(57)【要約】  本発明は、肝臓Ｘ受容体（ＬＸＲ）のモジュレーターである化合物に関し、さらにそのような化合物の生成方法および使用にも関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2009506052.tif 000030
またはその塩もしくは溶媒和物［式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ２は、フェニルであるか、またはピリジニルであり、この場合該フェニルは、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロゲン、ハロアルコキシ、および−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＨからそれぞれ独立に選択される１個または複数個の置換基で置換されていてもよい。］。
【請求項２】
Ｒ１がメチルまたはブチルであり、Ｒ２がフェニルまたはピリジニルであり、この場合該フェニルは、ヒドロキシル、メトキシ、Ｃｌ、Ｆ、−ＯＣＦ３、および−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＨからそれぞれ独立に選択される１〜３個の置換基で置換されていてもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がブチルであり、Ｒ２が、ヒドロキシル、メトキシ、およびＣｌからそれぞれ独立に選択される３個の置換基で置換されたフェニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
以下：
【化２】
2009506052.tif 000031
2009506052.tif 000032
2009506052.tif 000033
からなる群から選択される化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項５】
式Ｉ−Ａの化合物：
【化３】
2009506052.tif 000034
またはその塩もしくは溶媒和物［式中、
Ｒａは、Ｃｌまたはメトキシであり；
Ｒｂは、ヒドロキシルまたはメトキシであり；
Ｒｃは、Ｃｌまたはメトキシである。］。
【請求項６】
ＲａがＣｌであり、Ｒｂがヒドロキシルであり、Ｒｃがメトキシである、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
ＲａがＣｌであり、Ｒｂがヒドロキシルであり、ＲｃがＣｌである、請求項５に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒａがメトキシであり、Ｒｂがメトキシであり、ＲｃがＣｌである、請求項５に記載の化合物。
【請求項９】
以下：
【化４】
2009506052.tif 000035
2009506052.tif 000036
からなる群から選択される化合物またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載の化合物を含んでなる医薬組成物。
【請求項１１】
有効な治療物質として使用するための、請求項１〜９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２】
ＬＸＲモジュレーター活性に反応する病態または障害の治療で使用するための、請求項１〜９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３】
糖尿病、心血管疾患、脂質異常症、アテローム性動脈硬化病変、末梢血管疾患、炎症、癌、および中枢神経系の疾患の治療で使用するための、請求項１〜９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１４】
ＬＸＲモジュレーター活性に反応する病態または障害の治療で使用するための医薬の製造における、請求項１〜９のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１５】
糖尿病、心血管疾患、脂質異常症、アテローム性動脈硬化病変、末梢血管疾患、炎症、癌、および中枢神経系の疾患の治療で使用するための医薬の製造における、請求項１〜９のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１６】
請求項１〜９のいずれかに記載の化合物を投与することを含んでなる、ＬＸＲモジュレーター活性に反応する病態または障害の治療方法。
【請求項１７】
請求項１〜９のいずれかに記載の化合物を投与することを含んでなる、糖尿病、心血管疾患、脂質異常症、アテローム性動脈硬化病変、末梢血管疾患、炎症、癌、および中枢神経系の疾患の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肝臓Ｘ受容体（ＬＸＲ）のモジュレーターである化合物に関し、さらにそのような化合物の生成方法および使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
肝臓Ｘ受容体（ＬＸＲ）であるＬＸＲαおよびＬＸＲβは、核内ホルモン受容体スーパーファミリーに属するリガンド活性化転写因子である（非特許文献１）。ＬＸＲの天然のリガンドとしてコレステロールの代謝産物が特定されたことにより、この受容体の生物学的な役割はコレステロールのホメオスタシスを調節することであることが示唆された。ＬＸＲβはあるがＬＸＲαを欠くマウスでの研究で、ＬＸＲα（−／−）マウスは有効にコレステロールを胆汁酸に変換することができないことが示された。ＬＸＲα（−／−）マウスはまた、野生型の動物に比べた場合、肝臓におけるコレステロールの蓄積と同時に高レベルの血清低密度リポ蛋白も示した。これらおよび他のデータは、ＬＸＲが哺乳動物におけるコレステロールの代謝調節で重要な役割を果たしているという仮説を強力に支持している。例えば、（非特許文献２）を参照されたい。
【０００３】
有効且つ選択的なＬＸＲα／βデュアルアゴニストの特定により、ＬＸＲの生物学的動態をさらに解読するための非ステロイド性の化学的手段が提供された。例えば、（非特許文献３）および（非特許文献４）を参照されたい。厖大なインビボおよびインビトロの研究から得られたデータの蓄積は、ＬＸＲアゴニストが、心血管疾患を治療するための候補薬であることを示唆している。例えば、（非特許文献５）を参照されたい。より最近の開発は、ＬＸＲのリガンドが、炎症、糖尿病、および神経変性疾患の治療にも治療機会を提供し得ることを示唆している。例えば、（非特許文献６）、（非特許文献７）、および（非特許文献８）を参照されたい。
【非特許文献１】Peet, DJ et al., Curr. Opin. Genet. Dev., 1998, 8(5)571-575
【非特許文献２】Peet, DJ et al., Cell, 1998, 93(5):693-704
【非特許文献３】Schultz, JR et al., Gene Dev., 2000, 14(22):2831-2838
【非特許文献４】Collins, JL et al., J. Med. Chem., 2002, 45(10):1963-1966
【非特許文献５】Tontonoz, P. et al., Mol. Endocrinol., 2003, 17(6):985-993
【非特許文献６】Joseph, SB et al., Nat. Med., 2003, 9(2):213-219
【非特許文献７】Stulnig, TM et al., Mol. Pharmacol., 2002, 62(6):1299-1305
【非特許文献８】Wang, L et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2002, 99(21):13878-13883
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、ＬＸＲは、コレステロールのホメオスタシスに関与している多くの遺伝子の発現のみならず、マクロファージの先天免疫応答、グルコースの代謝、および脂肪酸の代謝も調節しており、またＬＸＲは多くの異なる組織で発現しているので、ＬＸＲのモジュレーターが、多くの疾患や障害に対して最良の治療機会を提供し得ると考えられる。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
簡潔には、一つの態様で、本発明は、式（Ｉ）
【化１】
2009506052.tif 000002
【０００６】
の化合物またはその塩もしくは溶媒和物［式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ２は、フェニルであるか、またはピリジニルであり、この場合該フェニルは、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロゲン、ハロアルコキシ、および−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＨからそれぞれ独立に選択される１個または複数個の置換基で置換されていてもよい。］
を提供する。
【０００７】
本発明のもう一つの態様により、本発明の化合物を含んでなる医薬組成物が提供される。
【０００８】
本発明のもう一つの態様により、有効な治療物質として使用するための本発明の化合物が提供される。
【０００９】
本発明のもう一つの態様により、ＬＸＲモジュレーター活性に反応する病態または障害の治療で使用するための本発明の化合物が提供される。
【００１０】
本発明のもう一つの態様により、２型糖尿病、心血管疾患、脂質異常症、アテローム性動脈硬化病変、末梢血管疾患、炎症、癌、および中枢神経系の疾患の治療で使用するための本発明の化合物が提供される。
【００１１】
本発明のもう一つの態様により、ＬＸＲモジュレーター活性に反応する病態または障害の治療で使用するための医薬の製造における本発明化合物の使用が提供される。
【００１２】
本発明のもう一つの態様により、２型糖尿病、心血管疾患、脂質異常症、アテローム性動脈硬化病変、末梢血管疾患、炎症、癌、および中枢神経系の疾患の治療で使用するための医薬の製造における本発明の化合物の使用が提供される。
【００１３】
本発明のもう一つの態様により、本発明の化合物を投与することを含んでなる、ＬＸＲモジュレーター活性に反応する病態または障害の治療方法が提供される。
【００１４】
本発明のもう一つの態様により、本発明の化合物を投与することを含んでなる、２型糖尿病、心血管疾患、脂質異常症、アテローム性動脈硬化病変、末梢血管疾患、炎症、癌、および中枢神経系の疾患の治療方法が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
用語は、一般に認められているその意味内で使用されている。以下にある定義は、定義する用語を限定するのではなく、明確にするためのものである。
【００１６】
一つの実施形態で、本発明は、Ｒ１がメチルまたはブチルであり、Ｒ２がフェニルであるか、またはピリジニルであり、この場合該フェニルは、ヒドロキシル、メトキシ、Ｃｌ、Ｆ、−ＯＣＦ３、および−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＨからそれぞれ独立に選択される１個〜３個の置換基で置換されていてもよい、式Ｉの化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を提供する。
【００１７】
本発明のもう一つの実施形態により、Ｒ１がブチルであり、Ｒ２が、ヒドロキシル、メトキシ、およびＣｌからそれぞれ独立に選択される３個の置換基で置換されたフェニルである、式Ｉの化合物またはその塩もしくは溶媒和物が提供される。
【００１８】
もう一つの実施形態で、本発明は、以下：
【化２】
2009506052.tif 000003
2009506052.tif 000004
2009506052.tif 000005
【００１９】
からなる群から選択される化合物またはその塩もしくは溶媒和物を提供する。
【００２０】
もう一つの実施形態で、本発明は、式（Ｉ−Ａ）の化合物：
【化３】
2009506052.tif 000006
【００２１】
またはその塩もしくは溶媒和物［式中、
Ｒａは、Ｃｌまたはメトキシであり；
Ｒｂは、ヒドロキシルまたはメトキシであり；
Ｒｃは、Ｃｌまたはメトキシである。］
を提供する。
【００２２】
本発明のもう一つの実施形態により、ＲａがＣｌであり、Ｒｂがヒドロキシルであり、Ｒｃがメトキシである、式Ｉ−Ａの化合物が提供される。
【００２３】
本発明のもう一つの実施形態により、ＲａがＣｌであり、Ｒｂがヒドロキシルであり、ＲｃがＣｌである、式Ｉ−Ａの化合物が提供される。
【００２４】
本発明のもう一つの実施形態により、Ｒａがメトキシであり、Ｒｂがメトキシであり、ＲｃがＣｌである、式Ｉ−Ａの化合物が提供される。
【００２５】
本発明のさらなる実施形態により、以下：
【化４】
2009506052.tif 000007
2009506052.tif 000008
【００２６】
からなる群から選択される化合物またはその塩もしくは溶媒和物が提供される。
【００２７】
実施形態つまり各可変部についての好ましい基を、各可変部に対して別々に上記で一般的に掲載したが、本発明の化合物には、式（Ｉ）中の各可変部のいくつかが、実施形態から、つまり各可変部についての好ましい基から選択されるものも含まれる。したがって、本発明には、実施形態および好ましい基のすべての組み合わせが含まれるものとする。
【００２８】
本発明の化合物は、１つまたは複数の核内受容体の機能をモジュレートする。特に、本発明の化合物は、肝臓Ｘ受容体（ＬＸＲ）をモジュレートする。本発明には、ＬＸＲαおよびＬＸＲβの部分アゴニスト、選択的アゴニスト、アンタゴニスト、または部分アンタゴニストである化合物も含まれる。本発明の化合物は、ＬＸＲが関連する疾患および病態の治療で有用である。例えば、ＬＸＲの機能または活性のモジュレーションによって予防、軽減、または治癒される疾患または病態に有用である。そのようなモジュレーションは、ある特定の組織内に孤立したものであってもよいし、あるいは治療されている被験者の身体全体に及ぶものであってもよい。
【００２９】
本明細書で使用する用語「治療」とは、特定の病態の緩和、病態の症状の解消または低減、病態の進行の減速または解消、および被験者における病態の初回発病もしくは以前に冒されたことのある被験者における病態の再発の防止または遅延を意味する。
【００３０】
本発明の一つの実施形態は、各種の障害、例えば、限定するものではないが、心血管疾患、アテローム性動脈硬化病変、脂質異常症、末梢血管疾患、２型糖尿病、炎症、キャッスルマン病、喘息、リューマチ性関節炎、若年性特発関節炎、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、胆汁うっ滞、乾癬、全身性紅斑性狼瘡、骨髄腫や悪液質のような癌、およびアルツハイマー病や双極性障害のような中枢神経系の疾患を治療するための、本発明化合物の使用である。
【００３１】
本発明の化合物は二つ以上の形態に結晶化することがあり、これは多形現象と呼ばれるもので、そのような多形形態（多形体）は、本発明の範囲内にある。多形現象は、一般に、温度、圧、またはその両方における変化への応答として起こり得るものである。多形現象は、結晶化プロセスにおける変動から生じることもある。多形体は、当技術分野で知られているいくつかの物理的特性、例えばＸ線回折パターン、溶解度、および融点によって識別することができる。
【００３２】
本明細書に記載する化合物のいくつかは１個以上のキラル中心を含むが、そうでない場合は複数種の立体異性体として存在することができる。本発明の範囲には、立体異性体の混合物のみならず精製されたエナンチオマーまたはエナンチオマー／ジアステレオマーリッチな混合物も包含される。本発明の範囲にはまた、式（Ｉ）で表される化合物の個々の異性体とならんでその任意の完全または部分的平衡混合物も包含される。本発明にはまた、上記式で表される化合物の個々の異性体が、１個以上のキラル中心が反転しているその個々の異性体の異性体との混合物としても包含されている。
【００３３】
本発明の塩は、典型的には、医薬的に許容される塩である。用語「医薬的に許容される塩」に包含される塩とは、毒性のない本発明化合物の塩を意味する。本発明化合物の塩は、本発明化合物中の置換基上にある窒素から誘導される酸付加塩を包含し得る。代表的な塩としては、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化塩、エデト酸カルシウム塩、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化塩、クラブラン酸塩、クエン酸塩、ジヒドロ塩化塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストール酸塩、エシル酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グルコリルアラサニル酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン塩、臭化水素酸塩、塩化水素酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリル酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル臭化塩、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、モノカリウムマレイン酸塩、ムチン酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、シュウ酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、カリウム塩、サリチル酸塩、ナトリウム塩、ステアリン酸塩、スバセチン酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオダイド塩、トリメチルアンモニウム塩、および吉草酸塩が挙げられる。本発明化合物の調製には、医薬的に許容されていない他の塩も有用であり得、これらは、本発明のさらなる態様を形成する。
【００３４】
本明細書で使用する用語「溶媒和物」とは、溶質（本発明では、本発明の化合物）と溶媒とによって形成されるさまざまな化学量論量の錯体を意味する。そのような溶媒は、本発明の目的のためには、溶質の生物学的活性を妨害するものであってはならない。好適な溶媒の非限定的な例としては、限定するものではないが、水、メタノール、エタノール、および酢酸が挙げられる。好ましくは、用いる溶媒は、医薬的に許容される溶媒とする。好適な医薬的に許容される溶媒の非限定的な例としては、水、エタノール、および酢酸が挙げられる。最も好ましくは、用いる溶媒は水とする。
【００３５】
本明細書で使用する用語「生理学的に機能する誘導体」とは、哺乳動物に投与した場合、本発明の化合物またはその活性代謝産物を（直接的または間接的に）提供することができる、本発明の化合物の医薬的に許容されるあらゆる誘導体を意味する。そのような誘導体、例えば、エステルやアミドは、当業者には、過度の実験を行うこともなく明らかなものである。Burger's Medicinal Chemistry And Drug Discovery, 5th Edition, Vol 1: Principles and Practiceの教示は参考になると思われる（この文献は、生理学的に機能する誘導体を教示しているという点で、参照により本明細書に組み込まれる）。
【００３６】
本明細書で使用する用語「有効量」は、組織、系、動物、あるいはヒトから、例えば研究者または臨床医が求めている生物学的または医学的反応を引き出すであろう薬物または医薬の量を意味する。生物学的または医学的反応には、予防的反応または治療的反応が考えられ得る。用語「治療的に有効な量」は、そのような量を与えられていない対応の被験体と比較した場合、疾患、障害、あるいは副作用の治療、治癒、予防、または回復の改善、あるいは疾患や障害の進行速度の低下をもたらす任意の量を意味する。この用語の範囲内には、正常時の生理学的な機能を向上させるのに有効な量も含まれる。治療で使用するには、本発明の化合物の治療的に有効な量は、その化学物質のまま投与することができる。さらには、本活性成分は、医薬組成物として提供することができる。
【００３７】
したがって、本発明はさらに、本発明の化合物の有効量と、１種以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含んでいる医薬組成物を提供する。本発明の化合物は、本明細書に記載されているとおりである。担体、希釈剤、または賦形剤は、製剤の他の成分と適合性があり且つその医薬組成物の受用者には有害でないという意味において、許容されるものでなければならない。
【００３８】
本発明のもう一つの態様により、本発明の化合物と１種以上の医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを混合することを含んでなる医薬製剤の調製方法も提供される。
【００３９】
本発明の化合物の治療的に有効な量は、さまざまな要因によって決まるものである。例えば、受用者の種、年齢および体重、治療を必要とするその正確な病態とその重症度、その製剤の特質、および投与の経路は、すべて考慮されるべき要因である。治療的に有効な量は、最終的には、担当の医師または獣医の判断によるべきである。通常、有効量は、１日あたり０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にあるべきである。つまり、７０ｋｇの成体哺乳動物に対しては１日あたりの実際の量は、通常、７〜７００ｍｇとなるであろう。この量は、１日あたり１回の用量で与えてもよいし、あるいは１日あたりの全体用量が同じとなるような、１日あたりいくつかの（例えば、２、３、４、５、またはそれ以上の）小分け用量で与えてもよい。本発明化合物の塩または溶媒和物の有効量は、本発明化合物自体の有効量との比例で決定することができる。本明細書で言及されている他の病態の治療には、同じような投薬量が適切であるはずである。
【００４０】
医薬製剤は、単位用量あたり所定量の活性成分が入っている単位用量形態で提供することができる。そのような単位には、非限定的な例として、治療されている病態、投与の経路、ならびに患者の年齢、体重および健康状態に応じて０．５ｍｇ〜１ｇの本発明の化合物が入っていてもよい。好ましい単位投薬量製剤は、本明細書中上記に記載した１日あたりの用量または小分け用量、もしくはその適切な分割量の活性成分が入っているものである。そのような医薬製剤は、製薬の技術分野で周知のいずれの方法によっても調製することができる。
【００４１】
医薬製剤は、適切ないずれの経路による投与にも、例えば経口（経頬や舌下を含む）、経直腸、経鼻、局所（経頬、舌下または経皮を含む）、経膣あるいは非経口（皮下、筋内、静内または皮内を含む）経路による投与にも適合化させることができる。そのような製剤は、製薬の技術分野で知られているいずれの方法によっても、例えば活性成分と担体または賦形剤とを組み合わせることによって調製することができる。
【００４２】
経口投与用に適合化される医薬製剤は、カプセル剤やタブレット剤のような個別の単位；粉末剤や顆粒剤；溶液剤や懸濁液剤（それぞれ水性もしくは非水性液体で）；可食フォーム剤やホイップ剤；あるいは水中油型液体エマルジョン剤や油中水型液体エマルジョン剤；として提供することができる。例えば、タブレットやカプセルの形態での経口投与には、活性薬物成分を、経口用非毒性の医薬的に許容される不活性担体、例えばエタノール、グリセロール、水などと組み合せることができる。粉末剤は、一般に、本化合物を好適な微細サイズに粉砕し、適当な医薬用担体、例えば可食炭水化物（例えば、デンプンまたはマンニトール）と一緒に混合することで調製される。矯味矯臭剤、安定化剤、分散化剤、および着色剤が入っていてもよい。
【００４３】
カプセル剤は、粉末、液体、または懸濁液の混合物を調製して、ゼラチンまたは他のなんらかの適当なシェル材でカプセル化することによって製造することができる。カプセル化する前に、混合物には、滑剤や潤滑剤、例えばコロイド状シリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムや固体状ポリエチレングリコールを加えることができる。カプセル剤が摂取されたときのその医薬のアベイラビリティを良くするために、崩壊剤や可溶化剤、例えばカンテン、炭酸カルシウムや炭酸ナトリウムを加えることもできる。さらに、望ましいまたは必要な場合は、混合物には、適切なバインダー、潤滑剤、崩壊剤、および着色剤を組み込むこともできる。適切なバインダーの例としては、デンプン、ゼラチン、天然の糖類例えばグルコースやβ−ラクトース、コーンスウィートナー、天然および合成のガム、例えばアカシア、トラガカントやアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックスなどが挙げられる。これらの投薬形態で有用な潤滑剤としては、例えば、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。崩壊剤としては、限定するものではないが、デンプン、メチルセルロース、カンテン、ベントナイト、キサンタンガムなどが挙げられる。
【００４４】
タブレット剤は、例えば、粉末混合物を調製し、顆粒化またはスラグ化し、潤滑剤と崩壊剤を加えて、タブレットにプレス加工することで製剤化することができる。粉末混合物は、適切に粉砕された本化合物と、上記に記載した希釈剤つまり基剤とを混合することで調製することができる。任意付加的な成分としては、バインダー例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチンあるいはポリビニルピロリドン；パラフィンのような溶液遅延剤；四級塩のような吸収促進剤；および／または吸収剤、例えばベントナイト、カオリンあるいはリン酸二カルシウム；が挙げられる。粉末混合物は、バインダー、例えばシロップ、デンプンペースト、アカディア粘液あるいはセルロースまたは高分子材料の溶液で湿式顆粒化して、スクリーンを通過させてもよい。顆粒化に代わるものとして、粉末混合物を、タブレット成形機に流してもよく、結果として不完全に形成されたスラグが顆粒に砕かれる。顆粒は、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルクまたはミネラルオイルを加えることで潤滑化して、タブレット成形ダイスに付着するのを防いでもよい。潤滑化された混合物は、次に、タブレットに圧縮成形される。本発明の化合物はまた、顆粒化またはスラグ化工程を経ることなしに、易流動性不活性担体と組み合せて、直接タブレットに圧縮成形してもよい。シェラックシールコーティング、砂糖または高分子材料のコーティング、およびワックスの光沢コーティングからなる透明または不透明の保護用コーティングを設けてもよい。これらのコーティングには、異なる単位投薬剤を区別するために、染料を加えてもよい。
【００４５】
溶液剤、シロップ剤、およびエリキシル剤などの経口用液剤は、所与の量が本化合物の所定量を含むような、投薬剤単位形態に調製してもよい。例えばシロップ剤は、本化合物を、適切に矯味矯臭化された水性溶液に溶解させることで調製することができ、エリキシル剤は、無毒のアルコール性ビヒクルを用いることで調製することができる。懸濁液剤は、一般には、本化合物を、無毒のビヒクル中に分散させることで製剤化することができる。可溶化剤や乳化剤、例えばエトキシル化イソステアリルアルコールやポリオキシエチレンソルビトールエーテル；安定化剤；矯味矯臭付加剤、例えばペパーミントオイルや天然の甘味料、サッカリン、または他の人工甘味料；なども加えることができる。
【００４６】
適切であれば、経口投与用の投薬剤単位製剤は、マイクロカプセル化することができる。放出を遅延または持続させるためには、製剤は、例えばコーティングすることによって、あるいは粒子状物質をポリマーやワックスなどの中に包埋することによっても調製することができる。
【００４７】
本発明の化合物は、リポソーム送達システムの形態、例えば小さなユニラメラベシクル、大きなユニラメラベシクル、およびマルチラメラベシクルの形態で投与することができる。リポソームは、各種のリン脂質、例えばコレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンから形成させることができる。
【００４８】
本発明の化合物は、本化合物分子がカップリングされているモノクローナル抗体を個々の担体として用いることによっても送達することができる。
【００４９】
本化合物は、標的化可能薬物担体としての可溶性ポリマーとカップリングさせてもよい。そのようなポリマーとしては、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタアクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチル−アスパルトアミドフェノールやパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキサイドポリリシンを挙げることができる。さらには、本化合物は、薬物の制御放出を達成するうえで有用な生分解性のポリマー類、例えば、ポリ乳酸、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマーにカップリングさせることができる。
【００５０】
経皮投与用に適合化される医薬製剤は、長期間に亘って受用者の表皮と緊密に接触したままであることが意図された個々のパッチとして提供することができる。本活性成分は、例えば、Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986)に一般的に記載されているイオン浸透により、パッチから送達することができる（該文献は、そのような送達システムに関して参照により本明細書に組み込まれる）。
【００５１】
局所投与用に適合化される医薬製剤は、軟膏剤、クリーム剤、懸濁液剤、ローション剤、粉末剤、溶液剤、ペースト剤、ジェル剤、スプレー剤、エアロゾル剤、またはオイル剤として製剤化することができる。
【００５２】
眼やその他の外部の組織（例えば、口や皮膚）の治療には、製剤は、局所用軟膏剤またはクリーム剤として適用することができる。軟膏剤に製剤化する場合は、本活性成分は、パラフィン系炭化水素か、または水混和性軟膏基剤と一緒に用いることができる。別の形態として、本活性成分は、水中油型クリーム基剤または油中水型基剤で、クリーム剤に製剤化することができる。
【００５３】
眼への局所投与用に適合化される医薬製剤としては点眼剤が挙げられる。この場合は、本活性成分は、適切な担体、特に水性溶媒に溶解または懸濁される。
【００５４】
口の中での局所投与用に適合化される医薬製剤としては、ロゼンジ剤、トローチ剤、およびマウスウォッシュ剤が挙げられる。
【００５５】
経鼻投与用に適合化される医薬製剤としては、担体が固体である場合、粒子径が例えば２０〜５００ミクロンの粗末剤が挙げられる。この粉末剤は、鼻から吸い込む方式で、すなわち鼻の下近くに保持された粉末の容器から鼻道の中に急に吸い込むことで投与される。鼻内スプレー剤として、あるいは点鼻剤として投与するための、担体が液体である好適な製剤としては、本活性成分の水性もしくは油性溶液剤が挙げられる。
【００５６】
吸入による投与用に適合化される医薬製剤としては、微細粒子のダスト剤やミスト剤が挙げられる。これらは、各種タイプの投薬量計量式の加圧エアロゾル器、ネブライザー器、または吹き入れ器により発生させることができる。
【００５７】
直腸投与用に適合化される医薬製剤は、坐薬剤や浣腸剤として提供することができる。
【００５８】
膣内投与用に適合化される医薬製剤は、膣座薬剤、タンポン剤、クリーム剤、ジェル剤、ペースト剤、フォーム剤、またはスプレー製剤として提供することができる。
【００５９】
非経口投与用に適合化される医薬製剤としては、水性および非水性の滅菌注射溶液剤（これには、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤や、製剤を対象の受容者の血液と等張にする溶質が入っていてもよい）、および水性および非水性の滅菌懸濁液剤（これには、懸濁化剤や増粘剤が入っていてもよい）が挙げられる。この製剤は、１回用量または複数回用量の容器、例えば密封されたアンプルやバイアルに入れて提供することができ、また使用直前に滅菌液体担体（例えば注射用の水）を加えることのみを必要とする凍結乾燥（lyophilized）状態で貯蔵しておくこともできる。即席の注射用溶液剤や懸濁液剤は、滅菌の粉末剤、顆粒剤、タブレット剤から調製することができる。
【００６０】
上記で詳細に述べた成分以外にも、本製剤には、当該の製剤のタイプに関係する技術分野で慣用のその他の添加剤が入っていてもよい。例えば、経口投与に適した製剤には、矯味矯臭剤や着色剤が入っていてもよい。
【００６１】
本発明の化合物およびその塩またはそれらの溶媒和物は、上記した病態の治療には単独であるいは他の治療剤との組み合せで用いることができる。本発明の化合物と他の医薬的に活性な薬剤とは一緒にまたは別々に投与することができるので、別々に投与する場合は、投与は同時または順次（任意の順序で）に行うことができる。本発明の化合物および他の医薬的に活性な薬剤の量および投与の相対的なタイミングは、所望の組み合せの治療効果を達成するように選ばれるものである。本発明の化合物と他の治療剤との組み合せでの投与は：（１）両方の化合物を含んでいる単一の医薬組成物；または（２）それぞれが化合物のひとつを含んでいる別々の医薬組成物；での同時的な投与による組み合せであってよい。別の形態として、組み合せは、順次方式で別々に投与してもよく、この場合は一つの治療剤が先ず投与され、他の治療剤が次に投与される、あるいはこの逆で投与される。このような順次的投与は、時間的に近いものであってもよいし、時間的に離れたものであってもよい。
【００６２】
本発明の化合物は様々な障害や病態の治療で用いることができるものであり、それゆえに、本発明の化合物は、そのような障害や病態の治療で有用な様々な他の好適な治療剤との組み合せで用いることができる。非限定的な例としては、抗糖尿病薬、抗骨粗しょう症薬、やせ薬、抗炎症薬、抗不安症薬、抗うつ薬、抗高血圧薬、抗血小板剤、抗血栓薬および血栓溶解剤、強心配糖体、コレステロールまたは脂質低下薬、ホスホジエステラーゼ阻害薬、キナーゼ阻害薬、甲状腺模倣剤、ウイルス性治療剤、認知障害治療薬、睡眠障害治療薬、抗がん剤、放射線療法剤、抗増殖薬、および抗腫瘍薬と本発明との組み合せが挙げられる。さらには、本発明の化合物は、栄養補助食品、例えばアミノ酸、トリグリセリド、ビタミン、ミネラル、クレアチン、ピロ酸、カルニチン、あるいはコエンザイムＱ１０と組み合せることもできる。
【００６３】
特に、本発明の化合物は、単独で、または他の薬剤との組み合わせで、心血管疾患、アテローム性動脈硬化病変、脂質異常症、末梢血管疾患、２型糖尿病、炎症、キャッスルマン病、喘息、リューマチ性関節炎、若年性特発関節炎、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、胆汁うっ滞、乾癬、全身性紅斑性狼瘡、骨髄腫や悪液質のような癌、およびアルツハイマー病や双極性障害のような中枢神経系の疾患の治療で有用であると考えられる。
【００６４】
本発明のさらなる態様により、様々な障害、例えば、限定するものではないが、心血管疾患、アテローム性動脈硬化病変、脂質異常症、末梢血管疾患、２型糖尿病、炎症、キャッスルマン病、喘息、リューマチ性関節炎、若年性特発関節炎、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、胆汁うっ滞、乾癬、全身性紅斑性狼瘡、骨髄腫や悪液質のような癌、およびアルツハイマー病や双極性障害のような中枢神経系の疾患の治療を必要とする哺乳動物の治療方法が提供され、該方法は、被験者に本発明の化合物を投与することを含む。本発明の化合物による治療を必要とする哺乳動物は典型的にはヒトである。
【００６５】
本発明の化合物は、周知の標準的な合成方法を含めて、様々な方法により生成させることができる。説明のための一般的な合成方法を以下に述べ、その後、本発明の具体的な化合物を実際の実施例で調製する。
【００６６】
以下に記載するすべてのスキームでは、合成化学の一般原理に従って、必要な場合は、感応性または反応性の基に対する保護基を用いる。保護基は、有機合成の標準的な方法（T. W. Green and P. G. M. Wuts (1991) Protecting Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons（保護基に関して参照により組み込まれる）に従って操作する。これらの基は、当業者には容易に明らかである方法を用いて化合物合成の都合のよい段階で除去される。プロセスの選択ならびに反応条件およびその実行の順序は、本発明の化合物の調製と整合したものでなければならない。
【００６７】
当業者なら、本発明の化合物に立体中心が存在するかどうかは解かるものである。したがって、本発明には、すべての考えられ得る立体異性体が含まれ、またラセミ化合物のみならず個々のエナンチオマーも同様に含まれる。単一のエナンチオマーとして化合物が望まれている場合は、そのような化合物は、立体特異的合成により、あるいは最終生成物または都合のよい任意の中間体の分割により得ることができる。最終生成物、中間体、または出発物質の分割は、当技術分野で知られている適切な任意の方法により行うことができる。例えば、Stereochemistry of Organic Compounds by E. L. Eliel, S. H. Wilen, and L. N. Mander (Wiley-Interscience, 1994)（立体化学に関して参照により組み込まれる）を参照されたい。
【００６８】
本発明による代表的なＬＸＲモジュレーターとしては以下が挙げられる：
１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−｛４−［メチル（フェニルメチル）アミノ］フェニル｝−２−プロパノール；
２−｛４−［ブチル（ピリジン−２−イルメチル）アミノ］フェニル｝−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール；
２−｛４−［ベンジル（ブチル）アミノ］フェニル｝−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール；
２−（４−｛ブチル［３−（２−ヒドロキシエトキシ）ベンジル］アミノ｝フェニル）−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール；
２−｛４−［ブチル（ピリジン−４−イルメチル）アミノ］フェニル｝−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール；
３−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］フェノール；
２−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］フェノール；
４−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］フェノール；
２−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］−６−フルオロフェノール；
２−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメトキシ）フェノール；
２−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］−４，６−ジクロロフェノール；
２−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］−４−クロロフェノール；
４−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］−２−クロロフェノール；
４−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］−２−クロロ−６−メトキシフェノール；
４−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］−２，６−ジクロロフェノール；
２−［４−（ブチル｛［３−クロロ−４，５−ビス（メチルオキシ）フェニル］メチル｝アミノ）フェニル］−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノール；
２−｛４−［ブチル（３，５−ジクロロベンジル）アミノ］フェニル｝−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール；
２−｛４−［ブチル（３，５−ジクロロ−４−メトキシベンジル）アミノ］フェニル｝−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール；
またはこれらの塩もしくは溶媒和物。
【００６９】
略記号
本明細書にあるプロセス、スキームおよび実施例で使用する略記号および慣例は、本明細書で使用する場合、現代の科学文献、例えば、Journal of the American Chemical SocietyやJournal of Biological Chemistryで使用されているものと一致したものとなっている。具体的には、以下の略記号が、実施例で、また明細書全体を通しても使用され得る。
【００７０】
ｇ（グラム）；
ｍｇ（ミリグラム）；
Ｌ（リットル）；
ｍＬ（ミリリットル）；
μＬ（マイクロリットル）；
ｐｓｉ（ポンド／平方インチ）；
Ｍ（モル濃度）；
ｍＭ（ミリモル濃度）；
Ｈｚ（ヘルツ）；
ＭＨｚ（メガヘルツ）；
ｍｏｌ（モル）；
ｍｍｏｌ（ミリモル）；
ｒｔ（室温）；
ｍｉｎ（分）；
ｈ（時）；
ｍｐ（融点）；
ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）；
ＣＤＣｌ３（重水素化クロロホルム）；
ＣＤ３ＯＤ（重水素化メタノール）；
ＳｉＯ２（シリカ）；
ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）；
ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）；
ａｔｍ（気圧）；
ＨＣｌ（塩酸）；
ＣＨＣｌ３（クロロホルム）；
ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）；
Ａｃ（アセチル）；
Ｍｅ（メチル）；
Ｅｔ（エチル）；
ＭｅＯＨ（メタノール）；
ＥｔＯＨ（エタノール）；
ｔ−Ｂｕ（ｔ−ブチル）；
Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）；
Ｎ２（窒素）；
ＭｓＣｌ（塩化メタンスルホニル）；
ｓａｔ’ｄ（飽和）；
ＤＭＡＰ（４−（ジメチルアミノ）ピリジン）；
ＡｃＨＯ（酢酸）；
ＤＣＭ（ジクロロメタン）；
ＬＡＨ（リチウムアルミニウムヒドリド）；
ＩＰＴＧ（イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド）；
ＴＢＳ（トリス緩衝生理食塩水）；
ＤＴＴ（ジチオトレイトール）；
ＥＤＴＡ（エチレンジアミンテトラ酢酸）；
ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）；
ＳＰＡ（シンチレーション近接アッセイ）；
ＥＬＩＳＡ（酵素免疫測定法）。
【００７１】
特に断らない限り、温度はすべて℃（摂氏）で表されている。反応はすべて特に断らない限り不活性雰囲気下の室温で行った。合成の詳細なしに用いられている試薬は、市販されているか、または文献の手順に従って生成させたものである。
【００７２】
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ  ４００ＭＨｚ  ＮＭＲ分光計で記録した。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、ケミカルシフトδ、プロトンの数、多重度（ｓ：シングレット、ｄ：ダブレット、ｔ：トリプレット、ｍ：マルチプレット、ｂｒ  ｓ：ブロードシングレット）、およびヘルツ単位でのカップリング定数（Ｊ）として報告されている。Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｓｐｒａｙ（ＥＳ）またはＣｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ（ＣＩ）は、Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  ５９８９Ａ質量分光計で記録した。
【００７３】
スキーム
【化５】
2009506052.tif 000009
【実施例】
【００７４】
中間体１：２−［４−（ブチルアミノ）フェニル］−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノール
【化６】
2009506052.tif 000010
【００７５】
触媒量のＤＭＡＰの存在下、２−（４−アミノフェニル）−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール１０ｇ（０．０４ｍｏｌ）のＤＣＭ１７０ｍＬ溶液に１２ｍＬ（０．０７ｍｏｌ）の無水酪酸および１４ｍＬ（０．０９ｍｏｌ）のトリエチルアミンを加えた。この混合物を４０℃で１８時間加熱した。この時点で、反応混合物は蒸発し、乾燥していた。残留物を酢酸エチルに溶解させて、１０％炭酸カリウム溶液を加えた。混合物を室温で２時間攪拌した。この時点で、固形物が沈殿していた。固形物を濾過により粗酪酸アミド／エステル生成物として回収した。このアミド／エステルを９５ｍＬの１Ｍ  ＬＡＨ／ジエチルエーテルにより室温で４時間処理した。この時点で、２０ｍＬの水を０℃でゆっくり加え、その後、５０ｍＬの１５％水酸化ナトリウム水溶液を加えた。得られた混合物をセライトに通すことで濾過した。濾液を酢酸エチルで抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして乾燥するまで蒸発させて、９．５ｇの中間体１を得た。1H-NMR (CDCl3) δ 0.98 (t, 3H), 1.45 (m, 2H), 1.63 (m, 2H), 3.15 (t, 2H), 6.63 (dd, J=1.9, 9.0 Hz, 2H), 7.45 (d, J=8.7 Hz, 2H)。
【００７６】
実施例１：１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−｛４−［メチル（フェニルメチル）アミノ］フェニル｝−２−プロパノール
【化７】
2009506052.tif 000011
【００７７】
２−（４−アミノフェニル）−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノール１０１ｍｇ（０．３９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／トリメチルオルトホルメート（１：１）８００μＬ室温溶液を４０μＬ（０．３９ｍｍｏｌ）のベンズアルデヒドで処理した。一晩攪拌した後、ＴＬＣが、中間体イミンが消尽されたことを示すまで反応を固体ナトリウムボロヒドリドで少しずつ処理した。溶離液としてＥｔＯＡｃを用いて反応をシリカゲルのパッドに通すことで濾過して、濾液を真空中で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（４：１／ヘキサン：ＥｔＯＡｃ）による精製により、８５ｍｇ（６３％）の中間体二級アミンを得た。この中間体６０ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）の氷酢酸６００μＬ溶液を過剰パラホルムアルデヒド、その後５３ｍｇ（０．８５μｍｏｌ）のＮａＣＮＢＨ３で処理した。室温で１５時間攪拌した後、溶離液としてＥｔＯＡｃを用いて反応をシリカゲルに通すことで濾過して、濾液を真空中で濃縮した。４：１／ヘキサン：ＥｔＯＡｃを用いた分取型ＴＬＣ（シリカゲル、１０００μｍ）により精製して、３０ｍｇ（５０％）の表題化合物を得た。1H-NMR (CDCl3) δ 3.07 (s, 3H), 4.56 (s, 2H), 6.76 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.18-7.29 (m, 3H), 7.33 (t, J=7.4 Hz , 2H), 7.49 (d, J=8.8 Hz, 2H)。マススペクトル (ES) m/e= 364 (M+1)。
【００７８】
実施例２：２−｛４−［ブチル（ピリジン−２−イルメチル）アミノ］フェニル｝−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール
【化８】
2009506052.tif 000012
【００７９】
２−（ブロモメチル）ピリジン０．０６ｇ（０．３２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ０．２ｍＬ溶液に０．０５ｇ（０．１６ｍｍｏｌ）の２−［４−（ブチルアミノ）フェニル］−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール（中間体１）および０．０６ｇ（０．４８ｍｍｏｌ）の炭酸カリウムを加えた。この混合物を１４０℃で１５分間マイクロウェーブ加熱した。この時点で、反応混合物は蒸発し、乾燥していた。残留物を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μマイクロＣ１８（１５０×２１ｍｍ）カラムを有する分取Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣ装置で精製し、０．１％のトリフルオロ酢酸が存在している３０％〜１００％のアセトニトリル／水で１０分かけて溶離して、表題化合物を得た。1H-NMR (CD3OD) δ 1.01  (t, 3H), 1.45 (m, 2H), 1.71 (m, 2H), 3.61 (t, 2H), 4.98 (s, 2H), 6.79 (d, J= 9.1 Hz, 2H), 7.54 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.86 (t, 2H), 8.42 (t, 1H), 8.72 ( d, J=5.5Hz, 1H)。マススペクトル (APCI) m/e= 407 (M+1)。
【００８０】
実施例３：２−｛４−［ベンジル（ブチル）アミノ］フェニル｝−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール
【化９】
2009506052.tif 000013
【００８１】
ベンズアルデヒド１．７ｇ（１５．８５ｍｍｏｌ）のＤＣＥ３０ｍＬ溶液に１ｍＬの氷酢酸、１ｇ（３．２ｍｍｏｌ）の２−［４−（ブチルアミノ）フェニル］−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール（中間体１）および３．４ｇ（１６ｍｍｏｌ）のナトリウムトリアセトキシボロヒドリドを加えた。混合物を室温で１８時間攪拌した。この時点で、反応混合物は蒸発し、乾燥していた。残留物を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μＣ１８（１５０×２１ｍｍ）カラムを有する分取Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣ装置で精製し、０．１％のトリフルオロ酢酸が存在している３０％〜１００％のアセトニトリル／水で１０分かけて溶離して、表題化合物を得た。1H-NMR (CD3OD) δ  0.97 (t, 3H), 1.41 (m, 2H), 1.65 (m, 2H), 3.49 (t, 2H), 4.62 (s, 2H), 6.76 (d, J= 9.0 Hz, 2H), 7.21-7.33 (m, 5H), 7.48 (d, J=8.8 Hz, 2H)。マススペクトル (APCI) m/e= 406 (M+1)。
【００８２】
以下の化合物を同様にして調製した。
【００８３】
実施例４：２−（４−｛ブチル［３−（２−ヒドロキシエトキシ）ベンジル］アミノ｝フェニル）−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール
【化１０】
2009506052.tif 000014
【００８４】
1H-NMR (CD3OD) δ 0.98 (t, 3H), 1.42 (m, 2H), 1.66 (m, 2H), 3.48 (t, 2H), 3.84 (t, 2H), 3.98 (t, 3H), 4.58 (s, 2H), 6.72 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.81 (s, 1H), 6.82 ( d, J=6.9 Hz, 2H), 7.23 (t, 1H), 7.45 (d, J= 8.7 Hz, 2H)。マススペクトル (APCI) m/e= 466 (M+1)。
【００８５】
実施例５：２−｛４−［ブチル（ピリジン−４−イルメチル）アミノ］フェニル｝−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール
【化１１】
2009506052.tif 000015
【００８６】
1H-NMR (CD3OD) δ 1.01 (t, 3H), 1.46 (m, 2H), 1.70 (m, 2H), 3.59 (t, 2H), 4.94 (s, 2H), 6.72 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 7.50 (d, J=8.7 Hz, 2H), 7.90 (d, J= 4.8 Hz, 2H), 8.74 (br s, 2H), マススペクトル (APCI) m/e= 407 (M+1)。
【００８７】
実施例６：３−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］フェノール
【化１２】
2009506052.tif 000016
【００８８】
1H-NMR (CD3OD) δ 0.98 (t, 3H), 1.41 (m, 2H), 1.67 (m, 2H), 3.45 (t, 2H), 4.54 (s, 2H), 6.65-6.73 (m, 5H), 7.14 (m, 1H), 7.45 (d, J= 8.9 Hz, 2H)。マススペクトル (APCI) m/e= 422 (M+1)。
【００８９】
実施例７：２−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］フェノール
【化１３】
2009506052.tif 000017
【００９０】
1H-NMR（CDCl3）δ 0.91（t、3H)、1.32（m、2H)、1.56（m、2H)、3.31（t、2H)、4.47（s、2H)、6.87（m、2H)、7.03（d、J=8.9 Hz、2H)、7.18（m、2H)、7.59（d、J=8.7 Hz、2H)。マススペクトル（APCI）m/e= 422（M+1)。
【００９１】
実施例８：４−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］フェノール
【化１４】
2009506052.tif 000018
【００９２】
1H-NMR (CD3OD) δ 0.89 (t, 3H), 1.25 (m, 2H), 1.51 (m, 2H), 3.08 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 6.73 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.84 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 6.99 (d, J=8.4 Hz, 2H), 7.43 (s, 1H), 7.52(d, J=8.6 Hz, 1H)。マススペクトル (ES) m/e= 422 (M+1)。
【００９３】
実施例９：２−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］−６−フルオロフェノール
【化１５】
2009506052.tif 000019
【００９４】
1H-NMR (CD3OD) δ 0.98 (t, 3H), 1.43 (m, 2H), 1.67 (m, 2H), 3.50 (t, 2H), 4.61 (s, 2H), 6.78 (m, 4H), 6.96 (m, 1H), 7.48 (d, J=8.8 Hz, 2H)。マススペクトル (APCI) m/e= 440 (M+1)。
【００９５】
実施例１０：２−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメトキシ）フェノール
【化１６】
2009506052.tif 000020
【００９６】
1H-NMR (CD3OD) δ 0.98 (t, 3H), 1.42 (m, 2H), 1.67 (m, 2H), 3.50 (t, 2H), 4.57 (s, 2H), 6.74-6.88 (m, 4H), 6.98 (dd, J=2.2, 8.6 Hz, 1H), 7.50 (d, J=8.7 Hz, 2H)。マススペクトル (ES) m/e= 506 (M+1)。
【００９７】
実施例１１：２−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］−４，６−ジクロロフェノール
【化１７】
2009506052.tif 000021
【００９８】
1H-NMR (CD3OD) δ 0.90 (t, 3H), 1.41 (m, 2H), 1.68 (m, 2H), 3.48 (t, 2H), 4.57 (s, 2H), 6.70 (d, J=9.0 Hz, 2H), 6.86 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.25 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.49 (d, J=8.7 Hz, 2H)。マススペクトル (APCI) m/e= 490 (M+1)。
【００９９】
実施例１２：２−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］−４−クロロフェノール
【化１８】
2009506052.tif 000022
【０１００】
1H-NMR (CD3OD) δ 0.99 (t, 3H), 1.43 (m, 2H), 1.66 (m, 2H), 3.52 (t, 2H), 4.56 (s, 2H), 6.77-6.90 (m, 4H), 7.06 (dd, J=2.6, 8.6 Hz, 1H), 7.54 (d, J=8.9 Hz, 2H)。マススペクトル (ES) m/e= 456 (M+1)。
【０１０１】
実施例１３：４−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］−２−クロロフェノール
【化１９】
2009506052.tif 000023
【０１０２】
1H-NMR (CD3OD) δ 0.96 (t, 3H), 1.39 (m, 2H), 1.61 (m, 2H), 3.50 (t, 2H), 4.53 (s, 2H), 6.83-6.99 (m, 4H), 7.13(d, J=1.9 Hz, 1H), 7.55 (d, J=8.7 Hz, 2H)。マススペクトル (ES) m/e= 456 (M+1)。
【０１０３】
実施例１４：４−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］−２−クロロ−６−メトキシフェノール
【化２０】
2009506052.tif 000024
【０１０４】
1H-NMR (CD3OD) δ 0.96 (t, 3H), 1.41 (m, 2H), 1.61 (m, 2H), 3.51 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 4.53 (s, 2H), 6.69 (d, J= 1.7 Hz, 1H), 6.76 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 6.89 (d, J= 9.0 Hz, 2H), 7.56 (d, J=8.7 Hz, 2H)。マススペクトル (ES) m/e= 486 (M+1)。
【０１０５】
実施例１５：４−［（ブチル｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝アミノ）メチル］−２，６−ジクロロフェノール
【化２１】
2009506052.tif 000025
【０１０６】
1H-NMR (CD3OD) δ 0.98 (t, 3H), 1.41 (m, 2H), 1.64 (m, 2H), 3.46 (t, 2H), 4.50 (s, 2H), 6.75 (d, J= 9.1 Hz, 2H), 7.12 (s, 2H), 7.50 (d, J= 8.9 Hz, 2H)。マススペクトル (APCI) m/e= 490 (M+1)。
【０１０７】
実施例１６：２−［４−（ブチル｛［３−クロロ−４，５−ビス（メチルオキシ）フェニル］メチル｝アミノ）フェニル］−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−プロパノール
【化２２】
2009506052.tif 000026
【０１０８】
1H-NMR (CD3OD) δ 0.98 (t, J=7.2 Hz, 3H), 1.30-1.50 (m, 2H), 1.55-1.75 (m, 2H), 3.50 (t, J=7.7 Hz, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 4.56 (s, 2H), 6.82 (dd, J = 6.3, 1.7 Hz, 4H), 7.54 (d, J = 8.8 Hz, 2H); マススペクトル (ES) m/e = 500 (M+1)。
【０１０９】
実施例１７：２−｛４−［ブチル（３，５−ジクロロベンジル）アミノ］フェニル｝−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール
【化２３】
2009506052.tif 000027
【０１１０】
1H-NMR (CD3OD) δ 0.98 (t, 3H), 1.42 (m, 2H), 1.66 (m, 2H), 2.51 (s, 3H), 3.48 (t, 2H), 4.55 (s, 2H), 6.71 (d, J = 9.1 Hz, 2H), 7.17 (d, J= 1.5 Hz, 2H), 7.30 (s, 1H), 7.49 (d, J= 8.9 Hz, 2H)。マススペクトル (APCI) m/e= 474 (M+1)。
【０１１１】
実施例１８：２−｛４−［ブチル（３，５−ジクロロ−４−メトキシベンジル）アミノ］フェニル｝−１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロプロパン−２−オール
【化２４】
2009506052.tif 000028
【０１１２】
1H-NMR (CD3OD) δ 0.98 (t, 3H), 1.41 (m, 2H), 1.64 (m, 2H), 3.48 (t, 2H), 3.85 (s, 3H), 4.55 (s, 2H), 6.74 (d, J = 9.1 Hz, 2H), 7.21 (s, 2H), 7.52 (d, J= 8.8 Hz, 2H)。マススペクトル (ES) m/e= 504 (M+1)。
【０１１３】
生物学的セクション
本発明の化合物はＬＸＲβのモジュレーターである。加えて、本発明の化合物は、ＬＸＲαのモジュレーターとしても有用であると思われる。ＬＸＲによって介在される活性は、以下のアッセイを用いて決定した。
【０１１４】
ＬＸＲα、ＬＸＲβの結合アッセイ：
【０１１５】
ＬＸＲβ
ヒトＬＸＲβリガンド結合ドメイン（ＬＸＲβ  ＬＢＤ）をＥ．ｃｏｌｉ株ＢＬ２１（ＤＥ３）中でアミノ末端ポリヒスチジンタグ融合蛋白として発現させた。発現は、ＩＰＴＧ誘導性Ｔ７プロモータの調節下にあった。この組み換え蛋白をコードするＤＮＡと修飾ポリヒスチジンタグを発現ベクターｐＲＳＥＴａ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）中にサブクローニングした。修飾ポリヒスチジンタグの配列（ＭＫＫＧＨＨＨＨＨＨＧ）をフレームでＬＸＲβの残基１８５〜４６１に融合させた。ヒトＬＸＲβ  ＬＢＤのコード配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｕ０７１３２（ＢｉｏＲｅｓｏｕｒｃｅｓ  ＃５４６４）から導いた。得られた全コード配列は以下のとおりである：ＭＫＫＧＨＨＨＨＨＨＧＰＶＧＰＱＧＳＳＳＳＡＳＧＰＧＡＳＰＧＧＳＥＡＧＳＱＧＳＧＥＧＥＧＶＱＬＴＡＡＱＥＬＭＩＱＱＬＶＡＡＱＬＱＣＮＫＲＳＦＳＤＱＰＫＶＴＰＷＰＬＧＡＤＰＱＳＲＤＡＲＱＱＲＦＡＨＦＴＥＬＡＩＩＳＶＱＥＩＶＤＦＡＫＱＶＰＧＦＬＱＬＧＲＥＤＱＩＡＬＬＫＡＳＴＩＥＩＭＬＬＥＴＡＲＲＹＮＨＥＴＥＣＩＴＦＬＫＤＦＴＹＳＫＤＤＦＨＲＡＧＬＱＶＥＦＩＮＰＩＦＥＦＳＲＡＭＲＲＬＧＬＤＤＡＥＹＡＬＬＩＡＩＮＩＦＳＡＤＲＰＮＶＱＥＰＧＲＶＥＡＬＱＱＰＹＶＥＡＬＬＳＹＴＲＩＫＲＰＱＤＱＬＲＦＰＲＭＬＭＫＬＶＳＬＲＴＬＳＳＶＨＳＥＱＶＦＡＬＲＬＱＤＫＫＬＰＰＬＬＳＥＩＷＤＶＨＥ。１０リットルの発酵バッチを、０．１ｍｇ／ｍＬのアンピシリンを含む２５℃のＲｉｃｈ  ＰＯ４培地中で１２時間生育させ、９℃まで冷却し、その温度に３６時間保持して、ＯＤ６００＝１４の密度にした。この細胞密度で、０．２５ｍＭ  ＩＰＴＧを加え、誘導を９℃で２４時間進めて、最終ＯＤ６００＝１６にした。細胞を遠心分離（２０分、３５００Ｇ、４℃）により収穫して、濃縮された細胞スラリーを−８０℃のＰＢＳ中に貯蔵した。
【０１１６】
ＬＸＲβリガンド結合ドメインの精製：３０〜４０ｇの細胞ペースト（発酵バッチ２〜３リットルに相当）を３００〜４００ｍＬのＴＢＳ・ｐＨ８．５（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）に再懸濁させた。ホモジナイザー（Ｒａｎｎｉｅ社）に３回通すことにより細胞を溶解し、細胞破壊物破片を遠心分離（３０分、２０，０００Ｇ、４℃）により除去した。透明になった上澄液を粗い予備フィルターに通すことで濾過し、５００ｍＭのイミダゾールを含有しているＴＢＳ・ｐＨ８．５を加えて、最終イミダゾール濃度５０ｍＭを得た。この溶解産物を、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ［Ｎｉ＋＋荷電］キレート化レジン（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）が充填され、ＴＢＳ・ｐＨ８．５／５０ｍＭイミダゾールで前処理平衡化されたカラム（６×８ｃｍ）に投入した。ベースライン吸収まで平衡緩衝液で洗浄した後、カラムを、５０〜２７５ｍＭイミダゾール／ＴＢＳ・ｐＨ８．５の線形勾配で展開させた。カラム画分を貯留し、５％の１，２−プロパンジオール、５ｍＭのＤＴＴおよび０．５ｍＭのＥＤＴＡを含有しているＴＢＳ・ｐＨ８．５に対して透析を行った。この蛋白サンプルをＣｅｎｔｒｉ−ｐｒｅｐ  １０Ｋ（Ａｍｉｃｏｎ社）を用いて濃縮し、５％の１，２−プロパンジオール、５ｍＭのＤＴＴおよび０．５ｍＭのＥＤＴＡを含有しているＴＢＳ・ｐＨ８．５で前処理平衡化されたＳｅｐｈａｒｏｓｅ  Ｓ−７５レジン（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）が充填されたカラム（３×９０ｃｍ）を用いて、サイズ排除に付した。
【０１１７】
ＬＸＲβのビオチニル化：精製ＬＸＲβ  ＬＢＤを、ＰＤ−１０ゲル濾過カラムを用いて、ＰＢＳ（１００ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）に脱塩／緩衝液交換した。ＬＸＲβ  ＬＢＤをおよそ１０ｍＭ／ＰＢＳに希釈し、５倍モル過剰のＮＨＳ−ＬＣ−Ｂｉｏｔｉｎ（Ｐｉｅｒｃｅ社）を最小容量のＰＢＳで加えた。この溶液を、ゆっくり混合しながら３０分間周囲室温でインキュベートした。ビオチニル化修飾反応は、２０００ｘモル過剰のＴｒｉｓ−ＨＣｌ・ｐＨ８を加えることにより停止させた。修飾ＬＸＲβ  ＬＢＤを４回の緩衝液交換（それぞれ、少なくとも５０倍容量で、５ｍＭのＤＴＴ、２ｍＭのＥＤＴＡおよび２％のスクロースを含有しているＰＢＳ）に対して透析を行った。ビオチニル化ＬＸＲβ  ＬＢＤを質量分光分析に付して、ビオチニル化試薬による修飾の程度を明らかにした。概して、およそ９５％の蛋白が少なくとも１個のビオチニル化部位を有し、また全体としてのビオチニル化の程度は、１〜９個の複数部位の正規分布に従っていた。
【０１１８】
ＬＸＲβ  ＳＰＡ用アッセイ緩衝液：５０ｍＭ  ＭＯＰＳ・ｐＨ７．５、５０ｍＭ  ＮａＦ、０．０５ｍＭ  ＣＨＡＰＳ。０．１ｍｇ／ｍＬのＦｒａｃｔｉｏｎ５脂肪酸フリーＢＳＡ。アッセイ緩衝液中での使用直前に固体ＤＴＴをアッセイ緩衝液に加える（最終濃度＝１０ｍＭ）。
【０１１９】
ＳＰＡビーズ／ＬＸＲβ／３Ｈ放射線リガンド溶液の調製：１０ｍＭの新たに固体から加えられたＤＴＴを含有している緩衝液に、適切な量の５ｍｇ／ｍＬのＳＰＡビーズ溶液を加えて０．２５ｍｇ／ｍＬの最終濃度にする。適切な量のＬＸＲβ  ＬＢＤを加えて、２５ｎＭの最終濃度を得、ゆっくり上下を逆にして混合する。室温で３０分インキュベートし、ビーズを２５００ｒｐｍで１０分間遠心沈降させて、ビーズペレットを乱すことなく上澄液を気をつけて除去する。１０ｍＭの新たに加えられたＤＴＴを含有しているアッセイ緩衝液で元の体積まで希釈する。ビーズ溶液に放射線標識リガンド（Ｎ−３Ｈ３−メチル−Ｎ−｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝ベンゼンスルホンアミド）を１０ｎＭの最終濃度まで加える。試験化合物が入っている９６ウェルプレートの各ウェルに、マルチドロップを用いて１００μＬを加え、室温で３０分インキュベートし、Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ  １４５０  Ｔｒｉｌｕｘで読み取る。次の式によりデータを標準化する：（１−（被検体の値−非特異的の平均値）／（１００％の平均値−非特異的の平均値））×１００＝％阻害。
【０１２０】
ＬＸＲα
ヒトＬＸＲαリガンド結合ドメイン（ＬＸＲα  ＬＢＤ）をＥ．ｃｏｌｉ株ＢＬ２１（ＤＥ３）中でアミノ末端ポリヒスチジンタグ融合蛋白として発現させた。発現は、ＩＰＴＧ誘導性Ｔ７プロモータの調節下にあった。この組み換え蛋白をコードするＤＮＡをｐＲＳＥＴａ発現ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）中にサブクローニングした。ヒトＬＸＲαのアミノ酸１８３〜４４７をコードする配列を、ベクター（ＭＲＧＳＨＨＨＨＨＨＧＭＡＳ）から誘導されたポリヒスチジンタグか、または修飾ヒスチジンタグ（ＭＫＫＧＨＨＨＨＨＨＧ）にフレームで融合させた。ヒトＬＸＲα  ＬＢＤのコード配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｕ２２６６２（ＢｉｏＲｅｓｏｕｒｃｅｓ  ＃１８７１１および＃１３６３５）から導いた。得られた全コード配列は以下のとおりである：ＭＫＫＧＨＨＨＨＨＨＧＥＥＥＱＡＨＡＴＳＬＰＰＲＡＳＳＰＰＱＩＬＰＱＬＳＰＥＱＬＧＭＩＥＫＬＶＡＡＱＱＱＣＮＲＲＳＦＳＤＲＬＲＶＴＰＷＰＭＡＰＤＰＨＳＲＥＡＲＱＱＲＦＡＨＦＴＥＬＡＩＶＳＶＱＥＩＶＤＦＡＫＱＬＰＧＦＬＱＬＳＲＥＤＱＩＡＬＬＫＴＳＡＩＥＶＭＬＬＥＴＳＲＲＹＮＰＧＳＥＳＩＴＦＬＫＤＦＳＹＮＲＥＤＦＡＫＡＧＬＱＶＥＦＩＮＰＩＦＥＦＳＲＡＭＮＥＬＱＬＮＤＡＥＦＡＬＬＩＡＩＳＩＦＳＡＤＲＰＮＶＱＤＱＬＱＶＥＲＬＱＨＴＹＶＥＡＬＨＡＹＶＳＩＨＨＰＨＤＲＬＭＦＰＲＭＬＭＫＬＶＳＬＲＴＬＳＳＶＨＳＥＱＶＦＡＬＲＬＱＤＫＫＬＰＰＬＬＳＥＩＷＤＶＨＥ。１０リットルの発酵バッチを、０．１ｍｇ／ｍＬのアンピシリンを含む２５℃のＲｉｃｈ  ＰＯ４培地中で１２時間生育させ、９℃まで冷却し、その温度に３６時間保持して、ＯＤ６００＝１４の密度にした。この細胞密度で、０．２５ｍＭ  ＩＰＴＧを加え、誘導を９℃で２４時間進めて、最終ＯＤ６００＝１６にした。細胞を遠心分離（２０分、３５００Ｇ、４℃）により収穫して、濃縮された細胞スラリーを−８０℃のＰＢＳ中に貯蔵した。
【０１２１】
ＬＸＲαリガンド結合ドメインの精製：典型的には、５０〜１００ｇの細胞ペーストを２５０〜７５０ｍＬのＴＢＳ・ｐＨ８．５（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）に再懸濁させる。ＡＰＶ  Ｒａｎｎｉｅ  ＭＩＮＩラボホモジナイザーに３回通すことにより細胞を溶解し、細胞破壊物破片を遠心分離（３０分、２０，０００Ｇ、４℃）により除去する。透明になった上澄液を粗い予備フィルターに通すことで濾過し、５００ｍＭのイミダゾールを含有しているＴＢＳ・ｐＨ８．５を加えて、最終イミダゾール濃度５０ｍＭを得る。この溶解産物を、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ［Ｎｉ＋＋荷電］キレート化レジン（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）が充填され、ＴＢＳ・ｐＨ８．５／５０ｍＭイミダゾールで前処理平衡化されたカラム（ＸＫ−２６、１０ｃｍ）に投入する。ベースライン吸収まで平衡緩衝液で洗浄した後、カラムを、９０ｍＭのイミダゾールを含有しているおよそ１カラム体積のＴＢＳ・ｐＨ−８．５で洗浄する。ＬＸＲα  ＬＢＤ（１８３〜４４７）を５０〜５００ｍＭのイミダゾール勾配で溶離する。カラムピーク画分を直ちに貯留し、５％の１，２−プロパンジオール、０．５ｍＭのＥＤＴＡおよび５ｍＭのＤＴＴを含有している２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ・ｐＨ８．５で４〜５倍に希釈する。次いでこの希釈された蛋白サンプルをＰｏｒｏｓ  ＨＱレジン（陰イオン交換）が充填されたカラム（ＸＫ−１６、１０ｃｍ）に投入する。希釈用緩衝液でベースライン吸収まで洗浄した後、３０〜５００ｍＭのＮａＣｌ勾配で溶離する。ピーク画分を貯留し、Ｃｅｎｔｒｉ−ｐｒｅｐ  １０Ｋ（Ａｍｉｃｏｎ社）を用いて濃縮し、５％の１，２−プロパンジオール、０．５ｍＭのＥＤＴＡおよび５ｍＭのＤＴＴを含有しているＴＢＳ・ｐＨ８．５で前処理平衡化されたＳｕｐｅｒｄｅｘ−７５レジン（Ｐｈａｒｍａｃｉａ社）が充填されたカラム（ＸＫ−２６、９０ｃｍ）を用いて、サイズ排除に付した。
【０１２２】
ＬＸＲαのビオチニル化：精製ＬＸＲα  ＬＢＤを、ＰＤ−１０ゲル濾過カラムを用いて、ＰＢＳ（１００ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．２、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ）に脱塩／緩衝液交換した。ＬＸＲα  ＬＢＤをおよそ１０ｍＭ／ＰＢＳに希釈し、最小容量のＰＢＳで５倍モル過剰のＮＨＳ−ＬＣ−Ｂｉｏｔｉｎ（Ｐｉｅｒｃｅ社）を加えた。この溶液を、ゆっくり混合しながら３０〜６０分間周囲温度でインキュベートした。ビオチニル化修飾反応は、２０００ｘモル過剰のＴｒｉｓ−ＨＣｌ・ｐＨ８を加えることにより停止させた。修飾ＬＸＲα  ＬＢＤを４回の緩衝液交換（それぞれ、少なくとも５０倍容量で、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＤＴＴ、２ｍＭのＥＤＴＡおよび２％のスクロースを含有している２５ｍＭのＴｒｉｓ・ｐＨ８．５）に対して透析を行った。ビオチニル化ＬＸＲα  ＬＢＤを質量分光分析に付して、ビオチニル化試薬による修飾の程度を明らかにした。概して、およそ９５％の蛋白が少なくとも１個のビオチニル化部位を有し、また全体としてのビオチニル化の程度は、１〜６個の複数部位の正規分布に従っていた。
【０１２３】
ＬＸＲα  ＳＰＡ用アッセイ緩衝液：５０ｍＭ  ＭＯＰＳ・ｐＨ７．５、５０ｍＭ  ＮａＦ、０．０５ｍＭ  ＣＨＡＰＳ。０．１ｍｇ／ｍＬのＦｒａｃｔｉｏｎ５脂肪酸フリーＢＳＡ。アッセイ緩衝液中での使用直前に固体ＤＴＴをアッセイ緩衝液に加える（最終濃度＝１０ｍＭ）。
【０１２４】
ＳＰＡビーズ／ＬＸＲα／３Ｈ放射線リガンド溶液の調製：１０ｍＭの新たに固体から加えられたＤＴＴを含有している緩衝液に、適切な量の５ｍｇ／ｍＬのＳＰＡビーズ溶液を加えて０．２５ｍｇ／ｍＬの最終濃度にする。適切な量のＬＸＲα  ＬＢＤを加えて、２５ｎＭの最終濃度を得、ゆっくり上下を逆にして混合する。室温で３０分インキュベートする。ビーズを２５００ｒｐｍで１０分間遠心沈降させて、ビーズペレットを乱すことなく上澄液を気をつけて除去する。１０ｍＭの新たに加えられたＤＴＴを含有しているアッセイ緩衝液で元の体積まで希釈する。ビーズ溶液に放射線標識リガンド（Ｎ−３Ｈ３−メチル−Ｎ−｛４−［２，２，２−トリフルオロ−１−ヒドロキシ−１−（トリフルオロメチル）エチル］フェニル｝ベンゼンスルホンアミド）を１０ｎＭの最終濃度まで加える。試験化合物が入っている９６ウェルプレートの各ウェルに、マルチドロップを用いて１００μＬを加え、室温で３０分インキュベートし、Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ  １４５０  Ｔｒｉｌｕｘで読み取る。次の式によりデータを正規化する：（１−（被検体の値−非特異的の平均値）／（１００％の平均値−非特異的の平均値））×１００＝％阻害。
【表１】
2009506052.tif 000029
【０１２５】
ＩＬ−６  ＥＬＩＳＡ：ヒト単球／マクロファージ細胞株であるＴＨＰ−１（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ．）を４０ｎｇ／ｍＬの１α，２５−ジヒドロキシ−ＶｉｔａｍｉｎＤ３（ＥＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）により１０×１０６細胞／５０ｍＬ標準細胞培養培地で７２時間分化させた。分化ＴＨＰ−１細胞を完全培地にある９６ウェルプレート（１×１０５／ｍＬ、２００μＬ／ウェル）に接種した。ＤＭＳＯ溶液中化合物（最終０．２％ＤＭＳＯ）を２ウェルずつに加え、最終濃度は２．３ｎＭから５．０μＭまでの範囲とした（３７℃／５％ＣＯ２加湿インキュベータ）。化合物またはビヒクルによる６時間の予備処理の後、リポ多糖体（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を各ウェルに最終濃度１００ｎｇ／ｍＬまで加えた。次いでプレートをさらに１８時間インキュベートした（３７℃／５％ＣＯ２加湿インキュベータ）。プレートを卓上遠心分離器中１２００ｒｐｍで５分間遠心分離して、すべての細胞をペレット化した。培地を取り出し、別の９６ウェルプレートに移し、アッセイまで４℃で貯蔵しておいた。この培地中のヒトＩＬ−６をＩＬ−６  ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いてアッセイした。本発明の化合物でＴＨＰ−１細胞を処理すると、ビヒクルで処理した細胞に比較した場合、上述のアッセイで測定される、培地中に検出されるＩＬ−６の量が少なくなる。ＩＣ５０が１００ｎＭ未満の化合物が好ましい。
【０１２６】
トリグリセリド蓄積アッセイ：ＨｅｐＧ２細胞を完全培地の９６ウェルプレートに接種した（１×１０５／ｍＬ、２００μＬ／ウェル）。２４時間後、ＤＭＳＯ溶液中化合物を３ウェルずつに加え、最終濃度は２．３ｎＭから５μＭまでとした。５％ＣＯ２加湿インキュベータ中３７℃で４日の後、各ウェルにつき細胞を５０μＬの０．１％ＮＰ−４０に溶解させた。トリグリセリド（ＧＰＯ）試薬セット（ＴｈｅｒｍｏＤＭＡ，Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＴＸ）を用いて細胞トリグリセリドを製造者のプロトコルに従って測定した。ビヒクルで処理した細胞に比較して、トリグリセリド蓄積をほとんどまたはまったく示さない化合物が好ましい。
【０１２７】
本明細書では本発明の特定の実施形態を説明しまた詳細に述べてきたが、本発明はそれらに限定されるものではない。ここまでの詳細な説明は本発明の説明として提供されているものであり、本発明の限定を構成するものと解釈すべきでない。当業者には改変は明らかであると思われるので、本発明の思想から逸脱しない改変はすべて、添付の特許請求の範囲の中に入るものとする。
【国際調査報告】
2009506052.tif 000037
2009506052.tif 000038
2009506052.tif 000039
2009506052.tif 000040