(57)【要約】  本発明は、６分子のアシル化インスリン毎に高含有量の亜鉛原子を有するインスリン組成物に関する。インスリンはアシル化インスリンであり、例えば即効型インスリンＡｓｐＢ２８ヒトインスリンのような更なるインスリンアナログと混合されてもよい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アシル化インスリンを含み、６分子のアシル化インスリン毎に４より多い亜鉛原子をさらに含む可溶性製薬学的組成物。
【請求項２】
６分子のアシル化インスリン毎に最大約１２の亜鉛原子を含む請求項１に記載の製薬学的組成物。
【請求項３】
６分子のアシル化インスリン毎に約４．３から約１２の亜鉛原子を含む請求項１又は２に記載の製薬学的組成物。
【請求項４】
６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を含む請求項１ないし３の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【請求項５】
少なくとも８５％のアシル化インスリンが、アシル化インスリンドデカマー複合体もしくはアシル化インスリンドデカマーより高分子量の複合体として存在する請求項１ないし４の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【請求項６】
組成物が界面活性剤を含む請求項１ないし５の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【請求項７】
インスリン分子が、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくは親インスリン部分のＢ鎖中のＬｙｓ残基のε−アミノ基の何れか一方とアミド結合を介して結合している少なくとも一つの遊離カルボン酸基もしくは中性ｐＨで負に荷電する基を含んでなる側鎖を有する請求項１ないし６の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【請求項８】
側鎖が少なくとも一つの芳香族基を含んでなる請求項１および７に記載の製薬学的組成物。
【請求項９】
側鎖が少なくとも一つの二官能性ＰＥＧ基を含んでなる請求項１および７に記載の製薬学的組成物。
【請求項１０】
インスリン分子が、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と結合している側鎖であって、一般式：
−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ２
およびそのＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｗは、
・残基がそのカルボン酸基のうちの一つと共に、親のインスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と一緒になってアミド基を形成する側鎖中のカルボン酸基を有するα−アミノ酸残基；
・アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている２、３または４のα−アミノ酸残基からなる鎖であって、
アミド結合−を介した鎖−は親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と連結しており、
Ｗのアミノ酸残基は、Ｗが側鎖中にカルボン酸基であるアミノ酸残基を少なくとも一つ有するように、中性側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖；もしくは、
・親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基からＸまでの共有結合
であり；
Ｘは、
・−ＣＯ−；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ  −ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；もしくは
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−であって、
ａ）Ｗがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖であるとき、下線の炭素からの結合を介して、Ｗ中のアミノ基とアミド結合を形成するか、あるいは、
ｂ）Ｗが共有結合であるとき、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基とアミド結合を形成し；
Ｙは、
・ｍが６から３２の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に１０から３２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ２は、
・−ＣＯＯＨ；
・−ＣＯ−Ａｓｐ；
・−ＣＯ−Ｇｌｕ；
・−ＣＯ−Ｇｌｙ；
・−ＣＯ−Ｓａｒ；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
・−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
・−ＳＯ３Ｈ；もしくは
・−ＰＯ３Ｈ
であるが、
ただし、Ｗが共有結合であってＸが−ＣＯ−であるならば、Ｚは−ＣＯＯＨとは異なる］
の側鎖を有する請求項１ないし７の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【請求項１１】
アシル化インスリンが、式
2009522231.tif 000032
およびその任意のＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
Ｘ４は、
・ｎが１、２、３、４、５もしくは６である−（ＣＨ２）ｎ；
・Ｒが、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ；−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；１又２の−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＣＯＯＨ基で置換されたアリーレン；−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾリルであるＮＲ
｛上式中、ｐは１から６の範囲の整数である｝；
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは、
・結合
であり；
Ｗ１は、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルからなる群から選択される一又は二の基で置換されていてもよいアリーレンもしくはヘテロアリーレンであるか、あるいはＷ１は結合であり；
ｍは０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｘ５は、
・−Ｏ−；
・
2009522231.tif 000033
｛Ｒは上記のように定義される｝；もしくは
・結合
であり；
Ｙ１は、
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−
・Ｒが上記のように定義されるＮＲ；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは
・結合
であり；
Ｑ７は、
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；もしくは
・式
−（ＣＨ２）ｓ  −Ｑ８−（Ｃ６Ｈ４）ｖ１−Ｑ９−（ＣＨ２）Ｗ  −Ｑ１０−（Ｃ６Ｈ４）ｖ２−Ｑ１１−（ＣＨ２）ｔ−Ｑ１２−（Ｃ６Ｈ４）ｖ３−Ｑ１３−（ＣＨ２）ｚ−
｛Ｑ８−Ｑ１３は、互いに独立して、Ｏ；Ｓもしくは結合であってよく；ｓ、ｗ、ｔおよびｚは、互いに独立して、ｓ、ｗ、ｔおよびｚの合計が４から２２の範囲になるように、０もしくは１から１０の整数であり、かつ、ｖ１、ｖ２、およびｖ３は、互いに独立して、０もしくは１であってよいが、ただし、Ｗ１が結合であるならば、Ｑ７は式−（ＣＨ２）ｖ４Ｃ６Ｈ４（ＣＨ２）Ｗ１（ｖ４およびｗ１の合計が６から２２の範囲になるように、ｖ４およびｗ１は整数であるか、あるいは、それらのうちの一つは０である）の二価の炭化水素鎖ではない｝
の二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ１は、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＰＯ３Ｈ２；
−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；
−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；
−テトラゾリルもしくは
Ｗ２が、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルから選択される一又は二の基で置換されているアリーレンもしくはヘテロアリーレンである−Ｏ−Ｗ２
であるが；
ただし、Ｗ１が結合であり、かつｖ１、ｖ２およびｖ３が全て０であり、かつＱ８−１３が全て結合であれば、Ｚ１はＯ−Ｗ２である］
を有する請求項１ないし８の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【請求項１２】
アシル化インスリンが、式
2009522231.tif 000034
およびその任意のＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
それぞれのｎは独立して、０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、およびＱ４は、互いに独立して、
・ｓが１−２０である（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−もしくは（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；もしくは、１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；
・ｔが１から６の整数である−（ＣＨ２）ｔ−もしくは−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｔ−；
・Ｒ１およびＲ２が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）１−６ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ１およびＲ２が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑが１−６である−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−；
・Ｒ３およびＲ４が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ３およびＲ４が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑ１が１−６である−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−）−、−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１；もしくは
・結合
であってよいが；
ただし、Ｑ１−Ｑ４は異なっており；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、独立して、
・Ｏ；
・結合；もしくは
・
2009522231.tif 000035
｛上式中、
Ｒは、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ、それぞれのｐが、残りのｐ'と独立して、１から６の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２、−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；もしくは−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾール−５−イルである｝
であり；かつ
Ｚは、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＯＳＯ３Ｈ
−ＯＰＯ３Ｈ２
−ＰＯ３Ｈ２もしくは
−テトラゾール−５−イル
である］
を有する請求項１ないし７および９の製薬学的組成物。
【請求項１３】
親インスリンがｄｅｓＢ３０ヒトインスリンアナログである請求項１ないし１２の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【請求項１４】
即効型インスリンをさらに含む請求項１ないし１３の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【請求項１５】
少なくとも８５％の即効型インスリンが、即効型インスリンヘキサマーもしくは即効型インスリンドヘキサマーより低分子量の複合体として存在する請求項１および１４項に記載の製薬学的組成物。
【請求項１６】
即効型インスリンがＡｓｐＢ２８ヒトインスリン、ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９ヒトインスリンおよび／又はＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンである請求項１および１４−１５に記載の製薬学的組成物。
【請求項１７】
６分子のアシル化インスリン毎に約４より多い亜鉛原子を組成物に添加する、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物を製造するための方法。
【請求項１８】
６分子のアシル化インスリン毎に最大約１２の亜鉛原子を組成物に添加する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
６分子のアシル化インスリン毎に約４．３から約１２の亜鉛原子を組成物に添加する、請求項１７−１８の何れか一項に記載の方法。
【請求項２０】
保存料の添加前に、亜鉛を組成物に添加する、請求項１７−１９に記載の方法。
【請求項２１】
保存料の添加後に、亜鉛を組成物に添加する、請求項１７−１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項２２】
保存料の添加前に亜鉛の一部を添加し、保存料の添加後に亜鉛の一部を添加する、請求項１７−２１の何れか一項に記載の方法。
【請求項２３】
保存料がフェノールおよび／又はｍ−クレゾールである、請求項１７−２２の何れか一項に記載の方法。
【請求項２４】
界面活性剤を製薬学的組成物と混合する、請求項１７−２３の何れか一項に記載の方法。
【請求項２５】
アシル化インスリンが、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と結合している側鎖であって、一般式：
−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ２
およびそのＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｗは、
・残基がそのカルボン酸基のうちの一つと共に、親のインスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と一緒になってアミド基を形成する側鎖中のカルボン酸基を有するα−アミノ酸残基；
・アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている２、３または４のα−アミノ酸残基からなる鎖であって、
アミド結合−を介した鎖−は親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と連結しており、
Ｗのアミノ酸残基は、Ｗが側鎖中にカルボン酸基であるアミノ酸残基を少なくとも一つ有するように、中性側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖；もしくは、
・親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基からＸまでの共有結合
であり；
Ｘは、
・−ＣＯ−；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ  −ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；もしくは
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−であって、
ａ）Ｗがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖であるとき、下線の炭素からの結合を介して、Ｗ中のアミノ基とアミド結合を形成するか、あるいは、
ｂ）Ｗが共有結合であるとき、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基とアミド結合を形成し；
Ｙは、
・ｍが６から３２の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に１０から３２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ２は、
・−ＣＯＯＨ；
・−ＣＯ−Ａｓｐ；
・−ＣＯ−Ｇｌｕ；
・−ＣＯ−Ｇｌｙ；
・−ＣＯ−Ｓａｒ；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
・−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
・−ＳＯ３Ｈ；もしくは
・−ＰＯ３Ｈ
であるが、
ただし、Ｗが共有結合であってＸが−ＣＯ−であるならば、Ｚは−ＣＯＯＨとは異なる］
の側鎖を有する請求項１７ないし２４の何れか一項に記載の方法。
【請求項２６】
アシル化インスリンが、式
2009522231.tif 000036
およびその任意のＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
Ｘ４は、
・ｎが１、２、３、４、５もしくは６である−（ＣＨ２）ｎ；
・Ｒが、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ；−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；１又２の−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＣＯＯＨ基で置換されたアリーレン；−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾリルであるＮＲ
｛上式中、ｐは１から６の範囲の整数である｝；
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは、
・結合
であり；
Ｗ１は、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルからなる群から選択される一又は二の基で置換されていてもよいアリーレンもしくはヘテロアリーレンであるか、あるいはＷ１は結合であり；
ｍは０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｘ５は、
・−Ｏ−；
・
2009522231.tif 000037
｛Ｒは上記のように定義される｝；もしくは
・結合
であり；
Ｙ１は、
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−
・Ｒが上記のように定義されるＮＲ；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは
・結合
であり；
Ｑ７は、
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；もしくは
・式
−（ＣＨ２）ｓ  −Ｑ８−（Ｃ６Ｈ４）ｖ１−Ｑ９−（ＣＨ２）Ｗ  −Ｑ１０−（Ｃ６Ｈ４）ｖ２−Ｑ１１−（ＣＨ２）ｔ−Ｑ１２−（Ｃ６Ｈ４）ｖ３−Ｑ１３−（ＣＨ２）ｚ−
｛Ｑ８−Ｑ１３は、互いに独立して、Ｏ；Ｓもしくは結合であってよく；ｓ、ｗ、ｔおよびｚは、互いに独立して、ｓ、ｗ、ｔおよびｚの合計が４から２２の範囲になるように、０もしくは１から１０の整数であり、かつ、ｖ１、ｖ２、およびｖ３は、互いに独立して、０もしくは１であってよいが、ただし、Ｗ１が結合であるならば、Ｑ７は式−（ＣＨ２）ｖ４Ｃ６Ｈ４（ＣＨ２）Ｗ１（ｖ４およびｗ１の合計が６から２２の範囲になるように、ｖ４およびｗ１は整数であるか、あるいは、それらのうちの一つは０である）の二価の炭化水素鎖ではない｝
の二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ１は、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＰＯ３Ｈ２；
Ｏ−ＳＯ３Ｈ；
Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；
−テトラゾリルもしくは
Ｗ２が、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルから選択される一又は二の基で置換されているアリーレンもしくはヘテロアリーレンである−Ｏ−Ｗ２
であるが；
ただし、Ｗ１が結合であり、かつｖ１、ｖ２およびｖ３が全て０であり、かつＱ８−１３が全て結合であれば、Ｚ１はＯ−Ｗ２である］
を有する請求項１７ないし２４に記載の方法。
【請求項２７】
アシル化インスリンが、式
2009522231.tif 000038
およびその任意のＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
それぞれのｎは独立して、０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、およびＱ４は、互いに独立して、
・ｓが１−２０である（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−もしくは（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；もしくは、１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；
・ｔが１から６の整数である−（ＣＨ２）ｔ−もしくは−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｔ−；
・Ｒ１およびＲ２が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）１−６ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ１およびＲ２が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑが１−６である−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−；
・Ｒ３およびＲ４が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ３およびＲ４が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑ１が１−６である−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−）−、−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１；もしくは
・結合
であってよいが；
ただし、Ｑ１−Ｑ４は異なっており；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、独立して、
・Ｏ；
・結合；もしくは
・
2009522231.tif 000039
｛上式中、
Ｒは、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ、それぞれのｐが、残りのｐ'と独立して、１から６の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２、−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；もしくは−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾール−５−イルである｝
であり；かつ
Ｚは、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＯＳＯ３Ｈ
−ＯＰＯ３Ｈ２
−ＰＯ３Ｈ２もしくは
−テトラゾール−５−イル
である］
を有する請求項１７ないし２４に記載の方法。
【請求項２８】
親インスリンがｄｅｓＢ３０ヒトインスリンアナログである請求項１７ないし２７の何れか一項に記載の方法。
【請求項２９】
即効型インスリンを組成物と混合する請求項１７ないし２８の何れか一項に記載の方法。
【請求項３０】
即効型インスリンがＡｓｐＢ２８ヒトインスリン、ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９ヒトインスリンおよび／又はＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンである請求項４６および８０に記載の方法。
【請求項３１】
糖尿病の治療のための医薬の製造のための、請求項１−１６の何れか一項に記載の組成物の使用。
【請求項３２】
請求項１−１６に記載の製薬学的組成物の治療的有効量を製薬学的に許容される担体と共に含む、治療の必要がある患者における糖尿病の治療のための製薬学的組成物。
【請求項３３】
請求項１−１６に記載の製薬学的組成物の治療的有効量を製薬学的に許容される担体と共に患者に投与することを含む、治療の必要がある患者における糖尿病の治療方法。
【請求項３４】
糖尿病の肺性治療のための、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態の治療において使用するための製薬学的組成物の製造のための、請求項１−１６の何れか一項に記載の組成物の使用。
【請求項３６】
実施例中に記載した組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
〔発明の分野〕
本発明は、遷延性の作用特性と高い亜鉛含有量を有するアシル化インスリンの製薬学的組成物に関する。さらに、本発明は、遷延性の作用特性と高い亜鉛含有量を有するアシル化インスリンの製薬学的組成物を製造するための方法、および糖尿病の治療のための組成物を製造する方法に関する。
【０００２】
〔発明の背景〕
現在、１型糖尿病および二型糖尿病の双方の糖尿病の治療は、いわゆる強化インスリン療法への信頼が高まっている。この療法によると、基礎インスリン要求性をカバーするための持続型インスリンの一又は二回の毎日の注射を、食事と関連するインスリン要求性をカバーするための、即効型インスリンのボーラス注射により補充して含む多様な毎日のインスリン注射により、患者を治療する。
持続型インスリン組成物は、当該分野において周知である。したがって、持続型インスリン組成物の主な型には、インスリン結晶又は非晶質インスリンの注射可能な水性懸濁液が含まれる。これらの組成物では、使用されるインスリン化合物は、典型的には、プロタミンインスリン、亜鉛インスリンまたはプロタミン亜鉛インスリンである。
【０００３】
ある欠点がインスリン懸濁液の使用に関連する。例えば、正確な投与を確保するために、該懸濁液の限定量がバイアルから引き出されるまたはカートリッジから排出される前に、インスリンの粒子は、穏やかな振盪により均質に懸濁されなくてはならない。また、塊形成または凝固を避けるために、インスリン懸濁液の貯蔵は、インスリン溶液に比較してより狭い範囲で温度を保たなくてはならない。
プロタミンは非免疫性であると依然は考えられていたが、現在では、プロタミンはヒトにおいて免疫性であり、且つ薬剤目的におけるそれらの使用は抗体の形成を引き起こすことが明らかとなっている。また、プロタミン−インスリン複合体がそれ自身免疫性であることがであるという証拠も見つかっている。従って、ある患者には、プロタミンを含有する延長したインスリン組成物の使用をさけなくてはならない。
【０００４】
もう１つの種類の延長されたインスリン組成物は、その溶液を注射した際にｐＨ値が上昇することから、インスリンが沈殿するであろう生理学的なｐＨよりも低いｐＨ値を有する溶液である。欠点は、インスリンの固体粒子が注射部位の組織の炎症の原因となる局所的な刺激物として作用することである。
インスリンは、膵臓のランゲルハンス島で生産される５１アミノ酸のペプチドである。モノマーとして働き、その第一の機能は、膜貫通受容体に結合し、活性化することにより、グルコース分子の脂肪および筋肉組織の細胞膜を横切った輸送を促進することである。
【０００５】
インスリンの特性は、ヘキサマーへと会合することができ、その形態でそのホルモンは生合成および貯蔵の間の化学および物理的な分解から保護されるということである。インスリンについて研究されたＸ線結晶からは、ヘキサマーは、三褶曲軸の回転により関連する三つのダイマーからなることが示されている。これらのダイマーは、その三褶曲軸上に位置する核にある二つの亜鉛イオンとの相互作用を介して、密接に会合してる。
ヒトインスリンが高濃度製薬学的製剤の形態で皮下組織に注射されるとき、それは自己会合しており、モノマーへの解離は比較的緩やかである。インスリンのヘキサマーおよびダイマーは、モノマーより毛細血管壁を貫通するのが遅い。
【０００６】
亜鉛およびフェノール性添加物は、通常、貯蔵の間の分解に対する予防としての、ヘキサマー形成を促進するために、治療的インスリン製剤に用いられる。しかしながら、この形態では、注射されたインスリンの作用は、皮下組織を介してヘキサマーが拡散し、ダイマーおよびモノマーが解離する間、遅延することになる。
インスリン製剤は、大抵、インスリンを、酸性条件下で小体積の水に溶解することにより調製される。亜鉛は、その後、製剤に添加され、続いて中和され、フェノールおよびｍ−クレゾールのような保存料が添加される。これらのインスリンの製薬学的製剤は、ヘキサマーのインスリン毎に約２、３もしくは４の亜鉛原子として提供される。
国際公開第２００５／０１２３４７号は、国際公開第９５／０７９３１号に開示されるアシル化インスリンと比較して追加の負電荷を含んでなるアシル化インスリン誘導体の別の群を開示する。これらのアシル化インスリンの製薬学的製剤は、ヘキサマーのインスリン毎に約２、３もしくは４の亜鉛原子として提供される。
【０００７】
国際公開第２００３／０９４９５６号は、モノマーのインスリンと可溶性アシル化インスリンアナログを混合することにより調製される安定インスリン製剤を開示する。製剤は、ヘキサマーのインスリン毎に約２．３から約４．５のＺｎ２＋を含む。この発明のアシル化インスリンアナログはインスリンデテミル（detemir）である。
国際公開第２００３／０９４９５６号から、即効作用および持続作用の双方を有する安定可溶性インスリン製剤を製剤化することは公知である。製剤は、ヘキサマーのインスリン毎に約２．３から約４．５のＺｎ２＋の範囲の亜鉛含有量を有する。この発明のアシル化インスリンアナログはインスリンデテミル（detemir）である。
【０００８】
国際公開第９９／２１８８８号は、６分子のインスリン誘導体毎に最大５の亜鉛原子を含むヒトインスリン誘導体の凝集に関する。
ヒトインスリンは、三つの第一級アミノ基を有する：Ａ鎖およびＢ鎖のＮ末端基、およびＬｙｓＢ２９のε−アミノ基。これらの基の一又は複数で置換された幾つかのインスリン誘導体が、先行技術中で知られている。したがって、米国特許第３５２８９６０号（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）は、インスリン分子のうちの１、２又は３の第一級アミノ基がカルボキシアロイル（ａｒｏｙｌ）基を有するＮ−カルボキシアロイル（ａｒｏｙｌ）インスリンに関する。
欧州特許第８９４０９５号は、Ｂ鎖のＮ末端および／又は位置Ｂ２８、Ｂ２９又はＢ３０のＬｙｓのε−アミノ基が、Ｗが長鎖炭化水素基であり得る式−ＣＯ−Ｗ−ＣＯＯＨの置換を有するこれらのインスリン誘導体は、作用の持続性を有し、生理学的ｐＨ値で可溶性である。
【０００９】
国際公開第９５／０７９３１号は、脂溶性（liphophilic）の側鎖が、親インスリンのＢ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはＢ鎖に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基の何れか一方に結合している持続性インスリン誘導体を開示する。
インスリンデテミル（detemir）の遅い吸収のメカニズムは、Havelundらにより研究されている(The mechanism of protraction of insulin detemir、a long-acting acylated analog of human insulin., Pharmaceutical Research, 21(2004)1498-1504)。インスリン製剤は、ヘキサマーのインスリン毎に２の亜鉛原子、続いてグリセロール、フェノール、ｍ−クレゾールおよびナトリウムリン酸塩を添加することにより調製される。
【００１０】
Whittinghamら(Crystallographic and solution studies of N-Lithocholyl insulin: a new generation of prolonged-acting human insulin, Biochemistry 2004, 43, 5987-5995)では、アシル化インスリンアナログの製剤が調製されている。そのインスリン製剤は、ヘキサマーのインスリン毎に２−２．５の亜鉛原子、続いてグリセロールおよびフェノールを添加することにより調製される。インスリンの構造は、サイズ排除カラムクロマトグラフィーで測定される。
本発明は、先行技術の課題を解決するアシル化インスリンの製薬学的組成物に関する。
【００１１】
〔発明の概要〕
本発明は、および６分子のアシル化インスリン毎に４より多い亜鉛原子を含んでなるアシル化インスリンを含む可溶性製薬学的組成物に関する。
亜鉛含有量は、６分子のアシル化インスリン毎に最大約１２の亜鉛原子であってよい。亜鉛含有量の上限は、インスリンの沈殿を起こし、溶液を懸濁液にする亜鉛含有量である。
【００１２】
本発明のある態様では、製薬学的組成物は、６分子のアシル化インスリン毎に約４．３から約１２の亜鉛原子、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を含む。本発明の更なる態様では、製薬学的組成物は、６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１１．４の亜鉛原子、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１０の亜鉛原子を含む。更なる態様では、製薬学的組成物は、６分子のアシル化インスリン毎に約６から約１０．５の亜鉛原子、もしくは、６分子のアシル化インスリン毎に約６．５から約１０の亜鉛原子を含むか、あるいは、製薬学的組成物は、６分子のアシル化インスリン毎に約７から約９の亜鉛原子を含む。更なる態様では、製薬学的組成物は、亜鉛濃度の約１／３から３倍のクエン酸塩を含む。
【００１３】
本発明のインスリン分子は、互いに相互作用して、亜鉛を含んでなる複合体を形成する。これらのインスリン−亜鉛複合体は、製薬学的組成部中に、ヘキサマー、ドデカマーもしくはドデカマーより高分子量の複合体として存在し得る。全ての種類のインスリンが亜鉛と複合体を形成する、例えば、ヒトインスリン、アシル化インスリン（インスリン誘導体）およびインスリンアナログ。
【００１４】
本発明のある態様では、少なくとも８５％のアシル化インスリンが、アシル化インスリンドデカマー複合体もしくはアシル化インスリンドデカマーより高分子量の複合体として存在する。
本発明のある態様では、少なくとも９０、９２、９５、９６、９７、９８、９９もしくは９９．５％のアシル化インスリンが、アシル化インスリンドデカマー複合体もしくはアシル化インスリンドデカマーより高分子量の複合体として存在する。
【００１５】
本発明のある態様では、製薬学的組成物は界面活性剤を含む。界面活性剤は、製薬学的組成物の重量に基づいて０．０００５−０．０１％の量で存在し得る。ある態様では、界面活性剤は、製薬学的組成物の重量に基づいて０．０００５−０．００７％の量で存在し得る。界面活性剤の例としては、ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ２０が挙げられ、それは組成物の重量に基づいて０．００１−０．００３％の量で存在し得る。別の例としては、ｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８が挙げられ、それは組成物の重量に基づいて０．００２−０．００６％の量で存在し得る。
【００１６】
インスリン分子は、インスリン分子の様々な位置でアシル化されてよい。ある態様では、インスリンは、親インスリン分子のＢ鎖中の位置のＬｙｓ残基のε−アミノ基、特にヒトインスリン分子のＢ２９リジン基のε−アミノ基においてアシル化される。しかしながら、本発明の他の態様によると、アシル化は、インスリン分子の別の位置で起きてもよく、例えば、Ｂ２９がリジンから別のアミノ酸残基へと改変されたとすれば、位置Ｂ１のα−アミノ基もしくはインスリン分子中の天然アミノ酸残基がリジン残基に置換された位置で起きてもよい。
したがって、ある態様では、アシル化インスリンは、位置Ｂ１のα−アミノ基もしくはインスリン分子のＡ又はＢ鎖中のリジン残基の遊離ε−アミノ基のどちらかにおいてアシル化される。
ある態様では、インスリンは、インスリン分子の位置Ｂ２９のリジン残基の遊離ε−アミノ基においてアシル化される。
【００１７】
アシル基は、脂溶性（liphophilic）基であり、典型的には、少なくとも一つの遊離カルボン酸基もしくは中性ｐＨで負に荷電する基を含み、約６から約３２の炭素原子を有する脂肪酸部分であろう。より典型的には、脂肪酸部分は、６から２４、８から２０、１２から２０、１２−１６、１０−１６、１０−２０、１４−１８もしくは１４−１６の炭素原子を有するであろう。
【００１８】
ある態様では、製薬学的組成物は、少なくとも一つの遊離カルボン酸基もしくは中性ｐＨで負に荷電する基を含む。ある態様では、製薬学的組成物は、４から３２の炭素原子を有する二カルボン酸性脂肪酸から誘導されるアシル基を含む。
更なる態様では、脂肪酸部分は、約６から約３２、６から２４、８から２０、１２から２０、１２−１６、１０−１６、１０−２０、１４−１８もしくは１４−１６の炭素原子を有する二カルボン酸性脂肪酸から誘導される。
【００１９】
ある態様では、製薬学的組成物は、アミド結合を介するリンカー基を介して、インスリンと結合したアシル基を含む。
アシル基は、問題の遊離アミノ基と直接結合していてよい。しかしながら、アシル基は、インスリン分子中の遊離アミノ基と、問題のアシル基とを一緒に連結するリンカーにより、アミド結合を介して結合していてもよい。
アシル化インスリンは、典型的には、ヒトインスリンと比較して、少なくとも一つ、もしくは二つの追加の負の正味荷電を有し、より典型的には、二つの追加の負の荷電を有するであろう。追加の負の荷電は、脂肪酸中の遊離カルボン酸基、あるいは、少なくとも一つが遊離カルボン酸もしくは中性ｐＨで負に荷電する基を含む一又は複数のアミノ酸残基を含み得るリンカー基によりもたらされ得る。更なる態様では、アシル基は、二カルボン酸性脂肪酸から誘導される。
【００２０】
ある態様では、製薬学的組成物は、インスリンが、親インスリン部分のＢ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはＢ鎖中のＬｙｓ残基のε−アミノ基の何れか一方とアミド結合を介して結合している側鎖であって、少なくとも一つの遊離カルボン酸基もしくは中性ｐＨで負に荷電する基を含んでなる側鎖と、炭素鎖に約４から約３２の炭素原子を有する脂肪酸部分と；あり得る、側鎖中の個々の構成成分をアミド結合を介して一緒に連結する一又は複数のリンカーとを有するインスリンを含む。
【００２１】
ある態様では、インスリン分子は、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と結合している側鎖であって、一般式：
−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ２
およびそのＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｗは、
・残基がそのカルボン酸基のうちの一つと共に、親のインスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と一緒になってアミド基を形成する側鎖中のカルボン酸基を有するα−アミノ酸残基；
・アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている２、３または４のα−アミノ酸残基からなる鎖であって、
アミド結合−を介した鎖−は親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と連結しており、
Ｗのアミノ酸残基は、Ｗが側鎖中にカルボン酸基であるアミノ酸残基を少なくとも一つ有するように、中性側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖；もしくは、
・親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基からＸまでの共有結合
であり；
Ｘは、
・−ＣＯ−；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ  −ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；もしくは
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−であって、
ａ）Ｗがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖であるとき、下線の炭素からの結合を介して、Ｗ中のアミノ基とアミド結合を形成するか、あるいは、
ｂ）Ｗが共有結合であるとき、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基とアミド結合を形成し；
Ｙは、
・ｍが６から３２の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に１０から３２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ２は、
・−ＣＯＯＨ；
・−ＣＯ−Ａｓｐ；
・−ＣＯ−Ｇｌｕ；
・−ＣＯ−Ｇｌｙ；
・−ＣＯ−Ｓａｒ；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
・−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
・−ＳＯ３Ｈ；もしくは
・−ＰＯ３Ｈ
であるが、
ただし、Ｗが共有結合であってＸが−ＣＯ−であるならば、Ｚは−ＣＯＯＨとは異なる］
の側鎖を有する。
【００２２】
ある態様では、Ｂ３０アミノ酸残基は除去されており、アシル化インスリンはｄｅｓＢ３０インスリンである。
ある態様では、Ｗは４から１０の炭素原子を有するα−アミノ酸残基であり、更なる態様では、Ｗは、α−Ａｓｐ、β−Ａｓｐ、α−Ｇｌｕ、γ−Ｇｌｕ、α−ｈＧｌｕおよびδ−ｈＧｌｕからなる群から選択される。
ある態様では、Ｘは、−ＣＯ−である。
ある態様では、Ｚ２は、−ＣＯＯＨである。
【００２３】
側鎖−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ２の置換基Ｙは、ｍが６から３２、８から２０、１２から２０、もしくは１２−１６の範囲の整数である式−（ＣＨ２）ｍ−の基であってよい。
ある態様では、Ｙは、１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に６から３２、１０から３２、１２から２０、もしくは１２−１６の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖である。
ある態様では、Ｙは、式−（ＣＨ２）ｖＣ６Ｈ４（ＣＨ２）Ｗ−（ｖおよびｗの合計が６から３０、１０から２０、もしくは１２−１６の範囲になるように、ｖおよびｗは整数であるか、あるいは、それらのうちの一つは０である）の二価の炭化水素鎖である。
更なる態様では、Wは、α−Ａｓｐ、β−Ａｓｐ、α−Ｇｌｕ、およびγ−Ｇｌｕからなる群から選択され；Ｘは、−ＣＯ−もしくは−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯであり；Ｙは、ｍが１２−１８の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−であり、かつ、Ｚ２は、−ＣＯＯＨもしくは−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２である。
【００２４】
アシル化インスリン化合物の非限定的な例としては、ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１７ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１８ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ−Ｎ−（γ−Ｇｌｕ））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−α−Ｇｌｕ−Ｎ−（β−Ａｓｐ））ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｙ−ＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｓａｒ−ＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；（ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−？−Ａｓｐ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−？−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｄ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−？−Ｄ−Ａｓｐ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−？−Ｄ−Ａｓｐ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎ−ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−？−Ｄ−Ａｓｐ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎ−ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−ＩＤＡ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−Ｇｌｙ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−Ｇｌｙ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；およびＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシメチル）−？−Ａｌａ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリンが挙げられる。
ある態様では、側鎖は、少なくとも一つの芳香族基もしくは少なくとも一つの二官能性ＰＥＧ基を含んでよい。以下、略語「ＰＥＧ」は、ポリエチレングリコールに対して用いる。
【００２５】
本発明のある態様では、本発明の組成物に用いられるアシル化インスリンは、式
2009522231.tif 000002
およびその任意のＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
Ｘ４は、
・ｎが１、２、３、４、５もしくは６である−（ＣＨ２）ｎ；
・Ｒが、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ；−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；１又２の−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＣＯＯＨ基で置換されたアリーレン；−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾリルであるＮＲ
｛上式中、ｐは１から６の範囲の整数である｝；
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは、
・結合
であり；
Ｗ１は、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルからなる群から選択される一又は二の基で置換されていてもよいアリーレンもしくはヘテロアリーレンであるか、あるいはＷ１は結合であり；
ｍは０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｘ５は、
・−Ｏ−；
・
2009522231.tif 000003
｛Ｒは上記のように定義される｝；もしくは
・結合
であり；
Ｙ１は、
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−
・Ｒが上記のように定義されるＮＲ；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは
・結合
であり；
Ｑ７は、
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；もしくは
・式
−（ＣＨ２）ｓ  −Ｑ８−（Ｃ６Ｈ４）ｖ１−Ｑ９−（ＣＨ２）Ｗ  −Ｑ１０−（Ｃ６Ｈ４）ｖ２−Ｑ１１−（ＣＨ２）ｔ−Ｑ１２−（Ｃ６Ｈ４）ｖ３−Ｑ１３−（ＣＨ２）ｚ−
｛Ｑ８−Ｑ１３は、互いに独立して、Ｏ；Ｓもしくは結合であってよく；ｓ、ｗ、ｔおよびｚは、互いに独立して、ｓ、ｗ、ｔおよびｚの合計が４から２２の範囲になるように、０もしくは１から１０の整数であり、かつ、ｖ１、ｖ２、およびｖ３は、互いに独立して、０もしくは１であってよいが、ただし、Ｗ１が結合であるならば、Ｑ７は式−（ＣＨ２）ｖ４Ｃ６Ｈ４（ＣＨ２）Ｗ１（ｖ４およびｗ１の合計が６から２２の範囲になるように、ｖ４およびｗ１は整数であるか、あるいは、それらのうちの一つは０である）の二価の炭化水素鎖ではない｝
の二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ１は、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＰＯ３Ｈ２；
−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；
−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；
−テトラゾリルもしくは
Ｗ２が、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルから選択される一又は二の基で置換されているアリーレンもしくはヘテロアリーレンである−Ｏ−Ｗ２
であるが；
ただし、Ｗ１が結合であり、かつｖ１、ｖ２およびｖ３が全て０であり、かつＱ８−１３が全て結合であれば、Ｚ１はＯ−Ｗ２である］
を有する。
【００２６】
本発明のある態様では、Ｗ１はフェニレンである。ある態様では、Ｗ１は、窒素、酸素又は硫黄を含んでなる５−７員環ヘテロ環系である。ある態様では、Ｗ１は、少なくとも一つの酸素を含んでなる５員環ヘテロ環系である。
本発明のある態様では、Ｑ７は、ｒが４から２２、８から２０、１２から２０、もしくは１４−１８の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｒ−である。ある態様では、Ｑ８、Ｑ９、Ｑ１２およびＱ１３は、全て結合であり、ｖ２は１であり、ｖ１およびｖ３は０である。ある態様では、Ｑ１０およびＱ１１は酸素である。
【００２７】
本発明のある態様では、X4およびY1は結合であり、X5は、
2009522231.tif 000004
［上式中、Ｒは、ｐが１−４である−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨである］
である。
ある態様では、Ｚ１は、−ＣＯＯＨである。
【００２８】
本発明のある態様では、製薬学的組成物のアシル化インスリンは、
０１００−００００−０４９６  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ０１００−００００−０５１５  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ０１００−００００−０５２２    ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ０１００−００００−０４８８  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ０１００−００００−０５４４  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシメチル）−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、および０１００−００００−０２９    ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−（フラニルｅｎｅ）ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、０１００−００００−０５５２  ＮεＢ２９  −｛４−カルボキシ−４−［１０−（４−カルボキシ−フェノキシ）−デカノイルアミノ］−ブチリル｝ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン
からなる群から選択される。
【００２９】
本発明のある態様では、製薬学的組成物中に存在するアシル化インスリンは、式
2009522231.tif 000005
およびその任意のＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
それぞれのｎは独立して、０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、およびＱ４は、互いに独立して、
・ｓが１−２０である（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−もしくは（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；もしくは、１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；
・ｔが１から６の整数である−（ＣＨ２）ｔ−もしくは−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｔ−；
・Ｒ１およびＲ２が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）１−６ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ１およびＲ２が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑが１−６である−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−；
・Ｒ３およびＲ４が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ３およびＲ４が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑ１が１−６である−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−）−、−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１；もしくは
・結合
であってよいが；
ただし、Ｑ１−Ｑ４は異なっており；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、独立して、
・Ｏ；
・結合；もしくは
・
2009522231.tif 000006
｛上式中、
Ｒは、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ、それぞれのｐが、残りのｐ'と独立して、１から６の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２、−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；もしくは−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾール−５−イルである｝
であり；かつ
Ｚは、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＯＳＯ３Ｈ
−ＯＰＯ３Ｈ２
−ＰＯ３Ｈ２もしくは
−テトラゾール−５−イル
である］
を有する。
【００３０】
本発明のある態様では、ｓは、２−１２、２−４もしくは２−３の範囲の整数である。ある態様では、ｓは好ましくは１である。
本発明のある態様では、Ｚは、−ＣＯＯＨである。
【００３１】
本発明のある態様では、製薬学的組成物のアシル化インスリンは、
Ｎ？Ｂ２９−（３−［２−｛２−（２−［？−カルボキシ−ペンタデカノイル−？−グルタミル−（２−アミノ−エトキシ）］−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−プロピノイル(propinoyl)）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（３−［２−｛２−（２−［？−カルボキシ−ヘプタデカノイル−？−グルタミル−（２−アミノ−エトキシ）］−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−プロピノイル(propinoyl)）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９？｛３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオニル−？−グルタミル  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（？−［２−（２−｛２−［２−（２−カルボキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エチルカルバモイル］−ヘプタデカノイル−α−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（？−［２−（２−｛２−［２−（２−カルボキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エチルカルバモイル］−ヘプタデカノイル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオニル−？−グルタミル  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［７−カルボキシヘプタノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］−エトキシ｝プロピルカルバモイル）プロピオニル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシ｝プロピルカルバモイル）−プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［９−カルボキシノナノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］エトキシ｝  −プロピルカルバモイル）プロピオニル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（９−カルボキシノナノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）  プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（９−カルボキシノナノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシ｝−プロピルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（２−［３−（２−（２−｛２−（  ７−カルボキシヘプタノイルアミノ）エトキシ｝エトキシ）−エチルカルバモイル］プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシペンタデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル））  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（  ３−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロポイオノイル(propionoyl)−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロポイオノイル(propionoyl)−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロポイオノイル(propionoyl)−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチルカルバモイル）−プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［？−カルボキシペンタデカノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］−エトキシ｝プロピルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（？−カルボキシウンデカノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシプロピルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（？−カルボキシトリデカノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシプロピルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（？−カルボキシウンデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（？−カルボキシトリデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−ガンマ−？−Ｄ−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−？−グルタミル｝  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（９−カルボキシノナノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル(propioniyl)−？−グルタミル｝  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシウンデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−？−グルタミル｝  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシトリデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−？−グルタミル｝  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン
からなる群から選択される。
【００３２】
親インスリン分子は、ヒトインスリンもしくはそのアナログである。ヒトインスリン非限定的なアナログとしては、ｄｅｓＢ３０アナログ；位置Ｂ３０のアミノ酸残基がＬｙｓであり、位置Ｂ２９のアミノ酸残基は、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、ＡｒｇおよびＬｙｓ以外の任意のコードされ得るアミノ酸であるインスリンアナログ；位置Ａ２１のアミノ酸残基がＡｓｎであるインスリンアナログおよび位置Ｂ３のアミノ酸残基がＬｙｓであり、位置Ｂ２９のアミノ酸残基がＧｌｕであるインスリンアナログが挙げられる。
【００３３】
親インスリンアナログの別の群では、位置Ｂ２８のアミノ酸残基はＡｓｐである。親インスリンアナログのこの群の具体的な例としては、欧州特許第２１４８２６号に開示されたＡｓｐＢ２８ヒトインスリンが挙げられる。
親インスリンアナログの別の群では、位置Ｂ２８のアミノ酸残基はＬｙｓであり、位置Ｂ２９のアミノ酸残基はＰｒｏである。親インスリンアナログのこの群の具体的な例としては、ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンが挙げられる。
【００３４】
親インスリンアナログの別の群では、位置Ｂ３０のアミノ酸残基はＬｙｓであり、位置Ｂ２９のアミノ酸残基は、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、ＡｒｇおよびＬｙｓ以外の任意のコードされ得るアミノ酸である。例としては、位置Ｂ２９のアミノ酸残基がＴｈｒであり、位置Ｂ３０のアミノ酸残基がＬｙｓであるインスリンアナログが上げられる。親インスリンアナログのこの群の具体的な例としては、ＴｈｒＢ２９ＬｙｓＢ３０ヒトインスリンが挙げられる。
親インスリンアナログの別の群では、位置Ｂ３のアミノ酸残基はＬｙｓであり、位置Ｂ２９のアミノ酸残基はＧｌｕである。例親インスリンアナログのこの群の具体的な例としては、ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９ヒトインスリンが挙げられる。
【００３５】
本発明に係る製薬学的組成物は、治療の必要のある患者における１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態の治療のための、アシル化インスリンの治療的有効量を製薬学的に許容される担体と共に含むであろう。
本発明の更なる態様では、治療の必要のある患者における１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態の治療のための、上記定義のアシル化インスリン誘導体の治療的有効量を、インスリン又はインスリンアナログと混合して、製薬学的に許容される担体および／又は添加物と共に含む製薬学的組成物が提供される。
【００３６】
このように、製薬学的組成物は、二つのインスリン構成成分の混合物からなっていってもよい：遅延性のインスリン作用を有するもの、基礎インスリン、および作用が急速に発現する別のもの、ボーラスインスリン。そのような混合物の例としては、国際公開２００５／０１２３４７号に開示されるＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリンに対応するＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリンと混合した、インスリンアスパルト、ＡｓｐＢ２８ヒトインスリンと、が挙げられる。そのような混合物の別の例としては、ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリンとの混合した、Ｌｉｓｐｒｏ、ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンが挙げられる。そのような混合物の第三の例としては、ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと混合した、グルリシン、ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリンが挙げられる。
【００３７】
本発明のある態様では、少なくとも８５％の即効型インスリンが、即効型インスリンヘキサマーもしくは即効型インスリンドヘキサマーより低分子量の複合体として存在する。
本発明のある態様では、少なくとも９０、９２、９５、９６、９７、９８、９９、９９，５％の即効型インスリンが、即効型インスリンヘキサマーもしくは即効型インスリンドヘキサマーより低分子量の複合体として存在する。
アシル化インスリン誘導体と即効型インスリンアナログとは、約９０％／１０％；約７５％／２５％、約７０％／３０％  約５０％／５０％、約２５％／７５％、約３０％／７０％もしくは約１０％／９０％のモル比で混合することができる。
【００３８】
ある態様では、本発明の製薬学的組成物は、約６．５から約８．５のｐＨを有するであろう。別の態様では、ｐＨは約７．０から約８．２であるか、ｐＨは約７．２から約８．０もしくは約７．４から約８．０であるか、あるいは、ｐＨは、約７．４から約７．８である。
【００３９】
本発明は、さらに、６分子のアシル化インスリン毎に約４より多い亜鉛原子を組成物に添加する、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物を製造するための方法を含む。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約４．３より多い亜鉛原子を組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５より多い亜鉛原子を組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５より多い亜鉛原子を組成物に添加する。更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約５．５より多い亜鉛原子、もしくは、６分子のアシル化インスリン毎に約６．５より多い亜鉛原子、もしくは、６分子のアシル化インスリン毎に約７．０より多い亜鉛原子、もしくは、６分子のアシル化インスリン毎に約７．５より多い亜鉛原子を組成物に添加する。
【００４０】
本発明のある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に最大約１２の亜鉛原子を組成物に添加することを含む。
本発明のある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に約４．３から約１２の亜鉛原子を組成物に添加することを含む。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１１．４の亜鉛原子を組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１０の亜鉛原子を組成物に添加する。
更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約６から約１０．５の亜鉛原子、もしくは、６分子のアシル化インスリン毎に約６．５から約１０の亜鉛原子、もしくは、６分子のアシル化インスリン毎に約７．０から約９の亜鉛原子を組成物に添加する。
【００４１】
本発明のある態様では、本方法は、保存料の添加前に、亜鉛を組成物に添加することを含む。本発明の更なる態様では、保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に１より多い亜鉛原子であるか、あるいは、保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に２より多い亜鉛原子であるか、あるいは、保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に３より多い亜鉛原子であるか、あるいは、保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に４より多い亜鉛原子であるか、あるいは、保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に５より多い亜鉛原子である。
【００４２】
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１１．４の亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加するか、あるいは、さらにより好ましくは、６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１０の亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加する。更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約６から約１０．５の亜鉛原子、もしくは、６分子のアシル化インスリン毎に約６．５から約１０の亜鉛原子、もしくは、６分子のアシル化インスリン毎に約７．０から約９の亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加する。
【００４３】
本発明のある態様では、本方法は、保存料の添加後に、亜鉛を組成物に添加することを含む。本発明のある態様では、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも０．５の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約２の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約３の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約４の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する。
【００４４】
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約０．５から約１２、約１から約１１．４、約１．５から約１１、約２から約１０．５、約３から約１０、もしくは約４から約９の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１１．４の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１０の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する。
【００４５】
更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約６から約１０．５、もしくは６分子のアシル化インスリン毎に約６．５から約１０、、もしくは６分子のアシル化インスリン毎に約７から約９の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する。
本発明のある態様では、本方法は、保存料の添加前に亜鉛の一部を添加し、保存料の添加後に亜鉛の一部を添加することを含む。
ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも０．５の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも０．５の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくは１１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。
【００４６】
ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加すること、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２又は３の亜鉛原子を保存料の添加後に添加すること、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に最大約１１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも４、５、６、７、８、９、１０もしくは１１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加すること含む。
【００４７】
ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加すること、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２又は３の亜鉛原子を保存料の添加後に添加すること、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に最大約１０の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０の亜鉛原子を保存料の添加後に添加すること含む。
【００４８】
ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加すること、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２又は３の亜鉛原子を保存料の添加後に添加すること、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に最大約９の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。
本発明のある態様では、保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子であり、保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子である。ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも４、５、６、７、８もしくは９の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。
【００４９】
本発明のある態様では、添加する保存料は、フェノールおよび／又はｍ−クレゾールである。
本発明のある態様では、本方法は、一工程で、製薬学的組成物に亜鉛原子の総量を添加することを含む。
本発明のある態様では、本方法は、二以上の工程で、製薬学的組成物に亜鉛原子を添加することを含む。例えば、亜鉛は、それぞれの工程が最大１Ｚｎ／６ｉｎｓのうちの少量の添加を含む１、２、３、４又は５工程で、組成物に添加されてよい。亜鉛は、それぞれの工程が２Ｚｎ／６ｉｎｓ、３Ｚｎ／６ｉｎｓ、４Ｚｎ／６ｉｎｓ、５Ｚｎ／６ｉｎｓもしくは６Ｚｎ／６ｉｎｓのうちの少量の添加を含む１、２、３、４又は５工程で、組成物に添加されてよい。
【００５０】
本発明のある態様では、本方法は、製薬学的組成物に界面活性剤を添加することを含む。界面活性剤は、製薬学的組成物の重量に基づいて０．０００５−０．０１％の量で製薬学的組成部中に混合し得る。ある態様では、界面活性剤は、組成物の重量に基づいて０．０００５−０．００７％の量で製薬学的組成物中に混合し得る。界面活性剤の例としては、ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ２０が挙げられ、それは組成物の重量に基づいて０．００１−０．００３％の量で製薬学的組成物中に混合し得る。別の例としては、ｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８が挙げられ、それは組成物の重量に基づいて０．００２−０．００６％の量で製薬学的組成物中に混合し得る。
【００５１】
本発明の更なる態様では、本方法は、インスリンが、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と結合している側鎖であって、一般式：
−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ２
およびそのＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｗは、
・残基がそのカルボン酸基のうちの一つと共に、親のインスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と一緒になってアミド基を形成する側鎖中のカルボン酸基を有するα−アミノ酸残基；
・アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている２、３または４のα−アミノ酸残基からなる鎖であって、
アミド結合−を介した鎖−は親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と連結しており、
Ｗのアミノ酸残基は、Ｗが側鎖中にカルボン酸基であるアミノ酸残基を少なくとも一つ有するように、中性側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖；もしくは、
・親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基からＸまでの共有結合
であり；
Ｘは、
・−ＣＯ−；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ  −ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；もしくは
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−であって、
ａ）Ｗがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖であるとき、下線の炭素からの結合を介して、Ｗ中のアミノ基とアミド結合を形成するか、あるいは、
ｂ）Ｗが共有結合であるとき、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基とアミド結合を形成し；
Ｙは、
・ｍが６から３２の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に１０から３２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ２は、
・−ＣＯＯＨ；
・−ＣＯ−Ａｓｐ；
・−ＣＯ−Ｇｌｕ；
・−ＣＯ−Ｇｌｙ；
・−ＣＯ−Ｓａｒ；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
・−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
・−ＳＯ３Ｈ；もしくは
・−ＰＯ３Ｈ
であるが、
ただし、Ｗが共有結合であってＸが−ＣＯ−であるならば、Ｚは−ＣＯＯＨとは異なる］
の側鎖を有するアシル化インスリンを含む。
【００５２】
本発明のある態様では、アシル化インスリンは、ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１７ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１８ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ−Ｎ−（γ−Ｇｌｕ））  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−α−Ｇｌｕ−Ｎ−（β−Ａｓｐ））  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｙ−ＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｓａｒ−ＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  （ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−？−Ａｓｐ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−？−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｄ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−？−Ｄ−Ａｓｐ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−？−Ｄ−Ａｓｐ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎ−ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−？−Ｄ−Ａｓｐ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎ−ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−ＩＤＡ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−Ｇｌｙ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−Ｇｌｙ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；およびＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシメチル）−？−Ａｌａ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリンからなる群から選択される。
【００５３】
本発明のある態様では、製薬学的組成物を調整するための方法に用いられるアシル化インスリンは、式
2009522231.tif 000007
およびその任意のＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
Ｘ４は、
・ｎが１、２、３、４、５もしくは６である−（ＣＨ２）ｎ；
・Ｒが、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ；−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；１又２の−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＣＯＯＨ基で置換されたアリーレン；−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾリルであるＮＲ
｛上式中、ｐは１から６の範囲の整数である｝；
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは、
・結合
であり；
Ｗ１は、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルからなる群から選択される一又は二の基で置換されていてもよいアリーレンもしくはヘテロアリーレンであるか、あるいはＷ１は結合であり；
ｍは０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｘ５は、
・−Ｏ−；
・
2009522231.tif 000008
｛Ｒは上記のように定義される｝；もしくは
・結合
であり；
Ｙ１は、
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−
・Ｒが上記のように定義されるＮＲ；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは
・結合
であり；
Ｑ７は、
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；もしくは
・式
−（ＣＨ２）ｓ  −Ｑ８−（Ｃ６Ｈ４）ｖ１−Ｑ９−（ＣＨ２）Ｗ  −Ｑ１０−（Ｃ６Ｈ４）ｖ２−Ｑ１１−（ＣＨ２）ｔ−Ｑ１２−（Ｃ６Ｈ４）ｖ３−Ｑ１３−（ＣＨ２）ｚ−
｛Ｑ８−Ｑ１３は、互いに独立して、Ｏ；Ｓもしくは結合であってよく；ｓ、ｗ、ｔおよびｚは、互いに独立して、ｓ、ｗ、ｔおよびｚの合計が４から２２の範囲になるように、０もしくは１から１０の整数であり、かつ、ｖ１、ｖ２、およびｖ３は、互いに独立して、０もしくは１であってよいが、ただし、Ｗ１が結合であるならば、Ｑ７は式−（ＣＨ２）ｖ４Ｃ６Ｈ４（ＣＨ２）Ｗ１（ｖ４およびｗ１の合計が６から２２の範囲になるように、ｖ４およびｗ１は整数であるか、あるいは、それらのうちの一つは０である）の二価の炭化水素鎖ではない｝
の二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ１は、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＰＯ３Ｈ２；
Ｏ−ＳＯ３Ｈ；
Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；
−テトラゾリルもしくは
Ｗ２が、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルから選択される一又は二の基で置換されているアリーレンもしくはヘテロアリーレンである−Ｏ−Ｗ２
であるが；
ただし、Ｗ１が結合であり、かつｖ１、ｖ２およびｖ３が全て０であり、かつＱ８−１３が全て結合であれば、Ｚ１はＯ−Ｗ２である］
を有する。
【００５４】
本発明のある態様では、Ｗ１はフェニレンである。ある態様では、Ｗ１は、窒素、酸素又は硫黄を含んでなる５−７員環ヘテロ環系である。ある態様では、Ｗ１は、少なくとも一つの酸素を含んでなる５員環ヘテロ環系である。
本発明のある態様では、Ｑ７は、ｒが４から２２、８から２０、１２から２０、もしくは１４−１８の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｒ−である。ある態様では、Ｑ８、Ｑ９、Ｑ１２およびＱ１３は、全て結合であり、ｖ２は１であり、ｖ１およびｖ３は０である。ある態様では、Ｑ１０およびＱ１１は酸素である。
【００５５】
本発明のある態様では、X4およびY1は結合であり、X5は、
2009522231.tif 000009
［上式中、Ｒは、ｐが１−４である−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨである］
である。
ある態様では、Ｚ１は、−ＣＯＯＨである。
【００５６】
本発明のある態様では、本方法で用いられるアシル化インスリンは、
０１００−００００−０４９６  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ０１００−００００−０５１５  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ０１００−００００−０５２２    ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ０１００−００００−０４８８  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ０１００−００００−０５４４  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシメチル）−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、および０１００−００００−０２９    ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−（フラニルｅｎｅ）ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、０１００−００００−０５５２  ＮεＢ２９  −｛４−カルボキシ−４−［１０−（４−カルボキシ−フェノキシ）−デカノイルアミノ］−ブチリル｝ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン
からなる群から選択される。
【００５７】
本発明のある態様では、本方法で用いられるアシル化インスリンは、式
2009522231.tif 000010
およびその任意のＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
それぞれのｎは独立して、０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、およびＱ４は、互いに独立して、
・ｓが１−２０である（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−もしくは（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；もしくは、１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；
・ｔが１から６の整数である−（ＣＨ２）ｔ−もしくは−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｔ−；
・Ｒ１およびＲ２が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）１−６ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ１およびＲ２が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑが１−６である−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−；
・Ｒ３およびＲ４が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ３およびＲ４が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑ１が１−６である−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−）−、−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１；もしくは
・結合
であってよいが；
ただし、Ｑ１−Ｑ４は異なっており；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、独立して、
・Ｏ；
・結合；もしくは
・
2009522231.tif 000011
｛上式中、
Ｒは、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ、それぞれのｐが、残りのｐ'と独立して、１から６の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２、−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；もしくは−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾール−５−イルである｝
であり；かつ
Ｚは、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＯＳＯ３Ｈ
−ＯＰＯ３Ｈ２
−ＰＯ３Ｈ２もしくは
−テトラゾール−５−イル
である］
を有する。
【００５８】
本発明のある態様では、ｓは、２−１２、２−４もしくは２−３の範囲の整数である。ある態様では、ｓは好ましくは１である。
本発明のある態様では、Ｚは、−ＣＯＯＨである。
【００５９】
本発明のある態様では、製薬学的組成物を調整するための方法で用いられるアシル化インスリンは、Ｎ？Ｂ２９−（３−［２−｛２−（２−［？−カルボキシ−ペンタデカノイル−？−グルタミル−（２−アミノ−エトキシ）］−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−プロピノイル（ｐｒｏｐｉｎｏｙｌ））  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（３−［２−｛２−（２−［？−カルボキシ−ヘプタデカノイル−？−グルタミル−（２−アミノ−エトキシ）］−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−プロピノイル（ｐｒｏｐｉｎｏｙｌ））  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９？｛３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオニル−？−グルタミル  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（？−［２−（２−｛２−［２−（２−カルボキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エチルカルバモイル］−ヘプタデカノイル−α−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（？−［２−（２−｛２−［２−（２−カルボキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エチルカルバモイル］−ヘプタデカノイル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオニル−？−グルタミル  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［７−カルボキシヘプタノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］−エトキシ｝プロピルカルバモイル）プロピオニル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシ｝プロピルカルバモイル）−プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［９−カルボキシノナノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］エトキシ｝  −プロピルカルバモイル）プロピオニル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（９−カルボキシノナノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）  プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（９−カルボキシノナノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシ｝−プロピルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（２−［３−（２−（２−｛２−（  ７−カルボキシヘプタノイルアミノ）エトキシ｝エトキシ）−エチルカルバモイル］プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシペンタデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル））  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（  ３−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エト���シ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏｎｏｙｌ）−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏｎｏｙｌ）−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏｎｏｙｌ）−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチルカルバモイル）−プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［？−カルボキシペンタデカノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］−エトキシ｝プロピルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（？−カルボキシウンデカノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシプロピルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（？−カルボキシトリデカノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシプロピルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（？−カルボキシウンデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（？−カルボキシトリデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−ガンマ−？−Ｄ−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−？−グルタミル｝  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（９−カルボキシノナノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル（ｐｒｏｐｉｏｎｉｙｌ）−？−グルタミル｝  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシウンデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−？−グルタミル｝  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシトリデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−？−グルタミル｝  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリンからなる群から���択される。
【００６０】
本発明のある態様では、本方法は、即効型インスリンを組成物に添加することを含む。即効型インスリンは、ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン、ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンおよびＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９−ヒトインスリンもしくはそれらの混合物である。
【００６１】
本発明のある態様では、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物は、糖尿病の治療のために用いられる。
本発明のある態様では、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物は、糖尿病の治療のための医薬の製造のために用いられる。
ある態様では、本発明は、製薬学的に許容される担体および／又は製薬学的に許容される添加物を有する本発明の製薬学的組成物に関し、その組成物は、治療を必要とする患者における１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態の治療のために提供され得る（ｋｒａｖ３１）。
【００６２】
本発明のある態様では、治療の必要のある患者において、１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態を治療するための方法であって、製薬学的に許容される担体および／又は添加物を含む製薬学的組成物の治療的有効量を患者に投与することを含む方法が提供される。（請求項３３）
本発明のある態様では、１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態の治療において用いるための製薬学的組成物の製造のための方法が提供される。
【００６３】
本発明のある態様では、治療の必要のある患者において、１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態を治療するための製薬学的組成物が提供される。
本発明のある態様では、治療の必要のある患者において、１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態を治療するための方法であって、本発明に係る製薬学的組成物の治療的有効量を患者に投与することを含む方法が提供される。
本発明のある態様では、１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態の治療において用いるための製薬学的組成物の製造のための方法が提供される。
【００６４】
本明細書で定義されるアシル化インスリンを含む製薬学的組成物は、ＯＡＤもしくはＧＬＰ−１と同時又は連続して投与してよい。ファクターは、双方の化合物を含む単回投与形態、あるいは、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物と、第二単位投与形態としてのＯＡＤを含む製薬学的組成物を含む製薬学的組成物の製剤を含む部分キット形態で提供されてよい。
第一又は第二又は第三などの単位投与がこの明細書の至るところで記述されるとき、これは投与の好ましい順序を示すものではなく、単に便宜上の目的のためになされるものである。
【００６５】
アシル化インスリンおよびＯＡＤ又はＧＬＰ−１の製剤を含む製薬学的組成物の製剤を「同時に」投与するとは、単回投与形態での化合物の投与、もしくは、第一の薬剤の投与に続く、１５分、１０、５又は２分以下の時間間隔での第二の薬剤の投与を意味する。どちらのファクターが最初に投与されてもよい。
「連続的に」投与するとは、第一の薬剤の投与に続く、１５分以上の時間間隔での第二の薬剤の投与を意味する。二つの単位投与形態のどちらが最初に投与されてもよい。好ましくは、双方の製品は、同じ静脈経路を通して注射する。
【００６６】
本発明の更なる態様では、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物は、一日一回、ＯＡＤ又はＧＬＰ−１と共に、同時又は連続して投与される。より好ましい態様では、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物は、さらに、即効型インスリンを含み、ＯＡＤ又はＧＬＰ−１と共に一日一回投与される。本発明のある態様では、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物は、独立型の集中治療で一日五回まで与えられ得る。さらにより好ましい態様では、製薬学的組成物は、さらに即効型インスリンを含み、集中治療は、一日五回まで与えられる独立型の治療であり得る。
【００６７】
本発明は、以下の項に要約されるであろう：
１．
アシル化インスリンを含み、６分子のアシル化インスリン毎に４より多い亜鉛原子をさらに含む可溶性製薬学的組成物。
２．
６分子のアシル化インスリン毎に最大約１２の亜鉛原子を含む項１に記載の製薬学的組成物。
【００６８】
３．
６分子のアシル化インスリン毎に約４．３から約１２の亜鉛原子を含む項１又は２に記載の製薬学的組成物。
４．
６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を含む項１ないし３の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
５．
少なくとも８５％のアシル化インスリンが、アシル化インスリンドデカマー複合体もしくはアシル化インスリンドデカマーより高分子量の複合体として存在する項１ないし４の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【００６９】
６．
少なくとも９２％のアシル化インスリンが、アシル化インスリンドデカマー複合体もしくはアシル化インスリンドデカマーより高分子量の複合体として存在する項１ないし５の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
７．
少なくとも９５％のアシル化インスリンが、アシル化インスリンドデカマー複合体もしくはアシル化インスリンドデカマーより高分子量の複合体として存在する項１ないし６の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
８．
少なくとも９７％のアシル化インスリンが、アシル化インスリンドデカマー複合体もしくはアシル化インスリンドデカマーより高分子量の複合体として存在する項１ないし７の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【００７０】
９．
組成物が界面活性剤を含む項１ないし８の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１０．
アシル化インスリンが、親インスリン部分のＢ鎖中のＬｙｓ残基のε−アミノ基でアシル化されたインスリンである項１ないし９の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１１．
アシル基が、少なくとも一つの遊離カルボン酸基もしくは中性ｐＨで負に荷電する基を含んでなる項１ないし１０の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【００７１】
１２．
アシル基が、４から３２の炭素原子を有する二カルボン酸性脂肪酸から誘導される項１又は１０−１１の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１３．
アシル基が、アミド結合を介したリンカー基を介して、インスリン分子と結合している項１又は１０−１２の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１４．
リンカー基が、少なくとも一つの遊離カルボキシル基もしくは中性ｐＨで負に荷電する基を含んでなる項１又は１３に記載の製薬学的組成物。
【００７２】
１５．
インスリン分子が、親インスリン部分のＢ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはＢ鎖中のＬｙｓ残基のε−アミノ基の何れか一方とアミド結合を介して結合している側鎖であって、少なくとも一つの遊離カルボン酸基もしくは中性ｐＨで負に荷電する基を含んでなる側鎖と、炭素鎖に約４から約３２の炭素原子を有する脂肪酸部分と；あり得る、側鎖中の個々の構成成分をアミド結合を介して一緒に連結する一又は複数のリンカーとを有する項１ないし１４の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１６．
側鎖が少なくとも一つの芳香族基を含んでなる項１−１５に記載の製薬学的組成物。
１７．
側鎖が少なくとも一つの二官能性ＰＥＧ基を含んでなる請求項１−１５に記載の製薬学的組成物。
【００７３】
１８．
インスリン分子が、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と結合している側鎖であって、一般式：
−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ２
およびそのＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｗは、
・残基がそのカルボン酸基のうちの一つと共に、親のインスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と一緒になってアミド基を形成する側鎖中のカルボン酸基を有するα−アミノ酸残基；
・アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている２、３または４のα−アミノ酸残基からなる鎖であって、
アミド結合−を介した鎖−は親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と連結しており、
Ｗのアミノ酸残基は、Ｗが側鎖中にカルボン酸基であるアミノ酸残基を少なくとも一つ有するように、中性側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖；もしくは、
・親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基からＸまでの共有結合
であり；
Ｘは、
・−ＣＯ−；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ  −ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；もしくは
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−であって、
ａ）Ｗがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖であるとき、下線の炭素からの結合を介して、Ｗ中のアミノ基とアミド結合を形成するか、あるいは、
ｂ）Ｗが共有結合であるとき、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基とアミド結合を形成し；
Ｙは、
・ｍが６から３２の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に１０から３２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ２は、
・−ＣＯＯＨ；
・−ＣＯ−Ａｓｐ；
・−ＣＯ−Ｇｌｕ；
・−ＣＯ−Ｇｌｙ；
・−ＣＯ−Ｓａｒ；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
・−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
・−ＳＯ３Ｈ；もしくは
・−ＰＯ３Ｈ
であるが、
ただし、Ｗが共有結合であってＸが−ＣＯ−であるならば、Ｚは−ＣＯＯＨとは異なる］
の側鎖を有する項１−１５の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１９．
Ｚ２が−ＣＯＯＨである項１−１５および１８の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【００７４】
２０．
アシル化インスリンが、ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１７ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１８ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ−Ｎ−（γ−Ｇｌｕ））  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−α−Ｇｌｕ−Ｎ−（β−Ａｓｐ））  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｙ−ＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｓａｒ−ＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  （ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−？−Ａｓｐ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−？−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｄ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−？−Ｄ−Ａｓｐ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−？−Ｄ−Ａｓｐ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎ−ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−？−Ｄ−Ａｓｐ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎ−ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−ＩＤＡ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−Ｇｌｙ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−Ｇｌｙ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；およびＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシメチル）−？−Ａｌａ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリンからなる群から選択される項１−１５および１８−１９の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【００７５】
２１．
アシル化インスリンが、式
2009522231.tif 000012
およびその任意のＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
Ｘ４は、
・ｎが１、２、３、４、５もしくは６である−（ＣＨ２）ｎ；
・Ｒが、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ；−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；１又２の−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＣＯＯＨ基で置換されたアリーレン；−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾリルであるＮＲ
｛上式中、ｐは１から６の範囲の整数である｝；
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは、
・結合
であり；
Ｗ１は、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルからなる群から選択される一又は二の基で置換されていてもよいアリーレンもしくはヘテロアリーレンであるか、あるいはＷ１は結合であり；
ｍは０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｘ５は、
・−Ｏ−；
・
2009522231.tif 000013
｛Ｒは上記のように定義される｝；もしくは
・結合
であり；
Ｙ１は、
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−
・Ｒが上記のように定義されるＮＲ；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは
・結合
であり；
Ｑ７は、
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；もしくは
・式
−（ＣＨ２）ｓ  −Ｑ８−（Ｃ６Ｈ４）ｖ１−Ｑ９−（ＣＨ２）Ｗ  −Ｑ１０−（Ｃ６Ｈ４）ｖ２−Ｑ１１−（ＣＨ２）ｔ−Ｑ１２−（Ｃ６Ｈ４）ｖ３−Ｑ１３−（ＣＨ２）ｚ−
｛Ｑ８−Ｑ１３は、互いに独立して、Ｏ；Ｓもしくは結合であってよく；ｓ、ｗ、ｔおよびｚは、互いに独立して、ｓ、ｗ、ｔおよびｚの合計が４から２２の範囲になるように、０もしくは１から１０の整数であり、かつ、ｖ１、ｖ２、およびｖ３は、互いに独立して、０もしくは１であってよいが、ただし、Ｗ１が結合であるならば、Ｑ７は式−（ＣＨ２）ｖ４Ｃ６Ｈ４（ＣＨ２）Ｗ１（ｖ４およびｗ１の合計が６から２２の範囲になるように、ｖ４およびｗ１は整数であるか、あるいは、それらのうちの一つは０である）の二価の炭化水素鎖ではない｝
の二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ１は、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＰＯ３Ｈ２；
−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；
−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；
−テトラゾリルもしくは
Ｗ２が、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルから選択される一又は二の基で置換されているアリーレンもしくはヘテロアリーレンである−Ｏ−Ｗ２
であるが；
ただし、Ｗ１が結合であり、かつｖ１、ｖ２およびｖ３が全て０であり、かつＱ８−１３が全て結合であれば、Ｚ１はＯ−Ｗ２である］
を有する項１−１６に記載の製薬学的組成物。
【００７６】
２２．
Ｗ１がフェニレンである項１又は２１に記載の製薬学的組成物。
２３．
Ｗ１が、窒素、酸素又は硫黄を含んでなる５−７員環ヘテロ環系である項１又は２１に記載の製薬学的組成物。
２４．
Ｗ１が、少なくとも一つの酸素を含んでなる５−７員環ヘテロ環系である項１、２１および２３に記載の製薬学的組成物。
【００７７】
２５．
本発明のある態様では、Ｑ７は、ｒが４から２２、８から２０、１２から２０、もしくは１４−１８の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｒ−である項２１−２４に記載の製薬学的組成物。
２６．
Ｑ８、Ｑ９、Ｑ１２およびＱ１３は、全て結合であり、ｖ２は１であり、ｖ１およびｖ３は０である項２１−２４に記載の製薬学的組成物。
２７．
Ｑ１０およびＱ１１は酸素である項２６に記載の製薬学的組成物。
【００７８】
２８．
Ｘ４およびＹ１は結合であり、Ｘ５は、
2009522231.tif 000014
［上式中、Ｒは、ｐが１−４である−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨである］
である項２１−２７に記載の製薬学的組成物。
２９．
Ｚ１は、−ＣＯＯＨである項２１−２８に記載の製薬学的組成物。
【００７９】
３０．
アシル化インスリンが、式
2009522231.tif 000015
およびその任意のＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
それぞれのｎは独立して、０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、およびＱ４は、互いに独立して、
・ｓが１−２０である（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−もしくは（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；もしくは、１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；
・ｔが１から６の整数である−（ＣＨ２）ｔ−もしくは−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｔ−；
・Ｒ１およびＲ２が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）１−６ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ１およびＲ２が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑが１−６である−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−；
・Ｒ３およびＲ４が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ３およびＲ４が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑ１が１−６である−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−）−、−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１；もしくは
・結合
であってよいが；
ただし、Ｑ１−Ｑ４は異なっており；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、独立して、
・Ｏ；
・結合；もしくは
・
2009522231.tif 000016
｛上式中、
Ｒは、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ、それぞれのｐが、残りのｐ'と独立して、１から６の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２、−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；もしくは−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾール−５−イルである｝
であり；かつ
Ｚは、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＯＳＯ３Ｈ
−ＯＰＯ３Ｈ２
−ＰＯ３Ｈ２もしくは
−テトラゾール−５−イル
である］
を有する項１−１５および１７の製薬学的組成物。
【００８０】
３１．
ｓが、２−１２、２−４もしくは２−３の範囲の整数である項１又は３０に記載の製薬学的組成物。
３２．
ｓが好ましくは１である項１又は３０に記載の製薬学的組成物。
３３．
Ｚが−ＣＯＯＨである項３０−３２に記載の製薬学的組成物。
３４．
親インスリンがｄｅｓＢ３０ヒトインスリンアナログである項１ないし３３の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【００８１】
３５．
親インスリンが、ヒトインスリン；  ｄｅｓＢ１  ヒトインスリン；  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＧｌｙＡ２１  ヒトインスリン；  ＧｌｙＡ２１  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＡｓｐＢ２８  ヒトインスリン；  ｐｏｒｃｉｎｅ  インスリン；  ＬｙｓＢ２８  ＰｒｏＢ２９  ヒトインスリン；  ＧｌｙＡ２１  ＡｒｇＢ３１  ＡｒｇＢ３２  ヒトインスリン；およびＬｙｓＢ３  ＧｌｕＢ２９  ヒトインスリンもしくはＡｓｐＢ２８  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリンからなる群から選択される項１ないし３４の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【００８２】
３６．
アシル化インスリンが、
０１００−００００−０４９６  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ０１００−００００−０５１５  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ０１００−００００−０５２２    ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ０１００−００００−０４８８  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ０１００−００００−０５４４  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシメチル）−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、および０１００−００００−０２９    ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−（フラニルｅｎｅ）ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、０１００−００００−０５５２  ＮεＢ２９  −｛４−カルボキシ−４−［１０−（４−カルボキシ−フェノキシ）−デカノイルアミノ］−ブチリル｝ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン
からなる群から選択される項１−１６、２１−２９および３４−３５に記載の製薬学的組成物。
【００８３】
３７．
アシル化インスリンが、Ｎ？Ｂ２９−（３−［２−｛２−（２−［？−カルボキシ−ペンタデカノイル−？−グルタミル−（２−アミノ−エトキシ）］−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−プロピノイル（ｐｒｏｐｉｎｏｙｌ））  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（３−［２−｛２−（２−［？−カルボキシ−ヘプタデカノイル−？−グルタミル−（２−アミノ−エトキシ）］−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−プロピノイル（ｐｒｏｐｉｎｏｙｌ））  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９？｛３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオニル−？−グルタミル  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（？−［２−（２−｛２−［２−（２−カルボキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エチルカルバモイル］−ヘプタデカノイル−α−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（？−［２−（２−｛２−［２−（２−カルボキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エチルカルバモイル］−ヘプタデカノイル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオニル−？−グルタミル  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［７−カルボキシヘプタノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］−エトキシ｝プロピルカルバモイル）プロピオニル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシ｝プロピルカルバモイル）−プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［９−カルボキシノナノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］エトキシ｝  −プロピルカルバモイル）プロピオニル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（９−カルボキシノナノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）  プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（９−カルボキシノナノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシ｝−プロピルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（２−［３−（２−（２−｛２−（  ７−カルボキシヘプタノイルアミノ）エトキシ｝エトキシ）−エチルカルバモイル］プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシペンタデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル））  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（  ３−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−���トキシ｝−エトキシ）−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏｎｏｙｌ）−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏｎｏｙｌ）−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏｎｏｙｌ）−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチルカルバモイル）−プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［？−カルボキシペンタデカノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］−エトキシ｝プロピルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（？−カルボキシウンデカノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシプロピルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（？−カルボキシトリデカノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシプロピルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（？−カルボキシウンデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（？−カルボキシトリデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−ガンマ−？−Ｄ−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−？−グルタミル｝  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（９−カルボキシノナノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル（ｐｒｏｐｉｏｎｉｙｌ）−？−グルタミル｝  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシウンデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−？−グルタミル｝  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシトリデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−？−グルタミル｝  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリンからなる群から選択される項１−１５、１７および３０−３５に記載の製薬学的組成物。
【００８４】
３８．
約６．５から８．５のｐＨを有する項１−３７の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
３９．
即効型インスリンをさらに含む項１−３８の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
４０．
少なくとも８５％の即効型インスリンが、即効型インスリンヘキサマーもしくは即効型インスリンヘキサマーより低分子量の複合体として存在する項１および３９に記載の製薬学的組成物。
【００８５】
４１．
少なくとも９２％の即効型インスリンが、即効型インスリンヘキサマーもしくは即効型インスリンヘキサマーより低分子量の複合体として存在する項１および３９−４０に記載の製薬学的組成物。
４２．
少なくとも９５％の即効型インスリンが、即効型インスリンヘキサマーもしくは即効型インスリンヘキサマーより低分子量の複合体として存在する項１および３９−４１に記載の製薬学的組成物。
【００８６】
４３．
少なくとも９７％の即効型インスリンが、即効型インスリンヘキサマーもしくは即効型インスリンヘキサマーより低分子量の複合体として存在する項１および３９−４２に記載の製薬学的組成物。
４４．
少なくとも９９％の即効型インスリンが、即効型インスリンヘキサマーもしくは即効型インスリンヘキサマーより低分子量の複合体として存在する項１および３９−４３に記載の製薬学的組成物。
【００８７】
４５．
即効型インスリンが、ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン、ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９ヒトインスリンおよび／又はＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンである項３９−４４に記載の製薬学的組成物。
４６．
６分子のアシル化インスリン毎に約４より多い亜鉛原子を組成物に添加する、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物を製造するための方法。
４７．
６分子のアシル化インスリン毎に最大約１２の亜鉛原子を組成物に添加する項４６に記載の方法。
【００８８】
４８．
６分子のアシル化インスリン毎に約４．３から約１２の亜鉛原子を組成物に添加する項４６−４７の何れか一項に記載の方法。
４９．
保存料の添加前に、亜鉛を組成物に添加する項４６−４８に記載の方法。
５０．
６分子のアシル化インスリン毎に１より多い亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加する項４６−４９の何れか一項に記載の方法。
【００８９】
５１．
６分子のアシル化インスリン毎に２より多い亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加する項４６−５０の何れか一項に記載の方法。
５２．
６分子のアシル化インスリン毎に３より多い亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加する項４６−５１の何れか一項に記載の方法。
５３．
６分子のアシル化インスリン毎に４より多い亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加する項４６−５２の何れか一項に記載の方法。
【００９０】
５４．
６分子のアシル化インスリン毎に５より多い亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加する項４６−５３の何れか一項に記載の方法。
５５．
保存料の添加後に、亜鉛を組成物に添加する項４６−４８に記載の方法。
５６．
６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも０．５の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する項４６−４８および５５に記載の方法。
【００９１】
５７．
６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する項４６−４８および５５−５６の何れか一項に記載の方法。
５８．
保存料の添加前に亜鉛の一部を添加し、保存料の添加後に亜鉛の一部を添加する項４６ないし５７の何れか一項に記載の方法。
５９．
保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子であり、保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子である項４６ないし５８の何れか一項に記載の方法。
【００９２】
６０．
保存料がフェノールおよび／又はｍ−クレゾールである項４６ないし５９の何れか一項に記載の方法。
６１．
界面活性剤を製薬学的組成物と混合する項４６ないし６０の何れか一項に記載の方法。
【００９３】
６２．
アシル化インスリンが、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と結合している側鎖であって、一般式：
−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ２
およびそのＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｗは、
・残基がそのカルボン酸基のうちの一つと共に、親のインスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と一緒になってアミド基を形成する側鎖中のカルボン酸基を有するα−アミノ酸残基；
・アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている２、３または４のα−アミノ酸残基からなる鎖であって、
アミド結合−を介した鎖−は親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と連結しており、
Ｗのアミノ酸残基は、Ｗが側鎖中にカルボン酸基であるアミノ酸残基を少なくとも一つ有するように、中性側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖；もしくは、
・親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基からＸまでの共有結合
であり；
Ｘは、
・−ＣＯ−；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ  −ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；もしくは
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−であって、
ａ）Ｗがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖であるとき、下線の炭素からの結合を介して、Ｗ中のアミノ基とアミド結合を形成するか、あるいは、
ｂ）Ｗが共有結合であるとき、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基とアミド結合を形成し；
Ｙは、
・ｍが６から３２の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に１０から３２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ２は、
・−ＣＯＯＨ；
・−ＣＯ−Ａｓｐ；
・−ＣＯ−Ｇｌｕ；
・−ＣＯ−Ｇｌｙ；
・−ＣＯ−Ｓａｒ；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
・−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
・−ＳＯ３Ｈ；もしくは
・−ＰＯ３Ｈ
であるが、
ただし、Ｗが共有結合であってＸが−ＣＯ−であるならば、Ｚは−ＣＯＯＨとは異なる］
の側鎖を有する項４６ないし６１の何れか一項に記載の方法。
６３．
アシル化インスリンが、ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１７ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１８ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ−Ｎ−（γ−Ｇｌｕ））  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｕ−ＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ａｓｐ−ＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−α−Ｇｌｕ−Ｎ−（β−Ａｓｐ））  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｇｌｙ−ＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（Ｓａｒ−ＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−γ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  （ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−？−Ａｓｐ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−？−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−γ−Ｄ−Ｇｌｕ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−？−Ｄ−Ａｓｐ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン  ＮεＢ２９−（Ｎα−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−？−Ｄ−Ａｓｐ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎ−ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ−？−Ｄ−Ａｓｐ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−（Ｎ−ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ−ＩＤＡ）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−Ｇｌｙ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−Ｇｌｙ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；およびＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシメチル）−？−Ａｌａ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリンからなる群から選択される項４６ないし６２の何れか一項に記載の方法。
【００９４】
６４．
アシル化インスリンが、式
2009522231.tif 000017
およびその任意のＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
Ｘ４は、
・ｎが１、２、３、４、５もしくは６である−（ＣＨ２）ｎ；
・Ｒが、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ；−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ２；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；１又２の−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＣＯＯＨ基で置換されたアリーレン；−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾリルであるＮＲ
｛上式中、ｐは１から６の範囲の整数である｝；
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑは１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは、
・結合
であり；
Ｗ１は、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルからなる群から選択される一又は二の基で置換されていてもよいアリーレンもしくはヘテロアリーレンであるか、あるいはＷ１は結合であり；
ｍは０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｘ５は、
・−Ｏ−；
・
2009522231.tif 000018
｛Ｒは上記のように定義される｝；もしくは
・結合
であり；
Ｙ１は、
・Ｒ１およびＲ２は、互いに独立し、それぞれのｑの値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−ＮＲ−ＣＯ−
・Ｒが上記のように定義されるＮＲ；
・Ｒ３およびＲ４は、互いに独立し、それぞれのｑ１の値からも独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、もしくはＯＨであってよく、ｑ１は１−６であり、Ｒは上記のように定義される−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＲ−ＣＯ）２−４−；もしくは
・結合
であり；
Ｑ７は、
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；もしくは
・式
−（ＣＨ２）ｓ  −Ｑ８−（Ｃ６Ｈ４）ｖ１−Ｑ９−（ＣＨ２）Ｗ  −Ｑ１０−（Ｃ６Ｈ４）ｖ２−Ｑ１１−（ＣＨ２）ｔ−Ｑ１２−（Ｃ６Ｈ４）ｖ３−Ｑ１３−（ＣＨ２）ｚ−
｛Ｑ８−Ｑ１３は、互いに独立して、Ｏ；Ｓもしくは結合であってよく；ｓ、ｗ、ｔおよびｚは、互いに独立して、ｓ、ｗ、ｔおよびｚの合計が４から２２の範囲になるように、０もしくは１から１０の整数であり、かつ、ｖ１、ｖ２、およびｖ３は、互いに独立して、０もしくは１であってよいが、ただし、Ｗ１が結合であるならば、Ｑ７は式−（ＣＨ２）ｖ４Ｃ６Ｈ４（ＣＨ２）Ｗ１（ｖ４およびｗ１の合計が６から２２の範囲になるように、ｖ４およびｗ１は整数であるか、あるいは、それらのうちの一つは０である）の二価の炭化水素鎖ではない｝
の二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚ１は、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＰＯ３Ｈ２；
Ｏ−ＳＯ３Ｈ；
Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；
−テトラゾリルもしくは
Ｗ２が、−ＣＯＯＨ、−ＳＯ３Ｈ、および−ＰＯ３Ｈ２およびテトラゾリルから選択される一又は二の基で置換されているアリーレンもしくはヘテロアリーレンである−Ｏ−Ｗ２
であるが；
ただし、Ｗ１が結合であり、かつｖ１、ｖ２およびｖ３が全て０であり、かつＱ８−１３が全て結合であれば、Ｚ１はＯ−Ｗ２である］
を有する項４６ないし６１の何れか一項に記載の方法。
【００９５】
６５．
Ｗ１がフェニレンである項４６および６４に記載の方法。
６６．
Ｗ１が、窒素、酸素又は硫黄を含んでなる５−７員環ヘテロ環系である項４４および６４に記載の方法。
６７．
Ｗ１が、少なくとも一つの酸素を含んでなる５−７員環ヘテロ環系である項６６に記載の方法。
【００９６】
６８．
本発明のある態様では、Ｑ７は、ｒが４から２２、８から２０、１２から２０、もしくは１４−１８の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｒ−である項４６および６４−６７に記載の方法。
６９．
Ｑ８、Ｑ９、Ｑ１２およびＱ１３は、全て結合であり、ｖ２は１であり、ｖ１およびｖ３は０である項４６および６４−６８に記載の方法。
７０．
Ｑ１０およびＱ１１は酸素である項６９に記載の方法。
【００９７】
７１．
Ｘ４およびＹ１は結合であり、Ｘ５は、
2009522231.tif 000019
［上式中、Ｒは、ｐが１−４である−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨである］
である項６４に記載の方法。
７２．
Ｚ１が−ＣＯＯＨである項６４−７１に記載の方法。
【００９８】
７３．
アシル化インスリンが、式
2009522231.tif 000020
およびその任意のＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｉｎｓは、Ｂ鎖のＮ末端アミノ酸残基のα−アミノ基もしくはインスリン部分のＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基を介して、アミド結合を介して側鎖のＣＯ−基と結合している親インスリン部分であり；
それぞれのｎは独立して、０、１、２、３、４、５もしくは６であり；
Ｑ１、Ｑ２、Ｑ３、およびＱ４は、互いに独立して、
・ｓが１−２０である（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−もしくは（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ−；
・ｒが４から２２の整数である−（ＣＨ２）ｒ−；もしくは、１、２もしくは３の−ＣＨ＝ＣＨ−基と、鎖中に４から２２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖；
・ｔが１から６の整数である−（ＣＨ２）ｔ−もしくは−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｔ−；
・Ｒ１およびＲ２が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨ、（ＣＨ２）１−６ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ１およびＲ２が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑが１−６である−（ＣＲ１Ｒ２）ｑ−；
・Ｒ３およびＲ４が、互いに独立して、Ｈ、−ＣＯＯＨであってよく、かつ、Ｒ３およびＲ４が、それぞれの炭素において異なっていてよく、かつ、ｑ１が１−６である−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−）−、−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＮＨＣＯ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＣＯＮＨ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１もしくは−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１−（ＣＯＮＨ−（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１−ＮＨＣＯ）１−２−（（ＣＲ３Ｒ４）ｑ１）１；もしくは
・結合
であってよいが；
ただし、Ｑ１−Ｑ４は異なっており；
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３は、独立して、
・Ｏ；
・結合；もしくは
・
2009522231.tif 000021
｛上式中、
Ｒは、水素もしくは−（ＣＨ２）ｐ−ＣＯＯＨ、それぞれのｐが、残りのｐ'と独立して、１から６の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｐ−ＳＯ３Ｈ、−（ＣＨ２）ｐ−ＰＯ３Ｈ２、−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＳＯ３Ｈ；−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２；もしくは−（ＣＨ２）ｐ−テトラゾール−５−イルである｝
であり；かつ
Ｚは、
−ＣＯＯＨ；
−ＣＯ−Ａｓｐ；
−ＣＯ−Ｇｌｕ；
−ＣＯ−Ｇｌｙ；
−ＣＯ−Ｓａｒ；
−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
−ＳＯ３Ｈ
−ＯＳＯ３Ｈ
−ＯＰＯ３Ｈ２
−ＰＯ３Ｈ２もしくは
−テトラゾール−５−イル
である］
を有する項４６−６１に記載の方法。
【００９９】
７４．
ｓが、２−１２、２−４もしくは２−３の範囲である項７３に記載の方法。
７５．
ｓが好ましくは１である項７３に記載の方法。
７６．
Ｚが−ＣＯＯＨである項７３−７５に記載の方法。
７７．
親インスリンがｄｅｓＢ３０ヒトインスリンアナログである項４６ないし７６の何れか一項に記載の方法。
【０１００】
７８．
親インスリンが、ヒトインスリン；  ｄｅｓＢ１  ヒトインスリン；  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＧｌｙＡ２１  ヒトインスリン；  ＧｌｙＡ２１  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ＡｓｐＢ２８  ヒトインスリン；  ｐｏｒｃｉｎｅ  インスリン；  ＬｙｓＢ２８  ＰｒｏＢ２９  ヒトインスリン；  ＧｌｙＡ２１  ＡｒｇＢ３１  ＡｒｇＢ３２  ヒトインスリン；およびＬｙｓＢ３  ＧｌｕＢ２９  ヒトインスリンもしくはＡｓｐＢ２８  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリンからなる群から選択される項４６ないし７７の何れか一項に記載の方法。
【０１０１】
７９．
アシル化インスリンが、
０１００−００００−０４９６  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ０１００−００００−０５１５  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１３ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ０１００−００００−０５２２    ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１５ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ０１００−００００−０４８８  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１６ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン；  ０１００−００００−０５４４  ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシメチル）−Ｃ６Ｈ４ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、および０１００−００００−０２９    ＮεＢ２９−［Ｎ−（ＨＯＯＣ（ＣＨ２）１４ＣＯ）−Ｎ−（カルボキシエチル）−ＣＨ２−（フラニルｅｎｅ）ＣＯ］  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、０１００−００００−０５５２  ＮεＢ２９  −｛４−カルボキシ−４−［１０−（４−カルボキシ−フェノキシ）−デカノイルアミノ］−ブチリル｝ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン
からなる群から選択される項４６−６１、６４−７２又は７７−７８に記載の方法。
【０１０２】
８０．
アシル化インスリンが、Ｎ？Ｂ２９−（３−［２−｛２−（２−［？−カルボキシ−ペンタデカノイル−？−グルタミル−（２−アミノ−エトキシ）］−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−プロピノイル（ｐｒｏｐｉｎｏｙｌ））  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（３−［２−｛２−（２−［？−カルボキシ−ヘプタデカノイル−？−グルタミル−（２−アミノ−エトキシ）］−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−プロピノイル（ｐｒｏｐｉｎｏｙｌ））  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９？｛３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオニル−？−グルタミル  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（？−［２−（２−｛２−［２−（２−カルボキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エチルカルバモイル］−ヘプタデカノイル−α−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（？−［２−（２−｛２−［２−（２−カルボキシ−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エチルカルバモイル］−ヘプタデカノイル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−ヘプタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロピオニル−？−グルタミル  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［７−カルボキシヘプタノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］−エトキシ｝プロピルカルバモイル）プロピオニル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシ｝プロピルカルバモイル）−プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［９−カルボキシノナノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］エトキシ｝  −プロピルカルバモイル）プロピオニル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（９−カルボキシノナノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）  プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（９−カルボキシノナノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシ｝−プロピルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（２−［３−（２−（２−｛２−（  ７−カルボキシヘプタノイルアミノ）エトキシ｝エトキシ）−エチルカルバモイル］プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシペンタデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル））  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（  ３−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−���トキシ｝−エトキシ）−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏｎｏｙｌ）−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏｎｏｙｌ）−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、Ｎ？Ｂ２９−（３−［２−（２−｛２−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−トリデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−プロポイオノイル（ｐｒｏｐｉｏｎｏｙｌ）−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−エトキシ］−エトキシ｝−エチルカルバモイル）−プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛２−［２−（３−［？−カルボキシペンタデカノイルアミノ］プロパ−オキシ）エトキシ］−エトキシ｝プロピルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（？−カルボキシウンデカノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシプロピルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（３−｛４−［３−（？−カルボキシトリデカノイルアミノ）プロパ−オキシ］ブトキシプロピルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（？−カルボキシウンデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−（３−（２−｛２−［２−（？−カルボキシトリデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エチルカルバモイル）プロピオニル−？−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−ガンマ−？−Ｄ−グルタミル）  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（７−カルボキシヘプタノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−？−グルタミル｝  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（９−カルボキシノナノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル（ｐｒｏｐｉｏｎｉｙｌ）−？−グルタミル｝  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシウンデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−？−グルタミル｝  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリン、ＮεＢ２９−｛３−［２−（２−｛２−［２−（？−カルボキシトリデカノイルアミノ）エトキシ］エトキシ｝エトキシ）エトキシ］プロピオニル−？−グルタミル｝  ｄｅｓＢ３０  ヒトインスリンからなる群から選択される項４６−６１又は７３−７８に記載の方法。
【０１０３】
８１．
即効型インスリンを組成物と混合する項４６ないし８０に記載の方法。
８２．
即効型インスリンが、ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン、ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９ヒトインスリンおよび／又はＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンである項４６および８０に記載の方法。
８３．
糖尿病の治療のための医薬の製造のための、項１−４５の何れか一項に記載の組成物の使用。
【０１０４】
８４．
項１−４５に記載の製薬学的組成物の治療的有効量を製薬学的に許容される担体と共に含む、治療の必要がある患者における糖尿病の治療のための製薬学的組成物。
８５．
項１−４５に記載の製薬学的組成物の治療的有効量を製薬学的に許容される担体と共に患者に投与することを含む、治療の必要がある患者における糖尿病の治療方法。
８６．
糖尿病の肺性治療のための、項８５に記載の方法。
【０１０５】
８７．
１型糖尿病、２型糖尿病および高血糖を引き起こす他の状態の治療において使用するための製薬学的組成物の製造のための、項１−４５に記載の組成物の使用。
８８．
実施例に記載される組成物。
本発明の別の態様は、以下に要約される。
９１．
アシル化インスリンを含み、６分子のアシル化インスリン毎に４より多い亜鉛原子をさらに含む可溶性製薬学的組成物。
【０１０６】
９２．
アシル化インスリンを含み、６分子のアシル化インスリン毎に５より多い亜鉛原子をさらに含む項９１に記載の可溶性製薬学的組成物。
９３．
６分子のアシル化インスリン毎に最大約１４の亜鉛原子を含む項９１−９２に記載の製薬学的組成物。
９４．
６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１４の亜鉛原子を含む項９１−９３に記載の製薬学的組成物。
【０１０７】
９５．
６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１３の亜鉛原子を含む項９１−９４の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
９６．
６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１２の亜鉛原子を含む項９１−９５の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
９７．
６分子のアシル化インスリン毎に約５．３から約１２の亜鉛原子を含む項９１−９６の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【０１０８】
９８．
６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１１．４の亜鉛原子を含む項９１−９７の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
９９．
６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１０の亜鉛原子を含む項９１−９８の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１００．
アシル化インスリンが、ＬｙｓＢ２９（Ｎε−テトラデカノイル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンもしくはＬｙｓＢ２９Ｎε−リトコロイル（lithocholoyl）−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンである項９１−９９の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【０１０９】
１０１．
アシル化インスリンが、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と結合している側鎖であって、一般式：
−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ
およびそのＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｗは、
・残基がそのカルボン酸基のうちの一つと共に、親のインスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と一緒になってアミド基を形成する側鎖中のカルボン酸基を有するα−アミノ酸残基；
・アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている２、３または４のα−アミノ酸残基からなる鎖であって、
アミド結合−を介した鎖−は親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と連結しており、
Ｗのアミノ酸残基は、Ｗが側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基を少なくとも一つ有するように、中性側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖；もしくは、
・親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基からＸまでの共有結合
であり；
Ｘは、
・−ＣＯ−；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ  −ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；もしくは
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−であって、
ａ）Ｗがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖であるとき、下線の炭素からの結合を介して、Ｗ中のアミノ基とアミド結合を形成するか、あるいは、
ｂ）Ｗが共有結合であるとき、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基とアミド結合を形成し；
Ｙは、
・ｍが６から３２の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に１０から３２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚは、
・−ＣＯＯＨ；
・−ＣＯ−Ａｓｐ；
・−ＣＯ−Ｇｌｕ；
・−ＣＯ−Ｇｌｙ；
・−ＣＯ−Ｓａｒ；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
・−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
・−ＳＯ３Ｈ；もしくは
・−ＰＯ３Ｈ
である］
の側鎖を有さない項９１−１００の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
【０１１０】
１０１．
アシル化インスリンがＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリンではない項９１−１０１の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１０２．
約６．５から８．５のｐＨを有する項９１ないし１０１の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１０３．
即効型インスリンをさらに含む項９１ないし１０２の何れか一項に記載の製薬学的組成物。
１０４．
即効型インスリンが、ＡｓｐＢ２８ヒトインスリンおよび／又はＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンである項１０３に記載の製薬学的組成物。
【０１１１】
１０９．
６分子のアシル化インスリン毎に約４より多い亜鉛原子を組成物に添加する、アシル化インスリンを含む製薬学的組成物を製造するための方法。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約４．３より多い亜鉛原子を組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５より多い亜鉛原子を組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５より多い亜鉛原子を組成物に添加する。
１１０．
６分子のアシル化インスリン毎に最大約１４の亜鉛原子を組成物に添加する項１０９に記載の方法。
【０１１２】
１１１．
６分子のアシル化インスリン毎に約４．３から約１４の亜鉛原子を組成物に添加する項１０９−１１０の何れか一項に記載の方法。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１１．４の亜鉛原子を組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１０の亜鉛原子を組成物に添加する。
【０１１３】
１１２．
保存料の添加前に、亜鉛を組成物に添加する項１０９−１１１に記載の方法。
１１３．
保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数が、６分子のアシル化インスリン毎に１より多い亜鉛原子である項１０９−１１２の何れか一項に記載の方法。
１１４．
保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数が、６分子のアシル化インスリン毎に２より多い亜鉛原子である項１０９−１１３の何れか一項に記載の方法。
【０１１４】
１１５．
保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数が、６分子のアシル化インスリン毎に３より多い亜鉛原子である項１０９−１１４の何れか一項に記載の方法。
１１６．
保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数が、６分子のアシル化インスリン毎に４より多い亜鉛原子である項１０９−１１５の何れか一項に記載の方法。
【０１１５】
１１７．
保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数が、６分子のアシル化インスリン毎に５より多い亜鉛原子である項１０９−１１６の何れか一項に記載の方法。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加するか、あるいは、より好ましくは、６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１１．４の亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加するか、あるいは、さらにより好ましくは６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１０の亜鉛原子を保存料の添加前に組成物に添加する。
【０１１６】
１１８．
保存料の添加後に、亜鉛を組成物に添加する項１０９−１１１の何れか一項に記載の方法。
１１９．
６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも０．５の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する項１１８に記載の方法。
【０１１７】
１２０．
６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する項１１８−１１９に記載の方法。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約２より多い亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約３より多い亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に約４より多い亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する。
本発明の更なる態様では、６分子のアシル化インスリン毎に約４．５から約１２の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、より好ましくは、６分子のアシル化インスリン毎に約５から約１１．４の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加するか、あるいは、さらにより好ましくは、６分子のアシル化インスリン毎に約５．５から約１０の亜鉛原子を保存料の添加後に組成物に添加する。
【０１１８】
１２１．
保存料の添加前に亜鉛の一部を添加し、保存料の添加後に亜鉛の一部を添加する項１０９−１２０の何れか一項に記載の方法。
ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２−３の亜鉛原子を保存料の添加後に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に最大約１１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。
【０１１９】
ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２−３の亜鉛原子を保存料の添加後に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に最大約１０の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。
【０１２０】
ある態様では、本方法は、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも１の亜鉛原子を保存料の添加後に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも２−３の亜鉛原子を保存料の添加後に添加するか、あるいは、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子を保存料の添加前に添加し、６分子のアシル化インスリン毎に最大約９の亜鉛原子を保存料の添加後に添加することを含む。
【０１２１】
１２２．
保存料の添加前に添加する亜鉛原子の数が、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子であり、保存料の添加後に添加する亜鉛原子の数が、６分子のアシル化インスリン毎に少なくとも３の亜鉛原子である項１２１の何れか一項に記載の方法。
１２３．
保存料がフェノールおよび／又はｍ−クレゾールである項１１２−１２２の何れか一項に記載の方法。
【０１２２】
１２４．
アシル化インスリンが、ＬｙｓＢ２９（Ｎε−テトラデカノイル）ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンもしくはＬｙｓＢ２９Ｎε−リトコロイル（lithocholoyl）−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリンである項１０９−１２３の何れか一項に記載の方法。
１０１．
アシル化インスリンが、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と結合している側鎖であって、一般式：
−Ｗ−Ｘ−Ｙ−Ｚ
およびそのＺｎ２＋錯体
［上式中、
Ｗは、
・残基がそのカルボン酸基のうちの一つと共に、親のインスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と一緒になってアミド基を形成する側鎖中のカルボン酸基を有するα−アミノ酸残基；
・アミドカルボニル結合を介して一緒に連結されている２、３または４のα−アミノ酸残基からなる鎖であって、
アミド結合−を介した鎖−は親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基と連結しており、
Ｗのアミノ酸残基は、Ｗが側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基を少なくとも一つ有するように、中性側鎖を有するアミノ酸残基および側鎖中にカルボン酸基を有するアミノ酸残基の群から選択される鎖；もしくは、
・親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基からＸまでの共有結合
であり；
Ｘは、
・−ＣＯ−；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−；
・−ＣＯ  −ＮＨＣＨ（ＣＯＯＨ）（ＣＨ２）４ＮＨＣＯ−；
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＯ−；もしくは
・−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−であって、
ａ）Ｗがアミノ酸残基もしくはアミノ酸残基の鎖であるとき、下線の炭素からの結合を介して、Ｗ中のアミノ基とアミド結合を形成するか、あるいは、
ｂ）Ｗが共有結合であるとき、下線のカルボニル炭素からの結合を介して、親インスリンのＢ鎖中に存在するＬｙｓ残基のε−アミノ基とアミド結合を形成し；
Ｙは、
・ｍが６から３２の範囲の整数である−（ＣＨ２）ｍ−；
・１、２もしくは３の−ＣＨ=ＣＨ−基と、鎖中に１０から３２の範囲の合計数の炭素原子を与えるのに十分な数の−ＣＨ２−基とを含んでなる二価の炭化水素鎖
であり；かつ、
Ｚは、
・−ＣＯＯＨ；
・−ＣＯ−Ａｓｐ；
・−ＣＯ−Ｇｌｕ；
・−ＣＯ−Ｇｌｙ；
・−ＣＯ−Ｓａｒ；
・−ＣＨ（ＣＯＯＨ）２；
・−Ｎ（ＣＨ２ＣＯＯＨ）２；
・−ＳＯ３Ｈ；もしくは
・−ＰＯ３Ｈ
である］
の側鎖を有さない項１０９−１２４の何れか一項に記載の方法。
【０１２３】
１２６．
アシル化インスリンがＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリンではない項１２５の何れか一項に記載の方法。
１２７．
即効型インスリンを組成物に添加する項１０９−１２６の何れか一項に記載の方法。
１２８．
即効型インスリンが、ＡｓｐＢ２８ヒトインスリンおよび／又はＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリンである項１２７に記載の方法。
１２９．
糖尿病の治療のための医薬のの製造のための、項９１−１０４の何れか一項に記載の組成物の使用。
【０１２４】
〔発明の詳細な説明〕
本発明は、通常水準（６分子のアシル化インスリン毎に２から４の亜鉛原子）を超える亜鉛含有量の増加が、あるアシル化インスリン誘導体、特にアシル化インスリンＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの中および高分子量インスリン複合体を増加させるという驚くべき知見に基づいたものである
本発明によれば、所望の度合いの会合を有するインスリンを含むインスリン製剤を設計することができる。
【０１２５】
さらに、アシル化インスリンを即効型インスリンアナログと混合するとき、鈍化が起きることなく、真の二相性特性が得られる。したがって、本発明によると、即効型インスリンアナログと遷延性アシル化インスリンの混合物であって、即効型インスリンとアシル化インスリンの注射部位からの消失速度は、別個の組成物で注射するときと同様である可溶性組成物が提供される。二相性製薬学的組成物としてのインスリンを投与することにより、注射の回数は減少し、より利便性が高く、安全な治療となる。
本発明は、さらに、インスリン製剤を調製するときに、保存料の添加後に亜鉛を加えることができるという驚くべき知見に基づいたものである。亜鉛は、典型的には、酢酸亜鉛、塩化亜鉛又はクエン酸亜鉛をインスリン製剤に添加することにより提供される。
【０１２６】
本発明によれば、本発明のアシル化インスリン組成物は、吸入により送達され、その急速な吸収を成し得る。吸入による投与は、薬物動態学的に、インスリンの皮下投与に比較し得る結果となり得る。本発明のアシル化インスリン組成物の吸入は、循環インスリンレベルの急速な上昇と、それに続く急速な血中グルコースレベルの降下につながる。異なる吸入装置が、典型的には、類似の粒子サイズおよび類似の肺付着レベルで比較すると、類似の薬物動態学を与える。
【０１２７】
〔実施例〕
実施例1
データフォーマット：
インスリン誘導体ピーク１面積（％）  ｘｘｘ
インスリンアスパルトピーク２面積（％）  ｘｘｘ
【０１２８】
結果：
【表１】
2009522231.tif 000022
2009522231.tif 000023
2009522231.tif 000024
2009522231.tif 000025
【０１２９】
実施例６
亜鉛バッファーとしてのクエン酸塩
Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０インスリン（ｉｎｓ．誘導体）（６００μＭまで）を水に懸濁し、溶解し、グリセロール１．６％、およびフェノール１６ｍＭおよびｍ−クレゾール１６ｍＭを加える。ｐＨを水酸化ナトリウムで７．５に調整し、クエン酸塩を、酢酸亜鉛に関してそれぞれ０．６、１．８および６ｍＭの６亜鉛／６インスリン誘導体の三つの製剤に添加した。その後、塩化ナトリウムを１０ｍＭまで加え、リン酸ナトリウム（ｐＨ７．５）を５ｍＭまで加え、続いてｐＨを水酸化ナトリウムで７．５又は７．８まで調整し、体積を水で調整する。
２ｍＭフェノールを含む溶出液を用いた実施例４に記載のＳＥＣ法により、５℃保存と比較して、３７℃２週間保存後で、製剤について研究した。３、５および６Ｚｎ／６ｉｎｓ．誘導体でクエン酸塩を有しない対照製剤も含めた。
インスリンアスパルト（３Ｚｎ／６ｉｎｓ）と、持続性インスリン誘導体との３０：７０の混和性を、ＳＥＣからの分画を集め、ＨＰＬＣにより即効性および持続性のインスリンを、高分子量画分（ピーク１）および低分子量画分（ピーク２）で定量化することにより測定した。画分カットと定量化は、実施例４に従った。
【０１３０】
結果：
【表２】
2009522231.tif 000026
2009522231.tif 000027
2009522231.tif 000028
【０１３１】
結論：
２ｍＭフェノールを含むＳＥＣ生理食塩水溶出液を用いると、持続型インスリン誘導体は、主に、ジヘキサマー形態（および、より多く会合した形態）に相当するアルブミンのサイズで会合しており、モノマー形態でのインスリン誘導体の量は、３から５および６Ｚｎ／６ｉｎｓ．誘導体へと増加する亜鉛濃度で減少する。６Ｚｎ／６ｉｎｓ．誘導体の亜鉛濃度まで１、３もしくは１０クエン酸塩当量を添加すると、３Ｚｎ／ｉｎｓ．誘導体での対照と比較して、モノマーインスリン誘導体の含有量が減少した。自己会合様式は、３７℃で２週間の貯蔵の後も変化しなかった。
クエン酸塩無しで製剤化されたインスリンアスパルト（３Ｚｎ／６ｉｎｓ）と、本実施例の上記系に示すように製剤化された持続性インスリン誘導体との３０：７０の混和性を、５℃および３７℃２週間保存後について、表に示す。３つのレベルでのクエン酸塩と６Ｚｎ／６ｉｎｓとを含むインスリン誘導体製剤は、３７℃２週間保存の後も、インスリンアスパルトと混合可能であることが示され、インスリンアスパルトは、３Ｚｎ／６ｉｎｓにおける通常のレベルの亜鉛の高分子量画分に、部分的に含まれた。
【０１３２】
実施例７
クエン酸亜鉛を加える。
Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０インスリン（ｉｎｓ．誘導体）（６００μＭまで）を水に懸濁し、溶解し、グリセロール１．６％、およびフェノール１６ｍＭおよびｍ−クレゾール１６ｍＭを加える。ｐＨを水酸化ナトリウムで７．５に調整し、クエン酸亜鉛を０．６ｍＭの亜鉛イオンになるまで添加する。その後、塩化ナトリウムを１０ｍＭまで加え、リン酸ナトリウム（ｐＨ７．５）を５ｍＭまで加え、続いてｐＨを７．５まで調整し、体積を水で調整する。
【０１３３】
実施例８
界面活性剤が添加し、即効性アナログと混合する。
Ｂ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０インスリン（ｉｎｓ．誘導体）（６００μＭまで）を水に懸濁し、溶解し、グリセロール１．６％、および１６ｍＭのフェノールおよび１６ｍＭのｍ−クレゾールを加える。ｐＨを水酸化ナトリウムで７．５に調整し、酢酸亜鉛で６亜鉛／６インスリン誘導体にする（任意によって、クエン酸塩としての亜鉛）。その後、塩化ナトリウムを１０ｍＭまで加え、界面活性剤、例えばｐｏｌｏｘａｍｅｒ１８８又はｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ２０を約０．００２％まで加え、リン酸ナトリウム（ｐＨ７．５）を５ｍＭまで加え、続いてｐＨを７．５まで調整し、体積を水で調整する。インスリンアスパルト（ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン）もしくはインスリンＬｉｓＰｒｏ（ＬｙｓＢ２８ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン）もしくはインスリングルリシン（ＬｙｓＢ３ＧｌｕＢ２９ヒトインスリン）（全て６００μＭ）を、実施例７又は実施例８により製剤化されるＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０インスリンと、約３／７から約７／３のモル比で混合する。
【０１３４】
実施例９
表３は、６のインスリン毎に２もしくは６のＺｎ（ＩＩ）を有する実施例４に記載されるようにして測定されたＳＥＣを示す。
表に記述される化合物の調製については、国際公開第２００６／０８２２０４号および国際公開第２００６／０８２２０５号を参照のこと。
【０１３５】
2009522231.tif 000029
【０１３６】
実施例１０
１，１６−ヘキサデカン二酸  モノベンジルエステルの調製
ヘキサデカン二酸（２０．０ｇ、６９．８ｍｍｏｌ）、ｎ−オクタンおよびＤｏｗｅｘ（登録商標）を懸濁させ、過熱還流する。６時間後、追加のギ酸ベンジル（２２．０ｇ、１６２ｍｍｏｌ）を加える。加熱を５０時間続ける。反応混合液を８０℃で濾過する。濾液を２０℃まで冷却し、沈殿を濾過により集める。粗生成物（２０．２ｇ）をジクロロメタン（２２０ｍｌ）に２０℃で４時間懸濁させる。懸濁液を濾過し、濾液を排出させて２０−３０℃で乾燥させる。結果として生じる固体（１３．９ｇ）を２−プロパノール（１４０ｍｌ）から再結晶する。
生成物を濾過により単離し、３０−４０℃で減圧下、一定重量まで乾燥させる。収量１０．２ｇ（３９％）の白色物質。
【０１３７】
Ｌ−２−（１５−ベンジルオキシカルボニル−ペンタデカノイルアミノ）−ペンタン二酸  ５−ベンジルエステル  １−（２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イル）エステルの調製
１，１６−ヘキサデカン二酸  モノベンジルエステル（２０．０ｇ、５３．１ｍｍｏｌ）を、３５−４０℃でアセトンに溶解する。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（６．４２ｇ／５５．８ｍｍｏｌ）を加える。結果として生じる溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（１２．１ｇ／５８．４ｍｍｏｌ）を加える。反応混合液を３５℃で３−４時間攪拌する。結果として生じた懸濁液に、トリエチルアミン（７．４０ｍｌ、５３．１ｍｍｏｌ）ｏｇ  Ｌ−グルタミン酸α−ベンジルエステル（１２．６ｇ／５３．１ｍｍｏｌ）を加える。反応混合液を３５−４０℃で８−１６時間攪拌する。反応混合液を２０−２５℃まで冷却する。メタンスルホン酸（３．４５ｍｌの／５３．１ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（１２．１ｇ／５３．１ｍｍｏｌ）を加える。反応混合液を２０−２５℃で８−１６時間攪拌する。反応混合液を濾過し、濾液を排出させて乾燥させる。残留物を、水（１００ｍｌ）およびトルエン（２００ｍｌ）で分画する。トルエン相を水の蒸留により乾燥させた。シリカゲル（２０ｇ）を残留物に加える。懸濁液を２０−２５℃で３０分間攪拌し、濾過する。濾液の体積を、減圧下のエバポレーションにより約１００−１２０ｍｌまで減少させた。Ｎ−ヘプタン（１５０ｍｌ）を、１５−３０分間にわたって加える。結果として生じる懸濁液を２時間攪拌する。生成物を濾過により単離し、２０−２５℃で減圧下、一定重量まで乾燥させる。収量２１ｇ（５８％）の白色物質。
【０１３８】
Ｌ−２−（１５−カルボキシ−ペンタデカノイルアミノ）−ペンタン二酸  ５−（２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イル）エステル（ＰＣ２４１４）の調製
Ｌ−２−（１５−ベンジルオキシカルボニル−ペンタデカノイルアミノ）−ペンタン二酸  ５−ベンジルエステル  １−（２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イル）エステル（５．０ｇ、７．３ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（９５μｌ）を含むアセトン（９５ｍｌ）に溶解する。パラジウム炭素、１０％（０．５０ｇ）を加える。３０−３５℃で攪拌しながら水素を加える。水素の消費が停止したとき、反応混合液を濾過する。濾液を２０℃に冷却し、ｎ−ヘプタン（１４０ｍｌ）を１５−３０分間にわたって加える。結果として生じる懸濁液を２−３時間で０−５℃に冷却する。生成物を濾過により単離し、２０−２５℃で減圧下、一定重量まで乾燥させる。収量３ｇ（８４％）の白色物質。
生成物は、アセトン−ｄ６を溶媒として用いてプロトンＮＭＲ（Ｂｒｕｋｅｒ６００ＭＨｚ）により分析した。
【０１３９】
１ＤスペクトルからのプロトンＮＭＲ帰属（内標準は、δ０．０ｐｐｍのＴＭＳ）
2009522231.tif 000030
【０１４０】
2009522231.tif 000031
【０１４１】
ＰＣ２４１４を用いたヒトインスリンｄｅｓＢ３０の位置Ｂ２９のリジンのε−アミノ基アシル化
４ｇのｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを６４ｇの精製水に懸濁する。１．８５ｍｌのトリエチルアミン（ＴＥＡ）を加えて、ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを溶解させ、ｐＨを１１．４−１２．０まで上げる。溶液を２−５℃まで冷却する。
４４８ｍｇのＰＣ２４１４を、１０−１５％の硫酸で安定化した３．５ｇのＮＭＰ（Ｎ−メチル−２−ピロリドン）に加える。
ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン溶液を攪拌し、ＰＣ２４１４溶液を、温度を低く保ちながら２０分間にわたって加える。
【０１４２】
ＰＣ２４１４の添加後、反応混合液を、Ｔｒｉｓ−ヒドロキシメチルアミノメタン（２０ｍｍｏｌ／ｋｇ）、酢酸アンモニウム（３０ｍｍｏｌ／ｋｇ）、エタノール４２，５  ％ｗ／ｗ、残部精製水、ｐＨ７，５からなる２．５重量の溶液で希釈する。
希釈後、かき混ぜながら、緩やかに１Ｍ酢酸を加えることにより、ｐＨを７．５に調整する。
ＨＰＬＣによる分析により、１４，２２％の残留ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンを有する７２，１１％のＬｙｓＢ２９（Ｎ？−ヘキサデカンジオイル−？−  グルタミル）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンの形成が示される。
【０１４３】
分析ＨＰＬＣ法：
オクチルジメチルシリル置換シリカを充填された、約100 Åの孔サイズと約３．５μｍの粒径を有する１５０Ｘ４．６ｍｍ内径のカラムを、４０℃で１ｍｌ／分の流速で、１：７．８％（ｗ／ｗ）を含むＮａＯＨ水溶液でｐＨ５．９に調整された２０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４．Ｈ２Ｏおよび１００ｍｍｏｌのＮａ２ＳＯ４バッファー、および２：４２，８％ｗ／ｗのアセトニトリルを含むアセトニトリル溶媒からなり、２５％（ｗ／ｗ）アセトニトリルとなるように調整した混合液を用いて、平衡化する。
ＬｙｓＢ２９（Ｎ？−ヘキサデカンジオイル−？−グルタミル）ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンは、約２０分後にカラムから溶出した。ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンは約６分後にカラムから溶出した。
【０１４４】
アッセイ（II）
ヒトインスリンに対する本発明のインスリン誘導体の効力
実験日の体重が238-383 gであったＳＤオスラットを、固定（clamp）実験に用いた。ラットは、制御された環境条件下で、餌に自由に接近でき、固定実験の前一晩（３ｐｍから）絶食した。
【０１４５】
〔実験プロトコール〕
外科手術の前に少なくとも１週間の間、動物施設でラットを馴養した。固定実験の前に、約１週間、タイゴン（Tygon）カテーテルをハロタン麻酔下で、頚静脈（注入用）及び頚動脈（血液採取用）に挿入し、首部背面で外面化して固定した。術後のラットにストレプトシリン（Streptocilin vet.）(Boehringer Ingelheim; 0.15 ml/rat, i.m.)を与え、回復期間の間、動物ケアユニット(25 ℃)に置いた。鎮痛のために、アノルフィン（Anorphin）(0.06 mg/rat, s.c.)を、麻酔の間投与し、リマディル（Rimadyl）(1.5 mg/kg, s.c.)を、麻酔から完全に回復した後(2-3 h)に投与し、２日間、日に一度投与した。
【０１４６】
用いた固定技術は（１）から適用させた。実験日の7 amに、一晩絶食させた(前日の3 pmから)ラットの体重を量り、サンプリングシリンジ及び注入システム（Harvard 22 Basic pumps, Harvard, and Perfectum Hypodermic glass syringe, Aldrich）に接続し、次いで、個々の固定ケージに置き、ここで、実験開始前約４５分安静にさせた。ラットは、全実験期間中、それらの通常の土台（beddin）上で自由に動くことができ、飲料水に自由に接近できた。血漿グルコースレベルが10分間隔で測定される基礎期間30分の後、試験されるインスリン誘導体及びヒトインスリン（ラット当たりの一つの投与レベル、投与レベル当たり n = 6〜7）を一定速度で300分、注入（i.v.）した。血漿グルコースレベルは、10分の間隔で終始測定し、20％グルコース水溶液の注入は正常血糖を維持するために、これに従って調節された。再懸濁した赤血球のサンプルは、各ラットからプールし、頚動脈カテーテルを介して約1/2 ml容量で戻された。
【０１４７】
各実験日において、試験される個々のインスリン誘導体及びヒトインスリン溶液の溶液サンプルを、固定実験の前及び終了時に採取し、該ペプチドの濃度をＨＰＬＣで確かめた。ラットインスリン及びＣ-ペプチド並びに試験されるインスリン誘導体及びヒトインスリンの血漿濃度を、実験の前及び終了時の関連する時点で測定した。ラットは、ペントバルビタールを過剰投与して実験終了時に殺した。
【０１４８】
アッセイ（ＩＩＩ）
ブタにおける、本発明のインスリン誘導体のＴ５０％の測定
Ｔ５０％は、外部γ−カウンターで測定したとき、試験されるインスリンのＡ１４Ｔｙｒ［１２５Ｉ］標識化誘導体の注入量の５０％が注入部位から消失する時間である。
実験動物ケアの原則に従い、薬物動態学的研究及び薬力学的研究のために、特異的病原体の無いＬＹＹＤ、非糖尿病メスブタ、Ｄａｎｉｓｈ  Ｌａｎｄｒａｃｅ、ＹｏｒｋｓｈｉｒｅおよびＤｕｒｏｃの交雑育種を用いた（Ｈｏｌｍｅｎｌｕｎｄ、Ｈａａｒｌｏｅｖ、Ｄｅｎｍａｒｋ）。ブタには意識があり、４−５月齢で体重７０−９５ｋｇであった。動物は実験の前に、一晩１８時間絶食させた。
【０１４９】
１２５Ｉを有するＴｙｒＡ１４で標識したインスリン誘導体の処方された製剤を、前述のようにブタに皮下注射した（Ribel, U., Jorgensen, K, Brange, J, and Henriksen, U. The pig as a model for subcutaneous insulin absorption in man. Serrano-Rios, M and Lefebvre, P. J. 891-896. 1985. Amsterdam; New York; Oxford, Elsevier Science Publishers. 1985 (Conference Proceeding)）。
実験の開始において、６０ｎｍｏｌの投与量の本発明に係るインスリン誘導体（試験化合物）と、６０ｎｍｏｌの投与量インスリンデテミル（detemir）（何れもＴｙｒＡ１４で１２５Ｉ標識されている）を、それぞれのブタの首の二つの異なる位置で注射した。
【０１５０】
皮下注射の部位からの放射性標識の消失は、従来の外部ガンマ計測法（Ribel, U. Subcutaneous absorption of insulin analogues. Berger, M. and Gries, F. A. 70-77 (1993). Stuttgart; New York, Georg Thime Verlag (Conference Proceeding)）の改変を用いてモニターした。この改変法により、コードレスの携帯型デバイスを用いて、数日間、皮下貯蔵物からの放射能活性の消失を連続的に測定することができる（Scancys Laboratorieteknik, Varlose, DK-3500, Denmark）。測定は、１分間隔で行い、計測値はバックグラウンド活性で補正した。
【図面の簡単な説明】
【０１５１】
全ての図は、ＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕ  ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンおよび／又はインスリンアスパルトの製剤の、３７℃で生理食塩水により溶出されたＳｕｐｅｒｏｓｅ６ＨＲでのサイズ排除クロマトグラフィーの結果を上図に、高分子量画分から低分子量画分又はインスリンモノマー画分までをカバーするそれぞれ１４画分の内容を下図に示したものである。
図中、以下の略語が用いられる：
アスパルト：  インスリンアスパルト
Ｚｎ／６Ｉｎｓ：  ６分子のインスリン毎に３の亜鉛原子
Ｚｎ／アシル−ｉｎｓ：  ６分子のアシル化インスリン毎に３の亜鉛原子
アシル−ｉｎｓ  アシル化インスリン
【図１】６分子のインスリンアスパルト毎に３の亜鉛原子を有するインスリンアスパルト６００μＭ
【図２】６分子のインスリンアスパルト毎に６の亜鉛原子を有するインスリンアスパルト６００μＭ
【図３】６分子のアシル化インスリン毎に３の亜鉛原子を有するＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリン６００μＭ
【図４】６分子のアシル化インスリン毎に４の亜鉛原子を有するＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリン６００μＭ
【図５】６分子のアシル化インスリン毎に６の亜鉛原子を有するＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリン６００μＭ
【図６】６分子のアシル化インスリン毎に８の亜鉛原子を有するＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリン６００μＭ
【図７】６分子のアシル化インスリン毎に３，６の亜鉛原子の総亜鉛含有量を有するインスリンアスパルト１８０μＭとＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリン８４０μＭとの混合物
【図８】６分子のアシル化インスリン毎に４．３の亜鉛原子の総亜鉛含有量を有するインスリンアスパルト１８０μＭとＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリン４２０μＭとの混合物
【図９】６分子のアシル化インスリン毎に４．５の亜鉛原子の総亜鉛含有量を有するインスリンアスパルト３００μＭとＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリン６００μＭとの混合物
【図１０】６分子のアシル化インスリン毎に８．６の亜鉛原子の総亜鉛含有量を有するインスリンアスパルト１８０μＭとＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリン４２０μＭとの混合物
【図１１】６分子のアシル化インスリン毎に１１．４の亜鉛原子の総亜鉛含有量を有するインスリンアスパルト１８０μＭとＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリン４２０μＭとの混合物
【図１２】６分子のアシル化インスリン毎に１２の亜鉛原子の総亜鉛含有量を有するインスリンアスパルト３００μＭとＬｙｓＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０ヒトインスリン３００μＭとの混合物
【図１３】別々に提供されたインスリンアスパルト（ＩＶ、破線、Ｎ＝８）、およびＢ２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−Ｇｌｕインスリンと混合して提供されたインスリンアスパルトの低亜鉛濃度（Ｉ、３．３８Ｚｎ／６ｉｎｓ誘導体、実線、Ｎ＝８）および高亜鉛濃度（ＩＩ、６Ｚｎ／６ｉｎｓ誘導体、点線、Ｎ＝７）の血漿特性
【図１４】別々に提供された２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０インスリン（ＩＩＩ、破線、Ｎ＝８）、およびインスリンアスパルトと混合して提供された２９Ｎε−ヘキサデカンジオイル−γ−ＧｌｕｄｅｓＢ３０インスリンの低亜鉛濃度（Ｉ、３．３８Ｚｎ／６ｉｎｓ誘導体、実線、Ｎ＝８）および高亜鉛濃度（ＩＩ、６Ｚｎ／６ｉｎｓ誘導体、点線、Ｎ＝７）の血漿特性
【図１】
2009522231.tif 000040
【図２】
2009522231.tif 000041
【図３】
2009522231.tif 000042
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【国際調査報告】
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2009522231.tif 000055