(57)【要約】本発明は、血小板濃縮物中のバクテリアおよびウイルスなどの病原体、および／または、白血球に柔軟な感光袋中で動かしながら紫外光を照射することによって不活化するための方法に関する。この場合、血液製剤は、動作（上下動、回転、水平動）による流体の混合が可能となるように、柔軟な袋に充填されている。このことは、充填を全充填容量の多くとも３０％にすることでさらに促進される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
血小板濃縮物（ＰＣ）中の病原体および白血球のうちの少なくとも一方を不活化するための方法であって、
給血者の血、および、機械によるアフェレーシスのうちの少なくとも一方から得られるＰＣを用意するステップと、
前記ＰＣに紫外（ＵＶ）光を照射するステップとを含み、
前記ＰＣは、個別に処理可能で別々に貯蔵される複数のユニットからなり、
前記ＰＣの複数のユニットのそれぞれが、柔軟かつ平坦なＵＶ透過性の複数の感光袋のそれぞれの中に入れられている、方法であって、
前記複数の感光袋のそれぞれは、前記複数の感光袋のそれぞれの最大の充填体積の３０％未満に充填されており、
前記複数の感光袋のそれぞれをＵＶ光の照射中に動作させることにより、前記複数の感光袋のそれぞれの内容物を循環させて、層厚の変化するゾーンを形成することを特徴とする方法。
【請求項２】
前記請求項１に記載の方法において、
前記病原体は、ウイルスおよびバクテリアのうちの少なくとも一つであることを特徴とする方法。
【請求項３】
前記請求項１〜２のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記動作により、前記ゾーンは、前記層厚が規則的且つ一時的に１ｍｍ未満となる被照射領域を有することを特徴とする方法。
【請求項４】
前記請求項１〜３のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記動作、特に前記動作の振幅を、前記ＰＣ内において前記層厚が規則的且つ一時的に０．５ｍｍ未満となる被照射領域が前記ＰＣ内に生じるように、行なうことを特徴とする方法。
【請求項５】
前記請求項１〜４のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記感光袋のそれぞれは、下面と上面とを有し、
前記感光袋のそれぞれの内容物に接触しているまたは接触可能な前記下面と前記上面との面積の合計は、前記内容物の内側全表面の面積の９０パーセントを上回り、好ましくは９９パーセントを上回っていることを特徴とする方法。
【請求項６】
前記請求項１〜５のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記照射は、
３２０ｎｍ未満２８０ｎｍまでのＵＶＢ、および、２８０ｎｍ未満２００ｎｍまでのＵＶＣ、特には２８０ｎｍ未満２００ｎｍまでのＵＶＣのうちの少なくとも一方であるか、または、
３２０ｎｍ未満２８０ｎｍまでのＵＶＢ、および、２８０ｎｍ未満２００ｎｍまでのＵＶＣ、特には２８０ｎｍ未満２００ｎｍまでのＵＶＣのうちの少なくとも一方を含み、
好ましくは前記の領域の波長の照射のみからなること特徴とする方法。
【請求項７】
前記請求項１〜６のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記ユニットの各々は、最大で８人の給血者、好ましくは最大で６人の給血者のサンプルから製造されていることを特徴とする方法。
【請求項８】
前記請求項１〜７のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記ユニットの各々は、１人の給血者のものであることを特徴とする方法。
【請求項９】
前記請求項１〜８のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記ＰＣは、１ｍｌ当り少なくとも１×１０８個の血小板を含み、好ましくは１ｍｌ当り少なくとも５×１０８個の血小板を含んでいることを特徴とする方法。
【請求項１０】
前記請求項１〜９のうちのいずれか１項に記載の方法において、
ＵＶＢによる前記照射を、０．３〜５Ｊ／ｃｍ２、好ましくは０．５〜２．５Ｊ／ｃｍ２の光エネルギーによって行なうことを特徴とする方法。
【請求項１１】
前記請求項１〜９のうちのいずれか１項に記載の方法において、
ＵＶＣによる前記照射を、０．０１〜２Ｊ／ｃｍ２、好ましくは０．１〜１Ｊ／ｃｍ２の光エネルギーによって行なうことを特徴とする方法。
【請求項１２】
前記請求項１〜１１のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記ＰＣは、プラズマと、必要に応じて適切な貯蔵媒体とを含み、
プラズマ含有率は、好ましくは２０重量％を上回っていることを特徴とする方法。
【請求項１３】
前記請求項１〜１２のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記ＰＣは、緩衝された水溶性の貯蔵媒体を含んでいることを特徴とする方法。
【請求項１４】
前記請求項１〜１３のうちのいずれか１項に記載の方法において、
ウイルス、バクテリア、および、白血球のうちの少なくとも１つを不活化し、
前記血小板の機能は、本質的に変化しないままであること特徴とする方法。
【請求項１５】
前記請求項１〜１４のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記感光袋は、５０００ｍｌ以下の体積を有していることを特徴とする方法。
【請求項１６】
前記請求項１〜１５のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記感光袋は、前記感光袋が動かされ照射される装置内に、動作可能に保持されており、特に、２つの面、例えばＵＶ透過性のあるガラスまたはプラスチックの板の間に装着されていないことを特徴とする方法。
【請求項１７】
前記請求項１〜１６のうちのいずれか１項に記載の方法において、
全感光期間の少なくとも４分の３は、前記感光袋を動かすことを特徴とする方法。
【請求項１８】
前記請求項１〜１７のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記感光袋を、振盪によって動かすことを特徴とする方法。
【請求項１９】
前記請求項１〜１７のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記感光袋を、上下動作によって動かすことを特徴とする方法。
【請求項２０】
前記請求項１〜１７のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記感光袋を、回転によって動かすことを特徴とする方法。
【請求項２１】
前記請求項１〜２０のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記振盪を、オービタル振盪器、プラットフォーム振盪器、シーソー式振盪器、または、タンブラー振盪器によって行なうことを特徴とする方法。
【請求項２２】
前記請求項１〜２１のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記感光袋を片面で置くことで、動作または振盪の間に、および、動作または振盪によって、前記感光袋の高さを、前記感光袋が置かれた面と、前記感光袋の上面に対する交差点との間の表面法線に沿った距離に関して、前記内容物に接触している前記感光袋の全上面に亘って連続的に変化させることを特徴とする方法。
【請求項２３】
前記請求項１〜２２のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記感光袋は、１０ｍｍの平均的な充填レベル、好ましくは５ｍｍ未満の平均的な充填レベルを有し、
前記動作によって、波の谷が連続的に生成され、
前記波の谷は、前記平均的な充填レベルの半分未満の層厚、好ましくは１ｍｍ未満、または、０．１ｍｍさえ下回る層厚を有していることを特徴とする方法。
【請求項２４】
前記請求項１〜２３のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記感光袋を、前記感光中は０．２〜８ｃｍの振幅で少なくともｘ方向、および、必要に応じてｙ方向（ｙ方向は、ｘ方向に対して直角）へ連続的に動かし、
これとは無関係に、振盪動作の方向転換の振動数は、０．５〜１０Ｈｚであることを特徴とする方法。
【請求項２５】
前記請求項１〜２４のうちのいずれか１項に記載の方法において、
前記感光袋は、前記照射中に、その最大の充填体積の多くとも２０％に充填されていることを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紫外光の照射によって血小板濃縮物（ＰＣ）中のバクテリアおよびウイルスなどの病原体、および／または、白血球を不活化するための方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
血液製剤の治療上の使用は血液製剤の受容者がウイルスおよびバクテリアに感染するリスクを生じさせる、ということが知られている。例として、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、並びに、エイズ病原菌ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２が挙げられる。製剤の製造時に上記病原体を不活化または除去するための工程が行なわれなければ、このリスクは常にある。
【０００３】
紫外（ＵＶ）光は波長に応じて区別されている。この出願の文脈においては、ＵＶＡを４００ｎｍ未満３２０ｎｍまで、ＵＶＢを３２０ｎｍ未満２８０ｎｍまで、ＵＶＣを２８０ｎｍ未満２００ｎｍまでと定義する。短波長の、すなわち、約３２０ｎｍ未満の波長域の紫外（ＵＶ）光（ＵＶＢおよびＵＶＣ）を照射することによって、例えば血漿または細胞性血液製剤におけるウイルスもバクテリアも不活化することができる、ということが知られている。３２０ｎｍ以上では、放射のエネルギーが小さ過ぎて微生物およびウイルスを不活化することができない。病原体不活化のための化学的方法、光化学的方法、および、光力学的方法に対して、ＵＶ光による単なる照射は、基本的に、それ自体で効果的であり、反応性化学薬品または光活性物質の添加物を必要としない、という利点を有している。
【０００４】
このような添加物またはその分裂生成物または光化学生成物は、中毒性または突然変異性があるので、多くの場合、後で取り除かれる必要がある。さらに、このような添加物またはその分裂生成物または光化学生成物がプラズマ蛋白質およびセル表面に結合する場合、処理された製剤中で新抗原性構造の形成を引き起こす可能性がある。通常、このような添加物を、完全に除去することはできないし、少なくとも、このような添加物を除去するにはさらに手間がかかる。さらに、このような追加の作業工程は、殺菌された製剤の品質を損なう可能性がある。直接的な病原体不活化に最も効果的なのは、ＵＶＣである。しかしながら、ＵＶＣは、血漿などの蛋白質含有溶液または混濁浮遊液（例えば、ＰＣ）には非常に浅い浸透深さまでしか浸透しない、という欠点を有している。
【０００５】
ＵＶＣは、第二次世界大戦中およびその直後に、血漿およびアルブミン溶液を殺菌するため、とりわけ肝炎ウイルスを不活化するために使用されていた。当時は、溶液を、ＵＶＣ光源を通過するように通過装置に薄膜として導入していた。この方法は、不確実だと証明され、中止された（非特許文献１)。
【０００６】
現在は、同じ原則に基づいて行なわれるさらに開発された方法が、治療上のプラズマ蛋白質製剤を殺菌するために使用されている。全ての場合において、比較的大きな体積、つまり、数百リットルまで、および、それ以上ものプラズマプールすなわち蛋白質溶液を処理することが考慮されていた、または、考慮されている（非特許文献２および非特許文献３）。
【０００７】
給血または機械によるアフェレーシスによって（多くとも数百ｍｌまでの体積で）得られるＰＣの多数の個々のユニットを殺菌するためには、上記流通装置は適していない。しかしながら、まさしくこれが、血液バンクの日々の業務に必要なのである。
【０００８】
ＵＶＢは、ＵＶＣと同じ程度ではないとしても、微生物致死性および殺ウイルス作用が同様にある。ＵＶＢは、蛋白質含有溶液および混濁浮遊液に、ＵＶＣよりもややよく浸透するが、例えばプラズマまたはＰＣへのその浸透深さは、ほんの数ミリメートルの範囲において測定される。ＰＣにおいて、ウイルスまたはバクテリアよりもＵＶ感度がかなり高いＴリンパ球を不活化するために、ＵＶＢの照射を試験した。これにより、製剤の受容者における外因性ＨＬＡ抗原に対する同種免疫が防止されることになる。なお、同種免疫は、ＰＣのさらなる輸液に対して受容者を抗療性にしてしまう可能性がある(非特許文献４および非特許文献５)。
【０００９】
しかしながら、この方法は実施されない。なぜなら、ほぼ同時に開発された白血球濾過が、類似の効果を有し且つコストおよび手間のより有利な代替形態を提供しているからである（非特許文献６)。
【００１０】
単色性のＵＶＢ光（波長３０８ｎｍ）を照射することによって、血小板浮遊液中のウイルスを不活化することができる、ということが同様に説明されていた。この場合、エキシマーレーザーが使用されていた。サンプル体積は、数ｍｌであった（非特許文献７）。この基準からは明らかに先に進んでいなかった。実際、ＵＶ光（つまりＵＶＢまたはＵＶＣ）を照射するだけで、完全なＰＣ中のウイルスまたはバクテリアを除染することの出来る方法は刊行物からは知られていない。
【非特許文献１】Kallenbach NR, Cornelius PA, Negus D他著「Inactivation of viruses by ultraviolet light」Curr Stud Hematol Blood Transfus、１９８９年、第５６頁、第７０〜８２頁
【非特許文献２】Hart H, Reid K, Hart W. 著「Inactivation of viruses during ultraviolet light treatment of human intravenous immunoglobulin and albumin」Vox Sang、１９９３年；６４（２）：第８２〜８頁
【非特許文献３】Chin S, Williams B, Gottlieb P他著「Virucidal short wavelength ultraviolet light treatment of plasma and factor VIII concentrate: protection of proteins by antioxidants」Blood、１９９５年；８６（１１）：第４３３１〜６頁
【非特許文献４】Andreu G, Boccaccio C, Lecrubier C, et al. 著「Ultraviolet Irradiation of platelet concentrates: feasibility in transfusion practice」Transfusion、１９９０年；３０（５）：第４０１〜６頁
【非特許文献５】Pamphilon DH. 著「The rationale and use of platelet concentrates irradiated with ultraviolet-B light」 Transfus Med Rev、１９９９年；１３（４）：第３２３〜３３頁
【非特許文献６】The Trial to Reduce Alloimmunization to Platelets Study Group著「Leukocyte reduction and ultraviolet B irradiation of platelets to prevent alloimmunization and refractoriness to platelet transfusions」N Engl J Med、１９９７年；３３７（２６）：第１８６１〜９頁
【非特許文献７】Prodouz KN, Fratantoni JC, Boone EJ, Bonner RF著「Use of laser-UV for inactivation of virus in blood products」Blood、１９８７年；７０（２）：第５８９〜９２頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
ＰＣは、機械による血小板アフェレーシスによって個々の給血者から得られるし、給血からも分離される。この場合、血小板は、複数（一般的に４〜６）の給血からプールされる。これによって得られるＰＣの体積は、一般的に、約２００〜３５０ｍｌである。しかしながら、ＰＣは、個々の給血からも製造され、その体積は、相当して比較的小さい（約４０〜８０ｍｌ）。プールＰＣにおいても、アフェレーシスＰＣにおいても、血小板は、血漿または特別な貯蔵媒体に、約３０〜４０％の残留血漿含有率で懸濁されている。ＰＣを、通気性のある平坦なプラスチック袋中に、２０〜２４℃で貯蔵する。
【００１２】
ＰＣを、このような袋中で、ＵＶ光で殺菌することが望ましい。しかしながら、この場合、製剤がＵＶ光をほとんど透過させない、という既述の問題が生じる。このことは、以下の計算例によって明らかになるであろう。殺菌のためにＵＶＢを準備し、ＰＣ体積を約３００ｍｌとし、さらに、ＵＶＢ放射の浸透深さを１ｍｍとし、袋の両側から照射するとすれば、適切な感光袋は、少なくとも１５００ｃｍ２の表面を有している必要がある。
【００１３】
このように寸法決定された比較的多数の袋をルーチンに基づいて処理することは、不可能とは言わないが、困難に思われる。ＵＶＢの代わりにＵＶＣによってＰＣを殺菌したいならば、この問題は、なおいっそう大きくなる。なぜなら、ＵＶＣの浸透深さはより少ないからである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
驚くべきことに、上記問題は、請求項１に記載の方法によって解決されるということが分かった。好ましい形態は、従属請求項の対象であるか、または、以下で説明されている。
【００１５】
本発明によれば、ＰＣを、その感光袋中で適切な方法で動かす。この動作は、ＵＶ放射を透過させることができるように非常に薄い層がＰＣ内に部分的に形成される程度の強さで行なわれる。同時に、この動作によって、ＰＣ懸濁液が袋中で効率的に混合される必要がある。以下の条件であればこれら双方を実現できる。
【００１６】
１．感光袋は非常に柔軟で、感光中は固定されず、例えば、水晶板の間に挟み込まれない。したがって、感光袋は、袋が動かされるときに生じるＰＣ浮遊液の各形状変化に適合する。
【００１７】
２．袋は、水平に（直線的に前後方向に、もしくは、円または楕円の形に）、または、垂直に（上下に）動かされる。
【００１８】
３．感光袋は、その最大の充填体積の多くても３０％まで、特に、多くても２０％まで充填されている。
【００１９】
全ての場合において、ＰＣ浮遊液の比較的大部分がその慣性によって元の方向へさらに動き、それゆえ、置き去りにされた残留部分がＵＶ放射を透過させることのできる薄い層を形成し得るように、動作方向の転換は突然であるほうがよい。感光中の袋の動作によって混合が恒常的に行なわれ、それゆえ、最終的には、ＰＣ（および、それに含まれるウイルスおよび／またはバクテリア）全体にＵＶが放射される。したがって、ＰＣは殺菌される。
【００２０】
感光袋は、ＵＶ透過性のプラスチック材料でできている。適切なプラスチックは、例えば、１ｍｍ以下のシート厚、特に、０．５ｍｍ未満のシート厚を有するエチレンビニルアセテートおよびポリオレフィンである。感光袋は、平坦に形成されており、２００〜３２０ｎｍの範囲において吸収極大を有していないことが好ましい。感光袋は、横になって充填された状態でほんの数ｍｍの厚み、例えば１０ｍｍ、特に５ｍｍ未満であり、好ましくは３ｍｍさえ下回り、例えば２００ｍｌまたは３００ｍｌまでのサンプル体積を受け入れるように定められている。しかしながら、感光袋の最大容量（体積）は、実際に感光袋に含まれる被処理サンプルの体積よりも、少なくとも因数３だけ、普通は少なくとも５倍、好ましくは少なくとも１０倍、または、少なくとも２０倍も大きい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
−実験的研究−
記載の実験は、方法の有効性を説明するものであり、以下で説明するバクテリアおよび／またはウイルスの不活化に制限されない。また、記載の実験において使用された「ランダムドナー」ＰＣに限らず、本発明に係る方法は、血小板アフェレーシス製剤にも使用可能である。全ての実験を、３〜６回実施した。表示された結果は、それぞれ、平均値±標準偏差を示す。
【００２２】
−血小板濃縮物−
ＰＣを、それぞれ５つの軟膜のプールから製造した。なお、プールは、それ自体は一般的な給血から得られたものである。ＰＣの体積は、約３００〜３５０ｍｌであり、血小板濃縮物は、約１０９／ｍｌであった。血小板は、貯蔵媒体ＳＳＰ＋（ＭａｃｏＰｈａｒｍａ社の製品）中で懸濁された。残留血漿含有率は、約３０〜４０％であった。
【００２３】
−バクテリアの研究−
不活化実験では、以下のバクテリア株を使用した。
【００２４】
表皮ブドウ球菌
黄色ブドウ球菌
セレウス菌
肺炎桿菌
バクテリア濃度を、コロニー形成検定によって決定した。また、バクテリア濃度を、コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍｌとして表す。バクテリアを不活化するための実験時に、完全なＰＣまたはＰＣ標本に、１０４〜１０５ＣＦＵ／ｍｌの上記種の１つを加え、その後、ＵＶ光を照射した。
【００２５】
−ウイルスの研究−
ＰＣ標本に、ブタヘルペスウイルス（ＳＨＶ−Ｉ、仮性狂犬病ウイルス、オーエスキー株）、または、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ、インディアナ株）を加えた。ウイルス力価を、ＣＰＥ検定（ＣＰＥ＝細胞変性効果(cytopathic effect)）によって測定した。ウイルス力価を、ＴＣＩＤ５０（ＴＣＩＤ＝組織培養感染量(tissue culture infective dose)）として表す。指標細胞として、ベロ細胞が機能する。実施した実験の当初のウイルス濃度は、約１０５〜１０７ＴＣＩＤ５０であった。
【００２６】
−感光装置−
使用された２つの感光装置の１つには、ＵＶＢ光を放つ管が備えられている。置かれた感光袋の両側から、すなわち、上下から照射を行なった。感光装置には、６０方向転換／分の振動数で水平の前後動作を行なう振盪装置が備えられている。同様に、第２感光装置には、ＵＶＢ光を放つ管が備えられている。同じく、両側から照射を行なった。（第２装置と同じ構成の）第３装置には、ＵＶＣ光（波長：２５４ｎｍ）を放つ管が備えられている。双方の装置には、異なる２つの振盪装置、すなわち、楕円の前後動作を行なう水平振盪器と、シーソー式振盪器とが備えられていてもよい。
【００２７】
−感光袋−
使用した感光袋は、ＵＶ透過性のエチルビニルアセテート（ＥＶＡ）でできている。２つのサイズの袋を使用した。
【００２８】
１．１４．５×１８．５ｃｍ（外部袋面約２６８ｃｍ２）
２．２２．５×３８ｃｍ（外部袋面約８５５ｃｍ２）
小さなＥＶＡ袋を用いた実験では、サンプル体積は、８０ｍｌであった。大きな袋を用いた実験では、約３００〜３５０ｍｌ（完全なＰＣ）であった。
【００２９】
＜実験例１＞
−振盪中の血小板浮遊液の自由な動作を伴う場合、および、伴わない場合のＵＶＢによる表皮ブドウ球菌の不活化−
この実験では、サンプル体積は８０ｍｌであった。一方のサンプルでは、感光袋を２つの水晶板の間にしっかりと挟み込むことにより、振盪中の血小板浮遊液の自由な動作可能性、および、薄層の形成が防止された。結果として出てきた層厚は、約３ｍｍであった。第２のサンプルでは、振盪中に血小板浮遊液が広範囲にわたって自由に動けるように、水晶板の間隔を拡大した。２つのサンプルに、１Ｊ／ｃｍ２で照射した。
【００３０】
表１が示すように、バクテリア力価は、固定されたサンプルでは、約２ｌｏｇ１０低減されたが、緩めて置かれたサンプルでは、４ｌｏｇ１０よりも多く低減された。
【００３１】
【表１】
2009523710.tif 000002
【００３２】
＜実験例２＞
−感光袋を緩めて、または、しっかりと装着し、振盪させる、完全なＰＣ中の表皮ブドウ球菌のＵＶＢによる不活化−
この実験のＰＣ体積は、３３０ｍｌであった。したがって、大きなＥＶＡ袋の平均的な層厚は、約３．９ｍｍである。ＰＣに、以下の条件で、３つの量（０．８、１．０および１．２Ｊ／ｃｍ２）のＵＶＢを照射した。
【００３３】
１．振盪させない、水晶板の間に緩めて置いた
２．振盪させる、水晶板の間に押し挟んだ
実験結果が示すように（表２）、振盪中はしっかりと装着されていたＰＣでは、バクテリア力価は、ＵＶＢ処理によって約２ｌｏｇ１０に低減されたのに対し、緩めて置かれたサンプルでは、量に応じて約３．４〜４ｌｏｇ１０を上回る分だけ低減された。
【００３４】
【表２】
2009523710.tif 000003
【００３５】
＜実験例３＞
−自由に動くことのできる、または、固定されたＰＣ標本中の更なるバクテリアのＵＶＢによる不活化−
最初の２つの実験例から、ＰＣ浮遊液がＵＶ照射中に自由に動くことができれば、ＰＣ中の表皮ブドウ球菌は効果的に不活化される、ということが分かる。以下の実験では、更なるバクテリア株、すなわち、黄色ブドウ球菌、セレウス菌、および、肺炎桿菌をテストした。
【００３６】
条件は、実験例１で説明したのと同じであった。３つの全ての場合において、表皮ブドウ球菌の場合と同様の結果であった。緩めて置かれたＰＣサンプルでは、バクテリアは、約３．９〜４．２５ｌｏｇ１０不活化された。一方、固定されたサンプルの力価は、約２〜３．４ｌｏｇ１０しか低減されなかった（表３）。
【００３７】
【表３】
2009523710.tif 000004
【００３８】
＜実験例４＞
−様々な振盪条件の下でのＵＶＢによるＰＣ標本中の表皮ブドウ球菌の不活化−
実験１から３で使用した上記のように前後動作をする水平振盪器以外の振盪器を使用する場合でも、緩めて置かれたＰＣ標本中の表皮ブドウ球菌の不活化が向上するかどうかを研究した。以下の実験では、円形の動作（半径：３ｃｍ、回転数：５０／分）を行なうオービタル振盪器、さらに、１分につき５０回の上下動作をするシーソー式振盪器を使用した。同様に、２つのサンプル（８０ｍｌ）の一方を、水晶板の間にしっかりと装着し、他方は緩めて置いた。表４に示す結果から分かるように、今回の場合は、緩めて置かれたＰＣサンプルでは、バクテリア不活化の程度が、しっかりと装着されたものよりも３〜４ｌｏｇ１０高い。
【００３９】
【表４】
2009523710.tif 000005
【００４０】
＜実験例５＞
−振盪中にＰＣ標本の自由な動作を伴う場合、および、伴わない場合のＵＶＢによるブタヘルペスウイルスの不活化−
ＵＶ光の照射中に固定されないＰＣ中の病原体の不活化の向上が、バクテリアのみならずウイルスにも関係しているかどうかを試験するために、以下の実験を実施した。８０ｍｌのＰＣ標本に、ブタヘルペスウイルス（ＳＨＶ−Ｉ）を加え、実験例１で説明したように、ＵＶＢで処理した。浮動するように置いたサンプルでは、ウイルス力価は、４ｌｏｇ１０近く低減されたのに対して、しっかりと装着されたものでは、約３ｌｏｇ１０しか低減されなかった。これにより、上記条件の下ではウイルスの不活化もはっきりと改善される、ということが確定される。
【００４１】
【表５】
2009523710.tif 000006
【００４２】
＜実験例６＞
−振盪中にＰＣ標本の自由な動作を伴う場合、および、伴わない場合のＵＶＢによる水疱性口内炎ウイルスの不活化−
ＰＣ標本に、ＳＨＶ−Ｉの代わりにＶＳＶを加えたこと以外は、実験例５で説明したのと同じように実験を行なった。同様に、緩めて置かれたサンプルにおけるウイルス不活化の程度は、感光中は水晶板の間に固定された比較サンプルにおけるウイルス不活化の程度よりも６．４６ｌｏｇ１０を上回る分だけ大きかった（表６）。実際、ウイルス力価はこの場合も比較的強く（約５．４ｌｏｇ１０）低減されたことが分かった。ＶＳＶは、ＳＨＶ−Ｉよりも明らかにＵＶ感度が高い。
【００４３】
【表６】
2009523710.tif 000007
【００４４】
＜実験例７＞
−振盪中にＰＣ標本の自由な動作を伴う場合、および、伴わない場合のＵＶＣによる表皮ブドウ球菌の不活化−
この実験では、ＵＶＢの代わりに、ＵＶＣによって照射を行なった。ＵＶ量は、０．３Ｊ／ｃｍ２（感光時間：６０秒）であった。それ以外の条件は、実験例１において説明したとおりであった。表７から分かるように、固定されたサンプルにおけるバクテリア力価は、約１ｌｏｇ１０しか低減なかった。このことは、ＵＶＣの血小板浮遊液に対する浸透深さが浅いことをはっきりと反映している。これに対して、緩めて置かれたサンプルでは、バクテリアは検出できなくなっていた。不活化因数は、４ｌｏｇ１０よりも大きかった。
【００４５】
【表７】
2009523710.tif 000008
【００４６】
＜実験例８＞
−振盪中にＰＣ標本の自由な動作を伴う場合、および、伴わない場合のＵＶＣによるＶＳＶの不活化−
実験例６でのように、テストウイルスとしてＶＳＶを使用した。条件は、実験例７と同じであった。表８に示す結果は、この場合も、病原体不活化の程度は、緩めて置かれたサンプルのほうが固定されたものよりもいっそう顕著であったことを示している。つまり、ウイルス力価は、固定されたものでは約１．５ｌｏｇ１０しか低減されなかったが、固定されていないサンプルでは約６．２ｌｏｇ１０低減された。
【００４７】
【表８】
2009523710.tif 000009
【国際調査報告】
2009523710.tif 000010
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