(57)【要約】  ジフテリア毒に免疫学的に関連するタンパク質分子は、アテローム性動脈硬化症及び更に関連する病気の治療のために提案される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物のアテローム動脈硬化症治療用の医薬調製物の製造のためのタンパク質分子の使用であって、該分子がCRM197の配列と少なくとも90%の同一性を有し、第1及び第2ジスルフィド橋、該第1ジスルフィド橋によって互いに結合されている2つの断片を含み、及び位置52にグルタミン酸を有する、前記分子。
【請求項２】
前記分子が、CRM197の配列と少なくとも95%の同一性を有する、請求項１記載の使用。
【請求項３】
前記分子が、CRM197の配列と少なくとも97%の同一性を有する、請求項２記載の使用。
【請求項４】
前記分子が、CRM197の配列と少なくとも98%の同一性を有する、請求項３記載の使用。
【請求項５】
前記分子が、CRM197の配列と少なくとも99%の同一性を有する、請求項４記載の使用。
【請求項６】
前記分子及びCRM197が1以上の異なった位置を有し、それらの異なった位置の少なくとも1つは相同な位置である、請求項１〜５のいずれか１項記載の使用。
【請求項７】
前記の異なった位置のすべてが相同である、請求項６記載の使用。
【請求項８】
前記分子がCRM197である、請求項５記載の使用。
【請求項９】
前記分子が、位置186に第1システイン及び位置201に第2システインを含み；該第1及び第2システインが第1ジスルフィド橋によって互いに結合されている、請求項１〜８のいずれか１項記載の使用。
【請求項１０】
前記分子が、それぞれ、位置461及び471に、第2ジスルフィド橋によって互いに結合されている第3及び第4システインを含む、請求項１〜９のいずれか１項記載の使用。
【請求項１１】
哺乳動物のアテローム動脈硬化症治療用の医薬調製物の製造のためのタンパク質分子の使用であって、該タンパク質分子は、ストリンジェントな条件下でHB-EGFにそれ自体を結合でき、そして抗体及び/又は白血球を引き付けるような方法で、免疫系の反応を刺激することができる、前記分子。
【請求項１２】
前記分子が、請求項１〜１０のいずれか１項に従って定義される、請求項１１記載の使用。
【請求項１３】
哺乳動物の卒中の治療及び/又は予防用の医薬調製物の製造のためのタンパク質分子の使用であって、該タンパク質分子は請求項１〜１２のいずれか１項に従って定義される、前記使用。
【請求項１４】
哺乳動物の梗塞の治療及び/又は予防用の医薬調製物の製造のためのタンパク質分子の使用であって、該タンパク質分子は請求項１〜１２のいずれか１項に従って定義される、前記使用。
【請求項１５】
哺乳動物の冠動脈疾患の治療及び/又は予防用の医薬調製物の製造のためのタンパク質分子の使用であって、該タンパク質分子は請求項１〜１２のいずれか１項に従って定義される、前記使用。
【請求項１６】
哺乳動物のネクローシスの治療及び/又は予防用の医薬調製物の製造のためのタンパク質分子の使用であって、該タンパク質分子は請求項１〜１２のいずれか１項に従って定義される、前記使用。
【請求項１７】
哺乳動物の虚血の治療及び/又は予防用の医薬調製物の製造のためのタンパク質分子の使用であって、該タンパク質分子は請求項１〜１２のいずれか１項に従って定義される、前記使用。
【請求項１８】
哺乳動物のアテローム性動脈硬化症の治療及び/又は予防のための、請求項１〜１２のいずれか１項記載のタンパク質分子の使用。
【請求項１９】
請求項１３〜１７のいずれか１項記載の疾患の治療及び/又は予防のための、請求項１〜１２のいずれか１項記載のタンパク質分子の使用。
【請求項２０】
哺乳動物のアテローム性動脈硬化症の治療及び/又は予防のための、請求項１〜１２のいずれか１項記載のタンパク質分子。
【請求項２１】
請求項１３〜１７のいずれか１項記載の疾患の治療及び/又は予防のための、請求項１〜１２のいずれか１項記載のタンパク質分子。
【請求項２２】
請求項１〜１２のいずれか１項記載のタンパク質分子又はその薬学的に許容される誘導体の1つ、及び賦形剤及び/又は薬学的に許容される希釈剤を含む、医薬調製物。
【請求項２３】
哺乳動物のアテローム性動脈硬化症の治療方法であって、請求項１〜１２のいずれか１項記載のタンパク質分子の有効量の該哺乳動物への投与を含む、前記方法。
【請求項２４】
請求項１３〜１７のいずれか１項記載の疾患の治療方法であって、請求項１〜１２のいずれか１項記載のタンパク質分子の有効量の哺乳動物への投与を含む、前記方法。
【請求項２５】
前記分子が皮下注射によって投与される、請求項２３又は２４記載の方法。
【請求項２６】
前記分子の投薬量が10日間〜30日間の開始期間については第1の定義された期間ごとに患者に投与される第1投与期を含み；該第1の定義された期間が2〜4日である、請求項２３〜２５のいずれか１項記載の方法。
【請求項２７】
前記の第1投与期の期間が約18日である、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
前記分子の投薬量が第2に定義された期間ごとに投与される第2投与期を含み；該第2の定義された期間が1〜3ケ月であり；該第2投与期の期間が4〜8ケ月である、請求項２４又は２５記載の方法。
【請求項２９】
前記投薬量が0.5〜4.0 mgである、請求項２５〜２７のいずれか１項記載の方法。
【請求項３０】
前記投薬量が0.5〜3.0 mgである、請求項２９記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は、アテローム性動脈硬化症の治療のための、及びアテローム性動脈硬化症に関連した更なる疾患の治療及び/又は予防のための、タンパク質分子の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景技術
心疾患系の疾患は、現在、高度に工業化された国々にとって、媒介物中、最も主要な死因の1つである。
【０００３】
アテローム性動脈硬化症は、年をとった場合に、ほとんどの人々に起こる動脈の硬化及び狭窄によって特徴づけられる心疾患である。アテローム性動脈硬化症は、血流が深刻に損なわれるまで、通常、兆候を示さない。アテローム動脈硬化症の典型的な兆候は、冠動脈が関連する場合には胸痛、又は足の動脈が関連する場合には足痛を含む。アテローム性動脈硬化症の可能性のある合併症は、虚血及び梗塞と共に、卒中、ネクローシス及び冠動脈疾患（その疾患の1つは狭心症である）を含む。
【０００４】
上で述べてきたことに基いて、アテローム性動脈硬化症及び関連疾患の治療のために利用できる医薬を製造する必要が依然として相当あることは明白である。
【発明の概要】
【０００５】
発明の開示
アテローム性動脈硬化症及び関連疾患の治療において新しい可能性を提供することは本発明の目的である。本発明によれば、本説明の後にくる独立クレームにおいて、好ましくは独立クレームに直接的又は間接的に従属する単一クレームのいずれか1つにおいてクレームされる、アテローム性動脈硬化症及び関連疾患の治療方法、及びアテローム性動脈硬化症及び関連疾患の治療のための医薬の製造におけるジフテリア毒誘導体の使用が提供される。
【０００６】
反対のことが明確に記載されていなければ、次の用語は、以下に示す意味を有する。
【０００７】
本明細書において、2つアミノ酸配列間の「同一性のパーセント」及び「同一性の%」は、最適なアラインメントでの2つの配列における対応する位置の同一のアミノ酸残基の割合を意味する。
【０００８】
核酸の2つのアミノ酸配列の「同一性のパーセント」を決定するために、該配列は、最適な比較に到達するように互いに配置される。ギャップ（すなわち、削除又は挿入）が、配列に導入され得る。次いで、対応する位置でのアミノ酸が比較される。第1配列の位置が第2配列の対応する位置を占める同一のアミノ酸によって占有される時には、その分子は、その位置で同一である（すなわち、その位置は同一である）。2つの配列間の同一性のパーセントは、該配列によって共有される同一の位置の数の結果である（すなわち、同一性のパーセント = (同一の位置の数/位置の総数) x 100）。好ましい実施態様によれば、該配列は同一の長さである。
【０００９】
比較された配列は、ギャップを有してもよい。
【００１０】
同一性のパーセントは、数学的アルゴリズムの手段によって得られる。2つの配列の比較にために使用される数学的アルゴリズムの非限定的な例は、Karlin及びAltschulのアルゴリズムであり [(1990), Proc. Natl Acad Sci USA 87: 2264-2268]、Karlin及びAltschulによって修飾された [(1993). Proc. Natl Acad Sci USA 90: 5873-5877]。かかるアルゴリズムは、AltschulのBLASTn及びBLASTpプログラムに組み込まれている [Altschul, et al, (1990). J Mol Biol 215: 403-410]。
【００１１】
1以上のギャップの存在下でもアラインメントを得るために、比較的高いペナルティを各ギャップに帰属し、及びより低いペナルティをギャップにおける各付加的なアミノ酸残基又はヌクレオチドに帰属する方法を使用することができる（かかる付加アミノ酸残基又はヌクレオチドは、伸張ギャップとして定義される）。明らかに、高ペナルティは、より少数のギャップを有する最適化アラインメントを決定するだろう。
【００１２】
この種のアラインメントの実現のために好適なプログラムの例は、Altschul等が記載しているBLASTプログラムである [(1997). Nucleic Acids Res 25: 3389-3402]。このために、BLASTN及びBLASTPプログラムは、デフォルトパラメータを用いて使用される。BLASTプログラムを使用する時には、マトリックスBLOSUM62が一般的に選ばれる。
【００１３】
最適なアラインメントを得るためのプログラムの好ましくかつ非限定的な例は、GCG Winsconsin Bestfitパッケージである [University of Winsconsin, USA; Devereux et al.(1984). Nucleic Acids Research 12: 387]。この場合にも、アミノ酸配列について、ギャップに関して-12のペナルティ及び各伸張について-4のペナルティを予測するデフォルトパラメータが使用される。
【００１４】
本明細書において、「相同な位置」とは、類似の物理化学的性質が与えられたアミノ酸である、2つの相同なアミノ酸を有する位置を意味する。例えば以下のアミノ酸は同一のグループに属する：芳香族 (Phe, Trp, Tyr)、酸性 (Glu, Asp)、極性 (Gln, Asn)、塩基性 (Lys, Arg, His)、脂肪族 (Ala, Leu, He, Val)、1つの水酸基を有する (Ser, Thr)、短い側鎖を有する (Gly, Ala, Ser, Thr, Met)。このような相同アミノ酸間の置換は、タンパク質の表現型を変更する（代表的なアミノ酸置換）と、予測される。代表的な置換の具体的な例は、当該分野で周知であり、様々な文献に記載されている [例えば、Bowie et al. (1990). Science 247: 1306-1310]。
【００１５】
本明細書における「ストリンジェントな条件」とは、好ましくは、SSC緩衝液（0.15 M 塩化ナトリウム溶液及び20 mM クエン酸ナトリウム）及び0.1 % SDS（ドデシル硫酸ナトリウム）で、50℃で1時間の洗浄を意味する。あるいは、「ストリンジェントな条件」は、過去の文献 [Ausubel F M et al. eds. (1989) Current Protocols in Molecular Biology, Vol.I, Green Publishing Associates, Tnc. and John Wiley & Sons Inc. New York] に記載されている。本明細書における「薬学的に許容される誘導体」は、もとの分子の生物的性質を維持する、又は複合体（すなわち、1以上の分子又はイオンが1以上の金属原子又は金属イオンに対して1以上の配位結合を形成する化合物）を意味する。このような誘導体の製造のための方法の非限定的な例は、以下の事項を含む：もとの分子の遊離塩基への、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸等）又は有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、サリチル酸、コハク酸、クエン酸等）の付加；もとの分子のプロトン酸の金属カチオン（例えば、アルカリ金属又はアルミニウムのカチオン等）による置換；もとの化合物のプロトン酸の有機塩基（例えば、ジメチルアミン、トリメチルアミン等）への移動、及びこのような有機塩基での配位。反対のことを述べない限り、本発明の対象である分子は、その「薬学的に許容される誘導体」を含むものとして理解される。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、CRM197での治療前に実施例3の患者で行われた超音波カラードップラー映像を示す。
【図２】図２は、CRM197での治療後に実施例3の患者で行われた超音波カラードップラー映像を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明の第1の態様に従って、哺乳動物におけるアテローム性動脈硬化症の治療のための、及び/又はアテローム性動脈硬化症に関連する疾患の治療又は予防のためのタンパク質分子、並びに哺乳動物におけるアテローム性動脈硬化症の治療のための、及び/又はアテローム性動脈硬化症に関連する疾患の治療又は予防のためのタンパク質分子の使用が提供される。特に、本発明の更なる態様に従って、哺乳動物におけるアテローム性動脈硬化症の治療のための、及び/又はアテローム性動脈硬化症に関連する疾患の治療又は予防のための医薬調製物の製造のためのタンパク質分子の使用が提供される。
【００１８】
アテローム性動脈硬化症に関連する疾患は、卒中、ネクローシス、及び虚血及び梗塞を伴う冠動脈疾患を含む。虚血は、特に、腎臓、肺及び脳血管におけるものでもよい。
【００１９】
タンパク質分子は、好ましくは、CRM197と少なくとも90%の同一性を有し、第1及び第2ジスルフィド橋を含み、それらはいずれも第1ジスルフィド橋の手段によって互いに連結され、位置52にグルタミン酸を有する。
【００２０】
CRM197は、コリネバクテリウム・ジフテリア（Corynebacterium diphtheriae）の変異株によって産生される毒素であり（Uchida T, Pappenheimer AM Jr, Greany R (1973) ジフテリア毒素及び関連タンパク質。I．ジフテリア毒素に血清学的に関連した変異タンパク質の単離及び性質 J Biol Chem 248: 3838-3844）、本質的に毒性がなく（Uchida et al. 上記参照）、現在、幼児ワクチンのための担体として使用されており（特に、Bartolozzi G, Rappuoli R. I vaccini, UTET, 2001. pp 114, 164参照）、位置52のグリシンの代わりにグルタミン酸の存在下でのジステリア毒素とは異なり、番号CAS 92092-36-9及び番号MDL MFCDOO1 66638で、Sigma-Aldrich（登録商標）で（研究的使用のために）市販されている。ジフテリア毒素は、周知のように、コリネバクテリウム・ジフテリア（Corynebacterium diphtheriae）によって産生される毒素である。ジステリアタンパク質の配列及び構造は記載されている[Delange R J, Drazin R E, and Collier R J (1976)。フラグメントAのアミノ酸配列は、ジフテリア毒素の酵素的に活性なフラグメントである。Proc Nat Acad Sci USA 73: 69-72、及びFalmagne P, Capiau C, Lambotte P et al. (1985)。ジフテリア毒素フラグメントBの完全なアミノ酸配列。その脂質-結合性との関係。Biochim Biophys Acta 827: 45-50]。CRM197は、Park H W and Williams A Wによって記載されるコリネバクテリウム・ジフテリア（Corynebacterium diphtheriae）の変異株を用いる同一の方法（J Exp Med 1: 164-185）によって産生され得る（Uchida et al. 上記参照）。
【００２１】
更に好ましい実施態様によれば、タンパク質分子は、CRM197の配列と少なくとも92%、94%、95%、96%、97%、98%、99%及び100%の同一性を有するべきである。タンパク質分子及びCRM197が1以上の異なった位置を示す場合には、好ましくは、これらの異なった位置の少なくとも1つは相同であるべきであり；より好ましくは、異なった位置は相同であるべきである。
【００２２】
好ましくは、タンパク質分子は、位置186に第1のシステイン及び位置201に第2のシステインを含む。第1及び第2のシステインは、第1ジスルフィド橋によって互いに結合される。タンパク質分子は、位置461に第3のシステイン及び位置471に第4のシステインを含む。第3及び第4のシステインは、第2ジスルフィド橋によって互いに結合される。
【００２３】
タンパク質分子は、それ自体、HB-EGFに結合することによって [Raab G, Klagsbrun H (1997), ヘパリン-結合EGF-様成長因子, Biochim Biophys Acta 1933: 179-199]、抗体及び白血球を引き付ける方法で免疫形を刺激することによって作用する (Harrison's Principles of Internal Medicine, ninth edition, pp 672-674)。HB-EGFは、EGFR (上皮成長因子受容体) の2つのサブタイプ (HER1及びHER4)を活性化することができるヘパリン-結合成長因子であり、一般的に、アテローム性動脈硬化症のような疾患プロセスにおいて過剰発現される [Miyagawa JI, Higasbiyama S, Kawata S, et al. (1995), ヒトアテローム斑の平滑筋細胞及びマクロファージにおけるヘパリン-結合EGF-様成長因子の局在化, J Clin Invest 95: 404-411]。
【００２４】
好ましくは、そのため、分子は、ストリンジェントな条件下で、それ自体HB-EGFに結合することができ、抗体及び/又は白血球を引き付ける方法で免疫反応を刺激することができる。
【００２５】
本発明の更なる特徴に従って、上で定義したタンパク質分子、又はその薬学的に許容される誘導体及び賦形剤及び/又は薬学的に許容される希釈剤の内の1つを含む医薬調製物が提供される。
【００２６】
本発明の更なる特徴に従って、哺乳動物におけるアテローム性動脈硬化症の治療方法及び/又はアテローム性動脈硬化症に関連する疾患の治療又は予防方法が提供される。該方法は、上記のように、タンパク質分子の有効量の哺乳動物への投与を予測する。
【００２７】
好ましくは、タンパク質分子は、皮下注射によって投与される。この方法では、敏感な対象における急速な免疫反応のリスクが極度に減少する。
【００２８】
好ましい実施態様では、該方法は、第1投与期を含む。そこでは、分子の投薬量は第1の定義された期間ごとに患者に投与される。第1の定義された期間は、2日〜4日である。好ましくは、第1の定義された期間は、約3日である。第1投与期の期間は、10日〜30日である。好ましくは、第1期の期間は、約18日である。
【００２９】
好ましくは、該方法は、第1投与期に続く第2投与期を含む。第2期では、分子の投薬量は、第2の定義された期間ごとに1回投与される。第2の定義された期間は、1〜3ケ月である。より好ましくは、第2の定義された期間は、約2ケ月である。第2期の期間は、4〜8ケ月である。より好ましくは、第2期の期間は約8ケ月である。
【００３０】
好ましくは、各単一投薬量は0.5〜4.0 mg、より好ましくは0.5〜3.6 mg、更に好ましくは0.5〜3.0 mgである。好ましくは、本方法は、速攻型の敏感症（ITH）又は遅延型の過敏症（DTH）を示す患者を識別する目的で、第1投与期に先行する予備治療を含む。予備治療の期間は、これまで詳細に記載されてきた [Buzzi S, Rubboli D, Buzzi G, et al. (2004). CRM197 (non-toxic diphtheria toxin): effects on advanced cancer patients. Cancer Immunol Immunother 53: 1041-1048]。痒疹及び紅斑反応がタンパク質投与から数分内に注射部位に起こる時に、及びIgEレベルが500 ng/mLを超える時に、ITH症状が現われる。
【００３１】
痒疹及び紅斑反応がタンパク質投与から24時間以内に注射部位に起こる時に、DTH症状が現われる。
【００３２】
本明細書に、完全な開示の目的のために上で引用した参考文献（文献、テキストブック等）の内容が完全に参照される。
【００３３】
本発明の更なる特徴は、単なる実例及び非-限定的な例に続く説明から明らかであろう。
【００３４】
特に、以下の実施例は、どのようにして、上で定義されたタンパク質分子の使用が、驚くべきことに、アテローム斑の関連する減少、よって、関連する疾患の改善を極度に引き起こすかを説明する。以下の実施例は、上で定義されたタンパク質分子が極度に低毒性を有することも示している（上で、Uchida et al.によって既に示されている）。
【実施例】
【００３５】
実施例１
安定剤として10%ショ糖を含む3.0 mg/mLの濃度が殺菌リン酸緩衝液（10 mM リン酸ナトリウム緩衝液, pH 7.2）中で到達するまで、CRM197を希釈した。最終産物を発熱物質無しのバイアル中にアリコートし、-20℃で保存した。
【００３６】
実施例２
右内頸動脈の55%狭窄（超音波検査装置試験）を有する68歳の男性を実施例1に記載のようにして調製した3.5 mgのCRM197の投薬量で治療し、1日おきに6回投与した。2ケ月おきに6ケ月間、患者に第1投薬量と同じ更なる投薬量を投与した。18ケ月後、超音波カラードップラー映像は初期狭窄の27%減少を示した（この説明で引用された内頸狭窄のケースの全ては、同一の医師によって使用される超音波装置によって検出及び監視された）。
【００３７】
実施例３
右内頸動脈（混合斑）の40%狭窄（NASCET）及び通常の左頸動脈（柔斑）の67.8%狭窄を有する74歳の男性を実施例1に記載のようにして調製した3.5 mgのCRM197の投薬量で治療し、1日おきに6回投与した（左頸動脈及び右総頸動脈は、脈管内膜の肥厚のみを示した）。2ケ月おきに6ケ月間、患者に第1投薬量と同じ更なる投薬量を投与した。患者は、体液性免疫を示し、中程度の遅れたジフテリア毒素及びCRM197に対する過敏症を示した。治療後に、患者によって示された唯一の副作用は、注射部位での痒みを伴う紅斑の発症であった。
【００３８】
治療後、58ケ月間、一定の間隔で患者をチェックした。治療開始から14ケ月後、左総頸動脈の狭窄の8%減少が観察された。治療開始から25ケ月後、左一般頸動脈の狭窄の15%減少が観察された。治療開始から58ケ月後、右内頸動脈の狭窄の71.5%減少及び左総頸動脈の狭窄の93.3%減少が観察された。
【００３９】
図1は、治療前に行われた左総頸動脈の超音波検査映像に関する。この超音波検査映像により、0.59 cm2の動脈切片の総面積、2.8 cmの切片全体の円周、0.19 cm2の透明血流面積（管腔）、32.2%の透明面積（管腔）の割合、及び67.8%の狭窄面積の割合を決定した。
【００４０】
図2は、治療後58ケ月に行われた左総頸動脈の超音波検査映像に関する。この超音波検査映像により、40.62 cm2の動脈切片の総面積、38.68 cm2の透明血流面積（管腔）、95.52%の透明面積（管腔）の割合、及び4.5%の狭窄面積の割合を決定した。
【００４１】
実施例４
右内頸動脈（混合斑）の65%狭窄（NASCET）及び左内頸動脈の40%狭窄（NASCET）（混合斑）を有する74歳の男性を実施例1に記載のようにして調製した1.7 mgのCRM197の投薬量で治療し、1日おきに6回投与した。2ケ月おきに6ケ月間、第1投薬量と同じ更なる投薬量を投与した。患者は、ジフテリア毒素及びCRM197に対して免疫を示さなかった。治療開始から8ケ月後に、右内頸動脈の狭窄の46%が減少し、左内頸動脈の狭窄の50%が減少したことが観察された。
【００４２】
実施例５
右内頸動脈の59%狭窄（NASCET）及び左内頸動脈の20%狭窄（NASCET）（それぞれ、柔斑及び硬斑）を有する74歳の男性を実施例1に記載のようにして調製した1.7 mgのCRM197の投薬量で治療し、1日おきに6回投与した。2ケ月おきに6ケ月間、第1投薬量と同じ更なる投薬量を患者に投与した。患者は、ジフテリア毒素及びCRM197に対して何の免疫能力も示さなかった。
【００４３】
治療開始から8ケ月後、右内頸動脈の狭窄の90%減少及び左内頸動脈の狭窄の30%減少が観察された。
【００４４】
実施例６
右内頸動脈の60%狭窄（NASCET）及び左内頸動脈の55%狭窄（NASCET）（混合斑）を有する65歳の男性を実施例1に記載のようにして調製した1.7 mgのCRM197の投薬量で治療し、1日おきに6回投与した。2ケ月おきに6ケ月間、第1投薬量と同じ更なる投薬量を患者に投与した。
【００４５】
患者は、ジフテリア毒素及びCRM197に対して何の免疫能力も示さなかった。治療開始から60ケ月後、右内頸動脈の狭窄の30%減少及び左内頸動脈の狭窄の25%減少が観察された。
【００４６】
実施例７
右内頸動脈の60%狭窄（NASCET）及び左内頸動脈の40%狭窄（NASCET）（混合斑）を有する78歳の男性を実施例1に記載のようにして調製した3.5 mgのCRM197の投薬量で治療し、1日おきに6回投与した。2ケ月おきに6ケ月間、第1投薬量と同じ更なる投薬量を患者に投与した。
【００４７】
患者は、ジフテリア毒素及びCRM197に対して強い体液性免疫を示した。
【００４８】
治療開始から60ケ月後、右内頸動脈の狭窄の40%減少及び左内頸動脈の狭窄の30%減少が観察された。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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