(57)【要約】  本発明は、リプロダクティブヘルス手順の首尾よい成り行きと、ある集団の患者に対して選択された分析的様式を使用して得られた体液のスペクトル間の相関関係を確立し、選択された様式を使用して患者の体液のスペクトルを当該患者のために獲得することによって、体外受精を含むリプロダクティブヘルス手順にとっての理想的な時期およびリプロダクティブヘルス手順の成り行きを確定するための方法に関する。
2009522381.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のことを含む生殖補助医療（ＡＲＴ）法：
培養培地中で少なくとも１つの胚をｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養すること；
少なくとも１つの胚の状態を確定するために、胚の培養中に時々胚の培養培地を分析的に試験すること；
胚の状態を使用して、少なくとも以下の１つを確定すること：
子宮に胚を移植するための時期；
将来の子宮への移植のための短期間保存に胚を供するための時期；
将来の子宮への移植のための冷凍保存に胚を供するための時期；
胚の培養を継続するための培養培地に対する調整；および
胚の培養を継続するための異なる培養培地に胚を移植するための時期。
【請求項２】
精子を使用して少なくとも１つの卵母細胞を体外受精することによって胚が得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
胚の状態を使用することが培養培地に対する調整を反復して確定することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
状態が着床のための胚の生存能である、請求項１に記載の方法であって、胚を移植するための時期が、着床にとって高い確率閾値に胚が到達する最も早い時期である、方法。
【請求項５】
子宮が哺乳動物子宮である、請求項１〜４に記載の方法であって、哺乳動物がヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ヤギ、およびクジラから選択される、方法。
【請求項６】
卵母細胞、精子および子宮の生存能をそれぞれ卵胞液、精漿、および子宮内膜液を分析的に試験することによって確定することをさらに含む、請求項２に記載の方法であって、卵母細胞、精子および子宮が胚移植のための高い着床または妊娠の確率を示唆する場合に胚が移植される、方法。
【請求項７】
いくつかの卵母細胞が受精され、いくつかの胚が培養され、そして胚が少なくとも前記の状態を使用して移植のために選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
いくつかの卵母細胞が受精され、いくつかの胚が培養され、そして胚が少なくとも部分的に前記の状態を使用して移植のために選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
分析的に試験することが培養培地のスペクトルを得ることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
いくつかの胚の培養培地の記録されたスペクトルと当該数の胚を使用した妊娠の記録された成功間の有効な相関関係を確定することによってスペクトルを較正することをさらに含む請求項９に記載の方法であって、状態がスペクトルに関する相関関係を実施することから確定される、方法。
【請求項１１】
スペクトルが光学スペクトルである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
スペクトルが培養培地の酸化ストレス成分に関連した情報を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
胚が凍結保存される請求項１１に記載の方法であって、凍結保存された培養培地の光学スペクトルを定期的に得ること、および凍結保存中に凍結保存された胚をモニターするために、凍結保存された培養培地の光学スペクトルから状態を確定することをさらに含む、方法。
【請求項１４】
いくつかの卵母細胞が受精され、いくつかの胚が培養され、そして少なくとも前記の状態を使用して移植のために胚が選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
以下のことを含む生殖補助医療（ＡＲＴ）法：
自身の卵胞液中の複数の卵母細胞を抜き出すこと；
卵母細胞の状態を確定するために、卵母細胞それぞれ１つの卵胞液を分析的に試験すること；および
凍結保存および受精の一方にとっての状態を使用して卵母細胞を選択すること。
【請求項１６】
分析的に試験することが卵胞液のスペクトルを得ることを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
いつくかの卵母細胞の卵胞液の記録されたスペクトルと、当該数の卵母細胞を使用した受精および／または妊娠の記録された成功間の有効な相関関係を確定することによって前記スペクトルを較正することをさらに含む、請求項１６に記載の方法であって、状態がスペクトルに関する相関関係を実施することから確定される、方法。
【請求項１８】
スペクトルが光学スペクトルである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
以下のことを含む、患者におけるリプロダクティブヘルス手順の首尾よい成り行きにとっての確率データを生み出す方法：
代謝産物と液体培地を交換する卵母細胞、精子および胚から選択された少なくとも１つの細胞にとっての選択された分析的様式を使用して液体培地中の少なくとも１つの代謝産物のスペクトルを獲得すること；
獲得したスペクトルと、リプロダクティブヘルス手順の首尾よい成り行きと、選択されたある患者集団のための分析的様式を使用して得られた液体培地中の代謝産物のスペクトル間で確立した相関関係を使用して、少なくとも１つの細胞にとっての確率データを生み出すこと。
【請求項２０】
分析的様式が多波長光学吸収である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
分析的様式が光学ラマン散乱および光学蛍光の１種である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
光学スペクトルが短波長近赤外である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
光学スペクトルが近赤外である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
選択された分析的様式がＮＭＲである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
少なくとも１つの細胞が卵母細胞である、請求項１９〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
少なくとも１つの細胞が胚である、請求項１９〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
リプロダクティブヘルス手順が体外受精である、請求項１９〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
リプロダクティブヘルス手順が妊娠中毒症に関連する、請求項１９〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
リプロダクティブヘルス手順がＩＡＩまたは羊膜内炎症に関連する、請求項１９〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
リプロダクティブヘルス手順が早期陣痛／早産に関連する、請求項１９〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
リプロダクティブヘルス手順が再発性流産／妊娠中絶に関係する、請求項１９〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
リプロダクティブヘルス手順が胚着床に関連する、請求項１９〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
リプロダクティブヘルス手順が性確定に関連する、請求項１９〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
リプロダクティブヘルス手順が環境汚染／感染に関連する、請求項１９〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
リプロダクティブヘルス手順が子宮外妊娠に関連する、請求項１９〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
リプロダクティブヘルス手順が正常妊娠に関連する、請求項１９〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
リプロダクティブヘルス手順が子宮内膜症に関連する、請求項１９〜２４のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
以下のことを含む生殖補助医療（ＡＲＴ）法：
精漿液中の１つ以上の精子の試料を提供すること；
精子の状態を確定するために、該精子の精漿を分析的に試験すること；および
凍結保存および受精の一方にとっての状態を使用して精子を選択すること。
【請求項３９】
分析的に試験することが精漿のスペクトルを得ることを含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
いつくかの精子の精液の記録されたスペクトルと、当該数の精子を使用した受精および／または妊娠の記録された成功間の有効な相関関係を確定することによってスペクトルを較正することをさらに含む、請求項３９に記載の方法であって、状態がスペクトルに関する相関関係を実施することから確定される、方法。
【請求項４１】
スペクトルが光学スペクトルである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
以下のことを含む生殖補助医療（ＡＲＴ）法：
胚の着床にとっての子宮の生存能を確定するために、患者の子宮の子宮内膜液を分析的に試験すること；および
生存能を使用して着床の時期を確定すること。
【請求項４３】
生存能が弱い場合、試験を反復し、生存能がより強い場合、着床の時期が確定される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
生存能を改善するために、規定食、休息／運動、および医学的介入の少なくとも１つが患者に提供される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
子宮内膜液がｉｎ  ｓｉｔｕで光学的に測定され、分析的試験がスペクトルを得ることを含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
何人かの患者の体液の記録されたスペクトルと、当該数の患者を使用した妊娠の記録された成功間の有効な相関関係を確定することによって、スペクトルを較正することをさらに含む、請求項４５に記載の方法であって、状態がスペクトルに対する相関関係を実施することから確定される、方法。
【請求項４７】
培養培地が凍結される、請求項１〜４６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は２００６年１月９日に出願された仮出願番号６０／７５７，２４２に対する優先権を主張し、その開示は参照として本明細書に援用される。
【０００２】
技術分野
本発明は、液体培地中の代謝産物を分析することによって、代謝産物と液体培地を交換する細胞の状態を確定すること、およびその使用に関する。
【０００３】
発明の背景
メタボロミクス
ヒトゲノムシークエンシングの完了により、ゲノム情報だけでは複雑な生物学的システムの生化学的および細胞的機能の包括的な特徴付けを提供することは不可能であることが明らかになってきた。結果として、多くの分子生物学的調査の焦点は、タンパク質ならびに、細胞、組織、または生体といった生物学的試料のような生理的環境中のポリペプチド、ホルモンおよび神経伝達物質（およびそれらの代謝産物）のような小分子の体系的な分析として広範囲に定義されるプロテオミクスおよびメタボロミクスの方にシフトしている。タンパク質および代謝産物は、遺伝子より遙かに数が多く、多様で、不安定であるため、それらの発見、確認、および定量のための既存の道具は研究者や医師の必要性に応じない。
【０００４】
プロテオミクスの重要な一側面は、固有の突然変異または変化した発現レベルを持つタンパク質の確認である。ある期間にわたる、または集団間のタンパク質および代謝産物レベルの差は、疾患状態、薬物処方計画、または代謝変化と相関させることができる。確認された分子種は、問題となっている疾患または異常にとっての生物学的マーカー（バイオマーカー）として役立つ可能性があり、それによって診断、予後および疾患処置の新規な方法が開発される、あるいは患者にとってより適切に適応させることを可能にする。そのようなバイオマーカーを発見するために、異なる試料型間のタンパク質と代謝産物レベルの相対的な差の正確な測定値を得ることが役立ち、そのようなプロセスはディファレンシャルフェノタイピングと呼ばれる。
【０００５】
体外受精（ＩＶＦ）治療
ヒトまたは動物のいずれに適用されるにしても、ＩＶＦを含む生殖補助医療（ＡＲＴ）の分野は多少厳密でない科学または技術である。精子（精子細胞）、卵母細胞（卵）および胚の生存能を査定するための能力は、本質的に顕微鏡下で肉眼的外観によって行われる。これらの細胞の肉眼的外観は多くの場合生存能と十分に相関しない。プロセスを管理するＡＲＴ専門家は、細胞内で何が起こっているかについての他の情報を得ることはできない。生育可能な配偶子が選択され、これらの配偶子が、子宮に首尾よく着床し、続いて健康な子孫を生じることになる生育可能な胚を生じるという希望と共に、全手順が遂行される。少なくとも生存能のいくつかの因子を確定するために１つの細胞を抜き出すことによる胚の遺伝的試験が可能であるが、そのような「侵襲的」手順は胚に不都合な影響を与えうる。現在、エンブリオロジストおよび他のＡＲＴ専門家がＡＲＴ手順のためにこれらの細胞の生存能を効率的に査定するための技術は存在しない。
【０００６】
ＩＶＦは、不妊カップルが利用可能な、最も実現可能な代替え手段であることが証明されていて、他の治療選択肢に優る、適切な「最重要な」手順としてしだいに認識されてきている。
【０００７】
ＩＶＦ手順は、６つの大まかな手続き上のステージに分類しうる：１）卵母細胞の大きなコホート集団を生み出すための不妊治療薬（ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｄｒｕｇ）を使用した雌の刺激；２）卵母細胞の回収；３）雄性配偶子収集および調製、その後卵の受精；４）生じた接合子／胚の増殖培地中での培養；５）胚選択、そして最後に６）胚移植。典型的には、胚着床および妊娠を含む重要な事象は、それ自体手順の制御の範囲外であるため、ＩＶＦプロセスの一部と見なされていない。現時のＩＶＦ業務では、手順のために選択される卵母細胞および胚は、主に主観的な形態学的基準および成長パターン（胚の場合）に基づいて、生育可能であるか、または健康であると推定される；この非常に重大な選択プロセスにおける補助に利用できる生物学的測定基準はない。使用しない胚は典型的には凍結保存される。
【０００８】
ＡＲＴサービスは現在、先天的に不妊でないが、「生殖機能（または生殖能力）を高めるおよび／または保存するための生物時計」を後退（ｐｕｓｈ  ｂａｃｋ）させるか、または制御することを望む患者にも治療の選択肢を提供することを可能にする（生殖能力保存）。他の点では正常な、生殖能力のある集団へのＡＲＴサービスの適用は、妊孕性温存の新規な治療パラダイムを生み出している。たとえば、生殖機能が混乱する可能性のある化学療法を患者が受けている場合、制御された生殖能力猶予に対する必要性がさらに認識されてもよい。
【０００９】
現在、卵母細胞、精子、または胚の選択を可能にし、ＩＶＦ手順の効力または安全性を保証するための実用的な生物学的基準または分析方法はない。結果として、ＩＶＦ手順のフロントエンド（下準備）における卵母細胞の反応能を確実に査定するために利用可能な分析方法がないため、エンブリオロジストは、胚の特性、および推測による元の卵母細胞の特性の指標として、主観的で、標準化されていない胚成長基準および形態学に頼ってきた。
【００１０】
発明の概要
２つの科学的専門分野の合流に基づいて以下の新規な技術基盤が確認されている：１）生体分光法、プロテオミックおよび分子診断バイオマーカーを確認し、定量し、そして実証することができるヒト生物学における異なる形態の分光分析の適用；および２）メタボロミクス、複雑な生物学的プロセスおよび機能を理解するために、（液体および固形組織の両方の）生物学的試料における複数の小分子バイオマーカー間の動的相互作用を調査し、統合する科学。メタボロミクスを利用して、組織および／または細胞型における代謝プロファイルの変化を検討することができる。
【００１１】
生体分光法に基づいたメタボロミクス（ＢＳＭ）という用語を使用して、ここではこの技術基盤を記載する。本明細書ではＢＳＭ基盤を使用して試料のプロテオミックおよび分子バイオマーカーの性質を分析し、その後インフォマティクスを使用してデータを特有の「メタボロミックプロファイル」に変換する。それぞれのプロファイルは特有の「フィンガープリント」または「サイン」に転換し、標的試料、したがって該試料が由来する患者の代謝状態を定義する。「メタボロミックプロファイリング」を使用して、疾患の開始または進行から正常な生理を分ける、多くの場合微細な差、または薬理療法への個々の反応を系統立てて識別してもよい。
【００１２】
したがって、本発明の範囲を限定することなく、ＢＳＭはヒトおよび動物の健康状態に対して広範に適用されることが認識されうる。そのようなＢＳＭ技術基盤の広範な適用には、以下のものが挙げられるが、それらに限定されない：（１）たとえば、アルツハイマー病（ＡＤ）におけるような、非侵襲的な、分子診断および予後査定、胎児‐母体健康状態のモニタリングおよび体外受精方法論、ならびに（２）効力および安全性の代用マーカーを確認するための、メタボロミックプロファイリングを使用した、薬物発見および開発のための薬物診断学に基づいた方策。これらの適用は、ＢＳＭ技術において生み出された、重点的適用を使用した、バイオマーカーを基礎にしたメタボロミックプロファイリングを利用する。
【００１３】
生体分光分析の種々の形態はいくつかの組織、器官、および液体の非侵襲的、ｉｎ−ｖｉｖｏモニタリングにとって有用であることが示されてきた。固形組織、個々の細胞および生物学的液体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分析もこの方法論を使用して実施される。生体分光法は多くの利点を有し、それらには扱いやすさ、正確さおよび特異性、容易な使用、速やかな分析、低い計測費用、１つの標本中の複数の分析物の同時測定、および関心事のその場での、または遠隔での分析のいずれかによる、継続した、リアルタイムモニタリングの利点が挙げられる。ＢＳＭ基盤を使用することにより、今や、小さな装置を使用して、２０マイクロリットル程度の少量の液体試料による１分間より短い時間での高速、高性能メタボロミック分析を実施することが可能である。
【００１４】
メタボロミクスは、遺伝子とタンパク質の相互関係の次第に増す理解の有益な拡張である。医学および科学界は今や、ゲノミクス、トランスクリプトミクスおよびプロテオミクスはホメオスタシスのまさに小部分であることを認識している。ゲノムは何であってよいかを表し、プロテオームは何が発現されているかを定義するが、健康状態および疾患に関して細胞、組織、器官または個体のリアルタイムな機能的状態を表すものはメタボロノームである。発現されたタンパク質のすべての「下流の事象」の蓄積効果およびタンパク質改変は、細胞の機能的状態を反映する小分子のプールにおいて表される。この分子目録のプロファイリング（メタボローム）は細胞環境における、細胞の健康状態、疾患、加齢ならびに薬物および生体異物の作用の相関を提供する。したがって、この情報を獲得する能力は、いくつかの科学的専門分野にわたり、分子診断学、予後学および薬物発見に対する技術的進歩を提供する。それは、複数の臨床環境における非常に貴重な意志決定能力を開業医に提供する。
【００１５】
リプロダクティブヘルスの範囲は、正常な生殖機能、並びに生殖不全および不妊を含む。リプロダクティブヘルスの分野における、さらにとりわけ生殖補助医療（ＡＲＴ）におけるバイオマーカーのメタボロミックプロファイリングは探求されてきていない。体外受精（ＩＶＦ）手順における治療の成り行き（妊娠）を高め、そしてより少ない数の生育可能な胚だけを移植のために慎重に前もって選択することを可能にすることによって、多胎妊娠のリスクを軽減するために、バイオマーカープロファイリングを使用して生育可能な、生物学的に反応能のある卵母細胞、精子、および胚が確実に確認される可能性があることが発見されている。
【００１６】
関連するＩＶＦ研究所手順において使用される体液および配偶子または胚培養培地を光学的に測定することにより、たとえば、卵母細胞、精子または胚の生存能、従っていずれか別の体外受精手順および関連した方法の成功の確率を確定するために有用な、試料のメタボロミックプロファイルを確定するための方法を提供することは、当該技術分野にとって重要な貢献である。
【００１７】
液体培地中の代謝産物を分析することにより、代謝産物と液体培地を交換する細胞の状態を確定するための方法が提供されることが非常に望ましい。細胞は、胚または幹細胞のような、適切な培養培地中で成長する細胞であってもよい。細胞は子宮壁の細胞であってもよく、そして液体培地は子宮内膜液であってもよい。
【００１８】
本発明は、液体培地中の代謝産物を分析することにより、代謝産物と液体培地を交換する細胞の状態を確定するための方法を提供する。
本発明はまた、関連するＩＶＦ研究所手順において使用される体液および配偶子または胚培養培地を光学的に測定することにより、たとえば、体外受精手順および関連した方法の成功の確率を確定するために有用な、試料のメタボロミックプロファイルを確定するためのシステムおよび方法を提供する。
【００１９】
また、体液、配偶子または胚培養培地のような液体中の代謝産物の、蛍光を含む単一波長、多波長光学吸収、ラマン散乱スペクトル、または磁気共鳴スペクトルのようなスペクトルを相関させるための方法および装置が提供され、そのようなスペクトルは配偶子を含む少なくとも１つの細胞、または胚中の複数の細胞の状態を伴う。
【００２０】
ある態様では、生殖補助医療（ＡＲＴ）法が提供される。この方法は培養培地中で、少なくとも１つの胚をｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養すること、胚の状態を確定するために、胚の成長中に時々少なくとも１つの胚の培養培地を分析的に試験すること、および胚の状態を使用して、少なくとも以下：
子宮に胚を移植するための時期；
将来の子宮への移植のための短期間保存に胚を供するための時期；
将来の子宮への移植のための冷凍保存に胚を供するための時期；
胚の培養を継続するための培養培地に対する調整；および
胚の培養を継続するための異なる培養培地に胚を移植するための時期の１つを確定することを組み合わせる。
【００２１】
ある態様では、この方法は卵母細胞、精子および子宮の生存能をそれぞれの卵胞液、精漿、子宮内膜液を分析的に試験することによって確定することをさらに含み、卵母細胞、精子、子宮の生存能が胚の移植にとっての高い着床または妊娠の確率を示唆する場合、１つの胚が移植される。
【００２２】
胚は、精子を使用して少なくとも１つの卵母細胞を体外受精することによって得ることができる。
ある態様では、胚が成長するに従って培養培地に対する調整が反復して確定される。
【００２３】
慣例のＩＶＦでは、胚の生存能についての信頼できる情報を得ることができず、３、４または５日目まで生き延びる胚はいっそう生育可能であるため、移植はときどき延期される。しかし、生育可能であることが既知の（または生育可能であることの高い確率の徴候を有する）胚をできるだけ早く移植することが望ましい。胚の生存能状態は、胚がたとえば２日目のような、成熟のある時点まで成長するに従って増加する可能性があるが、胚によっては、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで胚が成熟するに従って、生存能が著しく増加しない可能性がある。従って、ある態様では、胚を移植する時期は、胚が着床のための高い確率閾値に到達する最も早い時期として確定される。
【００２４】
本発明は限定することなく、哺乳動物、例えばヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ヤギ、およびクジラに適用されうることが認識される。
いくつかの卵母細胞が受精され、そしていくつかの胚が培養される場合、胚は少なくとも確定された状態を使用して移植のために選択されうる。
【００２５】
分析的な試験は、培養培地のスペクトルを得ることを含んでいてもよい。ある態様では、いくつかの胚の培養培地の記録されたスペクトルと当該数の胚を使用した妊娠の記録された成功間の有効な相関関係を確定することによって、スペクトルが較正され、状態はスペクトルに関する相関関係を実施することから確定される。ある態様では、スペクトルは光学スペクトルである。スペクトルは培養培地の酸化ストレス成分に関連した情報を含んでいてもよい。
【００２６】
胚が凍結保存される場合、凍結保存された培養培地のスペクトルが定期的に得られてもよく、そして状態は、凍結保存中に凍結保存された胚をモニターするための凍結保存培養培地光学スペクトルから確定することができる。
【００２７】
ある態様では、生殖補助医療（ＡＲＴ）法が提供される。この方法は自身の卵胞液中の複数の卵母細胞を抜き出すこと、卵母細胞の状態を確定するために、卵母細胞それぞれ１つの卵胞液を分析的に試験すること、ならびに凍結保存および受精の一方にとっての状態を使用して卵母細胞を選択することを含む。卵胞液の分析的な試験は、本質的に培養培地のためのものと同じである。
【００２８】
ある態様では、患者におけるリプロダクティブヘルス手順の首尾よい成り行きのための確率データを生み出す方法が提供される。この方法は、選択された分析的様式を使用して、代謝産物と液体培地を交換する、卵母細胞、精子および胚から選択された少なくとも１つの細胞にとっての、液体培地中の少なくとも１つの代謝産物のスペクトルを獲得すること、ならびに獲得したスペクトルおよび、リプロダクティブヘルス手順の首尾よい成り行きと、ある集団の患者のための選択された分析的様式を使用して得られた液体培地中の代謝産物のスペクトル間で成立した相関関係を使用して、少なくとも１つの細胞にとっての確率データを生み出すことを含む。これらの液体培地の分析的な試験は本質的に同じである。
【００２９】
分析的様式は、単一または多波長光学吸収、光学ラマン散乱または光学蛍光であってもよい。光学スペクトルは短波長近赤外範囲内であってもよい。選択された分析的様式がまた、ＮＭＲであってもよい。
【００３０】
リプロダクティブヘルス手順が妊娠中毒症、ＩＡＩまたは羊膜内炎症、早期陣痛／早産、再発性流産／妊娠中絶、胚着床、性確定、環境汚染／感染、子宮外妊娠、正常妊娠、または子宮内膜症に関連してもよい。
【００３１】
他の態様では、本発明は生殖補助医療（ＡＲＴ）法を提供する。この方法は精漿液中で１つ以上の精子の試料を提供すること、精子の状態を確認するために、精子の精漿を分析的に試験すること、ならびに凍結保存および受精の一方にとっての状態を使用して精子を選択することを含む。
【００３２】
他の態様では、本発明は生殖補助医療（ＡＲＴ）法を提供する。この方法は、胚の着床にとっての子宮の生存能を確定するために、患者の子宮の子宮内膜液を分析的に試験すること、および生存能を使用して着床の時期を確定することを含む。たとえば、生存能が弱い場合、試験を反復し、着床の時期は、生存能がより強い場合に確定される。たとえば、生存能を改善するために、患者に規定食、休息／運動、および医学的介入の少なくとも１つが提供されうる。
【００３３】
子宮内膜液はｉｎ  ｓｉｔｕで光学的に測定することができ、さらに分析的試験は光学スペクトルを得ることを含む。
ある態様では、代謝産物と液体培地を交換する細胞の状態を確定するための方法が提供される。この方法は、選択された分析的様式を使用して、少なくとも１つの細胞にとっての液体培地中の少なくとも１つの代謝産物のスペクトルを獲得すること、および獲得したスペクトルと、少なくとも１つの細胞の状態とある集団のために選択された分析的様式を使用して得られた液体培地中の代謝産物のスペクトル間の確立された相関関係を使用して、少なくとも１つの細胞にとっての確率データを生み出すことを組み合わせる。
【００３４】
ある態様では、分析的様式はまた、光学ラマン散乱、光学吸収、または光学蛍光のような、光学スペクトロスコピーである。ある態様では、光学スペクトルは液体培地の酸化ストレスについての情報を提供する。
【００３５】
他の態様では、培養培地中の１つ以上の細胞を維持するか、または培養するための方法が提供される。この方法は、選択された分析的様式を使用して得られた培養培地のスペクトルから確定された細胞の状態を使用して、培養培地を調整することを含む。
【００３６】
本発明のある態様では、培養培地中でｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養する１つ以上の細胞の培養を制御するための器具が提供される。この器具は、培養培地のスペクトルを獲得するためのスペクトル獲得装置、スペクトルデータと細胞の状態を関連付ける相関データのデータベース、相関データとスペクトルを使用して状態を表すデータを生み出す状態確定プロセッサー、状態を表すデータに反応して培養培地中で調整を行うための制御シグナルを生み出す培養培地コントローラーを組み合わせる。コントローラーは完全に自動化され、従って培養培地パラメータを変化させるためのバルブとスイッチを制御することができ、あるいは必要とされる調整をするために、コントローラーは技術者にレポートを提供することができる。ある態様では、スペクトルは培養培地の少なくとも１つの成分の酸化ストレスに関する情報を含む。
【００３７】
例として、培養培地への調整は、周囲温度または、溶解した酸素のような気体組成に関するものでありうる。同様に、調整はたとえばｐＨを変化させる、またはタンパク質を添加することのような、培養培地への物質の添加でありうる。他の場合では、調整は培養培地の交換であることが認識される。
【００３８】
器具は、フィードバックのような状態を使用して、培養培地を変化させるために稼働しうる。状態における測定可能な変化をもたらすための調整時間が、典型的にはフィードバックループサイクル時間を確定することになる。もちろん、調整がただちに培養培地のスペクトルに影響を与える場合、スペクトルは調整後に再び獲得され、調整後すぐ、および多少の時間後に確定される状態における変化を使用して、調整が細胞を維持するか、または培養するために有益であったかどうかを査定する。
【００３９】
本発明の目的のために、次の用語が以下のように定義される。
「体液」という用語は、全血、血漿、血清、尿、唾液、涙液、羊水、脳脊髄液（ＣＳＦ）、母乳、膣液、子宮液、精漿を意味することを意図する。
【００４０】
「培養培地」という用語は、配偶子および胚を含む、生育可能な細胞を研究所のｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養で維持するために使用することができる、いずれかの栄養素および塩類溶液の混合物を意味することを意図する。光学スペクトロスコピーのようないくつかの分析的様式の場合は、有用なスペクトルを得る能力に影響を与えずに培養培地は凍結されうる。
【００４１】
「患者」という用語は、ヒトまたは動物のいずれであっても、検討される、観察される、モニターされる、または研究されることになる対象を意味することを意図する。
「非侵襲的」という用語は、患者においてｉｎ  ｓｉｔｕ、またはｉｎ−ｖｉｖｏでたとえば少容量の体液を採取することによるような、最小限の侵襲により実施される経皮（ｔｒａｎｄｅｒｍａｌ）または経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）スペクトロスコピーを含むことを意図する。
【００４２】
「酸化ストレスに関連した疾患」という用語は、酸化ストレスを引き起こすか、または酸化ストレスによって引き起こされるか、もしくはそれに依存する異常を意味することを意図する。
【００４３】
「酸化ストレス成分」という用語は、検討中の体液培養培地または他の試料中の生化学的成分の酸化／抗酸化バランスの乱れを意味することを意図し、前者が優勢である場合、可能性がある組織損傷を導く。同じように、「複数の酸化ストレス成分」は検討中の体液培養培地または他の試料中の複数の生化学的成分の酸化／抗酸化バランスのそのような乱れを意味することを意図し、前者が優勢である場合、可能性がある組織損傷を導く。「レドックスサイン」という用語は、多波長光学吸収スペクトロスコピーまたはＮＭＲスペクトロスコピーから得た、酸化ストレス成分、またはＯＳ生物学的副産物の集合体を意味することを意図する。
【００４４】
「抗体」という用語は、１つのイムノグロブリン遺伝子もしくは複数のイムノグロブリン遺伝子、またはそのフラグメントによって実質的にコードされるポリペプチドを表す。認められたイムノグロブリン遺伝子には、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロンおよびミューコンスタント領域遺伝子、ならびに無数のイムノグロブリン可変領域遺伝子が挙げられる。軽鎖はカッパまたはラムダのいずれかとして分類される。重鎖はガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンとして分類され、それらが今度はそれぞれ、イムノグロブリンクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥを定義する。
【００４５】
「バイオマーカー」または「標的バイオマーカー」という用語は、タンパク質、酵素、ペプチド、小分子、酸化ストレス化合物、または他の生物学的化合物のプロファイルを表し、それらは体外受精またはアルツハイマー病のような、研究中の特定の手順または、医学的異常または疾患に関連する。特定のバイオマーカーの構造に関連するデータは新規な「メタボロミックプロファイル」または「フィンガープリント」に変換される。それぞれのプロファイルは典型的には、データを臨床異常または成り行きに相関させる専有のインフォマティクスを使用して分析される。メタボロミックプロファイリングを使用して、正常な生理と疾患の開始または進行間のしばしば微細な差、または治療化合物に対する個体の反応を系統的に識別する。この技術はいくつかの科学的研究分野および使用の分野にわたって適用可能である。
【００４６】
「胚の特性」は、その後の手順における使用に反応能がある胚を表す特性として定義され、体外受精のような、胚の選択および移植、ならびに妊娠を達成するための着床、ならびに凍結保存を含む短期間保管および長期間保管を含む手順における使用にとっての胚の生存能を反映する。短期間保管は約３日間から約５年間の保管として定義されてもよい。長期間保管は、不定期間の保管のための約５年間より長い保管としてさらに定義されてもよい。
【００４７】
「卵母細胞特性」という用語は、その後の手順における使用に反応能がある卵母細胞を表す特性として定義され、体外受精のような、卵母細胞の選択および移植、ならびに妊娠を達成するための着床、ならびに凍結保存を含む短期間保管および長期間保管を含む手順における使用にとっての卵母細胞の生存能を反映する。短期間保管は約３日間から約５年間の保管として定義されてもよい。長期間保管は、不定期間の保管のための約５年間より長い保管としてさらに定義されてもよい。
【００４８】
「精子特性」という用語は、その後の手順における使用に反応能がある精子を表す特性として定義され、体外受精のような、精子の選択および移植、ならびに妊娠を達成するための着床、ならびに凍結保存を含む短期間保管および長期間保管を含む手順における使用にとっての精子の生存能を反映する。短期間保管は約３日間から約５年間の保管として定義されてもよい。長期間保管は、不定期間の保管のための約５年間より長い保管としてさらに定義されてもよい。
【００４９】
「ＨＬＡ−Ｇ」という用語は、ヒト白血球抗原Ｇを表し、特記しない限り、可溶性および不溶性の形状の両方を含む。該用語は適切な状況では、抗原または遺伝子座のいずれかを表してもよい。
【００５０】
「インテグリン、ユビキチン、セレクチン、成長因子、インヒビチンおよび他のホルモン、他の酵素、小分子およびペプチド」という用語は、典型的なバイオマーカーであり、それらは種々の認められた科学的重要性を有する。
【００５１】
「イムノアッセイ」という用語は、分析物に特異的に結合する抗体を利用する分析または方法論である。イムノアッセイは、分析物を分離する、標的にする、または定量するための少なくとも１つの特有の抗体の特定の結合特性の使用により特徴付けられる。
【００５２】
「分離された」、「精製された」、または「生物学的に純粋な」という用語は、自然の状態において見いだされるような、通常は材料に伴う成分を、実質的に、または本質的に含まない材料を表す。
【００５３】
「ラベル」という用語は、スペクトロスコピー的、光化学的、生化学的、免疫化学的、または化学的手段により検出可能な組成物に関連して使用される。たとえば、有用なラベルには、蛍光色素、電子稠密試薬、熱量測定（ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ）、酵素、たとえばＥＬＩＳＡで通例使用されるようなもの、ビオチン、ジオキシゲニン、またはハプテンが挙げられ、そして抗血清またはモノクローナル抗体が入手可能なタンパク質は検出可能になり得る。
【００５４】
本明細書で参照するすべての参考文献は参照としてここに援用される。
好ましい態様の詳細な説明
本発明は、培養培地または体液、たとえば患者由来の体液の、多波長光学吸収、ラマン散乱スペクトル、または磁気共鳴スペクトルのようなスペクトルを酸化ストレス依存的疾患と相関させるための方法および器具を提供する。
【００５５】
酸化ストレス測定は、異常の開始を診断すること、または予言することにおける道具として臨床環境で利用されてこなかった。本発明は、臨床環境における使用に適切な、酸化ストレスの迅速な測定を可能にする道具を提供する。
【００５６】
比較的長期間にわたる酸化ストレスは、今まで異常の時間経過をよりよく研究し、それによって酸化ストレスのレベルに介入し、それを正すことを可能にする目的で測定されていなかった。本発明はどんな患者にとっての使用にも適切な様式で、迅速に、そして非侵襲的に酸化ストレスを測定することが可能な装置を提供する。
【００５７】
例として、本発明は光学的分析を使用して、体液中の１種以上の酸化ストレス成分を測定するための道具を提供する。本発明に従って分析される体液は、全血、血漿、血清、尿、唾液、涙液および脳脊髄液（ＣＳＦ）、羊水、母乳、膣もしくは子宮液のいずれか１種、またはその組み合わせであってもよい。本発明の別の側面は、卵母細胞特性、胚特性、精子特性などを確定するために、培養培地中の１種以上の酸化ストレス成分を測定するための道具を提供する。光学的分析はＮＩＲ、ＳＷＮＩＲ、およびＴＨｚ範囲のような、多様な範囲における光学スペクトル由来の波長によって成し遂げられてもよい。吸収スペクトルに加えて、ラマンスペクトルおよび蛍光スペクトルがさらに分析されてもよい。
【００５８】
また、患者または試料における酸化ストレス依存的異常の存在の確率データを確定するための方法および器具が提供される。酸化ストレス依存的疾患と、ある集団の患者または試料の選択された分析的様式を使用して得られた体液のスペクトル間に相関関係が確立される。確率データが確定されることになる患者の場合、体液のスペクトルは選択された様式を使用して得られる。患者の確率データは獲得したスペクトルおよび確立された相関関係を使用して生み出される。
【００５９】
本発明はまた、その後の手順における使用のための胚の特性を確定するための方法を提供し、そのような特性には胚生存能が挙げられる。これらの方法は、胚生存能のバイオマーカーのメタボロミックプロファイルを査定することによる、体外受精および胚移植（ＩＶＦ／ＥＴ）ならびに卵管胚移植（ＴＥＴ）を用いた子宮への胚の移植を含む。
【００６０】
ＢＳＭ技術基盤は、体外受精手順（ＩＶＦ）を含む、多くの異なる診断、予後およびモニタリングの目安に適用されてもよい。研究は、ＢＳＭが非侵襲的なやり方で、ならびに高い感度および特殊性で容易に実施されうることを示唆している。小型の原型装置が、工業的設備からなる大規模生産に容易に適用されてもよい。
【００６１】
メタボロミクスに指向した大部分の方法は、それらの中心となる技術として、質量分析法、ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、電気泳動ならびにマイクロアッセイおよびイムノアッセイを含むプロテオミクスに基づいた多様な分析的アッセイなどのような技術に頼っている。これらは調査、サービスまたは臨床委託研究所におけるような適用にとっては有用な研究方法であるが、それらは費用が掛かり、複雑である。対照的に、ＢＳＭは、小型で、使用が簡単であり、そしてスクリーニング目的にさえ使用しうる、携帯用のその場で使用できる（ｐｏｉｎｔ  ｏｆ  ｃａｒｅ）装置を使用して行われる。
【００６２】
化学的または生物学的試料の成分についての相対的な定量情報は、スペクトルを標準化し、原因となる化学種の濃度を正確に反映するピーク強度値を生み出すことによって得ることができる。標準化因子は、一連の試料全体に濃度が一定のままである、それらの固有の成分から計算される。異なる試料中に存在する成分の相対濃度は標準化されたピーク強度から見積もることができる。従来の方法とは異なり、内部標準または付加的な試薬は必要としない。該方法は、プロテオミクスおよびメタボロミクス調査におけるディファレンシャルフェノタイピングにとってとりわけ有用であり、試料全体に濃度が変化している分子が確認される。これらの確認された種は疾患または療法への反応にとっての生物学的マーカーとして役立ってもよい。
【００６３】
フリーラジカルはそれらの外側の軌道に、対になっていない電子を含む原子または分子である。それらの電子配置は、これらの化学種を、膜脂質、タンパク質、核酸および他の細胞基質と非常に反応しやすくさせている。フリーラジカルは環境の供与源から得てもよく、あるいは組織内で新規に生成されてもよい。スーパーオキシドアニオン（Ｏ２−）、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、シングレット酸素、次亜塩素酸（ＨＯＣｌ）、ペルオキシナイトライト（ＯＮＯＯ−）およびヒドロキシルラジカル（ＯＨ＊）は一般的な、内因性に生産される活性酸素種（ＲＯＳ）の例である。遷移金属、たとえば第一鉄（Ｆｅ２＋）または第一銅（Ｃｕ１＋）は、Ｈ２Ｏ２を細胞毒性の高いＯＨ＊ラジカルに還元することにより細胞レドックス化学においてきわめて重要な役割を果たす（Ｆｅｎｔｏｎ触媒作用）。哺乳動物組織では、進化的に保存された抗酸化酵素（たとえば、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼおよび種々のレダクターゼ）が多数の非酵素、低分子量抗酸化化合物（たとえば、ＧＳＨ、チオレドキシン、アスコルベート、トコフェロール、尿酸、メラトニン、ビリルビン）と協力して作動し、レドックスホメオスタシスを維持している。比較的低レドックス状態において遷移金属を維持することによって、フェリチン、トランスフェリン、ラクトフェリン、メタロチオネインおよびセルロプラスミンのような金属結合タンパク質が組織および体液の抗酸化保護に実質的に貢献する。
【００６４】
酸化ストレス（Ｏｓ）は「酸化力が抗酸化力を上回った状況であり、起こりうる［組織］損傷を引き起こす」と定義されてきた。このバランスは体液の１種以上の生化学的成分に関連しうる。酸化ストレスは、細胞の機能障害および死にとっての重要な一般的経路、および癌、糖尿病、閉塞性肺疾患、炎症性腸疾患、心虚血、糸球体腎炎、黄斑変性および種々の神経変性疾患を含む、広範なヒトの医学的異常における潜在的な治療標的として関係してきた。
【００６５】
従って、クロマトグラフィー技術および質量分析法を使用して、血漿および脳脊髄液（ＣＳＦ）中の酸化ストレスを測定することは公知である。そのような分析技術は多くの時間を浪費し、典型的には酸化ストレスの測定値を得るために非常に多くの量の体液を得ることを含む。
【００６６】
主題の発明において利用される生物学的マーカーには、炎症性マーカー、酸化ストレスマーカー、および細胞損傷マーカー、またはその組み合わせが挙げられる。炎症性マーカーには、サイトカインまたは白血球もしくは炎症性細胞の誘致を促進する他の炎症メディエーターが挙げられるが、それらに限定されない。炎症性マーカーは、炎症性細胞から遊離されうるが、必ずしも遊離されるとは限らない。炎症性マーカーには、８−イソプロスタン、ミエロペルオキシダーゼ、ＩＬ−６、およびＣ−反応性タンパク質が挙げられるが、それらに限定されない。酸化ストレスマーカーは、酸化剤またはフリーラジカルによって引き起こされる細胞損傷を示唆する。酸化ストレスマーカーには、脂質、タンパク質、またはＤＮＡのようなそれぞれの標的に到達するラジカルおよび酸化剤、ならびにラジカルおよび酸化剤によって引き起こされる損傷の間接的なマーカーが挙げられる。酸化ストレスマーカーには、遊離イオン、８−イソプロスタン、スーパーオキシドジスムターゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、脂質ヒドロペルオキシダーゼ、ジチロシン、および８−ヒドロキシグアニンが挙げられるが、それらに限定されない。細胞損傷マーカーには、遊離が壊死、または損傷した細胞に関連する生物学的分子（たとえば、酵素）が挙げられる。細胞損傷マーカーには、クレアチニンキナーゼおよびラクテートデヒドロゲナーゼが挙げられるが、それらに限定されない。いくつかの生物学的マーカーは１種以上のマーカー型として分類されうる。たとえば、８−イソプロスタンは炎症性マーカーおよび酸化ストレスマーカーの両方として分類されうる。
【００６７】
本発明はピーク強度を有するピークを含むスペクトルデータを処理するための方法を提供する。１組のスペクトルは、代謝産物、タンパク質またはペプチドを含む生物学的試料のような、複数の化学試料から得られる。スペクトルは、たとえばエレクトロスプレイイオン化（ＥＳＴ）、マトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）、または電子衝撃イオン化（ＥＩ）によって得られる質量スペクトルであり得る。それぞれのスペクトルにおけるピーク強度は、原因となる成分の濃度に比例するピーク強度を生み出すための標準化因子によって測定される。測定されるピーク強度に基づいて、特有の試料成分の相対濃度を見積もることができる。標準化因子は、濃度が化学試料中で実質的に一定である、化学試料成分に依存して計算される。一態様では、これらの成分は前もって確定されず、化学試料の固有の成分である。別の態様では、標準化因子はその組の２つ（たとえば第１および第２）のスペクトル間のピーク強度の比から計算され、中央値のようなピーク強度のノンパラメトリックな尺度である。
【００６８】
体外受精を含む生殖補助医療（ＡＲＴ）
本発明の方法を使用して、体外受精手順の首尾よいタイミングを確定してもよい。
現在、体外受精（ＩＶＦ）研究所は前期胚の形態、および受精後初めの４８〜７２時間の間のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの卵割の割合に基づいてだけ、それらを選択することが可能である。これらの基準は有用であるが、必ずしも成長可能性の優れた指標であるわけではない。多くの場合、３または４個の胚がこれらの比較的不完全な指標に基づいて選択され、その後子宮腔に移植される。生化学的、遺伝的、または発生的パラメータに基づいた、付加的で、いっそうストリンジェントな前期胚選択基準が利用できれば、再発する胚着床不全、自然流産、複数回のＩＶＦ試行または多胎妊娠のリスクによって引き起こされる心理学的トラウマに患者を曝すことなく、最も生存の可能性が高い１または２個の健康な前期胚を移植することが可能になる。従って、首尾よい着床のためのいっそう予言に役立つ試験に対する医学的必要性がある。
【００６９】
リプロダクティブヘルス（ＩＶＦ）。卵母細胞、精子、または胚反応能を査定するための市販の診断試験はない。現在、胚は非常に主観的な任意の形態学等級付け尺度に基づいて選択される。着床前遺伝診断（ＰＧＤ）は限定された数の遺伝的異常に関して試験する手順であり、胚反応能を予言するために使用することはできない。ＰＧＤは非常に侵襲的で、標準化された手順は無く、米国では数少ない専門の研究所においてだけ利用可能である。さらに、それは費用が掛かり、時間を浪費し、非常に議論の的になりやすい。卵母細胞、精子または胚特性を査定するために利用可能な試験はまったくない。リプロダクティブヘルスおよび産科学におけるこの技術の他の適用には、以下のものが挙げられる：妊娠中毒症、ＩＡＩまたは羊膜内炎症、早期陣痛／早産、再発性流産／妊娠中絶、着床、性確定、環境汚染、感染、子宮外妊娠、正常妊娠、または子宮内膜症など。
【００７０】
卵母細胞
最近まで、卵母細胞は一般に「正常」か、または反応能を有すると推定されていた。それらは、重い形態学的異形が観察される明らかな場合、または卵が未熟である（初期の判定基準はサイズであった）場合を除いて、ＩＶＦにおける潜在的にやっかいな問題の原因であると考えられていなかった。そのような場合、欠陥のある卵は廃棄され、そして廃棄が継続される。しかし、増加する科学的証拠はこの考えのパラダイムを変化させている。なぜなら、いくつかの新規な報告（きわめて最近では、ｔｈｅ  ２００５  Ａｎｎｕａｌ  ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ＡＳＲＭ）は若い女性（２１〜３１歳）においてすべての卵母細胞の５０％〜７５％もの多くが異常（異数性）であり、この数は年齢と共に劇的に増加することを証明しているからである。一般的に言って、いずれかのレベル、ゲノミック、プロテオミック、またはメタボロミックにおいて、ヒト卵母細胞生存能を検討している調査は不足していた。結果として、卵母細胞選択のための受容可能な手順はない。
【００７１】
ゲノミクス試験
いくつかのゲノミクス試験技術は、卵母細胞の反応能を査定する試み（たとえば、比較ゲノミックハイブリダイゼーション）にごく最近（＜２年）適合してきた。これらの技術は初期の段階にあり、それらは標準化または実証されておらず、ＩＶＦ研究所における実用的で、普通の手順では決してない。現在、これらの手順は卵の極体の生検が必要とされるため、非常に高価で、労働集約的であり、卵母細胞に対して高度に侵襲的である。そのような生検の影響はもしあるとしても、未知である。
【００７２】
より最近では、他の点では健康で、形態学的に反応能のある胚において、異数性の発生を査定することにより、着床前遺伝診断（ＰＧＤ）を使用して卵母細胞の特性を間接的に研究してきた。これらの研究では、若い女性由来の卵母細胞でさえ、高い染色体異常の発生率を有することが見いだされた；推論では、異常な胚は異常な卵母細胞から得られた。納得できるように、ＣＧＨまたはＰＧＤ手順のいずれかを使用して卵母細胞で検出される異数性の発生率は非常に類似し、およそ５０％である。
【００７３】
胚
歴史的に、胚はＩＶＦ成功をモニターし、予言するための介入の標的として多くの注目を受けてきた。ＩＶＦの「究極の目標（ｈｏｌｙ  ｇｒａｉｌ：聖杯）」は、どの胚が生育可能で、反応能のある胚であり、どの胚がそうでないかを知ることである。高い特性の胚‐最も妊娠する可能性が高い胚だけを着実に確認し、選択する手順があれば、そのような胚は移植のために日常的に選択されうるという仮説が有効である。数の少ない胚が将来的に生育可能であることが既知である場合、それらが移植されなければならないため、このことは、今度は多胎妊娠を減らしながら、妊娠率を改善するという期待をもたらす。
【００７４】
形態学的査定
今日、＋１〜＋４の等級付けシステムに基づいた胚の形態学的査定は、ＩＶＦ研究所における生存能の主要な決定因子である。胚は典型的には「Ｇｒａｄｕａｔｅｄ  Ｅｍｂｒｙｏ  Ｓｃｏｒｉｎｇ（ＧＥＳ）」を使用して査定される。ＧＥＳシステムは受精後初めの７２時間の胚を査定する。それぞれの胚は最大１００ポイントを基準として採点される。ＧＥＳポイント＞７０の胚は、胚移植（ＥＴ）に続いて子宮内膜に着床し、生育可能な妊娠を生み出すことになる、生育可能な胚盤胞に成長する最も高い可能性を有する。ＧＥＳは従って、ＥＴのために胚を選択することに関して患者に知らせるための適切な根拠を確立する。
【００７５】
培養プロセス中の胚の成長パターン（たとえば卵割率、フラグメンテーション、封入体、内細胞塊など）も評価されるが、これらの判定基準の使用に関してはエンブリオロジストの間での合意はさらに低い。形態学的査定は国内、または国際標準が欠如するため、明白な困難を抱えている。固有の観察者内および観察者間の変動性は、主観的な等級付けシステム、およびプロセスを繋ぎ止めるためのいずれか相関する生物学的判定基準の欠如に関連した。その上、この等級付けシステムに関する基本的な科学的欠陥は、形態学的分析は生物学的機能性の尺度として受け入れられることはできないという自明の理である。このプロセスの限界は、最近のＡＳＲＭ年会において再び強い関心の対象であった。それにもかかわらず、代わりとなる方法が出現していないため、エンブリオロジストはこの等級付けシステムに頼らざるを得ないでいる。
【００７６】
成長している細胞および胚のメタボロミックスペクトルプロファイルを分析することにより、栄養素、サプリメント、ｐＨおよび代謝産物に対する調整が査定される。このことが、細胞および胚の成長の継続的なモニタリングおよび最適化を可能にする。たとえば、酸化ストレスレベルの確定は、測定されて、酸化防止剤のような化学的実体の補足により、無効にされうる。より明確には、弱い胚はより多くの酸素を補足されてもよく、あるいは、培地のモニタリングに基づいて、培地ｐＨを改変する、代謝産物を除去する、または栄養素を培地に補足することのように、増殖培地を改変してその胚の生存能を改善してもよい。３日目の培地で培養する弱い胚は、本発明の培地モニタリングに基づいて５日目の培地に移して培養してもよい。
【００７７】
子宮査定
胚の着床にとっての子宮の生存能は子宮内膜液、すなわち子宮壁の内側を覆う液の分析スペクトル成分に相関させることができる。
【００７８】
方法論を適用して子宮頸部粘液および子宮を裏打ちする子宮内膜のメタボロミックプロファイルを確定し、胚着床に対する子宮内膜の生物学的受容力を確定することができる。生物学的液体としての頸部粘液は種々の分光光学的方法により分析し、受容する子宮内膜を表すメタボロミックプロファイルを確定することができるが、種々の子宮の子宮内膜裏打ちは、頸管を通して直接子宮に挿入されうるファイバー光学を利用する種々の分光光学的方法により、非侵襲的に検査することができる。子宮内膜のメタボロミクスによる確定は胚着床率増加、したがって妊娠を導くことになる。
【００７９】
着床前遺伝診断およびゲノミクス試験
胚のゲノミクス試験（すなわち、ＣＧＲ）は卵母細胞にとって、先に述べたようなものと同じ制限を受け、現在まで胚ＣＧＲは科学界から確かな注目を受けていない。しかし、ＡＲＴの分野は現在着床前遺伝診断の手順から恩恵を被り、該手順を使用して可能性がある２３対の染色体の中の９対に影響を与える、限られた数の特定の遺伝的疾患および異数性に関して、成長している胚をスクリーニングすることができる。ＰＧＤは、蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）と呼ばれる別の手順と組み合わせて使用される、労働集約的な手順である。残念ながら、ＰＧＤ／ＦＩＳＨは、ＩＶＦにとっての包括的な卵母細胞および胚の生存能を確認することになる場合、感度および特異性の両方を欠如する。ＰＧＤは胚の生存能に影響しうる異数性を検出することにおいて有用であるが、胚特性の包括的査定にとって有用であることは証明されていない。
【００８０】
ＰＧＤは初期胚の単一細胞生検を必要とし、そのプロセスに固有の健康リスクは未知であるため、議論の余地がある手順として考えられている。生検はＩＶＦ研究所で行われるが、それらは染色体分析のために、別の離れた遺伝学研究所に送られなければならない。ＰＤＧはまた、ＦＤＡおよびＡＳＲＭにより実験手順として見なされ、試験から得られる遺伝情報の性質のために、生命倫理的論議が生じている。ＰＧＤはまた、ＩＶＦにとっての日常的な、主流の試験として法外な費用がかかる。つい最近まで、ＰＧＤによる当該分野の先取りは、おそらく科学者が他のゲノミック方法論またはプロテオミクスおよびメタボロミクスを推進することを妨げてきた。
【００８１】
本発明のメタボロミックプロファイリングに比較して、ＰＧＤは非常に費用が掛かり、胚にとって侵襲的手順であり、従って未知の高いリスクを負い；遺伝的異常の試験に限定され；そして多くの時間を浪費する。その上、ＰＧＤは異数性のゲノム査定を除いて、胚生存能を確定するための有用な道具であることが証明されていない。ＰＧＤは複雑で高価な手順であるため、それが日常的な胚査定のための主流な選択肢になる可能性はない。多くの科学的および社会政治的理由から、ＰＧＤは依然として実験手順と見なされている。従って、包括的な卵母細胞および胚の反応能の試験としてのメタボロミックプロファイリングの導入は当該技術分野における主要な進歩である。
【００８２】
胚バイオマーカー
可溶性ヒト白血球抗原（ｓＨＬＡＧ）と呼ばれる分子である、胚生存能の少なくとも１つの分子バイオマーカーが多少厳格に検査されてきた。このタンパク質はイムノアッセイによって測定され、従っていっそう面倒であり、行程をやり終えるために長い時間（数時間）が掛かり、検査に費用がかかる。（培地試料の）容量制限のためにアッセイはデュープリケートで行うことができず、統計的な正確さに疑いを招く。他のプロテオミックバイオマーカー（たとえば、インテグリンベータ、ユビキチン、ＨＣＧ、など）が胚に対して最近仮定されている；しかし、これらのマーカーは包括的に研究されておらず、それらの胚生存能の指標としての役割は、もしあるとすれば、さらなる検討を必要とする。
【００８３】
単一胚移植（ＳＥＴ）を可能にすること
妊娠率を弱めること無く、多胎妊娠を減らすための手段としての単一胚移植プロセスにおける確実性を確立することは、ＩＶＦ専門家、ＡＳＲＭおよび保険提供者の等しいゴールである。残念ながら今までのところ、これはとらえどころのないゴールであることが証明されている。メタボロミックプロファイリングの有用性は、ＩＶＦ臨床業務において、複数胚移植または単一胚移植の選択を専門家に与えることが期待される。従って、メタボロミック試験の利点は認識されることができ、以下のことが挙げられる：（ｉ）治療成果（すなわち妊娠率）上昇および付随する多胎妊娠（３つ子以上）発生率の低下；（ｉｉ）母体および子にとっての医学的リスクの低下；（ｉｉｉ）複数の未熟児に対する医学的保護を提供することに伴う医学的費用の軽減；（ｉｖ）ＩＶＦに対するより広い保険適用範囲；（ｖ）不妊治療を求めるものにとってのより大きな信頼。
【００８４】
メタボロミックプロファイリングはまた、以下のことを含むＡＲＴ界にとっての他の利点の発生を可能にすることが期待される：１）予めスクリーニングされた、生育可能な卵だけを有望な受容者に提供する凍結ドナー卵バンク、および２）凍結保存、続いてその後のＩＶＦサイクルの将来の時点での受精のための、反応能のある、余分な数の卵の収集物である「卵母細胞レスキュー」。
【００８５】
ｓＨＬＡＧバイオマーカーアッセイ
ｓＨＬＡＧに対するこの単一バイオマーカーアッセイは、現在ＩＶＦ手順において利用されている。キットは本発明の方法を実施するための取り扱い説明書を付加的に含む。
【００８６】
本発明は以下の実施例を参照することにより、いっそう容易に理解されることになり、それらは本発明の範囲を限定することよりむしろそれを説明するために示される。
幹細胞
本発明はさらに、培養培地を分析することにより培養培地中の１つ以上の幹細胞の生存能を確定するために適用されうる。本発明に従って、幹細胞の酸化ストレスを確定するためのこれらの幹細胞の増殖培地の査定は、β細胞または分化した細胞型への幹細胞の分化を最大化するために必要である。分化因子は、タンパク質および他の代謝産物のような幹細胞増殖培地のスペクトルをモニタリングすることにより確認されてもよい。
【００８７】
実施例１
血漿の短波長近赤外（ＳＷＮＩＲ）スペクトロスコピー由来のＯＳの測定
サンプリング方法論
分析する前に室温に達するまで１時間試料を解凍し、その後３０分間遠心分離した。クリーニングおよびプレコンディショニングのために、試料細胞は初めに２００μｌの０．１Ｍ  ＮａＯＨ、続いて３ｘ２００μｌのミリポア水ですすいだ。
【００８８】
短波長近赤外（ＳＷＮＩＲ）スペクトロスコピー
ＳＷＮＩＲスペクトルは対照としての役割を果たす３回目のすすぎ水から記録された。その後すぐ、７５μｌの試料が試料セルに注入され、試料スペクトルは図１に示すような器具を使用して記録された。
【００８９】
短波長近赤外スペクトルは、以下のプロトコルを使用して調製された試料から得られた。測定のために、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｌｏｇｒａｐｈｉｃ近赤外分光光度計が使用された。分光光度計は、基準を測定試料と同時に得ることができるように２チャンネル入力口を備える。獲得したスペクトルは５８０〜１１００ｎｍ領域に及んだ。検出器の集積時間は１００ミリ秒であった。すべての試料は５０回測定され、結果を平均してスペクトルノイズを減らした。試料は、エッペンドルフピペットを使用して、１０ｍｍの内部パス長を持つ試料セルに導入された。およそ７５マイクロリットルの試料が使用された。スペクトルデータが得られた後、試料セルは２００マイクロリットルの０．１Ｍ  ＮａＯＨで洗浄し、続いて２００マイクロリットルミリポア水で３回洗浄した。それぞれの試料の後、３回目のすすぎ水から別個の基準スペクトルがとられた。このことが試料セルの汚染または光学システムのアラインメントにおける変化のモニタリングを可能にした。それぞれの試料スペクトルはその後の処理のために、連続した水試料に対して関連付けられた。
【００９０】
ＩＶＦサンプリング。卵母細胞：卵母細胞回収の時点において、いったん卵母細胞が確認され、そして栄養培地を入れるために除去されると、通常は廃棄される約１００μｌの卵胞液からなるアリコートがペトリ皿から回収される。
【００９１】
胚：通常は廃棄される使用済みの培養培地が、ＢＳＭによる分析のためにＩＶＦ培養のそれぞれのステージ（受精から胚盤胞への卵割まで）の終わりに回収される。個々の胚培養は、この手順のために胚を調製する好ましい方法であるが、強制的ではない。あるいは、ＰＧＤ、補助された孵化、および他の関連するＡＲＴ手順由来の廃棄された培養培地も同様のやり方で分析することができる。試料は速やかにＢＳＭによって分析するか、または将来の分析のために凍結することができる。卵母細胞および胚の選択は、それぞれの試料におけるバイオマーカーの特有のメタボロミックプロファイルに基づいて確定される。
【００９２】
液体試料は凍結され、そのままスペクトルを得るためのものとして使用されてもよく、あるいは後で解凍されてスペクトルを得てもよい。
分析方法論
演繹的波長選択
ＳＷＮＩＲスペクトルは多様な分子種由来の吸収を含む。血漿中に存在する主要な分子種を選択するために、ヘム（７００ｎｍ）、ＣＨ（８３０ｎｍ）、ＲＯＨ（９４０ｎｍ），Ｈ２Ｏ（９６０ｎｍ）、ＯＨ（９８０ｎｍ）およびＮＨ（１０２０ｎｍ）部分に関連する波長領域（幅１５ｎｍ）が図２に示すように確認された。これら６領域由来の集積された吸収は、その後以下に記載の回帰モデルにおいて使用された。
【００９３】
Ｈａａｒウェーブレット変換
Ｈａａｒ変換（ＨＴ）は最も古く、最も簡単なウェーブレット変換である。フーリエ変換と同様に、データ‐たとえばＮＩＲスペクトル‐を示された基準セットに投射する。基準セットとしてサイン、コサイン関数を使用するフーリエ変換とは違って、ＨＴはＨａａｒウェーブレットを使用する。この研究では、離散ウェーブレット変換（ＤＷＴ）が、連続ウェーブレット変換またはウェーブレットパケット変換にわたって選択され、計算の分かりやすさとスピードを最大にする。０＜ｘ＜１の範囲にわたって定義されたデータの場合、ＤＷＴに対するＨａａｒウェーブレットのファミリーは以下によって示される：
【００９４】
【数１】
2009522381.tif 000003
【００９５】
ＨＴを実行することは、スペクトルをφ、ΨおよびΨｎ、ｋの重みを付けた合計に分解することからなり、ここで重み付けは「ウェーブレット係数」として知られる。ファーザー（ｆａｔｈｅｒ）ウェーブレット、φの係数を得るために、全データウィンドウにわたるシグナルが集積される。マザー（ｍｏｔｈｅｒ）ウェーブレット、Ψの重み付けは、データポイントの初めの半分を集積し、データの残った半分の合計を引くことによって得られる。ドータ（ｄａｕｇｈｔｅｒ）ウェーブレットはスケールダウンされ、マザーウェーブレットのバージョンに変換される。表記において、Ψｎ、ｋはスケーリングを表し、ｋは変換を表す。従って、データの常に小さい領域は、合計され、データの最小エレメントサイズに至るまでのドータウェーブレットの係数が見いだされる。従ってドータウェーブレットはハイパスフィルタのように振る舞うが、ファーザーウェーブレットはローパスフィルタとして機能する。結局、得られたウェーブレット係数の数は元のデータセットにおけるポイントの数と同じである。
【００９６】
先の説明から、Ｈａａｒウェーブレットは３つの異なるレベル：＋１、−１または０を有するだけであるため、それらは簡単な構造であることが明らかになる。しかし、スケーリング関数または「サン（ｓｕｎ）」ウェーブレットと呼ばれるファーザーウェーブレットのスケールダウンし、シフトしたバージョンを導入することにより、さらにいっそう簡単にすることが可能である：
【００９７】
【数２】
2009522381.tif 000004
【００９８】
次にマザーウェーブレットは
Ψ＝φ０、１−φ１、１
として書き直すことができる。
「サン」ＨＴは従って、１と０だけから構築される２ｚ−１ウェーブレットを使用して、ｚポイントを持つスペクトル上で実施されうる。より高い世代のサンウェーブレットがより低い世代のサブセットであるため、このウェーブレット変換のための基準セットは直交しない。しかし、サンウェーブレットは一方向性である、すなわち、それらは正方向にだけ進むという利点を有する。従って、ドータウェーブレットとは異なり、サンウェーブレットはデータ処理において、生得的に一次導関数を実行しない。
【００９９】
スペクトル分析という面では、ＨＴはとりわけよく適する。得られたウェーブレット係数は、振動数および波長情報の両方を含む（ここで、「ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ」は通常の意味で使用されず、ウェーブレットが小規模および大規模な特徴を説明するかどうかを表す）。波長情報の保持のために、ＦＴの結果よりＨＴの結果のスペクトルの意味を理解することはたやすい。その上、別個の波長の重要性だけでなく、異なるサイズのスペクトルの特徴を検討することが可能になる。この特性の１つの一般的な適用は、高い振動数のウェーブレット係数を削除することによってデータをならすことである。あるいは、傾斜しているベースラインのようなデータセットの大きな傾向は、低振動数のウェーブレットを除去することによって修正されうる。
【０１００】
ＨＴの別の重要な特徴は、大量の情報を非常に少数の変数に圧縮する能力である。ドータウェーブレットはデータ圧縮において効率がよく、この特性を本研究明に利用して、試料の特性を推測するための最も倹約したモデルが見いだされる。対照的に、サンＨＴは部分的にリダンダントであるため、データ圧縮を同じように実施しないが、隣接する波長の完全な分離を可能にする。従って、この基準セットは特徴選択におけるいっそうの自由を可能にするべきである。その上、サンウェーブレットによって構築されたモデルは解釈することがより容易である。φｎ、ｋは２つの異なるレベルだけを有するため、波長領域は最適化アルゴリズムによって選択されるか、または選択されないかのいずれかである。選択されたサンウェーブレットに基づいて、試料分析のためのスリットまたはフィルターを使用する最も簡単な器械を組み立てることが可能であるべきである。
【０１０１】
ドータおよびサンＨＴの両方はＭａｔｌａｂ（Ｔｈｅ  Ｍａｔｈｗｏｒｋｓ  Ｉｎｃ．，Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ）で書かれたプログラムを使用して計算された。ドータＨＴの場合、Ｍａｌｌａｔのピラミッドアルゴリズムに基づいた高速ＨＴプログラムが一連の帰納的和および差を実行することによって、ウェーブレット係数を確定した。サンＨＴの結合、簡単な和が使用された。アルゴリズムはパワー２であるインプットデータの長さが必要であったため、最も２ｎ近くに到達するために実験スペクトルは最後のデータ値で水増しされた。ウェーブレット係数は確定され、広範なウェーブレットからいっそうコンパクトなウェーブレットまで順序よく配置された（φ、Ψ、Ψ１、０、．．．．、Ψｎ、ｋまたはφ、φ１、０．．．．φｎ、ｋ）。
【０１０２】
遺伝的アルゴリズム
関心のあるクラスを推測するための最も倹約した変数のサブセット（方法１由来の波長または方法２由来のウェーブレットのいずれか）は逆最小二乗（ＩＬＳ）回帰によって確定された。方法１におけるように、ほとんど波長が含まれない場合、すべての可能な組み合わせがモデル化された。多くのウェーブレットが分類（すなわち方法２）に含まれる場合、最もよいウェーブレットの選択を確定するための遺伝的アルゴリズム（ＧＡ）最適化が使用された。交配、交叉および突然変異のような原理を使用して、多くのモデルが評価された。それぞれの変数の組み合わせに対して、試料クラスは以下に従って推測された：
Ｙ＝α０＋α１Ｘ１＋α２Ｘ２＋．．．＋αｎＸｎ                （６）
式中、Ｙは依存的変数（神経学的クラス、すなわち０−正常、１−ＡＤ）であり、Ｘ１、Ｘ２、．．．Ｘｎは非依存的変数（すなわち、示された変数またはウェーブレット係数の強度）であり、そしてα０、α１、．．．αｎは１組の目盛りＸから確定される係数である。ＧＡ最適化の完全な説明はどこか他で示されているため、方法のあらましだけがここで示されることになる。
【０１０３】
１〜１５の変数を含む最良適合（ｂｅｓｔ  ｆｉｔ）（最適）モデルは、ＧＡ法を使用して求められた。ある集団の個体（すなわちモデル）は、バイナリーに、および辞書学的にそれらを積み上げることにおいて選択された変数をコード化することによって作製された。２”変数の前処理したスペクトルの場合、バイナリーコード化はｎビットを使用した。集団サイズは１０００にセットされた。すべての個体はメモリセットと一緒に使用され、方程式（６）に従ったモデルを構築した。対応する検量の標準誤差（ｓｔａｎｄａｒｄ  ｅｒｒｏｒ  ｏｆ  ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ）（ＳＥＣ）の計算は試験セットに基づいた。２つの最適な個体がそれらのＳＥＣに基づいて確認され、突然変異無しに次の世代のために保存された。新規な集団の残りは交叉確率１および突然変異確率０．０２を持つ個体を無作為に交配することによって満たされた。２０００世代を通じて集団をたどった後、アルゴリズムは安定解に収束した。
【０１０４】
同じ検索が１〜１５の変数により構築されたモデルに対して実行され、それらのＳＥＣを使用して予測残渣平方和（ＰＲＥＳＳ）プロットを得た。文字ｈは最小ＰＲＥＳＳ値を持つモデルにおけるウェーブレットの数を表す。最大節約モデルは、そのモデルのＰＲＥＳＳが、ｈウェーブレットを持つモデルのＰＲＥＳＳより有意に大きくない（ｆ検定。９９％信頼度）ような、最も少ない数ウェーブレットを持つものであった。
【０１０５】
推測されたクラス値は、０または１のいずれかであった。しかし、上記の回帰は連続の実際値を確定した。クラス分離は、クラス１由来であるとした０．５より大きい値と、クラス０由来の０．５より少ない値を使用して確定された。それぞれのモデルに対して、感度および特異性が確定され、モデル選択の基準として使用された。
【０１０６】
当業者には明らかなように、本発明はＮＩＲ、ＳＷＮＩＲおよびＴＨｚ範囲のような、多様な範囲の光学スペクトル由来の波長に関してよく機能しうることが認識される。吸収スペクトルに加えて、ラマンスペクトルおよび蛍光スペクトルも同様に分析されうる。当業者には明らかなように、ＮＭＲの場合、分析技術は改変されて、所望する酸化ストレス成分を確認し、および／または所望する疾患または異常との相関を実施することになる。
【０１０７】
また、本発明は酸化ストレスの１つ以上の値を提供することに加えて、疾患または異常状態にスペクトルを相関させるために使用されうる。後者の場合、プロセッサーは酸化ストレス成分の複数の値の重み付けされた平均値を表す値を生み出すことが可能であり、その結果重み付けされた平均値が患者の酸化ストレスの程度を表す値を提供することを本発明は提供する。
【０１０８】
実施例２
実施例１の代表的な方法はＩＶＦ手順、および胎児‐母体の健康状態のモニタリングにおいて利用されてもよい。該方法は、卵母細胞、精子、および胚を採取すること、ならびに同じものの凍結保存にも適用可能である。これらの方法を利用した体外受精プログラムも企図される。
【０１０９】
実施例３
成長する胚における酸化ストレス要素のメタボロミックサインはまた、培地の栄養素および代謝産物画分を確認する分析的分離技術を使用しても得られる。紫外線光学検出を備えたキャピラリー電気泳動を使用した分離の例が図７に示される。胚成長に関連する要素は確認され、胚生存能と正および負の両方の相関を有する。とりわけ、９００秒における１種の栄養素は胚生存能と負に相関するが、２種の代謝産物画分（１０００〜１１００秒）は正に相関する。両方の要素群由来の情報を合わせることによって、妊娠にいたる胚と至らなかった胚の分離は８０％の感度および１００％の特殊性で達成される。ここで開発された同じ方法論を使用して、他の起電分離技術、液体およびガスクロマトグラフィーのような分離技術が、生存能査定のための、成長する細胞のこれらのメタボロミックサインの分離にも使用されうる。
【０１１０】
本発明はその特定の態様に関連して記載されているが、それ以上の改変が可能であることは理解されることになり、そして本出願は一般に本発明の原則に従う、本発明のいずれかの変更、使用、または適用を包含し、そして本発明が関連する技術分野内の公知の、または慣例の業務内に属し、そして先に説明した本質的な特徴に適用されてもよく、そして添付の特許請求の範囲に従う、本発明の開示からの逸脱を含むことを意図する。
【０１１１】
参考文献
【０１１２】
【表１】
2009522381.tif 000005
【０１１３】
【表２】
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【０１１４】
【表３】
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【０１１５】
【表４】
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【図面の簡単な説明】
【０１１６】
本発明の付加的な特徴および利点は、添付の図面と組み合わせて考慮される以下の詳細な説明から明らかになる：
【図１】第１の光ファイバーを介してブロードバンドタングステンハロゲンランプからの光を供給される１ｃｍパス長の５０μｌ試料セル、６００ｎｍ〜１１００ｎｍ範囲のＣＷ強度を検出するための第２の光ファイバーを介して試料セルの相対する末端に結合した短波長近赤外（ＳＷＮＩＲ）分光光度計、およびスペクトルを記録し、分析するための分光光度計に接続したコンピュータを有する、光学酸化ストレス測定装置の概要図である。
【図２】６００〜１０００ｎｍ波長範囲における多様な分子種に由来する吸収レベルを示すグラフである。
【図３】２０個のＩＶＦ胚培養培地試料のラマンスペクトルを示す。
【図４】標準偏差のついた平均ラマンスペクトルを示す。
【図５】生育可能な試料のスペクトルを示す。
【図６】クロス確認を示す。
【図７】培地の栄養素および代謝産物画分を確認する紫外線光学検出を備えたキャピラリー電気泳動を使用して得られた、成長中の胚における酸化ストレス要素のメタボロミックサインのグラフである。
【０１１７】
添付の図面全体にわたり、同じ特徴が同じ参考文献番号によって確認される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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