(57)【要約】活性薬剤および非ポリマー性ポリアニオン化合物を、アニオン高分子およびアニオンポリマーを含有するマイクロ粒子に架橋活性化剤の存在下で結合させることができる。非限定的な例では、非ポリマー性ポリアニオン化合物は、アスパラギン酸またはグルタミン酸などのポリアニオンアミノ酸である。ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏでの活性薬剤の調節放出のために、マイクロ粒子を使用することができる。本発明により、例えば、マイクロ粒子を調製する方法であって、予備形成マイクロ粒子を提供するステップと、該予備形成マイクロ粒子を少なくとも１種の活性薬剤および少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物に曝露するステップと、該少なくとも１種の活性薬剤および該少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物と結合している該予備形成マイクロ粒子を含む該マイクロ粒子を形成するステップとを含む方法が提供される。
2009538926.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マイクロ粒子を調製する方法であって、
予備形成マイクロ粒子を提供するステップと、
該予備形成マイクロ粒子を少なくとも１種の活性薬剤および少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物に曝露するステップと、
該少なくとも１種の活性薬剤および該少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物と結合している該予備形成マイクロ粒子を含む該マイクロ粒子を形成するステップと
を含む方法。
【請求項２】
前記予備形成マイクロ粒子を、流動性媒体中の懸濁物として提供する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記曝露するステップが、前記少なくとも１種の活性薬剤および前記少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物を一緒に、または別々に前記懸濁物に混合するステップを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物が、二酸、三酸、四酸、ポリアニオンアミノ酸、それらの無水物、それらの類似体、それらの塩およびそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せのうちの少なくとも１種を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物の塩が、一価金属カチオン、二価金属カチオン、多価金属カチオン、有機カチオンおよびそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せを有する塩からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物が、アスパラギン酸、グルタミン酸、それらの塩およびそれらのうちの２種以上の組合せのうちの少なくとも１種を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記少なくとも１種の活性薬剤が、第一級アミン基およびカルボキシル基を含まず、少なくとも１個の求核基を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも１種の活性薬剤が、プロトン化可能であるかまたはプロトン化されている、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記少なくとも１種の活性薬剤が、前記少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物と結合している、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記少なくとも１種の活性薬剤が、ＬＨＲＨ、そのアゴニスト、そのアンタゴニスト、それらの類似体、それらの塩およびそれらのうちの２種以上の組合せのうちの少なくとも１種を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記予備形成マイクロ粒子、前記少なくとも１種の活性薬剤および前記少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物を含む混合物を形成するステップと、前記混合物を少なくとも１種の架橋活性化剤に曝露するステップとをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１種の架橋活性化剤が、カルボジイミドおよびその塩のうちの少なくとも１種を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記少なくとも１種の架橋活性化剤が、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、１−エチル−３−（４−アゾニア−４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミド、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミド、それらの塩およびそれらのうちの２種以上の組合せのうちの少なくとも１種を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記混合物を前記少なくとも１種の架橋活性化剤に１０℃から６０℃の間の温度および６．５以下のｐＨで曝露する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記予備形成マイクロ粒子が、少なくとも１種のアニオン高分子および少なくとも１種のアニオンポリマーを含む均一な混合物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
少なくとも１種のアニオン高分子と、
少なくとも１種のアニオンポリマーと、
少なくとも１種の活性薬剤と、
少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物と
を含むマイクロ粒子であって、該少なくとも１種のアニオン高分子および該少なくとも１種のアニオンポリマーが相互に均一に分布している、マイクロ粒子。
【請求項１７】
前記少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物が二酸、三酸、四酸、ポリアニオンアミノ酸、それらの無水物、それらの類似体、それらの塩およびそれらのうちの２種以上の組合せのうちの少なくとも１種を含む、請求項１６に記載のマイクロ粒子。
【請求項１８】
前記少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物の塩が、一価金属カチオン、二価金属カチオン、多価金属カチオン、有機カチオンおよびそれらのうちの２種以上の組合せを有する塩からなる群から選択される、請求項１７に記載のマイクロ粒子
【請求項１９】
前記少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物がアスパラギン酸、グルタミン酸、それらの塩およびそれらのうちの２種以上の組合せのうちの少なくとも１種を含む、請求項１６に記載のマイクロ粒子。
【請求項２０】
前記少なくとも１種のアニオン高分子がヒト血清アルブミンを含み、前記少なくとも１種のアニオンポリマーが硫酸デキストランを含む、請求項１６に記載のマイクロ粒子。
【請求項２１】
前記少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物が水性可溶性である、請求項１６に記載のマイクロ粒子。
【請求項２２】
前記少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物が脂肪酸ではない、請求項１６に記載のマイクロ粒子。
【請求項２３】
前記少なくとも１種の活性薬剤がプロトン化可能であるか、またはプロトン化されている、請求項１６に記載のマイクロ粒子。
【請求項２４】
前記少なくとも１種の活性薬剤が、前記少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物と結合している、請求項１６に記載のマイクロ粒子。
【請求項２５】
前記少なくとも１種の活性薬剤が、第一級アミン基およびカルボキシル基を含まず、少なくとも１個の求核基を含む、請求項１６に記載のマイクロ粒子。
【請求項２６】
前記求核基がヒドロキシル基である、請求項２３に記載のマイクロ粒子。
【請求項２７】
前記少なくとも１種の活性薬剤が、少なくとも１個のヒスチジン残基ならびにセリン残基、トレオニン残基、チロシン残基およびそれらのうちの２個またはそれより多くの組合せのうちの少なくとも１個を含む、請求項１６に記載のマイクロ粒子。
【請求項２８】
前記少なくとも１種の活性薬剤が、それぞれ構造Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３を有する同じかまたは異なるオリゴペプチドセグメントのうちの少なくとも１個を含み、Ｚ１はヒスチジン残基であり、Ｚ２はＺ１およびＺ３とは異なり、Ｚ２は単一のアミノ酸残基または２個またはそれより多くのアミノ酸残基の鎖であり、Ｚ３はセリン残基またはトレオニン残基である、請求項１６に記載のマイクロ粒子。
【請求項２９】
前記活性薬剤が、ＬＨＲＨ、そのアゴニスト、そのアンタゴニスト、それらの類似体、それらの塩およびそれらのうちの２種以上の組合せのうちの少なくとも１種を含む、請求項１６に記載のマイクロ粒子。
【請求項３０】
前記マイクロ粒子が、前記少なくとも１種のアニオン高分子および前記少なくとも１種のアニオンポリマーから形成される核を含み、前記核が、前記少なくとも１種の活性薬剤および前記少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物と結合している、請求項１６に記載のマイクロ粒子。
【請求項３１】
前記活性薬剤が、ロイプロリド；ゴセレリン；ブセレリン；ゴナドレリン；ヒストレリン；ナファレリン；デスロレリン；フェルチレリン；トリプトレリン；ならびに酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ヒドラジド、アミドおよび塩酸塩からなる群から選択されるそれらの塩；ならびにそれらのうちの２種以上の組合せのうちの少なくとも１種を含む、請求項１６に記載のマイクロ粒子。
【請求項３２】
少なくとも１種のアニオン高分子と、
少なくとも１種のアニオンポリマーと、
ＬＨＲＨ、そのアゴニスト、そのアンタゴニスト、それらの類似体、それらの塩およびそれらのうちの２種以上の組合せからなる群から選択される少なくとも１種の活性薬剤と、
ポリアニオンアミノ酸、それらの無水物、それらの類似体、それらの塩およびそれらのうちの２種以上の組合せからなる群から選択される少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物と
を含むマイクロ粒子。
【請求項３３】
前記少なくとも１種の活性薬剤が、ロイプロリド、ゴセレリン、ブセレリン、ゴナドレリン、ヒストレリン、ナファレリン、デスロレリン、フェルチレリン、トリプトレリン、それらの塩およびそれらのうちの２種以上の組合せからなる群から選択され、前記非ポリマー性ポリアニオン化合物が、アスパラギン酸、グルタミン酸およびそれらの塩からなる群から選択される、請求項３２に記載のマイクロ粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（技術分野）
本開示は一般に、マイクロ粒子およびマイクロ粒子を製造するための方法に関する。マイクロ粒子は、１ミリメートル未満の平均幾何粒径（時に直径と称される）を有する。マイクロ粒子は、多くの異なる用途、主に分離、診断および薬物送達で使用されている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
（概要）
本開示のいくつかの態様が存在する。一態様では、本開示は、少なくとも１種の活性薬剤および少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物を含むマイクロ粒子組成物およびマイクロ粒子を製造するための方法を提供する。他の態様では、本開示は、オリゴペプチドセグメントを有し、かつ／または第一級アミン基および／もしくはカルボキシル基を含まない、少なくとも１種の活性薬剤を含むマイクロ粒子組成物ならびにマイクロ粒子を製造する方法を提供する。マイクロ粒子の態様では、活性薬剤は、ヒドロキシル基でありうる少なくとも１個の求核基を含んでもよい。
【０００３】
さらなる態様では、本開示は、少なくとも１種の活性薬剤ならびに二酸、三酸、ポリアニオンアミノ酸、それらの誘導体およびそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せのうちの少なくとも１種を含む少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物を含む、マイクロ粒子組成物およびその組成物を製造するための方法を提供する。
【０００４】
本開示の他の態様では、予備形成マイクロ粒子、少なくとも１種の活性薬剤および少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物を組み合わせるステップと、この組合せを少なくとも１種の架橋活性化剤に曝露するステップとを包含する方法により、マイクロ粒子組成物を提供する。この方法により、予備形成マイクロ粒子が少なくとも１種の活性薬剤および少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物と結合しているマイクロ粒子を調製することができる。一例では、少なくとも１種の活性薬剤が、少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物と結合している。
【０００５】
この開示の他の態様は、少なくとも１種のアニオン高分子、少なくとも１種のアニオンポリマー、少なくとも１種の活性薬剤および少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物を含むマイクロ粒子組成物を提供する。さらなる態様では、アニオン高分子およびアニオンポリマーは、相互に均一に分布している。
【０００６】
本開示の他の態様、目的および利点は、特に、本明細書に記載されている様々な特徴の述べられているおよび述べられていない組合せを包含する、例示されている実施形態による以下の記載、添付の図面に示されている関連情報から理解される。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
この明細書では、添付の図面を参照する。
【図１】図１は、マイクロ粒子におけるロイプロリド、アスパラギン酸およびヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の様々な共有結合の可能な、しかし非限定的な反応スキームを示す図である。
【図２】図２は、実施例１の開示によるマイクロ粒子からのロイプロリドの放出動態を示すプロットである。
【図３】図３は、実施例３の開示によるマイクロ粒子からのロイプロリドの放出動態を示すプロットである。
【図４】図４は、実施例４の開示によるマイクロ粒子からのロイプロリドの放出動態を示すプロットである。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
（詳細な説明）
マイクロ粒子を使用すると、マイクロ粒子に組み込まれているか、他の方法で結合されている少なくとも１種の活性薬剤の調節放出（制御放出など）が可能な製剤を提供することができる。有効な送達媒体であるためには、少なくとも１種の結合されている活性薬剤が所望の放出プロファイルを示しうるようにマイクロ粒子を設計することができる。製剤は少なくとも１種の活性薬剤の有効性を、著しくは高めないとしても、実質的に維持する。
【０００９】
これらに限られないが、本開示は一般に、少なくとも１種の高分子（ヒト血清アルブミンのような水溶性高分子およびアニオン高分子など）、少なくとも１種のポリマー（硫酸デキストランのような水溶性ポリマーおよびアニオンポリマーなど）、少なくとも１種の活性薬剤（ロイプロリドおよびゴセレリンならびにそれらの塩のようなタンパク質性化合物および核酸など）および少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物（アスパラギン酸およびグルタミン酸のような二酸およびポリアニオンアミノ酸、それらの無水物、それらの類似体およびそれらの塩など）を含有するマイクロ粒子に関する。一例では、非ポリマー性ポリアニオン化合物は２個またはそれより多くの同じかまたは異なるアニオンおよび／または陰イオン化可能官能基（カルボキシル基など）ならびに必要に応じて、１個またはそれより多くの同じかまたは異なるカチオンおよび／または陽イオン化可能官能基（１個またはそれより多くのアミン基など）を有する。非ポリマー性ポリアニオン化合物の非限定的な例には、二酸（コハク酸、シュウ酸、マロン酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、マレイン酸、フマル酸のようなジカルボン酸など）；三酸（クエン酸、トリカルバリル酸、トリメリト酸、カルボキシメチルオキシコハク酸、ニトリロ三酢酸のようなトリカルボン酸など）；四酸（エチレンジアミン四酢酸、１，２，３，４−ブタンテトラカルボン酸のようなテトラカルボン酸など）；ポリアニオンアミノ酸（典型的には、アミノ基よりも多くの酸性の基を有する）、例えばアミノ二酸（アスパラギン酸、グルタミン酸、カイニン酸、β−ヒドロキシアスパラギン酸、β−ヒドロキシグルタミン酸、β−メチルアスパラギン酸、β−メチルグルタミン酸、２−アミノアジピン酸のようなジカルボン酸アミノ酸など）、アミノ三酸（カルボキシグルタメート、アコニット酸、ドモ酸（ｄｏｍｏｉｃ  ａｃｉｄ）のようなトリカルボン酸アミノ酸など）、ジアミノ三酸、ならびに、それらの無水物、それらの類似体およびそれらの塩（例えば、Ｎａ＋およびＫ＋のような一価金属カチオン、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋、Ｆｅ２＋、Ｃｕ２＋のような二価金属カチオン、Ａｌ３＋およびＦｅ３＋のような他の多価カチオンなどの１個またはそれより多くのカチオン、ならびに、テトラアルキルアンモニウムのような有機カチオン（ここで、アルキル基は独立に、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、アミル、イソアミル、ｓｅｃ−アミル、ｔ−アミル、ヘキシル、イソヘキシル、ｓｅｃ−ヘキシルおよびｔ−ヘキシル基などのＣ１からＣ６の直鎖または分枝鎖のアルキル基から選択される）を有する塩）が包含される。非限定的な一例では、非ポリマー性ポリアニオン化合物は、水溶性（ｗａｔｅｒ−ｓｏｌｕｂｌｅ）であるような水性可溶性（ａｑｕｅｏｕｓ−ｓｏｌｕｂｌｅ）である。他の非限定的な例では、非ポリマー性ポリアニオン化合物は、脂肪一酸、脂肪二酸および他の脂肪多酸を包含する脂肪酸ではない。さらなる非限定的な例では、少なくとも１種の活性薬剤は、ＬＨＲＨのアゴニスト、アンタゴニストおよび類似体ならびに本明細書に開示されてい��それらの塩など、（部分的または完全に、例えば、水溶液中で、または塩形態でのように）プロトン化可能であるかまたはプロトン化されている。さらなる非限定的な例では、本開示のマイクロ粒子は、脂質を含まない。
【００１０】
他の例では、活性薬剤は、官能性アミン基を含まず、官能性カルボキシル基を含まず、１個またはそれより多くの同じかまたは異なる求核基（ヒドロキシル基など）を有する。さらなる例では、活性薬剤は、セリン、トレオニンおよびチロシン残基のうち１個またはそれより多くを含有する。さらなる例では、活性薬剤は、１個またはそれより多くの同じかまたは異なるオリゴペプチドセグメント（トリペプチドセグメントなど）を含有し、このようなセグメントはそれぞれ、一般構造Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３を有し、ここで、Ｚ１はヒスチジン残基であり、Ｚ２はＺ１およびＺ３とは異なり、Ｚ２は単一のアミノ酸残基または２個またはそれより多くのアミノ酸残基を含有するセグメントであり、Ｚ３はセリン残基またはトレオニン残基である。適切な活性薬剤の非限定的な例には、ロイプロリド、ゴセレリン、ブセレリン、ゴナドレリン、ヒストレリン、ナファレリン、デスロレリン、フェルチレリン、トリプトレリン、それらのアゴニスト、それらのアンタゴニスト、それらの類似体、それらの塩（例えば、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ヒドラジド、アミドおよび塩酸塩）ならびにそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せが包含される。これらの活性薬剤のうちの少なくとも数種は、カチオン性である。
【００１１】
さらなる例では、マイクロ粒子を調製するための非限定的な方法は、支持体としての予備形成マイクロ粒子を提供するステップと、予備形成マイクロ粒子を少なくとも１種の活性薬剤および少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物に（同時に、連続して、または別々に）曝露するステップと、それぞれ予備形成マイクロ粒子、少なくとも１種の活性薬剤および少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物を含有するマイクロ粒子を形成するステップとを包含する。生じるマイクロ粒子はそれぞれ典型的に、少なくとも１個の予備形成マイクロ粒子を含有する。マイクロ粒子を形成する間および／またはその後に、予備形成マイクロ粒子を少なくとも１種の活性薬剤および／または少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物と（共有的に、静電的におよび／またはその他の形で）結合させることができる。マイクロ粒子の形成前、その間および／またはその後に、少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物を少なくとも１種の活性薬剤と（共有的に、静電的におよび／またはその他の形で）結合させることができる。一例では、予備形成マイクロ粒子を、水溶液などの非溶媒媒体中の懸濁物の形態で提供する。予備形成マイクロ粒子を、少なくとも１種の高分子（ヒト血清アルブミンのような）と少なくとも１種のポリマー（硫酸デキストランなど）との均一な混合物などの、２種またはそれより多くの材料から形成することができる。曝露プロセスを、少なくとも１種の架橋活性化剤（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド、１−エチル−３−（４−アゾニア−４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミド、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミドメト−ｐ−トルエンスルホネートおよびそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せのようなカルボジイミドおよびそれらの塩など）の存在下で実施することができる。一例では、少なくとも１種の架橋活性化剤を、少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物を加えた後に予備形成マイクロ粒子の懸濁物に１０℃から６０℃までの間の温度および／または６．５以下のｐＨで混合する。生じたマイクロ粒子は、そのまま（懸濁物の形態などで）さらに加工することなく使用してもよく、または、必要に応じて、例えば、遠心洗浄、濾過、ダイアフィルトレーション、透析および／または凍結乾燥を介して有用な形態（懸濁物または乾燥粉末など）に加工してもよい。
【００１２】
本明細書で他に定義されていない限り、本開示で使用される科学的専門用語および技術的専門用語は、当業者によって通常理解され、使用される意味を有するものとする。文脈で別段に必要とされない限り、単数形の用語はその複数形を包含するものとし、複数形の用語はその単数形を包含するものとすると理解される。特に、本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」および「ａｎ」は、文脈上別段明確に示していない限り、複数のものへの言及を包含する。したがって、例えば、特定のマイクロ粒子についての言及は、当業者に知られているその均等物を包含する、１個のこのようなマイクロ粒子またはそれより多くのこのようなマイクロ粒子についての言及である。また、本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、「少なくとも１つ」および「１つまたはそれより多く」という用語は、同じ意味を有し、１つ、２つ、３つまたはそれより多くを包含する。以下の用語は、別段に示されていない限り、本開示の文脈で使用される場合、以下の意味を有すると理解されるものとする。
【００１３】
「活性薬剤」とは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、１種またはそれより多くの物理的、化学的および／または生物学的な効果を直接的または間接的に誘発することができる、天然に生じるか、合成または半合成の物質（例えば、化合物、発酵物、抽出物、細胞構造物）を指している。活性薬剤は、寄生生物を破壊することにより、または宿主もしくは寄生生物の生理機能を著しく変更して疾患または異常の作用を制限することなどにより、生体の異常状態および／または病的状態を予防、緩和、処置および／または治癒することができる。活性薬剤は、生理学的な身体機能を維持、増強、減少、制限または破壊することができる。活性薬剤は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏ試験により、生理学的状態または状況を診断することができる。活性薬剤は、動物または微生物を誘引、無力化、阻害、殺傷、調節、忌避および／または抑制することにより、環境または生体を制御または防御することができる。活性薬剤は、他の方法で、身体を処置（脱臭、保護、装飾、手入れなど）することができる。効果および／またはその適用に応じて、活性薬剤はさらに、生理活性剤、医薬品（例えば、予防剤、治療剤）、診断剤、栄養補助剤および／または化粧品と称されることがあり、限定ではないが、プロドラッグ、親和性分子、合成有機分子、ポリマー、２ｋＤまたはそれより小さい（１．５ｋＤもしくはそれより小さいかまたは１ｋＤもしくはそれより小さいなど）分子量を有する分子、高分子（２ｋＤもしくはそれより大きいかまたは５ｋＤもしくはそれより大きい分子量を有する分子など）、タンパク質性化合物、ペプチド、ビタミン、ステロイド、ステロイド類似体、脂質、核酸、炭水化物、それらの前駆体およびそれらの誘導体を包含する。活性薬剤は、イオン性または非イオン性であってよく、中性であるか、正に荷電されているか、負に荷電されているか、または両性イオン性であってよく、単独で、またはそれらのうちの２種もしくはそれより多くの組合せで使用することができる。活性薬剤は水不溶性または水溶性であってよい。活性薬剤は、７．０もしくはそれより大きいかまたは７．０未満の等電点を有してよい。
【００１４】
「非ポリマー性ポリアニオン化合物」は、２個またはそれより多くの脱プロトン可能な基（酸性基など）を有するポリマー以外の化合物、ならびにそれらの対応する無水物、類似体および塩を指している。非限定的な一例では、非ポリマー性ポリアニオン化合物は、水溶性であるなどの水性可溶性である。他の非限定的な例では、非ポリマー性ポリアニオン化合物は、脂肪一酸、脂肪二酸および他の脂肪多酸を包含する脂肪酸ではない。
【００１５】
「マイクロ粒子」は、２００ミクロンもしくはそれより小さいか、１００ミクロンもしくはそれより小さいかまたは１０ミクロンもしくはそれより小さいなどの１ｍｍ未満の平均幾何粒径（時に直径と称される）を有する固体（実質的固体または半固体は包含するが、ゲル、液体および気体は除く）である粒子を指している。平均幾何粒径は、０．１ミクロンもしくはそれより大きいまたは０．５ミクロンもしくはそれより大きいなどの、これらのような値から０．０１ミクロンもしくはそれより大きいまでの間の範囲であってよい。一例では、平均幾何粒径は、０．５ミクロンから５ミクロンまでの範囲であってよい。平均幾何粒径は、動的光散乱法（光相関分光法、レーザー回折、低角度レーザー光散乱法（ＬＡＬＬＳ）、中角度レーザー光散乱法（ＭＡＬＬＳ）など）、光掩蔽法（Ｃｏｕｌｔｅｒ分析法など）または他の方法（流動学、光学または電子顕微鏡法など）により測定することができる。肺送達用粒子は、飛行時間型測定法またはＡｎｄｅｒｓｏｎ  Ｃａｓｃａｄｅ  Ｉｍｐａｃｔｏｒ測定法により決定される空気力学的粒径を有する。マイクロ粒子は、球形（時にマイクロスフェアと称される）を有してよく、かつ／またはカプセル封入されていてよい（時にマイクロカプセルと称する）。ある種のマイクロ粒子は、１個またはそれより多くの内部空隙および／または空洞を有してよい。他のマイクロ粒子は、このような空隙または空洞を含まなくてもよい。マイクロ粒子は、多孔性または非多孔性であってよい。マイクロ粒子は、一部または全体が、本明細書に開示されている活性薬剤、担体、ポリマーおよび／または安定剤などの１種またはそれより多くの非限定的材料から形成されていてよい。
【００１６】
「ペプチド」は、少なくとも一部が２種またはそれより多くの同じかまたは異なるアミノ酸および／またはイミノ酸から形成される天然、合成または半合成化合物を指している。ペプチドの非限定的例には、オリゴペプチド（ジペプチドおよびトリペプチドなどを包含するアミノ／イミノ酸モノマー単位を５０個未満有するものなど）、ポリペプチド、本明細書で定義されるとおりのタンパク質性化合物、ならびに、それらの前駆体および誘導体（例えば、グリコシル化、高グリコシル化、ＰＥＧ化、ＦＩＴＣ標識、それらの塩）が包含される。ペプチドは、単独で、またはそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せで使用することができる。ペプチドは、中性であるか、正に荷電しているか、負に荷電しているか、または両性イオン性であってよく、単独で、またはそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せで使用することができる。
【００１７】
「タンパク質性化合物」とは、タンパク質の天然、合成、半合成もしくは組換えの化合物、またはタンパク質に構造的および／もしくは機能的に関連する天然、合成、半合成もしくは組換えの化合物、ならびにペプチド結合を介して共有結合しているα−アミノ酸を含有するか、または本質的にそれから構成される化合物を指しており、前駆体、改変体、類似体、誘導体、アゴニスト、アンタゴニスト、ならびにそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せを包含する。天然に生じるタンパク質性化合物には、どのような種、例えば、ヒト、ウシ、ブタ、イヌまたはネコのものでも包含される。タンパク質性化合物またはその前駆体のアミノ酸部分は、固相合成化学、天然供給源からの精製、組換えＤＮＡ技術、アルキル化およびアシル化などの合成有機技術ならびにそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せにより製造することができる。
【００１８】
「前駆体」は、１種またはそれより多くの前駆体部分をある材料に固定するような、化学的および／または生化学的な反応または経路などを介して、所望の材料または物質に変換することができる、任意の材料または物質を指している。非限定的な前駆体部分には、マレイミド基、ジスルフィド基（例えば、オルト−ピリジルジスルフィド）、ビニルスルホン基、アジド基およびα−ヨードアセチル基が包含される。タンパク質性化合物の前駆体には、ホルモンなどの様々なタンパク質性化合物の還元（−−ＳＨ）形態およびＳ−保護形態、例えば、Ｓ−スルホネートがさらに包含される。
【００１９】
「類似体」は、基本化合物またはそのクラスに特徴的な薬学的および／または薬理学的活性を保持する基本化合物またはそのクラスの化学的に修飾された形態を有する化合物を指している。タンパク質性化合物およびその前駆体の類似体には例えば、基本化合物と比較して１個またはそれより多くのアミノ酸の置換、欠失、逆位または付加を有する分子が包含される。
【００２０】
「誘導体」は、１つまたはそれより多くの化学的および／または生化学的な反応または経路などを介して、親材料または物質から形成される任意の材料または物質を指している。誘導体の非限定的な例には、グリコシル化物、高グリコシル化物、ＰＥＧ化物、ＦＩＴＣ標識物、保護基で保護されたもの（例えば、アルコールまたはチオールについてはベンジル、アミンについてはｔ−ブトキシカルボニル）、さらに、それらの塩、エステル、アミド、結合体、複合体、製造関連化合物および代謝物が包含される。塩は、一価または多価の、金属、有機または有機金属であるカチオン、および一価または多価の、有機、無機または有機金属であるアニオンを伴う、有機塩または無機塩であってよい。薬学的に許容できる塩には、限定ではないが、非毒性無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸）および有機酸（例えば、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸（ｐａｍｏｉｃ）、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸）から形成される親化合物の慣用の非毒性塩または四級アンモニウム塩などの塩基性残基（例えば、アミン）の無機または有機の酸性塩、酸性残基（例えば、カルボン酸）のアルカリまたは有機塩などが包含される。タンパク質性化合物およびその前駆体の誘導体には例えば、基本化合物またはそれらの類似体のアミノ酸配列を有するが、加えて、そのアミノ酸側基、α−炭素原子、末端アミノ基および／または末端カルボン酸基のうちの１つまたはそれより多くの化学修飾を有する分子が包含される。
【００２１】
タンパク質性化合物にはさらに、基本化合物およびその前駆体の改変体、例えば、アミノ酸配列を長くおよび／または短くするように改変されている構造、例えば、ホルモンの２０Ｋ変異体、メチオニルホルモンなどが包含される。非限定的なタンパク質性化合物には、球状タンパク質（例えば、アルブミン、グロブリン、ヒストン）、繊維性タンパク質（例えば、コラーゲン、エラスチン、ケラチン）、複合タンパク質（１個またはそれより多くの非ペプチド成分を含有するもの、例えば、糖タンパク質、核タンパク質、ムコタンパク質、リポタンパク質、金属タンパク質を包含）、治療用タンパク質、融合タンパク質、受容体、抗原（合成または組換えの抗原など）、ウイルス表面タンパク質、ホルモンおよびホルモン類似体、抗体（モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体など）、酵素、Ｆａｂ断片、環状ペプチド、直鎖状ペプチド、ならびにそれらの前駆体、それらの類似体、それらの誘導体、それらの改変体、それらの断片、それらのアゴニスト、それらのアンタゴニストならびにそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せが包含される。非限定的な治療用タンパク質性化合物には、骨形成タンパク質、薬物耐性タンパク質、トキソイド、エリスロポエチン、血液凝固カスケードのタンパク質（例えば、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子など）、サブチリシン、オボアルブミン、アルファ−１−アンチトリプシン（ＡＡＴ）、ＤＮアーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、リゾチーム、リボヌクレアーゼ、ヒアルロニダーゼ、コラゲナーゼ、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）などの成長ホルモン、エリスロポエチン、インスリンおよびその類似体、インスリン様成長因子およびそれらの類似体、インターフェロン、グラチラマー、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、顆粒球コロニー刺激因子、デスモプレシン、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）およびそのアゴニストおよび類似体（例えば、ロイプロリド、ゴセレリン、ブセレリン、ゴナドレリン、ヒストレリン、ナファレリン、デスロレリン、フェルチレリン、トリプトレリン）、ＬＨＲＨアンタゴニスト、バソプレッシン、シクロスポリン、カルシトニン、副甲状腺ホルモン、副甲状腺ホルモンペプチドならびにグルコーゲン様ペプチドおよびそれらの類似体が包含される。
【００２２】
「核酸」は、少なくとも一部が、２種またはそれより多くの同じかまたは異なるヌクレオチドから形成される天然、合成、半合成または組換えの化合物を指しており、１本鎖または２本鎖であってよい。核酸の非限定的な例には、オリゴヌクレオチド（２０もしくはそれより少ない塩基対を有するもの、例えば、センス、アンチセンスまたはミスセンスなど）、アプタマー、ポリヌクレオチド（例えば、センス、アンチセンスまたはミスセンス）、ＤＮＡ（例えば、センス、アンチセンスまたはミスセンス）、ＲＮＡ（例えば、センス、アンチセンスまたはミスセンス）、ｓｉＲＮＡ、ヌクレオチド酸構築物、その１本鎖または２本鎖セグメント、ならびに、その前駆体および誘導体（例えば、グリコシル化物、高グリコシル化物、ＰＥＧ化物、ＦＩＴＣ標識物、ヌクレオシド、それらの塩）が包含される。核酸は、中性であるか、正に荷電しているか、負に荷電しているか、または両性イオン性であってよく、単独で、またはそれらのうちの２種もしくはそれより多くの組合せで使用することができる。
【００２３】
「炭水化物」は、少なくとも一部がモノマー糖単位から形成される天然、合成または半合成の化合物を指している。非限定的な炭水化物には、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ヘタスターチ、シクロデキストリン、アルギネート、キトサン、コンドロイチン、ヘパリン、ならびに、それらの前駆体および誘導体（例えば、グリコシル化物、高グリコシル化物、ＰＥＧ化物、ＦＩＴＣ標識物、それらの塩）などの多糖、糖、デンプンおよびセルロースが包含される。炭水化物は、イオン性または非イオン性であってよく、中性であるか、正に荷電しているか、負に荷電しているか、または両性イオン性であってよく、単独で、またはそれらのうちの２種もしくはそれより多くの組合せで使用することができる。
【００２４】
「脂質」は、一般的に両親媒性である、天然、合成または半合成の化合物を指している。脂質は典型的には、親水性部分および疎水性部分を含む。非限定的な例には、脂肪酸、中性脂肪、ホスファチド、油、糖脂質、界面活性剤、脂肪族アルコール、ロウ、テルペンおよびステロイドが包含される。脂質は、イオン性または非イオン性であってよく、中性であるか、正に荷電しているか、負に荷電しているか、または両性イオン性であってよく、単独で、またはそれらのうちの２種もしくはそれより多くの組合せで使用することができる。
【００２５】
特に薬剤（例えば、化合物）、プロセスまたは条件と組み合わせて使用される「安定化」は、マイクロ粒子（またはそのようなマイクロ粒子を含有する組成物もしくは配合物もしくはキット）を少なくとも部分的に形成し、その形成を促進し、かつ／またはその安定性（例えば、破壊、分解、劣化などに対する耐性の増強のような比較的バランスのとれた状態の維持）を増強するこのような薬剤、プロセスまたは条件の能力を指している。非限定的な安定化プロセスまたは条件には、熱入力／出力（例えば、加熱、冷却）、電磁波照射（例えば、ガンマ線、Ｘ線、ＵＶ、可視光、化学線、赤外線、マイクロ波、ラジオ波）、高エネルギー粒子照射（例えば、電子ビーム、核）および超音波照射が包含される。非限定的安定化剤には、脂質、タンパク質、ポリマー、炭水化物、界面活性剤、塩（例えば、一価または多価の、金属、有機、または有機金属であるカチオン、および一価または多価の、有機、無機または有機金属であるアニオンとの、有機塩、無機塩）、ならびに、本明細書に開示されているある種の担体、活性薬剤、架橋剤および助剤（非ポリマー性ポリアニオン化合物など）が包含される。安定剤は、イオン性または非イオン性であってよく、中性であるか、正に荷電しているか、負に荷電しているか、または両性イオン性であってよく、単独で、またはそれらのうちの２種もしくはそれより多くの組合せで使用することができる。
【００２６】
「高分子」は、三次元（例えば、三次および／または四次）構造をもたらしうる物質を指しており、担体および本開示のある種の活性薬剤を包含する。マイクロ粒子を形成するために使用される非限定的な高分子には特に、ポリマー、コポリマー、タンパク質（例えば、酵素、組換えタンパク質、ヒト血清アルブミンのようなアルブミン）、ペプチド、脂質、炭水化物、多糖類、核酸、ベクター（例えば、ウイルス、ウイルス粒子）、それらの複合体および結合体（例えば、炭水化物−タンパク質結合体のような２種の高分子の間、ハプテン−タンパク質結合体のような活性薬物と高分子との間の共有結合および／または非共有結合により、活性薬剤は、三次および／または四次構造を有することができるか、有することができない）ならびにそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せが包含される。高分子は典型的には、１５００またはそれより大きな分子量を有する。高分子は、中性であるか、正に荷電しているか、負に荷電しているか、または両性イオン性であってよく、単独で、またはそれらのうちの２種もしくはそれより多くの組合せで使用することができる。
【００２７】
「球状」は、少なくとも「実質的に球状」である幾何学的形状を指している。「実質的に球状」とは、最長長さ（すなわち、外周の２点の間の、その形の幾何中心を通過する長さ）と幾何中心を通過する任意の横断面上の最短長さとの比が、約１．３３もしくはそれより小さいかまたは約１．２５もしくはそれより小さい、などの約１．５もしくはそれより小さいであることを意味する。球状は対称中心線を有する必要はない。さらに、マイクロ粒子は表面テクスチャリング（マイクロ粒子の全体サイズと比較して規模が小さい、連続線または不連続線、島、格子、刻み、チャネル開口、隆起など）を有してよく、それでも依然として球状である。球状であるマイクロ粒子では、それらの間の表面接触は最小限であり、このことが、マイクロ粒子の望ましくない凝集を最小限にする。それに比べて、結晶または薄片のマイクロ粒子は典型的に、比較的大きな平坦表面で、イオン性および／または非イオン性の相互反応を介して、観察できる凝集を示す。
【００２８】
「単分散粒度分布」は、９０パーセンタイルの体積直径（すなわち、マイクロ粒子の最大１０％の平均粒径）と１０パーセンタイルの体積直径（すなわち、マイクロ粒子の最小１０％の平均粒径）との比が、約３またはそれより小さい、約２またはそれより小さい、約１．５から１などの、約５またはそれより小さいマイクロ粒子粒度分布を指している。その結果、「多分散粒度分布」は、上記の直径比が８もしくはそれより大きいかまたは１０もしくはそれより大きいなどの、５を上回るものを指している。多分散粒度分布を有するマイクロ粒子では、より大きなマイクロ粒子の間の空隙を、より小さなマイクロ粒子が充填することができ、それらの間の大きな接触表面および観察可能な凝集をおそらく示す。１．８もしくはそれより小さいなどの、２．５もしくはそれより小さい幾何学的標準偏差（ＧＳＤ）もまた、単分散粒度分布を示すために使用することができる。ＧＳＤの算出は、当業者に知られていて、理解される。
【００２９】
「非晶質」は、複数の非結晶性ドメインを有する（または結晶性が全く欠如している）マイクロ粒子またはその他の非結晶などの「実質的に非晶質」である材料および構成を指している。本開示の実質的に非晶質マイクロ粒子は一般的に、結晶格子がマイクロ粒子の５０体積％未満および／または５０重量％未満を構成するか、または存在しない無秩序な固体粒子であり、当業者が理解する通りの半結晶性マイクロ粒子および非結晶性マイクロ粒子を包含する。
【００３０】
「固体」は、少なくとも実質的に固体および／または半固体を包含するが、ゲル、液体および気体を除く状態を指している。
【００３１】
「予備形成マイクロ粒子」は、当業者に知られている方法などの１つまたはそれより多くの非限定的な方法を使用して作製され、本明細書に記載されているような表面改変を伴わず、その外表面に正、負または中性の正味表面電荷を有するか、有しうるマイクロ粒子を指している。予備形成マイクロ粒子はまた、本明細書では「コアマイクロ粒子」または「コア」とも称される。予備形成マイクロ粒子またはコアマイクロ粒子は典型的には、独立に、予備形成マイクロ粒子またはコアマイクロ粒子の一部に区画化することができるか、予備形成マイクロ粒子全体に実質的に均一に分布させることができる、１種またはそれより多くの活性薬剤、および必要に応じて、１種またはそれより多くの担体を含む。典型的にはゼロではない正味表面電荷は主に、または少なくとも実質的に、（単数または複数の）活性薬剤および／または任意選択の担体化合物に影響されうる。
【００３２】
「担体」は、三次元構造（三次および／または四次構造を包含する）を提供するという主な機能を有する化合物、典型的には高分子を指している。担体は、前記のマイクロ粒子の形成において、活性薬剤と結合しなくてもよく、または結合してもよい（その結合体または複合体など）。担体はさらに、活性薬剤であるような他の機能をもたらし、マイクロ粒子からの活性薬剤の放出プロファイルを改変し、かつ／またはマイクロ粒子に（正味表面電荷に少なくとも部分的に寄与するなどの）１種またはそれより多くの特定の特性を付与することができる。一例では、担体は、１５００ダルトンまたはそれより大きな分子量を有するタンパク質（ヒト血清アルブミンのようなアルブミンなど）である。
【００３３】
「ポリマー」または「ポリマーの」は、主鎖または環構造に２個またはそれより多くの繰り返しモノマー単位を有する天然、合成または半合成の分子を指している。ポリマーには広義には、ダイマー、トリマー、テトラマー、オリゴマー、高分子量ポリマー、付加物、ホモポリマー、ランダムコポリマー、擬コポリマー、ランダムコポリマー、交互コポリマー、周期コポリマー、２元ポリマー、３元ポリマー、４元ポリマー、他の形態のコポリマー、その置換誘導体およびその混合物が包含され、狭義には、１０個またはそれより多くの繰り返しモノマー単位を有する分子を指している。ポリマーは、直鎖状、分枝鎖状、ブロック、グラフト、単分散、多分散、規則性、不規則性、タクチック、イソタクチック、シンジオタクチック、立体規則性、アタクチック、ステレオブロック、１本鎖、２本鎖、星形、櫛形、樹枝状および／またはイオノマーであってよく、イオン性または非イオン性であってよく、中性であるか、正に荷電しているか、負に荷電しているか、または両性イオン性であってよく、単独で、またはそれらのうちの２種もしくはそれより多くの組合せで使用することができる。
【００３４】
「懸濁物」または「分散物」は、液体中の固体、液体中の液体、液体中の気体、固体中の固体、気体中の固体、気体中の液体などの２種またはそれより多くの相（例えば、固体、液体、気体）の（典型的には微細に分配された）混合物を指している。懸濁物または分散物は、長期間（例えば、数分間、数時間、数日間、数週間、数カ月間、数年間）安定なままでありうる。
【００３５】
「再懸濁」は、マイクロ粒子の特性のほとんどまたは全てを維持しながら、流動性媒体（例えば、液体）を加えることにより、非流動性（例えば、固体）状態から流動性（例えば、液体）状態にマイクロ粒子を変化させることを指している。液体は例えば、水性、水混和性または有機性であってよい。
【００３６】
「周囲温度」は、典型的には約２０℃から約４０℃の範囲の室温付近の温度を指している。
【００３７】
「治療」は、被験体における疾病、病気、疾患または傷害の処置（予防、診断、緩和、抑制、緩解または治癒を包含）において有用な任意の医薬品、薬物、予防薬、造影剤または染料を指している。治療的に有用なペプチドおよび核酸は、「医薬品」または「薬物」という用語の意味内に包含されうる。
【００３８】
「架橋する」、「架橋された」および「架橋すること」は一般的に、１種またはそれより多くの共有および／または非共有（例えば、イオン）結合を介しての、本明細書で開示したもののいずれかを包含する２種またはそれより多くの材料および／または物質の結合を指している。架橋は、自然に（例えば、シスチン残基のジスルフィド結合）または合成経路もしくは半合成経路を介して、例えば、必要に応じて１種またはそれより多くの架橋剤（すなわち、２種もしくはそれより多くの材料／物質ＹおよびＺと反応して、架橋生成物Ｙ−Ｘ−Ｚを形成することが単独で可能な分子Ｘ、ここで、Ｙ−ＸおよびＸ−Ｚの結合は独立に共有結合および／または非共有結合である）、開始剤（すなわち、架橋反応のためにフリーラジカルのような反応種を提供することが単独で可能な分子、例えば、有機過酸化物などの熱によって分解可能な開始剤、アゾ開始剤および炭素−炭素開始剤、様々な波長の光開始剤のような化学線によって分解可能な開始剤）、活性化剤（すなわち、第１の材料／物質Ｙと反応して、活性化中間体［Ａ−Ｙ］を形成することができ、これが次に第２の材料／物質Ｚと反応して、架橋生成物Ｙ−Ｚを形成することが可能な分子Ａ、ここで、Ａはプロセス中に化学的に変化するか、または消費される）、触媒（すなわち、プロセス中に化学的に改変されることなく、架橋反応の動態を改変することが可能な分子）、助剤（すなわち、１種またはそれより多くの開始剤、活性化剤および／または触媒と一緒に存在すると、架橋反応の動態を改変することおよび／またはマイクロ粒子などの生じた生成物と結合することが可能な分子、典型的には非ポリマー性ポリアニオン化合物）および／またはエネルギー源（例えば、加熱；冷却；電磁、ｅ−ビームおよび核のような高エネルギー照射；超音波のような音響放射など）の存在下で行うことができる。
【００３９】
「共有結合」は、２個の原子の結合軌道において電子の共有が関与する２個またはそれより多くの個々の分子の間の分子間相互作用（例えば、結合）を指している。
【００４０】
「非共有結合」は、共有結合が関与しない２個またはそれより多くの個々の分子の間の分子間相互作用を指している。分子間相互作用は、例えば、個々の分子の極性、電荷および／または他の特性によって左右され、限定ではないが、静電的（例えば、イオン）相互作用、双極子−双極子相互作用、ファンデルワールス力およびそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せを包含する。
【００４１】
「と結合している」および「と結合されている」は一般的に、様々な材料（典型的にはマイクロ粒子の一部であるもの）、マイクロ粒子の１種またはそれより多くのそのような材料および１種またはそれより多くの構造（またはその一部）ならびにマイクロ粒子の様々な構造（またはそれらの一部）の間の１種またはそれより多くの相互作用および／または組み込みを指している。マイクロ粒子の材料には、限定ではないが、本明細書に開示されている一価イオンおよび多価イオンなどのイオン、ならびに、活性薬剤、安定剤、架橋剤、荷電した化合物または非荷電の化合物などの化合物、本明細書に開示されている様々なポリマーおよびそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せが包含される。マイクロ粒子の構造およびその一部には、限定ではないが、コア、コアマイクロ粒子、予備形成マイクロ粒子、単層、中間マイクロ粒子、表面改変マイクロ粒子、このような構造の一部（外表面、内表面など）、このような構造およびそれらの一部の間のドメインならびにそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せが包含される。可逆的または不可逆的、移動性または非移動性の様々な結合が単独で、またはそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せで存在してよい。非限定的な結合には、限定ではないが、共有結合および／または非共有結合（例えば、共有結合、イオン性相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用、水素結合、ファンデルワールス力、架橋および／または任意の他の相互作用）、層／膜内へのカプセル封入、中心または小胞の中または２つの層／膜の間の区画化、マイクロ粒子全体またはその一部への均一な組み込み（例えば、中心もしくは層または小胞、またはその内表面および／または外表面への含有、接着および／または付着；異なる材料間の散在、結合および／または複合）が包含される。
【００４２】
「制御放出」は、その天然形態の活性薬剤の放出プロファイルと比較した、予め決定されたｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏでの活性薬剤の放出（例えば、溶解）プロファイルを指している。その放出動態の１つまたはそれより多くの態様（例えば、初期バースト、規定の期間または相にわたる量および／または速度、規定の期間にわたる累積量、総放出での時間の長さ、パターンおよび／またはプロファイルなど）が、増加、減少、短縮、延長および／または他の方法で所望の通りに変更されるように、活性薬剤は本明細書に開示されているとおりのマイクロ粒子またはそのようなマイクロ粒子を含有する組成物もしくは配合物と結合されている。制御放出の非限定的な例には、即時／瞬時放出（すなわち初期バーストまたは迅速放出）、延長放出、持続放出、長期放出、遅延放出、改変放出および／または標的化放出が包含され、個別に、それらのうちの２種またはそれより多くの組合せで、またはそれらのうちの１種またはそれより多くの不在下に行われる（例えば、初期バーストのない延長または持続放出）。
【００４３】
「延長放出」は、その天然形態での活性薬剤の自由な水性拡散期間よりも長期間にわたる本明細書に開示されているとおりのマイクロ粒子またはそのようなマイクロ粒子を含有する組成物もしくは配合物と結合している活性薬剤の放出を指している。延長放出期間は、複数時間（例えば、少なくとも約１、２、５もしくは１０時間）、複数日間（例えば、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１５、２０、３０、４０、４５、６０もしくは９０日間）、複数週間（少なくとも約１、２、３、４、５、６、１０、１５、２０、３０、４０もしくは５０週間）、複数カ月（少なくとも約１、２、３、４、６、９もしくは１２ヵ月間）、約１年もしくは複数年間または任意の２つの期間の間の範囲であってよい。延長放出のパターンは、連続的、周期的、散発的またはそれらの組合せであってよい。
【００４４】
「持続放出」は、活性薬剤の機能的に有意なレベル（すなわち、活性薬剤の所望の機能をもたらすことができるレベル）が延長放出期間の任意の時点において、典型的には連続的および／または均一な放出パターンで存在するような活性薬剤の延長放出を指している。持続放出プロファイルの非限定的な例には、放出時間（ｘ軸）対累積放出（ｙ軸）のプロットで示された場合に、１時間またはそれより長い期間にわたって、直線、段階的、ジグザグ、曲線および／または波状である少なくとも１つの上向き部分を示すものが包含される。
【００４５】
実際の実施例を除いて、または他に特に記載されていない限り、例えば、材料の量、時間、温度、反応条件、量比、分子量の値（数平均分子量Ｍｎであっても、重量平均分子量Ｍｗであってもよい）および本明細書に開示されている他のものに関するものなどの数値範囲、量、値およびパーセンテージは全て、あらゆる場合において、「約」という用語により修飾されると理解されたい。したがって、逆に指示されていない限り、本開示および添付の特許請求の範囲に記載されている数値パラメーターは、所望の場合に変動しうる近似値である。少なくとも、各数値パラメーターは、報告された有効数字の数を考慮して、通常の丸め技術の適用により、少なくとも解釈されるべきである。
【００４６】
記載された数値範囲およびパラメーターにかかわらず、開示の広範な範囲は近似値であり、具体的な実施例で記載された数値は可能な限り正確に報告されている。しかしながら、任意の数値は、その個々の試験測定で見出される標準偏差から必然的に生じる一定の誤差を固有に含有している。さらに、変動範囲の数値範囲が本明細書に記載されている場合、引用した値を包含するこれらの値の任意の組合せを使用できるものと考えられる。
【００４７】
「から形成される」および「で形成された」は、非制限的語法を意味する。したがって、列挙された成分のリスト「から形成される」または「で形成された」組成物は、少なくともこれらの列挙された成分を含む組成物であり、組成物の配合の間に他の引用されていない成分をさらに含みうることが意図されている。
【００４８】
「など」の前のものおよび「例えば」に続くものを包含する本明細書で提供された例は、特にそれに限定されないが、本開示およびその実施形態の様々な態様を単に例示していると考えられる。当業者に知られていて、かつ／または利用可能なその任意の適切な同等物、代替物および改変物（材料、物質、構成物、組成物、配合物、手段、方法、条件などを包含）は、本明細書に開示されたものの代わりに、またはそれと組み合わせて使用または実施することができ、本開示の範囲内に該当するものと考えられる。したがって、本明細書に開示されている特定の詳細は、制限と解釈されるべきではなく、特許請求の範囲の基礎として、かつ実質的に任意の適切な方法で本開示の態様を様々に使用することを当業者に教示するための代表的な基礎として単に解釈されるべきである。
【００４９】
マイクロ粒子は、制御放出プロファイルで活性薬剤をｉｎ  ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで送達する形態であり、薬物送達、ワクチン接種、遺伝子療法および病理組織学的なもしくはｉｎ  ｖｉｖｏでの組織もしくは腫瘍画像化などの幅広い様々な治療、製剤、診断、医学、医薬、化粧、栄養、殺生物、分離、工業、商業および研究の目的のために有用である。マイクロ粒子は、被験体への経口、非経口、粘膜；眼；静脈内、皮下、関節内、筋肉内、肺および／または局所投与のために適しうる。静脈内投与には、カテーテル法および血管形成術が包含される。非限定的マイクロ粒子、マイクロ粒子を作製するための材料および方法、マイクロ粒子を含有する組成物および配合物、ならびにマイクロ粒子、組成物および配合物の利用は、本明細書に開示されているものならびにその開示全体が参照により本明細書に援用される米国特許第６，０９０，９２５号明細書、同第６，２６８，０５３号明細書および同第６，４５８，３８７号明細書に記載されているものを包含する。マイクロ粒子は、単分散粒度分布などのほぼ均一な粒度分布および実質的に球形などのほぼ均一な形態を有しうる。マイクロ粒子の１つまたはそれより多くの特性を、これらに限られないが、成分またはその組合せの選択、異なる成分の濃度、反応温度、反応時間、水溶液中で反応が行われる場合にはｐＨなどの１つまたはそれより多くの変数を操作することにより、作製の間に調節することができる。
【００５０】
一例では、予備形成マイクロ粒子を包含する本開示のマイクロ粒子は、内部空隙または空洞を含まないが、その最も外側の表面に、複数の無秩序に分布しているチャネル開口部を有しうる。チャネル開口部は、サイズおよび／または深さにおいて同様かまたは異なってよい。例えばＢｒｕｎａｕｅｒ−Ｅｍｍｅｔｔ−Ｔｅｌｌｅｒ（ＢＥＴ）分析を使用する例えばガス吸着技術により決定される場合、チャネルは典型的には、１０００オングストロームまたはそれより小さい直径を有し、５００オングストロームから１０００オングストロームの直径を有するマクロチャネル、２０オングストロームから５００オングストローム未満の直径を有するメソチャネル、７オングストロームから２０オングストローム未満の直径を有するマイクロチャネルおよび／または７オングストローム未満の直径を有するウルトラマイクロチャネルを包含してよい。チャネルサイズ分布は、単頂形または二頂形であってよい。表面チャネルは、その直径に応じて、水およびある種の溶解材料に対して透過性であり得、水性流体をマイクロ粒子に侵入させ、適切なサイズのある種の溶解材料（例えば、活性薬剤、ポリマー、担体）をマイクロ粒子から外に出すことができる。
【００５１】
一例では、マイクロ粒子を形成する１種またはそれより多くの材料（例えば、高分子、ポリマー、活性薬剤および／または安定剤）は、マイクロ粒子全体に実質的に均一に分布している。様々な材料が、相互に絡み合って、かつ／または散在してよく、必要に応じて、相互に共有および／または非共有結合していてよい。任意の特定の理論または機構に束縛されることを望まないが、マイクロ粒子の内側部分（典型的にはマトリックス材料）が水溶性で、溶解されると、内側部分を形成する成分が少なくとも部分的に、適切な条件下にマイクロ粒子から拡散しうる（例えば、体液などの放出媒体または生理学的条件下では生理学的に許容できる緩衝剤に）と考えられる。（単数または複数の）高分子成分（担体分子など）および／または（単数または複数の）活性薬剤は、重量および／または体積でマイクロ粒子の少なくとも４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９８％および１００％未満またはその間の範囲を占めてよい。他の（単数または複数の）成分（例えば、ポリマー、安定剤）は、重量および／または体積でマイクロ粒子の３０％もしくはそれより少ない、２０％もしくはそれより少ない、１０％もしくはそれより少ない、５％もしくはそれより少ない、または２％もしくはそれより少ない、および０％より多く、またはそれらの間の範囲の少量で存在してよい。
【００５２】
マイクロ粒子を形成する１種またはそれより多くの様々な成分（例えば、高分子、ポリマー、活性薬剤および／または安定剤）を独立に、検出可能な標識で標識することができる。標識、様々な成分（例えば、タンパク質、核酸）の標識方法および標識の検出方法は、当業者に知られているものを包含する。非限定的な標識には、磁気物質（例えば、金属物質、金属）、放射性標識（例えば、［３２］Ｐ、［３］Ｈ、［１４］Ｃ、［３５］Ｓ、［１２５］Ｉ、［１３１］Ｉ）、質量または核磁気共鳴（ＮＭＲ）標識（例えば、［１３］Ｃ、［１５］Ｎ、［１９］Ｏ）、染料（例えば、臭化エチジウム、アクリジン、プロピジウム、インターカレーション染料、４’，６’−ジアミジノ−２−フェニルインドール）、化学発光薬剤、生物発光薬剤、蛍光原物質（ｆｌｕｏｒｏｇｅｎ）（例えば、フルオレセインおよび誘導体、フィコエリトリン、アロフィコシアニン、フィコシアニン、ローダミン、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ）、クロモゲン、ビオチン、抗原、アフィニティー標識（特異抗体により認識可能な化学基）およびそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せが包含される。［３２］Ｐ標識は、結合試薬を用いてタンパク質に結合させることができるか、ニックトランスレーション、末端標識または標識ヌクレオチドの導入により核酸分子の配列に導入することができ、［３］Ｈ、［１４］Ｃまたは［３５］Ｓ標識は、標識された前駆体の組み込みにより、または化学修飾により、ヌクレオチド配列に導入することができる一方で、［１２５］Ｉまたは［１３１］Ｉ標識は一般に、化学修飾によりヌクレオチド配列に組み込まれる。放射性標識を検出する方法には、シンチレーションカウント、ガンマ線分光法およびオートラジオグラフィーが包含される。質量またはＮＭＲ標識を検出する方法には、質量分析法および磁気共鳴画像化法が包含される。染料および蛍光原物質を検出する方法には、それぞれ分光光度法および蛍光検出が包含される。
【００５３】
例えば、１種またはそれより多くの成分をクロモゲン（酵素基質）で標識して、酵素標識またはアフィニティー標識を得ることができる。成分をビオチン−アビジン反応で使用するためにビオチン化し、必要に応じて、酵素または蛍光原物質などの第２標識に結合させることができる。成分をペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼまたは他の酵素で標識すると、基質を加えることにより色素形成反応または蛍光発光反応を得ることができる。標識はまた、標識された修飾塩基、アミノ酸または前駆体を導入することにより達成することができる。結合した抗体−抗原複合体を、酵素結合イムノアッセイ（ＥＬＩＳＡ）または分光光度法を使用して検出することができる。
【００５４】
１種またはそれより多くの高分子が、マイクロ粒子の大部分（少なくとも４０重量％から典型的には１００％未満まで、例えば、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはこれらの間の任意の範囲など）を形成しうる。１種またはそれより多くの活性薬剤（三次構造および四次構造を有することができるかまたはできない、有機または無機の、天然または合成の、医薬化合物または薬物など）を、１種もしくはそれより多くの高分子（例えば、担体、親和性分子）および／または１種もしくはそれより多くのポリマー（例えば、その複合体または結合体）の少なくとも一部（マイクロ粒子の表面に存在する部分など）または実質的に全部に共有結合および／または非共有結合させることができる。高分子は、より大きな高分子の一部であってもよいことは、当業者であれば理解するであろう。さらに、親和性分子は、受容体−リガンド相互作用の受容体部分またはリガンド部分であってよいことも理解されるであろう。他の生体分子と相互作用するリガンドの例には、動物に投与されると免疫応答を発生させ、抗体の産生を誘発する抗原として作用する、ウイルス、細菌、多糖類または毒素が包含される。
【００５５】
高分子の非限定的な例には、その全体がその参照により本明細書に援用される米国特許第６，４５８，３８７号明細書、１２〜１６欄に開示されているものが包含される。一例では、高分子は、３０ｋＤから８０ｋＤなどの１０ｋＤから１００ｋＤの中程度の分子量を有してよい。他の例では、高分子は、−５もしくはそれより小さい、または−１０もしくはそれより小さいなどの陰性（例えば、アニオン性または酸性）である正味電荷を有してよい。さらなる例では、高分子は、７を超えるか、６もしくはそれより小さいまたは５もしくはそれより小さいなどの７もしくはそれより小さい等電点ｐＩを有してよい。さらなる例では、高分子は、ポリアニオン性などのアニオン性である。さらなる例では、高分子は、１個またはそれより多くの同じかまたは異なるアニオン官能基を有する。さらなる例では、高分子は、３０個またはそれより多くの同じかまたは異なる（例えば、アニオンおよび／またはカチオン）官能基（例えば、カルボキシル基、アミン基、チオール基）、例えば、５０個もしくはそれより多くの１種もしくはそれより多くのこのような基または７０個もしくはそれより多くの１種またはそれより多くのこのような基を有してよい。さらなる例では、高分子は、非免疫原性であってよい。このような高分子の適切な例には、限定ではないが、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、オボアルブミンおよびα−ラクトアルブミンなどのアルブミンが包含される。
【００５６】
ポリマーの非限定的な例には、硫酸デキストラン、硫酸ヘパリン、硫酸ヘパラン、硫酸コンドロイチン、ガラクツロン酸、アルギネート、マンヌロン酸、グルロン酸、ヒアルロン酸、ヘパリン、キチン、キトサン、グリコサミノグリカン、プロテオグリカン、硫酸ポリスチレン、カルボキシメチルセルロース、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、ポリアクリレート、ポリシアノアクリレート、ポリアセテート、ポリ−β−ヒドロキシブチレート、ポリビニルピロリドン、ポリアニオンデンドリマー）などのアニオンポリマー、特にポリアニオンポリマー（例えば、多糖類スルフェートを包含するポリアニオン多糖類などのポリアニオン炭水化物）；ポリリジン、ポリアルギニン、プロタミン、硫酸プロタミン、ポリシトルリン、ポリオルニチン、ポリイミノ酸、ポリイミノチロシン、コレスチラミン樹脂、ジエチルアミノエチルセルロース、ヒストン、ミエリン塩基性タンパク質、硫酸ポリミキシンＢ、ブラジキニン、スペルミン、プトレッシン、オクチルアルギニン、ポリカチオンデンドリマー）などのカチオンポリマー、特にポリカチオンポリマーなどのイオンポリマー；ならびに非イオンと混合イオンおよび非イオンポリマー（例えば、ＨＳＡおよびＢＳＡなどのアルブミン、ＩｇＧ、ＩｇＭ、疎水性ポリマー、非イオン性親水性ポリマー、シリコーン、ゼイン、リグニン、界面活性剤、脂肪酸、リン脂質、ゼラチン）が包含される。また、本開示のマイクロ粒子の組成物および／または調製物において、限定はしないが、金属カチオン（例えば、Ｚｎ２＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｕ２＋から４＋、Ｆｅ２＋から３＋、Ｂｅ２＋、Ｓｒ２＋、Ｂａ２＋、Ｍｎ２＋、Ｃｏ２＋から６＋、Ｎｉ２＋から６＋、Ｃｄ２＋、Ｍｏ２＋、Ｒａ２＋、Ａｌ３＋、Ｔｂ３＋、Ｙ３＋）などの非ポリマー性の有機および／または無機の多価カチオンも有用である。
【００５７】
活性薬剤の非限定的な例には、その全体がその明示した参照により本明細書に援用される米国特許第６，４５８，３８７号明細書、２０〜２３欄に開示されているものが包含される。一例では、活性薬剤は、官能性カルボキシル基および第一級アミン基を実質的にまたは本質的に含まなくてよい。他の例では、活性薬剤は、１個またはそれより多くのヒドロキシル基などの１個またはそれより多くの同じかまたは異なる求核基を有してよい。さらなる例では、活性薬剤は、セリン、トレオニンおよびチロシンから選択される１個またはそれより多くの同じかまたは異なるアミノ酸残基を有してよい。さらなる例では、活性薬剤は、１個またはそれより多くの同じかまたは異なるオリゴペプチドセグメント（トリペプチドセグメントなど）Ｚ１−Ｚ２−Ｚ３を有してよく、ここで、Ｚ１はヒスチジン残基であり、Ｚ２はＺ１およびＺ３とは異なり、Ｚ２は単一のアミノ酸残基または２個またはそれより多くのアミノ酸残基の鎖であり、Ｚ３はセリン残基またはトレオニン残基（またはチロシン残基）である。少なくとも１個のこのようなトリペプチドセグメントを有する活性薬剤の非限定的な例には、ロイプロリド、ゴセレリン、ブセレリン、ゴナドレリン、ヒストレリン、ナファレリン、デスロレリン、フェルチレリン、トリプトレリン、酢酸ロイプロリドおよび塩酸ロイプロリドなどのそれらの塩（例えば、それらの酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ヒドラジド、アミドおよび塩酸塩）などのＬＨＲＨアゴニスト、ＬＨＲＨアンタゴニスト、ＬＨＲＨ類似体ならびにそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せが包含される。これらの活性薬剤のうちの少なくとも数種は、プロトン化可能であるか、またはプロトン化されている（例えば、水溶液中または塩形態でのように、部分的にまたは全部が）。
【００５８】
典型的には１種またはそれより多くの活性薬剤と共に、マイクロ粒子と結合しているものには、１種またはそれより多くの非ポリマー性ポリアニオン化合物も包含されうる。一例では、架橋反応の間の助剤のように、活性薬剤をマイクロ粒子と結合させるプロセス中に、非ポリマー性ポリアニオン化合物を、マイクロ粒子および／または活性薬剤と結合させることができる。非ポリマー性ポリアニオン化合物は、活性薬剤が１個またはそれより多くの高分子および／または１個またはそれより多くのポリマーと共有結合および／または非共有結合する工程中の副反応を低減または最小化することができる。非ポリマー性ポリアニオン化合物は、マイクロ粒子への活性薬剤の組み込みを促進することができる。非ポリマー性ポリアニオン化合物は、全放出量および／もしくは放出速度を遅延もしくは強化する、初期バーストを増大もしくは低減する、持続放出相の期間を延長もしくは短縮する、ならびに／または放出プロファイルを他の方法で変更するなど、マイクロ粒子からの活性薬剤の放出動態を改変することができる。非ポリマー性ポリアニオン化合物は、比較的少ない数の同じかまたは異なる官能基（例えば、８個またはそれより少ない、５個またはそれより少ない、２個またはそれより多く、３個またはそれより多く）を有する比較的小さい分子（すなわち、ポリマーではない）であってよい。同じかまたは異なる官能基の非限定的な例には、カルボキシル、第一級アミン、第二級アミン、ホスフェート、ヒドロキシル、ヒドロジドおよびヒドロキシアミノ基が包含される。一例では、少なくとも２個の同じかまたは異なる官能基がイオン性基またはイオン化可能な基（例えば、カルボキシル、ホスフェートなどのアニオン基；第一級アミンなどのカチオン基）であってよい。他の例では、非ポリマー性ポリアニオン化合物は、カチオン基よりもアニオン基が多いなどの、異なる数のアニオン基およびカチオン基（差は１、２、３またはそれより多く）を有することができる。
【００５９】
非ポリマー性ポリアニオン化合物は、上記の組み込み反応の間に中間体を形成することができ、中間体は、非ポリマー性ポリアニオン化合物の正味電荷とは異なる（符号および／または大きさ規模において異なるなど）正味電荷を有しうる。一例では、非ポリマー性ポリアニオン化合物は、本明細書に開示されているとおりの架橋活性化剤と結合している中間体を形成することができ、この中間体は、中性またはカチオン性であってよい。一例では、中間体は、非ポリマー性ポリアニオン化合物の１個またはそれより多くの官能基を消費する環化または任意の他の内部反応が不可能である。適切な非ポリマー性ポリアニオン化合物の非限定的な例には、二酸（ジカルボン酸を包含）、三酸（トリカルボン酸を包含）、四酸（テトラカルボン酸を包含）、それらの無水物、それらの類似体、それらの塩およびそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せなど、２個またはそれより多くの酸性基（カルボキシル基のような）を含有し、酸性である非ポリマー化合物が包含される。非ポリマー性ポリアニオン化合物は、酸性ポリアニオンアミノ酸（モノアミノ二酸、モノアミノ三酸、ジアミノ四酸など）、それらの無水物、それらの類似体、それらの塩およびそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せにおいてのように、１個またはそれより多くのカチオン基および／またはアミン基などの正イオン化可能な基を必要に応じてさらに有してもよい。非限定的な例では、非ポリマー性ポリアニオン化合物には、１個またはそれより多くのアスパラギン酸、グルタミン酸、それらの塩（そのナトリウム塩のような）およびそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せが包含される。他の非限定的な例では、非ポリマー性ポリアニオン化合物は、水溶性であるなど、水性可溶性である。さらなる非限定的な例では、非ポリマー性ポリアニオン化合物は、脂肪一酸、脂肪二酸および他の脂肪多酸を包含する脂肪酸ではない。
【００６０】
マイクロ粒子に組み込まれる非ポリマー性ポリアニオン化合物の量は、マイクロ粒子の所望の特性（例えば、実質的に球形、活性薬剤の高い添加量、マイクロ粒子凝集物を実質的に含まないこと、単分散粒度分布、活性薬剤の制御放出）に不利な影響を及ぼさないような量であってよい。マイクロ粒子に対する非ポリマー性ポリアニオン化合物の重量パーセンテージは、３％もしくはそれより少ないかまたは１％もしくはそれより少ないなどの５％もしくはそれより少ない、ただし０％を超えればよい。非ポリマー性ポリアニオン化合物と活性薬剤とのモル比は（両方ともマイクロ粒子に結合している）、１：１もしくはそれより少ない、または１：２もしくはそれより少ないなど、２：１もしくはそれより少なくてよい。少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物を含有するマイクロ粒子を、少なくとも１種の非ポリマー性ポリアニオン化合物を含まないが、他の点では前者のマイクロ粒子と同一の方法で形成されている他のマイクロ粒子と比較すると、前者のマイクロ粒子は、後者のマイクロ粒子と同じかまたは異なる活性薬剤放出プロファイルを有しうる。一例では、前者のマイクロ粒子の放出プロファイルは、後者のマイクロ粒子の初期バーストよりも大きな初期バーストを有する。
【００６１】
本開示のマイクロ粒子を形成する方法は、特に限られないが、例えば、その開示全体が本明細書に援用される米国特許第６，４５８，３８７号明細書、同第６，２６８，０５３号明細書、同第５，８４９，８８４号明細書および同第５，５７８，７０９号明細書に開示されているものを包含する。非限定的な方法では、必要に応じて追加のオイルまたは有機溶媒の不在下にて、流動性媒体（水溶液など）中で１種またはそれより多くの高分子および１種またはそれより多くのポリマーを１種またはそれより多くの溶解性低下剤と共に組み合わせ、次いで混合することにより、マイクロスフェアなどのマイクロ粒子を作製することができる。ポリアニオンポリマーなどのポリイオンポリマーを使用する場合、多価カチオンまたはその塩を典型的には、本質的に同時に（他の成分の添加の３０分以内）、混合物にその固体または溶液として加えることができる。必要に応じて、ゼラチンなどの追加の安定剤をさらに加えることもできる。必要に応じて、１００ｃＰ以下の低い粘度を有するものなど１種またはそれより多くの界面活性剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）、Ｌｕｔｒｏｌ（登録商標）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）、Ｂｒｉｊ（登録商標）、Ｓｐａｎ（登録商標）、Ｅｍｕｌｓａｎ（登録商標））もまた、特には均一なマイクロスフェアを形成するために混合物に加えることができる。
【００６２】
「溶解性低下剤」は、溶液中の高分子および／またはポリマーの溶解性を低下させて、マイクロ粒子の形成および／または安定化を促進しうる材料を指している。当業者には理解されるように、溶解性低下剤は、水性可溶性および／または水溶性であってよく、イオン性（例えば、ポリカチオン性、ポリアニオン性）または非イオン性であってよい。溶解性低下剤の非限定的な例には、その全体がその明示的な参照により本明細書に援用される米国特許第６，４５８，３８７号明細書、１６〜１８欄に開示されている水溶性ポリマーなどのイオンポリマー（例えば、ポリカチオン性、ポリアニオン性）および非イオンポリマーが包含される。具体的な例には、デンプン（例えば、５００ｋＤもしくはそれより多くかまたは１０００ｋＤから２０００ｋＤの分子量を有するものなどの、ヘタスターチ、ヒドロキシエチルスターチ（ＨＥＳ））、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、デキストランおよびポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー（ポロキサマー）が包含される。ポリマーは、単独で、またはその等量組合せ（例えば、ＰＶＰ／ＰＥＧ、ＰＶＰ／ヘタスターチ、ＰＶＰ／ＨＥＳ）などのそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せで使用することができる。
【００６３】
混合する前に、高分子およびポリマーは、第１液相で存在してよい一方で、溶解性低下剤は、第１液相とは異なる第２液相に存在してよい。別法では、材料は全て、単一の連続液相に存在してよい。液体混合物全体における全溶解性低下剤の重量パーセンテージは、少なくとも部分的に、マイクロ粒子の所望のサイズに左右されうる：５０μｍまたはそれより大きなマイクロ粒子サイズについては２０％またはそれより少なく；１５〜３５μｍなどの５０μｍ未満で１０μｍより大きなマイクロ粒子サイズについては、２０％より多くから４０％未満；１０μｍまたはそれより小さいマイクロ粒子サイズについては、４０％またはそれより多く。液体混合物全体における高分子およびポリマーそれぞれの重量パーセンテージは、１％から３％などの０．５から５％であってよいか、組合せは、３％から５％である。高分子とポリマーとの重量比は、１：１０またはそれより大、典型的には、１：２から１０：１、１：１から５：１または１．５：１から３：１などの２０：１またはそれより小であってよい。溶解性低下剤と高分子およびポリマーの組合せとの重量比は、１：１またはそれより大、典型的には３：１から３０：１、４：１から１６：１、５：１から１２：１、７：１から９：１または８：１などの１０００：１以下であってよい。分かれた液相を混合してエマルションなどの単一の均一な連続相にするための攪拌手段には、単独で、またはそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せで使用することができる音波処理、ボルテックス処理、攪拌、振動（ｖｉｂｒａｔｉｏｎ）、オシレーション（ｏｓｃｉｌｌａｔｉｏｎ）および揺動（ｒｏｃｋｉｎｇ）などの当業者に知られている任意のおよび全てのものが包含される。混合時間は、１０分間から４５分間の間または１５分間から３０分間の間などの５分間から１時間の間であってよい。混合温度は、０℃より上、３０℃より下などの周囲温度、周囲温度未満、ただし、混合物の凍結温度より上であってよい。
【００６４】
混合物を攪拌する前、その後またはその間に、水溶液のｐＨを高分子の等電点（ｐＩ）付近のｐＨに調節することができる。すなわち、水溶液のｐＨは、高分子のｐＩよりも高いか、等しいか、それ未満であってよく、その際、それらの間の差違は、３ｐＨ単位もしくはそれより小さいか、２ｐＨ単位もしくはそれより小さいか、１．５ｐＨ単位もしくはそれより小さいか、１ｐＨ単位もしくはそれより小さいなど、４ｐＨ単位もしくはそれより小さい。当業者によく知られている方法に従い、高分子溶液、水溶性ポリマー溶液および／またはその混合物に、酸または塩基を固体または溶液として加えるか、緩衝液または他のｐＨ調節溶液もしくは固体塩を加えることにより、ｐＨ調節を行うことができる。一例では、水溶性ポリマーを上記のような高分子のｐＩ付近のｐＨを有する緩衝液に溶かして、溶液を形成し、次いでこれを、高分子を含有する他の水溶液と混合して、上記のような高分子のｐＩ付近のｐＨを有する水性混合物を生じさせる。
【００６５】
任意の特定の理論または機構に束縛されることを望まないが、上記の混合プロセス中に形成されるマイクロ粒子をさらに加工して、離散した、固体および非晶質のマイクロ粒子へと安定化させることができると考えられる。このような安定化プロセスの非限定的な例には、１つまたはそれより多くのエネルギー源（例えば、熱、放射線、イオン化）および／または必要に応じて攪拌（例えば、音波処理、ボルテックス処理、混合、攪拌、振動、オシレーション、揺動）と組み合わせての１種またはそれより多くの架橋剤の添加および予め決定された期間にわたる混合物のインキュベーションなど、混合物を１つまたはそれより多くの条件（例えば、温度、ｐＨ、混合組成）の変化に供することが包含される。次いで、当業者に知られている物理的分離方法（例えば、遠心分離、濾過、透析、ダイアフィルトレーション）により、生じたマイクロ粒子を溶液中に存在する何らかの未組み込み成分から分離し、必要に応じて、１回またはそれより多くの回洗浄することができる。
【００６６】
架橋剤の非限定的な例には、ジアルデヒド、アミン、多価イオン、架橋される高分子上の特定の官能基に親和性を有する多官能性分子、Ｎ置換マレイミド、二官能性アルキルハロゲン化物、アリールハロゲン化物、イソシアネート、脂肪族または芳香族ジカルボン酸、脂肪族または芳香族ジスルホン酸、二官能性イミドエステルおよびビニルスルホンが包含される。マイクロスフェアを安定化するためにこれを使用するための追加の架橋剤および方法が、その全体が参照により本明細書に援用される米国特許第５，５７８，７０９号明細書に記載されている。
【００６７】
加熱を使用してマイクロ粒子を安定化させる際の温度は、周囲温度よりも高くてよく、典型的には、高分子の熱変性温度（すなわち、その温度またはそれより高い温度で、その中の結合などの１個またはそれより多くの結合の脆弱化および／または破壊を介して、高分子の天然三次および／または四次構造が、比較的より柔軟なものに変化し、高分子が部分的にまたは全部、開き、かつ／またはほどける温度）またはそれより高いなどの混合物の沸騰温度未満であってよい。本開示の高分子は、１個またはそれより多くの熱変性温度を有しうる。例えば、６８℃、８５℃および１２０℃の３つの熱変性温度が、ヒト血清アルブミンなどのアルブミンでは観察されている。インキュベーション温度は、５０℃から１２０℃、７０℃から１００℃または８５℃から９０℃などの３７℃から１５０℃の間であってよい。インキュベーションの長さは特に限られないが、少なくとも部分的に、水溶性ポリマーおよび高分子の個々の濃度、ならびに、エネルギー源のエネルギーレベルおよび／または架橋活性化剤の濃度に左右されうる。インキュベーション時間は典型的には、３０分間から６０分間の間などの５分間から２４時間の間である。
【００６８】
高分子を溶解性低下剤と混合する前またはその間、混合物をエネルギー源および／または架橋活性化剤にさらす前、および／またはマイクロ粒子を形成した後などの上記の通りのマイクロ粒子形成の１つまたはそれより多くの段階の前、その間および／またはその後に、活性薬剤を流動性媒体に導入することにより、１種またはそれより多くの活性薬剤をマイクロ粒子に組み込むことができる。活性薬剤は、高分子および／またはポリマーなどのマイクロ粒子に組み込まれる１種またはそれより多くの成分と共有結合および／または非共有結合を形成することができる。マイクロ粒子の形成前、その間および／またはその後に、結合を形成することができる。一例では、架橋活性化剤（水性可溶性および／または水溶性であるものなど）および必要に応じて、非ポリマー性ポリアニオン化合物などの助剤の存在下で、活性薬剤を高分子および／またはポリマーと共有結合させることができる。架橋活性化剤の非限定的な例には、単独で、またはそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せで使用される、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣ）、１−エチル−３−（４−アゾニア−４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミド（ＥＡＣ）および１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミドメト−ｐ−トルエンスルホネート（ＣＨＭＣ）などのカルボジイミドおよびそれらの塩が包含される。助剤（１種またはそれより多くの非ポリマー性ポリアニオン化合物など）を反応混合物に活性薬剤と共に、またはその後に加えることができる一方で、架橋活性化剤は典型的には、最後に、助剤の後に加える。
【００６９】
本開示のマイクロ粒子を、必要に応じて、その最も外側の表面で１種またはそれより多くの材料でコーティングすることもできる。マイクロ粒子をコーティングする材料および方法は、限定はしないが、その全体がその明示的な参照により本明細書に援用される米国特許第６，４５８，３８７号明細書に開示されているものが包含される。
【００７０】
一例では、ヒト血清アルブミンなどの少なくとも１種の高分子、硫酸デキストランなどの少なくとも１種のポリマー、塩化カルシウムなどの任意選択の二価のカチオン源、ヘタスターチなどの少なくとも１種の溶解性低下剤およびカルボキシメチルセルロースなどの任意選択の界面活性剤を組み合わせて、二液相水溶液を形成することができる。攪拌の継続下に、溶液に連続水性相を形成させ、８７℃などの高分子の熱変性温度またはそれより高い第１温度に加熱し、予め決定された期間にわたってインキュベーションし、次いで、周囲温度（２５℃から４０℃のような）などの高分子の最低熱変性温度未満の第２温度に冷却し、別の予め決定された期間にわたってインキュベーションすると、予備形成マイクロ粒子を作製することができる。予備形成マイクロ粒子を遠心分離などの任意の知られている分離手段により集め、そのまま使用することができるか、必要に応じて１回またはそれより多くの回数、典型的には、ある量の新鮮な反応緩衝液で、続いて所望の場合には安定剤の溶液（脱イオン水中５％ｗ／ｖのＣａＣｌ２などの二価カチオン含有水溶液）および純粋な脱イオン水で洗浄することができる。
【００７１】
任意選択の洗浄の後に、予備形成マイクロ粒子を、固体ペレットの形態で使用するか、非中性ｐＨの水性緩衝液（６．５もしくはそれより低い、または７．５もしくはそれより高い、などの少なくとも０．５ｐＨ単位ほど；または６．０もしくはそれより低いまたは８．０もしくはそれより高いなどの少なくとも１ｐＨ単位ほど中性ｐＨとは異なるもののような）などの反応媒体に再懸濁させることができる。予備形成マイクロ粒子中の高分子に対して５％から１００重量％または１０％から５０％または２０％から４０％または３０％から３５％などの予め決定された量のＬＨＲＨアゴニスト、ＬＨＲＨアンタゴニスト、ＬＨＲＨ類似体またはそれらのうちの２種もしくはそれより多くの組合せなどの活性薬剤をある体積の反応媒体に溶かし、マイクロスフェアペレットまたは再懸濁物と混合して、再懸濁混合物を形成することができ、これを必要に応じて、連続攪拌下、４０℃などの４５℃またはそれより低い温度から懸濁物の凝固点よりも高い第３温度または周囲温度（３７℃から２５℃など）またはそれより低い温度で、１５分間から６時間または２０分間から１時間などの１０分間から１２時間にわたってインキュベーションすることができる。予備形成マイクロ粒子を、このインキュベーションの間および／または後に、活性薬剤と結合（共有結合により、静電的におよび／またはその他により）させることができる。２０：１またはそれより小さい、加えられた活性薬剤全量に対するモル比（例えば、１０：１またはそれより小、１：１またはそれより大、３：１またはそれより大）を伴うなどの予め決定された量の非ポリマー性ポリアニオン化合物（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、それらの塩およびそれらのうちの２種またはそれより多くの組合せ）をある体積の反応媒体に溶かし、混合物に混合し、必要に応じて連続攪拌下に第３温度で１時間もしくはそれより短く、または１５分間もしくはそれより短くなどの１分またはそれより長くさらにインキュベーションすることができる。予備形成マイクロ粒子を、このインキュベーションの間および／または後に非ポリマー性ポリアニオン化合物と結合（共有結合により、静電的におよび／またはその他により）させることができる。活性薬剤を、このインキュベーションの間および／または後に非ポリマー性ポリアニオン化合物と結合（共有結合により、静電的におよび／またはその他により）させることができる。
【００７２】
次いで、再懸濁混合物を、４５℃もしくはそれより低いか、周囲温度（３７℃から２５℃など）もしくはそれより低いか、２℃もしくはそれより高いか、または１０℃もしくはそれより高いなどの第３温度と同じか異なってよい６０℃またはそれより低い第４温度に加熱または冷却することができる。予備形成マイクロ粒子中の高分子に対して２０重量％から２００重量％（例えば、４０％から１００％、５０％から８０％、５７％）などの予め決定された量および／または３０：１以下の加えられた活性薬剤全量に対するモル比（例えば、２５：１から１：１、２０：１から５：１、１５：１から８：１）を伴うＥＤＣなどの架橋活性化剤を、ある体積の反応媒体に溶かし、ゆっくりと混合して混合物にし、連続攪拌下に第４温度で１０分間から１０時間（例えば、１時間から５時間、３時間）の予め決定された期間にわたってインキュベーションすることができる。架橋活性化剤を同じかまたは異なる量の２またはそれより多くの部分で、反応インキュベーション期間の間の異なる時点で加えることができるか（少なくとも１部分は、反応インキュベーションの開始時に加えねばならない）、その全部を反応インキュベーションの開始時に加えることができる。
【００７３】
反応インキュベーションが終了したら、反応媒体の温度を周囲温度（２５℃以下など）に戻すことができ、生じたマイクロ粒子を、分離および必要に応じて、脱イオン水および／またはある体積の新鮮な反応緩衝液での１回またはそれより多くの回数（例えば、３、４、５回もしくはそれより多く、または連続的な）の遠心洗浄、続いて１種またはそれより多くの二価カチオン（本明細書に開示されている二価カチオン溶液など）を含有する１種またはそれより多くの溶液での１回もしくは複数回または連続遠心分離洗浄（必要に応じて３５℃から４０℃などの５℃高い温度で）、周囲温度（約２５℃など）脱イオン水での１回またはそれより多くの回数の洗浄などの洗浄を介して回収することができる。
【００７４】
本明細書に記載されているマイクロ粒子は、幅広い様々な分離、診断、治療、工業、商業、化粧および研究の目的に、または活性分子、反応成分（ｒｅａｃｔａｎｔ）もしくは薬物の組み込みおよび安定化を必要とする任意の目的に有用である。したがって、本発明のマイクロ粒子は、薬物送達、ワクチン接種、遺伝子療法および病理組織学的またはｉｎ  ｖｉｖｏでの組織画像化もしくは腫瘍画像化などの医学適用および診断用途に有用である。したがって、このマイクロスフェアは、経口または非経口投与；粘膜投与；眼投与；静脈内、皮下、関節内または筋肉内の注射；吸入による投与；および局所投与のために適している。
【００７５】
下記の実施例は、本発明の態様、特徴および／または利点を例示することを意図するものである。実施例は、本発明を限定するか、または他の形で制限すると考えられるべきではない。
【実施例】
【００７６】
（実施例１）
この実施例では、マイクロ粒子からのロイプロリド放出に対する非ポリマー性ポリアニオン化合物の組み込み効果を評価した。３種の配合物Ａ、ＢおよびＣをマイクロスフェアを形成するために使用した。表Ｉは、マイクロスフェアを形成するために反応混合物に加えられたそれぞれの成分の量を列挙している。酢酸ロイプロリドおよび非ポリマー性ポリアニオン化合物を予備形成マイクロ粒子と結合させる反応を、反応緩衝液（２５ｍＭのＭＥＳ緩衝液［（２−モルホリノ）エタンスルホン酸］、ｐＨ６．０）中で行った。予備形成マイクロ粒子を、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ、マイクロ粒子の７０重量％から８０重量％）および硫酸デキストラン（マイクロ粒子の２０重量％から３０重量％）の均一な混合物から形成した。酢酸ロイプロリド（ＭＥＳ緩衝液０．６ｍｌ中に溶解している１２ｍｇ）を攪拌下に、予備形成マイクロ粒子の懸濁物に周囲温度で、３５：１２のＨＳＡ：ロイプロリド（ｗ／ｗ）比で混合した。次いで、配合物ＡおよびＢでは、周囲温度で非ポリマー性ポリアニオン化合物（ＭＥＳ緩衝液０．２ｍｌに溶解しているアスパラギン酸１３．３ｍｇまたはグルタミン酸１４．７ｍｇ）を懸濁混合物に混合した。対照（配合物Ｃ）は、懸濁混合物に混合されている新鮮なＭＥＳ緩衝液０．２ｍｌ（非ポリマー性ポリアニオン化合物を含まない）を有した。
【００７７】
懸濁混合物をオーブン中で、３７℃のインキュベーション温度に加熱し、３時間インキュベーションし、その間に、ＥＤＣ（ＭＥＳ緩衝液中１００ｍｇ／ｍｌ）の３つの部分を各懸濁混合物に混合した：反応インキュベーションの開始時に０．３ｍｌ、インキュベーション中１．５時間の時点で０．１ｍｌおよびインキュベーション中２．５時間の時点で０．１ｍｌ。３時間の反応インキュベーション時間の後に、加熱を外し、生じたマイクロスフェアを液体反応媒体から遠心分離により分離し、次いで、それぞれ新鮮なＭＥＳ緩衝液１ｍｌアリコートを用いて遠心分離により３回洗浄した。各配合物で、４つの上澄み液（液体反応媒体および緩衝液洗浄剤を含む）を合わせると、約４．５ｍｌの単一の体積（すなわち表Ｉ中のＭＥＳ洗浄液）になった。緩衝液洗浄されたマイクロスフェアを遠心分離により、それぞれ５％（ｗ／ｖ）の塩化カルシウム溶液１ｍｌを用いて４回および脱イオン水１ｍｌを用いて１回さらに洗浄した。５つの上澄み液を合わせると、約５ｍｌの単一の体積（すなわち表Ｉ中のＣａＣｌ２洗浄液）になった。ＭＥＳ洗浄液およびＣａＣｌ２洗浄液中のロイプロリド含有量をＵＶ分光光度法（２８０ｎｍでの吸収）で測定して、マイクロスフェア中のロイプロリド含有量を算出した。３種の配合物Ａ、ＢおよびＣの全てのマイクロスフェアが、加えられたロイプロリドに匹敵する量（すなわち収率）を保持した。
【００７８】
【表１】
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次いで、十分に洗浄されたマイクロスフェアを攪拌しながら、放出緩衝液（５０ｍＭのリン酸Ｎａ、０．５Ｍの塩化ナトリウムおよび０．０５％のＴｗｅｅｎ８０、ｐＨ７．５）中、３７℃（オーブン中）で３時間インキュベーションして、ロイプロリドを放出した。放出媒体のアリコートを、様々な時間間隔で採取し、遠心分離して、ＵＶ分光光度法（２８０ｎｍでの吸収）によりその中のロイプロリド含有量を測定するための上澄みを集めた。放出媒体に放出されたロイプロリドの量が時間の関数としてプロットされている図２に示されているように、本明細書に記載されているとおりのマイクロスフェアへの非ポリマー性ポリアニオン化合物の組み込みにより、そこからのロイプロリド放出プロファイルを変更することができる。特に、アスパラギン酸の組み込みは、対照物の初期バーストよりも大きな初期バーストをもたらす一方で、後続の持続放出相は実質的に同じであった。グルタミン酸の組み込みは、対照物の初期バーストに匹敵する初期バーストをもたらす一方で、後続の持続放出相の間の放出速度は、著しく低減された。
【００７９】
（実施例２）
この実施例では、マイクロスフェアへのアスパラギン酸の組み込みを、［１４］Ｃ標識されたアスパラギン酸を使用して検証した。アスパラギン酸溶液（０．５０Ｍ）を、実施例１に記載されている通りにＭＥＳ緩衝液中で調製した。上記溶液のアリコート０．２０ｍｌに、同じＭＥＳ緩衝液中の［１４］Ｃ標識されたアスパラギン酸５マイクロリットルを混合し、混合物の６０マイクロリットルアリコートをシンチレーションカウントのために採取し、別の６０マイクロリットルアリコートを下記のマイクロスフェア調製で使用した。
【００８０】
それぞれマイクロスフェア（５０ｍｇ、実施例１と同一、本明細書に開示されている通りにＨＳＡおよび硫酸デキストランから形成）および塩酸ロイプロリド（１２ｍｇ、９．６マイクロモル）を実施例１と同様のＭＥＳ緩衝液０．６０ｍｌ中に含有する２つの混合物を形成した。混合物を、周囲温度で２０分間、回転子で懸濁状態に保持した。一方の混合物には、アスパラギン酸６０マイクロリットル（３０マイクロモル、［１４］Ｃ標識されたアスパラギン酸を含まない）を、他方の混合物には、上記の通りの［１４］Ｃ標識されたアスパラギン酸を含有する溶液６０マイクロリットルを混合した。次いで、ＭＥＳ緩衝液０．３４ｍｌに溶解している塩酸ＥＤＣ１６ｍｇ（８３マイクロモル）を各混合物に１アリコートで充填した。次いで、２つの混合物を３７℃（オーブン中）で、（回転子で）攪拌しながら３時間インキュベーションした。各混合物を遠心分離して液体反応媒体を除去し、次いで、新鮮なＭＥＳ緩衝液１ｍｌで１回、塩化カルシウム（５％ｗ／ｖ）１ｍｌで５回順次遠心分離洗浄して、ＭＥＳ洗浄液合わせて２ｍｌ、ＣａＣｌ２洗浄液合わせて５ｍｌおよびロイプロリド担持マイクロスフェアのペレットを得た。
【００８１】
［１４］Ｃ標識されたアスパラギン酸を含有する試料（ＭＥＳ洗浄液、ＣａＣｌ２洗浄液およびマイクロスフェア）を、シンチレーションカウンターを使用して分析して、加えられた全［１４］Ｃ標識されたアスパラギン酸の回収率１０１％を得た。［１４］Ｃ標識されたアスパラギン酸を含まない試料を、ＵＶ分光計を使用して分析して、マイクロスフェアに組み込まれたロイプロリドの量を算出した。結果を下記で表ＩＩにまとめる。マイクロスフェア中の組み込まれたアスパラギン酸（３マイクロモル）と組み込まれたロイプロリド（６．５２マイクロモル）とのモル比は、約０．４６であると評価された。
【００８２】
【表２】
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（実施例３）
さらなる実施例では、マイクロスフェアを形成する間に反応混合物に加えられるロイプロリド：（アスパラギン酸）：ＥＤＣのモル比の変動によるロイプロリド放出動態の改変程度を評価した。マイクロスフェアを上記の実施例１に記載されている通りに、下記の表ＩＩＩに挙げられている様々なモル比の５種の異なる配合物を使用して調製したが、ただし、塩酸ロイプロリドを、酢酸ロイプロリドの代わりに使用し、ＥＤＣを１アリコートで加えた。反応インキュベーションの後に、マイクロスフェアを新鮮なＭＥＳ緩衝液で５回、５％（ｗ／ｖ）塩化カルシウム溶液で５回および脱イオン水で少なくとも１回洗浄した。次いで、十分に洗浄されたマイクロスフェアを実施例１の放出緩衝液中でインキュベーションし、アリコートを規則的な時間間隔で取り、上記の実施例１に記載されている通りにロイプロリド放出動態を決定した。
【００８３】
【表３】
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図３に示されているように、配合物♯１、♯２および♯３（全てアスパラギン酸を含有する）のマイクロスフェアのロイプロリド放出プロファイルは実質的に類似しており、これは、ロイプロリド放出動態とマイクロスフェアを形成する間に使用されるロイプロリド：（アスパラギン酸）：ＥＤＣのモル比との相関が小さいことを示していた。アスパラギン酸を含有するマイクロスフェアは、アスパラギン酸を伴わないマイクロスフェアに比較してロイプロリド放出動態において高い初期バーストを一貫して示した。
【００８４】
（実施例４）
さらなる実施例では、ロイプロリド含有マイクロスフェアのスケールアップ調製物を作製し、酸性環境でのロイプロリドの延長放出動態を評価した。この実施例では、配合物Ａ、Ｂ、ＣまたはＤのマイクロスフェア（表ＩＶ）を比較的大規模（反応体積４０ｍｌ）で調製した。表ＩＶは、マイクロスフェアを形成するために反応混合物に加えられた個々の成分の量を挙げている。実施例１および３に記載の一般的なプロトコルに従ったが、ただし、ＥＤＣ  ＨＣｌを２つの異なる部分（一方は反応インキュベーションの開始時、他方はインキュベーション中２時間目）で配合物ＡおよびＤに加えた。
【００８５】
【表４】
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生じたマイクロスフェアを、実施例１に記載されているような放出緩衝液（実施例１においてと同じ組成だが、ｐＨ６．１）中での長期にわたる放出動態に関してアッセイした。参照配合物（配合物Ｅ、酢酸ロイプロリドを伴うがアスパラギン酸は伴わない）から形成されたマイクロスフェアもまた、長期放出に関してアッセイした。図４に示されているように、配合物Ａのマイクロスフェアのロイプロリド放出動態は、他の配合物のものとは異なるようである。
【００８６】
本開示の実施例は、本発明の原理のいくつかの適用の例示であることを理解されたい。当業者であれば、本開示の真の趣旨および範囲から逸脱することなく、数多くの変更を行うことができる。本明細書に開示されている様々な要素は、任意に組み合わせて使用することができ、本明細書に特に概説されている組合せを得ることに限られない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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