(57)【要約】本発明は、bFGF及びPDGFから選択される少なくとも一つの成長因子のケラチノサイトによる産生を増大させる、少なくとも一つの植物性活性成分を含む組成物の、肌への局所的適用を含む、少なくとも一つの加齢の皮膚性の徴候を予防及び／又は治療することを意図する、美容スキンケア方法に関する。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
バニラ抽出物又はマグノリア・チャンパカ・フラワー(Magnolia champaca flower)から抽出されたオイル以外の、bFGF及びPDGFから選択される少なくとも一つのヒト成長因子のケラチノサイトによる産生を増大する、少なくとも一つの植物性活性成分を含む組成物の、肌への局所的適用を含む、少なくとも一つの皮膚性の加齢の徴候を予防及び／又は治療するように意図される、美容スキンケア方法。
【請求項２】
前記活性成分がセドラス・アトランティカ（Cedrus atlantica）抽出物であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記活性成分が、極性指数が3.5より大きい極性有機溶媒を、任意に極性指数が１未満の無極性有機溶媒と混合して用いることにより、エッセンシャルオイルの排出後に、水蒸気蒸留残留物を抽出する工程を含む方法に従って得られることを特徴とする、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記成長因子がbFGFであることを特徴とする、請求項１〜３の何れかに記載の方法。
【請求項５】
前記活性成分がジンジャー・カシュームナー・ロクスブ（Zingiber cassumunar Roxb）抽出物であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記活性成分が、極性指数が１未満の無極性有機溶媒を、任意に極性指数が3.5より大きい極性有機溶媒と混合して用いる抽出工程を含む方法に従って得られることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記成長因子がPDGFであることを特徴とする請求項５又は６に記載の方法。
【請求項８】
前記極性有機溶媒がエタノール及びイソプロパノールのようなアルコールから選択されることを特徴とする、請求項３又は６に記載の方法。
【請求項９】
前記無極性有機溶媒がヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン及びイソオクタンから選択されることを特徴とする請求項３、６又は８に記載の方法。
【請求項１０】
しわ及び小じわの形成、肌の張りの減少及び／又は皮膚の衰えのような、前記徴候が、コラーゲンの産生の減退、及び／又はコラーゲンの分解に連結していることを特徴とする、請求項１〜９の何れかに記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物が、水中油エマルジョンの形態であることを特徴とする請求項１〜１０の何れかに記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも一つの加齢の皮膚性徴候を予防及び／又は治療するための、バニラ抽出物又はマグノリア・チャンパカ・フラワーから抽出されたオイル以外の、bFGF及びPDGFから選択される少なくとも一つの成長因子のケラチノサイトによる産生を増大する植物性活性成分の美容用の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ケラチノサイトを介したある成長因子の産生を増大する活性成分を含む植物性抽出物の肌への局所的適用を含む、加齢の皮膚性徴候と闘うことを意図する美容スキンケア方法に関する。
【発明を実施するための形態】
【０００２】
肌(skin)は主に三つの層から成る。即ち、最表面の表皮(epidermis)に始まり、真皮(dermis)及び皮下組織(hypoderm)から成る。
【０００３】
表皮は、特に、ケラチノサイト(大部分)、メラノサイト（肌の色素沈着に関与する）及びランゲルハンス細胞から成る。その機能は、外部環境から身体を保護すること、及び、その統合性を保証すること、及び特に、微生物及び化学物質の侵入を妨害すること、及び、脱水をもたらし得る、肌に含まれる水分の蒸発を防ぐことである。
【０００４】
真皮は、表皮に固体の支持（solid support）を提供し、また、その栄養を保証する。特に、それは、線維芽細胞と、主にコラーゲン、エラスチン及びプロテオグリカンから成る細胞外マトリックスとから成る。
【０００５】
コラーゲン繊維は、特に、肌の張り（firmness）に寄与する。それらは、年齢とともに減少する傾向を有し、特に閉経後は、自然再生がよりいっそう少ないため、また、それらを分解する強力なコラゲナーゼ活性のために、真皮が薄くなり肌のたるみがもたらされる。
【０００６】
このような事情で、加齢の皮膚性徴候、特に皮膚の衰え（dermic atrophy）に対して戦うことを可能にする新しい活性美容成分(active cosmetic ingredients)の探索が続けられている。
【０００７】
これに関して、肌に局所的に適用されたある種の植物成長因子が、美容の又は皮膚科学的な活性を働かすことができ、その結果、加齢のある種の皮膚性徴候の減弱をもたらすことが知られている。
【０００８】
例えば出願FR-2 854 328は、線維芽細胞のような細胞の分化及び／又は増殖を誘起するため及びそれによって皮膚性の加齢と闘うために、及び、肌の治癒を促進するために、フィトスルフォキン(phytosulfokine)のような、タンパク質起源の植物成長因子の使用を開示している。
【０００９】
それらの抗加齢及び治癒効果は、EGF（上皮成長因子）（EP-O 404 661）のような成長因子のものと類似した活性を有する、リポポリサッカリドのような化合物を肌に適用することによって、又は、VEGF（血管内皮成長因子）のような成長因子の産生を促進する他の化合物、特に、血管新生を改善し、それ故、輝く（radiant）肌の調子（tone）の損失のような皮膚性加齢の確実な症状を改善する、クロッカス（サフラン）フラワー及び雄しべの抽出物(JP2005-041811)を肌に適用することによって、代わりに得ることができることも知られている。
【００１０】
この同様の点について、α-ヒドロキシ酸の局所的適用は、種々の皮膚性の条件を改善するために、特に、光加齢の徴候を減らすために、何年もの間用いられてきた。このような事情で、それらの化合物が表皮によるVEGFのようなサイトカインの分泌を増大する効果を有し、また、このメカニズムが恐らく、それらの化合物によって観察される血管新生を改善する原因であり、それ故、それらの抗-加齢効果に部分的に寄与することが知られている (RENDL. M et al , British Journal of Dermatology 2001; 145: 3-9)。
【００１１】
最後に、出願人は、二つの植物性抽出物、バニラ抽出物及びマグノリア・チャンパカ・フラワーの抽出されたオイルが、特に、PDGF成長因子に対して合成刺激活性を有し、また、特に皮膚性の加齢の予防又は治療に用いられることができることを実証した。
【００１２】
しかしながら、加齢の皮膚性の徴候、特に、肌の張りの減少とより効果的に闘うことを可能にする、新しい美容活性成分に対する要求は、なお残っている。
【００１３】
さらにその上、最も少ない数の合成成分を含むことが可能な天然産物に対する、消費者によるますます増大する追及、及び、化学工業に由来する化合物を取り囲む、いっそう重い規制の拘束を考慮すると、それらの活性美容成分が植物起源のものであることが望ましいと思われる。
【００１４】
このような事情で、肌の張りの減少と戦うために、新しい生物学的ターゲットに局所的に作用することが可能であることを示し、このターゲットに作用する活性成分を選択するためのスクリーニング試験を開発し、及び、この試験に応答する多くの植物抽出物を同定し、それによって、上述の要求を満たすことを可能にしたことについて、出願人は功績を認められるに足るものである。
【００１５】
従って、本発明の目的は、皮膚性の加齢の少なくとも一つの徴候を予防及び／又は治療するように意図される、美容スキンケア方法であり、バニラ抽出物又はマグノリア・チャンパカ・フラワー(Magnolia champaca flower)から抽出されたオイル以外に、bFGF及びPDGFから選択される少なくとも一つのヒト成長因子のケラチノサイトによる産生を上昇させる、少なくとも一つの植物性活性成分を含む組成物の肌への局所的適用を含む。
【００１６】
本発明の他の目的は、皮膚性の加齢の少なくとも一つの徴候を予防及び／又は治療するための、バニラ抽出物又はマグノリア・チャンパカ・フラワーから抽出されたオイル以外の、bFGF及びPDGFから選択される少なくとも一つのヒト成長因子のケラチノサイトによる産生を上昇させる、植物性活性成分の美容用使用である。
【００１７】
イントロダクションとして、「少なくとも一つのヒト成長因子のケラチノサイトによる産生を上昇させる活性成分」は、特に下記の実施例で記載されるようなELISA方法によって測定される、未処理のコントロールと比較して上述の成長因子の産生を上昇することができる化合物又は（特に植物抽出物の場合）化合物の混合物を意味することが明記される。好ましくは、未処理のコントロールとの比較において、試験された抽出物によって生じる成長因子の量の上昇と、該試験で観察される標準偏差の間の差異は、少なくとも20%であり、好ましくは少なくとも40%であり、より好ましくは少なくとも60%であり、さらにより好ましくは少なくとも80%であり、又は少なくとも100%である。「植物性活性成分」は、単一の精製された化合物ではなく、植物から抽出された化合物の混合物を示すように意図される。
【００１８】
成長因子が細胞外マトリクスに蓄積され、線維芽細胞によるコラーゲンの産生を誘導した後、それらの産物による皮膚効果を間接的に得るために、ケラチノサイトによるある種の成長因子の産生を増大する化合物の使用の事実は、表皮の分泌性能力を利用すること、及び、美容産物が真皮より容易にアクセスできるターゲット（表皮）に作用することを可能にする。本発明に従って用いられる活性成分のこの作用様式は、それらの美容産物の規制要求(regulatory requirements)を満足させるさらなる利点を有し、珍重される皮膚効果は真皮への直接作用（これは美容においては禁止され、むしろ皮膚科学の下に起こる）によっては得られない。
【００１９】
本発明において目的とされる成長因子は、bFGF（基礎線維芽細胞成長因子）及びPDGF（血小板に由来する成長因子）から選択される。bFGF又はPDGFの産生を刺激する活性成分の使用が好ましい。
【００２０】
それらの成長因子の産生を促進する活性成分は、該組成物の総重量に関して0.00001〜10重量％の割合で用いることができ、好ましくは、0.0001〜5重量％の割合で、より好ましくは0.001〜0.1重量％の割合で用いることができる。
【００２１】
本発明に従って用いることができる活性成分は、植物性抽出物であり、即ち、任意のタイプの溶媒を用い、例えば、樹皮、木、根茎、茎、葉又は花のような植物の任意の部分の抽出によって得られる活性成分である。
【００２２】
そのような活性成分の例は、セドラス・アトランティカ(Cedrus atlantica)の（特に木の)抽出物及びジンジャー・カシュームナー(Zingiber cassumunar)（bengle）の（特に根茎の）抽出物を含む。
【００２３】
それらの抽出物は、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン及びイソオクタンのような、１未満の極性指数（polarity index）を有する無極性有機溶媒を、任意に（possibly）アルコール、特にエタノール又はイソプロパノールのような3.5より大きい極性指数を有する極性有機溶媒と混合して用いて、それらの植物から抽出する工程を含む方法に従って得ることができる。このタイプの抽出は、ジンジャー・カシュームナー・ロクスブ（Zingiber cassumunar Roxb）の抽出により特に適している。
【００２４】
代替方法として、本発明に従って用いられる活性成分は、アルコール、特に、メタノール、エタノール又はイソプロパノールのような3.5より大きい極性指数を有する極性有機溶媒を、任意に、上記で挙げられたような１未満の極性指数を有する無極性有機溶媒と混合して用いることにより、エッセンシャルオイルの排出後に、問題の植物からの水蒸気蒸留残留物を抽出する工程を含む方法に従って得ることができる。この抽出方法は、セドラス・アトランティカの抽出により特に適している。
【００２５】
全ての場合において、抽出は、関与する植物の全部又は一部において実行することができ、これは、通常の様式では、粉にされるか又は砕かれてよい。抽出は、一般に、粉にした材料を、例えば環境温度から100℃までの範囲の温度で一以上の上記溶媒中に、約30分〜12時間の期間、浸漬し又は穏やかに撹拌することによって行われる。該溶液は、次いで、植物からの不溶性物質を除去するために好ましくは濾過される。適切な場合、例えば、エタノール、メタノール、ヘキサン又はシクロヘキサンのような揮発性溶媒の場合、該溶媒もまた除去される。
【００２６】
この抽出工程は、植物抽出物の分野では共通であり、当業者は彼らの通常の知識に基づいて、それらの反応パラメーターを調節することができる。
【００２７】
本発明において目的とされる加齢の皮膚性徴候は、経時的な（内因性の）又は光線性の(光加齢)の加齢徴候であってよい。より特には、本発明は、しわ（wrinkles）及び小じわ（fine lines）の形成、肌の張り（firmness to the skin）の減少(loss)及び／又は皮膚の衰え(dermic atrophy)のような、コラーゲンの産生の減退及び／又はコラーゲンの分解に連結している皮膚性徴候を予防及び／又は治療することを目的とする。
【００２８】
好ましくは、本発明に従って用いられる活性成分、又は、本発明に従う方法で実行される組成物は、ヒトの肌に適用され、特にしわ肌に、より特には閉経期の女性の肌に適用される。顔、首又は任意にネックライン又は、代わりに身体の任意の部分の肌に有利に適用されることができる。
【００２９】
この活性成分を含む組成物は、朝に及び／又は夜に適用でき、好ましくは夜に適用でき、顔全体、首及び任意にネックラインに、又は体にも適用できる。
【００３０】
先に記載した活性成分の他に、本発明に従って実行される組成物は、一般に、生理学的に許容され、好ましくは美容用に許容される媒体、即ち、使用者に容認されない不快な感覚（フラッシング、なかなか治まらない痛み（nagging pains）、刺痛感覚（tingling sensations）…）を引き起こさないものを含む。
【００３１】
この媒体は一般に、水と任意にエタノールのような他の溶媒を含む。
【００３２】
本発明に従って用いられる組成物は、肌に局所的適用されるのに適切な任意の形態であってよく、及び特に、水中油、油中水又は多重エマルジョン(W/O/W又は0/W/O)のエマルジョン形態であってよく、任意にミクロエマルジョン又はナノエマルジョンであってよく、又は、水分散（hydrodispersion）、溶液、水性ゲル又は粉末の形態であってよい。この組成物は水中油エマルジョンの形態であることが好ましい。
【００３３】
この組成物は、好ましくは、顔及び／又は身体の肌のためのケア又は洗浄製品として用いられ、及び特に、例えばポンプボトル、エアロゾル缶、又はチューブにパッケージされた液体、ゲル又は泡の形態であってよく、又は例えば瓶にパッケージされたクリームとしての形態であってよい。或いは、メークアップ製品の形態であってもよく、特に、ファンデーション又はルースパウダー又は圧縮パウダー(compressed powder)であってよい。
【００３４】
それは、以下から選択される少なくとも一つの化合物のような、種々の添加物を含むことができるが、このリストに限定されない：
−オイル、特に、ジメチルポリシロキサン（ジメチコン）、ポリアルキルシクロシロキサン(シクロメチコン)及びポリアルキルフェニルシロキサン（フェニルジメチコン）のような、揮発性又は不揮発性の、直鎖又は環状シリコーンオイルから選択できるオイル；フッ化オイル、安息香酸アルキル及びポリブテンのような分枝炭化水素のような合成オイル；植物オイル及び、特に、ダイズ又はホホバオイル；及びパラフィンオイルのようなミネラルオイル；
−オゾセライト、ポリエチレンろう、みつろう又はカルナウバろうのようなろう；
−特に、触媒の存在下において、少なくとも一つの反応基（特に、水素又はビニル）を有し、少なくとも一つの末端及び／又は側鎖アルキル（特にメチル）又はフェニル基を保持するポリシロキサンを、オルガノハイドロゲンポリシロキサンのような有機ケイ素と反応させることによって得られるシリコンエラストマー；
−非イオン性、陰イオン性、陽イオン性又は両性の、界面活性剤、好ましくは乳化剤、 及び、特に、脂肪酸とグリセロールのエステル、脂肪酸とソルビタンのエステル、脂肪酸とポリエチレングリコールのエステルのような、脂肪酸とポリオールのエステル；脂肪酸とスクロースのエステル；脂肪アルコールとポリエチレングリコールのエステル；アルキルポリグルコシド；修飾されたポリシロキサンポリエーテル；ベタイン及びその誘導体；ポリクァテルニウム（polyquaterniums）；エトキシ化脂肪アルコールの硫酸塩；スルホサクシネート；サルコシネート；アルキル-及びジアルキルホスフェート及びそれらの塩；及び脂肪酸の石鹸；
−直鎖脂肪アルコールのような、及び特に、ヘキサデシル及びステアリルアルコールのような、共界面活性剤（cosurfactants）；
−濃厚剤及び／又はゲル化剤、及び、特に、親水性又は両親媒性の、アクリルアミドエチルプロパンスルホン酸(AMPS)の及び／又はアクリルアミドの及び／又はアクリル酸の及び／又はアクリル酸の塩又はエステルの、架橋又は非架橋のホモポリマー及びコポリマー；キサンタンガム又はガーゴム；セルロース誘導体；及びシリコーンゴム（ジメチコノール）；
−グリセリン、プロピレングリコール及び糖を含む、ポリオールのような湿潤剤(humectants)、及び、ヒアルロン酸及びその塩及びエステルのようなムコ多糖；
−ジベンゾイルメタン（ブチルメトキシジベンゾイルメタンを含む)の誘導体、ケイ皮酸（エチルヘキシルメトキシシンナマートを含む)の誘導体、サリチレート、パラ−アミノ安息香酸、β-β′-ジフェニルアクリレート、ベンゾフェノン、ベンジリデンカンファーの誘導体、フェニルベンズイミダゾール、トリアジン、フェニルベンゾトリアゾール及びアントラニル誘導体のような有機フィルター(filters)；
−被覆された又は被覆されていない色素又はナノ色素の形態の有機フィルター中の鉱物酸化物ベース（mineral oxide-based）、及び、特に、二酸化チタン又は酸化亜鉛ベース；
−着色剤
−保存剤；
−賦形剤(fillers)、及び、特に、ソフトフォーカスパウダー、これは特に、ポリアミド、シリカ、タルク、マイカ、ファイバ(特にポリアミド及びセルロース)から選択されることができる；
−強化剤（tightening agent）、及び、特に、植物タンパク質、合成ラテックス(特にアクリル)及び無機賦形剤のコロイド性分散液；
−EDTAの塩のような金属イオン封鎖剤
−フレグランス;
−及び、それらの混合物。
【００３５】
そのような添加物の例は、特に、「CTFA Dictionary (International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook published by the Cosmetic、Toiletry and Fragrance Association、9th Edition、2002)」に挙げられている。
【００３６】
本発明に従って用いられる組成物は、上記成長因子の産生を促進するもの以外の活性成分、及び特に、以下から選択される少なくとも一つの活性成分をさらに含むことができるが、このリストに限定されない：成長因子TGF-α又はβ及び／又はHBEGF(ヘパリン結合上皮成長因子)及び／又はVEGFの産生を刺激する薬剤；抗-グリケーション又は脱グリケーション(deglycating)剤；コラーゲンの合成を増大する薬剤又はその分解を防ぐ薬剤（抗-コラゲナーゼ剤、特に、マトリクスメタロプロテイナーゼ阻害剤)；エラスチンの合成を増大するか又はその分解を防ぐ薬剤(抗-エラスターゼ剤)；グリコサミノグリカン又はプロテオグリカンの合成を増大する薬剤又はそれらの分解を防ぐ薬剤（抗-プロテオグリカナーゼ剤）；ケラチノサイトの増殖又は分化を増大する薬剤；線維芽細胞の増殖を増大する薬剤；色素脱失（depigmenting）又は抗着色（anti-pigmenting）剤；抗酸化剤又は抗ラジカル剤又は抗汚染剤；表皮脂質の合成を増大する薬剤；及びそれらの混合物。
【００３７】
そのような薬剤の例は、特に、：植物抽出物及び、特に、Chondrus crispus、Thermus thermophilus、Pisum sativum、Centella asiatica、Scenedesmus、Moringa pterygosperma、Witch-hazel、Castanea sativa、Hibiscus sabdriffa、Polyanthes tuberosa、Argania spinosa、Aloe vera、Narcissus tarzetta、又は甘草(licorice)の抽出物；シトルスアウランチウム(ネロリ)(Citrus aurantium (Neroli))のエッセンシャルオイル；グリコール酸、乳酸及びクエン酸のようなα-ヒドロキシ酸、及びそれらのエステル；サリチル酸及びその誘導体のようなβ-ヒドロキシ酸；植物タンパク質（特に、ダイズ又はヘーゼルナッツ）の水解物；アシル化オリゴペプチド(特に、SEDERMAカンパニーから商品名Maxilip（登録商標）、Matrixyl（登録商標） 3000、Biopeptide（登録商標）CL又はBiopeptide（登録商標） ELで市販されている)；酵母抽出物及び、特に、サッカロミセス・セレビシア(Saccharomyces cerevisiae)；藻類抽出物及び、特に、sea cabbages；レチニルパルミテート、アスコルビン酸、アスコルビルグルコシド、マグネシウム又はナトリウムリン酸アスコルビル、アスコルビルパルミテート、アスコルビルテトライソパルミテート、アスコルビルソルベート、トコフェロール、トコフェリルアセテート及びトコフェリルソルベートのような、ビタミン及びそれらの誘導体；メタクリロイロキシエチルホスホリルコリンのホモポリマー及びコポリマー；ウレア；セラミド及びリン脂質；アルブチン；コウジ酸；エラグ酸;及びそれらの混合物。
【００３８】
本発明は、以下の非限定的な実施例により説明される。
【実施例】
【００３９】
実施例１；bFGFの産生の増大の試験
抽出物試験：植物性抽出物の活性を評価した。即ち、セダーウッドの水蒸気蒸留、得られたエッセンシャルオイルの排出、蒸留及び抽出の残留物のヘキサン/イソプロパノール混合物による回収、濾過、濾液の回収及び溶媒の混合物の蒸発、によって得られたセドラス・アトランティカ（Cedrus atlantica）の抽出物を、粘性液体抽出物を得るために、ジプロピレングリコールを介して吸収（take-up）し濾過した。
【００４０】
プロトコール：
bFGFの産生に関して、植物性抽出物の活性を、Quantikine（登録商標）イムノアッセイキット（No. DFB50, R&D Systems）を用いて、ELISA方法により、ケラチノサイト培養物中のヒトbFGF成長因子の濃度の定量的評価によって測定した。
【００４１】
ケラチノサイト培養物は以下のように調製した：ケラチノサイトの成長に適した培養培地(KGM Bullet Kit, Cambrex)中での増殖のために予め成長させた新生児の包皮(Cambrex 又はCascade Biologies)に由来するケラチノサイトを、6ウェルプレート中に播種した。
【００４２】
37℃、5% CO2及び飽和水分（moisture saturation）のオーブン中で２４時間培養した後、集密的な細胞を、PBS (Gibco)バッファーで、7.4のpHで洗浄し、試験される生成物を含むアルカリ性の特異的な培地(KGM, Cambrex)で２４時間、下記に示した濃度でインキュベートした。生成物は、二つのドナーについて三重に試験した。試験される生成物を含まないコントロール（「非処置」と称する）も、細胞を処置しない同じ培地中に保持して調製した。
【００４３】
結果：
【表１】
2009539925.tif 000002
【００４４】
この試験から、用いられたセドラス・アトランティカ抽出物が、bFGFの産生の増大を可能にするという結果が得られた。このような状況で、この成長因子は特に線維芽細胞の増殖及びケラチノサイトの遊走を誘発する能力を有することが知られている(Ashcroft GS et al., J. Anat. 1997, 180 (Pt. 3): 351-65)。従って、bFGFの増殖を増大させるという効果を介して、試験された抽出物は、肌に局所的に適用されることによって皮膚性の加齢と闘うことを可能にし得るものと思われる。
【００４５】
実施例２；PDGFの産生の増大についての試験
プロトコール：
実施例１と同様の方法で、Quantikineイムノアッセイキット(No. DAAOO, R&D Systems)及び実施例１のものと同じケラチノサイト培養条件を用いて、ELISA方法によって、細胞培養物中のヒトPDGF-AA成長因子の濃度の定量評価を介して、ベングル(Bengle)(Zingiber cassumunar Roxb.)抽出物の活性を、PDGFの産生に関して評価した。
【００４６】
この抽出物は、ヘキサン及びイソプロピルアルコールの(80/20)混合物を用いて乾燥ベングル根を抽出し、続いて濾過し、次いで、濾液中に存在する溶媒を減圧蒸発し、最後に、得られたオレオレジンを分子蒸留して得た。
【００４７】
分子蒸留プロセスは、下記表２に示したパラメーターに従って、オレオレジンをKDL4型(UIC GmH)の分子蒸留デバイスを通して蒸留することから成る。
【表２】
2009539925.tif 000003
【００４８】
次に、かま残（still bottoms）を回収し、次いで、96.2°でのエタノールによる洗浄に供し、及び、それらを漂白する目的で、50-60℃の温度で、活性炭による洗浄に供した。このようにして得られた濾液を、同じ条件下で第二洗浄操作に供した。最終的な濾液を、次いで、活性炭残渣を除去するために、コニカルフィルターで濾過し、次いで、エタノールを減圧蒸発した。
【００４９】
結果：10μg/ml (0.001%)で試験し、バングル抽出物は、PDGFの合成を、平均148%（非処理コントロールに対して）±20%上昇させる。
【００５０】
PDGFの割合が加齢と共に減少することは事実上、証明されており(Karlsson C. et al . , J. Cell. Physiol., 1994, 158(2): 256-62)、それ故、このPDGF合成活性化因子を、加齢の皮膚性徴候と闘うために肌に局所的に適用することは可能である。
【００５１】
実施例３：PDGF及びFGFbによる線維芽細胞増殖の刺激
方法：
単一のドナーからのヒトの真皮線維芽細胞をカスケードから得た。第７代継代において、細胞を96ウェルプレートに播種し、10% ウシ胎児血清(FBS, PAA, Linz, Austria)、25 mM L-グルタミン(Gibco)及び1% ペニシリン/ストレプトマイシン(Gibco)を補充した、Dulbecco's改変イーグル培地DMEM (Gibco BRL, Gaithersburg, USA)中で培養した。全ての細胞培養は、７℃、5% CO2及び95%空気で行った。
【００５２】
この線維芽細胞培養物を、二つの成長因子(BFGF及びFGFb)につき、種々の濃度で、２４時間の間、インキュベーションした。２４時間のインキュベーション後、96ウェルプレートから200μL用量の培地を取り出した。CellTiter 96 Aqueous One 溶液試薬を、製造者によって記載されたように用いた。細胞増殖を評価するために、490nmでの吸光度を、プレートリーダーを用いて記録した。コントロールは非処理細胞であった。  
実験は濃度につき８回行った。
【００５３】
結果：
コントロールと比較した、線維芽細胞の増殖の刺激の結果を下記表３に示す。
【表３】
2009539925.tif 000004
【００５４】
この実験から、試験された成長因子が、線維芽細胞の増殖を著しく増強することが表される。表皮においてそれらの成長因子の産生を刺激する活性薬剤は、コラーゲン合成の増大をもたらし、従って、それらの薬剤を含む美容組成物の真皮抗加齢効果を与える。
【００５５】
実施例４：水中油エマルジョン(O/W)
以下の組成物は、当業者にとって習慣的に調製することができる。以下に示した量は重量パーセントで表されている。大文字の成分は、ＩＮＣＩ命名法に従って識別されている。
【００５６】
エマルジョンＡ
セテアリルアルコール（CETEARYL ALCOHOL）＆セテアリルグルコシド（CETEARYL GLUCOSIDE）                      4.00 %
ベヘネス（BEHENETH）-25          2.00 %
セドラス・アトランティカ抽出物*  1.00 % 
カンゾウ抽出物                   0.10 %
エモリエント                     35.00 %
トコフェリルアセテート           0.50 %
ジメチコン（DIMETHICONE）        2.00 %
EDTA                             0.05 %
グリセリン                       5.00 %
ゲル化剤                         2.00 %
pH調整剤                         q.s.f.
保存剤                           q.s.f.
水                        q.s.f. 100.00 %
* 実施例１に記載されたように調製した
エマルジョンＢ
ベングル（Bengle）抽出物*           0.01 %
メチルシラノールマンヌロネート
（METHYLSILANOL MANNURONATE）       5.00 %
ステアレス（STEARETH）-21           1.50 %
トコフェリルアセテート              0.50 %
植物油                              5.00 %
シリコーンオイル                    6.00 %
オクチルドデカノール                2.00 %
グリセリン                          5.00 %
ゲル化剤                            2.80 %
変性アルコール                      5.00 %
金属イオン封鎖剤                    0.05 %
pH調整剤                            q.s.f.
保存剤                              q.s.f.
水                          q.s.f. 100.00
* 実施例２に記載されたように調製した。
【国際調査報告】
2009539925.tif 000005
2009539925.tif 000006
2009539925.tif 000007