(57)【要約】【解決手段】  本発明は化学式（Ｉ）を有する化合物に関し、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＱは本願明細書中で定義される。本発明の化合物はプロテインキナーゼの阻害剤として有用である。本発明はまた、上式の化合物を有する組成物に関する。本発明はまた、プロテインキナーゼのオープンコンホメーションを安定化する化合物、オープンコンホメーションにある結晶化したプロテインキナーゼ、およびその使用に関する。本願明細書に記載の化合物および組成物は、炎症症状または疾患の治療および予防に有用である。2009522363.tif 000038【選択図】      なし
2009522363.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式Ｉの化合物
【化１】
2009522363.tif 000035
又はその薬学的に許容可能な塩であって、
Ｒ１は、Ｒ５〜Ｌ１またはＲ５〜Ｌ２であり、
Ｒ２およびＲ３は、水素、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、アミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、及びＣ１〜６ジアルキルアミノからなる群から独立に選択されるものであり、或いは、Ｒ２およびＲ３は、それらに結合している炭素原子と共に５〜８員環を形成するものであり、
Ｒ４は、
【化２】
2009522363.tif 000036
であり、Ｘ１およびＸ２は、独立して（ＣＲ７Ｒ８）ｎであり、ｎはそれぞれ独立に１、２、または３であり、Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＨＮ−ＳＯ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、または−Ｃ（Ｏ）−であり、或いは、Ｒ４は、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、またはジ（Ｃ１〜６）アルキルアミノであり、
Ｒ５は、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノ、アミノカルボニル、Ｃ１〜６アルキルアミノカルボニル、Ｃ１〜６ジアルキルアミノカルボニル、フェニル、およびメトキシフェニルからなる群より独立に選択される１若しくはそれ以上の基で選択的に置換されている１、２、３、または４個のヘテロ原子を有する５又は６員のアリール環若しくはヘテロアリール環であり、
Ｌ１は、単結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＨ２、−ＯＣＨ２−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＳＣＨ２−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＸ２−、または−ＣＸＨ−であり、Ｘはハロゲンであり、
Ｒ６は、モルホリニル、チオモルホリニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、オキソチオモルホリニル、ジオキソチオモルホリニル、ピペラジニル、またはピペリジニルであり、
Ｌ２は、（ＣＲ９Ｒ１０）ｍであり、Ｒ９およびＲ１０は、それぞれ独立にＨ及びＣ１〜４アルキルからなる群から選択されるものであり、ｍは１、２、または３であり、
Ｑは、５員のヘテロアリール環またはフェニル環のジラジカルであり、その各々が１若しくはそれ以上のＲ１１およびＲ１２で選択的に置換されるものであり、
Ｇは、選択的に置換されたＣ１〜３アルキレン、Ｃ＝Ｏ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、または単結合のリンカーであり、
Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立に、水素、Ｃ１〜４アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１〜４アルキルアミノ、アミノカルボニル、Ｃ１〜４アルキルアミノカルボニル、Ｃ１〜４アルコキシカルボニル、ヒドロキシルメチル、アミノメチル、Ｃ１〜４アルキルアミノメチル、およびＣ１〜４アルキルアミノカルボニルメチルであり、
Ｒ１１は、独立して、それぞれが１〜３個のフェニル基で選択的に置換されている、Ｃ３〜１０アルキルまたはＣ３〜１０ハロアルキル；１若しくはそれ以上のＣ１〜３アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、オキソ、またはチオケトで選択的に置換されているＣ３〜７シクロアルキル；選択的に置換されたＣ３〜１０シクロへテロアルキル；選択的に、部分または完全ハロゲン化される可能性があり、且つ選択的に、１〜３個のＣ１〜５アルキルまたはフェニル基で置換されたＣ３〜１０分岐アルケニル；１〜３個のＣ１〜３アルキル基で選択的に置換されたＣ５〜７シクロアルケニル；シアノ；又はＣ１〜４アルコキシカルボニルであり、
Ｒ１２は、Ｃ１〜５アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜５アルコキシ、Ｃ１〜５アミノ、Ｃ１〜５アルキルアミノ、Ｃ１〜５ジアルキルアミノ、または選択的に置換されたフェニルであり、
ただし、Ｑが５員ヘテロアリール環のジラジカルである場合、Ｒ１はＲ５〜Ｌ１であり、Ｌ１は単結合である、化学式Ｉの化合物又はその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
請求項１記載の化合物において、Ｒ１はＲ５〜Ｌ１であり、Ｒ５はピリジル基であり、Ｌ１は、−ＣＨ２−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｓ−からなる群から選択されるものである。
【請求項３】
請求項１記載の化合物において、Ｒ１はＲ５〜Ｌ１であり、Ｒ５はピリジル基であり、Ｌ１は、−Ｏ−である。
【請求項４】
請求項１記載の化合物において、Ｑは、選択的に置換されたフェニル基である。
【請求項５】
請求項１記載の化合物において、ＱはＣ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルキル、またはハロゲンからなる群から選択される１若しくはそれ以上の置換基で置換されたフェニル基である。
【請求項６】
請求項１記載の化合物において、Ｒ４は、
【化３】
2009522363.tif 000037
である。
【請求項７】
請求項６記載の化合物において、Ｒ２は、モルホリン−４−イル、チオモルホリン−４−イル、１−オキソチオモルホリン−４−イル、及び１，１−ジオキソチオモルホリン−４−イルからなる群から選択されるものである。
【請求項８】
請求項６記載の化合物において、Ｒ２は、モルホリニル、チオモルホリニル、オキソチオモルホリニル、ジオキソチオモルホリニル、オキソピペラジニル、オキソジアゼパニル、およびジオキソチアジアゼパニルからなる群から選択されるものである。
【請求項９】
請求項６記載の化合物において、Ｘ１およびＸ２は、独立に、メチレン、エチレン、またはプロピレンである。
【請求項１０】
請求項１記載の化合物において、Ｇは−Ｃ（Ｏ）−である。
【請求項１１】
請求項１記載の化合物において、Ｒ２およびＲ３は水素である。
【請求項１２】
請求項１記載の化合物において、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜４アルキル、ハロゲン、、ヒドロキシル、およびアミノからなる群から独立に選択されるものである。
【請求項１３】
請求項１記載の化合物において、Ｒ１は、選択的に置換されたピリジロキシであり、Ｑは選択的に置換されたフェニルである。
【請求項１４】
請求項１記載の化合物において、Ｒ１は、選択的に置換されたピリジロキシであり、Ｑは、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルキル、またはハロゲンからなる群から選択される１若しくはそれ以上の置換基で置換されたフェニルである。
【請求項１５】
請求項１記載の化合物において、この化合物は、
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（３’，４’−ジフルオロ［１，１’−ビフェニル］尿素、
１−（４−（ピリジン−４−イロキシ）フェニル）−３−（２−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素、
１−（４−（４−アミノフロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）フェニル）−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）尿素、
１−（４−（４−アミノフロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル）フェニル）尿素、
メチル２−（３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ）フェニル）ウレイド）−４−（トリフルオロメチル）ベンゾエート、
メチル３−（３−（４−（ピリジン−４−イロキシ）フェニル）ウレイド）−５−（トリフルオロメチル）ベンゾエート、
メチル３−（３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ）フェニル）ウレイド）−５−（トリフルオロメチル）ベンゾエート、
１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ）フェニル）−３−（２−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素、
１−（４−（ピリジン−４−イロキシ）フェニル）−３−（３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素、
１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ）フェニル）−３−（３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素、
１−（４−（４−アミノ−６−（４−メトキシフェニル）フロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）フェニル）−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）尿素、
又は、これらの薬学的に許容可能な塩、からなる群から選択されるものである。
【請求項１６】
プロテインキナーゼ、及び請求項１記載の化合物を含有する組成物。
【請求項１７】
炎症性症状または炎症性疾患を治療または予防する方法であって、前記炎症性症状または炎症性疾患の治療または予防に十分な量の請求項１記載の化合物を、このような治療または予防を必要とする被験対象に投与する工程を有する方法。
【請求項１８】
プロテインキナーゼ介在性の症状または疾患を治療または予防する方法であって、前記プロテインキナーゼ介在性の症状または疾患の治療または予防に十分な量の請求項１記載の化合物を、このような治療または予防を必要とする被験対象に投与する工程を有する方法。
【請求項１９】
請求項１９記載の方法において、前記症状または疾患は癌である。
【請求項２０】
オープンコンフォメーションにおいてプロテインキナーゼの結晶形を調製する方法であって、請求項１記載の化合物の存在下で前記プロテインキナーゼを結晶化させる工程を有する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００６年１月４日に出願された米国仮出願第６０／７５５，８６０号の利益を主張するものであり、その全内容がこの参照により本願明細書に組み込まれるものである。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、プロテインキナーゼのコンフォメーション変調剤として有用な化学式Ｉの化合物に関する。この化合物はまた、プロテインキナーゼの阻害にも有用である。本発明はまた、当該化合物を含有する組成物にも関し、プロテインキナーゼ介在性の状態を処置したりプロテインキナーゼを阻害したりするのに化学式Ｉの化合物を用いる各種方法にも関する。
【０００３】
プロテインキナーゼは細胞過程の機能において重要な役割を果たしている。特定の分子経路の活性化および失活化は、多くの場合、１若しくはそれ以上のタンパク質のリン酸化または脱リン酸化により制御される。
【０００４】
例えば、ｐ３８キナーゼ等のマイトジェン活性化プロテインキナーゼは、炎症促進性サイトカイン類、エンドトキシン、紫外線、および浸透圧刺激等の各種ストレス刺激に応答して活性化する。ｐ３８の４種のアイソフォームが記載されている。このαおよびβ型は、炎症性細胞で発現し、ＴＮＦ−α産生の重要な介在物質であると考えられる。細胞中でのｐ３８αおよびβ酵素の阻害は、ＴＮＦ−αの発現レベルの低減を生じ、このような阻害剤は、炎症性疾患の動物モデルに有効である。
【０００５】
ｐ３８の多数の小分子阻害剤が、当該技術分野において既知である。これらの化合物は、ｐ３８キナーゼの表面の個々の位置を結合することで、その効果を及ぼすと考えられている。例えば、ある種のｐ３８阻害剤は、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１の産生を阻害し、その他は、それらの二次的生物学的効果の多くに直接的に干渉することができる。
【０００６】
タンパク質は多くの異なるコンフォメーションで存在することができる。これらのコンフォメーションは、様々な形で相互に異なることができる。例えばこれらのコンフォメーションは、各種３次元的立体配置で存在する異なった特定のアミノ酸を有することができる。よりグローバルな視点では、タンパク質は、全体的な３次構造の異なる立体配置で存在することができる。例えば、あるタンパク質は、「オープン」コンフォメーションおよび「クローズド」コンフォメーションの両者の形で存在することができる。
【０００７】
プロテインキナーゼのオープンコンフォメーションを安定化することのできる化合物は、キナーゼ類の作用を研究する手段として価値がある。このような化合物はまた、例えば薬剤発見の手段等の多くの理由で有用である。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の第１の観点は、化学式Ｉの化合物に関する。
【０００９】
本発明の第２の観点は、化学式Ｉの化合物と好適な担体または賦形剤を含有する組成物に関する。
【００１０】
本発明の第３の観点は、プロテインキナーゼの活性を阻害または調節する方法に関し、この方法は、プロテインキナーゼを化学式Ｉの化合物に接触させる工程を有する。
【００１１】
本発明の第４の観点は、プロテインキナーゼのコンフォメーションを特定する方法に関し、当該方法は化学式Ｉの化合物とのプロテインキナーゼ錯体の結晶を形成する工程を有する。
【００１２】
本発明の第５の観点は、プロテインキナーゼを結合または阻害することのできる化合物を特定する方法に関する。
【００１３】
本発明の第６の観点は、オープンコンフォメーションを有するプロテインキナーゼの結晶構造に関する。
【００１４】
本発明の第７の観点は、化学式Ｉの化合物との結晶化プロテインキナーゼ錯体に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明は、プロテインキナーゼに結合し、そのタンパク質上のアロステリック部位を露出させ安定化するように、タンパク質中でコンフォメーション変化を誘引する化合物を提供する。このアロステリック部位は、第２の化合物が結合し、そのタンパク質の機能に影響を与えることのできるプロテインキナーゼの領域である。このアロステリック部位の露呈は、例えば、プロテインキナーゼを阻害できる化合物の特定または設計に有用である。
【００１６】
本発明の化合物はまた、いくつかの実施形態においてはプロテインキナーゼの阻害剤として有用である。いくつかの実施形態における本発明の化合物は、以下のキナーゼの１若しくはそれ以上の阻害剤として有用である。すなわち、ＤＤＲ２、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ１、Ｆｌｔ３、Ｈｃｋ，ＪＮＫ２α２、ＪＮＫ３α３、ＪＮＫ３、ＫＤＲ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ＭＩＮＫ、ＭＫＫ６、Ｍｎｋ２、ＭｕＳＫ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｐｙｋ２、Ｒｅｔ、ＲＯＣＫＩ、ＴＡＫ１、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、Ａｂl１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−ａｌｐｈａ  １、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−ｂｅｔａ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ  Ａ，ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ｂｅｔａ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−ａｌｐｈａ、およびＳｒｃ。別の実施形態においては、この化合物は、以下のキナーゼの１若しくはそれ以上の阻害剤である。すなわち、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂl１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−ａｌｐｈａ１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−ｂｅｔａ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ  Ａ，ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ｂｅｔａ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−ａｌｐｈａ、およびＳｒｃ。別の実施形態においては、本発明による化合物は１若しくはそれ以上の以下のキナーゼの阻害剤である。即ち、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、およびＴｒｋＢ。
【００１７】
また別の実施形態において、本発明の化合物は、骨吸収、移植片対宿主反応、アテローム動脈硬化、関節炎、変形性関節症、リウマチ性関節炎、通風、乾癬、局所炎症性疾患病状、成人呼吸促迫症候群、喘息、慢性肺炎症性疾患、慢性閉塞性肺障害、心臓再灌流障害、腎臓再灌流障害、血栓、糸球体腎炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、多発性硬化症、エンドトキシンショック、骨粗鬆症、アルツハイマー病、うっ血性心不全、アレルギー、癌、および悪液質等のプロテインキナーゼ介在性の炎症およびその他の疾患の治療に有用である。
【００１８】
本発明の第１の観点は化学式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容可能な前記化合物の塩に関し、
【化４】
2009522363.tif 000003
【００１９】
Ｒ１はＲ５−Ｌ１またはＲ６−Ｌ２、
Ｒ２およびＲ３は独立に水素、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、アミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、およびＣ１〜６ジアルキルアミノ、またはＲ２およびはＲ３はこれらに結合している複数の炭素原子と共に５〜８員環を形成し、
Ｒ４は
【化５】
2009522363.tif 000004
であって、Ｘ１およびＸ２は独立に（ＣＲ７Ｒ８）ｎであり、ｎはそれぞれ独立に１、２、または３であり、Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＨＮ−ＳＯ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、または−Ｃ（Ｏ）−、あるいはＲ４はＣ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、またはジ（Ｃ１〜６）アルキルアミノであり、
Ｒ５は、５−または６員のアリール環、または１、２、３、または４個のヘテロ原子を有し、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノ、アミノカルボニル、Ｃ１〜６アルキルアミノカルボニル、Ｃ１〜６ジアルキルアミノカルボニル、フェニル、およびメトキシフェニルからなる群より独立に選択される１若しくはそれ以上の基で選択的に置換されているヘテロアリール環であり；
Ｌ１は、単結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＨ２、−ＯＣＨ２−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＳＣＨ２−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＸ２−、または−ＣＸＨ−であり、Ｘはハロゲンであり、
Ｒ６は、モルホリニル、チオモルホリニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、オキソチオモルホリニル、ジオキソチオモルホリニル、ピペラジニル、またはピペリジニルであり、
Ｌ２は（ＣＲ９Ｒ１０）ｍであり、Ｒ９およびＲ１０はそれぞれ独立にＨおよびＣ１−４アルキルからなる群から選択されるものであり、ｍは１、２、または３であり、
Ｑは、５員のヘテロアリール環またはフェニル環のジラジカルであって、その各々が１若しくはそれ以上のＲ１１およびＲ１２で選択的に置換され、
Ｇは、選択的に置換されたＣ１〜３アルキレン、Ｃ＝Ｏ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、または単結合のリンカーであり、
Ｒ７およびＲ８はそれぞれ独立に、水素、Ｃ１〜４アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１〜４アルキルアミノ、アミノカルボニル、Ｃ１〜４アルキルアミノカルボニル、Ｃ１〜４アルコキシカルボニル、ヒドロキシルメチル、アミノメチル、Ｃ１〜４アルキルアミノメチル、およびＣ１〜４アルキルアミノカルボニルメチルであり、
Ｒ１１は独立に、それぞれが選択的に１〜３つのフェニル基で置換されている、Ｃ３〜１０アルキルまたはＣ３〜１０ハロアルキル；１若しくはそれ以上のＣ１〜３アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、オキソ、またはチオケトで選択的に置換されているＣ３〜７シクロアルキル；選択的に置換されているＣ３〜１０シクロへテロアルキル；選択的に部分または完全ハロゲン化されていて、選択的に１〜３つのＣ１〜５アルキルまたはフェニル基で置換されていてもよいＣ３〜１０分岐アルケニル；１〜３つのＣ１〜３アルキル基で選択的に置換されているＣ５〜７シクロアルケニル；シアノ；またはＣ１〜４アルコキシカルボニルであって、
Ｒ１２は、Ｃ１〜５アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜５アルコキシ、Ｃ１〜５アミノ、Ｃ１〜５アルキルアミノ、Ｃ１〜５ジアルキルアミノ、または選択的に置換されたフェニルであり、
ただしＱが５員のヘテロアリール環のジラジカルである場合、Ｒ１は、Ｒ５−Ｌ１であり、Ｌ１は単結合である。
【００２０】
別の実施形態においては、本発明は化学式Ｉの化合物に関するものであり、
Ｒ１はＲ５−Ｌ１またはＲ６−Ｌ２、
Ｒ２およびＲ３は独立に水素、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、アミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、およびＣ１〜６ジアルキルアミノ、またはＲ２およびはＲ３はこれらに結合している複数の炭素原子と共に５〜８員環を形成し、
Ｒ４は
【化６】
2009522363.tif 000005
であって、Ｘ１およびＸ２は独立に（ＣＲ７Ｒ８）ｎであり、ｎはそれぞれ独立に１、２、または３であり、Ｚは、−Ｏ−、−ＮＨ−、−ＨＮ−ＳＯ２−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−、または−Ｃ（Ｏ）−であり、
Ｒ５は、５−または６員のアリール環、または１、２、または３個の窒素原子を有し、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノカルボニル、Ｃ１〜６アルキルアミノカルボニル、およびＣ１〜６ジアルキルアミノカルボニルからなる群より独立に選択される１若しくはそれ以上の基で選択的に置換されているヘテロアリール環であり、
Ｌ１は、単結合、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＨ２、−ＯＣＨ２−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＳＣＨ２−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＸ２−、または−ＣＸＨ−であり、Ｘはハロゲンであり、
Ｒ６は、モルホリニル、チオモルホリニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、オキソチオモルホリニル、ジオキソチオモルホリニル、ピペラジニル、またはピペリジニルであり、
Ｌ２は（ＣＲ９Ｒ１０）ｍであり、Ｒ９およびＲ１０はそれぞれ独立にＨおよびＣ１〜４アルキルからなる群から選ばれ、ｍは１、２、または３であり、
Ｑは、５員のヘテロアリール環またはフェニル環のジラジカルであって、その各々が１若しくはそれ以上のＲ１１およびＲ１２で選択的に置換され、
Ｇは、選択的に置換されたＣ１〜３アルキレン、Ｃ＝Ｏ、または単結合のリンカーであり、
Ｒ７およびＲ８はそれぞれ独立に、水素、Ｃ１〜４アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、Ｃ１〜４アルキルアミノ、アミノカルボニル、Ｃ１〜４アルキルアミノカルボニル、Ｃ１〜４アルコキシカルボニル、ヒドロキシルメチル、アミノメチル、Ｃ１〜４アルキルアミノメチル、およびＣ１〜４アルキルアミノカルボニルメチルであり、
Ｒ１１は独立に、それぞれが選択的に１〜３つのフェニル基で置換されている、Ｃ３〜１０アルキルまたはＣ３〜１０ハロアルキル；１若しくはそれ以上のＣ１〜３アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、オキソ、またはチオケトで選択的に置換されているＣ３〜７シクロアルキル；選択的に置換されているＣ３〜１０シクロへテロアルキル；選択的に部分または完全ハロゲン化されていて、選択的に１〜３つのＣ１〜５アルキルまたはフェニル基で置換されていてもよいＣ３〜１０分岐アルケニル；１〜３つのＣ１〜３アルキル基で選択的に置換されているＣ５〜７シクロアルケニル；シアノ；またはＣ１〜４アルコキシカルボニルであって、
Ｒ１２は、Ｃ１〜５アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜５アルコキシ、Ｃ１〜５アミノ、Ｃ１〜５アルキルアミノ、Ｃ１〜５ジアルキルアミノ、または選択的に置換されたフェニルであり、
ただしＱが５員のヘテロアリール環のジラジカルである場合、Ｒ１は、Ｒ５−Ｌ１であり、Ｌ１は単結合である。
【００２１】
一の実施形態において、本発明は化学式Ｉの化合物に関し、Ｒ１はＲ５−Ｌ１である。別の実施形態においては、Ｒ１はＲ６−Ｌ２である。別の実施形態においては、Ｒ１はＲ６−Ｌ２である。
【００２２】
一の実施形態において、Ｌ１は−ＣＨ２−である。別の実施形態においては、Ｌ１は−Ｏ−である。別の実施形態においては、Ｌ１は、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨＸ、および−ＣＸ２−からなる群から選択されるものである。別の実施形態においては、Ｌ１は単結合である。
【００２３】
一の実施形態において、Ｌ２はメチレン、エチレン、またはプロピレンである。別の実施形態においては、Ｌ２はその置換基と共にＣ３〜６分岐アルキレンリンカーである。
【００２４】
一の実施形態において、Ｒ１は、それぞれが選択的に置換されている４−ピリジロキシまたは３−ピリジロキシである。
【００２５】
一の実施形態において、Ｒ２およびＲ３は独立に、水素、Ｃ１〜６アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６ハロアルキル、アミノ、Ｃ１〜６アルキルアミノ、およびＣ１〜６ジアルキルアミノからなる群から選択されるものである。好適なＲ２およびＲ３基は、水素、メチル、エチル、プロピル、クロロ、ブロモ、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、クロロエトキシ、ジクロロエトキシ、アミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、ブチルアミノ、ジメチルアミノ、メチルエチルアミノ、およびジイソプロピルアミノ等である。別の実施形態では、Ｒ２およびＲ３は共に水素である。
【００２６】
別の実施形態において、Ｒ２およびＲ３は共に環を形成し、この環はフェニル環に融合して二環系をを形成する。適切な環として、炭素環、複素環、アリール環、非芳香環、ヘテロアリール環等が挙げられる。別の実施形態においては、Ｒ２およびＲ３は、３〜６員環を形成する。例えば、ある実施形態においては、Ｒ２、Ｒ３、およびフェニル環は共にナフチル環を形成する。Ｒ２およびＲ３により形成される別の好適な環系は、テトラヒドロナフチル、キノリニル、イソキノリニル等である。
【００２７】
別の実施形態において、Ｑはピロール、ピラゾール、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、フラン、またはチオフェンジラジカルであり、これらのそれぞれは１若しくはそれ以上のＲ１１およびＲ１２で置換されている。例えば、上記実施形態のそれぞれにおいて、Ｑはチエニル、ピラゾリル、およびチアゾイルからなる群から選ばれ、これらのそれぞれは選択的にＲ１１およびＲ１２で置換されている。ある実施形態では、５員複素環がＣ１〜５アルキル基、好ましくはｔ−ブチル基で置換されている。別の置換基として、メチル、エチル、およびイソプロピルが挙げられる。別の実施形態では、Ｑは、５−位をＣ１〜５アルキル基で置換されている等、選択的に置換されたチエニルである。
【００２８】
別の実施形態において、Ｑは、尿素が２−位に結合し、Ｇが３−位に結合しているチエニル基である。あるいは、Ｑは尿素が３−位に結合し、Ｇが２−位に結合しているチエニル基である。
【００２９】
また別の実施形態において、ＱはＣ１〜５アルキル基で置換されたピラゾリルである。
【００３０】
別の実施形態において、Ｑは選択的に置換されたフェニル環である。フェニル環は、例えば、アミノ、ヒドロキシル、ニトロ、ハロゲン、シアノ、チオール、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ３〜６シクロアルケニル、Ｃ３〜６シクロへテロアルキル、Ｃ３〜６シクロへテロアルケニル、Ｃ６〜１０アリール、５〜１０員のへテロアリール、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ３〜６アルケニルロキシ、Ｃ１〜６アルキルチオ、Ｃ１〜６アルキレンジオキシ、Ｃ１〜６アルコキシ（Ｃ１〜６）アルキル、Ｃ６〜１０アリール（Ｃ１〜６）アルキル、Ｃ６〜１０アリール（Ｃ２〜６）アルケニル、Ｃ６〜１０アリール（Ｃ１〜６）アルコキシ、Ｃ１〜６アミノアルキル、Ｃ１〜６アミノアルコキシ、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、Ｃ２〜６ヒドロキシアルコキシ、モノ（Ｃ１〜４）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜４）アルキルアミノ、Ｃ２〜６アルキルカルボニルアミノ、Ｃ２〜６アルコキシカルボニルアミノ、Ｃ２〜６アルコキシカルボニル、およびカルボキシで置換されていてもよい。別の実施形態においては、フェニル環は、１若しくはそれ以上のアミノ、ヒドロキシ、ニトロ、ハロゲン、シアノ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ３〜６シクロアルキルで置換されている。
【００３１】
一の実施形態において、Ｇは選択的に置換されたメチレン、エチレン、またはプロピレンリンカーのリンカーである。別の実施形態においては、Ｇは、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−である。また別の実施形態においては、Ｇは単結合である。別の実施形態においてはＧは−Ｃ（Ｏ）−である。
【００３２】
一の実施形態において、Ｒ４は、
【化７】
2009522363.tif 000006
である。別の実施形態においては、Ｒ４は
【化８】
2009522363.tif 000007
である。別の好適な実施形態においては、Ｘ１およびＸ２は共に非置換Ｃ１〜３アルキレン基である。別の好適な実施形態においては、Ｘ１およびＸ２は共に非置換エチレンである。ある実施形態においては、Ｚは−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）−、および−ＮＨＳ（Ｏ）−からなる群から選択されるものである。
【００３３】
Ｒ４の好適なものとして、モルホリニル、チオモルホリニル、オキソチオモルホリニル、ジオキソチオモルホリニル、オキソピペラジニル、オキソジアゼパニル、およびジオキソチアジアゼパニルが挙げられる。その他の好適な基として、１−オキソチオモルホリニル、１，１−ジオキソチオモルホリニル、４−モルホリニル、３−オキソピペラジニル、５−オキソ−１，４−ジアゼパニル、および１，１−ジオキソ[１，２，５]チアジアゼパニル等が挙げられる。
【００３４】
別の好適なＲ４基として、以下のものが挙げられる。
【００３５】
【化９】
2009522363.tif 000008
【００３６】
別の好適なＲ４基として、以下のものが挙げられる。
【００３７】
【化１０】
2009522363.tif 000009
【００３８】
別の好適なＲ４基として、以下のものが挙げられる。
【００３９】
【化１１】
2009522363.tif 000010
【００４０】
別の実施形態においては、Ｒ５は、上記のように選択的に置換された１、２、３、または４つのヘテロ原子を含む５または６員へテロアリール環である。例えば、Ｒ５は、１または２つの窒素原子を含む５または６員環であってもよく、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノ、アミノカルボニル、Ｃ１〜６アルキルアミノカルボニル、またはＣ１〜６ジアルキルアミノカルボニルにより置換されていてもよい。あるいは、Ｒ５は選択的に置換されたフェニル環でもよい。
【００４１】
ある実施形態においては、Ｒ５は１、２、または３つの窒素原子を含む６員環である。この６員環は、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、およびアルコキシアルキルからなる群から選択される１若しくはそれ以上の置換基で選択的に置換されていてもよい。別の具体的な実施形態において。Ｒ５は、２−ピリジル、３−ピリジル、または４−ピリジル等のピリジル基である。
【００４２】
別の実施形態において、Ｒ５は、窒素、硫黄、および酸素、およびこれらを組み合わせ等の１、２、または３つのヘテロ原子を含む９員の二環式ヘテロアリール環である。このヘテロアリール環は、アミノ、アミノカルボニル、Ｃ１〜６アルキルアミノカルボニル、およびＣ１〜６ジアルキルアミノカルボニルからなる群から選択される１若しくはそれ以上の置換基で選択的に置換されていてもよい。
【００４３】
別の好適なＲ５基として、２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イル、３，５−ジクロロピリジン−４−イル、フェニル、３，４−ジフルオロフェニル、４−アミノ−６−（４−メトキシフェニル）フロ「２，３−ｄ」ピリミジン−５−イル、および４−アミノフロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イルが挙げられる。
【００４４】
別の実施形態においては、Ｒ６はモルホリニルまたはチオモルホリニルである。あるいは、Ｒ６はテトラヒドロピラニルまたはテトラヒドロフラニルである。別の実施形態においては、Ｒ６はオキソチオモルホリニル、ジオキソチオモルホリニル、ピペラジニル、またはピペリジニルである。Ｒ６基のそれぞれは、選択的に置換されていてもよい。ある実施形態においては、Ｒ６基は、メチル、エチル、およびプロピルからなる群から独立に選択される１、２、または３つの置換基で選択的に置換される。
【００４５】
別の実施形態においては、Ｌ１は、Ｏ、Ｓ、または−ＣＨ２−である。別の実施形態においては、Ｌ１は、‐ＳＣＨ２−または−ＣＨ２Ｓ−である。別の実施形態においては、Ｌ１は−ＣＨ（ＯＨ）−または−Ｃ（Ｏ）−である。さらなる実施形態においては、Ｌ１は、−ＣＸ２−または−ＣＸＨ−であり、Ｘはハロゲンである。別の実施形態においては、Ｌ１は単結合である。
【００４６】
別の実施形態においては、Ｌ２は（ＣＲ９Ｒ１０）ｍであり、Ｒ５およびＲ６はそれぞれ水素で、ｍは１、２、または３である。別の実施形態においては、Ｌ２はＣ１〜４アルキル基で置換されたメチレン、エチレン、またはプロピレンである。別の実施形態においては、Ｌ２はメチレンリンカーである。
【００４７】
本発明の別の実施形態は、化学式Ｉの化合物に関し、Ｚは、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、またはＳ（Ｏ）２であり、Ｘ１およびＸ２は共に非置換のエチレンである。
【００４８】
別の実施形態においては、Ｑは、ＧおよびＲ４と共に、以下のものから選択される基を形成する。
【００４９】
【化１２】
2009522363.tif 000011
【００５０】
別の実施形態においては、Ｒ７およびＲ８は、水素、Ｃ１〜４アルキル、ハロゲン、アミノ、Ｃ１〜４アルキルアミノ、アミノカルボニル、Ｃ１〜４アルキルアミノカルボニル、およびＣ１〜４アルコキシカルボニルからなる群から独立に選択されるものである。別の実施形態においては、好適なＲ７およびＲ８として、水素、メチル、エチル、イソプロピル、クロロ、フルオロ、アミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、ヒドロキシ、プロピルアミノ、メチルアミノカルボニル、メトキシカルボニル、およびエトキシカルボニルが挙げられる。
【００５１】
別の実施形態においては、Ｒ９およびＲ１０は、水素、メチル、エチル、およびプロピルからなる群から独立に選択されるものである。別の実施形態においては、Ｒ９およびＲ１０は、水素、メチル、エチルからなる群から独立に選択されるものである。
【００５２】
別の実施形態においては、Ｒ１１は、Ｃ３〜１０アルキルおよびＣ３〜１０ハロアルキルからなる群から選択されるものである。別の実施形態においては、Ｒ１１は、１若しくはそれ以上のＣ１〜３アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、オキソ、またはチオケトで選択的に置換されたＣ３〜７シクロアルキルである。別の実施形態においては、Ｒ１１は、Ｃ３〜１０の選択的に置換されたシクロへテロアルキルである。また別の実施形態においては、Ｒ１１は、１〜３つのＣ１〜５アルキル基で選択的に置換されたＣ３〜１０分岐アルケニルおよびＣ３〜１０分岐ハロアルケニルからなる群から選択されるものである。また別の実施形態においては、Ｒ１１は１〜３つのＣ１〜３アルキル基で選択的に置換されたＣ５〜７シクロアルケニル、シアノ、およびＣ１〜４アルコキシカルボニルからなる群から選択されるものである。好適なＲ１１として、プロピル、ブチル、ヘキシル、シクロブチル、シクロプロピル、シクロヘキシル、シクロヘキサノイル等が挙げられる。
【００５３】
別の実施形態においては、Ｒ１２は、Ｃ１〜５アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１〜５アルコキシ、アミノ、Ｃ１〜５アルキルアミノ、およびＣ１〜５ジアルキルアミノからなる群から選択されるものである。別の実施形態においては、Ｒ１２は、フェニルおよび置換フェニルからなる群から選択されるものである。好適なＲ１２として、メチル、エチル、ブチル、フルオロ、ブロモ、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、アミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、ブチルアミノ、ジイソプロピルアミノ、フェニル等が挙げられる。
【００５４】
本発明の範囲の化合物の第一のサブクラスとして、化学式Ｉの化合物が挙げられ、Ｒ１は選択的に置換されたピリジロキシであり、Ｑは選択的に置換されたチエニルである。
【００５５】
これらの化合物のこの第一のサブクラスのある実施形態においては、Ｒ１は、Ｃ１〜５アルキル、Ｃ１〜５アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、Ｃ１〜５アルキルアミノ、Ｃ１〜５ジアルキルアミノ、シアノ、ハロゲン、カルボキシ、アミノカルボニル、およびＣ１〜５アルコキシカルボニルからなる群から選ばれた１または２つの置換基を有する４−ピリジロキシである。この第一のサブクラスの別の実施形態においては、Ｒ１は非置換４−ピリジロキシである。
【００５６】
この第一のサブクラスの別の実施形態においては、Ｑは非置換のチエニルである。ある実施形態においては、このチエニル基は、２または３−位の尿素のＮに結合している。別の実施形態においては、このチエニル基はＣ１〜５アルキル基、例えばｔ−ブチル基で５−位が置換されている。
【００５７】
この第一のサブクラスの別の実施形態においては、Ｒ４は、それぞれが選択的に置換されている、モルホリン−４−イル、チオモルホリン−４−イル、１−オキソチオモルホリン−４−イル、および１，１−ジオキソチオモルホリン−４−イルから選択される基である。
【００５８】
この第一のサブクラスの別の実施形態においては、Ｇは、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、Ｃ（Ｏ）、およびＣＨ２Ｃ（Ｏ）からなる群から選択されるものである。
【００５９】
本発明の範囲の化合物の第二のサブクラスとして、化学式Ｉの化合物が挙げられ、Ｒ１は選択的に置換されたピリジロキシであり、Ｒ４は、それぞれが選択的に置換されているモルホリン−４−イル、チオモルホリン−４−イル、１−オキソチオモルホリン−４−イル、および１，１−ジオキソチオモルホリン−４−イルからなる群から選択される基である。
【００６０】
本発明の範囲の化合物の第３のサブクラスとして、化学式Ｉの化合物が挙げられ、Ｒ１は選択的に置換されたピリジロキシであり、Ｇは、ＣＨ２およびＣ（Ｏ）からなる群より選択される基から選択されるものである。この第３のサブクラスにおいて、別の実施形態としてこれらの化合物が挙げられ、Ｒ２およびＲ３は水素である。
【００６１】
別の実施形態においては、本発明は、以下の化学式の１つを有する化学式Ｉに従う化合物に関する。
【００６２】
【化１３】
2009522363.tif 000012
【００６３】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｇ、およびＲ４は、上記定義のとおりである。
【００６４】
本発明の別の実施形態として、化学式Ｉに従う化合物が挙げられ、Ｒ１は３，５−ジクロロピリジン−４−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成する。
【００６５】
Ｒ１は、２−（メチルカルバモイル）ピリジン−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共にモルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル基を形成する。
【００６６】
Ｒ１は、ピリジン−４−イルメチル基であり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成する。
【００６７】
Ｒ１は、２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チアゾール−５−イル基を形成する。
【００６８】
Ｒ１は、ピリジン−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共に５−オキソ−１，４−ジアゼパン−１−カルボニル）チオフェン−３−イル基を形成する。
【００６９】
Ｒ１は、ピリジン−４−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共に１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル基を形成する。
【００７０】
Ｒ１は、ピリジン−４−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共に２−オキソピペラジン−４−カルボニル基を形成する。
【００７１】
Ｒ１は、ピリジン−４−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成する。
【００７２】
Ｒ１はピリジン−４−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１−オキシド−４−カルボニル基を形成する。
【００７３】
Ｒ１はピリジン−４−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成する。
【００７４】
Ｒ１はピリジン−４−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成する。
【００７５】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共に１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル）チオフェン−３−イル基を形成する。
【００７６】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共に５−オキソ−１，４−ジアゼパン−１−カルボニル基を形成する。
【００７７】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共に２−オキソピペラジン−４−カルボニル基を形成する。
【００７８】
Ｒ１はピリジン−４−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共にモルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル基を形成する。
【００７９】
Ｒ１はピリジン−４−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−４−カルボニル基を形成する。
【００８０】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成する。
【００８１】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共に２−オキソピペラジン−４−カルボニル基を形成する。
【００８２】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシであり、ＧおよびＲ４は共に５−オキソ−１，４−ジアゼパン−カルボニル基を形成する。
【００８３】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ基であり、ＧおよびＲ４は共に１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル基を形成する。
【００８４】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシであり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成し、ここで前述のサブグループは選択的に置換されていてもよい。
【００８５】
本発明の別の実施形態として、化学式Ｉに従う化合物が挙げられ、Ｒ１は３，５−ジクロロピリジン−４−イロキシ基であり、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１，１−ジオキシド−カルボニル基を形成する。
【００８６】
Ｒ１は、２−（メチルカルバモイル）ピリジン−イロキシ基であり、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共にモルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル基を形成する。
【００８７】
Ｒ１はピリジン−４−イルメチル基、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成する。
【００８８】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ基、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チアゾール−５−イル基を形成する。
【００８９】
Ｒ１は、ピリジン−４−イロキシ基、Ｑは、選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は、５−オキソ−１，４−ジアゼパン−１−カルボニル）チオフェン−３−イル基を形成する。
【００９０】
Ｒ１はピリジン−４−イロキシ基、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共に１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル基を形成し、
Ｒ１はピリジン−４−イロキシ基、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共に２−オキソピペラジン−４−カルボニル基を形成する。
【００９１】
Ｒ１は、ピリジン−４−イロキシ基、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成する。
【００９２】
Ｒ１はピリジン−４−イロキシ基、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４はチオモルホリン−１−オキシド−４−カルボニル基を形成する。
【００９３】
Ｒ１は、ピリジン−４−イロキシ基、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成する。
【００９４】
Ｒ１はピリジン−４−イロキシ基、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１，１−ジオキシド−カルボニル基を形成する。
【００９５】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ基、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共に１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル）チオフェン−３−イル基を形成する。
【００９６】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロオキシ基、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共に５−オキソ−１，４−ジアゼパン−カルボニル基を形成する。
【００９７】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ基、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共に２−オキソピペラジン−４−カルボニル基を形成し、
Ｒ１はピリジン−４−イロキシ基、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共にモルホリン−４−カルボニル）チオフェン−２−イル基を形成する。
【００９８】
Ｒ１はピリジン−４−イロキシ基、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−４−カルボニル基を形成する。
【００９９】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−イロキシ基、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成する。
【０１００】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ基、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共に２−オキソピペラジン−４−カルボニル基を形成する。
【０１０１】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共に５−オキソ−１，４−ジアゼパン−１−カルボニル基を形成する。
【０１０２】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ基、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共に１，２，５−チアジアゼパン−１，１−ジオキシド−５−カルボニル基を形成する。
【０１０３】
Ｒ１は２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ、Ｑは選択的に置換されたフェニルであり、ＧおよびＲ４は共にチオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル基を形成し、前述のいずれのサブグループも選択的に置換されていてもよい。
【０１０４】
別の実施形態においては、本発明は、本願明細書記載の方法で決定した場合、濃度２μＭで少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％のプロテインキナーゼ阻害効果を有する化学式Ｉの化合物に関する。本発明はまた、上記化合物の全てのサブクラスの化合物にも関し、この化合物は、本願明細書に記載の分析法で決定した場合、濃度２μＭで少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％のプロテインキナーゼ阻害効果を有する。ある実施形態においては、本発明はまた上記化合物の全てのサブクラスの化合物に関し、この化合物は本願明細書記載の分析法で決定した場合、濃度２μＭで少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％のプロテインキナーゼ阻害効果を有し、前記キナーゼはセリン−スレオニンキナーゼである。別の実施形態においては、本発明はまた、上記化合物の全てのサブクラスの化合物に関し、この化合物は本願明細書に記載の分析法で決定した場合、濃度２μＭで少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％のプロテインキナーゼ阻害効果を有し、前記キナーゼはチロシンキナーゼである。別の実施形態においては、本発明はまた、上記の化合物の全てのサブクラスの化合物に関し、この化合物は本願明細書記載の分析法で決定した場合、濃度２μＭで少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、または９５％のプロテインキナーゼ阻害効果を有し、前記キナーゼはマイトジェン活性化プロテインキナーゼである。
【０１０５】
これに限定されるものではないが、本発明のある実施形態は化学式Ｉの化合物に関し、Ｒ１は４−ピリジロキシ、Ｑは選択的に置換されたチエニルであり、当該化合物は２μＭの濃度でプロテインキナーゼを少なくとも８０％阻害し、前記プロテインキナーゼは、ＤＤＲ２、ＥｐｈＡ１、ＥＰｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ１、Ｆｌｔ３、Ｈｃｋ、ＪＮＫ２α２、ＪＮＫ３α３、ＪＮＫ３、ＫＤＲ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ＭＩＮＫ、ＭＫＫ６、Ｍｎｋ２、ＭｕＳＫ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｐｙｋ２、Ｒｅｔ、ＲＯＣＫＩ、ＴＡＫ１、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、Ａｂｌ１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−ａｌｐｈａ  １、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＧＳＫ３−ｂｅｔａ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ  Ａ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ｂｅｔａ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−ａｌｐｈａ、およびＳｒｃからなる群から選択されるものである。別の実施形態においてプロテインキナーゼは、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｐｙｋ２、Ｒｅｔ、ＲＯＣＫＩ、ＴＡＫ１、Ｔｉｅ２、ＴｒＫＡ、ＴｒｋＢ、Ａｂｌ１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−ａｌｐｈａ  １、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＧＳＫ３−ｂｅｔａ、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ  Ａ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−ｂｅｔａ、ＰＫＡ、ＰＫＣ−ａｌｐｈａ、およびＳｒｃからなる群から選択されるものである。
【０１０６】
別の実施形態においては、本発明は化学式Ｉの化合物に関し、Ｒ１は、Ｃ１〜４アルキル、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１〜４ハロアルキル、およびＣ１〜４アルコキシのうちの１〜３つで選択的に置換されたピリジロキシであり、前記化合物は、２μＭの濃度でプロテインキナーゼを少なくとも７５％阻害し、前記プロテインキナーゼは、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、およびＴｒｋＢからなる群から選択されるものである。
【０１０７】
別の実施形態においては、本発明は化学式Ｉの化合物に関し、Ｒ１はＣ１〜４アルキル、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１〜４ハロアルキル、およびＣ１〜４アルコキシのうちの１〜３つで選択的に置換されたピリジロキシであり、前記化合物は２μＭの濃度でプロテインキナーゼを少なくとも７５％阻害する。
【０１０８】
本願明細書に開示の方法および組成物に有用な好適な化合物の例として、以下のものが挙げられる。
【０１０９】
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（３’，４’−ジフルオロ［１，１−ビフェニル］尿素
１−（４−（ピリジン−４−イロキシ）フェニル）−３−（２−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素
１−（４−（４−アミノフロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）フェニル）−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）尿素、
１−（４−（４−アミノフロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）フェニル）−３−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル）フェニル尿素、
メチル２−（３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ）フェニル）ウレイド）−４−（トリフルオロメチル）ベンゾエート、
メチル３−（３−（４−（ピリジン−４−イロキシ）フェニル）ウレイド）−５−（トリフルオロメチル）ベンゾエート
メチル３−（３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ）フェニル）ウレイド）−５−（トリフルオロメチル）ベンゾエート
１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ）フェニル）−３−（２−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素、
１−（４−（ピリジン−４−イロキシ）フェニル）−３−（３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素、
１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ）フェニル）−３−（３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）尿素、
１−（４−（４−アミノ−６−（４−メトキシフェニル）フロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）フェニル）−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）尿素、および
これらの薬学的に許容可能な塩である。
【０１１０】
本発明はまた、化学式Ｉの化合物の塩を含む。「塩」の語は、化学式Ｉの化合物の酸および塩基添加塩を意味する。酸添加塩は、化学式Ｉの化合物に適切な酸を添加することにより生成できる。塩基添加塩は、化学式Ｉの化合物に適切な塩基を添加することにより生成できる。前記酸または塩基は、化学式Ｉの化合物を実質的に劣化、分解、または破壊しない。適切な塩の例として、塩酸塩、臭化水素酸塩、酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩、およびコハク酸塩が挙げられる。別の好適な塩として、ナトリウム、カリウム、炭酸塩、およびトロミタミン塩が挙げられる。
【０１１１】
本発明は、本系列に係る選択された化合物の構造的な非対称の結果から起こる、例えば、個々のエナンチオマーやジアステレオマーはもちろんエナンチオマーの混合物等の、光学異性体はもとより立体異性体も包含する。
【０１１２】
化学式Ｉの化合物はまた、水和等の溶媒和される。水和は化合物または当該化合物を含む組成物の製造中に起こることがあり、この水和は当該化合物の吸湿性性質により時間の経過と共に起こることもある。
【０１１３】
化学式Ｉの範囲のいくつかの化合物は、「プロドラッグ」と呼ばれる誘導体であってもよい。「プロドラッグ」という表現は、誘導体がその薬剤に比べて高い送達特性および薬効を有する、既知の直接作用する薬剤の誘導体を意味し、酵素または化学的処理により有効薬剤に転換するものである。プロドラッグは、代謝により切断できる基を有し、加溶媒分解または生理学的条件下で生体内で薬学的に活性な本発明の化合物となる本発明の化合物の誘導体である。例えば、本発明の化合物のエステル誘導体は、生体内で活性であることが多いが、生体外では活性を示さない。本発明の化合物の別の誘導体は、それらの酸および酸誘導体型の両方で活性を有するが、その酸誘導体型は哺乳動物の中での溶解性、組織適合性、または遅延遊離といった有利な点を供与することが多い（Ｂｕｎｄｇａｒｄ，Ｈ．，Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，ｐｐ．７〜９，２１〜２４，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ  １９８５参照）。プロドラッグとして、例えば親酸と適切なアルコールとの反応で調製されたエステル類、親酸化合物とアミンとの反応で調製されたアミド類等の当業者に既知の酸誘導体が挙げられる。本発明の化合物上のペンダント基の酸性基から誘導された単純脂肪族または芳香族エステル類は好ましいプロドラッグである。いくつかの場合においては、（アシロキシ）アルキルエステル類または（（アルコキシカルボニル）オキシ）アルキルエステル類等のダブルエステル型のプロドラッグを調製することが望ましい。
【０１１４】
いずれかの変数がいずれかの構成要素または化学式Ｉ中に１度以上存在する場合、各存在に対する定義は、特に明記のない限りその他の存在の定義とは独立している。また、置換基および／または変数の組み合わせは、そのような組み合わせが安定な化合物となる場合にのみ許容される。
【０１１５】
本願明細書中でそのもの自身あるいは別の基の一部として使用される「アルキル」の語は、分子鎖の長さが限定されていない限り、炭素数が１０までの直鎖および分岐状の分子鎖の基の両方を意味し、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、ペンチル、１−メチルブチル、イソブチル、ペンチル、ｔ−アミル（ＣＨ３ＣＨ２（ＣＨ３）２Ｃ−）、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、オクチル、またはデシルを含む。
【０１１６】
本願明細書中でそのもの自身あるいは別の基の一部として使用される「アルケニル」の語は、分子鎖の長さが限定されていない限り、炭素数が２〜１０までの直鎖および分岐状の分子鎖の基の両方を意味し、例えば、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、ペンテニル、１−ヘキセニル、および２−ヘキセニルが挙げられる。
【０１１７】
本願明細書中でそのもの自身あるいは別の基の一部として使用される「アルキニル」の語は、分子鎖の長さが限定されていない限り、炭素数が２〜１０までの直鎖および分岐状の分子鎖の基の両方を意味し、例えば、分子鎖中の２つの炭素原子間に少なくとも１つの３重結合があり、例えばエチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−メチル−２−ブチニル、１−メチル−３−ブチニル、２−メチル−３−ペンチニル、ヘキシニル、およびヘプチニル等が含まれる。
【０１１８】
アルケニルまたはアルキニル部分が置換基として存在する本願明細書中の例において、不飽和結合、即ちビニレニルまたはアセチレニル結合が好ましくは窒素、酸素、または硫黄部分に直接結合していない。
【０１１９】
本願明細書中でそのもの自身あるいは別の基の一部として使用される「シクロアルキル」の語は、３〜１４、好ましくは３〜１０個の炭素原子を含むシクロアルキル基を意味する。典型的な例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびビシクロ［２，２，２］オクチルが挙げられる。
【０１２０】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用される「シクロアルケニル」という語は、３〜１４、好ましくは３〜１０個の炭素原子、および１〜３個の炭素−炭素２重結合を有するシクロアルキル基を意味する。典型的な例として、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、シクロヘキサジエニルが挙げられる。
【０１２１】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用される「アルキレン」という語は、特に明記のない限り、１〜１５個の炭素原子、好ましくは１〜１０個の炭素原子、より好ましくは１〜６個の炭素原子を有する非分岐状の飽和炭化水素鎖のジラジカルを意味する。この語は、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２−ＣＨ２−）、プロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ブチレン等の基で例示される。
【０１２２】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用される「アルケニレン」という語は、特に明記のない限り、２〜１５個の炭素原子、好ましくは１〜１０個の炭素原子、より好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、少なくとも１、好ましくは１〜６箇所のビニル不飽和を有する非分岐状の不飽和炭化水素鎖のジラジカルを意味する。この語は、エテニレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）、プロペニレン（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２−）等の基によって例示される。
【０１２３】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用される「アルコキシ」という語は、特に明記のない限り、酸素原子に結合した上記のアルキル基のすべてを意味する。典型的な例として、メトキシ、エトキシ、イソプロピロキシ、ｓｅｃ−ブチロキシ、ｔ−ブチロキシが挙げられる。
【０１２４】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用される「アルケニロキシ」という語は、酸素原子に結合した上述のアルケニル基のすべてを意味する。典型的な例として、エテニロキシ、プロペニロキシ、ブテニロキシ、ペンテニロキシ、およびヘキセニロキシ等が挙げられる。
【０１２５】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用される「アリール」という語は、環状部分に６〜１４個の炭素原子、または環状部分に６〜１０個の炭素原子を有する単環または二環式の芳香基を意味する。
【０１２６】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用されるように「アラルキル」または「アリールアルキル」という語は、上記定義のようにベンジル、フェニルエチル、２−ナフチルメチル等のアリール置換基を有するＣ１〜６アルキル基を意味する。
【０１２７】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用される「ヘテロアリール」という語は、特に明記のない限り、５〜１４個の環原子を有し、環状配列中で共有される６、１０、または１４π電子を有し、炭素原子と１，２，３，４個の酸素、窒素、または硫黄原子とを有する基を意味する。ヘテロアリール基の例として、チエニル、ベンゾ[ｂ]チエニル、ナフト［２，３−ｂ］チエニル、チアントレニル、フリル、ピラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾキサゾリル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチイニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、インドリル、インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、イソキノリル、キノリル、フサラジニル、ナフチリジニル、キナゾリニル、シノリニル、プテリジニル、４αＨ−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ペリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、イソチアゾリル、フェノチアジニル、イソキサゾリル、フラジニル、フェノチアジニル、およびテトラゾリル基が挙げられる。さらに、ヘテロアリール類は、Ａ．Ｒ．Ｋａｔｒｉｚｋｙ  ａｎｄ  Ｃ．Ｗ．Ｒｅｅｓ，ｅｄｓ．，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｔｈｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｒｅａｃｔｉｏｎ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆＨｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｖｏｌ．１〜３，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９８４）に記載されている。
【０１２８】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用される「アルキレンジオキシ」という語は、アルキレン基および２個の酸素原子を有する環、特にＣ１〜４アルキレンジオキシを意味する。アルキレンジオキシ基は、ハロゲン（特にフッ素）で選択的に置換されていてもよい。典型的な例として、メチレンジオキシ（−ＯＣＨ２Ｏ−）またはジフルオロメチレンジオキシ（−ＯＣＦ２Ｏ−）が挙げられる。
【０１２９】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用される「ハロゲン」または「ハロ」という語は、塩素、臭素、フッ素、またはヨウ素を意味する。
【０１３０】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用される「モノアルキルアミン」または「モノアルキルアミノ」という語は、ＮＨ２の１個の水素が上記定義のアルキル基で置換された基を意味する。
【０１３１】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用される「ジアルキルアミン」または「ジアルキルアミノ」という語は、ＮＨ２の両方の水素が上記定義のアルキル基で置換された基を意味する。
【０１３２】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用される「ヒドロキシアルキル」という語は、１若しくはそれ以上の水素が１若しくはそれ以上の水素で置換されている上述のアルキル基のいずれかを意味する。
【０１３３】
本願明細書に記載の「アシルアミノ」の語は、化学式−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂの部分を意味し、ＲａおよびＲｂは独立に水素または上記定義のアルキル基である。
【０１３４】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用される「ハロアルキル」という語は、上述のアルキル基の１若しくはそれ以上の水素が１若しくはそれ以上のハロ部分で置換されている上述のアルキル基のいずれかを意味する。典型的な例として、フルオロメチル、トリフルオロメチル、トリクロロエチル、およびトリフルオロエチルが挙げられる。
【０１３５】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用される「ハロアルケニル」いう語は、上述のアルケニル基であって１若しくはそれ以上の水素が１若しくはそれ以上のハロ部分で置換されている上述のアルケニル基のいずれかを意味する。典型例として、フルオロエテニル、ジフルオロエテニル、およびトリクロロエテニルが挙げられる。
【０１３６】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用される「ハロアルキニル」という語は、上述のアルキニル基であって、１若しくはそれ以上の水素が１若しくはそれ以上のハロ部分で置換されている上述のアルキニル基を意味する。典型例として、フルオロエチニル、トリフルオロエチニル、およびトリクロロエチニルが挙げられる。
【０１３７】
本願明細書中でそのもの自身または別の基の一部として使用される「カルボキシアルキル」という語は、１若しくはそれ以上の水素が１若しくはそれ以上のカルボン酸部分で置換されている上述のアルキル基のいずれかを意味する。
【０１３８】
本願明細書中で使用される「ヘテロ原子」の語は、酸素原子（「Ｏ」）硫黄原子（「Ｓ」）、または窒素原子（「Ｎ」）を意味する。ヘテロ原子が窒素の場合、ＮＲａＲｂ部分を形成でき、ＲａおよびＲｂは、互いに独立に水素またはアルキル、または共にこれらが結合している窒素と共に飽和または不飽和の５−、６−、７員環を形成する。
【０１３９】
「オキシ」の語は、酸素（「Ｏ」）原子を意味する。
【０１４０】
「チオ」の語は、硫黄（「Ｓ」）原子を意味する。
【０１４１】
一般に特に記載のない限り、本願明細書中で使用される「選択的に置換された」という語は、アミノ、ヒドロキシ、ニトロ、ハロゲン、シアノ、チオール、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ３〜６シクロアルケニル、Ｃ３〜６シクロへテロアルキル、Ｃ３〜６シクロへテロアルケニル、Ｃ６〜１０アリール、５〜１０員ヘテロアリール、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ３〜６アルケニロキシ、Ｃ１〜６アルキルチオ、Ｃ１〜６アルキレンジオキシ、Ｃ１〜６アルコキシ（Ｃ１〜６）アルキル、Ｃ６〜１０アリール（Ｃ２〜６）アルケニル、Ｃ６〜１０アリール（Ｃ１〜６）アルコキシ、Ｃ１〜６アミノアルキル、Ｃ１〜６アミノアルコキシ、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、Ｃ２〜６ヒドロキシアルコキシ、モノ（Ｃ１〜４）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜４）アルキルアミノ、Ｃ２〜６アルキルカルボニルアミノ、Ｃ２〜６アルコキシカルボニルアミノ、Ｃ２〜６アルコキシカルボニル、Ｃ２〜６アルコキシ（Ｃ２〜６）アルコキシ、モノ（Ｃ１〜４）アルキルアミノ（Ｃ２〜６）アルコキシ、ジ（Ｃ１〜４）アルキルアミノ（Ｃ２〜６）アルコキシＣ２〜１０モノ（カルボキシアルキル）アミノ、ビス（Ｃ２〜１０カルボキシアルキル）アミノ、アミノカルボニル、Ｃ６〜１４アリール（Ｃ１〜６）アルコキシカルボニル、Ｃ２〜６アルキニルカルボニル、Ｃ１〜６アルキルスルホニル、Ｃ２〜６アルキニルスルホニル、Ｃ６〜１０アリールスルホニル、Ｃ６〜１０アリール（Ｃ１〜６）アルキルスルホニル、Ｃ１〜６アルキルスルフィニル、Ｃ１〜６アルキルスルホンアミド、Ｃ６〜１０アリールスルホンアミド、Ｃ６〜２０アリール（Ｃ１〜６）アルキルスルホンアミド、アミジノ、グアニジノ、Ｃ１〜６アルキルイミノアミノ、ホルミルイミノアミノ、Ｃ２〜６カルボキシアルコキシ、Ｃ２〜６カルボキシアルキル、およびカルボキシ（Ｃ１〜６）アルキルアミノからなる群から独立に選択される１若しくはそれ以上の置換基で選択的に置換されている基または複数の基を意味する。
【０１４２】
アルキル、アルケニル、アルキニル基に関して「選択的に置換された」という語句が使用される場合、アミノ、ヒドロキシ、ニトロ、ハロゲン、シアノ、チオール、Ｃ３〜６シクロアルキル、Ｃ３〜６シクロアルケニル、Ｃ３〜６シクロへテロアルキル、Ｃ３〜６ヘテロアルケニル、Ｃ６〜１０アリール、５〜１０員のヘテロアリール、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ３〜６アルケニロキシ、Ｃ１〜６アルキルチオ、Ｃ１〜６アルキレンジオキシ、Ｃ１〜６アルコキシ（Ｃ１〜６）アルキル、Ｃ６〜１０アリール（Ｃ１〜６）アルキル、Ｃ６〜１０アリール（Ｃ２〜６）アルケニル、Ｃ６〜１０アリール（Ｃ１〜６）アルコキシ、Ｃ１〜６アミノアルキル、Ｃ１〜６アミノアルコキシ、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、Ｃ２〜６ヒドロキシアルコキシ、モノ（Ｃ１〜４）アルキルアミノ、ジ（Ｃ１〜４）アルキルアミノ、Ｃ２〜６アルキルカルボニルアミノ、Ｃ２〜６アルコキシカルボニルアミノ、Ｃ２〜６アルコキシカルボニル、カルボキシ、（Ｃ１〜６）アルコキシ（Ｃ２〜６）アルコキシ、モノ（Ｃ１〜４）アルキルアミノ（Ｃ２〜６）アルコキシ、ジ（Ｃ１〜４）アルキルアミノ（Ｃ２〜６）アルコキシＣ２〜１０モノ（カルボキシアルキル）アミノ、ビス（Ｃ２〜１０カルボキシアルキル）アミノ、Ｃ６〜１４アリール（Ｃ１〜６）アルコキシカルボニル、Ｃ２〜６アルキニルカルボニル、Ｃ１〜６アルキルスルホニル、Ｃ２〜６アルキニルスルホニル、Ｃ６〜１０アリールスルホニル、Ｃ６〜１０アリール（Ｃ１〜６）アルキルスルホニル、Ｃ１〜６アルキルスルフィニル、Ｃ１〜６アルキルスルホンアミド、Ｃ６〜１０アリールスルホンアミド、Ｃ６〜１０アリール（Ｃ１〜６）アルキルスルホンアミド、アミジノ、グアニジド、Ｃ１〜６アルキルイミノアミノ、ホルミルイミノアミノ、Ｃ２〜６カルボキシアルコキシ、Ｃ２〜６カルボキシアルキル、およびカルボキシ（Ｃ１〜６）アルキルアミノからなる群から独立に選択される１若しくはそれ以上の置換基で選択的に置換される１つの基または複数の基を意味する。
【０１４３】
上記で使用される各語について詳しく定義していないが、各語は当業者により理解されるものである。
【０１４４】
組成
本発明の組成には、上記に定義した式Ｉの化合物、および１若しくはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤を有する薬学的組成を含む。本発明の好適な組成は、上述の１若しくはそれ以上の実施形態から選択される化合物、および１若しくはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤を有する薬学的組成である。式Ｉの化合物を１若しくはそれ以上有する薬学的組成は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（米国ペンシルバニア州Ｅａｓｔｏｎ）などの既知の編集物を参照するなど、先行技術で周知の通り製剤化することができる。
【０１４５】
本発明の１つの実施形態では、前記組成が上述の個別実施形態の１若しくはそれ以上から選択される化合物を有する。別の実施形態では、前記組成が上述の具体的な化合物またはサブグループのいずれかから成る群から選択される化合物；および薬学的に許容されるその塩を有する。
【０１４６】
１つの実施形態では、本発明の組成が式Ｉの化合物約０．００１ｍｇ〜約１０００ｍｇを有する。別の実施形態では、本発明の組成が式Ｉの化合物約０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇを有する。別の実施形態では、本発明の組成が式Ｉの化合物約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇを有する。別の実施形態では、前記組成が炎症状態、炎症性疾患、関節リウマチ、乾癬性関節炎、または結腸癌、非小細胞肺癌、および前立腺癌を含む癌を治療または予防するために十分な量で、一定量の式Ｉの化合物を有する。各組成の化合物の量は、前記薬学的組成の特定の目的によって変化する可能性がある。常にそうであるとは限らないが、一般には、疾患または病状を予防するために使用される組成は、疾患または病状を治療するために使用される組成よりも、化合物の量が少ない。
【０１４７】
本発明の薬学的組成は、本発明の化合物により有益な作用が生じる可能性のある、いかなる動物にも投与することができる。そのような動物で真っ先にあげられるものはヒトであるが、本発明ではそのように限定する意図はない。他の適切な動物には、イヌ科の動物、ネコ科の動物、イヌ、ネコ、家畜、ウマ、ウシ、ヒツジなどを含む。
【０１４８】
本発明の薬学的組成は、使用目的を達成するいかなる方法によっても投与することができる。例えば、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、口腔、または眼内経路、直腸、非経口、全身内、腟内、局所（粉末、軟膏、点滴薬、または経皮貼布など）、または口腔内または鼻内噴霧により投与することができる。投与される用量は、患者の年齢、健康状態、および体重、あれば併用治療の種類、投与回数、望ましい作用の性質によって決まる。
【０１４９】
薬学的に活性な化合物に加え、新しい薬学的製剤には、前記活性化合物を薬学的に使用可能な製剤に加工しやすくする賦形剤および佐剤を有する、適切な薬学的に許容される担体を含むことができる。
【０１５０】
本発明の薬学的製剤は、それ自体が既知の方法、例えば従来の混合、整粒、糖衣錠の製造、溶解、または凍結乾燥法により製造される。従って、経口で使用される薬学的製剤は、前記活性化合物に固体賦形剤を組み合わせ、任意選択で得られた混合物を粉砕し、希望または必要に応じて適切な佐剤を添加した後に顆粒混合物を加工し、錠剤または糖衣錠の中心を得ることで入手可能である。
【０１５１】
薬学的賦形剤は当該分野で周知である。適切な賦形剤は、例えばラクトースまたはスクロース、マンニトールまたはソルビトールといった単糖類、セルロース製剤、および／または例えばリン酸三カルシウムまたはリン酸水素カルシウムといったリン酸カルシウムなどの充填剤、および、例えばトウモロコシでんぷん、小麦でんぷん、コメでんぷん、ジャガイモでんぷん、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドンを用いたでんぷんのりなどの結合剤を含む。必要に応じて、前述のでんぷん、およびカルボキシメチルでんぷん、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸またはアルギン酸ナトリウムのようなその塩などの崩壊剤を添加することができる。佐剤は中でも、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸またはステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸カルシウムなどのその塩、および／またはポリエチレングリコールなどの流量調整剤および潤滑剤である。糖衣錠の中心は、必要に応じて胃液に抵抗性を示す適切なコーティングにより提供される。この目的で濃縮単糖類溶液を使用することができ、選択的にアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適切な有機溶媒または溶媒混合物を含むことができる。胃液に抵抗性を示すコーティングを作成するため、フタル酸アセチルセルロースまたはフタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの適切なセルロール製剤の溶液が使用される。活性化合物投与の組み合わせの特徴を明確にするため、染料または色素を前記錠剤または糖衣錠のコーティングに添加することができる。
【０１５２】
経口で使用可能な他の薬学的製剤には、ゼラチン製押し出しカプセル（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ  ｃａｐｓｕｌｅ）、およびグリセロールまたはソルビトールなどのゼラチンおよび可塑剤でできた密閉軟カプセルを含む。前記押し出しカプセルは、例えばラクトースなどの充填剤、でんぷんなどの結合剤、および／またはタルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、および選択的に安定剤と混合可能な顆粒剤の形態で、前記活性化合物を含むことができる。軟カプセルでは、前記活性化合物を、脂肪油または液体パラフィンなどの適切な液剤に溶解または懸濁することが好ましい。さらに、安定剤を添加することができる。
【０１５３】
非経口投与に適した製剤は、例えば、水溶性塩、アルカリ性溶液、およびシクロデキストリン封入複合体などの水溶性形態に前記活性化合物を入れた水溶液を含む。特に好ましいアルカリ性塩は、例えばトリス、水酸化コリン、ビス−トリスプロパン、Ｎ−メチルグルカミン、またはアルギニンなどで調整されるアンモニウム塩である。
【０１５４】
本発明の化合物は、滅菌液などの生理的に許容される希釈剤または水、生理食塩水、含水デキストロース、および他の薬学的に許容される糖溶液を含むその混合物、エタノール、イソプロパノール、またはヘキサデシルアルコールなどのアルコール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコール、２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノールなどのグリセロールケタール、ポリ（エチレングリコール）４００などのエーテル、薬学的に許容されるオイル、脂肪酸、脂肪酸エステル、またはグリセリド、またはアセチル化脂肪酸グリセリドに入れた注入可能な投与形態として、石鹸または界面活性剤などの薬学的に許容される界面活性剤、ペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはカルボキシメチルセルロースなどの懸濁化剤、乳化剤、または補助薬を添加するか添加せずに、非経口投与することもできる。いずれの場合においても、前記形態は滅菌し、注射器内に存在しやすい程度の液体とする必要がある。製造および保存条件下で安定であり、細菌および真菌などの微生物による汚染活動に対して保護されている必要がある。
【０１５５】
本明細書の製剤に有用な薬学的に許容されるオイルには、ピーナッツ油、大豆油、ゴマ油、綿実油、オリーブオイル、ひまわり油、ワセリン、および鉱油を含む、石油、動物、野菜、または合成由来のオイルを含む。使用可能な脂肪酸には、オレイン酸、ステアリン酸、およびイソステアリン酸を含むが、本明細書で有用な脂肪酸エステルには、オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルを含むことができる。適切な石鹸には、脂肪酸アルカリ金属、アンモニウム、およびトリエタノールアミン塩を含む。許容される界面活性剤には、例えばジメチルジアルキルアンモニウムハライド、アルカリピリジニウムハライド、および酢酸アルキルアミンなどの陽イオン性界面活性剤、およびスルホン酸アルキル、アリール、およびオレフィン、硫酸アルキル、オレフィン、エーテル、およびモノグリセリド、およびスルホサクシネートなどの陰イオン性界面活性剤を含む。有用な非イオン性界面活性剤には、脂肪族アミンオキシド、脂肪酸アルカノールアミド、およびポリオキシエチレンポリプロピレンコポリマーを含むことができる。両性界面活性剤には、アルキル−β−アミノプロピオン酸塩および２−アルキルイミダゾリン四級塩、およびその混合物を含むことができる。
【０１５６】
本発明の非経口組成は、１実施形態においては、溶液中に本明細書で説明される前記活性化合物を重量で約０．５〜約２５％含む。注入可能な滅菌溶液または懸濁液の形態の前記非経口製剤は、好ましくは等張溶剤に約０．０５％〜約５％の懸濁化剤を含む。緩衝剤および保存料も添加することができる。適切な界面活性剤を添加することもできる。これらの界面活性剤には、ソルビタンモノオレエートなどのポリエチレンソルビタン脂肪酸エステル、およびプロピレンオキシドとプロピレングリコールの縮合により形成された疎水性塩基とエチレンオキシドの高分子量付加体を含むことができる。
【０１５７】
さらに、前記活性化合物の懸濁液は、適切な油性注射用懸濁液として投与することができる。適切な親油性溶媒または媒体には、例えばゴマ油などの脂肪油、または例えばオレイン酸エチルまたはトリグリセリドまたはポリエチレングリコール−４００などの合成脂肪酸エステルを含む。水性注射用懸濁液は、例えばカルボキシルメチル・セルロース・ナトリウム、ソルビトール、および／またはデキストランなど、前記懸濁液の粘性を増加させる物質を含むことができる。選択的に、前記懸濁液に安定剤を含むこともできる。
【０１５８】
経口投与用の液状投与形態には、薬学的に許容される乳濁液、溶液、懸濁液、シロップ剤、およびエリキシル剤を含む。前記活性化合物に加え、前記液状投与形態には、例えば水または他の溶媒など当該分野で一般に使用される不活性希釈剤、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、オイル（特に綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブオイル、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、およびその混合物などの可溶化剤および乳化剤を含むことができる。
【０１５９】
懸濁液には、前記活性化合物に加え、例えばエトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、およびトラガカントなどの懸濁化剤、およびその混合物を含むことができる。
【０１６０】
局所投与には、肺および眼の表面など、皮膚または粘膜への投与を含む。吸入用など、局所投与用の組成は、加圧または非加圧の乾燥粉末として調整することができる。非加圧粉末組成では、例えば直径１００マイクロメーターまでのサイズを有する粒子を含有する、よりサイズの大きい薬学的に許容される不活性担体と混合し、細かく分割された形態の前記活性成分を使用することができる。適切な不活性担体には、ラクトースなどの糖を含む。望ましくは、重量で少なくとも９５％の前記活性成分の粒子が０．０１〜１０マイクロメーターの範囲で有効な粒子サイズを有する。
【０１６１】
代わりに、前記組成を加圧し、窒素または液化ガス噴霧剤などの圧縮ガスを含むことができる。前記液化噴霧剤および実際には前記組成全体は、前記活性成分があまりそこに溶解しないようにすることが好ましい。前記加圧組成は界面活性剤を含むこともできる。前記界面活性剤は液体または固体の非イオン性界面活性剤とするか、固体陰イオン性界面活性剤とすることができる。前記固体陰イオン性界面活性剤はナトリウム塩の形態で使用することが好ましい。
【０１６２】
局所投与のさらなる形態は、眼に投与される。本発明の化合物および組成は、前記化合物が前記眼の角膜、および例えば前眼房、後眼房、硝子体、房水、ガラス体液、角膜、虹彩／毛様体、水晶体、脈絡膜／網膜、および強膜など内部を貫通できるだけの十分な時間、眼表面との接触を維持するよう、薬学的に許容される眼科用媒体に入れて投与される。前記薬学的に許容される眼科用媒体は、例えば軟膏、植物油、または封入剤とすることができる。
【０１６３】
直腸または膣内投与用組成は、好ましくは坐薬であり、これは、室温では固体であるが、体温では液体となるため、直腸または膣腔で溶け、前記薬物を放出する、ココアバター、ポリエチレングリコール、または坐薬ワックスなどの適切な非刺激性賦形剤または担体と本発明の化合物とを混合することにより調整可能である。
【０１６４】
本発明の組成は、リポソームの形態で投与することもできる。当該分野で既知の通り、リポソームはリン脂質または他の液体物質に由来する。リポソームは、水媒体に分散される、単層または多層状の水和液晶で形成される。リポソームを形成することができる非毒性で生理的に許容される代謝性脂質を使用することができる。リポソームの形態の本組成は、本発明の化合物に加え、安定剤、保存料、賦形剤などを含むことができる。前記好適な脂質はリン脂質およびホスファチジルコリン（レシチン）であり、天然および合成のいずれであってもよい。リポソームを形成する方法は当該分野で既知である（例えば、Ｐｒｅｓｃｏｔｔ，Ｅｄ．，Ｍｅｔｈ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．１４：３３（１９７６）を参照）。
【０１６５】
別の実施形態では、本発明が式Ｉの化合物および担体を有する組成に関し、前記担体はアッセイに適している。そのような担体には、固体担体および液体担体を含むことができる。アッセイに適した組成は滅菌済みとすることができるが、必ずしも滅菌しなくともよい。アッセイに適した担体の例には、ジメチルスルホキシド、エタノール、ジクロロメタン、メタノールなどを含む。別の実施形態では、組成が式Ｉの化合物および担体を有し、前記化合物はｐ３８を阻害するのに適した量である。
【０１６６】
本発明の別の観点は、式Ｉの化合物、および１若しくはそれ以上のｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂｌ１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−α１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−β、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ  Ａ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−β、ＰＫＡ、ＰＫＣ−α、およびＳｒｃなどのプロテインキナーゼを有する組成に関する。
【０１６７】
前記化合物および組成の利用
本発明の追加観点は、プロテインキナーゼの立体構造変化を誘導する方法に関し、前記立体構造変化は前記プロテインキナーゼのアロステリック部位を露出する。本明細書で開示される発明の前に、小分子でプロテインキナーゼの前記立体構造変化を誘導および安定化し、前記アロステリック部位が露出および／または安定化したままで、例えば本明細書で説明する方法などで同定およびさらに使用できるようにすることが可能であった。前記プロテインキナーゼの立体構造変化は、前述の式Ｉの化合物により誘導することができる。この立体構造変化により、「オープン型」と本明細書で呼ばれるタンパク質の形態になる。別の実施形態では、式Ｉの化合物がＤＤＲ２、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ１、Ｆｌｔ３、Ｈｃｋ、ＪＮＫ２α２、ＪＮＫ３α３、ＪＮＫ３、ＫＤＲ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ＭＩＮＫ、ＭＫＫ６、Ｍｎｋ２、ＭｕＳＫ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｐｙｋ２、Ｒｅｔ、ＲＯＣＫＩ、ＴＡＫ１、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、Ａｂｌ１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−α１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＧＳＫ３−β、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ  Ａ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−β、ＰＫＡ、ＰＫＣ−α、およびＳｒｃから成る群から選択される１若しくはそれ以上のキナーゼのオープン型を安定化することができる。別の実施形態では、前記キナーゼがｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂｌ１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−α１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−β、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ  Ａ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−β、ＰＫＡ、ＰＫＣ−α、およびＳｒｃから成る群から選択される。
【０１６８】
前記プロテインキナーゼのオープン配座は、式Ｉの化合物により安定化させることができる。特定の実施形態では、式Ｉの化合物が、前記プロテインキナーゼが結晶化できるほど十分に、前記プロテインキナーゼのオープン配座を安定化することができる。他の実施形態では、式Ｉの化合物は、例えばＮＭＲ法またはｘ線回折法など既知の方法により、前記プロテインキナーゼの構造解明ができるほど十分に、前記プロテインキナーゼのオープン配座を安定化することができる。
【０１６９】
１つの実施形態では、前記プロテインキナーゼを前記ｐ３８プロテインキナーゼの立体構造変化を誘導できる化合物と接触させることにより、前記プロテインキナーゼの前記立体構造変化が誘導される。適切な化合物には、式Ｉの化合物を含む。前記誘導化合物は、前記化合物が前記プロテインキナーゼの立体構造変化を達成することができる期間、適切な培地中で、プロテインキナーゼを用い、インキュベートすることができる。特定の実施形態では、前記ｐ３８プロテインキナーゼおよび前記化学誘導物質は、約１、５、１０、２０、３０、６０、または１００分間インキュベートされる。
【０１７０】
適切な培地中、修飾因子をｐ３８などの前記プロテインキナーゼと接触させることができる。
【０１７１】
１つの実施形態では、本発明の化合物を用い、１３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１２％グリセロール、２％  ＤＭＳＯ、２ｍＭ  ＤＴＴ、２．５Ｃｉのγ−［３３Ｐ］ＡＴＰ（１０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ；１Ｃｉ＝３７ＧＢｑ）（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｓｅ）、１０Ｍ  ＡＴＰ（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｓｅ）、および２Ｍ  ＧＳＴ−ＡＴＦ２を含む５０μＬ、ｐＨ  ７．５の２４ｍＭトリス−ＨＣｌ緩衝液中、前記プロテインキナーゼの立体構造変化を誘導する。
【０１７２】
特定の実施形態では、前記立体構造変化を誘導および安定化する化合物は、以下に説明する領域で、プロテインキナーゼに結合する。
【０１７３】
プロテインキナーゼのアロステリック部位は、１つの実施形態では、Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ（ＤＦＧ）モチーフ付近のポケットであり、ここでは阻害因子の結合に大きな立体構造変化が必要である。その全開示が本明細書に参照として組み込まれているＰａｒｇｅｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐ３８  ＭＡＰ  Ｋｉｎａｓｅ  ｂｙ  ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｌｌｏｓｔｅｒｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ”，Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ９（４）：２６８−２７２（２００２）において、ｐ３８のこの領域について報告されている。１つの実施形態では、前記アロステリック部位は、クローズド情報では、セリン−トレオニン（Ｓｅｒ−Ｔｈｒ）キナーゼのＤＦＧモチーフで占有された疎水性ポケットである。前記疎水性ポケットは式Ｉの化合物で占有され、その結果プロテインキナーゼが前記オープン情報を有することができる。１つの実施形態では、前記ＤＦＧモチーフはクローズド配置の位置と比べ、約１〜約２０Åシフトする。別の実施形態では、前記ＤＦＧモチーフは約５〜約１５Å、または約９〜約１０Åシフトする。１つの実施形態では、前記アロステリック部位がＤＤＲ２、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ１、Ｆｌｔ３、Ｈｃｋ、ＪＮＫ２α２、ＪＮＫ３α３、ＪＮＫ３、ＫＤＲ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ＭＩＮＫ、ＭＫＫ６、Ｍｎｋ２、ＭｕＳＫ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｐｙｋ２、Ｒｅｔ、ＲＯＣＫＩ、ＴＡＫ１、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、Ａｂｌ１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−α１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＧＳＫ３−β、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ  Ａ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−β、ＰＫＡ、ＰＫＣ−α、およびＳｒｃから成る群から選択されるタンパク質のＤＦＧモチーフ、または類似モチーフ、または相同的モチーフ付近のアロステリック部位である。別の実施形態では、前記アロステリック部位が、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂｌ１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−α１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−β、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ  Ａ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−β、ＰＫＡ、ＰＫＣ−α、およびＳｒｃから成る群から選択されるタンパク質のＤＦＧモチーフ、または類似モチーフ、または相同的モチーフ付近のアロステリック部位である。
【０１７４】
オープン型の結晶化キナーゼ
別の観点では、本発明は前記オープン型で結晶化されたプロテアーゼに関する。前記オープン型の結晶化プロテインキナーゼは、例えば、前記プロテインキナーゼに結合する化合物をデザインまたは同定するために利用できる。前記プロテインキナーゼのオープン型は、特定の実施形態では、前記タンパク質のオープン型を安定化させる化合物と複合体を形成する。そのような化合物の例は、式Ｉの化合物である。
【０１７５】
別の実施形態では、本発明は式Ｉの化合物と一緒にオープン型で結晶化するプロテインキナーゼに関する。別の実施形態では、本発明は式Ｉの化合物と一緒にオープン型で結晶化するプロテインキナーゼに関し、前記キナーゼタンパク質はＤＤＲ２、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ１、Ｆｌｔ３、Ｈｃｋ、ＪＮＫ２α２、ＪＮＫ３α３、ＪＮＫ３、ＫＤＲ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ＭＩＮＫ、ＭＫＫ６、Ｍｎｋ２、ＭｕＳＫ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｐｙｋ２、Ｒｅｔ、ＲＯＣＫＩ、ＴＡＫ１、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、Ａｂｌ１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−α１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＧＳＫ３−β、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ  Ａ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−β、ＰＫＡ、ＰＫＣ−α、およびＳｒｃから成る群から選択される。別の実施形態では、本発明は式Ｉの化合物と一緒にオープン型で結晶化するプロテインキナーゼに関し、前記キナーゼタンパク質はｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂｌ１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−α１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−β、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ  Ａ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−β、ＰＫＡ、ＰＫＣ−α、およびＳｒｃから成る群から選択される。
【０１７６】
別の実施形態では、式Ｉの化合物と一緒にオープン型で結晶化する前記プロテインキナーゼがセリン−トレオニンキナーゼである。別の実施形態では、前記プロテインキナーゼがマイトジェン活性化プロテインキナーゼである。
【０１７７】
別の観点では、本発明は前記オープン型で結晶化されるｐ３８プロテアーゼに関する。前記オープン型の結晶化ｐ３８プロテインキナーゼは、例えば、ｐ３８に結合する化合物をデザインまたは同定するために利用できる。前記タンパク質のオープン型は、好ましくは、前記タンパク質のオープン型を安定化させる化合物と複合体を形成する。そのような化合物の例は、式Ｉの化合物である。
【０１７８】
本発明のオープン型で典型的な結晶化ｐ３８プロテインキナーゼは、（これに限定されるものではないが）例１−４のいずれか１つの化合物と共結晶化したｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ３８キナーゼのヒト型、およびその相同性変異体を含む。
【０１７９】
オープン型の結晶化プロテインキナーゼの例は、ヒトｐ３８αＭＡＰキナーゼである。
【０１８０】
１つの実施形態では、本発明が前記オープン型の結晶化ｐ３８プロテインキナーゼを提供する。前記オープン型の結晶化ｐ３８プロテインキナーゼは、本明細書に説明される特徴を有する。１つの実施形態では、前記オープン型の結晶化ｐ３８プロテインキナーゼの空間群が好ましくは六角形である。前記空間群の単位セル寸法はａ、ｂ、ｃ、α、β、およびγで定義され、ａは約６７Å〜約６８Å、ｂは約７６Å〜７７．００Å、およびｃは約７６．００Å〜約７７．００Åであり、好ましくはそれぞれ６７．５７、７６．６３、および７６．５８であり、αは約９０度、βは約９０度、およびγは約９０度である。
【０１８１】
前記オープン型の結晶化ｐ３８プロテインキナーゼは、Ｍａｔｔｈｅｗの係数によっても特徴付けられる。本発明のオープン型の結晶化ｐ３８プロテインキナーゼに関する特定の実施形態では、Ｍａｔｔｈｅｗの係数が１ダルトン（Ｄａ）あたり約２．２Å３〜約２．４Å３である。好ましくは、Ｍａｔｔｈｅｗの係数は約２．３Å３／Ｄａである。他の実施形態では、溶媒含有量が約４４％〜約５０％、好ましくは約４６％〜約４８％、好ましくは約４７％である。
【０１８２】
本明細書に用いる通り、「ｐ３８プロテインキナーゼ」の用語は、天然および遺伝子組み換えにより生成したｐ３８プロテインキナーゼ；天然、合成、および組み換えｐ３８プロテインキナーゼの生物学的に活性なポリペプチドフラグメント；ハイブリッド融合タンパク質およびダイマーを含む、ｐ３８プロテインキナーゼまたはそのフラグメントの生物学的に活性なポリペプチド変異体；システイン置換類似体を含む、ｐ３８プロテインキナーゼまたはそのフラグメントまたは変異体の生物学的に活性なポリペプチド類似体を含む。前記ｐ３８プロテインキナーゼは当該分野で既知のいかなる方法によっても作成および／または単離することができる。ｐ３８プロテインキナーゼおよびｐ３８プロテインキナーゼを作成する方法は、全開示が本明細書に参照として組み込まれているすべての文献に開示されている。
【０１８３】
相同体は、天然の変異またはヒトの操作により、１若しくはそれ以上のアミノ酸置換、欠失、または付加を含むタンパク質である。そのため、例として、結晶、オープン型のｐ３８プロテインキナーゼは、天然の変異またはヒトの操作により、１若しくはそれ以上のアミノ酸置換、欠失、または付加を含むことができる。指摘した通り、変化は好ましくは、前記タンパク質の折り畳みまたは活性に重大な影響を与えない保存的なアミノ酸置換など、比較的重要ではないものである。
【０１８４】
【表１】
2009522363.tif 000013
【０１８５】
本発明の１つの実施形態では、前記オープン型で結晶化されるｐ３８プロテインキナーゼが、１以上の保存的アミノ酸置換を有するが、保存的アミノ酸置換が２０以下のアミノ酸配列を有する、ｐ３８プロテインキナーゼのアミノ酸配列を有するか、代わりに前記アミノ酸から成る。他の実施形態では、前記オープン型で結晶化されるｐ３８プロテインキナーゼがヒトｐ３８プロテインキナーゼのアミノ酸配列を有し、これは１以上、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１以下の保存的アミノ酸置換を含む。
【０１８６】
例えば、ｐ３８プロテインキナーゼの標準アミノ酸配列と少なくとも９５％「同一」のアミノ酸配列を有するタンパク質により、前記ｐ３８プロテインキナーゼの標準アミノ酸において、前記タンパク質配列が１００アミノ酸につき５アミノ酸までの変化を含むことができる点を除き、前記タンパク質のアミノ酸配列が前記標準配列と同一であることを意図する。言い換えれば、標準アミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するタンパク質を得るため、前記標準配列のアミノ酸残基５％までを欠失させるか、別のアミノ酸と置換させ、または前記標準配列の全アミノ酸残基５％までのアミノ酸数を前記標準配列に挿入することができる。これらの前記標準配列の変化は、前記標準アミノ酸配列のアミノまたはカルボキシ末端位、または標準配列の残基中単独で、または前記標準配列内の１若しくはそれ以上の隣接基として散在し、これらの末端位のどこでも起こる可能性がある。
【０１８７】
実際問題として、特定のポリペプチドまたはタンパク質が、例えば特定のｐ３８プロテインキナーゼのアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるか否かは、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ  ８  ｆｏｒ  Ｕｎｉｘ（登録商標），Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ  ５３７１１）などの既知のコンピュータープログラムを用い、従来の方法で決定できる。特定の配列が例えば本発明の標準配列と９５％同一であるか否かを決定するため、Ｂｅｓｔｆｉｔまたは他の配列アラインメントプログラムを用いた場合、当然、同一性の割合が前記標準アミノ酸配列の全長にわたり計算され、前記標準配列のアミノ酸残基全数の５％までの相同性に違いが認められるように、パラメータが設定される。
【０１８８】
１つの実施形態では、前記結晶化プロテインキナーゼが、式Ｉの化合物の少なくとも１分子と複合体を形成する。他の実施形態では、前記オープン型プロテインキナーゼが、上述の特定の実施形態のいずれかから選択される化合物；および薬学的に許容されるその塩と複合体を形成する。
【０１８９】
結晶化オープン型キナーゼの調整法
本発明の別の観点は、式Ｉの化合物と共結晶化された前記オープン型の結晶化プロテインキナーゼを調整する方法に関する。本発明は、前記オープン型の結晶化プロテインキナーゼを調整する方法を提供する。好ましくは、前記方法により前記オープン型の結晶化プロテインキナーゼを作成し、前記プロテインキナーゼが、原子座標を含む前記プロテインキナーゼの３次元構造を決定できるだけ十分な高解像度を持つＸ線を回折する。前記３次元構造は、本明細書に説明する通り、本発明の多数の方法で有用である。１つの実施形態では、前記プロテインキナーゼがＤＤＲ２、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ１、Ｆｌｔ３、Ｈｃｋ、ＪＮＫ２α２、ＪＮＫ３α３、ＪＮＫ３、ＫＤＲ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ＭＩＮＫ、ＭＫＫ６、Ｍｎｋ２、ＭｕＳＫ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｐｙｋ２、Ｒｅｔ、ＲＯＣＫＩ、ＴＡＫ１、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、Ａｂｌ１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−α１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＧＳＫ３−β、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ  Ａ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−β、ＰＫＡ、ＰＫＣ−α、およびＳｒｃから成る群から選択される。別の実施形態では、前記プロテインキナーゼがｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂｌ１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−α１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−β、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ  Ａ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−β、ＰＫＡ、ＰＫＣ−α、およびＳｒｃから成る群から選択される。
【０１９０】
１つの実施形態では、本発明が、式Ｉの化合物と共結晶化された前記オープン型の結晶化プロテインキナーゼを調整する方法に関する。本発明は、式Ｉの化合物と共結晶化された前記オープン型の結晶化ｐ３８プロテインキナーゼを調整する方法を提供する。好ましくは、前記方法により前記オープン型の結晶化ｐ３８プロテインキナーゼを作成し、前記ｐ３８プロテインキナーゼが、原子座標を含む前記ｐ３８プロテインキナーゼの３次元構造を決定できるだけ十分な高解像度を持つＸ線を回折する。前記３次元構造は、本明細書に説明する通り、本発明の多数の方法で有用である。特に、式Ｉの化合物と複合体を形成する、組み換え非グリコシル化ヒトｐ３８αプロテインキナーゼを結晶化する方法が提供される。
【０１９１】
前記プロテインキナーゼは、真核細胞または真核生物の組織など、適切な材料から入手することができる。一般に、ｐ３８プロテインキナーゼまたはその一部を有するタンパク質は、十分な純度で可溶型として単離し、濃縮して結晶化する。前記ポリペプチドは、任意選択で、（結晶化を妨げる可能性のある）凝集がないか分析される。前記精製ポリペプチドは、好ましくはｐＨ、緩衝剤、緩衝剤濃度、塩、ポリマー、ポリマー濃度、他の沈殿剤、およびｐ３８プロテインキナーゼまたはその一部の濃度のいずれか１つの因子を考慮した様々な条件下で結晶化される。例えば、Ｂｌｕｎｄｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ（１９７６）；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，Ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｒｙｓｔａｌｓ，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．（１９８２）を参照。前記結晶化ｐ３８プロテインキナーゼは、任意選択で、キナーゼ活性を検証する。サイズおよび形の異なる結晶は、さらにＸ線回折適合性を検証することができる。
【０１９２】
特定の実施形態では、前記結晶体溶液のｐＨが約６〜８、好ましくは約６．５〜８である。別の実施形態では、前記溶液のｐＨが約７．５である。
【０１９３】
前記結晶体溶液は、任意選択で緩衝剤を含むことができる。緩衝剤は当該分野で周知である。典型的な緩衝剤には、リン酸塩、カコジル酸塩、酢酸塩、イミダゾール、トリスＨＣｌ、およびＨＥＰＥＳナトリウムを含む。
【０１９４】
特定の実施形態では、前記緩衝剤濃度が約１０ミリモル濃度（ｍＭ）〜約２００ｍＭである。
【０１９５】
前記塩はイオン性塩であり、これは当該分野で周知である。典型的な塩には、塩化カルシウム、クエン酸ナトリウム、塩化マグネシウム、酢酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸カリウム、酢酸マグネシウム、酢酸亜鉛、および酢酸カルシウムを含む。
【０１９６】
前記結晶体溶液は、ポリマーを含むことができる。本発明で有用な典型的なポリマーには、（必ずしもこれに限定されるものではないが）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）などを含む。前記ポリマーの平均分子量は約２００〜約１００，０００である。前記ポリマーの平均分子量に適した他の値には、約２００〜約１０，０００を含む。
【０１９７】
前記ポリマー濃度は、結晶化に適した溶液中の前記ポリマーの濃度である。特定の実施形態では、前記ポリマー濃度が約１％〜約５０％である。他の実施形態では、前記ポリマー濃度は約１％、５％、１０％、２０％、２５％、３０％、または４０％である。
【０１９８】
結晶化に適した溶液は、任意選択で、酒石酸カリウム、酒石酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、酢酸ナトリウム、硫酸リチウム、ギ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ギ酸マグネシウム（Ｍｇ（ＨＣＯ２）２）、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム；ＮＨ４ＰＯ４；および２−プロパノールから成る群から選択される１若しくはそれ以上の追加試薬を有する。
【０１９９】
前記ｐ３８プロテインキナーゼ、またはそのフラグメントのそのオープン型での結晶化には、あらゆる適切な結晶化法が利用される。適切な方法には、（これに限定されるものではないが）懸滴、蒸気拡散法、マイクロバッチ、シッティングドロップ、および透析を含む。
【０２００】
特定の実施形態では、前記結晶を約１時間〜約２４時間成長させる。
【０２０１】
本発明によれば、前記オープン型の結晶化ｐ３８プロテインキナーゼを調整する１つの実施形態で、以下の方法を利用する。結晶化については、前記タンパク質を２５ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ  ＤＴＴ、および５％グリセロールに対して透析し、Ａｍｉｃｏｎ攪拌限外ろ過セルとＹＭ−１０膜を用い、１６ｍｇ／ｍｌに濃縮する。前記サンプルの一定分量を液体窒素で急速冷凍し、−８０℃で保存する。式Ｉの化合物で飽和状態のタンパク質を、タンパク質：溶液の容積比３：２で貯蔵液（１０〜２０％  ＰＥＧ  ４０００、０．１Ｍカコジル酸、ｐＨ  ６、および５０ｍＭ  ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコシド界面活性剤）と混合する。前記混合物の懸滴またはシッティングドロップを前記貯蔵液の上から行い、蒸気拡散により結晶を成長させた。本発明の他の実施形態には、前記成分の比に＋／−１０％のばらつきがある同様の方法を含む。他の実施形態では、プロテインキナーゼがｐ３８αおよびｐ３８βから成る群から選択される。
【０２０２】
本発明に従って成長させた結晶は、０．１５〜１０．０Åまたは１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、または３．５などのこの範囲内の値など、少なくとも１０Åの解像度でＸ線を回折し、結晶構造の判定には３．５Å以上の解像度が好ましい。ただし、２５〜３．５Åなど、より低い解像度の回折パターンも有用である。
【０２０３】
本発明の特定の実施形態に従い、成長中の前記結晶の一部は、任意選択で除去、洗浄、および生物活性の分析が行われる。
【０２０４】
他の実施形態では、複数の同形置換に用いる重原子誘導体は、水銀試薬に前記結晶を浸すか、データ収集中に気体キセノン（Ｘｅ）雰囲気下に結晶を置くことで、入手可能である（Ｓｃｈｉｌｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．２７：９５０−９６０（１９９４））。適切な水銀試薬には、ｐ−クロロマーキュリーベンジルスルホナート（ＰＣＭＢＳ）を含む。前記水銀試薬の濃度は約０．１ｍＭ〜約０．５ｍＭである。
【０２０５】
本発明の追加観点は、ｐ３８プロテインキナーゼなどのプロテインキナーゼおよび式Ｉの化合物を有する組成である。他の実施形態では、前記組成がさらに、ｐ３８プロテインキナーゼなどの前記オープン型キナーゼを結晶化するために適した媒体を有する。結晶化に適した媒体は、（これに限定されるものではないが）緩衝剤、ｐＨ調節剤、塩、ポリマー、沈殿剤、およびその混合物を含むことができる。
【０２０６】
本発明の別の実施形態は、式Ｉの化合物、プロテインキナーゼ、および結晶化に適した担体を有する組成に関する。例えば、１つの実施形態では、前記組成が式Ｉの化合物、プロテインキナーゼ、および水を有する。前記組成は、任意選択でさらに、緩衝剤、ｐＨ調節剤、塩、ポリマー、沈殿剤、およびその混合物の１若しくはそれ以上を有する。
【０２０７】
適切な本発明の組成は、式Ｉの化合物；ｐ３８  ＭＡＰキナーゼ、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ、Ｌｃｋ、Ｌｕｎ、Ｔｉｅ２、およびＴＲＫから成る群から選択されるプロテインキナーゼ；水；および緩衝剤を有する。別の実施形態では、前記組成がｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂｌ１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−α１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−β、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ  Ａ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−β、ＰＫＡ、ＰＫＣ−α、およびＳｒｃから成る群から選択されるプロテインキナーゼ；式Ｉの化合物；および適切な結晶化媒体を有する。
【０２０８】
別の適切な組成は、式Ｉの化合物；ｐ３８  ＭＡＰキナーゼ、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ、Ｌｃｋ、Ｌｕｎ、Ｔｉｅ２、およびＴＲＫから成る群から選択されるプロテインキナーゼ；水；トリス−ＨＣｌおよび緩衝剤を有する。
【０２０９】
別の適切な組成は、式Ｉの化合物；ｐ３８  ＭＡＰキナーゼ、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ、Ｌｃｋ、Ｌｕｎ、Ｔｉｅ２、およびＴＲＫから成る群から選択されるプロテインキナーゼ；水；グリセロール；および緩衝剤を有する。
【０２１０】
別の適切な組成は、上述の本発明の具体的な実施形態のいずれかから成る群から選択される化合物、または薬学的に許容されるその塩；プロテインキナーゼ；水；および緩衝剤を有する。別の適切な組成は、本明細書に説明した具体的な実施形態またはその一部のいずれかから選択される化合物；プロテインキナーゼ；水；および緩衝剤を有する。
【０２１１】
薬物の同定法またはデザイン法
本発明の別の観点は、プロテインキナーゼのアロステリック部位に結合するか、はまり込む分子を同定またはデザインする方法に関する。プロテインキナーゼのアロステリック部位に結合するか、はまり込む分子を同定またはデザインすることで、特定のプロテインキナーゼを介した疾患および病状を効果的に治療または予防するように、前記分子を開発することができる。前記アロステリック部位に結合するか、はまり込むことで、分子は前記プロテインキナーゼの正常な機能を阻害する。前記プロテインキナーゼの正常な機能を阻害することで、前記分子は前述の病状を予防または治療する効果を示す。本発明の１観点は分子をデザインまたは同定する方法に関し、前記分子をデザインまたは同定する工程を利用する方法を有し、前記分子はプロテインキナーゼのアロステリック部位に結合するか、はまり込む。
【０２１２】
前記アロステリック部位の静電ポテンシャルマップからは前記アロステリック部位に関する情報が明らかとなり、これは本発明の分子を同定またはデザインする工程に有用である。例えば、前記アロステリック部位の特定部分は負の電荷が高いが、他の部位は正の電荷が高い。前記分子と前記アロステリック部位との誘引性相互作用を増加させるため、前記分子の負電荷部分が前記アロステリック部位の正電荷部分と相互作用することができ、前記分子の正電荷部分が前記アロステリック部位の負電荷部分と相互作用することができるような化合物を同定またはデザインしたいと考える人もいるかもしれない。前記アロステリック部位の静電ポテンシャルに関する他の説明は、当該分野で既知の方法により決定できる。
【０２１３】
前記アロステリック部位の親油性ポテンシャルマップからは前記アロステリック部位に関する情報が明らかとなり、これは本発明の分子を同定またはデザインする工程に有用である。例えば、前記アロステリック部位の特定部分は親油性が高いが、他の部位は親水性が高い。前記分子と前記アロステリック部位との誘引性相互作用を増加させるため、前記分子の親油性部分が前記アロステリック部位の親油性部分と相互作用することができ、前記分子の親水性部分が前記アロステリック部位の親水性部分と相互作用することができるような化合物を同定またはデザインしたいと考える人もいるかもしれない。前記アロステリック部位の親油性ポテンシャルに関する他の説明は、当該分野で既知の方法により決定できる。
【０２１４】
前記アロステリック部位のさらなる特徴は、本明細書に説明した方法により、分子を同定またはデザインする指針を提供する。従って、特定の実施形態では、分子をデザインまたは同定することが好都合であり、前記分子は、前記アロステリック部位と相互作用する、チオフェン部分などの芳香族またはヘテロアリール部分を少なくとも１つ含む。
【０２１５】
本発明の追加観点は、アロステリック部位に結合するか、はまり込む分子を同定またはデザインすることであり、前記分子は前記アロステリック部位の１若しくはそれ以上のアミノ酸と１若しくはそれ以上の相互作用を形成する。
【０２１６】
別の実施形態では、本発明により同定またはデザインされた分子の予想される親和性が、２０マイクロモル（μＭ）以下である。他の実施形態では、前記分子の予想される親和性が１μＭ以下である。他の好適な実施形態では、前記分子の予想される親和性が１μＭ、１００ｎＭ、１０ｎＭ、または１ｎＭ未満である。
【０２１７】
別の実施形態では、本発明により同定またはデザインされた分子の結合自由エネルギー計算値が約−６〜約−１６ｋｃａｌ／ｍｏｌである。他の実施形態では、前記分子の結合自由エネルギー計算値が約−１０〜約−１４ｋｃａｌ／ｍｏｌである。他の実施形態では、前記分子の結合自由エネルギー計算値が約−８〜約−１２ｋｃａｌ／ｍｏｌである。そのような計算は、当業者の技術により行うことができる。例えば、本明細書に参照により組み込まれているＡｑｖｉｓｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｃｏｕｎｔｓ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３５（６）：３５８−３６５（２００２）およびそこに引用されている参考文献を参照。
【０２１８】
別の実施形態では、本発明によってデザインまたは同定された化合物の予想結合エネルギーは、約−１０ｋｃａｌ／ｍｏｌ〜約−１５ｋｃａｌ／ｍｏｌである。他の適切な範囲は、約−１０ｋｃａｌ／ｍｏｌ〜約−３０ｋｃａｌ／ｍｏｌ、または約３５ｋｃａｌ／ｍｏｌを含む。１つの実施形態では、分子またはそのフラグメントの予想結合エネルギーは、全開示が参照によって本明細書に組み込まれている米国特許第６，７３５，５３０号明細書に説明される工程により計算される。
【０２１９】
別の実施形態では、本発明により同定またはデザインされた分子の親和性が、２０マイクロモル（μＭ）以下である。他の実施形態では、前記分子の親和性が１μＭ以下である。他の好適な実施形態では、前記分子の親和性が１００ｎＭ、１０ｎＭ、または１ｎＭ未満である。そのような測定は、当業者の技術の範囲内である。適切な分析については本明細書に説明される。１つの実施形態では、前記分子が本明細書に説明される分析のいずれか１つにより決定される、上述の親和性の値のいずれか１つを有する。
【０２２０】
前記化合物および組成のさらなる利用
本発明のさらなる観点は、式Ｉの化合物の使用法に関する。
【０２２１】
式Ｉの化合物は、プロテインキナーゼによる病状を治療または予防するために有用である。１つの実施形態では、本発明がプロテインキナーゼによる病状を治療、予防、または改善する方法に関し、そのような治療を必要とする被験者に、式Ｉの化合物の有効量を投与する工程を有する。本発明の１つの実施形態では、前記方法において上述の個別実施形態の１若しくはそれ以上から選択される化合物を使用する。別の実施形態では、前記プロテインキナーゼによる病状がＤＤＲ２、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ１、Ｆｌｔ３、Ｈｃｋ、ＪＮＫ２α２、ＪＮＫ３α３、ＪＮＫ３、ＫＤＲ、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ＭＩＮＫ、ＭＫＫ６、Ｍｎｋ２、ＭｕＳＫ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、Ｐｙｋ２、Ｒｅｔ、ＲＯＣＫＩ、ＴＡＫ１、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、Ａｂｌ１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−α１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＧＳＫ３−β、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ  Ａ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−β、ＰＫＡ、ＰＫＣ−α、およびＳｒｃから成る群から選択される１若しくはそれ以上の前記キナーゼによる病状である。別の実施形態では、前記プロテインキナーゼがｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、ＴｒｋＢ、Ａｂｌ１、Ａｋｔ１、ＣＫ２−α１、ｃ−ＭＥＴ、ＥＧＦＲ、ＥｐｈＢ４、ＥＲＫ２、ＦＧＦＲ１、ＧＳＫ３−β、ＩＧＦ１Ｒ、ＩＲＡＫ４、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ  Ａ、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２、ＰＤＧＦＲ−β、ＰＫＡ、ＰＫＣ−α、およびＳｒｃから成る群から選択される。別の実施形態では、前記プロテインキナーゼによる病状が、ｃ−ＲＡＦ、Ｆｌｔ３、ＪＮＫ３ａ３、ＪＮＫ３、Ｌｃｋ、Ｌｙｎ、ｐ３８α、ｐ３８β、ｐ３８γ、ｐ３８δ、Ｔｉｅ２、およびＴｒｋＢから成る群から選択される１若しくはそれ以上の前記キナーゼによる病状である。
【０２２２】
他の実施形態では、式Ｉの化合物がキナーゼによる病状を治療または予防するために有用である。１つの実施形態では、本発明がキナーゼによる病状を治療、予防、または改善する方法に関し、そのような治療を必要とする被験者に、式Ｉの化合物の有効量を投与する工程を有する。本発明の１つの実施形態では、前記方法において上述の個別実施形態の１若しくはそれ以上から選択される化合物を使用する。
【０２２３】
１つの実施形態では、前記病状または疾患がｐ３８αによるものである。
【０２２４】
本発明の別の実施形態は、炎症状態の治療または予防に関する。１つの実施形態では、本発明が炎症状態または疾患を治療、予防、または改善する方法に関し、そのような治療を必要とする被験者に、式Ｉの化合物の有効量を投与する工程を有する。本発明の１つの実施形態では、前記方法において上述の個別実施形態の１若しくはそれ以上から選択される化合物を使用する。
【０２２５】
本明細書に開示される方法の被験者は好ましくは、雌ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ニワトリ、シチメンチョウ、ウズラ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、およびモルモットを含む（これに限定されるものではないが）動物であり、より好ましくは哺乳類、最も好ましくはヒトである。
【０２２６】
本明細書に用いる通り、「キナーゼによる病状」という用語は、プロテインキナーゼが関与することが知られているすべての疾患または他の有害状態を意味する。これには、（必ずしもこれに限定されるものではないが）インターロイキンまたはＴＮＦｓ、特にＴＮＦ−αの過剰生産により生じることが知られている病状を含む。そのような病状には、（これに限定されるものではないが）炎症性疾患、自己免疫疾患、慢性閉塞性肺疾患、破壊性骨疾患、増殖性疾患、癌(結腸癌、非小細胞肺癌、および前立腺癌など）、感染症、神経変性疾患、アレルギー、脳卒中時の再灌流／虚血、心臓発作、血管原性疾患、臓器低酸素症、血管過形成、心肥大、トロンビン誘導性血小板凝集、およびプロスタグランジンエンドペルオキシダーゼシンターゼ−２が関与する疾患を含む。
【０２２７】
治療または予防可能な炎症性疾患には、（これに限定されるものではないが）急性膵炎、慢性膵炎、喘息、アレルギー、および成人呼吸窮迫症候群を含む。
【０２２８】
本発明の化合物は、癌、黄斑変性症、および関節炎など、増殖因子依存性の血管形成が関与する疾患の予防または治療に利用することができる。そのような増殖因子による血管形成には、アンジオポイエチン１、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、および血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）が関与する可能性がある。
【０２２９】
治療または予防可能な自己免疫疾患には、（これに限定されるものではないが）糸球体腎炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、慢性甲状腺炎、グレーブス病、自己免疫性胃炎、糖尿病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性好中球減少症、血小板減少症、アトピー性皮膚炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、多発性硬化症、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、乾癬、または移植片対宿主病を含む。
【０２３０】
治療または予防可能な破壊性骨疾患には、（これに限定されるものではないが）骨粗鬆症、変形性関節炎、および多発性骨髄腫に伴う骨疾患を含む。
【０２３１】
治療または予防可能な増殖性疾患には、（これに限定されるものではないが）急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、転移性黒色腫、カポジ肉腫、および多発性骨髄腫を含む。
【０２３２】
治療または予防可能な血管原性疾患には、固形腫瘍、眼の新血管形成、乳児血管腫を含む。
【０２３３】
治療または予防可能な感染症には、（これに限定されるものではないが）敗血症、敗血症性ショック、および細菌性赤痢を含む。
【０２３４】
治療または予防可能なウイルス性疾患には、（これに限定されるものではないが）（Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、およびＣ型肝炎を含む）急性肝炎感染、およびサイトメガロウイルス網膜炎を含む。
【０２３５】
本発明の化合物により治療または予防可能な神経変性疾患には、（これに限定されるものではないが）アルツハイマー病、パーキンソン病、および外傷による脳虚血または神経変性疾患を含む。
【０２３６】
本発明の化合物および組成は、アレルギーの治療および／または予防に利用できる。１つの実施形態では、前記化合物または組成を用い、アレルギー反応の炎症症状を治療または予防する。別の実施形態では、前記化合物または組成を用い、アレルゲンにより誘発された呼吸器の炎症反応を治療または予防する。
【０２３７】
別の実施形態では、本発明の化合物または組成を用い、結腸癌、非小細胞肺癌、および前立腺癌などの癌を治療する。１つの実施形態では、前記化合物または組成を用い、結腸直腸癌、結腸癌、食道癌、中皮腫、卵巣癌、および胃癌を含む（これに限定されるものではないが）慢性炎症を伴う癌を治療する。別の実施形態では、前記化合物または組成を用い、腫瘍形成を阻害することで癌を治療する。別の実施形態では、前記化合物または組成を用い、転移を抑制することで癌を治療する。別の実施形態では、前記化合物または組成を用い、アポトーシスを誘導することで癌を治療する。
【０２３８】
「ｐ３８による病状」は、脳卒中時の再灌流／虚血、心臓発作、心筋虚血、臓器低酸素症、血管過形成、心肥大、およびトロンビン誘導性血小板凝集も含む。
【０２３９】
式Ｉの化合物はさらに被験者に投与され、健常な被験者が炎症状態またはｐ３８による病状を発症しないように抑制または予防する可能性がある。炎症状態またはｐ３８による病状を有していないが、発症する可能性がある被験者に式Ｉの化合物を投与し、前記病状を予防または阻害することができる。つまり、式Ｉの化合物は、炎症状態またはｐ３８による病状または疾患の発症を予防または阻害する予防薬として使用することができる。前記方法に従い、式Ｉの化合物は、炎症状態またはｐ３８による病状または疾患の重大な発症を予防する上で効果的な用量で投与される。前記被験者の身体の中または表面に式Ｉの化合物があると、炎症状態またはｐ３８による病状または疾患の発症を予防または阻害する。
【０２４０】
本発明の化合物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量範囲内の有効量で投与することができる。本発明の化合物は、毎日単回投与することができ、または１日の合計量を例えば１日２、３、または４回の分割量で投与することができる。炎症状態およびｐ３８による病状の治療に関する当業者であれば、本明細書に提示した試験結果から、１日の有効量を決定することができるだろう。正確な用量と投与回数は、当業者に周知の通り、使用される式Ｉの特定化合物、治療される特定の病状、前記治療される病状の重症度、および特定患者の年齢、体重、および全身的な身体状態、また前記患者が服用している他の薬物によって決まる。前記用量は前記患者の必要量、前記治療される病状の重症度、および利用される化合物によって変わることがある。治療は、前記化合物の最適量に満たない少量から開始される。その後、前記用量はその状況下で最適な効果が得られるまで、少量ずつ増量される。便宜上、望ましい場合、１日の合計量はその日に何度かに分けて、分割投与することができる。
【０２４１】
治療有効量は、疾患を治療するため哺乳類に投与する場合、前記疾患のそのような治療効果をもたらすのに十分な化合物の量を意味することは理解される。前記治療有効量は、前記化合物、前記疾患とその重症度、および治療される哺乳類の年齢、体重などによって変わる。
【０２４２】
さらに、前記用量は特定の使用によって変化する可能性がある。例えば、かなり進展した炎症状態を有する被験者を治療する場合、被験者の前記炎症状態発症を予防するために使用される量と比べ、より高用量の式Ｉの化合物を用いることがある。
【０２４３】
すべての場合の投与において、前記式Ｉの化合物は、本明細書に説明する通り、前記化合物および薬学的に許容される賦形剤を有する薬学的組成として投与することができることは理解されるものとする。代わりに、前記式Ｉの化合物は、適宜純粋な物質として投与することもできる。
【０２４４】
本発明の追加観点では、式Ｉの化合物を単独使用するか、１若しくはそれ以上の追加抗炎症薬と併用することができる。本発明の化合物を１若しくはそれ以上の追加抗炎症薬と併用する場合、本発明の化合物を他の抗炎症薬と一緒に製剤化し、式Ｉの化合物と１若しくはそれ以上の追加抗炎症薬を有する薬学的組成を動物に投与するようにすることができる。代わりに、式Ｉの化合物は、１若しくはそれ以上の追加抗炎症薬を有する組成とは別の薬学的組成として投与することができる。
【０２４５】
本発明の化合物は、創薬アッセイにも有用である。式Ｉの化合物をアッセイに使用し、抗炎症薬またはｐ３８キナーゼなどのプロテインキナーゼ阻害薬としての他の化合物の有効性および／または力価を決定することができる。これらのアッセイには、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを含む。本発明の化合物は、新しい有用な抗炎症化合物または新しい有用なｐ３８キナーゼなどのキナーゼ阻害薬を発見するための対照として使用するか、リード化合物として使用することもできる。さらに、式Ｉの化合物を使用し、ｐ３８キナーゼなどのプロテインキナーゼとの結晶化複合体を形成することができる。
【０２４６】
前記化合物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏでプロテインキナーゼの阻害に利用することもできる。プロテインキナーゼの阻害に用いる式Ｉの化合物の量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏと比べ、ｉｎ  ｖｉｖｏで使用する場合に必ずしも同量ではない。前記特定化合物の薬物動態および薬力学などの因子によっては、ｉｎ  ｖｉｖｏでプロテインキナーゼを阻害する際、式Ｉの化合物の使用量をより多くまたはより少なくすることが必要となることもある。従って、本発明の追加観点はプロテインキナーゼを阻害する方法であり、プロテインキナーゼを式Ｉの化合物と接触させる工程を有する。本発明のこの観点に関する１つの実施形態では、前記方法が細胞に式Ｉの化合物を接触させる工程を有し、前記細胞はプロテインキナーゼを有する。本発明の別の実施形態では、前記方法が、式Ｉの化合物をプロテインキナーゼの阻害に十分な量で被験者に投与する工程を有し、前記被験者はプロテインキナーゼを有するか、発現している。１つの実施形態では、本発明の化合物を用い、１３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１２％グリセロール、２％  ＤＭＳＯ、２ｍＭ  ＤＴＴ、２．５Ｃｉのγ−［３３Ｐ］ＡＴＰ（１０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ；１Ｃｉ＝３７ＧＢｑ）（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｓｅ）、１０Ｍ  ＡＴＰ（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｓｅ）、および２Ｍ  ＧＳＴ−ＡＴＦ２を含む５０μＬ、ｐＨ  ７．５の２４ｍＭトリス−ＨＣｌ緩衝液中、プロテインキナーゼを阻害する。
【０２４７】
本発明の別の実施形態では、式Ｉの化合物を、プロテインキナーゼ、例えばｐ３８を阻害または調節するため、炎症状態または疾患を治療または予防するため、またはプロテインキナーゼによる病状を治療または予防するために用いる薬学的組成を調整するために利用することができる。
【０２４８】
別の実施形態では、本明細書に報告される方法のいずれか１つにおいて、上述の本発明の具体的な化合物またはサブグループのいずれかから選択される化合物、および薬学的に許容されるその塩を使用する。
【０２４９】
式Ｉの化合物の生物活性は、当該分野で既知の方法により前記化合物を検討することで決定できる。例えば、１若しくはそれ以上の既知アッセイにより、炎症状態を予防、治療、または阻害する化合物の能力を評価することができる。
【０２５０】
１つの実施形態では、１若しくはそれ以上の既知アッセイにより、ｐ３８キナーゼ活性を阻害または調節する化合物の能力を評価することができる。１つの既知のアッセイは、被験化合物によるＥＧＦ受容体ペプチドのｐ３８触媒リン酸化反応を阻害するための検査である。ＥＧＦ受容体のペプチドは、公開済みの米国特許出願公開第２００３／０１４９０３７号（Ｓａｌｉｔｕｒｏら）に報告されており、ｐ３８触媒キナーゼ反応のホスホリル受容体である。前記被験化合物の阻害活性は、被験化合物の有無に関わらず、前記ＥＧＦ受容体ペプチドのリン酸化反応の程度を比較することにより決定できる。
【０２５１】
化合物のｐ３８阻害活性を検討する第２のアッセイは、ＡＴＰアーゼ活性の阻害を検討するものである。このアッセイでは、活性化ｐ３８のＡＴＰアーゼ活性を阻害する化合物の能力を決定する。ｐ３８  ＡＴＰアーゼ活性による生成物のＡＤＰは、ＨＰＬＣ分析により定量化される。
【０２５２】
第３のアッセイは、ｐ３８のキナーゼ活性を阻害する化合物の能力を検討する、もう１つのアッセイである。以下の例のセクションで詳細を説明する通り、このアッセイでは、γ−［３３Ｐ］ＡＴＰからＧＳＴ−ＡＴＦ−２基質であるアミノ酸１９−９６（Ｕｐｓｔａｔｅ、米国ニューヨーク州）への３３Ｐの取り込みを測定する。この取り込みは、ｐ３８により触媒される。阻害化合物がある場合、ｐ３８が触媒するγ−［３３Ｐ］ＡＴＰからＧＳＴ−ＡＴＦ−２基質への３３Ｐの取り込みは少なくなる。
【０２５３】
化合物がｐ３８を阻害する能力を検討するために利用可能なもう１つのアッセイは、ＭＫＫ６によるｐ３８の活性化速度を測定するものである。上流キナーゼＭＫＫ６によるｐ３８の活性化は、例えばＥＬＩＳＡにより解明される。被験化合物はｐ３８キナーゼとともにプレインキュベートされる。
【０２５４】
リポポリサッカライド（ＬＰＳ）によるＴＮＦα分泌を阻害する化合物の能力を検討するアッセイも利用することができる。そのようなアッセイは当業者に既知であり、以下に詳細に例が説明されている。
【０２５５】
さらに、ｐ３８ＭＡＰキナーゼファミリーのタンパク質には、少なくともα、β、γ、およびδの４種類のイソ型を含むことは理解される。ｐ３８ＭＡＰキナーゼの別名には、（これに限定されるものではないが）サイトカイン抑制抗炎症薬結合タンパク質（ＣＳＢＰ）、ＣＳＢＰキナーゼ、およびストレス活性化プロテインキナーゼ（ＳＡＰＫ）を含む。ｐ３８ＭＡＰキナーゼの配列は、米国特許第５，７８３，６６４号、第５，７７７，０９７号、第５，９５５，３６６号、第６，０３３，８７３号、第５，８６９，０４３号、第６，４４４，４５５  Ｂ１号、第５，９４８，８８５号、および第６，３７６，２１４  Ｂ１号明細書に開示されている。
【０２５６】
式Ｉの化合物のキナーゼ活性決定に利用される追加アッセイは、以下の例のセクションに記載されている。
【０２５７】
化合物の調整方法
本発明で使用される化合物は、以下の説明で概要を示す方法により合成することができる。本発明で使用される化合物は、当該分野で既知の方法により、合成することができる。以下の一般的なスキームでは、本発明の化合物の調整に利用される合成法を図示する。
【０２５８】
本発明の化合物は、以下に説明する方法の少なくとも１つにより調整することができる。式Ｉの化合物は、ＧがＣ（Ｏ）またはＣＨ２であり、以下のスキームに示す通り、一般的な方法Ｉに従って調整することができ、
【化１４】
2009522363.tif 000014
ＧはＣＨ２またはＣ（Ｏ）であり；Ｑ、Ｘ１、Ｘ２、およびＺは上記に定義した通りであり；Ｒ１３は式Ｉに提供する通り、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３の他、フェニル基である。工程ａでは、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムなどの塩基を使用し、エステルを加水分解する。得られた酸は、次に工程ｂでホスゲンと反応させて環状無水物を形成し、これは次に、適切なアミンＲ１３−ＮＨ２と反応させ、カルボン酸が生成し、式中ＧはＣ（Ｏ）である。前記カルボン酸を、その後、
【化１５】
2009522363.tif 000015
と反応させ、式Ｉの化合物を生成し、式中、ＧはＣ（Ｏ）である。望ましい場合は、工程（ｅ）において、この化合物を任意選択でさらにＢＨ３−ＴＨＦなどの還元剤と反応させ、前記Ｃ（Ｏ）をＣＨ２に還元する。特定の実施形態では、工程ｄでカップリング剤を使用することができる。適切なカップリング剤には、ＥＤＣＩ、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、およびＨＣｌなどの酸を含む。
【０２５９】
例えば、ＧがＣ（Ｏ）またはＣＨ２である式Ｉの化合物は、以下のスキームにより調整可能であり、
【化１６】
2009522363.tif 000016
式中、Ｒ１３、Ｘ１、Ｘ２、およびＺは上述の通り定義される。工程ａでは、水酸化カリウムなどの塩基を使用する。工程ｂでは、ＣＯＣｌ２を使用する。工程ｃでは、適切なアミンＲ１３−ＮＨ２を使用する。工程ｄでは以下の化学式のアミンを使用する。
【０２６０】
【化１７】
2009522363.tif 000017
工程ｅではＢＨ３−ＴＨＦを使用する。例えば、酸、ＥＤＣＩ、または１−ヒドロキシベンゾトリアゾールなどの適切な触媒またはカップリング試薬を使用し、工程ｄのアミド形成を達成することができる。
【０２６１】
別の例として、ＧがＣ（Ｏ）またはＣＨ２である式Ｉの化合物は、以下のスキームにより同様に調整可能であり、
【化１８】
2009522363.tif 000018
式中、Ｒ１３、Ｘ１、Ｘ２、およびＺは上述の通り定義される。
【０２６２】
別の方法ＩＩでは、ＧがＣ（Ｏ）であり、Ｒ２が
【化１９】
2009522363.tif 000019
である式Ｉの化合物は、以下のスキームに示す通り調整可能であり、
【化２０】
2009522363.tif 000020
式中、Ｑ、Ｒ１３、Ｘ１、およびＸ２は式Ｉについて定義した通りである。方法ＩＩでは、工程ａが、例えばＮａＯＨまたはＫ２ＣＯ３などの塩基と前記化合物が反応して酸が生成し、その酸を、その後、適切なアミンである
【化２１】
2009522363.tif 000021
と反応させ、アミドが生成する工程を有する。次に前記アミドを２，２，２−トリフルオロエチルクロロギ酸塩と反応させ、カルバミン酸塩が生成する。次に前記カルバミン酸塩をアミンＲ１３−ＮＨ２と反応させ、式Ｉの化合物が生成する。
【０２６３】
例えば、式Ｉの化合物は、以下の通り、方法ＩＩに従って調整することができ、
【化２２】
2009522363.tif 000022
式中、工程ａではアミノエステルとＫＯＨを反応させ、次に、得られたアミノ酸をＥＤＣＩおよびＨＯＢＴと反応させた後、アミノアミドを
【化２３】
2009522363.tif 000023
と反応させ、次に、Ｒ１３−ＮＨ２を前記カルバミン酸塩と反応させることで尿素が生成する。
【０２６４】
対応する出発原料のアミンは、市販されているか、文献に報告されている方法で調整可能である。当然、式Ｉの特定化合物の調整には、当該分野で周知の他の方法および手順も利用することができる。
【０２６５】
当然、式Ｉの特定化合物の調整には、当該分野で既知の他の方法および手順も利用することができる。
【０２６６】
以下の実施例は、本発明の方法、化合物、および組成の説明に役立つが、これを制限するものではない。通常使用され、当業者に明白な様々な状態およびパラメータを他に適切に修正および調節することは、本発明の精神と範囲に含まれる。
【０２６７】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、標準的な手順に従い記録された。重要なピークは、プロトン数、多重度（ｓ：シングレット、ｄ：ダブレット、ｔ：トリプレット、ｑ：カルテット、ｍ：マルチプレット、ｂｒ  ｓ：ブロードシングレット）、およびカップリング定数（単位Ｈｅｒｔｚ）の順で一覧になっている。
【０２６８】
実施例
以下の説明は、式Ｉの特定化合物、およびこれらの化合物を調整するための特定の中間体を調整するために利用された手順を提供する。
【０２６９】
実施例１
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）−３−（３’，４’−ジフルオロ［１，１’−ビフェニル］ウレア
【化２４】
2009522363.tif 000024
【０２７０】
２級アミン樹脂（０．２５ｍｍｏｌ）にジオキサン（４ｍＬ）中、６−ｔｅｒｔ−ブチル−１Ｈ−チエノ［２，３−ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン溶液（１１３ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を処理し、反応混合物を１２時間９０℃で加熱した。前記樹脂をＴＨＦ（２×４ｍＬ）、ＤＣＭ（４×４ｍＬ）で洗い、減圧乾燥した。
【０２７１】
１０ｍＬの反応管に入れた一定量の樹脂（０．１ｍｍｏｌ）に３，４−ジフルオロフェニルボロン酸（１５８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（１０６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、トルエン（３ｍＬ）、ＥｔＯＨ（２ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２ｍＬ）を追加し、前記溶液に３分間窒素流を吹き込んだ。Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（５８ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を前記溶液に追加し、反応装置を密閉した。混合物を油浴中、７０℃で３時間加熱した。反応混合物を室温で冷却後、前記樹脂をろ過し、ＴＨＦ（４×３ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（４×３ｍＬ）、ＭｅＯＨ（２×３ｍＬ）、およびＤＣＭ（２×３ｍＬ）で洗った。
【０２７２】
樹脂上の酸中間体（０．１ｍｍｏｌ）を室温で３時間、ＤＣＭ（２ｍＬ）中、ＥＤＣＩ（９６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（６８ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、およびチオモルホリン１，１−ジオキシド（６８ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）で処理し、ＤＣＭ（２×３ｍＬ）、ＴＨＦ（２×３ｍＬ）、ＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗い、減圧乾燥した。
【０２７３】
上記に調整した樹脂（０．１ｍｍｏｌ）を５ｍＬシリンジ中、３分間５０％  ＴＦＡ／ＤＣＭ（２ｍＬ）で処理し、開裂した溶液をろ過した。前記樹脂をＤＣＭ（１ｍＬ）で洗い、合わせた溶液を穏やかに加熱しながら窒素を吹き付けて濃縮すると生成物が得られ、これを酢酸エチル／ＮａＨＣＯ３水溶液で抽出した。有機層を乾燥、濃縮すると粗生成物が得られ、これをｐｒｅｐ  ＳＦＣで精製すると、固体として望みの生成物が得られた。（収量＝５．５ｍｇ）。１Ｈ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ、アセトン−ｄ６）δ７．７１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），７．６０（ｍ，１Ｈ），７．４８（ｍ，１Ｈ），７．３９（ｍ，１Ｈ），４．１４（ｍ，４Ｈ），３．２４（ｍ，４Ｈ），１．３７（ｓ，９Ｈ）。
【０２７４】
実施例２
１−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（２−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレア
【化２５】
2009522363.tif 000025
【０２７５】
３０ｍＬのＭｅＯＨに２−ニトロ−４−（トリフルオロメチル）安息香酸（９４０．５ｍｇ、４ｍｍｏｌ）を含む１００ｍＬフラスコに、１００ｍｇの１０％Ｐｄ／Ｃを追加した。３回水素を流した後、反応混合物を水素雰囲気下で２時間攪拌した。前記混合物をセライト栓でろ過し、ろ液を濃縮すると２−アミノ−４−（トリフルオロメチル）安息香酸（７４０ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ、９０％）が得られた。
【０２７６】
２−アミノ−４−（トリフルオロメチル）安息香酸（４１０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）溶液にチオモルホリン１，１−ジオキシド（４０５ｍｇ、３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３４０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（４７９ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）を追加し、混合液を室温で１６時間攪拌した。揮発性物質を減圧留去すると粗生成物が得られ、これを酢酸エチル／ＮａＨＣＯ３水溶液で２回抽出した。有機層を乾燥、濃縮し、残渣を次の工程にそのまま用いた（収量＝５８０ｍｇ）。
【０２７７】
ＤＣＭ（５ｍＬ）中、０℃でホスゲン（Ｆｌｕｋａ；トルエン中２０％、ｄ  ０．９４、９８０μＬ、１．８６ｍｍｏｌ、３ｅｑ）を含むバイアルに、アニリン（２００ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）およびピリジン（ｄ  ０．９７８、２５０μＬ、３．１ｍｍｏｌ、５ｅｑ）の３ｍＬ  ＤＣＭ溶液を追加した。前記混合物を攪拌し、１時間かけて徐々に室温に暖めた。揮発性物質を減圧除去すると、イソシアネート／ピリジニウムＨＣｌ混合物が固体として残った。乾燥ＤＣＭ（３ｍＬ）を残渣に追加、濃縮し、高真空下で乾燥させた。
【０２７８】
ＤＣＭ（２ｍＬ）に２級アミン樹脂（０．１ｍｍｏｌ）およびピリジン（１０μＬ）を入れたスラリーに、ＤＣＭ（１ｍＬ）中、上記に調整したカルバミン酸クロライド（ｃａ  ０．２ｍｍｏｌ）溶液を追加し、反応混合物を３０分間攪拌した。前記樹脂をＤＣＭ（２×３ｍＬ）、ＭｅＯＨ（２×３ｍＬ）、ＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗い、減圧乾燥した。
【０２７９】
上記に調整した樹脂を５ｍＬシリンジ中、３分間５０％  ＴＦＡ／ＤＣＭ（２ｍＬ）で処理し、開裂した溶液をろ過した。前記樹脂をＤＣＭ（２×１ｍＬ）で洗い、合わせた溶液を穏やかに加熱しながら窒素を吹き付けて濃縮すると生成物が得られ、これを酢酸エチル／ＮａＨＣＯ３水溶液で抽出した。有機層を乾燥、濃縮すると、白色固体として望みの生成物が得られた（収量＝１５．１ｍｇ）。１Ｈ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．３６（ｓ，１Ｈ），８．４５（ｓ，１Ｈ），８．３６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），８．２２（ｓ，１Ｈ），７．５８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．８０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），４．００（ｍ，２Ｈ），３．６０（ｍ，２Ｈ），３．２４（ｍ，２Ｈ），３．１４（ｍ，２Ｈ）。
【０２８０】
実施例３
１−（４−（４−アミノフルオロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）フェニル）−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）ウレア
【化２６】
2009522363.tif 000026
【０２８１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ９．８８（ｓ，１Ｈ），９．６１（ｓ，１Ｈ），８．１７（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），６．６１（ｓ，１Ｈ），６．４３（ｓ，２Ｈ），３．８７（ｓ，４Ｈ），３．２０（ｓ，４Ｈ），１．２５（ｓ，９Ｈ）。
【０２８２】
実施例４
１−（４−（４−アミノフルオロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）フェニル）−３−（２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレア
【化２７】
2009522363.tif 000027
【０２８３】
実施例５
メチル２−（３−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イロキシ）フェニル）ウレイド）−４−（トリフルオロメチル）ベンゾエート
【化２８】
2009522363.tif 000028
【０２８４】
１Ｈ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ８．８４（ｍ，１Ｈ），８．４１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．０９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．０１（ｍ，１Ｈ），３．９６（ｓ，３Ｈ），２．９１（ｓ，３Ｈ）。
【０２８５】
実施例６
メチル３−（３−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレイド）−５−（トリフルオロメチル）ベンゾエート
【化２９】
2009522363.tif 000029
【０２８６】
１Ｈ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ８．３６（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２３（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．０６（ｄ，８．８Ｈｚ，２Ｈ），６．９０（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ）。
【０２８７】
実施例７
メチル３−（３−（４−（２−（メチルカルボニル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）ウレイド）−５−（トリフルオロメチル）ベンゾエート
【化３０】
2009522363.tif 000030
【０２８８】
１Ｈ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ８．４０（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２２（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ），７．８２（ｓ，１Ｈ），７．５５−７．５１（３Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），６．９９（ｍ，１Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），２．９１（ｓ，３Ｈ）。
【０２８９】
実施例８
１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（２−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルバモイル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレア
【化３１】
2009522363.tif 000031
【０２９０】
樹脂結合中間体エステル（０．１ｍｍｏｌ）、ＬｉＯＨ（２０ｍｇ）をＴＨＦ／水（４：１、３ｍＬ）に入れた不均一懸濁液を室温で１６時間激しく攪拌した。前記樹脂をＴＨＦ（４×３ｍＬ）、水（４×３ｍＬ）、ＤＣＭ（４×４ｍＬ）で洗い、減圧乾燥した。上述の通り調整した酸中間体（０．１ｍｍｏｌ）を室温で１２時間、ＤＣＭ（２ｍＬ）中、ＥＤＣＩ（ＭＷ＝１９１．７、９６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１３５．１２、６８ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、およびチオモルホリン１，１−ジオキシド（６８ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）で処理し、ＤＣＭ（２×３ｍＬ）、ＭｅＯＨ（２×３ｍＬ）、ＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗い、減圧乾燥した。
【０２９１】
上記に調整した樹脂（０．１ｍｍｏｌ）を５ｍＬシリンジ中、３分間５０％  ＴＦＡ／ＤＣＭ（２ｍＬ）で処理し、開裂した溶液をろ過した。前記樹脂をＤＣＭ（１ｍＬ）で洗い、合わせた溶液を穏やかに加熱しながら窒素を吹き付けて濃縮すると生成物が得られ、これを酢酸エチル／ＮａＨＣＯ３水溶液で抽出した。有機層を乾燥、濃縮すると、固体として望みの生成物が得られた。（収量＝３２．８ｍｇ）。１Ｈ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ８．４１（ｍ，１Ｈ），７．９５（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５５−７．５１（４Ｈ），７．４３（ｍ，１Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．００（ｄｄ，Ｊ＝５．６，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．３８（ｍ，２Ｈ），３．９０（ｍ，２Ｈ），３．２６（ｍ，４Ｈ），２．９１（ｓ，３Ｈ）。
【０２９２】
実施例９
１−（４−（ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレア
【化３２】
2009522363.tif 000032
【０２９３】
インドールアルデヒド樹脂（０．５ｇ、１ｍｍｏｌ／ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのシリンジ反応装置に入れた。５％  ＡｃＯＨ、４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）ベンゼンアミド（３９０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）溶液をシリンジに充填し、前記シリンジを２時間振盪した。５％  ＡｃＯＨ、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（２１２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液を前記シリンジに追加した。室温で２時間振盪後、さらに５％  ＡｃＯＨ、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（２１２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液を前記シリンジに追加し、室温で一晩、反応液を振盪した。前記樹脂を５％  ＡｃＯＨのＤＭＦ溶液（２×１０ｍＬ）、ＤＭＦ（２×１０ｍＬ）、ＤＣＭ（２×１０ｍＬ）、１０％ジイソプロピルエチルアミンのＤＣＭ溶液（２×１０ｍＬ）、ＤＣＭ（４×１０ｍＬ）で洗い、減圧乾燥させた。
【０２９４】
２級アミン樹脂（０．２ｍｍｏｌ）を１，２−ジクロロ−３−イソシアネートベンゼン（１８８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）溶液で処理し、反応混合液を２時間攪拌した。シリンジでＤＩＥＡ（５０μｌ）を追加し、反応液を２時間攪拌した。前記樹脂をＤＣＭ（２×４ｍＬ）、ＭｅＯＨ（２×４ｍＬ）、ＤＣＭ（３×４ｍＬ）で洗い、減圧乾燥した。
【０２９５】
調整した樹脂（０．２ｍｍｏｌ）を５ｍＬシリンジ中、３分間５０％  ＴＦＡ／ＤＣＭ（２ｍＬ）で処理し、開裂した溶液をろ過した。前記樹脂をＤＣＭ（１ｍＬ）で洗い、合わせた溶液を穏やかに加熱しながら窒素を吹き付けて濃縮すると生成物が得られ、これを酢酸エチル／ＮａＨＣＯ３水溶液で抽出した。有機層を乾燥、濃縮すると粗生成物が得られ、これをｐｒｅｐ  ＳＦＣで精製すると、白色固体として望みの生成物が得られた。（収量＝２５．６ｍｇ）。１Ｈ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．１０（ｓ，１Ｈ），９．９４（ｓ，１Ｈ），８．３６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），７．９３（ｓ，１Ｈ），７．６７（ｓ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４１（ｓ，１Ｈ），７．０５（ｄｄ，Ｊ＝９．２，２．０Ｈｚ，２Ｈ），６．８１（ｄｄ，Ｊ＝４．８，１．６Ｈｚ，２Ｈ），３．９３（ｍ，２Ｈ），３．６１（ｍ，２Ｈ），３．２０（ｍ，４Ｈ）。
【０２９６】
実施例１０
１−（４−（２−（メチルカルバモイル）ピリジン−４−イルオキシ）フェニル）−３−（３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルバモイル）−５−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレア
【化３３】
2009522363.tif 000033
【０２９７】
１Ｈ  ＮＭＲ：（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ８．４１（ｄｄ，Ｊ＝５．６，０．４Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｔ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５６−７．５２（３Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝０．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ），７．０１（ｄｄ，Ｊ＝５．６，２．８Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｍ，２Ｈ），３．８２（ｍ，２Ｈ），３．２３（ｍ，４Ｈ），２．９１（ｓ，３Ｈ）。
【０２９８】
実施例１１
１−（４−（４−アミノ−６−（４−メトキシフェニル）フロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）フェニル）−３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（チオモルホリン−１，１−ジオキシド−４−カルボニル）チオフェン−２−イル）ウレア
【化３４】
2009522363.tif 000034
【０２９９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３／ＣＤ３ＯＤ）：δ８．１８（ｓ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），６．５２（ｓ，１Ｈ），４．１４−４．０７（ｍ，４Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），３．１５（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，４Ｈ），１．３３（ｓ，９Ｈ）。
【０３００】
実施例１２
前記化合物の生物活性
ヒト非活性化ｐ３８キナーゼ（ＭＷ＝４３ｋＤａ）は、本明細書記載のプロトコールにより精製した。化学物質はＣａｌｂｉｏｃｈｅｍから購入した。蛍光特性はＣａｒｙ  Ｅｃｌｉｐｓｅ（Ｖａｒｉａｎ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、カリフォルニア州Ｗａｌｎｕｔ  Ｃｒｅｅｋ）により解析した。研究用グレードのＣＭ５センサーチップおよびカップリング試薬（Ｎ−エチル−Ｎ’−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド（ＥＤＣ）Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、および１Ｍの塩酸エタノールアミン、ｐＨ  ８．５）はＢｉａｃｏｒｅ  ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ、スウェーデン）から購入した。バイオセンサーによる分析は、Ｂｉａｃｏｒｅ  ３０００  ＳＰＲ装置により実施した。動態解析はＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ分光光度計（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、米国カリフォルニア州）により実施した。
【０３０１】
Ｐ３８キナーゼアッセイ。ｐ３８のプロテインキナーゼ活性は、γ−［３３Ｐ］ＡＴＰからＧＳＴ−ＡＴＦ−２基質のアミノ酸１９−９６（Ｕｐｓｔａｔｅ、米国ニューヨーク州）への３３Ｐの取り込みを測定することで決定した。前記反応は、１３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１２％グリセロール、２％  ＤＭＳＯ、２ｍＭ  ＤＴＴ、２．５Ｃｉのγ−［３３Ｐ］ＡＴＰ（１０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ；１Ｃｉ＝３７ＧＢｑ）（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｓｅ）、１０Ｍ  ＡＴＰ（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｓｅ）、および２Ｍ  ＧＳＴ−ＡＴＦ２を含む、最終容積５０μＬ、ｐＨ  ７．５の２４ｍＭトリス−ＨＣｌ緩衝液中で行った。化合物は１０ｎＭ  ｐ３８とともに、３０℃で２０分間プレインキュベートし、ＧＳＴ−ＡＴＦ２およびＡＴＰを加えて反応を開始し、３０℃で７０分間インキュベートした後、６００ｍＭリン酸１０μＬを加えて反応を停止した。リン酸化された基質を９６ウェルのホスホセルロースプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＭＡＰＨＮＯＢ  １０）に捕捉し、１００ｍＭリン酸で洗い、ＢｅｃｋｍｅｎＣｏｕｌｔｅｒ  ＬＳ６５００液体シンチレーションカウンタで計数した。
【０３０２】
Ａｂｌキナーゼ活性：最終反応容積を２５μＬとし、Ａｂｌｅ（ｍ）（５〜１０ｍＵ）をｍＭ  ＭＯＰＳ（ｐＨ  ７．０）、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、５０μＭ  ＥＡＩＹＡＡＰＦＡＫＫＫ、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μＬの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μＬの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３０３】
ＣＨＫ２キナーゼ活性：最終反応容積を２５ｍｌとし、ＣＨＫ２（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を８ｍＭ  ＭＯＰＳ（ｐＨ  ７．０）、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、２００ｍＭ  ＫＫＫＶＡＳＲＳＧＬＹＲＳＰＳＭＰＥＮＬＮＲＰＲ、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３０４】
ｃ−ＲＡＦキナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、ｃ−ＲＡＦ（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を２５ｍＭトリス（ｐＨ  ７．５）、０．０２ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．６６ｍｇ／ｍｌミエリン塩基性タンパク質、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３０５】
ｃＳＲＣキナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、ｃＳＲＣ（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を８ｍＭ  ＭＯＰＳ（ｐＨ  ７．０）、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、２５０μＭ  ＫＶＥＫＩＧＥＧＴＹＧＶＶＹＫ（Ｃｄｃ２ペプチド）、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３０６】
ＥｐｈＢ４キナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、ＥｐｈＢ４（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を８ｍＭ  ＭＯＰＳ（ｐＨ  ７．０）、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌポリ（Ｇｌｕｅ，Ｔｙｒ）４：１、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３０７】
Ｆｌｔ３キナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、Ｆｌｔ３（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を８ｍＭ  ＭＯＰＳ（ｐＨ  ７．０）、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、５０μＭ  ＥＡＩＹＡＡＰＦＡＫＫＫ、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５ｍｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０ｍｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３０８】
ＧＳＫ３βキナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、ＧＳＫ３β（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を８μＭ  ＭＯＰＳ（ｐＨ  ７．０）、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、２０ｍＭ  ＹＲＲＡＡＶＰＰＳＰＳＬＳＲＨＳＳＰＨＱＳ（ｐ）ＥＤＥＥＥ（蛍光体ＧＳ２ペプチド）、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μｌの反応液をスポットし、５０ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３０９】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、ＩＧＦ−１Ｒ（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を５０ｍＭトリス（ｐＨ  ７．５）、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、０．１％  β−メルカプトエタノール、２５０μＭ  ＫＫＫＳＰＥＧＹＶＮＩＥＦＧ、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３１０】
ＪＮＫ２α２キナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、ＪＮＫ２α２（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を５０ｍＭトリス（ｐＨ  ７．５）、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．１％  β−メルカプトエタノール、３μＭ  ＡＴＦ２、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３１１】
ＪＮＫ３キナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、ＪＮＫ３（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を５０ｍＭトリス（ｐＨ  ７．５）、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．１％  β−メルカプトエタノール、２５０μＭペプチド、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３１２】
Ｌｃｋキナーゼ活性：最終反応容積を２５ｍｌとし、Ｌｃｋ（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を５０ｍＭトリス（ｐＨ  ７．５）、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、２５０μＭ  ＫＶＥＫＩＧＥＧＴＹＧＶＶＹＫ（Ｃｄｃ２ペプチド)、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３１３】
Ｌｙｎキナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、Ｌｙｎ（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を５０ｍＭ  トリス（ｐＨ  ７．５）、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、０．１％  β−メルカプトエタノール、０．１ｍｇ／ｍｌポリ（Ｇｌｕｅ，Ｔｙｒ）４：１、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｆｉｌｔｅｒｍａｔ  Ａに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３１４】
ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２キナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、ＭＡＰＫＡＰ−Ｋ２（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を５０ｍＭ  β−グリセロリン酸ナトリウム（ｐＨ  ７．５）、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ、３０ｍＭ  ＫＫＬＮＲＴＬＳＶＡ、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３１５】
Ｍｅｔキナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、Ｍｅｔ（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を８ｍＭ  ＭＯＰＳ（ｐＨ  ７．０）、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、２５０μＭ  ＫＫＫＳＰＥＧＹＶＮＩＥＦＧ、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３１６】
ＰＤＧＦＲβキナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、ＰＤＧＦＲβ（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を８ｍＭ  ＭＯＰＳ（ｐＨ  ７．０）、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１ｍｇ／ｍｌポリ（Ｇｌｕｅ，Ｔｙｒ）４：１、１０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｆｉｌｔｅｒｍａｔ  Ａに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３１７】
ＰＫＡキナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、ＰＫＡ（ｂ）（５〜１０ｍＵ）を８ｍＭ  ＭＯＰＳ（ｐＨ  ７．０）、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、３０μＭ  ＬＲＲＡＳＬＧ（Ｋｅｍｐｔｉｄｅ）、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μｌの反応液をスポットし、５０ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３１８】
ＰＫＣαキナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、ＰＫＣα（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ  ７．４）、０．０３％トリトンＸ−１００、０．１ｍＭ  ＣａＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌホスファチジルセリン、１０μｇ／ｍｌジアシルグリセロール、０．１ｍｇ／ｍｌヒストンＨ１、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３１９】
ＳＡＰＫ２ａキナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、ＳＡＰＫ２ａ（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を２５ｍＭトリス（ｐＨ  ７．５）、０．０２ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．３３ｍｇ／ｍｌミエリン塩基性タンパク質、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３２０】
ＳＡＰＫ２ｂキナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、ＳＡＰＫ２ｂ（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を２５ｍＭトリス（ｐＨ  ７．５）、０．０２ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．３３ｍｇ／ｍｌミエリン塩基性タンパク質、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３２１】
ＳＡＰＫ３キナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、ＳＡＰＫ３（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を２５ｍＭトリス（ｐＨ  ７．５）、０．０２ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．３３ｍｇ／ｍｌミエリン塩基性タンパク質、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μＬの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μＬの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３２２】
ＳＡＰＫ４キナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、ＳＡＰＫ４（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を２５ｍＭトリス（ｐＨ  ７．５）、０．０２ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．３３ｍｇ／ｍｌミエリン塩基性タンパク質、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｐ３０  ｆｉｌｔｅｒｍａｔに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３２３】
Ｔｉｅ２キナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、Ｔｉｅ２（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を８ｍＭ  ＭＯＰＳ（ｐＨ  ７．０）、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．５ｍＭ  ＭｎＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍｌポリ（Ｇｌｕｅ，Ｔｙｒ）４：１、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｆｉｌｔｅｒｍａｔ  Ａに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３２４】
ＴｒｋＢキナーゼ活性：最終反応容積を２５μｌとし、ＴｒｋＢ（ｈ）（５〜１０ｍＵ）を８ｍＭ  ＭＯＰＳ（ｐＨ  ７．０）、０．２ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１ｍｇ／ｍｌポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１、１０ｍＭ酢酸マグネシウム、および［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性度、約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、濃度は必要に応じる）とともにインキュベートする。ＭｇＡＴＰ混合物を加えて反応を開始する。室温で４０分間インキュベートした後、５μｌの３％リン酸溶液を加えて反応を停止する。次に、Ｆｉｌｔｅｒｍａｔ  Ａに１０μｌの反応液をスポットし、７５ｍＭリン酸で５分間３回、メタノールで１回洗った後、乾燥させ、シンチレーション計数を行う。
【０３２５】
前記化合物の多くは、Ｆｌｔ３、ＫＤＲ、Ｔｉｅ２、およびｐ３８の阻害活性を検討した。前記化合物は良好な生物活性を示し、例えば、ＩＣ５０はＦｌｔ３で１μＭ未満、ＫＤＲで>１０〜０．１μＭ未満、Ｔｉｅ２で>１０〜１μＭ未満、ｐ３８で１μＭ未満であった。
【０３２６】
これで本発明について完全に説明したが、広範な同等の範囲の条件、製剤、および他のパラメータの中で、本発明またはそのいかなる実施形態の範囲にも影響せずに、同等の実験を実施できることは、当業者によって理解される。本明細書に引用したすべての特許および参考文献は、その全開示が本明細書に参照として組み込まれる。
【国際調査報告】
2009522363.tif 000039