(57)【要約】  式Ｉの化合物：式中Ｘは、酸素、窒素、およびイオウから選択され；ｎは０または１であり；Ｒ１は、アルキル、カルボン酸、カルボキシラート、カルボキサミド、エステル、およびそれらの組み合わせから選択され；Ｒ２は、アルキル、置換アルキル、カルボン酸、カルボキシラート、カルボキサミド、スルホニル、スルホンアミド、およびそれらの組み合わせから選択される；ならびにその誘導体および代謝物。更には式Ｉの化合物を用いて、不要の細胞増殖を特徴とする状態を有する被験体を予防および／または処置する方法も提供される。式Ｉの化合物、またはその誘導体もしくは薬学的に許容可能な塩を一つまたは複数含む薬学的化合物も提供される。2009538823.tif 000009
2009538823.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１の化合物であって、
【化１】
2009538823.tif 000006
式中Ｘは、酸素、窒素、およびイオウから成る群より選択され；
Ｒ１は、水素、アルキル、カルボン酸、カルボキシラート、カルボキサミド、エステル、およびそれらの組み合わせから成る群より選択され；
Ｒ２は、アルキルおよび置換アルキルから成る群より選択される化合物；
または、その誘導体もしくは薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
ＸはＯである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｘ−Ｒ１は、水素およびカルボン酸から選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
請求項３に記載の化合物であって、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−酢酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−プロピオン酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−酪酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−酢酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−プロピオン酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−酪酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−スクシナート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−グルタラート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−スクシナート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−グルタラート、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−シアノブチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(７−シアノヘプチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(９−シアノノニル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノデシル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−メチルスルホンアミドペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−メチルスルホンアミドオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−メチルスルホンアミドデシル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノスルホンアミドペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノスルホンアミドオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノスルホンアミドデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−シアノブチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(７−シアノヘプチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(９−シアノノニル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−メチルスルホンアミドペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−メチルスルホンアミドオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−メチルスルホンアミドデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノスルホンアミドペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノスルホンアミドオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノスルホンアミドデシル)クロマン、あるいはそれらの誘導体または薬学的に許容される塩から成る群より選択される、化合物。
【請求項５】
被験体内の細胞増殖性疾患の処置のための方法であって、そのような処置を必要とする被験体に、
【化２】
2009538823.tif 000007
ここでＸは、酸素、窒素、およびイオウから成る群より選択され；
Ｒ１は、アルキル、カルボン酸、カルボキシラート、カルボキサミド、エステル、およびそれらの組み合わせから成る群より選択され；
Ｒ２は、アルキル、置換アルキル、カルボン酸、カルボキシラート、カルボキサミド、スルホニル、スルホンアミド、およびそれらの組み合わせから成る群より選択される化合物Ｉ、またはその誘導体もしくは薬学的に許容可能な塩を、薬理学的有効用量投与することを含む、方法。
【請求項６】
ＸはＯである、請求項５記載の化合物。
【請求項７】
Ｘ−Ｒ１は、水素およびカルボン酸から選択される、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
前記化合物が、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−酢酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−プロピオン酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−酪酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−酢酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−プロピオン酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−酪酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−スクシナート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−グルタラート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−スクシナート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−グルタラート、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−シアノブチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(７−シアノヘプチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(９−シアノノニル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノデシル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−メチルスルホンアミドペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−メチルスルホンアミドオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−メチルスルホンアミドデシル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノスルホンアミドペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノスルホンアミドオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノスルホンアミドデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−シアノブチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(７−シアノヘプチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(９−シアノノニル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−メチルスルホンアミドペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−メチルスルホンアミドオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−メチルスルホンアミドデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノスルホンアミドペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノスルホンアミドオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノスルホンアミドデシル)クロマン、およびそれらの組み合わせ、あるいはそれらの誘導体または薬学的に許容される塩から成る群より選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記化合物が、アポトーシス、細胞周期停止、細胞分化、またはＤＮＡ合成停止を含む抗増殖作用を示す、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記被験体がヒト被験体である、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
薬学的組成物であって、
【化３】
2009538823.tif 000008
式中Ｘは、酸素、窒素、およびイオウから成る群より選択され；
Ｒ１は、水素、アルキル、カルボン酸、カルボキシラート、カルボキサミド、エステル、およびそれらの組み合わせから成る群より選択され；
Ｒ２は、アルキルおよび置換アルキルから成る群より選択される式Ｉの化合物；
または、その誘導体もしくは薬学的に許容可能な塩を一つまたは複数含む、薬学的組成物。
【請求項１２】
一つまたは複数の補助剤を更に含む、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
一つまたは複数の希釈剤を更に含む、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
ＸはＯである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｘ−Ｒ１は、ヒドロキシおよびカルボン酸から選択される、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
前記化合物が、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−酢酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−プロピオン酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−酪酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−酢酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−プロピオン酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−酪酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−スクシナート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−グルタラート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−スクシナート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−グルタラート、２−カルボキサミドブチル）クロマン−６−酪酸、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−シアノブチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(７−シアノヘプチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(９−シアノノニル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノデシル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−メチルスルホンアミドペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−メチルスルホンアミドオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−メチルスルホンアミドデシル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノスルホンアミドペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノスルホンアミドオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノスルホンアミドデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−シアノブチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(７−シアノヘプチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(９−シアノノニル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−メチルスルホンアミドペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−メチルスルホンアミドオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−メチルスル���ンアミドデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノスルホンアミドペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノスルホンアミドオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノスルホンアミドデシル)クロマン、およびそれらの組み合わせ、あるいはそれらの誘導体または薬学的に許容される塩から成る群より選択される、請求項１５に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
一つまたは複数の補助剤を更に含む、請求項１６に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
一つまたは複数の希釈剤を更に含む、請求項１７に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
一つまたは複数の希釈剤を更に含む、請求項１６に記載の薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連する出願への相互参照）
本出願は、２００６年２月２１日に出願された、その全体が本明細書中で参考として援用される米国仮特許出願第６０／７７５１０７号（題名「抗癌剤」）に対する優先権および利益を主張する。
【０００２】
（連邦政府によって資金を提供された研究の申告）
本発明は、少なくともその一部において、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｇｒａｎｔ  ＣＡ−１１２２５０およびＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｄｅｆｅｎｓｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｇｒａｍ  Ａｗａｒｄ  Ｗ８１ＸＷＨ−０５−１−００８９による資金を提供された。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
最近の研究は、α−トコフェリルスクシナートの癌治療薬としての使用の可能性を示唆している。α−トコフェリルスクシナートは、正常細胞に対し重大な毒性をもたらすことなく、悪性または形質転換した表現形を持つ細胞にアポトーシスを誘導することを示す証拠がある。さらには、乳癌およびメラノーマ腫瘍の増殖の抑制、大腸癌の肝臓への転移の阻止、および腫瘍壊死因子関連のアポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）に対する大腸癌細胞の感作を含むそのｉｎ  ｖｉｖｏでの有効性が、多くの動物モデル実験で示されている。このような進歩にもかかわらず、この酸化還元−不活性ビタミンＥ誘導体のアポトーシスに対する効果の基礎となるメカニズムについては分かっていない。
【０００４】
正常細胞に重大な毒性をもたらすことなく癌細胞にアポトーシスを誘導できる新規の抗癌剤が求められている。新規の抗癌剤を見つける一つの方法は、α−トコフェリルスクシナートが前立腺癌細胞内に抗新生物活性を仲介する、一つまたは複数の標的を決定することである。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の概要）
ここでは、
【０００６】
【化４】
2009538823.tif 000003
式中Ｘは、酸素、窒素、およびイオウから成る群より選択され；Ｒ１は、水素、アルキル、カルボン酸、カルボキシラート、カルボキサミド、エステル、およびそれらの組み合わせから成る群より選択され；Ｒ２は、アルキル、置換アルキル、カルボン酸、カルボキシラート、カルボキサミド、スルホニル、スルホンアミド、およびそれらの組み合わせから成る群より選択される式Ｉの化合物：
ならびにその誘導体および代謝物が提供される。
【０００７】
また、被験体に薬理学的有効用量の式Ｉの化合物を投与することを含む、前記被験体の細胞増殖性疾患の防止および／または処置も提供する。式Ｉの化合物の一つまたは複数を含む薬学的組成物も提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
（発明の詳細な説明）
ここでは：
【０００９】
【化５】
2009538823.tif 000004
式中Ｘは、酸素、窒素、およびイオウから成る群より選択され；Ｒ１は、水素、アルキル、カルボン酸、カルボキシラート、カルボキサミド、エステル、およびそれらの組み合わせから成る群より選択され；Ｒ２は、アルキル、置換アルキル、カルボン酸、カルボキシラート、カルボキサミド、スルホニル、スルホンアミド、およびそれらの組み合わせから成る群より選択される式Ｉの化合物；
ならびにその誘導体および代謝物が提供される。
【００１０】
幾つかの特定の実施形態では、式Ｉの化合物は、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−酢酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−プロピオン酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−酪酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−酢酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−プロピオン酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−酪酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−スクシナート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−グルタラート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−スクシナート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−グルタラート、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−シアノブチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(７−シアノヘプチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(９−シアノノニル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノデシル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−メチルスルホンアミドペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−メチルスルホンアミドオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−メチルスルホンアミドデシル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノスルホンアミドペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノスルホンアミドオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノスルホンアミドデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−シアノブチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(７−シアノヘプチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(９−シアノノニル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−メチルスルホンアミドペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−メチルスルホンアミドオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−メチルスルホンアミドデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノスルホンアミドペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノスルホンアミドオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノスルホンアミドデシル)クロマン、ならびにそれらの誘導体および代謝物から選択される。
【００１１】
更には、薬理学的有効用量の：
【００１２】
【化６】
2009538823.tif 000005
式中Ｘは、酸素、窒素、およびイオウから成る群より選択され；Ｒ１は、水素、アルキル、カルボン酸、カルボキシラート、カルボキサミド、エステル、およびそれらの組み合わせから成る群より選択され；Ｒ２は、アルキル、置換アルキル、カルボン酸、カルボキシラート、カルボキサミド、スルホニル、スルホンアミド、およびそれらの組み合わせから成る群より選択される式Ｉの化合物；
ならびにその誘導体および代謝物を動物に投与することを含む、細胞増殖性疾患の防止および／または処置のための方法も提供する。例示的実施形態では、ＸはＯであり、Ｘ−Ｒ１はヒドロキシもしくはカルボン酸のどちらかである。
【００１３】
幾つかの特定の実施形態では、式Ｉの化合物は、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−酢酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−プロピオン酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−酪酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−酢酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−プロピオン酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−酪酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−スクシナート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−グルタラート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−スクシナート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−グルタラート、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−シアノブチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(７−シアノヘプチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(９−シアノノニル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノデシル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−メチルスルホンアミドペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−メチルスルホンアミドオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−メチルスルホンアミドデシル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノスルホンアミドペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノスルホンアミドオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノスルホンアミドデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−シアノブチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(７−シアノヘプチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(９−シアノノニル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−メチルスルホンアミドペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−メチルスルホンアミドオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−メチルスルホンアミドデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノスルホンアミドペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノスルホンアミドオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノスルホンアミドデシル)クロマン、ならびにそれらの誘導体および代謝物から選択される。
【００１４】
本明細書に記載する方法によれば、式Ｉの化合物は、一般的にはアポトーシス、細胞周期停止、細胞分化、またはＤＮＡ合成停止の一つまたは複数を含むが、これらに限定されない抗増殖性効果を示す。本明細書に開示する方法は、特にヒトでの使用に好適である。
【００１５】
一つまたは複数の式Ｉの化合物および薬学的担体を含む、薬学的組成物も提供する。幾つかの特定の実施形態では、薬学的組成物は、式Ｉの次の化合物の一つまたは複数を含む：２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−酢酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−プロピオン酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−酪酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−酢酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−プロピオン酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−酪酸、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−スクシナート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−メチルペンチル)クロマン−６−グルタラート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−スクシナート、２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４，８−ジメチルノナニル)クロマン−６−グルタラート、および２カルボキサミドブチル)クロマン−６−酪酸、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−シアノブチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(７−シアノヘプチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(９−シアノノニル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノデシル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−メチルスルホンアミドペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−メチルスルホンアミドオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−メチルスルホンアミドデシル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノスルホンアミドペンチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノスルホンアミドオクチル)クロマン、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノスルホンアミドデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(４−シアノブチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(７−シアノヘプチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(９−シアノノニル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−メチルスルホンアミドペンチル)クロマン、６−スクシナート−２��５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−メチルスルホンアミドオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−メチルスルホンアミドデシル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(５−アミノスルホンアミドペンチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(８−アミノスルホンアミドオクチル)クロマン、６−スクシナート−２，５，７，８−テトラメチル−(２Ｒ−(１０−アミノスルホンアミドデシル)クロマン。
【００１６】
一つの例示的実施形態では、薬学的組成物は、治療有効量の、一つまたは複数の式Ｉの化合物を、許容可能な担体と共に含む。別の例示的実施形態では、薬学的組成物は、治療有効量の、式Ｉの化合物を一つまたは複数を、許容可能な担体および一つまたは複数の補助剤と共に含む。別の例示的実施形態では、薬学的組成物は、治療有効量の、一つまたは複数の式Ｉの化合物を、許容可能な担体、一つまたは複数の補助剤、および一つまたは複数の希釈剤と共に含む。これら例示のどの実施形態でも、一つまたは複数の式Ｉの化合物は、薬学的に許容可能なそれらの塩でよい。これら例示のどの実施形態でも、一つまたは複数の式Ｉの化合物は、式Ｉの誘導体でよい。
【００１７】
本発明の化合物および方法は、癌の発生を処理、阻害、または遅延させるのに有用であるが、これらに限定されない。前記化合物および方法は、前癌および他の有害な細胞増殖事象の処理にも有用である。本発明によれば、式Ｉの化合物は、有害な細胞増殖に苦しむ被験体に投与される。前記化合物および方法は、白血病、非小細胞肺癌、大腸癌、ＣＮＳ癌、メラノーマ、卵巣癌、腎臓癌、前立腺癌、膀胱癌、リンパ腫および乳癌を含む癌の処置に有用であるが、これらの癌に限定されるものではない。更には、それらは、前癌状態の個体、ならびにこれらの疾患に罹りやすい個体での、これらの癌の防止に有用である。
【００１８】
用語「処置」は、正常細胞への破壊効果を最小限にとどめながら、有害な増殖細胞を部分的または全体的に破壊することに関する。本発明によれば、細胞処理の望ましいメカニズムは、アポトーシス、細胞周期停止、細胞分化、またはＤＮＡ合成停止の一つまたは複数を含むが、これらに限定されない。
【００１９】
用語「防止」は、臨床的に明らかに不要である細胞増殖の発生を防止すること、またはリスクを有する個体に於いて、望ましくない急速な細胞の増殖の、前臨床的に明らかな段階の開始を防止することに関する。この定義には、悪性細胞の転移の防止、または悪性細胞の進行を停止させること、もしくは逆行させることも包含するものとする。これには、前癌および癌の発生リスクがある個体の予防的処置も含まれる。
【００２０】
用語「治療有効」および「薬理学的有効」は、代替治療法に典型的に伴う有害な副作用を回避しつつ、疾患重傷度および発生頻度を改善するという目的が達成される、各作用物質の量を表すものである。
【００２１】
処置の目的とする場合の用語「被験体」は、不要の、急激な細胞増殖を特徴とする障害を有するヒトまたは動物の被験体を包含する。このような障害としては、癌および前癌が挙げられるが、これらに限定されない。防止の方法の場合、被験体は、ヒトまたは動物の被験体であり、好ましくは、癌のような不要の急激な細胞増殖を特徴とする障害を獲得するリスクのあるヒト被験体である。被験体は、発癌性作用物質への暴露、不要の、急激な細胞増殖を特徴とする障害を遺伝的に起こしやすい等のリスクを持ち得る。ヒトの処置に有益であるだけでなく、本発明の化合物はまた、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、およびブタといったペットおよび家畜を含むが、これらに限定されない哺乳動物の獣医学的処置にも有用である。好ましくは、被験体はヒトを意味する。
【００２２】
用語「増殖性細胞」、「増殖細胞」、「急激に増殖している細胞」、「有害な増殖細胞」、「有害な急激に増殖している細胞」、「不要の、急激に増殖している細胞」等は、被験体中の癌細胞、前癌細胞、および他の異常な、急激な分裂を行っている細胞を指す。
【００２３】
本明細書で使用する「誘導体」は、アポトーシス、細胞周期停止、細胞分化、またはＤＮＡ合成停止を誘導する誘導体の能力によって測定した場合、実質的に等価な活性を有する式Ｉの化合物に構造的に関連した任意の化合物を包含するものとする。例を挙げると、そのような化合物には、その塩、エステル、代謝物、およびプロドラッグが含まれるが、これらに限定されない。このような化合物は、代謝メカニズムによる様に、ｉｎ  ｖｉｖｏで形成されてもよい。
【００２４】
用語アルキルを単独またはハロアルキルもしくはアルキルアリールのように他の用語と一緒に用いる場合、それはＣ１〜Ｃ１０の直鎖または枝分かれしたアルキルラジカルを含み、例としてはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル等が挙げられる。用語「ハロアルキル」は、一つまたは複数のハロラジカルで置換したＣ１〜Ｃ１０の直鎖または枝分かれしたアルキルラジカルを含む。ハロアルキルラジカルの幾つかの例としては、トリフルオロメチル、１，２−ジクロロエチル、３−ブロモプロピル等が挙げられる。用語「ハロ」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩから選択されるラジカルを含む。本発明のアルキルラジカル置換基は、アジドのような他の基（例えばアジドメチル、２−アジドエチル、３−アジドプロピル等）でも置換され得る。
【００２５】
用語アリールは、単独で、またはアルキルアリール、ハロアリール、もしくはハロアルキルアリールの様な他の用語と組み合わせて用いる場合、フェニル、ビフェニル、およびベンジルのような芳香族ラジカル、ならびにナフチル、アントリル、フェナントレニル、フルオレニル、およびインデニル等の様な融合アリールラジカルを含む。用語「アリール」はまた、芳香環の中に炭素および一つまたは複数のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、またはＳ）を有するアリールである「ヘテロアリール」を包含する。ヘテロアリールの例としては、インドリル、ピロリル等が挙げられる。「アルキルアリール」または「アリールアルキル」は、ブチルフェニル、プロピルフェニル、エチルフェニル、メチルフェニル、３，５−ジメチルフェニル、ｔｅｒｔ−ブチルフェニル等のアルキル−置換アリール基を指す。「ハロアリール」は、一つまたは複数の置換可能位置がハロラジカルで置換されたアリールラジカルを指し、例としてはフルオロフェニル、４−クロロフェニル、２，５−クロロフェニル等が挙げられる。「ハロアルキルアリール」は、ハロアルキル置換基を有するアリールラジカルを指す。ハロアルキルアリールの例としては、ブロモメチルフェニル、４−ブロモブチルフェニル等のラジカルが挙げられる。カルボキサミドは、基−ＣＯＮＨ２を指し、スルホンアミドは基−ＳＯ２ＮＨ２を指す。
【００２６】
式Ｉの化合物のファミリーには、その薬学的に許容可能な塩も含まれる。句「薬学的に許容可能な塩」とは、アルカリ金属塩を形成する、および遊離酸または遊離塩基の付加塩を形成するのに一般的に用いられる塩を含む。該塩の性質は、それが薬学的に許容可能であれば重要ではない。式Ｉの化合物の好適な薬学的に許容可能な酸付加塩は、無機酸から、または有機酸から調製できる。そのような無機酸の例は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、カルボン酸、硫酸、およびリン酸である。相応しい有機酸は、脂肪酸、脂環式酸、芳香族酸、アリール脂肪族酸、ヘテロ環式酸、カルボン酸、およびスルホン酸の部類から選択でき、その例としてはギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルクロン酸、マレイン酸、フマール酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸、アントラニル酸、メシル酸、サリチル酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、マンデル酸、アンボン酸、パモン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パントテン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルファニル酸、シクロヘキシルアミノスルホン酸、ステアリン酸、アルゲン酸（ａｌｇｅｎｉｃ  ａｃｉｄ）、β−ヒドロキシ安息香酸、ガラクタル酸、およびガラクツロン酸が挙げられる。式Ｉの化合物の好適な薬学的に許容可能な塩基付加塩としては、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、および亜鉛から作られた金属塩が挙げられる。あるいは、Ｎ，Ｎ'−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）およびプロカインから作られた有機塩は、式Ｉの化合物の塩基付加塩の形成に用いることができる。これらの塩は全て、例えば、適切な酸または塩基を式Ｉの化合物と反応させることによって、式Ｉの対応する化合物から通常の手段により調製できる。
【００２７】
有害な、急激に増殖している細胞を防止および／または処置するための、例えばそのような処置を必要としている被験体中の癌の発生を処置する、防止する、または遅延させるための薬学的組成物も提供される。薬学的組成物は、治療有効量の式Ｉの化合物、またはそれらの誘導体もしくは薬学的に許容される塩を、少なくとも一つの薬学的に許容可能な担体、補助剤、または希釈剤（本明細書ではまとめて「担体物質」と呼ぶ）、および望ましい場合には他の活性成分と共に含む。本発明の活性化合物は、当業者に知られる任意の好適経路から、好ましくはその経路に適合した薬学的組成物の形状、且つ目的とする処置に有効な用量で投与できる。活性化合物および組成物は、例えば経口、血管内、腹腔内、鼻内、気管支内、皮下、筋肉内、または局所（エアロゾルを含む）に投与できる。被験体によっては、全身投与ではなく局所投与が好ましいこともある。生体利用性を上げるために、脂質ビークル形状の製剤を用いてもよい。
【００２８】
本発明の投与は、防止または処置目的のいずれでもよい。ここで使用する方法および組成物は、単独で用いても、または細胞の不要な、急激な増殖を特徴とする障害の防止または処置について当業者に知られているさらなる治療法と一緒に用いてもよい。あるいは、本明細書に記載する方法および組成物は、補助療法として用いることもできる。例を挙げると、本発明のアポトーシス誘導化合物は、単独で投与しても、または他の抗新生物剤もしくは他の増殖阻害剤、または他の薬物もしくは栄養物と一緒に投与してもよい。
【００２９】
商業的に使用されている、臨床評価中、および前臨床開発中の多数の抗新生物剤が入手可能であり、これらは、癌または急激な細胞増殖を特徴とする他の障害の、併用薬物化学療法による処置のために選択できる。このような抗新生物剤は、複数の主要な分類、即ち抗生物質型製剤、アルキル化剤、抗代謝剤、ホルモン剤、免疫剤、インターフェロン型製剤、その他の製剤分類に分けられる。あるいは、メタロマトリックスプロテアーゼ阻害剤（ＭＭＰ）のような他の抗新生物剤を用いてもよい。併用治療に用いることができる好適な作用物質は、当業者により認識される。同様に、併用治療が望ましい場合、当業者に知られている放射線防護剤も用いることができる。
【００３０】
句「補助治療」（または併用治療）は、本発明の化合物および一つもしくは複数の他の薬学的作用物質の使用を定義する場合、これら活性作用物質を一定の比率で含む単独の製剤、または各作用物質について、複数の別々の製剤の形で、薬物の組み合わせの有益な効果を提供するレジメンで、それぞれの作用物質を連続的な方法で投与することを包含すること、およびこれらの作用物質の、実質的に同時の方法である同時投与も包含することを意図するものである。
【００３１】
経口投与では、薬学的組成物は、例えば錠剤、カプセル、懸濁液、または液体の形をとることができる。薬学的組成物は、特定量の活性成分を含有する投薬単位の形に作ることが好ましい。そのような投薬単位の例は、ラクトース、マンニトール、コーンスターチ、または馬鈴薯デンプンのような通常の添加物；結晶セルロース、セルロース誘導体、アカシア、コーンスターチ、またはゼラチンのような結合剤；コーンスターチ、馬鈴薯デンプン、またはカルボキシメチル−セルロース・ナトリウムのような崩壊剤；およびタルクまたはステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤を含むカプセル、錠剤、粉末、顆粒、または懸濁液である。活性成分は、例えば食塩水、デキストロースまたは水を好適担体として用いることができる組成物として注射によって投与することもできる。
【００３２】
静脈内、筋肉内、皮下、および腹腔内投与の場合は、化合物は受容者の血液と等張であることが好ましい無菌の水溶液と組み合わせることができる。このような調合物は、固体の活性成分を、塩化ナトリウム、グリシン等のような生理学的に適合する物質を含有する水に溶解すること、および生理的条件に適合する緩衝化されたｐＨを有す水溶液を生成すること、および該溶液を無菌化することによって調製できる。調合物は、密封されたアンプルまたはバイアルのようなユニットまたは複数回投与容器の中にいれてもよい。
【００３３】
不要の増殖細胞がＧ.Ｉ.（胃腸）管内に局在する場合は、化合物は当該技術分野で公知の、高ｐＨの小腸内で溶解し始める酸安定、塩基易変性コーティングを用いて調合できる。局所薬理効果を高め、全身性の取込を下げる調合が好ましい。
【００３４】
非腸管投与に好適な調合物は、等張にされることが好ましい活性化合物の無菌水性調製物を含むことが好都合である。注射用調製物は、化合物を植物油、合成脂肪族酸グリセリド、高級脂肪族酸のエステル、またはプロピレングリコールのような非水性溶媒中に懸濁または乳化することによっても調合できる。
【００３５】
局所使用向け調合物としては、既知のゲル、クリーム、オイル等が挙げられる。エアロゾル送達では、化合物は、食塩水のような既知エアロゾル賦形剤を用いて調合でき、市販の噴霧器を用いて投与できる。生体適合性を上げるために、脂肪酸供給源の形をした調合を用いてもよい。
【００３６】
直腸投与では、活性成分は、室温では固体であり、体温で溶融または溶解する基材を用いた座薬の形に調合できる。一般に用いられている基材としては、ココアバター、グリセリンゼラチン、硬化植物油、各種分子量のポリエチレングリコール、およびポリスチレンステアラートの脂肪酸エステルが挙げられる。
【００３７】
投薬の形態および量は、既知の処置または予防レジメンを参考にすることで、容易に確立できる。投与する治療活性化合物の量、および本発明の化合物および／または組成物を用いた疾患状態を処置するための投薬レジメンは、被験体の年齢、体重、性別、および医学的状態、疾患の重症度、投与経路および頻度、ならびに用いる具体的化合物、不要な増殖細胞の場所、ならびに処置対象となる個体の薬物動態特性に依存し、かくして広範囲に変化することがある。投薬量は、化合物を全身ではなく局所投与する場合、および処置ではなく防止を目的とする場合は一般的に低くなる。このような処置薬は、必要なだけ、且つ処置を行う医師が必要と判断した期間投与できる。当業者は、投与される阻害剤の投薬レジメンまたは治療有効量は、各個体に合わせて最適化する必要があることを認識するだろう。薬学的組成物は、約０.１〜２０００ｍｇの範囲、好ましくは約０.５〜５００ｍｇの範囲、最も好ましくは約１〜２００ｍｇの範囲で活性成分を含むことができる。約０.０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０.１〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重の日用量が適当であろう。日用量は、１日、１〜４回にして投与できる。
【００３８】
（実験手順）
細胞培養  −  ＬＮＣａＰアンドロゲン−依存性（ｐ５３+/+）およびＰＣ−３アンドロゲン−非応答性（ｐ５３−/−）前立腺癌細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から得た。安定したＢｃｌ−ｘＬ−過剰発現ＬＮＣａＰクローンＢ３(ＬＮＣａＰ/Ｂ３)の調製については以前に報告している（１８）。ＰＣ−３、ＬＮＣａＰ、およびＬＮＣａＰ/Ｂ３細胞は、５％二酸化炭素を含む加湿インキュベーター内、３７℃で１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を加えたＲＰＭＩ１６４０の中で維持した。正常ヒト前立腺上皮（ＰｒＥＣ）細胞は、Ｃａｍｂｒｅｘ  Ｂｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，  Ｉｎｃ.（Ｅａｓｔ  Ｔｕｔｈｅｒｆｏｒｄ、ＮＪ）から購入した。細胞は、５％二酸化炭素を含む加湿インキュベーター内、３７℃で、成長補助因子を加えたＰｒｏｓｔａｔｅ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｄｉｕｍの中で維持した。継代培養について推奨される接種密度は、２，５００細胞/ｃｍ２であった。継代培養から集密状態に達するまでに６〜９日を要した。
【００３９】
試薬  −  α−トコフェロール、α−トコフェリルスクシナート、２，２，５，７，８−ペンタメチル−６−クロマノール、および各種類似体の合成に必要な他の化学薬品は、特に記載がない限りはＡｌｄｒｉｃｈ  Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から購入した。ＴＳ−１（コハク酸モノ−[２−(４，８−ジメチル−ノニル)−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−イル]エステル）、ＴＳ−２（コハク酸モノ−[２，５，７，８−テトラメチル−２−(４−メチル−ペンチル)−クロマン−６−イル]エステル）、ＴＳ−３（コハク酸モノ−[２２，５，７，８−ペンタメチル−クロマン−６−イル]エステル）、ＴＳ−４（２−(４，８−ジメチル−ノニル)−２，５，７，８−テトラメチル−クロマン−６−オール）、およびＴＳ−５（３−[２，５，７，８−テトラメチル−２−(４，８−ジメチル−ノニル)−クロマン−６−イルオキシ]プロピオン酸）の合成は、他所に公開する。これら合成誘導体の同一性、純度（≧９９％）は、プロトン核磁気共鳴、高解像度質量測定法、および元素分析により証明した。細胞生存アッセイに用いるＭＴＴ[３−(４，５−ジメチルチアゾール−２−イル)−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロミド]は、ＴＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａ，Ｉｎｃ．（Ｐｏｒｔｌａｎｄ、ＯＲ）から購入した。Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ＥＬＩＳＡキットは、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｍａｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から購入した。Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｄ、ＰＡＲＰ、および開裂カスパーゼ９に対するウサギ抗体は、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）より購入した。Ｂａｄ、チトクロームｃに対するウサギ抗体、およびマウス抗−Ｂｃｌ−２は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＣＡ）から得た。マウスモノクローナル抗アクチン抗体は、ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｃｏｓｔａ  Ｍｅｓａ，ＣＡ）から得た。
【００４０】
細胞生存分析  −  個々の試験作用物質の細胞生存率に及ぼす作用は、ＭＴＴアッセイを用いて、６〜１２重試験で評価した。ＰＣ３、ＬＮＣａＰ、およびＢ３−ＬＮＣａＰ細胞を、ポリ−ｐ−リジンをコーティングした９６ウエルの平底プレート中の１０％ＦＢＳ培地を加えたＲＰＭＩ  １６４０培地に接種し、２４時間インキュベーションした。ＰｒＥＣ細胞は、９６ウエルの、平底プレートの増殖補助物を加えた前立腺上皮細胞培地（Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｄｉｕｍ）に推奨密度で３日間接種した。全ての細胞を、ＰＣ３、ＬＮＣａＰ、およびＬＮＣａＰ/Ｂ３の場合は最終濃度０.１％の無血清ＲＰＭＩ  １６４０培地中、ＰｒＥＣ細胞の場合は最終濃度０.１％の増殖補助剤入り前立腺上皮細胞培地（Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｄｉｕｍ）中で、エタノール（α−トコフェロール、α−トコフェリルスクシナート、およびＴＳ−３の場合）またはＤＭＳＯ（他の使用した全ての試験作用物質）に溶解した様々な濃度の試験作用物質に暴露した。コントロールには、薬物処理細胞と等濃度ＤＭＳＯまたはエタノールビークルを与えた。培地を取り除き、０.５ｍＭ  ＭＴＴの１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地２００μＬと交換し、細胞を３７℃のＣＯ２インキュベーター内で２時間インキュベーションした。ウエルから上清を取り除き、還元ＭＴＴ色素を２００μＬ/ウエルのＤＭＳＯに溶解した。５７０ｎｍの吸収を、プレートリーダーで測定した。
【００４１】
ＥＬＩＳＡによるアポトーシス検出  −  アポトーシスの誘導は、Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ＥＬＩＳＡキット（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を製造元指示書に従い用いて評価した。この試験は、アポトーシス誘導後にヌクレオゾームおよびオリゴヌクレオゾームの形をした細胞質ヒストン関連ＤＮＡ断片を定量化することに基づく。簡単に説明すると、５×１０６細胞をＴ−２５フラスコの中、１０％ＦＢＳ含有培地で２４時間培養した後、無血清培地の中で、様々な濃度の試験作用物質で２４時間処理した。浮遊細胞および接着細胞の両方を集めた；ＥＬＩＳＡでは、５×１０５細胞に相当する細胞溶解物を使用した。
【００４２】
細胞質内へのチトクロームｃ放出の右ウェスタンブロット分析  −  細胞質特異的なミトコンドリアを含まない溶解物は、確立された手順に従って調製した（１８）。簡単に説明すると、２４時間別個に処理した後、Ｔ−７５フラスコの中のインキュベーション媒体と付着細胞両方を集め、６００ｘｇで５分間遠心分離にかけた。沈殿分画を回収し、氷上に置き、冷やした１００μｌの低張溶解溶液[２２０ｍＭマンニトール、６８ｍＭショ糖、５０ｍＭ  ＫＣｌ、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、２ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭジチオスレイトール、ならびに１００μＭの４−(２−アミノエチル)ベンゼンスルホニルフロリド、８０ｎＭアプロチニン、５μＭベスタチン、１.５μＭのＥ−６４プロテアーゼ阻害剤、２μＭのロイペプチン、および１μＭペプスタチンＡを含むプロテアーゼ阻害剤混合液を含む５０ｍＭ  ＰＩＰＥＳ−ＫＯＨ（ｐＨ７.４）]と一緒に破砕した。氷上で４５分間インキュベーションした後、混合液を６００ｘｇ、１０分間の遠心分離にかけた。上清を微量遠心チューブに集め、１４，０００ｒｐｍ、３０分間の遠心分離にかけた。各上清からの等量のタンパク質（５０μｇ）を１５％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルで分離した。バンドをニトロセルロース膜に移し、以下記載の抗チトクロームｃ抗体を用いた免疫ブロッティングにより解析した。
【００４３】
免疫ブロッティング  −  細胞を１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ−１６４０培地に２４時間接種し、前記の様々な作用物質で処理した。個別に２４時間処理した後、Ｔ−２５またはＴ−７５内の付着細胞を剥がし取り、培地と一つにして、２２００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離にかけた。上清を回収し、氷上に置き、１％のプロテアーゼ阻害剤カクテル（ｓｅｔ  ＩＩＩ；ＥＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｉｎｃ.、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を加えた、２０〜５０μＬの冷溶解バッファー（Ｍ−ＰＥＲ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ；Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を用いて粉砕した。氷上で３０分間インキュベーションした後、混合液を１６，１００ｘｇ、３分間の遠心分離にかけた。懸濁液２μＬを取り、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイキット（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）を用いたタンパク質分析にかけた；残りの溶液には同量の２ｘＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動サンプルローディングバッファー（１００ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ６.８、４％ＳＤＳ、５％β−メルカプトエタノール、２０％グリセロール、および０.１％ブロモフェノールブルー）を加えた。混合液を１０分間沸騰させた。等量のタンパク質を８〜１２％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルにかけた。電気泳動後、タンパク質のバンドは、半乾燥転移セルの中でニトロセルロース膜に移した。トランスブロッティングした膜は、５％の脱脂乳を含むＴｒｉｓ−緩衝化食塩水／０.１％Ｔｗｅｅｎ２０（ＴＢＳＴ）で９０分間ブロッキングし、次に膜を適切な一次抗体のＴＢＳＴ／５％脱脂乳液と一緒に、４℃で一晩インキュベーションした。ＴＢＳＴで３回、合計４５分間洗浄した後、トランスブロッティング膜をヤギ抗ウサギまたは抗マウスＩＧＧ−西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗体（希釈率１：１０００）と１時間、室温でインキュベーションしてから、ＴＢＳＴで４回、合計１時間洗浄した。イムノブロットは、増強化学発光により視覚化した。
【００４４】
競合蛍光変光アッセイ  −  試験作用物質のＢｃｌ−ＸＬへの結合親和性は、作用物質のＢｃｌ−２またはＢｃｌ−ＸＬのどちらかに対するＢａｋ  ＢＨ３−ドメインペプチドの結合を置き換える能力を決定する競合蛍光偏光アッセイにより分析した。ＮＨ２末端をフルオロセインで標識したＢａｋ−ＢＨ３ペプチドであるＦｌｕ−ＢａｋＢＨ３は、Ｇｅｎｅｍｅｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ）から購入した。ＣＯＯＨ末端が切り取られたＨｉｓタグＢｃｌ−ＸＬは、ＥＭＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から購入し、可溶性グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ融合Ｂｃｌ−２は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから得た。結合アッセイは、確立された手順に従って（１９）、化学発光分光光度計を用いて、室温で、デュアル−パスレンスクオーツセルの中でλｅｍ４８０ｎｍおよびλｅｘ５３０ｎｍで測定を行い、実施した。
【００４５】
ＩＣ５０値の決定  −  細胞生存アッセイおよび蛍光偏光アッセイからのデータを、ＣａｌｃｕＳｙｎソフトウエア（Ｂｉｏｓｏｆｔ、Ｆｅｒｇｕｓｏｎ、ＭＯ）を用いて分析してＩＣ５０値を決定したが、この時の計算は培地効果方程式［即ちｌｏｇ(ｆａ／ｆｕ)＝ｍｌｏｇ(Ｄ)−ｍｌｏｇ(Ｄｍ)で、式中のｆａおよびｆｕは影響を受けた分画と影響を受けない分画をそれぞれ意味する；ｍは用量−効果曲線のＳ字性を意味するＨｉｌｌタイプ係数を表し；ＤおよびＤｍは、それぞれ使用した用量およびＩＣ５０を表す］に基づいている。
【００４６】
共免疫沈降  −  ４０μＭのα−トコフェリルスクシナートまたは１０μＭのＴＳ−１で２４時間処理したＰＣ３細胞をフラスコから剥がし取り、遠心分離チューブに移し、２２００ｒｐｍで１０分間遠心分離して細胞を沈殿させた。沈殿物を氷冷した放射免疫沈降アッセイバッファー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.４、１％Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ−４０、０.２５％デオキシコール酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、および１％プロテアーゼ阻害剤カクテル）０.５ｍＬに再浮遊させ、オービタルシェーカーを使って４℃で１５分間穏やかに混合し、続いて１４，０００ｘｇで１５分間遠心分離し、細胞溶解物を得た。これら細胞溶解物をプロテインＡ−アガロースビーズのスラリー１００μＬで処理した後、短時間遠心分離にかけて、非特異的に結合しているタンパク質を取り除いた。これら溶解物から、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイで測定して得た等量のタンパク質を抗−Ｂｃｌ−２またはＢｃｌ−ＸＬ抗体とオービタルシェーカーにかけながら、２３℃で２時間混合し、続いてプロテインＡ−アガロースビーズのスラリー１００μＬと４℃で１２時間混合した。免疫複合体を、短時間遠心分離にかけて集め、氷冷した放射免疫沈降アッセイバッファー８００μＬで４回洗浄し、２ｘＳＤＳサンプルローディングバッファー５０μＬに懸濁した。懸濁液を１０分間沸騰させ、短時間遠心分離にかけてビーズを取り除いた。Ｂａｋに対する抗体を用いたウエスタンブロット分析は、上記した通りである。
【００４７】
分子モデル化  −  Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋから得たヒトＢｃｌ−ｘＬ結晶構造（登録コード１Ｒ２Ｄ）（２０）から水分子を削除し、全ての水素を付加し、Ｇａｓｔｅｉｇｅｒ電荷（２１）を割り当て、次に非極性水素を加えた。Ｂａｋペプチド結合部位に中心を置く、０.３７５Å間隔の３−Ｄ親和性グリッドを、以下の原子タイプのそれぞれについて、Ａｕｔｏｇｒｉｄ４を用いて計算した：ａ）タンパク質：Ａ（芳香族Ｃ）、Ｃ、ＨＤ、Ｎ、ＮＡ、ＯＡ、ＳＡ；ｂ)リガンド：Ｃ、Ａ、Ｎ、ＮＡ、ＯＡ、Ｓ、ＳＡ、ＨＤ、Ｂｒ、ｅ（静電）およびＤ（脱溶媒）。ドッキングシミュレーションにはＡｕｔｏＤｏｃｋバージョン４.０.０を用いた。出願人はリガンドの立体構造探索にはＬａｍａｒｃｋｉａｎ遺伝的アルゴリズム（ＬＧＡ）を選択したが、それはシミュレーションされた親和性または単純な遺伝的アルゴリズムに対し性能が高いからである。リガンドの並進、回転、および内回転は、その状態変数として規定され、各遺伝子はある状態変数を示す。ＬＧＡは遺伝的アルゴリズムに部分的な最小化を加え、遺伝子集団を変更することができる。各化合物のドッキングパラメータは次の通りである：ドッキング施行回数１００回、集団サイズ  １５０、任意の開始位置および立体構造、２.０Åの並進ステップ範囲、回転ステップ範囲  ５０°、エリティズム（ｅｌｉｔｉｓｍ）  １、変位率  ０.０２、交叉率  ０.８、局所探索速度  ０.０６、およびエネルギー測定回数  １億回。最終的なドッキングした立体構造は、許容誤差２.０Åの二乗平均平方根偏差（ＲＭＳＤ）を用いてクラスター化した。
【００４８】
ここで図面を参照すると、図１は本明細書に記載した化合物を調製するための合成の概略を示す。図４は、α−トコフェリルスクシナート誘導アポトーシスに対するＰＣ−３、ＬＮＣａＰ、およびＢｃｌ−ｘＬを過剰発現しているＬＮＣａＰ（ＬＮＣａＰ／Ｂ３）細胞の感受性差を示す。(Ａ) 無血清ＲＰＭＩ  １６４０培地中に２４時間暴露した後の、ＰＣ−３、ＬＮＣａＰ、およびＬＮＣａＰ/Ｂ３細胞の生存率に対するα−トコフェリルスクシナートの用量依存的作用。点は平均値；バーはＳＤを表す（ｎ=６）。(Ｂ)α−トコフェリルスクシナートー処理ＰＣ−３細胞に於けるアポトーシス死の証拠。上パネル、指示濃度のα−トコフェリルスクシナートで２４時間処理されたＰＣ−３細胞内のヌクレオソームＤＮＡの形成。ＤＮＡの断片化は、細胞死検出ＥＬＩＳＡキットによって定量的に測定した。カラム、平均値：バー、ＳＤ（ｎ=３）。下パネル、各種用量のα−トコフェリルスクシナートによってＰＣ−３細胞に誘導された、チトクロームｃの細胞質内放出およびＰＡＲＰ切断。ＰＣ−３細胞は、無血清ＲＰＭＩ１６４０培地中で、指示用量により２４時間処理された。ミトコンドリアを含まない細胞溶解物から得た等量のタンパク質を電気泳動にかけ、各抗体を用いたウエスタンブロットにより探索した。
【００４９】
図５は、α−トコフェリルスクシナートが、ＢＨ３ドメインが仲介するヘテロダイマー形成を阻害することによって、Ｂｃｌ−ｘＬ／Ｂｃｌ−２の機能を遮断することを示す。(Ａ)α−トコフェリルスクシナートは、ＰＣ−３細胞では、Ｂａｄを除くＢｃｌ−２ファミリーメンバーの発現レベルについて明らかな作用を有していない。ＰＣ−３細胞を、無血清ＲＰＭＩ１６４０培地の中で様々な用量のα−トコフェリルスクシナートに２４時間暴露した。細胞溶解物から得た、等しい量のタンパク質を電気泳動にかけ、各抗体を用いたウエスタンブロットで探索した。(Ｂ)α−トコフェリルスクシナートによる、Ｂａｋ  ＢＨ３ペプチドとＢｃｌ−ｘＬおよびＢｃｌ−２のＢＨ３ドメインが仲介するタンパク質相互作用の用量依存的な阻害。曲線は、実験手順に記載した濃度のα−トコフェリルスクシナートによる、Ｂｃｌ−ｘＬまたはＢｃｌ−２からのＦｌｕ−Ｂａｋ  ＢＨ３ペプチドの置換を表す。(Ｃ)α−トコフェリルスクシナートは、ＢａｋによるＢｃｌ−ｘＬおよびＢｃｌ−２のヘテロダイマー形成を阻害することによって、カスパーゼ依存的なアポトーシス死を始動させる。上パネル、ＰＣ−３細胞におけるＢｃｌ−ｘＬ／Ｂａｋ（左）およびＢｃｌ−２／Ｂａｋ（右）相互作用の動態に対するα−トコフェリルスクシナートの作用。ＰＣ−３細胞を４０μＭのα−トコフェリルスクシナートまたはＤＭＳＯビークルに１２時間暴露し、細胞溶解物を抗−Ｂｃｌ−ｘＬまたは抗−Ｂｃｌ−２抗体を用いて免疫沈降させた。免疫沈降物を、抗−Ｂａｋ抗体を用いたウエスタンブロット（ＷＢ）分析により探索した。下パネル、ＰＣ−３細胞に於けるカスパーゼ−９活性化に対するα−トコフェリルスクシナートの用量依存的作用。ＰＣ−３細胞を指示濃度α−トコフェリルスクシナートで２４時間処理した。カスパーゼ−９抗体は、大型サブユニット（３９および３７ｋＤａ）を認識する。
【００５０】
図６は、α−トコフェリルスクシナート（上パネル）およびＢｃｌ−ｘＬのＢａｋ  ＢＨ３ペプチド−結合部位へのＴＳ−１のドッキングモデルを示す。図７は、α−トコフェリルスクシナートおよびＴＳ−１〜ＴＳ−５の構造、およびＢｃｌ−ｘＬへのＢａｋ  ＢＨ３ペプチド結合を阻害する効力、ならびにＰＣ−３およびＬＮＣａＰ細胞の生存能力を抑制する効力を示す。α−トコフェリルスクシナートおよびＴＳ−１〜ＴＳ−３の一般構造、ならびにＴＳ−４およびＴＳ−５の構造を上部に示す。Ｎは、脂肪族側鎖中のイソプラニル単位の数を表す。報告したＩＣ５０値は、無血清ＲＰＭＩ  １６４０培地中で２４時間暴露した後にＢａｋ  ＢＨ３ペプチド結合が５０％阻害されるか、またはＰＣ−３もしくはＬＮＣａＰ細胞死がＤＭＳＯコントロールと比較したときに５０％となる濃度である。
【００５１】
図８は、ＴＳ−１の抗癌作用の機械論的な検証を示す。(Ａ)薬物処理したＰＣ−３細胞でのアポトーシス死を示す証拠。左、指示濃度で薬物処理したＰＣ−３細胞に於ける細胞質ヌクレオソームＤＮＡの形成。ＤＮＡの断片化は、細胞死検出ＥＬＩＳＡキットによって定量的に測定した。カラム、平均値；バー、ＳＤ（ｎ=３）。右、様々な用量のＴＳ−１がＰＣ−３細胞に誘導したチトクロームｃの細胞質内放出およびＰＡＲＰ切断。ＰＣ−３細胞は、無血清ＲＰＭＩ  １６４０培地中で、指示用量により２４時間処理した。ミトコンドリアを含まない細胞溶解物から得た等量のタンパク質を電気泳動にかけ、各抗体を用いたウエスタンブロットにより探索した。(Ｂ)ＰＣ−３細胞に於けるＢｃｌ−ｘＬ/Ｂａｋ（左）およびＢｃｌ−２/Ｂａｋ（右）相互作用の動態におよぼすＴＳ−１の作用。ＰＣ−３細胞は、２０μＭのＴＳ−１またはＤＭＳＯビ−クルに１２時間暴露し、細胞融解物を抗−Ｂｃｌ−ｘＬまたは抗−Ｂｃｌ−２抗体で免疫沈降（ＩＰ）させた。免疫沈降物を、ウエスタンブロット分析（ＷＢ）により、抗−Ｂａｋ抗体を用いて探索した。（Ｃ）ＰｒＥＣの生存率に及ぼすα−トコフェリルスクシナート、ＴＳ−１、およびＴＳ−５の用量依存的な作用。細胞は、増殖補助物を加えた前立腺上皮細胞基礎培地（Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ）中で、指示濃度の試験作用物質に２４時間曝された。コントロールのＰＣ−３細胞にはＤＭＳＯまたはエタノールビークルを与えた、細胞生存率は、ＭＴＴアッセイにより分析した。
【００５２】
α−トコフェリルスクシナートに対するＬＮＣａＰおよびＰＣ−３前立腺癌細胞株の感受性の差  α−トコフェリルスクシナートの作用形式を理解する出願人の活動の一環として、出願人は二種類のヒト前立腺癌細胞株、ＬＮＣａＰおよびＰＣ−３に対するその抗増殖作用を調べた。これら二種類の細胞のうちＬＮＣａＰ細胞は、ＰＣ−３細胞よりも増殖阻害に対しより感受性であり、ＩＣ５０値はそれぞれ１５μＭおよび４０μＭである（図４Ａ）。この細胞生存率の低下は、少なくとも一部は、ＤＮＡ断片化、チトクロームｃ放出、およびＰＡＲＰ切断によって証明されるように、ミトコンドリア依存的なアポトーシス誘導によるものである（図４Ｂ）。ＬＮＣａＰおよびＰＣ−３細胞は共にＰＴＥＮ機能の消失によって、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／Ａｋｔシグナル伝達のアップレギュレーションを示すことから、この感受性の差は、アポトーシスシグナルへの反応に於けるミトコンドリアの完全性維持に関するそれぞれの能力の差によるものと思われる。このデータおよび他の研究室からのデータは、ＰＣ−３細胞が多くの治療薬のアポトーシス誘導作用に対し、Ｂｃｌ−ｘＬの過剰発現によって抵抗性であることを証明している。
【００５３】
異所性のＢｃｌ−ｘＬ発現はα−トコフェリルスクシナート誘導アポトーシスからＬＮＣａＰ細胞を保護する  Ｂｃｌ−ｘＬの高発現レベルがＰＣ−３細胞の抵抗性の基礎を成している可能性を検証するために、出願人は安定形質導入ＬＮＣａＰクローン（ＬＮＣａＰ/Ｂ３）に強制的に発現させたＢｃｌ−ｘＬがα−トコフェリルスクシナート誘導細胞死に及ぼす影響について評価した。Ｂ３細胞での異所性Ｂｃｌ−ｘＬの発現レベルは、ＰＣ−３細胞の内在性の発現レベルの約５倍であったが（図４Ａ、挿入図）、Ｂｃｌ−２の発現レベルはＬＮＣａＰ/Ｂ３細胞では若干低かった。ＬＮＣａＰ/Ｂ３細胞での高レベルの異所性Ｂｃｌ−ｘＬの発現は、α−トコフェリルスクシナート誘導細胞死に対するＬＮＣａＰ細胞の抵抗性を、ＰＣ−３細胞の抵抗性より高くした（図４Ａ）。
【００５４】
α−トコフェリルスクシナートは、Ｂｃｌ−ｘＬ機能の阻害剤である  上記の発見は、α−トコフェリルスクシナートが仲介するアポトーシスが、Ｂｃｌ−ｘＬおよび／または他Ｂｃｌ−２メンバーの機能の変更に関係することを示唆している。それ故に出願人は、転写および翻訳の両レベルについて推定されるこの関連性について調べた。最初に出願人はＢｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−２、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂａｄ、およびＢｉｄを含む各種Ｂｃｌ−２ファミリーメンバーのＰＣ−３細胞における発現に及ぼすα−トコフェリルスクシナートの用量依存的作用を、ウエスタンブロッティングを用いて評価した。図５Ａは、Ｂａｄの発現低下を除き、α−トコフェリルスクシナートへの暴露はＢｃｌ−２メンバーの発現レベルに大きな変化を起さなかった。第二に出願人は、競合蛍光偏光分析を用いて、フルオロセイン標識Ｂａｋ  ＢＨ３ドメインペプチドのＢｃｌ−ｘＬおよびＢｃｌ−２への結合に及ぼすα−トコフェリルスクシナートの影響を調べた。図５Ｂは、Ｂｃｌ−ｘＬおよびＢｃｌ−２とのＢＨ３ドメイン仲介相互作用を破壊するα−トコフェリルスクシナートの能力を示したものであり、能力は等しく、ＩＣ５０値は２６±２μＭであった。
【００５５】
α−トコフェリルスクシナートの作用様式を確認するために、出願人はＰＣ−３細胞内でのＢｃｌ−ｘＬ／ＢａｋおよびＢｃｌ−２／Ｂａｋ相互作用の動態に及ぼす細胞内の作用について評価した。α−トコフェリルスクシナート、またはＤＭＳＯビークルで１２時間処理したＰＣ−３細胞の溶解物をＢｃｌ−ｘＬまたはＢｃｌ−２に対する抗体で免疫沈降させた。ウエスタンブロッティングを用いた免疫沈降物の抗−Ｂａｋ抗体による探索から、Ｂｃｌ−ｘＬおよびＢｃｌ−２に結合するＢａｋのレベルは、ＤＭＳＯコントロールに比べて有意に低下することが示された（図５Ｃ、上パネル）。この細胞内結合性の低下は、上記のｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合データからも証明された。Ｂｃｌ−ｘＬおよびＢＣＬ−２は、ＢＨ３ドメインが仲介するヘテロダイマー形成を通してＢａｋおよび他の前アポトーシス性のＢｃｌ−２メンバーの作用を無効にしたことから、出願人は薬物処理した細胞では、このＢａｋ結合の低下には用量依存的な様式のカスパーゼ−９の活性化が伴うことも示した（図５Ｃ、下パネル）。
【００５６】
まとめると、これらのデータは、前立腺癌細胞のアポトーシスに対するα−トコフェリルスクシナートの作用が、少なくとも一部は、ＢＨ３ドメイン介在ヘテロダイマー形成を妨害することによるＢｃｌ−ｘＬ機能の阻害を通して伝えられることを証明している。別の見方をすれば、この機械論的な発見は、この作用物質を構造的に最適化して、強力なＢｃｌ−ｘＬ/Ｂｃｌ−２結合阻害剤を開発するための分子的な基礎を提供している。
【００５７】
Ｂｃｌ−ｘＬのＢａｋペプチド結合部位内へのα−トコフェリルスクシナートの分子ドッキング  α−トコフェリルスクシナートは、Ｂｃｌ−ｘＬのＢＨ１、ＢＨ２、およびＢＨ３領域が結合する疎水性クレフト内に位置するＢａｋペプチド結合部以内にドッキングした。ドッキング分析は、α−トコフェリルスクシナートがこの疎水性ポケットと相互作用する固有のヘアピン型の立体構造を採ることを示している（図６Ａ）。図示したように、ヘミスクシナートのカルボキシル末端は、Ａｒｇ１００のグアニジノ側鎖と静電的相互作用および水素結合を形成した。クロマン芳香族環は、π−π相互作用を通してＴｙｒ１０１およびＰｈｅ１０５とπ−π相互作用している間に、フィチル鎖は巻き戻されて、Ｌｅｕ１０８、Ｌｅｕ１３０、およびＡｌａ１４２の疎水性側鎖にアクセスできるようになる。しかしながら、脂肪族長鎖末端にあるイソプラニル単位は、大型の螺旋双極子の開始末端に位置するＡｓｎ１３６、Ｔｒｐ１３７のアミド主鎖、Ｇｌｙ１３８、およびＡｒｇ１３０、ならびに溶媒から成る極性領域内にオーバーハングしていた。
【００５８】
切断された側鎖を持つα−トコフェリルスクシナート誘導体は、より高いＢｃｌ−ｘＬ阻害能を示す  このコンピュータモデルは、Ｂｃｌ−ｘＬへのα−トコフェリルスクシナートの結合様式を明らかにし、構造最適化の分子的な基礎をもたらした。出願人は、ヘミスクシナートおよび側鎖の基部側にある二つのイソプラニル単位が、リガンドの固着およびタンパク質−リガンド複合体の安定化にそれぞれ重要な役割を果たすと、合理的に解釈した。しかしながら、遠位側のイソプラニル単位が極性環境に暴露すると、α−トコフェリルスクシナートの結合親和性は低下し得る。このことは、フィチル側鎖からイソプラニル単位を一つ取り除いた類似体であるＴＳ−１をＢｃｌ−ｘＬ結合ドメイン内にドッキングさせてみることによって裏付けられた（図６Ｂ）。この切断方類似体の結合様式は、α−トコフェリルスクシナートの結合様式に似ていたが、極性環境との望ましくない相互作用はなかった。理論値ΔＧｂｉｎｄｉｎｇは、α−トコフェリルスクシナートおよびＴＳ−１それぞれについて−７.５ｋｃａｌ／ｍｏｌおよび−８.１ｋｃａｌ／ｍｏｌと計算されたが、この差は、結合親和性にすると３倍の差になる。
【００５９】
上記モデル化データを評価するために、出願人はイソプラニル単位をそのフィチル側鎖から少しずつ除去してＴＳ−１、ＴＳ−２、およびＴＳ−３を作ることによって、α−トコフェリルスクシナートの構造に変更を加えた（図７Ａ）。これに加えて、それぞれヘミスクシナートを除去したもの、およびエーテル結合プロピオナートと置換したＴＳ−１類似体であるＴＳ−４およびＴＳ−５も合成し、末端のカルボキシル機能がリガンドの固着に果たす役割について検証した。
【００６０】
機能アッセイは、Ｂａｋペプチド−Ｂｃｌ−ｘＬ結合の阻害に関するこれら誘導体、またはα−トコフェリルスクシナートの効力と、細胞生存能力の抑制に関する効力とが平行関係にあることを示している（図７Ｂ）。該効力はＴＳ−１、ＴＳ−５＞ＴＳ−２＞α−トコフェリルスクシナートの順であり、ＴＳ−３およびＴＳ−４は１００μＭでも評価できる活性を認めなかった。Ｂｃｌ−ｘＬへのＢａｋペプチド結合の遮断に関しては、ＴＳ−１とα−トコフェリルスクシナートの間でＩＣ５０に３倍の差があったが、これは理論計算の差と同じである。
【００６１】
α−トコフェリルスクシナートとその切断型類似体間の阻害活性の差は、Ｂｃｌ−ｘＬ結合に疎水性側差の長さが微妙に影響することを裏付けている。しかしながら、ＴＳ−３の側差を完全に取り除くと結合親和性は無効になることは、タンパク質−リガンド複合体の安定化に、この疎水性の相互作用が役割を持つことを裏付けている。これに加えて、スクシナートをエーテル結合プロピオナートに交換してもＢｃｌ−ｘＬ結合および抗増殖活性に影響はなかった。この発見は、ヘミスクシナートエステル結合のカルボニル基が、リガンド結合には関与していないことを示唆しており、これはモデル化された認識様式にも一致する（図６）。
【００６２】
証拠は、ＴＳ−１がα−トコフェリルスクシナートと同じメカニズムを通して、ＰＣ−３細胞において、抗増殖作用を媒介することを示している。ＴＳ−１誘導アポトーシス死は、ＤＮＡ断片化、チトクロームｃ放出、およびＰＡＲＰ切断から証明された（図８Ａ）。さらには、１０μＭのＴＧ−１は、ＰＣ−３細胞に於けるＢｃｌ−ｘＬおよびＢｃｌ−２へのＢａｋの細胞内結合を完全に無くした（図８Ｂ）。ＬＮＣａＰおよびＰＣ−３細胞とは対称的に、正常の前立腺上皮細胞（ＰｒＥＣ）は、α−トコフェリルスクシナートについて観察されたのと同様に、ＴＳ−１およびＴＳ−５の抗増殖作用に対し抵抗性であった（図８Ｃ）。この感受性の差は、ＴＳ−１およびＴＳ−３のアポトーシスに及ぼす作用が腫瘍細胞特異的であることを示している。
【００６３】
本明細書に記載した実施例は、例示のみを目的としており、特許請求の範囲を限定するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】図１は、本明細書が記載する化合物を調製するための第一の合成の概略を示す図である。
【図２】図２は、本明細書が記載する化合物を調製するための第二の合成の概略を示す図である。
【図３】図３は、本明細書が記載する化合物を調製するための第三の合成の概略を示す図である。
【図４】図４は、α−トコフェリルスクシナートー誘導アポトーシスに対するＰＣ−３、ＬＮＣａＰ、およびＢｃｌ−ｘＬを過剰発現しているＬＮＣａＰ（ＬＮＣａＰ/Ｂ３）細胞の異なる感受性を示す図である。
【図５】図５は、α−トコフェリルスクシナートが、ＢＨ３ドメイン介在のヘテロダイマー形成を阻害することによって、Ｂｃｌ−ｘＬ/Ｂｃｌ−２の機能を遮断することを示す。
【図６】図６は、Ｂｃｌ−ｘＬのＢａｋ  ＢＨ３ペプチド−結合部位内へのα−トコフェリルスクシナート（上図）およびＴＳ−１のドッキングのモデルを示す。
【図７】図７は、α−トコフェリルスクシナートおよびＴＳ−１〜ＴＳ−５の構造、ならびにＢａｋ  ＢＨ３ペプチドのＢｃｌ−ｘＬへの結合を阻害する効力、ならびにＰＣ−３およびＬＮＣａＰ細胞の生存率を抑制する能力を示す。
【図８】図８は、ＴＳ−１の抗腫瘍作用の機械作用の有効性の証明。（Ａ)薬物処理したＰＣ−３細胞のアポトーシス死の証拠。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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