(57)【要約】  本発明は、ナトリウムチャネル遮断薬に関する。本発明はまた、これら本発明のナトリウムチャネル遮断薬を用いる種々の治療方法を含む。
2009539882.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）：
【化１】
2009539882.tif 000080
［式中、
Ｘは、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、低級アルキル、非置換もしくは置換フェニル、低級アルキル−チオ、フェニル−低級アルキル−チオ、低級アルキル−スルホニル、またはフェニル−低級アルキル−スルホニルであり；
Ｙは、水素、ヒドロキシル、メルカプト、低級アルコキシ、低級アルキル−チオ、ハロゲン、低級アルキル、非置換もしくは置換単核アリール、または−Ｎ（Ｒ２）２であり；
Ｒ１は水素または低級アルキルであり；
それぞれのＲ２は、独立に、−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−Ｚｇ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｒ７、または
【化２】
2009539882.tif 000081
であり；
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、独立に、水素、式（Ａ）によって表される基、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、フェニル、フェニル−低級アルキル、（ハロフェニル）−低級アルキル、低級−（アルキルフェニルアルキル）、低級（アルコキシフェニル）−低級アルキル、ナフチル−低級アルキル、またはピリジル−低級アルキルであるが、但し、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つは、式（Ａ）：
【化３】
2009539882.tif 000082
によって表される基であることを条件とし；
ここで、
それぞれのＲＬは、独立に、−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ２Ｒ７、−ＯＳＯ３Ｈ、−Ｏ−グルクロニド、−Ｏ−グルコース、
【化４】
2009539882.tif 000083
であり；
それぞれのｏは、独立に、０から１０の整数であり；
それぞれのｐは、０から１０の整数であり；
但し、それぞれの隣接する鎖におけるｏとｐの合計は１から１０であることを条件とし；
それぞれのｘは、独立に、Ｏ、ＮＲ１０、Ｃ（＝Ｏ）、ＣＨＯＨ、Ｃ（＝Ｎ−Ｒ１０）、ＣＨＮＲ７Ｒ１０であるか、または単結合を表し；
それぞれのＲ５は、独立に、
リンク−（ＣＨ２）ｎ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１３−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍＣＨ２−ＮＲ１３−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）ｎＣＨ２ＮＲ１３−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−Ｚｇ−（ＣＨ２）ｍ−Ｈｅｔ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰであり；
それぞれのリンクは、独立に、
−Ｏ−、−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｏ（ＣＨ２）ｍ−、−ＮＲ１３−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１３−、−ＮＲ１３−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｎ−Ｚｇ−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＲ７−、−ＳＯ２ＮＲ１０−、または−Ｈｅｔ−であり；
それぞれのＣＡＰは、独立に、
【化５】
2009539882.tif 000084
であり；
それぞれのＲ６は、独立に、−Ｒ７、−ＯＲ７、−ＯＲ１１、−Ｎ（Ｒ７）２、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ２Ｒ７、−ＯＳＯ３Ｈ、−Ｏ−グルクロニド、−Ｏ−グルコース、
【化６】
2009539882.tif 000085
であり；
ここで、２つのＲ６が−ＯＲ１１であり、フェニル環上で互いに隣接して位置する場合、２つのＲ６のアルキル部分は、共に結合してメチレンジオキシ基を形成してもよく；
但し、少なくとも２つの−ＣＨ２ＯＲ８が互いに隣接して位置する場合、Ｒ８基は、連結して環状一置換または二置換の１，３−ジオキサンまたは１，３−ジオキソランを形成してもよいことを条件とし；
それぞれのＲ７は、独立に、水素、低級アルキル、フェニル、または置換フェニルであり；
それぞれのＲ８は、独立に、水素、低級アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１１、グルクロニド、２−テトラヒドロピラニル、または
【化７】
2009539882.tif 000086
であり；
それぞれのＲ９は、独立に、−ＣＯ２Ｒ１３、−ＣＯＮ（Ｒ１３）２、−ＳＯ２ＣＨ２Ｒ１３、または−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１３であり；
それぞれのＲ１０は、独立に、−Ｈ、−ＳＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ９、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、または−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨであり；
それぞれのＺは、独立に、ＣＨＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）、−（ＣＨ２）ｎ−、ＣＨＮＲ１３Ｒ１３、Ｃ＝ＮＲ１３、またはＮＲ１３であり；
それぞれのＲ１１は、独立に、水素、低級アルキル、フェニル低級アルキルまたは置換フェニル低級アルキルであり；
それぞれのＲ１２は、独立に、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｒ１３、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１３、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１３、−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＣＨ３、ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ１１、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１１、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１３、−ＯＲ１１、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１０、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、−ＳＯ２ＮＨＲ１１、−ＮＨＲ１３、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１３Ｒ１３、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＣＨ３、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１１、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１１、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１３Ｒ１３、−ＯＲ１１、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨＲ１３、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１３Ｒ１３、または−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１３であり；
それぞれのＲ１３は、独立に、水素、低級アルキル、フェニル、置換フェニル、−ＳＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７ＳＯ２ＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７−ＣＯ２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、
＋
−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０Ｒ１０、
＋
−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ７Ｒ７Ｒ７、
【化８】
2009539882.tif 000087
であり；
但し、ＮＲ１３Ｒ１３は、それ自体で連結して、以下：
【化９】
2009539882.tif 000088
の１つによって表される基を形成し得ることを条件とし；
それぞれのＨｅｔは、独立に、−ＮＲ１３、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−Ｏ−、−ＳＯ２ＮＲ１３−、−ＮＨＳＯ２−、−ＮＲ１３ＣＯ−、または−ＣＯＮＲ１３−であり；
それぞれのｇは、独立に、１から６の整数であり；
それぞれのｍは、独立に、１から７の整数であり；
それぞれのｎは、独立に、０から７の整数であり；
それぞれのＱは、独立に、Ｃ−Ｒ５、Ｃ−Ｒ６、または窒素原子であり、ここで、少なくとも１つのＱはＣ−Ｒ５であり、環において最大３つのＱは窒素原子であり；
それぞれのＶは、独立に、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−
＋
ＮＲ１１Ｒ１１Ｒ１１、−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１０Ｒ１０
＋
−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ１１Ｒ１１Ｒ１１
であり；
但し、Ｖが窒素原子に直接結合している場合、Ｖはまた、独立に、Ｒ７、Ｒ１０、または（Ｒ１１）２であり得ることを条件とし；
ここで、２つの−ＣＨ２ＯＲ８基が互いに関して１，２−または１，３−に位置する場合、Ｒ８基は、連結して、環状一置換または二置換の１，３−ジオキサンまたは１，３−ジオキソランを形成してもよい］
によって表される化合物、または医薬的に許容されるその塩、ならびにその全てのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、互変異性体、多形および擬似多形。
【請求項２】
Ｙが−ＮＨ２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２が水素である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が水素である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘが塩素である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３が水素である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
それぞれのＲＬが水素である、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
ｏが４である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
ｐが０である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
ｘが単結合を表す、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
それぞれのＲ６が水素である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
最大１つのＱが窒素原子である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
いずれのＱも窒素原子でない、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｎ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
リンクが−Ｏ−であり、ＣＡＰが
【化１０】
2009539882.tif 000089
である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
リンクが−（ＣＨ２）ｎ−であり、ＣＡＰが
【化１１】
2009539882.tif 000090
である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１７】
式：
【化１２】
2009539882.tif 000091
によって表される、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
式：
【化１３】
2009539882.tif 000092
によって表される、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１９】
式：
【化１４】
2009539882.tif 000093
によって表される、請求項１６に記載の化合物。
【請求項２０】
式：
【化１５】
2009539882.tif 000094
によって表される、請求項１６に記載の化合物。
【請求項２１】
式：
【化１６】
2009539882.tif 000095
によって表される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項２２】
式：
【化１７】
2009539882.tif 000096
によって表される、請求項１５に記載の化合物。
【請求項２３】
式：
【化１８】
2009539882.tif 000097
によって表される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項２４】
式：
【化１９】
2009539882.tif 000098
によって表される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項２５】
式：
【化２０】
2009539882.tif 000099
によって表される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１３−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍＣＨ２−ＮＲ１３−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｎＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）ｎＣＨ２ＮＲ１０−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項３４】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項３５】
Ｒ５がリンク−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項３６】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項３７】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項３８】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｎ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３９】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４０】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４１】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４２】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４３】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４４】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１３−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４５】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍＣＨ２−ＮＲ１３−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４６】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｎＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）ｎＣＨ２ＮＲ１０−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４７】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４８】
Ｒ５がリンク−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４９】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１０−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５０】
Ｒ５がリンク−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５１】
ＣＡＰが式：
【化２１】
2009539882.tif 000100
によって表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５２】
ＣＡＰが式：
【化２２】
2009539882.tif 000101
によって表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５３】
ＣＡＰが式：
【化２３】
2009539882.tif 000102
によって表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５４】
ＣＡＰが式：
【化２４】
2009539882.tif 000103
によって表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５５】
ＣＡＰが式：
【化２５】
2009539882.tif 000104
によって表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項５６】
ｘが単結合である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５７】
医薬的に許容される塩の形態にある、請求項１に記載の化合物。
【請求項５８】
請求項１に記載の化合物；および
Ｐ２Ｙ２アゴニスト
を含む組成物。
【請求項５９】
請求項１に記載の化合物；および
気管支拡張剤
を含む組成物。
【請求項６０】
請求項１に記載の化合物；および
コリン作動性気管支拡張剤
を含む組成物。
【請求項６１】
請求項１に記載の化合物；および
イオン性オスモライト
を含む組成物。
【請求項６２】
請求項１に記載の化合物；および
塩化ナトリウムであるイオン性オスモライト
を含む組成物。
【請求項６３】
請求項１に記載の化合物；および
有機オスモライト
を含む組成物。
【請求項６４】
請求項１に記載の化合物；および
マンニトールである有機オスモライト
を含む組成物。
【請求項６５】
請求項１に記載の化合物；および
アデノシンアゴニスト
を含む組成物。
【請求項６６】
請求項１に記載の化合物および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項６７】
請求項１に記載の化合物の有効量を対象の粘膜表面に投与する段階を含む、粘膜表面の水分補給を促進する方法。
【請求項６８】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象の粘膜表面に局所投与する段階を含む、粘膜防御を回復する方法。
【請求項６９】
請求項１に記載の化合物の有効量をナトリウムチャネルに接触させる段階を含む、ナトリウムチャネルを遮断する方法。
【請求項７０】
請求項１に記載の化合物の有効量をベータ受容体に接触させる段階を含む、ベータ受容体を活性化する方法。
【請求項７１】
請求項１に記載の化合物の有効量をナトリウムチャネルおよびベータ受容体に接触させる段階を含む、ナトリウムチャネルを遮断し、同時にベータ受容体を活性化する方法。
【請求項７２】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、慢性気管支炎を治療する方法。
【請求項７３】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、嚢胞性線維症を治療する方法。
【請求項７４】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、副鼻腔炎を治療する方法。
【請求項７５】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象の膣道に投与する段階を含む、膣乾燥を治療する方法。
【請求項７６】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象の目に投与する段階を含む、ドライアイを治療する方法。
【請求項７７】
請求項１に記載の化合物の有効量を、対象の目に投与する段階を含む、眼球水分補給を促進する方法。
【請求項７８】
請求項１に記載の化合物の有効量を、対象の目に投与する段階を含む、角膜水分補給を促進する方法。
【請求項７９】
請求項１に記載の化合物の有効量を、対象の粘膜表面に投与する段階を含む、粘膜表面における粘液クリアランスを促進する方法。
【請求項８０】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、シェーグレン病を治療する方法。
【請求項８１】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、遠位腸閉塞症候群を治療する方法。
【請求項８２】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象の皮膚に投与する段階を含む、乾燥皮膚を治療する方法。
【請求項８３】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、食道炎を治療する方法。
【請求項８４】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象の口腔に投与する段階を含む、口内乾燥（口内乾燥症）を治療する方法。
【請求項８５】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象の鼻腔経路に投与する段階を含む、鼻脱水症を治療する方法。
【請求項８６】
鼻脱水症が、乾燥酸素を前記対象に与えることによって引き起こされる、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
請求項１に記載の化合物の有効量を、人口呼吸装置に接する対象に投与する段階を含む、人口呼吸装置に誘発される肺炎を予防する方法。
【請求項８８】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、喘息を治療する方法。
【請求項８９】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、原発性線毛運動不全を治療する方法。
【請求項９０】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、中耳炎を治療する方法。
【請求項９１】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、診断目的で痰を誘発させる方法。
【請求項９２】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、慢性閉塞性肺疾患を治療する方法。
【請求項９３】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、肺気腫を治療する方法。
【請求項９４】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、肺炎を治療する方法。
【請求項９５】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、便秘を治療する方法。
【請求項９６】
化合物が経口または坐薬もしくは浣腸によって投与される、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、慢性憩室炎を治療する方法。
【請求項９８】
請求項１に記載の化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含む、鼻副鼻腔炎を治療する方法。
【請求項９９】
式：
【化２６】
2009539882.tif 000105
によって表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１００】
式：
【化２７】
2009539882.tif 000106
によって表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０１】
式：
【化２８】
2009539882.tif 000107
によって表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０２】
式：
【化２９】
2009539882.tif 000108
によって表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０３】
式：
【化３０】
2009539882.tif 000109
によって表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０４】
式：
【化３１】
2009539882.tif 000110
によって表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０５】
式：
【化３２】
2009539882.tif 000111
によって表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０６】
式：
【化３３】
2009539882.tif 000112
によって表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０７】
式：
【化３４】
2009539882.tif 000113
によって表される、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０８】
式：
【化３５】
2009539882.tif 000114
によって表される、請求項１に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
継続出願情報
本出願は、参照により本明細書に組み込まれる、２００６年６月９日に出願された米国仮出願第６０／８１２０７７号の優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、ベータ−アドレナリン受容体アゴニスト活性を有するナトリウムチャネル遮断薬に関する。本発明はまた、これら本発明のナトリウムチャネル遮断薬／ベータ−アドレナリン受容体アゴニストを用いる種々の治療方法を含む。
【背景技術】
【０００３】
環境と身体との間の界面にある粘膜表面は、いくつかの「先天的防御」、すなわち防御機構を進化させてきた。このような先天的防御の主な形態は、これらの表面を液体で洗浄することである。典型的には、粘膜表面の液体層の量が、水（およびカチオンカウンターイオン）と結合したアニオン（Ｃｌ−および／またはＨＣＯ３−）分泌をしばしば反映する上皮液体分泌と、水およびカウンターアニオン（Ｃｌ−および／またはＨＣＯ３−）と結合したＮａ＋吸収をしばしば反映する上皮液体吸収との間の均衡を反映する。粘膜表面の多くの疾患は、分泌（少なすぎる）と吸収（相対的に多すぎる）との間の不均衡によって生じたこれらの粘膜表面の防護的液体が少なすぎることによって引き起こされる。これらの粘膜機能不全を特徴付ける塩輸送プロセスの欠陥は、粘膜表面の上皮層に存在する。
【０００４】
粘膜表面に防護的液体層を補給する１つの手法は、Ｎａ＋チャネルおよび液体吸収を遮断すると共に、同時にベータ−アドレナリン受容体を活性化し、それにより液体分泌を引き起こすことによってその系を「再均衡化」させ、それにより液体分泌を生じさせることである。Ｎａ＋および液体吸収の律速段階を仲介する上皮タンパク質は、上皮Ｎａ＋チャネル（ＥＮａＣ）である。ＥＮａＣおよびベータ−アドレナリン受容体は、上皮の頂端面、すなわち粘膜表面−外部環境界面に位置する。したがって、ＥＮａＣ仲介Ｎａ＋および液体吸収を阻害するために、アミロライドクラス（ＥＮａＣの細胞外ドメインから阻害する）のＥＮａＣ遮断薬が粘膜表面に送達されなければならず、そして重要なことには、治療有用性を達成するためにこの部位に維持されなけらばならない。本発明は、粘膜表面上の少なすぎる液体と特徴とする疾患ならびに効力増加、粘膜吸収減少、およびこれらの疾患の治療に必要なＥＮａＣおよびベータ−アドレナリン受容体からの緩慢な解離（「解放」または脱離）を示すように設計されたベータ−アドレナリン受容体アゴニスト活性を含む「局所」ナトリウムチャネル遮断薬について記載する。
【０００５】
慢性気管支炎（ＣＢ）の最もよく見られる致死性遺伝性形態である嚢胞性線維症（ＣＦ）を含む慢性気管支炎は、身体が肺からの粘液を正常に清浄化できないことを反映する疾患であり、最終的には慢性気道感染をもたらす。正常な肺において、慢性肺内気道感染（慢性気管支炎）に対する主な防御は、気管支の気道表面からの粘液の連続的なクリアランスによって仲介される。健常対象におけるこの機能は、潜在的に有害な毒素および病原体を肺から効果的に除去する。最近のデータは、ＣＢおよびＣＦの両方における初期問題、すなわち、「基本的欠陥」は、気道表面からの粘液を清浄化する機能不全であることを示している。粘液を清浄化する機能不全は、気道表面の液体とムチンとの量の間の不均衡を反映している。この「気道表面の液体」（ＡＳＬ）は、血漿（すなわち、等張性）と同様の比率の塩と水とから主として構成されている。ムチン高分子類は、吸入された細菌を通常捕捉し、「線毛周囲の液体」と呼ばれる水様の低粘度溶液にたたき込む線毛作用によって肺から外に輸送される明確な定義される「粘液層」中に組織化される。その疾患状態において、気道表面上の粘液とＡＳＬとの量に不均衡が存在する。この不均衡は、粘液濃縮につながるＡＳＬの相対的減少、ＰＣＬの潤滑活性減少、および線毛活動による口腔へ粘液を清浄化する機能不全をもたらす。肺からの粘液の機械的クリアランスの減少は、気道表面に付着した粘液の慢性的な細菌定着につながる。これは、細菌の慢性的停滞、慢性的基盤上の局所抗菌物質の粘液に捕捉された細菌死滅不全であり、その結果として、この種の表面感染に対する身体の慢性的炎症反応であり、ＣＢおよびＣＦの症候群が導かれる。
【０００６】
米国における現在の羅患人口は、後天的（主として喫煙暴露由来）型の慢性気管支炎に罹った患者が１２，０００，０００人および遺伝型嚢胞性線維症に罹った患者が約３０，０００人である。ほとんど同じ数の両者の人口が欧州に存在する。アジアでは、ＣＦは少ないが、ＣＢの発生率は高く、世界のその他の国々同様増加しつつある。
【０００７】
現在、これらの疾患を引き起こす基本的欠陥のレベルでＣＢおよびＣＦを特異的に治療する製品に対する医療的必要性は大きいが、いまだ満たされていない。慢性気管支炎および嚢胞性線維症に対する現在の治療は、これらの疾患の症状および／または後期作用を治療することに焦点を当てている。したがって、慢性気管支炎に対して、吸入β−アゴニスト類、ステロイド類、抗コリン薬、ならびに経口テオフィリンおよびホスホジエステラーゼ阻害薬が現在使用されている全てである。しかし、これらの薬剤だけでいずれも肺からの粘液清浄化機能不全の基本的問題を有効に治療していない。同様に、嚢胞性線維症において、薬理的薬剤の同じスペクトルが用いられる。接着粘液塊において増殖する細菌を殺そうとして不首尾に終わった好中球によってＣＦ肺から肺中に沈着したＤＮＡを清浄化するようにデザインされたごく最近の戦略（「Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ」；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）によって、および細菌から接着粘液プラークを除去する肺自体の殺菌機構を増強させるように設計された吸入抗生物質（例えば、「ＴＯＢＩ」）の使用によって補完されてきた。身体の一般的原理は、初期病変が治療されない場合（この場合では粘液停滞／閉塞）、細菌感染は慢性になると共に、抗菌療法に対してますます抵抗性になる。したがって、ＣＢおよびＣＦ肺疾患の両方に対する満たされていない主要な治療上の必要性は、気道粘液に再水分補給（すなわち、ＡＳＬ容量を回復／拡大）し、肺から、細菌に関して、そのクリアランスを促進する有効な手段である。
【０００８】
米国特許第６２６４９７５号において、Ｒ．Ｃ．  Ｂｏｕｃｈｅｒは、粘膜表面に水分補給するためのピラジノイルグアニジンナトリウムチャネル遮断薬の使用について記載している。よく知られた利尿薬のアミロライド、ベンザミル、およびフェナミルによって代表されるこれらの化合物は有効である。しかし、これらの化合物は、（１）比較的に効力が低い（肺によって吸入され得る薬剤の量が制限されるのでこれは重要である）；（２）急速に吸収される（これは粘膜表面の薬剤の半減期を制限する）；および（３）ＥＮａＣから自由に解離し得る、という重大な不利点を被る。これらのよく知られた利尿薬において具体化されるこれらの不利点の全てが合わさって、粘液表面に水分補給するために治療的利益を有するには不十分な能力および／または有効半減期を粘膜表面上で有する化合物をもたらす。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国仮出願第６０／８１２０７７号
【特許文献２】米国特許第６２６４９７５号
【特許文献３】米国特許第５６５６２５６号
【特許文献４】米国特許第５２９２４９８号
【特許文献５】米国特許第６９２６９１１号
【特許文献６】米国特許第５７８９３９１号
【特許文献７】米国特許第５７４０７９４号
【特許文献８】米国特許第５６５４００７号
【特許文献９】米国特許第５４５８１３５号
【特許文献１０】米国特許第５７７５３２０号
【特許文献１１】米国特許第５７８５０４９号
【特許文献１２】米国特許第５６２２１６５号
【特許文献１３】米国特許第５５７７４９７号
【特許文献１４】米国特許第５６４５０５１号
【特許文献１５】米国特許第５４９２１１２号
【特許文献１６】米国特許第５８２６５７０号
【特許文献１７】米国特許第５８１３３９７号
【特許文献１８】米国特許第５８１９７２６号
【特許文献１９】米国特許第５６５５５１６号
【特許文献２０】米国特許第４５０１７２９号
【特許文献２１】米国特許第４３８９３９３号
【特許文献２２】米国特許第５７０７６４４号
【特許文献２３】米国特許第４２９４８２９号
【特許文献２４】米国特許第４８３５１４２号
【特許文献２５】米国特許第４５０１７２９号
【特許文献２６】米国特許第５６５６２５６号
【特許文献２７】米国特許第３３１３８１３号
【特許文献２８】米国特許第６８５８６１４号
【特許文献２９】米国特許第６８５８６１５号
【特許文献３０】米国特許第６９０３１０５号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Intracellular Cl-activity and cellular Cl-pathways in cultured human airway epithelium、Am J Physiol.、1989年5月;256(5 Pt 1):C1033~44頁、Willumsen NJ、Davis CW、Boucher RC
【非特許文献２】Cellular Cl-transport in cultured cystic fibros is airway epithelia、Am J Physiol. 1989年5月;256(5 Pt 1):C1045~53頁、Willumsen NJ、Davis CW、Boucher RC
【非特許文献３】Activation of an apical Cl-conductance by Ca2+ ionophores in cystic fibrosis airway epithelia、Am J Physiol. 1989年2月;256(2 Pt 1):C226~33頁、Willumsen NJ、Boucher RC
【非特許文献４】RL Smithら、Journal of the American Chemistry Society、1979年、101、191~201頁
【非特許文献５】J. Nairn、Solutions, Emulsions, Suspensions and Extracts、in Remington:The Science and Practice of Pharmacy、第86章(第19版、1995年)
【非特許文献６】E.J Cragoe、“The Synthesis of Amiloride and its Analogs”(第3章)、in Amiloride and Its Analogs、25~36頁
【非特許文献７】Sabaterら、Journal of Applied Physiology、1999年、87(6)、2191~2196頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
明らかに、必要とされるものは、ＣＢ／ＣＦ患者の肺から粘液のクリアランスを回復するのにより有効な薬剤である。これらの新規な療法の価値は、ＣＦおよびＣＢの両方の集団の生活の質および寿命の改善に反映される。
【００１２】
身体内および身体上の他の粘膜表面は、それらの表面の保護表面液体の正常な生理機能においてわずかな違いを示すが、疾患の病態生理学は、共通の主題、すなわち保護的表面液体が少なすぎることを反映する。例えば、口内乾燥症（口内乾燥）において、口腔からの連続的Ｎａ＋（ＥＮａＣ）輸送仲介液体吸収にもかかわらず、耳下舌下腺および顎下腺の液体分泌不全により口腔は液体が枯渇している。同様に、乾性角結膜炎（ドライアイ）は、結合表面上の連続的Ｎａ＋依存性液体吸収にもかかわらず涙腺の液体分泌不全によって引き起こされる。鼻副鼻腔炎では、ＣＢにおけるように、ムチン分泌と相対的ＡＳＬ枯渇との間に不均衡が存在する。最後に、胃腸管では、末端回腸におけるＮａ＋（および液体）吸収増加と相まった近位小腸におけるＣｌ−（および液体）の分泌不全が、遠位腸閉塞症候群（ＤＩＯＳ）をもたらす。高齢患者では、下行結腸における過剰Ｎａ＋（および容量）吸収が、慢性の便秘および憩室炎を引き起こす。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の目的は、同じ分子中にナトリウムチャネル遮断活性およびベータ−アドレナリン受容体アゴニスト活性の両方を有する化合物を提供することである。
【００１４】
本発明の目的は、既知の化合物に比べて、より効力があり、および／または粘膜表面からの吸収がより遅く、および／または可逆性が低い化合物を提供することである。
【００１５】
本発明の別の態様は、アミロライド、ベンザミル、およびフェナミルなどの化合物と比べて、より効力がある、および／または吸収がより遅く、および／または低い可逆性を示す化合物を提供することである。したがって、該化合物は既知の化合物と比べて、粘膜表面で長期にわたる薬力学的半減期を与える。
【００１６】
本発明の別の目的は、（１）既知の化合物と比べて、粘膜表面、特に気道表面からの吸収がより遅く；（２）粘膜表面に投与後に粘膜表面から吸収される場合、投与親化合物と比べて、ナトリウムチャネルを遮断することおよびベータ−アドレナリン受容体アゴニスト活性において有効性減少を示すその代謝誘導体にｉｎ  ｖｉｖｏで変換される、化合物を提供することである。
【００１７】
本発明の別の目的は、アミロライド、ベンザミル、およびフェナミルなどの化合物と比べて、より効力がある、および／または吸収がより遅く、および／または低い可逆性を示す化合物を提供することである。したがって、このような化合物は、以前の化合物と比べて、粘膜表面で長期にわたる薬力学的半減期を与える。
【００１８】
本発明の別の目的は、上記化合物の薬理学的特性を利用する治療方法を提供することである。
【００１９】
特に、本発明の目的は、粘膜表面の再水分補給に依存する治療方法を提供することである。
【００２０】
本明細書において記載される任意の化合物は、医薬的に許容されるその塩であることができ、ここで、上記化合物は、その全てのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、互変異性体、多形および擬似多形を含む。多形は、異なる物理的形態（異なる融解範囲を有し、異なる示差走査熱量測定（ＤＳＣ）記録を示し、異なるＸ−線粉末回折（ＸＲＰＤ）スペクトルを示す異なる結晶形態）である。擬似多形は、異なる溶媒和物理的形態（溶媒和物として異なる融解範囲を有し、溶媒和物として異なる示差走査熱量測定（ＤＳＣ）記録を示し、溶媒和物として異なるＸ−線粉末回折（ＸＲＰＤ）スペクトルを示す異なる結晶形態）である。
【００２１】
本発明はまた、上記化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００２２】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を対象の粘膜表面に投与する段階
を含む、粘膜表面の水分補給を促進する方法を提供する。
【００２３】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象の粘膜表面に局所投与する段階
を含む、粘膜防御を回復する方法を提供する。
【００２４】
本発明はまた、式（Ｉ）で表される化合物の有効量をナトリウムチャネルに接触させ、同時にベータ−アドレナリン受容体（ベータアゴニスト）を活性化させる段階
を含む、ＥＮａＣを遮断し、ベータ−アドレナリン受容体アゴニストを発揮させる方法を提供する。
【００２５】
本発明の目的は、式（Ｉ）：
【００２６】
【化１】
2009539882.tif 000003
【００２７】
［式中、
Ｘは、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、低級アルキル、非置換もしくは置換フェニル、低級アルキル−チオ、フェニル−低級アルキル−チオ、低級アルキル−スルホニル、またはフェニル−低級アルキル−スルホニルであり；
Ｙは、水素、ヒドロキシル、メルカプト、低級アルオキシ、低級アルキル−チオ、ハロゲン、低級アルキル、非置換もしくは置換単核アリール、または−Ｎ（Ｒ２）２であり；
Ｒ１は水素または低級アルキルであり；
それぞれのＲ２は、独立に、−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｒ７、または
【００２８】
【化２】
2009539882.tif 000004
【００２９】
であり；
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ、独立に、水素、式（Ａ）によって表される基、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、フェニル、フェニル−低級アルキル、（ハロフェニル）−低級アルキル、低級−（アルキルフェニルアルキル）、低級（アルコキシフェニル）−低級アルキル、ナフチル−低級アルキル、またはピリジル−低級アルキルであるが、但し、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つは、式（Ａ）：
【００３０】
【化３】
2009539882.tif 000005
【００３１】
によって表される基であることを条件とし；
ここで、
それぞれのＲＬは、独立に、−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ２Ｒ７、−ＯＳＯ３Ｈ、−Ｏ−グルクロニド、−Ｏ−グルコース、
【００３２】
【化４】
2009539882.tif 000006
【００３３】
であり；
それぞれのｏは、独立に、０から１０の整数であり；
それぞれのｐは、０から１０の整数であり；
但し、それぞれの隣接する鎖におけるｏとｐの合計は１から１０であることを条件とし；
それぞれのｘは、独立に、Ｏ、ＮＲ１０、Ｃ（＝Ｏ）、ＣＨＯＨ、Ｃ（＝Ｎ−Ｒ１０）、ＣＨＮＲ７Ｒ１０であるか、または単結合を表し；
ここで、それぞれのＲ５は、独立に、
リンク（Ｌｉｎｋ）−（ＣＨ２）ｎ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１３−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍＣＨ２−ＮＲ１３−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）ｎＣＨ２ＮＲ１３−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−Ｚｇ−（ＣＨ２）ｍ−Ｈｅｔ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ
であり、
ここで、リンクは、独立に、
−Ｏ−、（ＣＨ２）ｎ−、−Ｏ（ＣＨ２）ｍ−、−ＮＲ１３−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１３、−ＮＲ１３−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｚｇ−（ＣＨ２）ｎ、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、ＳＯ２ＮＲ７−、ＳＯ２ＮＲ１０−、−Ｈｅｔ−、
であり、
ここで、それぞれのＣＡＰは、独立に、
【００３４】
【化５】
2009539882.tif 000007
【００３５】
であり、
それぞれのＲ６は、独立に、−Ｒ７、−ＯＲ７、−ＯＲ１１、−Ｎ（Ｒ７）２、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ２Ｒ７、−ＯＳＯ３Ｈ、−Ｏ−グルクロニド、−Ｏ−グルコース、
【００３６】
【化６】
2009539882.tif 000008
【００３７】
であり、
ここで、２つのＲ６が−ＯＲ１１であり、フェニル環上で互いに隣接して位置する場合、２つのＲ６のアルキル部分は、共に結合してメチレンジオキシ基を形成してもよく；但し、少なくとも２つの−ＣＨ２ＯＲ８が互いに隣接して位置する場合、Ｒ８基は、連結して環状一置換または二置換の１，３−ジオキサンまたは１，３−ジオキソランを形成してもよいことを条件とし、
それぞれのＲ７は、独立に、水素、低級アルキル、フェニル、または置換フェニルであり；
それぞれのＲ８は、独立に、水素、低級アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１１、グルクロニド、２−テトラヒドロピラニル、または
【００３８】
【化７】
2009539882.tif 000009
【００３９】
であり、
それぞれのＲ９は、独立に、−ＣＯ２Ｒ１３、−ＣＯＮ（Ｒ１３）２、−ＳＯ２ＣＨ２Ｒ１３、または−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１３であり；
それぞれのＲ１０は、独立に、−Ｈ、−ＳＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ９、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、または−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨであり；
それぞれのＺは、独立に、ＣＨＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）、−（ＣＨ２）ｎ−、−ＣＨＮＲ１３Ｒ１３、Ｃ＝ＮＲ１３、またはＮＲ１３であり；
それぞれのＲ１１は、独立に、水素、低級アルキル、フェニル低級アルキルまたは置換フェニル低級アルキルであり；
それぞれのＲ１２は、独立に、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｒ１３、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１３、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１３、−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＣＨ３、ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ１１、ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１１、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１３、−ＯＲ１１、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１０、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、ＳＯ２ＮＨＲ１１、−ＮＨＲ１３、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１３Ｒ１３、ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＣＨ３、ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１１、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１１、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１３、−ＯＲ１１、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨＲ１３、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１３Ｒ１３、または−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１３であり；
それぞれのＲ１３は、独立に、水素、低級アルキル、フェニル、置換フェニル、−ＳＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７ＳＯ２ＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７−ＣＯ２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、
＋
−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０Ｒ１０、
＋
−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ７Ｒ７Ｒ７、
【００４０】
【化８】
2009539882.tif 000010
【００４１】
であり、
但し、ＮＲ１３Ｒ１３は、それ自体で連結して、以下：
【００４２】
【化９】
2009539882.tif 000011
【００４３】
の１つを形成してもよいことを条件とし；
それぞれのＨｅｔは、独立に、−ＮＲ１３、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−Ｏ−、−ＳＯ２ＮＲ１３−、−ＮＨＳＯ２−、−ＮＲ１３ＣＯ−、−ＣＯＮＲ１３−であり；
それぞれのｇは、独立に、１から６の整数であり；
それぞれのｍは、独立に、１から７の整数であり；
それぞれのｎは、独立に、０から７の整数であり；
それぞれのＱは、独立に、Ｃ−Ｒ５、Ｃ−Ｒ６、または窒素原子であり、ここで、少なくとも１つのＱはＣＲ５であり、環における最大３つのＱは窒素原子であり；
それぞれのＶは、独立に、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−
＋
ＮＲ１１Ｒ１１Ｒ１１、−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１０Ｒ１０
＋
−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ１１Ｒ１１Ｒ１１
であり；
但し、Ｖが窒素原子に直接結合している場合、Ｖはまた、独立に、Ｒ７、Ｒ１０、または（Ｒ１１）２であることを条件とし；
ここで、２つの−ＣＨ２ＯＲ８基が互いに関して１，２−または１，３−に位置する場合、Ｒ８は、連結して、環状一置換または二置換の１，３−ジオキサンまたは１，３−ジオキソランを形成してもよい］
によって表される化合物を表すピラジノイルグアニジン化合物のクラスを有して達成することができ、
ここで、任意の上記化合物は、医薬的に許容されるその塩であることができ、ここで、上記化合物は、その全てのラセミ体、エナンチオマー、ジアステレオマー、互変異性体、多形および擬似多形を含む。
【００４４】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を対象の粘膜表面に投与する段階
を含む、粘膜表面における粘液クリアランスを促進する方法を提供する。
【００４５】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、慢性気管支炎を治療する方法を提供する。
【００４６】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、嚢胞性線維症を治療する方法を提供する。
【００４７】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、鼻副鼻腔炎を治療する方法を提供する。
【００４８】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象の鼻腔に投与する段階
を含む、鼻脱水症を治療する方法を提供する。
【００４９】
特定の実施形態において、鼻脱水症は乾燥酸素を対象に与えることによって引き起こされる。
【００５０】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、副鼻腔炎を治療する方法を提供する。
【００５１】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、肺炎を治療する方法を提供する。
【００５２】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される有効化合物を対象に人工呼吸器によって投与する段階
を含む、人工呼吸器に誘発される肺炎を予防する方法を提供する。
【００５３】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、喘息を治療する方法を提供する。
【００５４】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、原発性線毛運動不全を治療する方法を提供する。
【００５５】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、中耳炎を治療する方法を提供する。
【００５６】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、診断目的で痰を誘発させる方法を提供する。
【００５７】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、慢性閉塞性肺疾患を治療する方法を提供する。
【００５８】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、肺気腫を治療する方法を提供する。
【００５９】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象の目に投与する段階
を含む、ドライアイを治療する方法を提供する。
【００６０】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象の目に投与する段階
を含む、眼球水分補給を促進する方法を提供する。
【００６１】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を対象の目に投与する段階
を含む、角膜水分補給を促進する方法を提供する。
【００６２】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、シェーグレン病を治療する方法を提供する。
【００６３】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象の膣道に投与する段階
を含む、膣乾燥を治療する方法を提供する。
【００６４】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象の皮膚に投与する段階
を含む、乾燥皮膚を治療する方法を提供する。
【００６５】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、口内乾燥（口内乾燥症）を治療する方法を提供する。
【００６６】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、遠位腸閉塞症候群を治療する方法を提供する。
【００６７】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、食道炎を治療する方法を提供する。
【００６８】
本発明はまた、式（Ｉ）によって表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、便秘を治療する方法を提供する。本方法の１つの実施形態において、該化合物は、経口または坐薬もしくは浣腸によってのいずれかで投与される。
【００６９】
本発明はまた、式（Ｉ）で表される化合物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階
を含む、慢性憩室炎を治療する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】アミロライドで遮断前および後のナトリウムチャネルのベースライン活性を示す図である。
【図２】ベータ−アゴニストの添加前および後のナトリウムチャネルの活性を示す図である。
【図３】Ｎａチャネル遮断薬およびベータアゴニストの加算性の基礎をなす機序を示す図である。
【図４】式Ｉの化合物の互変異性体を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００７１】
本発明は、式（Ｉ）の化合物がまた、同一分子内にナトリウムチャネル遮断活性およびベータアゴニスト活性の両方を有することの発見に基づく。
【００７２】
本発明は、式（Ｉ）の化合物が、アミロライド、ベンザミル、およびフェナミルなどの化合物と比べて、より効力がある、および／または粘膜表面、特に気道表面からの吸収がより遅く、および／またはＥＮａＣとの相互作用からの可逆性が低いことの発見にも基づく。したがって、式（Ｉ）の化合物は、これらの化合物と比べて、粘膜表面でより長い半減期を有する。
【００７３】
本発明は、式（Ｉ）によって包含される特定の化合物が、投与後に粘膜表面から吸収された後に、親投与化合物と比べて、ナトリウムチャネルを遮断し、ベータ−アドレナリン受容体アゴニストとして作用する有効性減少を示すその代謝誘導体にｉｎ  ｖｉｖｏで変換されることの発見にも基づく。この重要な特性は、ナトリウムチャネルを遮断し、受容者の身体、例えば、腎臓および心臓における他の非標的位置にあるベータ−受容体を活性化することによって、該化合物が好ましくない副作用を引き起こす傾向が低いことを意味する。
【００７４】
単一薬剤療法は、慢性気管支炎および嚢胞性線維症などのほとんどの主要な疾患を不適切に治療されたままの状態としている。したがって、単一標的薬剤に対して、有効性を高め、または安全性を改善する目標をもって同時に多くの標的を治療し、かつ調節する新規な薬剤または薬剤の組合せ（多薬理学）を発見し、開発することはしばしば必要である。これを達成するのに３つの可能な方法がある。１）２つ以上の薬剤の組合せ療法的「カクテル」；この手法の利点は、患者の服薬遵守不良によってしばしば低減させられる。２）単一の錠剤、液体配合物、吸入器または乾燥粉末装置において２つ以上の剤を含む多成分薬剤（「固定組合せ」または多成分薬剤）；これは、時に、多成分薬剤に対する患者の服用遵守を改善するが、多代謝経路を最小化するために慎重に投与する複雑さを増加させる。３）多薬剤標的を同時に調節できる単一分子物質（デザインされた多リガンド）。始めの２つの手法に対する多リガンドの利点は、服薬遵守を改善し、有効性を高め、単一の新規な化学物質で多系における既知の一組の欠乏症を標的にし、患者間の薬物動態的および薬力学的変動の予測できない相違がしばしばなく、薬剤カクテルおよび多成分薬剤と比べて配合するのがしばしば容易であり、潜在的に薬剤−薬剤相互作用の危険を低下させることである。したがって、ナトリウムチャネル遮断活性ならびにベータアゴニスト活性の両方を有する多リガンドを発見することが本発明者らの目標であった。
【００７５】
ナトリウムチャネル遮断薬に対するベータ−アドレナリン受容体アゴニスト活性の付加は、治療目的として水分補給を必要としている対象における気道表面に水分補給する能力を著しく高める。ベータ−アゴニスト活性がＮａチャネル遮断薬単独、またはベータ−アゴニスト単独の水分補給能力を増す機構は、イオン流についての電気化学的勾配および気道上皮においてこれらの力から生じる正味分泌について説明する以下の図表に記載される。
【００７６】
図１に示されるように、ベースライン条件下でヒト気道上皮はＮａＣｌおよびＨ２Ｏを吸収する。活性Ｎａ＋吸収は、このプロセスを推進する。Ｃｌ−は、電気的中性を保つためにＮａ＋と共に受動的に吸収される。Ｃｌ−には、頂端細胞膜を横断する正味の推進力は存在しないので、Ｃｌ−は経上皮電位に応じて細胞間を通って吸収される。水は、ＮａＣｌ吸収によって生じた浸透勾配に応じて細胞および細胞間を通って移動する。
【００７７】
Ｎａ＋チャネル遮断薬の適用（例としてアミロライドを示す）は、細胞中へのＮａ＋の入場を阻害し、これは、（１）Ｎａ＋吸収を止め、（２）頂端細胞膜（Ｖａ）を過分極化する。Ｖａの過分極は、Ｃｌ−分泌に有利に働く電気化学的推進力を発生する（Ｎａ＋は今や細胞間経路を介して分泌方向に従う）。Ｃｌ−分泌の速度は、ベースライン条件下で通常最大３０〜５０％活性である頂端膜Ｃｌ−チャネルの活性に比例する。要約すると、Ｎａ＋チャネル遮断薬の適用は、Ｎａ＋吸収を阻害し、穏やかなＣｌ−分泌量の誘因となる。水は分泌されたＮａＣｌに応じて細胞を通って追随することに再度留意されたい。
【００７８】
対照的に、図２に示されるように、ヒト気道上皮に対するベータ−アゴニスト（例としてイソプロテレノールを示す）単独の付加は、Ｎａ＋吸収またはＣｌ−分泌の変化をもたらさない。この作用の不在の理由は、Ｃｌ−が細胞を横断する電気化学的推進力が存在しないためである（以下の参考文献を参照：Intracellular Cl-activity and cellular Cl-pathways in cultured human airway epithelium、Am J Physiol.、1989年5月;256(5 Pt 1):C1033~44頁、Willumsen NJ、Davis CW、Boucher RC、Cellular Cl-transport in cultured cystic fibrosis airway epithelia、Am J Physiol. 1989年5月;256(5 Pt 1):C1045~53頁、Willumsen NJ、Davis CW、Boucher RC、Activation of an apical Cl-conductance by Ca2+ ionophores in cystic fibrosis airway epithelia、Am J Physiol. 1989年2月;256(2 Pt 1):C226~33頁、Willumsen NJ、Boucher RC）。このように、通常ｃＡＭＰの変化を介するＣＦＴＲである頂端膜Ｃｌ−チャネルのベータ−アゴニスト仲介活性化は、障壁を横切るＣｌ−の移動速度に変化をもたらさず、したがって、経上皮の塩化ナトリウムまたは水分泌の変化をもたらさない。
【００７９】
しかし、Ｎａチャネル遮断薬がベータ−アゴニストと共に投与されると、これら２つのクラスの化合物間の加成性が達成され、その結果、Ｃｌ−（およびＮａ＋、Ｈ２Ｏ）分泌が加速される。この加成性の基礎にある機構は図３に示される。Ｎａチャネル遮断薬の存在下で、Ｃｌ−についての電気化学的勾配が生じる（図１も参照）。今やベータ−アゴニストが存在すると、これはベータ−アゴニストに誘導されたｃＡＭＰの増加によって頂端膜ＣＦＴＲを約３０％基礎活性から約１００％活性に変換し、最終的にＰＫＡ（プロテインキナーゼＡ）によってＣＦＴＲを活性化する。ＥＮａＣ遮断の結果としてＣｌ−分泌に利する電気化学的推進力が存在するので、Ｃｌ−チャネル活性の増加が結果としてＣｌ−（およびＮａ＋、Ｈ２Ｏ）分泌を増加させる。このように、単にＮａ＋チャネル遮断薬またはベータ−アドレナリン受容体アゴニスト自体のみと比べて、ヒト気道上皮を浸す環境において上皮の水分補給能力は、Ｎａ＋チャネル遮断薬およびベータ−アドレナリン受容体アゴニストの両方の活性の存在によって大きく高められる。本発明の発見は、同じ分子内に含まれる両活性の上皮への投与が、Ｎａチャネル遮断薬に続けてベータ−アゴニストの連続投与と少なくとも同じ程度に有効であり、したがって、前に言及した利点を有するということである。
【００８０】
式Ｉの化合物は、主に、図４に示される３つの互変異性体の組合せとして存在する。図４は、溶液中に存在する式Ｉに表される３つの互変異性体を示す。Ｓｍｉｔｈらによる以前の研究では、遊離の塩基が主に、アシルイミノ互変異性体として存在する一方、生理学的に活性な種がアシルアミノ互変異性体のプロトン化型として存在することが示された（図１、参考文献ＲＬ  Smithら、Journal of the American Chemistry Society、1979年、101、191~201頁）。これらの構造表示は、特許および科学文献の両方においてアミロライドおよびその誘導体を表すのに用いられた。その構造が実際には、ｐＨ、作用部位および置換基の性質に依存するそれぞれの現実の量を有する３つの型の混成であると理解して、本発明者らは、本特許を通して便宜のためにこのアシルアミノおよびアシルイミノ表示の両方を用いる。
【００８１】
式（Ｉ）によって表される化合物において、Ｘは、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、低級アルキル、低級シクロアルキル、非置換もしくは置換フェニル、低級アルキル−チオ、フェニル−低級アルキル−チオ、低級アルキル−スルホニル、またはフェニル−低級アルキル−スルホニルであり得る。ハロゲンが好ましい。
【００８２】
ハロゲンの例には、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素が含まれる。塩素および臭素は好ましいハロゲンである。塩素は特に好ましい。この記述は、本開示を通して用いられる用語「ハロゲン」に適用される。
【００８３】
本明細書に用いられるように、用語「低級アルキル」は、８個未満の炭素原子を有するアルキル基を意味する。この範囲には、炭素原子の全ての特定の値ならびに、例えば、１、２、３、４、５、６、および７個の炭素原子間にある部分的な範囲が含まれる。用語「アルキル」は、例えば、線状、分岐、および環状アルキル基のような全ての種類を包含する。この記述は、本開示を通して用いられる用語「低級アルキル」に適用される。好適な低級アルキル基の例には、メチル、エチル、プロピル、シクロプロピル、ブチル、イソブチルなどが含まれる。
【００８４】
フェニル基に対する置換基にはハロゲンが含まれる。特に好ましいハロゲン置換基は、塩素および臭素である。
【００８５】
Ｙは、水素、ヒドロキシル、メルカプト、低級アルコキシ、低級アルキル−チオ、ハロゲン、低級アルキル、低級シクロアルキル、単核アリール、または−Ｎ（Ｒ２）２であり得る。低級アルコキシ基のアルキル部分は、上記と同じである。単核アリールの例にはフェニル基が含まれる。フェニル基は、上記のように非置換または置換であり得る。Ｙの好ましい本体は−Ｎ（Ｒ２）２である。それぞれのＲ２が水素である化合物などが特に好ましい。
【００８６】
Ｒ１は、水素または低級アルキルであり得る。水素はＲ１にとって好ましい。
【００８７】
それぞれのＲ２は、独立に、−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｒ７、または
【００８８】
【化１０】
2009539882.tif 000012
【００８９】
であり得る。
【００９０】
水素および低級アルキル、特にＣ１〜Ｃ３アルキルはＲ２にとって好ましい。水素は特に好ましい。
【００９１】
Ｒ３およびＲ４は、独立に、水素、式（Ａ）によって表される基、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、フェニル、フェニル−低級アルキル、（ハロフェニル）−低級アルキル、低級−（アルキルフェニルアルキル）、低級（アルコキシフェニル）−低級アルキル、ナフチル−低級アルキル、またはピリジル−低級アルキルであり得るが、但し、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つは式（Ａ）によって表されることを条件とする。
【００９２】
好ましい化合物は、Ｒ３およびＲ４の一方が水素であり、他方が式（Ａ）によって表されるものである。
【００９３】
式（Ａ）において、部分−（Ｃ（ＲＬ））２）ｏ−ｘ−（Ｃ（ＲＬ）２）ｐ−は、芳香族環に結合したアルキレン基を規定する。変数ｏおよびｐは、それぞれ、０から１０の整数であり得るが、但しその鎖におけるｏおよびｐの合計が１から１０であるという条件に従う。このように、ｏおよびｐは、それぞれ０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり得る。したがって、ｏおよびｐの合計は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０であり得るか、またはその間の任意の部分の範囲であり得る。好ましくは、ｏおよびｐの合計は、２から６である。特に好ましい実施形態において、ｏおよびｐの合計は４である。
【００９４】
アルキレン鎖における結合基ｘは、独立に、Ｏ、ＮＲ１０、Ｃ（＝Ｏ）、ＣＨＯＨ、Ｃ（＝Ｎ−Ｒ１０）、ＣＨＮＲ７Ｒ１０であり得るか、または単結合を表す。したがって、ｘが単結合を表す場合、環に結合したアルキレン鎖は式−（Ｃ（ＲＬ）２）ｏ＋ｐ−によって表され、ここで、ｏ＋ｐの合計は１から１０である。
【００９５】
それぞれのＲＬは、独立に、−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ２Ｒ７、−ＯＳＯ３Ｈ、−Ｏ−グルクロニド、−Ｏ−グルコース、
【００９６】
【化１１】
2009539882.tif 000013
【００９７】
であり得る。
【００９８】
好ましいＲＬ基には、−Ｈ、−ＯＨ、特にそれぞれのＲ７が水素である−Ｎ（Ｒ７）２が含まれる。
【００９９】
式（Ａ）におけるアルキレン鎖において、炭素原子に結合した一方のＲＬ基が水素以外である場合、その炭素原子に結合した他方のＲＬが水素、すなわち、式−ＣＨＲＬ−であることが好ましい。アルキレン鎖における最大２つのＲＬ基が水素以外であり、ここで該鎖における他のＲＬ基に水素があることも好ましい。アルキレン鎖における唯一つのＲＬ基が水素以外であり、ここで該鎖における他のＲＬ基に水素があることがさらにより好ましい。これらの実施形態において、ｘが単結合を表すことが好ましい。
【０１００】
本発明の別の特定の実施形態において、アルキレン鎖におけるＲＬ基の全てが水素である。これらの実施形態において、アルキレン鎖は式−（ＣＨ２）ｏ−ｘ−（ＣＨ２）ｐ−によって表される。
【０１０１】
上記に検討したように、それぞれのＲ５は、独立に、リンク−（ＣＨ２）ｎ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１３−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍＣＨ２−ＮＲ１３−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）ｎＣＨ２ＮＲ１３−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰ、リンク−Ｚｇ−（ＣＨ２）ｍ−Ｈｅｔ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＲ１１Ｒ１１−ＣＡＰである。
【０１０２】
上記に検討したように、それぞれのリンクは、独立に、−Ｏ−、（ＣＨ２）ｎ−、−Ｏ（ＣＨ２）ｍ−、−ＮＲ１３−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１３、−ＮＲ１３−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２）ｍ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３−（ＣＨ２）ｍ−、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−（ＣＨ２）ｎ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、ＳＯ２ＮＲ７−、ＳＯ２ＮＲ１０−、−Ｈｅｔ−である。
【０１０３】
それぞれのＣＡＰは、独立に、
【０１０４】
【化１２】
2009539882.tif 000014
【０１０５】
である。
【０１０６】
それぞれのＲ６は、独立に、−Ｒ７、−ＯＲ７、−ＯＲ１１、−Ｎ（Ｒ７）２、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−Ｒ８、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−（Ｚ）ｇ−Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０−ＣＨ２（ＣＨＯＲ８）（ＣＨＯＲ８）ｎ−ＣＨ２ＯＲ８、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｒ７、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＯ２Ｒ７、−ＯＳＯ３Ｈ、−Ｏ−グルクロニド、−Ｏ−グルコース、
【０１０７】
【化１３】
2009539882.tif 000015
【０１０８】
であり、
ここで、２つのＲ６が−ＯＲ１１であり、フェニル環上で互いに隣接して位置する場合、２つのＲ６のアルキル部分は、共に結合してメチレンジオキシ基を形成してもよく；
但し、少なくとも２つの−ＣＨ２ＯＲ８が互いに隣接して位置する場合、Ｒ８基は、連結して、環状一置換または二置換の１，３−ジオキサンまたは１，３−ジオキソランを形成してもよく、
【０１０９】
それぞれのＲ７は、独立に、水素、低級アルキル、フェニル、または置換フェニルである。
【０１１０】
それぞれのＲ８は、独立に、水素、低級アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１１、グルクロニド、２−テトラヒドロピラニル、または
【０１１１】
【化１４】
2009539882.tif 000016
【０１１２】
である。
【０１１３】
それぞれのＲ９は、独立に、−ＣＯ２Ｒ１３、−ＣＯＮ（Ｒ１３）２、−ＳＯ２ＣＨ２Ｒ１３、または−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１３である。
【０１１４】
それぞれのＲ１０は、独立に、−Ｈ、−ＳＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ９、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、または−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨである。
【０１１５】
それぞれのＺは、独立に、ＣＨＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）、−（ＣＨ２）ｎ−、−ＣＨＮＲ１３Ｒ１３、Ｃ＝ＮＲ１３、またはＮＲ１３である。
【０１１６】
それぞれのＲ１１は、独立に、水素、低級アルキル、フェニル低級アルキルまたは置換フェニル低級アルキルである。
【０１１７】
それぞれのＲ１２は、独立に、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ２Ｒ１３、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１３、−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１３、−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＣＨ３、ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ１１、ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１１、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１３、−ＯＲ１１、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ１０、−Ｂｒ、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、ＳＯ２ＮＨＲ１１、−ＮＨＲ１３、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１３Ｒ１３、ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ２ＣＨ３、ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１１、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１１、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１３、−０Ｒ１１、−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨＲ１３、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１３Ｒ１３、または−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１３である。
【０１１８】
それぞれのＲ１３は、独立に、水素、低級アルキル、フェニル、置換フェニル、−ＳＯ２ＣＨ３、−ＣＯ２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７ＳＯ２ＣＨ３、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７−ＣＯ２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ７−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＨ）ｎ−ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、
＋
−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０Ｒ１０、
＋
−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ７Ｒ７Ｒ７、
【０１１９】
【化１５】
2009539882.tif 000017
【０１２０】
であり、但し、ＮＲ１３Ｒ１３は、それ自体で連結して、以下：
【０１２１】
【化１６】
2009539882.tif 000018
【０１２２】
の１つを含む基を形成してもよいことを条件とする。
【０１２３】
それぞれのＨｅｔは、独立に、−ＮＲ１３、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−Ｏ−、−ＳＯ２ＮＲ１３−、−ＮＨＳＯ２−、−ＮＲ１３ＣＯ−、−ＣＯＮＲ１３−である。
【０１２４】
それぞれのｇは、独立に、１から６の整数である。
【０１２５】
それぞれのｍは、独立に、１から７の整数である。
【０１２６】
それぞれのｎは、独立に、０から７の整数である。
【０１２７】
それぞれのＱは、独立に、Ｃ−Ｒ５、Ｃ−Ｒ６、または窒素原子であり、ここで、少なくとも１つのＱはＣ−Ｒ５であり、環における最大３つのＱは窒素原子である。
【０１２８】
それぞれのＶは、独立に、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｍ−
＋
ＮＲ１１Ｒ１１Ｒ１１、−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ７Ｒ１０、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＲ１０Ｒ１０
＋
−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ７Ｒ７、−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＯＲ８）ｍ−（ＣＨ２）ｍＮＲ１１Ｒ１１Ｒ１１
であり、但し、Ｖが窒素原子に直接結合している場合、Ｖはまた、独立に、Ｒ７、Ｒ１０、または（Ｒ１１）２であり得ることを条件とする。
【０１２９】
本発明の１つの実施形態において、２つの−ＣＨ２ＯＲ８基が互いに関して１，２−または１，３−に位置する場合、Ｒ８は、連結して、環状一置換または二置換の１，３−ジオキサンまたは１，３−ジオキソラン；
【０１３０】
【化１７】
2009539882.tif 000019
【０１３１】
を形成し得る。
【０１３２】
本発明において、２つのＲ６が−ＯＲ１１であり、フェニル環上で互いに隣接して位置する場合、２つのＲ６のアルキル部分は、共に結合してメチレンジオキシ基を形成してもよい。
【０１３３】
本発明において、少なくとも２つの−ＣＨ２ＯＲ８が互いに隣接して位置する場合、Ｒ８基は、連結して、環状一置換または二置換の１，３−ジオキサンまたは１，３−ジオキソランを形成してもよい。
【０１３４】
さらに、Ｒ６基の１つまたは複数が上記のＲ６の広い定義内にあるＲ５基の１つであることができる。
【０１３５】
２つのＲ６が−ＯＲ１１であり、フェニル環上で互いに隣接して位置する場合、２つのＲ６基のアルキル部分は共に結合して、メチレンジオキシ基、すなわち、式−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−の基を形成してもよい。
【０１３６】
上記に検討したように、Ｒ６は水素であり得る。したがって、１、２、３、または４つのＲ６基が水素以外であり得る。好ましくは、該Ｒ６基の最大３つが水素以外である。
【０１３７】
それぞれのｇは、独立に、１から６の整数である。したがって、それぞれのｇは、１、２、３、４、５、または６であり得る。
【０１３８】
それぞれのｍは、１から７の整数である。したがって、それぞれのｍは、１、２、３、４、５、６、または７であり得る。
【０１３９】
それぞれのｎは、０から７の整数である。したがって、それぞれのｎは、０、１、２、３、４、５、６、または７であり得る。
【０１４０】
式（Ａ）におけるそれぞれのＱは、Ｃ−Ｒ５、Ｃ−Ｒ６、または窒素原子であり、ここで、少なくとも１つのＱは、環における最大３つのＱが窒素原子であるＣ−Ｒ５である。したがって、環において１、２、または３個の窒素原子が存在し得る。好ましくは、最大２つのＱが窒素原子である。より好ましくは、最大１つのＱが窒素原子である。１つの特定の実施形態において、窒素原子は環の３−位置にある。本発明の別の実施形態において、Ｑは、Ｃ−Ｒ５またはＣ−Ｒ６のいずれかであり、すなわち、該環において窒素原子は存在しない。別の実施形態において、１つのＱは、Ｃ−Ｒ５である。
【０１４１】
式（Ａ）によって表される好適な基のより具体的な例は、下記式（Ｂ）〜（Ｅ）に示される：
【０１４２】
【化１８】
2009539882.tif 000020
【０１４３】
（式中、ｏ、ｘ、ｐ、Ｒ５、およびＲ６は、上記に定義したとおりである）；
【０１４４】
【化１９】
2009539882.tif 000021
【０１４５】
（式中、ｎは１から１０の整数であり、Ｒ５は上記に定義したとおりである）；
【０１４６】
【化２０】
2009539882.tif 000022
【０１４７】
（式中、ｎは１から１０の整数であり、Ｒ５は上記に定義したとおりである）；
【０１４８】
【化２１】
2009539882.tif 000023
【０１４９】
（式中、ｏ、ｘ、ｐ、Ｒ５、およびＲ６は、上記に定義したとおりである）。
【０１５０】
本発明の好ましい実施形態において、Ｙは−ＮＨ２である。
【０１５１】
別の好ましい実施形態において、Ｒ２は水素である。
【０１５２】
別の好ましい実施形態において、Ｒ１は水素である。
【０１５３】
別の好ましい実施形態において、Ｘは塩素である。
【０１５４】
別の好ましい実施形態において、Ｒ３は水素である。
【０１５５】
別の好ましい実施形態において、ＲＬは水素である。
【０１５６】
別の好ましい実施形態において、ｏは４である。
【０１５７】
別の好ましい実施形態において、ｐは０である。
【０１５８】
別の好ましい実施形態において、ｏおよびｐの合計は４である。
【０１５９】
別の好ましい実施形態において、ｘは単結合を表す。
【０１６０】
別の好ましい実施形態において、Ｒ６は水素である。
【０１６１】
別の好ましい実施形態において、最大１つのＱは窒素原子である。
【０１６２】
別の好ましい実施形態において、いずれのＱも窒素原子でない。
【０１６３】
本発明の好ましい実施形態において、
Ｘはハロゲンであり；
Ｙは−Ｎ（Ｒ７）２であり；
Ｒ１は水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルであり；
Ｒ２は、−Ｒ７、−ＯＲ７、−ＣＨ２ＯＲ７、または−ＣＯ２Ｒ７であり；
Ｒ３は、式（Ａ）によって表される基であり；そして
Ｒ４は、水素、式（Ａ）によって表される基、または低級アルキルである。
【０１６４】
本発明の別の好ましい実施形態において、
Ｘはクロロまたはブロモであり；
Ｙは−Ｎ（Ｒ７）２であり；
Ｒ２は水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルであり；
上記のとおり、最大３つのＲ６は水素以外であり；
上記のとおり、最大３つのＲＬは水素以外であり；そして
最大２つのＱは窒素原子である。
【０１６５】
本発明の別の好ましい実施形態において、
Ｙは−ＮＨ２である。
【０１６６】
本発明の別の好ましい実施形態において、
Ｒ４は水素であり；
上記のとおり、最大１つのＲＬは水素以外であり；
上記のとおり、最大２つのＲ６は水素以外であり；そして
最大１つのＱは窒素原子である。
【０１６７】
本発明の別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式
【０１６８】
【化２２】
2009539882.tif 000024
【０１６９】
によって表される。
【０１７０】
本発明の別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式：
【０１７１】
【化２３】
2009539882.tif 000025
【０１７２】
によって表される。
【０１７３】
本発明の別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式：
【０１７４】
【化２４】
2009539882.tif 000026
【０１７５】
によって表される。
【０１７６】
本発明の別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式：
【０１７７】
【化２５】
2009539882.tif 000027
【０１７８】
によって表される。
【０１７９】
本発明の別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式：
【０１８０】
【化２６】
2009539882.tif 000028
【０１８１】
によって表される。
【０１８２】
本発明の別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式：
【０１８３】
【化２７】
2009539882.tif 000029
【０１８４】
によって表される。
【０１８５】
本発明の別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式：
【０１８６】
【化２８】
2009539882.tif 000030
【０１８７】
によって表される。
【０１８８】
本発明の別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式：
【０１８９】
【化２９】
2009539882.tif 000031
【０１９０】
によって表される。
【０１９１】
本発明の別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式：
【０１９２】
【化３０】
2009539882.tif 000032
【０１９３】
によって表される。
【０１９４】
本発明の別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式：
【０１９５】
【化３１】
2009539882.tif 000033
【０１９６】
によって表される。
【０１９７】
本発明の別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式：
【０１９８】
【化３２】
2009539882.tif 000034
【０１９９】
によって表される。
【０２００】
本発明の別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式：
【０２０１】
【化３３】
2009539882.tif 000035
【０２０２】
によって表される。
【０２０３】
本発明の別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式：
【０２０４】
【化３４】
2009539882.tif 000036
【０２０５】
によって表される。
【０２０６】
本発明の別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式：
【０２０７】
【化３５】
2009539882.tif 000037
【０２０８】
によって表される。
【０２０９】
本発明の別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式：
【０２１０】
【化３６】
2009539882.tif 000038
【０２１１】
によって表される。
【０２１２】
本発明の別の好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式：
【０２１３】
【化３７】
2009539882.tif 000039
【０２１４】
によって表される。
【０２１５】
式（Ｉ）の化合物は、遊離の塩基として調製され、かつ用いられ得る。他に、該化合物は、医薬的に許容される塩として調製され、かつ用いられ得る。医薬的に許容される塩は、親化合物の所望の生物活性を保持または強化し、好ましくない毒性作用を与えない塩である。このような塩の例には、（ａ）無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸などと共に形成された酸付加塩；（ｂ）有機酸、例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギニン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸、マロン酸、スルホサリチル酸、グリコン酸、２−ヒドロキシ−３−ナフトエート、パモエート、サリチル酸、ステアリン酸、フタル酸、マンデル酸、乳酸などと共に形成された塩；および（ｃ）元素アニオン、例えば、塩素、臭素、およびヨウ素から形成された塩がある。
【０２１６】
式（Ｉ）の範囲内の化合物の全てのエナンチオマー、ジアステレオマー、互変異性体およびラセミ混合物は本発明によって包含されることが留意されるべきである。このようなエナンチオマーおよびジアステレオマーの全ての混合物は本発明の範囲内にある。
【０２１７】
いずれの特定の理論にも限定されることなしに、式（Ｉ）の化合物は、ｉｎ  ｖｉｖｏでナトリウムチャネル遮断薬およびベータ受容体アゴニストとして機能すると考えられる。上皮ナトリウムチャネルを遮断すること、ならびに粘膜表面に存在するベータ−受容体を活性化させることによって、式（Ｉ）の化合物は粘膜表面による水の吸収を減少させる。この作用は、粘膜表面の保護的液体の容量を増加させ、系を再均衡させ、したがって、疾患を治療させる。
【０２１８】
本発明はまた、上記に検討した式（Ｉ）の化合物の特性を利用する治療方法を提供する。したがって、本発明の方法によって治療され得る対象は、限定されないが、嚢胞性線維症、原発性線毛運動不全、慢性気管支炎、慢性閉塞性気道疾患に悩む患者、人工呼吸器を付けた患者、急性肺炎に悩む患者などが含まれる。患者の少なくとも１つの肺に該活性化合物を投与し、次いで、その患者から喀痰を誘発または収集することによって、患者から喀痰試料を得るために本発明を用いることができる。通常、本発明品は、エアロゾル（液体または乾燥粉末）または洗浄によって呼吸器粘膜表面に投与する。
【０２１９】
本発明の方法によって治療され得る対象にはまた、鼻腔内に酸素補給をされている患者（気道表面を乾燥させ易い治療方式）；鼻気道表面に影響するアレルギー性疾患または応答  （例えば、花粉、塵埃、動物の毛または粒子、昆虫または昆虫粒子などに対するアレルギー性応答）  に悩む患者；鼻気道表面の細菌感染、例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ感染などのブドウ球菌感染症、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ感染、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染、Ｐｓｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｕｒｉｇｉｎｏｓａ感染などに悩む患者；鼻気道表面に影響する炎症性疾患に悩む患者；または副鼻腔炎  （ここで、活性薬剤または薬剤は、洞における鼻詰まり流体の排液を促進するのに有効な量を投与することによって洞における鼻詰まり粘膜分泌の排液を促進するために投与される）、または合併鼻副鼻腔炎に悩む患者が含まれる。本発明は、エアロゾルおよび点滴薬を含む局所送達によって鼻−副鼻腔表面に投与され得る。
【０２２０】
本発明は、気道表面以外の粘膜表面に水分補給するために使用され得る。このような他の粘膜表面には、胃腸表面、口腔表面、性器−尿道（膣）表面、眼球表面または目の表面、内耳および中耳が含まれる。例えば、本発明の活性化合物は、有効量で、局所的に（ｌｏｃａｌｌｙ／ｔｏｐｉｃａｌｌｙ）、経口で、または直腸にを含む任意の好適な手段によって投与され得る。
【０２２１】
本発明は主に、ヒト対象の治療に関するが、獣医学的目的のために他の哺乳動物対象、例えば、イヌおよびネコの治療にも用いることができる。
【０２２２】
上記に検討したように、本発明の組成物を調製するために用いられる化合物は、医薬的に許容される遊離の塩基の形態であり得る。該化合物の遊離の塩基は一般にその塩に比べて水溶液に溶解しないため、遊離の塩基組成物は肺への活性薬剤のより持続した放出を与えるために用いられる。溶液中に溶解しない粒子状形態で肺中に存在する活性薬剤は、溶液中にゆっくりと溶解するので徐々に体内に吸収され得るようになる薬剤の貯蔵所としてさらに機能する。
【０２２３】
本発明の別の態様は、医薬的に許容される担体（例えば、水性担体溶液）中に式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物である。一般に、式（Ｉ）の化合物は、粘膜表面による水の再吸収を阻害するのに有効な量で組成物中に含まれる。
【０２２４】
本発明の化合物はまた、Ｐ２Ｙ２受容体アゴニストまたは医薬的に許容されるその塩（本明細書において時に「活性薬剤」ともいう）と併用して用いることができる。該組成物は、Ｐ２Ｙ２受容体アゴニストまたは医薬的に許容されるその塩（本明細書において時に「活性薬剤」ともいう）をさらに含み得る。Ｐ２Ｙ２受容体アゴニストは通常、気道表面、特に鼻気道表面による塩化物および水分泌を刺激するのに有効な量で含まれる。好適なＰ２Ｙ２受容体アゴニストは、米国特許第６２６４９７５号の第９〜１０欄、米国特許第５６５６２５６号、および米国特許第５２９２４９８号に記載され、それらのそれぞれは参照により本明細書に組み込まれる。
【０２２５】
気管支拡張剤も本発明の化合物と組み合わせて用いることができる。これらの気管支拡張剤には、限定されないが、抗コリン作動薬（限定されないが、臭化イプラトロピウムを含む）、ならびにテオフィリンおよびアミノフィリンなどの化合物が含まれる。これらの化合物は、本明細書に記載される活性化合物の前に、または同時にのいずれかで知られた技術によって投与され得る。
【０２２６】
イオン性および有機のオスモライトも本発明の化合物と組み合わせて用いることができる。有用なイオン性オスモライトには、医薬的に許容されるアニオンおよび医薬的カチオンからなる任意の塩が含まれる。有機オスモライトには、限定されないが、糖、糖アルコールおよび有機オスモライトが含まれる。イオン性および非イオン性オスモライトの詳細な例は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６９２６９１１号において与えられる。特に有用なイオン性オスモライトは、高張塩化ナトリウムまたは亜硝酸ナトリウムである。特に有用な有機オスモライトは、還元糖マンニトールである。
【０２２７】
本発明の別の態様は、医薬的に許容される担体（例えば、水性担体溶液）中に上記活性化合物を含む医薬配合物である。一般に、該活性化合物は、気道および他の表面を含む粘膜表面による水の再吸収を阻害するなどの粘膜表面を治療するのに有効な量で組成物中に含まれる。
【０２２８】
本明細書において開示される活性化合物は、局所的に、経口で、直腸に、膣に、眼に、および経皮的になどを含む任意の好適な手段によって粘膜表面に投与され得る。例えば、便秘の治療について、該活性化合物は、胃腸粘膜表面に経口または直腸投与され得る。該活性化合物は、経口投与のための液滴、錠剤などとして、直腸もしくは生殖器−尿道投与のための坐薬としてなど、滅菌生理食塩水もしくは希釈食塩水または局所溶液などの任意の好適な形態で医薬的に許容される担体と組み合わせられ得る。賦形剤は、必要に応じて、該活性化合物の溶解度を高める配合中に含められ得る。
【０２２９】
本明細書において開示される活性化合物は、生理もしくは希釈食塩水または蒸留水などの医薬的に許容される担体中に該活性化合物をスプレー、ミスト、または液滴として含む任意の好適な手段によって患者の気道表面に投与され得る。例えば、該活性化合物は、その開示がその全体において参照により本明細書に組み込まれるＪａｃｏｂｕｓに付与された米国特許第５７８９３９１号に記載されるように配合物として調製および投与され得る。
【０２３０】
本発明を実施するために調製される固体または液体粒状活性薬剤は、上記のように、（呼吸して）吸い込み可能または吸い込み不可能な粒径の粒子を含むことができる（すなわち、吸い込み可能な粒子については、吸入後に口腔および喉頭を通過して、気管支および肺の肺胞中に入るのに十分小さい粒径の粒子であり、吸い込み不可能な粒子については、咽頭を通過して気管支および肺の肺胞に入るよりもむしろ鼻気道経路に保持されるのに十分大きい粒子である）。一般に、粒径が約１から５ミクロン（より具体的には、粒径が約４．７ミクロン未満）の範囲にある粒子は吸い込み可能である。吸い込み不可能な粒径の粒子は、粒径が約５ミクロンを超え、目視可能な液滴の粒径までである。したがって、鼻腔内投与について、１０〜５００μｍの範囲の粒径が鼻腔における保持を確実にするために用いられ得る。
【０２３１】
本発明による配合物の製造において、活性薬剤または生理学的に許容されるその塩もしくは遊離の塩基は通常、なかんずく、許容される担体と一緒に混合される。当然、担体は、配合物中の任意の他の成分と混合可能でなければならず、かつ患者に対して有害であってはならない。担体は固体もしくは液体、または両方でなければならず、好ましくは、単位用量配合物、例えば、０．５重量％から９９重量％の該活性化合物を含み得るカプセルとして該化合物と一緒に配合される。１つまたは複数の活性化合物を本発明の配合物中に取り込むことができ、この配合物は本質的に該成分を混合することからなる調剤学の任意のよく知られた技術によって調製することができる。
【０２３２】
微粉化された活性薬剤の吸い込み可能または吸い込み不可能な乾燥粒子を含む組成物は、該乾燥活性薬剤を乳鉢および乳棒で粉砕し、次いで、微粉化された組成物を、４００メッシュふるいを通過させて、大きな塊を粉砕するか分離して取り出すことによって調製し得る。
【０２３３】
粒子状活性薬剤組成物は、エアロゾルの配合を容易にするように働く分散剤を場合によって含み得る。好適な分散剤は乳糖であり、これは任意の好適な比（例えば、重量基準で約１対１）で該活性薬剤とブレンドし得る。
【０２３４】
本明細書において開示される活性化合物は、当該技術分野において知られた好適な手段、例えば、点鼻薬、噴霧などによって対象の鼻腔、副鼻腔および肺を含む気道表面に投与され得る。本発明の１つの実施形態において、本発明の活性化合物は経気管支鏡洗浄によって投与される。本発明の好ましい実施形態において、本発明の活性化合物は、対象が吸入する、該活性化合物を含む吸い込み可能な粒子のエアロゾル懸濁液を投与することによって肺気道表面に被着する。吸い込み可能な粒子は、液体または固体であり得る。対象の肺にエアロゾル粒子を投与するための多数の吸入器が知られている。
【０２３５】
限定されないが、そのそれぞれが参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５７４０７９４号；同第５６５４００７号；同第５４５８１３５号；同第５７７５３２０号；および同第５７８５０４９号に開示されたものを含む、Nolctar Therapeutic Systems、Palo Alto、California、USAによって開発されたものなどの吸入器を用いることができる。本出願人は、本明細書に引用される全ての特許参照文献の開示が、その全体において参照により本明細書に組み込まれることを特に意図する。限定されないが、そのそれぞれが参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５６２２１６６号；同第５５７７４９７号；同第５６４５０５１号；および同第５４９２１１２号に開示されたものを含む、Ｄｕｒａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡによって開発されたものなどの吸入器も用いることができる。さらに、限定されないが、そのそれぞれが参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５８２６５７０号；同第５８１３３９７号；同第５８１９７２６号；および同第５６５５５１６号に開示されたものを含む、Ａｒａｄｉｇｍ  Ｃｏｒｐ．、Ｈａｙｗａｒｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡによって開発されたものなどの吸入器を用いることができる。これらの装置は、乾燥粒子吸入器として特に好適である。
【０２３６】
該活性化合物を含む液体粒子のエアロゾルは、圧力駆動エアロゾル噴霧器または超音波噴霧器を用いるなどの任意の好適な手段によって生成させることができる。例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４５０１７２９号を参照されたい。噴霧器は、圧縮ガス、通常空気もしくは酸素を細いベンチュリーオリフィスを通して加速することによってまたは超音波撹拌によってのいずれかで、該活性成分の溶液または懸濁液を治療用エアロゾル噴霧に変換する市販の装置である。噴霧器における使用のための好適な配合物は、液体担体中の活性成分からなり、該活性成分は該配合物の４０％ｗ／ｗまで、好ましくは２０％ｗ／ｗ未満を構成する。担体は通常、水（および最も好ましくは、滅菌のピロゲンを含まない水）または希釈水性アルコール溶液である。ペルフルオロカーボン担体も用いることができる。場合による添加剤には、配合物が滅菌されていない場合、保存剤、例えば、メチルヒドロキシ安息香酸、酸化防止剤、香味剤、揮発性油、緩衝剤および表面活性剤が含まれる。
【０２３７】
該活性化合物を含む固体粒子のエアロゾルは同様に、任意の固体粒子状薬剤エアロゾル発生器を用いて生成させることができる。対象に固体粒子状薬剤を投与するためのエアロゾル発生器は、上記に説明したように吸い込み可能な粒子を生成し、ヒト投与に好適な比率で所定定量の薬剤を含む多量のエアロゾルを発生させる。固体粒子状エアロゾル発生器の具体的種類の１つは、吸入器（ｉｎｓｕｆｆｌａｔｏｒ）である。吸入による投与のための好適な配合物には、吸入器によって送達され得るか、または嗅ぐ仕方で鼻腔中に取り入れられ得る細かく粉砕した粉末が含まれる。吸入器において、粉末（例えば、本明細書において記載される治療を実施するのに有効なその定量）は、通常ゼラチンもしくはプラスチックで作製されたカプセルまたはカートリッジに含まれ、これはｉｎ  ｓｉｔｕで穴をあけるか、または開くのいずれかであり、該粉末は吸入後に該装置を通って吸引される空気によってか、または手動ポンプによって送達される。吸入器で用いられる粉末は、該活性成分のみからなるか、または該活性成分、好適な粉末希釈剤、例えば、乳糖、および場合により表面活性剤を含む粉末ブレンドのいずれかからなる。該活性成分は通常、該配合物の０．１から１００％ｗ／ｗを構成する。具体的なエアロゾル発生器の第２の種類は、定量吸入器を含む。定量吸入器は圧縮されたエアロゾルディスペンサーであり、液化推進剤中に活性成分の懸濁または溶液配合物を通常含む。使用の間に、これらの装置は、通常１０から１５０μｌである定量容量を供給するように構成された弁を通して配合物を送り出し、該活性成分を含む細粒スプレーを生成する。好適な推進剤には、特定のクロロフルオロカーボン化合物、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタンおよびそれらの混合物が含まれる。該配合物は、１つまたは複数の共溶媒、例えば、エタノール、界面活性剤、例えば、オレイン酸またはソルビタントリオレエート、酸化防止剤および好適な香味剤をさらに含んでもよい。
【０２３８】
固体または液体の粒子から形成されるかにかかわらず、エアロゾルは、約１０から１５０リットル／分、より好ましくは３０から１５０リットル／分、最も好ましくは約６０リットル／分の流量でエアロゾル発生器によって生成され得る。より多くの量の薬剤を含むエアロゾルはより迅速に投与され得る。
【０２３９】
本明細書に開示される活性化合物の投与量は、治療される条件および対象の状態に依存して変化するが、一般に、気道表面に被着する、約０．０１、０．０３、０．０５、０．１から１、５、１０または２０ｍｇの医薬剤であり得る。１日用量は、一または多単位用量投与の中で分割され得る。目標は、肺気道表面の医薬剤の濃度１０−９〜１０４Ｍを達成することである。
【０２４０】
別の実施形態において、対象が鼻を通して吸入する、活性化合物を含む吸い込み可能または吸い込み不可能な粒子（好ましくは吸い込み不可能な粒子）のエアロゾル懸濁液を投与することによって、それらは投与される。該吸い込み可能または吸い込み不可能な粒子は、液体または固体であり得る。活性薬剤の量には、対象の気道表面上の活性薬剤の溶解濃度約１０−９、１０−８、または１０−７から約１０−３、１０−２、１０−１モル／リットル、より好ましくは約１０−９から約１０−４モル／リットルを達成するのに十分な量であり得る。
【０２４１】
活性化合物の投与量は、治療される条件および対象の状態に依存して変化するが、一般に、対象の鼻気道表面上の活性薬剤の溶解濃度約１０−９、１０−８、または１０−７から約１０−３、１０−２、１０−１モル／リットル、より好ましくは約１０−７から約１０−４モル／リットルを達成するのに十分な量であり得る。投与される活性化合物の特定の配合物の溶解度に依存して、１日用量は、一または数単位用量投与の中で分割され得る。重量基準で１日用量は、対象の年齢および状態に依存して、ヒト対象について活性薬剤粒子約０．０１、０．０３、０．１、０．５または１．０から１０または２０ミリグラムの範囲であり得る。現に好ましい単位用量は、１日当たり２〜１０回投与の計画で与えられる活性薬剤約０．５ミリグラムである。投与量は、任意の好適な手段（例えば、ゼラチンカプセルをカプセル化する）によって包装済み単位として与えられ得る。
【０２４２】
本発明の１つの実施形態において、該粒子状活性薬剤組成物は、活性薬剤の遊離の塩基および医薬的に許容される塩の両方を含み、鼻の粘液分泌中への溶解のために、活性薬剤の早期放出および持続放出の両方で提供され得る。このような組成物は、患者に早期の緩和、および時間経過と共に持続する緩和の両方を提供するように機能する。活性薬剤治療の経過と共に患者の薬剤服用遵守を向上させるために、必要とされる１日の投与の回数を減らすことによる持続放出が期待される。
【０２４３】
気道投与に好適な医薬配合物には、溶液、乳濁液、懸濁液および抽出物の配合物が含まれる。参照により本明細書に組み込まれる、Ｊ．  Ｎａｉｒｎ、Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，  Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，  Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｅｘｔｒａｃｔｓ、ｉｎ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第８６章（第１９版、１９９５年）を一般的に参照されたい。鼻腔投与に好適な医薬配合物は、それらの開示が全体において参照により本明細書に組み込まれる、Ｓｃｈｏｒに付与された米国特許第４３８９３９３号；Ｉｌｌｕｍに付与された同第５７０７６４４号；Ｓｕｚｕｋｉに付与された同第４２９４８２９号；およびＳｕｚｕｋｉに付与された同第４８３５１４２号に記載されるように調製され得る。
【０２４４】
該活性化合物を含む液体粒子の噴霧またはエアロゾルは、任意の好適な手段、例えば、水性の医薬的に許容される担体、例えば、滅菌生理食塩水溶液または滅菌水中の該活性薬剤を有する単純な鼻スプレーによって生成され得る。投与は、圧力駆動エアロゾル噴霧器または超音波噴霧器と共にあり得る。例えば、その両方が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第４５０１７２９号および同第５６５６２５６号を参照されたい。鼻液滴もしくはスプレー瓶または噴霧器における使用に好適な配合物は、該活性成分が該配合物の４０％ｗ／ｗまで、好ましくは２０％ｗ／ｗ未満を構成する、液体担体中の該活性成分からなる。通常、該担体は、水（最も好ましくは滅菌のピロゲンを含まない水）または希釈水性アルコール溶液であり、好ましくは０．１２％から０．８％塩化ナトリウム溶液で作製される。場合による添加剤には、配合物が滅菌にされない場合、例えば、メチルヒドロキシ安息香酸、酸化防止剤、香味剤、揮発性油、緩衝剤、浸透圧的に活性な薬剤（例えば、マンニトール、キシリトール、エリトリトール）および表面活性剤が含まれる。
【０２４５】
微粉化された活性薬剤の吸い込み可能または吸い込み不可能な乾燥粒子を含む組成物は、該乾燥活性薬剤を乳鉢および乳棒で粉砕し、次いで、微粉化された組成物を、４００メッシュふるいを通過させて、大きな塊を粉砕するか分離して取り出すことによって調製し得る。
【０２４６】
該粒子状組成物は、エアロゾルの形成を容易にするのに働く分散剤を場合によって含み得る。好適な分散剤は乳糖であり、これは任意の好適な比（例えば、重量基準で約１対１）で該活性薬剤とブレンドすることができる。
【０２４７】
式（Ｉ）の化合物は、当該技術分野において知られた操作によって合成することができる。代表的な合成手順は、以下のスキームに示される：
【０２４８】
【化３８】
2009539882.tif 000040
【０２４９】
これらの手順は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＥ．Ｊ  Ｃｒａｇｏｅ、“Ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ａｍｉｌｏｒｉｄｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  Ａｎａｌｏｇｓ”（第３章）、ｉｎ  Ａｍｉｌｏｒｉｄｅ  ａｎｄ  Ｉｔｓ  Ａｎａｌｏｇｓ、２５〜３６頁に記載されている。該化合物を調製する他の方法は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第３３１３８１３号に記載されている。米国特許第３３１３８１３号に記載された特定の方法Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤの中を参照されたい。これらの化合物の調製、特に、新規なＨＮＲ３Ｒ４断片の調製に有用な他の方法は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第６８５８６１４号、同第６８５８６１５号、および同第６９０３１０５号に記載されている。スキーム１から９は、限定されないが、本明細書に記載されるナトリウムチャネル遮断薬／ベータアドレナリンアゴニストを調製するのに用いられる手順の代表的なものである。
【０２５０】
【化３９Ａ】
2009539882.tif 000041
【０２５１】
【化３９Ｂ】
2009539882.tif 000042
【０２５２】
【化３９Ｃ】
2009539882.tif 000043
【０２５３】
【化４０】
2009539882.tif 000044
【０２５４】
【化４１】
2009539882.tif 000045
【０２５５】
【化４２Ａ】
2009539882.tif 000046
【０２５６】
【化４２Ｂ】
2009539882.tif 000047
【０２５７】
【化４３Ａ】
2009539882.tif 000048
【０２５８】
【化４３Ｂ】
2009539882.tif 000049
【０２５９】
【化４３Ｃ】
2009539882.tif 000050
【０２６０】
【化４４】
2009539882.tif 000051
【０２６１】
【化４５Ａ】
2009539882.tif 000052
【０２６２】
【化４５Ｂ】
2009539882.tif 000053
【０２６３】
【化４６Ａ】
2009539882.tif 000054
【０２６４】
【化４６Ｂ】
2009539882.tif 000055
【０２６５】
【化４７】
2009539882.tif 000056
【０２６６】
【化４８Ａ】
2009539882.tif 000057
【０２６７】
【化４８Ｂ】
2009539882.tif 000058
【０２６８】
【化４９】
2009539882.tif 000059
【０２６９】
【化５０Ａ】
2009539882.tif 000060
【０２７０】
【化５０Ｂ】
2009539882.tif 000061
【０２７１】
【化５０Ｃ】
2009539882.tif 000062
【０２７２】
【化５０Ｄ】
2009539882.tif 000063
【０２７３】
【化５１】
2009539882.tif 000064
【０２７４】
本発明の化合物を特徴付けするためにいくつかのアッセイを用いることができる。代表的なアッセイを下記する。
【０２７５】
１．上皮ナトリウムチャネル遮断およびベータアゴニスト活性のｉｎ  ｖｉｖｏ測定
上皮ナトリウムチャネル遮断およびベータアゴニスト活性の効力を評価するために、それぞれの化合物は、同様の方法論で２つの別個の実験手順を用いて試験した。
【０２７６】
上皮ナトリウムチャネル遮断薬の効力を評価するために、本発明の化合物では、ウッシング（Ｕｓｓｉｎｇ）チャンバーに堆積した気道上皮単層を用いて短絡回路電流（ＩＳＣ）下で測定した気道上皮ナトリウム電流の内腔薬剤阻害の決定を含む。新たに切除したヒト、またはイヌ気道から得た細胞を多孔性０．４ミクロンＴｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）  Ｐｅｒｍｅａｂｌｅ  Ｓｕｐｐｏｒｔｓ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．、Ａｃｔｏｎ、ＭＡ）上に播種し、ホルモン規定媒体中の空気−液体界面（ＡＬＩ）条件で培養し、Ｕｓｓｉｎｇチャンバー内のクレブス重炭酸塩リンゲル（ＫＢＲ）に浴させながらナトリウム輸送活性（ＩＳＣ）についてアッセイした。試験薬剤添加の全ては、近似的に半対数用量添加（１×１０−１１Ｍから６×１０−５Ｍ）で内腔浴に対してされ、ＩＳＣの累積的変化（減少する）を記録する。薬剤の全ては、約１×１０−２の濃度にある原液としてジメチルスルホキシド中で調製し、−２０℃で保存する。６つの調製物を通常並行して実験し；実験当たり１つの調製物は正の対照として５５２−０２を取り込む。濃度−効果の関係の開始前に、デザイナー多重リガンド（ＤＭＬ）のベータアゴニスト成分を阻害するために内腔浴（１０μＭ）に非選択的ベータアゴニスト遮断薬であるプロプラノロールを適用した。電圧固定法からのデータ全てを、コンピュータインターフェースを介して収集し、オフラインで分析した。
【０２７７】
全ての化合物について濃度−効果の関係を考慮し、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）用ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ３．００、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡを用いて分析した。最大有効濃度であるＥＣ５０値を計算し、正の対照としての５５２−０２の効力と比較する。
【０２７８】
ベータアゴニスト活性を評価するために、本発明の化合物では、ウッシングチャンバーに堆積した気道上皮単層を用いて短絡回路電流（ＩＳＣ）下で測定した気道上皮ナトリウム電流の内腔薬剤阻害の決定を含む。新たに切除したヒト、イヌまたはヒツジ気道から得た細胞を多孔性０．４ミクロンＴｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）  Ｐｅｒｍｅａｂｌｅ  Ｓｕｐｐｏｒｔｓ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）上に播種し、ホルモン規定媒体中の空気−液体界面（ＡＬＩ）条件で培養し、ウッシングチャンバー内のクレブス重炭酸塩リンゲル（ＫＢＲ）に浴させながらアニオン分泌（ＩＳＣ）についてアッセイした。試験薬剤添加の全ては、近似的に半対数用量添加（８×１０−１０Ｍから６．５×１０−５Ｍ）で内腔浴に対してであり、ＩＳＣ（励起）の累積的変化を記録する。薬剤の全ては、１×１０−１から１×１０−２Ｍの濃度にある原液としてジメチルスルホキシド中で調製し、−２０℃で保存する。６つの調製物を通常並行して実験し；実験当たり１つの調製物は、試験される化合物に取り込まれるアナログに依存して、ホルモテロール、サルメテロール、または正の対照として別のよく認識されたベータアゴニストのいずれかを取り込む。濃度−効果の関係の開始前に、ナトリウム吸収によって引き起こされるＩＳＣの変化を除去するために頂端面に、効力のあるナトリウムチャネル遮断薬である５５２−０２（１μＭ）を適用した。電圧固定法からのデータ全てを、コンピュータインターフェースを介して収集し、オフラインで分析した。
【０２７９】
全ての化合物について濃度−効果の関係を考慮し、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）用ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ３．００、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡを用いて分析した。最大有効濃度であるＥＣ５０値を計算し、正の対照としてのホルモテロールまたはサルブタモルのいずれかの効力と比較する。
【０２８０】
２．気道上皮による化合物吸収および生体内変化のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ
気道上皮細胞は、経上皮吸収の進行の間に薬剤を代謝する能力を有する。さらに、可能性は高くはないが、特異的な外酵素活性によって気道上皮表面で薬剤を代謝し得ることが可能である。恐らくは外表面事象としてより可能性があることとして、肺疾患、例えば、嚢胞性線維症を患う患者の気道内腔をふさぐ感染性分泌物により化合物は代謝し得る。したがって、一連のアッセイを行い、試験化合物とヒト気道上皮および／またはヒト気道上皮内腔産物との相互作用から生じる任意の化合物の生体内変化（代謝または共役）を特徴付ける。
【０２８１】
最初の一連のアッセイにおいて、「ＡＳＬ」刺激薬としてのＫＢＲにおける試験化合物の相互作用がＴｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）  Ｐｅｒｍｅａｂｌｅ  Ｓｕｐｐｏｒｔｓ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）、挿入系において増殖したヒト気道上皮細胞の頂端面に適用される。大部分の化合物について、化学種を分離するために高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）ならびに試験化合物および新規な代謝物の相対量を測定するためにこれらの化合物の内因性蛍光発光特性を用いて、代謝または共役（新しい種の生成）を試験する。典型的なアッセイとして、試験溶液（１ｍＬ  ＫＢＲ、１００μＭの試験化合物を含む）を上皮内腔表面に置く。（１）内腔浴から漿膜浴に浸透する試験化合物の質量および（２）親化合物からの代謝産物の形成能力のＨＰＬＣ分析について内腔区画および漿膜区画それぞれから順次的に５から６００μｌの試料を得る。ＨＰＬＣデータから、内腔表面上の新規な代謝産物化合物の比率および／または形成ならびに側底部溶液中の試験化合物および／または新規な代謝産物の出現を内部標準に基づいて定量する。親化合物に関する潜在的な新規代謝産物のクロマトグラフィー移動度に関するデータも定量化する。
【０２８２】
ＣＦ喀痰による試験化合物の代謝可能性を分析するために、１０人のＣＦ患者（ＩＲＢ認可下）から得た痰として出されたＣＦ喀痰の「代表的」混合物を収集した。この喀痰を激しくボルテックスしてＫＢＲ溶液の１：５混合物中に溶解させ、その後、この混合物を「正味の」喀痰アリコートに分け、「上清」アリコートが得られるようにアリコートを超遠心分離にかけた（正味の＝細胞の；上清＝液体相）。ＣＦ喀痰による化合物代謝の通常調査には、「正味の」ＣＦ喀痰に知られた質量の試験化合物を添加し、ＣＦ喀痰「上清」のアリコートを３７℃でインキュベートし、その後、上記のとおりＨＰＬＣ分析による化合物安定性／代謝の特徴付けのためにそれぞれの喀痰種類からアリコートを順次的に試料採取した。次いで、上記のように、化合物の消失、新規代謝産物の形成率、および新規代謝産物のＨＰＬＣ移動度の分析を行う。
【実施例】
【０２８３】
本発明について一般的に記載してきたが、説明のみのために本明細書において提供され、かつ他に特記されない限り限定的であることを意図しない特定の具体的な実施例を参照することによってさらなる理解を得ることができる。
【０２８４】
ベータアゴニスト活性を有するナトリウムチャネル遮断薬の調製
材料および方法。全ての試薬および溶媒は、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ．から購入し、さらなる精製をすることなしに使用した。ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＷＭ３６０（３６０ＭＨｚで１Ｈ  ＮＭＲおよび９０ＭＨｚで１３Ｃ  ＮＭＲ）またはＢｒｕｋｅｒ  ＡＣ３００（３００ＭＨｚで１Ｈ  ＮＭＲおよび７５ＭＨｚで１３Ｃ  ＮＭＲ）のいずれかで得た。フラッシュクロマトグラフィーは、２０ｐｓｉ（Ｎ２）で９０ｇシリカゲルカートリッジ（４０Ｍ  ＦＳＯ−０１１０−０４０１５５、３２〜６３μｍ）を充填したＥｌｕｔｉｏｎ  ＳｏｌｕｔｉｏｎからのＦｌａｓｈ  Ｅｌｕｔｅ（商標）システム（ＰＯ  Ｂｏｘ  ５１４７、Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ２２９０５）で行った。ＧＣ−分析は、Ｈｅｌｉｆｌｅｘ  Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  Ｃｏｌｕｍｎ（Ａｌｌｔｅｃｋ）を備えたＳｈｉｍａｚｕ  ＧＣ−１７で行った；相：ＡＴ−１、長さ：１０メートル、ＩＤ：０．５３ｍｍ、フィルム：０．２５ミクロン。ＧＣパラメータ：注入器３２０℃、検出器３２０℃、ＦＩＤ気体流量：Ｈ２４０ｍｌ／分、空気４００ｍｌ／分。キャリヤーガス：Ｓｐｌｉｔ比１６：１、Ｎ２流量１５ｍｌ／分、Ｎ２速度１８ｃｍ／秒。温度プログラムは、０〜３分間７０℃、３〜１０分間７０〜３００℃、１０〜１５分間３００℃である。
【０２８５】
ＨＰＬＣ分析を、Ｍｉｃｒｏｓｏｒｂ  ＭＶ  Ｃ８カラム、１００Ａ、２５ｃｍを備えたＧｉｌｓｏｎ  ３２２  Ｐｕｍｐ、検出器３６０ｎｍでのＵＶ／Ｖｉｓ−１５６で行った。移動相：Ａ＝０．１％ＴＦＡを有するアセトニトリル、Ｂ＝０．１％ＴＦＡを有する水。勾配プログラム：１分間９５：５  Ｂ：Ａ、次いで、７分かけて２０：８０  Ｂ：Ａに、次いで、１分かけて１００％Ａに、その後１１分間１００％Ａで洗い出し（ｗａｓｈｏｕｔ）、流量：１ｍｌ／分。
【０２８６】
（実施例１）
Ｎ−（５−｛２−［４−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）グアニジノ］ブチル｝フェニル）ブチルアミノ］−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル｝−２−ヒドロキシフェニル）ホルムアミド（１２）の合成（スキーム１）
【０２８７】
【化５２】
2009539882.tif 000065
【０２８８】
１−（４−ベンジルオキシ−３−ニトロフェニル）エタノン（２）
アセトン（１２０ｍＬ）中、１−（４−ヒドロキシ−３−ニトロフェニル）エタノン（５．９２ｇ、３２．７０ミリモル）、ヨウ化ナトリウム（４．９０ｇ、３２．７０ミリモル）、炭酸カリウム（１３．５５ｇ、９８．００ミリモル）、および臭化ベンジル（５．０４ｍＬ、４２．５０ミリモル）の混合物を還流下で６６時間撹拌した。ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去後、得られた残渣をジクロロメタンで希釈し、不溶性無機物をろ別した。ろ液を真空で濃縮し、得られた残渣をジクロロメタンで溶出するフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、白色固体（８．２４ｇ、９３％）としてベンジルエーテル２を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ２．６０  （ｓ，  ３Ｈ）、５．３２  （ｓ，  ２Ｈ）、７．１８  （ｄ，  １Ｈ）、７．４１  （ｍ，  ５Ｈ）、８．１２  （ｄｄ，  １Ｈ）、８．４４  （ｄ，  １Ｈ）。
【０２８９】
１−（４−ベンジルオキシ−３−ニトロフェニル）−２−ブロモエタノン（３）
三臭化フェニルトリメチルアンモニウム（１．４６ｇ、３．９０ミリモル）を無水ＴＨＦ（１５ｍＬ）中１−（４−ベンジルオキシ−３−ニトロフェニル）エタノン（２）（１．０４ｇ、３．８２ミリモル）の溶液に３回に分けて添加した。この反応混合物を室温で１２時間撹拌した。次いで、重炭酸ナトリウム水溶液（５％、１０ｍＬ）およびチオ硫酸ナトリウム水溶液（１０％、５ｍＬ）を添加した。この混合物をジクロロメタンで抽出し、混合有機物をロータリーエバポレーションで濃縮した。得られた残渣をジクロロメタンで溶出するＢｉｏｔａｇｅシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、白色固体（１．０８ｇ、８１％収率）としてブロモケトン３を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ４．４９  （ｓ，  ３Ｈ）、５．３５  （ｓ，  ２Ｈ）、７．２１  （ｄ，  １Ｈ）、７．４０  （ｍ，  ５Ｈ）、８．１５  （ｄｄ，  １Ｈ）、８．４９  （ｄ，  １Ｈ）。
【０２９０】
１−（４−ベンジルオキシ−３−ニトロフェニル）−２−ブロモ−１−（Ｒ）−エタノール（４）
ＴＨＦ中ＢＨ３・ＴＨＦの溶液（１Ｍ、３．７０ｍＬ、３．７０ミリモル）を無水ＴＨＦ（１５ｍＬ）中１−（４−ベンジルオキシ−３−ニトロフェニル）−２−ブロモエタノン（３）（１．０８ｇ、３．０８ミリモル）およびＲ−メチル−ＣＢＳ−オキサゾボロリジン（トルエン中１Ｍ、０．６１ｍＬ、０．６１ミリモル）の溶液に添加した。得られた反応混合物を室温で１６時間撹拌した。メタノール（５ｍＬ）をゆっくり添加して、反応をクエンチした。ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去後、得られた残渣をジクロロメタンで溶出するＢｉｏｔａｇｅシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、黄色の粘性油（０．７２ｇ、６６％）として所望のブロモアルコール４を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ２．８２  （ｄ，  １Ｈ）、３．４８  （ｄｄ，  １Ｈ）、３．５９  （ｄｄ，  １Ｈ）、４．８９  （ｍ，  １Ｈ）、５．２１  （ｓ，  ２Ｈ）、７．１１  （ｄ，  １Ｈ）、７．３９  （ｍ，  ５Ｈ）、７．５０  （ｄｄ，  １Ｈ）、７．８７  （ｄ，  １Ｈ）。
【０２９１】
Ｎ−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ブロモ−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）フェニル］ホルムアミド（５）
Ｐａｒｒ水素発生器を、ＴＨＦ（８ｍＬ）およびトルエン（８ｍＬ）の混合溶媒中に溶解したＰｔＯ２および１−（４−ベンジルオキシ−３−ニトロ−フェニル）−２−ブロモ−１−（Ｒ）−エタノール（４）（０．７２ｇ、２．０４ミリモル）で充填した。この混合物を５５ｐｓｉ、室温で１６時間水素化した。次いで、ギ酸（０．１３ｍＬ、３．４５ミリモル）および無水酢酸（０．２２ｍＬ、２．３３ミリモル）の混合物を添加し、室温で６６時間撹拌を続けた。触媒を、セライトパッドを通してろ過し、ろ液をロータリーエバポレーションによって濃縮した。得られた残渣を酢酸エチル／ジクロロメタン（勾配０％から１０％）で溶出するＢｉｏｔａｇｅシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、白色固体（０．４５ｇ、６３％）として所望のホルムアミド５を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ２．９５  （ｓ，  １Ｈ）、３．５２  （ｍ，  １Ｈ）、３．６０  （ｍ，  １Ｈ）、４．８５  （ｍ，  １Ｈ）、５．０８  （ｓ，  ２Ｈ）、６．９６  （ｄ，  １Ｈ）、７．１３  （ｄｄ，  １Ｈ）、７．３９  （ｍ，  ５Ｈ）、７．８８  （ｂｒ，  １Ｈ）、８．３７  （ｄｄ，  １Ｈ）。
【０２９２】
Ｎ−（２−ベンジルオキシ−５−（Ｒ）−オキシラニルフェニル）ホルムアミド（６）
炭酸カリウム（０．１９ｇ、１．３７ミリモル）を、ＴＨＦ（３ｍＬ）およびメタノール（５ｍＬ）の混合溶媒中に溶解したＮ−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ブロモ−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）フェニル］ホルムアミド（５）（０．３７ｇ、１．０５ミリモル）の溶液に添加した。この反応混合物を室温で３時間撹拌した。ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去後、残渣をジクロロメタン中に溶解し、吸引ろ過して無機物を除去した。ろ液を真空で濃縮し、トルエンでさらに共蒸発させ、高真空下で乾燥した。所望のエポキシド６を白色固体（０．２１ｇ、７２％）として得て、精製することなしに次のステップに直接用いた：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ２．７８  （ｄｄ，  １Ｈ）、３．０７  （ｄｄ，  １Ｈ）、３．７９  （ｄｄ，  １Ｈ）、５．０６  （ｓ，  ２Ｈ）、６．９２  （ｄ，  １Ｈ）、７．１５  （ｍ，  １Ｈ）、７．３８  （ｍ，  ５Ｈ）、７．９０  （ｓ，  １Ｈ）、８．３６  （ｓ，  １Ｈ）。
【０２９３】
［４−（４−｛４−［２−（４−ベンジルオキシ−３−ホルミルアミノフェニル）−２−（Ｒ）−ヒドロキシエチルアミノ］−ブチル｝フェニル）ブチル］カルバミン酸ベンジルエステル（８）
ｉＰｒＯＨ（６ｍＬ）中Ｎ−（２−ベンジルオキシ−５−（Ｒ）−オキシラニルフェニル）ホルムアミド（６）（０．２１ｇ、０．７６ミリモル）および｛４−［４−（４−アミノブチル）フェニル］ブチル｝カルバミン酸ベンジルエステル（７）（０．４０ｇ、１．１４ミリモル。その合成についてスキーム８を参照）の混合物を還流下で１６時間撹拌した。次いで、ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去し、得られた残渣を、メタノール／ジクロロメタン（勾配、０から７％）で溶出するＢｉｏｔａｇｅシリカゲルカラムクロマトグラフィー、次いでジクロロメタン／メタノール／濃水酸化アンモニウム（２００：１０：１、ｖ／ｖ）で溶出する分取ＴＬＣによって精製した。所望の付加物８を固体（０．１４ｇ、３０％）として単離した：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．５０  （ｍ，  ２Ｈ）、１．６２  （ｍ，  ６Ｈ）、２．５５  （ｍ，  ４Ｈ）、２．７６  （ｍ，  ３Ｈ）、２．９４  （ｄｄ，  １Ｈ）、３．１８  （ｍ，  ２Ｈ）、３．９６  （ｂｒ，  ２Ｈ）、４．８２  （ｍ，  ２Ｈ）、５．０６  （ｍ，  ４Ｈ）、６．９２  （ｄ，  １Ｈ）、７．０５  （ｍ，  ４Ｈ）、７．１３  （ｄｄ，  １Ｈ）、７．３４  （ｍ，  ５Ｈ）、７．３９  （ｍ，  ５Ｈ）、７．８６  （ｂｒ，  １Ｈ）、８．３４  （ｄｄ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ６２４  ［Ｃ３８Ｈ４５Ｎ３Ｏ５＋Ｈ］＋。さらに、２つの副生物を得た。この異性体付加物９（７８ｍｇ、１６％）：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．５８  （ｍ，  ８Ｈ）、２．５２  （ｍ，  ８Ｈ）、３．１９  （ｍ，  ２Ｈ）、３．５３  （ｄｄ，  １Ｈ）、３．６９  （ｍ，  ２Ｈ）、４．７８  （ｂｒ，  １Ｈ）、５．０８  （ｍ，  ４Ｈ）、６．９５  （ｄ，  １Ｈ）、７．０５  （ｍ，  ５Ｈ）、７．３２  （ｍ，  ５Ｈ）、７．４０  （ｍ，  ５Ｈ）、７．８２  （ｂｒ，  １Ｈ）、８．３５  （ｄ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ６２４  ［Ｃ３８Ｈ４５Ｎ３Ｏ５＋Ｈ］＋。そして、このｂｉｓ−付加物１０（０．１７ｇ、２４％）：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．５５  （ｍ，  ８Ｈ）、２．６０  （ｍ，  １０Ｈ）、３．１６  （ｍ，  ２Ｈ）、４．６２  （ｍ，  ２Ｈ）、４．８２  （ｂｒ，  １Ｈ）、５．０５  （ｍ，  ６Ｈ）、６．９０  （ｍ，  ２Ｈ）、７．０８  （ｍ，  ６Ｈ）、７．３５  （ｍ，  １５Ｈ）、７．８０  （ｍ，  ２Ｈ）、８．３１  （ｍ，  ２Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ８９３  ［Ｃ５４Ｈ６０Ｎ４Ｏ８＋Ｈ］＋。
【０２９４】
Ｎ−［５−（２−｛４−［４−（４−アミノブチル）フェニル］ブチルアミノ｝−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）−２−ヒドロキシフェニル］ホルムアミド二酢酸塩（１１）
［４−（４−｛４−［２−（４−ベンジルオキシ−３−ホルミルアミノフェニル）−２−（Ｒ）−ヒドロキシエチルアミノ］−ブチル｝フェニル）ブチル］カルバミン酸ベンジルエステル（８）（８４ｍｇ、０．１４ミルモル）、二水酸化パラジウム（２８ｍｇ、炭素上１０％Ｐｄ（ＯＨ）２、５０％含水）、酢酸３滴、メタノール（５ｍＬ）、およびジクロロメタン（５ｍＬ）の混合物を常圧水素圧下、室温で１６時間撹拌した。触媒を、セライトパッドを通してろ過し、ろ液をロータリーエバポレーションによって濃縮し、高真空下でさらに乾燥し、黄色固体（６９ｍｇ、９９％）として所望のアミン二酢酸塩１１を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．６８  （ｍ，  ８Ｈ）、１．９３  （ｓ，  ６Ｈ）、２．６３  （ｍ，  ４Ｈ）、２．９１  （ｍ，  ２Ｈ）、３．０８  （ｍ，  ４Ｈ）、４．８３  （ｍ，  １Ｈ）、６．８８  （ｄ，  １Ｈ）、７．０５  （ｄ，  １Ｈ）、７．１１  （ｓ，  ４Ｈ）、８．１０  （ｓ，  １Ｈ）、８．３０  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４００  ［Ｃ２３Ｈ３３Ｎ３Ｏ３＋Ｈ］＋。
【０２９５】
Ｎ−（５−｛２−［４−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）グアニジノ］−ブチル｝フェニル）ブチルアミノ］−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル｝−２−ヒドロキシフェニル）ホルムアミド（１２）
ジイソプロピルエチルアミン（０．１３ｍＬ、０．７２ミリモル）を、無水エタノール（５ｍＬ）中Ｎ−［５−（２−｛４−［４−（４−アミノブチル）フェニル］ブチルアミノ｝−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）−２−ヒドロキシフェニル］ホルムアミド二酢酸塩（１１）（６５ｍｇ、０．１３ミリモル）の溶液に添加した。この混合物を７０℃（オイルバス）で１０分間撹拌し、その後、１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−２−メチルイソチオユリアヒドロヨーダイド（５３ｍｇ、０．１４ミルモル）を２回に分けて４５分かけて添加した。反応混合物をその温度で３時間撹拌し、室温に冷却した。溶媒をロータリーエバポレーションによって除去した。残渣をＢｉｏｔａｇｅシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ａ＝ジクロロメタン、Ｂ＝メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム水溶液、勾配Ｂ／Ａ  １％から１５％）によって精製し、次いで、それぞれ０．０５％濃水酸化アンモニウムを含む勾配アセトニトリルおよび水で溶出する半分取ＨＰＬＣによってさらに精製し、緑がかった黄色固体（３５ｍｇ、４６％）としてＮ−（５−｛２−［４−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）グアニジノ］−ブチル｝フェニル）ブチルアミノ］−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル｝−２−ヒドロキシフェニル）ホルムアミド（１２）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １．５０  （ｍ，  ８Ｈ）、２．５１  （ｍ，  ４Ｈ）、３．１５  （ｍ，  ６Ｈ）、４．４２  （ｍ，  １Ｈ）、５．００  （ｂｒ，  １Ｈ）、６．５８  （ｂｒ，  ２Ｈ）、６．７２  （ｍ，  １Ｈ）、６．８０  （ｍ，  １Ｈ）、７．０８  （ｍ，  ４Ｈ）、８．００  （ｓ，  １Ｈ）、８．２５  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ６１２  ［Ｃ２９Ｈ３８ＣｌＮ９Ｏ４＋Ｈ］＋；  ［α］Ｄ２５  −３．３°（ｃ  ０．１５，  ＭｅＯＨ）；  融点  １３８〜１４０℃。
【０２９６】
（実施例２）
Ｎ−｛４−［４−（４−｛ビス−［２−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３−ホルミルアミノフェニル）−エチル］アミノ｝ブチル）フェニル］ブチル｝−Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−グアニジン二酢酸塩（１４）の合成（スキーム２）
【０２９７】
【化５３】
2009539882.tif 000066
【０２９８】
｛４−［４−（４−｛ビス−［２−（４−ヒドロキシ−３−ホルミルアミノフェニル）−２−（Ｒ）−ヒドロキシエチル］アミノ｝ブチル）フェニル］ブチル｝アミン二酢酸塩（１３）
｛４−［４−（４−｛ビス−［２−（４−ベンジルオキシ−３−ホルミルアミノフェニル）−２−（Ｒ）−ヒドロキシエチル］アミノ｝ブチル）フェニル］ブチル｝カルバミン酸ベンジルエステル（１０）（０．１７ｇ、０．１９ミリモル）、二水酸化パラジウム（５０ｍｇ、炭素上１０％Ｐｄ（ＯＨ）２、５０％含水）、酢酸８滴、メタノール（１０ｍＬ）、およびジクロロメタン（５ｍＬ）の混合物を常圧水素圧下、室温で１８時間撹拌した。触媒を、セライトパッドを通してろ過し、ろ液をロータリーエバポレーションによって濃縮し、高真空でさらに乾燥し、白色固体（０．１０ｍｇ、９８％）として所望のアミン二酢酸塩１３を得た：ｍ／ｚ（ＥＳＩ）５７９［Ｃ３２Ｈ４２Ｎ４Ｏ６＋Ｈ］＋。
【０２９９】
Ｎ−｛４−［４−（４−｛ビス−［２−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３−ホルミルアミノフェニル）−エチル］アミノ｝ブチル）フェニル］ブチル｝−Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）グアニジン二酢酸塩（１４）
ジイソプロピルエチルアミン（０．１６ｍＬ、０．９２ミルモル）を、無水エタノール（４ｍＬ）中｛４−［４−（４−｛ビス−［２−（４−ヒドロキシ−３−ホルミルアミノフェニル）−２−（Ｒ）−ヒドロキシエチル］アミノ｝ブチル）フェニル］ブチル｝−アミン二酢酸塩（１３）（１２９ｍｇ、０．１９ミリモル）の溶液に添加した。この混合物を７０℃（オイルバス）で１０分間撹拌し、その後、１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−２−メチルイソチオユリアヒドロヨーダイド（７９ｍｇ、０．２０ミルモル）を１回で添加した。反応混合物をその温度で３時間撹拌し、室温に冷却した。溶媒をロータリーエバポレーションによって除去した。残渣をＢｉｏｔａｇｅシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ａ＝ジクロロメタン、Ｂ＝メタノール中１０％濃水酸化アンモニア水、勾配Ｂ／Ａ  １％から２５％）によって精製し、緑がかった黄色の固体（４４ｍｇ、２６％）として所望の付加物１４を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １．５０  （ｍ，  ８Ｈ）、１．９８  （ｓ，  ６Ｈ）、２．５８  （ｍ，  ４Ｈ）、３．２０  （ｍ，  ８Ｈ）、４．４５  （ｍ，  ２Ｈ）、６．６０  （ｂｒ，  ２Ｈ）、６．８０  （ｍ，  ４Ｈ）、７．０８  （ｍ，  ４Ｈ）、８．００  （ｓ，  ２Ｈ）、８．２８  （ｓ，  ２Ｈ）、９．５６  （ｂｒ，  ２Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ７９１  ［Ｃ３８Ｈ４７ＣｌＮ１０Ｏ７＋Ｈ］＋；  ［α］Ｄ２５  −４．０°（ｃ  ０．３５，  ＭｅＯＨ）；  融点  １２８〜１３０℃。
【０３００】
（実施例３）
Ｎ−（５−｛２−［２−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）グアニジン］ブチル｝フェノキシ）エチルアミノ］−１−（Ｒ）−ヒドロキシルエチル｝−２−ヒドロキシフェニル）ホルムアミド（１９）の合成（スキーム３）
【０３０１】
【化５４】
2009539882.tif 000067
【０３０２】
｛４−［４−（２−ベンジルアミノエトキシ）フェニル］ブチル｝カルバミン酸ベンジルエステル（１６）
ベンズアルデヒド（０．７４ｍｌ、７．３１ミリモル）を無水ジクロロエタン（５０ｍＬ）中に溶解した４−［４−（２−アミノエトキシ）フェニル］ブチルカルバミン酸ベンジルエステル（１５）（５．００ｇ（ＮＭＲにより約５０％純度）、７．３０ミリモル）の溶液に添加した。得られた溶液を周囲温度で７時間撹拌した。トリアセトキシボロヒドリドナトリウム（４．１０ｇ、１９．３５ミルモル）をゆっくりと添加し、還元を６０時間続けた。反応を重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）でクエンチし、次いで、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出した。混合有機抽出物を水およびブラインで順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥した。白色固体が乾燥中に析出し、それをジクロロメタン中に溶解することによって収集し、次いで、固体硫酸ナトリウムをろ別した。ろ液を濃縮し、真空下で乾燥し、白色固体として１６（１．３５ｇ、４３％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．４５〜１．６２  （ｍ，  ４Ｈ）、２．５４  （ｔ，  ２Ｈ）、３．０７〜３．２２  （ｍ，  ４Ｈ）、３．８８  （ｓ，  ２Ｈ）、４．１０  （ｔ，  ２Ｈ）、４．７３  （ｂｒ，  １Ｈ）、５．０９  （ｓ，  ２Ｈ）、６．７９  （ｄ，  ２Ｈ）、７．０４  （ｄ，  ２Ｈ）、７．２８〜７．３９  （ｍ，  １０Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４３３  ［Ｃ２７Ｈ３２Ｎ２Ｏ３＋Ｈ］＋。
【０３０３】
｛４−［４−（２−｛ベンジル−［２−（４−ベンジルオキシ−３−ホルミルアミノフェニル）−２−（Ｒ）−ヒドロキシエチル］アミノ｝エトキシ）フェニル］ブチル｝カルバミン酸ベンジルエステル（１７）
ベンジルアミン１６（６１９ｍｇ、１．４３ミルモル）をメタノール（１０ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（５ｍＬ）中ブロモアルコール５（５００ｍｇ、１．４３ミリモル）およびＫ２ＣＯ３（４９５ｍｇ、３．５８ミルモル）の懸濁液に添加した。懸濁液を周囲温度で１５時間撹拌し、次いで、５５℃に７５時間加熱した。固体を真空ろ過して、ろ液を真空下で濃縮した。得られた油をヘキサン中５〜５０％酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィーにかけ、オフホワイトの固体として所望の生成物１７（５０８ｍｇ、５１％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．４５〜１．６２  （ｍ，  ４Ｈ）、２．５４  （ｔ，  ２Ｈ）、２．６５〜２．７１  （ｍ，  １Ｈ）、３．１４〜３．２３  （ｍ，  ３Ｈ）、３．５８〜３．７４  （ｍ，  １Ｈ）、３．８８〜４．０９  （ｍ，  ３Ｈ）、４．７１  （ｂｒ，  ２Ｈ）、５．０４−  ５．２１（ｍ，  ４Ｈ）、６．７９〜７．２５  （ｍ，  ６Ｈ）、７．３４〜７．５２  （ｍ，  １６Ｈ）、７．６５〜７．８７  （ｍ，  １Ｈ）、８．３２〜８．４９  （ｍ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ７０２  ［Ｃ４３Ｈ４７Ｎ３Ｏ６＋Ｈ］＋。
【０３０４】
Ｎ−［５−（２−｛２−［４−（４−アミノブチル）フェノキシ］エチルアミノ｝−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）−２−ヒドロキシフェニル］ホルムアミド（１８）
α−アミノアルコール１７（５００ｍｇ、０．７１ミリモル）をエタノール（２０ｍＬ）に溶解した。標準的な水素化操作に従って、二水酸化パラジウム（炭素上２０％、５０％含水）を添加した。反応混合物を常圧Ｈ２圧下、周囲温度で１５時間撹拌した。触媒を珪藻土を通したろ過によって除去し、ろ液を黄色固体まで濃縮した。粗固体をジクロロメタン中１０〜３０％（メタノール中２０％濃水酸化アンモニア）で溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、黄色固体として１８（１４６ｍｇ、５３％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．２９〜１．７２  （ｍ，  ５Ｈ）、１．９３  （ｓ，  ３Ｈ）、２．５８  （ｔ，  ２Ｈ）、２．７１〜２．９０  （ｍ，  ４Ｈ）、２．９９  （ｔ，  ２Ｈ）、４．０５  （ｔ，  ２Ｈ）、４．６６〜４．７２  （ｍ，  １Ｈ）、６．７８〜６．８５  （ｍ，  ３Ｈ）、６．９７〜７．１６  （ｍ，  ３Ｈ）、７．８２〜８．０４  （ｍ，  １Ｈ）、８．２９  （ｓ，  １Ｈ）。
【０３０５】
Ｎ−（５−｛２−［２−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）グアニジン］ブチル｝フェノキシ）エチルアミノ］−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル｝−２−ヒドロキシフェニル）ホルムアミド（１９）
ジイソプロピルアミン（０．１０ｍＬ、０．５７ミリモル）および１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−２−メチルイソチオユリアヒドロヨーダイド（１４６ｍｇ、０．３８ミリモル）をエタノール（５ｍＬ）中アミン１８（１４６ｍｇ、０．３８ミリモル）の溶液に順次添加した。この反応混合物を７５℃に５時間加熱し、その後、冷却し、真空下で濃縮した。得られた残渣を、ジクロロメタン中１〜３０％（２０：８０濃水酸化アンモニア水／メタノール）で溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、黄色固体として所望の生成物１９（１００ｍｇ、４４％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １．４６〜１．６４  （ｍ，  ４Ｈ）、２．５１〜２．５８  （ｍ，  ２Ｈ）、２．６６  （ｔ，  ２Ｈ）、２．９０  （ｔ，  ２Ｈ）、３．１６  （ｂｒ，  ２Ｈ）、３．９１〜４．１１  （ｍ，  ４Ｈ）、４．５１  （ｔ，  １Ｈ）、５．１８  （ｂｒ，  １Ｈ）、６．７５〜６．９９  （ｍ，  ７Ｈ）、７．０５〜７．０９  （ｍ，  ２Ｈ）、８．０２〜８．０６  （ｍ，  １Ｈ）、８．１９  （ｂｒ，  １Ｈ）、９．５３  （ｂｒ，  １Ｈ）；  融点  １２０〜１２４℃  （分解）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ６００  ［Ｃ２７Ｈ３４ＣｌＮ９Ｏ５＋Ｈ］＋；  ［α］２５Ｄ  −７．５°（ｃ  ０．３５，  ＣＨ３ＯＨ）。
【０３０６】
（実施例４）
Ｎ−（５−｛２−［４−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−グアニジノ］ブチル｝フェニル）−１−メチルブチルアミノ］−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル｝−２−ヒドロキシ−フェニル）ホルムアミド（３０）の合成（スキーム４）
【０３０７】
【化５５】
2009539882.tif 000068
【０３０８】
２−（１−メチルブト−３−イニル）イソインドール−１，３−ジオン（２２）
フタルイミド２１（１３．１２ｇ、８９．１６ミリモル）、ＰＰｈ３（２３．３８ｇ、８９．１６ミリモル）およびＴＨＦ（無水、２５０ｍＬ）から構成される溶液を室温で１時間撹拌した。この溶液に４−ヒドロキシペンチン２０（５．００ｇ、５９．４４ミリモル）を１回で添加し、その後、ＴＨＦ（無水、５０ｍＬ）に溶解したＤＩＡＤ（１７．２７ｍＬ、８９．１６ミリモル）の溶液を２時間かけて滴下した。ＤＩＡＤの添加後、温度を６０℃に上昇させ、反応混合物をその温度で一晩さらに撹拌した。混合物を室温に冷却し、真空下で濃縮した。残渣にジクロロメタン（１００ｍＬ）を添加した。形成された沈殿物を真空ろ過し、ジクロロメタンで洗浄した。ろ液および洗浄液を合わせて、真空下で濃縮した。残渣を、酢酸エチルおよびヘキサンの混合物（０〜７５％、ｖ／ｖ）で溶出するカラムクロマトグラフィーにかけ、オフホワイトの固体として所望の生成物２２（４．４７ｇ、３５％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．５４  （ｄ，  ３Ｈ）、１．９２  （ｓ，  １Ｈ）、２．６８  （ｍ，  １Ｈ）、２．９６  （ｍ，  １Ｈ）、４．５９  （ｍ，  １Ｈ）、７．７２  （ｄｄ，  ２Ｈ）、７．８５  （ｄｄ，  ３．０Ｈｚ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ２１４  ［Ｃ１３Ｈ１１ＮＯ２＋Ｈ］＋。
【０３０９】
（４−｛４−［４−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロイソインドール−２−イル）ペント−１−イニル］フェニル｝ブト−３−イニル）−カルバミン酸ベンジルエステル（２４）
［４−（４−ヨードフェニル）ブト−３−イニル］カルバミン酸ベンジルエステル２３（２．３３ｇ、５．７５ミリモル）、ＣｕＩ（０．２２ｇ、１．１５ミリモル）、Ｅｔ３Ｎ（１０ｍＬ）およびＴＨＦ（無水、１５ｍＬ）の混合物を含む１００ｍＬの丸底フラスコを真空処理して、窒素で再充填した。この操作を３回以上繰り返した。この懸濁液にＰｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（０．４０ｇ、０．５８ミリモル）を１回で添加し、その後、ＴＨＦ（無水、１０ｍＬ）に溶解した化合物２２（１．３５ｇ、６．３２ミリモル）の溶液を２時間かけて滴下した。撹拌を一晩続けた。反応混合物を真空下で濃縮した。残渣を酢酸エチル（０〜２５％）およびヘキサンの混合物で溶出するカラムクロマトグラフィーにかけ、オフイエローの固体として所望の生成物２４（２．６０ｇ、９２％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．７１  （ｄ，  ３Ｈ）、２．６１  （ｔ，  ２Ｈ）、２．９２  （ｍ，  １Ｈ）、３．１４  （ｍ，  １Ｈ）、３．４３  （ｔ，  ２Ｈ）、４．６７  （ｍ，  １Ｈ）、５．０７  （ｂｒ，  １Ｈ）、５．１１  （ｓ，  ２Ｈ）、７．１２〜７．３３  （ｍ，  ９Ｈ）、７．７１  （ｄｄ，  ２Ｈ）、７．９２  （ｄｄ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４９１  ［Ｃ３１Ｈ２６Ｎ２Ｏ４＋Ｈ］＋。
【０３１０】
（４−｛４−［４−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロイソインドール−２−イル）ペンチル］フェニル｝ブチル）カルバミン酸ベンジルエステル（２５）
ＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解した化合物２４（２．５３ｇ、５．１５ミリモル）を含む溶液を真空処理して窒素で再充填した。この操作を５回繰り返した。この溶液にパラジウム触媒（０．５ｇ、炭素上１０％Ｐｄ、５０％含水）を添加した。次いで、フラスコを水素ガスで４５ｐｓｉに加圧した。次いで、混合物を室温で一晩振とうした。触媒を真空下でろ過し、エタノール（３×２０ｍＬ）で洗浄した。ろ液および洗浄液を合わせて、真空下で濃縮した。残渣をジクロロメタン（２５ｍＬ）中に取り入れた。新たに形成された溶液にＥｔ３Ｎ（２．３２ｍＬ、１５．４５ミルモル）を添加した。次いで、溶液を氷浴中０℃に冷却した。溶液にＣｂｚＣｌ（１．３２ｇ、７．７３０ミリモル）を１０分かけて滴下し、ＣｂｚＣｌの添加後、周囲温度に３時間かけてゆっくり加温させ、一晩連続撹拌した。反応を水（３０ｍＬ）でクエンチした。２層を分離した。有機層を塩水（３×３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮した。得られた残渣をヘキサン中０〜３０％酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィーにかけ、無色の粘性油として所望の生成物２５（０．９０ｇ、３５％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．４５  （ｄ，  ３Ｈ）、１．４５〜１．６６  （ｍ，  ６Ｈ）、１．７２〜１．８６  （ｍ，  ２Ｈ）、２．０６〜２．１６  （ｍ，  ２Ｈ）、２．５５  （ｍ，  ４Ｈ）、３．２０  （ｍ，  ２Ｈ）、４．３８  （ｍ，  １Ｈ）、４．８０  （ｂｒ，  １Ｈ）、５．０８  （ｓ，  ２Ｈ）、７．０４  （ｓ，  ４Ｈ）、７．３４  （ｍ，  ５Ｈ）、７．６９  （ｄｄ，  ２Ｈ）、７．８１  （ｄｄ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４９９  ［Ｃ３１Ｈ３４Ｎ２Ｏ４＋Ｈ］＋。
【０３１１】
｛４−［４−（４−アミノペンチル）フェニル］ブチル｝カルバミン酸ベンジルエステル（２６）
化合物２５（０．９０ｇ、１．８１ミリモル）、ヒドラジン（０．２６ｍＬ、５．４２ミリモル）およびエタノール（１０ｍＬ）を含む溶液を７５℃で３時間加熱し、次いで、周囲温度に冷却した。白色沈殿物を真空下でろ過し、エタノール（３×５ｍＬ）で洗浄した。ろ液および洗浄液を合わせて、濃縮した。残渣をメタノール（０〜１５％）、濃縮水酸化アンモニウム（０〜１．５％）およびジクロロメタンの混合物で溶出するカラムクロマトグラフィーにかけ、白色のワックス状固体として所望の生成物２６（０．５９ｇ、８８％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．０８  （ｄ，  ３Ｈ）、１．３６〜１．８０  （ｍ，  ８Ｈ）、２．５５  （ｍ，  ４Ｈ）、２．８８  （ｍ，  １Ｈ）、３．１０  （ｔ，  ２Ｈ）、５．０８  （ｓ，  ２Ｈ）、７．０８  （ｓ，  ４Ｈ）、７．３４  （ｍ，  ５Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ３６９  ［Ｃ２３Ｈ３２Ｎ２Ｏ２＋Ｈ］＋。
【０３１２】
［４−（４−｛４−［２−（４−ベンジルオキシ−３−ホルミルアミノフェニル）−２−（Ｒ）−ヒドロキシエチルアミノ］ペンチル｝フェニル）ブチル］カルバミン酸ベンジルエステル（２７）
化合物２６（０．５９ｇ、１．６０ミリモル）、化合物５（０．４２ｇ、１．１９ミリモル）、Ｋ２ＣＯ３（０．２３ｇ、１．６８ミリモル）およびクロロホルム（２５ｍＬ）から構成される懸濁液を加熱し、７２時間還流させ、次いで、周囲温度に冷却した。固体を真空ろ過し、クロロホルム（３×１０ｍＬ）で洗浄した。ろ液および洗浄液を合わせて、濃縮した。残渣をジクロロメタン中メタノール（０〜１０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにかけた。未反応開始物質２６（０．３９ｇ、６６％回収）を分離した状態で回収した。このステップでは分離できない所望の生成物２７の２つのジアステレオマーの混合物を無色の粘性油として得た（０．２９ｇ、２８％）：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．０８  （ｄ，  ３Ｈ）、１．３７  （ｍ，  ２Ｈ）、１．４８〜１．６８  （ｍ，  ６Ｈ）、２．５５  （ｍ，  ４Ｈ）、２．７４  （ｂｒ，  ２Ｈ）、２．９２  （ｍ，  １Ｈ）、３．１８  （ｍ，  ２Ｈ）、３．５８  （ｍ，  １Ｈ）、３．７２  （ｍ，  １Ｈ）、４．７０  （ｍ，  １Ｈ）、４．８０  （ｂｒ，  １Ｈ）、５．０８  （ｍ，  ４Ｈ）、６．９２  （ｍ，  １Ｈ）、７．０８  （ｍ，  ５Ｈ）、７．２２  （ｔ，  １Ｈ）、７．３４  （ｍ，  １０Ｈ）、７．９２  （ｓ，  １Ｈ）、８．３１  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ６３８  ［Ｃ３９Ｈ４７Ｎ３Ｏ５＋Ｈ］＋。
【０３１３】
Ｎ−［５−（２−｛４−［４−（４−アミノブチル）フェニル］−１−メチルブチルアミノ｝−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）−２−ヒドロキシフェニル］ホルムアミド（２８）
化合物２７（０．２９ｇ、０．４５ミリモル）、パラジウム触媒（０．２ｇ、炭素上１０％Ｐｄ、５０％含水）、エタノール（１０ｍＬ）およびメタノール（５ｍＬ）の混合物を１Ｈ２圧下、室温で４時間水素化した。触媒を真空ろ過し、エタノール（３×５ｍＬ）で洗浄した。ろ液および洗浄液を合わせて、濃縮した。残渣をメタノール（０〜２２％）、濃水酸化アンモニウム（０〜２．２％）およびジクロロメタン（１００〜７５．６％）の混合物で溶出するカラムクロマトグラフィーにかけて、無色のガラス固体として所望の生成物２８（０．１０ｇ、５４％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．０８  （ｄ，  ３Ｈ）、１．３２  （ｍ，  ２Ｈ）、１．４８〜１．７８  （ｍ，  ６Ｈ）、２．５９  （ｍ，  ４Ｈ）、２．７８  （ｍ，  ５Ｈ）、３．４４  （ｍ，  ２Ｈ）、４．７５  （ｍ，  １Ｈ）、６．８２  （ｍ，  １Ｈ）、７．００  （ｍ，  １Ｈ）、７．０８  （ｍ，  ５Ｈ）、８．０６  （ｓ，  １Ｈ）、８．３１  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４１４  ［Ｃ３１Ｈ４１Ｎ３Ｏ３＋Ｈ］＋。そのジアステレオマー２９（１３ｍｇ、７％）も淡黄色固体として単離した：１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．２６  （ｄ，  ３Ｈ）、１．４８〜１．９０  （ｍ，  ８Ｈ）、２．５０  （ｍ，  ４Ｈ）、２．８２〜３．０８  （ｍ，  ３Ｈ）、３．５０  （ｍ，  ２Ｈ）、４．６０  （ｍ，  １Ｈ）、６．８２〜６．８２  （ｍ，  ２Ｈ）、７．１０  （ｍ，  ５Ｈ）、８．００  （ｓ，  １Ｈ）、８．２８  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４１４  ［Ｃ３１Ｈ４１Ｎ３Ｏ３＋Ｈ］＋。
【０３１４】
Ｎ−（５−｛２−［４−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）グアニジノ］ブチル｝フェニル）−１−メチルブチルアミノ］−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル｝−２−ヒドロキシフェニル）ホルムアミド（３０）
化合物２８（０．１０ｇ、０．２５ミリモル）、ヒューニッヒ塩基（０．２１ｍＬ、１．２３ミリモル）およびエタノール（５ｍＬ）を７０℃で３０分間加熱し、その後、１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−２−メチルイソチオユリアヒドロヨーダイド（０．１１ｇ、０．２７ミルモル）を添加した。得られた溶液をその温度でさらに３時間連続的に撹拌し、その後、室温に冷却した。溶媒をエバポレーションによって除去した。得られた残渣を、メタノール（０〜２８％）、濃水酸化アンモニウム（０〜２．８％）およびジクロロメタン（１００〜６９．２％）の混合物で溶出するカラムクロマトグラフィーにかけ、黄色固体として３０（８７ｍｇ、５６％）を得た：ｍ．ｐ．  １２０〜１２１℃（分解）；［α］Ｄ２５−６．６５°（ｃ０．２０、メタノール）；１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １．０８  （ｄ，  ３Ｈ）、１．３２  （ｍ，  ２Ｈ）、１．４８〜１．７２  （ｍ，  ６Ｈ）、２．５５  （ｍ，  ４Ｈ）、２．６４〜２．９２  （ｍ，  ３Ｈ）、３．１６  （ｍ，  ２Ｈ）、４．５６  （ｍ，  １Ｈ）、６．７６  （ｍ，  １Ｈ）、６．８２  （ｍ，  １Ｈ）、６．９２  （ｍ，  １Ｈ）、７．１０  （ｍ，  ４Ｈ）、８．０７  （ｓ，  １Ｈ）、８．２８  （ｓ，  １Ｈ）、８．５１  （ｓ，  １Ｈ）、９．３０  （ｓ，  １Ｈ）、９．５９  （ｓ  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ６２６  ［Ｃ３０Ｈ４０ＣｌＮ９Ｏ４＋Ｈ］＋。
【０３１５】
（実施例５）
Ｎ−（５−｛２−［４−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）グアニジノ］ブチル｝フェニル）ブチルアミノ］−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル｝−２−ヒドロキシフェニル）−メタンスルホンアミド（４０）の合成（スキーム５）
【０３１６】
【化５６】
2009539882.tif 000069
【０３１７】
Ｎ−（５−アセチル−２−ベンジルオキシフェニル）−Ｎ−ベンジルメタンスルホンアミド（３２）
アセトン（１０ｍＬ）中Ｎ−（５−アセチル−２−ヒドロキシフェニル）メタンスルホンアミド（３１）（０．３０ｇ、１．３２ミリモル）、ヨウ化ナトリウム（０．２０ｇ、１．３２ミリモル）、炭酸カリウム（０．９１ｇ、６．５８ミリモル）、および臭化ベンジル（０．３９ｍＬ、３．２８ミリモル）の混合物を還流下６６時間撹拌した。ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去後、得られた残渣をジクロロメタンで希釈し、不溶性無機物を真空ろ過した。ろ液を真空で濃縮し、得られた残渣をジクロロメタン中酢酸エチル（０〜３％）の混合物で溶出するフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、黄色固体（０．５４ｇ、９９％）としてベンジルエーテル３２を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ２．３８  （ｓ，  ３Ｈ）、２．８５（ｓ，  ３Ｈ）、４．７５  （ｂｒ，  ２Ｈ）、５．１８  （ｓ，  ２Ｈ）、７．０５  （ｄ，  １Ｈ）、７．２３  （ｍ，  ５Ｈ）、７．４２  （ｍ，  ５Ｈ）、７．６２  （ｄ，  １Ｈ）、７．８９  （ｄｄ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４１０  ［Ｃ２３Ｈ２３ＮＯ４Ｓ＋Ｈ］＋。
【０３１８】
Ｎ−ベンジル−Ｎ−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ブロモアセチル）フェニル］メタンスルホンアミド（３３）
三臭化フェニルトリメチルアンモニウム（１．１９ｇ、３．１６ミリモル）を無水ＴＨＦ（１５ｍＬ）中Ｎ−（５−アセチル−２−ベンジルオキシフェニル）−Ｎ−ベンジルメタンスルホンアミド（３２）（１．２３ｇ、３．０１ミリモル）の溶液に添加した。この反応混合物を室温で１６時間撹拌した。次いで、重炭酸ナトリウム水溶液（５％、１５ｍＬ）を添加した。混合物をジクロロメタンで抽出して、混合有機物をロータリーエバポレーションによって濃縮した。得られた残渣をジクロロメタンで溶出するＢｉｏｔａｇｅシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、固体（１．２５ｇ、８５％収率）としてブロモケトン３３を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ２．８５（ｓ，  ３Ｈ）、４．２１  （ｓ，  ２Ｈ）、４．７５  （ｂｒ，  ２Ｈ）、５．１９  （ｓ，  ２Ｈ）、７．０８  （ｄ，  １Ｈ）、７．２２  （ｍ，  ５Ｈ）、７．４３  （ｍ，  ５Ｈ）、７．６５  （ｄ，  １Ｈ）、７．９２  （ｄｄ，  １Ｈ）。
【０３１９】
Ｎ−ベンジル−Ｎ−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ブロモ−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）フェニル］メタン−スルホンアミド（３４）
ＴＨＦ中ＢＨ３・ＴＨＦの溶液（１Ｍ、２．８０ｍＬ、２．８０ミリモル）を無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中Ｎ−ベンジル−Ｎ−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ブロモアセチル）フェニル］メタンスルホンアミド（３３）（１．０９ｇ、２．２３ミリモル）およびＲ−メチル−ＣＢＳ−オキサゾボロリジン（トルエン中１Ｍ、０．４５ｍＬ、０．４５ミリモル）の混合物に添加した。この反応混合物を０℃で１５分間、次いで、室温で１６時間撹拌した。メタノール（５ｍＬ）をゆっくり添加して反応をクエンチした。ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去後、得られた残渣をジクロロメタン中酢酸エチル（０〜３％）の混合物で溶出するＢｉｏｔａｇｅシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、白色固体（０．９２ｇ、８４％）として所望のブロモアルコール３４を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ２．６０  （ｓ，  １Ｈ）、２．８５  （ｓ，  ３Ｈ）、３．３０  （ｍ，  １Ｈ）、３．３８  （ｍ，  １Ｈ）、４．７０  （ｍ，  ３Ｈ）、５．１１  （ｓ，  ２Ｈ）、７．００  （ｍ，  ２Ｈ）、７．２１  （ｍ，  ５Ｈ）、７．２８  （ｄ，  １Ｈ）、７．４２  （ｍ，  ５Ｈ）。
【０３２０】
Ｎ−ベンジル−Ｎ−（２−ベンジルオキシ−５−（Ｒ）−オキシラニルフェニル）メタンスルホンアミド（３５）
炭酸カリウム（０．５２ｇ、３．７６ミリモル）をＴＨＦ（８ｍＬ）およびメタノール（１０ｍＬ）の混合溶媒中に溶解したＮ−ベンジル−Ｎ−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ブロモ−１−ヒドロキシエチル）フェニル］メタン−スルホンアミド（３４）（０．９２ｇ、１．８８ミリモル）の溶液に添加した。この反応混合物を室温で２０時間撹拌した。ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去後、残渣をジクロロメタン中に溶解し、吸引ろ過して無機物を除去した。ろ液を真空で濃縮し、トルエンでさらに共蒸発させ、高真空で乾燥した。所望のエポキシド３５を白色固体（０．６９ｇ、９０％）として得て、精製することなしに次のステップに直接用いた：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ２．６０  （ｍ，  １Ｈ）、２．８４  （ｓ，  ３Ｈ）、３．０２  （ｄｄ，  １Ｈ）、３．６６  （ｄｄ，  １Ｈ）、４．７５  （ｂｒ，  ２Ｈ）、５．１０  （ｓ，  ２Ｈ）、６．９７  （ｄ，  １Ｈ）、７．０１  （ｄ，  １Ｈ）、７．１２  （ｄｄ，  １Ｈ）、７．２２  （ｍ，  ５Ｈ）、７．４１  （ｍ，  ５Ｈ）。
【０３２１】
｛４−［４−（４−｛２−［３−（ベンジルメタンスルホニルアミノ）−４−ベンジルオキシフェニル］−２−（Ｒ）−ヒドロキシエチルアミノ｝ブチル）フェニル］ブチル｝カルバミン酸ベンジルエステル（３６）
エタノール（４ｍＬ）中Ｎ−ベンジル−Ｎ−（２−ベンジルオキシ−５−（Ｒ）−オキシラニルフェニル）メタンスルホンアミド（３５）（０．６９ｇ、１．７０ミリモル）および｛４−［４−（４−アミノブチル）フェニル］ブチル｝カルバミン酸ベンジルエステル（７）（０．７７ｇ、２．１６ミリモル）の混合物を還流下で２４時間撹拌した。ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去し、得られた残渣をジクロロメタン中メタノール（０〜８％）の混合物で溶出するＢｉｏｔａｇｅシリカゲルカラムクロマトグラフィー、次いで、ジクロロメタン中メタノール（４％）の混合物で溶出する分取ＴＬＣによって精製した。所望の付加物３６を固体（０．４１ｇ、３２％）として単離した：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．５０  （ｍ，  ４Ｈ）、１．６１  （ｍ，  ４Ｈ）、２．５７  （ｍ，  ８Ｈ）、２．７５  （ｂｒ，  １Ｈ）、２．８３  （ｓ，  ３Ｈ）、３．１９  （ｍ，  ２Ｈ）、４．５１  （ｄｄ，  １Ｈ）、４．７７  （ｂｒ，  ３Ｈ）、５．０７  （ｓ，  ２Ｈ）、５．０８  （ｓ，  ２Ｈ）、６．９６  （ｄ，  １Ｈ）、６．９８  （ｄ，  １Ｈ）、７．０６  （ｍ，  ４Ｈ）、７．１９  （ｍ，  ５Ｈ）、７．２７  （ｄｄ，  １Ｈ）、７．３３  （ｍ，  ５Ｈ）、７．４１（ｍ，  ５Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ７６４  ［Ｃ４５Ｈ５３Ｎ３Ｏ６Ｓ＋Ｈ］＋。さらに、２つの副生成物を得た。この異性体付加物３７（０．２３ｇ、１８％）：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．４０  （ｍ，  ２Ｈ）、１．５８  （ｍ，  ６Ｈ）、２．１５  （ｂｒ，  ２Ｈ）、２．２９  （ｍ，  ２Ｈ）、２．５２  （ｍ，  ２Ｈ）、２．５８  （ｔ，  ２Ｈ）、２．８６  （ｓ，  ３Ｈ）、３．１９  （ｍ，  ２Ｈ）、３．３２  （ｄｄ，  １Ｈ）、３．５０  （ｍ，  ２Ｈ）、４．７６  （ｂｒ，  ２Ｈ）、５．０８  （ｓ，  ２Ｈ）、５．１１  （ｓ，  ２Ｈ）、６．８８  （ｄ，  １Ｈ）、６．９６  （ｄ，  １Ｈ）、７．０６  （ｍ，  ４Ｈ）、７．１６  （ｍ，  ６Ｈ）、７．３３  （ｍ，  ５Ｈ）、７．４３（ｍ，  ５Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ７６４  ［Ｃ４５Ｈ５３Ｎ３Ｏ６Ｓ＋Ｈ］＋。および、ビス−付加物３８（０．４５ｇ、２３％）：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．５５  （ｍ，  ８Ｈ）、２．３８  （ｍ，  ２Ｈ）、２．５８  （ｍ，  ４Ｈ）、２．８４  （ｓ，  ６Ｈ）、３．１８  （ｍ，  ２Ｈ）、４．４６  （ｍ，  ２Ｈ）、４．７８  （ｂｒ，  ４Ｈ）、５．１０  （ｍ，  ６Ｈ）、６．９６  （ｍ，  ４Ｈ）、７．０８  （ｍ，  ４Ｈ）、７．２０  （ｍ，  １２Ｈ）、７．３３  （ｍ，  ５Ｈ）、７．４２  （ｍ，  １０Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  １１７３  ［Ｃ６８Ｈ７６Ｎ４Ｏ１０Ｓ２＋Ｈ］＋。
【０３２２】
Ｎ−［５−（２−｛４−［４−（４−アミノブチル）フェニル］ブチルアミノ｝−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）−２−ヒドロキシフェニル］−メタンスルホンアミド二酢酸塩（３９）
｛４−［４−（４−｛２−［３−（ベンジルメタンスルホニルアミノ）−４−ベンジルオキシフェニル］−２−（Ｒ）−ヒドロキシエチルアミノ｝ブチル）フェニル］ブチル｝カルバミン酸ベンジルエステル（３６）（０．４１ｇ、０．５４ミリモル）、二水酸化パラジウム（０．１２ｇ、炭素上１０％Ｐｄ（ＯＨ）２、５０％含水）、酢酸１０滴、メタノール（９ｍＬ）、およびジクロロメタン（６ｍＬ）の混合物を常圧水素圧下、室温で１６時間撹拌した。触媒を、セライトパッドを通すろ過によって除去し、ろ液をロータリーエバポレーションによって濃縮し、高真空でさらに乾燥して、白色固体として所望のアミン二酢酸塩３９（０．３０ｇ、９６％）を得た：ｍ／ｚ（ＥＳＩ）４５０［Ｃ２３Ｈ３５Ｎ３Ｏ４Ｓ＋Ｈ］＋。
【０３２３】
Ｎ−（５−｛２−［４−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）グアニジノ］ブチル｝フェニル）ブチルアミノ］−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル｝−２−ヒドロキシフェニル）メタンスルホンアミド（４０）
ジイソプロピルエチルアミン（０．５４ｍＬ、３．１１ミリモル）を無水エタノール（８ｍＬ）中Ｎ−［５−（２−｛４−［４−（４−アミノブチル）フェニル］ブチルアミノ｝−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）−２−ヒドロキシフェニル］−メタンスルホンアミド二酢酸塩（３９）（０．３０ｇ、０．５２ミリモル）の溶液に添加した。この混合物を７０℃（オイルバス）で１０分間撹拌し、その後、１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−２−メチルイソチオユリアヒドロヨーダイド（０．２１ｇ、０．５４ミリモル）を１回で添加した。反応混合物をその温度で３時間撹拌し、室温に冷却した。ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去した。残渣をＢｉｏｔａｇｅシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ａ＝ジクロロメタン、Ｂ＝メタノール中１０％水酸化アンモニア水、勾配Ｂ／Ａ  ０％から１５％）によって精製し、そしてそれぞれ０．０１％濃水酸化アンモニウムを含む、勾配アセトニトリルおよび水で溶出する半分取ＨＰＬＣによってさらに精製し、緑がかった黄色の固体（０．１７ｇ、４８％）としてＮ−（５−｛２−［４−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）グアニジノ］ブチル｝フェニル）ブチルアミノ］−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル｝−２−ヒドロキシフェニル）メタンスルホンアミド（４０）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．６０  （ｍ，  ８Ｈ）、２．６０  （ｍ，  ６Ｈ）、２．７２  （ｍ，  １Ｈ）、２．８０  （ｍ，  １Ｈ）、２．８８  （ｓ，  ３Ｈ）、３．２３  （ｍ，  ２Ｈ）、４．６５  （ｍ，  １Ｈ）、６．８０  （ｄ，  １Ｈ）、６．９８  （ｄ，  １Ｈ）、７．０６  （ｍ，  ４Ｈ）、７．３０  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ６６２  ［Ｃ２９Ｈ４０ＣｌＮ９Ｏ５Ｓ＋Ｈ］＋；  ［α］Ｄ２５  −７．５°（ｃ  ０．６０，  ＭｅＯＨ）；  融点  １０８〜１１０℃。
【０３２４】
（実施例６）
Ｎ−［５−（２−｛［４−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−グアニジノ］ブチル｝フェニル）ブチル］−［２−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３−メタンスルホニル−アミノフェニル）エチル］アミノ｝−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）−２−ヒドロキシフェニル］メタン−スルホンアミド（４２）の合成（スキーム６）
【０３２５】
【化５７】
2009539882.tif 000070
【０３２６】
Ｎ−［５−（２−｛｛４−［４−（４−アミノブチル）フェニル］ブチル｝−［２−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３−メタンスルホニルアミノフェニル）エチル］アミノ｝−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）−２−ヒドロキシフェニル］メタンスルホンアミド二酢酸塩（４１）
（４−｛４−［４−（ビス−｛２−［３−（ベンジルメタンスルホニルアミノ）−４−ベンジルオキシフェニル］−２−（Ｒ）−ヒドロキシエチル｝アミノ）ブチル］フェニル｝ブチル）カルバミン酸ベンジルエステル（３８）（０．４５ｇ、０．３８３ミルモル）、二水酸化パラジウム（０．１２ｇ、炭素上１０％Ｐｄ（ＯＨ）２、５０％含水）、酢酸１０滴、メタノール（１２ｍＬ）、およびジクロロメタン（６ｍＬ）の混合物を常圧水素圧下、室温で１８時間撹拌した。触媒を、セライトパッドを通して真空ろ過によって除去し、ろ液をロータリーエバポレーションによって濃縮し、高真空下でさらに乾燥し、白色固体（０．３０ｇ、９８％）として所望のアミン二酢酸塩４１を得た：ｍ／ｚ（ＥＳＩ）６７９［Ｃ３２Ｈ４２Ｎ４Ｏ６＋Ｈ］＋。
【０３２７】
Ｎ−［５−（２−｛［４−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）グアニジノ］ブチル｝フェニル）ブチル］−［２−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３−メタンスルホニルアミノフェニル）エチル］アミノ｝−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）−２−ヒドロキシフェニル］メタンスルホンアミド（４２）
ジイソプロピルエチルアミン（０．３３ｍＬ、１．８９ミリモル）を無水エタノール（５ｍＬ）中Ｎ−［５−（２−｛｛４−［４−（４−アミノブチル）フェニル］ブチル｝−［２−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３−メタンスルホニルアミノフェニル）エチル］アミノ｝−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）−２−ヒドロキシフェニル］メタンスルホンアミド二酢酸塩（４１）（０．３０ｇ、０．３７５ミリモル）の溶液に添加した。この混合物を７０℃（オイルバス）で１５分間撹拌し、その後、１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−２−メチルイソチオユリアヒドロヨーダイド（０．１６ｇ、０．４１ミリモル）を１回で添加した。反応混合物をその温度で３時間撹拌し、室温に冷却した。溶媒をロータリーエバポレーションによって除去した。残渣をＢｉｏｔａｇｅシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ａ＝ジクロロメタン、Ｂ＝メタノール中１０％濃水酸化アンモニア水、勾配Ｂ／Ａ  ０％から２５％）によって精製し、それぞれ０．０１％濃水酸化アンモニア水を含む勾配アセトニトリルおよび水で溶出する分取ＨＰＬＣによってさらに精製し、緑がかった黄色固体（７８ｍｇ、２３％）として所望の付加物４２を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １．５０  （ｍ，  ８Ｈ）、２．５８  （ｍ，  ４Ｈ）、２．８８  （ｓ，  ６Ｈ）、３．２０  （ｍ，  ８Ｈ）、４．４８  （ｍ，  ２Ｈ）、６．６０  （ｂｒ，  ２Ｈ）、６．７８  （ｄ，  ２Ｈ）、６．９０  （ｄ，  ２Ｈ）、７．１０  （ｓ，  ４Ｈ）、７．１８  （ｓ，  ２Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ８９１  ［Ｃ３８Ｈ５１ＣｌＮ１０Ｏ９Ｓ２＋Ｈ］＋；  ［α］Ｄ２５  −２３．０°（ｃ  ０．４０，  ＭｅＯＨ）；  融点  １４８〜１５０℃。
【０３２８】
（実施例７）
Ｎ−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−Ｎ’−｛１１−［２−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルフェニル）エチルアミノ］ウンデシル｝グアニジン（５５）の合成（スキーム７）
【０３２９】
【化５８】
2009539882.tif 000071
【０３３０】
５−アセチル−２−ベンジルオキシ安息香酸メチルエステル（４４）
ベンジルクロライド（３．８５ｍｌ、３３．４５ミリモル）をアセトニトリル（５０ｍＬ）中サリチル酸エステル４３（５．００ｇ、２５．７５ミリモル）、ヨウ化ナトリウム（３８６ｍｇ、２．５７ミリモル）、および重炭酸ナトリウム（２．５０ｇ、２９．７５ミルモル）の６０℃溶液にゆっくり添加した。この反応液を加熱して１６時間還流させた。溶媒を真空下で除去した。残渣を酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶解し、０．５Ｎ  ＨＣｌ（２５ｍＬ）、水（２５ｍＬ）、５％塩化アンモニウム（２５ｍＬ）、次いでブライン（２５ｍＬ）で順次洗浄した。有機部分を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、油まで濃縮した。ジエチルエーテルおよびヘキサンの添加後に生じた沈殿物を真空ろ過し、オフホワイトの固体としてエステル４４（３．９８ｇ、５５％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ２．５５  （ｓ，  ３Ｈ）、３．８５  （ｓ，  ３Ｈ）、５．３３  （ｓ，  ２Ｈ）、７．３１〜７．５１  （ｍ，  ６Ｈ）、８．１７〜８．３１  （ｍ，  ２Ｈ）。
【０３３１】
２−ベンジルオキシ−５−（２−ブロモアセチル）安息香酸メチルエステル（４５）
フェニルトリメチル三臭化アンモニウム（１０．６０ｇ、２８．２０ミリモル）を無水テトラヒドロフラン（５０ｍＬ）中アセトフェノン４４（８．００ｇ、２８．１０ミリモル）の撹拌溶液に７回に分けて添加した。１８時間後、反応混合物を水（２５０ｍＬ）中に注ぎ、１時間撹拌した。形成された沈殿物を真空ろ過によって収集した。この収集固体をエタノールから再結晶して、白色の針状固体としてα−ブロミド４５（７．３５ｇ、７２％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ３．８５  （ｓ，  ３Ｈ）、４．８９  （ｓ，  １Ｈ）、５．３８  （ｓ，  ２Ｈ）、７．２２  （ｄ，  １Ｈ）、７．３１〜７．５１  （ｍ，  ６Ｈ）、８．１７〜８．３１  （ｍ，  ２Ｈ）。
【０３３２】
２−ベンジルオキシ−５−（２−ブロモ−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）安息香酸メチルエステル（４６）
（Ｒ）−２−メチル−ＣＢＳ−オキサゾボロリジン（トルエン中１．０Ｍ溶液１．３８ｍＬ）をテトラヒドロフラン（８０ｍＬ）中α−ブロモケトン４５（５．００ｇ、１３．８０ミリモル）の溶液に添加した。１５分間撹拌後、ボランテトラヒドロフラン錯体（テトラヒドロフラン中１Ｍ溶液８．５ｍＬ）を１５分の時間にわたって滴下した。周囲温度で１．５時間撹拌後、メタノール（８．５ｍＬ）をゆっくり添加することによって反応をクエンチした。溶媒を真空下で除去した。残渣をヘキサンおよび酢酸エチル（２：１）の混合溶媒に溶解した。この固体をシリカゲルのパッドを通して真空ろ過した。ろ液を濃縮し、真空下で乾燥して、白色固体として４６（４．８６ｇ、９７％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ３．３２〜３．５８  （ｍ，  １Ｈ）、３．６４〜３．６８  （ｍ，  １Ｈ）、３．８１  （ｓ，  ３Ｈ）、４．７８〜４．８０  （ｍ，  １Ｈ）、５．２１  （ｓ，  ２Ｈ）、５．８３  （ｄ，  １Ｈ）、７．２２  （ｄ，  １Ｈ）、７．３１〜７．３３  （ｍ，  １Ｈ）、７．３８〜７．４９  （ｍ，  ５Ｈ）、７．６１  （ｓ，  １Ｈ）。
【０３３３】
２−ベンジルオキシ−５−（Ｒ）−オキシラニル安息香酸メチルエステル（４７）
水素化ナトリウム（鉱油中６０％  ５３１ｍｇ、１３．３０ミリモル）を窒素雰囲気下、ヘキサン中で撹拌した。ヘキサンを傾しゃして、鉱油を除去した。この操作を２回繰り返した。次いで、水素化ナトリウムを無水テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）中に懸濁し、−２０℃に冷却した。無水テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）中ブロモヒドリン４６（４．８５ｇ、１３．２８ミリモル）の溶液をこの水素化ナトリウム懸濁液に滴下した。３時間撹拌後、水（５ｍＬ）をゆっくり添加して反応をクエンチし、水（１５ｍＬ）でさらに希釈し、酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出した。混合有機抽出物を水（２５ｍＬ）およびブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、黄色の油まで濃縮した。真空下で乾燥後、黄色の油としてエポキシド４７（３．６８ｇ、９７％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ２．８５〜２．８８  （ｍ，  １Ｈ）、３．０８〜３．１０  （ｍ，  １Ｈ）、３．８１  （ｓ，  ３Ｈ）、３．９３〜３．９５  （ｍ，  １Ｈ）、５．２１  （ｓ，  ２Ｈ）、７．２２  （ｄ，  １Ｈ）、７．３１〜７．３３  （ｍ，  １Ｈ）、７．３８〜７．４９  （ｍ，  ５Ｈ）、７．６１  （ｓ，  １Ｈ）。
【０３３４】
（１１−アミノウンデシル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４９）
シリンジポンプを用いて、メタノール（５０ｍＬ）中重炭酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．３４ｇ、１５．３０ミリモル）の溶液をメタノール（１００ｍＬ）中ジアミン４８（３．００ｇ、１６．１０ミリモル）およびジイソプロピルエチルアミン（２．８０ｍＬ、１６．００ミリモル）の撹拌溶液に１０時間かけて添加した。反応液をさらに１２時間撹拌した。次いで、溶媒を真空下で除去した。ジクロロメタン中５〜３０％（１０：９０水酸化アンモニウム／メタノール）で溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、オフホワイトの固体としてモノ−保護アミン４９（２．６０ｇ、５６％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  アセトン−ｄ６）  δ  １．３１〜１．５５  （ｍ，  ２７Ｈ）、２．８０  （ｂｒ，  ２Ｈ）、３．０１〜３．０７  （ｍ，  ２Ｈ）、３．１３〜３．１７  （ｍ，  ２Ｈ）、５．８８  （ｂｒ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ２８７  ［Ｃ１６Ｈ３４Ｎ２Ｏ２＋Ｈ］＋。
【０３３５】
２−ベンジルオキシ−５−［２−（１１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノウンデシルアミノ）−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル］安息香酸メチルエステル（５０）
エタノール（５０ｍＬ）中エポキシド４７（１．５０ｇ、５．２８ミリモル）の溶液をエタノール（１５０ｍＬ）中モノ−保護ジアミン４９の６０℃溶液に３時間かけてゆっくり添加した。１５時間撹拌後、反応液を油まで濃縮し、ジクロロメタン中０から５％メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、透明な油として５０（５１５ｍｇ、１７％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  アセトン−ｄ６）  δ  １．２６〜１．４９  （ｍ，  ２７Ｈ）、２．４６〜２．４９  （ｍ，  ２Ｈ）、２．８０  （ｂｒ，  ３Ｈ）、３．０２〜３．０５  （ｍ，  ２Ｈ）、３．４３〜３．７４  （ｍ，  ３Ｈ）、３．８４  （ｓ，  ３Ｈ）、５．２２  （ｓ，  ２Ｈ）、５．８８  （ｂｒ，  １Ｈ）、５．１６  （ｄ，  １Ｈ）、７．３１〜７．４２  （ｍ，  ３Ｈ）、７．５１〜７．５７  （ｍ，  ３Ｈ）、７．７５  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ５７１  ［Ｃ３３Ｈ５０Ｎ２Ｏ６＋Ｈ］＋。
【０３３６】
｛１１−［２−（４−ベンジルオキシ−３−ヒドロキシメチルフェニル）−２−（Ｒ）−ヒドロキシエチルアミノ］ウンデシル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５２）
水素化ジイソブチルアルミニウム（ヘキサン中１．０Ｍ溶液６．１５ｍＬ、６．１５ミリモル）を０℃で撹拌している、テトラヒドロフラン（２５ｍＬ）中フェニルエステル５１（７０２ｍｇ、１．２３ミリモル）の溶液にゆっくり添加した。この反応液を０℃で１５分間撹拌し、次いで、周囲温度に加温した。４．５時間後、反応液を０℃に冷却し、メタノール（１０ｍＬ）を滴下してクエンチした。反応液を乾燥まで濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解した。飽和塩化アンモニウム水溶液をこの溶液中に添加した。層を分離し、水層を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。混合有機抽出物を水およびブラインで順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、油まで濃縮した。ジクロロメタン中０から１０％（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム）で溶出するカラムクロマトグラフィーによってこの粗油を精製し、油としてベンジルアルコール５２（５０７ｍｇ、７６％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  アセトン−ｄ６）  δ  １．２６〜１．４９  （ｍ，  ２７Ｈ）、２．４６〜２．４９  （ｍ，  ２Ｈ）、２．８０  （ｂｒ，  ３Ｈ）、３．０２〜３．０５  （ｍ，  ２Ｈ）、３．４３〜４．０５  （ｍ，  ３Ｈ）、４．７２  （ｓ，  ２Ｈ）、５．１４  （ｓ，  ２Ｈ）、５．８８  （ｂｒ，  １Ｈ）、７．４８  （ｄ，  １Ｈ）、７．２７〜７．９９  （ｍ，  ７Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ５４３  ［Ｃ３２Ｈ５０Ｎ２Ｏ５＋Ｈ］＋。
【０３３７】
｛１１−［２−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルフェニル）−２−エチルアミノ］ウンデシル｝カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５３）
ベンジルアルコール５２（５０７ｍｇ、０．９３ミリモル）をエタノール（２０ｍＬ）に溶解した。標準水素化プロトコルに従って、パラジウム触媒（炭素上１０％パラジウム、５０％含水）を反応液に添加した。水素化を１水素圧下、周囲温度で１５時間行った。珪藻土を通して触媒をろ過し、ろ液を濃縮して黄色の油を得た。ジクロロメタン中５％メタノール、次いで、ジクロロメタン中１０から２０％（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム）で溶出するカラムクロマトグラフィーによってこの粗油を精製し、透明油としてフェノール５３（１１９ｍｇ、２８％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  アセトン−ｄ６）  δ  １．２６〜１．４９  （ｍ，  ２７Ｈ）、２．４６〜２．４９  （ｍ，  ２Ｈ）、２．８０  （ｂｒ，  ４Ｈ）、３．０２〜３．０５  （ｍ，  ２Ｈ）、３．４３〜４．０５  （ｍ，  ３Ｈ）、４．７２  （ｓ，  ２Ｈ）、５．８８  （ｂｒ，  １Ｈ）、６．７７  （ｍ，  １Ｈ）、７．１３  （ｍ，  １Ｈ）、７．４８  （ｄ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４５３  ［Ｃ２５Ｈ４４Ｎ２Ｏ５＋Ｈ］＋。
【０３３８】
４−［２−（１１−アミノウンデシルアミノ）−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル］−２−ヒドロキシメチルフェノール酢酸塩（５４）
ヨード−トリメチルシラン（３０μｌ、０．２１ミリモル）を無水ジクロロメタン（１ｍＬ）中アミン５３（６０ｍｇ、０．１３ミリモル）の溶液に滴下した。０．５時間後、メタノール（１ｍＬ）を添加して反応をクエンチした。溶媒を真空下で除去し、残渣を３０％無水酢酸およびジエチルエーテルの１：１混合物（２０ｍＬ）に溶解した。層を分離し、水層をジエチルエーテル（２×１０ｍＬ）で抽出した。この水溶液を真空下で濃縮し、酢酸塩５４（７１ｍｇ、定量収率）を得た。この化合物をさらに精製することなく次の反応に直接用いた。
【０３３９】
Ｎ−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−Ｎ’−｛１１−［２−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルフェニルエチルアミノ］ウンデシル｝グアニジン（５５）
ジイソプロピルエチルアミン（０．１０ｍＬ、０．５７ミリモル）および１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−２−メチルイソチオユリアヒドロヨーダイド（５０ｍｇ、０．１３ミリモル）をエタノール（４ｍＬ）中５４（６１ｍｇ、０．１３ミリモル）の溶液に順次添加した。この反応混合物を７０℃に６．５時間加熱し、その後、冷却し、真空下で濃縮した。得られた残渣をジクロロメタン中１〜２０％（３０：７０濃水酸化アンモニウム／メタノール）で溶出するカラムクロマトグラフィーで最初に、次いで分取ＨＰＬＣによって精製し、黄色固体として所望の生成物５５（４ｍｇ、５％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．２６〜１．６７  （ｍ，  １８Ｈ）、２．１９〜２．２４  （ｍ，  ２Ｈ）、２．５１〜２．５８  （ｍ，  ２Ｈ）、３．２５〜３．３０  （ｍ，  ２Ｈ）、４．５７〜４．６４  （ｍ，  ３Ｈ）、６．７５  （ｄ，  １Ｈ）、７．０７  （ｄｄ，  １Ｈ）、７．２３  （ｄ  ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ５６５  ［Ｃ２７Ｈ４１ＣｌＮ８Ｏ４＋Ｈ］＋。
【０３４０】
（実施例８）
Ｎ−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−Ｎ’−［４−（４−｛４−［２−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルフェニル）エチルアミノ］ブチル｝フェニル）ブチル］−グアニジン（６３）の合成（スキーム８）
【０３４１】
【化５９】
2009539882.tif 000072
【０３４２】
２−［４−（４−ヨードフェニル）ブト−３−イニル］イソインドール−１，３−ジオン（５７）
無水テトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）中に溶解したトリエチルアミン（２５０ｍＬ）、ヨウ化銅（Ｉ）（１．７２ｇ、９．０９ミリモル）およびジヨードベンゼン（５６）（２０．００ｇ、６０．６０ミリモル）を含む溶液を室温で撹拌した。反応フラスコを真空にし、次いで、窒素でパージすることを３回行った。溶液をビス（トリフェニルホスフィン）二塩化パラジウム（ＩＩ）（４．２０ｇ、６．０６ミリモル）で処理し、室温で３０分間撹拌を続けた。無水テトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）中に溶解したトリエチルアミン（２５０ｍＬ）および２−ブト−３−イニルイソインドール−１，３−ジオン（１２．０６ｇ、６０．０６ミリモル）を含む溶液を付加漏斗によって１２時間にわたって滴下した。反応液を室温で４８時間撹拌させた。溶液をろ過し、ろ液を真空で濃縮した。得られた残渣をヘキサン中０〜１００％酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、茶色の固体として所望の生成物５７（１２．５ｇ、５１％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤ２Ｃｌ２）  δ  ７．８５  （ｄｄ，  ２Ｈ）、７．７４  （ｄｄ，  ２Ｈ）、７．６０  （ｄ，  ２Ｈ）、７．０４  （ｄ，  ２Ｈ）、３．９２  （ｔ，  ２Ｈ）、２．７９  （ｔ，  ２Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４０２  ［Ｃ１８Ｈ１２ＩＮＯ２＋Ｈ］＋。
【０３４３】
（４−｛４−［４−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロイソインドール−２−イル）ブト−１−イニル］フェニル｝ブト−３−イニル）−カルバミン酸ベンジルエステル（５８）
無水テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中に溶解したトリエチルアミン（１００ｍＬ）、ヨウ化銅（Ｉ）（０．５０ｇ、２．６０ミリモル）および５７（７．００ｇ、１７．４０ミリモル）を含む溶液を室温で撹拌した。反応フラスコを３回、真空処理し、次いで窒素でパージした。溶液をビス（トリフェニルホスフィン）二塩化パラジウム（ＩＩ）（１．２０ｇ、１．７０ミリモル）で処理し、室温で３０分間撹拌し続けた。次いで、反応混合物をブト−３−イニルカルバミン酸ベンジルエステル（４．２５ｇ、２０．９０ミリモル）で処理した。反応液を室温で１６時間撹拌させた。この溶液をろ過し、ろ液を真空で濃縮した。得られた残渣をヘキサン中０〜１００％酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、茶色の固体として所望の生成物５８（６．０ｇ、７２％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤ２Ｃｌ２）  δ  ７．８５  （ｄｄ，  ２Ｈ）、７．７４  （ｄｄ，  ２Ｈ）、７．３５〜７．３２  （ｍ，  ５Ｈ）、７．２７  （ｄ，  ２Ｈ）、７．２２  （ｄ，  ２Ｈ）、５．０８  （ｓ，  ２Ｈ）、３．９３  （ｔ，  ２Ｈ）、３．３９  （ｔ，  ２Ｈ）、２．８１  （ｔ，  ２Ｈ）、２．６２  （ｔ，  ２Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４７７  ［Ｃ３０Ｈ２４Ｎ２Ｏ４＋Ｈ］＋。
【０３４４】
（４−｛４−［４−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロイソインドール−２−イル）ブチル］フェニル｝ブチル）カルバミン酸ベンジルエステル（５９）
無水テトラヒドロフラン（７５ｍＬ）中に溶解した５８（６．０ｇ、１２．５９ミリモル）および二水酸化パラジウム（炭素上２０％Ｐｄ（ＯＨ）２、５０％含水、３．０ｇ、２１．４３ミリモル）を含む懸濁液を窒素で２０分間通気した。反応混合物を真空処理し、次いで、Ｈ２ガス（４５ｐｓｉ）で充填し、室温で２４時間撹拌させた。溶液をろ過し、ろ液を真空で濃縮した。得られた残渣をヘキサン中０〜１００％酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、高粘度の茶色の油として所望の生成物５９（４．８８ｇ、８０％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．８５  （ｄｄ，  ２Ｈ）、７．７４  （ｄｄ，  ２Ｈ）、７．３５〜７．２８  （ｍ，  ６Ｈ）、７．０６  （ｄ，  ４Ｈ）、３．７０  （ｔ，  ２Ｈ）、３．１９  （ｔ，  ２Ｈ）、２．６３〜２．５６  （ｍ，  ４Ｈ）、２．００  （ｄ，  ２Ｈ）、１．７３〜１．５０  （ｍ，  ８Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４８５  ［Ｃ３０Ｈ３２Ｎ２Ｏ４＋Ｈ］＋。
【０３４５】
｛４−［４−（４−アミノブチル）フェニル］ブチル｝カルバミン酸ベンジルエステル（７）
エタノール（５０ｍＬ）およびメチレンクロライド（１０ｍＬ）中に溶解した５９（４．０ｇ、８．２０ミリモル）およびヒドラジン（２．０６ｇ、４１．２０ミリモル）を含む溶液を加熱して還流させた。反応混合物をＮ２雰囲気下で１６時間撹拌させた。この溶液をろ過し、ろ液を真空で濃縮した。得られた残渣を０〜２０％（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム）およびジクロロメタンの混合物で溶出させるカラムクロマトグラフィーによって精製し、オフホワイトの固体として所望の生成物７（６．００ｇ、７２％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．３４  （ｓ，  ４Ｈ）、７．０７  （ｓ，  ４Ｈ）、５．０８  （ｓ，  ２Ｈ）、３．１８  （ｔ，  ２Ｈ）、２．９４  （ｓ，  ２Ｈ）、２．７０  （ｔ，  ２Ｈ）、２．５９  （ｔ，  ４Ｈ）、１．６５〜１．４７  （ｍ，  ８Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ３５５  ［Ｃ２２Ｈ３０Ｎ２Ｏ２＋Ｈ］＋。
【０３４６】
２−ベンジルオキシ−５−（２−｛４−［４−（４−ベンジルオキシカルボニルアミノブチル）フェニル］ブチルアミノ｝−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）安息香酸メチルエステル（６０）
エタノール（３０ｍＬ）中に溶解した７（１．３０ｇ、３．６７ミリモル）および２−ベンジルオキシ−５−（Ｒ）−オキシラニル安息香酸メチルエステル４７（１．１４ｇ、４．０４ミリモル）を含む溶液を６０℃に加熱した。この溶液をその温度でＮ２雰囲気下４８時間撹拌した。溶液を真空で濃縮した。得られた残渣を０〜２０％（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム）およびジクロロメタンの混合物で溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、オフホワイトの固体として所望の生成物６０（０．７６ｇ、３３％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ７．８０  （ｄ，  １Ｈ）、７．７２  （ｄ，  １Ｈ）、７．４４  （ｄ，  ２Ｈ）、７．３４  （ｄ，  １０Ｈ）、７．０５  （ｄ，  ４Ｈ）、７．００  （ｄｄ，  １Ｈ）、５．１７  （ｓ，  ２Ｈ）、５．０８  （ｓ，  ２Ｈ）、４．８９  （ｄｄ，  １Ｈ）、３．８９  （ｓ，  ３Ｈ）、３．１９  （ｔ，  ２Ｈ）、２．９０  （ｄｄ，  ２Ｈ）、２．９１〜２．４６  （ｍ，  ８Ｈ）、１．６１〜１．５０  （ｍ，  ８Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ６３９  ［Ｃ３９Ｈ４６Ｎ２Ｏ６＋Ｈ］＋。
【０３４７】
この反応の副生物として、ホフホワイトの固体として６４（スキーム９参照）（０．５７ｇ、１８％）も単離した：ｍ／ｚ（ＥＳＩ）９２４［Ｃ５６Ｈ６２Ｎ２Ｏ１０＋Ｈ］＋。
【０３４８】
［４−（４−｛４−［２−（４−ベンジルオキシ−３−ヒドロキシメチルフェニル）−２−（Ｒ）−ヒドロキシエチルアミノ］ブチル｝フェニル）ブチル］カルバミン酸ベンジルエステル（６１）
無水テトラヒドロフラン（６ｍＬ）中に溶解した６０（０．６２ｇ、０．９７ミリモル）の溶液を０℃に冷却した。この溶液を水素化ジイソブチルアルミニウム（４．８ｍＬ、ヘキサン中１Ｍ）で処理した。反応混合物を１６時間かけて室温までゆっくり加温させた。溶液を真空で濃縮した。得られた残渣を０〜２０％（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム）およびジクロロメタンの混合物で溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、オフホワイトの固体として所望の生成物６１（０．３８ｇ、６４％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  ７．４３  （ｓ，  ４Ｈ）、７．４０〜７．１７  （ｍ，  １０Ｈ）、７．０７  （ｓ，  ２Ｈ）、６．９７  （ｄｄ，  １Ｈ）、５．１２  （ｓ，  ２Ｈ）、５．０４  （ｓ，  ２Ｈ）、４．７８  （ｄｄ，  １Ｈ）、４．６９  （ｄ，  ２Ｈ）、３．６３  （ｔ，  ２Ｈ）、３．１１  （ｔ，  ２Ｈ）、２．６２〜２．４６  （ｍ，  ６Ｈ）、１．６１  （ｂｒ，  ４Ｈ）、１．５１  （ｂｒ，  ２Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ６１１  ［Ｃ３８Ｈ４６Ｎ２Ｏ５＋Ｈ］＋。
【０３４９】
４−（２−｛４−［４−（４−アミノブチル）フェニル］ブチルアミノ｝−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）−２−ヒドロキシ−メチルフェノール（６２）
エタノール（１５ｍＬ）中６１（０．３８ｇ、０．６２ミリモル）およびパラジウム触媒（炭素上１０％Ｐｄ、５０％含水、０．５０、４．６９ミリモル）を含む懸濁液を窒素で２０分間通気した。この反応混合物を真空処理し、次いで、Ｈ２ガス（１気圧）を充填し、室温で２４時間撹拌させた。触媒を真空ろ過し、ろ液を真空で濃縮した。得られた残渣を０〜２０％（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム）およびジクロロメタンの混合物で溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、オフホワイトの固体として所望の生成物６２（０．２４ｇ、９８％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  ７．２１  （ｄ，  １Ｈ）、７．０９〜７．０４  （ｍ，  ４Ｈ）、７．０８  （ｄｄ，  ２Ｈ）、４．６３  （ｄ，  ２Ｈ）、３．６５  （ｔ，  ２Ｈ）、３．５９〜３．５４  （ｍ，  ２Ｈ）、２．７７〜２．４３  （ｍ，  １１Ｈ）、１．６４  （ｔ，  ２Ｈ）、１．５８  （ｔ，  ２Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ３８７  ［Ｃ２３Ｈ３４Ｎ２Ｏ３＋Ｈ］＋。
【０３５０】
Ｎ−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−Ｎ’−［４−（４−｛４−［２−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルフェニル）エチルアミノ］ブチル｝フェニル）ブチル］グアニジン（６３）
エタノール（８ｍＬ）中に溶解した６２（０．２４ｇ、０．６２ミリモル）を含む溶液を６５℃に加熱した。この反応混合物を１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−２−メチルイソチオユリアヒドロヨーダイド（０．２４ｍｇ、０．６２ミリモル）およびジイソプロピルエチルアミン（０．４７ｍＬ）で処理した。反応混合物をその温度でＮ２雰囲気下、５時間撹拌した。溶液を真空で濃縮した。得られた残渣を最初に、０〜２０％（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム）およびジクロロメタンの混合物で溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、次いで同じ溶媒系を用いる分取ＴＬＣによってさらに精製し、淡黄色の固体として所望の生成物６３（１５ｍｇ、５％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ７．２２  （ｄ，  １Ｈ）、７．０８  （ｄ，  ４Ｈ）、６．９７  （ｄ，  １Ｈ）、６．６８  （ｄ，  ４Ｈ）、６．５７  （ｂｒ，  １Ｈ）、４．４５  （ｓ，  ２Ｈ）、３．１５  （ｄ，  ２Ｈ）、２．３３  （ｔ，  １Ｈ）、１．５９〜１．５２  （ｍ，  ６Ｈ）、１．３９  （ｓ，  ２Ｈ）、１．２３  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ６００  ［Ｃ２９Ｈ３９ＣｌＮ８Ｏ４＋Ｈ］＋。
【０３５１】
（実施例９）
Ｎ−｛４−［４−（４−｛ビス−［２−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルフェニル）エチル］アミノ｝ブチル）フェニル］ブチル｝−Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−グアニジン（６７）の合成（スキーム９）
【０３５２】
【化６０】
2009539882.tif 000073
【０３５３】
｛４−［４−（４−｛ビス−［２−（４−ベンジルオキシ−３−ヒドロキシメチルフェニル）−２−（Ｒ）−ヒドロキシエチル］アミノ｝ブチル）フェニル］ブチル｝カルバミン酸ベンジルエステル（６５）
無水テトラヒドロフラン（５ｍＬ）に溶解した６４（５６７ｍｇ、０．６１ミリモル）の溶液を０℃に冷却した。この溶液を水素化ジイソブチルアルミニウム（３．０ｍＬ、ヘキサン中１Ｍ）で処理した。反応混合物を１６時間かけて室温にゆっくり加温させた。溶液を真空で濃縮した。得られた残渣を０〜２０％（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム）およびジクロロメタンの混合物で溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、オフホワイトの固体として所望の生成物６５（０．２５ｇ、４７％）を得た：ｍ／ｚ（ＥＳＩ）８６８［Ｃ５４Ｈ６２Ｎ２Ｏ８＋Ｈ］＋。
【０３５４】
｛４−［４−（４−｛ビス−［２−（４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルフェニル）−２−（Ｒ）−ヒドロキシエチル］アミノ｝ブチル）フェニル］ブチル｝アミン（６６）
エタノール（１０ｍＬ）中６５（２５０ｍｇ、０．２８ミリモル）およびパラジウム触媒（炭素上１０％Ｐｄ、５０％含水、１００ｍｇ、０．９４ミリモル）を含む懸濁液に窒素で２０分間通気した。この反応混合物を真空処理し、次いで、Ｈ２ガス（１気圧）で充填し、室温で２４時間撹拌させた。懸濁液をろ過し、ろ液を真空で濃縮した。得られた残渣を０〜２０％（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム）およびジクロロメタンの混合物で溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、オフホワイトの固体として所望の生成物６６（４５ｍｇ、２８％）を得た：ｍ／ｚ（ＥＳＩ）５５３［Ｃ３２Ｈ４４Ｎ２Ｏ６＋Ｈ］＋。
【０３５５】
Ｎ−｛４−［４−（４−｛ビス−［２−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチルフェニル）エチル］アミノ｝ブチル）フェニル］ブチル｝−Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）グアニジン（６７）
エタノール（４ｍＬ）中に溶解した６６（４５ｍｇ、０．０８ミリモル）を含む溶液を６５℃に加熱した。この反応混合物を１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−２−メチルイソチオユリアヒドロヨーダイド（３２ｍｇ、０．１２ミリモル）およびジイソプロピルエチルアミン（０．４０μＬ）で処理した。反応混合物をその温度でＮ２雰囲気下、５時間撹拌した。この溶液を真空で濃縮した。得られた残渣を最初に、０〜２０％（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム）およびジクロロメタンの混合物で溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、次いで同じ溶媒系を用いる分取ＴＬＣによってさらに精製し、淡黄色の固体として所望の生成物６７（１８ｍｇ、３０％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ７．２６  （ｓ，  １Ｈ）、７．１０  （ｓ，  ２Ｈ）、６．９７  （ｓ，  １Ｈ）、６．６８  （ｓ，  １Ｈ）、６．５８  （ｓ，  １Ｈ）、４．８８  （ｂｒ，  １Ｈ）、４．４６  （ｓ，  ３Ｈ）、３．１６  （ｓ，  ２Ｈ）、１．５８〜１．２３  （ｍ，  ６Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ７６６  ［Ｃ３９Ｈ５３ＣｌＮ８Ｏ７＋Ｈ］＋。
【０３５６】
（実施例１０）
Ｎ−（５−｛２−［４−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−グアニジノ］ブチル｝フェニル）−１−メチルブチルアミノ］−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル｝−２−ヒドロキシ−フェニル）ホルムアミド（３０）ビス−ラクテート二水和物塩の合成
【０３５７】
【化６１】
2009539882.tif 000074
【０３５８】
エタノール中Ｎ−（５−｛２−［４−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）グアニジノ］ブチル｝フェニル）−１−メチルブチルアミノ］−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル｝−２−ヒドロキシ−フェニル）ホルムアミド（３０）１６０ｍｇの溶液に乳酸２．０当量を添加し、室温で１時間撹拌した。エタノールをロータリーエバポレーションによって除去し、所望のＮ−（５−｛２−［４−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−グアニジノ］ブチル｝フェニル）−１−メチルブチルアミノ］−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル｝−２−ヒドロキシ−フェニル）ホルムアミド（ビス−ラクテート二水和物塩）２０２ｍｇを得た：［α］Ｄ２５−２５．３°（ｃ０．２５、ＭｅＯＨ）；ｍｐ１１６〜１１９℃、ｍ／ｚ＝６２６、元素分析Ｃ、Ｈ、Ｎ（０．３％以内）。
【０３５９】
生物活性
下記実施例の化合物を上記ｉｎ  ｖｉｔｒｏのアッセイを用いてイヌ気管支上皮における効力について試験した。
【０３６０】
（実施例１１）
化合物３０  ＥＮａＣ遮断活性、ＩＣ５０（ｎＭ）＝８．４（９３ｘ  アミロライド）
ベータアゴニスト活性、ＥＣ５０（ｎＭ）＝７１．６（ホモテロール＝１３．１）
【０３６１】
（実施例１２）
化合物６７  ＥＮａＣ遮断活性、ＩＣ５０（ｎＭ）＝２２．２（２９ｘ  アミロライド）
【０３６２】
（実施例１３）
化合物１４  ＥＮａＣ遮断活性、ＩＣ５０（ｎＭ）＝１７．７（６６ｘ  アミロライド）
【０３６３】
（実施例１４）
化合物４２  ＥＮａＣ遮断活性、ＩＣ５０（ｎＭ）＝２１．６（５４ｘ  アミロライド）
【０３６４】
（実施例１５）
化合物１９  ＥＮａＣ遮断活性、ＩＣ５０（ｎＭ）＝１０（１２０ｘ  アミロライド）
【０３６５】
（実施例１６）
化合物１２  ＥＮａＣ遮断活性、ＩＣ５０（ｎＭ）＝５．７（１３２ｘ  アミロライド）
ベータアゴニスト活性、ＥＣ５０（ｎＭ）＝１５１（ホモテロール＝５．３）
【０３６６】
（実施例１７）
化合物６３  ＥＮａＣ遮断活性、ＩＣ５０（ｎＭ）＝６．５（１５４ｘ  アミロライド）
【０３６７】
（実施例１８）
化合物４０  ＥＮａＣ遮断活性、ＩＣ５０（ｎＭ）＝９．２（９１ｘ  アミロライド）
ベータアゴニスト活性、ＥＣ５０（ｎＭ）＝１５７６（ホモテロール＝９．３）
【０３６８】
（実施例１９）
Ｎ−（５−｛２−［４−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）グアニジノ］ブチル｝フェニル）ブチルアミノ］−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル｝−２−ヒドロキシフェニル）メタンスルホンアミドジアセテート１３７の合成（スキーム１０）
【０３６９】
【化６２】
2009539882.tif 000075
【０３７０】
Ｎ−（５−アセチル−２−ベンジルオキシフェニル）−Ｎ−ベンジルメタンスルホンアミド（１３０）
アセトン（６７０ｍＬ）中Ｎ−（５−アセチル−２−ヒドロキシフェニル）メタンスルホンアミド（１２９）（２０．００ｇ、８７．１０ミリモル）、ヨウ化ナトリウム（１３．００ｇ、８６．７０ミリモル）、炭酸カリウム（６０．００ｇ、４３４．１０ミリモル）、および臭化ベンジル（２６．００ｍＬ、２１８．９０ミリモル）の混合物を還流下１５時間撹拌した。次いで、この反応混合物を室温に冷却し、固形物をろ過によって除去し、ろ液を真空で濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０：１００から３０：７０酢酸エチル／ジクロロメタン）によって精製し、黄色の固体（２９．６０ｇ、７７％収率）としてベンジルエーテル３０を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ２．３８  （ｓ，  ３Ｈ）、２．８５  （ｓ，  ３Ｈ）、４．７５  （ｂｒ  ｓ，  ２Ｈ）、５．１８  （ｓ，  ２Ｈ）、７．０５  （ｄ，  １Ｈ）、７．２３  （ｍ，  ５Ｈ）、７．４２  （ｍ，  ５Ｈ）、７．６２  （ｄ，  １Ｈ）、７．８９  （ｄｄ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４１０  ［Ｃ２３Ｈ２３ＮＯ４Ｓ＋Ｈ］＋。
【０３７１】
Ｎ−ベンジル−Ｎ−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ブロモアセチル）フェニル］メタンスルホンアミド（１３１）
三臭化フェニルトリメチルアンモニウム（２８．６０ｇ、７６．１０ミリモル）を無水ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中Ｎ−（５−アセチル−２−ベンジルオキシフェニル）−Ｎ−ベンジルメタンスルホンアミド（１３０）（２９．６０ｇ、７２．３０ミリモル）の溶液に４回に分けて添加した。この反応混合物を周囲温度で１４時間撹拌した。固形物を真空ろ過によって除去し、ろ液をロータリーエバポレーションによって濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタンのみ）によって精製し、オフホワイトの固体（２５．１０ｇ、７１％収率）としてブロモケトン１３１を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ２．８５  （ｓ，  ３Ｈ）、４．２１  （ｓ，  ２Ｈ）、４．７５  （ｂｒ，  ２Ｈ）、５．１９  （ｓ，  ２Ｈ）、７．０８  （ｄ，  １Ｈ）、７．２２  （ｍ，  ５Ｈ）、７．４３  （ｍ，  ５Ｈ）、７．６５  （ｄ，  １Ｈ）、７．９２  （ｄｄ，  １Ｈ）。
【０３７２】
Ｎ−ベンジル−Ｎ−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ブロモ−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル）フェニル］メタン−スルホンアミド（１３２）
ＴＨＦ中ＢＨ３・ＴＨＦ（１Ｍ、３０．７０ｍＬ、３０．７０ミリモル）の溶液を無水ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中Ｎ−ベンジル−Ｎ−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ブロモアセチル）フェニル］メタンスルホンアミド（１３１）（２５．００ｇ、５１．２０ミリモル）およびＲ−メチル−ＣＢＳ−オキサゾボロリジン（トルエン中１Ｍ、５．１０ｍＬ、５．１０ミリモル）の混合物に添加した。この反応混合物を０℃で１５分間、次いで、室温で１６時間撹拌した。次いで、メタノール（１００ｍＬ）をゆっくり添加して、反応をクエンチした。ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去後、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタンのみ）によって精製し、オレンジ色の油（２３．８０ｇ、９５％収率）として所望のブロモアルコール１３２を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ２．８６  （ｓ，  ３Ｈ）、３．３０〜３．３８  （ｍ，  ２Ｈ）、４．７０  （ｍ，  ３Ｈ）、５．１１  （ｓ，  ２Ｈ）、７．００  （ｍ，  ２Ｈ）、７．２１  （ｍ，  ５Ｈ）、７．２８  （ｄ，  １Ｈ）、７．４２  （ｍ，  ５Ｈ）。
【０３７３】
Ｎ−ベンジル−Ｎ−（２−ベンジルオキシ−５−（Ｒ）−オキシラニルフェニル）メタンスルホンアミド（１３３）
炭酸カリウム（０．５０ｇ、３．５８ミリモル）を、ＴＨＦ（８ｍＬ）およびメタノール（８ｍＬ）の溶媒混合物中に溶解したＮ−ベンジル−Ｎ−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ブロモ−１−ヒドロキシエチル）フェニル］メタンスルホンアミド（１３２）（１．００ｇ、２．０４ミリモル）の溶液に添加し、この反応混合物を室温で２時間撹拌した。ロータリーエバポレーションによって溶媒を除去後、残渣をジクロロメタンに溶解し、吸引ろ過して無機物を除去した。ろ液を真空で濃縮し、トルエンと共にさらに共蒸発させ、高真空下で乾燥した。所望のエポキシド１３３を白色の固体（１．０１ｇ、＞９９％収率）として得て、精製することなく次のステップに直接用いた：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ２．６０  （ｍ，  １Ｈ）、２．８４  （ｓ，  ３Ｈ）、３．０２  （ｄｄ，  １Ｈ）、３．６６  （ｄｄ，  １Ｈ）、４．７５  （ｂｒ  ｓ，  ２Ｈ）、５．１０  （ｓ，  ２Ｈ）、６．９７  （ｄ，  １Ｈ）、７．０１  （ｄ，  １Ｈ）、７．１２  （ｄｄ，  １Ｈ）、７．２２  （ｍ，  ５Ｈ）、７．４１  （ｍ，  ５Ｈ）。
【０３７４】
（Ｒ）−ベンジル｛４−［４−（４−｛２−［３−（Ｎ−ベンジルメタンスルホニルアミノ）−４−ベンジルオキシ］フェニル｝−２−ヒドロキシエチルアミノ）ブチル］フェニル｝ブチルカルバメート（１３５）
無水クロロホルム（１５ｍＬ）中Ｎ−ベンジル−Ｎ−（２−ベンジルオキシ−５−（Ｒ）−オキシラニルフェニル）メタンスルホンアミド（１３３）（１．２５ｇ、３．０５ミリモル）およびベンジル４−［４−（４−アミノペンチル）フェニル］ブチルカルバメート（１３４）（１．２５ｇ、３．３９ミリモル）の混合物を密封管中で６８℃に９６時間加熱した。この時間後、混合物を室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーションによって除去した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５：９５メタノール／ジクロロメタン）によって精製した。所望の付加物１３５（０．３５ｇ、１５％収率）を白色発泡体として単離した：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ０．８８〜０．９４  （ｍ，  ３Ｈ）、１．２１〜１．６１  （ｍ，  １０Ｈ）、２．３４〜２．５７  （ｍ，  ５Ｈ）、２．８６  （ｍ，  ３Ｈ）、３．１９  （ｍ，  ２Ｈ）、３．４３〜３．６９（ｍ，  ２Ｈ）、４．７７  （ｂｒ  ｓ，  ３Ｈ）、５．０７  （ｍ，  ２Ｈ）、５．３０  （ｓ，  ２Ｈ）、６．８６〜７．４３  （ｍ，  ２２Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ７７８  ［Ｃ４６Ｈ５５Ｎ３Ｏ６Ｓ＋Ｈ］＋。
【０３７５】
Ｎ−［５−（（１Ｒ）−２−｛５−［４−（４−アミノブチル）フェニル］ペンタン−２−イルアミノ｝−１−ヒドロキシエチル）−２−ヒドロキシフェニル］−メタンスルホンアミド（１３６）
（Ｒ）−ベンジル｛４−［４−（４−｛２−［３−（Ｎ−ベンジルメタンスルホニルアミノ）−４−ベンジルオキシ］フェニル｝−２−ヒドロキシエチルアミノ）ブチル］フェニル｝ブチルカルバメート（１３５）（０．３５ｇ、０．４６ミリモル）、二水酸化パラジウム（５０ｍｇ、炭素上１０％Ｐｄ（ＯＨ）２、５０％含水）およびエタノール（１５ｍＬ）の混合物を常圧水素圧下、室温で１６時間撹拌した。触媒を珪藻土を通してろ過することによって除去し、ろ液をロータリーエバポレーションによって濃縮し、次いで、高真空下でさらに乾燥して、黄褐色の固体（０．２１ｇ、９７％収率）として所望のアミン１３６を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．０８〜１．１１  （ｍ，  ３Ｈ）、１．２１〜１．６１  （ｍ，  １０Ｈ）、２．３４〜２．５７  （ｍ，  ５Ｈ）、２．７１〜２．９２  （ｍ，  ８Ｈ）、４．６３  （ｍ，  １Ｈ）、６．８４〜６．８８  （ｍ，  １Ｈ）、７．０１〜７．１２  （ｍ，  ５Ｈ）、７．３６  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４６４  ［Ｃ２４Ｈ３７Ｎ３Ｏ４Ｓ＋Ｈ］＋。
【０３７６】
Ｎ−（５−｛２−［４−（４−｛４−［Ｎ’−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）グアニジノ］ブチル｝フェニル）ブチルアミノ］−１−（Ｒ）−ヒドロキシエチル｝−２−ヒドロキシフェニル）メタンスルホンアミドジアセテート（１３７）
ジイソプロピルエチルアミン（０．１０ｍＬ、０．５７ミリモル）を無水エタノール（８ｍＬ）中Ｎ−［５−（（１Ｒ）−２−｛５−［４−（４−アミノブチル）フェニル］ペンタン−２−イルアミノ｝−１−ヒドロキシエチル）−２−ヒドロキシフェニル］−メタンスルホンアミド（１３６）（０．２１ｇ、０．４５ミリモル）および１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−２−メチルイソチオユリアヒドロヨーダイド（５）（０．１８ｇ、０．４５ミリモル）の混合物に添加した。この混合物を７０℃（オイルバス）で２時間撹拌した。この時間後、混合物を室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーションによって除去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配１０：９０から３０：７０（メタノール／ジクロロメタン中１０％濃水酸化アンモニウム水））によって精製し、半分取ＨＰＬＣ（勾配１０：９から９０：１０アセトニトリル／水（それぞれ０．０１％濃酢酸を含む））によってさらに精製し、黄褐色固体（２５．０ｍｇ、８％収率）としてスルホンアミド誘導体（１３７）を得た：ｍｐ  ７６〜８０℃；１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  ０．９４〜０．９７  （ｍ，  ３Ｈ）、１．２４  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、１．４０  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、１．５１〜１．６０  （ｍ，  ６Ｈ）、１．９０  （ｓ，  ６Ｈ）、２．４９〜２．６６  （ｍ，  ６Ｈ）、２．８９  （ｓ，  ３Ｈ）、３．１１〜３．１９  （ｍ，  ２Ｈ）、４．６３  （ｍ，  １Ｈ）、６．６３  （ｂｒ，  ２Ｈ）、６．８０  （ｄ，  １Ｈ）、６．９８  （ｄ，  １Ｈ）、７．０６  （ｍ，  ４Ｈ）、７．１６  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ６７６  ［Ｃ３０Ｈ４２ＣｌＮ９Ｏ５Ｓ＋Ｈ］＋。
【０３７７】
（実施例２０）
３，５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−｛Ｎ−［４−（４−｛４−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（３−ヒドロキシフェニル）エチルアミノ］ペンチル｝フェニル）ブチル］カルバミミドイル｝ピラジン−２−カルボキサミド１４３の合成（スキーム１１）
【０３７８】
【化６３】
2009539882.tif 000076
【０３７９】
ベンジル４−［４−（４−オキソペンチル）フェニル］ブチルカルバメート（１４０）
ピリジジウムクロロクロメート（７．３２ｇ、３４．００ミリモル）をジクロロメタン（２５０ｍＬ）中ベンジル４−［４−（４−ヒドロキシペンチル）フェニル］ブチルカルバメート（１３８）（６．２７ｇ、１７．００ミリモル）および４Åモレキュラーシーブの混合物に３回に分けて添加し、室温で６時間撹拌した。次いで、この反応混合物を珪藻土を通してろ過し、ろ液を黒色油まで濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカ、３０：７０酢酸エチル／ヘキサン）によって精製し、白色固体としてケトン１４０（６．５８ｇ、＞９９％収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．５０〜１．５６  （ｍ，  ２Ｈ）、１．６０〜１．６６  （ｍ，  ２Ｈ）、１．８５〜１．９０  （ｍ，  ２Ｈ）、２．１１  （ｓ，  ３Ｈ）、２．４２  （ｔ，  ２Ｈ）、２．５６〜２．６０  （ｍ，  ４Ｈ）、３．１９〜３．２３  （ｍ，  ２Ｈ）、４．７０  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、５．０８  （ｓ，  ２Ｈ）、７．０７  （ｓ，  ４Ｈ）、７．２９〜７．３６  （ｍ，  ５Ｈ）。
【０３８０】
ベンジル４−（４−｛４−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（３−ヒドロキシフェニル）エチルアミノ］ペンチル｝フェニル）ブチルカルバメート（１４１）
メタノール（１０ｍＬ）中市販のアミノアルコール塩１３９（０．３９ｇ、２．０６ミリモル）およびケトン１４０（０．７５ｇ、２．０４ミリモル）の溶液を周囲温度で５時間撹拌した。次いで、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１．３０ｇ、６．１３ミリモル）を４回に分けて添加し、さらに１４時間撹拌した。次いで、この反応混合物をろ過し、ろ液を濃縮した。クロマトグラフィー（シリカゲル、３０：７０酢酸エチル／ヘキサン、その後１０：９０（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム）／ジクロロメタン）によって精製し、粘着性の白色発泡体としてブチルカルバメート１４１（１．０１ｇ、＞９９％収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．２１  （ｂｒ  ｓ，  ３Ｈ）、１．４８〜１．７４  （ｍ，  １０Ｈ）、２．００  （ｓ，  ３Ｈ）、２．５０〜２．６０  （ｍ，  ５Ｈ）、２．９２〜３．３０  （ｍ，  ５Ｈ）、４．８８  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、４．９７  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、５．０８  （ｓ，  ２Ｈ）、６．７５  （ｂｒ  ｓ，  ２Ｈ）、６．８９  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、７．００〜７．１１  （ｍ，  ５Ｈ）、７．２９〜７．３６  （ｍ，  ５Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ５０５  ［Ｃ３１Ｈ４０Ｎ２Ｏ４＋Ｈ］＋。
【０３８１】
３−（（Ｒ）−２−｛５−［４−（４−アミノブチル）フェニル］ペンタン−２−イルアミノ｝−１−ヒドロキシエチル）フェノール（１４２）
ブチルカルバメート１４１（１．０４ｇ、２．０６ミリモル）、二水酸化パラジウム（０．２０ｇ、炭素上１０％Ｐｄ（ＯＨ）２、５０％含水）およびエタノール（５０ｍＬ）の混合物を室温で常圧水素圧下、９４時間撹拌した。触媒を珪藻土を通してろ過することによって除去し、ろ液をロータリーエバポレーションによって濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカ、勾配０：１００から１０：９０  （メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム）／ジクロロメタン）によって精製し、黄褐色固体として所望のアミン１４２（０．６３ｇ、８３％収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．１６〜１．２９  （ｍ，  ３Ｈ）、１．４８〜１．７４  （ｍ，  ８Ｈ）、２．５０〜２．６０  （ｍ，  ４Ｈ）、２．９２〜３．３０  （ｍ，  ５Ｈ）、４．８３  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、６．７１〜６．７２  （ｍ，  １Ｈ）、６．８３〜６．８５  （ｍ，  ２Ｈ）、７．００〜７．１５  （ｍ，  ５Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ３７１  ［Ｃ２３Ｈ３４Ｎ２Ｏ２＋Ｈ］＋。
【０３８２】
３，５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−｛Ｎ−［４−（４−｛４−［（Ｒ）−２−ヒドロキシ−２−（３−ヒドロキシフェニル）エチルアミノ］ペンチル｝フェニル）ブチル］カルバミミドイル｝ピラジン−２−カルボキサミド（１４３）
ジイソプロピルエチルアミン（０．４５ｍＬ、２．５８ミリモル）を無水エタノール（１０ｍＬ）中アミノアルコール１４２（０．６３ｇ、１．６９ミリモル）および１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−２−メチルイソチオユリアヒドロヨーダイド（０．６６ｇ、２．５８ミリモル）の混合物に添加した。この混合物を７５℃（オイルバス）で４．５時間撹拌した。この時間後、混合物を室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーションによって除去した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配５：９５から１０：９０メタノール／ジクロロメタン、続けて勾配５：９５から１０：９０（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム水）／ジクロロメタン）によって精製し、その後４０℃真空オーブン中で８８時間乾燥し、黄色固体としてフェノール誘導体１４３（０．３０ｇ、３０％収率）を得た：ｍｐ  ８２〜８６°；１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ０．９３  （ｄｄ，  ３Ｈ，  Ｊ  ＝  ６．０，  ３．５Ｈｚ）、１．２１〜１．２８  （ｍ，  １Ｈ）、１．３２〜１．４０  （ｍ，  １Ｈ）、１．４９〜１．６０  （ｍ，  ６Ｈ）、１．７５  （ｓ，  １Ｈ）、２．４９〜２．６６  （ｍ，  ５Ｈ）、３．１１〜３．１９  （ｍ，  ２Ｈ）、４．４４〜４．４８  （ｍ，  １Ｈ）、５．１７  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、６．５９〜６．７２  （ｍ，  ６Ｈ）、７．０６〜７．１１  （ｍ，  ５Ｈ）、９．０９  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ５８３  ［Ｃ２９Ｈ３９ＣｌＮ８Ｏ３＋Ｈ］＋。
【０３８３】
（実施例２１）
３，５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−［Ｎ−（４−｛４−［（Ｒ）−４−（（１Ｒ，２Ｓ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イルアミノ）ペンチル］フェニル｝ブチル）カルバミミドイル］ピラジン−２−カルボキサミド（ＡＬＢ１１６９９５）（スキーム６）および３，５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−［Ｎ−（４−｛４−［（Ｓ）−４−（（１Ｒ，２Ｓ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イルアミノ）ペンチル］フェニル｝ブチル）カルバミミドイル］ピラジン−２−カルボキサミド（１４７ａ）（スキーム１２）の合成
【０３８４】
【化６４】
2009539882.tif 000077
【０３８５】
ベンジル４−｛４−［（Ｒ）−４−（（１Ｒ，２Ｓ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イルアミノ）ペンチル］フェニル｝ブチルカルバメート（１４５ａ）およびベンジル４−｛４−［（Ｓ）−４−（（１Ｒ，２Ｓ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イルアミノ）ペンチル］フェニル｝ブチルカルバメート（１４５ｂ）
メタノール（８ｍＬ）中市販のアミノアルコール塩１４４（０．２２ｇ、１．４２ミリモル）、ケトン１４０（０．５０ｇ、１．３６ミリモル）および酢酸（０．０８ｍＬ）の溶液を周囲温度で１．５時間撹拌した。次いで、水素化シアノホウ素ナトリウム（０．１３ｇ、２．０６ミリモル）を添加し、反応液をさらに１４時間撹拌した。次いで、反応混合物をろ過し、ろ液を濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカ、ジクロロメタン、次いで１０：９０（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム）／ジクロロメタン）によって精製し、透明無色な油としてブチルカルバメート１４５ａ（０．１９ｇ、３５％収率）：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．０１  （ｄ，  ３Ｈ）、１．３２〜１．３７  （ｍ，  ３Ｈ）、１．４８〜１．７４  （ｍ，  ９Ｈ）、２．５２〜２．６２  （ｍ，  ４Ｈ）、３．１１〜３．３０  （ｍ，  ４Ｈ）、４．７５  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、５．０８  （ｍ，  ２Ｈ）、７．０８  （ｍ，  ４Ｈ）、７．２８〜７．３７  （ｍ，  １０Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ５０３  ［Ｃ３２Ｈ４２Ｎ２Ｏ３＋Ｈ］＋および透明無色の油として１４５ｂ（１８７ｍｇ、３６％）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ０．８７〜０．９４  （ｍ，  ３Ｈ）、１．２１〜１．２７  （ｍ，  ３Ｈ）、１．４８〜１．７４  （ｍ，  ９Ｈ）、２．５２〜２．６２  （ｍ，  ４Ｈ）、２．９９  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、３．１１〜３．３０  （ｍ，  ３Ｈ）、４．７３  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、４．８５〜４．９５  （ｍ，  １Ｈ）、５．０８  （ｍ，  ２Ｈ）、７．０８  （ｍ，  ４Ｈ）、７．２８〜７．３７  （ｍ，  １０Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ５０３  ［Ｃ３２Ｈ４２Ｎ２Ｏ３＋Ｈ］＋
【０３８６】
（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛（Ｒ）−５−［４−（４−アミノブチル）フェニル］ペンタン−２−イルアミノ｝−１−フェニルプロパン−１−オル（４６ａ）および（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛（Ｓ）−５−［４−（４−アミノブチル）フェニル］ペンタン−２−イルアミノ｝−１−フェニルプロパン−１−オル（１４６ｂ）
ブチルカルバメート１４５ａ（０．１９ｇ、０．３７ミリモル）、二水酸化パラジウム（０．１５ｇ、炭素上１０％Ｐｄ（ＯＨ）２、５０％含水）およびエタノール（６ｍＬ）の混合物を常圧水素圧下、室温で６６時間撹拌した。触媒を珪藻土を通してろ過することによって除去し、ろ液をロータリーエバポレーションによって濃縮し、茶色の油として所望のアミン１４６ａ（０．１１ｇ、７７％収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００  ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  ０．８９−０．９４  （ｍ，  ３Ｈ）、１．００−１．０９  （ｍ，  ３Ｈ）、１．３２−１．７２  （ｍ，  ８Ｈ）、２．５２−２．９２  （ｍ，  ７Ｈ）、４．７５  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、７．０８  （ｍ，  ４Ｈ）、７．２８−７．３７  （ｍ，  ５Ｈ）。同じ操作に従って、ブチルカルバメート１４５ｂ（０．１９ｇ、０．３７ミリモル）、二水酸化パラジウム（１５０ｍｇ、炭素上１０％Ｐｄ（ＯＨ）２、５０％含水）およびエタノール（６ｍＬ）を用いて、アミン１４６ｂ（０．１３ｇ、９９％収率）を茶色の油として得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  ０．８７〜０．９６  （ｍ，  ３Ｈ）、１．０１〜１．０９  （ｍ，  ３Ｈ）、１．３２〜１．７２  （ｍ，  ８Ｈ）、２．５２〜２．９２  （ｍ，  ７Ｈ）、４．７５  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、７．０８  （ｍ，  ４Ｈ）、７．２８〜７．３７  （ｍ，  ５Ｈ）。
【０３８７】
３，５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−［Ｎ−（４−｛４−［（Ｒ）−４−（（１Ｒ，２Ｓ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イルアミノ）ペンチル］フェニル｝ブチル）カルバミミドイル］ピラジン−２−カルボキサミド（１４７ａ）および３，５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−［Ｎ−（４−｛４−［（Ｓ）−４−（（１Ｒ，２Ｓ）−１−ヒドロキシ−１−フェニルプロパン−２−イルアミノ）ペンチル］フェニル｝ブチル）カルバミミドイル］ピラジン−２−カルボキサミド（１４７ｂ）
ジイソプロピルエチルアミン（０．０８ｍＬ、０．４６ミリモル）を無水エタノール（３ｍＬ）中アミノアルコール１４６ａ（０．１１ｇ、０．２８ミリモル）および１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−２−メチルイソチオユリアヒドロヨーダイド（５）（０．１１ｇ、０．２８ミリモル）の混合物に添加した。この混合物を７５℃（オイルバス）で５．５時間撹拌した。この時間後、混合物を室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーションによって除去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配５：９５から１０：９０メタノール／ジクロロメタン、続けて１０：９０（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム水）／ジクロロメタン）によって精製した。分取ＴＬＣ（シリカ、１０：９０（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム水）／ジクロロメタン）によってさらに精製し、黄色固体としてカルボキサミド誘導体１４７ａ（０．０４ｇ、２５％収率）を得た：ｍｐ６０〜６４℃；１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ０．７８  （ｍ，  ３Ｈ）、０．９１〜１．０３  （ｍ，  ３Ｈ）、１．２２〜１．６３  （ｍ，  ９Ｈ）、２．５９〜２．６６  （ｍ，  ２Ｈ）、２．７１〜２．９２  （ｂｒ  ｓ，  ２Ｈ）、３．１１〜３．１９  （ｍ，  ２Ｈ）、３．２８〜３．３０  （ｍ，  １Ｈ）、４．５８  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、６．６８  （ｂｒ  ｓ，  ２Ｈ）、７．０６〜７．１１  （ｍ，  ４Ｈ）、７．２０〜７．３２  （ｍ，  ５Ｈ）、９．０９  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ５８３  ［Ｃ３０Ｈ４１ＣｌＮ８Ｏ２＋Ｈ］＋。同じ操作に従って、エタノール（４ｍＬ）中アミン１４６ｂ（０．１３ｇ、０．３６ミリモル）、チオユリア５（０．１４ｇ、０．３７ミリモル）およびジイソプロピルエチルアミン（０．１０ｍＬ、０．５７ミリモル）を用いて、１４７ｂ（０．０３ｇ、１３％収率）を黄色固体として得た：ｍｐ５８〜６２℃；１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ０．８１  （ｂｒ  ｓ，  ３Ｈ）、０．９９〜１．１８  （ｍ，  ３Ｈ）、１．２９〜１．６３  （ｍ，  ８Ｈ）、２．５９〜２．６６  （ｍ，  ３Ｈ）、２．８１〜３．１９  （ｍ，  ４Ｈ）、４．７０  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、６．５０〜７．１１  （ｍ，  ７Ｈ）、７．２０〜７．３２  （ｍ，  ５Ｈ）、９．０９  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ５８３  ［Ｃ３０Ｈ４１ＣｌＮ８Ｏ２＋Ｈ］＋。
【０３８８】
（実施例２２）
（Ｒ）−３，５−ジアミノ−Ｎ−（Ｎ−４−（４−（２−（３−（２−（４−（ベンジルオキシ）−３−ホルムアミドフェニル）−２−ヒドロキシエチルアミノ）ブチルアミノ）−２−オキソエトキシ）フェニル）ブチル）カルバミミドイル）−６−クロロピラジン−２−カルボキサミドジ−Ｌ−ラクテート１６０の合成（スキーム１３）
【０３８９】
【化６５】
2009539882.tif 000078
【０３９０】
ベンジル３−ヒドロキシブチルカルバメート（１４９）
ジクロロメタン（無水、１００ｍＬ）中４−アミノブタン−２−オル（３．００ｇ、３３．６５ミリモル）およびジイソ−プロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、８．７９ｍＬ、５０．４８ミリモル）の溶液を氷／水浴中で１５分間冷却した。この溶液に、ＣｂｚＣｌ（５．７４ｍＬ、２０ｍＬ無水ジクロロメタンで希釈）を３０分かけて滴下した。氷浴を取り除いて、得られた反応混合物を室温でさらに３時間撹拌した。この時間後、混合物を濃縮し、得られた残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配１：９９から３：９７メタノール／ジクロロメタン）にかけ、淡茶色の粘性油として１４９（８．９１ｇ、定量収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．２０  （ｄ，  ３Ｈ）、１．５８  （ｍ，  ２Ｈ）、３．２２  （ｍ，  ２Ｈ）、３．９０  （ｍ，  １Ｈ）、５．１０  （ｓ，  ２Ｈ）、５．２８  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、７．３４  （ｍ，  ５Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ２２４  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９１】
ベンジル３−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ブチルカルバメート（１５０）
ジクロロメタン（無水、６０ｍＬ）中１４９（４．４９ｇ、２０．１３ミリモル）およびイミダゾール（２．０５ｇ、３０．２０ミリモル）の溶液を氷／水浴中で冷却した。この溶液に、ＴＢＤＭＳＣｌ（３．３４ｇ、２２．１４ミリモル）を１回で添加し、混合物を一晩撹拌した。この間、温度は室温に自然に上昇させた。この時間後、固体沈殿物をろ過により除去した。ろ液を短シリカゲルパッド上に載せ、１２：８８酢酸エチル／ヘキサンで溶出させ、無色液体として所望の生成物１５０（７．１０ｇ、定量収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ０．４９  （ｓ，  ３Ｈ）、０．５１  （ｓ，  ３Ｈ）、０．８５  （ｓ，  ９Ｈ）、１．０９  （ｄ，  ３Ｈ）、１．６９  （ｍ，  ２Ｈ）、３．２０  （ｍ，  ２Ｈ）、３．８８  （ｍ，  １Ｈ）、４．６７  （ｍ，  １Ｈ）、５．０  （ｓ，  ２Ｈ）、５．１５  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、７．２８  （ｍ，  ５Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ３３８  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９２】
３−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ブタン−１−アミン（１５１）
エタノール（５０ｍＬ）に溶解した化合物１５０（７．１０ｇ、２１．０６ミリモル）およびパラジウム触媒（１．５０ｇ、炭素上１０％Ｐｄ、５０％含水）の懸濁液を水素雰囲気下で５時間撹拌した。触媒をろ過によって除去し、エタノール（３×１５ｍＬ）で洗浄した。ろ液および洗浄液を合わせて、真空下で濃縮して完全に乾燥させ、無色粘性油として１５１（３．６０ｇ、８４％収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  ０．４８  （ｓ，  ３Ｈ）、０．５３  （ｓ，  ３Ｈ）、０．９０  （ｓ，  ９Ｈ）、１．１０  （ｓ，  ３Ｈ）、１．５５  （ｍ，  ２Ｈ）、２．６８  （ｍ，  ２Ｈ）、３．８８  （ｍ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ２０４  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９３】
ベンジル４−（４−（２−３−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ブチルアミノ）−２−オキソエトキシ）フェニル）−ブチルカルバメート（１５３）
ＴＨＦヒドラジン（無水、５０ｍＬ）中２−（４−（４−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）ブチル）フェノキシ）酢酸１５２（５．０７ｇ、１４．１８ミリモル）およびカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ、２．８７ｇ、１７．７３ミリモル）を含む懸濁液に化合物１５１（３．６１ｇ、１７．７３ミリモル、５ｍＬ無水ＴＨＦに溶解）を添加し、この混合物を室温で一晩撹拌した。固形物をろ過によって除去し、ＴＨＦ（３×２０ｍＬ）で洗浄した。ろ液および洗浄液を合わせて、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（勾配０：１００から５０：５０酢酸エチル／ヘキサン）にかけて、無色粘性油として所望の生成物１５３（４．３３ｇ、５６％収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  ０．４８  （ｓ，  ３Ｈ）、０．５３  （ｓ，  ３Ｈ）、０．９０  （ｓ，  ９Ｈ）、１．１８  （ｓ，  ３Ｈ）、１．５３〜１．７５  （ｍ，  ６Ｈ）、２．６２  （ｍ，  ２Ｈ）、３．２４  （ｍ，  ２Ｈ）、３．４４  （ｍ，  ２Ｈ）、３．９３  （ｍ，  １Ｈ）、４．１８  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、４．４６  （ｓ，  ２Ｈ）、４．７８  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、５．１２  （ｓ，  ２Ｈ）、６．８３  （ｄ，  ２Ｈ）、７．０８  （ｄ，  ２Ｈ）、７．３６  （ｍ，  ５Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ５３４  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９４】
ベンジル４−（４−（２−（３−（ヒドロキシブチルアミノ）−２−オキソエトキシ）フェニル）ブチルカルバメート（１５４）
ＴＨＦ（２０ｍＬ）中化合物１５３（４．３３ｇ、７．９７ミリモル）およびＴＢＡＦ（ＴＨＦ中１Ｍ溶液、２４ｍＬ）の溶液を室温で７２時間撹拌し、次いで、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（勾配５０：５０から１０：９０酢酸エチル／ヘキサン）にかけて、所望の生成物５４（２．３２ｇ、６７％収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．２２  （ｓ，  ３Ｈ）、１．３３  （ｍ，  １Ｈ）、１．４３  （ｍ，  １Ｈ）、１．５３〜１．７７  （ｍ，  ４Ｈ）、２．４１  （ｍ，  ２Ｈ）、２．６２  （ｔ，  ２Ｈ）、２．９２  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、３．２４  （ｍ，  ２Ｈ）、３．７８  （ｍ，  ２Ｈ）、４．４０  （ｓ，  ２Ｈ）、４．７５  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、５．１２  （ｓ，  ２Ｈ）、６．８１  （ｄ，  ２Ｈ）、７．１２  （ｄ，  ２Ｈ）、７．３６  （ｍ，  ５Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４２９  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９５】
ベンジル４−（４−（２−オキソ−２−（３−オキソブチルアミノ）エトキシ）フェニル）ブチルカルバメート（１５５）
ジクロロメタン（２０ｍＬ）中化合物１５４（１．２１ｇ、２．８２ミリモル）およびＰＣＣ（１．８３ｇ、８．４６ミリモル）の混合物を室温で一晩撹拌した。この時間後、混合物をカラムクロマトグラフィー（勾配５０：５０から８０：２０酢酸エチル／ヘキサン）にかけて、オフホワイトの固体として所望の生成物５５（０．８５ｇ、７１％収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．５３〜１．７０  （ｍ，  ４Ｈ）、２．１２  （ｓ，  ３Ｈ）、２．５７  （ｔ，  ２Ｈ）、２．７２  （ｔ，  ２Ｈ）、３．２２  （ｍ，  ２Ｈ）、３．６４  （ｍ，  ２Ｈ）、４．４０  （ｓ，  ２Ｈ）、４．７５  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、５．１２  （ｓ，  ２Ｈ）、６．８１  （ｄ，  ２Ｈ）、７．１２  （ｄ，  ２Ｈ）、７．３６  （ｍ，  ５Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４２７  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９６】
（Ｒ）−ベンジル４−（４−（２−（３−（２−（４−ベンジルオキシ）−３−ホルムアミドフェニル）−２−ヒドロキシエチルアミノ）ブチルアミノ）−２−オキソエトキシ）フェニル）ブチルカルバメート（１５７）
メタノール（無水、１０ｍＬ）中化合物５５（０．８６ｇ，２．０１ミリモル）および（Ｒ）−Ｎ−（５−（２−アミノ−１−ヒドロキシエチル）−２−ベンジルオキシ）フェニル）ホルムアミド５６（０．４１ｇ、２．１２ミリモル）を含む溶液を室温で３時間撹拌した。次いで、この溶液にＮａＣＮＢＨ３（０．３８ｇ、６．０５ミリモル）を１回で添加し、この混合物を室温で一晩連続的に撹拌した。この時間後、混合物を濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（勾配０：１００から９：９１メタノール／ジクロロメタン）にかけて、所望の生成物５７（１．０１ｇ、８３％収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．３３  （ｍ，  ３Ｈ）、１．４７〜１．６８  （ｍ，  ４Ｈ）、１．７７  （ｍ  １Ｈ）、２．０２  （ｍ，  １Ｈ）、２．５４  （ｍ，  ２Ｈ）、３．０２〜３．２６  （ｍ，  ５Ｈ）、３．５６  （ｍ，  ２Ｈ）、４．５４  （ｄ，  ２Ｈ）、４．８４  （ｍ，  １Ｈ）、５．１０  （ｓ，  ２Ｈ）、６．９０  （ｍ，  ３Ｈ）、７．１２  （ｍ，  ３Ｈ）、７．３５  （ｍ，  ５Ｈ）、８．１３  （ｓ，  １Ｈ）、８．３３（ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ６０７  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９７】
（Ｒ）−２−（４−（４−アミノブチル）フェノキシ）−Ｎ−（３−（２−（４−（ベンジルオキシ）−３−ホルムアミドフェニル）−２−ヒドロキシエチルアミノ）ブチル）アセトアミド（１５８）
メタノール（５０ｍＬ）中に溶解した化合物５７（１．０１ｇ、１．６６ミリモル）およびパラジウム触媒（０．３０ｇ、炭素上１０％Ｐｄ、５０％含水）の混合物を常圧水素圧下、室温で一晩撹拌した。触媒をろ過によって除去し、メタノール（３×１５ｍＬ）で洗浄した。ろ液および洗浄液を合わせて、真空下で濃縮して完全に乾燥し、オフホワイトの発泡体として１５８（０．７１ｇ、９１％収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （３００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．１４  （ｍ，  ３Ｈ）、１．５０〜１．８２  （ｍ，  ６Ｈ）、２．６０  （ｍ，  ２Ｈ）、２．７８  （ｍ，  ４Ｈ）、３．３４  （ｍ，  ３Ｈ）、４．５０  （ｓ，  ２Ｈ）、４．６５  （ｍ，  １Ｈ）、６．８４  （ｍ，  ３Ｈ）、７．１４  （ｍ，  ３Ｈ）、８．１３  （ｓ，  １Ｈ）、８．３３  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４７３  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９８】
（Ｒ）−３，５−ジアミノ−Ｎ−（Ｎ−４−（４−（２−（３−（２−（４−（ベンジルオキシ）−３−ホルムアミドフェニル）−２−ヒドロキシエチルアミノ）ブチルアミノ）−２−オキソエトキシ）フェニル）ブチル）カルバミミドイル）−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド（１５９）
化合物１５８（０．６５ｇ、１．３７ミリモル）、ヒューニッヒ塩基（０．９６ｍＬ、５．５０ミリモル）およびエタノール（５ｍＬ）の懸濁液を７０℃で３０分間加熱し、次いで、１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−２−メチルイソチオユリアヒドロヨーダイド（０．５９ｇ、１．５１ミリモル）を添加した。得られた溶液をその温度でさらに３時間連続的に撹拌し、その後室温に冷却した。未溶解固形物をろ過によって除去した。ろ液を濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（勾配０：１００から１６：８４（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム）／ジクロロメタン）にかけ、黄色固体として１５９（０．１０３ｇ、２７％収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．１２  （ｍ，  ３Ｈ）、１．５８  （ｍ，  ２Ｈ）、１．６８  （ｍ，  ４Ｈ）、２．５８  （ｍ，  ２Ｈ）、２．７５  （ｍ，  ３Ｈ）、３．２８  （ｍ，  ４Ｈ）、４．４８  （ｓ，  ２Ｈ）、４．６７  （ｍ，  １Ｈ）、６．８７  （ｄ，  １Ｈ）、６．９３  （ｄ，  ２Ｈ）、７．０１  （ｄ，  １Ｈ）、７．１８  （ｄ，  ２Ｈ）、８．０６  （ｓ，  １Ｈ）、８．３３（ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ６８５  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０３９９】
（Ｒ）−３，５−ジアミノ−Ｎ−（Ｎ−４−（４−（２−（３−（２−（４−（ベンジルオキシ）−３−ホルムアミドフェニル）−２−ヒドロキシエチルアミノ）ブチルアミノ）−２−オキソエトキシ）フェニル）ブチル）カルバミミドイル）−６−クロロピラジン−２−カルボキサミドジ−Ｌ−ラクテート（１６０）
Ｌ−乳酸（０．０２７ｇ、０．３０ミリモル）をエタノール（１０ｍＬ）中化合物１５９（０．１０３ｇ、０．１５ミリモル）の懸濁液に添加し、この混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、この溶液を真空下で濃縮し、完全に乾燥して、淡黄色固体として１６０（０．１２９ｇ、定量収率）を得た：ｍｐ８２〜８６℃；［α］Ｄ２５  −３．０１°；１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １．１２  （ｍ，  ３Ｈ）、１．２２  （ｄ，  ６Ｈ）、１．５６  （ｍ，  ５Ｈ）、１．７４  （ｍ，  １Ｈ）、２．８０  （ｍ，  ２Ｈ）、２．９４  （ｍ，  １Ｈ）、３．２０  （ｍ，  ４Ｈ）、３．９８  （ｑ，  ２Ｈ）、４．４０  （ｓ，  ２Ｈ）、４．６５  （ｍ，  １Ｈ）、６．８８  （ｍ，  ４Ｈ）、７．１４  （ｄ，  ２Ｈ）、８．１０  （ｓ，  １Ｈ）、８．３０  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ６８５  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４００】
（実施例２３）
Ｎ−（Ｎ−（４−（４−（（Ｓ）−４−（（Ｒ）−２−（３−アセトアミド−４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシエチルアミノ）ペンチル）ブチル）カルバミミドイル）−３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミドジ−Ｌ−ラクテート（１７５）の合成（スキーム１４）
【０４０１】
【化６６】
2009539882.tif 000079
【０４０２】
（Ｒ）−Ｎ−５−（２−アミノ−１−ヒドロキシエチル）−２−（ベンジルオキシ）フェニル）アセトアミド（１７１）
ＥｔＯＨおよびＥｔＯＡｃの混合溶媒（６ｍＬ、１／１）中化合物１７０（３００ｍｇ、０．９３ミリモル）およびパラジウム触媒（５０ｍｇ、炭素上１０％Ｐｄ、５０％含水）の懸濁液を５０ｐｓｉ水素圧下、室温で３．５時間水素化した。触媒をセライトを通してろ過し、ＥｔＯＨ（３×５ｍＬ）で洗浄した。合わせたろ液および洗浄液を濃縮し、高真空でさらに乾燥して淡黄色固体として所望の生成物１７１（１２４ｍｇ、５４％収率）を得て、これをさらに精製することなく直接に用いた：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  ２．１６  （ｓ，  ３Ｈ）、２．８１  （ｄ，  ２Ｈ）、４．５５  （ｍ，  １Ｈ）、６．８２  （ｍ，  １Ｈ）、６．９９  （ｍ，  １Ｈ）、７．６４  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ２１１  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４０３】
ベンジル４−（４−（４−（Ｒ）−２−（３−アセトアミド−４−ベンジルオキシ）フェニル）−２−ヒドロキシエチルアミノ）ペンチル）フェニル）ブチルカルバメート（１７２）
メタノール（無水、５ｍＬ）中化合物１７１（１２４ｍｇ、０．５９ミリモル）および４０（２１７ｍｇ、０．５９ミリモル）の溶液を室温で２．５時間撹拌した。次いで、この溶液にＮａＣＮＢＨ３（１００ｍｇ、１．５９ミリモル）を１回で添加し、この混合物を室温で一晩連続的に撹拌した。この時間後、混合物を濃縮し、残渣をクロマトグラフィー（勾配５：９５から１０：９０メタノール／ジクロロメタン）にかけて、淡黄色固体として所望の生成物１７２（１８３ｍｇ、５５％収率）を得た：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）  δ  １．２１  （ｍ，  ３Ｈ）、１．５０〜１．６５  （ｍ，  ８Ｈ）、２．１６  （ｓ，  ３Ｈ）、２．５４  （ｍ，  ４Ｈ）、２．７２〜３．１２  （ｍ，  ３Ｈ）、３．１８  （ｍ，  ２Ｈ）、３．５８  （ｍ，  １Ｈ）、４．７６  （ｍ，  １Ｈ）、４．８０  （ｂｒ，  ｓ，  １Ｈ）、５．０７  （ｍ，  ２Ｈ）、６．８８  （ｍ，  １Ｈ）、６．９４  （ｍ，  １Ｈ）、７．０４  （ｓ，  ４Ｈ）、７．３４  （ｂｒ  ｓ，  ５Ｈ）、８．４５  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ５６２  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４０４】
Ｎ−５−（（１Ｒ）−２−（５−（４−（４−アミノブチル）フェニル）ペンタン−２−イルアミノ）−１−ヒドロキシエチル）−２−ベンジルオキシフェニル）アセトアミド（１７３）
エタノール（５ｍＬ）中化合物１７２（１８０ｍｇ、０．３２ミリモル）およびパラジウム触媒（１００ｍｇ、炭素上１０％Ｐｄ、５０％含水）の混合物を室温および１水素圧下で一晩水素化した。触媒を真空ろ過し、エタノール（３×５ｍＬ）で洗浄した。ろ液および洗浄液を合わせて、濃縮し、無色ガラス固体として所望の生成物１７３（１１９ｍｇ、８７％収率）を得て、これをさらに精製することなく直接用いた：１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．１３  （ｍ，  ３Ｈ）、１．３５〜１．７６  （ｍ，  ８Ｈ）、２．１７  （ｓ，  ３Ｈ）、２．６０  （ｍ，  ４Ｈ）、２．８３  （ｍ，  ５Ｈ）、４．６５  （ｍ，  １Ｈ）、６．８３  （ｍ，  １Ｈ）、７．０３  （ｍ，  １Ｈ）、７．１０  （ｍ，  ４Ｈ）、７．７０  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ４２８  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４０５】
Ｎ−（Ｎ−（４−（４−（（Ｓ）−４−（（Ｒ）−２−（３−アセトアミド−４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシエチルアミノ）ペンチル）フェニル）ブチル）カルバミミドイル）−３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミド（１７４）
化合物１７３（１１５ｍｇ、０．２７ミリモル）、ヒューニッヒ塩基（０．０７ｍＬ、０．４０ミリモル）およびエタノール（３ｍＬ）の溶液を７５℃で３０分間加熱した。次いで、この溶液に１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボニル）−２−メチルイソチオユリアヒドロヨーダイド（１０５ｍｇ、０．２７ミリモル）を添加した。得られた溶液をその温度でさらに６時間連続的に撹拌し、その後室温に冷却した。溶媒をエバポレーションによって除去した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカ、勾配１から１５（メタノール中１０％濃水酸化アンモニウム）／ジクロロメタン）にかけて、黄色固体として１７４（５１ｍｇ、３０％収率）を得た：［α］Ｄ２５  −９．１°（ｃ０．２５、メタノール）；１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＣＤ３ＯＤ）  δ  １．０５  （ｍ，  ３Ｈ）、１．３２  （ｍ，  ２Ｈ）、１．５０〜１．８０  （ｍ，  ６Ｈ）、２．１７  （ｓ，  ３Ｈ）、２．５３  （ｍ，  ４Ｈ）、２．６６〜２．８６  （ｍ，  ３Ｈ）、３．２５  （ｍ，  ２Ｈ）、４．６６  （ｍ，  １Ｈ）、６．８３  （ｍ，  １Ｈ）、６．９８  （ｍ，  １Ｈ）、７．１０  （ｍ，  ４Ｈ）、７．７２  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ６４０  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４０６】
Ｎ−（Ｎ−（４−（４−（（Ｓ）−４−（（Ｒ）−２−（３−アセトアミド−４−ヒドロキシフェニル）−２−ヒドロキシエチルアミノ）ペンチル）フェニル）ブチル）カルバミミドイル）−３，５−ジアミノ−６−クロロピラジン−２−カルボキサミドジ−Ｌ−ラクテート（１７５）
黄色固体の化合物１７５（５４ｍｇ、定量収率）を１６８ａと同様の方法で１７４から調製した：ｍｐ４６〜５０℃（分解）；１Ｈ  ＮＭＲ  （５００ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １．０５  （ｍ，  ３Ｈ）、１．１７  （ｓ，  ６Ｈ）、１．３２  （ｍ，  ２Ｈ）、１．５０〜１．８０  （ｍ，  ６Ｈ）、２．０８  （ｓ，  ３Ｈ）、２．５３  （ｍ，  ４Ｈ）、２．６０〜２．８２  （ｍ，  ２Ｈ）、２．９４  （ｍ，  １Ｈ）、３．２０  （ｍ，  ２Ｈ）、３．４３  （ｍ，  ２Ｈ）、３．８７  （ｍ，  ２Ｈ）、４．６３  （ｍ，  １Ｈ）、６．６８  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、６．８１  （ｍ，  １Ｈ）、６．９２  （ｍ，  １Ｈ）、７．１０  （ｍ，  ４Ｈ）、７．２８  （ｂｒ  ｓ，  １Ｈ）、７．７１  （ｓ，  １Ｈ）、９．３４  （ｓ，  １Ｈ）；  ｍ／ｚ  （ＥＳＩ）  ６４０  ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０４０７】
方法
動物における薬剤の生理学的効果および作用機序
参照により本明細書に組み込まれるＳａｂａｔｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、１９９９年、８７（６）、２１９１〜２１９６頁に記載されたｉｎ  ｖｉｖｏモデルを用いて、粘液線毛クリアランス（ＭＣＣ）を高める化合物の効果は測定することができる。
【０４０８】
動物準備：７５Ｋｇまでの成体雌ヒツジを拘束して、特殊な身体装具を用いて真直ぐ立たせた。この動物の頭を固定し、鼻挿管（７．５ｍｍ−Ｉ．Ｄ．気管挿入管（ＥＴＴ）（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ、Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ））前に鼻腔内経路の局所麻酔を与えた（２％リドカイン）。ＥＴＴの切断部（ｃｕｆｆ）は、声帯直下に置いた。挿管後、動物を約２０分間平衡状態にさせ、その後ＭＣＣ測定を開始した。
【０４０９】
ヒツジＭＣＣ  ｉｎ  ｖｉｖｏ測定：空気力学的液滴メジアン径３．６μｍを生成するＲａｉｎｄｒｏｐ  Ｎｅｐｕｌｉｚｅｒ（Ｎｅｌｌｃｏｒ  Ｐｕｒｉｔａｎ  Ｂｅｎｎｅｔｔ、Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ、ＣＡ）によって、テクネチウム（９９ｍＴｃ−ＳＣ３．１ｍｇ／ｍＬ、約１０〜１５ｍＣｉ）で放射線標識した硫黄コロイドのエアロゾルを発生させた。ソレノイドバルブおよび圧縮空気（２０ｐｓｉ）源からなる線量計システムにこの噴霧器を接続した。噴霧器の発生物は、一端が呼吸装置（Ｈａｒｖａｒｄ  ａｐｐａｒａｔｕｓ、Ｓｏｕｔｈ  Ｎａｔｉｃｋ、ＭＡ）に接続されているＴピース中に誘導した。このシステムを呼吸装置の吸息周期の開始時に１秒間作動させた。１回換気量は３００ｍＬに設定し、吸息対呼気比１：１、および速度２０呼吸／分とし、主な気道の被着を最大化した。ヒツジは９９ｍＴｃ−ＳＣエアロゾルを最大５分間まで吸い込んだ。トレーサ被着に続けて、ガンマ線カメラを用いて気道からの９９ｍＴｃ−ＳＣのクリアランスを測定した。ヒツジを装具内で自然な直立位置においてその背中の上方にカメラを配置した。画像の視野はヒツジの脊髄に垂直であった。ヒツジ上に外部の放射線標識マーカーを置き、ガンマ線カメラの適切な位置合わせを容易にした。目的の部位をヒツジの右肺に対応する画像上でトレースし、カウントを記録した。カウントを放射性物質の崩壊について補正し、ベースライン画像に存在する放射能の割合として表した。肺の外形は胃の上方で重なり、カウントが飲み込まれた９９ｍＴｃ−ＳＣ−標識粘液によって影響を受ける可能性があったので左肺は分析から除外した。ガンマ線カメラにインターフェースで接続されたコンピュータ上に被着画像の全てを保存した。プロトコルには、放射線−エアロゾル投与直後に得たベースライン沈着画像が含まれた。ベースライン画像を取得後、２つの別個のプロトコルを用いて、自由呼吸するヒツジに対して４ｍＬの水（ビヒクル）、ホルモテロール（３ｍＭ）、または新規な化学物質（３ｍＭ）のいずれかを、Ｐａｒｉ  ＬＣ  ＪｅｔＰｌｕｓ噴霧器を使用してエアロゾル化した。プロトコル１、投与直後（時間０から１時間）にデータを取得し、即時の生理学的反応「短期間効果」を示し、プロトコル２、投与後４時間にデータを取得し、化合物耐久性および「長期間効果」を示した。噴霧器は流速８Ｌ／分であり、溶液を送る時間は１０〜１２分であった。化合物投与の終了時に、ヒツジは直ちに抜管して、ＥＴＴからの過剰９９ｍＴｃ−ＳＣ−ラベル標識粘液の吸引によるカウントの偽上昇を防止した。肺に保持された９９ｍＴｃ−ＳＣの経時的な測定を５分間隔で１時間の期間にわたって得た。少なくとも７日（９９ｍＴＣの半減期＝６時間）の洗い出し期間によって、異なる薬剤での研究を隔てた。
【０４１０】
統計分析：反復測定で二元配置分散分析法（ｔｗｏ−ｗａｙ  ｒｅｐｅａｔｅｄ  ＡＮＯＶＡ）を用いて、ｉｎ  ｖｉｖｏヒツジＭＣＣアッセイからのデータを分析し、続けて傾きを比較するためにＡＮＯＣＯＶＡを用いて保持率対時間プロットの線形回帰の傾き分析、および必要に応じて多重比較試験（Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ）を行った。保持された活性パーセント（４時間後）をプロトコル２からの傾き値をプロトコル１で得られた傾き値で割り、１００％を掛けることによって計算した。
【０４１１】
動物準備：成体ヒツジ（２５から３５ｋｇの重量範囲）を改造ショッピングカートに適合させた特殊な身体装具に直立位置で拘束した。動物の頭を固定し、鼻腔内経路の局所麻酔を２％リドカインで誘発した。次いで、７．５ｍｍ内径の気管挿入管（ＥＴＴ）を用いて鼻腔的に挿管した。ＥＴＴの切断部を声帯直下に置き、その位置を軟性気管支鏡で確認した。挿管後、動物を約２０分間平衡状態にさせ、その後に粘液線毛クリアランスの測定を開始した。
【０４１２】
放射線−エアロゾルの投与：空気力学的メジアン径３．６μｍを有する液滴を生成するＲａｉｎｄｒｏｐ  Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒを用いて、９９ｍＴｃ−ヒト血清アルブミンのエアロゾル（３．１ｍｇ／ｍｌ；約２０ｍＣｉを含む）を発生させた。噴霧器はソレノイドバルブおよび圧縮空気（２０ｐｓｉ）源からなる線量計システムに接続した。噴霧器の発生物はプラスチックＴコネクタ中に誘導し；その一端は気管挿入管に接続し、他端はピストン呼吸装置に接続した。このシステムを呼吸装置の吸息周期の開始時に１秒間作動させた。呼吸装置は、１回換気量は５００ｍＬに設定し、吸息対呼気比１：１、および速度２０呼吸／分とし、主な気道の被着を最大化した。ヒツジは５分間放射線標識エアロゾルを吸い込んだ。ガンマ線カメラを用いて９９ｍＴｃ−ヒト血清アルブミンの気道からのクリアランスを測定した。画像の視野が動物の脊髄に垂直になるように、カート内に支持されて自然の直立位置にあるヒツジに関してその動物の背中の上方にカメラを配置した。外部の放射線標識マーカーをヒツジ上に置き、ガンマ線カメラ下の適切な配置を確保した。画像は全て、ガンマ線カメラと一体化されたコンピュータ内に保存した。目的の部位をヒツジの右肺に対応する画像上でトレースし、カウントを記録した。カウントを放射性物質の崩壊について補正し、ベースライン画像に存在する放射能の割合として表した。肺の外形は胃の上方で重さなり、カウントは放射線標識粘液として飲み込まれ、胃に入る可能性があるので左肺は分析から除外した。
【０４１３】
処置プロトコル（時間−ゼロでの活性の評価）：放射線−エアロゾル投与直後に、ベースライン被着画像を得た。時間ゼロで、ベースライン画像を取得後、ビヒクル対照（蒸留水）、正の対照（アミロライド）、または実験化合物を、Ｐａｒｉ  ＬＣ  ＪｅｔＰｌｕｓ噴霧器を用いて４ｍＬ容量から自由呼吸する動物に対してエアロゾル化した。噴霧器は、１分当たり８リットルの流量で圧縮空気によって駆動させた。溶液を送る時間は１０から１２分であった。ＥＴＴからの過剰な放射線−トレーサの吸引によって引き起こされるカウントの不正上昇を防止するために、総容量の送達直後に動物は抜管した。投与後最初の２時間の間に１５分間隔で、および総観察期間８時間投与後の次の６時間に１時間毎に、肺の連続画像を得た。少なくとも７日の洗浄期間によって、異なる実験薬剤を用いた投与期間を隔てた。
【０４１４】
処置プロトコル（時間−４時間での活性の評価）：標準プロトコルの以下の変更を用いて、ビヒクル対照（蒸留水）、正の対照化合物（アミロライドまたはベンザミル）、または調査薬剤への単回暴露の後に反応の持続性を評価した。時間ゼロで、ビヒクル対照（蒸留水）、正の対照（アミロライド）、または調査化合物を、Ｐａｒｉ  ＬＣ  ＪｅｔＰｌｕｓ噴霧器を用いて４ｍＬ容量から自由呼吸する動物に対してエアロゾル化した。噴霧器は、１分当たり８リットルの流量で圧縮空気によって駆動させた。溶液を送る時間は１０から１２分であった。動物を特殊な身体装具に直立位置で４時間拘束した。４時間の期間の終わりに、動物はＲａｉｎｄｒｏｐ  Ｎｅｂｕｌｉｚｅｒからエアロゾル化された９９ｍＴｃ−ヒト血清アルブミンの単回用量（３．１ｍｇ／ｍｌ；約２０ｍＣｉを含む）を受けた。放射−トレーサの総容量の送達直後に動物は抜管した。放射線−エアロゾル投与直後にベースライン被着画像を得た。放射線−トレーサの投与後最初の２時間（薬剤投与後４乃至６時間を表す）の間に１５分間隔で、および総観察期間４時間投与後に次の２時間に１時間毎に、肺の連続画像を得た。少なくとも７日の洗い出し期間によって、異なる実験薬剤を用いた投与期間を隔てた。
【０４１５】
統計：ＳＹＳＴＡＴ  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）、バーション５を用いてデータを分析した。（全般的効果を評価するために）二元配置分散分析法（ｔｗｏ−ｗａｙ  ｒｅｐｅａｔｅｄ  ＡＮＯＶＡ）を用いてデータを分析し、その後、特定のペア間の相違を確認するためにペアードｔ−検定（ｐａｉｒｅｄ  ｔ−ｔｅｓｔ）を行った。Ｐが０．０５未満またはそれに等しい場合、有意とした。急速クリアランス段階の間の初期速度における相違を評価するために、線形最小二乗回帰を用いて平均ＭＣＣ曲線についての傾き値（時間ゼロ評価に投与後最初の４５分の間に収集されたデータから計算）を計算した。
【０４１６】
本発明の多くの変更および変形が上記教示に鑑みて可能であることが明らかである。したがって、添付の請求項の範囲内で、本発明は本明細書において具体的に記載されたのとは別に実施され得ることが理解されるべきである。
【図４】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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