(57)【要約】  本発明は、特に「ｐＨシンク領域」を用いることによりｐＨの変化の方向が逆転される等電点電気泳動による分離に使用される装置に関する。
2009539101.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
分離方向に沿って互いに隣り合って設けられる多数の領域を有する、特に等電点電気泳動による分離に用いられる装置であって、
前記装置は、少なくともｐＨシンク領域を有し、ここでｐＨ値は、一定であり、又は増加若しくは減少するｐＨ値を有する少なくとも１つの隣り合う領域と比較して、符号が異なる勾配を有する曲線を有する、装置。
【請求項２】
前記装置は、前記ｐＨシンク領域の次に分離領域が続く一連の領域を有し、前記分離領域は、分離後に生体分子が存在しうる領域を意味し及び／又は含む、請求項１に記載の装置。
【請求項３】
前記装置は、ｐＨシンク領域の次に遷移領域が続き、前記遷移領域の次に分離領域が続く一連の領域を有し、前記遷移領域は特に、分離方向において前記ｐＨシンク領域の直後に設けられ、分離後は本質的にアナライトがない領域を意味し及び／又は含む、請求項１又は２に記載の装置。
【請求項４】
前記ｐＨシンク領域の長さは、隣り合う２つの分離領域の平均の５％以上１００％以下である、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の装置。
【請求項５】
各々の単一の分離領域におけるｐＨの差は、０．０５以上４．０以下である、請求項１乃至４のいずれか１項に記載の装置。
【請求項６】
前記装置は、前記分離方向に関して、１又は複数のｐＨシンク領域及び１又は複数の分離領域の双方の前に設けられる開始領域を少なくとも有する、請求項１乃至５のいずれか１項に記載の装置。
【請求項７】
前記領域は、基板材料内に設けられ、少なくとも１つのアクリルモノマー及び少なくとも１つの多官能性アクリルモノマーの重合から生成されるポリアクリル酸物質を含む、請求項１乃至６のいずれか１項に記載の装置。
【請求項８】
多官能性アクリルモノマーが、少なくとも１つのｐＨ設定モノマーを含む、請求項１乃至７のいずれか１項に記載の装置。
【請求項９】
前記装置は、更に、自動化されたアナライザ及び多数のｐＨシンク領域を有し、前記ｐＨシンク領域の幅は、自動化されたアナライザの形状に適応される、請求項１乃至８のいずれか１項に記載の装置。
【請求項１０】
請求項１乃至９のいずれか１項に記載の装置を組み込んだシステムであって、
分子診断に使用されるバイオセンサ、
血液又は唾液のような複雑な生物学的混合物のタンパク質及び核酸の迅速且つセンシティブな検出、
化学、医薬又は分子生物学に関する高スループットスクリーニング装置、
犯罪学、病院内のオンサイトテスト、中央研究所又は科学研究の診断のための、例えばＤＮＡ又はタンパク質の、テスト装置、
心臓病学、感染症及び腫瘍学、食品、環境診断に関するＤＮＡ又はタンパク質診断のツール、
コンビナトリアルケミストリーのためのツール、
解析装置、
の１又は複数において使用されるシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、分離装置の分野に関し、特に生体分子の等電点電気泳動による分離装置の分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体分子、特に多数の生体分子を含みうるサンプルの分離において、等電点電気泳動として知られる技法が、広く使われている。この分離技法において、タンパク質のような多くの生体分子が、規定されるｐＨを有し、そのｐＨにおいては、それらが電気的に中性であり、そのｐＨ以下又は以上では、それらが帯電されることが利用される。
【０００３】
例えば国際公開第２００４／０３６２０４Ａ２号パンフレット及び米国特許出願公開第２００５０１５０７６９号公報にあるように、ｐＨが段階的に変えられる装置が提案されているが、通常、等電点電気泳動は、連続的に変化するｐＨを有する装置において行われる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、特に、より自動化された分離を提供するように設計される分離装置に関して、生体分子が分離後に有する位置が、分離されたサンプルの自動的な読み取りを容易にするように規定されるべきである必要がある。
【０００５】
従って、本発明の目的は、分離装置、特に、多くのアプリケーションに関して、より自動化された分離及び分離されたサンプルの読み取りが達成されうる等電点電気泳動に関する分離装置を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
この目的は、本発明の請求項１に記載の装置によって解決される。従って、分離、特に等電点電気泳動に用いられる装置であって、分離方向に沿って互いに隣り合って設けられる多数の領域を含む装置が提案されており、装置は、少なくともｐＨシンク領域を有し、ここでｐＨ値は、一定であり、又はｐＨ値が増加又は減少する少なくとも１つの隣り合う領域と比較して、符号の異なる勾配を有する曲線を有する。
【０００７】
本発明の意味において、「分離」なる語は、最も広い意味及び意義に理解されるべきであり、以下の１又は複数を含むことに注意すべきである。
−吸光度の差によって混合物を分離するために使用されるプロセス。
−液体又は気体によって保持される化学的混合物が、それらが静止した液相又は固相の周りを又は上を流れるとき、溶質の差分布の結果として、成分に分離されるプロセス。
−２つの異なる媒体に関する物質の相対的親和性の差に基づいて、物質の混合物を分離するために使用される技法の多様なグループの任意のもの。２つの異なる媒体の一方（移動相）は、動く流体であり、他方（固定相又は吸収剤）は、多孔性の固体及び／又はゲル及び／又は固体の支持体上にコーティングされた液体である。
−例えば等電点電気泳動のような、特に外部電場及び／又はｐＨである外力の影響化で異なる電荷及び／又は量の結果として生じる分離技法。
【０００８】
本発明による装置は、これに制限されないが、生物学的分子化合物の分離に有用でありえることに注意すべきである。生物学的分子化合物は、これらに限定されないが、例えば、核酸及び関連する化合物（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、オリゴヌクレオチド又はそれの類似体、ＰＣＲ製品、ゲノムＤＮＡ、細菌性人工染色体、プラスミド、その他）、タンパク質及び関連する化合物（例えばポリペプチド、ペプチド、モノクローナル又はポリクローナル抗体、可溶性の又は結合されたレセプタ、転写因子、その他）、抗原、リガンド、ハプテン、炭水化物及び関連する化合物（例えば多糖類、オリゴサッカライド、その他）、メンブレンフラグメントのような細胞フラグメント、細胞オルガネラ、無傷細胞、細菌、ウィルス、原生動物、その他である。
【０００９】
このような装置を使用することによって、多くのアプリケーションについて、以下の利点のうちの少なくとも１つが、達成されうる：
【００１０】
−ｐＨシンク領域を設けることにより、生体分子は、本質的に、このｐＨシンク領域には現れない。分離を行った後に生体分子が存在しうる装置の領域、特に装置の分離領域が、規定されるので、これは、より良好な自動化を可能にし、よって、多くのアプリケーションにおいて、解析の自動化を容易にする。
【００１１】
−装置は、この理由により、例えば高スクリーニング及び高いスループット解析のためにチップ上に適用されることができる自動解析装置において、より良く実現されることができる。
【００１２】
−生体分子が実質的に現れない明確に規定された領域（ｐＨシンク領域）があるとともに、ｐＨシンク領域は、分離領域に個別のセンサ素子を整合させる（そして、センサのより感受性がない領域、すなわち個別のセンサ素子間の領域とｐＨシンク領域を並べる）ことを可能にするので、装置は、すべての生体分子の処理の非常に効率的なやり方を可能にし、例えば他の解析のために分離チャネルで初期のアナライト物質のほぼ１００％を分離することを可能にし、すなわち非常に効率的な解析を可能にする。
【００１３】
−互いに非常に近い等電気泳動点を有する生体分子でも、本発明の範囲内の広範囲のアプリケーションについて、アナライト材料の損失無く又は取るに足らない損失のみを伴って、（シングルステップ装置において）効率的に分離されることができる。
【００１４】
−本発明の装置は、広範囲のアプリケーションにおいて適用可能であり、特に２Ｄ分離技法に関して有用である。
【００１５】
−本発明の装置は、広範囲のアプリケーションにおいて、非常に少ない量のアナライトであっても迅速且つ信頼性のある非常に効率的な臨床診断ツールを与えることを可能にする。このようなアプリケーションにおいて、アナライトの量は、多くの場合、制限されている（例えば患者の血液サンプル）。更には、解析時間が、重要な主要パラメータである。非常に少ない量の専用のタンパク質（又は例えば特定の病原体をマークする他の分子）であっても、検出されなければならない。
【００１６】
−本発明の装置は、広範囲のアプリケーションにおいて、シングルランで定量的解析を実施することを可能にする。
【００１７】
本発明の好適な実施例によれば、装置は、多数のｐＨシンク領域を含む。
【００１８】
本発明の好適な実施例によれば、装置は、ｐＨシンク領域の次に分離領域が続く一連の領域を含み、ここで、分離領域は、特に分離後に生体分子が存在しうる領域を意味し及び／又は含む。
【００１９】
本発明の範囲内の多くのアプリケーションによれば、（複数の）分離領域におけるｐＨの勾配は、（複数の）ｐＨシンク領域とは符号が異なることに注意すべきである。
【００２０】
本発明の異なる好適な実施例によれば、装置は、ｐＨシンク領域の次に遷移領域が続き、遷移領域の次に分離領域が続く一連の領域を含む。ここで、本発明の意味において遷移領域は、特に、分離方向においてｐＨシンク領域の直後に設けられ、分離時には本質的にアナライトがない領域を意味し及び／又は含む。
【００２１】
このような遷移領域において、ｐＨの勾配は、ｐＨシンク領域とは符号が異なりうる（これは必ずしもそうでなければならないというわけではないが）ことに注意すべきである。しかしながら、このような遷移領域の取り入れが、本発明の範囲内の広範囲のアプリケーションにおいて、本発明の範囲内の広範囲のアプリケーションについて分離の質を更に高め、それにより、ｐＨシンク領域の長さが、低減されることができることが示されている。
【００２２】
本発明の範囲内の多くのアプリケーションにおいて、このような遷移領域が存在する場合、遷移領域のｐＨの勾配は、ｐＨシンク領域とは符号が異なる。
【００２３】
本発明の好適な実施例によれば、ｐＨシンク領域の長さは、隣り合う２つの分離領域の平均の２％以上２００％以下である。これは、本発明の範囲内でほとんどのアプリケーションについて、コンパクトな設計を可能にする。
【００２４】
上述したように、遷移領域が、ｐＨシンク領域及び分離領域の間にあってもよいので、「隣り合う」なる用語は、必ずしも、ｐＨシンク領域が２つの分離領域の間でそれらに直接隣接することを意味しないことに注意すべきである。
【００２５】
本発明の好適な実施例によれば、ｐＨシンク領域の長さは、２つの隣り合う分離領域の平均の５％以上１００％以下である。
【００２６】
本発明の好適な実施例によれば、ｐＨシンク領域の長さは、２つの隣り合う分離領域の平均の１０％以上５０％以下である。
【００２７】
本発明の好適な実施例によれば、（等電点電気泳動の間の生体分子フローの方向における）ｐＨシンク領域の長さは、１μｍ以上５００μｍ以下である。これは、本発明の範囲内の多くのアプリケーションについて、コンパクトな設計を可能にする。
【００２８】
本発明の好適な実施例によれば、ｐＨシンク領域の長さは、１００μｍ以下である。
【００２９】
本発明の好適な実施例によれば、ｐＨシンク領域の長さは、５０μｍ以下である。
【００３０】
本発明の好適な実施例によれば、いくつかのｐＨシンク領域が装置に存在する場合、ｐＨシンク領域の長さは、同じ又は本質的に同じでありえ、別の好適な実施例によれば、ｐＨシンク領域の長さは、互いに異なることに注意すべきである。
【００３１】
本発明の好適な実施例によれば、分離領域の長さは、同じ又は本質的に同じでありえ、別の好適な実施例によれば、分離領域の長さは互いに異なることに注意すべきである。
【００３２】
好適な実施例によれば、各々の単一の分離領域のｐＨの差（最高から最低を引いたｐＨの増加又は減少グラジエント）は、０．０５以上４．０以下である。
【００３３】
好適な実施例によれば、各々の単一の分離領域におけるｐＨの差（増加又は減少グラジエント）は、０．１以上２．０以下である。
【００３４】
好適な実施例によれば、各々の単一の分離領域におけるｐＨの差（増加又は減少グラジエント）は、０．１以上１．０以下である。
【００３５】
本発明の好適な実施例によれば、分離領域におけるｐＨの平均差は、すべての分離領域について、同じ又は本質的に同じであり、本発明の別の好適な実施例によれば、分離領域のｐＨの平均差は、それぞれ異なる分離領域について異なる。
【００３６】
本発明の好適な実施例によれば、ｐＨシンク領域におけるｐＨの平均差は、すべてのｐＨシンク領域について同じであり又は本質的に同じであり、本発明の別の好適な実施例によれば、ｐＨシンク領域におけるｐＨの平均差は、異なるｐＨシンク領域について異なる。
【００３７】
本発明の好適な実施例によれば、装置は、（分離方向に関して）（複数の）ｐＨシンク領域及び（複数の）分離領域の両方の前に設けられる開始領域を少なくとも有する。
【００３８】
実際に、このような開始領域が、分離の品質を改善することができることが示された。
【００３９】
本発明の好適な実施例によれば、分離後、ｐＨシンク領域には、本質的にアナライトがない。
【００４０】
「本質的」なる語は、サンプル内のすべてのアナライトの３重量パーセント未満を、好適には１重量パーセント未満を、より好適には０．１重量パーセント未満を意味し及び／又は含む。
【００４１】
本発明の好適な実施例によれば、２つの隣り合う分離領域間に配置されるｐＨシンク領域を有し、増加する（又は減少する）ｐＨを有する隣り合う分離領域の数は、２以上１００以下である。
【００４２】
これは、広範囲のアプリケーションが、シングルランで解析を実施することを可能にする。
【００４３】
本発明の好適な実施例によれば、２つの隣り合う分離領域間に配置されるｐＨシンク領域を有し、増加（又は減少）するｐＨを有する隣り合う分離領域の数は、２０以上である。
【００４４】
本発明の好適な実施例によれば、２つの隣り合う分離領域間に配置されるｐＨシンク領域を有し、増加（又は減少）するｐＨを有する隣り合う分離領域の数は、５０以上である。
【００４５】
本発明の好適な実施例によれば、領域は、基板材料内に設けられ、少なくとも１つの二官能性モノマー及び少なくとも１つの多官能性（ｆ＞２）モノマーの重合から生成されるポリアクリル酸物質を含む。
【００４６】
モノマーは、一実施例によれば、モノマーから形成されるポリマーが、膨張した媒体を形成するために、水を容易に吸収するようなレンジから選択される。
【００４７】
本発明の一実施例によれば、アクリルモノマーは、アクリルアミド、特にソプロピルアクリルアミド、Ｎ，Ｎジメチルアクリルアミド、アクリル酸、ヒドロキシエチルアクリレート、エトキシエトキシエチルアクリレート、メタクリル酸又はその混合物を含むグループから選択される。
【００４８】
本発明の一実施例によれば、多官能性アクリルモノマーは、ビスアクリル及び／又はトリアクリル及び／又はテトラアクリル及び／又はペンタアクリルモノマーである。
【００４９】
本発明の一実施例によれば、多官能性モノマーは、Ｎ，Ｎメチレンビスアクリルアミド、ジエチレングリコールジアクリレート、トリエチレングルコールジアクリレート、テトラエチレングリコールジアクリレート、ポリエチレングリコールジアクリレート、ジエチレングリコールジメタクリレート、トリエチレングルコールジメタクリレート、テトラエチレングリコールジメタクリレート、トリプロピレングリコールジアクリレート、ペンタエリスリトールトリアクリレート又はその混合物を含むグループから選択される。
【００５０】
本発明の好適な実施例によれば、多官能性アクリルモノマー混合物は、少なくとも１つのｐＨ設定モノマーを含む。
【００５１】
本発明の好適な実施例によれば、少なくとも１つのｐＨ設定モノマーは、アクリル酸、緩衝剤モイエティのアクリルアミノ誘導体又はその混合物のグループから選択される。これらの物質は、本発明の範囲内の広範囲のアプリケーションに最も良く適していることが実際に示された。
【００５２】
本発明の好適な実施例によれば、装置は、（複数の）ｐＨシンク領域及び分離領域のｐＨを調整するために、少なくとも１つのｐＨ設定層を含む。
【００５３】
本発明の好適な実施例によれば、ｐＨ設定層は、重合された有機酸（例えばアクリル酸又はアクリルスルホン酸）、重合された有機アミン、ピリジン又はその混合物のグループから選択される物質を含む。これらの物質は、実際に、本発明の範囲内の広範囲のアプリケーションに最も良く適していることが示された。
【００５４】
本発明の好適な実施例によれば、ポリカーボハイドレート物質を含む、特に３，６−アンヒドロガラクトース及びＤグラクトースのポリマーを含む、領域が、基板材料内に設けられる。
【００５５】
本発明の好適な実施例によれば、装置は、更に、自動化されたアナライザ及び多数のｐＨシンク領域を含む。ここで、ｐＨシンク領域及び／又は分離領域の幅は、自動化されたアナライザの形状に適応される。
【００５６】
本発明の好適な実施例によれば、自動化されたアナライザは、ＣＣＤカメラである。ＣＣＤカメラは、リンクされた、又は結合されたキャパシタ（ピクセル）のアレイを含む集積回路を含む、画像を記録するためのセンサである。外部回路の制御下において、各々のキャパシタは、その近傍の１又は他のものにその電荷を移し、最終的に、各々のピクセルを最初に帯電させた光の強度の情報を提供することができる。キャパシタのアレイは、例えば水平の行についてはｐｈ、垂直の列についてはｐｖの期間で編成される１２８０ｘ１０２４ピクセルのマトリクスを形成する。
【００５７】
本発明の好適な実施例によれば、自動化されたアナライザは、光学センサ、磁気センサ、電気センサ、容量センサのグループから選択される少なくとも１つのセンサを有する。広範囲のアプリケーションにおいて、これらのセンサは、実際に真価を示された。
【００５８】
本発明の好適な実施例によれば、（複数の）ｐＨシンク領域及び／又は分離領域の幅は、分離チャネル及び／又は分離方向を含む分離媒体に整合される。
【００５９】
このような分離媒体は、例えば欧州特許出願公開第０５１１１９４０号公報に開示されており、その内容は、参照によって本願明細書に盛り込まれるものとする。
【００６０】
本発明は、更に、分離領域、ｐＨシンク領域及び／又は遷移領域を生成する方法であって、
ａ）段階的に増加する及び／又は減少するｐＨを有する第１の分離ゾーンを設けるステップと、
ｂ）特にｐＨ設定層を達成するために、ｐＨ設定手段を加えることによって、分離ゾーン内にｐＨシンク領域及び／又は遷移領域を導入するステップと、
を含む。
【００６１】
本発明の好適な実施例によれば、分離ゾーンは、好ましくは架橋剤としてメチレンビスアクリルアミドを用いる、特にアクリルアミドに溶解したアクリルアミド緩衝剤である２つの緩衝剤を選択し、分離ゾーンに沿って緩衝剤の間の比率を連続的に変化させることによって、提供される。
【００６２】
好適には、分離ゾーンは、アクリルアミド溶液内のアクリルアミド緩衝剤のグラジエントが、プラスチック支持フィルムに架橋されるスラブゲルにキャストされ、分離ゾーンを形成するゲルが、重合副産物を除去するために洗われ、その後、ゲルが、保存のために乾燥されるやり方で製造される。分離ゾーンの任意のポイントにおけるｐＨは、当該部位においてゲルに架橋される緩衝剤の混合物によって決定されることができる。
【００６３】
好適な実施例によれば、ステップｂ）は、印刷によって、好適には分離ゾーンの選択された部分に酸性及び／又は基本の分子を、好適にはストライプ形に、インクジェット印刷することによって提供される。
【００６４】
別の好適な実施例によれば、ステップｂ）は、分離ゾーンに光酸発生剤を最初に組み込み、グレースケールマスクを通じた分離ゾーンの照光によって、領域にｐＨの変化を引き起こし、ｐＨシンク領域及び／又は遷移領域を生じさせることによって、提供される。ここで、マスクは透過可能である。
【００６５】
本発明は、更に分離領域、ｐＨシンク領域及び／又は遷移領域を生成する方法であって、好適には架橋剤としてメチレンビスアクリルアミドを用いて、特にアクリルアミドに溶解したアクリルアミド緩衝剤である２つの緩衝剤を選択し、分離領域、ｐＨシンク領域及び／又は遷移領域を生成するために緩衝剤の間の比率を連続的に変化させることを含む。
【００６６】
これは、上述した方法のステップｂ）を回避し、従って、本発明の範囲内の広範囲のアプリケーション内で有用である。しかしながら、この方法は、ｐＨグラジエントのより滑らかな勾配を提供するためにより有利である一方で、上述の方法は、ｐＨのより急峻な勾配を生じさせるためにより有用であることが示された。
【００６７】
本発明による装置は、幅広い多様なシステム及び／又はアプリケーションにおいて有用でありえ、その幾つかを以下に示す。
−分子診断のために使用されるバイオセンサ。
−例えば血液又は唾液のような複雑な生物学的混合物におけるタンパク質及び核酸の迅速且つセンシティブな検出。
−化学、医薬又は分子生物学に関する高スループットスクリーニング装置。
−犯罪学、（病院内の）オンサイトテスト、中央研究所又は科学研究における診断に関する、例えばＤＮＡ又はタンパク質のテスト装置。
−心臓病学、感染症及び腫瘍学、食品、環境診断に関する、ＤＮＡ又はタンパク質診断のツール。
−コンビナトリアルケミストリーのツール。
−解析装置。
【００６８】
上述した構成要素、請求項に記載される構成要素、及び記述される実施例において本発明により使用される構成要素は、当該分野において知られている選択基準が、制限なく適用されることができるように、それらのサイズ、形状、物質選択及び技術的概念に関して、いかなる特別な除外も受けない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６９】
本発明の目的の付加の詳細、特徴、特性及び利点は、従属請求項、図面並びに個々の図面及び例示の以下の記述において開示される。個々の図面及び例示は、本発明による分離媒体及び装置のいくつかの好適な実施例を例示的な形態で示している。
【００７０】
図１は、本発明の第１の実施例による装置１の分離領域の非常に概略的な上面図を示している。この分離領域において、分離領域１０及びｐＨシンク領域２０は、分離方向に沿って交互に並べられる（図１では左から右である）。「ｐＨ］曲線によって概略的に示されているように、ｐＨは、分離領域１０において増加し、ｐＨシンク領域２０において減少する。
【００７１】
装置１は、更に分離の前にサンプルが注入される開始領域３０を含む。
【００７２】
結果として、分離を実施した後、生体分子は、ｐＨシンク領域２０には存在せず、分離領域１０にのみ存在する。
【００７３】
図１において、ｐＨシンク領域２０及び分離領域１０の幅は、或る程度同じであることに注意すべきである。しかしながら、多くのアプリケーションにおいて、状況は異なり、ｐＨシンク領域２０の幅は、分離領域１０の幅と比較して非常に狭い。
【００７４】
図１において、あるｐＨ値は、装置１の分離領域において「２倍」又は偶数倍で生じうることに更に留意すべきである。しかしながら、当業者であれば、これは、分離方向があるということにより、各々のｐＨについて、生体分子が「終わる」ただ１つの位置があるので、問題ではないことが容易に分かるであろう。
【００７５】
分離の質を高めるために、特に分離技法が等電点電気泳動であるとき、外部電界（図示せず）が、印加されることができることに注意すべきである。
【００７６】
図２は、本発明の第１の実施例による、装置１の分離領域の非常に概略的な上面図を示している。この装置は、２Ｄ分離に適しており、分離領域１０及びｐＨシンク領域２０を含む。分離領域１０及びｐＨシンク領域は、壁４０及び壁４０の間のチャネル５０に適応される。この構造は、例えば欧州特許出願公開第０５１１１９４０号公報から知られており、その内容は、参照によって本願明細書に盛り込まれるものとする。
【００７７】
サンプルは、本実施例において、（「Ｘ」によってマークされる）開始領域３０に注入される。その後、ｐＨによる第１の分離、例えば等電点電気泳動が実施される。ここで、本実施例において分離方向は、右から左であり、すなわち図１の装置とは逆である。
【００７８】
結果として、分離領域１０は、壁４０に適応されるので、サンプルのすべてのアナライトは、チャネルの前にくる。分離の第２のステップ（例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥでありうる）において、アナライトは、チャネル５０内でのみ移動することができ、これは、非常により高い程度の分離を伴う広範囲のアプリケーションを可能にする。
【００７９】
更に、別の好適な実施例（図示せず）によれば、チャネルは「井戸」のような構造を有することができることにも注意すべきである。このような構造は、例えば、欧州特許出願公開第０５１１１９４０号公報に開示されており、本発明の範囲内の広範囲のアプリケーションについて、光学及び／又は機械的センサによる大きな程度の解読率を可能にする。
【００８０】
図３は、本発明の第３の実施例による、分離方向（「ｘ」により示される）に沿ったｐＨグラジエントの非常に概略的な図を示している。
【００８１】
図３において、左から右に向かう分離方向に沿って、分離領域１０、ｐＨシンク領域２０及び遷移領域２５が、連続的に設けられ、その後、次の分離領域１０が続くことが明確に見られることができる。
【００８２】
図３において、分離領域と比較したｐＨシンク領域の長さは、かなり短いが、遷移領域２５があるということにより、分離領域の長さに対する、生体分子が存在しない又は本質的に存在しない領域の長さの比率は、約２０％である。
【００８３】
図４は、本発明の第４の実施例による、分離方向（「ｘ」によって示される）に沿ったｐＨグラジエントの非常に概略的な図を示している。図５は、本発明の第５の実施例による、分離方向（それは、「ｘ」によって示される）に沿ったｐＨグラジエントの非常に概略的な図を示している。
【００８４】
図４乃至図５の実施例において、ｐＨプロファイルは、同一であるが、図４では、分離方向が、左から右に向かい、図５は、右から左に向かい、すなわち反対方向にある。
【００８５】
図４及び図５においても、分離方向に沿って、分離領域１０、ｐＨシンク領域２０及び遷移領域２５が、連続的に設けられ、その後、次の分離領域１０が続くことが、明確に見られることができる。しかしながら、図４の実施例において、生体分子を有しない又は本質的に有しない領域（すなわち領域２０及び２５）の長さは、図５と比較して、非常に大きく、これは、分離方向を単に変更することによって、本発明の範囲内で、分離状態を大きく変化させることが可能であることを示している。
【００８６】
上述の詳細な実施例の構成要素及びフィーチャの特定の組み合わせは、単なる例示的なものであり、これらの教示と本明細書及び参照によって盛り込まれる特許／アプリケーションの他の教示との入れ替え及び置き換えもまた、明確にはっきりと企図される。当業者であれば分かるように、ここに記述されるものの変更、変形及び他の実現は、請求項に記載される本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、当業者に思いつくであろう。従って、前述した説明は、単なる例示にすぎず、制限することは意図されない。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲及びそれと同等のものにおいて規定される。更に、明細書及び特許請求の範囲において使用される参照符号は、請求項に記載される本発明の範囲を制限しない。
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】本発明の第１の実施例による装置の分離領域の非常に概略的な上面図。
【図２】本発明の第２の実施例による装置の分離領域の非常に概略的な上面図。
【図３】本発明の第３の実施例による分離方向に沿ったｐＨグラジエントの非常に概略的な図。
【図４】本発明の第４の実施例による分離方向に沿ったｐＨグラジエントの非常に概略的な図。
【図５】本発明の第５の実施例による分離方向に沿ったｐＨグラジエントの非常に概略的な図。
【図１】
2009539101.tif 000003
【図２】
2009539101.tif 000004
【図３】
2009539101.tif 000005
【図４】
2009539101.tif 000006
【図５】
2009539101.tif 000007
【国際調査報告】
2009539101.tif 000008
2009539101.tif 000009