(57)【要約】骨折治癒を促進または増強し、骨損傷を治療し、骨形成を増強するために骨発生を促進するための方法を開示する。本方法は、一般に、アラキドン酸の代謝経路またはシグナル伝達経路を調整し、特に、５−リポキシゲナーゼインヒビターを使用する。これらの分子を、単独で送達させるか、骨再吸収を阻害し、骨からのカルシウム吸収を調節し、骨蓄積を増強し、骨形成を増強し、骨形成を誘導し、微生物の成長を減少させ、炎症を軽減し、そして／または疼痛を軽減する１つまたは複数の薬剤と組み合わせて送達することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療を必要とする哺乳動物被験体を治療するために骨発生を促進するための方法であって、該被験体に治療有効量の５−リポキシゲナーゼ活性を減少させる化合物を投与する工程を含み、ここで、該５−リポキシゲナーゼ活性の減少によって骨発生が促進され、それにより、骨折、骨損傷、および骨形成の誘導によって治療される状態からなる群から選択される状態が治療されることを含む、方法。
【請求項２】
前記状態が骨折である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記骨折が、非骨粗鬆症性骨折（ｎｏｎ−ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｔｉｃ  ｆｒａｃｔｕｒｅ）、骨粗鬆症性骨折（ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｔｉｃ  ｆｒａｃｔｕｒｅ），先天性疾患に関連する骨折，後天性疾患に関連する骨折，または骨切り術による骨折（ｏｓｔｅｏｔｏｍｉｃ  ｆｒａｃｔｕｒｅ）である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記骨折が非骨粗鬆症性骨折である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記骨折が骨粗鬆症性骨折である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記骨折が骨切り術による骨折である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記状態が、骨形成の誘導によって治療される状態である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記状態が、脊椎固定または関節固定によって治療される状態である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記状態が骨損傷である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記投与がｉｎ  ｖｉｖｏである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記投与がｅｘ  ｖｉｖｏである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記化合物が５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）の阻害によって５−リポキシゲナーゼ活性を減少させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記化合物が小分子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記小分子が、３−［１−（４−クロロベンジル）−３−ｔ−ブチル−チオ−５−イソプロピルインドール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸（ＭＫ８８６）、３−（１−（４−クロロベンジル）−３−（１−ブチル−チオ）−５−（キノリン−２−イル−メトキシ）−インドール−２−イル）−２，２−ジメチルプロパン酸）（ＭＫ−５９１）、ノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）、２−（１２−ヒドロキシドデカ−５，１０−ジイニル）−３，５，６−トリメチル−１，４−ベンゾキノン（ＡＡ８６１）、（Ｎ−（１−ベンゾ（ｂ）チエン−２−イルエチル）−Ｎ−ヒドロキシ尿素）（ジロートン）、マソプロコール、テニダップ、フロブフェン、ロナパレン、タゴリジン（ｔａｇｏｒｉｚｉｎｅ）、ＡＡ−８６１、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−１２１７９８、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７６７４５、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７８７７３、［（Ｒ）（＋）Ｎ’−［［５−（４−フルオロフェノキシ）フラン−２−イル］−１−メチル−２−プロピニル］−Ｎ−ヒドロキシ尿素（Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７９１７５）、Ａｂｂｏｔｔ  ＡＢＴ  ７６１、Ｄａｉｎｉｐｐｏｎ  ＡＬ−３２６４、Ｂａｙｅｒ  Ｂａｙ−ｘ−１００５、Ｂｉｏｆｏｒ  ＢＦ−３８９、ブナプロラスト、Ｃｙｔｏｍｅｄ  ＣＭＩ−３９２、Ｔａｋｅｄａ  ＣＶ−６５０４、リン酸エナザドレム、Ｌｅｏ  Ｄｅｎｍａｒｋ  ＥＴＨ−６１５、塩酸フレゼラスチン、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ−６６３５３６、Ｍｅｒｃｋｌｅ  ＭＬ−３０００、３Ｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｒ−８４０、リロピロックス、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ  ＳＣＨ−４０１２０、テポキサリン、リナゾラスト（ＴＭＫ−６８８）、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−２１３８、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  ＢＵ−４６０１Ａ、カルバゾマイシンＣ、ラグナマイシン、Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  ＢＷ−７０Ｃ、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２６５２９、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＣＩ  １００４、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＰＤ−１３６００５、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＰＤ−１４５２４６、Ｅｌｓａｉ  Ｅ−３０４０、Ｆｕｊｉｒｅｂｉｏ  Ｆ−１３２２、Ｆｕｊｉｓａｗａ  ＦＲ−１１０３０２、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ−６９９３３３、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ−７３９０１０、Ｌｉｌｌｙ  ＬＹ−２６９４１５、Ｌｉｌｌｙ  ＬＹ−１７８００２、Ｈｏｅｃｈｓｔ  Ｒｏｕｓｓｅｌ  Ｐ−８８９２、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ＳＢ−２０２２３５、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＡＹ−１２１５２０、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＡＹ−１２５００７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−７７１７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２１６８００、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２３０４８７、１，２−ジヒドロ−ｎ−（２−チアゾリル）−１−オキソピロロ（３，２，１−ｋｌ）フェノチアジン−１−カルボキシアミド、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−６５２６０、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−６９４１２、Ａｂｂｏｔｔ−６３１６２、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＡＨＲ−５３３３、Ｂａｙｅｒ  Ｂａｙ−ｑ−１５３１、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  ＢＩ−Ｌ−３５７、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  ＢＩ−Ｌ−９３ＢＳ、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  ＢＩＬ  ２２６ＸＸ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  ＢＭＹ−３００９４、カルバゾマイシンＢ、Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  ＢＷ−Ｂ２１８Ｃ、Ｃｈａｕｖｉｎ  ＣＢＳ−１１１４、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２１５９５、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２２７４５、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２３８８５、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ  ２４８９１、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−８５１５、Ｃｈｉｅｓｉ  ＣＨＦ−１９０９、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＣＩ−９８６、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＣＩ９８７、シルシリオール、ドセベノン、Ｅｉｓａｉ  Ｅ−５１１０、Ｅｉｓａｉ  Ｅ−６０８０、エノフェラスト、エポカルバゾリン−Ａ、エプロバフェン（ｅｐｒｏｖａｆｅｎ）、エバンダミン（ｅｖａｎｄａｍｉｎｅ）、Ｆｉｓｏｎｓ  ＦＰＬ  ６２０６４、Ｚｅｎｅｃａ  ＩＣＩ−２１１９６５、Ｚｅｎｅｃａ  ＩＣＩ−２１６８００、Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  ＫＦ−８９４０、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６５１３９２、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６５１８９６、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６５２３４３、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６５６２２４、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６７０６３０、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６７４６３６、Ｌｉｌｌｙ  ＬＹ−２３３５６９、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  ＭＫ−５９１、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６５５２４０、ニトロソキサシン−Ａ、Ｏｎｏ  ＯＮＯ−５３４９、Ｏｎｏ  ＯＮＯ−ＬＰ−２１９、Ｏｎｏ  ＯＮＯ−ＬＰ−２６９、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＰＤ−１２７４４３、Ｐｕｒｄｕｅ  Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ  ＰＦ−５９０１、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ  Ｒｅｖ−５３６７、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ  ＲＧ−５９０１−Ａ、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ  ＲＧ−６８６６、Ｒｏｕｓｓｅｌ−Ｕｃｌａｆ  ＲＵ−４６０５７、Ｓｅａｒｌｅ  ＳＣ−４１６６１Ａ、Ｓｅａｒｌｅ  ＳＣ−４５６６２、Ｓａｎｄｏｚ  ＳＤＺ−２１０−６１０、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ＳＫ＆Ｆ−１０４３５１、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ＳＫ＆Ｆ−１０４４９３、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ＳＫ＆Ｆ−１０５８０９、Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏ  ＳＬ−８１−０４３３、Ｔｅｉｊｉｎ  ＴＥＩ−８００５、Ｔｅｒｕｍｏ  ＴＭＫ−７７７、Ｔｅｒｕｍｏ  ＴＭＫ−７８１、Ｔｅｒｕｍｏ  ＴＭＫ−７８９、Ｔｅｒｕｍｏ  ＴＭＫ−９１９、Ｔｅｒｕｍｏ  ＴＭＫ−９９２、Ｔｅｉｋｏｋｕ  Ｈｏｒｍｏｎｅ  ＴＺＩ−４１１２７、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＡＹ−１２０７３９、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＹ−４７２８８、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＹ−４８２５２、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＹ−５０２９５、Ｙｏｓｈｉｔｏｍｉ  Ｙ−１９４３２、４−｛３−［４−（２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニルチオ］｝フェニル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキシアミド、エスクレチン、フェニドン、ＢＩ−Ｌ−２３９、５，８，１１−エイコサトリイン酸（ＥＴＩ）、５，８，���１，１４−エイコサテトライン酸（ＥＴＹＡ）、シンナミル−３，４−ジヒドロキシ−α−シアノシンナマート、クルクミン、エスクレイチン（ｅｓｃｕｌｅｉｔｉｎ）、ゴッシポール、カフェー酸、バイカレイン、７，７−ジメチルエイコサドレノン酸（７，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌｅｉｃｏｓａｄｒｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）（ＤＥＤＡ）、Ｌｙ３１１７２７、ブロモエノールラクトン、メチルアラキドニルフルオロホスホナート、メチルｙ−リノレニルフルオロホスホナート、オレオキシエチルホスホリルコリン、ＡＡＣＯＣＦ３、ｎ−（ｐ−アミルシンナモイル）アントラニル酸、メパクリン、キナクリン、アタブリン、パラブロモフェナシルブロミド（ｐａｒａｂｒｏｍｏｐｈｅｎａｃｙｌｂｒｏｍｉｄｅ）、アリストロキン酸、コルチゾン、Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  ４８０８４８、Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  ６５９０３２、Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  ６７７１１６、ＢＭＳ−１８１１６２、ＭＪ３３、およびＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ＭＬＮ９７７からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記小分子が、マソプロコール、テニダップ、（Ｎ−（１−ベンゾ（ｂ）チエン−２−イルエチル）−Ｎ−ヒドロキシ尿素）（ジロートン）、フロブフェン、ロナパレン、タゴリジン（ｔａｇｏｒｉｚｉｎｅ）、ＡＡ−８６１、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−１２１７９８、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７６７４５、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７８７７３、［（Ｒ）（＋）Ｎ’−［［５−（４−フルオロフェノキシ）フラン−２−イル］−１−メチル−２−プロピニル］−Ｎ−ヒドロキシ尿素（Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７９１７５）、Ａｂｂｏｔｔ  ＡＢＴ  ７６１、Ｄａｉｎｉｐｐｏｎ  ＡＬ−３２６４、Ｂａｙｅｒ  Ｂａｙ−ｘ−１００５、Ｂｉｏｆｏｒ  ＢＦ−３８９、ブナプロラスト、Ｃｙｔｏｍｅｄ  ＣＭＩ−３９２、Ｔａｋｅｄａ  ＣＶ−６５０４、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２６５２９、リン酸エナザドレム、Ｌｅｏ  Ｄｅｎｍａｒｋ  ＥＴＨ−６１５、塩酸フレゼラスチン、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ−６６３５３６、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ−６９９３３３、Ｍｅｒｃｋｌｅ  ＭＬ−３０００，３Ｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｒ−８４０、リロピロックス、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ  ＳＣＨ−４０１２０、テポキサリン、リナゾラスト（ＴＭＫ−６８８）、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−７７１７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２１６８００、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２３０４８７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−２１３８、およびＮＤＧＡ（非ジヒドログアイアレチン酸）からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記小分子が、テニダップ、ジロートン、フロブフェン、ロナパレン、タゴリジン、ＡＡ−８６１、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−１２１７９８、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７６７４５、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７８７７３、［（Ｒ）（＋）Ｎ’−［［５−（４−フルオロフェノキシ）フラン−２−イル］−１−メチル−２−プロピニル］−Ｎ−ヒドロキシ尿素（Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７９１７５）、Ａｂｂｏｔｔ  ＡＢＴ  ７６１、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２６５２９、Ｂｉｏｆｏｒ  ＢＦ−３８９、Ｃｙｔｏｍｅｄ．ＣＭＩ−３９２、Ｌｅｏ  Ｄｅｎｍａｒｋ  ＥＴＨ−６１５、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ  ６９９３３３、Ｍｅｒｃｋｌｅ  ＭＬ−３０００、３Ｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｒ−８４０、リナゾラスト（ＴＭＫ−６８８）、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−７７１７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２１６８００、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２３０４８７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−２１３８、およびＮＤＧＡ（非ジヒドログアイアレチン酸）からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記化合物が、
【化１】
2009504776.tif 000018
からなる群から選択される配列を含む核酸を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記化合物が、
【化２】
2009504776.tif 000019
からなる群から選択される配列を含む核酸を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
薬学的有効量のＣＯＸ−１活性を減少させる化合物を前記被験体に投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記化合物が、ＳＣ−５６０、ＦＲ１２２０４７、サリチル酸バレロイル（Ｖａｌｅｒｏｙｌ  ｓａｌｉｃｙｌａｔｅ）、アスピリン、デキシケトプロフェン（Ｄｅｘｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎｅ）、ケテロラック（Ｋｅｔｅｒｏｌａｃ）、フルルビプロフェン、およびスプロフェンからなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
薬学的有効量のＣＯＸ−２活性を増加させる化合物を前記被験体に投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記化合物が、プロスタグランジンＥ２、ブタプロスト、スルプロストン、ＣＰ−５３６、７４５−０１、ＣＰ−０４３、３０５−０２、ＣＰ−０４４、５１９−０２、ＣＰ４３２、ＯＮＯ−４８１９、ＣＰ−５３３、５３６、プロスタグランジンＦ２α、ビマトプロスト、クロプロステノール、ラタノプロスト、タフルプロスト、骨形態発生タンパク質−２（ＢＭＰ２）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、インターロイキン−１α、インターロイキン−１β、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、トランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、副甲状腺ホルモン関連ペプチド（ＰＴＨｒＰ）、およびテラパラチド（ｔｅｒａｐａｒａｔｉｄｅ）からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記被験体のＣＯＸ−２活性を増加させるのに十分な量の、超音波療法を該被験体に施すか、パルス電磁場を該被験体に曝露する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
この出願は、２００５年８月１８日に出願された米国仮出願第６０／７０９，８３８号（この全体の開示は、全ての目的のためにその全体が参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、一般に、アラキドン酸代謝経路またはシグナル伝達経路の調整、特に、５−リポキシゲナーゼ活性のインヒビターの使用による骨形成または骨折の治癒の促進または増強に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
骨折は、一般的な外傷である。米国で年間約８００万件〜１０００万件骨折が報告されており、これらのうち１００万件を超えて入院が必要である。これらの骨折の年間治療費は、２００億ドルを超えると見積もられている。この件数で既に重大であるが、これらの数字は、一般人口の高齢化によって増加すると予想される。さらに、軍人においては、骨折は一般的な訓練時の損傷である。骨折は、一般に、腕および脚に起こり、一般的な戦闘時の創傷でもある。外傷に加えて、骨折は、疾患によっても引き起こされ得る。骨粗鬆症は、成熟骨の骨ミネラル密度の減少によって起こり、最小限の外傷後に骨折する。この疾患は増加し続けており、経済的影響は甚大である。最も一般的な骨折は、脊椎、橈骨遠位端、および股関節部で起こる。６５歳以上の女性人口の１／３が脊椎を骨折し、その一部が骨粗鬆症に起因する。さらに、股関節部骨折は、高齢の女性の３人に約１人および男性の６人に約１人が発症する可能性が高い。
【０００４】
骨折治癒は、複雑な組織再生過程であり、成長因子、サイトカイン、他のシグナル伝達分子、および機械環境に応答した細胞の移動、増殖、アポトーシス、および分化を含む。最適な再生のために、各細胞過程の順序および規模を一過性に制御しなければならない。正常な骨折治癒事象を、４期に分けて以下に記載する。第１期では、血腫形成および局在化組織低酸素が、骨折治癒の最初の細胞および分子の事象である。第２期は、初期段階と呼ばれ、骨折部位の炎症後の細胞の急速な蓄積によって特徴づけられる。マクロファージおよび好中球は、骨折部位の間葉細胞の急速な移動および増殖前に炎症時の骨折部位に存在する。第３の再生期では、軟骨内骨化によって新規の骨が作製され、これが骨折部位の架橋をする。この時点で、骨折仮骨は、十分に定義された形態を有する。膜内骨化により、仮骨周囲に骨膜骨の支柱が作製される。仮骨内の間葉細胞は、骨膜骨支柱の接触面で軟骨細胞に分化し始める。新規の各軟骨細胞は予想されるように発達し、基質沈着後に基質が石灰化して石灰化軟骨が生成され、アポトーシスを起こす。石灰化軟骨に通路が形成され、この形成は骨膜骨の支柱から開始される。骨芽細胞は、これらの通路内の石灰化軟骨表面上に移動するか分化し、新規の骨を沈着し始める。軟骨細胞分化が仮骨（骨折部位）の周囲から中心に進行するにつれて、軟らかい仮骨が線維性（未成熟）骨に置換されるまで、通路形成、骨芽細胞分化、および新規の骨形成が続く。再生期中の血管形成は不可欠である。再生期に作製された未熟な線維性骨は、正常な体重負荷には機械的に不適当である。線維性骨の機械的性質の低下を補うために、骨折仮骨は、有意により大きな直径を有し、それにより、より卓越した構造の機械的性質が得られる。最後の再造形期では、骨折仮骨の直径は骨が正常な直径を得られるまで減少する一方で、構成要素の機械的性質の増強によって骨全体の機械的性質が維持される。これは、機械的に不十分な線維性骨の機械的に強力な層状（成熟）骨への置換によって達成される。連続的に繰り返すことにより、破骨細胞は、線維性骨を吸収し、骨芽細胞がそれを層状骨に置換する。破骨細胞の形成および機能を支配する分子機構はＲＡＮＫＬ−ＲＡＮＫ経路によって起こり、この経路は骨折治癒中に活性化される。
【０００５】
骨折を、一般に、骨折の徒手整復および罹患骨の固定（鋳造）によって保存的に治療する。このような場合、骨は、上記の軟骨内骨化経路によって治癒する。ビタミンＣ、ビタミンＤ、およびカルシウムを含む適切な栄養素は、治癒に役立つ。観血的整復および内固定が一般的になった２０世紀中期以来、骨折治療で主な進展はない。骨折治癒を強化するための成長因子治療の裏付けは、依然として実現していない。
【０００６】
不運なことに、多くの骨折は、治癒の成功を増大し、合併症の可能性を減少させるための外科的介入が必要である。たった１つの骨治癒の薬理学的増強法が承認されており、組換え骨形態発生タンパク質（ＢＭＰ−２またはＢＭＰ−７（ＯＰ−１））を使用した治療である。これらの成長因子の使用には手術が必要であり、その費用および生理学的レベルを超える成長因子の使用に起因する未知の潜在的副作用により、ＢＭＰは、治療不応性骨折を治癒するための最後の手段として使用される。典型的な患者の治療はまた、治癒過程における抗生物質、麻酔薬、ＮＳＡＩＤ、ＣＯＸ−２インヒビター、または他の鎮痛薬の投与を含む。
【０００７】
ＮＳＡＩＤはシクロオキシゲナーゼを阻害し、それにより、アラキドン酸のプロスタグランジン（ＰＧＤ２、ＰＧＥ２、ＰＧＦ２α、ＰＧＩ２、ＴＸＡ２）への変換を阻害する。アラキドン酸はまた、ロイコトリエン（ＬＴＢ４、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、ＬＴＥ４）、リポキシン（ＬＸＡ４、ＬＸＢ４）、および５−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（５−ＨＥＴＥ）の前駆体である。酵素５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）は、アラキドン酸を５−ヒドロペルオキシエイコサテトラエン酸（５−ＨｐＥＴＥ）に変換する。これは、５−ＨＥＴＥ、ロイコトリエン（ＬＴ）、およびリポキシンを生成する代謝経路の第１段階である。ロイコトリエンはまた炎症誘発性を示し、好中球を誘引して毛細管透過性をもたらす能力を有する。アラキドン酸代謝経路を、図１にまとめている。
【０００８】
リポキシゲナーゼは、植物および動物中に見出される非ヘム鉄含有酵素であり、一定の多価不飽和脂肪酸（脂質およびリポタンパク質など）の酸素付加を触媒する。いくつかのリポキシゲナーゼ酵素が公知であり、それぞれ、特徴的な酸化作用を有する。哺乳動物リポキシゲナーゼは、アラキドン酸の酸素付加された位置によって命名される。例えば、酵素５−リポキシゲナーゼは、アラキドン酸を５−ヒドロペルオキシエイコサテトラエン酸（５−ＨｐＥＴＥ）に変換し、酵素１２−リポキシゲナーゼはアラキドン酸を１２−ＨｐＥＴＥに変換する。５−リポキシゲナーゼ活性には、一般にＦＬＡＰ（５リポキシゲナーゼ活性化タンパク質）と呼ばれる補因子を必要とする。ロイコトリエン合成は、ＦＬＡＰを阻害する薬物（ＭＫ８６６）またはＦＬＡＰを欠くマウスで減少する。
【０００９】
特許文献１は、５−ＬＯインヒビターが破骨細胞活性を減少させることを開示している。破骨細胞活性の抑制により、ヒトの病的状態において骨吸収が阻害され、骨量減少が軽減される。骨吸収は、新規に形成された骨をより強くより成熟した骨に再造形するために必要であるので、骨折治癒の不可欠な部分である。骨吸収の阻害は、正常な骨折治癒の後期を悪化させると予想される。非特許文献１および非特許文献２は、骨折治癒に及ぼすビスホスホネート療法の影響を開示している。データは、破骨細胞活性および骨再造形を低下させるビスホスホネート療法は骨折治癒の初期段階を阻害しないが、後期骨再造形段階を低下させることを示している。骨折治癒に及ぼすビスホスホネートの影響は、それ自体が機械的に成熟した層状骨よりもむしろ機械的に未熟な繊維性骨を含む巨大な骨折仮骨を持続させることである。
【００１０】
特許文献２は、１２／１５−リポキシゲナーゼインヒビターを使用して、骨量減少を阻害するか骨量を増加させることができることを開示している。この公報は、ＩＬ−４を過剰発現し、１５−ＬＯインヒビターで処置したトランスジェニックマウスで骨ミネラル密度が保存されることを示すデータを記載している。この公報は、１５−ＬＯインヒビターが骨折治癒または骨癒合不全治療を補助することができることを開示していない。
【００１１】
非特許文献３は、ラット胎児頭蓋冠細胞（骨芽細胞）の分化に及ぼすＬＴＢ４、５−ＨＥＴＥ、およびＬＴＤ４（全て、５−ＬＯ機能の生成物）の影響を開示している。データは、５−ＨＥＴＥおよびＬＴＢ４がｉｎ  ｖｉｔｒｏで骨小結節形成およびアルカリホスファターゼ活性を減少させるが、ＬＴＤ４は影響を及ぼさなかったことを示す。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ器官培養モデル由来の結果は、ＬＴＢ４または５−ＨＥＴＥ処置によってマウス頭蓋冠の厚さのＢＭＰ２誘導性増加が防止されることを示した。しかし、この公報は、いかなる５−ＬＯインヒビターの使用も開示しておらず、５−ＬＯ阻害によって培養骨芽細胞または器官培養で同一の効果が得られるであろうことも開示していない。同様に、ＲｅｎおよびＤｚｉａｋ（非特許文献４）は、ＬＴＢ４処置によってｉｎ  ｖｉｔｒｏでの初代ラット頭蓋冠（骨芽細胞）培養物の増殖が減少するが、ＬＴＢ４はより高い濃度にて（０．３〜１μモル）、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで確立された骨芽細胞株（Ｓａｏｓ−２およびＧ２９２）の増殖を促進することができることを開示している。ＲｅｎおよびＤｚｉａｋはまた、ＬＴＣ４が初代ラット骨芽細胞またはＳａｏｓ−２細胞の増殖に影響を及ぼさないが、Ｇ２９２細胞の増殖を促進することを開示している。さらに、ＲｅｎおよびＤｚｉａｋは、５−ＬＯインヒビター（ＡＡ−８６１）でのＳａｏｓ−２細胞の処置はＳａｏｓ−２細胞増殖に影響を及ぼさなかったことを開示している。公報は、５−ＬＯ阻害が骨発生に影響を及ぼさないことを示している。
【００１２】
したがって、骨形成または骨折治癒の促進または増強のための組成物および方法が非常に望まれることが明らかである。
【特許文献１】国際公開第９５／３０４１９号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０３／０６６０４８号パンフレット
【非特許文献１】Ｋｏｉｖｕｋａｎｇａｓら、Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ  ｄｏｅｓ  ｎｏｔ  ｐｒｅｖｅｎｔ  ｆｒａｃｔｕｒｅ  ｈｅａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｒａｔｓ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００３）４０８：２６８−２７８
【非特許文献２】Ｐｅｔｅｒら、Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ  ｏｎ  ｆｒａｃｔｕｒｅ  ｈｅａｌｉｎｇ  ａｎｄ  ｂｏｎｅ  ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｉｎ  ｄｏｇｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９６）１４：７４−７９
【非特許文献３】Ｔｒａｉａｎｅｄｅｓ，Ｋら、５−Ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｂｏｎｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ（１９９８）１３９：３１７８−３１８４
【非特許文献４】Ｒｅｎ  ａｎｄ  Ｄｚｉａｋ，Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓ  ｏｎ  ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．Ｃａｌｃｉｆｉｅｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（１９９１）４９：１９７−２０１
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（要旨）
本発明は、骨形成の誘導によって処置された骨折、骨損傷、または状態を治療するために５−リポキシゲナーゼ活性を減少させる化合物を投与することによる骨発生の促進方法を提供する。
【００１４】
本発明の別の態様では、本方法は、シクロオキシゲナーゼ活性のモジュレーターなどのさらなる活性成分（ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）をさらに含み得る。１つの態様では、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性は増加する。別の態様では、シクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）の活性は減少する。
【００１５】
１つの態様では、本方法は、化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ投与を使用する。別の態様では、化合物のｅｘ  ｖｉｖｏ投与を使用する。
【００１６】
１つの態様では、化合物は小分子である。別の態様では、化合物はアンチセンス化合物である。別の態様では、化合物はＲＮＡｉ化合物である。
【００１７】
本発明のこれらまたは他の態様は、以下の詳細な説明および添付の図面を参照すると明らかとなる。さらに、種々の引例を本明細書中に示し、これらは、一定の手順または組成物をより詳細に記載し、したがって、その全体が本明細書中で参考として援用される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
（発明の詳細な説明）
本発明の実施には、他で示さない限り、当業者の範囲内の従来のタンパク質化学法、生化学法、組換えＤＮＡ技術、および薬理学を使用する。このような技術は、文献に十分に説明されている。例えば、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）；Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｄｄｉｔｉｏｎ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ  ａｎｄ  Ｎ．Ｋａｐｌａｎ  ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）；Ｃａｒｅｙ  ａｎｄ  Ｓｕｎｄｂｅｒｇ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３ｒｄ  Ｅｄ．（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ）Ｖｏｌｓ  Ａ  ａｎｄ  Ｂ（１９９２）を参照のこと。
【００１９】
本明細書中に引用した全ての刊行物、特許、および特許出願（上記または下記）は、その全体が本明細書中で参考として援用される。
【００２０】
Ｉ．定義
本発明の説明では、以下の用語を使用し、これらを、下記のように定義されることが意図される。
【００２１】
「アラキドン酸代謝経路またはシグナル伝達経路の調整」は、細胞または動物中でのアラキドン酸代謝経路またはシグナル伝達経路に関与する任意の酵素または調節分子の活性または濃度を阻害または促進する薬物または化合物の使用を意味する。好ましくは、薬物または化合物を、ＦＬＡＰインヒビター（ＢＡＹｘ  １００５、ＭＫ−８８６、およびＭＫ−０５９１）、５−リポキシゲナーゼインヒビター（ジロートン、ＢＡＹ−Ｇ５７６、ＲＳ−４３、１７９、Ｗｙ−４７、２８８、ＡＢＴ−７６１、ビタミンＡ、およびＢＷ  Ａ４Ｃなど）、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（ザフィルルカスト、モンテルカスト、プランルカスト、ＩＣＩ  ２０４、２１９、ＭＫ−５７１、ＭＫ−６７９、ＯＮＯ−ＲＳ−４１１、ＳＫ＆Ｆ  １０４、３５３、およびＷｙ−４８、２５２など）、；ロイコトリエンＢ４受容体アンタゴニスト、ロイコトリエンＣ４合成インヒビター、ロイコトリエンＡ４加水分解酵素インヒビター、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト、およびロイコトリエンアナログ、ロイコトリエンの形成および作用を調整する化合物、シクロオキシゲナーゼ活性に影響を及ぼす化合物、プロスタグランジン活性に影響を及ぼす化合物（受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、プロスタグランジンアナログなど）、ロイコトリエン活性に影響を及ぼす化合物（受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、およびロイコトリエンアナログなど）からなる群から選択することができる。
【００２２】
「促進された」は、非処置被験体またはコントロール被験体と比較した場合、処置被験体において骨発生がより迅速に起こるか、骨治癒に必要な時間が減少されるか、骨がより迅速に治癒することを意味する。
【００２３】
「増強」は、非処置被験体またはコントロール被験体と比較して処置した被験体の治癒骨の特徴が改善される（例えば、骨強度がより高くなるなど）ことを意味する。
【００２４】
「骨折治癒」または「骨折修復」は、特に、骨折および骨損傷の治癒の促進ならびに治癒骨折または部位の機械的安定性の改善を意味する。このような骨折は、例えば、一般的な外傷性（無能力または非骨粗鬆症性）骨折、骨粗鬆症または任意の病因による骨減少症に起因する骨粗鬆症性骨折、パジェット病による骨折または他の薬物の副作用の結果としての骨量減少に起因する骨折（例えば、高用量の副腎皮質ステロイドを投与した患者）、他の先天性または後天性の疾患（例えば、骨発生不全症および乳癌など）から生じた骨折、例えば、骨の延長および四肢の伸長手順で使用される手術によって生じる骨折（骨切り術）、および遷延治癒骨折または骨癒合不全の治療であり得る。本発明は、当業者に一般的な技術を使用した骨発生の促進および増強による骨折の正常な軽減および固定後に骨折治癒が増加する。
【００２５】
「骨形成」は、本発明の方法（例えば、５−リポキシゲナーゼインヒビターの投与による）にしたがって処置した被験体における骨形成速度が、５−リポキシゲナーゼインヒビターを投与していない被験体における骨形成速度を超えて増加することを意味する。このような骨形成の増強を、本明細書中で、例えば、上記のように、定量的デジタル化形態測定および骨形成の他のマーカーを使用して決定する。骨形成は、脊椎固定および他の関節または骨強直に適用するために使用される骨形成過程、人工器官内または人工器官周囲の骨形成、または既存の骨を増大させるか喪失した骨または骨断片を置換するための骨形成を含むことを意味する。
【００２６】
「骨発生」は、骨折した骨の修復、意図的または非意図的損傷によって生じる欠陥を有する骨の修復、または１つを超える骨または骨断片を融合するために使用される骨形成の誘導に関連する骨の生成を意味する。「骨発生」は、青年期の正常な骨成長に関連する骨形成を含むことを意味しない。「骨発生」はまた、破骨細胞が骨を吸収し、骨芽細胞が新規の骨を作製して吸収された骨と交換する過程によって骨が正常に代謝回転する、しばしば骨再造形と呼ばれる正常な骨ホメオスタシスに関連する骨形成を含むことを意図しない。
【００２７】
「骨損傷」は、骨の一部が除去されるかそうでなければ喪失するような骨の損傷を意味する。このような骨損傷には、異常な穴、割れ目、または診断または治療手順を行う目的で骨に作製された開口部、外傷または疾患由来の骨断片の喪失、および骨の刺創などが含まれるであろう。
【００２８】
用語「調整」は、アラキドン酸の代謝経路またはシグナル伝達経路に及ぼすモジュレーターの影響をいう。モジュレーターは、例えば、調整することができるポリペプチド、核酸、高分子、複雑な分子、小分子、化合物など（天然に存在するか天然に存在しない）であり得る。モジュレーターを、経路中の酵素活性を測定するアッセイを含めることによって機能特性、生物活性または生物学的過程、その組み合わせのインヒビターまたはアクチベーター（直接または間接的）（例えば、アゴニスト、部分的アンタゴニスト、部分的アゴニスト、逆アゴニスト、およびアンタゴニストなど）としての潜在的活性について評価することができる。
【００２９】
用語「有効量」または「薬学的有効量」は、所望の生物学的結果を得るのに十分な薬剤の量をいう。このような結果は、疾患の徴候、症状、または原因の軽減および／または緩和または生物系の任意の他の所望の変化であり得る。例えば、治療で使用するための「有効量」は、骨発生の臨床的に有意な増加、それによる骨折修復における治癒率の増加、軟骨の損傷または障害の逆転、骨折による骨融合不全、遷延融合、および伸延骨発生における骨形成の刺激および／または増大、人工器官への骨成長の増加および／または促進、関節強直、骨強直、または脊椎固定における骨形成の増強または促進、自家移植片、同種移植片、または合成骨材料の組み込みなどの既存の骨を増大するか喪失した骨または骨断片を置換するための骨形成、および歯の損傷の修復に必要な本明細書中の活性化合物を含む組成物の量である。
【００３０】
本明細書中で使用される、用語「治療する」または「治療」を交換可能に使用し、この用語は、骨発生を促進して所望の治療目的を得るために本発明の方法にしたがって１つまたは複数の化合物を投与することを示すことを意味する。この用語は、さらに、既存の骨または軟骨の欠損症状の改善、さらなる症状の防止、症状の根底にある代謝上の原因の改善または防止、および／または骨成長の助長を含む。
【００３１】
本明細書中で使用される、「小分子」は、約５００ダルトン未満の分子量の化合物を示すことを意味する。小分子には、ポリペプチドおよびポリヌクレオチドなどの生体高分子は含まれない。
【００３２】
「薬学的に許容可能な」または「薬理学的に許容可能な」は、生物学的に望ましい材料を意味する（すなわち、いかなる望ましくない生物学的作用も生じないか、この材料を含む組成物のいかなる成分とも有害な様式で相互作用することなく材料を個体に投与することができる）。
【００３３】
「生理学的ｐＨ」または「生理学的範囲のｐＨ」は、約ｐＨ７．２〜８．０の範囲、より典型的には、約ｐＨ７．２〜７．６の範囲のｐＨを意味する。
【００３４】
本明細書中で使用される、用語「被験体」は、哺乳動物を含む。哺乳動物の例には、以下の哺乳動物クラスの任意のメンバー：ヒト、非ヒト霊長類（チンパンジーなど）、他の類人猿およびサル種、家畜（ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタなど）、ペット（ｄｏｍｅｓｔｉｃ  ａｎｉｍａｌ）（ウサギ、イヌ、およびネコなど）、実験動物（ラット、マウス、およびモルモットなどのげっ歯類などが含まれる）が含まれるが、これらに限定されない。この用語は、特定の年齢や性別を示さない。
【００３５】
本発明の化合物を使用して、５−リポキシゲナーゼ、５−リポキシゲナーゼ、およびシクロオキシゲナーゼ、ならびにアラキドン酸の代謝経路またはシグナル伝達経路における他の酵素および化合物の活性を阻害または減少することができる。この文脈では、酵素活性の阻害および減少は、酵素、細胞、または被験体を試験化合物で処置していないコントロール実験と比較した測定活性レベルの低下をいう。特定の実施形態では、測定活性の阻害または減少は、少なくとも１０％の減少または阻害である。当業者は、測定活性の少なくとも２０％、５０％、７５％、９０％、または１００％または１０％と１００％との間の任意の量の減少または阻害が特定の適用に好ましいと認識する。酵素活性の阻害は、任意の機構（例として、酵素の存在量の減少、触媒活性の競合的または非競合的阻害、酵素と補因子またはアクセサリータンパク質との間の相互作用の妨害などが含まれるが、これらに限定されない）を介し得る。さらに、本発明の化合物を使用して、ＣＯＸ−２活性を増加させることができる。特定の実施形態では、酵素活性の増加は、酵素、細胞、または被験体を試験化合物で処置していないコントロール実験と比較した測定活性レベルの上昇をいう。特定の実施形態では、測定活性の増加は、少なくとも１０％である。当業者は、測定の活性の少なくとも２０％、５０％、７５％、９０％、または１００％または１０％と１００％との間の任意の量またはそれを超えた増加が特定の適用に好ましいと認識している。酵素活性の増加は、任意の機構（例として、酵素の存在量の増加、酵素の代謝回転の増加、またはその基質結合特性の変化が含まれるが、これらに限定されない）を介し得る。酵素５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）、ＣＯＸ−１、およびＣＯＸ−２を言う場合、表１で参照される例示的配列（そのいくつかを以下の表１の直後に示す）ならびに日常的なアラインメントアルゴリズム（例えば、ＢＬＡＳＴなど）を使用して当業者が確認することができる、例示的配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一の配列を含むことを意図する。さらに、他の哺乳動物ホモログが含まれる。このようなホモログを、例えば、配列類似性、機能的類似性、および染色体位置に基づいて、ホモログとして同定する。タンパク質配列に加えて、例示的核酸配列を提供し、これらから当業者は本発明の方法にしたがって酵素活性の阻害に有用なアンチセンスおよびＲＮＡｉ化合物の配列を容易に得ることができる。本発明の実施に有用なアンチセンス化合物は当該分野で公知であり、例えば、Ｄｉｎｇら、（１９９９）ＢＢＲＣ  Ｖｏｌ．２６１，ｐｐ．２１８−２２３（参考として援用される）に記載のように、購入することができる。
【００３６】
表１−例示的な配列
【００３７】
【化３】
2009504776.tif 000002
【００３８】
【化４】
2009504776.tif 000003
１．ｍＲＮＡ配列間の類似性
２．タンパク質配列間の類似性。
【００３９】
【化５】
2009504776.tif 000004
【００４０】
【化６】
2009504776.tif 000005
【００４１】
【化７】
2009504776.tif 000006
【００４２】
【化８】
2009504776.tif 000007
【００４３】
【化９】
2009504776.tif 000008
【００４４】
【化１０】
2009504776.tif 000009
【００４５】
【化１１】
2009504776.tif 000010
【００４６】
【化１２】
2009504776.tif 000011
ＩＩ．５−リポキシゲナーゼインヒビター
出願人は、５−リポキシゲナーゼ活性の阻害によって骨発生を促進され、これを使用して、骨折治癒を促進および／または増強するか、骨損傷を治療するか、骨形成の誘導によって治療することができることを発見した。出願人の発見は、ＣＯＸ−２機能の喪失によって骨折治癒を阻害し得る潜在的機構が、アラキドン酸のリポキシゲナーゼ経路への迂回によるものであり、その結果、５−ＨＥＴＥ、ＬＴＢ４、または他の５−ＬＯ代謝産物レベルが以上に高く阻害されるという仮説に基づく（図２）。骨折などの正常な炎症反応中に、プロスタグランジンおよびロイコトリエンの合成の均衡を保つ（図２Ａ）。理論に拘束されないが、本発明者らは、ＣＯＸ−２機能の阻害によってアラキドン酸がリポキシゲナーゼ経路に迂回されて過剰なロイコトリエンを生成し、それにより、骨形成が損なわれると理論づけている（図２Ｂ）。逆に、５−リポキシゲナーゼ活性の阻害により、アラキドン酸がシクロオキシゲナーゼ経路に迂回されて過剰なプロスタグランジンが生成され、それにより、骨形成が促進または増強される（図２Ｃ）。
【００４７】
この潜在的機構を試験するために、５−ＬＯ−／−マウスにおける骨折治癒を評価した。出願人は、５−ＬＯ機能の喪失が治癒を促進することを見出した。Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドの年齢適合マウスにおける骨折治癒のＸ線写真実験は、正常なマウスにおける骨折３週間後と比較して、５−ＬＯ−／−マウスにおいて骨折２週間後までに骨折骨橋形成が起こることを示した（図３）。さらに、仮骨再造形が有意に促進され、それにより、ねじり機械的試験に基づいて、正常マウスよりも５−ＬＯ−／−仮骨がその構造および物質特性をより早く回復した（図４および表２）。したがって、５−ＬＯ機能の喪失により、骨折治癒および骨形成が促進および増強される。
【００４８】
石灰化サンプルの組織学的試験は、Ｘ線写真データを裏付けた。スティーベネルブルー（Ｓｔｅｖｅｎｅｌ’ｓ  ｂｌｕｅ）およびワンギーソンのピクロフクシンで染色した正常マウスおよび５−ＬＯ−／−マウスの骨折のプラスチック包埋石灰化切片は、治癒のちょうど２週間後に５−ＬＯ−／−マウスにおいて骨折が石灰化組織と骨橋形成する一方で、正常マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）は依然として軟骨性の軟らかい仮骨を有していることを示す。骨折仮骨軟骨領域の組織形態測定は、５−ＬＯ−／−マウスにおいて骨折から７日後までに軟骨領域がピークになる一方で、正常マウスでは骨折から１０日後までにピークになることを示した（図５および表３）。骨折仮骨中の新規の骨（石灰化組織）測定は、治癒から７日後の５−ＬＯ−／−で新規の骨がほぼ２倍であり、１０日後も新規の骨が有意により多数であることを示した。（図５および表２）。これらのデータは、たとえ有意に促進されていても、正常な軟骨内骨化経路を使用して５−ＬＯ−／−マウスの骨折を治癒することを示す。異なる遺伝的背景の幼若および老齢５−ＬＯ−／−マウスを使用した実験により、以下の同一の結果が得られた：５−ＬＯ機能の喪失によって骨再生が促進される。
【００４９】
これらの実験由来のデータは、５−ＬＯ−／−マウスにおける１０日目の骨折仮骨が正常マウスの１４日目の仮骨と等価であること、１４日目の５−ＬＯ−／−仮骨が２１日目の正常仮骨と等価であること、および１ヶ月目の５−ＬＯ−／−仮骨が３ヶ月目の正常仮骨と等価であることを示す（図３）。したがって、５−ＬＯ機能の喪失により、骨折治癒の再生期および再造形期が促進および／または増強される。
【００５０】
本発明の１つの態様では、５−リポキシゲナーゼ活性を阻害し、骨折治癒を促進および／または増強するか、骨吸収を防止するか、骨形成を促進する化合物は、ヒト疾患を治療する取り組みに重要な利益を与える。５−リポキシゲナーゼ活性を阻害する化合物を、例えば、外傷または骨粗鬆症もしくは骨関節炎に起因する骨折の治療方法、パジェット病の治療方法、他の状態（骨移植および骨折増加に関連する疾患など）の治療方法、および骨形成を必要とする方法（脊椎固定、他の骨および関節の強直手順、骨または四肢の延長、骨構造の増大、同種移植片、自家移植片、または合成骨材料の骨損傷への組み込みなど）、人工器官内または人工器官周囲の骨成長、および他の類似の手順で使用することができる。
【００５１】
本発明の方法の実施に有用な５−リポキシゲナーゼのいくつかのインヒビターおよびその投与は公知である。５−リポキシゲナーゼインヒビターは、３−［１−（４−クロロベンジル）−３−ｔ−ブチル−チオ−５−イソプロピルインドール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸（ＭＫ８８６）またはその誘導体、３−（１−（４−クロロベンジル）−３−（１−ブチル−チオ）−５−（キノリン−２−イル−メトキシ）−インドール−２−イル）−２，２−ジメチルプロパン酸）（ＭＫ−５９１）またはその誘導体、ノルジヒドログアイアレチン酸（ｎｏｒｄｉｈｙｄｒｏｇｕａｉａｒｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）（ＮＤＧＡ）またはその誘導体、２−（１２−ヒドロキシドデカ−５，１０−ジイニル）−３，５，６−トリメチル−１，４−ベンゾキノン（ＡＡ８６１）またはその誘導体、または（Ｎ−（１−ベンゾ（ｂ）チエン−２−イルエチル）−Ｎ−ヒドロキシ尿素）（ジロートン）またはその誘導体であり得る。誘導体には、例えば、５−リポキシゲナーゼインヒビターとしても有用な薬学的に許容可能な塩、プロドラッグなどが含まれる。例示的化合物の誘導体は、特許請求の範囲に記載の本発明の範囲内に含まれることが意図される。
【００５２】
本発明で使用される他の５−リポキシゲナーゼインヒビターには、マソプロコール、テニダップ、フロブフェン、ロナパレン、タゴリジン、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−１２１７９８、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７６７４５、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７８７７３、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７９１７５、Ａｂｂｏｔｔ  ＡＢＴ  ７６１、Ｄａｉｎｉｐｐｏｎ  ＡＬ−３２６４、Ｂａｙｅｒ  Ｂａｙ−ｘ−１００５、Ｂｉｏｆｏｒ  ＢＦ−３８９、ブナプロラスト、Ｃｙｔｏｍｅｄ  ＣＭＩ−３９２、Ｔａｋｅｄａ  ＣＶ−６５０４、リン酸エナザドレム、Ｌｅｏ  Ｄｅｎｍａｒｋ  ＥＴＨ−６１５、塩酸フレゼラスチン、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ−６６３５３６、Ｍｅｒｃｋｌｅ  ＭＬ−３０００、３Ｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｒ−８４０、リロピロックス、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ  ＳＣＨ−４０１２０、テポキサリン、リナゾラスト（ＴＭＫ−６８８）、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−２１３８、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  ＢＵ−４６０１Ａ、カルバゾマイシンＣ、ラグナマイシン、Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  ＢＷ−７０Ｃ、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２６５２９、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＣＩ  １００４、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＰＤ−１３６００５、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＰＤ−１４５２４６、Ｅｌｓａｉ  Ｅ−３０４０、Ｆｕｊｉｒｅｂｉｏ  Ｆ−１３２２、Ｆｕｊｉｓａｗａ  ＦＲ−１１０３０２、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ−６９９３３３、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ−７３９０１０、Ｌｉｌｌｙ  ＬＹ−２６９４１５、Ｌｉｌｌｙ  ＬＹ−１７８００２、Ｈｏｅｃｈｓｔ  Ｒｏｕｓｓｅｌ  Ｐ−８８９２、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ＳＢ−２０２２３５、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＡＹ−１２１５２０、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＡＹ−１２５００７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−７７１７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２１６８００、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２３０４８７、１，２−ジヒドロ−ｎ−（２−チアゾリル）−１−オキソピロロ（３，２，１−ｋｌ）フェノチアジン−１−カルボキシアミド、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−６５２６０、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−６９４１２、Ａｂｂｏｔｔ−６３１６２、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＡＨＲ−５３３３、Ｂａｙｅｒ  Ｂａｙ−ｑ−１５３１、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  ＢＩ−Ｌ−３５７、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  ＢＩ−Ｌ−９３ＢＳ、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  ＢＩＬ  ２２６ＸＸ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  ＢＭＹ−３００９４、カルバゾマイシンＢ、Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  ＢＷ−Ｂ２１８Ｃ、Ｃｈａｕｖｉｎ  ＣＢＳ−１１１４、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２１５９５、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２２７４５、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２３８８５、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ  ２４８９１、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−８５１５、Ｃｈｉｅｓｉ  ＣＨＦ−１９０９、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＣＩ−９８６、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＣＩ  ９８７、シルシリオール、ドセベノン、Ｅｉｓａｉ  Ｅ−５１１０、Ｅｉｓａｉ  Ｅ−６０８０、エノフェラスト、エポカルバゾリ��−Ａ、エプロバフェン（ｅｐｒｏｖａｆｅｎ）、エバンダミン（ｅｖａｎｄａｍｉｎｅ）、Ｆｉｓｏｎｓ  ＦＰＬ  ６２０６４、Ｚｅｎｅｃａ  ＩＣＩ−２１１９６５、Ｚｅｎｅｃａ  ＩＣＩ−２１６８００、Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  ＫＦ−８９４０、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６５１３９２、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６５１８９６、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６５２３４３、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６５６２２４、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６７０６３０、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６７４６３６、Ｌｉｌｌｙ  ＬＹ−２３３５６９、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  ＭＫ−５９１、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６５５２４０、ニトロソキサシン−Ａ、Ｏｎｏ  ＯＮＯ−５３４９、Ｏｎｏ  ＯＮＯ−ＬＰ−２１９、Ｏｎｏ  ＯＮＯ−ＬＰ−２６９、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＰＤ−１２７４４３、Ｐｕｒｄｕｅ  Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ  ＰＦ−５９０１、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ  Ｒｅｖ−５３６７、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ  ＲＧ−５９０１−Ａ、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ  ＲＧ−６８６６、Ｒｏｕｓｓｅｌ−Ｕｃｌａｆ  ＲＵ−４６０５７、Ｓｅａｒｌｅ  ＳＣ−４１６６１Ａ、Ｓｅａｒｌｅ  ＳＣ−４５６６２、Ｓａｎｄｏｚ  ＳＤＺ−２１０−６１０、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ＳＫ＆Ｆ−１０４３５１、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ＳＫ＆Ｆ−１０４４９３、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ＳＫ＆Ｆ−１０５８０９、Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏ  ＳＬ−８１−０４３３、Ｔｅｉｊｉｎ  ＴＥＩ−８００５、Ｔｅｒｕｍｏ  ＴＭＫ−７７７、Ｔｅｒｕｍｏ  ＴＭＫ−７８１、Ｔｅｒｕｍｏ  ＴＭＫ−７８９、Ｔｅｒｕｍｏ  ＴＭＫ−９１９、Ｔｅｒｕｍｏ  ＴＭＫ−９９２、Ｔｅｉｋｏｋｕ  Ｈｏｒｍｏｎｅ  ＴＺＩ−４１１２７、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＡＹ−１２０７３９、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＹ−４７２８８、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＹ−４８２５２、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＹ−５０２９５、Ｙｏｓｈｉｔｏｍｉ  Ｙ−１９４３２、４−｛３−［４−（２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニルチオ］｝フェニル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキシアミド、エスクレチン、フェニドンおよびその誘導体、ＢＩ−Ｌ−２３９、５，８，１１−エイコサトリイン酸（ＥＴＩ）、５，８，１１，１４−エイコサテトライン酸（ＥＴＹＡ）、シンナミル−３、４−ジヒドロキシ−α−シアノシンナマート、クルクミン、エスクレイチン（ｅｓｃｕｌｅｉｔｉｎ）、ゴッシポール、カフェー酸、バイカレイン、７，７−ジメチルエイコサドレノン酸（７，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌｅｉｃｏｓａｄｒｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）（ＤＥＤＡ）、Ｌｙ３１１７２７、ブロモエノールラクトン、メチルアラキドニルフルオロホスホナート、メチルｙ−リノレニルフルオロホスホナート、オレオキシエチルホスホリルコリン、ＡＡＣＯＣＦ３、ｎ−（ｐ−アミルシンナモイル）アントラニル酸、メパクリン、キナクリン、アタブリン、パラブロモフェナシルブロミド（ｐａｒａｂｒｏｍｏｐｈｅｎａｃｙｌｂｒｏｍｉｄｅ）、ア���ストロキン酸、副腎皮質ステロイド、Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  ４８０８４８、Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  ６５９０３２、Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  ６７７１１６、ＢＭＳ−１８１１６２、ＭＪ３３、およびＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ＭＬＮ９７７が含まれる。
【００５３】
より好ましい５−リポキシゲナーゼインヒビターには、マソプロコール、テニダップ、ジロートン、フロブフェン、ロナパレン、タゴリジン、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−１２１７９８、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７６７４５、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７８７７３、［（Ｒ）（＋）Ｎ’−［［５−（４−フルオロフェノキシ）フラン−２−イル］−１−メチル−２−プロピニル］−Ｎ−ヒドロキシ尿素（Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７９１７５）］、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７９１７５、Ａｂｂｏｔｔ  ＡＢＴ  ７６１、Ｄａｉｎｉｐｐｏｎ  ＡＬ−３２６４、Ｂａｙｅｒ  Ｂａｙ−ｘ−１００５、Ｂｉｏｆｏｒ  ＢＦ−３８９、ブナプロラスト、Ｃｙｔｏｍｅｄ  ＣＭＩ−３９２、Ｔａｋｅｄａ  ＣＶ−６５０４、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２６５２９、リン酸エナザドレム、Ｌｅｏ  Ｄｅｎｍａｒｋ  ＥＴＨ−６１５、塩酸フレゼラスチン、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ  ６６３５３６、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ  ６９９３３３、Ｍｅｒｃｋｌｅ  ＭＬ−３０００、３Ｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｒ−８４０、リロピロックス、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ  ＳＣＨ  ４０１２０、テポキサリン、リナゾラスト（ＴＭＫ−６８８）、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−７７１７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２１６８００、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２３０４８７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−２１３８、およびＮＤＧＡ（非ジヒドログアイアレチン酸）が含まれる。
【００５４】
さらにより好ましい５−リポキシゲナーゼインヒビターには、テニダップ、ジロートン、フロブフェン、ロナパレン、タゴリジン、ＡＡ−８６１、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−１２１７９８、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７６７４５、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７８７７３、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７９１７５、Ａｂｂｏｔｔ  ＡＢＴ  ７６１、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２６５２９、Ｂｉｏｆｏｒ  ＢＦ−３８９、Ｃｙｔｏｍｅｄ  ＣＭＩ−３９２、Ｌｅｏ  Ｄｅｎｍａｒｋ  ＥＴＨ−６１５、ロナパレン、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ  ６９９３３３、Ｍｅｒｃｋｌｅ  ＭＬ−３０００、３Ｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｒ−８４０、リナゾラスト（ＴＭＫ−６８８）、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−７７１７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２１６８００、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２３０４８７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−２１３８、およびＮＤＧＡ（非ジヒドログアイアレチン酸）が含まれる。
【００５５】
別の態様では、本発明は、５−ＬＯインヒビターおよびＣＯＸインヒビターならびにその使用を含む。好ましくは、ＣＯＸインヒビターは、選択的ＣＯＸ−１インヒビター（すなわち、ＣＯＸ−２活性を阻害するよりもＣＯＸ−１活性を阻害する）である。５−ＬＯインヒビターおよびＣＯＸインヒビターの使用は、薬物の組み合わせの薬効が得られるレジメンでの連続的様式による各インヒビターの投与、実質的に同時様式でのインヒビターの同時投与（固定比率のこれらの活性成分を有する単一のカプセルまたは各薬剤の複数の個別のカプセルなど）、および両酵素を阻害する単一の化合物の投与を採用することを意図する。
【００５６】
ＣＯＸインヒビターを、セレコキシブ、ロフェコキシブ、メロキシカム、ピロキシカム、バルデコキシブ、パレコキシブ、エトリコキシブ、ＣＳ−５０２、ＪＴＥ−５２２、Ｌ−７４５、３３７、ＦＲ１２２０４７、ＮＳ３９８、非選択性ＮＳＡＩＤ（アスピリン、イブプロフェン、インドメタシン  ＣＡＹ１０４０４、ジクロフェナック、ケトプロフェン、ナプロキセン、ケトロラック、フェニルブタゾン、トルフェナム酸、およびスリンダクなどが含まれるであろう）、またはステロイドもしくは副腎皮質ステロイドからなる群から選択することができる。シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害する化合物は、米国特許第５，３８０，７３８号、同第５，３４４，９９１号、同第５，３９３，７９０号、同第５，４６６，８２３号、同第５，４３４，１７８号、同第５，４７４，９９５号、同第５，５１０，３６８号およびＷＯ書類ＷＯ９６／０６８４０号、ＷＯ９６／０３３８８号、ＷＯ９６／０３３８７号、ＷＯ９５／１５３１６号、ＷＯ９４／１５９３２号、ＷＯ９４／２７９８０号、ＷＯ９５／００５０１号、ＷＯ９４／１３６３５号、ＷＯ９４／２０４８０号、およびＷＯ９４／２６７３１号に記載されており、そうでなければ、当業者に公知である。
【００５７】
選択的ＣＯＸ−１インヒビターは、当該分野で公知である。以下は、好ましいＣＯＸ−１選択性ＮＳＡＩＤのリストである：ＳＣ−５６０（Ｓｍｉｔｈら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  ９５：１３３１３−８（１９９８））、ＦＲ１２２０４７（Ｄｏｈｉら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２４３：１７９−８４（１９９３））、サリチル酸バレロイル（Ｖａｌｅｒｏｙｌ  ｓａｌｉｃｙｌａｔｅ）、アスピリン。アスピリンは、ｉｎ  ｖｉｖｏで迅速に不活化される不可逆性シクロオキシゲナーゼインヒビターである。アスピリンはＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２を阻害することができるが、アスピリンでの事前の処置により、ＣＯＸ−２の発現前または発現中に全ての既存のＣＯＸ−１を不活化することができる。したがって、発現される任意の新規のＣＯＸ−２は活性であるが、全ての「より古い」ＣＯＸ−１またはＣＯＸ−２は不活化される。
【００５８】
以下は、ＣＯＸ−２と対比してＣＯＸ−１を優先的に阻害するＮＳＡＩＤのリストである：デキシケトプロフェン（Ｄｅｘｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎｅ）、ケテロラック（Ｋｅｔｅｒｏｌａｃ）、フルルビプロフェン、スプロフェン。（Ｗａｒｎｅｒら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  ９６：７５６３−８（１９９９））も参照のこと。
【００５９】
別の実施形態では、本発明は、５−ＬＯインヒビターおよびＣＯＸ−２アクチベーターならびにその使用を含む。ＣＯＸ−２アクチベーターも当該分野で公知である。ＣＯＸ−２遺伝子発現の調節に関する総論および以下に列挙の化合物または治療（参考文献なし）についての参考文献として、（Ｔａｎａｂｅ  ａｎｄ  Ｔｏｈｎａｉ，Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  ＆  ｏｔｈｅｒ  Ｌｉｐｉｄ  Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ６８−６９：９５−１１４（２００２０）を参照のこと。好ましいＣＯＸ−２アクチベーターには、超音波療法（Ｓｅｎａら、Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３１：７０３−８（２００５））、パルス電磁場（ＰＥＭＦ）（Ｌｏｈｍａｎｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２１：３２６−３４（２００３））、ＢＭＰ２（Ｃｈｉｋａｚｕら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  ａｎｄ  Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １７：１４３０−４０（２００２））、ＰＤＧＦ、ＦＧＦ、およびＰＴＨならびにそのアナログ（ＰＴＨｒＰおよびテラパラチド（ｔｅｒａｐａｒａｔｉｄｅ））（Ｍａｃｉｅｌら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ２４：２４２９−３５（１９９７））が含まれる。他のＣＯＸ−２アクチベーターには、プロスタグランジンおよびプロスタグランジン受容体アゴニスト（Ｒｏｓｃｈら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ３３８：１１７１−８（２００５０）、ＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）、ＩＬ−１α（インターロイキン１α）、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α（腫瘍壊死因子α）、ＦＧＦ（線維芽細胞成長因子）、ＴＧＦ−β（トランスフォーミング成長因子β）、ＴＧＦ−α、ＥＧＦ（上皮成長因子）、ＴＰＡ（テトラデカノイルホルボールアセテート）が含まれる。
【００６０】
さらに、本発明は、治療有効量の５−リポキシゲナーゼインヒビターおよびシクロオキシゲナーゼ−２インヒビター（例えば、リコフェロン（ｌｉｃｏｆｅｌｏｎｅ）、Ｄｕｐｏｎｔ  Ｄｕｐ  ６９７、Ｔａｉｓｈｏ  ＮＳ−３９８、メロキシカム、フロスリド、Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  ４０６３８１、Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  ６４４７８４、またはテポキサリンなど）を含む組み合わせを含む。
【００６１】
本発明の方法による骨代謝の調整を、コントロール被験体と比較した投与後の骨強度および骨量の試験によって決定することができる。このような試験を、画像化技術（例えば、Ｘ線、核磁気共鳴像法、Ｘ線断層撮影法、超音波、および音響伝導）またはストレス試験によってｉｎ  ｓｉｔｕで行うか、標準的な組織学的方法、Ｘ線写真法、機械的方法、または生化学的方法によってｅｘ  ｖｉｖｏで行うことができる。骨密度および／または骨量の調整を、１つまたは複数のパラメーター（骨ミネラル密度、骨強度、小柱数、骨サイズ、および骨組織連結度など）の変化によって評価することができる。骨ミネラル密度（ＢＭＤ）のいくつかの決定方法は、当該分野で公知である。例えば、二重エネルギーＸ線吸収測定法または定量的コンピュータ断層撮影法などを使用して、ＢＭＤ測定を行うことができる。同様に、を賞して、当該分野で周知の方法を使用して骨形成の増加を決定することができる。例えば、腰椎由来のテトラサイクリン標識海綿骨および大腿遠位骨幹端の骨形成速度（ＢＦＲ）の動的測定を、定量的デジタル化形態測定を使用して行うことができる（Ｌｉｎｇら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １４０：５７８０−５７８８（１９９９））。あるいは、骨形成マーカー（アルカリホスファターゼ活性、血清コラーゲンペプチドレベル、または血清オステオカルシンレベルなど）を評価して、骨形成の増加が起こったかどうかを間接決定することができる（Ｌｏｏｋｅｒら、Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  １１：４６７−４８０（２０００））。アラキドン酸の代謝経路またはシグナル伝達経路を調整する化合物の、骨折治癒および／または骨形成を促進または増強する能力、骨形成を促進する能力、および骨量減少を防止する能力について試験することができる。当業者に周知の種々の動物モデル（動物骨折モデル、動物骨切り術モデル、動物穿頭骨錐欠損モデル、動物骨損傷モデル、種々の動物の区域性欠損モデル、および骨延長モデル、および卵巣摘出誘導性骨量減少モデルなど）でこれを試験することができる。これらの動物モデルの有用性は十分に確立されており、広範な異なる所見によって立証されている。例えば、動物（ラットが含まれる）におけるＢＭＰ２研究は、ＢＭＰ２が骨発生を刺激することを証明しており、ＢＭＰ２は、現在、骨修復に適用するためにヒトで臨床的に使用されている（商標名ＩＮＦＵＳＥ）。動物におけるこれについての何百もの論文および数十のヒトについての論文が存在し、ＮＳＡＩＤは、ラットにおける骨折修復を阻害し（Ｓｉｍｏｎら、Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ  ２  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｂｏｎｅ  ｆｒａｃｔｕｒｅ  ｈｅａｌｉｎｇ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  ａｎｄ  Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １７：９６３−７６（２００２））、ＮＳＡＩＤは、ヒトにおける不十分な骨折治癒と相関し（Ｂｕｒｄら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  ａｎｄ  Ｊｏｉｎｔ  Ｓｕｒｇｅｒｙ（Ｂｒｉｔｉｓｈ）８５Ｂ：７００−５（２００３））、Ｒｕｂｉｎら、（２００１），ＪＢＪＳ  ８３（２）：２５９−２７０で引用した研究は、超音波処置がラット（Ａｚｕｍａ  ｒｅｆ．）および��トの骨折修復を促進することを示す。骨粗鬆症療法についてのＦＤＡガイドラインは、前臨床試験が２種の使用を必要とし、一方が卵巣摘出ラットモデルでなければならないことを示す。
【００６２】
本発明の方法による骨代謝の調整を、偽処置細胞と比較してアラキドン酸代謝を変化させる処置後の骨芽細胞および／または軟骨細胞の増殖、生存、および分化の試験によってｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定することができる。細胞または臓器外植片（新生げっ歯類頭蓋冠または指骨など）を、本出願に記載のように、５−リポキシゲナーゼ活性を阻害するか、シクロオキシゲナーゼ活性を変化させるか、ロイコトリエンまたはプロスタグランジン受容体機能に影響を及ぼす化合物などで処置することができる。さらなる処置方法には、アンチセンス核酸、干渉ＲＮＡ、他の核酸またはタンパク質などの使用が含まれ得る。骨芽細胞または軟骨細胞の増殖および生存を、当業者に周知の多数の技術（細胞の計数、放射性標識チミジンまたはブロモデオキシウリジンの複製ＤＮＡへの組み込み、トリパンブルー排除、およびアポトーシスを受けた細胞内でのＤＮＡの末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ末端標識など）によって測定することができる。骨芽細胞および／または軟骨細胞の分化を、当業者に周知の多数の技術によって測定することができ、これらの技術には、骨芽細胞または軟骨細胞の培養物の石灰化を確認するためのｖｏｎ  Ｋｏｓｓａの方法またはアリザリンレッドによって染色した石灰化小結節の形成、プロテオグリカン基質の生成を測定するための軟骨細胞のアルシアンブルー染色、タンパク質または核酸ベースのアッセイ方法を使用した骨芽細胞および軟骨細胞の分化のマーカー（Ｉ型、ＩＩ型、おいよびＸ型コラーゲン、オステオカルシン、およびアグレカン（ａｇｇｒｅｃａｎ）など）を測定するための遺伝子発現分析、アルカリホスファターゼ活性の測定、ならびに酵素結合免疫アッセイ（ＥＩＡ）などの定量的方法によるＲＡＮＫＬ、ＯＰＧ、ＶＥＧＦ、骨形成タンパク質、および他の成長因子の測定が含まれるであろう。
【００６３】
５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）
ＦＬＡＰは、アラキドン酸輸送タンパク質としての作用によってアラキドン酸に特異的に結合して５−ＬＯを活性化する１８ｋＤの膜結合ポリペプチドである。ＦＬＡＰ遺伝子は、３１ｋｂを超える長さであり、５つの小さなエクソンおよび４つの巨大なエクソン（エクソン１についてはＧｅｎＢａｎｋ  １８２６５７、Ｇｅｎｂａｎｋ  Ｍ６０４７０、エクソン２についてはＧｅｎｂａｎｋ  Ｍ６３２５９、エクソン３についてはＧｅｎｂａｎｋ  Ｍ６３２６０、エクソン４についてはＧｅｎｂａｎｋ  Ｍ６３２６１、およびエクソン５についてはＧｅｎｂａｎｋ  Ｍ６３２２）からなる。
【００６４】
核酸エンベロープは、５−ＬＯおよびＦＬＡＰがアラキドン酸を代謝するように作用する細胞内部位であり、好中球および単球のイオノフォア活性化により、５−ＬＯが沈降不可能な位置から核膜に転位置する。ＦＬＡＰ機能のインヒビターにより、５−ＬＯのサイトゾルから膜への転位置が防止され、５−ＬＯ活性化が阻害される。したがって、ＦＬＡＰインヒビターは、抗炎症薬候補である。
【００６５】
ロイコトリエン合成は、ＦＬＡＰ（ＭＫ８６６）を阻害する薬物によって減少するかＦＬＡＰを欠くマウスで減少する。したがって、本発明の１つの態様では、ＦＬＡＰインヒビター（ＢＡＹｘ  １００５、ＭＫ−８８６、およびＭＫ−０５９１など）は、アラキドン酸の代謝経路またはシグナル伝達経路を調整し、それにより、骨折治癒および骨形成を促進および／または増強する方法で使用する。
【００６６】
アンチセンス治療
用語「アンチセンス核酸」は、５−ＬＯもしくはＦＬＡＰコードＤＮＡおよびＲＮＡの塩基配列またはアラキドン酸の代謝経路もしくはシグナル伝達経路における他のタンパク質をコードする塩基配列に相補的なオリゴヌクレオチドをいうことを意図する。アンチセンスヌクレオチドは、修飾もしくは未修飾のＲＮＡ、ＤＮＡ、または混合ポリマーオリゴヌクレオチドであり得、標的細胞に導入した場合、その標的核酸に特異的に結合して、転写、ＲＮＡプロセシング、輸送、および／または翻訳を妨害する。オリゴヌクレオチドを使用した二本鎖（ｄｓ）ＤＮＡのターゲティングによって三重らせんを形成し、ＲＮＡのターゲティングによって二重らせんを形成する。
【００６７】
遺伝子のプロモーターおよび他の調整領域、エクソン、イントロン、またはエクソン−イントロン境界に結合するようにアンチセンス構築物をデザインすることができる。アンチセンスＲＮＡ構築物またはこのようなアンチセンスＲＮＡをコードするＤＮＡを使用して、宿主細胞内（宿主動物（ヒト被験体が含まれる）内など）の遺伝子の転写、翻訳、またはその両方をｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで阻害することができる。「相補的ヌクレオチド」を含む核酸配列は、グアニンがシトシンと対合し（Ｇ：Ｃ）、ＤＮＡの場合にアデニンがチミンと対合するか（Ａ：Ｔ）、ＲＮＡの場合にアデニンがウラシルと対合する（Ａ：Ｕ）、標準的なワトソン−クリック相補性規則に従って塩基対合することができる核酸配列である。
【００６８】
アンチセンス構築物の文脈で遺伝子配列の全部または一部を使用することができるが、好ましくは、１７塩基長の任意の配列を使用して、固有の標的配列を特定することができる。より短いオリゴマーはｉｎ  ｖｉｖｏ接近可能性を得て増加させることが容易であるが、多数の他の要因がハイブリッド形成の特異性の決定に関与する。その相補的標的との結合親和性および配列特異性が治療薬としての使用に十分であるようにアンチセンスオリゴヌクレオチドを選択する。したがって、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、またはそれを超える塩基対のオリゴヌクレオチドを使用することができる。内因性遺伝子の機能が影響を受けるかどうか、または相補的配列を有する関連遺伝子の発現が影響を受けるかどうかをｉｎ  ｖｉｔｒｏで決定するための構築物の試験によって、所与のアンチセンス核酸が対応する宿主細胞遺伝子のターゲティングで有効であるかどうかを容易に決定することができる。
【００６９】
干渉ＲＮＡ
干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）フラグメント、特に、二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡｉを使用して、アラキドン酸の代謝経路またはシグナル伝達経路を調整することができる。小干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、典型的には、遺伝子発現を干渉する１９〜２５ヌクレオチド長のＲＮＡ分子である。線虫、ショウジョウバエ、植物、およびヒトの遺伝子をサイレンシングするためのＲＮＡｉの使用に関連する方法は、当該分野で公知である（Ｆｉｒｅら、Ｎａｔｕｒｅ  ３９１：８０６−８１１（１９９８）；Ｓｈａｒｐ，Ｐ．Ａ．ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ２００１．Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１５：４８５−４９０（２００１）；Ｔｕｓｃｈｌ，Ｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２：２３９−２４５（２００１）；ＷＯ０１２９０５８号；およびＷＯ９９３２６１９号）。
【００７０】
ＲＮＡｉで使用されるヌクレオチド配列は、少なくとも約１５〜５０塩基対の配列を含む。配列は、任意選択的に５’末端および／または３’末端にオーバーハングを有する二重鎖であり得、この二重鎖の一方の鎖がアラキドン酸の代謝経路またはシグナル伝達経路内に核酸分子の核酸配列を有する少なくとも１５個の連続する塩基の核酸配列を含む。各鎖の長さは、より長く、必要に応じて、本明細書中に記載の任意のヌクレオチドの１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、または３０ヌクレオチドなどまたは全長までであり得る。一本鎖オーバーハングは、例えば、１、２、３、４、５、または１０ヌクレオチド長であり得、３’末端、５’末端、または３’末端と５’末端の両方に存在し得る。このようなフラグメントを、化学合成によるフラグメントの直接的合成、核酸増幅テクノロジーの適用、または組換え産生のための選択した配列の組換えベクターへの導入によって容易に調製することができる。
【００７１】
特に、ヌクレオチド配列またはＲＮＡｉは、５−ＬＯまたはＦＬＡＰコードＤＮＡおよびＲＮＡの塩基配列またはアラキドン酸の代謝経路またはシグナル伝達経路中の他のタンパク質をコードする塩基配列に相補的なオリゴヌクレオチドであり得る。オリゴヌクレオチドは、修飾もしくは未修飾のＲＮＡ、ＤＮＡ、または混合ポリマーオリゴヌクレオチドであり得、標的細胞に導入した場合、その標的核酸に特異的に結合して、転写、ＲＮＡプロセシング、輸送、および／または翻訳を妨害する。
【００７２】
他の薬剤
本発明の別の態様では、さらなる薬剤または薬物を、被験体に投与することができる。さらなる薬剤は、有効にカルシウムホメオスタシスを調節するか、軟骨形成を調整するか、骨発生を調整するか、骨再造形を調整するか、疼痛を調節するか、炎症を調節するか、抗生物質活性を有する１つまたは複数の活性成分を含み得る。さらなる活性成分は、エストロゲン、ＩＧＦ、インスリン、骨形成タンパク質および他の成長因子、オステオプロテグリン（ＯＰＧ）、カルシトニン、ビスホスホネート、ビタミンＤ３またはそのアナログ、スタチン、アドロゲン（ａｄｒｏｇｅｎ）、フッ化塩、副甲状腺ホルモンまたはそのアナログ、血管形成を増強する薬剤（血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）など）、骨代謝に関与する天然に存在するホルモン調節因子の転写の調節を変化させる薬剤、ビタミン、ミネラル補給剤、栄養補給剤、およびその組み合わせであり得るが、これらに限定されない。さらなる薬剤はまた、ゲンタマイシン、シプロフロキサシン、およびバンコマイシンなどの抗生物質であり得る。このさらなる活性成分を、本発明の５−リポキシゲナーゼインヒビターの投与前、同時、または投与後に被験体に投与することができる。抗炎症薬（非ステロイド系抗炎症薬および副腎皮質ステロイドが含まれるが、これらに限定されない）、ｐ３８キナーゼインヒビター、および抗ウイルス薬（リビビリン（ｒｉｂｉｖｉｒｉｎ）、ビダラビン，アシクロビル、およびガンシクロビルが含まれるが、これらに限定されない）を、本発明の組成物と組み合わせることもできる。抗生物質化合物（ゲンタマイシン、テイコプラニン、トブラマイシン、およびバンコマイシンが含まれるが、これらに限定されない）を、本発明の組成物と組み合わせることもできる。
【００７３】
ＩＩＩ．薬学的処方物および投与様式
本明細書中に記載の方法は、上記の分子を含む薬学的組成物を、１つまたは複数の薬学的に許容可能な賦形剤またはビヒクル、および任意選択的に治療成分および／または予防成分と共に使用する。このような賦形剤には、水、生理食塩水、グリセロール、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸、エタノール、シクロデキストリン、修飾シクロデキストリン（すなわち、スルホブチルエーテルシクロデキストリン）などの液体が含まれる。非液体処方物に適切な賦形剤も当業者に公知である。薬学的に許容可能な塩を、本発明の組成物と組み合わせて使用することができ、例えば、鉱酸塩（塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩など）および有機酸塩（酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、および安息香酸塩など）が含まれる。薬学的に許容可能な賦形剤および塩の詳細な議論は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）で得られる。
【００７４】
さらに、補助剤（湿潤剤または乳化剤など）、生物学的緩衝物質、および界面活性剤などは、このような賦形剤中に存在することができる。生物学的緩衝液は、薬学的に許容可能であり、所望のｐＨ（すなわち、生理学的に許容可能な範囲のｐＨ）の処方物が得られる実質的に任意の溶液であり得る。緩衝液の例には、生理食塩水、リン酸緩衝化生理食塩水、Ｔｒｉｓ緩衝化生理食塩水、およびハンクス緩衝化生理食塩水が含まれる。
【００７５】
意図する投与様式に応じて、薬学的組成物は、固体、半固体の形態、または液体投薬形態（例えば、錠剤、座剤、丸薬、カプセル、粉末、液体、懸濁液、クリーム、軟膏、またはローションなど）、好ましくは、正確な投薬量の単回投与に適切な単位投薬形態であり得る。組成物は、薬学的に許容可能なキャリアと組み合わせた有効量の選択された薬物が含み、さらに、他の医薬品（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｇｅｎｔ）、アジュバント、希釈剤、緩衝液などを含み得る。
【００７６】
本発明は、１つまたは複数の薬学的に許容可能なキャリアおよび任意選択的に他の治療成分および／または予防成分と共に本発明の化合物（異性体、異性体のラセミ混合物または非ラセミ混合物が含まれる）またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物を含む薬学的組成物を含む。
【００７７】
一般に、本発明の化合物を、薬学的処方物（経口（口腔および舌下が含まれる）、直腸、鼻腔内、局所、肺、膣、または非経口（筋肉内、動脈内、鞘内、皮下、および静脈内が含まれる）投与に適切な薬学的処方物、吸入もしくは吹送による投与に適切な形態の薬学的処方物、または骨形成部位への投与に適切な形態薬学的処方物が含まれる）として投与する。好ましい投与様式は、苦痛の程度に応じて調整することができる都合のよい１日投薬量のレジメンを使用した経口または静脈内投与様式である。
【００７８】
骨形成部位への送達のための処方物は、ポリラクチドおよび／またはポリガラクチドポリマー、パルミチン酸、アルギン酸塩、プラスター、硫酸カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウムとリン酸カルシウムとの混合物、ヒドロキシアパタイト、コラーゲンまたは他の細胞外基質物質、骨蝋（ＣＰ  Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｉｎｃ．，Ｅｔｈｉｃｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｕｎｉｔｅｓ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．またはＣｅｒｅｍｅｄの骨蝋など）、Ｏｒｔｈｏｃｏｎ  Ｂｏｎｅ  Ｐｕｔｔｙ（ａ  ｍｉｘｔｕｒｅ  ｏｆ  ステアリン酸カルシウム、ビタミンＥアセテート、およびアルキレンオキシドコポリマーの混合物）またはこの目的のために使用することができる他の材料または化合物への吸着またはカプセル化を含む。骨形成部位での直接置換またはキャリアを含むか含まない本発明の活性化合物の人工器官もしくは外科的に埋め込んだデバイスの表面への沈着によって送達することができる。
【００７９】
薬学的または治療有効量の組成物を、被験体に送達する。正確な有効量は、被験体によって変化し、種、年齢、被験体のサイズおよび健康状態、治療を受ける状態の性質および範囲、担当医の提案、ならびに投与のために選択された治療薬もしくは治療薬の組み合わせに依存する。したがって、所与の状況についての有効量を、日常的実験によって決定することができる。本発明の目的のために、一般に、治療量は、少なくとも１回の投与において約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重〜約４０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約０．５ｍｇ／ｋｇ体重〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。より巨大な哺乳動物では、示した１日投薬量は、約１ｍｇ〜４，８００ｍｇを１日に１回または複数回、より好ましくは、約１０ｍｇ〜１，２００ｍｇの範囲であり得る。被験体に、目的の障害の徴候、症状、または原因を軽減および／または改善するか、生物系の任意の他の所望の変化を引き起こすのに必要なほどの用量で投与することができる。このような疾患を治療する当業者は、過度の実験を行うことなく、個人的知識および本出願の開示に従って、所与の疾患についての治療有効量の本発明の化合物を確定することができる。本発明の方法を実施する場合、ヒトへの開始用量を、ラット用量データから推定する必要があり得る。このような推定方法は、当該分野で周知である。ＦＤＡ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  “Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ：Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓａｆｅ  Ｓｔａｒｔｉｎｇ  Ｄｏｓｅ  ｉｎ  Ｉｎｉｔｉａｌ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ”  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  Ｊｕｌｙ  ２００５（Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｒｅｇｉｓｔｅｒ  Ｄｏｃｕｍｅｎｔ  ５−１４４５６）およびｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／Ｃｄｅｒ／ｇｕｉｄａｎｃｅ／５５４１ｆｈｌ．ｐｄｆの利用可能なオンラインを参照のこと。一般に、ｍｇ／ｋｇで示されるラット用量を、６．２で割って等価なヒト用量を得るべきである。
【００８０】
所望する場合、処方物を、有効成分の徐放性または制御放出投与に適合させた腸溶コーティングを使用して調製することができる。
【００８１】
薬学的調製物は、好ましくは、単位投薬形態である。このような形態では、調製物を、適量の活性成分を含む単位用量に再分割する。単位投薬形態は、包装された調製物、個別の量の調製物（小包化した（ｐａｃｋｅｔｅｄ）錠剤、カプセル、およびバイアルまたはアンプル中の粉末など）であり得る。また、単位投薬形態は、それ自体がカプセル、錠剤、カシェ剤またはロゼンジであり得るか、適切な数のこれらのいずれかを含む包装形態であり得る。
【実施例】
【００８２】
ＩＶ．実験
以下は、本発明の実施のための特定の実施形態の例である。実施例は、説明のみを目的として提供し、本発明の範囲を制限することを決して意図しない。
【００８３】
使用した数値（例えば、量、温度など）に関して確実に正確であるように努力したが、勿論、いくらかの実験誤差および偏差を考慮すべきである。
【００８４】
（実施例１）
５ＬＯ  ノックアウトマウス
５−リポキシゲナーゼを欠くノックアウトマウス（Ａｌｏｘ５−／−または５−ＬＯ−／−）を、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅから購入した。大腿管に逆行して挿入した髄内ワイヤを使用して、切迫大腿骨骨折を安定化した。三点曲げデバイス（ｔｈｒｅｅ−ｐｏｉｎｔ  ｂｅｎｄｉｎｇ  ｄｅｖｉｃｅ）を使用して、骨折を作製した。大腿骨骨折治癒を、組織形態計測法、Ｘ線写真術、および機械的ねじれ試験によって測定または評価した。５−ＬＯ−／−マウスにより、同一の遺伝的背景および年齢の野生型マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）と比較して、骨折治癒の統計的に有意な定量的促進および増強が証明された。１０〜１２週齢のメスマウスの骨幹中央部に閉鎖骨折を作製した。骨折治癒を、Ｘ線によって評価し（図３）、骨折の４週間後および１２週間後の機械的ねじれ試験によって定量的に評価した（図４および表２）。治癒から４週間後または１２週間後に、５ＬＯ−／−マウスおよび野生型（ＷＴ）マウス由来の骨折大腿骨を切り出し、ＭＴＳ  ｓｅｒｖｏｈｙｄｒａｕｌｉｃ試験装置およびインターフェイス２０Ｎｍトルク負荷セルを使用して、ねじれの障害を機械的に試験した。骨折大腿骨の寸法を、試験前後に測定した。ピークトルク、剛性、最大剪断応力、および剪断弾性係数を、仮骨寸法およびトルク対角度変位曲線に対するトルクから計算した。全ての機械的パラメーターは、ＷＴマウスと比較して、５−ＬＯ−／−において治癒から４週間後に５０〜１２０％高かった。正常および５−ＬＯ−／−マウス由来の段階的時間骨折標本の組織形態測定分析は、５−ＬＯ−／−マウスにおいて軟骨領域が初期により広い範囲でピークになることを示した（図５および表３）。さらに、有意により多数の新規の骨（石灰化組織）は、骨折から７日後および１０日後に５−ＬＯ−／−骨折仮骨中に存在した。データは、５−ＬＯ−ＫＯマウスで骨折治癒が促進および増強されることを証明する。
【００８５】
表２−同一の遺伝的背景および骨折時の年齢の５−ＬＯ−／−マウスおよび野生型マウス由来の骨折大腿骨機械的ねじれ試験データのまとめ（Ｆｘ）
【００８６】
【化１３】
2009504776.tif 000012
表３−同一の遺伝的背景および骨折時の年齢の５−ＬＯ−／−マウスおよび野生型マウス由来の骨折仮骨組織形態計測分析のまとめ
【００８７】
【化１４】
2009504776.tif 000013
連続Ｘ線（図３）は、野生型マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）と比較して５−ＬＯ−／−マウスで骨折治癒が促進されることを示す。より具体的には、５−ＬＯ−／−マウス由来の１０日目の骨折は、野生型マウス由来の１４日目の骨折と類似の段階であるようであり、１４日目の５−ＬＯ−／−骨折は２１日目の野生型骨折に類似し、１ヶ月目の５−ＬＯ−／−骨折は３ヶ月目野生型骨折に類似する。機械試験データは、５−ＬＯ−／−骨折仮骨の構造的および物質的性質が治癒４週間後にコントロールよりも統計的に有意に改善されることを定量的に示し、ピークトルクが５０％増加し、剛性が７５％増加し、最大剪断応力が７５％増加し、剪断弾性係数が１００％を超えて増加する。さらに、５−ＬＯ−／−マウス由来の４週間目の機械試験パラメーターは、１２週目の野生型マウスと類似し、このことは図３のＸ線データを裏付け、５−ＬＯ−／−マウスで骨折治癒が促進および増強されることを証明している。治癒１２週後、野生型骨折仮骨の剛性および剪断弾性係数は、５−ＬＯ−／−骨折仮骨と肩を並べた。５−ＬＯ−／−マウスおよびＷＴマウス由来の段階的骨折仮骨標本の組織形態計測は、機械的所見およびＸ線写真の所見を裏付ける（図５および表２）。仮骨軟骨領域は、５−ＬＯ−／−マウスで骨折７日目までにピークに達するが、ＷＴマウスで１０日目までピークに達しなかった。ＷＴマウスと比較して、５−ＬＯ−／−仮骨で７日目にほぼ４倍の軟骨が存在した。同時に、ＷＴマウスと比較して、５−ＬＯ−／−マウスでさらに新規の骨形成も認められ、７日目にほぼ２倍の新規の骨（石灰化組織）が存在し、１０日目に３０％を超える新規の骨が存在した。したがって、データは、正常マウスよりも５−ＬＯ−／−マウスで、構造的性質および物質的性質が増強されたより早く且つより機械的に正常な骨折仮骨を生じる骨折治癒と一致する。
【００８８】
（実施例２）
ＣＯＸ−２ノックアウトマウス
骨折治癒を、ＣＯＸ−２遺伝子の欠失がターゲティングされたマウスでアッセイした。大腿骨骨幹中央部閉鎖骨折を、ＣＯＸ−２ノックアウトマウス、ＣＯＸ−１ノックアウトマウス、および野生型マウス（示さず）の右後肢に作製した。骨折治癒を、Ｘ線および組織学（図６）ならびに機械的試験（示さず）によって評価した。データは、骨折治癒は、骨折治癒がＣＯＸ−２ノックアウトマウスで劇的に損なわれるが、ＣＯＸ−１ノックアウトマウスまたは野生型マウスでは損なわれなかったことを示す。治癒１４日後のＸ線は、ＣＯＸ−１ノックアウトマウスで巨大な石灰化骨折仮骨を示し（図６）、ＣＯＸ−２ノックアウトマウスで明らかな石灰化仮骨はほとんどまたは全く認められない。組織学的試験は、ＣＯＸ−２ノックアウト仮骨がかなりの量の軟骨を有したが、新規の骨は明らかでなかったと言う点でＸ線所見が追認された。ねじれ機械試験データは、ＣＯＸ−１ノックアウトまたは野生型マウスよりも骨折仮骨の構造的性質および物質的性質が統計的に有意に劣ることを示す。実施例１、実施例３、および実施例４の実験結果を組み合わせた場合、これは、どのようにして本発明の方法によって骨形成に影響を与えるようにアラキドン酸の代謝またはシグナル伝達を操作することがきるのかについて証明される。
【００８９】
（実施例３）
５−リポキシゲナーゼインヒビターでのラットの処置
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（３月齢）に、当該分野で説明されている標準的な大腿骨閉鎖骨折手順を行った（Ｓｉｍｏｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  ａｎｄ  Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７（６）：９６３−９７６（２００２）；Ｂｏｎｎａｒｅｎｓ  ａｎｄ  Ｅｉｎｈｏｒｎ，Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｓｔａｎｄａｒｄ  ｃｌｏｓｅｄ  ｆｒａｃｔｕｒｅ  ｉｎ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｉｍａｌ  ｂｏｎｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２：９７−１０１（１９８４））。切迫骨折を、髄内ステンレススチールピンを使用して安定化させた。骨折の４時間後から、ラットに３０ｍｇ／ｋｇのＮＤＧＡ（ノルジヒドロガイラレチン酸（ｎｏｒｄｉｈｙｄｒｏｇａｉａｒｅｔｉｃ  ａｃｉｄ））を含む１％メチルセルロース（５−リポキシゲナーゼインヒビター処置群）またはキャリアのみ（１％メチルセルロース）で処置した。手術の翌日から骨折１４日後まで継続して、実験ラットに、２回のＮＤＧＡ（３０ｍｇ／ｋｇ）で処理し、最初の投与は８〜１０ＡＭに行い、別のＮＤＧＡは８〜１０時間後に投与した。コントロールラットを同様に処置したが、キャリアのみ（１％メチルセルロース）で処置した。骨折３週間後、ラットを屠殺し、骨折大腿骨を採取し、Ｐａｃｋａｒｄ  ＦａｘｉｔｒｏｎおよびＫｏｄａｋ  ＭｉｎＲ２０００マンモグラフィフィルムを使用して、骨折大腿骨の高解像度のＸ線写真を撮影した。各処置群（コントロールおよび５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）インヒビター処置）についての２つの代表的なＸ線写真を図７に示す。
【００９０】
Ｘ線写真は、３週間後に５−ＬＯインヒビター処置ラットの骨折大腿骨が新規の骨と架橋したことを示す。対照的に、コントロールラットで十分に形成された石灰化骨折仮骨が形成されたが、依然として骨折部位と架橋しなかった。ラットＣでは、骨折は、骨折仮骨の中央側（上）および側面（下）の新規の骨と架橋する。ラットＤでは、骨折は、側面（下）で新規の骨と架橋し、中央での新規の骨の架橋を示す。コントロールラットでは、新規の骨の架橋は認められない（ラットＡおよびＢ）。したがって、データは、幼若な正常ラットで５−ＬＯインヒビター療法が骨折治癒過程を促進することができることを証明している。
【００９１】
（実施例４）
５−リポキシゲナーゼインヒビターでのラットの処置
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（３月齢）に、当該分野で説明されている標準的な大腿骨閉鎖骨折手順を行った（Ｓｉｍｏｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  ａｎｄ  Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７（６）：９６３−９７６（２００２）；Ｂｏｎｎａｒｅｎｓ  ａｎｄ  Ｅｉｎｈｏｒｎ，Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｓｔａｎｄａｒｄ  ｃｌｏｓｅｄ  ｆｒａｃｔｕｒｅ  ｉｎ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｉｍａｌ  ｂｏｎｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２：９７−１０１（１９８４））。切迫骨折を、髄内ステンレススチールピンを使用して安定化させた。骨折の４時間後から、ラットにビヒクル（１％メチルセルロース）または１％メチルセルロースに懸濁した５−ＬＯのインヒビターで処置した。３０ｍｇ／ｋｇのインヒビターＡ（ＮＤＧＡ）を投与し、５ｍｇ／ｋｇのインヒビターＢ（ＡＡ−８６１）を投与した。手術の翌日から骨折２１日後まで継続して、実験ラットに、２回のインヒビター（ＡまたはＢのいずれか）で処理し、最初の投与は８〜１０ＡＭに行い、別の投与は８〜１０時間後に投与した。コントロールラットを同様に処置したが、キャリアのみ（１％メチルセルロース）で処置した。骨折３週間後、ラットを麻酔し、骨折大腿骨を採取し、Ｐａｃｋａｒｄ  ＦａｘｉｔｒｏｎおよびＫｏｄａｋ  ＭｉｎＲ２０００マンモグラフィフィルムを使用して、骨折大腿骨の高解像度のＸ線写真を撮影した（図８Ａ、８Ｂ、および８Ｃ）。骨折５週間後にラットを屠殺し、大腿骨を切除し、機械的ねじれ試験によって構造の機械的性質についてアッセイした（図８Ｄ）。
【００９２】
Ｘ線写真は、治癒３週間後に、５−ＬＯインヒビター処置ラットで骨折が架橋するようであるが、ビヒクル処置ラットではそうでないことを示した。
【００９３】
機械的ねじれ試験を使用して、治癒５週間後に各大腿骨によって維持されたピークトルクを測定した。データは、インヒビターＡ（ＮＤＧＡ）処置ラットおよびインヒビターＢ処置ラット由来の大腿骨のピークトルクがビヒクル処置ラットよりも２２％および５３％高いことを示す（図８Ｄ）。さらに、インヒビターＡまたはＢ処置ラット由来の全大腿骨が骨連結に失敗したが、ビヒクル処置ラット由来の大腿骨の１３％（１５のうちの２）が骨癒合不全に失敗し、明らかな骨架橋は認められなかった。
【００９４】
これらの実験による所見は、５−ＬＯ阻害療法が骨折治癒を促進（より早い骨架橋）および増強（より良好な機械的性質）することができることを証明する。
【００９５】
（実施例５）
小分子化合物（ＲＮＡｉ）およびアンチセンス化合物を使用した、ｅｘ  ｖｉｖｏ処置方法
ｅｘ  ｖｉｖｏでの骨発生を促進する方法を使用して、例えば、不応性骨折、外傷または骨断片の病的切除に起因する区域性欠損の治癒または関節固定を補助する。これらの例では、前駆骨細胞を、標準的方法を使用して被験体または適切なドナーから単離し、ｅｘ  ｖｉｖｏで培養する。細胞を、喪失した骨の断片に相当するか、失われた断片に適合するように成形することができるか、骨の末端に並列する適切な足場中で成長させるか、足場中に播種する。細胞を、適切な細胞培養条件または誘導因子（骨形成タンパク質−２（ＢＭＰ−２）など）を使用してｅｘ  ｖｉｖｏで骨を形成するように誘導する。一旦細胞が新規の骨基質を構成し始めると、構築物を患者に移植して、骨発生させて治癒を促進することができる。この事象の順序を、典型的には、骨発生を増強させるための組織工学アプローチという。
【００９６】
５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）の阻害を使用して、組織工学に適用するためのｅｘ  ｖｉｖｏ骨形成を促進することができる。５−ＬＯまたはＦＬＡＰの小分子インヒビターを単独で使用するかまたは周知の誘導剤（ＢＭＰ−２など）と組み合わせて使用したｅｘ  ｖｉｖｏでの骨発生の促進によってこれを行う。
【００９７】
第２のアプローチは、５−ＬＯ活性を阻害し、ｅｘ  ｖｉｖｏ骨発生を促進するためのＲＮＡｉテクノロジーを使用する。市販のトランスフェクション試薬（ＴｒａｎｓＩＴ−ＴＫＯまたはｊｅｔＳＩなど）を使用した培養前駆骨格細胞（ｓｋｅｌｅｔａｌ  ｃｅｌｌ）のｓｉＲＮＡ配列プールでのトランスフェクションによってこれを行う。約１００万個の細胞を、５０〜２００ｐｍｏｌの各ｓｉＲＮＡを使用して、５−ＬＯまたはＦＬＡＰに特異的な３つのｓｉＲＮＡのカクテルでトランスフェクションする。あるいは、５−ＬＯおよびＦＬＡＰをターゲティングするｓｉＲＮＡのプールを使用する。コントロールとして、細胞を、増強緑色蛍光タンパク質（ＥＧＦＰ）をノックダウンするように開発された市販のｓｉＲＮＡを使用して同様にトランスフェクションする。５−ＬＯまたはＦＬＡＰのノックダウンを、ウェスタンブロット分析によって確認し、結果を定量して、５−ＬＯおよび／またはＦＬＡＰ発現が８０％を超えて減少することが確認された。
【００９８】
処置した前駆骨格細胞を培養し、アルシアンブルーまたはアリザリンレッド結合などの測定または必要に応じて特異的基質タンパク質の測定を使用して、軟骨または骨基質の細胞外基質生成として骨発生を評価する。５−ＬＯまたはＦＬＡＰのノックダウンにより、アリザリンレッド結合によって測定された石灰化基質沈着の増強に基づいて骨発生が促進される。これは、５−ＬＯ活性を阻害するためのＲＮＡｉまたはアンチセンスアプローチが組織工学の目的のためのｅｘ  ｖｉｖｏでの骨発生の促進に有用であることを示す。
【００９９】
５−ＬＯのためのｓｉＲＮＡ対のプールを、例えば、
【０１００】
【化１５】
2009504776.tif 000014
から選択することができる。ＦＬＡＰのためのｓｉＲＮＡ対のプールを、例えば、
【０１０１】
【化１６】
2009504776.tif 000015
から選択することができる。略して、各ｓｉＲＮＡ対のセンス鎖のみを示す。ｓｉＲＮＡ対はセンス鎖上に５’−ＡＡオーバーハングを有し、アンチセンス鎖上に５’−ＵＵオーバーハングを有する二本鎖小ＲＮＡであることが当該分野で周知である。骨格の化学修飾がｓｉＲＮＡ分子の取り込みの安定化または改良に有利であり得ることも当該分野で周知である。Ｐｉｒｏｌｌｏ  ＫＦら、（２００３），Ｒａｉｔ  Ａ，Ｓｌｅｅｒ  ＬＳ，Ｃｈａｎｇ  ＥＨ，“Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：ｆｒｏｍ  ｔｈｅｏｒｙ  ｔｏ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｒａｃｔｉｃｅ，”  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ．９９（ｌ）：５５−７７。有利に骨格が化学修飾されたオリゴヌクレオチドの製造は、当業者のレベルの範囲内であり、このような修飾骨格化合物（および未修飾骨格化合物）の使用は、本発明の範囲内である。
【０１０２】
当業者は、細胞へのｓｉＲＮＡの直接トランスフェクションに加えて、これらまたは類似の配列を発現する発現ベクターおよびトランスフェクション、ウイルス媒介性送達、または細胞内へのＤＮＡ分子の送達方法によって細胞に送達された発現ベクターを開発することができる。発現ベクターは、５−ＬＯ、ＦＬＡＰ、またはその両方を持続的に阻害し、それによって骨発生を促進するｓｉＲＮＡを発現する。
【０１０３】
当業者はまた、５−ＬＯまたはＦＬＡＰの発現を阻害するためのさらなるストラテジーを使用して前駆骨格細胞における同一の骨発生効果を促進することができる。このようなテクノロジーには、アンチセンスの使用が含まれる。
【０１０４】
例示的５−リポキシゲナーゼアンチセンス配列には、例えば、
【０１０５】
【化１７】
2009504776.tif 000016
が含まれる。
【０１０６】
例示的ＦＬＡＰアンチセンス配列には、例えば、
【０１０７】
【化１８】
2009504776.tif 000017
が含まれる。
【０１０８】
したがって、骨折治癒を促進または増強し、骨損傷を治療し、骨形成を増強するために骨発生を促進する新規の方法を開示する。本発明の好ましい実施形態をいくらか詳細に記載しているが、添付の特許請求の範囲に定義の本発明の精神および範囲を逸脱することなく明白な変形形態を実施することができると理解される。
【図面の簡単な説明】
【０１０９】
【図１】図１は、例示的なアラキドン酸代謝経路またはシグナル伝達経路をまとめている。
【図２】図２は、シクロオキシゲナーゼ活性またはリポキシゲナーゼ活性を変化させて骨形成を促進または増強することによるアラキドン酸代謝の調整を図解する。図２Ａは、経路の正常な機能を示す。図２Ｂは、ＣＯＸ−２活性の阻害によってロイコトリエンが過剰に産生され、骨治癒または他の骨発生過程における骨形成を妨害することを示す。図２Ｃは、リポキシゲナーゼ活性の阻害によってプロスタグランジンが過剰に産生され、骨折修復または他の骨発生過程における骨形成を促進または増強することを示す。
【図３】図３は、５ＬＯ−／−マウスおよび正常マウス（Ｃ５７ＢＬ／６）から作製した大腿骨骨折の連続Ｘ線写真を示す。Ｘ線は、骨発生、すなわち、骨折治癒が５ＬＯ−／−マウスで促進されることを示す。
【図４】図４は、骨折発症から２８日後および８４日後の野生型（ＷＴ）および５−ＬＯノックアウトマウス（５ＬＯ−ＫＯまたは５−ＬＯ−／−）における骨折治癒の機械的試験データを示す。ピークトルク（図４Ａ）、剛性（図４Ｂ）、最大剪断応力（図４Ｃ）、および剪断弾性係数（図４Ｄ）を、仮骨直径および角度変位曲線に対するトルクから計算した。
【図５】図５は、骨折から７、１０、１４、および２１日後の野生型（ＷＴ）および５−ＬＯノックアウトマウス（５−ＬＯＫＯまたは５−ＬＯ−／−）由来の骨折治癒の組織形態計測データを図解する。左のパネルは、新規に形成された骨（石灰化組織）である骨折仮骨領域の比率を示し、右のパネルは、軟骨である骨折仮骨領域の比率を示す。
【図６】図６は、ＣＯＸ−２ノックアウトマウスで骨折治癒が劇的に妨害され、骨発生（新規の骨の形成）の欠如によって治癒が不十分になることを示す。図６Ａは、Ｘ線由来のデータを示し、図６Ｂおよび６Ｃは、機能的ＣＯＸ−１遺伝子を欠く１４日齢のマウスにおける大腿骨骨折の組織学的サンプルを示す。図６Ｄは、Ｘ線由来のデータを示し、図６Ｅおよび６Ｆは、機能的ＣＯＸ−２遺伝子を欠く１４日齢のマウスにおける大腿骨骨折の組織学的サンプルを示す。
【図７】図７は、骨発生が５−ＬＯインヒビターで処置したラットで促進され、その結果、非処置ラットよりも骨折治癒が早いことを図解する。
【図８−１】図８は、骨発生が２つの異なる５−ＬＯインヒビターで処置したラットで促進され、その結果、非処置ラットよりも骨折治癒が早いことを図解する。図８Ａ、８Ｂ、および８Ｃは、ビヒクルコントロール（８Ａ）、ＮＤＧＡ（８Ｂ）、およびＡＡ−８６１（８Ｃ）のＸ線由来のデータを示す。
【図８−２】図８は、骨発生が２つの異なる５−ＬＯインヒビターで処置したラットで促進され、その結果、非処置ラットよりも骨折治癒が早いことを図解する。図８Ｄは、５−ＬＯ阻害によって骨折仮骨ピークトルクが増加することを示すグラフである。
【図１】
2009504776.tif 000020
【図２】
2009504776.tif 000021
【図３】
2009504776.tif 000022
【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
2009504776.tif 000026
【図６Ｃ】
2009504776.tif 000027
【図６Ｄ】
2009504776.tif 000028
【図６Ｅ】
2009504776.tif 000029
【図６Ｆ】
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【図７】
2009504776.tif 000031
【図８−１】
2009504776.tif 000032
【図８−２】
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【手続補正書】
【提出日】平成20年5月9日(2008.5.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療を必要とする哺乳動物被験体を治療するために骨発生を促進するための方法であって、該被験体に治療有効量の５−リポキシゲナーゼ活性を減少させる化合物を投与する工程を含み、ここで、該５−リポキシゲナーゼ活性の減少によって骨発生が促進され、それにより、骨折、骨損傷、および骨形成の誘導によって治療される状態からなる群から選択される状態が治療されることを含む、方法。
【請求項２】
前記状態が骨折である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記骨折が、非骨粗鬆症性骨折（ｎｏｎ−ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｔｉｃ  ｆｒａｃｔｕｒｅ）、骨粗鬆症性骨折（ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｔｉｃ  ｆｒａｃｔｕｒｅ），先天性疾患に関連する骨折，後天性疾患に関連する骨折，または骨切り術による骨折（ｏｓｔｅｏｔｏｍｉｃ  ｆｒａｃｔｕｒｅ）である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記骨折が非骨粗鬆症性骨折である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記骨折が骨粗鬆症性骨折である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記骨折が骨切り術による骨折である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記状態が、骨形成の誘導によって治療される状態である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記状態が、脊椎固定または関節固定によって治療される状態である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記状態が骨損傷である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記投与がｉｎ  ｖｉｖｏである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記投与がｅｘ  ｖｉｖｏである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記化合物が５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）の阻害によって５−リポキシゲナーゼ活性を減少させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記化合物が小分子を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記小分子が、３−［１−（４−クロロベンジル）−３−ｔ−ブチル−チオ−５−イソプロピルインドール−２−イル］−２，２−ジメチルプロパン酸（ＭＫ８８６）、３−（１−（４−クロロベンジル）−３−（１−ブチル−チオ）−５−（キノリン−２−イル−メトキシ）−インドール−２−イル）−２，２−ジメチルプロパン酸）（ＭＫ−５９１）、ノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）、２−（１２−ヒドロキシドデカ−５，１０−ジイニル）−３，５，６−トリメチル−１，４−ベンゾキノン（ＡＡ８６１）、（Ｎ−（１−ベンゾ（ｂ）チエン−２−イルエチル）−Ｎ−ヒドロキシ尿素）（ジロートン）、マソプロコール、テニダップ、フロブフェン、ロナパレン、タゴリジン（ｔａｇｏｒｉｚｉｎｅ）、ＡＡ−８６１、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−１２１７９８、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７６７４５、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７８７７３、［（Ｒ）（＋）Ｎ’−［［５−（４−フルオロフェノキシ）フラン−２−イル］−１−メチル−２−プロピニル］−Ｎ−ヒドロキシ尿素（Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７９１７５）、Ａｂｂｏｔｔ  ＡＢＴ  ７６１、Ｄａｉｎｉｐｐｏｎ  ＡＬ−３２６４、Ｂａｙｅｒ  Ｂａｙ−ｘ−１００５、Ｂｉｏｆｏｒ  ＢＦ−３８９、ブナプロラスト、Ｃｙｔｏｍｅｄ  ＣＭＩ−３９２、Ｔａｋｅｄａ  ＣＶ−６５０４、リン酸エナザドレム、Ｌｅｏ  Ｄｅｎｍａｒｋ  ＥＴＨ−６１５、塩酸フレゼラスチン、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ−６６３５３６、Ｍｅｒｃｋｌｅ  ＭＬ−３０００、３Ｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｒ−８４０、リロピロックス、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ  ＳＣＨ−４０１２０、テポキサリン、リナゾラスト（ＴＭＫ−６８８）、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−２１３８、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  ＢＵ−４６０１Ａ、カルバゾマイシンＣ、ラグナマイシン、Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  ＢＷ−７０Ｃ、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２６５２９、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＣＩ  １００４、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＰＤ−１３６００５、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＰＤ−１４５２４６、Ｅｌｓａｉ  Ｅ−３０４０、Ｆｕｊｉｒｅｂｉｏ  Ｆ−１３２２、Ｆｕｊｉｓａｗａ  ＦＲ−１１０３０２、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ−６９９３３３、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ−７３９０１０、Ｌｉｌｌｙ  ＬＹ−２６９４１５、Ｌｉｌｌｙ  ＬＹ−１７８００２、Ｈｏｅｃｈｓｔ  Ｒｏｕｓｓｅｌ  Ｐ−８８９２、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ＳＢ−２０２２３５、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＡＹ−１２１５２０、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＡＹ−１２５００７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−７７１７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２１６８００、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２３０４８７、１，２−ジヒドロ−ｎ−（２−チアゾリル）−１−オキソピロロ（３，２，１−ｋｌ）フェノチアジン−１−カルボキシアミド、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−６５２６０、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−６９４１２、Ａｂｂｏｔｔ−６３１６２、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＡＨＲ−５３３３、Ｂａｙｅｒ  Ｂａｙ−ｑ−１５３１、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  ＢＩ−Ｌ−３５７、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  ＢＩ−Ｌ−９３ＢＳ、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  ＢＩＬ  ２２６ＸＸ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  ＢＭＹ−３００９４、カルバゾマイシンＢ、Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  ＢＷ−Ｂ２１８Ｃ、Ｃｈａｕｖｉｎ  ＣＢＳ−１１１４、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２１５９５、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２２７４５、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２３８８５、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ  ２４８９１、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−８５１５、Ｃｈｉｅｓｉ  ＣＨＦ−１９０９、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＣＩ−９８６、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＣＩ９８７、シルシリオール、ドセベノン、Ｅｉｓａｉ  Ｅ−５１１０、Ｅｉｓａｉ  Ｅ−６０８０、エノフェラスト、エポカルバゾリン−Ａ、エプロバフェン（ｅｐｒｏｖａｆｅｎ）、エバンダミン（ｅｖａｎｄａｍｉｎｅ）、Ｆｉｓｏｎｓ  ＦＰＬ  ６２０６４、Ｚｅｎｅｃａ  ＩＣＩ−２１１９６５、Ｚｅｎｅｃａ  ＩＣＩ−２１６８００、Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  ＫＦ−８９４０、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６５１３９２、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６５１８９６、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６５２３４３、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６５６２２４、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６７０６３０、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６７４６３６、Ｌｉｌｌｙ  ＬＹ−２３３５６９、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  ＭＫ−５９１、Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ  Ｌ−６５５２４０、ニトロソキサシン−Ａ、Ｏｎｏ  ＯＮＯ−５３４９、Ｏｎｏ  ＯＮＯ−ＬＰ−２１９、Ｏｎｏ  ＯＮＯ−ＬＰ−２６９、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ  ＰＤ−１２７４４３、Ｐｕｒｄｕｅ  Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ  ＰＦ−５９０１、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ  Ｒｅｖ−５３６７、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ  ＲＧ−５９０１−Ａ、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ  ＲＧ−６８６６、Ｒｏｕｓｓｅｌ−Ｕｃｌａｆ  ＲＵ−４６０５７、Ｓｅａｒｌｅ  ＳＣ−４１６６１Ａ、Ｓｅａｒｌｅ  ＳＣ−４５６６２、Ｓａｎｄｏｚ  ＳＤＺ−２１０−６１０、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ＳＫ＆Ｆ−１０４３５１、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ＳＫ＆Ｆ−１０４４９３、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  ＳＫ＆Ｆ−１０５８０９、Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏ  ＳＬ−８１−０４３３、Ｔｅｉｊｉｎ  ＴＥＩ−８００５、Ｔｅｒｕｍｏ  ＴＭＫ−７７７、Ｔｅｒｕｍｏ  ＴＭＫ−７８１、Ｔｅｒｕｍｏ  ＴＭＫ−７８９、Ｔｅｒｕｍｏ  ＴＭＫ−９１９、Ｔｅｒｕｍｏ  ＴＭＫ−９９２、Ｔｅｉｋｏｋｕ  Ｈｏｒｍｏｎｅ  ＴＺＩ−４１１２７、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＡＹ−１２０７３９、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＹ−４７２８８、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＹ−４８２５２、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｏｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＷＹ−５０２９５、Ｙｏｓｈｉｔｏｍｉ  Ｙ−１９４３２、４−｛３−［４−（２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−１−イル）フェニルチオ］｝フェニル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボキシアミド、エスクレチン、フェニドン、ＢＩ−Ｌ−２３９、５，８，１１−エイコサトリイン酸（ＥＴＩ）、５，８，���１，１４−エイコサテトライン酸（ＥＴＹＡ）、シンナミル−３，４−ジヒドロキシ−α−シアノシンナマート、クルクミン、エスクレイチン（ｅｓｃｕｌｅｉｔｉｎ）、ゴッシポール、カフェー酸、バイカレイン、７，７−ジメチルエイコサドレノン酸（７，７−ｄｉｍｅｔｈｙｌｅｉｃｏｓａｄｒｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ）（ＤＥＤＡ）、Ｌｙ３１１７２７、ブロモエノールラクトン、メチルアラキドニルフルオロホスホナート、メチルｙ−リノレニルフルオロホスホナート、オレオキシエチルホスホリルコリン、ＡＡＣＯＣＦ３、ｎ−（ｐ−アミルシンナモイル）アントラニル酸、メパクリン、キナクリン、アタブリン、パラブロモフェナシルブロミド（ｐａｒａｂｒｏｍｏｐｈｅｎａｃｙｌｂｒｏｍｉｄｅ）、アリストロキン酸、コルチゾン、Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  ４８０８４８、Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  ６５９０３２、Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  ６７７１１６、ＢＭＳ−１８１１６２、ＭＪ３３、およびＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ＭＬＮ９７７からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記小分子が、マソプロコール、テニダップ、（Ｎ−（１−ベンゾ（ｂ）チエン−２−イルエチル）−Ｎ−ヒドロキシ尿素）（ジロートン）、フロブフェン、ロナパレン、タゴリジン（ｔａｇｏｒｉｚｉｎｅ）、ＡＡ−８６１、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−１２１７９８、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７６７４５、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７８７７３、［（Ｒ）（＋）Ｎ’−［［５−（４−フルオロフェノキシ）フラン−２−イル］−１−メチル−２−プロピニル］−Ｎ−ヒドロキシ尿素（Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７９１７５）、Ａｂｂｏｔｔ  ＡＢＴ  ７６１、Ｄａｉｎｉｐｐｏｎ  ＡＬ−３２６４、Ｂａｙｅｒ  Ｂａｙ−ｘ−１００５、Ｂｉｏｆｏｒ  ＢＦ−３８９、ブナプロラスト、Ｃｙｔｏｍｅｄ  ＣＭＩ−３９２、Ｔａｋｅｄａ  ＣＶ−６５０４、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２６５２９、リン酸エナザドレム、Ｌｅｏ  Ｄｅｎｍａｒｋ  ＥＴＨ−６１５、塩酸フレゼラスチン、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ−６６３５３６、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ−６９９３３３、Ｍｅｒｃｋｌｅ  ＭＬ−３０００，３Ｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｒ−８４０、リロピロックス、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ  ＳＣＨ−４０１２０、テポキサリン、リナゾラスト（ＴＭＫ−６８８）、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−７７１７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２１６８００、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２３０４８７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−２１３８、およびＮＤＧＡ（非ジヒドログアイアレチン酸）からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記小分子が、テニダップ、ジロートン、フロブフェン、ロナパレン、タゴリジン、ＡＡ−８６１、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−１２１７９８、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７６７４５、Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７８７７３、［（Ｒ）（＋）Ｎ’−［［５−（４−フルオロフェノキシ）フラン−２−イル］−１−メチル−２−プロピニル］−Ｎ−ヒドロキシ尿素（Ａｂｂｏｔｔ  Ａ−７９１７５）、Ａｂｂｏｔｔ  ＡＢＴ  ７６１、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ  ＣＧＳ−２６５２９、Ｂｉｏｆｏｒ  ＢＦ−３８９、Ｃｙｔｏｍｅｄ．ＣＭＩ−３９２、Ｌｅｏ  Ｄｅｎｍａｒｋ  ＥＴＨ−６１５、Ｍｅｒｃｋ  Ｆｒｏｓｓｔ  Ｌ  ６９９３３３、Ｍｅｒｃｋｌｅ  ＭＬ−３０００、３Ｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｒ−８４０、リナゾラスト（ＴＭＫ−６８８）、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−７７１７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２１６８００、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＭ−２３０４８７、Ｚｅｎｅｃａ  ＺＤ−２１３８、およびＮＤＧＡ（非ジヒドログアイアレチン酸）からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記化合物が、
【化１】
2009504776.tif 000034
からなる群から選択される配列を含む核酸を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記化合物が、
【化２】
2009504776.tif 000035
からなる群から選択される配列を含む核酸を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
薬学的有効量のＣＯＸ−１活性を減少させる化合物を前記被験体に投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記化合物が、ＳＣ−５６０、ＦＲ１２２０４７、サリチル酸バレロイル（Ｖａｌｅｒｏｙｌ  ｓａｌｉｃｙｌａｔｅ）、アスピリン、デキシケトプロフェン（Ｄｅｘｋｅｔｏｐｒｏｆｅｎｅ）、ケテロラック（Ｋｅｔｅｒｏｌａｃ）、フルルビプロフェン、およびスプロフェンからなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
薬学的有効量のＣＯＸ−２活性を増加させる化合物を前記被験体に投与する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記化合物が、プロスタグランジンＥ２、ブタプロスト、スルプロストン、ＣＰ−５３６、７４５−０１、ＣＰ−０４３、３０５−０２、ＣＰ−０４４、５１９−０２、ＣＰ４３２、ＯＮＯ−４８１９、ＣＰ−５３３、５３６、プロスタグランジンＦ２α、ビマトプロスト、クロプロステノール、ラタノプロスト、タフルプロスト、骨形態発生タンパク質−２（ＢＭＰ２）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、インターロイキン−１α、インターロイキン−１β、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、トランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、副甲状腺ホルモン関連ペプチド（ＰＴＨｒＰ）、およびテラパラチド（ｔｅｒａｐａｒａｔｉｄｅ）からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記被験体のＣＯＸ−２活性を増加させるのに十分な量の、超音波療法を該被験体に施すか、パルス電磁場を該被験体に曝露する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2009504776000001.app
【国際調査報告】
2009504776.tif 000036
2009504776.tif 000037