(57)【要約】本出願は、ガン患者における生存の延長を記載しており、ここで該患者は、ペルツズマブのようなＨＥＲ二量体化インヒビターを用いて該患者を処置することによって、ＥＧＦまたはＴＧＦ−αのレベルの上昇が生じている。本発明は、ガン患者の生存を延長するための方法に関しており、この方法は、該患者に対してＨＥＲ二量体化インヒビターを、該患者の生存を延長する量で投与する工程を包含し、ここで、該患者は、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）またはトランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−α）のレベルの上昇を生じることが確認されており、かつこのガンは、卵巣癌、腹膜癌および卵管癌からなる群より選択される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガン患者の生存を延長するための方法であって、該患者に対してＨＥＲ二量体化インヒビターを、該患者の生存を延長する量で投与する工程を包含し、該患者は、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）またはトランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−α）のレベルの上昇を生じることが確認されており、かつ該ガンは、卵巣癌、腹膜癌および卵管癌からなる群より選択される、方法。
【請求項２】
前記患者が、ＥＧＦのレベルの上昇を生じることが確認されている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記患者が、ＥＧＦのレベルの上昇を該患者の血清中で有することが見出されている、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記患者が、ＴＧＦ−αのレベルの上昇を生じることが確認されている、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記患者が、ＴＧＦ−αのレベルの上昇を該患者の血清中で有することが見出されている、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ＨＥＲ二量体化インヒビターが、ＨＥＲ２二量体化インヒビターである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ＨＥＲ二量体化インヒビターが、ＨＥＲヘテロ二量体化を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ＨＥＲ二量体化インヒビターが、ＨＥＲ抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体が、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３からなる群より選択されるＨＥＲレセプターに結合する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体がＨＥＲ２に結合する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２細胞外ドメインのドメインＩＩに結合する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗体が、ＨＥＲ２細胞外ドメインのドメインＩとＩＩとＩＩＩとの間の接合部に結合する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＨＥＲ抗体が、それぞれ配列番号３および４において、軽鎖可変および重鎖可変のアミノ酸配列を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＨＥＲ二量体化インヒビターがペルツズマブである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＨＥＲ抗体が裸の抗体である、請求項８に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＨＥＲ抗体がインタクトな抗体である、請求項８に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＨＥＲ抗体が、抗原結合領域を含む抗体フラグメントである、請求項８に記載の方法。
【請求項１８】
前記ガンが、進行性、難治性または再発性の卵巣癌である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ガンが、白金耐性の卵巣癌である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ガンが、原発性の腹膜癌または卵管癌である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＨＥＲ二量体化インヒビターが、単独の抗癌剤として投与される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記患者に対して第二の治療剤を投与する工程を包含する、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記第二の治療剤が、化学療法剤、ＨＥＲ抗体、腫瘍関連抗原に対する抗体、抗ホルモン化合物、心保護薬、サイトカイン、ＥＧＦＲ標的薬物、血管新生阻害剤、チロシンキナーゼインヒビター、ＣＯＸインヒビター、非ステロイド性抗炎症薬、ファルネシル転移酵素インヒビター、癌胎児性タンパク質ＣＡ１２５に結合する抗体、ＨＥＲ２ワクチン、ＨＥＲ標的化治療、Ｒａｆもしくはｒａｓインヒビター、リポソームドキソルビシン、トポテカン、タキサン、二重（ｄｕａｌ）チロシンキナーゼインヒビター、ＴＬＫ２８６、ＥＭＤ−７２００、悪心を処置する医薬、皮膚発疹を予防もしくは処置する医薬または標準的なざ瘡治療、下痢を処置もしくは予防する医薬、解熱薬、および造血成長因子からなる群より選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記第二の治療剤が化学療法剤である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記化学療法剤が、代謝拮抗剤の化学療法剤である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記代謝拮抗剤の化学療法剤がゲムシタビンである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記第二の治療剤が、トラスツズマブ、エルロチニブまたはベバシズマブである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
無増悪生存（ＰＦＳ）が拡大される、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
全生存（ＯＳ）が拡大される、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
卵巣、腹膜、または卵管の癌を有する患者の生存を延長する方法であって、該患者に対してペルツズマブを、該患者の生存を延長する量で投与する工程を包含し、該患者は、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）またはトランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−α）のレベルの上昇を生じることが確認されている、方法。
【請求項３１】
患者が卵巣癌を有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記患者が進行性、難治性または再発性の卵巣癌を有する、請求項３０または請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記患者に対して化学療法剤を投与する工程をさらに包含する、請求項３０〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記化学療法剤が代謝拮抗剤の化学療法剤である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記代謝拮抗剤の化学療法剤がゲムシタビンである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
卵巣、腹膜または卵管の癌を有する患者の無増悪生存（ＰＦＳ）を拡大するための方法であって、該患者に対してペルツズマブを、該患者のＰＦＳを拡大する量で投与する工程を包含し、該患者の血清では、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）のレベルの上昇を有することが確認されている、方法。
【請求項３７】
卵巣、腹膜または卵管の癌を有する患者の無増悪生存（ＰＦＳ）を拡大するための方法であって、該患者に対してペルツズマブを、該患者のＰＦＳを拡大する量で投与する工程を包含し、該患者の血清では、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）およびトランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−α）のレベルの上昇を有することが確認されている、方法。
【請求項３８】
前記癌が卵巣癌である、請求項２６または請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記卵巣癌が、進行性、難治性または再発性の卵巣癌である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
ＨＥＲ二量体化インヒビターでの処置のための患者を選択する方法であって、該患者が、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）またはトランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−α）のレベルの上昇を生じることが確認される場合、ＨＥＲ二量体化インヒビターで該患者を処置する工程を包含する、方法。
【請求項４１】
患者の生存が、ＥＧＦまたはＴＧＦ−αのレベルの上昇を生じず、かつ同じ処置を受ける患者の生存に対して延長される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記生存が全生存（ＯＳ）である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記生存が無増悪生存（ＰＦＳ）である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＨＥＲ二量体化インヒビターがＨＥＲ２二量体化インヒビターである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４５】
前記ＨＥＲ二量体化インヒビターがＨＥＲヘテロ二量体化を阻害する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４６】
前記ＨＥＲ二量体化インヒビターがＨＥＲ抗体である、請求項３１に記載の方法。
【請求項４７】
前記抗体が、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３からなる群より選択されるＨＥＲレセプターに結合する、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記抗体がＨＥＲ２に結合する、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記ＨＥＲ２抗体が、ＨＥＲ２細胞外ドメインのドメインＩＩに結合する、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記抗体が、ＨＥＲ２細胞外ドメインのドメインＩとＩＩとＩＩＩとの間の接合部に結合する、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記ＨＥＲ抗体が、それぞれ配列番号３および４において、軽鎖可変および重鎖可変のアミノ酸配列を含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記ＨＥＲ二量体化インヒビターがペルツズマブである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記ＨＥＲ抗体が裸の抗体である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５４】
前記ＨＥＲ抗体がインタクトな抗体である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５５】
前記ＨＥＲ抗体が、抗原結合領域を含む抗体フラグメントである、請求項４６に記載の方法。
【請求項５６】
化学療法剤を用いて前記患者を処置する工程をさらに包含する、請求項４０〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
前記化学療法剤がゲムシタビンである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
ＨＥＲ二量体化インヒビターと、処置されるべき患者が上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）またはトランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−α）のレベルの上昇を生じる場合、ＨＥＲ二量体化インヒビターについての有益な用途を示す添付文書または表示とを備える、キット。
【請求項５９】
前記癌が、卵巣癌、腹膜癌または卵管癌である、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記有益な用途が、生存の延長である、請求項３８に記載の方法。
【請求項６１】
前記生存が、無増悪生存である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記ＨＥＲ二量体化インヒビターが抗体である、請求項５８〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
前記抗体がＨＥＲ２抗体である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記抗体がペルツズマブである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）またはトランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−α）のレベルの上昇を生じている患者を処置するためにＨＥＲ二量体化インヒビターをプロモーションさせる方法。
【請求項６６】
前記プロモーションが書面の形態である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記プロモーションが、添付文書の形態である、請求項６６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、ガン患者における生存の延長に関しており、ここでは患者は、ペルツズマブのようなＨＥＲ二量体化インヒビターを用いてこの患者を処置することによって、ＥＧＦまたはＴＧＦ−αのレベルの上昇が生じている。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
ＨＥＲレセプターおよびそれに対する抗体
レセプターチロシンキナーゼ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅｓ）のＨＥＲファミリーは、細胞の増殖、分化および生存の重要なメディエーターである。このレセプターのファミリーとしては、４つの別個のメンバーが挙げられ、これには、上皮成長因子レセプター（ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ１、またはＨＥＲ１）、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２またはｐ１８５ｎｅｕ）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）およびＨＥＲ４（ＥｒｂＢ４またはｔｙｒｏ２）が挙げられる。
【０００３】
ｅｒｂＢ１遺伝子によってコードされるＥＧＦＲは、ヒトの悪性腫瘍において原因として関係があるとされている。詳細には、ＥＧＦＲの発現の増大が、乳房、膀胱、肺、頭部、頸部および胃の癌、ならびにグリア芽細胞腫で観察されている。ＥＧＦＲ受容体発現の増大はしばしば、ＥＧＦＲリガンドの産生の増大に関連しており、同じ腫瘍細胞による、トランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−α）は、自己分泌刺激経路によるレセプター活性化を生じる。非特許文献１。ＥＧＦＲまたはそのリガンド、ＴＧＦ−αおよびＥＧＦに対するモノクローナル抗体は、このような悪性腫瘍の処置における治療剤として評価されている。例えば、非特許文献１；非特許文献２；ならびに非特許文献３を参照のこと。
【０００４】
ＨＥＲファミリーの第二のメンバー、ｐ１８５ｎｅｕはもともと、化学的に処理したラットの神経芽細胞腫由来のトランスフォーミング遺伝子の産物として特定された。ｎｅｕプロトオンコジーン（ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ）の活性化型は、このコードされたタンパク質の膜貫通領域における点変異（バリンからグルタミン酸）から生じる。ｎｅｕのヒトホモログの増幅は、乳癌および卵巣癌で観察されており、そして不良な予後と相関している（Ｓｌａｍｏｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３５：１７７〜１８２（１９８７）；Ｓｌａｍｏｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：７０７〜７１２（１９８９）；および米国特許第４，９６８，６０３号明細書）。今まで、ｎｅｕプロトオンコジーンにおける点変異と類似の点変異はヒト腫瘍では報告されていない。ＨＥＲ２の過剰発現（高頻度であるが、遺伝子増幅のせいで均一ではない）がまた、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎臓癌、結腸癌、甲状腺癌、膵臓癌および膀胱癌を含む他の癌腫では観察されている。とりわけ、Ｋｉｎｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：９７４（１９８５）；Ｙｏｋｏｔａら、Ｌａｎｃｅｔ：１：７６５〜７６７（１９８６）；Ｆｕｋｕｓｈｉｇｅら、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，６：９５５〜９５８（１９８６）；Ｇｕｅｒｉｎら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  Ｒｅｓ．，３：２１〜３１（１９８８）；Ｃｏｈｅｎら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，４：８１〜８８（１９８９）；Ｙｏｎｅｍｕｒａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５１：１０３４（１９９１）；Ｂｏｒｓｔら、Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．，３８：３６４（１９９０）；Ｗｅｉｎｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５０：４２１〜４２５（１９９０）；Ｋｅｒｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５０：５１８４（１９９０）；Ｐａｒｋら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，４９：６６０５（１９８９）；Ｚｈａｕら、Ｍｏｌ．Ｃａｒｃｉｎｏｇ．，３：２５４〜２５７（１９９０）；Ａａｓｌａｎｄら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ５７：３５８〜３６３（１９８８）；Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ  ５９：４６〜５２（１９９１）；およびＭｃＣａｎｎら、Ｃａｎｃｅｒ，６５：８８〜９２（１９９０）を参照のこと。ＨＥＲ２は、前立腺癌で過剰発現され得る（Ｇｕら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．９９：１８５〜９（１９９６）；Ｒｏｓｓら、Ｈｕｍ．Ｐａｔｈｏｌ．２８：８２７〜３３（１９９７）；Ｒｏｓｓら、Ｃａｎｃｅｒ  ７９：２１６２〜７０（１９９７）；およびＳａｄａｓｉｖａｎら、Ｊ．Ｕｒｏｌ．１５０：１２６〜３１（１９９３））。
【０００５】
ラットｐ１８５ｎｅｕおよびヒトＨＥＲ２タンパク質産物に対する抗体が記載されている。
【０００６】
Ｄｒｅｂｉｎおよび共同研究者は、ラットのｎｅｕ遺伝子産物であるｐ１８５ｎｅｕに対する抗体を産生させている。例えば、非特許文献４；非特許文献５；および特許文献１を参照のこと。非特許文献６は、ｐ１８５ｎｅｕの２つの別個の領域と反応性である抗体の混合物が、ヌードマウスに移植されたｎｅｕ形質転換ＮＩＨ−３Ｔ３細胞に対して相乗的な抗腫瘍効果を生ずるということを報告している。また、１９９８年１０月２０日発行の特許文献２も参照のこと。
【０００７】
Ｈｕｄｚｉａｋら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．９（３）：１１６５〜１１７２（１９８９）は、ヒト乳房腫瘍細胞株ＳＫ−ＢＲ−３を用いて特徴付けられたＨＥＲ２抗体のパネルの生成を記載する。抗体に対する曝露後のＳＫ−ＢＲ−３細胞の相対的な細胞増殖は、７２時間後の単層のクリスタルバイオレット染色によって確認された。このアッセイを用いたところ、最大阻害は、細胞増殖を５６％まで阻害した４Ｄ５と呼ばれる抗体で得られた。このパネルでの他の抗体は、このアッセイで細胞増殖をより低い程度まで低下させた。この抗体４Ｄ５はさらに、ＨＥＲ２を過剰発現する乳房腫瘍細胞株をＴＮＦ−αの細胞傷害性効果に対して感受性にすることが見出された。また、１９９７年１０月１４日発行の米国特許第５，６７７，１７１号明細書も参照のこと。Ｈｕｄｚｉａｋらに考察されるＨＥＲ２抗体はさらに、Ｆｅｎｄｌｙら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５０：１５５０〜１５５８（１９９０）；Ｋｏｔｔｓら、Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ２６（３）：５９Ａ（１９９０）；Ｓａｒｕｐら、Ｇｒｏｗｔｈ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  １：７２〜８２（１９９１）；Ｓｈｅｐａｒｄら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１（３）：１１７〜１２７（１９９１）；Ｋｕｍａｒら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１（２）：９７９〜９８６（１９９１）；Ｌｅｗｉｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３７：２５５〜２６３（１９９３）；Ｐｉｅｔｒａｓら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ９：１８２９〜１８３８（１９９４）；Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５４：５３０１〜５３０９（１９９４）；Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（２０）：１４６６１〜１４６６５（１９９４）；Ｓｃｏｔｔら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１４３００〜５（１９９１）；Ｄ’ｓｏｕｚａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１：７２０２〜７２０６（１９９４）；Ｌｅｗｉｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５６：１４５７〜１４６５（１９９６）；およびＳｃｈａｅｆｅｒら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １５：１３８５〜１３９４（１９９７）に特徴付けられる。
【０００８】
マウスＨＥＲ２抗体４Ｄ５の組み換えヒト化バージョン（ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８、ｒｈｕＭＡｂ  ＨＥＲ２、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）またはＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）；米国特許第５，８２１，３３７号明細書）は、広範な事前の抗癌療法を受けた、ＨＥＲ２を過剰発現する転移性乳癌を有する患者で臨床的に活性である（Ｂａｓｅｌｇａら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１４：７３７〜７４４（１９９６））。トラスツズマブは、腫瘍がＨＥＲ２タンパク質を過剰発現する転移性乳癌を有する患者の処置について１９９８年９月２５日に、米国食品医薬品局（Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）から市販の承認を受けた。
【０００９】
種々の特性を有する他のＨＥＲ２抗体は、Ｔａｇｌｉａｂｕｅら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４７：９３３〜９３７（１９９１）；ＭｃＫｅｎｚｉｅら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ４：５４３〜５４８（１９８９）；Ｍａｉｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１：５３６１〜５３６９（１９９１）；Ｂａｃｕｓら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ３：３５０〜３６２（１９９０）；Ｓｔａｎｃｏｖｓｋｉら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８８：８６９１〜８６９５（１９９１）；Ｂａｃｕｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：２５８０〜２５８９（１９９２）；Ｘｕら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ５３：４０１〜４０８（１９９３）；国際公開第９４／００１３６号パンフレット；Ｋａｓｐｒｚｙｋら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：２７７１〜２７７６（１９９２）；Ｈａｎｃｏｃｋら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１：４５７５〜４５８０（１９９１）；Ｓｈａｗｖｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５４：１３６７〜１３７３（１９９４）；Ａｒｔｅａｇａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５４：３７５８〜３７６５（１９９４）；Ｈａｒｗｅｒｔｈら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１５１６０〜１５１６７（１９９２）；米国特許第５，７８３，１８６号明細書；ａｎｄ  Ｋｌａｐｐｅｒら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １４：２０９９〜２１０９（１９９７）に記載されている。
【００１０】
相同性スクリーニングで、２つの他のＨＥＲレセプターファミリーのメンバーの特定が得られている；ＨＥＲ３（米国特許第５，１８３，８８４号明細書および同第５，４８０，９６８号明細書、ならびにＫｒａｕｓら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８６：９１９３〜９１９７（１９８９））およびＨＥＲ４（欧州特許出願第５９９，２７４号明細書；Ｐｌｏｗｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：１７４６〜１７５０（１９９３）；およびＰｌｏｗｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３６６：４７３〜４７５（１９９３））。これらのレセプターの両方とも、少なくともいくつかの乳癌細胞株での発現の増大を示す。
【００１１】
ＨＥＲレセプターは一般に、細胞中で種々の組み合わせで見出され、そしてヘテロ二両体化は、種々のＨＥＲリガンドに対して多様な細胞応答を増大すると考えられる（Ｅａｒｐら、Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  ＲｅｓｅａｒｃｈおよびＴｒｅａｔｍｅｎｔ  ３５：１１５〜１３２（１９９５））。ＥＧＦＲは、６つの異なるリガンドによって結合される；上皮細胞成長因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）（ＥＧＦ）、トランスフォーミング成長因子α（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｌｐｈａ）（ＴＧＦ−α）、アンフィレギュリン（ａｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎ）、ヘパリン結合上皮細胞成長因子（ｈｅｐａｒｉｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）（ＨＢ−ＥＧＦ）、ベータセルリン（ｂｅｔａｃｅｌｌｕｌｉｎ）およびエピレグリン（ｅｐｉｒｅｇｕｌｉｎ）（Ｇｒｏｅｎｅｎら、Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  １１：２３５〜２５７（１９９４））。単一の遺伝子の選択的スプライシングから得られたヘレグリンタンパク質のファミリーは、ＨＥＲ３およびＨＥＲ４のリガンドである。このヘレグリンファミリーとしては、α、βおよびγのヘレグリン（Ｈｏｌｍｅｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５６：１２０５〜１２１０（１９９２）；米国特許第５，６４１，８６９号明細書；およびＳｃｈａｅｆｅｒら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １５：１３８５〜１３９４（１９９７））；ｎｅｕ分化因子（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）（ＮＤＦ）、グリア成長因子（ｇｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）（ＧＧＦ）；活性誘発性アセチルコリンレセプター（ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）（ＡＲＩＡ）；ならびに感覚および運動神経由来の因子（ｓｅｎｓｏｒｙ  ａｎｄ  ｍｏｔｏｒ  ｎｅｕｒｏｎ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ）（ＳＭＤＦ）が挙げられる。概説については、Ｇｒｏｅｎｅｎら、Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  １１：２３５〜２５７（１９９４）；Ｌｅｍｋｅ，Ｇ．Ｍｏｌｅｃ．＆  Ｃｅｌｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．７：２４７〜２６２（１９９６）およびＬｅｅら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｖ．４７：５１〜８５（１９９５）を参照のこと。近年では、３つのさらなるＨＥＲリガンドが特定された；ＨＥＲ３またはＨＥＲ４のいずれかに結合することが報告されているニューレグリン−２（ｎｅｕｒｅｇｕｌｉｎ−２）（ＮＲＧ−２）（Ｃｈａｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ  ３８７  ５０９〜５１２（１９９７）；およびＣａｒｒａｗａｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３８７：５１２〜５１６（１９９７））；ＨＥＲ４に結合するニューレグリン−３（Ｚｈａｎｇら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９４（１８）：９５６２〜７（１９９７））；ならびにＨＥＲ４に結合するニューレグリン−４（Ｈａｒａｒｉら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８：２６８１〜８９（１９９９））ＨＢ−ＥＧＦ、ベータセルリンおよびエピレグリン（これもＨＥＲ４に結合する）。
【００１２】
ＥＧＦおよびＴＧＦαは、ＨＥＲ２に結合しないが、ＥＧＦは、ＥＧＦＲおよびＨＥＲ２を刺激して、ヘテロ二量体を形成し、これが、ＥＧＦＲを活性化して、ヘテロ二量体中でＨＥＲ２のリン酸転移反応を生じる。二量体化および／またはリン酸転移反応は、ＨＥＲ２チロシンキナーゼを活性化すると考えられる。Ｅａｒｐら（前出）を参照のこと。同様に、ＨＥＲ３がＨＥＲ２と同時発現される場合、活性なシグナル伝達複合体が形成されて、ＨＥＲ２に対する抗体は、この複合体を破壊し得る（Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９（２０）：１４６６１〜１４６６５（１９９４））。さらに、ヘレグリン（ＨＲＧ）についてのＨＥＲ３の親和性は、ＨＥＲ２と同時発現されるときにより高い親和性まで増大される。また、ＨＥＲ２−ＨＥＲ３タンパク質複合体に関しては、Ｌｅｖｉら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １５：１３２９〜１３４０（１９９５）；Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９２：１４３１〜１４３５（１９９５）；およびＬｅｗｉｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５６：１４５７〜１４６５（１９９６）も参照のこと。ＨＥＲ４は、ＨＥＲ３と同様に、ＨＥＲ２と活性なシグナル伝達複合体を形成する（ＣａｒｒａｗａｙおよびＣａｎｔｌｅｙ，Ｃｅｌｌ  ７８：５〜８（１９９４））。
【００１３】
ＨＥＲ抗体に関する特許刊行物としては以下が挙げられる：米国特許第５，６７７，１７１号明細書、米国特許第５，７２０，９３７号明細書、米国特許第５，７２０，９５４号明細書、米国特許第５，７２５，８５６号明細書、米国特許第５，７７０，１９５号明細書、米国特許第５，７７２，９９７号明細書、米国特許第６，１６５，４６４号明細書、米国特許第６，３８７，３７１号明細書、米国特許第６，３９９，０６３号明細書、米国特許出願公開第２００２／０１９２２１１号（Ａ１）明細書、米国特許第６，０１５，５６７号明細書、米国特許第６，３３３，１６９号明細書、米国特許第４，９６８，６０３号明細書、米国特許第５，８２１，３３７号明細書、米国特許第６，０５４，２９７号明細書、米国特許第６，４０７，２１３号明細書、米国特許第６，７１９，９７１号明細書、米国特許第６，８００，７３８号明細書、米国特許出願公開第２００４／０２３６０７８号明細書（Ａ１）、米国特許第５，６４８，２３７号明細書、米国特許第６，２６７，９５８号明細書、米国特許第６，６８５，９４０号明細書、米国特許第６，８２１，５１５号明細書、国際公開第９８／１７７９７号パンフレット、米国特許第６，１２７，５２６号明細書、米国特許第６，３３３，３９８号明細書、米国特許第６，７９７，８１４号明細書、米国特許第６，３３９，１４２号明細書、米国特許第６，４１７，３３５号明細書、米国特許第６，４８９，４４７号明細書、国際公開第９９／３１１４０号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／０１４７８８４号明細書（Ａ１）、米国特許出願公開第２００３／０１７０２３４号明細書（Ａ１）、米国特許出願公開第２００４／００３７８２３号明細書（Ａ１）、米国特許出願公開第２００５／０００２９２８号明細書（Ａ１）、米国特許第６，５７３，０４３号明細書、米国特許第６，９０５，８３０明細書、米国特許出願公開第２００３／０１５２９８７号明細書（Ａ１）、国際公開第９９／４８５２７号パンフレット、米国特許出願公開第２００２／０１４１９９３号明細書（Ａ１）、米国特許出願公開第２００５／０２４４４１７号明細書（Ａ１）、米国特許第６，９４９，２４５号明細書、米国特許出願公開第２００３／００８６９２４号明細書、米国特許出願公開第２００４／００１３６６７号明細書（Ａ１）、国際公開第００／６９４６０号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／０１７０２３５号（Ａ１）明細書、米国特許第７，０４１，２９２号明細書、国際公開第０１／００２３８号パンフレット、米国特許出願公開第２００６／００８３７３９号明細書、国際公開第０１／１５７３０号パンフレット、米国特許第６，６２７，１９６号（Ｂ１）明細書、米国特許第６，６３２，９７９号（Ｂ１）明細書、国際公開第０１／００２４４号パンフレット、米国特許出願公開第２００２／０００１５８７号（Ａ１）明細書、米国特許出願公開第２００２／００９０６６２号（Ａ１）明細書、米国特許第６，９８４，４９４号（Ｂ２）明細書、国際公開第０１／８９５６６号パンフレット、米国特許出願公開第２００２／００６４７８５号明細書、米国特許出願公開第２００３／０１３４３４４号明細書、国際公開第２００５／０９９７５６号パンフレット、米国特許出願公開第２００６／００１３８１９号明細書、国際公開第２００６／０７３９８Ａ１号パンフレット、米国特許出願公開第２００６／００１８８９９号明細書、国際公開第２００６／３３７００号パンフレット、米国特許出願公開第２００６／００８８５２３号明細書、米国特許出願公開第２００６／００３４８４０号明細書、国際公開第０４／２４８６６号パンフレット、米国特許出願公開第２００４／００８２０４７号明細書、米国特許出願公開第２００３／０１７５８４５号（Ａ１）明細書、国際公開第０３／０８７１３１号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／０２２８６６３号明細書、国際公開第２００４／００８０９９Ａ２号パンフレット、米国特許出願公開第２００４／０１０６１６１号明細書、国際公開第２００４／０４８５２５号パンフレット、米国特許出願公開第２００４／０２５８６８５号（Ａ１）明細書、国際公開第２００５／１６９６８号パンフレット、米国特許出願公開第２００５／００３８２３１号（Ａ１）明細書、米国特許第５，９８５，５５３号明細書、米国特許第５，７４７，２６１号明細書、米国特許第４，９３５，３４１号明細書、米国特許第５，４０１，６３８号明細書、米国特許第５，６０４，１０７号明細書、国際公開第８７／０７６４６号パンフレット、国際公開第８９／１０４１２号パンフレット、国際公開第９１／０５２６４号パンフレット、欧州特許第４１２，１１６号（Ｂ１）明細書、欧州特許第４９４，１３５号（Ｂ１）明細書、米国特許第５，８２４，３１１号明細書、欧州特許第４４４，１８１号（Ｂ１）明細書、欧州特許第１，００６，１９４号（Ａ２）明細書、米国特許出願公開第２００２／０１５５５２７号（Ａ１）明細書、国際公開第９１／０２０６２号パンフレット，米国特許第５，５７１，８９４号明細書、米国特許第５，９３９，５３１号明細書、欧州特許第５０２，８１２号（Ｂ１）明細書、国際公開第９３／０３７４１号パンフレット、欧州特許第５５４，４４１号（Ｂ１）明細書、欧州特許第６５６，３６７号（Ａ１）明細書、米国特許第５，２８８，４７７号明細書、米国特許第５，５１４，５５４号明細書、米国特許第５，５８７，４５８号明細書、国際公開第９３／１２２２０号パンフレット、国際公開第９３／１６１８５号パンフレット、米国特許第５，８７７，３０５号明細書、国際公開第９３／２１３１９号パンフレット、国際公開第９３／２１２３２号パンフレット、米国特許第５，８５６，０８９号明細書、国際公開第９４／２２４７８号パンフレット、米国特許第５，９１０，４８６号明細書、米国特許第６，０２８，０５９号明細書、国際公開第９６／０７３２１号パンフレット、米国特許第５，８０４，３９６号明細書、米国特許第５，８４６，７４９号明細書、欧州特許第７１１，５６５号明細書、国際公開第９６／１６６７３号パンフレット、米国特許第５，７８３，４０４号明細書、米国特許第５，９７７，３２２号明細書、米国特許第６，５１２，０９７号明細書、国際公開第９７／００２７１号パンフレット、米国特許第６，２７０，７６５号明細書、米国特許第６，３９５，２７２号明細書、米国特許第５，８３７，２４３号明細書、国際公開第９６／４０７８９号パンフレット、米国特許第５，７８３，１８６号明細書、米国特許第６，４５８，３５６号明細書、国際公開第９７／２０８５８号パンフレット、国際公開第９７／３８７３１号パンフレット、米国特許第６，２１４，３８８号明細書、米国特許第５，９２５，５１９号明細書、国際公開第９８／０２４６３号パンフレット、米国特許第５，９２２，８４５号明細書、国際公開第９８／１８４８９号パンフレット、国際公開第９８／３３９１４号パンフレット、米国特許第５，９９４，０７１号明細書、国際公開第９８／４５４７９号パンフレット、米国特許第６，３５８，６８２号（Ｂ１）明細書、米国特許出願公開第２００３／００５９７９０号明細書、国際公開第９９／５５３６７号パンフレット、国際公開第０１／２００３３号パンフレット、米国特許出願公開第２００２／００７６６９５号（Ａ１）明細書、国際公開第００／７８３４７号パンフレット、国際公開第０１／０９１８７号パンフレット、国際公開第０１／２１１９２号パンフレット、国際公開第０１／３２１５５号パンフレット、国際公開第０１／５３３５４号パンフレット、国際公開第０１／５６６０４号パンフレット、国際公開第０１／７６６３０号パンフレット、国際公開第０２／０５７９１号パンフレット、国際公開第０２／１１６７７号パンフレット、米国特許第６，５８２，９１９号明細書、米国特許出願公開第２００２／０１９２６５２号（Ａ１）明細書、米国特許出願公開第２００３／０２１１５３０号（Ａ１）明細書、国際公開第０２／４４４１３号パンフレット、米国特許出願公開第２００２／０１４２３２８号明細書、米国特許第６，６０２，６７０号（Ｂ２）、国際公開第０２／４５６５３号パンフレット、国際公開第０２／０５５１０６号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／０１５２５７２号明細書、米国特許出願公開第２００３／０１６５８４０号明細書、国際公開第０２／０８７６１９号パンフレット、国際公開第０３／００６５０９号パンフレット、国際公開第０３／０１２０７２号パンフレット、国際公開第０３／０２８６３８号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／００６８３１８号明細書、国際公開第０３／０４１７３６号パンフレット、欧州特許第１，３５７，１３２号明細書、米国特許出願公開第２００３／０２０２９７３号明細書、米国特許出願公開第２００４／０１３８１６０号明細書、米国特許第５，７０５，１５７号明細書、米国特許第６，１２３，９３９号明細書、欧州特許第６１６，８１２号（Ｂ１）明細書、米国特許出願公開第２００３／０１０３９７３号明細書、米国特許出願公開第２００３／０１０８５４５号明細書、米国特許第６，４０３，６３０号（Ｂ１）明細書、国際公開第００／６１１４５号パンフレット、国際公開第００／６１１８５号パンフレット、米国特許第６，３３３，３４８号（Ｂ１）明細書、国際公開第０１／０５４２５号パンフレット、国際公開第０１／６４２４６号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／００２２９１８号明細書、米国特許出願公開第２００２／００５１７８５号（Ａ１）明細書、米国特許第６，７６７，５４１号明細書、国際公開第０１／７６５８６号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／０１４４２５２号明細書、国際公開第０１／８７３３６号パンフレット、米国特許出願公開第２００２／００３１５１５号（Ａ１）明細書、国際公開第０１／８７３３４号パンフレット、国際公開第０２／０５７９１号パンフレット、国際公開第０２／０９７５４号パンフレット、米国特許出願公開第２００３／０１５７０９７号明細書、米国特許出願公開第２００２／００７６４０８号明細書、国際公開第０２／０５５１０６号パンフレット、国際公開第０２／０７０００８号パンフレット、国際公開第０２／０８９８４２号パンフレットおよび国際公開第０３／８６４６７号パンフレット。
【００１４】
診断薬
ＨＥＲ２抗体トラスツズマブで処置した患者を、ＨＥＲ２過剰発現／増幅に基づく治療について選択する。例えば、国際公開第９９／３１１４０号パンフレット（Ｐａｔｏｎら、）、米国特許出願公開第２００３／０１７０２３４号（Ａ１）明細書（Ｈｅｌｌｍａｎｎ，Ｓ．）、および米国特許出願公開第２００３／０１４７８８４号明細書（Ｐａｔｏｎら）；ならびに国際公開第０１／８９５６６号パンフレット、米国特許出願公開第２００２／００６４７８５号明細書、および米国特許出願公開第２００３／０１３４３４４号明細書（Ｍａｓｓら）を参照のこと。また、ＨＥＲ２の過剰発現および増幅についての免疫組織化学（ＩＨＣ）および蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）に関する米国特許第６，５７３，０４３号明細書、米国特許第６，９０５，８３０号明細書、および米国特許出願公開第２００３／０１５２９８７号明細書、Ｃｏｈｅｎらも参照のこと。
【００１５】
国際公開第２００４／０５３４９７号パンフレットおよび米国特許出願公開第２００４／０２４８１５号Ａ１明細書（Ｂａｃｕｓら）、ならびに米国特許出願公開第２００３／０１９０６８９号明細書（ＣｒｏｓｂｙおよびＳｍｉｔｈ）は、トラスツズマブ療法に対する応答を決定することまたは推定することについて言及している。米国特許出願公開第２００４／０１３２９７号Ａ１明細書（Ｂａｃｕｓら）は、ＡＢＸ０３０３ＥＧＦＲ抗体療法に対する応答を決定することまたは推定することに関する。国際公開第２００４／００００９４号パンフレット（Ｂａｃｕｓら）は、ＧＷ５７２０１６、低分子、ＥＧＦＲ−ＨＥＲ２チロシンキナーゼインヒビターに対する応答を決定することに関する。国際公開第２００４／０６３７０９号パンフレット（Ａｍｌｅｒら）は、ＥＧＦＲインヒビターであるエルロチニブＨＣｌに対する感受性を決定するためのバイオマーカーおよび方法について言及している。米国特許出願公開第２００４／０２０９２９０号明細書および国際公開第０４／０６５５８３号パンフレット（Ｃｏｂｌｅｉｇｈら）は、乳癌の予後についての遺伝子発現マーカーに関する。国際公開第０３／０７８６６２号パンフレット（Ｂａｋｅｒら、）、および国際公開第０３／０４０４０４号パンフレット（Ｂｅｖｉｌａｃｑｕａら）も参照のこと。国際公開第０２／４４４１３号パンフレット（Ｄａｎｅｎｂｅｒｇ，Ｋ．）は、化学療法レジメンを決定するためにＥＧＦＲおよびＨＥＲ２の遺伝子発現を決定することについて言及する。
【００１６】
ペルツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）で処置される患者は、ＨＥＲ活性化または二量体化に基づいて、治療について選択され得る。ペルツズマブおよびこれを用いた治療のための患者の選択に関する特許刊行物としては、以下が挙げられる：米国特許第６，９４９，２４５号明細書、国際公開第０１／００２４５号パンフレット、米国特許出願公開第２００５／０２０８０４３号明細書、米国特許出願公開第２００５／０２３８６４０号明細書、米国特許出願公開第２００６／００３４８４２号明細書、および米国特許出願公開第２００６／００７３１４３号明細書（Ａｄａｍｓら）；米国特許出願公開第２００３／００８６９２４号明細書（Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ，Ｍ．）；米国特許出願公開第２００４／００１３６６７号Ａ１明細書（Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ，Ｍ．）；ならびに国際公開第２００４／００８０９９Ａ２号パンフレット、および米国特許出願公開第２００４／０１０６１６１号明細書（Ｂｏｓｓｅｎｍａｉｅｒら）。
【００１７】
Ｃｒｏｎｉｎら．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１６４（１）：３５〜４２（２００４）は、保存用（ａｒｃｈｉｖａｌ）パラフィン包埋組織における遺伝子発現の測定を記載している。Ｍａら．Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：６０７〜６１６（２００４）は、保存された一次生検から採取された腫瘍組織切片から単離されたＲＮＡを用いる遺伝子オリゴヌクレオチドマイクロアレイによる遺伝子プロファイリングを記載している。
【００１８】
ペルツズマブ（組み換えヒトモノクローナル抗体２Ｃ４としても公知；ＯＭＮＩＴＡＲＧ（商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ，Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ）は、まずＨＥＲ二量体化インヒビター（ＨＤＩ）として公知の新規なクラスの薬剤であり、そしてＨＥＲ２が他のＨＥＲレセプター（例えば、ＥＧＦＲ／ＨＥＲ１、ＨＥＲ３およびＨＥＲ４）との活性なヘテロ二量体を形成する能力を阻害するように機能し、そしてＨＥＲ２発現レベルとは無関係に活性である。例えば、ＨａｒａｒｉおよびＹａｒｄｅｎ  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９：６１０２〜１４（２０００）；ＹａｒｄｅｎおよびＳｌｉｗｋｏｗｓｋｉ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２：１２７〜３７（２００１）；Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉ  Ｎａｔ  Ｓｔｒｕｃｔ  Ｂｉｏｌ  １０：１５８〜９（２００３）；Ｃｈｏら、Ｎａｔｕｒｅ  ４２１：７５６〜６０（２００３）；ならびにＭａｌｉｋら、Ｐｒｏ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ４４：１７６〜７（２００３）を参照のこと。
【００１９】
腫瘍細胞におけるＨＥＲ２−ＨＥＲ３ヘテロ二両体の形成のペルツズマブ遮断は、重要な細胞シグナル伝達を阻害し、これが腫瘍増殖の低下および生存を生じることが実証されている（Ａｇｕｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２：１２７〜３７（２００２））。
【００２０】
ペルツズマブは、臨床では単一の薬剤として試験を受けており、これは、進行性のガンを有する患者で第Ｉａ相臨床試験、そして卵巣癌および乳癌ならびに肺癌および前立腺癌を有する患者で第ＩＩ相臨床試験である。第Ｉ相試験では、標準的な治療の間または後に進行された、難治の、局所的に進行した、再発性または転移性の固形腫瘍を有する患者が、３週ごとにペルツズマブを静脈内投与して処置された。ペルツズマブは一般に十分耐容性であった。腫瘍の退行は、応答について評価可能な２０例の患者のうち３例で得られた。２例の患者では、部分反応が確認された。２．５ヶ月より長い安定な疾患が２１例の患者のうち６例で観察された（Ａｇｕｓら、Ｐｒｏ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２２：１９２（２００３））。２．０〜１５ｍｇ／ｋｇの用量では、ペルツズマブの薬物動態は線形であり、平均クリアランスは、２．６９〜３．７４ｍＬ／日／ｋｇにおよび、そして、平均終末消失半減期（ｍｅａｎ  ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ  ｈａｌｆ−ｌｉｆｅ）は、１５．３〜２７．６日に及んだ。ペルツズマブに対する抗体は、検出されなかった（Ａｌｌｉｓｏｎら、Ｐｒｏ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２２：１９７（２００３））。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２１】
【特許文献１】国際公開第９４／２２４７８号パンフレット
【特許文献２】米国特許第５，８２４，３１１号明細書
【非特許文献】
【００２２】
【非特許文献１】ＢａｓｅｌｇａおよびＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎ  Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．６４：１２７〜１５４（１９９４）
【非特許文献２】Ｍａｓｕｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４４：１００２〜１００７（１９８４）
【非特許文献３】Ｗｕら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９５：１８９７〜１９０５（１９９５）
【非特許文献４】Ｄｒｅｂｉｎら、Ｃｅｌｌ  ４１：６９５〜７０６（１９８５）
【非特許文献５】Ｍｙｅｒｓら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．１９８：２７７〜２９０（１９９１）
【非特許文献６】Ｄｒｅｂｉｎら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２：２７３〜２７７（１９８８）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２３】
発明の要旨
本発明は、ＨＥＲ二量体化インヒビターであるペルツズマブで処置したヒトガン患者からの臨床的データを提供する。患者は、種々の血清バイオマーカーの発現レベルについて評価し、そして、このような発現レベルとトラスツズマブでの処置に応答した臨床的利点との間の相関を評価した。この臨床的なデータによって、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）またはトランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−α）のレベルの上昇を生じる卵巣癌を有する患者は、ペルツズマブ処置に応答して、正常なＥＧＦまたはＴＧＦ−αのレベルを有する患者に対して生存の利点を示したということが示された。類似の利点が、白金耐性の卵巣癌、原発性の腹膜癌および卵管癌を有する患者を含む、別の進行中の臨床試験で期待されている。
【００２４】
従って、一局面では本発明は、ガン患者の生存を延長するための方法に関しており、この方法は、この患者に対してＨＥＲ二量体化インヒビターを、この患者の生存を延長する量で投与する工程を包含し、ここで、この患者は、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）またはトランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−α）のレベルの上昇を生じることが確認されており、かつこのガンは、卵巣癌、腹膜癌および卵管癌からなる群より選択される。
【００２５】
別の局面では、本発明は、卵巣、腹膜、または卵管の癌を有する患者の生存を延長する方法に関しており、この方法は、この患者に対してペルツズマブを、この患者の生存を延長する量で投与する工程を包含し、ここで、この患者は、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）またはトランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−α）のレベルの上昇を生じることが確認されている。
【００２６】
さらなる局面では、本発明は、卵巣、腹膜または卵管の癌を有する患者の無増悪生存（ＰＦＳ）を拡大するための方法に関しており、この方法は、この患者に対してペルツズマブを、この患者のＰＦＳを拡大する量で投与する工程を包含し、ここで、この患者の血清では、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）のレベルの上昇を有することが確認されている。
【００２７】
なおさらなる局面では、本発明は、卵巣、腹膜または卵管の癌を有する患者の無増悪生存（ＰＦＳ）を拡大するための方法に関しており、この方法は、この患者に対してペルツズマブを、この患者のＰＦＳを拡大する量で投与する工程を包含し、この患者の血清では、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）およびトランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−α）のレベルの上昇を有することが確認されている。
【００２８】
さらなる局面では、本発明は、ＨＥＲ二量体化インヒビターでの処置のための患者を選択する方法に関しており、この方法は、この患者が上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）およびトランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−α）のレベルの上昇を生じることが確認されている場合、このＨＥＲ二量体化インヒビターでこの患者を処置する工程を包含する。
【００２９】
全ての局面について、特定の実施形態では、この患者は、この患者の血清においてＥＧＦのレベルの上昇を有することが見出されている。
【００３０】
別の実施形態では、上記患者は、ＴＧＦαのレベルの上昇をこの患者の血清中で有することが見出されている。
【００３１】
別の実施形態では、上記ＨＥＲ二量体化インヒビターは、ＨＥＲ２二量体化インヒビターである。
【００３２】
さらに別の実施形態では、上記ＨＥＲ二量体化インヒビターは、ＨＥＲヘテロ二量体化を阻害する。
【００３３】
さらなる実施形態では、上記ＨＥＲ二量体化インヒビターは、ＨＥＲ抗体であり、これは、例えば、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３からなる群より選択されるＨＥＲレセプターに結合し得る。
【００３４】
詳細な実施形態では、上記抗体はＨＥＲ２に、例えば、ＨＥＲ２細胞外ドメインのドメインＩＩに、またはＨＥＲ２細胞外ドメインのドメインＩとＩＩとＩＩＩとの間の接合部に結合する。
【００３５】
特定の実施形態では、上記ＨＥＲ二量体化インヒビターは、ペルツズマブである。
【００３６】
上記のガンは、例えば、進行性、難治性または再発性の卵巣癌、白金耐性の卵巣癌、原発性の腹膜癌または卵管癌であってもよい。
【００３７】
上記ＨＥＲ二量体化インヒビターは、単独の抗癌剤として、または第二の治療剤と組み合わせて患者に投与されてもよい。
【００３８】
上記第二の治療剤は、例えば、化学療法剤、ＨＥＲ抗体、腫瘍関連抗原に対する抗体、抗ホルモン化合物、心保護薬、サイトカイン、ＥＧＦＲ標的薬物、血管新生阻害剤、チロシンキナーゼインヒビター、ＣＯＸインヒビター、非ステロイド性抗炎症薬、ファルネシル転移酵素インヒビター、癌胎児性タンパク質ＣＡ１２５に結合する抗体、ＨＥＲ２ワクチン、ＨＥＲ標的化治療、Ｒａｆもしくはｒａｓインヒビター、リポソームドキソルビシン、トポテカン、タキサン、二重（ｄｕａｌ）チロシンキナーゼインヒビター、ＴＬＫ２８６、ＥＭＤ−７２００、悪心を処置する医薬、皮膚発疹を予防もしくは処置する医薬または標準的なざ瘡治療、下痢を処置もしくは予防する医薬、解熱薬、または造血成長因子であってもよい。
【００３９】
特定の実施形態では、この第二の治療剤は、化学療法剤、例えば、代謝拮抗剤の化学療法剤、例えば、ゲムシタビン、トラスツズマブ、エルロチニブまたはベバシズマブである。
【００４０】
上記の臨床的な利点は好ましくは、生存に関して測定され、生存としては、全生存（ｏｖｅｒａｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）（ＯＳ）および無増悪生存（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）（ＰＦＳ）、好ましくはＰＦＳが挙げられる。
【００４１】
別の局面では、本発明は、ＨＥＲ二量体化インヒビターと、処置されるべき患者が上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）またはトランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−α）のレベルの上昇を生じる場合、ＨＥＲ二量体化インヒビターについての有益な用途を示す添付文書または表示とを備える、キットに関しており、ここでこの臨床的な利点は好ましくは、生存の延長、詳細にはＰＦＳの拡大である。
【００４２】
さらなる局面では、本発明は、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）またはトランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−α）のレベルの上昇を生じている患者を処置するためにＨＥＲ二量体化インヒビターをプロモーションさせる方法に関しており、ここで上記プロモーションは添付文書のような書面の形態を含む任意の形態をとってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】図１は、ＨＥＲ２タンパク質構造の概略図、およびその細胞外ドメインのドメインＩ−ＩＶについてのアミノ酸配列（それぞれ、配列番号１９〜２２）を示す。
【図２】図２Ａおよび図２Ｂは、マウスモノクローナル抗体２Ｃ４の可変軽鎖（ＶＬ）（図２Ａ）および可変重鎖（ＶＨ）（図２Ｂ）のアミノ酸配列のアラインメントを示す（それぞれ、配列番号１および２）；改変体５７４／ペルツズマブのＶＬおよびＶＨドメイン（それぞれ、配列番号３および４）、ならびにヒトのＶＬおよびＶＨコンセンサスフレームワーク（ｈｕｍκ１、軽鎖κサブグループＩ；ｈｕｍＩＩＩ、重鎖サブグループＩＩＩ）（それぞれ、配列番号５および６）。星印は、ペルツズマブの可変ドメインとマウスモノクローナル抗体２Ｃ４との間、またはペルツズマブの可変ドメインとヒトフレームワークとの間の相違を特定する。相補性決定領域（ＣＤＲ）は、カギカッコ内である。
【図３】図３Ａおよび図３Ｂは、トラスツズマブの軽鎖（図３Ａ；配列番号１３）および重鎖（図３Ｂ：配列番号１４）のアミノ酸配列を示す。ＣＤＲは、太字で示す。軽鎖および重鎖の分子量の計算値は、２３，５２６．２２Ｄａおよび４９，２１６．５６Ｄａである（還元型のシステイン）。炭水化物成分は、重鎖のＡｓｎ２９９に結合される。
【図４】図４は模式的に、ＨＥＲ２のヘテロ二量体結合部位での２Ｃ４の結合であって、これによって活性化されたＥＧＦＲまたはＨＥＲ３とのヘテロ二量体化を妨げる結合を示す。
【図５】図５は、ＭＡＰＫおよびＡｋｔ経路に対するＨＥＲ２／ＨＥＲ３のカップリングを示す。
【図６】図６は、トラスツズマブおよびペルツズマブの種々の活性を比較する。
【図７Ａ】図７Ａおよび図７Ｂは、それぞれ、トラスツズマブの軽鎖（図７Ａ；配列番号１５）および重鎖（図７Ｂ：配列番号１６）のアミノ酸配列を示す。
【図７Ｂ】図７Ａおよび図７Ｂは、それぞれ、トラスツズマブの軽鎖（図７Ａ；配列番号１５）および重鎖（図７Ｂ：配列番号１６）のアミノ酸配列を示す。
【図８Ａ】図８Ａおよび図８Ｂは、それぞれ、改変ペルツズマブの軽鎖配列（図８Ａ；配列番号１７）および改変ペルツズマブの重鎖配列（図８Ｂ：配列番号１８）を示す。
【図８Ｂ】図８Ａおよび図８Ｂは、それぞれ、改変ペルツズマブの軽鎖配列（図８Ａ；配列番号１７）および改変ペルツズマブの重鎖配列（図８Ｂ：配列番号１８）を示す。
【図９】図９は、バイオマーカーのＨＥＲ２、ＴＧＦ−α、アンフィレギュリン（ａｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎ）、およびＥＧＦの間のスピアマン相関を示す。
【図１０】図１０は、臨床的共分散とともにマーカーの平均／相関を示す。
【図１１】図１１は、ＨＥＲ２、ＴＧＦ−α、アンフィレギュリンおよびＥＧＦについての無増悪生存（ＰＦＳ）を用いるカットオフ決定を示す。
【図１２】図１２は、ＨＥＲ２、ＴＧＦ−α、アンフィレギュリンおよびＥＧＦについての全生存（ＯＳ）を用いるカットオフ決定を示す。
【図１３】図１３は、カットオフに従う患者の分布を反映する。
【図１４】図１４は、ＨＥＲ２マーカーの単変量解析で決定された３マーカーカットオフによって分けたカプラン・マイヤーのＰＦＳおよびＯＳの曲線を示す。
【図１５】図１５は、ＴＧＦ−αマーカーの単変量解析で決定された３マーカーカットオフによって分けたカプラン・マイヤーのＰＦＳおよびＯＳの曲線を示す。
【図１６】図１６は、ＥＧＦマーカーの単変量解析で決定された３マーカーカットオフによって分けたカプラン・マイヤーのＰＦＳおよびＯＳの曲線を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
好ましい実施形態の詳細な説明
Ｉ．定義
「生存（ｓｕｒｖｉｖａｌ）」とは、生き残っている患者をいい、そして全生存（ｏｖｅｒａｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）および無増悪生存（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）を包含する。
【００４５】
「全生存（ｏｖｅｒａｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）」とは、診断または処置の時点から、１年、５年などのような所定の期間生き残っている患者をいう。
【００４６】
「無増悪生存（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）」とは、ガンの進行も悪化もなく、生き残っている患者をいう。
【００４７】
「生存の延長（ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）」とは、未処置の患者に対する（すなわち、ペルツズマブのようなＨＥＲ二量体インヒビターで処置していない患者に対する）、またはＨＥＲ活性を示さない患者に対する、および／または承認された抗癌剤（例えば、ガンが卵巣癌である場合、トポテカンまたはリポソームドキソルビシン）で処置した患者に対する、処置した患者における全生存または無増悪生存の増大を意味する。
【００４８】
ここでは、「無増悪期間（ｔｉｍｅ  ｔｏ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）」または「ＴＴＰ」とは、一般には週数または月数で測定される時間であって、最初の処置（例えば、ペルツズマブのようなＨＥＲ二量体化インヒビターを用いる）の時点からそのガンが進行または悪化するまでのをいう。このような進行は、当業者によって評価され得る。卵巣癌の場合、例えば、進行は、ＲＥＣＩＳＴ（例えば、Ｔｈｅｒａｓｓｅら、Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２（３）：２０５〜２１６（２０００）を参照のこと）によって評価され得る。
【００４９】
「ＴＴＰの延長（ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ  ＴＴＰ）」とは、未処置の患者に対する（すなわち、ペルツズマブのようなＨＥＲ二量体インヒビターで処置していない患者に対する）、またはＨＥＲ活性を示さない患者に対する、および／または承認された抗癌剤（例えば、ガンが卵巣癌である場合、トポテカンまたはリポソームドキソルビシン）で処置した患者に対する、処置した患者における増悪までの時間の延長を意味する。
【００５０】
「他覚的応答（ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」とは、測定可能な応答であり、これには完全寛解（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）（ＣＲ）または部分的応答（ｐａｒｔｉａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）（ＰＲ）を包含する。
【００５１】
「完全寛解（ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」または「ＣＲ」とは、処置に対する応答におけるガンの全ての徴候の消失であるものとする。これは、ガンが治癒したことを常に意味するものではない。
【００５２】
「部分的応答（ｐａｒｔｉａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」または「ＰＲ」とは、１つ以上の腫瘍もしくは病変のサイズにおける、または身体におけるガンの程度における、処置に対する応答での軽減をいう。
【００５３】
「ＨＥＲレセプター」とは、ＨＥＲレセプターファミリーに属するレセプタープロテインチロシンキナーゼであり、これにはＥＧＦＲレセプター、ＨＥＲ２レセプター、ＨＥＲ３レセプターおよびＨＥＲ４レセプターが包含される。このＨＥＲレセプターは、一般に、細胞外ドメインを含み、この細胞外ドメインは、ＨＥＲリガンドを結合し得、そして／または別のＨＥＲレセプター分子；親油性膜貫通ドメイン；保存された細胞内チロシンキナーゼドメイン；およびリン酸化され得るいくつかのチロシン残基を保有するカルボキシ末端シグナル伝達ドメインと二量体化し得る。このＨＥＲレセプターは、「ネイティブな配列」のＨＥＲレセプターであっても、またはその「アミノ酸配列改変体」であってもよい。好ましくは、このＨＥＲレセプターは、ネイティブ配列のヒトＨＥＲレセプターである。
【００５４】
「ＥｒｂＢ１」、「ＨＥＲ１」、「上皮細胞増殖因子レセプター（受容体）」および「ＥＧＦＲ」という用語は、本明細書において互換可能に使用され、そして例えば、天然に存在するその改変体形態（例えば、Ｈｕｍｐｈｒｅｙら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）  ８７：４２０７〜４２１１（１９９０）における欠失改変体ＥＧＦＲ）を含む、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５６：８８１〜９１４（１９８７）において開示されるようなＥＧＦＲをいう。ｅｒｂＢ１とは、ＥＧＦＲタンパク質産物をコードする遺伝子をいう。
【００５５】
「ＥｒｂＢ２」および「ＨＥＲ２」という表現は、本明細書において交換可能に使用され、例えば、Ｓｅｍｂａら，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８２：６４９７〜６５０１（１９８５）およびＹａｍａｍｏｔｏら．Ｎａｔｕｒｅ  ３１９：２３０〜２３４（１９８６）（Ｇｅｎｅｂａｎｋ登録番号Ｘ０３３６３）に記載されるヒトＨＥＲ２タンパク質をいう。この用語「ｅｒｂＢ２」とは、ヒトＥｒｂＢ２をコードする遺伝子をいい、そして「ｎｅｕ＠とは、ラットｐ１８５ｎｅｕをコードする遺伝子をいう。好ましいＨＥＲ２は、ネイティブ配列のヒトＨＥＲ２である。
【００５６】
本明細書において、「ＨＥＲ２細胞外ドメイン」または「ＨＥＲ２  ＥＣＤ」とは、細胞膜に固定されているかまたは循環中にあるかのいずれかである、細胞の外部に存在するＨＥＲ２のドメインをいい、これにはそのフラグメントを包含する。一実施形態において、ＨＥＲ２の細胞外ドメインは、以下の４つのドメインを含み得る：ドメインＩ（およそ１〜１９５のアミノ酸残基；配列番号１９）、ドメインＩＩ（およそ１９６〜３１９のアミノ酸；配列番号２０）、ドメインＩＩＩ（およそ３２０〜４８８のアミノ酸残基；配列番号２１）、およびドメインＩＶ（およそ４８９〜６３０のアミノ酸残基；配列番号２２）（残基の番号付けは、シグナルペプチドを含まない）。Ｇａｒｒｅｔｔら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．１１：４９５〜５０５（２００３）、Ｃｈｏら、Ｎａｔｕｒｅ  ４２１：７５６〜７６０（２００３）、Ｆｒａｎｋｌｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：３１７〜３２８（２００４）、およびＰｌｏｗｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：１７４６〜１７５０（１９９３）ならびに本明細書中の図１を参照のこと。
【００５７】
「ＥｒｂＢ３」および「ＨＥＲ３」とは、例えば、米国特許第５，１８３，８８４号明細書および同第５，４８０，９６８号明細書、ならびにＫｒａｕｓら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８６：９１９３〜９１９７（１９８９）において開示される、レセプターポリペプチドをいう。
【００５８】
本明細書において「ＥｒｂＢ４」および「ＨＥＲ４」という用語は、例えば、欧州特許出願第５９９，２７４号明細書；Ｐｌｏｗｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：１７４６〜１７５０（１９９３）；およびＰｌｏｗｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３６６：４７３〜４７５（１９９３）において開示されるレセプターポリペプチドをいい、これには、例えば１９９９年４月２２日に公開された国際公開第９９／１９４８８号パンフレットにおいて開示されるような、そのアイソフォームを含む。
【００５９】
「ＨＥＲリガンド」とは、ＨＥＲレセプターに結合し、そして／またはＨＥＲレセプターを活性化するポリペプチドを意味する。本明細書における特に目的とされるＨＥＲリガンドは、以下などの、ネイティブな配列のヒトＨＥＲリガンドである：上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）（Ｓａｖａｇｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４７：７６１２〜７６２１（１９７２））；トランスフォーミング増殖因子α（ＴＧＦ−α）（Ｍａｒｑｕａｒｄｔら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２３：１０７９〜１０８２（１９８４））；シュワノーマ・オートクライン（ｓｃａｗａｎｏｍａ  ａｕｔｏｃｒｉｎｅ）増殖因子またはケラチノサイトオートクライン増殖因子としても公知である、アンフィレギュリン（Ｓｈｏｙａｂら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４３：１０７４〜１０７６（１９８９）；Ｋｉｍｕｒａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：２５７〜２６０（１９９０）；およびＣｏｏｋら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１：２５４７〜２５５７（１９９１））；ベータセルリン（Ｓｈｉｎｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９：１６０４〜１６０７（１９９３）；およびＳａｓａｄａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９０：１１７３（１９９３））；ヘパリン結合性上皮細胞増殖因子（ＨＢ−ＥＧＦ）（Ｈｉｇａｓｈｉｙａｍａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：９３６〜９３９（１９９１））；エピレグリン（Ｔｏｙｏｄａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：７４９５〜７５００（１９９５）；およびＫｏｍｕｒａｓａｋｉら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １５：２８４１〜２８４８（１９９７））；ヘレグリン（以下を参照のこと）；ニューレグリン−２（ＮＲＧ−２）（Ｃａｒｒａｗａｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３８７：５１２〜５１６（１９９７））；ニューレグリン−３（ＮＲＧ−３）（Ｚｈａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９４：９５６２〜９５６７（１９９７））；ニューレグリン−４（ＮＲＧ−４）（Ｈａｒａｒｉら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １８：２６８１〜８９（１９９９））；ならびにクリプト（ＣＲ−１）（Ｋａｎｎａｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（６）：３３３０〜３３３５（１９９７））。ＥＧＦＲを結合するＨＥＲリガンドとしては、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、アンフィレギュリン、ベータセルリン、ＨＢ−ＥＧＦおよびエピレグリンが挙げられる。ＨＥＲ３を結合するＨＥＲリガンドとしては、ヘレグリンが挙げられる。ＨＥＲ４を結合し得るＨＥＲリガンドとしては、ベータセルリン、エピレグリン、ＨＢ−ＥＧＦ、ＮＲＧ−２、ＮＲＧ−３、ＮＲＧ−４およびヘレグリンが挙げられる。
【００６０】
本明細書において使用される「ヘレグリン（ｈｅｒｅｇｕｌｉｎ）」（ＨＲＧ）とは、米国特許第５，６４１，８６９号明細書またはＭａｒｃｈｉｏｎｎｉら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２：３１２〜３１８（１９９３）において開示される、ヘレグリン遺伝子産物によってコードされるポリペプチドをいう。ヘレグリンの例としては、ヘレグリン−α、ヘレグリン−β１、ヘレグリン−β２およびヘレグリン−β３（Ｈｏｌｍｅｓら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５６：１２０５〜１２１０（１９９２）；および米国特許第５，６４１，８６９号明細書）；ｎｅｕ分化因子（ＮＤＦ）（Ｐｅｌｅｓら、Ｃｅｌｌ  ６９：２０５〜２１６（１９９２））；アセチルコリンレセプター誘導活性（ＡＲＩＡ）（Ｆａｌｌｓら、Ｃｅｌｌ  ７２：８０１〜８１５（１９９３））；グリア細胞増殖因子（ＧＧＦ）（Ｍａｒｃｈｉｏｎｎｉら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２：３１２〜３１８（１９９３））；感覚および運動ニューロン由来因子（ｓｅｎｓｏｒｙ  ａｎｄ  ｍｏｔｏｒ  ｎｅｕｒｏｎ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ）（ＳＭＤＦ）（Ｈｏら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１４５２３〜１４５３２（１９９５））；γ−ヘレグリン（Ｓｃｈａｅｆｅｒら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１５：１３８５〜１３９４（１９９７））が挙げられる。
【００６１】
本明細書において、「ＨＥＲ二量体」とは、少なくとも２つのＨＥＲレセプターを含む、非共有結合した二量体である。このような複合体は、２つ以上のＨＥＲレセプターを発現する細胞がＨＥＲリガンドに曝される場合に形成され得、そして免疫沈降法により単離され得、そして例えば、Ｓｌｉｗｋｏｗｓｋｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９（２０）：１４６６１〜１４６６５（１９９４）に記載されるＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、分析され得る。他のタンパク質、例えば、サイトカインレセプターサブユニット（例えば、ｇｐ１３０）は、この二量体と会合され得る。好ましくは、ＨＥＲ二量体は、ＨＥＲ２を含む。
【００６２】
本明細書において、「ＨＥＲヘテロ二量体」とは、非共有結合的に会合したヘテロ二量体であり、これは少なくとも２つの異なるＨＥＲレセプター、例えば、ＥＧＦＲ−ＨＥＲ２ヘテロ二量体、ＨＥＲ２−ＨＥＲ３ヘテロ二量体またはＨＥＲ２−ＨＥＲ４ヘテロ二量体を含む。
【００６３】
「ＨＥＲインヒビター」とは、ＨＥＲの活性化またはＨＥＲの機能を妨げる薬剤である。ＨＥＲインヒビターの例としては、ＨＥＲ抗体（例えば、ＥＧＦＲ抗体、ＨＥＲ２抗体、ＨＥＲ３抗体またはＨＥＲ４抗体）；ＥＧＦＲ標的化薬物；低分子ＨＥＲアンタゴニスト；ＨＥＲチロシンキナーゼインヒビター；ＨＥＲ２およびＥＧＦＲの二重（ｄｕａｌ）チロシンキナーゼインヒビター（例えば、ラパチニブ（ｌａｐａｔｉｎｉｂ）／ＧＷ５７２０１６）；アンチセンス分子（例えば、国際公開第２００４／８７２０７号パンフレットを参照のこと）；ならびに／または、下流シグナル伝達分子、例えば、ＭＡＰＫまたはＡｋｔに結合するかまたはその機能を妨げる薬剤が挙げられる（図５を参照のこと）。好ましくは、ＨＥＲインヒビターは、ＨＥＲレセプターに結合する、抗体または低分子である。
【００６４】
「ＨＥＲ２二量体化インヒビター」とは、ＨＥＲ二量体またはＨＥＲヘテロ二量体の形成を阻害する薬剤である。好ましくは、ＨＥＲ２二量体化インヒビターは抗体であり、例えば、そのヘテロ二量体の結合部位でＨＥＲ２に結合する抗体である。本明細書において最も好ましいＨＥＲ二量体化インヒビターは、ペルツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）またはＭＡｂ  ２Ｃ４である。ＨＥＲのヘテロ二量体化結合部位に対する２Ｃ４の結合は、図４に図示される。ＨＥＲ二量体化インヒビターの他の例としては、ＥＧＦＲに結合しそしてこれと１つ以上の他のＨＥＲレセプターとの二量体化を阻害する抗体（例えば、活性化ＥＧＦＲもしくは「非連結（ｕｎｔｅｔｈｅｒｅｄ）」ＥＧＦＲに結合するＥＧＦＲモノクローナル抗体８０６，Ｍａｂ８０６；Ｊｏｈｎｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（２９）：３０３７５〜３０３８４（２００４）を参照のこと）；ＨＥＲ３に結合しそしてこれと１つ以上の他のＨＥＲレセプターとの二量体化を阻害する抗体；ＨＥＲ４に結合しそしてこれと１つ以上のＨＥＲレセプターとの二量体化を阻害する抗体；ペプチド二量体化インヒビター（米国特許第６，４１７，１６８号明細書）；アンチセンス二量体化インヒビター；などが挙げられる。
【００６５】
「ＨＥＲ２二量体化インヒビター」とは、ＨＥＲ２を含む二量体またはヘテロ二量体の形成を阻害する薬剤である。
【００６６】
「ＨＥＲ抗体（ＨＥＲ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」とは、ＨＥＲレセプターに結合する抗体である。必要に応じて、ＨＥＲ抗体はさらに、ＨＥＲの活性化または機能を妨害する。好ましくは、このＨＥＲ抗体は、ＨＥＲ２レセプターに結合する。本明細書において特に目的のＨＥＲ２抗体は、ペルツズマブである。ＨＥＲ２抗体の別の例は、トラスツズマブである。ＥＧＦＲ抗体の例としては、セツキシブおよびＡＢＸ０３０３が挙げられる。
【００６７】
「ＨＥＲ活性化」とは、任意の１以上のＨＥＲレセプターの活性化、またはリン酸化をいう。一般に、ＨＥＲ活性化は、シグナル伝達（例えば、ＨＥＲレセプターまたは基質ポリペプチドにおけるＨＥＲレセプターリン酸化チロシン残基の細胞内キナーゼドメインにより引き起こされる）を生じる。ＨＥＲ活性化は、目的のＨＥＲレセプターを含むＨＥＲ二量体に結合するＨＥＲリガンドによって媒介され得る。ＨＥＲ二量体に結合するＨＥＲリガンドは、二量体におけるＨＥＲレセプターの１つ以上のキナーゼドメインを活性化し得、それにより、ＨＥＲレセプターの１つ以上におけるチロシン残基のリン酸化および／またはさらなる基質ポリペプチド（類）、例えば、ＡｋｔまたはＭＡＰＫ細胞内キナーゼにおけるチロシン残基のリン酸化を生じる。例えば、図５を参照のこと。
【００６８】
「リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）」とは、ＨＥＲレセプターのようなタンパク質、またはその基質に対する１つ以上のリン酸基（類）の付加をいう。
【００６９】
「ＨＥＲ二量体化を阻害する」抗体とは、ＨＥＲ二量体の形成を阻害または妨げる抗体である。好ましくは、このような抗体は、ＨＥＲ２に対してそのヘテロ二量体結合部位で結合する。本明細書における最も好ましい二量体化阻害抗体は、ペルツズマブまたはＭＡｂ２Ｃ４である。ＨＥＲ２のヘテロ二量体結合部位に対する２Ｃ４の結合は、図４に例示される。ＨＥＲ二量体化を阻害する抗体の他の例としては、ＥＧＦＲに結合し、そしてそれと１つ以上の他のＨＥＲレセプターとの二量体化を阻害する抗体（例えば、活性なまたは未係合（ｕｎｔｅｔｈｅｒｅｄ）＠ＥＧＦＲに結合するＥＧＦＲモノクローナル抗体８０６、ＭＡｂ８０６；Ｊｏｈｎｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（２９）：３０３７５〜３０３８４（２００４））；ＨＥＲ３に結合し、そしてそれと１つ以上の他のＨＥＲレセプターとの二量体化を阻害する抗体；およびＨＥＲ４に結合し、そしてそれと１つ以上の他のＨＥＲレセプターとの二量体化を阻害する抗体が挙げられる。
【００７０】
「トラスツズマブよりも効率的にＨＥＲレセプターのリガンド活性化をブロックする」抗体とは、ＨＥＲレセプター（類）またはＨＥＲ二量体（類）のＨＥＲリガンド活性化をトラスツズマブよりも効率的に（例えば、少なくとも約２倍効率的に）軽減または排除する抗体である。好ましくは、このような抗体は、ＨＥＲレセプターのＨＥＲリガンド活性化を、マウスモノクローナル抗体２Ｃ４もしくはそのＦａｂフラグメントと、またはペルツズマブもしくはそのＦａｂフラグメントと少なくともほぼ同じ程度効率的にブロックする。当業者は、ＨＥＲ二量体を直接研究することによって、またはＨＥＲ活性化、もしくは下流のシグナル伝達（ＨＥＲ二量体化から生じる）を評価することによって、および／または抗体−ＨＥＲ２結合部位を評価することなどによって、ＨＥＲレセプターのリガンド活性化をブロックする抗体の能力を評価し得る。トラスツズマブよりも効率的にＨＥＲレセプターのリガンド活性化を阻害する能力で抗体についてスクリーニングするためのアッセイは、Ａｇｕｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２：１２７〜１３７（２００２）および米国特許第６，９４９，２４５明細書（Ａｄａｍｓら）に記載される。単なる一例として、当業者は以下についてアッセイし得る：ＨＥＲ二量体形成の阻害（例えば、Ａｇｕｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２：１２７〜１３７（２００２）の図１Ａ〜図１Ｂ；および米国特許第６，９４９，２４５号明細書を参照のこと）；ＨＥＲ二量体を発現する細胞のＨＥＲリガンド活性の減少（米国特許第６，９４９，２４５号明細書およびＡｇｕｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２：１２７〜１３７（２００２）の図２Ａ〜Ｂ、例えば）；ＨＥＲ二量体を発現する細胞に対するＨＥＲリガンド結合のブロック（米国特許第６，９４９，２４５号明細書、およびＡｇｕｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２：１２７〜１３７（２００２）の図２Ｅ、例えば）；ＨＥＲリガンドの存在（非存在）下においてＨＥＲ二量体を発現する、ガン細胞（例えば、ＭＣＦ７、ＭＤＡ−ＭＤ−１３４、ＺＲ−７５−１、ＭＤ−ＭＢ−１７５、Ｔ−４７Ｄ細胞）の細胞増殖阻害（米国特許第６，９４９，２４５号明細書およびＡｇｕｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２：１２７〜１３７（２００２）の図３Ａ−Ｄ、例えば）；下流シグナル伝達の阻害（例えば、ＨＲＧ依存性ＡＫＴリン酸化の阻害、またはＨＲＧ−もしくはＴＧＦα−依存性ＭＡＰＫリン酸化の阻害）（米国特許第６，９４９，２４５号明細書、Ａｇｕｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２：１２７〜１３７（２００２）図２Ｃ−Ｄ（例えば）を参照のこと）。当業者はまた、ＨＥＲ２に対して結合する抗体の抗体−ＨＥＲ２結合部位を、例えば、結晶構造のような構造もしくはモデルを評価することにより研究することによって、この抗体がＨＥＲ二量体化を阻害するか否かを評価し得る（例えば、Ｆｒａｎｋｌｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：３１７〜３２８（２００４）を参照のこと）。
【００７１】
ＨＥＲ２上での「ヘテロ二量体の結合部位（ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ）」とは、ＨＥＲ２の細胞外ドメインにおける領域であって、そこでの二量体の形成の際のＥＧＦＲ、ＨＥＲ３またはＨＥＲ４の細胞外ドメインにおける領域と接触するかまたは干渉する領域をいう。この領域は、ＨＥＲ２のドメインＩＩに見出される。Ｆｒａｎｋｌｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：３１７〜３２８（２００４）。
【００７２】
ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブよりも効率的に（例えば、少なくとも２倍効率的に）「ＨＲＧ依存性ＡＫＴリン酸化を阻害し得る」そして／または「ＨＲＧ−またはＴＧＦα依存性ＭＡＰＫリン酸化」を阻害し得る（１例として、Ａｇｕｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２：１２７〜１３７（２００２）および米国特許第６，９４９，２４５号明細書を参照のこと）。
【００７３】
ＨＥＲ２抗体とは、ペルツズマブのように、「ＨＥＲ２外部ドメイン切断を阻害しない」抗体であってもよい（Ｍｏｌｉｎａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：４７４４〜４７４９（２００１））。トラスツズマブは他方では、ＨＥＲ２外部ドメイン切断を阻害し得る。
【００７４】
ＨＥＲ２の「ヘテロ二量体結合部位に結合する」ＨＥＲ２抗体は、ドメインＩＩ中の残基に結合し（そして必要に応じて、ドメインＩまたはＩＩＩなどの、ＨＥＲ２の細胞外ドメインのうちの他のドメイン中の残基にも結合する）、そして少なくともある程度まで、ＨＥＲ２−ＥＧＦＲヘテロ二量体、ＨＥＲ２−ＨＥＲ３へテロ二量体またはＨＥＲ２−ＨＥＲ４ヘテロ二量体の形成を立体的に妨げ得る。Ｆｒａｎｋｌｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：３１７〜３２８（２００４）は、ＲＣＳＢタンパク質データバンク（ＩＤコード  ＩＳ７８）に登録された、ＨＥＲ２−ペルツズマブの結晶構造を特徴付けており、これは、ＨＥＲ２のヘテロ二量体結合部位に結合する例示的な抗体を示している。
【００７５】
ＨＥＲ２の「ドメインＩＩに結合する」抗体は、ドメインＩＩ中の残基に結合し、そして必要に応じて、ドメインＩまたはＩＩＩなどの、ＨＥＲ２の他のドメイン中の残基に結合する。好ましくは、ドメインＩＩに結合する抗体は、ＨＥＲ２のドメインＩ、ＩＩおよびＩＩＩの間の接合部に結合する。
【００７６】
タンパク質「発現」とは、遺伝子中にコードされる情報のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）への、次いでタンパク質への変換をいう。
【００７７】
本明細書において、目的のタンパク質（例えばＨＥＲレセプターまたはＨＥＲリガンド）を「発現する」サンプルまたは細胞とは、このタンパク質をコードするｍＲＮＡもしくはこのタンパク質（そのフラグメントを含む）が、そのサンプルもしくはその細胞中に存在することが確認されている、サンプルまたは細胞である。
【００７８】
本明細書において用いる場合、「ポリメラーゼ連鎖反応」または「ＰＣＲ」という技術は一般に、核酸、ＲＮＡおよび／またはＤＮＡの微量の特定の小片が、１９８７年７月２８日発行の米国特許第４，６８３，１９５号明細書に記載されるように増幅される手順をいう。一般には、オリゴヌクレオチドプライマーが設計できるように、目的の領域の末端から、または超えて配列情報が利用される必要がある；これらのプライマーは、配列中において、増幅されるべきテンプレートの反対側の鎖に対して同一または類似である。２つのプライマーの５’末端ヌクレオチドは、増幅物質の末端と一致し得る。ＰＣＲを用いて、特定のＲＮＡ配列、特定のＤＮＡ配列を全ゲノムＤＮＡ、全細胞ＲＮＡから転写されたｃＤＮＡ、バクテリオファージまたはプラスミド配列などから増幅してもよい。一般には、Ｍｕｌｌｉｓら、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．，５１：２６３（１９８７）；Ｅｒｌｉｃｈ，編，ＰＣＲ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９８９）を参照のこと。本明細書において用いる場合、ＰＣＲは、プライマーとして公知の核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）の使用を含む、核酸の試験サンプルを増幅するための核酸ポリメラーゼ反応方法の唯一ではないが１つの例であると考えられ、そして核酸ポリメラーゼを利用して、核酸の特定の小片を増幅もしくは生成するか、または特定の核酸に相補的である核酸の特定の小片を増幅もしくは生成する。
【００７９】
「定量的なリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応」または「ｑＲＴ−ＰＣＲ」とは、ＰＣＲ産物の量がＰＣＲ反応における各工程で測定されるＰＣＲの形態をいう。この技術は、Ｃｒｏｎｉｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６４（１）：３５〜４２（２００４）；およびＭａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：６０７〜６１６（２００４）を含む種々の刊行物で記載されている。
【００８０】
「マイクロアレイ」という用語は、基板上のハイブリッド可能なアレイエレメント、好ましくはポリヌクレオチドプローブの順序付けされた配列をいう。
【００８１】
「ポリヌクレオチド」という用語は、単数または複数で用いられる場合、一般には、任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドをいい、これは未改変のＲＮＡもしくはＤＮＡであっても、または改変されたＲＮＡもしくはＤＮＡであってもよい。従って例えば、本明細書に規定されるようなポリヌクレオチドとしては、限定はしないが、一本鎖および二本鎖のＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域を含むＤＮＡ、一本鎖および二本鎖のＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖領域を含むＲＮＡ、一本鎖であってもよくまたはさらに代表的には、二本鎖であってもよいし、または一本鎖および二本鎖領域を含むＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子が挙げられる。さらに、本明細書において用いられる場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、ＲＮＡもしくはＤＮＡ、またはＲＮＡおよびＤＮＡの両方を含む三本鎖領域をいう。このような領域の鎖は、同じ分子由来であっても、または異なる分子由来であってもよい。この領域は、この分子の１つ以上の全てを含んでもよいが、より代表的には、この分子のいくつかのうちのある領域のみを含む。三重らせん領域の分子の１つは、しばしばオリゴヌクレオチドである。「ポリヌクレオチド」という用語は詳細には、ｃＤＮＡを含む。この用語は、１つ以上の改変塩基を含むＤＮＡ（ｃＤＮＡを含む）およびＲＮＡを包含する。従って、安定性について、または他の理由について改変された骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡは、その用語が本明細書で意図されるような「ポリヌクレオチド」である。さらに、異常な塩基、例えば、イノシン、または修飾塩基、例えば、トリチウム化塩基を含むＤＮＡまたはＲＮＡが、本明細書に規定されるような「ポリヌクレオチド」という用語内に含まれる。一般には、「ポリヌクレオチド」という用語は、未修飾のポリヌクレオチドの全ての化学的、酵素的および／または代謝的に修飾された形態、ならびにウイルスおよび細胞（単純細胞および複雑型細胞を含む）のＤＮＡおよびＲＮＡ特徴の化学的形態を包含する。
【００８２】
「オリゴヌクレオチド」という用語は、比較的短いポリヌクレオチドをいい、これには、限定はしないが、一本鎖デオキシリボヌクレオチド、一本鎖または二本鎖のリボヌクレオチド、ＲＮＡ：ＤＮＡハイブリッドおよび二本鎖ＤＮＡが挙げられる。オリゴヌクレオチド、例えば、一本鎖のＤＮＡプローブオリゴヌクレオチドはしばしば、化学的方法によって、例えば、市販の自動的オリゴヌクレオチドシンセサイザーを用いて合成される。しかし、オリゴヌクレオチドは、インビトロの組み換えＤＮＡ媒介性技術を含む種々の他の方法によって、そして細胞および生物体におけるＤＮＡの発現によって作成され得る。
【００８３】
「遺伝子増幅」という句は、複数のコピーの遺伝子または遺伝子フラグメントが特定の細胞または細胞株で形成されるプロセスをいう。この複製領域（増幅ＤＮＡのストレッチ）はしばしば、「アンプリコン」と呼ばれる。通常は、生成されたメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の量はまた、発現される特定の遺伝子からなるコピー数の割合において増大する。
【００８４】
ハイブリダイゼーション反応の「ストリンジェンシー」とは、当業者によって容易に決定され、そして一般的にプローブ長、洗浄温度、および塩濃度に依存する経験的な計算である。一般に、プローブが長くなると適切なアニーリングに必要な温度が高くなるが、プローブが短くなるとそれに必要な温度は低くなる。ハイブリダイゼーションは、一般的に、相補鎖がその融点より低い環境に存在する場合に、変性ＤＮＡが再アニーリングする能力に依存する。プローブとハイブリダイゼーション配列の間で所望される相同性の程度が高くなるほど、用いることができる相対温度は高くなる。その結果、より高い相対温度は、反応条件をよりストリンジェントにさせることになり、低い温度はストリンジェントを低下させることになる。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーの更なる詳細および説明については、Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９５）を参照のこと。
【００８５】
本明細書において定義される「ストリンジェント条件」または「高ストリンジェンシー条件」とは、代表的には（１）洗浄のために低イオン強度および高温度、例えば、５０℃において０．０１５Ｍの塩化ナトリウム／０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム／０．１％のドデシル硫酸ナトリウムを使用するか；（２）ハイブリダイゼーション中に、ホルムアミドなどの変性剤、例えば、４２℃において５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドと０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％フィコール／０．１％のポリビニルピロリドン／５０ｍＭのｐＨ６．５のリン酸ナトリウム緩衝液、と７５０ｍＭの塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムを使用するか；または（３）５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５ＭのＮａＣｌ、０．０７５Ｍのクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％のピロリン酸ナトリウム、５×デンハート溶液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％ＳＤＳ、および１０％の硫酸デキストランを４２℃で使用し、４２℃における０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）および５５℃で５０％のホルムアミド、続いてＥＤＴＡを含む０．１×ＳＳＣからなる高ストリンジェンシー洗浄を５５℃で用いる。
【００８６】
「中程度のストリンジェント条件」とは、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，  １９８９に記載されているように特定され得、そして上記のストリンジェントより低ストリンジェントの洗浄溶液およびハイブリダイゼーション条件（例えば、温度、イオン強度および％ＳＤＳ）の使用を含む。中程度のストリンジェント条件の例は、２０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭのクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハート溶液、１０％硫酸デキストラン、および２０ｍｇ／ｍｌの変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中の３７℃での一晩のインキュベーション、続いて１×ＳＳＣ中で３７〜５０℃でのフィルターの洗浄の使用である。当業者は、プローブ長などの因子に適合させる必要がある場合、どのようにして温度、イオン強度等を調節するかという方法を認識する。
【００８７】
「ネイティブ配列」ポリペプチドとは、天然に由来するポリペプチド（例えば、ＨＥＲレセプターまたはＨＥＲリガンド）と同じアミノ酸配列を有するポリペプチドであり、天然に存在する改変体または対立遺伝子改変体を含む。このようなネイティブ配列ポリペプチドは、天然から単離されてもよいし、または組換え手段もしくは合成手段により生成されてもよい。従って、ネイティブ配列ポリペプチドは、天然に存在するヒトポリペプチドのアミノ酸配列を有しても、マウスポリペプチドのアミノ酸配列を有しても、または任意の他の哺乳動物種由来のポリペプチドのアミノ酸配列を有してもよい。
【００８８】
本明細書中の「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、そして具体的には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）および抗体フラグメントを、それが所望の生物学的活性を示す限り包含する。
【００８９】
本明細書中で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団由来の抗体を指し、すなわち、モノクローナル抗体の生成の間に発生し得る可能性ある改変体（このような改変体は一般に少量で存在し得る）を除いて、その抗体集団を含む個々の抗体は同一であり、そして／または同じエピトープを結合する。このようなモノクローナル抗体としては、代表的に、標的を結合するポリペプチド配列を含む抗体が挙げられ、ここで、標的結合性ポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列から、単一の標的結合性ポリペプチド配列の選択を含むプロセスによって取得された。例えば、この選択プロセスは、複数のクローン、例えば、ハイブリドーマクローンのプール、ファージクローンのプール、または組換えＤＮＡクローンのプールからの、固有のクローンの選択であってもよい。選択された標的結合性配列は、例えば、標的に対する親和性を向上させるため、標的結合性配列をヒト化させるため、細胞培養物におけるこの配列の生成を改善させるため、インビボでのその免疫原性を低減させるため、多重特異的抗体を作成するためなどのために、さらに改変されてもよいこと、そしてその変更された標的結合性配列を含む抗体もまた本発明のモノクローナル抗体であることが、理解されるべきである。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を代表的に含むポリクローナル抗体調製物と対照的に、モノクローナル抗体調製物のうちの各々のモノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。これらの特異性に加え、モノクローナル抗体調製物は、これらが代表的には他の免疫グロブリンに混入されていないという点において、有利である。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一の抗体集団から取得される場合の抗体の特徴を示し、そして任意の特定の方法による抗体の生成を必要とするものと解釈されるべきでない。例えば、本発明に従って用いられるべきモノクローナル抗体は、以下を含む、種々の技術によって作製され得る：例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）；Ｈａｒｌｏｗら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、第２版、１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３〜６８１、（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８１））、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照のこと）、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４〜６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１〜５９７（１９９１）；Ｓｉｄｈｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９〜３１０（２００４）；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３〜１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７〜１２４７２（２００４）；およびＬｅｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）���１１９〜１３２（２００４）を参照のこと）、ならびにヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリンの遺伝子座または遺伝子のうちの一部または全てを有する動物においてヒト抗体またはヒト様抗体を生成するための技術（例えば、国際公開第１９９８／２４８９３号パンフレット；国際公開第１９９６／３４０９６号パンフレット；国際公開第１９９６／３３７３５号パンフレット；国際公開第１９９１／１０７４１号パンフレット；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２：２５５〜２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ．、７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０６明細書；同第５，５６９，８２５号明細書；同第５，５９１，６６９号明細書（全てＧｅｎＰｈａｒｍ）；米国特許第５，５４５，８０７号明細書；国際公開第１９９７／１７８５２号パンフレット；米国特許第５，５４５，８０７号明細書；同第５，５４５，８０６号明細書；同第５，５６９，８２５号明細書ｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９〜７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：８５６〜８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：８１２〜８１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：８４５〜８５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：８２６（１９９６）；ならびにＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３：６５〜９３（１９９５）を参照のこと）。
【００９０】
本明細書中のモノクローナル抗体は、詳細には「キメラ」抗体であって、ここでは重鎖および／または軽鎖の一部が、特定の種に由来する抗体または特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるかまたは相同であり、一方、その鎖（単数または複数）の残りが、別の種に由来する抗体または別の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるかまたは相同であるキメラ抗体、ならびにそのような抗体のフラグメントを、これらが、所望の生物学的活性を示す限り包含する（米国特許第４，８１６，５６７号明細書およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１〜６８５５（１９８４））。本明細書中における目的のキメラ抗体としては、非ヒト霊長類（例えば、旧世界サル、類人猿など）由来の可変ドメイン抗原結合配列とヒト定常領域配列とを含む霊長類化＠抗体、ならびに「ヒト化」抗体が挙げられる。
【００９１】
非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小限の配列を含むキメラ抗体である。たいていは、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する、マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基により置換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ある場合には、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）の残基は、対応する非ヒト残基により置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にもドナー抗体中にも見出されない残基を含み得る。これらの改変は、抗体の性能をさらに改良するためになされる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つそして代表的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここでは、超可変ループのうちの全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、必要に応じて免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（代表的にはヒト免疫グロブリンの定常領域）の少なくとも一部を含む。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２〜５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３〜３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３〜５９６（１９９２）を参照のこと。
【００９２】
ヒト化ＨＥＲ２抗体としては、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−１抗体、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−２抗体、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−３抗体、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−４抗体、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−５抗体、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−６抗体、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−７抗体およびｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８抗体またはトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））（本明細書において参考として明らかに援用される、米国特許第５，８２１，３３７号明細書の表３において記載されるとおり）；ヒト化５２０Ｃ９抗体（国際公開第９３／２１３１９号パンフレット）；ならびにヒト化２Ｃ４抗体（例えば、本明細書中に記載されるペルツズマブ）が挙げられる。
【００９３】
本明細書における目的について、「トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）」、「ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）」および「ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８」とは、それぞれ、配列番号１５および１６における軽鎖アミノ酸配列および重鎖アミノ酸配列を含む抗体をいう。
【００９４】
本明細書において、「ペルツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）」および「ＯＭＮＩＴＡＲＧ（商標）」とは、それぞれ、配列番号１３および１４における軽鎖アミノ酸配列および重鎖アミノ酸配列を含む抗体をいう。
【００９５】
トラスツズマブとペルツズマブとの機能の間の相違を図６に図示する。
【００９６】
本明細書において、「インタクトな」抗体とは、２つの抗原結合領域とＦｃ領域とを含む抗体をいう。好ましくは、インタクトな抗体は、機能的なＦｃ領域を有する。
【００９７】
「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体の一部を含み、好ましくは、この抗体の抗原結合領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、およびＦｖフラグメント；二重特異的抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）；直鎖状抗体；単鎖抗体分子；ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【００９８】
「ネイティブ抗体」とは、通常、約１５０，０００ダルトンのヘテロ４量体糖タンパク質であり、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖からなる。各々の軽鎖は、共有結合性のジスルフィド結合によって重鎖に結合されるが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の間で変動する。各々の重鎖および軽鎖はまた、規則性に間隔をあけた鎖内ジスルフィド架橋を有する。各々の重鎖は、一方の末端に可変ドメイン（ＶＨ）、続いて多くの定常ドメインを有する。各々の軽鎖は、その一方の末端に可変ドメイン（ＶＬ）、そして他方の末端に定常ドメインを有する。軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第一の定常ドメインと整列され、そして軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列される。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間の境界面を形成すると考えられる。
【００９９】
「可変」という用語は、可変ドメインの特定の部分が、抗体間で広範にわたって配列が異なり、そして特定の抗体各々のその特定の抗原に対する結合および特異性において用いられるという事実をいう。しかし、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたり均等には分布されない。可変性は、軽鎖および重鎖の可変ドメインの両方における超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中する。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。ネイティブ重鎖および軽鎖の可変ドメインの各々は、４つのＦＲを含み、それらのＦＲは、大部分がβシート構造をとり、３つの超可変領域により連結され、これらの超可変領域は、βシート構造に連結するループを形成し、そして場合によっては、このβシート構造の一部を形成する。各鎖中の超可変領域は、ＦＲによって互いに近位に保持され、そして、他の鎖からの超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）を参照のこと）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接には関与しないが、種々のエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）における抗体の関与を示す。
【０１００】
本明細書中で使用される場合、「超可変領域」という用語は、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基をいう。超可変領域は一般に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２４〜３４（Ｌ１）、残基５０〜５６（Ｌ２）および残基８９〜９７（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメイン中の残基３１〜３５（Ｈ１）、残基５０〜６５（Ｈ２）および残基９５〜１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））ならびに／または「超可変ループ」由来のアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｌ１）、残基５０〜５２（Ｌ２）および残基９１〜９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｈ１）、残基５３〜５５（Ｈ２）および残基９６〜１０１（Ｈ３）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１〜９１７（１９８７））を含む。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基は、本明細書中で規定するような超可変領域の残基以外の、可変ドメイン残基である。
【０１０１】
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメント（各々、単一の抗原結合部位を有する）および残りの「Ｆｃ」フラグメント（この名前は、その容易に結晶化する能力を反映する）を生成する。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有するＦ（ａｂ’）２フラグメントを生じ、そしてこれは、依然として抗原を架橋し得る。
【０１０２】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む、最小限の抗体フラグメントである。この領域は、密接に非共有結合した１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインとの二量体からなる。この立体配置において、各可変ドメインの３つの超可変領域は相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を規定する。集団的に、この６つの可変領域は、抗体に抗原結合特異性を与える。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に対して特異的な３つの超可変領域のみを含むＦｖの半分）でさえも、結合部位全体よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識および結合する能力を有する。
【０１０３】
Ｆａｂフラグメントもまた、軽鎖の定常ドメインと、重鎖の第一定常ドメイン（ＣＨ１）とを含む。Ｆａｂ＝フラグメントは、抗体のヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含む、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端における２〜３残基の付加によって、Ｆａｂフラグメントと異なる。Ｆａｂ’−ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基が少なくとも１つの遊離したチオール基を保有するＦａｂ’についての、本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、元々、間にヒンジシステインを有する一対のＦａｂ’フラグメントとして生成された。抗体フラグメントの他の化学的カップリングもまた、公知である。
【０１０４】
任意の脊椎動物種由来の抗体の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２つの明確に区別される型（カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる）のうちの１つに割り当てられ得る。
【０１０５】
本明細書において「Ｆｃ領域」という用語を用いて、ネイティブ配列のＦｃ領域および改変体Ｆｃ領域を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定する。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６位またはＰｒｏ２３０位のアミノ酸残基からそのＣ末端までに広がるように規定される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付けシステムに従った残基４４７）は、例えば、抗体の産生もしくは精製の間に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することによって、取り除かれ得る。従って、インタクトな抗体の組成物は、全てＫ４４７残基が除かれた抗体集団、Ｋ４４７残基が除かれていない抗体集団、およびＫ４４７残基を有する抗体とＫ４４７残基を有しない抗体との混合物を有する抗体集団を含み得る。
【０１０６】
他に示されない場合、本明細書における免疫グロブリン重鎖における残基の番号付けは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）（これは、本明細書中で参考として明らかにに援用される）におけるＥＵ指数の番号付けである。この「ＫａｂａｔにおけるＥＵ指数」とは、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基番号付けをいう。
【０１０７】
「機能性Ｆｃ領域」は、ネイティブ配列のＦｃ領域の「エフェクター機能」を保有する。例示的な「エフェクター機能」としては、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害性；Ｆｃレセプター結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面レセプター（例えば、Ｂ細胞レセプター；ＢＣＲ）の下方制御、などが挙げられる。このようなエフェクター機能には、一般的に、結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）とＦｃ領域とが結合されることを必要とし、そして例えば、本明細書において開示される種々のアッセイを使用して評価され得る。
【０１０８】
「ネイティブ配列のＦｃ領域」は、天然に見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。ネイティブ配列のヒトＦｃ領域としては、ネイティブ配列のヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域（非ＡアロタイプおよびＡアロタイプ）；ネイティブ配列のヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域；ネイティブ配列のヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域；およびネイティブ配列のヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域、ならびに天然に存在するこれらの改変体が挙げられる。
【０１０９】
「改変体Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸改変、好ましくは、１つ以上のアミノ酸置換のせいでネイティブ配列のＦｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、改変体Ｆｃ領域は、ネイティブ配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域に対して比較すると、少なくとも１つのアミノ酸置換（例えば、ネイティブ配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域において、約１〜約１０個のアミノ酸置換、そして好ましくは、約１〜約５個のアミノ酸置換）を有する。本明細書において、改変体Ｆｃ領域は、好ましくは、ネイティブ配列のＦｃ領域および／または親ポリペプチドのＦｃ領域と、少なくとも約８０％の相同性を有し、そして最も好ましくはそれらと少なくとも約９０％の相同性を有し、より好ましくはそれらと少なくとも約９５％の相同性を有する。
【０１１０】
それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、インタクトな抗体は、異なるクラス＠に分類され得る。５つの主なクラスのインタクトな抗体：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが存在し、そしてそれらのいくつかは、さらにサブクラス＠（アイソタイプ）例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡおよびＩｇＡ２に分類され得る。それらの異なるクラスの抗体に対応する重鎖定常ドメインは、各々、α、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元立体配置は周知である。
【０１１１】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」および「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が、標的細胞上の結合抗体を認識しそして引き続きその標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応をいう。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７〜９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約される。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号明細書または同第５，８２１，３３７号明細書に記載されるようなインビトロＡＤＣＣアッセイが実施され得る。このようなアッセイのための有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、またはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボ（例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ），９５：６５２〜６５６（１９９８）において開示されるような動物モデルにおいて）で評価され得る。
【０１１２】
「ヒトエフェクター細胞」とは、１つ以上のＦｃＲを発現しそしてエフェクター機能を果たす白血球である。好ましくは、この細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、そしてＡＤＣＣエフェクター機能を果たす。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞および好中球が挙げられ；ＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が好ましい。エフェクター細胞は、そのネイティブな供給源から、例えば、本明細書中に記載されるように血液またはＰＢＭＣから、単離され得る。
【０１１３】
「Ｆｃレセプター」または「ＦｃＲ」という用語は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを記載するために使用される。好ましいＦｃＲは、ネイティブ配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（γレセプター）を結合するＦｃＲであり、そしてこれらとしては、ＦｃγＲＩサブクラスのレセプター、ＦｃγＲＩＩサブクラスのレセプターおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスのレセプター（これらのレセプターの対立遺伝子改変体および選択的スプライシングされた形態を含む）が挙げられる。ＦｃγＲＩＩレセプターとしては、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化レセプター」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害レセプター」）が挙げられ、これらは、そのレセプターの細胞質ドメイン中で主に異なる、類似するアミノ酸配列を有する。活性化レセプターであるＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン中に免疫レセプターチロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害レセプター（ＦｃγＲＩＩＢ）は、その細胞質ドメイン中に免疫レセプターチロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む。（総説Ｍ．Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５：２０３−２３４（１９９７）を参照のこと）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４（１９９４）；ならびにｄｅ  Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，１２６：３３０−４１（１９９５）に概説される。他のＦｃＲ（将来同定されるＦｃＲを含む）は、本明細書中の用語「ＦｃＲ」によって包含される。この用語はまた、胎児への母性ＩｇＧの移行を担い（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：２４９（１９９４））、免疫グロブリンのホメオスタシスを調節する、新生児レセプター（ＦｃＲｎ）を含む。
【０１１４】
「補体依存性細胞傷害性」または「ＣＤＣ」は、補体の存在下で標的を溶解する分子の能力をいう。補体活性化経路は、同族抗原と複合体化された分子（例えば、抗体）への、補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）の結合により開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３（１９９６）に記載されるようなＣＤＣアッセイを行ってもよい。
【０１１５】
「単鎖Ｆｖ」抗体フラグメントまたは「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含み、ここでこれらのドメインは、一本のポリペプチド鎖中に存在する。好ましくは、このＦｖポリペプチドは、このｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間のポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの総説については、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，第１１３巻，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２６９〜３１５頁（１９９４）中のＰｌｕｅｃｋｔｈｕｎを参照のこと。ＨＥＲ２抗体のｓｃＦｖフラグメントは、国際公開第９３／１６１８５号パンフレット；米国特許第５，５７１，８９４号明細書；および米国特許第５，５８７，４５８号明細書に記載される。
【０１１６】
「二重特異的抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体フラグメントをいい、このフラグメントは、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）中に可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）に連結されている可変重鎖ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上のこの２つのドメイン間で対形成させるには短すぎるリンカーを用いることによって、これらのドメインを別の鎖の相補ドメインと対形成させ、そして２つの抗原結合部位を作製する。二重特異的抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）は、例えば、欧州特許第４０４，０９７号明細書；国際公開第９３／１１１６１号パンフレット；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４〜６４４８（１９９３）において、さらに詳細に記載されている。
【０１１７】
「裸抗体」とは、細胞傷害性部分または放射性標識のような異種分子にはコンジュゲートされない、抗体である。
【０１１８】
「単離（された）」抗体とは、その天然の環境の成分から同定されそして分離および／または回収された抗体である。その天然の環境の混入物成分は、その抗体についての診断的用途または治療的用途を妨害する物質であり、そしてこれらとしては、酵素、ホルモン、および他のタンパク質様の溶質または非タンパク質様の溶質が挙げられ得る。好ましい実施形態において、抗体は、（１）ローリー法によって測定した場合に、９５重量％を超える抗体にまで、そして最も好ましくは、９９重量％を超えるまでに精製されるか、（２）スピニングカップ（ｓｐｉｎｎｉｎｇ  ｃｕｐ）配列決定装置の使用により、少なくとも１５残基のＮ末端アミノ酸配列または内部アミノ酸配列を得るに十分な程度まで精製されるか、あるいは（３）クーマシーブルー染色または好ましくは銀染色を用いる、還元条件下または非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均一まで精製される。単離された抗体は、組換え細胞内においてインサイチュでその抗体を含む。なぜなら、その抗体の天然環境の少なくとも１つの成分は存在していないからである。しかし、通常には、単離された抗体は、少なくとも１回の精製工程によって調製される。
【０１１９】
「親和性成熟した」抗体とは、その１つ以上の超可変領域中に１つ以上の変異を有する抗体であって、このことが、これら変異を有しない親抗体と比較して抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらしている。好ましい親和性成熟した抗体は、標的抗原に対してナノモル濃度またはさらにピコモル濃度の親和性を有する。親和性成熟した抗体は、当該分野で公知である手順によって生成される。Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９〜７８３（１９９２）は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインのシャッフリングによる親和性成熟を記載する。ＣＤＲ残基および／またはフレームワーク残基のランダム変異誘発が、以下によって記載される：Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ、ＵＳＡ  ９１：３８０９〜３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ  １６９：１４７〜１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４〜２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０〜９（１９９５）；およびＨａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９〜８９６（１９９２）。
【０１２０】
本明細書における「主要種の抗体（ｍａｉｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、組成物中で量的に優勢な抗体分子である、組成物中の抗体構造をいう。一実施形態において、主要種の抗体はＨＥＲ２抗体、例えば、ＨＥＲ２のドメインＩＩに結合する抗体、トラスツズマブよりも効率的にＨＥＲ二量体化を阻害する抗体、および／またはＨＥＲ２のヘテロ二量体化結合に結合する抗体である。本明細書における、主要種の抗体の好ましい実施形態は、配列番号３および配列番号４における可変軽鎖および可変重鎖のアミノ酸配列を含む、そして最も好ましくは配列番号１３および１４（ペルツズマブ）における軽鎖および重鎖アミノ酸配列を含むものである。
【０１２１】
本明細書における「アミノ酸配列改変体」抗体とは、主要種の抗体とは異なるアミノ酸配列を有する抗体である。通常、アミノ酸配列改変体は、この主要種の抗体と少なくとも約７０％の相同性を有し、そして好ましくは、これらは主要種の抗体と、少なくとも約８０％の相同性、より好ましくは少なくとも約９０％の相同性を有する。アミノ酸配列改変体は、主要種の抗体のアミノ酸配列内の特定の位置またはそのアミノ酸配列に近接する特定の位置に、置換、欠失、および／または付加を有する。本明細書におけるアミノ酸配列改変体の例としては、酸性改変体（例えば、脱アミノ化抗体改変体）、塩基性改変体、その抗体の１つまたは２つの軽鎖においてアミノ末端リーダー伸長（例えば、ＶＨＳ−）を有する抗体、その抗体の１つまたは２つの重鎖においてＣ末端リジン残基を有する抗体、などが挙げられ、そして重鎖および／または軽鎖のアミノ酸配列に対する改変の組み合わせが挙げられる。本明細書における特定の目的の抗体改変体とは、その１つまたは２つの軽鎖上にアミノ末端リーダー伸長を含み、必要に応じてさらに、主要種の抗体に対して他のアミノ酸配列および／またはグリコシル化相違を含む抗体である。
【０１２２】
本明細書における「グリコシル化改変体」抗体とは、主要種の抗体に対して結合された１つ以上の炭水化物部分と異なる、この抗体に対して結合された１つ以上の炭水化物部分を有する抗体である。本明細書におけるグリコシル化改変体の例としては、この抗体のＦｃ領域に結合されたＧ０オリゴ糖構造の代わりにＧ１オリゴ糖構造またはＧ２オリゴ糖構造を有する抗体、抗体の１つまたは２つの軽鎖に結合された１つまたは２つの炭水化物部分を有する抗体、抗体の１つまたは２つの重鎖に結合される炭水化物を有さない抗体、など、ならびにグリコシル化改変の組み合わせが挙げられる。
【０１２３】
抗体がＦｃ領域を有する場合、オリゴ糖構造が、その抗体の１つまたは２つの重鎖に、例えば、残基２９９（残基のＥｕ番号付けで２９８）に結合され得る。ペルツズマブについては、Ｇ０は、優勢なオリゴ糖構造であり、他のオリゴ糖構造、例えば、Ｇ０−Ｆ、Ｇ−１、Ｍａｎ５、Ｍａｎ６、Ｇ１−１、Ｇ１（１−３）およびＧ２が、ペルツズマブ組成物中では少ない量で見いだされている。
【０１２４】
他に示さない限り、本明細書におけるＡＧ１オリゴ糖構造＠は、Ｇ−１、Ｇ１−１、Ｇ１（１−６）およびＧ１（１−３）構造を含む。
【０１２５】
「アミノ末端リーダー伸長」とは、本明細書において、抗体の任意の１つ以上の重鎖または軽鎖のアミノ末端に存在するアミノ末端リーダー配列の１つ以上のアミノ酸残基をいう。例示的なアミノ末端リーダー伸長は、抗体改変体の１方または両方の軽鎖に存在する３つのアミノ酸残基ＶＨＳを含むかそれからなる。
【０１２６】
「脱アミノ化（ｄｅａｍｉｎａｔｅｄ）」抗体とは、その抗体の１つ以上のアスパラギン残基が、例えば、アスパラギン酸、スクシンイミド、またはイソアスパラギン酸に誘導体化されている抗体である。
【０１２７】
「癌、ガン（ｃａｎｃｅｒ）」および「癌性、ガンの（ｃａｎｃｅｒｏｕｓ）」という用語は、代表的には制御されない細胞増殖を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指すか記述する。ガンの例としては、限定はしないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫（髄芽腫および網膜芽細胞腫を含む）、肉腫（脂肪肉腫および滑膜細胞肉腫を含む）、神経内分泌腫瘍（カルチノイド腫瘍、ガストリノーマおよび島細胞癌を含む）、中皮腫、神経鞘腫（聴神経腫を含む）、髄膜腫、腺ガン、黒色腫、および白血病またはリンパ系悪性疾患が挙げられる。このようなガンのさらに詳細な例としては、扁平上皮ガン（例えば上皮扁平上皮ガン）、小細胞肺ガン（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺ガン（ＮＳＣＬＣ）、肺腺ガンおよび肺扁平上皮ガンを含む肺ガン、腹膜癌、肝細胞癌、消化管癌を含む胃癌、膵臓癌、神経膠芽腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、ヘパトーマ、乳癌（転移性乳癌を含む）、結腸癌、直腸癌、直腸結腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、精巣癌、食道癌、胆道腫瘍、ならびに頭頚部癌が挙げられる。
【０１２８】
「進行性の（ａｄｖａｎｃｅｄ）」ガンとは、本来の部位または器官の外側に、局所浸潤または転移のいずれかによって広がったガンである。
【０１２９】
「難治性、不応性、抗療性（ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ）」ガンとは、化学療法剤などの抗腫瘍剤がそのガン患者に投与されているにもかかわらず進行するガンである。難治性のガンの例は、白金不応性のガンである。
【０１３０】
「再発性の」ガンとは、初回治療に応答後に、当初の部位または遠隔部位のいずれかで再成長したガンである。
【０１３１】
本明細書において、「患者」とはヒト患者である。この患者はガン患者＠、すなわちガンの１つ以上の症状に罹患しているか、またはそれに罹患するリスクのある患者である。
【０１３２】
本明細書における「腫瘍サンプル」は、患者の腫瘍由来のサンプルであるか、またはその腫瘍由来の腫瘍細胞を含むサンプルである。本明細書における腫瘍サンプルの例としては、限定はしないが、腫瘍生検、循環している腫瘍細胞、循環している血漿タンパク質、腹水、腫瘍由来の、または腫瘍様性質を示す初代細胞培養物または細胞系、ならびにホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍サンプルまたは凍結腫瘍サンプルなどの保存処理された腫瘍サンプルが挙げられる。
【０１３３】
「固定された」腫瘍サンプルとは、固定剤を用いて組織学的に保存処理されているンプルである。
【０１３４】
「ホルマリン固定された」腫瘍サンプルとは、固定剤としてホルムアルデヒドを用いて保存処理されているサンプルである。
【０１３５】
「包埋された」腫瘍サンプルとは、パラフィン、ろう、セロイジン、または樹脂などの堅固で一般的に硬い媒質により囲まれたサンプルである。包埋によって、顕微鏡検査用または組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）作成用の薄切片を切り出すことが可能になる。
【０１３６】
「パラフィン包埋」腫瘍サンプルは、石油由来の固体炭化水素の精製混合物に囲まれたサンプルである。
【０１３７】
本明細書において、「凍結」腫瘍サンプルとは、凍結しているか、または凍結された腫瘍サンプルを指す。
【０１３８】
「ＨＥＲの発現、増幅、または活性化を示す」ガンまたは生物学的サンプルとは、診断検査において（過剰発現を含めて）ＨＥＲレセプターを発現し、ＨＥＲ遺伝子を増幅しており、そして／またはその他の方法でＨＥＲレセプターの活性化もしくはリン酸化を示すものである。
【０１３９】
「ＨＥＲの活性化を示す」ガンまたは生体サンプルとは、診断検査においてＨＥＲレセプターの活性化またはリン酸化を示すものである。このような活性化は、（例えばＥＬＩＳＡによりＨＥＲのリン酸化を測定することによって）直接、または（本明細書に記載された遺伝子発現プロファイリングによって、またはＨＥＲのヘテロ二量体を検出することによって）間接的に決定することができる。
【０１４０】
本明細書において、「遺伝子発現プロファイリング」とは、ＨＥＲのリン酸化を直接決定するための代用として１つ以上の遺伝子の発現を評価することを指す。
【０１４１】
本明細書における「ホスホ−ＥＬＩＳＡアッセイ」とは、試薬、通常は抗体を用いる酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）で１つ以上のレセプターＨＥＲ、特にＨＥＲ２のリン酸化を評価し、リン酸化されたレセプターＨＥＲ、基質、または下流のシグナル伝達分子を検出するアッセイである。好ましくは、リン酸化ＨＥＲ２を検出する抗体が使用される。好ましくは新鮮または凍結の生物学的なサンプル由来の細胞溶解液を用いてこのアッセイを行ってもよい。
【０１４２】
「レセプターＨＥＲの過剰発現または増幅」を伴うガン細胞は、同じ組織型の非ガン性細胞に比べて、有意に高レベルのレセプターＨＥＲタンパク質または遺伝子を有するガン細胞である。このような過剰発現は、遺伝子増幅によって、または転写もしくは翻訳の増加によって引き起こすことができる。ＨＥＲレセプターの過剰発現または増幅は、細胞表面に存在するＨＥＲタンパク質のレベル増大を評価することによって、診断または予後アッセイで（例えば免疫組織化学アッセイ（ＩＨＣ）により）決定してもよい。あるいは、またはさらに、例えば、蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ；１９９８年１０月公開の国際公開第９８／４５４７９号パンフレットを参照のこと）、サザンブロット、またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術（定量リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）など）によって、細胞中のＨＥＲをコードしている核酸のレベルを測定してもよい。血清などの生物学的な液体中のシェディングされた（ｓｈｅｄ）抗原（例えばＨＥＲ細胞外ドメイン）を測定することによって、ＨＥＲレセプターの過剰発現または増幅を研究することもできる（例えば、１９９０年６月１２日発行の米国特許第４，９３３，２９４号明細書；１９９１年４月１８日公開の国際公開第９１／０５２６４号パンフレット；１９９５年３月２８日発行の米国特許第５，４０１，６３８号明細書；およびＳｉａｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １３２：７３〜８０（１９９０）を参照のこと）。上記アッセイの他に、様々なインビボのアッセイが当業者に利用できる。例えば検出可能な標識、例えば放射性同位体で必要に応じて標識された抗体に、患者の体内の細胞を曝露して、例えば放射能を外部スキャンすることにより、またはその抗体に予め曝露された患者から採取した生検を分析することにより、その患者の細胞に対する抗体の結合を評価してもよい。
【０１４３】
逆に、「ＨＥＲレセプターを過剰発現も増幅もしない」ガンとは、同じ組織型の非ガン性細胞に比べて正常レベルよりも高いレセプターＨＥＲタンパク質も遺伝子も有さないガンである。ペルツズマブなどのＨＥＲ二量体化を阻害する抗体を使用して、レセプターＨＥＲ２を過剰発現も増幅もしないガンを処置してもよい。
【０１４４】
本明細書において、「制癌剤、抗腫瘍剤（ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ａｇｅｎｔ）」とは、ガンを処置するために使用される薬物を指す。本明細書における抗腫瘍剤の非限定的な例には、化学療法剤、ＨＥＲ二量体化インヒビター、ＨＥＲ抗体、腫瘍関連抗原に対する抗体、抗ホルモン化合物、サイトカイン、ＥＧＦＲ標的薬、抗血管形成剤、チロシンキナーゼインヒビター、成長阻害剤および成長阻害抗体、細胞傷害薬、アポトーシスを誘導する抗体、ＣＯＸインヒビター、ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター、ガン胎児タンパク質ＣＡ１２５と結合する抗体、ＨＥＲ２ワクチン、Ｒａｆインヒビターまたはｒａｓインヒビター、リポソームドキソルビシン、トポテカン、タキサン、二重（ｄｕａｌ）チロシンキナーゼインヒビター、ＴＬＫ２８６、ＥＭＤ−７２００、ペルツズマブ、トラスツズマブ、エルロチニブ、およびベバシズマブが挙げられる。
【０１４５】
「承認（認可）された抗腫瘍剤（ａｐｐｒｏｖｅｄ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ａｇｅｎｔ）」とは、食品医薬品局（ＦＤＡ）または外国の同等機関などの監督機関により販売許可を与えられた、ガンを処置するために使用される薬物である。
【０１４６】
ＨＥＲ二量体化インヒビターが「単一抗癌剤」として投与される場合、そのインヒビターはそのガンを処置するために投与される唯一の抗癌剤であり、すなわちそのインヒビターは化学療法剤などの別の抗癌剤と組み合わせては投与されない。
【０１４７】
本明細書における「標準的治療、診療標準（ｓｔａｎｄａｒｄ  ｏｆ  ｃａｒｅ）」とは、特定の形態のガンを処置するために日常的に使用される抗癌剤（単数または複数）を意味する。例えば、白金耐性卵巣ガンについて、標準的治療はトポテカンまたはリポソームドキソルビシンである。
【０１４８】
本明細書に使用される場合の「成長インヒビター剤、成長阻害剤（ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔ）」とは、細胞、特にＨＥＲ発現ガン細胞の成長をインビトロまたはインビボのいずれかで阻害する化合物または組成物を指す。このように、成長インヒビター剤は、Ｓ期のＨＥＲ発現細胞の割合を有意に低減する薬剤でありうる。成長インヒビター剤の例としては、Ｇ１停止およびＭ期停止を誘導する薬剤などの、細胞周期の進行を（Ｓ期以外の位置で）遮断する薬剤が挙げられる。古典的Ｍ期遮断薬としては、ビンカ（ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、タキサン、ならびにドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、およびブレオマイシンなどのトポＩＩインヒビターが挙げられる。Ｇ１で停止させる薬剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、およびａｒａ−ＣなどのＤＮＡアルキル化剤は、Ｓ期停止にも波及する。さらなる情報は、Ｔｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，  Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ  ａｎｄ  Ｉｓｒａｅｌ編集の、Ｍｕｒａｋａｍｉらによる「Ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，  ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，  ａｎｄ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ」（ＷＢ  Ｓａｕｎｄｅｒｓ：  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  １９９５）と題した第１章、特に１３頁に見出すことができる。
【０１４９】
「成長阻害（ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ）」抗体の例は、ＨＥＲ２に結合し、ＨＥＲ２を過剰発現しているガン細胞の成長を阻害する抗体である。好ましい成長阻害ＨＥＲ２抗体は、約０．５から３０μｇ／ｍｌの抗体濃度で、細胞培養でのＳＫ−ＢＲ−３乳房腫瘍細胞の成長を２０％よりも大きく、好ましくは５０％よりも大きく（例えば、約５０％から約１００％）阻害し、ここでこの成長阻害は、抗体にＳＫ−ＢＲ−３細胞を曝露した６日間後に決定される（１９９７年１０月１４日発行の米国特許第５，６７７，１７１号明細書を参照のこと）。このＳＫ−ＢＲ−３細胞成長阻害アッセイは、その特許および本明細書の下記にさらに詳細に記載されている。好ましい成長阻害抗体は、マウスモノクローナル抗体４Ｄ５のヒト化改変体、例えばトラスツズマブである。
【０１５０】
「アポトーシスを誘導する」抗体とは、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の拡大、細胞の断片化、および／または膜小胞（アポトーシス小体と呼ばれる）の形成によって決定されるようなプログラムされた細胞死を誘導する抗体である。この細胞は、通常、レセプターＨＥＲ２を過剰発現する細胞である。好ましくは、この細胞は、腫瘍細胞、例えば、乳房細胞、卵巣細胞、胃細胞、子宮内膜細胞、唾液腺細胞、肺細胞、腎臓細胞、結腸細胞、甲状腺細胞、膵臓細胞、または膀胱細胞である。インビトロでは、この細胞は、ＳＫ−ＢＲ−３細胞、ＢＴ４７４細胞、Ｃａｌｕ３細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−３６１細胞、またはＳＫＯＶ３細胞であり得る。アポトーシスに関連する細胞事象を評価するために様々な方法が利用できる。例えば、アネキシンの結合によってホスファチジルセリン（ＰＳ）の移行を測定してもよく；ＤＮＡラダー生成によってＤＮＡの断片化を評価してもよく；そして低二倍体細胞の任意の増加によってＤＮＡの断片化と同時に核／クロマチンの凝縮を評価してもよい。好ましくは、アポトーシスを誘導する抗体とは、ＢＴ４７４細胞を用いたアネキシン結合アッセイにおいて、未処理細胞と比較して約２から５０倍、好ましくは約５から５０倍、最も好ましくは約１０から５０倍のアネキシン結合の誘導を招く抗体である（以下参照）。アポトーシスを誘導するＨＥＲ２抗体の例は、７Ｃ２および７Ｆ３である。
【０１５１】
「エピトープ２Ｃ４」とは、抗体２Ｃ４が結合する、ＨＥＲ２の細胞外ドメイン中の領域である。２Ｃ４エピトープに結合する抗体についてスクリーニングするために、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されているような慣用的な交差遮断（ｃｒｏｓｓ−ｂｌｏｃｋｉｎｇ）アッセイを行ってもよい。好ましくは、この抗体は、ＨＥＲ２に対する２Ｃ４の結合を約５０％以上ブロックする。あるいは、エピトープマッピングを行って、その抗体がＨＥＲ２の２Ｃ４エピトープに結合するかどうかを評価してもよい。エピトープ２Ｃ４は、ＨＥＲ２の細胞外ドメイン中のドメインＩＩ由来残基を含む。２Ｃ４およびペルツズマブは、ドメインＩ、ＩＩ、およびＩＩＩの結合部でＨＥＲ２の細胞外ドメインに結合する。Ｆｒａｎｋｌｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：３１７〜３２８（２００４）。
【０１５２】
「エピトープ４Ｄ５」は、ＨＥＲ２の細胞外ドメイン中の、抗体４Ｄ５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１０４６３）およびトラスツズマブが結合する領域である。このエピトープはＨＥＲ２の膜貫通ドメインに近接しており、ＨＥＲ２のドメインＩＶ内である。４Ｄ５エピトープに結合する抗体についてスクリーニングするために、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されているような日常的な交差遮断アッセイを行ってもよい。あるいは、エピトープマッピングを行って、その抗体がＨＥＲ２の４Ｄ５エピトープ（例えば、ＨＥＲ２  ＥＣＤの約５２９番残基から約６２５番残基まで、両端の残基を含めた領域における任意の１つ以上の残基、残基の付番にはシグナルペプチドを含める）に結合するかどうかを評価してもよい。
【０１５３】
「エピトープ７Ｃ２／７Ｆ３」は、７Ｃ２抗体および／または７Ｆ３抗体（それぞれＡＴＣＣに寄託、以下を参照のこと）が結合する、ＨＥＲ２の細胞外ドメインのドメインＩ内のＮ末端の領域である。７Ｃ２／７Ｆ３エピトープに結合する抗体についてスクリーニングするために、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されているような慣用的な交差遮断アッセイを行ってもよい。あるいは、その抗体がＨＥＲ２上の７Ｃ２／７Ｆ３エピトープ（例えば、ＨＥＲ２  ＥＣＤの約２２番残基から約５３番残基までの領域中の任意の１つ以上の残基、残基の付番にはシグナルペプチドを含める）に結合するか否かを確認するために、エピトープマッピングを行ってもよい。
【０１５４】
「処置」とは、治療的処置および予防措置または阻止措置の両方をいう。処置を必要とする者には、すでにそのガンを有する者およびそのガンが予防されるべき者が包含される。従って、本明細書において処置されるべき患者とは、ガンを有すると診断されたことがあってもよいし、または、ガンの素因があるか、もしくはガンに感受性であってもよい。
【０１５５】
「有効量」という用語は、患者におけるガンを処置するために有効な薬物の量を指す。その薬物の有効量は、ガン細胞数を減少させ；腫瘍の大きさを低減し；末梢器官へのガン細胞の浸潤を阻害し（すなわちある程度減速させて、好ましくは停止させ）；腫瘍の転移を阻害し（すなわちある程度減速させて、好ましくは停止させ）；腫瘍の成長をある程度阻害し；かつ／またはガンに関連した１つ以上の症状をある程度軽減し得る。薬物が成長を阻止して、かつ／または現存しているガン細胞を殺滅できる程度に、有効量は細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性であってもよい。有効量は、（例えば、固形腫瘍効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）またはＣＡ−１２５の変化によって測定されるような）無増悪生存を延長し、（部分奏効（ＰＲ）または完全奏効（ＣＲ）を含めた）客観的奏効を招き、全生存時間を増大させ、そして／または（ＦＯＳＩによって評価されるような）ガンの１つ以上の症状を改善し得る。
【０１５６】
本明細書で用いる場合「細胞傷害薬（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｇｅｎｔ）」という用語は、細胞の機能を阻害もしくは阻止し、かつ／または細胞の破壊を起こす物質を指す。この用語は、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２およびＬｕの放射性同位体）、化学療法剤、および細菌、真菌、植物、または動物起源の低分子毒素または酵素的に活性な毒素などの毒素を、そのフラグメントおよび／または変異体を含めて包含することを意味する。
【０１５７】
「化学療法剤」とは、ガンの処置に有用な化合物である。化学療法剤の例としては、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミドなどのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファンなどのアルキルスルホネート；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、およびトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミンおよびメチルメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；ＴＬＫ２８６（ＴＥＬＣＹＴＡ（商標））；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；δ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成アナログであるトポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、および９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、およびビゼレシン合成アナログを含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；テニポシド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；ズオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）（合成アナログＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エロイテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベンビキン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソ尿素、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）；クロドロネートなどのビスホスホン酸塩；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンガンマ１ＩおよびカリケアマイシンオメガＩ１（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．  Ｅｄ．  Ｅｎｇｌ．，３３：１８３〜１８６（１９９４）を参照のこと））およびアントラサイクリン、例えば、アンナマイシン、ＡＤ３２、アルカルビシン（ａｌｃａｒｕｂｉｃｉｎ）、ダウノルビシン、デキストラゾキサン（ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ）、ＤＸ−５２−１、エピルビシン、ＧＰＸ−１００、イダルビシン、ＫＲＮ５５００、メノガリル、ジネマイシン（ジネマイシンＡを含む）、エスペラマイシン、ネオカルジノスタチン発色団および関係する色素タンパク質エンジイン��生物質発色団、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アウスラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エソルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、およびゾルビシン；葉酸アナログ、例えば、デノプテリン、プテロプテリン、およびトリメトレキサート；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、およびチオグアニン；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、およびフロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、およびテストラクトン；抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、およびトリロスタン；ホリニン酸（ロイコボリン）などの葉酸補給剤；アセグラトン；葉酸代謝拮抗抗悪性腫瘍薬、例えば、ＡＬＩＭＴＡ（登録商標）、ＬＹ２３１５１４、ペメトレキセド、ジヒドロ葉酸還元酵素インヒビター、例えば、メトトレキサート、代謝拮抗物質、例えば、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）およびそのプロドラッグ、例えば、ＵＦＴ、Ｓ１およびカペシタビン、ならびにチミジル酸シンターゼインヒビターおよびグリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼインヒビター、例えば、ラルチトレキセド（ＴＯＭＵＤＥＸ（商標）、ＴＤＸ）；ジヒドロピリミジンデヒドロゲナーゼのインヒビター、例えば、エニルウラシル；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デホファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジクオン；エルホルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシノイド、例えば、メイタンシンおよびアンサミトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ７多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラ���キサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２毒素、ベラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジンＡ、およびアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））：ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイドおよびタキサン、例えば、ＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、パクリタキセルのＣｒｅｍｏｐｈｏｒフリーのアルブミン加工ナノ粒子処方物であるＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドセタキセル（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル；ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））；６−チオグアニン；メルカプトプリン；プラチナ；プラチナアナログまたはプラチナベースアナログ、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチン；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；ビンカアルカロイド；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；上記いずれかの薬学的に受容可能な塩、酸、または誘導体；ならびに上記の２つ以上の組み合わせ、例えば、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法についての略語）およびＦＯＬＦＯＸ（オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））と５−ＦＵおよびロイコボリンとを組合せて用いた処置レジメンについての略語）が挙げられる。
【０１５８】
腫瘍に及ぼすホルモンの作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、抗エストロゲンおよび選択的エストロゲンレセプターモジュレーター（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）（ＳＥＲＭ）も本定義に含まれ、これらとしては、例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）トレミフェン；副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼインヒビター、例えば４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）酢酸メゲストロール、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）エキセメスタン、ホルメスタン、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）ボロゾール、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）レトロゾール、およびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）アナストロゾールなど；ならびに抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリン；ならびにトロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に例えばＰＫＣ−α、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、および上皮成長因子レセプター（ＥＧＦ−Ｒ）などの、接着性細胞増殖に関係するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチド；ワクチン、例えば、遺伝子治療ワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、およびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼ１インヒビター；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；ならびに前記いずれかの薬学的に受容可能な塩、酸、または誘導体が挙げられる。
【０１５９】
「代謝拮抗化学療法剤（ａｎｔｉｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）」とは、代謝物に構造的に類似しているが、生産的方法で身体によって用いられることができない薬剤である。多くの代謝拮抗化学療法剤は、核酸、ＲＮＡおよびＤＮＡの産生を妨害する。代謝拮抗化学療法剤の例としては、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（商標））、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、６−チオグアニン、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、アラビノシルシトシン（ＡＲＡ−Ｃ、シタラビン）（ＣＹＴＯＳＡＲ−Ｕ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＩＴＣ−ＤＯＭＥ（登録商標））、アゾシトシン（ａｚｏｃｙｔｏｓｉｎｅ）、デオキシシトシン、ピリドミデン（ｐｙｒｉｄｍｉｄｅｎｅ）、フルダラビン（ＦＬＵＤＡＲＡ（登録商標））、クラドラビン、２−デオキシ−Ｄ−グルコースなどが挙げられる。好ましい代謝拮抗化学療法剤は、ゲムシタビンである。
【０１６０】
「ゲムシタビン」すなわち「２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロシチジン一塩酸塩（ｂ−異性体）」は、抗腫瘍活性を示すヌクレオシドアナログである。ゲムシタビンＨＣｌの実験式は、Ｃ９Ｈ１１Ｆ２Ｎ３Ｏ４  Ａ  ＨＣｌである。ゲムシタビンＨＣｌは、ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）の商標でＥｌｉ  Ｌｉｌｌｙにより販売されている。
【０１６１】
「白金系（ベースの）化学療法剤（ｐｌａｔｉｎｕｍ−ｂａｓｅｄ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）」とは、分子の構成部分としてプラチナを含有する有機化合物を含む。白金ベースの化学療法剤の例としては、カルボプラチン、シスプラチン、およびオキサリプラチンが挙げられる。
【０１６２】
「白金系化学療法」とは、１つ以上の白金ベースの化学療法剤を、必要に応じて１つ以上のその他の化学療法剤と組み合わせた治療を意味する。
【０１６３】
「化学療法耐性」ガンとは、化学療法方式を受けているのに、そのガン患者が進行した（すなわち、そのガン患者は「化学療法難治性」である）か、またはその患者が化学療法レジメンを完了した１２か月以内（例えば６か月以内）に進行したということを意味する。
【０１６４】
「白金耐性」ガンとは、白金ベースの化学療法を受けているのに、そのガン患者が進行した（すなわち、その患者は「白金不応性」である）か、またはその患者が白金ベースの化学療法レジメンを完了した後１２か月以内（例えば、６か月以内）に進行したということを意味する。
【０１６５】
「血管新生阻害剤（ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ）」とは、血管の発生をある程度遮断または妨害する化合物を指す。抗血管形成因子は、例えば、血管形成の促進に関与する成長因子または成長因子レセプターに結合する低分子または抗体であり得る。本明細書における好ましい抗血管形成因子は、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））などの、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）に結合する抗体である。
【０１６６】
「サイトカイン」という用語は、ある細胞集団によって放出され、細胞間媒介性物質として別の細胞に作用するタンパク質についての総称である。このようなサイトカインの例は、リンホカイン、モノカイン、および従来のポリペプチドホルモンである。これらのサイトカインの中に含まれるのは、成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝成長因子；線維芽細胞成長因子；プロラクチン；胎盤ラクトゲン；腫瘍壊死因子αおよび腫瘍壊死因子β；ミュラー管抑制物質；マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−βなどの神経成長因子；血小板成長因子；ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−βなどのトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）；インスリン様成長因子−Ｉおよびインスリン様増殖因子−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン、例えば、インターフェロン−α、インターフェロン−β、およびインターフェロン−γ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）（マクロファージＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）、および顆粒球ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）など）；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２；ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−βなどの腫瘍壊死因子；ならびにＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含めたその他のポリペプチド因子である。本明細書に用いる場合、サイトカインという用語は、天然供給物由来またはリコンビナント細胞培養物由来のタンパク質、およびネイティブな配列のサイトカインの生物学的に活性な等価物を包含する。
【０１６７】
本明細書において用いる場合、「ＥＧＦＲ標的薬（ＥＧＦＲ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｄｒｕｇ）」という用語は、ＥＧＦＲに結合して、場合によりＥＧＦＲの活性化を阻害する治療剤を指す。このような薬剤の例としては、ＥＧＦＲに結合する抗体および低分子が挙げられる。ＥＧＦＲに結合する抗体の例としては、ＭＡｂ５７９（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ＨＢ８５０６）、ＭＡｂ４５５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ＨＢ８５０７）、ＭＡｂ２２５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ８５０８）、ＭＡｂ５２８（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ８５０９）（米国特許第４，９４３，５３３号明細書、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎらを参照のこと）、ならびにその改変体、例えば、キメラ化２２５（Ｃ２２５またはセツキシマブ；ＥＲＢＵＴＩＸ（登録商標））および再成形（ｒｅｓｈａｐｅｄ）ヒト２２５（Ｈ２２５）（国際公開第９６／４０２１０号パンフレット、Ｉｍｃｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．を参照のこと）；ＩＭＣ−１１Ｆ８、完全ヒトＥＧＦＲ標的抗体（Ｉｍｃｌｏｎｅ）、ＩＩ型変異体ＥＧＦＲと結合する抗体（米国特許第５，２１２，２９０号明細書）；米国特許第５，８９１，９９６号明細書に記載された、ＥＧＦＲと結合するヒト化抗体およびキメラ抗体；ＡＢＸ−ＥＧＦなどの、ＥＧＦＲと結合するヒト抗体（国際公開第９８／５０４３３号パンフレット、Ａｂｇｅｎｉｘを参照のこと）；ＥＭＤ５５９００（Ｓｔｒａｇｌｉｏｔｔｏら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ３２Ａ：６３６〜６４０（１９９６））；ＥＧＦＲとの結合についてＥＧＦおよびＴＧＦ−αの両方と競合する、ＥＧＦＲに対するヒト化ＥＧＦＲ抗体であるＥＭＤ７２００（マツズマブ）；ならびにｍＡｂ８０６またはヒト化ｍＡｂ８０６（Ｊｏｈｎｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（２９）：３０３７５〜３０３８４（２００４））が挙げられる。抗ＥＧＦＲ抗体を細胞傷害薬とコンジュゲートしてもよく、これによって免疫コンジュゲートを発生してもよい（例えば、欧州特許第６５９，４３９号（Ａ２）明細書、Ｍｅｒｃｋ  Ｐａｔｅｎｔ  ＧｍｂＨを参照のこと）。ＥＧＦＲに結合する低分子の例としては、ＺＤ１８３９すなわちゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（商標）；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＣＰ−３５８７７４すなわちエルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（商標）；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ）、およびＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（ＳＵ５２７１；Ｓｕｇｅｎ）、ＥＭＤ−７２００が挙げられる。
【０１６８】
「チロシンキナーゼインヒビター」は、ＨＥＲレセプターなどのチロシンキナーゼのチロシンキナーゼ活性を阻害する分子である。このようなインヒビターの例としては、前の段落で言及したＥＧＦＲ標的薬；武田から入手可能なＴＡＫ１６５などの低分子ＨＥＲ２チロシンキナーゼインヒビター；ＥｒｂＢ２レセプターチロシンキナーゼの経口選択的インヒビターであるＣＰ−７２４，７１４（ＰｆｉｚｅｒおよびＯＳＩ）；優先的にＥＧＦＲと結合するが、ＨＥＲ２を過剰発現している細胞およびＥＧＦＲを過剰発現している細胞の両方を阻害するＥＫＢ−５６９（Ｗｙｅｔｈから入手できる）などの二重ＨＥＲインヒビター；経口ＨＥＲ２およびＥＧＦＲチロシンキナーゼインヒビターであるＧＷ５７２０１６（Ｇｌａｘｏから入手できる）；ＰＫＩ−１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓから入手できる）；カネルチニブ（ＣＩ−１０３３；Ｐｈａｒｍａｃｉａ）などの汎ＨＥＲ（ｐａｎ−ＨＥＲ）インヒビター；Ｒａｆ−１シグナル伝達を阻害する、ＩＳＩＳ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能なアンチセンス剤ＩＳＩＳ−５１３２などのＲａｆ−１インヒビター；Ｇｌａｘｏから入手可能なメシル酸イマチニブ（Ｇｌｅｅｖａｃ（商標））などの非ＨＥＲ標的化ＴＫインヒビター；ＭＡＰＫ細胞外調節キナーゼＩインヒビターＣＩ−１０４０（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能な）；キナゾリン、例えば、ＰＤ１５３０３５、４−（３−クロロアニリノ）キナゾリン；ピリドピリミジン；ピリミドピリミジン；ピロロピリミジン、例えば、ＣＧＰ５９３２６、ＣＧＰ６０２６１、およびＣＧＰ６２７０６；ピラゾロピリミジン、４−（フェニルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；クルクミン（ジフェルロイルメタン、４，５−ビス（４−フルオロアニリノ）フタルイミド）；ニトロチオフェン部分含有チルホスチン；ＰＤ−０１８３８０５（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒ）；アンチセンス分子（例えば、ＨＥＲをコードしている核酸に結合する分子）；キノキサリン（米国特許第５，８０４，３９６号明細書）；トリホスチン（ｔｒｙｐｈｏｓｔｉｎ）（米国特許第５，８０４，３９６号明細書）；ＺＤ６４７４（Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ−７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）；汎ＨＥＲインヒビター、例えば、ＣＩ−１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；アフィニタック（Ａｆｆｉｎｉｔａｃ）（ＩＳＩＳ３５２１；Ｉｓｉｓ／Ｌｉｌｌｙ）；メシル酸イマチニブ（Ｇｌｅｅｖａｃ；  Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＰＫＩ１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＧＷ２０１６（Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ＣＩ−１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＥＫＢ−５６９（Ｗｙｅｔｈ）；セマキシニブ（Ｓｕｇｅｎ）；ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ−７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）；ＩＮＣ−１Ｃ１１（Ｉｍｃｌｏｎｅ）；または以下の特許公報のいずれかに記載されるもの：米国特許第５，８０４，３９６号明細書；国際公開第９９／０９０１６号パンフレット（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎｉｍｉｄ）；国際公開第９８／４３９６０号パンフレット（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ）；国際公開第９７／３８９８３号パンフレット（Ｗａｒ��ｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）；国際公開第９９／０６３７８号パンフレット（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）；国際公開第９９／０６３９６号パンフレット（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）；国際公開第９６／３０３４７号パンフレット（Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ）；国際公開第９６／３３９７８号パンフレット（Ｚｅｎｅｃａ）；国際公開第９６／３３９７号パンフレット（Ｚｅｎｅｃａ）；および国際公開第９６／３３９８０号パンフレット（Ｚｅｎｅｃａ）が挙げられる。
【０１６９】
本明細書における「固定、一定（ｆｉｅｘｄ）」または「均一、ちょうど（ｆｌａｔ）」用量の治療剤とは、患者の体重（ＷＴ）または体表面積（ＢＳＡ）を考慮せずにヒト患者に投与される用量を指す。従って、固定用量または均一用量はｍｇ／ｋｇ用量としても、ｍｇ／ｍ２用量としても提供されるものではなく、治療剤の絶対量として提供される。
【０１７０】
本明細書における「負荷」投与とは、一般に患者に与えられる初回投与の治療剤を含み、その後にその治療剤の１回以上の維持用量が続く。一般に単回の負荷投与が与えられるが、多回の負荷投与も本明細書において考慮される。通常は、維持投与で実現することができるよりも早期に治療剤の所望の定常状態濃度を実現するために、投与される負荷投与（単数または複数）の量は、投与される維持用量を超え、かつ／またはその負荷投与（単数または複数）は維持投与（単数または複数）よりも頻繁に投与される。
【０１７１】
本明細書における「維持」投与とは、処置期間にわたり患者に与えられる治療剤の１回以上の投与を指す。通常は、維持投与は、ほぼ毎週、ほぼ隔週、ほぼ３週間毎、またはほぼ４週間毎などの間をあけた処置間隔で投与される。
【０１７２】
（ＩＩ．抗体の産生）
好ましい実施形態では、ＨＥＲ二量体化インヒビターは抗体であるので、本発明に従って用いられるＨＥＲ抗体の産生についての例示的な技法に関して以下に説明する。抗体の産生に用いられるべきＨＥＲ抗原は、例えば、所望のエピトープを含む、ＨＥＲレセプターの可溶型細胞外ドメインまたはその一部分であってもよい。あるいは、細胞表面にＨＥＲを発現している細胞（例えば、ＨＥＲ２を過剰発現するように形質転換されたＮＩＨ−３Ｔ３細胞；またはＳＫ−ＢＲ−３細胞などのガン細胞系、Ｓｔａｎｃｏｖｓｋｉら、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８８：８６９１〜８６９５（１９９１）を参照のこと）を用いて抗体を作製してもよい。抗体の発生に有用な他の形態のＨＥＲレセプターは、当業者に明らかである。
【０１７３】
（（ｉ）ポリクローナル抗体）
ポリクローナル抗体は、好ましくは、関連抗原およびアジュバントの複数回の皮下（ｓｃ）注射または腹腔内（ｉｐ）注射によって動物中で産生される。二官能性剤または誘導化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介したコンジュゲート）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リシン残基を介する）、グルタルアルデヒド、コハク酸無水物、ＳＯＣｌ２、または式中ＲおよびＲ１が異なるアルキル基であるＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲを用いて、免疫されるべき種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシチログロブリン、またはダイズトリプシンインヒビターに対して関連抗原をコンジュゲートすることが有用であり得る。
【０１７４】
例えば、（それぞれウサギまたはマウスに対して）１００μｇまたは５μｇのタンパク質またはコンジュゲートを３倍容積のフロイント完全アジュバントと混合し、複数の部位にその溶液を皮内注射することによって、抗原、免疫原性コンジュゲート、または誘導体に対して動物を免疫処置する。１か月後、フロイント完全アジュバントに入れた初回量の１／５から１／１０のペプチドまたはコンジュゲートを用いて複数の部位で皮下注射することにより、その動物を追加免疫する。７日から１４日後、その動物から採血し、その血清の抗体力価をアッセイする。力価がプラトーになるまで動物に追加免疫する。好ましくは、同抗原のコンジュゲートであるが、異なるタンパク質に対して、および／または異なる架橋試薬を通じてコンジュゲートしたコンジュゲートを用いて、その動物を追加免疫する。タンパク質融合体として組み換え細胞培養でコンジュゲートを作成することもできる。さらに、ミョウバンなどの凝集剤を適切に用いて、免疫応答を増強させる。
【０１７５】
（（ｉｉ）モノクローナル抗体）
本明細書におけるモノクローナル抗体を作成するための種々の方法が当該分野で利用可能である。例えば、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）に最初に記載されたハイブリドーマ法を使用して、組み換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号明細書）によりモノクローナル抗体を作成してもよい。
【０１７６】
ハイブリドーマ法では、マウス、またはハムスターなどのその他の適切な宿主動物を、本明細書において上記されるように免疫して、免疫のために用いられるタンパク質に特異的に結合する抗体を産生するか、または産生できるリンパ球を誘発させる。あるいは、リンパ球をインビトロで免疫してもよい。次いで、ポリエチレングリコールなどの適切な融合剤を用いて、リンパ球を骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成させる（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，第５９〜１０３頁（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。
【０１７７】
このようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、未融合の親の骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１つ以上の物質を好ましくは含有する適切な培地に接種し、成長させる。例えば、親骨髄腫細胞が酵素であるヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠如している場合、ハイブリドーマ用の培養培地は、代表的には、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含んでおり（ＨＡＴ培地）、これらの物質はＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を阻止する。
【０１７８】
好ましい骨髄腫細胞とは、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベルの産生を支持し、かつＨＡＴ培地などの培地に感受性の細胞である。これらのうち好ましい骨髄腫細胞系は、マウス骨髄腫系、例えば、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡから入手可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍由来の細胞系、ならびにＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ  ＵＳＡから入手可能なＳＰ−２細胞またはＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞である。ヒト骨髄腫細胞系およびマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞系も、ヒトモノクローナル抗体の産生のために記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；およびＢｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，第５１〜６３頁（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））。
【０１７９】
その抗原に対するモノクローナル抗体の産生のために、ハイブリドーマ細胞が中で成長している培地をアッセイする。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により産生されるモノクローナル抗体の結合特異性を、免疫沈降により、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）などのインビトロ結合アッセイにより決定する。
【０１８０】
モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎら、Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のスキャッチャード解析（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ  ａｎａｌｙｓｉｓ）によって決定することができる。
【０１８１】
所望の特異性、親和性、および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定された後で、限界希釈手順によりそのクローンをサブクローニングして、標準的な方法により成長させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９〜１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。この目的に適切な培地としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。さらに、このハイブリドーマ細胞を、動物における腹水腫瘍としてインビボで成長させてもよい。
【０１８２】
サブクローンにより分泌されたモノクローナル抗体を、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィーなどの従来の抗体精製手順によって培養培地、腹水、または血清から適切に分離する。
【０１８３】
モノクローナル抗体をコードしているＤＮＡは、従来の手順を用いて（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードしている遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離されて、配列解析される。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。一旦単離されると、そのＤＮＡを発現ベクターの中に配置することができ、次にその発現ベクターを、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または他の状況では抗体タンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトして、組み換え宿主細胞中でモノクローナル抗体の合成を得る。抗体をコードしているＤＮＡを細菌中で組み換え発現させることに関する総説論文としては、Ｓｋｅｒｒａら、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：２５６〜２６２（１９９３）およびＰｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖｓ．，１３０：１５１〜１８８（１９９２）が挙げられる。
【０１８４】
さらなる実施形態では、モノクローナル抗体または抗体フラグメントを、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２〜５５４（１９９０）に記載されている技術を用いて作製された抗体ファージライブラリーから単離してもよい。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４〜６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１〜５９７（１９９１）は、ファージライブラリーを用いた、それぞれマウス抗体およびヒト抗体の単離を記載している。その後の刊行物は、鎖シャッフリング（ｃｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９〜７８３（１９９２））による高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の産生ならびに非常に大きなファージライブラリーを構築するためのストラテジーとしてのコンビナトリアル感染およびインビボ組み換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら、Ｎｕｃ．  Ａｃｉｄｓ．  Ｒｅｓ．，２１：２２６５〜２２６６（１９９３））について記載している。このように、これらの技術は、モノクローナル抗体の単離のための従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に対する実行可能な代替法である。
【０１８５】
例えば、相同マウス配列に代わり、ヒト重鎖および軽鎖の定常ドメインについてのコード配列に置換することによって（米国特許第４，８１６，５６７号明細書；およびＭｏｒｒｉｓｏｎ，ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，８１：６８５１（１９８４））ＤＮＡを改変してもよいし、または免疫グロブリンのコード配列に、非免疫グロブリンポリペプチドについてのコード配列の全てもしくは一部を共有結合的に繋ぐことによっても、ＤＮＡを改変してもよい。
【０１８６】
代表的には、抗体の定常ドメインの代わりにこのような非免疫グロブリンポリペプチドに置換するか、または、抗体の一つの抗原結合部位の可変ドメインの代わりにそれらに置換して、抗原に対する特異性を有する一つの抗原結合部位と、異なる抗原に対する特異性を有する別の抗原結合部位とを含むキメラ二価抗体を生み出す。
【０１８７】
（（ｉｉｉ）ヒト化抗体）
非ヒト抗体をヒト化するための方法は当該分野で記載されている。好ましくは、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源からその抗体に導入された１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、「輸入（ｉｍｐｏｒｔ）」残基と称される。この残基は、代表的には「輸入」可変ドメインから取り入れられる。ヒト化は、ヒト抗体の対応配列の代わりに超可変部配列に置換することによって、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者らの方法（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２〜５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３〜３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４〜１５３６（１９８８））に従って本質的に行ってもよい。従って、このような「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインよりも実質的に小さな配列が非ヒト種由来の対応する配列に置換されたキメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号明細書）である。実際にはヒト化抗体とは、代表的には一部の超可変部残基と、可能性としてはいくつかのＦＲ残基とが、げっ歯動物抗体の類似部位由来の残基に置換されているヒト抗体である。
【０１８８】
ヒト化抗体を作成する際に用いられるべき、軽鎖および重鎖両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低減するために非常に重要である。いわゆる「ベストフィット（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」法に従い、げっ歯類の抗体の可変ドメインの配列を、公知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングする。次いで、そのげっ歯類の配列に最も近いヒト配列を、ヒト化抗体についてのヒトフレームワーク部（ＦＲ）として受け入れる（Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７））。別の方法では、特定サブグループの軽鎖または重鎖の全ヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワーク領域を用いる。同じフレームワークを、いくつかの異なるヒト化抗体に用いてもよい（Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３））。
【０１８９】
抗体が抗原に対する高い親和性およびその他の好都合な生物学的性質を保持したままヒト化されることは、さらに重要である。この目標を実現するために、好ましい方法に従って、親配列およびヒト化配列の三次元モデルを用いて親配列および様々な概念上のヒト化産物の分析のプロセスによってヒト化抗体を調製する。三次元免疫グロブリンモデルが、一般に利用可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の有望な三次元コンフォメーション構造を図解して表示するコンピュータプログラムを利用することができる。これらの表示の調査により、候補免疫グロブリン配列の機能発揮にこれらの残基が果たしそうな役割を分析すること、すなわち、候補免疫グロブリンがその抗原と結合する能力に影響する残基を分析することが可能になる。このように、ＦＲ残基を、レシピエント配列および輸入（ｉｍｐｏｒｔ）配列から選択して組合せることができ、それにより、標的抗原（類）に対する親和性増大などの所望の抗体特性が達成される。一般に、超可変領域の残基は、抗原結合に影響することに直接的かつ最も実質的に関与している。
【０１９０】
米国特許第６，９４９，２４５号明細書は、ＨＥＲ２と結合してＨＥＲレセプターのリガンドによる活性化をブロックする例示的なヒト化ＨＥＲ２抗体の産生を記載している。本明細書において特に目的となるヒト化抗体は、マウスモノクローナル抗体２Ｃ４（またはそのＦａｂフラグメント）と本質的に同様に効果的に、ＥＧＦ、ＴＧＦ−αおよび／もしくはＨＲＧ媒介性のＭＡＰＫ活性化をブロックし、そして／またはマウスモノクローナル抗体２Ｃ４（もしくはそのＦａｂフラグメント）と本質的に同様に効果的にＨＥＲ２と結合する。本明細書におけるヒト化抗体は、例えば、ヒト可変重鎖ドメインに組み込まれた非ヒト超可変部残基を含んでもよく、さらにＫａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に述べられた可変ドメイン付番システムを利用して、６９Ｈ、７１Ｈ、および７３Ｈからなる群より選択される位置にフレームワーク部（ＦＲ）置換を含んでもよい。一実施形態では、ヒト化抗体は、位置６９Ｈ、７１Ｈおよび７３Ｈの二つまたは全てにＦＲ置換を含む。
【０１９１】
本明細書において目的の例示的なヒト化抗体は、重鎖可変ドメイン相補性決定部残基ＧＦＴＦＴＤＹＴＭＸ（Ｘは好ましくはＤまたはＳ）（配列番号：７）；ＤＶＮＰＮＳＧＧＳＩＹＮＱＲＦＫＧ（配列番号：８）；および／またはＮＬＧＰＳＦＹＦＤＹ（配列番号：９）を含み、必要に応じて、それらのＣＤＲ残基にアミノ酸改変を含む（例えばその改変がその抗体の親和性を本質的に維持または改善する場合）。例えば、目的の抗体改変体は、約１個から約７個または約５個のアミノ酸置換を上記重鎖可変ＣＤＲ配列に有してもよい。例えば下記のような親和性成熟によって、このような抗体改変体を調製してもよい。最も好ましいヒト化抗体は、配列番号：４の重鎖可変ドメインアミノ酸配列を含む。
【０１９２】
ヒト化抗体は、例えば前段の可変重鎖ドメインＣＤＲ残基に追加して、軽鎖可変ドメイン相補性決定残基ＫＡＳＱＤＶＳＩＧＶＡ（配列番号：１０）；ＳＡＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３（Ｘ１は好ましくはＲもしくはＬ、Ｘ２は好ましくはＹもしくはＥ、Ｘ３は好ましくはＴもしくはＳである）（配列番号：１１）；および／またはＱＱＹＹＩＹＰＹＴ（配列番号：１２）を含んでもよい。このようなヒト化抗体は、必要に応じて、上記ＣＤＲ残基のアミノ酸改変を含む（例えばその改変がその抗体の親和性を本質的に維持または改善する場合）。例えば、目的の抗体変異体は、約１個から約７個または約５個のアミノ酸置換を上記可変軽鎖ＣＤＲ配列に有してもよい。例えば下記のような親和性成熟によって、このような抗体改変体を調製してもよい。最も好ましいヒト化抗体は、配列番号：３の可変軽鎖ドメインアミノ酸配列を含む。
【０１９３】
本出願は、ＨＥＲ２と結合して、ＨＥＲレセプターのリガンドによる活性化をブロックする、親和性成熟した抗体も考慮している。親抗体は、ヒト抗体またはヒト化抗体、例えば配列番号３および４の可変軽鎖配列および／または可変重鎖配列をそれぞれ含む（すなわちペルツズマブのＶＬおよび／またはＶＨを含む）抗体であってもよい。親和性成熟した抗体は好ましくは、マウス２Ｃ４またはペルツズマブよりも優れた親和性で（例えば、ＨＥＲ２細胞外ドメイン（ＥＣＤ）ＥＬＩＳＡを用いて評価する場合、例えば約２または約４倍から約１００倍または約１０００倍向上した親和性で）ＨＥＲレセプター２に結合する。置換のための例示的な可変重鎖ＣＤＲ残基としては、Ｈ２８、Ｈ３０、Ｈ３４、Ｈ３５、Ｈ６４、Ｈ９６、Ｈ９９、または二つ以上の組み合わせ（例えば、これらの残基の２、３、４、５、６、または７個）が挙げられる。変更のための可変軽鎖ＣＤＲ残基の例としては、Ｌ２８、Ｌ５０、Ｌ５３、Ｌ５６、Ｌ９１、Ｌ９２、Ｌ９３、Ｌ９４、Ｌ９６、Ｌ９７、または二つ以上の組み合わせ（例えば、これらの残基の２から３、４、５、または最大約１０個）が挙げられる。
【０１９４】
種々の形態のヒト化抗体または親和性成熟した抗体が考慮される。例えば、ヒト化抗体または親和性成熟した抗体は、Ｆａｂなどの抗体フラグメントであってもよく、このフラグメントは、免疫コンジュゲートを発生させるために、１つ以上の細胞傷害薬（類）と必要に応じてコンジュゲートされる。あるいは、ヒト化抗体または親和性成熟した抗体は、インタクトなＩｇＧ１抗体などのインタクトな抗体であってもよい。好ましいインタクトなＩｇＧ１抗体は、配列番号１３の軽鎖配列および配列番号１４の重鎖配列を含む。
【０１９５】
（（ｉｖ）ヒト抗体）
ヒト化の代替として、ヒト抗体を作成してもよい。例えば、免疫処置した際に、内因性免疫グロブリン産生の不在下でヒト抗体の全レパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を生み出すことが今や可能である。例えば、キメラマウスおよび生殖細胞系変異体マウスにおける抗体重鎖Ｊ部（ＪＨ）遺伝子の同型接合型欠失は、内因性抗体産生の完全な阻害を招くことが記載されている。このような生殖細胞系突然変異マウスにヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子アレイの移入によって、抗原チャレンジの際にヒト抗体の産生が生じる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５〜２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ．，７：３３（１９９３）；ならびに米国特許第５，５９１，６６９号明細書、同第５，５８９，３６９号明細書、および同第５，５４５，８０７号明細書を参照のこと。あるいは、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５３（１９９０））を用いて、免疫処置されていないドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーからヒト抗体およびヒト抗体フラグメントをインビトロ産生してもよい。この技術に従って、抗体Ｖドメイン遺伝子を、Ｍ１３またはｆｄなどの糸状バクテリオファージのメジャーまたはマイナーなコートタンパク質遺伝子のいずれかにインフレームでクローニングして、ファージ粒子の表面上に機能的な抗体フラグメントとして提示させる。糸状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを有するので、その抗体の機能的性質に基づく選択によってまた、それらの性質を示す抗体をコードしている遺伝子の選択も得られる。このように、そのファージは、Ｂ細胞の性質の一部を模倣している。ファージディスプレイを種々の形式で行ってもよい；それらの総説については、例えばＪｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．およびＣｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：５６４〜５７１（１９９３）を参照のこと。いくつかの起源のＶ遺伝子セグメントをファージディスプレイのために用いてもよい。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４〜６２８（１９９１）は、免疫処置されたマウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小さなランダムコンビナトリアルライブラリーから抗オキサゾロン抗体の多様なアレイを単離した。免疫処置されていないヒトドナーからＶ遺伝子のレパートリーを構築してもよく、（自己抗原を含む）多様なアレイの抗原に対する抗体を、Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１〜５９７（１９９１）、またはＧｒｉｆｆｉｔｈら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５〜７３４（１９９３）によって記載されている技術に本質的に従って単離してもよい。米国特許第５，５６５，３３２号明細書および第５，５７３，９０５号明細書も参照のこと。
【０１９６】
上記のように、ヒト抗体は、インビトロ活性化したＢ細胞により作成してもよい（米国特許第５，５６７，６１０号明細書および同第５，２２９，２７５号明細書を参照のこと）。
【０１９７】
ヒトＨＥＲ２抗体は、１９９８年６月３０日に発行された米国特許第５，７７２，９９７号明細書および１９９７年１月３日に公開された国際公開第９７／００２７１号パンフレットに記載されている。
【０１９８】
（（ｖ）抗体フラグメント）
種々の技術が、１つ以上の抗原結合領域を含む抗体フラグメントの産生のために開発されている。伝統的には、これらのフラグメントは、インタクトな抗体のタンパク質分解消化を介して誘導された（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７〜１１７（１９９２）；およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照のこと）。しかし、これらのフラグメントは、今や組み換え宿主細胞によって直接産生されてもよい。例えば、その抗体フラグメントは、上記で考察される抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントを、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収して、化学的に結合させてＦ（ａｂ’）２フラグメントを形成させてもよい（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３〜１６７（１９９２））。別のアプローチに従って、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを、組み換え宿主細胞培養物から直接単離してもよい。抗体フラグメントの産生のためのその他の技術は、当業者に明白である。他の実施形態では、選り抜きの抗体は一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。国際公開第９３／１６１８５号パンフレット；米国特許第５，５７１，８９４号明細書；および米国特許第５，５８７，４５８号明細書を参照のこと。この抗体フラグメントは、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号明細書に例えば記載された線状抗体（ｌｉｎｅａｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）＠でもあってもよい。このような線状抗体フラグメントは、単一特異性であっても、または二重特異性であってもよい。
【０１９９】
（（ｖｉ）二重特異性抗体）
二重特異性抗体は、少なくとも二つの異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、ＨＥＲ２タンパク質の二つの異なるエピトープに結合し得る。他のこのような抗体は、ＨＥＲ２結合部位と、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ３、および／またはＨＥＲ４についての結合部位（単数または複数）とを組合せてもよい。あるいは、細胞防御メカニズムをＨＥＲ２発現細胞に集中させるために、白血球上の誘因分子、例えば、Ｔ細胞レセプター分子（例えば、ＣＤ２もしくはＣＤ３）、またはＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）などの、ＩｇＧに対するＦｃレセプター（ＦｃγＲ）に結合するアームとＨＥＲ２アームを組合せてもよい。ＨＥＲ２を発現する細胞に細胞傷害薬を局在化させるために、二重特異性抗体を用いてもよい。これらの抗体は、ＨＥＲ２結合アームと、細胞傷害薬（例えば、サポリン、抗インターフェロン−α、ビンカアルカロイド、リシン（ｒｉｃｉｎ）Ａ鎖、メトトレキサート、または放射性同位体ハプテン）と結合するアームとを保有する。二重特異性抗体を、全長抗体または抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製してもよい。
【０２００】
国際公開第９６／１６６７３号パンフレットは、二重特異性ＨＥＲ２／ＦｃγＲＩＩＩ抗体を記載しており、そして米国特許第５，８３７，２３４号明細書は、二重特異性ＨＥＲ２／ＦｃγＲＩ抗体ＩＤＭ１（Ｏｓｉｄｅｍ）を開示している。二重特異性ＨＥＲ２／Ｆｃα抗体は、国際公開第９８／０２４６３号パンフレットに示されている。米国特許第５，８２１，３３７号明細書は、二重特異性ＨＥＲ２／ＣＤ３抗体を教示している。ＭＤＸ−２１０は、二重特異性ＨＥＲ２−ＦｃγＲＩＩＩ  Ａｂである。
【０２０１】
二重特異性抗体を作成するための方法は、当該分野において公知である。全長二重特異性抗体の従来の産生は、二つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づく。ここで、その二つの鎖は異なる特異性を有する（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７〜５３９（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダムな取り合わせという理由で、これらのハイブリドーマ（クアドローマ（ｑｕａｄｒｏｍａｓ））は、１０個の異なる抗体分子の潜在的な混合物を産生し、そのうち、一つだけが正しい二重特異性構造を有する。正しい分子の精製は、普通はアフィニティークロマトグラフィー工程によってなされるが、かなり煩雑であり、その産物の収率は低い。類似の手順が国際公開第９３／０８８２９号パンフレットおよびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５〜３６５９（１９９１）に開示されている。
【０２０２】
異なるアプローチに従って、所望の結合特異性（抗体−抗原の結合部位）を有する抗体可変ドメインを、免疫グロブリン定常ドメイン配列と融合させる。この融合体は、好ましくは、ヒンジ部の少なくとも一部、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインを有する。軽鎖の結合に必要な部位を有する第一重鎖定常部（ＣＨ１）を、これら融合体の少なくとも一つに存在することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合体と、必要な場合、免疫グロブリン軽鎖とをコードしているＤＮＡを、別々の発現ベクターに挿入して、適切な宿主生物に同時トランスフェクションする。これによって、構築に用いられる等しくない比率の３本のポリペプチド鎖が最適な収率を提供する実施形態において、それら３本のポリペプチドフラグメントの相互比率の調整に大きな可塑性が提供される。しかし、少なくとも２本のポリペプチド鎖が等しい比で発現することが高収率を招く場合、またはその比が特に重要ではない場合に、２本または３本全てのポリペプチド鎖についてのコード配列を一つの発現ベクターに挿入することが可能である。
【０２０３】
このアプローチの好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、一方のアームでの第１結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖と、他方のアームでのハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第２結合特異性を提供する）とから構成される。この非対称構造は、望まれていない免疫グロブリン鎖の組合せから所望の二重特異性化合物の分離を容易にすることが見出された。なぜなら、二重特異性分子の半分のみに免疫グロブリン軽鎖が存在することが、分離の容易な方法をもたらすからである。このアプローチは、国際公開第９４／０４６９０号パンフレットに開示されている。二重特異性抗体を作成するさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照のこと。
【０２０４】
米国特許第５，７３１，１６８号明細書に記載されている別のアプローチに従って、抗体分子対の間の境界を操作して、組み換え細胞培養物から回収されるヘテロ二量体の率を最大にしてもよい。好ましい境界は、抗体定常ドメインのＣＨ３ドメインの少なくとも一部分を含む。この方法では、第１抗体分子の境界由来の１つ以上の小型アミノ酸側鎖を、より大型の側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）に交換する。その大型側鎖に同一または類似の大きさの代償的な「空洞（ｃａｖｉｔｉｅｓ）」は、大型アミノ酸側鎖（単数または複数）をより小型のアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはトレオニン）に交換することによって、第２抗体分子の境界に生み出される。これによって、ホモ二量体などのその他の望まれない最終産物に比べてヘテロ二量体の収率を増加させるためのメカニズムが得られる。
【０２０５】
二重特異性抗体としては、架橋抗体または「ヘテロコンジュゲート」抗体が挙げられる。例えば、ヘテロコンジュゲートにおける抗体のうちの一方をアビジンと、他方をビオチンと結合させてもよい。このような抗体は、例えば、望まれていない細胞に免疫系細胞を標的するために（米国特許第４，６７６，９８０号明細書）、そしてＨＩＶ感染の処置のために（国際公開第９１／００３６０号パンフレット、国際公開第９２／２００３７３号パンフレット、および欧州特許第０３０８９号明細書）提案されている。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の好都合な架橋方法を用いて作成してもよい。適切な架橋剤は当該分野において周知であり、米国特許第４，６７６，９８０号明細書に、多数の架橋技術と共に開示されている。
【０２０６】
抗体フラグメントから二重特異性抗体を作成するための技術は、文献にも記載されている。例えば、化学的結合を用いて二重特異性抗体を調製してもよい。Ｂｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）は、インタクトな抗体をタンパク質分解的に開裂してＦ（ａｂ’）２フラグメントを発生する手順を記載している。これらのフラグメントを、ジチオール錯化剤である亜砒酸ナトリウムの存在下で還元して、隣接するジチオールを安定化して、分子間ジスルフィド形成を阻止する。次に、生成したＦａｂ’フラグメントをチオニトロ安息香酸（ＴＮＢ）誘導体に変換する。次に、メルカプトエチルアミンを用いた還元により、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の一つをＦａｂ’−チオールに再変換し、等モル量のその他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合して、二重特異性抗体を形成させる。産生した二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化のための薬剤として用いてもよい。
【０２０７】
最近の進歩により、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のＦａｂ’−ＳＨフラグメントを直接回収することが容易になった。このＦａｂ’−ＳＨフラグメントを、化学的に結合させて、二重特異性抗体を形成させてもよい。Ｓｈａｌａｂｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７５：２１７〜２２５（１９９２）は、完全にヒト化された二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の産生を記載している。各々のＦａｂ’フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから別々に分泌され、インビトロで定方向化学的カップリング（ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｏｕｐｌｉｎｇ）に供されて、二重特異性抗体が形成された。このように形成した二重特異性抗体は、ＨＥＲレセプター２を過剰発現している細胞および正常なヒトＴ細胞に結合することができ、かつヒト乳房腫瘍標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を誘発することができた。
【０２０８】
組み換え細胞培養物から二重特異性抗体フラグメントを直接作成して単離するための種々の技術も記載されている。例えば、二重特異性抗体は、ロイシンジッパーを用いて産生されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７〜１５５３（１９９２）。Ｆｏｓタンパク質およびＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドを、遺伝子融合によって二つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結した。その抗体ホモ二量体を、ヒンジ部で還元して単量体を形成し、次に、再び酸化して抗体へテロ二量体を形成した。この方法も、抗体ホモ二量体産生のために利用してもよい。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４〜６４４８（１９９３）によって記載された「二特異性抗体」技術は、二重特異性抗体フラグメントを作成するための代替メカニズムを提供した。このフラグメントは、同じ鎖上の二つのドメイン間で対形成させるには短すぎるリンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。従って、一つのフラグメントのＶＨドメインおよびＶＬドメインは、別のフラグメントの相補的なＶＬドメインおよびＶＨドメインと対形成することを強いられ、それによって、二つの抗原結合部位が形成される。二重特異性抗体フラグメントを単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用によって作成するための別のストラテジーも報告されている。Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと。
【０２０９】
二つを超える結合価を有する抗体が考慮されている。例えば、三重特異性抗体を調製すしてもよい。Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０２１０】
（（ｖｉｉ）その他のアミノ酸配列の改変）
本明細書に記載された抗体のアミノ酸配列の改変（単数または複数）が考慮されている。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的性質を改善することが所望され得る。適切なヌクレオチド変化を抗体の核酸に導入することにより、またはペプチド合成により、抗体のアミノ酸配列変異体を調製する。このような改変としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失および／またはそれへの挿入および／またはその置換が挙げられる。欠失、挿入、および置換の任意の組合せは、最終構築物に達するように作成されるが、ただし、その最終構築物は所望の性質を有する。そのアミノ酸変化によってまた、グリコシル化部位の数または位置を変化させることなどの、抗体の翻訳後プロセスを変更することもできる。
【０２１１】
突然変異誘発についての好ましい位置である、抗体の特定の残基または領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１〜１０８５（１９８９）に記載されたとおり「アラニンスキャニング突然変異誘発（ａｌａｎｉｎｅ  ｓｃａｎｎｉｎｇ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ））」と呼ばれる。この方法では、標的の残基のうち一つの残基またはグループ（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕなどの荷電した残基）が同定され、中性または陰性に荷電したアミノ酸（最も好ましくはアラニンまたはポリアラニン）に交換されて、アミノ酸と抗原との相互作用に影響を与える。次に、置換に対する機能的感受性を実証しているアミノ酸位置を、置換部位に、または置換部位の代わりにさらなる変異体またはその他の変異体を導入することによって精密化する。このように、アミノ酸配列変異を導入するための部位が予め決定されているが、その突然変異自体の性質は予め決定されている必要はない。例えば、所与の部位での突然変異の能力を分析するために、ａｌａ（アラニン）スキャニングまたはランダム突然変異誘発を、標的コドンまたは標的領域で行って、発現した抗体変異体を所望の活性についてスクリーニングする。
【０２１２】
アミノ酸配列挿入には、長さが１個の残基から１００個以上の残基を有するポリペプチドまでの範囲のアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合体、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入体が挙げられる。末端挿入体の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体、または細胞毒性ポリペプチドに融合した抗体が挙げられる。抗体分子のその他の挿入改変体としては、抗体のＮ末端またはＣ末端と酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ用）との、または抗体の血清半減期を増大させるポリペプチドとの融合物が挙げられる。
【０２１３】
別のタイプの改変体は、アミノ酸置換改変体である。これらの改変体は、抗体分子中の少なくとも一つのアミノ酸残基が異なる残基に交換されている。置換突然変異誘発について最も目的の部位としては超可変領域が挙げられるが、ＦＲの変更も考慮される。保存的置換を、表１で「好ましい置換（ｐｒｅｆｅｒｒｅｄ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ）」の見出しの下に示す。このような置換が生物学的活性の変化を招くならば、表１に「例示的置換」と称するか、またはアミノ酸クラスを参照して以下にさらに記載される、より実質的な変化を導入し、その産物をスクリーニングしてもよい。
【０２１４】
【表１】
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抗体の生物学的特性における実質的な改変は、（ａ）例えばシートまたはヘリックスコンフォメーションなどの、置換の領域におけるポリペプチド主鎖の構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖のバルク（かさ高さ）を維持することに対する効果が有意に異なる置換を選択することによって達成される。アミノ酸は、側鎖の特性における類似性によって以下のような群に分けてもよい（Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第２版，第７３〜７５頁，Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９７５））：
（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）
（２）無荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）
（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）。
【０２１５】
あるいは、天然に存在する残基を、共通の側鎖の特製に基づいて以下の群に分けてもよい：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０２１６】
非保存的置換とは、これらのクラスのうち、一つのメンバーを別のクラスのものに交換することを必要とする。
【０２１７】
抗体の適切な高次構造の維持に関与しない任意のシステイン残基を、一般にセリンに置換して、その分子の酸化に対する安定性を改善して、異常な架橋を阻止することもできる。逆に、システイン結合（単数または複数）をその抗体に付加して、（特に、その抗体がＦｖフラグメントなどの抗体フラグメントである場合）その安定性を改善してもよい。
【０２１８】
特に好ましい型の置換改変体は、親の抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを包含する。一般的に、さらなる開発のために選択された、得られた改変体（単数または複数）は、それらの改変体が作成された親の抗体に比べて、改善された生物学的性質を有する。このような置換改変体を作成するための簡便な方法は、ファージディスプレイを用いた親和性成熟を包含する。要するに、いくつかの超可変領域の部位（例えば、６から７個の部位）を突然変異させて全ての可能なアミノ置換を各部位に作成する。このように作成された抗体改変体は、糸状ファージ粒子から一価の様式で、各粒子内にパッケージングされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物との融合体として提示される。次に、ファージディスプレイされた改変体を、本明細書に開示されたように、それらの生物学的活性（例えば結合親和性）についてスクリーニングする。改変のための候補となる超可変領域の部位を同定するために、アラニンスキャニング変異誘発を行って、抗原結合に重大に寄与する超可変部残基を同定することができる。あるいは、またはさらに、抗原−抗体複合体の結晶構造を分析して、抗体とヒトＨＥＲ２との間の接触点を同定することが有益であり得る。そのような接触残基および隣接する残基は、本明細書に詳細に述べられた技術による置換のための候補である。このような改変体が一旦発生すれば、改変体のパネルを本明細書に記載されたスクリーニングに供し、１つ以上の関連するアッセイで優れた性質を有する抗体を、さらなる開発のために選択してもよい。
【０２１９】
この抗体の別の型のアミノ酸改変体は、この抗体の本来のグリコシル化パターンが変更している。変更とは、抗体に見出される１つ以上の糖質部分を欠失させること、および／またはその抗体には存在しない１つ以上のグリコシル化部位を付加することを意味する。
【０２２０】
抗体のグリコシル化は、代表的にはＮ−結合またはＯ−結合のいずれかである。Ｎ−結合とは、アスパラギン残基の側鎖に糖質部分が付着していることを指す。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−トレオニン（Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖に糖質部分を酵素的に付着させるための認識配列である。このように、これらのトリペプチド配列のいずれかがポリペプチド中に存在することで、潜在的なグリコシル化部位が生み出される。Ｏ−結合型グリコシル化とは、（最も一般的にはセリンまたはトレオニンであるが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンも用いられてもよい）ヒドロキシアミノ酸に対する、糖であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースの一つの付着を指す。
【０２２１】
この抗体へのグリコシル化部位の付加は、好都合には、アミノ酸配列を変更することにより、そのアミノ酸配列が（Ｎ−結合型グリコシル化部位のための）上記の１つ以上のトリペプチド配列を有するようにすることによって実現される。本来の抗体の配列に（Ｏ−結合型グリコシル化部位のための）１つ以上のセリンまたはトレオニン残基を付加するか、またはこれらに置換することによっても変更を行うことができる。
【０２２２】
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに付着している糖質を変更してもよい。例えば、抗体のＦｃ領域に付着したフコースを欠如した成熟糖質構造を有する抗体が米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号Ａ１明細書、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．に記載されている。米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号Ａ１明細書（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ）も参照のこと。糖質中の二分岐型Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）が抗体のＦｃ部に付着した抗体は、国際公開第０３／０１１８７８号パンフレット、Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら、および米国特許第６，６０２，６８４号明細書、Ｕｍａｎａらに参照されている。オリゴ糖中の少なくとも一つのガラクトース残基が抗体のＦｃ領域に付着した抗体は、Ｐａｔｅｌらの国際公開第９７／３００８７号パンフレットに報告されている。変更された糖質がそのＦｃ領域に付着した抗体に関する国際公開第９８／５８９６４号パンフレット（Ｒａｊｕ，Ｓ．）および国際公開第９９／２２７６４号パンフレット（Ｒａｊｕ，Ｓ．）も参照のこと。
【０２２３】
例えば、抗体の抗原依存性細胞媒介性の細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を増強するためのエフェクター機能に関して、本発明の抗体を改変することが所望され得る。これは、抗体のＦｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を導入することによって達成され得る。あるいは、またはさらに、システイン残基（類）をＦｃ部に導入してもよく、これによって、この領域に鎖間ジスルフィド結合を形成させてもよい。このように作成されたホモ二量体抗体は、改善した内部移行能ならびに／または増大した補体介在性細胞殺滅および抗体依存性細胞性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を有し得る。Ｃａｒｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１７６：１１９１〜１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８〜２９２２（１９９２）を参照のこと。増強した抗腫瘍活性を有するホモ二量体抗体を、Ｗｏｌｆｆら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：２５６０〜２５６５（１９９３）に記載されているようなヘテロ二官能性架橋剤を用いて調製することもできる。あるいは、二重のＦｃ部を有する抗体を加工することができ、それによって、その抗体は増強した補体溶解およびＡＤＣＣ能を有し得る。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ３：２１９〜２３０（１９８９）を参照のこと。
【０２２４】
国際公開第００／４２０７２号パンフレット（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）は、ヒトエフェクター細胞の存在下で改善したＡＤＣＣ機能を有する抗体であって、ここで、その抗体はそのＦｃ領域にアミノ酸置換を含む抗体を記載している。好ましくは、改善したＡＤＣＣを有する抗体は、Ｆｃ部の位置２９８、３３３、および／または３３４に置換を含む（ＥＵの残基の番号付け）。好ましくは、変更されたＦｃ部は、これらの位置の一つ、二つもしくは三つに置換を含むか、または、その置換からなるヒトＩｇＧ１  Ｆｃ部である。このような置換は、必要に応じてＣ１ｑの結合および／またはＣＤＣを増加させる置換（単数または複数）と組み合わされる。
【０２２５】
変更されたＣ１ｑ結合性および／または補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を有する抗体は、国際公開第９９／５１６４２号パンフレット、米国特許第６，１９４，５５１Ｂ１号明細書、米国特許第６，２４２，１９５Ｂ１号明細書、米国特許第６，５２８，６２４Ｂ１号明細書、および米国特許第６，５３８，１２４号明細書（Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、）に記載されている。この抗体は、そのＦｃ領域のアミノ酸位置２７０、３２２、３２６、３２７、３２９、３１３、３３３、および／または３３４（残基のＥｕ付番）のうち１つ以上にアミノ酸置換を含む。
【０２２６】
抗体の血清半減期を増大させるために、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号明細書に記載されているように、サルベージレセプター結合エピトープを抗体（特に抗体フラグメント）に組み込むことができる。本明細書中で用いられる場合、「サルベージレセプター結合エピトープ（ｓａｌｖａｇｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｅｐｉｔｏｐｅ）」という用語は、ＩｇＧ分子のインビボ血清半減期の増大を担う、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
【０２２７】
新生児Ｆｃレセプター（ＦｃＲｎ）との結合性が改善しており、半減期が増大した抗体は、国際公開第００／４２０７２号パンフレット（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）および米国特許出願公開第２００５／００１４９３４Ａ１号明細書（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、その中にＦｃ領域とＦｃＲｎとの結合性を改善する１つ以上の置換を有するＦｃ領域を含む。例えば、Ｆｃ領域は位置２３８、２５０、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１４、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、４２８または４３４（残基のＥｕ付番）のうち１つ以上に置換を有し得る。ＦｃＲｎとの改善した結合性を有する好ましいＦｃ領域含有抗体改変体は、そのＦｃ領域の位置３０７、３８０、および４３４（残基のＥｕ付番）のうち一つ、二つ、または三つの位置にアミノ酸置換を含む。
【０２２８】
三つ以上（好ましくは四つ）の機能的抗原結合部位を有する加工された抗体も考えられている（米国特許出願公開第２００２／０００４５８７Ａ１号明細書、Ｍｉｌｌｅｒら）。
【０２２９】
この抗体のアミノ酸配列改変体をコードしている核酸分子は、当該分野で公知の種々の方法により調製される。これらの方法としては限定はしないが、天然の供給源からの単離（天然アミノ酸配列改変体の場合）または初期調製改変体もしくは非改変体バージョンの抗体のオリゴヌクレオチド媒介性（もしくは部位特異的）突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発、およびカセット突然変異誘発による調製が挙げられる。
【０２３０】
（（ｖｉｉｉ）所望の性質を有する抗体についてのスクリーニング）
抗体を発生させるための技術は、上に記載されている。必要に応じて、特定の生物学的特性を有する抗体をさらに選択してもよい。
【０２３１】
ＨＥＲレセプターのリガンド活性化をブロックする抗体を同定するために、（例えば、別のＨＥＲレセプターとコンジュゲートして、それと共に目的のＨＥＲレセプターがＨＥＲヘテロオリゴマーを形成する）ＨＥＲレセプターを発現している細胞へのＨＥＲリガンドの結合を、その抗体がブロックする能力を決定してもよい。例えば、ＨＥＲヘテロオリゴマーのＨＥＲレセプターを自然発現しているか、またはそれを発現するようにトランスフェクションされた細胞を、その抗体と共にインキュベーションして、次に標識したＨＥＲリガンドに曝露してもよい。次いで、その抗体が、ＨＥＲヘテロオリゴマー中のＨＥＲレセプターへのリガンドの結合をブロックする能力を、評価してもよい。
【０２３２】
例えば、ＨＥＲ２抗体によるＭＣＦ７乳房腫瘍細胞系へのＨＲＧの結合の阻害は、本質的に米国特許第６，９４９，２４５号明細書に記載されたように２４ウェルプレート形式で氷上で単層ＭＣＦ７培養物を用いて行ってもよい。ＨＥＲ２モノクローナル抗体を各ウェルに加え、３０分間インキュベーションしてもよい。次いで、１２５Ｉ標識したｒＨＲＧβ１１７７−２２４（２５ｐｍ）を加えて、インキュベーションを４から１６時間続けてもよい。用量反応曲線を準備してもよいし、そして目的の抗体についてＩＣ５０値を算出してもよい。一実施形態では、ＨＥＲレセプターのリガンド活性化をブロックする抗体は、このアッセイで約５０ｎＭ以下、より好ましくは約１０ｎＭ以下という、ＭＣＦ７細胞に対するＨＲＧ結合阻害についてのＩＣ５０を有する。抗体が、Ｆａｂフラグメントなどの抗体フラグメントである場合、このアッセイにおけるＭＣＦ７細胞に対するＨＲＧの結合阻害についてのＩＣ５０は、例えば約１００ｎＭ以下、より好ましくは５０ｎＭ以下であってもよい。
【０２３３】
あるいは、または追加して、ＨＥＲヘテロオリゴマーに存在するＨＥＲレセプターのＨＥＲリガンド刺激性チロシンリン酸化を抗体がブロックする能力を評価してもよい。例えば、ＨＥＲレセプターを内因性発現しているか、またはそれらを発現するようにトランスフェクトされた細胞を、抗体と共にインキュベーションして、次に、ＨＥＲリガンド依存性チロシンリン酸化活性について抗ホスホチロシンモノクローナル抗体（必要に応じて検出可能な標識とコンジュゲートされたもの）を用いてアッセイしてもよい。米国特許第５，７６６，８６３号明細書に記載されているキナーゼレセプター活性化アッセイも、ＨＥＲレセプターの活性化および抗体によるその活性のブロックを決定するために利用できる。
【０２３４】
一実施形態では、本質的に米国特許第６，９４９，２４５号明細書に記載されたように、ＭＣＦ７細胞でのＨＲＧによるｐ１８０チロシンリン酸化の刺激を阻害する抗体についてスクリーニングしてもよい。例えば、ＭＣＦ７細胞を２４ウェルプレートにプレートして、ＨＥＲ２に対するモノクローナル抗体を各ウェルに加え、室温で３０分間インキュベーションし；次いで最終濃度０．２ｎＭまでｒＨＲＧβ１１７７−２４４を各ウェルに加えてもよく、そしてインキュベーションを８分間続けてもよい。培地を各ウェルから吸引し、ＳＤＳサンプル緩衝液（５％のＳＤＳ、２５ｍＭのＤＴＴ、および２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ６．８）１００μｌを加えることによって反応を停止させてもよい。各サンプル（２５μｌ）を、４〜１２％の勾配ゲル（Ｎｏｖｅｘ）で電気泳動して、次にポリビニリデンジフルオリド膜に電気泳動的に移行させてもよい。抗ホスホチロシン（１μｇ／ｍｌ）免疫ブロットを発色させて、Ｍｒ約１８０，０００での顕著な反応性バンドの強度を反射率デンシトメトリーにより定量してもよい。選択された抗体は、好ましくはこのアッセイのコントロールの約０〜３５％まで、ＨＲＧによるｐ１８０チロシンリン酸化刺激を有意に阻害する。反射率デンシトメトリーによって決定された、ＨＲＧによるｐ１８０チロシンリン酸化刺激を阻害することについての用量反応曲線を準備してもよく、目的の抗体についてのＩＣ５０を算出してもよい。一実施形態では、ＨＥＲレセプターのリガンド活性化をブロックする抗体は、このアッセイにおいてＨＲＧによるｐ１８０チロシンリン酸化刺激を阻害することについて、約５０ｎＭ以下の、より好ましくは約１０ｎＭ以下というＩＣ５０を有する。抗体が、Ｆａｂフラグメントなどの抗体フラグメントである場合、このアッセイにおいて、ＨＲＧによるｐ１８０チロシンリン酸化刺激を阻害することについてのＩＣ５０は、例えば約１００ｎＭ以下、より好ましくは５０ｎＭ以下であってもよい。
【０２３５】
例えば、本質的にＳｃｈａｅｆｅｒら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １５：１３８５〜１３９４（１９９７）に記載されているように、ＭＤＡ−ＭＢ−１７５細胞に及ぼす抗体の成長阻害効果を評価してもよい。このアッセイに従って、ＭＤＡ−ＭＢ−１７５細胞を、ＨＥＲ２モノクローナル抗体（１０μｇ／ｍＬ）で４日間処理して、クリスタルバイオレットで染色してもよい。ＨＥＲ２抗体とのインキュベーションにより、モノクローナル抗体２Ｃ４によって示される効果に類似した、この細胞系に及ぼす成長阻害効果が示され得る。さらなる実施形態では、外因性ＨＲＧはこの阻害を有意に逆転しないであろう。好ましくは、この抗体は、外因性ＨＲＧの存在下および不在下の両方で、モノクローナル抗体４Ｄ５よりも高い程度（および必要に応じてモノクローナル抗体７Ｆ３よりも高い程度）までＭＤＡ−ＭＢ−１７５細胞の細胞増殖を阻害し得る。
【０２３６】
一実施形態では、目的のＨＥＲ２抗体は、モノクローナル抗体４Ｄ５よりも実質的に効果的に、好ましくはモノクローナル抗体７Ｆ３よりも実質的に効果的に、米国特許第６，９４９，２４５号明細書に記載された実験などの共免疫沈降実験で決定されるとおり、ＭＣＦ７細胞およびＳＫ−ＢＲ−３細胞の両方においてＨＥＲ２とＨＥＲ３とのヘレグリン依存性の会合をブロックし得る。
【０２３７】
成長阻害性ＨＥＲ２抗体を同定するために、ＨＥＲ２を過剰発現しているガン細胞の成長を阻害する抗体についてスクリーニングしてもよい。一実施形態では、選り抜きの成長阻害抗体は、細胞培養において約０．５から３０μｇ／ｍｌの抗体濃度で約２０〜１００％、好ましくは約５０〜１００％、ＳＫ−ＢＲ−３細胞の成長を阻害し得る。このような抗体を同定するために、米国特許第５，６７７，１７１号明細書に記載されているＳＫ−ＢＲ−３アッセイを行ってもよい。このアッセイに従って、ＳＫ−ＢＲ−３細胞を、１０％ウシ胎仔血清、グルタミン、およびペニシリン−ストレプトマイシンを補充したＦ１２とＤＭＥＭ培地との１：１混合物中で増殖させる。ＳＫ−ＢＲ−３細胞を、３５ｍｍの細胞培養皿に細胞２０，０００個で（２ｍｌ／３５ｍｍの皿）でプレートする。皿１枚あたり０．５から３０μｇ／ｍｌのＨＥＲ２抗体を添加する。６日後に、未処理の細胞と比較した細胞数を、電子ＣＯＵＬＴＥＲ（商標）細胞計数機を用いて計数する。ＳＫ−ＢＲ−３細胞の成長を約２０〜１００％または約５０〜１００％阻害する抗体を、成長阻害性抗体として選択してもよい。４Ｄ５および３Ｅ８などの成長阻害性抗体についてスクリーニングするアッセイに関しては、米国特許第５，６７７，１７１号明細書を参照のこと。
【０２３８】
アポトーシスを誘導する抗体を選択するために、ＢＴ４７４細胞を用いたアネキシン結合アッセイを利用できる。ＢＴ４７４細胞を培養して、前段に考察したように皿に播種する。次いで、培地を取り除き、新鮮培地単独または１０μｇ／ｍｌのモノクローナル抗体を含有する培地に交換する。３日間のインキュベーション期間の後に、単層をＰＢＳで洗浄し、トリプシン処理により剥離する。次いで、細胞を遠心分離して、Ｃａ２＋結合緩衝液に再懸濁して、細胞死アッセイについて上に論じたように試験管にアリコートする。次いで、試験管に標識したアネキシン（例えばアネキシンＶ−ＦＴＩＣ）（１μｇ／ｍｌ）を入れる。ＦＡＣＳＣＡＮ（商標）フローサイトメータおよびＦＡＣＳＣＯＮＶＥＲＴ（商標）ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いてサンプルを分析してもよい。コントロールに比べて統計的に有意なレベルのアネキシン結合を誘導する抗体を、アポトーシス誘導性抗体として選択する。アネキシン結合アッセイに追加して、ＢＴ４７４細胞を用いたＤＮＡ染色アッセイを利用できる。このアッセイを行うために、前の二つの段落に記載したように目的の抗体で処理したＢＴ４７４細胞を、３７℃で２時間、９μｇ／ｍｌのＨＯＥＣＨＳＴ３３３４２（商標）と共にインキュベーションし、次いで、ＥＰＩＣＳ  ＥＬＩＴＥ（商標）フローサイトメータ（Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）でＭＯＤＦＩＴ  ＬＴ（商標）ソフトウェア（Ｖｅｒｉｔｙ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｈｏｕｓｅ）を用いて分析する。このアッセイを用いて、未処理細胞（最大１００％のアポトーシス細胞）よりも２倍以上（好ましくは３倍以上）というアポトーシス細胞率の変化を誘導する抗体を、アポトーシス促進性抗体として選択してもよい。７Ｃ２および７Ｆ３などの、アポトーシスを誘導する抗体についてスクリーニングするためのアッセイに関しては国際公開第９８／１７７９７号パンフレットを参照のこと。
【０２３９】
目的の抗体によって結合されるＨＥＲ２上のエピトープに結合する抗体についてスクリーニングするために、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，編集、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されているような慣用的な交差ブロック（ｃｒｏｓｓ−ｂｌｏｃｋｉｎｇ）アッセイを行って、２Ｃ４またはペルツズマブなどの抗体がＨＥＲ２に結合するのをその抗体が交差ブロック（ｃｒｏｓｓ−ｂｌｏｃｋ）するかどうかを評価してもよい。あるいは、またはさらに、当該分野で公知の方法によって、エピトープマッピングを行うことができ、かつ／または抗体−ＨＥＲ２構造を研究して（Ｆｒａｎｋｌｉｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：３１７〜３２８（２００４））ＨＥＲ２のどのドメイン（単数または複数）がその抗体によって結合されるか確認してもよい。
【０２４０】
（（ｉｘ）ペルツズマブ組成物）
ＨＥＲ２抗体組成物の一実施形態では、その組成物は主要種ペルツズマブ抗体とその１つ以上の改変体との混合物を含む。本明細書におけるペルツズマブ主要種抗体の好ましい実施形態は、配列番号３および４の可変軽鎖および可変重鎖アミノ酸配列を含む抗体であり、最も好ましくは配列番号１３および１７より選択される軽鎖アミノ酸配列と、配列番号１４および１８より選択される重鎖アミノ酸配列（これらの配列の脱アミド化および／または酸化改変体を含む）とを含む抗体である。一実施形態では、この組成物は主要種ペルツズマブ抗体と、アミノ末端リーダー伸長を含むそのアミノ酸配列改変体との混合物を含む。好ましくは、アミノ末端リーダー伸長は抗体改変体の軽鎖上（例えば抗体改変体の１本または２本の軽鎖上）に存在する。主要種ＨＥＲ２抗体または抗体改変体は全長抗体または抗体フラグメント（例えばＦ（ａｂ＝）２フラグメントのＦａｂ）であってもよいが、好ましくは両方が全長抗体である。本明細書における抗体改変体は、その任意の１つ以上の重鎖または軽鎖上にアミノ末端リーダー伸長を含んでもよい。好ましくは、アミノ末端リーダー伸長は、抗体の１本または２本の軽鎖上である。アミノ末端リーダー伸長は、好ましくはＶＨＳ−を含むか、またはそれからなる。限定はしないがＮ末端配列解析、電荷不均一性についてのアッセイ（例えば陽イオン交換クロマトグラフィーまたはキャピラリーゾーン電気泳動）、質量分析などを含めた種々の分析技術により、組成物中のアミノ末端リーダー伸長の存在を検出してもよい。組成物中の抗体改変体の量は、一般的にその改変体を検出するために用いられる任意のアッセイ（好ましくはＮ末端配列解析）の検出限界を構成する量から、主要種抗体の量未満の量までの範囲である。一般的に、組成物中の抗体分子の約２０％以下（例えば約１％から約１５％、例えば５％から約１５％）は、アミノ末端リーダー伸長を含む。そのようなパーセント量は、好ましくは定量的Ｎ末端配列解析または陽イオン交換分析を用いて（好ましくは、ＰＲＯＰＡＣ  ＷＣＸ−１０（商標）陽イオン交換カラムなどの高分解能弱陽イオン交換カラムを用いて）決定される。アミノ末端リーダー伸長改変体の他に、主要種抗体および／または改変体のさらなるアミノ酸配列の変更が考慮されており、それらには限定はしないが一つまたは両方の重鎖にＣ末端リシン残基を含む抗体、脱アミド化抗体改変体などが挙げられる。
【０２４１】
さらに、主要種抗体または改変体は、さらにグリコシル化変異を含んでもよく、その非限定的な例としては、Ｆｃ領域に付着したＧ１もしくはＧ２オリゴ糖構造を含む抗体、その軽鎖に付着した糖質部分（例えば、抗体の１本もしくは２本の軽鎖に付着した、例えば１つ以上のリシン残基に付着したグルコースもしくはガラクトースなどの一つもしくは二つの糖質部分）を含む抗体、１本もしくは２本の非グリコシル化重鎖を含む抗体、または１本もしくは２本の重鎖に付着したシアリデート化（ｓｉａｌｉｄａｔｅｄ）オリゴ糖を含む抗体などが挙げられる。
【０２４２】
この組成物は、遺伝子操作された細胞系、例えばＨＥＲ２抗体を発現しているチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系から回収してもよく、またペプチド合成により調製してもよい。
【０２４３】
（ｘ）免疫コンジュゲート
本発明はまた、細胞毒性剤、例えば、化学療法剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物または動物起源の低分子毒素または酵素活性毒素であって、そのフラグメントおよび／または改変体を含む）、または放射性同位体（すなわち放射性コンジュゲート）にコンジュゲートした抗体を含む免疫コンジュゲートにも関する。
【０２４４】
このような免疫コンジュゲートの発生に有用な化学療法剤は上に記載されている。抗体と、１つ以上の低分子毒素、例えば、カリケアミシン、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）（米国特許第５，２０８，０２０号明細書）、トリコテン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｎｅ）、およびＣＣ１０６５とのコンジュゲートも本明細書において考慮される。
【０２４５】
本発明の１つの好ましい実施形態では、抗体は、１つ以上のメイタンシン分子（例えば、抗体１分子あたり約１から約１０個のメイタンシン分子）とコンジュゲートされる。メイタンシンを、例えばＭａｙ−ＳＳ−Ｍｅに変換してもよく、それをＭａｙ−ＳＨ３に還元して改変抗体と反応させ（Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７〜１３１（１９９２））、メイタンシノイド−抗体免疫コンジュゲートを生成させてもよい。
【０２４６】
目的の別の免疫コンジュゲートは、１つ以上のカリケアミシン分子とコンジュゲートしている抗体を含む。カリケアミシンファミリーの抗生物質は、サブピコモル濃度で、２本鎖ＤＮＡ切断を生じ得る。使用され得るカリケアミシンの構造アナログとしては限定はしないが、γ１Ｉ、α２Ｉ、α３Ｉ、Ｎ−アセチル−γ１Ｉ、ＰＳＡＧ、およびθＩ１が挙げられる（Ｈｉｎｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：３３３６〜３３４２（１９９３）およびＬｏｄｅら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５８：２９２５〜２９２８（１９９８））。参照により本明細書に特に援用される米国特許第５，７１４，５８６号明細書；第５，７１２，３７４号明細書；第５，２６４，５８６号明細書；および第５，７７３，００１号明細書も参照のこと。
【０２４７】
用いられ得る酵素活性毒素およびそのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、アルファ−サルシン（ｓａｒｃｉｎ）、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａインヒビター、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニン、マイトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、およびトリコテセンが挙げられる。例えば、１９９３年１０月２８日に公開された国際公開第９３／２１２３２号パンフレットを参照のこと。
【０２４８】
本発明は、抗体と核酸分解活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼ、またはＤＮＡエンドヌクレアーゼ、例えば、デオキシリボヌクレアーゼ；ＤＮａｓｅ）との間に形成される免疫コンジュゲートをさらに考慮する。
【０２４９】
種々の放射性同位体が、放射性コンジュゲートしたＨＥＲ２抗体の産生に利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、およびＬｕの放射性同位体が挙げられる。
【０２５０】
抗体と細胞毒性薬とのコンジュゲートを、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシインイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジポイミデートＨＣＬなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トリエン（ｔｏｌｙｅｎｅ）−２，６−ジイソシアネートなど）、およびビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）を用いて作成してもよい。例えば、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）に記載されているように、リシン免疫毒素を調製してもよい。炭素−１４−標識した１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体に放射性ヌクレオチドをコンジュゲートするための例示的なキレート剤である。国際公開第９４／１１０２６号パンフレットを参照のこと。リンカーは、細胞内で細胞毒性薬物の放出を容易にする切断可能なリンカー（ｌｅａｖａｂｌｅ  ｌｉｎｋｅｒ）＠であってもよい。例えば、酸に不安定なリンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７〜１３１（１９９２））を用いてもよい。
【０２５１】
あるいは、抗体および細胞毒性薬を含む融合タンパク質は、例えば組み換え技術またはペプチド合成によって作成してもよい。
【０２５２】
他の免疫コンジュゲートが本明細書において考慮される。例えば、種々の非タンパク質性ポリマー、例えばポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとのコポリマーのうちの一つに抗体を連結してもよい。例えばコアセルベーション技術もしくは界面重合によって調製されたマイクロカプセル（例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースマイクロカプセルもしくはゼラチンマイクロカプセル、およびポリ（メタクリル酸）メチルマイクロカプセル）に、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、ミクロエマルション、ナノ粒子、およびナノカプセル）に、またはマクロエマルションに、抗体を捕捉してもよい。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１６版，Ｏｓｌｏ，Ａ．，Ｅｄ．，（１９８０）に開示されている。
【０２５３】
本明細書において開示された抗体は、免疫リポソームとして処方してもよい。抗体を含有するリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０（１９８０）；米国特許第４，４８５，０４５号明細書および第４，５４４，５４５号明細書；ならびに１９９７年１０月２３日公開の国際公開第９７／３８７３１号パンフレットに記載されているように、当該分野において公知の方法により調製される。循環時間が改善されたリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号明細書に開示されている。
【０２５４】
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ−誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発法によって生成させてもよい。所定の孔径のフィルターを通してリポソームを押出して、所望の直径を有するリポソームを得る。本発明の抗体のＦａｂ’フラグメントを、ジスルフィド交換反応を介して、Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：２８６〜２８８（１９８２）に記載されているようにリポソームにコンジュゲートしてもよい。必要に応じて、化学療法剤がリポソーム内に含まれる。Ｇａｂｉｚｏｎら、Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８１（１９）１４８４（１９８９）を参照のこと。
【０２５５】
（ＩＩＩ．治療のための患者の選択）
本明細書における患者を、治療前に診断試験に供する。一般には、診断試験を行う場合、サンプルは治療の必要な患者から得てもよい。被験体がガンを有する場合、サンプルは腫瘍サンプル、または他の生物学的サンプル、例えば、生物学的な液体であってもよく、これには、限定はしないが、血液、尿、唾液、腹水または誘導体、例えば、血清および血漿などを包含する。
【０２５６】
診断アッセイを腫瘍サンプルで行う場合、この腫瘍サンプルは、卵巣癌、腹膜癌、卵管癌、転移性乳癌（ＭＢＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、前立腺癌、または結腸直腸癌などに由来し得る。本明細書における生体サンプルは、固定サンプル、例えばホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）サンプル、または凍結サンプルであってもよい。
【０２５７】
一実施形態では、患者におけるＥＧＦおよび／またはＴＨＧ−αのレベルを評価し、ここでは、正常なレベルに比較したそのレベルの上昇によって、その患者がＨＥＲ二量体化インヒビターでの治療の候補であることが示される。ＥＧＦおよび／またはＴＧＦ−αのこのようなレベルは、インビボにおいて、または患者から採取された種々の生物学的サンプルにおいて評価され得る。しかし好ましくは、試験されるこの生物学的サンプルは血清または血漿のサンプルである。
【０２５８】
ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現を決定するための種々の方法としては、限定はしないが、遺伝子発現プロファイリング、定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）を含むポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、マイクロアレイ分析遺、伝子発現の連続分析（ｓｅｒｉａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）（ＳＡＧＥ）、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ、マッシブリィ・パラレル・シグネチャー・シーケンシング（Ｍａｓｓｉｖｅｌｙ  Ｐａｒａｌｌｅｌ  Ｓｉｇｎａｔｕｒｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）（ＭＰＳＳ）による遺伝子発現解析、プロテオミクス、免疫組織化学法（ＩＨＣ）などが挙げられる。好ましくはｍＲＮＡが定量される。このようなｍＲＮＡ分析は、好ましくはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）の技術を用いて、またはマイクロアレイ分析により行われる。ＰＣＲが採用される場合、好ましい形態のＰＣＲは定量リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲ）である。一実施形態では、１つ以上の上記遺伝子の発現が、例えば同一腫瘍型の他のサンプルに比べて中央値以上である場合、その発現は発現陽性とみなされる。中央値の発現レベルは、本質的に遺伝子発現の測定と同時発生的に決定されてもよいし、また予め決定されていてもよい。
【０２５９】
固定パラフィン包埋組織をＲＮＡ起源として用いる、遺伝子発現をプロファイリングするための、ｍＲＮＡ単離、精製、プライマー伸長、および増幅を含めた代表的なプロトコールの段階は、種々の公表された雑誌文献（例えば、Ｇｏｄｆｒｅｙら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ２：８４〜９１（２０００）；Ｓｐｅｃｈｔら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５８：４１９〜２９（２００１））に示されている。要するに、代表的なプロセスは、パラフィン包埋腫瘍組織サンプルの約１０μｇ厚の切片を切り出すことで開始する。次いで、ＲＮＡを抽出し、タンパク質およびＤＮＡを除去する。ＲＮＡ濃度を分析した後に、ＲＮＡの修復および／または増幅段階を必要ならば含めることができ、そして遺伝子特異的プロモータを用いてＲＮＡを逆転写し、続いてＰＣＲを行う。最後に、データを解析して、検査された腫瘍サンプルで特定された特徴的な遺伝子発現パターンに基づいて患者に利用できる最良の処置選択肢（単数または複数）を特定する。
【０２６０】
特定の血清ＥＬＩＳＡバイオアッセイプロトコールを実施例１に提供する。
【０２６１】
ＥＧＦおよび／またはＴＧＦ−αはまた、インビボの診断アッセイを用いて、例えば、試験されるべき分子に結合して、検出可能標識（例えば、放射性同位体）でタグ化されている分子（例えば、抗体）を投与することによって、そして標識の局在化のために患者を外からスキャンすることによって評価されてもよい。
【０２６２】
ＥＧＦおよび／またはＴＧＦ−αの評価とは別に、当業者は、ガンにおいてＨＥＲの発現または増幅を決定し得る。種々の診断／予測アッセイがこれに利用可能である。一実施形態では、ＨＥＲの過剰発現を、例えばＨＥＲＣＥＰＴＥＳＴ（登録商標）（Ｄａｋｏ）を用いるＩＨＣにより分析してもよい。腫瘍生検からのパラフィン包埋組織切片をＩＨＣアッセイに供して、以下のようなＨＥＲ２タンパク質染色強度基準にあてはめてもよい：
スコア０  染色が観察されないか、または腫瘍細胞の１０％未満に膜染色が観察される。
【０２６３】
スコア１＋  腫瘍細胞の１０％超にかすか／わずかに認知できる膜染色が検出される。これらの細胞は膜の一部だけが染色される。
【０２６４】
スコア２＋  腫瘍細胞の１０％超に膜全体の弱から中度の染色が観察される。
【０２６５】
スコア３＋  腫瘍細胞の１０％超に膜全体の中から強度の染色が観察される。
【０２６６】
ＨＥＲ２の過剰発現評価についてスコア０または１＋を有する腫瘍を、ＨＥＲ２を過剰発現していないと特徴づけてもよく、一方、スコア２＋または３＋を有する腫瘍を、ＨＥＲ２を過剰発現していると特徴づけてもよい。
【０２６７】
ＨＥＲ２を過剰発現している腫瘍を、細胞１個あたりに発現したＨＥＲ２分子のコピー数に対応する免疫組織化学スコアによって採点してもよく、そして生化学的に決定してもよい：
０＝０〜１０，０００コピー／細胞、
１＋＝少なくとも約２００，０００コピー／細胞、
２＋＝少なくとも約５００，０００コピー／細胞、
３＋＝少なくとも約２，０００，０００コピー／細胞。
【０２６８】
チロシンキナーゼのリガンド非依存的活性化を誘導する３＋レベルでのＨＥＲ２の過剰発現（Ｈｕｄｚｉａｋら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４：７１５９〜７１６３（１９８７））は、乳ガンの約３０％に生じ、これらの患者では無再発生存数および全生存数は減少する（Ｓｌａｍｏｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：７０７〜７１２（１９８９）；Ｓｌａｍｏｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３５：１７７〜１８２（１９８７））。
【０２６９】
あるいは、またはさらに、ＩＮＦＯＲＭ（商標）（Ｖｅｎｔａｎａ，Ａｒｉｚｏｎａが販売）またはＰＡＴＨＶＩＳＩＯＮ（商標）（Ｖｙｓｉｓ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）などのＦＩＳＨアッセイを、ホルマリン固定パラフィン包埋腫瘍組織に対して行って、腫瘍におけるＨＥＲ２の増幅の程度（もしあれば）を決定してもよい。
【０２７０】
一実施形態では、このガンとはＥＧＦＲを発現する（かつ過剰発現し得る）ガンであり、このような発現は、上に言及したようなＨＥＲ２の発現を評価するための方法に関して評価してもよい。
【０２７１】
（ＩＶ．薬学的処方物）
本発明に従って用いられるＨＥＲ二量体化インヒビターの治療用処方物は、所望の程度の純度を有する抗体と、任意の薬学的に受容可能な担体、賦形剤、または安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０））と共に、一般には凍結乾燥製剤または水溶液の形態で混合することによって、保存用に調製される。抗体の結晶も考慮されている（米国特許出願公開第２００２／０１３６７１９号明細書を参照のこと）。受容可能な担体、賦形剤、または安定化剤は、使用される投薬量および濃度でレシピエントに対して無毒性であり、これらとしては、リン酸塩、クエン酸塩、およびその他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンを含めた抗酸化剤；保存料（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコール、もしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルパラベンもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシン；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖類、二糖類、およびその他の糖質（炭水化物）；ＥＤＴＡなどのキレート剤；糖類、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン界面活性剤が挙げられる。凍結乾燥された抗体処方物は、参照により本明細書に特に組み入れられる国際公開第９７／０４８０１号パンフレットに記載されている。
【０２７２】
治療用途に好ましいペルツズマブ処方物は、３０ｍｇ／ｍＬペルツズマブを、２０ｍＭの酢酸ヒスチジン、１２０ｍＭのスクロース、０．０２％のポリソルベート２０（ｐＨ６．０）中に含む。別のペルツズマブ処方物は、２５ｍｇ／ｍＬのペルツズマブ、１０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ緩衝液、２４０ｍＭのスクロース、０．０２％のポリソルベート２０（ｐＨ６．０）を含む。
【０２７３】
本明細書における処方物はまた、処置される特定の適応に必要な２つ以上の活性化合物、好ましくは相互に有害な影響を及ぼさない相補的活性を有する化合物も含んでもよい。ＨＥＲ二量体化インヒビターと組み合わせることのできる種々の薬物は、下記の方法の節に記載されている。このような分子は、好適には、意図された目的に有効な量で組み合わされて存在する。
【０２７４】
例えばコアセルベーション技術によって、または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロースマイクロカプセルもしくはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ（メタクリル酸メチル）マイクロカプセルに、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、ミクロエマルション、ナノ粒子、およびナノカプセル）に、またはマクロエマルションに、活性成分を捕捉してもよい。このような技術はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１６版，Ｏｓｌｏ，Ａ．，編集，（１９８０）に開示されている。
【０２７５】
持続性放出製剤を調製してもよい。持続性放出製剤の適切な例としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが挙げられ、このマトリックスは、造形品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形態である。持続性放出マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（メタクリル酸２−ヒドロキシエチル）、またはポリ（ビニルアルコール）、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号明細書）、Ｌ−グルタミン酸とγ−エチル−Ｌ−グルタミン酸とのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される注射可能なミクロスフェア）などの分解性の乳酸−グリコール酸コポリマー、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【０２７６】
インビボ投与のために用いられる処方物は無菌でなければならない。これは、無菌濾過膜を通して濾過することにより容易に実現される。
【０２７７】
（Ｖ．ＨＥＲ二量体化インヒビターを用いた処置）
本明細書の発明は、ＥＧＦおよび／またはＴＧＦ−αのレベルの上昇を生じているガン患者において生存を延長するための方法を提供し、この方法は、その患者の生存を延長する量のＨＥＲ二量体化インヒビターをその患者に投与することを包含する。好ましくは、ＨＥＲ二量体化インヒビターはＨＥＲ２二量体化インヒビターであり、かつ／またはＨＥＲのヘテロ二量体化を阻害する。
【０２７８】
ＨＥＲ二量体化インヒビターでの治療のための候補患者を特定するための方法は、上記の第ＩＩＩ章で考察されている。
【０２７９】
ＨＥＲ二量体化インヒビターで処置することのできる種々のガンの例は、上記の定義の節に挙げる。好ましいガンの適応としては、卵巣癌；腹膜癌；卵管癌；転移性乳癌（ＭＢＣ）を含む乳癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含む肺癌、前立腺癌、および結腸直腸癌が挙げられる。一実施形態では、処置されるガンは進行性、治療抵抗性、再発性、化学療法耐性、および／または白金耐性のガンである。
【０２８０】
ＨＥＲ二量体化インヒビターを用いた治療は、ＴＴＰおよび／または生存を延長する。一実施形態では、ＨＥＲ二量体化インヒビターを用いた治療は、認可された抗腫瘍剤を投与することによって、または処置されるガンについての診療基準によって実現されるＴＴＰまたは生存よりも、ＴＴＰまたは生存を少なくとも約５％、または少なくとも１０％、または少なくとも１５％、または少なくとも２０％、または少なくとも２５％より長く延長する。
【０２８１】
好ましい実施形態では、本発明は、卵巣癌、腹膜癌、または卵管癌を有する患者であって、そのガンがＨＥＲ２活性化を示している患者における疾患の進行までの期間（ＴＴＰ）または生存を延長するための方法を提供し、この方法は、患者のＴＴＰまたは生存を延長する量のペルツズマブをその患者に投与することを含む。この患者は、進行性、難治性、再発性、化学療法耐性、および／または白金耐性の卵巣癌、腹膜癌、または卵管癌を有してもよい。患者へのペルツズマブの投与は、例えばこのような患者にトポテカンまたはリポソームドキソルビシンを投与することによって実現されるＴＴＰまたは生存よりも少なくとも約５％、または少なくとも１０％、または少なくとも１５％、または少なくとも２０％、または少なくとも２５％より大きくＴＴＰまたは生存を延長し得る。
【０２８２】
ＨＥＲ二量体化インヒビターを、公知の方法、例えば、ボーラス投与のような静脈内投与、あるいは、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑膜内、鞘内、経口、局所、または吸入の経路に従いある時間にわたる持続注入によって、ヒト患者に投与する。抗体の静脈内投与が好ましい。
【０２８３】
ガンの予防または処置のためのＨＥＲ二量体化インヒビターの用量は、上に定義したような処置されるべきガンのタイプ、ガンの重症度および経過、その抗体が予防目的のために投与されるか、または治療目的のために投与されるか、以前の治療、患者の臨床歴およびその抗体に対する応答、ならびに担当の医師の判断力に左右される。
【０２８４】
一実施形態では、固定用量のＨＥＲ二量体化インヒビターが投与される。この固定用量は、適切には１回で患者に投与されても、または連続した処置で患者に投与されてもよい。固定用量が投与される場合、好ましくはその固定用量は約２０ｍｇから約２０００ｍｇのＨＥＲ二量体化インヒビターの範囲である。例えば、その固定用量は約４２０ｍｇ、約５２５ｍｇ、約８４０ｍｇ、または約１０５０ｍｇのＨＥＲ二量体化インヒビター、例えばペルツズマブであってもよい。
【０２８５】
一連の用量が投与される場合、これらは、例えばおよそ毎週、およそ隔週、およそ３週間毎、またはおよそ４週間毎に投与されてもよいが、好ましくはおよそ３週間毎に投与される。例えば疾患が進行するまで、有害事象まで、または医師によって決定されるその他の時点まで、この固定用量を投与し続けてもよい。例えば、約２、３、または４から最大約１７回以上の固定用量を投与してもよい。
【０２８６】
一実施形態では、負荷用量の抗体を１回以上投与した後、その抗体の維持用量を１回以上投与する。別の実施形態では、患者に同用量を複数回投与する。
【０２８７】
本発明の好ましい一実施形態に従って、ＨＥＲ二量体化インヒビター（例えば、ペルツズマブ）、固定用量約８４０ｍｇ（負荷用量）を投与し、その後にその抗体、約４２０ｍｇ（維持用量）を１回以上投与する。維持用量は、好ましくはほぼ３週間毎に、合計して少なくとも２回から最大１７回以上投与される。
【０２８８】
本発明の別の好ましい実施形態に従って、ＨＥＲ二量体化インヒビター（例えば、ペルツズマブ）、固定用量の約１０５０ｍｇが１回以上、例えば３週間毎に投与される。この実施形態によれば、１回、２回、またはそれを超える固定用量が、例えば所望により最大１年間（１７サイクル）以上投与される。
【０２８９】
別の実施形態では、ＨＥＲ二量体化インヒビター（例えばペルツズマブ）固定用量の約１０５０ｍｇが負荷用量として投与され、その後に維持用量の約５２５ｍｇが１回以上投与される。本実施形態によれば、約１、２、またはそれを超える維持用量が、３週間毎に患者に投与されてもよい。
【０２９０】
ＨＥＲ二量体化インヒビターは単一抗腫瘍剤として投与されてもよいが、患者は必要に応じてＨＥＲ二量体化インヒビターと、１つ以上の化学療法剤との組み合わせで処置される。好ましくは化学療法剤の少なくとも一つは、ゲムシタビンなどの代謝拮抗化学療法剤である。組み合わせ投与としては、別々の処方物または単一の薬学的処方物を用いた同時投与または併行投与、およびいずれかの順序で投与する連続投与がある。このとき両方の（または全ての）活性薬剤がそれらの生物学的活性を同時に発揮する期間が存在することが好ましい。このように、ＨＥＲ二量体化インヒビターの投与前または投与後に代謝拮抗化学療法剤を投与してもよい。本実施形態では、代謝拮抗化学療法剤の少なくとも１回の投与と、ＨＥＲ二量体化インヒビターの少なくとも１回の投与との間のタイミングは、好ましくは約１か月以下であり、最も好ましくは約２週間以下である。あるいは、代謝拮抗化学療法剤およびＨＥＲ二量体化インヒビターは、単一の処方物または別々の処方物の形で患者に同時投与される。化学療法剤（例えばゲムシタビンなどの代謝拮抗化学療法剤）とＨＥＲ二量体化インヒビター（例えばペルツズマブ）との組み合わせを用いた処置により、患者に対して相乗的な、すなわち相加的よりも大きな治療効果が生じ得る。
【０２９１】
代謝拮抗化学療法剤は、投与されるならば、それについての公知の投薬量で通常投与されるか、または代謝拮抗化学療法剤の投与に原因があるとされる薬物の併用作用または負の副作用が原因で必要に応じて減量される。このような化学療法剤のための調製および投薬スケジュールは、製造業者の説明書に従って、または当業者により経験的に決定されるとおり用いればよい。代謝拮抗化学療法剤がゲムシタビンである場合、好ましくは、ゲムシタビンは約６００ｍｇ／ｍ２から１２５０ｍｇ／ｍ２の間（例えば約１０００ｍｇ／ｍ２）の用量で、例えば３週間サイクルの１日目および８日目に投与される。
【０２９２】
ＨＥＲ二量体化インヒビターおよび代謝拮抗化学療法剤の他に、他の治療レジメンをそれと組み合わせてもよい。例えば、第２（第３、第４など）の化学療法剤（類）を投与してもよく、ここでは、第２の化学療法剤は、別の異なる代謝拮抗化学療法剤または代謝拮抗物質ではない化学療法剤のいずれかである。例えば、第２の化学療法剤は、タキサン（例えば、パクリタキセルもしくはドセタキセル）、カペシタビン、または白金系化学療法剤（例えば、カルボプラチン、シスプラチン、またはオキサリプラチン）、アントラサイクリン（例えば、リポソームドキソルビシンを含むドキソルビシン）、トポテカン、ペメトレキセド、ビンカアルカロイド（ビノレルビンなど）、およびＴＬＫ２８６であってもよい。異なる化学療法剤のカクテル（Ｃｏｃｋｔａｉｌ）＠を投与してもよい。
【０２９３】
ＨＥＲ二量体化インヒビターと組み合わせてもよいその他の治療剤としては、以下のうちの任意の１つ以上が挙げられる：第２の異なるＨＥＲ二量体化インヒビター（例えば、トラスツズマブなどの成長阻害性ＨＥＲ２抗体、またはＨＥＲ２過剰発現細胞のアポトーシスを誘導するＨＥＲ２抗体、例えば、７Ｃ２、７Ｆ３、もしくはそのヒト化改変体）；ＥＧＦＲ、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４などの異なる腫瘍関連抗原に対する抗体；抗ホルモン化合物、例えば、抗エストロゲン化合物、例えばタモキシフェン、またはアロマターゼインヒビター；（治療に関連する任意の心筋機能不全を阻止または低減するための）心臓保護剤；サイトカイン；ＥＧＦＲ標的薬（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）、またはセツキシマブなど）；抗血管形成剤（特にＡＶＡＳＴＩＮ（商標）の商標でＧｅｎｅｎｔｅｃｈによって販売されているベバシズマブ）；チロシンキナーゼインヒビター；ＣＯＸインヒビター（例えばＣＯＸ−１インヒビターまたはＣＯＸ−２インヒビター）；非ステロイド系抗炎症薬であるセレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標））；ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎから入手可能なチピファルニブ（Ｔｉｐｉｆａｒｎｉｂ）／ＺＡＲＮＥＳＴＲＡ（商標）Ｒ１１５７７７、またはＳｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈから入手可能なロナファルニブ（Ｌｏｎａｆａｒｎｉｂ）ＳＣＨ６６３３６）；ガン胎児タンパク質ＣＡ１２５と結合する抗体、例えば、オレゴボマブ（Ｏｒｅｇｏｖｏｍａｂ）（ＭｏＡｂ  Ｂ４３．１３）；ＨＥＲ２ワクチン（例えば、ＰｈａｒｍｅｘｉａのＨＥＲ２  ＡｕｔｏＶａｃワクチン、またはＤｅｎｄｒｅｏｎのＡＰＣ８０２４タンパク質ワクチン、またはＧＳＫ／ＣｏｒｉｘａのＨＥＲ２ペプチドワクチン）；別のＨＥＲ標的化療法（例えば、トラスツズマブ、セツキシマブ、ＡＢＸ−ＥＧＦ、ＥＭＤ７２００、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ＣＰ７２４７１４、ＣＩ１０３３、ＧＷ５７２０１６、ＩＭＣ−１１Ｆ８、ＴＡＫ１６５など）；Ｒａｆインヒビターおよび／またはｒａｓインヒビター（例えば国際公開第２００３／８６４６７号パンフレットを参照のこと）；ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤（ＤＯＸＩＬ（登録商標））；トポテカンなどのトポイソメラーゼＩインヒビター；タキサン；ＨＥＲ２およびＥＧＦＲの二重チロシンキナーゼインヒビター、例えば、ラパチニブ／ＧＷ５７２０１６：ＴＬＫ２８６（ＴＥＬＣＹＴＡ（登録商標））；ＥＭＤ−７２００；悪心を処置する薬、例えば、セロトニン拮抗薬、ステロイド、またはベンゾジアゼピン；局所または経口抗生物質を含む、皮疹を予防もしくは処置する薬または標準的なざ瘡治療法；下痢を処置または予防する薬；アセトアミノフェン、ジフェンヒドラミン、またはメペリジンなどの解熱薬；造血成長因子など。
【０２９４】
同時投与された任意の上記薬剤についての適切な投薬量は、現在使用されている投薬量であり、その薬剤およびＨＥＲ二量体化インヒビターの併用作用（相乗作用）に起因してその投薬量を減量してもよい。
【０２９５】
上記治療レジメンに加えて、ガン細胞の外科的除去および／または放射線療法を患者に実施してもよい。
【０２９６】
そのインヒビターが抗体である場合、好ましくは、投与される抗体は裸抗体である。一方、投与されるインヒビターを、細胞毒性薬とコンジュゲートしてもよい。好ましくは、その細胞毒性薬が結合しているコンジュゲートしたインヒビターおよび／または抗原は、細胞によって内部移行され、コンジュゲートの結合したガン細胞が殺滅されることによって、その治療効果が増す。好ましい実施形態では、細胞毒性薬はガン細胞中の核酸を標的または妨害する。このような細胞毒性薬の例としては、メイタンシノイド、カリケアミシン、リボヌクレアーゼ、およびＤＮＡエンドヌクレアーゼが挙げられる。
【０２９７】
本出願は、遺伝子療法によるＨＥＲ二量体化インヒビターの投与を考慮する。例えば、細胞内抗体を発生させるための遺伝子療法の使用に関する、１９９６年３月１４日に公開された国際公開第９６／０７３２１号パンフレットを参照のこと。
【０２９８】
核酸（必要に応じてベクターに含まれる）を患者の細胞内にインビボおよびエキソビボで至らせるためには、二つの主なアプローチが存在する。インビボ送達については、患者に直接、通常はその抗体が必要とされる部位に核酸を注射する。エキソビボ処置については、患者の細胞を取り出し、これらの単離された細胞に核酸を導入して、改変された細胞を患者に直接投与するか、または例えば多孔性膜内に封入して、その多孔性膜を患者に移植する（例えば米国特許第４，８９２，５３８号明細書および同第５，２８３，１８７号明細書を参照のこと）。生存可能な細胞に核酸を導入するために利用できる種々の技術が存在する。これらの技術は、核酸が培養細胞にインビトロで導入されるか、それとも対象となる宿主の細胞にインビボで導入されるかによって変わる。哺乳動物細胞にインビトロで核酸を移入するのに適した技術には、リポソームの使用、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、ＤＥＡＥ−デキストラン、リン酸カルシウム沈殿法などが挙げられる。遺伝子のエキソビボ送達に通常使用されているベクターはレトロウイルスである。
【０２９９】
現在好ましいインビボ核酸導入技術としては、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、単純ヘルペス（Ｈｅｒｐｅｓ  ｓｉｍｐｌｅｘ）Ｉウイルス、またはアデノ随伴ウイルス）および脂質ベースの系（遺伝子の脂質介在性導入に有用な脂質は、例えばＤＯＴＭＡ、ＤＯＰＥ、およびＤＣ−Ｃｈｏｌである）を用いたトランスフェクションが挙げられる。ある状況では、核酸の供給源に、標的細胞を標的する薬剤、例えば、細胞表面膜タンパク質または標的細胞に特異的な抗体、標的細胞上のレセプターに対するリガンドなどを提供することが所望される。リポソームが使用される場合、エンドサイトーシスに関連する細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質、例えば、特定の細胞型に親和性のキャプシドタンパク質またはそのフラグメント、循環中にインターナリゼーションを受けるタンパク質に対する抗体、および細胞内局在を標的して細胞内半減期を増大するタンパク質を、標的化のために、および／または取込みを促進するために用いてもよい。レセプター媒介性エンドサイトーシスの技術は、例えば、Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９〜４４３２（１９８７）；およびＷａｇｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：３４１０〜３４１４（１９９０）に記載されている。現在公知の遺伝子マーカー作成および遺伝子治療プロトコールの総説については、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：８０８〜８１３（１９９２）を参照のこと。国際公開第９３／２５６７３号パンフレットおよび本明細書に引用した参考文献も参照のこと。
【０３００】
（ＶＩ．材料の寄託）
以下のハイブリドーマ細胞系は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ  ２０１１０−２２０９，ＵＳＡ（ＡＴＣＣ）に寄託されている：
抗体の名称  ＡＴＣＣ番号  寄託日
７Ｃ２  ＡＴＣＣ  ＨＢ−１２２１５  １９９６年１０月１７日
７Ｆ３  ＡＴＣＣ  ＨＢ−１２２１６  １９９６年１０月１７日
４Ｄ５  ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０４６３  １９９０年５月２４日
２Ｃ４  ＡＴＣＣ  ＨＢ−１２６９７  １９９９年４月８日
これらの寄託は、特許手続き目的のための微生物の寄託の国際的承認に関するブタペスト条約およびその規則（ブタペスト条約）の規定のもとで行われた。これは寄託の日付から３０年間、この寄託物の実現可能な培養が維持されることを保証するものである。この寄託物は、ブタペスト条約の条項に従い、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．とＡＴＣＣとの間の合意に従ってＡＴＣＣから利用可能であり、これによって、公開寄託物質に対する利用性について寄託者によって課される全ての制限が関連の米国特許の許諾の際に決定的に除去されることを保証し、どちらが最初にくるとしても、関連した米国特許の発行時又は任意の米国または外国特許出願の公開時に、寄託の培養物の子孫を永久かつ非制限的に入手可能とすることを保証し、米国特許法第１２２条及びそれに従う特許庁長官規則（特に参照番号８８６ＯＧ６３８の３７ＣＦＲ第１．１４条を含む）に従って権利を有すると米国特許庁長官が決定した者に対してその子孫を入手可能とすることを保証するものである。
【０３０１】
本発明のさらなる詳細は、以下の非限定的な実施例によって例示される。明細書における全ての引用の開示は、参照により明らかに本明細書に援用される。
【実施例】
【０３０２】
（実施例１）
ペルツズマブで処置した卵巣癌を有する患者における臨床的な血清バイオマーカーの分析
研究のデザイン
第ＩＩ相、非盲検、単一アームの多施設研究を行って、進行性、治療抵抗性、または再発性の卵巣ガンを有する被験体におけるｒｈｕＭａｂ２Ｃ４（ペルツズマブ）の有効性の腫瘍ベースのＨＥＲ２活性化の影響を評価した。
【０３０３】
このトライアルのコホート１では、以前の化学療法に対して抵抗性であったか、または以前の化学療法後に再発した、進行性の卵巣癌を有する６５例の被験体を登録し、そして１サイクルあたり４２０ｍｇのｒｈｕＭａｂ（ペルツズマブ）を投与した。これらのうち６１例で実施した。４例の被験体が、この研究から脱落し、ペルツズマブを用いた治療は何ら受けなかった。
【０３０４】
コホート１に登録し、適格基準を満たした被験体は、腫瘍組織の生検または腹水からの腫瘍細胞の吸引を受けた。この組織をＥＬＩＳＡによりＨＥＲ２リン酸化について分析し、サンプル中で定量的にリン酸化ＨＥＲ２および総ＨＥＲ２を測定した。
【０３０５】
ペルツツマブは、１０ｍＭのＬ−ヒスチジン（ｐＨ６．０）、２４０ｍＭのスクロースおよび０．０２％のポリソルベート２０中に処方される２５ｍｇ／ｍＬのｒｈｕＭＡｂ  ２Ｃ４を含む単回使用処方物として提供された。１０ｃｃの各バイアルは、約１７５ｍｇのｒｈｕＭａｂ  ２Ｃ４を含むものとした（７．０ｍＬ／バイアル）。受け入れの際、バイアルは使用まで２℃〜８℃で冷蔵した。この処方物は、防腐剤を含まないので、バイアルのシールを穿刺するのは１回だけという指示をした。残りの溶液は廃棄した。０．９％の塩化ナトリウム注射液（ＵＳＰ）を含有するＰＶＣポリエチレンおよび非ＰＶＣポリオレフィンバッグに希釈した注入用のｒｈｕＭａｂ  ２Ｃ４の溶液を、使用前に２４時間２℃〜８℃で保管させた。
【０３０６】
ペルツズマブは、進行性の疾患の証拠を示さなかった被験体については、３週ごとに最大１年まで（１７サイクル）ＩＶ注入として投与した。被験体には、８４０ｍの負荷用量（サイクル１）をデシーブ（ｄｅｃｉｖｅｄ）し、その後、サイクル２以降では４２０ｍｇを続けた。
【０３０７】
コホート１への登録が完了した後、コホート２の登録を開始した。適格基準を満たすコホート２の被験体は、３週ごとに最大１年まで（１７サイクル）ＩＶ注入で１０５０ｍｇのペルツズマブの投与を受ける。コホート２の被験体（継続中）は、腫瘍組織の生検も、腹水からの腫瘍細胞の吸引も受けない。
【０３０８】
応答は、６週後、３ヶ月後およびその後３か月ごとに評価した。さらなる応答は、コホート２の被験体においてのみ１８週（４．５か月）で評価する。
【０３０９】
測定可能な疾患は、固形腫瘍効果判定基準（Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ）（ＲＥＣＩＳＴ）（例えば、Ｔｈｅｒａｓｓｅら、Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２（３）：２０５〜２１６（２０００）を参照のこと）を用いて、臨床的評価およびＣＴスキャンまたは等価物によって評価した。評価は可能だが測定可能な疾患のない被験体についての応答は、ＣＡ−１２５の変化、ならびに疾患の臨床的および放射線的な証拠に従って評価した。
【０３１０】
一次有効性エンドポイント：
ペルツズマブでの処置の開始後、研究期間の任意の時点での最高の全体的応答。これは、ペルツズマブでの処置の開始後、ＲＥＣＩＳＴを用いた研究者らによる評価によって、またはＣＡ−１２５の変化によって確認されたものである。
【０３１１】
二次有効性のエンドポイント：
無増悪期間（Ｔｉｍｅ  Ｔｏ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ：ＴＴＤＰ）、
奏功期間、
生存時間（全生存期間、Ｏｖｅｒａｌｌ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ：ＯＳ）および
３、６および１２か月で増悪なし（無病生存期間（Ｄｉｓｅａｓｅ−Ｆｒｅｅ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ：ＤＦＳ）の被験体の割合。
【０３１２】
増悪は、増悪または死亡のどちらかが先に確認された場合と規定された。
【０３１３】
無増悪期間（ＴＴＤＰ）とは、研究薬物処置の初日（１日目）から増悪または死亡の確認の時点までの時間として規定された。
【０３１４】
生存期間とは、１日目から死亡時までの時間として規定した。
【０３１５】
奏功期間とは、最初の完全寛解または部分寛解から増悪または死亡時までの時間として規定した。
【０３１６】
この研究における３か月、６か月および１２か月後の進行なしの被験体の割合について正確な９５％信頼区間を求めた。
【０３１７】
増悪および生存期間に対する中央時間は、カプラン−マイヤー生存分析（Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｍｅｔｈｏｄｓ）を用いて算出した。
【０３１８】
生物学的マーカーの試験的な評価を、このトライアルに組み込んだ。この評価の目的は、どの被験体がペルツズマブ処置に応答するかもしくはしないかを予測し得る１つ以上の処置前生物学的マーカーを見出すこと、またはペルツズマブ活性のバイオマーカーとして機能し得る１つ以上の治療後生物学的マーカーを特定することであった。詳細には、１つ以上の有意なエンドポイント、例えば、全生存期間（ＯＳ）または無病生存期間（ＤＦＳ）から判断して、ペルツズマブ処置から特に利益を得る可能性の高い患者集団の特定が、生物学的マーカーの評価によって可能になる。
【０３１９】
このような遺伝子発現プロファイリングは、正常な卵巣上皮組織および卵巣上皮腫瘍で行われている。本研究で得た卵巣腫瘍サンプルを、ＲＮＡ発現とペルツズマブに対する応答との間の関係を探索するためにＲＮＡ発現プロファイリングに供した。
【０３２０】
血清バイオマーカーの測定
ペルツズマブで処置したＨＥＲ２発現転移性乳癌患者由来の血清を、下に記載のとおり、アンフィレギュリン、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、および放出されたＨＥＲ２（ＨＥＲ２  ＥＣＤ）のレベルについて評価した。
【０３２１】
血清バイオマーカーの評価に用いたキット：
【０３２２】
【化１】
2009539836.tif 000003
プロトコール
ＨＥＲ２−ＥＣＤ
ＨＥＲ２−ＥＣＤ  ＥＬＩＳＡは、製造業者の推奨に従って行った。
【０３２３】
アンフィレギュリン
試薬、標準希釈液およびサンプルは、製造業者の指示に従って調製した。ＥｖｅｎＣｏａｔ  Ｇｏａｔ  Ａｎｔｉ−ｍｏｕｓｅ  ＩｇＧマイクロプレート・ストリップ（ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  ｓｔｒｉｐｓ）（Ｒ＆Ｄ，Ｃａｔ．＃ＣＰ００２；このキットには備えられていない）を、プレートに結合して、ＥＬＩＳＡプレートを作製した。１００μｌの希釈した捕獲抗体（キットに備えられている；ＰＢＳで１：１８０に）を、各々のウェルに添加し、そのウェルを室温で１時間インキュベートした。
【０３２４】
各々のウェルを吸引して洗浄した。このプロセスを、洗浄が計４回になるように３回繰り返した。そのウェルを、マニフォールド・ディスペンサーを用いて、各々のウェルに４００μｌの洗浄緩衝液（０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ）を充てんし、続いて吸引することによって洗浄した。最後の洗浄後、残りの洗浄緩衝液をすべて吸引によって除去した。次いで、そのプレートを逆さにして、清浄なペーパータオルの上で水気を切った。
【０３２５】
１ウェルあたり１００μｌの標準的な希釈液または希釈サンプル（下を参照）を添加した。ピペッティング工程の後は毎回チップを交換した。そのプレートを接着ストリップ（このキットに備えられている）でカバーして、ロッキングプラットフォーム上で室温で２時間インキュベートした。その後、吸引および洗浄の工程を上記のように繰り返した。
【０３２６】
吸引されたサンプルおよび洗浄溶液は研究用の消毒剤で処理した。
【０３２７】
試薬希釈液（１％ＢＳＡ，Ｒｏｔｈ；Ａｌｂｕｍｉｎ  Ｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｖ，Ｃａｔ．＃Ｔ８４４．２，を含むＰＢＳ）で１：１８０に希釈した１００μｌの検出抗体（このキットに備えられている）を各ウェルに添加し、そのプレートを室温で２時間インキュベートした。その後に、吸引および洗浄の工程を上記のとおり繰り返した。
【０３２８】
ストレプトアビジン−ＨＲＰの１００μｌの希釈液を各々のウェルに添加して（このキットに備えられている；試薬希釈液で１：２００希釈）、そのウェルを新しい接着ストリップでカバーして、室温で２０分間インキュベートした。吸引および洗浄の工程を上記のとおり繰り返した。
【０３２９】
１００μｌの基質溶液（Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（Ｒ＆Ｄ，Ｃａｔ．＃ＤＹ９９９；このキットと一緒には提供されない）を、各々のウェルに添加して、そのウェルを室温で２０分間、遮光下でインキュベートした。
【０３３０】
５０μｌの停止溶液（Ｓｔｏｐ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（１．５ＭのＨ２ＳＯ４（Ｓｃｈｗｅｆｅｌｓａｅｕｒｅ  ｒｅｉｎｓｔ，Ｍｅｒｃｋ，Ｃａｔ．＃７１３））を、各々のウェルに添加し、続いて注意深く混合した。各々のウェルの光学密度を、４５０ｎｍに設定したマイクロプレートリーダーを用いて直ちに決定した。
【０３３１】
アンフィレギュリンの標準曲線：
４０ｎｇ／ｍｌのアンフィレギュリンのストック溶液を、１％ＢＳＡを含むＰＢＳで調製して、アリコートして、−８０℃で保管した。２０％ＢＳＡを含むＰＢＳに溶かしたアンフィレギュリン溶液で、２週間を超えたものは安定ではなく、従って、用いられなかった。各々の実験の前には、アリコートしたアンフィレギュリンのストック溶液から、２０％ＢＳＡを含むＰＢＳで新たにアンフィレギュリン溶液を調製し、その標準曲線を作成した。その最高濃度は、１０００ｐｇ／ｍｌ（アンフィレギュリンストック溶液の１：４０希釈）とした。ＥＬＩＳＡキットに備えられている標準物から線形の標準曲線を得た。曲線のエクセルに基づく分析によって、あらゆるＥＬＩＳＡの曲線方程式を求めることができるようにした。
【０３３２】
アンフィレギュリンのサンプル：
サンプルを試薬希釈液中で１：１に希釈したところ、全てのサンプルは、ＥＬＩＳＡの直線範囲内であった。各々のサンプルは、二連で測定した。必要があれば、データの質および十分な量の血清の有無に応じて、実験を続け、測定を繰り返した。
【０３３３】
ＥＧＦ
試薬、標準希釈液およびサンプルを、製造業者の指示に従って調製した。過剰な抗体コーティングしたマイクロタイタープレートのストリップ（このキットに備えられている）をフレームから取り除いて、ＥＬＩＳＡプレートを作製した。ウェルの必要数およびプレートのレイアウトを決定した後、５０μｌのアッセイ希釈液（Ａｓｓａｙ  Ｄｉｌｕｅｎｔ）ＲＤ１（このキットに備えられている）を、各々のウェルに添加した。次いで、１ウェルあたり２００μｌの標準希釈液または希釈されたサンプル（例えば、Ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ  Ｄｉｌｕｅｎｔ  ＲＤ６Ｈで１：２０にした）を添加した。チップはピペッティング工程の後、毎回交換した。
【０３３４】
そのプレートを、接着ストリップ（キットに備えられている）でカバーして、室温で２時間、ロッキングプラットフォーム上でインキュベートした。
【０３３５】
各々のウェルを吸引して洗浄し、そのプロセスを、３回繰り返して、洗浄が計４回になすようにした。洗浄は、マニフォールド・ディスペンサーを用いて、各々のウェルに４００μｌの洗浄緩衝液（このキットに備えられている）を充てんし、引き続いて吸引することによって行った。最終の洗浄後、残っている洗浄緩衝液をすべて吸引によって除去した。次いで、そのプレートをひっくり返して、清浄なペーパータオル上で水気を切った。
【０３３６】
吸引したサンプルおよび洗浄溶液を研究用の消毒剤で処理し、２００μｌのコンジュゲート（このキットに備えられている）を各々のウェルに添加した。次いで、そのプレートを新しい接着ストリップでカバーして、室温で２時間インキュベートした。
【０３３７】
吸引および洗浄の工程は前記のように繰り返した。
【０３３８】
２００μｌの基質溶液（このキットに備えられている）を各々のウェルに添加し、続いて室温で２０分間、遮光下でインキュベートした。５０μｌの停止溶液（このキットに備えられている）を各々のウェルに添加し、続いて注意深く混合した。
【０３３９】
各々のウェルの光学密度を、４５０ｎｍに設定したマイクロプレートリーダーを用いて、３０分内に決定した。
【０３４０】
ＥＧＦの標準曲線：
ＥＬＩＳＡキットに備えられている標準物によって線形の標準曲線を得た。極めて低い濃度でも検出可能な結果が示された。
【０３４１】
ＥＧＦのサンプル：
このサンプルを用いて全部で４つのアッセイを行った。各々のサンプルは、２〜５回測定し、測定の回数は、結果の質（平均＋／−ＳＤ）と十分な量の血清が利用できるのかと次第である。
【０３４２】
サンプルをＣａｌｉｂｒａｔｏｒ  Ｄｉｌｕｅｎｔ  ＲＤ６Ｈで１：２０に希釈したところ、全てのサンプルは、ＥＬＩＳＡの直線範囲内であった。
【０３４３】
ＴＧＦ−α
試薬、標準希釈液およびサンプルを、製造業者の指示に従って調製した。過剰な抗体でコーティングしたマイクロタイタープレートのストリップ（このキットに備えられている）をフレームから取り除いて、ＥＬＩＳＡプレートを準備した。ウェルの必要数およびプレートのレイアウトを決定した後、１００μｌのアッセイ希釈液（Ａｓｓａｙ  Ｄｉｌｕｅｎｔ）ＲＤ１Ｗ（このキットに備えられている）を、各々のウェルに添加し、続いて１ウェルあたり５０μｌの標準希釈液またはサンプルを添加した。チップはピペッティング工程の後、毎回交換した。
【０３４４】
そのプレートを、このキットに備えられている接着ストリップ（ａｄｈｅｓｉｖｅ  ｓｔｒｉｐ）でカバーして、室温で２時間、ロッキングプラットフォーム上でインキュベートした。
【０３４５】
各々のウェルを吸引して洗浄し、そのプロセスを３回繰り返して、洗浄が計４回になるようにした。洗浄工程の後、各々のウェルを、マニフォールド・ディスペンサーを用いて、４００μｌの洗浄緩衝液（このキットに備えられている）を充てんし、その後に吸引した。最終の洗浄後、残っている洗浄緩衝液を吸引によって全て除去し、そのプレートをひっくり返して、清浄なペーパータオルの上で水気を切った。
【０３４６】
吸引したサンプルおよび洗浄溶液は研究用の消毒剤で処理した。
【０３４７】
２００μｌのＴＧＦ−αコンジュゲート（このキットに備えられている）を各々のウェルに添加し、そのプレートを新しい接着ストリップでカバーして、室温で２時間インキュベートした。
【０３４８】
吸引および洗浄の工程は、上記のように繰り返した。その後に、２００μｌの基質溶液（このキットに備えられている）を各々のウェルに添加し、そのプレートを室温で３０分間、遮光下でインキュベートした。
【０３４９】
５０μｌの停止溶液（このキットに備えられている）を各々のウェルに添加し、注意深く混合した。
【０３５０】
各々のウェルの光学密度を、４５０ｎｍに設定したマイクロプレートリーダーを用いて、３０分内に決定した。
【０３５１】
ＴＧＦ−αの標準曲線：
ＥＬＩＳＡキットに備わる標準物によって線形の標準曲線を得た。極めて低い濃度でも検出可能な結果が示された。
【０３５２】
ＴＧＦ−αのサンプル：
このサンプルを用いて全部で４つのアッセイを行った。サンプルは、２〜４回の独立したアッセイで測定した。
【０３５３】
結果
種々のマーカーの間の相関は、スピアマンの順位相関係数検定を用いて試験し、そしてその結果を図９に示す。この試験によれば、相関は、−１（負の相関が最も強い場合）と＋１（正の相関が最も強い場合）との間でランク付けされる。図９に示されるとおり、ＨＥＲ２、ＴＧＦ−α、アンフィギュレリンおよびＥＧＦの血清レベルは、極めて小さい相関を示し、これによってこれらの遺伝子は独立したマーカーとして機能することが確認される。
【０３５４】
図１０は、臨床的な共変量で試験したマーカーの相関を示しており、この共変量としては、ＥＣＯＧスコア（ＢＥＣＯＧ＝ベースラインのＥＣＯＧスコア）、以前の化学療法（ＰＲＩＴＣＮ）、腫瘍量および診断の期間（ＤＩＡＧＤＵＲ，すなわち被験体が診断の前にどの程度長くガンを有していたか）が挙げられる。ＥＣＯＧスコアが低いほど（０および１）、この疾患は重篤度が低く、その患者は比較的良好な状態であることが示される。ＥＣＯＧスコアが高くなるほど（＞１）、重篤度が上がりスコアは２から４である。図１０に示されるとおり、試験されたマーカーの血清レベルと疾患の重篤度との間に有意な相関はなかった。他方では、アンフィレギュリンおよびＥＧＦの血清レベルは、以前に受けた化学療法処置が４つを超える被験体では有意に高かった。
【０３５５】
生存曲線は、カプラン−マイヤー法に従ってプロットした。無増悪生存期間（ＰＦＳ）および全生存期間（ＯＳ）の確率を規定するのに最善の区別ができるカットオフを規定するために、これらの曲線を、ログランク検定を用いて患者のサブグループ内で比較した。ＰＦＳおよびＯＳについての結果は、それぞれ図１１および図１２に示す。図１１に示されるとおり、ＰＦＳに関するカットオフポイントは特にＥＧＦレベルについて明確である（明瞭な正の相関）。
【０３５６】
ＰＦＳを用いカットオフに従う患者の分布を、図１３に示す。図に示されるとおり、カットオフは、個々のマーカーＲＧＦ−αおよびＥＧＦの場合成果が十分に定まっており、組み合わされたマーカーに対するこれらの関数として特に有用である。
【０３５７】
生存曲線は、カプラン−マイヤー生存分析によって計算した。ＰＦＳおよびＯＳに対するＨＥＲ２レベルの影響は、図１４に示されるカプラン−マイヤープロットによって図示される。ＰＦＳおよびＯＳに対するＴＧＦ−αのレベルの影響は、図１５に示されるカプラン−マイヤープロットによって図示される。ＰＦＳおよびＯＳに対するＥＧＦレベルの影響は、図１６に示されるカプラン−マイヤープロットによって図示される。
【０３５８】
（実施例２）
ペルツズマブおよび化学療法で処置された、卵巣癌、原発性腹膜癌または卵管癌を有する患者における血清バイオマーカー分析
研究のデザイン
白金耐性の卵巣癌、原発性腹膜癌または卵管癌を有する被験体における、化学療法剤ゲムシタビンをプラシーボと組み合わせたものに対する、ペルツズマブ（ｒｈｕＭＡｂ２Ｃ４）とゲムシタビンとの組み合わせの有効性の一次的評価をするために第ＩＩ相、無作為化、プラシーボコントロールの二重盲検、多施設臨床試験を行う。このとき、全ての被験体について無増悪生存期間（ＰＦＳ）を測定する。このトライアルの別の目的は、白金耐性の卵巣癌、腹膜癌または卵管癌を有する被験体における、ゲムシタビンをプラシーボと組み合わせたものに対する、ペルツズマブとゲムシタビンとの組み合わせの安全性および耐容性を評価することである。
【０３５９】
この研究について適格である被験体とは、増悪が見られ、進行した疾患に対し白金ベースの化学療法レジメンを受けたばかりかまたは６か月内に受けている被験体である。白金耐性疾患の場合、過去のレジメン回数は１回だけ認められる。
【０３６０】
被験体は、処置アーム１（ゲムシタビン＋ペルツズマブ）またはアーム２（ゲムシタビン＋プラシーボ）のいずれかに対して１：１の比で無作為化する。ゲムシタビンは、２１日のサイクルの１日目および８日目に投与する。ゲムシタビンは、８００ｍｇ／ｍ２の初回負荷用量で３０分間（±５分）にわたって注入する。盲検の薬物（ゲムシタビンまたはプラシーボ）は、２１日サイクルの１日目、ゲムシタビン投与の３０分後に、投与する。ペルツズマブは、８４０ｍｇという初回負荷用量で投与し（サイクル１）、続いてサイクル２以降では４２０ｍｇを投与する。これに対するプラシーボについては、ペルツズマブ用量を調製するために必要な懸濁液の量と等価な容積で投与する。
【０３６１】
進行性疾患のない被験体に、この研究で最大１７サイクルまでゲムシタビンに加えて盲検の研究薬を用いた処置を受けさせる。応答は、最初の８サイクルの間６週ごとに、その後約３か月ごとに（サイクル２、４、６、８、１２および１７の終わりに）評価する。測定可能な疾患は、固形腫瘍効果判定基準（Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ｓｏｌｉｄ  Ｔｕｍｏｒｓ：ＲＥＣＩＳＴ）を用いて、臨床的評価およびコンピューター断層撮影または等価物によって評価する。評価可能な疾患を有する被験体についての応答は、ＣＡ−１２５の変化、および疾患の臨床的な放射線学的な証拠に従って評価する。
【０３６２】
さらなる同意のある患者には、予備的な生物学的マーカー研究について血清および血漿のサンプルを提供する選択肢がある。これらの研究には、ＨＥＲレセプター遺伝子ファミリーにおける潜在的な変異の評価、ＨＥＲファミリータンパク質およびＨＥＲシグナル伝達に関連する下流のタンパク質の免疫組織化学、ＨＥＲ２活性化を評価する二量体化アッセイまたは近接解析、ならびにＨＥＲ２シグナル伝達に関連すると特定されるか、または応答のマーカーもしくは予測因子として機能し得る特定の遺伝子の発現レベルの決定が含まれる。この研究は、遺伝子発現分析およびプロテオミクス技術を包含する。
【０３６３】
一次的な転帰の測定：
ＲＥＣＩＳＴを用いた研究者らによる評価によって、またはＣＡ−１２５の変化によって（測定不能な疾患を有する被験体のみ）確認した場合の無増悪生存期間。
【０３６４】
二次的な転帰の測定：
客観的奏功率（部分的寛解または完全寛解）、応答の期間、生存時間、および４か月で増悪なし。
【０３６５】
一次的エンドポイント：
一次的有効性エンドポイントは、無増悪生存期間であり、これは無作為化の時点から研究時における任意の原因に由来する増悪または死亡のどちらかが先に確認された場合と規定された。増悪は、それぞれ、測定可能な疾患および測定不能な疾患を有する被験体について、ＲＥＣＩＳＴまたはＣＡ−１２５における変化に従って、研究者が評価する。研究時における死亡とは、研究医薬の最後の投薬の３０日内の任意の原因に由来する死亡として規定される。
【０３６６】
増悪も死亡もなしの被験体についてのデータは、最後の腫瘍またはＣＡ−１２５評価の時点で（または、ベースライン訪問の後に腫瘍もなくＣＡ−１２５の評価も行われない場合、無作為化時に１日を加えた時点で）打ち切る。
【０３６７】
カプラン−マイヤー法を用いて、各々の処置アームについて中央値の無増悪生存期間を評価する。２つのモデル（無作為化層別因子（ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ  ｓｔｒａｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ）［Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）疾患状態可測性および白金耐性疾患についての以前のレジメンの数］の有無）を利用して、コックス・プロポーショナル・ハザード・モデル（ｃｏｘ  ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ  ｈａｚａｒｄ  ｍｏｄｅｌｓ）を用い、危険率（すなわち、９５％信頼区間での処置効果の大きさ）を評価する。層別化モデルによって、一次的信頼区間を得る。無作為化層別因子（ＥＣＯＧ状態、疾患可測性および白金耐性疾患の以前のレジメンの回数）によって層別化されたログランク検定を用い、処置アーム間の相違を評価するための試験的な仮説検定を行う。非層別化ログランク検定も得られる。無増悪生存期間の個別分析も、測定可能な疾患を有する被験体、および測定不能な疾患を有する被験体について提示される；各々の群における被験体の数が少ないこともあるので、試験的ログランク検定は、両方の群について行われなくてもよい。無増悪生存についての別の分析も、白金耐性の疾患について任意の以前のレジメンを有さない被験体、および白金耐性の疾患について１つの以前のレジメンを有する被験体について行ってもよい；試験的なログランク検定を両方の群について行う。
【０３６８】
二次的なエンドポイント：
客観的応答
客観的応答は、４週間以上離れた２つの連続する機会で判断された完全寛解または部分的応答として規定される。ベースライン後の腫瘍もＣＡ−１２５評価もなしの被験体は、非応答者とみなされる。客観的奏効率および９５％信頼区間の評価（Ｂｌｙｔｈ−Ｓｔｉｌｌ−Ｃａｓｅｌｌａ）を各々の処置アームについて計算する。腫瘍奏効率における相違についての信頼区間を計算する（ＳａｎｔｅｒおよびＳｎｅｌｌ，Ｊ．Ａｍ．Ｓｔａｔ．Ａｓｓｏｃ．７５：３８６〜９４（１９８０）；ＢｅｒｇｅｒおよびＢｏｏｓ，Ｊ．Ａｍ．Ｓｔａｔ．Ａｓｓｏｃ．８９：４０８７〜９１（１９９０））。フィッシャーの直接確率検定を用いて、処置アームの間の相違を探査するための試験的仮説検定を行う。
【０３６９】
客観的応答の期間
客観的応答を有する被験体について、被験体応答の期間は、研究時における最初の応答から増悪または任意の原因由来の死亡までの時間として規定される。打ち切りの取り扱い方法および分析方法は、無増悪生存期間について記載されたのと同じである。
【０３７０】
４か月での進行なし
各々の処置アームについて４か月での進行なしの被験体の割合を、無増悪生存期間についてのカプラン−マイヤー曲線から評価する。無増悪生存率および９５％信頼区間の評価（Ｇｒｅｅｍｗｏｏｄ，Ｒｅｐ．Ｐｕｂ．Ｈｅａｌｔｈ．Ｍｅｄ．Ｓｕｂｊｅｃｔｓ  ３３：１〜２６（１９２６））を、各々の処置アームについて算出する。両側Ｚ検定を用いて、処置アーム間の相違を評価するための試験的仮説検定を行う。
【０３７１】
生存の期間
生存の期間は、無作為化から任意の理由に由来する死亡までの時間として規定される。死亡が研究時に生じるか処置中断後に生じるかにかかわらず、全ての死亡が含まれる。死ななかった被験体については、生存の期間は、最後に接触した日に打ち切られる。分析方法は、無増悪生存について記載された方法と同じである。
【０３７２】
研究は継続中であるが、血清または血漿のサンプルの遺伝子発現分析に基づいて、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）および／またはトランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−α）のレベルの上昇を生じる患者は、ペルツツマブおよびゲムシタビン処置に応答して、生存（特に無増悪生存期間）の延長を示すことが期待される。
【図１】
2009539836.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
2009539836.tif 000010
【図７Ｂ】
2009539836.tif 000011
【図８Ａ】
2009539836.tif 000012
【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
2009539836.tif 000017
【図１３】
2009539836.tif 000018
【図１４】
2009539836.tif 000019
【図１５】
2009539836.tif 000020
【図１６】
2009539836.tif 000021
【配列表】
2009539836000001.app
【国際調査報告】
2009539836.tif 000022
2009539836.tif 000023
2009539836.tif 000024
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