(57)【要約】  1以上の有糸分裂キネシンの活性をモジュレートすることによって細胞の増殖性疾患および障害を処置するために有用な化合物を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式I :
【化１】
2009514875.tif 000073
[式中
R1は、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され;
Xは、-(CR10R11)m、-(CR10R11)nC(R13)=C(R14)、-O(CR10R11)p-、およびNR8-から選択され;
Yは、XとZを連結する直接結合、-C(O)-、および-C(=N-R9)-から選択され;
Zは、-(CR10R11)q、-(CR10R11)rC(R13)=C(R14)、-O(CR10R11)s-、およびNR8-から選択され;
R8は、-CO-R7、水素、アルコキシ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、スルホニル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され;
R9は、水素、アルコキシ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、シアノ、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され;
R10およびR11は、独立して、水素、ヒドロキシ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、または場合により置換されているシクロアルキルから選択され;
R13およびR14は、独立して、水素、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、または場合により置換されているシクロアルキルから選択され;
mは、0、1、および2から選択され;
nは0および1から選択され;
pは、0、1、および2から選択され;
qは、0、1、および2から選択され;
rは0および1から選択され;
sは、0、1、および2から選択され;
R2は、水素、ヒドロキシ、場合により置換されているアルコキシ、場合により置換されているアミノ、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、および場合により置換されているアルキルから選択され;
R3およびR4は、独立して、水素、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているアルコキシカルボニル、場合により置換されているアミノ、アミノカルボニル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、および場合により置換されているシクロアルキルから選択され; または
R2およびR4は、それらが結合している炭素と一緒になって、場合により置換されている3〜7員環を形成し、該環は、場合により、O、N、およびSから選択される1、2、または3個のヘテロ原子を含み; または
R2およびR3は、それらが結合している炭素と一緒になって、場合により置換されている3〜7員環を形成し、該環は、場合により、O、N、およびSから選択される1、2、または3個のヘテロ原子を含み; および
R7は、場合により置換されている低級アルキル、場合により置換されているアリール、ヒドロキシ、場合により置換されているアミノ、場合により置換されているアラルコキシ、または場合により置換されているアルコキシから選択され、
ただし、Yが-C(O)-であり、かつZがNR8である場合、Xは-(CR10R11)m (式中mは0である)ではないことを条件とし; およびYがXとZを連結する直接結合であり、かつXが-(CR10R11)m (式中mは0である)である場合、Zは-(CR10R11)q (式中qは0である)ではないことを条件とする]
の化合物および製薬的に許容されるその塩、溶媒和物、キレート、非共有結合性複合体、プロドラッグ、および混合物から選択される少なくとも1つの化学物質。
【請求項２】
R1が、場合により置換されているアリールである、請求項１の少なくとも1つの化学物質。
【請求項３】
R1が、場合により置換されているフェニルである、請求項２の少なくとも1つの化学物質。
【請求項４】
R1が、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているアルキル、スルホニル、ハロ、場合により置換されているアミノ、スルファニル、場合により置換されているアルコキシ、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、アシル、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから独立して選択される1、2または3個の基で置換されているフェニルである、請求項３の少なくとも1つの化学物質。
【請求項５】
R1が、3-ハロ-4-イソプロポキシ-フェニル、3-シアノ-4-イソプロポキシ-フェニル、3-ハロ-4-((R)-1,1,1-トリフルオロプロパン-2-イルオキシ)フェニル、3-シアノ-4-((R)-1,1,1-トリフルオロプロパン-2-イルオキシ)フェニル、3-ハロ-4-イソプロピルアミノ-フェニル、3-シアノ-4-イソプロピルアミノ-フェニル、3-ハロ-4-((R)-1,1,1-トリフルオロプロパン-2-イルアミノ)フェニル、および3-シアノ-4-((R)-1,1,1-トリフルオロプロパン-2-イルアミノ)フェニルから選択される、請求項４の少なくとも1つの化学物質。
【請求項６】
R2が、水素、場合により置換されているアルコキシ、および場合により置換されているアミノから選択される、請求項１〜５のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項７】
R2が水素である、請求項６の少なくとも1つの化学物質。
【請求項８】
式Iの化合物が以下の式II :
【化２】
2009514875.tif 000074
[式中
R5は、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されている低級アルキル、ニトロ、シアノ、水素、スルホニル、およびハロから選択され;
R6は、水素、ハロ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているアミノ、スルファニル、場合により置換されているアルコキシ、シクロアルキルオキシ、場合により置換されているヘテロシクロアルキルオキシ、場合により置換されているアリールオキシ、および場合により置換されているヘテロアリールオキシから選択され; および
R7は、水素、アシル、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているアルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、場合により置換されているアミノ、スルホニル、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択される]
の化合物から選択される、請求項１の少なくとも1つの化学物質。
【請求項９】
R3が、水素、アミノカルボニル、場合により置換されているアミノ、場合により置換されている低級アルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、および場合により置換されているヘテロアリールから選択される、請求項１〜８のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項１０】
R3が、カルバモイル、(モノ低級アルキル)カルバモイル、場合により置換されているアミノ、および場合により置換されている低級アルキルから選択される、請求項９の少なくとも1つの化学物質。
【請求項１１】
式IIの化合物が以下の式III :
【化３】
2009514875.tif 000075
の化合物から選択される、請求項８の少なくとも1つの化学物質。
【請求項１２】
式IIの化合物が以下の式IV :
【化４】
2009514875.tif 000076
[式中
R19は水素および場合により置換されている低級アルキルから選択され; および
R20は、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアルコキシ、および場合により置換されているアミノから選択される]
の化合物から選択される、請求項８の少なくとも1つの化学物質。
【請求項１３】
R19が水素および低級アルキルから選択される、請求項１２の少なくとも1つの化学物質。
【請求項１４】
R19が水素である、請求項１３の少なくとも1つの化学物質。
【請求項１５】
R20が、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているアミノ、および場合により置換されているヘテロシクロアルキルから選択される、請求項１２〜１４のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項１６】
R20が、(ジメチルアミノ)メチル、アゼチジン-1-イルメチル、ピロリジン-1-イルメチル、(メチルアミノ)メチル、アミノメチル、アミノ、メチルアミノ、およびジメチルアミノから選択される、請求項１５の少なくとも1つの化学物質。
【請求項１７】
R4が、場合により置換されている低級アルキルおよび場合により置換されているアリールから選択される、請求項１〜１６のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項１８】
R4がフェニルおよびベンジルから選択され、該各基が、場合により置換されているヘテロアリール基で置換されており、かつ該フェニルおよびベンジルの各基が、場合により、ハロ、ヒドロキシ、および低級アルキルから選択される基でさらに置換されている、請求項１７の少なくとも1つの化学物質。
【請求項１９】
R4がフェニルおよびベンジルから選択され、該各基が、
7,8-ジヒドロ-イミダゾ[1,2-c][1,3]オキサジン-2-イル、
3a,7a-ジヒドロ-1H-ベンゾイミダゾール-2-イル、
イミダゾ[2,1-b]オキサゾール-6-イル、
オキサゾール-4-イル、
5,6,7,8-テトラヒドロ-イミダゾ[1,2-a]ピリジン-2-イル、
1H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル、
2,3-ジヒドロ-イミダゾール-4-イル、
1H-イミダゾール-2-イル、
イミダゾ[1,2-a]ピリジン-2-イル、
チアゾール-2-イル、
チアゾール-4-イル、
ピラゾール-3-イル、および
1H-イミダゾール-4-イル, l
から選択されるヘテロアリール基で置換されており、該各ヘテロアリール基が、場合により置換されている低級アルキル、ハロ、アシル、スルホニル、シアノ、ニトロ、場合により置換されているアミノ、および場合により置換されているヘテロアリールから選択される1、2、または3個の基で場合により置換されている、請求項１８の少なくとも1つの化学物質。
【請求項２０】
式IIの化合物が以下の式V :
【化５】
2009514875.tif 000077
[式中
tは、0、1、および2から選択され;
R17およびR18は、独立して、水素、ヒドロキシ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、または場合により置換されているシクロアルキルから選択され;
R16は、場合により置換されているヘテロアリールであり; および
R15は、水素、ハロ、ヒドロキシ、および低級アルキルから選択される]
の化合物から選択される、請求項８の少なくとも1つの化学物質。
【請求項２１】
R3が、水素、アミノカルボニル、場合により置換されているアミノ、場合により置換されている低級アルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、および場合により置換されているヘテロアリールから選択される、請求項２０の少なくとも1つの化学物質。
【請求項２２】
R3が、カルバモイル、(モノ低級アルキル)カルバモイル、場合により置換されているアミノ、および場合により置換されている低級アルキルから選択される、請求項２１の少なくとも1つの化学物質。
【請求項２３】
R16が、
7,8-ジヒドロ-イミダゾ[1,2-c][1,3]オキサジン-2-イル、
3a,7a-ジヒドロ-1H-ベンゾイミダゾール-2-イル、
イミダゾ[2,1-b]オキサゾール-6-イル、
オキサゾール-4-イル、
5,6,7,8-テトラヒドロ-イミダゾ[1,2-a]ピリジン-2-イル、
1H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル、
2,3-ジヒドロ-イミダゾール-4-イル、
1H-イミダゾール-2-イル、
イミダゾ[1,2-a]ピリジン-2-イル、
チアゾール-2-イル、
チアゾール-4-イル、
ピラゾール-3-イル、および
1H-イミダゾール-4-イル
から選択され、該各基が、場合により置換されている低級アルキル、ハロ、アシル、スルホニル、シアノ、ニトロ、場合により置換されているアミノ、および場合により置換されているヘテロアリールから選択される1、2、または3個の基で場合により置換されている、請求項２０〜２２のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項２４】
R16が、
1H-イミダゾール-2-イル、
イミダゾ[1,2-a]ピリジン-2-イル; および
1H-イミダゾール-4-イル
から選択され、該各基が、場合により置換されている低級アルキル、ハロ、およびアシルから選択される1または2個の基で場合により置換されている、請求項２３の少なくとも1つの化学物質。
【請求項２５】
R15が水素である、請求項２０〜２５のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項２６】
R5が、水素、シアノ、ニトロ、またはハロである、請求項８〜２５のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項２７】
R5がクロロまたはシアノである、請求項２６の少なくとも1つの化学物質。
【請求項２８】
R6が、場合により置換されている低級アルコキシ、場合により置換されている低級アルキル、または場合により置換されているアミノである、請求項８〜２７のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項２９】
R6が、低級アルコキシ、2,2,2-トリフルオロ-1-メチル-エトキシ、低級アルキルアミノまたは2,2,2-トリフルオロ-1-メチル-エチルアミノである、請求項２８の少なくとも1つの化学物質。
【請求項３０】
R6が、プロポキシ、2,2,2-トリフルオロ-1-メチル-エトキシ、プロピルアミノ、または2,2,2-トリフルオロ-1-メチル-エチルアミノである、請求項２９の少なくとも1つの化学物質。
【請求項３１】
R7が水素である、請求項８〜３０のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項３２】
Xが-(CR10R11)mであり、かつmが0である、請求項１〜３１のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項３３】
Xが-(CR10R11)mであり、かつmが1である、請求項１〜３１のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項３４】
Xが-(CR10R11)mであり、かつmが2である、請求項１〜３１のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項３５】
Xが-(CR10R11)nC(R13)=C(R14)-であり、かつnが0である、請求項１〜３１のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項３６】
XがNR8であり、かつR8が水素である、請求項１〜３１のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項３７】
Xが-(CR10R11)mであり、R10が水素であり、R11がヒドロキシであり、かつmが1である、請求項１〜３１のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項３８】
Xが-(CHOH)CH2-である、請求項１〜３１のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項３９】
Yが-C(O)-である、請求項１〜３８のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項４０】
Yが、XとZを連結する直接結合である、請求項１〜３８のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項４１】
ZがNR8である、請求項１〜４０のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項４２】
Zが-(CR10R11)qであり、かつqが0である、請求項１〜４０のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項４３】
Zが-O(CR10R11)sであり、かつsが0である、請求項１〜４０のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項４４】
Zが-O(CR10R11)sであり、かつsが1である、請求項１〜４０のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項４５】
Zが-O(CR10R11)sであり、かつsが2である、請求項１〜４０のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項４６】
-X-Y-Z-が、-CH2NR8-、-CH2C(O)NR8-、-NR8C(O)NR8-、-CH2CH2C(O)NR8-、-CH=CH-、-CH2-、-CH2CH2-、-CH(OH)-CH2-NR8-、-NR8C(O)-、-C(O)O-、-C(O)OCH2CH2-、-C(O)CH2-、および-CH(OH)-CH2-から選択される、請求項１〜３１のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質。
【請求項４７】
式Iの化合物が以下の化合物から選択される、請求項１の少なくとも1つの化学物質:
(3E)(2R)-4-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]-N-メチル-2-[(4-フェニルフェニル)メチル]ブタ-3-エナミド;
2-アミノ-1-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]エタン-1-オール;
2-アミノ-N-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]-3-[4-(フェニルメトキシ)フェニル]プロパンアミド;
N-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]-2-[(メチルアミノ)カルボニルアミノ]-3-[4-(フェニルメトキシ)フェニル]プロパンアミド;
1-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]-2-({[4-(フェニルメトキシ)フェニル]メチル}アミノ)エタン-1-オール;
1-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]-2-((2-ヒドロキシエチル){[4-(フェニルメトキシ)フェニル]メチル}アミノ)エタン-1-オール;
2-{[(ジメチルアミノ)スルホニル]アミノ}-N-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]-3-[4-(フェニルメトキシ)フェニル]プロパンアミド;
(1S)-1-({4-[2-(tert-ブチル)-1-メチルイミダゾール-4-イル]フェニル}メチル)-3-ヒドロキシプロピル3-シアノ-4-(メチルエトキシ)ベンゾエート;
(1S)-1-({4-[2-(tert-ブチル)-1-メチルイミダゾール-4-イル]フェニル}メチル)-3-ヒドロキシプロピル3-クロロ-4-(メチルエトキシ)ベンゾエート;
(3S)-3-(アセチルアミノ)-4-{4-[2-(tert-ブチル)イミダゾール-4-イル]フェニル}ブチル3-シアノ-4-(メチルエトキシ)ベンゾエート;
(3S)-3-({[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]メチル}アミノ)-4-{4-[2-(1-ヒドロキシ-イソプロピル)-1-メチルイミダゾール-4-イル]フェニル}ブタン-1-オール;
(4E)(3S)-3-({4-[2-(tert-ブチル)-1-メチルイミダゾール-4-イル]フェニル}メチル)-5-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]ペンタ-4-エン-1-オール;
(3S)-4-{4-[2-(tert-ブチル)-1-メチルイミダゾール-4-イル]フェニル}-3-({[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]メチル}アミノ)ブタン酸;
(3S)-3-({4-[2-(tert-ブチル)-1-メチルイミダゾール-4-イル]フェニル}メチル)-1-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]-5-ヒドロキシペンタン-1-オン; および
(3S)-3-({4-[2-(tert-ブチル)-1-メチルイミダゾール-4-イル]フェニル}メチル)-1-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]ペンタン-1,5-ジオール。
【請求項４８】
医薬賦形剤および、請求項１〜４７のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質を含む組成物。
【請求項４９】
式Iの化合物以外の化学療法剤をさらに含む、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
タキサン、ビンカアルカロイド、またはトポイソメラーゼIインヒビターをさらに含む、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
CENP-Eキネシン活性をモジュレートする方法であって、請求項１〜４７のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質の有効量と該キネシンを接触させるステップを含む方法。
【請求項５２】
CENP-Eを阻害する方法であって、請求項１〜４７のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質の有効量と該キネシンを接触させるステップを含む方法。
【請求項５３】
細胞増殖性疾患を処置するための方法であって、その必要がある被験体に、請求項１〜４７のいずれか一項の少なくとも1つの化学物質を投与するステップを含む前記方法。
【請求項５４】
細胞増殖性疾患を処置するための方法であって、その必要がある被験体に、請求項４８〜５０のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含む前記方法。
【請求項５５】
疾患が、癌、過形成、再狭窄、心肥大、免疫不全、および炎症からなる群から選択される、請求項５３または５４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、2005年11月2日に提出された米国仮特許出願第60/733,040号の利益を主張する。該仮特許出願は参照によりここに組み入れられる。
【０００２】
本発明は、1以上の有糸分裂キネシンのインヒビターであり、細胞の増殖性疾患、例えば癌、過形成、再狭窄、心肥大、免疫不全、真菌障害、および炎症の処置に有用な化学物質に関する。
【背景技術】
【０００３】
癌の処置に使用される治療物質には、タキサンおよびビンカアルカロイドがあり、それらは微小管に作用する。微小管は紡錐体の主要な構造要素である。紡錐体は、細胞分裂から生じる2つの各娘細胞への、複製コピーのゲノムの分配を担う。前記薬物が紡錐体を破壊すると、癌細胞の分裂が阻害され、癌細胞死が誘発されると推定される。しかし、微小管は他のタイプの細胞構造も形成する。該細胞構造には、神経突起（nerve processes）中の細胞内輸送のための経路が含まれる。前記物質は紡錐体を特異的に標的にするわけではないため、副作用を有し、該副作用がそれらの有用性を制限する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
癌の処置に使用される物質の特異性を改善することはかなり興味深いことである。前記物質の投与に伴う副作用を低減できれば実現される治療上の利益ゆえである。従来、癌の処置に関する劇的な改善は新規機構によって作用する治療物質の特定と関連していた。その例には、タキサンだけでなく、カンプトセシンクラスのトポイソメラーゼIインヒビターも含まれる。これらの両展望から、有糸分裂キネシンは新規抗癌剤の魅力的な標的である。
【０００５】
有糸分裂キネシンは紡錐体の組立ておよび機能に必須の酵素であるが、一般に、例えば神経突起中の、他の微小管構造の部分ではない。有糸分裂キネシンは有糸分裂の全段階で必須の役割を果たす。前記酵素は、ATPの加水分解によって放出されたエネルギーを、細胞貨物の、微小管に沿った指向性の移動を駆動する機械的な力に変換する「分子モーター」である。この仕事に十分な触媒ドメインは、約340アミノ酸からなるコンパクトな構造である。有糸分裂中、キネシンは微小管を組織して二極性構造にする。該構造が紡錐体である。キネシンは、紡錘体微小管に沿った染色体の移動、ならびに有糸分裂の特定段階と関連している紡錐体の構造変化を媒介する。有糸分裂キネシンの機能を実験的に動揺させると、紡錐体の形成異常または機能障害が生じ、細胞周期停止および細胞死が生じることが多い。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
以下の式I :
【化１】
2009514875.tif 000002
【０００７】
の化合物および製薬的に許容されるその塩、溶媒和物、キレート、非共有結合性複合体、プロドラッグ、および混合物から選択される少なくとも1つの化学物質を提供する。式中、
R1は、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され;
Xは、-(CR10R11)m、-(CR10R11)nC(R13)=C(R14)、-O(CR10R11)p-、およびNR8-から選択され;
Yは、XとZを連結する直接結合、-C(O)-、および-C(=N-R9)-から選択され;
Zは、-(CR10R11)q、-(CR10R11)rC(R13)=C(R14)、-O(CR10R11)s-、およびNR8-から選択され;
R8は、-CO-R7、水素、アルコキシ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、スルホニル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され;
R9は、水素、アルコキシ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、シアノ、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され;
R10およびR11は、独立して、水素、ヒドロキシ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、または場合により置換されているシクロアルキルから選択され;
R13およびR14は、独立して、水素、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、または場合により置換されているシクロアルキルから選択され;
mは、0、1、および2から選択され;
nは0および1から選択され;
pは、0、1、および2から選択され;
qは、0、1、および2から選択され;
rは0および1から選択され;
sは、0、1、および2から選択され;
R2は、水素、ヒドロキシ、場合により置換されているアルコキシ、場合により置換されているアミノ、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、および場合により置換されているアルキルから選択され;
R3およびR4は、独立して、水素、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているアルコキシカルボニル、場合により置換されているアミノ、アミノカルボニル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、および場合により置換されているシクロアルキルから選択され; または
R2およびR4は、それらが結合している炭素と一緒になって、場合により置換されている3〜7員環を形成し、該環は、場合により、O、N、およびSから選択される1、2、または3個のヘテロ原子を含み; または
R2およびR3は、それらが結合している炭素と一緒になって、場合により置換されている3〜7員環を形成し、該環は、場合により、O、N、およびSから選択される1、2、または3個のヘテロ原子を含み; および
R7は、場合により置換されている低級アルキル、場合により置換されているアリール、ヒドロキシ、場合により置換されているアミノ、場合により置換されているアラルコキシ(aralkoxy)、または場合により置換されているアルコキシから選択され、
ただし、Yが-C(O)-であり、かつZがNR8である場合、Xは-(CR10R11)m (式中mは0である)ではないことを条件とし; およびYがXとZを連結する直接結合であり、かつXが-(CR10R11)m (式中mは0である)である場合、Zは-(CR10R11)q (式中qは0である)ではないことを条件とする。
【０００８】
さらに、医薬賦形剤および本明細書中に記載の少なくとも1つの化学物質を含む組成物を提供する。
【０００９】
さらに、CENP-Eキネシン活性をモジュレートする方法であって、該キネシンを本明細書中に記載の少なくとも1つの化学物質の有効量と接触させるステップを含む方法を提供する。
【００１０】
さらに、CENP-Eを阻害する方法であって、該キネシンを本明細書中に記載の少なくとも1つの化学物質の有効量と接触させるステップを含む方法を提供する。
【００１１】
さらに、細胞の増殖性疾患を処置(治療)するための方法であって、その必要がある被験体に本明細書中に記載の少なくとも1つの化学物質を投与するステップを含む方法を提供する。
【００１２】
さらに、細胞の増殖性疾患を処置するための方法であって、医薬賦形剤および本明細書中に記載の少なくとも1つの化学物質を含む組成物を、その必要がある被験体に投与するステップを含む方法を提供する。
【００１３】
さらに、細胞の増殖性疾患を処置するための薬物の製造における、本明細書中に記載の少なくとも1つの化学物質の使用を提供する。
【００１４】
さらに、CENP-Eキネシン活性と関連している障害を処置するための薬物を製造するための、本明細書中に記載の少なくとも1つの化学物質の使用を提供する。
【００１５】
本明細書で使用される以下の単語および句は、それらが使用される文脈によって特に指定される場合を除き、概して、以下に記載の意味を有するものとする。
【００１６】
本明細書中で使用されるように、任意の変数が化学式中で2回以上登場する場合、各登場に関するその定義は他の各登場時のその定義と無関係である。特許における「a」および「the」についての通常の意味にしたがって、例えば「a」キナーゼまたは「the」キナーゼへの言及は1以上のキナーゼを含む。
【００１７】
式Iはそのすべての下位の式(subformulae)を含む。例えば式Iは式IIの化合物を含む。
【００１８】
2つの文字または記号の間ではないダッシュ(「-」)は、置換基の結合点を示すために使用される。例えば、-CONH2は炭素原子を介して結合している。
【００１９】
「場合による」または「場合により」とは、以後に記載される事象または状況が存在してもしなくてもよく、かつ該説明が、該事象または状況が存在する場合およびそれが存在しない場合を含むことを意味する。例えば、「場合により置換されているアルキル」は、下記定義の「アルキル」および「置換されているアルキル」の両者を包含する。1以上の置換基を含有する任意の基に関して、そのような基が、立体的に非現実的であり、合成的に不可能であり、かつ/または本質的に不安定である任意の置換または置換パターンを導入しないものとすることが当業者に理解される。
【００２０】
「アルキル」は、指定数の炭素原子、通常1〜20炭素原子、例えば1〜8炭素原子、例えば1〜6炭素原子を有する直鎖および分岐鎖を包含する。例えばC1-C6アルキルは、1〜6炭素原子からなる直鎖および分岐鎖アルキルの両者を包含する。アルキル基の例には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、n-ブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、2-ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、2-ヘキシル、3-ヘキシル、3-メチルペンチル、等が含まれる。アルキレンは別のサブセットのアルキルであり、アルキルと同じ残基であるが、2結合点を有する残基を表す。アルキレン基は、通常、2〜20炭素原子、例えば2〜8炭素原子、例えば2〜6炭素原子を有する。例えば、C0アルキレンは共有結合を示し、C1アルキレンはメチレン基である。特定数の炭素を有するアルキル基を命名する場合、該数の炭素を有するすべての幾何的組み合わせが包含されるものとする; ゆえに、例えば、「ブチル」には、n-ブチル、sec-ブチル、イソブチルおよびt-ブチルが含まれるものとし; 「プロピル」には、n-プロピルおよびイソプロピルが含まれる。「低級アルキル」とは、1〜4炭素を有するアルキル基を表す。
【００２１】
「アルケニル」とは、親アルケンの単一炭素原子から1水素原子を除去することによって得られる少なくとも1つの炭素-炭素二重結合を有する不飽和分岐鎖または直鎖アルキル基を表す。該基は二重結合(群)についてシスまたはトランス構造であってよい。典型的なアルケニル基には、非限定的に、エテニル; プロペニル、例えばプロパ-1-エン-1-イル、プロパ-1-エン-2-イル、プロパ-2-エン-1-イル(アリル)、プロパ-2-エン-2-イル、シクロプロパ-1-エン-1-イル; シクロプロパ-2-エン-1-イル; ブテニル、例えばブタ-1-エン-1-イル、ブタ-1-エン-2-イル、2-メチル-プロパ-1-エン-1-イル、ブタ-2-エン-1-イル、ブタ-2-エン-1-イル、ブタ-2-エン-2-イル、ブタ-1,3-ジエン-1-イル、ブタ-1,3-ジエン-2-イル、シクロブタ-1-エン-1-イル、シクロブタ-1-エン-3-イル、シクロブタ-1,3-ジエン-1-イル; 等が含まれる。特定の実施形態では、アルケニル基は2〜20炭素原子を有し、他の実施形態では、2〜6炭素原子を有する。
【００２２】
「アルキニル」とは、親アルキンの単一炭素原子から1水素原子を除去することによって得られる少なくとも1つの炭素-炭素三重結合を有する不飽和分岐鎖または直鎖アルキル基を表す。典型的なアルキニル基には、非限定的に、エチニル; プロピニル、例えばプロパ-1-イン-1-イル、プロパ-2-イン-1-イル; ブチニル、例えばブタ-1-イン-1-イル、ブタ-1-イン-3-イル、ブタ-3-イン-1-イル; 等が含まれる。特定の実施形態では、アルキニル基は2〜20炭素原子を有し、他の実施形態では、3〜6炭素原子を有する。
【００２３】
「シクロアルキル」は、通常3〜7環炭素原子を有する、非芳香族の炭素環式環を示す。該環は飽和であっても、1以上の炭素-炭素二重結合を有してもよい。シクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、およびシクロヘキセニル、ならびに架橋型およびケージド飽和環基、例えばノルボルナンが含まれる。
【００２４】
「アルコキシ」とは、酸素橋を介して結合している指定数の炭素原子からなるアルキル基を意味し、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、n-ブトキシ、sec-ブトキシ、tert-ブトキシ、ペンチルオキシ、2-ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ネオペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、2-ヘキシルオキシ、3-ヘキシルオキシ、3-メチルペンチルオキシ、等である。アルコキシ基は、通常、酸素橋を介して結合している1〜7炭素原子を有する。「低級アルコキシ」とは、1〜4炭素を有するアルコキシ基を表す。
【００２５】
「モノ-およびジ-アルキルカルボキサミド」は、式: -(C=O)NRaRb (式中、RaおよびRbは、独立して、水素および指定数の炭素原子からなるアルキル基から選択され、ただしRaおよびRbがともに水素であることはない)の基を包含する。
【００２６】
「アシル」とは、基: (アルキル)-C(O)-; (シクロアルキル)-C(O)-; (アリール)-C(O)-; (ヘテロアリール)-C(O)-; および(ヘテロシクロアルキル)-C(O)- (ここで、該基はカルボニル官能基を介して親構造に結合しており、かつ式中、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびヘテロシクロアルキルは本明細書中に記載の通りである)を表す。アシル基は指定数の炭素原子を有し、ケト基の炭素は炭素原子数に含まれる。例えばC2アシル基は式: CH3(C=O)-を有するアセチル基である。
【００２７】
「アルコキシカルボニル」とは、カルボニル炭素を介して結合している式: (アルコキシ)(C=O)-の基(式中、アルコキシ基は指定数の炭素原子を有する)を意味する。ゆえにC1-C6アルコキシカルボニル基は、その酸素を介してカルボニルリンカーに結合している1〜6炭素原子を有するアルコキシ基である。
【００２８】
「アミノ」とは、基: -NH2を意味する。
【００２９】
「モノ-およびジ-(アルキル)アミノ」は二級および三級アルキルアミノ基(ここで、アルキル基は上記定義の通りであり、指定数の炭素原子を有する)を包含する。アルキルアミノ基の結合点は窒素上である。モノ-およびジ-アルキルアミノ基の例には、エチルアミノ、ジメチルアミノ、およびメチル-プロピル-アミノが含まれる。
【００３０】
用語「アミノカルボニル」とは、基: -CONRbRcを表し、式中
Rbは、H、場合により置換されているC1-C6アルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され; および
Rcは、独立して、水素および場合により置換されているC1-C4アルキルから選択され; または
RbおよびRcは、それらが結合している窒素と一緒になって、場合により置換されている5員〜7員窒素含有ヘテロシクロアルキル(場合により、ヘテロシクロアルキル環中に、O、N、およびSから選択される1または2個の追加のヘテロ原子を含む)を形成し;
ここで、置換されている各基は、独立して、以下の基から独立して選択される1以上の置換基で置換されている: C1-C4アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-C4アルキル-、ヘテロアリール-C1-C4アルキル-、C1-C4ハロアルキル、-OC1-C4アルキル、-OC1-C4アルキルフェニル、-C1-C4アルキル-OH、-OC1-C4ハロアルキル、ハロ、-OH、-NH2、-C1-C4アルキル-NH2、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-NH(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキルフェニル)、-NH(C1-C4アルキルフェニル)、シアノ、ニトロ、オキソ(シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロアリールの置換基として)、-CO2H、-C(O)OC1-C4アルキル、-CON(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-CONH(C1-C4アルキル)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4アルキル)、-NHC(O)(フェニル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(フェニル)、-C(O)C1-C4アルキル、-C(O)C1-C4アルキルフェニル、-C(O)C1-C4ハロアルキル、-OC(O)C1-C4アルキル、-SO2(C1-C4アルキル)、-SO2(フェニル)、-SO2(C1-C4ハロアルキル)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4アルキル)、-SO2NH(フェニル)、-NHSO2(C1-C4アルキル)、-NHSO2(フェニル)、および-NHSO2(C1-C4ハロアルキル)。
【００３１】
「アリール」は以下のものを包含する:
6員炭素環式芳香環、例えばベンゼン;
少なくとも1つの環が炭素環および芳香環である二環式環系、例えばナフタレン、インダン、およびテトラリン; および
少なくとも1つの環が炭素環および芳香環である三環式環系、例えばフルオレン。
【００３２】
例えば、アリールには、N、O、およびSから選択される1以上のヘテロ原子を含有する5員〜7員ヘテロシクロアルキル環と縮合している6員炭素環式芳香環が含まれる。環の一方のみが炭素環式芳香環であるそのような縮合している二環式環系では、結合点は炭素環式芳香環上またはヘテロシクロアルキル環上であってよい。置換ベンゼン誘導体から形成され、かつ環原子上に自由原子価を有する二価基は、置換フェニレン基と称される。名称が「-イル」で終わる一価多環式炭化水素基において、自由原子価を有する炭素原子から1水素原子を除去することによって得られる二価基は、対応する一価基の名称に「-イデン(-idene)」を付加することによって命名される。例えば、2結合点を有するナフチル基はナフチリデンと称される。しかし、アリールは、決して、ヘテロアリールを包含しないか、またはヘテロアリールと重複しない。ヘテロアリールは、別途、以下で定義される。ゆえに、1以上の炭素環式芳香環がヘテロシクロアルキル芳香環と縮合している場合、得られる環系は本明細書中で定義されるヘテロアリールであり、アリールではない。
【００３３】
用語「アリールオキシ」とは、基: -O-アリールを表す。
【００３４】
「カルバムイミドイル(Carbamimidoyl)」とは、基: -C(=NH)-NH2を表す。
【００３５】
「置換カルバムイミドイル」とは、基: -C(=NRe)-NRfRgを表し、式中、Re、Rf、およびRgは、独立して、水素、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、および場合により置換されているヘテロシクロアルキルから選択され、ただし、Re、Rf、およびRgの少なくとも1つは水素ではないことを条件とし、かつここで、置換されているアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、およびヘテロアリールとは、それぞれ、1以上(例えば5個まで、例えば3個まで)の水素原子が、以下の基から独立して選択される置換基で置き換えられているアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、およびヘテロアリールを表す:
-Ra、-ORb、場合により置換されているアミノ(-NRcCORb、-NRcCO2Ra、-NRcCONRbRc、-NRbC(NRc)NRbRc、-NRbC(NCN)NRbRc、および-NRcSO2Raが含まれる)、ハロ、シアノ、ニトロ、オキソ(シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、およびヘテロアリールの置換基として)、場合により置換されているアシル(例えば-CORb)、場合により置換されているアルコキシカルボニル(例えば-CO2Rb)、アミノカルボニル(例えば-CONRbRc)、-OCORb、-OCO2Ra、-OCONRbRc、スルファニル(例えばSRb)、スルフィニル(例えば-SORa)、およびスルホニル(例えば-SO2Raおよび-SO2NRbRc)、
ここで、Raは、場合により置換されているC1-C6アルキル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され;
Rbは、H、場合により置換されているC1-C6アルキル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され; および
Rcは、独立して、水素および場合により置換されているC1-C4アルキルから選択され; または
RbおよびRc、およびそれらが結合している窒素は、場合により置換されているヘテロシクロアルキル基を形成し; および
ここで、場合により置換されている各基は置換されていないか、または独立して、以下の基から独立して選択される1以上の、例えば1、2、または3個の置換基で置換されている: C1-C4アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-C4アルキル-、ヘテロアリール-C1-C4アルキル-、C1-C4ハロアルキル、-OC1-C4アルキル、-OC1-C4アルキルフェニル、-C1-C4アルキル-OH、-OC1-C4ハロアルキル、ハロ、-OH、-NH2、-C1-C4アルキル-NH2、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-NH(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキルフェニル)、-NH(C1-C4アルキルフェニル)、シアノ、ニトロ、オキソ(シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロアリールの置換基として)、-CO2H、-C(O)OC1-C4アルキル、-CON(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-CONH(C1-C4アルキル)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4アルキル)、-NHC(O)(フェニル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(フェニル)、-C(O)C1-C4アルキル、-C(O)C1-C4フェニル、-C(O)C1-C4ハロアルキル、-OC(O)C1-C4アルキル、-SO2(C1-C4アルキル)、-SO2(フェニル)、-SO2(C1-C4ハロアルキル)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4アルキル)、-SO2NH(フェニル)、-NHSO2(C1-C4アルキル)、-NHSO2(フェニル)、および-NHSO2(C1-C4ハロアルキル)。
【００３６】
用語「ハロ」には、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードが含まれ、用語「ハロゲン」には、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素が含まれる。
【００３７】
「ハロアルキル」とは、1以上のハロゲン原子〜許容できる最大数までのハロゲン原子で置換されている、指定数の炭素原子を有する上記定義のアルキルを示す。ハロアルキルの例には、非限定的に、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、2-フルオロエチル、およびペンタ-フルオロエチルが含まれる。
【００３８】
「ヘテロアリール」は以下のものを包含する:
N、O、およびSから選択される1以上の、例えば1〜4個の、または特定の実施形態では、1〜3個のヘテロ原子を含有し、残りの環原子が炭素である5員〜7員芳香族単環式環;
N、O、およびSから選択される1以上の、例えば1〜4個の、または特定の実施形態では、1〜3個のヘテロ原子を含有し、残りの環原子が炭素であり、かつ少なくとも1個のヘテロ原子が芳香環中に存在する二環式ヘテロシクロアルキル環; および
N、O、およびSから選択される1以上の、例えば1〜5個の、または特定の実施形態では、1〜4個のヘテロ原子を含有し、残りの環原子が炭素であり、かつ少なくとも1個のヘテロ原子が芳香環中に存在する三環式ヘテロシクロアルキル環。
【００３９】
例えば、ヘテロアリールには、5員〜7員シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル環と縮合している5員〜7員ヘテロシクロアルキル、芳香環が含まれる。環の一方のみが1以上のヘテロ原子を含有する、そのような縮合している二環式ヘテロアリール環系では、結合点はいずれかの環上であってよい。ヘテロアリール基中のSおよびO原子の総数が1を超える場合、それらのヘテロ原子は互いに隣接していない。特定の実施形態では、ヘテロアリール基中のSおよびO原子の総数は2を超えない。特定の実施形態では、芳香族複素環中のSおよびO原子の総数は1を超えない。ヘテロアリール基の例には、非限定的に、(優先順位1を割り当てられる連結位置から番号付けされた場合)、2-ピリジル、3-ピリジル、4-ピリジル、2,3-ピラジニル、3,4-ピラジニル、2,4-ピリミジニル、3,5-ピリミジニル、2,3-ピラゾリニル、2,4-イミダゾリニル、イソキサゾリニル、オキサゾリニル、チアゾリニル、チアジアゾリニル、テトラゾリル、チエニル、ベンゾチオフェニル、フラニル、ベンゾフラニル、ベンゾイミダゾリニル、インドリニル、ピリダジニル、トリアゾリル、キノリニル、ピラゾリル、および5,6,7,8-テトラヒドロイソキノリニルが含まれる。名称が「-イル」で終わる一価ヘテロアリール基において、自由原子価を有する原子から1水素原子を除去することによって得られる二価基は、対応する一価基の名称に「-イデン」を付加することによって命名される。例えば、2結合点を有するピリジル基はピリジリデンと称される。ヘテロアリールは、本明細書中で定義されるアリール、シクロアルキル、またはヘテロシクロアルキルを包含しないか、またはそれらと重複しない。
【００４０】
置換ヘテロアリールには、1以上のオキシド(-O-)置換基で置換されている環系、例えばピリジニルN-オキシドも含まれる。
【００４１】
「ヘテロシクロアルキル」とは、酸素、硫黄、および窒素、ならびに前記ヘテロ原子の少なくとも1つを含む組み合わせから独立して選択される1〜3ヘテロ原子に加えて少なくとも2炭素原子を含有する、通常3〜7環原子を有する単一の非芳香環を意味する。該環は飽和であっても、1以上の炭素-炭素二重結合を有してもよい。好適なヘテロシクロアルキル基には、例えば(優先順位1を割り当てられる連結位置から番号付けされた場合)、2-ピロリジニル、2,4-イミダゾリジニル、2,3-ピラゾリジニル、2-ピペリジル、3-ピペリジル、4-ピペリジル、および2,5-ピペリジニルが含まれる。モルホリニル基もまた考慮され、それには、2-モルホリニルおよび3-モルホリニル(酸素に優先順位1を割り当てて番号付けされる)が含まれる。置換ヘテロシクロアルキルには、1以上のオキソ(=0)またはオキシド(-O-)置換基で置換されている環系も含まれ、例えばピペリジニルN-オキシド、モルホリニル-N-オキシド、1-オキソ-1-チオモルホリニルおよび1,1-ジオキソ-1-チオモルホリニルである。
【００４２】
「ヘテロシクロアルキル」には、二環式環系であって、通常3〜7環原子を有する一方の非芳香環が、酸素、硫黄、および窒素、ならびに前記ヘテロ原子の少なくとも1つを含む組み合わせから独立して選択される1〜3ヘテロ原子に加えて少なくとも2炭素原子を含有し; かつ通常3〜7環原子を有する他方の環が、酸素、硫黄、および窒素から独立して選択される1〜3ヘテロ原子を場合により含有し、かつ芳香族ではない、二環式環系も含まれる。
【００４３】
本明細書中で使用される「モジュレーション」とは、化合物の不存在下での活性と比較して、式Iの化合物の存在に対する直接または間接的応答としての活性の変化を表す。該変化は活性の増加または活性の減少であってよく、化合物とキネシンの直接的相互作用に起因するか、または化合物と、ひいてはキネシン活性に影響する1以上の他の因子の相互作用に起因するものであってよい。例えば、化合物の存在は、例えば、キネシンと直接結合することによって、(直接的または間接的に)別の因子にキネシン活性を増加または減少させることによって、または(直接的または間接的に)細胞または生物中に存在するキネシンの量を増加または減少させることによってキネシン活性を増加または減少させる。
【００４４】
用語「スルファニル」には、基: -S-(場合により置換されている(C1-C6)アルキル)、-S-(場合により置換されているアリール)、-S-(場合により置換されているヘテロアリール)、および-S-(場合により置換されているヘテロシクロアルキル)が含まれる。ゆえに、スルファニルには、基: C1-C6アルキルスルファニルが含まれる。
【００４５】
用語「スルフィニル」には、基: -S(O)-(場合により置換されている(C1-C6)アルキル)、-S(O)-場合により置換されているアリール)、-S(O)-場合により置換されているヘテロアリール)、-S(O)-(場合により置換されているヘテロシクロアルキル); および-S(O)-(場合により置換されているアミノ)が含まれる。
【００４６】
用語「スルホニル」には、基: -S(O2)-(場合により置換されている(C1-C6)アルキル)、-S(O2)-(場合により置換されているアリール)、-S(O2)-(場合により置換されているヘテロアリール)、-S(O2)-(場合により置換されているヘテロシクロアルキル)、および-S(O2)-(場合により置換されているアミノ)が含まれる。
【００４７】
本明細書中で使用される用語「置換されている」とは、指定の原子または基上の任意の1以上の水素が、指定の基から選択される基で置き換えられており、ただし、該指定の原子の正常な原子価を超えないことを意味する。置換基がオキソ(すなわち=O)である場合、原子上の2個の水素が置き換えられる。置換基および/または変数の組み合わせは、該組み合わせが安定な化合物または有用な合成中間体を生じさせる場合にのみ許容される。安定な化合物または安定な構造とは、反応混合物からの単離、およびその後の、少なくとも実用性を有する物質としての製剤化に耐えるために十分に頑強な化合物を意味するものとする。特に指定しない限り、置換基はコア構造に向けて命名される。例えば、(シクロアルキル)アルキルが候補置換基として列挙される場合、コア構造に対するこの置換基の結合点はアルキル部分中にあることが理解されるべきであろう。
【００４８】
用語「置換されている」アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、およびヘテロアリールとは、特に明示的に規定しない限り、それぞれ、1以上(例えば5個まで、例えば3個まで)の水素原子が、以下の基から独立して選択される置換基で置き換えられているアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、およびヘテロアリールを表す:
-Ra、-ORb、場合により置換されているアミノ(-NRcCORb、-NRcCO2Ra、-NRcCONRbRc、-NRbC(NRc)NRbRc、-NRbC(NCN)NRbRc、および-NRcSO2Raが含まれる)、ハロ、シアノ、ニトロ、オキソ(シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、およびヘテロアリールの置換基として)、場合により置換されているアシル(例えば-CORb)、場合により置換されているアルコキシカルボニル(例えば-CO2Rb)、アミノカルボニル(例えば-CONRbRc)、-OCORb、-OCO2Ra、-OCONRbRc、スルファニル(例えばSRb)、スルフィニル(例えば-SORa)、およびスルホニル(例えば-SO2Raおよび-SO2NRbRc)、
ここで、Raは、場合により置換されているC1-C6アルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているアルケニル、場合により置換されているアルキニル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され;
Rbは、水素、場合により置換されているC1-C6アルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され; および
Rcは、独立して、水素および場合により置換されているC1-C4アルキルから選択され; または
RbおよびRc、およびそれらが結合している窒素は、場合により置換されているヘテロシクロアルキル基を形成し; および
ここで、場合により置換されている各基は置換されていないか、または独立して、以下の基から独立して選択される1以上の、例えば1、2、または3個の置換基で置換されている: C1-C4アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-C4アルキル-、ヘテロアリール-C1-C4アルキル-、C1-C4ハロアルキル、-OC1-C4アルキル、-OC1-C4アルキルフェニル、-C1-C4アルキル-OH、-OC1-C4ハロアルキル、ハロ、-OH、-NH2、-C1-C4アルキル-NH2、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-NH(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキルフェニル)、-NH(C1-C4アルキルフェニル)、シアノ、ニトロ、オキソ(シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロアリールの置換基として)、-CO2H、-C(O)OC1-C4アルキル、-CON(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-CONH(C1-C4アルキル)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4アルキル)、-NHC(O)(フェニル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(フェニル)、-C(O)C1-C4アルキル、-C(O)C1-C4アルキルフェニル、-C(O)C1-C4ハロアルキル、-OC(O)C1-C4アルキル、-SO2(C1-C4アルキル)、-SO2(フェニル)、-SO2(C1-C4ハロアルキル)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4アルキル)、-SO2NH(フェニル)、-NHSO2(C1-C4アルキル)、-NHSO2(フェニル)、および-NHSO2(C1-C4ハロアルキル)。
【００４９】
用語「置換アシル」とは、基: (置換アルキル)-C(O)-; (置換シクロアルキル)-C(O)-; (置換アリール)-C(O)-; (置換ヘテロアリール)-C(O)-; および(置換ヘテロシクロアルキル)-C(O)-を表し、ここで該基はカルボニル官能基を介して親構造に結合しており、かつ式中、置換されているアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびヘテロシクロアルキルは、それぞれ、1以上(例えば5個まで、例えば3個まで)の水素原子が、以下の基から独立して選択される置換基によって置き換えられているアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、およびヘテロシクロアルキルを表す:
-Ra、-ORb、場合により置換されているアミノ(-NRcCORb、-NRcCO2Ra、-NRcCONRbRc、-NRbC(NRc)NRbRc、-NRbC(NCN)NRbRc、および-NRcSO2Raが含まれる)、ハロ、シアノ、ニトロ、オキソ(シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、およびヘテロアリールの置換基として)、場合により置換されているアシル(例えば-CORb)、場合により置換されているアルコキシカルボニル(例えば-CO2Rb)、アミノカルボニル(例えば-CONRbRc)、-OCORb、-OCO2Ra、-OCONRbRc、スルファニル(例えばSRb)、スルフィニル(例えば-SORa)、およびスルホニル(例えば-SO2Raおよび-SO2NRbRc)、
ここでRaは、場合により置換されているC1-C6アルキル、場合により置換されているアルケニル、場合により置換されているアルキニル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され;
Rbは、H、場合により置換されているC1-C6アルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され; および
Rcは、独立して、水素および場合により置換されているC1-C4アルキルから選択され; または
RbおよびRc、およびそれらが結合している窒素は、場合により置換されているヘテロシクロアルキル基を形成し; および
ここで、場合により置換されている各基は置換されていないか、または独立して、以下の基から独立して選択される1以上の、例えば1、2、または3個の置換基で置換されている: C1-C4アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-C4アルキル-、ヘテロアリール-C1-C4アルキル-、C1-C4ハロアルキル、-OC1-C4アルキル、-OC1-C4アルキルフェニル、-C1-C4アルキル-OH、-OC1-C4ハロアルキル、ハロ、-OH、-NH2、-C1-C4アルキル-NH2、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-NH(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキルフェニル)、-NH(C1-C4アルキルフェニル)、シアノ、ニトロ、オキソ(シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロアリールの置換基として)、-CO2H、-C(O)OC1-C4アルキル、-CON(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-CONH(C1-C4アルキル)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4アルキル)、-NHC(O)(フェニル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(フェニル)、-C(O)C1-C4アルキル、-C(O)C1-C4アルキルフェニル、-C(O)C1-C4ハロアルキル、-OC(O)C1-C4アルキル、-SO2(C1-C4アルキル)、-SO2(フェニル)、-SO2(C1-C4ハロアルキル)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4アルキル)、-SO2NH(フェニル)、-NHSO2(C1-C4アルキル)、-NHSO2(フェニル)、および-NHSO2(C1-C4ハロアルキル)。
【００５０】
用語「置換アルコキシ」とは、アルキル構成要素が置換されているアルコキシ(すなわち-O-(置換アルキル))を表し、ここで「置換アルキル」とは、1以上(例えば5個まで、例えば3個まで)の水素原子が、以下の基から独立して選択される置換基によって置き換えられているアルキルを表す:
-Ra、-ORb、場合により置換されているアミノ(-NRcCORb、-NRcCO2Ra、-NRcCONRbRc、-NRbC(NRc)NRbRc、-NRbC(NCN)NRbRc、および-NRcSO2Raが含まれる)、ハロ、シアノ、ニトロ、オキソ(シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、およびヘテロアリールの置換基として)、場合により置換されているアシル(例えば-CORb)、場合により置換されているアルコキシカルボニル(例えば-CO2Rb)、アミノカルボニル(例えば-CONRbRc)、-OCORb、-OCO2Ra、-OCONRbRc、スルファニル(例えばSRb)、スルフィニル(例えば-SORa)、およびスルホニル(例えば-SO2Raおよび-SO2NRbRc)、
ここでRaは、場合により置換されているC1-C6アルキル、場合により置換されているアルケニル、場合により置換されているアルキニル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され;
Rbは、H、場合により置換されているC1-C6アルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され; および
Rcは、独立して、水素および場合により置換されているC1-C4アルキルから選択され; または
RbおよびRc、およびそれらが結合している窒素は、場合により置換されているヘテロシクロアルキル基を形成し; および
ここで、場合により置換されている各基は置換されていないか、または独立して、以下の基から独立して選択される1以上の、例えば1、2、または3個の置換基で置換されている: C1-C4アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-C4アルキル-、ヘテロアリール-C1-C4アルキル-、C1-C4ハロアルキル、-OC1-C4アルキル、-OC1-C4アルキルフェニル、-C1-C4アルキル-OH、-OC1-C4ハロアルキル、ハロ、-OH、-NH2、-C1-C4アルキル-NH2、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-NH(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキルフェニル)、-NH(C1-C4アルキルフェニル)、シアノ、ニトロ、オキソ(シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロアリールの置換基として)、-CO2H、-C(O)OC1-C4アルキル、-CON(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-CONH(C1-C4アルキル)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4アルキル)、-NHC(O)(フェニル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(フェニル)、-C(O)C1-C4アルキル、-C(O)C1-C4アルキルフェニル、-C(O)C1-C4ハロアルキル、-OC(O)C1-C4アルキル、-SO2(C1-C4アルキル)、-SO2(フェニル)、-SO2(C1-C4ハロアルキル)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4アルキル)、-SO2NH(フェニル)、-NHSO2(C1-C4アルキル)、-NHSO2(フェニル)、および-NHSO2(C1-C4ハロアルキル)。いくつかの実施形態では、置換アルコキシ基は「ポリアルコキシ」または-O-(場合により置換されているアルキレン)-(場合により置換されているアルコキシ)であり、置換アルコキシ基には、-OCH2CH2OCH3等の基、およびグリコールエーテル、例えばポリエチレングリコールの残基、および-O(CH2CH2O)xCH3 (式中、xは2〜20、例えば2〜10、および例えば、2〜5の整数である)が含まれる。別の置換アルコキシ基はヒドロキシアルコキシまたは-OCH2(CH2)yOH (式中、yは1〜10、例えば1〜4の整数である)である。
【００５１】
用語「置換アルコキシカルボニル」とは、基: (置換アルキル)-O-C(O)-を表し、ここで該基はカルボニル官能基を介して親構造に結合しており、かつ、置換とは、1以上(例えば5個まで、例えば3個まで)の水素原子が、以下の基から独立して選択される置換基によって置き換えられているアルキルを表す:
-Ra、-ORb、場合により置換されているアミノ(-NRcCORb、-NRcCO2Ra、-NRcCONRbRc、-NRbC(NRc)NRbRc、-NRbC(NCN)NRbRc、および-NRcSO2Raが含まれる)、ハロ、シアノ、ニトロ、オキソ(シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、およびヘテロアリールの置換基として)、場合により置換されているアシル(例えば-CORb)、場合により置換されているアルコキシカルボニル(例えば-CO2Rb)、アミノカルボニル(例えば-CONRbRc)、-OCORb、-OCO2Ra、-OCONRbRc、スルファニル(例えばSRb)、スルフィニル(例えば-SORa)、およびスルホニル(例えば-SO2Raおよび-SO2NRbRc)、
ここでRaは、場合により置換されているC1-C6アルキル、場合により置換されているアルケニル、場合により置換されているアルキニル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され;
Rbは、H、場合により置換されているC1-C6アルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され; および
Rcは、独立して、水素および場合により置換されているC1-C4アルキルから選択され; または
RbおよびRc、およびそれらが結合している窒素は、場合により置換されているヘテロシクロアルキル基を形成し; および
ここで、場合により置換されている各基は置換されていないか、または独立して、以下の基から独立して選択される1以上の、例えば1、2、または3個の置換基で置換されている: C1-C4アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-C4アルキル-、ヘテロアリール-C1-C4アルキル-、C1-C4ハロアルキル、-OC1-C4アルキル、-OC1-C4アルキルフェニル、-C1-C4アルキル-OH、-OC1-C4ハロアルキル、ハロ、-OH、-NH2、-C1-C4アルキル-NH2、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-NH(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキルフェニル)、-NH(C1-C4アルキルフェニル)、シアノ、ニトロ、オキソ(シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロアリールの置換基として)、-CO2H、-C(O)OC1-C4アルキル、-CON(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-CONH(C1-C4アルキル)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4アルキル)、-NHC(O)(フェニル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(フェニル)、-C(O)C1-C4アルキル、-C(O)C1-C4アルキルフェニル、-C(O)C1-C4ハロアルキル、-OC(O)C1-C4アルキル、-SO2(C1-C4アルキル)、-SO2(フェニル)、-SO2(C1-C4ハロアルキル)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4アルキル)、-SO2NH(フェニル)、-NHSO2(C1-C4アルキル)、-NHSO2(フェニル)、および-NHSO2(C1-C4ハロアルキル)。
【００５２】
用語「置換アミノ」とは、基: -NHRdまたは-NRdReを表し、式中、Rdは、ヒドロキシ、場合により置換されているアルコキシ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているアシル、場合により置換されているカルバムイミドイル、場合により置換されているアミノカルボニル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているアルコキシカルボニル、スルフィニルおよびスルホニルから選択され、かつ式中、Reは、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、および場合により置換されているヘテロシクロアルキルから選択され、かつここで、置換されているアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、およびヘテロアリールとは、それぞれ、1以上(例えば5個まで、例えば3個まで)の水素原子が、以下の基から独立して選択される置換基によって置き換えられているアルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロシクロアルキル、およびヘテロアリールを表す:
-Ra、-ORb、場合により置換されているアミノ(-NRcCORb、-NRcCO2Ra、-NRcCONRbRc、-NRbC(NRc)NRbRc、-NRbC(NCN)NRbRc、および-NRcSO2Raが含まれる)、ハロ、シアノ、ニトロ、オキソ(シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、およびヘテロアリールの置換基として)、場合により置換されているアシル(例えば-CORb)、場合により置換されているアルコキシカルボニル(例えば-CO2Rb)、アミノカルボニル(例えば-CONRbRc)、-OCORb、-OCO2Ra、-OCONRbRc、スルファニル(例えばSRb)、スルフィニル(例えば-SORa)、およびスルホニル(例えば-SO2Raおよび-SO2NRbRc)、
ここでRaは、場合により置換されているC1-C6アルキル、場合により置換されているアルケニル、場合により置換されているアルキニル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され;
Rbは、H、場合により置換されているC1-C6アルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され; および
Rcは、独立して、水素および場合により置換されているC1-C4アルキルから選択され; または
RbおよびRc、およびそれらが結合している窒素は、場合により置換されているヘテロシクロアルキル基を形成し; および
ここで、場合により置換されている各基は置換されていないか、または独立して、C1-C4アルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール-C1-C4アルキル-、ヘテロアリール-C1-C4アルキル-、C1-C4ハロアルキル、-OC1-C4アルキル、-OC1-C4アルキルフェニル、-C1-C4アルキル-OH、-OC1-C4ハロアルキル、ハロ、-OH、-NH2、-C1-C4アルキル-NH2、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-NH(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキルフェニル)、-NH(C1-C4アルキルフェニル)、シアノ、ニトロ、オキソ(シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、またはヘテロアリールの置換基として)、-CO2H、-C(O)OC1-C4アルキル、-CON(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-CONH(C1-C4アルキル)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4アルキル)、-NHC(O)(フェニル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(フェニル)、-C(O)C1-C4アルキル、-C(O)C1-C4アルキルフェニル、-C(O)C1-C4ハロアルキル、-OC(O)C1-C4アルキル、-SO2(C1-C4アルキル)、-SO2(フェニル)、-SO2(C1-C4ハロアルキル)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4アルキル)、-SO2NH(フェニル)、-NHSO2(C1-C4アルキル)、-NHSO2(フェニル)、および-NHSO2(C1-C4ハロアルキル)から独立して選択される1以上の、例えば1、2、または3個の置換基で置換されており; および
ここで、場合により置換されているアシル、場合により置換されているアルコキシカルボニル、スルフィニルおよびスルホニルは本明細書中で定義される通りである。
【００５３】
用語「置換アミノ」とは、それぞれ上記の基: -NHRd、およびNRdRdのN-オキシドをさらに表す。N-オキシドは、対応するアミノ基を、例えば過酸化水素またはm-クロロペルオキシ安息香酸で処理することによって調製することができる。当業者はN-酸化を実行するための反応条件を熟知している。
【００５４】
式Iの化合物には、非限定的に、式Iの化合物の光学異性体、ラセミ化合物、および他のその混合物が含まれる。該状況では、単一のエナンチオマーまたはジアステレオマー、すなわち光学活性型を不斉合成またはラセミ化合物の分割によって取得することができる。ラセミ化合物の分割は、例えば、慣用の方法、例えば分割剤の存在下での結晶化、または例えばキラル高圧液体クロマトグラフィー(HPLC)カラムを使用するクロマトグラフィーによって達成することができる。さらに、式Iの化合物には、炭素-炭素二重結合を含むZ-およびE-型(またはシス-およびトランス-型)の化合物が含まれる。式Iの化合物が種々の互変異性体として存在する場合、本発明の化学物質には、該化合物のすべての互変異性体が含まれる。
【００５５】
本発明の化学物質には、非限定的に式Iの化合物およびそのすべての製薬的に許容される形式が含まれる。本明細書中で列挙される該化合物の製薬的に許容される形式には、その製薬的に許容される塩、溶媒和物、結晶形(多形体および包接体が含まれる)、キレート、非共有結合性複合体、プロドラッグ、および混合物が含まれる。特定の実施形態では、本明細書中に記載の化合物は製薬的に許容される塩の形式である。ゆえに、用語「化学物質」および「化学物質群」はまた、製薬的に許容される塩、溶媒和物、キレート、非共有結合性複合体、プロドラッグ、および混合物を包含する。
【００５６】
「製薬的に許容される塩」には、非限定的に無機酸との塩、例えば塩酸塩、リン酸塩、二リン酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、スルフィン酸塩、硝酸塩、および同様の塩; ならびに有機酸との塩、例えばリンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、2-ヒドロキシエチルスルホン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、およびアルカン酸塩、例えば酢酸塩、HOOC-(CH2)n-COOH (式中、nは0〜4である)、および同様の塩が含まれる。同様に、製薬的に許容されるカチオンには、非限定的にナトリウム、カリウム、カルシウム、アルミニウム、リチウム、およびアンモニウムが含まれる。
【００５７】
さらに、式Iの化合物を酸付加塩として取得した場合、酸性塩の溶液を塩基性化することによって遊離塩基を取得することができる。逆に、生成物が遊離塩基であれば、塩基化合物から酸付加塩を調製するための慣用の手順にしたがって、該遊離塩基を、好適な有機溶媒に溶解し、該溶液を酸で処理することによって付加塩、特に製薬的に許容される付加塩を製造してよい。当業者は、無毒の製薬的に許容される付加塩を調製するために使用してよい種々の合成方法論を認識する。
【００５８】
上記のように、プロドラッグ、例えば式Iの化合物のエステルまたはアミド誘導体もまた、化学物質の範囲内に入る。用語「プロドラッグ」には、患者に投与された場合、例えば該プロドラッグが代謝処理されると、式Iの化合物になる任意の化合物が含まれる。プロドラッグの例には、非限定的に、式Iの化合物の官能基(例えばアルコールまたはアミン基)のアセテート、ホルメート、ホスフェート、およびベンゾエートおよび同様の誘導体が含まれる。
【００５９】
用語「溶媒和物」とは、溶媒と化合物の相互作用によって形成される化学物質を表す。好適な溶媒和物は、製薬的に許容される溶媒和物、例えば水和物(一水和物および半水和物が含まれる)である。
【００６０】
用語「キレート」とは、化合物が2 (またはそれ以上)の点で金属イオンに配位することによって形成される化学物質を表す。
【００６１】
用語「非共有結合性複合体」とは、化合物と別の分子の相互作用(該相互作用では、該化合物と該分子の間に共有結合が形成されない)によって形成される化学物質を表す。例えば、複合体形成は、ファンデルワールス相互作用、水素結合、および静電相互作用(イオン結合とも称される)によって生じうる。
【００６２】
用語「活性物質」は、生物学的活性を有する化学物質を示すために使用される。特定の実施形態では、「活性物質」は医薬的有用性を有する化合物である。例えば、活性物質は抗癌治療薬であってよい。
【００６３】
「有意な」とは、統計学的有意性の標準パラメトリック検定、例えばスチューデントT検定(その場合、p < 0.05)での統計学的に有意な任意の検出可能な変化を意味する。
【００６４】
用語「抗有糸分裂薬」とは、例えば中期停止を引き起こすことによって、有糸分裂を阻害または予防するための薬物を表す。いくつかの抗腫瘍薬は増殖をブロックし、抗有糸分裂薬とみなされる。
【００６５】
用語、本発明の化学物質の「治療有効量」とは、ヒトまたは非ヒト患者に投与された場合に、治療上の利益、例えば症状の改善、疾患進行の減速、または疾患の予防を提供するために有効な量を意味し、例えば、治療有効量はCENP-E阻害に応答する疾患の症状を減少させるために十分な量である。いくつかの実施形態では、治療有効量は癌の症状を低減するために十分な量である。いくつかの実施形態では、治療有効量は、生物中の検出可能な癌性細胞の数を減少させるか、癌性腫瘍の成長を検出可能な程度に減速させるか、または停止させるために十分な量である。いくつかの実施形態では、治療有効量は癌性腫瘍を縮小させるために十分な量である。
【００６６】
用語「阻害」は、生物学的活性または過程のベースライン活性についての有意な減少を示す。「CENP-E活性の阻害」とは、少なくとも1つの化学物質の不存在下でのCENP-Eの活性と比較して、本明細書中に記載の少なくとも1つの化学物質の存在に対する直接または間接的応答としてのCENP-E活性の減少を表す。活性の減少は、化学物質とCENP-Eの直接的相互作用に起因しても、本明細書中に記載の化学物質(群)と、ひいてはCENP-E活性に影響する1以上の他の因子の相互作用に起因してもよい。例えば、化学物質(群)の存在は、CENP-Eと直接結合することによって、(直接的または間接的に)別の因子にCENP-E活性を減少させることによって、または(直接的または間接的に)細胞または生物中に存在するCENP-Eの量を減少させることによって、CENP-E活性を減少させる。
【００６７】
「CENP-E阻害に応答する疾患」は、CENP-Eの阻害によって治療上の利益、例えば症状の改善、疾患進行の減少、疾患発症の予防もしくは遅延、または特定の細胞タイプの異常な活性の阻害が提供される疾患である。
【００６８】
「処置(treatment)」または「処置する(treating)」とは、患者における疾患の任意の処置を意味する。以下の行為が含まれる:
a) 疾患の予防、すなわち、疾患の臨床症状が発症しないようにすること;
b) 疾患の阻害;
c) 臨床症状の発症の減速または停止; および/または
d) 疾患の軽減、すなわち、臨床症状を退行させること。
【００６９】
「患者」とは、処置、観察または実験の対象になっているか、またはそれらの対象になる動物、例えば哺乳類を表す。本発明の方法はヒトの治療および獣医学適用の両方において有用でありうる。いくつかの実施形態では、患者は哺乳類であり; いくつかの実施形態では、患者はヒトであり; いくつかの実施形態では、患者はネコおよびイヌから選択される。
【００７０】
式Iの化合物は下記様式で命名および番号付けすることができる。例えば、命名ソフトウェア、例えばChemInnovation Software, Inc.から入手可能なPipeline PilotまたはNomenclatorTMを使用して、化合物:
【化２】
2009514875.tif 000003
【００７１】
は、(3E)(2R)-4-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]-N-メチル-2-[(4-フェニルフェニル)メチル]ブタ-3-エナミドと命名することができる。ChemDraw Ultra 9.0の構造=名称アルゴリズムを用いて同化合物を命名すると、その名称は、(R,E)-2-(ビフェニル-4-イルメチル)-4-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-N-メチルブタ-3-エナミドである。下記実施例セクションの構造は、ChemDrawを用いて命名した。他の化合物、例えば特許請求の範囲で列挙される化合物は、ChemInnovationソフトウェアを用いて命名した。
【００７２】
本発明は、1以上の有糸分裂キネシンのインヒビターである新規化学物質のクラスに関する。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載の化学物質は有糸分裂キネシン、CENP-E、特にヒトCENP-Eを阻害する。CENP-Eは、中期の染色体整列を達成するために必須のプラス端指向性(plus end-directed)の微小管モーターである。CENP-Eは間期に蓄積し、有糸分裂の完了後に分解される。CENP-Eに対する抗体のマイクロインジェクションまたはCENP-Eのドミナントネガティブ突然変異体の過剰発現は、前中期染色体が二極性紡錘体上に散在している状態で有糸分裂の停止を引き起こす。CENP-Eのテールドメインは動原体の局在化を媒介し、さらに、有糸分裂チェックポイントキナーゼhBubR1と相互作用する。CENP-Eはまた、活性型のMAPキナーゼと結び付く。ヒト(Yen, et al., Nature, 359(6395):536-9 (1992)) CENP-Eのクローニングが報告されている。Thrower, et al., EMBO J., 14:918-26 (1995)では、部分的に精製された天然型のヒトCENP-Eが報告された。さらに、該研究では、CENP-Eがマイナス端指向性の微小管モーターであることが報告された。Wood, et al., Cell, 91:357-66 (1997))では、大腸菌(E. coli)でのアフリカツメガエル(Xenopus) CENP-Eの発現およびin vitroでXCENP-Eがプラス端指向性のモーターとしての運動性を有することが開示されている。CENP-E  PCT国際公開第WO 99/13061号(参照により本明細書中に組み入れられる)を参照のこと。
【００７３】
いくつかの実施形態では、化学物質は有糸分裂キネシン、CENP-Eを阻害し、ならびに以下から選択される1以上のヒト有糸分裂キネシンをモジュレートする: HSET (米国特許第6,361,993号(参照により本明細書中に組み入れられる)を参照のこと); MCAK (米国特許第6,331,424号(参照により本明細書中に組み入れられる)を参照のこと); RabK-6 (米国特許第6,544,766号(参照により本明細書中に組み入れられる)を参照のこと); Kif4 (米国特許第6,440,684号(参照により本明細書中に組み入れられる)を参照のこと); MKLP1 (米国特許第6,448,025号(参照により本明細書中に組み入れられる)を参照のこと); Kif15 (米国特許第6,355,466号(参照により本明細書中に組み入れられる)を参照のこと); Kid (米国特許第6,387,644号(参照により本明細書中に組み入れられる)を参照のこと); Mpp1, CMKrp, KinI-3 (米国特許第6,461,855号(参照により本明細書中に組み入れられる)を参照のこと); Kip3a (PCT国際公開第WO 01/96593号(参照により本明細書中に組み入れられる)を参照のこと); Kip3d (米国特許第6,492,151号(参照により本明細書中に組み入れられる)を参照のこと); およびKSP (米国特許第6,617,115号(参照により本明細書中に組み入れられる)を参照のこと)。
【００７４】
有糸分裂キネシンを阻害する方法は、本発明のインヒビターを1以上の有糸分裂キネシン、特にヒトキネシン; またはその断片および変異体と接触させるステップを含む。該阻害は、紡錐体を崩壊させる、有糸分裂キネシンのATP加水分解活性および/または紡錐体形成活性の阻害でありうる。
【００７５】
本発明は、細胞増殖と関連している障害を処置するための、1以上の有糸分裂キネシン、特に、1以上のヒト有糸分裂キネシンのインヒビターを提供する。本明細書中に記載の化学物質、組成物および方法は、その選択性が異なりうるものであり、非限定的に癌、過形成、再狭窄、心肥大、免疫不全、真菌障害および炎症を含めた細胞増殖の疾患を処置するために使用される。
【００７６】
以下の式I :
【化３】
2009514875.tif 000004
【００７７】
の化合物および製薬的に許容されるその塩、溶媒和物、キレート、非共有結合性複合体、プロドラッグ、および混合物から選択される少なくとも1つの化学物質を提供する。式中
R1は、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され;
Xは、-(CR10R11)m、-(CR10R11)nC(R13)=C(R14)、-O(CR10R11)p-、およびNR8-から選択され;
Yは、XとZを連結する直接結合、-C(O)-、および-C(=N-R9)-から選択され;
Zは、-(CR10R11)q、-(CR10R11)rC(R13)=C(R14)、-O(CR10R11)s-、およびNR8-から選択され;
R8は、-CO-R7、水素、アルコキシ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、スルホニル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され;
R9は、水素、アルコキシ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、シアノ、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択され;
R10およびR11は、独立して、水素、ヒドロキシ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、または場合により置換されているシクロアルキルから選択され;
R13およびR14は、独立して、水素、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、または場合により置換されているシクロアルキルから選択され;
mは、0、1、および2から選択され;
nは0および1から選択され;
pは、0、1、および2から選択され;
qは、0、1、および2から選択され;
rは0および1から選択され;
sは、0、1、および2から選択され;
R2は、水素、ヒドロキシ、場合により置換されているアルコキシ、場合により置換されているアミノ、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、および場合により置換されているアルキルから選択され;
R3およびR4は、独立して、水素、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているアルコキシカルボニル、場合により置換されているアミノ、アミノカルボニル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、および場合により置換されているシクロアルキルから選択され; または
R2およびR4は、それらが結合している炭素と一緒になって、場合により置換されている3〜7員環を形成し、該環は、場合により、O、N、およびSから選択される1、2、または3個のヘテロ原子を含み; または
R2およびR3は、それらが結合している炭素と一緒になって、場合により置換されている3〜7員環を形成し、該環は、場合により、O、N、およびSから選択される1、2、または3個のヘテロ原子を含み; および
R7は、場合により置換されている低級アルキル、場合により置換されているアリール、ヒドロキシ、場合により置換されているアミノ、場合により置換されているアラルコキシ、または場合により置換されているアルコキシから選択され、
ただし、Yが-C(O)-であり、かつZがNR8である場合、Xは-(CR10R11)m (式中mは0である)ではないことを条件とし; およびYがXとZを連結する直接結合であり、かつXが-(CR10R11)m (式中mは0である)である場合、Zは-(CR10R11)q (式中qは0である)ではないことを条件とする。
【００７８】
いくつかの実施形態では、R1は、場合により置換されているアリールである。いくつかの実施形態では、R1は、場合により置換されているフェニルである。いくつかの実施形態では、R1は、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているアルキル、スルホニル、ハロ、場合により置換されているアミノ、スルファニル、場合により置換されているアルコキシ、場合により置換されているアリールオキシ、場合により置換されているヘテロアリールオキシ、アシル、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから独立して選択される1、2または3個の基で置換されているフェニルである。いくつかの実施形態では、R1は、3-ハロ-4-イソプロポキシ-フェニル、3-シアノ-4-イソプロポキシ-フェニル、3-ハロ-4-((R)-1,1,1-トリフルオロプロパン-2-イルオキシ)フェニル、3-シアノ-4-((R)-1,1,1-トリフルオロプロパン-2-イルオキシ)フェニル、3-ハロ-4-イソプロピルアミノ-フェニル、3-シアノ-4-イソプロピルアミノ-フェニル、3-ハロ-4-((R)-1,1,1-トリフルオロプロパン-2-イルアミノ)フェニル、および3-シアノ-4-((R)-1,1,1-トリフルオロプロパン-2-イルアミノ)フェニルから選択される。
【００７９】
いくつかの実施形態では、Xは-(CR10R11)mであり、かつmは0である。いくつかの実施形態では、Xは-(CR10R11)mであり、かつmは1である。いくつかの実施形態では、Xは-(CR10R11)mであり、かつmは2である。
【００８０】
いくつかの実施形態では、Xは-(CR10R11)nC(R13)=C(R14)-であり、かつnは0である。
【００８１】
いくつかの実施形態では、XはNR8であり、かつR8は水素である。
【００８２】
いくつかの実施形態では、Xは-(CR10R11)mであり、R10は水素であり、R11はヒドロキシであり、かつmは1である。いくつかの実施形態では、Xは-(CHOH)CH2-である。
【００８３】
いくつかの実施形態では、Yは-C(O)-である。いくつかの実施形態では、Yは、XとZを連結する直接結合である。
【００８４】
いくつかの実施形態では、ZはNR8である。
【００８５】
いくつかの実施形態では、Zは-(CR10R11)qであり、かつqは0である。
【００８６】
いくつかの実施形態では、Zは-O(CR10R11)sであり、かつsは0である。いくつかの実施形態では、Zは-O(CR10R11)sであり、かつsは1である。いくつかの実施形態では、Zは-O(CR10R11)sであり、かつsは2である。
【００８７】
いくつかの実施形態では、-X-Y-Z-は、-CH2NR8-、-CH2C(O)NR8-、-NR8C(O)NR8-、-CH2CH2C(O)NR8-、-CH=CH-、-CH2-、-CH2CH2-、-CH(OH)-CH2-NR8-、-NR8C(O)-、-C(O)O-、-C(O)OCH2CH2-、-C(O)CH2-、および-CH(OH)-CH2-から選択される。
【００８８】
いくつかの実施形態では、R2は、水素、場合により置換されているアルコキシ、および場合により置換されているアミノから選択される。いくつかの実施形態では、R2は水素である。
【００８９】
いくつかの実施形態では、R3は、水素、アミノカルボニル、場合により置換されているアミノ、場合により置換されている低級アルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、および場合により置換されているヘテロアリールから選択される。いくつかの実施形態では、R3は、カルバモイル、(モノ低級アルキル)カルバモイル、場合により置換されているアミノ、および場合により置換されている低級アルキルから選択される。
【００９０】
いくつかの実施形態では、R4は、場合により置換されている低級アルキルおよび場合により置換されているアリールから選択される。いくつかの実施形態では、R4はフェニルおよびベンジルから選択され、該各基は、場合により置換されているヘテロアリール基で置換されており、かつ該フェニルおよびベンジルの各基は、場合により、ハロ、ヒドロキシ、および低級アルキルから選択される基でさらに置換されている。いくつかの実施形態では、R4はフェニルおよびベンジルから選択され、該各基は、
7,8-ジヒドロ-イミダゾ[1,2-c][1,3]オキサジン-2-イル、
3a,7a-ジヒドロ-1H-ベンゾイミダゾール-2-イル、
イミダゾ[2,1-b]オキサゾール-6-イル、
オキサゾール-4-イル、
5,6,7,8-テトラヒドロ-イミダゾ[1,2-a]ピリジン-2-イル、
1H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル、
2,3-ジヒドロ-イミダゾール-4-イル、
1H-イミダゾール-2-イル、
イミダゾ[1,2-a]ピリジン-2-イル、
チアゾール-2-イル、
チアゾール-4-イル、
ピラゾール-3-イル、および
1H-イミダゾール-4-イル
から選択されるヘテロアリール基で置換されており、該各ヘテロアリール基は、場合により置換されている低級アルキル、ハロ、アシル、スルホニル、シアノ、ニトロ、場合により置換されているアミノ、および場合により置換されているヘテロアリールから選択される1、2、または3個の基で場合により置換されている。
【００９１】
さらに、以下の式II :
【化４】
2009514875.tif 000005
【００９２】
の化合物および製薬的に許容されるその塩、溶媒和物、キレート、非共有結合性複合体、プロドラッグ、および混合物から選択される少なくとも1つの化学物質を提供する。式中、X、Y、Z、R3、およびR4は式Iの化合物に関して記載される通りであり、かつ式中
R5は、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されている低級アルキル、ニトロ、シアノ、水素、スルホニル、およびハロから選択され;
R6は、水素、ハロ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているアミノ、スルファニル、場合により置換されているアルコキシ、シクロアルキルオキシ、場合により置換されているヘテロシクロアルキルオキシ、場合により置換されているアリールオキシ、および場合により置換されているヘテロアリールオキシから選択され; および
R7は、水素、アシル、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているアルコキシ、ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、場合により置換されているアミノ、スルホニル、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択される。
【００９３】
いくつかの実施形態では、R5は、水素、シアノ、ニトロ、またはハロである。いくつかの実施形態では、R5はクロロまたはシアノである。
【００９４】
いくつかの実施形態では、R6は、場合により置換されている低級アルコキシ、場合により置換されている低級アルキル、または場合により置換されているアミノである。いくつかの実施形態では、R6は、低級アルコキシ、2,2,2-トリフルオロ-1-メチル-エトキシ、低級アルキルアミノまたは2,2,2-トリフルオロ-1-メチル-エチルアミノである。いくつかの実施形態では、R6は、プロポキシ、2,2,2-トリフルオロ-1-メチル-エトキシ、プロピルアミノ、または2,2,2-トリフルオロ-1-メチル-エチルアミノである。
【００９５】
いくつかの実施形態では、R7は水素である。
【００９６】
さらに、以下の式III :
【化５】
2009514875.tif 000006
【００９７】
の化合物および製薬的に許容されるその塩、溶媒和物、キレート、非共有結合性複合体、プロドラッグ、および混合物から選択される少なくとも1つの化学物質を提供する。式中、X、Y、Z、およびR4は式Iの化合物に関して記載される通りであり、かつR5、R6、およびR7は式IIの化合物に関して記載される通りである。
【００９８】
さらに、以下の式IV :
【化６】
2009514875.tif 000007
【００９９】
の化合物および製薬的に許容されるその塩、溶媒和物、キレート、非共有結合性複合体、プロドラッグ、および混合物から選択される少なくとも1つの化学物質を提供する。式中、X、Y、Z、およびR4は式Iの化合物に関して記載される通りであり、R5、R6、およびR7は式IIの化合物に関して記載される通りであり、かつ式中
R19は水素および場合により置換されている低級アルキルから選択され; および
R20は、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているヘテロアリール、場合により置換されているアルコキシ、および場合により置換されているアミノから選択される。
【０１００】
いくつかの実施形態では、R19は水素および低級アルキルから選択される。いくつかの実施形態では、R19は水素である。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、R20は、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているアミノ、および場合により置換されているヘテロシクロアルキルから選択される。いくつかの実施形態では、R20は、(ジメチルアミノ)メチル、アゼチジン-1-イルメチル、ピロリジン-1-イルメチル、(メチルアミノ)メチル、アミノメチル、アミノ、メチルアミノ、およびジメチルアミノから選択される。
【０１０２】
さらに、以下の式V :
【化７】
2009514875.tif 000008
【０１０３】
の化合物および製薬的に許容されるその塩、溶媒和物、キレート、非共有結合性複合体、プロドラッグ、および混合物から選択される少なくとも1つの化学物質を提供する。式中、X、Y、Z、およびR3は式Iの化合物に関して記載される通りであり、R5、R6、およびR7は式IIの化合物に関して記載される通りであり、かつ式中
tは、0、1、および2から選択され;
R17およびR18は、独立して、水素、ヒドロキシ、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているアリール、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、または場合により置換されているシクロアルキルから選択され;
R16は、場合により置換されているヘテロアリールであり; および
R15は、水素、ハロ、ヒドロキシ、および低級アルキルから選択される。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、R16は
7,8-ジヒドロ-イミダゾ[1,2-c][1,3]オキサジン-2-イル、
3a,7a-ジヒドロ-1H-ベンゾイミダゾール-2-イル、
イミダゾ[2,1-b]オキサゾール-6-イル、
オキサゾール-4-イル、
5,6,7,8-テトラヒドロ-イミダゾ[1,2-a]ピリジン-2-イル、
1H-[1,2,4]トリアゾール-3-イル、
2,3-ジヒドロ-イミダゾール-4-イル、
1H-イミダゾール-2-イル、
イミダゾ[1,2-a]ピリジン-2-イル、
チアゾール-2-イル、
チアゾール-4-イル、
ピラゾール-3-イル、および
1H-イミダゾール-4-イル
から選択され、該各基は、場合により置換されている低級アルキル、ハロ、アシル、スルホニル、シアノ、ニトロ、場合により置換されているアミノ、および場合により置換されているヘテロアリールから選択される1、2、または3個の基で場合により置換されている。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、R16は
1H-イミダゾール-2-イル、
イミダゾ[1,2-a]ピリジン-2-イル; および
1H-イミダゾール-4-イル
から選択され、該各基は、場合により置換されている低級アルキル、ハロ、およびアシルから選択される1または2個の基で場合により置換されている。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、R15は水素である。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、式Iの化合物は以下の化合物から選択される:
(3E)(2R)-4-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]-N-メチル-2-[(4-フェニルフェニル)メチル]ブタ-3-エナミド;
2-アミノ-1-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]エタン-1-オール;
2-アミノ-N-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]-3-[4-(フェニルメトキシ)フェニル]プロパンアミド;
N-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]-2-[(メチルアミノ)カルボニルアミノ]-3-[4-(フェニルメトキシ)フェニル]プロパンアミド;
1-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]-2-({[4-(フェニルメトキシ)フェニル]メチル}アミノ)エタン-1-オール;
1-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]-2-((2-ヒドロキシエチル){[4-(フェニルメトキシ)フェニル]メチル}アミノ)エタン-1-オール;
2-{[(ジメチルアミノ)スルホニル]アミノ}-N-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]-3-[4-(フェニルメトキシ)フェニル]プロパンアミド;
(1S)-1-({4-[2-(tert-ブチル)-1-メチルイミダゾール-4-イル]フェニル}メチル)-3-ヒドロキシプロピル3-シアノ-4-(メチルエトキシ)ベンゾエート;
(1S)-1-({4-[2-(tert-ブチル)-1-メチルイミダゾール-4-イル]フェニル}メチル)-3-ヒドロキシプロピル3-クロロ-4-(メチルエトキシ)ベンゾエート;
(3S)-3-(アセチルアミノ)-4-{4-[2-(tert-ブチル)イミダゾール-4-イル]フェニル}ブチル3-シアノ-4-(メチルエトキシ)ベンゾエート;
(3S)-3-({[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]メチル}アミノ)-4-{4-[2-(1-ヒドロキシ-イソプロピル)-1-メチルイミダゾール-4-イル]フェニル}ブタン-1-オール;
(4E)(3S)-3-({4-[2-(tert-ブチル)-1-メチルイミダゾール-4-イル]フェニル}メチル)-5-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]ペンタ-4-エン-1-オール;
(3S)-4-{4-[2-(tert-ブチル)-1-メチルイミダゾール-4-イル]フェニル}-3-({[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]メチル}アミノ)ブタン酸;
(3S)-3-({4-[2-(tert-ブチル)-1-メチルイミダゾール-4-イル]フェニル}メチル)-1-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]-5-ヒドロキシペンタン-1-オン; および
(3S)-3-({4-[2-(tert-ブチル)-1-メチルイミダゾール-4-イル]フェニル}メチル)-1-[3-クロロ-4-(メチルエトキシ)フェニル]ペンタン-1,5-ジオール。
【０１０８】
出発材料および他の反応物は、例えばAldrich Chemical Company, Milwaukee, WIから商業的に入手可能であり、または当業者が、一般に用いられる合成方法論を使用して容易に製造してもよい。
【０１０９】
特に指定しない限り、用語「溶媒」、「不活性有機溶媒」または「不活性溶媒」とは、それとともに記載されている反応の条件下で不活性の溶媒を意味し、例えば、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン(「THF」)、ジメチルホルムアミド(「DMF」)、クロロホルム、塩化メチレン(またはジクロロメタン)、ジエチルエーテル、メタノール、ピリジン等が含まれる。特に指定しない限り、本発明の反応で使用される溶媒は不活性有機溶媒である。
【０１１０】
一般に、カルボン酸のエステルは、慣用のエステル化手順によって調製してよく、例えば、概して酸性条件下で、必要なカルボン酸を適切なアルカノールで処理することによってアルキルエステルを調製してよい。同様に、アミドは、慣用のアミド化手順を使用して調製してよく、例えば、活性化カルボン酸を適切なアミンで処理することによってアミドを調製してよい。あるいは、Tetrahedron Lett. 48, 4171-4173, (1977)に記載の手順にしたがって、場合によりトリメチルアルミニウムの存在下で、該酸の低級アルキルエステル、例えばメチルエステルをアミンで処理して、必要なアミドを得ることができる。カルボキシル基は、アルキルエステル、例えばメチルエステルとして保護してよく、該エステルは、慣用の手順を使用して調製および除去してよく、カルボメトキシをカルボキシルに変換するための好都合な1方法は水性水酸化リチウムを使用することである。
【０１１１】
本明細書中に記載の塩および溶媒和物は、当技術分野において慣用の方法によって製造できる。例えば、本発明の化合物が酸である場合、該遊離酸を無機または有機塩基、例えばアミン(一級、二級、または三級); アルカリ金属またはアルカリ土類金属の水酸化物; 等で処理することによって所望の塩基付加塩を調製することができる。好適な塩の実例には、アミノ酸、例えばグリシンおよびアルギニン; アンモニア; 一級、二級、および三級アミン; 例えばエチレンジアミン、および環状アミン、例えばシクロヘキシルアミン、ピペリジン、モルホリン、およびピペラジンから得られる有機塩; ならびにナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、アルミニウム、およびリチウムから得られる無機塩が含まれる。
【０１１２】
化合物が塩基である場合、当技術分野において公知の任意の好適な方法によって所望の酸付加塩を調製してよい。該方法には、該遊離塩基を無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、等で、または有機酸、例えば酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、ピラノシジル酸(pyranosidyl acid)、例えばグルクロン酸またはガラクツロン酸、アルファ-ヒドロキシ酸、例えばクエン酸または酒石酸、アミノ酸、例えばアスパラギン酸またはグルタミン酸、芳香族酸、例えば安息香酸または桂皮酸、スルホン酸、例えばp-トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、等で処理することが含まれる。
【０１１３】
本明細書中に記載の化学物質および中間体の単離および精製は、所望であれば、任意の好適な分離または精製手順、例えば、ろ過、抽出、結晶化、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーまたは厚層(thick-layer)クロマトグラフィー、または前記手順の組み合わせによって行うことができる。好適な分離および単離手順の具体的説明は、以下の実施例を参照することによって得ることができる。しかし、当然、他の等価な分離または単離手順を使用することもできる。
【０１１４】
反応スキーム1
【化８】
2009514875.tif 000009
2009514875.tif 000010
【０１１５】
反応スキーム1のステップ1では、極性プロトン性溶媒、例えばメタノール中の式101の化合物および過剰(例えば約3当量)の鉄粉末の撹拌混合物に濃HClを加える。反応溶液を室温で一晩撹拌した後、生成物である式103の化合物を単離し、場合により精製する。
【０１１６】
反応スキーム1のステップ2では、不活性溶媒、例えばDMF中の過剰(例えば約1.2当量)の式104の化合物(式中、PGは保護基、例えばBocである)の溶液に、過剰(例えば約1.2当量)のHBTUおよび式103の化合物を加える。反応混合物を約14時間撹拌する。生成物である式105の化合物を単離し、場合により精製する。
【０１１７】
反応スキーム1のステップ3では、保護基PGを除去して遊離アミンを得る。例えば、不活性溶媒、例えばDCM中の式105の化合物の溶液にTFAを加える。反応混合物を約4時間撹拌する。生成物である式107の化合物を単離し、場合により精製する。
【０１１８】
反応スキーム1のステップ4では、不活性溶媒、例えばDCM中の式107の化合物、例えばTFA塩の溶液に、過剰(例えば約2当量)の式: Cl-S(O)2R21R22 (式中、R21およびR22は、独立して、水素および場合により置換されている低級アルキルから選択される)の化合物、塩基、例えばDIEA、およびDMAPを加える。反応混合物を約14時間撹拌する。生成物である式109の化合物を単離し、場合により精製する。
【０１１９】
反応スキーム2
【化９】
2009514875.tif 000011
【０１２０】
反応スキーム2では、不活性溶媒、例えばDCM中の式107の化合物、例えば式107の化合物のTFA塩の溶液に、過剰(例えば約2当量)の式: R20-CO (式中、R20は、場合により置換されているアミノである)のイソシアン酸塩および塩基、例えばDIEAを加える。反応混合物を約4時間撹拌する。生成物である式203の化合物を単離し、場合により精製する。
【０１２１】
反応スキーム3
【化１０】
2009514875.tif 000012
2009514875.tif 000013
【０１２２】
反応スキーム3のステップ1では、不活性溶媒、例えばDMF中の式301の化合物の溶液に、約当量のジエチルシアノホスホネートおよび塩基、例えばトリエチルアミンを約0℃で加える。反応混合物を室温にあたため、約14時間撹拌する。生成物である式303の化合物を単離し、場合により精製する。
【０１２３】
反応スキーム3のステップ2では、不活性溶媒中の式303の化合物の溶液に、約0℃でNaBH4を加える。反応混合物を約90分間撹拌する。そしてLiAlH4 (例えばTHF中の1 M LiAlH4)を滴加する。生成物である式305の化合物を単離し、場合により精製する。
【０１２４】
反応スキーム3のステップ3では、不活性溶媒、例えばDCM中の式305の化合物の溶液に、塩基、例えばDIEA、Na(OAc)3BH、および過剰(例えば1.1当量)の式: R8'CHO (式中、R8'は、場合により置換されているアルキル、場合により置換されているシクロアルキル、場合により置換されているヘテロシクロアルキル、場合により置換されているアリール、および場合により置換されているヘテロアリールから選択される)のアルデヒドを約0℃で加える。反応混合物を室温にあたため、約14時間撹拌する。生成物である式307の化合物を単離し、場合により精製する。
【０１２５】
反応スキーム3のステップ4では、不活性溶媒、例えばDCM中の式307の化合物の溶液に、Na(OAc)3BHおよび過剰(例えば約1.1当量)の式: H(CO)-CH2-OTBDMSのアルデヒドを約0℃で加える。反応混合物を室温にあたため、10時間撹拌する。生成物である式309の化合物を単離し、場合により精製する。
【０１２６】
反応スキーム4
【化１１】
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【０１２７】
反応スキーム4では、不活性溶媒、例えばDMF中の式405の化合物の溶液に、DIEAおよび過剰(例えば約1.2当量)の式403の化合物を加える。反応混合物を約1時間撹拌する。生成物である式405の化合物を単離し、場合により精製する。
【０１２８】
反応スキーム5
【化１２】
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【０１２９】
反応スキーム5では、例えば不活性溶媒中の式501の化合物の撹拌溶液に過剰のMnO2を加える。反応を約18時間還流する。生成物である式503の化合物を単離し、場合により精製する。
【０１３０】
製造後の本発明の化学物質は、有糸分裂の改変が関与する種々の適用での用途を有する。当業者に理解されるように、有糸分裂は種々の様式で改変しうる; すなわち、有糸分裂経路における成分の活性を増加または減少させることによって有糸分裂に影響を与えることができる。別の言い方をすると、平衡を乱すことによって、特定成分を阻害または活性化することによって、有糸分裂に影響を与える(例えば、崩壊させる)ことができる。同様のアプローチを使用して減数分裂を改変しうる。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、本発明の化学物質を使用して紡錐体形成を阻害し、ゆえに有糸分裂において長期の細胞周期停止を引き起こしうる。この関連で「阻害する」とは、紡錐体形成を減少または妨害するか、または紡錐体機能障害を引き起こすことを意味する。本明細書中で「紡錐体形成」とは、有糸分裂キネシンが微小管を組織して二極性構造にすることを意味する。本明細書中で「紡錐体機能障害」とは、有糸分裂停止を意味する。
【０１３２】
本発明の化学物質は、1以上の有糸分裂キネシンに結合し、および/またはその活性を阻害する。いくつかの実施形態では、有糸分裂キネシンはヒトの有糸分裂キネシンであるが、該化学物質を使用して、他の生物由来の有糸分裂キネシンに結合させるか、またはその活性を阻害しうる。この関連で、「阻害する」とは、紡錘体極分離を増加または減少させて、紡錐体極の形成異常、すなわち扁平化(splaying)を引き起こすか、または別の様式で、紡錐体の形態的動揺を引き起こすことを意味する。さらに、前記目的での有糸分裂キネシンの定義には、該タンパク質の変異体および/または断片および、より具体的には、該タンパク質のモータードメインが含まれる。
【０１３３】
本発明の化学物質を使用して細胞増殖疾患を処置する。本明細書中で提供される化学物質によって処置できるそのような疾患状態には、非限定的に、癌(以下でさらに考察する)、自己免疫疾患、真菌障害、関節炎、移植片拒絶、炎症性腸疾患、非限定的に、外科手術、血管形成術、等を含めた医療手順後に誘発される細胞増殖が含まれる。処置には、細胞増殖の阻害が含まれる。いくつかの事例では、細胞は異常な状態ではないかもしれないが、依然として処置を必要とすることが理解される。ゆえに、いくつかの実施形態では、本明細書中の発明には、前記障害または状態のいずれか1つに罹患している細胞もしくは個体または、その差し迫った罹患の対象に対する適用が含まれる。
【０１３４】
本明細書中で提供される化学物質、医薬製剤および方法は、特に、固形腫瘍、例えば皮膚、乳房、脳、子宮頸部の癌腫、精巣の癌腫、等を含めた癌の処置に有用であると考えられる。さらに具体的には、処置できる癌には、非限定的に、以下の癌が含まれる:
心臓: 肉腫(血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫)、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫および奇形腫;
肺: 気管支原性癌腫(扁平細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌)、胞巣状癌(細気管支癌)、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨性過誤腫、中皮腫;
胃腸: 食道(扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫)、胃(癌腫、リンパ腫、平滑筋肉腫)、膵臓(管腺癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド腫瘍、ビポーマ)、小腸(腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫(Karposi's sarcoma)、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫)、大腸(腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫);
尿生殖路: 腎臓(腺癌、ウィルムス腫瘍[腎芽腫]、リンパ腫、白血病)、膀胱および尿道(扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌)、前立腺(腺癌、肉腫)、精巣(精上皮腫、奇形腫、胚性癌腫、奇形癌腫、絨毛癌、肉腫、間質細胞癌腫、線維腫、線維腺腫、類腺腫瘍、脂肪腫);
肝臓: 肝細胞腫(肝細胞癌)、胆管癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫;
骨: 骨原性肉腫(骨肉腫)、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫(細網肉腫)、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫脊索腫、osteochronfroma (骨軟骨性外骨腫)、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫(chondromyxofibroma)、類骨骨腫および巨細胞腫;
神経系: 頭蓋(骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎)、髄膜(髄膜腫、髄膜肉腫(meningiosarcoma)、神経膠腫症)、脳(星細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、上衣細胞腫、胚細胞腫[松果体腫]、多形性グリア芽細胞腫(glioblastoma multiform)、乏突起膠腫、シュワン腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍)、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫);
婦人科: 子宮(子宮内膜癌)、子宮頸部(子宮頸癌、前腫瘍(pre-tumor)子宮頸部形成異常)、卵巣(卵巣癌[漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、未分類の癌腫]、顆粒膜-髄膜(granulosa-thecal)細胞腫、セルトリ-ライディッヒ細胞腫、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫)、外陰(扁平上皮癌、上皮内癌腫、腺癌、線維肉腫、黒色腫)、膣(明細胞癌腫、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫(胚性横紋筋肉腫]、ファロピウス管(癌腫);
血液: 血液(骨髄球性白血病[急性および慢性]、急性リンパ性(リンパ芽球性)白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群)、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫[悪性リンパ腫];
皮膚: 悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫(Karposi's sarcoma)、モウルスディスプラスチックニーバス（moles dysplastic nevus）、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬; および
副腎: 神経芽細胞腫。
【０１３５】
本明細書中で使用されるように、癌の処置には、癌性細胞の処置が含まれ、癌性細胞には、上で特定される症状のいずれか1つに罹患している細胞が含まれる。ゆえに、本明細書中で提供される用語「癌性細胞」には、上で特定される症状のいずれか1つに罹患している細胞が含まれる。
【０１３６】
本発明の別の有用な態様は、本明細書に記載の少なくとも1つの化学物質および、該少なくとも1つの化学物質の有効量を投与することによって細胞の増殖性疾患を処置する説明を含む添付文書または他のラベルを有するキットである。本発明のキット中の化学物質は、特に、細胞の増殖性疾患の処置過程のための1以上の用量として提供され、各用量は医薬賦形剤および本明細書中に記載の少なくとも1つの化学物質を含む医薬製剤である。
【０１３７】
有糸分裂キネシンをモジュレートする活性のアッセイに関して、概して、有糸分裂キネシンまたは本明細書中に記載の少なくとも1つの化学物質は、単離されたサンプルを収容する領域を有する不溶性支持体(例えば、マイクロタイタープレート、アレイ、等)に結合しており、拡散できない。該不溶性支持体は、サンプルが結合できる任意の組成でできていてよく、可溶性材料から容易に分離でき、かつ、別の点でも、スクリーニング方法全体と適合する。そのような支持体の表面は中実または多孔性で、かつ任意の好都合な形状であってよい。好適な不溶性支持体の例には、マイクロタイタープレート、アレイ、メンブレンおよびビーズが含まれる。これらは、典型的に、ガラス、プラスチック(例えば、ポリスチレン)、多糖類、ナイロンまたはニトロセルロース、テフロン（商標）、等でできている。マイクロタイタープレートおよびアレイは、少量の試薬およびサンプルを使用して多数のアッセイを同時に実行できるので、特に好都合である。サンプル結合の具体的様式は、本発明の試薬および方法全体と適合し、かつ該サンプルの活性を維持し、かつ非拡散性である限り、重大ではない。結合の具体的方法には、抗体(該タンパク質が支持体に結合している場合、リガンド結合部位または活性化配列を立体的にブロックしない)、「粘着性」またはイオン性支持体に対する直接結合、化学架橋、表面上での該タンパク質または物質の合成、等の使用が含まれる。サンプルの結合後、過剰の未結合材料を洗浄によって除去する。そして、ウシ血清アルブミン(BSA)、カゼインまたは他の無害なタンパク質または他の部分とインキュベートすることによってサンプル収容領域をブロックしてよい。
【０１３８】
本発明の化学物質を単独で使用して有糸分裂キネシンの活性を阻害してよい。いくつかの実施形態では、本発明の少なくとも1つの化学物質を有糸分裂キネシンと組み合わせ、有糸分裂キネシンの活性をアッセイする。キネシン活性は当技術分野において公知であり、1以上の下記活性が含まれる: ATP加水分解に影響する能力; 微小管結合;滑走および重合/脱重合(微小管動態に対する影響); 紡錘体の他のタンパク質に対する結合; 細胞周期調節に関与するタンパク質に対する結合; 他の酵素、例えばキナーゼまたはプロテアーゼの基質として働くこと; および特異的キネシン細胞活性、例えば紡錘体極分離。
【０１３９】
運動性アッセイを実施する方法は当業者に周知である(例えば、Hall, et al. (1996), Biophys. J., 71: 3467-3476, Turner et al., 1996, AnaL Biochem. 242 (1):20-5; Gittes et al., 1996, Biophys. J. 70(l): 418-29; Shirakawa et al., 1995, J. Exp. BioL 198: 1809-15; Winkelmann et al., 1995, Biophys. J. 68: 2444-53; Winkelmann et al., 1995, Biophys. J. 68: 72Sを参照のこと)。
【０１４０】
当技術分野において公知の、ATPアーゼ加水分解活性を決定するための方法を使用することもできる。好適には、溶液ベースのアッセイを利用する。米国特許6,410,254 (ここに参照によりその全体が組み入れられる)には、そのようなアッセイが記載されている。あるいは、慣用の方法を使用する。例えば、キネシン(およびより具体的には、有糸分裂キネシンのモータードメイン)からのPi放出を定量することができる。いくつかの実施形態では、ATPアーゼ加水分解活性アッセイは、0.3 M PCA (過塩素酸)およびマラカイトグリーン試薬(8.27 mMモリブデン酸ナトリウムII、0.33 mM マラカイトグリーンオキサラート、および0.8 mMトリトンX-1 00)を利用する。該アッセイを実施するために、10μLの反応混合物を90μLの冷0.3 M PCA中でクエンチする。リン酸標準を使用し、それによりデータを、放出された無機リン酸のmMに変換することができる。すべての反応および標準がPCA中でクエンチされたら、100μLのマラカイトグリーン試薬を、例えばマイクロタイタープレート中の該当するウェルに加える。混合物を10〜15分間展開し、650 nmの吸光度でプレートを読み取る。リン酸標準を使用した場合、吸光度の読み取り値をPiのmMに変換し、時間に対してプロットすることができる。さらに、当技術分野において公知のATPアーゼアッセイには、ルシフェラーゼアッセイが含まれる。
【０１４１】
キネシンモータードメインのATPアーゼ活性を使用して物質の影響をモニターすることもでき、それは当業者に周知である。いくつかの実施形態では、微小管の不存在下でキネシンのATPアーゼアッセイを実施する。いくつかの実施形態では、微小管の存在下でATPアーゼアッセイを実施する。上記アッセイにおいて、異なるタイプの物質を検出することができる。いくつかの実施形態では、物質の影響は微小管およびATPの濃度と無関係である。いくつかの実施形態では、ATP、微小管または両者の濃度を増加させることによって、キネシンATPアーゼに対する物質の影響を減少させることができる。いくつかの実施形態では、ATP、微小管または両者の濃度を増加させることによって物質の影響を増加させる。
【０１４２】
そして、in vitroで有糸分裂キネシンの生化学的活性を阻害する化学物質をin vivoでスクリーニングしてよい。in vivoスクリーニング法には、細胞周期分布、細胞生存度、または紡錘体の存在、形態、活性、分布、または数のアッセイが含まれる。例えばフローサイトメトリーによって細胞集団の細胞周期分布をモニターするための方法は、細胞生存度を決定するための方法と同様に、当業者に周知である。例えば、米国特許6,437,115 (ここに参照によりその全体が組み入れられる)を参照のこと。紡錘体形成および形成異常をモニターするための微視的方法は当業者に周知である(例えば、Whitehead and Rattner (1998), J. Cell Sci. 111:2551-61; Galgio et al, (1996) J. Cell Biol., 135:399-414を参照のこと(各文献は参照によりその全体が本明細書中に組み入れられる))。
【０１４３】
本発明の化学物質は1以上の有糸分裂キネシンを阻害する。阻害の一尺度はIC50である。IC50は、有糸分裂キネシンの活性がコントロールと比較して50パーセント減少する化学物質の濃度として定義される。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約1 mM未満のIC50を有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約100μM未満のIC50を有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約10μM未満のIC50を有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約1μM未満のIC50を有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約100 nM未満のIC50を有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約10 nM未満のIC50を有する。IC50の測定は、本明細書中に記載のアッセイ等のATPアーゼアッセイを使用して行う。
【０１４４】
阻害の別の尺度はKiである。1μM未満のIC50を有する化学物質では、KiまたはKdは、本明細書中に記載の化合物と有糸分裂キネシンの相互作用に関する解離速度定数として定義される。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約100μM未満のKiを有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約10μM未満のKiを有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約1μM未満のKiを有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約100 nM未満のKiを有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約10 nM未満のKiを有する。
【０１４５】
化学物質に関するKiは、3つの仮定およびミカエリス・メンテンの式に基づいてIC50から決定される。第一に、1つの化合物分子のみが酵素に結合し、協同作用は存在しない。第二に、活性な酵素および試験化合物の濃度は既知である(すなわち、調製物中に有意な量の不純物または不活性型は存在しない)。第三に、酵素-インヒビター複合体の酵素速度はゼロである。該速度(すなわち化合物濃度)データは以下の式に近似される:
【数１】
2009514875.tif 000016
【０１４６】
(式中、Vは実測の速度であり、Vmaxは遊離酵素の速度であり、I0はインヒビター濃度であり、E0は酵素濃度であり、およびKdは酵素-インヒビター複合体の解離定数である)。
【０１４７】
阻害の別の尺度はGI50である。GI50は、細胞増殖の割合を50パーセント減少させる化学物質の濃度として定義される。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約1 mM未満のGI50を有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約20μM未満のGI50を有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約10μM未満のGI50を有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約1μM未満のGI50を有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約100 nM未満のGI50を有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約10 nM未満のGI50を有する。GI50の測定は、本明細書中に記載のアッセイ等の細胞増殖アッセイを使用して行う。このクラスの化学物質は細胞増殖を阻害することが分かっている。
【０１４８】
小分子インヒビターのin vitro効力は、例えばヒト卵巣癌細胞(SKOV3)を9点希釈系列の化合物に対する72時間の曝露後の生存度に関してアッセイすることによって決定する。細胞生存度は、市販の試薬であるMTS/PMSの生体還元によって形成される生成物ホルマゾン(formazon)の吸光度を測定することよって決定する。72時間の時点で無処理コントロール細胞からバックグラウンド吸収(完全細胞死滅)を引いたパーセントとして、用量反応曲線の各点を計算する。
【０１４９】
本明細書中に記載の化学物質はCENP-Eを阻害する。阻害の一尺度はIC50である。IC50は、CENP-Eの活性がコントロールと比較して50パーセント減少する化学物質の濃度として定義される。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約1 mM未満のIC50を有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約100μM未満のIC50を有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約10μM未満のIC50を有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約1μM未満のIC50を有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約100 nM未満のIC50を有する。いくつかの実施形態では、少なくとも1つの化学物質は約10 nM未満のIC50を有する。IC50の測定は、本明細書中に記載のアッセイ等のATPアーゼアッセイを使用して行う。
【０１５０】
クリニックで癌の処置にうまく適用されている抗増殖性化合物(癌化学療法剤)は、非常に様々なGI50を有する。例えば、A549細胞では、パクリタキセルGI50は4 nMであり、ドキソルビシンは63 nMであり、5-フルオロウラシルは1μMであり、ヒドロキシ尿素は500μMである(National Cancer Institute, Developmental Therapeutic Program, http://dtp.nci.nih.gov/によって提供されるデータ)。したがって、細胞増殖を阻害する化合物は、阻害を示す濃度と無関係に、潜在的な臨床有用性を有する。
【０１５１】
有糸分裂キネシンに結合する化合物のスクリーニング方法で本発明の化学物質を用いるために、有糸分裂キネシンを支持体に結合させて、本発明の化合物をアッセイに加える。あるいは、本発明の化学物質を支持体に結合させて、有糸分裂キネシンを加える。新規結合物質を捜し出す対象であるクラスの化合物には、特異的抗体、化学物質ライブラリーのスクリーニングによって特定される非天然結合物質、ペプチドアナログ、等が含まれる。特に興味深いのは、ヒト細胞に対して低い毒性を有する候補物質のスクリーニングアッセイである。多種多様なアッセイをこの目的で使用してよく、それには、標識in vitroタンパク質-タンパク質結合アッセイ、電気泳動度移動検定、タンパク質結合に関する免疫アッセイ、機能アッセイ(リン酸化アッセイ、等)等が含まれる。
【０１５２】
本発明の化学物質と有糸分裂キネシンの結合についての決定はいくつかの様式で行うことができる。いくつかの実施形態では、化学物質を、例えば蛍光性または放射性部分で標識して、結合を直接測定する。例えば、有糸分裂キネシンのすべてまたは部分を固形支持体に取り付け、標識試験化合物(例えば、少なくとも1原子が、検出可能な同位体によって置換されている本発明の化学物質)を加え、過剰の試薬を洗浄して除去し、および該標識の量が固形支持体上に存在する量であるかどうかを測定することによってこの決定を行ってよい。
【０１５３】
本明細書中で「標識(された)」とは、化合物が、検出可能なシグナルを提供する標識、例えば放射性同位体、蛍光タグ、酵素、抗体、粒子、例えば磁性粒子、化学発光タグ、または特異的結合分子、等で直接または間接的に標識されていることを意味する。特異的結合分子には、ビオチンおよびストレプトアビジン、ジゴキシンおよび抗ジゴキシン等のペアが含まれる。特異的結合メンバーでは、補完メンバーは、通常、上で概説されるように、既知の手順にしたがって、検出を提供する分子で標識されている。該標識は、直接または間接的に、検出可能なシグナルを提供することができる。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、成分の1つのみを標識する。例えば、125Iを使用して、またはフルオロフォアを用いて、キネシンタンパク質をチロシン位置で標識してよい。あるいは、2以上の成分を異なる標識で標識してよく; 例えば、タンパク質に関して125Iを使用し、かつ有糸分裂阻害剤に関してフルオロフォア(fluorophor)を使用して標識する。
【０１５５】
本発明の化学物質を競合物質として使用して追加の薬物候補をスクリーニングしてもよい。本明細書中で使用される「候補物質」または「薬物候補」または文法上の同等表現は、生物活性の試験対象である任意の分子、例えばタンパク質、オリゴペプチド、有機小分子、多糖、ポリヌクレオチド、等をさす。それらは、細胞増殖表現型または核酸配列およびタンパク質配列の両者を含めた細胞増殖配列の発現を直接または間接的に改変可能である。他の事例では、細胞増殖タンパク質結合および/または活性の変化をスクリーニングする。この種類のスクリーニングは微小管の存在または不存在下で実施してよい。タンパク質結合または活性をスクリーニングする場合、特定の実施形態では、該特定タンパク質に結合することが既知の分子、例えばポリマー構造、例えば微小管、およびエネルギー供給源、例えばATPを除外する。本明細書中のアッセイの具体的実施形態には、本明細書中で「外因性」物質と称される、その内因性の天然の状態では細胞増殖タンパク質を拘束しない候補物質が含まれる。いくつかの実施形態では、外因性物質からは、さらに、有糸分裂キネシンに対する抗体が除外される。
【０１５６】
候補物質は多数の化学物質クラスを包含しうるが、典型的には、それらは、100ダルトンより大きく、かつ約2,500ダルトン未満の分子量を有する小さい有機化合物である。候補物質は、タンパク質との構造的相互作用、特に水素結合および親油性結合に必要な官能基を含み、典型的に、少なくともアミン、カルボニル、ヒドロキシ、エーテル、またはカルボキシル基を含み、概して、該機能的化学基の少なくとも2つを含む。候補物質は、1以上の上記官能基で置換されている環式炭素または複素環式構造および/または芳香族または多環芳香族構造を含むことが多い。候補物質は生体分子中でも見出され、それには、ペプチド、糖類、脂肪酸、ステロイド、プリン、ピリミジン、誘導体、構造アナログまたはその組み合わせが含まれる。
【０１５７】
候補物質は、合成または天然化合物のライブラリーを含めた多種多様な供給源から取得される。例えば、多種多様な有機化合物および生体分子をランダムおよび計画的に合成するための多数の手段が利用可能であり、それには、ランダム化オリゴヌクレオチドの発現が含まれる。あるいは、細菌、真菌、植物および動物抽出物の形態の天然化合物のライブラリーが入手可能であるか、または容易に作成することができる。さらに、天然ライブラリーおよび化合物または合成によって作成されたライブラリーおよび化合物を、慣用の化学的、物理的および生化学的手段によって容易に修飾することができる。公知の薬理学的物質を計画的またはランダムな化学修飾、例えばアシル化、アルキル化、エステル化、および/またはアミド化(amidification)に付して、構造アナログを製造してよい。
【０１５８】
第一サンプル中で有糸分裂キネシンと薬物候補を組み合わせることによって競合的スクリーニングアッセイを行ってよい。第二サンプルは、少なくとも1つの本発明の化学物質、有糸分裂キネシンおよび薬物候補を含む。これは微小管の存在または不存在下で実施してよい。両サンプルに関して薬物候補の結合を決定する。変化、すなわち2サンプル間の結合の差異は、有糸分裂キネシンに結合可能で、かつ、その活性を潜在的に阻害可能な薬物候補の存在を示す。すなわち、第一サンプルと比較して第二サンプル中で薬物候補の結合が異なれば、該薬物候補は有糸分裂キネシンに結合可能である。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、競合的結合アッセイの使用によって有糸分裂キネシンに対する候補物質の結合を決定する。いくつかの実施形態では、該競合物質は、有糸分裂キネシンに結合することが知られている結合部分、例えば抗体、ペプチド、結合パートナー、リガンド、等である。特定状況下では、候補物質および結合部分の間で、結合部分が候補物質に取って代わるような、競合的結合が存在する。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、候補物質を標識する。最初に、候補物質、または競合物質、または両者を有糸分裂キネシンに対して加える。結合が存在すれば、該結合を可能にするために十分な時間加える。最適な活性を促進する任意の温度、典型的には4〜40℃の範囲でインキュベーションを実施してよい。
【０１６１】
インキュベーション時間は最適活性のために選択するが、高速ハイスループットスクリーニングを容易にするために最適化してもよい。典型的には、0.1〜1時間の範囲で十分である。一般に、過剰の試薬を除去するか、または洗浄して除く。そして第二の成分を加え、結合を示す標識成分の存在または不存在を追跡する。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、まず競合物質を加え、次いで候補物質を加える。競合物質の置換は、候補物質が有糸分裂キネシンに対して結合しており、ゆえに有糸分裂キネシンに結合可能であり、潜在的にその活性を阻害可能であることの証拠である。いくつかの実施形態では、いずれかの成分を標識することができる。ゆえに、例えば、競合物質を標識する場合、洗浄溶液中の標識の存在は物質による置換を示す。あるいは、候補物質を標識する場合、支持体上の標識の存在は置換を示す。
【０１６３】
いくつかの実施形態では、まず候補物質を加え、インキュベーションおよび洗浄を行い、次いで競合物質を加える。競合物質による結合の不存在は、より高い親和性で候補物質が有糸分裂キネシンに結合していることを示しうる。ゆえに、候補物質を標識する場合、競合物質結合の欠落を伴う支持体上の標識の存在は、候補物質が有糸分裂キネシンに結合可能であることを示しうる。
【０１６４】
有糸分裂キネシンの活性を阻害可能な候補物質をスクリーニングすることによって阻害を試験する。該スクリーニングは、候補物質を上記のように有糸分裂キネシンと組み合わせるステップ、および有糸分裂キネシンの生物学的活性の変化を決定するステップを含む。すなわち、いくつかの実施形態では、候補物質は有糸分裂キネシンに結合し(このことは必要でないことがある)、かつ本明細書中で定義されるその生物学的または生化学的活性を変化させるべきであろう。該方法には、上で概説されるように、細胞周期分布、細胞生存度の変化、または紡錐体の存在、形態、活性、分布、または量に関する細胞のin vitroスクリーニング法およびin vivoスクリーニングの両者が含まれる。
【０１６５】
あるいは、示差スクリーニングを使用して、天然型有糸分裂キネシンに結合するが、修飾型有糸分裂キネシンに結合できない薬物候補を特定しうる。
【０１６６】
ポジティブコントロールおよびネガティブコントロールを該アッセイで使用してよい。好適には、統計学的に有意な結果を得るために、すべてのコントロールおよび試験サンプルを少なくとも3回実施する。すべてのサンプルのインキュベーションは、該物質とタンパク質の結合に十分な時間行う。インキュベーション後、すべてのサンプルを洗浄して、非特異的に結合している材料を除き、一般に標識されている結合物質の量を決定する。例えば、放射性標識を用いる場合、サンプルをシンチレーションカウンターでカウントして結合化合物の量を決定しうる。
【０１６７】
種々の他の試薬を該スクリーニングアッセイに加えてもよい。これらの試薬には、最適なタンパク質-タンパク質結合を促し、かつ/または非特異的またはバックグラウンド相互作用を低減するために使用しうる試薬、例えば塩、中性タンパク質、例えばアルブミン、界面活性剤、等が含まれる。さらに、別の様式でアッセイの効率を向上させる試薬、例えばプロテアーゼインヒビター、ヌクレアーゼインヒビター、抗菌剤、等を使用してよい。必要な結合を提供する任意の順序で成分の混合物を加えてよい。
【０１６８】
状況に応じて、本発明の化学物質を細胞に投与する。本明細書中で「投与された」とは、細胞培養または患者において、少なくとも1つの本発明の化学物質の治療有効量を細胞に投与することを意味する。本明細書中で「治療有効量」とは、投与の目的である影響を生じさせる用量を意味する。厳密な用量は処置の目的に依存し、当業者は公知の技術を使用してそれを突き止めることができる。当技術分野において知られているように、全身送達対局所送達、年齢、体重、全般的健康、性別、食事、投与期間、薬物相互作用および症状の重症度に関する調整が必要であり、当業者は所定の実験法でそれを突き止めることができる。本明細書中で「細胞」とは、有糸分裂または減数分裂を改変できる任意の細胞を意味する。
【０１６９】
本発明において「患者」には、ヒトおよび他の動物、特に哺乳類、および他の生物がともに含まれる。ゆえに、本方法はヒトの治療および獣医学適用にともに適用可能である。いくつかの実施形態では、患者は哺乳類であり、さらに特に、患者はヒトである。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、本明細書中で記載されるように、所望の薬理学的活性を有する本発明の化学物質を、医薬賦形剤を含む製薬的に許容される組成物として患者に投与してよい。導入の様式に応じて、下記考察のように種々の様式で化学物質を製剤化してよい。製剤中の少なくとも1つの化学物質の濃度は約0.1〜100 wt.%で変動する。
【０１７１】
該物質は、単独で、または他の処置、すなわち照射、または他の化学療法剤、例えば微小管形成に対して作用すると思われるタキサンクラスの物質またはカンプトセシンクラスのトポイソメラーゼIインヒビターと組み合わせて投与してよい。使用時、本発明の少なくとも1つの化学物質の投与前に、投与と同時に、または投与後に他の化学療法剤を投与してよい。本発明の一態様では、本発明の少なくとも1つの化学物質を1以上の他の化学療法剤と共投与する。「共投与する(co-administer)」とは、化合物が実際に投与された時点にかかわらず、少なくとも1つの化学物質ならびに共投与化合物が患者の血流中で同時に見出されるように、少なくとも1つの化学物質を患者に投与することを意味し、同時投与を含む。
【０１７２】
本発明の化学物質の投与は種々の様式で行うことができる。該様式には、非限定的に、経口、皮下、静脈内、鼻腔内、経皮、腹腔内、筋肉内、肺内、経膣、経直腸、または眼内投与が含まれる。いくつかの場合、例えば、創傷および炎症の処置において、化合物または組成物を溶液またはスプレーとして直接適用してよい。
【０１７３】
医薬剤形は、本明細書中に記載の少なくとも1つの化学物質および1以上の医薬賦形剤を含む。当技術分野において知られているように、医薬賦形剤は、種々の剤形(例えば: 経口剤形、例えば錠剤、カプセル剤、および液剤; 局所用剤形、例えば皮膚、眼、および耳用の剤形; 坐剤; 注射剤; 呼吸器用の剤形等)の薬物または医薬の送達を可能にするか、または向上させるために機能する二次的成分である。医薬賦形剤には、不活性成分、協力剤または、活性成分の医学的効果に実質的に寄与する化学物質が含まれる。例えば、医薬賦形剤は、流動特性、製品均質性、安定性、食味、または外観を改善するか、使用の利便性のために、取扱いおよび用量の投与を容易にするか、またはバイオアベイラビリティを調節するよう機能する。医薬賦形剤は、通常、不活性であると説明されるが、医薬賦形剤の特性とそれらを含有する剤形の間に関係があることが当技術分野において理解される。
【０１７４】
担体または希釈剤としての使用に好適な医薬賦形剤は当技術分野において周知であり、種々の製剤中でそれらを使用してよい。例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, A. R. Gennaro, Editor, Mack Publishing Company (1990); Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, A. R. Gennaro, Editor, Lippincott Williams & Wilkins (2000); Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd Edition, A. H. Kibbe, Editor, American Pharmaceutical Association, and Pharmaceutical Press (2000); およびHandbook of Pharmaceutical Additives, compiled by Michael and Irene Ash,Gower (1995)を参照のこと。各文献は、あらゆる目的において、参照により本明細書中に組み入れられる。
【０１７５】
経口固形剤形、例えば錠剤は、典型的に、1以上の医薬賦形剤を含み、該医薬賦形剤は、例えば、満足な加工および圧縮特性を付与するために役立ち、または錠剤に追加の望ましい物理的特性をもたらす。そのような医薬賦形剤は、希釈剤、結合剤、流動促進剤、滑沢剤、崩壊剤、染料、香料、甘味剤、ポリマー、ワックスまたは他の溶解遅延材料から選択してよい。
【０１７６】
静脈内投与用の組成物は、概して、静脈内輸液、すなわち、循環系によって容易に運搬され、かつ吸収できる、単純な化学物質、例えば糖、アミノ酸または電解質の滅菌溶液を含む。そのような輸液は注射用水USPを用いて調製される。
【０１７７】
非経口投与用の剤形は、概して、輸液、特に静脈内輸液、すなわち、循環系によって容易に運搬され、かつ吸収できる、単純な化学物質、例えば糖、アミノ酸または電解質の滅菌溶液を含む。そのような輸液は典型的に注射用水USPを用いて調製される。静脈内(IV)用途に通常使用される輸液は、Remington, The Science and Practice of Pharmacy [完全な引用は上に挙げる]に開示されており、それには以下の輸液が含まれる:
アルコール、例えば5%アルコール(例えば、デキストロースおよび水(「D/W」)または生理食塩水溶液(「NSS」)中のD/W中のアルコール、例えば5%デキストロースおよび水(「D5/W」)、またはNSS中のD5/W中のアルコール);
合成アミノ酸、例えばAminosyn、FreAmine、Travasol、例えばそれぞれ3.5または7; 8.5; 3.5、5.5または8.5 %;
塩化アンモニウム、例えば2.14%;
デキストラン40、NSS中、例えば10%またはD5/W中、例えば10%;
デキストラン70、NSS中、例えば6%またはD5/W中、例えば6%;
デキストロース(グルコース、D5/W)、例えば2.5〜50%;
デキストロースおよび塩化ナトリウム、例えば5〜20%デキストロースおよび0.22〜0.9% NaCl;
乳酸加リンガー(ハートマン)、例えばNaCl 0.6%、KCl 0.03%、CaCl2 0.02%;
乳酸0.3%;
マンニトール、例えば5%、場合によりデキストロース、例えば10%またはNaCl、例えば15または20%と組み合わされている;
種々の組み合わせの電解質、デキストロース、フルクトース、転化糖リンガー、例えばNaCl 0.86%、KCl 0.03%、CaCl2 0.033%を含む多電解質輸液;
炭酸水素ナトリウム、例えば5%;
塩化ナトリウム、例えば0.45、0.9、3、または5%;
乳酸ナトリウム、例えば1/6 M; および
注射用滅菌水。
【０１７８】
そのようなIV輸液のpHは様々であり、当技術分野において知られているように典型的には3.5〜8である。
【０１７９】
本発明の化学物質は、単独で、または他の処置、すなわち照射、または他の治療薬、例えば微小管形成に対して作用すると思われるタキサンクラスの物質またはカンプトセシンクラスのトポイソメラーゼIインヒビターと組み合わせて投与することができる。その使用時、他の治療物質は、本発明の活性物質の投与前に、投与と同時に(別々の剤形であろうと複合剤形であろうと)、または投与後に投与することができる。
【０１８０】
以下の実施例は、上記発明の使用様式をより完全に説明するため、ならびに本発明の種々の態様を実行するために考慮される最良の様式を記載するためのものである。これらの実施例は決して本発明の真の範囲を限定するためのものではなく、説明のために提供されるものであることが理解される。本明細書中で引用されるすべての刊行物(非限定的に特許および特許出願が含まれる)は、個別の各刊行物が、具体的かつ個別に、参照により本明細書中に、完全に記載されているかのように、組み入れられることが指定されているかのように、参照により本明細書中に組み入れられる。
【実施例】
【０１８１】
実施例1: 3-(4-(ベンジルオキシ)フェニル)-N-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-2-(N,N-ジメチルスルファモイルアミノ)プロパンアミドの製造
【化１３】
2009514875.tif 000017
【０１８２】
実験セクション:
【化１４】
2009514875.tif 000018
【０１８３】
DMF (15 mL)中の1-イソプロポキシ-4-ニトロベンゼン1.1 (2 g, 11.0 mmol)の溶液に、N-クロロスクシンイミド(NCS) (1.8 g, 13.2 mmol)を0℃で加えた。0℃で4時間撹拌した後、反応混合物を室温にあたため、14時間撹拌した。アセトニトリルおよびH2Oの混合物を使用するRP-HPLCで混合物を精製し、1.2 (1.8 g, 76%)を得た。生成物を1H NMRによって特徴付けした。
【化１５】
2009514875.tif 000019
【０１８４】
1.2 (1.7 g, 7.88 mmol)、鉄粉末(1.3 g, 23.2 mmol)およびメタノール(35 mL)の撹拌混合物に濃HCl (4 mL)を加えた。反応溶液を室温で一晩撹拌した後、飽和ナトリウムNaHCO3を加えることによって溶液のpHを塩基性化し、DCM (250 mL)で希釈した。有機層をH2Oおよびブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して、1.3を得た。生成物をさらに精製することなく次のステップで使用した。
【化１６】
2009514875.tif 000020
【０１８５】
DMF (10 mL)中の1.4 (1.2 g, 3.2 mmol)の溶液に、HBTU (1.18 g, 3.2 mmol)および粗製の1.3 (480 mg, 2.6 mmol)を加えた。反応混合物を14時間撹拌した。アセトニトリルおよびH2Oの混合物を使用するRP-HPLCで混合物を精製し、1.5 (450 mg, 1.2から32%)を得た。LRMS (M+H+) m/z 539.1。
【化１７】
2009514875.tif 000021
【０１８６】
DCM (20 mL)中の1.5 (400 mg, 0.74 mmol)の溶液にTFA (2 mL)を加えた。反応混合物を4時間撹拌した。混合物を濃縮し、アセトニトリルおよびH2Oの混合物を使用するRP-HPLCで精製して、1.6をTFA塩(400 mg, quant.)として得た。LRMS (M+H+) m/z 439.0。
【化１８】
2009514875.tif 000022
【０１８７】
DCM (5 mL)中の1.6 (TFA塩, 50 mg, 0.09 mmol)の溶液に、ジメチルスルファモイルクロライド(32 uL, 0.18 mmol)、DIEA (79 uL, 0.45 mmol)およびDMAP (20 mg, 0.18 mmol)を加えた。反応混合物を14時間撹拌した。混合物を濃縮し、アセトニトリルおよびH2Oの混合物を使用するRP-HPLCで精製して、1 (15 mg, 31%)を得た。LRMS (M+H+) m/z 546.5。
【０１８８】
実施例2: 3-(4-(ベンジルオキシ)フェニル)-N-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-2-(3-メチルウレイド)プロパンアミドの製造
【化１９】
2009514875.tif 000023
【０１８９】
実験セクション:
【化２０】
2009514875.tif 000024
【０１９０】
DCM (5 mL)中の6 (TFA塩, 50 mg, 0.09 mmol)の溶液に、MeNCO (10 uL, 0.18 mmol)およびDIEA (32 uL, 0.18 mmol)を加えた。反応混合物を4時間撹拌した。混合物を濃縮し、アセトニトリルおよびH2Oの混合物を使用するRP-HPLCで精製して、8 (45 mg, quant.)を得た。LRMS (M+H+) m/z 496.1。
【０１９１】
実施例3: 2-((4-(ベンジルオキシ)ベンジル)(2-ヒドロキシエチル)アミノ)-1-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)エタノールの製造
【化２１】
2009514875.tif 000025
【０１９２】
DMF (150 mL)中の4-イソプロポキシル安息香酸3.1 (25 g, 140 mmol)の溶液にNCS (24 g, 182 mmol)を加えた。反応混合物を一晩撹拌した。H2O (500 mL)を反応混合物に加えた。沈殿を回収し、水で洗浄し、乾燥して、3.2 (26.4 g, 88 %)を白色固形物として得た。生成物をさらに精製することなく次のステップで使用した。
【化２２】
2009514875.tif 000026
【０１９３】
DMF (40 mL)中の3.2 (10 g, 46.6 mmol)およびCH3NO2 (20.95 mL, 39 mmol)の溶液に、ジエチルシアノホスホネート(7.1 mL, 46.6 mmol)およびトリエチルアミン(16.4 mL, 117 mmol)を0℃で加えた。反応混合物を室温にあたため、14時間撹拌した。混合物を濃縮して3.3を得た。生成物をさらに精製することなく次のステップで使用した。
【化２３】
2009514875.tif 000027
【０１９４】
THF (35 mL)中の3.3 (1.3 g, 5 mmol)の溶液にNaBH4 (230 mg, 6 mmol)を0℃で加えた。反応混合物を90分間撹拌した。そしてLiAlH4 (THF中1 M, 6 mL)を滴加した。反応混合物をMeOH (7 mL)でクエンチし、濃縮した。得られた残留物をEtOAcで抽出した。EtOAc溶液をHCl (1M)で洗浄した。そして水層を濃縮し、高真空下で乾燥した。得られた固形物をMeOHで抽出し、ろ過し、濃縮し、アセトニトリルおよびH2Oの混合物を使用するRP-HPLCで精製して、3.4 (105 mg, 3.2から9%)を得た。LRMS (M+H+-H2O) m/z 212.0。
【化２４】
2009514875.tif 000028
【０１９５】
DCM (6 mL)中の3.4 (250 mg, 0.94 mmol)の溶液に、DIEA (99 uL, 0.56 mmol)、Na(OAc)3BH (260 mg, 1.23 mmol)およびアルデヒド3.5 (220 mg, 1.03 mmol)を0℃で加えた。反応混合物を室温にあたため、14時間撹拌した。反応混合物を飽和NaHCO3でクエンチし、DCMで希釈した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、アセトニトリルおよびH2Oの混合物を使用するRP-HPLCで精製して、3.6 (120 mg, 30%)を得た。LRMS (M+H+) m/z 426.1。
【化２５】
2009514875.tif 000029
【０１９６】
DCM (5 mL)中の3.6 (60 mg, 0.14 mmol)の溶液に、Na(OAc)3BH (36 mg, 0.17 mmol)およびアルデヒド3.7 (30 mg, 0.17 mmol)を0℃で加えた。反応混合物を室温にあたため、10時間撹拌した。反応混合物を飽和NaHCO3でクエンチし、DCMで希釈した。有機層をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、アセトニトリルおよびH2Oの混合物を使用するRP-HPLCで精製して、3 (5 mg, 8%)を得た。LRMS (M+H+) m/z 470.5。
【０１９７】
実施例4: (S)-3-アセトアミド-4-(4-(2-tert-ブチル-1H-イミダゾール-4-イル)フェニル)ブチル3-シアノ-4-イソプロポキシベンゾエートの製造
【化２６】
2009514875.tif 000030
【０１９８】
実験セクション:
【化２７】
2009514875.tif 000031
【０１９９】
メタノール(200 mL)中のD-アスパラギン酸4.1 (59 g, 0.376 mol)の溶液に、HClガスを0℃で10分間バブルした。反応混合物を室温にあたため、一晩撹拌した。混合物を濃縮し、得られた残留物を乾燥して、4.2をHCl塩(0.376 mol)として得た。生成物をさらに精製することなく使用した。LRMS (M-H+) m/z 162.0。
【化２８】
2009514875.tif 000032
【０２００】
THF (200 mL)中の4.2 (0.376 mol)およびDIEA (196 mL, 1.13 mol)の撹拌溶液にクロロギ酸ベンジル(59.0 mL, 0.414 mol)を滴加した。反応溶液を室温で1時間撹拌した後、溶液を濃縮した。得られた残留物をNaHCO3溶液(300 mL)に溶解し、DCM (100 mL X 3)で抽出した。DCM溶液をまとめ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して、4.3 (0.376 mol)を得た。生成物をさらに精製することなく使用した。LRMS (M+H+) m/z 296.1。
【化２９】
2009514875.tif 000033
【０２０１】
THF (200 mL)およびH2O (100 mL)中の4.3 (0.376 mol)の溶液に水酸化リチウム(31.6 g, 0.752 mol)を加えた。反応混合物を2時間撹拌した。反応混合物をシリカゲルプラグを通してろ過し(ろ液のpHは約7であった)、濃縮した。残留物を乾燥して4.4 (0.376 mol)を得た。生成物をさらに精製することなく使用した。LRMS (M+H+) m/z 268.1。
【化３０】
2009514875.tif 000034
【０２０２】
無水酢酸(200 mL)中の4.4 (0.376 mol)の溶液を1時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物を真空下で乾燥して、4.5 (0.376 mol)を得た。生成物をさらに精製することなく使用した。
【化３１】
2009514875.tif 000035
【０２０３】
THF (1000 mL)中の4.5 (0.376 mol)の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム(14.2 g, 0.376 mol)を0℃で30分間かけて加えた。反応混合物を3時間撹拌した。HCl (4N)を使用して混合物をpH約2に酸性化した。溶液を約1/4に濃縮し、水(300 mL)で希釈し、エチルエーテル(200 mL X 3)で抽出した。エーテル溶液をまとめ、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空下で濃縮した。得られた残留物をベンゼン(300 mL)に溶解し、それにTsOH (500 mg)を加えた。反応混合物を還流温度で3時間撹拌した。溶液を約100 mLに濃縮し、エーテル(200 mL)を加えて、沈殿を形成させた。沈殿をろ過し、エーテルで洗浄し、乾燥して、4.6 (57.5 g, 4.1から65%)を得た。LRMS (M+H+) m/z 236.1。
【化３２】
2009514875.tif 000036
【０２０４】
メタノール(200 mL)中の4.6 (30.0 g, 0.128 mol)およびトリエチルアミン(142 mL, 1.02 mol)の溶液を一晩撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物を乾燥して4.7を得た。生成物を次のステップでそのまま使用した。LRMS (M+H+) m/z 268.1。
【化３３】
2009514875.tif 000037
【０２０５】
DCM (300 mL)中の化合物4.7 (0.128 mol)、Ph3P (50.4 g, 0.192 mol)およびイミダゾール(13.1 g, 0.192 mol)の溶液を0℃で10分間撹拌した。ヨウ素(48.7 g, 0.192 mol)を15分間かけて少しずつ加えた。反応混合物を室温にあたため、1時間撹拌した。固形物をろ過によって除いた。ろ液を飽和Na2SO3 (200 mL x 2)およびブライン(200 mL)で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。得られた残留物をシリカゲルで精製(ヘキサン:EtOAc 4:1〜1:1)し、化合物4.8 (27.5 g, 4.6から59.2%)を白色固形物として得た。LRMS (M+H+) m/z 378.0。
【化３４】
2009514875.tif 000038
【０２０６】
ジオキサン(100 mL)中の4-ヨードアセトフェノン4.9 (10 g, 40.6 mmol)の溶液に、臭素(2.18 mL, 42.7 mmol)を0℃で滴加した。反応混合物を30分間撹拌した。得られた溶液を濃縮した。残留物をジクロロメタン(200 mL)に溶解し、飽和(satd.) NaHCO3、H2Oおよびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮して、4.10を得た。DMF (100 mL)中の4.10の溶液に炭酸カリウム(16.8 g, 122 mmol)およびtert-ブチルカルバミジン塩酸塩4.11 (11.1 g, 81.2 mmol)を加えた。一晩撹拌した後、反応混合物をろ過し、ろ液を濃縮した。得られた残留物を、ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物を使用して、シリカゲルで精製し、4.12 (8.1 g, 61%)を得た。LRMS (M+Na+) m/z 327.0。
【化３５】
2009514875.tif 000039
【０２０７】
亜鉛粉末(607 mg, 9.28 mmol)および、10分間窒素でパージされたDMF (5 mL)の混合物に、1,2-ジブロモエタン(45.8 uL, 0.532 mmol)を加えた。混合物をヒートガンで約2分間加熱し、5分間冷却し、再度ヒートガンで加熱し、そして室温に冷却した。TMSCl (17 uL, 0.133 mmol)を混合物に加えた。混合物を30分間撹拌した後、4.8 (500 mg, 1.33 mmol)を加えた。1時間後、LCMSで4.8の完全消費が示された。上記反応溶液に、ヨウ化アリール4.12 (438 mg, 1.33 mmol)、Pd2(dba)3 (30.4 mg, 0.0333 mmol)およびトリ-o-トリルホスフィン(40.5 mg, 0.133 mmol)を加えた。反応混合物を50℃で1時間維持した(LC-MS分析によってモニターした)。反応混合物をシリカゲルプラグに直接積載し、ヘキサン:EtOAc (3:1〜1:1)で溶出させ、化合物4.13 (500 mg, 83%)を得た。LRMS (M+H+) m/z 450.2。
【化３６】
2009514875.tif 000040
【０２０８】
THF (50 mL)中の4.13 (500 mg, 1.11 mmol)の溶液に、LiAlH4 (2.22 mL, 2.22 mmol)を0℃で滴加した。反応混合物を20分間撹拌した。シリカゲルプラグに通して溶液をろ過し、ろ液を濃縮した。得られた残留物を酢酸(3 mL)中の濃臭化水素に溶解し、10分間撹拌し、濃縮した。残留物を酢酸エチル(100 mL)に溶解し、飽和NaHCO3、H2Oおよびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮して、4.14 (250 mg)を得た。生成物をさらに精製することなく使用した。LRMS (M+H+) m/z 330.2。
【化３７】
2009514875.tif 000041
【０２０９】
DMF (2 mL)中の4.14 (250 mg, 0.759 mmol)の溶液にDIEA (159 uL, 0.911 mmol)および4.15 (338 mg, 0.911 mmol)を加えた。反応混合物を1時間撹拌し、そして濃縮した。得られた残留物を、ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物を使用して、シリカゲルで精製し、4 (180 mg, 45%)を得た。LRMS (M+H+) m/z 517.3。
【０２１０】
実施例5: [(3S,4E)-3-[4-(2-t-ブチル-1-メチル-1H-イミダゾール-4-イル)ベンジル]-5-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-4-ペンテン-1-オールの製造
【化３８】
2009514875.tif 000042
【０２１１】
実験セクション:
【化３９】
2009514875.tif 000043
【０２１２】
[(3S,4E)-3-(4-ブロモベンジル)-5-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-4-ペンテン-1-オール
2-t-ブチル-1-メチル-1H-イミダゾール(5.2)
0℃のピバルデヒド(pivaldehyde) (40 g, 464 mMol)の撹拌溶液に、メタノール中の2 Mメチルアミン溶液(250 mL, 500 mMol)を加えた。2時間撹拌した後、炭酸アンモニウム(23 g, 240 mMol)および三量体のグリオキサール二水和物(33 g, 157 mMol)を加えた。反応物をゆっくり室温にあたため、18時間撹拌した。(最初は懸濁液であった反応物が透明な褐色溶液になった。) 反応物を真空下で濃縮し、高真空下で短経路によって蒸留した。標題生成物(28.65 g, 44%)を淡黄色油状物として得た。生成物を64〜66℃で0.2 mm Hgで蒸留した: 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ6.88 (d, J = 1.2 Hz, 1 H), 6.77 (d, J = 1.2 Hz, 1 H), 3.77 (s, 3 H), 1.45 (s, 9 H)。
【化４０】
2009514875.tif 000044
【０２１３】
2-t-ブチル-4,5-ジヨード-1-メチル-1H-イミダゾール(5.3)
DMF (400 mL)中の2-t-ブチル-1-メチル-1H-イミダゾール(28.36 g, 205 mMol)の撹拌溶液に、N-ヨードスクシンイミド(113 g, 502 mMol)を少しずつ加えた。反応物を撹拌し、90℃で18時間N2下で加熱した。室温(RT)に冷却した後、反応物を真空下で蒸発乾固した。残存する残留物をEtOAcにとり、水性チオ硫酸ナトリウム、ブラインで洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、ろ過し、真空下で蒸発させた。固形物をMeOH (100 mL)中でスラリーにした。撹拌しながら水(100 mL)をゆっくり加えて白色懸濁液を得た。該懸濁液をろ過し、小容量の(1:1) MeOH、H2Oですすぎ、真空下で乾燥し、標題化合物(67.21 g, 84%)を白色固形物として得た: MS (ES) m/e 390.6 (M + H)+; 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ3.80 (s, 3 H), 1.44 (s, 9 H)。
【化４１】
2009514875.tif 000045
【０２１４】
2-t-ブチル-4-ヨード-1-メチル-1H-イミダゾール(5.4)
N2下で0℃のTHF (100 mL)中の2-t-ブチル-4,5-ジヨード-1-メチル-1H-イミダゾール(25.19 g, 65 mMol)の撹拌溶液に、Et2O中の3.0 M EtMgBr溶液(25 mL, 75 mMol)を滴加した。(反応物は濁った懸濁液を形成した。) 反応物を0℃で30分間撹拌し、そして飽和水性NH4Cl (50 mL)で慎重にクエンチした。EtOAcで抽出し、ブラインで洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、ろ過し、真空下で蒸発乾固した後、標題化合物(16.58 g, 96%)を淡黄色固形物として得た: MS (ES) m/e 264.8 (M + H)+; 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ6.86 (s, 1 H), 3.75 (s, 3 H), 1.44 (s, 9 H)。
【化４２】
2009514875.tif 000046
【０２１５】
2-t-ブチル-1-メチル-4-(トリメチルスタナニル)-1H-イミダゾール(2-t-butyl-1-methyl-4-(trimethylstannanyl)-1H-imidazole) (5.5)
CH2Cl2 (80 mL)中の2-t-ブチル-4-ヨード-1-メチル-1H-イミダゾール(8.0 g, 30.3 mMol)の撹拌溶液に、Et2O中の3.0 M EtMgBr溶液(12 mL, 36 mMol)を室温でN2下で滴加した。1時間撹拌した後、THF中の1.0 Nトリメチルスズクロライド溶液(32 mL, 32 mMol)を5分間かけて滴加した。反応物を室温で16時間撹拌し、真空下で濃縮し、EtOAcにとり、水性NH4Clで洗浄し、乾燥(MgSO4)し、ろ過し、真空下で蒸発させた。真空下で短経路蒸留(0.2 mmHg, 110〜120℃)して、標題化合物(7.49 g, 82%)を透明な油状物として得た。該油状物を冷蔵庫で固化させてろう状固形物にした: 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ6.81 (s, 1 H), 3.78 (s, 3 H), 1.48 (s, 9 H), 0.32 (s, 9 H)。
【化４３】
2009514875.tif 000047
【０２１６】
3-クロロ-4-イソプロポキシベンジルアルコール(5.7)
0℃でN2下のTHF (50 mL)中の3-クロロ-4-イソプロポキシ安息香酸(5.0 g, 23.3 mMol)の撹拌溶液に、THF中の1 Nボラン溶液(34 mL, 34 mMol)を10分間かけて滴加した。反応物を室温にあたため、4時間撹拌した。反応物を0℃に再冷却し、H2O (10 mL)でゆっくりクエンチした。反応物を真空下で濃縮し、EtOAcにとり、1 N Na2CO3、ブラインで洗浄し、乾燥(MgSO4)し、ろ過し、真空下で蒸発させて、標題化合物(4.71 g, 100%)を透明な油状物として得た: 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.40 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 7.20 (dd, J = 2.4, 8.4 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 8.4 Hz, 1 H), 4.62 (s, 2 H), 4.56 (m, 1 H), 1.39 (d, J = 6.4 Hz, 6 H)。
【化４４】
2009514875.tif 000048
【０２１７】
3-クロロ-4-イソプロポキシベンジルブロミド(5.8)
THF (50 mL)中の3-クロロ-4-イソプロポキシベンジルアルコール(4.0 g, 20 mMol)の撹拌溶液に、0℃で撹拌しながら、四臭化炭素(8.0 g, 24 mMol)およびトリフェニルホスフィン(5.6 g, 21 mMol)を加えた。反応物を室温にあたため、18時間撹拌した。反応物を真空下で濃縮し、5% EtOAc、ヘキサンにとり、ろ過して不溶物を除き、フラッシュシリカゲル(5% EtOAc, ヘキサン)によって精製して、標題化合物(3.51 g, 66%)を透明な油状物として得た: 1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ7.43 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 7.24 (dd, J = 2.4, 8.4 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8.4 Hz, 1 H), 4.58 (m, 1 H), 4.46 (s, 2 H), 1.40 (d, J = 6.4 Hz, 6 H)。
【化４５】
2009514875.tif 000049
【０２１８】
3-クロロ-4-イソプロポキシ-ベンジル(トリフェニル)ホスホニウムブロミド(5.9)
アセトニトリル(50 mL)中の3-クロロ-4-イソプロポキシベンジルブロミド(3.5 g, 13.3 mMol)の撹拌溶液にトリフェニルホスフィン(3.5 g, 13.3 mMol)を加えた。反応物を4時間還流し、室温に冷却し、真空下で蒸発乾固して、標題化合物(6.98 g, 100%)を白色固形物として得た: MS (ES) m/e 445.2 (M - Br-)+。
【化４６】
2009514875.tif 000050
【０２１９】
(4S)-4-ベンジル-3-(4-ベンジルオキシブタノイル)-1,3-オキサゾリジン-2-オン(5.11)
0℃のTHF (200 mL)中の4-ベンジルオキシブタン酸(5.1 g, 26.3 mMol)およびEt3N (3.8 mL, 27.2 mMol)の撹拌溶液にクロロギ酸エチル(2.6 mL, 27.2 mMol)を滴加した。(濃厚な白色スラリーが形成された。) 反応物を室温にあたため、1時間撹拌した。
【０２２０】
別のフラスコ中で、THF (100 mL)中の(4S)-4-ベンジル-1,3-オキサゾリジン-2-オン(4.66 g, 26.3 mMol)の撹拌溶液を、-78℃でN2下で、ヘキサン中の2.5 M BuLi溶液(10.6 mL, 26.5 mMol)で滴下処理した。30分間撹拌した後、-78℃で上記撹拌混合無水物に対して該溶液をカニューレで入れた。30分間撹拌した後、反応物を0℃にあたため、さらに30分間撹拌した。反応物を飽和水性NH4Clでクエンチし、真空下で濃縮し、EtOAcにとり、H2O、ブラインで洗浄し、乾燥(MgSO4)し、ろ過し、真空下で蒸発乾固した。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー(25% EtOAc, ヘキサン)によって標題化合物(7.00 g, 75%)を透明な油状物として得た: MS (ES) m/e 354.2 (M + H)+。
【化４７】
2009514875.tif 000051
【０２２１】
(4S)-3-[4-(t-ブチルジメチルシリルオキシ)ブタノイル]-4-ベンジル-1,3-オキサゾリジン-2-オン(5.12)
EtOH (150 mL)中の(4S)-4-ベンジル-3-(4-ベンジルオキシブタノイル)-1,3-オキサゾリジン-2-オン(6.98 g, 19.8 mMol)の撹拌溶液に20% Pd(OH)2-炭素(1 g)を加えた。H2のバルーンを取り付け、反応物を24時間撹拌した。反応物をCelite (登録商標)のパッドに通してろ過し、EtOHですすぎ、真空下で蒸発乾固した。THF (100 mL)中の得られた透明な油状物およびイミダゾール(3.0 g, 44 mMol)に、0℃で撹拌しながら、THF (50 mL)中のt-ブチルジメチルシリルクロライド(6.0 g, 21.8 mMol)の溶液を滴加した。(濃厚な白色沈殿が形成された。) 反応物を室温にあたため、4時間撹拌した。真空下で濃縮した後、残留物をEtOAcにとり、冷0.5 N HCl、ブラインで洗浄し、乾燥(MgSO4)し、ろ過し、真空下で蒸発させた。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー(20% EtOAc, ヘキサン)によって標題化合物(7.34 g, 98%)を透明な油状物として得た: MS (ES) m/e 378.2 (M + H)+。
【化４８】
2009514875.tif 000052
【０２２２】
(4S)-3-[(2S)-2-(4-ブロモベンジル)-4-(t-ブチルジメチルシリルオキシ)ブタノイル]-4-ベンジル-1,3-オキサゾリジン-2-オン(5.13)
-78℃のTHF (100 mL)中の(4S)-3-[4-(t-ブチルジメチルシリルオキシ)ブタノイル]-4-ベンジル-1,3-オキサゾリジン-2-オン(7.34 g, 19.4 mMol)の撹拌溶液に、THF中の1 Nリチウムビス(トリメチルシリル)アミド溶液(27 mL, 27 mMol)を滴加した。-78℃で1時間撹拌した後、THF (10 mL)中の4-ブロモベンジルブロミド(6.8 g, 27.2 mMol)の溶液を加えた。反応物を-78℃で1時間撹拌し、0℃にあたため、1時間撹拌し、飽和水性NH4Clでクエンチした。反応物をEtOAcで抽出し、ブラインで洗浄し、乾燥(MgSO4)し、ろ過し、真空下で蒸発させた。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー(10% EtOAc, ヘキサン)によって精製し、標題化合物(9.4 g, 88%)を透明な油状物として得た: MS (ES) m/e 546.2 (M + H)+。
【化４９】
2009514875.tif 000053
【０２２３】
(2S)-2-(4-ブロモベンジル)-4-(t-ブチルジメチルシリルオキシ)-1-ブタノール(5.14)
THF (150 mL)中の(4S)-3-[(2S)-2-(4-ブロモベンジル)-4-(t-ブチルジメチルシリルオキシ)ブタノイル]-4-ベンジル-1,3-オキサゾリジン-2-オン(9.4 g, 17.2 mMol)の撹拌溶液に、H2O (30 mL)中のホウ水素化ナトリウム(2.7 g, 71.4 mMol)の溶液を滴加した。(温度を20〜25℃で維持した。ガスの発生が観察された。) 反応物を18時間撹拌し、H2Oで希釈し、EtOAcで抽出し、ブラインで洗浄し、乾燥(MgSO4)し、ろ過し、真空下で蒸発させた。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー(15〜20% EtOAc, ヘキサン)によって精製し、標題化合物(5.5 g, 85%)を透明な油状物として得た: MS (ES) m/e 373.2 (M + H)+。
【化５０】
2009514875.tif 000054
【０２２４】
(2S)-2-(4-ブロモベンジル)-4-(t-ブチルジメチルシリルオキシ)-1-ブタナール(5.15)
CH2Cl2 (20 mL)中の(2S)-2-(4-ブロモベンジル)-4-(t-ブチルジメチルシリルオキシ)-1-ブタノール(5.0 g, 13.4 mMol)およびEt3N (9.4 mL, 67 mMol)の撹拌溶液に、20 mL DMSO中の三酸化硫黄(sulfer trioxide)ピリジン複合体(10.8 g, 67.8 mMol)の濁った溶液を加えた。反応物を室温で1時間撹拌し、CH2Cl2で希釈し、冷H2Oで洗浄し、乾燥(MgSO4)し、ろ過し、真空下で蒸発させた。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー(5% EtOAc, ヘキサン)によって精製し、標題化合物(3.32 g, 67%)を透明な油状物として得た: MS (ES) m/e 371.2 (M + H)+。
【化５１】
2009514875.tif 000055
【０２２５】
[(3S,4E,Z)-3-(4-ブロモベンジル)-5-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-4-ペンテン-1-イル]オキシ]t-ブチルジメチルシラン(5.17)
DMF (50 mL)中の3-クロロ-4-イソプロポキシ-ベンジル(トリフェニル)ホスホニウムブロミド(6.98 g, 13.3 mMol)および(2S)-2-(4-ブロモベンジル)-4-(t-ブチルジメチルシリルオキシ)-1-ブタナール(4.9 g, 13.2 mMol)の撹拌溶液に、NaH 60%分散物(0.53 g, 13.3 mMol)を5分間かけて少しずつ加えた。反応物を室温で4時間撹拌し、真空下で蒸発乾固した。残留物をEtOAcにとり、H2O、ブラインで洗浄し、乾燥(MgSO4)し、ろ過し、真空下で蒸発させた。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー(5% EtOAc, ヘキサン) (CH2Cl2で積載)によって精製し、標題化合物(7.05 g, 98%)をトランスおよびシスオレフィンの(2.3:1)混合物として得た: MS (ES) m/e 537.2 (M + H)+; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) (トランスオレフィン)δ6.12 (d, J = 16.0 Hz, 1 H), 5.85 (dd, J = 16.0, 8.4 Hz, 1 H); (シスオレフィン)δ6.31 (d, J = 11.6 Hz, 1 H), 5.33 (app. t, J = 11.6 Hz, 1 H)。
【化５２】
2009514875.tif 000056
【０２２６】
[(3S,4E,Z)-3-(4-ブロモベンジル)-5-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-4-ペンテン-1-イル]オキシ]t-ブチルジメチルシラン(1.5 g, 2.8 mMol)に、(3:1:1) HOAc、THF、H2Oの溶液(20 mL)を加えた。反応物を40℃で18時間撹拌し、真空下で蒸発乾固し、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー(25% EtOAc, ヘキサン)によって精製して、標題生成物(トランスオレフィン異性体) (0.56 g, 48%)を透明な油状物として得た: MS (ES) m/e 555.2 (M + H)+。
【０２２７】
シスオレフィン異性体(0.21 g, 18%)を含有する早期フラクションならびに混合オレフィンフラクション(0.15 g, 13%)をさらに単離した。
【化５３】
2009514875.tif 000057
【０２２８】
[(3S,4E)-3-[4-(2-t-ブチル-1-メチル-1H-イミダゾール-4-イル)ベンジル]-5-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-4-ペンテン-1-オール(5)
圧力試験管に、[(3S,4E)-3-(4-ブロモベンジル)-5-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-4-ペンテン-1-オール(0.56 g, 1.3 mMol)、2-t-ブチル-1-メチル-4-(トリメチルスタナニル)-1H-イミダゾール(0.52 g, 1.7 mMol)およびジオキサン(10 mL)を加えた。テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0) (80 mg, 0.07 mMol)を加え、試験管をN2でパージし、キャップし、撹拌しながら100℃に加熱した。100℃で8時間後、反応物を室温に冷却し、真空下で蒸発乾固した。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー(50% EtOAc, ヘキサン)によって精製し、標題化合物(192 mg, 50%)を白色固形物として得た: MS (ES) m/e 481.4 (M + H)+。
【０２２９】
実施例6: (3S)-1-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-5-ヒドロキシ-3-[4-(2-t-ブチル-1-メチル-1H-イミダゾール-4-イル)ベンジル]-1-ペンタノンの製造
【化５４】
2009514875.tif 000058
【０２３０】
実験セクション:
【化５５】
2009514875.tif 000059
【０２３１】
(3S)-3-(4-ブロモベンジル)-1-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-5-(t-ブチルジメチルシリルオキシ)-1-(1R,S)-ペンタノール(6.1)
0℃のTHF (6 mL)中の[(3S,4E,Z)-3-(4-ブロモベンジル)-5-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-4-ペンテン-1-イル]オキシ]t-ブチルジメチルシラン(3.0 g, 5.5 mMol)の撹拌溶液に、THF中の1 Nボラン溶液(30 mL, 30 mMol)を滴加した。反応物を室温にゆっくりあたため、18時間撹拌した。反応物を0℃に冷却し、そしてH2O (30 mL)で慎重にクエンチした。(激しくガスが発生した。) 5分間撹拌した後、過ホウ酸ナトリウム四水和物(6.0 g, 40 mMol)を加え、0℃で2時間撹拌した。反応物をH2Oで希釈し、EtOAcで抽出し、Celite (登録商標)に通してろ過して不溶物を除去し、ブラインで洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、ろ過し、真空下で蒸発させた。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー(15% EtOAc, ヘキサン)によって精製し、標題化合物(2.10 g, 67%)をジアステレオマーの混合物として得た: MS (ES) m/e 555.2 (M + H)+。
【化５６】
2009514875.tif 000060
【０２３２】
(3S)-3-(4-ブロモベンジル)-1-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-5-ヒドロキシ-(1R,S)-1-ペンタノール(6.2)
(3S)-3-(4-ブロモベンジル)-1-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-5-(t-ブチルジメチルシリルオキシ)-1-(1R,S)-ペンタノール(2.4 g, 4.3 mMol)に、(3:1:1) HOAc、THF、H2Oの溶液(20 mL)を加えた。反応物を40℃で18時間撹拌し、真空下で蒸発乾固し、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー(60〜100% EtOAc, ヘキサン)によって精製して、標題生成物(0.89 g, 93%)を透明な油状物として得た: MS (ES) m/e 423.0 (M + H - H2O)+。
【化５７】
2009514875.tif 000061
【０２３３】
(3S)-1-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-5-ヒドロキシ-3-[4-(2-t-ブチル-1-メチル-1H-イミダゾール-4-イル)ベンジル]-(1R,S)-1-ペンタノール(6.3)
圧力試験管に、(3S)-3-(4-ブロモベンジル)-1-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-5-ヒドロキシ-(1R,S)-1-ペンタノール(0.88 g, 2.0 mMol)、2-t-ブチル-1-メチル-4-(トリメチルスタナニル)-1H-イミダゾール(0.9 g, 3.0 mMol)およびジオキサン(25 mL)を加えた。テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0) (180 mg, 0.16 mMol)を加え、試験管をN2でパージし、キャップし、撹拌しながら100℃に加熱した。100℃で16時間後、反応物を室温に冷却し、真空下で蒸発乾固した。フラッシュクロマトグラフィー(EtOAc)によって精製し、標題化合物(0.5 g, 50%)を白色固形フォームとして得た: MS (ES) m/e 499.4 (M + H)+。
【化５８】
2009514875.tif 000062
【０２３４】
(3S)-1-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-5-ヒドロキシ-3-[4-(2-t-ブチル-1-メチル-1H-イミダゾール-4-イル)ベンジル]-1-ペンタノン(6)
CHCl3 (25 mL)中の(3S)-1-(3-クロロ-4-イソプロポキシフェニル)-5-ヒドロキシ-3-[4-(2-t-ブチル-1-メチル-1H-イミダゾール-4-イル)ベンジル]-(1R,S)-1-ペンタノール(0.49 g, 1.0 mMol)の撹拌溶液にMnO2 (1.0 g, 11.5 mMol)を加えた。反応物を18時間還流し、室温に冷却し、Celite (登録商標)のパッドに通してろ過し、CHCl3ですすぎ、真空下で蒸発乾固した。シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィー(25〜75% EtOAc, CH2Cl2)によって精製し、標題化合物(242 mg, 49%)を白色固形物として得た: MS (ES) m/e 497.4 (M + H)+。
【０２３５】
実施例7: (1S)-1-({4-[2-(tert-ブチル)-1-メチル-1H-イミダゾール-4-イル]フェニル}メチル)-3-ヒドロキシプロピル3-クロロ-4-[(イソ-プロピル)オキシ]ベンゾエートの製造
【化５９】
2009514875.tif 000063
【０２３６】
実験セクション:
【化６０】
2009514875.tif 000064
【０２３７】
(2R)-4-(tert-ブチルジフェニルシリル)オキシ-1,2-エポキシブタン(7.2)
テトラヒドロフラン(0.2 mL)中のラセミ4-(tert-ブチルジフェニルシリル)オキシ-1,2-エポキシブタン(Pearson, W. H. and Fang, W.-k., J. Org. Chem., 2000, 65, 7158-7174の方法によって製造)(6.53 g, 20.0 mmol)の溶液を、(1R,2R)-(-)-N,N'-ビス(3,5-ジ-tert-ブチルサリチリデン)-1,2-シクロヘキサンジアミノコバルト((1R,2R)-(-)-N,N'-bis(3,5-di-tert-butylsalicydene)-1,2-cyclohexanediaminocobalt) (II) (0.06 g, 0.10 mmol)、酢酸(0.023 mL, 0.40 mmol)、および水(0.198 mL, 11.0 mmol)で0℃で処理した。冷却浴を除去した後、追加のテトラヒドロフラン(5.0 mL)を加え、溶液を室温で一晩撹拌した。追加の水(0.198 mL, 11.0 mmol)を加え、溶液を室温で3 d撹拌し、次いで真空中でSiO2上に濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー(0〜10% EtOAc/ヘキサン)によって精製し、標題化合物を淡黄色油状物として得た(2.74 g; 42%)。1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d)δ ppm 7.64 - 7.70 (m, 4 H) 7.36 - 7.46 (m, 6 H) 3.76 - 3.90 (m, 2 H) 3.06 - 3.15 (m, 1 H) 2.79 (dd, J=4.9, 4.2 Hz, 1 H) 2.52 (dd, J=5.2, 2.7 Hz, 1 H) 1.78 (q, J=5.9 Hz, 2 H) 1.06 (s, 9 H)。[α]D = +6.82°(c = 1.0, CHCl3)。MS (ES+) m/e 327 [M+H]+。
【化６１】
2009514875.tif 000065
【０２３８】
4-(4-ブロモフェニル)-2-tert-ブチル-1H-イミダゾール(7.4)
N,N-ジメチルホルムアミド(60.0 mL)中の2,4'-ジブロモアセトフェノン(4.17 g, 15.0 mmol)の溶液を、t-ブチルカルバミジン塩酸塩(2.05 g, 15.0 mmol)およびK2CO3 (4.15 g, 30.0 mmol)で処理し、50℃に4時間加熱した。冷却後、反応物を水でクエンチし、ブラインで希釈し、EtOAcで3回抽出した。有機層をMgSO4で乾燥し、ろ過し、真空中で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー(10〜40% EtOAc/ヘキサン)によって精製し、標題化合物を淡黄色固形物として得た(3.38 g; 81%)。1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d)δ ppm 7.58 (d, J=8.1 Hz, 2 H) 7.46 (d, J=8.6 Hz, 2 H) 7.18 (s, 1 H) 1.42 (s, 9 H)。MS (ES+) m/e 279/281 [M+H]+。
【化６２】
2009514875.tif 000066
【０２３９】
4-(4-ブロモフェニル)-2-tert-ブチル-1-メチル-1H-イミダゾール(7.5)
テトラヒドロフラン(15.0 mL)中の7.4 (0.718 g, 2.57 mmol)の溶液を水素化ナトリウム(0.123 g, 鉱油中の60%分散物, 3.09 mmol)で処理した。室温で15分間撹拌した後、メチルトリフルオロメタンスルホネート0.291 mL, 2.57 mmol)を加え、溶液を室温で30分間撹拌した。反応物を水でクエンチし、ブラインで希釈し、EtOAcで2回抽出した。有機層をMgSO4で乾燥し、ろ過し、真空中で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー(5〜20% EtOAc/ヘキサン)によって精製し、標題化合物を白色固形物として得た(0.687 g; 91%)。1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d δ ppm 7.61 (ddd, J=8.8, 2.4, 2.1 Hz, 2 H) 7.44 (ddd, J=8.8, 2.4, 2.1 Hz, 2 H) 7.03 (s, 1 H) 3.77 (s, 3 H) 1.47 (s, 9 H)。MS (ES+) m/e 293/295 [M+H]+。
【化６３】
2009514875.tif 000067
【０２４０】
(2S)-1-{4-[2-tert-ブチル-1-メチル-1H-イミダゾール-4-イル]フェニル}-4-[(tert-ブチルジフェニルシリル)オキシ]-2-ブタノール(7.6)
テトラヒドロフラン(3.0 mL)中の7.5 (0.110 g, 0.375 mmol)の溶液をn-BuLi (0.234 mL, ヘキサン中の1.6 M溶液, 0.375 mmol)で-78℃で処理した。-78℃で1時間撹拌した後、テトラヒドロフラン(3.0 mL)中の実施例7a)由来の化合物(0.102 g, 0.313 mmol)の溶液を加え、次いで三フッ化ホウ素ジエチルエーテル化合物(0.048 mL, 0.375 mmol)を加えた。-78℃で2時間撹拌した後、反応物をメタノールでクエンチし、飽和水性NaHCO3で処理し、EtOAcで3回抽出した。有機層をMgSO4で乾燥し、ろ過し、真空中で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー(10〜30% EtOAc/ヘキサン)によって精製し、標題化合物を淡黄色油状物として得た(0.138 g; 82%)。1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) -δ ppm 7.62 - 7.71 (m, 6 H) 7.40 (d, J=7.6 Hz, 2 H) 7.36 - 7.45 (m, 4 H) 7.17 (d, J=8.3 Hz, 2 H) 7.00 (s, 1 H) 4.05 - 4.17 (m, 1 H) 3.86 (ddd, J=10.4, 5.2, 5.2 Hz, 1 H) 3.79 - 3.83 (m, 1 H) 3.77 (s, 3 H) 3.12 (d, J=2.3 Hz, 1 H) 2.84 (dd, J=13.6, 6.8 Hz, 1 H) 2.74 (dd, J=13.6, 6.5 Hz, 1 H) 1.63 - 1.76 (m, 2 H) 1.47 (s, 9 H) 1.05 (s, 9 H)。MS (ES+) m/e 541 [M+H]+。
【化６４】
2009514875.tif 000068
【０２４１】
(1S)-1-({4-[2-tert-ブチル-1-メチル-1H-イミダゾール-4-イル]フェニル}メチル)-3-[(tert-ブチルジフェニルシリル)オキシ]プロピル3-クロロ-4-[(イソ-プロピル)オキシ]ベンゾエート(7.7)
塩化メチレン(3.0 mL)中の7.6 (0.070 g, 0.129 mmol)の溶液を3-クロロ-4-[(1-メチルエチル)オキシ]安息香酸(0.033 g, 0.155 mmol)で処理し、次いでN-(3-(ジメチルアミノプロピル)-N'-エチルカルボジイミド(0.045 g, 0.233 mmol)および4-ジメチルアミノピリジン(0.002 g, 0.013 mmol)で処理した。室温で24時間撹拌した後、反応物を1N水性HClでクエンチし、ブラインで希釈し、EtOAcで3回抽出した。有機層をMgSO4で乾燥し、ろ過し、真空中で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー(10〜40% EtOAc/ヘキサン)によって精製し、標題化合物を透明な無色油状物として得た(0.076 g; 80%)。MS (ES+) m/e 737 [M+H]+。
【化６５】
2009514875.tif 000069
【０２４２】
(1S)-1-({4-[2-(tert-ブチル)-1-メチル-1H-イミダゾール-4-イル]フェニル}メチル)-3-ヒドロキシプロピル3-クロロ-4-[(イソ-プロピル)オキシ]ベンゾエート(7)
テトラヒドロフラン(5.0 mL)中の7.7 (0.076 g, 0.103 mmol)の溶液をテトラブチルアンモニウムフルオライド(0.206 mL, テトラヒドロフラン中の1M溶液, 0.206 mmol)で処理した。室温で一晩撹拌した後、反応物を飽和水性NaHCO3でクエンチし、EtOAcで3回抽出した。有機層をMgSO4で乾燥し、ろ過し、真空中で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー(25〜50% EtOAc/ヘキサン)によって精製し、標題化合物を白色固形物として得た(0.041 g; 80%)。1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d)δ ppm 8.03 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 7.88 (dd, J=8.7, 2.1 Hz, 1 H) 7.69 (d, J=8.1 Hz, 2 H) 7.19 (d, J=8.3 Hz, 2 H) 7.01 (s, 1 H) 6.93 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 4.67 (qq, J=6.1 Hz, 1 H) 4.48 - 4.57 (m, 1 H) 4.41 (ddd, J=11.1, 5.8, 5.6 Hz, 1 H) 3.90 - 4.02 (m, 1 H) 3.78 (s, 3 H) 2.85 (dd, J=13.4, 4.8 Hz, 1 H) 2.74 (dd, J=13.6, 8.0 Hz, 1 H) 1.93 - 2.03 (m, 1 H) 1.79 - 1.90 (m, 1 H) 1.48 (s, 9 H) 1.41 (d, J=6.1 Hz, 6 H)。MS (ES+) m/e 499 [M+H]+。
【０２４３】
実施例8: (1S)-1-({4-[2-(tert-ブチル)-1-メチル-1H-イミダゾール-4-イル]フェニル}メチル)-3-ヒドロキシプロピル3-シアノ-4-[(イソ-プロピル)オキシ]ベンゾエートの製造
【化６６】
2009514875.tif 000070
【０２４４】
3-シアノ-4-[(1-イソ-プロピル)オキシ]安息香酸を3-クロロ-4-[(1-イソ-プロピル)オキシ]安息香酸の代わりに使用した点を除き、実施例7.7および7の手順にしたがって、標題化合物を白色固形物として得た。1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d)δ ppm 8.23 (d, J=2.0 Hz, 1 H) 8.16 (dd, J=8.8, 2.3 Hz, 1 H) 7.70 (d, J=8.1 Hz, 2 H) 7.19 (d, J=8.1 Hz, 2 H) 7.02 (s, 1 H) 6.98 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 4.74 (qq, J=6.1 Hz, 1 H) 4.50 - 4.59 (m, 1 H) 4.43 (ddd, J=11.2, 6.1, 5.4 Hz, 1 H) 3.89 - 4.01 (m, 1 H) 3.78 (s, 3 H) 2.85 (dd, J=13.4, 4.6 Hz, 1 H) 2.75 (dd, J=13.6, 8.0 Hz, 1 H) 1.94 - 2.03 (m, 1 H) 1.78 - 1.89 (m, 1 H) 1.48 (s, 9 H) 1.44 (d, J=6.1 Hz, 6 H)。MS (ES+) m/e 490 [M+H]+。
【０２４５】
実施例9
上記の手順と同様の手順を使用して、以下の化合物を製造した。
【表１】
2009514875.tif 000071
【０２４６】
実施例10
有糸分裂キネシンインヒビターの適用
ヒト腫瘍細胞Skov-3 (卵巣)を96ウェルプレートにウェルあたり4,000細胞の密度でプレートし、24時間接着させ、種々の濃度の試験化合物で24時間処理した。細胞を4%ホルムアルデヒド中で固定し、抗チューブリン抗体(蛍光標識された二次抗体を使用して後に認識される)およびヘキスト色素(DNAを染色する)で染色した。
【０２４７】
視覚的点検で、該化合物が細胞周期停止を引き起こしたことが示された。
【０２４８】
実施例11
細胞IC50
小分子インヒビターのin vitro効力は、ヒト卵巣癌細胞(SKOV3)を10点希釈系列の化合物に対する72時間の曝露後の生存度に関してアッセイすることによって決定する。細胞生存度は、市販の試薬であるMTS/PMSの生体還元によって形成される生成物ホルマゾンの吸光度を測定することよって決定する。72時間の時点で無処理コントロール細胞からバックグラウンド吸収(完全細胞死滅)を引いたパーセントとして、用量反応曲線の各点を計算する。
【０２４９】
材料および溶液:
細胞: SKOV3, 卵巣癌(ヒト)
培地: RPMI培地+ 5%ウシ胎児血清+ 2mM L-グルタミン
細胞生存度を決定するための比色剤: Promega MTSテトラゾリウム化合物
最大細胞死滅用のコントロール化合物: トポテカン, 1uM。
【０２５０】
手順:
1日目 - 細胞のプレーティング
1.  T175フラスコ中の接着性SKOV3細胞を10mLのPBSで洗い、2mLの0.25%トリプシンを加える。37℃で5分間インキュベートする。8mLの培地(RPMI培地+ 5%FBS)を使用してフラスコから細胞をすすぎ、新たな50mL滅菌コニカルに移す。マイクロ遠心チューブ中の等張性希釈剤である900uLのViaCount試薬(Guava Technology)に100uLの細胞懸濁液を加えることによって細胞濃度を決定する。Guava細胞カウンター中にバイアルを置き、読み取りを取得状態にする。細胞数を記録し、300細胞/20uLを達成するために適切な細胞容量を算出する。
【０２５１】
2.  384ウェルCoStarプレートの全ウェルに20ulの細胞懸濁液(300細胞/ウェル)を加える。
【０２５２】
3.  37℃、100%湿度、および5%CO2で24時間インキュベートし、細胞をプレートに接着させる。
【０２５３】
2日目 - 化合物の添加
1.  滅菌384ウェルCoStarアッセイプレートにおいて、250X最大所望濃度の5ulの化合物をウェルB11〜O11 (H11コントロールウェルを除く)およびB14〜O14に分配する(プレートあたり27化合物であり、端のウェルは蒸発を理由に使用しない)。250X化合物を使用して、細胞に対するビヒクル(DMSO)の最終均一濃度が0.4%であるよう保証する。14.3ulの10mMトポテカンを10mlのRPMI培地中の5.8% DMSO中に希釈し、終濃度14.3uMの原液を得る。このトポテカン原液1.5ulを列13 (行B〜O)の細胞20ulに加え、細胞に対する最終トポテカン濃度1uMを得る。これらのウェル由来のODを使用して、死細胞およびビヒクルのバックグラウンド吸光度について引き算する。DMSOを含まない培地80ulを列11および14の各化合物ウェルに加える。培地(5.8% DMSO含有) 40ulを残りの全ウェルに加える。ある列から次の列に40ulを移すことによって、列11から列2まで2倍に化合物を連続希釈する。各時点で十分に混合するよう気を付ける。同様に、列14から列23まで2倍に化合物を連続希釈する。
【０２５４】
2.  各化合物プレートで、化合物プレートのウェル由来の化合物含有培地1.5uLを、対応する細胞プレートのウェルに重複して加える。37℃、100%湿度、および5% CO2で72時間プレートをインキュベートする。
【０２５５】
5日目 - MTSの添加およびODの読み取り
1.  薬物と72時間インキュベートした後、インキュベーターからプレートを取り出し、MTS / PMS 4.5ulを各ウェルに加える。37℃、100%湿度、5% CO2で120分間プレートをインキュベートする。384ウェル分光光度計で5秒の振とうサイクル後に490nmでODを読み取る。
【０２５６】
データ解析では、コントロール(吸光度-バックグラウンド)の正規化%を算出し、XLfitを使用して用量反応曲線を作成する。本明細書中に記載の特定化学物質は、この方法によって試験すると活性を示した。
【０２５７】
実施例12
IC50の算出:
組成物のIC50の測定では、ATPアーゼアッセイを使用する。以下の溶液を使用する: 溶液1は、3 mMホスホエノールピルビン酸カリウム塩(Sigma P-7127), 2 mM ATP (Sigma A-3377), 1 mM IDTT (Sigma D-9779), 5μMパクリタキセル(Sigma T-7402), 10 ppmアンチフォーム289 (Sigma A-8436), 25 mM Pipes/KOH pH 6.8 (Sigma P6757), 2 mM MgC12 (VWR JT400301), および1 mM EGTA (Sigma E3889)からなる。溶液2は、1 mM NADH (Sigma N8129), 0.2 mg/ml BSA (Sigma A7906), ピルビン酸キナーゼ7U/ml, L-乳酸デヒドロゲナーゼ10 U/ml (Sigma P0294), 100 nM有糸分裂キネシンのモータードメイン, 50μg/ml微小管, 1 mM DTT (Sigma D9779), 5μMパクリタキセル(Sigma T-7402), 10 ppmアンチフォーム289 (Sigma A-8436), 25 mM Pipes/KOH pH 6.8 (Sigma P6757), 2 mM MgC12 (VWR JT4003-01), および1 mM EGTA (Sigma E3889)からなる。96ウェルマイクロタイタープレート(Corning Costar 3695)中で、溶液1を使用して、組成物の連続希釈(8〜12 2倍希釈)を行う。連続希釈後、各ウェルは50μlの溶液1を有する。50μlの溶液2を各ウェルに加えることによって反応を開始させる。この作業は、マルチチャネルピペッターを使用して、手作業で、または自動液体操作デバイスを用いて行ってよい。そしてマイクロタイタープレートをマイクロプレート吸光度読み取り装置に移し、キネティックモードで各ウェルに関して340 nmの複数の吸光度読み取り値を取得する。そして、ATPアーゼ速度に比例する、実測の変化率を化合物濃度の関数としてプロットする。標準IC50決定では、非線形近似プログラム(例えばGrafit 4)を使用して以下の4パラメータ式によって取得データを近似する:
【数２】
2009514875.tif 000072
【０２５８】
式中、yは実測の割合であり、xは化合物濃度である。
【０２５９】
このクラスの他の化学物質は細胞増殖を阻害することが分かっているが、GI50値は様々であった。試験化学物質のGI50値は200 nM〜最大試験濃度を超える範囲であった。この結果は、生化学的に有糸分裂キネシン活性を阻害した化学物質のほとんどが最大試験濃度(概して約20μM)で細胞増殖を、いくらか、実際に阻害したが、細胞増殖は50%未満にしか阻害されなかったことを意味する。多数の該化学物質は10μM未満のGI50値を有し、1μM未満のGI50値を有するものもいくつかある。クリニックで癌の処置にうまく適用されている抗増殖性化合物(癌化学療法剤)は、非常に様々なGI50を有する。例えば、A549細胞では、パクリタキセルGI50は4 nMであり、ドキソルビシンは63 nMであり、5-フルオロウラシルは1μMであり、ヒドロキシ尿素は500μMである(National Cancer Institute, Developmental Therapeutic Program, http://dtp.nci.nih.gov/によって提供されるデータ)。したがって、実質的にいかなる濃度であっても細胞増殖を阻害する化合物であれば有用でありうる。
【国際調査報告】
2009514875.tif 000078
2009514875.tif 000079