(57)【要約】１．０〜１００ｋＤａの分子量を有するデキストラン水溶液を含む液体組成物を提供し、かつ哺乳動物の体内に液体組成物を導入することによって得られ、それにより哺乳動物の体内の原位置で形成される固体又は半固体インプラント。１〜１００ｋＤａの分子量を有するデキストラン水溶液を含む液体組成物を提供し、かつ液体組成物を凝固させるステップを含み、それにより凝固中、水が液体組成物から徐々に除去される、生物医学的用途に有用な組成物の調製方法。組成物から調製された生物医学用品。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
１．０〜１００ｋＤａの分子量を有するデキストラン水溶液を含む液体組成物を提供し、かつ哺乳動物の体内に前記液体組成物を導入することによって得られ、それにより前記哺乳動物の体内の原位置で形成される固体又は半固体インプラント。
【請求項２】
前記液体組成物は、その中に溶解又は懸濁された生物活性物質を更に含む請求項１に記載のインプラント。
【請求項３】
前記生物活性物質は、前記液体組成物の０．０１〜２５重量％の濃度で存在する請求項２に記載のインプラント。
【請求項４】
前記生物活性物質は、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、有機分子、及びオリゴ又はポリヌクレオチドを含む群から選択される請求項２又は３に記載のインプラント。
【請求項５】
デキストランは、５０〜７５重量％、好ましくは６０〜７０重量％の範囲内の濃度で前記液体組成物中に存在する請求項１から４のいずれかに記載のインプラント。
【請求項６】
前記液体組成物は、滅菌である請求項１から５のいずれかに記載のインプラント。
【請求項７】
前記液体組成物は、注入によって哺乳動物の体内に導入される請求項１から６のいずれかに記載のインプラント。
【請求項８】
前記注入は、２５ゲージ又はそれよりも細い針によって実行される請求項７に記載のインプラント。
【請求項９】
前記液体組成物は、凍結乾燥され、かつそれを哺乳動物の体内に導入する前に初期の水濃度に再水和される請求項２から８のいずれかに記載のインプラント。
【請求項１０】
（ａ）１〜１００ｋＤａの分子量を有するデキストラン水溶液を含む液体組成物を提供し、かつ
（ｂ）前記液体組成物を凝固させるステップを含む、生物医学的用途に有用な組成物を調製する方法であって、
水がステップ（ｂ）の間に前記液体組成物から徐々に除去されることを特徴とする方法。
【請求項１１】
デキストランの分子量は、１〜７０ｋＤａである請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
デキストランは、前記液体組成物中で、２５〜７５重量％の範囲内の濃度で存在する請求項１０又は１１に記載の方法。
【請求項１３】
デキストランは、前記液体組成物中で、５０〜７５重量％の範囲内の濃度で存在する請求項１０から１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記ステップ（ａ）の前記液体組成物からの水は、蒸発によって除去される請求項１０から１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記蒸発は、０〜１００℃の温度で実行される請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記蒸発は、２０〜３７℃の温度で実行される請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
蒸発速度は、１時間当たりステップ（ａ）の前記液体組成物の０．１〜７５重量％である請求項１４から１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
ステップ（ａ）の前記液体組成物からの水は、抽出によって除去される請求項１０から１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記抽出は、１重量部のステップ（ａ）の前記液体組成物に１〜１０重量部のエタノール、液体ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又は液体ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）を添加することによって実行される請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ステップ（ａ）の前記液体組成物に生物活性物質を導入するステップ（ｃ）を含む請求項１０から１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記生物活性物質は、ステップ（ａ）の前記液体組成物中に溶解又は懸濁される請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記生物活性物質は、前記液体組成物中で０．０１〜２５重量％の濃度で存在するような量で導入される請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２３】
生物医学的用途に有用な前記組成物は、哺乳動物の体内で生物活性物質の制御放出に適した組成物である請求項１９から２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
請求項１０から２３のいずれかに記載の方法によって調製された組成物を含むことを特徴とする生物医学用途の物品。
【請求項２５】
硬質の薬剤カプセルの形状の請求項２４に記載の物品。
【請求項２６】
硬質の医療装置、例えばプレート、ネジ、ピンの形状の請求項２４に記載の物品。
【請求項２７】
硬質の医療プロテーゼの形状の請求項２４に記載の物品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的に新規なデキストランマトリックス及びそれらを調製する方法に関する。更に本発明は、前記マトリックスに基づく物品及び組成物、並びに生物医学的用途でのこれらの物品及び組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
新薬の開発と比較して、薬物送達生成物では、特に活性成分が安全性及び毒性に関して予め十分に特徴付けられた時に、多くの場合、少ない開発時間及びコストが要求される。その上、薬物送達技術は、新規な化学成分（ＮＣＥ）に使用でき、困難な薬剤特性にもかかわらず、それらが配合されることを可能にする（Ｍ．Ｖ．Ｃｈａｕｂａｌ，”Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ｉｎ  Ｌｅａｄ  Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ”，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ，９，（１４），６０３−６０９，２００４）。
【０００３】
薬物の制御放出及び標的送達は、薬物送達技術が根差す２つの大概念である。これらの概念の実現成功は、副作用を減少させ、多くの薬物の生物学的利用能及び安定性を改善し、並びに患者のコンプライアンスを高め、かつ投薬過誤を予防することができる。
【０００４】
経口経路は、最も便利な薬物投与方法であり、かつ経口薬物送達技術における小さな改善でさえも、患者のコンプライアンス及び薬物の生物学的利用能を高めることができる。現在の薬物送達技術は、主に遅延放出、すなわち剤形が腸上部又は結腸のようなＧＩＴの特異領域に到達するまで放出されないことに焦点が当てられる。例えば、腸上部への部位特異的送達は、ｐＨ感受性コーティングの使用によって長年達成された。
【０００５】
ゼラチンカプセルは、経口薬物送達に関して非常に普及しているが、ゼラチンカプセル殻の物理化学的性質は、これらのカプセルが腸内ポリマーによって被覆されている時に重大な難問を呈する。ＨＰＭＣカプセルは、ゼラチンのものと比較して若干の利点を有し、かつ米国特許７０９４４２５は、薬物が小腸又は結腸内でカプセルから放出されるように、適切なコーティングをＨＰＭＣカプセルに提供する。
【０００６】
しかしながら、領域内で更なる進歩を可能にする新規な材料の差し迫った必要性がなおも残っている。
【０００７】
生分解性生体適合性ポリマーを主成分とする注入可能な原位置形成装置（ＩＳＦＤ）は、制御放出薬物送達システムとして非常に魅力的である。それらは、潜在的にあらゆる種類の組織及び薬物に適合し、全身又は局所的薬物送達を提供し、投与が容易であり、生成が簡易かつ安価である。
【０００８】
マイクロスフェアに基づく注入可能な薬物送達システムと同様に、ＩＳＦＤは、薬物送達システムを移植するために必要な切開を回避する。しかしながら、マイクロスフェアの製造及び貯蔵は、多くの問題を呈する。また、一旦体内に移植されると、その粒状性質のため、マイクロスフェアは凝集し、かつ移動する傾向があり、そのことは、それらの行動を予測しにくくする。更に、何らかの合併症がある場合、広範な外科的介入なしに体からマイクロスフェアを除去することは、著しく困難であるか、又は不可能である。
【０００９】
現在のところ、タンパク質及びペプチドは普通薬になっており、かつ多くの組換えタンパク質が臨床実験中であるか、すでに規制当局の認可を受けた。現在の治療において、頻繁な注入又は輸液治療は、それらの大部分へ処方される投薬計画であり、かつタンパク質の短い血漿内半減期及び不安定性のために、適切な送達システムの差し迫った必要性がある。ＩＳＦＤは、かかるタイプの薬物のための理論的に優れた送達システムである。
【００１０】
ＩＳＦＤ生成中のタンパク質の不安定性の問題を回避するための技術を発達させることを目的とする熱心な努力にもかかわらず、この分野での進歩は、非常に遅く、主な理由は、おそらく大部分のタンパク質の三次元構造が、あまりにも敏感すぎて使用される製造条件に耐えられないことである。例えば科学文献は、有機溶剤への暴露による分解ポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）及びＰＬＧＡマトリックスの分解で形成される酸性環境に基づくインプラント製造における安定性問題の多数の記述を含む。最近、ＰＬＧＡマイクロスフェア中のｐＨ値が１．５に下がることが明らかにされたが、それは、多くの治療的使用が可能なタンパク質を変性又は損なうために、完全に十分である（Ｆｕら、Ｖｉｓｕａｌ  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  Ａｃｉｄｉｃ  Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  Ｗｉｔｈｉｎ  Ｄｅｇｒａｄｉｎｇ  Ｐｏｌｙ（ｌａｃｔｉｃ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）（ＰＬＧＡ）Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．１７，Ｎｏ．１，２０００，１００−１０６）。ＰＬＧＡインプラントに関して、ｐＨ値は、酸性分解生成物が拡散することが次に更に妨げられるようになり、かつ分解の自触媒反応が強められることにより、更に下がることが見込まれ得る。ＰＬＧＡ生分解の性質は、形成される分解生成物がそれらの酸性基によって更なる加水分解に触媒作用を及ぼすことが可能であり、かつこのことが集中的な生分解及び高い生分解率、並びに従って微小粒子内部のｐＨの実質的な減少を製剤注入後の数週間又は数ヶ月でもたらすようになっている。
【００１１】
製造過程における有機溶剤及びＰＬＧＡマトリックスの生分解中の化学的酸性環境への生物活性物質の暴露によって引き起こされた上記問題を解決するための多数の試みが、記載された。マトリックスとしてのＰＬＧＡを、化学的に中性の分解生成物、例えばアミノ酸及びＰＥＧを生成するポリマーと置き換えるための試みがなされた（米国特許出願２００４００７７７８０）。
【００１２】
ＩＳＦＤに関する幾つかの優れた批評は、以下の通りである。
「注入可能な薬物送達システムのための新規な生分解性ポリマー（Ｂ．Ｊｅｏｎｇ，Ｙ．Ｋ．Ｃｈｏｉ，Ｙ．Ｈ．Ｂａｅ，Ｇ．Ｚｅｎｔｎｅｒ，Ｓ．Ｗ．Ｋｉｍ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ６２（１９９９）１０９−１１４）、
「原位置形成非経口薬物送達システム：概観」（Ｃ．Ｂ．Ｐａｃｋｈａｅｕｓｅｒ，Ｊ．Ｓｃｈｎｉｅｄｅｒｓ，Ｃ．Ｇ．Ｏｓｔｅｒ，Ｔ．Ｋｉｓｓｅｌ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ５８（２００４）４４５−４５５）、
「原位置形成ヒドロゲル−温度感受性システムの批評。総説」（Ｅｖｅ  Ｒｕｅｌ−Ｇａｒｉｅｐｙ，Ｊｅａｎ−Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅ  Ｌｅｒｏｕｘ，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ５８（２００４）４０９−４２６）。
【００１３】
注入可能システムの原位置ゲル化は、温度、ｐＨ、イオン又は溶剤組成の変化によって推進される特異的ポリマーの分子会合の変化に基づくことがある。ＩＳＦＤに潜在的に使用できる多くのポリマーは、新規な化学成分（ＮＣＥ）であり、多くの理由により非経口投与、特に反復非経口投与に適さない。全ての中で最も重要なものは、哺乳動物の組織とのポリマーマトリックスの低い生体適合性である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
以上のことから、原位置でゲル化し、かつ生物活性物質の制御、持続又は遅延放出用のＩＳＦＤの生成過程において使用できる生分解性かつ生体適合性材料の新たな必要性があるように見える。
【００１５】
かかる生分解性かつ生体適合性材料は、敏感な生物活性物質に関しても非経口投与可能な調剤の高い装填を可能にする過程において、生物活性物質が、その生物活性を保持できるようにする条件で取り込まれることを可能にするようになるべきである。
【００１６】
生分解性かつ生体適合性材料は、実質的に完全に生分解性かつ生体適合性調剤が、生成及び適用されることを可能にするようになるべきでもある。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明の１つの目的は、生物活性物質の生物活性が製造過程中、及び投与後に本質的に維持されるように、前記生物活性物質を含むことが可能なＩＳＦＤ用の生体適合性の、生分解性ポリマーマトリックスを提供することである。
【００１８】
本発明のもう１つの目的は、ＧＩＴの特異部位への標的送達を目指すカプセル用のマトリックスを提供することである。
【００１９】
本発明のなおも更なる目的は、注入可能な制御放出貯蔵システム、軟組織増加のための充填剤、及び多くのタイプの医療装置に有用な方法及び組成物を提供することである。
【００２０】
それ故に、本発明の一実施態様において、固体又は半固体インプラントは、１．０〜１００ｋＤａの分子量を有するデキストラン水溶液を含む液体組成物を調製し、かつ哺乳動物の体内に液体組成物を導入することによって提供され、それによりインプラントは、哺乳動物の体内の原位置で形成される。
【００２１】
本発明のもう１つの実施態様において、１．０〜１００ｋＤａの分子量を有するデキストランの高濃度水溶液を含む液体組成物を提供し、この液体組成物を生物活性剤と任意に混合し、かつ混合物を哺乳動物の体内に注入するステップを含む、哺乳動物の体内での生物活性物質（ＢＡＳ）の制御放出用の組成物を調製する方法であって、液体組成物が（半）固体インプラントを形成するために体内で凝固する方法が提供される。
【００２２】
本発明により使用される用語「半固体インプラント」は、固体及び液体の間の中間の剛性及び粘度を有するインプラントを指す。
【００２３】
一実施態様において、デキストランは、５０〜７５重量％、好ましくは６０〜７０重量％の範囲内の濃度で液体組成物中に存在する。
【００２４】
インプラントの一実施態様において、デキストランの分子量は、１ｋＤａ〜１００ｋＤａに、例えば１〜７０ｋＤａに及ぶことがある。
【００２５】
インプラントの調製に使用される液体組成物は、好ましくは滅菌であり、かつパイロジェンがない。
【００２６】
非常に好適には、本発明のインプラントは、原位置形成装置（ＩＳＦＤ）であり、かつそのようなものとして、デキストラン溶液を含む液体組成物と、任意に何らかの生物活性物質とを導入することによって哺乳動物の体内で形成できる。導入は、例えば輸液又は皮下注射器によって、例えば２５ゲージ又はそれよりも細い針、例えば２２ゲージの針によって行われ得る。
【００２７】
一実施態様において、液体組成物は、その中に溶解又は懸濁された生物活性物質を更に含む。生物活性物質は、０．０１〜２５重量％の濃度で液体組成物中に適切に存在できる。
【００２８】
一実施態様において、インプラントが、１種を超える生物活性物質を含み得ることが予想される。
【００２９】
一実施態様において、インプラントが、軟組織増加のために使用されるならば、生物活性物質は、液体組成物中に存在しないことが予想される。
【００３０】
生物活性物質は、例えばデキストラン水溶液に適合する溶剤中の溶液として又は粒子粉末として液体組成物に添加できる。それは、デキストランを添加する前にデキストランを溶解するために使用される水に組み込むことができる。
【００３１】
本発明のために、かつ特に明記しない限り、用語「生物活性物質」は、哺乳動物被検者に投与される時に所望の生物活性又は影響を有する物質を指す。それは、例えばタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、有機分子、オリゴ若しくはポリヌクレオチド又は他のいかなる生物活性分子からも選択できることが予想される。例えば、生物活性物質は、成長因子、インスリン、エリスロポイエチン、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、血液凝固第Ｖ〜ＸＩＩＩ因子、プロテインＣ、グルカゴン様ペプチド１又は２、Ｃ−ペプチド、ワクチン、ホルモン、例えば性ホルモン、上皮成長ホルモン、ヒト成長ホルモン、ＬＨＲＨ類似体、マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球コロニー刺激因子、レプチン、インターロイキン、Ｚｎフィンガーヌクレアーゼ又はそのいずれかの類似体若しくは誘導体、及び有機分子（例えばステロイド、鎮痛剤、局所麻酔剤、抗生物質、化学療法剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、抗増殖剤、抗分裂剤、血管形成剤、抗凝血剤）、オリゴ又はポリヌクレオチド（例えば相同組換えのためのオリゴヌクレオチド、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、ｓｉＲＮＡをコード化する遺伝子を含むプラスミド）及び他のいかなる生物活性分子からも選択できる。
【００３２】
本発明の一実施態様において、インプラントを形成する液体組成物は、当業者に周知の凍結乾燥技術を使用して、凍結乾燥される。凍結乾燥された組成物は、その場合、哺乳動物の体内に導入する前に初期の水濃度に再水和される使用まで便利に貯蔵できる。
【００３３】
本発明のもう１つの実施態様において、
（ａ）１〜１００ｋＤａの分子量を有するデキストラン水溶液を含む液体組成物を提供し、かつ
（ｂ）液体組成物を凝固させるステップを含む、生物医学的用途に有用な組成物を調製する方法であって、
水がステップ（ｂ）の間に液体組成物から徐々に除去される方法が提供される。
【００３４】
発明の方法の一実施態様において、デキストランの分子量は、１ｋＤａ〜１００ｋＤａに、例えば１〜７０ｋＤａに及ぶことがある。
【００３５】
方法の一実施態様において、デキストランは、２５〜７５重量％の範囲内の初期濃度で、例えば５０〜７５重量％の濃度範囲で液体組成物中に存在できる。
【００３６】
生物医学装置を調製するための本発明の方法は、液体組成物から水を除去することを含み、かつこのことは、例えば水の蒸発又は水の抽出によって実行できる。
【００３７】
蒸発は、１０〜４０℃、例えば２０〜３７℃の温度のような、０〜１００℃、例えば０〜５０℃の温度で実行できる。
【００３８】
蒸発速度は、適切には１時間当たりステップ（ａ）の液体組成物の０．１〜７５、例えば１〜５０又は５〜２０重量％である。
【００３９】
一実施態様において、ステップ（ｂ）で水は、抽出によって、１重量部のステップ（ａ）の液体組成物に１〜１０重量部のエタノール、液体ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又は液体ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）を添加することによって液体組成物から除去される。
【００４０】
生物医学的用途に有用な組成物を調製する方法の一実施態様において、液体組成物は、溶液又は分散（懸濁液又はエマルジョン）として存在できる、以上で本明細書に定義されたような生物活性物質を更に含む。
【００４１】
生物活性物質は、適切には０．０１〜２５重量％の濃度で液体組成物中に存在できる。
【００４２】
一実施態様において、１種を超える生物活性物質が、液体組成物中に存在することが予想される。
【００４３】
一実施態様において、組成物が軟組織増加のための充填剤として使用されるならば、生物活性物質が、液体組成物中に存在しないことが予想される。
【００４４】
生物活性物質は、例えばデキストラン水溶液に適合する溶剤中の溶液として又は粒子粉末として添加できる。それは、ステップ（ｂ）で使用するための本発明の液体組成物を与えるように、デキストランを添加する前に、水に組み込むことができる
【００４５】
一実施態様において、
（ａ）少なくとも１種の生物活性物質と、１〜１００ｋＤａの分子量を有するデキストラン水溶液とを含む液体組成物を提供し、かつ
（ｂ）液体組成物を凝固させるステップを含む、哺乳動物の体内で生物活性物質の制御放出に適した組成物を調製する方法であって、
水がステップ（ｂ）の間に液体組成物から徐々に除去される方法がそれ故に提供される。
【００４６】
更に、本発明の一実施態様において、生物医学用途の物品、例えば硬質の薬剤カプセル、硬質の医療装置、例えばプレート、ネジ若しくはピン、又は硬質の医療プロテーゼが提供される。
【００４７】
最後に、本発明のために、哺乳動物は、ヒト又は動物、例えば飼育場動物、例えばウシ、ブタ、ウマ又はヒツジ、家畜、例えばイヌ又はネコ、実験動物、例えばラット、マウス又はウサギ等であってもよいことに注目すべきである。
【００４８】
本発明の更なる実施態様は、本明細書において以下に、かつ請求項において定義される通りである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４９】
本発明の主要な目的は、生物活性物質の生物活性が製造過程中、及び投与後に本質的に維持されるようにその中に組み込まれた前記生物活性物質を含むことが可能なＩＳＦＤ用のポリマーマトリックスと、ＧＩＴの特異部位への標的送達を目指すカプセル用のマトリックスとを提供することである。
【００５０】
デキストランは、有機溶剤中で溶解される必要がなく、かつ中性物質に、最終的には水及び二酸化炭素に代謝され、かつ呼吸及び尿を介して体内から排出されるブドウ糖に分解できるので、適切な、恐らくは理想的でさえあるマトリックス材料である。
【００５１】
非常に好適には、デキストランは周知の材料であり、かつ全ての分子量デキストランは、小腸粘膜中に局在化した酵素によって胃腸管中で酵素分解し、かつ毒性でないことが報告された（例えばＥＵＲＯＰＥＡＮ  ＣＯＭＭＩＳＳＩＯＮ  ＨＥＡＬＴＨ  ＆  ＣＯＮＳＵＭＥＲ  ＰＲＯＴＥＣＴＩＯＮ  ＤＩＲＥＣＴＯＲＡＴＥ−ＧＥＮＥＲＡＬ，ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ  ＣＯＭＭＩＴＴＥＥ  ＯＮ  ＦＯＯＤ  ＣＳ／ＮＦ／ＤＯＳ／７／ＡＤＤ  ３”ＦＩＮＡＬ  ＯＰＩＮＩＯＮ  ＯＦ  ＴＨＥ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ  ＣＯＭＭＩＴＴＥＥ  ＯＮ  ＦＯＯＤ  ＯＮ  Ａ  ＤＥＸＴＲＡＮ  ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮ，ＰＲＯＤＵＣＥＤ  ＵＳＩＮＧ  ＬＥＵＣＯＮＯＳＴＯＣ  ＭＥＳＥＮＴＥＲＯＩＤＥＳ，ＳＡＣＣＨＡＲＯＭＹＣＥＳ  ＣＥＲＥＶＩＳＩＡＥ  ａｎｄ  ＬＡＣＴＯＢＡＣＩＬＬＵＳ  Ｓｐｐ，ＡＳ  Ａ  ＮＯＶＥＬ  ＦＯＯＤ  ＩＮＧＲＥＤＩＥＮＴ  ＩＮ  ＢＡＫＥＲＹ  ＰＲＯＤＵＣＴＳ”ｆｒｏｍ  １８  Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２０００参照）。薬剤上許容し得るデキストランの例は、血漿増量剤として静脈内で使用される分子量７０ｋＤａ（Ｍａｃｒｏｄｅｘ（登録商標））及び４０ｋＤａ（Ｒｈｅｏｍａｃｒｏｄｅｘ（登録商標））のそれである。
【００５２】
臨床等級のデキストランは、市販されており、かつ非経口投与可能な調剤の製造に許容し得る純度を有する（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｅｘｔｒａｎ．ｎｅｔ／ｂｕｙｄｅｘｔｒａｎ．ｈｔｍｌ）。それらは、生物活性物質が、かかる物質の生物活性の保持を可能にする条件で混和できるようにするために十分に高い濃度で十分に安定した水溶液を形成することが可能である。
【００５３】
デキストランを含む炭水化物ポリマーは、類似した分子量の全ての合成ポリマーよりも遙かに高いガラス転移温度を有する。非晶質炭水化物の高いガラス転移温度を説明する１つの質的図式は、乾燥状態で炭水化物分子間の分子間水素結合の形成がより大きな分子的実体の形成をもたらし、他方で水が、炭水化物鎖間の水素結合の形成を分裂させることである。水素結合の重要な役割に従って、水素結合ネットワークの形成は、水素結合形成及び分裂の両方を含む複雑な機構を介して進行し、かつ本質的に２つのパラメータ−温度及び水分活性−によって決まる。これらのパラメータを操作し、炭水化物を主成分とした、異なるタイプのポリマーマトリックスは、形成された水素結合の量及びそれらの特異的な空間分布のために理論的に得ることができる。
【００５４】
発明者によってなされた幾つかの実験上の発見は、デキストランが経口標的送達システム、例えばカプセル、及びＩＳＦＤ用のポリマーマトリックスとして使用できるという彼の仮説を裏付けた。本発明者は、デキストランの高濃度水溶液が容易に得られることを明らかにした。例えば、４０ｋＤａの分子量を有する２ｇのデキストランと、注射器中の１ｇの水とを混合することは、１８〜２２ゲージ針を介して投薬できる、極めて粘性ではない溶液を提供する。２つの表面（ガラス又は金属）の間に挟まれ、デキストラン溶液は、室温で約８時間後に、言及された表面に粘着しない薄い不透明膜を提供する。追加の遅い乾燥は、独自の特性を有する可撓性膜を提供する。膜は、溶液によって被覆されるガラス又は金属棒が使用される時に標準カプセルのキャップ及び本体の形で得ることができる。溶解比較実験は、デキストランマトリックスを主成分とするカプセル及び標準ゼラチンカプセルが、水、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）及び０．１Ｎ  ＨＣｌ中で極めて異なる溶解速度を有することを明らかにした。例えば５０ｍｌの水、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）又は０．１Ｎ  ＨＣｌ中で３７℃かつ１０００回転／分（磁石撹拌器）で、完全溶解時間は、ゼラチンカプセルに関して数秒、かつデキストランカプセルに関して約１時間であった。しかしながら、ＰＢＳ中へのデキストラナーゼの添加は、溶解時間を数分間、減少させる。これらの実験は、全ての分子量デキストランが小腸粘膜中に局在化した酵素によって胃腸管中で酵素分解する上記の事実と総合すると、ｐＨ感受性コーティングに基づかない小腸及び結腸への標的送達の新規な戦略ベースを与える。
【００５５】
デキストランが細菌によって結腸中のみで酵素分解できることを示す多くの科学的出版物があることに、ここで注目することは、興味深い（例えば欧州特許出願ＥＰ１１８４０３２Ａ１参照）。しかしながら、腸内デキストラナーゼの存在は、１９６３年からの周知の事実である（Ｄａｈｌｑｖｉｓｔ  Ａ．”Ｒａｔ  Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｄｅｘｔｒａｎａｓｅ．Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｏｔｈｅｒ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｓｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ  ｔｒａｃｔ”，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．（１９６３）８６，７２を参照）。
【００５６】
水素結合ネット形成過程が開始した後の、高濃度水性デキストラン溶液からの遅い水除去は、最終生成物の特性、例えばカプセル殻の溶解度に影響を与える、非常に重要な技術形態である。この水除去がなければ、結晶化したデキストラン粒子の形成が、（特に低分子量デキストランに関して）起こることがあり、かつ均質系の完全性は破壊される。薬物送達に結晶化したデキストラン粒子を使用する試みは、文献、例えば米国特許４７１３２４９、欧州特許出願ＥＰ１１８４０３２Ａ１、米国特許出願２００４０２３４６１５に記載されている。しかしながら、これらの公報において、均質構造を有する物品、例えばカプセル殻及びインプラント又はデキストランマトリックスを主成分とする特別な装置を得ることができたという示唆は、ない。
【００５７】
しかしながら本発明によれば、優れた生体適合性及び機械強度を有するデキストランを主成分とするモノリシックインプラントは、整形外科外傷固着及び歯科再生手術の生分解性膜に使用される、プレート、ネジ及びピンの形状で容易に調製できる。
【００５８】
整形外科における生分解性インプラントは、金属インプラントと対照的に、装置除去のための第２の外科的介入を必要としないが、それらは一般に採用されておらず、それは、高レベルの局所異物反応に起因し得る。ＰＬＡ又はＰＧＡに基づく、最も普及した先行技術のインプラントの生分解過程は、加水分解によって、小さい断片に破壊されるポリマー鎖から開始する。インプラントの分子量は最初に減少し、かつインプラントの機械強度は減少し、その後の機械的断片化を可能にする。次にインプラントの吸収が、可溶性分解生成物の放出、マクロファージによる食作用及び細胞内分解によって起こる。ポリグリコリドでできた固定インプラントへの組織応答は、１５を超える臨床研究において報告され、かつ４７％までの有害組織応答率が記録された。（Ａｍｂｒｏｓｅ  ＣＧ，  Ｃｌａｎｔｏｎ  ＴＯ：Ｂｉｏａｂｓｏｒｂａｂｌｅ  ｉｍｐｌａｎｔｓ：Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ  ｉｎ  ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ  ｓｕｒｇｅｒｙ．Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ３２：１７１−１７７，２００４）。
【００５９】
本出願で使用される用語「インプラント」とは、硬質の医療装置、例えばプレート、ネジ、ピンのような、哺乳動物の体内に移植されたいかなる異物若しくは組成物、又は軟組織増加のために有用なインプラントのような、固体若しくは半固体異物を意味することに注目できる。
【００６０】
用語「生分解性」は、デキストランを主成分とする、ＩＳＦＤが、非経口投与後に体内で溶解すること、かつデキストラン分子が腎臓を通して排泄されるか、又は最終的に生体によって水及び二酸化炭素に代謝できることを意味することが追加できる。
【００６１】
水素結合の均質ネット形成の過程中の、濃縮デキストラン溶液からの水除去は、例えば液体ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）及びエタノールによるデキストラン溶液からの水抽出過程によって、最適速度での水蒸散又は水抽出によって提供できる。高濃度デキストラン溶液は、液体低分子量ＰＥＧ中で分散でき、かつモノリシックデキストランに近い凝固後、マイクロスフェアを得ることができる。これらのマイクロスフェアは、注入可能な充填剤として、制御放出のための貯蔵として、又は標的送達用の経口調剤として使用できる。
【００６２】
デキストランと混合された活性物質は、例えば緩衝溶液中で、溶解形状であるか、又は固体、非晶質、又は結晶質形状であっても良く、かつ混合は、一般的に０℃〜４５℃である適切な温度で、好ましくは室温（２０℃）で行うことができる。生物活性物質をデキストラン溶液に添加すること又はその逆が、可能である。このシステム、例えばタンパク質中での使用に適した生物活性物質が、一般的に巨大分子であるので、溶解した巨大分子の溶液をデキストランと混合する時に、巨大分子が一般的に内部相又は沈殿物に相当するエマルジョンが形成できることが可能である。生物活性物質が、その生物活性を保持するか又は感知できるほどに失わないならば、このことは完全に許容できる。不水溶性物質は、水溶剤、例えばエタノールと適合する粉末、エマルジョン又は溶液の形状で添加できる。次に均質溶液、エマルジョン又は懸濁液が、当該分野において周知の適切な技術を使用して実行できる撹拌によって作られる。
【００６３】
凍結乾燥は、正しく設計されると、タンパク質のような封入された生物活性物質に対して特に穏やかであるので、多くの場合好ましい乾燥方法である。ＢＡＳを含む高濃度デキストラン溶液に適用されると、それは、長期間室温で貯蔵でき、かつ適用前に初期水濃度に容易に再水和できる調剤を提供する。
【００６４】
本発明者は、初期に極めて粘性でなく，かつ哺乳動物の体内への注入によって投与できる高濃度デキストラン水溶液によって実験を行った。これらの実験は、デキストラン溶液が生体内の生理学的条件で凝固できることを明らかにした−公共の場で以前記載されたかった事実である。驚くべきことに、高濃度水性デキストラン溶液、例えばデキストラン４０ｋＤａの６７％の水溶液が、水性媒体、例えばＰＢＳ中に置かれるか、又は哺乳動物に注入される時、水性環境への暴露後の比較的短い期間中に起こるゲル形成、及び形成されたインプラントからの生物活性物質（ＢＡＳ）の放出が、得られることが発見された。更に、極めて重要な実験上の発見は、形成されたインプラント中に取り込まれたＢＡＳの放出速度が、異なる分子量及び溶解度を有する幅広い範囲の薬物において（主に溶解による）デキストランマトリックス生分解の速度と一致するということである。
【００６５】
本発明は、本発明の範囲の限定として解釈されるべきでない、以下の実施例によって更に例示される。
【実施例１】
【００６６】
ステップ１：約７５重量％の溶液を得るために、１ｇの蒸留水が１５ｍｌの試験管中で３ｇのデキストラン（１ｋＤａ、Ｐｈａｒｍａｃｏｓｍｏｓ）と混合された。混合物は、気泡を除去するために、６ｍｍＨｇで真空処理され、かつ２０００回転／分で５分間遠心分離された。透明溶液が得られた。
【００６７】
ステップ２：１ｍｌのデキストラン溶液を含む３本の１５ｍｌの試験管が、調製され、かつ２ｍｌの水が、全ての管に添加され、それは３７℃かつ３０回転／分でシェーカ内に置かれた。１ｍｌの緩衝液が、３０分毎に取られ、かつ１ｍｌの新鮮水が添加された。緩衝剤の試料は、水蒸散後、マトリックス濃度に関して重量分析された。７日間のゼロ次に近い溶解速度が明らかにされ、かつ約５０％のマトリックス質量が、溶解された。
【実施例２】
【００６８】
ステップ１：約６７重量％の溶液を得るために、１ｇのＰＢＳ、ｐＨ７．４が１５ｍｌの試験管中で２ｇのデキストラン（４０ｋＤａ、Ｐｈａｒｍａｃｏｓｍｏｓ）と混合された。混合物は、気泡を除去するために、６ｍｍＨｇで真空処理され、かつ２０００回転／分で５分間遠心分離され、透明溶液を与えた。
【００６９】
ステップ２：１ｍｌの溶液を含む３本の１５ｍｌの試験管が、調製され、かつ２ｍｌのＰＢＳ、ｐＨ７．４が、全ての管に添加され、それは３７℃かつ３０回転／分でシェーカ内に置かれた。１ｍｌの緩衝液が、３０分毎に取られ、かつ１ｍｌの新鮮緩衝液が添加された。緩衝剤の試料は、水蒸散後、マトリックス濃度に関して重量分析された。７日間のゼロ次に近い溶解速度が明らかにされ、かつ約５０％のマトリックス質量が、溶解された。
【実施例３】
【００７０】
ステップ１：約６７重量％の溶液を得るために、１ｇの蒸留水が１５ｍｌの試験管中で２ｇのデキストラン（４０ｋＤａ、Ｐｈａｒｍａｃｏｓｍｏｓ）と混合された。混合物は、気泡を除去するために、６ｍｍＨｇで真空処理され、かつ２０００回転／分で５分間遠心分離された。透明溶液が得られた。
【００７１】
ステップ２：１ｍｌのデキストラン溶液を含む３本の１５ｍｌの試験管が、調製され、かつ２ｍｌの０．１Ｎ  ＨＣｌが、全ての管に添加され、それは３７℃かつ３０回転／分でシェーカ内に置かれた。１ｍｌの媒体が、３０分毎に取られ、かつ１ｍｌの新鮮な酸が添加された。緩衝剤の試料は、水蒸散後、マトリックス濃度に関して重量分析された。７日間のゼロ次に近い溶解速度が明らかにされ、かつ約５０％のマトリックス質量が、溶解された。
【実施例４】
【００７２】
ステップ１：約６７重量％の溶液を得るために、１ｇの蒸留水が１５ｍｌの試験管中で２ｇのデキストラン（４０ｋＤａ、Ｐｈａｒｍａｃｏｓｍｏｓ）と混合された。混合物は、気泡を除去するために、６ｍｍＨｇで真空処理され、かつ２０００回転／分で５分間遠心分離された。透明溶液が得られた。
【００７３】
ステップ２：０．１ｍｌのインスリン溶液（２５ＩＵ）が、デキストラン溶液に添加され、かつそれと完全に混合された。２ｍｌの緩衝液が、デキストラン及びインスリンの混合物を含む管に添加され、かつ管は、３７℃かつ３０回転／分でシェーカ内に置かれた。１ｍｌの緩衝液が、３０分毎に取られ、かつ１ｍｌの新鮮な緩衝液が添加された。緩衝剤の試料は、ＨＰＬＣ及びＥＬＩＳＡ法によってインスリン濃度に関して分析された。７日間のゼロ次に近い放出速度が明らかにされた（図１）。
【実施例５】
【００７４】
ステップ１：約６７重量％の溶液を得るために、１ｇの蒸留水が１５ｍｌの試験管中で２ｇのデキストラン（４０ｋＤａ、Ｐｈａｒｍａｃｏｓｍｏｓ）と混合された。混合物は、気泡を除去するために、６ｍｍＨｇで真空処理され、かつ２０００回転／分で５分間遠心分離され、かつ透明溶液が得られた。
【００７５】
ステップ２：４ｍｇのテストステロンを含む０．１ｍｌのエタノールが、デキストラン溶液に添加され、かつそれと完全に混合された。２ｍｌの血清が、デキストラン及びテストステロンの混合物を含む管に添加され、かつ３７℃かつ３０回転／分でシェーカ内に置かれた。１ｍｌの血清が、３０分毎に取られ、かつ１ｍｌの新鮮なものが添加された。緩衝剤の試料は、特殊なＥＬＩＳＡ法によってテストステロンに関して分析された。７日間のゼロ次のテストステロン放出が明らかにされた（図１）。
【００７６】
デキストランを主成分とするＩＳＦＤの生分解性及び生体適合性は、非経口注入（皮下及び筋肉内）と、時間に応じた組織の組織学的検査とによって検査された。注入は、細い口径の針、例えば大部分が筋肉内適用に使用される２２ゲージ針によって可能である。デキストランを主成分とするＩＳＦＤは、いかなる炎症及び結合組織形成もなしに、哺乳動物の組織（マウス）から正常に消える。
【実施例６】
【００７７】
ステップ１：約６７重量％の溶液を得るために、１ｇの蒸留水が１５ｍｌの試験管中で２ｇのデキストラン（４０ｋＤａ、Ｐｈａｒｍａｃｏｓｍｏｓ）と混合された。混合物は、気泡を除去するために、６ｍｍＨｇで真空処理され、かつ２０００回転／分で５分間遠心分離され、かつ透明溶液が得られた。
【００７８】
ステップ２：ＩＳＦＤ形成及びその生体適合性が、モデルとしてマウスを使用して生体内で調査された。ステップ１の溶液は、インスリン注射器中に置かれ、かつ動物当たり２０μｌの溶液の用量で、マウスに筋肉内及び皮下注入として投与された。追跡調査は、１、７、２８及び４９日目であった。組織病理学は、十分に耐容性を示したＩＳＦＤ形成を確認した。７週間後に、ＩＳＦＤによって誘発される炎症反応及び結合組織形成は、明らかにされなかった。組織中のインプラント溶解速度が、生体外溶解試験よりも遙かに低いので、得られた実験結果は、デキストランを主成分とするＩＳＦＤが、制御放出貯蔵システムとして、かつ軟組織増加のための充填剤として潜在的に使用できることを示す。
【実施例７】
【００７９】
ステップ１：約７０重量％の溶液を得るために、１．５ｍｌのインスリンＡｃｔｒａｐｉｄ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）が、２０ｍｌの注射器中で３．５ｇのデキストラン（４０ｋＤａ、Ｐｈａｒｍａｃｏｓｍｏｓ）と混合された。溶液は、カプセル当たり０．２５ｇ（７．５ＩＵ）の用量で標準硬質ゼラチンカプセル＃２（Ｃａｐｓｕｌｅｇｅｌ、ＵＳＡ）中で投薬された。１２時間の室温での遅い水蒸発は、カプセル形状及び硬度に影響を与えなかった。
【００８０】
ステップ２：インスリンを含むカプセルの血糖低下作用は、健常ボランティアにおいて研究された。２５０ｍｇのデキストラン４０ｋＤａ（Ｐｈａｒｍａｃｏｓｍｏｓ）を含むカプセルが、プラセボとして使用された。実験は、健常ボランティアにほぼ１２時間の一晩の絶食の後、実行され、かつ実験中に、血糖濃度が測定された（Ｇｌｕｃｏｍｅｔｅｒ  Ｏｎｅ  Ｔｏｕｃｈ，ＢＡＳＩＣ  Ｐｌｕｓ，ＬＩＦＥＳＣＡＮ，Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｎｓｏｎ）。被検者らは、３時間の投薬後治療の間の食品を摂らなかった。研究中、各被検者は、第１日（１日目）にプラセボ（２５０ｍｇのデキストラン４０ｋＤａを含む標準ゼラチンカプセル）を受けた。その翌日（２日目）に、全ての被検者は、ステップ１で調製された２つのゼラチンカプセルを受けた。第８日（８日目）に、各被検者は、炭水化物に富む食品を摂り、かつ第９日に各人は、同じ食品を摂り、食品の６０分前にステップ１で調製された４つのゼラチンカプセルを摂った。血液試料が、血漿ブドウ糖濃度（ｍｍｏｌ／Ｌ）を決定するために、時限間隔で（１５分間毎）引き出された（図２及び３）。
【００８１】
得られた実験データは、カプセルが絶食状態中に有益な血糖低下作用を提供し、かつ食品を食べた後に最大糖値を効果的に低下させることを示す。
【図面の簡単な説明】
【００８２】
【図１】それぞれ実施例４及び実施例５の条件でのインスリン及びテストステロン放出のグラフ表示である。
【図２】それぞれ１日目（Ｄ１）にプラセボ組成物（各々が２５０ｍｇのデキストラン４０ｋＤａを含む２つの標準ゼラチンカプセル＃２）、２日目（Ｄ２）に本発明によるインスリン含有組成物（各々が２５０ｍｇのデキストランマトリックス及びヒト組換えインスリン７．５ＩＵを含む２つの標準ゼラチンカプセル＃２）、並びに８日目（Ｄ８）に食品組成物、及び９日目（Ｄ９）に本発明によるインスリン含有組成物（各々が２５０ｍｇのデキストランマトリックス及びヒト組換えインスリン７．５ＩＵを含む４つの標準ゼラチンカプセル＃２）の投与後に測定された、健康な被検者１（ＢＭＩ２４）における血漿ブドウ糖濃度（ｍｍｏｌ／Ｌ）の変動のグラフ表示である。  １日目（Ｄ１）−絶食状態１８０分、３日目（Ｄ３）−３０分目に経口的に１５ＩＵ、５日目（Ｄ５）−３０分目に食品、７日目（Ｄ７）−３０分目に経口的に３０ＩＵ及び３０分目に食品。
【図３】それぞれ１日目（Ｄ１）にプラセボ組成物（各々が２５０ｍｇのデキストラン４０ｋＤａを含む２つの標準ゼラチンカプセル＃２）、２日目（Ｄ２）に本発明によるインスリン含有組成物（各々が２５０ｍｇのデキストランマトリックス及びヒト組換えインスリン７．５ＩＵを含む２つの標準ゼラチンカプセル＃２）、並びに８日目（Ｄ８）に食品組成物、及び９日目（Ｄ９）に本発明によるインスリン含有組成物（各々が２５０ｍｇのデキストランマトリックス及びヒト組換えインスリン７．５ＩＵを含む４つの標準ゼラチンカプセル＃２）の投与後に測定された、健康な被検者２（ＢＭＩ２９）における血漿ブドウ糖濃度（ｍｍｏｌ／Ｌ）の変動のグラフ表示である。  １日目（Ｄ１）−絶食状態１８０分、３日目（Ｄ３）−３０分目に経口的に１５ＩＵ、５日目（Ｄ５）−３０分目に食品、７日目（Ｄ７）−３０分目に経口的に３０ＩＵ及び３０分目に食品。
【図１】
2009523791.tif 000003
【図２】
2009523791.tif 000004
【図３】
2009523791.tif 000005
【手続補正書】
【提出日】平成20年3月20日(2008.3.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）２５〜７５重量％の範囲内の濃度で１〜１００ｋＤａの分子量を有するデキストラン水溶液を提供し、
（ｂ）ステップ（ａ）の前記水溶液にタンパク質から選択された生物活性物質を導入し、かつ
（ｃ）このようにして得られた液体組成物を凝固させるステップを含む、タンパク質から選択された生物活性物質の、哺乳動物の体内への制御放出に適した組成物を調製する方法であって、
ステップ（ｃ）の間に、水が蒸発又は抽出によって前記液体組成物から徐々に除去されることを特徴とする方法。
【請求項２】
デキストランの分子量は、１〜７０ｋＤａである請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップ（ａ）においてデキストランは、５０〜７５重量％の範囲内の濃度で存在する請求項１から３のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
前記ステップ（ｂ）の前記液体組成物からの水は、蒸発によって除去される請求項１から３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記蒸発は、０〜５０℃の温度で実行される請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記蒸発は、２０〜３７℃の温度で実行される請求項５に記載の方法。
【請求項７】
蒸発速度は、１時間当たりステップ（ｂ）の前記液体組成物の０．１〜７５重量％である請求項４から６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
ステップ（ｂ）の前記液体組成物からの水は、抽出によって除去される請求項１から３のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記抽出は、１重量部のステップ（ｂ）の前記液体組成物に１〜１０重量部のエタノール、液体ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又は液体ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）を添加することによって実行される請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記生物活性物質は、ステップ（ａ）の前記液体組成物中に溶解又は懸濁される請求項１から９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記生物活性物質は、前記液体組成物中で０．０１〜２５重量％の濃度で存在するような量で導入される請求項１から１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
請求項１から１１のいずれかに記載の方法によって調製された組成物を含むことを特徴とする生物医学用途の物品。
【請求項１３】
硬質の薬剤カプセルの形状の請求項１２に記載の物品。
【請求項１４】
硬質の医療装置、例えばプレート、ネジ、ピンの形状の請求項１２に記載の物品。
【請求項１５】
硬質の医療プロテーゼの形状の請求項１２に記載の物品。
【国際調査報告】
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