(57)【要約】  本発明は、放出できるように結合したインデノイソキノリン・ポリマー複合体を提供する。複合体の製造方法及びそれを用いた哺乳動物の治療方法についても開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式（I）：
【化１】
2009539879.tif 000056
で表される化合物であって、
Ａはキャップ基：
【化２】
2009539879.tif 000057
であり、
Ｒは、実質的に非抗原性の水溶性ポリマーであり、
Ｌ及びＬ’は、独立して、放出性リンカーから選択される、
ことを特徴とする化合物。
【請求項２】
前記独立して選択される放出性リンカーが、化学式（II）：
【化３】
2009539879.tif 000058
で表される、請求項１記載の化合物であって、
Ｌ1は、二官能性の結合部分であり、
Ｙ1-4 は、独立してＯ、Ｓ、またはＮＲ12であり、
Ｒ1、Ｒ4、Ｒ9、Ｒ10、及びＲ12は、独立して、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-12分岐鎖アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-6置換アルキル、Ｃ3-8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ1-6ヘテロアルキル、及び、置換Ｃ1-6へテロアルキルからなる群より選択され、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、及びＲ6は、独立して、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、フェノキシ、Ｃ1-8へテロアルキル、Ｃ1-8へテロアルコキシ、置換Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ3-8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、ハロゲン−、ニトロ−、シアノ−、カルボキシ−、Ｃ1-6カルボキシアルキル、及びＣ1-6アルキルカルボニルからなる群より選択され、
Ａｒは、化学式（II）に含まれる場合に、多置換の芳香族炭化水素または多置換の複素環式芳香族基を形成する、芳香族部分であり、
ｒ、ｓ、ｔ、及びｕは独立して０または１であり、
ｍ及びｐは、独立して０または正の整数である、
ことを特徴とする、化合物。
【請求項３】
化学式（III）：
【化４】
2009539879.tif 000059
を有する、請求項１記載の化合物であって、
Ａは、キャップ基または：
【化５】
2009539879.tif 000060
であり、
Ｒは実質的に非抗原性の水溶性ポリマーであり、
Ｌ1は、二官能性の結合部分であり、
Ｙ1-4 は、独立してＯ、Ｓ、またはＮＲ12であり、
Ｒ1、Ｒ4、Ｒ9、Ｒ10、及びＲ12は、独立して、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-12分岐鎖アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-6置換アルキル、Ｃ3-8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ1-6ヘテロアルキル、及び、置換Ｃ1-6へテロアルキルからなる群より選択され、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、及びＲ6は、独立して、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、フェノキシ、Ｃ1-8へテロアルキル、Ｃ1-8へテロアルコキシ、置換Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ3-8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、ハロゲン−、ニトロ−、シアノ−、カルボキシ−、Ｃ1-6カルボキシアルキル、及びＣ1-6アルキルカルボニルからなる群より選択され、
Ａｒは、化学式（II）に含まれる場合に、多置換の芳香族炭化水素または多置換の複素環式芳香族基を形成する、芳香族部分であり、
ｒ、ｓ、ｔ、及びｕは独立して０または１であり、
ｍ及びｐは、独立して０または正の整数である、
ことを特徴とする、化合物。
【請求項４】
前記キャップ基が、水素、ＮＨ2、ＯＨ、ＣＯ2Ｈ、Ｃ1-6アルキルＣ1-6アルコキシ置換アルコキシ、及びジアルキルアシル尿素アルキルからなる群より選択されることを特徴とする請求項３記載の化合物。
【請求項５】
前記キャップ基が、ＣＨ3またはＯＣＨ3であることを特徴とする請求項３記載の化合物。
【請求項６】
Ａが：
【化６】
2009539879.tif 000061
であることを特徴とする請求項３記載の化合物。
【請求項７】
化学式：
【化７】
2009539879.tif 000062
を有することを特徴とする請求項３記載の化合物。
【請求項８】
化学式：
【化８】
2009539879.tif 000063
を有することを特徴とする請求項７記載の化合物。
【請求項９】
化学式：
【化９】
2009539879.tif 000064
を有することを特徴とする請求項３記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒが、直線状の、末端が分岐した、またはマルチアームのポリアルキレンオキシドを含むことを特徴とする請求項３記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒが、−Ｃ(＝Ｙ21)−(ＣＨ2)n−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)x−Ａ及び−Ｃ(＝Ｙ21)−Ｙ2−(ＣＨ2)n−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)x−Ａからなる群より選択され、
ｎは０または正の整数であり、
Ｙ21-22 は、独立して、Ｏ、ＳまたはＮＲ12であり、
ｘは、重合度を表す、
ことを特徴とする請求項３記載の化合物。
【請求項１２】
前記ポリアルキレンオキシドが、化学式：−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)x−を有するポリエチレングリコールであり、
ｘが約１０〜約２，３００の整数である、
ことを特徴とする請求項１０記載の化合物。
【請求項１３】
前記ポリアルキレンオキシドが、約２，０００〜約１００，０００の平均分子量を有することを特徴とする請求項１０記載の化合物。
【請求項１４】
前記ポリアルキレンオキシドが、約１０，０００〜約８０，０００の平均分子量を有することを特徴とする請求項１０記載の化合物。
【請求項１５】
前記ポリアルキレンオキシドが、約２０，０００〜約６０，０００の平均分子量を有することを特徴とする請求項１０記載の化合物。
【請求項１６】
前記ポリアルキレンオキシドが、約４０，０００の平均分子量を有することを特徴とする請求項１０記載の化合物。
【請求項１７】
ｍ及びｐが０であることを特徴とする請求項３記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ1、Ｒ4、Ｒ9、及びＲ10がすべて水素であることを特徴とする請求項３記載の化合物。
【請求項１９】
Ｙ1-4がＯであることを特徴とする請求項３記載の化合物。
【請求項２０】
下記化学式：
【化１０−１】
2009539879.tif 000065
【化１０−２】
2009539879.tif 000066
および
【化１１】
2009539879.tif 000067
からなる群より選択される、請求項３記載の化合物であって、
ＰＥＧが化学式：
−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)x−ＣＨ2ＣＨ2−
を有し、ここで、
ｘが約１０〜約２，３００の整数である、
ことを特徴とする、化合物。
【請求項２１】
化学式：
【化１２】
2009539879.tif 000068
または
【化１３】
2009539879.tif 000069
で表され、
ｘが約１０〜約２３００の整数である、
ことを特徴とする請求項３記載の化合物。
【請求項２２】
請求項３記載の化合物またはそれらの塩を効果的な量で含む、薬学的に許容される薬剤。
【請求項２３】
請求項３記載の化合物を効果的な量で、それらを必要とする患者に投与する工程を有してなる、癌の治療方法。
【請求項２４】
前記請求項３記載の化合物が：
【化１４】
2009539879.tif 000070
であり、
ｘが約１０〜約２３００の整数である、
ことを特徴とする請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
化学式（III）の化合物の調製方法であって、
（ａ）下記構造：
【化１５】
2009539879.tif 000071
を有する活性化ポリマーを提供し、
（ｂ）前記活性化ポリマーを、下記構造：
【化１６】
2009539879.tif 000072
を有する保護化インデノイソキノリンと反応させ、
（ｃ）工程（ｂ）で得られた中間体から前記保護基を除去して化学式（III）：
【化１７】
2009539879.tif 000073
の化合物を形成する、
各工程を有してなり、
Ａはキャップ基または
【化１８】
2009539879.tif 000074
であり、
Ｒは実質的に非抗原性の水溶性ポリマーであり、
Ｌ1は、二官能性の結合部分であり、
Ｙ1-4 は、独立してＯ、Ｓ、またはＮＲ12であり、
Ｒ1、Ｒ4、Ｒ9、Ｒ10、及びＲ12は、独立して、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-12分岐鎖アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-6置換アルキル、Ｃ3-8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ1-6ヘテロアルキル、及び、置換Ｃ1-6へテロアルキルからなる群より選択され、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、及びＲ6は、独立して、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、フェノキシ、Ｃ1-8へテロアルキル、Ｃ1-8へテロアルコキシ、置換Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ3-8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、ハロゲン−、ニトロ−、シアノ−、カルボキシ−、Ｃ1-6カルボキシアルキル、及びＣ1-6アルキルカルボニルからなる群より選択され、
Ａｒは、化学式（II）に含まれる場合に、多置換の芳香族炭化水素または多置換の複素環式芳香族基を形成する、芳香族部分であり、
ｒ、ｓ、ｔ、及びｕは独立して０または１であり、
ｍ及びｐは、独立して０または正の整数であり、
Ｂ1は離脱基であり、
Ｂ2は保護基である、
ことを特徴とする、方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の説明】
【０００１】
本出願は、参照することにより本願に援用される、２００６年６月９日出願の米国仮特許出願第６０／８０４，３８８号の優先権の利益を主張するものである。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、放出できるように結合したインデノイソキノリン・ポリマー複合体に関する。複合体の製造方法及びそれを用いた哺乳動物の治療方法についても開示する。
【背景技術】
【０００３】
カンプトセシン及びカンプトセシン類似体は、トポイソメラーゼＩ阻害剤として知られている。それらは、抗腫瘍能力を有することが示されている。その抗腫瘍能力にもかかわらず、カンプトセシン及びその類似体は、幾つかの不利な性質を有している。構造中のラクトン環の存在が、それらの臨床的有用性を制限する。下記参照のこと。
【０００４】
2009539879.tif 000002
長年にわたって、抗腫瘍能力及び化学的安定性について可能性を有するトポイソメラーゼＩ阻害剤を提供するための重要な試みが行なわれている。一部の試みは、インビトロで良好な抗腫瘍効果を示す、インデノイソキノリンの発見につながった。インデノイソキノリンは、ラクトン環を有さず、顕著な化学的安定性を示す。その安定性及びインビトロにおける抗腫瘍活性にもかかわらず、インデノイソキノリンの臨床的有用性は、水への溶解性の乏しさのせいで大幅に制限されている。インデノイソキノリンは、例えば、特許文献１に記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００６／００２５５９５号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
前述の不利な点を考慮の上、所望の治療活性及び水溶性の性質を有するトポイソメラーゼＩ阻害剤の提供が引き続き必要とされている。実質的に非抗原性のトポイソメラーゼＩ阻害剤の提供もまた渇望されているであろう。腎臓または細網内皮系などを通じた身体からの排出が早すぎず、十分なバイオアベイラビリティを有する、トポイソメラーゼＩ阻害剤の提供もまた望ましいであろう。制御可能な循環半減期を有するトポイソメラーゼＩ阻害剤の提供もまた、望ましいであろう。本発明は、これらの要求及び他の要求の解決に向けて取り組むものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の１つの態様には、放出できるように結合したインデノイソキノリン・ポリマー複合体がある。放出できるように結合したインデノイソキノリン・ポリマー複合体は、化学式（I）の構造を有する：
【化１】
2009539879.tif 000003
【０００８】
ここで、
Ａは、メチル基または
【化２】
2009539879.tif 000004
【０００９】
などのキャップ基であり、
Ｒは、ポリエチレングリコールなどの実質的に非抗原性の水溶性ポリマーであり、
Ｌ及びＬ’は、独立して、放出性(releasable)リンカーから選択される。
【００１０】
一部の特に好ましい複合体は、次の構造を有し：
【化３】
2009539879.tif 000005
【００１１】
ここでｘは約１０〜約２３００の整数である。ｘは、ＰＥＧが、１０，０００より大きい分子量を有するように選択されることが好ましい、正の整数である。本発明の別の態様では、ＰＥＧの分子量は約２０，０００または４０，０００である。
【００１２】
本発明のさらなる態様は、下記の化学式：
【化４】
2009539879.tif 000006
【００１３】
の化合物を含み、
ここでｘは上記の定義と同一である。
【００１４】
本発明のさらに別の態様では、前述の薬学的に許容される塩、及び、それらを含む薬学的に許容される薬剤が提供される。治療方法もまた意図されており、ここで、治療に効果的な量の本明細書に記載されるポリマー複合体が、それを必要とする患者、すなわち哺乳動物に投与される。さらなる態様では、本明細書に記載の放出できるように結合したインデノイソキノリン・ポリマー複合体の調製方法を提供する。
【００１５】
本発明がもたらす有利な点の１つは、好ましい治療特性を示すインデノイソキノリンに、優れた水溶解度を提供する、MJ III-65としても知られる、６−［３−（２−ヒドロキシエチル）アミノ−１−プロピル］−５，６−ジヒドロ−２，３−ジメトキシ−８，９−メチレンジオキシ−５，１１−ジオキソ−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリンの能力である。MJ III-65の遊離塩基の形態は、次の構造を有する：
【化５】
2009539879.tif 000007
【００１６】
本発明の目的では、「ＩｎｄＱ」は、６−［３−（２−ヒドロキシエチル）アミノ−１−プロピル］−５，６−ジヒドロ−２，３−ジメトキシ−８，９−メチレンジオキシ−５，１１−ジオキソ−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリン、及び、その塩の形態を意味するものと理解されたい。
【００１７】
本明細書に記載の化合物は、改善された薬物動態学的特性をも提供し、それによってインビボでの抗腫瘍能力を提供する。さらには、本発明は、本明細書に記載される化合物を含む製剤を提供する。製剤は、静脈を通じた哺乳動物への投与を容易にする。投与の際に、親化合物であるＩｎｄＱがそこから遊離する。いかなる理論にも拘束されるものではないが、以下に、放出できるように結合したＩｎｄＱポリマー複合体からの親化合物(parent drug) ＩｎｄＱの制御放出を概略的に示す。
【００１８】
2009539879.tif 000008
【００１９】
他の、及びさらなる有利な点は、以下の説明及び実施例から明らかになるであろう。
【００２０】
本発明の目的では、「アルキル」という用語は、直鎖、分岐鎖、例えばハロゲン、アルコキシ、ニトロなどで置換された、Ｃ1-12を含むが、Ｃ1-4アルキル、Ｃ3-8 シクロアルキル、または置換シクロアルキルなどが好ましいものと理解されたい。
【００２１】
本発明の目的では、 「置換された」という用語は、官能基、または１つ以上の異なる原子を有する化合物内に含まれる１つ以上の原子が、付加または置換されることを含むものと解されるべきである。
【００２２】
本発明の目的では、置換アルキルには、カルボキシアルキル、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、ヒドロキシアルキル、及びメルカプトアルキルが含まれ、置換アルケニルには、カルボキシアルケニル、アミノアルケニル、ジアルケニルアミノ、ヒドロキシアルケニル、及びメルカプトアルケニルが含まれ、置換アルキニルには、カルボキシアルキニル、アミノアルキニル、ジアルキニルアミノ、ヒドロキシアルキニル、及びメルカプトアルキニルが含まれ、置換シクロアルキルには、４−クロロシクロヘキシルなどの部分が含まれ、アリールには、ナフチルなどの部分が含まれ、置換アリールには、３−ブロモフェニルなどの部分が含まれ、アラルキルには、トリルなどの部分が含まれ、ヘテロアルキルには、エチルチオフェンなどの部分が含まれ、置換へテロアルキルには、３−メトキシ−チオフェンなどの部分が含まれ、アルコキシには、メトキシなどの部分が含まれ、フェノキシには、３−ニトロフェノキシなどの部分が含まれる。ハロゲンには、フルオロ、クロロ、ヨード、及びブロモが含まれるものと解されるべきである。
【００２３】
本発明の目的では、「効果的な量」及び「十分な量」という用語は、当然ながら、所望の効果または治療効果を達成する量を意味し、そのような効果は、当業者に理解されている。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
Ａ．概観
本発明の１つの態様では、本発明は、化学式（I）：
【化６】
2009539879.tif 000009
【００２５】
を有する化合物を提供し、
ここで、
Ａはキャップ基または
【化７】
2009539879.tif 000010
【００２６】
であり、
Ｒは、実質的に非抗原性の水溶性ポリマーであり、
Ｌ及びＬ’は、独立して、放出性リンカーから選択される。
【００２７】
本発明の１つの態様では、本発明に記載される化合物は、ベンジルの脱離系に基づく放出性リンカー（以後、「ＲＮＬ」リンカーまたは「ＲＮＬ系」リンカーという）を含む。
【００２８】
放出性リンカーＬ及びＬ’は、独立して、化学式（II）：
【化８】
2009539879.tif 000011
【００２９】
であり、
ここで、
Ｌ1は、二官能性の結合部分であり、
Ｙ1-4 は、独立してＯ、Ｓ、またはＮＲ12であり、
Ｒ1、Ｒ4、Ｒ9、Ｒ10、及びＲ12は、独立して、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-12分岐鎖アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-6置換アルキル、Ｃ3-8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ1-6ヘテロアルキル、及び、置換Ｃ1-6へテロアルキルからなる群より選択され、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、及びＲ6は、独立して、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、フェノキシ、Ｃ1-8へテロアルキル、Ｃ1-8へテロアルコキシ、置換Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ3-8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、ハロゲン−、ニトロ−、シアノ−、カルボキシ−、Ｃ1-6カルボキシアルキル、及びＣ1-6アルキルカルボニルからなる群より選択され、
Ａｒは、化学式（II）に含まれる場合に多置換の芳香族炭化水素または多置換の複素環式芳香族基を形成する、芳香族部分であり、
ｒ、ｓ、ｔ、及びｕは独立して０または１であり、
ｍ及びｐは、独立して０または正の整数である。
【００３０】
化学式（III）の化合物は、インデノイソキノリンの１つの特定の誘導体である、MJ III-65としても知られる、６−［３−（２−ヒドロキシエチル）アミノ−１−プロピル］−５，６−ジヒドロ−２，３−ジメトキシ−８，９−メチレンジオキシ−５，１１−ジオキソ−１１Ｈ−インデノ［１，２−ｃ］イソキノリンを含むことが好ましい。MJ III-65の遊離塩基はNSC 706743であると同定され、ＨＣｌ塩の形態はNSC 706744と同定されている。MJ III-65の遊離塩基の形態は、下記構造を有する：
【化９】
2009539879.tif 000012
【００３１】
本発明の特定の態様では、化学式（III）：
【化１０】
2009539879.tif 000013
【００３２】
を有する化合物が提供され、
ここで、
Ａはキャップ基または
【化１１】
2009539879.tif 000014
【００３３】
であり、
Ｒは、実質的に非抗原性の水溶性ポリマーであり、
Ｌ1は、二官能性の結合部分であり、
Ｙ1-4 は、独立してＯ、Ｓ、またはＮＲ12であり、
Ｒ1、Ｒ4、Ｒ9、Ｒ10、及びＲ12は、独立して、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-12分岐鎖アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-6置換アルキル、Ｃ3-8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ1-6ヘテロアルキル、及び、置換Ｃ1-6へテロアルキルからなる群より選択され、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、及びＲ6は、独立して、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、フェノキシ、Ｃ1-8へテロアルキル、Ｃ1-8へテロアルコキシ、置換Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ3-8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、ハロゲン−、ニトロ−、シアノ−、カルボキシ−、Ｃ1-6カルボキシアルキル、及び、Ｃ1-6アルキルカルボニルからなる群より選択され、
Ａｒは、化学式（II）に含まれる場合に多置換の芳香族炭化水素または多置換の複素環式芳香族基を形成する、芳香族部分であり、
ｒ、ｓ、ｔ、及びｕは独立して０または１であり、
ｍ及びｐは、独立して０または正の整数である。
【００３４】
一部の特定の態様では、ｍ及びｐは独立して０〜６であり、１であることが好ましい。他の好ましい実施の形態では、ｍ及びｐは０である。さらなる好ましい態様では、ｍ＝０、ｐ＝０及びＹ3＝ＮＨのとき、Ｒは−Ｃ(＝Ｙ21)−(ＣＨ2)n−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)x−ＣＨ3に対応するＰＥＧ誘導体ではなく、また、ｍ＝０、ｐ＝１、Ｌ1＝ＯＣＨ2、Ｙ4＝Ｏ及びＹ3＝ＮＨのとき、Ｒは−ＣＨ３−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)x−(ＣＨ2)n−に対応するＰＥＧ誘導体ではない。いずれの場合も、ｎは０または正の整数であり、Ｙ21はＯ、ＳまたはＮＲ12であり、ｘは本明細書に記載する重合度を表す。
【００３５】
一部の他の好ましい実施の形態では、ｍ及びｐは１である。別の特定の態様では、Ｒ1、Ｒ4、Ｒ9、及びＲ10はすべて水素であることが好ましい。さらに別の特定の態様では、Ｙ1-4は０であり、ｍは０である。
【００３６】
Ａがキャップ基である場合の本発明の態様では、それらの基には、水素、ＮＨ2、ＯＨ、ＣＯ2Ｈ、Ｃ1-6アルキルまたは置換アルキルなど、Ｃ1-6アルコキシ置換アルコキシなど、ジアルキルアシル尿素アルキルなどのような部分が含まれるということが当業者に理解されよう。本発明の一部の態様では、キャップ基はＣＨ3またはＯＣＨ3が好ましい。あるいは、Ａは、
【化１２】
2009539879.tif 000015
【００３７】
であり、
ここで、すべての変数は、先に定義されたとおりであって、それによってビス誘導体が形成される。
【００３８】
他の特定の態様では、化学式：
【化１３】
2009539879.tif 000016
【００３９】
を有する化合物を提供し、ここで、すべての変数は、先に定義されたとおりであって、それによってビス誘導体が形成される。ビス形態は、ＩｎｄＱがポリマー上に２つ取り込まれた、ポリマー複合体のΔ形態ともいわれる。この態様の範囲内では、本発明の一部の特定の好ましい化合物には、化学式：
【化１４】
2009539879.tif 000017
【００４０】
を有するものが含まれ、
ここで、すべての変数は、先に定義されたとおりである。
【００４１】
一部の別の態様では、化学式： 
【化１５】
2009539879.tif 000018
【００４２】
を有するオルト置換された化合物が提供される。オルト置換された化合物は、さらに：
【化１６】
2009539879.tif 000019
【００４３】
を含み、
ここで、すべての変数は先に定義されたとおりである。
【００４４】
本発明の一部の態様では、本明細書に記載される化合物は、直線状の、末端が分岐した、またはマルチアームのポリアルキレンオキシドを含む。本発明の一部の好ましい実施の形態では、ポリアルキレンオキシドは、ポリエチレングリコール及びポリプロピレングリコールを含む。
【００４５】
さらに好ましい態様では、Ｒは、−Ｃ(＝Ｙ21)−(ＣＨ2)n−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)x−Ａまたは−Ｃ(＝Ｙ21)−Ｙ22−(ＣＨ2)n−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)x−Ａであり、
ここで、
ｎは０または正の整数であり、
Ｙ21-22 は、独立して、Ｏ、ＳまたはＮＲ12であり、
ｘは、重合度を表し、
Ａは、先に定義されたとおりである。
【００４６】
Ｂ．実質的に非抗原性の水溶性ポリマー
本明細書に記載される化合物に用いられるポリマーは、水溶性のポリマーであり、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ’ｓ）など、実質的に非抗原性であることが好ましい。ポリアルキレンオキシドは、約２，０００〜約１００，０００の平均分子量を有し、約１０，０００〜約８０，０００が好ましく、約２０，０００〜約４０，０００、または６０，０００がさらに好ましい。一部の別の実施の形態では、本明細書に記載される化合物は、約４０，０００の平均分子量を有するポリアルキレンオキシドを含む。ポリアルキレンオキシドは、ポリエチレングリコール及びポリプロピレングリコールを含む。ポリアルキレンオキシドは、ポリエチレングリコールを含むことがさらに好ましい。ＰＥＧは一般に化学式：
−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)x−
によって表され、
ここで、ｘはポリマーの重合度、すなわち、ポリマー鎖中に繰り返される単位の数を表し、ポリマーの分子量によって決まる。例証を目的とし、限定はしないが、本発明のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）残基部分は、
−Ｃ(＝Ｙ21)−(ＣＨ2)n−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)x−Ａ、及び 
−Ｃ(＝Ｙ21)−Ｙ22−(ＣＨ2)n−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)x−Ａ
の中から選択することができ、
ここで、
ｎは、０または正の整数であり、好ましくは１〜６であり、さらに好ましくは１であり、
Ｙ21-22は、独立して、Ｏ、ＳまたはＮＲ12であり、
ｘは、約１０〜約２，３００の整数である。
【００４７】
あるいは、ＰＥＧ部分は：
【化１７】
2009539879.tif 000020
【００４８】
であってもよく、
ここで、
各Ｘ11は、独立して、存在しないか、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2またはＮＲ33であり、
各Ｙ11は、独立して、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ33であり、
各Ｙ12は、独立して、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ33であり、
Ｒ31-33は、独立して、水素、アミノ、置換アミノ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、シリルエーテル、スルホニル、メルカプト、Ｃ1-6アルキルメルカプト、アリールメルカプト、置換アリールメルカプト、置換Ｃ1-6アルキルチオ、Ｃ1-6 アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6アルキニル、Ｃ3-19分岐鎖アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-6置換アルキル、Ｃ2-6置換アルケニル、Ｃ2-6置換アルキニル、Ｃ3-8 置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換へテロアリール、Ｃ1-6へテロアルキル、置換Ｃ1-6へテロアルキル、Ｃ1-6アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ1-6 へテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ2-6アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ2-6アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ2-6アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ2-6置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ2-6置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ2-6置換アルカノイルオキシ、及び、置換アリールカルボニルオキシからなる群より選択され、
ここで、置換基は、アシル、アミノ、アミド、アミジン、アラルキル、アリール、アジド、アルキルメルカプト、アリールメルカプト、カルボニル、カルボキシラート、シアノ、エステル、エーテル、ホルミル、ハロゲン、ヘテロアリール、へテロシクロアルキル、ヒドロキシ、イミノ、ニトロ、チオカルボニル、チオエステル、チオアセテート、チオホルメート、アルコキシ、ホスホリル、ホスホネート、ホスフィネート、シリル、スルフヒドリル、サルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、及びスルホニルからなる群より選択され、
ａ’およびｂ’は、独立して、０または正の整数であり、好ましくは１〜６であり、さらに好ましくは１であり、
ｘは、約１０〜約２３００の整数である。
【００４９】
分岐鎖またはＵ−ＰＥＧ誘導体は、参照することにより各々の開示が本明細書に援用される、米国特許第５，６４３，５７５号、同第５，９１９，４５５号、同第６，１１３，９０６号、及び同第６，５６６，５０６号の各明細書に記載されている。このようなポリマーの非限定的なリストとしては、下記化学式：
【化１８】
2009539879.tif 000021
【００５０】
を有するポリマー系（iv）〜（ix）に相当し、
ここで、
Ｒ51-52はポリアルキレンオキシドであり、
Ｙ51-52は独立して、Ｏ、ＳまたはＮＲ12であり、
Ｘ21はＯ、ＮＲ12、Ｓ、ＳＯまたはＳＯ2であり、
ｃ’及びｔ’は独立して、０または正の整数であり、
ｓ’は０または１であり、
ｍＰＥＧは、Ｈ3ＣＯ(−ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)x−であり、
ここでｘは、ポリマーの総分子量が 約２，０００〜約１００，０００になるように選択される正の整数であり、約２０，０００〜約６０，０００であることが好ましい。Ｒ12は、先に定義されたとおりである。
【００５１】
さらに別の態様では、ポリマーには、マルチアームＰＥＧ−ＯＨ、または、参照することにより本明細書にその開示が援用される、日油株式会社のDrug Delivery System catalog, Ver. 8, April 2006に記載されるような「スター−ＰＥＧ」製品が含まれる。放出性リンカーを有するポリマーは、米国特許第５，１２２，６１４号または同第５，８０８，０９６号の各明細書に記載される活性化法を用いて、適切な活性ポリマーに転換させることができる。具体的には、このようなＰＥＧは、化学式：
【化１９】
2009539879.tif 000022
【００５２】
または
【化２０】
2009539879.tif 000023
【００５３】
であって差し支えなく、
ここで、
ｕ’は約４〜約４５５の整数であり、約２０，０００〜約６０，０００の総分子量を有するポリマーを提供することが好ましく、最大３つの残基末端部がメチルまたは他の低級アルキルでキャップされている。
【００５４】
一部の好ましい実施の形態では、４つのＰＥＧアームのすべてが、ＩｎｄＱの付加を促進するため、適切な離脱基に変換される。変換前のこのような化合物としては、
【化２１−１】
2009539879.tif 000024
【化２１−２】
2009539879.tif 000025
【００５５】
および
【化２２】
2009539879.tif 000026
【００５６】
が挙げられる。
【００５７】
適切なスターまたはマルチアームポリマーは、重量によって大幅に変化しうる。本発明の目的では、通常、約２，０００〜約１００，０００の範囲の総平均分子量を有するこれらのポリマーが、選択される。約２０，０００〜約６０，０００の分子量が好ましく、４０，０００が特に好ましい。
【００５８】
本発明に含まれるポリマー材料は、室温で水溶性であることが好ましい。このようなポリマーの非限定的なリストには、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコールなどのポリアルキレンオキシドホモポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール、それらの共重合体、及び、ブロック共重合体の水溶解度が維持されるように提供された、それらのブロック共重合体が含まれる。
【００５９】
さらなる実施の形態、及びＰＡＯ系ポリマーの代替として、デキストラン、ポリビニルアルコール、炭水化物系ポリマー、ヒドロキシプロピルメタクリルアミド（ＨＰＭＡ）、ポリアルキレンオキシド、及び／またはそれらの共重合体を用いることができる。参照することによりその内容が本明細書に援用される、本発明の譲受人に譲渡された米国特許第６，１５３，６５５号明細書も参照のこと。本明細書に記載された、ＰＥＧなどのＰＡＯ’ｓにも、同じタイプの活性化が用いられることは、当業者に理解されよう。当業者はさらに、前述のリストが単なる例示にすぎず、本明細書に記載する性質を有するすべてのポリマー材料が意図されていることを認識するであろう。本発明の目的では、「実質的にまたは効果的に非抗原性の」とは、毒性のない、感知できるほどの免疫原性の反応を哺乳動物に発現させないものとして当技術分野で理解されるすべての材料を意味する。
【００６０】
一部の態様では、末端アミン基を有するポリマーを用いてポリマー複合体を作ることができる。末端アミンを含むポリマーを高純度で調製する方法は、参照することにより本明細書に援用される、米国特許出願第１１／５０８，５０７号または同第１１／５３７，１７２号の各明細書に記載されている。例えば、アジドを有するポリマーは、トリフェニルホスフィンなどのホスフィン系還元剤、または、ＮａＢＨ4などのアルカリ金属ホウ化水素還元剤と反応する。あるいは、脱離基を有するポリマーは、メチルｔ−ブチルイミドジカルボネート（ＫＮＭｅＢｏｃ）のカリウム塩などの保護化アミン塩、または、ジｔ−ブチルイミドジカルボネート（ＫＮＢｏｃ2）のカリウム塩と反応した後、保護化アミン基を脱保護化する。これらの方法で形成した末端アミンを含むポリマーの純度は、約９５％よりも高く、９９％よりも高いことが好ましい。
【００６１】
さらに別の態様では、末端カルボン酸を有するポリマーを、ポリマー複合体に用いることができる。末端カルボン酸を有するポリマーを高純度で調製する方法は、参照することにより本明細書に援用される、米国特許出願第１１／３２８，６６２号明細書に記載されている。この方法は、ポリアルキレンオキシドのｔ−アルキルエステルを最初に調製し、続いてそれらのカルボン酸誘導体に変換する。本方法のＰＡＯカルボン酸の調製の第１段階は、ポリアルキレンオキシド・カルボン酸のｔ−ブチルエステルなどの中間体を形成する工程を含む。この中間体は、カリウムｔ−ブトキシドなどの塩基の存在下で、ＰＡＯをｔ−ブチルハロアセテートと反応させることによって形成される。一旦、ｔ−ブチルエステル中間体が形成されると、ポリアルキレンオキシドのカルボン酸誘導体は９２％を超える純度で容易に得ることができ、９７％を超えることが好ましく、９９％を超えることがさらに好ましく、純度９９．５％を超えることが最も好ましい。
【００６２】
Ｃ．放出性リンカー
本発明の化合物は、放出性リンカーを利用する。これらの放出性リンカーは、ベンジルの脱離系に基づいている。ある実施の形態では、Ｌ及びＬ’は、独立して、化学式（II）：
【化２３】
2009539879.tif 000027
【００６３】
の実施の形態から選択され、
ここで、
Ｌ1は、二官能性の結合部分であり、
Ｙ1-4 は、独立してＯ、Ｓ、またはＮＲ12であり、
Ｒ1、Ｒ4、Ｒ9、Ｒ10、及びＲ12は、独立して、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-12分岐鎖アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-6置換アルキル、Ｃ3-8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ1-6ヘテロアルキル、及び、置換Ｃ1-6へテロアルキルからなる群より選択され、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、及びＲ6は、独立して、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、フェノキシ、Ｃ1-8へテロアルキル、Ｃ1-8へテロアルコキシ、置換Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ3-8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、ハロゲン−、ニトロ−、シアノ−、カルボキシ−、Ｃ1-6カルボキシアルキル、及び、Ｃ1-6アルキルカルボニルからなる群より選択され、
Ａｒは、化学式（II）に含まれる場合に、多置換の芳香族炭化水素または多置換の複素環式芳香族基を形成する、芳香族部分であり、
ｒ、ｓ、ｔ、及びｕは独立して０または１であり、
ｍ及びｐは、独立して０または正の整数であり、ｐは０〜６であることが好ましく、１であることがさらに好ましい。
【００６４】
本明細書に記載される化合物に用いられるベンジル脱離系の放出性リンカー（ＲＮＬ）は、参照することによりその内容が本明細書に援用される、本発明の譲受人に譲渡された米国特許第６，７２０，３０６号明細書に記載されている。
【００６５】
本明細書に記載される化合物の特定の態様では、Ｒ2及びＲ6は、独立して、Ｃ1-6アルキルである。Ｒ2及びＲ6は、両方とも、メチルまたはメトキシであることが好ましい。別の好ましい態様では、Ｒ3及びＲ5は、水素である。別の好ましい態様では、Ｒ1及びＲ4は、独立して、水素、ＣＨ3及びＣＨ2ＣＨ3からなる群より選択される。
【００６６】
本発明の目的では、Ｌ1として本明細書に定義される二官能性の結合部分は、
【化２４】
2009539879.tif 000028
【００６７】
および
【化２５】
2009539879.tif 000029
【００６８】
から選択され、
ここで、
ＭはＸまたはＱであり、
ここで、
Ｘは、電子求引基であり、
Ｑは、
【化２６】
2009539879.tif 000030
【００６９】
から３〜６原子の位置に自由電子対を含む部分であり、
ａ及びｄは、独立して、０または正の整数であり、
ｂは、０または１であり、
ｑは、３または４であり、
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ14及びＲ15は、独立して、Ｒ9を定義する群と同一の群から選択され、
Ｙ5 は、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ12である。
【００７０】
一部の好ましい態様では、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5及びＲ6 は、ｍ及びｄが両方とも０のとき、すべてがＨではない。一部の特定の実施の形態では、Ｒ7及びＲ8は、カルボキシアルキル、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、ヒドロキシアルキル、及びメルカプトアルキルからなる群より選択される、置換Ｃ1-6アルキルを含む。さらに好ましい実施の形態では、Ｘは、Ｏ、ＮＲ12、Ｓ、ＳＯ及びＳＯ2からなる群より選択され、Ｏ及びＮＲ12であることが好ましく、Ｑは、Ｃ2-4アルキル、シクロアルキル、アリール、及びアラルキル基からなる群より選択される。Ｑは、ＮＨ、ＮＲ12、Ｏ、Ｓ、−ＣＨ2−ＣＨ(Ｏ)−Ｎ(Ｈ)−、及びオルト置換されたフェニルからなる群のうちから置換される。さらなる特定の実施の形態では、ｄは、１〜約１２の整数であり、１または２であることが好ましい。
【００７１】
別の態様では、放出性リンカーは、
【化２７】
2009539879.tif 000031
【００７２】
に対応するアミノ酸を用いる。アミノ酸残基は、天然または非天然アミノ酸でありうる。疎水性または非疎水性の、天然アミノ酸、及び、さまざまな当技術分野で既知の非天然アミノ酸（ＤまたはＬ）、の誘導体及び類似体もまた、本発明の範囲内であることが意図されている。非天然アミノ酸残基の適切な非限定的リストには、２−アミノアジピン酸、 ３−アミノアジピン酸、β−アラニン、β−アミノプロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、ピペリジン酸、６−アミノカプロン酸、２−アミノヘプタン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノイソ酪酸、２−アミノピメリン酸、 ２，４−アミノ酪酸、デスモシン、２，２−ジアミノピメリン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、 ｎ−エチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロイソロイシン、Ｎ−メチルグリシン、サルコシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、６−Ｎ−メチル−リジン、Ｎ−メチルバリン、ノルバリン、ノルロイシン、及びオルニチンが含まれる。一部の好ましいアミノ酸は、グリシン、アラニン、メチオニン、またはサルコシンであり、グリシンがさらに好ましい。
【００７３】
Ｌ1は、
【化２８】
2009539879.tif 000032
【００７４】
が好ましく、
ここで、すべての変数は、先に定義されたとおりである。
【００７５】
あるいは、Ｌ1は、
【化２９】
2009539879.tif 000033
【００７６】
および
【化３０】
2009539879.tif 000034
【００７７】
からなる群より選択可能であり、
ここで、
Ｒ31〜Ｒ37は、独立して、水素、アミノ、置換アミノ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、シリルエーテル、スルホニル、メルカプト、Ｃ1-6 アルキルメルカプト、アリールメルカプト、置換アリールメルカプト、置換Ｃ1-6 アルキルチオ、Ｃ1-6 アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ2-6 アルキニル、Ｃ3-19 分岐鎖アルキル、Ｃ3-8 シクロアルキル、Ｃ1-6 置換アルキル、Ｃ2-6 置換アルケニル、Ｃ2-6 置換アルキニル、Ｃ3-8 置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ1-6 へテロアルキル、置換Ｃ1-6 へテロアルキル、Ｃ1-6 アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ1-6 へテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ2-6 アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ2-6 アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ2-6 アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ2-6 置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ2-6 置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ2-6 置換アルカノイルオキシ、及び、置換アリールカルボニルオキシからなる群より選択され、
ここで、置換基は、アシル、アミノ、アミド、アミジン、アラルキル、アリール、アジド、アルキルメルカプト、アリールメルカプト、カルボニル、カルボキシレート、シアノ、エステル、エーテル、ホルミル、ハロゲン、ヘテロアリール、へテロシクロアルキル、ヒドロキシ、イミノ、ニトロ、チオカルボニル、チオエステル、チオアセテート、チオホルメート、アルコキシ、ホスホリル、ホスホネート、ホスフィネート、シリル、スルフヒドリル、サルフェート、スルホネート、スルファモイル、スルホンアミド、及びスルホニルからなる群より選択され、
ｗ’およびｙ’は、独立して、０または正の整数であり、好ましくは１〜６であり、
ｖ’は、０または１である。
【００７８】
放出性リンカーは、
【化３１】
2009539879.tif 000035
【００７９】
および
【化３２】
2009539879.tif 000036
【００８０】
のうちの１つである芳香族基、Ａｒを含み、
ここで、
Ｊは、Ｏ、Ｓ、またはＮＲ13であり、
Ｅ及びＺは、独立して、ＣＲ13またはＮＲ13であり、
Ｒ13は、Ｒ9を定義する群と同一の群から選択される。
【００８１】
インデノイソキノリンのポリマー複合体は、前述の米国特許第６，１８０，０９５号明細書に記載される、Enzon Pharmaceuticals, Inc.社から市販されるＲＮＬ型活性化ＰＥＧリンカーのいずれかを用いて、本発明の別の態様で調製することができることが理解されよう。
【００８２】
本発明は、ｔ−メチルロック(methyl lock)（ＴＭＬ）系及びバイシン系のシステムなど、別の実施の形態では、放出性リンカーシステムを用いることができる。ＴＭＬを含むこれらの別の放出性シンカーシステムは、参照することにより、その内容が本明細書に援用される、米国特許第５，９６５，１１９号、同第６，６２４，１４２号、及び同第６，３０３，５６９号の各明細書に記載されている。バイシン系の放出性リンカーシステムは、本発明の譲受人に譲渡された、米国特許第７，１２２，１８９号、及び同第７，０８７，２２９号の各明細書、及び米国特許出願第１０／５５７，５２２号、同第１１／５０２，１０８号、及び同第１１／０１１，８１８号の各明細書に記載されている。これら各特許文献の開示は、参照することにより本明細書に援用される。
【００８３】
Ｄ．ＩｎｄＱポリマー複合体の調製
本発明のさらなる態様では、放出できるように結合されたＩｎｄＱポリマー複合体の調製方法が提供される。一般に、ＩｎｄＱのＰＥＧポリマー複合体は、ＩｎｄＱの選択的保護を経て生成した後、活性ＰＥＧと結合する。活性化ＲＮＬ−ＮＨＳ誘導体は、例えば前述の米国特許第６，１８０，０９５号明細書に記載される技法を用いて、先に報告したように生成された。これらのＰＥＧ化条件を用いて、他のＩｎｄＱ誘導体及び他のＰＥＧリンカーのほとんどを結合させることができることは、当業者によって理解されよう。
【００８４】
さまざまなインデノイソキノリンの調製方法が、参照することによってその内容を本明細書に援用される、米国特許出願公開第２００６／００２５５９５号明細書に記載されている。
【００８５】
本発明は、化学式（III）の化合物の調製方法を提供する。本方法は、
（ａ）下記構造：
【化３３】
2009539879.tif 000037
【００８６】
を有する活性化ポリマーを提供し、
（ｂ）前記活性化ポリマーを下記構造：
【化３４】
2009539879.tif 000038
【００８７】
を有する保護化インデノイソキノリンと反応させ、
（ｃ）工程（ｂ）から得られた中間体から前記保護基を除去して化学式（III）：
【化３５】
2009539879.tif 000039
【００８８】
の化合物を形成する、
各工程を有してなり、
ここで、
Ａはキャップ基または
【化３６】
2009539879.tif 000040
【００８９】
であり、
Ｒは、実質的に非抗原性の水溶性ポリマーであり、
Ｌ1は、二官能性の結合部分であり、
Ｙ1-4 は、独立してＯ、Ｓ、またはＮＲ12であり、
Ｒ1、Ｒ4、Ｒ9、Ｒ10、及びＲ12は、独立して、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-12分岐鎖アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ1-6置換アルキル、Ｃ3-8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ1-6ヘテロアルキル、及び、置換Ｃ1-6へテロアルキルからなる群より選択され、
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、及びＲ6は、独立して、水素、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、フェノキシ、Ｃ1-8へテロアルキル、Ｃ1-8へテロアルコキシ、置換Ｃ1-6アルキル、Ｃ3-8シクロアルキル、Ｃ3-8置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、ハロゲン−、ニトロ−、シアノ−、カルボキシ−、Ｃ1-6カルボキシアルキル、及び、Ｃ1-6アルキルカルボニルからなる群より選択され、
Ａｒは、化学式（II）に含まれる場合に、多置換の芳香族炭化水素または多置換の複素環式芳香族基を形成する、芳香族部分であり、
ｒ、ｓ、ｔ、及びｕは独立して０または１であり、
ｍ及びｐは、独立して０または正の整数であり、
Ｂ1は離脱基であり、
Ｂ2は保護基である。
【００９０】
離脱基または活性化基は、当業者に知られており、例えば、ｐ−ニトロフェノキシ、チアゾリジニルチオン、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル、または、例えばＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾリル、ハロゲン、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジル、イミダゾリル、Ｏ−アシル尿素、ペンタフルオロフェノールまたは２，４，６−トリ−クロロフェノールなどの他の適切な離脱基または活性化基、または、当業者にとって明白な他の適切な離脱基が挙げられる。ＩｎｄＱのＯＨを保護するための、適切なＯＨ−保護基の非限定的なリストとしては、ＴＢＤＰＳＣｌ、ＴＢＤＭＳＣｌ及びＴＭＳＣｌが挙げられる。当技術分野における熟練者にとって周知の他の適切な保護基も、本発明の範囲内にある。
【００９１】
あるいは、本明細書に記載の化合物は、ＩｎｄＱをＲＮＬリンカーと結合させた後にＰＥＧ化することによって調製することができる。インデノイソキノリンのポリマー複合体は、米国特許第６，１８０，０９５号明細書に記載されるものを含む、Enzon Pharmaceuticals, Inc.社から市販される、任意のＲＮＬ型の活性化ＰＥＧリンカーを用いて、本発明の別の態様で調製することができる。
【００９２】
以下に示すスキーム１に記載されるように、ＯＨ上の保護基を利用することにより、20kｍＰＥＧ−ＲＮＬ９−ＮＨＳ、20kΔＰＥＧ−ＲＮＬ９−ＮＨＳ、及び40kΔＰＥＧ−ＲＮＬ９−ＮＨＳ（ＲＮＬ９−ＮＨＳ部分を以下のカッコ内に示す）を含むさまざまなＰＥＧｓが、選択的に、MJ III 65（ＮＳＣ７０６７４４）（以後「ＩｎｄＱ」という）の第２級アミン基に付加した。脱保護化に続いて、ＰＥＧ化されたＩｎｄＱ複合体が成功裏に生成した。
【００９３】
ＲＮＬ９−ＮＨＳ：
【化３７】
2009539879.tif 000041
【００９４】
スキーム１．40kΔＰＥＧ−ＲＮＬ９−ＩｎｄＱ
2009539879.tif 000042
【００９５】
本発明の目的では、活性化基または離脱基は、ＩｎｄＱ上に認められる第２級アミン基と反応する能力のある基と解されるべきである。
【００９６】
本発明の一部の態様では、放出性リンカーシステムを含む活性化ポリマーとして：
【化３８】
2009539879.tif 000043
【００９７】
および
【化３９】
2009539879.tif 000044
【００９８】
が挙げられる。
【００９９】
本発明の１つの別の態様では、ＩｎｄＱポリマー複合体は、本発明の譲受人に譲渡された、米国特許第７，１２２，１８９号、及び同第７，０８７，２２９号の各明細書、及び米国特許出願第１０／５５７，５２２号、同第１１／５０２，１０８号、及び同第１１／０１１，８１８号の各明細書に記載されるような、特定のバイシン系の放出性リンカーシステムを含む。このような活性化ポリマーの一部には、
【化４０】
2009539879.tif 000045
【０１００】
および
【化４１】
2009539879.tif 000046
【０１０１】
が含まれる。
【０１０２】
Ｅ．好適な化合物
本明細書に記載される化合物の一部の特定の実施の形態は、
【化４２−１】
2009539879.tif 000047
【化４２−２】
2009539879.tif 000048
【０１０３】
および
【化４３】
2009539879.tif 000049
【０１０４】
から選択され、
ここで、ＰＥＧは化学式：
−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)x−ＣＨ2ＣＨ2−
を有し、
ｘは約１０〜約２，３００の整数である。
【０１０５】
本発明の化合物としては、
【化４４】
2009539879.tif 000050
【０１０６】
または
【化４５】
2009539879.tif 000051
【０１０７】
が好ましく、
ここで、ｘは約１０〜約２，３００の整数である。
【０１０８】
本発明のさらに別の態様では、化学式（III）の化合物の薬学的に許容される塩が提供される。本発明のさらなる態様では、化学式（III）の化合物またはそれらの塩を効果的な量で含む、薬学的に許容される薬剤が提供される。
【０１０９】
Ｆ．治療方法
さらに別の態様では、本発明は、癌の治療方法を提供する。本方法は、化学式（III）の化合物を効果的な量でそれらを必要とする患者に投与する工程を含む。治療可能な病状としては、癌または腫瘍、あるいは一般にトポイソメラーゼＩ阻害剤及び／またはインデノイソキノリンの投与を必要とする病状が挙げられる。
【０１１０】
１つの特定の態様では。治療方法には、下記化学式：
【化４６】
2009539879.tif 000052
【０１１１】
を有する化合物を投与する工程が含まれ、
ここでｘは約１０〜約２，３００の整数である。ｘは、ＰＥＧが約２０，０００〜約６０，０００、さらに好ましくは約４０，０００の分子量を有するように選択される整数であることが好ましい。
【０１１２】
治療に効果的な量の決定は、特に本開示を踏まえた、当業者の能力の範囲内である。
【０１１３】
本発明の方法に用いる化合物では、治療に効果的な量は、最初にインビトロでアッセイをすることによって推定することができる。よって、投与量は、動物モデル用に製剤し、効果的な投与量を含む血中濃度範囲を達成して差し支えない。このような情報を用いて、患者に有用な投与量をさらに的確に決定することができる。例えば、プロドラッグとして用いられる、投与される組成物の量は、そこに含まれる親化合物によって決まるであろう。一般に、本治療方法に用いられるプロドラッグの量は、哺乳動物に所望の治療結果を効果的に達成する量である。当然、さまざまなプロドラッグ化合物の投与量は、親化合物、インビボでの加水分解速度、ポリマーの分子量などに応じて、多少変化するであろう。加えて、当然ながら、投与量は投与形態及び投与経路に応じて変化しうる。しかしながら、一般的には、本明細書に記載される化合物は、約１〜約１００ｍｇ／ｋｇ／週の範囲の量で投与することができ、約２〜約６０ｍｇ／ｋｇ／週が好ましい。上記範囲は例示であって、当業者は、臨床経験及び治療適応に基づいて選択されるプロドラッグの最適な投与量を決定するであろう。さらには、正確な剤形、投与経路及び投与量は、患者の病状を考慮して、個別の内科医によって選択されて差し支えない。また、本明細書に記載される化合物の毒性及び治療効力は、当技術分野で周知の方法を用いて、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手段によって決定することができる。１つの特定の態様では、本発明は、本明細書に記載される化合物を、ＩｎｄＱと等価で約５ｍｇ／ｋｇ／回〜約２０ｍｇ／ｋｇ／回の量を投与することを含む、癌またはトポイソメラーゼＩ阻害剤に関係する疾病の治療方法を提供する。
【０１１４】
１つの特定の態様では、本発明の治療は、本明細書に記載される化合物を、約５〜約２０ｍｇ／ｋｇ／回または約１０〜約３０ｍｇ／ｋｇ／回の量で、癌またはトポイソメラーゼＩ阻害剤に関係する疾病を有する哺乳動物に投与する工程を含む。
【０１１５】
組成物は、複数週の治療プロトコルの一環として与えられて差し支えない、一日一回量、または複数回に分けた用量で投与されてもよい。正確な用量は、当業者に認識されるように、病状の段階及び重症度、ポリマー−プロドラッグ複合体組成物に対する腫瘍の感受性、及び治療される患者の個別の特性によって決定される。
【０１１６】
ポリマー複合体が投与される本発明のすべての態様において、記載される投薬量は、投与されるポリマー複合体の量ではなく、ＩｎｄＱの量に基づいている。治療は、所望の臨床結果が得られるまで、１日以上の期間、与えられることが意図されている。本発明の化合物の正確な量、頻度、及び投与期間は、当然ながら、主治医によって決定される病気の重症度はもとより、性別、年齢、及び患者の病状に応じて変化するであろう。
【０１１７】
さらなる態様は、相乗効果または上乗せ効果を目的として、本明細書に記載される本発明の化合物を、他の抗癌治療と併用することを含む。
【０１１８】
Ｇ．組成物／製剤
本明細書に記載のポリマー複合体を含む医薬品組成物は、例えば、さまざまな周知の混合、溶解、顆粒化、粉末化、エマルション化、カプセル化、封入、または凍結乾燥法など、当技術分野で周知の方法によって製造して差し支えない。組成物を、賦形剤及び、活性化合物を医薬品に使用可能な調剤へと加工するのを促進する助剤を含む、１種類以上の生理的に許容される担体と併せて製剤してもよい。適切な剤形は、選択される投与経路によって決まる。
【０１１９】
限定はしないが、静脈注射、筋肉注射、及び皮下注射を含めた注射では、本発明の化合物を水溶液の形態で製剤して差し支えなく、生理食塩緩衝液などの生理的に適合する緩衝液、または、限定はしないがピロリドンまたはジメチルスルホキシドを含む極性溶媒が好ましい。
【０１２０】
化合物はまた、例えばボーラス注入または持続注入による、非経口的投与用に製剤されて差し支えない。注射用製剤は、単位用量の形態で、例えばアンプルまたは複数回用の容器中に存在させてもよい。有用な組成物としては、限定はしないが、懸濁液、溶液、もしくは、油性または水性媒体のエマルションが挙げられ、懸濁剤、安定剤、及び／または分散剤などの添加剤を含めてもよい。
【０１２１】
非経口的投与用の医薬品組成物としては、限定はしないが、活性化合物の塩（好適）などの水溶性の形態の水溶液が挙げられる。加えて、活性化合物の懸濁液は、脂肪親和性の媒体で調製して構わない。適切な脂肪親和性の媒体として、ゴマ油などの脂肪油、オレイン酸エチル及びトリグリセリドなどの脂肪酸エステル、またはリポソームなどの材料が挙げられる。注射用水性懸濁液は、カルボキシルメチル・セルロース・ナトリウム、ソルビトール、またはデキストランなど、懸濁液の粘性を上昇させる物質を含んでもよい。随意的に、懸濁液に、適切な安定剤及び／または化合物の溶解度を高める薬剤を含めて、高濃度溶液を調製して構わない。あるいは、活性成分は、使用前に、殺菌した、発熱物質を含まない水などの適切な媒体で用時調製するため、粉末の形態であってもよい。
【０１２２】
経口投与では、活性化合物を当技術分野で周知の薬学的に許容される担体と併せて、化合物を製剤することができる。このような担体は、本発明の化合物を、錠剤、丸薬、トローチ剤、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、ペースト、スラリー、溶液、懸濁液、患者の飲用水で希釈する高濃度の溶液及び懸濁液、患者の食料で希釈する予混合物など、患者の経口摂取用に製剤することができる。経口用途の医薬品組成物は、固体の賦形剤を用いて、随意的に得られた混合物を粉砕し、顆粒の混合物を加工し、必要に応じて他の適切な助剤を加えた後、錠剤または糖衣錠のコアを得ることで、作ることができる。有用な賦形剤としては、とりわけ、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖などの増量剤、例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、及びジャガイモデンプンなどのセルロース調製物、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの他の材料が挙げられる。必要に応じて、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸など、崩壊剤を加えてもよい。アルギン酸ナトリウムなどの塩も使用して構わない。
【０１２３】
吸入による投与では、本発明の化合物は、加圧型パックまたは噴霧器及び適切な推進剤を用いたエアゾールスプレーの形態で便利に送達させることができる。
【０１２４】
化合物はまた、例えばココアバター又は他のグリセリドなど、従来の坐剤用基剤を使用して、坐剤又は保持浣腸剤(retention enemas)などの直腸用組成物の形態で製剤化して差し支えない。
【０１２５】
前述の製剤に加えて、化合物は、持続性製剤として製剤化してもよい。このような長時間作用型の製剤は、インプランテーション（皮下または筋肉内）または筋肉注射によって投与して差し支えない。この発明の化合物は、この投与経路では、適切なポリマーまたは疎水性材料を用いて（例えば、薬理学的に許容される油を用いたエマルションの形態で）、イオン交換樹脂を用いて、または、限定はしないが、やや不溶性の塩など、やや不溶性の誘導体として製剤化されて構わない。
【０１２６】
リポソーム及びエマルションなど他の送達システムも使用することができる。
【０１２７】
さらには、化合物は、治療薬を含む固体の疎水性ポリマーの半透性の基剤などの徐放システムを用いて送達されてもよい。さまざまな徐放性材料が確立され、当業者によく知られている。徐放性のカプセルは、それらの化学的性質に応じて、数週間から１００日を超える期間にわたり、化合物を放出して差し支えない。特定の化合物の化学的性質及び生物学的安定性に応じて、追加的な安定化法を用いてもよい。
【実施例】
【０１２８】
以下の実施例は、本発明のさらなる理解を提供する役割をするが、多少なりとも、本発明の有効範囲を制限することを意味しない。実施例に挙げる下線及び太字の数字はスキーム２に示すものに対応している。ＡＣＮ（アセトニトリル）、ＤＣＭ（ジクロロメタン）、ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド）、ＤＳＣ（ジスクシンイミジルカーボネート）、ＩＰＡ（イソプロパノール）、及びＴＥＡ（トリエチルアミン）などの略語が、実施例中に用いられている。
【０１２９】
スキーム２．40kΔＰＥＧ−ＲＮＬ９−ＩｎｄＱ
2009539879.tif 000053
実施例１．概要
すべての反応は、乾燥窒素雰囲気下で行なった。市販の試薬及び無水溶媒はさらなる精製をせずに使用した。インデノイソキノリン化合物（ＩｎｄＱ、MJ III 65またはNSC 706744）は、米国国立がん研究所及びパデュー大学(Purdue University)から提供された。ＮＭＲスペクトルは、望ましいindicated重水素で置換された溶媒を用いて、Varian Mercury 300 MHzのＮＭＲ分光計で記録した。化学シフト（δ）は、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）から下の領域をｐｐｍで記録し、結合定数（Ｊ値）をＨｚで得た。ラット血漿におけるＰＥＧ化したインデノイソキノリンの反応の進行及びインビトロでの加水分解は、０．０５％ＴＦＡを用いた水中のアセトニトリルの直線的な勾配を使用し、２５０×４．６ｍｍ、Ｃ１８のPhenomenex Jupiter 300Aカラム上に２７５ｎｍを観察する紫外吸光検出器を備えた、Waters 2420 HPLCでモニタした。質量スペクトルは、Agilent質量分析計から得た。
【０１３０】
実施例２．化合物１
ＤＭＦ（５０ｍｌ）中の４−ヒドロキシベンジルアルコール（１０．０ｇ、８０．６ｍｍｏｌ）及びｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（１３．４ｇ、８８．９ｍｍｏｌ）の溶液を氷浴で０℃まで冷却した後、ＤＭＦ（１００ｍｌ）中のＴＥＡ（４４．６ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。反応混合物を室温まで上昇させ、一晩攪拌した。反応の完了をＴＬＣで確認後、反応混合物を減圧下で蒸発させることによって濃縮し、その後、ＤＣＭ（２００ｍｌ）及び１０％ＮａＨＣＯ3（１５０ｍｌ）で抽出した。有機層を無水ＭｇＳＯ4で乾燥し、ロータリー・エバポレータで濃縮した。この生成物を、シリカゲルクロマトグラフィーでさらに精製し、化合物１（９．５ｇ）を得た：1H NMR (300 MHz, CDCl3）δ7.08 (d, 2H, J = 8.3), 6.67 (d, 2H, J = 8.4), 4.99 (s, 1H), 4.57 (s, 1H), 0.93 (s, 9H), 0.091 (s, 6H); 13C NMR (75.4 MHz, CDCl3) δ154.4, 133.4, 127.8, 115.0, 64.8, 26.0, 18.5, -5.1。
【０１３１】
実施例３．化合物２
ジスクシンイミジルカーボネート（ＤＳＣ、０．７０ｇ、２．７３ｍｍｏｌ）を、化合物１（０．７１ｇ、３．０ｍｍｏｌ）及びピリジン（０．２６ｍｌ、３．２５ｍｍｏｌ）を含むクロロホルム（５０ｍｌ）に懸濁した。混合物を一晩還流した後、室温まで冷却し、ＤＭＦ（３０ｍｌ）中の40kＰＥＧ−(ＮＨ2)2（１０ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びピリジン（０．２６ｍｌ、３．２５ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。反応混合物を室温で一晩拡販し、その混合物を減圧下で蒸発させることにより濃縮させた。粗生成物をエーテルで沈殿させ、２０％ＤＭＦ／ＩＰＡから結晶化し、化合物２（９．５ｇ）を得た：13C NMR (75.4 MHz, CDCl3)δ154.5, 149.6, 138.0, 126.6, 121.1, 64.3, 40.9, 25.9, 18.3, -5.2。
【０１３２】
実施例４．化合物３
化合物２（８．５ｇ）を、ＡＣＮ（４０ｍｌ）、Ｈ2Ｏ（２０ｍｌ）及び酢酸（１００ｍｌ)の混合液中、室温で一晩攪拌した後、ＤＣＭ（１００ｍｌ）で抽出した。有機層をロータリー・エバポレータで濃縮し、エーテルで沈殿させ、エーテルで洗浄して、化合物３３（８．０ｇ）を得た：13C NMR (75.4 MHz, CDCl3)δ154.4, 150.0, 138.1, 127.5, 121.3, 64.2, 40.9。
【０１３３】
実施例５．40kＰＥＧ−(ＲＮＬ９−ＮＨＳ)2 （化合物４）
ＤＳＣ（０．７７ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を、化合物３（７．５ｇ、０．１８８ｍｍｏｌ）を含む、ＤＣＭ（１００ｍｌ）及びＤＭＦ（１０ｍｌ）の溶液中に懸濁した。混合物を０℃〜−１０℃に冷却した後、ピリジン（０．２５ｍｌ、３．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を一晩かけて室温まで上昇させ、減圧下で蒸発させることにより混合物を濃縮した。粗生成物をエーテルで沈殿させ、２０％（v/v）のＤＭＦ／ＩＰＡから再結晶し、化合物４（６．５ｇ）を生成させた：13C NMR (75.4 MHz, CDCl3)δ168.3, 154.1, 151.5, 151.2, 129.8, 129.6, 121.7, 40.9, 25.4。
【０１３４】
実施例６．ＩｎｄＱ−ＴＢＤＰＳ（化合物５）
無水ＤＭＦ１００ｍｌ中のＩｎｄＱ（１．０ｇ、２．２１ｍｍｏｌ）及びｔ-ブチルジフェニルシリルクロリド（２．８２ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）の懸濁液に２．３２ｍｌ（１６．７ｍｍｏｌ）のＴＥＡ及び６０ｍｌのＤＭＦの混合液を室温にて加えた。反応混合物を５０℃で一晩、強攪拌した。ＩｎｄＱが消失した後、混合物を減圧下で蒸発させて濃縮した。残渣を、酢酸エチル、ＤＣＭ及びメタノールの混合液を溶離液として用いたシリカゲルのオープンカラムに注入し、純度９４．７％の化合物５（０．５５ｇ）を得た：1H NMR (300 MHz, DMSO-d6)δ7.84 (s, 1H), 7.63 (m, 4H) 7.61 (s, 1H), 7.44 (m, 7H), 6.08 (s, 2H), 4.84 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.73 (t, 2H),  2.72 (m, 2H),  2.66 (m, 2H), 1.82 (m, 2H), 0.99 (s, 9H) ppm; ESI-MS, 691.36 [M＋1]+。
【０１３５】
実施例７．40kＰＥＧ−(ＲＮＬ９-ＩｎｄＱ−ＴＢＤＰＳ)2（化合物６）
化合物４（６．０ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、化合物５（０．４５ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．５ｍｌ、２．８７ｍｍｏｌ）の溶液を室温で一晩攪拌した後、減圧下で蒸発させることにより溶媒を除去した。残渣をエーテルで沈殿させた。沈殿物を真空ろ過によって回収し、エーテルで洗浄した。粗生成物を、２０％ＤＭＦ／ＩＰＡで２回、６５℃で再結晶し、化合物６（５．４ｇ）を得た。
【０１３６】
実施例８．40kＰＥＧ−(ＲＮＬ９-ＩｎｄＱ)2（化合物７）
化合物６（５．４ｇ）を、ＴＨＦの５０％水溶液（２００ｍｌ）中の２．５ＮのＨＣｌに溶解させた。溶液を室温で攪拌した。化合物６の消失をＨＰＬＣで確認した後、反応混合物を蒸発させてＴＨＦを除去し、ＤＣＭで抽出した。有機層をエーテルで沈殿させ、粗生成物を得た。生成物を、２０％ＤＭＦ／ＩＰＡで、６５℃において結晶化し、純度９９％の化合物７（４．４ｇ）を生成した：13C NMR (75.4 MHz, CDCl3)δ189.1, 162.0, 156.4, 154.6, 152.9, 151.2, 150.6, 148.8, 148.6, 133.0, 132.1, 130.0, 128.8, 127.9, 121.4, 116.6, 107.7, 105.1, 102.7, 102.5, 66.7, 61.0, 56.1, 55.9, 50.8, 46.1, 42.5, 40.9, 28.6。
【０１３７】
実施例９．ラット血漿中におけるＩｎｄＱ−ＲＮＬ９−ＰＥＧ複合体の加水分解
各バイアル（１．５ｍｌ）に、１０ｍｇ／ｍｌの濃度のＰＥＧ化ＩｎｄＱ複合体のメタノール溶液を加えた。減圧下でメタノールを除去した後、０．１ｍｌのラット血漿を各バイアルに加え、加水分解を開始させた。各バイアルを０．５分間ボルテックスし、すぐに３７℃のインキュベーター内に置いた。０、０．５、２、４、６、及び２４時間の時間間隔で、選択したバイアルに０．４ｍｌのＭｅＯＨとＡＣＮ（１：１）の混合液を加え、加水分解をクエンチした。クエンチした混合物を０．４５μｍのフィルタ膜でろ過し、１０μｌのろ液をＨＰＬＣシステムに注入した。結果を下記の表１に示す。
【０１３８】
実施例１０．ＩｎｄＱ％の決定
本明細書に記載する化合物について、活性化ＩｎｄＱ重量％を決定した。例えば、ＲＮＬ９を含む40kΔＰＥＧ−ＩｎｄＱにおけるＩｎｄＱの量を、純度９９．５％のＩｎｄＱを外部標準として使用して、バイオ紫外線可視分光光度計で測定した。ＩｎｄＱ（１０ｍｇ）を２５ｍｌの９０％ＤＭＦに溶解し、３０分間、超音波処理して、濃度０．８８５ｍｍｏｌ／ｍｌのＩｎｄＱの原液を調製した。標準曲線測定に使用するＩｎｄＱ標準液を、ＩｎｄＱの原液を希釈して、０．０５μｍｏｌ／ｍｌ〜０．０３０μｍｏｌ／ｍｌの濃度で調製した。試験するＰＥＧ−ＲＮＬ９−ＩｎｄＱ化合物（１０ｍｇ）を１ｍｌの９０％ＤＭＦ水溶液に溶解した。ＩｎｄＱ及びＰＥＧ化ＩｎｄＱ溶液の吸収を２９０ｎｍで測定し、ＩｎｄＱの量を算出した。表１を参照のこと。
【表１】
2009539879.tif 000054
【０１３９】
表は、本明細書に記載される化合物が、ＩｎｄＱを生理食塩水に可溶化し、安定化させたことを示している。カスタマイズした放出性ＰＥＧリンカーを使用したインデノイソキノリン化合物のＰＥＧ化は、難溶性のＩｎｄＱ(NSC 706744)を成功裏に可溶化させた。例えば、生理食塩水中のＲＮＬ９を含む１％未満の20kΔＰＥＧ化ＩｎｄＱは、室温で４時間、分解された。ＲＮＬ９を含むＰＥＧ化ＩｎｄＱは、インビトロでのラット血漿において、約４．２時間の半減期を示した。
【０１４０】
実施例１１．中空糸アッセイ
所定の中空糸スクリーニングに、１２の腫瘍細胞系の標準パネルを使用した。これらには、ＮＣＩ−Ｈ２３、ＮＣＩ−Ｈ５２２、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５、ＳＷ−６２０、ＣＯＬＯ２０５、ＬＯＸ、ＵＡＣＣ−６２、ＯＶＣＡＲ−３、ＯＶＣＡＲ−５、Ｕ２５１及びＳＦ−２９５が含まれる。合計３種類の細胞系を各実験用に調製し、各マウスが３つの腹腔内インプラント（各細胞系を１つずつ）、及び、３つの皮下インプラント（各細胞系を１つずつ）を与えられるようにした。試験される各化合物を、２回量の濃度で腹腔内投与した。各治療群における各細胞系の％ネット成長を算出し、媒体で治療した対照群の％ネット成長と比較した。媒体対照試料に比べて、治療試料における％ネット成長における５０％を超える低下は、肯定的な結果と考えられる。各肯定的な結果には２点が与えられ、試験した所定の化合物について、すべての得点を合計した。試験した化合物の最大可能得点は９６点であった（１２細胞系×２箇所×２服用レベル×２[得点]）。ｉｐ＋ｓｃの得点が２０点以上、ｓｃの得点が８点以上、または、評価した両方の用量レベルでいずれかの細胞系の細胞死を引き起こした場合、化合物には、異種移植変試験が検討される。
【０１４１】
１２及び１８ｍｇ／ｋｇ／用量のＩｎｄＱ活性用量と等価の20kΔＰＥＧ−ＲＮＬ９−ＩｎｄＱ、及び９及び１２ｍｇ／ｋｇ／用量のＩｎｄＱ活性用量と等価の40kΔＰＥＧ−ＲＮＬ９−ＩｎｄＱを使用して、先に公開されている方法によって、マウスのインビボにおける中空糸アッセイ（ＨＦＡ）を行った。比較対照のため、NSC 706744（天然または未修飾のもの）を、所定の試験での最高用量である、１００及び１５０ｍｇ／ｋｇ／用量の投与量で評価した。
【０１４２】
投与した化合物の量は、例えば、約１６ｍｇ／ｋｇの用量を提供するような薬剤に基づいている。したがって、
計算値：20kΔＰＥＧ−ＲＮＬ９−ＩｎｄＱ
１６ｍｇ／ｋｇの用量
例えば体重２５ｇのマウスを使用
マウスあたり０．４ｍｇのＩｎｄＱ
（１６ｍｇ／１０００ｇ）×２５ｇ＝０．４ｍｇ
マウスあたり１０．８ｍｇのＩｎｄＱ−ＰＥＧ複合体
ＩｎｄＱの重量％：３．７％
０．４ｍｇ／３．７％＝１０．８ｍｇ
マウスあたり、濃度５３ｍｇ／ｍｌのＩＮＤＱ−ＰＥＧを０．２０ｍｌ 
溶解度＝Ｃ＝５３ｍｇ／ｍｌ
Ｖ＝１０．８／５３＝０．２０ｍＬ
同様に、
計算値：40kΔＰＥＧ−ＲＮＬ９−ＩｎｄＱ
１６ｍｇ／ｋｇの用量
体重２５ｇのマウスを使用
マウスあたり０．４ｍｇのＩｎｄＱ
（１６ｍｇ／１０００ｇ）×２５ｇ＝０．４ｍｇ
マウスあたり１８．２ｍｇのＩｎｄＱ−ＰＥＧ複合体
ＩｎｄＱの重量％：２．２％
０．４ｍｇ／２．２％＝１８．２ｍｇ
マウスあたり、濃度３２．９ｍｇ／ｍｌのＩＮＤＱ−ＰＥＧを０．５５ｍｌ 
溶解度＝Ｃ＝３２．９ｍｇ／ｍｌ
Ｖ＝１８．２／３２．９＝０．５５ｍＬ
インビボにおけるＨＦＡ活性の結果を表２に記載する。
【表２】
2009539879.tif 000055
【０１４３】
インビボでの研究は、ＰＥＧ化ＩｎｄＱ化合物が、親化合物NSC 706744の比較用量とは対照的に、優れた活性を有していることを示した。公開された得点比較を用いて、20kΔＰＥＧ−ＲＮＬ９−ＩｎｄＱ及び40kΔＰＥＧ−ＲＮＬ９−ＩｎｄＱの用量よりも著しく高い（市販の活性剤に基づいて）１００及び１５０ｍｇ／ｋｇ用量で、NSC 706744はＩＰ繊維で６／４８点、ＳＣ繊維で６／４８点を記録した。試験した20kΔＰＥＧ−ＲＮＬ９−ＩｎｄＱはＩＰで１２／４８点、ＳＣで４／４８点を記録した。試験した40kΔＰＥＧ−ＲＮＬ９−ＩｎｄＱの用量では、はるかに多い用量を投与したNSC 706744とは対照的に、ＩＰで２８／４８点、ＳＣで１０／４８点という非常に高い得点結果となった。40kＰＥＧの合計点３８／９６は、今日まで中空糸アッセイで評価した３６０４の化合物のうちの上位３％に入る。インビボでのＨＦＡ研究は、抗腫瘍能力の向上を、カスタマイズしたＰＥＧ化を通じて達成できることを示した。
【国際調査報告】
2009539879.tif 000075