(57)【要約】  本発明は、インフルエンザワクチン、特にイヌインフルエンザワクチンに関する。このワクチンは、組換えポックスウイルスワクチン又は不活化ワクチンのいずれでもよい。本発明はさらに、動物、特にイヌをインフルエンザから防御するために用いるインフルエンザ抗原、エピトープ又は免疫原をコードし、発現させる組換えポックスウイルスベクターを包含する。
2009506050.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
インフルエンザに対する免疫応答をイヌに誘発する方法であって、インフルエンザ抗原をコードするポリヌクレオチドを含むアビポックス発現ベクター、及び薬学上若しくは獣医学上許容される担体、賦形剤又は媒体を、免疫応答誘発に有効な量で含む製剤を投与することを含む方法。
【請求項２】
製剤がさらにアジュバントを含むことを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】
インフルエンザ抗原が、血球凝集素、マトリックスタンパク質、膜タンパク質、ノイラミニダーゼ、非構造タンパク質、核タンパク質、ポリメラーゼ、及びそれらの断片からなるグループから選択されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項４】
インフルエンザ抗原が、インフルエンザに感染したイヌから単離されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項５】
インフルエンザ抗原が、感染イヌに対する気管支肺胞洗浄により、又は感染イヌの肺組織から、単離されることを特徴とする請求項４記載の方法。
【請求項６】
インフルエンザ抗原が、ウマインフルエンザウイルス単離物から単離されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項７】
ウマインフルエンザウイルスが、オハイオウマインフルエンザウイルス単離物、ケンタッキーウマインフルエンザウイルス単離物、ニューマーケットウマインフルエンザウイルス単離物、又はそれらの混合物からなるグループから選択されることを特徴とする請求項６記載の方法。
【請求項８】
アビポックス発現ベクターが、弱毒化されたアビポックス発現ベクターであることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項９】
アビポックス発現ベクターが、カナリア痘ベクターであることを特徴とする請求項８記載の方法。
【請求項１０】
カナリア痘ベクターが、ＡＬＶＡＣであることを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項１１】
インフルエンザ抗原が、血球凝集素であることを特徴とする請求項８記載の方法。
【請求項１２】
血球凝集素が、Ｈ３であることを特徴とする請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
カナリア痘ベクターが、ＣＰ１５２９及びＣＰ１５３３からなるグループから選択されることを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項１４】
インフルエンザに対する免疫応答をイヌに誘発する方法であって、不活化インフルエンザワクチン及び薬学上許容される担体を免疫応答誘発に有効な量で含む製剤を投与することを含む方法。
【請求項１５】
製剤がさらにアジュバントを含むことを特徴とする請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
不活化インフルエンザワクチンが、イヌ不活化インフルエンザ単離物、ウマ不活化インフルエンザ単離物、又はそれらの混合物からなるグループから選択されることを特徴とする請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
ウマインフルエンザ単離物が、オハイオウマインフルエンザ単離物、ケンタッキーウマインフルエンザ単離物、ニューマーケットウマインフルエンザ単離物、及びそれらの混合物からなるグループから選択されることを特徴とする請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
不活化インフルエンザワクチンが、ホルマリン又はβ−プロピオラクトンで不活化されることを特徴とする請求項１４記載の方法。
【請求項１９】
アジュバントが、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、カルボマー、又は油−水エマルジョンであり、必要に応じてＣｐＧをさらに含むことを特徴とする請求項１５記載の方法。
【請求項２０】
投与が、皮下投与又は筋肉内投与であることを特徴とする請求項１４記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００５年８月２５日出願の米国出願第１１／２１１９８３号から優先権を主張する２００５年１１月１日出願の米国出願第１１／２６４６２２号から優先権を主張している。
【０００２】
参照による組込み
上記各出願、上記各出願で引用された全文書、又は上記各出願の審査において引用された全文書（「出願引用文書」）、本出願引用文書において引用若しくは参照された全ての文書、本出願で引用又は参照された全文書（「本出願引用文書」）、本出願引用文書で引用若しくは参照された全文書、本出願又は参照することにより本出願に組み込まれた文書で言及された製品に関する製造者指示書、説明書、製品仕様書、製品のプロダクトシート、以上全ては参照することにより本出願に組み込まれ、本発明を実施する上で採用される。
【０００３】
本発明は、インフルエンザワクチン、特にイヌインフルエンザワクチンを包含する。このワクチンは、組換えポックスウイルスワクチン又は不活化ワクチンのいずれでもよい。
【背景技術】
【０００４】
米国で何千頭ものイヌがインフルエンザに似た呼吸器疾患に感染した。咳と発熱により特徴付けられる重篤な呼吸器疾患の頻発は、レース用の犬舎でグレイハウンドの間に発生した。病理学的知見としては、重篤な肺出血及び胸膜出血、増殖性気管炎における急性及び亜急性のびらん、気管支炎及び細気管支炎及び気管支肺炎等が挙げられる。２００４年にフロリダ州ジャクソンビルで、ウマからイヌへと種の壁を越えたウマインフルエンザウイルスによって８頭のグレイハウンドが死んだ。
【０００５】
ウマインフルエンザはウマの疾患であり、そのウイルスはヒトインフルエンザの原因ウイルスと同じグループに属する。この疾患は、ヨーロッパ、北米、アジアの一部においてウマの集団にみられる疾患であり、罹患馬は一般に発熱し、頻発性の空咳を呈する。疾患の初期段階ではウマは数日間食欲がなくなるが、通常は２〜３週間で回復する。
【０００６】
ウマインフルエンザのＨ３Ｎ８亜型は、これに感染して死んだフロリダ州のイヌ２頭及びテキサス州のイヌ１頭の肺から単離された。遺伝子配列解析及び系統発生的比較の結果、上記３頭から得たイヌ単離物は、ウマインフルエンザＨ３Ｎ８型の同時期の株と密接に関連し、同株から進化していた。免疫組織化学法により、気管支腺上皮細胞、気管支及び細気管支上皮細胞、及び肺胞マクロファージでインフルエンザ抗原が観察された。血球凝集抑制法及びマイクロ中和法により、イヌインフルエンザウイルスのセロコンバージョンが観察された。
【０００７】
レース用グレイハウンドの重篤な呼吸器疾患の頻発事案において単離された３種類のインフルエンザウイルスを分子分析及び抗原分析に供したところ、これらウイルスがＨ３Ｎ８型ウマインフルエンザと密接に関連していることが示された（例えばCrawford et al., Science. 2005 Oct 21;310(5747):482-5. Epub 2005 Sep 26を参照）。系統発生的分析の結果、イヌインフルエンザウイルスのゲノムは単系統群を形成することが示され、これはウイルスの種間伝播が一度行われたことと一致する。血球凝集素内で分子が変化することにより、新たな宿主で適応的進化が生じたことが示唆された。疾患に伴い一時的に抗体価が上昇することと実験的接種試験とにより、呼吸器疾患の病因における上記ウイルスの役割が裏付けられた。感染が地理的に拡大し、数年間続くことから、イヌインフルエンザウイルスがグレイハウンド犬の間で効率的に伝播することが示される。ペット犬での感染が証明されたことにより、かかる感染がペット犬の集団で流行することが示唆される。
【０００８】
２００５年には、トリインフルエンザ（Ｈ３Ｎ８型ウイルス）の変異型によってマサチュウセッツ州でグレイハウンドが死んだ事例が報告された。したがって、イヌ用の有効なインフルエンザワクチンが必要とされている。
【０００９】
本出願において文書を引用又は特定していても、それは、それら文書が本発明に対する先行技術となることを認めるものではない。
【非特許文献１】Crawford et al., Science. 2005 Oct 21;310(5747):482-5
【発明の開示】
【００１０】
本発明は、イヌインフルエンザワクチンを包含し、かかるワクチンは組換えイイヌンフルエンザワクチン又は不活化イヌインフルエンザワクチンのいずれでもよい。
【００１１】
イヌインフルエンザワクチンが、組換えワクチンである実施態様では、ベクターが、インフルエンザ抗体、エピトープ、又は免疫原をコードするポリヌクレオチドを含むアビポックス発現ベクターであることが有利である。かかるインフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原は、血球凝集素、マトリックスタンパク質、ノイラミニダーゼ、非構造タンパク質、核タンパク質、ポリメラーゼ、又はそれらの断片である。
【００１２】
有利な一実施態様では、イヌインフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原は、インフルエンザに罹患したイヌ由来である。限定するものではないが一例として、インフルエンザウイルスは、罹患犬の気管支肺胞洗浄によって及び／又は肺組織から単離できる。イヌに感染するインフルエンザのヌクレオチド配列の単離及び特徴付けは、当業者の日常的な実験により行うことができる。
【００１３】
イヌインフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原はウマインフルエンザから単離できる。かかるウマインフルエンザは、オハイオウマインフルエンザ、ケンタッキーウマインフルエンザ、又はニューマーケットウマインフルエンザであってよい。
【００１４】
アビポックス発現ベクターは、弱毒化アビポックス発現ベクターであってよい。一実施態様では、アビポックス発現ベクターはカナリア痘ベクターであり、有利にはＡＬＶＡＣである。インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原は、Ｈ３等の血球凝集素であってよい。カナリア痘ベクターは、ＣＰ２２４２、ＣＰ１５２９、ＣＰ１５３３であってよい。
【００１５】
本発明はまた、不活化インフルエンザワクチンを包含する。かかる不活化インフルエンザワクチンは、不活化イヌインフルエンザであってよい。別の実施態様では、不活化インフルエンザワクチンはウマインフルエンザであり、有利にはオハイオウマインフルエンザ、ケンタッキーウマインフルエンザ、又はニューマーケットウマインフルエンザである。ワクチンは、ホルマリン又はβ−プロピオラクトンにより不活化できる。
【００１６】
本発明はまた、イヌにインフルエンザに対する免疫応答を誘発する方法に関する。この方法は、上記組換えインフルエンザワクチン又は不活化ワクチンのいずれか一つと、薬学上若しくは動物学的に許容される担体、賦形剤若しくは媒体とを免疫応答の誘発に有効な量で含む製剤を投与することを含む方法である。有利な実施態様ではアジュバントを加えてもよい。かかるアジュバントは、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、カルボマー、又は油−水エマルジョンなどでよく、任意にＣｐＧを含んでもよい。上記投与は、皮下投与又は筋肉内投与であることが有利である。
【００１７】
本発明はさらに、イヌにインフルエンザに対する免疫応答を誘導する方法に関する。この方法は、上記組換えインフルエンザワクチン又は不活化ワクチンのいずれか一つと、薬学上若しくは動物学的に許容される担体、賦形剤若しくは媒体とを免疫応答の誘導に有効な量で含む製剤を投与することを含む方法である。有利な実施態様ではアジュバントを加えてもよい。かかるアジュバントは、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、カルボマー、又は油−水エマルジョンなどであり、任意にＣｐＧを含んでもよい。上記投与は、皮下投与又は筋肉内投与であることが有利である。
【００１８】
本発明はさらに、免疫応答の誘発方法又は誘導方法を実施するためのキットを包含する。かかるキットには、組換えインフルエンザワクチン又は不活化ワクチンのいずれか一つと方法を実施するための指示書が含まれる。
【００１９】
本開示、特に特許請求の範囲及び／又は各段落において、「含む（comprises）」、「含まれる（comprised）」、「含んでいる（comprising）」などの用語は、米国特許法においてそれぞれに付与されている意味を有することができ、例えば「含む（includes）」、「含まれる（included）」、「含んでいる（including）」などを意味することができ、「から本質的になっている（consisting essentially of）」及び「から本質的になる（consists essentially of）」などの用語は、米国特許法においてそれぞれに付与されている意味を有し、例えば明示されていないエレメントを許容するが、従来技術に見出されるか、或いは本発明の基本的又は新規な特徴に影響を及ぼすエレメントは除外する。
【００２０】
上記の実施態様及びその他の実施態様は、以下の詳細な説明において開示され、或いは詳細な説明から自明であり、また詳細な説明に包含される。
【００２１】
実施例を参照して示す以下の詳細な説明は、図面を参照することにより最もよく理解されるが、かかる詳細な説明は、説明されている具体的な実施態様だけに本発明を限定するものではない。
［発明の詳細な説明］
【００２２】
本発明は、ウマインフルエンザＨＡを発現する組換えカナリア痘がイヌにおいて免疫原性を示すことを明らかにする出願人の研究に一部基づいている。
【００２３】
本発明は、動物に、有利には脊椎動物に、より有利にはイヌに免疫応答を誘発するあらゆるインフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原を包含する。かかるインフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原は、どのようなインフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原であってもよく、例えば、動物に、有利には脊椎動物に、より有利にはイヌに反応を誘発、誘導又は刺激するタンパク質、ペプチド、又はその断片が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００２４】
有利な一実施態様では、イヌインフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原はインフルエンザに感染したイヌ由来である。インフルエンザウイルスは、例えば、罹患犬の気管支肺胞洗浄によって及び／又は肺組織から単離できるがこれらに限定されるものではない。イヌに感染するインフルエンザのヌクレオチド配列の単離及び特徴付けは、当業者の日常的な実験により行うことができる。  
【００２５】
別の有利な実施態様では、イヌインフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原は、インフルエンザに感染したウマ由来、又はウマインフルエンザ株由来である。ウマインフルエンザ株が、オハイオウマインフルエンザ株、ケンタッキーウマインフルエンザ株、又はニューマーケットウマインフルエンザ株であることが有利である。かかるイヌインフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原は、実施例４及び５のヌクレオチド配列から当業者が決定できるものである。イヌインフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原が、血球凝集素（ＨＡ）（例えばＨＡ前駆体、Ｈ１・Ｈ２タンパク質、マトリックスタンパク質（例：マトリックスタンパク質Ｍ１及びＭ２）、ノイラミニダーゼ、非構造（ＮＳ）タンパク質（例：ＮＳ１又はＮＳ２）、核タンパク質（ＮＰ）及びポリメラーゼ(例：ＰＡポリメラーゼ、ＰＢ１ポリメラーゼ１又はＰＢ２ポリメラーゼ２)）であることが有利である。
【００２６】
本発明の方法に用いることができるケンタッキーウマインフルエンザ株の例には以下が含まれるが、これらの例に限定はされない。ウマインフルエンザ株A/eq/Kentucky/98 （例えば、Crouch et al., Vaccine. 2004 Dec 2;23(3):418-25を参照）、A/Equi 2 （ケンタッキー８１）（例えば、Short et al., J Vet Pharmacol Ther. 1986 Dec;9(4):426-32, Horner & Ledgard, N Z Vet J. 1988 Dec;36(4):205-6を参照）、A/equine/Kentucky/1/81 （Ｅｑ／Ｋｙ）（例えば、Breathnach et al., Vet Immunol Immunopathol. 2004 Apr;98(3-4):127-36を参照）、A/Equine/Kentucky/1/81（Ｈ３Ｎ８）（例えば、Olsen et al., Vaccine. 1997 Jul;15(10):1149-56, Morley et al. Vet Microbiol. 1995 Jun;45(1):81-92, Ozaki et al., Vet Microbiol. 2001 Sep 20;82(2):111-9, Sugiura et al., J Virol Methods. 2001 Oct;98(1):1-8を参照、またSugiura et al., J Virol Methods. 2001 Oct;98(1):1-8, Goto et al., J Vet Med Sci. 1993 Feb;55(1):33-7, Goto et al., J Vet Med Sci. 1993 Feb;55(1):33-7を参照）、A/Equine/Kentucky/1/91（Ｈ３Ｎ８）（例えば、Youngner et al., Am J Vet Res. 2001 Aug;62(8):1290-4を参照）、A/Equine/Kentucky/1277/90 （Ｅｑ／ケンタッキー) （例えば、Webster & Thomas, Vaccine. 1993;11(10):987-93を参照）、A/Equine/Kentucky/2/91（Ｈ３Ｎ８）（例えば、Donofrio et al., J Vet Diagn Invest. 1994 Jan;6(1):39-43を参照）、A/Equine/Kentucky/79（Ｈ３Ｎ８）（例えば、Donofrio et al., J Vet Diagn Invest. 1994 Jan;6(1):39-43を参照）、A/equine/Kentucky/81（例えば、Sugiura et al., J Virol Methods. 2001 Oct;98(1):1-8を参照）、A/equine/Kentucky/91（Ｈ３Ｎ８）（例えば、Gross et al., Equine Vet J. 1998 Nov;30(6):489-97を参照）、A/equine-2/Kentucky/95 （Ｈ３Ｎ８）（例えば、Heldens et al., Vet J. 2004 Mar;167(2):150-7を参照）、並びにA/equine-2/Kentucky/98（例えば、Chambers et al., Equine Vet J. 2001 Nov;33(7):630-6を参照）。これらの開示は、その全体を本明細書に組み込むこととする。
【００２７】
本発明の方法に用いることができるニューマーケットウマインフルエンザ株の例には以下が含まれるが、これらの例に限定はされない。ウマインフルエンザ株A/eq/Newmarket/1/77（Lindstrom et al., Arch Virol. 1998;143(8):1585-98を参照）、A/eq/Newmarket/5/03（Edlund Toulemonde et al., Vet Rec. 2005 Mar 19;156(12):367-71を参照）、A/Equi 2（Ｈ３Ｎ８）、Newmarket 1/93 （Mohler et al., Biotechnol Bioeng. 2005 Apr 5;90(1):46-58, Nayak et al., J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2005 Jul 8を参照）、A/equi-2/Newmarket-1/93 （Heldens et al., J Immunol Methods. 2002 Jun 1;264(1-2):11-7を参照）、A/equine/Newmarket/2/93（Wattrang et al., Viral Immunol. 2003;16(1):57-67を参照）、A/equine/Newmarket/79（Ｈ３Ｎ８）（Duhaut & Dimmock, Virology. 2000 Sep 30;275(2):278-85, Noble & Dimmock, J Gen Virol. 1994 Dec;75 ( Pt 12):3485-91, Duhaut & Dimmock, Virology. 1998 Sep 1;248(2):241-53, Hannant & Mumford, Vet Immunol Immunopathol. 1989 Jul;21(3-4):327-37, Hannant et al., Vet Microbiol. 1989 Apr;19(4):293-303, Hannant et al., Vet Rec. 1988 Feb 6;122(6):125-8, Richards et al., Vet Immunol Immunopathol. 1992 Jun;33(1-2):129-43, Heldens et al., Vet J. 2004 Mar;167(2):150-7を参照）、A/equine/Newmarket/1/77（Ｈ７Ｎ７）（Goto et al., J Vet Med Sci. 1993 Feb;55(1):33-7, Sugiura et al., J Virol Methods. 2001 Oct;98(1):1-8, Sugiura et al., J Virol Methods. 2001 Oct;98(1):1-8を参照）、並びに A/equine-2/Newmarket-2/93 （Heldens et al., Vet J. 2004 Mar;167(2):150-7を参照)。これらの開示は、その全体を本明細書に組み込むこととする。
【００２８】
本発明はまた、例えば以下に挙げるその他のウマインフルエンザウイルスを包含するが、これらに限定はされない。ウマインフルエンザウイルスA/eq/Miami/63（Ｈ３Ｎ８）（例えば、van Maanen et al., Vet Microbiol. 2003 Jun 10;93(4):291-306を参照）、A/equi 1（プラハ株）（例えば、Horner & Ledgard, N Z Vet J. 1988 Dec;36(4):205-6, Short et al., J Vet Pharmacol Ther. 1986 Dec;9(4):426-32を参照）、A/Equi 2（マイアミ株）（例えば、Short et al., J Vet Pharmacol Ther. 1986 Dec;9(4):426-32を参照）、A/equi-1/Prague/56  （Ｐｒ／５６）（例えば、Heldens et al., J Immunol Methods. 2002 Jun 1;264(1-2):11-7を参照）、A/equi-2/Suffolk/89（Ｓｕｆ／８９）（例えば、Heldens et al., J Immunol Methods. 2002 Jun 1;264(1-2):11-7を参照）、A/Equine 2/Sussex/89（Ｈ３Ｎ８）（例えば、Mumford et al., Vet Rec. 1994 Feb 12;134(7):158-62を参照）、A/equine/Sussex/89（例えば、Wattrang et al., Viral Immunol. 2003;16(1):57-67を参照）、A/equine-2/Saskatoon/90（例えば、Chambers et al., Equine Vet J. 2001 Nov;33(7):630-6を参照）、A/Equine/Prague/1/56（Ｈ７Ｎ７）（例えば、Donofrio et al., J Vet Diagn Invest. 1994 Jan;6(1):39-43, Morley et al. Vet Microbiol. 1995 Jun;45(1):81-92を参照）、A/equine/Miami/1/63（Ｈ３Ｎ８）（例えば、Morley et al. Vet Microbiol. 1995 Jun;45(1):81-92, Ozaki et al., Vet Microbiol. 2001 Sep 20;82(2):111-9, Thomson et al., Vet Rec. 1977 May 28;100(22):465-8,  Mumford et al., Epidemiol Infect. 1988 Jun;100(3):501-10, Donofrio et al., J Vet Diagn Invest. 1994 Jan;6(1):39-43, Mumford et al., J Hyg (Lond). 1983 Jun;90(3):385-95を参照）、A/Aichi/2/68（Ｈ３Ｎ２）（例えば、Ozaki et al., Vet Microbiol. 2001 Sep 20;82(2):111-9を参照）、A/equine/Tokyo/2/71（Ｈ３Ｎ８）（例えば、Goto et al., J Vet Med Sci. 1993 Feb;55(1):33-7を参照）、A/eq/LaPlata/1/88（例えば、Lindstrom et al., Arch Virol. 1998;143(8):1585-98を参照）、A/Equine/Jilin/1/89（Ｅｑ／Jilin）（例えば、Webster & Thomas, Vaccine. 1993;11(10):987-93を参照）、A/Equine/Alaska/1/91（Ｈ３Ｎ８）（例えば、Webster & Thomas, Vaccine. 1993;11(10):987-93を参照）、A/equine/Saskatoon/1/91（Ｈ３Ｎ８）（例えば、Morley et al. Vet Microbiol. 1995 Jun;45(1):81-92を参照）、A/equine/Rome/5/91（Ｈ３Ｎ８）（例えば、Sugiura et al., J Virol Methods. 2001 Oct;98(1):1-8を参照）、A/equine/La Plata/1/93（Ｈ３Ｎ８）（例えば、Ozaki et al., Vet Microbiol. 2001 Sep 20;82(2):111-9を参照）、A/equine/La Plata/1/93（ＬＰ／９３）（例えば、Sugiura et al., J Virol Methods. 2001 Oct;98(1):1-8を参照）、A/eq/Holland/1/95（Ｈ３Ｎ８）（例えば、van Maanen et al., Vet Microbiol. 2003 Jun 10;93(4):291-306を参照）、並びに A/eq/Holland/2/95（Ｈ３Ｎ８）（例えば、van Maanen et al., Vet Microbiol. 2003 Jun 10;93(4):291-306を参照）。これらの開示は、その全体を本明細書に組み込むこととする。
【００２９】
別の有利な実施態様では、イヌインフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原は、インフルエンザに感染したウマ、又は最近の単離物に由来するウマインフルエンザ株である。
【００３０】
インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原は、以下に挙げるその他のインフルエンザ株から単離することもできるが、これらの例に限定はされない。トリＨ５Ｎ１インフルエンザウイルスＡ／ホンコン／１５６／９７（Ａ／ＨＫ／１５６／９７）（例えば、Leneva et al., Antimicrob Agents Chemother. 2001 Apr;45(4):1216-24を参照）、トリＨ７Ｎ１インフルエンザ株（例えば、Foni et al., New Microbiol. 2005 Jan;28(1):31-5を参照）、トリＨ９Ｎ２インフルエンザウイルス（例えば、Leneva et al., Antimicrob Agents Chemother. 2001 Apr;45(4):1216-24を参照）、トリインフルエンザウイルスＡ／Chicken／ＨＫ／Ｇ９／９７（Ｈ９Ｎ２）（例えば、Leneva et al., Antimicrob Agents Chemother. 2001 Apr;45(4):1216-24を参照）、トリインフルエンザウイルスＡ／Quail/ＨＫ／Ｇ１／９７（Ｈ９Ｎ２）（例えば、Leneva et al., Antimicrob Agents Chemother. 2001 Apr;45(4):1216-24を参照）、トリインフルエンザウイルスＡ／Teal／ＨＫ／Ｗ３１２／９７（Ｈ６Ｎ１）（例えば、Leneva et al., Antimicrob Agents Chemother. 2001 Apr;45(4):1216-24を参照）、トリ由来のトリ汎発性インフルエンザＡ型ウイルス（例えば、Audsley & Tannock, Expert Opin Biol Ther. 2004 May;4(5):709-17を参照）、低温適合性（ｃａ）及び温度感受性（ｔｓ）マスタードナー株、Ａ／Leningrad／１３４／１７／５７（Ｈ２Ｎ２）（例えば、Youil et al., Virus Res. 2004 Jun 15;102(2):165-76を参照）、ウマインフルエンザウイルス（Ａ／Ｅｑｕｉ２（Ｈ３Ｎ８）、ニューマーケット１／９３）（例えば、Mohler et al., Biotechnol Bioeng. 2005 Apr 5;90(1):46-58; Nayak et al., J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2005 Jul 8を参照）、ウマ−２インフルエンザウイルス（ＥＩＶ；Ｈ３Ｎ８亜型)（例えば、Virology. 2001 Aug 15;287(1):202-13を参照）、ウマ−２インフルエンザウイルスＡ／ウマ／Kentuckey／１／９１（Ｈ３Ｎ８）（例えば、Youngner et al., Am J Vet Res. 2001 Aug;62(8):1290-4を参照）、ヒトインフルエンザウイルスＡ（Ｈ３Ｎ２）型単離物（例えば、Abed et al., J Infect Dis. 2002 Oct 15;186(8):1074-80を参照）、ヒトインフルエンザウイルスＡ／Memphis／１／７１（Ｈ３Ｎ２）（例えば、Suzuki et al., Biochem J. 1996 Sep 1;318 ( Pt 2):389-93を参照）、ヒトインフルエンザウイルスＡ／Nanchang／９３３／９５（Ｈ３Ｎ２）型ウイルス（例えば、Scholtissek et al., J Virol. 2002 Feb;76(4):1781-6を参照）、ヒトインフルエンザウイルスＡ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）型ウイルス（例えば、Scholtissek et al., J Virol. 2002 Feb;76(4):1781-6を参照）、ヒトインフルエンザウイルスＡ／Singapore／５７（Ｈ２Ｎ２）型ウイルス（例えば、Scholtissek et al., J Virol. 2002 Feb;76(4):1781-6を参照）、インフルエンザウイルスＡ型（例えば、Chare et al., J Gen Virol. 2003 Oct;84(Pt 10):2691-703を参照）、インフルエンザウイルスＡＰＲ／８／３４（ＰＲ８）型ウイルス（Ｈ１Ｎ１亜型）（例えば、Mantani et al., Planta Med. 2001 Apr;67(3):240-3を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Aichi／２／６８（Ｈ３Ｎ２）（例えば、Miyamoto et al., Antiviral Res. 1998 Aug;39(2):89-100を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Ann Arbor／６／６０低温適合性ウイルス（例えば、Treanor et al., J Virol. 1994 Dec;68(12):7684-8を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Beijing 32／９２（Ｈ３Ｎ２）（例えば、Zakay-Rones et al., J Altern Complement Med. 1995 Winter;1(4):361-9を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Charlottesville／３１／９５（Ｈ１Ｎ１）（例えば、Gubareva et al., J Gen Virol. 2002 Nov;83(Pt 11):2683-92を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Kawasaki／８６（Ｈ１Ｎ１）型ウイルス（例えば、Staschke et al., Virology. 1998 Sep 1;248(2):264-74を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Korea／８２（Ｈ３Ｎ２）（例えば、Treanor et al., J Virol. 1994 Dec;68(12):7684-8を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Leningrad／１３４／５７（例えば、Egorov et al., J Virol. 1998 Aug;72(8):6437-41を参照）、インフルエンザウイルスＡ／ＮＷＳ／３３（Ｈ１Ｎ１）（例えば、Sidwell et al., Antiviral Res. 1998 Feb;37(2):107-20を参照）インフルエンザウイルスＡ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）（例えば、Miyamoto et al., Antiviral Res. 1998 Aug;39(2):89-100を参照）、インフルエンザウイルスＡ／ＰＲ８／３４（例えば、Nunes-Correia et al., Biochemistry. 1999 Jan 19;38(3):1095-101, Tree et al., Vaccine. 2001 May 14;19(25-26):3444-50を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Puerto Rico（ＰＲ）／８／３４（例えば、Egorov et al., J Virol. 1998 Aug;72(8):6437-41を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Puerto Rico／8-Mount Sinai（例えば、Mazanec et al., J Virol. 1995 Feb;69(2):1339-43を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Shangdong 9／９３（Ｈ３Ｎ２）（例えば、Zakay-Rones et al., J Altern Complement Med. 1995 Winter;1(4):361-9, Sidwell et al., Antiviral Res. 1998 Feb;37(2):107-20を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Shingapol／１／５７（Ｈ２Ｎ２）（例えば、Miyamoto et al., Antiviral Res. 1998 Aug;39(2):89-100を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Singapore 6／８６（Ｈ１Ｎ１）（例えば、Zakay-Rones et al., J Altern Complement Med. 1995 Winter;1(4):361-9を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Singapore／１／５７（Ｈ２Ｎ２）（例えば、Bantia et al., Antimicrob Agents Chemother. 1998 Apr;42(4):801-7を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Texas 36／９１（Ｈ１Ｎ１）（例えば、Zakay-Rones et al., J Altern Complement Med. 1995 Winter;1(4):361-9を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Texas／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）型ウイルス（例えば、Gubareva et al., J Infect Dis. 2001 Feb 15;183(4):523-31, Halperin et al., Vaccine. 1998 Aug;16(13):1331-5を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Texas／３６／９１（Ｈ１Ｎ１）（例えば、Hayden et al., Antiviral Res. 1994 Oct;25(2):123-31を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Udorn／７２型ウイルス感染症（例えば、Shimizu et al., Virology. 1999 Feb 15;254(2):213-9を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Victoria／３／７５（Ｈ３Ｎ２）（例えば、Sidwell et al., Antiviral Res. 1998 Feb;37(2):107-20を参照）、インフルエンザウイルスＡ／Virginia／８８（Ｈ３Ｎ２）（例えば、Hayden et al., Antiviral Res. 1994 Oct;25(2):123-31を参照）、インフルエンザウイルスＡ／ＷＳＮ／３３（Ｈ１Ｎ１）（例えば、Lu et al., Arch Virol. 2002;147(2):273-84を参照）、インフルエンザウイルスＡ／ＷＳＮ／３３（例えば、Gujuluva et al., Virology. 1994 Nov 1;204(2):491-505を参照）、インフルエンザウイルスＢ型（例えば、Chare et al., J Gen Virol. 2003 Oct;84(Pt 10):2691-703を参照）、インフルエンザウイルスＢ／Ann Arbor 1／８６（例えば、Zakay-Rones et al., J Altern Complement Med. 1995 Winter;1(4):361-9を参照）、インフルエンザウイルスＢ／Harbin／７／９４（例えば、Halperin et al., Vaccine. 1998 Aug;16(13):1331-5を参照）、インフルエンザウイルスＢ／Hong Kong／５／７２（例えば、Sidwell et al., Antiviral Res. 1998 Feb;37(2):107-20を参照）、インフルエンザウイルスＢ／Lee／４０（例えば、Miyamoto et al., Antiviral Res. 1998 Aug;39(2):89-100を参照）、インフルエンザ��イルスＢ／Victoriaグループ（例えば、Nakagawa et al., J Virol Methods. 1999 Apr;79(1):113-20を参照）、インフルエンザウイルスＢ／Yamagata 16／８８ （例えば、Zakay-Rones et al., J Altern Complement Med. 1995 Winter;1(4):361-9を参照）、インフルエンザウイルスＢ／Yamagataグループ（例えば、Nakagawa et al., J Virol Methods. 1999 Apr;79(1):113-20を参照）、インフルエンザウイルスＢ／Yamanashi／１６６／９８（例えば、Hoffmann et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2002 Aug 20;99(17):11411-6を参照）、インフルエンザウイルスＣ型（例えば、Chare et al., J Gen Virol. 2003 Oct;84(Pt 10):2691-703を参照）、インフルエンザウイルス株Ａ／Equi／２／Kildare／８９（例えば、Quinlivan et al., J Clin Microbiol. 2004 Feb;42(2):759-63を参照）、インフルエンザウイルスＢ型／Panama 45／９０（例えば、Zakay-Rones et al., J Altern Complement Med. 1995 Winter;1(4):361-9を参照）、低温適合性／温度感受性（ｃａ／ｔｓ）ロシア型インフルエンザＡ型生ワクチン（例えば、Palker et al., Virus Res. 2004 Oct;105(2):183-94を参照）、Madin Darby Canine Kidney（ＭＤＣＫ）由来細胞株（例えば、Halperin et al., Vaccine. 2002 Jan 15;20(7-8):1240-7を参照）、マウス適合型インフルエンザウイルスＡ／Guizhou／５４／８９（Ｈ３Ｎ２亜型）（例えば、Nagai et al., Biol Pharm Bull. 1995 Feb;18(2):295-9を参照）、マウス適合型インフルエンザウイルスＡ／ＰＲ／８／３４（Ａ／ＰＲ８）（例えば、Nagai et al., Antiviral Res. 1995 Jan;26(1):11-25を参照）、マウス適合型インフルエンザウイルスＢ／Ibaraki／２／８５（例えば、Nagai et al., Biol Pharm Bull. 1995 Feb;18(2):295-9を参照）、ロシア型弱毒化インフルエンザ生ワクチンドナー株Ａ／Leningrad／１３４／１７／５７、A/Leningrad／１３４／４７／５７及びＢ／ＵＳＳＲ／６０／６９（例えば、Audsley & Tannock, J Virol Methods. 2005 Feb;123(2):187-93を参照）、ブタＨ１及びＨ３型インフルエンザウイルス（例えば、Gambaryan et al., Virus Res. 2005 Jul 1を参照）ブタインフルエンザＡ型ウイルス（例えば、Landolt et al., Am J Vet Res. 2005 Jan;66(1):119-24を参照）、ブタインフルエンザウイルス（ＳＩＶ）（例えば、Clavijo et al., Can J Vet Res. 2002 Apr;66(2):117-21を参照）、ブタインフルエンザウイルスＡ／Ｓｗ／Ｇｅｒ２／８１（例えば、Zakay-Rones et al., J Altern Complement Med. 1995 Winter;1(4):361-9を参照）、ブタインフルエンザウイルスＡ／Ｓｗ／Ｇｅｒ８５３３／９１（例えば、Zakay-Rones et al., J Altern Complement Med. 1995 Winter;1(4):361-9を参照）、シチメンチョウインフルエンザウイルスＡ／Ｔｕｒ／Ｇｅｒ３／９１（例えば、Zakay-Rones et al., J Altern Complement Med. 1995 Winter;1(4):361-9を参照）、並びにシチメンチョウインフルエンザウイルスＡ／turkey／Minnesota／８３３／８０（Ｈ４Ｎ２）（例えば、Gubareva et al., J Virol. 1997 May;71(5):3385-90を参照）これらの開示は、その全体を本明細書に組み込むこととする。
【００３１】
本明細書で使用する「抗原」又は「免疫原」という用語は、宿主動物で特異的免疫応答を誘導する物質を意味する。抗原は、死滅させた、弱毒化した、又は生きている生物全体；生物のサブユニット又は一部；免疫原性の性質を有する挿入物を含有する組換えベクター；宿主動物への提示後に免疫応答を誘導することができるＤＮＡの小片又は断片；タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、エピトープ、ハプテン、又はこれらの組合せを含んでもよい。或いは、免疫原又は抗原に毒素又は抗毒素が含まれていてもよい。
【００３２】
本明細書で使用する「免疫原性タンパク質又はペプチド」という用語もまた、一旦宿主に投与されると、そのタンパク質に対する液性及び／又は細胞性の免疫応答を引き起こすことができるという意味で免疫学的に活性なペプチド及びポリペプチドを含む。かかるタンパク質断片は、全タンパク質としての免疫活性と実質的に同じ免疫活性を有していることが好ましい。したがって、本発明のタンパク質断片は、少なくとも一つのエピトープ又は抗原決定基を含み、又はそれらから実質的になり、又はそれらからなる。エピトープという用語は、液性免疫応答（Ｂ細胞）及び／又は細胞性免疫応答（Ｔ細胞）を誘導することができるタンパク質部位に関する用語である。
【００３３】
「免疫原性タンパク質又はペプチド」という用語はさらに、本明細書で定義する免疫応答の産生機能をポリペプチドが保持する限りにおいて、その配列に欠失、付加、及び置換があることも含む。この点に関し、置換は保存的な性質のもの、すなわちアミノ酸ファミリー内で生じる置換であることが特に好ましい。例えば、アミノ酸は一般的に、（１）酸性−アスパラギン酸及びグルタミン酸、（２）塩基性−リシン、アルギニン、ヒスチジン、（３）非極性−アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、及び（４）非荷電極性−グリシン、アスパラギン、グルタミン、シスチン、セリン、スレオニン、チロシンという４つのファミリーに分類される。フェニルアラニン、トリプトファン及びチロシンは、芳香族アミノ酸に分類されることもある。ロイシンをイソロイシン又はバリンに（或いはその逆）、アスパラギン酸をグルタミン酸に（或いはその逆）、スレオニンをセリンに（或いはその逆）それぞれ単独に置換しても、又はあるアミノ酸を構造的に関連するアミノ酸に同様に保存的に置換しても、生物活性には大きく影響しないことは十分に予測されることである。したがって、基準分子のアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列を有するが、そのタンパク質の免疫原性に実質的に影響しないような軽微なアミノ酸置換を有するタンパク質は、基準ポリペプチドの定義に含まれる。
【００３４】
「エピトープ」という用語は、特異的なＢ細胞及び／又はＴ細胞が応答する抗原又はハプテンの部位をさす。この用語は、「抗原決定基」又は「抗原決定部位」と同じ意味でも用いられる。同じエピトープを認識する抗体は、ある抗体が、標的抗原に別の抗体が結合するのを阻止する能力を示す簡便なイムノアッセイによって同定することができる。
【００３５】
組成物又はワクチンに対する「免疫応答」とは、目的とする組成物又はワクチンに対する細胞性及び／又は抗体による免疫応答が宿主に生じることである。一般的に「免疫応答」の作用には、目的組成物又はワクチンに含まれる一若しくは複数の抗原を特異的に対象とする抗体、Ｂ細胞、ヘルパーＴ細胞、及び／又は細胞傷害性Ｔ細胞の産生のうち１以上が含まれるが、これらに限定はされない。宿主が、新たな感染への耐性の増強及び／又は疾患の臨床的重症度の緩和といった治療的又は防御的な免疫応答を示すことが好ましい。かかる防御効果は、感染宿主で通常みられる症状の緩和又は喪失、回復時間の短縮、及び／又は感染宿主におけるウイルス価の低下により示される。
【００３６】
本明細書で使用する「免疫原性」タンパク質又はポリペプチドという用語は、上記の免疫応答を誘発するアミノ酸配列も意味する。本明細書で使用する「免疫原性」タンパク質又はポリペプチドには、タンパク質の完全長配列、そのアナログ、その免疫原性断片が含まれる。「免疫原性断片」は、１以上のエピトープを含み、上記の免疫応答を誘発するタンパク質断片を意味する。かかる断片は、当技術分野で公知の各種エピトープマッピング手法により同定することができる。例えば、Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66 (Glenn E. Morris, Ed., 1996) Humana Press, Totowa, N.Jを参照のこと。線状エピトープは例えば、あるタンパク質分子の部位に相当する多数のペプチドを固体支持体上で同時に合成し、それらペプチドが支持体上に付着しているうちに抗体と反応させることにより決定できる。かかる手法は、当技術分野で公知であり、例えば、米国特許第４７０８８７１号、Geysen et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:3998-4002、Geysen et al. (1986) Molec. Immunol. 23:709-715に記載されており、これらはその全体が参照として本明細書に組み込まれる。同様に、立体構造エピトープは、エックス線結晶学及び二次元核磁気共鳴法等によってアミノ酸の空間立体構造を決定することにより容易に同定される。例えば、上記のEpitope Mapping Protocolsを参照のこと。特にT. parvaのタンパク質に適用できる方法が、その全文を参照として本明細書に組み込んでいるＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２２６０５号に完全に記載されている。
【００３７】
例えば、ポリエピトープ、フランキングエピトープ、その他組換え抗原若しくは合成的に由来する抗原などの合成抗原も定義に含まれる。例えば、Bergmann et al. (1993) Eur. J. Immunol. 23:2777-2781; Bergmann et al. (1996) J. Immunol. 157:3242-3249; Suhrbier, A. (1997) Immunol.及び Cell Biol. 75:402-408; Gardner et al. (1998) 12th World AIDS Conference, Geneva, Switzerland, Jun. 28-Jul. 3, 1998を参照のこと。本発明の目的に用いる免疫原性断片には、通常、分子中の少なくとも約３個のアミノ酸、好ましくは少なくとも約５個のアミノ酸、より好ましくは少なくとも約１０〜１５個のアミノ酸、最も好ましくは２５個以上のアミノ酸が含まれる。断片の長さに重要な意味をもつ上限はなく、タンパク質配列のほぼ全長に近い長さであってもよいし、タンパク質のエピトープを少なくとも一つ有する融合タンパク質であってもよい。
【００３８】
したがって、エピトープを発現するポリヌクレオチドの最小構造は、インフルエンザタンパク質又はポリタンパク質のエピトープ又は抗原決定基をコードするヌクレオチドを含み、又は実質的にそれらからなり、又はそれらからなる構造である。全タンパク質又はポリタンパク質の断片をコードするポリヌクレオチド、より有利には全タンパク質又はポリタンパク質をコードする配列において少なくとも２１個のヌクレオチド、有利には少なくとも４２個のヌクレオチド、好ましくは少なくとも５７個、８７個又は１５０個の連続又は隣接するヌクレオチドを含み、又は実質的にそれらからなり、又はそれらからなるポリヌクレオチドが挙げられる。オーバーラッピングペプチドライブラリーの構築（Hemmer B.  et al., Immunology Today, 1998, 19 (4), 163-168), Pepscan (Geysen et al., (1984) Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 81, 3998-4002; Geysen et al., (1985) Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 82, 178-182; Van der Zee R. et al., (1989) Eur. J. Immunol., 19, 43-47; Geysen H.M., (1990) Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health, 21, 523-533; Multipin.RTM.  Peptide Synthesis Kits de Chiron）、及びアルゴリズム（De Groot A. et al., (1999) Nature Biotechnology, 17, 533-561）、及びＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２２６０５号の方法などのエピトープ決定法を用いて過度な実験を行うことなく本発明を実施でき、上記文献はその全文が本明細書に組み込まれている。その他、本明細書に引用又は組み込まれている文献も、免疫原又は抗原のエピトープ、ひいてはかかるエピトープをコードする核酸分子を決定する方法の参考にすることができる。
【００３９】
「ポリヌクレオチド」は、ヌクレオチドのあらゆる長さのポリマー形態であり、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、及びアナログが任意の組合せで含まれる。ポリヌクレオチドは三次元構造をとり、既知又は未知のいずれであれ、あらゆる機能を発揮できる。「ポリヌクレオチド」という用語には、二重鎖、一本鎖、及び三重らせんの各構造の分子が含まれる。別途に特定又は要求していない限り、本明細書に記載されているポリヌクレオチドに関する本発明の実施態様には、二重鎖構造と、ＤＮＡ、ＲＮＡ若しくはそのハイブリッド分子の二重鎖構造を構成することが知られ又は予測されている二つの相補構造の各々とが、両方含まれる。
【００４０】
ポリヌクレオチドの非限定的な例として、遺伝子又は遺伝子断片、エキソン、イントロン、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、あらゆる配列から単離されたＤＮＡ、あらゆる配列から単離されたＲＮＡ、核酸プローブ及びプライマーが挙げられる。ポリヌクレオチドには、メチル化されたヌクレオチド及びヌクレオチドアナログ、ウラシル、フルオロリボースやチオラート等のその他の糖及び結合基  並びにヌクレオチドブランチ等の修飾ヌクレオチドが含まれる。ヌクレオチド配列は、連結等による重合の後に標識成分でさらに修飾してもよい。本定義に含まれるその他の修飾には、キャッピングや、１以上の天然型ヌクレオチドをアナログで置換することや、タンパク質、金属イオン、標識成分、その他のポリヌクレオチド又は固体支持体にポリヌクレオチドを付着させる手法を用いることが含まれる。ポリヌクレオチドは化学合成法により得ることができ、また微生物由来であってもよい。
【００４１】
本発明にはさらに、インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原をコードするポリヌクレオチドの相補鎖が含まれる。かかる相補鎖は、任意の長さのポリマーであってもよく、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、及びアナログを任意の組合せで含むことができる。
【００４２】
「タンパク質」、「ペプチド」、「ポリペプチド」及び「ポリペプチド断片」という用語は、本明細書中、任意の長さのアミノ酸残基のポリマーと同じ意味で使われる。かかるポリマーは線状又は分枝状のいずれでもよく、修飾アミノ酸又はアミノ酸アナログを含み、アミノ酸以外の化学基で切断されてもよい。これらの用語には、天然に修飾されたアミノ酸ポリマー、或いは干渉により、例えばジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、又は標識成分若しくは生物活性成分との結合などその他の操作若しくは修飾法により修飾されたアミノ酸ポリマーも含まれる。
【００４３】
「単離された」ポリヌクレオチド又はポリペプチドは、自然環境下で伴う物質を実質的に含んでいないものをいう。実質的に含んでいないとは、それらの物質を少なくとも５０％、有利には少なくとも７０％、より有利には少なくとも８０％、さらに有利には少なくとも９０％含んでいないことをいう。
【００４４】
ハイブリダイゼーション反応は、異なる「ストリンジェンシー」条件下で行うことができる。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーを高くする条件はよく知られている。例えば、「Molecular Cloning: A Laboratory Manual」第二版（Sambrook et al. 1989）を参照のこと。（ストリンジェンシーを高くするために）関係する条件としては以下が例示される。インキュベーション温度として、２５ｏＣ、３７ｏＣ、５０ｏＣ、及び６８ｏＣ、緩衝液濃度として、１０×ＳＳＣ、６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣ（ＳＳＣは、０．１５ＭのＮａＣｌ及び１５ｍＭのクエン酸緩衝液）並びにその他の緩衝液系を用いる同等物、ホルムアミド濃度として０％、２５％、５０％、及び７５％、インキュベーション時間として５分間〜２４時間、１回又は２回以上の洗浄ステップ、洗浄インキュベーション時間として、１分、２分又は１５分、洗浄液として、６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣ、又は脱イオン水。
【００４５】
本発明にはさらに、それがコードするポリペプチドの特性を増強若しくは低減し、又はかかる特性に著しく影響しないインフルエンザポリペプチドと機能的に同等な変異体又は誘導体をコードするポリヌクレオチド及びその機能的に同等な断片が含まれる。かかる機能的に同等な変異体、誘導体、及び断片は、インフルエンザ活性の保持能力を有する。例えば、コードするアミノ酸配列を変化させることのないＤＮＡ配列の変化、アミノ酸残基の保存的置換をもたらす変化、一若しくは数個のアミノ酸の欠失又は付加、並びにアミノ酸アナログによるアミノ酸残基の置換は、コードされるポリペプチドの特性に著しく影響しないものである。保存的なアミノ酸の置換は、グリシン／アラニン、バリン／イソロイシン／ロイシン、アスパラギン／グルタミン、アスパラギン酸／グルタミン酸、セリン／スレオニン／メチオニン、リシン／アルギニン、及びフェニルアラニン／チロシン／トリプトファンである。一実施態様では、目的のインフルエンザポリヌクレオチド又はポリペプチドに対する変異体の相同性又は同一性は、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、少なくとも９９％である。
【００４６】
本発明の目的で、重複及び同一性が最大となるが配列ギャップが最小となるように整列したときに配列を比較することによって配列の同一性又は相同性を決定することができる。具体的には、配列同一性は、いくつかの数学的アルゴリズムのいずれかを使用して決定することができる。２つの配列の比較に使用する数学的アルゴリズムの非限定的な例は、Karlin & Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1993; 90: 5873-5877などで改変された、Karlin & Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1990; 87: 2264-2268のアルゴリズムである。
【００４７】
配列の比較に使用する数学的アルゴリズムの他の例は、Myers & Miller, CABIOS 1988; 4: 11-17のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（第２．０版）中に組み込まれている。アミノ酸配列の比較にＡＬＩＧＮプログラムを利用するとき、ＰＡＭ１２０重み残基表、１２のギャップ長ペナルティー、及び４のギャップペナルティーを使用することができる。局所的な配列の類似性及びアラインメントの領域を同定するさらに他の有用なアルゴリズムは、Pearson & Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988; 85: 2444-2448に記載のＦＡＳＴＡアルゴリズムである。
【００４８】
ＷＵ−ＢＬＡＳＴ（Washington University BLAST）第２．０版ソフトウェアが本発明に従った使用に有利である。複数のＵＮＩＸ（登録商標）プラットフォーム用のＷＵ−ＢＬＡＳＴ第２．０版実行可能プログラムをftp://blast.wustl.edu/blast/executablesからダウンロードすることができる。このプログラムは、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ第１．４版を基礎とし、そのプログラムは、パブリックドメインのＮＣＢＩ−ＢＬＡＳＴ第１．４版を基礎とする（Altschul & Gish, 1996, Local alignment statistics, Doolittle ed., Methods in Enzymology 266: 460-480；Altschul et al., Journal of Molecular Biology 1990; 215: 403-410；Gish & States, 1993；Nature Genetics 3: 266-272；Karlin & Altschul, 1993; Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5873-5877；これらはすべて、参照により本明細書に組み込まれている）。
【００４９】
一般に、アミノ酸配列の比較は、既知の構造を有するポリペプチドのアミノ酸配列を、未知の構造を有するポリペプチドのアミノ酸配列と整列することによって行う。次いで、配列中のアミノ酸を比較し、相同性があるアミノ酸の集団を一群にする。この方法によって、ポリペプチドの保存された領域が検出され、アミノ酸の挿入及び欠失が明らかとなる。アミノ酸配列間の相同性は、市販のアルゴリズムを使用することによって決定することができる（上記の相同性の記載も参照されたい）。本明細書においてその他の形で言及したものに加えて、米国バイオテクノロジー情報センター（National Center for Biotechnology Information）によって提供されるプログラムＢＬＡＳＴ、ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＰ、及びＰＳＩ−ＢＬＡＳＴにも言及する。これらのプログラムは、この目的で当技術分野において広く使用され、２つのアミノ酸配列の相同性がある領域を整列することができる。
【００５０】
そのセット中のすべての検索プログラムにおいて、ギャップアラインメントルーチンは、データベース検索自体に不可欠である。ギャップ形成は、望ましい場合には停止することができる。長さのギャップ１つについての初期設定のペナルティー（Ｑ）は、タンパク質及びＢＬＡＳＴＰではＱ＝９であり、ＢＬＡＳＴＮではＱ＝１０であるが、任意の整数に変更してもよい。ギャップを伸長する、初期設定の残基当たりのペナルティー（Ｒ）は、タンパク質及びＢＬＡＳＴＰではＲ＝２であり、ＢＬＡＳＴＮではＲ＝１０であるが、任意の整数に変更してもよい。重複及び同一性が最大となるが配列ギャップが最小となるように配列を整列するために、Ｑ値及びＲ値の任意の組合せを使用することができる。初期設定のアミノ酸比較行列はＢＬＯＳＵＭ６２であるが、ＰＡＭなどの他のアミノ酸比較行列を利用することができる。
【００５１】
或いは又はさらには、「相同性」又は「同一性」という用語は、例えば、ヌクレオチド又はアミノ酸の配列に関して、２つの配列間にある類似性の定量的尺度を示すことができる。％配列類似性は、（Ｎｒｅｆ−Ｎｄｉｆ）＊１００／Ｎｒｅｆとして算出することができ、式中、Ｎｄｉｆは、整列したときに２つの配列で同一でない残基の合計数であり、Ｎｒｅｆは、配列の１つの残基数である。したがって、ＤＮＡ配列AGTCAGTCは、配列AATCAATCとの配列同一性が７５％である（Ｎｒｅｆ＝８；Ｎｄｉｆ＝２）。
【００５２】
或いは又はさらには、配列に関して「相同性」又は「同一性」という用語は、２つの配列の短い方でのヌクレオチド又はアミノ酸の数で割った、同一のヌクレオチド又はアミノ酸の位置の数を指すこともでき、２つの配列のアラインメントは、例えば、２０ヌクレオチドのウィンドウサイズ、４ヌクレオチドの語長、及び４のギャップペナルティーを使用して、Wilbur及びLipmanのアルゴリズムに従って決定することができ（参照により本明細書に組み込まれているWilbur & Lipman, Proc Natl Acad Sci USA 1983; 80: 726）、アラインメントを含めた配列データのコンピュータ支援型の分析及び解釈は、好都合なことに、市販されているプログラム（例えば、Intelligenetics（商標）Suite、Intelligenetics社製、カリフォルニア州）を使用して行うことができる。ＲＮＡ配列がＤＮＡ配列と類似する、又はある程度の配列の同一性又は相同性を有するというとき、ＤＮＡ配列中のチミジン（Ｔ）は、ＲＮＡ配列中のウラシル（Ｕ）と同じであるとみなす。したがって、ＲＮＡ配列は、本発明の範囲内にあり、ＤＮＡ配列中のチミジン（Ｔ）をＲＮＡ配列中のウラシル（Ｕ）と同じであるとみなすことにより、ＤＮＡ配列に由来し得る。
【００５３】
また、過度の実験を行わずに、当業者は、％相同性を決定するための他の多数のプログラム又は参照文献を参考にすることができる。
【００５４】
本発明はさらに、ベクター分子又は発現ベクター中に含まれ、プロモーターエレメント、及び場合によってはエンハンサーと作動的に連結しているインフルエンザポリヌクレオチドを包含する。
【００５５】
ベクターとしては、ポックスウイルスが有利であり、特にワクシニアウイルスや、鶏痘ウイルス若しくはカナリア痘ウイルスなどのアビポックスウイルスが有利である。ウイルスがカナリア痘ウイルスであることが有利である。カナリア痘株として有利なのは、弱毒化株である。かかるベクターは、ケンタッキー株、ニューマーケット株及び／又はオハイオ株のエピトープを少なくとも一つ発現させることができる。有利なカナリア痘構築物には、ｖＣＰ１５２９、ｖＣＰ１５３３、及びｖＣＰ２２４２が含まれるが、これらに限定されない。弱毒化組換えカナリア痘ウイルス（例えばＡＬＶＡＣ）又は弱毒化鶏痘ウイルス（例えばＴＲＯＶＡＣ）等の組換えアビポックスウイルス（例えば米国特許５５０５９４１及び５７５６１０３を参照）が特に有利である。有利な一実施態様では、Edlund Toulemonde et al., Vet Rec. 2005 Mar 19;156(12):367-71 が記載している組換えＡＬＶＡＣワクチンが、イヌインフルエンザワクチンとして用いられる。本発明の方法で用いられるその他のウイルスとして、弱毒化ワクシニアウイルス（例えばＮＹＶＡＣ）等のワクシニアウイルス、イヌアデノウイルス（ＣＡＶ）等のアデノウイルス、イヌヘルペスウイルス（ＣＨＶ）又はネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）等のヘルペスウイルスがあるが、これらに限定されない。
【００５６】
「ベクター」とは、インビトロ又はインビボで標的細胞へと送達される異種ポリヌクレオチドを含む組換えＤＮＡ又はＲＮＡのプラスミド又はウイルスを指す。異種ポリヌクレオチドは、治療の目的で対象とする配列を含んでもよく、場合によっては、発現カセットの形態でもよい。本明細書においては、ベクターは、最終的な標的の細胞又は対象の中で複製可能である必要がない。その用語はクローン化用ベクターを含み、ウイルスベクターもそれに含まれる。
【００５７】
「組換えの」という用語は、ポリヌクレオチドの半合成的又は合成的な由来を意味し、それは天然には存在せず、又は天然には認められない配置で他のポリヌクレオチドと連結している。
【００５８】
「異種の」とは、比較する残りの存在物と遺伝的に異なる存在物に由来することを意味する。例えば、ポリヌクレオチドは、遺伝子工学技術により、異なる供給源に由来するプラスミド又はベクター中に入れることができ、それは異種のポリヌクレオチドである。その生来のコード配列から除去し、生来の配列以外のコード配列と作動的に連結したプロモーターは、異種のプロモーターである。
【００５９】
本発明のポリヌクレオチドは、同じ転写単位内にあるさらなるコード配列、プロモーターなどの調節エレメント、リボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、同じ又は異なるプロモーターの調節下にあるさらなる転写単位、クローン化、発現、相同組換え、及び宿主細胞の形質転換を可能にする配列や、本発明の実施形態の提供に望ましい可能性がある任意の構築物などのさらなる配列を含んでもよい。
【００６０】
インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原の発現用エレメントが本発明のベクター中に存在すると有利である。最小限の形では、これは、開始コドン（ＡＴＧ）、終止コドン及びプロモーター、並びにまた場合によってはプラスミドなどの特定のベクター、及び特定のウイルスベクター、例えばポックスウイルス以外のウイルスベクター用のポリアデニル化配列を含み、本質的にそれらからなり、又はそれらからなる。ポリヌクレオチドがポリタンパク質断片、例えばインフルエンザペプチドをコードするとき、ベクター中で、ＡＴＧを読み枠の５’に置き、終止コドンを３’に置くと有利である。エンハンサー配列、イントロンなどの安定化配列や、タンパク質の分泌を可能にするシグナル配列など、発現調節用の他のエレメントが存在してもよい。
【００６１】
インビボ又はインビトロで本発明の遺伝子の遺伝子産物を発現させるベクター又は組換え体又はプラスミドを作製し且つ／又は投与する方法は、任意の望ましい方法、例えば、米国特許第４６０３１１２号；第４７６９３３０号；第４３９４４４８号；第４７２２８４８号；第４７４５０５１号；第４７６９３３１号；第４９４５０５０号；第５４９４８０７号；第５５１４３７５号；第５７４４１４０号；第５７４４１４１号；第５７５６１０３号；第５７６２９３８号；第５７６６５９９号；第５９９００９１号；第５１７４９９３号；第５５０５９４１号；第５３３８６８３号；第５４９４８０７号；第５５９１６３９号；第５５８９４６６号；第５６７７１７８号；第５５９１４３９号；第５５５２１４３号；第５５８０８５９号；第６１３００６６号；第６００４７７７号；第６１３００６６号；第６４９７８８３号；第６４６４９８４号；第６４５１７７０号；第６３９１３１４号；第６３８７３７６号；第６３７６４７３号；第６３６８６０３号；第６３４８１９６号；第６３０６４００号；第６２２８８４６号；第６２２１３６２号；第６２１７８８３号；第６２０７１６６号；第６２０７１６５号；第６１５９４７７号；第６１５３１９９号；第６０９０３９３号；第６０７４６４９号；第６０４５８０３号；第６０３３６７０号；第６４８５７２９号；第６１０３５２６号；第６２２４８８２号；第６３１２６８２号；第６３４８４５０号；及び第６３１２６８３号；１９８６年１０月１６日に出願された米国特許出願第９２０１９７号；ＷＯ９０／０１５４３；ＷＯ９１／１１５２５；ＷＯ９４／１６７１６；ＷＯ９６／３９４９１；ＷＯ９８／３３５１０；ＥＰ２６５７８５；ＥＰ０  ３７０  ５７３；Andreansky et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996; 93: 11313-11318；Ballay et al., EMBO J. 1993; 4: 3861-65；Felgner et al., J. Biol. Chem. 1994; 269: 2550-2561；Frolov et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996; 93: 11371-11377；Graham, Tibtech 1990; 8: 85-87；Grunhaus et al., Sem. Virol. 1992; 3: 237-52；Ju et al., Diabetologia 1998; 41: 736-739；Kitson et al., J. Virol. 1991; 65: 3068-3075；McClements et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996; 93: 11414-11420；Moss, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996; 93: 11341-11348；Paoletti, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996; 93: 11349-11353；Pennock et al., Mol. Cell. Biol. 1984; 4: 399-406；Richardson （Ed), Methods in Molecular Biology 1995; 39, "Baculovirus Expression Protocols," Humana Press Inc.；Smith et al. （1983) Mol. Cell. Biol. 1983; 3: 2156-2165；Robertson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996; 93: 11334-11340；Robinson et al., Sem. Immunol. 1997; 9: 271；並びにRoizman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996; 93: 11307-11312による、又はそれらの中で開示されている方法に類似する、又はそれらの中で引用された文献中に開示されている方法でもよい。したがって、本発明のベクターは、（参照により本明細書に組み込まれている文献中にある）ポックスウイルス（例えば、ワクシニアウイルス、アビポックスウイルス、カナリア痘ウイルス、鶏痘ウイルス、アライグマポックス（raccoonpox）ウイルス、豚痘ウイルスなど）、アデノウイルス（例えば、ヒトアデノウイルス、イヌアデノウイルス）、ヘルペスウイルス（例えば、イヌヘルペスウイルス）、バキュロウイルス、レトロウイルスなど、任意の適切な組換えウイルス又はウイルスベクターでもよく、或いは、ベクターはプラスミド��もよい。本明細書で引用され、参照により本明細書に組み込まれている文献は、本発明の実施に有用なベクターの例を提供するのに加えて、本発明の組成物中の１つ又は複数のベクターによって発現させ、或いはその組成物中に含まれる非インフルエンザペプチド又はその断片の供給源を提供することもできる。
【００６２】
本発明はまた、発現ベクターなどのベクターを含む製剤、例えば治療用組成物にも関する。製剤は、１つ又は複数のインフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原を含み、本質的にそれからなり、又はそれからなる（且つ有利にはそれを発現する）１つ又は複数のベクター、例えばインビボ発現ベクターなどの発現ベクターを含み、本質的にそれからなり、又はそれからなり得る。有利には、ベクターは、薬学上又は獣医学上許容される担体、賦形剤又は媒体中で、インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原をコードする（そして有利には発現する）ポリヌクレオチドを含み、本質的にそれからなり、又はそれからなるポリヌクレオチドを含み、発現する。したがって、本発明の実施形態によれば、製剤中の他の１つ又は複数のベクターは、インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原（血球凝集素、ノイラミニダーゼ、核タンパク質など）の１つ又は複数の他のタンパク質、或いはその断片をコードするポリヌクレオチドを含み、本質的にそれからなり、又はそれからなり、適当な状況下では、ベクターは、そのタンパク質又はその断片を発現する。
【００６３】
他の実施形態によれば、製剤中の１つ又は複数のベクターは、インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原の１つ又は複数のタンパク質或いは（複数の）その断片をコードする（複数の）ポリヌクレオチドを含み、本質的にそれからなり、又はそれからなり、１つ又は複数のベクターは、（複数の）ポリヌクレオチドの発現を有する。本発明の製剤は、有利には、同じタンパク質及び／又は異なるタンパク質をコードするが、有利には同じタンパク質をコードする異なるイヌインフルエンザ単離物由来のポリヌクレオチドを含み、本質的にそれからなり、又はそれからなり、また有利には適当な条件又は適切な条件の下で、或いは適切な宿主細胞中で、インビボで有利にはそれを発現する少なくとも２つのベクターを含み、本質的にそれからなり、又はそれからなる。１つ又は複数のベクターを含む製剤は、インフルエンザ抗原、融合タンパク質又はそのエピトープをコードし、有利にはインビボで有利には発現するポリヌクレオチドを含み、本質的にそれからなり、又はそれからなる。本発明はまた、異なるインフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原、例えば、それだけに限らないが、ニワトリ、アヒル、ガチョウを含む鳥類に加えて、ヒト、ブタなどの異なる種由来のインフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原を含み、本質的にそれからなり、又はそれからなり、それをコードし発現するベクターの混合物をも対象とする。
【００６４】
本発明の一実施形態によれば、発現ベクターはウイルスベクターであり、具体的にはインビボ発現ベクターである。有利な実施形態では、発現ベクターはアデノウイルスベクターである。有利には、アデノウイルスはヒトＡｄ５ベクター、Ｅ１欠失及び／又はＥ３欠失アデノウイルスである。
【００６５】
特定の一実施形態では、ウイルスベクターは、ポックスウイルス、例えばワクシニアウイルス又は弱毒化ワクシニアウイルス（例えば、ニワトリ胚繊維芽細胞上でのアンカラワクチン株の５７０回を超える継代の後に得られたＭＶＡという改変型アンカラ株；Stickl & Hochstein-Mintzel, Munch. Med. Wschr., 1971, 113, 1149-1153；Sutter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1992, 89, 10847-10851を参照；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１５０８として入手可能；又はＮＹＶＡＣ、ＮＹＶＡＣの構築、並びにコペンハーゲン株のワクシニアウイルスゲノムから欠失したさらなるＯＲＦも有し、異種コード核酸分子のこの組換え体の部位への挿入も有するＮＹＶＡＣの変異、また適合するプロモーターの使用について論じる米国特許第５４９４８０７号を参照、例えば米国特許第５４９４８０７号の実施例１〜６及び以下参照；ＷＯ９６／４０２４１も参照されたい）、アビポックスウイルス又は弱毒化アビポックスウイルス（例えば、カナリア痘、鶏痘、ハトポックス、鳩痘、ウズラポックス、ＡＬＶＡＣ又はＴＲＯＶＡＣ；例えば、米国特許第５５０５９４１号、第５４９４８０７号を参照）、豚痘、アライグマポックス、ラクダ痘、或いは粘液腫症ウイルスである。
【００６６】
本発明の他の実施形態によれば、ポックスウイルスベクターは、カナリア痘ウイルス又は鶏痘ウイルスベクターであり、有利には、弱毒化カナリア痘ウイルス又は鶏痘ウイルスである。これに関して、カナリア痘ウイルスは、アクセス番号ＶＲ−１１１でＡＴＣＣから入手可能である。弱毒化カナリア痘ウイルスは、米国特許第５７５６１０３号（ＡＬＶＡＣ）及びＷＯ０１／０５９３４中に記載されている。多数の鶏痘ウイルス予防接種株、例えばMERIAL社によって売り出されているＤＩＦＴＯＳＥＣ  ＣＴ株、及びINTERVET社によって売り出されているＮＯＢＩＬＩＳ  ＶＡＲＩＯＬＥワクチンも入手可能である；弱毒化鶏痘ウイルス株ＴＲＯＶＡＣに関する米国特許第５７６６５９９号も参照されたい。
【００６７】
その組換え体を生成する方法及びその組換え体をどのように投与するかに関する情報について、当業者は、本明細書で引用した文献及びＷＯ９０／１２８８２を参照することができ、例えば、ワクシニアウイルスに関しては、とりわけ米国特許第４７６９３３０号、第４７２２８４８号、第４６０３１１２号、第５１１０５８７号、第５４９４８０７号及び第５７６２９３８号に言及がなされ、鶏痘ウイルスに関しては、とりわけ米国特許第５１７４９９３号、第５５０５９４１号及び第５７６６５９９号に言及がなされ、カナリア痘ウイルスに関しては、とりわけ米国特許第５７５６１０３号に言及がなされ、豚痘ウイルスに関しては、とりわけ米国特許第５３８２４２５号に言及がなされ、アライグマポックスウイルスに関しては、とりわけＷＯ００／０３０３０に言及がなされている。
【００６８】
発現ベクターがワクシニアウイルスである場合、発現させる１つ又は複数のポリヌクレオチドの１つ又は複数の挿入部位は、有利には、チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子又は挿入部位、血球凝集素（ＨＡ）遺伝子又は挿入部位、Ａ型封入体（ＡＴＩ）をコードする領域である；本明細書で引用した文献、特にワクシニアウイルスに関するものも参照されたい。カナリア痘ウイルスの場合では、有利には、１つ又は複数の挿入部位は、（複数の）ＯＲＦのＣ３、Ｃ５及び／又はＣ６である；本明細書で引用した文献、特にカナリア痘ウイルスに関するものも参照されたい。鶏痘ウイルスの場合では、有利には、１つ又は複数の挿入部位は、ＯＲＦのＦ７及び／又はＦ８である；本明細書で引用した文献、特に鶏痘ウイルスに関するものも参照されたい。ＭＶＡウイルスの１つ又は複数の挿入部位は、有利には、Carroll M. W. et al., Vaccine, 1997, 15 （4), 387-394；Stittelaar K. J. et al., J. Virol., 2000, 74 （9), 4236-4243；Sutter G. et al., 1994, Vaccine, 12 （11), 1032-1040を含めた様々な刊行物中にあるものと同様であり、これに関しては、完全なＭＶＡゲノムがAntoine G., Virology, 1998, 244, 365-396に記載されており、それから当業者は他の挿入部位又は他のプロモーターを使用することができることにも留意されたい。
【００６９】
有利には、発現させるポリヌクレオチドを、特定のポックスウイルスプロモーター、例えば、とりわけワクシニアプロモーター７．５ｋＤａ（Cochran et al., J. Virology, 1985, 54, 30-35）、ワクシニアプロモーターＩ３Ｌ（Riviere et al., J. Virology, 1992, 66, 3424-3434）、ワクシニアプロモーターＨＡ（Shida, Virology, 1986, 150, 451-457）、牛痘プロモーターＡＴＩ（Funahashi et al., J. Gen. Virol., 1988, 69, 35-47）、ワクシニアプロモーターＨ６（Taylor J. et al., Vaccine, 1988, 6, 504-508；Guo P. et al. J. Virol., 1989, 63, 4189-4198；Perkus M. et al., J. Virol., 1989, 63, 3829-3836）の調節下に挿入する。
【００７０】
特定の実施形態では、ウイルスベクターは、ヒトアデノウイルス（ＨＡＶ）やイヌアデノウイルス（ＣＡＶ）などのアデノウイルスである。
【００７１】
一実施形態では、ウイルスベクターは、ヒトアデノウイルス、具体的には、ウイルスゲノムのＥ１領域における欠失、具体的にはGenbankにおいてアクセッション番号Ｍ７３２６０で且つ参照刊行物J. Chroboczek et al Virol. 1992, 186, 280-285で開示されているｈＡｄ５の配列を基準として約４５９ヌクレオチド位〜約３５１０ヌクレオチド位の欠失により複製できなくした血清型５型のアデノウイルスである。欠失させたアデノウイルスは、Ｅ１を発現する２９３細胞（F. Graham et al J. Gen. Virol. 1977, 36, 59-72）又はＰＥＲ細胞、具体的にはＰＥＲ．Ｃ６（F. Falloux et al Human Gene Therapy 1998, 9, 1909-1917）中で増殖する。Ｅ３領域において、具体的には約２８５９２ヌクレオチド位〜約３０４７０ヌクレオチド位でヒトアデノウイルスを欠失させることができる。Ｅ１領域における欠失は、Ｅ３領域における欠失と組み合わせて行うことができる（例えば、J. Shriver et al. Nature, 2002, 415, 331-335；F. Graham et al Methods in Molecular Biology Vol .7: Gene Transfer and Expression Protocols Edited by E. Murray, The Human Press Inc, 1991, p 109-128；Y. Ilan et al Proc. Natl. Acad. Sci. 1997, 94, 2587-2592；米国特許第６１３３０２８号；米国特許第６６９２９５６号；S. Tripathy et al Proc. Natl. Acad. Sci. 1994, 91, 11557-11561；B. Tapnell Adv. Drug Deliv. Rev.1993, 12, 185-199；X. Danthinne et al Gene Thrapy 2000, 7, 1707-1714；K. Berkner Bio Techniques 1988, 6, 616-629；K. Berkner et al Nucl. Acid Res. 1983, 11, 6003-6020；C. Chavier et al J. Virol. 1996, 70, 4805-4810を参照）。挿入部位は、事実上Ｅ１及び／又はＥ３領域の部分的な又は完全な欠失の後のＥ１及び／又はＥ３座位（領域）でもよい。有利には、発現ベクターがアデノウイルスであるとき、発現させるポリヌクレオチドは、強力なプロモーターなど真核細胞中で機能するプロモーター、好ましくはサイトメガロウイルス前早期遺伝子プロモーター（ＣＭＶ−ＩＥプロモーター）、具体的にはM. Boshart et al Cell 1985, 41, 521-530における約−７３４ヌクレオチド位〜＋７ヌクレオチド位のエンハンサー／プロモーター領域、又はPromega社製のpCIベクターのエンハンサー／プロモーター領域の調節下に挿入する。ＣＭＶ−ＩＥプロモーターは、有利にはネズミ又はヒト由来である。伸長因子１αのプロモーターを使用することもできる。筋特異的プロモーターを使用することもできる（X. Li et al Nat. Biotechnol. 1999, 17, 241-245）。プラスミドベクターに関して、強力なプロモーターについても本明細書で論じる。一実施形態では、スプライシング配列をエンハンサー／プロモーター領域の下流に置くことができる。例えば、ＣＭＶ−ＩＥ遺伝子から単離されたイントロン１（R. Stenberg et al J. Virol. 1984, 49, 190）、ウサギ又はヒトのβ−グロビン遺伝子から単離されたイントロン、具体的にはｂ−グロビン遺伝子のイントロン２、イムノグロブリン遺伝子から単離されたイントロン、ＳＶ４０早期遺伝子由来のスプライシング配列、又はマウスイムノグロブリン受容配列と融合したヒトβ−グロビン供与配列を含むPromega社製のpCIベクターから単離されたキメライントロン配列（Genbankアクセッション番号ＣＶＵ４７１２０における約８９０ヌクレオチド位〜約１０２２ヌクレオチド位）。発現させるポリヌクレオチド、例えば、ウシ成長ホルモン遺伝子、具体的にはGenbankアクセッション番号ＢＯＶＧＨＲＨにおける約２３３９ヌクレオチド位〜約２５５０ヌクレオチド位、ウサギβ−グロビン遺伝子又はＳＶ４０後期遺伝子ポリアデニル化シグナルの下流にポリ（Ａ）配列及び終結配列を挿入することができる。
【００７２】
他の実施形態では、ウイルスベクターは、イヌアデノウイルス、具体的にはＣＡＶ−２である（例えば、L. Fischer et al. Vaccine, 2002, 20, 3485-3497；米国特許第５５２９７８０号；米国特許第５６８８９２０号；ＰＣＴ出願ＷＯ９５／１４１０２を参照）。ＣＡＶでは、挿入部位は、Ｅ３領域中、且つ／又はＥ４領域と右ＩＴＲ領域の間に位置する領域中でもよい（米国特許第６０９０３９３号；米国特許第６１５６５６７号を参照）。一実施形態では、挿入物は、サイトメガロウイルス前早期遺伝子プロモーター（ＣＭＶ−ＩＥプロモーター）や、ヒトアデノウイルスベクターについてすでに記載したプロモーターなどのプロモーターの調節下にある。発現させるポリヌクレオチド、例えば、ウシ成長ホルモン遺伝子、又はウサギβ−グロビン遺伝子のポリアデニル化シグナルの下流にポリ（Ａ）配列及び終結配列を挿入することができる。
【００７３】
他の特定の実施形態では、ウイルスベクターは、イヌヘルペスウイルス（ＣＨＶ）やネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）などのヘルペスウイルスである。ＣＨＶでは、挿入部位は、具体的にはチミジンキナーゼ遺伝子中、ＯＲＦ３中、又はＵＬ４３ＯＲＦ中でもよい（米国特許第６，１５９，４７７号を参照）。一実施形態では、発現させるポリヌクレオチドを、真核細胞中で機能するプロモーター、有利にはＣＭＶ−ＩＥプロモーター（ネズミ又はヒト）の調節下に挿入する。発現させるポリヌクレオチド、例えば、ウシ成長ホルモン遺伝子、又はウサギβ−グロビン遺伝子のポリアデニル化シグナルの下流にポリ（Ａ）配列及び終結配列を挿入することができる。
【００７４】
本発明のさらなる実施形態によれば、発現ベクターは、プラスミドベクター又はＤＮＡプラスミドベクター、具体的にはインビボ発現ベクターである。特定の非限定的な例では、pVR1020又は1012プラスミド（VICAL社製；Luke C. et al., Journal of Infectious Diseases, 1997, 175, 91-97；Hartikka J. et al., Human Gene Therapy, 1996, 7, 1205-1217；例えば米国特許第５８４６９４６号及び第６４５１７６９号を参照）を、ポリヌクレオチド配列挿入用ベクターとして利用することができる。pVR1020プラスミドは、pVR1012に由来し、ヒトｔＰＡシグナル配列を含む。一実施形態では、ヒトｔＰＡシグナルは、Genbankアクセッション番号ＨＵＭＴＰＡ１４におけるアミノ酸Ｍ（１）〜アミノ酸Ｓ（２３）を含む。他の特定の非限定的な例では、ポリヌクレオチド配列挿入用ベクターとして利用されるプラスミドは、Genbankアクセッション番号Ｕ２８０７０におけるアミノ酸Ｍ（２４）〜アミノ酸Ａ（４８）のウマＩＧＦ１のシグナルペプチド配列を含むことができる。実施の際に参考にし又は使用することができるＤＮＡプラスミドに関するさらなる情報は、例えば、米国特許第６８５２７０５号；第６８１８６２８号；第６５８６４１２号；第６５７６２４３号；第６５５８６７４号；第６４６４９８４号；第６４５１７７０号；第６３７６４７３号及び第６２２１３６２号の中に認められる。
【００７５】
プラスミドという用語は、本発明に従ったポリヌクレオチド、及び望ましい宿主又は標的の１つ又は複数の細胞中でのそのインビボ発現に必要なエレメントを含む任意のＤＮＡ転写単位を包含する；また、これに関して、超らせん型又は非超らせん型の環状プラスミド、並びに直鎖の形態が本発明の範囲内にあるものとされることに留意されたい。
【００７６】
各プラスミドは、必要に応じて異種ペプチド配列と融合させたインフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原をコードするポリヌクレオチドに加えて、プロモーターに作動的に連結させた、又はプロモーターの制御下にある、又はプロモーター依存的な、変異体、アナログ又は断片を含み又は含有し又は本質的にそれからなる。一般に、真核細胞中で機能する強力なプロモーターを使用すると有利である。好ましい強力なプロモーターは、ヒト又はネズミ由来の前早期サイトメガロウイルスプロモーター（ＣＭＶ−ＩＥ）、或いは、場合によってはラットやモルモットなど他に由来するものである。ＣＭＶ−ＩＥプロモーターは、事実上のプロモーター部を含むことができ、それはエンハンサー部と結合していてもよく、或いは結合していなくてもよい。ＥＰ−Ａ−２６０ １４８、ＥＰ−Ａ−３２３ ５９７、米国特許第５１６８０６２号、第５３８５８３９号、及び第４９６８６１５号、並びにＰＣＴ出願ＷＯ８７／０３９０５を参照することができる。ＣＭＶ−ＩＥプロモーターは、有利にはヒトＣＭＶ−ＩＥ（Boshart M. et al., Cell., 1985, 41, 521-530）又はネズミＣＭＶ−ＩＥである。
【００７７】
より一般的な用語において、プロモーターはウイルス又は細胞に由来する。本発明の実施で通常使用することができるＣＭＶ−ＩＥ以外の強力なウイルスプロモーターは、ＳＶ４０ウイルスの早期／後期プロモーター、又はラウス肉腫ウイルスのＬＴＲプロモーターである。本発明の実施で通常使用することができる強力な細胞プロモーターは、例えば、デスミンプロモーター（Kwissa M. et al., Vaccine, 2000, 18, 2337-2344）や、アクチンプロモーター（Miyazaki J. et al., Gene, 1989, 79, 269-277）など、細胞骨格の遺伝子のプロモーターである。
【００７８】
これらのプロモーターの機能的な細断片、即ち、十分なプロモーター活性を維持するこれらのプロモーターの一部分は本発明内に含まれ、例えば、ＰＣＴ出願ＷＯ９８／００１６６又は米国特許第６１５６５６７号に従った切断型ＣＭＶ−ＩＥプロモーターは、本発明の実施で使用することができる。その結果、本発明の実施におけるプロモーターは、十分なプロモーター活性を維持し、したがってプロモーターとして機能し、好ましくは、その誘導体又は細断片が由来する実際の又は完全長のプロモーターのものと実質的に類似した、例えば、米国特許第６１５６５６７号の切断型ＣＭＶ−ＩＥプロモーターの活性又は完全長ＣＭＶ−ＩＥプロモーターの活性と同種のプロモーター活性を維持する完全長プロモーターの誘導体及び細断片を含む。したがって、本発明の実施におけるＣＭＶ−ＩＥプロモーターは、完全長プロモーターの一部分及び／又は完全長プロモーターのエンハンサーの一部分、並びに誘導体及び細断片を含み、本質的にそれからなり、又はそれからなり得る。
【００７９】
好ましくは、プラスミドは、他の発現調節エレメントを含み、又は本質的にそれからなる。（複数の）安定化配列、例えば（複数の）イントロン配列、好ましくは、ｈＣＭＶ−ＩＥの第１イントロン（ＰＣＴ出願ＷＯ８９／０１０３６）、ウサギβ−グロビン遺伝子のイントロンII（van Ooyen et al., Science, 1979, 206, 337-344）を組み込むと特に有利である。
【００８０】
ポックスウイルス以外のプラスミド及びウイルスベクター用のポリアデニル化シグナル（ポリＡ）に関しては、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）遺伝子のポリ（Ａ）シグナル（米国特許第５１２２４５８号）、又はウサギβ−グロビン遺伝子のポリ（Ａ）シグナル又はＳＶ４０ウイルスのポリ（Ａ）シグナルをより多く使用することができる。
【００８１】
本発明の他の実施形態によれば、発現ベクターは、適当な細胞系においてタンパク質のインビトロ発現に使用する発現ベクターである。分泌後に、又は分泌後でなくても（細胞溶解の分泌が通常起こらず又は行われない場合）、培養上清中で、又は培養上清から、発現したタンパク質を回収し、場合によっては、限外濾過などの濃縮方法により濃縮し、及び／或いはアフィニティー、イオン交換やゲル濾過型のクロマトグラフィー法などの精製手段により精製することができる。
【００８２】
「宿主細胞」とは、遺伝子改変した、又は組換えプラスミドやベクターなどの外因性ポリヌクレオチドの投与によって遺伝子改変することができる原核細胞又は真核細胞を意味する。遺伝子改変細胞を指すとき、その用語は、最初に改変された細胞とその子孫細胞をどちらも指す。好適な宿主細胞としては、ベイビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、結腸癌（Ｃａｃｏ−２）細胞、ＣＯＳ７細胞、ＭＣＦ−７細胞、ＭＣＦ−１０Ａ細胞、Madin-Darbyイヌ腎臓（ＭＤＣＫ）株、ミンク肺（Ｍｖ１Ｌｕ）細胞、ＭＲＣ−５細胞、Ｕ９３７細胞、及びＶＥＲＯ細胞等があるが、これらに限定されない。所望の配列を含むポリヌクレオチドは、適切なクローン化用又は発現ベクター中に挿入することができ、そのベクターは、複製及び増幅に適した宿主細胞中に導入することができる。ポリヌクレオチドは、当技術分野で知られている任意の手段によって宿主細胞に導入することができる。目的のポリヌクレオチドを含むベクターは、直接的な取り込み；エンドサイトーシス；トランスフェクション；ｆ−交配；エレクトロポレーション；塩化カルシウム、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン、又は他の物質を使用するトランスフェクション；微粒子銃；リポフェクション；及び感染（ベクターが感染性である、例えばレトロウイルスベクターである場合）を含めたいくつかの適当な手段のいずれかによって宿主細胞中に導入することができる。ベクター又はポリヌクレオチドの導入の選択は、宿主細胞の特長によってしばしば決まる。
【００８３】
有利な実施形態では、本発明は、治療有効量の、インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原の送達及び標的細胞中での発現用の製剤の投与を提供する。治療有効量の決定は、当業者にとって日常的な実験である。一実施形態では、製剤は、インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原を発現するポリヌクレオチド、及び薬学上又は獣医学上許容される担体、媒体又は賦形剤を含む発現ベクターを含む。有利な実施形態では、薬学上又は獣医学上許容される担体、媒体又は賦形剤は、トランスフェクションを促進し、且つ／或いはベクター又はタンパク質の保存性を高める。
【００８４】
薬学上又は獣医学上許容される担体又は媒体又は賦形剤は、当業者に周知である。例えば、薬学上又は獣医学上許容される担体又は媒体又は賦形剤は、０．９％ＮａＣｌ溶液（例えば、食塩水）又はリン酸緩衝液でもよい。本発明の方法に使用することができる他の薬学上又は獣医学上許容される担体又は媒体又は賦形剤には、それだけに限らないが、ポリ−（Ｌ−グルタミン酸）又はポリビニルピロリドンがある。薬学上又は獣医学上許容される担体又は媒体又は賦形剤は、ベクター（又はインビトロで本発明のベクターから発現したタンパク質）の投与を促進する任意の化合物又は化合物の組合せでもよい；有利には、担体、媒体又は賦形剤は、トランスフェクションを促進し、且つ／或いはベクター（又はタンパク質）の保存性を高める。投与量及び投与体積は、本明細書において全体的な記載の中で論じるが、過度の実験を行わずに、当技術分野の知識と併せて読み取られた本開示から当業者が決定することもできる。
【００８５】
プラスミドに独占的にではないが有利に適した四級アンモニウム塩を含む陽イオン性脂質は、有利には下記の式を有するものである。
【００８６】
【化１】
2009506050.tif 000003
【００８７】
上記の式において、Ｒ１は、１２〜１８個の炭素原子を有する飽和又は不飽和の直鎖脂肪族ラジカルであり、Ｒ２は、２又は３個の炭素原子を含む他の脂肪族ラジカルであり、Ｘは、アミン又はヒドロキシル基、例えばＤＭＲＩＥである。他の実施形態では、陽イオン性脂質は、中性脂質、例えばＤＯＰＥと結合している。
【００８８】
これらの陽イオン性脂質の中で、ＤＭＲＩＥ（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ビス（テトラデシルオキシ）−１−プロパンアンモニウム；ＷＯ９６／３４１０９）、有利には、中性脂質と、有利にはＤＯＰＥ（ジオレオイル−ホスファチジル−エタノールアミン；Behr J. P., 1994, Bioconjugate Chemistry, 5, 382-389）と結合して、ＤＭＲＩＥ−ＤＯＰＥを形成するものが好ましい。
【００８９】
有利には、アジュバントとのプラスミド混合物は、製剤を投与して、又は製剤投与のすぐ前に即時的に形成され、有利にはそれと同時に形成される；例えば、投与のすぐ前又は先に、プラスミド−アジュバントの混合物が形成され、有利には、その結果、投与以前に混合物が複合体を形成する十分な時間、例えば、投与前の約３０分など、投与前の約１０〜約６０分が得られる。
【００９０】
ＤＯＰＥが存在する場合、ＤＭＲＩＥ：ＤＯＰＥのモル比は、有利には約９５：約５〜約５：約９５であり、より有利には約１：約１、例えば１：１である。
【００９１】
ＤＭＲＩＥ又はＤＭＲＩＥ−ＤＯＰＥのアジュバント：プラスミドの重量比は、約５０：約１〜約１：約５などの約５０：約１〜約１：約１０、有利には約１：約１及び約１：約２、例えば１：１及び１：２でもよい。
【００９２】
本発明は、不活化イヌインフルエンザワクチンも提供する。本明細書において「不活化ワクチン」という用語は、もはや複製も増殖もできない感染性生物又は病原体を含むワクチン組成物を意味する。不活化は、生物の免疫原性を保持しつつ、その複製又は増殖を阻止するのに十分な各種方法によって行われる。
【００９３】
不活化ワクチンは、罹患犬から得たインフルエンザウイルスの単離物を不活化したものでもよい。かかるウイルスは、罹患犬の肺胞又は肺から単離することができる。別の実施態様では、不活化ワクチンが不活化ウマインフルエンザである。有利な実施態様では、かかるウマインフルエンザが、ケンタッキー又はニューマーケットウマインフルエンザである。不活化ワクチンとしては、上記インフルエンザ株のいずれかを不活化したものが可能である。
【００９４】
不活化ワクチンは、回収した培養液からも調製することができる。かかるウイルスは、孵化１０〜１１日の卵を接種することにより（J. Violay et al、米国特許第６０４８５３７号）、或いはＢＨＫ−２１細胞培養物（C. Ross et al Archiv. Fur die gesamte Virusforschung 1970, 30, 82-88; T. Tolstova et al Acta Virol. 1966, 10, 315-321; Ho. Merten et al Adv. Exp. Med. Biol. 1996, 397, 141-151）、ＭＤＣＫ細胞培養物（J. Tree et al Vaccine 2001, 19, 3444-3450; Y. Ghendon et al Vaccine 2005, 23, 4678-4684; R. Brands et al Dev. Biol. Stand. 1999, 98, 93-100; R. Youil et al J Virol. Methods 2004, 120, 23-31）、Ｖｅｒｏ細胞培養物（O. Kistner et al Vaccine 1998, 16, 960-968; E. Govorkova et al J. Virol. 1996, 70, 5519-5524）を接種することにより作製できる。尿膜腔液又は細胞培養上清は、低遠心分離及び／又は濾過により清澄できる。ウイルスは、限外濾過によって濃縮することができ、ショ糖密度勾配ゾーン遠心分離法や（J. Violay et al、米国特許第６０４８５３７号；O. Kistner et al idem）、ゲル濾過法（D. Nayak et al J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. 2005, 823, 75-81; S. Tomita et al Kitasato Arch. Exp. Med. 1971, 44, 185-196）により精製できる。
【００９５】
不活化は、一般に用いられている不活化ワクチンの作製法によりウイルスを処理することによって行うことができる。これらの方法には、尿膜腔液に対するホルムアルデヒド法（O. Kistner et al idem; A. Garcia et al Avian Diseases 1998, 42, 248-256）、β−プロピオラクトン法（B. Bdowsky et al Vaccine 1991, 9, 398-402 and Vaccine 1993, 11, 343-348; N. Keverin et al Arch. Virol. 2000, 145, 1059-1066）、エチレンイミン法（D. Swayne et al Avian Diseases 2001, 45, 355-365)、有機溶媒による処理、界面活性剤による処理、Tween−エーテルによる処理、又はTritonＸ−１００による処理（J. Vilay et al idem）が含まれるが、これらに限定はされない。活性化するための濃度は、ホルムアルデヒドの場合に約０．０１〜０．２％ｗ／ｖ、β−プロピオラクトンの場合に約０．０３〜０．２％ｗ／ｖ、エチレンイミンの場合に約０．５〜２０ｍＭである。本明細書に記載した方法は、当技術分野で公知のウイルス不活化法の例である。不活化ウイルスワクチンは、通常、アジュバントと混合して投与される。不活化ワクチンは、筋肉内接種又は皮下接種、スプレー法、或いは経眼、経鼻、経口又は卵内投与を含む複数の方法により動物に投与できるが、これらに限定はされない。
【００９６】
本発明の免疫原性組成物及びワクチンは、本質的に１以上のアジュバントを含み、又は本質的にそれらからなる。本発明を実施する際に使用するのに好適なアジュバントは以下のとおりである。（１）アクリル酸又はメタクリル酸のポリマー、無水マレイン酸及びアルケニル誘導体のポリマー、（２）１以上の非メチル化ＣｐＧユニットを有するオリゴデオキシリボヌクレオチド配列などの免疫刺激配列（ＩＳＳ）（Klinman et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 1996, 93, 2879-2883；ＷＯ９８／１６２４７）、（３）M. Powell, M. Newman, Plenum Press（１９９５年）により発行された「Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach」１４７頁に記載のＳＰＴエマルジョン、及び同１８３頁に記載のＭＦ５９エマルジョン等の水中油型乳剤、（４）第四アンモニウム塩を含有する陽イオン性脂質、例えばＤＤＡ、（５）サイトカイン、（６）水酸化アルミニウム又はリン酸アルミニウム、（７）サポニン、（８）本出願で引用し、参照として組み込んだ文書に記載されているその他のアジュバント、（９）上記の任意の組合せ又は混合物。
【００９７】
ウイルスベクターに特に適している（３）の水中油型乳剤は、軽質流動パラフィン油（ヨーロッパ薬局方型）、スクアラン、スクアレン等のイソプレノイド油、アルケンをオリゴマー化して得られる油（例えばイソブテン又はデセン）、植物油、オレイン酸エチル、プロピレングリコール、ジ（カプリル酸／カプリン酸）、カプリル酸／カプリン酸トリグリセロール、及びプロピレングリコールジオレイン酸等の直鎖アルキル基を有する酸エステル又はアルコールエステル、或いは分枝脂肪アルコール又は分枝脂肪酸のエステル（特にイソステアリン酸エステル）基剤とすることができる。
【００９８】
油を乳化剤と併用して乳剤を形成してもよい。乳化剤は、非イオン界面活性剤であってよく、例えば、一方では、ソルビタン、マンニド（例えばアンヒドロマンニトールオレアート）、グリセロール、ポリグリセロール、又はプロピレングリコールのエステルが挙げられ、他方では、オレイン酸、イソステアリン酸、リシノール酸、又はヒドロキシステアリン酸のエステルが挙げられ、これらのエステルは任意にエトキシ化されていてもよく、また、プルロニック（Pluronic）（例えばＬ１２１）等のポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレン・コポリマーブロックが挙げられる。
【００９９】
上記（１）の種類のアジュバントポリマーとしては、架橋アクリル酸又はメタクリル酸のポリマーが好適であり、特に糖のポリアルケニルエーテル又はポリアルコールによって架橋されていることが好ましい。これらの化合物は、カルボマー（carbomer）の名称で知られている（Pharmeuropa, vol. 8, no. 2, June 1996）。当業者であれば、米国特許第２９０９４６２号を参照することもできるであろう。米国特許第２９０９４６２号には、少なくとも３個、好ましくは８個以下のヒドロキシル基（かかる少なくとも３個のヒドロキシル基の水素原子が、少なくとも２個の炭素原子を有する不飽和脂肪族ラジカルで置換されている）を有するポリヒドロキシル化合物によって架橋されているアクリルポリマーが提供されている。ラジカルとして好ましいものは、２〜４個の炭素原子を有するラジカル（例えばビニル、アリル）や、その他エチレン性不飽和基を有するものが挙げられる。かかる不飽和ラジカルには、メチル等の他の置換基が含まれていてもよい。カルボポール（Carbopol）（BF Goodrich、米国オハイオ州）の名称で販売されている製品が特に好適である。カルボポールは、アリルサッカロース又はアリルペンタエリスリトールで架橋されている。その中でも、カルボポール９７４Ｐ、９３４Ｐ、及び９７１Ｐを参照している。
【０１００】
無水マレイン酸アルケニル誘導体コポリマーについては、ＥＭＡ（Monsanto）が好適である。ＥＭＡは、直鎖又は架橋のエチレン無水マレイン酸コポリマーであり、例えばジビニルエーテルで架橋されている。J. Fields et al., Nature 186: 778-780, June 4, 1960も参照のこと。
【０１０１】
構造に関しては、アクリル酸ポリマー、メタクリル酸ポリマー、及びＥＭＡは次式を有する基本ユニットで構成されていることが好ましい。
【０１０２】
【化２】
2009506050.tif 000004
【０１０３】
上記の式において、
Ｒ１及びＲ２は、同じ又は異なり、Ｈ又はＣＨ３を表す。
ｘ＝０又は１、好ましくはｘ＝１である。
ｙ＝１又は２であり、かつ、ｘ＋ｙ＝２を満たす。
ＥＭＡについては、ｘ＝０及びｙ＝２であり、カルボマーについては、ｘ＝ｙ＝１である。
【０１０４】
上記各ポリマーは、水又は生理食塩水（２０ｇ／ｌのＮａＣｌ）に可溶であり、ソーダ（ＮａＯＨ）等によってｐＨを７．３〜７．４に調整して、発現ベクターを取り込めるアジュバント溶液を供する。最終ワクチン組成物のポリマー濃度は、０．０１〜１．５％ｗ／ｖの範囲であり、０．０５〜１％ｗ／ｖが有利であり、０．１〜０．４％ｗ／ｖが好ましい。
【０１０５】
一若しくは複数のサイトカイン（５）は、免疫原性組成物又はワクチン組成物においてタンパク質形態をとることができ、或いは宿主内で１若しくは複数の免疫原又はそのエピトープと共発現させることができる。１又は複数の免疫原又はそのエピトープを発現するベクターと同じベクターにより、又はそれとは別のベクターにより、１又は複数のサイトカインを共発現させることが好ましい。
【０１０６】
本発明は、例えば、活性組成物を混合することによる、有利にはアジュバント、担体、サイトカイン、及び／又は希釈剤と共に混合することによる混合組成物の調製も包含する。
【０１０７】
本発明で使用できるサイトカインには次のものを含むが、これらに限定はされない。顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロンα（ＩＦＮα）、インターフェロンβ（ＩＦＮβ）、インターフェロンγ（ＩＦＮγ）、インターロイキン−１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−５（ＩＬ−５）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−７（ＩＬ−７）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、インターロイキン−９（ＩＬ−９）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子β（ＴＮＦβ）、及び形質転換成長因子β（ＴＧＦβ）。サイトカインは、本発明の免疫原性組成物又はワクチン組成物と同時投与及び／又は連続投与することができると理解される。したがって、例えば、本発明のワクチンに、例えばその宿主に接種するのに適合したサイトカイン又は免疫応答が誘発されるサイトカインなど、適切なサイトカインをインビボで発現する外因性核酸分子を含めることもできる（例えばイヌへの投与用の調剤にイヌサイトカイン）。
【０１０８】
本発明の医薬組成物及び／又は治療用組成物、及び／又は製剤は、本明細書に記載する１以上の発現ベクター及び／又はポリペプチドを、治療反応誘発に有効な量で含み、又は実質的にそれらからなり、又はそれらからなることが有利である。かかる有効量は、本明細書に組み込む文書を含む本明細書の記載、当技術分野における知見から過度な実験を行うことなく決めることができる。
【０１０９】
プラスミドベクターに基づく治療用及び／又は医薬組成物の場合は、一投与量は一般的に、約１μｇ〜約２０００μｇ、有利には約５０μｇ〜約１０００μｇ、より有利には約１００μｇ〜約８００μｇのインフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原を発現するプラスミドを含み、又は実質的にそれらからなり、又はそれらからなる投与量である。プラスミドベクターに基づく治療用及び／又は医薬組成物をエレクトロポレーションによって投与する場合、プラスミドの用量は、約０．１μｇ〜１ｍｇが一般的であり、有利には約１μｇ〜１００μｇ、有利には約２μｇ〜５０μｇである。投与量としては、約０．１ｍｌ〜約２ｍｌであり、約０．２ｍｌ〜約１ｍｌが有利である。かかる用量及び投与量は、イヌ、並びにウマやネコ等の他の哺乳動物標的種の治療に適したものである。
【０１１０】
治療用及び／又は医薬組成物は、インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原を発現する組換えアデノウイルスのウイルス粒子を、一用量あたり約１０４〜約１０１１、有利には約１０５〜約１０１０、より有利には約１０６〜約１０９で含む。ポックスウイルスに基づく治療用及び／又は医薬組成物の場合の用量は、約１０２ｐｆｕ〜約１０９ｐｆｕとすることができる。医薬組成物は、インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原を発現するポックスウイルス又はヘルペスウイルス組換体を一用量あたり、約１０５〜１０９、有利には約１０６〜１０８ｐｆｕで含有する。
【０１１１】
標的種としての哺乳動物に対するウイルスベクターに基づく組成物（例えばポックスウイルス以外のウイルスベクターに基づく組成物）の投与量、例えばイヌ用組成物の投与量は、一般的に約０．１ｍｌ〜約２．０ｍｌ、好ましくは約０．１ｍｌ〜約１．０ｍｌ、より好ましくは約０．５ｍｌ〜約１．０ｍｌである。
【０１１２】
新たな細胞培養によって作出されたウイルス又は生物又は病原体の不活化組成物を用い、約１０４〜１０９に相当するＣＣＩＤ５０（不活化前の力価）、有利には約１０５〜１０８に相当するＣＣＩＤ５０を一用量単位として動物に投与する。一用量単位の量は、０．２ｍｌ〜５．０ｍｌ、有利には０．５ｍｌ〜２．０ｍｌ、より有利には約２．０ｍｌとすることができる。投与は一回でも複数回でもよく、例えば２〜４週間の間隔を空けて２回投与することができ、初回投与の約３週間後に追加投与することが有利である。
【０１１３】
有利な実施態様においては、動物、有利にはイヌに、不活化ワクチンを約３〜４週間の間隔を空けて皮下経路で２回接種するが、筋肉内経路で投与してもよい。１回目及び／又は２回目の接種当日と、第２回接種の約２〜４週間後とに血液試料を回収し、ウイルス中和反応、血球凝集阻害法、ＥＬＩＳＡ、又は一元放射溶血試験（ＳＲＨ）等の当業者に周知の方法によって抗インフルエンザウイルス特異的抗体を測定する。
【０１１４】
不活化ワクチンの効果は、動物、有利にはイヌに、インフルエンザの悪性株（有利にはインフルエンザＨ３Ｎ８型）をチャレンジ接種する２回目の免疫から約２〜４週間後に調べる。動物へのチャレンジ接種は、スプレー、鼻腔内、気管内、及び／又は経口で行うことができる。チャレンジ接種用のウイルスの量は、投与経路によって約１０５〜８ＥＩＤ５０である。例えば、スプレー法による投与の場合はウイルス懸濁液をエアロゾル化し、約１〜１００μｍの液滴とし、鼻腔内、気管内、経口投与の場合、チャレンジ接種用ウイルスの量はそれぞれ約０．５ｍｌ、１〜２ｍｌ、５〜１０ｍｌである。チャレンジ接種後の１４日間、動物における発熱、咳、鼻漏、眼漏、呼吸困難、食欲不振、昏睡などの臨床兆候を毎日観察する。さらに、動物群を安楽死させ、肺及び胸膜の出血、気管炎、気管支炎、細気管支炎、気管支肺炎の病理知見を調べる。チャレンジ接種の１〜１４日後に全ての動物から気管スワブを回収し、ウイルスを単離する。例えばチャレンジ接種の３、７及び１０日後に呼吸器組織におけるウイルス抗原の有無を免疫組織化学法で調べる。血液試料をチャレンジ接種後（例えばチャレンジ接種の７及び１４日後）に回収し、抗インフルエンザＨ３Ｎ８型ウイルス特異的抗体の有無を分析する。
【０１１５】
本明細書の開示は実施例を参照しているが、本発明はかかる実施例に限定されないことを当業者は理解するものとする。当業者であれば、本明細書の開示及び当技術分野における知見に基づき、各々の注入プロトコールについて投与回数、投与経路、用量を過度な実験を行うことなく決めることができる。
【０１１６】
本発明は、本発明に基づいて作製された治療用組成物の有効量を動物に対して少なくとも一回投与することを包含する。動物は、雄、雌、妊娠雌、及び新生動物のいずれであってもよい。かかる投与は、筋肉内（ＩＭ）、皮内（ＩＤ）、又は皮下（ＳＣ）への注入や、鼻腔内又は経口投与を含む種々の経路によることができるが、これらに限定されない。本発明の治療用組成物は、無針装置（例えば、Pigjet、Biojector、又はVitajet apparatus（Bioject、米国オレゴン州）を用いて投与することもできる。プラスミド組成物を投与する別のアプローチには、エレクトロポレーションの使用がある（例えば、S. Tollefsen et al. Vaccine, 2002, 20, 3370-3378; S. Tollefsen et al. Scand. J. Immunol., 2003, 57, 229-238; S. Babiuk et al., Vaccine, 2002, 20, 3399-3408、ＷＯ９９／０１１５８を参照）。別の実施態様では、遺伝子銃又は金粒子衝撃法によって動物に治療用組成物を送達している。有利な実施態様では、動物は脊椎動物である。より有利な実施態様では、脊椎動物はイヌである。
【０１１７】
本発明の一実施態様は、動物にインフルエンザに対する免疫応答を誘発させる方法に関し、かかる方法は、免疫応答誘発に有効量の組換えポックスウイルスインフルエンザワクチン又は不活化インフルエンザワクチンを送達し、発現させる製剤を投与することを含む方法である。本発明のさらに別の実施態様は、動物にインフルエンザに対する免疫応答又は防御応答を誘導する方法に関し、かかる方法は、インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原を送達し、発現させる有効量の製剤を動物に投与することを含む方法であり、かかる製剤は、組換えポックスウイルスインフルエンザワクチン又は不活化インフルエンザワクチン、及び薬理学上又は獣医学上許容される担体、媒体又は賦形剤を含む。
【０１１８】
本発明は、動物、有利には脊椎動物における免疫応答を誘発、誘導又は刺激する方法に関する。一実施態様においては、脊椎動物はイヌであるが、ネコでもよい。
【０１１９】
本発明の別の実施態様は、動物にインフルエンザに対する免疫応答又は防御応答を誘導する方法を行うためのキットに関し、かかるキットには、組換えインフルエンザポックスウイルスワクチン又は不活化インフルエンザワクチン、及び動物において免疫応答誘発に有効量を送達する方法を実施するための指示書が含まれる。
【０１２０】
以下に示す非限定的な実施例により本発明をさらに説明する。
［実施例］
【実施例１】
【０１２１】
Ｈ３遺伝子を発現するカナリア痘のイヌへの接種
０日及び２１日にケンタッキー（ＣＰ１５２９）及びニューマーケット（ＣＰ１５３３）ウマインフルエンザから得たＨ３遺伝子発現カナリア痘を接種したイヌを用いて試験を実施した。ＣＰ１５２９及びＣＰ１５３３の構築については、国際特許公報ＷＯ９９／４４６３３の実施例１（ｃ５遺伝子座）、実施例４及び実施例５に記載されており、同公報の開示は、参照として本明細書に組み込まれている。ドナープラスミドpJT004及びpJT005のヌクレオチド配列を図１及び図２に示す。
【０１２２】
血清を回収し、Ｈ３Ｎ８型インフルエンザウイルス及びその他のウイルスについて試験した。表１に示すように、血球凝集素Ｈ３遺伝子を発現するカナリア痘によって、Ｈ３Ｎ８株には特異的に反応するがＨ１Ｎ１型又はＨ７Ｎ７には反応しない抗体が相当量誘導された。重要なことに、抗体は、初回免疫から２週間以内に検出可能だった。
以上のことから、インフルエンザＨＡ遺伝子を発現するカナリア痘は、イヌにおいて免疫原性を示す。
【０１２３】
【表１】
2009506050.tif 000005
【実施例２】
【０１２４】
ドナープラスミドpALVAC C5 H6p合成型ＥＩＶ Ｈ３ ＨＡ、pJY1571.1の構築
ＨＡ遺伝子は、２００３年にウマから単離したウマインフルエンザウイルス（ＥＩＶ）Ｈ３Ｎ８型オハイオ０３株由来のものを使った。哺乳動物細胞での発現用にＨＡ遺伝子にコドン最適化合成を施した。ＥＩＶオハイオ０３株ＨＡのアミノ酸配列とニューマーケット株Ｈ３ＨＡのアミノ酸配列とを比較した結果を図３に示す。
【０１２５】
コドン最適化されたＥＩＶ Ｈ３ ＨＡ（オハイオ０３）を発現するＡＬＶＡＣ組換体を作製するためにＡＬＶＡＣドナープラスミドを構築することを目的とした。このプラスミドの名称は、pALVAC C5 H6p合成型ＥＩＶ Ｈ３ ＨＡ、pJY1571.1だった。このプラスミドの骨格は、pALVAC C5 H6pである。プロモーターは、Ｈ６プロモーターだった。
【０１２６】
プラスミドの構築に関する記載は以下のとおりであり、図４Ａに図式化して示した。EcoRV／Xholで消化させることによりプラスミドpEIV H3N8 HAから合成型ＥＩＶ Ｈ３ ＨＡ（オハイオ０３）を単離し、EcoRV／Xholで消化したドナープラスミドpALVAC C5 H6pに連結し、pALVAC C5 H6p合成型ＥＩＶ Ｈ３ ＨＡを作出した。得られたプラスミドには、ＨＡＯＲＦと、転写終結シグナルとして機能するＴ５ＡＴ配列との間に、Xho1、Xba I、Cla I、及びSma I からなるマルチクローニング部位がある。ＨＡ ＯＲＦとＴ５ＡＴ配列を近づけるため、リフィルしたXho１部位とSma Iを連結させることにより上記マルチクローニング部位を除去した。次に、得られたプラスミドpJY1571.1の配列決定を行い、正しい配列を含んでいることを確認した。得られたプラスミドのダイアグラムを図４Ｂに示す。ＥＩＶ Ｈ３ ＨＡの推定アミノ酸配列を図５Ａに示し、アーム及び挿入物の翻訳付きヌクレオチド配列を図５Ｂに示す。
【実施例３】
【０１２７】
組換えカナリア痘vCP2242の構築
本実施例の目的は、ＥＩＶ Ｈ３Ｎ８のコドン最適化ＨＡがＡＬＶＡＣのＣ５遺伝子座に挿入されたＡＬＶＡＣの組換体（vCP2242）を作製し、特徴付けすることだった。親ウイルスはＡＬＶＡＣ、ドナープラスミドはpJY1571.1、挿入部位はＣ５遺伝子座、プロモーターはＨ６プロモーターだった。また、インビトロ組換えに用いた細胞は、初期ニワトリ胚線維芽細胞（１°ＣＥＦ）だった。
【０１２８】
１５μｇのNot I線状化ドナープラスミドpJY1571.1を１°ＣＥＦ細胞にトランスフェクトすることにより、インビトロ組換え（ＩＶＲ）を行った。次に、トランスフェクト細胞を、レスキューウイルスとしてのＡＬＶＡＣに１０ＭＯＩで感染させた。２４時間後、トランスフェクト−感染細胞を回収し、超音波に供し、組換えウイルスのスクリーニングに用いた。
【０１２９】
組換えプラークのスクリーニングを、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で標識した８２１ｂｐのＥＩＶ合成型ＨＡ特異的プローブを用いるプラークリフトハイブリダイゼーション法に基づき、製造者プロトコールに従って行った。プラーク精製を４回連続して行った後、vCP2242と命名した組換体が作製され、ＥＩＶ合成型ＨＡ挿入物に１００％陽性、かつ、Ｃ５ＯＲＦに１００％陰性であることがハイブリダイゼーションの結果、確認された。
【０１３０】
発現分析及び配列分析を行った。発現分析は、ウエスタンブロッティングで行った。初期ＣＥＦ細胞をvCP2242ストックに１０ＭＯＩで感染させ、３７℃で２６．５時間インキュベートした。次に、細胞及び培養上清を回収した。１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で試料タンパク質を分離し、Immobilonナイロン膜に移し、モノクローナルマウス抗ＥＩＶ ＨＡ抗体プール（抗Ｅｑ／ＡＫ／９１：１２４−１Ｄ９−１、１２４−３Ｅ３−３、１２４−４Ｆ３−２、及びＨ３Ｎ８ Ａ Ｅｑ／ｍｉａｍｉ／６３のプールの１０００倍希釈液）を用いてプローブした。ペルオキシダーゼ結合ヤギ抗マウス抗血清を二次抗体として使用し、ルミノール試薬を用いてバンドを視覚化した。図６に示すように、vCP2242は、細胞ペレットで発現された８０ｋＤａのタンパク質をタンパク質発現プロフィールとして示したが、培養培地中では発現プロフィールを示さなかった。
【０１３１】
配列分析の結果から、ＥＩＶ合成型ＨＡ及びＡＬＶＡＣのＣ５Ｌ及びＣ５Ｒの配列が正しかったことが明らかになった。
【実施例４】
【０１３２】
ケンタッキーウマインフルエンザのヌクレオチド配列
定義  インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/5/02(H3N8)）非構造タンパク質遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＹ８５５３４５；配列番号：８
1 agcaaaagca gggtgacaaa aacataatgg attccaacac tgtgtcaagc tttcaggtag
61 actgttttct ttggcatgtc cgcaaacgat tcgcagacca agaactgggt gatgccccat
121 tccttgaccg gcttcgccga gaccagaagt ccctaagggg aagaggtatc actcttggtc
181 tggacatcga aacagccact catgcaggaa agcagatagt ggagcagatt ctggaaaagg
241 aatcagatga ggcacttaaa atgaccattg cctctgttcc tacttcacgc tacttaactg
301 acatgactct tgatgagatg tcaagagact ggttcatgct catgcccaag caaaaagtaa
361 caggctccct atgtataaga atggaccagg caatcatgga taagaacatc atacttaaag
421 caaactttag tgtgattttc gaaaggctgg aaacactaat actacttaga gccttcaccg
481 aagaaggagc agtcgttggc gaaatttcac cattaccttc tcttccagga catactaatg
541 aggatgtcaa aaatgcaatt ggggtcctca tcggaggact taaatggaat gataatacgg
601 ttagaatctc tgaaactcta cagagattcg cttggagaag cagtcatgag aatgggagac
661 cttcattccc ttcaaagcag aaatgaaaaa tggagagaac aattaagcca gaaatttgaa
721 gaaataagat ggttgattga agaagtgcga catagattga aaaatacaga aaatagtttt
781 gaacaaataa catttatgca agccttacaa ctattgcttg aagtagaaca agagataaga
841 actttctcgt ttcagcttat ttaatgataa aaaacaccct tgtttctact
【０１３３】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/5/02(H3N8)）マトリックスタンパク質遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＹ８５５３４４；配列番号：９
1 agcaaaagca ggtagatatt taaagatgag tcttctgacc gaggtcgaaa cgtacgttct
61 ctctatcgta ccatcaggcc ccctcaaagc cgagatcgcg cagagacttg aagatgtctt
121 tgcagggaag aacaccgatc ttgaggcact catggaatgg ctaaagacaa gaccaatcct
181 gtcacctttg actaaaggga ttttaggatt tgtattcacg ctcaccgtgc ccagtgagcg
241 aggactgcag cgtagacgct ttgtccaaaa tgcccttagt ggaaacggag atccaaacaa
301 catggacaga gcagtaaaac tgtacaggaa gcttaaaaga gaaataacat tccatggggc
361 aaaagaggtg gcactaagct attccactgg tgcactagcc agctgcatgg gactcatata
421 caacagaatg ggaactgtga caaccgaagt ggcatttggc ctggtatgcg ccacatgtga
481 acagattgct gattcccagc atcgatctca caggcagatg gtgacaacaa ccaacccatt
541 aatcagacat gaaaacagaa tggtattagc cagtaccacg gctaaagcca tggaacagat
601 ggcaggatca agtgagcagg cagcagaggc catggaggtt gctagtaagg ctaggcagat
661 ggtacaggca atgagaacca ttgggaccca ccctagctcc agtgccggtt tgaaagatga
721 tctccttgaa aatttacagg cctaccagaa acggatggga gtgcaaatgc agcgattcaa
781 gtgatcctct cgttattgca gcaagtatca ttgggatctt gcacttgata ttgtggattc
841 ttgatcgtct tttcttcaaa ttcatttatc gtcgccttaa atacgggttg aaaagagggc
901 cttctacgga aggagtacct gagtctatga gggaagaata tcggcaggaa cagcagaatg
961 ctgtggatgt tgacgatggt cattttgtca acatagagct ggagtaaaaa actaccttgt
1021 ttctact
【０１３４】
定義  インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/5/02(H3N8)）ノイラミニダーゼ遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＹ８５５３４３；配列番号：１０
1 agcaaaagca ggagtttaaa atgaatccaa atcaaaagat aatagcaatt ggatttgcat
61 cattggggat attaatcatt aacgtcattc tccatgtagt cagcattata gtaacagtac
121 tggtcctcaa taacaatgga acaggtctga actgcaaagg gacgatcata agagagtaca
181 atgaaacagt aagagtagaa aaaattactc aatggtataa taccagtgca attaagtaca
241 tagagagacc tccaaatgaa tactacatga acaacaccga accactttgt gaggcccaag
301 gctttgcacc attttccaaa gataatggaa tacgaattgg gtcgagaggc catgtttttg
361 tgataagaga accttttgta tcatgttcgc cctcagaatg tagaaccttt ttcctcacac
421 agggctcatt actcaatgac aaacattcta acggcacagt aaaggaccga agtccatata
481 ggactttgat gagtgtcaaa atagggcaat cacctaatgt gtatcaagct aggtttgaat
541 cggtggcatg gtcagcaaca gcatgccatg atggaaaaaa atggatgaca gttggagtca
601 cagggcccga caatcaagca attgcagtag tgaactatgg aggtgttccg gttgatatta
661 ttaattcatg ggcaggggat atcttaagaa cccaagaatc atcatgcacc tgcattaaag
721 gagactgtta ttgggtaatg actgatggac cggcaaatag gcaagctaaa tataggatat
781 tcaaagcaaa agatggaaga gtaattggac agactgatat aagtttcaat gggggacaca
841 tagaggagtg ttcttgttac cccaatgaag ggaaggtgga atgcatatgc agggacaatt
901 ggactggaac aaatagacca attctggtaa tatcttctga tctatcgtac acagttggat
961 atttgtgtgc tggcattccc actgacactc ctaggggaga ggatagtcaa ttcacaggct
1021 catgtacaag acctttggga aataaaggat acggtgtaaa aggtttcggg tttcgacaag
1081 gaactgacgt atgggccgga aggacaatta gtaggacttc aagatcagga ttcgaaataa
1141 taaaaatcag gaatggttgg acacagaaca gtaaagacca aatcaggagg caagtgatta
1201 tcgatgaccc aaattggtca ggatatagcg gttctttcac attgccggtt gaactaacaa
1261 aaaagggatg tttggtcccc tgtttctggg ttgaaatgat tagaggtaaa cctgaagaaa
1321 caacaatatg gacctctagc agctccattg tgatgtgtgg agtagatcat aaaattgcca
1381 gttggtcatg gcacgatgga gctattcttc cctttgacat cgataagatg taatttacga
1441 aaaaactcct tgtttctact
【０１３５】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/5/02(H3N8)）核タンパク質遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＹ８５５３４２；配列番号：１１
1 agcaaaagca gggtagataa tcactcactg agtgacatca aagtcatggc gtctcaaggc
61 accaaacgat cctatgaaca gatggaaact gatggggaac gccagaatgc aactgaaatc
121 agagcatctg tcggaaggat ggtgggagga atcggccggt tttatgttca gatgtgtact
181 gagcttaaac taaacgacca tgaagggcgg ctgattcaga acagcataac aatagaaagg
241 atggtacttt cggcattcga cgaaagaaga aacaagtatc tcgaggagca tcccagtgct
301 ggaaaagacc ctaagaaaac gggaggcccg atatacagaa ggaaagatgg gaaatggatg
361 agggaactca tcctccatga taaagaagaa atcatgagaa tctggcgtca ggccaacaat
421 ggtgaagacg ctactgctgg tcttactcat atgatgatct ggcactccaa tctcaatgac
481 accacatacc aaagaacaag ggctcttgtt cggactggga tggatcccag aatgtgctct
541 ctgatgcaag gctcaaccct cccacggaga tctggagccg ctggtgctgc agtaaaaggt
601 gttggaacaa tggtaatgga actcatcaga atgatcaaac gcggaataaa tgatcggaat
661 ttctggagag gtgaaaatgg tcgaaggacc agaattgctt atgaaagaat gtgcaatatc
721 ctcaaaggga aatttcagac agcagcacaa cgggctatga tggaccaggt gagggaaggc
781 cgcaatcctg gaaacgctga gattgaggat ctcattttct tagcacgatc agcacttatt
841 ttgagaggat cagtagccca taaatcatgc ctacctgcct gtgtttatgg ccttgcagta
901 accagtgggt atgactttga gaaggaagga tactctctgg ttggaattga tcctttcaaa
961 ctactccaga acagtcaaat tttcagtcta atcagaccaa aagaaaaccc agcacacaag
1021 agccagttgg tgtggatggc atgccattct gcagcatttg aggacctgag agttttgaat
1081 ttcattagag gaaccaaagt aatcccaaga ggacagttaa caaccagagg agttcaaatt
1141 gcttcaaatg aaaacatgga gacaatagat tctagcacac ttgaactgag aagcaaatat
1201 tgggcaataa ggaccagaag tggaggaaac accagtcaac agagagcatc tgcaggacag
1261 ataagtgtgc aacctacttt ctcagtacag agaaatcttc cctttgagag agcaaccatt
1321 atggctgcat tcactggtaa cactgaaggg aggacttccg acatgagaac ggaaatcata
1381 aggatgatgg aaagtgccaa atcagaagat gtgtctttcc aggggcgggg agtcttcgag
1441 ctctcggacg aaaaggcaac gaacccgatc gtgccttcct ttgacatgag caatgaaggg
1501 tcttatttct tcggagacaa tgctgaggaa tttgacagtt aaagaaaaat acccttgttt
1561 ctact
【０１３６】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/5/02(H3N8)）血球凝集素前駆体、遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＹ８５５３４１； 配列番号：１２
1 agcaaaagca ggggatattt ctgtcaatca tgaagacaac cattattttg atactactga
61 cccattgggc ctacagtcaa aacccaatca gtggcaacaa cacagccaca ttgtgtctgg
121 gacaccatgc agtagcaaat ggaacattgg taaaaacaat aagtgatgat caaattgagg
181 tgacaaatgc tacagaatta gttcagagca tttcaatggg gaaaatatgc aacaactcat
241 atagaattct agatggaaga aattgcacat taatagatgc aatgctagga gacccccact
301 gtgacgtctt tcagtatgag aattgggacc tctttataga aagaagcagc gctttcagca
361 attgctaccc atatgacatc cctgactatg catcgctccg atccattgta gcatcctcag
421 gaacattgga attcacagca gagggattca catggacagg tgtcactcaa aacggaagaa
481 gtggagcctg caaaagggga tcagccgata gtttctttag ccgactgaat tggctaacaa
541 aatctggaaa ctcttacccc acattgaatg tgacaatgcc taacaataaa aatttcgaca
601 agctatacat ctgggggatt catcacccga gctcaaatca agagcagaca aaattgtaca
661 tccaagaatc aggacgagta acagtctcaa caaaaagaag tcaacaaaca ataatcccta
721 acatcggatc tagaccgtgg gtcagaggtc aatcaggcag gataagcata tactggacca
781 ttgtaaaacc tggagatatc ctaatgataa acagtaatgg caacttagtt gcaccgcggg
841 gatattttaa attgaaaaca gggaaaagct ctgtaatgag atcagatgca cccatagaca
901 tttgtgtgtc tgaatgtatt acaccaaatg gaagcatctc caacgacaag ccattccaaa
961 atgtgaacaa agttacatat ggaaaatgcc ccaagtatat caggcaaaac actttaaagt
1021 tggccactgg gatgaggaat gtaccagaaa agcaaatcag aggaatcttt ggagcaatag
1081 cgggattcat cgaaaacggc tgggaaggaa tggttgatgg gtggtatggg ttccgatatc
1141 aaaactctga aggaacaggg caagctgcag atctaaagag cactcaagca gccatcgacc
1201 agattaatgg aaagttaaac agagtgattg aaagaaccaa tgagaaattc catcaaatag
1261 agaaggaatt ctcagaagta gaaggaagaa ttcaggactt ggagaaatat gtagaagaca
1321 ccaaaataga cctatggtcc tacaatgcag aattgctggt ggctctagaa aatcaacata
1381 caattgactt aacagatgca gaaatgaata aattattcga gaagactaga cgccagttaa
1441 gagaaaacgc agaagacatg ggaggtggat gtttcaagat ttaccacaaa tgtgataatg
1501 catgcattgg atcaataaga aatgggacat atgaccatta catatacaga gatgaagcat
1561 taaacaaccg atttcaaatc aaaggtgttg agttgaaatc aggctacaaa gattggatac
1621 tgtggatttc attcgccata tcatgcttct taatttgcgt tgttctattg ggtttcatta
1681 tgtgggcttg ccaaaaaggc aacatcagat gcaacatttg catttgagta aactgatagt
1741 taaaaacacc cttgtttcta ct
【０１３７】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/5/02(H3N8)）ＰＡポリメラーゼ遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＹ８５５３４０； 配列番号：１３
1 agcgaaagca ggtactgatc caaaatggaa gactttgtgc gacagtgctt caatccaatg
61 atcgtcgagc ttgcggaaaa ggcaatgaaa gaatatggag aggacccgaa aatcgaaaca
121 aacaaatttg cagcaatatg cactcacttg gaagtctgct tcatgtactc ggatttccac
181 tttattaatg aactgggtga gtcagtggtc atagagtctg gtgacccaaa tgctcttttg
241 aaacacagat ttgaaatcat tgaggggaga gatcgaacaa tggcatggac agtggtaaac
301 agcatctgca acaccacaag agctgaaaaa cctaaatttc ttccagattt atacgactat
361 aaggagaaca gatttgttga aattggtgtg acaaggagag aagttcacat atactacctg
421 gagaaggcca acaaaataaa gtctgagaaa acacatatcc acattttctc atttacagga
481 gaggaaatgg ctacaaaagc ggactatact cttgatgaag agagtagagc caggatcaag
541 accagactat tcactataag acaagaaatg gccagtagag gcctctggga ttcctttcgt
601 cagtccgaga gaggcgaaga gacaattgaa gaaagatttg aaatcacagg gacgatgcgc
661 aagcttgcca attacagtct cccaccgaac ttctccagcc ttgaaaattt tagagtctat
721 gtggatggat tcgaaccgaa cggctgcatt gagagtaagc tttctcaaat gtccaaagaa
781 gtaaatgcca gaatcgaacc attttcaaag acaacacccc gaccactcaa aatgccaggt
841 ggtccaccct gccatcagcg atctaaattc ttgctaatgg atgctctgaa actgagcatt
901 gaggacccaa gtcacgaggg agagggaata ccactatatg atgcaatcaa atgcatgaaa
961 actttctttg gatggaaaga gcccagtatt gttaaaccac atgaaaaggg tataaacccg
1021 aactatctcc aaacttggaa gcaagtatta gaagaaatac aagaccttga gaacgaagaa
1081 aggaccccca agaccaagaa tatgaaaaaa acaagccaat tgaaatgggc actaggtgaa
1141 aatatggcac cagagaaagt ggattttgag gattgtaaag acatcagtga tttaaaacag
1201 tatgacagcg atgagccaga aacaaggtct cttgcaagtt ggattcaaag tgagttcaac
1261 aaagcttgtg agctgacaga ttcaagctgg atagagctcg atgaaattgg ggaggatgtc
1321 gccccaatag aatacattgc gagcatgagg agaaattatt ttactgctga gatttcccat
1381 tgtagagcaa cagaatatat aatgaaagga gtgtacatca acactgctct actcaatgca
1441 tcctgtgctg cgatggatga atttcaatta attccgatga taagtaaatg caggaccaaa
1501 gaagggagaa ggaaaacaaa tttatatgga ttcataataa agggaaggtc ccatttaaga
1561 aatgatactg acgtggtgaa ctttgtaagt atggaatttt ctctcactga tccaagattt
1621 gagccacaca aatgggaaaa atactgcgtt ctagaaattg gagacatgct tctaaggact
1681 gctgtaggtc aagtgtcaag acccatgttt ttgtatgtaa ggacaaatgg aacctctaaa
1741 attaaaatga aatggggaat ggaaatgagg cgctgcctcc ttcagtctct gcaacagatt
1801 gaaagcatga tcgaagctga gtcctcagtc aaagaaaagg acatgaccaa agaatttttt
1861 gagaacaaat cagagacatg gcctatagga gagtccccca aaggagtgga agagggctca
1921 atcgggaagg tttgcaggac cttattagca aaatctgtgt ttaacagttt atatgcatct
1981 ccacaactgg aagggttttc agctgaatct aggaaattac ttctcattgt tcaggctctt
2041 agggataacc tggaacctgg aacctttgat attggggggt tatatgaatc aattgaggag
2101 tgcctgatta atgatccctg ggttttgctt aatgcatctt ggttcaactc cttccttaca
2161 catgcactga agtagttgtg gcaatgctac tatttgctat ccatactgtc caaaaaagta
2221 ccttgtttct act
【０１３８】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/5/02(H3N8)）ＰＢ１ポリメラーゼ１遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＹ８５５３３９； 配列番号：１４
1 agcgaaagca ggcaaaccat ttgaatggat gtcaatccga ctctactttt cttaaaggtg
61 ccagcgcaaa atgctataag cacaacattc ccttatactg gagatcctcc ctacagtcat
121 ggaacaggga caggatacac catggatact gtcaacagaa cacaccaata ttcagaaaag
181 gggaaatgga caacaaacac tgagattgga gcaccacaac ttaatccaat cgatggacca
241 cttcctgaag acaatgaacc aagtgggtac gcccaaacag attgtgtatt ggaagcaatg
301 gctttccttg aagaatccca tcccggaatc tttgaaaatt cgtgtcttga aacgatggag
361 gtgattcagc agacaagagt ggacaaacta acacaaggcc gacaaactta tgattggacc
421 ttgaatagga atcaacctgc cgcaacagca cttgctaata caattgaagt gttcagatca
481 aatggtctga cttccaatga atcagggagg ttgatggact tcctcaaaga tgtcatggag
541 tccatgaaca aggaagaaat ggaaataaca acacacttcc aacgaaagag aagagtaaga
601 gacaacatga caaagagaat ggtaacacag agaaccatag ggaagaaaaa acaacgatta
661 aacagaaaga gttatctaat cagaacatta accctaaaca caatgaccaa ggacgctgag
721 agagggaaat tgaaacgacg agcaatcgca accccaggga tgcagataag aggatttgta
781 tattttgttg aaacactagc ccgaagaata tgtgaaaagc ttgaacaatc aggattgcca
841 gttggcggta atgagaaaaa ggccaaactg gctaatgtcg tcagaaaaat gatgactaat
901 tcccaagaca ctgaactctc cttcaccatc actggggaca ataccaaatg gaatgaaaat
961 cagaacccac gcatattcct ggcaatgatc acatacataa ctagaaacca gccagaatgg
1021 ttcagaaatg ttctaagcat tgcaccgatt atgttctcaa ataaaatggc aagactgggg
1081 aaaggatata tgtttgaaag caaaagtatg aaactgagag ctcaaatacc agcagaaatg
1141 ctagcaagca ttgacctgaa atatttcaat gattcaacaa aaaagaaaat taaaaagata
1201 cgaccacttc tggttgacgg gactgcttca ctgagtcctg gcatgatgat gggaatgttc
1261 aacatgttga gcactgtgct gggtgtatcc atattaaacc tgggccagag gaaatacaca
1321 aagaccacat actggtggga tggtctgcaa tcatccgatg actttgcttt gatagtgaat
1381 gcgcctaatc atgaaggaat acaagctgga gtagacagat tctatagaac ttgcaaactg
1441 gtcgggatca acatgagcaa aaagaagtcc tacataaata gaaccggaac attcgaattc
1501 acaagctttt tctaccggta tggttttgta gccaatttca gcatggaact acccagtttt
1561 ggggtttccg gaataaatga atctgcagac atgagcattg gagtgacagt catcaaaaac
1621 aacatgataa ataatgatct cggtcctgcc acggcacaaa tggcactcca actcttcatt
1681 aaggattacc ggtacacata ccggtgccat agaggtgata cccagataca aaccagaaga
1741 tcttttgagt tgaagaaact gtgggaacag actcgatcaa agactggtct actggtatca
1801 gatgggggtc caaacctata taacatcaga aacctacaca tcccggaagt ttgtttaaaa
1861 tgggagctaa tggatgaaga ttataagggg aggctatgca atccattaaa tcctttcgtt
1921 agtcacaaag aaattgaatc agtcaacagt gcagtagtaa tgcctgcgca tggccctgcc
1981 aaaagcatgg agtatgatgc tgttgcaaca acacattctt ggatccccaa gaggaaccgg
2041 tccatattga acacaagcca aaggggaata ctcgaagatg agcagatgta tcagaaatgc
2101 tgcaacctgt ttgaaaaatt cttccccagc agctcataca gaagaccagt cggaatttct
2161 agtatggttg aggccatggt gtccagggcc cgcattgatg cacgaattga cttcgaatct
2221 ggacggataa agaaggatga gttcgctgag atcatgaaga tctgttccac cattgaagag
2281 ctcagacggc aaaaatagtg aatttagctt gatcttcatg aaaaaatgcc ttgtttctac
2341 t
【０１３９】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/5/02(H3N8)）ＰＢ２ポリメラーゼ２遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＹ８５５３３８； 配列番号：１５
1 agcgaaagca ggtcaaatat attcaatatg gagagaataa aagaactgag agatctgatg
61 ttacaatccc gcacccgcga gatactaaca aaaactactg tggaccacat ggccataatc
121 aagaaataca catcaggaag acaagagaag aaccctgcac ttaggatgaa atggatgatg
181 gcaatgaaat acccaattac agcagataag aggataatgg agatgattcc tgagagaaat
241 gaacagggac aaaccctttg gagcaaaacg aacgatgctg gctcagaccg cgtaatggta
301 tcacctctgg cagtgacatg gtggaatagg aatggaccaa caacgagcac aattcattat
361 ccaaaagtct acaaaactta ttttgaaaag gttgaaagat tgaaacacgg aacctttggc
421 cccgttcatt ttaggaatca agtcaagata agacgaagag ttgatgtaaa ccctggtcac
481 gcggacctca gtgccaaaga agcacaagat gtgatcatgg aagttgtttt cccaaatgaa
541 gtgggagcca gaattctaac atcggaatca caactaacaa taaccaaaga gaaaaaggaa
601 gaacttcagg actgcaaaat tgctcccttg atggtagcat acatgctaga aagagagttg
661 gtccgaaaaa caaggttcct cccagtggca ggcggaacaa gcagtgtata cattgaagtg
721 ttgcatctga ctcagggaac atgctgggag caaatgtaca ccccaggagg agaagttaga
781 aacgatgata ttgatcaaag tttaattatt gcagcccgga acatagtgag aagagcgaca
841 gtatcagcag atccactagc atccctactg gaaatgtgcc acagtacaca gattggtgga
901 ataaggatgg tagacatcct taagcagaat ccaacagagg aacaagctgt ggatatatgc
961 aaagcagcaa tgggattgag aattagctca tcattcagct ttggtggatt caccttcaaa
1021 agaacaagtg gatcatcagt caagagagaa gaagaaatgc ttacgggcaa ccttcaaaca
1081 ttgaaaataa gagtgcatga gggctatgaa gaattcacaa tggtcggaag aagagcaaca
1141 gccattctca gaaaggcaac cagaagattg attcaattga tagtaagtgg gagagatgaa
1201 caatcaattg ctgaagcaat aattgtagcc atggtgtttt cgcaagaaga ttgcatgata
1261 aaagcagttc gaggcgattt gaactttgtt aatagagcaa atcagcgttt gaaccccatg
1321 catcaactct tgaggcattt ccaaaaagat gcaaaagtgc ttttccaaaa ttggggaatt
1381 gaacccatcg acaatgtaat gggaatgatt ggaatattgc ctgacatgac cccaagcacc
1441 gagatgtcat tgagaggagt gagagtcagc aaaatgggag tggatgagta ctccagcact
1501 gagagagtgg tggtgagcat tgaccgtttt ttaagagttc gggatcaaag gggaaacata
1561 ctactgtccc ctgaagaagt cagtgaaaca caaggaacgg aaaagctgac aataatttat
1621 tcgtcatcaa tgatgtggga gattaatggt cccgaatcag tgttggtcaa tacttatcaa
1681 tggatcatca ggaactggga aattgtaaaa attcagtggt cacaggaccc cacaatgtta
1741 tacaataaga tagaatttga gccattccag tccctggtcc ctagggccac cagaagccaa
1801 tacagcggtt tcgtaagaac cctgtttcag caaatgcgag atgtacttgg aacatttgat
1861 actgctcaaa taataaaact cctccctttt gccgctgctc ctccggaaca gagtaggatg
1921 cagttctctt ctttgactgt taatgtaaga ggatcgggaa tgaggatact tgtaagaggc
1981 aattccccag tgttcaacta caataaagcc actaaaaggc tcacagtcct cggaaaggat
2041 gcaggtgcgc ttactgagga cccagatgaa ggtacggctg gagtagaatc tgctgttcta
2101 agagggtttc tcattttagg taaagaaaac aagagatatg gcccagcact aagcatcaat
2161 gaactaagca aacttgcaaa aggggagaaa gccaatgtac taattgggca aggggacgta
2221 gtgttggtaa tgaaacggaa acgtgactct agcatactta ctgacagcca gacagcgacc
2281 aaaaggattc ggatggccat caattagtgt tgaattgttt aaaaacgacc ttgtttctac
2341 t
【０１４０】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/1/91(H3N8)）血球凝集素前駆体（ＨＡ）遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 Ｌ３９９１８；  配列番号：１６
1 agcaaaagca ggggatattt ctgtcaatca tgaagacaac cattattttg atactactga
61 cccattgggt ctacagtcaa aacccaacca gtggcaacaa cacagccaca ttatgtctgg
121 gacaccatgc agtagcaaat ggaacattgg taaaaacaat aactgatgac caaattgagg
181 tgacaaatgc tactgaatta gttcagagca tttcaatagg gaaaatatgc aacaactcat
241 atagagttct agatggaaga aattgcacat taatagatgc aatgctagga gacccccact
301 gtgatgtctt tcagtatgag aattgggacc tcttcataga aagaagcagc gctttcagca
361 gttgctaccc atatgacatc cctgactatg catcgctccg gtccattgta gcatcctcag
421 gaacattgga attcacagca gagggattca catggacagg tgtcactcaa aacggaagaa
481 gtggatcctg caaaagggga tcagccgata gtttctttag ccgactgaat tggctaacaa
541 aatctggaaa ctcttacccc acattgaatg tgacaatgcc taacaataaa aatttcgaca
601 aactatacat ctgggggatt catcacccga gctcaaacga agagcagaca aaattgtaca
661 tccaagaatc aggacgagta acagtctcaa caaaaagaag tcaacaaaca ataatcccta
721 acatcggatc tagaccgtgg gtcaggggtc aatcaggcag gataagcata tactggacca
781 ttgtaaaacc tggagatatc ctaatgataa acagtaatgg caacttagtt gcaccgcggg
841 gatattttaa attgaaaaca gggaaaagct ctgtaatgag atcagatgca cccatagaca
901 tttgtgtgtc tgaatgtatt acaccaaatg gaagcatccc caacgacaaa ccatttcaaa
961 atgtgaacaa agttacatat ggaaaatgcc ccaagtatat caggcaaaac actttaaagc
1021 tggccactgg gatgaggaat gtaccagaaa agcaaatcag aggaatcttt ggagcaatag
1081 cgggattcat agaaaacggc tgggaaggaa tggttgatgg gtggtatgga ttccgatatc
1141 aaaactcgga aggaacagga caagctgcag atctaaagag cactcaagca gccatcgacc
1201 agatcaatgg aaaattaaac agagtgattg aaaggaccaa tgagaaattc catcaaatag
1261 agaaggaatt ctcagaagta gaagggagaa tccaggattt ggagaagtat gtagaagaca
1321 ccaaaataga cctatggtcc tacaatgcag aattgctggt ggctctagaa aatcaacata
1381 caattgactt aacagatgca gaaatgaata aattattcga gaagactaga cgccagttaa
1441 gagaaaacgc ggaagacatg ggaggtggat gtttcaagat ataccacaaa tgtgataatg
1501 catgcattgg atcaataaga aatgggacat atgaccatta catatacaga gatgaagcat
1561 taaacaaccg gtttcaaatc aaaggtgttg agttgaaatc aggctacaaa gattggatac
1621 tgtggatttc attcgccata tcatgcttct taatttgcgt tgttctattg ggtttcatta
1681 tgtgggcttg ccaaaaaggc aacatcagat gcaacatttg catttgagta aactgatagt
1741 taaaaacacc cttgtttcta ct
【０１４１】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/1/92(H3N8)）血球凝集素前駆体（ＨＡ）遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 Ｌ３９９１７；  配列番号：１７
1 agcaaaagca ggggatattt ctgtcaatca tgaagacaac cattattttg atactactga
61 cccattgggt ctacagtcaa aacccaacca gtggcaacaa cacagccaca ttatgtctgg
121 gacaccatgc agtagcaaat ggaacattgg taaaaacaat aactgatgac caaattgagg
181 tgacaaatgc tactgaatta gttcagagca tttcaatagg gaaaatatgc aacaactcat
241 atagggttct agatggaaga aattgcacat taatagatgc aatgctagga gacccccact
301 gtgatgtctt tcagtatgag aattgggacc tcttcataga aagaagcagc gctttcagca
361 attgctaccc atatgacatc cctgactatg catcgctccg gtccattgta gcatcctcag
421 gaacattaga attcacagca gagggattca catggacagg tgtcactcaa aacggaagaa
481 gtggagcctg caaaagggga tcagccgata gtttctttag ccgactgaat tggctaacaa
541 aatctggaaa ctcttacccc acattgaatg tgacaatgcc taacaataaa aatttcgaca
601 aactatacat ctgggggatt catcacccga gctcaaacaa tgagcagaca aaattgtata
661 tccaagaaac aggacgagta acagtctcaa caaaaagaag tcaacaaaca ataatcccta
721 acatcggatc tagaccgtgg gtcaggggtc aatcaggcag gataagcata tactggacca
781 ttgtaaaacc tggagatatc ctaatgataa acagcaatgg caacttagtt gcaccgcggg
841 gatattttaa attgagaaca gggagaagct ctgtaatgag atcagatgca cccatagaca
901 tttgtgtgtc tgaatgtatt acaccaaatg gaagcatccc caacgacaaa ccatttcaaa
961 atgtgaacaa agttacatat ggaaaatgcc ccaaatatat caggcaaaac actttaaagc
1021 tggccactgg gatgaggaat gtaccagaaa agcaaatcag aggaatcttt ggagcaatag
1081 cgggattcat agaaaacggc tgggaaggaa tggttgatgg gtggtatgga ttccgatatc
1141 aaaactcgga aggaacagga caagctgcag atctaaagag cactcaagca gccatcgacc
1201 agatcaatgg aaaattaaac agagtgattg aaaggaccaa tgagaaattc catcaaatag
1261 agaaggaatt ctcagaagta gaagggagaa tccaggattt ggagaagtat gtagaagaca
1321 ccaaaataga cctatggtcc tacaatgcag aattgctagt ggctctagaa aatcaacata
1381 caattgactt aacagacgca gaaatgaata aattattcga gaagactaga cgccagttaa
1441 gagaaaacgc ggaagacatg ggaggtggat gtttcaagat ttaccacaaa tgtgataatg
1501 catgcattgg atcaataaga aatgggacat atgaccatta catatacaga gatgaagcat
1561 taaacaaccg atttcaaatc aaaggtgttg aattaaaatc aggctacaaa gattggatac
1621 tgtggatttc attcgccata tcatgcttct taatttgtgt tgttctattg ggtttcatta
1681 tgtgggcttg ccaaaaaggc aacatcagat gcaacatttg catttgagta aactgatagt
1741 taaaaacacc cttgtttcta ct
【０１４２】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/1/90(H3N8)）血球凝集素前駆体（ＨＡ）遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 Ｌ３９９１５； 配列番号：１８
1 agcaaaagca ggggatattt ctgtcaatca tgaaaacaac cattattttg atactactga
61 cccattgggt ctacagtcaa aacccaacca gtggcaacaa cacagccaca ttatgtctgg
121 gacaccatgc agtagcaaat ggaacattgg taaaaacaat aactgatgac caaattgagg
181 tgacaaatgc tactgaatta gttcagagca tttcaatagg aaaaatatgc aacaactcat
241 atagggttct agatggaaga aattgcacat taatagatgc aatgctagga gaccctcact
301 gtgatgtctt tcagtatgag aattgggacc tcttcataga aagaagcagc gctttcagca
361 attgctaccc atatgacatc cctgactatg catcgctccg gtccattgta gcatcctcag
421 gaacattaga attcacagca gagggattca catggacagg tgtcactcaa aacggaggaa
481 gtggagcctg caaaagagga tcagccgata gtttctttag ccgactgaat tggctaacaa
541 aatctggaaa ctcttacccc acattgaatg tgacaatgcc taacaataaa aatttcgaca
601 aactatacat ctgggggatt catcacccga gctcaaacaa tgagcagaca aaattgtata
661 tccaagaatc aggacgagta acagtctcaa caaaaagaag tcaacaaaca ataatcccta
721 acatcggatc tagaccgtgg gtcaggggtc aatcaggcag gataagcata tactggacca
781 ttgtaaaacc tggagatatc ctaatgataa acagtaatgg caacttagtt gcaccgcggg
841 gatattttaa attgagaaca gggaaaagct ctgtaatgag atcagatgca cccatagaca
901 cttgtgtgtc tgaatgtatt acaccaaatg gaagcatccc caacgacaaa ccatttcaaa
961 atgtgaacaa agttacatat ggaaaatgcc ccaagtatat caggcaaaac actttaaagc
1021 tggccactgg gatgaggaat gtaccagaaa agcaaatcag aggaatcttt ggagcaatag
1081 cgggattcat agaaaacggc tgggaaggaa tggttgatgg gtggtatgga ttccgatatc
1141 aaaactcgga aggaacagga caagctgcag atctaaagag cactcaagca gccatcgacc
1201 agatcaatgg aaaattaaac agagtgattg aaaggaccaa tgagaaattc catcaaatag
1261 agaaggaatt ctcagaagta gaagggagaa tcaaggactt ggagaagtat gtagaagaca
1321 ccaaaataga cctatggtcc tacaatgcag aattgctggt ggctctagaa aatcaacata
1381 caattgactt aacagatgca gaaatgaata aattattcga gaagactaga cgccagttaa
1441 gagaaaacgc ggaagacatg ggaggtggat gtttcaagat ctaccacaaa tgtgataatg
1501 catgcattgg atcaataaga aatgggacat atgaccatta catatacaaa gatgaagcat
1561 taaacaaccg atttcaaatc aaaggtgttg agttgaaatc aggctacaaa gattggatac
1621 tgtggatttc attcgccata tcatgcttct taatttgcgt tgttctattg ggtttcatta
1681 tgtgggcttg ccaaaaaggc aacatcagat gcaacatttg catttgagta aactgatagt
1741 taaaaacacc cttgtttcta ct
【０１４３】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/1/94(H3N8)）血球凝集素前駆体（ＨＡ）遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 Ｌ３９９１４；  配列番号：１９
1 agcaaaagca ggggatattt ctgtcaatca tgaagacaac cattattttg atactactga
61 cccattgggt ctacagtcaa aacccaacca gtggcaacaa cacagccaca ttatgtctgg
121 gacaccatgc agtagcaaat ggaacattgg taaaaacaat aactgatgac caaattgagg
181 tgacaaatgc tactgaatta gttcagagca tttcaatagg gaaaatatgc aacaactcat
241 atagagttct agatggaaga aattgcacat taatagatgc aatgctagga gacccccact
301 gtgatgtctt tcagtatgag aattgggacc tcttcataga aagaagcagc gctttcagca
361 attgctaccc atatgacatc cctgactatg catcgctccg gtccattgta gcatcctcag
421 gaacattgga attcacagca gagggattca catggacagg tgtcactcaa aacggaagaa
481 gtggagcctg caaaagggga tcagccgata gtttctttag ccgactgaat tggctaacaa
541 aatctggaaa ctcttacccc acattgaatg tgacaatgcc taacaataaa aatttcgaca
601 aactatacat ctgggggatt catcacccga gctcaaacca acagcaaaca gaattgtaca
661 tccaagaatc aggacgagta acagtctcaa caaaaagaag tcaacaaacg ataatcccta
721 atatcggatc tagaccgtgg gtcaggggtc aatcaggcag gataagcata tactggacca
781 ttgtaaaacc tggagatatc ctaatgataa acagtaatgg caacttagtt gcaccgcggg
841 gatattttaa attgaaaaca gggaaaagct ctgtaatgag atcagatgca cccatagaca
901 tttgtgtgtc tgaatgtatt acaccaaatg gaagcatccc caacgacaaa ccatttcaaa
961 atgtgaacaa agttacatat ggaaaatgcc ccaagtatat caggcaaaac actttaaagc
1021 tggccactgg gatgaggaat gtaccagaaa agcaaatcag aggaatcttt ggagcaatag
1081 cgggattcat agaaaacggc tgggaaggaa tggttgatgg gtggtatgga ttccgatatc
1141 aaaactcgga aggaacagga caagctgcag atctaaagag cactcaagca gccatcgacc
1201 agattaatgg aaaattaaac agagtgattg aaaggaccaa tgagaaattc catcaaatag
1261 agaaggaatt ctcagaagta gaagggagaa tccaggactt ggagaagtat gtagaagaca
1321 ccaaaataga cctatggtcc tacaatgcag aattgctggt ggctctagaa aatcaacata
1381 caattgactt aacagatgca gaaatgaata aattattcga gaagactaga cgccagttaa
1441 gagaaaacgc ggaagacatg ggaggtggat gtttcaagat ttaccacaaa tgtgataatg
1501 catgcattgg atcaataaga aatgggacat atgaccatta catatacaga gatgaagcat
1561 taaacaaccg atttcaaatc aaaggtgttg agttgaaatc aggctacaaa gattggatac
1621 tgtggatttc attcgccata tcatgcttct taatttgcgt tgttctattg ggtttcatta
1681 tgtgggcttg ccaaaaaggc aacatcagat gcaacatttg catttgagta aactgatagt
1741 taaaaacacc cttgtttcta ct
【０１４４】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/1/81(H3N8)）核タンパク質（ＮＰ）遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＹ２９１２８８； 配列番号：２０
1 agcaaaagca gggtagataa tcactcactg agtgacatca aagtcatggc gtctcaaggc
61 accaaacgat cttatgagca gatggaaact ggtggggaac gccagaatgc aactgaaatc
121 agagcatctg ttggaaggat ggtgggagga atcggccggt tctatgttca aatgtgtact
181 gagcttaaac tcaacgacca tgaagggcgg ctgattcaga acagcataac aatagaaagg
241 atggtacttt cggcattcga cgaaagaaga aacaagtacc tcgaggagca tcccagtgct
301 gggaaagacc ccaagaaaac gggaggcccg atatacagaa ggagagatgg gaaatggatg
361 agagaactca tcctccatga taaagaagaa atcatgagga tctggcgtca ggccaacaat
421 ggtgaagacg ctactgctgg tcttactcat atgatgatct ggcactccaa tctcaatgac
481 accacctacc aaagaacaag ggctcttgtt cgggctggga tggatcccag aatgtgctct
541 ctgatgcaag gatcaactct cccacggaga tctggagctg ccggtgctgc agtgaagggt
601 gttggaacaa tggtaatgga actcatcagg atgatcaaac gcgggataaa tgatcgaaac
661 ttctggagag gtgaaaatgg tcgaagaacc agaattgctt atgaaagaat gtgcaacatc
721 ctcaagggga aattccaaac agcagcacaa cgagcaatga tggaccaagt gagggagggc
781 cgcaatcctg gaaatgctga gattgaggat ctcattttct tggcacgatc agcactcatt
841 ctgagaggat cagtagccca taaatcatgc ctacctgcct gtgtttatgg ccttgcagta
901 gccagtgggt atgactttga gaaagaggga tactctctgg ttggaattga tcctttcaaa
961 ctactccaga acagccaaat tttcagtcta atcagaccga aagaaaatcc agcacacaag
1021 agccagctgg tgtggatggc atgccattct gcagcatttg aggacctgag agtttcgaat
1081 ttcattagag gaaccaaagt aatcccaaga ggacagttag caaccagggg agtgcaaatt
1141 gcttcaaatg aaaacatgga gacaatagat tctagcacac tcgaactgag gagcagatat
1201 tgggcaataa ggaccaggag tggggggaac accagtcaac agagagcatc tgcaggacag
1261 ataagtgtgc aacccacttt ctcagtgcag agaaatcttc cctttgaaag agcaaccatt
1321 atggctgcat tcactggaaa cactgagggg aggacttccg acatgagaac ggaaatcata
1381 aggatgatgg aaaatgccag atcagaagat gtgtctttcc aggggcgggg agtcttcgag
1441 ctctcggacg aaaaggcaac gaacccgatc gtgccttcct ttgacatgag caatgaaggg
1501 tcttatttct tcggagacaa tgctgaggag tttgacagtt aaagaaaaat acccttgttt
1561 ctact
【０１４５】
定義  血球凝集素前駆体のインフルエンザＡ型ウイルス（A/Equine/Kentucky/1/92(H3N8)）遺伝子、部分的ＣＤＳ
アクセッション番号 Ｄ３０６８３； 配列番号：２１
1 gtcaatcatg aagacaacca ttattttgat actactgacc cattgggtct acagtcaaaa
61 cccaaccagt ggcaacaaca cagccacatt atgtctggga caccatgcag tagcaaatgg
121 aacattggta aaaacaataa ctgatgacca aattgaggtg acaaatgcta ctgaattagt
181 tcagagcatt tcaataggga aaatatgcaa caactcatat agggttctag atggaagaaa
241 ttgcacatta atagatgcaa tgctaggaga cccccactgt gatgtctttc agtatgagaa
301 ttgggacctc ttcatagaaa gaagcagcgc tttcagcaat tgctacccat atgacatccc
361 tgactatgca tcgctccggt ccattgtagc atcctcagga acattagaat tcacagcaga
421 gggattcaca tggacaggtg tcactcaaaa cggaggaagt ggagcctgca aaaggggatc
481 agccgatagt ttctttagcc gactgaattg gctaacaaaa tctggaaact cttaccccac
541 attgaatgtg acaatgccta acaataaaaa tttcgacaaa ctatacatct gggggattca
601 tcacccgagc tcaaacaatg agcagacaaa attgtatatc caagaaacag gacgagtaac
661 agtctcaaca aaaagaagtc aacaaacaat aatccctaac atcggatcta gaccgtgggt
721 caggggtcaa tcaggcagga taagcatata ctggaccatt gtaaaacctg gagatatcct
781 aatgataaac agcaatggca acttagttgc accgcgggga tattttaaat tgagaacagg
841 gagaagctct gtaatgagat cagatgcacc catagacatt tgtgtgtctg aatgtattac
901 accaaatgga agcatcccca acgacaaacc atttcaaaat gtgaacaaag ttacatatgg
961 aaaatgcccc aaatatatca ggcaaaacac tttaaagctg gccactggga tgaggaatgt
1021 accagaaaag caaatcagag gaatctttgg agcaatagcg ggattcatag aaaacggctg
1081 ggaaggaatg gttgat
【０１４６】
定義  インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/1/97(H3N8)） 血球凝集素前駆体（ＨＡ１）ｍＲＮＡ、部分的ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＦ１９７２４９；  配列番号：２２
1 agcaaaagca ggggatattt ctgtcaatca tgaagacaac cattattttg atactactga
61 cccattgggc ctacagtcaa aacccaatca gtggcaacaa cacagccaca ttgtgtctgg
121 gacaccatgc agtagcaaat ggaacattgg taaaaacaat aactgatgat caaattgagg
181 tgacaaatgc tactgaatta gttcagagca tttcaatggg gaaaatatgc aacaactcat
241 atagagttct agatggaaga aattgcacat taatagatgc aatgctagga gacccccact
301 gtgatgtctt tcagtatgag aattgggacc tctttataga aagaagcagc gctttcagca
361 attgctaccc atatgacatc cctgactatg catcgctccg gtccattgta gcatcctcag
421 gaacattgga attcacagca gagggattca catggacagg tgtcactcaa aacggaagaa
481 gtggagcctg caaaagggga tcagccgata gtttctttag ccgactgaat tggctaacaa
541 aatctggaaa ctcttacccc acattgaatg tgacaatgcc taacaataaa aatttcgaca
601 aactatacat ctgggggatt catcacccga gctcaaacca agagcagaca aaattgtaca
661 tccaagaatc aggacgagta acagtctcaa caaaaagaag tcaacaaaca ataatcccta
721 acatcggatc tagaccgtgg gtcaggggtc aatcaggcag gataagcata tactggacca
781 ttgtaaaacc tggagatatc ctaatgataa acagtaatgg caacttagtt gcaccgcggg
841 gatattttaa attgaaaaca gggaaaagct ctgtaatgag atcagatgca cccatagaca
901 tttgtgtgtc tgaatgtatt acaccaaatg gaagcatctc caacgacaaa ccattccaaa
961 atgtgaacaa agttacatat ggaaaatgcc ccaagtatat caggcaaaac actttaaagc
1021 tggccactgg gatgaggaat gaaccagaaa agcaaatcag a
【０１４７】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/1/96(H3N8)）血球凝集素前駆体（ＨＡ１）ｍＲＮＡ、部分的ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＦ１９７２４８； 配列番号：２３
1 agcaaaagca ggggatattt ctgtcaatca tgaagacaac cattattttg atactactga
61 cccattgggt ctacagtcaa aacccaacca gtggcaacaa cacagccaca ttatgtctgg
121 gacaccatgc agtagcaaat ggaacattgg taaaaacaat aactgatgac caaattgagg
181 tgacaaatgc tactgaatta gttcagagca tttcaatagg gaaaatatgc aacaactcat
241 atagagttct agatggaaga aattgcacat taatagatgc aatgctagga gacccccact
301 gtgatgtctt ccagtatgag aattgggacc tcttcataga aagaagcagc gctttcagca
361 attgctaccc atatgacatc cctgactatg catcgctccg gtccattgta gcatcctcag
421 gaacattaga attcacagca gagggattca catggacagg tgtcactcaa aacggaagaa
481 gtggagcctg caaaagggga tcagccgata gtttctttag ccgactgaat tggctaacaa
541 aatctggaaa ctcttacccc acattgaatg tgacaatgcc taacaataaa aatttcgaca
601 aactatacat ctgggggatt catcacccga gctcaaacca aaagcagaca gaattgtaca
661 tccaagaatc aggacgagta acagtctcaa caaaaagaag tcaacaaacg ataatcccta
721 atatcggatc tagaccgtgg gttaggggtc aatcaggcag gataagcata tactggacca
781 ttgtaaaacc tggagatatc ctaatgataa acagtaatgg caacttagtt gcaccgcggg
841 gatattttaa attgaaaaca gggaaaagct ctgtaatgag atcagatgca cccatagaca
901 tttgtgtgtc tgaatgtatt acaccaaatg gaagcatccc caacgacaaa ccatttcaaa
961 atgtgaacaa agttacatat ggaaaatgcc ccaagtatat caggcaaaac actttaaagc
1021 tggccactgg gatgaggaat gtaccagaaa agcaaatcag a
【０１４８】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/9/95(H3N8)）血球凝集素前駆体（ＨＡ１）ｍＲＮＡ、部分的ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＦ１９７２４７； 配列番号：２４
1 agcaaaagca ggggatattt ctgtcaatca tgaagacaac cattattttg atactactga
61 cccattgggt ctacagtcaa aacccaacca gtggaaacaa cacagccaca ttatgtctgg
121 gacaccatgc agtagcaaat ggaacattgg taaaaacaat aactgatgac caaattgagg
181 tgacaaatgc tactgaatta gttcagagca tttcaatagg gaaaatatgc aacaactcat
241 atagagttct agatggaaga aattgcacat taatagatgc aatgctagga gacccccact
301 gtgatgtctt ccagtatgag aattgggacc tcttcataga aagaagcagc gctttcagca
361 attgctaccc atatgacatc cctgactatg catcgctccg gtccattgta gcatcctcag
421 gaacattgga attcacagca gagggattca catggacagg tgtcactcaa aacggaagaa
481 gtggagcctg caaaagggga tcagccgata gtttctttag ccgactgaat tggctaacaa
541 aatctggaaa ctcttacccc acattgaatg tgacaatgcc taacaataaa aatttcgaca
601 aactatacat ctgggggatt catcacccga gctcaaacca aaagcagaca gaattgtaca
661 tccaagaatc aggacgagta acagtctcaa caaaaagaag tcaacaaacg ataatcccta
721 atatcggatc tagaccgtgg gtcaggggtc aatcaggcag gataagcata tactggacca
781 ttgtaaaacc tggagatatc ctaatgataa acagtaatgg caacttagtt gcaccgcggg
841 gatattttaa attgaaaaca gggaaaagct ctgtaatgag atcagatgca cccatagaca
901 tttgtgtgtc tgaatgtatt acaccaaatg gaagcatccc caacgacaaa ccatttcaaa
961 atgtgaacaa agttacatat ggaaaatgcc ccaagtatat caggcaaaac actttaaagc
1021 tggccactgg gatgaggaat gtaccagaaa agcaaatcag a
【０１４９】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/1/98(H3N8)）血球凝集素前駆体（ＨＡ１）ｍＲＮＡ、部分的ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＦ１９７２４１； 配列番号：２５
1 agcaaaagca ggggatattt ctgtcaatca tgaagacaac cattattttg atactactga
61 cccattgggt ctacagtcaa aacccaacca gtggaaacaa cacagccaca ttatgtctgg
121 gacaccatgc agtagcaaat ggaacattgg taaaaacaat aactgatgac caaattgagg
181 tgacaaatgc tactgaatta gttcagagca tttcaatagg gaaaatatgc aacaactcat
241 ataaagttct agatggaaga aattgcacat taatagatgc aatgctagga gacccccact
301 gtgatgtctt ccagtatgag aattgggacc tcttcataga aagaagcagc gctttcagca
361 attgctaccc atatgacatc cctgactatg catcgctccg gtccattgta gcatcctcag
421 gaacattaga attcacagca gagggattca catggacagg tgtcactcaa aacggaagaa
481 gtggagcctg caaaagggga tcagccgata gtttctttag ccgactgaat tggctaacaa
541 aatctggaaa ctcttacccc acattgaatg tgacaatgcc taacaataaa aatttcgaca
601 aactatacat ctgggggatt catcacccga gctcaaacca acagcagaca gaattgtaca
661 tccaagaatc aggacgagta acagtctcaa caaaaagaag tcaacaaacg atagtcccta
721 atatcggatc tagaccgtgg gttaggggtc aatcaggcag gataagcata tactggacca
781 ttgtaaaacc tggagatatc ctaatgataa acagtaatgg caacttagtt gcaccgcggg
841 gatattttaa attgaaaaca gggaaaagct ctgtaatgag atcagatgca cccatagaca
901 tttgtgtgtc tgaatgtatt acaccaaatg gaagcatccc caacgacaaa ccatttcaaa
961 atgtgaacaa agttacatat ggaaaatgcc ccaagtatat caggcaaaac actttaaagc
1021 tggccactgg gatgaggaat ataccagaaa agcaaatcag a
【０１５０】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/eq/Kentucky/81(H3N8)）血球凝集素ｍＲＮＡ、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 Ｕ５８１９５； 配列番号：２６
1 agcaaaagca ggggatactt tctgtcaatc atgaagacaa ccattatttt gatactactg
61 acccattggg tctacagtca aaacccaacc agtggcaaca acacagccac actatgtctg
121 ggacaccatg cagtagcaaa tggaacattg gtaaaaacaa taactgatga ccaaattgag
181 gtgacaaatg ctactgaatt agttcagagc acttcaatag ggaaaatatg caacaaccca
241 tatagggttc tagatggaag aaactgcaca ttaatagatg caatgctagg agatccccac
301 tgtgatgttt ttcagtatga gaattgggac ctcttcatag aaagaagcag cgctttcagc
361 aattgctacc catatgacat ccctgactat gcatcgctcc ggtctattgt ggcatcttca
421 ggaacattag aattcacagc agagggattc acatggacag gtgtcactca aaacggagga
481 agtggagcct gcagaagggg gtcagccgat agtttcttta gccgactgaa ttggctaaca
541 aaatctggaa attcttaccc cacattgaat gtaacaatgc ctaacaataa caatttcgat
601 aaactataca tctgggggat ccatcacccg agcacaaaca atgagcagac aaaattgtat
661 atccaagaat cagggcgagt aacagtctca acaaaaagaa gtcaacaaac aataatcccc
721 aacatcggat ctagaccgtg ggtcaggggt caatcaggca ggataagcat atattggacc
781 attgtgaaac ctggagatat cctaatgata aacagtaatg gcaacttagt tgcaccgcgg
841 ggatatttta aaatgcgaac agggaaaagc tctgtaatga gatcagatgc acccatagac
901 acttgtgtgt ccgagtgtat tacaccaaat ggaagcatcc ccaacgacaa accatttcaa
961 aatgtgaaca aagttacata tggaaaatgc cccaagtata tcaagcagaa tactttgaag
1021 ctggccactg ggatgaggaa tgtaccagaa aagcaaatca gaggaatctt tggagcaata
1081 gcgggattca tagaaaacgg ctgggaagga atggttgatg ggtggtatgg attccgatat
1141 cagaattcgg aaggaacagg acaagctgca gatctaaaga gcactcaagc agccatcgac
1201 cagatcaatg gaaaattgaa cagagtgatt gaaaggacca atgagaaatt ccatcaaata
1261 gagaaggaat tctcagaagt agaagggaga atccaggact tggagaagta tgtagaagac
1321 accaaaatag acctatggtc ctacaatgca gagttactgg tggctctaga aaatcaacat
1381 acgattgact taacagatgc agaaatgaat aaattattcg agaagactag gcgccagtta
1441 agagaaaacg cggaagacat ggggggtgga tgtttcaaga tttatcacaa atgtgataat
1501 gcatgcattg gatcaataag aaatgggaca tatgaccatt acatatacag agatgaagca
1561 ttaaacaacc gatttcaaat taaaggtgtt gaattgaaat caggctacaa agattggata
1621 ctgtggattt cattcgccat atcatgcttc ttaatttgcg ttgttctatt gggtttcatc
1681 atgtgggctt gccaaaaagg caacatcaga tgcaacattt gcatttgagt aaactgataa
1741 ttaaaaacac ccttgtttct act
【０１５１】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Kentucky/2/86 (H3N8)）膜タンパク質Ｍ１及び膜タンパク質Ｍ２遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 Ｍ６３５４０；  配列番号：２７
1 agcaaaagca ggtagatatt taaagatgag tcttctaacc gaggtcgaaa cgtacgttct
61 ctctattgta ccatcaggcc ccctcaaagc cgagatcgcg cagagacttg aagatgtctt
121 tgcagggaag aacaccgatc ttgaggcact catggaatgg ctaaagacaa gaccaatcct
181 gtcacctctg actaaaggga ttttaggatt tgtgttcacg ctcaccgtgc ccagtgagcg
241 aggactgcaa cgtagacgct ttgtccaaaa tgcccttagt ggaaacggag atccaaataa
301 catggacaga gcagtaaaac tgtacaagaa gcttaaaaga gaaataacat tccatggggc
361 aaaagaggtg gcactcagct attccactgg tgcactagcc agctgcatgg gactcatata
421 caacagaatg gggactgtga caaccgaagt ggcatttggc ctggtatgcg ccacatgtga
481 acagattgct gattcccagc atcgatctca caggcagatg gtgacaacaa ccaacccact
541 aatcagacat gaaaacagaa tggtactagc cagtaccaca gctaaaacca tggagcaggt
601 ggcagggtcg agtgagcagg cagcagaggc catggaggtt gctagtaagg ccaggcagat
661 ggtgcaggca atgaggacca ttgggaccca ccctagctcc agtgccggtt tgaaagatga
721 tcttcttgaa aatttgcagg cctaccagaa acggatggga gtgcaaatgc agcggttcaa
781 gtgatcctct cgttattgca gcaagtatca ttgggatctt gcacttgata ttgtggattc
841 ttgatcgcct tttcttcaaa ttcatttatc gtctccttaa atacggtttg aaaagagggc
901 cttctacgga aggagtacct gagtctatga gggaagaata tcggcaggaa cagcagaatg
961 ctgtggatgt tgacgatggt cattttgtca acatagagct ggagtaaaaa actaccttgt
1021 ttctact
【０１５２】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス単離物Ａ／ウマ／ケンタッキー／７６非構造タンパク質、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 Ｍ８０９７１；  配列番号：２８
1 agcaaaagca gggtgacaaa aacataatgg attccaacac tgtgtcaagc tttcaggtag
61 actgttttct ttggcatgtc cgcaaacgat ttgcagacca agaactgggt gatgccccat
121 tccttgaccg gcttcgccga gaccagaagt ccctaaaagg aagaggcagc actcttggtc
181 tggacatcga aacagccact cgtgcaggaa agcagatagt ggagcggatt ctggaagagg
241 agtcagatga ggcacttaaa atgaccattg cctctgttcc tgcttcacgc tacttaactg
301 acatgactct tgatgagatg tcaagagact ggttcatgct catgcccaag cagaaagtaa
361 caggctccct atgtataagg atggaccagg caatcatgga taagaacatc atactaaaag
421 caaactttag tgtgattttc gaaaggctgg agacactaat actacttaga gctttcaccg
481 aagaaggagc agtcgttggc gaaatttcac cattgccttc tcttccagga catactaatg
541 aggatgtcaa aaatgcaatt ggggtcctca tcggaggact taaatggaat gataacacag
601 ttagaatctc tgaaactcta cagagattcg cttggagaag cagtcatgag aatgggagac
661 cttcattccc tccaaagcag aaacgaaaaa tggcgagaac aattgagtca gaagtttgaa
721 gaaataaggt ggttgattga agaagtgcga catagattga aaaatacaga aaatagtttt
781 gaacaaataa catttatgca agccttacaa ctattgcttg aagtagaaca agagataaga
841 actttctcgt ttcagcttat ttaatgataa aaaacaccct tgtttctact
【０１５３】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/eq/Kentucky/92(H3N8)）マトリックスタンパク質Ｍ１及びＭ２（Ｍ）遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＦ００１６８３；  配列番号：２９
1 atgagtcttc tgaccgaggt cgaaacgtac gttctctcta tcgtaccatc aggccccctc
61 aaagccgaga tcgcgcagag acttgaagat gtctttgcag ggaagaacac cgatcttgag
121 gcactcatgg aatggctaaa gacaagacca atcctgtcac ctctgactaa agggatttta
181 ggattcgtat tcacgctcac cgtgcccagt gagcgaggac tgcagcgtag acgctttgtc
241 caaaatgccc ttagtggaaa cggagatcca aacaacatgg acagagcagt aaaactgtac
301 aggaaactta aaagagaaat aacattccat ggggcaaaag aggtggcact cagctattcc
361 actggtgcac tagccagctg catgggactc atatacaaca gaatgggaac tgtgacaacc
421 gaagtggcat ttggcctagt atgcgccaca tgtgaacaga ttgctgattc ccagcatcga
481 tctcacaggc agatggtgac aacaaccaac ccattaatca gacatgaaaa cagaatggta
541 ttagccagta ccacggctaa agccatggag cagatggcag ggtcgagtga gcaggcagca
601 gaggccatgg aggttgctag taaggctagg cagatggtac aggcaatgag gaccattggg
661 acccacccta gctccagtgc cggtttgaaa aatgatctcc ttgaaaattt gcaggcctac
721 cagaaacgga tgggagtgca aatgcagcga ttcaagtgat cctctcgtta ttgcagcaag
781 tatcattggg atcttgcact tgatattgtg gattcttgat cgccttttct tcaaattcat
841 ttatcgtcgc cttaaatacg ggttgaaaag agggccttct acggaaggag tacctgagtc
901 tatgagggaa gaatatcggc aggaacagca gaatgctgtg gatgttgacg atggtcattt
961 tgtcaacata gagctggagt aa
【０１５４】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/eq/Kentucky/81(H3N8)）マトリックスタンパク質Ｍ１及びＭ２（Ｍ）遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＦ００１６７６； 配列番号：３０
1 atgagtcttc taaccgaggt cgaaacgtac gttctctcta tcgtaccatc aggccccctc
61 aaagccgaga tcgcgcagag acttgaagat gtctttgcag ggaagaacac cgatcttgag
121 gcactcatgg aatggctaaa gacaagacca atcctgtcac ctctgactaa agggatttta
181 ggatttgtgt tcacgctcac cgtgcccagt gagcgaggac tgcagcgtag acgctttgtc
241 caaaatgccc ttagtggaaa cggagatcca aacaacatgg acagagcagt aaaactgtac
301 aggaagctta aaagagaaat aacattccat ggggcaaaag aggtggcact cagctattcc
361 actggtgcac tagccagctg catgggactc atatacaaca gaatggggac tgtgacaacc
421 gaagtggcat ttggcctggt atgcgccaca tgtgaacaga ttgctgattc ccagcatcga
481 tctcacaggc agatggtgac aacaaccaac ccactaatca gacatgaaaa cagaatggta
541 ctagccagta ccacagctaa agccatggaa cagatggcag ggtcgagtga gcaggcagca
601 gaggccatgg aggttgctag taaggccagg cagatggtac aggcaatgag gaccattggg
661 acccacccta gctccagtgc cggtttgaaa gatgatcttc ttgaaaattt gcaggcctac
721 cagaaacgga tgggagtgca aatgcagcga ttcaagtgac cctctcgtta ttgcagcaag
781 tatcattggg atcttgcact tgatattgtg gattcttgat cgccttttct tcaaattcat
841 ttatcgtcgc cttaaatacg gtttgaaaag agggccttct acggaaggag tacctgagtc
901 tatgagggaa gaatatcggc aggaacagca gaatgctgtg gatgttgacg atggtcattt
961 tgtcaacata gagctggagt aa
【０１５５】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/eq/Kentucky/92(H3N8)）非構造タンパク質ＮＳ１及びＮＳ２（ＮＳ）遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＦ００１６７１；  配列番号：３１
1 atggattcca acactgtgtc aagctttcag gtagactgtt ttctttggca tgtccgcaaa
61 cgattcgcag accaagaact gggtgatgcc ccattccttg accggcttcg ccgagaccag
121 aagtccctaa aaggaagagg tagcactctt ggtctggaca tcgaaacagc cactcgtgca
181 ggaaagcaga tagtggagca gattctggaa gaggaatcag atgaggcact taaaatgacc
241 attgcctctg ttcctgcttc acgctactta actgacatga ctcttgatga gatgtcaaga
301 gactggttca tgctcatgcc caagcagaaa gtaacaggct ccctatgtat aagaatggac
361 caggcaatca tggataagaa catcatactt aaagcaaact ttagtgtgat tttcgaaagg
421 ctggaaacac taatactact tagagccttc accgaagaag gagcagtcgt tggcgaaatt
481 tcaccattgc cttctcttcc aggacatact aatgaggatg tcaaaaatgc aattggggtc
541 ctcatcggag gacttaaatg gaatgataat acggttagaa tctctgaaac tctacagaga
601 ttcgcttgga gaagcagtca tgagaatggg agaccttcat tccctccaaa gcagaaacga
661 aaaatggaga gaacaattga gccagaagtt tgaagaaata agatggttga ttgaagaagt
721 gcgacataga ttgaaaaata cagaaaatag ttttgaacaa ataacattta tgcaagcctt
781 acaactattg cttgaagtag aacaagagat aagaactttc tcgtttcagc ttatttaa
【０１５６】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/eq/Kentucky/1/88(H3N8)）非構造タンパク質ＮＳ１及びＮＳ２（ＮＳ）遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＦ００１６６４； 配列番号：３２
1 atggattcca acactgtgtc aagctttcag gtagactgtt ttctttggca tgtccgcaaa
61 cgatttgcag accaagaact gggtgatgcc ccattccttg accggcttcg ccgagaccag
121 aagtccctaa aaggaagagg cagcactctt ggtctggaca tcgaaacagc cactcgtgca
181 ggaaagcaga tagtggagca gattctggaa gaggaatcag atgaggcact taaaatgacc
241 attgcctctg ttcctgcttc acgctactta actgacatga ctcttgatga gatgtcaaga
301 gactggttca tgctcatgcc caagcagaaa gtaacaggct ccctatgtat aaggatggac
361 caggcaatca tggataagaa catcatacta aaagcaaact ttagtgtgat tttcgaaagg
421 ctggagacac taatactact tagagccttc accgaagaag gagcagtcgt tggcgaaatt
481 tcaccattgc cttctcttcc aggacatact aatgaggatg tcaaaaatgc aattggggtc
541 ctcatcggag gacttaaatg gaatgataat acagttagag tctctgaaac tctacagaga
601 ttcgcttgga gaagcagtca tgagaatggg agaccttcat tccctccaaa gcagaaacga
661 aaaatggcga gaacaattga gccagaagtt tgaagaaata agatggttga ttgaagaagt
721 gcgacataga ttgaaaaata cagaaaatag ttttgaacaa ataacattta tgcaagcctt
781 acaactattg cttgaagtag aacaagagat aagaactttc tcgtttcagc ttatttaa
【０１５７】
定義 インフルエンザＡ／ウマ／ケンタッキー／２／８６（Ｈ３Ｎ８）核タンパク質（ｓｅｇ５）ｍＲＮＡ、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 Ｍ３０７５１；  配列番号：３３
1 agcaaaagca gggtagataa tcactcactg agtgacatca aagtcatggc gtctcaaggc
61 accaaacgat cttatgagca gatggaaact ggtggggaac gccagaatgc aactgaaatc
121 agagcatctg tcggaaggat ggtgggagga atcggccggt tctatgttca gatgtgtact
181 gagcttaaac tcaacgacca tgaagggcgg ctgattcaga acagcataac aatagaaagg
241 atggtacttt cggcattcga cgaaagaaga aacaagtacc tcgaggagca tcccagtgct
301 gggaaagacc ccaagaaaac gggaggcccg atatacagaa ggaaagatgg gaaatggatg
361 agagaactca tcctccatga taaagaagaa atcatgagga tctggcgtca ggccaacaat
421 ggtgaagacg ctactgctgg tcttactcat atgatgatct ggcactccaa tctcaatgac
481 accacatacc aaagaacaag ggctcttgtt cgggctggga tggatcccag aatgtgctct
541 ctgatgcaag gatcaaccct cccacggaga tctggagctg ccggtgctgc agtaaaaggt
601 gttggaacaa tggtaatgga actcatcagg atgatcaaac gcgggataaa tgatcgaaat
661 ttctggagag gtgaaaatgg tcgaagaacc agaattgctt atgaaagaat gtgcaatatc
721 ctcaaaggga aattccaaac agcagcacaa cgggcaatga tggaccaagt gagggagggc
781 cgcaatcctg gaaatgctga gattgaggat ctcattttct tggcacgatc agcactcatt
841 ttgagaggat cagtagccca taaatcatgc ctacctgcct gtgtttatgg ccttgcagta
901 gccagtgggt atgactttga gaaggaagga tactctctgg ttggaattga tcctttcaaa
961 ctactccaga acagccaaat tttcagtcta atcagaccga aagaaaatcc agcacacaag
1021 agccagttgg tgtggatggc atgccattct gcagcatttg aggacctgag agttttgaat
1081 ttcattagag gaaccaaagt aatcccaaga ggacagttag caaccagagg agtgcaaatt
1141 gcttcaaatg aaaacatgga gacaatagat tctagcacac tcgaactgag gagcagatat
1201 tgggcaataa ggaccaggag tggagggaac accagtcaac agagagcatc tgcaggacag
1261 ataagtgtgc aacccacttt ctcagtgcag agaaatcttc cctttgaaag agcaaccatt
1321 atggctgcat tcactgggaa cactgagcgg aggacttccg acatgagaac ggaaatcata
1381 aggatgatgg aaaatgccag atcagaagat gtgtctttcc aggggcgggg agtcttcgag
1441 ctctcggacg aaaaggcaac gaacccgatc gtgccttcct ttgacatgag caatgaaggg
1501 tcttatttct tcggagacaa tgctgaggag tttgacagtt aaagaaaaat acccttgttt
1561 ctact
【０１５８】
定義 インフルエンザＡ／ウマ／ケンタッキー／２／８６（Ｈ３Ｎ８）、ＰＢ２ポリメラーゼ、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 Ｍ７３５２６  Ｍ３６０４９；  配列番号：３４
1 agcaaaagca ggtcaaatat attcaatatg gagagaataa aagaactgag agatctaatg
61 tcacagtccc gcacccgcga gatactaaca aaaactactg tggaccatat ggccataatc
121 aagaaataca catcaggaag acaagagaag aaccccgcac ttaggatgaa gtggatgatg
181 gcaatgaaat acccaattac agcagataag aggataatgg aaatgattcc tgagagaaat
241 gaacaggggc aaaccctttg gagcaaaacg aacgatgctg gctcagaccg cgtaatggta
301 tcacctctgg cagtgacatg gtggaatagg aatggaccaa caacgagcac aattcattat
361 ccaaaagtct acaaaactta ttttgaaaaa gttgaaaggt taaaacacgg aacctttggc
421 cccgttcatt ttaggaatca agtcaagata agacggagag ttgacgtaaa ccctggtcac
481 gcggacctca gtgccaaaga agcacaagat gtgatcatgg aagttgtttt cccaaatgaa
541 gtgggagcca gaattctaac atcggaatca caactaacaa taaccaaaga gaaaaaagaa
601 gaacttcagg actgcaaaat tgcccccttg atggtagcat acatgctaga aagagagttg
661 gtccgaaaaa caaggttcct cccagtggct ggcggaacaa gcagtgtata cattgaggtg
721 ttgcatctga ctcagggaac gtgctgggaa caaatgtaca ccccaggagg agaagttaga
781 aacgatgaca ttgatcaaag tttaattatt gctgcccgga acatagtgaa aagagcgaca
841 gtatcagcag atccactagc atccctgctg gagatgtgcc acagtacaca gattggtgga
901 ataaggatgg tagacatcct taagcagaat ccaacagagg aacaagctgt ggatatatgc
961 aaagcagcaa tggggttaag aattagctca tcattcagct ttggtggatt cacctttaag
1021 agaacaagtg gatcatcagt caagagagaa gaagaaatgc ttacgggcaa ccttcaaaca
1081 ttgaaaataa gagtgcatga gggctatgaa gaattcacaa tggtcggaag aagagcaaca
1141 gccattctca gaaagacaac cagaagattg attcaattga tagtaagtgg gagagatgaa
1201 cagtcaattg ctgaagcaat aattgtagcc atggtgtttt cgcaagaaga ttgcatgata
1261 aaagcagttc gaggcgattt gaacttcgtt aatagagcaa atcagcgctt gaaccccatg
1321 catcaactct tgaggcattt ccaaaaggat gcaaaagtgc ttttccagaa ttgggggatt
1381 gaacccatcg acaatgtgat gggaatgatc ggaatattgc ccgacatgac cccaagcacc
1441 gagatgtcat tgagaggagt gagagtcagc aaaatgggag tggatgagta ctccagcact
1501 gagagagtgg tggtgagcat tgaccgtttt ttaagagttc gggatcaaag gggaaacata
1561 ctactgtccc ctgaagaggt cagtgaaaca caaggaacgg aaaagctgac aataatttat
1621 tcatcatcaa tgatgtggga gattaatggt cccgagtcag tgttggtcaa tacttatcaa
1681 tggatcatca gaaactggga aattgtgaaa attcaatggt cacaggatcc cacaatgtta
1741 tacaataaga tagaatttga gccattccag tccctggtcc ctagggccac cagaagccaa
1801 tacagcggtt tcgtaaggac cctgtttcag caaatgcgag atgtacttgg aacatttgac
1861 actgctcaaa taataaaact cctccctttt gccgctgctc ctccggaaca gagtagaatg
1921 cagttctctt ctttgactgt taatgtaaga ggatcgggaa tgaggatact tgtaagaggc
1981 aattccccag tgttcaacta caacaaagcc actaagaggc tcacagtcct cggaaaggat
2041 gcaggtgcgc ttactgaaga cccagatgaa ggtacggctg gagtagaatc tgctgttctg
2101 agagggtttc tcatcttagg taaagaaaac aagagatatg gcccagcact aagcatcaat
2161 gaactgagca aacttacaaa aggggagaaa gctaatgtgc taattgggca aggggacgtg
2221 gtgttggtaa tgaaacggaa acgtgactct agcatactta ctgacagtca gacagcgacc
2281 aaaaggattc ggatggccat caattagtgt tgaattgttt aaaaacgacc ttgtttctac
2341 t
【０１５９】
定義 インフルエンザＡ／ウマ／ケンタッキー／１／８７（Ｈ３Ｎ８）血球凝集素（ＨＡ）ＲＮＡ（ｓｅｇ．４）、完全ＣＤＳ
アクセッション番号  Ｍ２４７２８  Ｊ０４３３６； 配列番号：３５
1 agcaaaagca ggggatattt ctgtcaatca tgaagacaac cattgttttg atactactga
61 cccattgggt ctacagtcaa aacccaacca gtggcaacaa cacagccaca ttatgtctgg
121 gacaccatgc agtagcaaat ggaacactgg taaaaacaat aactgatgac cagattgagg
181 tgacaaatgc tactgaatta gttcagagca tttcaatagg gaaaatatgc aacaactcat
241 atagggttct agatggaaga aattgcacat taatagatgc aatgctagga gacccccact
301 gtgatgtttt tcngtatgag aattgggacc tcttcataga aagaagcagc gctttcagca
361 attgctaccc atatgacatc cctgactatg catcgctccg gtctattgtg gcatcctcag
421 gaacattaga attcacagca gagggattca catggacagg tgtcactcaa aacggaagaa
481 gtggagcctg caaaagggga tcagccgata gtttctttag ccgactgaat tggctaacaa
541 aatctggaaa ttcttacccc acattgaatg tgacaatgcc taacaataac aatttcgata
601 aactatacat ctgggggatt catcacccga gctcaaacaa tgagcagaca aaattgtata
661 tccaagaatc aggacgagta acagtctcaa caaaaagaag tcaacaaaca ataatcccca
721 acatcggatc tagaccgtgg gtcaggggtc aatcaggcag gataagcata tattggacca
781 ttgtgaaacc tggagatatc ctaatgataa acagtaatgg caacttagtt gcaccgcggg
841 gatatttcaa attgagaaca gggaaaagct ctgtaatgag atcagatgca cccatagaca
901 cttgtgtgtc tgaatgtatt acaccaaatg gaagcatccc caacgacaaa ccattccaaa
961 atgtgaacaa agttacatat ggaaaatgcc ccaagtatat caggcaaaac actttgaagc
1021 tggccactgg gatgaggaat gtaccagaaa agcaaatcag aggaatcttt ggagcaatag
1081 cgggattcat agaaaacggc tgggaaggaa tggttgatgg gtggtatgga ttccgatatc
1141 aaaattcgga aggaacagga caagctggag atctaaagag cactcaagca gccatcgacc
1201 agatcaatgg aaaattaaac agagtgattg aaaggaccaa tgagaaattc catcaaatag
1261 agaaggaatt ctcagaagta gaagggagaa tccaggactt ggagaagtat gtagaagaca
1321 ccaaaataga cctatggtcc tacaatgcag aattgctggt ggctctagaa aatcaacata
1381 caattgactt aacagatgca gaaatgaata aattattcga gaagactagg cgccagttaa
1441 gagaaaacgc ggaagacatg ggaggtggat gtttcaggat ttaccacaaa tgtgataatg
1501 catgcattgg atcaataaga aatgggacat atgaccatta catatacaga gatgaagcat
1561 taaacaaccg atttcaaatt aaaggtgttg agttgaaatc aggctacaaa gattggatac
1621 tgtggatttc attcgccata tcatgcttct taatttgcgt tgttctattg ggtttcatta
1681 tgtgggcttg ccaaaaaggc aacatcagat gcaacatttg catttgagta aactgatagt
1741 taaaaacacc cttgtttcta ct
【０１６０】
定義  インフルエンザＡ／ウマ／ケンタッキー／２／８６（Ｈ３Ｎ８）血球凝集素 （ＨＡ）ＲＮＡ（ｓｅｇ．４）、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 Ｍ２４７２７  Ｊ０４３３６；配列番号：３６
1 agcaaaagca ggggatattt ctgtcaatca tgaagacaac cattattttg atactactga
61 cccattgggt ctacagtcaa aacccaacca gtggcaacaa cacagccaca ttatgtctgg
121 gacaccatgc agtagcaaat ggaacattgg taaaaacaat aactgatgac caaattgagg
181 tgacaaatgc tactgaatta gttcagagca tttcaatagg gaaaatatgc aacaactcat
241 atagggttct agatggaaga aattgcacat taatagatgc aatgctagga gacccccact
301 gtgatgtttt tcngtatgag aattgggacc tcttcataga aagaagcagc gcttccagca
361 attgctaccc atatgacatc cctgactatg catcgctccg gtctattgtg gcatcctcag
421 gaacattaga attcacagca gagggattca catggacagg tgtcactcaa aacggaagaa
481 gtggagcctg caaaagggga tcagccgata gtttctttag ccgactgaat tggctaacaa
541 aatctggaaa ttcttacccc acattgaatg tgacaatgcc taacaataac aatttcgata
601 agctatacat ctgggggatc catcacccga gctcaaacaa tgagcagaca aaattgtata
661 tccaagaatc aggacgagta acagtctcaa caaaaagaag tcaacaaaca ataatcccca
721 acatcggatc tagaccgtgg gtcaggggtc aatcaggcag gataagcata tattggacca
781 ttgtgaaacc tggagatatc ctaataataa acagtaatgg caacttagtt gcaccgcggg
841 gatatttcaa attgcgaaca gggaaaagct ctgtaatgag atcagatgca cccatagaca
901 cttgtgtgtc tgaatgtatt acaccaaatg gaagcatccc caacgacaaa ccatttcaaa
961 atgtgaacaa agttacatat ggaaaatgcc ccaagtatat caggcaaaac actttgaagc
1021 tggccactgg gatgaggaat gtaccagaaa agcaaatcag aggaatcttt ggagcaatag
1081 cgggattcat agaaaacggc tgggaaggaa tggttgatgg gtggtatgga ttccgatatc
1141 aaaactcgga aggaacagga caagctggag atctaaagag cactcaagca gccatcgacc
1201 agatcaatgg aaaattgaac agagtgattg aaaggaccaa tgagaaattc catcaaatag
1261 agaaggaatt ctcagaagta gaagggagaa tccaggactt ggagaagtat gtagaagaca
1321 ccaaaataga cctatggtcc tacaatgcag agttgctggt ggctctagaa aatcaacata
1381 caattgactt aacagatgca gaaatgaata aactattcga gaagactagg cgccagttaa
1441 gagaaaacgc ggaagacatg ggaggtggat gtttcaagat ttatcacaaa tgtgataatg
1501 catgcattgg atcaataaga aatgggacat atgaccatta catatacaga gatgaagcat
1561 taaacaaccg atttcaaatt aaaggtgtag agctgaaatc aggctacaaa gattggatac
1621 tgtggatttc attcgccata tcatgcttct taatttgcgt tgttctattg ggtttcatta
1681 tgtgggcttg ccaaaaaggc aacatcagat gcaacatttg catttgagta aactgatagt
1741 taaaaacacc cttgtttcta ct
【実施例５】
【０１６１】
ニューマーケットウマインフルエンザのヌクレオチド配列
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine 2/Suffolk/89(H3N8)）ＮＳ１遺伝子
アクセッション番号 Ｘ８００６０； 配列番号：３７
1 atggattcca acactgtgtc aagctttcag gtagactgtt ttctttggca tgtccgcaaa
61 cgatttgcag accaagaact gggtgatgcc ccattccttg accggcttcg ccgagaccag
121 aagtccctaa aaggaagagg tagcactctt ggtctggaca tcgaaacagc cactcgtgca
181 ggaaagcaga tagtggagca gattctggaa gaggaatcag atgaggcatt taaaatgacc
241 attgcctctg ttcctgcttc acgctactta actgacatga ctcttgatga gatgtcaaga
301 gactggttca tgctcatgcc caagcagaaa gtaacaggct ccctatgtat aagaatggac
361 caggcaatca tggataagaa catcatactt aaagcaaact ttagtgtgat tttcgaaagg
421 ctggagacac taatactact cagggccttc accgaagaag gagcagtcgt tggcgaaatt
481 tcaccattgc cttctcttcc aggacatact aatgaggatg tcaaaaatgc aattggggtc
541 ctcatcggag gacttaaatg gaatgataat acggttagag tctctgaaac tctacagaga
601 ttcgcttgga gaagcagtca tgagaatggg agaccttcat tccctccaaa gcagaaacga
661 aaaatggaga gaacaattga gtcagaagtt tga
【０１６２】
定義  血球凝集素ＨＡＹサブユニットのインフルエンザＡ型ウイルス（A/eq/Newmarket/93/(H3N8)）ＨＡＩ遺伝子、ゲノムＲＮＡ
アクセッション番号 Ｘ８５０８９； 配列番号：３８
1 atgaagacaa ccattatttt gatactactg acccattggg tctacagtca aaacccaacc
61 agtggcaaca acacagccac attatgtctg ggacaccatg cagtagcaaa tggaacattg
121 gtaaaaacaa taactgatga ccaaattgag gtgacaaatg ctactgaatt agtccagagc
181 atttcaatag ggaaaatatg caacaactca tatagggttc tagatggaag aaattgcaca
241 ttaatagatg caatgctagg agacccccat tgtgatgatt ttcagtatga gaattgggac
301 ctcttcatag aaagaagcag cgctttcagc aattgctacc catatgacat ccctgactat
361 gcatcgctcc ggtccattgt agcatcctca ggaacattag aattcacagc agaggggttc
421 acatggacag gtgtcactca aaacggagga agtggagcct gcaaaagggg atcagccgat
481 agtttcttta gccgactgaa ttggctaaca aaatctggaa attcttaccc catattgaat
541 gtgacaatgc ctaacaataa aaatttcgat aaactataca tctgggggat tcatcacccg
601 agctcaaaca aagagcagac aaaattatat atccaagaat caggacgagt aacagtctca
661 acagaaagaa gtcaacaaac agtaatccct aacatcggat ctaggccgtg ggtcaggggt
721 caatcaggca ggataagcat atactggacc attgtaaaac ctggagatat tctaatgata
781 aacagtaatg gcaacttagt tgcaccgcgg ggatatttta aattgagaac agggaaaagc
841 tctgtaatga gatcagatgc actcatagac acttgtgtgt ctgaatgtat tacaccaaat
901 ggaagcatcc ccaacgacaa accatttcaa aatgtgaaca aaattacata tggaaaatgc
961 cccaagtata tcaggcaaaa cactttaaag ctggccactg ggatgaggaa tgtaccagaa
1021 aagcaaatca ga
【０１６３】
定義  血球凝集素ＨＡＹサブユニットのインフルエンザＡ型ウイルス（A/eq/Newmarket/93/(H3N8)）ＨＡＩ遺伝子、ゲノムＲＮＡ
アクセッション番号 Ｘ８５０８８；  配列番号：３９
1 atgaagacaa ccattatttt gatactactg acccattggg tctacagtca aaacccaacc
61 agtggcaaca acacagccac attatgtctg ggacaccatg cagtagcaaa tggaacattg
121 gtaaaaacaa taactgatga ccaaattgag gtgacaaatg ctactgaatt agttcagagc
181 atttcaatag ggaaaatatg caacaactca tatagagttc tagatggaag aaattgcaca
241 ttaatagatg caatgctagg agacccccac tgtgatgtct ttcagtatga gaattgggac
301 ctcttcatag aaagaagcag cgctttcagc aattgctacc catatgacat ccctgactat
361 gcatcgctcc ggtccattgt agcatcctca ggaacattgg aattcacagc agagggattc
421 acatggacag gtgtcactca aaacggaaga agtggagcct gcaaaagggg atcagccgat
481 agtttcttta gccgactgaa ttggctaaca aaatctggaa actcttaccc cacattgaat
541 gtgacaatgc ctaacaataa aaatttcgac aaactataca tctgggggat tcatcacccg
601 agctcaaacc aacagcagac agaattgtac atccaagaat caggacgagt aacagtctca
661 acaaaaagaa gtcaacaaac gataatccct aatatcggat ctagaccatg ggtcaggggt
721 caatcaggca ggataagcat atactggacc attgtaaaac ctggagatat cctaatgata
781 aacagtaatg gcaacttagt tgcaccgcgg ggatatttta aattgaaaac agggaaaagc
841 tctgtaatga gatcagatgc acccatagac atttgtgtgt ctgaatgtat tacaccaaat
901 ggaagcatcc ccaacgacaa accatttcaa aatgtgaaca aagttacata tggaaaatgc
961 cccaagtata tcaggcaaaa cactttaaag ctggccactg ggatgaggaa tgtaccagaa
1021 aagcaaatca ga
【０１６４】
定義  血球凝集素ＨＡＹサブユニットのインフルエンザＡ型ウイルス（A/eq/Sussex/89/(H3N8)）ＨＡＩ遺伝子、ゲノムＲＮＡ
アクセッション番号 Ｘ８５０９０； 配列番号：４０
1 atgaagacaa ccattatttt gatactactg acccattggg tctacagtca aaacccaacc
61 agtggcaaca acacagccac attatgtctg ggacaccatg cagtagcaaa tggaacattg
121 gtaaaaacaa taactgatga ccaaattgag gtgacaaatg ctactgaatt agttcagagc
181 atttcaatag ggaaaatatg caacaactca tatagggttc tagatggaag aaattgcaca
241 ttaatagatg caatgctagg agacccccac tgtgatgttt ttcagtatga gaattgggac
301 ctcttcatag aaagaagcag cgctttcagc aattgctacc catatgacat ccctgactat
361 gcatcgctcc ggtccattgt agcatcctca ggaacattag aattcacagc agagggattc
421 acatggacag gtgtcactca aaacggaaga agtggagcct gcaaaagggg atcagccgat
481 agtttcttta gccgactgaa ttggctaaca aaatctggaa attcttaccc catattgaat
541 gtgacaatgc ctaacaataa aaatttcgat aaactataca tctgggggat tcatcacccg
601 agctcaaaca aagagcagac aaaattgtat atccaagaat caggacgagt aacagtctca
661 acagaaagaa gtcaacaaac agtaatccct aacatcggat ctagaccgtg ggtcaggggt
721 caatcaggca ggataagcat atactggacc attgtaaaac ctggagatat tctaatgata
781 aacagtaatg gcaacttagt tgcaccgcgg ggatatttta aattgagaac agggaaaagc
841 tctgtaatga gatcagatgc actcataggc acttgtgtgt ctgaatgtat tacaccaaat
901 ggaagcatcc ccaacgacaa accatttcaa aatgtgaaca aagttacata tggaaaatgc
961 cccaagtata tcaggcaaaa cactttaaag ctggccactg ggatgaggaa tgtaccagaa
1021 aagcaaatca ga
【０１６５】
定義  血球凝集素ＨＡＹサブユニットのインフルエンザＡ型ウイルス（A/eq/Lambourn/92/(H3N8)）ＨＡＩ遺伝子、ゲノムＲＮＡ
アクセッション番号 Ｘ８５０８７； 配列番号：４１
1 atgaagacaa ccattatttt gatactactg acccattggg tctacagtca aaacccaacc
61 agtggcaaca acacagccac attatgtctg ggacaccatg cagtagcaaa tggaacattg
121 gtaaaaacaa taactgatga ccaaattgag gtgacaaatg ctactgaatt agttcagagc
181 atttcaatag ggaaaatatg caacaactca tatagggttc tagatggaag aaattgcaca
241 ttaatagatg caatgctagg agacccccat tgtgatgatt ttcagtatga gaattgggac
301 ctcttcatag aaagaagcag tgctttcagc aattgctacc catatggcat ccctgactat
361 gcatcgctcc ggtccattgt agcatcctca ggaacattag aattcacagc agaggggttc
421 acatggacag gtgtcactca aaacggaaga agtggagcct gcaaaagggg atcagccgat
481 agtttcttta gccgactcaa ttggctaaca aaatctggaa attcttaccc catattgaat
541 gtgacaatgc ctaacaataa aaatttcgat aaactataca tctgggggat tcatcacccg
601 agctcaaaca aagagcagac aaaattatat atccaagaat caggacgagt aacagtctca
661 acagaaagaa gtcaacaaac agtaatccct aacatcggat ctaggccgtg ggtcaggggt
721 caatcaggca ggataagcat atactggacc attgtaaaac ctggagatat tctaatgata
781 aacaataatg gcaacttagt tgcaccgcgg ggatatttta aattgagaac agggaaaagc
841 tctgtaatga gatcagatgc actcatagac acttgtgtgt ctgaatgtat tacaccaaat
901 ggaagcatcc ccaacgacaa accatttcaa aatgtgaaca aagttacata tggaaaatgc
961 cccaagtata tcaggcaaaa cactttaaag ctggccactg ggatgaggaa tataccagaa
1021 aagcaaatca ga
【０１６６】
定義  血球凝集素ＨＡＹサブユニットのインフルエンザＡ型ウイルス（A/eq/Ella/89/(H3N8)）ＨＡＩ遺伝子、ゲノムＲＮＡ
アクセッション番号 Ｘ８５０８６； 配列番号：４２
1 atgaagacaa ccattatttt gatactactg acccattggg tctacagtca aaacccaacc
61 agtggcaaca acacagccac attatgtctg ggacaccatg cagtagcaaa tggaacattg
121 gtaaaaacaa taactgatga ccaaattgag gtgacaaatg ctactgaatt agttcagagc
181 atttcaatag ggaaaatatg caacaactca tatagggttc tagatggaag aaattgcaca
241 ttaatagatg caatgctagg agacccccac tgtgatgttt ttcagtatga gaattgggac
301 ctcttcatag aaagaagcag cgctttcagc aattgctacc catatgacat ctctgactat
361 gcatcgctcc ggtccattgt agcatcctca ggaacattag aattcacagc agagggattc
421 acatggacag gtgtcactca aaacggaaga agtggagcct gcaaaagggg atcagccgat
481 agtttcttta gccgactgaa ttggctaaca aaatctggaa attcttaccc catattgaat
541 gtgacaatgc ctaacaataa aaatttcgat aaactataca tctgggggat tcatcacccg
601 agctcaaaca aagagcagac aaaattgtat atccaagaat caggacgagt aacagtctca
661 acagaaagaa gtcaacaaac agtaatccct aacatcggat ctagaccgtg ggtcaggggt
721 caatcaggca ggataagcat atactggacc attgtaaaac ctggagatat tctaatgata
781 aacagtaatg gcaacttagt tgcaccgcgg ggatatttta aattgagaac agggaaaagc
841 tctgtaatga gatcagatgc acccataggc acttgtgtgt ctgaatgtat tacaccaaat
901 ggaagcatcc ccaacgacaa accatttcaa aatgtgaaca aagttacata tggaaaatgc
961 cccaagtata tcaggcaaaa cactttaaag ctggccactg ggatgaggaa tgtaccagaa
1021 aagcaaatca ga
【０１６７】
定義  血球凝集素ＨＡＹサブユニットのインフルエンザＡ型ウイルス(A/eq/Arundel/91/(H3N8))ＨＡＩ遺伝子、ゲノムＲＮＡ
アクセッション番号 Ｘ８５０８５； 配列番号：４３
1 atgaagacaa ccattatttt gatactactg acccattggg tctacagtca aaacccaacc
61 agtggcaaca acacagccac attatgtctg ggacaccatg cagtagcaaa tggaacattg
121 gtaaaaacaa taactgatga ccaaattgag gtgacaaatg ctactgaatt agttcagagc
181 atttcaatag ggaaaatatg caacaactca tatagagttc tagatggaag aaattgcaca
241 ttaatagatg caatgctagg agacccccac tgtgatgtct ttcagtatga gaattgggac
301 ctcttcatag aaagaagcag cgctttcagc aattgctacc catatgacat ccctgactat
361 gcatcgctcc ggtccattgt agcatcctca ggaacattag aattcacagc agagggattc
421 acatggacag gtgtcactca aaacggaaga agtggagcct gcaaaagggg atcagccgat
481 agtttcttta gccgactgaa ttggctaaca aaatctggaa attcttaccc catattgaat
541 gtgacaatgc ctaacaataa aaatttcgat aaactataca tctgggggat tcatcacccg
601 agctcaaaca aagagcagac aaaattgtac atccaagaat caggacgagt aacagtctca
661 acaaaaagaa gtcaacaaac aataatccct aacatcggat ctagaccgtg ggtcaggggt
721 caatcaggca ggataagcat atactggacc attgtaaaac ctggagatat cctaatgata
781 aacagtaatg gcaacttagt tgcaccgcgg ggatatttta aattgagaac agggaaaagc
841 tctgtaatga gatcagatgc acccatagac atttgtgtgt ctgaatgtat tacaccaaat
901 ggaagcatcc ccagcgacaa accatttcaa aatgtaaaca aagttacata tggaaaatgc
961 cccaagtata tcaggcaaaa cactttaaag ctggccactg ggatgaggaa tgtaccagaa
1021 aagcaaatca ga
【０１６８】
定義  血球凝集素のインフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Suffolk/89(H3N8)）ＨＡ遺伝子
アクセッション番号 Ｘ６８４３７； 配列番号：４４
1 ctgtcaatca tgaagacaac cattattttg atactactga cccattgggt ctacagtcaa
61 aacccaacca gtggcaacaa cacagccaca ttatgtctgg gacaccatgc agtagcaaat
121 ggaacattgg taaaaacaat aactgatgac caaattgagg tgacaaatgc tactgaatta
181 gttcagagca tttcaatagg gaaaatatgc aacaactcat atagggttct agatggaaga
241 aattgcacat taatagatgc aatgctagga gacccccact gtgatgtttt tcagtatgag
301 aattgggacc tcttcataga aagaagcagc gctttcagca attgctaccc atatgacatc
361 cctgactatg catcgctccg gtccattgta gcatcctcag gaacattaga attcacagca
421 gagggattca catggacagg tgtcactcaa aacggaagaa gtggagcctg caaaagggga
481 tcagccgata gtttctttag ccgactgaat tggctaacaa aatctggaaa ttcttacccc
541 atattgaatg tgacaatgcc taacaataaa aatttcgata aactatacat ctgggggatt
601 catcacccga gctcaaacaa agagcagaca aaattgtata tccaagaatc aggacgagta
661 acagtctcaa cagaaagaag tcaacaaaca gtaatcccta acatcggatc tagaccgtgg
721 gtcaggggtc aatcaggcag gataagcata tactggacca ttgtaaaacc tggagatatt
781 ctaacgataa acagtaatgg caacttagtt gcaccgcggg gatattttaa attgagaaca
841 gggaaaagct ctgtaatgag atcagatgca cccatagaca cttgtgtgtc tgaatgtatt
901 acaccaaatg gaagcatccc caacgacaaa ccatttcaaa atgtgaacaa agttacatat
961 ggaaaatgcc ccaagtatat caggcaaaac actttaaagc tggccaccgg gatgaggaat
1021 gtaccagaaa agcaaatcag aggaatcttt ggagcaatag cgggattcat agaaaacggc
1081 tgggaaggaa tggttgatgg gtggtatgga ttccgatatc aaaactcgga aggaacagga
1141 caagctgcag atctaaagag cactcaagca gccatcgacc agatcaatgg aaaattaaac
1201 agagtgattg aaaggaccaa tgagaaattc catcaaatag agaaggaatt ctcagaagta
1261 gaagggagaa tccaggattt ggagaagtat gtagaagaca ccaaaataga cctatggtcc
1321 tacaatgcag aattgctggt ggctctagaa aatcaacata caattgactt aacagatgca
1381 gaaatgaata aattattcga gaagactagg cgccagttaa gagaaaacgc ggaagacatg
1441 ggaggtggat gtttcaagat ttaccacaaa tgtgataatg catgcattgg atcaataaga
1501 aatgggacat atgaccatta catatacaga gatgaagcat taaacaaccg atttcaaatc
1561 aaaggtgttg agttgaaatc aggctacaaa gattggatac tgtggatttc attcgccata
1621 tcatgcttct taatttgcgt tgttctattg ggtttcatta tgtgggcttg ccaaaaaggc
1681 aacatcagat gcaacatttg catttgagta aactgatagt taaaaacacc cttgtttcta
1741 ct
【０１６９】
定義  血球凝集素インフルエンザＡ型ウイルス（A/equine/Newmarket/1/77(H7N7)）遺伝子
アクセッション番号 Ｘ６２５５４； 配列番号：４５
1 nnnnnnnnnn nnnnnnnnna aatgaacact cagattctaa tattagccat ttcggcattc
61 ctctgtgtac gtgcagataa aatctgccta ggacatcatg ctgtgtctaa tggaaccaaa
121 gtagacaccc ttactgaaaa gggaatagaa gtcgtcaatg caacagaaac agttgaacaa
181 aaaaacatcc ccaagatctg ctcaaaaggg aaacagacta ttgaccttgg tcaatgtgga
241 ttactaggga ccactattgg tcccccccaa tgcgaccaat ttcttgaatt ctctgctaat
301 ttaataattg agagaagaga aggtgatgat atttgttatc caggcaaatt tgacaatgaa
361 gaaacattga gacaaatact cagaaaatcc ggaggaatta aaaaggagaa tatgggattc
421 acatataccg gagtgagaac caatggagag actagcgcct gtagaaggtc aagatcttcc
481 ttttatgcag aaatgaaatg gctcctatct aacacagaca atggggtatt cccacaaatg
541 acaaaatcct acaagaacac taagaaggag ccagctctga taatctgggg aatccaccac
601 tcaggatcaa ctgctgaaca gactagattg tatggaagtg gaaacaagtt gataacagtt
661 tggagttcca aataccaaca atcttttgcc ccaaaccctg gaccaaggcc gcaaatgaat
721 ggccaatcag gaagaattga cttttactgg ctgatgttag atcccaatga tactgttaat
781 ttcagtttta atggggcctt tatagcacct gaccgcgcca gttttctaag aggtaaatct
841 ctaggaattc agagtgacgc acaacttgac aacaattgtg aaggtgaatg ttatcatatt
901 ggaggtacca taattagcaa cttgcccttt caaaacatta atagcagagc aattgggaaa
961 tgccccagat acgtaaagca aaaaagctta atgctagcaa ccggaatgaa aaatgttcct
1021 gaaaattcta cacacaaaca gttaactcat cacatgcgca aaaaaagagg tttatttggt
1081 gcaatagcag gatttattga aaatggatgg gaaggattaa tagatggatg gtatggatac
1141 agacatcaga atgcacaagg agaaggaact gctgcagact acaaaagtac acaatctgct
1201 gtcaatcaaa taaccgggaa attaaacaga ctaatagaaa aaaccaacca gcaatttgaa
1261 ctaatagata atgaattcaa tgaaatagaa aagcaaattg gcaatgttat taactggact
1321 agagattcta tcatcgaaat atggtcatat aatgcagaat tcctcgtggc agtggagaat
1381 caacacacta ttgatttaac tgattcagag atgaacaaat tatatgaaaa ggtaagaaga
1441 cagctgagag aaaatgctga ggaagatggt aatggctgtt ttgaaatatt tcaccaatgt
1501 gacaatgatt gcatggccag cattagaaac aatacatatg atcataaaaa atacagaaag
1561 gaggcaatac aaaacagaat tcagattgat gcagtaaagt tgagcagcgg ttacaaagaa
1621 ataatacttt ggtttagctt cggggcatca tgtttcttat ttcttgccat tgcaatggtt
1681 cttgctttca tatgcataaa aaatggaaac atgcggtgca ctatttgtat ataagtttga
1741 aaaaacaccc ttgtttctan n
【０１７０】
定義  血球凝集素インフルエンザＡ型ウイルスＨＡ部分遺伝子、ゲノムＲＮＡ、A/equine/Newmarket-Bob Champion/89(H3N8)株.
アクセッション番号 ＡＪ２２３１９３； 配列番号：４６
1 agtcaaaacc caaccagtgg caacaacaca gccacattat gtctgggaca ccatgcagta
61 gcaaatggaa cattggtaaa aacaataact gatgaccaaa ttgaggtgac aaatgctact
121 gaattagttc agagcatttc aatagggaaa atatgcaaca actcatatag ggttctagat
181 ggaagaaatt gcacattaat agatgcaatg ctaggagacc cccactgtga tgtttttcag
241 tatgagaatt gggacctctt catagaaaga agcagcgctt tcagcaattg ctacccatat
301 gacatccctg actatgcatc gctccggtcc attgtagcat cctcaggaac attagaattc
361 acagcagagg gattcacatg gacaggtgtc actcaaaacg gaagaagtgg agcctgcaaa
421 aggggatcag ccgatagttt ctttagccga ctgaattggc taacaaaatc tggaaattct
481 taccccatat tgaatgtgac aatgcctaac aataaaaatt tcgataaact atacatctgg
541 gggattcatc acccgagctc aaacaaagag cagacaaaat tgtatatcca agaatcagga
601 cgagtaacag tctcaacaga aagaagtcaa caaacagtaa tccctaacat cggatctaga
661 ccgtgggtca ggggtcaatc aggcaggata agcatatact ggaccattgt aaaacctgga
721 gatattctaa tgataaacag taatggcaac ttagttgctc cgcggggata ttttaaattg
781 agaacaggga aaagctctgt aatgagatca gatgcaccca tagacacttg tgtgtctgaa
841 tgtattacac caaatggaag catccccaac gacaaaccat ttcaaaatgt gaacaaagtt
901 acatatggaa aatgccccaa gtatatcagg caaaacactt taaagctggc cactgggatg
961 aggaatgtac cagaaaagca aatcagagga atctttggag caatagaggg attcatagaa
1021 aacggctggg aaggaatggt tgatgggtgg tatggattcc gatatcaaaa ctcggaagga
1081 acaggacaag ctgcag
【０１７１】
定義 血球凝集素前駆体のインフルエンザＡ型ウイルス（A/Equine/NewMarket/D64/79(H3N8)）遺伝子、部分的ＣＤＳ
アクセッション番号 Ｄ３０６７７； 配列番号：４７
1 ctgtcaatca tgaagacaac cattattttg atactactga cccattgggt ctacagtcaa
61 aacccaacca gtggcaacaa cacagccaca ctatgtctgg gacaccatgc agtagcaaat
121 ggaacattgg taaaaacaat aactgatgac caaattgagg tgacaaatgc cactgaatta
181 gttcagagca cttcaatagg gaaaatatgc aacaacccat atagggttct agatggaaga
241 aactgcacat taatagatgc aatgctagga gatccccact gtgatgtttt tcagtatgag
301 aattgggacc tcttcataga aagaagcagc gctttcagca attgctaccc atatgacatc
361 cctgactatg catcgctccg gtctattgtg gcatcttcag gaacattaga attcacagca
421 gagggattca catggacagg tgtcactcaa aacggaagaa gtggcgcctg cagaagggga
481 tcagccgata gtttctttag ccgactgaat tggctaacaa aatctggaga ttcttacccc
541 acattgaatg tgacaatgcc taacaataac aatttcgata aactatacat ctgggggatc
601 catcacccga gcacaaacaa tgagcagaca aaattgtatg tccaagaatc agggcgagta
661 acagtctcaa caaaaagaag tcaacaaaca ataatcccca acatcggatc tagaccgtgg
721 gtcaggggtc aaccaggcag gataagcata tattggacca ttgtgaaacc tggagatatc
781 ctaatgataa acagtaatgg caacttagtt gcaccgcggg gatatttcaa aatgcgaaca
841 ggaaaaagct ctataatgag atcagatgca cccatagaca cttgtgtgtc cgagtgtatt
901 acaccaaatg gaagcatccc caacgacaaa ccatttcaaa atgtgaacaa agttacatat
961 gggaaatgcc ccaagtatat caagcagaat actttgaagc tggccactgg gatgaggaat
1021 gtaccagaaa agcaaatcag aggaatcttt ggagcaatag cgggattcat agaaaatggc
1081 tgggag
【０１７２】
定義  インフルエンザＡ型ウイルス（A/eq/Newmarket/1/77(H7N7)）マトリックスタンパク質Ｍ１及びＭ２（Ｍ）遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＦ００１６８６； 配列番号：４８
1 atgagtcttc tgaccgaggt cgaaacgtac gttctctcta tcgtaccatc aggccccctc
61 aaagccgaga tcgcgcagag acttgaagat gtctttgcag gaaagaacac cgatcttgag
121 gcactcatgg aatggctaaa gacaagacca atcctgtcac ctctgactaa ggggatttta
181 ggatttgtgt tcacgctcac cgtgcccagt gagcgaggac tgcagcgtag acgctttgtc
241 caaaatgccc ttaatgggaa cggagatcca aacaacatgg acagagcagt aaaactgtac
301 aggaagctta aaagggaaat aacattccat ggggcaaaag aggtggcact cagctattcc
361 actggtgcac tagccagctg catgggactc atatacaaca gaatggggac tgtgacaacc
421 gaagtggcat ttggcctggt atgcgccaca tgtgaacaga ttgctgattc ccagcaccga
481 tctcacagac agatggtgac aacaaccaac ccactaatca gacacgagaa cagaatggta
541 ctagccagta ccacagctaa agccatggag cagatggcag ggtcgagtga gcaggcagca
601 gaggccatgg aggttgctag tcaggccagg cagatggtgc aggcaatgag aaccattggg
661 acccacccta gctccagtgc cggtttgaaa aatgatcttc ttgaaaattt gcaggcctac
721 cagaaacgga tgggagtgca aatgcagcga ttcaagtgat cctctcgtta ttgcagcaag
781 tatcattggg atcttgcact tgatattgtg gattcttgat cgtcttttct tcaaatgcat
841 ttatcgtcgt cttaaatacg gtttgaaaag agggccttct acggaaggag tacctgagtc
901 tatgagggaa gaatatcggc aggaacagca gagtgctgtg gatgttgacg atggtcattt
961 tgtcaacata gagctggagt aa
【０１７３】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/eq/Newmarket/79(H3N8)）マトリックスタンパク質Ｍ１及びＭ２（Ｍ）遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＦ００１６７５； 配列番号：４９
1 atgagtcttc taaccgaggt cgaaacgtac gttctctcta tcgtaccatc aggccccctc
61 aaagccgaga tcgcgcagag acttgaagat gtctttgcag ggaagaacac cgatcttgag
121 gcactcatgg aatggctaaa gacaagacca atcctgtcac ctctgactaa agggatttta
181 ggatttgtgt tcacgctcac cgtgcccagt gagcgaggac tgcagcgtag acgctttgtc
241 caaaatgccc ttagtggaaa cggagatcca aacaacatgg acagagcagt aaaactgtac
301 aggaagctta aaagagaaat aacattccat ggggcaaaag aggtggcact cagctattcc
361 actggtgcac tagccagctg catgggactc atatacaaca gaatggggac tgtgacaacc
421 gaagtggcat ttggcctggt atgcgccaca tgtgaacaga ttgctgattc ccagcatcga
481 tctcacaggc agatggtgac aacaaccaac ccactaatca gacatgaaaa cagaatggta
541 ctagccagta ccacagctaa agccatggag cagatggcag ggtcgagtga gcaggcagca
601 gaggccatgg aggttgctag taaggccagg cagatggtac aggcaatgag gaccattggg
661 acccacccta gctccagtgc cggtttgaaa gatgatcttc ttgaaaattt gcaggcctac
721 cagaaacgga tgggagtgca aatgcagcga ttcaagtgat cctctcgtta ttgcagcaag
781 tatcattggg atcttgcact tgatattgtg gattcttgat cgccttttct tcaaattcat
841 ttatcgtcgc cttaaatacg gtttgaaaag agggccttct acggaaggag tacctgagtc
901 tatgagggaa gaatatcggc aggaacagca gaatgctgtg gatgttgacg atggtcattt
961 tgtcaacata gagctggagt aa
【０１７４】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/eq/Newmarket/1/77(H7N7)）非構造タンパク質ＮＳ１及びＮＳ２（ＮＳ）遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号 ＡＦ００１６６３； 配列番号：５０
1 atggattcca acactgtgtc aagctttcag gtagactgtt ttctttggca tgtccgcaaa
61 cgatttgcag accaagaact gggtgatgcc ccattccttg accggcttcg ccgagaccag
121 aagtccctaa aaggaagagg cagcactctt ggtctggaca tcgaaacagc cactcatgca
181 ggaaagcaga tagtggagcg aattctggaa gaggaatcag atgaggcact taaaatgacc
241 atagcctctg ttcctacttc acgctactta actgacatga ctcttgatga gatgtcaaga
301 gactggttca tgctcatgcc caagcagaaa gtaacaggct ccctatgtat aaggatggac
361 caagcaatca tggataagaa catcatacta aaagcaaact ttagtgtgat tttcgaaagg
421 ctggagacac taatactact tagagctttc accgaagaag gagcagtcgt tggcgaaatt
481 tcaccattgc cttctcttcc aggacatact aatgaggatg tcaaaaatgc aattggggtc
541 ctcatcggag gacttaaatg gaatgataac acagttagag tctctgaaac tctacagaga
601 ttcgcttgga gaagcagtca tgagaatggg agaccttcat tccctccaaa gcagaaacga
661 aaaatggcga gaacaattga gtcagaagtt tgaagaaata aggtggttga ttgaagaagt
721 gagacataga ttgaaaaata cagaaaatag ttttgaacaa ataacattta tgcaagcctt
781 acaactattg cttgaagtag aacaagagat aagaactttc tcgtttcagc ttatttaa
【０１７５】
定義 インフルエンザＡ型ウイルス（A/eq/Newmarket/D63/79(H3N8)）非構造タンパク質ＮＳ１及びＮＳ２（ＮＳ）遺伝子、完全ＣＤＳ
アクセッション番号  ＡＦ００１６６２； 配列番号：５１
1 atggattcca acactgtgtc aagctttcag gtagactgtt ttctttggca tgtccgcaaa
61 cgatttgcag accaagaact gggtgatgcc ccattccttg accggcttcg ccgagaccag
121 aagtccctaa aaggaagagg cagcactctt ggtctggaca tcgaaacagc cactcgtgca
181 ggaaagcaga tagtggagcg gattctggaa gaggagtcag atgaggcact taaaatgacc
241 attgcctctg ttcctgcttc acgctactta actgacatga ctcttgatga gatgtcaaga
301 gactggttca tgctcatgcc caagcagaaa gtaacaggct ccctatgtat aaggatggac
361 caggcaatca tggataagaa catcatacta aaagcaaact ttagtgtgat tttcgaaagg
421 ctggagacac taatactact tagagccttc accgaagaag gagcagtcgt tggcgaaatt
481 tcaccattgc cttctcttcc aggacatact aatgaggatg tcaaaaatgc aattggggtc
541 ctcatcggag gacttaaatg gaatgataat acagttagag tctctgaaac tctacagaga
601 ttcgcttgga gaagcagtca tgagaatggg agaccttcat tccctccaaa gcagaaacga
661 aaaatggcga gaacaattga gccagaagtt tgaagaaata agatggttga ttgaagaagt
721 gcgacataga ttgaaaaata cagaaaatag ttttgaacaa ataacattta tgcaagcctt
781 acaactattg cttgaagtag aacaagagat aagaactttc tcgtttcagc ttatttaa
【実施例６】
【０１７６】
不活化インフルエンザウイルスワクチンのイヌにおける効果
９〜１１日齢の孵化鶏卵、或いはＭＤＣＫ細胞等の連続細胞培養物のいずれかにおいてワクチン活性成分（ＡＩ）を作製した。
【０１７７】
卵の作出、回収、及び精製  孵化鶏卵におけるワクチンＡＩ産物は、１００〜１０００ＥＩＤ５０（鶏卵感染量）を含有するウイルス懸濁液０．１〜０．２５ｍｌを尿膜腔に接種することにより調製する。３３〜３７℃で２〜６日インキュベーションした後、尿膜液を回収し、プールする。このウイルスプールを１５００〜４０００ｇで５〜１５分間遠心分離にかけて清澄化し、２０μｍフィルターで濾過する（１）。このウイルスは、３００ＫＤａの膜を用いる限外濾過により、最大濃縮係数を２０として濃縮してもよい（２）。
【０１７８】
さらに、濃縮ウイルスを必要に応じて精製してもよい。かかる精製は、スクロース勾配法によるゾーン限外遠心分離並びにその後の０．５μｍ膜を用いるウイルス含有画分の濾過によって行うが、このステップは繰り返してもよい。ウイルス含有画分をリン酸緩衝液等の適当な緩衝液で希釈する（３）。
【０１７９】
さらなる精製は、最終濃度（ｗ／ｖ）が０．１％、及び最終濃度（ｗ／ｗ）が５０％のTween／エーテルでそれぞれ処理することからなる。得られる溶液を遠心分離にかけて水性相を回収する。このステップは繰り返してもよい。水性相を窒素処理して残留エーテルを除去する（４）。
【０１８０】
細胞培養物の作製、回収、及び精製  ０．００１〜１ＴＣＩＤ５０のＭＯＩ率で接種することにより、細胞（ＭＤＣＫ、ＢＨＫ、ＰｅｒＣ６細胞など）内で活性成分を調製する。３５〜３７℃で４８〜９６時間インキュベーションした後、細胞変性効果（ＣＰＥ）が約５０〜９０％のときに培養物を回収する。培養物を超音波分解し、１５００〜４０００ｇで５〜１５分間遠心分離にかける（１）。このウイルスを、３００ＫＤの膜を用いる限外濾過により、最大濃縮係数を２０として濃縮する（２）。
【０１８１】
ウイルスは、必要に応じ、排除クロマトグラフィー（セファロース６高速流）により精製してもよい（３）。
【０１８２】
不活化  ホルマリン又はβ−プロピオラクトンをそれぞれ最終濃度が０．０５％（ｗ／ｖ）又は０．０１％（ｗ／ｖ）になるように加えてウイルス（画分１、２、３又は４）を不活化し、懸濁液をそれぞれ５℃で１６〜１８時間又は２０℃で２５〜３６時間、連続攪拌下で保持する。
【０１８３】
活性成分が不活化していることは、孵化鶏卵又はＭＤＣＫ細胞に接種することのより確認される。
【０１８４】
最終ワクチンの調製  ワクチンは、不活化インフルエンザウイルスと、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、カルボマー又は油−水エマルジョン等のアジュバントとからなり、ＣｐＧ（１〜１００ｕｇ／用量）等の他の免疫刺激成分を含んでいてもよい。一般的にワクチンは、一元放射免疫拡散法（ＳＲＤ）による測定値として１５〜５０μｇ量、又は血球凝集素単位で４００を上回る量の血球凝集素を含有する。
【０１８５】
ワクチンは、皮下又は筋肉内のいずれかの経路で投与される。４週齢以上の子イヌに２〜５週間の間隔を空けて２用量を投与する。免疫期間：初回のワクチン接種過程後の６〜１２ヵ月。
【０１８６】
ワクチン接種／チャレンジ接種のプロトコール  イヌ（４週齢未満）に不活化ワクチン２用量を３〜４週間の間隔を空けて皮下経路により接種する。１回目及び２回目のワクチン接種当日、並びに２回目のワクチン接種から２〜４週間後に血液試料を回収し、ウイルス中和反応、血球凝集阻害法、ＥＬＩＳＡ、又は一元放射溶血試験（ＳＲＨ）により抗インフルエンザウイルス特異的抗体量を測定する。
【０１８７】
２回目の免疫化の２〜４週間後に、イヌにインフルエンザＨ３Ｎ８型悪性株をチャレンジ接種し、ワクチンの効果を測定する。
【０１８８】
ワクチン接種犬及び対照犬に以下の経路でチャレンジ接種を行う。
スプレー：  動物を閉鎖コンテナーに収容し、或いはイヌの鼻にマスクをあて、ウイルス懸濁液をエアロゾル化して１〜１００μＭの液滴を作出する。エアロゾルを噴霧したチャンバーに動物を３０分間放置し、エアロゾルを吸入させる。
【０１８９】
あるいは、以下のいずれかの経路によってチャレンジ接種を行うこともできる。
鼻腔内：  チャレンジ接種用ウイルスを１０５〜８ＥＩＤ５０で含む０．５ｍｌを各鼻孔にドロッパーを利用して液下する。
気管内：  １０５〜８ＥＩＤ５０ウイルスを含む１〜２ｍｌを直接、気管に注入する。
経口：  チャレンジ接種用ウイルスを１０５〜８ＥＩＤ５０で含む５〜１０ｍｌを経口投与する。
【０１９０】
チャレンジ接種後１４日間、動物における発熱、咳、鼻漏、眼漏、呼吸困難、食欲不振、昏睡などの臨床兆候を毎日観察する。さらに、動物群を安楽死させ、肺及び胸膜の出血、気管炎、気管支炎、細気管支炎、気管支肺炎の病理知見を調べる。
【０１９１】
免疫化後１〜１４日に全ての動物から気管スワブを回収し、ウイルスを単離する。
【０１９２】
チャレンジ接種の３、７及び１０日後に呼吸器組織におけるウイルス抗原の有無を免疫組織化学法で評価する。
【０１９３】
チャレンジ接種の７及び１４日後に血液試料を回収し、抗インフルエンザＨ３Ｎ８型ウイルス特異的抗体の有無を分析する。
【０１９４】
以下の番号付段落によって本発明をさらに説明する。
１．インフルエンザに対する免疫応答をイヌに誘発する方法であって、インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原をコードするポリヌクレオチドを含むアビポックス発現ベクター、及び薬学上若しくは獣医学上許容される担体、賦形剤若しくは媒体を、免疫応答誘発に有効な量で含む製剤を投与することを含む方法。
２．インフルエンザに対する免疫応答をイヌに誘導する方法であって、インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原をコードするポリヌクレオチドを含むアビポックス発現ベクター、及び薬学上若しくは獣医学上許容される担体、賦形剤若しくは媒体を、免疫応答誘導に有効な量で含む製剤を投与することを含む方法。
３．製剤がさらにアジュバントを含む段落１又は２の方法。
４．インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原が、血球凝集素、マトリックスタンパク質、膜タンパク質、ノイラミニダーゼ、非構造タンパク質、核タンパク質、ポリメラーゼ、及びそれらの断片からなるグループから選択される段落１〜３いずれかの方法。
５．インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原が、インフルエンザに感染したイヌから単離される段落１〜４いずれかの方法。
６．インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原が、感染犬に対する気管支肺胞洗浄により又は感染犬の肺組織から単離される段落５の方法。
７．インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原が、ウマインフルエンザから単離される段落１〜４いずれかの方法。
８．ウマインフルエンザが、オハイオウマインフルエンザ、ケンタッキーウマインフルエンザ、又はニューマーケットウマインフルエンザである段落７の方法。
９．アビポックス発現ベクターが、弱毒化されたアビポックス発現ベクターである段落１〜８いずれかの方法。
１０．アビポックス発現ベクターが、カナリア痘ベクターである段落９の方法。
１１．カナリア痘ベクターが、ＡＬＶＡＣである段落１０の方法。
１２．インフルエンザ抗原、エピトープ、又は免疫原が、血球凝集素である段落１０又は１１の方法。
１３．血球凝集素が、Ｈ３である段落１２の方法。
１４．カナリア痘ベクターが、ＣＰ１５２９又はＣＰ１５３３である段落１２又は１３の方法。
１５．インフルエンザに対する免疫応答をイヌに誘発する方法であって、不活化インフルエンザワクチン及び薬学上又は獣医学上許容される担体、賦形剤若しくは媒体を免疫応答誘発に有効な量で含む製剤を投与することを含む方法。
１６．インフルエンザに対する免疫応答をイヌに誘導する方法であって、不活化インフルエンザワクチン及び薬学上又は獣医学上許容される担体、賦形剤若しくは媒体を免疫応答誘導に有効な量で含む製剤を投与することを含む方法。
１７．製剤がさらにアジュバントを含む段落１５又は１６の方法。
１８．不活化インフルエンザワクチンが、不活化イヌインフルエンザである段落１５〜１７いずれかの方法。
１９．不活化インフルエンザワクチンが、不活化ウマインフルエンザである段落１５〜１７いずれかの方法。
２０．ウマインフルエンザが、オハイオウマインフルエンザ、ケンタッキーウマインフルエンザ、ニューマーケットウマインフルエンザである段落１９の方法。
２１．不活化インフルエンザワクチンが、ホルマリン又はβ−プロピオラクトンで不活化される段落１５〜２０いずれかの方法。
２２．アジュバントが、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、カルボマー、又は油−水エマルジョンである段落１７〜２１いずれかの方法。
２３．アジュバントが、ＣｐＧをさらに含む段落１７〜２２いずれかの方法。
２４．投与が、皮下投与又は筋肉内投与である段落１５〜２３いずれかの方法。
２５．段落１〜＊いずれかのワクチンと、段落１〜２４いずれかの方法を行うための指示書とを含む、段落１〜２４いずれかの方法を行うためのキット。
【０１９５】
このように本発明の好ましい実施形態について詳細に記載したが、本発明の趣旨又は範囲から逸脱することなく本発明に多くの自明の変更を施すことができるため、上記段落で定義される本発明は、上述してきた記載中の特定の詳細に限定されるべきではないと理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【０１９６】
【図１−１】ＰＪＴ００４への挿入物の配列を示す図である（配列番号１）。
【図１−２】ＰＪＴ００４への挿入物の配列を示す図である（配列番号１）。
【図２−１】ＰＪＴ００５への挿入物の配列を示す図である（配列番号２）。
【図２−２】ＰＪＴ００５への挿入物の配列を示す図である（配列番号２）。
【図３】ＥＩＶオハイオ０３株ＨＡのアミノ酸配列をニューマーケット株Ｈ３ＨＡのアミノ酸配列と比較した結果を示す図である（配列番号３及び４）。
【図４Ａ】コドン最適化されたＥＩＶ Ｈ３ ＨＡ（オハイオ０３）を発現するＡＬＶＡＣ組換体を作製するためのＡＬＶＡＣドナープラスミドの構築を示す図である。
【図４Ｂ】pALVAC C5 H6p合成型ＥＩＶ Ｈ３ ＨＡ、pJY1571.1を示す図である。
【図５Ａ】ＥＩＶ Ｈ３ ＨＡプロダクトの推定アミノ酸配列を示す図である。
【図５Ｂ−１】アーム及び挿入物の翻訳付きヌクレオチド配列を示す図である。
【図５Ｂ−２】アーム及び挿入物の翻訳付きヌクレオチド配列を示す図である。
【図５Ｂ−３】アーム及び挿入物の翻訳付きヌクレオチド配列を示す図である。
【図５Ｂ−４】アーム及び挿入物の翻訳付きヌクレオチド配列を示す図である。
【図５Ｂ−５】アーム及び挿入物の翻訳付きヌクレオチド配列を示す図である。
【図５Ｂ−６】アーム及び挿入物の翻訳付きヌクレオチド配列を示す図である。
【図６】vCP2242のウエスタンブロッティングを示す図である。プールされた抗ＥＩＶ抗体の１０００倍希釈液を使って分析した。１列目：Fermentas Prestainタンパク質マーカー５μｌ、２列目：ＡＬＶＡＣ細胞ペレット１５μｌ、３列目：vCP2242．細胞ペレット１５μｌ、４列目：vCP2242．細胞ペレット１５μｌ、５列目：vCP1533．細胞ペレット１５μｌ、６列目：スペース、７列目：ＡＬＶＡＣ上清４０μｌ、８列目：vCP2242．上清４０μｌ、９列目：vCP2242．上清４０μｌ、１０列目：vCP1533．上清４０μｌ。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ−１】
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【図５Ｂ−２】
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【図５Ｂ−３】
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【図５Ｂ−４】
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【図５Ｂ−５】
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【図５Ｂ−６】
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【図６】
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【国際調査報告】
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