(57)【要約】  本発明は、線維症の非侵襲性可視化のために適した新規造影剤を提供する。造影剤製造用の前駆体並びに造影剤を含んでなる医薬品組成物及び医薬品組成物製造用のキットもまた、本発明によって提供される。さらなる態様として、線維症を含む状態のインビボイメージング及びかかる状態の診断用医薬品の製造のための該造影剤の使用も提供される。【選択図】    図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
コラーゲン結合ペプチド（ＣＢＰ）及びイメージング成分を含んでなる造影剤であって、前記ＣＢＰは
（ｉ）ＲＲＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫＸａａＩＬＹ、
（ｉｉ）ＧＥＬＹＫＸａａＩＬＹ、
（ｉｉｉ）ＤＡＲＫＳＥＶＱＫ、
（ｉｖ）ＫＥＬＮＶＬＹＴ、
（ｖ）ＸａａＶＷＬＷＥＱＸａａ、
（ｖｉ）ＸａａＶＷＬＷＥＮＸａａ、
（ｖｉｉ）ＸａａＶＷＴＬＰＤＱＸａａ、
（ｖｉｉｉ）ＴＧＥＬＹＫＸａａＩＬＹＴＬＡＷＫＴＴＡＲＬＫＥＬＮＬＶＹＴＴ、
（ｉｘ）医療用ヒルＨｉｒｕｄｏ ｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓの唾液から導かれるサラチン組換えポリペプチド、
（ｘ）デコリンの残基１７６〜２０１、及び
（ｘｉ）ペプチド（ｉ）〜（ｘ）のいずれかのペプチド類似体
から選択されるか、或いは前記ＣＢＰはこれらのペプチドのいずれかの安定化型、切断型及び／又は環状型であるか、或いはこれらのペプチド又はその切断型の２種のホモ若しくはヘテロ二量体であり、式中のＸａａはシステイン、２−アミノ酪酸、メチオニン又はアラニンのいずれかであることができ、前記イメージング成分は前記ＣＢＰの一体部分であるか、或いは適当な化学基を介してＣＢＰに連結している、造影剤。
【請求項２】
前記ＣＢＰがペプチド（ｉ）〜（ｖｉｉ）或いはその切断型又は環状型から選択されるか、或いは前記ＣＢＰがこれらのペプチド又はその切断型の２種のホモ若しくはヘテロ二量体であり、Ｘａａがシステイン又は２−アミノ酪酸のいずれかであることができる、請求項１記載の造影剤。
【請求項３】
前記ＣＢＰがペプチド（ｉ）〜（ｉｖ）或いはその切断型又は環状型から選択されるか、或いは前記ＣＢＰがこれらのペプチド又はその切断型の２種のホモ若しくはヘテロ二量体であり、Ｘａａがシステイン又は２−アミノ酪酸のいずれかであることができる、請求項１又は請求項２記載の造影剤。
【請求項４】
前記ＣＢＰが下記のものから選択され、各々の場合においてＮ末端は任意にアセチルで保護されかつＣ末端は任意にアミドで保護される、請求項１又は請求項２記載の造影剤。
（ａ）下記方法の１以上で修飾されたペプチド（ｉ）、
・２つのＮ末端アルギニンを除去するための切断
・Ｘａａ＝２−アミノ酪酸又はシステイン
・メチル化アラニン残基
・メチル化リシン残基
・リシンによるチロシンの置換
・Ｃ末端へのポリエチレングリコール及び／又はジグリコリルの付加
（ｂ）（ａ）と同様に修飾されかつレトロインベルソ配列に変換されたペプチド（ｉ）、
（ｃ）Ｘａａ＝システインであるペプチド（ｉｉ）、
（ｄ）非修飾ペプチド（ｉｉｉ）又はそれぞれがＮ末端及びＣ末端に付加された２つのシステイン残基によって環化されたペプチド（ｉｉｉ）、
（ｅ）非修飾ペプチド（ｉｖ）又は下記方法のいずれか一方又は両方で修飾されたペプチド（ｉｖ）、
・バリン５及びロイシン６の逆転
・それぞれがＮ末端及びＣ末端に付加された２つのシステイン残基による環化
並びに
（ｆ）Ｘａａ＝システインであるペプチド（ｖ）〜（ｖｉｉ）。
【請求項５】
前記ＣＢＰが下記のものから選択される、請求項４記載の造影剤。
ａ）ＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫＣＩＬＹ−ＮＨ2、
ｂ）ＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫ−［Ａｂｕ］−ＩＬＹ−ＮＨ2、
ｃ）Ａｃ−ＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＦＫ−［Ａｂｕ］−ＩＬＹ−ＮＨ2、
ｄ）Ａｃ−ＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫ−［Ａｂｕ］−ＩＬＦ−ＮＨ2、
ｅ）Ａｃ−ＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹ−［ＮＭｅＬｙｓ］−［Ａｂｕ］−ＩＬＦ−ＮＨ2、
ｆ）Ａｃ−ＡＮ−［ＮＭｅＡｌａ］−ＡＬＫＡＧＥＬＹＫ−［Ａｂｕ］−ＩＬＦ−ＮＨ2、
ｇ）Ａｃ−ＡＮ−［ＮＭｅＡｌａ］−ＡＬＫＡＧＥＬＹ−［ＮＭｅＬｙｓ］−［Ａｂｕ］−ＩＬＦ−ＮＨ2、
ｈ）ＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫ−［Ａｂｕ］−ＩＬＹ−［ＰＥＧ（４）］−［ジグリコリル］−ＮＨ2、
ｉ）ＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹ−［ＮＭｅＬｙｓ］−［Ａｂｕ］−ＩＬＹ−［ＰＥＧ（４）］−［ジグリコリル］−ＮＨ2、
ｊ）ＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫ−［Ａｂｕ］−ＩＬＹ−［ＰＥＧ（４）］−［ジグリコリル］−ＣＯＯＨ、
ｋ）Ｄ−ＹＬＩ−［Ａｂｕ］−ＫＹＬＥＧＡＫＬＡＡＮＡ−ＮＨ2、
ｌ）ＧＥＬＹＫＣＩＬＹ−ＮＨ2、
ｍ）ＤＡＲＫＳＥＶＱＫ−ＮＨ2、
ｎ）２つの付加末端システイン残基を介して環化されたＣＤＡＲＫＳＥＶＱＫＣ−ＮＨ2、
ｏ）ＫＥＬＮＶＬＹＴ−ＮＨ2、
ｐ）ＫＥＬＮＬＶＹＴ−ＮＨ2、
ｑ）Ａｃ−ＫＥＬＮＬＶＹＴ−ＮＨ2、
ｒ）２つの付加末端システイン残基の橋かけによって環化されたＡｃ−ＣＫＥＬＮＬＶＹＴＣ−ＮＨ2、
ｓ）システイン残基の橋かけによって環化されたＣＶＷＬＷＥＱＣ−ＮＨ2、
ｔ）システイン残基の橋かけによって環化されたＣＶＷＬＷＥＮＣ−ＮＨ2、及び
ｕ）システイン残基の橋かけによって環化されたＣＶＷＴＬＰＤＱＣ−ＮＨ2。
（式中、「Ａｃ」はアセチル基であり、「Ａｂｕ」は２−アミノ酪酸であり、「ＮＭｅＬｙｓ」はＮ−メチル化リシンであり、「ＭＮｅＡｌａ」はＮ−メチル化アラニンであり、「ＰＥＧ（Ｘ）」はＸ単位のポリエチレングリコール鎖である。）
【請求項６】
前記イメージング成分が下記のものから選択される、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載の造影剤。
（ｉ）放射性金属イオン、
（ｉｉ）常磁性金属イオン、
（ｉｉｉ）γ放出型放射性ハロゲン、
（ｉｖ）陽電子放出型放射性非金属、
（ｖ）過分極ＮＭＲ活性核、及び
（ｖｉ）インビボ光学イメージングのために適したレポーター。
【請求項７】
イメージング成分が放射性金属イオンである、請求項６記載の造影剤。
【請求項８】
放射性金属イオンが99mＴｃである、請求項７記載の造影剤。
【請求項９】
イメージング成分がγ放出型放射性ハロゲンである、請求項６記載の造影剤。
【請求項１０】
γ放出型放射性ハロゲンが123Ｉ及び131Ｉから選択される、請求項９記載の造影剤。
【請求項１１】
イメージング成分が陽電子放出型放射性非金属である、請求項６記載の造影剤。
【請求項１２】
陽電子放出型放射性非金属が18Ｆ及び11Ｃから選択される、請求項１１記載の造影剤。
【請求項１３】
請求項１乃至請求項１２記載の造影剤を製造するための前駆体であって、当該前駆体は請求項１乃至請求項４のＣＢＰ及びイメージング成分の供給源と反応し得る化学基を含み、前記化学基は
（ｉ）金属イメージング成分を錯体化できるキレーター、
（ｉｉ）トリアルキルスタンナン又はトリアルキルシランのような有機金属誘導体、
（ｉｉｉ）求核置換用のアルキルハライド、アルキルトシレート又はアルキルメシレートを含む誘導体、或いは
（ｉｖ）チオール含有化合物をアルキル化してチオエーテル含有生成物を与える誘導体
からなり、前記化学基は前記ＣＢＰの一体部分であるか、或いは前記ＣＢＰに連結している、前駆体。
【請求項１４】
前記化学基が
（ｉ）金属イメージング成分を錯体化できるキレーター、或いは
（ｉｉ）トリアルキルスタンナン又はトリアルキルシランのような有機金属誘導体
からなる、請求項１３記載の前駆体。
【請求項１５】
無菌で非発熱性の形態にある、請求項１３又は請求項１４記載の前駆体。
【請求項１６】
当該前駆体が固相に結合されている、請求項１３乃至請求項１５のいずれか１項に記載の前駆体。
【請求項１７】
請求項１乃至請求項１２のいずれか１項に記載の造影剤を、ヒトへの投与に適した形態の生体適合性キャリヤーと共に含んでなる医薬品組成物。
【請求項１８】
前記造影剤が放射性イメージング成分を含む、請求項１７記載の医薬品組成物。
【請求項１９】
１人の患者用として適した放射能量を有し、適当な注射器又は容器に入れて供給される、請求項１８記載の医薬品組成物。
【請求項２０】
請求項１７乃至請求項１９のいずれか１項記載の医薬品組成物を製造するためのキットであって、請求項１３乃至請求項１９のいずれか１項記載の前駆体を含んでなるキット。
【請求項２１】
インビボ診断又はイメージング方法で使用するための、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項２２】
前記方法がコラーゲン形成状態のインビボイメージングに関する、請求項２１記載の造影剤。
【請求項２３】
コラーゲン形成状態が線維症に関連した状態である、請求項２２記載の造影剤。
【請求項２４】
前記線維症に関連した状態が特発性肺線維症、喘息、慢性閉塞性肺疾患、強皮症、糖尿病性網膜症、ＡＭＤ、アテローム性動脈硬化症、脆弱性プラーク、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、ＩｇＡ腎症、肝線維症、慢性関節リューマチ又はうっ血性心不全である、請求項２３記載の造影剤。
【請求項２５】
被験体においてコラーゲン形成状態のインビボ診断又はイメージングを行うための方法であって、請求項１７乃至請求項１９記載の医薬品組成物の投与を含んでなる方法。
【請求項２６】
請求項１７乃至請求項１９記載の医薬品組成物を予め投与した被験体においてコラーゲン形成状態のインビボイメージングを行うための、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の造影剤の使用。
【請求項２７】
コラーゲン形成状態のインビボイメージング用医薬品の製造のための、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の造影剤の使用。
【請求項２８】
コラーゲン形成状態と戦うための薬物によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニターする方法であって、請求項１乃至請求項１２のいずれか１項記載の造影剤を前記身体に投与する段階、及び前記造影剤の取込みを検出する段階を含んでなる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は診断イメージングに関し、特に線維症の診断イメージングに関する。このような目的のため、特に肝臓、心臓、腎臓及び肺における線維症の診断イメージングのために適した診断造影剤が記載される。
【背景技術】
【０００２】
簡単に述べれば、線維症は瘢痕組織であって、組織におけるすべての「修復」過程の一部をなす。しかし、進行中の炎症、感染及び反復損傷の場合には、線維症の瘢痕組織は増成して「機能性」細胞に置き換わることがなく、したがって異常な器官機能、そして結局は器官不全を引き起こす。線維症は、医学における主要な古典的病理学的過程の１つである。それは世界中で数百万人の患者がいる多くの病気の基本構成要素であり、下記のような疾患を含んでいる。
ａ）特発性肺線維症（原因不明の肺線維症）、喘息及び慢性閉塞性肺疾患のような肺疾患、
ｂ）強皮症：身体の結合組織（即ち、皮膚及び内臓器官）内における過度の細胞外マトリックス沈着を特徴とする異質性で生命にかかわる疾患、
ｃ）移植に伴う術後瘢痕、
ｄ）糖尿病性網膜症及び加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）（眼の線維症性疾患及び失明の主因）、
ｅ）アテローム性動脈硬化症及び脆弱性プラークを含む心臓血管疾患、
ｆ）糖尿病に関連した腎線維症−糖尿病性腎症及び糸球体硬化症、
ｇ）ＩｇＡ腎症（腎不全及び透析や再移植の必要性の原因）、
ｈ）肝硬変及び胆道閉鎖症（肝線維症及び肝不全の主因）、
ｉ）Ｃ型肝炎感染、
ｊ）慢性関節リューマチ、
ｋ）皮膚筋炎のような自己免疫疾患、並びに
ｌ）うっ血性心不全。
【０００３】
線維症の臨床的発現は広範囲にわたる。肝硬変を例に取れば、その臨床的発現は全くの無症状から肝不全にまでわたり、基礎にある肝疾患の性質及び重症度並びに肝線維症の程度によって決定される。肝硬変患者の４０％までは無症候であり、１０年を超えてその状態が続くこともあるが、腹水、静脈瘤出血及び脳障害をはじめとする合併症が発生すると進行性の悪化は避けられない。したがって、線維症及び肝硬変はウイルス疾患、自己免疫疾患、薬物誘発疾患、胆汁うっ滞疾患及び代謝性疾患をはじめとする各種の原因に由来した慢性肝損傷に対する持続した創傷治癒応答の結果を表している。肝線維症及び肝硬変の共通原因には、免疫媒介損傷、遺伝的異常及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）があり、最後のものは特に糖尿病及びメタボリックシンドローム（ＭＳ）と関連している。西欧の母集団では高率のＭＳが存在している。この症候群は、通例は肥満でありかつ高脂血症及び高血圧を有する個人において起こり、しばしばＩＩ型糖尿病の発症を引き起こす。メタボリックシンドロームの肝臓における発現は非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）であり、米国では人口の２４％が罹患していると推定される。脂肪肝はＮＡＦＬＤのスペクトルの軽症側の末端を表しており、これが進行するとＮＡＳＨになり、遂には肝硬変に至る。線維症の発症はかかる進行のリスクを示しており、現時点では肝生検によって評価される。しかし、肝生検は顕著な不快感を引き起こし、危険を伴わないわけではなく、多くの費用がかかる。その上、肝線維症のために利用できる血液試験はＮＡＦＬＤでは確実でない。
【０００４】
線維症は、細胞外マトリックス成分の過度の分泌によって特徴づけられる。これは、マトリックスタンパク質（最も注目すべきはＩ型及びＩＩＩ型コラーゲン）の合成の増加及び分解の減少によって引き起こされる。Ｉ型及びＩＩＩ型コラーゲンは細胞外マトリックスの主成分であり、線維症の発症を助長する。線維症の過程の初期段階では高レベルのＩＩＩ型コラーゲンが認められ、続いてＩ型コラーゲンが優勢になる。いくつかのグループが、コラーゲンに結合するペプチド化合物を開示している。Ｃｈｉａｎｇ及びＫａｎｇ［Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１９９７，１００（８），２０７９−８４］並びにＣｈｉａｎｇ［Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．，２０００，３２０（６），３６２−６７及び２００２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７，３４８９６−９０１］は、血小板上に見出され、コラーゲン媒介血小板凝集及びＡＴＰ放出を阻止するＩ型及びＩＩＩ型コラーゲンレセプターの配列から導かれた合成ペプチドを報告している。Ｔｈｏｍａｓら［２００５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８０（２４），２２５９６−６０５］は、Ｉ型コラーゲンのＣ末端領域に結合するレセプターであるＥｎｄｏ１８０を記載している。Ｄｅｐｒａｅｔｅｒａら［１９９８，Ｂｌｏｏｄ，９２（１１），４２０７］は、仔ウシ皮膚及びヒトのＩ型コラーゲンに対するＷｉｌｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）の結合を阻止する２種の環状オクタペプチドを報告している。Ｔｙｅら［２００５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８０（１４），１３４８７−４９２］は、組換え骨シアロタンパク質（ｒＢＳＰ）から導かれる合成ペプチドのＩ型コラーゲンに対する結合を報告している。
【０００５】
国際公開第２００６／０５４９０４号は、コラーゲン形成領域に結合する標的化ベクターを含む造影剤に関する。これらの造影剤は、過度のコラーゲン形成に関係する疾患（とりわけ線維症）の診断及び治療のモニタリングのために有用であると示唆されている。
【０００６】
線維症の検出のためのさらなる造影剤に対するニーズが存在している。
【特許文献１】国際公開第２００６／０５４９０４号パンフレット
【非特許文献１】Ｃｈｉａｎｇ  ａｎｄ  Ｋａｎｇ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１９９７，１００（８），２０７９−８４．
【非特許文献２】Ｃｈｉａｎｇ，Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．，２０００，３２０（６），３６２−６７．
【非特許文献３】Ｃｈｉａｎｇ，２００２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７，３４８９６−９０１．
【非特許文献４】Ｔｈｏｍａｓ  ｅｔ  ａｌ，２００５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８０（２４），２２５９６−６０５．
【非特許文献５】Ｄｅｐｒａｅｔｅｒａ  ｅｔ  ａｌ，１９９８，Ｂｌｏｏｄ，９２（１１），４２０７．
【非特許文献６】Ｔｙｅ  ｅｔ  ａｌ，２００５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８０（１４），１３４８７−４９２．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、線維症の非侵襲性可視化のために適した新規造影剤を提供する。造影剤製造用の前駆体並びに造影剤を含んでなる医薬品組成物及び医薬品組成物製造用のキットもまた、本発明によって提供される。さらなる態様として、線維症を含む状態のインビボイメージング及びかかる状態の診断用医薬品の製造のための該造影剤の使用も提供される。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
第１の態様では、本発明は、コラーゲン結合ペプチド（ＣＢＰ）及びイメージング成分を含んでなる造影剤であって、前記ＣＢＰは
（ｉ）ＲＲＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫＸａａＩＬＹ、
（ｉｉ）ＧＥＬＹＫＸａａＩＬＹ、
（ｉｉｉ）ＤＡＲＫＳＥＶＱＫ、
（ｉｖ）ＫＥＬＮＶＬＹＴ、
（ｖ）ＸａａＶＷＬＷＥＱＸａａ、
（ｖｉ）ＸａａＶＷＬＷＥＮＸａａ、
（ｖｉｉ）ＸａａＶＷＴＬＰＤＱＸａａ、
（ｖｉｉｉ）ＴＧＥＬＹＫＸａａＩＬＹＴＬＡＷＫＴＴＡＲＬＫＥＬＮＬＶＹＴＴ、
（ｉｘ）医療用ヒルＨｉｒｕｄｏ ｍｅｄｉｃｉｎａｌｉｓの唾液から導かれるサラチン組換えポリペプチド、
（ｘ）デコリンの残基１７６〜２０１、及び
（ｘｉ）ペプチド（ｉ）〜（ｘ）のいずれかのペプチド類似体
から選択されるか、或いは前記ＣＢＰはこれらのペプチドのいずれかの安定化型、切断型及び／又は環状型であるか、或いはこれらのペプチド又はその切断型の２種のホモ若しくはヘテロ二量体であり、式中のＸａａはシステイン、２−アミノ酪酸（Ａｂｕ）、メチオニン又はアラニンのいずれかであることができる造影剤を提供する。上記ペプチド（ｉ）〜（ｘｉ）の各々は、コラーゲン結合活性を有する生理的ペプチドのフラグメントであるか、或いはそれから導かれるものである。好ましくは、ＣＢＰは８〜３０マーのペプチドであり、最も好ましくは８〜２０マーのペプチドである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の造影剤は、好適には１μＭ未満の親和力、好ましくは１００ｎＭ未満の親和力、最も好ましくは１０ｎＭ未満の親和力をもってコラーゲンに結合する。
【００１０】
本発明のペプチド（ｘｉ）に関連する「ペプチド類似体」という用語は、ペプチド（ｉ）〜（ｘ）の全部又は一部を含む天然又は合成ペプチドであって、１以上のアミノ酸残基が代わりのアミノ酸残基で置換されており、しかもコラーゲンに対する親和性を保持しているものを意味する。好ましいペプチド類似体は合成ペプチドである。ペプチドの変更を最小限に抑えるため、若干のアミノ酸残基のみを置換し、保存的置換のみを行うのが普通である。下記の表は、保存的と考えられる置換を略示している。
【００１１】
【表１】
2009537624.tif 000002
しかし、コラーゲンに対する親和性が保持される限りは、任意のアミノ酸置換が好適である。
【００１２】
本発明のＣＢＰの「安定化」型は、血漿中での切断に対して向上した抵抗性を有するように修飾された配列（ｉ）〜（ｘｉ）のいずれかのペプチドである。ＣＢＰのコラーゲン結合性が保持されてイメージング成分が標的に確実に送達されるように、ＣＢＰはインビボで無傷のままに保たれることが重要である。
【００１３】
ＣＢＰを安定化する１つの方法は、ＣＢＰのＮ末端にＺ1基を結合すること及び／又はＣＢＰのＣ末端にＺ2基を結合することである。Ｚ1基は、最後のアミノ酸残基のアミン基を置換する。即ち、Ｚ1がＨである場合、ＣＢＰのアミノ末端は最後のアミノ酸残基の遊離ＮＨ2基で終わる。Ｚ2基は、最後のアミノ酸残基のカルボニル基を置換する。即ち、Ｚ2がＯＨである場合、ＣＢＰのカルボキシ末端は最後のアミノ酸残基の遊離ＣＯ2Ｈ基で終わり、Ｚ2がＯＢC（式中、ＢCは生体適合性陽イオンである。）である場合、その末端カルボキシ基はＣＯ2ＢCとしてイオン化される。
【００１４】
ＣＢＰのＮ末端用の好適なＺ1基は当業者にとって公知であり、好適にはＮアシル化基−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）ＲG（式中、アシル基−（Ｃ＝Ｏ）ＲGはＣ1-6アルキル及びＣ3-10アリール基から選択されるＲGを有するか、或いはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位を含む。）から選択される。好ましいＮ末端基はアセチル、ベンジルオキシカルボニル又はトリフルオロアセチルであり、最も好ましくはアセチルである。
【００１５】
ＣＢＰのＣ末端用の好適なＺ2基には、カルボキサミド、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、ベンジルエステル、シクロヘキシルエステル、アミノアルコール及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位がある。好ましいかかる基はカルボキサミド又はＰＥＧであり、最も好ましいかかる基はカルボキサミドである。
【００１６】
ＣＢＰを安定化する方法の追加例には、アミノ酸残基のＮ−アルキル化（好ましくはＮ−メチル化）、アミノ酸残基のアセチル化、非天然アミノ酸又はアミド結合アイソスターの組込み、血漿酵素によって容易に認識されない他の部分の付加（例えば、ポリエチレングリコール又はジグリコロイル部分によるＣ末端の延長）、及びレトロインベルソ配列へのペプチド構造の変換（即ち、アミノ酸配列の逆転及びＤ−アミノ酸によるすべてのＬ−アミノ酸の置換）がある。
【００１７】
本発明のＣＢＰの「切断」型は、前記切断型が５以上のアミノ酸残基を含むことを条件にして、カルボキシ末端及び／又はアミノ末端から１〜５のアミノ酸が欠如している配列（ｉ）〜（ｘｉ）のいずれかのペプチドである。
【００１８】
本発明のＣＢＰの「環状」型は、存在するシステイン残基又はペプチド配列に付加されたシステイン残基を用いた橋かけによって環化されたＣＢＰである。環化はまた、頭−尾環化（即ち、Ｎ末端アミノ基とＣ末端カルボキシ基との間でアミド結合を形成すること）によっても達成できる。システイン残基がペプチド配列に付加される場合には、頭−尾環化を達成するため、これらを末端に付加するのが好ましい。環状ペプチドを形成するためのさらなる方法は、その側鎖を介して２つのアミノ酸（例えば、リシン及びグルタミン酸）の間に結合を形成することである。
【００１９】
ＣＢＰペプチドは、通常の固相合成で得ることができる。Ａｌｂｅｒｉｃｉｏは、固相ペプチド合成の手法に関する最近の総説を提供している［Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，２００４，８，２１１−２１］。
【００２０】
本発明の特定のＣＢＰペプチドの記載は、（上記ペプチド（ｉ）〜（ｘ）と同じ番号を用いて示される）下記の参考文献中に見出すことができる。
（ｉ）Ｃｈｉａｎｇ  ａｎｄ  Ｋａｎｇ，１９９７，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１００（８），２０７９−８４．
（ｉｉ）Ｃｈｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，２０００，Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．，３２０（６），３６２−７．
（ｉｉｉ）Ｃｈｉａｎｇ，２００２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７，３４８９６−９０１．
（ｉｖ）Ｃｈｉａｎｇ，２００２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７，３４８９６−９０１．
（ｖ）Ｄｅｐｒａｅｔｅｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｂｌｏｏｄ，９２（１１），４２０７−１１．
（ｖｉ）Ｄｅｐｒａｅｔｅｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｂｌｏｏｄ，９２（１１），４２０７−１１．
（ｖｉｉ）Ｐａｒｅｔｉ  ｅｔ  ａｌ，１９８７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６２（２８），１３８４１．
（ｖｉｉｉ）Ｚｈｕ  ｅｔ  ａｌ，２００７，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．，１１９（１），１１１−１１９．
（ｉｘ）Ｃｒｕｚ  ｅｔ  ａｌ，２００１，Ｊ．Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｓｕｒｇｅｒｙ，３４（４），７２４−２９．
（ｘ）Ｈｕｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔ．Ｒｅｓ．，５５（４），４９６−５０２．
「造影剤」という用語は、哺乳動物における特定の生理学的又は病態生理学的状態を標的化するように設計され、哺乳動物体へのインビボ投与後に検出できる化合物を意味する。
【００２１】
本発明の造影剤では、イメージング成分はＣＢＰの一体部分として存在することができる。例えば、ＣＢＰの原子の１つが12Ｃの代わりに11Ｃになり得る。別法として、イメージング成分は適当な化学基（例えば、金属イオンであるイメージング成分を錯体化できる金属キレート）を介してＣＢＰに連結することができる。ＣＢＰを適当な化学基に結合し又はイメージング成分自体に直接結合するリンカーが存在することもできる。本発明の好適なリンカーは式−（Ｌ）n−を有する。式中、
各Ｌは独立に−ＣＯ−、−ＣＲ'2−、−ＣＲ'＝ＣＲ'−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ'2ＣＯ2−、−ＣＯ2ＣＲ'2−、−ＮＲ'−、−ＮＲ'ＣＯ−、−ＣＯＮＲ'−、−ＮＲ'（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ’−、−ＮＲ'（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ'−、−ＳＯ2ＮＲ'−、−ＮＲ'ＳＯ2−、−ＣＲ'2ＯＣＲ'2−、−ＣＲ'2ＳＣＲ'2−、−ＣＲ'2ＮＲ'ＣＲ'2−、Ｃ4-8シクロヘテロアルキレン基、Ｃ4-8シクロアルキレン基、Ｃ5-12アリーレン基、Ｃ3-12ヘテロアリーレン基、アミノ酸、ポリアルキレングリコール、ポリ酢酸又はポリグリコール酸部分であり、
ｎは０〜１５の値を有する整数であり、
各Ｒ' は独立にＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ3-10アルキルアリール、Ｃ2-10アルコキシアルキル、Ｃ1-10ヒドロキシアルキル又はＣ1-10フルオロアルキルであるか、或いは２以上のＲ' 基がこれらの結合する原子と共に炭素環式又は複素環式の飽和又は不飽和環を形成する。
ただし、前記リンカーは３０原子の鎖より長くないことを条件とする。
【００２２】
枝分れリンカー基（即ち、リンカー基−（Ｌ）n−がさらなる−（Ｌ）n−リンカー基で置換され、末端が上記に定義したようなＲ' 基で終わるもの）も可能であることが想定されている。かかる枝分れリンカーは、本発明の造影剤の体内分布及び／又は排泄を操作することに関連して特に有用である。
【００２３】
「アミノ酸」という用語は、Ｌ−又はＤ−アミノ酸、アミノ酸類似体（例えば、ナフチルアラニン）或いはアミノ酸模倣体を意味し、これらは天然のもの又は純粋に合成由来のものであってよく、光学的に純粋なもの（即ち、単一の鏡像異性体）、したがってキラルなものであるか、或いは鏡像異性体の混合物であってよい。好ましくは、本発明のアミノ酸は光学的に純粋なものである。
【００２４】
かかるリンカーは、後述するような本発明の他の態様に関連しても適用できる。ＣＢＰを適当な化学基に結合し又はイメージング成分自体に直接結合するためには、好ましいＬ基は−ＣＯ−、−ＣＨ2−、−ＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＣＨ2ＯＣＨ2−及びアミノ酸である。
【００２５】
好ましい実施形態では、本発明のＣＢＰは、上述したペプチド（ｉ）〜（ｖｉｉ）、或いはその安定化型、切断型又は環状型、或いはこれらのペプチド又はその切断型の２種のホモ若しくはヘテロ二量体から選択され、式中のＸａａは前記に定義した通りである。
【００２６】
最も好ましい実施形態では、本発明のＣＢＰは下記のものから選択され、各々の場合においてＮ末端は任意にアセチルで保護されかつＣ末端は任意にアミドで保護される。
（ａ）下記方法の１以上で修飾されたペプチド（ｉ）、
・２つのＮ末端アルギニンを除去するための切断
・Ｘａａ＝２−アミノ酪酸又はシステイン
・メチル化アラニン残基
・メチル化リシン残基
・リシンによるチロシンの置換
・Ｃ末端へのポリエチレングリコール鎖及び／又はジグリコリルの付加
（ｂ）（ａ）と同様に修飾されかつレトロインベルソ配列に変換されたペプチド（ｉ）、
（ｃ）Ｘａａ＝システインであるペプチド（ｉｉ）、
（ｄ）非修飾ペプチド（ｉｉｉ）又はそれぞれがＮ末端及びＣ末端に付加された２つのシステイン残基によって環化されたペプチド（ｉｉｉ）、
（ｅ）非修飾ペプチド（ｉｖ）又は下記方法のいずれか一方又は両方で修飾されたペプチド（ｉｖ）、
・バリン５及びロイシン６の逆転
・それぞれがＮ末端及びＣ末端に付加された２つのシステイン残基による環化
並びに
（ｆ）Ｘａａ＝システインであるペプチド（ｖ）〜（ｖｉｉ）。
【００２７】
本発明の最も好ましいＣＢＰの例は下記の通りである（すべてのアミノ酸は特記しない限りＬ−アミノ酸である）。
ａ）ＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫＣＩＬＹ−ＮＨ2、
ｂ）ＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫ−［Ａｂｕ］−ＩＬＹ−ＮＨ2、
ｃ）Ａｃ−ＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＦＫ−［Ａｂｕ］−ＩＬＹ−ＮＨ2、
ｄ）Ａｃ−ＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫ−［Ａｂｕ］−ＩＬＦ−ＮＨ2、
ｅ）Ａｃ−ＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹ−［ＮＭｅＬｙｓ］−［Ａｂｕ］−ＩＬＦ−ＮＨ2、
ｆ）Ａｃ−ＡＮ−［ＮＭｅＡｌａ］−ＡＬＫＡＧＥＬＹＫ−［Ａｂｕ］−ＩＬＦ−ＮＨ2、
ｇ）Ａｃ−ＡＮ−［ＮＭｅＡｌａ］−ＡＬＫＡＧＥＬＹ−［ＮＭｅＬｙｓ］−［Ａｂｕ］−ＩＬＦ−ＮＨ2、
ｈ）ＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫ−［Ａｂｕ］−ＩＬＹ−［ＰＥＧ（４）］−［ジグリコリル］−ＮＨ2、
ｉ）ＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹ−［ＮＭｅＬｙｓ］−［Ａｂｕ］−ＩＬＹ−［ＰＥＧ（４）］−［ジグリコリル］−ＮＨ2、
ｊ）ＡＮＡＡＬＫＡＧＥＬＹＫ−［Ａｂｕ］−ＩＬＹ−［ＰＥＧ（４）］−［ジグリコリル］−ＣＯＯＨ、
ｋ）Ｄ−ＹＬＩ−［Ａｂｕ］−ＫＹＬＥＧＡＫＬＡＡＮＡ−ＮＨ2、
ｌ）ＧＥＬＹＫＣＩＬＹ−ＮＨ2、
ｍ）ＤＡＲＫＳＥＶＱＫ−ＮＨ2、
ｎ）２つの付加末端システイン残基を介して環化されたＣＤＡＲＫＳＥＶＱＫＣ−ＮＨ2、
ｏ）ＫＥＬＮＶＬＹＴ−ＮＨ2、
ｐ）ＫＥＬＮＬＶＹＴ−ＮＨ2、
ｑ）Ａｃ−ＫＥＬＮＬＶＹＴ−ＮＨ2、
ｒ）２つの付加末端システイン残基の橋かけによって環化されたＡｃ−ＣＫＥＬＮＬＶＹＴＣ−ＮＨ2、
ｓ）システイン残基の橋かけによって環化されたＣＶＷＬＷＥＱＣ−ＮＨ2、
ｔ）システイン残基の橋かけによって環化されたＣＶＷＬＷＥＮＣ−ＮＨ2、及び
ｕ）システイン残基の橋かけによって環化されたＣＶＷＴＬＰＤＱＣ−ＮＨ2。
上記リスト中、「Ａｃ」はアセチル基であり、「Ａｂｕ」は２−アミノ酪酸であり、「ＮＭｅＬｙｓ」はＮ−メチル化リシンであり、「ＭＮｅＡｌａ」はＮ−メチル化アラニンであり、「ＰＥＧ（Ｘ）」はＸ単位のポリエチレングリコール鎖である。
【００２８】
最も好ましい実施形態では、本発明のＣＢＰは、上述した（ｉ）〜（ｉｖ）、或いはその安定化型、切断型又は環状型、或いはこれらのペプチド又はその切断型の２種のホモ若しくはヘテロ二量体から選択されるペプチドであり、式中のＸａａは前記に定義した通りである。
【００２９】
「造影剤」は、人体の外部から検出するか、或いはインビボで使用するために設計された検出器（例えば、内視鏡のような血管内放射線又は光検出器）又は手術中の使用のために設計された放射線検出器の使用によって検出することができる。
【００３０】
イメージング成分は、好ましくは下記のものから選択される。
（ｉ）放射性金属イオン、
（ｉｉ）常磁性金属イオン、
（ｉｉｉ）γ放出型放射性ハロゲン、
（ｉｖ）陽電子放出型放射性非金属、
（ｖ）過分極ＮＭＲ活性核、及び
（ｖｉ）インビボ光学イメージングのために適したレポーター。
【００３１】
イメージング成分が放射性金属イオン（即ち、放射性金属）である場合、好適な放射性金属は、64Ｃｕ、48Ｖ、52Ｆｅ、55Ｃｏ、94mＴｃ又は68Ｇａのような陽電子放射体、或いは99mＴｃ、111Ｉｎ、113mＩｎ又は67Ｇａのようなγ放射体であり得る。好ましい放射性金属は99mＴｃ、64Ｃｕ、68Ｇａ及び111Ｉｎである。最も好ましい放射性金属はγ放射体、特に99mＴｃである。
【００３２】
イメージング成分が常磁性金属イオンである場合、好適なかかる金属イオンには、Ｇｄ（ＩＩＩ）、Ｍｎ（ＩＩ）、Ｃｕ（ＩＩ）、Ｃｒ（ＩＩＩ）、Ｆｅ（ＩＩＩ）、Ｃｏ（ＩＩ）、Ｅｒ（ＩＩ）、Ｎｉ（ＩＩ）、Ｅｕ（ＩＩＩ）及びＤｙ（ＩＩＩ）がある。好ましい常磁性金属イオンはＧｄ（ＩＩＩ）、Ｍｎ（ＩＩ）及びＦｅ（ＩＩＩ）であり、Ｇｄ（ＩＩＩ）が特に好ましい。
【００３３】
イメージング成分がγ放出型放射性ハロゲンである場合、放射性ハロゲンは好適には123Ｉ、131Ｉ及び77Ｂｒから選択される。125Ｉは、インビボ診断イメージング用のイメージング成分として使用するのに適さないので特に除外される。好ましいγ放出型放射性ハロゲンは123Ｉである。
【００３４】
イメージング成分が陽電子放出型放射性非金属である場合、好適なかかる陽電子放射体には、11Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、17Ｆ、18Ｆ、75Ｂｒ、76Ｂｒ及び124Ｉがある。好ましい陽電子放出型放射性非金属は11Ｃ、13Ｎ、18Ｆ及び124Ｉであり、特に好ましくは11Ｃ及び18Ｆであり、最も好ましくは18Ｆである。
【００３５】
イメージング成分が過分極ＮＭＲ活性核である場合、かかるＮＭＲ活性核は非ゼロ核スピンを有し、13Ｃ、15Ｎ、19Ｆ、29Ｓｉ及び31Ｐを含む。これらのうち、13Ｃが好ましい。「過分極」という用語は、ＮＭＲ活性核の分極度がそれの平衡分極を超えて増強されていることを意味する。（12Ｃに対する）13Ｃの天然存在度は約１％であり、好適な13Ｃ−標識化合物は過分極前に好適には５％以上、好ましくは５０％以上、最も好ましくは９０％以上の存在度に富化される。本発明の造影剤の１以上の炭素原子は好適には13Ｃで富化され、続いてこれが過分極される。
【００３６】
イメージング成分がインビボ光学イメージングのために適したレポーターである場合、レポーターは光学イメージング手続きで直接又は間接に検出できる任意の成分である。レポーターは、光散乱剤（例えば、着色又は無着色粒子）、吸光剤又は発光剤であり得る。さらに好ましくは、レポーターは発色団又は蛍光化合物のような染料である。染料は、紫外域乃至近赤外域の波長をもった電磁スペクトル中の光と相互作用する任意の染料であり得る。最も好ましくは、レポーターは蛍光特性を有する。
【００３７】
好ましい有機発色性及び発蛍光性レポーターには、広範な非局在化電子系を有する群、例えばシアニン類、メロシアニン類、インドシアニン類、フタロシアニン類、ナフタロシアニン類、トリフェニルメチン類、ポルフィリン類、ピリリウム染料、チアピリリウム染料、スクアリリウム染料、クロコニウム染料、アズレニウム染料、インドアニリン類、ベンゾフェノキサジニウム染料、ベンゾチアフェノチアジニウム染料、アントラキノン類、ナフトキノン類、インダスレン類、フタロイルアクリドン類、トリスフェノキノン類、アゾ染料、分子内及び分子間電荷移動染料及び染料錯体、トロポン類、テトラジン類、ビス（ジチオレン）錯体、ビス（ベンゼン−ジチオレート）錯体、インドアニリン染料、ビス（Ｓ，Ｏ−ジチオレン）錯体がある。緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及び異なる吸収／発光特性を有するＧＦＰの変種のような蛍光タンパク質も有用である。特定の状況においてはある種の希土類金属（例えば、ユウロピウム、サマリウム、テルビウム又はジスプロシウム）の錯体が使用され、蛍光ナノ結晶（量子ドット）についても同様である。
【００３８】
使用できる発色団の具体例には、フルオレセイン、スルホローダミン１０１（Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ）、ローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、ローダミン１９、インドシアニングリーン、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３Ｂ、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、Ｃｙ７．５、Ｍａｒｉｎａ  Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ  ８８、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ  ５１４、テトラメチルローダミン、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ３５０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４３０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５３２、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５４６、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５６８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５９４、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６３３、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６６０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６８０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７００及びＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７５０がある。
【００３９】
特に好ましいのは、４００ｎｍ〜３μｍ、特に６００〜００ｎｍの可視域又は近赤外（ＮＩＲ）域に吸収極大を有する染料である。光学イメージングモダリティ及び測定技法には、特に限定されないが、ルミネセンスイメージング、内視鏡検査、蛍光内視鏡検査、光学コヒーレンス断層撮影、透過率イメージング、時間分解透過率イメージング、共焦点イメージング、非線形顕微鏡検査、光音響イメージング、音響光学イメージング、スペクトル分析、反射スペクトル分析、干渉分析、コヒーレンス干渉分析、拡散光学断層撮影及び蛍光媒介拡散光学断層撮影（連続波、時間ドメイン及び周波数ドメインシステム）、並びに光の散乱、吸光、偏光、ルミネセンス、蛍光寿命、量子収率及び消光の測定がある。
【００４０】
好ましいイメージング成分は、インビボ投与後、例えばＳＰＥＣＴ、ＰＥＴ及びＭＲによる非侵襲的方法で外部から検出できるものである。最も好ましいイメージング成分は、放射性のもの、とりわけ放射性金属イオン、γ放出型放射性ハロゲン及び陽電子放出型放射性非金属であり、特にＳＰＥＣＴ又はＰＥＴを用いるイメージングに適するものである。しかし、若干の用途のためには他のイメージング成分が好ましい。例えば、ＡＭＤのイメージングのためには光学イメージング成分が好ましい。
【００４１】
本発明の好ましいイメージング成分はインビボで容易に代謝を受けず、したがって最も好ましくはヒトにおいて６０〜２４０分のインビボ半減期を示す。かかる造影剤は、好ましくは腎臓経由で排泄される（即ち、尿中排泄を示す）。かかる造影剤は、好ましくは病巣で１．５以上、最も好ましくは５以上の信号／バックグラウンド比を示し、１０以上が特に好ましい。造影剤が放射性同位体を含む場合、非特異的に結合しているか又はインビボで遊離している造影剤のピークレベルの１／２のクリアランスは、好ましくはイメージング成分の放射性同位体の放射性崩壊半減期以下の時間で起こる。
【００４２】
さらに、かかる造影剤の分子量は好適には５０００ダルトン以下である。好ましくは、分子量は１５０〜３０００ダルトン、最も好ましくは２００〜１５００ダルトンの範囲内にあり、３００〜８００ダルトンが特に好ましい。
【００４３】
好適には、イメージング成分はＣＢＰのＮ末端又はＣ末端を介して或いはアミノ酸側鎖のいずれかを介してＣＢＰに連結される。好ましくはイメージング成分は、任意には上述のような式（Ｌ）n−のリンカー、好ましくはＰＥＧリンカーを媒介として、ＣＢＰのＮ末端又はＣ末端を介してＣＢＰに連結される。
【００４４】
本発明の好ましい造影剤の例を下記の表に示す。
【００４５】
【表２】
2009537624.tif 000003
表中、Ａｃ、Ａｂｕ、ＮＭｅＬｙｓ及びＰＥＧ（Ｘ）は前記に定義した通りであり、α−Ｈｉｓはα−ヒスチジンである。
【００４６】
（実施例１８に記載される）インビトロアッセイを用いて、これらの好ましい造影剤のいくつかに関するコラーゲン親和力はナノモル濃度の範囲内にあり、若干の場合には５０ｎＭ未満であることが証明された。
【００４７】
キレートＩ及びキレーターＩＩは、本発明の第２の態様に関連して後記に一層詳しく記載される。上記造影剤１〜１２に関しては、キレートＩＩへの結合点はブリッジヘッド基の位置にある（下記式Ｉｂを参照されたい）。上記造影剤１３〜２４に関しては、キレートＩへの結合点はブリッジヘッド基の位置にある（下記式Ｉａを参照されたい）。
【００４８】
上記造影剤２５及び２８に関しては、123ＩはＮ末端に最も近いチロシン残基のフェノール側鎖に結合されている。123Ｉが別のチロシン残基のフェノール側鎖に結合されている造影剤２５ａ及び２８ａも想定することができる。造影剤２６、２７及び２９に関しては、123Ｉはチロシン残基のフェノール側鎖に結合されている。
【００４９】
上記造影剤３０〜３４に関しては、18Ｆはチオール結合を介してＣＢＰのＮ末端に結合されている。即ち、次式の通りである。
【００５０】
【化１】
2009537624.tif 000004
式中、ＣＢＰは問題となる特定のペプチドを表す。この種の18Ｆ標識造影剤に関する一層の詳細については、式ＩＩＩ、ＩＩＩａ及びＩＩＩｂに関連する以下の説明を参照されたい。
【００５１】
前駆体化合物を経由する造影剤の合成は、本発明の第２の態様に関連して以下に一層詳しく記載される。
【００５２】
造影剤１、２９、３５及び３６の分析より、これらはインビトロでは高い親和性をもってコラーゲンに結合することが証明された。造影剤１は、肝線維症造影剤として好ましい体内分布特性を有することが証明された（実施例１９を参照されたい）。肝線維症のラットモデル（胆管結紮、ＢＤＬ−実施例２０に記載）では、造影剤１として投与された活性は血液プールから急速に除去され、注射後１時間及び２時間では対照動物に比べてＢＤＬ動物の肝臓に顕著な蓄積が認められることが示された。
【００５３】
第２の態様では、本発明は、上述したようなＣＢＰ及びイメージング成分の供給源と反応し得る化学基を含む本発明の造影剤を製造するための前駆体であって、前記化学基は
（ｉ）金属イメージング成分を錯体化できる合成リガンド、
（ｉｉ）トリアルキルスタンナン又はトリアルキルシランのような有機金属誘導体、
（ｉｉｉ）求核置換用のアルキルハライド、アルキルトシレート又はアルキルメシレートを含む誘導体、或いは
（ｉｖ）チオール含有化合物をアルキル化してチオエーテル含有生成物を与える誘導体
からなり、前記化学基は前記ＣＢＰの一体部分であるか、或いは前記ＣＢＰに連結している前駆体を提供する。
【００５４】
「前駆体」は、好都合な化学形態のイメージング成分との化学反応が部位特異的に起こり、最小数の段階（理想的にはただ１つの段階）で反応を実施でき、かつ格別の精製の必要なしに（理想的にはいかなる追加の精製も必要なしに）所望の造影剤が得られるように設計された、本発明のＣＢＰの誘導体からなる。かかる前駆体は合成品であり、良好な化学純度で簡便に得ることができる。「前駆体」は、任意にはＣＢＰのある種の官能基に対する１種以上の保護基を含むことができる。
【００５５】
「保護基」という用語は、望ましくない化学反応を阻止又は抑制するが、分子の残部を変質させない十分に温和な条件下で問題の官能基から脱離させ得るのに十分な反応性を有するように設計された基を意味する。脱保護後には所望の生成物が得られる。保護基は当業者にとって公知であり、アミン基に関してはＢｏｃ（ここでＢｏｃはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルである。）、Ｆｍｏｃ（ここでＦｍｏｃはフルオレニルメトキシカルボニルである。）、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Ｄｄｅ［即ち、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］及びＮｐｙｓ（即ち、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）から適宜に選択され、カルボキシル基に関してはメチルエステル、ｔｅｒｔ−ブチルエステル及びベンジルエステルから適宜に選択される。ヒドロキシル基に関しては、好適な保護基は、メチル、エチル又はｔｅｒｔ−ブチル、アルコキシメチル又はアルコキシエチル、ベンジル、アセチル、ベンゾイル、トリチル（Ｔｒｔ）、又はテトラブチルジメチルシリルのようなトリアルキルシリルである。チオール基に関しては、好適な保護基はトリチル及び４−メトキシベンジルである。さらに他の保護基の使用は、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，Ｔｈｅｏｒｏｄｏｒａ  Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ（Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９９）に記載されている。
【００５６】
好ましくは、イメージング成分の供給源と反応し得る前記化学基は、
（ｉ）金属イメージング成分を錯体化できる合成リガンド、或いは
（ｉｉ）トリアルキルスタンナン又はトリアルキルシランのような有機金属誘導体
からなる。
【００５７】
イメージング成分が放射性金属イオンからなる場合、放射性医薬品は好ましくは放射性金属イオンと合成リガンドとの金属錯体からなる。「金属錯体」という用語は、金属イオンと１以上のリガンドとの配位錯体を意味する。金属錯体は、「キレート交換に耐える」こと（即ち、金属配位座に関して他の潜在的に競合するリガンドとのリガンド交換を受けにくいこと）が極めて好ましい。潜在的に競合するリガンドには、インビトロでは製剤中の他の賦形剤（例えば、製剤中に使用される放射線防護剤又は抗菌防腐剤）があり、インビボでは内因性化合物（例えば、グルタチオン、トランスフェリン又は血漿タンパク質）がある。「合成」という用語はそれの通常の意味を有し、即ち、天然の供給源（例えば、哺乳動物体）から単離されるものではなく人造のものを意味する。かかる化合物は、それの製造及び不純物プロフィルを完全に制御できるという利点を有している。
【００５８】
キレート交換に耐える金属錯体を形成するために本発明で使用するのに適したリガンドには、２〜６（好ましくは２〜４）の金属ドナー原子が（金属ドナー原子を結合する炭素原子又は非配位ヘテロ原子の非配位主鎖を有することで）五員又は六員のキレート環を生じるように配列されたキレート剤、或いは金属イオンと強く結合するドナー原子を含む単座リガンド（例えば、イソニトリル、ホスフィン又はジアゼニド）がある。キレート剤の一部として金属とよく結合するドナー原子種の例は、アミン、チオール、アミド、オキシム及びホスフィンである。ホスフィンは非常に強い金属錯体を形成するので、単座又は二座のホスフィンでも好適な金属錯体を形成する。イソニトリル及びジアゼニドの直線形状はキレート剤中に組み込みにくいものであり、したがって通例は単座リガンドとして使用される。好適なイソニトリルの例には、ｔｅｒｔ−ブチルイソニトリルのような単純アルキルイソニトリル、及びＭＩＢＩ（即ち、１−イソシアノ−２−メトキシ−２−メチルプロパン）のようなエーテル置換イソニトリルがある。好適なホスフィンの例には、テトロフォスミン（Ｔｅｔｒｏｆｏｓｍｉｎ）、及びトリス（３−メトキシプロピル）ホスフィンのような単座ホスフィンがある。好適なジアゼニドの例には、ＨＹＮＩＣ系列のリガンド（即ち、ヒドラジン置換ピリジン又はニコチンアミド）がある。
【００５９】
キレート交換に耐える金属錯体を形成するテクネチウム用の好適なキレート剤の例には、特に限定されないが、下記のものがある。
（ｉ）ジアミンジオキシム、
（ｉｉ）ＭＡＧ3（メルカプトアセチルトリグリシン）のようなチオールトリアミドドナーセット又はＰｉｃａのようなジアミドピリジンチオールドナーセットを有するＮ3Ｓリガンド及び関連するリガンド、
（ｉｉｉ）ＢＡＴ又はＥＣＤ（即ち、エチルシステイネート二量体）のようなジアミンジチオールドナーセット或いはＭＡＭＡのようなアミドアミンジチオールドナーセットを有するＮ2Ｓ2リガンド、
（ｉｖ）シクラム、モノオキソシクラム又はジオキソシクラムのようなテトラアミン、アミドトリアミン又はジアミドジアミンドナーセットを有する開鎖又は大環状リガンドであるＮ4リガンド、
（ｖ）ジアミンジフェノールドナーセットを有するＮ2Ｏ2リガンド、並びに
（ｖｉ）α−ヒスチジン＋Ｔｃ（ＣＯ）3。
【００６０】
テクネチウム用の本発明の好ましいキレート剤はジアミンジオキシム、テトラアミン及びα−ヒスチジン＋Ｔｃ（ＣＯ）3である。別の好ましい実施形態では、テクネチウム錯体化の形成に際してＨＹＮＩＣリガンドが使用される。以下、好ましい型をさらに詳しく説明する。
【００６１】
好ましいジアミンジオキシムは下記の式（Ｉ）を有する。
【００６２】
【化２】
2009537624.tif 000005
式中、Ｅ1〜Ｅ6は各々独立にＲ*基であり、
各Ｒ*はＨ或いはＣ1-10アルキル、Ｃ3-10アルキルアリール、Ｃ2-10アルコキシアルキル、Ｃ1-10ヒドロキシアルキル、Ｃ1-10フルオロアルキル、Ｃ2-10カルボキシアルキル又はＣ1-10アミノアルキルであるか、或いは２以上のＲ*基がそれに結合した原子と共に炭素環式又は複素環式の飽和又は不飽和環を形成し、Ｒ*基の１以上はＣＢＰに連結されており、
Ｑ′は式−（Ｊ′）e−（式中、ｅは３、４又は５であり、各Ｊ′は−（Ｊ′）f−が−Ｏ−又は−ＮＲ*−である最大１つのＪ′基を含むことを条件にして独立に−Ｏ−、−ＮＲ*−又は−Ｃ（Ｒ*）2−である。）の橋かけ基である。
【００６３】
好ましいＱ′基は下記の通りである。
Ｑ′＝−（ＣＨ2）（ＣＨＲ*）（ＣＨ2）−（即ち、プロピレンアミンオキシム又はＰｎＡＯ誘導体）、
Ｑ′＝−（ＣＨ2）2（ＣＨＲ*）（ＣＨ2）2−（即ち、ペンチレンアミンオキシム又はＰｅｎｔＡＯ誘導体）、及び
Ｑ′＝−（ＣＨ2）2ＮＲ*（ＣＨ2）2−。
【００６４】
Ｅ1〜Ｅ6は、好ましくはＣ1-3アルキル、アルキルアリール、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、フルオロアルキル、カルボキシアルキル及びアミノアルキルから選択される。最も好ましくは、各Ｅ1〜Ｅ6基はＣＨ3である。
【００６５】
式ＩへのＣＢＰのコンジュゲーションは前駆体化合物を形成する。ＣＢＰは、好ましくはＥ1又はＥ6のＲ*基或いはＱ′部分のＲ*基に連結される。最も好ましくは、それはＱ′部分のＲ*基に連結される。それがＱ′部分のＲ*基に連結される場合、Ｒ*基は好ましくはブリッジヘッドの位置にある。その場合、Ｑ′は、好ましくは−（ＣＨ2）（ＣＨＲ*）（ＣＨ2）−、−（ＣＨ2）2（ＣＨＲ*）（ＣＨ2）2−又は−（ＣＨ2）2ＮＲ*（ＣＨ2）2−であり、最も好ましくは−（ＣＨ2）（ＣＨＲ*）（ＣＨ2）2−である。特に好ましいジアミンジオキシム前駆体化合物は下記の式（Ｉａ）を有する。
【００６６】
【化３】
2009537624.tif 000006
式中、
Ｅ7〜Ｅ20は各々独立にＲ*基であり、
ＧはＮ又はＣＲ*であり、
Ｙ′は−（Ｌ）n−ＣＢＰ（式中、−（Ｌ）n−は前記に定義したようなリンカー基であり、ＣＢＰは前記に定義した通りである。）である。
【００６７】
式（Ｉａ）の好ましいキレーターは下記の式（Ｉｂ）を有する。
【００６８】
【化４】
2009537624.tif 000007
式中、Ｇは上記に定義した通りであり、好ましくはＣＨ（キレートＩ、その合成は実施例１に記載される）であり、
したがってＣＢＰはブリッジヘッドの−ＣＨ2ＣＨ2ＮＨ2基を介して連結されて前駆体化合物を形成する。
【００６９】
テトラアミンキレーターを用いて形成される好ましい前駆体化合物は、下記の式ＩＩを有する。
【００７０】
【化５】
2009537624.tif 000008
式中、
Ｙ" は−（Ｌ）n−ＣＢＰ（式中、−（Ｌ）n−は前記に定義したようなリンカー基であり、ＣＢＰは前記に定義した通りである。）であり、好ましくはＹ" に関する−（Ｌ）n−はアリール環を含まず、錯体の親油性を最小限に抑えるために役立ち、
Ｅ21〜Ｅ26は前記に定義したようなＲ*基である。
【００７１】
テトラアミンキレートを用いて形成される最も好ましい前駆体化合物は、下記の式ＩＩａを有する。
【００７２】
【化６】
2009537624.tif 000009
式中、Ｙ" は上記に定義した通りである。
【００７３】
テトラアミンキレートを用いて形成される特に好ましい前駆体化合物は、Ｙ" が−ＣＯ−ＣＢＰ（式中、ＣＢＰは前記に定義した通りである。）である式ＩＩａのもの（キレートＩＩ−ＣＢＰ）である。
【００７４】
別の好ましい実施形態では、本発明のＣＢＰは、ＣＢＰと下記式ＩＩＩの６−ヒドラジノニコチンアミド（ＨＹＮＩＣ）とのコンジュゲートである前駆体の製造によって99mＴｃで標識できる。
【００７５】
【化７】
2009537624.tif 000010
式中、Ｙ"′は−（Ｌ）n−ＣＢＰ（式中、−（Ｌ）n−は前記に定義したようなリンカー基であり、ＣＢＰは前記に定義した通りである。）である。
【００７６】
ＨＹＮＩＣは２つの配位座しか占めることができないので、99mＴｃの配位球を完成させるためにはコリガンドが必要となる。好適なコリガンドには、トリシン或いはトリシン＋第２のホスフィン又はピリジンコリガンドがある。ホスフィンコリガンドの例には、トリフェニルホスフィン−３，３′，３"−トリスルホン酸三ナトリウム（ＴＰＰＴＳ）、トリフェニルホスフィン−３，３′−ジスルホン酸二ナトリウム（ＴＰＰＤＳ）及びトリフェニルホスホン−３−モノスルホン酸ナトリウム（ＴＰＰＭＳ）がある。ピリジンコリガンドの例には、ニコチン酸（ＮＩＣ）、イソニコチン酸（ＩＳＯＮＩＣ）、２−（４−ピリジル）エチルスルホン酸（ＰＥＳ）及びピリジン−３−スルホン酸がある。好ましくは、式ＩＩＩの前駆体の99mＴｃ標識は、コリガンドがトリシン又はトリシン＋ＴＰＰＴＳの組合せである場合に実施される。
【００７７】
ＨＹＮＩＣに関連する放射性標識技法の徹底的な総説は、Ｌｉｕ［Ｔｏｐ  Ｃｕｒｒ．Ｃｈｅｍ．，２００５，２５２，ｐｐ．１１７−１５３］によって与えられている。
【００７８】
さらに別の実施形態では、本発明のＣＢＰははさらに、ＣＢＰのＮ末端に好ましくはアセチルリンカーを介してヒスチジン残基が付加された前駆体によって99mＴｃで標識できる。下記のように、ヒスチジンをＣＢＰに結合して99mＴｃ標識に適した前駆体を形成できる方法は他にも存在する。
【００７９】
【化８】
2009537624.tif 000011
式中、ＣＢＰは前記に定義されたような本発明のＣＢＰである。
【００８０】
ヒスチジンは、それがいかに連結されるかに応じ、面幾何学的に[99mＴｃ（ＯＨ2）3−（ＣＯ）3]+と反応して本発明の造影剤を形成できる２つ又は３つの配位座を提供する。好ましいコンジュゲートは３つの配位剤を提供する（即ち、上記の式ＩVａ〜ＩVｃ）。
【００８１】
かかる前駆体及び造影剤化合物を製造するための方法は、Ｂａｎｅｒｊｅｅら［Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，２００５，３２，ｐｐ．１−２０］及びＰａｋら［Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．，２００３，９，ｐｐ．２０５３−２０６１］によって詳述されている。
【００８２】
上述のリガンドはテクネチウム（例えば、94mＴｃ又は99mＴｃ）を錯体化するために特に適しており、Ｊｕｒｉｓｓｏｎら［Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，９９，２２０５−２２１８（１９９９）］によって一層詳しく記載されている。かかるリガンドは、銅（64Ｃｕ又は67Ｃｕ）、バナジウム（例えば、48Ｖ）、鉄（例えば、52Ｆｅ）或いはコバルト（例えば、55Ｃｏ）のような他の金属に対しても有用である。
【００８３】
他の好適なリガンドはＳａｎｄｏｚの国際公開第９１／０１１４４号に記載されており、その中にはインジウム、イットリウム及びガドリニウムに対して特に好適なリガンド（特に大環状アミノカルボキシレート及びアミノホスフィン酸リガンド）が含まれる。ガドリニウムの非イオン性（即ち、中性）金属錯体を形成するリガンドも知られており、米国特許第４，８８５，３６３号に記載されている。ガドリニウムに対して特に好ましいのは、ＤＴＰＡ、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、トリエチレンテトラアミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、１０−（２−ヒドロキシプロピル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−三酢酸（ＤＯ３Ａ）及びこれらの誘導体をはじめとするキレートである。
【００８４】
リンカー基−（Ｌ）n−の役割は、金属配位後に生じる比較的バルキーなテクネチウム錯体をＣＢＰの活性部位から遠ざけることで、例えば基質の結合を損なわないようにすることにあると想定されている。これは、バルキーな基が活性部位から離れて位置する自由を与えるような柔軟性（例えば、単純アルキル鎖）及び／又は金属錯体が活性部位から離れるように向きを定める剛性（例えば、シクロアルキル又はアリールスペーサー）の組合せによって達成できる。リンカー基の性質は、得られるコンジュゲートのテクネチウム錯体化の体内分布を変化させるためにも使用できる。即ち、例えばリンカーにエーテル基を導入すると、血漿タンパク質の結合を最小限に抑えるために役立つ。或いは、ポリアルキレングリコール、特にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のようなポリマーリンカー基を使用すると、インビボで血液中の造影剤の寿命を延ばすために役立ち得る。
【００８５】
これらのキレーターに関連する好ましいリンカー基−（Ｌ）n−は、２〜１０の原子、最も好ましくは２〜５の原子を含む主鎖（即ち、−（Ｌ）n−部分を構成する結合原子）を有しており、２つ又は３つの原子が特に好ましい。２つの原子を含む最小リンカー基主鎖は、キレーターが生物学的標的化部分から十分に引き離される結果としていかなる相互作用も最小限に抑えられるという利点を与える。さらに、ＣＢＰが金属イオンに対するキレーターの配位と効果的に競合することはありそうにない。このようにして、ＣＢＰの生物学的標的化特性及びキレーターの金属錯体化能力が共に維持される。ＣＢＰは、結合が血中において容易に代謝を受けないようにしてキレーターに結合していることが極めて好ましい。それは、標識ＣＢＰが所望のインビボ標的部位に到達する前に、かかる代謝がイメージング金属錯体の切断をもたらすからである。したがって、ＣＢＰは、好ましくは容易に代謝されない−（Ｌ）n−リンカー基を介して本発明の金属錯体に共有結合される。好適なかかる結合は、炭素−炭素結合、アミド結合、尿素又はチオ尿素結合、或いはエーテル結合である。
【００８６】
アルキレン基又はアリーレン基のような非ペプチドリンカー基は、連結されたＣＢＰとの顕著な水素結合相互作用が存在しない結果としてリンカーがＣＢＰに巻き付かないという利点を有する。好ましいアルキレンスペーサー基は−（ＣＨ2）q−（式中、ｑは２〜５の値を有する整数である。）である。好ましいアリーレンスペーサーは下記の式を有する。
【００８７】
【化９】
2009537624.tif 000012
式中、ａ及びｂは各々独立に０、１又は２である。
【００８８】
かくして、好ましいＹ′又はＹ" 基は−ＣＨ2ＣＨ2−（Ｌ）p−ＣＢＰ（式中、ｐは０〜３の値を有する整数である。）である。最も好ましくは、−（Ｌ）p−は−ＣＯ−又は−ＮＲ−である。式Ｉに関しては、ＧがＮでありかつ−（Ｌ）p−が−ＮＲ−である場合、このような基構成は商業的に入手可能な対称的な中間体Ｎ（ＣＨ2ＣＨ2ＮＨ2）3に由来するという追加の利点を有している。
【００８９】
イメージング金属がテクネチウムである場合、通常のテクネチウム出発原料は、テクネチウムがＴｃ（VＩＩ）酸化状態にある過テクネチウム酸イオン（即ち、ＴｃＯ4-）である。過テクネチウム酸イオン自体は容易に金属錯体を形成せず、したがってテクネチウム錯体の製造には、第一スズイオンのような適当な還元剤を添加してテクネチウムの酸化状態を低い酸化状態（通常はＴｃ（Ｉ）ないしＴｃ（Ｖ））に還元することで錯体化を容易にすることが通常必要である。溶媒は、有機溶媒又は水性溶媒或いはこれらの混合物であり得る。溶媒が有機溶媒を含む場合、有機溶媒は好ましくはエタノール又はＤＭＳＯのような生体適合性溶媒である。好ましくは、溶媒は水性溶媒であり、最も好ましくは等張食塩水である。
【００９０】
イメージング成分が放射性ヨウ素である場合、好ましい前駆体は、求電子又は求核ヨウ素化を受ける誘導体或いは標識アルデヒド又はケトンとの縮合を受ける誘導体を含むものである。第１のカテゴリーの例は下記の（ａ）〜（ｃ）である。
（ａ）トリアルキルスタンナン（例えば、トリメチルスタンニル又はトリブチルスタンニル）、トリアルキルシラン（例えば、トリメチルシリル）或いは有機ホウ素化合物（例えば、ボロネートエステル又はオルガノトリフルオロボレート）のような有機金属誘導体。
（ｂ）ハロゲン交換用の非放射性アルキルブロミド、或いは求核ヨウ素化用のアルキルトシレート、メシレート又はトリフレート。
（ｃ）求核ヨウ素化に向けて活性化された芳香環（例えば、アリールヨードニウム塩、アリールジアゾニウム塩、アリールトリアルキルアンモニウム塩又はニトロアリール誘導体）。
【００９１】
前駆体は、好ましくは（放射性ヨウ素交換を可能にするための）アリールヨージド又はブロミドのような非放射性ハロゲン原子、有機金属前駆体化合物（例えば、トリアルキルスズ、トリアルキルシリル又は有機ホウ素化合物）、或いはトリアゼンのような有機前駆体又は求核置換のための良好な脱離基（例えば、ヨードニウム塩）からなる。好ましくは、放射性ヨウ素化のためには、前駆体は有機金属前駆体化合物からなり、最も好ましくはトリアルキルスズからなる。
【００９２】
有機分子中に放射性ヨウ素を導入するための前駆体及び方法は、Ｂｏｌｔｏｎ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）］によって記載されている。好適なボロネートエステル有機ホウ素化合物及びそれの製法は、Ｋａｂａｌｋａら［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，２９，８４１−８４３（２００２）及び３０，３６９−３７３（２００３）］によって記載されている。好適なオルガノトリフルオロボレート及びそれの製法は、Ｋａｂａｌｋａら［Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．，３１，９３５−９３８（２００４）］によって記載されている。
【００９３】
放射性ヨウ素が結合できるアリール基の例を以下に示す。
【００９４】
【化１０】
2009537624.tif 000013
いずれも、芳香環上への容易な放射性ヨウ素置換を可能にする置換基を含んでいる。ＣＢＰペプチド配列中にチロシン残基が既に存在している場合には、固有のフェノール基を用いて放射性ヨウ素化を実施できる。代わりの方策では、コラーゲン結合特性が損なわれない限り、放射性ヨウ素化用のペプチド配列にチロシン残基を付加することができる。
【００９５】
放射性ヨウ素を含む代わりの置換基は、例えば下記式のように、放射性ハロゲン交換による直接ヨウ素化で合成できる。
【００９６】
【化１１】
2009537624.tif 000014
飽和脂肪族系に結合したヨウ素原子はインビボでの代謝を受けやすく、したがって放射線ヨウ素の損失を招きやすいことが知られているので、放射性ヨウ素原子は好ましくはベンゼン環のような芳香環への直接共有結合により又はビニル基を介して結合される。
【００９７】
放射性フッ素化は、18Ｆ−フッ化物と良好な脱離基を有する前駆体（例えば、アルキルブロミド、アルキルメシレート又はアルキルトシレート）中の適当な化学基との反応を用いる直接標識によって実施できる。18Ｆはまた、18Ｆ（ＣＨ2）3ＯＨ反応体でＮ−ハロアセチル基をアルキル化して−ＮＨ（ＣＯ）ＣＨ2Ｏ（ＣＨ2）318Ｆ誘導体を得ることによっても導入できる。アリール系に関しては、アリールジアゾニウム塩、アリールニトロ化合物又はアリール第四級アンモニウム塩からの18Ｆ−フッ化物求核置換が、アリール−18Ｆ誘導体への好適な経路である。
【００９８】
本発明の18Ｆ標識化合物は、18Ｆ−フルオロジアルキルアミンを生成させ、次いで18Ｆ−フルオロジアルキルアミンを（例えば）塩素、Ｐ（Ｏ）Ｐｈ3又は活性化エステルを含む前駆体と反応させた場合のアミド生成によって得ることができる。
【００９９】
ペプチドの放射性ヨウ素化のために特に適したさらに別の放射性ヨウ素化アプローチが国際公開第０３／０８０５４４号に記載されており、これはチオールカップリングを使用する。下記式の一方を有するＣＢＰ前駆体化合物を
【０１００】
【化１２】
2009537624.tif 000015
下記式Ｖの化合物と反応させることで、
【０１０１】
【化１３】
2009537624.tif 000016
（式中、ＹVは式−（Ｌ）o−（式中、Ｌは前記に定義した通りであり、ｏは１〜１０である。）のリンカーであり、任意には１〜６のヘテロ原子を含み、
ＸVは式−（Ｌ）p−（式中、Ｌは前記に定義した通りであり、ｐは１〜３０である。）のリンカーであり、任意には１〜１０のヘテロ原子を含み、
ＣＢＰは前記に定義したようなコラーゲン結合ペプチドである。）
それぞれ下記式（Ｖａ）又は（Ｖｂ）の放射性フッ素化造影剤を得る。
【０１０２】
【化１４】
2009537624.tif 000017
（式中、ＸV及びＹVは前記に定義した通りであり、ＣＢＰは前記に定義したようなコラーゲン結合ペプチドである。）
ペプチドの放射性ヨウ素化のために特に適した追加のアプローチはが国際公開第０４／０８０４９２号に記載されており、これはアミノキシカップリングを使用する。放射性ヨウ素化は、下記式（VＩ）のＣＢＰ前駆体化合物を下記式（VＩａ）の化合物と反応させるか、
【０１０３】
【化１５】
2009537624.tif 000018
或いは下記式（VＩＩ）のＣＢＰ前駆体化合物を下記式（VＩＩａ）の化合物と反応させることで、
【０１０４】
【化１６】
2009537624.tif 000019
（式中、
Ｒ1は、アルデヒド部分、ケトン部分、アセタールのような保護アルデヒド、ケタールのような保護ケトン、或いは酸化剤を用いて迅速かつ効率的に酸化すればアルデヒド又はケトンを与え得るジオール又はＮ末端セリン残基のような官能基である。
Ｒ2は、水性緩衝液のような温和な条件下でＲ1と部位特異的に反応して安定なコンジュゲートを与える官能基である。Ｒ2は、第一アミン、第二アミン、ヒドロキシルアミン、ヒドラジン、ヒドラジド、アミノキシ、フェニルヒドラジン、セミカルバジド又はチオセミカルバジドのようなアンモニア誘導体であり得るが、好ましくはヒドラジン、ヒドラジド又はアミノキシ基である。
Ｒ3は、Ｒ4と部位特異的に反応する官能基である。Ｒ3は、第一アミン、第二アミン、ヒドロキシルアミン、ヒドラジン、ヒドラジド、アミノキシ、フェニルヒドラジン、セミカルバジド又はチオセミカルバジドのようなアンモニア誘導体であり得るが、好ましくはヒドラジン、ヒドラジド又はアミノキシ基である。
Ｒ4は、アルデヒド部分、ケトン部分、アセタールのような保護アルデヒド、ケタールのような保護ケトン、或いは酸化剤を用いて迅速かつ効率的に酸化すればアルデヒド又はケトンを与え得るジオール又はＮ末端セリン残基のような官能基である。）
それぞれ下記式（ＶＩＩＩ）又は（ＩX）のコンジュゲートを得る。
【０１０５】
【化１７】
2009537624.tif 000020
（式中、Ｘは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＮＨＣＯＮＨ−又は−ＮＨＣＳＮＨ−であり、好ましくは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−又は−Ｏ−であり、ＹはＨ、アルキル又はアリール置換基であり、Ｌは前記に定義した通りであり、ｍは０〜１０である。）
18Ｆ−標識誘導体の合成経路のさらなる詳細は、Ｂｏｌｔｏｎ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）］によって記載されている。
【０１０６】
前駆体を合成するためには、まず、関連するＣＢＰを構築する。ＡＢＩ４３３Ａ合成機を用いて、ＭＢＨＡ−Ｒｉｎｋアミド樹脂（０．５８ｍｍｏｌ／ｇ）上にペプチドを０．１ｍｍｏｌスケールでアセンブルできる。ＮＭＰ中のＨＢＴＵ−ＨＯＢｔ−ＤＩＥＡを用いて、１０倍モル過剰量のＦｍｏｃアミノ酸誘導体をインサイチュで活性化し、Ｆｍｏｃを２０％ピペリジン／ＮＭＰ溶液中で脱保護する。アセンブリ後、樹脂をＮ2バブラー装置に移し、上記に定義したようなイメージング成分と反応し得る化学基のカップリングを行う。カイザー試験を実施して前駆体化合物への１００％転化を確認する。固体支持体からの切断及び側鎖保護基の除去を同時に行う。その後、過剰のＴＦＡを真空中で除去し、ジエチルエーテルの添加で前駆体化合物を沈殿させる。ジエチルエーテルによるトリチュレーションの後、粗前駆体を白色固体として遊離させる。残留物を０．１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ：Ｈ2Ｏ（１：１）に溶解し、凍結乾燥し、ＨＰＬＣで精製し、ＬＣ−ＭＳで分析する。
【０１０７】
下記に示すのは、（対応する造影剤と同じ番号を有する）本発明の好ましい前駆体化合物の例である。
【０１０８】
【表３】
2009537624.tif 000021
第３の態様では、本発明は、上述したような造影剤を哺乳動物への投与に適した形態で生体適合性キャリヤーと共に含んでなる医薬品組成物を提供する。好ましい実施形態では、医薬品組成物は放射性医薬品組成物である。
【０１０９】
「生体適合性キャリヤー」は、組成物が生理学的に許容できるようにして（即ち、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）造影剤を懸濁又は溶解するための流体（特に液体）である。生体適合性キャリヤー媒質は、好適には、無菌の無発熱原性注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性又は非低張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、生体適合性対イオンを有する血漿陽イオンの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。生体適合性キャリヤー媒質はまた、エタノールのような生体適合性有機溶媒からなっていてもよい。かかる有機溶媒は、親油性の高い化合物又は配合物を可溶化するために有用である。好ましくは、生体適合性キャリヤー媒質は無発熱原性注射用水、等張食塩水又はエタノール水溶液である。静脈内注射用生体適合性キャリヤー媒質のｐＨは好適には４．０〜１０．５の範囲内にある。
【０１１０】
かかる医薬品組成物は、好適には、無菌保全性を維持しながら皮下注射針による１回又は数回の穿刺に適したシール（例えば、クリンプ加工した隔壁シールクロージャー）を備えた容器に入った状態で供給される。かかる容器は１回分又は複数回分の患者用量を含み得る。好ましい複数用量容器は、複数の患者用量を含む（例えば、容積１０〜３０ｃｍ3の）単一のバルクバイアルからなり、したがって臨床的状況に合わせて製剤の実用寿命中に様々な時間間隔で１回分の患者用量を臨床グレードの注射器に抜き取ることができる。予備充填注射器は１回分のヒト用量又は「単位用量」を含むように設計され、したがって好ましくは臨床用に適した使い捨て注射器又は他の注射器である。医薬品組成物が放射性医薬品組成物である場合、予備充填注射器には、施術者を放射線量から保護するための注射器シールドを任意に設けることができる。好適なかかる放射性医薬品注射器シールドは当技術分野で公知であり、好ましくは鉛又はタングステンからなっている。
【０１１１】
本発明の医薬品は、以下に第４の態様として記載するようなキットから製造できる。別法として、かかる医薬品を無菌製造条件下で製造することで所望の無菌生成物を得ることができる。かかる医薬品を非無菌条件下で製造し、次いで例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は（例えば、エチレンオキシドによる）化学処理を用いて終末滅菌を施すこともできる。好ましくは、本発明の医薬品はキットから製造される。
【０１１２】
第１の実施形態に関連して上述した通り、放射性医薬品組成物に関しては、本発明の最も好ましい放射性イメージング成分は99mＴｃ、123Ｉ、11Ｃ及び18Ｆである。
【０１１３】
第４の態様では、本発明は、第３の実施形態の医薬品組成物を製造するためのキットを提供する。かかるキットは、第２の実施形態の好適な前駆体、好ましくは無菌で無発熱原性の形態にある前駆体であって、イメージング成分の無菌供給源との反応により最小数の操作で所望の医薬品が得られるような前駆体を含んでいる。かかる考慮事項は、放射性医薬品（特に、放射性同位体が比較的短い半減期を有する放射性医薬品）の場合において、取扱いを容易にし、したがって放射線薬剤師に対する放射線量を低減させるために特に重要である。したがって、かかるキットの再構成用の反応媒質は好ましくは上記に定義したような「生体適合性キャリヤー」であり、最も好ましくは水性のものである。
【０１１４】
好適なキット容器は、注射器による溶液の添加及び抜取りを許しながら、無菌保全性及び／又は放射能安全性の維持、さらに任意には不活性ヘッドスペースガス（例えば、窒素又はアルゴン）の維持を可能にする密封容器からなっている。好ましいかかる容器は、気密クロージャーを（通例はアルミニウムからなる）オーバーシールと共にクリンプ加工した隔壁密封バイアルである。かかる容器は、例えばヘッドスペースガスの変更又は溶液のガス抜きのために所望される場合、クロージャーが真空に耐え得るという追加の利点を有している。
【０１１５】
キット中に使用する場合、前駆体の好ましい態様は第２の実施形態に関して上述した通りである。キット中に使用するための前駆体を無菌製造条件下で使用すれば、所望の無菌で非発熱性の材料を得ることができる。また、前駆体を非無菌条件下で使用し、次いで例えばγ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は（例えば、エチレンオキシドによる）化学処理を用いる終末滅菌を施すこともできる。好ましくは、前駆体は無菌で非発熱性の形態で使用される。最も好ましくは、無菌で非発熱性の前駆体は上述したような密封容器内で使用される。
【０１１６】
キットの前駆体は、第２の実施形態に関して上述したように、好ましくは固体担体マトリックスに共有結合した状態で供給される。
【０１１７】
99mＴｃに関しては、キットは好ましくは凍結乾燥されており、99mＴｃ放射性同位体ジェネレーターからの無菌の99mＴｃ−過テクネチウム酸イオン（ＴｃＯ4-）を用いて再構成することで、それ以上の操作なしにヒトへの投与に適した溶液を与えるように設計されている。好適なキットは、未錯体化キレート剤を、製剤学的に供給できる還元剤（例えば、亜ジチオン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸、ホルムアミジン、スルフィン酸、第一スズイオン、Ｆｅ（ＩＩ）又はＣｕ（Ｉ））及び弱有機酸と生体適合性陽イオンとからなる１種以上の塩と共に収容した容器（例えば、隔壁密封バイアル）を含んでいる。「生体適合性陽イオン」という用語は、イオン化して負に帯電した基と共に塩を形成する正に帯電した対イオンを意味する。この場合、前記正に帯電した対イオンも無毒性であり、したがって哺乳動物体（特に人体）への投与に適している。好適な生体適合性陽イオンの例には、アルカリ金属であるナトリウム及びカリウム、アルカリ土類金属であるカルシウム及びマグネシウム、並びにアンモニウムイオンがある。好ましい生体適合性陽イオンはナトリウム及びカリウムであり、最も好ましくはナトリウムである。
【０１１８】
放射性金属錯体造影剤製造用のキットは、任意にはさらに、トランスキレーターとして機能する第２の弱有機酸又は生体適合性陽イオンを有するそれの塩を含むことができる。トランスキレーターは、放射性金属と迅速に反応して弱い錯体を形成し、次いでキットのキレーターによって置換される化合物である。テクネチウムに関しては、これはテクネチウム錯体化と競合する過テクネチウム酸イオンの急速な還元によって還元加水分解テクネチウム（ＲＨＴ）が生成するリスクを最小限に抑える。好適なかかるトランスキレーターは上述した弱有機酸及びそれの塩であり、好ましくは酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩又はホスホン酸塩、好ましくはホスホン酸塩、最も好ましくはジホスホン酸塩である。好ましいかかるトランスキレーターは、ＭＤＰ（即ち、メチレンジホスホン酸）又は生体適合性陽イオンを有するそれの塩である。
【０１１９】
放射性金属錯体製造用のキットに関してはまた、遊離形態のキレーターを使用する代わりに、キレーターきーはキレーターの非放射性金属錯体を任意に含むことができる。放射性金属を添加すると、これは金属交換反応（即ち、リガンド交換）を受けて所望の生成物を与える。好適なかかる金属交換反応用錯体は銅又は亜鉛錯体である。
【０１２０】
99mＴｃ造影剤キット中に使用される製剤学的に許容可能な還元剤は、好ましくは塩化第一スズ、フッ化第一スズ又は酒石酸第一スズのような第一スズ塩であり、無水状態又は水和状態のいずれであってもよい。第一スズ塩は、好ましくは塩化第一スズ又はフッ化第一スズである。
【０１２１】
キットはさらに、放射線防護剤、抗菌防腐剤、ｐＨ調整剤又はフィラーのような追加成分を任意に含むことができる。
【０１２２】
「放射線防護剤」という用語は、水の放射線分解から生じる含酸素遊離基のような高反応性遊離基を捕捉することで分解反応（例えば、レドックス過程）を阻止する化合物を意味する。本発明の放射線防護剤は、好適には、アスコルビン酸、ｐ−アミノ安息香酸（即ち、４−アミノ安息香酸）、ゲンチジン酸（即ち、２，５−ジヒドロキシ安息香酸）、及び生体適合性陽イオンを有するこれらの塩から選択される。「生体適合性陽イオン」及びそれの好ましい実施形態は、上述した通りである。
【０１２３】
「抗菌防腐剤」という用語は、潜在的に有害な微生物（例えば、細菌、酵母又はかび）の増殖を阻止する薬剤を意味する。抗菌防腐剤はまた、用量に応じ、多少の殺菌性を示すこともある。本発明の抗菌防腐剤の主な役割は、再構成後の放射性医薬品組成物（即ち、放射性診断製剤そのもの）中におけるこのような微生物の増殖を阻止することである。しかし、抗菌防腐剤は、再構成前の本発明の非放射性キットの１種以上の成分中における潜在的に有害な微生物の増殖を阻止するためにも任意に使用できる。好適な抗菌防腐剤には、パラベン類（即ち、メチル、エチル、プロピル又はブチルパラベン或いはこれらの混合物）、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールがある。好ましい抗菌防腐剤はパラベン類である。
【０１２４】
「ｐＨ調整剤」という用語は、再構成されたキットのｐＨがヒト又は哺乳動物への投与のために許容し得る範囲（およそｐＨ４．０〜１０．５）内にあることを保証するために有用な化合物又は化合物の混合物を意味する。好適なかかるｐＨ調整剤には、トリシン、リン酸塩又はＴＲＩＳ（即ち、トリス（ヒドロキシルメチル）アミノメタン）のような製剤学的に許容可能な緩衝剤、及び炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物のような製剤学的に許容可能な塩基がある。前駆体を酸性塩の形態で使用する場合には、ｐＨ調整剤を任意には独立のバイアル又は容器に入れて供給することができ、その結果としてキットのユーザーは多段操作の一部としてｐＨを調整することができる。
【０１２５】
「フィラー」という用語は、製造及び凍結乾燥中における材料の取扱いを容易にすることができる製剤学的に許容可能な増量剤を意味する。好適なフィラーには、塩化ナトリウムのような無機塩、及びスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースのような水溶性糖又は糖アルコールがある。
【０１２６】
本発明の造影剤はインビボイメージングのために有用である。したがって、第５の態様では、本発明は、インビボ診断又はイメージング方法（例えば、ＳＰＥＣＴ又はＰＥＴ）で使用するための本発明の造影剤を提供する。好ましくは、前記方法はコラーゲン形成がアップレギュレートされている状態のインビボイメージングに関し、したがって特発性肺線維症、喘息、慢性閉塞性肺疾患、強皮症、糖尿病性網膜症、ＡＭＤ、アテローム性動脈硬化症、脆弱性プラーク、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、ＩｇＡ腎症、肝線維症、慢性関節リューマチ及びうっ血性心不全のような線維症に関連した状態の診断において有用である。最も好ましくは、前記のインビボ診断又はイメージング方法は、慢性閉塞性肺疾患、糖尿病性網膜症、ＡＭＤ、アテローム性動脈硬化症、脆弱性プラーク、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、肝線維症及びうっ血性心不全、特に好ましくは肝線維症の診断において有用な方法である。
【０１２７】
本発明のこの態様はまた、被験体においてコラーゲン形成がアップレギュレートされている状態のインビボ診断又はイメージングを行うための方法であって、本発明の第３の態様の医薬品組成物を予め投与することを含んでなる方法を提供する。前記被験体は好ましくは哺乳動物であり、最も好ましくはヒトである。別の実施形態では、本発明のこの態様はさらに、本発明の第３の態様の医薬品組成物を予め投与した被験体においてコラーゲン形成がアップレギュレートされている状態のインビボイメージングを行うための、本発明の造影剤の使用を提供する。
【０１２８】
「予め投与した」とは、臨床医の関与の下で医薬品を例えば静脈内注射によって患者に投与する段階が既に実施されていることを意味する。本発明のこの態様はまた、コラーゲン形成がアップレギュレートされている状態のインビボ診断イメージング用の医薬品を製造するための、第１の実施形態の造影剤の使用を含んでいる。
【０１２９】
第６の態様では、本発明は、コラーゲン形成がアップレギュレートされている状態と戦うための薬物によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニターする方法であって、本発明の造影剤を前記身体に投与する段階、及び前記造影剤の取込みを検出する段階を含んでなる方法を提供する。前記投与及び検出は、任意ではあるが好ましくは、例えば前記薬物による治療前、治療中及び治療後に繰り返して実施される。
【実施例】
【０１３０】
実施例の簡単な説明
実施例１は、キレートＩの合成を記載する。
【０１３１】
実施例２は、キレートＩのグルタリルアミド誘導体の合成を記載する。
【０１３２】
実施例３は、キレートＩＩの合成を記載する。
【０１３３】
実施例４〜１７は、造影剤１、３、８、１０、２９及び３５〜４３の合成を記載する。
【０１３４】
実施例１８は、本発明の造影剤のインビトロコラーゲン結合親和性を評価する方法を記載する。
【０１３５】
実施例１９は、肝線維症の動物モデルにおける本発明の造影剤１のインビボ体内分布を記載する。
【０１３６】
実施例２０は、肝線維症のイメージングに関する化合物の可能性の評価に適したインビボモデル（胆管結紮モデル）を記載する。
【０１３７】
実施例で使用される略語のリスト
Ａｃｍ        アセトアミドメチル
ＡＣＮ        アセトニトリル
ＡｃＯＨ      酢酸
ＢＤＬ        胆管結紮
Ｂｏｃ        ｔ−ブトキシカルボニル
ＤＣＭ        ジクロロメタン
ＤＩＥＡ      ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ        ジメチルホルムアミド
ＥＳＩ−ＭＳ  エレクトロスプレーイオン化質量分析法
ＨＢＴＵ      Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチル−ウロニウ
ム−ヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＢｔ      Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ      高速液体クロマトグラフィー
ＩＲ          赤外
ＬＣ−ＭＳ    液体クロマトグラフィー質量分析法
ＭＳ          質量分析法
ＮＭＭ        Ｎ−メチルモルホリン
ＮＭＰ        Ｎ−メチルピロリドン
ＮＭＲ        核磁気共鳴
ＯｔＢｕ      β−ｔ−ブチルエステル
ＰｙＡＯＰ    （７−アザベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホ
ニウムヘキサフルオロホスフェート
ＲＦ          保持分率
ｓ．ｃ．      皮下
ＴＦＡ        トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ        テトラヒドロフラン
ＴＬＣ        薄層クロマトグラフィー
Ｔｒｔ        トリフェニルメチル
実施例１：キレート１［ビス［Ｎ−（１，１−ジメチル−２−Ｎ−ヒドロキシイミンプロピル）−２−アミノエチル］−（２−アミノエチル）メタン］の合成
（段階ａ）：トリス（メチルオキシカルボニルメチル）メタンの製造
メタノール（２００ｍｌ）中の３−（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステル（８９ｇ、２６７ｍｍｏｌ）を、（木炭担持１０％パラジウム：５０％水）（９ｇ）と共に、水素ガス（３．５バール）の雰囲気下で３０時間振盪した。溶液をけいそう土で濾過し、真空中で濃縮することで、３−（メトキシカルボニルメチル）グルタル酸ジメチルエステルを油状物として得た。収量（８４．９ｇ、９４％）。
【０１３８】
ＮＭＲ 1Ｈ（ＣＤＣｌ3）、δ２．４８（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，３×ＣＨ2）、２．７８（１Ｈ，六重線，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨ）、３．７（９Ｈ，ｓ，３×ＣＨ3）。
【０１３９】
ＮＭＲ 13Ｃ（ＣＤＣｌ3）、δ２８．６（ＣＨ）、３７．５０（３×ＣＨ3）、５１．６（３×ＣＨ2）、１７２．２８（３×ＣＯＯ）。
【０１４０】
（段階ｂ）：ｐ−メトキシ−ベンジルアミンによるトリメチルエステルのアミド化
トリス（メチルオキシカルボニルメチル）メタン［２ｇ、８．４ｍｍｏｌ］をｐ−メトキシ−ベンジルアミン（２５ｇ、１７８．６ｍｍｏｌ）に溶解した。装置を蒸留用として組み立て、窒素流の下で１２０℃で２４時間加熱した。反応の進行を捕集したメタノールの量でモニターした。反応混合物を周囲温度まで冷却し、３０ｍｌの酢酸エチルを添加し、次いで沈殿したトリアミド生成物を３０分間撹拌した。トリアミドを濾過によって単離し、濾過ケークを十分な量の酢酸エチルで数回洗って過剰のｐ−メトキシ−ベンジルアミンを除去した。乾燥後、４．６ｇ（１００％）の白色粉末を得た。極めて不溶性の生成物は、それ以上の精製又は特性決定を行うことなく次の段階でそのまま使用した。
【０１４１】
（段階ｃ）：１，１，１−トリス［２−（ｐ−メトキシベンジルアミノ）エチル］メタンの製造
氷水浴中で冷却した１０００ｍｌ三つ口丸底フラスコ内において、段階２（ａ）からのトリアミド（１０ｇ、１７．８９ｍｍｏｌ）を２５０ｍｌの１Ｍボラン溶液（３．５ｇ、２４４．３ｍｍｏｌボラン）に注意深く添加した。添加の完了後、氷水浴を取り除き、反応混合物を６０℃までゆっくりと加熱した。反応混合物を６０℃で２０時間撹拌した。反応混合物の試料（１ｍｌ）を抜き取り、０．５ｍｌの５Ｎ  ＨＣｌと混合し、３０分間放置した。試料に０．５ｍｌの５０ＮａＯＨ、次いで２ｍｌの水を添加し、すべての白色沈殿が溶解するまで溶液を撹拌した。溶液をエーテル（５ｍｌ）で抽出し、蒸発させた。残留物を１ｍｇ／ｍｌの濃度でアセトニトリルに溶解し、ＭＳによって分析した。ＭＳスペクトル中にモノアミド及びジアミド（Ｍ＋Ｈ／ｚ＝５２０及び５３４）が見られるならば、反応は完結していない。反応を完結させるため、さらに１００ｍｌの１ＭボランＴＨＦ溶液を添加し、反応混合物を６０℃でさらに６時間撹拌し、前記の試料採取手順に従って新たな試料を抜き取った。トリアミンへの転化が完結するまで、必要に応じて１ＭボランＴＨＦ溶液の追加添加を続けた。
【０１４２】
反応混合物を周囲温度まで冷却し、５Ｎ  ＨＣｌをゆっくりと添加した［注意：激しい発泡が起こる！］。ＨＣｌは、それ以上のガス発生が認められなくなるまで添加した。混合物を３０分間撹拌し、次いで蒸発させた。ケークをＮａＯＨ水溶液（２０〜４０％、１：２ｗ／ｖ）中に懸濁し、３０分間撹拌した。次に、混合物を水（３倍容）で希釈した。次に、混合物をジエチルエーテル（２×１５０ｍｌ）で抽出した［注意：ハロゲン化溶媒を使用しないこと］。次に、合わせた有機相を水（１×２００ｍｌ）、次いでブライン（１５０ｍｌ）で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した。蒸発後の収量：油状物として７．６ｇ、８４％。
【０１４３】
ＮＭＲ 1Ｈ（ＣＤＣｌ3）、δ：１．４５（６Ｈ，ｍ，３×ＣＨ2）、１．５４（１Ｈ，七重線，ＣＨ）、２．６０（６Ｈ，ｔ，３×ＣＨ2Ｎ）、３．６８（６Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ2）、３．７８（９Ｈ，ｓ，３×ＣＨ3Ｏ）、６．９４（６Ｈ，ｄ，６×Ａｒ）、７．２０（６Ｈ，ｄ，６×Ａｒ）。
【０１４４】
ＮＭＲ 13Ｃ（ＣＤＣｌ3）、δ：３２．１７（ＣＨ）、３４．４４（ＣＨ2）、４７．００（ＣＨ2）、５３．５６（ＡｒＣＨ2）、５５．２５（ＣＨ3Ｏ）、１１３．７８（Ａｒ）、１２９．２９（Ａｒ）、１３２．６１（Ａｒ）、１５８．６０（Ａｒ）。
【０１４５】
（段階ｄ）：１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの製造
１，１，１−トリス［２−（ｐ−メトキシベンジルアミノ）エチル］メタン（２０．０ｇ、０．０３６ｍｏｌ）をメタノール（１００ｍｌ）に溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）2（５．０ｇ）を加えた。混合物を水素化し（３バール、１００℃、オートクレーブ中）、５時間撹拌した。１０時間後及び１５時間後にＰｄ（ＯＨ）2をさらに２部分（２×５ｇ）に分けて添加した。
【０１４６】
反応混合物を濾過し、濾液をメタノールで洗った。合わせた有機相を蒸発させ、残留物を真空蒸留（１×１０-2、１１０℃）して２．６０ｇ（５０％）の１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンを得た。
【０１４７】
ＮＭＲ 1Ｈ（ＣＤＣｌ3）：δ２．７２（６Ｈ，ｔ，３×ＣＨ2Ｎ）、１．４１（Ｈ，七重線，ＣＨ）、１．３９（６Ｈ，ｑ，３×ＣＨ2）。
【０１４８】
ＮＭＲ 13Ｃ（ＣＤＣｌ３）：δ３９．８（ＣＨ2ＮＨ2）、３８．２（ＣＨ2）、３１．０（ＣＨ）。
【０１４９】
（段階ｅ）：キレートＩの製造
トリス（２−アミノエチル）メタン（４．０４７ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）の乾燥エタノール（３０ｍｌ）溶液に、無水炭酸カリウム（７．７ｇ、５５．８ｍｍｏｌ、２当量）を窒素雰囲気下において室温で激しく撹拌しながら添加した。３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタン（７．５６ｇ、５５．８ｍｏｌ、２当量）の溶液を乾燥エタノール（１００ｍｌ）に溶解し、この溶液７５ｍｌを反応混合物にゆっくりと滴下した。反応は、シリカプレート上のＴＬＣ［ジクロロメタン、メタノール、濃（比重０．８８）アンモニア（１００／３０／５）で展開し、ＴＬＣプレートはニンヒドリンを吹き付けて加熱することで発色させた］によって追跡した。モノ−、ジ−及びトリ−アルキル化生成物は、この順序で増加するＲＦで見られた。分析ＨＰＬＣは、ＲＰＲ逆相カラムを使用して３％アンモニア水中７．５〜７５％アセトニトリルの勾配で実施した。反応物を真空濃縮してエタノールを除去し、水（１１０ｍｌ）中に再懸濁した。この水性スラリーをエーテル（１００ｍｌ）で抽出してトリアルキル化化合物の一部及び親油性不純物を除去し、モノアルキル化及び所望のジアルキル化生成物を水層に残した。良好なクロマトグラフィーを保証するために水溶液を酢酸アンモニウム（２当量、４．３ｇ、５５．８ｍｍｏｌ）で緩衝化した。水溶液を４℃で一晩貯蔵した後、自動化分取ＨＰＬＣによって精製した。
【０１５０】
収量（２．２ｇ、６．４ｍｍｏｌ、２３％）。
【０１５１】
質量分析：正イオン１０Ｖコーン電圧。実測値：３４４、計算値Ｍ＋Ｈ＝３４４。
【０１５２】
ＮＭＲ 1Ｈ（ＣＤＣｌ3）：δ１．２４（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ3）、１．３（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ3）、１．２５−１．７５（７Ｈ，ｍ，３×ＣＨ2，ＣＨ）、（３Ｈ，ｓ，２×ＣＨ2）、２．５８（４Ｈ，ｍ，ＣＨ2Ｎ）、２．８８（２Ｈ，ｔ，ＣＨ2Ｎ2）、５．０（６Ｈ，ｓ，ＮＨ2，２×ＮＨ，２×ＯＨ）。
【０１５３】
ＮＭＲ 1Ｈ（（ＣＤ3）2ＳＯ）：δ１．１（４×ＣＨ）、１．２９（３×ＣＨ2）、２．１（４Ｈ，ｔ，２×ＣＨ2）。
【０１５４】
ＮＭＲ 13Ｃ（（ＣＤ3）2ＳＯ）：δ９．０（４×ＣＨ3）、２５．８（２×ＣＨ3）、３１．０（２×ＣＨ2）、３４．６（ＣＨ2）、５６．８（２×ＣＨ2Ｎ）、１６０．３（Ｃ＝Ｎ）。
【０１５５】
ＨＰＬＣ条件：２５ｍｍＰＲＰカラムを用いて流量８ｍｌ／分。
【０１５６】
Ａ＝３％アンモニア溶液（比重＝０．８８）／水、Ｂ＝アセトニトリル。
時間          ％Ｂ
０            ７．５
１５          ７５．０
２０          ７５．０
２２          ７．５
３０          ７．５
１回の操作当り水溶液３ｍｌをロードし、１２．５〜１３．５分の時間枠で捕集する。
【０１５７】
実施例２：キレートＩのグルタリルアミド誘導体［ビス［（１，１−ジメチル−２−Ｎ−ヒドロキシイミンプロピル）−２−アミノエチル］−（２−（グルタリルアミド）エチル）メタン］の合成
窒素雰囲気下において、乾燥アセトニトリル（５０ｍｌ）及びトリエチルアミン（１５０ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）中のキレートＩ（０．５ｇ、１．４５ｍｍｏｌ）を氷浴上で０℃に冷却した。撹拌反応物に無水グルタル酸（１６５ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）を添加し、室温まで温めて一晩撹拌した。一晩で生成した沈殿を濾過によって集め、真空乾燥することで、表題化合物の不純試料（２６７ｍｇ、０．５８３ｍｍｏｌ、４０％）を得た。濾液を真空中で濃縮して無色のガラス体を得、これを集めた沈殿と共に５％アンモニア水（比重＝０．８８０）（５０ｍｌ）に再溶解し、自動化分取ＨＰＬＣで精製した。
【０１５８】
ＨＰＬＣ条件：１５０ｍｍ×２５ｍｍＰＲＰカラムを用いて流量８ｍｌ／分。
【０１５９】
試料は１回の操作当り２ｍｌの水溶液としてロードした。
【０１６０】
Ａ＝３％アンモニア溶液（比重＝０．８８）／水。
【０１６１】
Ｂ＝アセトニトリル。
時間          ％Ｂ
０            ７．５
１５          ７５．０
２０          ７５．０
２２          ７．５
３１          ７．５
所要の生成物は１２．２５〜１６．５分に溶出した。生成物溶液を真空中で蒸発させて無色のガラス状フォーム（融点５４．８℃）（３０４ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ、４７％）を得た。生成物は、ＴＬＣ及び分析ＨＰＬＣのいずれにおいても１つのスポットとして分析された。
【０１６２】
ＮＭＲ 1Ｈ（ＤＭＳＯ）：０．７（１２Ｈ，ｓ，４×ＣＨ3）、０．８５（４Ｈ，ｍ，２×ＣＨ2）、１．０（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）、１．３（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ3）、１．３（４Ｈ，ｍ，２×ＣＨ2）、１．６（２Ｈ，ｍ，ＣＨ2）、１．７５（６，ｍ，３×ＣＨ2）、２．６（２，ｍ，２×ＯＨ）、３．２（２Ｈ，ｔ，ＮＨ）、７．３（１Ｈ，ｔ，ＮＨ）。
【０１６３】
ＮＭＲ 13Ｃ（ＣＤ3ＳＯ）：８．９７、２０．５１、２０．９１、２５．０９、２５．６０、３１．０６、３３．４１、３３．８６、５６．８９、６６．９９、１６０．０７、１７１２．３４、１７４．３５、１７４．５６。
【０１６４】
Ｍ／Ｓ：Ｃ22Ｈ43Ｎ5Ｏ5に関するＭ＋Ｈ＝４５７、実測値＝４５７．６。
【０１６５】
実施例３：（８−アミノ−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Ｂｏｃ保護キレートＩＩ）の合成
段階（ａ）：２−（６−クロロ−ヘキシルオキシ）テトラヒドロピラン
６−クロロヘキサノール（６．８５ｇ、１０ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸（５００ｍｇ）を乾燥エーテル（７５ｍｌ）に溶解し、氷浴中で０〜５℃に冷却した。絶えず撹拌しながら、乾燥エーテル（２５ｍｌ）中のジヒドロピラン（４．３ｇ、１０ｍｍｏｌ）を３０分かけて滴下した。滴下完了後、冷却浴を取り除き、撹拌を１６時間続けた。溶液を水（５０ｍｌ×２）で抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、減圧下で溶媒を蒸発させると淡黄色の油状物が残った。13Ｃ  ＮＭＲによれば、この油状物は精製せずに以後の反応で使用するのに十分純粋であることが示された。収量１０．１ｇ（９１％）。
【０１６６】
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１９．７（ＣＨ2）、２５．５（ＣＨ2）、２５．６（ＣＨ2）、２６．７（ＣＨ2）、２９．６（ＣＨ2）、３０．８（ＣＨ2）、３２．６（ＣＨ2）、４５．０（ＣＨ2Ｃｌ）、６２．３（ＯＣＨ2）、６７．４（ＯＣＨ2）、９８．８（ＯＣＨＯ）。
【０１６７】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．３０−１．７１（１４Ｈ，ｍ，ＣＨ2×７），３．２４−３．３２（１Ｈ）、３．４１−３．４８（３Ｈ，ｍＣＨ及びＣＨ2）、３．６０−３．６７（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）、３．７２−３．８２（１Ｈ，ｂｍ，ＣＨ）、４．４４−４．４９（１Ｈ，ｂｍ，ＯＣＨＯ）。
【０１６８】
段階（ｂ）：２−［６−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロン酸ジエチルエステル
乾燥窒素ブランケット下において、少量のナトリウム（１．１３ｇ、４９ｍｍｏｌ）を絶えず撹拌しながら乾燥エタノール（１００ｍｌ）に溶解した。マロン酸ジエチル（８．０ｇ、５０ｍｍｏｌ）を一度に添加し、溶液を６０℃で１時間加熱した。
２−（６−クロロ−ヘキシルオキシ）−テトラヒドロピラン（９．３ｇ、４２．２ｍｍｏｌ）を一度に添加し、温度を７５〜８０℃に上昇させてこのレベルに２４時間維持した。冷却後、無機固体を濾過によって除去し、濾液から溶媒を蒸発させた。残留物をＣＨ2Ｃｌ2（５０ｍｌ）に溶解し、水（３０ｍｌ×２）で抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、揮発分を除去すると淡黄色の油状物が残った。この油状物を、石油エーテル４０：６０／エーテル（２００：４０）を溶離剤とするシリカゲル上のクロマトグラフィーにかけた。所要の生成物はｒf＝０．１５で溶出され、無色の油状物として単離された。収量８．７ｇ（６０％）。
【０１６９】
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１４．０（ＣＨ3×２）、１９．６（ＣＨ2）、２５．５（ＣＨ2）、２７．２（ＣＨ2）、２８．６（ＣＨ2）、２９．０（ＣＨ2）、２９．６（（ＣＨ2）、３０．０（ＣＨ2）、３０．８（ＣＨ2）、５２．０（ＣＨ）、６１．２（ＯＣＨ2×２）、６２．２（ＯＣＨ2）、６７．４（ＯＣＨ2）、９８．８（ＯＣＨＯ）、１６９．４（Ｃ＝Ｏ×２）。
【０１７０】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．１０−１．２５（１４Ｈ，ｍ，ＣＨ3×２，ＣＨ2×４）、１．３６−１．５０（６Ｈ，ｂｍ，ＣＨ2×３）、１．７０−１．８１（２Ｈ，ｂｍ，ＣＨ2）、３．１７−３．２８（２Ｈ，ｍ，ＣＨ2）、３．５６−３．６６（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）、３．７０−３．８０（１Ｈ，ｍ，ＯＣＨ）、４．０４−４．１６（４Ｈ，ｍ，ＯＣＨ2×２）、４．０３−４．０８（１Ｈ，ｍ，ＯＣＨＯ）。
【０１７１】
段階（ｃ）：Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノ−エチル）−２−［６−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロナミド
２−［６−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロン酸ジエチルエステル（５．１ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）を１，２−ジアミノエタン（１０ｇ、１６７ｍｍｏｌ）に溶解し、室温で１６時間撹拌した。揮発分を真空中（０．０１ｍｍＨｇで４０〜５０℃）で除去すると淡緑色の粘稠な残留物が残ったが、これをＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ／ＮＨ4ＯＨ（５０：５０：５）で溶出するカラムクロマトグラフィーにかけた。表題化合物はｒf０．２で溶出され、静置後に凝固する淡緑色の粘稠な油状物として捕集された。（収量３．９ｇ、７１％）。
【０１７２】
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１９．８（ＣＨ2）、２５．５（ＣＨ2）、２６．０（ＣＨ2）、２７．５（ＣＨ2）、２９．２（ＣＨ2）、２９．７（ＣＨ2）、３０．８（ＣＨ2）、３１．９（ＣＨ2）、４１．０（ＮＣＨ2×２）、４１．９（ＮＣＨ2×２）、５４．６（ＣＨ）、６２．５（ＯＣＨ2）、６７．５（ＯＣＨ2）、９８．９（ＯＣＨＯ）、１７１．６（Ｃ＝Ｏ×２）。
【０１７３】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．１５−１．２８（６Ｈ，ｂｓ，ＣＨ2×３）、１．３９−１．４４（６Ｈ，ｂｍ，ＣＨ2×３）、１．６９−１．７４（４Ｈ，ｂｍ，ＣＨ2×２）、２．６４（４Ｈ，ｂｓ，ＮＨ2×２）、２．７３（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，ＣＨ2×２）、３．０８−３．２９（６Ｈ，ｍ，ＣＨ2×３）、３．３５−３．４１（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）、３．５５−３．６３（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）、３．７０−３．７８（１Ｈ，ｍ，ＣＨ）、４．４３（１Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝４Ｈｚ，ＯＣＨＯ）、７．７８（２Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，ＯＣＮＨ×２）。
【０１７４】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ-1：−３４１７、３０８２、２９３６、２８６２、１６６３、１５５８、１４３９、１３５４、１３２３、１２６１、１２００、１１８９、１０７６、１０２６、９５６、９０７、８６７、８１０。
【０１７５】
段階（ｄ）：Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−［６−ヒドロキシ−ヘキシル］−マロナミド
Ｎ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−［６−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−ヘキシル］−マロナミド（３．９ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（８．５ｇ、３ｍｍｏｌ）及びエタノール（５０ｍｌ）を７０〜７５℃で１６時間加熱還流した。冷却後、９の永久ｐＨが達成されるまで濃水酸化アンモニウム（０．８８０）を滴下した。沈殿した白色固体をセライト（Ｃｅｌｉｔｅ）による濾過で除去し、濾過ケークをエタノール（３０ｍｌ）で洗った。エタノールを減圧下（１５ｍｍＨｇ、４０℃）で除去すると半固形のワックスが残った。この残留物をＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ／ＮＨ4ＯＨ（１００：５０：１０）で溶出するシリカゲル上のクロマトグラフィーにかけたところ、表題化合物はｒf＝０．２を有することが判明した。この生成物を捕集し、エタノール（１００ｍｌ×３）と共蒸発させることで残留水を除去した。静置後に凝固する淡緑色の粘稠な残留物が得られた。（収量２．１ｇ、６９％）。
【０１７６】
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：δ２５．４（ＣＨ2）、２７．３（ＣＨ2）、２８．９（ＣＨ2）、３０．４（ＣＨ2）、３２．２（ＣＨ2）、４０．６（ＮＣＨ2×２）、４１．７（ＮＣＨ2×２）、５４．１（ＣＨ）、６１．６（ＣＨ2ＯＨ）、１７１．７（Ｃ＝Ｏ×２）。
【０１７７】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：δ１．２８−１．３８（６Ｈ，ｂｓ，ＣＨ2×３）、１．４６−１．５５（２Ｈ，ｂｍ，ＣＨ2）、１．７９−１．８７（２Ｈ，ｂｍ，ＣＨ2）、２．７３（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，Ｈ2ＮＣＨ2×２）、３．１３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ）、３．２７（４Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６及び２Ｈｚ，ＨＮＣＨ2×２）、３．５３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＯＣＨ2）。
【０１７８】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ-1：−３３６４、２９３２、２８６２、２５２７、１６６３、１５５８、１４６２、１３２７、１２２３、１１９２、１０３４。
【０１７９】
質量分析（Ｆａｂｓ）ｍ／ｅ：−Ｃ13Ｈ29Ｎ4Ｏ3に関する計算値（Ｍ＋Ｈ）２８９、実測値２８９。
【０１８０】
段階（ｅ）：（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−８−ヒドロキシ−オクチル）−炭酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
乾燥窒素のブランケット下において、ジオキサン（５０ｍｌ）中のＮ，Ｎ′−ビス（２−アミノエチル）−２−［６−ヒドロキシヘキシル］マロナミド（２．１ｇ、７．３ｍｍｏｌ）の撹拌混合物にニートなボラン−ジメチルスルフィド付加物（１５ｍｌ、１５０ｍｍｏｌ）を注射器で滴下した。滴下完了後、混合物を１１０℃で５日間穏やかに加熱還流した。この期間中、若干の白色固体が残留した。冷却後、揮発分を減圧下で除去すると白色固体が残ったが、これにメタノール（５０ｍｌ）を滴下して無色溶液を得た。この溶液を３時間加熱還流し、冷却し、濃ＨＣｌ（５ｍｌ）を添加し、加熱還流を７０〜７５℃で４８時間続けた。溶媒を除去すると粘稠な緑色残留物が残ったが、これをメタノール（１００ｍｌ×３）と共蒸発させることで淡緑色の固体が残った。この固体を乾燥メタノールに再溶解し、無水炭酸カリウム（４．０ｇ、３０ｍｍｏｌ）を添加し、次いでジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（７．０ｇ、３２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で４８時間撹拌した。無機固体をセライトによる濾過で除去し、濾液から溶媒を蒸発させると粘稠な残留物が残った。残留物を水（５０ｍｌ）と混合し、ＣＨ2Ｃｌ2（５０ｍｌ×３）で抽出した。有機画分を合わせ、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、溶媒を蒸発させると淡黄色の残留物が残った。
【０１８１】
注意：この時点において、13Ｃ  ＮＭＲで反応をモニターするのが好都合である。
【０１８２】
残留物を、ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ（９５：５）を溶離剤とするシリカゲル上のクロマトグラフィーにかけた。表題化合物はｒf＝０．４１で溶出され、無色の粘稠な油状物として単離された（収量２．５ｇ、５２％）。
【０１８３】
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ２５．６（ＣＨ2）、２６．４（ＣＨ2）、２８．４（ＣＨ3×１２）、２９．８（ＣＨ2×２）、３２．６（ＣＨ2）、３６．５（非常にブロード，ＣＨ）、３９．２（ＮＣＨ2×２，隣接ＣＨ）、４６．９（ブロードな一重線，ＨＮＣＨ2×２）、５０．０（ブロードな一重線，ＮＣＨ2×２）、６２．４（ＨＯＣＨ2）、７９．０（ＯＣ×２）、７９．９（ＯＣ×２）、１５６．４（ブロードな一重線、Ｃ＝Ｏ×４）。
【０１８４】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．０５−１．１８（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ2×４）、１．２７（１８ｈ，ｓ，ＣＨ3×６，ｔ−ブチル）、１．３１（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ3×６，ｔ−ブチル）、１．４１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ2）、１．８１（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ）、２．６３（１Ｈ，ｂｓ，ＯＨ）、２．９８（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ2×２）、３．１１（８Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ2×４）、３．４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨ2Ｏ）、５．２（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ×２）。
【０１８５】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ-1：−３３５０、２９７６、２９３１、２８５９、１６７４、１５１６、１４５５、１４１８、１３９３、１２６０、１２５０、１１６５、１０６９、９６５、８７１、７７５。
【０１８６】
質量分析（Ｆａｂｓ）ｍ／ｅ：−Ｃ33Ｈ65Ｎ4Ｏ9に関する計算値（Ｍ＋Ｈ）６６１、実測値６６１。
【０１８７】
段階（ｆ）：トルエン−４−スルホン酸８−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル−アミノ］−７−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−オクチルエステル
（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチル−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）アミノ］−メチル｝−８−ヒドロキシオクチル）−炭酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．５２ｇ、３．８２ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（１．０ｇ、５．２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．３ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）及びＣＨ2Ｃｌ2（３０ｍｌ）を、溶媒をゆっくりと蒸発させながら室温で撹拌した。反応を炭素ＮＭＲによってモニターしたところ、３日後には出発原料はほとんど残留しなかった。反応体積をＣＨ2Ｃｌ2で３０ｍｌに調整し、水（５０ｍｌ×３）で抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、溶媒を蒸発させると褐色の残留物が残った。この残留物を、ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ（１００：５）を溶離剤とするシリカゲル上のクロマトグラフィーにかけた。最初に溶出された化合物は、ｒf＝０．９５を有する未反応のトシルクロリドであった。表題化合物はｒf＝０．２で溶出され、淡黄色の粘稠な油状物として単離された。収量（１．２０ｇ、３９％）。
【０１８８】
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ２１．７（ＣＨ3トシル）、２５．３（ＣＨ2）、２６．３（ＣＨ2）、２８．５（ＣＨ3×１２）、２８．８（ＣＨ2）、２９．５（ＣＨ2）、２９．９（ＣＨ2）、３６．５（ＣＨ，非常にブロード）、３９．４（ＮＣＨ2×２）、４７．０（ブロード，ＮＣＨ2×２）、５０．５（ブロード，ＮＣＨ2×２）、７０．６（ＴｓＯＣＨ2）、７９．１（ＯＣ×２）、８０．０（ＯＣ×２）、１２７．９（ＣＨ×２）、１２９．９（ＣＨ×２）、１３３．２（Ｃ）、１４４．７（Ｃ−Ｓ  Ｔｓ）、１５６．１（ブロード，Ｃ＝Ｏ×４）。
【０１８９】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．１６（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ2×４）、１．３５（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ3×６）、１．３９（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ3×６）、１．８８（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ）、２．３８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3トシル）、３．１０−３．１２（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ2×２）、３．１９（８Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ2×４）、３．９３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2ＯＴｓ）、５．０（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）、５．０８（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）、７．２９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨ×２，Ａｒ）、７．７２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨ×２，Ａｒ）。
【０１９０】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ-1：−３３６０、２９７４、２９３２、２８６２、１６９３、１５１６、１４７９、１４１８、１３９１、１３６６、１２５０、１１７７、１０６９、９５９、８１６、７７５。
【０１９１】
質量分析（Ｆａｂｓ）ｍ／ｅ：−Ｃ40Ｈ71Ｎ4Ｏ11Ｓに関する計算値（Ｍ＋Ｈ）８１５、実測値８１５。
【０１９２】
段階（ｇ）：（８−アジド−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
トルエン−４−スルホン酸８−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル−アミノ］−７−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）アミノ］メチル｝−オクチルエステル（１．１０５ｇ、１．３６ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（３５０ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）及びメタノール（１０ｍｌ）を７０〜７５℃で１６時間加熱還流した。冷却後、メタノールを減圧下において室温で除去し、約１〜２ｍｌが残留するまで続けた。この残留物を水（２５ｍｌ）で希釈し、ＣＨ2Ｃｌ2（２５ｍｌ×４）で抽出した。有機抽出液を合わせ、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濾過し、揮発分を室温で蒸発させる（注意：アジ化物は潜在的に爆発性であり、この段階は安全シールドの後方で実施すべきである。）と淡黄色の粘稠な残留物が残った。この残留物は、純粋な状態の所望化合物であった。（収量８２０ｍｇ、８８％）。
【０１９３】
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ２６．３（ＣＨ2）、２６．５（ＣＨ2）、２８．３（ＣＨ3×１２）、２８．７（ＣＨ2）、２９．６（ＣＨ2）、２９．８（ＣＨ2）、３６．８（ブロード，ＣＨ）、３９．３（ＮＣＨ2×２）、４６．９（ブロード，ＮＣＨ2×２）、５０．０（ブロード，ＮＣＨ2×２）、５１．３（ＣＨ2Ｎ3）、７９．０（ＯＣ×２）、７９．８（ＯＣ×２）、１５６．０（Ｃ＝Ｏ×４）。
【０１９４】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．１６（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ2×４）、１．２９（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ3×６）、１．３３（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ3×６）、１．４７（２Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，ＣＨ2隣接ＣＨ）、１．８６（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ）、２．９５−３．０５（４Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ2×２）、３．０５−３．２０（１０Ｈ，ｂｓ，ＮＣＨ2×４及びＣＨ2Ｎ3）、５．０９（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ×２）。
【０１９５】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ-1：−３３５０、２９７４、２９３２、２８６０、２０９７（強バンドＮ3）、１６９４、１５２０、１４７０、１４１８、１３９１、１３６６、１２５０、１１６７、１０６９、８７０、７７７。
【０１９６】
段階（ｈ）：（８−アミノ−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（キレートＩＩ）
（８−アジド−２−｛［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−（２−ｔｅｒｔ−カルボニルアミノ−エチル）−アミノ］−メチル｝−オクチル）−（２−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８２０ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）、木炭担持１０％パラジウム（１００ｍｇ）及びメタノール（１０ｍｌ）を３０気圧の圧力の水素ガスを用いて室温で１６時間処理した。固形分をセライトによる濾過で除去し、濾過ケークをメタノール（５０ｍｌ）で洗った。濾液から揮発分を除去すると粘稠な油状物が残ったが、これは純粋な状態の所望物質であった。（収量７００ｍｇ、８９％）。
【０１９７】
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ２６．４（ＣＨ2）、２６．６（ＣＨ2）、２８．４（ＣＨ3×１２）、３２．９（ＣＨ2×２）、３６．８（ブロード，ＣＨ）、３９．２（ＮＣＨ2×２）、４１．８（Ｈ2ＮＣＨ2）、４６．９（ブロード，ＮＣＨ2×２）、４９．８（ブロード，ＮＣＨ2×２）、７８．９（ＯＣ×２）、７９．７（ＯＣ×２）、１５６．０（Ｃ＝Ｏ×４）。
【０１９８】
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．０８（８Ｈ，ｂｓ，ＣＨ2×４）、１．２３（１８Ｈ，ｓ，ＣＨ3×６）、１．２７（２０Ｈ，ｂｓ，ＣＨ3×６及びＣＨ2）、１．７７（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨ）、２．４０（２Ｈ，ｂｓ，ＮＨ2）、２．５０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2ＮＨ2）、２．９７（４Ｈ，ｂｍ，ＮＣＨ2×２）、３．００−３．１６（８Ｈ，ｂｍ，ＮＣＨ2×４）、５．２１（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）、５．３０（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ）。
【０１９９】
ＩＲ（薄膜）ｃｍ-1：−３３６０、１６９３、１５２０、１４５９、１４１８、１３９２、１３６７、１２５０、１１７０、１０６８、９６４、９２２、８７１、７７５、７３３。
【０２００】
質量分析（Ｆａｂｓ）ｍ／ｅ：−Ｃ33Ｈ66Ｎ5Ｏ8に関する計算値（Ｍ＋Ｈ）６６０、実測値６６０。
【０２０１】
実施例４：造影剤１の合成
（ａ）前駆体１の合成
【０２０２】
【化１８】
2009537624.tif 000022
Ｎｏｖａ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｒｉｎｋ  ＭＢＨＡ樹脂（０．５８ｍｍｏｌｅ／ｇ又は０．７２ｍｍｏｌｅ／ｇ）の使用により、ＡＢＩ  ４３３Ａ自動化合成機上でこのペプチドをアセンブルした。ペプチドは０．１ｍｍｏｌｅスケール又は０．２５ｍｍｏｌｅスケールで合成した。標準プロトコルを使用した。
カップリング試薬：ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ、塩基：ＤＩＥＡ、溶媒：ＮＭＰ。
ＨＰＬＣ移動相Ａ）０．１％ＴＦＡ／Ｈ2Ｏ、Ｂ）０．１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮ。
ＨＰＬＣカラム：
分析用：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｇｅｍｉｎｉ、２５０×４．６ｍｍ、５μｍ。
【０２０３】
分取用：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｇｅｍｉｎｉ、２５０×２１ｍｍ、１０μｍ。
【０２０４】
自動アセンブリに続き、ペプチド樹脂（１３０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ中で１０分間膨潤させた。テトラＢｏｃ−キレートＩＩ ＮＨＳエステル（１４８ｍｇ、０．２ｍｍｏｌｅ、実施例３に記載したＢｏｃ保護キレートＩＩ）をＤＭＦ（５ｍｌ）中でＰｙＡＯＰ（１０４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌｅ）及びＮＭＭ（４０μｌ、０．４ｍｍｏｌｅ）と３分間混合した。ＮＭＭ（２０μｌ、０．２ｍｍｏｌｅ）を樹脂に添加し、その後にキレートＩＩ／ＰｙＡＯＰ／ＮＭＭ溶液を添加した。樹脂溶液混合物をバブリング下で一晩放置したところ、陰性のカイザー試験によって連結ペプチドへの１００％転化が示された。切断及び凍結乾燥に続き、粗ペプチドをＬＣ−ＭＳ（２０分で２０〜４０％Ｂ）で分析した。分析によって適正なＭＷが存在することが示されたが、高率の欠失ペプチド（恐らくは−Ｌｅｕ）も認められた。ＲＴ：１３．７分。
【０２０５】
４０分で２０〜３５％Ｂの勾配を用いて粗ペプチド混合物を精製した。いくつかの画分を捕集し、分析し、凍結乾燥した。収量：５．８ｍｇの白色綿毛状固体。ＨＰＬＣ純度：９８％。ＥＳＩ−ＭＳ：理論ＭＷ：１９４０．４０。実測（Ｍ＋Ｈ）2+／２：９７１．２。
【０２０６】
（ｂ）前駆体１の放射性標識
造影剤を形成するため、室温まで温めたバイアルにＭｅＯＨ２０μｌ中の前駆体２０μｇを下記の試薬と共に加えた。
【０２０７】
【表４】
2009537624.tif 000023
１ｍｌのＤｒｙｔｅｃ（商標）99mＴｃ溶出液をバイアルに加え、溶液を室温で２０分間放置し、次いでＨＰＬＣ及びＩＴＬＣで分析した。
【０２０８】
ＨＰＬＣ分析は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｇｅｍｉｎｉカラム（Ｃ18  １５０×４．６ｍｍ、５μｍ）、溶媒Ａ＝０．０６％アンモニア及び溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮを用いて実施した。二重ＵＶは２２５ｎｍ及び２５４ｎｍで測定した。
【０２０９】
ＨＰＬＣ勾配：
流量：１．００ｍｌ／分。
０分          ２０％Ｂ
２０分        ４０％Ｂ
２２分        ９５％Ｂ
２６分        ９５％Ｂ
３７分        ２０％Ｂ
３０分        ２０％Ｂ
ＩＴＬＣ−ＩＴＬＣ  ＳＧストリップ−移動相＝食塩水又は２−ブタノン（ＭＥＫ）。
【０２１０】
実施例５：造影剤３の合成
（ａ）前駆体３の合成
【０２１１】
【化１９】
2009537624.tif 000024
上記実施例４で造影剤１に関して記載したようにしてこのペプチドをアセンブルした。
【０２１２】
自動アセンブリに続き、ペプチド樹脂（１１０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ中で１０分間膨潤させた。テトラＢｏｃ−キレートＩＩ ＮＨＳエステル（１４８ｍｇ、０．２ｍｍｏｌｅ、実施例３に記載したＢｏｃ保護キレートＩＩ）をＤＭＦ（５ｍｌ）中でＰｙＡＯＰ（１０４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌｅ）及びＮＭＭ（４０μｌ、０．４ｍｍｏｌｅ）と３分間混合した。ＮＭＭ（２０μｌ、０．２ｍｍｏｌｅ）を樹脂に添加し、その後にキレートＩＩ／ＰｙＡＯＰ／ＮＭＭ溶液を添加した。樹脂溶液混合物をバブリング下で一晩放置したところ、陰性のカイザー試験によって連結ペプチドへの１００％転化が示された。切断及び凍結乾燥に続き、粗ペプチドをＬＣ−ＭＳ（２０分で２〜１２％Ｂ）で分析した。分析により、適正なＭＷが主ピークとして存在することが示された。ＲＴ：１２分。
【０２１３】
４０分で２〜１０％Ｂの勾配を用いて粗ペプチド混合物を精製した。３つの画分を捕集し、分析し、凍結乾燥して３ｍｇの純粋なペプチドを得た。ペプチドを純Ｈ2Ｏに溶解した場合の初期ＨＰＬＣ分析によれば、電荷の異なる化学種の存在に原因する２つの基線で分離されたピークが示された。次に、ペプチドを０．１％ＴＦＡ／Ｈ2Ｏに溶解し、適正な質量を有する１つのピークを得た。ＨＰＬＣ純度：９８％。理論ＭＷ：１２５９．４９。実測（Ｍ＋Ｈ）2+／２：６３０．６。
【０２１４】
（ｂ）前駆体３の放射性標識
５０μｇの前駆体及び下記のようなＨＰＬＣを使用した点を除き、造影剤１に関して上述した方法に従って放射性標識を実施した。
【０２１５】
ＨＰＬＣ勾配：
流量：１．００ｍｌ／分。
０分          ５％Ｂ
１０分        ４０％Ｂ
１５分        ４０％Ｂ
１７分        １０％Ｂ
２０分        ５％Ｂ
実施例６：造影剤８の合成
（ａ）前駆体８の合成
【０２１６】
【化２０】
2009537624.tif 000025
上記実施例４で造影剤１に関して記載したようにしてこのペプチドをアセンブルした。
【０２１７】
自動アセンブリに続き、ペプチド樹脂（１３３ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ中で１０分間膨潤させた。テトラＢｏｃ−キレートＩＩ−ＮＨＳエステル（１４８ｍｇ、０．２ｍｍｏｌｅ、実施例３に記載したＢｏｃ保護キレートＩＩ）及びＰｙＡＯＰ（１０４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦに溶解し、混合し、ＮＭＭ（４０μｌ、０．４ｍｍｏｌｅ）を溶液に添加し、２分間放置した。ＮＭＭ（２０μｌ、０．２ｍｍｏｌｅ）を樹脂に添加し、その後にキレートＩＩ／ＰｙＡＯＰ／ＮＭＭ溶液を添加した。樹脂混合物をＮ2バブリング下で２４時間放置したところ、カイザー試験によって反応が完了したことが示された。ＤＭＦ／ＤＣＦ洗浄に続き、樹脂をＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ2Ｏ（１０：０．２５：０．２５）中で２時間切断し、次いで濾過し、ジエチルエーテル中でトリチュレートし、ロタバポリー（ｒｏｔａｖａｐｏｒｙ）で蒸発させ、凍結乾燥した。粗ペプチドをＬＣ−ＭＳ（２０分で１０〜３０％Ｂ）で分析した。分析によって１つの主ピークの存在が示された。分取ＨＰＬＣ（４０分で１０〜３０％Ｂ）を用いて粗ペプチド混合物を精製した。２つの画分を捕集し、分析し、凍結乾燥した。収量：８．７ｍｇの白色綿毛状固体。ＨＰＬＣ純度：９９％。ＥＳＩ−ＭＳ：理論ＭＷ：１１７８．４５。実測（Ｍ＋Ｈ）2+／２：５９０．０。
【０２１８】
（ｂ）前駆体８の放射性標識
下記のようなＨＰＬＣを使用した点を除き、造影剤１に関して実施例４に記載した方法に従って放射性標識を実施した。
【０２１９】
ＨＰＬＣ勾配：
０分          １０％Ｂ
２０分        ３０％Ｂ
２１分        ９５％Ｂ
２６分        ９５％Ｂ
２７分        １０％Ｂ
３０分        １０％Ｂ
実施例７：造影剤１０の合成
（ａ）前駆体１０の合成
【０２２０】
【化２１】
2009537624.tif 000026
上記実施例４で造影剤１に関して記載したようにしてこのペプチドをアセンブルした。
【０２２１】
ペプチジル樹脂Ｈ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｖａｌ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＲをＴＦＡ（１０ｍｌ）中２．５％水及び２．５％ＴＩＳの溶液で２時間処理した。樹脂を濾過によって除去し、濾液を真空中で蒸発させた。ジエチルエーテルを残留物に添加した。得られた沈殿をジエチルエーテルで洗って風乾したところ、８４ｍｇの粗Ｈ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＮＨ2が得られた。
【０２２２】
粗Ｈ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−ＮＨ2（８４ｍｇ）をアルゴンブランケット下で７５％ＡｃＯＨ水溶液（８０ｍＬ）に溶解した。１Ｍ  ＨＣｌ（８ｍＬ）、アニソール（０．４ｍＬ）及びＡｃＯＨ中０．０２５Ｍ  Ｉ2（２６．６ｍＬ）をこの順序で添加した。１／２時間後、反応を停止させるために１Ｍアスコルビン酸を添加した。大部分の溶媒を真空中で蒸発させた。残留物を水／０．１％ＴＦＡで希釈し、生成物を分取ＨＰＬＣで２回精製したところ、１７ｍｇの純粋なＣｙｓ１−８；Ｈ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−ＮＨ2（１７ｍｇ）が得られた。
【０２２３】
Ｃｙｓ１−８；Ｈ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−ＮＨ2（１７ｍｇ）、テトラ−Ｂｏｃ−キレートＩＩ  ＮＨＳエステル（１７ｍｇ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）（３ｍｇ）及びＮ−メチルモルホリン（１７μｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。次に、混合物を６０％ＡＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ（７ｍＬ）で希釈し、生成物を分取ＨＰＬＣで精製したところ、１６ｍｇの純粋なＣｙｓ１−８；テトラ−Ｂｏｃ−キレートＩＩ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−ＮＨ2が得られた。
【０２２４】
Ｃｙｓ１−８；テトラ−Ｂｏｃ−キレートＩＩ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−ＮＨ2をＴＦＡ（１０ｍｌ）中２．５％水及び２．５％ＴＩＳの溶液で２時間処理した。ＴＦＡを真空中で蒸発させ、残留物をＤＭＦ（０．５ｍＬ）に溶解し、２０％ＡＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ（５ｍＬ）で希釈し、生成物を分取ＨＰＬＣ（勾配：４０分で２０〜４０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：１０ｍｌ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ（商標）５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：２４．７分）で精製したところ、８．７ｍｇの純粋なＣｙｓ１−８；キレートＩＩ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−ＮＨ2が得られた。質量分析法を用いて生成物を特性決定した（ＭＨ+計算値：１２６３．６、ＭＨ+実測値：１２６３．８）。
【０２２５】
（ｂ）前駆体１０の放射性標識
５０μｇの前駆体を使用した点を除き、造影剤１に関して実施例４に記載した方法に従って放射性標識を実施した。
【０２２６】
実施例８：造影剤２９の合成
（ａ）前駆体２９の合成
【０２２７】
【化２２】
2009537624.tif 000027
上記実施例４で造影剤１に関して記載したようにしてこのペプチドをアセンブルした。
【０２２８】
自動アセンブリに続き、ペプチド樹脂（６５ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ中で１０分間膨潤させた。その後、ＤＭＦ（１０ｍｌ）中のＡｃ2Ｏ（４５０μｌ）／ＤＩＥＡ（２５０μｌ）／ＨＯＢｔを用いて樹脂を２時間アセチル化した。陰性のカイザー試験によって完全なアセチル化が示された。（３Ｉ）Ｙ−ＯＨの同時エステル化のため、樹脂をＤＭＦ中２０％ピペリジンで２×２０分間処理した。次に、樹脂をＤＭＦ／ＤＣＭで十分に洗い、室温で乾燥した。樹脂をＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ2Ｏ（１０：０．２５：０．２５）中で２時間切断し、次いで濾過し、ジエチルエーテル中でトリチュレートし、ロタバポリーで蒸発させ、凍結乾燥した。粗ペプチドをＬＣ−ＭＳ（２０分で２０〜４０％Ｂ）で分析した。分析によって２つの主ピークの存在が示された。粗ペプチド混合物を分取ＨＰＬＣ（４０分で２０〜３５％Ｂ）で精製した。２つの画分を捕集し、分析し、凍結乾燥した。収量：０．５ｍｇの白色固体。ＨＰＬＣ純度：９９％。ＥＳＩ−ＭＳ：理論ＭＷ：１１４６．１。実測（Ｍ＋Ｈ）2+／２：５７３．６。
【０２２９】
（ｂ）前駆体２９の放射性標識
最初に、１０μｌ（１ｍＭ、１０-8モル）の０．０５Ｍ  ＮａＯＨ中Ｎａ127Ｉを２００μｌの０．２Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ４）に添加した。次に、この溶液をＮａ123Ｉバイアルに入った約２５μｌの０．０５Ｍ  ＮａＯＨ中Ｎａ123Ｉ溶液（４５０ＭＢｑ）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｃｙｇｎｅ社）に添加した。内容物をシラン処理バイアルに移し、１０μｌの過酢酸（５ｍＭ、５×１０-8モル）を添加した。次に、前駆体（７０μｌのＭｅＯＨ中１００μｇ、８．１×１０-8モル）を添加し、バイアルの内容物をピペットで混合した。約５分後、反応混合物をＨＰＬＣで分析した。
【０２３０】
ＨＰＬＣ分析は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｌｕｎａ（商標）（Ｃ18  １５０×４．６ｍｍ、５μｍ）カラム、溶媒Ａ＝０．１％ＴＦＡ／Ｈ2Ｏ及び溶媒Ｂ＝０．１％ＴＦＡ／Ｈ2Ｏを用いて実施した。二重ＵＶは２２５ｎｍ及び２５４ｎｍで測定した。
【０２３１】
ＨＰＬＣ勾配：
流量：１ｍｌ／分。
０分          １０％Ｂ
２０分        ５０％Ｂ
２２．５分    １００％Ｂ
２７分        １００％Ｂ
２７．５分    ２０％Ｂ
３１分        ２０％Ｂ
ＩＴＬＣ−ＩＴＬＣ  ＳＧストリップ−移動相＝食塩水。
【０２３２】
実施例９：造影剤３５の合成
（ａ）前駆体３５の合成
【０２３３】
【化２３】
2009537624.tif 000028
上記実施例４で造影剤１に関して記載したようにしてこのペプチドをアセンブルした。
【０２３４】
自動アセンブリに続き、ペプチド樹脂（１５０ｍｇ）をＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ2Ｏ（１０：０．２５：０．２５）中で２時間切断し、次いで濾過し、ジエチルエーテル中でトリチュレートし、ロタバポリーで蒸発させ、凍結乾燥した。粗ペプチドをＬＣ−ＭＳ（２０分で１０〜３０％Ｂ）で分析した。分析によって２つの主ピークの存在が示された。４０分で１０〜３０％Ｂの勾配を用いて粗ペプチド混合物を精製した。２つの画分を捕集し、分析し、凍結乾燥した。収量：１．５ｍｇの白色綿毛状固体。ＨＰＬＣ純度：９９％。ＥＳＩ−ＭＳ：理論ＭＷ：１１０４．０６。実測（Ｍ＋Ｈ）2+／２：５５２．８。
【０２３５】
（ｂ）前駆体３５の放射性標識
造影剤２９に関して実施例８に記載した方法に従って放射性標識を実施した。
【０２３６】
実施例１０：造影剤３６の合成
（ａ）前駆体３６の合成
【０２３７】
【化２４】
2009537624.tif 000029
上記実施例４で造影剤１に関して記載したようにしてこのペプチドをアセンブルした。
【０２３８】
自動アセンブリに続き、ペプチド樹脂（１３０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ中で１０分間膨潤させた。その後、ＤＭＦ（１０ｍｌ）中のＡｃ2Ｏ（４５０μｌ）／ＤＩＥＡ（２５０μｌ）／ＨＯＢｔを用いて樹脂を２時間アセチル化した。陰性のカイザー試験によって完全なアセチル化が示された。（３Ｉ）Ｙ−ＯＨの同時エステル化のため、樹脂をＤＭＦ中２０％ピペリジンで２×２０分間処理した。次に、樹脂をＤＭＦ／ＤＣＭで十分に洗い、室温で乾燥した。樹脂をＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ2Ｏ（１０：０．２５：０．２５）中で２時間切断し、次いで濾過し、ジエチルエーテル中でトリチュレートし、ロタバポリーで蒸発させ、凍結乾燥した。粗ペプチドをＬＣ−ＭＳ（２０分で２０〜４０％Ｂ）で分析した。分析によって２つの主ピークの存在が示された。粗ペプチド（１７ｍｇ）を、Ｈ2Ｏ（２４ｍｌ）、ＭｅＣＮ（１６ｍｌ）及びＤＭＳＯ（１６０μｌ）からなる溶液中で酸化した。ｐＨは２５％ＮＨ3で約９に調整した。溶液を室温で一晩撹拌し続けた。ＬＣ−ＭＳによって酸化は完了したことが示され、ｐＨをＡｃＯＨで４に調整した。ペプチドを凍結乾燥し、その後に分取ＨＰＬＣ（４０分で２０〜３５％Ｂ）で精製した。
【０２３９】
２つの画分を捕集し、分析した。収量：２．５ｍｇの白色綿毛状固体。ＨＰＬＣ純度：９９％。ＥＳＩ−ＭＳ：理論ＭＷ：１３５０．３７。実測（Ｍ＋Ｈ）2+／２：６７５．６。
【０２４０】
（ｂ）前駆体３６の放射性標識
下記のようなＨＰＬＣを使用した点を除き、造影剤２９に関して実施例８に記載した方法に従って放射性標識を実施した。
流量：１ｍｌ／分。
０分          ２０％Ｂ
２０分        ３５％Ｂ
２２．５分    １００％Ｂ
２７分        １００％Ｂ
２７．５分    ２０％Ｂ
３１分        ２０％Ｂ
実施例１１：造影剤３７の合成
（ａ）前駆体３７の合成
【０２４１】
【化２５】
2009537624.tif 000030
上記実施例４で造影剤１に関して記載したようにしてこのペプチドをアセンブルした。
【０２４２】
自動アセンブリに続き、ペプチド樹脂（６５ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ中で１０分間膨潤させた。Ｆｍｏｃ−ＰＥＧ４−ＣＯＯＨ（１００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦに溶解し、ＰｙＡＯＰ（１００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌｅ）／ＤＭＦ溶液に添加した。ＮＭＭ（４０μｌ、０．４ｍｍｏｌｅ）を添加し、溶液を２分間放置した。ＮＭＭ（２０μｌ、０．２ｍｍｏｌｅ）を樹脂に添加し、その後にカップリング溶液を添加した。樹脂混合物をＮ2バブリング下で一晩放置した。カイザー試験によって反応は完了していないことが示されたが、カップリング操作を２回繰り返すことでカイザー試験が陰性になった。ＤＭＦ中２０％ピペリジン（２×７ｍｌ）を用いて、Ｆｍｏｃ脱保護を１×１０分及び１×５分実施した。ＤＭＦ中のＰｙＡＯＰ（２１１ｍｇ、０．４ｍｍｏｌｅ）／ＮＭＭ（８０μｌ、０．８ｍｍｏｌｅ）を用いて、Ｆｍｏｃ−（３Ｉ）Ｙ−ＣＯＯＨ（０．５ｍｍｏｌｅ）を３時間カップリングした。カイザー試験によって反応が完了したことが示された。
【０２４３】
ＤＭＦ洗浄に続き、ＤＭＦ（１０ｍｌ）中のＡｃ2Ｏ（４５０μｌ）／ＤＩＥＡ（２５０μｌ）／ＨＯＢｔを用いて樹脂を２時間アセチル化した。陰性のカイザー試験によって完全なアセチル化が示された。（３Ｉ）Ｙ−ＯＨの同時エステル化のため、樹脂をＤＭＦ中２０％ピペリジンで２×２０分間処理した。次に、樹脂をＤＭＦ／ＤＣＭで十分に洗い、室温で乾燥した。樹脂をＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ2Ｏ（１０：０．２５：０．２５）中で２時間切断し、次いで濾過し、ジエチルエーテル中でトリチュレートし、ロタバポリーで蒸発させ、凍結乾燥した。粗ペプチドをＬＣ−ＭＳ（２０分で２０〜４０％Ｂ）で分析したところ、１つの主ピークが約９０％の純度で示された。ペプチドは寒冷標準として使用するだけであったので、粗ペプチドをそれ以上は精製しなかった。ＥＳＩ−ＭＳ：理論ＭＷ：１６８１．６。実測（Ｍ＋Ｈ）2+／２：８４０．３。
【０２４４】
（ｂ）前駆体３７の放射性標識
下記のようなＨＰＬＣ勾配を使用した点を除き、造影剤２９に関して実施例８に記載した方法に従って放射性標識を実施した。
０分          ５％Ｂ
２０分        ２５％Ｂ
２２．５分    １００％Ｂ
２７分        １００％Ｂ
２７．５分    ２５％Ｂ
３１分        ５％Ｂ
実施例１２：造影剤３８の合成
（ａ）前駆体３８の合成
【０２４５】
【化２６】
2009537624.tif 000031
上記実施例４で造影剤１に関して記載したようにしてこのペプチドをアセンブルした。
【０２４６】
自動アセンブリに続き、ペプチド樹脂（８０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ中で１０分間膨潤させた。ブロモ酢酸（２５０ｍｌ）及びＤＣＣ（２００ｍｇ）を混合し、ＤＣＭ（１０ｍｌ）を添加した。スラリーを室温で１時間撹拌し続け、その後に濾過した。ＤＣＭ溶液をロタバポリーで蒸発させ、残留物にＤＣＭ（１０ｍｌ）を添加した。その後、ＤＩＥＡ（５０μｌ、０．５ｍｍｏｌｅ）を添加し、ＤＭＦ／ＤＩＥＡ溶液を樹脂に添加した。樹脂混合物をバブリング下で９０分間放置したところ、陰性のカイザー試験によって反応が完了したことが示された。ＤＭＦ洗浄後、ＤＭＦ中のＨｉｓ（ｔｒｔ）ＯｔＢｕ（１００ｍｇ、０．３ｍｍｏｌｅ）及びＤＩＥＡ（５０μｌ、０．５ｍｍｏｌｅ）を樹脂に添加した。樹脂混合物をバブリング下で一晩放置した。樹脂をＤＭＦ／ＤＣＭで十分に洗い、室温で一晩放置した。樹脂をＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ2Ｏ（１０：０．２５：０．２５）中で２時間切断し、次いで濾過し、ジエチルエーテル中でトリチュレートし、ロタバポリーで蒸発させ、凍結乾燥した。粗ペプチドをＬＣ−ＭＳ（２０分で２０〜４０％Ｂ）で分析した。分析によって２つの主ピークの存在が示された。分取ＨＰＬＣ（４０分で２０〜３５％Ｂ）を用いて粗ペプチド混合物を精製した。１つの画分を捕集し、分析し、凍結乾燥した。収量：２ｍｇの白色固体。ＨＰＬＣ純度：９８％。ＥＳＩ−ＭＳ：理論ＭＷ：１９１７．３。実測（Ｍ＋Ｈ）2+／２：９５８．８。
【０２４７】
（ｂ）前駆体３８の放射性標識
ジェネレーターから溶出した１ｍｌの99mＴｃＯ4-をＴｃ−カルボニルキット（Ｉｓｏｌｉｎｋ（商標）、Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ社、ペッテン、オランダ）に添加し、５ｍｌのヘッドスペースを除去し、バイアルを１００℃で２０分間加熱した。バイアルを室温まで冷却し、１ｍｌの０．１Ｍ  ＰＢＳ（ｐＨ７．４）を添加し、溶液のｐＨを測定し、次いでＴＬＣ（Ｍｅｒｃｋ  Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ−移動相＝９９％ＭｅＯＨ／１％ＨＣｌ）で分析した。
【０２４８】
２００μｌの99mＴｃ（ＣＯ）3（Ｈ2Ｏ）3溶液を、５０μｌ／５０μｇのＭｅＯＨ中前駆体及び２００μｌの１Ｍ  ２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸緩衝液（ｐＨ６．５）と共に、新しいシラン処理バイアルに加えた。溶液を６０℃で６０分間加熱し、次いでＨＰＬＣ及びＩＴＬＣ（ＳＧストリップ−移動相＝食塩水）で分析した。
【０２４９】
最初のＨＰＬＣ分析は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉカラム（Ｃ18  １５０×４．６ｍｍ、５μｍ）、溶媒Ａ＝０．１％ＴＦＡ／Ｈ2Ｏ及び溶媒Ｂ＝０．１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮを用いて実施した。ＵＶは２５４ｎｍで測定した。
【０２５０】
ＨＰＬＣ勾配：
流量：１ｍｌ／分。
０分          ２０％Ｂ
２０分        ４０％Ｂ
２１分        ９５％Ｂ
２６分        ９５％Ｂ
２７分        ２０％Ｂ
３２分        ２０％Ｂ
次のＨＰＬＣ分析は、分析用としてＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ18カラム  １５０×２．１ｍｍ（５μｍ）−流量０．２ｍｌ／分を用いるか、又は精製用としてＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  Ｃ18カラム  １５０×４．６ｍｍ（３μｍ）−流量１．０ｍｌ／分を用いて実施した。
【０２５１】
溶媒Ａ＝０．０６％アンモニア及び溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ。ＵＶは２１４ｎｍで測定した。
【０２５２】
ＨＰＬＣ勾配：
流量：１ｍｌ／分。
０分          ２５％Ｂ
２０分        ９５％Ｂ
２６分        ９５％Ｂ
２７分        ２５％Ｂ
３０分        ２５％Ｂ
実施例１３：造影剤３９の合成
（ａ）前駆体３９の合成
【０２５３】
【化２７】
2009537624.tif 000032
上記実施例４で造影剤１に関して記載したようにしてこのペプチドをアセンブルした。
【０２５４】
自動アセンブリに続き、ペプチド樹脂（１３ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌｅ）をマイクロ波バイアルに移し、ＤＭＦ（３ｍｌ）中のＢｏｃ−ＨＹＮＩＣ−ＮＨＳエステル（５ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌｅ）／ＨＯＢｔ（２ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌｅ）／ＤＩＥＡ（８μｌ、０．０．６ｍｍｏｌｅ）を添加した。樹脂混合物を室温で１５分間放置し、その後にマイクロ波中に６０℃で２時間配置した。樹脂をＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ2Ｏ（１０：０．２５：０．２５）中で２時間切断し、次いで濾過し、ジエチルエーテル中でトリチュレートし、ロタバポリーで蒸発させ、凍結乾燥した。粗ペプチドをＬＣ−ＭＳ（２０分で２０〜４０％Ｂ）で分析した。分析によって２つの主ピークの存在が示された。粗ペプチド混合物を分取ＨＰＬＣ（４０分で２０〜３５％Ｂ）で精製した。１つの画分を捕集し、分析し、凍結乾燥した。収量：１ｍｇの白色固体。ＨＰＬＣ純度：９８％。ＥＳＩ−ＭＳ：理論ＭＷ：１８５７．２。実測（Ｍ＋Ｈ）2+／２：９２９．５。
【０２５５】
（ｂ）前駆体３９の放射性標識
５０μｌ／５０μｇの前駆体（ＭｅＯＨ中）をシラン処理バイアルに加えた。次に、０．３ｍｌのトリシン（０．１％酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５）中３０ｍｇ）をバイアルに加え、次いで１ｍｌの０．１％酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５）を加えた。次に、０．５ｍｌの99mＴｃＯ4-（放射能０．７〜４．４ＧＢｑ）をバイアルに加え、次いで０．１ｍｌのＮ2パージドＳｎＣｌ2食塩水溶液（０．４４ｍＭ  ｄｍ-3）を加えた。これを室温で３０分間反応させた。
【０２５６】
ＨＰＬＣ分析は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉカラム（Ｃ18  １５０×４．６ｍｍ、５μｍ）、溶媒Ａ＝１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６）及び溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮを用いて実施した。ＵＶは２５４ｎｍで測定した。
【０２５７】
ＨＰＬＣ勾配：
流量：１ｍｌ／分。
０分          ２０％Ｂ
２０分        ４０％Ｂ
２１分        ９５％Ｂ
２６分        ９５％Ｂ
２７分        ２０％Ｂ
３２分        ２０％Ｂ
ＩＴＬＣ  ＳＧストリップ−移動相＝食塩水。
【０２５８】
実施例１４：造影剤４０の合成
（ａ）前駆体４０の合成
【０２５９】
【化２８】
2009537624.tif 000033
上記実施例４で造影剤１に関して記載したようにしてこのペプチドをアセンブルした。
【０２６０】
自動アセンブリに続き、ペプチド樹脂（リシン上ｉｖＤｄｅ保護）（１８２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌｅ）をＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ2Ｏ（１０：０．２５：０．２５）中で２時間切断し、次いで濾過し、ジエチルエーテル中でトリチュレートし、ロタバポリーで蒸発させ、凍結乾燥した。キレートＩ−グルタル酸（２３ｍｇ）、ＰｙＡＯＰ（２５ｍｇ）及びＮＭＭ（６μｌ）をＤＭＦ（３ｍｌ）に溶解し、ペプチド残留物に添加した。溶液を室温で一晩振盪し続けた。粗ペプチドをＬＣ−ＭＳ（２０分で２５〜７０％Ｂ）で分析した。分析によって２つの主ピークの存在が示された。粗ペプチド混合物（リシン保護状態）を分取ＨＰＬＣ（４０分で３０〜６０％Ｂ）で精製した。３つの画分を捕集し、分析し、凍結乾燥した。収量：４．３ｍｇの白色固体。ＨＰＬＣ純度：９８％。ペプチド（４ｍｇ）をＤＭＦ（８ｍｌ）に溶解し、ヒドラジン水化物（１６０μｌ）を添加することでｉｖＤｄｅ保護基を除去した。脱保護をＨＰＬＣでモニターしたところ、２０分後には反応が完了した。試料を１０％ＭｅＣＮ／Ｈ2Ｏで希釈し、ｐＨを４に調整した。その後、ペプチドをＨＰＬＣ（４０分で２０〜４０％Ｂ）で精製し、凍結乾燥して収量２．５ｍｇの白色綿毛状固体を得た。ＨＰＬＣ純度：９８％。ＥＳＩ−ＭＳ：理論ＭＷ：２１６１．７。実測（Ｍ＋Ｈ）2+／２：１０８２．２。
【０２６１】
（ｂ）前駆体４０の放射性標識
下記のようなＨＰＬＣ勾配を使用しながら、造影剤１に関して実施例４に記載したようにして放射性標識を室温で２０分間実施した。
流量：１．００ｍｌ／分。
０分          ２５％Ｂ
２０分        ６０％Ｂ
２１分        ９５％Ｂ
２７分        ２５％Ｂ
３２分        ２５％Ｂ
実施例１５：造影剤４１の合成
（ａ）前駆体４１の合成
【０２６２】
【化２９】
2009537624.tif 000034
上記実施例４で造影剤１に関して記載したようにしてこのペプチドをアセンブルした。
【０２６３】
自動アセンブリに続き、ペプチド樹脂（７０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌｅ）をＤＭＦ中で１０分間膨潤させた。テトラＢｏｃ−キレートＩＩ ＮＨＳエステル（７０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌｅ、実施例３に記載したＢｏｃ保護キレートＩＩ）をＤＭＦ（５ｍｌ）中でＰｙＡＯＰ（５０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌｅ）及びＮＭＭ（３０μｌ、０．３ｍｍｏｌｅ）と３分間混合した。ＮＭＭ（２０μｌ、０．２ｍｍｏｌｅ）を樹脂に添加し、その後にキレートＩＩ／ＰｙＡＯＰ／ＮＭＭ溶液を添加した。樹脂溶液混合物をバブリング下で一晩放置したところ、陰性のカイザー試験によって連結ペプチドへの１００％転化が示された。樹脂をＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ2Ｏ（１０：０．２５：０．２５）中で２時間切断し、次いで濾過し、ジエチルエーテル中でトリチュレートし、ロタバポリーで蒸発させ、凍結乾燥した。ＬＣ−ＭＳ（２０分で２０〜４０％Ｂ）によって１つの主ピークが示され、粗ペプチドを分取ＨＰＬＣ（４０分で２０〜３０％Ｂ）で精製した。１つの画分を捕集し、凍結乾燥後に１ｍｇの白色固体を得た。ＨＰＬＣ純度：９８％。ＥＳＩ−ＭＳ：理論ＭＷ：２９４８．６。実測（Ｍ＋Ｈ）3+／３：９８３．４。
【０２６４】
（ｂ）前駆体４１の放射性標識
５０μｇの前駆体及び下記のようなＨＰＬＣ勾配を使用した点を除き、造影剤１に関して実施例４に記載したようにして放射性標識を室温で２０分間実施した。
０分          ２０％Ｂ
２０分        ４０％Ｂ
２１分        ９５％Ｂ
２６分        ９５％Ｂ
２７分        ２０％Ｂ
３２分        ２０％Ｂ
実施例１６：造影剤４２の合成
（ａ）前駆体４２の合成
【０２６５】
【化３０】
2009537624.tif 000035
上記実施例４で造影剤１に関して記載したようにしてこのペプチドをアセンブルした。
【０２６６】
ペプチジル樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（５ｍｌ）中２．５％水及び２．５％トリイソプロピルシラン（ＴＩＳ）の溶液で２時間処理した。樹脂を濾過によって除去し、濾液を真空中で蒸発させた。ジエチルエーテルを残留物に添加した。得られた沈殿をエーテルで洗って風乾したところ、９５ｍｇの粗Ｈ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｂｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−ＮＨ2が得られた。
【０２６７】
Ｈ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｂｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−ＮＨ2（２４ｍｇ）、キレートＩ−Ｇｌｕｔ活性エステル（６２ｍｇ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）（７ｍｇ）及びｓｙｍ．−コリジン（６６μｌ）を１−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）（１ｍＬ）に溶解し、反応混合物を３７℃で一晩撹拌した。反応混合物をＮＭＰ（０．５ｍＬ）、水／０．１％ＴＦＡ（１ｍＬ）及びアセトニトリル（ＡＣＮ）／０．１％ＴＦＡ（１ｍＬ）で希釈し、分取ＨＰＬＣを用いて生成物を精製したところ、５ｍｇの純粋なキレートＩ−Ｇｌｕｔ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｂｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−ＮＨ2が得られた。
【０２６８】
キレートＩ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｂｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−ＰＥＧ（４）−ｄｉｇｌｙｃｏｌｏｙｌ−ＮＨ2（５ｍｇ）を２％ヒドラジン一水化物／ＮＭＰ（１ｍＬ）で３０分間処理した。１０％ＡＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ（４ｍＬ）を反応混合物に添加し、生成物を分取ＨＰＬＣ（勾配：４０分で１０〜４０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ（商標）５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３５．０分）で精製したところ、２．３ｍｇの純粋な生成物が得られた。純粋な生成物を分析ＨＰＬＣ（勾配：５分で１０〜４０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ（商標）３μ  Ｃ１８（２）２０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：４．０２分）で分析した。質量分析法を用いて追加の生成物特性決定を実施した（ＭＨ22+計算値：１２２６．３、ＭＨ22+実測値：１２２６．３）。
【０２６９】
（ｂ）前駆体４２の放射性標識
下記のようなＨＰＬＣ勾配を使用しながら、造影剤１に関して実施例４に記載したようにして放射性標識を室温で２０分間実施した。
流量：１．００ｍｌ／分。
０分          ２５％Ｂ
２０分        ６０％Ｂ
２１分        ９５％Ｂ
２７分        ２５％Ｂ
３２分        ２５％Ｂ
実施例１７：造影剤４３の合成
（ａ）前駆体４２の合成
【０２７０】
【化３１】
2009537624.tif 000036
上記実施例４で造影剤１に関して記載したようにしてこのペプチドをアセンブルした。
【０２７１】
ペプチジル樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（５ｍｌ）中２．５％水及び２．５％ＴＩＳの溶液で２時間処理した。樹脂を濾過によって除去し、濾液を真空中で蒸発させた。ジエチルエーテルを残留物に添加した。得られた沈殿をエーテルで洗って風乾したところ、７７ｍｇの粗Ｈ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｂｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−ＮＨ2が得られた。
【０２７２】
Ｈ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｂｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−ＮＨ2（２４ｍｇ）、キレートＩ  Ｇｌｕｔ活性エステル（６２ｍｇ）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）（７ｍｇ）及びｓｙｍ．−コリジン（６６μｌ）をＮＭＰ（１ｍＬ）に溶解し、反応混合物を３７℃で一晩撹拌した。反応混合物をＮＭＰ（０．５ｍＬ）、水／０．１％ＴＦＡ（１ｍＬ）及びＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ（１ｍＬ）で希釈し、分取ＨＰＬＣを用いて生成物を精製したところ、６．５ｍｇの純粋なキレートＩ−Ｇｌｕｔ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｂｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−ＮＨ2が得られた。
【０２７３】
キレートＩ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌｙｓ（ｉｖＤｄｅ）−Ａｂｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−ＰＥＧ（４）−ジグリコロイル−ＮＨ2（６．５ｍｇ）を２％ヒドラジン一水化物／ＮＭＰ（１ｍＬ）で３５分間処理した。１０％ＡＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ（８ｍＬ）を反応混合物に添加し、生成物を分取ＨＰＬＣ（勾配：４０分で１０〜４０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ（商標）５μ  Ｃ１８（２）２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３１．０分）で精製したところ、５．３ｍｇの純粋な生成物が得られた。純粋な生成物を分析ＨＰＬＣ（勾配：５分で１０〜４０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ（商標）３μ  Ｃ１８（２）２０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３．５２分）で分析した。質量分析法を用いて追加の生成物特性決定を実施した（ＭＨ22+計算値：１２３３．３、ＭＨ22+実測値：１２３３．３）。
【０２７４】
（ｂ）前駆体４３の放射性標識
下記のようなＨＰＬＣ勾配を使用しながら、造影剤１に関して実施例４に記載したようにして放射性標識を室温で２０分間実施した。
流量：１．００ｍｌ／分。
０分          ２０％Ｂ
２０分        ５５％Ｂ
２１分        ９５％Ｂ
２７分        ２０％Ｂ
３２分        ２０％Ｂ
実施例１８：Ｉ型コラーゲンに対する造影剤１のインビトロ結合
Ｍａｘｉｓｏｒｐプレートを５０μＬ又は１００μＬの０．１ｍｇ／ｍＬＩ型コラーゲンと共に４℃で一晩インキュベートした。ピペットを用いてすべての溶液をウェルから除去した。ウェルを２００μＬのＰＢＳで２回洗い、０．１％ＢＳＡを含む１５０μＬのＰＢＳと共に室温で３０分間インキュベートした。ウェルを２００μＬのＰＢＳで５回洗い、次いで９０μＬのＰＢＳを各ウェルに加えた。１０μＬのニートな（及びＰＢＳで２倍系列希釈した）造影剤１をウェルに四重試料として加えた。プレートをシールし、３７℃で１時間インキュベートした。
【０２７５】
ウェルを氷冷ＰＢＳ（２００μＬ）で７回洗い、次いでウェルをガラスバイアルに移し、Ｗａｌｌａｃカウンターを用いて各試料に関し６０秒カウントを行うことで99mＴｃ放射能を計数（測定）した。
【０２７６】
下記の図１は、１つの実験から得られたＩ型コラーゲン被覆ウェルに対する造影剤１の結合を示している。曲線（黒点のトレース）はＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＳＭでモデル化した非線形回帰単一部位結合双曲線を用いて当てはめたものであり、当てはめデータ（ｒ2＝０．９９９２）を用いてＢmax＝１０６８ａｍｏｌ（アトモル）及びＫd＝１９４．２ｎＭが得られた。
実施例１９：造影剤１のインビボ体内分布
１８頭の雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（１８０〜２００ｇ）を手術した。各動物の腹部を剃毛してベタジン溶液を塗布し、次いで５ｍｇ／ｋｇのカルプロフェン（ｓ．ｃ．）及び５ｍｇ／ｋｇのブプロノルフィン（ｓ．ｃ．）を投与した。イソフルラン麻酔下で正中線開腹術を実施し、総胆管の位置を確認した。胆管を二重に結紮した（ｎ＝９）。第１の結紮は肝管の接合部間で行い、第２の結紮は膵管の入口上方で行った。縫合前、約２〜３ｍｌの食塩水を腹腔内に投与した。筋膜及び皮膚を縫合し、動物に２ｍｇ／ｋｇのメタクロプロミド（ｓ．ｃ．）、５ｍｇ／ｋｇのベテトリル（ｓ．ｃ．）及び約２ｍｌの食塩水（ｓ．ｃ．）を投与した。次の２日間、必要に応じてカルプロフェン（５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。対照動物には、胆管を操作し、縫合糸を胆管下方に通す擬似手術を施した（ｎ＝９）。動物を１５日間にわたって綿密にモニターした。手術後１６日目、イソフルラン麻酔下の動物に尾静脈経由で０．１ｍｌの造影剤１（約１ＭＢｑ）を静脈内注射した。注射から５分、６０分及び１２０分後に器官を切除した（ＢＤＬ動物）。５分、６０分及び１２０分後に器官を切除した（対照動物）。
【０２７７】
下記の表は、調査した様々な時点におけるパーセント注射量を示している。
【０２７８】
【表５】
2009537624.tif 000037
実施例２０：肝線維症の胆管結紮モデル
この胆管結紮モデルは、文献（例えば、Ｂｉｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，３１３（３），９５２−９６１；Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｐｒｉｅｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，９８（５），６１１−６１７；Ｕｂｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９（６），１４３１−１４３６）中に以前に記載されたものから採用した。
【０２７９】
１．雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（１８０〜２００ｇ）の腹部を剃毛してベタジン溶液を塗布し、次いで５ｍｇ／ｋｇのカルプロフェン（ｓ．ｃ．）及び５ｍｇ／ｋｇのブプロノルフィン（ｓ．ｃ．）を投与した。
【０２８０】
２．イソフルラン麻酔下で正中線開腹術を実施し、総胆管の位置を確認した。
【０２８１】
３．胆管を二重に結紮した。第１の結紮は肝管の接合部間で行い、第２の結紮は膵管の入口上方で行った。
【０２８２】
４．縫合前、約２〜３ｍｌの食塩水を腹腔内に投与した。
【０２８３】
５．筋膜及び皮膚を縫合し、動物に２ｍｇ／ｋｇのメタクロプロミド（ｓ．ｃ．）、５ｍｇ／ｋｇのベテトリル（ｓ．ｃ．）及び約２ｍｌの食塩水（ｓ．ｃ．）を投与した。
【０２８４】
６．次の２日間、必要に応じてカルプロフェン（５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。
【０２８５】
７．対照動物には、胆管を操作し、縫合糸を胆管下方に通す擬似手術を施した。
【０２８６】
８．動物を所要期間にわたって綿密にモニターした。
【０２８７】
９．体内分布の日、イソフルラン麻酔下の動物に尾静脈経由で０．３ｍｌの放射性標識化合物（約２ＭＢｑ）を静脈内注射した。
【０２８８】
１０．注射から５分、６０分及び１２０分後に器官を切除した（ＢＤＬ動物）。
【０２８９】
１１．５分、６０分及び１２０分後に器官を切除した（対照動物）。
【０２９０】
１２．Ｗａｌｌａｃカウンターを用いて各器官中における組織１グラム当たり放射能を測定した。
【図面の簡単な説明】
【０２９１】
【図１】Ｉ型コラーゲン被覆ウェルに対する造影剤１の結合を示している。
【配列表】
2009537624000001.app
【国際調査報告】
2009537624.tif 000038
2009537624.tif 000039
2009537624.tif 000040
2009537624.tif 000041
2009537624.tif 000042
2009537624.tif 000043