(57)【要約】  本発明は細胞培養装置に関する。この細胞培養装置（１００）は細胞をそれらの培地と共に受け入れる目的をもち、多孔性材料から成る少なくとも一つの細胞支持層を含み、この層はウェルの容積の中に挿入し得るように適合した大きさの該ウェルの底部（１１０〜１１１）、またはクレードルまたはインサート（１５０）のに中に直接注入されるゲルを脱水して得られる。本発明によれば培養を自動化することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
培地と共に細胞を受けいれるための細胞の培養ウェルを少なくとも一つ含んで成る細胞培養装置において、該装置は少なくとも一つの多孔性材料の細胞支持層を有し、この層は該ウェルの底部に、或いは該ウェルの容積の中に挿入し得るように適合した大きさをもつクレードルまたはインサートの底部に直接注入された水性ゲルを脱水して得られることを特徴とする細胞培養装置。
【請求項２】
脱水は好ましくは凍結乾燥または加熱による脱水により行われることを特徴とする請求項１または２記載の装置。
【請求項３】
脱水の後で、且つ防水用の包装の中で、少なくともウェルまたはクレードルもしくはインサートの多孔性の材料の層を含む底部が滅菌されていることを特徴とする請求項１または２記載の装置。
【請求項４】
好ましくは防水性の包装の中で、培養装置全体が滅菌されていることを特徴とする請求項１〜４記載の装置。
【請求項５】
滅菌は照射、好ましくはβ線またはγ線の照射による滅菌、またはエチレンオキシドのような滅菌用のガスを用いて処理する滅菌から成る群から選ばれる上記請求項のいずれか一つに記載された装置。
【請求項６】
多孔性材料の層の少なくとも周辺縁部を所定の位置に保持し、好ましくは多孔性材料の上記層の周辺の境界、および底部でそれに面した内側の側壁の周辺の境界における防水性を保証する要素を具備していることを特徴とする上記請求項のいずれか一つに記載された装置。
【請求項７】
位置保持用の要素は、多孔性材料の層の上記周辺縁部の上の支持を得て該周辺の境界において防水性を保証するのに十分な大きさをもっていることを特徴とする請求項６記載の装置。
【請求項８】
ウェルまたはクレードルの上記底部は取り外し可能であり、また該ウェルに連結可能であることを特徴とする上記請求項のいずれか一つに記載された装置。
【請求項９】
ウェルまたはクレードルの上記底部は、僅かな力をかけて取り付けるかスナップによる係合により該ウェルに連結され、防水性を保証することを特徴とする上記請求項のいずれか一つに記載された装置。
【請求項１０】
ウェルまたはクレードルの上記底部は該ウェルまたはクレードルの外側に連結され、該ウェルまたはクレードルの側壁の下方の縁部は、該多孔性材料の層の周辺縁部を所定の位置に保持する要素を構成していることを特徴とする上記請求項のいずれか一つに記載された装置。
【請求項１１】
細胞の培養を、例えば細胞の接着および／または増殖を促進する被膜を用いて、促進するために、ウェルまたはクレードルの底部の内壁の少なくとも一部を物理的に、または化学的に、または生物学的に、或いはこれらの組み合わせで処理されていることを特徴とする上記請求項のいずれか一つに記載された装置。
【請求項１２】
培養ウェル（３８０）当たり複数のクレードルまたはインサート（１５０；２２０〜２５０）を具備していることを特徴とする上記請求項のいずれか一つに記載された装置。
【請求項１３】
蓋３６０を具備し、この蓋にはクレードルまたはインサート（１５０；２２０〜２５０）と同じ数のオリフィス（３９０）が備えられ、各オリフィス（３９０）はクレードルまたはインサート（１５０；２２０〜２５０）を受け入れこれを所定の位置に保つことができることを特徴とする請求項１２記載の装置。
【請求項１４】
水性ゲルはコラーゲンを含んで成ることを特徴とする上記請求項のいずれか一つに記載された装置。
【請求項１５】
水性ゲルはコラーゲンおよび少なくとも１種のポリサッカリドの混合物を含んで成ることを特徴とする上記請求項のいずれか一つに記載された装置。
【請求項１６】
水性ゲルはコラーゲン、少なくとも１種のポリサッカリドおよび／または場合により変性されたキトサンの混合物を含んで成ることを特徴とする上記請求項のいずれか一つに記載された装置。
【請求項１７】
ロボット化または自動化し得るプラットフォーム、好ましくは、培地を注入または吸引するための装置を、ロボットまたはオートメーション装置によって自動的に、特に例えばコンピュータによりそれ自体が指令されて位置させ得るように基質を配置することができるロボット化または自動化し得るプラットフォーム上における請求項１〜１６の任意の一つに記載された装置の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は培養の良好な再現性を得ることができる培養装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
当業界における最近の状態は特許文献１に記載されている。
【０００３】
この文献には、コラーゲン、キトサンおよびグリコサミノグリカンの混合物をベースにした新規生体材料（ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ）が記載されている。この生体材料は特に細胞の増殖、特に火傷をした患者の移植の場合における支持体として使用される。細胞の増殖のための支持体を製造する場合、一般にこの支持体はフラスコ、ペトリ皿または多数のウェル（ｗｅｌｌ）をもったプレートの中に注入されたゲルを乾燥して得られた支持体のフィルムにより形成される（１４頁、実施例５参照）。
【０００４】
その実施例１には特に人工皮膚の必須の成分である真皮を作るための実施態様が記載されており、それによれば均一な溶液によりつくられたゲルを工業的な凍結乾燥器で凍結乾燥するか、或いは場合により真空をかけたオーブンの中で加熱して脱水する。
【０００５】
また実施例５には一変形法が記載されているが、それによると凍結乾燥または脱水したマトリックスをインビトロで使用して細胞（繊維芽細胞、表皮細胞、軟骨細胞等）の三次元的な培養基を作ることができる（１４頁、８〜１１行）。この場合実施例１に記載されているように、凍結乾燥は工業的な凍結乾燥器の中で行われ、加熱による脱水は随時真空をかけてオーブンの中で行われ、得られたスポンジから成る基質を先ず必要な大きさに切断した後、インビトロで上記の培養を行うために例えばフラスコ、ペトリ皿、または多数のウェルをもったプレートに先ず移さなければならない。
【特許文献１】ヨーロッパ特許第０  ２９６  ０７８号明細書。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の主たる目的は、良好な再現性をもった培養の基質（ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ  ｏｆ  ｃｕｌｔｕｒｅｓ）の調製に関連する新規技術的問題を解決することである。
【０００７】
また本発明の主たる目的は、細胞を受け入れるための多孔性の媒体を含んで成る培養プレートを調製する方法において、その工程の数を減少させるという新規技術的問題を解決することである。
【０００８】
本発明の他の主たる目的は、滅菌された培養基質支持装置を再現可能な安全且つ信頼できる特に高い生産性をもったスクリーニングを達成できるように工業用および医療用に大規模に製造する方法を提供するという新規技術的問題を解決することである。
【０００９】
本発明の他の主たる目的は、ロボット化可能な或いは自動化可能なプラットフォームにおいて使用することができ、好ましくは培地を注入または吸引する装置を特にロボットまたはオートメーション装置によって、例えばコンピュータによってそれ自体が指令されることにより（ｉｔｓｅｌｆ  ｃｏｍｍａｎｄｅｄ  ｂｙ  ａ  ｃｏｍｐｕｔｅｒ）、自動的に位置させることができ且つこれを再現可能な方法で行うことができるように、基質を配置できる培養基質支持装置の一解決法を提供するという新規技術的問題を解決することである。
【００１０】
最後に本発明の主たる目的は、種々の型の支持物に使用することができ、特に自動化された培養および／または自動化されたスクリーニングの観点から、インサートを位置させるための、自動化またはロボット化と両立させ得る、取り外し可能なインサートを使用できる培養基質支持装置の一解決法を提供するという新規技術的問題を解決することである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の概要
第１の態様に従えば、本発明は培地と共に培養すべき細胞を受け入れるための底部を具備した細胞の培養ウェル（ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｗｅｌｌ）を少なくとも一つ含んで成る細胞培養装置において、該装置は少なくとも一つの多孔性材料の細胞支持層を有し、この層は該ウェルの底部に、或いは該ウェルの容積の中に挿入し得るように適合した大きさをもつクレードル（ｃｒａｄｌｅ）またはインサート（ｉｎｓｅｒｔ）の底部に直接注入された水性ゲルを、好ましくは凍結乾燥又は加熱脱水により、脱水して得られることを特徴とする細胞培養装置に関する。
【００１２】
本発明の有利な特徴に従えば、この装置は多孔性材料の層を含むウェル或いはクレードルまたはインサートの底部が、該脱水の後に、好ましくは防水性の包装の中で、滅菌されていることを特徴としている。
【００１３】
他の有利な本発明の特徴に従えば、この装置は、好ましくは防水性の包装の中で培養装置全体が滅菌されていれることを特徴としている。
【００１４】
本発明の他の有利な特徴に従えば、上記の滅菌は照射、好ましくはβ線またはγ線の照射による滅菌、またはエチレンオキシドのような滅菌用のガスを用いて処理する滅菌から成る群から選ばれる。
【００１５】
本発明の他の有利な特徴に従えば、この装置は、多孔性材料の層の収縮防止（ａｎｔｉ−ｒｅｔｒａｃｔｉｏｎ）効果を生じることにより多孔性材料の層の周辺縁部を所定の位置に保持し、且つ好ましくは多孔性材料の該層の周辺の境界、および底部でそれに面した内側の側壁の周辺の境界における防水性を保証する要素を具備していることを特徴としている。
【００１６】
本発明の文脈の範囲内において、周辺部におけるこの防水性は、境界を経由する材料の交換を避けるために、即ち多孔性材料の層の側方の縁部（ｓｉｄｅ  ｅｄｇｅ）を経由する、多孔性材料の層の上面に沈積（ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ）した物質と多孔性材料の層の中に存在し得る培地または細胞との間の連絡を避けるために備えられている。
【００１７】
本発明の特定の実施態様に従えば、上記の位置を保持する要素は、多孔性材料の層の周辺縁部の上に支えられるのに十分な大きさをもった環状のリングを含んで成っている。
【００１８】
本発明の他の有利な特徴に従えば、この装置はクレードルの該底部がクレードルに対し取り外しおよび連結が可能であり、クレードル自身はウェルに連結することができることを特徴としている。
【００１９】
本発明のさらに他の有利な特徴に従えば、この装置は、僅かに力をかけて取り付ける（ｆｉｔｔｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ｓｌｉｇｈｔ  ｆｏｒｃｉｎｇ）かスナップによる係合（ｓｎａｐ−ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）によりクレードルの該取り外し可能な底部が連結され、このようにして安全且つ信頼性をもって防水性が保証されることを特徴としている。
【００２０】
本発明のさらに他の有利な特徴に従えば、この装置は、クレードルの該取り外し可能な
底部がウェルまたはクレードルの外側に連結され、従ってウェルまたはクレードルの側壁の下方の縁部は多孔性材料の該層の周辺縁部を所定の位置に保つ要素を構成していることを特徴としている。
【００２１】
本発明のさらに他の有利な特徴に従えば、この装置は、例えば細胞の接着および／または増殖を促進する被膜を用いて細胞の培養を促進するために、該ウェルまたはクレードルの底部の内側の側壁の少なくとも一部は物理的に、または化学的に、または生物学的に、或いはこれらを組み合わせた方法で処理されていることを特徴としている。
【００２２】
本発明の文脈の範囲において、壁の材料、好ましくはプラスティックス材料の全体としてのイオン電荷を変化させる任意の物理的または化学的方法を使用することができ、そして／または壁の被膜は、細胞の接着および／または増殖を促進する任意の生物的な分子、例えばコラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン等と共に使用できる。
【００２３】
本発明のさらに他の有利な実施態様に従えば、この装置は、ウェルまたはクレードルの底部が合成材料、ニトロセルロースをベースにした材料、ポリアミド、例えば「ナイロン」をベースにした材料、ポリテトラフルオロエチレンまたはテフロンをベースにした材料、ポリカーボネートをベースにした材料、ポリエチレンまたはポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）をベースにした半透過性（ｓｅｍｉ−ｐｅｒｍｅａｂｌｅ）材料、ポリエステル、例えばセルロースポリエステル、特にアセテート、例えば半透過性のＢｉｏｐｏｒｅ−ＣＭ膜をベースにした材料、或いはポリビニルピロリドンさえもベースにした材料から成る群から選ばれる不活性の支持材料からつくられていることを特徴としている。
【００２４】
「をベースにした材料」という表現は今考えている材料を含んで成る、実質的に該材料から成る（ｉｓ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）、或いはそれだけを含む材料を意味するものと了解されたい。
【００２５】
本発明のさらに他の有利な実施態様に従えば、この装置は培養ウェル１個当たり複数のクレードルまたはインサートを含んで成っていることを特徴としている。
【００２６】
本発明のさらに他の有利な実施態様の変形に従えば、この装置はまた蓋を含んで成り、この蓋にはクレードルまたはインサートと同じ数のオリフィスが備えられ、各オリフィスはクレードルまたはインサートを受けこれを所定の位置に保つことができることを特徴としている。
【００２７】
本発明のさらに特定の実施態様に従えば、ウェルまたはクレードルの内部に直接注入される上記のゲルはコラーゲンを含んで成っている。
【００２８】
一つの有利な特徴に従えば、該ゲルはコラーゲンおよび少なくとも１種のポリサッカリドの混合物を含んで成っている。
【００２９】
他の有利な実施態様に従えば、該ゲルはコラーゲンおよび少なくとも１種のポリサッカリドおよびキトサンの混合物を含んで成り、キトサンは場合により、例えばアシル化の程度、好ましくはアセチル化の程度によって変性されており、これは求められる用途の関数として調節されている。アセチル化の種々の程度は当業界の専門家には公知であり、特に上記の特許文献１に記載されている。
【００３０】
第２の態様において、また本発明は、ロボット化または自動化し得るプラットフォーム、好ましくは、培地を注入または吸引するための装置がロボットまたはオートメーション装置によって自動的に、例えばコンピュータによりそれ自体が指令されて、位置され得るように基質が配置されることができるロボット化または自動化し得るプラットフォーム上における上記のおよび下記に説明する装置の使用に関する。
【００３１】
本発明によれば、上記の種々の技術的問題は、実際に安全且つ信頼のおける方法で解決され、これは工業的および医療的規模において、特に工業的および医薬品的規模において再現性をもっていることを理解すべきである。
【００３２】
本発明の他の目的、特徴および利点は、本発明による細胞培養装置の現在使用されているいくつかの好適な実施態様を参照して下記に示す例示的な説明により明らかになるであろう。これらの説明は単に例示のための説明であり、本発明の範囲を限定するものではない。添付図面は本発明の全体の一部を構成し、全体としてなされた説明から、また本発明を説明する添付図面から当業界の現状において新規と思われる任意の特徴は、そのままその機能において、従って一般的な意味において特許請求の範囲に請求がなされていることに注目されたい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
好適実施態様の説明
図１〜３を参照すれば，一般的な参照番号１０で表される細胞培養装置の第１の実施態様が示されており，この培養装置は、培地を用いて培養すべき細胞（当然ここでは示されていない）を受け入れるための、底部２１を備えたほぼ円筒形をした細胞を培養するための少なくとも一つの細胞培養ウェル２０を含んで成り、本発明に従えば、該ウェルは細胞を支持する多孔性材料の少なくとも一つの層３６を含み、該層は本発明の第１の実施態様に従ってウェルの該底部２１の中に直接注入された水性のゲルを脱水して、好ましくは凍結乾燥または加熱により脱水して得られることを特徴としている。このように注入され脱水されたゲルはウェルの底部にフィルムまたはスポンジをつくる。
【００３４】
本発明の有利な実施態様に従えば、該装置は多孔性材料の層３６を含むウェル２０の底部２１が、該脱水を行った後、好ましくは防水性をもった包装（図示せず）の中で滅菌されていることを特徴としている。
【００３５】
本発明の他の有利な実施態様に従えば、該装置は培養装置１０全体が防水性をもった包装（図示せず）の中で滅菌されていることを特徴としている。
【００３６】
本発明の特に有利な実施態様に従えば、滅菌は照射、好ましくはβ線またはγ線を照射する滅菌、或いはエチレンオキシドのような滅菌用のガスを用いる処理による照射から成る群から選ばれる。
【００３７】
本発明のさらに他の有利な実施態様に従えば、該装置は、多孔性材料の層３６が収縮防止効果を生じることにより多孔性材料の層３６の少なくとも周辺縁部３６ａの位置を保持し、また好ましくは多孔性材料の該層の周辺の境界およびウェル２０のそれに面する内部側壁２２の周辺の境界で防水性を保証する要素５０を具備していることを特徴としている。
【００３８】
当業界の専門家には容易に理解できるように、本発明の文脈においては、周辺部を経由する材料の交換を防ぐために、即ち多孔性材料の層の側方の縁を経由する、多孔性材料の上方の表面に沈積した物質と培地または多孔性材料の層の中に存在し得る細胞との間の連絡を避けるために、周辺部においてこのような防水性が備えられていることが有利である。
【００３９】
本発明の特定の一実施態様に従えば、実際に図３の断面図に示されているように、上記
の位置保持用の要素５０は環状のリング５２を具備し、該リングは多孔性材料の層３６の周辺縁部３６ａ上に支持され且つこの周辺縁部３６ａを少なくとも部分的に平らにして多孔性材料の層３６の収縮防止効果を保証するのに十分な大きさもっている。
【００４０】
ここに示された実施態様においては、環状のリング５２はまた実際には、多孔性材料３６の壁２０の上に覆いかぶさった培養装置の効果的な内壁となるであろう。環状のリング５２は、保持要素５０を容易に取り外すことができるように、その上方部分に例えばフランジのような止め要素５４をもっている。止め要素５４はウェル２０の壁２２の肩２３の上に位置するように取り付けることができる。例えば蓋のような古典的な閉鎖要素６０を取り付けることもできる。
【００４１】
図４を参照すれば、図１〜３の第１の実施態様の変形実施態様が示されており、これに従えば、当業界の専門家には十分理解できるように、ウェル２０をもった多数の培養装置１０を受け入れるための多数の開口部８１をもったプレート８０が備えられ、各ウェルは多孔性材料の層３６を有し、それに対して多数の保持用の要素５０が取り付けられている。
【００４２】
本発明の他の変形実施態様に従えば、プレート８０が多数の培養ウェル２０を統合することができ、各ウェル２０の中に直接注入されたゲルを脱水、好ましくは凍結乾燥または加熱による脱水を行うことにより、最初の段階で多孔性材料の層３６をインシトゥで形成することができることは明らかである。
【００４３】
蓋を形成する要素６０でこのプレート８０を覆い、培養が当業界の専門家には公知の汚染を避け得ることが有利である。
【００４４】
図５〜７に示された図１〜３の実施態様と同様な第２の実施態様においては、同様なまたは同一の部品の参照番号には同じ参照番号かまたは１００だけ増加した参照番号が使用されている。
【００４５】
この場合、ここでは１００の参照番号か付けられた培養装置全体は、先ず第１にそれ自身外側の培養ウェルと呼ばれる第１のウェルを規定する第１の下方部品１１０を具備し、これはその上方の縁部に図３に表された肩２３に相当する肩１２３を備えており、第２にここでクレードルと名付けられた第２の部品１１５を具備し、これはこの実施態様に従えば次の二つの異なった要素から構成されていることが示されている：
−下方要素１２０と呼ばれる第１の要素。ここで該第１の要素は図１〜３に示された培養ウェル２０と同様な機能をする内側の培養ウェルと呼ばれる第２のウェルを形成し、また底部１２１を形成する壁、内側の側壁１２２、およびここではフランジの形をした上方の縁部１２４を含んで成り、この場合該上方の縁部は特に第１の下方要素１２０の把持を容易にする目的をもっている。
【００４６】
−上方要素１５０と呼ばれる第２の要素。この第２の要素もまた保持要素として機能し、従って図１〜３の第１の実施態様の保持要素５０と同様な機能をもち、ここでは保持要素５０の環状のリング５２の円筒形の部分と同様な機能をもつほぼ円筒形をした下方の部分１５２、および環状のリング５２の内側の表面５３と同様な内側の表面１５３を具備し、この場合中間の部分が、ここでは図１〜３に示された第１の実施態様の保持要素５０のフランジ５４と同様なフランジ１５４の形をした上方の縁部を規定する上方の部分に円筒形の部分１５２を連結する連結アーム１５５によって形成されている。
【００４７】
またこの第２の要素１５０は、上方の縁部１５４を形成している上方部分の中に切り込み（ｃｕｔ  ｏｕｔ）または間隙（ｇａｐ）１５７を備え、ここで二つの隣接した連結ア
ーム１５５を分離する距離全体に亙って延びているのが有利であり、これによってピペットまたは多重通路（ｍｕｌｔｉ−ｃｈａｎｎｅｌ）ピペットの先端の管状の部分の通過に十分な、或は注入套管（ｐｏｕｒｉｎｇ  ｉｎ  ｃａｎｎｕｌａ）または自動取り出し用套管（ａｎ  ａｕｔｏｍａｔｉｃ  ｒｅｍｏｖａｌ  ｃａｎｎｕｌａ）の通過に十分な空間を生じ、最初の段階で多孔性材料の層３６がインシトゥで形成されるウェル形成用の要素１２０の中に培地の溶液を分布させたり取り出したりすることができる。
【００４８】
事実、本発明のこの第２の実施態様に従えば、実際に培養ウェルを構成する該第１の要素１２０は、図５から良くわかるように、取り外しが可能であり、また少なくとも一時的に第２の要素１５０と連結することができることを記しておく。
【００４９】
従って初期的なゲルをこれらの第１の要素１２０の底部１２１および側壁１２２によって規定されるウェルの中に直接注入し、次いでこれらの第１の要素１２０を、場合により真空をかけて凍結乾燥器またはオーブンの中に入れ、インシトゥで多孔性材料の層３６を形成することができる。
【００５０】
次にこれらの第１の要素１２０を第２の要素１５０と組み合わせ、それによって下方の環状の円筒形の部分１５２が多孔性材料の層３６の周辺縁部３６ａの上に支持されてそれを圧縮し、図７で良くわかるように、図３に示された第１の実施態様と同様な方法で多孔性材料３６の該周辺縁部の収縮防止効果を保証するようにすることができる。
【００５１】
即ち、本発明の有利な実施態様に従えば、クレードル１１５のウェルの底部を形成する第１の要素１２０は、僅かな力をかけて取り付けるかスナップにより係合させることにより第２の要素１５０と連結される。クレードル１１５の場合には第２の要素１５０は円筒形の壁１５２によって形成される。
【００５２】
本発明のさらに他の実施態様に従えば、第１の要素１２０の該底部１２１は第２の上方要素１５０の円筒形の部分１５２の外側に連結され、該要素１５０の内壁５４は実際にクレードル１１５のウェルの壁をも規定し、他方クレードルの一部をなす円筒形の部分１５２の下方の縁部１５７は多孔性材料の層３６の周辺の縁部３６ａを所定の位置に保つ要素１５０を構成している。
【００５３】
図８を参照すれば、図８から良くわかり当業界の専門家には十分理解できるように、図４と同様な方法で、ここでは参照番号１８０の、多数の開口部をもつプレートが示されており、多数の培養装置１００であって、それぞれ多孔性材料の層３６を有し多数の保持装置１５０が備えられているウェル１２０を含むクレードル１５５を伴う培養装置を受け入れる。
【００５４】
図８に示された本発明の他の実施態様の変形に従えば、プレート１８０には底部１１１を備えた多数の外側の培養ウェル１１０が組み込まれていることは明らかであり、該ウェル１１０はクレードル１５０を配置し得る容積をもった底部１１１を具備し、該クレードルは底部１２１および側辺（ｓｉｄｅ）１２２をつくる壁によって規定された内側のウェルを規定する第１の要素１２０を具備し、この中には最初の段階で各ウェル２０の底部２１に直接注がれるゲルを脱水、好ましくは凍結乾燥または加熱乾燥によってつくられた多孔性材料の層３６が含まれている。
【００５５】
この培養装置構造物はそれ自身新規であり、当業界の専門家にとって自明ではないことを理解すべきである。
【００５６】
このプレート１８０は、蓋を形成する要素１６０で覆い、図４の実施態様と同様な方法
で培養が不都合な汚染を避け得るようにすることが有利である。
【００５７】
最後に、図９を参照すれば、プレート２８０の他の実施態様の変形が示されているが、これに対して参照番号はさらに１００だけ増加しており、プレート２８０は、外側のウェルを規定する上方の縁部２２３に肩をもった側壁２１０並びに底部をつくっている壁２１１を有する多数のキャビティーを含んで成り、この容積の中に多数の本発明の培養装置２００を挿入することができるが、この実施態様に従えばクレードル２１５は単一部品として作られ、あたかもそれが内側の培養ウェル２２０自身を規定するインサートであるように構成され、この場合その大きさは図５〜８の実施態様の下方部分をつくるウェル１２０よりも大きいことができる。
【００５８】
この第３の実施態様の変形に従えば、前の実施態様のフランジ５４または１５４と似たフラップ２５４がクレードルまたはインサート２１５の上に備えられ、図９において良く分かるように、底部２２１をもった多数の開口部２８１を具備したプレート２８０の肩２２３をつくる上方表面上に支持を得るように（ｃｏｍｅ  ｔｏ  ｔａｋｅ  ｓｕｐｐｏｒｔ）なっている。前の実施態様と同様に、これらのクレードルまたはインサート２１５は多孔性材料の層３８を含み、この層はゲルを脱水、好ましくは凍結乾燥または加熱による脱水を行うことによりインシトゥでつくられる。
【００５９】
本発明に従えば、培養装置２００はまた図１〜４の装置５０および図５〜８の装置１５０と同様の位置保持装置２５０を備え、これは円筒形の部分を有する環状のリング２５２を具備し、その下方の縁部２５７は、前の実施態様におけるように、多孔性材料の層３６の周辺の縁３６ａの収縮を防止する機能をもっていることが有利である。
【００６０】
該環状のリング２５２はまたフラップ２２４に対応した窪み２５６を含んで成るフランジ２５４を具備していることが有利である。
【００６１】
本発明の文脈を離れることなく本発明を種々の実施態様を用いて実施し得ることは当業界の専門家には容易に理解できるであろう。さらにこれらの実施態様は本発明の統合された全体の一部を構成し、またそのように特許請求の範囲において請求されている。
【００６２】
さらに第２の態様に従えば、本発明は、図１０および１１に示されているように、好ましくは培地を注入または吸引するための装置３９２が、特にロボットまたはオートメーション装置３９６により指令され、例えばそれ自体がコンピュータ３９８により指令されて自動的に位置することができるように、基質を配置することを可能にするロボット化または自動化し得るプラットフォームにおける上記に定義された装置の使用に関する。
【００６３】
本発明の他の有利な特徴に従えば、細胞の培養を促進するために、培地と接触した内部の壁の少なくとも一部を、それがウェルおよび／またはクレードルおよび／またはインサートのいずれであっても、物理的または化学的または生物学的に、或いはこれらを組み合わせた方法で例えば細胞の接着および／または増殖を促進する被膜を用いて、処理する。
【００６４】
この点に関しては、培地と接触した内壁を構成する材料、好ましくはプラスティックス材料の全体としてのイオン電荷を変化させる任意の物理的または化学的方法、および／または、培地および／または細胞の接着を促進する任意の生物的な分子、例えばコラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン等により該内壁の被膜の実現に導く材料を使用することができる。
【００６５】
本明細書の序文の部分には、この壁をつくるのに使用できる材料の例が挙げられている。
【００６６】
図１０〜１１を参照すれば、一般的な参照番号３００がつけられた本発明の第４の実施態様の図が示されており、これは単一の貯蔵容器（ｒｅｃｅｐｔａｃｌｅ）要素３８０を含んで成り、該要素は単一の共通の培養ウェル３１０を構成しており、従って培地を受けるための共通の培養の底部（ｃｕｌｔｕｒｅ  ｂｏｔｔｏｍ）３１１を含んで成り、この貯蔵容器の中に多数のクレードルまたはインサート、例えば図５〜７の実施態様のクレードルまたはインサート１５０、または図９の実施態様の２２０〜２５０を挿入することができる。
【００６７】
クレードルまたはインサート１５０または２２０〜２５０を安定な位置に保つ観点からすれば、本発明に従った蓋３６０は取り付けられたクレードルまたはインサートの数と同数のオリフィス３９０を具備していることが有利である。このようにして各オリフィス３９０はクレードルまたはインサート１５０または２２０〜２５０を受け入れ、これを所定の位置に保持することができる。
【００６８】
共通の培養ウェル３１０〜３１１を形成する貯蔵容器３８０を含んで成る実施態様により、図１０では参照番号３９２で、また図１１ではもっと良くわかるように示されたピペットの筒状の部分または多通路ピペットの先端、或いは同様な自動注入または取出し用の套管の先端を１回の操作で挿入し、共通のウェル３１０〜３１１を形成している要素の中の培地の溶液を注入しまたは取り出し得ることがわかるであろう。この培地は図１１において参照番号３９４で模式的に示されている。
【００６９】
ピペット３９２はロボット化または自動化し、特にロボットまたはオートメーション装置３９６により、例えばそれ自体がコンピュータ３９８により指令を受けるプラットフォームの一部を構成し得ることは、当業界の専門家には容易に理解されることであろう。
【００７０】
本発明の文脈の範囲で逐次的に培養基（ｃｕｌｔｕｒｅｓ）を作ることができる。
【００７１】
従って、図１１に示された液面がＡに達した培地を用い、例えば細胞の培養を継続する或る期間の間培養基（ｃｕｌｔｕｒｅｓ）を作ることができる。
【００７２】
次にピペット３９２で吸い上げることにより、容易に一度で培地を取り換え、異なった液面、例えば液面Ｂの所まで一定容積の培地を導入することができる。或いはこの場合逆に空気／液の境界面に細胞を配置することができる。液面Ａでは液体媒質の高さはｈ１、液面Ｂでは液体媒質の高さはｈ２であり、この高さは貯蔵容器３８０または底部のプレートによってつくられる共通のウェル３１０、３１１の中に導入される培地の容積によって制御される。
【００７３】
図１１に示された実施態様においては、蓋３６０は側方の縁部３６１を有し、これは貯蔵容器３８０の内部に挿入されるようになっているが、蓋３６０の側方の縁部３６１が貯蔵容器３８０の外側に来るようにすることもできることは明らかである。
【００７４】
本発明の有利な一実施態様に従えば、多孔性材料の層３６はコラーゲンを含んで成るゲルを注入することによりインシトゥで得られる。このコラーゲンは任意の出所をもっていることができ、牛、豚、馬または海産物に由来するものが有利である。
【００７５】
特定の一実施態様に従えば、ゲルはコラーゲンと少なくとも１種のポリサッカリドの混合物を含んで成っている。任意の種類のポリサッカリド、特にグルコサミノグリカン、例えばコンドロイチン４−サルフェート、コンドロイチン６−サルフェート、ヒアルロン酸およびこれらの混合物を使用することができる。
【００７６】
他の特定の実施態様に従えば、ゲルはコラーゲン、少なくとも１種のポリサッカリド、および場合により変性されたキトサンを含んで成っている。変性されたキトサンとしては本明細書の背景技術の項に記載された文献、即ち特許文献１を参照することができる。この特許は引用により本明細書に包含される。
【００７７】
このように多孔性材料の層３６は特許文献１の実施例１に記載されたようなコラーゲン、少なくとも１種のポリサッカリドおよびキトサンの混合物のゲルの組成物からつくることができる。
【００７８】
しかし、本発明に従った自明ではない方法により、ゲルを
（ａ）図１〜４のウェル２０に直接注入するか、
（ｂ）図４〜８のクレードル１１５のウェル１２０に直接注入するか、或いは
（ｃ）図９のクレードルまたはインサート２１５に直接注入し、
しかる後このように注入されたゲルの脱水を、ウェル２０の中、またはクレードルまたはインサート１２０の底部においてインシトゥで、好ましくは、脱水装置、好ましくは凍結乾燥器または場合により真空下のオーブン中で直接凍結乾燥するか加熱して脱水することにより行う。
【００７９】
本発明の文脈の範囲内において、ウェル２０、またはクレードル１１５またはインサート２１５の底部１２０は、このようなインシトゥ製造法により、開始時から培地の支持物として作用する多孔性材料の層３６を含んでおり、これはもはや切断する必要がなくおよび／または中間的な加熱脱水装置または凍結乾燥装置から培養のウェルへ移す必要もない。さらに多孔性材料の層３６の周辺縁部３６ａの位置を保持するそれぞれの装置５０、１５０、２５０のために、多孔性材料の層３６の周辺縁部３６ａの収縮を防止する効果が得られると同時に、有利なことには培養のウェルの壁の境界で、即ち多孔性材料の層３６の周辺縁部３６ａの高さの所で、上記の技術的利点が得られることにより、水漏れを防止する特性が得られる。
【００８０】
このように本発明は添付図面に記載し図示した技術的方法と同等なすべての技術的手段を含んで成り、これらはその種々の組み合わせと共に本発明の全体の一部をなすものである。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１】本発明の細胞培養基支持装置の第１の実施態様の分解模式図。この場合該装置は多孔性材料の層を所定の位置に保つ要素が取り付けられた個々の培養のウェルを具備している。
【図２】閉鎖要素以外は組み立てられている図１の実施態様を示す図。
【図３】図２のＩＩＩ−ＩＩＩの線に沿った断面図。
【図４】本発明の細胞培養基支持装置の図１に示された第１の実施態様の、この場合は多数のウェルをもつ培養プレートを具備した変形実施態様。
【図５】本発明の細胞培養基支持装置の第２の実施態様の分解模式図。この場合該装置は個々の培養のウェルに挿入し得るクレードルを具備している。
【図６】閉鎖要素以外は組み立てられている図５の第２の実施態様を示す図。
【図７】図６のＶＩＩ−ＶＩＩの第２の線に沿った断面図。
【図８】本発明の細胞培養基支持装置の第２の実施態様の、多数のウェルをもつ培養プレートをもつ文脈の範囲内の変形実施態様。
【図９】取り外し得るウェルおよび位置保持要素の文脈の範囲内における本発明の培養基支持装置の第３の実施態様。この場合位置保持要素は多数のウェルをもつ培養プレートの文脈の範囲内において環状の位置保持リングにより構成されている。
【図１０】多数のクレードルまたはインサートを受け入れるのに十分な容積をもつ共通の培養ウェルを含んで成る本発明の培養基支持装置の第４の実施態様。
【図１１】培養装置の長手方向の部分断面図。蓋の中に備えられた多数のオリフィスの中に保持された多数のクレードルまたはインサートを示し、これは培地を置きまたは取り除くために自動的な方法でピペットを挿入できるロボット化されたプラットフォームの文脈の範囲内において有利に使用することができる。
【図１】
2009506752.tif 000002
【図２】
2009506752.tif 000003
【図３】
2009506752.tif 000004
【図４】
2009506752.tif 000005
【図５】
2009506752.tif 000006
【図６】
2009506752.tif 000007
【図７】
2009506752.tif 000008
【図８】
2009506752.tif 000009
【図９】
2009506752.tif 000010
【図１０】
2009506752.tif 000011
【図１１】
2009506752.tif 000012
【国際調査報告】
2009506752.tif 000013
2009506752.tif 000014
2009506752.tif 000015