(57)【要約】  本発明は、ストレスまたは照射、例えば日光もしくはＵＶ照射の有害作用に対する皮膚の保護のための、美容用または医薬用組成物における、または、栄養補助食品における、ジンセノサイド類およびジンセノサイド類を含有する植物抽出物の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ストレスまたは照射の有害作用に対する皮膚の保護用の組成物を製造するための、ジンセノサイド類および／またはそれらを含有する植物抽出物の使用。
【請求項２】
照射が、日光、ＵＶ−ＡまたはＵＶ−Ｂ照射である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
ランゲルハンス細胞の保護、ヒト皮膚線維芽細胞におけるＨＯ−１ｍ−ＲＮＡ発現の増加の誘導、ヘムオキシゲナーゼの内因性合成の増加、一酸化炭素およびビリルビンの内因性生成の増加、内因性反応性酸素種の防止および／または限定、および／または、細胞からの反応性酸素種の排除、ＵＶ光曝露に起因する皮膚の光免疫抑制の防止および／または限定、細胞のアポトーシス、老化または機能喪失の防止および／または限定、および／または、それにより影響される疾患または症状の処置または防止のための、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
皮膚の免疫系の保護、酸化ストレスに対する皮膚の保護、炎症性皮膚疾患に対する保護、アポトーシスに対する保護、老化に対する保護、皮膚細胞の過剰増殖に対する保護、および／または、ミトコンドリアにおける制御が不完全な呼吸に対する保護のための、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
ジンセノサイドが、ジンセノサイドＧ−Ｒａ１、Ｇ−Ｒａ２、Ｇ−Ｒａ３、Ｇ−Ｒｂ１、Ｇ−Ｒｂ２、Ｇ−Ｒｂ３、Ｇ−Ｒｃ、Ｇ−Ｒｄ、Ｇ−Ｒｅ、Ｇ−Ｒｆ、Ｇ−Ｒｇ１、Ｇ−Ｒｇ２、Ｇ−Ｒｇ３、Ｇ−Ｒｈ１、Ｇ−Ｒｈ２、Ｇ−Ｒｓ１、Ｇ−Ｒｓ２、Ｇ−Ｒｏ、ＭＧ−Ｒｂ１、ＭＧ−Ｒｂ２、ＭＧ−Ｒｃ、ＭＧ−Ｒｄ、Ｑ−Ｒ１、Ｎ−Ｒ１、Ｎ−Ｒ４、２０Ｇｌｃ−Ｒｆまたはこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の使用。
【請求項６】
抽出物が、サンシチニンジン（San Qi）、チョウセンニンジン（C.A.Meyer）および／またはアメリカニンジンの抽出物である、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の使用。
【請求項７】
抽出物が根または根茎の抽出物である、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
抽出物がジンセノサイド類を全抽出物の０.１％ないし１００重量％の量で含有する、請求項１ないし請求項７のいずれかに記載の使用。
【請求項９】
抽出物がジンセノサイド類を全抽出物の８０重量％以上の量で含有する、請求項１ないし請求項８のいずれかに記載の使用。
【請求項１０】
抽出物が、全抽出物の重量で、１０ないし６０％の量のＧ−Ｒｂ１、１０ないし６０％の量のＧ−Ｒｇ１、０ないし１５％の量のＧ−Ｒｄ、０ないし１５％の量のＮ−Ｒ１、および／または、０ないし１０％の量のＧ−Ｒｅを含有する、請求項１ないし請求項９のいずれかに記載の使用。
【請求項１１】
組成物がジンセノサイド類を全組成物の重量で０.０１％から１０％までの量で含有する、請求項１ないし請求項１０のいずれかに記載の使用。
【請求項１２】
組成物が、全組成物の重量で、０.００１ないし６％の量のＧ−Ｒｂ１、０.００１ないし６％の量のＧ−Ｒｇ１、０ないし１.５％の量のＧ−Ｒｄ、０ないし１.５％の量のＮ−Ｒ１、および／または、０ないし１％の量のＧ−Ｒｅを含有する、請求項１ないし請求項１１のいずれかに記載の使用。
【請求項１３】
ジンセノサイド類またはそれらを含有する抽出物が、少なくとも１種のさらなる活性物質または植物抽出物と組み合わされている、請求項１ないし請求項１２のいずれかに記載の使用。
【請求項１４】
ジンセノサイド類またはそれらを含有する抽出物が、皮膚科的使用に通常用いられる少なくとも１種のさらなる活性物質または植物抽出物と組み合わせられている、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
組成物が局所投与のための皮膚科用または美容用組成物である、請求項１ないし請求項１４のいずれかに記載の使用。
【請求項１６】
組成物が液剤またはクリームである、請求項１ないし請求項１５のいずれかに記載の使用。
【請求項１７】
組成物が栄養補助食品である、請求項１ないし請求項１３のいずれかに記載の使用。
【請求項１８】
組成物が、通常または腸溶性被覆錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤、エリキシル剤、液剤または懸濁剤である、請求項１７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ストレスまたは日光もしくはＵＶ照射などの照射の有害作用に対する皮膚の保護のための、美容用または医薬用組成物における、または、栄養補助食品における、ジンセノサイド（ginsenoside）類およびジンセノサイド類を含有する植物抽出物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
パナクス属の植物ファミリーは、チョウセンニンジン（Panax ginseng）(C.A.Meyer)、アメリカニンジン（Panax quinquefolium）およびサンシチニンジン（Panax notoginseng）などの多数の種を含み、栄養補助食品、医薬および化粧品において、産業的に栽培および使用されている。それらは、活性物質として、ジンセノサイド類と呼ばれるサポニン類を含有する。各々の種のジンセノサイド類は基本的に同じであるが、各々の種に異なる割合で含有される。
【０００３】
サンシチニンジン（San Qiとも呼ばれる）は、例えば中国の南西部で生育する直立性多年生草本植物である。伝統的に、人々はサンシチニンジンの根を強壮剤としてのみならず、外傷、炎症、肝炎、心臓および血管の疾患並びに老化などの、多くの症状および疾患の処置にも使用している。現在までに、３０種を超えるジンセノサイド類がサンシチニンジンの根から単離できた。主要なジンセノサイド類は、ジンセノサイドＲｇ１およびジンセノサイドＲｂ１、続いてジンセノサイドＲｄ、Ｒｅ、Ｒｇ２およびノトジンセノサイドＲ１である。多くの科学的研究が、有機機能に対するジトロピズム（ditropism）調節作用 (Y.M. Luo et al., Acta Pharmacologica Sinica, 1993, 14(5), 401-404)、中枢神経系に対する作用 (Y. Ying et al., Acta Pharmaceutica Sinica, 1994, 29(4), 241-245)、癌予防 (T. Konoshima et al., Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1992, 40, 531-533; L. Xu et al., Journal of WCUMS, 1991, 22(2), 124-127) および抗ウイルス活性 (J. Li et al., Journal of Norman Bethune University of Medical Sciences, 1992, 18(1), 24-26) などの、サンシチニンジンの薬理的特性および生物学的活性を裏付けた。
【０００４】
美容産業では、サンシチニンジンおよび／またはジンセノサイド類は、様々な適用に使用される。サンシチニンジン抽出物は、しわの改善および経時的およびＵＶに誘導される老化の防止のために、皮膚の弾力性の活性化について特許請求されている（ＪＰ２００６−０２８１５０）。
【０００５】
ジンセノサイドＲｂ１またはＲｂ−１様の物質は、エラスチン合成の刺激（ＷＯ９９／０７３３８）、毛髪の処理（ＦＲ９３００８９９、ＵＳ５,６６３,１６０）、創傷後の組織再生の刺激（ＪＰ２００２−２５５８２６）、皮膚の老化を受けている組織の再構築（ＷＯ２００２／０７２５９９）、火傷の場合の創傷処置（ＪＰ２００４−０７７４５６）について記載されている。ジンセノサイドＲｂ１は、また、ジンセノサイドＲｃおよびＲｄ（ＪＰ２００３−０７０４９６）と組み合わせて、ＵＶによる損傷を受けたＤＮＡの修復用のエンドヌクレアーゼを活性化するために使用される。ジンセノサイドＲｈ２およびＲｇ３は、それらのＵＶ吸収特性のために、ＵＶを遮断する美容用組成物に配合される（ＫＲ２００４−００９８１７７）。
【０００６】
ランゲルハンス細胞は、皮膚の免疫保護を担う。皮膚がＵＶ光に曝されると、ランゲルハンス細胞は表皮から消失し、結果的にそれは感染性疾患および癌に対してあまり保護されなくなる（T. Schwarz, Photodermatol Photoimmunol Photomed 2002, 18, 141-145)。  
【０００７】
ヘムオキシゲナーゼＨＯは、一酸化炭素ＣＯ、ビリベルジン（それは、抗酸化性のビリルビンに迅速に変換される）および遊離鉄（それは、鉄結合タンパク質フェリチンの誘導を導く）の形成を伴って、ヘム（細胞内に見出される分子）の開環を触媒する酵素である。ヘムオキシゲナーゼには２つの形態がある：主に神経組織にある構成型形態であるＨＯ−２、および、誘導型形態であるＨＯ−１。それらは、抗酸化、抗炎症、抗アポトーシスおよび抗増殖作用のために、細胞保護的酵素であると考えられる（L.E. Otterbein et al., Trends Immunol. 2003, 24(8), 449-55）。ＨＯ−１誘導は、火傷の治癒を改善すると考えられ（Gan HT et al., Surgery., 2006, 141(3):385-93）、その２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール（Protopanaxadiol）による誘導は、抗炎症活性のために、ＮＯ生成を低減させると証明されている（Lee SH et al., Planta Med., 2005, 71(12), 1167-70）。また、ＨＯ−１（それ自体は、ＵＶ−Ａ曝露により生成される）により生成される一酸化炭素は、ＵＶ−Ｂ照射に起因する光免疫抑制からランゲルハンス細胞を保護できるとも見出された（M. Allanson et al., J. Invest. Dermatol., 2005, 124(3), 644-650）。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、ストレスまたは例えば日光またはＵＶ照射などの照射の有害作用に対する皮膚の保護のための、ジンセノサイド類および／またはそれらを含有する植物抽出物に関する。
【０００９】
本発明によるジンセノサイド類およびそれらを含有する抽出物の使用は、皮膚の保護のための適切かつ安全な方法である。
【００１０】
本発明によると、ジンセノサイド類には、ジンセノサイドＧ−Ｒａ１、Ｇ−Ｒａ２、Ｇ−Ｒａ３、Ｇ−Ｒｂ１、Ｇ−Ｒｂ２、Ｇ−Ｒｂ３、Ｇ−Ｒｃ、Ｇ−Ｒｄ、Ｇ−Ｒｅ、Ｇ−Ｒｆ、Ｇ−Ｒｇ１、Ｇ−Ｒｇ２、Ｇ−Ｒｇ３、Ｇ−Ｒｈ１、Ｇ−Ｒｈ２、Ｇ−Ｒｓ１、Ｇ−Ｒｓ２、Ｇ−Ｒｏ、ＭＧ−Ｒｂ１、ＭＧ−Ｒｂ２、ＭＧ−Ｒｃ、ＭＧ−Ｒｄ、Ｑ−Ｒ１、Ｎ−Ｒ１、Ｎ−Ｒ４および２０Ｇｌｃ−Ｒｆが含まれるが、これらに限定されない。好ましいのは、ジンセノサイドＧ−Ｒｇ１、Ｇ−Ｒｂ１、Ｇ−Ｒｄ、Ｇ−Ｒｅ、Ｇ−Ｒｇ２およびＮ−Ｒ１である。最も好ましくは、ジンセノサイドは、ジンセノサイドＧ−Ｒｇ１およびＧ−Ｒｂ１からなる群から選択される。
【００１１】
全ての言及したジンセノサイド類は、知られており、パナクス属の植物から、標準的な方法により、例えば抽出およびクロマトグラフィーにより、単離できる。
【００１２】
本発明によると、ジンセノサイド類は、単一のジンセノサイドおよび異なるジンセノサイド類の混合物を表す。好ましいのは、ジンセノサイドＧ−Ｒｇ１およびＧ−Ｒｂ１を含むジンセノサイド類の混合物であり、より好ましくは、ジンセノサイドＧ−Ｒｇ１、Ｇ−Ｒｂ１、Ｇ−Ｒｄ、Ｇ−Ｒｅ、Ｇ−Ｒｇ２およびＮ−Ｒ１の混合物である。
【００１３】
本発明によるジンセノサイド類を含有する植物抽出物は、パナクス属のファミリーの植物の抽出物であり、それは、チョウセンニンジン（C.A.Meyer）、アメリカニンジンおよびサンシチニンジン（San Qi）を含むがこれらに限定されない。好ましいのは、サンシチニンジン（San Qi）である。
【００１４】
抽出は、植物の全ての部分で実施できる。好ましくは、根または根茎を抽出する。
抽出は、標準的抽出方法により行うことができる。好ましくは、根または根茎を、抽出に適用できる極性溶媒で、場合により数回、抽出する。粗抽出物を、クロマトグラフィーにより精製できる。場合により、画分を噴霧乾燥により乾燥できる。
【００１５】
本発明による抽出物は、通常、乾燥抽出物である。にも拘わらず、抽出物を溶液としても使用でき（即ち、説明した抽出方法の最終乾燥段階を省略する）、場合により、生成物を、例えばゼラチンカプセルに、カプセル封入できる。
【００１６】
抽出に使用される極性溶媒は、好ましくはアルコールまたは水とアルコールの混合物であり、アルコールは、好ましくはエタノールである。
【００１７】
好ましいのは、ジンセノサイド類を０.１ないし１００％の、好ましくは１０ないし１００％の、好ましくは８０％を超える量で含有する乾燥植物抽出物である。
【００１８】
本発明による抽出物は、好ましくは、全抽出物の重量で、Ｇ−Ｒｂ１を１０ないし６０％の量で、Ｇ−Ｒｇ１を１０ないし６０％の量で、Ｇ−Ｒｄを０ないし１５％の量で、Ｎ−Ｒ１を０ないし１５％の量で、および／または、Ｇ−Ｒｅを０ないし１０％の量で、含有する。
【００１９】
ジンセノサイド類は、それを含有する抽出物から、標準的な単離方法により単離および／または精製できる。標準的な単離方法には、クロマトグラフィー的方法が含まれるが、これらに限定されない。
【００２０】
本発明によるジンセノサイド類またはそれらを含有する抽出物は、任意の形態で任意の有効な経路で投与でき、例えば、経口、非経腸、経腸、静脈内、腹腔内、局所、経皮（例えば、任意の標準的パッチを使用する）、眼、鼻腔、局所、非経口、例えばエアロゾル、吸入、皮下、筋肉内、頬側、舌下、直腸、膣、動脈内およびくも膜下腔内などを含む。それらは、単独で、または、任意の活性または非活性の成分と組み合わせて、投与できる。好ましいのは、局所または経口投与である。
【００２１】
本発明によるジンセノサイド類またはそれらを含有する抽出物は、既知の方法で通常の製剤、例えば美容用、皮膚科用、医薬用または栄養補助食品の組成物に変換できる。これらは、液体または固体製剤であり得る。例えば、非限定的に、通常および腸溶性被覆錠剤、カプセル剤、丸剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、液剤、懸濁剤、坐剤、シロップ剤、固体および液体エアロゾル剤、乳剤、ペースト、クリーム、軟膏、ミルク、ジェル、膏薬、美容液（serums）、フォーム、シャンプー、スティックまたはローションであり得る。
【００２２】
好ましいのは、水性液剤、白色または着色クリーム、軟膏、ミルク、ジェル、膏薬、美容液、フォーム、シャンプー、スティック、クリーム、ペーストまたはローションの形態の、皮膚科用または美容用組成物である。
【００２３】
また、好ましいのは、本発明によるジンセノサイド類またはそれらを含有する抽出物を含む経口投与可能な栄養補助食品の組成物である。
【００２４】
本発明によるジンセノサイド類またはそれらを含有する抽出物は、さらに、任意の他の適する添加物または医薬的に許容し得る担体、好ましくは、皮膚科的および／または美容的に許容し得る担体と、組み合わせることができる。そのような添加物には、既に言及された物質のいずれも、および、常套に使用されるもの、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Gennaro and Gennaro, eds, 20th edition, Lippincott Williams & Wilkins, 2000); Theory and Practice of Industrial Pharmacy (Lachman et al., eds., 3rd edition, Lippincott Williams & Wilkins, 1986); Encyclopedia of Pharmaceutical Technology (Swarbrick and Boylan, eds., 2nd edition, Marcel Dekker, 2002) に記載のもののいずれもが含まれる。これらは、本明細書において、それらが活性薬物と組み合わせられ、治療目的で安全に対象に投与できることを示すために、「医薬的に許容し得る担体」と呼ばれ得る。
【００２５】
本発明のジンセノサイド類またはそれらを含有する抽出物の投与量は、所望の治療活性を提供するために、処置されるべき効果および／または疾患のタイプおよび／または疾患の状態を考慮して選択できる。これらの量は、特定の患者のために日常的に決定でき、ここで、様々なパラメーターを利用して適切な投与量を選択するか（例えば、疾患のタイプ、患者の年齢、疾患の状態、患者の健康状態、体重など）、または、それらの量は、比較的標準的であり得る。
【００２６】
投与される有効成分の量は、特定の化合物および用いる投薬単位、投与の様式および時間、処置期間、年齢、性別、処置される患者の全般的状態、処置される症状の性質および程度、薬物代謝および排出の速度、可能な薬物の組合せおよび薬物−薬物相互作用などの考慮事項に応じて、広範囲にわたり得る。
【００２７】
好ましいのは、全組成物の重量で０.０１％より多く１０％までの量で、本発明による抽出物を含有する組成物である。
【００２８】
さらに、本発明による組成物は、好ましくは、全組成物の重量で、Ｇ−Ｒｂ１を０.００１ないし６％の量で、Ｇ−Ｒｇ１を０.００１ないし６％の量で、Ｇ−Ｒｄを０ないし１.５％の量で、Ｎ−Ｒ１を０ないし１.５％の量で、および／または、Ｇ−Ｒｅを０ないし１％の量で含有する。
【００２９】
本発明による組成物は、１日に１回またはそれ以上、好ましくは３回まで、より好ましくは２回まで投与される。好ましいのは、局所または経口投与である。
【００３０】
それにも拘わらず、体重、有効成分に対する個体の挙動、製剤のタイプおよび投与を実施する時間または間隔に応じて、特定された量から逸脱することが有利な場合があり得る。例えば、上述の最低量より少なくても十分な場合があり得、一方、特定された上限を超えなければならない場合もある。比較的大量の投与の場合、１日にわたり、これらをいくつかの個別用量に分割するのが望ましいことがある。
【００３１】
本発明によるジンセノサイド類またはそれらを含有する抽出物は、少なくとも１種のさらなる活性物質または植物抽出物と、例えば皮膚科的使用に通常用いられる物質または植物抽出物と、組み合わせることもできる。
【００３２】
さらなる活性物質には、剥離および／または加湿剤、ＵＶフィルタリングまたはブロッキング剤、脱色素沈着（depigmenting）または色素沈着促進（propigmenting）剤、抗糖化剤、抗炎症剤、抗菌剤、皮膚、表皮、毛髪または爪の巨大分子の合成を刺激する、かつ／または、それらの分解を防止する物質、ケラチノサイトの分化を刺激する物質、筋弛緩剤、汚染防止剤（antipollution）および／または抗フリーラジカル剤、減量剤（slimming agent）、微小循環に作用する物質、細胞のエネルギー代謝に作用する物質、引き締める（tightening）物質、毛髪の喪失を防止するか、または、成長を刺激する物質、灰色または白色の毛髪を防止する物質、または、これらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、その組合せは、局所用の皮膚科用または美容用組成物に含有される。
【００３３】
本発明によるジンセノサイド類またはそれらを含有する抽出物は、また、アルファ−ヒドロキシ酸、サリチル酸またはその誘導体、例えばアセチルサリチル酸、システイン誘導体、セラミド、ステロイド、トコフェロール、トコトリエノール、アルブチンまたはその誘導体、アスコルビン酸またはその誘導体、レチノールまたはその誘導体、レチノイドまたはその誘導体、カロテノイド、グリチルレチン酸、グリチルリチン酸またはその塩、センテラ（centella）抽出物またはその単離された成分、プレクトランサス（plectranthus）抽出物、ボスウェリア（boswellia）抽出物、ショウガ抽出物、アロエ抽出物、アンゼリカ抽出物、エゾウコギ抽出物、ロディオラ（rhodiola）抽出物、ヒッポファエ（hippophae）抽出物、キアノティス（cyanotis）抽出物、植物油、オリゴペプチド、補酵素Ｑ１０、ユビキノン、カフェイン、テオフィリン、茶抽出物、カカオ抽出物、酵母抽出物、ダイズ抽出物、リスベラトロールおよび／またはプロシアニジンオリゴマーと組み合わせることもできる。好ましくは、その組合せは、局所用の皮膚科用または美容用組成物に含有される。
【００３４】
本発明によるジンセノサイド類またはそれらを含有する抽出物は、また、皮膚および／または毛髪の美容的な質を支持する、痩せていることを支持する、筋肉の強度を保持する、記憶力を改善する、コレステロールを低減する、閉経の障害を低減する、日光の有害な作用を防止する、かつ／または、心血管の問題を防止するための物質と組み合わせることもできる。好ましくは、その組合せは、経口投与可能な組成物に含有される。
【００３５】
本発明によるジンセノサイド類またはそれらを含有する抽出物は、また、多不飽和脂肪酸またはそれらの誘導体、ビタミン類、少数元素、カルシウム塩、カロテノイド、植物ホルモン、ポリフェノール、薬用植物抽出物、カルノシンおよび／またはカフェインと組み合わせることもできる。好ましくは、その組合せは、経口投与可能な組成物に含有される。
【００３６】
本発明によるジンセノサイド類またはそれらを含有する抽出物は、栄養補助食品の分野または皮膚科分野で使用でき、それには、ストレスまたは日光もしくはＵＶ照射、好ましくはＵＶ−ＡまたはＵＶ−Ｂ照射などの照射の有害作用に対する皮膚の保護のための、美容的および医薬的使用が含まれる。
【００３７】
本発明による皮膚の保護には、皮膚の免疫系の保護、酸化または他のストレスに対する皮膚の保護、炎症性皮膚疾患に対する保護、アポトーシスに対する保護、老化に対する保護、皮膚細胞の過剰増殖に対する保護、および、ミトコンドリアにおける制御が不完全な呼吸に対する保護が含まれるが、これらに限定されない。
【００３８】
さらに、本発明によるジンセノサイド類またはそれらを含有する抽出物は、ランゲルハンス細胞の保護、ヒト皮膚線維芽細胞におけるＨＯ−１ｍ−ＲＮＡ発現の増加の誘導、ヘムオキシゲナーゼの内因性合成の増加、一酸化炭素およびビリルビンの内因性生成の増加、内因性反応性酸素種の防止および／または限定、および／または、細胞からの反応性酸素種の排除、例えばＵＶ光曝露に起因する皮膚の光免疫抑制の防止および／または限定、細胞のアポトーシス、老化または機能喪失の防止および／または限定、および／または、それにより影響される疾患または症状の処置または防止のために使用できる。
【００３９】
さらに、本発明によるジンセノサイド類またはそれらを含有する抽出物は、創傷治癒のために、皮膚の再生のために、そして、皮膚の老化に対して使用できる。
【実施例】
【００４０】
実施例
実施例１：
サンシチニンジンの根または根茎を、エタノールで抽出する。ジンセノサイド類を含有する画分を、カラムクロマトグラフィーにより、噴霧乾燥の前に単離する。
【００４１】
対応する生成物は粉末形態であり、９０％を超えるジンセノサイド類を含有する。純度はＨＰＬＣにより制御でき、全抽出物の重量で１０−６０％のＧ−Ｒｂ１、１０−６０％のＧ−Ｒｇ１、０−１５％のＧ−Ｒｄ、０−１５％のＮ−Ｒ１および０−１０％のＧ−Ｒｅを含有できる抽出物を示す。
【００４２】
実施例２：
サンシチニンジン抽出物（実施例１による）の活性を、エクスビボのヒト皮膚モデルで、ＵＶに誘導されるランゲルハンス細胞の毒性に対して評価する。
【００４３】
皮膚パンチを腹部皮膚生検から採取し、ＤＭＥＭ、グルタミン、ペニシリン−ストレプトマイシンおよびウシ胎児血清で構成される培地中で培養する。ＤＭＳＯに希釈したサンシチニンジン抽出物を培養培地に２回、ＵＶ照射の２４時間および１時間前に添加する。処理無し、照射有りまたは無しの２つの他の生検群を、ＵＶ有りまたは無しの対照として調製する。
【００４４】
次いで、ランゲルハンス細胞を、AntiCD1a-FITC 抗体で特異的に標識する。皮膚生検を凍結し、切片にする。次いで、蛍光ランゲルハンス細胞を計数するために、落射蛍光で切片を観察する。
【００４５】
保護の割合を、ＵＶ無しの対照と比較して、下式に従い算出する：
【数１】
2009537466.tif 000002
【００４６】
対照＋ＵＶでは、表皮に位置するランゲルハンス細胞の数は、９５％まで減少し、標識される。０.０４、０.２および１ｍｇ／ｍｌのサンシチニンジン根のジンセノサイド画分との２４時間の事前のインキュベーションは、ランゲルハンス細胞の減少の３２％、５５％および６３％を防止する。
【００４７】
サンシチニンジン抽出物（実施例１による）はＵＶＡまたはＵＶＢを吸収しないので、試験されたランゲルハンス細胞に対する活性は、実際に生物学的活性に関係する。
【００４８】
実施例３：
培養したヒト皮膚線維芽細胞でｃＤＮＡアレイにより遺伝子発現を測定する。サンシチニンジン抽出物（実施例１による）を、ＤＭＳＯ中０.２ｍｇ／ｍｌで単層培養に添加する。試験化合物および細胞を、アッセイ培地中で２４時間インキュベートする。標準的ミニチップを使用して、遺伝子発現の分析を実施する。スポット装置および目的のｃＤＮＡ特異的マーカーを使用して、チップにスポットする。
【００４９】
サンシチニンジンのジンセノサイド画分での処理により、ヘムオキシゲナーゼ−１ｍ−ＲＮＡの発現が基底レベルの１８９％に増強されることが、ｃ−ＤＮＡアレイにより見出された。
【００５０】
実施例４：
サンシチニンジン抽出物（実施例１による）によるヘム−オキシゲナーゼ１の活性化を、ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）増幅により測定する。試験化合物を含有するか、またはしないアッセイ培地中で、線維芽細胞を、４時間、８時間または２４時間培養する。各インキュベーション時間の終わりに、細胞をＰＢＳバッファーで洗浄し、Tri-試薬中に置き、参照としてのＧ３ＰＤＨと共に凍結する。
【００５１】
LightCycler（登録商標）システムを使用して、トリプリケート（triplicate）でＰＣＲを実施する。増幅されたＤＮＡ中の蛍光の組込みを、ＰＣＲサイクル中に継続的に測定した。「蛍光強度」対「ＰＣＲ−サイクル」のプロットは、各マーカーについての相対的発現値の評価を可能にする。
【００５２】
サンシチニンジン抽出物と接触して４時間後の細胞中のＨＯ−１ｍ−ＲＮＡの発現は、基底レベルの３１３％である。
【００５３】
実施例５：
サンシチニンジン抽出物（実施例１による）のストレスに誘導される早期老化に対する保護作用の評価を、インビトロで培養したヒト二倍体線維芽細胞で試験する。ストレスに誘導される早期老化は、準毒性ストレスの増殖型細胞に対する長期的作用と定義でき、インビトロでＨ２Ｏ２−誘導により表すことができる。老化に関連するβ−ガラクトシダーゼは、老化した非増殖性細胞のバイオマーカーとみなされる。
【００５４】
本研究では、線維芽細胞の処理を３段階で行う。第１段階では、サンシチニンジン抽出物を５０、１５０または３００μｇ／ｍｌの３種の異なる濃度で含有する培養培地で、線維芽細胞を２４時間処理する（予処理段階）。その後、第２段階では、ストレス誘導のために、培地をＨ２Ｏ２（２００μＭ）を含有する培地に交換する。２時間後、培地を５０、１５０または３００μｇ／ｍｌの３種の異なる濃度の最初の培養培地に再度交換する（第３段階、回復期）。７２時間の回復時間の後、老化に関連するβ−ガラクトシダーゼをｐＨ６で比色定量的および蛍光定量的試験により測定する。
【００５５】
結果によると、線維芽細胞の準毒性Ｈ２Ｏ２用量への曝露は、１７.６％から４３.５％へのβ−ガラクトシダーゼ陽性細胞の量の増加を導く。誘導前２４時間およびストレス後の回復期の培養培地中の濃度１５０または３００μｇ／ｍｌは、ストレスに誘導されるβ−ガラクトシダーゼ陽性細胞の割合を、各々３７.５％および３３.２％に有意に低減させる。
【００５６】
実施例６：正常化（tonifying）クリーム
【表１】
2009537466.tif 000003
【国際調査報告】
2009537466.tif 000004
2009537466.tif 000005
2009537466.tif 000006
2009537466.tif 000007
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