(57)【要約】  本発明は、加工された多価及び多重特異的結合タンパク質、製造の方法並びに特に、急性及び慢性炎症性疾患及び他の疾患の予防及び／又は治療におけるそれらの使用に関する。
2009504191.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であり、前記ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の可変ドメインであり、Ｃは定常ドメインであり、Ｘ１はアミノ酸又はポリペプチドを表し、Ｘ２はＦｃ領域を表し、及びｎは０又は１である。）を含む、前記結合タンパク質。
【請求項２】
前記ＶＤ１及びＶＤ２が重鎖可変ドメインである、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項３】
前記重鎖可変ドメインが、マウス重鎖可変ドメイン、ヒト重鎖可変ドメイン、ＣＤＲ移植された重鎖可変ドメイン及びヒト化重鎖可変ドメインからなる群から選択される、請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項４】
ＶＤ１及びＶＤ２が同一の抗原に結合することが可能である、請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項５】
ＶＤ１及びＶＤ２が異なる抗原に結合することが可能である、請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項６】
Ｃが重鎖定常ドメインである、請求項２に記載の結合タンパク質。
【請求項７】
Ｘ１がリンカーである（但し、Ｘ１はＣＨ１ではない。）、請求項６に記載の結合タンパク質。
【請求項８】
リンカーがＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＳＡＫＴＴＰ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＲＡＤＡＡＰ；ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ；ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ；ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４；ＳＡＫＴＴＰ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＡＤＡＡＰ；ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ；ＴＶＡＡＰ；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ；ＱＰＫＡＡＰ；ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ；ＡＫＴＴＰＰ；ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ；ＡＫＴＴＡＰ；ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ；ＡＳＴＫＧＰ；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ；ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ；ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ；及びＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳからなる群から選択される、請求項７に記載の結合タンパク質。  
【請求項９】
Ｘ２がＦｃ領域である、請求項７に記載の結合タンパク質。
【請求項１０】
前記Ｆｃ領域がバリアントＦｃ領域である、請求項９に記載の結合タンパク質。
【請求項１１】
ポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であり、前記ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり（但し、ＣＨ１ではない。）、及びＸ２はＦｃ領域である。）を含む、前記結合タンパク質。
【請求項１２】
前記ＶＤ１及びＶＤ２が軽鎖可変ドメインである、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項１３】
前記軽鎖可変ドメインが、マウス軽鎖可変ドメイン、ヒト軽鎖可変ドメイン、ＣＤＲ移植された軽鎖可変ドメイン及びヒト化軽鎖可変ドメインからなる群から選択される、請求項１２に記載の結合タンパク質。
【請求項１４】
ＶＤ１及びＶＤ２が同一の抗原に結合することが可能である、請求項１２に記載の結合タンパク質。
【請求項１５】
ＶＤ１及びＶＤ２が異なる抗原に結合することが可能である、請求項１２に記載の結合タンパク質。
【請求項１６】
Ｃが軽鎖定常ドメインである、請求項１２に記載の結合タンパク質。
【請求項１７】
Ｘ１がリンカーである（但し、Ｘ１はＣＬ１ではない。）、請求項１６に記載の結合タンパク質。
【請求項１８】
リンカーがＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＳＡＫＴＴＰ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＲＡＤＡＡＰ；ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ；ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ；ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４；ＳＡＫＴＴＰ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＡＤＡＡＰ；ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ；ＴＶＡＡＰ；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ；ＱＰＫＡＡＰ；ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ；ＡＫＴＴＰＰ；ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ；ＡＫＴＴＡＰ；ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ；ＡＳＴＫＧＰ；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ；ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ；ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ；及びＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳからなる群から選択される、請求項１７に記載の結合タンパク質。
【請求項１９】
結合タンパク質がＸ２を含まない、請求項１７に記載の結合タンパク質。
【請求項２０】
ポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であり、前記ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり（但し、ＣＨ１ではない。）、及びＸ２はＦｃ領域を含まない。）を含む、前記結合タンパク質。
【請求項２１】
第一及び第二のポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であり、前記第一のポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり（但し、Ｘ１は、ＣＨ１ではない。）、及びＸ２はＦｃ領域である。）を含み；並びに前記第二のポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり（但し、Ｘ１は、ＣＨ１ではない。）、及びＸ２はＦｃ領域を含まない。）を含む、前記結合タンパク質。
【請求項２２】
４つのポリペプチド鎖を含む結合タンパク質であり、２つのポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり（但し、Ｘ１は、ＣＨ１ではない。）、及びＸ２はＦｃ領域である。）を含み；並びに２つのポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり（但し、Ｘ１は、ＣＨ１ではない。）、及びＸ２はＦｃ領域を含まない。）を含む、前記結合タンパク質。
【請求項２３】
前記結合タンパク質が１つ又はそれ以上の標的に結合することが可能である、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項２４】
該標的が、ＡＢＣＦ１；ＡＣＶＲ１；ＡＣＶＲ１Ｂ；ＡＣＶＲ２；ＡＣＶＲ２Ｂ；ＡＣＶＲＬ１；ＡＤＯＲＡ２Ａ；アグレカン；ＡＧＲ２；ＡＩＣＤＡ；ＡＩＦ１；ＡＩＧ１；ＡＫＡＰ１；ＡＫＡＰ２；ＡＭＨ；ＡＭＨＲ２；ＡＮＧＰＴ１；ＡＮＧＰＴ２；ＡＮＧＰＴＬ３；ＡＮＧＰＴＬ４；ＡＮＰＥＰ；ＡＰＣ；ＡＰＯＣ１；ＡＲ；ＡＺＧＰ１（亜鉛−ａ−糖タンパク質）；Ｂ７．１；Ｂ７．２；ＢＡＤ；ＢＡＦＦ；ＢＡＧ１；ＢＡＩ１；ＢＣＬ２；ＢＣＬ６；ＢＤＮＦ；ＢＬＮＫ；ＢＬＲ１（ＭＤＲ１５）；ＢｌｙＳ；ＢＭＰ１；ＢＭＰ２；ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）；ＢＭＰ４；ＢＭＰ６；ＢＭＰ８；ＢＭＰＲ１Ａ；ＢＭＰＲ１Ｂ；ＢＭＰＲ２；ＢＰＡＧ１（プレクチン）；ＢＲＣＡ１；Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）；Ｃ３；Ｃ４Ａ；Ｃ５；Ｃ５Ｒ１；ＣＡＮＴ１；ＣＡＳＰ１；ＣＡＳＰ４；ＣＡＶ１；ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）；ＣＣＬ１（Ｉ−３０９）；ＣＣＬ１１（エオタキシン）；ＣＣＬ１３（ＭＣＰ−４）；ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−１ｄ）；ＣＣＬ１６（ＨＣＣ−４）；ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）；ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）；ＣＣＬ１９（ＭＩＰ−３ｂ）；ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）；ＭＣＡＦ；ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａ）；ＣＣＬ２１（ＭＩＰ−２）；ＳＬＣ；エクソダス−２；ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ−１）；ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ−１）；ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２）；ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）；ＣＣＬ２６（エオタキシン−３）；ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）；ＣＣＬ２８；ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１ａ）；ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂ）；ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）；ＣＣＬ７（ＭＣＰ−３）；ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２）；ＣＣＮＡ１；ＣＣＮＡ２；ＣＣＮＤ１；ＣＣＮＥ１；ＣＣＮＥ２；ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４５）；ＣＣＲ２（ｍｃｐ−１ＲＢ／ＲＡ）；ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）；ＣＣＲ４；ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）；ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ−Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）；ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩ１）；ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲ１／ＣＫＲ−Ｌ１）；ＣＣＲ９（ＧＰＲ−９−６）；ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）；ＣＣＲＬ２（Ｌ−ＣＣＲ）；ＣＤ１６４；ＣＤ１９；ＣＤ１Ｃ；ＣＤ２０；ＣＤ２００；ＣＤ−２２；ＣＤ２４；ＣＤ２８；ＣＤ３；ＣＤ３７；ＣＤ３８；ＣＤ３Ｅ；ＣＤ３Ｇ；ＣＤ３Ｚ；ＣＤ４；ＣＤ４０；ＣＤ４０Ｌ；ＣＤ４４；ＣＤ４５ＲＢ；ＣＤ５２；ＣＤ６９；ＣＤ７２；ＣＤ７４；ＣＤ７９Ａ；ＣＤ７９Ｂ；ＣＤ８；ＣＤ８０；ＣＤ８１；ＣＤ８３；ＣＤ８６；ＣＤＨ１（Ｅ−カドヘリン）；ＣＤＨ１０；ＣＤＨ１２；ＣＤＨ１３；ＣＤＨ１８；ＣＤＨ１９；ＣＤＨ２０；ＣＤＨ５；ＣＤＨ７；ＣＤＨ８；ＣＤＨ９；ＣＤＫ２；ＣＤＫ３；ＣＤＫ４；ＣＤＫ５；ＣＤＫ６；ＣＤＫ７；ＣＤＫ９；ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）；ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）；ＣＤＫＮ１Ｃ；ＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６ＩＮＫ４ａ）；ＣＤＫＮ２Ｂ；ＣＤＫＮ２Ｃ；ＣＤＫＮ３；ＣＥＢＰＢ；ＣＥＲ１；ＣＨＧＡ；ＣＨＧＢ；キチナーゼ；ＣＨＳＴ１０；ＣＫＬＦＳＦ２；ＣＫＬＦＳＦ３；ＣＫＬＦＳＦ４；ＣＫＬＦＳＦ５；ＣＫＬＦＳＦ６；ＣＫＬＦＳＦ７；ＣＫＬＦＳＦ８；ＣＬＤＮ３；ＣＬＤＮ７（クラウジン−７）；ＣＬＮ３；ＣＬＵ（クラステリン）；ＣＭＫＬＲ１；ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）；ＣＮＲ１；ＣＯＬ１８Ａ１；ＣＯＬ１Ａ１；ＣＯＬ４Ａ３；ＣＯＬ６Ａ１；ＣＲ２；ＣＲＰ；ＣＳＦ１（Ｍ−ＣＳＦ）；ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）；ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）；ＣＴＬＡ４；ＣＴＮＮＢ１（ｂ−カドヘリン）；ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）；ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１）；ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）；ＣＸＣＬ１（ＧＲＯ１）；ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）；ＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ／ＩＰ−９）；ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）；ＣＸＣＬ１３；ＣＸＣＬ１４；ＣＸＣＬ１６；ＣＸＣＬ２（ＧＲＯ２）；ＣＸＣＬ３（ＧＲＯ３）；ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ−７８／ＬＩＸ）；ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）；ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）；ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ−Ｌ２）；ＣＸＣＲ４；ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）；ＣＹＢ５；ＣＹＣ１；ＣＹＳＬＴＲ１；ＤＡＢ２ＩＰ；ＤＥＳ；ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８；ＤＮＣＬ１；ＤＰＰ４；Ｅ２Ｆ１；ＥＣＧＦ１；ＥＤＧ１；ＥＦＮＡ１；ＥＦＮＡ３；ＥＦＮＢ２；ＥＧＦ；ＥＧＦＲ；ＥＬＡＣ２；ＥＮＧ；ＥＮＯ１；ＥＮＯ２；ＥＮＯ３；ＥＰＨＢ４；ＥＰＯ；ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ−２）；ＥＲＥＧ；ＥＲＫ８；ＥＳＲ１；ＥＳＲ２；Ｆ３（ＴＦ）；ＦＡＤＤ；ＦａｓＬ；ＦＡＳＮ；ＦＣＥＲ１Ａ；ＦＣＥＲ２；ＦＣＧＲ３Ａ；ＦＧＦ；ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）；ＦＧＦ１０；ＦＧＦ１１；ＦＧＦ１２；ＦＧＦ１２Ｂ；ＦＧＦ１３；ＦＧＦ１４；ＦＧＦ１６；ＦＧＦ１７；ＦＧＦ１８；ＦＧＦ１９；ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）；ＦＧＦ２０；ＦＧＦ２１；ＦＧＦ２２；ＦＧＦ２３；ＦＧＦ３（ｉｎｔ−２）；ＦＧＦ４（ＨＳＴ）；ＦＧＦ５；ＦＧＦ６（ＨＳＴ−２）；ＦＧＦ７（ＫＧＦ）；ＦＧＦ８；ＦＧＦ９；ＦＧＦＲ３；ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）；ＦＤＬ１（ＥＰＳＩＬＯＮ）；ＦＩＬ１（ＺＥＴＡ）；ＦＬＪ１２５８４；ＦＬＪ２５５３０；ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）；ＦＬＴ１；ＦＯＳ；ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ−１）；ＦＹ（ＤＡＲＣ）；ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）；ＧＡＧＥＢ１；ＧＡＧＥＣ１；ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ−６ＳＴ；ＧＡＴＡ３；ＧＤＦ５；ＧＦＩ１；ＧＧＴ１；ＧＭ−ＣＳＦ；ＧＮＡＳ１；ＧＮＲＨ１；ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）；ＧＰＲ３１；ＧＰＲ４４；ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）；ＧＲＣＣ１０（Ｃ１０）；ＧＲＰ；ＧＳＮ（ゲルソリン）；ＧＳＴＰ１；ＨＡＶＣＲ２；ＨＤＡＣ４；ＨＤＡＣ５；ＨＤＡＣ７Ａ；ＨＤＡＣ９；ＨＧＦ；ＨＩＦ１Ａ；ＨＥＰ１；ヒスタミン及びヒスタミン受容体；ＨＬＡ−Ａ；ＨＬＡ−ＤＲＡ；ＨＭ７４；ＨＭＯＸ１；ＨＵＭＣＹＴ２Ａ；ＩＣＥＢＥＲＧ；ＩＣＯＳＬ；ＩＤ２；ＩＦＮ−ａ；ＩＦＮＡ１；ＩＦＮＡ２；ＩＦＮＡ４；ＩＦＮＡ５；１ＦＮＡ６；ＩＦＮＡ７；ＩＦＮＢ１；ＩＦＮγ；ＩＦＮＷ１；ＩＧＢＰ１；ＩＧＦ１；ＩＧＦ１Ｒ；ＩＧＦ２；ＩＧＦＢＰ２；ＩＧＦＢＰ３；ＩＧＦＢＰ６；ＩＬ−１；ＩＬ１０；ＩＬ１０ＲＡ；ＩＬ１０ＲＢ；ＩＬ１１；ＩＬ１１ＲＡ；ＩＬ−１２；ＩＬ１２Ａ；ＩＬ１２Ｂ；ＩＬ１２ＲＢ１；ＩＬ１２ＲＢ２；ＩＬ１３；ＩＬ１３ＲＡ１；ＩＬ１３ＲＡ２；ＩＬ１４；ＩＬ１５；ＩＬ１５ＲＡ；ＩＬ１６；ＩＬ１７；ＩＬ１���Ｂ；ＩＬ１７Ｃ；ＩＬ１７Ｒ；ＩＬ１８；ＩＬ１８ＢＰ；ＩＬ１８Ｒ１；ＩＬ１８ＲＡＰ；ＩＬ１９；ＩＬ１Ａ；ＩＬ１Ｂ；ＩＬ１Ｆ１０；ＩＬ１Ｆ５；ＩＬ１Ｆ６；ＩＬ１Ｆ７；ＩＬ１Ｆ８；ＩＬ１Ｆ９；ＩＬ１ＨＹ１；ＩＬ１Ｒ１；ＩＬ１Ｒ２；ＩＬ１ＲＡＰ；ＩＬ１ＲＡＰＬ１；ＩＬ１ＲＡＰＬ２；ＩＬ１ＲＬ１；ＩＬ１ＲＬ２ＩＬ１ＲＮ；ＩＬ２；ＩＬ２０；ＩＬ２０ＲＡ；ＩＬ２１Ｒ；ＩＬ２２；ＩＬ２２Ｒ；ＩＬ２２ＲＡ２；ＩＬ２３；ＩＬ２４；ＩＬ２５；ＩＬ２６；ＩＬ２７；ＩＬ２８Ａ；ＩＬ２８Ｂ；ＩＬ２９；ＩＬ２ＲＡ；ＩＬ２ＲＢ；ＩＬ２ＲＧ；ＩＬ３；ＩＬ３０；ＩＬ３ＲＡ；ＩＬ４；ＩＬ４Ｒ；ＩＬ５；ＩＬ５ＲＡ；ＩＬ６；ＩＬ６Ｒ；ＩＬ６ＳＴ（糖タンパク質１３０）；ＩＬ７；ＩＬ７Ｒ；ＩＬ８；ＩＬ８ＲＡ；ＩＬ８ＲＢ；ＩＬ８ＲＢ；ＩＬ９；ＩＬ９Ｒ；ＩＬＫ；ＩＮＨＡ；ＩＮＨＢＡ；ＩＮＳＬ３；ＩＮＳＬ４；ＩＲＡＫ１；ＩＲＡＫ２；ＩＴＧＡ１；ＩＴＧＡ２；ＩＴＧＡ３；ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）；ＩＴＧＡＶ；ＨＧＢ３；ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）；ＪＡＧ１；ＪＡＫ１；ＪＡＫ３；ＪＵＮ；Ｋ６ＨＦ；ＫＡＩ１；ＫＤＲ；ＫＩＴＬＧ；ＫＬＦ５（ＧＣＢｏｘＢＰ）；ＫＬＦ６；ＫＬＫ１０；ＫＬＫ１２；ＫＬＫ１３；ＫＬＫ１４；ＫＬＫ１５；ＫＬＫ３；ＫＬＫ４；ＫＬＫ５；ＫＬＫ６；ＫＬＫ９；ＫＲＴ１；ＫＲＴ１９（ケラチン１９）；ＫＲＴ２Ａ；ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的ＩＩ型ケラチン）；ＬＡＭＡ５；ＬＥＰ（レプチン）；Ｌｉｎｇｏ−ｐ７５；Ｌｉｎｇｏ−Ｔｒｏｙ；ＬＰＳ；ＬＴＡ（ＴＮＦ−ｂ）；ＬＴＢ；ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）；ＬＴＢ４Ｒ２；ＬＴＢＲ；ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ；ＭＡＧ又はＯｍｇｐ；ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ−Ｊｕｎ）；ＭＤＫ；ＭＩＢ１；ミドカイン；ＭＩＦ；ＭＩＰ−２；ＭＫＩ６７（Ｋｉ−６７）；ＭＭＰ２；ＭＭＰ９；ＭＳ４Ａ１；ＭＳＭＢ；ＭＴ３（メタロチオネクチン−ＩＩＩ）；ＭＴＳＳ１；ＭＵＣ１（ムチン）；ＭＹＣ；ＭＹＤ８８；ＮＣＫ２；ニューロカン；ＮＦＫＢ１；ＮＦＫＢ２；ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）；ＮＧＦＲ；ＮｇＲ−Ｌｉｎｇｏ；ＮｇＲ−Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇｏ）；ＮｇＲ−ｐ７５；ＮｇＲ−Ｔｒｏｙ；ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）；ＮＯＸ５；ＮＰＰＢ；ＮＲＯＢ１；ＮＲ０Ｂ２；ＮＲ１Ｄ１；ＮＲ１Ｄ２；ＮＲ１Ｈ２；ＮＲ１Ｈ３；ＮＲ１Ｈ４；ＮＲ１Ｉ２；ＮＲ１Ｉ３；ＮＲ２Ｃ１；ＮＲ２Ｃ２；ＮＲ２Ｅ１；ＮＲ２Ｅ３；ＮＲ２Ｆ１；ＮＲ２Ｆ２；ＮＲ２Ｆ６；ＮＲ３Ｃ１；ＮＲ３Ｃ２；ＮＲ４Ａ１；ＮＲ４Ａ２；ＮＲ４Ａ３；ＮＲ５Ａ１；ＮＲ５Ａ２；ＮＲ６Ａ１；ＮＲＰ１；ＮＲＰ２；ＮＴ５Ｅ；ＮＴＮ４；ＯＤＺ１；ＯＰＲＤ１；Ｐ２ＲＸ７；ＰＡＰ；ＰＡＲＴ１；ＰＡＴＥ；ＰＡＷＲ；ＰＣＡ３；ＰＣＮＡ；ＰＤＧＦＡ；ＰＤＧＦＢ；ＰＥＣＡＭ１；ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）；ＰＧＦ；ＰＧＲ；フォスファカン；ＰＩＡＳ２；ＰＩＫ３ＣＧ；ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）；ＰＬＧ；ＰＬＸＤＣ１；ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）；ＰＰＩＤ；ＰＲ１；ＰＲＫＣＱ；ＰＲＫＤ１；ＰＲＬ；ＰＲＯＣ；ＰＲＯＫ２；ＰＳＡＰ；ＰＳＣＡ；ＰＴＡＦＲ；ＰＴＥＮ；ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ−２）；ＰＴＮ；ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）；ＲＡＲＢ；ＲＧＳ１；ＲＧＳ１３；ＲＧＳ３；ＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４���）；ＲＯＢＯ２；Ｓ１００Ａ２；ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）；ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）；ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）；ＳＣＹＥ１（内皮単球活性化サイトカイン）；ＳＤＦ２；ＳＥＲＰＩＮＡ１；ＳＥＲＰＩＮＡ３；ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）；ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ−１）；ＳＥＲＰＩＮＦ１；ＳＨＢＧ；ＳＬＡ２；ＳＬＣ２Ａ２；ＳＬＣ３３Ａ１；ＳＬＣ４３Ａ１；ＳＬＩＴ２；ＳＰＰ１；ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）；ＳＴ６ＧＡＬ１；ＳＴＡＢ１；ＳＴＡＴ６；ＳＴＥＡＰ；ＳＴＥＡＰ２；ＴＢ４Ｒ２；ＴＢＸ２１；ＴＣＰ１０；ＴＤＧＦ１；ＴＥＫ；ＴＧＦＡ；ＴＧＦＢ１；ＴＧＦＢ１Ｉ１；ＴＧＦＢ２；ＴＧＦＢ３；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢＲ１；ＴＧＦＢＲ２；ＴＧＦＢＲ３；ＴＨ１Ｌ；ＴＨＢＳ１（トロンボスポンディン−１）；ＴＨＢＳ２；ＴＨＢＳ４；ＴＨＰＯ；ＴＩＥ（Ｔｉｅ−１）；ＴＩＭＰ３；組織因子；ＴＬＲ１０；ＴＬＲ２；ＴＬＲ３；ＴＬＲ４；ＴＬＲ５；ＴＬＲ６；ＴＬＲ７；ＴＬＲ８；ＴＬＲ９；ＴＮＦ；ＴＮＦ−ａ；ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）；ＴＮＦＡＩＰ３；ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ；ＴＮＦＲＳＦ２１；ＴＮＦＲＳＦ５；ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）；ＴＮＦＲＳＦ７；ＴＮＦＲＳＦ８；ＴＮＦＲＳＦ９；ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）；ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）；ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰＯ３Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）；ＴＮＦＳＦ１３Ｂ；ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ−Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）；ＴＮＦＳＦ１８；ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）；ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）；ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）；ＴＮＦＳＦ９（４−１ＢＢリガンド）；ＴＯＬＬＩＰ；トール様受容体；ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＩｉａ）；ＴＰ５３；ＴＰＭ１；ＴＰＭ２；ＴＲＡＤＤ；ＴＲＡＦ１；ＴＲＡＦ２；ＴＲＡＦ３；ＴＲＡＦ４；ＴＲＡＦ５；ＴＲＡＦ６；ＴＲＥＭ１；ＴＲＥＭ２；ＴＲＰＣ６；ＴＳＬＰ；ＴＷＥＡＫ；ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＢ；ＶＥＧＦＣ；ベルシカン；ＶＨＬＣ５；ＶＬＡ−４；ＸＣＬ１（リンホタクチン）；ＸＣＬ２（ＳＣＭ−１ｂ）；ＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）；ＹＹ１及びＺＦＰＭ２からなる群から選択される、請求項２３に記載の結合タンパク質。
【請求項２５】
前記結合タンパク質が２つの標的に結合することができ、前記２つの標的がＣＤ１３８及びＣＤ２０；ＣＤ１３８及びＣＤ４０；ＣＤ２０及びＣＤ３；ＣＤ３８及びＣＤ１３８；ＣＤ３８及びＣＤ２０；ＣＤ３８及びＣＤ４０；ＣＤ４０及びＣＤ２０；ＣＤ１９及びＣＤ２０；ＣＤ−８及びＩＬ−６；ＰＤＬ−１及びＣＴＬＡ−４；ＣＴＬＡ−４及びＢＴＮＯ２；ＣＳＰＧｓ及びＲＧＭＡ；ＩＧＦ１及びＩＧＦ２；ＩＧＦ１／２及びＥｒｂ２Ｂ；ＩＬ−１２及びＩＬ−１８；ＩＬ−１２及びＴＷＥＡＫ；ＩＬ−１３及びＡＤＡＭ８；ＩＬ−１３及びＣＬ２５；ＩＬ−１３及びＩＬ−１β；ＩＬ−１３及びＩＬ−２５；ＩＬ−１３及びＩＬ−４；ＩＬ−１３及びＩＬ−５；ＩＬ−１３及びＩＬ−９；ＩＬ−１３及びＬＨＲアゴニスト；ＩＬ−１３及びＭＤＣ；ＩＬ−１３及びＭＩＦ；ＩＬ−１３及びＰＥＤ２；ＩＬ−１３及びＳＰＲＲ２ａ；１Ｌ−１３及びＳＰＲＲ２ｂ；ＩＬ−１３及びＴＡＲＣ；ＩＬ−１３及びＴＧＦ−β；ＩＬ−１α及びＩＬ−１β；ＭＡＧ及びＲＧＭＡ；ＮｇＲ及びＲＧＭＡ；ＮｏｇｏＡ及びＲＧＭＡ；ＯＭＧｐ及びＲＧＭＡ；ＲＧＭＡ及びＲＧＭＢ；Ｔｅ３８及びＴＮＦα；ＴＮＦα及びＩＬ−１２；ＴＮＦα及びＩＬ−１２ｐ４０；ＴＮＦα及びＩＬ−１３；ＴＮＦα及びＩＬ−１５；ＴＮＦα及びＩＬ−１７；ＴＮＦα及びＩＬ−１８；ＴＮＦα及びＩＬ−１β；ＴＮＦα及びＩＬ−２３；ＴＮＦα及びＭＩＦ；ＴＮＦα及びＰＥＧ２；ＴＮＦα及びＰＧＥ４；ＴＮＦα及びＶＥＧＦ；並びにＶＥＧＦＲ及びＥＧＦＲ；ＴＮＦα及びＲＡＮＫリガンド；ＴＮＦα及びＢｌｙｓ；ＴＮＦα及びＧＰ１３０；ＴＮＦα及びＣＤ−２２；並びにＴＮＦα及びＣＴＬＡ−４からなる群から選択される、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項２６】
結合タンパク質が１つ又はそれ以上の標的の生物学的機能を調節することが可能である、請求項２３に記載の結合タンパク質。
【請求項２７】
結合タンパク質が１つ又はそれ以上の標的を中和することが可能である、請求項２３に記載の結合タンパク質。
【請求項２８】
標的が、サイトカイン、ケモカイン、細胞表面タンパク質、酵素及び受容体からなる群から選択される、請求項２３から２５の何れか１項に記載の結合タンパク質。
【請求項２９】
該サイトカインが、リンホカイン、モノカイン及びポリペプチドホルモンからなる群から選択される、請求項２８に記載の結合タンパク質。
【請求項３０】
前記サイトカインがＩＬ−１α又はＩＬ−１βである、請求項２９に記載の結合タンパク質。
【請求項３１】
結合タンパク質が、配列番号３３、配列番号３７、配列番号４１、配列番号４５、配列番号４７、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７及び配列番号５９からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列；並びに、配列番号３５、配列番号３９、配列番号４３、配列番号４６、配列番号４９、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８及び配列番号６０からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項３０に記載の結合タンパク質。
【請求項３２】
前記サイトカインがＴＮＦ−α及びＩＬ−１３である、請求項２９に記載の結合タンパク質。
【請求項３３】
前記サイトカインがＩＬ−１２及びＩＬ−１８である、請求項２９に記載の結合タンパク質。
【請求項３４】
結合タンパク質が、配列番号８３、配列番号９０、配列番号９３、配列番号９５及び配列番号１１４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列；並びに配列番号８６、配列番号９１、配列番号９４、配列番号４６、配列番号９６及び配列番号１１６からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の結合タンパク質。
【請求項３５】
ケモカインが、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５及びＣＸＣＬ−１３からなる群から選択される、請求項２８に記載の結合タンパク質。
【請求項３６】
細胞表面タンパク質がインテグリンである、請求項２８に記載の結合タンパク質。
【請求項３７】
細胞表面タンパク質がＣＤ−２０及びＣＤ３である、請求項２８に記載の結合タンパク質。
【請求項３８】
結合タンパク質が、配列番号９７であるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０１のＤＶＤ軽鎖を含む、請求項３７に記載の結合タンパク質。
【請求項３９】
酵素が、キナーゼ及びプロテアーゼからなる群から選択される、請求項２８に記載の結合タンパク質。
【請求項４０】
受容体が、リンホカイン受容体、モノカイン受容体及びポリペプチドホルモン受容体からなる群から選択される、請求項２８に記載の結合タンパク質。
【請求項４１】
前記結合タンパク質が、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、少なくとも約１０２Ｍ−１Ｓ−１；少なくとも約１０３Ｍ−１Ｓ−１；少なくとも約１０４Ｍ−１Ｓ−１；少なくとも約１０５Ｍ−１Ｓ−１；及び少なくとも約１０６Ｍ−１Ｓ−１からなる群から選択される、前記１つ又はそれ以上の標的への結合速度定数（Ｋｏｎ）を有する、請求項２８に記載の結合タンパク質。
【請求項４２】
前記結合タンパク質が、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、最大約１０−３ｓ−１；最大約１０−４ｓ−１；最大約１０−５ｓ−１；及び最大約１０−６ｓ−１からなる群から選択される、前記１つ又はそれ以上の標的への解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する、請求項２８に記載の結合タンパク質。
【請求項４３】
前記結合タンパク質が、最大約１０−７Ｍ；最大約１０−８Ｍ；最大約１０−９Ｍ；最大約１０−１０Ｍ；最大約１０−１１Ｍ；最大約１０−１２Ｍ及び最大１０−１３Ｍからなる群から選択される、前記１つ又はそれ以上の標的への解離定数（ＫＤ）を有する、請求項２８に記載の結合タンパク質。
【請求項４４】
請求項１から４３の何れか１項に記載された結合タンパク質を含み、免疫接着分子、造影剤、治療剤及び細胞毒性剤からなる群から選択される因子をさらに含む、結合タンパク質連結体。
【請求項４５】
前記因子が、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識及びビオチンからなる群から選択される造影剤である、請求項４４に記載の結合タンパク質連結体。
【請求項４６】
前記造影剤が、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ及び１５３Ｓｍからなる群から選択される放射性標識である、請求項４５に記載の結合タンパク質連結体。
【請求項４７】
前記因子が、代謝抑制剤、アルキル化剤、抗生物質、増殖因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、トキシン及びアポトーシス剤からなる群から選択される治療剤又は細胞毒性剤である、請求項４５に記載の結合タンパク質連結体。
【請求項４８】
前記結合タンパク質が結晶化された結合タンパク質である、請求項１に記載の結合タンパク質。
【請求項４９】
前記結晶が担体を含まない医薬徐放結晶である、請求項４８に記載の結晶化された結合タンパク質。
【請求項５０】
前記結合タンパク質が、インビボにおいて、前記結合タンパク質の可溶性対応物より長い半減期を有する、請求項４８に記載の結晶化された結合タンパク質。
【請求項５１】
前記結合タンパク質が生物学的活性を保持している、請求項４８に記載の結晶化された結合タンパク質。
【請求項５２】
請求項１から２２の何れか１項に記載の結合タンパク質アミノ酸配列をコードする単離された核酸。
【請求項５３】
請求項５２に記載の単離された核酸を含むベクター。
【請求項５４】
前記ベクターが、ｐｃＤＮＡ、ｐＴＴ、ｐＴＴ３、ｐＥＦＢＯＳ、ｐＢＶ、ｐＪＶ、ｐｃＤＮＡ３．１ＴＯＰＯ、ｐＥＦ６ＴＯＰＯ及びｐＢＪからなる群から選択される、請求項５３に記載のベクター。
【請求項５５】
請求項５３に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項５６】
前記宿主細胞が原核細胞である、請求項５５に記載の宿主細胞。
【請求項５７】
前記宿主細胞がＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）である、請求項５６に記載の宿主細胞。
【請求項５８】
前記宿主細胞が真核細胞である、請求項５５に記載の宿主細胞。  
【請求項５９】
前記真核細胞が、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞及び真菌細胞からなる群から選択される、請求項５８に記載の宿主細胞。
【請求項６０】
前記真核細胞が、哺乳動物細胞、鳥類細胞及び昆虫細胞からなる群から選択される動物細胞である、請求項５８に記載の宿主細胞。
【請求項６１】
前記宿主細胞がＣＨＯ細胞である、請求項５８に記載の宿主細胞。
【請求項６２】
前記宿主細胞がＣＯＳである、請求項５８に記載の宿主細胞。
【請求項６３】
前記宿主細胞が酵母細胞である、請求項５８に記載の宿主細胞。
【請求項６４】
前記酵母細胞がサッカロミセス・セレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）である、請求項６３に記載の宿主細胞。
【請求項６５】
前記宿主細胞が昆虫Ｓｆ９細胞である、請求項５８に記載の宿主細胞。
【請求項６６】
結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で、請求項５５から６５の何れか１項に記載の宿主細胞を培地中において培養することを含む、結合タンパク質を生産する方法。
【請求項６７】
生産された結合タンパク質の５０％から７５％が、二重特異的四価結合タンパク質である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
生産された結合タンパク質の７５％から９０％が、二重特異的四価結合タンパク質である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
生産された結合タンパク質の９０％から９５％が、二重特異的四価結合タンパク質である、請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
請求項６６に記載の方法に従って生産されたタンパク質。
【請求項７１】
請求項１から５１及び７０の何れか１項に記載の結合タンパク質及び医薬として許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項７２】
少なくとも１つの追加の治療剤をさらに含む、請求項７１に記載の医薬組成物。
【請求項７３】
前記追加の薬剤が、治療剤、造影剤、細胞毒性剤、血管新生阻害剤；キナーゼ阻害剤；共刺激分子遮断剤；接着分子遮断剤；抗サイトカイン抗体又はその機能的断片；メトトレキサート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能な標識又はレポーター；ＴＮＦアンタゴニスト；抗リウマチ薬；筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔、鎮静剤、局所麻酔、神経筋肉遮断剤、抗微生物剤、抗乾癬剤、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫化、イムノグロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性医薬、抗うつ剤、抗精神病薬、刺激物質、喘息薬、βアゴニスト、吸入用ステロイド、エピネフリン又は類縁体、サイトカイン及びサイトカインアンタゴニストからなる群から選択される、請求項７２に記載の医薬組成物。
【請求項７４】
治療が達成されるように、請求項１から５１及び７０の何れか１項に記載の結合タンパク質を対象に投与することによって、対象の疾病又は疾患を治療する方法。
【請求項７５】
前記疾患が、関節リウマチ、骨関節炎、若年性慢性関節炎、化膿性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性又は慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーライン紫斑症、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生性疾患、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、孤発性の、多内分泌腺機能低下症候群Ｉ型及び多内分泌腺機能低下症候群ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清反応陰性関節炎、関節炎、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸性関節炎、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニア及びサルモネラ関連関節炎、脊椎関節症、アテローム性疾患／アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型原発性低γグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、繊維性肺疾患、突発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｃ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌｕｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ヘモシデローシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、繊維症、放射性繊維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性又はルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インシュリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状紅斑性狼瘡、男性不妊症特発性又はＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（全てのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織疾患に続発する肺高血圧症、グッドパ���チャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｙｘｏｅｄｅｍａ）、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギー及び喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害（例えば、うつ病及び統合失調症）、Ｔｈ２型及びＴｈ１型によって媒介される疾病、急性及び慢性疼痛（疼痛の様々な形態）、並びに、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌及び腎臓癌及び造血性悪性病変（白血病及びリンパ腫）などの癌、無βリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性及び慢性寄生性又は感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性又は慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房（ａｅｒｉａｌ）異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α−１−アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応（ａｎｔｉ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，）、大動脈（ａｏｒｄｉｃ）及び動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、心房細動（持続的又は発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群（ｃａｒｄｉａｃ  ｓｔｕｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序な又は多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性繊維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、中枢神経ドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発された薬物誘発性運動疾患、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路及び小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症（ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｅｍａｔｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ）、致死的胸腺移植組織拒絶、フリードライヒ失調症、機能的末梢動脈疾���、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、糸球体腎炎、何れかの臓器又は組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、肝炎（Ａ型）、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺繊維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪血症（ｌｉｐｅｄｅｍａ）、肝臓移植拒絶、リンパ浮腫（ｌｙｍｐｈｅｄｅｒｍａ）、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｅｍｉａ）、代謝性／特発性、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｕｌｔｉ−ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性（メンセル・デジェリーヌ−トーマス  シャイ−ドレーガー及びマシャド−ジョセフ）、重症筋無力症、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、マイコバクテリウム・チュバキュロシス、骨髄形成異常、心筋梗塞、真菌虚血疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性Ｉ筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈及びその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、ｏｋｔ３療法、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症及び皮膚変化症候群（ｓｋｉｎ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、灌流後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ポンプ後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｕｍｐ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象及び病、レイノー病、レフサム病、規則的なＱＲＳ幅の狭い頻脈症（ｒｅｇｕｌａｒ  ｎａｒｒｏｗ  ＱＲＳ  ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、固有不整脈（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｒｒｙｔｈｍｉａｓ）、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、湿疹、心血管系の梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞又はＦＡＢＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏症反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんましん、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルス及び真菌感染、ウイルス性脳炎（ｖｉｔａｌ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、何れかの臓器又は組織の異種移植拒絶を含む群から選択される、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
対象への前記投与が、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心臓周囲内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、結腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口内、舌下、鼻内及び経皮から選択される少なくとも１つの様式による、請求項７４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、多価及び多重特異的な結合タンパク質、それらの製造方法に関し、特に、急性及び慢性炎症、癌並びにその他の疾病の予防及び／又は治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
２つ又はそれ以上の抗原に結合することが可能な多重特異的抗体などの加工されたタンパク質が、本分野において公知である。このような多重特異的結合タンパク質は、細胞融合、化学的連結又は組み換えＤＮＡ技術を用いて作製することが可能である。
【０００３】
二特異的抗体は、二特異的抗体の所望される特異性を有するマウスモノクローナル抗体を発現する２つの異なるハイブリドーマ細胞株の体細胞融合に基づき、クアドローマ技術（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．  ａｎｄ  Ａ．Ｃ．  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，１９８３．３０５（５９３４）：ｐ．５３７−４０参照）を用いて作製されてきた。得られたハイブリッド−ハイブリドーマ（又はクアドローマ）細胞株内で２つの異なるＩｇ重鎖と軽鎖がランダムに対合するために、最大１０個の異なる免疫グロブリン種が生成され、そのうち１つだけが機能的な二特異的抗体である。誤対合された副産物の存在及び大幅に減少した産生率は、複雑な精製操作が必要とされることを意味している。
【０００４】
二特異的抗体は、２つの異なるｍＡｂの化学的連結によって生産することが可能である（Ｓｔａｅｒｚ，Ｕ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８５．  ３１４（６０１２）：ｐ．６２８−３１参照）。このアプローチは、均一な調製を与えない。他のアプローチは、２つの異なるモノクローナル抗体又はより小さな抗体断片の化学的連結を使用してきた（Ｂｒｅｎｎａｎ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５．２２９（４７０８）：ｐ．８１−３参照）。別の方法は、２つの親抗体をヘテロ二重機能的クロスリンカーと対結合させることであるが、クロスリンカーの親抗体との反応が部位指定的でないので、得られた二特異的抗体の調製物には著しい分子不均一性があるという問題がある。二特異的抗体のより均一な調製物を得るために、２つの異なるＦａｂ断片が、部位指定された様式で、それらのヒンジシステイン残基において化学的に架橋されてきた（Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９８７．  １３９（７）：ｐ．２３６７−７５参照）。しかし、この方法は、Ｆａｂ’２断片をもたらし、完全なＩｇＧ分子をもたらさない。
【０００５】
多岐にわたる他の組み換え二特異的抗体フォーマットが、最近、開発されている（Ｋｒｉａｎｇｋｕｍ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｍｏｌ  Ｅｎｇ，２００１．  １８（２）：ｐ．３１−４０参照）。それらのうち、直列型一本鎖Ｆｖ分子及びダイアボディ並びにこれらの様々な誘導体が、組み換え二特異的抗体の構築のために、最も広く使用されているフォーマットである。一般に、これらの分子の構築は、異なる抗原を認識する２つの一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片から始まる（Ｅｃｏｎｏｍｉｄｅｓ，Ａ．Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ，２００３．  ９（１）：ｐ．４７−５２参照）。直列型ｓｃＦｖ分子（ｔａＦｖ）は、２つのｓｃＦｖ分子を付加的ペプチドリンカーと単に接続する単純なフォーマットである。これらの直列型ｓｃＦｖ分子中に存在する２つのｓｃＦｖ断片は、別個の折り畳み実体を形成する。２つのｓｃＦｖ断片及び最大６３個の残基の長さを有するリンカーを接続するために、様々なリンカーを使用することが可能である（Ｎａｋａｎｉｓｈｉ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００１．  １９：ｐ．４２３−７４参照）。親ｓｃＦｖ断片は、通常、細菌内で、可溶性形態で発現されることができるが、直列型ｓｃＦｖ分子は、細菌中で不溶性凝集物を形成することがしばしば観察される。従って、可溶性直列型ｓｃＦｖ分子を作製するために、一般に、再折り畳みプロトコール又は哺乳動物発現系の使用が適用される。最近の研究において、トランスジェニックウサギ及びウシによる、ＣＤ２８及び抗悪性黒色腫関連プロテオグリカンに対して誘導された直列型ｓｃＦｖのインビボ発現が報告された（Ｇｒａｃｉｅ，Ｉ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ，１９９９．１０４（１０）：ｐ．１３９３−４０１参照）。この構築物では、２つのｓｃＦｖ分子は、ＣＨ１リンカーによって接続され、二特異的抗体の最大１００ｍｇ／Ｌの血清濃度が見出された。細菌中での可溶性発現を可能とするために、ドメイン順序の変動、又は変動する長さ若しくは柔軟性を有する中央リンカーを使用することを含む様々な戦略が使用された。現在、幾つかの研究が、極めて短いＡｌａ３リンカー又はグリシン／セリンが豊富な長いリンカーを用いた、細菌中での可溶性直列型ｓｃＦｖ分子の発現が報告されている（Ｌｅｕｎｇ，Ｂ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０００．１６４（１２）：ｐ．６４９５−５０２；Ｉｔｏ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００３．１７０（９）：ｐ．４８０２−９；Ｋａｒｎｉ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ，２００２．１２５（１−２）：ｐ．１３４−４０参照）。最近の研究では、細菌中で、可溶性及び活性形態で産生された分子を濃縮するために、３又は６個の残基の長さを有する無作為化された中央リンカーを含有する直列型ｓｃＦｖレパートリーのファージディスプレイが使用された。このアプローチは、６アミノ酸残基のリンカーを有する好ましい直列型ｓｃＦｖ分子の単離をもたらした（Ａｒｎｄｔ，Ｍ．  ａｎｄ  Ｊ．  Ｋｒａｕｓｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ＭｏＩ  Ｂｉｏｌ，２００３．  ２０７：ｐ．３０５−２１参照）。このリンカー配列が、直列型ｓｃＦｖ分子の可���性発現に対する一般的な解決策であるかどうかは不明である。それにも関わらず、この研究は、部位指定突然変異導入と組み合わせた直列型ｓｃＦｖ分子のファージディスプレイが、これらの分子（これらの分子は、細菌内で、活性形態で発現され得る。）を濃縮するための強力なツールであることを示した。
【０００６】
二特異的ダイアボディ（ｄｂ）は、発現のためにダイアボディフォーマットを使用する。ダイアボディは、ＶＨ及びＶＬドメインを接続するリンカーの長さを、約５残基まで減少させることによってｓｃＦｖ断片から作製される（Ｐｅｉｐｐ，Ｍ．  ａｎｄ  Ｔ．  Ｖａｌｅｒｉｕｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ，２００２．３０（４）：ｐ．５０７−１１参照。）。リンカーサイズのこの減少は、ＶＨ及びＶＬドメインの交差対合による２つのポリペプチド鎖の二量体化を促進する。二特異的ダイアボディは、構造ＶＨＡ−ＶＬＢ及びＶＨＢ−ＶＬＡ（ＶＨ−ＶＬ配置）又はＶＬＡ−ＶＨＢ及びＶＬＢ−ＶＨＡ（ＶＬ−ＶＨ配置）の何れかとともに、２つのポリペプチド鎖を同一細胞内で発現させることによって作製される。  異なる様々な二特異的ダイアボディが過去に作製されており、それらの多くは、細菌中で、可溶性形態で発現され得る。しかしながら、最近の比較研究は、可変ドメインの方向性が、活性な結合部位の発現及び形成に影響を与え得ることを示している（Ｍａｃｋ，Ｍ．，Ｇ．  Ｒｉｅｔｈｍｕｌｌｅｒ，ａｎｄ  Ｐ．  Ｋｕｆｅｒ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，１９９５．  ９２（１５）：ｐ．７０２１−５参照）。それにもかかわらず、細菌中での可溶性発現は、直列型ｓｃＦｖ分子に比べて重要な利点を示す。しかしながら、２つの異なるポリペプチド鎖が単一の細胞内で発現されるので、活性なヘテロ二量体とともに、不活性なホモ二量体が産生され得る。これにより、二特異的ダイアボディの均一な調製物を得るために、さらなる精製工程の実施が必要となる。二特異的ダイアボディの生成を強制する１つのアプローチは、ノブ・イントゥ・ホールダイアボディの作製である（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，Ｔ．  Ｐｒｏｓｐｅｒｏ，ａｎｄ  Ｇ．  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，１９９３．  ９０（１４）：ｐ．６４４４−８．１８参照）。これは、ＨＥＲ２及びＣＤ３に対して誘導された二特異的ダイアボディに対して示された。Ｖａｌ３７をＰｈｅと交換し、Ｌｅｕ４５をＴｒｐと交換することによって、ＶＨドメイン中に大きなノブが導入され、抗ＨＥＲ２又は抗ＣＤ３可変ドメインの何れかにおいて、Ｐｈｅ９８をＭｅｔに変異させ、Ｔｒｙ８７をＡｌａに変異させることによって、ＶＬドメイン中に相補的な穴が作製された。このアプローチを使用することによって、二特異的ダイアボディの産生は、親ダイアボディによる７２％からノブ・イントゥ・ホールダイアボディによる９０％超まで増加し得る。重要なことに、産生率は、これらの変異の結果として、僅かに減少したに過ぎなかった。しかしながら、分析された幾つかの構築物に対して抗原結合活性の低下が観察された。従って、このかなり精巧なアプローチは、変化されていない結合活性を有するヘテロ二量体分子を産生する変異を同定するために、様々な構築物の分析を必要とする。さらに、このようなアプローチは、定常領域に免疫グロブリン配列の変異的修飾を必要とし、このため、抗体配列の非原型及び非天然形態を作製し、これは、増加した免疫原性、乏しいインビボ安定性及び望ましくない薬物動態をもたらし得る。
【０００７】
一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）は、二特異的ダイアボディ様分子の形成を改善するための別の戦略である（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．  ａｎｄ  Ｇ．  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，１９９７．  ４５（３−４）：ｐ．１２８−３０；Ｗｕ，Ａ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９６．  ２（１）：ｐ．２１−３６参照）。二特異的一本鎖ダイアボディは、２つのダイボディ形成ポリペプチド鎖を、約１５アミノ酸残基の長さを有する追加の中央リンカーと接続することによって作製される。従って、単量体の一本鎖ダイアボディ（５０−６０ｋＤａ）に対応する分子量を有する全ての分子が二特異的である。二特異的一本鎖ダイアボディは、細菌中において、可溶性且つ活性な形態で発現され、精製された分子の大半が単量体として存在することが、幾つかの研究によって示されている（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．  ａｎｄ  Ｇ．  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ，１９９７．  ４５（３−４）：ｐ．１２８−３０；Ｗｕ，Ａ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９６．  ２（１）：ｐ．２１−３６；Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．  ａｎｄ  Ｐ．  Ｐａｃｋ，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９７．  ３（２）：ｐ．８３−１０５；Ｒｉｄｇｗａｙ，Ｊ．Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ，１９９６．  ９（７）：ｐ．６１７−２１参照）。従って、一本鎖ダイアボディは、直列型ｓｃＦｖ（全ての単量体は二特異的である。）とダイアボディ（細菌中での可溶性発現）の利点を併有している。
【０００８】
より最近に、ダイアボディは、ジ−ダイアボディと名づけられた、よりＩｇ様の分子を作製するためにＦｃに融合されている（Ｌｕ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２００４．  ２７９（４）：ｐ．２８５６−６５）。さらに、ＩｇＧの重鎖中に２つのＦａｂリピートを含み、４つの抗原分子に結合することが可能な多価の抗体構築物が記載されている（ＷＯ０１７７３４２Ａ１，ａｎｄ  Ｍｉｌｌｅｒ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００３．  １７０（９）：ｐ．４８５４−６１参照）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本分野において、２つ又はそれ以上の抗原に結合することが可能な改良された多価結合タンパク質に対する要求が存在する。本発明は、高い親和性で、２つ又はそれ以上の抗原に結合することが可能な結合タンパク質の新規ファミリーを提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
発明の要旨
本発明は２つ又はそれ以上の抗原に結合することが可能な多価結合タンパク質に関する。本発明は、高い親和性で、２つ又はそれ以上の抗原に結合することが可能な結合タンパク質の新規ファミリーを提供する。
【００１１】
一態様において、本発明は、ポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の可変ドメインであり、Ｃは定常ドメインであり、Ｘ１はアミノ酸又はポリペプチドを表し、Ｘ２はＦｃ領域を表し、及びｎは０又は１である。）を含む、結合タンパク質を提供する。好ましい実施形態において、結合タンパク質中のＶＤ１及びＶＤ２は、重鎖可変ドメインである。より好ましくは、重鎖可変ドメインは、マウス重鎖可変ドメイン、ヒト重鎖可変ドメイン、ＣＤＲ移植された重鎖可変ドメイン及びヒト化重鎖可変ドメインからなる群から選択される。好ましい実施形態において、ＶＤ１及びＶＤ２は、同一の抗原に結合することができる。別の実施形態において、ＶＤ１及びＶＤ２は、異なる抗原に結合することができる。好ましくは、Ｃは、重鎖定常ドメインである。より好ましくは、Ｘ１はリンカーである（但し、Ｘ１はＣＨ１ではない。）。最も好ましくは、Ｘ１は、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＳＡＫＴＴＰ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＲＡＤＡＡＰ；ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ；ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ；ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４；ＳＡＫＴＴＰ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＡＤＡＡＰ；ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ；ＴＶＡＡＰ；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ；ＱＰＫＡＡＰ；ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ；ＡＫＴＴＰＰ；ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ；ＡＫＴＴＡＰ；ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ；ＡＳＴＫＧＰ；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ；ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ；ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ；及びＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳからなる群から選択されるリンカーである。好ましくは、Ｘ２は、Ｆｃ領域である。より好ましくは、Ｘ２は、バリアントＦｃ領域である。
【００１２】
好ましい実施形態において、上に開示されている結合タンパク質はポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり（但し、ＣＨ１ではない。）、及びＸ２はＦｃ領域である。）を含む。
【００１３】
別の実施形態において、結合タンパク質中のＶＤ１及びＶＤ２は、軽鎖可変ドメインである。好ましくは、軽鎖可変ドメインは、マウス軽鎖可変ドメイン、ヒト軽鎖可変ドメイン、ＣＤＲ移植された軽鎖可変ドメイン及びヒト化軽鎖可変ドメインからなる群から選択される。一実施形態において、ＶＤ１及びＶＤ２は、同一の抗原に結合することができる。別の実施形態において、ＶＤ１及びＶＤ２は、異なる抗原に結合することができる。好ましくは、Ｃは、軽鎖定常ドメインである。より好ましくは、Ｘ１はリンカーである（但し、Ｘ１はＣＬ１ではない。）。好ましくは、Ｘ１は、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＳＡＫＴＴＰ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＲＡＤＡＡＰ；ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ；ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ；ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４；ＳＡＫＴＴＰ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＡＤＡＡＰ；ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ；ＴＶＡＡＰ；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ；ＱＰＫＡＡＰ；ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ；ＡＫＴＴＰＰ；ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ；ＡＫＴＴＡＰ；ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ；ＡＳＴＫＧＰ及びＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰからなる群から選択されるリンカーである。好ましくは、結合タンパク質は、Ｘ２を含まない。
【００１４】
好ましい実施形態において、上に開示されている結合タンパク質はポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり（但し、ＣＨ１ではない。）、及びＸ２はＦｃ領域を含まない。）を含む。
【００１５】
別の好ましい実施形態において、本発明は、２つのポリペプチド鎖を含み、前記第一のポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり（但し、ＣＨ１ではない。）、及びＸ２はＦｃ領域である。）を含み；並びに前記第二のポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり（但し、ＣＨ１ではない。）、及びＸ２はＦｃ領域を含まない。）を含む。最も好ましくは、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は４つのポリペプチド鎖を含み、第一の２つのポリペプチド鎖は、それぞれ、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の重鎖可変ドメインであり、Ｃは重鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり（但し、ＣＨ１ではない。）、及びＸ２はＦｃ領域である。）を含み；並びに第二の２つのポリペプチド鎖は、それぞれ、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１はリンカーであり（但し、ＣＨ１ではない。）、及びＸ２はＦｃ領域を含まない。）を含む。このような二重可変ドメイン（ＤＶＤ）タンパク質は、４つの抗原結合部位を有する。
【００１６】
別の好ましい実施形態において、上に開示されている結合タンパク質は、１つ又はそれ以上の標的に結合することが可能である。好ましくは、標的は、サイトカイン、細胞表面タンパク質、酵素及び受容体からなる群から選択される。好ましくは、結合タンパク質は、１つ又はそれ以上の標的の生物学的機能を調節することが可能である。より好ましくは、結合タンパク質は、１つ又はそれ以上の標的を中和することが可能である。本発明の結合タンパク質は、リンホカイン、モノカイン及びポリペプチドホルモンからなる群から選択されるサイトカインに結合することができる。特定の実施形態において、結合タンパク質は、ＩＬ−１α及びＩＬ−１β；ＩＬ−１２及びＩＬ−１８；ＴＮＦα及び１Ｌ−２３、ＴＮＦα及びＩＬ−１３；ＴＮＦ及びＩＬ−１８；ＴＮＦ及びＩＬ−１２；ＴＮＦ及びＩＬ−１β；ＴＮＦ及びＭＩＦ；ＴＮＦ及びＩＬ−１７；並びにＴＮＦ及びＩＬ−１５；ＴＮＦ及びＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＲ及びＥＧＦＲ；ＩＬ−１３及びＩＬ−９；ＩＬ−１３及びＩＬ−４；ＩＬ−１３及びＩＬ−５；ＩＬ−１３及びＩＬ−２５；ＩＬ−１３及びＴＡＲＣ；ＩＬ−１３及びＭＤＣ；ＩＬ−１３及びＭＥＦ；ＩＬ−１３及びＴＧＦ−β；ＩＬ−１３及びＬＨＲアゴニスト；ＩＬ−１３及びＣＬ２５；ＩＬ−１３及びＳＰＲＲ２ａ；ＤＬ−１３及びＳＰＲＲ２ｂ；ＩＬ−１３及びＡＤＡＭ８；及びＴＮＦα及びＰＧＥ４、ＩＬ−１３及びＰＥＤ２、ＴＮＦ及びＰＥＧ２からなる群から選択されるサイトカインの対に結合することができる。別の実施形態において、本発明の結合タンパク質は、ＣＤ１３８及びＣＤ２０；ＣＤ１３８及びＣＤ４０；ＣＤ１９及びＣＤ２０；ＣＤ２０及びＣＤ３；ＣＤ３８及びＣＤ１３８；ＣＤ３８及びＣＤ２０；ＣＤ３８及びＣＤ４０；ＣＤ４０及びＣＤ２０；ＣＤ−８及びＩＬ−６；ＣＳＰＧｓ及びＲＧＭ  Ａ；ＣＴＬＡ−４及びＢＴＮＯ２；ＩＧＦｌ及びＩＧＦ２；ＩＧＦ１／２及びＥｒｂ２Ｂ；ＩＬ−１２及びＴＷＥＡＫ；ＩＬ−１３及びＩＬ−１β；ＭＡＧ及びＲＧＭＡ；ＮｇＲ及びＲＧＭＡ；ＮｏｇｏＡ及びＲＧＭＡ；ＯＭＧｐ及びＲＧＭＡ；ＰＤＬ−１及びＣＴＬＡ−４；ＲＧＭＡ及びＲＧＭＢ；Ｔｅ３８及びＴＮＦα；ＴＮＦα及びＢｌｙｓ；ＴＮＦα及びＣＤ−２２；ＴＮＦα及びＣＴＬＡ−４；ＴＮＦα及びＧＰ１３０；ＴＮＦα及びＩＬ−１２ｐ４０；並びにＴＮＦα及びＲＡＮＫリガンドからなる群から選択される標的の対に結合することが可能である。
【００１７】
一実施形態において、ヒトＩＬ−１α及びヒトＩＬ−１βに結合することができる結合タンパク質は、配列番号３３、配列番号３７、配列番号４１、配列番号４５、配列番号４７、配列番号５１、配列番号５３、配列番号５５、配列番号５７及び配列番号５９からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列を含み；並びに、配列番号３５、配列番号３９、配列番号４３、配列番号４６、配列番号４９、配列番号５２、配列番号５４、配列番号５６、配列番号５８及び配列番号６０からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。別の実施形態において、マウスＩＬ−１α及びマウスＩＬ−１βに結合することができる結合タンパク質は、配列番号１０５のＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０９のＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００１８】
一実施形態において、ＩＬ−１２及びＩＬ−１８に結合することができる結合タンパク質は、配列番号８３、配列番号９０、配列番号９３、配列番号９５及び配列番号１１４からなる群から選択されるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列；並びに配列番号８６、配列番号９１、配列番号９４、配列番号４６、配列番号９６及び配列番号１１６からなる群から選択されるＤＶＤ軽鎖アミノ酸配列を含む。
【００１９】
一実施形態において、ＣＤ２０及びＣＤ３に結合することができる結合タンパク質は、配列番号９７であるＤＶＤ重鎖アミノ酸配列及び配列番号１０１のＤＶＤ軽鎖を含む。
【００２０】
別の実施形態において、本発明の結合タンパク質は、ＢＭＰ１、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰ８、ＣＳＦ１（Ｍ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（Ｇ−ＣＳＦ）、ＥＰＯ、ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）、ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）、ＦＧＦ３（ｉｎｔ−２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６（ＨＳＴ−２）、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２３、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４、ＩＦＮＡ５、ＩＦＮＡ６、ＩＦＮＡ７、ＥＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ＩＦＮＷ１、ＦＩＬ１、ＦＩＬ１（ε）、ＦＬＬ１（ζ）、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１ｌ、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１３、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８Ａ、ＩＬ２８Ｂ、ＩＬ２９、ＩＬ３０、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＬＴＡ（ＴＮＦ−ｂ）、ＬＴＢ、ＴＮＦ（ＴＮＦ−ａ）、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４−１ＢＢリガンド）、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰＯ３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ−Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧ１）、ＴＮＦＳＦ１８、ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬ１ＲＬ１、ＩＬ１ＲＬ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ７Ｒ、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１７Ｒ、ＩＬ１８Ｒ１、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２Ｒ、ＩＬ１ＨＹ１、ＩＬ１ＲＡＰ、ＩＬ１ＲＡＰＬ１、ＩＬ１ＲＡＰＬ２、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ１８ＢＰ、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＩＬ２２ＲＡ２、ＡＥＦ１、ＨＧＦ、ＬＥＰ（レプチン）、ＰＴＮ及びＴＨＰＯからなる群から選択される１つ、２つ又はそれ以上のサイトカイン、サイトカイン関連タンパク質及びサイトカイン受容体に結合することができる。
【００２１】
本発明の結合タンパク質は、ＣＣＬ１（Ｉ−３０９）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１／ＭＣＡＦ）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１ａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ−３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２）、ＣＣ１１（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ＭＣＰ−４）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−１ｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ−４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９（ＭＤＰ−３ｂ）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａ）、ＣＣＬ２１（ＳＬＣ／エキソダス−２）、ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ−１）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ−１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６（エオタキシン−３）、ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）、ＣＣＬ２８、ＣＸＣＬ１（ＧＲＯ１）、ＣＸＣＬ２（ＧＲＯ２）、ＣＸＣＬ３（ＧＲＯ３）、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ−７８）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ１０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１）、ＳＣＹＥ１、ＸＣＬ１（リンホタクチン）、ＸＣＬ２（ＳＣＭ−１ｂ）、ＢＬＲ１（ＭＤＲ１５）、ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）、ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４５）、ＣＣＲ２（ｍｃｐ−１ＲＢ／ＲＡ）、ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）、ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ−Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）、ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩ１）、ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲ１／ＣＫＲ−Ｌ１）、ＣＣＲ９（ＧＰＲ−９−６）、ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）、ＣＣＲＬ２（Ｌ−ＣＣＲ）、ＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）、ＣＭＫＬＲ１、ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）、ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）、ＣＸＣＲ４、ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）、ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ−Ｌ２）、ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）、ＨＭ７４、ＩＬ８ＲＡ（ＩＬ８Ｒａ）、ＩＬ８ＲＢ（ＩＬ８Ｒｂ）、ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）、ＴＣＰ１０、ＣＫＬＦＳＦ２、ＣＫＬＦＳＦ３、ＣＫＬＦＳＦ４、ＣＫＬＦＳＦ５、ＣＫＬＦＳＦ６、ＣＫＬＦＳＦ７、ＣＫＬＦＳＦ８、ＢＤＮＦ、Ｃ５Ｒ１、ＣＳＦ３、ＧＲＣＣ１０（Ｃ１０）、ＥＰＯ、ＦＹ（ＤＡＲＣ）、ＧＤＦ５、ＨＤＦ１Ａ、ＩＬ８、ＰＲＬ、ＲＧＳ３、ＲＧＳ１３、ＳＤＦ２、ＳＬＩＴ２、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２及びＶＨＬからなる群から選択される１つ又はそれ以上のケモカイン、ケモカイン受容体及びケモカイン関連タンパク質に結合することができる。本発明の結合タンパク質は、インテグリンからなる群から選択される細胞表面タンパク質に結合することができる。本発明の結合タンパク質は、キナーゼ及びプロテアーゼからなる群から選択される酵素に結合することができる。本発明の結合タンパク質は、リンホカイン受容体、モノカイン受容体及びポリペプチドホルモン受容体からなる群から選択される受容体に結合することができる。
【００２２】
好ましい実施形態において、結合タンパク質は多価である。より好ましくは、結合タンパク質は多重特異的である。上記多価及び／又は多重特異的結合タンパク質は、特に治療的見地から望ましい特性を有する。例えば、多価及び／又は多重特異的結合タンパク質は、（１）抗体が結合する抗原を発現している細胞によって、二価抗体より速く内部に取り込まれる（及び／又は異化され）；（２）アゴニスト抗体であり；及び／又は（３）多価抗体が結合することができる抗原を発現している細胞の細胞死及び／又はアポトーシスを誘導し得る。多価及び／又は多重特異的結合タンパク質の少なくとも１つの抗原結合特異性を提供する「親抗体」は、抗体が結合する抗原を発現している細胞によって内部に取り込まれ（及び／又は異化される）抗体であり得、及び／又はアゴニスト、細胞死誘導及び／又はアポトーシス誘導抗体であり得、並びに本明細書に記載されている多価及び／又は多重特異的結合タンパク質は、これらの特性の１つ又はそれ以上の改善を示し得る。さらに、本明細書に記載されているように、多価結合タンパク質として構築された場合、親抗体は、これらの特性の何れか１つ又はそれ以上を欠如し得るが、ここに述べられているようにして構築されたとき、これらの特性は付与され得る。
【００２３】
別の実施形態において、本発明の結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、少なくとも１０２Ｍ−１ｓ−１；少なくとも１０３Ｍ−１ｓ−１；少なくとも１０４Ｍ−１ｓ−１；少なくとも１０５Ｍ−１ｓ−１；及び少なくとも１０６Ｍ−１ｓ−１からなる群から選択される、１つ又はそれ以上の標的への結合速度定数（Ｋｏｎ）を有する。好ましくは、本発明の結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、１０２Ｍ−１ｓ−１と１０３Ｍ−１ｓ−１の間、１０３Ｍ−１ｓ−１と１０４Ｍ−１ｓ−１の間、１０４Ｍ−１ｓ−１と１０５Ｍ−１ｓ−１の間、又は１０５Ｍ−１ｓ−１と１０６Ｍ−１ｓ−１の間の、１つ又はそれ以上の標的に対する結合速度定数（Ｋｏｎ）を有する。
【００２４】
別の実施形態において、結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、最大約１０−３ｓ−１；最大約１０−４ｓ−１；最大約１０−５ｓ−１；及び最大約１０−６ｓ−１からなる群から選択されるからなる群から選択される、１つ又はそれ以上の標的への解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。好ましくは、本発明の結合タンパク質は、表面プラズモン共鳴によって測定された場合に、１０−３ｓ−１から１０−４ｓ−１の、１０−４ｓ−１から１０−５ｓ−１の、又は１０−５ｓ−１から１０−６ｓ−１の間の、１つ又はそれ以上の標的に対する解離速度定数（Ｋｏｆｆ）を有する。
【００２５】
別の実施形態において、結合タンパク質は、最大約１０−７Ｍ；最大約１０−８Ｍ；最大約１０−９Ｍ；最大約１０−１０Ｍ；最大約１０−１１Ｍ；最大約１０−１２Ｍ及び最大１０−１３Ｍからなる群から選択される、１つ又はそれ以上の標的への解離定数（ＫＤ）を有する。好ましくは、本発明の結合タンパク質は、１０−７Ｍから１０−８Ｍの；１０−８Ｍから１０−９Ｍの；１０−９Ｍから１０−１０Ｍの；１０−１０Ｍから１０−１１Ｍの；１０−１１Ｍから１０−１２Ｍの；又は１０−１２Ｍから１０−１３ＭのＩＬ−１２又はＩＬ−２３に対する解離定数（ＫＤ）を有する。
【００２６】
別の実施形態において、上記合タンパク質は、免疫接着分子、造影剤、治療剤及び細胞毒性剤からなる群から選択される因子をさらに含む連結体である。好ましくは、造影剤は、放射性標識、酵素、蛍光標識、発光標識、生物発光標識、磁気標識及びビオチンからなる群から選択される。より好ましくは、造影剤は、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ及び１５３Ｓｍからなる群から選択される放射性標識である。好ましくは、治療剤又は細胞毒性剤は、代謝抑制剤、アルキル化剤、抗生物質、成長因子、サイトカイン、抗血管新生剤、抗有糸分裂剤、アントラサイクリン、トキシン及びアポトーシス剤からなる群から選択される。
【００２７】
別の実施形態において、上記結合タンパク質は結晶化された結合タンパク質であり、結晶として存在する。好ましくは、この結晶は、無担体医薬徐放結晶である。より好ましくは、結晶化された結合タンパク質は、前記結合タンパク質の可溶性対応物より大きなインビボ半減期を有する。最も好ましくは、結晶化された結合タンパク質は生物学的活性を保持する。
【００２８】
別の実施形態において、上記結合タンパク質はグリコシル化される。好ましくは、グリコシル化は、ヒトグリコシル化パターンである。本発明の一態様は、上に開示されている結合タンパク質の何れか１つをコードする単離された核酸に関する。さらなる実施形態は、上に開示されている単離された核酸を含むベクターを提供し、前記ベクターは、ｐｃＤＮＡ；ｐＴＴ（Ｄｕｒｏｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００２，ＶｏＩ  ３０，Ｎｏ．２）；ｐＴＴ３（さらなる多重クローニング部位を有するｐＴＴ；ｐＥＦＢＯＳ（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ，Ｓ．  ａｎｄ  Ｎａｇａｔａ，Ｓ．，（１９９０）  Ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｏｌ１８，ＮＯ．１７）；ｐＢＶ；ｐＪＶ；ｐｃＤＮＡ３．１ＴＯＰＯ、ｐＥＦ６ＴＯＰＯ及びｐＢＪからなる群から選択される。
【００２９】
別の態様において、宿主細胞は、上に開示されたベクターで形質転換される。好ましくは、宿主細胞は原核細胞である。より好ましくは、宿主細胞はイー・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）である。関連する実施形態において、宿主細胞は真核細胞である。好ましくは、真核細胞は、原生生物細胞、動物細胞、植物細胞及び真菌細胞からなる群から選択される。より好ましくは、宿主細胞は、ＣＨＯ及びＣＯＳを含む（但し、これらに限定されない。）哺乳動物細胞；又はサッカロミセス・セレビシアエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）などの真菌細胞；又はＳｆ９などの昆虫細胞である。
【００３０】
本発明の別の態様は、結合タンパク質を産生するのに十分な条件下で、同じく上に開示されている宿主細胞の何れか１つを培地中において培養することを含む、上に開示されている結合タンパク質を生産する方法を提供する。好ましくは、この方法によって生産された結合タンパク質の５０％から７５％が、二重特異的四価結合タンパク質である。より好ましくは、この方法によって生産された結合タンパク質の７５％から９０％が、二重特異的四価結合タンパク質である。最も好ましくは、生産された結合タンパク質の９０％から９５％が、二重特異的四価結合タンパク質である。
【００３１】
別の実施形態は、上に開示されている方法に従って産生された結合タンパク質を提供する。
【００３２】
一実施形態は、結合タンパク質の放出のための組成物を提供し、この組成物は製剤を含み、該製剤は、上に開示されている結晶化された結合タンパク質及び成分並びに少なくとも１つのポリマー性担体を含む。好ましくは、ポリマー担体は、：ポリ（アクリル酸）、ポリ（シアノアクリラート）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（無水物）、ポリ（デプシペプチド）、ポリ（エステル）、ポリ（乳酸）、ポリ（乳酸グリコール酸共重合体）又はＰＬＧＡ、ポリ（ｂ−ヒドロキシブチラート）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ジオキサノン）；ポリ（エチレングリコール）、ポリ（（ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド、ポリ［（オルガノ）ホスファゼン］、ポリ（オルトエステル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、無水マレイン酸−アルキルビニルエーテル共重合体、プルロニックポリオール、アルブミン、アルギナート、セルロース及びセルロース誘導体、コラーゲン、フィブリン、ゼラチン、ヒアルロン酸、オリゴ糖、グリカミノグリカン、硫酸化された多糖、これらの混合物及び共重合体からなる群の１つ又はそれ以上から選択されるポリマーである。好ましくは、成分は、アルブミン、ショ糖、トレハロース、ラクチトール、ゼラチン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、メトキシポリエチレングリコール及びポリエチレングリコールからなる群から選択される。別の実施形態は、上に開示された組成物の有効量を哺乳動物に投与する工程を含む哺乳動物を治療する方法を提供する。
【００３３】
本発明は、上に開示された結合タンパク質と、及び医薬として許容される担体とを含む医薬組成物も提供する。さらなる実施形態において、この医薬組成物は、疾患を治療するための少なくとも１つの追加の治療剤を含む。好ましくは、追加の薬剤は、治療剤、造影剤、細胞毒性剤、血管新生阻害剤（抗ＶＥＧＦ抗体又はＶＥＧＦ−トラップが含まれるが、これらに限定されない。）；キナーゼ阻害剤（ＫＤＲ及びＴＩＥ−２阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。）；共刺激分子遮断剤（抗Ｂ７．１、抗Ｂ７．２、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、抗ＣＤ２０が含まれるが、これらに限定されない。）；接着分子遮断剤（抗ＬＦＡ−１Ａｂ、抗Ｅ／ＬセレクチンＡｂ、小分子阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。）；抗サイトカイン抗体又はその機能的断片（抗ＩＬ−１８、抗ＴＮＦ、抗ＩＬ−６／サイトカイン受容体抗体が含まれるが、これらに限定されない。）；メトトレキサート；シクロスポリン；ラパマイシン；ＦＫ５０６；検出可能な標識又はレポーター；ＴＮＦアンタゴニスト；抗リウマチ薬；筋肉弛緩剤、麻酔薬、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛剤、麻酔、鎮静剤、局所麻酔、神経筋肉遮断剤、抗微生物剤、抗乾癬剤、コルチコステロイド、アナボリックステロイド、エリスロポエチン、免疫化、イムノグロブリン、免疫抑制剤、成長ホルモン、ホルモン置換薬、放射性薬剤、抗うつ剤、抗精神病薬、刺激物質、喘息薬、βアゴニスト、吸引用ステロイド、エピネフリン又は類縁体、サイトカイン及びサイトカインアンタゴニストからなる群から選択される。
【００３４】
別の実施形態において、本発明は、上に開示されている結合タンパク質によって結合されることができる標的又は複数の標的が有害である疾患にしているヒトを治療する方法であり、ヒト対象中の標的又は複数の標的が阻害され、及び治療が達成されるように、上に開示されている結合タンパク質をヒト対象に投与することを含む、前記方法を提供する。好ましくは、疾患は、関節リウマチ、骨関節炎、若年性慢性関節炎、化膿性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性又は慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーライン紫斑症、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生性疾患、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、孤発性の、多内分泌腺機能低下症候群Ｉ型及び多内分泌腺機能低下症候群ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清反応陰性関節炎、関節炎、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸性関節炎、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニア及びサルモネラ関連関節炎、脊椎関節症、アテローム性疾患／アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型原発性低γグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、繊維性肺疾患、突発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｃ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌｕｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ヘモシデローシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、繊維症、放射性繊維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性又はルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インシュリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に���連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状紅斑性狼瘡、男性不妊症特発性又はＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（全てのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織疾患に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｙｘｏｅｄｅｍａ）、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギー及び喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害（例えば、うつ病及び統合失調症）、Ｔｈ２型及びＴｈ１型によって媒介される疾病、急性及び慢性疼痛（疼痛の様々な形態）、並びに、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌及び腎臓癌及び造血性悪性病変（白血病及びリンパ腫）などの癌、無βリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性及び慢性寄生性又は感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性又は慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房（ａｅｒｉａｌ）異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α−１−アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応（ａｎｔｉ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，）、大動脈（ａｏｒｄｉｃ）及び動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、心房細動（持続的又は発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群（ｃａｒｄｉａｃ  ｓｔｕｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序な又は多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性繊維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、中枢神経ドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発された薬��誘発性運動疾患、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路及び小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症（ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｅｍａｔｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ）、致死的胸腺移植組織拒絶、フリードライヒ失調症、機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、糸球体腎炎、何れかの臓器又は組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、肝炎（Ａ型）、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺繊維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪血症（ｌｉｐｅｄｅｍａ）、肝臓移植拒絶、リンパ浮腫（ｌｙｍｐｈｅｄｅｒｍａ）、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｅｍｉａ）、代謝性／特発性、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｕｌｔｉ−ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性（メンセル・デジェリーヌ−トーマス  シャイ−ドレーガー及びマシャド−ジョセフ）、重症筋無力症、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、マイコバクテリウム・チュバキュロシス、骨髄形成異常、心筋梗塞、真菌虚血疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性Ｉ筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈及びその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、ｏｋｔ３療法、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症及び皮膚変化症候群（ｓｋｉｎ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、灌流後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ポンプ後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｕｍｐ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象及び病、レイノー病、レフサム病、規則的なＱＲＳ幅の狭い頻脈症（ｒｅｇｕｌａｒ  ｎａｒｒｏｗ  ＱＲＳ  ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レ��ー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、固有不整脈（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｒｒｙｔｈｍｉａｓ）、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、湿疹、心血管系の梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞又はＦＡＢＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏症反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんましん、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルス及び真菌感染、ウイルス性脳炎（ｖｉｔａｌ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、何れかの臓器又は組織の異種移植拒絶を含む群から選択される。
【００３５】
別の態様において、本発明は、上に論述されているような第二の因子の投与前、投与と同時又は投与後に、上に開示されている結合タンパク質の何れか１つを投与する工程を含む、疾患に罹患している患者を治療する方法を提供する。好ましい実施形態において、第二の因子は、ブデノシド、上皮増殖因子、コルチコステロイド、シクロスポリン、スルファサラジン、アミノサリチラート、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、メトロニダゾール、リポキシゲナーゼ阻害剤、メサラミン、オルサラジン、バルサラジド、抗酸化剤、トロンボキサン阻害剤、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体、抗ＩＬ−６モノクローナル抗体、増殖因子、エラスターゼ阻害剤、ピリジニル−イミダゾール化合物、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＥＭＡＰ−Ｅ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ−１９、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０又はこれらのリガンドの抗体、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラート・モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、イブプロフェン、コルチコステロイド、プレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動薬、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体、可溶性ｐ５５ＴＮＦ受容体、可溶性ｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ、抗炎症性サイトカイン、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦβからなる群から選択される。
【００３６】
好ましい実施形態において、上に開示されている医薬組成物は、非経口、皮下、筋肉内、静脈内、関節内、気管支内、腹腔内、嚢内、軟骨内、腔内（ｉｎｔｒａｃａｖｉｔｙ）、腔内（ｉｎｔｒａｃｅｌｉａｌ）、小脳内、脳室内、結腸内、頸管内、胃内、肝臓内、心筋内、骨内、骨盤内、心臓周囲内、腹腔内、胸膜内、前立腺内、肺内、結腸内、腎臓内、網膜内、脊髄内、滑膜内、胸腔内、子宮内、膀胱内、ボーラス、膣、直腸、口内、舌下、鼻内及び経皮から選択される少なくとも１つの様式によって、対象に投与される。
【００３７】
本発明の一態様は、本発明の少なくとも１つの結合タンパク質に対する少なくとも１つの抗イディオタイプ抗体を提供する。抗イディオタイプ抗体には、本発明の結合タンパク質中に取り込まれることができる、重鎖若しくは軽鎖又はそのリガンド結合部分の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、重鎖又は軽鎖可変領域、重鎖又は軽鎖定常領域、フレームワーク領域又はその何れかの一部など（これらに限定されない。）、免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む何れかのタンパク質又はペプチド含有分子が含まれる。
【００３８】
別の実施形態において、本発明の結合タンパク質は、ＡＢＣＦ１；ＡＣＶＲ１；ＡＣＶＲ１Ｂ；ＡＣＶＲ２；ＡＣＶＲ２Ｂ；ＡＣＶＲＬ１；ＡＤＯＲＡ２Ａ；アグレカン；ＡＧＲ２；ＡＩＣＤＡ；ＡＩＦ１；ＡＩＧ１；ＡＫＡＰ１；ＡＫＡＰ２；ＡＭＨ；ＡＭＨＲ２；ＡＮＧＰＴ１；ＡＮＧＰＴ２；ＡＮＧＰＴＬ３；ＡＮＧＰＴＬ４；ＡＮＰＥＰ；ＡＰＣ；ＡＰＯＣ１；ＡＲ；ＡＺＧＰ１（亜鉛−ａ−糖タンパク質）；Ｂ７．１；Ｂ７．２；ＢＡＤ；ＢＡＦＦ；ＢＡＧ１；ＢＡＩ１；ＢＣＬ２；ＢＣＬ６；ＢＤＮＦ；ＢＬＮＫ；ＢＬＲ１（ＭＤＲ１５）；ＢｌｙＳ；ＢＭＰ１；ＢＭＰ２；ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦ１０）；ＢＭＰ４；ＢＭＰ６；ＢＭＰ８；ＢＭＰＲ１Ａ；ＢＭＰＲ１Ｂ；ＢＭＰＲ２；ＢＰＡＧ１（プレクチン）；ＢＲＣＡ１；Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）；Ｃ３；Ｃ４Ａ；Ｃ５；Ｃ５Ｒ１；ＣＡＮＴ１；ＣＡＳＰ１；ＣＡＳＰ４；ＣＡＶ１；ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）；ＣＣＬ１（Ｉ−３０９）；ＣＣＬ１１（エオタキシン）；ＣＣＬ１３（ＭＣＰ−４）；ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−１ｄ）；ＣＣＬ１６（ＨＣＣ−４）；ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）；ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）；ＣＣＬ１９（ＭＩＰ−３ｂ）；ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）；ＭＣＡＦ；ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａ）；ＣＣＬ２１（ＭＩＰ−２）；ＳＬＣ；エキソダス−２；ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ−１）；ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ−１）；ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２）；ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）；ＣＣＬ２６（エオタキシン−３）；ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）；ＣＣＬ２８；ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１ａ）；ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂ）；ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）；ＣＣＬ７（ＭＣＰ−３）；ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２）；ＣＣＮＡ１；ＣＣＮＡ２；ＣＣＮＤ１；ＣＣＮＥ１；ＣＣＮＥ２；ＣＣＲ１（ＣＫＲ１／ＨＭ１４５）；ＣＣＲ２（ｍｃｐ−１ＲＢ／ＲＡ）；ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）；ＣＣＲ４；ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）；ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ−Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）；ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩ１）；ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲ１／ＣＫＲ−Ｌ１）；ＣＣＲ９（ＧＰＲ−９−６）；ＣＣＲＬ１（ＶＳＨＫ１）；ＣＣＲＬ２（Ｌ−ＣＣＲ）；ＣＤ１６４；ＣＤ１９；ＣＤ１Ｃ；ＣＤ２０；ＣＤ２００；ＣＤ−２２；ＣＤ２４；ＣＤ２８；ＣＤ３；ＣＤ３７；ＣＤ３８；ＣＤ３Ｅ；ＣＤ３Ｇ；ＣＤ３Ｚ；ＣＤ４；ＣＤ４０；ＣＤ４０Ｌ；ＣＤ４４；ＣＤ４５ＲＢ；ＣＤ５２；ＣＤ６９；ＣＤ７２；ＣＤ７４；ＣＤ７９Ａ；ＣＤ７９Ｂ；ＣＤ８；ＣＤ８０；ＣＤ８１；ＣＤ８３；ＣＤ８６；ＣＤＨ１（Ｅ−カドヘリン）；ＣＤＨ１０；ＣＤＨ１２；ＣＤＨ１３；ＣＤＨ１８；ＣＤＨ１９；ＣＤＨ２０；ＣＤＨ５；ＣＤＨ７；ＣＤＨ８；ＣＤＨ９；ＣＤＫ２；ＣＤＫ３；ＣＤＫ４；ＣＤＫ５；ＣＤＫ６；ＣＤＫ７；ＣＤＫ９；ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）；ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）；ＣＤＫＮ１Ｃ；ＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６ＩＮＫ４ａ）；ＣＤＫＮ２Ｂ；ＣＤＫＮ２Ｃ；ＣＤＫＮ３；ＣＥＢＰＢ；ＣＥＲ１；ＣＨＧＡ；ＣＨＧＢ；キチナーゼ；ＣＨＳＴ１０；ＣＫＬＦＳＦ２；ＣＫＬＦＳＦ３；ＣＫＬＦＳＦ４；ＣＫＬＦＳＦ５；ＣＫＬＦＳＦ６；ＣＫＬＦＳＦ７；ＣＫＬＦＳＦ８；ＣＬＤＮ３；ＣＬＤＮ７（クラウジン−７）；ＣＬＮ３；ＣＬＵ（クラステリン）；ＣＭＫＬＲ１；ＣＭＫＯＲ１（ＲＤＣ１）；ＣＮＲ１；ＣＯＬ１８Ａ１；ＣＯＬ１Ａ１；ＣＯＬ４Ａ３；ＣＯＬ６Ａ１；ＣＲ２；ＣＲＰ；ＣＳＦ１（Ｍ−ＣＳＦ）；ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）；ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）；ＣＴＬＡ４；ＣＴＮＮＢ１（ｂ−カドヘリン）；ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）；ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤ１）；ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）；ＣＸＣＬ１（ＧＲＯ１）；ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）；ＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ／ＩＰ−９）；ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ１）；ＣＸＣＬ１３；ＣＸＣＬ１４；ＣＸＣＬ１６；ＣＸＣＬ２（ＧＲＯ２）；ＣＸＣＬ３（ＧＲＯ３）；ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ−７８／ＬＩＸ）；ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）；ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）；ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ−Ｌ２）；ＣＸＣＲ４；ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／Ｂｏｎｚｏ）；ＣＹＢ５；ＣＹＣ１；ＣＹＳＬＴＲ１；ＤＡＢ２ＩＰ；ＤＥＳ；ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８；ＤＮＣＬ１；ＤＰＰ４；Ｅ２Ｆ１；ＥＣＧＦ１；ＥＤＧ１；ＥＦＮＡ１；ＥＦＮＡ３；ＥＦＮＢ２；ＥＧＦ；ＥＧＦＲ；ＥＬＡＣ２；ＥＮＧ；ＥＮＯ１；ＥＮＯ２；ＥＮＯ３；ＥＰＨＢ４；ＥＰＯ；ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ−２）；ＥＲＥＧ；ＥＲＫ８；ＥＳＲ１；ＥＳＲ２；Ｆ３（ＴＦ）；ＦＡＤＤ；ＦａｓＬ；ＦＡＳＮ；ＦＣＥＲ１Ａ；ＦＣＥＲ２；ＦＣＧＲ３Ａ；ＦＧＦ；ＦＧＦ１（ａＦＧＦ）；ＦＧＦ１０；ＦＧＦ１１；ＦＧＦ１２；ＦＧＦ１２Ｂ；ＦＧＦ１３；ＦＧＦ１４；ＦＧＦ１６；ＦＧＦ１７；ＦＧＦ１８；ＦＧＦ１９；ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）；ＦＧＦ２０；ＦＧＦ２１；ＦＧＦ２２；ＦＧＦ２３；ＦＧＦ３（ｉｎｔ−２）；ＦＧＦ４（ＨＳＴ）；ＦＧＦ５；ＦＧＦ６（ＨＳＴ−２）；ＦＧＦ７（ＫＧＦ）；ＦＧＦ８；ＦＧＦ９；ＦＧＦＲ３；ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）；ＦＤＬ１（ε）；ＦＩＬ１（ζ）；ＦＬＪ１２５８４；ＦＬＪ２５５３０；ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）；ＦＬＴ１；ＦＯＳ；ＦＯＳＬ１（ＦＲＡ−１）；ＦＹ（ＤＡＲＣ）；ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）；ＧＡＧＥＢ１；ＧＡＧＥＣ１；ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ−６ＳＴ；ＧＡＴＡ３；ＧＤＦ５；ＧＦＩ１；ＧＧＴ１；ＧＭ−ＣＳＦ；ＧＮＡＳ１；ＧＮＲＨ１；ＧＰＲ２（ＣＣＲ１０）；ＧＰＲ３１；ＧＰＲ４４；ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）；ＧＲＣＣ１０（Ｃ１０）；ＧＲＰ；ＧＳＮ（ゲルソリン）；ＧＳＴＰ１；ＨＡＶＣＲ２；ＨＤＡＣ４；ＨＤＡＣ５；ＨＤＡＣ７Ａ；ＨＤＡＣ９；ＨＧＦ；ＨＩＦ１Ａ；ＨＥＰ１；ヒスタミン及びヒスタミン受容体；ＨＬＡ−Ａ；ＨＬＡ−ＤＲＡ；ＨＭ７４；ＨＭＯＸ１；ＨＵＭＣＹＴ２Ａ；ＩＣＥＢＥＲＧ；ＩＣＯＳＬ；ＩＤ２；ＩＦＮ−ａ；ＩＦＮＡ１；ＩＦＮＡ２；ＩＦＮＡ４；ＩＦＮＡ５；１ＦＮＡ６；ＩＦＮＡ７；ＩＦＮＢ１；ＩＦＮγ；ＩＦＮＷ１；ＩＧＢＰ１；ＩＧＦ１；ＩＧＦ１Ｒ；ＩＧＦ２；ＩＧＦＢＰ２；ＩＧＦＢＰ３；ＩＧＦＢＰ６；ＩＬ−１；ＩＬ１０；ＩＬ１０ＲＡ；ＩＬ１０ＲＢ；ＩＬ１１；ＩＬ１１ＲＡ；ＩＬ−１２；ＩＬ１２Ａ；ＩＬ１２Ｂ；ＩＬ１２ＲＢ１；ＩＬ１２ＲＢ２；ＩＬ１３；ＩＬ１３ＲＡ１；ＩＬ１３ＲＡ２；ＩＬ１４；ＩＬ１５；ＩＬ１５ＲＡ；ＩＬ１６；ＩＬ１７；ＩＬ１７Ｂ；ＩＬ１７Ｃ；ＩＬ１７Ｒ；ＩＬ１８；ＩＬ１８ＢＰ；ＩＬ１８Ｒ１；ＩＬ１８ＲＡＰ；ＩＬ１９；ＩＬ１Ａ；ＩＬ１Ｂ；ＩＬ１Ｆ１０；ＩＬ１Ｆ５；ＩＬ１Ｆ６；ＩＬ１Ｆ７；ＩＬ１Ｆ８；ＩＬ１Ｆ９；ＩＬ１ＨＹ１；ＩＬ１Ｒ１；ＩＬ１Ｒ２；ＩＬ１ＲＡＰ；ＩＬ１ＲＡＰＬ１；ＩＬ１ＲＡＰＬ２；ＩＬ１ＲＬ１；ＩＬ１ＲＬ２ＩＬ１ＲＮ；ＩＬ２；ＩＬ２０；ＩＬ２０ＲＡ；ＩＬ２１Ｒ；ＩＬ２２；ＩＬ２２Ｒ；ＩＬ２２ＲＡ２；ＩＬ２３；ＩＬ２４；ＩＬ２５；ＩＬ２６；ＩＬ２７；ＩＬ２８Ａ；ＩＬ２８Ｂ；ＩＬ２９；ＩＬ２ＲＡ；ＩＬ２ＲＢ；ＩＬ２ＲＧ；ＩＬ３；ＩＬ３０；ＩＬ３ＲＡ；ＩＬ４；ＩＬ４Ｒ；ＩＬ５；ＩＬ５ＲＡ；ＩＬ６；ＩＬ６Ｒ；ＩＬ６ＳＴ（糖タンパク質１３０）；ＩＬ７；ＩＬ７Ｒ；ＩＬ８；ＩＬ８ＲＡ；ＩＬ８ＲＢ；ＩＬ８ＲＢ；ＩＬ９；ＩＬ９Ｒ；ＩＬＫ；ＩＮＨＡ；ＩＮＨＢＡ；ＩＮＳＬ３；ＩＮＳＬ４；ＩＲＡＫ１；ＩＲＡＫ２；ＩＴＧＡ１；ＩＴＧＡ２；ＩＴＧＡ３；ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）；ＩＴＧＡＶ；ＨＧＢ３；ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）；ＪＡＧ１；ＪＡＫ１；ＪＡＫ３；ＪＵＮ；Ｋ６ＨＦ；ＫＡＩ１；ＫＤＲ；ＫＩＴＬＧ；ＫＬＦ５（ＧＣＢｏｘＢＰ）；ＫＬＦ６；ＫＬＫ１０；ＫＬＫ１２；ＫＬＫ１３；ＫＬＫ１４；ＫＬＫ１５；ＫＬＫ３；ＫＬＫ４；ＫＬＫ５；ＫＬＫ６；ＫＬＫ９；ＫＲＴ１；ＫＲＴ１９（ケラチン１９）；ＫＲＴ２Ａ；ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的ＩＩ型ケラチン）；ＬＡＭＡ５；ＬＥＰ（レプチン）；Ｌｉｎｇｏ−ｐ７５；Ｌｉｎｇｏ−Ｔｒｏｙ；ＬＰＳ；ＬＴＡ（ＴＮＦ−ｂ）；ＬＴＢ；ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）；ＬＴＢ４Ｒ２；ＬＴＢＲ；ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ；ＭＡＧ又はＯｍｇｐ；ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ−Ｊｕｎ）；ＭＤＫ；ＭＩＢ１；ミドカイン；ＭＩＦ；ＭＩＰ−２；ＭＫＩ６７（Ｋｉ−６７）；ＭＭＰ２；ＭＭＰ９；ＭＳ４Ａ１；ＭＳＭＢ；ＭＴ３（メタロチオネクチン−ＩＩＩ）；ＭＴＳＳ１；ＭＵＣ１（ムチン）；ＭＹＣ；ＭＹＤ８８；ＮＣＫ２；ニューロカン；ＮＦＫＢ１；ＮＦＫＢ２；ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）；ＮＧＦＲ；ＮｇＲ−Ｌｉｎｇｏ；ＮｇＲ−Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇｏ）；ＮｇＲ−ｐ７５；ＮｇＲ−Ｔｒｏｙ；ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）；ＮＯＸ５；ＮＰＰＢ；ＮＲＯＢ１；ＮＲ０Ｂ２；ＮＲ１Ｄ１；ＮＲ１Ｄ２；ＮＲ１Ｈ２；ＮＲ１Ｈ３；ＮＲ１Ｈ４；ＮＲ１Ｉ２；ＮＲ１Ｉ３；ＮＲ２Ｃ１；ＮＲ２Ｃ２；ＮＲ２Ｅ１；ＮＲ２Ｅ３；ＮＲ２Ｆ１；ＮＲ２Ｆ２；ＮＲ２Ｆ６；ＮＲ３Ｃ１；ＮＲ３Ｃ２；ＮＲ４Ａ１；ＮＲ４Ａ２；ＮＲ４Ａ３；ＮＲ５Ａ１；ＮＲ５Ａ２；ＮＲ６Ａ１；ＮＲＰ１；ＮＲＰ２；ＮＴ５Ｅ；ＮＴＮ４；ＯＤＺ１；ＯＰＲＤ１；Ｐ２ＲＸ７；ＰＡＰ；ＰＡＲＴ１；ＰＡＴＥ；ＰＡＷＲ；ＰＣＡ３；ＰＣＮＡ；ＰＤＧＦＡ；ＰＤＧＦＢ；ＰＥＣＡＭ１；ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）；ＰＧＦ；ＰＧＲ；フォスファカン；ＰＩＡＳ２；ＰＩＫ３ＣＧ；ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）；ＰＬＧ；ＰＬＸＤＣ１；ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）；ＰＰＩＤ；ＰＲ１；ＰＲＫＣＱ；ＰＲＫＤ１；ＰＲＬ；ＰＲＯＣ；ＰＲＯＫ２；ＰＳＡＰ；ＰＳＣＡ；ＰＴＡＦＲ；ＰＴＥＮ；ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ−２）；ＰＴＮ；ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）；ＲＡＲＢ；ＲＧＳ１；ＲＧＳ１３；ＲＧＳ３；ＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４４）；ＲＯＢＯ２；Ｓ１００Ａ２；ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）；ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）；ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）；ＳＣＹＥ１（内皮単球活性化サイトカイン）；ＳＤＦ２；ＳＥＲＰＩＮＡ１；ＳＥＲＰＩＮＡ３；ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）；ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ−１）；ＳＥＲＰＩＮＦ１；ＳＨＢＧ；ＳＬＡ２；ＳＬＣ２Ａ２；ＳＬＣ３３Ａ１；ＳＬＣ４３Ａ１；ＳＬＩＴ２；ＳＰＰ１；ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）；ＳＴ６ＧＡＬ１；ＳＴＡＢ１；ＳＴＡＴ６；ＳＴＥＡＰ；ＳＴＥＡＰ２；ＴＢ４Ｒ２；ＴＢＸ２１；ＴＣＰ１０；ＴＤＧＦ１；ＴＥＫ；ＴＧＦＡ；ＴＧＦＢ１；ＴＧＦＢ１Ｉ１；ＴＧＦＢ２；ＴＧＦＢ３；ＴＧＦＢＩ；ＴＧＦＢＲ１；ＴＧＦＢＲ２；ＴＧＦＢＲ３；ＴＨ１Ｌ；ＴＨＢＳ１（トロンボスポンディン−１）；ＴＨＢＳ２；ＴＨＢＳ４；ＴＨＰＯ；ＴＩＥ（Ｔｉｅ−１）；ＴＩＭＰ３；組織因子；ＴＬＲ１０；ＴＬＲ２；ＴＬＲ３；ＴＬＲ４；ＴＬＲ５；ＴＬＲ６；ＴＬＲ７；ＴＬＲ８；ＴＬＲ９；ＴＮＦ；ＴＮＦ−ａ；ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）；ＴＮＦＡＩＰ３；ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ａ；ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ；ＴＮＦＲＳＦ２１；ＴＮＦＲＳＦ５；ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）；ＴＮＦＲＳＦ７；ＴＮＦＲＳＦ８；ＴＮＦＲＳＦ９；ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）；ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）；ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰＯ３Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）；ＴＮＦＳＦ１３Ｂ；ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ−Ｌ）；ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）；ＴＮＦＳＦ１８；ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）；ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）；ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）；ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）；ＴＮＦＳＦ９（４−１ＢＢリガンド）；ＴＯＬＬＩＰ；トール様受容体；ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＩｉａ）；ＴＰ５３；ＴＰＭ１；ＴＰＭ２；ＴＲＡＤＤ；ＴＲＡＦ１；ＴＲＡＦ２；ＴＲＡＦ３；ＴＲＡＦ４；ＴＲＡＦ５；ＴＲＡＦ６；ＴＲＥＭ１；ＴＲＥＭ２；ＴＲＰＣ６；ＴＳＬＰ；ＴＷＥＡＫ；ＶＥＧＦ；ＶＥＧＦＢ；ＶＥＧＦＣ；ベルシカン；ＶＨＬＣ５；ＶＬＡ−４；ＸＣＬ１（リンホタクチン）；ＸＣＬ２（ＳＣＭ−１ｂ）；ＸＣＲ１（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲ１）；ＹＹ１及びＺＦＰＭ２からなる群から選択される１つ又はそれ以上の標的に結合することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３９】
発明の詳細な説明
本発明は、２つ又はそれ以上の抗原に結合することが可能な多価及び／又は多重特異的結合タンパク質に関する。具体的には、本発明は、二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）及びその医薬組成物並びにこのようなＤＶＤ−Ｉｇを作製するための核酸、組み換え発現ベクター及び宿主細胞に関する。インビトロ又はインビボの何れかで、特異的抗原を検出するために本発明のＤＶＤ−Ｉｇを使用する方法も、本発明によって包含される。
【００４０】
本明細書に別段の定義がなければ、本発明に関連して使用される科学及び技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。しかしながら、何らかの曖昧さが伏在している場合には、用語の意味及び範囲は明確であるべきであり、本明細書中に付与されている定義は、全ての辞書又は本明細書外の定義に優越する。さらに、文脈上別段の必要がなければ、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数を含むものとする。本願において、「又は」の使用は、別段の記載がなければ、「及び／又は」を意味する。さらに、「含んでいる」という用語並びに「含む」及び「含まれた」などのその他の形式の使用は、限定的なものではない。また、「要素」又は「成分」などの用語は、別段の記載がなければ、一つのユニットを含む要素及び成分並びに１より多いサブユニットを含む要素及び成分を包含する。
【００４１】
一般的に、本明細書に記載されている細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学並びにタンパク質及び核酸化学及びハイブリド形成に関連して使用される命名法及びこれらの技術は、周知のものであり、本分野において一般的に使用されている。一般に、本発明の方法及び技術は、別段の記載がなければ、本分野において周知の慣用方法に従い、並びに本明細書を通じて引用及び論述されている様々な一般的参考文献及びより具体的な参考文献中に記載されているように、実施することができる。酵素反応及び精製技術は、製造業者の説明書に従って、本分野で一般的に遂行されているように、又は本明細書に記載されているように、実施される。本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学及び医薬品化学及び薬化学に関して使用される命名法、並びに本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学及び医薬品化学及び薬化学の実験室操作及び技術は、周知のものであり、本分野で一般的に使用されているものである。化学合成、化学分析、医薬の調製、調合、及び送達、及び患者の治療に対しては、標準的な技術を使用し得る。
【００４２】
本発明をさらに容易に理解し得るように、幾つかの用語を以下に定義する。  
本明細書において使用される「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸のあらゆるポリマー鎖を表す。「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、ポリペプチドという用語と互換的に使用され、同じく、アミノ酸のポリマー鎖を表す。「ポリペプチド」という用語は、固有又は人工のタンパク質、タンパク質断片及びタンパク質配列のポリペプチド類縁体を包含する。ポリペプチドは、単量体又は多量体であり得る。
【００４３】
「単離されたタンパク質」又は「単離されたポリペプチド」という用語は、その由来起源又は由来源のために、その固有の状態において当該タンパク質又はポリペプチドとともに存在する天然に随伴される成分を伴わないタンパク質又はポリペプチドであり、同じ種に由来する他のタンパク質を実質的に含まず、異なる種から得られた細胞によって発現され、又は天然には存在しない。従って、化学的に合成されたポリペプチド、又はポリペプチドが本来由来する細胞とは異なる細胞系の中で合成されたポリペプチドは、それに本来付随している成分から「単離」されている。タンパク質は、本分野で周知のタンパク質精製技術を使用し、単離によって、本来付随している成分が実質的に存在しないようにすることもできる。
【００４４】
本明細書において使用される「回収する」という用語は、例えば、本分野で周知のタンパク質精製技術を使用して、単離によって、ポリペプチドなどの化学種を、本来付随する成分を実質的に含まないようにする方法を表す。
【００４５】
本明細書において使用される「生物学的活性」とは、抗原の全ての固有の生物学的特性を表す。生物学的特性には、受容体に結合すること；細胞増殖の誘導、細胞増殖を阻害すること、他のサイトカインの誘導、アポトーシスの誘導及び酵素活性が含まれるが、これらに限定されない。
【００４６】
第二の化学種との抗体、タンパク質又はペプチドの相互作用に関して、本明細書において使用される「特異的結合」又は「特異的に結合する」という用語は、相互作用が、化学種、例えば、抗体上の特定の構造（例えば、抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存し、タンパク質一般ではなく、特異的なタンパク質構造を認識し、結合することを意味する。抗体がエピトープ「Ａ」に対して特異的であれば、標識された「Ａ」及び抗体を含有する反応中での、エピトープＡを含有する分子（すなわち、標識されていない遊離のＡ）の存在は、抗体に結合した、標識されたＡの量を減少させる。
【００４７】
本明細書において使用される「抗体」という用語は、４つのポリペプチド鎖（２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖）から構成されるあらゆる免疫グロブリン（Ｉｇ）分子又はＩｇ分子の本質的なエピトープ結合特性を保持した全ての機能的分子、変異体、バリアント又はこれらの誘導体を広く表すものとする。このような変異体、バリアント又は誘導体抗体のフォーマットは、本分野において公知である。これらの非限定的な実施形態は、以下に論述されている。
【００４８】
完全長の抗体において、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書において、ＨＣＶＲ又はＶＨと略称される。）及び重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書において、ＬＣＶＲ又はＶＬと略称される。）及び軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬから構成される。ＶＨ及びＶＬ領域は、より保存された領域（フレームワーク領域（ＦＲ）と称される。）が散在された超可変領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される。）へ、さらに細分割することが可能である。各ＶＨ及びＶＬは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順で、アミノ末端からカルボキシ末端に配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される。免疫グロブリン分子は、あらゆる種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスであり得る。
【００４９】
「Ｆｃ領域」という用語は、無傷の抗体のパパイン消化によって生成され得る、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。Ｆｃ領域は、固有配列のＦｃ領域又はバリアントＦｃ領域であり得る。免疫グロブリンのＦｃ領域は、一般に、２つの定常ドメイン（ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン）を含み、場合によって、ＣＨ４ドメインを含む。抗体エフェクター機能を変化させるために、Ｆｃ部分中のアミノ酸残基を置換することが、本分野において周知である（Ｗｉｎｔｅｒ，ｅｔ  ａｌ  ＵＳ  ＰＡＴ  ＮＯＳ  ５，６４８，２６０；５６２４８２１）。抗体のＦｃ部分は、幾つかの重要なエフェクター機能、例えば、サイトカイン誘導、ＡＤＣＣ、食作用、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び抗体の半減期／排除速度及び抗原−抗体複合体を媒介する。幾つかの事例において、これらのエフェクター機能は、治療用抗体のために望ましいが、別の事例では、治療目的に応じて、必要でない場合があり得、又は有害である場合さえあり得る。ある種のヒトＩｇＧイソタイプ、特に、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、それぞれ、ＦｃγＲ及び補体Ｃ１ｑへの結合を介して、ＡＤＣＣ及びＣＤＣを媒介する。新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、抗体の循環半減期を決定する重要な成分である。さらに別の実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸残基は、抗体のエフェクター機能が変化されるように、抗体の定常領域、例えば、抗体のＦｃ領域において置換されている。免疫グロブリンの２つの同一の重鎖の二量体化は、ＣＨ３ドメインの二量体化によって媒介され、ヒンジ領域内のジスルフィド結合によって安定化される（Ｈｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ；２６４：４１５−２０；Ｔｈｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ  １９９９  Ｊ  ＭｏＩ  Ｂｉｏｌ；２９３：６７−７９．）。重鎖−重鎖ジスルフィド結合を防止するための、ヒンジ領域内のシステイン残基の変異は、ＣＨ３ドメインの二量体化を不安定化させる。ＣＨ３二量体化にとって必要とされる残基が同定されている（Ｄａｌｌ’  Ａｃｑｕａ  １９９８  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３７：９２６６−７３．）。従って、一価の半Ｉｇを生成することが可能である。興味深いことに、これらの一価の半Ｉｇ分子は、ＩｇＧ及びＩｇＡ両サブクラスに対して、天然に見出されている（Ｓｅｌｉｇｍａｎ  １９７８  Ａｎｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２９：８５５−７０．  ；Ｂｉｅｗｅｎｇａ  ｅｔ  ａｌ  １９８３  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ５１：３９５−４００）。ＦｃＲｎ：ＩｇＦｃ領域の化学量論は、２：１であることが決定されており（Ｗｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ  ．２０００  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３９：９６９８−７０８）、半Ｆｃは、ＦｃＲｎ結合を媒介するのに十分である（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ  １９９４  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ；２４：５４２−５４８．）。ＣＨ３二量体化にとって重要な残基がＣＨ３ｂシート構造の内部界面上に位置しているのに対して、ＦｃＲｎ結合に必要とされる領域は、ＣＨ２−ＣＨ３ドメインの外側界面に位置しているので、ＣＨ３ドメインの二量体化を崩壊させるための変異は、そのＦｃＲＮ結合に対して、より大きな悪影響を有さないかもしれない。しかしながら、半Ｉｇ分子は、通常の抗体よりサイズが小��いので、組織透過においてある種の利点を有し得る。一実施形態において、少なくとも１つのアミノ酸残基は、重鎖の二量体化が破壊されて、半ＤＶＤＩｇ分子をもたらすように、本発明の結合タンパク質の定常領域、例えば、Ｆｃ領域において置換されている。
【００５０】
本明細書において使用される抗体の「抗原結合部分」（又は単に「抗体部分」）という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つ又はそれ以上の断片を表す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって実行可能であることは示されている。このような抗体の実施形態は、二特異的、二重特異的又は多重特異的フォーマットでもあり得、２つ又はそれ以上の異なる抗原に特異的に結合する。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例には、（ｉ）Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価断片）、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域において、ジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片）、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）単一の可変ドメインを含むｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＣＴ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ  ９０／０５１４４  Ａ１（参照により本明細書に組み込まれる。））及び（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬ及びＶＨは別個の遺伝子によってコードされているが、これらは、ＶＬ及びＶＨ領域が対合して一価分子を形成している単一のタンパク質鎖として、これらの作製を可能とする合成リンカーによって、組み換え法を用いて連結することが可能である（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている。例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；ａｎｄ  Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照）。このような一本鎖抗体も、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されるものとする。ダイアボディなどの一本鎖抗体の他の形態も包含される。ダイアボディは、ＶＨ及びＶＬドメインが一本鎖ポリペプチド鎖上に発現されているが、同一鎖上にある２つのドメイン間での対合を可能とするには短すぎるリンカーを使用することにより、両ドメインを別の鎖の相補的ドメインと対合するように強制し、２つの抗原結合部位を作出する二価の二特異的抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｄ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ  ｅｔ  ａｌ（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ２：１１２１−１１２３を参照）。このような抗体結合部分は、本分野において公知である（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ  ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ．７９０  ｐｐ．（ＩＳＢＮ  ３−５４０−４１３５４−５）。さらに、一本鎖抗体も、相補的軽鎖ポリペプチドと一緒に、抗原結合領域の対を形成する直列Ｆｖセグメントの対を含む「直鎖抗体」（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）に含まれる（Ｚａｐａｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５）；ａｎｄ  ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  ＮＯ．５，６４１，���７０）。
【００５１】
本明細書を通じて、「多価結合タンパク質」という用語は、２つ又はそれ以上の抗原結合部位を含む結合タンパク質を表すために使用される。多価結合タンパク質は、好ましくは、３つ又はそれ以上の抗原結合部位を有するように加工され、一般に、天然に存在しない抗体である。「多重特異的結合タンパク質」という用語は、２つ又はそれ以上の関連する標的又は無関係な標的に結合することが可能な結合タンパク質を表す。本発明の二重可変ドメイン（ＤＶＤ）結合タンパク質は、２つ又はそれ以上の抗原結合部位を含み、四価又は多価結合タンパク質である。ＤＶＤは、単一特異的であり得（すなわち、１つの抗原に結合することができる。）、又は多重特異的（すなわち、２つ又はそれ以上の抗原に結合することができる。）であり得る。２つの重鎖ＤＶＤポリペプチド及び２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むＤＶＤ結合タンパク質は、ＤＶＤＩｇと表される。ＤＶＤＩｇの各半分は、重鎖ＤＶＤポリペプチド及び軽鎖ＤＶＤポリペプチド及び２つの抗原結合部位を含む。各結合部位は、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインを含み、計６ＣＤＲが抗原結合部位当たりの抗原結合に関与する。
【００５２】
本明細書に使用される「二特異的抗体」という用語は、クアドローマ技術（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．  ａｎｄ  Ａ．Ｃ．  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，１９８３．３０５（５９３４）：ｐ．５３７−４０参照）によって、２つの異なるｍＡの化学的連結によって（Ｓｔａｅｒｚ，Ｕ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８５．  ３１４（６０１２）：ｐ．６２８−３１参照）、又はノブ・イントゥ・ホール若しくはＦｃ領域中に変異を導入する類似のアプローチによって（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，Ｔ．  Ｐｒｏｓｐｅｒｏ，ａｎｄ  Ｇ．  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ，１９９３．  ９０（１４）：ｐ．６４４４−８．１８参照）作製され、そのうち１つのみが機能的な二特異的抗体である複数の異なる免疫グロブリン種をもたらす、完全長抗体を表す。分子機能によって、二特異的抗体は、その２つの結合アーム（ＨＣ／ＬＣの１つの対）の１つの上に存在する１つの抗原（又はエピトープ）に結合し、その第二のアーム（ＨＣ／ＬＣの異なる対）の上に存在する異なる抗原（又はエピトープ）に結合する。この定義によって、二特異的抗体は、（特異性及びＣＤＲ配列の両者において）２つの異なる抗原結合アームを有し、それが結合する各抗原に対して一価である。
【００５３】
本明細書において使用される「二重特異的抗体」という用語は、その２つの結合アーム（ＨＣ／ＬＣの対）の各々の中に存在する２つの異なる抗原（又はエピトープ）に結合することが可能な完全長抗体を表す（ＰＣＴ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ  ０２／０２７７３参照）。従って、二重特異的結合タンパク質は、同一の特異性と同一のＣＤＲ配列を有する２つの同一の抗原結合アームを有し、これが結合する各抗原に対して二価である。
【００５４】
結合タンパク質の「機能的抗原結合部位」とは、標的抗原に結合することが可能な部位である。抗原結合部位の抗原結合親和性は、必ずしも、当該抗原結合部位が由来する親抗体と同程度に強力であるとは限らないが、抗原に結合する能力は、抗原への抗体結合を評価するための公知の様々な方法の何れか１つを用いて測定可能でなければならない。さらに、本明細書において、多価抗体の抗原結合部位の各々の抗原結合親和性は、定量的に同一である必要はない。
【００５５】
「サイトカイン」という用語は、１つの細胞集団によって放出され、細胞間媒介物質として別の細胞集団に対して作用するタンパク質に対する包括的用語である。このようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン及び伝統的なポリペプチドホルモンである。サイトカインに含まれるのは、ヒト成長ホルモン、Ｎメチオニルヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インシュリン；プロインシュリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）及び黄体形成ホルモンなどの糖タンパク質ホルモン；肝細胞増殖因子；繊維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子−α及び−β；ミュラー管抑制物質；マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮細胞増殖因子；インテグリン；トロンボポエチンＴＰＯ）；ＮＧＦ−αなどの神経細胞増殖因子；血小板増殖因子；ＴＧＦ−α及びＴＧＦ−βなどのトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）；インシュリン様増殖因子−１及び−１１；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン−α、−β及び−γなどのインターフェロン；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；及び顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３などのインターロイキン（ＩＬ）；ＴＮＦ−α又はＴＮＦ−βなどの腫瘍壊死因子；並びにＬＩＦ及びキットリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子である。本明細書において使用される、サイトカインという用語には、天然源から又は組み換え細胞培養から得られるタンパク質及び固有配列のサイトカインの生物学的に活性な均等物が含まれる。
【００５６】
「リンカー」という用語は、ペプチド結合によって連結された２つ又はそれ以上のアミノ酸残基を含むポリペプチドを表し、１つ又はそれ以上の抗原結合部分を連結するために使用される。このようなリンカーポリペプチドは、本分野において周知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８；Ｐｏｌｊａｋ，ＲＪ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９４）  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３参照）。好ましいリンカーには、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＳＡＫＴＴＰ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＲＡＤＡＡＰ；ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ；ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ；ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４；ＳＡＫＴＴＰ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＡＤＡＡＰ；ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ；ＴＶＡＡＰ；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ；ＱＰＫＡＡＰ；ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ；ＡＫＴＴＰＰ；ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ；ＡＫＴＴＡＰ；ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ；ＡＳＴＫＧＰ；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰが含まれるが、これらに限定されない。
【００５７】
免疫グロブリン定常ドメインは、重鎖又は軽鎖定常ドメインを表す。ヒトＩｇＧ重鎖及び軽鎖定常ドメインアミノ酸配列は、本分野において公知である。
【００５８】
本明細書において使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を表す。すなわち、該集団を構成する各抗体は、僅かな量で存在する可能性がある天然に存在する変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原に対して誘導される。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して誘導された異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物と異なり、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して誘導される。「モノクローナル」という修飾語は、何れかの特定の方法によって、抗体を産生することを要求するものと解釈すべきではない。
【００５９】
本明細書において使用される「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むものとする。本発明のヒト抗体は、例えば、ＣＤＲ、特にＣＤＥ３中に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムな突然変異導入若しくは部位特異的突然変異導入によって、又はインビボでの体細胞変異によって導入された変異）を含み得る。しかしながら、本明細書において使用される「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上に移植された抗体を含まないものとする。
【００６０】
本明細書において使用される「組み換えヒト抗体」という用語は、宿主細胞中に形質移入された組み換え発現ベクターを用いて発現された抗体（以下のＩＩ節Ｃでさらに記載されている。）、組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｈ．Ｒ．，（１９９７）  ＴＩＢ  Ｔｅｃｈ．１５：６２−７０；Ａｚｚａｚｙ  Ｈ．，ａｎｄ  Ｈｉｇｈｓｍｉｔｈ  Ｗ．Ｅ．，（２００２）  Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：４２５−４４５；Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ  Ｊ．Ｖ．，ａｎｄ  Ｌａｒｒｉｃｋ  Ｊ．Ｗ．（２００２）  ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２９：１２８−１４５；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  Ｈ．，ａｎｄ  Ｃｈａｍｅｓ  Ｐ．（２０００）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−３７８）、ヒト免疫グロブリン遺伝子に対して遺伝子導入されている動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．  Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５；Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ  Ｓ−Ａ．，ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎ  Ｌ．Ｌ．（２００２）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３：５９３−５９７；Ｌｉｔｔｌｅ  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ（２０００）  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ２１：３６４−３７０参照）又はヒト免疫グロブリン遺伝子配列の、他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む他の何れかの手段によって調製され、発現され、作製され、若しくは単離された抗体など、組み換え手段によって調製され、発現され、作製され、若しくは単離された全てのヒト抗体を含むものとする。このような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する。しかしながら、ある種の実施形態において、このような組換えヒト抗体は、インビトロ突然変異導入（又は、ヒトＩｇ配列に対して遺伝子導入された動物が使用される場合には、インビボ体細胞突然変異導入）に供され、従って、組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ及びＶＬ配列に由来し、これらの配列に関連しつつも、インビボで、ヒト抗体生殖系列レパートリー内には、天然に存在しない場合があり得る配列である。
【００６１】
「親和性成熟された」抗体とは、変化を有しない親抗体と比べて、抗体の１つ又はそれ以上のＣＤＲ中に、抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす１つ又はそれ以上の変化を有する抗体である。好ましい親和性成熟された抗体は、標的抗原に対してｎＭの親和性を有し、又はｐＭの親和性さえ有する。親和性成熟された抗体は、本分野において公知の操作によって産生される。「Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．ＢｉｄｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）」は、ＶＨ及びＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟を記載している。ＣＤＲ及び／又はフレームワーク残基の無作為な突然変異導入は、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．ＰｒｏｃＮａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９（１９９５）；及びＨａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．  ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６（１９９２）によって記載されている。
【００６２】
「キメラ抗体」という用語は、ヒト定常領域に連結されたマウス重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗体など、ある種に由来する重鎖及び軽鎖可変領域配列並びに別の種に由来する定常領域配列を含む抗体を表す。
【００６３】
「ＣＤＲ移植された抗体」という用語は、マウスＣＤＲの１つ又はそれ以上（例えば、ＣＤＲ３）がヒトＣＤＲ配列で置換されているマウス重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗体など、ある種に由来する重鎖及び軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨ及び／又はＶＬのＣＤＲ領域の１つ又はそれ以上の配列が、別の種のＣＤＲ配列と置換されている抗体を表す。
【００６４】
「ヒト化抗体」という用語は、ヒト以外の種（例えば、マウス）由来の重鎖及び軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨ及び／又はＶＬ配列の少なくとも一部が、より「ヒト類似に」、すなわち、ヒト生殖系列可変配列により類似するように改変された抗体を表す。ヒト化抗体の１つの種類は、ヒトＣＤＲ配列がヒト以外のＶＨ及びＶＬ配列中に導入されて、対応する非ヒトＣＤＲ配列が置換されているＣＤＲ移植された抗体である。
【００６５】
「Ｋａｂａｔ番号」、「Ｋａｂａｔ定義」及び「Ｋａｂａｔ標識」という用語は、本明細書において、互換的に使用される。本分野において認められているこれらの用語は、抗体又はその抗原結合部分の重鎖及び軽鎖可変領域中の他のアミノ酸残基に比べて、より可変的な（すなわち、超可変的な）アミノ酸残基に付番するシステムを表す（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９７１）  Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ，Ｓｃｉ．１９０：３８２−３９１  ａｎｄ  ，Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＮＯ．９１−３２４２）。重鎖可変領域の場合、超可変領域は、ＣＤＲ１に対するアミノ酸位置３１から３５、ＣＤＲ２に対するアミノ酸位置５０から６５及びＣＤＲ３に対するアミノ酸位置９５から１０２にわたる。軽鎖可変領域の場合、超可変領域は、ＣＤＲ１に対するアミノ酸位置２４から３４、ＣＤＲ２に対するアミノ酸位置５０から５６及びＣＤＲ３に対するアミノ酸位置８９から９７にわたる。
【００６６】
本明細書で使用される「ＣＤＲ」という用語は、抗体可変配列内の相補性決定領域を表す。重鎖及び軽鎖の各可変領域中には３つのＣＤＲが存在し、これらは、各可変領域に対して、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と表記される。本明細書において使用される「ＣＤＲセット」という用語は、抗原に結合することが可能な単一の可変領域中に存在する３つのＣＤＲの群を表す。これらのＣＤＲの正確な境界は、異なる系に従って、異なって定義されてきた。Ｋａｂａｔによって記載された系（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）  ａｎｄ（１９９１））は、抗体の何れの可変領域に対しても適用可能な明瞭な残基付番系を提供するのみならず、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界を提供する。これらのＣＤＲは、ＫａｂａｔＣＤＲと称され得る。Ｃｈｏｔｈｉａ及び共同研究者（Ｃｈｏｔｈｉａ  ＆Ｌｅｓｋ，Ｊ．  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）  ａｎｄ  Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３（１９８９））は、ＫａｂａｔＣＤＲ内のある種の亜部分が、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性を有するにも関わらず、ほぼ同一のペプチド骨格立体構造を採ることを見出した。これらの亜部分は、Ｌ１、Ｌ２及びＬ３又はＨ１、Ｈ２及びＨ３（「Ｌ」及び「Ｈ」は、それぞれ、軽鎖及び重鎖領域を表記する。）と表記される。これらの領域は、ＣｈｏｔｈｉａＣＤＲと称される場合があり、これは、ＫａｂａｔＣＤＲと重複する境界を有する。ＫａｂａｔＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界が、Ｐａｄｌａｎ（ＦＡＳＥＢ  Ｊ．  ９：１３３−１３９（１９９５））及びＭａｃＣａｌｌｕｍ（Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２６２（５）：７３２−４５（１９９６））によって記載されている。さらに別のＣＤＲ境界定義が、上記系の１つに厳格に従わない場合があり得るが、それにも関わらず、ＫａｂａｔＣＤＲと重複するが、これらは、残基又は場合によってＣＤＲ全体の特定の残基又は基が、抗原結合に著しい影響を与えないという予測又は実験的な発見に照らして、短縮又は延長され得る。本明細書に使用されている方法は、これらの系の何れかに従って定義されたＣＤＲを使用し得るが、好ましい実施形態は、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａによって定義されたＣＤＲを使用する。
【００６７】
本明細書で使用される「フレームワーク」又は「フレームワーク配列」という用語は、ＣＤＲを差し引いた可変領域の残りの配列を表す。ＣＤＲ配列の正確な定義は、異なる系によって決定され得るので、フレームワーク配列の意義は、これに対応して、異なる解釈に供せられる。６つのＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、−Ｌ２及び−Ｌ３並びに重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、−Ｈ２及び−Ｈ３）は、軽鎖及び重鎖上のフレームワーク領域も、各鎖上の４つの亜領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）に分割し、ＣＤＲ１はＦＲ１とＦＲ２の間に位置し、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３の間に、ＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４の間に位置する。他者によって表記されるように、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３又はＦＲ４として特定の亜領域を特定せずに、フレームワーク領域は、天然に存在する単一の免疫グロブリン鎖の可変領域内の組み合わされたＦＲを表す。本明細書において使用される、１つのＦＲは、４つの亜領域の１つを表し、複数のＦＲは、フレームワーク領域を構成する４つの亜領域の２つ又はそれ以上を表す。
【００６８】
本明細書において使用される「生殖系列抗体遺伝子」又は「遺伝子断片」という用語は、特定の免疫グロブリンの発現のために遺伝的再編成及び変異をもたらす成熟プロセスを経ていない非リンパ系細胞によってコードされる免疫グロブリン配列を表す。（例えば、Ｓｈａｐｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２（３）：１８３−２００（２００２）；Ｍａｒｃｈａｌｏｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  Ｂｉｏｌ．４８４：１３−３０（２００１）参照）。本発明の様々な実施形態によって提供される利点の１つは、生殖系列抗体遺伝子は、成熟した抗体遺伝子より、種内の個体に特徴的な必須のアミノ酸配列構造を保存する傾向がより大きく、このため、その種において治療的に使用された場合に、外来源に由来するものと認識される可能性がより低いという認識から生じる。
【００６９】
本明細書において使用される「ヒト化抗体」という用語は、目的の抗原に免疫特異的に結合し、並びにヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域及び非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補的決定領域（ＣＤＲ）を含む抗体又はそのバリアント、誘導体、類縁体若しくは断片である。ＣＤＲに関して、本明細書において使用される「実質的に」という用語は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有するＣＤＲを表す。ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）の全てを実質的に含み、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全ては非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のものに対応し、及びフレームワーク領域の全て又は実質的に全てが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。好ましくは、ヒト化抗体は、免疫グロブリン、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含む。幾つかの実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖と、重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含有する。この抗体は、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４領域も含み得る。幾つかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含有する。幾つかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含有する。特定の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖のヒト化可変ドメイン及び／又はヒト化重鎖のみを含有する。
【００７０】
本明細書において使用される「中和」という用語は、結合タンパク質がサイトカインに特異的に結合して、サイトカインの生物学的活性を中和することを表す。好ましくは、中和結合タンパク質はサイトカインに結合し、少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％又はそれ以上、その生物学的活性を低下させる。
【００７１】
「活性」という用語は、２つ又はそれ以上の抗原に対するＤＶＤ−Ｉｇの結合特異性／親和性などの活性を含む。
【００７２】
「エピトープ」という用語には、免疫グロブリン又はＴ細胞受容体に特異的に結合することができる、あらゆるポリペプチド決定基が含まれる。ある種の実施形態において、エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル又はスルホリルなどの分子の化学的に活性な表面基を含み、ある種の実施形態において、特異的な三次元構造的特徴及び／又は特異的な電荷特徴を有し得る。エピトープとは、抗体によって結合される抗原の領域である。ある種の実施形態において、抗体が、タンパク質及び／又は高分子の複雑な混合物中で、その標的抗原を優先的に認識する場合に、抗体は抗原を特異的に結合すると称される。
【００７３】
本明細書において使用される「表面プラズモン共鳴」という用語は、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いて、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによって、リアルタイムな生物特異的相互作用の分析を可能とする光学現象を表す。さらなる記載については、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９３）  Ａｎｎ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｌｉｎ．  ５１：１９−２６；Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７；Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９５）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．  ８：１２５−１３１；ａｎｄ  Ｊｏｈｎｎｓｏｎ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １９８：２６８−２７７を参照されたい。
【００７４】
本明細書において使用される「Ｋｏｎ」という用語は、本分野において公知であるように、抗体／抗原複合体を形成するための抗原への抗体の会合に対する結合速度定数を表すものとする。
【００７５】
本明細書において使用される「Ｋｏｆｆ」という用語は、本分野において公知であるように、抗体／抗原複合体からの抗体の解離に対する解離速度定数を表すものとする。
【００７６】
本明細書において使用される「Ｋｄ」という用語は、本分野において公知であるように、特定の抗体抗原相互作用の解離定数を表すものとする。
【００７７】
本明細書において使用される「標識された結合タンパク質」という用語は、結合タンパク質の同定を与える標識が取り込まれたタンパク質を表す。好ましくは、標識は、検出可能なマーカーであり、例えば、放射性標識されたアミノ酸の取り込み、又は印を付けたアビジン（例えば、光学的方法又は比色分析法によって検出することができる、蛍光マーカー又は酵素活性を含有するストレプトアビジン）によって検出することができるビオチン部分のポリペプチドへの付着である。ポリペプチド用の標識の例には、以下の放射性同位体又は放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ又は１５３Ｓｍ）；蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニドリン光体）；酵素的標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）；化学発光マーカー；ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体に対する結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）；及びガドリニウムキレートなどの磁気因子が含まれるが、これらに限定されない。
【００７８】
「連結体」という用語は、第二の化学部分（治療剤又は細胞毒性剤など）に化学的に連結された抗体などの結合タンパク質を表す。本明細書において、「因子」という用語は、化学的化合物、化学的化合物の混合物、生物学的高分子又は生物由来物質から作製された抽出物を表記するために使用される。好ましくは、治療剤又は細胞毒性因子には、百日咳毒素、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール及びピューロマイシン並びにこれらの類縁体又は相同体が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００７９】
本明細書において使用される「結晶」及び「結晶化された」という用語は、結晶の形態で存在する抗体又はその抗原結合部分を表す。結晶は、物質の固体状態の一形態であり、これは、非晶質の固体状態又は液体の結晶状態などの他の形態とは異なる。結晶は、原子、イオン、分子（例えば、抗体などのタンパク質）又は分子集合体（例えば、抗原／抗体複合体）の規則的な反復する三次元配列から構成される。これらの三次元配列は、本分野においてよく理解されている特異的な数学的関係に従って整列されている。結晶中で反復されている基礎的単位又は構築ブロックは、非対称単位と呼ばれる。所定の十分に整えられた結晶的対称性に合致する配置での非対称単位の反復は、結晶の「単位格子」を与える。全ての三次元中での規則的な転換による単位格子の反復は、結晶を与える。Ｇｉｅｇｅ，Ｒ．  ａｎｄ  Ｄｕｃｒｕｉｘ，Ａ．  Ｂａｒｒｅｔｔ，Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，２ｎｄ  ｅａ．，ｐｐ．２０  １−１６，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９９９）を参照されたい。
【００８０】
本明細書において使用される「ポリヌクレオチド」という用語は、２つ又はそれ以上のヌクレオチド（リボヌクレオチド若しくはデオキシヌクレオチドの何れかまたはヌクレオチドの何れかのタイプの修飾された形態）のポリマー形態を意味する。本用語は、ＤＮＡの一本鎖及び二本鎖形態を含むが、好ましくは、二本鎖ＤＮＡである。
【００８１】
本明細書において使用される「単離されたポリペプチド」という用語は、（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡ若しくは合成起源又はこれらの幾つかの組み合わせの）ポリヌクレオチドを意味するものとし、その起源のために、「単離されたポリヌクレオチド」は、「単離されたポリヌクレオチド」が本来その中でともに見出されるポリヌクレオチドの全部又は一部と会合していない、本来連結されていないポリヌクレオチドに作用可能に連結されている、又はより大きな配列の一部として本来存在しない、ことを意味する。
【００８２】
本明細書において使用される「ベクター」という用語は、核酸分子に連結されている別の核酸を輸送することができる該核酸分子を表すものとする。ベクターの１つの種類は「プラスミド」であり、これは、その中にさらなるＤＮＡセグメントを連結し得る環状二本鎖ＤＮＡループを表す。ベクターの別の種類はウイルスベクターであり、ここで、追加のＤＮＡセグメントはウイルスゲノム中に連結され得る。ある種のベクターは、当該ベクターがその中に導入された宿主細胞中で自律的複製を行うことができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞中への導入されて、宿主細胞のゲノム中に組み込まれることが可能であり、これにより、宿主ゲノムとともに複製される。さらに、ある種のベクターは、それらが作用可能に連結されている遺伝子の発現を誘導することが可能である。このようなベクターは、本明細書において、「組換え発現ベクター」（又は単に、「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、しばしば、プラスミドの形態である。プラスミドは、最も一般的に使用されるベクターの形態であるので、本明細書において、「プラスミド」及び「ベクター」は互換的に使用され得る。しかしながら、本発明は、均等な機能を果たす、ウイルスベクターなどの（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）発現ベクターのような他の形態を含むものとする。
【００８３】
「作用可能に連結された」という用語は、記載された成分をそれらを所期の様式で機能させることができる関係にある併置状態を表す。コード配列に対して「作用可能に連結された」制御配列は、制御配列と適合的な条件下で、コード配列の発現が達成されるように連結されている。「作用可能に連結された」配列は、目的の遺伝子と連続する発現調節配列及び目的の遺伝子を調節するように、トランスにて又は離れて作用する発現調節配列の両方を含む。本明細書において使用される「発現調節配列」という用語は、連結されているコード配列の発現及びプロセッシングに影響を与えるために必要であるポリヌクレオチド配列を表す。発現調節配列には、適切な転写開始、終結、プロモーター及びエンハンサー配列；スプライシング及びポリアデニル化シグナルなどの効率的なＲＮＡプロセッシングシグナル；細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列；翻訳効率を増強する配列（すなわち、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列）；タンパク質の安定性を増強する配列；及び所望であれば、タンパク質分泌を増強させる配列が含まれる。このような調節配列の性質は、宿主生物に応じて異なる。原核生物では、このような調節配列は、一般に、プロモーター、リボソーム結合部位及び転写終結配列を含む。真核生物では、一般に、このような調節配列には、プロモーター及び転写終結配列が含まれ得る。「調節配列」という用語は、その存在が発現及びプロセッシングに不可欠である成分を含むものとし、その存在が有利である追加の成分、例えば、リーダー配列及び融合対配列も含むことが可能である。
【００８４】
本明細書において記載される「形質転換」とは、外来ＤＮＡが宿主細胞に入る全てのプロセスを表す。形質転換は、本分野で周知の様々な方法を用いて、自然の条件又は人工の条件下で起こり得る。形質転換は、原核又は真核宿主細胞中へ外来核酸配列を挿入するための何れかの公知の方法に依拠し得る。本方法は、形質転換されている宿主細胞に基づいて選択され、ウイルス感染、電気穿孔、リポフェション及び粒子照射を含み得るが、これらに限定されない。このような「形質転換された」細胞には、挿入されたＤＮＡが、自律的に複製するプラスミドとして、又は宿主染色体の一部として、その中で複製することできる安定に形質転換された細胞が含まれる。これらには、挿入されたＤＮＡ又はＲＮＡを、限られた時間にわたって一過性に発現する細胞も含まれる。
【００８５】
本明細書において使用される「組換え宿主細胞」（又は単に、「宿主細胞」）という用語は、外来ＤＮＡがその中に導入されている細胞を表すものとする。このような用語は、当該細胞を表すのみならず、このような細胞の子孫も表すことを理解すべきである。突然変異又は環境的な影響のために、後続の世代中にある種の修飾が生じ得るので、このような子孫は、実際には親細胞と同一でないことがあり得るが、本明細書において使用される「宿主細胞」という用語の範囲になお含まれる。好ましくは、宿主細胞には、生物の何れかの界から選択される原核及び真核細胞が含まれる。好ましい真核細胞には、原生生物、真菌、植物及び動物細胞が含まれる。最も好ましくは、宿主細胞には、原核細胞株イー・コリ；哺乳動物細胞株ＣＨＯ、ＨＥＫ２９３及びＣＯＳ；昆虫細胞株Ｓｆ９及び真菌細胞サッカロミセス・セレビシアエが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００８６】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成及び組織培養及び形質転換（例えば、電気穿孔、リポフェクション）に対しては標準的な技術が使用され得る。酵素反応及び精製技術は、製造業者の説明書に従って、又は本分野で一般的に遂行されているように、又は本明細書に記載されているように、実施され得る。一般に、先述の技術及び手順は、本分野で周知の慣用的な方法に従い、並びに本明細書を通じて引用及び論述されている様々な一般的参考文献及びより具体的な参考文献中に記載されているように、実施し得る。例えば、「Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．  Ｙ．（１９８９））」（参照により、あらゆる目的のために、本明細書に組み込まれる。）を参照されたい。
【００８７】
本分野において公知であり、及び本明細書において使用されている「トランスジェニック生物」とは、導入遺伝子を含有する細胞を有する生物を表し、生物中に導入された導入遺伝子（又は生物の子孫）は、生物中に自然に発現されていないポリペプチドを発現する。「導入遺伝子」とは、細胞のゲノム中に安定に及び作用可能に組み込まれているＤＮＡ構築物であり、この細胞からトランスジェニック生物が発達し、トランスジェニック生物の１つ又はそれ以上の細胞種又は組織中で、コードされた遺伝子産物の発現を誘導する。
【００８８】
「制御する」又は「調節する」という用語は互換的に使用され、本明細書において使用される場合、目的の分子の活性（例えば、サイトカインの生物学的活性）の変化又は変更を表す。調節は、目的の分子の一定の活性又は機能の規模の増加又は減少であり得る。分子の典型的な活性及び機能には、結合特性、酵素活性、細胞受容体活性化及びシグナル伝達が含まれるが、これらに限定されない。
【００８９】
これに対応して、本明細書において使用される「調節物質」という用語は、目的の分子の活性又は機能（例えば、サイトカインの生物学的活性）を変化又は変更させることが可能な化合物である。例えば、調節物質は、調節物質の不存在下で観察される活性又は機能の規模と比べて、分子のある種の活性又は機能の規模の増加又は減少を引き起こし得る。ある種の実施形態において、調節物質は、分子の少なくとも１つの活性又は機能の規模を減少させる阻害剤である。典型的な阻害剤には、タンパク質、ペプチド、抗体、ペプチバディ、炭水化物又は小有機分子が含まれるが、これらに限定されるものではない。ペプチバディは、例えば、ＷＯ０１／８３５２５に記載されている。
【００９０】
本明細書において使用される「アゴニスト」という用語は、目的分子と接触したときに、アゴニストの不存在下で観察される活性又は機能の規模と比べて、分子のある種の活性又は機能の規模の増加を引き起こす調節物質を表す。興味深い特定のアゴニストには、ポリペプチド、核酸、炭水化物又は抗原に結合する他の全ての分子が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００９１】
本明細書において使用される「アンタゴニスト」又は「阻害剤」という用語は、目的分子と接触したときに、アンタゴニストの不存在下で観察される活性又は機能の規模と比べて、分子のある種の活性又は機能の規模の減少を引き起こす調節物質を表す。興味深い具体的なアンタゴニストには、抗原の生物学的又は免疫学的活性を遮断又は調節するアンタゴニストが含まれる。抗原のアンタゴニスト及び阻害剤には、タンパク質、核酸、炭水化物又は抗原に結合する他の全ての分子が含まれ得るが、これらに限定されるものではない。
【００９２】
本明細書において使用される「有効量」という用語は、疾患若しくはその１つ若しくはそれ以上の症候の重度及び／又は持続時間を低下若しくは軽減し、疾患の進行を抑制し、疾患の退行を引き起こし、疾患に伴う１つ若しくはそれ以上の症候の再発、発達、発症若しくは進行を予防し、疾患を検出し、又は別の療法（例えば、予防的又は治療的剤）の予防的又は治療的効果を増強若しくは改善するのに十分である療法の量を表す。
【００９３】
本明細書で使用される「試料」という用語は、最も広義で使用される。本明細書において使用される「生物学的試料」は、生物又は生物であったものから得られた物質の何れかの量を含むが、これらに限定されない。このような生物には、ヒト、マウス、ラット、サル、イヌ、ウサギ及びその他の動物が含まれるが、これらに限定されない。このような物質には、血液、血清、尿、滑液、細胞、臓器、組織、骨髄、リンパ節及び脾臓が含まれるが、これらに限定されない。
【００９４】
Ｉ．ＤＶＤ結合タンパク質の作製
本発明は、１つ又はそれ以上の標的に結合することが可能な二重可変ドメイン結合タンパク質及びこれを作製する方法に関する。好ましくは、結合タンパク質はポリペプチド鎖を含み、前記ポリペプチド鎖はＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ（ＶＤ１は第一の可変ドメインであり、ＶＤ２は第二の可変ドメインであり、Ｃは定常ドメインであり、Ｘ１はアミノ酸又はポリペプチドを表し、Ｘ２はＦｃ領域を表し、及びｎは０又は１である。）を含む。本発明の結合タンパク質は、様々な技術を用いて作製することが可能である。本発明は、発現ベクター、宿主細胞及び結合タンパク質を作製する方法を提供する。
【００９５】
Ａ．親モノクローナル抗体の作製
ＤＶＤ結合タンパク質の可変ドメインは、目的の抗原に結合することができるポリクローナル及びモノクローナル抗体など、親抗体から取得することが可能である。これらの抗体は、天然に存在し得、又は組み換え技術によって作製され得る。
【００９６】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組み換え及びファージディスプレー技術又はこれらの組み合わせの使用など、本分野で公知の多様な技術を用いて調製することが可能である。例えば、モノクローナル抗体は、本分野において公知であり、例えば、「Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．  １９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−ＣｅＩｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）」（前記参考文献は、参照により全体が組み込まれる。）に教示されているものなど、ハイブリドーマ技術を用いて作製することが可能である。本明細書において使用される「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術を通じて産生された抗体に限定されない。「モノクローナル抗体」という用語は、あらゆる真核、原核又はファージクローンなど、単一のクローンに由来する抗体を表し、それが産生される方法によらない。ハイブリドーマは、実施例１において、以下に記載されているように、選択され、クローニングされ、頑強なハイブリドーマ増殖、高い抗体産生及び所望の抗体特性など、所望の特性についてさらにスクリーニングされる。ハイブリドーマは、培養され、同系の動物中で、免疫系を欠く動物（例えば、ヌードマウス）中で、インビボで、又は細胞培養中で、インビトロで増殖され得る。ハイブリドーマを選択し、クローニングし、増殖させる方法は、当業者に周知である。好ましい実施形態において、ハイブリドーマはマウスハイブリドーマである。別の好ましい実施形態において、ハイブリドーマは、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ又はウマなど、非ヒト非マウス種の中で産生され得る。別の実施形態において、ハイブリドーマは、ヒト非分泌性骨髄腫が、特異的抗原に結合することが可能な抗体を発現するヒト細胞と融合されているヒトハイブリドーマである。
【００９７】
また、組み換えモノクローナル抗体は、Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ５，６２７，０５２，ＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ９２／０２５５１及びＢａｂｃｏｃｋ，Ｊ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：７８４３−７８４８に記載されているように、選択リンパ球抗体法（ＳＬＡＭ；ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｍｅｔｈｏｄ）として本分野で呼ばれている手法を用いて、単一の単離されたリンパ球から作製される。この方法では、目的の抗体を分泌する単一細胞、例えば、免疫された動物に由来するリンパ球が同定され、重鎖及び軽鎖可変領域ｃＤＮＡが、逆転写酵素−ＰＣＲによって細胞から救出され、これらの可変領域は、次いで、ＣＯＳ又はＣＨＯ細胞などの哺乳動物宿主細胞中で、適切な免疫グロブリン定常領域（例えば、ヒト定常領域）に関連して発現することが可能である。増幅された免疫グロブリン配列で形質移入され、インビボで選択されたリンパ球に由来する宿主細胞は、次いで、例えば、目的の抗原に対する抗体を発現する細胞を単離するために、形質移入された細胞をパニングすることによって、インビトロで、さらに分析及び選択を行うことが可能である。増幅された免疫グロブリン配列は、さらに、ＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ９７／２９１３１及びＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ００／５６７７２に記載されているものなど、インビトロでのアフィニティー成熟方法によるなど、インビトロで操作することが可能である。
【００９８】
モノクローナル抗体は、目的の抗原を有するヒト免疫グロブリン遺伝子座の幾つか又は全てを含む非ヒト動物を免疫することによっても産生される。好ましい実施形態において、非ヒト動物は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウス（ヒト免疫グロブリン遺伝子座の巨大断片を含み、マウス抗体産生を欠失している改変されたマウス系統）である。例えば、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３−２１（１９９４）並びにＵｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐａｔｅｎｔｓ  ５，９１６，７７１，５，９３９，５９８，５，９８５，６１５，５，９９８，２０９，６，０７５，１８１，６，０９１，００１，６，１１４，５９８及び６，１３０，３６４を参照されたい。１９９１年７月２５日に公開されたＷＯ９１／１０７４，、１９９４年２月３日に公開されたＷＯ９４／０２６０２、ともに１９９６年１０月３１日に公開されたＷＯ９６／３４０９６及びＷＯ９６／３３７３５、１９９８年４月２３日に公開されたＷＯ９８／１６６５４、１９９８年６月１１日に公開されたＷＯ９８／２４８９３、１９９８年１１月１２日に公開されたＷＯ９８／５０４３３、１９９９年９月１０日に公開されたＷＯ９９／４５０３１、１９９９年１０月２１日に公開されたＷＯ９９／５３０４９、２０００年２月２４日に公開されたＷＯ  ０００９５６０及び２０００年６月２９日に公開されたＷＯ００／０３７５０４も参照されたい。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスは、完全なヒト抗体の成人様ヒトレパートリーを産生し、抗原特異的ヒトＭａｂを生成する。ＸＥＮＯＭＯＵＳＥトランスジェニックマウスは、ヒト重鎖遺伝子座及びｘ軽鎖遺伝子座のメガ塩基サイズの生殖系列配置ＹＡＣ断片の導入を通じて、ヒト抗体レパートリーの約８０％を含有する。Ｍｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：１４６−１５６（１９９７），Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  Ｊ．  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３−４９５（１９９８）（これらの開示内容は、参照により、本明細書に組み込まれる。）を参照されたい。
【００９９】
親抗体を作製するために、インビトロ法も使用することが可能であり、抗体ライブラリーは、所望の結合特異性を有する抗体を同定するためにスクリーニングされる。組み換え抗体ライブラリーのこのようなスクリーニングの方法は、本分野において周知であり、例えば、Ｌａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ５，２２３，４０９；Ｋａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ＷＯ  ９２／１８６１９；Ｄｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ＷＯ  ９１／１７２７１；Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ  ＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ＷＯ  ９２／２０７９１；Ｍａｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ＷＯ  ９２／１５６７９；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ＷＯ  ９３／０１２８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ  ＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ＷＯ  ９２／０１０４７；Ｇａｒｒａｒｄ  ｅｔ  ａｌ  ＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＷＯ  ９２／０９６９０；Ｆｕｃｈｓ  ｅｔ  ａｌ（１９９１）  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０−１３７２；Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄ  Ｈｙｈｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５；Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ（１９８９）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ（１９９０）  ３４８：５５２−５５４；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ（１９９３）  ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２６：８８９−  ８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  ＰＮＡＳ  ８９：３５７６−３５８０；Ｇａｒｒａｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）  Ｎｕｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １９：４１３３−４１３７；ａｎｄ  Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ（１９９１）  ＰＮＡＳ  ８８：７９７８−７９８２，ＵＳ  ｐａｔｅｎｔ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ２００３０１８６３７４，ａｎｄ  ＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＷＯ  ９７／２９１３１（これらの各々の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。）に記載されている方法が含まれる。
【０１００】
本発明の親抗体は、本分野で公知の様々なファージディスプレイ法を用いて作製することも可能である。ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインは、これらをコードしているポリヌクレオチド配列を担持するファージ粒子の表面上にディスプレイされる。特に、このようなファージは、レパートリー又はコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒト又はマウス）から発現される抗原結合ドメインをディスプレイするために使用することが可能である。目的の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原を用いて、例えば、標識された抗原又は固体表面若しくはビーズに結合若しくは捕捉された抗原を用いて、選択又は同定することが可能である。これらの方法で使用されるファージは、典型的には、ファージ遺伝子ＩＩＩ又は遺伝子ＶＩＩＩタンパク質の何れかに組み換え的に融合されたＦａｂ、Ｆｖ又はジスルフィドで安定化されたＦｖ抗体ドメインとともにファージから発現されたｆｄ及びＭ１３結合ドメインを含む糸状ファージである。本発明の抗体を作製するために使用することが可能なファージディスプレイ法の例には、「Ｂｒｉｎｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ１８２：４１−５０（１９９５）；Ａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：１７７−１８６（１９９５）；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２−９５８（１９９４）；Ｐｅｒｓｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  １８７  ９−１８（１９９７）；Ｂｕｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５７：１９１−２８０（１９９４）；ＰＣＴ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；ＰＣＴ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ＷＯ９０／０２８０９；ＷＯ９１／１０７３７；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９３／１１２３６；ＷＯ９５／１５９８２；ＷＯ９５／２０４０１；並びにＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．５，６９８，４２６；５，２２３，４０９；５，４０３，４８４；５，５８０，７１７；５，４２７，９０８；５，７５０，７５３；５，８２１，０４７；５，５７１，６９８；５，４２７，９０８；５，５１６，６３７；５，７８０，２２５；５，６５８，７２７；５，７３３，７４３及び５，９６９，１０８」（これらの各々は、その全体が、参照により、本明細書に組み込まれる。）に開示されているものが含まれる。
【０１０１】
上記参考文献に記載されているように、ファージ選択後、ヒト抗体又は他の所望される全ての抗原結合断片を含む完全な抗体を作製するために、ファージから得た抗体コード領域を単離及び使用し、例えば、以下に詳述されているように、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母及び細菌など、あらゆる所望の宿主中で発現させることが可能である。例えば、ＰＣＴ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ９２／２２３２４；Ｍｕｌｌｉｎａｘ  ｅｔ  ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １２（６）：８６４−８６９（１９９２）；及びＳａｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＪＲＩ  ３４：２６−３４（１９９５）；及びＢｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３（１９８８）に開示されている方法などの本分野で公知の方法を用いて、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）２断片を組み換え的に産生するための技術も使用することが可能である（前記参考文献は、参照により、それらの全体が組み込まれる。）。一本鎖Ｆｖ及び抗体を作製するために使用することが可能な技術の例には、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．４，９４６，７７８及び５，２５８，４９８；Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２０３：４６−８８（１９９１）；Ｓｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９０：７９９５−７９９９（１９９３）；並びにＳｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０３８−１０４０（１９８８）に記載されているものが含まれる。
【０１０２】
ファージディスプレイによる組み換え抗体ライブラリーのスクリーニングに代えて、巨大なコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングするための本分野で公知の他の方法を、親抗体の同定のために適用することが可能である。代替的発現系の１つの種類は、Ｓｚｏｓｔａｋ及びＲｏｂｅｒｔｓによるＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＮＯ．ＷＯ  ９８／３１７００並びにＲｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｗ．  ａｎｄ  Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｊ．Ｗ．（１９９７）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４，１２２９７−１２３０２に記載されているような、組み換え抗体ライブラリーがＲＮＡ−タンパク質融合物として発現されるものである。この系において、ピューロマイシン、ペプチジルアクセプター抗生物質をそれらの３’末端に担持する合成ｍＲＮＡのインビトロ翻訳によって、ｍＲＮＡ及びこれがコードするペプチド又はタンパク質の間に共有結合的融合物が作製される。従って、特異的なｍＲＮＡは、コードされているペプチド又はタンパク質、例えば抗体又はその一部の特性（抗体又はその一部の、二重特異性抗原への結合など）に基づいて、ｍＲＮＡの複雑な混合物（例えば、コンビナトリアルライブラリー）から濃縮することが可能である。このようなライブラリーのスクリーニングから回収された、抗体又はその一部をコードする核酸配列は、上述のような組み換え手段によって（例えば、哺乳動物宿主細胞中で）発現されることが可能であり、さらに、最初に選択された配列中に変異が導入されているｍＲＮＡ−ペプチド融合物のスクリーニングのさらなるラウンドによって、又は上述のように、組み換え抗体のインビトロでの親和性成熟のためのその他の方法によって、さらなる親和性成熟に供することが可能である。
【０１０３】
別のアプローチにおいて、親抗体は、本分野で公知の酵母ディスプレイ法を用いて作製することも可能である。酵母ディスプレイ法では、抗体ドメインを酵母細胞壁に繋留し、これらを酵母の表面上にディスプレイするために、遺伝学的な方法が使用される。特に、このような酵母は、レパートリー又はコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒト又はマウス）から発現される抗原結合ドメインをディスプレイするために使用することが可能である。親抗体を作製するために使用することが可能な酵母ディスプレイ法の例には、参照により本明細書に組み込まれるＷｉｔｔｒｕｐ，ｅｔ  ａｌ．Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔｅｎｔ  ＮＯ．６，６９９，６５８に開示されているものが含まれる。
【０１０４】
上記抗体は、ＣＤＲ移植された及びヒト化された親抗体を作製するために、さらに修飾を施すことが可能である。ＣＤＲ移植された親抗体は、ヒト抗体由来の重鎖及び軽鎖可変領域配列を含み、ＶＨ及び／又はＶＬのＣＤＲ領域の１つ又はそれ以上が、目的の抗原に結合することが可能なマウス抗体のＣＤＲ配列と置換される。あらゆるヒト抗体から得られるフレームワーク配列が、ＣＤＲ移植のためのテンプレートとしての役割を果たし得る。しかしながら、このようなフレームワーク上への直鎖の置換は、しばしば、抗原への結合親和性を若干喪失させる。元のマウス抗体に対して、ヒト抗体がより相同であるほど、ヒトフレームワークとマウスＣＤＲの組み合わせは、親和性を低下させ得るＣＤＲ中の歪みを導入する可能性がより低くなる。従って、ＣＤＲ以外のマウス可変フレームワークを置換するために選択されたヒト可変フレームワークは、マウス抗体可変領域フレームワークと少なくとも６５％の配列同一性を有することが好ましい。ＣＤＲを除くヒト及びマウス可変領域は、少なくとも７０％の配列同一性を有することがより好ましい。ＣＤＲを除くヒト及びマウス可変領域は、少なくとも７５％の配列同一性を有することがさらに好ましい。ＣＤＲを除くヒト及びマウス可変領域は、少なくとも８０％の配列同一性を有することが最も好ましい。このような抗体を作製する方法は、本分野において公知である（ＥＰ２３９，４００；ＰＣＴｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ９１／０９９６７；Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔ．  Ｎｏｓ．  ５，２２５，５３９；５，５３０，１０１；及び５，５８５，０８９参照）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）又はリサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（ＥＰ  ５９２，１０６；ＥＰ  ５１９，５９６；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ７（６）：８０５−８１４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９１：９６９−９７３（１９９４）），及びチェーンシャッフリング（Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔ．  ＮＯ．５，５６５，３５２）。
【０１０５】
ヒト化抗体は、非ヒト種に由来する１つ又はそれ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）と、ヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域とを有する所望の抗原に結合する非ヒト種抗体から得られる抗体分子である。公知のヒトＩｇ配列は、開示されている。例えば、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ−／ｑｕｅｒｙ．ｆｃｇｉ；ｗｗｗ．ａｔｃｃ．ｏｒｇ／ｐｈａｇｅ／ｈｄｂ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｓｃｉｑｕｅｓｔ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｂｃａｍ．ｃｏｍ／；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／ｏｎｌｉｎｅｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｐｕｂｌｉｃ．ｉａｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｐｅｄｒｏ／ｒｅｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｍｇｅｎ．ｕｎｉ−ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．ｄｅ／ＳＤ／ＩＴ／ＩＴ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｗｈｆｒｅｅｍａｎ．ｃｏｍ／ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ／ＣＨ−０５／ｋｕｂｙ０５．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｌｉｂｒａｒｙ．ｔｈｉｎｋｑｕｅｓｔ．ｏｒｇ／１２４２９／Ｉｍｍｕｎｅ／Ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｈｈｍｉ．ｏｒｇ／ｇｒａｎｔｓ／ｌｅｃｔｕｒｅｓ／１９９６／ｖｌａｂ／；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．Ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｍ．−ｉｋｅｉｍａｇｅｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｏｕｒｃｅ．ｃｏｍ／；ｍｃｂ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＢｉｏＬｉｎｋｓ／Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．ｈｔｍｌ．ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙｌｉｎｋ．ｃｏｍ／；ｐａｔｈｂｏｘ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｅｎｔｅｒ／ｉｎｄｅｘ．−ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｈｃｌ／；ｗｗｗ．ｐｅｂｉｏ．ｃｏｍ／ｐａ／３４０９１３／３４０９１３．ｈｔｍｌ−；ｗｗｗ．ｎａｌ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／ａｗｉｃ／ｐｕｂｓ／ａｎｔｉｂｏｄｙ／；ｗｗｗ．ｍ．ｅｈｉｍｅ−ｕ．ａｃｊｐ／．ａｂｏｕｔ．ｙａｓｕｈｉｔｏ−／Ｅｌｉｓａ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ．ｃｏｍ／ｔａｂｌｅ．ａｓｐ；ｗｗｗ．ｉｃｎｅｔ．ｕｋ／ａｘｐ／ｆａｃｓ／ｄａｖｉｅｓ／ｌｉｎ−ｋｓ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｔｅｃｈ．ｕｆｌ．ｅｄｕ／．ａｂｏｕｔ．ｆｃｃｌ／ｐｒｏｔｏｃｏｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｓａｃ−ｎｅｔ．ｏｒｇ／ｓｉｔｅｓ ｇｅｏ．ｈｔｍｌ；ａｘｉｍｔｌ．ｉｍｔ．ｕｎｉ−ｍａｒｂｕｒｇ．ｄｅ／．ａｂｏｕｔ．ｒｅｋ／ＡＥＰ−Ｓｔａｒｔ．ｈｔｍｌ；ｂａｓｅｒｖ．ｕｃｉ．ｋｕｎ．ｎｌ／．ａｂｏｕｔ．ｊｒａａｔｓ／ｌｉｎｋｓｌ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｒｅｃａｂ．ｕｎｉ−ｈｄ．ｄｅ／ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ／；ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｉｍｔ−ｄｏｃ／ｐｕｂｌｉｃ／ＩＮＴＲＯ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／Ｖ ｍｉｃｅ．ｈｔｍｌ；ｉｍｇｔ．ｃｎｕｓｃ．ｆｒ：８１０４／；ｗｗｗ．ｂｉｏｃｈｅｍ．ｕｃｌ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍａｒｔｉｎ／ａｂｓ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ａｎｔｉｂｏｄｙ．ｂａｔｈ．ａｃ．ｕｋ／；ａｂｇｅｎ．ｃｖｍ．ｔａｍｕ．ｅｄｕ／ｌａｂ／ｗｗｗａｂｇｅｎ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｕｎｉｚｈ．ｃｈ／．ａｂｏｕｔ．ｈｏｎｅｇｇｅｒ／ＡＨＯｓｅｍｉｎａｒ／Ｓｌｉｄｅ０１．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｂｋ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｕｂｃｇ０７ｓ／；ｗｗｗ．ｎｉｍｒ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋ／ＣＣ／ｃｃａｅｗｇ／ｃｃａｅｗｇ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏｕｔ．ｍｒｃ７／ｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ＴＡＨＨＰ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｉｂｔ．ｕｎａｍ．ｍｘ／ｖｉｒ／ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ／ｓｔａｔ ａｉｍ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｂｉｏｓｃｉ．ｍｉｓｓｏｕｒｉ．ｅｄｕ／ｓｍｉｔｈｇｐ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｃｒｙｓｔ．ｂｉｏｃ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／．ａｂｏ−ｕｔ．ｆｍｏｌｉｎａ／Ｗｅｂ−ｐａｇｅｓ／Ｐｅｐｔ／ｓｐｏｔｔｅｃｈ．ｈｔｍｌ；ｗｗｗ．ｊｅｒｉｎｉ．ｄｅ／ｆｒ  ｒｏｄｕｃｔｓ．ｈｔｍ；ｗｗｗ．ｐａｔｅｎｔｓ．ｉｂｍ．ｃｏｍ／ｉｂｎａ．ｈｔｍｌ．Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ（１９８３）（各々、参照により、全体本明細書にが組み込まれる。）。このような導入された配列は、免疫原性を低下させるために、又は結合、親和性、結合速度、解離速度、結合力、特異性、半減期若しくは本分野で公知の他の何れかの適切な特性を減少、増強若しくは修飾するために使用することが可能である。
【０１０６】
ヒトフレームワーク領域中のフレームワーク残基は、抗原結合を変化させるために、好ましくは抗原結合を改善させるために、ＣＤＲドナー抗体由来の対応する残基で置換され得る。これらのフレームワーク置換は、本分野で周知の方法によって、例えば、抗原結合にとって重要なフレームワーク残基を同定するために、ＣＤＲとフレームワーク残基の相互作用をモデリングすることによって、及び特定の位置における異常なフレームワーク残基を同定するための配列比較によって同定される。（例えば、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔ．  ＮＯ．５，５８５，０８９；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３（１９８８）（これらは、その全体が、本明細書中に参照により組み込まれる。）を参照されたい。）。三次元免疫グロブリンモデルが一般的に利用可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列が採り得る三次元立体構造を図式及び表示するコンピュータプログラムを利用可能である。これらのディスプレイの検査は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の推定される役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響を与える残基の分析を可能とする。このようにして、ＦＲ残基は、所望される抗体特性（標的抗原に対して増加された親和性など）が達成されるように、コンセンサス及び輸入配列から選択され、組み合わせることが可能である。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に影響を与えることに直接、及び最も実質的に関与する。抗体は、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２（１９８６）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４（１９８８）），Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７），Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５１：２６２３（１９９３），Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａ．  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ９１：９６９−９７３（１９９４）；ＰＣＴ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ  ９１／０９９６７，ＰＣＴ／：ＵＳ９８／１６２８０，ＵＳ９６／１８９７８，ＵＳ９１／０９６３０，ＵＳ９１／０５９３９，ＵＳ９４／０１２３４，ＧＢ８９／０１３３４，ＧＢ９１／０１１３４，ＧＢ９２／０１７５５；ＷＯ９０／１４４４３，ＷＯ９０／１４４２４，ＷＯ９０／１４４３０，ＥＰ２２９２４６，ＥＰ  ５９２，１０６；ＥＰ  ５１９，５９６，ＥＰ  ２３９，４００，Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．５，５６５，３３２，５，７２３．３２３，５，９７６，８６２，５，８２４，５１４，５，８１７，４８３，５８１４４７６，５７６３１９２，５７２３３２３，５，７６６８８６，５，７１４，３５２，６，２０４，０２３，６，１８０，３７０，５，６��３，７６２，５，５３０，１０１，５，５８５，０８９，５，２２５，５３９；４，８１６，５６７（各々（これらの中に引用されている参考文献を含む。）、参照により、全体が本明細書中に組み込まれる。）に記載されているものなどの（但し、これらに限定されない。）、本分野で公知の様々な技術を用いてヒト化することが可能である。
【０１０７】
親モノクローナル抗体は、特異的な標的に結合することができる、本分野において周知の様々なモノクローナル抗体から選択され得る。これらには、抗ＴＮＦ抗体（ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  ＮＯ．６，２５８，５６２）、抗ＩＬ−１２及び／又は抗ＩＬ−１２ｐ４０抗体（ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ６，９１４，１２８）；抗ＩＬ−１８抗体（ＵＳ２００５／０１４７６１０Ａ１）、抗Ｃ５、抗ＣＢＬ、抗ＣＤ１４７、抗ｇｐ１２０、抗ＶＬＡ−４、抗ＣＤ１１ａ、抗ＣＤ１８、抗ＶＥＧＦ、抗ＣＤ４０Ｌ、抗Ｉｄ、抗ＩＣＡＭ−１、抗ＣＸＣＬ１３、抗ＣＤ２、抗ＥＧＦＲ、抗ＴＧＦ−β２、抗Ｅ−セレクチン、抗第ＶＩＩ因子、抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、抗Ｆｇｐ、抗ＣＤ１１／１８、抗ＣＤ１４、抗ＩＣＡＭ−３、抗ＣＤ８０、抗ＣＤ４、抗ＣＤ３、抗ＣＤ２３、抗β２−インテグリン、抗α４β７、抗ＣＤ５２、抗ＨＬＡＤＲ、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ２０、抗ＭＩＦ、抗ＣＤ６４（ＦｃＲ）、抗ＴＣＲαβ、抗ＣＤ２、抗ＨｅｐＢ、抗ＣＡ１２５、抗ＥｐＣＡＭ、抗ｇｐ１２０、抗ＣＭＶ、抗ｇｐＩＩｂＩＩＩａ、抗ＩｇＥ、抗ＣＤ２５、抗ＣＤ３３、抗ＨＬＡ、抗ＶＮＲインテグリン、抗ＩＬ−１α、抗ＩＬ−１β、抗ＩＬ−１受容体、抗ＩＬ−２受容体、抗ＩＬ−４、抗ＩＬ−４受容体、抗ＩＬ−５、抗ＩＬ−５受容体、抗ＩＬ−６、抗ＩＬ−８、抗ＩＬ−９、抗ＩＬ−１３、抗ＩＬ−１３受容体、抗ＩＬ−１７及び抗ＩＬ−２３（Ｐｒｅｓｔａ  ＬＧ．  ２００５  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １１６：７３１−６及びｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐａｔｈ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／〜ｍｒｃ７／ｈｕｍａｎｉｓａｔｉｏｎ／ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．ｈｔｍｌ参照）が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０１０８】
親モノクローナル抗体は、使用が認可された、臨床試験中の又は臨床的用途のために開発中の様々な治療用抗体からも選択され得る。このような治療用抗体には、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（Ｒ），ＩＤＥＣ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）（例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．ＮＯ．５，７３６，１３７参照）、非ホジキンリンパ腫を治療するために認可されたキメラ抗ＣＤ２０抗体；ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｇｅｎｍａｂによって現在開発中の抗ＣＤ２０、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．ＮＯ．５，５００，３６２に記載されている抗ＣＤ２０抗体、ＡＭＥ−１３３（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）、ｈＡ２０（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、ＨｕｍａＬＹＭ（Ｉｎｔｒａｃｅｌ）及びＰＲＯ７０７６９（「Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｖａｒｉａｎｔｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」と題されたＰＣＴ／ＵＳ２００３／０４０４２６）、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（Ｒ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）（例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．ＮＯ．５，６７７，１７１参照）、乳癌を治療するために認可されたヒト化抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ抗体；ペルツズマブ（ｒｈｕＭａｂ−２Ｃ４，Ｏｍｎｉｔａｒｇ（Ｒ））、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって現在開発中；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，７５３，８９４に記載されている抗Ｈｅｒ２抗体；セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（Ｒ），Ｉｍｃｌｏｎｅ）（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．ＮＯ．４，９４３，５３３；ＰＣＴ  ＷＯ９６／４０２１０）、様々な癌に対する臨床試験中のキメラ抗ＥＧＦＲ抗体；ＡＢＸ−ＥＧＦ（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．ＮＯ．６，２３５，８８３）、Ａｂｇｅｎｉｘ−Ｉｍｍｕｎｅｘ−Ａｍｇｅｎによって現在開発中；ＨｕＭａｘ−ＥＧＦｒ（Ｕ．Ｓ．Ｓｅｒ．ＮＯ．１０／１７２，３１７）、Ｇｅｎｍａｂによって現在開発中；４２５、ＥＭＤ５５９００、ＥＭＤ６２０００及びＥＭＤ７２０００（Ｍｅｒｃｋ  ＫＧａＡ）（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．ＮＯ．５，５５８，８６４；Ｍｕｒｔｈｙ  ｅｔ  ａｌ．１９８７，Ａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．２５２（２）：５４９−６０；Ｒｏｄｅｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５（４）：３１５−２０；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．４（７）：７７３−８３）；ＩＣＲ６２（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）（ＰＣＴ  ＷＯ９５／２００４５；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．１９９３，２２（１−３）：１２９−４６；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．１９９３，６７（２）：２４７−５３；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉ  ｅｔ  ａｌ，１９９６，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．７３（２）：２２８−３５；Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉ  ｅｔ  ａｌ，２００３，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，１０５（２）：２７３−８０）；ＴｈｅｒａＣＩＭ  ｈＲ３（ＹＭ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃａｎａｄａ  ａｎｄ  Ｃｅｎｔｒｏ  ｄｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉａ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，Ｃｕｂａ（Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔ．  ＮＯ．５，８９１，９９６；Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔ．  ＮＯ．６，５０６，８８３；Ｍａｔｅｏ  ｅｔ  ａ���，１９９７，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３（１）：７１−８１）；ｍＡｂ−８０６（Ｌｕｄｗｉｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ）（Ｊｕｎｇｂｌｕｔｈ  ｅｔ  ａｌ．２００３，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．１００（２）：６３９−４４）；ＫＳＢ−１０２（ＫＳ  Ｂｉｏｍｅｄｉｘ）；ＭＲ１−１（ＩＶＡＸ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（ＰＣＴ  ＷＯ０１６２９３１Ａ２）；及びＳＣ１０Ｏ（Ｓｃａｎｃｅｌｌ）（ＰＣＴ  ＷＯ０１／８８１３８）；アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（Ｒ），Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍ）、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病の治療に対して現在認可されているヒト化モノクローナル抗体；ムロモナブ−ＣＤ３（ＯｒｔｈｏｃｌｏｎｅＯＫＴ３（Ｒ））、Ｏｒｔｈｏ  Ｂｉｏｔｅｃｈ／Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｓｏｎによって開発された抗ＣＤ３抗体、イブリツモマブ・チウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（Ｒ））、ＩＤＥＣ／ＳｃｈｅｒｉｎｇＡＧによって開発された抗ＣＤ２０抗体、ゲムツズマブ・オゾガマイシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（Ｒ））、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｗｙｅｔｈによって開発された抗ＣＤ３３（ｐ６７タンパク質）抗体、アレファセプト（Ａｍｅｖｉｖｅ（Ｒ））、Ｂｉｏｇｅｎ）によって開発された抗ＬＦＡ−３Ｆｃ融合、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ／Ｌｉｌｌｙによって開発されたアブシキシマブ（ＲｅｏＰｒｏ（Ｒ））、Ｎｏｖａｒｔｉｓによって開発されたバシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（Ｒ））、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅによって開発されたパリジズマブ（Ｓｙｎａｇｉｓ（Ｒ））、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（Ｒ））、Ｃｅｎｔｏｃｏｒによって開発された抗ＴＮＦα抗体、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（Ｒ））、Ａｂｂｏｔｔによって開発された抗ＴＮＦα抗体、Ｈｕｍｉｃａｄｅ（Ｒ）、Ｃｅｌｌｔｅｃｈによって開発された抗ＴＮＦα抗体、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（Ｒ））、Ｉｍｍｕｎｅｘ／Ａｍｇｅｎによって開発された抗ＴＮＦαＦｃ融合、ＡＢＸ−ＣＢＬ、Ａｂｇｅｎｉｘによって開発されている抗体ＣＤ１４７抗体、ＡＢＸ−ＩＬ８、Ａｂｇｅｎｉｘによって開発されている抗ＩＬ８抗体、ＡＢＸ−Ｍａｌ、Ａｂｇｅｎｉｘによって開発されている抗ＭＵＣ１８抗体、ペムツモマブ（Ｒ１５４９，９０Ｙ−ｍｕＨＭＦＧｌ）、Ａｎｔｉｓｏｍａによって開発中の抗ＭＵＣ１、Ｔｈｅｒｅｘ（Ｒ１５５０）、Ａｎｔｉｓｏｍａによって開発されている抗ＭＵＣ１抗体、Ａｎｔｉｓｏｍａによって開発されているＡｎｇｉｏＭａｂ（ＡＳ１４０５）、Ａｎｔｉｓｏｍａによって開発されているＨｕＢＣ−１、Ａｎｔｉｓｏｍａによって開発されているＴｈｉｏｐｌａｔｉｎ（ＡＳ１４０７）、Ａｎｔｅｇｒｅｎ（Ｒ）（ナタリズマブ）、Ｂｉｏｇｅｎによって開発されている抗α−４−β−１（ＶＬＡ−４）及びα−４−β−７−抗体、ＶＬＡ−１ｍＡｂ、Ｂｉｏｇｅｎによって開発されている抗ＶＬＡ−１インテグリン抗体、ＬＴＢＲｍＡｂ、Ｂｉｏｇｅｎによって開発されている抗リンホトキシンβ受容体（ＬＴＢＲ）抗体、ＣＡＴ−１５２、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙによって開��されている抗ＴＧＦ−β２抗体、Ｊ６９５、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ及びＡｂｂｏｔｔによって開発されている抗ＩＬ−１２抗体、ＣＡＴ−１９２、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ及びＧｅｎｚｙｍｅによって開発されている抗ＴＧＦβ１抗体、ＣＡＴ−２１３、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙによって開発されている抗エオタキシン１抗体、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ及びＨｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．によって開発されているＬｙｍｐｈｏＳｔａｔ−Ｂ（Ｒ）抗Ｂｌｙｓ抗体、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１ｍＡｂ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ及びＨｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．によって開発されている抗ＴＲＡＩＬ−Ｒ１抗体、Ａｖａｓｔｉｎ（Ｒ）ベバシズマブ、ｒｈｕＭＡｂ−ＶＥＧＦ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって開発されている抗ＶＥＧＦ抗体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって開発されている抗ＨＥＲ受容体ファミリー抗体、抗組織因子（ＡＴＦ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって開発されている抗組織因子抗体、Ｘｏｌａｉｒ（Ｒ）（オマリズマブ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈによって開発されている抗ＩｇＥ抗体、Ｒａｐｔｉｖａ（Ｒ）（エフェリズマブ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ及びＸｏｍａによって開発されている抗ＣＤ１１ａ抗体、ＭＬＮ−０２抗体（旧ＬＤＰ−０２）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ及びＭｉｌｌｅｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されている、ＨｕＭａｘ  ＣＤ４、Ｇｅｎｍａｂｕによって開発されている抗ＣＤ４抗体、ＨｕＭａｘ−ＩＬ１５、Ｇｅｎｍａｂ及びＡｍｇｅｎによって開発されている抗ＩＬ１５抗体、Ｇｅｎｍａｂ及びＭｅｄａｒｅｘによって開発されているＨｕＭａｘ−Ｉｎｆｌａｍ、ＨｕＭａｘ−Ｃａｎｃｅｒ、Ｇｅｎｍａｂ及びＭｄａｒｅｘ及びＯｘｆｏｒｄ  ＧｃｏＳｃｉｅｎｃｅｓによって開発されている抗ヘパラナーゼＩ抗体、Ｇｅｎｍａｂ及びＡｍｇｅｎによって開発されているＨｕＭａｘ−Ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｇｅｎｍａｂによって開発されているＨｕＭａｘ−ＴＡＣ、ＩＤＥＣ−１３１及びＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されている抗ＣＤ４０Ｌ抗体、ＩＤＥＣ−１５１（クレノリキシマブ）、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されている抗ＣＤ４抗体、ＩＤＥＣ−１１４、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されている抗ＣＤ８０抗体、ＩＤＥＣ−１５２、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されている抗ＣＤ２３、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発されている抗マクロファージ遊走因子（ＭＩＦ）抗体、ＢＥＣ２、Ｉｍｃｌｏｎｅによって開発されている抗イディオタイプ抗体、ＩＭＣ−１Ｃ１１、Ｉｍｃｌｏｎｅによって開発されている抗ＫＤＲ抗体、ＤＣ１０ｌ、Ｉｍｃｌｏｎｅによって開発されている抗ｆｌｋ−１抗体、Ｉｍｃｌｏｎｅによって開発されている抗ＶＥカドヘリン抗体、ＣＥＡ−Ｃｉｄｅ（Ｒ）（ラベツズマブ）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓによって開発されている抗癌胎児抗原（ＣＥＡ）抗体���ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（Ｒ）（エプラツズマブ）、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓによって開発されている抗ＣＤ２２抗体、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓによって開発されているＡＦＰ−Ｃｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓによって開発されているＭｙｅｌｏｍａＣｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓによって開発されているＬｋｏＣｉｄｅ、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓによって開発されているＰｒｏｓｔａＣｉｄｅ、ＭＤＸ−０１０、Ｍｅｄａｒｅｘによって開発されている抗ＣＴＬＡ４抗体、ＭＤＸ−０６０、Ｍｅｄａｒｅｘによって開発されている抗ＣＤ３０抗体、Ｍｅｄａｒｅｘによって開発されているＭＤＸ−０７０、Ｍｅｄａｒｅｘによって開発されているＭＤＸ−０１８、Ｏｓｉｄｅｍ（Ｒ）（ＩＤＭ−Ｉ）並びにＭｅｄａｒｅｘ及びＩｍｍｕｎｏ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓによって開発されている抗Ｈｅｒ２抗体、ＨｕＭａｘ（Ｒ）−ＣＤ４、Ｍｅｄａｒｅｘ及びＧｅｎｍａｂによって開発されている抗ＣＤ４抗体、ＨｕＭａｘ−ＩＬ１５、Ｍｅｄａｒｅｘ及びＧｅｎｍａｂによって開発されている抗ＩＬ１５抗体、ＣＮＴＯ１４８、Ｍｅｄａｒｅｘ及びＣｅｎｔｏｃｏｒ／Ｊ＆Ｊによって開発されている抗ＴＮＦα抗体、ＣＮＴＯ１２７５、ＣｅｎｔｏｃｏｒＪ＆Ｊによって開発されている抗サイトカイン抗体、ＭＯＲ１０１及びＭＯＲ１０２、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓによって開発されている抗細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ−Ｉ）（ＣＤ５４）抗体、ＭＯＲ２０１、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓによって開発されている抗繊維芽細胞増殖因子受容体受容体３（ＦＧＦＲ−３）抗体、Ｎｕｖｉｏｎ（Ｒ）（ビシリズマブ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓによって開発されている抗ＣＤ３抗体、ＨｕＺＡＦ（Ｒ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓによって開発されている抗γインターフェロン抗体、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓによって開発されている抗α５β１インテグリン、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  
Ｌａｂｓによって開発されている抗ＩＬ−１２、ＩＮＧ−１、Ｘｏｍａによって開発されている抗Ｅｐ−ＣＡＭ抗体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ及びＮｏｖａｒｔｉｓによって開発されたＸｏｌａｉｒ（Ｒ）（オマリズマブ）ヒト化抗ＩｇＥ抗体並びにＭＬＮ０１、Ｘｏｍａによって開発されている抗β２インテグリン抗体（本パラグラフにおいて上で引用されている参考文献の全ては、参照により、本明細書中に明示的に組み込まれる。）が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０１０９】
Ｂ．ＤＶＤ分子の構築：
二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）分子は、２つの異なる親ｍＡｂ由来の２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、組み換えＤＮＡ技術によって、直接又は短いリンカーを介して直列に連結され、その後に軽鎖定常ドメインが続くように設計される。同様に、重鎖は、直列に連結された２つの異なる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）の後に、定常ドメインＣＨ１及びＦｃ領域（図１Ａ）を含む。
【０１１０】
可変ドメインは、上記方法の何れか１つによって作製された親抗体から得られた組み換えＤＮＡ技術を用いて取得することが可能である。好ましい実施形態において、可変ドメインは、マウス重鎖又は軽鎖可変ドメインである。より好ましくは、可変ドメインは、ＣＤＲ移植された又はヒト化された可変重鎖又は軽鎖ドメインである。最も好ましくは、可変ドメインは、ヒト重鎖又は軽鎖可変ドメインである。
【０１１１】
一実施形態において、第一及び第二の可変ドメインは、組み換えＤＮＡ技術を用いて、互いに直接連結されている。別の実施形態において、可変ドメインは、リンカー配列を介して連結されている。好ましくは、２つの可変ドメインが連結されている。３つ又はそれ以上の可変ドメインも、直接又はリンカー配列を介して連結され得る。可変ドメインは、同じ抗原に結合し得、又は異なる抗原に結合し得る。本発明のＤＶＤ分子は、１つの免疫グロブリン可変ドメイン及び受容体のリガンド結合ドメイン、酵素の活性ドメインなどの１つの非免疫グロブリン可変ドメインを含み得る。ＤＶＤ分子は、２つ又はそれ以上の非Ｉｇドメインも含み得る。
【０１１２】
リンカー配列は、単一のアミノ酸又はポリペプチド配列であり得る。好ましくは、リンカー配列は、ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲ；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＳＡＫＴＴＰ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＲＡＤＡＡＰ；ＲＡＤＡＡＰＴＶＳ；ＲＡＤＡＡＡＡＧＧＰＧＳ；ＲＡＤＡＡＡＡ（Ｇ４Ｓ）４；ＳＡＫＴＴＰ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＧＧ；ＳＡＫＴＴＰＫＬＥＥＧＥＦＳＥＡＲＶ；ＡＤＡＡＰ；ＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰ；ＴＶＡＡＰ；ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ；ＱＰＫＡＡＰ；ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ；ＡＫＴＴＰＰ；ＡＫＴＴＰＰＳＶＴＰＬＡＰ；ＡＫＴＴＡＰ；ＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰ；ＡＳＴＫＧＰ；ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ；ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ；ＧＥＮＫＶＥＹＡＰＡＬＭＡＬＳ；ＧＰＡＫＥＬＴＰＬＫＥＡＫＶＳ；及びＧＨＥＡＡＡＶＭＱＶＱＹＰＡＳからなる群から選択される。リンカー配列の選択は、幾つかのＦａｂ分子の結晶構造分析に基づいている。Ｆａｂ又は抗体分子構造中の可変ドメインとＣＨ１／ＣＬ定常ドメインの間には、天然の柔軟な連結が存在する。この天然の連結は、ＶドメインのＣ末端由来の４〜６残基及びＣＬ／ＣＨ１ドメインのＮ末端由来の４〜６残基によって構成される約１０から１２個のアミノ酸残基を含む。本発明のＤＶＤＩｇは、それぞれ、ＤＶＤ−Ｉｇの軽鎖及び重鎖中のリンカーとしてＣＬ又はＣＨ１のＮ末端の５から６アミノ酸残基、又は１１から１２アミノ酸残基を用いて作製された。ＣＬ又はＣＨ１ドメインのＮ末端残基、特に最初の５から６個のアミノ酸残基は、強い二次構造なしにループ立体構造を採り、従って、２つの可変ドメイン間の柔軟なリンカーとして作用することが可能である。ＣＬ又はＣＨ１ドメインのＮ末端残基は、Ｉｇ配列の一部であるので、可変ドメインの天然の伸長であり、従って、リンカー及び連結から生じ得る何れの免疫原性を、大きな程度まで最小限に抑える。
【０１１３】
他のリンカー配列は、ＣＬ／ＣＨ１ドメインのあらゆる長さのあらゆる配列を含み得るが、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの全ての残基は含まない。例えば、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの最初の５から１２個のアミノ酸残基；軽鎖リンカーは、Ｃκ又はＣλに由来することが可能であり；並びに重鎖リンカーは、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４、Ｃα１、Ｃα２、Ｃδ、Ｃε及びＣμを含む、何れかのイソタイプのＣＨ１に由来することが可能である。リンカー配列は、Ｉｇ様タンパク質（例えば、ＴＣＲ、ＦｃＲ、ＫＩＲ）、Ｇ／Ｓを基礎とする配列（例えば、Ｇ４Ｓリピート）；ヒンジ領域に由来する配列及び他のタンパク質から得られる他の天然配列などの他のタンパク質からも由来し得る。
【０１１４】
好ましい実施形態において、定常ドメインは、組み換えＤＮＡ技術を用いて、２つの連結された可変ドメインに連結されている。好ましくは、連結された重鎖可変ドメインを含む配列は、重鎖定常ドメインに連結され、連結された軽鎖可変ドメインを含む配列は、軽鎖定常ドメインに連結される。好ましくは、定常ドメインは、それぞれ、ヒト重鎖定常ドメイン及びヒト軽鎖定常ドメインである。最も好ましくは、ＤＶＤ重鎖は、Ｆｃ領域にさらに連結されている。Ｆｃ領域は、固有配列のＦｃ領域又はバリアントＦｃ領域であり得る。最も好ましくは、Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域である。好ましい実施形態において、Ｆｃ領域には、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ又はＩｇＤから得られるＦｃ領域が含まれる。
【０１１５】
最も好ましい実施形態において、２つの重鎖ＤＶＤポリペプチド及び２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドは組み合わされて、ＤＶＤ−Ｉｇ分子を形成する。特異的な標的に結合することができる特異的ＤＶＤ−Ｉｇ分子の詳細な説明及びこれを作製する方法は、以下の実施例の部に記載されている。
【０１１６】
Ｃ．ＤＶＤタンパク質の作製
本発明の結合タンパク質は、本分野で公知の多数の何れかによって作製され得る。例えば、宿主細胞からの発現において、ＤＶＤ重鎖及びＤＶＤ軽鎖をコードする発現ベクターは、標準的な技術によって、宿主細胞中に形質移入される。「形質移入」という用語の様々な形態は、原核又は真核宿主細胞中への外来ＤＮＡの導入のために一般に使用される多様な技術、例えば、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラン形質移入などを包含するものとする。原核又は真核宿主細胞の何れの中でも、本発明のＤＶＤタンパク質を発現することは可能であるが、真核細胞（特に、哺乳動物細胞）は、原核細胞に比べて、適切に折りたたまれ、免疫学的に活性なＤＶＤタンパク質を集合及び分泌する傾向がより大きいので、真核細胞中でのＤＶＤタンパク質の発現が好ましく、哺乳動物宿主細胞中での発現が最も好ましい。
【０１１７】
本発明の組換え抗体を発現するための好ましい哺乳動物宿主細胞には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，（１９８０）  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０に記載されており、例えばＲ．Ａ．Ｋａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｐ．Ａ．Ｓｈａｒｐ（１９８２）  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に記載されているようにＤＨＦＲ選択可能マーカーとともに使用されるｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む。）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞が含まれる。ＤＶＤタンパク質をコードする組換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞中に導入されると、宿主細胞中でＤＶＤタンパク質の発現を可能とするのに十分な期間にわたって又はより好ましくは、宿主細胞がその中で増殖されている培地中へのＤＶＤタンパク質の分泌を可能とするのに十分な期間にわたって宿主細胞を培養することによって、ＤＶＤタンパク質が産生される。ＤＶＤタンパク質は、標準的なタンパク質精製方法を用いて、培地から回収することが可能である。
【０１１８】
本発明のＤＶＤタンパク質の組換え発現用の好ましいシステムにおいて、リン酸カルシウムによって媒介された形質移入によって、ＤＶＤ重鎖及びＤＶＤ軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞中に導入される。組換え発現ベクター内で、ＤＶＤ重鎖及び軽鎖遺伝子は、遺伝子の転写の高いレベルを誘導するために、各々、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＰＬプロモーター制御要素へ作用可能に連結されている。組換え発現ベクターは、メトトレキサート選択／増幅を用いて、ベクターで形質移入されたＣＨＯ細胞の選択を可能とするＤＨＦＲ遺伝子も担持する。選択された形質転換体宿主細胞は、ＤＶＤ重鎖及び軽鎖の発現を可能とするために培養され、完全な状態のＤＶＤタンパク質が培地から回収される。組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞を形質移入し、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培地からＤＶＤタンパク質を回収するために、標準的な分子生物学的技術が使用される。さらに、本発明は、本発明のＤＶＤタンパク質が合成されるまで、適切な培地中で、本発明の宿主細胞を培養することによって、本発明のＤＶＤタンパク質を合成する方法を提供する。本方法は、培地からＤＶＤタンパク質を単離することをさらに含むことが可能である。
【０１１９】
ＤＶＤ−Ｉｇの重要な特徴は、ＤＶＤ−Ｉｇが、慣用の抗体として、類似の様式で産生及び精製され得ることである。ＤＶＤ−Ｉｇの産生は、定常領域の何れの配列修飾もなく、又は何れの種類の化学的修飾もなく、所望される二重特異的活性を有する均一な単一主要産物をもたらす。「二特異的」、「多重特異的」及び「多重特異的多価」完全長結合タンパク質を作製するための他の以前に記載された方法は、単一の主要産物をもたらさず、代わりに、集合した不活性な単一特異的、多重特異的、多価の完全長結合タンパク質と、異なる結合部位の組み合わせを有する多価完全長結合タンパク質との混合物の細胞内産生又は分泌された産生をもたらす。例として、Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｐｒｅｓｔａ（ＰＣＴｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎＷＯ２００１／０７７３４２（Ａ１））に記載されている設計に基づいて、重鎖及び軽鎖の１６の可能な組み合わせが存在する。その結果、タンパク質の僅か６．２５％が、所望の活性形態であると思われる。典型的には、大規模な製造において使用される標準的クロマトグラフィー技術を用いて、タンパク質の完全に活性な形態を、タンパク質の不活性な及び部分的に活性な形態から分離することは、未だ実証されていない。
【０１２０】
驚くべきことに、本発明の「二重特異的多価完全長結合タンパク質」の設計は、主として、所望される「二重特異的多価完全長結合タンパク質」へ集合する二重可変ドメイン軽鎖及び二重可変ドメイン重鎖をもたらす。
【０１２１】
集合され、及び発現された二重可変ドメイン免疫グロブリン分子の少なくとも５０％、好ましくは７５％及びより好ましくは９０％が、所望される二重特異的四価タンパク質である。本発明の本態様は、特に、本発明の市販の利用を強化する。従って、本発明は、単一の細胞中で二重可変ドメイン軽鎖及び二重可変ドメイン重鎖を発現し、「二重特異的四価完全長結合タンパク質」の単一の主要産物をもたらす方法を含む。
【０１２２】
本発明は、単一の細胞中で二重可変ドメイン軽鎖及び二重可変ドメイン重鎖を発現し、「二重特異的四価完全長結合タンパク質」の「主要産物」をもたらす好ましい方法を提供し、ここで、「主要産物」は、二重可変ドメイン軽鎖及び二重可変ドメイン重鎖を含む全ての集合されたタンパク質の５０％を上回る。
【０１２３】
本発明は、単一の細胞中で二重可変ドメイン軽鎖及び二重可変ドメイン重鎖を発現し、「二重特異的四価完全長結合タンパク質」の単一の「主要産物」をもたらすより好ましい方法を提供し、ここで、「主要産物」は、二重可変ドメイン軽鎖及び二重可変ドメイン重鎖を含む全ての集合されたタンパク質の７５％を上回る。
【０１２４】
本発明は、単一の細胞中で二重可変ドメイン軽鎖及び二重可変ドメイン重鎖を発現し、「二重特異的四価完全長結合タンパク質」の単一の「主要産物」をもたらす最も好ましい方法を提供し、ここで、「主要産物」は、二重可変ドメイン軽鎖及び二重可変ドメイン重鎖を含む全ての集合されたタンパク質の９０％を上回る。
【０１２５】
ＩＩ．誘導体化されたＤＶＤ結合タンパク質：
一実施形態は、標識された結合タンパク質を提供し、ここで、本発明の結合タンパク質は、別の機能的分子（例えば、ペプチド又はタンパク質）へ誘導体化され、又は連結される。例えば、本発明の標識された結合タンパク質は、別の抗体（例えば、二特異的抗体又はダイアボティ）、検出可能な因子、細胞毒性剤、薬剤及び／又は別の分子（ストレプトアビジンコア領域又はポリヒスチジンタグなど）との、結合タンパク質の会合を媒介可能なタンパク質若しくはペプチドなどの１つ又はそれ以上の他の分子実体へ、（化学的カップリング、遺伝的融合、非共有会合又はその他によって）本発明の結合タンパク質を機能的に連結することによって誘導することが可能である。
【０１２６】
本発明の結合タンパク質を誘導体化し得る有用な検出可能因子には、蛍光化合物が含まれる。典型的な蛍光検出可能因子には、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、５−ジメチルアミン−１−ナフタレンスルホニルクロリド、フィコエリトリンなどが含まれる。結合タンパク質は、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼなどの検出可能な酵素でも誘導体化され得る。結合タンパク質が検出可能な酵素で誘導体化される場合には、検出可能な反応産物を生成させるために、本酵素が使用するさらなる試薬を添加することによって抗体が検出される。例えば、検出可能因子西洋ワサビペルオキシダーゼが存在する場合には、過酸化水素及びジアミノベンジジンの添加は、検出可能な発色した反応産物をもたらす。結合タンパク質は、ビオチンを用いて誘導体化し、アビジン又はストレプトアビジン結合の間接的な測定を通じても検出され得る。
【０１２７】
本発明の別の実施形態は、結晶化された結合タンパク質並びにこのような結晶を含む製剤及び組成物を提供する。一実施形態において、結晶化された結合タンパク質は、結合タンパク質の可溶性対応物より大きなインビボ半減期を有する。別の実施形態において、結合タンパク質は、結晶化後の生物活性を保持する。
【０１２８】
本発明の結晶化された結合タンパク質は、本分野で公知の方法に従って、及びＷＯ０２０７２６３６（参照により、本明細書に組み込まれる。）に開示されているように産生され得る。
【０１２９】
本発明の別の実施形態は、抗体又はその抗原結合部分が１つ又はそれ以上の炭水化物残基を含む、グリコシル化された結合タンパク質を提供する。新生インビボタンパク質産生は、翻訳後修飾として知られるさらなるプロセッシングを経ることがあり得る。特に、糖（グリコシル）残基は、酵素的に付加され得る（グリコシル化として知られる方法）。共有結合されたオリゴ糖側鎖を有する得られたタンパク質は、グリコシル化されたタンパク質又は糖タンパク質として知られる。抗体は、Ｆｃドメイン中、及び可変ドメイン中に１つ又はそれ以上の炭水化物残基を有する糖タンパク質である。Ｆｃドメイン中の炭水化物残基は、抗体の抗原結合又は半減期に対する効果を最小限に抑えながら、Ｆｃドメインのエフェクター機能に対して重要な効果を有する（Ｒ．  Ｊｅｆｆｅｒｉｓ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２１（２００５），ｐｐ．１１−１６）。これに対して、可変ドメインのグリコシル化は、抗体の抗原結合活性に対して影響を及ぼし得る。可変ドメイン中のグリコシル化は、おそらくは、立体的な妨害のために、抗体結合親和性に対して負の影響を有し得（Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，ＭｏＩ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９３）  ３０：１３６１−１３６７）又は抗原に対する増加した親和性をもたらし得る（Ｗａｌｌｉｃｋ，Ｓ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９８８）  １６８：１０９９−１１０９；Ｗｒｉｇｈｔ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．（１９９１）  １０：２７１７  ２７２３）。
【０１３０】
本発明の一態様は、結合タンパク質のＯ結合型又はＮ結合型グリコシル化部位が変異されているグリコシル化部位変異体を作製することに関する。当業者は、標準的な周知の技術を用いて、このような変異体を作製することが可能である。生物学的活性を保持するが、増加又は減少した結合活性を有するグリコシル化部位変異体が、本発明の別の目的である。
【０１３１】
さらに別の実施形態において、本発明の抗体又は抗原結合部分のグリコシル化は修飾される。例えば、無グリコシル化抗体を作製することが可能である（すなわち、抗体は、グリコシル化を欠如する。）。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増加させるために改変することが可能である。このような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内のグリコシル化の１つ又はそれ以上の部位を変化させることによって達成することが可能である。例えば、それによって、当該部位のグリコシル化を除去するために、１つ又はそれ以上の可変領域グリコシル化部位の除去をもたらす１つ又はそれ以上のアミノ酸置換を施すことが可能である。このような無グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増加させ得る。このようなアプローチは、ＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ２００３０１６４６６Ａ２並びにＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．５，７１４，３５０及び６，３５０，８６１（これらの各々は、参照により、その全体が本明細書に組み込まれる。）に、さらに詳しく記載されている。
【０１３２】
これに加えて又はこれに代えて、フコシル残基の減少した量を有する低フコシル化抗体又は増加した二分岐ＧｌｃＮＡｃ構造を有する抗体など、グリコシル化の変化した種類を有する本発明の修飾された結合タンパク質を作製することが可能である。このような変化されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増加させることが示されている。このような炭水化物修飾は、例えば、変化したグリコシル化機構を有する宿主細胞中で抗体を発現させることによって達成することが可能である。変化したグリコシル化機構を有する細胞は本分野において記載されており、その中で、本発明の組み換え抗体を発現させることによって、変化したグリコシル化を有する抗体を産生するための宿主細胞として使用することができる。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０；Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１及びＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ：ＥＰ  １，１７６，１９５；ＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ＷＯ０３／０３５８３５；ＷＯ９９／５４３４２  ８０（これらの各々の全体が、参照により本明細書中に組み込まれる。）を参照されたい。
【０１３３】
タンパク質グリコシル化は、対象のタンパク質のアミノ酸配列及びその中でタンパク質が発現される宿主細胞に依存する。異なる生物は、異なるグリコシル化酵素（例えば、グリコシル転移酵素及びグリコシダーゼ）を産生し得、利用可能な異なる基質（ヌクレオチド糖）を有し得る。このような要因のために、タンパク質グリコシル化パターン及びグリコシル残基の組成は、タンパク質がその中で発現されている宿主系に応じて異なり得る。本発明において有用なグリコシル残基には、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、ｎ−アセチルグルコサミン及びシアル酸が含まれ得るが、これらに限定されない。好ましくは、グリコシル化された結合タンパク質は、グリコシル化パターンがヒトであるように、グリコシル残基を含む。
【０１３４】
異なるタンパク質グリコシル化は異なるタンパク質特性をもたらし得ることが、当業者に公知である。例えば、酵母などの微生物宿主中で産生され、酵母内在経路を用いてグリコシル化された治療用タンパク質の効力は、ＣＨＯ細胞株などの哺乳動物細胞中で発現された同じタンパク質の効力と比べて低下され得る。また、このような糖タンパク質は、ヒトにおいて免疫原性であり得、投与後に、減少したインビボ半減期を示し得る。ヒト及び他の動物中の特異的な受容体は、特異的なグリコシル残基を認識し得、血流からのタンパク質の迅速な除去を促進し得る。他の有害な効果は、タンパク質の折り畳み、溶解度、プロテアーゼに対する感受性、運搬、輸送、区画化、分泌、他のタンパク質又は因子による認識、抗原性又はアレルゲン性の変化が含まれ得る。従って、当業者は、グリコシル化の特異的な組成及びパターン、例えば、ヒト細胞中又は意図される対象動物の種特異的細胞中で産生されるものと同一又は少なくとも類似のグリコシル化組成及びパターンを有する治療タンパク質を好み得る。
【０１３５】
宿主細胞のものとは異なるグリコシル化されたタンパク質を発現することは、異種グリコシル化酵素を発現するために宿主細胞を遺伝的に修飾することによって達成され得る。本分野で公知の技術を使用して、当業者は、ヒトタンパク質グリコシル化を呈する抗体又はその抗原結合部分を作製し得る。例えば、酵母株中で産生されたグリコシル化されたタンパク質（糖タンパク質）が、動物細胞、特にヒト細胞のものと同一のタンパク質グリコシル化を呈するように（Ｕ．Ｓ  ｐａｔｅｎｔ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ２００４００１８５９０及び２００２０１３７１３４並びにＰＣＴ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ２００５１００５８４Ａ２）、酵母株は、天然に存在しないグリコシル化酵素を発現するように遺伝的に修飾されている。
【０１３６】
結合タンパク質に加えて、本発明は、本発明のこのような結合タンパク質に対して特異的な抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体にも関する。抗Ｉｄ抗体は、別の抗体の抗原結合領域と一般的に付随する固有の決定基を認識する抗体である。抗Ｉｄは、結合タンパク質又はそのＣＤＲ含有領域で動物を免疫化することによって調製することが可能である。免疫された動物は、免疫抗体のイディオタイプ決定基を認識し、これに応答し、及び抗Ｉｄ抗体を産生する。抗Ｉｄ抗体は、いわゆる抗抗Ｉｄ抗体を産生するさらに別の動物中に免疫応答を誘導するための「免疫原」としても使用し得る。
【０１３７】
さらに、ライブラリーのメンバー宿主細胞がバリアントグリコシル化パターンを有する目的のタンパク質を産生するように、様々なグリコシル化酵素を発現するように遺伝学的に改変された宿主細胞のライブラリーを用いて、目的のタンパク質を発現させ得ることが、当業者によって理解されている。次いで、当業者は、特定の新規グリコシル化パターンを有する目的のタンパク質を選択及び単離し得る。好ましくは、特に選択された新規グリコシル化パターンを有するタンパク質は、改善又は改変された生物学的特性を示す。
【０１３８】
ＩＩＩ．ＤＶＤ−Ｉｇの使用
本発明の結合タンパク質は２つ又はそれ以上の抗原に結合することができるので、本発明の結合タンパク質は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又は組織免疫組織化学など慣用のイムノアッセイを用いて、（例えば、血清又は血漿などの生物学的試料中で）抗原を検出するために使用することが可能である。ＤＶＤ−Ｉｇは、結合した又は結合していない抗体の検出を促進するために、検出可能な物質で直接又は間接的に標識される。適切な検出可能な物質には、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質及び放射性物質が含まれる。適切な酵素の例には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ又はアセチルコリンエステラーゼが含まれる。適切な補欠分子族複合体の例には、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチンが含まれる。適切な蛍光物質の例には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド又はフィコエリトリンが含まれる。発光物質の例には、ルミノールが含まれる；及び適切な放射性材料の例には、３Ｈ１、１４Ｃ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ又は１５３Ｓｍが含まれる。
【０１３９】
本発明の結合タンパク質は、好ましくは、インビトロ及びインビボの両者で、抗原の活性を中和することが可能である。従って、このようなＤＶＤ−Ｉｇは、例えば、抗原を含有する細胞培地中で、ヒト対象中で、本発明の結合タンパク質が交叉反応する抗原を有するその他の哺乳動物対象中で、抗原活性を阻害するために使用することが可能である。別の実施形態において、本発明は、抗原活性が有害である疾病又は疾患に罹患している対象中の抗原活性を低下させる方法を提供する。本発明の結合タンパク質は、治療目的のために、ヒト対象に投与することができる。
【０１４０】
本明細書において使用される「抗原活性が有害である疾患」という用語は、本疾患に罹患している対象中での抗原の存在が、疾患の病態生理の原因であることが又は疾患の悪化に寄与している因子であることが示されており、又は疑われている疾病及びその他の疾患を含むものとする。従って、抗原活性が有害である疾患は、抗原活性の低下が疾患の症候及び／又は進行を緩和することが予測される疾患である。このような疾患は、例えば、本疾患に罹患している患者の生物学的液体中の抗原濃度の増加（例えば、対象の血清、血漿、滑液中などの抗原の濃度の増加）によって明らかとされ得る。本発明の結合タンパク質で治療することが可能な疾患の非限定的な例には、以下に、及び本発明の抗体の医薬組成物に関するセクションに論述されている疾患が含まれる。
【０１４１】
本発明のＤＶＤ−Ｉｇは、１つの抗原又は複数の抗原に結合し得る。このような抗原には、以下のデータベース（データベースは、参照により、本明細書に組み込まれる。）に列記されている標的が含まれるが、これらに限定されるものではない。これらの標的データベースには、以下のものが含まれる。
【０１４２】
治療の標的（ｈｔｔｐ：／／ｘｉｎ．ｃｚ３．ｎｕｓ．ｅｄｕ．ｓｇ／ｇｒｏｕｐ／ｃｊｔｔｄ／ｔｔｄ．ａｓｐ）；
サイトカイン及びサイトカイン受容体（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｙｔｏｋｉｎｅｗｅｂｆａｃｔｓ．ｃｏｍ／、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｏｐｅｗｉｔｈｃｙｔｏｋｉｎｅｓ．ｄｅ／ｃｏｐｅ．ｃｇｉ及びｈｔｔｐ：／／ｃｍｂｉ．ｂｊｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／ｃｍｂｉｄａｔａ／ｃｇｆ／ＣＧＦ Ｄａｔａｂａｓｅ／ｃｙｔｏｋｉｎｅ．ｍｅｄｉｃ．ｋｕｍａｍｏｔｏ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ＣＦＣ／ｉｎｄｅｘＲ．ｈｔｍｌ）；
ケモカイン（ｈｔｔｐ：／／ｃｙｔｏｋｉｎｅ．ｍｅｄｉｃ．ｋｕｍａｍｏｔｏ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ＣＦＣ／ＣＫ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ．ｈｔｍｌ）；
ケモカイン受容体及びＧＰＣＲ（ｈｔｔｐ：／／ｃｓｐ．ｍｅｄｉｃ．ｋｕｍａｍｏｔｏ−ｕ．ａｃ．ｊｐ／ＣＳＰ／Ｒｅｃｅｐｔｏｒ．ｈｔｍｌ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｐｃｒ．ｏｒｇ／７ｔｍ／）；
嗅覚受容体（ｈｔｔｐ：／／ｓｅｎｓｅｌａｂ．ｍｅｄ．ｙａｌｅ．ｅｄｕ／ｓｅｎｓｅｌａｂ／ＯＲＤＢ／ｄｅｆａｕｌｔ．ａｓｐ）；
受容体（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｕｐｈａｒ−ｄｂ．ｏｒｇ／ｉｕｐｈａｒ−ｒｄ／ｌｉｓｔ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍ）；
癌標的（ｈｔｔｐ：／／ｃｇｅｄ．ｈｇｃ．ｊｐ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｉｎｐｕｔ．ｃｇｉ）；
潜在的な抗体標的として分泌されるタンパク質（ｈｔｔｐ：／／ｓｐｄ．ｃｂｉ．ｐｋｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／）；
タンパク質キナーゼ（ｈｔｔｐ：／／ｓｐｄ．ｃｂｉ．ｐｋｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／）並びに
ヒトＣＤマーカー（ｈｔｔｐ：／／ｃｏｎｔｅｎｔ．ｌａｂｖｅｌｏｃｉｔｙ．ｃｏｍ／ｔｏｏｌｓ／６／１２２６／ＣＤ ｔａｂｌｅ ｆｉｎａｌ ｌｏｃｋｅｄ．ｐｄｆ）及び（Ｚｏｌａ  Ｈ，２００５  ＣＤ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２００５：ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｂｌｏｏｄ，１０６：３１２３−６）。
【０１４３】
ＤＶＤ−Ｉｇは、効力／安全を増強し、及び／又は患者の対象範囲を増加させるために、２つの異なる標的を同時に遮断するための治療剤として有用である。このような標的は、可溶性標的（ＩＬ−１３及びＴＮＦ）及び細胞表面受容体標的（ＶＥＧＦＲ及びＥＧＦＲ）が含まれ得る。このような標的は、癌療法のために腫瘍細胞とＴ細胞（Ｈｅｒ２とＣＤ３）との間に、又は自己免疫／移植のために自己反応性細胞及びエフェクター細胞の間に、又はある所定の疾病において疾病を引き起こす細胞を除去するために何れかの標的細胞とエフェクター細胞の間に、再誘導された細胞障害を誘導するために使用することも可能である。
【０１４４】
さらに、同一受容体上の２つの異なるエピトープを標的とするように設計されている場合には、ＤＶＤ−Ｉｇは、受容体のクラスタリング及び活性化を惹起するために使用することが可能である。これは、アゴニスト及びアンタゴニスト作用を有する抗ＧＰＣＲ治療剤を作製する上で有用性を有し得る。この場合には、ＤＶＤ−Ｉｇは、クラスタリング／シグナル伝達（２つの細胞表面分子）又はシグナル伝達（１つの分子上）のために、１つの細胞上に存在する２つの異なるエピトープを標的とするために使用することが可能である。同様に、ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、ＣＴＬＡ−４連結、及びＣＴＬＡ−４細胞外ドメインの２つの異なるエピトープ（又は同一エピトープの２コピー）を標的として免疫応答の下方制御をもたらすことによる負のシグナルを惹起するように設計することが可能である。ＣＴＬＡ−４は、多数の免疫学的疾患の治療的処置に対して、臨床的に妥当性が確認された標的である。ＣＴＬＡ−４／Ｂ７相互作用は、細胞周期の進行、ＩＬ−２産生および活性化に続くＴ細胞の増殖を弱化することによって、Ｔ細胞活性化を負に制御し、ＣＴＬＡ−４（ＣＤ１５２）の拘束は、Ｔ細胞の活性化を下方制御し、免疫寛容の誘導を促進する。しかしながら、ＣＴＬＡ−４の活性化は連結を必要とするので、アゴニスト性抗体によるＣＴＬＡ−４の拘束によって、Ｔ細胞の活性化を弱化するという戦略は成功を収めていない。ＣＴＬＡ−４／Ｂ７の分子相互作用は、結晶構造分析によって示されたように（Ｓｔａｍｐｅｒ  ２００１  Ｎａｔｕｒｅ４１０：６０８）、「歪んだジッパー」配列である。しかしながら、抗ＣＴＬＡ−４モノクローナル抗体を含む、現在利用可能なＣＴＬＡ−４結合試薬は何れも、連結特性を有しない。この問題に対処するために、幾つかの試みが行われてきた。１つの事例では、細胞要素が結合された一本鎖抗体が作製され、マウス中での同種異系拒絶を著しく阻害した（Ｈｗａｎｇ  ２００２  ＪＩ  １６９：６３３）。別の事例では、人工のＡＰＣ表面に連結された、ＣＬＴＡ−４に対する一本鎖抗体が作製され、Ｔ細胞応答を弱化させることが示された（Ｇｒｉｆｆｉｎ  ２０００  ＪＩ  １６４：４４３３）。何れの事例でも、人工の系内に近接して配置された膜結合型抗体によって、ＣＴＬＡ−４連結が達成された。これらの実験は、ＣＴＬＡ−４の負のシグナル伝達を引き起こすことによる免疫の下方制御という概念に対する証明を与えるが、これらの報告で使用された試薬は、治療的用途には適していない。この目的のために、ＣＴＬＡ−４細胞外ドメインの２つの異なるエピトープ（又は同一エピトープの２コピー）を標的とするＤＶＤ−Ｉｇ分子を使用することによって、ＣＴＬＡ−４連結が達成され得る。論拠は、ＩｇＧの２つの結合部位を貫く距離（約１５０から１７０Å）が、ＣＴＬＡ−４の活性な連結（２個のＣＴＬＡ−４ホモ二量体間で３０から５０Å）には大きすぎるということである。しかしながら、ＤＶＤ−Ｉｇ（１つのアーム）上の２つの結合部位間の距離はずっと短く、３０から５０Åの範囲にあるので、ＣＴＬＡ−４の適切な連結を可能とする。
【０１４５】
同様に、ＤＶＤ−Ｉｇは、細胞表面受容体複合体の２つの異なる要素を標的とすることが可能である（例えば、ＩＬ−１２Ｒα及びβ）。さらに、ＤＶＤ−Ｉｇは、標的可溶性タンパク質／病原体の迅速な排除を誘導するために、ＣＲ１及び可溶性タンパク質／病原体を標的とすることが可能である。
【０１４６】
さらに、本発明のＤＶＤ−Ｉｇは、細胞内送達（内部移行受容体及び細胞内分子を標的化すること）、脳内への送達（血液脳関門を横切るために、トランスフェリン受容体及び中枢神経系疾患媒介物質を標的化すること）など、組織特異的な送達（増強された局所ＰＫにより、より高い効力及び／又はより低い毒性を得るために、組織マーカー及び疾病媒介物質を標的とすること）のために使用することが可能である。ＤＶＤ−Ｉｇは、その抗原の非中和エピトープへの結合を介して特異的な位置へ抗原を送達するための担体たんぱく質としての役割も果たすことができ、抗原の半減期を増加させることが可能である。さらに、ＤＶＤ−Ｉｇは、患者中に植え込まれた医療用具に物理的に連結され、又はこれらの医療用具を標的とするように設計することが可能である（Ｂｕｒｋｅ，Ｓａｎｄｒａ  Ｅ．；Ｋｕｎｔｚ，Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｅ．；Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｌｅｗｉｓ  Ｂ．，Ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ（ＡＢＴ−５７８）  ｅｌｕｔｉｎｇ  ｓｔｅｎｔｓ．Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（２００６），５８（３），４３７−４４６；Ｓｕｒｆａｃｅ  ｃｏａｔｉｎｇｓ  ｆｏｒ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄ，Ｈ．  Ｆ．；Ｂｌａｎｃｈｅｍａｉｎ，Ｎ．；Ｍａｙｅｒ，Ｇ．；Ｃｈａｉ，Ｆ．；Ｌｅｆｅｂｖｒｅ，Ｍ．；Ｂｏｓｃｈｉｎ，Ｆ．，Ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｄ  Ｃｏａｔｉｎｇｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００６），２００（２２−２３），６３１８−６３２４；Ｄｒｕｇ／  ｄｅｖｉｃｅ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｌｏｃａｌ  ｄｒｕｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ，Ｗｕ，Ｐｅｎｇ；Ｇｒａｉｎｇｅｒ，Ｄａｖｉｄ  Ｗ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（２００６），２７（１１），２４５０−２４６７；Ｍｅｄｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ  ｄｅｖｉｃｅｓ．，Ｍａｒｑｕｅｓ，Ａ．  Ｐ．；Ｈｕｎｔ，Ｊ．  Ａ．；Ｒｅｉｓ，Ｒｕｉ  Ｌ．，Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００５），３７７−３９７参照）。要約すれば、医療用インプラントの部位へ、細胞の適切な種類を誘導することは、正常な組織機能の治癒及び回復を促進し得る。あるいは、用具に連結されたＤＶＤ、又は用具を標的とするＤＶＤによって、装置の植え込み時に放出される媒介物質（サイトカインが含まれるが、これに限定されない。）の阻害も提供される。例えば、封鎖された動脈をきれいにし、心筋への血流を改善するために、介入的心臓病学において、長年にわたってステントが使用されている。しかしながら、伝統的な地金ステントは、一部の患者に、再狭窄（治療された領域中の動脈が再び狭くなること）を引き起こすことが知られており、血液凝固を引き起こし得る。最近、抗ＣＤ３４抗体によって被覆されたステントが記載されており、これは、再狭窄を軽減し、血液全体を循環している内皮前駆細胞（ＥＰＣ）を捕捉することによって、血液凝固の発生を予防する。内皮細胞は、血管に整列している細胞であり、血液が滑らかに流れるようにしている。ＥＰＣは、ステントの硬い表面に付着して滑らかな層を形成し、この層は、治癒を促進するのみならず、従来ステントの使用に付随してきた合併症である再狭窄及び血液凝固を予防する（Ａｏｊｉ  ｅｔ  ａｌ．２００５  Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ．４５（１０）：１５７４−９）。ステントを必要としている患者に対する結果を改善させることに加えて、心血管バイパス手術を必要としている患者に対しても改善が示唆されている。例えば、抗ＥＰＣ抗体で被覆された人工血管導管（人工動脈）は、バイパス手術移植のために、患者の足又は腕からの動脈を使用する必要性をなくする。これは、手術及び麻酔時間を短縮し、それにより、冠動脈手術死を低下させる。ＤＶＤ−Ｉｇは、細胞動員を促進するために、植え込まれた装置上に被覆された、細胞表面マーカー（ＣＤ３４など）及びタンパク質（又は、脂質及び多糖を含む（但し、これらに限定されない。）あらゆる種類のエピトープ）に結合するように設計されている。このようなアプローチは、一般的に、他の医療用インプラントに対しても適用することが可能である。あるいは、ＤＶＤ−Ｉｇは、医療用具上に被覆することも可能であり、植え込まれた時に、（又はすでに充填されたＤＶＤ−Ｉｇの老朽化及び変性など、さらなる新鮮なＤＶＤ−Ｉｇを必要とし得る全ての他の要請に応じて）用具から全てのＤＶＤを放出し、装置は、新鮮なＤＶＤ−Ｉｇを患者に全身投与することによって、最充填することが可能であり、この場合、ＤＶＤ−Ｉｇは、結合部位の１セットを有する目的標的（サイトカイン、細胞表面マーカー（ＣＤ３４など）など）に結合し、及び結合部位の他のセットを有する装置上に被覆された標的（タンパク質、あらゆる種類のエピトープ（脂質、多糖及びポリマーを含むが、これらに限定されない。）に結合するように設計されている。この技術は、被覆されたインプラントの有用性を拡張するという利点を有している。
【０１４７】
Ａ．様々な疾病におけるＤＶＤ−Ｉｇの使用
本発明のＤＶＤ−Ｉｇ分子は、様々な疾病を治療するための治療分子としても有用である。このようなＤＶＤ分子は、特定の疾病に関与する１つ又はそれ以上の標的に結合し得る。様々な疾病におけるこのような標的の例が、以下に記載されている。
【０１４８】
１．ヒト自己免疫及び炎症性応答
Ｃ５、ＣＣＬ１（１−３０９）、ＣＣＬ１１（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ｍｃｐ−４）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−１ｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ−４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２（ｍｃｐ−１）、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａ）、ＣＣＬ２１（ＭＩＰ−２）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ−１）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−１ａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−１ｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ｍｃｐ−３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）、ＣＸＣＬＩｌ（Ｉ−ＴＡＣ／ＩＰ−９）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦｌ）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ−７８／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）、ＣＸＣＬ９、ＩＬ１３、ＩＬ８、ＣＣＬ１３（ｍｃｐ−４）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸ３ＣＲ１、ＩＬ８ＲＡ、ＸＣＲ１（ＣＣＸＣＲ１）、ＩＦＮＡ２、ＩＬ１０、ＩＬ１３、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ１Ｆ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬ１Ｆ７、ＩＬ１Ｆ８、ＩＬ１Ｆ９、ＩＬ２２、ＩＬ５、ＩＬ８、ＩＬ９、ＬＴＡ、ＬＴＢ、ＭＩＦ、ＳＣＹＥ１（内皮単球活性化サイトカイン）、ＳＰＰ１、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ５、ＩＦＮＡ２、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＡＢＣＦ１、ＢＣＬ６、Ｃ３、Ｃ４Ａ、ＣＥＢＰＢ、ＣＲＰ、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１ＲＮ、ＩＬ８ＲＢ、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＯＬＬＩＰ、ＦＡＤＤ、ＩＲＡＫ１、ＩＲＡＫ２、ＭＹＤ８８、ＮＣＫ２、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、ＴＲＡＦ５、ＴＲＡＦ６、ＡＣＶＲ１、ＡＣＶＲ１Ｂ、ＡＣＶＲ２、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＡＣＶＲＬ１、ＣＤ２８、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ、ＣＤ３Ｚ、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＮＲ１、ＣＴＬＡ４、ＣＹＳＬＴＲ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＦＣＧＲ３Ａ、ＧＰＲ４４、ＨＡＶＣＲ２、ＯＰＲＤ１、Ｐ２ＲＸ７、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＢＬＲ１、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１５、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２３、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＲ４、ＧＰＲ２、ＳＣＹＥ１、ＳＤＦ２、ＸＣＬ１、ＸＣＬ２、ＸＣＲ１、ＡＭＨ、ＡＭＨＲ２、ＢＭＰＲｌＡ、ＢＭＰＲ１Ｂ、ＢＭＰＲ２、Ｃ１９ｏｒｆ１０（ＩＬ２７ｗ）、ＣＥＲｌ、ＣＳＦ１、ＣＳＦ２、ＣＳＦ３、ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８、ＦＧＦ２、ＧＦＩ１、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ＩＧＦ１、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１Ｒ１、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ９、ＩＬ９Ｒ、ＩＬ１０、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＩＬ１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３、ＥＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ｒ、ＩＬ１８、ＩＬ１８Ｒ１、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＫＩＴＬＧ、ＬＥＰ、ＬＴＡ、ＬＴＢ、ＬＴＢ４Ｒ、ＬＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ、ＭＩＦ、ＮＰＰＢ、ＰＤＧＦＢ、ＴＢＸ２１、ＴＤＧＦ１、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＧＦＢＩ、ＴＧＦＢＲ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨ１Ｌ、ＴＮＦ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＲＳＦ１１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＳＦ４、ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦＳＦ６、ＴＮＦＳＦ１１、ＶＥＧＦ、ＺＦＰＭ２及びＲＮＦ１１０（ＺＮＦ１４４）など、多くのタンパク質が、一般的な自己免疫及び炎症性応答に関与していると推定されている。一態様において、上に列記されている標的の１つ又はそれ以上に結合することが可能なＤＶＤ−Ｉｇが提供される。
【０１４９】
２．喘息
アレルギー性喘息は、好酸球増加症、杯細胞異形成、上皮細胞の変化、気道過敏症（ＡＨＲ）並びにＴｈ２及びＴｈ１サイトカイン発現並びに上昇した血清ＩｇＥレベルの存在によって特徴付けられる。気道炎症が、喘息の発病の基礎を成す中心的な因子であることは、現在では広く受け入れられており、Ｔ細胞、Ｂ細胞、好酸球、肥満細胞及びマクロファージなどの炎症性細胞と、サイトカイン及びケモカインなどの分泌されるこれらの媒介物質の複雑な相互作用が関与している。コルチコステロイドは、今日、喘息に対する最も重要な抗炎症性治療であるが、それらの作用機序は非特異的であり、特に、若い患者集団では、安全性についての懸念が存在する。従って、より特異的で、標的化された治療の開発が必要とされる。マウス中のＩＬ−１３が、好酸球性炎症とは独立に、ＡＨＲ、粘膜の過剰分泌及び気道繊維症など、喘息の特徴の多くを模倣するという、証拠が増加している。（Ｆｉｎｏｔｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００５），１７（８），９９３−１００７；Ｐａｄｉｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００５），１７４（１２），８０９７−８１０５）。
【０１５０】
ＩＬ−１３は、喘息を伴う病的応答を引き起こす上で中心的な役割を有すると推定されている。肺でのＩＬ−１３の効果を抑制するための抗ＩＬ−１３モノクローナル抗体療法の開発は、喘息のための新規治療としてかなりの有望性を与える、刺激的な新しいアプローチである。しかしながら、異なる免疫学的経路の他の媒介物質も喘息の発病に関与しており、ＩＬ−１３に加えて、これらの媒介物質を遮断することは、さらなる治療的利点を与え得る。このような標的対には、ＩＬ−１３及び腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）などの炎症促進性サイトカインが含まれるが、これに限定されるものではない。ＴＮＦ−αは、喘息における炎症性応答を増幅し得、疾病の重度と関連し得る（ＭｃＤｏｎｎｅｌｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００１），３１（Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  Ａｓｔｈｍａ，Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  ＣＯＰＤ），２４７−２５０）。これは、ＩＬ−１３及びＴＮＦ−αの両方を遮断し、特に、重い気道疾病において、有益な効果を有し得ることを示唆する。好ましい実施形態において、本発明のＤＶＤ−Ｉｇは、標的であるＩＬ−１３及びＴＮＦαに結合し、喘息を治療するために使用される。
【０１５１】
炎症及びＡＨＲをともに評価することができる、ＯＶＡによって誘導された喘息マウスモデルなどの動物モデルが本分野において公知であり、様々なＤＶＤ−Ｉｇ分子が喘息を治療する能力を測定するために使用し得る。喘息を研究するための動物モデルは、Ｃｏｆｆｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００５），２０１（１２），１８７５−１８７９；Ｌｌｏｙｄ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１），７７，２６３−２９５；Ｂｏｙｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００５），２０１（１２），１８６９−１８７３；ａｎｄ  Ｓｎｉｂｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００５），３５（２），１４６−５２に開示されている。これらの標的対の定型的な安全性評価に加えて、免疫抑制の程度に対する特異的検査が保証され、最高の標的対を選択する上で役立ち得る（Ｌｕｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ（１９９４），９２（１−３），２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ（１９９２），７７  ９９−１０２；Ｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１），１０８（２），２５０−２５７参照）。
【０１５２】
上で開示されている論拠に基づいて、並びに効力及び安全性のための同じ評価モデルを使用して、ＤＶＤ−Ｉｇ分子が結合することができ、喘息を治療するために有用であり得る他の標的対を決定し得る。ＩＬ−１βは、喘息における炎症応答にも関与が推定されているので、好ましくは、このような標的には、ＩＬ−１３及びＩＬ−１βが含まれ；ＩＬ−１３及びＩＬ−９など、炎症に関与しているＩＬ−１３及びサイトカイン及びケモカイン；ＩＬ−１３及びＩＬ−４；ＩＬ−１３及びＩＬ−５；ＩＬ−１３及びＩＬ−２５；ＩＬ−１３及びＴＡＲＣ；ＩＬ−１３及びＭＤＣ；ＩＬ−１３及びＭＩＦ；ＩＬ−１３及びＴＧＦ−β；ＩＬ−１３及びＬＨＲアゴニスト；ＩＬ−１３及びＣＬ２５；ＩＬ−１３及びＳＰＲＲ２ａ；ＩＬ−１３及びＳＰＲＲ２ｂ；並びにＩＬ−１３及びＡＤＡＭ８が含まれるが、これらに限定されるものではない。本発明は、ＣＳＦ１（ＭＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）、ＦＧＦ２、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ヒスタミン及びヒスタミン受容体、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１２Ｂ、ＩＬ１３、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１８、ＩＬ１９、ＫＴＩＬＧ、ＰＤＧＦＢ、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ５ＲＡ、ＩＬ８ＲＡ、ＩＬ８ＲＢ、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１８Ｒ１、ＴＳＬＰ、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ８、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１８、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４，ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＸＣＬ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＸ３ＣＲ１、ＧＰＲ２、ＸＣＲ１、ＦＯＳ、ＧＡＴＡ３、ＪＡＫ１、ＪＡＫ３、ＳＴＡＴ６、ＴＢＸ２１、ＴＧＦＢ１、ＴＮＦＳＦ６、ＹＹ１、ＣＹＳＬＴＲ１、ＦＣＥＲ１Ａ、ＦＣＥＲ２、ＬＴＢ４Ｒ、ＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ及びキチナーゼからなる群から選択される、喘息に関与している１つ又はそれ以上の標的に結合することが可能なＤＶＤ−Ｉｇも提供する。
【０１５３】
３．関節リウマチ
全身性疾患である関節リウマチ（ＲＡ）は、関節の滑液中の慢性的炎症反応によって特徴付けられ、軟骨の変性と隣接する関節骨を伴う。ＴＮＦ、ケモカイン及び成長因子など、多くの炎症促進性サイトカインが、罹患した関節中に発現されている。抗ＴＮＦ抗体又はｓＴＮＦＲ融合タンパク質の、ＲＡのマウスモデルへの全身投与は、抗炎症性及び関節保護的であることが示された。ＲＡ患者中のＴＮＦの活性が、静脈内に投与されたインフリキシマブ（キメラ抗ＴＮＦモノクローナル抗体（ｍＡＢ））で遮断された臨床的調査（Ｈａｒｒｉｍａｎ  Ｇ，Ｈａｒｐｅｒ  ＬＫ，Ｓｃｈａｉｂｌｅ  ＴＦ．１９９９  Ｓｕｍｍａｒｙ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｕｓｉｎｇ  ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ，ａｎ  ａｎｔｉ−ＴＮＦａｌｐｈａ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  ５８  Ｓｕｐｐｌ  １：１６１−４）は、ＴＮＦがＩＬ−６、ＩＬ−８、ＭＣＰ−１及びＶＥＧＦ産生、免疫及び炎症性細胞の関節中への動員、血管新生並びにマトリックスメタロプロテイナーゼ−１及び−３の血液レベルの低下を制御するという証拠を提供した。関節リウマチにおける炎症性経路をより深く理解することによって、関節リウマチに関与する他の治療標的の同定に結びついた。過去、インターロイキン−６アンタゴニスト（ＭＲＡ）、ＣＴＬＡ４Ｉｇ（アダタセプト、Ｇｅｎｏｖｅｓｅ  Ｍｃ  ｅｔ  ａｌ  ２００５  Ａｂａｔａｃｅｐｔ  ｆｏｒ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｔｏ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．３５３：１１１４−２３．）、及び抗Ｂ細胞療法（リツキシマブ、Ｏｋａｍｏｔｏ  Ｈ，Ｋａｍａｔａｎｉ  Ｎ．  ２００４  Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｆｏｒ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．３５１：１９０９）などの有望な治療が、無作為化された対照臨床試験において既に検査されてきた。インターロイキン−１５、インターロイキン−１７及びインターロイキン−１８など、他のサイトカインが同定され、動物モデルにおいて有益であることが示されており、これらの因子の臨床試験が現在進行中である。抗ＴＮＦ及び別の媒介物質を組み合わせた二重特異的抗体療法は、臨床的効力及び／又は患者の対象範囲を増大させる上で大きな可能性を秘めている。例えば、ＴＮＦとＶＥＧＦ（何れも、ＲＡの病態生理学に関与している。）の両方を遮断することは、炎症及び血管新生を根絶することができる可能性を秘めている。ＴＮＦ及びＩＬ−１８、ＴＮＦ及びＩＬ−１２；ＴＮＦ及びＩＬ−２３；ＴＮＦ及びＩＬ−１β；ＴＮＦ及びＭＤＤＦ；ＴＮＦ及びＩＬ−１７；並びにＴＮＦ及びＩＬ−１５を含む（但し、これらに限定されない。）、ＲＡに関与している標的の他の対を、特異的ＤＶＤＩｇで遮断することも想定される。これらの標的対の定型的な安全性評価に加えて、免疫抑制の程度に対する特異的検査が保証され、最高の標的対を選択する上で役立ち得る（Ｌｕｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ（１９９４），９２（１−３），２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ（１９９２），７７  ９９−１０２；Ｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１），１０８（２），２５０−２５７参照）。ＤＶＤＩｇ分子が関節リウマチの治療に対して有用であるかどうかは、コラーゲンによって誘導された関節炎マウスモデルなど、前臨床動物ＲＡモデルを用いて評価することが可能である。他の有用なモデルも本分野において周知である（Ｂｒａｎｄ  ＤＤ．，Ｃｏｍｐ  Ｍｅｄ．（２００５）  ５５（２）：１１４−２２参照）。
【０１５４】
４．ＳＬＥ
ＳＬＥの免疫病原性の特徴は、ポリクローナルＢ細胞活性化であり、これは、高グロブリン血症、自己抗体産生及び免疫複合体形成をもたらす。基本的な異常は、全般的なＴ細胞の調節不全のために、Ｔ細胞が禁じられたＢ細胞クローンを抑制できないことであるように見受けられる。さらに、Ｂ及びＴ細胞の相互作用は、第二のシグナルを開始する、ＩＬ−１０並びにＣＤ４０とＣＤ４０Ｌ及びＢ７及びＣＤ２８とＣＴＬＡ−４などの同時刺激分子などの幾つかのサイトカインによって促進される。これらの相互作用は、免疫複合体及びアポトーシス材料の損傷された食細胞の排除とともに、生じた組織傷害によって免疫応答を永続化させる。以下の標的がＳＬＥに関与し得、治療的介入のためのＤＶＤ−Ｉｇアプローチのために使用できる可能性を秘めている。Ｂ細胞標的化療法：ＣＤ−２０、ＣＤ−２２、ＣＤ−１９、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８０、ＨＬＡ−ＤＲＡ、ＩＬ１０、ＩＬ２、ＩＬ４、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６、ＴＮＦＳＦ５、ＴＮＦＳＦ６、ＢＬＲ１、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ＩＣＯＳＬ、ＩＧＢＰ１、ＭＳ４Ａ１、ＲＧＳ１、ＳＬＡ２、ＣＤ８１、ＩＦＮＢ１、ＩＬ１０、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＳＦ５、ＡＩＣＤＡ、ＢＬＮＫ、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ−６ＳＴ、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ４、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＫＬＦ６、ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ３８、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＤＰＰ４、ＦＣＥＲ２、ＩＬ２ＲＡ、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＲ２、ＩＬ１Ｒ２、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＭＳ４Ａ１、ＳＴ６ＧＡＬ１、ＣＤ１Ｃ、ＣＨＳＴ１０、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＤＲＡ及びＮＴ５Ｅ；同時刺激シグナル：ＣＴＬＡ４又はＢ７．１／Ｂ７．２；Ｂ細胞生存の阻害」ＢｌｙＳ、ＢＡＦＦ；補体不活化：Ｃ５；サイトカイン調節。中心的な原理は、何れかの組織中の総合的な生物応答は、炎症促進性サイトカイン又は抗炎症性サイトカインの局所レベル間のバランスの結果であるということである（Ｓｆｉｋａｋｉｓ  ＰＰ  ｅｔ  ａｌ  ２００５  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  １７：５５０−７参照）。ＳＬＥは、血清ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０の文献に報告された上昇を伴う、Ｔｈ２によって誘導される疾病であると考えられる。ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＮＦ−ａ及びＴＮＦ−ａからなる群から選択される１つ又はそれ以上の標的に結合することが可能なＤＶＤＩｇも想定される。上で論述されている標的の組み合わせは、多数の狼瘡前臨床モデル中で検査することが可能なＳＬＥに対して治療的な効力を増強する（Ｐｅｎｇ  ＳＬ（２００４）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．；１０２：２２７−７２参照）。
【０１５５】
５．多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、主に病因が不明である複雑なヒト自己免疫型疾病である。神経系を通じたミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）の免疫学的破壊が、多発性硬化症の主要な病因である。ＭＳは、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞による浸潤を伴う複雑な病変の疾病であり、中枢神経系内の応答の疾病である。サイトカイン、反応性窒素種及び同時刺激分子の中枢神経系中での発現は全て、ＭＳにおいて記載されている。主に検討すべきであるのは、自己免疫の発達に寄与する免疫学的機序である。特に、Ｔｈ１及びＴｈ２細胞などの他のＴ細胞のバランス／調節を補助する、抗原発現、サイトカイン及び白血病相互作用並びに調節性Ｔ細胞は、治療標的の同定のための重要な領域である。
【０１５６】
ＩＬ−１２は、ＡＰＣによって産生される炎症促進性サイトカインであり、Ｔｈ１エフェクター細胞の分化を促進する。ＩＬ−１２は、ＭＳ患者及びＥＡＥに罹患した動物中の発達している病変中で産生される。以前、ＩＬ−１２経路中の妨害がげっ歯類中のＥＡＥを効果的に抑制すること、及びコモンマモセット中のミエリン誘発性ＥＡＥモデル中で、抗ＩＬ−１２ｍＡｂを用いたＩＬ−１２ｐ４０のインビボ中和が有益な効果を有することが示された。
【０１５７】
ＴＷＥＡＫは、中枢神経系（ＣＮＳ）中で恒常的に発現されるＴＮＦファミリーのメンバーであり、細胞の種類に応じて炎症促進性、増殖性又はアポトーシス効果を有する。その受容体Ｆｎ１４は、内皮細胞、反応性星状膠細胞及び神経細胞によって、中枢神経系中で発現されている。ＴＷＥＡＫ及びＦＮ１４ｍＲＮＡ発現は、実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）の間に、脊髄中で増加した。ミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質（ＭＯＧ）によってＣ５７ＢＬ／６マウス中に誘導されたＥＡＥにおける抗ＴＷＥＡＫ抗体治療は、マウスが初回刺激相後に治療された場合に、疾病の重度及び白血球の浸潤の低下をもたらした。
【０１５８】
本発明の一態様は、ＩＬ−１２、ＴＷＥＡＫ、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１３、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ−１８、ＶＥＧＦ、ＶＬＡ−４、ＴＮＦ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ２００、ＩＦＮγ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、Ｃ５、ＣＤ５２及びＣＣＲ２からなる群から選択される１つ又はそれ以上、好ましくは２つの標的に結合することができるＤＶＤＩｇ分子に関する。好ましい実施形態には、ＭＳの治療に対して有益な治療剤としての二重特異的抗ＩＬ−１２／ＴＷＥＡＫＤＶＤＩｇが含まれる。ＭＳを治療するためのＤＶＤ分子の有用性を評価するための幾つかの動物モデルが、本分野において公知である（Ｓｔｅｉｎｍａｎ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．，（２００５）  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６（１１）：５６５−７１；Ｌｕｂｌｉｎ  ＦＤ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｅｍｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．８（３）：１９７−２０８；Ｇｅｎａｉｎ  ＣＰ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．７５（３）：１８７−９７；Ｔｕｏｈｙ  ＶＫ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１８９（７）：１０３３−４２；Ｏｗｅｎｓ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｃｌｉｎ．ｌ３（１）：５１−７３；及び’ｔ  Ｈａｒｔ  ＢＡ，ｅｔ  ａｌ．，（２００５）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７５（７）：４７６１−８参照）。これらの標的対の定型的な安全性評価に加えて、免疫抑制の程度に対する特異的検査が保証され、最高の標的対を選択する上で役立ち得る（Ｌｕｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ（１９９４），９２（１−３），２２９−４３；Ｄｅｓｃｏｔｅｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ（１９９２），７７  ９９−１０２；Ｊｏｎｅｓ  Ｒ．  ２０００  Ｒｏｖｅｌｉｚｕｍａｂ（ＩＣＯＳ  Ｃｏｒｐ）］Ｄｒｕｇｓ．３（４）：４４２−６）参照）。
【０１５９】
６．敗血症
敗血症の病態生理は、グラム陰性生物（リポ多糖［ＬＰＳ］、リピドＡ、エンドトキシン）及びグラム陽性生物（リポテイコ酸、ペプチドグリカン）の両方の外膜成分によって開始される。これらの外膜成分は、単球の表面上のＣＤ１４受容体に結合することが可能である。最近記載されたトール様受容体によって、シグナルは、その後、細胞へと伝達され、炎症促進性サイトカインである腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）及びインターロイキン−１（ＩＬ−１）の最終的な産生をもたらす。圧倒的な炎症性応答及び免疫応答は、敗血症性ショックの本質的な特徴であり、敗血症によって誘導される組織損傷、多臓器不全及び死亡の病因において中心的な役割を果たす。サイトカイン、特に、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）及びインターロイキン（ＩＬ）−１は、敗血症性ショックの極めて重要な媒介物質であることが示されている。これらのサイトカインは、組織に対して直接的な毒性効果を有しており、ホスホリパーゼＡ２も活性化させる。これらの効果及び他の効果は、血小板活性化因子、酸化窒素合成酵素活性の促進、好中球による組織浸潤の促進及び好中球活性の促進の増加した濃度をもたらす。
【０１６０】
敗血症及び敗血症性ショックの治療は、なお臨床的な難問であり、炎症性応答を標的とした生物学的応答修飾物質（すなわち、抗ＴＮＦ、抗ＭＩＦ）を用いた最近の前向き臨床試験は、若干の臨床的有益性を示したに過ぎなかった。最近、免疫抑制の付随期間を逆転させることを目指した治療法に関心が移っている。実験動物及び重病の患者における研究は、リンパ系臓器及び幾つかの実質組織の増加したアポトーシスが、この免疫抑制、アネルギー及び臓器系機能不全に寄与することを示している。敗血症症候群の間、リンパ球アポトーシスは、ＩＬ−２の不存在によって又はグルココルチコイド、グランザイム若しくはいわゆる「死亡（ｄｅａｔｈ）」サイトカイン：腫瘍壊死因子α又はＦａｓリガンドの放出によって引き金を引かれ得る。アポトーシスは、Ｂｃｌ−２ファミリーのアポトーシス促進性のメンバー及びアポトーシス抑制性のメンバーによって影響を受け得る、細胞質及び／又はミトコンドリアのカスパーゼの自己活性化を介して進行する。実験動物では、アポトーシスの阻害剤を用いた治療はリンパ系細胞のアポトーシスを抑制することができるのみならず、予後も改善し得る。抗アポトーシス因子を用いた臨床試験は、主にそれらの投与及び組織標的化に伴う技術的困難さが原因で、実現性が低いままであるが、リンパ球アポトーシスの阻害は、敗血症患者に対する魅力的な治療の標的である。同様に、炎症性媒介物質及びアポトーシス媒介物質の両方を標的とする二重特異的因子は、さらなる有益性を有し得る。本発明の一態様は、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＭＩＦ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１８、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＦａｓＬ、ＬＰＳ、トール様受容体、ＴＬＲ−４、組織因子、ＭＩＰ−２、ＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＡＳＰ１、ＣＡＳＰ４、ＩＬ１０、ＩＬ１Ｂ、ＮＦＫＢ１、ＰＲＯＣ、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＣＳＦ３、ＩＬ１０、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ６、ＡＤＯＲＡ２Ａ、ＣＣＲ３、ＩＬ１０、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ１ＲＮ、ＭＩＦ、ＮＦＫＢ１、ＰＴＡＦＲ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ４、ＧＰＲ４４、ＨＭＯＸ１、ミッドカイン、ＩＲＡＫ１、ＮＦＫＢ２、ＳＥＲＰＩＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＥ１及びＴＲＥＭ１からなる群から選択される、敗血症に関与する１つ又はそれ以上の標的、好ましい２つの標的に結合することが可能なＤＶＤＩｇに関する。敗血症に対するこのようなＤＶＤＩｇの効力は、本分野において公知の前臨床動物モデルにおいて評価することが可能である（Ｂｕｒａｓ  ＪＡ，ｅｔ  ａｌ．，（２００５）  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ．４（１０）：８５４−６５及びＣａｌａｎｄｒａ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ，（２０００）Ｎａｔ  Ｍｅｄ．６（２）：１６４−７０）参照）。
【０１６１】
７．神経疾患
７．１神経変性疾患
慢性神経変性疾患は、通常、神経細胞機能の進行性の喪失（神経細胞死、脱ミエリン化）、運動性の喪失及び記憶の喪失によって特徴付けられる年齢依存性疾患である。慢性神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病）の基礎を成す機序として明らかになりつつある知見は、複雑な病因を示しており、それらの発達及び進行に、様々な要因、例えば、年齢、血糖状態、アミロイド産生及び多量体化、ＲＡＧＥ（ＡＧＥに対する受容体）に結合する後天的糖化終末産物（ＡＧＥ）の蓄積、増加した脳の酸化的ストレス、減少した脳の血流、炎症性サイトカイン及びケモカインの放出を含む神経炎症、神経細胞の機能不全及びミクログリアの活性化が寄与していることが認められている。従って、これらの慢性神経変性疾患は、複数の細胞種及び媒介物質の間で複雑な相互作用を示す。このような疾病に対する治療戦略は限られており、非特異的な抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド、ＣＯＸ阻害剤）又は神経細胞の喪失及び／又はシナプス機能を抑制するための因子で炎症プロセスを遮断することが大部分を占める。これらの治療は、疾病の進行を停止させることができない。最近の研究は、可溶性Ａ−ｂペプチド（Ａ−ｂオリゴマー形態）に対する抗体などのより標的化された療法が、疾病の進行を停止させるのに役立つことができるのみならず、記憶を維持するのにも役立ち得ることを示唆している。これらの予備的な観察は、２以上の疾病媒介物質を標的とする特異的な療法（例えば、Ａ−ｂ及び炎症促進性サイトカイン（ＴＮＦなど））が、単一の疾病機序を標的化する場合に観察されたものより、慢性神経変性疾患に対して、ずっと優れた治療的効果を提供し得ることを示唆している（例えば、可溶性Ａ−バロン）（ＣＥ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ，ｅｔ  ａｌ，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ．２００５  Ｏｃｔ  ２４；Ｎｅｌｓｏｎ  ＲＢ．，Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．２００５；ｌ  １：３３３５；Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｌ．  Ｋｌｅｉｎ．；Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  Ｉｎｔ．２００２  ；４１  ：３４５；Ｍｉｃｈｅｌｌｅ  Ｃ  Ｊａｎｅｌｓｉｎｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．２００５  ；２：２３；Ｓｏｌｏｍａｎ  Ｂ．，Ｃｕｒｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｓ．２００４；ｌ：１４９；Ｉｇｏｒ  Ｋｌｙｕｂｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２００５；１１：５５６−６１；Ａｒａｎｃｉｏ  Ｏ，ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ（２００４）１−１０；Ｂｏｒｎｅｍａｎｎ  ＫＤ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．２００１；１５８：６３；Ｄｅａｎｅ  Ｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２００３；９：９０７−１３；及びＥｌｉｅｚｅｒ  Ｍａｓｌｉａｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ．２００５；４６：８５７参照）。
【０１６２】
本発明のＤＶＤ−Ｉｇ分子は、アルツハイマー病などの慢性神経変性疾患に関与する１つ又はそれ以上の標的に結合することが可能である。このような標的には、ＡＤの発病に関与すると推定されている全ての媒介物質（可溶性又は細胞表面）、例えば、ＡＧＥ（Ｓ１００Ａ、アムホテリン）、炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１）、ケモカイン（例えば、ＭＣＰ１）、神経再生を阻害する分子（例えば、Ｎｏｇｏ、ＲＧＭ−Ａ）、神経突起の成長を増強する分子（ニューロトロフィン）が含まれるが、これらに限定されない。ＤＶＤ−Ｉｇ分子の効力は、アミロイド前駆体タンパク質又はＲＡＧＥを過剰発現し、アルツハイマー病様の症候を発症するトランスジェニックマウスなどの前臨床動物モデルで妥当性を確認することが可能である。さらに、ＤＶＤ−Ｉｇ分子を構築し、動物モデルで効力について検査することが可能であり、ヒト患者での検査のために、最良の治療的ＤＶＤ−Ｉｇを選択することができる。ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、パーキンソン病などの他の神経変性疾患の治療のためにも使用することが可能である。α−シニュクレインが、パーキンソン病に関与している。α−シヌクレイン及び炎症性媒介物質（ＴＮＰ、ＩＬ−１、ＭＣＰ−１など）を標的とすることができるＤＶＤ−Ｉｇは、パーキンソン病に対する有効な治療であることを証明することが可能であり、本発明において想定される。
【０１６３】
７．２神経細胞の再生及び脊髄損傷
病的機序の知見の増大に関わらず、脊髄損傷（ＳＣＩ）は、なお、多大な損害を与える症状であり、高い医学的な要求を特徴とする医学的な適応症である。多くの脊髄損傷は、挫傷又は圧迫傷害であり、通常、一次損傷に続いて、最初の損傷を悪化させ、病変部位の著しい拡大（特には、１０倍超）をもたらす二次的な損傷機序（炎症媒介物質、例えば、サイトカイン及びケモカイン）が起こる。ＳＣＩにおけるこれらの原発及び続発性の機序は、他の手段、例えば発作によって引き起こされた脳損傷における機序と極めて類似している。満足する治療は存在せず、メチルプレドニゾロン（ＭＰ）の高用量ボーラス注射は、損傷から８時間後という狭い時間枠内で使用される唯一の療法である。しかしながら、この治療は、顕著な機能的回復が全くなしに、続発性損傷を予防することのみを目的としている。明瞭な効果の欠如並びにその後の感染症を伴う免疫抑制及び重い組織病理学的な筋肉の変化などの重い副作用に対して大きな批判が為されている。内在性の再生能を刺激する他の薬物、生物学又は小分子は認可されていないが、有望な治療原理及び薬物候補が、近年、ＳＣＩの動物モデルにおいて有効性を示している。多くの場合、ヒトＳＣＩにおける機能的回復の欠如は、病変部位における、瘢痕組織中、ミエリン中及び損傷を伴う細胞上における神経突起の増殖を阻害する因子によって引き起こされる。このような因子は、ミエリン随伴タンパク質ＮｏｇｏＡ、ＯＭｇｐ及びＭＡＧ、ＲＧＭＡ、瘢痕随伴ＣＳＰＧ（コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）及び反応性星状膠細胞に対する阻害因子（一部のセマホリン及びエフリン）である。しかしながら、病変部位では、増殖阻害分子が見出されるのみならず、ニューロトロフィン、ラミニンＬ１及びその他のような神経突起成長刺激因子も見出される。阻害的な影響の低下が、バランスを、増殖阻害から増殖促進へとシフトさせ得るので、神経突起成長阻害分子及び神経突起成長促進分子のこの協調は、ＮｏｇｏＡ又はＲＧＭＡのような単一の因子を遮断することが、げっ歯類ＳＣＩモデルにおいて著しい機能回復をもたらしたことを説明し得る。しかしながら、単一の神経突起成長阻害分子を遮断することによって観察された回復は完全ではなかった。より速く、より顕著な回復を達成するためには、２つの神経突起成長阻害分子（例えば、Ｎｏｇｏ及びＲＧＭＡ）を遮断するか、又は神経突起成長阻害分子を遮断し、及び神経突起成長増強分子の機能を増強するか（例えば、Ｎｏｇｏ及びニューロトロフィン）、又は神経突起成長阻害分子（例えば、Ｎｏｇｏ）及び炎症促進性分子（例えば、ＴＮＦ）を遮断することが、望ましい場合があり得る（ＭｃＧｅｅ  ＡＷ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２００３；２６：１９３；Ｍａｒｃｏ  Ｄｏｍｅｎｉｃｏｎｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｓｃｉ．２００５；２３３：４３；Ｍｉｌａｎ  Ｍａｋｗａｎａｌ，ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｊ．  ２００５；２７２：２６２８；Ｂａｒｒｙ  Ｊ．  Ｄｉｃｋｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００２；２９８：１９５９；Ｆｅｌｉｃｉａ  Ｙｕ  Ｈｓｕａｎ  Ｔｅｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｒｅｓ．２００５；７９：２７３；Ｔａｒａ  Ｋａｒ��ｅｚｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ２００４；７，７３６；Ｇａｎｇ  Ｘｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．２００４；９１；１０１８参照）。
【０１６４】
一態様において、ＮｇＲ及びＲＧＭＡ；ＮｏｇｏＡ及びＲＧＭＡ；ＭＡＧ及びＲＧＭＡ；ＯＭＧｐ及びＲＧＭＡ；ＲＧＭＡ及びＲＧＭＢ；ＣＳＰＧ及びＲＧＭＡ；アグレカン、ミッドカイン、ニューロカン、ベルシカン、ホスファカン、Ｔｅ３８及びＴＮＦ−ａ；樹状突起及び軸索の出芽を促進する抗体と組み合わされたＡβ球状体（ｇｌｏｂｕｌｏｍｅｒ）特異的抗体などの標的対に結合することが可能なＤＶＤ−Ｉｇが提供される。樹状突起の病変は、ＡＤの極めて早期の兆候であり、ＮＯＧＯＡが樹状突起の成長を制限することが知られている。ａｂのこのような種類を、ＳＣＩ候補（ミエリンタンパク質）Ａｂの何れかと組み合わせることが可能である。他のＤＶＤ−Ｉｇ標的は、ＮｇＲ−ｐ７５、ＮｇＲ−Ｔｒｏｙ、ＮｇＲ−Ｎｏｇｏ６６（Ｎｏｇｏ）、ＮｇＲ−Ｌｉｎｇｏ、Ｌｉｎｇｏ−Ｔｒｏｙ、Ｌｉｎｇｏ−ｐ７５、ＭＡＧ又はＯｍｇｐのあらゆる組み合わせを含み得る。さらに、標的には、神経突起の阻害に関与すると推定されている全ての媒介物質（可溶性又は細胞表面）、例えば、Ｎｏｇｏ、Ｏｍｐｇ、ＭＡＧ、ＲＧＭＡ、セマフォリン、エフリン、可溶性Ａ−ｂ、炎症促進性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１）、ケモカイン（例えば、ＭＩＰＩａ）、神経再生を阻害する分子も含まれ得る。抗ｎｏｇｏ／抗ＲＧＭＡ又は類似のＤＶＤ−Ｉｇ分子の効力は、脊髄損傷の前臨床動物モデルにおいて、妥当性を確認することが可能である。さらに、これらのＤＶＤ−Ｉｇ分子を構築し、動物モデルで効力について検査することが可能であり、ヒト患者での検査のために、最良の治療的ＤＶＤ−Ｉｇを選択することができる。さらに、単一の受容体、例えば３つのリガンドＮｏｇｏ、Ｏｍｐｇ及びＭＡＧに結合するＮｏｇｏ受容体並びにＡ−ｂ及びＳ１００Ａに結合するＲＡＧＥ上の２つの異なるリガンド結合部位を標的とするＤＶＤ−Ｉｇ分子を構築することが可能である。さらに、神経突起成長阻害剤、例えば、ｎｏｇｏ及びｎｏｇｏ受容体は、多発性硬化症のような免疫学的疾患において神経再生を抑制する上でも役割を果たす。ｎｏｇｏ−ｎｏｇｏ受容体の相互作用の阻害は、多発性硬化症の動物モデルの回復を増強させることが示されている。従って、１つの免疫媒介物質、例えば、ＩＬ−１２のようなサイトカイン、及び神経突起成長阻害分子、例えば、ｎｏｇｏ又はＲＧＭの機能を遮断することができるＤＶＤ−Ｉｇ分子は、免疫又は神経突起成長阻害剤分子のみを遮断するより、より速く、より大きな効力を与え得る。
【０１６５】
８．腫瘍疾患
モノクローナル抗体療法が、癌に対する重要な治療法として登場している（ｖｏｎ  Ｍｅｈｒｅｎ  Ｍ，ｅｔ  ａｌ  ２００３  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ．  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｍｅｄ．；５４：３４３−６９）。抗体は、アポトーシス、再誘導された細胞毒性、リガンド−受容体相互作用の妨害を誘導し、又は新生物表現型にとって重大なタンパク質の発現を抑制することによって、抗腫瘍効果を発揮し得る。さらに、抗体は、腫瘍微小環境の成分を標的とすることが可能であり、腫瘍に付随する脈管構造の形成など不可欠な構造を擾乱する。抗体は、そのリガンドが増殖因子である受容体（上皮増殖因子受容体など）を標的とすることも可能である。従って、抗体は、細胞増殖を刺激する天然のリガンドが標的とされる腫瘍細胞へ結合することを阻害する。あるいは、抗体は、抗イディオタイプネットワーク、補体媒介性細胞傷害又は抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導し得る。２つの別個の腫瘍媒介物質を標的とする二重特異的抗体の使用は、単一特異的療法に比べて、さらなる有利さを与えるものと思われる。腫瘍疾患を治療するために、標的の以下の対に結合することができるＤＶＤＩｇも想定される。ＩＧＦ１及びＩＧＦ２；ＩＧＦ１／２及びＥｒｂ２Ｂ；ＶＥＧＦＲ及びＥＧＦＲ；ＣＤ２０及びＣＤ３、ＣＤ１３８及びＣＤ２０、ＣＤ３８及びＣＤ２０、ＣＤ３８及びＣＤ１３８、ＣＤ４０及びＣＤ２０、ＣＤ１３８及びＣＤ４０、ＣＤ３８及びＣＤ４０。他の標的の組み合わせには、ＥＧＦ／ｅｒｂ−２／ｅｒｂ−３ファミリーの１つ又はそれ以上のメンバーが含まれる。ＤＶＤＩｇが結合し得る、腫瘍疾患に関与する他の標的（１つ又はそれ以上）には、ＣＤ５２、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＢＭＰ６、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ２４、ＩＮＨＡ、ＴＮＦ、ＴＮＦＳＦ１０、ＢＭＰ６、ＥＧＦ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＧＲＰ、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＮＨＡ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＶＥＧＦ、ＣＤＫ２、ＥＧＦ、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ２、ＦＧＦ４、ＦＧＦ７、ＩＧＦ１、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＬ２、ＶＥＧＦ、ＢＣＬ２、ＣＤ１６４、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＣＤＫＮ２Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＤＫＮ３、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＯＤＺ１、ＰＡＷＲ、ＰＬＧ、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＡＲ、ＢＲＣＡ１、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、Ｅ２Ｆ１、ＥＧＦＲ、ＥＮＯ１、ＥＲＢＢ２、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ２、ＩＮＳＬ４、ＭＹＣ、Ｎ０Ｘ５、ＮＲ６Ａ１、ＰＡＰ、ＰＣＮＡ、ＰＲＫＣＱ、ＰＲＫＤ１、ＰＲＬ、ＴＰ５３、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ９、ＩＧＦＢＰ３、ＩＬ２、ＩＮＨＡ、ＫＬＫ６、ＴＰ５３、ＣＨＧＢ、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＮＨＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＰＲＬ、ＫＬＫ６、ＳＨＢＧ、ＮＲ１Ｄ１、ＮＲ１Ｈ３、ＮＲ１Ｉ３、ＮＲ２Ｆ６、ＮＲ４Ａ３、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、ＮＲ０Ｂ１、ＮＲ０Ｂ２、ＮＲ１Ｄ２、ＮＲ１Ｈ２、ＮＲ１Ｈ４、ＮＲ１Ｉ２、ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲ２Ｅ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ２Ｆ１、ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲ４Ａ１、ＮＲ４Ａ２、ＮＲ５Ａ１、ＮＲ５Ａ２、ＮＲ６Ａ１、ＰＧＲ、ＲＡＲＢ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ６、ＫＬＫ３、ＫＲＴ１、ＡＰＯＣ１、ＢＲＣＡ１、ＣＨＧＡ、ＣＨＧＢ、ＣＬＵ、ＣＯＬ１Ａ１、ＣＯＬ６Ａ１、ＥＧＦ、ＥＲＢＢ２、ＥＲＫ８、ＦＧＦ１、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ２、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＧＮＲＨ１、ＩＧＦ１、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＩＬ１２Ａ、ＩＬ１Ａ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ２、ＩＬ２４、ＩＮＨＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＫＬＫ１０、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ＫＬＫ１５、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ９、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＳＭＢ、ＮＴＮ４、ＯＤＺ１、ＰＡＰ、ＰＬＡＵ、ＰＲＬ、ＰＳＡＰ、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＨＢＧ、ＴＧＦＡ、ＴＩＭＰ３、ＣＤ４４、ＣＤＨ１、ＣＤＨ１０、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨ７、ＣＤＨ９、ＣＤＨ１、ＣＤＨ１０、ＣＤＨ１３、ＣＤＨ１８、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨ７、ＣＤＨ８、ＣＤＨ９、ＲＯＢＯ２、ＣＤ４４、ＩＬＫ、ＩＴＧＡ１、ＡＰＣ、ＣＤ１６４、ＣＯＬ６Ａ１、ＭＴＳＳ１、ＰＡＰ、ＴＧＦＢ１Ｉ１、ＡＧＲ２、ＡＩＧ１、ＡＫＡＰ１、ＡＫＡＰ２、ＣＡＮＴ１、ＣＡＶ１、ＣＤＨ１２、ＣＬＤＮ３、ＣＬＮ３、ＣＹＢ５、ＣＹＣ１、ＤＡＢ２ＩＰ、ＤＥＳ、ＤＮＣＬ１、ＥＬＡＣ２、ＥＮＯ２、ＥＮＯ３、ＦＡＳＮ、ＦＬＪ１２５８４、ＦＬＪ２５５３０、ＧＡＧＥＢ１、ＧＡＧＥＣ１、ＧＧＴ１、ＧＳＴＰ１、ＨＩＰ１、ＨＵＭＣＹＴ２Ａ、ＩＬ２９、Ｋ６ＨＦ、ＫＡＩ１、ＫＲＴ２Ａ、ＭＩＢ１、ＰＡＲＴ１、ＰＡＴＥ、ＰＣＡ３、ＰＩＡＳ２、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＰＩＤ、ＰＲ１、ＰＳＣＡ、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ２、ＴＰＭ１、ＴＰＭ２、ＴＲＰＣ６、ＡＮＧＰＴ１、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＰＥＰ、ＥＣＧＦ１、ＥＲＥＧ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＩＧＦ、ＦＬＴ１、ＪＡＧ１、ＫＤＲ、ＬＡＭＡ５、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＰＧＦ、ＰＬＸＤＣ１、ＳＴＡＢ１、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＣ、ＡＮＧＰＴＬ３、ＢＡＩ１、ＣＯＬ４Ａ３、ＩＬ８、ＬＡＭＡ５、ＮＲＰ１、ＮＲＰ２、ＳＴＡＢ１、ＡＮＧＰＴＬ４、ＰＥＣＡＭ１、ＰＦ４、ＰＲＯＫ２、ＳＥＲＰＩＮＦ１、ＴＮＦＡＩＰ２、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ２、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ５、ＣＸＣＬ６、ＣＸＣＬ９、ＩＦＮＡ１、ＩＦＮＢ１、ＩＦＮＧ、ＩＬ１Ｂ、ＩＬ６、ＭＤＫ、ＥＤＧ１、ＥＦＮＡ１、ＥＦＮＡ３、ＥＦＮＢ２、ＥＧＦ、ＥＰＨＢ４、ＦＧＦＲ３、ＨＧＦ、ＩＧＦ１、ＩＴＧＢ３、ＰＤＧＦＡ、ＴＥＫ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢ１、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢＲ１、ＣＣＬ２、ＣＤＨ５、ＣＯＬ１８Ａ１、ＥＤＧ１、ＥＮＧ、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ３、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＢＡＤ、ＢＡＧ１、ＢＣＬ２、ＣＣＮＡ１、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＤ１、ＣＣＮＥ１、ＣＣＮＥ２、ＣＤＨ１（Ｅ−カドヘリン）、ＣＤＫＮ１Ｂ（ｐ２７Ｋｉｐ１）、ＣＤＫＮ２Ａ（ｐｌ６ＩＮＫ４ａ）、ＣＯＬ６Ａ１、ＣＴＮＮＢ１（ｂ−カテニン）、ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ−２）、ＥＳＲ１、ＥＳＲ２、Ｆ３（ＴＦ）、ＦＯＳＬｌ（ＦＲＡ−Ｉ）、ＧＡＴＡ３、ＧＳＮ（ゲルソリン）、ＩＧＦＢＰ２、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ６、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ（糖タンパク質１３０）、ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）、ＪＵＮ、ＫＬＫ５、ＫＲＴ１９、ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ−Ｊｕｎ）、ＭＫＩ６７（Ｋｉ−６７）、ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮＭＥ１（ＮＭ２３Ａ）、ＰＧＲ、ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）、ＰＴＥＮ、ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン）、ＳＥＲＰＩＮＥ１（ＰＡＩ−１）、ＴＧＦＡ、ＴＨＢＳ１（トロンボスポンジン−１）、ＴＩＥ（Ｔｉｅ−１）、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＩｉａ）、ＴＰ５３、ＡＺＧＰ１（亜鉛−ａ−糖タンパク質）、ＢＰＡＧ１（プレクチン）、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１Ｗａｐ１／Ｃｉｐ１）、ＣＬＤＮ７（クラウジン−７）、ＣＬＵ（クラステリン）、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ−２）、ＦＧＦ１、ＦＬＲＴ１（フィブロネクチン）、ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）、ＧＮＡＳ１、ＩＤ２、ＩＴＧＡ６（ａ６インテグリン）、ＩＴＧＢ４（ｂ４インテグリン）、ＫＬＦ５（ＧＣ  Ｂｏｘ  ＢＰ）、ＫＲＴ１９（ケラチン１９）、ＫＲＴＨＢ６（毛髪特異的タイプＩＩ型ケラチン）、ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ、ＭＴ３（メタロチオネクチン−ＩＩＩ）、ＭＵＣ１（ムチン）、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ−２）、ＲＡＣ２（ｐ２１Ｒａｃ２）、Ｓ１００Ａ２、ＳＣＧＢ１Ｄ２（リポフィリンＢ）、ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）、ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）、ＳＰＲＲ１Ｂ（Ｓｐｒ１）、ＴＨＢＳ１、ＴＨＢＳ２、ＴＨＢＳ４及びＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）からなる群から選択されるものが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０１６６】
ＩＶ．医薬組成物
本発明は、本発明の結合タンパク質と、及び医薬として許容される担体とを含む医薬組成物も提供する。本発明の結合タンパク質を含む医薬組成物は、疾患を診断し、検出し、若しくはモニタリングし、疾患又は１つ若しくはそれ以上のその症候を予防し、治療し、管理し、若しくは軽減する上で、及び／又は研究において使用されるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、組成物は、１つ又はそれ以上の本発明のタンパク質を含む。別の実施形態において、医薬組成物は、１つ又はそれ以上の本発明の結合タンパク質と、及び疾患を治療するための、本発明の結合タンパク質以外の１つ又はそれ以上の予防又は治療剤とを含む。好ましくは、予防剤又は治療剤は、疾患又は１つ若しくはそれ以上のその症候の予防、治療、管理又は軽減に有用であることが知られており、又は疾患又は１つ若しくはそれ以上のその症候の予防、治療、管理又は軽減においてこれまで使用されており、若しくは現在使用されている。これらの実施形態に従えば、組成物は、担体、希釈剤又は賦形剤をさらに含み得る。
【０１６７】
本発明の結合タンパク質は、対象に投与するのに適した医薬組成物中に取り込ませることが可能である。典型的には、医薬組成物は、本発明の結合タンパク質と、及び医薬として許容される担体とを含む医薬組成物も提供する。本明細書において使用される「医薬として許容される担体」には、生理的に適合性がある、全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤などが含まれる。医薬として許容される担体の例には、水、生理的食塩水、リン酸緩衝化された生理的食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどの１つ又はそれ以上及びこれらの組み合わせが含まれる。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、マニトール、ソルビトールなどの多価アルコール又は塩化ナトリウムを含むことが好ましい。医薬として許容される担体は、抗体又は抗体部分の保存期間又は有効性を増強する、湿潤剤又は乳化剤、防腐剤又は緩衝剤などの補助物質の微量をさらに含み得る。
【０１６８】
様々な送達系が公知であり、例えば、リポソーム、微粒子、ミクロカプセル、抗体又は抗体断片を発現することができる組み換え細胞、受容体によって媒介されるエンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６２：４４２９−４４３２（１９８７）参照）、レトロウイルス又は他のベクターの一部としての核酸の構築物などに封入して、本発明の１つ若しくはそれ以上の抗体又は本発明の１つ若しくはそれ以上の抗体及び疾患又は１つ若しくはそれ以上のその症候を予防し、管理し、治療し、若しくは軽減するのに有用な予防剤又は治療剤の組み合わせを投与するために使用することが可能である。本発明の予防剤又は治療剤を投与する方法には、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内及び皮下）、硬膜外投与、腫瘍内投与及び粘膜投与（例えば、鼻内及び経口経路）が含まれるが、これらに限定されない。さらに、例えば、吸入装置又は噴霧器及びエアロゾル化剤を加えた製剤の使用によって、経肺投与を使用することが可能である。例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．６，０１９，９６８、５，９８５，３２０、５，９８５，３０９、５，９３４，２７２、５，８７４，０６４、５，８５５，９１３、５，２９０，５４０及び４，８８０，０７８；並びにＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏｓ．ＷＯ９２／１９２４４、ＷＯ９７／３２５７２、ＷＯ９７／４４０１３、ＷＯ９８／３１３４６及びＷＯ９９／６６９０３（これらの各々は、参照により、それらの全体が本明細書に組み込まれる。）を参照されたい。一実施形態において、本発明の結合タンパク質、組み合わせ療法又は本発明の組成物は、ＡｌｋｅｒｍｅｓＡＩＲ（Ｒ）経肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）を用いて投与される。特定の実施形態において、本発明の予防剤又は治療剤は、筋肉内、静脈内、腫瘍内、経口、鼻内、経肺又は皮下投与される。予防剤又は治療剤は、あらゆる都合のよい経路によって、例えば、注入若しくはボーラス注射によって、上皮又は粘膜皮下の裏打ち（例えば、口粘膜、直腸及び腸粘膜など）を通じた吸収によって投与され得、生物学的に活性な他の因子と一緒に投与され得る。投与は、全身又は局所であり得る。
【０１６９】
特定の実施形態において、治療を必要としている部位へ局所的に、本発明の予防剤又は治療剤を投与することが望ましい場合があり得る。これは、例えば、局所的注入によって、注射によって、又はインプラントの手段によって達成され得るが、これらに限定されるものではなく、前記インプラントは、シアラスチック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜、ポリマー、繊維性マトリックス（例えば、Ｔｉｓｓｕｅｌ（Ｒ））又はコラーゲンマトリックスなどの、膜及びマトリックスを含む多孔性又は非多孔性材料である。一実施形態において、本発明の１つ又はそれ以上の抗体アンタゴニストの有効量は、疾患又はその症候を予防し、治療し、管理し、及び／又は軽減するために、対象の罹患した部位へ局所的に投与される。別の実施形態において、本発明の１つ又はそれ以上の抗体の有効量は、疾患又は１つ若しくはそれ以上のその症候を予防し、治療し、管理し、及び／又は軽減するために、本発明の結合タンパク質以外の１つ又はそれ以上の治療薬（例えば、１つ又はそれ以上の予防剤又は治療剤）の有効量と組み合わせて、対象の罹患した部位へ局所的に投与される。
【０１７０】
別の実施形態において、予防剤又は治療剤は、調節された放出系又は徐放系に入れて送達することが可能である。一実施形態において、調節された放出又は徐放を達成するためにポンプを使用し得る（Ｌａｎｇｅｒ，上記；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０；Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７；Ｓａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎ．  Ｅｎｇｌ．Ｊ．  Ｍｅｄ．３２１：５７４参照）。別の実施形態において、本発明の治療薬の調節された放出又は徐放を達成するために、ポリマー材料を使用することが可能である。（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２３：６１を参照されたい。Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７  １：１０５）；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．ＮＯ．５，６７９，３７７；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，９１６，５９７；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．ＮＯ．５，９１２，０１５；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．ＮＯ．５，９８９，４６３；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．ＮＯ．５，１２８，３２６；ＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＷＯ９９／１５１５４；及びＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＷＯ  ９９／２０２５３も参照されたい。徐放製剤中で使用されるポリマーの例には、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリラート）、ポリ（メチルメタクリラート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−コビニルアセタート）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）及びポリオルトエステルが含まれるが、これらに限定されるものではない。好ましい実施形態において、徐放製剤中で使用されるポリマーは、不活性であり、溶脱可能な不純物を含まず、保存時に安定であり、無菌であり、及び生物分解性である。さらに別の実施形態において、調節された放出系又は徐放系は、予防剤又は治療剤の近くに配置されて、全身投薬量の一部のみを必要とするようにすることができる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，ｓｕｐｒａ，ｖｏｌ．  ２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）参照）。
【０１７１】
徐放系は、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３）による概説中に論述されている。本発明の１つ又はそれ以上の治療剤を含む徐放製剤を作製するために、当業者に公知のあらゆる技術を使用することが可能である。例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，５２６，９３８、ＰＣＴ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ  ９１／０５５４８、ＰＣＴ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＷＯ９６／２０６９８、Ｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，“Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ  ｏｆ  ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｇｅｌ，”  Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３９：１７９−１８９，Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｌｕｎｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｏｎｇ−Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，”  ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ５０：３７２−３９７，Ｃｌｅｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，“Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｆｏｒ  ａ  ｂＦＧＦ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，”  Ｐｒｏ．Ｌｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３−８５４，ａｎｄ  Ｌａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，”Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｌｏｃａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，“  Ｐｒｏｃ．ｌｎｔ’ｌ．  Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９−７６０（これらの各々は、参照により、それらの全体が本明細書中に組み込まれる。）を参照されたい。
【０１７２】
本発明の組成物が予防剤又は治療剤をコードする核酸である特定の実施形態において、適切な核酸発現ベクターの一部として、核酸を構築し、例えば、レトロウイルスベクター（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，９８０，２８６）の使用によって、又は直接の注射によって、又は微粒子照射（例えば、遺伝子銃；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎ）の使用によって、核酸が細胞内となるように核酸を投与し、又は脂質若しくは細胞表面受容体若しくは形質移入剤でコーティングし、又は核内に入ることが知られているホメオボックス様ペプチドに連結して核酸を投与することによって（例えば、Ｊｏｌｉｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８８：１８６４−１８６８参照）、核酸がコードしている予防剤又は治療剤の発現を促進するために、核酸をインビボで投与することが可能である。あるいは、相同的組み換えによる発現のために、核酸を細胞内に導入し、宿主細胞ＤＮＡ内に取り込むことが可能である。
【０１７３】
本発明の医薬組成物は、その予定された投与経路と適合的であるように製剤化される。投与の経路の例には、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口、鼻内（例えば、吸入）、経皮（例えば、局所）、経粘膜及び直腸投与が含まれるが、これらに限定されない。特異的な実施形態において、組成物は、ヒトへの静脈内、皮下、筋肉内、経口、鼻内又は局所投与に適合された医薬組成物として、定型的な手法に従って製剤化される。典型的には、静脈内投与のための組成物は、無菌の等張水性緩衝液中の溶液である。必要な場合には、組成物は、可溶化剤及び注射の部位における痛みを和らげるための局所麻酔剤（リグノカムンｌｉｇｎｏｃａｍｎｅ）など）も含み得る。
【０１７４】
本発明の組成物が局所的に投与されるべき場合には、組成物は、軟膏、クリーム、経皮パッチ、ローション、ゲル、シャンプー、スプレー、エアロゾル、溶液、エマルジョンの形態で又は当業者に周知の他の形態で製剤化することが可能である。例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，１９ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９９５）」を参照されたい。噴霧不能な局所剤形の場合には、局所適用に適合性のある担体又は１つ若しくはそれ以上の賦形剤を含み、及び好ましくは水より大きな動粘性係数を有する粘性ないし半固体又は固体の形態が通例使用される。適切な製剤は、所望であれば、滅菌され、又は、例えば、浸透圧などの様々な特性に影響を及ぼすための補助剤（例えば、防腐剤、安定化剤、湿潤剤、緩衝剤又は塩）と混合された、溶液、懸濁液、エマルジョン、クリーム、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、粉末、リニメント剤、軟膏（ｓａｌｖｅ）など（これらに限定されない）を含む。他の適切な局所剤形には、好ましくは、固体又は液体不活性担体と組み合わされた活性成分が、加圧された揮発性物質（例えば、フレオンなどの気体状噴射剤）との混合物中又は搾り出し瓶中に梱包されている噴霧可能なエアロゾル調製物が含まれる。所望であれば、医薬組成物及び剤形に、加湿剤又は湿潤剤も添加することが可能である。このような追加の成分の例は、本分野において周知である。
【０１７５】
本発明の方法が組成物の鼻内投与を含む場合には、組成物は、エアロゾル形態、スプレー、ミスト中に、又は点鼻薬の形態で製剤化することが可能である。特に、本発明に従って使用するための予防剤又は治療剤は、適切な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又はその他の適切な気体）を用いて、加圧されたパック又は噴霧器からエアロゾルスプレー提示の形態で都合よく送達することが可能である。加圧されたエアロゾルの場合には、投薬単位は、定量された量を送達するためのバルブを付与することによって決定され得る。化合物とラクトース又はデンプンなどの適切な粉末基剤との粉末混合物を含有する、吸入装置又はガス注入装置で使用するためのカプセル及びカートリッジ（例えば、ゼラチンから構成される。）を製剤化し得る。本発明の方法が経口投与を含む場合、錠剤、カプセル、カシェ剤、ゲルキャップ、溶液、懸濁液などの形態で、組成物を経口的に製剤化することが可能である。錠剤又はカプセルは、従来の手段によって、結合剤（例えば、予めゼラチン化されたトウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロース又はリン酸水素カルシウム）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク又はシリカ）；崩壊剤（例えば、イモデンプン又はグリコール酸デンプンナトリウム）；又は湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの、医薬として許容される賦形剤とともに調製することが可能である。錠剤は、本分野において周知な方法によって被覆され得る。経口投与用の液体調製物は、溶液、シロップ若しくは懸濁液の形態（これらに限定されない。）を採り得、又は、使用前に、水若しくは他の適切なビヒクルを用いて構成するための乾燥製品として与えられ得る。このような液体調製物は、慣用の手段によって、懸濁剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体又は硬化食用脂肪）；乳化剤（例えば、レシチン又はアカシア）；非水性ビヒクル（例えば、アーモンド油、油状エステル、エチルアルコール又は分画された植物油）；及び防腐剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル若しくはプロピル又はソルビン酸）などの医薬として許容される添加物とともに調製され得る。調製物は、適宜、緩衝液塩、着香剤、着色剤及び甘味剤も含有し得る。経口投与用調製物は、予防剤又は治療剤の遅い放出、調節された放出又は徐放のために、適切に製剤化され得る。
【０１７６】
本発明の方法は、例えば、吸入装置又は噴霧器の使用、エアロゾル化剤とともに製剤化された組成物の使用によって、経肺投与を含み得る。例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．６，０１９，９６８、５，９８５，３２０、５，９８５，３０９、５，９３４，２７２、５，８７４，０６４、５，８５５，９１３、５，２９０，５４０及び４，８８０，０７８；並びにＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏｓ．ＷＯ９２／１９２４４、ＷＯ９７／３２５７２、ＷＯ９７／４４０１３、ＷＯ９８／３１３４６及びＷＯ９９／６６９０３（これらの各々は、参照により、それらの全体が本明細書に組み込まれる。）を参照されたい。特定の実施形態において、本発明の結合タンパク質、組み合わせ療法及び／又は本発明の組成物は、ＡｌｋｅｒｍｅｓＡＩＲ（Ｒ）経肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓ．）を用いて投与される。
【０１７７】
本発明の方法は、注射による（例えば、ボーラス注射又は連続的注入による）非経口投与のために製剤化された組成物の投与を含み得る。注射用製剤は、添加された防腐剤とともに、単位剤形で（例えば、アンプル又は複数投薬容器に入れて）与え得る。組成物は、油性又は水性ビヒクル中の懸濁液、溶液又はエマルジョンなどの形態を採り得、懸濁剤、安定化剤及び／又は分散剤などの処方剤を含有し得る。あるいは、活性成分は、使用前に適切なビヒクル（例えば、発熱物質を含まない無菌水）で構成するための粉末形態であり得る。
【０１７８】
本発明の方法は、さらに、デポ調製物として製剤化された組成物の投与を含み得る。このよな長期作用製剤は、（例えば、皮下又は筋肉内への）植え込みによって、又は筋肉内注射によって投与され得る。従って、例えば、組成物は、適切なポリマー材料若しくは疎水性材料（例えば、許容される油中のエマルジョンとして）又はイオン交換樹脂とともに、又は難溶性誘導体として（例えば、難溶性塩として）調合され得る。
【０１７９】
本発明の方法は、中性又は塩形態として製剤化された組成物の投与を包含する。医薬として許容される塩には、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するものなどの陰イオンとともに形成された塩、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものなｄ、陽イオンとともに形成された塩が含まれる。
【０１８０】
一般的には、組成物の成分は、別個に、又は単位剤形中に（例えば、活性剤の量を示した注射器又はにおい袋など、密閉された容器中の凍結乾燥された乾燥粉末又は無水濃縮物として）一緒に混合されて供給される。投与の様式が注入である場合には、組成物は、医薬等級の無菌水又は生理的食塩水を含有する注入瓶を用いて分配することが可能である。投与の様式が注射による場合には、注射用の無菌水又は生理的食塩水の注射器は、投与前に成分が混合され得るように提供することが可能である。
【０１８１】
特に、本発明は、本発明の予防剤若しくは治療剤の１つ若しくはそれ以上又は本発明の医薬組成物が、薬剤の量を示した注射器又はにおい袋など、密閉された容器中に梱包されることも提供する。一実施形態において、本発明の予防剤若しくは治療剤の１つ若しくはそれ以上又は医薬組成物は、密閉された容器中の凍結乾燥された乾燥無菌粉末又は無水濃縮物として供給され、対象に投与するための適切な濃度になるように（例えば、水又は生理的食塩水で）再構成することができる。好ましくは、本発明の予防剤若しくは治療剤の１つ若しくはそれ以上又は医薬組成物は、少なくとも５ｍｇ、より好ましくは、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも１５ｍｇ、少なくとも２５ｍｇ、少なくとも３５ｍｇ、少なくとも４５ｍｇ、少なくとも５０ｍｇ、少なくとも７５ｍｇ又は少なくとも１００ｍｇの単位投薬量で、密封された容器中の凍結乾燥された乾燥無菌粉末として供給される。本発明の凍結乾燥された予防若しくは治療剤又は医薬組成物は、その元の容器中で、２℃と８℃の間で保存されるべきであり、本発明の予防剤若しくは治療剤又は医薬組成物は、再構成後、１週以内、好ましくは５日以内、７２時間以内、４８時間以内に、２４時間以内に、１２時間以内に、６時間以内に、５時間以内に、３時間以内に、又は１時間以内に投与されるべきである。別の実施形態において、本発明の予防剤若しくは治療剤の１つ若しくはそれ以上又は本発明の医薬組成物は、薬剤の量及び濃度を示す密閉された容器中に、液体形態で供給される。好ましくは、投与された組成物の液体形態は、少なくとも０．２５ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは、少なくとも０．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも２．５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも１５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも７５ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも１００ｍｇ／ｍｌで、密封された容器中に供給される。液体形態は、その元の容器中で、２℃と８℃の間で保存されるべきである。
【０１８２】
本発明の結合タンパク質は、非経口投与に適した医薬組成物中に取り込ませることが可能である。好ましくは、抗体又は抗体部分は、０．１から２５０ｍｇ／ｍＬの結合タンパク質を含有する注射可能溶液として調製される。注射可能溶液は、フリント容器又は琥珀色の容器、注射器又は予め充填されたシリンジ中の液体又は凍結乾燥された剤形から構成され得る。緩衝液は、ｐＨ５．０から７．０（最適にはｐＨ６．０）のＬ−ヒスチジン（１から５０ｍＭ）、最適には５から１０ｍＭであり得る。他の適切な緩衝液には、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム又はリン酸カリウムが含まれるが、これらに限定されない。０から３００ｍＭの濃度に（最適には、液体剤形に対して１５０ｍＭ）の溶液の毒性を修飾するために、塩化ナトリウムを使用することが可能である。凍結乾燥された剤形に対して、凍結保護剤、主に、０から１０％のスクロース（最適には、０．５から１．０％）を含めることが可能である。他の適切な凍結保護剤には、トレハロース及びラクトースが含まれる。凍結乾燥された剤形に対して、充填剤、主に、１から１０％のマニトール（最適には、２から４％）を含めることが可能である。液体及び凍結乾燥された両剤形において、安定化剤、主に１から５０ｍＭのＬ−メチオニン（最適には、５から１０ｍＭ）を使用することが可能である。他の適切な充填剤には、グリシンアルギニンが含まれ、０から０．０５％のポリソルベート−８０（最適には、０．００５から０．０１％）として含めることが可能である。さらなる界面活性剤には、ポリソルベート２０及びＢＲＩＪ界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。非経口投与用の注射可能な溶液として調製された本発明の結合タンパク質を含む医薬組成物は、治療用タンパク質（例えば、抗体）の吸収又は分散を増加させるために使用されるものなど、アジュバントとして有用な因子をさらに含むことが可能である。特に有用なアジュバントは、Ｈｙｌｅｎｅｘ（Ｒ）（組み換えヒトヒアルロニダーゼ）などのヒアルロニダーゼである。注射可能な溶液中へのヒアルロニダーゼの添加は、非経口投与、特に皮下投与後に、ヒト生物学的利用可能性を改善する。痛み及び不快感がより小さく、及び注射部位反応の発生を最小限に抑えながら、より大きな注射部位容量（すなわち、１ｍＬより大きい）も可能である（参照により、本明細書に組み込まれるＷＯ２００４０７８１４０及びＵＳ２００６１０４９６８を参照）。
【０１８３】
本発明の組成物は、様々な形態であり得る。これらには、例えば、液体溶液（例えば、注射可能な溶液及び注入可能な溶液）など、分散液又は懸濁液、錠剤、丸薬、粉末、リポソーム及び坐薬）などの、液体、半固体及び固体剤形が含まれる。好ましい形態は、予定される投与の様式及び治療用途に依存する。典型的な好ましい組成物は、他の抗体を用いたヒトの受動免疫に対して使用される組成物と同様の組成物など、注射可能溶液又は注入可能溶液の形態である。投与の好ましい様式は、非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋肉内）である。好ましい実施形態において、抗体は、静脈内注入又は注射によって投与される。別の好ましい実施形態において、抗体は、筋肉内注入又は皮下注射によって投与される。
【０１８４】
治療組成物は、典型的には、製造及び保存の条件下で、無菌及び安定でなければならない。組成物は、溶液、ミクロエマルジョン、分散液、リポソーム又は高薬物濃度に適したその他の秩序化された構造として製剤化することが可能である。無菌注射可能溶液は、上に列記されている成分の１つ又は組み合わせを加えた適切な溶媒中に、必要な量で活性な化合物（すなわち、抗体、抗体部分）を取り込ませ、必要に応じて、ろ過された滅菌によって調製することが可能である。一般的に、分散液は、塩基性分散溶媒及び上に列記されたものから得られる必要なその他の成分を含有する無菌ビヒクル中に活性化合物を取り込ませることによって調製される。無菌注射可能溶液の調製のための凍結乾燥された無菌粉末の場合には、調製の好ましい方法は、予め滅菌ろ過されたその溶液から、あらゆる追加の所望される成分を加えた活性成分の粉末を与える真空乾燥及び粉末乾燥である。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料を使用することによって、分散液の場合に必要な粒径を維持することによって、及び界面活性剤を使用することによって維持することができる。注射可能組成物の延長された吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩及びゼラチンを組成物中に含めることによって実現することができる。
【０１８５】
本発明の結合タンパク質は、本分野で公知の様々な方法によって投与することが可能であるが、多くの治療用途において、好ましい投与経路／様式は皮下注射、静脈内注射又は注入である。当業者によって理解されるように、投与の経路及び／又は様式は、所望される結果に応じて変動する。ある種の実施形態において、活性化合物は、インプラント、経皮パッチ及び微小封入された送達系を含む徐放製剤など、迅速な放出に対して化合物を保護する担体とともに調製され得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸など、生物分解可能な生物適合性ポリマーを使用することが可能である。このような製剤の多くの調製方法は、特許が付与されているか、又は、一般的に当業者に公知である。例えば、「Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８」を参照されたい。
【０１８６】
ある種の実施形態において、本発明の結合タンパク質は、例えば、不活性希釈剤又は同化可能な食用担体とともに経口投与され得る。また、化合物（及び、所望であれば、その他の成分）は、硬い若しくは軟い殻のゼラチンカプセル中に封入され、錠剤へと圧縮され、又は患者の食事中に直接取り込ませ得る。経口治療投与の場合、化合物は、賦形剤とともに取り込まれ、摂取可能な錠剤、口腔錠、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウェハースなどの形態で使用され得る。非経口投与以外によって本発明の化合物を投与するために、その不活化を妨げるための物質で化合物を被覆し、又はその不活化を妨げるための物質とともに化合物を同時投与することが必要であり得る。
【０１８７】
補助的活性化合物も、組成物中に取り込ませることが可能である。ある種の実施形態において、本発明の結合タンパク質は、ＩＬ−１２活性が有害である疾患を治療するのに有用である、１つ又はそれ以上のさらなる治療剤とともに共製剤化され、及び／又は同時投与される。例えば、本発明の結合タンパク質は、他の錠剤に結合する１つ又はそれ以上のさらなる抗体（例えば、他のサイトカインに結合する抗体又は細胞表面分子に結合する抗体）とともに共製剤化され、及び／又は同時投与され得る。さらに、本発明の１つ又はそれ以上の抗体は、先述の治療剤の２つ又はそれ以上と組み合わせて使用され得る。このような組み合わせ療法は、投与される治療剤のより低い投薬量を有利に使用し得るので、様々な単独療法に伴って生じ得る毒性又は合併症が回避される。
【０１８８】
ある種の実施形態において、結合タンパク質は、本分野で公知の半減期延長ビヒクルに連結される。このようなビヒクルには、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコール及びデキストランが含まれるが、これらに限定されない。このようなビヒクルは、例えば、Ｕ．Ｓ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｅｒｉａｌ  ＮＯ．０９／４２８，０８２及び公開されたＰＣＴ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＷＯ９９／２５０４４（参照により、あらゆる目的のために、本明細書に取り込まれる。）に記載されている。
【０１８９】
特定の実施形態において、本発明の結合タンパク質又は本発明の別の予防剤若しくは治療剤をコードする核酸配列は、遺伝子治療によって、疾患又は１つ若しくはそれ以上のその症候を治療し、予防し、管理し、又は軽減するために投与される。遺伝子治療は、発現された核酸又は発現可能な核酸の、対象への投与によって実行される治療を表す。本発明の本実施形態において、核酸は、予防的効果又は治療的効果を媒介する、本発明のコードされたそれらの抗体又は予防剤若しくは治療剤を産生する。
【０１９０】
本発明に従って、本分野で利用可能な遺伝子治療のためのあらゆる方法を使用することが可能である。遺伝子治療の方法の一般的な概説については、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  １２：４８８−５０５；Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，１９９１，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２（１９９３）；ａｎｄ  Ｍｏｒｇａｎ  ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７；Ｍａｙ，１９９３，ＴＩＢＴＥＣＨ  １１（５）：１５５−２１５を参照されたい。使用可能な組み換えＤＮＡ技術の分野で一般的に知られた方法は、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）；ａｎｄ  Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）に記載されている。遺伝子治療の様々な方法の詳細な記述は、ＵＳ２００５０００４２６６４Ａ１（参照により、本明細書に組み込まれる。）に開示されている。
【０１９１】
本発明の結合タンパク質は、結合タンパク質によって認識される標的が有害である様々な疾病を治療する上で有用である。このような疾病には、関節リウマチ、骨関節炎、若年性慢性関節炎、化膿性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性紅斑性狼瘡、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インシュリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性疾患、乾癬、皮膚炎、強皮症、移植片対宿主病、臓器移植拒絶、臓器移植に関連する急性又は慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、バセドウ病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー肉芽腫症、ヘノッホ・シェーライン紫斑症、腎臓の顕微鏡的血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症性ショック、毒素性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染性疾患、寄生性疾患、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、発作、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、孤発性の、多内分泌腺機能低下症候群Ｉ型及び多内分泌腺機能低下症候群ＩＩ型、シュミット症候群、成人（急性）呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清反応陰性関節炎、関節炎、ライター病、乾癬性関節炎、潰瘍性大腸性関節炎、腸疾患性滑膜炎、クラミジア、エルシニア及びサルモネラ関連関節炎、脊椎関節症、アテローム性疾患／アテローム性動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱性疾患、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫性溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎／ロイヤルフリー病、慢性粘膜皮膚カンジダ症、巨細胞性動脈炎、原発性硬化性肝炎、突発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群、後天性免疫不全関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型原発性低γグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊症、卵巣機能不全、早期卵巣機能不全、繊維性肺疾患、突発性間質性肺炎、炎症後間質性肺疾患、間質性肺炎、結合組織疾患関連間質性肺疾患、混合性結合組織疾患関連肺疾患、全身性硬化症関連間質性肺疾患、関節リウマチ関連間質性肺疾患、全身性紅斑性狼瘡関連肺疾患、皮膚筋炎／多発性筋炎関連肺疾患、シェーグレン病関連肺疾患、強直性脊椎炎関連肺疾患、血管炎性びまん性肺疾患（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｃ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｌｕｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ヘモシデローシス関連肺疾患、薬物によって誘導された間質性肺疾患、繊維症、放射性繊維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤性肺疾患、感染後間質性肺疾患、通風関節炎、自己免疫性肝炎、１型自己免疫性肝炎（古典的自己免疫性又はルポイド肝炎）、２型自己免疫性肝炎（抗ＬＫＭ抗体肝炎）、自己免疫媒介性低血糖症、黒色表皮腫を伴うＢ型インシュリン抵抗性、副甲状腺機能低下症、臓器移植に関連する急性免疫疾患、臓器移植に関連する慢性免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、１型乾癬、２型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、腎臓病ＮＯＳ、糸球体腎炎、腎臓の顕微鏡的血管炎、ライム病、円板状紅斑性狼瘡、男性不妊症特���性又はＮＯＳ、精子自己免疫、多発性硬化症（全てのサブタイプ）、交感性眼炎、結合組織疾患に続発する肺高血圧症、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スチル病、全身性硬化症、シェーグレン症候群、高安病／動脈炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺疾患、甲状腺機能亢進症、甲状腺腫自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｙｘｏｅｄｅｍａ）、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘発性肝障害、胆汁うっ滞（ｃｈｏｌｅｏｓａｔａｔｉｓ）、特異体質性肝疾患、薬物誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギー及び喘息、Ｂ群連鎖球菌（ＧＢＳ）感染、精神障害（例えば、うつ病及び統合失調症）、Ｔｈ２型及びＴｈ１型によって媒介される疾病、急性及び慢性疼痛（疼痛の様々な形態）、並びに、肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、大腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌及び腎臓癌及び造血性悪性病変（白血病及びリンパ腫）などの癌、無βリポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性及び慢性寄生性又は感染性プロセス、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性又は慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房（ａｅｒｉａｌ）異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘発性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植拒絶、α−１−アンチトリプシン欠乏症、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ｃｄ３治療、抗リン脂質症候群、抗受容体過敏症反応（ａｎｔｉ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，）、大動脈（ａｏｒｄｉｃ）及び動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、動脈硬化症、動静脈痩、運動失調、心房細動（持続的又は発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心不整脈、心機能不全症候群（ｃａｒｄｉａｃ  ｓｔｕｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心臓腫瘍、心筋症、心肺バイパス炎症反応、軟骨移植拒絶、小脳皮質変性、小脳疾患、無秩序な又は多巣性心房頻脈、化学療法関連疾患、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール症、慢性炎症性病変、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性サリチル酸中毒、結腸直腸癌、うっ血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺性心、冠動脈疾患、クロイツフェルト−ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性繊維症、サイトカイン療法関連疾患、ボクサー脳、脱髄性疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的症状、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病性動脈硬化疾患、瀰漫性レビー小体病、拡張型うっ血性心筋症、大脳基底核の疾患、中年のダウン症候群、中枢神経ドーパミン受容体を遮断する薬物によって誘発された薬物誘発性運動疾患、薬物感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌疾患、喉頭蓋炎、エプスタイン−バーウイルス感染、紅痛症、垂体外路及び小脳疾患、家族性血球貪食性リンパ組織球症（ｆａｍｉｌｉａｌ  ｈｅｍａｔｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｓｉｓ）、致死的胸腺移植組織拒絶、フリードライヒ失調症、機能的末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス壊疸、胃潰瘍、糸球体腎炎、何れかの臓器又は組織の移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物に起因する肉芽腫、有毛細胞白血病、ハラーホルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植拒絶、血色素症、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓溶解血小板減少紫斑病、出血、肝炎（Ａ型）、ヒス束不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、ホジキン病、運動過剰疾患、過敏症反応、過敏性肺炎、高血圧、運動低下疾患、視床下部−下垂体−副腎皮質系評価、特発性アジソン病、特発性肺繊維症、抗体媒介性細胞毒性、無力症、乳児脊髄性筋萎縮症、大動脈の炎症、Ａ型インフルエンザ、電離放射線曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血再灌流障害、虚血性発作、若年性関節リウマチ、若年性脊髄性筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植拒絶、レジオネラ、リーシュマニア症、ハンセン病、皮質脊髄系の病変、脂肪血症（ｌｉｐｅｄｅｍａ）、肝臓移植拒絶、リンパ浮腫（ｌｙｍｐｈｅｄｅｒｍａ）、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症（ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｅｍｉａ）、代謝性／特発性、偏頭痛、ミトコンドリア多系疾患（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｍｕｌｔｉ−ｓｙｓｔｅｍ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、混合性結合組織病、モノクローナル高ガンマグロブリン血症、多発性骨髄腫、多系統変性（メンセル・デジェリーヌ−トーマス  シャイ−ドレーガー及びマシャド−ジョセフ）、重症筋無力症、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ、マイコバクテリウム・チュバキュロシス、骨髄形成異常、心筋梗塞、真菌虚血疾患、上咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性疾患、神経原性Ｉ筋萎縮、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹部大動脈及びその分枝の閉塞、閉塞性動脈疾患、ｏｋｔ３療法、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管復元術処置、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植拒絶、膵癌、腫瘍随伴性症候群／悪性腫瘍の高カルシウム血症、副甲状腺移植拒絶、骨盤内炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム硬化性疾患、末梢血管疾患、腹膜炎、悪性貧血、ニューモシスチス・カリニ肺炎、肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発神経炎、臓器肥大、内分泌疾患、単クローン性γグロブリン血症及び皮膚変化症候群（ｓｋｉｎ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、灌流後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ポンプ後症候群（ｐｏｓｔ  ｐｕｍｐ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、心筋梗塞後開心術症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射線療法、レイノー現象及び病、レイノー病、レフサム病、規則的なＱＲＳ幅の狭い頻脈症（ｒｅｇｕｌａｒ  ｎａｒｒｏｗ  ＱＲＳ  ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ）、腎血管性高血圧、再灌流障害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症、老年性舞踏病、レビー小体型の老年性認知症、血清反応陰性関節炎、ショック、鎌形赤血球貧血症、皮膚同種異系移植拒絶、皮膚変化症候群、小腸移植拒絶、固形腫瘍、固有不整脈（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｒｒｙｔｈｍｉａｓ）、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌性筋炎、小脳の構造的病変、亜急性硬化性全脳炎、湿疹、心血管系の梅毒、全身性アナフィラキシー、全身性炎症反応症候群、全身性発症若年性関節リウマチ、Ｔ細胞又はＦＡＢＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓血管炎、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、ＩＩＩ型過敏症反応、ＩＶ型過敏症、不安定狭心症、尿毒症、尿路性敗血症、じんましん、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈疾患、静脈血栓症、心室細動、ウイルス及び真菌感染、ウイルス性脳炎（ｖｉｔａｌ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）／無菌性髄膜炎、ウイルス関連血球貪食症候群、ウェルニッケ−コルサコフ症候群、ウィルソン病、何れかの臓器又は組織の異種移植拒絶が含まれるが、これらに限定されない（Ｐｅｒｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．ＰＣＴ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＷＯ２００２０９７０４８Ａ２，Ｌｅｏｎａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＣＴ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＮＯ．ＷＯ９５２４９１８Ａ１，ａｎｄ  Ｓａｌｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＣＴ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＮＯ．ＷＯ００／５６７７２Ａ１参照）。
【０１９２】
本発明の結合タンパク質は、自己免疫疾患、特に、関節リウマチ、脊椎炎、アレルギー、自己免疫性糖尿病、自己免疫性ブドウ膜炎など、炎症を伴う自己免疫疾患に罹患しているヒトを治療するために使用することが可能である。
【０１９３】
好ましくは、本発明の結合タンパク質又はその抗原結合部分は、関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、インシュリン依存性糖尿病及び乾癬を治療するために使用される。
【０１９４】
本発明の結合タンパク質は、様々な疾病の治療において有用な１つ又はそれ以上の追加の治療剤とともに投与することも可能である。
【０１９５】
本発明の結合タンパク質は、このような疾病を治療するために、単独で、又は組み合わせて使用することが可能である。結合タンパク質は、単独で、又は追加の因子、例えば治療剤と組み合わせて使用することが可能であり、前記追加の因子は、その意図される目的に対して、当業者によって選択されることを理解すべきである。例えば、追加の因子は、本発明の抗体によって治療されている疾病又は症状を治療するのに有用であると本分野で認識されている治療剤とすることが可能である。追加の因子は、治療組成物に有益な属性を付与する因子、例えば、組成物の粘性に影響を与える因子とすることも可能である。
【０１９６】
本発明に含まれるべき組み合わせは、それらの意図される目的に対して有用な組み合わせであることをさらに理解すべきである。以下に記されている因子は、例示を目的とするものであって、限定を意図するものではない。本発明の一部である組み合わせは、本発明の抗体及び以下のリストから選択される少なくとも１つの追加の因子であり得る。当該組み合わせにおいて、形成された組成物がその意図される機能を実行することが可能であれば、組み合わせは、２以上の追加の因子、例えば、２又は３個の追加の因子を含むこともできる。
【０１９７】
自己免疫疾患及び炎症性疾患を治療するための好ましい組み合わせは、ＮＳＡＩＤとも称される非ステロイド性抗炎症薬（イブプロフェンのような薬物が含まれる。）である。他の好ましい組み合わせは、プレドニゾロンなどのコルチコステロイドである。ステロイド使用の周知の副作用は、本発明のＤＶＤＩｇと組み合わせて患者を治療するときに必要とされるステロイド用量を徐々に減らすことによって、低減することが可能であり、又は除去することさえ可能である。本発明の抗体又は抗体部分とともに組み合わせることが可能な関節リウマチに対する治療剤の非限定的な例には、以下のもの：サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）；その他のヒトサイトカイン又は成長因子（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３、インターフェロン、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）に対する抗体又はこれらのアンタゴニストが含まれる。本発明の結合タンパク質又はその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０、ＣＴＬＡ又はＣＤ１５４を含むこれらのリガンド（ｇｐ３９又はＣＤ４０Ｌ）などの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることが可能である。
【０１９８】
治療剤の好ましい組み合わせは、異なる点で、自己免疫及びこれに続く炎症カスケードを干渉し得る。好ましい例には、キメラ、ヒト化又はヒトＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７、（ＰＣＴ公開ＷＯ９７／２９１３１）、ＣＡ２（ＲｅｍｉｃａｄｅＴＭ）、ＣＤＰ５７１、及び可溶性ｐ５５又はｐ７５ＴＮＦ受容体、これらの誘導体、（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥｎｂｒｅｌＴＭ）又はｐ５５ＴＮＦＲ１ｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ）及びＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤などのようなＴＮＦアンタゴニストが含まれる。同様にＩＬ−１阻害剤（インターロイキン−１変換酵素阻害剤、ＩＬ−１ＲＡなど）は、同じ理由のために有効であり得る。他の好ましい組み合わせには、インターロイキン１１が含まれる。さらに別の好ましい組み合わせには、ＩＬ−１２機能と平行して、ＩＬ−１２機能に依存して、又はＩＬ−１２と協調して作用し得る自己免疫応答の中心的プレーヤーが含まれる。特に好ましいのは、ＩＬ−１８抗体又は可溶性ＩＬ−１８受容体又はＩＬ−１８結合タンパク質などのＩＬ−１８アンタゴニストである。ＩＬ−１２及びＩＬ−１８は、重複しているが、異なる機能を有しており、両者に対するアンタゴニストの組み合わせは、最も有効であり得ることが示されている。さらに別の好ましい組み合わせは、非枯渇性抗ＣＤ４阻害剤である。さらに別の好ましい組み合わせには、抗体、可溶性受容体又は拮抗性リガンドを含む、共同刺激経路ＣＤ８０（Ｂ７．１）又はＣＤ８６（Ｂ７．２）のアンタゴニストが含まれる。
【０１９９】
本発明の結合タンパク質は、メトトレキサート、６−ＭＰ、アザチオプリンスルファサラジン、メサラジン、オルサラジン、クロロキニン／ヒドロキシクロロキン、ペニシラミン、金チオリンゴ酸塩（筋肉内及び経口）、アザチオプリン、コルヒチン、コルチコステロイド（経口、吸入及び局所注射）、β−２アドレナリン作動性受容体アゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテラール）、キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）、クロモグリカート、ネドクロミル、ケトチフェン、イプラトロピウム及びオキシトロピウム、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラート・モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦ□又はＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する因子（例えば、ＩＲＡ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体及びそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５又はｐ７５ＴＮＦ受容体及び誘導体ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥｎｂｒｅｌＴＭ及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ））、ｓＩＬ−ＩＲ１、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）、炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）、セレコキシブ、葉酸、硫酸ヒドロキシクロロキン、ロフェコキシブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、ナプロキセン、バルデコキシブ、スルファサラジン、メチルプレドニゾロン、メロキシカム、酢酸メチルプレドニゾロン、金チオリンゴ酸ナトリウム、アスピリン、トリムシノロン・アセトニド、プロポキシフェンナプシラート／ａｐａｐ、フォラート、ナブメトン、ジクロフェナク、ピロキシカム、エトドラク、ジクロフェナクナトリウム、オキサプロジン、塩酸オキシコドン、ヒドロコドン二酒石酸塩／ａｐａｐ、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フェンタニル、アナキンラ、ヒト組み換え、塩酸トラマドール、サルサラート、スリンダク、シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン、アセトアミノフェン、アレンドロナートナトリウム、プレドニゾロン、硫酸モルヒネ、塩酸リドカイン、インドメタシン、硫酸グルコサミン／コンドロイチン、塩酸アミトリプチリン、スルファジアジン、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸オロパタジン、ミソプロストール、ナプロキセンナトリウム、オメプラゾール、シクロホスファミド、リツキシマブ、ＩＬ−１ＴＲＡＰ、ＭＲＡ、ＣＴＬＡ４−ＩＧ、ＩＬ−１８ＢＰ、抗ＩＬ−１８、抗ＩＬ１５、ＢＩＲＢ−７９６、ＳＣＩＯ−４６９、ＶＸ−７０２，ＡＭＧ−５４８、ＶＸ７４０、ロフルミラスト、ＩＣ−４８５、ＣＤＣ−８０１及びメソプラムなどの因子とも組み合わされ得る。好ましい組み合わせには、メトトレキサート又はレフルノミドが含まれ、���度又は重度の関節リウマチの症例では、シクロスポリンが含まれる。
【０２００】
関節リウマチを治療するために、結合タンパク質と組み合わせて使用することも可能な非限定的な追加の因子には、以下の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）；サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤｓ）；ＣＤＰ−５７１／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化された抗ＴＮＦα抗体；Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｂａｙｅｒ）；ｃＡ２／インフリキシマブ（キメラ抗ＴＮＦα抗体；Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ／エタネルセプト（７５ｋＤＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質；イムネックス；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９４）Ｖｏｌ．３７，Ｓ２９５；Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（１９９６）Ｖｏｌ．４４，２３５Ａを参照；５５ｋｄＴＮＦ−ＩｇＧ（５５ｋＤＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質；Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ）；ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ２１０３９６（抗原刺激された（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）非枯渇性抗ＣＤ４抗体；ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９５）  Ｖｏｌ．３８，Ｓ１８５を参照；ＤＡＢ４８６−ＩＬ−２及び／又はＤＡＢ３８９−ＩＬ−２（ＩＬ−２融合タンパク質；Ｓｅｒａｇｅｎ；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９３）Ｖｏｌ．３６，１２２３）参照；抗Ｔａｃ（ヒト化抗ＩＬ−２Ｒα；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ／Ｒｏｃｈｅ）；ＩＬ−４（抗炎症性サイトカイン；ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１０（ＳＣＨ５２０００；組換えＩＬ−１０、抗炎症性サイトカイン；ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−４；ＩＬ−１０及び／又はＩＬ−４アゴニスト（例えば、アゴニスト抗体）；ＩＬ−１ＲＡ（ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；Ｓｙｎｅｒｇｅｎ／Ａｍｇｅｎ）；アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（Ｒ）／Ａｍｇｅｎ）；ＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）  Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８４参照；Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．−Ｈｅａｒｔ  ａｎｄ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（１９９５）  Ｖｏｌ．２６８，ｐｐ．３７−４２）；Ｒ９７３４０１（ホスホジエステラーゼＩＶ型阻害剤；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８２参照；ＭＫ−９６６（ＣＯＸ−２阻害剤；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ８１参照）；Ｉｌｏｐｒｏｓｔ（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ８２参照）；メトトレキサート；サリドマイド（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）  Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８２参照）及びサリドマイド関連薬（例えば、Ｃｅｌｇｅｎ）；レフノミド（抗炎症性及びサイトカイン阻害剤；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ１３１；Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９６）Ｖｏｌ．４５，ｐｐ．１０���−１０７参照）；トラネキサム酸（プラスミノーゲン活性化の阻害剤；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８４参照）；Ｔ−６１４（サイトカイン阻害剤；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８２参照）；プロスタグランジンＥ１（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８２参照）；Ｔｅｎｉｄａｐ（非ステロイド性抗炎症薬；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８０参照）；ナプロキセン（非ステロイド性抗炎症薬；例えば、Ｎｅｕｒｏ  Ｒｅｐｏｒｔ（１９９６）Ｖｏｌ．７，ｐｐ．１２０９−１２１３参照）；メロキシカム（非ステロイド性抗炎症薬）；イブプロフェン（非ステロイド性抗炎症薬）；ピロキシカム（非ステロイド性抗炎症薬）；ジクロフェナク（非ステロイド性抗炎症薬）；インドメタシン（非ステロイド性抗炎症薬）；スルファサラジン（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８１参照）；アザチオプリン（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８１参照）；ＩＣＥ阻害剤（酵素インターロイキン１β変換酵素の阻害剤）；ｚａｐ−７０及び／又はｌｃｋ阻害剤（チロシンキナーゼｚａｐ−７０又はｌｃｋの阻害剤）；ＶＥＧＦ阻害剤及び／又はＶＥＧＦ−Ｒ阻害剤（血管内皮細胞増殖因子又は血管内皮細胞増殖因子受容体の阻害剤；血管新生の阻害剤）；コルチコステロイド抗炎症薬（例えば、ＳＢ２０３５８０）；ＴＮＦ−コンベルターゼ阻害剤；抗ＩＬ−１２抗体；抗ＩＬ−１８抗体；インターロイキン−１１（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）  Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２９６参照）；インターロイキン−１３（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ３０８参照）；インターロイキン−１７阻害剤（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ１２０参照）；金；ペニシラミン；クロロキン；クロラムブシル；ヒドロキシクロロキン；シクロスポリン；シクロホスファミド；全リンパ系照射；抗胸腺細胞グロブリン；抗体ＣＤ４抗体；ＣＤ５トキシン；経口投与されたペプチド及びコラーゲン；ロベンザリト二ナトリウム；サイトカイン制御因子（ＣＲＡｓ）ＨＰ２２８及びＨＰ４６６（Ｈｏｕｇｈｔｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；ＩＣＡＭ−Ｉアンチセンスホスホロチオアートオリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ２３０２；Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；可溶性補体受容体１（ＴＰ１０；Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）；プレドニゾン；オルゴテイン；グリコサミノグリカンポリサルファート；ミノサイクリン；抗ＩＬ２Ｒ抗体；マウス及び植物脂質（魚及び植物種子脂肪酸；例えば、ＤｅＬｕｃａ  ｅｔ  ���ｌ．（１９９５）Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．Ｊ，：７５９−７７７参照）；アウラノフィン；フェニルブタゾン；メクロフェナミン酸；フルフェナミン酸；静脈内免疫グロブリン；ジレウトン；アザリビジン；ミコフェノール酸（ＲＳ−６１４４３）；タクロリムス（ＦＫ−５０６）；シロリムス（ラパマイシン）；アミプリロース（テラフェクチン）；クラドリビン（２−クロロデオキシアデノシン）；メトトレキサート；抗ウイルス剤；及び免疫調節剤が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０２０１】
一実施形態において、結合タンパク質又はその抗原結合部分は、関節リウマチの治療用の以下の因子の１つと組み合わせて投与される。ＫＤＲの小分子阻害剤（ＡＢＴ−１２３）、Ｔｉｅ−２の小分子阻害剤；メトトレキサート；プレドニゾン；セレコキシブ；葉酸；硫酸ヒドロキシクロロキン；ロフェコキシブ；エタネルセプト；インフリキシマブ；レフルノミド；ナプロキセン；バルデコキシブ；スルファサラジン；メチルプレドニゾロン；イブプロフェン；メロキシカム；酢酸メチルプレドニゾロン、金チオリンゴ酸ナトリウム；アスピリン；アザチオプリン；トリアムシノロン・アセトニド；プロプキシフェン・ナプシラート／ａｐａｐ；フォラート；ナブメトン；ジクロフェナク；ピロキシカム；エトドラク；ジクロフェナクナトリウム；オキサプロジン、塩酸オキシコドン、重酒石酸ヒドロコドン／ａｐａｐ；ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール；フェンタニル；アナキンラ、ヒト組み換え；塩酸トラマドール；サルサラート；スリンダク；シアノコバラミン／ｆａ／ピリドキシン；アセトアミノェン；アレンドロナートナトリウム；プレドニゾロン；硫酸モルヒネ；塩酸リドカイン；インドメタシン；硫酸グルコサミン／コンドロイチン；シクロスポリン；塩酸アミトリプチリン；スルファジアジン；塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン；塩酸オロパタジン；ミソプロストール；ナプロキセンナトリウム；オメプラゾール；ミコフェノラート・モフェチル；シクロホスファミド；リツキシマブ、ＩＬ−１ＴＲＡＰ；ＭＲＡ；ＣＴＬＡ４−ＩＧ；ＩＬ−１８ＢＰ；ＡＢＴ−８７４；ＡＢＴ−３２５（抗ＩＬ−１８）；抗ＩＬ−１５；ＢＩＲＢ−７９６；ＳＣＩＯ−４６９；ＶＸ−７０２；ＡＭＧ−５４８；ＶＸ７４０；ロフルミラスト；ＩＣ−４８５；ＣＤＣ−８０１及びメソプラム。
【０２０２】
本発明の結合タンパク質とともに組み合わせることが可能な炎症性腸疾患に対する治療剤の非限定的な例には、以下のもの：ブデノシド；上皮成長因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチラート；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体；抗ＩＬ−６モノクローナル抗体；成長因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；他のヒトサイトカイン又は成長因子（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）に対する抗体又はこれらのアンタゴニストが含まれる。本発明の抗体又はその抗原結合部分は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ９０これらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることが可能である。本発明の抗体又はその抗原結合部分は、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラート・モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦα又はＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する因子（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＮＦα変換酵素阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体及びそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５又はｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）及び炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）などの因子とも組み合わされ得る。
【０２０３】
結合タンパク質を組み合わせることが可能な、クローン病に対する治療剤の好ましい例には、以下のもの：ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７（ＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９７／２９１３１；ＨＵＭＩＲＡ）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物、（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ）及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ））阻害剤及びＰＤＥ４阻害剤が含まれる。本発明の抗体又はその抗原結合部分は、コルチコステロイド、例えば、ブデノシド及びデキサメタゾンと組み合わせることが可能である。本発明の結合タンパク質又はこれらの抗原結合部分は、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸及びオルサラジンなどの因子と、並びにＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインの合成又は作用を妨害する因子（例えば、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤及びＩＬ−１ｒａ）とも組み合わされ得る。本発明の抗体又はその抗原結合部分は、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤６−メルカプトプリンとともに使用され得る。本発明の結合タンパク質又はその抗原結合部分は、ＩＬ−１１と組み合わせることが可能である。本発明の結合タンパク質又はその抗原結合部分は、メサラミン、プレドニゾン、アザチオプリン、メルカプトプリン、インフリキシマブ、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ジフェノキシラート／硫酸アトロピン、塩酸ロペラミド、メトトレキサート、オメプラゾール、フォラート、シプロフロキサシン／デキストロース−水、重酒石酸ヒドロコドン／ａｐａｐ、テトラサイクリン塩酸塩、フルオシノニド、メトロニダゾール、チメロサール／ホウ酸、コレスチラミン／スクロース、塩酸シプロフロキサシン、硫酸ヒヨスチアミン、塩酸メペリジン、塩酸ミダゾラム、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、塩酸プロメタジン、リン酸ナトリウム、スルファメトキサゾール／トリメトプリム、セレコキシブ、ポリカルボフィル、ナプシル酸プロポキシフェン、ヒドロコルチゾン、マルチビタミン、バルサラジド二ナトリウム、リン酸コデイン／アセトアミノフェン（ａｐａｐ）、塩酸コレセベラム、シアノコバラミン、葉酸、レボフロキサシン、メチルプレドニソロン、ナタリズマブ及びインターフェロンγと組み合わせることが可能である。
【０２０４】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、多発性硬化症のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：コルチコステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキサート；４−アミノピリジン；チザニジン；インターフェロン−β１ａ（ＡＶＯＮＥＸ；Ｂｉｏｇｅｎ）；インターフェロン−β１ｂ（ＢＥＴＡＳＥＲＯＮ；Ｃｈｉｒｏｎ／Ｂｅｒｌｅｘ）；インターフェロンα−ｎ３）（Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｆｕｊｉｍｏｔｏ）、インターフェロン−α（Ａｌｆａ  Ｗａｓｓｅｒｍａｎｎ／Ｊ＆Ｊ）、インターフェロン−β１Ａ−ＩＦ（Ｓｅｒｏｎｏ／Ｉｎｈａｌｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＰＥＧインターフェロンα２ｂ（Ｅｎｚｏｎ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）、コポリマー１（Ｃｏｐ−１；ＣＯＰＡＸＯＮＥ；Ｔｅｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈内免疫グロブリン；クラブリビン；他のヒトサイトカイン又は成長因子（例えば、ＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−ＩＩ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ及びＰＤＧＦ）及びそれらの受容体に対する抗体又はこれらのアンタゴニストが含まれる。本発明の結合タンパク質は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０又はこれらのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることが可能である。本発明の結合タンパク質は、メトトレキサート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノラート・モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えば、イブプロフェン、プレドニゾロンなどのコルチコステロイド、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシンアゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作用薬、ＴＮＦα又はＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達を妨害する因子（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＤＣＫ、ｐ３８又はＭＡＰキナーゼ阻害剤）、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤、ＴＡＣＥ阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、可溶性サイトカイン受容体及びそれらの誘導体（例えば、可溶性ｐ５５又はｐ７５ＴＮＦ受容体、ｓＩＬ−１ＲＩ、ｓＩＬ−１ＲＩＩ、ｓＩＬ−６Ｒ）及び炎症抑制性サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３及びＴＧＦβ）などの因子とも組み合わされ得る。
【０２０５】
本発明の結合タンパク質を組み合わせることが可能な、多発性硬化症のための治療剤の好ましい例には、インターフェロン−β、例えば、ＩＦＮβ１ａ及びＩＦＮ１ｂ；コパキソン（ｃｏｐａｘｏｎｅ）、コルチコステロイド、カスパーゼ阻害剤、例えばカスパーゼ−１の阻害剤、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤並びにＣＤ４０リガンド及びＣＤ８０に対する抗体が含まれる。
【０２０６】
本発明の結合タンパク質は、アレムツズマブ、ドロナビノール、ユニメド、ダクリズマブ、ミトキサントロン、塩酸キサリプロデン、ファムプリジン、酢酸グラチラマー、ナタリズマブ、シンナビドール、ａ−イムノカインＮＮＳＯ３、ＡＢＲ−２１５０６２、ＡｎｅｒｇｉＸ．ＭＳ、ケモカイン受容体アンタゴニスト、ＢＢＲ−２７７８、カラグアリン、ＣＰＩ−１１８９、ＬＥＭ（リポソーム封入されたミトキサントロン）、ＴＨＣ．ＣＢＤ（カンナビノイドアゴニスト）ＭＢＰ−８２９８、メソプラム（ＰＤＥ４阻害剤）、ＭＮＡ−７１５、抗ＩＬ−６受容体抗体、ニューロバックス、ピルフェニドンアロトラップ１２５８（ＲＤＰ−１２５８）、ｓＴＮＦ−Ｒ１、タラムパネル、テリフルノミド、ＴＧＦ−β２、チプリモチド、ＶＬＡ−４アンタゴニスト（例えば、ＴＲ−１４０３５、ＶＬＡ４Ｕｌｔｒａｈａｌｅｒ、Ａｎｔｅｇｒａｎ−ＥＬＡＮ／Ｂｉｏｇｅｎ）、インターフェロンγアンタゴニスト、ＩＬ−４アゴニストなどの因子とも組み合わされ得る。
【０２０７】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、狭心症のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：アスピリン、ニトログリセリン、イソソルバイド・モノニトラート、コハク酸メトプロロール、アテノロール、酒石酸メトプロロール、ベシル酸アムロジピン、塩酸ジルチアゼム、硝酸イソソルビド、重硫酸クロピドグレル、ニフェジピン、アトロバスタチンカルシウム、塩化カリウム、フロセミド、シンバスタチン、塩酸ベラパミル、ジゴキシン、塩酸プロプラノロール、カルベジロール、リシノプリル、スピロノラクトン、ヒドロクロロチアジド、マレイン酸エナラプリル、ナドロール、ラミプリル、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、バルサルタン、塩酸ソタロール、フェノフィブラート、エゼチミブ、ブメタニド、ロサルタンカリウム、リシノプリル／ヒドロクロロチアジド、フェロジピン、カプトプリル、フマル酸ビソプロロールが含まれる。
【０２０８】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、強直性脊椎炎のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：イブプロフェン、ジクロフェナク及びミソプロストール、ナプロキセン、メロキシカム、インドメタシン、ジクロフェナク、セレコキシブ、ロフェコキシブ、スルファサラジン、メトトレキサート、アザチオプリン、ミノサイクリン、プレドニゾン、エタネルセプト、インフリキシマブが含まれる。
【０２０９】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、喘息のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：アルブテロール、サルメテロール／フルチカゾン、モンテルカストナトリウム、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、プレドニゾン、キシナホ酸サルメテロール、塩酸レバルブテロール、硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、リン酸プレドニゾロンナトリウム、トリアムシノロン・アセトニド、二プロピオン酸ベクロメタゾン、イプラトロピウム臭化物、アジスロマイシン、酢酸ピルブテロール、プレドニゾロン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、クラリスロマイシン、ザフィルルカスト、フマル酸フォルモテロール、インフルエンザウイルスワクチン、メチルプレドニゾロン、アミノキシシリン三水和物、フルニソリド、アレルギー注射、クロモリンナトリウム、塩酸フェキソフェナジン、フルニソリド／メントール、アモキシシリン／クラブラナート、レボフロキサシン、吸入補助装置、グアイフェネシン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、塩酸マキシフロキサシン、ドキシサイクリン水和物（ｈｙｃｌａｔｅ）、グアイフェネシン／ｄ−メトルファン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロルフェニル、ガチフロキサシン、塩酸セチリジン、フロ酸モメタゾン、キシナホ酸サルメテロール、ベンゾナタート、セファレキシン、ｐｅ／ヒドロコドン／クロルフェニル、塩酸セチリジン／シュードエフェドリン、フェニレフリン／ｃｏｄ／プロメタジン、コデイン／プロメタジン、セフプロジル、デキサメタゾン、グアイフェネシン／シュードエフェドリン、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、ネドクロミルナトリウム、硫酸テルブタリン、エピネフリン、メチルプレドニゾロン、硫酸メタプロテレノールが含まれる。
【０２１０】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることができる、ＣＯＰＤに対する治療剤の非限定的な例には、以下のもの：硫酸アルブテロール／イプラトロピウム、イプラトロピウムブロミド、サルメテロール／フルチカゾン、アルブテロール、キシナホ酸サルメテロール、プロピオン酸フルチカゾン、プレドニゾン、テオフィリン無水物、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、モンテルカストナトリウム、ブデソニド、フマル酸フォルモテロール、トリアムシノロン・アセトニド、レボフロキサシン、グアイフェネシン、アジスロマイシン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、塩酸レバルブテロール、フルニソリド、セフトリアキソンナトリウム、アミノキシシリン三水和物、ガチフロキサシン、ザフィルルカスト、アモキシシリン／クラブラナート、フルニソリド／メントール、クロルフェニラミン／ヒドロコドン、硫酸メタプロテレノール、メチルプレドニゾロン、フロ酸モメタゾン、ｐ−エフェドリン／ｃｏｄ／クロロフェニル、酢酸ピルブテロール、ｐ−エフェドリン／ロラタジン、硫酸テルブタリン、チオトロピウムブロミド、（Ｒ，Ｒ）−フォルモテロール、ＴｇＡＡＴ、シロミラスト、ロフルミラストが含まれる。
【０２１１】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることができる、ＨＣＶに対する治療剤の非限定的な例には、以下のもの：インターフェロン−α−２ａ、インターフェロン−α−２ｂ、インターフェロン−αｃｏｎ１、インターフェロン−α−ｎｌ、ＰＥＧ化されたインターフェロン−α−２ａ、ＰＥＧ化されたインターフェロン−α−２ｂ、リバビリン、Ｐｅｇインターフェロンα−２ｂ＋リバビリン、ウルソデオキシコール酸、グリシルリジン酸、チマルファシン、マキサミン、ＶＸ−４９７及び以下の標的：ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶプロテアーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶＩＲＥＳ（配列内リボソーム進入部位）への介入を通じて、ＨＣＶを治療するために使用されるあらゆる化合物が含まれる。
【０２１２】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることができる、特発性肺繊維症のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：プレドニゾン、アザチオプリン、アルブテロール、コルヒチン、硫酸アルブテロール、ジゴキシン、γインターフェロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、ロラゼパム、フロセミド、リシノプリル、ニトログリセリン、スピロノラクトン、シクロホスファミド、イプラトロピウムブロミド、アクチノマイシンｄ、アルテプラーゼ、プロピオン酸フルチカゾン、レボフロキサシン、硫酸メタプロテレノール、硫酸モルヒネ、塩酸オキシコドン、塩化カリウム、トリアムシノロン・アセトニド、タクロリムス無水物、カルシウム、インターフェロン−α、メトトレキサート、ミコフェノラート・モフェチル、インターフェロン−γ−１βが含まれる。
【０２１３】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることができる、心筋梗塞のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：アスピリン、ニトログリセリン、酒石酸メトプロロール、エノキサパリンナトリウム、ヘパリンナトリウム、重硫酸クロピドグレル、カルベジロール、アテノロール、硫酸モルヒネ、コハク酸メトプロロール、ワルファリンナトリウム、リシノプリル、一硝酸イソソルビド、ジゴキシン、フロセミド、シンバスタチン、ラミプリル、テネクテプラーゼ、マレイン酸エナラプリル、トルセミド、レタバーゼ、ロサルタンカリウム、塩酸キナプリル／ｍａｇ  ｃａｒｂ、ブメタニド、アルテプラーゼ、エナラプリラート、塩酸アミオダロン、塩酸チロフィバンｍ−水和物、塩酸ジルチアゼム、カプトプリル、イルベサルタン、バルサルタン、塩酸プロプラノロール、フォシノプリルナトリウム、塩酸リドカイン、エプチフィバチド、セファゾリンナトリウム、硫酸アトロピン、アミノカプロン酸、スピロノラクトン、インターフェロン、塩酸ソタロール、塩化カリウム、ドキュセートナトリウム、塩酸ドブタミン、アルプラゾラム、プラバスタチンナトリウム、アトロバスタチンカルシウム、塩酸ミダゾラム、塩酸メペリジン、二硝酸イソソルビド、エピネフリン、塩酸ドーパミン、ビバリルジン、ロスバスタチン、エゼチミブ／シンバスタチン、アバシミブ、カリポリドが含まれる。
【０２１４】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、乾癬のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：ＫＤＲの小分子阻害剤（ＡＢＴ−１２３）、Ｔｉｅ−２の小分子阻害剤、カルシポトリエン、プロピオン酸クロベタゾール、トリアムシノロン・アセトニド、プロピオン酸ハロベタゾール、タザロテン、メトトレキサート、フルオシノニド、増強された（ａｕｇｍｅｎｔｅｄ）二プロピオン酸ベタメタゾン、フルオシノロン・アセトニド、アシトレチン、タールシャンプー、吉草酸ベタメタゾン、フロ酸モメタゾン、ケトコナゾール、パラモキシン／フルオシノロン、吉草酸ヒドロコルチゾン、フルランドレノリド、尿素、ベタメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール／皮膚軟化剤（ｅｍｏｌｌ）、プロピオン酸フルチカゾン、アジスロマイシン、ヒドロコルチゾン、保湿処方、葉酸、デソニド、ピメクロリムス、コールタール、二酢酸ジフロラゾン、葉酸エタネルセプト、乳酸、メトキサレン、ｈｃ／次没食子酸ビスマス（ｂｉｓｍｕｔｈ  ｓｕｂｇａｌ）／酸化亜鉛（ｚｎｏｘ）／ｒｅｓｏｒ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、日焼け止め、ハルシノニド、サリチル酸、アンスラリン、ピバル酸クロコルトロン、石炭抽出物、コールタール／サリチル酸、コールタール／サリチル酸／硫黄、デスオキシメタゾン、ジアゼパム、皮膚軟化剤、フルオシノニド／皮膚軟化剤、鉱物油／ひまし油／ｎａ  ｌａｃｔ、鉱物油／落花生油、石油／ミリスチン酸イソプロピル、ソラーレン、サリチル酸、石鹸／トリブロムサラン、チメロサール／ホウ酸、セレコキシブ、インフリキシマブ、シクロスポリン、アレファセプト、エファリズマブ、タクロリムス、ピメクロリムス、ＰＵＶＡ、ＵＶＢ、スルファサラジンが含まれる。
【０２１５】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることができる、乾癬性関節炎のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：メトトレキサート、エタネルセプト、ロフェコキシブ、セレコキシブ、葉酸、スルファサラジン、ナプロキセン、レフルノミド、酢酸メチルプレドニゾロン、インドメタシン、硫酸ヒロドキシクロロキン、プレドニゾン、スリンダク、増強された二プロピオン酸ベタメタゾン、インフリキシマブ、メトトレキサート、フォラート、トリアムシノロン・アセトニド、ジクロフェナク、ジメチルスルホキシド、ピロキシカム、ジクロフェナクナトリウム、ケトプロフェン、メロキシカム、メチルプレドニゾロン、ナブメトン、トルメチンナトリウム、カルシポトリエン、シクロスポリン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、フルオシノニド、硫酸グルコサミン、金チオリンゴ酸ナトリウム、二酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、イブプロフェン、リセドロン酸ナトリウム、スルファジアジン、チオグアニン、バルデコキシブ、アレファセプト、エファリズマブが含まれる。
【０２１６】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、再狭窄のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：シロリムス、パクリタキセル、エベロリムス、タクロリムス、ＡＢＴ−５７８、アセトアミノフェンが含まれる。
【０２１７】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、坐骨神経痛のための治療剤の非限定的な例には、以下のもの：二酒石酸ヒドロコドン／アセトアミノフェン、ロフェコキシブ、塩酸シクロベンザプリン、メチルプレドニゾロン、ナプロキセン、イブプロフェン、塩酸オキシコドン／アセトアミノフェン、セレコキシブ、バルデコキシブ、酢酸メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、リン酸コデイン／アセトアミノフェン、塩酸トラマドール／アセトアミノフェン、メタキサロン、メロキシカム、メトカルバモール、塩酸リドカイン、ジクロフェナクナトリウム、ギャバペンチン、デキサメタゾン、カリソプロドール、ケトロラク・トロメタミン、インドメタシン、アセトアミノフェン、ジアゼパム、ナブメタオン、塩酸オキシコドン、塩酸チザニジン、ジクロフェナクナトリウム／ミソプロストール、ナプシル酸プロポキシフェン／アセトアミノフェン、ａｓａ／ｏｘｙｃｏｄ／コキシコドンｔｅｒ、イブプロフェン／重酒石酸ヒドロコドン、塩酸トラマドール、エトドラク、塩酸プロポキシフェン、塩酸アミトリプチリン、カリソプロドール／リン酸コデイン／ａｓａ、硫酸モルヒネ、マルチビタミン、ナプロキセンナトリウム、クエン酸オルフェナドリン、テマゼパムが含まれる。
【０２１８】
本発明の結合タンパク質と組み合わせることが可能な、ＳＬＥ（狼瘡）のための治療剤の好ましい例には、以下のもの：ＮＳＡＩＤ、例えば、ジクロフェナク、ナプロキセン、イブプロフェン、ピロキシカム、インドメタシン；ＣＯＸ２阻害剤、例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ；抗マラリア剤、例えば、ヒドロキシクロロキン；ステロイド、例えば、プレドニゾン、プレドニゾロン、ブデノシド、デキサメタゾン；細胞障害剤、例えば、アザチオプリン、シクロホスファミド、ミコフェノラート・モフェチル、メトトレキサート；ＰＤＥ４の阻害剤又はプリン合成阻害剤、例えば、Ｃｅｌｌｃｅｐｔが含まれる。本発明の結合タンパク質は、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸、オルサラジン、イムランなどの因子と、並びにＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインの合成、産生又は作用を妨害する因子、例えば、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤及びＩＬ−１ｒａのようなカスパーゼ阻害剤とも組み合わされ得る。本発明の結合タンパク質は、また、Ｔ細胞シグナル伝達阻害剤、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤；又はＴ細胞活性化分子を標的とする分子、例えば、ＣＴＬＡ−４−ＩｇＧ又は抗Ｂ７抗体ファミリー抗体、抗ＰＤ−１ファミリー抗体とともに使用され得る。本発明の結合タンパク質は、ＩＬ−１１又は抗サイトカイン抗体、例えば、ホノトリズマブ（抗ＩＦＮｇ抗体）、又は抗受容体受容体抗体、例えば、抗ＩＬ−６受容体抗体及びＢ細胞表面分子に対する抗体と組み合わせることが可能である。本発明の抗体又はその抗原結合部分は、また、ＬＪＰ３９４（アベチムス（ａｂｅｔｉｍｕｓ））（Ｂ細胞を枯渇させ、又は不活化する因子）、例えば、リツキシマブ（抗ＣＤ２０抗体）、リンホスタットーＢ（抗ＢｌｙＳ抗体）、ＴＮＦアンタゴニスト、例えば、抗ＴＮＦ抗体、Ｄ２Ｅ７（ＰＣＴ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＮＯ．ＷＯ９７／２９１３１；ＨＵＭＩＲＡ）、ＣＡ２（ＲＥＭＩＣＡＤＥ）、ＣＤＰ５７１、ＴＮＦＲ−Ｉｇ構築物（ｐ７５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＥＮＢＲＥＬ及びｐ５５ＴＮＦＲＩｇＧ（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ））とともに使用され得る。
【０２１９】
本発明の医薬組成物は、本発明の結合タンパク質の「治療的有効量」又は「予防的有効量」を含み得る。「治療的有効量」は、所望の治療的結果を達成するための投薬量で、及び所望の治療的結果を達成するために必要な期間にわたって有効な量を表す。結合タンパク質の治療的有効量は、当業者によって決定され得、病状、年齢、性別及び個体の体重並びに結合タンパク質が個体内で所望の応答を惹起する能力などの因子に従って変動し得る。治療的有効量は、抗体又は抗体部分のあらゆる毒性効果又は有害効果が、治療的に有益な効果によって凌駕される量でもある。「予防的有効量」は、所望の予防的結果を達成するために必要な投薬量で、及び所望の予防的結果を達成するために必要な期間にわたって有効な量を表す。典型的には、疾病のより初期段階の前に又は疾病のより初期段階において、予防的投薬が患者に使用されるので、予防的有効量は、治療的有効量より少ない。
【０２２０】
投薬計画は、最適な所望の応答（例えば、治療的応答又は予防的応答）を与えるように調整され得る。例えば、単一のボーラスを投与することができ、複数の分割された用量を経時的に投与することができ、又は、治療状況の緊急性によって示されるように、用量を比例的に減少若しくは増加させ得る。投与の容易さ及び投薬量の均一性のために、投薬単位形態で非経口組成物を製剤化することが特に有利である。本明細書において使用される投薬単位形態は、治療されるべき哺乳動物患者に対する統一された投薬として適した、物理的に分離された単位を表し、各単位は、必要とされる医薬担体とともに、所望される治療効果を生じるように計算された活性化合物の所定量を含有する。本発明の投薬単位形態に対する規格は、（ａ）活性化合物の特有の特徴及び達成されるべき具体的な治療効果又は予防効果並びに（ｂ）個体における過敏症の治療用のこのような活性化合物を配合する分野に固有の制約によって規定され、これらに直接依存する。
【０２２１】
本発明の結合タンパク質の治療的又は予防的有効量に対する典型的な非限定的範囲は、０．１から２０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１から１０ｍｇ／ｋｇである。緩和されるべき症状の種類及び重度に応じて、投薬量の値が変化し得ることに注意すべきである。何れかの具体的な患者に対して、個体の要求に従って、組成物の投与を行い又は監督している者の専門的判断に従って、特異的投薬計画を経時的に調整すべきこと、及び、本明細書に記載されている投薬量の範囲は典型的なものに過ぎず、特許請求の範囲に記載されている組成物の範囲又は実施に限定することを意図したものではないことをさらに理解すべきである。
【０２２２】
本明細書に記載されている本発明の方法の他の適切な改変及び適合が明白であり、本発明の範囲又は本明細書に開示されている実施形態から逸脱することなく、適切な均等物を用いてこれらを行い得ることが当業者に自明である。ここに、本発明を詳しく記載してきたが、例示のみを目的とし、本発明を限定することを意図したものではない以下の実施例を参照することによって、本発明がより明確に理解される。
【実施例】
【０２２３】
実施例
（実施例１）
二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）の作製
二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）分子は、２つの異なる親ｍＡｂ由来の２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、組み換えＤＮＡ技術によって、直接又は短いリンカーを介して直列に連結され、その後に軽鎖定常ドメインが続くように設計される。同様に、重鎖は、直列に連結された２つの異なる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）の後に、定常ドメインＣＨ１及びＦｃ領域（図１Ａ）を含む。
【０２２４】
（実施例１．１）
ＩＬ−１α及びＩＬ−１βに対するマウスモノクローナル抗体の作製
本分野で周知のハイブリドーマ技術を用いて、以下のように、ＩＬ−１α及びＩＬ−１βに対するモノクローナル抗体を作製した。  
（実施例１．１．Ａ）
マウスの免疫化
精製された組み換えヒトＩＬ−１α及びマウスＩＬ−１β（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、免疫原並びに力価アッセイ及びＥＬＩＳＡスクリーニングでのコーティング抗原として使用した。初回及び強化免疫の両者に対する全ての抗原について、免疫化の用量は、５．０から２０．０μｇ／マウス／注射の範囲であった。ＩｍｍｕｎＥａｓｙアジュバントをＱｉａｇｅｎ（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）から購入し、１０．０μｇ抗原当り２０ｍＬのＩｍｍｕｎＥａｓｙアジュバントのアジュバント／抗原比で使用した。免疫化すべき動物の各群は、Ｄｒ．  Ｙｏｉｃｈｉｒｏ  Ｉｗａｋｕｒａ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｏｋｙｏ，Ｍｉｎａｔｏ−ｋｕ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）から入手した５匹のＩＬ−１αβＫＯマウスを含んだ。以下に記載されている投薬スケジュールに従って、マウスを免疫化した。ＭＲＣ−５細胞はＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から購入し、ＩＬ−１バイオアッセイのために使用した。ヒトＩＬ−８ＥＬＩＳＡキット並びに対照マウス抗ｈＩＬ−１α及びβ抗体（ＭＡＢ２００及びＭＡＢ２０１）は、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）から購入した。
【０２２５】
要約すると、まず、渦巻き撹拌を用いて、バイアル中のアジュバントを穏やかに混合することによって、アジュバント−抗原混合物を調製した。アジュバントの所望の量をバイアルから取り出し、加熱滅菌された１．５ｍＬ微小遠心管に入れた。０．５から１．０ｍｇ／ｍＬの範囲にわたる濃度で、ＰＢＳ又は生理的食塩水中に抗原を調製した。次いで、抗原の計算された量を、アジュバントとともに微小遠心管に添加し、５回、ピペット操作で穏やかに上下させることによって溶液を混合した。アジュバント−抗原混合物を、室温で１５分間温置した後、ピペット操作で穏やかに５回上下させることによって、再度混合した。動物に注射するために、アジュバント−抗原溶液を適切な注射器中に吸引した。抗原の計５から２０μｇを、５０から１００μＬの容量で注射した。各動物を免疫化し、次いで、力価に応じて、２から３回強化免疫した。優れた力価を有する動物には、融合及びハイブリドーマの生成の前に、最終の静脈内強化免疫を施した。
【０２２６】
（実施例１．１．Ｂ）
ハイブリドーマのスクリーニング
上記のようにして作製されたハイブリドーマをスクリーニングし、ＥＬＩＳＡを用いて抗体力価を測定した。標準的なＥＬＩＳＡ手法を用いて、特異的抗体を誘導するために、ＥＬＩＳＡプレート上に、タンパク質抗原を直接被覆した。要約すれば、ＥＬＩＳＡプレートを、ｒｈＩＬ−１α又はｒｈＩＬ−１β（ＰＢＳ中、１．０μｇ／ｍＬ）の何れか１００μＬで、一晩４℃でコートした。２５０μＬのＰＢＳ／０．５％Ｔｗｅｅｎ２０で、プレートを３回洗浄し、２００μＬのブロッキング緩衝液（０．５％Ｔｗｅｅｎ２０を加えたＰＢＳ中の２％ＢＳＡ）でブロックした。各ウェルに、希釈された血清又はハイブリドーマ上清（１００μＬ）を添加し、室温で２時間温置した。次いで、ＰＢＳ／０．５％Ｔｗｅｅｎ２０で、プレートを３回洗浄し、検出のためにＨＲＰヤギ抗マウスＩｇＧを用い、４５０ｎｍで結合ＯＤを観察した。ＥＬＩＳＡ中で高い特異的結合活性を示した抗体を産生するハイブリドーマクローンをサブクローニングし、精製し、抗体の親和性（Ｂｉａｃｏｒｅ）及び効力（ＭＲＣ−５バイオアッセイ）を、以下のように性質決定した。
【０２２７】
（実施例１．１．Ｃ）
ＩＬ−１α及びＩＬ−１βに対するマウスモノクローナル抗体の性質決定
実施例１．１．Ｂに記載されているハイブリドーマによって産生された抗体を性質決定するために、以下のアッセイを使用した。
【０２２８】
（実施例１．１．Ｃ．１）
表面プラズモン共鳴：
製造業者の指示書及び標準的な操作に従い、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（ＢｉａｃｏｒｅＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって、捕捉された抗体（ヤギ抗マウスＩｇＧを介して、バイオセンサーマトリックス上に捕捉されたマウス抗ｒｍＩＬ１抗体）とｒｍＩＬ−１との間のリアルタイム結合相互作用を測定した。要約すると、ＨＢＳ走行緩衝液（ＢｉａｃｏｒｅＡＢ）中にｒｍＩＬ−１を希釈し、５ｍＬ／分の流速で、固定化されたタンパク質マトリックスを通じて、５０μＬの分取試料を注射した。使用したｒｈＩＬ１の濃度は、６２．５、１２５、１８７．５、２５０、３７５、５００、７５０、１０００、１５００及び２０００ｎＭであった。解離定数（解離速度）、会合定数（結合速度）を測定するために、ＢＩＡｃｏｒｅ速度論評価ソフトウェア（バージョン３．１）を使用した。
【０２２９】
（実施例１．１．Ｃ．２）
抗ＩＬ−１バイオアッセイ：
ＭＲＣ−５細胞株は、用量依存的様式で、ヒトＩＬ−１α及びＩＬ−１βに応答してＩＬ−８を産生するヒト肺繊維芽細胞株である（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ，Ｃ．Ａ．，Ｋ．Ｍｕｅｇｇｅ，ａｎｄ  Ｓ．  Ｋ．  Ｄｕｒｕｍ．  ２０００．  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６：１参照）。１０％ＦＢＳ完全ＭＥＭ中でＭＲＣ−５細胞を培養し、５％ＣＯ２インキュベータ中、３７℃で増殖させた。組み換えヒトＩＬ−１α及びＩＬ−１βに対するｍＡｂの中和効力を測定するために、ｍＡｂ（５０μＬ）の異なる濃度（０から１０μｇ／ｍＬ）を９６ウェルプレートに添加し、３７℃で１時間、ｒｈＩＬ−１ａ又はｒｈＩＬ−１ｂの５０μＬ（１０から５０ｐｇ／ｍＬ）とともに予め温置した。上清を採集し、希釈し、標準的なＩＬ−８ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、ＥＬＩＳＡによってＩＬ−８濃度を測定した。抗体の効力は、抗体がＭＲＣ−５細胞によるＩＬ−８産生を阻害する能力によって測定した。
【０２３０】
Ｂｉａｃｏｒｅ及びＭＲＣ−５バイオアッセイに基づいて、下表１に示されているように、高い親和性及び効力を有する多数のマウス抗ｈＩＬ−１ａ及び抗ｈＩＬ−１ｂ抗体を同定した。
【０２３１】
【表１】
2009504191.tif 000003
【０２３２】
（実施例１．１．Ｄ）
ＩＬ−１α及びＩＬ−１βに対するマウスモノクローナル抗体のクローニング及び配列決定
製造業者の指示書に従い、Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、各ハイブリドーマ細胞株から全ＲＮＡをの単離及び精製後に、表１に記載されている全ての抗ＩＬ−１ａ／ｂｍＡｂ及びさらなる抗体の可変重（ＶＨ）及び軽（ＶＬ）遺伝子のクローニング及び配列決定を実施した。製造業者による指示どおりに、Ｏｎｅ−ｔｕｂｅＲＴ−ＰＣＲキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用し、Ｍｏｕｓｅ  Ｉｇ−Ｐｒｉｍｅｒ  Ｓｅｔ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）から得たＩｇＧＶＨ及びＩｇκＶＬオリゴヌクレオチドを用いて、ＶＨ及びＶＬ両遺伝子の増幅を行った。製造業者の指示書に従って、ｐＣＲ−ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に、生産的増幅から得られたＤＮＡ断片をクローニングした。次いで、ＡＢＩ３０００シークエンサ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を用いたジデオキシ鎖終結法によって、複数のＶＨ及びＶＬクローンの配列を決定した。全てのｍＡｂＶＬ及びＶＨ遺伝子の配列が、以下の表２に示されている。
【０２３３】
【表２】
2009504191.tif 000004
2009504191.tif 000005
【０２３４】
（実施例１．２）
マウス−ヒトキメラ抗体の作製及び性質決定
上記全てのｍＡｂを、（ヒト定常領域との）キメラに変換し、発現させ、精製し、活性を確認するために性質決定し、その後のＤＶＤ−Ｉｇ分析のための対照として使用する。３Ｄ１２．Ｅ３をキメラ形態に変換するために、プライマーＰ１及びＰ２を用いて、３Ｄ１２．Ｅ３−ＶＬをＰＣＲ増幅し、プライマーＰ３及びＰ４を用いて、（ＡＢＣで社内作製されたｐＢＯＳベクター中の）ヒトＣｋ遺伝子を増幅した。両ＰＣＲ反応は、標準的なＰＣＲ技術及び操作に従って行った。２つのＰＣＲ産物をゲル精製し、標準的なＰＣＲ条件を使用し、プライマーＰ１及びＰ４を用いて、その後の重複ＰＣＲ反応のための重複テンプレートとして一緒に使用した。製造業者の指示書に従い、ＴＯＰＯクローニングによって、最終ＰＣＲ産物キメラ軽鎖３Ｄ１２．Ｅ３−ＶＬ−ｈＣｋを、ｐＥＦ６ＴＯＰＯ哺乳動物発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中にサブクローニングした。表３は、ＰＣＲプライマーの配列を示している。
【０２３５】
【表３】
2009504191.tif 000006
【０２３６】
３Ｄ１２．Ｅ３重鎖をキメラ形態に変換するために、プライマーＰ５及びＰ６を用いて、３Ｄ１２．Ｅ３−ＶＨをＰＣＲ増幅し、プライマーＰ７及びＰ８を用いて、（ＡＢＣで社内作製されたｐＢＯＳベクター中の）ヒトＣγ１遺伝子を増幅した。両ＰＣＲ反応は、標準的なＰＣＲ技術及び操作に従って行った。２つのＰＣＲ産物をゲル精製し、標準的なＰＣＲ条件を使用し、プライマーＰ５及びＰ８を用いて、その後の重複ＰＣＲ反応のための重複テンプレートとして一緒に使用した。製造業者の指示書に従い、最終ＰＣＲ産物キメラ軽鎖３Ｄ１２．Ｅ３−ＶＨ−ｈＣγ１を、ｐｃＤＮＡ３．１ＴＯＰＯ哺乳動物発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中にサブクローニングした。表４は、ＰＣＲプライマーの配列を示している。
【０２３７】
【表４】
2009504191.tif 000007
【０２３８】
同様に、プライマーＰ２１／Ｐ２２（ＶＨに対して）及びＰ７／Ｐ８（ｈＣγ１に対して）を用いてキメラ１３Ｆ５．Ｇ５−ＶＨ−Ｃγ１を作製し、ｐｃＤＮＡ３．１ＴＯＰＯベクター中にクローニングし、プライマーＰ２３／Ｐ２４（ＶＬに対して）及びＰ３／Ｐ４（ｈＣｋに対して）を用いてキメラ１３Ｆ５．Ｇ５−ＶＬ−Ｃｋを作製し、ｐＥＦ６ＴＯＰＯベクター中にクローニングした。表５は、ＰＣＲプライマーの配列を示している。
【０２３９】
【表５】
2009504191.tif 000008
【０２４０】
キメラＡｂを発現させるために、７２時間、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、１３Ｆ５．Ｇ５−ＶＬ−Ｃκ及び１３Ｆ５．Ｇ５−ＶＨ−Ｃγ１をＣＯＳ中に同時発現させ、培地を集め、プロテインＡクロマトグラフィーによってＩｇＧ精製した。同様に、７２時間、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、１３Ｆ５．Ｇ５−ＶＬ−Ｃκ及び１３Ｆ５．Ｇ５−ＶＨ−Ｃγ１をＣＯＳ中に同時発現させ、培地を集め、プロテインＡクロマトグラフィーによってＩｇＧを精製した。活性を確認するために、Ｂｉａｃｏｒｅ及びＭＲＣ−５バイオアッセイによって、精製された両キメラＡｂを性質決定した。結果は、これらのキメラＡｂが元のマウスｍＡｂの親和性及び効力と類似の親和性及び効力を示すことを示した。
【０２４１】
（実施例１．３）
ＩＬ−１α／β二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）の構築、発現及び精製
ｈＩＬ−１α及びｈＩＬ−１βに結合することが可能なＤＶＤ−Ｉｇを作製するために使用された構築物が、図１Ｂに示されている。要約すれば、それぞれ、組み換えＩＬ−１αタンパク質（ｒｈＩＬ−１α）及び組み換えＩＬ−１βタンパク質（ｒｈＩＬ−１β）でＢａｌｂ／ｃマウスを免疫化することによって、２つの高親和性マウスＡｂ、抗ｈＩＬ−１α（クローン３Ｄ１２．Ｅ３）及び抗ｂＩＬ−１β（クローン１３Ｆ５．Ｇ５）を含む親ｍＡｂを取得した。マウスＩｇＰｒｉｍｅｒＫｉｔ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いて、ＲＴ−ＰＣＲによって、これら２つのハイブリドーマクローンのＶＬ／ＶＨ遺伝子を単離した。活性及び効力を確認するために、まず、ＶＬ／ＶＨ遺伝子を（ヒト定常領域との）キメラ抗体に変換した。ＤＶＤ１−Ｉｇを作製するために、１３Ｆ５．Ｇ５のＶＨ及びＶＬを、それぞれ、３Ｄ１２．Ｅ３のＶＨ及びＶＬのＮ末端に直接融合した（図１Ｂに示されているとおり）。軽鎖（リンカー配列はＡＤＡＡＰ）及び重鎖（リンカー配列はＡＫＴＴＰＰ）の両方に、２つの可変ドメイン間のリンカーを有することを除き、ＤＶＤ２−Ｉｇを同様に構築した。これらの配列は、マウスＣｋ及びＣＨ１配列のＮ末端から選択された。マウスＣｋ及びＣＨ１のＮ末端から選択されたこれらのリンカー配列は、可変ドメインの天然の伸長であり、幾つかのＦａｂ結晶構造の解析に基づけば、顕著な二次構造なしに柔軟な立体構造を示す。ＰＣＲクローニングの詳細な手順は、以下に記載されている。
【０２４２】
（実施例１．３．Ａ）
ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ１−Ｉｇの分子クローニング：
プライマーＰ２１及びＰ２５を用いて、１３Ｆ５．Ｇ５−ＶＨをＰＣＲ増幅し、プライマーＰ１４及びＰ８を用いて、３Ｄ１２．Ｅ３−ＶＨ−ｈＣγ１を増幅した。両ＰＣＲ反応は、標準的なＰＣＲ技術及び操作に従って行った。２つのＰＣＲ産物をゲル精製し、標準的なＰＣＲ条件を使用し、プライマーＰ２１及びＰ８を用いて、その後の重複ＰＣＲ反応のための重複テンプレートとして一緒に使用した。製造業者の指示書に従い、最終ＰＣＲ産物ＤＶＤＩｇ重鎖ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ１−ＶＨ−ｈＣγ１を、ｐｃＤＮＡ３．１ＴＯＰＯ哺乳動物発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中にサブクローニングした。表６は、ＰＣＲプライマーの配列を示している。
【０２４３】
【表６】
2009504191.tif 000009
【０２４４】
ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ１−Ｉｇ軽鎖を作製するために、プライマーＰ２３及びＰ２６を用いて、１３Ｆ５．Ｇ５−ＶＬをＰＣＲ増幅し、プライマーＰ１６及びＰ４を用いて、３Ｄ１２．Ｅ３−ＶＬ−ｈＣκを増幅した。両ＰＣＲ反応は、標準的なＰＣＲ技術及び操作に従って行った。２つのＰＣＲ産物をゲル精製し、標準的なＰＣＲ条件を使用し、プライマーＰ２３及びＰ４を用いて、その後の重複ＰＣＲ反応のための重複テンプレートとして一緒に使用した。製造業者の指示書に従い、最終ＰＣＲ産物ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ１−Ｉｇ軽鎖ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ１−ＶＬ−ｈＣκを、ｐＥＦ６ＴＯＰＯ哺乳動物発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中にサブクローニングした。表７は、ＰＣＲプライマーの配列を示している。
【０２４５】
【表７】
2009504191.tif 000010
【０２４６】
（実施例１．３．Ｂ）
ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ２−Ｉｇの分子クローニング：
プライマーＰ２１及びＰ１７を用いて、１３Ｆ５．Ｇ５−ＶＨをＰＣＲ増幅し、プライマーＰ１８及びＰ８を用いて、３Ｄ１２．Ｅ３−ＶＨ−ｈＣγ１を増幅した。両ＰＣＲ反応は、標準的なＰＣＲ技術及び操作に従って行った。２つのＰＣＲ産物をゲル精製し、標準的なＰＣＲ条件を使用し、プライマーＰ２１及びＰ８を用いて、その後の重複ＰＣＲ反応のための重複テンプレートとして一緒に使用した。製造業者の指示書に従い、最終ＰＣＲ産物ＤＶＤ２−Ｉｇ重鎖ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ２−ＶＨ−ｈＣγ１を、ｐｃＤＮＡ３．１ＴＯＰＯ哺乳動物発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中にサブクローニングした。表８は、ＰＣＲプライマーの配列を示している。
【０２４７】
【表８】
2009504191.tif 000011
【０２４８】
ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ２−Ｉｇ軽鎖を作製するために、プライマーＰ２３及びＰ１９を用いて、１３Ｆ５．Ｇ５−ＶＬをＰＣＲ増幅し、プライマーＰ２０及びＰ４を用いて、３Ｄ１２．Ｅ３−ＶＬ−ｈＣκを増幅した。両ＰＣＲ反応は、標準的なＰＣＲ技術及び操作に従って行った。２つのＰＣＲ産物をゲル精製し、標準的なＰＣＲ条件を使用し、プライマーＰ２３及びＰ４を用いて、その後の重複ＰＣＲ反応のための重複テンプレートとして一緒に使用した。製造業者の指示書に従い、最終ＰＣＲ産物ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ２−Ｉｇ軽鎖ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ２−ＶＬ−ｈＣκを、ｐＥＦ６ＴＯＰＯ哺乳動物発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中にサブクローニングした。表９は、ＰＣＲプライマーの配列を示している。
【０２４９】
【表９】
2009504191.tif 000012
【０２５０】
ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ１−Ｉｇ及びｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ２−Ｉｇの最終配列が表１０に記載されている。
【０２５１】
【表１０】
2009504191.tif 000013
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2009504191.tif 000015
2009504191.tif 000016
【０２５２】
（実施例１．３．Ｃ）
ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ１−Ｉｇの発現及び精製
各構築物の重鎖及び軽鎖を、それぞれ、ｐｃＤＮＡ３．１ＴＯＰＯ及びｐＥＦ６ＴＯＰＯベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．）中にサブクローニングし、正確さを確かめるために配列を決定した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００及び２９３ｆｅｃｔｉｎ試薬を用いて、それぞれ、ＣＯＳ細胞及びヒト胎児由来腎臓２９３細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）中に、各構築物の重鎖及び軽鎖をコードするプラスミドを一過性に発現させた。一過性形質移入の７２時間後に、細胞培地を採集し、製造業者の指示書に従って、プロテインＡクロマトグラフィー（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を用いて抗体を精製した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、Ａｂを分析し、Ａ２８０及びＢＣＡ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）によって定量した。表１１は、ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ１−Ｉｇ及びｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ２−Ｉｇの発現レベルが、キメラＡｂのものと同等であることを示しており、哺乳動物細胞中でＤＶＤ−Ｉｇが効率的に発現され得ることを示唆している。
【０２５３】
【表１１】
2009504191.tif 000017
【０２５４】
（実施例１．４）
ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ−Ｉｇの質量分析及びＳＥＣ分析
ＤＶＤ−Ｉｇの軽鎖及び重鎖の分子量（ＭＷ）を測定するために、１．０ＭＤＴＴ溶液（５μＬ）によって、ＤＶＤ−Ｉｇの１０μＬ（０．８μｇ／μＬ）を還元した。ＤＶＤ−Ｉｇの重鎖及び軽鎖を分離するために、ＰＬＲＰ−Ｓ、８μ、４０００オングストローム及び１×１５０ｍｍタンパク質カラム（Ｍｉｃｈｒｏｍ  ＢｉｏＲｅｓｏｕｒｃｅ，Ａｕｂｕｒｎ，ＭＡ）を使用した。質量分析計ＱＳＴＡＲ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）とともに、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＩ１０Ｏ  Ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｐａｌａ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を使用した。試料を脱塩するため、流れを廃棄からＭＳに切り替えるために、バルコバルブを１０分に設定した。緩衝液Ａは、０．０２％ＴＦＡ、０．０８％ＦＡ、０．１％ＡＣＮ及び９９．８％ＨＰＬＣ−Ｈ２Ｏであった。緩衝液Ｂは、０．０２％ＴＦＡ、０．０８％ＦＡ、０．１％ＣＡＮ、０．１％ＨＰＬＣ−Ｈ２Ｏ及び９９．８％ＡＣＮを含有した。ＨＰＬＣ流速は５０μＬ／分であり、試料注入容量は８．０ｍＬであった。カラムオーブンの温度は６０℃に設定し、分離グラジエントは、５分間５％Ｂ、３５分間で５％Ｂから６５％Ｂ、さらに５分間で６５％Ｂから９５％Ｂ、５分間で９５％Ｂから５％Ｂであった。ＴＯＦＭＳスキャンは８００から２５００ａｍｕであり、サイクルは３６００であった。完全長ＤＶＤ−ＩｇのＭＷを測定するために、試料を脱塩するため、Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＭｉｃｒｏＴｒａｐ  ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（Ｍｉｃｈｒｏｍ  ＢｉｏＲｅｓｏｕｒｃｅ，Ａｕｂｕｒｎ，ＭＡ）を使用した。ＨＰＬＣグラジエントは、５分間５％Ｂ、１分で５％Ｂから９５％Ｂ、さらに４分で９５％Ｂから５％Ｂであった。ＱＳＴＡＲＴＯＦＭＳスキャンは２０００から３５００ａｍｕであり、サイクルは８９９であった。全てのＭＳ生データは、Ａｎａｌｙｓｔ  ＱＳ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて分析した。ＤＶＤ−ＩｇのＳＥＣ分析の場合、ＰＢＳ中の精製されたＤＶＤ−Ｉｇ及びキメラＡｂを、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ  ６  １０／３００  Ｇ２，３００ｘ１０ｍｍカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）にかけた。ＳＥＣのために、ＨＰＬＣ装置モデル１０Ａ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ，Ｃｏｌｕｍｂｉａ，ＭＤ）を使用した。全てのタンパク質は、２８０ｎｍ及び２１４ｎｍでのＵＶ検出を用いて測定した。溶出は、０．５ｍＬ／分の流速で、均一濃度であった。安定性研究については、ＰＢＳ中の０．２から０．４ｍｇ／ｍＬの濃度範囲の試料に、−８０℃及び２５℃の間での３回の凍結融解サイクルを行うか、又は４週間及び８週間、４℃、２５℃若しくは４０℃で温置した後、ＳＥＣ分析を行った。
【０２５５】
プロテインＡクロマトグラフィーによって、ＤＶＤ−Ｉｇ及びキメラＡｂを精製した。精製収率（３から５ｍｇ／Ｌ）は、各タンパク質に対する発現溶媒のｈＩｇＧ定量と合致していた。精製されたＤＶＤ−Ｉｇ及びキメラＡｂの組成及び純度は、還元及び非還元両条件でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析した。非還元条件では、４つのタンパク質の各々が、単一の結合として移動した。ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、予想通り、キメラＡｂより大きな分子量を示した。非還元条件では、４つのタンパク質の各々が、２つのバンド（１つは重鎖及び１つは軽鎖）を与えた。同じく、ＤＶＤ−Ｉｇの重鎖及び軽鎖は、キメラＡｂのものよりサイズが大きかったＳＤＳ−ＰＡＧＥは、各ＤＶＤ−Ｉｇが単一種として発現され、重鎖及び軽鎖が効率的に対合されて、ＩｇＧ様分子を形成することを示した。２つのＤＶＤ−Ｉｇ分子の重鎖及び軽鎖並びに完全長タンパク質のサイズは、アミノ酸配列に基づいて計算されたそれらの分子量と合致している（表１１参照）。
【０２５６】
ＤＶＤ−Ｉｇの正確な分子量を測定するために、質量分析法を使用した。表１に示されているように、実験的に測定された各ＤＶＤ−Ｉｇ（軽鎖、重鎖及び完全長タンパク質を含む。）の分子量は、予想される値と、よく一致している。溶液中でのＤＶＤ−Ｉｇの物理的特性をさらに研究するために、各タンパク質を分析するためにサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用した。キメラＡｂ及びＤＶＤ２−Ｉｇの両方が単一のピークを示し、単量体タンパク質として物理的均一性を示した。３Ｄ１２．Ｅ３キメラＡｂは、１３Ｆ５．Ｇ５キメラＡｂより小さな物理的サイズを示し、３Ｄ１２．Ｅ３キメラＡｂがよりコンパクトな球状の形状を採ることを示唆している。ＤＶＤ１−Ｉｇは、主ピーク及び右側の肩ピークを示し、ＤＶＤ１−Ｉｇの一部が、おそらく、現行の緩衝液条件では、凝集した形態であることを示唆している。
【０２５７】
（実施例１．５）
ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ−Ｉｇのインビトロ安定性の分析
ＤＶＤ−Ｉｇの物理的安定性を、以下のように調べた。ＰＢＳ中の０．２から０．４ｍｇ／ｍＬの濃度範囲の精製された抗体に、−８０℃及び２５℃の間での３回の凍結融解サイクルを行うか、又は４週間及び８週間、４℃、２５℃若しくは４０℃で温置した後、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析を用いた分析を行った（表１２参照）。
【０２５８】
【表１２】
2009504191.tif 000018
【０２５９】
両キメラＡｂは、通常のＩｇＧ分子にとって正常な、凝集及び断片化の僅かな程度を示した。ＤＶＤ１−Ｉｇは、精製後、ＳＣＥ上で幾らかの凝集を示した。安定性分析では、ＤＶＤ１−Ｉｇも、異なる条件下におけるＰＢＳ中での凝集を示したが、ＤＶＤ１−Ｉｇの凝集された形態のパーセントは、延長された保存中又はより高い温度でも増加しなかった。ＤＶＤ１−Ｉｇの断片化された形態のパーセントは、正常な範囲にあり、キメラ３Ｄ１２．Ｅ３．Ａｂのものと類似であった。これに対して、ＤＶＤ２−Ｉｇは、著しい安定性を示した。検査した全ての条件において、ＤＶＤ２−Ｉｇについては、凝集及び断片化は検出されず、ＤＶＤ２−Ｉｇの１００％が、完全な状態の単量体分子を維持した。
【０２６０】
（実施例１．６）
ｈＩＬ−１ａ／ｂＰＶＤ−Ｉｇの抗原結合親和性の測定
ｒｈＩＬ１−α及びｒｈＩＬ１−βへのＤＶＤ−Ｉｇ結合の速度論は、２５℃のＨＢＳ−ＥＰ（１０ｍＭＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４，１５０ｍＭＮａＣｌ，３ｍＭＥＤＴＡ及び０．００５％界面活性剤Ｐ２０）を使用して、Ｂｉａｃｏｒｅ  ３０００  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いた表面プラズモン共鳴を基礎とする測定によって測定した。全ての化学物質は、ＢｉａｃｏｒｅＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）から、あるいは本明細書に記載されている別の入手先から取得した。製造業者の指示書に従う標準的なアミンカップリングキット及び２５ｍｇ／ｍＬでの操作を用いて、概ね、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．５）中に希釈されたヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃγ断片特異的ポリクローナル抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）の５０００ＲＵを、ＣＭ５研究等級バイオセンサーチップ全体に直接固定した。バイオセンサー表面上の反応しなかった部分は、エタノールアミンでブロックした。フローセル２及び４中の修飾されたカルボキシメチルデキストラン表面を、反応表面として使用した。フローセル１及び３中のヤギ抗ヒトＩｇＧなしの修飾されていないカルボキシメチルデキストランは、基準表面として使用した。速度論分析のために、Ｂｉｏｅｖａｌｕａｔｉｏｎ４．０．１ソフトウェアを用いて、全ての１０の注射の会合及び解離相に対して、１：１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデルから誘導された速度方程式を同時にフィッティングさせた（グローバルフィット解析を使用）。ヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃ特異的反応表面にわたって捕捉するために、ＨＥＰＥＳ緩衝化された生理的食塩水中に、精製されたＤＶＤ−Ｉｇ試料を希釈し、５ｍＬ／分の流速で、反応マトリックス上に注入した。２５ｍＬ／分の連続的流速下で、会合及び解離速度定数ｋｏｎ（Ｍ−１ｓ−１）及びｋｏｆｆ（ｓ−１）を測定した。１．２５から１０００ｎＭの範囲にわたる１０個の異なる抗原濃度で速度論結合測定を行うことによって、速度定数を導いた。次いで、以下の式：ＫＤ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎによって、速度論的速度定数から、ＤＶＤ−ＩｇとｒｈＩＬ１α／β間の反応の平衡解離定数（Ｍ）を計算した。全ての非特異的結合バックグラウンドを記録し、差し引いて、屈折率の変化及び注入のノイズの大半を除去するために、ｒｈＩＬ１α／β試料の分取試料も、ブランク参照及び反応ＣＭ表面上に同時に注入した。その後、５ｍＬ／分の流速で、１０ｍＭグリシン（ｐＨ１．５）の２５ｍＬを２回注入して、表面を再生した。抗Ｆｃ抗体が固定化された表面が完全に再生され、１２サイクルにわたって、完全な捕捉能を維持した。以下の式：
【０２６１】
【数１】
2009504191.tif 000019
を用いて、飽和結合条件（定常状態平衡）下で、捕捉されたＤＶＤ−Ｉｇ−ｒｈＩＬ１αβ複合体の見かけの化学量論を計算した。
【０２６２】
Ｂｉａｃｏｒｅ分析は、キメラＡｂが、元のハイブリドーマｍＡｂと同様の類似の結合速度論及びＩＬ−１への親和性を有することを示し、正しいＶＬ／ＶＨ配列が単離されたことを示唆している（表ＩＩＩ）。ｈＩＬ−１αへの２つのＤＶＤ−Ｉｇの全体的な結合パラメータは類似しており、ＤＶＤ−Ｉｇの親和性は、キメラ３Ｄ１２．Ｅ３Ａｂの親和性より、２から３倍低いに過ぎなかった。ＤＶＤ２−ＩｇのｈＩＬ−１βへの結合親和性は、キメラＡｂ１３Ｆ５．Ｇ５より若干低かったが、ＤＶＤ１−Ｉｇの親和性より３倍高かった。ＩＬ−１に対する化学量論の評価によって示されたところによれば、ｈＩＬ−１に対するキメラＡｂの親和性と比較した、ｈＩＬ−１に対する２つのＤＶＤ−Ｉｇの親和性は同様であった。二価の単一特異的である両キメラＡｂは、それぞれ、１．６及び１．７の化学量論で、Ｂｉｏｃｏｒｅ上のＩＬ−１α及びＩＬ−１βに結合された。これは、抗体がＢｉａｃｏｒｅセンスチップ上に密に固定化された場合の分子間妨害のために、ＩｇＧに対して共通しており、化学量論は１．５から２．０の範囲である。ｈＩＬ−１α及びｈＩＬ−１βに対する両ＤＶＤ−Ｉｇの化学量論は、２つのキメラＡｂの化学量論と類似しており、両ＤＶＤ−Ｉｇは各抗原に対して二価の結合能を有することを示唆している。
【０２６３】
【表１３】
2009504191.tif 000020
【０２６４】
さらに、ＤＶＤ−Ｉｇの四価二重特異的抗原結合も、Ｂｉａｃｏｒｅによって分析した（表１４）。Ｂｉａｃｏｒｅセンサーチップ上のヤギ抗ヒトＦｃ抗体を介して、まず、ＤＶＤ−Ｉｇが捕捉され、第一の抗原を注入し、結合シグナルを観察した。第一の抗原によってＤＶＤ−Ｉｇが飽和されるにつれて、次いで、第二の抗原を注入し、第二のシグナルを観察した。ＤＶＤ２−Ｉｇについては、まず、ＩＬ−１βを注入した後ＩＬ−１αを注入し、又はまずＩＬ−１αを注入した後、ＩＬ−１βを注入することによって、これを行った。何れの配列においても、二重結合活性が検出された。ＤＶＤ１−Ｉｇについても、同様の結果が得られた。このように、各ＤＶＤ−Ｉｇは、二重特異的四価分子として、両抗原を同時に結合することができた。表ＩＶに示されているように、第一の抗原（ｈＩＬ−１α又はｈＩＬ−１βの何れか）に対する両ＤＶＤ−Ｉｇの化学量論は１．５より大きく、単一特異的二価結合の化学量論と同様であった。第二の抗原を注入すると、ＤＶＤ−Ｉｇは第一の抗原によって既に占領されていたが、第二の抗原（すなわち、ｈＩＬ−１α又はｈＩＬ−１βの何れか）に対する両ＤＶＤ−Ｉｇの化学量論は、１．０と１．３の間であった。このように、ＤＶＤ−Ｉｇは、２つのＩＬ−１α及び２つのＩＬ−β分子に結合することができる。Ｂｉａｃｏｒｅセンサーチップ上のヤギ抗ヒトＦｃ抗体を介して、まず、ＤＶＤ−Ｉｇを捕捉し、第一の抗原を注入し、結合シグナルを観察した後、第二の抗原を注入した。
【０２６５】
【表１４】
2009504191.tif 000021
【０２６６】
（実施例１．７）
ＤＶＤ−Ｉｇの機能的均一性の測定
ＤＶＤ２−Ｉｇは、標的特異的アフィニティークロマトグラフィーに代えて、プロテインＡクロマトグラフィーによって精製されたので、誤って折り畳まれた及び／又は誤った対を為した何れかのＶＬ／ＶＨドメインが存在する場合には、２つの異なる抗原に対する結合研究によって評価することが可能である。このような結合分析は、サイズ排除液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって実施された。ＤＶＤ２−Ｉｇは、単独で、又はＩＬ−１α、ＩＬ−１β若しくは等モル比のＩＬ−１α及びＩＬ−１βの両方との、３７℃で１２０分の温置期間後に、カラムにかけた。抗原の各々は、対照として、単独でも走行させた。ＳＥＣの結果は、ＤＶＤ２−Ｉｇが溶液中のＩＬ−１α及びＩＬ−１βを結合可能であり、このような結合は、ＳＥＣシグナルに対するシフト（何れかの抗原と複合体を形成した場合に、ＤＶＤ２−Ｉｇの動的サイズの増加を示す。）をもたらすことを示した。ＤＶＤ２−Ｉｇシグナルのシフトは、部分的でなく、１００％であったので、すべてのＤＶＤ−２Ｉｇ分子が抗原を結合できることを示唆する。ＩＬ−１α及びＩＬ−１βの両者の存在下では、ＤＶＤ２−Ｉｇシグナルのさらなる、完全なシフトが存在し、すべてのＤＶＤ２−Ｉｇ分子が、両抗原を均一な様式で結合できることを示している。本実験は、ＤＶＤ−Ｉｇが、機能的に均一なタンパク質として発現されることを示した。これは、ＤＶＤ−Ｉｇが、以前に記載された全ての二特異的、多重特異的及び多価イムノグロブリン様及びイムノグロブリン由来分子とは異なる均一な単一の機能的種として産生できることを示しているので、重要な示唆を有する。
【０２６７】
（実施例１．８）
ＤＶＤ−Ｉｇの生物学的活性の測定
ＭＲＣ−５バイオアッセイを用いてＤＶＤ−Ｉｇの生物学的活性を測定した。ＭＲＣ−５細胞株は、用量依存的様式で、ヒトＩＬ−１α及びＩＬ−１βに応答してＩＬ−８を産生するヒト肺繊維芽細胞株である。ＭＲＣ−５細胞は、ＡＴＣＣから取得し、１０％ＦＢＳ完全ＭＥＭ中、５％ＣＯ２インキュベータ中で、３７℃で培養した。ヒトＩＬ−１α及びＩＬ−１βに対するＤＶＤ−Ｉｇの中和活性を測定するために、ＭＥＭ／１０％ＦＢＳ中のＡｂの５０μＬ（１Ｅ−７から１１Ｅ−１２Ｍ）を９６ウェルプレートに添加し、３７℃、５％ＣＯ２で１時間、ｈＩＬ−１α又はｈＩＬ−１βの５０μＬ（２００ｐｇ／ｍＬ）とともに予め温置した。次いで、１Ｅ５／ｍＬの濃度のＭＲＣ−５細胞を全てのウェルに添加し（１００μＬ）、５％ＣＯ２のインキュベータ中、３７℃で、プレートを一晩温置した。上清を採集し、標準的なＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）によって、ヒトＩＬ−８産生を測定した。ＤＶＤ−Ｉｇの中和活性は、ＤＶＤ−ＩｇがＩＬ−８産生を阻害する能力によって測定した。
【０２６８】
表１３に示されているように、両ＤＶＤ−Ｉｇは、ｈＩＬ−１α及びｈＩＬ−１βを中和することができた。ｈＩＬ−１αへの結合親和性に合致して、ｈＩＬ−１αに対するＤＶＤ１−Ｉｇ及びＤＶＤ２−Ｉｇの中和活性も同様であった（すなわち、キメラＡｂの中和活性の１／３（表ＩＩＩ参照））。ｈＩＬ−１βに対するその結合親和性と合致して、ｈＩＬ−１βに対するＤＶＤ２−Ｉｇの中和活性は、キメラＡｂ１３Ｆ５．Ｇ５の中和活性より若干低いが、ＤＶＤ１−Ｉｇの親和性より３倍高かった。総じて、元のｍＡｂと比較して、ＤＶＤ−Ｉｇ分子の生物学的活性には、著しい減少は存在しなかった。
【０２６９】
ＤＶＤ−Ｉｇが、ＩＬ−１α及びＩＬ−１βの両方の存在下で、ＩＬ−８産生を阻害できるかどうかを決定するために、ＭＲＣ−５アッセイの同じ培養系中にｈＩＬ−１αとｈＩＬ−１βの等量を添加した。ＤＶＤ１−Ｉｇ及びＤＶＤ２−Ｉｇは何れも、１つのサイトカインのみが存在するモノアッセイの活性と同様の活性で、ＩＬ−１α及びＩＬ−１βの両方の存在下において、ＭＲＣ−５細胞によるＩＬ−８合成を阻害することができた（表１３）。ＩＬ−１αとＩＬ−１βがともに存在する本アッセイにおいて、ＤＶＤ２−Ｉｇの二重阻害活性（１．２ｎＭ）は、ＤＶＤ１−ＩＧの二重阻害活性（２．２ｎＭ）より高かった。
【０２７０】
（実施例２）
ＤＶＤ−Ｉｇ分子中のリンカーサイズ及び可変ドメインの配向の分析
表１５に示されているように、異なる親ｍＡｂ対を有するさらなるＤＶＤ−Ｉｇ分子を構築した。ｍＡｂの各対に対して、それぞれ２つの異なるドメイン配向ａ−ｂ−Ｃ（α−β定常ドメイン）及びｂ−ａ−Ｃ（β−α定常ドメイン）で、４つの異なるＤＶＤ−Ｉｇ構築物（短いリンカーを有する２つ及び長いリンカーを有する２つ）を作製した。リンカー配列は、以下に示されているように、ヒトＣｋ又はＣＨ１ドメインのＮ末端配列に由来した。
【０２７１】
短いリンカー：軽鎖：ＴＶＡＡＰ；重鎖：ＡＳＴＫＧＰ
長いリンカー：軽鎖：ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ；重鎖ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ
全ての重鎖及び軽鎖構築物を、ｐＢＯＳ発現ベクター中にサブクローニングし、ＣＯＳ細胞又はフリースタイル２９３細胞中で発現させた。
【０２７２】
新しいＤＶＤクローンを構築するために、ｈＩＬ−１ａｂＤＶＤ１−Ｉｇ及びｈＩＬ−１ａｂＤＶＤ２−Ｉｇに対して記載されているように、重複ＰＣＲを用いて、２つのｍＡｂの可変ドメイン（軽鎖及び重鎖の両方）を、まず、直列に連結した。次いで、相同的組み換えを用いて、前記連結された片をｐＢＯＳベクター中にサブクローニングした。要約すれば、制限消化によって、ベクターを直鎖化した（ｐＢＯＳ−ｈＣｋベクター２μｇを、Ｏ＋緩衝液中のＦａｐＡＩ及びＢｓｉＷＩで消化し、並びにｐＢＳＯ−ｈＣγｚ、ｎｏｎ  ａ、ベクター２μｇを、Ｏ＋緩衝液中のＦｓｐＡＩ及びＳａＩＩで消化した。）。１％アガロースゲル上で、消化された試料を走行させ、骨格断片を５０μＬの水中に精製した。相同的組み換え及び形質転換のために、ＤＨ５α形質転換受容性細胞を氷上で融解し、２０から５０ｎｇの連結されたＰＣＲ産物及び直鎖化されたベクター２０から５０ｎｇと混合した（全ての５０μＬＤＨ５α細胞中）。混合物を穏やかに混合し、４５分間、氷上で温置した後、４２℃で１分間、熱ショックを与えた。次いで、１００μＬのＳＯＣ培地を添加し、３７℃で１時間温置した。アンピシリンを含有するＬＢ／寒天プレート上で、形質転換培養物を播種し、３７℃で１８から２０時間温置した。細菌クローンを単離し、そこからＤＮＡを精製し、配列決定分析に供した。以前に記載したように、Ａｂ発現及び精製のために、ＣＯＳ又は２９３細胞中に、最終配列が確認されたクローンを同時形質移入した（同じＡｂ対のＨＶ及びＬＣをマッチングさせる。）。
【０２７３】
精製されたＤＶＤ−Ｉｇタンパク質の特性は、表１６に要約されている。表１６の左側部分は、新しいｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ−１ｇ分子の構築のために使用されたｍＡｂの２つの対の特異性、結合親和性及び中和能を示している。ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ３ａ−Ｉｇ、ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ４ａ−Ｉｇ，ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ３ｂ−Ｉｇ及びｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ４ｂ−Ｉｇを構築するために、抗体１８Ｆ４．２Ｃ８及び１Ｂ１２．４Ｈ４（実施例１．１．Ｄ参照）を使用した。ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ３ａ−Ｉｇ及びｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ４ａ−Ｉｇは、ａ−ｂ−Ｃの配向であり、それぞれ、短いリンカー及び長いリンカーを有する。ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ３ｂ−Ｉｇ及びｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ４ｂ−Ｉｇは、ｂ−ａ−Ｃの配向であり、それぞれ、短いリンカー及び長いリンカーを有する。ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ５ａ−Ｉｇ、ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ６ａ−Ｉｇ，ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ５ｂ−Ｉｇ及びｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ６ｂ−Ｉｇを構築するために、抗体６Ｈ３．１Ａ４及び６Ｂ１２．４Ｆ６を使用した。ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ５ａ−Ｉｇ及びｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ６ａ−Ｉｇは、ａ−ｂ−Ｃの配向であり、それぞれ、短いリンカー及び長いリンカーを有する。ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ５ｂ−Ｉｇ及びｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ６ｂ−Ｉｇは、ｂ−ａ−Ｃの配向であり、それぞれ、短いリンカー及び長いリンカーを有する。ｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ１−Ｉｇに対して先述した操作を使用し（実施例１．３参照）、重複ＰＣＲ操作を用いて、これらの追加のｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ−Ｉｇの分子クローニングを行った。これらの追加のｈＩＬ−１ａ／ｂＤＶＤ−Ｉｇのアミノ酸配列は、表１５に開示されている。
【０２７４】
【表１５】
2009504191.tif 000022
2009504191.tif 000023
2009504191.tif 000024
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2009504191.tif 000032
2009504191.tif 000033
【０２７５】
新規ＤＶＤ構築物の特徴は、表１６に要約されている。親和性（Ｋｄ）及び生物学的活性（ＩＣ５０）は、それぞれ、Ｂｉａｃｏｒｅ及びＭＲＣ−５バイオアッセイによって測定した。全ての新規ＤＶＤタンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析は、還元条件及び非還元条件の両方で、通常の抗体及びＤＶＤ１／２−Ｉｇと同様の正常な移動パターンを示した。
【０２７６】
【表１６】
2009504191.tif 000034
【０２７７】
新しいＤＶＤ分子の機能的な性質決定は、何れの配向においても、両抗原の結合及び中和の点で、長いリンカーを有するＤＶＤは、短いリンカーを有するＤＶＤに比べて成績が優れていた。長いリンカーを有するＤＶＤに関しては、ｂ−ａ−Ｃの配向を有するＤＶＤは、両抗原への優れた結合及び両抗原の優れた中和を示したが、ａ−ｂ−Ｃ配向を有するＤＶＤは、ＩＬ−１αへの優れた結合及びＩＬ−αの優れた中和を示したが、ＩＬ−１βへの結合及びＩＬ−βの中和は低下していた（例えば、ＤＶＤ４ｂ対ＤＶＤ４ａ）。ＤＶＤ−Ｉｇ分子、ＤＶＤ４ｂは、ＩＬ−１α及びＩＬ−１βの両方を、ｎＭ未満で結合及び中和し、親ｍＡｂの結合及び中和特性を完全に保持していた。
【０２７８】
（実施例３）
ＩＬ−１２及びＩＬ−１８を結合できるＤＶＤ−Ｉｇの作製
ＩＬ−１２及びＥＬ−１８を結合できるＤＶＤ−Ｉｇ分子を、上述のとおり、１つがヒトＩＬ−１２ｐ４０に対するもの（ＡＢＴ８７４）、もう１つがヒトＥＬ−１８に対するもの（ＡＢＴ３２５）である２つの親モノクローナル抗体を使用して構築した。４つの異なる抗ＩＬ−１２／１８ＤＶＤ−Ｉｇ構築物を作製し、２つは短いリンカーを、２つは長いリンカーを有し、各々２つの異なるドメイン配向：１２−１８−Ｃ及び１８−１２−Ｃであった（表ＶＩ）。ヒトＣλ／Ｃｋ又はＣＨ１ドメインのＮ末端配列由来のリンカー配列は、次のとおりであった。
【０２７９】
ＤＶＤ１２１８構築物（ＡＢＴ８７４はＶλを有する。）に関して：
軽鎖（λ）：短いリンカー：ＱＰＫＡＡＰ、長いリンカー：ＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰ、
重鎖（ｖｌ）：短いリンカー：ＡＳＴＫＧＰ、長いリンカー：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ、
ＤＶＤ１８１２構築物（ＡＢＴ３２５は、Ｖｋを有する。）に関して：
軽鎖（ｋ）：短いリンカー：ＴＶＡＡＰ、長いリンカー：ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰ、
重鎖（ｖｌ）：短いリンカー：ＡＳＴＫＧＰ、長いリンカー：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ。
【０２８０】
全ての重鎖及び軽鎖作製をｐＢＯＳ発現ベクター中にサブクローニングし、ＣＯＳ細胞又はフリースタイル２９３細胞中で発現させた後、タンパク質Ａクロマトグラフィーにより精製した。精製した材料をＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びＳＥＣへ供し、それらの特性は、ＤＶＤ２−Ｉｇのものと同様であった。
【０２８１】
以下の表１７は、各抗ＩＬ１２／Ｌ１８  ＤＶＤ−Ｉｇタンパク質を発現させるために使用した重鎖及び軽鎖の作製を記載する。
【０２８２】
【表１７】
2009504191.tif 000035
【０２８３】
実施例３．１．１：ＤＶＤ１２１８ＳＬ及びＤＶＤ１２１８ＬＬのためのＤＮＡ作製の分子クローニング
重鎖構築物ＤＶＤ１２１８ＨＣ−ＬＬ及びＤＶＤ１２１８ＨＣ−ＳＬを作製するために、それぞれプライマー１及びプライマー２Ｌ又はプライマー２Ｓを使用して、ＡＢＴ−８７４のＶＨドメインをＰＣＲ増幅したのに対して、それぞれプライマー３Ｌ若しくはプライマー３Ｓ及びプライマー４を使用して、ＡＢＴ−３２５のＶＨドメインを増幅した。標準的なＰＣＲ技術及び手法に従って、両ＰＣＲ反応を実施した。２つのＰＣＲ産物をゲル精製し、標準的なＰＣＲ条件を使用して、プライマー１及びプライマー４を使用するその後の重複ＰＣＲ反応のための重複テンプレートとして一緒に使用した。哺乳動物以外の発現ベクターであるｐＢＯＳ−ｈＣｖｌ（Ａｂｂｏｔｔ）を、Ｓｒｆ１及びＳａｌＩで二重消化したものに対して、標準的な相同性組換えアプローチを使用することによって、重複しているＰＣＲ産物をサブクローニングした。
【０２８４】
軽鎖構築物ＤＶＤ１２１８ＬＣ−ＬＬ及びＤＶＤ１２１８ＬＣ−ＳＬを作製するために、それぞれ、プライマー５及びプライマー６Ｌ又はプライマー６Ｓを使用して、ＡＢＴ−８７４のＶＬドメインをＰＣＲ増幅したのに対して、それぞれ、プライマー７Ｌ若しくはプライマー７Ｓ及びプライマー８を使用して、ＡＢＴ−３２５のＶＬドメインを増幅した。標準的なＰＣＲ技術及び手法に従って、両ＰＣＲ反応を実施した。２つのＰＣＲ産物をゲル精製し、標準的なＰＣＲ条件を使用して、プライマー５及びプライマー８を使用するその後の重複ＰＣＲ反応のための重複テンプレートとして一緒に使用した。ｐＢＯＳ−ｈＣｋｌ哺乳動物発現ベクターである（Ａｂｂｏｔｔ）をＳｒｆ１及びＮｏｔＩで二重消化したものに対して、標準的な相同性組換えアプローチを使用することによって、重複しているＰＣＲ産物をサブクローニングした。これらの構築のために使用したプライマーを以下の表１８に列挙する。
【０２８５】
【表１８】
2009504191.tif 000036
【０２８６】
以下に記載されているように、ＤＶＤ１８１２ＳＬ及びＤＶＤ１８１２ＬＬを作製するために、類似のアプローチが使用された。
【０２８７】
実施例３．１．２：ＤＶＤ１８１２ＳＬ及びＤＶＤ１８１２ＬＬのためのＤＮＡ作製の分子クローニング
重鎖構築物ＤＶＤ１８１２ＨＣ−ＬＬ及びＤＶＤ１８１２ＨＣ−ＳＬを作製するために、それぞれ、プライマー１及びプライマー９Ｌ又はプライマー９Ｓを使用して、ＡＢＴ−３２５のＶＨドメインをＰＣＲ精製した。それぞれ、プライマー１０Ｌ又はプライマー１０Ｓ及びプライマー４を使用して、ＡＢＴ−８７４のＶＨドメインを増幅した。標準的なＰＣＲ技術及び手法に従って、両ＰＣＲ反応を実施した。２つのＰＣＲ産物をゲル精製し、標準的なＰＣＲ条件を使用して、プライマー１及びプライマー４を使用するその後の重複ＰＣＲ反応のための重複テンプレートとして一緒に使用した。哺乳動物以外の発現ベクターであるｐＢＯＳ−ｈＣｖｌ（Ａｂｂｏｔｔ）を、Ｓｒｆ１及びＳａｌＩで二重消化したものに対して、標準的な相同性組換えアプローチを使用することによって、重複しているＰＣＲ産物をサブクローニングした。以下は、プライマーの配列である。
【０２８８】
軽鎖構築物ＤＶＤ１８１２ＬＣ−ＬＬ及びＤＶＤ１８１２ＬＣ−ＳＬを作製するために、それぞれ、プライマー１１及びプライマー１２Ｌ又はプライマー１２Ｓを使用して、ＡＢＴ−３２５のＶＬドメインをＰＣＲ増幅したのに対して、それぞれ、プライマー１３Ｌ又はプライマー１３Ｓ及びプライマー１４を使用して、ＡＢＴ−８７４のＶＬドメインを増幅した。標準的なＰＣＲ技術及び手法に従って、両ＰＣＲ反応を実施した。２つのＰＣＲ産物をゲル精製し、標準的なＰＣＲ条件を使用して、プライマー１１及びプライマー１４を使用するその後の重複ＰＣＲ反応のための重複テンプレートとして一緒に使用した。ｐＢＯＳ−ｈＣｋｌ哺乳動物発現ベクターである（Ａｂｂｏｔｔ）をＳｒｆ１及びＮｏｔＩで二重消化したものに対して、標準的な相同性組換えアプローチを使用することによって、重複しているＰＣＲ産物をサブクローニングした。これらの構築のために使用されるプライマーを以下の表１９に列挙する。
【０２８９】
【表１９】
2009504191.tif 000037
2009504191.tif 000038
【０２９０】
抗ＩＬ１２／Ｌ−１８  ＤＶＤ−Ｉｇの８個の重鎖及び軽鎖作製のための最終的なＤＮＡ配列は、表２０に示されているとおりである。
【０２９１】
【表２０】
2009504191.tif 000039
2009504191.tif 000040
2009504191.tif 000041
2009504191.tif 000042
2009504191.tif 000043
2009504191.tif 000044
2009504191.tif 000045
【０２９２】
（実施例３．２）
ＩＬ−１２／Ｌ−１８ＤＶＤＩｇの抗原結合親和性の測定
ｈＩＬ−１２及びｈＩＬ−１８に対する抗ＩＬ−１２／１８ＤＶＤ−Ｉｇの結合親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した（表２１）。ＥＬ−１８に対する中和活性は、ＫＧ−１アッセイによって測定した（Ｋｏｎｉｓｈｉ，Ｋ，ｅｔ  ａｌ．）。簡潔に述べると、（２ｎｇ／ｍＬの最終濃度の）ＩＬ−１８試料を、（０ｍｇ／ｍＬと１０ｍｇ／ｍＬの間の最終濃度の）ＤＶＤ−Ｉｇとともに３７℃で１時間、予め温置した後、１０ｎｇ／ｍＬのｈＴＮＦを含有するＲＰＭＩ培地中のＫＧ−１細胞（３×１０６個／ｍＬ）へ添加した後、３７℃で１６ないし２０時間温置した。培養上清を回収し、各試料中のヒトＩＦＮ−γ生成をＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって測定した。ＩＣ５０値として表されるＩＬ−１８に対するＤＶＤ分子の阻害活性を表６に示す。ＩＬ−１２に対する抗ＩＬ−１２／１８  ＤＶＤ分子の阻害活性を測定するために、活性化されたＰＨＡ芽細胞からＩＬ−１２によって誘導されるＩＦＮ−γ生成アッセイを利用した（Ｄ’Ａｎｄｒｅａ，Ａ  ｅｔ  ａｌ．）。ヒトＩＦＮ−γを産生するために、ＰＨＡ芽細胞を、ヒトＩＬ−１２とともに１８時間温置した。２００ｐｇ／ｍＬのヒトＩＬ−１２濃度で、最大を下回る刺激（最大の５５ないし７５％）を得た。特異的ヒトＩＦＮ−γＥＬＩＳＡ（Ｅｎｄｏｇｅｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）を使用して、ＩＦＮ−γに関して上清をアッセイした。ＩＬ−１２ＤＶＤを中和することによって、ＩＬ−１２によって誘導されるＩＦＮ−γ産生が妨害される。表２１に示されているように、ヒトＰＨＡ芽細胞によるＩＦＮ−γ産生の５０％を阻害するために必要なＤＶＤ濃度を測定することによって、ＤＶＤの中和活性を測定した。
【０２９３】
Ｂｉａｃｏｒｅによって親和性（Ｋｄ）を測定し、ＫＧ−１バイオアッセイ（ＩＬ−１８）及びＰＢＭＣアッセイ（ＩＬ−１２）により作用強度を測定した。
【０２９４】
【表２１】
2009504191.tif 000046
【０２９５】
表２１は、抗ＤＬ−１２／ＩＬ−１８ＤＶＤ分子の構築に使用された２つの完全なヒトモノクローナル抗体の特異性、結合親和性及び中和活性を示す。表ＶＩに示されているように、これらのモノクローナル抗体は、高い親和性及び中和活性を有する。抗ＩＬ−１８／ＩＬ−１２ＤＶＤ作製の特徴の要約が表ＶＩに示されている。全ての新たなＤＶＤタンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析は、通常の抗体及びＤＶＤ１／２−Ｉｇと同様に、還元条件及び非還元条件の両者で正常な移動パターンを示した。ＳＥＣ分析は、全ての分子が正常であることを示し、２００ｋＤ領域においてピークを呈した。Ｂｉａｃｏｒｅ結合データは、生物学的アッセイにおいて中和活性と一致する。
【０２９６】
（実施例３．３）
インビボでの抗ＩＬ−１２／ＩＬ−１８ＤＶＤ−Ｉｇの生物活性
ｈｕＰＢＭＣ−ＳＣＩＤマウスモデルを使用して、インビボでの抗ＤＬ−１２／ＩＬ−１８ＤＶＤ−Ｉｇの生物活性を測定した。本モデルにおいて、抗ＩＬ−１２抗体（ＡＢＴ−８７４）、抗ＥＬ−１８抗体（ＡＢＴ−３２５）又は抗ＩＬ−１２／抗ＩＬ−１８ＤＶＤ−Ｉｇを腹腔内又は静脈内注射した（２５０ｍｇ／各マウス）後、新たに精製したヒトＰＢＭＣ（ｈｕＰＢＭＣ）を、ＳＣＩＤマウスへ腹腔内注射した。１５分後、乾燥黄色ブドウ球菌細胞（ＳＡＣ）をマウスに投与し、ヒトＩＦＮγ産生を誘導した。動物（ｎ＝７ないし８匹／群）を１８ないし２０時間後に屠殺し、血清ｈｕＩＦＮγレベルをＥＬＩＳＡにより測定した。ＡＢＴ８７４及びＡＢＴ−３２５は、ＳＡＣにより誘導されるＩＦＮγを７０％阻害し、本モデルにおける各化合物での最大ＩＦＮγ阻害に相当する。しかしながら、ＡＢＴ−８７４＋ＡＢＴ−３２５及び抗ＩＬ−１２／抗ＩＬ−１８ＤＶＤ−Ｉｇでマウスを処理すると、ＩＦＮγ生成をほぼ１００％阻害した。これらの結果は、抗ＩＬ−１２／抗ＩＬ−１８ＤＶＤ−Ｉｇ分子が、インビボで機能的に活性があることを示唆する。
【０２９７】
（実施例３．４）
抗ＩＬ−１２／ＩＬ−１８ＤＶＤ−Ｉｇの薬物動態学的及び薬力学的研究
抗ＥＬ−１２／ＩＬ−１８ＤＶＤ−Ｉｇの全般的な薬物動態学的及び薬力学的特性は、マウスにおいて親モノクローナル抗体と同様である。すなわち、７３％の生物学的利用率であり、通常のＩｇＧに匹敵した。おそらくは、抗ヒトＩｇＧ反応のために、類似の薬物動態学的特徴、すなわち第６ないし８日の後の迅速なクリアランスも、他のモノクローナル抗体（例、ヒト、ラット等）について観察された。
【０２９８】
雄のＳＤラットに、４ｍｇ／ｋｇで、抗ＩＬ−１２／ＩＬ−１８ＤＶＤ−Ｉｇを静脈内注射又は皮下注射の何れかで投与した。ＰＫ曲線の初期の部分は正常に見え、他のヒト抗体のものと極めて類似していた。第６日目に始まるＤＶＤ−Ｉｇの迅速なクリアランスのために、両群における正確な半減期は得られなかった。第６日目後のＤＶＤ−Ｉｇ濃度の急激な低下は、ＲＡＨＡ反応によるものであり得る。しかしながら、既に研究されている他の単一特異的ヒト抗体のみならず、本実験において、このＤＶＤ−Ｉｇの構築のために使用された親抗体（ＡＢＴ−８７４）の１つについても、同様の特性が観察された。皮下注射及び静脈内注射の両者で、第６日までのＤＶＤ−Ｉｇ濃度に基づいて、ＤＶＤ−Ｉｇの生物学的利用率を概算した。３匹のうちの２匹のラットで、８０ないし９５％の生物学的利用率が示され、３匹の間数の平均生物学的利用率は７３％であった。
【０２９９】
（実施例３．５）
抗ＩＬ−１２／抗ＩＬ−１８ＤＶＤ−Ｉｇの物理的／化学的特徴
２９３細胞由来の、プロテインＡによって精製された抗ＩＬ−１２／抗ＩＬ−１８ＤＶＤ−Ｉｇの物理的及び化学的特徴の結果が、表２２に要約されている。
【０３００】
【表２２】
2009504191.tif 000047
【０３０１】
（実施例３．６）
更なる抗１２／抗１８  ＤＶＤ−Ｉｇ（１Ｄ４．１−ＡＢＴ３２５）の作製
表２３に示されているように、異なる親抗ＩＬ−１２モノクローナル抗体（クローン番号１Ｄ４．１）の更なる抗ＥＬ−１２／ＩＬ−１８ＤＶＤ−Ｉｇ分子を構築した。以下のような、ヒトＣｋ及びＣＨ１ドメインのＮ末端配列由来の短いリンカーを用いて、１Ｄ４．１−ＡＢＴ３２５ＤＶＤ−Ｉｇ構築物を作製した。
【０３０２】
短いリンカー：軽鎖：ＴＶＡＡＰ、重鎖：ＡＳＴＫＧＰ
全ての重鎖及び軽鎖作製を、ｐＢＯＳ発現ベクター中にサブクローニングし、ＣＯＳ細胞又はフリースタイル２９３細胞中で発現させた後、上述のとおり性質決定した。１Ｄ４．１−ＡＢＴ３２５  ＤＶＤ−Ｏｇは、２つのもとのモノクローナル抗体の活性を完全に保持する（表２４）。
【０３０３】
【表２３】
2009504191.tif 000048
2009504191.tif 000049
【０３０４】
【表２４】
2009504191.tif 000050
【０３０５】
（実施例４）
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ＤＶＤ−Ｉｇの作製
マウス抗ヒトＣＤ２０（クローン５Ｆ１）及び抗ヒトＣＤ３（クローンＯＫＴ３）親抗体を使用して、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３  ＤＶＤ−Ｉｇを生成した。最初の構築物は、異なるドメイン配向を有する２つのＤＶＤ−Ｉｇを含んだ。ＶＣＤ３−リンカーＶＣＤ２０−定常の順序で、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０ＤＶＤ−Ｉｇを構築し、ＶＣＤ２０−リンカー−ＶＣＤ３−定常の順序で、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３  ＤＶＤ−Ｉｇを構築した。しかしながら、予備的な細胞表面結合研究において、抗ＣＤ２０結合活性は、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０ＤＶＤ−Ｉｇ分子中で低下したが、抗ＣＤ３活性は、本デザインにおいて保存された。これに対して、抗ＣＤ３結合活性及び抗ＣＤ２０結合活性は何れも、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ＤＶＤ−Ｉｇ中で完全に保存され、これは、ＤＶＤ−Ｉｇフォーマットにおけるこれら２つのモノクローナル抗体／標的の組み合わせに関して、最適なドメイン配向であることを示した。従って、その後の研究のために、抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ＤＶＤ−Ｉｇ構築物を選択した。
【０３０６】
抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３  ＤＶＤ−ＩｇをキメラＩｇとして作製した。すなわち、定常領域は、ヒト定常領域であった。結合分析のため、ヒトＴ細胞株ジャーカット及びＢ細胞株ラジ（Ｒａｊｉ）をヒトＩｇＧでブロックした後、マウス抗ｈＣＤ３モノクローナル抗体ＯＫＴ３、マウス抗ｈＣＤ２０モノクローナル抗体１Ｆ５、及び抗ＣＤ２０／抗ＣＤ３ＤＶＤ−Ｉｇで染色した。次に、細胞を洗浄し、ＦＩＴＣ標識したヤギ抗マウスＩｇＧ（抗ｈＩｇＧとの交差反応性は存在しない。）で染色した。抗ＣＤ２０／ＣＤ３ＤＶＤ−Ｉｇは、Ｔ細胞及びＢ細胞の両者に結合したのに対し、ＣＤ３及びＣＤ２０モノクローナル抗体は、それぞれ、Ｔ細胞のみ又はＢ細胞のみに結合した。ＣＤ２０／ＣＤ３ＤＶＤ−Ｉｇのアミノ酸配列は、表２５に開示されている。
【０３０７】
【表２５】
2009504191.tif 000051
2009504191.tif 000052
2009504191.tif 000053
【０３０８】
（実施例５）
ｍＩＬ−１α／βＤＶＤ−Ｉｇの作製
薬物動態、インビボでの有効性、組織浸透及びＤＶＤ−Ｉｇ分子の免疫原性に関する重要な問題を研究するために、以下に記載されているように、マウス抗マウスＥＬ１α／βＤＶＤ−Ｉｇ分子を構築した。
【０３０９】
（実施例５．１）
ｍＩＬ−１α／βＤＶＤ−Ｉｇの構築
ＤＬ１αβ二重ノックアウトマウスから作製された２つのマウス抗マウスＩＬ−１α／βモノクローナル抗体（９Ｈ１０及び１０Ｇ１１）を使用して、抗マウスＩＬ−１α／βＤＶＤ−Ｉｇ分子を構築した。それぞれ、マウスＩＬ−１α又はマウスＩＬ−１βでＩＬ−１α／β二重ノックアウトマウスを免疫化することによって、マウス抗マウスＤＬ−１ａ及びマウス抗マウスＩＬ−１βのモノクローナル抗体を生成した。１つのマウス抗マウスＩＬ−１α（クローン９Ｈ１０）及び１つのマウス抗マウスＩＬ−１βモノクローナル抗体（クローン１０Ｇ１１）を選択し、ｍＩＬ−１α／βＤＶＤ−Ｉｇ分子を作製するために使用した。多様なリンカーサイズ及び異なるドメイン配向を検査した。Ｖ（抗ｍＩＬ−１β）−リンカー−Ｖ（抗ｍＩＬ−１β）−マウス定常部（Ｃγ２ａ及びＣＫ）の向きで、最終的な機能的ｍＩＬ−１α／βＤＶＤ−Ｉｇ分子を構築した。クローニング、発現及び精製手法は、ｈＩＬ−１α／βＤＶＤ−Ｉｇのものと同様であった。ｈＩＬ−１α／βＤＶＤ３−Ｉｇに関して記載されているものと同様の重複ＰＣＲ及び相同的組換えを使用して、ｍＩＬ−１α／βＤＶＤ−Ｉｇのクローニングを実施した。ｍＩＬ−１α／βＤＶＤ−Ｉｇの配列を以下の表２６に示す。
【０３１０】
【表２６】
2009504191.tif 000054
2009504191.tif 000055
【０３１１】
マウスｍＩＬ−１α／βＤＶＤ−Ｉｇは、ＩＬ−１α及びＩＬ−１βの両者に対して親和性／インビトロでの有効性を保持した。表２７は、モノクローナル抗体９Ｈ１０（抗ｍ１Ｌ−１α）、１０Ｇ１１（抗ｍ１Ｌ−１β）及びｍＩＬ−１α／βＤＶＤ−Ｉｇの性質決定を示す。
【０３１２】
【表２７】
2009504191.tif 000056
【０３１３】
（実施例５．２）
関節炎モデルにおけるｍＩＬ−ロット／βＤＶＤ−Ｉｇのインビボでの活性
抗ＥＬ−１α、抗ＩＬ−１β、組み合わされた抗ＩＬ−１α／抗ＩＬ−１β、及びマウス抗ＩＬ−１α／βＤＶＤ４−Ｉｇの治療効果を、本分野で周知のコラーゲン誘発性関節炎マウスモデルにおいて評価した。簡潔に述べると、ＣＦＡ中のウシＩＩ型コラーゲンを使用して、雄ＤＢＡ−１マウスを尾部の根元で免疫化した。第２１日目にマウスを、ザイモサンで腹腔内（腹腔内）追加免疫した。第２４ないし２７日目で疾病が発症した後、マウスを選択し、マウスを各群１０匹の個別の群に分割した。対照群及び抗サイトカイン群の平均関節炎スコアは、治療の開始時と同等であった。ＩＬ−１を中和するために、抗ＩＬ−１αモノクローナル抗体、抗ＩＬ−１βモノクローナル抗体、抗ＩＬ−１α／抗ＩＬ−βモノクローナル抗体の組み合わせ、又はマウス抗ＩＬ−１α／β  ＤＶＤ４−Ｉｇの１ないし３ｍｇ／ｋｇを、マウスに１日おきに腹腔内注射した。末梢関節における関節炎の視覚的様相に関して、マウスを１週間に３回注意深く検査し、疾病活性に関するスコアを決定した。
【０３１４】
治療モードにおけるＩＬ−１の遮断は、関節炎の重度を効果的に緩和し、抗ＩＬ−１βは、抗ＩＬ−１α（対象群と比較して、平均関節炎スコアにおいて１０％低下）よりも大きな有効性を示した（２４％低下）。抗ＩＬ−１αと抗ＩＬ−１βとの間にさらなる効果が観察され、抗ＩＬ−１α及び抗ＩＬ−１βの両モノクローナル抗体で処理したマウスにおいて平均関節炎スコアは４０％低下した。驚くべきことに、同一用量レベルにおいて、ｍＤＶＤ−Ｉｇの処理は、平均関節炎スコアの４７％の低下を示し、ｍＤＶＤ−Ｉｇのインビボでの治療上の有効性を示した。同様の有効性は、本動物モデルにおける関節腫脹の測定結果においても観察された。
【０３１５】
本発明は、分子生物学及び薬物送達の分野で周知の技術全体を、参照により組み込む。これらの技術には、以下の公報に記載されている技術が含まれるが、これに限定されるものではない。
【０３１６】
【表２８】
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【０３１７】
実施形態及び特徴が多数、上述されているが、本明細書の開示又は添付されている特許請求の範囲に定義されている本発明から逸脱せずに、記載されている実施形態及び特徴の改変及び変形を為し得ることが、当業者によって理解される。本明細書に挙げられている公報の各々は、参照により組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０３１８】
【図１】図１Ａは、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）＝Ｉｇ構築物の模式図であり、２つの親抗体からＤＶＤ−Ｉｇを作製するための戦略を示している。図１Ｂは、ハイブリドーマクローン２Ｄ１３．Ｅ３（抗ＩＬ−１α）及び１３Ｆ５．Ｇ５（抗ＩＬ−１β）からの構築物ＤＶＤ１−Ｉｇ、ＤＶＤ２−Ｉｇ及び２つのキメラ単一特異的抗体の模式図である。
【図１】
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【配列表】
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