(57)【要約】  封入されたクロモニックナノ粒子を作成する方法は、架橋されたクロモニックナノ粒子を、炭酸、リン酸、乳酸、クエン酸、ホウ酸、硫酸、及びそれらの混合物からなる群より選択される酸に対し、水の存在下に暴露して、架橋されたナノ粒子を、クロモニック材料、多価カチオン類、及び酸アニオン類を含む複合体を含むシェル中に封入することを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
封入されたクロモニックナノ粒子を作成する方法であって、
（ａ）（ｉ）連続した水溶性ポリマー相と、（ｉｉ）クロモニック材料を含んでいる不連続なクロモニック相、とを含んでいる水性混合物を調製して、クロモニックナノ粒子を形成すること；
（ｂ）結果として生じる前記クロモニックナノ粒子を、多価カチオン塩を用いて非共有結合的に架橋すること；及び、
（ｃ）結果として生じる架橋クロモニックナノ粒子を、炭酸、リン酸、乳酸、クエン酸、ホウ酸、硫酸、及びそれらの混合物からなる群から選択される酸に対し、水の存在下に暴露して、前記架橋クロモニックナノ粒子を、クロモニック材料、多価カチオン類、及び酸アニオン類を含んでいる複合体を含んでいるシェル中に封入することであって、前記酸が前記架橋クロモニックナノ粒子を実質的に溶解しない量で存在すること、を含んでいる方法。
【請求項２】
前記酸が、約２５重量パーセントを超えない前記架橋クロモニックナノ粒子が２時間の間に溶解するような量で存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記酸が、約１０重量パーセントを超えない前記架橋クロモニックナノ粒子が２時間の間に溶解するような量で存在する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
結果として生じる前記架橋クロモニックナノ粒子が、炭酸に対し暴露される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
結果として生じる前記架橋クロモニックナノ粒子が、リン酸に対し暴露される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
１Ｎリン酸：水の重量比が、約１：１０と約１：３００の間である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
１Ｎリン酸：水の重量比が、約１：２５と約１：１００の間である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
結果として生じる前記架橋クロモニックナノ粒子が、水溶液中にある、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
結果として生じる前記架橋クロモニックナノ粒子を含んでいる水溶液が、二酸化炭素に対し暴露される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記不連続なクロモニック相が、さらにゲスト化合物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記ゲスト化合物が、生物活性化合物である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ゲスト化合物が、薬物、除草剤、殺虫剤、フェロモン、及び抗菌剤からなる群より選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ゲスト化合物が薬物である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
結果として生じる前記架橋クロモニックナノ粒子を、クロモニック材料を含んでいる組成物中に分散して、クロモニックナノ粒子分散物を形成すること；及び、（ｉ）前記クロモニックナノ粒子分散物を含んでいる第２の不連続なクロモニック相と、（ｉｉ）第２の連続した水溶性ポリマー相、とを含んでいる、第２の水性混合物を調製することであって、前記ナノ粒子を酸に対し暴露して前記ナノ粒子を複合体を含んでいる前記シェル中に封入するに先立ち、前記クロモニックナノ粒子を第１のシェル中に封入すること、をさらに含んでいる、請求項１に記載方法。
【請求項１５】
前記第２の不連続なクロモニック相が、さらにゲスト化合物を含んでいる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
複合体を含んでいるシェル中に封入された、結果として生じる前記クロモニックナノ粒子を、クロモニック材料を含んでいる組成物中に分散して、クロモニックナノ粒子分散物を形成すること、及び、（ｉ）前記クロモニックナノ粒子分散物を含んでいる第２の不連続なクロモニック相と、（ｉｉ）第２の連続した水溶性ポリマー相、とを含んでいる、第２の水性混合物を調製すること、をさらに含んでいる、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記第２の不連続なクロモニック相が、さらにゲスト化合物を含んでいる、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記多価カチオン塩の前記多価カチオンが、Ｂａ２＋、Ｃａ２＋、Ｆｅ２＋、Ｆｅ３＋、Ｚｎ２＋、Ｍｇ２＋、及びＡｌ３＋からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記水溶性ポリマーが、ビニルアルコールポリマー類、アスパラギン酸ポリマー類、アクリル酸ポリマー類、メタクリル酸ポリマー類、アクリルアミドポリマー類、ビニルピロリドンポリマー類、ポリ（アルキレンオキシド）類、ビニルメチルエーテルポリマー類、スルホン化ポリエステル、複合炭水化物、グアーガム、アラビアガム、トラガカントガム、カラマツガム、インドガム、ローカストビーンガム、寒天、アルギナート、カラギーナン、ペクチン、セルロース及びセルロース誘導体、デンプン及び修飾デンプン、及びそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記クロモニック材料が、以下の一般式の１つ以上：
【化１】
2009522412.tif 000008
［式中、
各Ｒ２は、電子供与基、電子求引基、及び電子中性基からなる群から独立に選択され、
Ｒ３は、置換及び非置換のヘテロ芳香環、及び置換及び非置換のヘテロ環式環からなる群から選択され、前記環は、Ｒ３の環内の窒素原子を介してトリアジンに結合されている］
及び、それらの両性イオン類、プロトン互変異性体類、及び塩類から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記クロモニック材料が、以下の一般式：
【化２】
2009522412.tif 000009
［式中、Ｘ−は対イオンである］の１つ以上から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記水性混合物が、さらに貴金属塩を含んでいる、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記貴金属塩を還元して、前記架橋クロモニックナノ粒子中に含有された元素状の貴金属ナノ粒子の懸濁物を生成することをさらに含んでいる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
封入されたクロモニック粒子を作成する方法であって、
（ａ）クロモニック材料を含んでいる水性混合物を調製すること；
（ｂ）クロモニック材料を含んでいる前記水性混合物を、多価カチオン塩に対し暴露して、架橋されたクロモニック粒子を形成すること；及び、
（ｃ）結果として生じた架橋クロモニック粒子を、炭酸、リン酸、乳酸、クエン酸、ホウ酸、硫酸、及びそれらの混合物からなる群から選択される酸に対し、水の存在下に暴露して、前記架橋粒子を、クロモニック材料、多価カチオン類、及び酸アニオン類を含んでいる複合体を含んでいるシェル中に封入することであって、前記酸が、前記架橋クロモニック粒子を実質的に溶解しない量で存在すること、を含んでいる方法。
【請求項２５】
前記酸が、約２５重量パーセントを超えない前記架橋クロモニック粒子が２時間の間に溶解するような量で存在する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記酸が、約１０重量パーセントを超えない前記架橋クロモニックナノ粒子が２時間の間に溶解するような量で存在する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
結果として生じる前記架橋クロモニック粒子が、炭酸に対し暴露される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
結果として生じる前記架橋クロモニック粒子が、リン酸に対し暴露される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
前記水性混合物が、さらにゲスト化合物を含んでいる、請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
封入されたクロモニック粒子であって、クロモニック材料、多価カチオン類、及び、ＨＣＯ３−、ＰＯ４３−、ＣＨ３ＣＨＯＨＣＯＯ−、Ｃ３Ｈ５Ｏ（ＣＯＯ）３３−、ＢＯ３３−、ＳＯ４２−、及びそれらの混合物からなる群から選択される酸アニオン類を含んでいる複合体を含んでいるシェル中に封入されたクロモニック粒子を含んでなる粒子。
【請求項３１】
前記クロモニック粒子がナノ粒子である、請求項３０に記載の封入されたクロモニック粒子。
【請求項３２】
前記酸アニオンがＨＣＯ３−である、請求項３０に記載の封入されたクロモニック粒子。
【請求項３３】
前記酸アニオンがＰＯ４３−である、請求項３０に記載の封入されたクロモニック粒子。
【請求項３４】
前記クロモニックナノ粒子がゲスト化合物を含有する、請求項３０に記載の封入されたクロモニック粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば制御放出に有用である、封入されたクロモニック粒子に関しており、別の観点においては、封入されたクロモニック粒子を作成する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
物質又は材料の封入及び制御放出は、多くの方法により達成されてよい。典型的には、ポリマーコーティングが、物質を包囲するか、又は物質との混合物を形成するべく使用されてよい。別の共通したアプローチは、物質の放出を可能にする開口部又は膜を有する巨視的構造を用いる。封入及び制御放出は、幅広い実用性があるが、制御放出性薬物送達の分野では特に有用である。
【０００３】
ＰＣＴ国際公開ＷＯ２００５／０１２４８８は、ゲスト分子（例えば薬物）をクロモニックマトリックス中に封入して、その後に放出され得るようにすることを記述している。クロモニックマトリックスは、ある環境条件から薬物を保護し、次に別の環境条件下では該薬物を可制御性に送達することが可能である。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
簡潔には、本発明は、封入されたクロモニックナノ粒子を作成する方法を提供する。この方法は、（ａ）（ｉ）連続した水溶性ポリマー相と、（ｉｉ）クロモニック材料を含む不連続なクロモニック相、とを含む水性混合物を調製して、クロモニックナノ粒子を形成すること；（ｂ）結果として生じるクロモニックナノ粒子を、多価カチオン塩を用いて非共有結合的に架橋すること；及び、（ｃ）結果として生じる架橋クロモニックナノ粒子を、炭酸、リン酸、乳酸、クエン酸、ホウ酸、硫酸、及びそれらの混合物からなる群から選択される酸に対し、水の存在下に暴露すること、を含む。それゆえ該架橋クロモニックナノ粒子は、クロモニック材料、多価カチオン類、及び酸アニオン類を含む複合体を含むシェル中に封入される。
【０００５】
本明細書で使用するとき、「ナノ粒子」とは、約１，０００ナノメートル未満の粒子を指す。
【０００６】
本明細書で使用するとき、「クロモニック材料」（又は「クロモニック化合物」）は、典型的には、種々の親水基に囲まれた疎水性コアの存在によって特徴づけられる、大型の多環分子を指す（例えば、「モレキュラー・クリスタルズ・リキド・クリスタルズ（Molec. Crystals Liq. Crystals）」１９８４年、第１０８巻、ｐ．３４９所収のアットウッド及びライドン（Attwood, T.K. & Lydon, J.E.）の論文を参照）。疎水性コアは、芳香及び／又は非芳香環を含有することが可能である。溶液中にある場合、これらのクロモニック材料は、ロングレンジオーダーにより特徴づけられるネマチック秩序化状態へ凝集する傾向がある。
【０００７】
本明細書で使用するとき、「分散物」とは、液体連続相内に分布又は懸濁され、例えば数分間、数時間、又は数日間といった、有用な期間にわたって分離しない、固形クロモニックナノ粒子を意味する。
【０００８】
別の観点においては、本発明は、封入されたクロモニックマクロ寸法粒子の作成法を提供する。この方法は、（ａ）クロモニック材料を含む水性混合物を調製すること；（ｂ）クロモニックナノ粒子を含む該水性混合物を、多価カチオン塩に対し暴露して、架橋されたクロモニック粒子を形成すること；及び（ｃ）結果として生じる架橋クロモニック粒子を、炭酸、リン酸、乳酸、クエン酸、ホウ酸、硫酸、及びそれらの混合物からなる群から選択される酸に対し、水の存在下に暴露すること、を含む。それゆえ架橋クロモニック粒子は、クロモニック材料、多価カチオン類、及び酸アニオン類を含むシェル中に封入される。
【０００９】
さらに別の観点においては、本発明は、クロモニック材料、多価カチオン類、並びに、ＨＣＯ３−、ＰＯ４３−、ＣＨ３ＣＨＯＨＣＯＯ−、Ｃ３Ｈ５Ｏ（ＣＯＯ）３３−、ＢＯ３３−、及びＳＯ４２−からなる群から選択される酸アニオン類を含む複合体を含むシェル中に封入されるクロモニック粒子を提供する。
【００１０】
本発明の封入された粒子は、多くの用途において有用である。それらは、ゲスト化合物（例えば薬物）の封入及び制御放出のために特に有用であることが可能である。例えば、薬物は、クロモニックナノ粒子中に封入されることが可能である。このクロモニックス（Chromonics）は、ある環境条件から薬物を保護し、次に別の環境条件下では該薬物を可制御性に送達することが可能である。該シェルは、クロモニック材料、多価カチオン類、及び、ＨＣＯ３−、ＰＯ４３−、ＣＨ３ＣＨＯＨＣＯＯ−、Ｃ３Ｈ５Ｏ（ＣＯＯ）３３−、ＢＯ３３−、及びＳＯ４２−からなる群から選択される酸アニオン類を含む複合体を含む（「複合シェル」）が、しかしながら、クロモニックス単独に比較して、ある環境条件からの保護の増大を提供することが可能である。
【００１１】
クロモニック材料からなる１以上のシェル層中に封入された、クロモニックナノ粒子を含む多層クロモニック構造は、当該技術分野において公知である（例えば、２００５年１２月１９日出願の、米国特許出願第１１／２７５２０２号を参照）。薬物は、クロモニックナノ粒子中、及び／又は、該ナノ粒子を封入する１以上のクロモニックシェル層中に封入されることが可能である。本発明により提供された複合シェルは、１以上のクロモニックシェル層と組合せて使用可能である（例えば、複合シェルは最も内側のシェル層か、中間のシェル層か、最も外側のシェル層か、又はそれらの任意の組合せであることも可能である）。それゆえ、本発明により提供された複合シェル層は、薬物の制御放出のための可撓性の増大を提供する。
【００１２】
例えば、即時的及び持続的な薬物放出の組合せが所望される場合（例えば、投薬が、放出の最初のバーストを提供して、特定の症状を迅速に緩和し、それに続く持続的な送達が、症状の延長された治療を提供する例において）、外側のクロモニックシェル層は、迅速な放出を提供するべく、また内側の複合シェル層は、徐放性の送達を提供するべく製剤されることが可能である。
【００１３】
複合シェル層はまた、クロモニックナノ粒子における封入及びクロモニックシェル層における封入によって提供される保護に比較して、環境条件からの保護の増大を提供することが可能である。例えば、複合シェル層は、酸性条件において、クロモニックシェル層よりも長期にわたって、安定して残留することが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
任意のクロモニック材料が、本発明の方法及び構造において有用であることが可能である。クロモニック相を形成する化合物は、当該技術分野において公知であり、例えば、キサントース（Xanthose）（例えばアゾ色素及びシアニン色素）、及びペリレンを包含する（例えば、「ラングミュア（Langmure）」２０００年、第１６巻、ｐ．５４０９所収のカワサキ（Kawasaki）らの論文、又は、「ジャーナル・オブ・コロイド・アンド・インターフェース・サイエンス（J. colloid and Interface Science）」２００４年、第８巻、ｐ．４８０所収のライドン（Lydon）の論文を参照）。有用なクロモニック材料の代表的な実例は、ジ−及びモノ−パラジウムオルガニル類、スルファモイル置換銅フタロシアニン類、及びヘキサアリールトリフェニレンを包含する。
【００１５】
好ましいクロモニック材料は、以下の一般式：
【００１６】
【化１】
2009522412.tif 000002
【００１７】
［式中、
各Ｒ２は、電子供与基、電子求引基、及び電子中性基からなる群から独立して選択され、
Ｒ３は、置換及び非置換のヘテロ芳香環、及び置換及び非置換のヘテロ環式環からなる群から選択され、該環は、Ｒ３の環内の窒素原子を介してトリアジン基に結合されている］の１つ以上から選択されるものを含む。
【００１８】
上述したように、クロモニック化合物は中性であるが、両性イオン又はプロトン互変異性体などの代替の形状で存在することが可能である（例えば、水素原子がカルボキシル基の１つから解離されて、トリアジン環の窒素原子の１つと結合する場合）。クロモニック化合物はまた、例えば炭酸塩などの、塩であることが可能である。
【００１９】
上記の一般構造は、カルボキシル基が、化合物のトリアジン骨格へのアミノ結合についてパラである配向（式Ｉ）、及び、カルボキシル基がトリアジン骨格へのアミノ結合についてメタである配向（式ＩＩ）を示す。カルボキシル基はまた、パラ及びメタ配向の組合せであることも可能である（図示されず）。好ましくは、配位はパラである。
【００２０】
好ましくは、各Ｒ２は、水素か、又は、置換又は非置換のアルキル基である。さらに好ましくは、Ｒ２は、水素、非置換アルキル基、ヒドロキシ又はハロゲン官能基で置換されたアルキル基、及び、エーテル、エステル、又はスルホニルを含むアルキル基からなる群から独立して選択される。最も好ましくは、Ｒ２は水素である。
【００２１】
Ｒ３は、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、イミダゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール、ピラゾール、トリアゾール、トリアジン、キノリン、及びイソキノリンから誘導される、ヘテロ芳香環であることが可能であるが、これに限定されない。好ましくは、Ｒ３は、ピリジン又はイミダゾールから誘導されるヘテロ芳香環を含む。ヘテロ芳香環Ｒ３のための置換基は、置換又は非置換のアルキル、カルボキシ、アミノ、アルコキシ、チオ、シアノ、アミド、スルホニル、ヒドロキシ、ハロゲン、ペルフルオロアルキル、アリール、エーテル、及びエステル基からなる群より選択されることが可能である。好ましくは、Ｒ３のための置換基は、アルキル、スルホニル、カルボキシ、ハロゲン、ペルフルオロアルキル、アリール、エーテル、及び、ヒドロキシ、スルホニル、カルボキシ、ハロゲン、ペルフルオロアルキル、アリール、又はエーテルで置換されたアルキル基、からなる群から選択される。Ｒ３が置換ピリジンである場合、置換基は、好ましくは４−位に局在される。Ｒ３が置換イミダゾールである場合、置換基は、好ましくは３−位に局在される。
【００２２】
Ｒ３の代表的な実例としては、以下に示す、４−（ジメチルアミノ）ピリジニウム−１−イル、３−メチルイミダゾリウム−１−イル、４−（ピロリジン−１−イル）ピリジニウム−１−イル、４−イソプロピルピリジニウム−１−イル、４−［（２−ヒドロキシエチル）メチルアミノ］ピリジニウム−１−イル、４−（３−ヒドロキシプロピル）ピリジニウム−１−イル、４−メチルピリジニウム−１−イル、キノリニウム−１−イル、４−ｔｅｒｔ−ブチルピリジニウム−１−イル、及び４−（２−スルホエチル）ピリジニウム−１−イルが挙げられる。
【００２３】
【化２】
2009522412.tif 000003
【００２４】
Ｒ３はまた、以下の一般構造：
【００２５】
【化３】
2009522412.tif 000004
【００２６】
［式中、Ｒ４は、水素か、又は、置換若しくは非置換のアルキル基である］に代表されることが可能である。さらに好ましくは、Ｒ４は、水素、非置換アルキル基、及び、ヒドロキシ、エーテル、エステル、スルホネート、又はハロゲン官能基で置換されたアルキル基、からなる群から選択される。最も好ましくは、Ｒ４は、プロピルスルホン酸、メチル、及びオレイルからなる群から選択される。
【００２７】
Ｒ３はまた、例えばモルホリン、ピロリジン、ピペリジン、及びピペラジンなどの、ヘテロ環式環から選択されることが可能である。
【００２８】
本発明の方法における使用のための好ましいクロモニック化合物は、以下の化学式：
【００２９】
【化４】
2009522412.tif 000005
【００３０】
［式中、Ｘ−は対イオンである］の一つに代表されることが可能である。好ましくは、Ｘ−は、ＨＳＯ４−、Ｃｌ−、ＣＨ３ＣＯＯ−、及びＣＦ３ＣＯＯ−からなる群から選択される。
【００３１】
式ＩＩＩは、その両性イオンの形状にある化合物を描いている。それゆえイミダゾール窒素は、正電荷をもち、カルボキシ官能基の１つが負電荷をもつ（ＣＯＯ−）。
【００３２】
該化合物はまた、双方のカルボキシ官能基が負電荷をもち、正電荷が、トリアジン基の窒素の１つ及びイミダゾール基の窒素によって保持されるような、他の互変異性型として存在することが可能である。
【００３３】
米国特許第５，９４８，４８７号（ザホウアニ（Sahouani）ら）に記述されたように、式Ｉのトリアジン誘導体は、水溶液として調製可能である。上記の式Ｉに示されたトリアジン分子のための典型的な合成経路は、２段階のプロセスを含む。塩化シアヌルは、４−アミノ安息香酸で処理され、４−｛［４−（４−カルボキシアニリノ）−６−クロロ−１，３，５−トリアジン−２−イル］アミノ｝安息香酸を与える。この中間体は、置換又は非置換の窒素含有ヘテロ環で処理される。ヘテロ環の窒素原子は、トリアジンの塩素原子を置き換えて、対応する塩化物を形成する。上記の式ＩＩＩに示されたものなどの、両性イオン性誘導体は、該塩化物を水酸化アンモニウム中に溶解すること、及び、それをアニオン交換カラムに流下させて、塩化物を水酸化物で置き換えること、それに続く溶媒の除去、によって調製される。上記の式ＩＩに示されたものなどの、代替の構造は、４−アミノ安息香酸の代わりに３−アミノ安息香酸を使用することにより得られてもよい。
【００３４】
クロモニック材料は、水溶液（好ましくは、アルカリ性水溶液）中に溶解されると、クロモニック相又は集合体を形成することが可能である。クロモニック相又は集合体は、当該技術分野において周知であり（例えば、ジョン・ライドン（Johon Lydon）著、「液晶ハンドブック（Handbook of Liquid Crystals）、第２Ｂ巻、第ＸＶＩＩＩ章、クロモニックス」、１９９８年、ｐ．９８１〜１００７参照）、平坦な、多環芳香族分子の積層体からなる。該分子は、親水基によって囲まれた疎水性コアからなる。積層は、数多くのモルホジーを呈することが可能であるが、典型的には、層の積層体によって作られる円柱を形成する傾向により特徴づけられる。分子の規則的な積層体が形成され、それは濃度を増すにつれて成長する。
【００３５】
好ましくは、クロモニック材料は、１以上のｐＨ調整化合物、及び任意に界面活性剤の存在下に、水溶液中に置かれる。ｐＨ調整化合物の添加は、クロモニック材料が水溶液中でより可溶性になるようにする。好適なｐＨ調整化合物は、例えば、水酸化アンモニウム又は種々のアミン類といった、任意の公知の塩基を包含する。界面活性剤は、例えば、クロモニックナノ粒子のクロモニックマトリックス内への薬物の取込みを促進するべく、水溶液へ添加されることが可能である。本明細書で使用するとき、「クロモニックマトリックス」は、ネマチック秩序化状態へ凝集するクロモニック材料を指す。
【００３６】
好適な界面活性剤としては、イオン性及び非イオン性界面活性剤が挙げられる（好ましくは非イオン性）。任意の添加物、例えば粘度調整剤（例えばポリエチレングリコール）、及び／又は、結合剤（例えば低分子量加水分解デンプン類）もまた、添加可能である。
【００３７】
典型的には、クロモニック材料は、約４０℃より低い温度において（さらに典型的には、室温で）、水溶液中に溶解され、塩基の添加によりｐＨ６〜８に中和される。中和されたクロモニック材料は、次に、水溶性ポリマーの溶液と合されてよい。当業者は、しかしながら、結果として生じるナノ粒子の形状及び寸法が、温度を変えることによって、ある程度制御可能であることを認識するであろう。
【００３８】
クロモニック材料を含む水性組成物は、水溶性ポリマーを含む連続相と混合されて、水性混合物を形成することが可能である。
【００３９】
好ましくは、水溶性ポリマーは、約２０，０００未満の分子量を有する。有用な水溶性ポリマー類としては、例えば、ビニルアルコールポリマー類、アスパラギン酸ポリマー類、アクリル酸ポリマー類、メタクリル酸ポリマー類、アクリルアミドポリマー類、ビニルピロリドンポリマー類、ポリ（アルキレンオキシド）類、ビニルメチルエーテルポリマー類、スルホン化ポリエステル類、複合糖質、グアーガム、アラビアガム、トラガカントガム、カラマツガム、カラヤガム、ローカストビーンガム、寒天、アルギナート、カラギーナン、ペクチン類、セルロース及びセルロース誘導体、デンプン及び修飾デンプン、及びこれらの組合せが挙げられる。コポリマー類、例えばブロック又はランダムコポリマー類もまた、有用であることが可能である。好ましい水溶性ポリマー類としては、例えば、セルロース類、デンプン類（ホスホン化又はスルホン化デンプンなどの修飾デンプン類を含む）、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリ（エチレングリコール）−ｃｏ−（プロピレングリコール）、及びそれらの混合物を包含する。
【００４０】
特定の水溶性ポリマーが、ナノ粒子の形状に影響を及ぼすことがある。殆どの実例では、球形のナノ粒子が得られる。別の実施形態においては、アシキュラー（針様の）金属性ナノ粒子が、修飾デンプンの使用の結果として得られている。ナノ粒子の縦横比は、典型的には１：４から１：１０までの範囲であり、約３００ナノメートルから約１０ミクロンまでの一次元寸法を有する。さらに別の実施形態においては、偏球又はトロイダル形状が得られてもよい。
【００４１】
水性混合物中の各成分の相対濃度は、結果として生じるナノ粒子の所望の寸法と、意図する用途とに依存して変わるであろう。しかしながら、一般的にクロモニック材料は、クロモニック相が不連続でありかつ水溶性ポリマー相が連続的であるべく充分な量で水溶性ポリマーの溶液に添加される。水溶性ポリマー及びクロモニック材料の量は、一般的に、乾燥重量ベースで、その比が少なくとも約５：１であり及び約９９：１より小さく、好ましくは３：１から１５：１であるように選択される。一般的に水溶性ポリマーは、水性混合物の約１５重量パーセント〜約２５重量パーセントを構成する。一般に、クロモニック材料の濃度は、水性混合物の約０．２５重量パーセント〜約７重量パーセントである。
【００４２】
任意に、表面張力を増大させるか又はコーティングを促進する、界面活性剤及び他の添加物（例えば、エタノールなどの短鎖アルコール）が添加可能である。
【００４３】
水性混合物から形成されるクロモニックナノ粒子は、多価カチオン類により非共有結合的に架橋される。この架橋が、ナノ粒子を水に不溶性にする。非共有結合とは、架橋が永久的に形成された共有（又は化学）結合を含まないことを意味する。すなわち架橋は、新たな、より大きい分子をもたらす化学反応からの結果として生じるのではなく、むしろカチオン類とホスト分子との、静電及び／又は配位結合から結果として生じ、それは、化学反応を受けることなくそれらを一緒に保持するべく充分に強いものである。これらの相互作用は、典型的には本質においてイオン性であり、ホスト分子上の見掛けの負電荷と、多価カチオンの見掛けの正電荷との相互作用の結果として生じることが可能である。多価カチオンは少なくとも２つの正電荷をもつことから、２以上のクロモニック分子とイオン結合を、すなわち２以上のクロモニック分子間の架橋を、形成することが可能である。２価及び／又は３価のカチオン類が好ましい。大部分の多価カチオン類が２価であることは、さらに好ましい。好適なカチオン類としては、任意の２価又は３価のカチオン類が挙げられ、バリウム、カルシウム、マグネシウム、亜鉛、アルミニウム、及び鉄は特に好ましい。
【００４４】
一般に、クロモニック材料は、水溶性ポリマーの連続相と、クロモニック材料の非連続相とを含む分散物形成の後に架橋される。典型的には分散物は、過剰の多価カチオン塩の溶液へ添加される。
【００４５】
非共有結合的架橋に続き、ナノ粒子表面は、表面修飾剤により修飾されて、粒子をさらに親水性、疎水性、生体適合性、又は生理活性にすることが可能である。表面基は、その後凝集なく連続相中に分散されていることが可能な、表面修飾されたクロモニックナノ粒子を提供するべく充分な量で、粒子表面上に存在する。好ましくは表面基は、クロモニックナノ粒子の表面上に単層、好ましくは連続した単層を形成するべく充分な量で存在する。一般に、架橋クロモニックナノ粒子は、まず水溶性ポリマーの分散物から単離され、次いで表面修飾剤の溶液中に懸濁される。
【００４６】
表面修飾基は、表面修飾剤から誘導されてよい。概略的には、表面修飾剤は、式Ａ−Ｂ（式中、Ａ基はクロモニックナノ粒子の表面に付着することが可能であり、Ｂ基は適合化させる基であって、所望の親水性、疎水性、又は生体適合性を与える）によって表されることが可能である。適合化させる基は、粒子を、相対的により極性に、相対的に極性を低く、又は相対的に非極性にするべく選択可能である。
【００４７】
好適な表面修飾剤の種類としては、炭素、硫黄、及びリンの有機オキシ酸、例えばアルキルカルボキシレート、アルキルサルフェート、アルキルスルホネート、アルキルホスフェート及びアルキルホスホネート、グリコシドホスホネート、並びにこれらの組合せが挙げられる。商標名ツイーン（Tween）（商標）及びスパン（Span）（商標）で市販されている表面修飾剤もまた、有用であることが可能である。
【００４８】
カルボン酸官能性を有する極性表面修飾剤の代表的な実例としては、酸又は塩の形状にある、化学構造ＣＨ３Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＯＯＨ（ｎ＝２−５０）を有するポリ（エチレングリコール）モノカルボン酸、及び、化学構造ＣＨ３ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＯＯＨを有する２−（２−メトキシエトキシ）酢酸が挙げられる。
【００４９】
カルボン酸官能基を有する非極性表面修飾剤の代表的な実例としては、酸又は塩の形状にある、オクタン酸、ドデカン酸、及びオレイン酸が挙げられる。オレイン酸などの、オレフィン性不飽和を含有するカルボン酸の場合には、炭素−炭素二重結合は、Ｚ又はＥ立体異性体のいずれかとして、或いはそれらの混合物として存在してもよい。
【００５０】
好適なリン含有酸の実例としては、酸又は塩の形状にある、例えば、オクチルホスホン酸、デシルホスホン酸、ドデシルホスホン酸、オクタデシルホスホン酸、オレイルホスホン酸、及び、化学構造ＣＨ３Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＰＯ３Ｈ２（ｎ＝２−５０）を有するポリ（エチレングリコール）モノホスホン酸を含めたアルキルホスホン酸が挙げられる。オレイルホスホン酸などの、オレフィン性不飽和を含有するホスホン酸の場合には、炭素−炭素二重結合は、Ｚ又はＥ立体異性体のいずれかとして、或いはそれらの混合物として存在してもよい。
【００５１】
好適なリン含有酸の付加的な実例としては、例えば、オクチルホスフェート、ドデシルホスフェート、オレイルホスフェート、ジオレイルホスフェート、オレイルメチルホスフェート、及び、化学構造ＣＨ３Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＰＯ３Ｈ２（ｎ＝２−５０）を有するポリ（エチレングリコール）モノリン酸を含めた、リン酸のモノエステル及びジエステル、アルキルホスフェートが挙げられる。
【００５２】
いくつかの修飾においては、表面修飾剤Ａ−ＢのＢ基はまた、クロモニックナノ粒子の親水性、疎水性、又は生体適合性をさらに調整するべく、付加的な特定官能基を含有することが可能である。好適な官能基としては、ヒドロキシル、カルボニル、エステル、アミド、エーテル、アミノ、及び四級アンモニウム官能基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５３】
他の好適な表面修飾剤は、ポリマー性の界面活性剤である。
【００５４】
生体適合性が所望される場合には、クロモニックナノ粒子は、グリコシドホスホネート、例えば、ホスホン酸のグルコシド、マンノシド、及びガラクトシドにより、表面修飾されてもよい。
【００５５】
いくつかの実施態様においては、水性組成物は、溶液中で貴金属塩と混合されて、金属クロモニックナノ粒子を生成することが可能である。続いて、混合物は多価カチオン塩と接触するようにされ、クロモニックナノ粒子を非共有結合的に架橋し、貴金属塩を取り込むようにすることが可能である。
【００５６】
好ましい貴金属塩としては、銀塩（例えば、硝酸銀及び酢酸銀など）、金塩（例えば、金チオリンゴ酸ナトリウム及び塩化金など）、白金塩（例えば、硝酸白金及び塩化白金など）、及びそれらの混合物が挙げられる。他の遷移金属もまた使用可能である。特に、１価の遷移金属カチオン類の塩が使用可能である。
【００５７】
金属塩は、還元されて、架橋クロモニックナノ粒子中に含有された元素状の貴金属ナノ粒子の懸濁物を生成することが可能である。このことは、当該技術分野において公知の還元法により達成可能である。例えば、還元は、還元剤（例えば、トリス（ジメチルアミノ）ボラン、ホウ化水素ナトリウム、ホウ化水素カリウム、又はホウ化水素アンモニウム）、電子ビーム（ｅ−ビーム）処理、又は紫外線（ＵＶ）光を使用することにより達成可能である。
【００５８】
金属ナノ粒子は、例えば、タグとして役立つ。それらは、医学用イメージング、光スイッチ装置、光コミュニケーションシステム、赤外線検出器、赤外線クローキング装置、化学センサ、及び、受動太陽放射線収集又は検出装置などといった、数多くの適用において有用であることが可能である。
【００５９】
水性混合物から形成された架橋クロモニックナノ粒子は、水の存在下に、酸に対し暴露されて、架橋されたナノ粒子を、クロモニック材料、多価カチオン類（多価カチオン塩から）、及び酸アニオン類を含む複合体を含むシェル中に封入することが可能である。好適な酸としては、炭酸、リン酸、乳酸、クエン酸、ホウ酸、硫酸、及びこれらの混合物が挙げられる。好ましい酸は、炭酸及びリン酸である。
【００６０】
酸は、架橋クロモニックナノ粒子が、実質的に溶解しないようにする量（例えば、２時間の間に溶解するクロモニックナノ粒子の、約２５重量％を超えないような量（好ましくは、約１０重量％を超えない）で存在する）。酸がリン酸である場合、例えば、１Ｎリン酸対水の重量比は、典型的には約１：１０と約１：３００の間（好ましくは、約１：２５と約１：１００の間、さらに好ましくは、約１：５０）である。
【００６１】
架橋クロモニックナノ粒子は、数多くの方法により、水の存在下で酸に対し暴露されることが可能である。例えば、酸は、架橋クロモニックナノ粒子を含む水溶液へ添加されることが可能であり、又は、架橋クロモニックナノ粒子が、希酸溶液と混合されることも可能である。利用されるべき酸が炭酸である場合、架橋クロモニックナノ粒子を含む水溶液を含む容器は、ドライアイスと共に密閉容器中に置かれることが可能であり、又はドライアイスが、架橋クロモニックナノ粒子を含む水溶液を通してバブリングされることが可能である。
【００６２】
任意に、クロモニックナノ粒子はまた、複合シェルに加えて、クロモニックシェル層を有することも可能である。例えば、内側のクロモニックシェル層（すなわち、クロモニックナノ粒子と複合シェルとの間に局在するクロモニックシェル層）は、架橋クロモニックナノ粒子を、クロモニック材料を含む組成物中に分散すること、及び次に、複合シェルを形成する前に、該分散物と、連続水溶性ポリマー相とを含む第２の水性混合物を調製することにより、添加されることが可能である。或いは、又は内側のクロモニックシェル層に加えて、外側のクロモニックシェル層が、複合シェル内に封入されたクロモニックナノ粒子を、クロモニック材料を含む組成物中に分散すること、及び次に、該分散物と、連続水溶性ポリマー相とを含む第２の水性混合物を調製することにより、添加されることが可能である。
【００６３】
上述の任意のクロモニック材料が、クロモニック材料を含む組成物において使用可能である。クロモニック材料を含む組成物において使用されるクロモニック材料は、第１の水性混合物において利用されたものと同じクロモニック材料であるか、又は異なるクロモニック材料であることが可能である。例えば、いくつかの適用においては、低いｐＨ条件下で異なる吸収性又は異なる安定性を有する、２つの異なるクロモニック材料を使用することが有利である可能性がある。
【００６４】
上述の任意の水溶性ポリマー類が、第２の水性混合物の連続水性ポリマー相に使用可能である。第２の水性混合物において使用される水溶性ポリマーは、第１の水性混合物において利用されるものと同じ水溶性ポリマーであるか、又は異なる水溶性ポリマーであることが可能である。
【００６５】
第２の水性混合物は、成分の濃度が変化し得ることを除いて、第１の水性混合物の作成について記述されたものと本質的に同じ手順を用いて作成可能である。
【００６６】
第２の水性混合物用には、クロモニック材料は水溶液中に溶解されることが可能である。一般に、クロモニック材料は溶液に対し、溶液の約０．１重量パーセント〜約３０重量パーセント（好ましくは約２重量パーセント〜約２０重量パーセント）の範囲の濃度を達成するように添加される。架橋クロモニックナノ粒子は、クロモニック材料を含むこの水溶液中に分散可能である。この分散物は、次に、第２の連続水溶性ポリマー相と混合されて、第２の水性混合物を作成することが可能である。典型的には、水溶性ポリマー及びクロモニック材料の量は、その比が、乾燥重量ベースで少なくとも約１：１であり、約１０：１より小さくなるように選択される。
【００６７】
任意に、ｐＨ調整化合物、界面活性剤、及び／又は貴金属塩が、上述のように利用されることが可能である。
【００６８】
クロモニックナノ粒子は、第２の不連続なクロモニック相のクロモニック材料中に封入される。クロモニックナノ粒子の周囲の、クロモニック材料のこの「シェル」又は層の厚さは、典型的には、およそ数分子の厚さ（例えば、単層）から、約２００ナノメートルまでであることができる。
【００６９】
クロモニックシェル層は、多価カチオン類により非共有結合的に架橋可能である。一般に、クロモニック材料は、第２の水性分散物の形成後に架橋される。典型的には分散物は、過剰の多価カチオン塩の溶液へ添加される。
【００７０】
非共有結合的架橋に続き、第２の不連続なクロモニック相は、上述のように、表面修飾剤に接触されて、クロモニックナノ粒子の周囲のクロモニック材料からなるシェル層を、さらに親水性、疎水性、生体適合性、又は生理活性にすることが可能である。
【００７１】
クロモニック材料からなる１以上の付加的なシェル層が所望される場合には、上述の方法が反復されることが可能である。
【００７２】
本発明はまた、封入されたクロモニックなマクロ寸法粒子を作成するべく使用可能である。クロモニック材料は、上述のように、１以上のｐＨ調整化合物及び任意に界面活性剤の存在下に、水溶液中に置かれることが可能である。
【００７３】
結果として生じる、クロモニック材料を含む水性混合物は、多価カチオン塩に対し暴露されて、非共有結合的に架橋されたクロモニック粒子を形成することが可能である。粒子は、ほぼ任意の所望の形状に作成されることが可能である。もし、例えば球形の粒子が所望であれば、クロモニック材料を含む水性混合物は、多価カチオン塩を含む溶液に対し、滴下添加されることが可能である。他の形状の粒子は、例えば、クロモニック材料を含むペースト様の水性混合物を所望の形状に成形することによって、形成されることが可能である。
【００７４】
結果として生じる架橋クロモニック粒子は、次に、炭酸、リン酸、乳酸、クエン酸、ホウ酸、硫酸、及びそれらの混合物からなる群より選択される酸に対し、上述のように水の存在下に暴露されて、架橋粒子を複合シェル中に封入することが可能である。
【００７５】
本発明は、クロモニック材料、多価カチオン類、及び、ＨＣＯ３−、ＰＯ４３−、ＣＨ３ＣＨＯＨＣＯＯ−、Ｃ３Ｈ５Ｏ（ＣＯＯ）３３−、ＢＯ３３−、ＳＯ４２−、及びそれらの混合物からなる群より選択される酸アニオン類を含む複合体を含んでなるシェル中に封入された、クロモニック粒子（ナノ−又はマクロ寸法の）を提供する。複合シェルは、例えば、吸収用途（例えば、特定のタンパク質、カチオン類、低分子薬、又は触媒を吸収するため）に有用であることが可能である。本発明はまた、１以上のゲスト化合物の制御放出に使用可能である。ゲスト化合物は、クロモニック（ナノ）粒子内に、及び／又は、任意のクロモニックシェル層内に、封入されることが可能である。
【００７６】
例えば、複合シェルは、酸の存在下では不安定なゲスト分子を、効果的に隔離することが可能である。したがって、複合シェル内に封入されている間、それらは崩壊しない。
【００７７】
有用なゲスト化合物の実例としてはは、染料、化粧用薬剤、芳香剤、着香料、及び、薬物、除草剤、殺虫剤、フェロモンなどの生理活性化合物、及び抗微生物薬（例えば、抗細菌薬及び抗真菌薬など）が挙げられる。生理活性化合物は、本明細書において、疾病の診断、治療、緩和、処置、又は予防における使用のため、或いは生体の構造又は機能に影響を及ぼすために意図された化合物として定義される。生体に対し治療効果を持つように意図されている薬物（すなわち、医薬的に活性のある成分）は、特に有用なゲスト化合物である。或いはまた、除草剤及び殺虫剤は、生体、例えば植物又は害虫に対し、負の効果を持つように意図された生理活性化合物の実例である。本発明においては、任意種類の薬物が使用可能であるが、特に好適な薬物としては、固形の剤形に製剤された場合に比較的不安定であるもの、胃の低いｐＨ条件によって悪影響を及ぼされるもの、胃腸管の酵素に暴露されることにより悪影響を及ぼされるもの、及び持続放出又は制御放出により患者へ提供されることが望まれるものが挙げられる。
【００７８】
複合シェル及びクロモニック（ナノ）粒子は、ある環境条件から薬物を選択的に保護し、次に別の環境条件下では、該薬物を可制御的に送達することができる。例えば、複合シェルは、動物へ投与された場合、ｐＨの変化の結果として、胃の酸性環境においては安定であることが可能であり、腸の非酸性環境内へ通されると溶解する。クロモニック材料はまた、酵素的分解から薬物を保護することが可能である。
【００７９】
ゲスト化合物は、クロモニック材料からなる第１の水溶液に対し、ゲスト化合物を添加することにより、クロモニックナノ粒子中に含有又はインターカレートされることが可能である。或いは、ゲスト化合物は、クロモニック材料又は多価カチオン溶液との混合に先立ち、油又は噴射剤などの、別の賦形剤又はビヒクル中に分散又は溶解されることが可能である。（ナノ）粒子は、例えば、濾過、噴霧、又は他の手段により収集され、水性担体を除去するべく乾燥されることが可能である。
【００８０】
薬物などのゲスト化合物は、クロモニック材料の導入に先立ち、水性分散剤含有溶液中に溶解されることが可能である。好適な分散剤としては、長鎖飽和脂肪酸又はアルコール、及び、モノ若しくはポリ不飽和脂肪酸又はアルコールを含む、アルキルホスフェート、ホスホネート、スルホネート、スルフェート、又はカルボキシラートが挙げられる。オレイルホスホン酸は、好適な分散剤の実例である。いかなる特定の理論にも束縛されるべきではないが、分散剤はゲスト化合物の分散を助けることから、それが封入されることは、より良好であると考えられる。
【００８１】
アルカリ性化合物は、クロモニック材料の導入に先立ち、ゲスト化合物溶液に添加可能である。或いは、アルカリ性化合物は、ゲスト化合物とクロモニック材料溶液との混合に先立ち、クロモニック材料溶液へ添加されることが可能である。好適なアルカリ性化合物の実例としてはは、エタノールアミン、水酸化ナトリム若しくは水酸化リチウムヒドロキシド、又は、モノ、ジ、トリアミン又はポリアミンといったアミン類が挙げられる。いかなる特定の理論にも束縛されるべきではないが、ホスト化合物が上記の式Ｉ及びＩＩに記述されたようなトリアジン化合物である場合には特に、アルカリ性化合物はホスト化合物の溶解を助けると考えられる。
【００８２】
大きい粒子（例えば、直径数ミリメートルのオーダー）が調製可能であるが、本発明のナノ粒子の体積メジアン径は、典型的には１０００ナノメートル未満の寸法であり、通常は５００ナノメートル未満の寸法であり、いくつかの場合には１００ナノメートル未満の寸法である。ある例では、１μｍより大きい寸法の粒子をもつことが所望されることもある。特に、こうした粒径は、腸内では特定酵素の存在のために不安定である薬物の、経口送達のために好ましいことがある。こうした薬物の実例としては、タンパク質、ペプチド、抗体、及び、身体の酵素的プロセスに対し特に感受性であってもよい他の生体分子が挙げられる。こうした場合、これらの小さい粒子は、腸壁に直接取り込まれ、粒子が主として腸障壁を通過した後に溶解し、腸環境へ暴露された感受性薬物の量が最小化されるようにしてもよい。
【００８３】
しかしながらいくつかの場合には、より大きい粒子が所望されることが可能である。例えば、より大きい粒径寸法は、局所投与薬（例えば、ペースト又は軟膏）のために好ましいことがある。
【００８４】
ゲスト化合物は、ゲスト化合物を、クロモニック材料からなる第２の水溶液に対し、或いは、不連続クロモニック相が非共有結合的に架橋される場合には、沈澱に先立って多価カチオン溶液に対し添加することにより、任意のクロモニックシェル層中に含有又はインターカレートされることが可能である。上述のように、ゲスト化合物は、クロモニック材料又は多価カチオン溶液との混合に先立ち、油又は噴射剤などの、別の賦形剤又はビヒクル中に分散又は溶解されることが可能である。
【００８５】
クロモニック（ナノ）粒子及びクロモニックシェル層は、１価カチオン類又は、界面活性剤などの他の非イオン性化合物の水溶液中に溶解可能である。典型的な１価カチオン類としては、ナトリウム及びカリウムが挙げられる。クロモニック（ナノ）粒子及びクロモニックシェル層を溶解するために必要な１価カチオン類の濃度は、ナノ粒子及びシェル層の中に含有されるクロモニック分子の種類及び量に依存する。それゆえ、異なるクロモニック材料が、ナノ粒子及び任意のクロモニックシェル層のために選択され、それらが異なる濃度で溶解するようにすることが可能である。しかしながら、一般に、完全な溶解のためには、少なくとも、マトリックス中のカルボキシル基のモル量と同等の、１価カチオン類のモル量があるべきである。このようにして、各カルボキシル基と会合するべき少なくとも１つの１価カチオン類があることになる。
【００８６】
本発明の複合シェルは、しかしながら、クロモニック（ナノ）粒子及びクロモニックシェル層に比較して、１価カチオン類及び他の非イオン性化合物の水溶液に対し、増大された抵抗性を示す。
【００８７】
本発明は、経口による用量送達における使用のための、薬物の封入に特に有用である。典型的な経口用剤形としては、タブレット及びカプセルなどの固形調剤が挙げられるが、液体懸濁物及びシロップなどの、経口的に投与される他の調剤を挙げることもまた可能である。本発明の複合シェルは、胃の酸性環境において、１時間よりも長く、ある場合には１２時間よりも長い時間にわたり、安定であることが可能であり、１００時間を超えても安定であることもある。
【実施例】
【００８８】
本発明の目的及び利益は、以下の実施例によってさらに例示されるが、これらの実施例において列挙される特定の材料及び量、並びに他の諸条件及び詳細は、本発明を過度に制限するものと解釈されるべきではない。
【００８９】
別段の記載がない限り、全ての試薬及び化合物は、シグマ−アルドリッチ・ケミカル社（（Sigma-Aldrich Chemical Co.）、ミズーリ州、セントルイス）から入手されたか、又は入手可能である。本明細書で使用するとき、「精製水」は、商品名「オムニソルブ（OMNISOLVE）」でＥＭＤケミカルズ社（EMD Chemical）（ニュージャージー州、ギブスタウン）から市販されている水を指す。
【００９０】
使用された光学顕微鏡は、ライカ・マイクロシステムズ社（Leica Microsystems, Inc.）（イリノイ州、バノックバーン（Bannockburn））から入手可能な、ＦＣ６サイロ（cyro）アタッチメントを具備した顕微鏡モデルＵＣＴであり、動的光散乱技術を用いた測定は、マルバーン社（Malvern Company）（英国、ウースターシャー（Worcestershire））からのマルバーンゼン３６００（Malvern Zen 3600）で行われた。
【００９１】
クロモニック混合物（「クロモニック混合物」）の調製
精製水中に、式ＩＶのクロモニック化合物（３０重量％）を含有する混合物は、フラスコ内で磁気的に約４５分間撹拌されて、白色のペーストを生成した。新たに調製された水酸化ナトリウム溶液（純粋中、５０重量％）が、白色のペーストを含有しているフラスコに対し、その外見がクリーム状の液晶状溶液に変わるまで滴下添加された。この混合物のｐＨは、水酸化ナトリウム溶液の添加を制御することにより、この添加プロセスを通じて７．５以下に維持された。結果として生じたクリーム状の液晶状溶液が、必要に応じ使用された。
【００９２】
クロモニック混合物−ＨＰＭＣエマルション（「クロモニック−ＨＰＭＣ」）の調製
クロモニック混合物の一部は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ、純水中２５％；ＨＰＭＣ溶液に対するクロモニック混合物の重量比は、１：２０）を含有する溶液中に、室温で３０分間撹拌することにより分散された。
【００９３】
このエマルション（０．６ｇ）は、次に、塩化カルシウム及び塩化亜鉛（それぞれ５重量％）を含有する水溶液（１０ｍＬ）へ添加された。この溶液は、室温で３０分間振とうされ、３５００ｒｐｍで２０分間遠心分離された。次に、結果として得られた上清は捨てられた。残留残渣は、精製水（１０ｍＬ）で洗浄され、再度３５００ｒｐｍで２０分間遠心分離された。結果として得られた残渣の試料は、光学顕微鏡下に観察した場合、青色の蛍光を発光し、動的光散乱技術を用いた測定は、それが５００ｎｍレンジの粒子を含有することを示した。
【００９４】
リン酸緩衝食塩水溶液（ＰＢＳ）の調製
この溶液は、磁性撹拌器を用いてストック溶液Ａ（２００ｍＬ）をストック溶液Ｂ（６０ｍＬ）とを１５分間混合すること、及び、ストック溶液Ｂを必要に応じ使用して、ｐＨを７．５に調整することにより作成された。ストック溶液Ａは、リン酸一水素二ナトリウム（１ｇ）と、塩化ナトリウム（１．７ｇ）とを、精製水（２００ｍＬ）中に含有していた。ストック溶液Ｂは、リン酸一水素二ナトリウム（０．５６ｇ）と、塩化ナトリウム（１．７ｇ）とを、精製水（２００ｍＬ）中に含有していた。
【００９５】
実施例１及び２
クロモニック−ＨＰＭＣの一部（１．０ｇ）は、精製水中の塩化カルシウム（１０％）溶液へ添加され、そのまま１０分間保持され、次いで、シェーカーベッド（ジャイロトリー・シェーカー（Gyrotory Shaker）モデルＧ２（ニュー・ブランズウィック・サイエンティフィック社（New Brunswick Scientific Co. Inc）、米国、ニュージャージー州、エディソン（Edison））を用いて、室温でさらに３０分間振とうされた。次に、開放容器内のこの混合物は、ドライアイスを含有する密閉されたジャーの中に６時間保持された。この時間の後、試料は３５００ｒｐｍで２０分間遠心分離された。次いで、結果として生じた上清は捨てられた。残留残渣は精製水（１０ｍＬ）で洗浄され、再度３５００ｒｐｍで２０分間遠心分離された。結果として生じた残渣の試料は、光学顕微鏡下に観察すると青色の蛍光を発光し、動的光散乱技術を用いた測定は、それが５００ｎｍレンジの粒子を含有することを示した。
【００９６】
結果として得られた残渣の試料（１．０ｇ）は、ＰＢＳ（５ｍＬ）へ添加すること、及び、表１に記録された時間にわたり、室温で撹拌することにより試験された。指定された時間の後、試料は３５００ｒｐｍで２０分間遠心分離された。次いで、結果として生じた上清は捨てられた。残留残渣の重量は、残留量を計算するべく、同じ試料の最初の重量と比較され、それはパーセント残留として表１に記録されている。
【００９７】
比較実施例１及び２
試料は、試料を３０分間振とうした後、そのまま４時間保持されたこと、及びドライアイスの存在下に置かれなかったことを除いて、実施例１及び２について記載されたものと同じ方法を用いて調製及び分析された。得られた結果もまた、表１に含まれている。
【００９８】
【表１】
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【００９９】
比較実施例３
クロモニック混合物の一部（１．０ｇ）は、精製水中の、塩化カルシウムの１０％溶液（１０ｍＬ）に対し、２ｍＬピペットから、５分間にわたり滴下添加され、直径約５ｍｍの大きいビーズを形成した。この混合物は次に、そのまま１２時間、室温で貯蔵された。上清は捨てられ、残留残渣は精製水（１０ｍＬ）で洗浄された。ＰＢＳ（１０ｍＬ）が残渣へ添加され、混合物は表２に記録された時間にわたり、室温で穏やかに振とうされた。残渣を完全に溶解するために要した時間（残渣がもはや見られなくなった時間として定義された）は、表２に示されている。
【０１００】
実施例３
クロモニック混合物の一部（１．０ｇ）は、精製水中の、塩化カルシウムの１０％溶液（１０ｍＬ）に対し、２ｍＬピペットから、５分間にわたり滴下添加され、直径約５ｍｍの大きいビーズを形成した。この混合物は、ドライアイスを含有している密閉されたジャーの内側の、開放容器中に、該密閉容器に置かれたときの最初の凍結から試料が融解した後、２時間にわたり保持された。上清は捨てられ、残留残渣は精製水（１０ｍＬ）で洗浄された。ＰＢＳ（１０ｍＬ）が残渣へ添加され、混合物は表２に記録された時間にわたり、室温で穏やかに振とうされた。残渣を完全に溶解するために要した時間（残渣がもはや見られなくなった時間として定義された）は、表２にリストされている。
【０１０１】
実施例４
クロモニック混合物の一部（１．０ｇ）は、精製水中の、塩化カルシウムの１０％溶液（１０ｍＬ）に対し、２ｍＬピペットから、５分間にわたり滴下添加され、直径約５ｍｍの大きいビーズを形成した。この混合物は、ドライアイスを含有している密閉されたジャーの中の、開放容器に、該密閉容器に置かれたときの最初の凍結から試料が融解した後、１２時間にわたり保持された。上清は捨てられ、残留残渣は精製水（１０ｍＬ）で洗浄された。ＰＢＳ（１０ｍＬ）が残渣へ添加され、混合物は表２に記録された時間にわたり、室温で穏やかに振とうされた。残渣を完全に溶解するために要した時間（残渣がもはや見られなくなった時間として定義された）は、表２にリストされている。
【０１０２】
実施例５
クロモニック混合物の一部（１．０ｇ）は、精製水中の、塩化カルシウムの１０％溶液（１０ｍＬ）に対し、２ｍＬピペットから、５分間にわたり滴下添加され、直径約５ｍｍの大きいビーズを形成した。この混合物は、そのまま５分間保持された。この時間の後、上清は捨てられた。残留ビーズに対し、精製水（１０ｍＬ）が添加され、穏やかに２０秒間旋回され、上清は捨てられた。次いで、残留残渣に対し、リン酸（０．１ｇ、１Ｎ）を含有する精製水（１０ｍＬ）が添加され、この混合物はそのまま５分間保持された。上清は捨てられ、残留残渣は精製水（１０ｍＬ）で洗浄された。ＰＢＳ（１０ｍＬ）が残渣へ添加され、混合物は表２に記録された時間にわたり、室温で穏やかに振とうされた。残渣を完全に溶解するために要した時間（残渣がもはや見られなくなった時間として定義された）は、表２にリストされている。
【０１０３】
実施例６
クロモニック混合物の一部（１．０ｇ）は、精製水中の、塩化カルシウムの１０％溶液（１０ｍＬ）に対し、２ｍＬピペットから、５分間にわたり滴下添加され、直径約５ｍｍの大きいビーズを形成した。この混合物は、そのまま５分間保持された。この時間の後、上清は捨てられた。残留ビーズに対し精製水（１０ｍＬ）が添加され、穏やかに２０秒間旋回され、上清は捨てられた。次いで、残留残渣に対し、リン酸（０．１ｇ、１Ｎ）を含有する精製水（１０ｍＬ）が添加され、この混合物はそのまま１２時間保持された。上清は捨てられ、残留残渣は精製水（１０ｍＬ）で洗浄された。ＰＢＳ（１０ｍＬ）が残渣へ添加され、混合物は表２に報告された時間にわたり、室温で穏やかに振とうされた。残渣を完全に溶解するために要した時間（残渣がもはや見られなくなった時間として定義された）は、表２にリストされている。
【０１０４】
【表２】
2009522412.tif 000007
【０１０５】
本発明の範囲及び趣旨から逸脱しない様々な変更及び改変は当分野の技術者には明らかとなるであろう。本発明は、本明細書で述べる例示的な実施形態及び実施例によって不当に制限されるものではないこと、また、こうした実施例及び実施形態は、本明細書において以下に記述する特許請求の範囲によってのみ限定されることを意図する、本発明の範囲に関する例示のためにのみ提示されることを理解すべきである。
【国際調査報告】
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