(57)【要約】  以下の(式I)によって表される式を有する新規の[1.2.4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン化合物を開示する。該化合物を医薬組成物として調製することができ、非限定的な例として、関節炎及び炎症等を含む、ヒトを含む哺乳類における様々な状態の予防及び治療に使用することができる。  【化１】2009538877.tif 000270【選択図】なし
2009538877.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式IIIの化合物;又はその医薬として許容し得る塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ;並びにその立体異性体、同位体変異体及び互変異性体: 
【化１】
2009538877.tif 000247
(式中、
R1は、H、又は置換若しくは無置換のアルキルであり;R8及びR9の各々は、独立に、置換又は無置換のシクロアルキル、置換又は無置換のヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のアリール、置換又は無置換のヘテロアリールから選択される。)。
【請求項２】
R8が、置換又は無置換のシクロペンチル、シクロヘキシル、置換又は無置換のフェニル、置換又は無置換のピリジル、置換又は無置換のピリミジン、及び置換又は無置換のピラジン、置換又は無置換のピロール、置換又は無置換のピラゾール、及び置換又は無置換のイミダゾールから選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項３】
R8が、置換フェニル、置換ピリジル及び置換ピリミジンから選択され;該置換基が、
-L-R8dであり；式中、
Lは、結合、アルキレン、ヘテロアルキレン、-O-、-N(R8e)-、-CO-、-CO2-、-SO-、-SO2-、-CON(R8e)-、-SO2N(R8e)-、-N(R8e)CO-、-N(R8e)SO2-、-N(R8e)CON(R8e)-、-N(R8e)SO2N(R8e)-から選択され;
R8dは、置換又は無置換のアルキル、置換又は無置換のシクロアルキル、置換又は無置換のアリール、置換又は無置換のヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のヘテロアリール、置換又は無置換のアミノ、置換又は無置換のアラルキル、置換又は無置換のヘテロアリールアルキル、及び置換又は無置換のアミノアルキルから選択され;
R8eは、H、置換又は無置換のアルキル、及び置換又は無置換のシクロアルキルから選択される；
である、請求項1記載の化合物。
【請求項４】
R8が、
【化２】
2009538877.tif 000248
である、請求項1記載の化合物
(式中、L及びR8dは請求項3に記載の通りであり;添字nは1〜4から選択され;各R8aは、独立に、水素、置換又は無置換のアルキル、アルコキシ、シアノ及びハロから選択される。)。
【請求項５】
Lが、結合、-O-、-CO-、-CON(R8e)-又は-N(R8e)CO-であり;
R8dが、置換又は無置換のアルキル、置換又は無置換のシクロアルキル、置換又は無置換のアリール、置換又は無置換のヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のヘテロアリール、置換又は無置換のアラルキル、置換又は無置換のヘテロアリールアルキル、及び置換又は無置換のアミノアルキルから選択され;
R8eが、H、置換又は無置換のアルキルから選択される、請求項4記載の化合物。
【請求項６】
Lが、結合、-O-、-CO-、-CON(R8e)-又は-N(R8e)CO-であり;
R8dが、H、アルキルアミノエチル、ジアルキルアミノエチル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールアルキル及びヘテロアリールアルキルから選択される、請求項4記載の化合物。
【請求項７】
Lが、結合、-O-、-CO-、-CON(R8e)-又は-N(R8e)CO-であり;
R8dが、H、メチルアミノエチル、エチルアミノエチル、ジメチルアミノエチル、ジエチルアミノエチル、置換又は無置換のピロリジニル、ベンジル及びピリジルメチルから選択される、請求項4記載の化合物。
【請求項８】
Lが、結合、-CO-、-O(CH2)ml-、-CON(H)(CH2)ml-又は-NHCO-であり;添字m1が1〜4から選択され;R8dが、
【化３】
2009538877.tif 000249
(式中、環Pは、置換又は無置換のヘテロシクロアルキルである。)
である、請求項4記載の化合物。
【請求項９】
式IVa、IVb、IVc又はIVdの化合物;又はその医薬として許容し得る塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ;並びにその立体異性体、同位体変異体及び互変異性体:
【化４】
2009538877.tif 000250
(式中、L及び環Pは請求項8に記載の通りであり;添字nは1〜4から選択され;各R8aは、独立に、水素、置換又は無置換のアルキル、アルコキシ、シアノ及びハロから選択され;R9は、独立に、置換又は無置換のアリール及びヘテロアリールから選択される。)。
【請求項１０】
Lが結合である、請求項9記載の化合物。
【請求項１１】
Lが-CO-である、請求項9記載の化合物。
【請求項１２】
Lが-NHCO-又は-CONH-である、請求項9記載の化合物。
【請求項１３】
Lが-CON(H)-CH2-CH2-又は-N(H)-CO-CH2-CH2-である、請求項9記載の化合物。
【請求項１４】
Lが-OCH2-CH2-又は-NHCH2-CH2-である、請求項9記載の化合物。
【請求項１５】
前記環Pが、置換又は無置換のピペリジン、モルホリン又はピペラジンである、請求項9から14のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１６】
各R8aがHである、請求項9記載の化合物。
【請求項１７】
添字nが1であり、R8aがMe、Et、Pr、イソ-Pr、Cl、F、CN、OMe又はCF3である、請求項9記載の化合物。
【請求項１８】
式Va、Vb、Vc、Vd、Ve又はVfの化合物である、請求項1記載の化合物:
【化５】
2009538877.tif 000251
(式中、R9は請求項1に記載の通りであり、R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル、又は置換若しくは無置換のシクロアルキルである。)。
【請求項１９】
R8bがHである、請求項18記載の化合物。
【請求項２０】
R8bが、置換若しくは無置換のアルキル、又は置換若しくは無置換のシクロアルキルである、請求項18記載の化合物。
【請求項２１】
R8bが、Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CH2CONH2、シクロプロピル又はシクロプロピルメチルである、請求項18記載の化合物。
【請求項２２】
R9が、置換又は無置換のアリールから選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項２３】
R9が、置換又は無置換のフェニルから選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項２４】
R9が、置換又は無置換のヘテロアリールから選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項２５】
R9が、置換又は無置換のフェニル、ピリジル、インドリル、イソインドリル、ピロリル、フラニル、チエニル、ピラゾリル、オキサゾリル及びチアゾリルから選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項２６】
R9が、
【化６】
2009538877.tif 000252
であって、
A1、A2及びA3の各々は、独立に、S、O、N、NR9a及びCR9aから選択され;R9aの各々は、独立に、H、又は置換若しくは無置換のアルキルであり;R9bは、CONH2、CONHMe又はCNである、請求項1から25のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２７】
R9が、
【化７】
2009538877.tif 000253
である、請求項1から25のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２８】
R9が、
【化８】
2009538877.tif 000254
である、請求項1から25のいずれか一項記載の化合物。
【請求項２９】
R9が、
【化９】
2009538877.tif 000255
(式中、添字mは1〜4から選択され、各R9dは、独立に、H、置換若しくは無置換のアルキル又はハロである。)
である、請求項1から25のいずれか一項記載の化合物。
【請求項３０】
R9が、
【化１０】
2009538877.tif 000256
(式中、添字mは1〜4から選択され、各R9dは、独立に、H、置換若しくは無置換のアルキル又はハロである。)
である、請求項1から25のいずれか一項記載の化合物。
【請求項３１】
R9が、
【化１１】
2009538877.tif 000257
(式中、添字mは1〜3から選択され、各R9dは、独立に、H、置換若しくは無置換のアルキル又はハロである。)
である、請求項1から25のいずれか一項記載の化合物。
【請求項３２】
各R9ｄがHである、請求項29から31のいずれか一項記載の化合物。
【請求項３３】
mが1又は2であり、各R9dがMe、Cl又はFである、請求項29から31のいずれか一項記載の化合物。
【請求項３４】
式VIa、VIb、VIc、VId、VIe又はVIfの化合物である、請求項1記載の化合物:
【化１２】
2009538877.tif 000258
(R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル、又は置換若しくは無置換のシクロアルキルである。)。
【請求項３５】
式VIIa、VIIb、VIIc、VIIc、VIId、VIIe又はVIIfの化合物である、請求項1記載の化合物:
【化１３】
2009538877.tif 000259
(R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル、又は置換若しくは無置換のシクロアルキルである。)。
【請求項３６】
式VIIIa、VIIIb、VIIIc、VIIId、VIIIe又はVIIIfの化合物である、請求項1記載の化合物:
【化１４】
2009538877.tif 000260
(R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル、又は置換若しくは無置換のシクロアルキルである。)。
【請求項３７】
式IXa、IXb、IXc、IXd、IXe又はIXfの化合物である、請求項1記載の化合物:
【化１５】
2009538877.tif 000261
(R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル、又は置換若しくは無置換のシクロアルキルである。)。
【請求項３８】
式Xa、Xb、Xc、Xd、Xe又はXfの化合物である、請求項1記載の化合物:
【化１６】
2009538877.tif 000262
(R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル、又は置換若しくは無置換のシクロアルキルである。)。
【請求項３９】
式XIa、XIb、XIc、XId、XIe又はXIfの化合物である、請求項1記載の化合物:
【化１７】
2009538877.tif 000263
(R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル、又は置換若しくは無置換のシクロアルキルであり;R9eは水素、Me又はCNである。)。
【請求項４０】
R8bがHである、請求項34から39のいずれか一項記載の化合物。
【請求項４１】
R8bがシクロアルキルである、請求項34から39のいずれか一項記載の化合物。
【請求項４２】
R8bがシクロプロピルである、請求項34から39のいずれか一項記載の化合物。
【請求項４３】
R8bが、置換又は無置換のアルキルである、請求項34から39のいずれか一項記載の化合物。
【請求項４４】
R8bが、Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CF3、CH2CF3、CH2CONH2又はシクロプロピルメチルである、請求項34から39のいずれか一項記載の化合物。
【請求項４５】
式XIIa、XIIb、XIIc又はXIIdの化合物である、請求項1記載の化合物:
【化１８】
2009538877.tif 000264
。
【請求項４６】
式XIIIa、XIIIb、XIIIc又はXIIIdの化合物である、請求項1記載の化合物:
【化１９】
2009538877.tif 000265
。
【請求項４７】
式XIVa、XIVb、XIVc又はXIVdの化合物である、請求項1記載の化合物:
【化２０】
2009538877.tif 000266
。
【請求項４８】
式XVa、XVb又はXIVcの化合物である、請求項1記載の化合物:
【化２１】
2009538877.tif 000267
[Lは、結合、-CO-又は-O-CH2-CH2-であり;環Pは、
【化２２】
2009538877.tif 000268
(R8bは、H、Me、i-Pr、t-Bu、CH2CONH2、シクロプロピルメチル又はCH2CF3である。)である。]。
【請求項４９】
Lが結合であり、前記環Pが、
【化２３】
2009538877.tif 000269
である、請求項48記載の化合物。
【請求項５０】
(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
4-{8-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-ベンズアミド;
4-{8-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-1H-ピリジン-2-オン;
4-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-ベンズアミド;
4-{8-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
2-フルオロ-4-{8-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-ベンズアミド;
3-フルオロ-4-{8-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-ベンズアミド;
5-{8-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
3-フルオロ-4-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-ベンズアミド;
2-フルオロ-4-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-ベンズアミド;
[5-(5-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン;
[5-(5-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン;
5-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
2,6-ジフルオロ-4-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-ベンズアミド;
4-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-[5-(5-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
(3-フルオロ-4-モルホリン-4-イル-フェニル)-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
(3-クロロ-4-モルホリン-4-イル-フェニル)-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
[4-(2-モルホリン-4-イル-エトキシ)-フェニル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
4-{8-[4-(2-モルホリン-4-イル-エトキシ)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
5-{8-[4-(2-モルホリン-4-イル-エトキシ)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-[5-(2H-ピラゾール-3-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
4-{8-[4-((2R,6S)-2,6-ジメチル-モルホリン-4-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
(4-モルホリン-4-イル-3-トリフルオロメチル-フェニル)-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
2,6-ジフルオロ-4-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-ベンズアミド;
4-[8-(4-ピペラジン-1-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
5-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-フラン-3-カルボン酸アミド;
5-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-フラン-3-カルボン酸アミド;
[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-[4-((2S,5R)-2,4,5-トリメチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-アミン;
4-{8-[4-((2S,5R)-2,4,5-トリメチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
5-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
4-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-フラン-2-カルボン酸アミド;
6-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-3,4-ジヒドロ-2H-イソキノリン-1-オン;
5-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
{2-モルホリン-4-イル-5-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-メタノール;
[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
6-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-3,4-ジヒドロ-1H-キノリン-2-オン;
(4-ピペラジン-1-イル-フェニル)-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
(6-モルホリン-4-イル-ピリジン-3-イル)-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
[6-(4-シクロプロピルメチル-ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
[6-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-{6-[4-(2,2,2-トリフルオロ-エチル)-ピペラジン-1-イル]-ピリジン-3-イル}-アミン;
[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-{4-[4-(2,2,2-トリフルオロ-エチル)-ピペラジン-1-イル]-フェニル}-アミン;
[4-(4-シクロプロピルメチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
4-[8-(6-モルホリン-4-イル-ピリジン-3-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
(5-ベンゾ[#b!]チオフェン-3-イル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン;
(5-ベンゾ[#b!]チオフェン-3-イル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-アミン;
(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-(5-チオフェン-3-イル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-アミン;
[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-(5-チオフェン-3-イル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-アミン;
[5-(5-エチル-1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン;
6-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-1,1-ジオキソ-1,2-ジヒドロ-1$l%6&-ベンゾ[#d!]イソチアゾール-3-オン;
4-{8-[6-(4-シクロプロピルメチル-ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-{8-[6-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-(8-{6-[4-(2,2,2-トリフルオロ-エチル)-ピペラジン-1-イル]-ピリジン-3-イルアミノ}-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-(8-{4-[4-(2,2,2-トリフルオロ-エチル)-ピペラジン-1-イル]-フェニルアミノ}-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-{8-[4-(4-シクロプロピルメチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
[4-(4-シクロプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
[6-(4-シクロプロピル-ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
4-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-チアゾール-2-カルボン酸アミド;
4-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チアゾール-2-カルボン酸アミド;
4-(8-{4-[1-(2,2,2-トリフルオロ-エチル)-ピペリジン-4-イル]-フェニルアミノ}-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-{4-[1-(2,2,2-トリフルオロ-エチル)-ピペリジン-4-イル]-フェニル}-アミン;
5-{8-[4-(2-モルホリン-4-イル-エトキシ)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
(5-ベンゾチアゾール-6-イル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン;
(2-フルオロ-4-モルホリン-4-イル-フェニル)-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
(2-クロロ-4-モルホリン-4-イル-フェニル)-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
1-{5-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-チオフェン-2-イル}-エタノン;
{4-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-2H-ピラゾール-3-イル}-メタノール;
6-{4-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-フェニル}-4,5-ジヒドロ-2H-ピリダジン-3-オン;
(5-ベンゾ[1,2,5]オキサジアゾール-5-イル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン;
4-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-チアゾール-2-カルボン酸メチルアミド;
4-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チアゾール-2-カルボン酸メチルアミド;
5-[8-(2-フルオロ-4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
5-[8-(2-クロロ-4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
5-{8-[2-クロロ-4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
[5-(2-アミノ-ピリミジン-5-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン;
5-{8-[6-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
3-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-ベンゾ[#b!]チオフェン-7-カルボン酸アミド;
3-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-ベンゾ[#b!]チオフェン-7-カルボン酸アミド;
{4-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-ピリジン-2-イル}-メタノール;
(4-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-ピリジン-2-イル)-メタノール;
[4-(1-イソプロピル-ピペリジン-4-イル)-フェニル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
{5-[4-(2-アミノ-チアゾール-4-イル)-フェニル]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル}-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン;
4-{8-[6-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-フラン-2-カルボン酸アミド;
5-[8-(6-モルホリン-4-イル-ピリジン-3-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
4-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-フラン-2-カルボン酸アミド;
4-{8-[4-(1-イソプロピル-ピペリジン-4-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
(4-{8-[6-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-ピリジン-2-イル)-メタノール;
[5-(2-フルオロメチル-ピリジン-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-アミン;
5-{8-[4-(1-イソプロピル-ピペリジン-4-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
[5-(1H-インダゾール-6-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン;
4-[8-(6-モルホリン-4-イル-ピリジン-3-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-フラン-2-カルボン酸アミド;
4-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-5-メチル-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-{8-[6-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-5-メチル-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
4-{8-[6-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
5-[8-(2-モルホリン-4-イル-ピリミジン-5-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
1-{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-ピペラジン-2-オン;
5-{8-[2-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-ピリミジン-5-イルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
5-{8-[4-(4-#tert!-ブチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
[4-(4-#tert!-ブチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
[5-(1H-インダゾール-5-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン;
5-{8-[4-(2-オキソ-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
[5-(1H-インダゾール-6-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-アミン;
[6-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イル]-(5-{(E)-1-[4-メチレン-2,4-ジヒドロ-ピラゾール-(3E)-イリデンメチル]-プロペニル}-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-アミン;
7-フルオロ-5-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
6-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
(3-メチルアミノメチル-4-モルホリン-4-イル-フェニル)-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;
2-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-5,6-ジヒドロ-フロ[2,3-#c!]ピロール-4-オン;
5-{8-[4-(4-イソプロピル-2-オキソ-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
2-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-4,5-ジヒドロ-チエノ[2,3-#c!]ピロール-6-オン;
5-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-3,3-ジメチル-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
5-(8-シクロヘキシルアミノ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
5-[8-(テトラヒドロ-ピラン-4-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;及び
5-[8-(4-フルオロ-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン
から選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項５１】
4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-N-ピリジン-3-イルメチル-ベンズアミド;
4-[5-(2-オキソ-1,2-ジヒドロ-ピリジン-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-N-ピリジン-3-イルメチル-ベンズアミド;
2-メトキシ-N-(6-メチル-ピリジン-3-イルメチル)-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
4-(8-{3-メトキシ-4-[(6-メチル-ピリジン-3-イルメチル)-カルバモイル]-フェニルアミノ}-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
N-ベンジル-2-メトキシ-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
N-ベンジル-3-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
3-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-N-ピリジン-2-イルメチル-ベンズアミド;
N,N-ジエチル-3-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
{3-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-ピロリジン-1-イル-メタノン;
(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-{3-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-メタノン;
3-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
N-エチル-3-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
N-シクロヘキシルメチル-3-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
N-(4-ヒドロキシ-ベンジル)-3-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
4-[8-(4-ベンジルカルバモイル-3-メトキシ-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-[8-(6-ベンゾイルアミノ-ピリジン-3-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
N-ベンジル-N-メチル-3-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
N-{5-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ピリジン-2-イル}-ベンズアミド;
1-{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンゾイル}-ピペリジン-4-カルボン酸メチルアミド;
4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-N-(2-ピリジン-4-イル-エチル)-ベンズアミド;
(4-エチル-ピペラジン-1-イル)-{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-メタノン;
N-(1-エチル-ピロリジン-2-イルメチル)-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
(2,5-ジヒドロ-ピロール-1-イル)-{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-メタノン;
[4-(2-エトキシ-エチル)-ピペラジン-1-イル]-{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-メタノン;
N-シクロプロピルメチル-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
N-メチル-N-(1-{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンゾイル}-ピロリジン-3-イル)-アセトアミド;
[4-(4-フルオロ-ベンジル)-ピペラジン-1-イル]-{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-メタノン;
(4-フェニル-ピペラジン-1-イル)-{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-メタノン;
((S)-2-メトキシメチル-ピロリジン-1-イル)-{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-メタノン;
N-((R)-1-ベンジル-ピロリジン-3-イル)-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-(4-ピリジン-2-イル-ピペラジン-1-イル)-メタノン;
N-(1-メトキシメチル-プロピル)-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
[4-(2-メトキシ-エチル)-ピペラジン-1-イル]-{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-メタノン;
N-[2-(4-ヒドロキシ-フェニル)-エチル]-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
(4-#sec!-ブチル-ピペラジン-1-イル)-{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-メタノン;
N-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
(ベンジル-{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンゾイル}-アミノ)-酢酸エチルエステル;
N-イソプロピル-2-(4-{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンゾイル}-ピペラジン-1-イル)-アセトアミド;
N-(2-メトキシ-エチル)-N-メチル-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
N-エチル-N-(2-メトキシ-エチル)-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-N-(テトラヒドロ-フラン-2-イルメチル)-ベンズアミド;
(3,6-ジヒドロ-2H-ピリジン-1-イル)-{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-メタノン;
N-(2-メチルスルファニル-エチル)-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
N-(2,2-ジメチル-[1,3]ジオキソラン-4-イルメチル)-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
N-(2-ジイソプロピルアミノ-エチル)-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
N-((S)-1-エチル-ピロリジン-2-イルメチル)-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
N-イソブチル-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;
[1,4']ビピペリジニル-1'-イル-{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-メタノン;
N-(2-ヒドロキシ-エチル)-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド;及び
4-[8-(6-フェニルアセチルアミノ-ピリジン-3-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-チオフェン-2-カルボン酸アミド
から選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項５２】
4-{8-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
5-{8-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
[5-(5-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン;
4-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-{8-[4-(2-モルホリン-4-イル-エトキシ)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-{8-[4-((2R,6S)-2,6-ジメチル-モルホリン-4-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-[8-(4-ピペラジン-1-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-{8-[4-((2S,5R)-2,4,5-トリメチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
5-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
4-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-フラン-2-カルボン酸アミド;
5-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
4-[8-(6-モルホリン-4-イル-ピリジン-3-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-{8-[6-(4-シクロプロピルメチル-ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-{8-[6-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-(8-{6-[4-(2,2,2-トリフルオロ-エチル)-ピペラジン-1-イル]-ピリジン-3-イルアミノ}-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-(8-{4-[4-(2,2,2-トリフルオロ-エチル)-ピペラジン-1-イル]-フェニルアミノ}-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
4-{8-[4-(4-シクロプロピルメチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
5-{8-[4-(2-モルホリン-4-イル-エトキシ)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
5-{8-[6-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
5-[8-(6-モルホリン-4-イル-ピリジン-3-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
4-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-フラン-2-カルボン酸アミド;
4-{8-[4-(1-イソプロピル-ピペリジン-4-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド;
5-{8-[4-(1-イソプロピル-ピペリジン-4-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
5-[8-(2-モルホリン-4-イル-ピリミジン-5-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン;
[4-(4-tert-ブチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン;及び
2-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-4,5-ジヒドロ-チエノ[2,3-c]ピロール-6-オン
から選択される、請求項1記載の化合物。
【請求項５３】
医薬として許容し得る担体と、医薬として有効な量の、請求項1から52のいずれか一項記載の化合物とを含む医薬組成物。
【請求項５４】
前記担体が非経口担体である、請求項53記載の医薬組成物。
【請求項５５】
前記担体が経口担体である、請求項53記載の医薬組成物。
【請求項５６】
前記担体が局部担体である、請求項53記載の医薬組成物。
【請求項５７】
ECM分解を特徴とする状態の治療又は予防のための医薬品の製造における、請求項1から52のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項５８】
炎症を含む疾患から選択される状態の治療又は予防のための医薬品の製造における、請求項1から52のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項５９】
前記疾患がリウマチ様関節炎である、請求項58記載の化合物の使用。
【請求項６０】
マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ活性化タンパク質キナーゼ5の阻害薬の投与によって予防、改善又は解消される状態の治療又は予防のための医薬品の製造における、請求項1から52のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項６１】
異常マトリックス金属プロテイナーゼ活性を特徴とする状態の治療方法であって、治療有効量の請求項1から52のいずれか一項記載のマトリックス金属プロテイナーゼ阻害化合物を投与することを含む、前記方法。
【請求項６２】
細胞外マトリックスの分解を伴う疾患から選択される状態の治療方法であって、治療上有効なマトリックス金属プロテイナーゼ阻害量の請求項1から52のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む、前記方法。
【請求項６３】
MMP1の異常細胞発現を伴う疾患から選択される状態の治療方法であって、治療上有効なマトリックス金属プロテイナーゼ阻害量の請求項1から52のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む、前記方法。
【請求項６４】
炎症性疾患の治療又は予防方法であって、それを必要とする対象に対して、治療有効量の請求項1から52のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む、前記方法。
【請求項６５】
リウマチ様関節炎の治療又は予防方法であって、それを必要とする対象に対して、治療有効量の請求項1から52のいずれか一項記載の化合物を投与することを含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
(発明の分野)
本発明は、その発現が、細胞外マトリックス(extra-cellular matrix)(ECM)の分解、関節変性並びに当該分解及び/又は炎症を伴う疾患をもたらす経路に関与するセリン/トレオニンキナーゼの活性部位に結合することが可能なトリアゾロピラジン化合物の1クラスに関する。
【０００２】
細胞外マトリックスの分解を伴う疾患としては、乾癬性関節炎、若年性関節炎、早期関節炎、反応性関節炎、骨関節炎、強直性脊椎炎、骨粗鬆症、腱炎及び歯周疾患のような筋骨格疾患、癌転移、気道疾患(COPD、喘息)、腎臓及び肝臓線維症、アテローム硬化症及び心不全のような心臓血管疾患、並びに神経炎症及び多発性硬化症のような神経疾患が挙げられるが、それらに限定されない。主に関節変性を含む疾患としては、乾癬性関節炎、若年性関節炎、早期関節炎、反応性関節炎、骨関節炎及び強直性脊椎炎が挙げられるが、それらに限定されない。
【０００３】
リウマチ様関節炎(Rheumatoid arthritis)(RA)は、関節構造の炎症及び破壊を特徴とする慢性関節変性疾患である。該疾患が放置されると、関節機能の低下による実質的な機能障害及び疼痛、さらには早死に至る。したがって、RA治療の目的は、疾患の進行を遅らせるのでなく、関節破壊を止めるための緩解を達成することである。疾患の結果の深刻さに加えて、RAの高い罹患率(世界中で成人の約0.8%がかかっている)は、社会経済的影響が大きいことを意味する。(RAの概要については、Smolen及びSteiner(2003);Lee及びWeinblatt(2001);Choy及びPanayi(2001);O'Dell(2004)及びFirestein(2003)を参照されたい)。
【０００４】
RAが自己免疫疾患であることは広く認められているが、該疾患の「開始段階」を駆動する厳密なメカニズムに関しては意見が一致していない。知られていることは、初期促進物質が、罹患しやすい宿主において、様々な細胞型(B細胞、T細胞、マクロファージ、線維芽細胞、内皮細胞及び樹状細胞等)の活性化をもたらす事象のカスケードを媒介することである。それに伴い、関節を取り囲む関節及び組織に様々なサイトカインの生成量の増加が観察される(例えば、TNF-α、IL-6、IL-1、IL-15及びIL-18等)。該疾患が進行すると、細胞活性化及びサイトカイン生成カスケードが自己存続するようになる。この早期段階において、関節構造の破壊が既に非常に明確になる。患者の30パーセントは、診断時において、骨浸食がX線写真で実証され、この割合は2年後に60パーセントに増加する。
【０００５】
RA患者の関節の組織分析は、RA関連分解プロセスに関与するメカニズムを明示する。この分析により、RA関連関節劣化に関与する主たる作動体はパンヌスであり、髄膜線維芽細胞が、多様なタンパク質分解酵素を生成することによって、軟骨及び骨浸食の主な駆動体となることが示されている。関節は、典型的に、髄膜及び関節嚢に囲まれた軟骨層上につながる2つの隣接骨を含む。進行RAの患者では、髄膜線維芽細胞の増殖並びにT細胞、B細胞、単核細胞、マクロファージ及び好中球等の単核細胞の浸透により、関節の髄膜のサイズが大きくなって、パンヌスを形成する。パンヌスは、関節空間を狭める隣接軟骨の分解を媒介し、隣接骨及び軟骨を侵す可能性を有する。骨及び軟骨組織は、主としてそれぞれコラーゲンI型又はII型で構成されるため、パンヌスの破壊及び侵入特性は、膠原溶解性プロテアーゼ、主にマトリックス金属プロテイナーゼ(matrix metallo proteinase)(MMP)の分泌によって媒介される。軟骨の下及び軟骨に隣接する骨の浸食もRAプロセスの一部であり、主に、骨とパンヌスの界面の破骨細胞の存在に起因する。破骨細胞は、骨組織に接着すると、閉鎖区画を形成する多核細胞であり、その内部で、破骨細胞が、骨組織を分解するプロテアーゼ(カテプシンK、MMP9)を分泌する。関節における破骨細胞集団が、活性化SF及びT細胞によるNFκBリガンドの受容体活性化因子(receptor activator of NFκB ligand)(RANKL)の分泌によって誘発される前駆体細胞からの骨芽細胞形成によって異常に増加する。
【０００６】
様々なコラーゲン型が、細胞外マトリックス(ECM)の安定性を定める上で主たる役割を有する。コラーゲンI型及びコラーゲンII型は、例えば、それぞれ骨及び軟骨の主たる構成要素である。コラーゲンタンパク質は、典型的には、コラーゲン原線維と称する多量体構造になる。原生のコラーゲン線維は、タンパク質分解開裂に対して非常に強い抵抗性を有する。わずかな種類のECM分解タンパク質、即ちMMP及びカテプシンが、原生コラーゲンを分解する能力を有することが報告された。カテプシンの中でも、主として破骨細胞において活性であるカテプシンKが最も特徴的である。MMPの中でも、MMP1、MMP2、MMP8、MMP13及びMMP14は、膠原溶解性を有することが知られる。髄膜線維芽細胞(synovial fibroblasts)(SF)によるMMP1の発現の増加と関節疾患の進行との相関性が十分に確定され、関節浸食プロセスを予測する(Cunnaneら、2001)。したがって、RAに関連して、MMP1は、極めて重要なコラーゲン分解タンパク質である。インビトロにおいて、RA病理に重要なサイトカイン(例えば、TNF-α及びIL1β)で培養SFを処理すると、これらの細胞によるMMP1の発現が増加することになる(Andreakosら、2003)。したがって、SFによって発現されたMMP1のレベルの監視は、インビボで軟骨分解に関与する侵食表現型へのSFの活性化を示すため、RAの分野において重要な情報になる。SFによるMMP1発現の阻害は、RAの治療に向けた貴重な治療手法である。
【０００７】
ECM分解タンパク質の活性は、また、RAと異なる様々な疾患、例えば、関節の分解を伴う他の疾患の進行の原因となる、或いは関連し得る。これらの疾患としては、感染性関節炎、若年性関節炎、早期関節炎、反応性関節炎、骨関節炎及び強直性脊椎炎が挙げられるが、それらに限定されない。本発明に従って、且つ本明細書に記載のMMPの発現に関与する標的を使用して特定される化合物で治療可能であり得る他の疾患は、骨粗鬆症、腱炎及び歯周疾患のような筋骨格疾患(Gapskiら、2004)、癌転移(Coussensら、2002)、気道疾患(COPD、喘息)(Suzukiら、2004)、肺、腎臓線維症(Schanstraら、2002)、慢性C型肝炎に伴う肝臓線維症(Reiffら、2005)、アテローム硬化症及び心不全のような心臓血管疾患(Creemersら、2001)、並びに神経炎症及び多発性硬化症のような神経疾患(Rosenberg、2002)である。当該疾患にかかっている患者は、(ECMを分解から保護することによる)ECMの安定化の恩恵を受けることができる。
【０００８】
マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ活性化タンパク質キナーゼ5(Mitogen-Activated Protein Kinase-Activated Protein Kinase 5)(MAPKAPK5又はPRAK)として特定される471アミノ酸セリン/トレオニンキナーゼは、広範な組織で発現される。タンパク質は、N末端にその触媒領域を含み、そのC末端に核局在化シグナル(nuclear localization signal)(NLS)及び核輸出シグナル(nuclear export signal)(NES)の両方を含む。内因性MAPKAPK5は、主に細胞質に存在するが、細胞の応力又はサイトカイン活性が、その核への転位を媒介する(Newら、2003)。この事象は、MAPKAPK5のリン酸化に依存する。Thr182は、MAPKAPK5の調節リン酸化部位である。p38αキナーゼは、過剰発現環境においてMAPKAPK5をリン酸化することが可能であるが、内因性MAPKAPK5を用いた実験は、この仮説を裏づけるものではない(Shiら、2003)。生存可能且つ繁殖可能なMAPKAPK5ノックアウトマウスが発生した。これらのマウスの表現型は、p38αによって調節されるMAPKAPK5関連キナーゼであるMAPKAPK2が欠乏したマウスの表現型とまったく異なる(Shiら、2003)。これは、各タンパク質の機能が異なり、いずれのキナーゼも他のキナーゼの活性を補償できないことを示す。MAPKAPK5及びMAPKAPK2は、一緒になって、役割が重複しない異なる標的を表す。MAPK6(ERK3とも称する)は、最近、新規のシグナル伝達経路を定めるMAPKAPK5に対する生理的に重要な基質として特定された(Seternesら、2004)。
【背景技術】
【０００９】
(発明の背景)
RAに伴う疼痛を軽減し、患者の生活の質を向上させるためにNSAIDS(Non-steroidal anti-inflammatory drugs)(非ステロイド性抗炎症薬)が使用される。しかし、これらの薬物は、RA関連関節破壊を抑止しない。
【００１０】
コルチコステロイドは、X線写真で検知されたRAの進行を抑えることが認められ、低投与量で使用して、RA患者の一部(30から60%)を治療する。しかし、長期間のコルチコステロイドの使用には深刻な副作用が伴う(皮膚菲薄、骨粗鬆症、白内障、高血圧症、高脂血症)。
【００１１】
合成DMARD(Disease-Modifying Anti-Rheumatic Drugs)(疾患修飾性抗リウマチ薬)(例えば、メトトレキセート、レフルノミド、スルファサラジン)は、主として、RAの免疫炎症成分に対処する。主な短所として、これらの薬物は、限られた効果しか発揮しない(DMARDは、関節破壊の進行を遅くするだけで、阻止しないため、長期間にわたる疾患の進行が続く)。メトトレキセートで24カ月治療した後にACR40スコアを達成するのは平均で患者の30%にすぎないことによって効果の欠如が示される。これは、米国リウマチ学会によれば、その症状の50%の改善を達成するのは患者の30%にすぎないことを意味する(O'Dellら、1996)。加えて、DMARDの作用の厳密なメカニズムは、しばしば不明確である。
【００１２】
生物学的DMARD(インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、リツキシマブ、CTLA4-Ig)は、RAの病態生理において重要な役割を有するサイトカイン(例えば、TNF-α)又は細胞(例えば、T細胞又はB細胞)を不活性化する治療タンパク質である(Kremerら、2003;Edwardsら、2004)。TNF-α遮断薬(インフリキシマブ、エタネルセプト、アダリムマブ)とメトトレキセートの複合治療は、現在利用可能な最も有効なRA治療であるが、この治療によっても、12カ月の治療後に患者の50〜60%において病徴の50%の改善(ACR40)が達成されるにすぎない(St Clairら、2004)ことは驚くべきことである。抗TNF-α薬に対するいくつかの有害事象警告が存在し、この種の薬物に伴う副作用を明確にしている。TNF-α遮断薬について、感染(結核)、血液学的事象及び脱髄性障害のリスクの上昇が記載された(Gomez-Reinoら、2003も参照されたい)。深刻な副作用の他に、TNF-α遮断薬は、不快な投与法(注入部位の反応が付随する高頻度の注射)及び大きな生産コストという生物学的治療薬類の一般的な短所も有する。後期開発段階のより新しい薬剤は、T細胞共刺激性分子及びB細胞を標的とする。これらの薬剤の効果は、TNF-α遮断薬の効果と類似していると想定される。様々な標的治療薬が類似の限られた効果を有することは、RAには多数の病原性因子が存在することを示唆する。これは、また、RAに関係する病原性事象を理解する上で欠乏症を示す。
【００１３】
RAに対する現行の治療薬は、効果が限られているため、満足できるものではない(患者の30%に対して十分な治療が存在しない)。このため、緩解を達成するためのさらなる手法が求められる。残留疾患は、進行性関節損傷及び進行性障害のリスクをもたらすため、緩解が必要である。RA治療に現在使用されている薬物の主たる標的であるRA疾患の免疫炎症成分を阻害しても、該疾患の主な特徴である関節劣化が阻止されない。
【００１４】
US2005/0009832には、MAPKAPK5を含むタンパク質キナーゼのモジュレータとして置換イミダゾロ[1,2-a]ピラジン-8-イル-アミン類が記載されている。WO02/056888には、一部のサイトカインの発現を調節することが可能なTNFモジュレータとしてMAPKAPK5の阻害薬が記載されている。これらの先行技術文献のいずれにも、本明細書の以下に記載の化合物類の範囲内の化合物が開示されていない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
(発明の要旨)
本発明は、MAPKAPK5が、MMP1の発現をもたらす経路で機能すること、及び本発明の化合物などのMAPKAPK5活性の阻害が、MMP活性の異常に高い発現を含む疾患の治療に有用であることの発見に基づく。
【００１６】
本発明の化合物を、一般には、5位においてアリール基又はヘテロアリール基で置換され、かつ8位においてアリールアミノ基又はヘテロアリールアミノ基で置換された[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル-アミンと記述することができる。
【００１７】
より詳細には、本発明は、哺乳類細胞においてマトリックス金属プロテイナーゼ阻害特性を有する、式(I)の化合物、又はその医薬として許容し得る塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグに関する:
【化１】
2009538877.tif 000003
(式中、
A及びBは、独立に、CR2R"、NR"、酸素又は硫黄であり;
AAは、CR2又はNであり;
Dは、C=O、CR2R"又はNR"であり;
Eは、kが0の場合はNH又はCR"R6であり、kが1の場合はNH又はCR"R6aであり;
Fは、硫黄、酸素又はNHであり;
Tは、酸素又はNRであり;
U、V、W及びXは、独立に、CR"R7又はNR"であり;
Yは、CR"又はNであり;
Zは、水素、アミノ、ヒドロキシル、低級アルコキシ、カルバモイル、カルボキシル、SO2Rz、SO2NRRz、-NR(CO)(CH2)d-Rz、-NRRz、-(CO)-ORz、-(CO)-NR(CH2)d-Rz、又は
【化２】
2009538877.tif 000004
であり;
Rは、独立に、水素又は低級アルキルであり;
R"は、Hであり、又は隣接原子と二重結合を形成し;
R1は、H;R2;又は1つ以上のR2で所望により置換された低級アルキル、低級シクロアルキル及び低級アルキル-低級シクロアルキルであり;
R3は、Hであり、又は隣接R"と二重結合を形成し;
R2は、H、F、Cl;CN;COOR4;OR4;C(O)N(R4R5);S(O)2N(R4R5);低級アルキル;O-低級アルキル;NH-低級アルキル;S-低級アルキル;COO-低級アルキル;OC(O)-低級アルキル;C(O)N(R4)-低級アルキル;S(O)2N(R4)-低級アルキル;S(O)N(R4)-低級アルキル;S(O)2-低級アルキル;S(O)-低級アルキル;N(R4)S(O)2-低級アルキル;及びN(R4)S(O)-低級アルキルであり;各低級アルキルは、F及びClの1種以上で所望により置換されており;
R4及びR5は、独立に、H;F、Cl;又はF及びClの1種以上で所望により置換された低級アルキル、低級シクロアルキル、若しくは低級アルキル-低級シクロアルキルであり;
R6は、水素、アミノ、ヒドロキシル、カルバモイル、カルボキシル、SO2R、NRR'、-(CO)-OR、又は-(CO)-NRR'であり;
R6aは、R6、Cl、F、低級アルコキシ、シアノ、トリフルオロメトキシ;又は隣接基と一緒になって-(CHR")n-NR-(CHR")p-であり、それらが結合した環に縮合される5又は6員の複素環式環を形成し;
R7は、独立に、水素、ハロゲン、低級アルキル又は低級アルコキシであり;
Rzは、水素、低級アルキル、低級アルカノイル、フェニル、1-低級アルキルピロリジン-3-イル、ピラゾール-4-イル、ピラゾール-2-イル、或いはヒドロキシル、アミノ、モノ又はジ低級アルキルアミノ、アセトアミジル、低級アルカノイル、低級アルキル、4-ヒドロキシ-フェニル、3-アミノメチルフェニル、低級アルキルスルホニル、4-ジ低級アルキルアミノフェニル、ピリド-3-イル、1H-インドール-3-イル、モルホリン-4-イルの1種以上で置換された低級アルキル、低級アルカノイル、フェニル、1-低級アルキルピロリジン-3-イル、ピラゾール-4-イル、ピラゾール-2-イル又はピリド-3-イルであり;
R及びRzは、ともに、-(CHR)q-T-(CHR)r-であり、それらが結合した窒素とともに5又は6員の複素環式環を形成してもよく;
Rz及びR7は、ともに、-(CHR")n-NR-(CHR")p-であり、それらが結合した環に縮合する5又は6員の複素環式環を形成してもよく、
b及びdは、独立に、0又は1であり;但し、b又はdの少なくとも1つが1であることを条件とし;
kは、0又は1であり;
mは、0又は1であり;
n及びpは、独立に、0、1又は2であり;
q及びrは、1又は2であり;
xは、0又は1であり;
但し、R7又はRzの少なくとも1つが水素以外である。)。
【００１８】
本発明の別の態様は、式IIIの化合物;又はその医薬として許容し得る塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ;並びにその立体異性体、同位体変異体及び互変異性体である:
【化３】
2009538877.tif 000005
(式中、
R1は、H又は置換若しくは無置換のアルキルであり;R8及びR9の各々は、独立に、置換又は無置換のシクロアルキル、置換又は無置換のヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のアリール、置換又は無置換のヘテロアリールから選択される。)。
【００１９】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、置換又は無置換のシクロペンチル、シクロヘキシル、置換又は無置換のフェニル、置換又は無置換のピリジル、置換又は無置換のピリミジン、及び置換又は無置換のピラジン、置換又は無置換のピロール、置換又は無置換のピラゾール及び置換又は無置換のイミダゾールから選択される。
【００２０】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R1は、H、Me、Et、i-Pr又はCF3である。
【００２１】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R1は、Hである。
【００２２】
本発明の別の態様は、式IVa、IVb、IVc又はIVdの化合物;又はその医薬として許容し得る塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ;並びにその立体異性体、同位体変異体及び互変異性体に関する:
【化４】
2009538877.tif 000006
(式中、Lは、結合、-CO-、-O(CH2)ml-、-CON(H)(CH2)ml-又は-NHCO-であり;添字m1は、1〜4から選択され;環Pは、置換又は無置換のヘテロシクロアルキルであり;添字nは、1〜4から選択され;各R8aは、独立に、水素、置換又は無置換のアルキル、アルコキシ、シアノ、カルバモイル、CHO及びハロから選択され;R9は、独立に、置換又は無置換のアリール及びヘテロアリールから選択される。)。
【００２３】
一実施態様において、式III-IVdの化合物に関して、R9は、置換又は無置換のアリールである。別の実施態様において、R9は、置換又は無置換のフェニルである。
【００２４】
一実施態様において、式III-IVdの化合物に関して、R9は、置換又は無置換のヘテロアリールである。別の実施態様において、R9は、置換又は無置換のピリジルである。
【００２５】
一実施態様において、式III-IVdの化合物に関して、R9は、置換又は無置換のフェニル、インドリル、イソイノリル、ピロリル、フラニル、チエニル、ピラゾリル、オキサゾリル及びチアゾリルから選択される。
【００２６】
さらなる態様において、本発明は、本発明のトリアゾロピラジン化合物と、医薬としての担体、賦形剤又は希釈剤とを含む医薬組成物を提供する。本発明のこの態様において、医薬組成物は、本明細書に記載の化合物の1種以上を含むことができる。さらに、本明細書に開示されている医薬組成物及び治療方法に有用な本発明の化合物は、調製及び使用に関していずれも医薬として許容し得る。
【００２７】
本発明の別の態様は、炎症、コラーゲン分解を伴う疾患、特に、異常なマトリックス金属プロテアーゼ(MMP1)及び/又はマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ活性化タンパク質キナーゼ5(MAPKAPK5)活性を特徴とする疾患、中でもリウマチ様関節炎(RA)が当該疾患の具体例である疾患の治療に有用な、治療方法における本発明の化合物の使用、医薬組成物及び当該組成物の製造に関する。本発明は、本発明の化合物の製造工程にも関する。
【００２８】
他の目的及び利点は、添付の例示的な図面を参照しながら以下の詳細な説明を検討すれば当業者に明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】健康な関節とRA患者の関節との著しい組織学的相違を示す図である。
【００３０】
【図２】リウマチ様関節炎の病理に関与するサイトカインに誘発される髄膜線維芽細胞におけるMMP1の発現の増加を示すチャートである。
【００３１】
【図３】既知の抗炎症化合物によるSFによるMMP1の「TNF-αに基づく誘発」に誘導される発現の投与量依存的阻害を示すグラフである。
【００３２】
【図４】Ad-siRNAウイルス標的MAPKAPK5での細胞の感染によるSFにおけるMAPKAPK5の発現のタンパク質レベルの低下を示すゲルである。
【００３３】
【図５】Ad-siRNAウイルス標的MAPKAPK5でのSFによるMMP1発現の「複合誘発」誘導レベルの低下を示すチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
(発明の詳細な説明)
定義
該化合物、当該化合物を含む医薬組成物、並びに当該化合物及び組成物の使用方法を説明する場合は、特に指定する場合を除いて、以下の用語は、以下の意味を有する。以下に定義する成分のいずれかを様々な置換基で置換してもよいこと、及びそれぞれの定義は、それらの範囲内に当該置換成分を含めることを意図することも理解されたい。非限定的な例として、当該置換基としては、例えば、ハロ(フルオロ、クロロ、ブロモ等)、-CN、-CF3、-OH、-OCF3、C2〜C6アルケニル、C3〜C6アルキニル、C1〜C6アルコキシ、アリール及びジC1〜C6アルキルアミノを挙げることができる。さらに、「基」及び「ラジカル」という用語は、本明細書に用いられる場合は、区別なく用いられると見なされ得ることを理解されたい。
【００３５】
「アルコキシ」は、アルキル-O-を指す。代表的なアルコキシとしては、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、i-プロポキシ、n-ブトキシ、及びヘプトキシが挙げられる。好ましいアルコキシ基は、低級アルコキシである。
【００３６】
「アルキル」は、1個から約20個の炭素原子を有する直鎖状又は分枝状脂肪族炭化水素を指す。好ましいアルキルは、1個から約12個の炭素原子を有する。より好ましいのは、低級アルキルである。分枝状は、メチル、エチル又はプロピル等の1つ以上の低級アルキル基が線状アルキル鎖に結合していることを意味する。
【００３７】
「アルキルアミノ」は、アルキル-NH-を指す。好ましいアルキルアミノは、(C1〜C6)-アルキルアミノである。代表的なアルキルアミノは、メチルアミノ及びエチルアミノを含む。
【００３８】
「アミノ低級アルカノイル」は、NH2-R-COを指し、Rは、低級アルキレンである。好ましい基としては、アミノエタノイル及びアミノアセチルが挙げられる。
【００３９】
「カルバモイル低級アルキル」は、ラジカルNH2CO低級アルキルを指す。好ましい基としては、カルバモイルエチル及びカルバモイルメチルが挙げられる。
【００４０】
「カルボキシ低級アルキルエステル」は、カルボキシラジカル、-COO-基の低級アルキルエステルを指す。
【００４１】
「本発明の化合物」及び同等の表現は、上記の式(I、II又はIII)の化合物を包括することを意図し、その表現は、許容される文脈において、プロドラッグ、医薬として許容し得る塩及び溶媒和物、例えば水和物を含む。同様に、中間体への言及は、それら自体が特許請求されているか否かにかかわらず、許容される文脈において、それらの塩及び溶媒和物を包括することを意図する。
【００４２】
「発現」は、内因性発現を指す。
【００４３】
「ハロ」又は「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを指す。
【００４４】
「水素」は、置換基の文脈において、-Hが該化合物の位置に存在し、その同位体、即ち重水素をも含むことを意味する。
【００４５】
「低級アルカノイルアミノ」は、Rが低級アルキル基を表す有機官能基R-CO-を有するアミノ基を指す。
【００４６】
「低級アルキル」は、直鎖状又は分枝状であってもよい線状アルキル鎖における1個から約6個の炭素原子を指す。
【００４７】
「低級アルコキシ」は、直鎖状又は分枝状であってもよく、かつ酸素原子によって結合される線状アルキル鎖における1個から約6個の炭素原子を指す。
【００４８】
「低級アルキルスルホンアミド」は、R*が水素又は低級アルキルであり、かつ少なくとも1つのR*が低級アルキルである式-SO2NR*R*のスルホンアミドの低級アルキルアミドを指す。
【００４９】
「予防」は疾患を防止するために講じられる措置を指す。
【００５０】
「溶媒和物」は、1つ以上の溶媒分子を有する本発明に有用な化合物の物理的結合を指す。この物理的結合は、水素結合を含む。一部の場合において、溶媒和物は、例えば、1つ以上の溶媒分子が結晶固体の結晶格子に取り込まれた場合に単離可能になる。「溶媒和物」は、溶液相及び単離可能溶媒の両方を包括する。本発明の化合物を例えば結晶の形で調製することができ、溶媒和又は水和することができる。好適な溶媒和物には、水和物等の医薬として許容し得る溶媒和物が含まれ、化学量論的溶媒和物及び非化学量論的溶媒和物の両方がさらに含まれる。従来の溶媒には、水、エタノール及び酢酸等が含まれるため、代表的な溶媒和物には、水和物、エタノレート及びメタノレートが含まれる。
【００５１】
「置換」は、分子内の1つの原子又は原子群を別の原子又は基で置き換えることを意味する。
【００５２】
「スルホンアミド」は、化学基SO2NH2を含有する化合物群を指す。
【００５３】
「治療有効量」は、医師又は他の臨床家が求めている対象の生物学的又は医学的応答を誘発する薬物又は医薬の量を指す。「治療有効量」は、化合物、疾患及びその重度、並びに治療すべき対象の年齢、体重等に応じて異なり得る。特に、細胞外マトリックスの分解を特徴とする疾患状態の治療に関して、「有効なマトリックス金属プロテアーゼ阻害量」という用語は、細胞外マトリックス分解が有意に軽減されるように、対象の疾患に冒された組織におけるMMP-1の生成の生物学的に有意な減少をもたらす本発明の化合物の有効量を指すものである。マトリックス金属プロテアーゼ阻害特性を有する化合物又は「マトリックス金属プロテアーゼ阻害化合物」は、細胞に有効量提供されると、当該細胞におけるMMP-Iの生成の生物学的に有意な減少を引き起こすことが可能である本発明の化合物を指す。
【００５４】
「アリール」は、1個の水素原子を親芳香族環系の単一炭素原子から除去することによって誘導される一価の芳香族炭化水素基を指す。典型的なアリール基としては、アセアントリレン、アセナフチレン、アセフェナントリレン、アントラセン、アズレン、ベンゼン、クリセン、コロネン、フルオランテン、フルオレン、ヘキサセン、へキサフェン、ヘキサレン、as-インダセン、s-インダセン、インダン、インデン、ナフタレン、オクタセン、オクタフェン、オクタレン、オバレン、ペンタ-2,4-ジエン、ペンタセン、ペンタレン、ペンタフェン、ペリレン、フェナレン、フェナントレン、ピセン、プレイアデン、ピレン、ピラントレン、ルビセン、トリフェニレン及びトリナフタレン等から誘導される基が挙げられるが、それらに限定されない。特に、アリール基は、6個から14個の炭素原子を含む。
【００５５】
「置換アリール」は、本明細書の「置換」の定義に記載した基を含み、特に、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルケニル、置換アルケニル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、置換アルキル、アルキニル、置換アルキニル、アミノ、置換アミノ、アミノカルボニル、アミノカルボニルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、シアノ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオール、アルキル-S(O)-、アリール-S(O)-、アルキル-S(O)2-、及びアリール-S(O)2-からなる群から選択される1つ以上の置換基、例えば1個から5個の置換基、特に1個から3個の置換基で所望により置換されてもよいアリール基を指す。
【００５６】
「ビシクロアリール」は、1個の水素原子を親ビシクロ芳香族環系の単一炭素原子から除去することによって誘導される一価の芳香族炭化水素基を指す。典型的なビシクロアリール基としては、インダン、インデン、ナフタレン及びテトラヒドロナフタレン等から誘導される基が挙げられるが、それらに限定されない。特に、アリール基は、8個から11個の炭素原子を含む。
【００５７】
「ビシクロヘテロアリール」は、1個の水素原子を親ビシクロヘテロ芳香族環系の単一原子から除去することによって誘導される一価のビシクロヘテロ芳香族基を指す。典型的なビシクロヘテロアリール基としては、ベンゾフラン、ベンズイミダゾール、ベンズインダゾール、ベンズジオキサン、クロメン、クロマン、シンノリン、フタラジン、インドール、インドリン、インドリジン、イソベンゾフラン、イソクロメン、イソインドール、イソインドリン、イソキノリン、ベンゾチアゾール、ベンゾオキサゾール、ナフチリジン、ベンゾオキサジアゾール、プテリジン、プリン、ベンゾピラン、ベンズピラジン、ピリドピリミジン、キナゾリン、キノリン、キノリジン、キノキサリン、ベンゾモルファン、テトラヒドロイソキノリン及びテトラヒドロキノリン等から誘導される基が挙げられるが、それらに限定されない。好ましくは、ビシクロヘテロアリール基は、9〜11員ビシクロヘテロアリールであり、5〜10員ヘテロアリールが特に好ましい。特に、ビシクロヘテロアリール基は、ベンゾチオフェン、ベンゾフラン、ベンゾチアゾール、インドール、キノリン、イソキノリン、ベンズイミダゾール、ベンゾオキサゾール及びベンズジオキサンから誘導される基である。
【００５８】
「カルバモイル」は、ラジカル-C(O)N(R42)2を指し、各R42基が、独立に、本明細書に定義されている水素、アルキル、シクロアルキル又はアリールであり、これらは本明細書に定義されるように所望により置換されていてもよい。具体的な実施態様において、「カルバモイル」という用語は、-C(O)-NH2を指す。
【００５９】
「シクロアルキル」は、3個から約10個の炭素原子を有し、1個から3個のアルキル基で所望により置換され得る、縮合及び架橋環系を含む単一環式環又は多縮合環を有する環式ヒドロカルビル基を指す。当該シクロアルキル基としては、例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル、1-メチルシクロプロピル、2-メチルシクロペンチル及び2-メチルシクロオクチル等の単一環構造、並びにアダマンタニル等の多環構造が挙げられる。
【００６０】
「置換シクロアルキル」は、本明細書の「置換」の定義に記載した基を含み、特に、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルコキシ、置換アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アミノ、置換アミノ、アミノカルボニル、アミノカルボニルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、シアノ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、ケト、ニトロ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオケト、チオール、アルキル-S(O)-、アリール-S(O)-、アルキル-S(O)2-及びアリール-S(O)2-からなる群から選択される1つ以上の置換基、例えば1個から5個の置換基、特に1個から3個の置換基を有するシクロアルキル基を指す。
【００６１】
「置換」は、1つ以上の水素原子が、それぞれ独立に、同一又は異なる置換基で置き換えられた基を指す。典型的な置換基としては、-X、-R46、-O-、=O、-OR46、-SR46、-S-、=S、-NR46R47、=NR46、-CX3、-CF3、-CN、-OCN、-SCN、-NO、-NO2、=N2、-N3、-S(O)2O-、-S(O)2OH、-S(O)2R46、-OS(O2)O-、-OS(O)2R46、-P(O)(O-)2、-P(O)(OR46)(O-)、-OP(O)(OR46)(OR47)、-C(O)R46、-C(S)R46、-C(O)OR46、-C(O)NR46R47、-C(O)O-、-C(S)OR46、-NR48C(O)NR46R47、-NR48C(S)NR46R47、-NR49C(NR48)NR46R47及び-C(NR48)NR46R47が挙げられるが、それらに限定されない。(式中、各Xは、独立に、ハロゲンであり;各R46、R47、R48及びR49は、独立に、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アルキル、アリールアルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換アルキル、シクロヘテロアルキル、置換シクロヘテロアルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、-NR50R51、-C(O)R50又は-S(O)2R50、或いは所望によりR50及びR51は、それらがともに結合した原子と一緒になって、シクロヘテロアルキル又は置換シクロヘテロアルキル環を形成し;R50及びR51は、独立に、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アルキル、アリールアルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換アルキル、シクロヘテロアルキル、置換シクロヘテロアルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル又は置換ヘテロアリールアルキルである)
【００６２】
代表的な置換アリールの例としては、以下の基が挙げられる。
【化５】
2009538877.tif 000007
【００６３】
これらの式において、R52及びR53の一方は、水素であってもよく、R52及びR53の少なくとも一方が、それぞれ独立に、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロヘテロアルキル、アルカノイル、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、NR54COR55、NR54SOR55、NR54SO2R57、COOアルキル、COOアリール、CONR54R55、CONR54OR55、NR54R55、SO2NR54R55、S-アルキル、S-アルキル、SOアルキル、SO2アルキル、Sアリール、SOアリール、SO2アリールから選択され;或いはR52及びR53は結合して、N、O又はSの群から選択される1種以上のヘテロ原子を所望により含有する5個から8個の原子の環式環(飽和又は不飽和)を形成してもよい。R54、R55及びR56は、独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、ペルフルオロアルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換アルキル又はヘテロアルキル等である。
【００６４】
化合物、又は化合物上に存在する基を記述するのに用いられる場合の「ヘテロ」は、該化合物又は基における1つ以上の炭素原子が窒素、酸素又は硫黄ヘテロ原子で置き換えられたことを意味する。ヘテロは、1個から5個、特に1個から3個のヘテロ原子を有するアルキル、例えばヘテロアルキル、シクロアルキル、例えばシクロヘテロアルキル、アリール、例えばヘテロアリール、シクロアルケニル及びシクロヘテロアルケニル等の上記のヒドロカルビル基のいずれにも適用できる。
【００６５】
「ヘテロアリール」は、親ヘテロ芳香族環系の単一原子から1個の水素原子を除去することによって誘導される一価のヘテロ芳香族基を指す。典型的なヘテロアリール基としては、アクリジン、アルシンドール、カルバゾール、β-カルボリン、クロマン、クロメン、シンノリン、フラン、イミダゾール、インダゾール、インドール、インドリン、インドリジン、イソベンゾフラン、イソクロメン、イソインドール、イソインドリン、イソキノリン、イソチアゾール、イソオキサゾール、ナフチリジン、オキサジアゾール、オキサゾール、ペリミジン、フェナントリジン、フェナントロリン、フェナジン、フタラジン、プテリジン、プリン、ピラン、ピラジン、ピラゾール、ピリダジン、ピリジン、ピリミジン、ピロール、ピロリジン、キナゾリン、キノリン、キノリジン、キノキサリン、テトラゾール、チアジアゾール、チアゾール、チオフェン、トリアゾール及びキサンテン等から誘導される基が挙げられるが、それらに限定されない。好ましくは、ヘテロアリール基は、5〜15員のヘテロアリールで、5〜10員のヘテロアリールが特に好ましい。特定のヘテロアリール基は、チオフェン、ピロール、ベンゾチオフェン、ベンゾフラン、インドール、ピリジン、キノリン、イミダゾール、オキサゾール及びピラジンから誘導される基である。
【００６６】
代表的なヘテロアリールの例としては、以下の基が挙げられる
【化６】
2009538877.tif 000008
(式中、各Yは、カルボニル、N、NR58、O及びSから選択され、R58は、独立に、水素、アルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール又はヘテロアルキル等である。)。
【００６７】
本明細書に用いられているように、「シクロヘテロアルキル」という用語は、N、O及びSから独立に選択される1種以上のヘテロ原子を含有する安定した複素環式非芳香族環及び縮合環を指す。縮合複素環式環系は、炭素環式環を含み、複素環式環を1つ含むだけでよい。複素環式環の例としては、ピペラジニル、ホモピペラジニル、ピペリジニル及びモルホリニルが挙げられるが、それらに限定されず、以下の実例で示される
【化７】
2009538877.tif 000009
(式中、各Xは、CR582、NR58、O及びSから選択され;各Yは、NR58、O及びSから選択され;R58は、独立に、水素、アルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール又はヘテロアルキル等である。)。これらのシクロヘテロアルキル環は、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルコキシ、置換アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アミノ、置換アミノ、アミノカルボニル、アミノカルボニルアミノ、アミノカルボニルオキシ、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、シアノ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、ケト、ニトロ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオケト、チオール、アルキル-S(O)-、アリール-S(O)-、アルキル-S(O)2-及びアリール-S(O)2-からなる群から選択される1つ以上の基で所望により置換されてもよい。置換基は、例えばラクタム及び尿素誘導体をもたらすカルボニル又はチオカルボニルを含む。
【００６８】
代表的なシクロヘテロアルケニルの例としては、以下の基が挙げられる
【化８】
2009538877.tif 000010
(式中、各Xは、CR582、NR58、O及びSから選択され;各Yは、カルボニル、N、NR58、O及びSから選択され;R58は、独立に、水素、アルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール又はヘテロアルキル等である。)。
【００６９】
置換基を含むヘテロ原子を有する代表的なアリールの例としては、以下の基が挙げられる
【化９】
2009538877.tif 000011
(式中、各Xは、C-R582、NR58、O及びSから選択され;各Yは、カルボニル、NR58、O及びSから選択され;R58は、独立に、水素、アルキル、シクロアルキル、シクロヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリール又はヘテロアルキル等である。)。
【００７０】
有機合成の分野の当業者なら、芳香族か非芳香族かにかかわらず、安定した化学的に存在可能な複素環式環におけるヘテロ原子の最大数が、環の大きさ、不飽和度及びヘテロ原子の価数によって決まることを認識するであろう。概して、複素環式環は、ヘテロ芳香族環が化学的に存在可能で、安定していれば1個から4個のヘテロ原子を有することができる。
【００７１】
「医薬として許容し得る」とは、動物、より詳細にはヒトにおける使用について、連邦政府又は州政府の監督機関に承認されていること、或いは米国薬局方又は一般的に認識された他の薬局方に掲載されていることを指す。
【００７２】
「医薬として許容し得る塩」は、本発明の化合物の無毒性の無機及び有機酸付加塩並びに塩基付加塩を指し、特に、それらは医薬として許容し得るものであり、本発明の化合物の所望の薬理活性を有する。これらの塩を本発明に有用な化合物の最終単離及び精製中にインサイチュウで調製することができる。当該塩としては、(1)塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸及びリン酸等の無機酸で形成された酸付加塩;又は酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、3-(4-ヒドロキシベンゾイル)安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、1,2-エタン-ジスルホン酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、4-クロロベンゼンスルホン酸、2-ナフタレンスルホン酸、4-トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、4-メチルビシクロ[2.2.2]-オクト-2-エン-1-カルボン酸、グルコヘプトン酸、3-フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、三級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸及びムコン酸等の有機酸で形成された酸付加塩;或いは(2)親化合物に存在する酸プロトンが、金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン又はアルミニウムイオンで置き換えられる場合;又はエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン及びN-メチルグルカミン等の有機塩基と配位結合するときに形成される塩；が挙げられる。塩は、単なる例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム及びテトラアルキルアンモニウム等を含み；及び該化合物が塩基性官能基を含む場合は、塩化水素酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩及びシュウ酸塩等の無毒性有機酸又は無機酸の塩をさらに含む。「医薬として許容し得る陽イオン」という用語は、酸官能基の無毒性の許容し得る陽イオン性対イオンを指す。当該陽イオンは、ナトリウム陽イオン、カリウム陽イオン、カルシウム陽イオン、マグネシウム陽イオン、アンモニウム陽イオン及びテトラアルキルアンモニウム陽イオン等によって代表される。
【００７３】
「医薬として許容し得る媒体」は、本発明の化合物とともに投与される希釈剤、補助剤、賦形剤又は担体を指す。
【００７４】
「予防すること」又は「予防」は、疾患又は障害を被るリスクの低下(即ち、疾患に曝露され得る、又は該疾患に罹患しやすいが、該疾患の症状をまだ経験していない、又は示していない対象において該疾患の臨床的症状の少なくとも1つが生じないようにすること)を指す。
【００７５】
「プロドラッグ」は、開裂性基を有し、加溶媒分解により、又は生理的条件下で、インビボで医薬として活性な本発明の化合物になる本発明の化合物の誘導体を含む化合物を指す。当該例としては、コリンエステル誘導体等、及びN-アルキルモルホリンエステル等が挙げられるが、それらに限定されない。
【００７６】
「対象」は、ヒトを含む。「ヒト」、「患者」及び「対象」という用語は、本明細書において区別なく用いられる。
【００７７】
任意の疾患又は障害の「治療をすること」又は「治療」は、一実施態様において、疾患又は障害を改善すること(即ち、疾患又はその臨床的症状の少なくとも1つの発生を抑止又は抑制すること)を指す。別の実施態様において、「治療すること」又は「治療」は、対象によって認識し得ない少なくとも1つの物理的パラメータを改善することを指す。さらに別の実施態様において、「治療すること」又は「治療」は、物理的(例えば、認識可能な症状の安定化)、生理的(例えば、物理的パラメータの安定化)又はその双方において疾患又は障害を調節することを指す。さらに別の実施態様において、「治療すること」又は「治療」は、疾患又は障害の発症を遅らせることを指す。
【００７８】
本発明の化合物の他の誘導体は、それらの酸及び酸誘導体形態の双方において活性を有するが、酸感応形態では、哺乳類生体における溶解性、組織相溶性又は遅延放出の利点をしばしば提供する(Bundgard,H.、「プロドラッグの設計(Design of Prodrugs)」、7〜9頁、21〜24頁、Elsevier、Amsterdam 1985参照)。プロドラッグとしては、当該技術分野の実務者に良く知られている酸誘導体、例えば、親酸と好適なアルコールとの反応によって調製されるエステル、或いは親酸化合物と置換又は無置換のアミンとの反応によって調製されるアミド、又は酸無水物、若しくは混合無水物が挙げられる。本発明の化合物に係属した酸基から誘導される単純な脂肪族又は芳香族エステル、アミド及び無水物は、好ましいプロドラッグである。場合によっては、(アシルオキシ)アルキルエステル又は((アルコキシカルボニル)オキシ)アルキルエステル等の二重エステル型プロドラッグを調製するのが望ましい。好ましいのは、本発明の化合物のC1〜C8アルキルエステル、C2〜C8アルケニルエステル、アリールエステル、C7〜C12置換アリールエステル及びC7〜C12アリールアルキルエステルである。
【００７９】
本明細書に用いられているように、「同位体変異体」という用語は、当該化合物を構成する原子の1個以上に不自然な割合の同位体を含む化合物を指す。例えば、化合物の「同位体変異体」は、例えば、重水素(2H又はD)、炭素13(13C)又は窒素15(15N)等の1種以上の非放射性同位元素を含み得る。当該同位体置換基が作られる化合物において、以下の原子は、存在する場合には、例えば、任意の水素が2H/Dであり、任意の炭素が13Cであり、又は任意の窒素が15Nであり得るように変化し得ること、並びに当該原子の存在及び配置が当該技術分野の知識の範囲内で決定され得ることが理解されるであろう。同様に、本発明は、例えば、得られた化合物を薬物及び/又は基質組織分散試験に使用できる場合に、同位体変異体を放射線同位元素で調製することを含むことができる。放射線活性同位元素の三重水素、即ち3H及び炭素14、即ち14Cは、導入の容易さ及び容易な検出手段という点でこの目的に特に有用である。さらに、11C、18F、15O及び13N等のポジトロン放出同位体で置換された化合物を調製することができ、それらは、基質受容体占有率を調べるためのポジトロン放出断層撮影(Positron Emission Topography)(PET)検査に有用である。
【００８０】
本明細書に提示された化合物のすべての同位体変異体は、放射線活性か否かにかかわらず、本発明の範囲内に包括されることを意図する。
【００８１】
同一の分子式を有するが、それらの原子の結合の性質又は配列、或いはそれらの原子の空間における配置が異なる化合物を「異性体」と呼ぶことも理解されたい。それらの原子の空間における配置が異なる異性体を「立体異性体」と呼ぶ。
【００８２】
互いの鏡像でない立体異性体を「ジアステレオ異性体」と呼び、互いに重ねることができない鏡像である立体異性体を「鏡像異性体」と呼ぶ。化合物が不斉中心を有する場合、例えば、4つの異なる基に結合する場合は、一対の鏡像異性体が可能である。鏡像異性体は、その不斉中心の絶対配位を特徴とすることができ、Cahn及びPrelogのR又はS配列規則によって、或いは分子が偏光面を回転する右旋性又は左旋性(即ち、それぞれ(+)又は(-)異性体)と呼ばれる方式によって記述される。キラル化合物は、個々の鏡像異性体として、又はそれらの混合物として存在することができる。等しい割合の鏡像異性体を含む混合物を「ラセミ混合物」と呼ぶ。
【００８３】
「互変異性体」は、特定の化合物構造の互換性の形であり、水素原子及び電子の変位が異なる化合物を指す。したがって、π電子及び原子(通常はH)の移動を通じて2つの構造が平衡になり得る。例えば、エノール及びケトンは、酸又は塩基で処理することによって迅速に相互変換されるため、互変異性体である。互変異性の別の例は、同様に酸又は塩基で処理することによって形成されるフェニルニトロメタンのアシ及びニトロ形である。
【００８４】
互変異性体形は、該当する化合物の最適な化学反応性及び生物活性の達成に重要であり得る。
【００８５】
本発明の化合物は、1つ以上の不斉中心を有することができるため、当該化合物を個々の(R)-又は(S)-立体異性体或いはそれらの混合物として製造することができる。特に指定する場合を除いて、明細書及び請求項における特定の化合物の記述又は命名は、個々の鏡像異性体及びそれらの混合物又はラセミ体等を含むことを意図する。立体化学構造の決定法及び立体異性体の分離法は、当該技術分野で良く知られている。
【００８６】
(化合物)
本発明は、MAPKAPK5が、MMP1の発現をもたらす経路で機能すること、及び本発明の化合物などのMAPKAPK5活性の阻害剤が、MMP活性の異常に高い発現を伴う疾患の治療に有用であることの発見に基づく。
【００８７】
本発明の化合物は、一般には、5位においてアリール基又はヘテロアリール基で置換され、8位においてアリールアミノ基又はヘテロアリールアミノ基で置換された[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル-アミンとして記述することができる。
【００８８】
より詳細には、本発明は、哺乳類細胞においてマトリックス金属プロテイナーゼ阻害特性を有する、式(I)の化合物;又はその医薬として許容し得る塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグに関する:
【化１０】
2009538877.tif 000012
(式中、
A及びBは、独立に、CR2R"、NR"、酸素又は硫黄であり;
AAは、CR2又はNであり;
Dは、C=O、CR2R"又はNR"であり;
Eは、kが0の場合はNH又はCR"R6であり、kが1の場合はNH又はCR"R6aであり;
Fは、硫黄、酸素又はNHであり;
Tは、酸素又はNRであり;
U、V、W及びXは、独立に、CR"R7又はNR"であり;
Yは、CR"又はNであり;
Zは、水素、アミノ、ヒドロキシル、低級アルコキシ、カルバモイル、カルボキシル、SO2Rz、SO2NRRz、-NR(CO)(CH2)d-Rz、-NRRz、-(CO)-ORz、-(CO)-NR(CH2)d-Rz、又は
【化１１】
2009538877.tif 000013
であり;
Rは、独立に、水素又は低級アルキルであり;
R"は、Hであり、又は隣接原子と二重結合を形成し;
R1は、H;R2;又は1つ以上のR2で所望により置換された低級アルキル、低級シクロアルキル及び低級アルキル-低級シクロアルキルであり;
R3は、Hであり、又は隣接R"と二重結合を形成し;
R2は、H、F、Cl;CN;COOR4;OR4;C(O)N(R4R5);S(O)2N(R4R5);低級アルキル;O-低級アルキル;NH-低級アルキル;S-低級アルキル;COO-低級アルキル;OC(O)-低級アルキル;C(O)N(R4)-低級アルキル;S(O)2N(R4)-低級アルキル;S(O)N(R4)-低級アルキル;S(O)2-低級アルキル;S(O)-低級アルキル;N(R4)S(O)2-低級アルキル;及びN(R4)S(O)-低級アルキルであり;各低級アルキルは、F及びClの1種以上で所望により置換されており;
R4及びR5は、独立に、H;F、Cl;又はF及びClの1種以上で所望により置換された低級アルキル、低級シクロアルキル若しくは低級アルキル-低級シクロアルキルであり;
R6は、水素、アミノ、ヒドロキシル、カルバモイル、カルボキシル、SO2R、NRR'、-(CO)-OR又は-(CO)-NRR'であり;
R6aは、R6、Cl、F、低級アルコキシ、シアノ、トリフルオロメトキシ;又は隣接基と一緒になって-(CHR")n-NR-(CHR")p-であり、それらが結合した環に縮合される5又は6員の複素環式環を形成し;
R7は、独立に、水素、ハロゲン、低級アルキル又は低級アルコキシであり;
Rzは、水素、低級アルキル、低級アルカノイル、フェニル、1-低級アルキルピロリジン-3-イル、ピラゾール-4-イル、ピラゾール-2-イル、或いはヒドロキシル、アミノ、モノ又はジ低級アルキルアミノ、アセトアミジル、低級アルカノイル、低級アルキル、4-ヒドロキシ-フェニル、3-アミノメチルフェニル、低級アルキルスルホニル、4-ジ低級アルキルアミノフェニル、ピリド-3-イル、1H-インドール-3-イル、モルホリン-4-イルの1種以上で置換された低級アルキル、低級アルカノイル、フェニル、1-低級アルキルピロリジン-3-イル、ピラゾール-4-イル、ピラゾール-2-イル又はピリド-3-イルであり;
R及びRzは、ともに、-(CHR)q-T-(CHR)r-であり、それらが結合した窒素とともに5又は6員の複素環式環を形成してもよく;
Rz及びR7は、ともに、-(CHR")n-NR-(CHR")p-であり、それらが結合した環に縮合する5又は6員の複素環式環を形成してもよく、
b及びdは、独立に、0又は1であり;但し、b又はdの少なくとも1つが1であることを条件とし;
kは、0又は1であり;
mは、0又は1であり;
n及びpは、独立に、0、1又は2であり;
q及びrは、1又は2であり;
xは、0又は1であり;
但し、R7又はRzの少なくとも1つが水素以外である。)。
【００８９】
本発明の好ましい態様は、式IIの化合物;又はその医薬として許容し得る塩、水和物、溶媒和物若しくはプロドラッグのサブクラスである：
【化１２】
2009538877.tif 000014
(式中、
A及びBは、独立に、CR2R"、NR"、酸素又は硫黄であり;
AAは、CR2又はNであり;
Dは、C=O、CR2R"又はNR"であり;
Eは、kが0の場合はNH又はCR"R6であり、kが1の場合はNH又はCR"R6aであり;
Fは、硫黄、酸素又はNHであり;
Tは、酸素又はNRであり;
R"は、Hであり、又は隣接原子と二重結合を形成し;
Rは、独立に、水素又は低級アルキルであり;
R1は、H;R2;又は1つ以上のR2で所望により置換された低級アルキル、低級シクロアルキル及び低級アルキル-低級シクロアルキルであり;
R2は、H、F、Cl;CN;COOR4;OR4;C(O)N(R4R5);S(O)2N(R4R5);低級アルキル;O-低級アルキル;NH-低級アルキル;S-低級アルキル;COO-低級アルキル;OC(O)-低級アルキル;C(O)N(R4)-低級アルキル;S(O)2N(R4)-低級アルキル;S(O)N(R4)-低級アルキル;S(O)2-低級アルキル;S(O)-低級アルキル;N(R4)S(O)2-低級アルキル;及びN(R4)S(O)-低級アルキルであり;各低級アルキルは、F及びClの1種以上で所望により置換されており;
R4及びR5は、独立に、H;F、Cl;又はF及びClの1種以上で所望により置換された低級アルキル、低級シクロアルキル若しくは低級アルキル-低級シクロアルキルであり;
R6は、水素、アミノ、ヒドロキシル、カルバモイル、カルボキシル、SO2R、NRR'、-(CO)-OR又は-(CO)-NRR'であり;
R6aは、R6、Cl、F、低級アルコキシ、シアノ、トリフルオロメトキシ;又は隣接基と一緒になって-(CHR")n-NR-(CHR")p-であり、それらが結合した環に縮合される5又は6員の複素環式環を形成し;
R8は、独立に、オルト位においてRaで置換され、メタ位においてRbで置換され、パラ位においてRcで置換されたフェニル;ピリド-3-イル;5位においてRcで置換されたピリド-3-イル;又は独立に、2位においてRaで置換され、4位においてRdで置換されたシクロヘキシルであり;
Raは、水素、ハロゲン、低級アルキル、トリフルオロメチル又は低級アルコキシであり;
Rbは、水素、トリフルオロメチル、低級アルコキシ、低級アルキルスルホンアミド、カルボキシル、-NReRf、-(CO)-OR又は-(CO)-NReRfであり;
Rcは、水素、アミノ、ヒドロキシル、低級アルコキシ、カルバモイル、カルボキシル、SO2R、SO2NReRf、NReRf、-(CO)-OR又は-(C0)-NReRfであり;或いは
Rb及びRcは、一緒になって、ベンズジアゾール、又は3位においてR'で置換されたインドールを形成することができ;
Rdは、ヒドロキシル、ハロゲン、アミノ、低級アルコキシ又はNReRfであり;
Re及びRfは、独立に、水素、1-低級アルキルピロリジン-3-イル、1-R-ピラゾール-4-イル、低級アルカノイル、フェニル、或いは4-ヒドロキシ-フェニル、3-アミノメチルフェニル、低級アルキルスルホニル、4-ジ低級アルキルアミノフェニル、ピリド-3-イル、1H-インドール-3-イル、モルホリン-4-イル、ヒドロキシル、アミノ、モノ若しくはジ低級アルキルアミノ又は低級アルカノイルの1種以上で所望により置換された低級アルキルであり;或いはR'及びR"は、一緒になって-(CHR)n-T-(CHR)n-であり、それらが結合した窒素とともに5又は6員の複素環式環を形成し;
mは、0、1又は2であり;
nは、1又は2であり;
但し、Ra、Rb及びRcの少なくとも1つが水素以外である。)。
【００９０】
本発明の特に好ましい実施態様は、式IIIの化合物;又はその医薬として許容し得る塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ;並びにその立体異性体、同位体変異体及び互変異性体に関する:
【化１３】
2009538877.tif 000015
(式中、R1は、H、又は置換若しくは無置換のアルキルであり;R8及びR9の各々は、独立に、置換又は無置換のシクロアルキル、置換又は無置換のヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のアリール、置換又は無置換のヘテロアリールから選択される。)。
【００９１】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、置換又は無置換のシクロペンチル、シクロヘキシル、置換又は無置換のフェニル、置換又は無置換のピリジル、置換又は無置換のピリミジン、及び置換又は無置換のピラジン、置換又は無置換のピロール、置換又は無置換のピラゾール及び置換又は無置換のイミダゾールから選択される。
【００９２】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R1は、H、Me、Et、i-Pr又はCF3である。
【００９３】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R1は、Hである。
【００９４】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、置換又は無置換のシクロアルキルから選択される。
【００９５】
別の実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、置換又は無置換のシクロヘキシル又はシクロペンチルから選択される。
【００９６】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、置換又は無置換のヘテロシクロアルキルから選択される。
【００９７】
別の実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、置換又は無置換のピペリジニル、モルホリニル又はピロリジニルから選択される。
【００９８】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、置換又は無置換のフェニル、ピリジル又はピリミジンから選択される。
【００９９】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、置換フェニル、置換ピリジル及び置換ピリミジンから選択され;該置換基は、
-L-R8dである(式中、
Lは、結合、アルキレン、ヘテロアルキレン、-O-、-N(R8e)-、-CO-、-CO2-、-SO-、-SO2-、-CON(R8e)-、-SO2N(R8e)-、-N(R8e)CO-、-N(R8e)SO2-、-N(R8e)CO N(R8e)-、-N(R8e)SO2 N(R8e)-から選択され;
R8dは、置換又は無置換のアルキル、置換又は無置換のシクロアルキル、置換又は無置換のアリール、置換又は無置換のヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のヘテロアリール、置換又は無置換のアミノ、置換又は無置換のアラルキル、置換又は無置換のヘテロアリールアルキル及び置換又は無置換のアミノアルキルから選択され;
R8eは、H、置換又は無置換のアルキル及び置換又は無置換のシクロアルキルから選択される。)。
【０１００】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、
【化１４】
2009538877.tif 000016
である(式中、L及びR8dは上記パラグラフで記載した通りであり;添字nは1〜4から選択され;各R8aは、独立に、水素、置換又は無置換のアルキル、アルコキシ、シアノ及びハロから選択される。)。
【０１０１】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は上記の通りであり、添字nは1であり、R8aは、Me、Et、Pr、イソ-Pr、Cl、F、CN、OMe又はCF3である。別の実施態様において、R8aは、2-(-Lに対するオルト)位に存在する。さらに別の実施態様において、R8aは、2-Cl、2-F、2-Me又は2-CF3である。
【０１０２】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は上記の通りであり、
Lは、結合、-O-、-CO-、-CON(R8e)-、又は-N(R8e)CO-であり;
R8dは、置換又は無置換のアルキル、置換又は無置換のシクロアルキル、置換又は無置換のアリール、置換又は無置換のヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のヘテロアリール、置換又は無置換のアラルキル、置換又は無置換のヘテロアリールアルキル及び置換又は無置換のアミノアルキルから選択され;
R8eは、H、置換又は無置換のアルキルから選択される。
【０１０３】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は上記の通りであり、
Lは、結合、-O-、-CO-、-CON(R8e)-又は-N(R8e)CO-であり;
R8dは、H、アルキルアミノエチル、ジアルキルアミノエチル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールアルキル、及びヘテロアリールアルキルから選択される。
【０１０４】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は上記の通りであり、
Lは、結合、-O-、-CO-、-CON(R8e)-、又は-N(R8e)CO-であり;
R8dは、メチルアミノエチル、エチルアミノエチル、ジメチルアミノエチル、ジエチルアミノエチル、置換又は無置換のピロリジニル、ベンジル及びピリジルメチルから選択される。
【０１０５】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は上記の通りであり、
Lは、結合、-CO-、SO2、-(CH2)ml-、-O(CH2)ml-、-NH(CH2)ml-、-CON(H)(CH2)ml-、又は-SO2NH(CH2)m1であり;添字m1は1〜4から選択され;R8dは、
【化１５】
2009538877.tif 000017
である(式中、環Pは、置換又は無置換のヘテロシクロアルキルである。)。
別の実施態様において、Lは、結合、-CO-、-O(CH2)ml-、-CON(H)(CH2)ml-、又は-NHCO-である。
【０１０６】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は上記の通りであり;Lは、結合であり;環Pは、置換又は無置換のヘテロシクロアルキルである。
【０１０７】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は上記の通りであり;Lは、結合であり;環Pは、置換又は無置換のピペリジン、置換又は無置換のピペラジン、及び置換又は無置換のピペリジン、モルホリンである。
【０１０８】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は上記の通りであり;Lは、COであり;環Pは、置換又は無置換のヘテロシクロアルキルである。
【０１０９】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は上記の通りであり;Lは、COであり;環Pは、置換又は無置換のピペリジン、置換又は無置換のピペラジン、及び置換又は無置換のピペリジン、モルホリンである。
【０１１０】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は上記の通りであり;Lは、-(CH2)ml-、-O(CH2)ml-、又は-NH(CH2)ml-であり;添字m1は、1〜4から選択され;環Pは、置換又は無置換のヘテロシクロアルキルである。
【０１１１】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は上記の通りであり;Lは、-(CH2)ml-、-O(CH2)ml-、又は-NH(CH2)ml-であり;添字m1は、2又は3であり;環Pは、置換又は無置換のピペリジン、置換又は無置換のピペラジン、及び置換又は無置換のピペリジン、モルホリンである。
【０１１２】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は上記の通りであり;Lは、-CON(H)(CH2)ml-、又は-NHCO(CH2)ml-であり;添字m1は、1〜4から選択され;環Pは、置換又は無置換のヘテロシクロアルキルである。
【０１１３】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は上記の通りであり;Lは、-CON(H)(CH2)ml-であり;添字m1は、2又は3であり;環Pは、置換又は無置換のピペリジン、置換又は無置換のピペラジン、及び置換又は無置換のピペリジン、モルホリンである。
【０１１４】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、該化合物は、式IVa、IVb、IVc又はIVdの化合物;又はその医薬として許容し得る塩、溶媒和物若しくはプロドラッグ;並びにその立体異性体、同位体変異体及び互変異性体である:
【化１６】
2009538877.tif 000018
(式中、L及び環Pは、上記の通りであり;添字nは、1〜4から選択され;各R8aは、独立に、水素、置換又は無置換のアルキル、アルコキシ、シアノ及びハロから選択され;R9は、独立に、置換又は無置換のアリール及びヘテロアリールから選択される。)。
【０１１５】
一実施態様において、式IVa〜IVdの化合物に関して、Lは、結合である。
【０１１６】
一実施態様において、式IVa〜IVdの化合物に関して、Lは、メチレン、エチレン、プロピレン及びブチレンである。
【０１１７】
一実施態様において、式IVa〜IVdの化合物に関して、Lは、-CO-である。
【０１１８】
Lが-CO-である、請求項9記載の化合物。
【０１１９】
Lが-NHCO-又は-CONH-である、請求項9記載の化合物。
【０１２０】
Lが-CON(H)-CH2-CH2-又は-N(H)-CO-CH2-CH2-である、請求項9記載の化合物。
【０１２１】
Lが-OCH2-CH2-又は-NHCH2-CH2-である、請求項9記載の化合物。
【０１２２】
一実施態様において、式IVa〜IVdの化合物に関して、Lは、-SO2-である。
【０１２３】
一実施態様において、式IVa〜IVdの化合物に関して、Lは、-CON(H)-CH2-CH2-又は-SO2NH-CH2-CH2-である。
【０１２４】
一実施態様において、式IVa〜IVdの化合物に関して、Lは、-OCH2-CH2-又は-NHCH2-CH2-である。
【０１２５】
好ましい実施態様において、Lは、結合である。
【０１２６】
一実施態様において、式IVa〜IVdの化合物に関して、環Pは、置換又は無置換のピペリジン、モルホリン又はピペラジンである。
【０１２７】
一実施態様において、式IVa〜IVdの化合物に関して、L及び環Pは、上記の通りであり;添字nは4であり、各R8aはHである。
【０１２８】
一実施態様において、式IVa〜IVdの化合物に関して、L及び環Pは、上記の通りであり;添字nは1であり、R8aは、Me、Et、Pr、イソ-Pr、Cl、F、CN、OMe又はCF3である。別の実施態様において、R8aは、2-(-Lに対してオルト)位に存在する。さらに別の実施態様において、R8aは、2-Cl、2-F、2-Me又は2-CF3である。
【０１２９】
さらなる実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、
【化１７】
2009538877.tif 000019
である(式中、環Pは、置換又は無置換のヘテロシクロアルキルであり;添字nは、1〜4から選択され、各R8aは、独立に、水素、置換又は無置換のアルキル、アルコキシ、シアノ及びハロから選択される。)。
【０１３０】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、上記の通りであり、環Pは、置換又は無置換のピペリジン、モルホリン又はピペラジンである。
【０１３１】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、上記の通りであり、添字nは4であり、各R8aはHである。
【０１３２】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、上記の通りであり、添字nは1であり、R8aは、Me、Et、Pr、イソ-Pr、Cl、F、CN、OMe又はCF3である。別の実施態様において、R8aは、2-(N-環Pに対してオルト)位に存在する。さらに別の実施態様において、R8aは、2-Cl、2-F、2-Me又は2-CF3である。
【０１３３】
さらなる実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、
【化１８】
2009538877.tif 000020
である(式中、添字nは、1〜4から選択され;各R8aは、独立に、水素、置換又は無置換のアルキル、アルコキシ、シアノ及びハロから選択され;R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル又は置換若しくは無置換のシクロアルキルであり;R8cは、水素、置換又は無置換のアルキルであり、添字xは、1〜8から選択される。)。
【０１３４】
さらなる実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、
【化１９】
2009538877.tif 000021
である(式中、添字nは、1〜4から選択され;各R8aは、独立に、水素、置換又は無置換のアルキル、アルコキシ、シアノ及びハロから選択され;R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル又は置換若しくは無置換のシクロアルキルであり;R8cは、水素又はMeである。)。
【０１３５】
さらなる実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、
【化２０】
2009538877.tif 000022
である(式中、添字nは、1〜4から選択され;各R8aは、独立に、水素、置換又は無置換のアルキル、アルコキシ、シアノ及びハロから選択される。)。
【０１３６】
さらなる実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、
【化２１】
2009538877.tif 000023
である(式中、添字nは、1〜4から選択され;各R8aは、独立に、水素、置換又は無置換のアルキル、アルコキシ、シアノ及びハロから選択され;R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル又は置換若しくは無置換のシクロアルキルである。)。
【０１３７】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、上記の通りであり、添字nは4であり、各R8aはHである。
【０１３８】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、上記の通りであり、添字nは1であり、R8aは、Me、Et、Pr、イソ-Pr、Cl、F、CN、OMe又はCF3である。別の実施態様において、R8aは、2-(N-環Pに対してオルト)位に存在する。さらに別の実施態様において、R8aは、2-Cl、2-F、2-Me又は2-CF3である。
【０１３９】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、上記の通りであり、R8bはHである。
【０１４０】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、上記の通りであり、R8bは、置換又は無置換のアルキルである。
【０１４１】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、上記の通りであり、R8bは、置換又は無置換のシクロアルキルである。
【０１４２】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、上記の通りであり、R8bは、Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CH2CF3、CF3、CH2CONH2、シクロプロピル又はシクロプロピルメチルである。
【０１４３】
1つの特定の実施態様において、式IIIの化合物に関して、R8は、上記の通りであり、R8bは、i-Prである。
【０１４４】
さらなる実施態様において、式IVa〜IVdの化合物に関して、R8aは、独立に、水素、置換又は無置換のアルキル、アルコキシ、シアノ、カルバモイル、CHO及びハロから選択される。一実施態様において、R8aは、H、Me、F又はClである。好ましい実施態様において、R8aは、Hである。
【０１４５】
一実施態様において、式IVa〜IVdの化合物に関して、該化合物は、式Va、Vb、Vc、Vd、Ve又はVfの化合物である:
【化２２】
2009538877.tif 000024
(式中、R9は、式IIIについて記載した通りであり、R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル又は置換若しくは無置換のシクロアルキルである。)。
【０１４６】
一実施態様において、式Va〜Vfの化合物に関して、R8bは、Hである。
【０１４７】
一実施態様において、式Va〜Vfの化合物に関して、R8bは、置換又は無置換のアルキルである。
【０１４８】
一実施態様において、式Va〜Vfの化合物に関して、R8bは、置換又は無置換のシクロアルキルである。
【０１４９】
一実施態様において、式Va〜Vfの化合物に関して、R8bは、Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CH2CF3、CF3、CH2CONH2、シクロプロピル又はシクロプロピルメチルである。
【０１５０】
1つの特定の実施態様において、式Va〜Vfの化合物に関して、R8bは、i-Prである。
【０１５１】
一実施態様において、式III〜Vfの化合物に関して、R9は、置換又は無置換のアリールである。別の実施態様において、R9は、置換又は無置換のフェニルである。
【０１５２】
一実施態様において、式III〜Vfの化合物に関して、R9は、置換又は無置換のヘテロアリールである。別の実施態様において、R9は、置換又は無置換のピリジルである。
【０１５３】
一実施態様において、式III〜Vfの化合物に関して、R9は、置換又は無置換のフェニル、インドリル、イソイノリル、ピロリル、フラニル、チエニル、ピラゾリル、オキサゾリル及びチアゾリルから選択される。
【０１５４】
一実施態様において、式III〜Vfの化合物に関して、R9は、
【化２３】
2009538877.tif 000025
である(A1、A2及びA3の各々は、独立に、S、O、N、NR9a及びCR9aから選択され;R9aの各々は、独立に、H、又は置換若しくは無置換のアルキルであり;R9bは、CONH2、CONHMe又はCNである。)。
【０１５５】
さらなる実施態様において、式III〜Vfの化合物に関して、R9は、
【化２４】
2009538877.tif 000026
である。
【０１５６】
さらなる実施態様において、式III〜Vfの化合物に関して、R9は、
【化２５】
2009538877.tif 000027
である。
【０１５７】
さらなる実施態様において、式III〜Vfの化合物に関して、R9は、
【化２６】
2009538877.tif 000028
である(式中、添字mは、1〜4から選択され、各R9dは、独立に、H、置換若しくは無置換のアルキル又はハロである。)。
【０１５８】
さらなる実施態様において、式III〜Vfの化合物に関して、R9は、
【化２７】
2009538877.tif 000029
である(式中、添字mは、1〜4から選択され、各R9dは、独立に、H、置換若しくは無置換のアルキル又はハロである。)。
【０１５９】
さらなる実施態様において、式III〜Vfの化合物に関して、R9は、
【化２８】
2009538877.tif 000030
である(式中、添字mは、1〜3から選択され、各R9dは、独立に、H、置換又は無置換のアルキル或いはハロである。)。
【０１６０】
さらなる実施態様において、式III〜Vfの化合物に関して、R9は上記の通りであり;各R9dはHである。
【０１６１】
さらなる実施態様において、式III〜Vfの化合物に関して、R9は上記の通りであり;mは1又は2であり、各R9dは独立にMe、Cl又はFである。
【０１６２】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、該化合物は、式VIa、VIb、Vic、VId、VIe又はVIfの化合物である:
【化２９】
2009538877.tif 000031
(R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル又は置換若しくは無置換のシクロアルキルである。)。
【０１６３】
さらなる実施態様において、式VIa〜VIfの化合物に関して、R8bはHである。
【０１６４】
さらなる実施態様において、式VIa〜VIfの化合物に関して、R8bはシクロアルキルである。
【０１６５】
さらなる実施態様において、式VIa〜VIfの化合物に関して、R8bはシクロプロピルである。
【０１６６】
さらなる実施態様において、式VIa〜VIfの化合物に関して、R8bは、置換又は無置換のアルキルである。
【０１６７】
さらなる実施態様において、式VIa〜VIfの化合物に関して、R8bは、Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CF3、CH2CF3、CH2CONH2又はシクロプロピルメチルである。
【０１６８】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、該化合物は、式VIIa、VIIb、VIIc、VIIc、VIId、VIIe又はVIIfの化合物である:
【化３０】
2009538877.tif 000032
(R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル又は置換若しくは無置換のシクロアルキルである。)。
【０１６９】
さらなる実施態様において、式VIIa〜VIIdの化合物に関して、R8bはHである。
【０１７０】
さらなる実施態様において、式VIIa〜VIIfの化合物に関して、R8bはシクロアルキルである。
【０１７１】
さらなる実施態様において、式VIIa〜VIIfの化合物に関して、R8bはシクロプロピルである。
【０１７２】
さらなる実施態様において、式VIIa〜VIIfの化合物に関して、R8bは、置換又は無置換のアルキルである。
【０１７３】
さらなる実施態様において、式VIIa〜VIIfの化合物に関して、R8bは、Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CF3、CH2CF3、CH2CONH2又はシクロプロピルメチルである。
【０１７４】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、該化合物は、式VIIIa、VIIIb、VIIIc、VIIId、VIIIe又はVIIIfの化合物である：
【化３１】
2009538877.tif 000033
(R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル又は置換若しくは無置換のシクロアルキルである。)。
【０１７５】
さらなる実施態様において、式VIIIa〜VIIIfの化合物に関して、R8bはHである。
【０１７６】
さらなる実施態様において、式VIIIa〜VIIIfの化合物に関して、R8bはシクロアルキルである。
【０１７７】
さらなる実施態様において、式VIIIa〜VIIIfの化合物に関して、R8bはシクロプロピルである。
【０１７８】
さらなる実施態様において、式VIIIa〜VIIIfの化合物に関して、R8bは、置換又は無置換のアルキルである。
【０１７９】
さらなる実施態様において、式VIIIa〜VIIIfの化合物に関して、R8bは、Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CF3、CH2CF3、CH2CONH2又はシクロプロピルメチルである。
【０１８０】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、該化合物は、式IXa、IXb、IXc、IXd、IXe又はIXfの化合物である:
【化３２】
2009538877.tif 000034
(R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル又は置換若しくは無置換のシクロアルキルである。)。
【０１８１】
さらなる実施態様において、式IXa〜IXfの化合物に関して、R8bはHである。
【０１８２】
さらなる実施態様において、式IXa〜IXfの化合物に関して、R8bはシクロアルキルである。
【０１８３】
さらなる実施態様において、式IXa〜IXfの化合物に関して、R8bはシクロプロピルである。
【０１８４】
さらなる実施態様において、式IXa〜IXfの化合物に関して、R8bは、置換又は無置換のアルキルである。
【０１８５】
さらなる実施態様において、式IXa〜IXfの化合物に関して、R8bは、Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CF3、CH2CF3、CH2CONH2又はシクロプロピルメチルである。
【０１８６】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、該化合物は、式Xa、Xb、Xc、Xd、Xe又はXfの化合物である:
【化３３】
2009538877.tif 000035
(R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル又は置換若しくは無置換のシクロアルキルである。)。
【０１８７】
さらなる実施態様において、式Xa〜Xfの化合物に関して、R8bはHである。
【０１８８】
さらなる実施態様において、式Xa〜Xfの化合物に関して、R8bはシクロアルキルである。
【０１８９】
さらなる実施態様において、式Xa〜Xfの化合物に関して、R8bはシクロプロピルである。
【０１９０】
さらなる実施態様において、式Xa〜Xfの化合物に関して、R8bは、置換又は無置換のアルキルである。
【０１９１】
さらなる実施態様において、式Xa〜Xfの化合物に関して、R8bは、Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CF3、CH2CF3、CH2CONH2又はシクロプロピルメチルである。
【０１９２】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、該化合物は、式XIa、XIb、XIc、XId、XIe又はXIfの化合物である:
【化３４】
2009538877.tif 000036
(R8bは、水素、置換若しくは無置換のアルキル又は置換若しくは無置換のシクロアルキルであり;R9eは、水素、Me又はCNである。)。
【０１９３】
一実施態様において、式XIa〜XIfの化合物に関して、R9eはHである。
【０１９４】
一実施態様において、式XIa〜XIfの化合物に関して、R9eはMeである。
【０１９５】
一実施態様において、式XIa〜XIfの化合物に関して、R9eはCNである。
【０１９６】
さらなる実施態様において、式XIa〜XIfの化合物に関して、R8bはHである。
【０１９７】
さらなる実施態様において、式XIa〜XIfの化合物に関して、R8bはシクロアルキルである。
【０１９８】
さらなる実施態様において、式XIa〜XIfの化合物に関して、R8bはシクロプロピルである。
【０１９９】
さらなる実施態様において、式XIa〜XIfの化合物に関して、R8bは、置換又は無置換のアルキルである。
【０２００】
さらなる実施態様において、式XIa〜XIfの化合物に関して、R8bは、Me、Et、Pr、i-Pr、t-Bu、i-Bu、CF3、CH2CF3、CH2CONH2又はシクロプロピルメチルである。
【０２０１】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、該化合物は、式XIIa、XIIb、XIIc又はXIIdの化合物である:
【化３５】
2009538877.tif 000037
。
【０２０２】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、該化合物は、式XIIIa、XIIIb、XIIIc又はXIIIdの化合物である:
【化３６】
2009538877.tif 000038
。
【０２０３】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、該化合物は、式XIVa、XIVb、XIVc又はXIVdの化合物である:
【化３７】
2009538877.tif 000039
。
【０２０４】
一実施態様において、式IIIの化合物に関して、該化合物は、式XVa、XVb又はXIVcの化合物である:
【化３８】
2009538877.tif 000040
[Lは、結合又は-O-CH2-CH2-であり;環Pは、
【化３９】
2009538877.tif 000041
(R8bは、H、Me、i-Pr、t-Bu、CH2CONH2、シクロプロピルメチル又はCH2CF3である。)である。]。
【０２０５】
1つの特定の実施態様において、式XVa〜XVcの化合物に関して、Lは結合である。別の特定の実施態様において、Lは-O-CH2-CH2-である。
【０２０６】
1つの特定の実施態様において、式XVa〜XVcの化合物に関して、環Pは、
【化４０】
2009538877.tif 000042
である。
【０２０７】
より具体的な実施態様において、式XVa〜XVcの化合物に関して、環Pは、
【化４１】
2009538877.tif 000043
である。
【０２０８】
別の実施態様において、式IIIの化合物に関して、該化合物は、表1から選択される。
【０２０９】
別の実施態様において、式IIIの化合物に関して、該化合物は、表2から選択される。
【０２１０】
一部の態様において、本発明は、上記式の化合物のプロドラッグ及び誘導体を提供する。プロドラッグは、代謝開裂性の基を有し、加溶媒分解によって、又は生理的条件下で、インビボで医薬として活性な本発明の化合物になる本発明の化合物の誘導体である。プロドラッグは、対象に投与されたときは不活性であり得るが、インビボで本発明の活性化合物に変換される。「医薬として許容し得るプロドラッグ」は、本明細書に用いられているように、適切な医学的判断の範囲内において、合理的な便益/リスク比に見合った過度の毒性、刺激、アレルギー応答を有する患者の組織と接触して使用するのに好適であり、それらの本発明の化合物の使用目的に有効である本発明に有用な化合物のプロドラッグを指す。「プロドラッグ」という用語は、インビボで変換されて、本発明に有用な有効化合物又はその医薬として許容し得る塩、水和物若しくは溶媒和物を与える化合物を指す。変換は、血液中の加水分解等の様々なメカニズムによって起こり得る。代謝開裂性の基を有する化合物には、代謝開裂性の基の存在により、親化合物に付与される溶解性及び/又は吸収率の向上の結果として改善された生物学的利用能を発揮できるという利点があるため、当該化合物は、プロドラッグとして作用する。参照により本明細書に組み込まれている「プロドラッグの設計(Design of Prodrugs)」、H.Bundgaard編、Elsevier(1985);「酵素学における方法(Methods in Enzymology)」;K.Widderら編、Academic Press、42、309〜396(1985);「薬物設計及び開発のテキストブック(A Textbook of Drug Design and Development)」、Krogsgaard-Larsen及びH.Bandaged編、第5章;Design and Applications of Prodrugs、113〜191(1991);Advanced Drug Delivery Reviews、H.Bundgard、8、1〜38(1992);J.Pharm.Sci.、77、285(1988);Chem.Pharm.Bull.、N.Nakeyaら、32、692(1984);「新規の送達システムとしてのプロドラッグ(Pro-drugs as Novel Delivery Systems)」、T.Higuchi及びV.Stella、14 A.C.S.Symposium Series、及び「薬物設計における生体可逆的単体(Bioreversible Carriers in Drug Design)」、E.B.Roche編、American Pharmaceutical Association and Pergamon Press、1987には詳細な説明が記載されている。当該例としては、コリンエステル誘導体等、N-アルキルモルホリンエステル等が挙げられるが、それらに限定されない。
【０２１１】
本発明の化合物の他の誘導体は、それらの酸及び酸誘導体形態の双方において活性を有するが、酸感応形態は、哺乳類生体における溶解性、組織相溶性又は遅延放出の利点をしばしば提供する(Bundgard,H.、「プロドラッグの設計(Design of Prodrugs)」、7〜9頁、21〜24頁、Elsevier、Amsterdam 1985参照)。プロドラッグとしては、当該技術分野の実務者に良く知られている酸誘導体、例えば、親酸と好適なアルコールとの反応によって調製されるエステル、或いは親酸化合物と置換又は無置換のアミンとの反応によって調製されるアミド、又は酸無水物、若しくは混合無水物が挙げられる。本発明の化合物に係属した酸基から誘導される単純な脂肪族又は芳香族エステル、アミド及び無水物は、好ましいプロドラッグである。場合によっては、(アシルオキシ)アルキルエステル又は((アルコキシカルボニル)オキシ)アルキルエステル等の二重エステル型プロドラッグを調製するのが望ましい。好ましいのは、本発明の化合物のC1〜C8アルキルエステル、C2〜C8アルケニルエステル、アリールエステル、C7〜C12置換アリールエステル及びC7〜C12アリールアルキルエステルである。
【０２１２】
(医薬組成物)
医薬として採用される場合は、本発明の化合物は、典型的には医薬組成物の形態で投与される。当該組成物は、医薬技術分野で良く知られた方法で調製され、少なくとも1種の活性化合物を含むことができる。
【０２１３】
一般には、本発明の化合物は、医薬として有効な量で投与される。実際に投与される化合物の量は、典型的には、治療すべき状態、選択された投与経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重及び応答並びに患者の症状の重度等を含む関連状況に鑑みて、医師によって決定される。
【０２１４】
経口、直腸、経皮、皮下、静脈内、筋肉内及び鼻内を含む様々な経路で本発明の医薬組成物を投与することができる。意図する送達経路に応じて、本発明の化合物は、好ましくは、注射可能組成物又は経口組成物として、或いは全ての経皮投与のための軟膏剤、ローション剤又は貼付剤として製剤される。
【０２１５】
経口投与用組成物は、バルク液剤若しくは懸濁剤又はバルク粉剤の形態をとることができる。しかし、より一般的には、組成物は、正確な投与を容易にするために単位剤形で提供される。「単位剤形」という用語は、ヒト対象及び他の哺乳類に対する単位投与物として好適な物理的に不連続な単位であって、各単位は、好適な医薬賦形剤と一緒になって、所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性材料を含む単位を指す。典型的な単位剤形としては、液体組成物の前充填、前測定アンプル又はシリンジ、或いは固体組成物の場合は丸剤、錠剤又はカプセル剤等が挙げられる。当該組成物において、フランスルホン酸化合物は、通常は少量(約0.1から約50重量%、好ましくは約1から約40重量%)の構成要素であり、残りは、様々な媒体又は担体、及び所望の剤形を形成するのに役立つ処理助剤である。
【０２１６】
経口投与に好適な液体剤形は、緩衝剤、懸濁剤及び分散剤、着色剤並びに香料等を有する好適な水性又は非水性媒体を含むことができる。固体剤形は任意の以下の成分、又は同様の性質の化合物を含むことができる：例えば、微結晶セルロース、ゴムトラガカント又はゼラチン等の結合剤;デンプン又はラクトース等の賦形剤、アルギン酸、プリモゲル又はトウモロコシデンプン等の崩壊剤;ステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤;コロイド二酸化ケイ素等の滑剤;ショ糖又はサッカリン等の甘味料;或いはペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジ香料等の香料の成分。
【０２１７】
注射可能組成物は、典型的には、注射可能無菌食塩水若しくはリン酸緩衝食塩水、又は当該技術分野で知られている他の注射可能担体をベースとする。先述のように、当該組成物における活性化合物は、典型的には、しばしば約0.05から10重量%の少量の構成要素であり、残りは、注射可能担体等である。
【０２１８】
経皮組成物は、典型的には、活性成分を一般には約0.01から約20重量%、好ましくは約0.1から約20重量%、好ましくは約0.1から約10重量%、より好ましくは約0.5から約15重量%の範囲で含む局部的軟膏剤又はクリーム剤として処方される。軟膏剤として処方される場合は、活性成分は、典型的には、パラフィン軟膏基剤又は水和性軟膏基剤と組み合わされる。或いは、活性成分を例えば水中油クリーム基剤によりクリーム剤で処方することができる。当該経皮製剤は、当該技術分野で良く知られており、一般には、活性成分又は製剤の皮膚浸透又は安定性を向上させるための追加的な成分を含む。すべての当該既知の経皮製剤及び成分が本発明の範囲内に含まれる。
【０２１９】
本発明の化合物を経皮デバイスによって投与することもできる。よって、レザバー又は多孔性膜型或いは固体マトリックス集合体の貼付剤を使用して、経皮投与を遂行することができる。
【０２２０】
経口投与可能組成物、注射可能組成物又は局所投与可能組成物の上記構成要素は、代表例にすぎない。他の材料並びに処理技術等は、参照により本明細書に組み込まれている「Remingtonの薬学(Remington's Pharmaceutical Sciences)」、第17版、1985、Mack Publishing Company、Pennsylvania(ペンシルバニア)州Eastonの第8部に記載されている。
【０２２１】
本発明の化合物を持続放出形で、或いは持続放出薬物送達システムから投与することもできる。代表的な持続放出材料の説明を「Remingtonの薬学(Remington's Pharmaceutical Sciences)」に見出すことができる。
【０２２２】
以下の製剤例は、本発明の代表的な医薬組成物を例示する。しかし、本発明は、以下の医薬組成物に限定されない。
【０２２３】
(製剤1-錠剤)
本発明の化合物を、乾燥粉末として約1:2の重量比で乾燥ゼラチン結合剤と混合する。潤滑剤として少量のステアリン酸マグネシウムを添加する。混合物を錠剤プレスで240〜270mgの錠剤に成形する(錠剤1個当たり80〜90mgの活性アミド化合物)。
【０２２４】
(製剤2-カプセル剤)
本発明の化合物を、乾燥粉末として約1:1の重量比でデンプン希釈剤と混合する。混合物を250mgのカプセルに充填する(カプセル1個当たり125mgの活性アミド化合物)。
【０２２５】
(製剤3-液剤)
本発明の化合物(125mg)、ショ糖(1.75g)及びキサンタンゴム(4mg)を混合し、10番メッシュのU.S.篩に通し、次いで微結晶セルロース及びナトリウムカルボキシメチルセルロース(11:89、50mg)を水に溶解させた既製溶液と混合する。安息香酸ナトリウム(10mg)、香料及び着色剤を水で希釈し、攪拌しながら添加する。次いで、十分量の水を添加して、全容量5mLを製造する。
【０２２６】
(製剤4-錠剤)
本発明の化合物を、乾燥粉末として約1:2の重量比で乾燥ゼラチン結合剤と混合する。潤滑剤として少量のステアリン酸マグネシウムを添加する。混合物を錠剤プレスで450〜900mgの錠剤に成形する(150〜300mgの活性アミド化合物)。
【０２２７】
(製剤5-注射剤)
本発明の化合物を無菌緩衝食塩水注射可能水性媒体に溶解又は懸濁させて、約5mg/mlの濃度とする。
【０２２８】
(製剤6-局部)
ステアリルアルコール(250g)及び白色ワセリン(250g)を約75℃で融解させ、次いで本発明の化合物(50g)、メチルパラベン(0.25g)、プロピルパラベン(0.15g)、硫酸ラウリルナトリウム(10g)及びプロピレングリコール(120g)の混合物を水(約370g)に溶解させた溶液を添加し、得られた混合物を凝固するまで攪拌する。
【０２２９】
(治療方法)
本発明の化合物は、MMP1及び/又はMAPKAPK5の異常活性に因果的に関連する、又は帰する哺乳類における状態を治療するための治療薬として使用される。よって、本発明の化合物及び医薬組成物は、ヒトを含む哺乳類における炎症性疾患の予防及び/又は治療のための治療薬として使用される。
【０２３０】
治療方法の態様において、本発明は、特に関節炎、とりわけリウマチ様関節炎における細胞外マトリックス(ECM)分解に伴う状態にかかりやすい、又はかかっている哺乳類を治療する方法であって、本発明の化合物の1種以上又は上記医薬組成物の有効量を投与することを含む、前記方法を提供する。
【０２３１】
別の治療方法の態様において、本発明は、MMP1の異常細胞発現に伴う状態にかかりやすい、又はかかっている哺乳類を治療する方法であって、治療有効量の本発明の化合物又はその医薬組成物を投与することを含む、前記方法を提供する。
【０２３２】
別の治療方法の態様において、本発明は、異常なマトリックス金属プロテイナーゼ活性を特徴とする状態を治療又は予防する方法であって、治療上有効なマトリックス金属プロテイナーゼ阻害量の本発明の化合物の1種以上又はその医薬組成物を投与することを含む、前記方法を提供する。
【０２３３】
さらに別の治療方法の態様において、本発明は、例えば、リウマチ様関節炎及び骨関節炎等の炎症、心筋梗塞、様々な自己免疫疾患及び障害、ブドウ膜炎及びアテローム硬化症;例えば乾癬等の疥癬/痒み症;並びに腎臓障害に媒介される、又はそれらをもたらす疾患及び障害にかかりやすい、又はかかっている哺乳類を治療する方法であって、有効な状態治療量又は状態予防量の上記医薬組成物の1種以上を投与することを含む、前記方法を提供する。
【０２３４】
本発明は、また、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ活性化タンパク質キナーゼ5の阻害薬の投与によって予防、改善又は解消される状態、或いは異常なコラーゲン活性を特徴とする状態、或いはECM分解に伴う状態又は炎症を含む疾患から選択される状態の治療又は予防、最も好ましくはリウマチ様関節炎の治療のための医薬品の製造における本発明の化合物の使用に関する。
【０２３５】
本発明のさらなる態様として、特に前記状態及び疾患の治療又は予防における医薬として使用するための本発明の化合物を提供する。また、前記状態及び疾患の1つの治療又は予防のための医薬品の製造における本発明の化合物の使用を本明細書に提供する。
【０２３６】
本発明の方法の好ましい投薬は、炎症を特徴とする疾患状態にかかっている対象に対して、有効なマトリックス金属プロテアーゼ阻害量の本発明の化合物を、患者における異常レベルの細胞外マトリックス分解を軽減する、好ましくは前記分解に関与する自己永久プロセスを終了させるのに十分な時間にわたって投与することを含む。該方法の特別な実施態様は、本発明の化合物の有効なマトリックス金属プロテアーゼ阻害量を、リウマチ様関節炎が発生している、又は発生しやすい対象患者に対して、それぞれ、前記患者における関節のコラーゲン及び骨分解をそれぞれ軽減又は予防する、好ましくは前記分解に関与する自己永久プロセスを終わらせるのに十分な時間にわたって投与することを含む。
【０２３７】
注射投与量は、いずれも約1から約120時間、特に24から96時間にわたって、約0.1mg/kg/時から少なくとも10mg/kg/時の範囲である。十分な安定状態レベルを達成するために、約0.1mg/kgから約10mg/kg以上の前充填ボーラスを投与することもできる。最大合計投与量は、40から80kgのヒト患者に対して約2g/日を超えないことが想定される。
【０２３８】
炎症及び自己免疫状態等の長期的な状態の予防及び/又は治療では、治療のための投薬は、通常多くの月数又は年数に及ぶため、患者の便利さ及び寛容を考慮して経口投与が好ましい。経口投与では、1日当たり1回から5回、特に2回から4回、典型的には3回の投与が代表的な投薬である。これらの投与パターンを用いると、各投与は、本発明の化合物の約0.01から約20mg/kgを提供し、好ましい投与は、約0.1から約10mg/kg、特に約1から約5mg/kgをそれぞれ提供する。
【０２３９】
経皮投与量は、一般には、注射投与を用いて達成されるのと同様又はそれ以下の血液レベルを提供するように選択される。
【０２４０】
炎症状態の発症を予防するのに使用される場合は、本発明の化合物は、該状態を発生させるリスクを有する患者に対して、典型的には医師の助言及び監督の下で、上記投与量で投与されることになる。特定の状態を発生させるリスクを有する患者としては、一般には、家族の該状態歴を有する患者、又は遺伝子検査又はスクリーニングによって、該状態を特に発生させやすいことが認められた患者が挙げられる。
【０２４１】
本発明の化合物を唯一の活性薬として投与することができ、或いは同一又は類似の治療活性を実証し、当該組合せ投与に対して安全且つ効果的であると判断される他の化合物を含む他の薬剤と組み合わせて投与することができる。
【０２４２】
(一般的な合成手順)
以下の一般的方法及び手順を用いて、本発明のトリアゾロ[1,5-a]ピリジル化合物を、容易に入手可能な出発材料から調製することができる。典型的又は好ましいプロセス条件(即ち、反応温度、時間、反応物質のモル比、溶媒、圧力等)が示される場合も、特に明記していなければ他のプロセス条件を用いることもできることが理解されるであろう。最適な反応条件は、使用する具体的な反応物質又は溶媒に応じて異なってもよいが、当該条件は、慣例の最適化手順に従って当業者により決定され得る。
【０２４３】
また、当業者に明らかなように、一部の官能基が望ましくない(化学)反応を行うことを防止するために、従来の保護基が必要であり得る。特定の官能基に対する好適な保護基の選択、並びに保護及び脱保護の好適な条件は、当該技術分野で良く知られている。例えば、T.W.Greene及びP.G.M.Wutsの論文、「有機合成における保護基(Protecting Groups in Organic Synthesis)」、第2版、Wiley、New York、1991及びそこに引用されている参考文献には、多くの保護基並びにそれらの導入及び除去について記載されている。
【０２４４】
以上に記載した代表的なビシクロヘテロアリールの調製に関して、以下の方法を詳細に示す。本発明の化合物は、有機合成の当業者によって、既知又は市販の出発材料及び試薬から調製され得る。
(一般的な合成経路)
【化４２】
2009538877.tif 000044
【０２４５】
(一般)
すべての試薬は、市販品であり、特に指定する場合を除いてさらに精製することなくそのまま使用された。市販の無水溶媒を、不活性雰囲気下で実施する反応に使用した。特に指定する場合を除いて、他のすべての場合には試薬グレードの溶媒を使用した。シリカゲル60(35〜70μm)でカラムクロマトグラフィーを実施した。プレコートシリカゲルF-254プレート(厚さ0.25mm)を使用して薄層クロマトグラフィーを実施した。1H NMRスペクトルをBruker DPX 400 NMR分光計(400MHz)で記録した。1H NMRスペクトルに対する化学シフト(δ)を、内部標準としてのテトラメチルシラン(δ0.00)又は適切な残留溶媒ピーク、即ちCHCl3(δ7.27)に対する百万分率(parts per million)(ppm)で報告する。多重度を一重項(singlet)(s)、二重項(doublet)(d)、三重項(triplet)(t)、四重項(quartet)(q)、多重項(multiplet)(m)及びブロード(broad)(br)で示す。結合定数(J)をHzで示す。エレクトロスプレーMSスペクトルをMicromassプラットフォームLC/MS分光計で得た。すべてのLCMS分析に使用したカラム:Waters Acquity UPLC BEH C18 1.7μm、2.1mm(内径)×50mm(長さ)(部品番号186002350)。分取HPLC:Waters XBridge Prep C18 5μm ODB 19mm(内径)×100mm(長さ)(部品番号186002978)。どの方法もMeCN/H2O勾配を用いている。H2Oは、0.1%TFA又は0.1%NH3を含有する。
【０２４６】
(本発明の化合物の代表的な合成)
化合物1:(4-モルホリン-4-イルフェニル)-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]アミン
工程1:N'-(3,6-ジブロモ-ピラジン-2-イル)-N,N-ジメチルホルムアミジン
【化４３】
2009538877.tif 000045
エタノール(150mL)に懸濁させた3,6-ジブロモ-ピラジン-2-イルアミン(15.37g、60.80mmol)とN,N-ジメチルホルムアミドジメチルアセタール(10.1mL、76.00mmol)の混合物を2時間還流させる。反応混合物を真空中で蒸発させて、表題の化合物(18.6g)を得る。1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ (ppm) 3.20 (s, 3H), 3.21 (s, 3H), 7.93 (s, 1H), 8.48 (s, 1H). LCMS: Rt 3.81分 (99.1%), m/z (APCI) 307 (M+H)+.
【０２４７】
工程2:N-(3,6-ジブロモ-ピラジン-2-イル)-N'-ヒドロキシホルムアミジン
【化４４】
2009538877.tif 000046
N'-(3,6-ジブロモ-ピラジン-2-イル)-N,N-ジメチルホルムアミジン(18.6g、60.80mmol)をメタノール(200mL)に溶解させた溶液に対して、塩酸ヒドロキシルアミン(5.91g、85.12mmol)を1回で添加する。反応物を室温で16時間攪拌する。溶媒を蒸発させ、固体残渣を低温(氷冷)水で処理し、濾過によって回収する。沈殿を水及び石油エーテルで2回洗浄し、真空中で乾燥させて、白色固体として表題の化合物(17.45g)を得る。
1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 7.82 (1H, br s), 8.21 (1H, s), 8.34 (1H, m), 11.17 (1H, br s). LCMS: Rt 3.17分 (98.7 %), m/z (APCI) 295 (M+H)+.
【０２４８】
工程3:5,8-ジブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン
【化４５】
2009538877.tif 000047
N-(3,6-ジブロモ-ピラジン-2-イル)-N'-ヒドロキシホルムアミジン(17.4mg、58.80mmol)をポリリン酸(150g)で50℃にて1時間、次いで70℃にて1.75時間処理する。室温まで冷却した後、水を反応混合物に添加する。固体のNaHCO3を少量ずつ慎重に添加することによって、得られた懸濁物をpH8にする。形成した沈殿を濾過によって回収し、1NのNaOHで1回、水で3回洗浄し、真空中で乾燥させる。残渣を酢酸エチルと1NのNaOHの間で分離させ、有機相をさらに1NのNaOHで洗浄し、食塩水で1回洗浄する。有機相をMgSO4で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、白色固体として表題の化合物(10.15g)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 8.43 (s, 1H), 8.92 (s, 1H). LCMS: Rt 2.73分 (94.2 %), m/z (APCI) 277 (M+H)+.
【０２４９】
工程4:(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(4-モルホリン-4-イルフェニル)アミン
【化４６】
2009538877.tif 000048
5,8-ジブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン(123mg、443μmol)と4-(4-モルホリノ)アニリン(118mg、0.664mmol)とN-エチルジイソプロピルアミン(116mL、0.664mmol)の混合物を2-プロパノール(3mL)中で還流させながら4.5時間加熱する。反応混合物を蒸発させて乾固させ、残渣をジクロロメタンとクエン酸(10%)の間で分離させる。有機相を水及び塩水で1回洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、黄色固体として表題の化合物(156mg、94%)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 3.11 (m, 4H), 3.78 (m, 4H), 6.97 (d, 2H), 7.82 (d, 2H), 7.87 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 9.93 (br s, 1H). LCMS, Rt 3.32分 (96.8 %) m/z (APCI) 375 (M+H)+.
【０２５０】
工程5:(4-モルホリン-4-イルフェニル)-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]アミン
【化４７】
2009538877.tif 000049
(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(4-モルホリン-4-イルフェニル)アミン(220mg、0.586mmol)、4-(4,4,5,5-テトラトメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール(171mg、0.879mmol)、Pd(PPh3)4(68mg、59μmol)及びNaOtBu(225mg、2.34mmol)を4mLのDMF/水(3:1)に含めた懸濁物を密封管の中で5分間脱気する。密封管の中で反応混合物を90℃で一晩加熱する。溶媒の蒸発後、残渣を濾過によって回収し、水(3×)及びエーテル(2×)で洗浄し、真空中で乾燥させる。粗製物をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、96:4 DCM/MeOH)で精製して、黄色固体として表題の化合物(76mg、36%)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 3.11 (4H, m), 3.79 (4H, m), 6.98 (2H, d), 7.90 (2H, d), 8.17 (1H, s), 8.35 (1H, br s), 8.64 (1H, br s), 8.75 (1H, s), 9.73 (1H, br s). LCMS: Rt 2.68分 (97.7 %) m/z (APCI) 363 (M+H)+.
【０２５１】
化合物4:4-(8-(4-(4-メチルピペラジン-1-イル)フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5a]ピラジン-5-イル)ピリジン-2(1H)-オン
工程1:[5-(2-メトキシ-ピリジン-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-アミン
【化４８】
2009538877.tif 000050
2:1 DMF/ジオキサン(2.2mL)中(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-アミン(80mg、0.206mmol)、2-メトキシピリジン-4-ホウ酸(63mg、0.412mmol)、Pd(PPh3)4(0.052mmol)及び1.5NのNa2CO3(1.1mL、1.65mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。96:4 DCM:NH3(MeOH中7M)を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって粗製物を精製し、所望の生成物を含む留分を混合し、蒸発させて、表題の化合物(40mg、47%)を得る。HPLC(254nm):Rt 2.26分(65%)。
【０２５２】
工程2:4-(8-(4-(4-メチルピペラジン-1-イル)フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5a]ピラジン-5-イル)ピリジン-2(1H)-オン
【化４９】
2009538877.tif 000051
[5-(2-メトキシ-ピリジン-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-アミン(40mg、0.096mmol)及び塩酸ピリジン(55mg、0.48mmol)を水(1mL)に溶解させた溶液を室温で1時間攪拌する。溶媒を真空中で除去し、96:4 DCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。表題の化合物(23mg、60%)を単離する。
【０２５３】
11mg(0.0273mmol)の遊離塩基化合物を最小量のMeOH/DCMに溶解(還流して溶解)させ、MeOH中0.1Mのメタンスルホン酸(0.273mL)を添加する。溶媒を蒸発させた後、残渣を酢酸エチル-ジエチルエーテルとDCM-ジエチルエーテルの1:1の混合物で数回粉砕し、濾過し、真空中で乾燥させて、メシル酸塩(13mg、99%)として目標の化合物を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2.21 (3H, s), 2.91 (3H, s, MsOH), 3.00 (2H, t), 3.18-3.26 (2H, m), 3.58 (2H, d), 3.90 (2H, d), 6.83 (1H, s), 7.07 (2H, d), 7.25 (1H, s), 7.53 (1H, d), 7.93 (2H, d), 8.14 (1H, s), 8.76 (1H, s), 9.69 (1H, br s), 10.21 (1H, s), 13.3 (1H, br s). LCMS: Rt 1.71分 (97.5%), m/z (APCI) 403 (M+H)+.
【０２５４】
化合物6:4-{8-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド
工程1:(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-アミン
【化５０】
2009538877.tif 000052
5,8-ジブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン(2g、7.20mmol)と4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミン(1.65g、8.64mmol)とN-エチルジイソプロピル-アミン(1.5mL、8.64mmol)の混合物を80℃にて2-プロパノール(50mL)中で8時間加熱する。反応混合物を蒸発させて乾固させ、残渣をジクロロメタンと水の間で分離させる。水相をジクロロメタンで2回抽出する。有機層を塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、灰色固体として表題の化合物(1.41g)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2.27 (3H, s), 2.54 (4H, m), 3.14 (4H, m), 6.97 (2H, d), 7.80 (2H, d), 7.87 (1H, s), 8.72 (1H, s), 9.92 (1H, br s). LCMS: Rt 2.07分 (77.4 %), m/z (APCI) 388 (M+H)+.
【０２５５】
工程2:4-ブロモ-チオフェン-2-カルボン酸アミド
【化５１】
2009538877.tif 000053
4-ブロモ-チオフェン-2-カルボキシリル酸(2.0g、9.66mmol)、塩酸1-エチル-3-(3'-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(2.04g、10.63mmol)及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物(1.44g、10.63mmol)をDMF(20mL)に溶解させた溶液を室温で2時間攪拌する。次いで、反応混合物を0℃まで冷却し、NH3水溶液(1mL、17.3mmol)を添加する。混合物を室温でさらに5時間攪拌し、次いで水を反応混合物に添加し、得られた沈殿を濾過で回収し、1MのNaOH、H2O及び石油エーテルで洗浄する。表題の化合物を白色固体(1.56g、78%)として単離する。
【０２５６】
工程3:4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-チオフェン-2-カルボン酸アミド
【化５２】
2009538877.tif 000054
4-ブロモ-チオフェン-2-カルボン酸アミド(1.3g、6.34mmol)、ビス(ピナコラト)ジボロン(3.22g、12.7mmol)、PdCl2dppf(0.26g、0.318mol)及びKOAc(1.87g、19.10mmol)をジオキサン(20mL)に懸濁させ、窒素で5分間パージし、次いで90℃で一晩加熱する。溶媒を真空中で除去し、残渣を酢酸エチルと水の間で分離させる。水層を酢酸エチルで3回抽出し、一緒にした有機相を塩水で洗浄し、MgSO4で濾過し、蒸発させる。表題の生成物をEtOAc-石油エーテルから結晶させる(2.135g、LCMSによる純度77%)。
【０２５７】
工程4:4-{8-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド
【化５３】
2009538877.tif 000055
5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-アミン(100mg、258mmol)、4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサ-ボロラン-2-イル)-チオフェン-2-カルボン酸アミド(130mg、516mmol)及びPd(PPh3)4(74mg、64.5mmol)をNa2CO3(1.37mL、1.5M、2.06mmol)水溶液及びDMF/ジオキサン2/1(2.75mL)に含めた懸濁物を反応管の中で5分間脱気する。管を密封し、反応混合物を90℃で一晩加熱する。室温まで冷却した後、反応混合物を酢酸エチルと水の間で分離させる。沈殿を濾過によって回収し、水(1×)及びエーテル(2×)で洗浄し、真空中で乾燥させる。粗製物をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル、DCM/MeOH/NH3 96:4)で精製して、黄色固体として表題の化合物(43mg)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2.26 (3H, s), 2.50 (4H, m), 3.15 (4H, m,), 6.99 (2H, d), 7.60 (1H, br s), 7.88 (2H, d), 8.10 (2H, m), 8.48 (1H, s), 8.66 (1H, s), 8.79 (1H, s), 9.97 (1H, br s). LCMS: Rt 1.99分 (97.6 %), m/z (APCI) 435 (M+H)+.
【０２５８】
化合物9:5-{8-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド
工程1:5-ブロモ-チオフェン-2-カルボン酸アミド
【化５４】
2009538877.tif 000056
5-ブロモ-チオフェン-2-カルボン酸(4.51g、21.78mmol)、3-ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物(3.24g、23.96mmol)、1-エチル-3-(3'-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(4.6g、23.96mmol)をDMF(70mL)に溶解させた溶液を室温で2時間攪拌する。次いで、反応混合物を0℃まで冷却し、35%NH3水溶液(2.2mL)を添加する。混合物を室温で一晩攪拌する。溶媒を真空中で除去し、残渣をEtOAcに溶解させ、1NのNaHCO3及び塩水で洗浄する。有機層を一緒にし、MgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題の化合物(3.78g、84%)を得る。HPLC(254nm):Rt 2.46分(96.5%)。
【０２５９】
工程2:5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-チオフェン-2-カルボン酸アミド
【化５５】
2009538877.tif 000057
5-ブロモ-チオフェン-2-カルボン酸アミド(0.5g、2.426mmol)、ビス(ピナコラト)ジボロン(678mg、2.669mmol)、PdCl2dppf(59mg、0.072mmol)及びKOAc(0.714g、7.28mmol)をジオキサン(5mL)に懸濁させ、窒素で5分間パージし、次いで85℃で一晩加熱する。溶媒を真空中で除去し、残渣を酢酸エチルと水の間で分離させる。水層を再び酢酸エチルで抽出し、一緒にした有機相を塩水で洗浄し、MgSO4で濾過し、真空中で蒸発させて、表題の化合物(417mg、68%)を得る。
【０２６０】
工程3:5-{8-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド
【化５６】
2009538877.tif 000058
1.5MのNa2CO3水溶液(1.37mL、2.06mmol)及びジオキサン(2.75mL)中5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-アミン(100mg、0.258mmol)、5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサ-ボロラン-2-イル)-チオフェン-2-カルボン酸アミド(130mg、0.516mmol)及びPd(PPh3)4(74mg、0.0645mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。溶媒の蒸発後、96:6 DCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製して、表題の化合物(23mg、21%)を得る。LCMS:Rt 1.94分(97.9%)。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2.26 (3H, s), 2.49 (4H, m), 3.14 (4H, m), 6.98 (2H, d), 7.51 (1H, br s), 7.85-7.89 (2H, m), 8.03 (2H, d), 8.10 (1H, br s), 8.38 (1H, s), 8.82 (1H, s), 10.10 (1H, s). LCMS: Rt 1.94分, (97.9%), m/z (APCI) 435 (M+H)+.
【０２６１】
化合物12:5-(5-メチル-lH-ピラゾール-4-イル)-N-(4-モルホリノフェニル)-[l,2,4]トリアゾロ[l,5-a]ピラジン-8-アミン
【化５７】
2009538877.tif 000059
1.5MのNa2CO3(水溶液)(2.84mL、4.26mmol)及びジオキサン(8.5mL)中(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン(0.2g、0.53mmol)、5-メチル-4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール(222mg、1.06mmol)及びPd(PPh3)4(0.154mg、0.134mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。98:2及び97:3 DCM:NH3(MeOH中7M)を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーで反応混合物を精製して、表題の化合物(15mg、7.5%)を得る。MeOH(0.398mL)中0.1Mのメタンスルホン酸を使用してメシル酸塩に変換して、淡緑色の固体として表題の化合物(15mg)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2.41 (3H, s, MsOH), 2.46 (3H, s), 3.20 (4H, m), 3.71 (4H, m), 7.11 (2H, d), 7.74 (1H, s), 7.97 (2H, d), 8.15 (1H, s), 8.69 (1H, s), 9.88 (1H, s). LCMS: Rt 2.41分 (98.3%), m/z (APCI) 377 (M+H)+.
【０２６２】
化合物15:4-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-チオフェン-2-カルボン酸アミド
【化５８】
2009538877.tif 000060
1.5MのNa2CO3(水溶液)(2.84mL、4.26mmol)及びジオキサン(10mL)中(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン(0.2g、0.53mmol)、4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-チオフェン-2-カルボン酸アミド(0.27mg、1.06mmol)及びPd(PPh3)4(0.15mg、0.133mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。反応混合物を水と酢酸エチルの間で分離させる。沈殿を形成し、濾過によって回収し、95:5 DCM:MeOHを使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、表題の化合物(84.1mg、37.4%)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 3.13 (4H, m), 3.79 (4H, m), 7.01 (2H, d), 7.60 (1H, br s), 7.91 (2H, d), 8.10 (2H, s), 8.48 (1H, s), 8.66 (1H, s), 8.79 (1H, s), 9.96 (1H, s). LCMS: Rt 2.61分 (97.1%), m/z (APCI) 422 (M+H)+.
【０２６３】
化合物16:5-(5-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)-N-(4-(4-メチルピペラジン-1-イル)フェニル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-アミン
工程1:5-メチル-4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール
【化５９】
2009538877.tif 000061
ジメチルスルホキシド(30mL)中4-ブロモ-5-メチル-1H-ピラゾール(3g、18.6mmol)、ビス(ピナコラト)ジボロン(8.52g、33.5mmol)、PdCl2dppf(913mg、1.118mmol)及びKOAc(5.49mg、55.9mmol)を使用して、化合物86、工程2について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。7:3、続いて1:1の石油エーテル:酢酸エチルで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで反応混合物を精製して、5-メチル-4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール(3.87g、100%)を得る。
【０２６４】
工程2:5-(5-メチル-1H-ピラゾール-4-イル)-N-(4-(4-メチルピペラジン-1-イル)フェニル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-アミン
【化６０】
2009538877.tif 000062
ジオキサン(5.4mL)中(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-アミン(132mg、0.340mmol)、5-メチル-4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール(141mg、0.68mmol)、Pd(PPh3)4(98mg、0.085mmol)及び1.5NのNa2CO3(1.81mL、2.72mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。95:5 DCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで粗製物を精製した後にジエチルエーテル及び石油エーテルで粉砕して、淡緑色固体として表題の化合物(9mg、7%)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2.27 (3H, s), 2.38-2.49 (7H, m), 3.14 (4H, m), 6.97 (2H, d), 7.70 (1H, s), 7.88 (2H, d), 7.99及び8.43 (1H, br s), 8.68 (1H, s), 9.71 (1H, s), 12.92及び12.98 (1H, br s).
【０２６５】
0.1Mメタンスルホン酸(0.231mL)を使用してメシル酸塩に変換して、目標化合物(11mg)を得る。LCMS:Rt 1.78分(86%)、m/z(APCI)390(M+H)+。
【０２６６】
化合物17:-(3-フルオロ-4-モルホリノフェニル)-5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-アミン
工程1:(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(3-フルオロ-4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン
【化６１】
2009538877.tif 000063
2-プロパノール(6mL)中5,8-ジブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン(0.5g、1.799mmol)、3-フルオロ-4-モルホリン-4-イル-フェニルアミン(0.53g、2.70mmol)及びDIPEA(0.470mL、2.70mmol)を使用して、化合物6、工程1について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。反応混合物を10%クエン酸水溶液とDCMの間で分離させる。有機相を分離し、水及び塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、表題の化合物(697mg、98%)を得て、それをさらに精製することなく次の工程で使用する。LCMS:Rt 3.52分(98.2%)。
【０２６７】
工程2:N-(3-フルオロ-4-モルホリノフェニル)-5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-アミン
【化６２】
2009538877.tif 000064
1.5MのNa2CO3(1.36mL、2.03mmol)及びジオキサン(4mL)中(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(3-フルオロ-4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン(100mg、0.254mmol)、4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール(99mg、0.51mmol)及びPd(PPh3)4(73mg、0.063mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。98:2 DCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィー、並びにジエチルエーテル及び石油エーテルによる粉砕によって粗製物を精製して、目標化合物(43mg、44%)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 3.01 (4H, m), 3.79 (4H, m), 7.08 (1H, t), 7.79 (1H, d), 8.06 (1H, d), 8.26 (1H, s), 8.38 (1H, s), 8.67 (1H, s), 8.79 (1H, s), 10.03 (1H, s), 13.3 (1H, br s). LCMS: Rt 2.83分 (99%), m/z (APCI) 381 (M+H)+.
【０２６８】
化合物19:5-(5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-2-モルホリノベンズアミド
工程1:5-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-2-モルホリン-4-イル-ベンズアミド
【化６３】
2009538877.tif 000065
2-プロパノール(7mL)中5,8-ジブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン(250mg、0.90mmol)、5-アミノ-2-モルホリン-4-イルベンズアミド(299mg、1.35mmol)及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.24mL、1.35mmol)を使用して、化合物6、工程1について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。iPrOH及びEt2Oで粉砕して、表題の化合物(273mg、73%)を得る。
【０２６９】
工程2:5-(5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-2-モルホリノベンズアミド
【化６４】
2009538877.tif 000066
1.5MのK2CO3(水溶液)(1.93mL)及びジオキサン(3.44mL)中5-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-2-モルホリン-4-イル-ベンズアミド(140mg、0.33mmol)、4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール(130mg、0.67mmol)及びPd(PPh3)4(96mg、0.083mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。DCM、次いで99:1、次いで97:3、次いで95:5のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで粗製物を精製して、白色固体(40.5mg、30%)として表題の化合物を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2.96 (4H, m), 3.79 (4H, m), 7.28 (2H, d), 7.45 (1H, m), 7.54 (1H, br s), 8.01-8.09 (1H, dd), 8.25 (1H, s), 8.50 (1H, d), 8.69 (1H, br s), 8.78 (1H, s), 9.98 (1H, s), 13.3 (1H, br s). LCMS: Rt 2.23分 (96.9%), m/z (APCI) 406 (M+H)+.
【０２７０】
化合物21:4-(8-(4-(2-モルホリノエトキシ)フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)チオフェン-2-カルボキサミド
【化６５】
2009538877.tif 000067
1.5MのNa2CO3(1.44mL、2.16mmol)及びジオキサン(4.3mL)中(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(2-モルホリン-4-イル-エトキシ)-フェニル]-アミン(113mg、0.27mmol)、4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-チオフェン-2-カルボキサミド(136mg、0.537mmol)及びPd(PPh3)4(78mg、0.067mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。97:3のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで反応混合物を精製して、表題の化合物(65mg、52%)を得る。LCMS:Rt 1.98分(98.9%)。MeOH(1.1385mL)中0.1Mメタンスルホン酸を使用してメシル酸塩に変換して、表題の化合物(50mg、95%)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2.37 (3H, s, MsOH), 3.21-3.64 (6H, m), 3.76 (2H, t), 4.05 (2H, d), 4.40 (2H, m), 7.09 (2H, d), 7.61 (1H, br s), 8.02 (2H, d), 8.11 (2H, s), 8.48 (1H, s), 8.67 (1H, s), 8.82 (1H, s), 9.91 (1H, br s), 10.09 (1H, s). LCMS: Rt 1.98分 (97.7%), m/z (APCI) 466 (M+H)+.
【０２７１】
化合物22:5-(8-(4-(2-モルホリノエトキシ)フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)チオフェン-2-カルボキサミド
【化６６】
2009538877.tif 000068
1.5MのNa2CO3(1.5mL、2.24mmol)及びジオキサン(4.5mL)中(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(2-モルホリン-4-イル-エトキシ)-フェニル]-アミン(118mg、0.28mmol)、5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-チオフェン-2-カルボキサミド(142mg、0.56mmol)及びPd(PPh3)4(81mg、0.07mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。97:3のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで反応混合物を精製して、表題の化合物(33mg、25%)を得る。LCMS:Rt 2.66分(99%)。MeOH(0.569mL)中0.1Mメタンスルホン酸を使用してメシル酸塩に変換して、表題の化合物(24mg、86%)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2.37 (3H, s, MsOH), 3.25 (2H, m), 3.50-3.64 (4H, m), 3.76 (2H, t), 4.05 (2H, d), 4.40 (2H, m), 7.09 (2H, d), 7.51 (1H, br s), 7.87 (1H, d), 7.99-8.05 (3H, m), 8.11 (1H, br s), 8.37 (1H, s), 8.84 (1H, s), 9.92 (1H, br s), 10.21 (1H, s). LCMS: Rt 1.95分 (98.8%), m/z (APCI) 466 (M+H)+.
【０２７２】
化合物23:(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-[5-(2H-ピラゾール-3-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン
工程1:1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール
【化６７】
2009538877.tif 000069
1H-ピラゾール(14.3g、0.21mol)を、触媒量のTFA(0.1mL、1.3mmol)の存在下で3,4-ジヒドロ-2H-ピラン(26.74g、0.32mol)に溶解させる。反応混合物を95℃で5時間攪拌し、冷却し、次いでNaH(0.2g、5mmol)を使用してクエンチする。溶媒を除去して、褐色油(33.3g、99%)として表題の化合物を得て、それをさらに精製することなく次の工程で使用する。
【０２７３】
工程2:1H-ピラゾール-2-ホウ酸
【化６８】
2009538877.tif 000070
1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール(7.6g、52mmol)をTHF(50mL)に溶解させた冷却溶液(-78℃)に対して、温度を-70℃に維持しながら、nBuLi(33mL、ヘキサン中2.5M、82.5mmol)及びホウ酸トリイソプロピル(12.7mL、55mmol)を1滴ずつ添加する。反応混合物を-70℃で1時間攪拌し、次いで4時間にわたって室温まで昇温させる。2MのHClで反応物をクエンチした後、溶媒を真空中で除去し、1MのNaOHを使用してpH6に調整する。沈殿を形成し、濾過によって回収し、トルエン及び石油エーテルで洗浄する。酢酸エチルで粉砕して、白色固体(2.7g、48%)として目標化合物を得て、それをさらに精製することなく次の工程で使用する。
工程3:(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-[5-(2H-ピラゾール-3-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミン
【化６９】
2009538877.tif 000071
DMF(2mL)中5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(モルホリン-4-イル)-フェニル]-アミン(100mg、0.267mmol)、1H-ピラゾール-2-ホウ酸(60mg、0.535mmol)、Pd(PPh3)4(93mg、0.08mmol)及びNa2CO3(88mg、0.80mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。反応混合物をステムチューブに入れ、100℃で18時間攪拌する。冷却後、混合物をNaHCO3溶液で希釈し、EtOAc(4×)で抽出する。有機層を水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、粗製物を得て、それを、DCM、次いで96:4のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製する。ジエチルエーテル(12.4mg、13%)で粉砕した後に、表題の化合物を単離する。0.1Mのメタンスルホン酸(0.342mL、0.0342mmol)を使用してメシル酸塩に変換して、目標化合物(10mg、81%)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2.34 (3H, s, MsOH), 3.14 (4H, m), 3.81 (4H, m), 7.04 (2H, d), 7.27 (1H, m), 7.92 (3H, m), 8.24 (1H, s), 8.76 (1H, s), 9.92 (1H, s). LCMS: Rt 2.45分 (97.6%), m/z (APCI) 363 (M+H)+.
【０２７４】
化合物28:4-(8-(4-(4-イソプロピルピペラジン-l-イル)フェニルアミノ)-[l,2,4]トリアゾロ[l,5-a]ピラジン-5-イル)チオフェン-2-カルボキサミド
【化７０】
2009538877.tif 000072
1.5MのNa2CO3(1.28mL、1.92mmol)及びジオキサン(3.84mL)中5-ブロモ-N-(6-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-アミン(100mg、0.24mmol)、4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-チオフェン-2-カルボキサミド(121mg、0.48mmol)及びPd(PPh3)4(69mg、0.059mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。DCM及び97:3のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで粗製物を精製して、淡緑色の固体として表題の化合物(68mg、61%)を得る。MeOH(1.47mL、0.147mmol)中0.1Mメタンスルホン酸を使用してメシル酸塩に変換した後、DCM及びジエチルエーテルで粉砕して、表題の化合物(67mg、98.5%)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 1.35 (6H, d), 2.34 (3H, s, MsOH), 3.00 (2H, t), 3.22-3.25 (2H, m), 3.56-3.61 (3H, m), 3.89 (2H, d), 7.09 (2H, d), 7.60 (1H, br s), 7.97 (2H, d), 8.10 (2H, s), 8.48 (1H, s), 8.67 (1H, s), 8.81 (1H, s), 9.23 (1H, br s), 10.03 (1H, s). LCMS: Rt 2.13分 (98.4%), m/z (APCI) 463 (M+H)+.
【０２７５】
化合物29:5-(8-(4-モルホリノフェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)フラン-3-カルボキサミド
工程1:[5-(4-カルバモイル-フラン-2-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル
【化７１】
2009538877.tif 000073
DMF(1mL)中(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-(5-トリブチルスタナニル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル(137mg、0.199mmol)、5-ブロモ-フラン-3-カルボキサミド(76mg、0.4mmol)及びPd(PPh3)4(23mg、0.020mmol)を使用して、化合物35、工程3について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。98:2のDCM:MeOH及び96:4のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離する反応混合物を精製して、表題の化合物(33mg、33%)を得る。
【０２７６】
工程2:5-(8-(4-モルホリノフェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)フラン-3-カルボキサミド
【化７２】
2009538877.tif 000074
[5-(4-カルバモイル-フラン-2-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル(33mg、0.065mmol)を1:1のDCM:TFA混合物(2mL)(水2滴)に溶解させた溶液を室温で2時間攪拌する。飽和Na2CO3を添加後、沈殿を形成し、濾過によって回収し、水、ジエチルエーテル及び石油エーテルで洗浄する。真空下で乾燥した後、表題の化合物を単離する(20mg、76%)。MeOH(0.444mL)中0.1Mメタンスルホン酸を使用してメシル酸塩に変換して、表題の化合物(19mg、100%)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2.36 (3H, s, MsOH), 3.22 (4H, m), 3.82-3.89 (4H, m), 7.13 (2H, d), 7.36 (1H, br s), 7.86 (1H, s), 7.95 (3H, m), 8.17 (1H, s), 8.40 (1H, s), 8.84 (1H, s), 10.17 (1H, s). LCMS: Rt 2.60分 (96.9%), m/z (APCI) 406 (M+H)+.
【０２７７】
化合物33:5-(8-(4-モルホリノフェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)イソインドリン-1-オン
【化７３】
2009538877.tif 000075
1.5MのNa2CO3(14.3mL)及びジオキサン(40mL)中(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン(1.0g、2.67mmol)、5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン(化合物79についての記載を参照)(1.03g、4.01mmol)及びPd(PPh3)4(0.77g、0.67mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。DCM、次いで96:4のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、表題の化合物(0.895g、79%)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 3.12 (4H, m), 3.79 (4H, m), 4.51 (2H, s), 7.01 (2H, d), 7.84 (1H, d), 7.92 (2H, d), 8.01 (1H, s), 8.09 (1H, d), 8.23 (1H, s), 8.72 (1H, s), 8.73 (1H, s), 10.02 (1H, s). LCMS: Rt 2.51分 (97.8%), m/z (APCI) 428 (M+H)+.
【０２７８】
化合物34:4-(8-(4-モルホリノフェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)フラン-2-カルボキサミド
【化７４】
2009538877.tif 000076
1.5MのNa2CO3(水溶液)(1.1mL、168mmol)及びジオキサン(3mL)中(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン(78mg、0.16mmol)、4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-フラン-2-カルボン酸アミド(100mg、0.34mmol)及びPd(PPh3)4(60mg、0.052mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。反応混合物を水と酢酸エチルの間で分離させ、表題の化合物を沈殿させ、濾過によって回収する。DCM及び95:5のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで固体を精製して、表題の化合物(42mg、65%)を得る。0.1Mのメタンスルホン酸(0.82mL)を使用してメシル酸塩に変換して固体を得て、それをジエチルエーテルで粉砕して、表題の化合物(30.5mg)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2.19 (3H, s, MsOH), 3.03-3.07 (4H, m), 3.67 (4H, m), 6.99 (2H, br s), 7.43 (1H, d), 7.74-7.82 (4H, m), 8.06 (1H, br s), 8.59 (1H, br s), 8.64 (1H, s), 9.91 (1H, br s). LCMS: Rt 2.64分 (98.1%), m/z (APCI) 406 (M+H)+.
【０２７９】
化合物35:6-(8-(4-モルホリノフェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)-3,4-ジヒドロイソキノリン-1-(2H)-オン
工程1:(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル
【化７５】
2009538877.tif 000077
5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(モルホリン-4-イル)-フェニル]-アミン(300mg、0.800mmol)、ジメチルアミノピリジン(10mg、0.08mmol)及びジtertブチルジカーボネート(523mg、2.4mmol)をジクロロメタン(5ml)に溶解させた溶液を50℃で一晩攪拌する。反応混合物をDCMと水の間で分離させ、有機層を1NのNaOH及び塩水で洗浄する。有機層をMgSO4で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、粗製化合物を得て、それをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製する。98:2のDCM:MeOHで溶離して、表題の化合物(352mg、93%)を得る。LCMS:Rt 3.45分(97.8%)。
【０２８０】
工程2:(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-(5-トリブチルスタナニル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル
【化７６】
2009538877.tif 000078
(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル(370mg、0.78mmol)をTHF(12mL)に溶解させた冷却(-78℃)溶液に対して、THF(0.78mL、1.56mmol)中2Mの塩化イソプロピルマグネシウムを添加し、5分間攪拌後、塩化トリブチル錫(0.42、1.56mmol)を添加する。反応混合物を-78℃で15分間攪拌し、室温でさらに15分間攪拌する。溶媒を除去した後、5:1の石油エーテル:酢酸エチル、次いで1:1の石油エーテル:酢酸エチルで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。表題の化合物を単離する(105mg、20%)。
【０２８１】
工程3:(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-[5-(1-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-6-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル
【化７７】
2009538877.tif 000079
(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-(5-トリブチルスタナニル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル(100mg、0.15mmol)及び6-ブロモ-3,4-ジヒドロ-2H-イソキノリン-1-オンをDMF(1mL)に溶解させた脱気溶液に対して、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(17mg、0.015mmol)を添加し、反応混合物を90℃で一晩攪拌する。溶媒を真空中で除去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製する。1:1の石油エーテル:酢酸エチル及び酢酸エチルで溶離して、黄色固体(30mg、37%)として目標化合物を得る。
【０２８２】
工程4:6-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-3,4-ジヒドロ-2H-イソキノリン-1-オン
【化７８】
2009538877.tif 000080
(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-[5-(1-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロ-イソキノリン-6-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル(30mg、0.055mmol)をTFA:DCMの1:1混合物(1滴のH2O)に溶解させた溶液を室温で2時間攪拌する。溶媒を真空中で除去し、残渣を酢酸エチルと飽和NaHCO3(水溶液)の間で分離させる。水層を酢酸エチル(2×)で抽出する。有機層を一緒にし、蒸発させて、残渣を得て、酢酸エチルで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。表題の化合物(18mg、75%)を単離し、MeOH中0.1Mのメタンスルホン酸(0.317mL)を使用してメシル酸塩(16.6mg、97%)に変換する。
1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2.36 (3H, s MsOH), 3.04 (2H, t), 3.21 (4H, m), 3.47 (2H, t), 3.83 (4H, m), 7.11 (2H, d), 7.95-8.02 (6H, m), 8.05 (1H, s), 8.74 (1H, s), 10.09 (1H, br s). LCMS: Rt 2.81分 (97.9%), m/z (APCI) 442 (M+H)+.
【０２８３】
化合物36:5-(8-(4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)イソインドリン-1-オン
【化７９】
2009538877.tif 000081
1.5MのNa2CO3(7.7mL)及びジオキサン(23mL)中5-ブロモ-N-(6-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-アミン(0.6g、1.44mmol)、5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン(0.56g、2.16mmol)及びPd(PPh3)4(0.416g、0.36mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。DCM、次いで98:2のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、表題の化合物(0.36g、53%)を得て、それを、MeOH(0.77mL)中1Mのメタンスルホン酸を使用してメシル酸塩に変換する。ジエチルエーテル及びDCMで粉砕した後、表題の化合物を固体(0.410g)として単離する。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 1.35 (6H, d), 2.35 (3H, s, MsOH), 3.04 (2H, t), 3.20-3.27 (2H, m), 3.56-3.63 (3H, m), 3.89 (2H, d), 4.52 (2H, s), 7.09 (2H, d), 7.85 (1H, d), 7.95-8.01 (3H, m), 8.10 (1H, d), 8.24 (1H, s), 8.72 (1H, s), 8.74 (1H, s), 9.27 (1H, br s), 10.07 (1H, s). LCMS: Rt 2.93分 (97.9%), m/z (ES+) 469 (M+H)+.
【０２８４】
化合物37:{5-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-2-モルホリノフェニル}メタノール
工程1:(2-モルホリン-4-イル-5-ニトロ-フェニル)-メタノール
【化８０】
2009538877.tif 000082
2-モルホリン-4-イル-5-ニトロ-ベンズアルデヒド(0.8g、3.39mmol)をMeOH(5mL)に溶解させた冷却(0℃)溶液に対して、NaBH4(0.125g、3.39mmol)を添加し、反応混合物を室温で3時間攪拌する。反応物を水でクエンチした後、溶媒を真空中で除去し、残渣を酢酸エチルに溶解させ、塩水で洗浄する。有機層をMgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題の化合物(870mg)を得て、それをさらに精製することなく次の工程で使用する。
【０２８５】
工程2:(5-アミノ-2-モルホリン-4-イル-フェニル)-メタノール
【化８１】
2009538877.tif 000083
(2-モルホリン-4-イル-5-ニトロ-フェニル)-メタノール(870mg)をエタノール(40mL)に溶解させた溶液に対して、水酸化パラジウム(87mg)を添加し、混合物を水素圧力(10バール)下でParr装置にて4時間攪拌する。反応混合物をセライト521で濾過し、エタノールで洗浄し、真空中で濃縮して、表題の化合物(640mg、83%)を得る。
【０２８６】
工程3:3-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシメチル)-4-モルホリン-4-イル-フェニルアミン
【化８２】
2009538877.tif 000084
(5-アミノ-2-モルホリン-4-イル-フェニル)-メタノール(640mg、3.07mmol)、tert-ブチルジメチルシリルクロリド(509mg、3.38mmol)及びイミダゾール(250mg、3.68mmol)をジメチルホルムアミド(20mL)に溶解させた溶液を室温で一晩攪拌する。溶媒を真空中で除去し、残渣を水と酢酸エチルの間で分離させる。有機層を塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗製物を得る。DCM、次いでDCM:MeOHの95:5混合物で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、ピンク色の固体(390mg、27%)として表題の化合物を得る。
【０２８７】
工程4:(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[3-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシメチル)-4-モルホリン-4-イル-フェニル]-アミン
【化８３】
2009538877.tif 000085
5,8-ジブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン(0.391g、1.41mmol)と3-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシメチル)-4-モルホリン-4-イル-フェニルアミン(0.5g、1.55mmol)とN-エチルジイソプロピル-アミン(0.27mL、1.55mmol)の混合物を2-プロパノール(10mL)中にて90℃で8時間加熱する。反応混合物を蒸発させて乾固させ、残渣をジクロロメタンと水の間で分離させる。水相をジクロロメタンで2回抽出する。有機層を一緒にし、塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、表題の化合物(335mg、46%)を得る。
【０２８８】
工程5:[5-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-2-モルホリン-4-イル-フェニル]-メタノール
【化８４】
2009538877.tif 000086
5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[3-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシメチル)-4-モルホリン-4-イル-フェニル]-アミン(285mg、0.549mmol)をTHF(0.63mL)中1Mのフッ化テトラブチルアンモニウム溶液に溶解させた溶液を室温で1時間攪拌する。反応混合物を酢酸エチルと水の間で分離させる。有機層を10%のクエン酸溶液及び塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮して、クリーム状の固体(100mg、45%)として表題の化合物を得る。
【０２８９】
工程6:{5-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-2-モルホリノフェニル}メタノール
【化８５】
2009538877.tif 000087
1.5MのNa2CO3(1.12mL)及びジオキサン(2.0mL)中[5-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-2-モルホリン-4-イル-フェニル]-メタノール(85mg、0.21mmol)、4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサ-ボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール(81mg、0.42mmol)及びPd(PPh3)4(60mg、0.052mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。反応混合物を95:3のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した後、逆相分取HPLCで精製する。淡褐色の固体(10mg、12%)として表題の化合物を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2.87 (4H, m), 3.77 (4H, m), 4.63 (2H, d), 5.12 (1H, t), 7.11 (1H, d), 7.84 (1H, d), 8.12 (1H, s), 8.21 (1H, s), 8.39 (1H, s), 8.69 (1H, s), 8.77 (1H, s), 9.78 (1H, s), 13.29 (1H, br s). LCMS: Rt 2.45分 (96.3%), m/z (APCI) 393 (M+H)+.
【０２９０】
化合物41:(6-[モルホリン-4-イル]ピリジン-3-イル)-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]アミン
【化８６】
2009538877.tif 000088
工程4において(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(6-モルホリン-4-イル-ピリジン-3-イル)アミンを使用して、化合物120について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.80分(95%)、m/z(ESI)364(M+H)+。
【０２９１】
化合物42:[6-(4-[シクロプロピルメチル]ピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]アミン
【化８７】
2009538877.tif 000089
工程4において(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[6-(4-[シクロプロピルメチル]ピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イル]アミンを使用して、化合物120について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.80分(95%)、m/z(ESI)417(M+H)+。
【０２９２】
化合物43:[6-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]アミン
【化８８】
2009538877.tif 000090
工程4において(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[6-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イル]アミンを使用して、化合物120について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.77分(95%)、m/z(ESI)405(M+H)+。
【０２９３】
化合物44:[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-{6-[4-(2,2,2-トリフルオロエチル)ピペラジン-1-イル]ピリジン-3-イル}アミン
【化８９】
2009538877.tif 000091
工程4において(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-{6-[4-(2,2,2-トリフルオロエチル)ピペラジン-1-イル]-ピリジン-3-イル}アミンを使用して、化合物120について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.95分(95%)、m/z(ESI)445(M+H)+。
【０２９４】
化合物46:{4-[4-(シクロプロピルメチル)ピペラジン-1-イル]フェニル}-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]アミン
【化９０】
2009538877.tif 000092
(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-{4-[4-シクロプロピルメチル)ピペラジン-1-イル]フェニル}アミンを使用して、化合物120、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=1.02(95%)、m/z(ESI)444(M+H)+。
【０２９５】
化合物47:4-[8-(6-[モルホリン-4-イル]ピリジン-3-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]チオフェン-2-カルボン酸アミド
【化９１】
2009538877.tif 000093
工程4において(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(6-モルホリン-4-イル-ピリジン-3-イル)アミンを使用して、化合物167について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.85分(95%)、m/z(ESI)423(M+H)+。
【０２９６】
化合物48:(5-ベンゾ[b]チオフェン-3-イル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(4-モルホリン-4-イルフェニル)アミン
【化９２】
2009538877.tif 000094
工程4において(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(4-モルホリン-4-イルフェニル)アミン及び4,4,5,5-テトラメチル-2-ベンゾ[b]チオフェン-3-イル-[1,3,2]ジオキサボロランを使用して、化合物120について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.84分(95%)、m/z(ESI)402(M+H)+。
【０２９７】
化合物50:(4-モルホリン-4-イルフェニル)-(5-チオフェン-3-イル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)アミン
【化９３】
2009538877.tif 000095
工程4において(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(4-モルホリン-4-イルフェニル)アミン及び4,4,5,5-テトラメチル-2-チオフェン-3-イル-[1,3,2]ジオキサボロランを使用して、化合物120について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt 1.19分(95%)、m/z(ESI)379(M+H)+。
【０２９８】
化合物51:[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)フェニル]-(5-チオフェン-3-イル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)アミン
【化９４】
2009538877.tif 000096
最終工程において(5-ブロモ[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-フェニル]アミンを使用して、化合物50について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:rt=1.11分(95%)、m/z(ESI)420(M+H)+。
【０２９９】
化合物52:5-(5-エチル-1H-ピラゾール-4-イル)-N-(4-モルホリノフェニル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-アミン
工程1:3-エチル-1H-ピラゾール
【化９５】
2009538877.tif 000097
1-トリメチルシラニル-ペント-1-イン-3-オン(0.5g、3.25mmol)及びヒドラジン硫酸塩(0.56g、4.33mmol)をエタノール(15mL)に溶解させた攪拌溶液に対して、飽和Na2CO3(0.52g、4.87mmol)を添加し、混合物を90℃で5時間還流させる。反応混合物を水及び塩水で希釈し、ジエチルエーテル(3×)を使用して抽出する。有機層を一緒にし、MgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗製物を得て、それをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製する。90:10の石油エーテル:酢酸エチルで溶離して、表題の化合物(0.1196g、36%)を得る。
【０３００】
工程2:4-ブロモ-5-エチル-1H-ピラゾール
【化９６】
2009538877.tif 000098
3-エチル-1H-ピラゾール(0.114g、1.186mmol)を酢酸(2mL)に溶解させた攪拌溶液に対して、臭素(0.061mL、1.186mmol)を添加し、混合物を室温で2時間攪拌する。反応混合物を飽和NaHCO3で塩基性化し、酢酸エチル(3×)を使用して抽出する。有機層を一緒にし、MgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮して、表題の化合物(0.180g、87%)を得る。その化合物をさらに精製することなく次の工程に使用する。
【０３０１】
工程3:4-ブロモ-5-エチル-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール及び4-ブロモ-3-エチル-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール
【化９７】
2009538877.tif 000099
4-ブロモ-5-エチル-1H-ピラゾール(0.179g、1.032mmol)、を触媒量のTFA(0.001mL、0.00103mmol)の存在下で3,4-ジヒドロ-2H-ピラン(0.28mL、3.098mmol)に溶解させる。反応混合物を90℃で3時間攪拌し、冷却し、次いでNaH(1.5mg、0.0061mmol)を使用してクエンチする。溶媒を除去した後、90:10の石油エーテル-酢酸エチルの混合物で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。所望の化合物を含む留分を回収し、真空中で濃縮して、表題の化合物(175mg、66%)を得る。
【０３０２】
工程4:5-エチル-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール及び3-エチル-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール
【化９８】
2009538877.tif 000100
ジメチルスルホキシド(2mL)中4-ブロモ-5-エチル-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール及び4-ブロモ-3-エチル-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール(168mg、0.65mmol)、ビス(ピナコラト)ジボロン(331mg、1.3mmol)、PdCl2dppf(53mg、65μmol)及びKOAc(190mg、1.95mmol)を使用して、化合物86、工程2について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。90:10の石油エーテル:酢酸エチルで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで反応混合物を精製して、表題の化合物(61.1mg、31%)を得る。
【０３０３】
工程5:{5-[5-エチル-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル}-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン及び{5-[3-エチル-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル}-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン
【化９９】
2009538877.tif 000101
1.5MのNa2CO3(水溶液)(0.45mL、0.6mmol)及びジオキサン(2mL)中(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン(0.032g、0.085mmol)、5-エチル-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール及び3-エチル-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール(0.52mg、0.17mmol)並びにPd(PPh3)4(0.025mg、0.021mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。反応混合物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、1:1の石油エーテル:酢酸エチルで溶離した後、1:4の石油エーテル:酢酸エチルで溶離して、表題の化合物(45mg)を得る。
【０３０４】
工程6:5-(5-エチル-1H-ピラゾール-4-イル)-N-(4-モルホリノフェニル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-アミン
【化１００】
2009538877.tif 000102
{5-[5-エチル-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル}-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン及び{5-[3-エチル-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル}-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン(40mg、0.077mmol)及び濃HCl(0.3mL)をMeOHに(10mL)に溶解させた溶液を室温で5時間攪拌する。溶媒を除去した後、固体残渣を酢酸エチルと飽和NaHCO3の間で分離させる。不溶存固体を濾過によって回収し、水、ジエチルエーテル及び石油エーテルで洗浄し、乾燥させて表題の化合物(5mg、17%)を得る。0.1Mのメタンスルホン酸(0.128mL)を使用してメシル酸塩に変換して、固体として表題の化合物(5.6mg、89%)を得る。
1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 1.13 (3H, m), 2.29 (3H, s, MsOH), 2.74 (2H, m), 3.29 (4H, m), 3.77 (4H, m), 7.06 (2H, m), 7.62 (1H, s), 7.89 (2H, d), 8.00 (1H, s), 8.61 (1H, s), 9.83 (1H, s). LCMS: Rt 2.69分 (98.4%), m/z (APCI) 391 (M+H)+.
【０３０５】
化合物53:6-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-1,1-ジオキソ-1,2-ジヒドロ-lλ6-ベンゾ[d]イソチアゾール-3-オン
工程1:1,1-ジオキソ-6-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-1,2-ジヒドロ-1λ6-ベンゾ[d]イソチアゾール-3-オン
【化１０１】
2009538877.tif 000103
ジオキサン(10mL)中6-ブロモ-1,1-ジオキソ-1,2-ジヒドロ-lλ6-ベンゾ[d]イソチアゾール-3-オン(0.5、1.9mmol)、ビス(ピナコラト)ジボロン(0.53g、2.1mmol)、PdCl2dppf(0.047g、0.058mmol)及びKOAc(0.56g、5.7mmol)を使用して、化合物86、工程2に記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。溶媒を真空中で除去し、残渣をDCMと水の間で分離させる。有機層を飽和NaHCO3及び2MのHClで洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、表題の化合物(990mg、169%)を得て、それをさらに精製することなく次の工程に使用する。
【０３０６】
工程2:(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-[5-(1,1,3-トリオキソ-2,3-ジヒドロ-1H-1λ6-ベンゾ[d]イソチアゾール-6-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル
【化１０２】
2009538877.tif 000104
1.5MのNa2CO3(2mL、3mmol)及びジオキサン(6mL)中(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル(170mg、0.36mmol)、1,1-ジオキソ-6-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-1,2-ジヒドロ-1λ6-ベンゾ[d]イソチアゾール-3-オン(374mg、0.72mmol)及びPd(PPh3)4(100mg、0.082mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。1:1の石油エーテル:酢酸エチルを使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーで反応混合物を精製して、まだ純度の低い化合物を得る。10:1のDCM:MeOHで溶離する第2のシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、表題の化合物(91mg、44%)を得る。
【０３０７】
工程3:6-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-1,1-ジオキソ-1,2-ジヒドロ-lλ6-ベンゾ[d]イソチアゾール-3-オン
【化１０３】
2009538877.tif 000105
(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-[5-(1,1,3-トリオキソ-2,3-ジヒドロ-1H-lλ6-ベンゾ[d]イソチアゾール-6-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル(100mg、0.173mmol)をジオキサン中4MのHCl(2.5mL)に溶解した懸濁物を室温で2時間攪拌する。溶媒を真空下で除去し、残渣をDCM、ジエチルエーテル及び石油エーテルで粉砕して、表題の化合物(84mg、100%)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 3.25 (4H, m), 3.85 (4H, m), 7.20 (2H, d), 7.88 (2H, d), 8.16 (1H, d), 8.24 (1H, s), 8.58 (1H, d), 8.82 (2H, s), 8.96 (1H, s), 10.31 (1H, s). LCMS: Rt 2.31分 (95.7%), m/z (APCI) 478 (M+H)+.
【０３０８】
化合物54:4-{8-[6-(4-[シクロプロピルメチル]ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}チオフェン-2-カルボン酸アミド
【化１０４】
2009538877.tif 000106
工程4において(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[6-(4-[シクロプロピルメチル]ピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イル)アミンを使用して、化合物120について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.85分(95%)、m/z(ESI)476(M+H)+。
【０３０９】
化合物55:4-{8-[6-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}チオフェン-2-カルボン酸アミド
【化１０５】
2009538877.tif 000107
工程4において(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[6-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イル)アミンを使用して、化合物167について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.82分(95%)、m/z(ESI)464(M+H)+。
【０３１０】
化合物56:4-(8-{6-[4-(2,2,2-トリフルオロエチル)ピペラジン-1-イル]-ピリジン-3-イルアミノ}-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)チオフェン-2-カルボン酸アミド
【化１０６】
2009538877.tif 000108
工程4において(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-{6-[4-(2,2,2-トリフルオロエチル)ピペラジン-1-イル]-ピリジン-3-イル}アミンを使用して、化合物167について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.99分(95%)、m/z(ESI)504(M+H)+。
【０３１１】
化合物57:4-(8-{4-[4-(2,2,2-トリフルオロエチル)ピペラジン-1-イル]-フェニルアミノ}-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}チオフェン-2-カルボン酸アミド
【化１０７】
2009538877.tif 000109
(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-{4-[4-(2,2,2-トリフルオロエチル)ピペラジン-1-イル]フェニル}アミンを使用して、化合物58について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=1.07分(95%)、m/z(ESI)503(M+H)+。
【０３１２】
化合物58:4-{8-[4-(4-(シクロプロピルメチル)ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}チオフェン-2-カルボン酸アミド
【化１０８】
2009538877.tif 000110
2-(アミノカルボニル)チオフェン-4-ホウ酸を使用して、化合物46について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.93(95%)、m/z(ESI)475(M+H)+。
【０３１３】
化合物59:[4-(4-シクロプロピルピペラジン-1-イル)フェニル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]アミン
【化１０９】
2009538877.tif 000111
(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(4-シクロプロピルピペラジン-1-イル)-フェニル]アミンを使用して、化合物46について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.84(95%)、m/z(ESI)402(M+H)+。
【０３１４】
化合物60:[6-(4-シクロプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]アミン
【化１１０】
2009538877.tif 000112
工程4において(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[6-(4-シクロプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イル]アミンを使用して、化合物120について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.76分(95%)、m/z(ESI)403(M+H)+。
【０３１５】
化合物61:4-[8-(4-モルホリン-4-イルフェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]チアゾール-2-カルボン酸アミド
【化１１１】
2009538877.tif 000113
工程3においてアンモニア(MeOH中7M)を使用して、化合物73について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=1.00分(95%)、m/z(ESI)423(M+H)+。
【０３１６】
化合物62:4-{8-[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}チアゾール-2-カルボン酸アミド
【化１１２】
2009538877.tif 000114
最終工程において(5-ブロモ[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-フェニル]アミンを使用して、化合物61に記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:rt=0.96分(95%)、m/z(ESI)464(M+H)+。
【０３１７】
化合物63:4-(8-{4-[1-(2,2,2-トリフルオロエチル)ピペリジン-4-イル]フェニルアミノ}-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)チオフェン-2-カルボン酸アミド
工程1:1-トリフルオロアセチル-4-(4-ニトロフェニル)ピペリジン
【化１１３】
2009538877.tif 000115
トリエチルアミン(Triethylamine)(1.0mL、7.3mmol)及び4-(4-ニトロフェニル)ピペリジン(1.0g、4.8mmol)をDCM(25mL)中でN2下にて0℃で攪拌し、無水トリフルオロ酢酸(0.81mL、5.8mmol)を添加する。混合物を3日間攪拌し、室温まで昇温させる。次いで、溶液をDCM(50mL)で希釈し、水(2×15mL)、NaHCO3(50%飽和水溶液、2×15mL)及び塩水(15mL)で洗浄する。溶媒をMgSO4で乾燥させ、蒸発させて、所望の化合物(1.46g、4.66mmol)を得る。
【０３１８】
工程2:1-(2,2,2-トリフルオロエチル)-4-(4-ニトロフェニル)ピペリジン
【化１１４】
2009538877.tif 000116
1-トリフルオロアセチル-4-(4-ニトロフェニル)ピペリジン(1.42g、4.7mmol)をTHF(15mL)に溶解させた溶液を、凝縮器及び均圧添加漏斗が装着された25mLの二口フラスコ中で攪拌する。その系をN2で洗浄し、NaBH4(210mg、5.6mmol)を添加し、フラスコを0℃まで冷却する。次いで、ヨウ素(600mg、2.3mmol)をTHF(5mL)に溶解させた溶液を20分間にわたって1滴ずつ添加した後、添加漏斗を取り外し、混合物を還流させながら一晩加熱する。得られた淡黄色の懸濁物を室温まで冷却し、MeOH(1.5mL)を慎重に添加して、気体を激しく発生させる。溶媒を蒸発させて、表題の化合物を得て、それをさらに精製することなく使用する。
【０３１９】
工程3:4-[1-(2,2,2-トリフルオロエチル)ピペリジン-4-イル]フェニルアミン
【化１１５】
2009538877.tif 000117
ギ酸アンモニウム(1.38g、22mmol)及び10%Pd/C(230mg、0.2mmol)を、1-(2,2,2-トリフルオロエチル)-4-(4-ニトロフェニル)ピペリジン(1.26g、4.4mmol)をEtOH(10mL)及びEtOAc(10mL)に溶解させた溶液に添加する。懸濁物を還流させながら24時間加熱して、4時間及び8時間後にさらなる分量のギ酸アンモニウム(2g)を添加する。混合物をセライトで濾過し、蒸発させて、橙色の固体を得る。これをDCM(40mL)と水(20mL)の間で分離させ、層を分離する。水相をDCM(2×20mL)で抽出し、一緒にした有機層をMgSO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、薄い橙色の固体(980mg)としてN-{4-[1-(2,2,2-トリフルオロエチル)ピペリジン-4-イル]フェニル}ホルムアミドを得る。
【０３２０】
ホルムアミドをMeOH(20mL)に溶解させた溶液を室温で攪拌し、HCl(濃、1mL)を添加する。濃い紫色の溶液を還流させながら1時間加熱し、冷却し、MeOHを蒸発させる。残渣を水(20mL)とともに攪拌し、気泡が消えるまでNaHCO3(飽和水溶液)を添加する。混合物をDCM(20mL、2×10mL)で抽出し、一緒にした抽出物をMgSO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、橙色の固体(870mg)として表題の化合物を得る。
【０３２１】
この材料は、化合物89に対して用いられる方法と類似の方法を用いて、4-(8-{4-[1-(2,2,2-トリフルオロエチル)ピペリジン-4-イル]フェニルアミノ}-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)チオフェン-2-カルボン酸アミドを調製するのに使用される。
【化１１６】
2009538877.tif 000118
【０３２２】
LCMS:Rt=2.11分(100%)、m/z(ESI)502(M+H)+。
【０３２３】
化合物65:5-(8-(4-(2-モルホリノエトキシ)フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)イソインドリン-1-オン
工程1:(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(2-モルホリン-4-イル-エトキシ)-フェニル]-アミン
【化１１７】
2009538877.tif 000119
化合物6、工程1について記載された手順に従って、2-プロパノール(6mL)中5,8-ジブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン(0.5g、1.799mmol)、4-(2-モルホリン-4-イル-エトキシ)-フェニルアミン(0.6g、4.5mmol)及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.47mL、2.7mmol)を95℃で一晩攪拌する。溶媒を蒸発させた後、残渣をDCMに溶解させ、水(2×)及び塩水で洗浄する。有機層をMgSO4で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、油を得て、それをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製する。DCM:MeOHの97:3混合物で溶離して、淡黄色の固体として表題の化合物(650mg、86%)を得る。LCMS:Rt 2.06分(97.7%)。
【０３２４】
工程2:5-(8-(4-(2-モルホリノエトキシ)フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)イソインドリン-1-オン
【化１１８】
2009538877.tif 000120
1.5MのNa2CO3(1.02mL、1.53mmol)及びジオキサン(3mL)中(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(2-モルホリン-4-イル-エトキシ)-フェニル]-アミン(80mg、0.19mmol)、5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン(74mg、0.29mmol)及びPd(PPh3)4(55mg、0.047mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。DCM及びDCM:NH3(MeOH中7M)の97:3混合物で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで反応混合物を精製する。ジエチルエーテルを使用して粉砕した後に、表題の化合物を固体(61.9mg、69%)として単離する。MeOH中1Mのメタンスルホン酸(0.134mL)を使用して該物質をメシル酸塩に変換して、表題の化合物(57.1mg)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2.40 (3H, s, MsOH), 3.25-3.38 (2H, m), 3.60-3.78 (4H, m), 3.84 (2H, t), 4.09 (2H, d), 4.45 (2H, m), 4.56 (2H, s), 7.14 (2H, d), 7.90 (1H, d), 8.05-8.19 (4H, m), 8.28 (1H, s), 8.76 (1H, br s), 8.79 (1H, s), 10.00 (1H, br s), 10.16 (1H, s). LCMS: Rt 1.98分 (99.1%), m/z (APCI) 472 (M+H)+.
【０３２５】
化合物67:N-(2-フルオロ-4-モルホリノフェニル)-5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-アミン
工程1:(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(2-フルオロ-4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン
【化１１９】
2009538877.tif 000121
2-プロパノール(2mL)中5,8-ジブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン(0.105g、0.89mmol)、2-フルオロ-4-モルホリン-4-イル-フェニルアミン(93mg、0.474mmol)、DIPEA(0.123mL、0.706mmol)及び1,4-ジアザビシクロ[2.2.2]オクタン(53mg、0.472mmol)を使用して、化合物6、工程1について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。反応混合物をDCMと10%クエン酸水溶液の間で分離させ、有機層を分離し、10%クエン酸溶液、水及び塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。表題の化合物を淡赤色の固体(77mg、42%)として単離し、さらに精製することなく次の工程に使用する。LCMS:Rt 3.48分(89%)。
【０３２６】
工程2:N-(2-フルオロ-4-モルホリノフェニル)-5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-アミン
【化１２０】
2009538877.tif 000122
1.5NのNa2CO3(1.09mL、1.62mmol)及びジオキサン(3.25mL)中(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-(2-フルオロ-4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン(80mg、0.203mmol)、4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール(79mg、0.406mmol)及びPd(PPh3)4(59mg、0.051mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。97:3のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで反応混合物を精製する。生成物を含む留分を一緒にし、真空中で蒸発させて、固体を得て、それをジエチルエーテル及び石油エーテルで粉砕して、表題の化合物(29mg、38%)を得る。LCMS:Rt 2.90分(96%)。
【０３２７】
MeOH(0.762mL、0.076mmol)中0.1Mのメタンスルホン酸溶液を使用してメシル酸塩に変換して、表題の化合物(35mg)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 2.36 (3H, s, MsOH), 3.19 (4H, m), 3.79 (4H, m), 6.84-6.94 (2H, m), 7.54 (1H, t), 8.08 (1H, s), 8.48 (2H, s), 8.76 (1H, s), 9.31 (1H, s). LCMS: Rt 2.91分 (95.4%), m/z (APCI) 381 (M+H)+.
【０３２８】
化合物70:(4-(8-(4-モルホリノフェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)-1H-ピラゾール-5-イル)メタノール
工程1:4-ブロモ-5-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシメチル)-1H-ピラゾール
【化１２１】
2009538877.tif 000123
(4-ブロモ-2H-ピラゾール-3-イル)-メタノール(0.64mg、3.63mmol)、tert-ブチルジメチルシリルクロリド(0.82g、5.45mmol)及びイミダゾール(0.42g、6.18mmol)をN,N-ジメチルホルムアミド(20mL)に溶解させた溶液を室温で一晩攪拌する。反応混合物をジエチルエーテル:酢酸エチルの50:50混合物で希釈し、水(3×)で洗浄する。有機層をMgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮する。80:20の石油エーテル:酢酸エチルで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製して、表題の化合物(1.035g、98%)を得る。
【０３２９】
工程2:4-ブロモ-3-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシメチル)-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール及び4-ブロモ-5-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシメチル)-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール
【化１２２】
2009538877.tif 000124
4-ブロモ-5-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシメチル)-1H-ピラゾール(1g、3.45mmol)を、触媒量のTFA(0.0026mL、0.035mmol)の存在下で3,4-ジヒドロ-2H-ピラン(0.944mL、10.34mmol)に溶解させる。反応混合物を90℃で18時間攪拌し、冷却し、次いでNaH(4.69mg、0.206mmol)を使用してクエンチする。溶媒を除去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、95:5の石油エーテル-酢酸エチルの混合物で溶離した後、90:10の石油エーテル-酢酸エチルで溶離する。所望の化合物を含む留分を回収し、真空中で濃縮して、4-ブロモ-3-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシメチル)-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール及び4-ブロモ-5-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシメチル)-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール(724mg、56%)を得る。
【０３３０】
工程3:{5-[5-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシメチル)-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル}-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル及び{5-[3-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシメチル)-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル}-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル
【化１２３】
2009538877.tif 000125
DMF(4mL)中(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-(5-トリブチルスタナニル-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル(210mg、0.30mmol)、4-ブロモ-3-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシメチル)-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール及び4-ブロモ-5-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシメチル)-1-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-1H-ピラゾール(170mg、0.45mmol)並びにテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(35mg、0.030mmol)を使用して、化合物35、工程3について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。7:3、次いで3:7の石油エーテル:酢酸エチルで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで粗製化合物を精製して、表題の化合物(62.5mg)を得る。
【０３３１】
工程4:(4-(8-(4-モルホリノフェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)-1H-ピラゾール-5-イル)メタノール
【化１２４】
2009538877.tif 000126
{5-[3-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシメチル)-1-(テトラヒドロ-ピラン-3-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル}-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン及び{5-[5-(tert-ブチル-ジメチル-シラニルオキシメチル)-1-(テトラヒドロ-ピラン-3-イル)-1H-ピラゾール-4-イル]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル}-(4-モルホリン-4-イル-フェニル)-アミン(53.6mg、0.077mmol)及び濃HCl(0.27mL)をMeOH(5mL)に溶解させた溶液を室温で2時間攪拌する。溶媒を除去した後、残渣を酢酸エチルと水の間で分離させる。水層を酢酸エチル(3×)で洗浄し、一緒にした有機層をMgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残渣をジオキサン中4MのHClに溶解させ、真空中で濃縮し、次いで酢酸エチルと飽和NaHCO3の間で分離させる。有機層をMgSO4で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、粗製化合物を得て、それをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製する。表題の化合物を単離して、EtOAc及び95:5のDCM:MeOH混合物(5.4mg、18%)で溶離する。
1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 3.11 (4H, m), 3.79 (4H, m), 4.65 (2H, d), 5.25及び5.53 (1H, br s), 6.99 (2H, m), 7.84及び8.51 (1H, br s), 7.92 (2H, d), 8.12 (1H, d), 8.70 (1H, s), 9.74 (1H, s), 13.12及び13.23 (1H, br s). LCMS: Rt 2.26分 (96.2%), m/z (APCI) 393 (M+H)+.
【０３３２】
化合物73:4-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[l,2,4]トリアゾロ[l,5-a]ピラジン-5-イル]-チアゾール-2-カルボン酸メチルアミド
工程1:2,4-ジブロモチアゾール
【化１２５】
2009538877.tif 000127
チアゾリジノン(3.43g、29.32mmol)とPOBr3(25g、87.96mmol、3当量)を、固体として窒素下で混合する。次いで、反応混合物を3時間にわたって攪拌下で110℃まで加熱して、黒色シロップを形成させる。次いで、反応混合物を室温まで冷却させ、水/氷(200mL)混合物を非常に慎重に添加する。得られた灰色の懸濁物をジエチルエーテル(3×50mL)で抽出し、有機層を一緒にし、シリカプラグで濾過し、蒸発させて、橙色の油(4g、57%)として表題の化合物を得て、それをさらに精製することなく次の工程に使用する。
【０３３３】
工程2:4-ブロモチアゾール-2-カルボン酸エチルエステル
【化１２６】
2009538877.tif 000128
ジブロモチアゾール(1g、4.15mmol)をTHF(15mL)に溶解させた0℃の溶液に対して、iPrMgClをTHFに溶解させた溶液(2M、2.3mL、4.57mmol、1.10当量)を1滴ずつ添加する。反応物を0℃で0.25時間攪拌する。得られた橙色の溶液に対して、カニューレを介して、THF(5ml)中炭酸ジエチル(3mL)を添加する。得られた緑色溶液をさらに室温で0.5時間攪拌し、その時点で飽和NH4Clを添加することによって反応物をクエンチする。溶離剤として6/4シクロヘキサン/DCMを使用したLCによって表題の化合物を精製して、淡黄色の粉末状固体として514.2mg(52%)の表題の化合物を得る。
【０３３４】
工程3:4-ブロモチアゾール-2-カルボン酸メチルアミド
【化１２７】
2009538877.tif 000129
4-ブロモチアゾール-2-カルボン酸エチルエステル(500mg、2.13mmol)をメタノール(1mL)に溶解し、メタノール(10mL)中メチルアミンを添加する。混合物を室温で一晩攪拌する。溶媒を減圧下で蒸発させて、黄色固体として表題の化合物を得る。LCMS:Rt 0.92分(100%)、m/z(ESI)219/221(M+H)+。
【０３３５】
工程4:4-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[l,2,4]トリアゾロ[l,5-a]ピラジン-5-イル]-チアゾール-2-カルボン酸メチルアミド
【化１２８】
2009538877.tif 000130
4-ブロモチアゾール-2-カルボン酸メチルアミドを、化合物6、工程3について記載した方法と類似の方法でボロネートに変換する。次いで、化合物120、工程4について記載した方法を用いて表題の化合物を調製する。LCMS:Rt=1.06分(95%)、m/z(ESI)437(M+H)+。
【０３３６】
化合物79:5-(8-(6-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)イソインドリン-1-オン
工程1:4-ブロモ-2-ブロモメチル-安息香酸メチルエステル
【化１２９】
2009538877.tif 000131
4-ブロモ-2-メチル-安息香酸(4.6g、21.39mmol)をMeOH中2MのHClに溶解させ、3時間還流させる。溶媒を蒸発させて、4-ブロモ-2-メチル-安息香酸メチルエステル(4.24g、86%)を得る。この中間体(18.51mmol)を四塩化炭素(100mL)に溶解させ、N-ブロモスクシンイミド(NBS)(5.57g、24.06mmol)を添加する。次いで、AIBN(122mg、740μmol)を添加し、混合物を窒素で5分間パージする。次いで、反応混合物を4時間還流させる。室温まで冷却した後、反応混合物を濾過し、濾液を蒸発させる。残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、2:1の石油エーテル/酢酸エチル)で精製して、表題の化合物(3.42g、60%)を得る。
【０３３７】
工程2:5-ブロモ-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン
【化１３０】
2009538877.tif 000132
4-ブロモ-2-ブロモメチル-安息香酸メチルエステル(0.5g、16.2mmol)を90℃にて5分間メタノールアンモニア(10mL、MeOH中7NのNH3)で処理する。室温まで冷却した後、沈殿を形成し、濾過によって回収し、少量のメタノールで洗浄して、無色固体(224mg、65%)として表題の化合物を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 4.41 (2H, s), 7.64 (1H, d), 7.70 (1H, d), 7.87 (1H, s), 8.67 (1H, br s). LCMS: Rt 2.49分, (99.6%), m/z (APCI) 212 (M+H)+.
【０３３８】
工程3:5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン
【化１３１】
2009538877.tif 000133
5-ブロモ-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン(230mg、1.08mmol)、ビス(ピナコラト)ジボロン(300mg、1.18mmol)、PdCl2dppf(25mg、31μmol)及びKOAc(320mg、3.26mmol)をジオキサン(4mL)に懸濁させ、窒素で5分間パージし、次いで85℃で一晩加熱する。溶媒を真空中で除去し、残渣を酢酸エチルと水の間で分離させる。水層を酢酸エチル(3×)で抽出し、一緒にした有機相を塩水で1回洗浄し、MgSO4で濾過し、蒸発させる。固体残渣をヘキサンで粉砕し、真空中で乾燥させて、灰色固体として表題の化合物(185mg、66%)を得る。1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ (ppm) 1.37 (12H, s), 4.45 (2H, s), 6.38 (1H, br s), 7.87 (1H, d), 7.93 (2H, m).
【０３３９】
工程4:1-イソプロピル-4-(5-ニトロ-ピリジン-2-イル)-ピペラジン
【化１３２】
2009538877.tif 000134
2-クロロ-5-ニトロピリジン(2.5g、15.7mmol)をTHF(25mL)に溶解させた溶液に対して、1-イソプロピルピペラジン(2.01g、15.7mmol)及びK2CO3(3.25g、23.6mmol)を添加する。反応混合物を50℃で4時間攪拌し、次いで70℃で一晩攪拌する。溶媒を真空中で除去し、10:1の石油エーテル-ジエチルエーテルを使用して、得られた橙色の固体を粉砕する。単離した化合物(3.7g、94%)をさらに精製することなく次の工程に使用する。
【０３４０】
工程5:6-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イル-アミン
【化１３３】
2009538877.tif 000135
1-イソプロピル-4-(5-ニトロ-ピリジン-2-イル)-ピペラジン(0.9g、3.6mmol)をMeOH(20mL)に溶解させ、二塩化第二錫二水和物(4g、18mmol)を添加する。水浴を使用して混合物を冷却し、濃HCl(4mL)を添加する。反応物を室温で一晩攪拌する。メタノールを除去した後、濃NaOH(pH11)を使用して、得られた淡黄色溶液を塩基性化し、白色沈殿を形成する。固体を濾過によって回収し、水をジエチルエーテル(5×)で抽出する。有機層を一緒にし、MgSO4で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、橙色の油を得て、それを静置させながら結晶化して、橙色の固体を得る(0.68g、86%)。
【０３４１】
工程6:5-ブロモ-8-(6-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-アミン
【化１３４】
2009538877.tif 000136
2-プロパノール(2mL)中5,8-ジブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン(0.188g、0.68mmol)、6-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-ピリジン-3-イルアミン(0.180g、0.816mmol)及びN-エチルジイソプロピル-アミン(0.20mL、1.02mmol)を使用して、化合物6、工程1について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。DCM、次いで95:5のDCM:MeOHを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーで粗製物を精製して、淡褐色固体(260mg、92%)として表題の化合物を得る。
【０３４２】
工程5:5-(8-(6-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)イソインドリン-1-オン
【化１３５】
2009538877.tif 000137
1.5MのNa2CO3(0.64mL)及びジオキサン(2mL)中5-ブロモ-N-(6-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-アミン(50mg、0.12mmol)、5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン(56mg、0.216mmol)及びPd(PPh3)4(35mg、0.03mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。95:5のDCM:MeOH、次いで90:10のDCM:MeOHで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで粗製物を精製する。10:1のn-ヘキサン:DCM混合物(19mg、34%)で粉砕した後に表題の化合物を得る。0.1Mのメタンスルホン酸(0.35mL)を使用してメシル酸塩に変換して、黄色固体として表題の化合物を得る(20mg、69%)。
1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 1.34 (6H, d), 2.36 (6H, s, 2xMsOH), 3.16-3.21 (5H, m), 3.57 (2H, m), 4.45 (2H, d), 4.52 (2H, s), 7.11 (1H, d), 7.86 (1H, d), 8.01 (1H, s), 8.10 (1H, d), 8.24-8.29 (2H, m), 8.72 (1H, s), 8.76 (1H, s), 8.82 (1H, d), 9.39 (1H, br s), 10.21 (1H, s). LCMS: Rt 1.92分 (98.5%), m/z (APCI) 470 (M+H)+.
【０３４３】
化合物80:3-[8-(4-モルホリン-4-イルフェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-ベンゾ[b]チオフェン-7-カルボン酸アミド
工程1:1-ブロモ-2-(2-エトキシビニルスルファニル)ベンゼン
【化１３６】
2009538877.tif 000138
2-ブロモチオフェノール(10.50g、55.87mmol)を乾燥DMF(50mL)に溶解させた溶液に対して、窒素下で、炭酸カリウム(9.2mL、61.46mmol、1.10当量)を慎重に添加する。気泡が静まったら、2-ブロモ-1,1-ジエトキシエタン(8.46g、61.46mmol、1.10当量)を混合物に添加し、室温で2時間攪拌する。得られた懸濁物を200mLの氷水に注ぎ、ジエチルエーテル(3×50mL)で抽出する。有機層を塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させて、溶媒除去後に、粘性の橙色の油として表題の化合物を得て、それをさらに精製することなく使用する。
【０３４４】
工程2:7-ブロモベンゾ[b]チオフェン
【化１３７】
2009538877.tif 000139
1-ブロモ-2-(2-エトキシビニルスルファニル)ベンゼンをクロロベンゼン(50mL)に溶解させ、溶液を70℃まで加熱する。次いで、PPA(10.5mL)を慎重に添加し、二相混合物を150℃で一晩加熱する。得られた暗色シロップを冷却させ、上清溶媒をピペットで除去する。クロロベンゼン(15mL)を残渣に添加し、30分間にわたって150℃まで加熱する。溶媒を再び除去し、洗浄液が透明になるまで残渣を少量のジクロロメタンで洗浄する。有機留分を一緒にし、セライトで濾過して、透明な黄色溶液を得る。真空下で濃縮後、シクロヘキサンを溶離剤として使用するLCを行って、粘性無色油(1.21g、35%)として表題の化合物を得た。
【０３４５】
工程3:ベンゾ[b]チオフェン-7-カルボン酸エチルエステル
【化１３８】
2009538877.tif 000140
7-ブロモベンゾ[b]チオフェン(500mg、2.36mmol)を窒素下で乾燥THF(5.0mL)に溶解させる。マグネシウム片(530mg、2.83mmol、1.20当量)を添加し、得られた混合物を還流させながら、マグネシウムが溶解するまで加熱する。得られた濁黄色溶液を室温まで冷却させ、炭酸ジエチル(2mL、過剰量)を添加し、1時間攪拌を続けて、塩化アンモニウム(10%水溶液)を添加する。得られた混合物をDCMと水の間で分離させ、水層をDCMで抽出する。有機留分を一緒にし、塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、シリカに吸着させる。8/2のシクロヘキサン/ジクロロメタンを溶離剤として使用するLCで精製して、薄い橙色の油(346.2mg、71%)として表題の化合物を得た。
【０３４６】
工程4:ベンゾ[b]チオフェン-7-カルボン酸
【化１３９】
2009538877.tif 000141
ベンゾ[b]チオフェン-7-カルボン酸エチルエステル(1.0g、48mmol)をメタノール(10mL)及び水(10mL)に溶解させた溶液に対して、水酸化ナトリウム(5g、過剰量)を添加する。溶液を室温で30分間攪拌し、その時点ですべてのエステルが消費される。6MのHCl溶液を添加することによって反応混合物をpH1に調整し、DCMで抽出する。一緒にした有機層をシリカプラグで濾過して、黄色固体(505.2mg、59%)として表題の化合物を得る。
【０３４７】
工程5:ベンゾ[b]チオフェン-7-カルボン酸アミド
【化１４０】
2009538877.tif 000142
ベンゾ[b]チオフェン-7-カルボン酸(505mg、2.84mmol)をジクロロメタン(10mL)に溶解させた溶液を室温で攪拌し、塩化チオニル(669mg、5.68mmol、2.0当量)、次いでDMF(0.06mL)を添加して、気体を発生させる。得られた溶液を室温で1時間攪拌する。次いで、アンモニア水溶液(10mL)を混合物に慎重に添加して、気体を激しく発生させる。次いで、得られた混合物を水(50mL)で希釈し、飽和NaHCO3(水溶液)を添加することによってpHを中性にする。水層をDCMで抽出し、有機層を一緒にし、Na2SO4で乾燥させる。溶媒を減圧下で蒸発させて、黄色固体(500mg、98%)として表題の化合物(純度81%)を得て、それをさらに精製することなく使用する。
【０３４８】
工程6:3-ブロモベンゾ[b]チオフェン-7-カルボン酸アミド
【化１４１】
2009538877.tif 000143
ベンゾ[b]チオフェン-7-カルボン酸アミド(500mg、2.82mmol)をジクロロメタン(5mL)に溶解させた溶液を室温で攪拌し、酢酸(5mL)を添加した後、NBS(750mg、4.23mmol、1.5当量)を添加する。反応物を室温で1時間攪拌し、その時点で、LC-MS分析は、出発材料から所望の化合物(79%)及び二臭化物質(21%)への完全変換を示す。反応物を水(50mL)で希釈し、二亜硫酸カリウム水溶液、次いで重炭酸ナトリウムで中和する。次いで、水層をジクロロメタンで抽出し、得られた有機層を一緒にし、塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、蒸発させる。DCMを溶離剤として使用するLCで粗製物を精製して、白色固体(300mg、41%)として表題の化合物を得る。
【０３４９】
工程7:3-(4,4,5,5-テトラメチル[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)ベンゾ[b]チオフェン-7-カルボン酸アミド
【化１４２】
2009538877.tif 000144
3-ブロモベンゾ[b]チオフェン-7-カルボン酸アミド(300mg、1.18mmol)をジオキサン(5mL)に溶解させた溶液を窒素下で攪拌する。Pd(dppf)Cl2(29mg、3モル%)、酢酸カリウム(230mg、2.35mmol、2.0当量)及びビスピナコラトジボロン(450mg、1.77mmol、1.5当量)を添加し、反応物を80℃まで加熱し、一晩攪拌する。得られた橙色の上清をDCMで希釈し、セライトで濾過し、真空下で濃縮して、油を得て、それをさらに精製することなく次の工程に使用する。
【０３５０】
工程8:3-[8-(4-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-ベンゾ[b]チオフェン-7-カルボン酸アミド
【化１４３】
2009538877.tif 000145
化合物120、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 3.19 (4H, br s), 3.76 (4H, br s), 5.70 (1H, d), 7.12 (2H, m), 7.43 (1H, t), 7.63 (1H, br s), 7.76-7.80 (2H, m), 7.92 (1H, d), 8.03 (1H, d), 8.21 (1H, s), 8.28 (1H, s), 8.6 (1H, s), 10.09 (1H, s).  LCMS: Rt = 1.01分 (95%), m/z (ESI) 472 (M+H)+.
【０３５１】
化合物81:3-{8-[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}ベンゾ[b]チオフェン-7-カルボン酸アミド
【化１４４】
2009538877.tif 000146
最終工程において(5-ブロモ[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-フェニル]アミンを使用して、化合物80について記載した方法を用いてこの化合物を調製することができる。LCMS:rt=0.94分(95%)、m/z(ESI)513(M+H)+。
【０３５２】
化合物83:(4-{8-[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}ピリジン-2-イル)メタノール
工程1:4-ブロモ-2-メチルピリジン-1-オキシド
【化１４５】
2009538877.tif 000147
4-ブロモ-2-メチルピリジン(5g、29mmol)をDCM(20mL)を溶解させた溶液を0℃まで冷却させ、m-CPBA(7.55g、43.87mmol、1.5当量)を30分間にわたって1滴ずつ添加する。次いで、氷浴を取り除き、混合物を室温で3時間攪拌させる。得られた溶液を重炭酸ナトリウム(飽和水溶液)で希釈し、DCMで抽出する。有機層を一緒にし、重炭酸ナトリウム(飽和水溶液)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させ、真空下で濃縮して、薄い橙色の油として表題の化合物を得て、それをさらに精製しない。
【０３５３】
工程2:酢酸4-ブロモピリジン-2-イルメチルエステル
【化１４６】
2009538877.tif 000148
4-ブロモ-2-メチルピリジン-1-オキシド(4.00g、21.40mmol)をDCM(20mL)に溶解させた溶液に対して、無水酢酸(6mL)を添加する。混合物を室温で1時間攪拌し、次いで還流させながら一晩加熱する。溶媒を真空下で除去し、粗製物をシリカプラグで濾過し、DCMで溶離して、橙色の油(815mg)として表題の化合物を得る。
【０３５４】
工程3:酢酸4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)ピリジン-2-イルメチルエステル
【化１４７】
2009538877.tif 000149
酢酸4-ブロモピリジン-2-イルメチルエステル(800mg、3.49mmol)をジオキサン(5mL)に溶解させた溶液を窒素下で攪拌する。Pd(dppf)Cl2(85mg、3モル%)、酢酸カリウム(1.03g、10.5mmol、3.0当量)及びビスピナコラトジボロン(1.33g、5.24mmol、1.5当量)を添加し、反応物を80℃で一晩加熱する。得られた橙色の懸濁物をDCMで希釈し、セライトで濾過し、真空下で濃縮して、油を得て、それをさらに精製することなく次の工程で使用する。
【０３５５】
工程4:酢酸4-{8-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-ピリジン-2-イルメチルエステル
【化１４８】
2009538877.tif 000150
(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)フェニル]アミン(300mg、0.723mmol)及びPd(dppf)Cl2(59mg、10モル%)を4/1ジオキサン/水(5mL)に溶解した懸濁物を室温で攪拌し、炭酸カリウム(200mg、1.45mmol、2.0当量)及び酢酸4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)ピリジン-2-イルメチルエステル(300mg、1.08mmol、1.5当量)を添加する。得られた混合物を85℃で一晩加熱する。得られた溶液をジクロロメタンと水の間で分離させ、有機層をシリカ上に濃縮させ、カラムクロマトグラフィー(98/2のDCM/MeOH)で精製して、黄色固体として表題の化合物を得る。LCMS:Rt=0.78分(100%)、m/z 445(M+H)+。
【０３５６】
工程5:(4-{8-[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}ピリジン-2-イル)メタノール
【化１４９】
2009538877.tif 000151
酢酸4-{8-[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}ピリジン-2-イルメチルエステルを、炭酸カリウムをメタノールに溶解させた1.5M溶液10mL中にて室温で一晩攪拌する。次いで、10%クエン酸水溶液を添加することによってpHを中性にし、混合物をDCMで抽出する。MeOH中98/2のDCM/2MのNH3を溶離剤として使用するLCで精製して、黄色粉末(40.3mg、2工程で12.5%)として表題の化合物を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 1.02 (6H, m), 2.33 (1H, m), 2.60 (4H, br m), 3.10 (4H, br m), 4.65 (2H, d), 5.51 (1H, t), 6.96 (2H, d), 7.84-7.89 (3H, m), 8.11 (1H, s), 8.17 (1H, m), 8.61 (1H, d), 8.73 (1H, m), 10.08 (1H, s).  LCMS: Rt  = 0.78分 (100%), m/z (ESI) 445 (M+H)+.
【０３５７】
化合物84:[4-(1-イソプロピルピペリジン-4-イル)フェニル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]アミン
【化１５０】
2009538877.tif 000152
工程4においてピラゾール-4-ホウ酸を使用して、化合物92について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt 0.89分(100%)m/z(ESI)403(M+H)+。
【０３５８】
化合物86:4-(8-(6-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)フラン-2-カルボキサミド
工程1:4-ブロモ-フラン-2-カルボン酸アミド
【化１５１】
2009538877.tif 000153
4,5-ジブロモ-フラン-2-カルボン酸(7.79g、28.85mmol)をNH4OH(100mL)に溶解させた溶液に対して、亜鉛微粉(2.29g、34.62mmol)を少量ずつ添加する。反応混合物を室温で7分間攪拌し、次いでセライトで濾過し、水及び2MのHClで洗浄する。濃HClを使用して濾液を酸性化してpH1とし、酢酸エチル(3×)で抽出する。有機相を塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、油(4.96g)を得て、それを静置させながら固化して、白色固体を得て、それをさらに精製することなく使用する。
【０３５９】
固体(4.93g、25.81mmol)を塩化チオニル(44.2mL)に溶解させ、1時間還流させる。溶媒を真空中で除去した後、残渣をジクロロメタン(75mL)に溶解させ、0.5MのNH3をジオキサン(52mL)に溶解させた溶液を添加する。反応混合物を室温で1時間攪拌し、次いで33%のNH3水溶液(5mL)を添加し、反応物をさらに2時間攪拌する。溶媒を真空中で除去し、残渣をNaHCO3飽和溶液に吸収させる。酢酸エチル(3×)を使用して塩基性溶液を抽出し、一緒にした有機層をMgSO4で乾燥させ、真空中で濃縮する。酢酸エチル:石油エーテル:酢酸の(50:49:1の)混合物で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、表題の化合物(1.2g、22%)を得る。
【０３６０】
工程2:4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-フラン-2-カルボン酸アミド
【化１５２】
2009538877.tif 000154
4-ブロモ-フラン-2-カルボン酸アミド(1.2g、6.32mmol)、ビス(ピナコラト)ジボロン(1.76g、6.94mmol)、PdCl2dppf(0.154g、189mol)及びKOAc(1.85g、18.94mmol)をジオキサン(20mL)に懸濁させ、窒素で5分間パージし、次いで90℃で一晩加熱する。溶媒を真空中で除去し、残渣を酢酸エチルと水の間で分離させる。水層を酢酸エチルで3回抽出し、一緒にした有機相を塩水で洗浄し、MgSO4で濾過し、蒸発させる。固体残渣をヘキサンで粉砕し、真空中で乾燥させて、固体(0.984g,66%)として表題の化合物を得る。
【０３６１】
工程3:4-(8-(6-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)フラン-2-カルボキサミド
【化１５３】
2009538877.tif 000155
1.5MのNa2CO3(0.8mL、1.15mmol)及びジオキサン(2mL)中5-ブロモ-8-(6-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-アミン(60mg、0.144mmol)、4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-フラン-2-カルボン酸アミド(59mg、0.26mmol)及びPd(PPh3)4(42mg、0.036mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。溶媒を蒸発させた後、DCM、次いで97.5:2.5及び95:5のDCM:NH3(MeOH中7M)を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで粗製物を精製する。黄色固体(30mg、47%)として表題の化合物を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 1.05 (6H, d), 2.54-2.59 (4H, m), 2.70-2.74 (1H, m), 3.47 (4H, m), 6.90 (1H, d), 7.60 (1H, br s), 7.91 (1H, s), 7.99 (1H, br s), 8.12 (1H, dd), 8.19 (1H, s), 8.68 (1H, s), 8.75 (1H, s), 8.81 (1H, s), 10.03 (1H, s). LCMS: Rt 2.64分 (98.1%), m/z (APCI) 406 (M+H)+.  LCMS: Rt 2.74分 (93%), m/z (ES+) 448 (M+H)+.
【０３６２】
化合物88:4-(8-(4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)フラン-2-カルボキサミド
工程1:1-イソプロピル-4-(4-ニトロ-フェニル)-ピペラジン
【化１５４】
2009538877.tif 000156
4-フルオロニトロベンゼン(5g、35.4mmol)をTHF(50mL)に溶解させた溶液に対して、1-イソプロピルピペラジン(4.54g、35.4mmol)及びK2CO3(7.35g、53.2mmol)を添加する。反応混合物を室温で一晩攪拌する。溶媒を真空中で除去し、残渣をEtOAcと水の間で分離させる。有機層を塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮する。99:1及び98:2のDCM:NH3(MeOH中7M)を使用するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで粗製化合物を精製して、表題の化合物(8.2g、94%)を得る。
【０３６３】
工程2:4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミン
【化１５５】
2009538877.tif 000157
1-イソプロピル-4-(4-ニトロ-フェニル)-ピペラジン(8.3g、33.2mmol)をMeOH(120mL)に溶解させ、二塩化第二錫二水和物(37.4g、0.165mol)を添加する。水浴を使用して混合物を冷却し、濃HCl(36mL)を添加する。反応物を室温で一晩攪拌する。メタノールを除去した後、濃NaOH(pH11)を使用して、得られた溶液を塩基性化する。水相をジエチルエーテル(3×)で抽出し、有機層を一緒にし、MgSO4で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、表題の化合物(6.4g、88%)を得る。
【０３６４】
工程3:(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-アミン
【化１５６】
2009538877.tif 000158
95℃で一晩攪拌した2-プロパノール(30mL)中5,8-ジブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン(2g、7.20mmol)、4-(4-イソプロピル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミン(1.89g、8.62mmol)及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン(1.88mL、10.8mmol)を使用して、化合物6、工程1について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。ジエチルエーテル及び石油エーテルで粉砕した後、灰色固体(2.59g、87%)として表題の化合物を単離する。
【０３６５】
工程4:4-(8-(4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)フラン-2-カルボキサミド
【化１５７】
2009538877.tif 000159
1.5MのNa2CO3(水溶液)(1.143mL、1.71mmol)及びジオキサン(4mL)中5-ブロモ-N-(6-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-アミン(80mg、0.21mmol)、4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-フラン-2-カルボン酸アミド(101mg、0.42mmol)及びPd(PPh3)4(62mg、0.053mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。DCM及び97:3のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで粗製物を精製する。ジエチルエーテル(35.4mg、42%)で粉砕した後に、表題の化合物を単離する。MeOH(0.0793mL)中1Mのメタンスルホン酸を使用してメシル酸塩に変換して、固体(35mg)として表題の化合物を得る。
H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 1.35 (6H, d), 2.35 (3H, s, MsOH), 3.01 (2H, t), 3.22-3.35 (2H, m), 3.58 (3H, m), 3.88 (2H, d), 7.09 (2H, d), 7.61 (1H, br s), 7.94 (2H, m), 8.00 (1H, br s), 8.22 (1H, s), 8.76 (1H, s), 8.82 (1H, s), 9.27 (1H, br s), 10.02 (1H, s).  LCMS: Rt 2.02分 (98.9%), m/z (APCI) 447 (M+H)+.
【０３６６】
化合物89:4-{8-[4-(1-イソプロピルピペリジン-4-イル)フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-チオフェン-2-カルボン酸アミド
【化１５８】
2009538877.tif 000160
工程4において2-(アミノカルボニル)チオフェン-4-ホウ酸を使用して、化合物92について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt 0.94分(100%)、m/z(ESI)462(M+H)+。
【０３６７】
化合物90:(4-{8-[6-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}ピリジン-2-イル)メタノール
【化１５９】
2009538877.tif 000161
工程4において(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[6-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)ピリジン-3-イル]アミンを使用して、化合物83について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.71分(95%)、m/z(ESI)446(M+H)+。
【０３６８】
化合物92:5-{8-[4-(1-イソプロピルピペリジン-4-イル)フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロイソインドール-1-オン
工程1:1-イソプロピル-4-(4-ニトロフェニル)ピペリジン
【化１６０】
2009538877.tif 000162
4-(4-ニトロフェニル)ピペリジン(250mg、1.21mmol)、K2CO3(170mg、1.21mmol)及び2-ヨードプロパン(240μL、2.4mmol)を密封管内のアセトニトリル(3mL)中にて120℃で45分間攪拌する。混合物を冷却し、溶媒を減圧下で除去する。残渣をDCM(20mL)と水(5mL)の間で分離させ、層を分離し、DCMを水(5mL)及び塩水(5mL)で洗浄し、MgSO4で乾燥させる。溶媒を蒸発させて、表題の化合物(300mg)を得て、それをさらに精製することなく使用する。
【０３６９】
工程2:4-(1-イソプロピルピペリジン-4-イル)フェニルアミン
【化１６１】
2009538877.tif 000163
ヒドラジン(水中35重量%、0.67mL、7.2mmol)及び10%Pd/C(38mg、0.03mmol)を、1-イソプロピル-4-(4-ニトロフェニル)ピペリジン(180mg、0.72mmol)をEtOH(10mL)に溶解させた溶液に添加し、混合物を還流させながら3時間加熱する。冷却後、混合物をセライトで濾過し、溶媒を蒸発させる。残渣をDCM(25mL)に再溶解させ、MgSO4で乾燥させ、溶媒を蒸発させて、淡黄色固体(113mg、0.52mmol)として所望の化合物を得て、それをさらに精製することなく使用した。
【０３７０】
工程3:(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(1-イソプロピルピペリジン-4-イル)フェニル]アミン
【化１６２】
2009538877.tif 000164
N,N-ジイソプロピルエチルアミン(200μL、1.2mmol)を、iPrOH(5mL)中4-(1-イソプロピルピペリジン-4-イル)フェニルアミン(220mg、1.0mmol)と5,8-ジブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン(280mg、1.0mmol)の混合物に添加し、還流させながら48時間加熱する。混合物を冷却し、溶媒を減圧下で蒸発させて、橙色から褐色の固体を得る。これをDCM(50mL)と水(20mL)の間で分離させ、層を分離する。有機相をクエン酸(10%水溶液、3×25mL)で洗浄する。合わせた洗浄液をDCM(25mL)で抽出し、次いでNaHCO3(固)を添加することによって塩基性にする。混合物をDCM(3×25mL)で抽出し、一緒にした抽出物をMgSO4で乾燥させ、蒸発させる。DCM中5%〜10%のMeOHで溶離するシリカゲルによるクロマトグラフィーで粗製物を精製して、所望の化合物を得て、それを出発アニリンで汚染した。これをMeOHから再結晶させて、純粋の表題化合物(110mg)を得た。
【０３７１】
化合物79について記載した工程4と類似の方法で5-{8-[4-(1-イソプロピルピペリジン-4-イル)フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロイソインドール-1-オンを調製するために、この物質を使用することができる。
【化１６３】
2009538877.tif 000165
LCMS:Rt 0.91分(100%)、m/z(ESI)468(M+H)+。
【０３７２】
化合物100:1-(4-(5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)フェニル)ピペラジン-2-オン
工程1:4-(4-アミノ-フェニル)-3-オキソ-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
【化１６４】
2009538877.tif 000166
p-ヨード-アニリン(918mg、4.8mmol)、3-オキソ-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(960mg、4.2mmol)、(1R,2R)-シクロヘキサン-1,2-ジアミン(0.05mL、0.42mmol)、ヨウ化第一銅(14.9mg、0.0042mmol)及びK2CO3(1.19g、2.04mmol)をジオキサン(4mL)に溶解した懸濁物を反応管の中で5分間にわたって窒素でパージする。管を密封し、反応混合物を119℃で15時間加熱する。室温まで冷却した後、反応混合物を酢酸エチル(40mL)で洗浄しながらシリカカートリッジで濾過する。濾液を真空中で濃縮して、褐色の液体(1.06g、87%)として表題の化合物を得る。LCMS:Rt 0.88分(91%)。
【０３７３】
工程2:1-[4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-フェニル]-ピペラジン-2-オン
【化１６５】
2009538877.tif 000167
2-プロパノール(1mL)中5,8-ジブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン(0.283g、1.00mmol)、4-(4-アミノ-フェニル)-3-オキソ-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(0.300g、1.00mmol)及びN-エチルジイソプロピル-アミン(0.20mL、1.02mmol)を使用して、化合物6、工程1について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。DCM、次いで98:2のDCM:MeOHで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで粗製物を精製して、白色固体(0.252g、51%)として4-[4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-フェニル]-3-オキソ-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステルを得る。
【０３７４】
4-[4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-フェニル]-3-オキソ-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(0.252mg、0.6mmol)を2:1のDCM:TFA(4.8mL)に溶解させた溶液を室温で1時間攪拌する。次いで、混合物をDCMで希釈し、飽和NaHCO3で塩基性化する。水層をDCM(3×)で抽出し、有機層を一緒にし、MgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮して、固体(180mg、78%)として表題の化合物を得る。
【０３７５】
工程3:1-(4-(5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)フェニル)ピペラジン-2-オン
【化１６６】
2009538877.tif 000168
2mLの3:1のDMF/水中1-[4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-フェニル]-ピペラジン-2-オン(70mg、0.18mmol)、4-(4,4,5,5-テトラメチル-1,3,2-ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール(64mg、0.33mmol)、Pd(PPh3)4(21mg、18μmol)及びNaOtBu(70mg、0.72mmol)を使用して、化合物1、工程5について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。反応混合物を真空下で濃縮し、勾配99:1から90:10のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。淡緑色固体(13mg、19%)として表題の化合物を単離する。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 3.05 (2H, m), 3.42 (2H, s), 3.62 (2H, m), 7.32 (2H, d), 8.07 (2H, d), 8.26 (1H, s), 8.39 (1H, br s), 8.67 (1H, br s), 8.81 (1H, s), 10.05 (1H, s), 13.32 (1H, br s). LCMS: Rt 6.98分 (92.4%), m/z (APCI) 376 (M+H)+.
【０３７６】
化合物102:5-{8-[4-(4-tert-ブチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン
工程1:1-tert-ブチル-4-(4-ニトロ-フェニル)-ピペラジン
【化１６７】
2009538877.tif 000169
1-フルオロ-4-ニトロ-ベンゼン(314mg、2.23mmol)及び4-tert-ブチル-ピペラジン(1g、3.34mmol)をジオキサン(15mL)に溶解させた溶液に対して、K2CO3(1.65mg、11.9mmol)を添加し、反応物を130℃で一晩攪拌する。溶媒を真空下で蒸発させ、残渣を酢酸エチルと水の間で分離させる。有機層を塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗製化合物を得る。DCM、次いで99:1のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して、表題の化合物(348mg、55.4%)を得る。LCMS:Rt 3.87分(99%)。
【０３７７】
工程2:4-(4-tert-ブチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミン
【化１６８】
2009538877.tif 000170
1-tert-ブチル-4-(4-ニトロ-フェニル)-ピペラジン(348mg、1.32mmol)をMeOH(10mL)に溶解させ、二塩化第二錫二水和物(1.08g、4.79mmol)を添加する。水浴を使用して混合物を冷却し、濃HCl(3mL)を添加する。反応物を40℃で一晩攪拌する。メタノールを除去した後、濃NaOH(pH11)を使用して、得られた溶液を塩基性化する。水相をジエチルエーテル(3×)で抽出し、有機層を一緒にし、MgSO4で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、表題の化合物(308mg、99%)を得て、それをさらに精製することなく次の工程で使用する。LCMS:Rt 2.16分(87%)。
【０３７８】
工程3:(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(4-tert-ブチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-アミン
【化１６９】
2009538877.tif 000171
2-プロパノール(5mL)中5,8-ジブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン(0.308g、1.107mmol)、4-(4-tert-ブチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミン(0.310g、1.33mmol)及びN-エチルジイソプロピル-アミン(0.289mL、1.66mmol)を使用して、化合物6、工程1について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。反応混合物をDCMと1NのNaOHとの間で分離させ、有機層を分離し、水及び塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮する。残渣をジエチルエーテル及び石油エーテルで粉砕して、クリーム状固体として表題の化合物(440mg、92%)を得る。LCMS:Rt 2.25分(96%)。
【０３７９】
工程4:5-{8-[4-(4-tert-ブチル-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン
【化１７０】
2009538877.tif 000172
1.5MのNa2CO3(水溶液)(1.24mL)及びジオキサン(3.7mL)中(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(4-tert-ブチル-ピペラジン-1-イル)-フェニル]-アミン(100mg、0.232mmol)、5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン(90mg、0.32mmol)及びPd(PPh3)4(67mg、0.058mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。反応混合物を酢酸エチルと塩水の間で分離させ、有機層を分離し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させる。98:2のDCM:NH3(MeOH中7M)、次いで95:5のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで残渣を精製して、固体を得て、それをジエチルエーテル及び石油エーテルで粉砕して、表題の化合物(71mg、63%)を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 1.43 (9H, s), 2.36 (3H, s, MsOH), 3.02 (2H, m), 3.19-3.26 (2H, m), 3.67 (2H, d), 3.90 (2H, d), 4.52 (2H, s), 7.10 (2H, d), 7.86 (1H, d), 7.96-8.01 (3H, m), 8.10 (1H, d), 8.24 (1H, s), 8.72 (1H, s), 8.75 (1H, s), 9.09 (1H, br s), 10.09 (1H, s). LCMS: Rt 2.07分 (99%), m/z (APCI) 483 (M+H)+.
【０３８０】
化合物105:5-{8-[4-(2-オキソ-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン
工程1:3-オキソ-4-{4-[5-(1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソインドール-5-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル
【化１７１】
2009538877.tif 000173
1.5MのNa2CO3(水溶液)(1.3mL、1.92mmol)及びジオキサン(2.5mL)中4-[4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-フェニル]-3-オキソ-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(115mg、0.24mmol)、5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン(92mg、0.35mmol)及びPd(PPh3)4(83mg、0.072mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。反応混合物を塩水で希釈し、次いでトルエンを添加し、沈殿を形成し、濾過によって回収する。得られた固体をDCMに溶解させ、シリカカートリッジで濾過して、黄色固体として表題の化合物(60mg、47%)を得る。
【０３８１】
工程2:5-{8-[4-(2-オキソ-ピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン
【化１７２】
2009538877.tif 000174
3-オキソ-4-{4-[5-(1-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソインドール-5-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-フェニル}-ピペラジン-1-カルボン酸tert-ブチルエステル(59mg、0.1mmol)を3:1のDCM:TFA(1.2mL)に溶解させた溶液を室温で1時間攪拌する。反応混合物をDCMで希釈し、飽和NaHCO3で塩基性化する。水層をDCM(3×)で抽出し、有機層を一緒にし、MgSO4で乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、黄色固体(38mg、86%)として表題化合物を得る。1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 3.07 (2H, m), 3.44 (2H, s), 3.64 (2H, m), 4.50 (2H, s), 7.32 (2H, d), 7.83 (1H, d), 8.04-8.10 (4H, m), 8.22 (1H, s), 8.70 (1H, br s), 8.74 (1H, s), 10.25 (1H, s). LCMS: Rt 7.17分 (93.7%), m/z (APCI) 441 (M+H)+.
【０３８２】
化合物108:7-フルオロ-5-{8-[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロイソインドール-1-オン
工程1:4-ブロモ-2,6-ジフルオロ安息香酸メチルエステル
【化１７３】
2009538877.tif 000175
4-ブロモ-2,6-ジフルオロ-安息香酸(5g、21mmol)をDCM(10mL)に溶解した懸濁物に対して、塩化チオニル(15mL)及びDMF(0.5mL)を添加する。混合物を室温で2.5時間攪拌する。次いで、それを0℃まで冷却し、MeOH(20mL)を慎重に添加して、HClを激しく発生させる。さらに0.5時間攪拌した後、透明溶液をDCM(50mL)と水(50mL)の間で分離させる。有機層を飽和NaHCO3、塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、溶媒を真空下で除去して、淡黄色油として表題の化合物を得て、それをさらに精製することなく使用する。
【０３８３】
工程2:4-ブロモ-2-フルオロ-6-(ニトロメチル)安息香酸メチルエステル
【化１７４】
2009538877.tif 000176
水素化ナトリウム(4.05g、169mmol、8当量)及びMgSO4(40g)をDMSO(100mL)に溶解した懸濁物にニトロメタン(10mL、169mmol、8当量)を室温で慎重に添加し、得られたスラリーを0.25時間攪拌する。得られた黄色スラリーに対して、4-ブロモ-2,6-ジフルオロ安息香酸メチルエステル(5.3g、21mmol)を添加し、混合物を室温で3日間攪拌し、その時点で、すべての出発材料が消費される。水(200mL)及び6MのHCl(50mL)を添加した後、DCM(200mL)を添加する。さらなる水(500mL)を添加して、透明の二相系を得る。水層をDCM(3×100mL)で抽出し、次いでDCM層を一緒にし、飽和NaHCO3及び塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させる。溶媒を蒸発させて、64%の所望の物質を含む橙色の固体を得て、それをさらに精製することなく使用する。LCMS;Rt=1.27分(64%)。
【０３８４】
工程3:5-ブロモ-7-フルオロ-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン
【化１７５】
2009538877.tif 000177
前工程による粗製4-ブロモ-2-フルオロ-6-(ニトロメチル)安息香酸メチルエステルをMeOH(100mL)に溶解させる。この透明の橙色の溶液に対して、亜鉛微粉(3.35g、51.3mmol、3当量)を添加した後、ギ酸アンモニウム(3.23g、51.3mmol、3当量)を添加して、発熱反応を生じさせる。0.3時間後、MeOH(50mL)中7MのNH3を添加し、混合物を室温で一晩攪拌する。得られた混合物をセライトで濾過し、黄色濾液をシリカ上に吸着させ、94/6のDCM/MeOH 7M NH3を使用するLCで大まかに洗浄する。溶媒を除去して、淡褐色の固体を得て、それをDCMに再溶解させ、10%のNaOHで洗浄し、減圧下で濃縮して、白色固体を残し、それをさらに少量のDCMで粉砕して、表題の化合物を得る。LCMS:Rt 0.96分(100%)、m/z 230/232(M+H)+。
【０３８５】
工程4:7-フルオロ-5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-2,3-ジヒドロイソインドール-1-オン
【化１７６】
2009538877.tif 000178
5-ブロモ-7-フルオロ-2,3-ジヒドロイソインドール-1-オン(531mg、2.31mmol)をジオキサン(5mL)に溶解させた溶液を窒素下で攪拌する。Pd(dppf)Cl2(94mg、5モル%)、酢酸カリウム(453mg、4.62mmol、2.0当量)及びビスピナコラトジボロン(1.17g、4.62mmol、2当量)を添加し、反応物を80℃で3時間加熱する。得られた橙色の懸濁物をDCMで希釈し、セライトで濾過し、真空下で濃縮して、油を得て、それを最小量のDCMに再溶解させる。ジエチルエーテルを徐々に添加して、淡褐色の固体として表題の化合物を得る。LCMS:Rt 1.18分(100%)、m/z 277/279(M+H)+。
【０３８６】
工程5:7-フルオロ-5-{8-[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロイソインドール-1-オン
【化１７７】
2009538877.tif 000179
上記ボロネートを使用して、化合物91について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.90分(95%)、m/z 487(M+H)+。
【０３８７】
化合物112:5-(8-(4-(4-イソプロピル-2-オキソピペラジン-1-イル)フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)イソインドリン-1-オン
工程1:1-[4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-フェニル]-4-イソプロピル-ピペラジン-2-オン
【化１７８】
2009538877.tif 000180
1-[4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-フェニル]-ピペラジン-2-オン(実施例31、工程2)(180mg、0.47mmol)をMeOH(4mL)に溶解させた溶液に対して、酢酸(0.03mL、0.47mmol)、NaOAc(38mg、0.47mmol)及びアセトン(0.2mL、1.18mmol)を添加する。反応混合物を室温で1時間攪拌し、次いでNaCNBH3(60mg、0.94mmol)を添加し、混合物を40℃で一晩攪拌する。室温まで冷却した後、反応混合物を濃HCl(pH1)で酸性化し、真空中で濃縮する。残渣を6NのNaOHとDCMとの間で分離させる。水層をDCM(3×)で抽出し、一緒にした有機層をMgSO4で乾燥させ、真空中で濃縮して、粗製化合物を得て、それをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製する。DCM及び98:2のDCM:MeOHで溶離して、黄色固体(45mg、25%)として表題の化合物を得る。
【０３８８】
工程2:5-(8-(4-(4-イソプロピル-2-オキソピペラジン-1-イル)フェニルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル)イソインドリン-1-オン
【化１７９】
2009538877.tif 000181
1.5MのNa2CO3(水溶液)(0.5mL、0.75mmol)及びジオキサン(1.2mL)中1-[4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-フェニル]-4-イソプロピル-ピペラジン-2-オン(40mg、0.09mmol)、5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-2,3-ジヒドロ-イソインドール-1-オン(37mg、0.14mmol)及びPd(PPh3)4(31mg、0.027mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。反応混合物を塩水で希釈し、次いでトルエンを添加し、沈殿を形成し、濾過によって回収する。濾液をジエチルエーテル、石油エーテル及びMeOHで洗浄し、次いでシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製する。99:1のDCM:NH3(MeOH中7M)、次いで98:2及び95:5のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離して、黄色固体(24mg、55%)として表題の化合物を得る。
1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 1.08 (6H, d), 2.73-2.87 (3H, m), 3.27 (2H, s), 3.62-3.68 (2H, m), 4.52 (2H, s), 7.36 (2H, d), 7.84 (1H, d), 8.07-8.10 (4H, m), 8.25 (1H, s), 8.70 (1H, br s), 8.77 (1H, s), 10.28 (1H, s). LCMS: Rt 1.94分 (95.2%), m/z (APCI) 483 (M+H)+.
【０３８９】
化合物114:5-{8-[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-3,3-ジメチル-2,3-ジヒドロイソインドール-1-オン
工程1:5-ブロモ-2-(4-メトキシベンジル)-3,3-ジメチル-2,3-ジヒドロイソインドール-1-オン
【化１８０】
2009538877.tif 000182
水素化ナトリウム(130mg、鉱油中60%分散液、3.2mmol)及びヨウ化テトラ-nブチルアンモニウム(243mg、0.68mmol)をTHF(20mL)に溶解した懸濁物を室温で攪拌し、5-ブロモ-2,3-ジヒドロイソインドール-1-オン(675mg、3.2mmol)をTHF(20mL)及びDMF(4mL)に溶解させた溶液を添加する。75分後、臭化4-メトキシベンジル(460μL、3.2mmol)を添加し、4時間攪拌を続ける。次いで、水素化ナトリウム(635mg、鉱油中60%分散液、15.9mmol)を添加し、攪拌を30分間続けてから、ヨードメタン(1.19mL、19mmol)を添加し、混合物を30分間にわたって70℃まで加熱する。冷却後、NH4Cl(飽和水溶液)を添加し、混合物を酢酸エチル(120mL)で希釈する。層を分離し、有機相をMgSO4で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去する。石油エーテル中5%から10%の酢酸エチルで溶離するシリカクロマトグラフィーで残渣を精製して、黄色油(640mg、1.78mmol)として表題の化合物を得る。
【０３９０】
工程2:5-ブロモ-3,3-ジメチル-2,3-ジヒドロイソインドール-1-オン
【化１８１】
2009538877.tif 000183
5-ブロモ-2-(4-メトキシベンジル)-3,3-ジメチル-2,3-ジヒドロイソインドール-1-オン(640mg、1.78mmol)及び硝酸セリウムアンモニウム(2.91g、5.33mmol)をアセトニトリル(11mL)及び水(5mL)に溶解させた溶液を0℃で45分間攪拌する。溶液を酢酸エチル(100mL)で希釈し、塩水(40mL)で洗浄する。有機溶媒をMgSO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させる。石油エーテル中10%から50%の酢酸エチルで溶離するシリカクロマトグラフィーで残渣を精製して、表題の化合物(367mg、1.53mmol)を得る。
【０３９１】
工程3:5-{8-[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-フェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-3,3-ジメチル-2,3-ジヒドロイソインドール-1-オン
【化１８２】
2009538877.tif 000184
化合物6、工程3に類似の方法で5-ブロモ-3,3-ジメチル-2,3-ジヒドロイソインドール-1-オンを対応するボロネートに変換する。次いで、化合物120、工程4について記載した方法を用いて、(5-ブロモ[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-フェニル]アミンから表題の化合物を調製するためにこれを使用する。LCMS:Rt=0.92分(100%)、m/z=497(M+H)+。
【０３９２】
化合物118:4-(5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-N-(ピリジン-3-イルメチル)ベンズアミド
工程1:4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-安息香酸メチルエステル
【化１８３】
2009538877.tif 000185
2-プロパノール(2.5mL)中5,8-ジブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン(250mg、0.90mmol)、4-アミノ安息香酸メチルエステル(163mg、1.08mmol)及びN-エチルジイソプロピル-アミン(0.19mL、1.08mmol)を使用して、化合物6、工程1について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。2-プロパノールで粉砕後に褐色固体(148mg、47%)として表題の化合物を得る。
【０３９３】
工程2:4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-安息香酸
【化１８４】
2009538877.tif 000186
4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-安息香酸メチルエステル(460mg、1.32mmol)をTHF(11mL)に懸濁させ、水酸化リチウム一水和物(554mg、13.2mmol)を水(11mL)に溶解させた溶液を添加する。反応混合物を室温で4時間攪拌し、次いでメタノール(11mL)を添加し、混合物を50℃で24時間攪拌する。混合物を水とDCMの間で分離させ、水相を2MのHCl(pH2)で酸性化し、黄色の沈殿を形成する。沈殿を濾過によって回収し、水及びジエチルエーテルで洗浄し、乾燥させて、表題の化合物(215mg、49%)を得る。
【０３９４】
工程3:4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-N-ピリジン-3-イルメチル-ベンズアミド
【化１８５】
2009538877.tif 000187
4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-安息香酸(0.230g、0.69mmol)、3-ヒドロキシベンゾトリアゾール(0.103g、0.76mmol)、1-エチル-3-(3'-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド水和物(0.146g、0.76mmol)をDMF(5mL)及び3-ピコリルアミン(0.077mL、0.76mmol)に溶解させた溶液を室温で21時間攪拌する。溶媒を真空中で除去し、残渣をジエチルエーテル、酢酸エチル及びジクロロメタンで粉砕する。淡黄色固体を得て、水で洗浄し、乾燥して、表題の化合物を得る(241mg、82%)。
【０３９５】
工程4:4-(5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-N-(ピリジン-3-イルメチル)ベンズアミド
【化１８６】
2009538877.tif 000188
1.5MのK2CO3(水溶液)(1.4mL)及びジオキサン(2.5mL)中4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-N-ピリジン-3-イルメチル-ベンズアミド(100mg、0.24mmol)、4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール(93mg、0.48mmol)及びPd(PPh3)4(70mg、0.06mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。DCM、続いて98:2、次いで96:4、次いで90:10のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで粗製物を精製して、白色固体(19.6mg、20%)として表題の化合物を得る。
1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 4.52 (2H, d), 7.40 (1H, m), 7.78 (1H, d), 7.93 (2H, d), 8.18 (2H, d), 8.32 (1H, s), 8.48-8.62 (4H, m), 8.82 (1H, s), 9.01 (1H, t), 10.21 (1H, br s), 13.3 (1H, br s). LCMS: Rt 1.86分 (93%), m/z (ES+) 412 (M+H)+.
【０３９６】
化合物119:4-(5-(2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-N-(ピリジン-3-イルメチル)ベンズアミド
工程1:4-[5-(2-メトキシ-ピリジン-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-N-ピリジン-3-イルメチル-ベンズアミド
【化１８７】
2009538877.tif 000189
1.5MのK2CO3(水溶液)(1.6mL)及びジオキサン(2.9mL)中4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-N-ピリジン-3-イルメチル-ベンズアミド(120mg、0.28mmol)、2-メトキシピリジン-4-ホウ酸(87mg、0.57mmol)及びPd(PPh3)4(81mg、0.07mmol)を使用して、化合物6、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。DCM、続いて99:1、次いで97:3、次いで95:5のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで粗製物を精製して、白色固体(92.6mg、73%)として表題の化合物を得る。
【０３９７】
工程2:4-(5-(2-オキソ-1,2-ジヒドロピリジン-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-N-(ピリジン-3-イルメチル)ベンズアミド
【化１８８】
2009538877.tif 000190
密封管内の水(0.5mL)中4-[5-(2-メトキシ-ピリジン-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-N-ピリジン-3-イルメチル-ベンズアミド(71.5mg、0.16mmol)と塩酸ピリジニウム(91mg、0.79mmol)の混合物を150℃で25分間加熱する。その後、溶媒を真空中で除去する。DCM、続いて98:2、次いで90:10のDCM:NH3(MeOH中7M)で溶離するシリカゲルによるクロマトグラフィーで残渣を処理し、所望の生成物を含む留分を一緒にし、蒸発させる。黄色固体(34.5mg、49%)として表題の化合物を単離する。
【０３９８】
1H-NMR (400MHz, d6-DMSO) δ (ppm) 4.52 (2H, d), 6.82 (1H, m), 7.22 (1H, s), 7.38 (1H, m), 7.51 (1H, d), 7.78 (2H, d), 8.18-8.23 (3H, m), 8.51 (1H, d), 8.62 (1H, s), 8.82 (1H, s), 9.01 (1H, t), 10.58 (1H, br s), 11.8 (1H, br s).  LCMS: Rt 1.72分 (97%), m/z (ES+) 439 (M+H)+.
【０３９９】
化合物120:2-メトキシ-N-(6-メチルピリジン-3-イル)メチル-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド
工程1:2-メトキシ-N-(6-メチルピリジン-3-イル)メチル-4-ニトロベンズアミド
【化１８９】
2009538877.tif 000191
2-メトキシ-4-ニトロ安息香酸(293mg、1.49mmol)をDMF(2mL)に溶解させ、4-メチルモルホリン(220μL、3.0mmol)及びTBTU(1.79g、1.7mmol)を添加する。混合物を室温で30分間攪拌し、C-(6-メチルピリジン-3-イル)メチルアミン(400mg、3.27mmol)を添加する。室温で12時間攪拌を続ける。DCM(10mL)を添加し、有機相をNa2CO3(5%水溶液)、HCl(3%水溶液)及び水で洗浄し、次いでNa2SO4で乾燥させる。溶媒を蒸発させた後、残渣をエーテル-ヘキサンで粉砕して、白色固体として表題の化合物を得る。
【０４００】
工程2:4-アミノ-2-メトキシ-N-[(6-メチルピリジン-3-イル)メチル]ベンズアミド
【化１９０】
2009538877.tif 000192
2-メトキシ-N-(6-メチルピリジン-3-イル)メチル-4-ニトロベンズアミド(448mg、1.49mmol)をEtOH及びEtOAc(それぞれ8mL)に溶解させた溶液を攪拌し、ギ酸アンモニウム(375mg、6mmol)及び10%Pd/C(100mg)を添加する。混合物を還流させながら20分間加熱し、冷却し、セライトで濾過し、固体をEtOHで洗浄し、一緒にした溶媒を蒸発させて、表題の化合物を得る。
【０４０１】
工程3:4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-2-ヒドロキシ-N-[(6-メチル-ピリジン-3-イル)メチル]ベンズアミド
【化１９１】
2009538877.tif 000193
5,8-ジブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン(285mg、1.03mmol)及び4-アミノ-2-メトキシ-N-[(6-メチルピリジン-3-イル)メチル]ベンズアミド(280mg、1.03mmol)をiPrOH(5mL)中で攪拌し、HBr(48%水溶液、380μL)を添加する。混合物を還流させながら24時間加熱する。冷却懸濁物をNaHCO3(飽和水溶液、25mL)及び水(25mL)に注ぎ、CHCl3(4×30mL)で抽出する。抽出物をMgSO4で乾燥させ、蒸発させる。10% CH2Cl2/MeOHで溶離するカラムクロマトグラフィーで残渣を精製する。生成物を含む留分を蒸発させ、残渣をMeOHで粉砕して、褐色固体として表題の化合物を得る。
【０４０２】
工程4:2-メトキシ-N-(6-メチルピリジン-3-イル)メチル-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド
【化１９２】
2009538877.tif 000194
ピラゾール-4-ボロン酸(19mg、0.17mmol)、4-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-2-ヒドロキシ-N-[(6-メチル-ピリジン-3-イル)メチル]ベンズアミド(40mg、0.085mmol)、K2CO3(24mg、0.17mmol)及びPd(dppf)Cl2CH2Cl2(4mg、0.005mmol)を密封性の管に量りとる。管を窒素で洗浄し、ジオキサン-水(4:1、4mL)を添加する。管を密封し、30秒間にわたって窒素ガスを流しながら超音波浴に配置し、次いで85℃の油浴に入れる。反応物を28時間攪拌し、2時間及び18時間後に追加的な分量のボロン酸(10mg)及び触媒(2mg)を添加する。粗製混合物をSiO2上に吸収させ、1%〜10%のMeOH/DCMで溶離するカラムクロマトグラフィーで精製する。得られた生成物をMeOH/DCM(4:1、10mL)に再溶解し、0.1MのMsOH/MeOH(2当量)を添加し、溶媒を蒸発し、残渣を水に吸収させ、凍結乾燥して、そのビスメシル酸塩(38mg)として表題の化合物を得る。LCMS:Rt 0.92分(93.9%)、m/z(ESI)455(M+H)+。
【０４０３】
化合物122:N-ベンジル-2-メトキシ-4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]-ベンズアミド
【化１９３】
2009538877.tif 000195
工程1においてベンジルアミンを使用して、化合物120について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt 1.62分(100%)、m/z(ESI)440(M+H)+。
【０４０４】
化合物124:N-ピリジン-2-イルメチル3-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]ベンズアミド
【化１９４】
2009538877.tif 000196
工程5において2-ピリジルメチルアミンを使用して、化合物129について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.84分(100%)、m/z(ESI)412(M+H)+。
【０４０５】
化合物127:(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-{3-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]フェニル}メタノン
【化１９５】
2009538877.tif 000197
工程5において4-イソプロピルピペラジンを使用して、化合物129について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.84分(100%)、m/z(ESI)432(M+H)+。
【０４０６】
化合物129:N-エチル3-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]ベンズアミド
工程1:3-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)安息香酸エチルエステル
【化１９６】
2009538877.tif 000198
5,8-ジブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン(1.39g、5.00mmol)及び3-アミノ安息香酸エチル(0.93g、5.60mmol)をiPrOH(10mL)中で攪拌し、HBr(48%水溶液、1.14mL、10mmol)を添加する。混合物を85℃で4時間加熱し、次いで室温まで冷却し、NaHCO3(飽和水溶液、25mL)でクエンチする。得られた懸濁物を0℃まで冷却し、白色固体を吸引濾過によって回収し、水(10mL)で洗浄する。粗製物をEtOHに吸収させ、溶媒を蒸発させて、オフホワイトの固体(1.79g、4.9mmol)として表題の化合物を得て、それをさらに精製することなく使用する。
【０４０７】
工程2:3-[(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-tert-ブトキシカルボニル-アミノ]安息香酸エチルエステル
【化１９７】
2009538877.tif 000199
3-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)安息香酸エチルエステル(1.79g、4.93mmol)をDCM(20mL)に溶解させた溶液を室温にてN2下で攪拌し、BOC2O(1.34g、6.16mmol)及びDMAP(0.30g、2.46mmol)を添加する。攪拌を2時間続けると、出発材料が完全に変換したことがLCMSによって示される。混合物を濾過し、濾液を希釈クエン酸(pH6、5mL)及び塩水(5mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させる。溶媒を蒸発させて、黄色油(1.87g、4.0mmol)として表題の化合物を得て、それをさらに精製することなく使用する。
【０４０８】
工程3:3-{tert-ブトキシカルボニル-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミノ}安息香酸エチルエステル
【化１９８】
2009538877.tif 000200
ジオキサン(37.5mL)及び水(9.6mL)中3-[(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-tert-ブトキシカルボニル-アミノ]安息香酸エチルエステル(0.58g、1.25mmol)と、4-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-1H-ピラゾール(0.49g、2.50mmol)と、K2CO3(0.35g、2.50mmol)と、Pd(dppf)Cl2DCM(102mg、0.125mmol)の混合物に窒素を吹き込む。凝縮器をフラスコに装着し、系を排気し、N2(気)でパージし、次いで115℃で25分間加熱する。加熱浴を取り除き、CO2(固)を添加して冷却し、系を緩衝する。溶媒を減圧下で除去し、DCM中10%から50%の酢酸エチルで溶離するシリカクロマトグラフィーで残渣を精製して、橙色の油(0.61g、＞100%)として表題の化合物を得て、それをさらに精製することなく使用する。
【０４０９】
工程4:3-{tert-ブトキシカルボニル-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミノ}安息香酸
【化１９９】
2009538877.tif 000201
低純度の3-{tert-ブトキシカルボニル-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミノ}安息香酸エチルエステル(0.61g、1.25mmol)をTHF(2.5mL)に溶解させ、KOH(2M水溶液、2.5mL、5mmol)を添加し、混合物を60℃で一晩加熱する。溶液を冷却し、セライトで濾過し、水で洗浄する。濾液をクエン酸(2M水溶液、2.5mL)に注ぎ、0℃で攪拌する。得られた固体を吸引濾過によって回収し、水で洗浄し、EtOH中に懸濁させることによって乾燥させ、減圧下で蒸発させて、褐色のゴム(280mg)を得る。
【０４１０】
濾液をDCMで抽出することによってさらなる生成物を得て、合計量が352mgの表題の化合物を得る。これをさらに精製することなく使用する。
【０４１１】
工程5:N-エチル3-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]ベンズアミド
【化２００】
2009538877.tif 000202
3-{tert-ブトキシカルボニル-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]-アミノ}安息香酸(42mg、0.10mmol)、エチルアミン(12M水溶液、42μL、0.50mmol)及びトリエチルアミン(28μL、0.20mmol)をDMF(0.30mL)中で攪拌し、PyBOP(57mg、0.11mmol)を添加する。攪拌を一晩続ける。反応混合物をEtOAc(7mL)とNaHCO3(飽和水溶液、7mL)の間で分離させ、層を分離する。一緒にした有機層を塩水(2×5mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥させる。溶媒を蒸発させて、油を得て、それを、HCl(12M水溶液、0.15mL)を含有するMeOH(0.3mL)に溶解させ、一晩攪拌する。トリエチルアミン(0.25mL)及びEtOH(2mL)を添加し、溶媒を減圧下で除去する。残渣を分取HPLCで精製して、白色固体(7mg)として表題の化合物を得る。1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ = 13.29 ppm (s, 0.8 H); 10.01 (s, 0.9 H); 8.77 (s, 1.0 H); 8.65 (s, 1.0 H); 8.52 (s, 1.1 H); 8.41-8.37 (m, 2.1 H); 8.25 (s, 1.0 H); 8.08 (d, 1.0 H); 7.47 (d, 1.0 H); 7.41 (t, 1.1 H); 7.04-7.03 (m, 0.5 H); 3.32 (s, 29.2 H (水)); 1.14 (t, 3.5 H).  LCMS: Rt = 0.95分 (100 %), m/z (ESI) 349 (M+H)+.
【０４１２】
化合物131:N-(4-ヒドロキシベンジル)3-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]ベンズアミド
【化２０１】
2009538877.tif 000203
工程5において4-ヒドロキシベンジルアミンを使用して、化合物129について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.98分(100%)、m/z(ESI)427(M+H)+。
【０４１３】
化合物134:N-ベンジル-N-メチル3-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]ベンズアミド
【化２０２】
2009538877.tif 000204
工程5においてN-メチルベンジルアミンを使用して、化合物129について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=1.15分(100%)、m/z(ESI)425(M+H)+。
【０４１４】
化合物167:4-[8-(6-フェニルアセチルアミノ-ピリジン-3-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-チオフェン-2-カルボン酸アミド
工程1:N-(5-ニトロピリジン-2-イル)-2-フェニルアセトアミド
【化２０３】
2009538877.tif 000205
2-アミノ-5-ニトロピリジン(4.17g、30mmol)をピリジン(30mL)に溶解させた溶液を室温で攪拌し、塩化フェニルアセチル(4.64g、30mmol)をTHF(30mL)を溶解させた溶液を1滴ずつ添加する。混合物を24時間攪拌し、次いで氷-水(250mL)に注いで、褐色の固体を得て、それをさらに精製することなく使用する。
【０４１５】
化合物120について記載した方法の工程2及び3と類似の方法でN-[5-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-ピリジン-2-イル]-2-フェニルアセトアミドを調製するために、この物質を使用する。
【０４１６】
工程4:4-[8-(6-フェニルアセチルアミノ-ピリジン-3-イルアミノ)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル]-チオフェン-2-カルボン酸アミド
【化２０４】
2009538877.tif 000206
N-[5-(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ)-ピリジン-2-イル]-2-フェニルアセトアミド及び2-(アミノカルボニル)チオフェン-4-ボロン酸を使用して、化合物120、工程4について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt 1.06分(100%)m/z(ESI)471(M+H)+。
【０４１７】
化合物169:2-(4-{4-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イルアミノ]フェニル}-ピペリジン-1-イル)アセトアミド
【化２０５】
2009538877.tif 000207
工程1において2-ブロモアセトアミドを使用して、化合物84について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.81分(100%)、m/z(ESI)418(M+H)+。
【０４１８】
化合物170:5-{8-[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-3-トリフルオロメチルフェニルアミノ]-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-5-イル}-2,3-ジヒドロイソインドール-1-オン
【化２０６】
2009538877.tif 000208
5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル)-2,3-ジヒドロイソインドール-1-オンを使用して、化合物GB15について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.99分(95%)、m/z(ESI)537(M+H)+。
【０４１９】
化合物171:[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-3-トリフルオロメチルフェニル]-[5-(1H-ピラゾール-4-イル)-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル]アミン
【化２０７】
2009538877.tif 000209
(5-ブロモ-[1,2,4]トリアゾロ[1,5-a]ピラジン-8-イル)-[4-(4-イソプロピルピペラジン-1-イル)-3-トリフルオロメチルフェニル]アミンを使用して、化合物46について記載した方法を用いて、この化合物を調製することができる。LCMS:Rt=0.99(95%)、m/z(ESI)472(M+H)+。
【０４２０】
上記手順によって調製される本発明の化合物の他の例は、以上に記載されている。
【０４２１】
(精製条件及び特性決定)
慣例として、いずれの合成後化合物もギルソン分取HPLCシステム(322ポンプ、155UV/VIS検出器、215液体ハンドラー)を使用した逆相HPLCを用いて精製することができる。ギルソン215は、自動サンプラー及びフラクションコレクターとして働く。化合物をシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーで精製することもできる。
【０４２２】
エレクトロスプレー源を備えた単一四重極計測装置を使用する質量分析によって化合物の特性決定を行う。
【０４２３】
(化合物の有用性を実証する生物アッセイ)
(実施例1:MAPKAP-K5アッセイ)
室温で30分間インキュベートした0.1又は0.2μCiの33P-ATP;0.6μMのATP;1mUのMAPKAP-K5;3μMのMAPKAP-K5ペプチド基質を使用して、FlashPlate形式でMAPKAP-K5反応を実施する。
【０４２４】
フラッシュプレートアッセイ:
MAPKAP-K5キナーゼ反応を384ウェルポリプロピレンプレート(Matrix Technologies)で実施し、次いでストレプトアビジンコート384ウェルフラッシュプレート(Perkin-Elmer)に移す。
【０４２５】
2μLの試験化合物又は標準阻害薬を含むウェルに対して、Hydra(Robbins Scientific)を使用して13μLの酵素混合物又は希釈剤を添加する。
【０４２６】
Multidrop(Thermo-Labsystems)を使用して10μLの[2.5×]基質カクテルを添加することによって反応を開始させて、
ImUのMAPKAP-K5
3μMのMAPKAP-K5ペプチド基質
0.6μMのATP
0.004μCiの[33P]-γ-ATP/μL
1×反応緩衝剤
のアッセイにおける最終濃度を得る。
【０４２７】
プレートを室温で30分間インキュベートする。
【０４２８】
ミクロ-フィル(Micro-fill)(Biotek)を使用して25μLのEDTA(50mM)を各ウェルに添加することによって反応を停止させる。
【０４２９】
Zymarkロボットシステムを使用して反応物をストレプトアビジンコートフラッシュプレートに移す。プレートを室温で60分間インキュベートする。
【０４３０】
Tecanプレート洗浄機を使用してすべてのウェルを100μlのリン酸緩衝食塩水で3回洗浄する。
【０４３１】
Packard TopCount上のフラッシュプレート(空のウェル)のシンチレーション計数によって放射活性を測定する。
酵素混合物:
酵素
50mMのTris Hcl(pH7.5)
0.1mMのEGTA
2mMのDTT
lmg/mLのBSA
反応緩衝剤:
50mMのTris Hcl(pH7.5)
0.1mMのEGTA
10mMの酢酸マグネシウム
2mMのDTT
【０４３２】
上記の合成方法に従って以下の化合物を調製した、又は調製することが可能である。以下の表1及び表2の目的について、実施例1に記載のMAPKAPK5アッセイの方法を使用して測定できる各化合物の活性は、以下のように表される。
【表１】
2009538877.tif 000210
【表２】
2009538877.tif 000211
2009538877.tif 000212
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2009538877.tif 000227
【表３】
2009538877.tif 000228
2009538877.tif 000229
2009538877.tif 000230
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2009538877.tif 000234
2009538877.tif 000235
【０４３３】
(実施例2.活性化初代滑膜線維芽細胞によるMMP1の発現の調節剤識別のためのアッセイの開発)
細胞のECM分解活性を低下させる化合物を識別するために、細胞のECM分解活性を誘発して、この活性の適正な検出を可能にするとともに、より明確な読取りを達成することができる。RAに関連して、格別の細胞は、哺乳類滑膜線維芽細胞であり、ECM分解活性を誘発するのに使用できるトリガーは、関節炎の分野で重要なサイトカイン、例えば、TNF-α、IL1β、IL6、OSM、IL17及びMIF1-αである。このリストは、RA病原に潜在的に関与するサイトカインが過多であるため、包括的でない(Smolen及びSteiner、2003)。病理の複雑さにできるだけ近いインビトロアッセイを設定するために、加えるトリガーは、単核細胞、マクロファージ、T細胞及びB細胞等の関節炎の分野で重要なサイトカイン産性細胞をトリガーと接触させることによって生成される因子の混合物である必要がある。サイトカイン産性細胞は、複雑且つ不偏の因子の混合物を生成することによって接触に応答することになる。使用するサイトカイン産性細胞がパンヌスにも見出され、このトリガーを生成するために加えられるサイトカインがリウマチ様関節炎患者の滑液に見出される場合は、究極的に生成される因子の混合物は、関節炎患者の関節に存在する因子の一部を含むことになる。
【０４３４】
「MMPアッセイ」の原理
マトリックス金属プロテアーゼ(MMP)は、例えば、他のプロテアーゼ、即ち成長因子の成熟及び細胞外マトリックス構成要素の分解等の様々な生理的役割を有する。MMP1は、骨及び軟骨の主たる構成要素である原生コラーゲンを分解することが可能なMMPファミリーの構成要素の1つである。滑髄膜線維芽細胞(synovial fibroblasts)(SF)によるMMP1の発現の増加は、関節疾患の進行の特徴であり、関節における浸食プロセスの予測となる(Cunnaneら、2001)。SFによるMMP1の発現は、TNF-α又はIL1βのようなサイトカイン等のリウマチ様関節炎に重要なトリガーによるSFの活性化によって増強され得る(Andreakosら、2003)。総合すると、活性化SFによって生成されるMMP1のレベルの測定は、この事象が、パンヌスに見られるように浸食性表現型に対して、SFの活性化のレベルを反映するため、RAに関連して極めて重要な読取値である。活性化SFにおける候補薬物目標の発現の低下が、これらの細胞によるMMP1発現の低下をもたらす場合は、その薬物目標は、MMP1発現の調節に関与することが証明されるため、RAの治療のための治療手法の開発に重要であると見なされる。
【０４３５】
以下の実施例において、「MMPアッセイ」とも呼ばれるアッセイの開発は、多様な活性化トリガーに応答して滑膜線維芽細胞(synovial fibroblasts)(SF)によるMMP1生成を監視する(実施例2.1)。次いで、このアッセイの使用は、RA治療薬の開発のための薬物目標と見なされる遺伝子生成物の検証について記載される(実施例2.2)。薬物目標の検証は、RNAi(RNA干渉)(RNA interference)ベースのメカニズムによる目標遺伝子の発現レベルを低下させるshRNAの細胞における発現を媒介するノックダウンウイルス又はAd-siRNAとも呼ばれる組換えアデノウイルスを使用して実施される(WO03/020931参照)。次いで、検証された薬物目標の活性を調節する化合物の識別を表3に記載する。識別された薬物目標の活性を調節する化合物を試験するための「MMPアッセイ」の使用を以下にさらに記載する。
【０４３６】
(アッセイ実施例)
使用する対照ウイルス:
これらの試験に使用する対照ウイルスを以下に列記する。dE1/dE2Aアデノウイルスは、WO99/64582に記載されるように、PER.E2Aパッケージング細胞におけるヘルパープラスミドpWEAd5AflII-rITR.dE2Aの同時形質移入によってこれらのアダプタープラスミドから生成される。
負対照ウイルス:
Ad5-eGFP_KD:目標配列:GCTGACCCTGAAGTTCATC(配列番号:1)。Sap1-部位を使用して、WO03/020931に記載されるように生成されるベクター及びウイルスにクローンされる。
Ad5-Luc_v13_KD:目標配列GGTTACCTAAGGGTGTGGC(配列番号:2)。Sap1-部位を使用して、WO03/020931に記載されるように生成されるベクター及びウイルスにクローンされる。
Ad5-M6PR_v1_KD:目標配列CTCTGAGTGCAGTGAAATC(配列番号:3)。Sap1-部位を使用して、WO03/020931に記載されるように生成されるベクター及びウイルスにクローンされる。
正対照ウイルス:
Ad5-MMPl_v1O_KD:目標配列ACAAGAGCAAGATGTGGAC(配列番号:4)。Sap1-部位を使用して、WO03/020931に記載されるように生成されるベクター及びウイルスにクローンされる。
目標検証に使用するウイルス:
Ad5-MAPKAPK5_v13_KD:目標配列CGGCACTTTACAGAGAAGC(配列番号:5)。Sap1-部位を使用して、WO03/020931に記載されるように生成されるベクター及びウイルスにクローンされる。
Ad5-MAPKAPK5_v12_KD:目標配列ATGATGTGTGCCACACACC(配列番号:6)。Sap1-部位を使用して、WO03/020931に記載されるように生成されるベクター及びウイルスにクローンされる。
【０４３７】
(実施例2.1:MMPアッセイの開発)
MMP1の測定のための384ウェル形式ELISAを開発する。様々な一次抗体並びに様々なELISAプロトコルを試験する。以下のプロトコルを開発し、検証して、384ウェルプレートにおけるSF上清のMMP1レベルを測定する。白色Lumitrac 600 384ウェルプレート(Greiner)を2μg/mLの抗MMP1抗体MAB1346(Chemicon)でコートする。抗体をバッファー40(1LのミリQ水中1.21gのTrisベース(Sigma)、0.58gのNaCl(Calbiochem)及び5mlの10%のNaN3(Sigma)、pH8.5に調整)で希釈する。4℃で一晩インキュベートした後、プレートをPBS(10LのミリQ中80gのNaCl、2gのKCl(Sigma)、11.5gのNa2HPO4.7H2O及び2gのKH2PO4;pH7.4)で洗浄し、100μL/ウェルのカゼインバッファー(PBS中2%カゼイン(VWR International))でブロックする。翌日、カゼインバッファーをELISAプレートから除去し、50μL/ウェルのECバッファー(1LのミリQ中4gのカゼイン、2.13gのNa2HPO4(Sigma)、2gのウシアルブミン(Sigma)、0.69gのNaH2PO4.H2O(Sigma)、0.5gのCHAPS(Roche)、23.3gのNaCl、4mlの0.5MのEDTA(pH8)(Invitrogen)、5mlの10%NaN3、pH7.0に調整)で置き換える。0.25mMのDTT(Sigma)を融解サンプルプレートに添加する。ECバッファーを除去した後、20μLのサンプルをELISAプレートに移す。4℃で一晩インキュベートした後、プレートをPBSで2回、そしてPBST(0.05%のTween-20を含むPBS(Sigma))で1回洗浄し、35μL/ウェルのビオチン化抗MMP1抗体溶液(R&D)とともにインキュベートする。この二次抗体をバッファーC(2LのミリQ中0.82gのNaH2PO4.H2O、4.82gのNa2HPO4、46.6gのNaCl、20gのウシアルブミン及び4mLの0.5MのEDTA(pH8)、pH7.0に調整)で5μg/mLの濃度に希釈する。室温で2時間インキュベートした後、プレートを上記のように洗浄し、50μL/ウェルのストレプトアビジン-HRP結合体(Biosource)とともにインキュベートする。ストレプトアビジン-HRP結合体をバッファーCで0.25μg/mLの濃度に希釈する。45分後、プレートを上記のように洗浄し、50μL/ウェルのBM Chem ELISA基質(Roche)とともに5分間インキュベートする。積算時間が200ミリ秒のLuminoscan Ascent Luminometer(Labsystems)又はEnvision読取装置(Perkin Elmer)で読取りを行う。
【０４３８】
RAの分野で重要なサイトカイン(TNF-α、IL1β及びOSM)又はそれらの組合せで処理した際のSFによるMMP1発現の増加を図2に白色棒で示す。この実験では、SFを96ウェルプレートに3000個の細胞/ウェルの密度で接種する。24時間後、培地を1%のFBSが補給されたM199培地に交換する。培地交換の1日後に、サイトカイン又はそれらの組合せを培養物に添加し、各サイトカインを25ng/mLの最終濃度まで添加する。サイトカインを添加してから72時間後に、上清を回収し、以上に示したプロトコルに記載したようにMMP1 ELISAで処理する。この実験と並行して、同一のプロトコルを用いて、THP1細胞(M199+1%FBSで2倍に希釈)の上清を同一のサイトカイン又はサイトカインの組合せで48時間にわたってM199培地+1%FBS中にて処理して、SFをトリガーさせる。これらのサンプルのMMP1レベルを図2に灰色棒で示す。TNF-α処理THP1細胞の上清でトリガーされたSFによるMMP1発現の誘発は、組換えTNF-α単独でトリガーされたSF(3倍の誘発)と比較して強く(4.5倍を超える誘発)、3つの純化サイトカイン(TNF-α、IL1βb、OSM)の混合物によって得られた5倍の誘発にほぼ等しい。この結果は、TNF-α誘発THP1細胞の上清が、TNF-αの他に、SFをMMP1発現に向けて活性化させるさらなる炎症促進因子を含むことを示す。RA病原におけるTNF-αの役割が確認され(インフリキシマブ及びエタネルセプト等のTNF-α遮断薬は、RA患者の治療に多少の効果を示す)、THP-1細胞がRA患者の関節に存在する単核細胞/マクロファージを代表するため、THP-1細胞をTNF-αベースの複合体トリガーと接触させることによって調製されるTNF-αベースのトリガー混合物は、RA患者の関節に存在する因子を含み、次いでRAに関連する。「複合体トリガー」とも呼ばれるこのTNF-αベースの複合体トリガーは、さらに「MMPアッセイ」の基礎として使用される。
【０４３９】
「複合体トリガー」によるSFの活性化の阻害は、齧歯類におけるコラーゲン誘発関節炎をも強く抑制する強力な抗炎症薬であるデキサメタソンを用いて示される(Yangら、2004)(図3)。デキサメタソンは、複合体トリガー活性化SFによって生成されるMMP1の量を投与量に応じて減少させることが示されている。SFを96のウェルプレートに3000個の細胞/ウェルの密度で接種する。接種の24時間後に、高濃度のデキサメタソンを細胞に添加する。一晩インキュベートした後、すべてのウェルの培地をTNF-αで処理したTHP-1細胞の上清(M199+0.5%FBSで50%に希釈)及び前日に添加したのと同じ濃度のデキサメタソンに一新する。処理の48時間後に、上清を回収し、上記MMP1 ELISAに接触させる。デキサメタソンを添加すると、SFによるMMP1発現が明らかに低下し、IC50値が約1nMになった(図3参照)。これらのデータは、生理的に適切な阻害薬を添加することによって活性化SFによるMMP1発現を低下させることができることを示し、「MMPアッセイ」の原理を証明するものである。
【０４４０】
(実施例2.2:MAPKAPK5はSF「複合体トリガー」誘発MMP1発現を調節する)
(A)MAPKAPK5発現をノックダウンするAd-siRNAウイルス機能
siRNAが目標とするMAPKAPK5及びeGFPの発現を媒介する組換えアデノウイルスを
WO03/020931に記載されている手順に従って生成する。組換えアデノウイルスに使用する目標配列は、CGGCACTTTACAGAGAAGC(配列番号:5)並びにATGATGTGTGCCACACACC(配列番号:6)である。組換えアデノウイルスに使用するeGFP mRNA内の目標配列は、GCTGACCCTGAAGTTCATC(配列番号:1)である。Sap1部位を使用して、これらの配列をアダプタープラスミドにクローンする。WO99/64582に記載されるように、PER.E2Aパッケージング細胞におけるヘルパープラスミドpWEAd5AflII-rITR.dE2Aの同時形質移入によってこれらのアダプタープラスミドからdE1/dE2Aアデノウイルスを生成する。
【０４４１】
アデノウイルス目標MAPKAPK5の機能を以下のように試験する。これらのアデノウイルスを使用して、以下のようにペトリ皿に培養した初代ヒトSFを感染させる。1日目に、ペトリ皿1つ当たり500,000個のSFを接種する。1日後、それらの細胞を(Q-rt-PCRによってウイルスに対して定められた力価(1mL当たりのウイルス粒子の数)に基づく)4000のMOIでAd5-MAPKAPK5-v13_KD(1.6E9 VP/mL)又はAd5-eGFP-v5_KD(1.3E10 VP/mL)に感染させる。7日目に、トリプシンEDTA溶液を使用する標準的な手順に従って、細胞をペトリ皿から分離する。次いで、10%FBSが補給されたDMEM成長培地を添加することによってトリプシンを中和する。次いで、細胞を遠心分離工程(1000rpm、5分間)によって回収する。ペレットを100μLの新鮮なRIPAバッファー(50mMのTris(pH7.5)、150mMのNaCl、1%のデオキシコレート、1%のTriton X100、0.1%のSDS)で溶解する。次いで、サンプルを10秒間超音波処理する。次いで、BSAを標準として、提供元が記載するBCAキット(Pierce、Cat N°23227)を使用して、サンプルのタンパク質濃度を測定する。RIPAバッファーで19.5μlに希釈された30μgの細胞可溶化物に対して、3.5μLの還元剤(NuPage還元剤N°10、Invitrogen NP0004)及び7.5μLのサンプルバッファー(NuPage LDSサンプルバッファー、Invitrogen NP0007)を添加する。次いで、30μLサンプルを5分間煮沸し、10%ポリアクリルアミドゲル(Invitrogen NP0301)上に充填する。タンパク質ノックダウンのレベルの推定を可能にするために、Ad5-eGFP-v5_KD感染細胞の可溶化物の15μg、7.5μg及び3.75μgもゲル上に充填する。次いで、ゲルを1×MOPS/SDS NuPageランニングバッファー(Invitrogen NP001)にて100Vで2時間処理する。10μlのシーブループラス前染色標準(Invitrogen LC5925)を使用して、ゲル上のタンパク質サイズを推定する。次いで、100mlのNupage移行バッファー20*(NP0006-1)と、400mLのメタノールと、1500mLのミリQ水とを混合することによって調製された移行バッファーを使用して、湿式ブロット手順によって、ゲル上のタンパク質をPVDF膜(Invitrogen LC2002)に移行させる。移行前に、膜を最初にメタノール及びトランスファーバッファーに浸す。100Vで90分間にわたって移行を行う。次いで、PBST(0.1%のTween20が補給されたPBS(Sigma、P1379))で調製したブロッキングバッファー(2%ブロッキングパウダー(Amersham、RPN2109)に30分間浸すことによって膜を遮断する。ブロッキング後、ブロッキングバッファーで250倍に希釈された対MAPKAPK5マウスモノクローナル抗体(BD Bioscience、Cat N°612080)を使用して免疫検出を行う。この一次抗体とともに一晩インキュベートした後、膜をPBSTで3回洗浄し、ブロッキングバッファーで50000倍に希釈された二次抗体((ポリクローナルヤギ抗マウスIg、HRP結合(DAKO P0447)とともに1時間インキュベートする。次いで、ブロットをPBSTで3回洗浄し、製造元の説明書に従ってKodakimager上のECLアドバンス(RPN2109、Amersham)で検出を行う。Ad5-MAPKAPK5-v13_KD感染細胞は、Ad5-eGFP-v5_KD負対照ウイルスで感染された細胞と比較してMAPKAPK5の発現レベルが低いことがウェスタンブロット法によって明らかになった。希釈Ad5-eGFP-v5_KD感染サンプルとの比較によって、発現が1/2に減少することを推定することが可能になった。「剥離手順」(PBST中で膜を5分間煮沸すること)によってMAPKAPK5抗体を除去した後のβ-アクチンの免疫検出によって30μgのサンプルの同等充填を証明する。一次抗体の1000倍の希釈率の対β-アクチンヤギポリクローナル抗体(Santa Cruz、Cat N°SC-1615)及び二次抗体の50000倍の希釈率のウサギ抗ヤギ抗体を使用することを除いては、MAPKAPK5検出について記載した方法に従ってβ-アクチンの免疫検出を行う。この実験の結果を図4に示す。総合すると、生成したAd-siRNAウイルスの初代ヒトSFにおけるMAPKAPK5発現レベルを低下させる機能がこの実験によって実証された。
【０４４２】
(B)MAPKAPK5ノックダウンAd-siRNAはSF誘発MMP1発現を低下させる
「MMPアッセイ」におけるAd5-MAPKAPK5-v13_KDウイルスの効果を以下のように試験する。1日目に、完全滑膜成長培地(Cell Applications)において、SF(継代9から10)を細胞3000個毎ウェルの密度で96のウェルプレートに接種する。1日後、細胞を漸増量(3、6;9、12又は15μL)の以下のウイルス:Ad5-eGFP-v5_KD、Ad5-MAPKAPK5-v12_KD、Ad5-MAPKAPK5-v13_KD、Ad5-MMPl-v10_KDに感染させる。中性ウイルスAd5-Luc-v13_KDを添加することによってウイルス充填量を補正して、細胞上の最終ウイルス容量をすべてのウェルにおいて15μLとする。この補正は、観察される効果が、細胞に加えられるウイルス充填量に起因しないことを保証するものである。次いで、活性化工程の前に細胞を5日間インキュベートする。この工程は、すべてのウェルにおいて、成長培地を、25μLの「複合体トリガー」が補給された75μLのM199培地と取り換えることを含む。活性化工程の48時間後に、上清を回収し、実施例1に記載したようにMMP1 ELISAに接触させる。実験の結果を図5に示す。実験の質は、Ad-siRNAウイルス目標MMP1そのものの効果によって実証される。この正対照ウイルスは、SFによるMMP1発現を強固に低下させるのに対して、ルシフェラーゼの発現を標的とするように設計された負対照ウイルスは、MMP1発現のレベルに影響を与えない。MAPKAPK5標的(Ad5-MAPKAPK5-v12_KD及びAd5-MAPKAPK5-v13)を検証するのに使用される2種類のウイルスは、初代ヒトSFによる複合体トリガー誘発MMP1発現をも明確に低下させる。MAPKAPK5は、SFにおけるMMP1発現を調節することを示す貴重な薬物目標であることをこの実験から結論づけることができる。同様に、小分子化合物によるMAPKAPK5酵素活性の阻害は、「MMPアッセイ」における「複合体サイトカイン」誘発MMP1発現を低下させることが想定される。小分子化合物によるMAPKAPK5酵素活性の阻害は、RAに伴う関節の劣化を抑えることも想定される。
【０４４３】
(C)MAPKAPK5を阻害する化合物を試験するインビトロ「MMPアッセイ」
生化学アッセイ(即ち、無細胞で純化酵素を使用)におけるMAPKAPK5活性を阻害する化合物を以下のプロトコルに従って「MMPアッセイ」で試験する。
【０４４４】
化合物主原液(いずれも100%DMSO中10mMの濃度)を水(蒸留水、GIBCO、DNアーゼ及びRNアーゼフリー)で10倍に希釈して、10%DMSO中1mMの中間体処理原液を得る。この中間体処理原液を10%DMSOで3倍(又は10倍)にさらに希釈して、10%DMSO中それぞれ333μM(又は100μM)の濃度の中間体処理原液を得る。次いで、1mM並びに333μM(又は100μM)の中間体処理原液を1.1%DMSOで10倍にさらに希釈して、2%のDMSO中100μM及び33.3μM(又は10μM)の濃度の10×の処理原液を得る。次いで、この10×の処理原液を、1%FBSが補給されたM199培地で10倍に希釈して、10μM及び3.33μM(又は1μM)の化合物並びに0.2%のDMSOを含む最終の「1×化合物調製物」を得る。これらは、化合物を細胞に対して試験する最終条件である。並行して、10×の処理原液を「複合体トリガー」(即ち、実施例1に記載したように生成したTNF-α処理THP1細胞の上清)で10倍に希釈し、それを、1%FBSが補給されたM199で2倍に希釈して、「50%複合体トリガー調製物中1×の化合物」を生成する。
【０４４５】
1日目に、完全滑膜成長培地(Cell Applications)において、RASFを細胞3000個毎ウェルの密度で96のウェルプレート(平底の組織培養処理、Greiner)に接種する。5日目、以下のように化合物を培養細胞に添加する。培地を細胞から完全に除去し、1%FBS及び0.2%DMSOが補給されたM199培地において10μM又は3.33μM(又は1μM)の化合物を含む75μLの「1×の化合物調製物」と取り換える。化合物が平衡になり、細胞に侵入することを可能にする2時間のインキュベーション後、対応する化合物を対応する濃度で含むウェルにおける「1×の化合物調製物」の上のウェルに対して「50%複合体トリガー調製物中1×の化合物」の25μLを添加する。このように、8倍に希釈された複合体トリガーを究極的に細胞に加える。次いで、48時間のインキュベーションを行い、次いで20μlの細胞上清を上記のようにMMP1 ELISAで処理して、生データ(RLU(relative luminescence units):相対的発光単位)を送出する。以下の対照が実験に含まれる。細胞を複合体トリガーによって活性化するが、0.2%DMSO媒体のみを添加する(したがって化合物を添加しない)最大シグナル対照。この対照は、試験で達成され得るMMP1の最大レベルを示す。最小シグナル対照もこれらの実験に含められる。ここでは細胞をトリガーしない。次いで、5日目に、細胞の培地を、1%FBSが補給された100μlのM199培地と交換する。この対照は、RASFによって生成される基本的MMP1レベルを復帰させる。次いで、以下の式を用いて、化合物によって達成されたMMP1発現の阻害率を、ELISAによって復帰されたRLUデータに基づいて計算する。[[(最大MMP1レベル-最小MMP1レベル)-(濃度Yの化合物XのMMP1レベル-最小MMP1レベル)]/(最大MMP1レベル-最小MMP1レベル)]×100。
【０４４６】
化合物の毒性を以下のように評価する。1日目に、100μLの完全滑膜成長培地において、SFを96の白色の組織培養処理ウェルプレートに細胞3000個毎ウェルの密度で接種する。MMP1レベルを測定するために、本例では、化合物操作、細胞に対する化合物の添加並びに細胞の活性化をさらに上記のように行う。48時間のインキュベーション後に、培地をウェルから除去し、1%FBSが補給された50μLの新鮮なM199培地と取り換える。次いで、50μLの基質(Promega Celltiter Glow細胞成長可能キット)をウェルに添加する。10分間のインキュベーション後に、発光シグナルを測定する。最大対照ウェルと比較した場合における50%を超える発光シグナルの低下は、有意な毒性を反映すると考えられる。「MMPアッセイ」で試験された化合物では毒性は観察されない。
【０４４７】
様々な化合物の細胞浸透能力差等の要因が、インビトロ生化学アッセイと細胞MMPアッセイの化合物の活性の差に寄与し得ることを理解されたい。
【０４４８】
以下の表3及び表4の目的について、本明細書に記載されているアッセイ法を用いて測定できる各化合物のMMP1 EC50は、以下のように表される。
【表４】
2009538877.tif 000236
【表５】
2009538877.tif 000237
2009538877.tif 000238
2009538877.tif 000239
2009538877.tif 000240
【０４４９】
【表６】
2009538877.tif 000241
2009538877.tif 000242
【０４５０】
(実施例3:ヒトPBMCによるサイトカイン放出に対する化合物の影響を評価するためのアッセイ)
ヒト末梢血液単核細胞(peripheral blood mononuclear cells)(PBMC)を健康な協力者の血液から調製した「軟膜」から単離し、本質的にはBφyum(1984)の方法に従って単離する。手短に述べると、軟膜を1×PBS(Gibco)で1:1に希釈し、30mLを50mLのファルコン管の中の20mLのLymphoprep(商標)(Lucron Bioproducts)の上部に慎重に配置する。遠心分離(35分間、400g、18℃)後、単核細胞を白色の中間相から回収し、再懸濁及び遠心分離(10分間、200g)によって1×PBSで3回洗浄する。単離したPBMCを、10%の加熱不活性化FBS(Hyclone)が補給されたRPMI 1640(カタログ番号21875、Gibco)に最終的に再懸濁させる。
【０４５１】
アッセイでは、PBMCを96ウェルプレート(Nunc)に細胞2.5E6個/mLの密度で160μL接種する。試験化合物を最初にDMSO(Sigma)で順次希釈し、次いで1%の加熱非活性化FBSを含むM199培地(Gibco)で50倍に希釈する。化合物をアッセイプレートにてさらに1/10に希釈して、0.2%の最終DMSO濃度を得る。細胞を化合物とともに37℃、5%CO2で1時間にわたって前インキュベートする。次いで、20μLの容量で1μg/mLの最終濃度まで添加されるLPS(大腸菌(Escherichia coli)血清型026:B6、カタログ番号L2654、Sigma)で細胞を刺激し、細胞をさらに24時間培養する。プレートを遠心分離し、上清を回収し、ELISAにおける適切な希釈物の分析まで-80℃で保管する。
【０４５２】
上清におけるTNFαレベルを測定するために以下の384ウェル化学発光ELISAプロトコルが開発された。1×PBS(Gibco)で1μg/mLまで希釈される(40μL/ウェルの)抗TNFα捕獲抗体(カタログ番号551220、BD Pharmingen)を白色Lumitrac 600 384ウェルプレート(Greiner)にコートする。4℃で一晩インキュベートした後、プレートを1×PBS(10LのミリQ中80gのNaCl、2gのKCl(Sigma)、11.5gのNa2HPO4.7H2O及び2gのKH2PO4;pH7.4)で洗浄し、100μL/ウェルバッファーB(1%のBSAを含有する1×PBS(Sigma)、5%のショ糖(Sigma)及び0.05%のNaN3(Sigma))でブロックする。室温で4時間インキュベートした後、ブロッキングバッファーを除去し、プレートをPBST(0.05%のTween-20を含む1×PBS(Sigma))で1回洗浄する。次いで、40μLのサンプルをELISAプレートに移し、プレートを4℃でインキュベートする。翌日、プレートを3回(PBSTで2回、PBSで1回)洗浄し、最初にバッファーD(1%のBSAを含む1×PBS)で250ng/mlの濃度まで希釈された35μL/ウェルのビオチン化抗TNFα抗体(カタログ番号554511、BD Pharmingen)を添加する。室温で2時間インキュベートした後、プレートを上記のように洗浄し、バッファーDによるストレプトアビジン-HRP結合体(カタログ番号SNN2004、Biosource)の1/2000希釈物の35μL/ウェルを添加する。45分後、プレートを上記のように洗浄し、50μL/ウェルのBM化学発光ELISA基質POD(Roche)とともに5分間インキュベートする。積算時間が100ミリ秒のLuminoscan Ascent Luminometer(Labsystems)で読取りを行って、生データ(RLU(relative luminescence units):相対的発光単位)を送出する。以下の対照、即ち細胞をLPSによって活性化するが、0.2%DMSO媒体のみを添加する(したがって化合物を添加しない)最大シグナル対照が実験に含まれる。この対照は、試験で達成され得るTNFαの最大レベルを示す。最小シグナル対照もこれらの実験に含められる。ここでは細胞をトリガーしない。この対照は、PBMCによって生成される基本的TNFαレベルを復帰させる。次いで、以下の式を用いて、化合物によって達成されたTNFα放出の阻害率(percent inhibition)(PIN)を、ELISAによって復帰されたRLUデータに基づいて計算する。100-[((濃度Yの化合物XのTNFαレベル-最小TNFαレベル)/(最大TNFαレベル-最小TNFαレベル))×100]。化合物を8種の濃度(1/3順次希釈)で試験する場合には、各試験濃度において化合物について達成されたPINデータの平均値を曲線適合することによってEC50値を計算することができる。
【０４５３】
LPS刺激PBMC培養物によるIL1及びIL6の放出に対する化合物の効果を検定するために、上記と同じELISAプロトコルを用いて上清の適切な希釈物を測定することができる。IL1及びIL6 ELISAに対する対応対抗体(いずれもR&D Systems製)を以下のように使用することができる。抗IL1捕獲抗体(カタログ番号MAB601)を0.5μg/mLで使用し、ビオチン化抗IL1検出抗体(カタログ番号BAF201)を50ng/mLで使用し;抗IL6捕獲抗体(カタログ番号MAB206)を1μg/mLで使用し;ビオチン化抗IL6検出抗体(カタログ番号BAF206)を50ng/mLで使用する。
【０４５４】
以下の表5の目的について、本明細書に記載されているアッセイ法を用いて測定できる各化合物のPBMC EC50は、以下のように表される。
【表７】
2009538877.tif 000243
【０４５５】
【表８】
2009538877.tif 000244
2009538877.tif 000245
2009538877.tif 000246
【０４５６】
本発明は、また、炎症性疾患の治療又は予防方法であって、それを必要とする対象に対して、治療有効阻害薬のマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ活性化タンパク質キナーゼ5阻害量の式1の化合物を投与することを含む、前記方法に関する。
【０４５７】
本方法発明の別の態様は、異常なマトリックス金属プロテイナーゼ活性を特徴とする状態の治療又は予防方法であって、治療有効量の式1のマトリックス金属プロテイナーゼ阻害化合物を投与することを含む、前記方法に関する。
【０４５８】
本方法発明のさらなる態様は、細胞外マトリックスの分解を含む疾患から選択される状態の治療又は予防方法であって、治療上有効なマトリックス金属プロテイナーゼ阻害量の式1の化合物を投与することを含む、前記方法である。
【０４５９】
本方法発明のさらなる態様は、MMP1の異常細胞発現を含む疾患から選択される状態の治療又は予防方法であって、治療上有効なマトリックス金属プロテイナーゼ阻害量の式1の化合物を投与することを含む、前記方法である。
【０４６０】
本方法発明の特別な実施態様は、リウマチ様関節炎の治療又は予防方法であって、それを必要とする対象に対して、治療有効量の式1の化合物を投与することを含む、前記方法である。
【０４６１】
本発明は、また、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ活性化タンパク質キナーゼ5の阻害薬の投与によって予防、改善又は解消される状態、異常なコラゲナーゼ活性を特徴とする状態、或いは炎症を含む疾患から選択される状態の治療又は予防、最も好ましくはリウマチ様関節炎の治療のための医薬品の製造における本発明の化合物の使用に関する。
【０４６２】
対象患者に対する本発明の化合物の投与は、自己投与及び別の人による投与の双方を含む。患者は、既存の疾患又は医学的状態に対する治療を必要としていてもよいし、骨代謝における障害に影響される疾患及び医学的状態のリスクを防止又は軽減するための予防的治療を望んでいてもよい。本発明の化合物を経口により、経皮により、吸入により、注射により、鼻により、直腸により、又は持続放出製剤を介して対象患者に送達することができる。
【０４６３】
本発明の方法の好ましい投薬は、炎症を特徴とする疾患状態にかかっている対象に対して、有効なマトリックス金属プロテアーゼ阻害量の本発明の化合物を、患者における異常レベルの細胞外マトリックス分解を軽減する、好ましくは前記分解に関与する自己永久プロセスを終了させるのに十分な時間にわたって投与することを含む。該方法の特別な実施態様は、有効なマトリックス金属プロテアーゼ阻害量の本発明の化合物を、リウマチ様関節炎が発生している、又は発生しやすい対象患者に対して、前記患者における関節のコラーゲン及び骨分解をそれぞれ軽減又は予防する、好ましくは前記分解に関与する自己永久プロセスを終わらせるのに十分な時間にわたって投与することを含む。
【０４６４】
当該化合物の毒性及び治療効果を、例えば、LD50(集団の50%に対して致死的な投与量)及びED50(集団の50%において治療有効な投与量)を測定するための細胞培養物又は実験動物における標準的な医薬手順によって測定することができる。毒性効果と治療効果の投与量比は、治療指数であり、それをLD50/ED50比として表すことができる。大きな治療指数を示す化合物が好ましい。毒性の副作用を示す化合物を使用してもよいが、非感染細胞の潜在的な損傷を最小限にすることによって、副作用を軽減するために、当該化合物を患部に誘導する送達系の設計に注意を払う必要がある。
【０４６５】
ヒトにおける使用に対する投与量の範囲を処方する上で細胞培養アッセイ及び動物試験から得られたデータを利用することができる。当該化合物の投与量は、好ましくは、ほとんど又はまったく毒性のないED50を含む循環濃度の範囲内である。投与量は、採用される剤形及び利用される投与経路に応じて、この範囲内で異なっていてもよい。本発明の方法に使用される任意の化合物について、治療有効投与量を細胞培養アッセイから最初に推定することができる。投与量を動物モデルにおいて処方して、細胞培養で測定されるIC50(即ち、症状の最大半減阻害を達成する試験化合物の濃度)を含む循環血漿濃度範囲を達成することができる。当該情報を利用して、ヒトにおける有用な投与量をより正確に決定することができる。例えば、高速液体クロマトグラフィーによって、血漿におけるレベルを測定することができる。
【０４６６】
対象患者に投与するための本発明の化合物の好ましい治療有効量は、1日当たり1回から3回投与される約0.1mg/kgから約10mg/kgである。例えば、本発明の方法の効果的な投薬は、本発明の前記化合物の約5mgから約1000mgを1日当たり1回から3回投与してもよい。しかし、特定の対象患者に対する具体的な投与量は、年齢、体重、全体的な健康状態、性別、食事、投与時間、投与経路、分泌速度、薬物の組合せ及び特定の炎症状態の重度を含む様々な要因に依存することが理解されるであろう。これらの要因の検討は、状態の進行を防止、抑制又は抑止するのに必要な治療有効投与量又は予防有効投与量を決定することを目的とする通常の熟練度の臨床家の裁量内に十分におさまる。
【０４６７】
本発明の化合物を投与に好適な医薬組成物に組み込むことができる。当該組成物は、典型的には、少なくとも1つの本発明の化合物及び少なくとも1つの医薬として許容し得る担体を含む。本明細書に用いられているように、「医薬として許容し得る担体」という言葉は、医薬投与に適合するラクトース、ステアリン酸マグネシウム、石膏、ショ糖、タルク、ステアリン酸、ゼラチン、寒天、ペクチン又はアカシア等の固体担体;植物油、落花生油及び無菌水等の液体、任意の溶媒及びあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤等を含むことを意図する。医薬として許容し得る担体のこの列挙は、限定的なものと見なされるべきではない。医薬として活性な物質の当該媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野で良く知られている。従来の媒体又は薬剤が活性化合物と不適合である場合を除いて、該組成物におけるそれらの使用が考えられる。補足的な活性化合物を該組成物に組み込むこともできる。
【０４６８】
本発明の医薬組成物は、その目的とする投与経路と適合するように処方される。投与経路の例としては、非経口投与、例えば、静脈内投与、皮内投与、皮下投与、経口投与(例えば吸入)、経皮投与(例えば局部)、経粘膜投与及び直腸投与が挙げられる。非経口投与、皮内投与又は皮下投与に使用される液剤又は懸濁剤は、以下の成分:注射用水、食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒等の無菌希釈剤;ベンジルアルコール又はメチルパラベン等の抗菌剤;アスコルビン酸又は重亜硫酸ナトリウム等の酸化防止剤;エチレンジアミンテトラ酢酸等のキレート化剤;酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩等の緩衝剤、及び塩化ナトリウム又はブドウ糖等の浸透圧調整剤を含むことができる。pHを塩酸又は水酸化ナトリウム等の酸又は塩基で調整することができる。非経口製剤をガラス製又はプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ又は多投与バイアルに封入することができる。
【０４６９】
注射可能用途に好適な医薬組成物としては、無菌水溶液(水溶性の場合)又は分散液及び無菌注射可能溶液又は分散液の即時調製用無菌粉末が挙げられる。静脈内投与では、好適な担体としては、生理食塩水、静菌水、Cremophor ELTM(BASF、NJ(ニュージャージ)州Parsippany)又はリン酸緩衝食塩水(phosphate buffered saline)(PBS)が挙げられる。いずれの場合も、該組成物は、無菌でなければならず、シリンジ注入が容易になる程度の流動性を有する必要がある。製造及び保管条件下で安定していなければならず、細菌及び真菌等の微生物の汚染作用から保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコール等)及びそれらの好適な混合物を含む溶媒又は分散媒体であり得る。例えば、レシチン等のコーティングを使用することによって、分散液の場合は必要な粒径を維持することによって、及び界面活性剤を使用することによって適正な流動性を維持することができる。微生物の作用の防止を様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸及びチメロサール等によって達成することができる。多くの場合において、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトール等のポリアルコール、塩化ナトリウムを組成物に含めることが好ましい。吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物に含めることによって注射可能組成物の吸収を遅延させることができる。
【０４７０】
適切な溶媒に含めた必要量の活性化合物(例えば、本発明の一実施態様による化合物)を必要に応じて以上に列挙した成分の1つ又は組合せと混合した後に濾過滅菌を行うことによって無菌注射可能溶液を調製することができる。一般に、分散液は、基本的な分散媒体及び以上に列挙した成分のうちの必要な他の成分を含む無菌媒体に活性化合物を組み込むことによって調製される。無菌注射可能溶液を調製するための無菌粉末の場合は、好ましい調製方法は、活性成分及びその既に無菌濾過した溶液からの任意のさらなる所望の成分の粉末を生成する真空乾燥及び凍結乾燥である。
【０４７１】
経口組成物は、一般には、不活性希釈剤又は可食性担体を含む。それらをゼラチンカプセルに封入するか、圧縮して錠剤にすることができる。経口治療薬投与を目的として、活性化合物を賦形剤と混合し、錠剤、トローチ剤又はカプセル剤の形で使用することができる。洗口液として使用するための流動性担体を使用して、経口組成物を調製することも可能であり、その場合は、流動性担体における化合物を口に含み、濯いで、喀出又は嚥下する。
【０４７２】
医薬として適合し得る結着剤及び/又は補助物質を組成物の一部として含めることができる。錠剤、丸剤、カプセル剤及びトローチ剤等は、以下の成分又は同様の性質の化合物のいずれかを含有することができる。微結晶セルロース、ゴムトラガカント又はゼラチン等の結合剤;デンプン又はラクトース等の賦形剤、アルギン酸、プリモゲル又はトウモロコシデンプン等の崩壊剤;ステアリン酸マグネシウム又はステロート等の潤滑剤;コロイド二酸化ケイ素等の滑剤;ショ糖又はサッカリン等の甘味料;或いはペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジ香料等の香料。
【０４７３】
吸入による投与では、好適な推進剤、例えば、化合物を二酸化炭素等の気体を含む加圧容器若しくは分配器、又は噴霧器からのエアロゾル噴霧剤の形で送達する。
【０４７４】
全身投与を経粘膜又は経皮手段によって行うこともできる。経粘膜又は経皮投与では、浸透すべき隔壁に対して好適な浸透剤を製剤に使用する。当該浸透剤は、当該技術分野で広く知られており、例えば、経粘膜投与用浸透剤、洗浄剤、胆汁酸塩及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与を鼻噴霧剤又は坐薬の使用を通じて行うことができる。経皮投与では、活性化合物を当該技術分野で広く知られている軟膏剤(ointment)、軟膏剤(salves)、ゲル剤又はクリーム剤に処方する。
【０４７５】
化合物を(例えば、ココアバター及び他のグリセリド等の従来の坐薬基剤を有する)坐薬又は直腸送達用固定浣腸の形で調製することもできる。
【０４７６】
一実施態様において、移植体及びマイクロカプセル化送達系を含む制御放出製剤のような、身体から急速に除去されないように化合物を保護する担体とともに活性化合物を調製する。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸等の生分解性の生体適合性ポリマーを使用することができる。当該製剤を調製するための方法は、当業者にとって明らかであろう。それらの材料をAlza Corporation及びNova Pharmaceuticals,Inc.から商業的に得ることもできる。リポソーム懸濁物(ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体とともに感染細胞に誘導されるリポソームを含む)を医薬として許容し得る担体として使用することもできる。これらを当業者に知られている方法に従って調製することができる。
【０４７７】
投与の容易さ及び投与量の均一性に対応する単位剤形で経口又は非経口組成物を処方することが特に有利である。単位剤形は、本明細書に用いられているように、治療される対象に対する単一投与物として適した物理的に不連続な単位であって、各単位は、必要な医薬担体とともに所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性化合物を含む単位を指す。本発明の単位剤形の仕様は、活性化合物の独自の特性及び達成される特定の治療効果、並びに個体の治療のために当該活性化合物を構成する技術における固有の制限によって決定され、且つそれらにそのまま依存する。
【０４７８】
医薬組成物を投与説明書とともに容器、パック又は分配器に含めることができる。
【０４７９】
本発明の一実施態様による化合物を塩、好ましくは式Iの化合物の医薬として許容し得る塩として提供することができる。これらの化合物の医薬として許容し得る塩の例としては、それぞれメタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、塩酸塩及び硫酸塩等を与える酢酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、シュウ酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、安息香酸、サリチル酸、フェニル酢酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸及びp-トルエンスルホン酸等の有機酸、塩酸及び硫酸等の鉱酸から誘導される塩、或いは有機塩基及び無機塩基等の塩基から誘導される塩が挙げられる。本発明の化合物の塩を形成するための好適な無機塩基の例としては、アンモニア、リチウム、ナトリウム、カルシウム、カリウム、アルミニウム、鉄、マグネシウム及び亜鉛等の水酸化物、炭酸塩及び重炭酸塩が挙げられる。塩は好適な有機塩基で形成することもできる。本発明の化合物による医薬として許容し得る塩基付加塩の形成に好適な当該塩基としては、無毒性であり、塩を形成するのに十分に強い有機塩基が挙げられる。当該有機塩基は、当該技術分野で既に良く知られており、アルギニン及びリシン等のアミノ酸、モノ、ジ及びトリエタノールアミン等のモノ、ジ又はトリヒドロキシアルキルアミン、コリン、メチルアミン、ジメチルアミン及びトリメチルアミン等のモノ、ジ及びトリアルキルアミン、グアニジン;N-メチルグルコサミン;N-メチルピペラジン;モルホリン;エチレンジアミン;N-ベンジルフェネチルアミン;及びトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン等を含むことができる。
【０４８０】
本発明の一実施態様による化合物の塩を、当該技術分野で良く知られている方法を用いて、従来の様式で調製することができる。本発明の第1又は第2の態様による遊離塩基化合物を水溶液又は水性アルコール溶液、或いは必要な酸を含有する他の好適な溶媒に溶解させることによって、前記塩基化合物の酸付加塩を調製することができる。本発明の化合物が酸官能基を含む場合には、前記化合物と好適な塩基を反応させることによって前記化合物の塩基塩を調製することができる。酸又は塩基をそのまま分離することもできるし、例えば蒸発によって溶液を濃縮することによって得ることもできる。本発明の化合物は、溶媒和物又は水和物の形で存在することもできる。
【０４８１】
以上の記載は、本質的に例示的で説明を目的としており、本発明及びその好ましい実施態様を例証することを意図することを当業者なら理解するであろう。慣例の実験を通じて、当業者は、本発明の主旨から逸脱することなく加えることができる明らかな修正及び変更を認識するであろう。したがって、本発明は、以上の記載によってではなく、添付の請求項及びそれらの同等物によって規定されることを意図する。
【０４８２】
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【０４８３】
以上の記載から、本発明の組成物及び方法における様々な修正及び変更を当業者なら理解するであろう。添付の請求項の範囲内のすべての当該修正は、そこに含まれることを意図する。
【０４８４】
各種の化合物の細胞浸透能力の差などの要因は、インビトロ生化学アッセイと細胞アッセイにおける化合物の活性の差に寄与し得ることを理解されたい。
【０４８５】
本明細書に引用されている特許及び特許出願を含むが、それらに限定されないあらゆる文献は、それぞれの文献が、完全に記載されているかのように参照により本明細書に組み込まれていることを具体的且つ個別的に示すように参照により本明細書に組み込まれている。
【０４８６】
本出願に示される本発明の化合物の化学名は、MDLのISIS Draw Autonom Softwareツールを使用して導かれたものであり、検証されていない。矛盾がある場合は、図示した構造を優先させるのが好ましい。
【図１】
2009538877.tif 000271
【図２】
2009538877.tif 000272
【図３】
2009538877.tif 000273
【図４】
2009538877.tif 000274
【図５】
2009538877.tif 000275
【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成21年3月17日(2009.3.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
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