(57)【要約】  本発明は、式Ｉピロール類から誘導された新規化合物、それらを得るための方法、および特定のヒストンデアセチラーゼにおいて、それらの阻害活性に基づく癌の治療用の医薬組成物における薬物としてのそれらの適用について記載する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉのピロール誘導体：
【化１】
2009521519.tif 000041
（上記式中：
Ｒ１およびＲ３は、独立して、フェニル基、環の異なる位置における一または多置換フェニル、またはＯ、Ｎ、もしくはＳの少なくとも一つのヘテロ原子を含むＣ５‐Ｃ１０ヘテロアリール基を表し、
Ｒ２は、水素原子または電子求引基、例えばニトロ基、またはアミノもしくはアミド基を表し、
Ｒ４は、水素原子または、直鎖、分岐、もしくは環式Ｃ１‐Ｃ６アルキル基を表し、
ｎは、１〜８のメチレン基の数を表し、
Ｘは、二級アミン基、酸素原子、またはイオウ原子を表し、
Ｙは、メチレン、置換メチレン、および二級アミンから選択される基を表し、
Ｚは、酸素またはイオウ原子を表し、および
Ｗは、ヒドロキシル、ヒドロキシアミン、ヒドラジン、およびアルキル、アリール、またはヘテロアリール‐ヒドラジンから選択される基を表す）。
【請求項２】
〔１〕下記構造式の６‐（３，５‐ジフェニル‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド）ヘキサン酸：
【化２】
2009521519.tif 000042
〔２〕下記構造式の６‐（４‐ニトロ‐３，５‐ジフェニル‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド）ヘキサン酸：
【化３】
2009521519.tif 000043
〔３〕下記構造式のＮ‐〔５‐（ヒドロキシカルバモイル）ペンチル〕‐５‐フェニル‐３‐（４‐メトキシカルボニル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド：
【化４】
2009521519.tif 000044
〔４〕下記構造式のＮ‐〔５‐（ヒドロキシカルバモイル）ペンチル〕‐３‐フェニル‐５‐（４‐メトキシカルボニル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド：
【化５】
2009521519.tif 000045
〔５〕下記構造式のＮ‐〔５‐（ヒドロキシカルバモイル）ペンチル〕‐３‐フェニル‐５‐（４‐メトキシカルボニル）‐４‐ニトロ‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド：
【化６】
2009521519.tif 000046
〔６〕下記構造式の１‐〔４‐〔３，５‐ビス（３，５‐ジメトキシフェニル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド〕ブチル〕‐３‐ヒドロキシ尿素：
【化７】
2009521519.tif 000047
〔７〕下記構造式の１‐〔４‐〔５‐（４‐メトキシフェニル）‐４‐ニトロ‐３‐（チオフェン‐２‐イル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド〕ブチル〕‐３‐（２‐メチルアミノ）尿素：
【化８】
2009521519.tif 000048
から選択される、請求項１に記載の一般式Ｉのピロール誘導体。
【請求項３】
一般式（Ｉａ）の化合物の製造方法であって：
【化９】
2009521519.tif 000049
（上記式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、およびｎは、前記の意味を有する）、
ａ）式IIの１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：
【化１０】
2009521519.tif 000050
ｂ）式IIIの化合物：
ＨＸ‐（ＣＨ２）ｎ‐Ｒ５        (III)
（上記式中、Ｒ５はアルコキシカルボニルである）、
ｃ）カルボキシル基の活性化のための試薬、および
ｄ）Ｃ３‐Ｃ１０炭素の環式または非環式脂肪族およびＣ９‐Ｃ１５炭素のアルカン芳香族から選択される三級アミン、
から構成される混合物を反応させ、得られた生成物を水酸化リチウムまたは水酸化ナトリウム、ジメトキシエタン、および水の混合物と反応させることを含んでなる、方法。
【請求項４】
一般式（Ｉｂ）の化合物の製造方法であって： 
【化１１】
2009521519.tif 000051
（上記式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、およびｎは、前記の意味を有する）、
ａ）式IIの１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：
【化１２】
2009521519.tif 000052
ｂ）式IIIの化合物：
ＨＸ‐（ＣＨ２）ｎ‐Ｒ５        (III)
（上記式中、Ｒ５はアルコキシカルボニルである）、
ｃ）カルボキシル基の活性化のための試薬、および
ｄ）Ｃ３‐Ｃ１０炭素の環式または非環式脂肪族およびＣ９‐Ｃ１５炭素のアルカン芳香族から選択される三級アミン、
から構成される混合物を反応させ、得られた生成物をメタノール中、過剰のナトリウムメトキシドの存在下において、ヒドロキシルアミンクロロヒドレートおよびフェノールフタレインの混合物へ加えることを含んでなる、方法。
【請求項５】
一般式（Ｉｃ）の化合物の製造方法であって：
【化１３】
2009521519.tif 000053
（上記式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、Ｚ、およびｎは、前記の意味を有する）、
ａ）式IIの１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：
【化１４】
2009521519.tif 000054
ｂ）式IIIの化合物：
ＨＸ‐（ＣＨ２）ｎ‐Ｒ５        (III)
（上記式中、Ｒ５はｔ‐ブトキシカルバモイル（ＮＨＢｏｃ）またはベンジルオキシカルバモイル（ＮＨＣＢｚ）である）、
ｃ）カルボキシル基の活性化のための試薬、および
ｄ）Ｃ３‐Ｃ１０炭素の環式または非環式脂肪族およびＣ９‐Ｃ１５炭素のアルカン芳香族から選択される三級アミン、
から構成される混合物を反応させ、得られた生成物を酸処理または加水分解により脱保護し、それをホスゲンまたはそのアナログ、例えばジホスゲン、トリホスゲン、またはチオホスゲンと反応させて、イソシアネートを得、これがヒドロキシルアミンにより処理されることを含んでなる、方法。
【請求項６】
一般式（Ｉｄ）の化合物の製造方法であって：
【化１５】
2009521519.tif 000055
（上記式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、Ｚ、およびｎは前記の意味を有し、Ｒ６はＨ、Ｃ１‐Ｃ６アルキル、アリール、またはＯ、Ｎ、もしくはＳから選択されるヘテロ原子一以上を有する５または６員のヘテロアリールである）、
ａ）式IIの１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：
【化１６】
2009521519.tif 000056
ｂ）式IIIの化合物：
ＨＸ‐（ＣＨ２）ｎ‐Ｒ５        (III)
（上記式中、Ｒ５はｔ‐ブトキシカルバモイル（ＮＨＢｏｃ）またはベンジルオキシカルバモイル（ＮＨＣＢｚ）である）、
ｃ）カルボキシル基の活性化のための試薬、および
ｄ）Ｃ３‐Ｃ１０炭素の環式または非環式脂肪族およびＣ９‐Ｃ１５炭素のアルカン芳香族から選択される三級アミン、
から構成される混合物を反応させ、得られた生成物を酸処理または水素化分解により脱保護し、それをホスゲンまたはそのアナログ、例えばジホスゲン、トリホスゲン、またはチオホスゲンと反応させて、イソシアネートまたはチオイソシアネートを得、これがヒドラジンまたはアルキル、アリール、もしくはヘテロアリール‐ヒドラジンにより処理されることを含んでなる、方法。
【請求項７】
一般式（Ｉｄ）の化合物の製造方法であって：
【化１７】
2009521519.tif 000057
（上記式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、Ｚ、およびｎは前記の意味を有し、Ｒ６はＨ、Ｃ１‐Ｃ６アルキル、アリール、またはＯ、Ｎ、もしくはＳから選択されるヘテロ原子一以上を有する５または６員のヘテロアリールである）、
ａ）式IIの１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：
【化１８】
2009521519.tif 000058
ｂ）式IIIの化合物：
ＨＸ‐（ＣＨ２）ｎ‐Ｒ５        (III)
（上記式中、Ｒ５は、３‐ベンジルオキシウレイルまたは３‐アルキル、アリールもしくはヘテロアリールウレイルである）、
ｃ）カルボキシル基の活性化のための試薬、および
ｄ）Ｃ３‐Ｃ１０炭素の環式または非環式脂肪族およびＣ９‐Ｃ１５炭素のアルカン芳香族から選択される三級アミン、
から構成される混合物の反応を含んでなる、方法。
【請求項８】
癌の治療に使用するための、請求項１に記載のピロール誘導体。
【請求項９】
癌の治療に使用するための、請求項２に記載のピロール誘導体。
【請求項１０】
癌の治療用薬剤の製造における、請求項１に記載のピロール誘導体の使用。
【請求項１１】
癌の治療用薬剤の製造における、請求項２に記載のピロール誘導体の使用。
【請求項１２】
請求項１に記載の化合物と、少なくとも一種の薬学上許容される賦形剤とを含んでなる、医薬組成物。
【請求項１３】
請求項２に記載の化合物と、少なくとも一種の薬学上許容される賦形剤とを含んでなる、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
発明の分野
本発明は、ピロール類から誘導された新規化合物、それらの製造方法、および特定のヒストンデアセチラーゼにおいて、それらの阻害作用に基づく医薬組成物における癌の治療用の薬物としてのその使用に関する。
【０００２】
背景技術
三および四置換ピロール環の化学的合成は、直線的または収束的合成の方法論を用いて、いくつかの手法により行える（Sundberg,in Comprehensive Heterocyclic Chemistry,Katrizki,A.and Rees,C.W.Eds.,Pergamon:Oxford,1984,Vol.4,p.313）。一つの十分な一般的な製造手法は、置換ピロリジン類の芳香族化からなる（Fejes et al.,Tetrahedron,2000,56,8645、Gupta et al.,Synth.Commun.,1998,28,3151）。更に、後者のヘテロ環類は、アルケン類と、アゾメチンイリド類とのシクロ付加を用いて収束的に製造しうる（Ayerbe et al.,J.Org.Chem.,1998,63,1795、Vivanco et al.,J.Am.Chem.Soc.,2000,122,6078）。カルボン酸類の誘導体と、ヒドロキシルアミンとのカップリング反応はヒドロキサム酸類の形成をもたらし（Reddy et al.,Tetrahedron Lett.,2000,41,6285）、並びに置換アミン類と、ホスゲンおよびチオホスゲン誘導体との反応は、中間イソシアネート類およびチオシアネート類の形成を経て、対応するＮ-ヒドロキシ尿素類、Ｎ-ヒドロキシチオ尿素類、Ｎ-（アルキル）アミノ尿素類、およびＮ-（アルキル）アミノチオ尿素類を生産することも知られている（Jain et al.,Bioorg.Med.Chem.Lett.,2003,13,4223）。
【０００３】
他方、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の阻害剤は、特定の腫瘍の成長メカニズムを妨げることにより、癌治療のために有望な手法を示すことが知られている（McLaughin et al.,Biochem.Pharm.,2004,68,1139、Kramer et al.,Trends Endocrin.Met.,2001,12,294、Archer et al.,Curr.Opin.Genet.Dev.,1999,9,171）。前記阻害剤の治療作用の詳細なメカニズムはよく知られていないが、ｐ２１サイクリン依存性キナーゼのような細胞周期制御タンパク質をコードするＤＮＡのある領域に局在しているヒストンのアセチル化による転写因子へのある遺伝子の接近を、ＨＤＡＣの活性中心の阻害が促す、という一般的な合意がなされている（Archer et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1998,95,6791）。この治療ターゲットのもう一つの利点は、ｍＲＮＡへのＤＮＡの転写のわずか約２％がＨＤＡＣ阻害剤により修飾されるにすぎない（McLaughin et al.,Biochem.Pharm.,2004,68,1139）、と考えられることであり、そうでなければ臨床試験で観察されたこれら阻害剤の低毒性に影響を有するはずである（Van Lint et al.,Gen.Express,1996,5,245、Glaser et al.,Mol.Cancer Ther.,2003,2,151）。同様に、他の治療との相乗的な組合せで、耐性への進化を難しくする遺伝子転写プロファイルを改善することにより、ＨＤＡＣ阻害剤の臨床有用性が増大しうると考えられる（Keen et al.,Cancer Res.Treat.,2003,81,177、Egger et al.,Nature,2004,429,457）。
【０００４】
ＨＤＡＣ阻害剤の様々なファミリーが知られており、その一般的な特徴が様々な総説に見られる（Villar-Garea and Esteller,Int.J.Cancer,2004,112,171 and Curr.Drug Metab.,2003,4,11、Grozinger et al.,Chem.Biol.,2002,9,3、McLaughlin et al.,Drug Discov.Today,2003,8,793、Monneret,Eur.J.Med.Chem.,2005,40,1、Biel et al.,Angew.Chem.Int.Ed.,2005,44,3186）。一般的には、最も活性な阻害剤の構造は、ＨＤＡＣの活性中心の金属イオンへ配位されうる単位へ、炭素スペーサー鎖により結合された、主に疎水性の環式または多環式部分を有することにより特徴づけられる。特に、３‐（４‐アロイル‐１‐メチル‐１Ｈ‐２-ピロリル）‐Ｎ‐ヒドロキシ‐２-プロペンアミド類の合成がＨＤＡＣの阻害剤として記載されていた（Mai et al.,J.Med.Chem.,2004,47,1098参照）。この場合に、スペーサー鎖は不飽和であり、ピロール環の３位および５位は置換されず、直線的分子配列となる。
【０００５】
合成により得られる阻害剤の量にかかわらず、それらの治療有用性は問題が無いというわけではなく、それらの中で挙げられねばならないものは様々なＨＤＡＣの阻害選択性であり、その一部は腫瘍学、毒性、および化学的不安定性の点において有用な治療標的を構成しない。この関係において、本発明は、化学的に安定な分子となる様々な官能基を導入しうる可能性を包含して、様々な多環式系、スペーサーの大きさ、および阻害する酵素の金属原子への配位単位を有した、新規ＨＤＡＣ阻害剤の合成の一般的方法について記載している。
【０００６】
したがって、本発明により提起される問題は、腫瘍過程の亢進および進行と関連した様々なＨＤＡＣの阻害に際する高い選択性、高い化学的安定性、および低毒性を有した化合物並びに組成物を提供することである。提案される解決法は、一般式Ｉのピロール誘導体の使用である。これらの化合物は、３位および５位にアリールまたはヘテロアリール置換基、並びに多様な種類のスペーサーからなる電子求引基、例えば４位の硝酸基および２位の異種（heterogeneous）基を有し、ＨＤＡＣの金属イオンへ配位するようにＮ-ヒドロキシ尿素、Ｎ-アルキルアミノ（アリール）尿素、Ｎ-ヒドロキシチオ尿素、およびＮ-アルキルアミノ（アリール）チオ尿素基を用いている。これらのピロール誘導体は、細胞増殖および腫瘍成長を阻害する大きな能力を示す。
【０００７】
すなわち、本発明は、例えば優れた薬理学的性質、固相および溶液中の安定性、それら化学的合成の容易性および効率性と出発化合物の入手容易性および多様性のような利点を有し、現在のヒストンデアセチラーゼ阻害剤における現存する欲求を解決するものである。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、目的として一般式Ｉのピロール誘導体を有する：
【化１】
2009521519.tif 000002
【０００９】
同様に、本発明の別の目的は、一般式Ｉからこれらの化合物を製造するための方法である。
【００１０】
本発明の別の追加目的は、特定のヒストンデアセチラーゼの作用の阻害を通して、腫瘍成長を抑制することによる、様々な形の癌の治療のためのこれら誘導体の使用である。
【００１１】
最後に、この発明は、一般式Ｉからいずれかのピロール誘導体と少なくとも一種の薬学上許容される賦形剤とを含有しうる医薬組成物の製造を、目的として有する。
【発明の具体的説明】
【００１２】
第一に、本発明は下記式Ｉを有する、ピロールから誘導された特定の化合物を提供する：
【化２】
2009521519.tif 000003
上記式中：
Ｒ１およびＲ３は、独立して、フェニル基、環の異なる位置における一または多置換フェニル、またはＯ、Ｎ、もしくはＳの少なくとも一つのヘテロ原子を含むＣ５‐Ｃ１０ヘテロアリール基を表し、
Ｒ２は、水素原子または電子求引基、例えばニトロ基、またはアミンもしくはアミド基を表し、
Ｒ４は、水素原子または直鎖、分岐、もしくは環式Ｃ１‐Ｃ６アルキル基を表し、
ｎは、１〜８のメチレン基の数を表し、
Ｘは、二級アミン基、酸素原子、またはイオウイオンを表し、
Ｙは、メチレン、置換メチレン、および二級アミンから選択される基を表し、
Ｚは、酸素またはイオウの原子を表し、および
Ｗは、ヒドロキシル、ヒドロキシアミン、ヒドラジン、およびアルキル、アリールまたはヘテロアリール‐ヒドラジンから選択される基を表す。
【００１３】
好ましい態様において、一般式Ｉの化合物は以下である：
・下記構造式の６‐（３，５‐ジフェニル‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド）ヘキサン酸：
【化３】
2009521519.tif 000004
・下記構造式の６‐（４‐ニトロ‐３，５‐ジフェニル‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド）ヘキサン酸：
【化４】
2009521519.tif 000005
・下記構造式のＮ‐〔５‐（ヒドロキシカルバモイル）ペンチル〕‐３‐フェニル‐５‐（４‐メトキシカルボニル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド：
【化５】
2009521519.tif 000006
・下記構造式のＮ‐〔５‐（ヒドロキシカルバモイル）ペンチル〕‐５‐フェニル‐３‐（４‐メトキシカルボニル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド：
【化６】
2009521519.tif 000007
・下記構造式のＮ‐〔５‐（ヒドロキシカルバモイル）ペンチル〕‐３‐フェニル‐５‐（４‐メトキシカルボニル）‐４‐ニトロ‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド：
【化７】
2009521519.tif 000008
・下記構造式の１‐〔４‐〔３，５‐ビス（３，５‐ジメトキシフェニル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド〕ブチル〕‐３‐ヒドロキシ尿素：
【化８】
2009521519.tif 000009
・下記構造式の１‐〔４‐〔５‐（４‐メトキシフェニル）‐４‐ニトロ‐３‐（チオフェン‐２‐イル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド〕ブチル〕‐３‐（２‐メチルアミノ）尿素：
【化９】
2009521519.tif 000010
【００１４】
本発明の別の態様は、一般式Ｉの化合物を得るための様々な工程に言及する。下記方法Ａ〜Ｅは、我々が以下に見られるような、一般式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、および（Ｉｄ）の化合物を得るための工程について記載する。これらの化合物（Ｉａ）〜（Ｉｄ）は、その一般式が一般式Ｉに属する化合物である。
【００１５】
方法Ａ
方法Ａは、一般式（Ｉａ）の化合物の製造のための工程を表す：
【化１０】
2009521519.tif 000011
（上記式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、およびｎは、前記の意味を有する）、
ａ）式IIの１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：
【化１１】
2009521519.tif 000012
ｂ）式IIIの化合物：
ＨＸ‐（ＣＨ２）ｎ‐Ｒ５        (III)
（上記式中、Ｒ５はアルコキシカルボニルである）、
ｃ）カルボキシル基の活性化のための試薬、および
ｄ）Ｃ３‐Ｃ１０炭素の環式または非環式脂肪族およびＣ９‐Ｃ１５炭素のアルカノ‐芳香族から選択される三級アミン、
から構成される混合物を反応させ、得られた生成物を水酸化リチウムまたは水酸化ナトリウム、ジメトキシエタン、および水の混合物と反応させる。
【００１６】
本発明の目的のために、フェーズａ）〜ｄ）の四種化合物から構成される反応混合物が、有機溶媒中−８５℃〜＋２５℃の温度、好ましくは０℃付近の温度で、諸成分の一種を他の三種の前に混合物へ加えることにより得られる。次いで、環境温度に達するまで、それは反応を終了させるためにしばらく放置される。カップリング反応が終了した後、一般的方法に従った後に得られるエステルは、水酸化リチウムまたは水酸化ナトリウム、ジメトキシエタン、および水の混合物との反応に付され、こうして対応処理後に、一般式（Ｉａ）の化合物を得る。
【００１７】
方法Ｂ
方法Ｂは、一般式（Ｉｂ）の化合物の製造のための工程を表す：
【化１２】
2009521519.tif 000013
（上記式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、およびｎは、前記の意味を有する）、
ａ）式IIの１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：
【化１３】
2009521519.tif 000014
ｂ）式IIIの化合物：
ＨＸ‐（ＣＨ２）ｎ‐Ｒ５        (III)
（上記式中、Ｒ５はアルコキシカルボニルである）、
ｃ）カルボキシル基の活性化のための試薬、および
ｄ）Ｃ３‐Ｃ１０炭素の環式または非環式脂肪族およびＣ９‐Ｃ１５炭素のアルカノ‐芳香族から選択される三級アミン、
から構成される混合物を反応させ、得られた生成物をメタノール中、過剰のナトリウムメトキシドの存在下において、塩酸ヒドロキシルアミンおよびフェノールフタレインの混合物へ加える。
【００１８】
本発明の目的のために、フェーズａ）〜ｄ）の四種化合物から構成される反応混合物が、有機溶媒中−８５℃〜＋２５℃の温度、好ましくは０℃付近の温度において、諸成分の一種を他の三種の前に混合物へ加えることにより得られる。次いで、環境温度に達するまで、それは反応を終了させるためにしばらく放置される。カップリング反応が終了した後、得られたエステルは、メタノール中、過剰のナトリウムメトキシドの存在下において、塩酸ヒドロキシルアミンおよびフェノールフタレインの混合物へ加えられる。反応が終了した後、対応処理後に、一般式（Ｉｂ）の化合物が得られる。
【００１９】
方法Ｃ
方法Ｃは、一般式（Ｉｃ）の化合物の製造のための工程を表す：
【化１４】
2009521519.tif 000015
（上記式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、Ｚ、およびｎは前記の意味を有する）、
ａ）式IIの１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：
【化１５】
2009521519.tif 000016
ｂ）式IIIの化合物：
ＨＸ‐（ＣＨ２）ｎ‐Ｒ５        (III)
（上記式中、Ｒ５はｔ‐ブトキシカルバモイル（ＮＨＢｏｃ）またはベンジルオキシカルバモイル（ＮＨＣＢｚ）である）、
ｃ）カルボキシル基の活性化のための試薬、および
ｄ）Ｃ３‐Ｃ１０炭素の環式または非環式脂肪族およびＣ９‐Ｃ１５炭素のアルカノ‐芳香族から選択される三級アミン、
から構成される混合物を反応させ、得られた生成物を酸処理または加水分解を用いて脱保護し、それをホスゲンまたはそのアナログ、例えばジホスゲン、トリホスゲン、またはチオホスゲンと反応させて、イソシアネートまたはチオイソシアネートを得、これがヒドロキシルアミンにより処理される。
【００２０】
本発明の目的のために、フェーズａ）〜ｄ）の四種化合物から形成される反応混合物が、有機溶媒中−８５℃〜＋２５℃の温度、好ましくは０℃付近の温度において、諸成分の一種を他の三種の前に混合物へ加えることにより得られる。次いで、環境温度に達するまで、それは反応を終了させるためにしばらく放置される。化合物IIIにおけるＲ５の意味に応じて、即ちＲ５がｔ‐ブトキシカルバモイル（ＮＨＢｏｃ）またはベンジルオキシカルバモイル（ＮＨＣＢｚ）を表すかに応じて、その後の処理は異なる。Ｒ５がＮＨＢｏｃである場合、得られた生成物は酸処理、好ましくは環境温度において、ハロゲン化溶媒中トリフルオロ酢酸との反応に付されねばならない。Ｒ５がＮＨＣＢｚを表す場合、得られた生成物は水素化分解、好ましくは溶媒として短鎖アルコール中、パラジウム不均一触媒の存在下において、水素ガスまたはギ酸アンモニウムとの反応に付される。双方の場合において、脱保護後に一級アミンが得られ、これがホスゲンまたはその誘導体の一つ、例えばジホスゲン、トリホスゲン、またはチオホスゲンにより処理される。反応がホスゲン、ジホスゲン、またはトリホスゲンとの場合であるとき、最終化合物（Ｉｃ）はＺに酸素の原子を有する。他方で処理がチオホスゲンとの場合であるとき、Ｚはイオウ原子となる。
【００２１】
ホスゲン（ジホスゲン、トリホスゲン）またはチオホスゲンとの反応後、対応するイソシアネート類またはチオイソシアネート類が得られ、これが式（Ｉｃ）の化合物を得るためにヒドロキシルアミンと、その場で(in situ)処理される。
【００２２】
方法Ｄ
方法Ｄは、一般式（Ｉｄ）の化合物の製造のための工程を表す：
【化１６】
2009521519.tif 000017
（上記式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、Ｚ、およびｎは前記の意味を有し、Ｒ６はＨ、Ｃ１‐Ｃ６アルキル、アリールまたはＯ、Ｎ、もしくはＳから選択されるヘテロ原子一以上を有する５または６員のヘテロアリールである）、
ａ）式IIの１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：
【化１７】
2009521519.tif 000018
ｂ）式IIIの化合物：
ＨＸ‐（ＣＨ２）ｎ‐Ｒ５        (III)
（上記式中、Ｒ５は、ｔ‐ブトキシカルバモイル（ＮＨＢｏｃ）またはベンジルオキシカルバモイル（ＮＨＣＢｚ）である）、
ｃ）カルボキシル基の活性化のための試薬、および
ｄ）Ｃ３‐Ｃ１０炭素の環式または非環式脂肪族およびＣ９‐Ｃ１５炭素のアルカノ‐芳香族から選択される三級アミン、
から構成される混合物を反応させ、得られた生成物を酸処理または加水分解により脱保護し、それをホスゲンまたはそのアナログ、例えばジホスゲン、トリホスゲン、またはチオホスゲンと反応させて、イソシアネートまたはチオイソシアネートを得、これがヒドラジンまたはアルキル、アリールもしくはヘテロアリールヒドラジンにより処理される。
【００２３】
本発明の目的のために、フェーズａ）〜ｄ）の四種化合物から形成される反応混合物が、有機溶媒中−８５℃〜＋２５℃の温度、好ましくは０℃付近の温度において、諸成分の一種を他の三種の前に混合物へ加えることにより得られる。次いで、環境温度に達するまで、それは反応を終了させるためにしばらく放置される。化合物IIIにおけるＲ５の意味に応じて、即ちＲ５がｔ‐ベンジルオキシカルバモイル（ＮＨＢｏｃ）またはベンジルオキシカルバモイル（ＮＨＣＢｚ）を表すかに応じて、その後の処理は異なる。Ｒ５がＮＨＢｏｃである場合、得られた生成物は酸処理、好ましくは環境温度において、ハロゲン化溶媒中トリフルオロ酢酸との反応に付されねばならない。Ｒ５がＮＨＣＢｚを表す場合、得られた生成物は水素化分解、好ましくは溶媒として短鎖アルコール中、パラジウム不均一触媒の存在下において、水素ガスまたはギ酸アンモニウムとの反応に付される。双方の場合において、脱保護後に一級アミンが得られ、これがホスゲンまたはその誘導体の一つ、例えばジホスゲン、トリホスゲン、またはチオホスゲンにより処理される。反応がホスゲン、ジホスゲン、またはトリホスゲンとの場合であるとき、最終化合物（Ｉｄ）はＺに酸素の原子を有する。他方で処理がチオホスゲンとの場合であるとき、Ｚはイオウ原子となる。
【００２４】
ホスゲン（ジホスゲン、トリホスゲン）またはチオホスゲンとの反応後、対応するイソシアネート類またはチオイソシアネート類が得られ、これが式（Ｉｄ）の化合物を得るためにヒドラジン類またはアルキルヒドラジン類と、その場で(in situ)処理される。
【００２５】
方法Ｅ
方法Ｅは、一般式（Ｉｄ）の化合物の製造のための追加工程を表す：
【化１８】
2009521519.tif 000019
（上記式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｘ、Ｚ、およびｎは前記の意味を有し、Ｒ６はＨ、Ｃ１‐Ｃ６アルキル、アリールまたはＯ、Ｎ、もしくはＳから選択されるヘテロ原子一以上を有する５または６員のヘテロアリールである）
ａ）式IIの１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：
【化１９】
2009521519.tif 000020
ｂ）式IIIの化合物：
ＨＸ‐（ＣＨ２）ｎ‐Ｒ５        (III)
（上記式中、Ｒ５は、３‐ベンジルオキシウレイルまたは、３‐アルキル、アリールもしくはヘテロアリールウレイルである）、
ｃ）カルボキシル基の活性化のための試薬、および
ｄ）Ｃ３‐Ｃ１０炭素の環式または非環式脂肪族およびＣ９‐Ｃ１５炭素のアルカン芳香族から選択される三級アミン、
から構成される混合物の反応を含んでなる。
【００２６】
先に詳細に記載されたカップリング反応がＮ‐ベンジルオキシ尿素類またはチオ尿素類で行なわれる場合、適切な触媒の存在下において、水素化分解により対応Ｎ‐ヒドロキシ尿素類またはチオ尿素類を遊離させることのみが必要である。Ｎ‐アルキル（アリール、ヘテロアリール）アミノ尿素類またはチオ尿素類の場合、該基が対応前駆体(III)で既に導入されている場合、カップリング反応により予想最終分子を直接的に生じる。
【００２７】
方法Ａ〜Ｅの共通要素として、カルボキシル基活性化試薬は、好ましくはフェニルジクロロホスフェート、ジエチルホスホロシアミデート（ＤＥＰＣ）、または１‐ヒドロキシベンゾトリアゾールと、Ｎ‐（３‐ジメチルアミノプロピル）‐Ｎ′‐エチルカルボジイミドとにより形成される系である。
【００２８】
三級アミンは、それに関する限り、Ｃ３‐Ｃ１０炭素の環式または非環式脂肪族およびＣ９‐Ｃ１５炭素のアルカノ‐芳香族から選択される、方法ＡおよびＢに共通の試薬である。この三級アミンは、好ましくはＮ‐メチルピロリジンまたはＮ‐メチルモルホリンから選択される。
【００２９】
マイクロ波の照射を用いて方法Ａ〜Ｅの各々で要素ａ）〜ｄ）間の反応を行なうことも好ましい。
【００３０】
式IIの前記化合物の製造は有機溶媒中またはその非存在下において、マイクロ波の照射により行なわれ、第一に：
ａ）下記式IVの（Ｅ）または（Ｚ）立体配置のニトロアルケン：
Ｏ２Ｎ‐ＣＨ＝ＣＨ‐Ｒ３        （IV）
（上記式中：
Ｒ３は前記の意味を有する）、
ｂ）下記式Ｖの（Ｅ）または（Ｚ）立体配置のイミン：
Ｒ１‐ＣＨ＝Ｎ‐ＣＨ２‐ＣＯＯＲ６        （Ｖ）
（上記式中：
Ｒ１は前記の意味を有し、および
Ｒ６はＣ１‐Ｃ６アルキルまたはアリール基を表す）、
ｃ）好ましくは過塩素酸リチウム、過塩素酸銀、または酢酸銀から選択される金属塩、および
ｄ）Ｃ３‐Ｃ１０炭素の環式または非環式脂肪族またはＣ９‐Ｃ１５炭素のアルカノ‐芳香族から選択される三級有機塩基、
を含んでなる混合物を反応させる。
【００３１】
本発明の目的のために、上記の四種成分から構成される反応混合物は、マイクロ波の照射を用いて、または有機溶媒中−２５℃〜＋２５℃の温度、好ましくは＋２５℃付近の温度において、諸成分の一種を他の三種へ加えることにより得られる。シクロ付加反応終了後、各具体的反応向けに選択された置換基に対応する２‐アルコキシカルボニルピロリジン類の混合物が得られる。この混合物はテトラヒドロフランのような環式エーテルまたは“ジグリム”としても知られるビス（２‐メトキシエチル）エーテルのような高沸点非環式体に溶解され、二酸化マンガン、過酸化水素または２，３‐ジクロロ‐５，６‐ジシアノ‐１，４‐ベンゾキノンのような酸化剤が加えられる。＋６０℃〜＋２５０℃の温度において特定の時間後、２‐アルコキシカルボニル‐ＮＨ‐ピロールおよび対応２‐アルコキシカルボニル‐４‐ニトロ‐ＮＨ‐ピロールから構成される混合物が得られ、その諸成分は分別結晶化またはクロマトグラフィーにより分離される。一般式IIの酸類は、前記エステルのアルカリ加水分解により、好ましくは水およびジメトキシエタンの混合物中水酸化リチウムまたは水酸化ナトリウムでそれらを処理することにより得られる。
【００３２】
本発明の追加の態様は、癌の治療のための一般式Ｉのこれら化合物の使用に関する。これら化合物の作用メカニズムは、アポトーシスまたは成長および細胞増殖のような調節工程に関与するタンパク質の合成の阻止で獲得されるヒストンデアセチラーゼとの拮抗性に基づく。これらの性質は、デアセチラーゼおよび関連酵素複合体と、その天然基質（例えば、ヒストンの末端リジンのε位でＮ‐アセチル化されたリジンの残基）との結合を防止または阻止し、そのためこれらは一または多アセチル化状態において留まる。
【００３３】
本発明の最終な態様は、一般式Ｉの化合物の少なくとも一種と、一種以上の許容される薬学上の賦形剤とからなる組成物に関する。本発明の式Ｉ化合物は純粋物質として並びに医薬処方物の形態により投与しうるが、組合せ形態での化合物の投与が好ましい。薬剤の組合せは、好ましくは：
ｉ）式Ｉ化合物のみを含有し、
ii）一種以上の賦形剤および／またはトランスポーター物質を含有し、および
iii)いずれか追加の治療活性物質も含有しうる、
処方剤の形態をとる。
【００３４】
賦形剤、トランスポーター物質、および補助物質は、それらが処方または製造の他成分と混合できて、治療される生物で副作用を生じないように、薬学上および生理学上許容されねばならない。
【００３５】
処方剤には、経口または非経口投与（皮下、皮内、筋肉内、および静脈内を含む）に適したものを含むが、最良の投与経路は患者の状態に依存する。
【００３６】
処方剤は簡単な剤形をとることができ、薬理分野において公知の方法に従い製造される。投与する活性物質の量は療法の特徴に応じて変化するが、それらは一回でまたは数回に分けて通常１ｍｇ〜５００ｍｇ／日である。
【実施例】
【００３７】
先の概念の更なる理解を助けるため、本発明の一部の実施例を以下に記載する。これらの例は単なる例示にすぎない。
【００３８】
実施例１
下記構造式の５‐フェニル‐３‐（４‐メトキシフェニル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：
【化２０】
2009521519.tif 000021
および下記構造式の５‐フェニル‐３‐（４‐メトキシフェニル）‐４‐ニトロ‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸の製造：
【化２１】
2009521519.tif 000022
アセトニトリル（８００ｍＬ）中、Ｎ‐フェニルメチリデングリシン酸メチル（１４．１７ｇ，８０．０ｍｍｏｌ）の混合物に、トリエチルアミン（１２ｍＬ，８０．０ｍｍｏｌ）、酢酸銀（１．９８ｇ，１１．９ｍｍｏｌ）、および（Ｅ）‐２‐（４‐メトキシフェニル）‐１‐ニトロエテン（１４．３３ｇ，８０．０ｍｍｏｌ）を連続的に加えた。反応の進行を薄層クロマトグラフィーで追跡した。反応終了後、混合物をセライト層で濾過し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（２×１５０ｍＬ）および水（２×１５０ｍＬ）で洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥させたら、溶液を減圧下で蒸発させ、５‐フェニル‐３‐（４‐メトキシフェニル）‐２‐メトキシカルボニル‐４‐ニトロピロリジンのジアステレオマーの混合物２６．５ｇを得た。この混合物１２．２２ｇ（３４．２７ｍｍｏｌ）を不活性雰囲気下でビス（２‐メトキシエチル）エーテル（３４３ｍＬ）に溶解し、二酸化マンガン（２９．８ｇ，３４３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を攪拌下で４８時間還流した。この後、混合物を環境温度へ戻し、セライト層で濾過した。得られた溶液を減圧下で濃縮し、５‐フェニル‐３‐（４‐メトキシフェニル）‐２‐メトキシカルボニル‐４‐ニトロ‐１Ｈ‐ピロールおよび５‐フェニル‐３‐（４‐メトキシフェニル）‐２‐メトキシカルボニル‐１Ｈ‐ピロールからなる混合物７．９３ｇを得た。フラッシュカラムクロマトグラフィーを用いて生成物を分離し、それらの各々を次に示されたように別々に加水分解した。１０％ＮａＯＨ（４０ｍＬ，水溶液）をエタノール（１００ｍＬ）中、対応エステル（４．０ｍｍｏｌ）の溶液へ滴下し、混合物を還流下で攪拌した。反応の進行を薄層クロマトグラフィーで追跡した。反応終了後、混合物を０℃に冷却し、１Ｎ  ＨＣｌで中和し、塩化メチレン（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機フラクションをＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させ、対応するカルボン酸を得た。
５‐フェニル‐３‐（４‐メトキシフェニル）‐２‐メトキシカルボニル‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：
収率，４１％、ｍ．ｐ．１９８℃（分解）、ＩＲ３４６７，１６４３ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１１．７２（ｓ，１Ｈ），７．８８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．５１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．３８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．２６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），６．９１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．６９（ｓ，１Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．３４（ｂｓ，１Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１６２．５，１５７．９，１３４．４，１３１．３，１３１．２，１３０．３，１２８．６，１２７．９，１２７．０，１２５．１，１１９．８，１１３．０，１１２．９，１０９．３，５５．０，５４．９；Ｃ１８Ｈ１５ＮＯ３の分析計算値：Ｃ，７３．７１；Ｈ，５．１５；Ｎ，４．７８．実測値：Ｃ，７３．５６；Ｈ，５．０８；Ｎ，４．８１％．
５‐フェニル‐３‐（４‐メトキシフェニル）‐４‐ニトロ‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：
収率，２８％、ｍ．ｐ．１９０℃（分解）、ＩＲ３４３７，１６６３，１４９３ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）７．５７‐７．５２（ｍ，２Ｈ），７．４８‐７．４３（ｍ，３Ｈ），７．２４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），６．９０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），３．７９（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１６１．６，１５８．３，１３３．５，１３２．５，１３１．１，１２９．３，１２９．０，１２８．０，１２４．５，１２４．２，１２１．１，１１２．７，５４．９；Ｃ１８Ｈ１４Ｎ２Ｏ５の分析計算値：Ｃ，６３．９０；Ｈ，４．１７；Ｎ，８．２８．実測値：Ｃ，６３．８５；Ｈ，４．２０；Ｎ，８．２７％．
【００３９】
実施例２
下記構造式の３‐フェニル‐５‐（４‐メトキシフェニル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：
【化２２】
2009521519.tif 000023
および下記構造式の３‐フェニル‐５‐（４‐メトキシフェニル）‐４‐ニトロ‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸の製造：
【化２３】
2009521519.tif 000024
これらの物質は実施例１の場合と実質的に類似した方法を用いて製造し、標題の化合物を黄色固体物として得た。
３‐フェニル‐５‐（４‐メトキシフェニル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：収率，５２％、ｍ．ｐ．２５１℃、ＩＲ３４５７，３３１６，１６１８ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１０．６７（ｂｓ，１Ｈ），７．８８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．７０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．２３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．１１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），６．８７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），６．５２（ｓ，１Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），３．３８（ｂｓ，１Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１６６．１，１５７．５，１３７．１，１２９．７，１２８．９，１２７．９，１２６．９，１２５．３，１２５．２，１２４．７，１１３．９，１０６．４，５４．９；Ｃ１８Ｈ１５ＮＯ３の分析計算値：Ｃ，７３．７１；Ｈ，５．１５；Ｎ，４．７８．実測値：Ｃ，７３．４８；Ｈ，５．１１；Ｎ，４．７９％．
３‐フェニル‐５‐（４‐メトキシフェニル）‐４‐ニトロ‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：収率，３５％、ｍ．ｐ．１０６‐１０７℃、ＩＲ３４０７，１６６８，１５０７，１３５１ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ３）９．３２（ｓ，１Ｈ），７，５４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．４２‐７．３８（ｍ，５Ｈ），７．０１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），３．８８（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ３）１６３．４，１６１．１，１３５．２，１３３．２，１３０．８，１３０．３，１２９．７，１２８．７，１２８．２，１２７．８，１２７．６，１２０．６，１１４．３，１１４．２，５５．４；Ｃ１８Ｈ１４Ｎ２Ｏ５の分析計算値：Ｃ，６３．９０；Ｈ，４．１７；Ｎ，８．２８．実測値：Ｃ，６３．７７；Ｈ，４．１９；Ｎ，８．３０％．
【００４０】
実施例３
下記構造式の５‐（４‐メトキシフェニル）‐３‐（チオフェン‐２‐イル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：
【化２４】
2009521519.tif 000025
および下記構造式の５‐（４‐メトキシフェニル）‐４‐ニトロ‐３‐（チオフェン‐２‐イル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸の製造：
【化２５】
2009521519.tif 000026
これらの物質は実施例１の場合と実質的に類似した方法を用いて製造し、標題の化合物を黄色固体物として得た。
５‐（４‐メトキシフェニル）‐３‐（チオフェン‐２‐イル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：収率，５４％、ｍ．ｐ．１５３‐１５４℃、ＩＲ３４２４，３１１２，２９６４，１６１０ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ３）８．２９（ｂｓ，１Ｈ），７．４１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．１０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），７．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．１Ｈｚ），７．０２‐６．９８（ｍ，２Ｈ），６．９２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），６．５８（ｓ，１Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ３）１５８．６，１３９．２，１３３．０，１２７．４，１２５．３，１２１．８，１２１．２，１２０．４，１１４．９，１１４．４，１０３．５，７１．９，７０．５，５９．０，５５．３；Ｃ１６Ｈ１３ＮＯ３Ｓの分析計算値：Ｃ，６４．２０；Ｈ，４．３８；Ｎ，４．６８．実測値：Ｃ，６４．１１；Ｈ，４．３５；Ｎ，４．７０％．
５‐（４‐メトキシフェニル）‐４‐ニトロ‐３‐（チオフェン‐２‐イル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸：収率，２８％、ｍ．ｐ．１８０‐１８１℃、ＩＲ３４０８，３１２０，１６１０，１５１１ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）７．５４（ｄａ，１Ｈ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），７．４９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．０３（ｂｓ，２Ｈ），７．００（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），３．８１（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１６１．１，１３５．１，１３３．７，１３０．１，１２９．３，１２７．３，１２６．８，１２０．１，１１４．３，６５．９，５５．４，１５．２；Ｃ１６Ｈ１２Ｎ２Ｏ５Ｓの分析計算値：Ｃ，５５．８１；Ｈ，３．５１；Ｎ，８．１４．実測値：Ｃ，５６．０９；Ｈ，３．４９；Ｎ，８．１４％．
【００４１】
実施例４
下記構造式の６‐（３，５‐ジフェニル‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド）ヘキサン酸の製造：
【化２６】
2009521519.tif 000027
ＤＭＦ（７．５ｍＬ）中、３，５‐ジフェニル‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸（０．３９ｇ，１．５ｍｍｏｌ）および６‐アミノヘキサン酸のメチルエステルのクロロヒドレート（０．２５ｇ，１．５ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却した。トリエチルアミン（１．１５ｍＬ，８．２５ｍｏｌ）、１‐ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．２２ｇ，１．６５ｍｍｏｌ）、Ｎ‐（３‐ジメチルアミノプロピル）‐Ｎ′‐エチルカルボジイミドのクロロヒドレート（０．３２ｇ，１．６５ｍｍｏｌ）、およびＮ‐メチルモルホリン（０．１６５ｍＬ，１．５ｍｍｏｌ）を連続的に加え、混合物を０℃で２時間、更に環境温度で９６時間攪拌した。この後、酢酸エチル（３００ｍＬ）を加え、得られた溶液を水（９０ｍＬ）、１Ｎ  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（９０ｍＬ，水溶液）、水（９０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３（９０ｍＬ，飽和水溶液）、およびＮａＣｌ（９０ｍＬ，飽和水溶液）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させ、０．４７ｇ（１．２ｍｍｏｌ）のエステルを得た。
得られたメチルエステルをエチレングリコールジメチルエーテル（６ｍＬ）に溶解し、溶液を０℃に冷却した。次いで、１Ｎ  ＬｉＯＨ（３．６ｍＬ）の溶液を滴下し、得られた混合物を０℃で攪拌した。反応の進行を薄層クロマトグラフィーで測定した。反応終了後、１０％クエン酸の水溶液（ｐＨ＝６）３．６ｍＬを加えた。溶液を塩化メチレン（３×５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機フラクションをＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させた。粗反応生成物をジエチルエーテルで摩砕し、０．４２ｇの白色固体物を得た。
収率，７４％、ｍ．ｐ．２２８‐２２９℃、ＩＲ３４２７，３２４６，１６０８ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１３．０５（ｓ，１Ｈ），８．７３（ｓ，１Ｈ），７．９９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．５２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．３６‐７．２９（ｍ，４Ｈ），７．２１（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，Ｊ′＝７．０Ｈｚ），６．６５（ｓ，１Ｈ），３．２１（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，Ｊ′＝５．６Ｈｚ），２．０５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．５４‐１．４４（ｍ，４Ｈ），１．３６‐１．３０（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１７７．５，１６０．８，１３６．１，１３２．７，１３１．８，１２９．０，１２８．５，１２８．３，１２７．６，１２６．５，１２５．９，１２４．６，１２３．３，１０８．３，３７．３，２８．８，２６．６，２５．５；Ｃ２３Ｈ２４Ｎ２Ｏ３の分析計算値：Ｃ，７３．３８；Ｈ，６．４３；Ｎ，７．４４．実測値：Ｃ，７３．４５；Ｈ，６．４１；Ｎ，７．４４％．
【００４２】
実施例５
下記構造式の６‐（４‐ニトロ‐３，５‐ジフェニル‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド）ヘキサン酸の製造：
【化２７】
2009521519.tif 000028
この物質は、実施例４の場合と実質的に類似した方法を用いて製造し、標題の化合物を黄色固体物として得た。
収率，７１％、ｍ．ｐ．１５３‐１５４℃、ＩＲ３４１７，３１５５，１６３８，１４９２ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）７．５８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．３６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．３２‐７．２３（ｍ，７Ｈ），４．８７（ｂｓ，２Ｈ），３．０７（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，Ｊ′＝６．６Ｈｚ），２．０９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．４６‐１．４０（ｍ，２Ｈ），１．３５‐１．２９（ｍ，２Ｈ），１．１８‐１．１２（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１７６．０，１６１．９，１３６．８，１３４．４，１３３．４，１３１．８，１３０．１，１２９．０，１２７．５，１２７．４，１２７．３，１２６．３，１２２．８，７１．０，６４．８，５７．９，３８．２，３５．０，２８．８，２６．０，２４．７，１５．１；Ｃ２３Ｈ２３Ｎ３Ｏ５の分析計算値：Ｃ，６５．５５；Ｈ，５．５０；Ｎ，９．９７．実測値：Ｃ，６５．３７；Ｈ，５．４４；Ｎ，１０．０１％．
【００４３】
実施例６
下記構造式のＮ‐〔５‐（ヒドロキシカルバモイル）ペンチル〕‐３‐フェニル‐５‐（４‐メトキシカルボニル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミドの製造：
【化２８】
2009521519.tif 000029
不活性雰囲気下メタノール（１．２５ｍＬ）中、ヒドロキシルアミンクロロヒドレート（０．２６ｇ，３．７５ｍｍｏｌ）およびフェノールフタレイン（１ｍｇ）の溶液に、恒久的桃色が溶液で観察されるまで、（不活性雰囲気下でメタノール３．３ｍＬ中、ナトリウムメトキシド０．６５ｇ，１２．０ｍｍｏｌの溶液から得られる）メタノール中、ナトリウムメトキシドの一部を滴下する。実施例４の方法に従い、３‐フェニル‐５‐（４‐メトキシフェニル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸および６‐アミノヘキサン酸のメチルエステルのクロロヒドレートから製造された６‐〔３‐フェニル‐５‐（４‐メトキシフェニル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド〕ヘキサン酸メチル（０．５３ｇ，１．２５ｍｍｏｌ）と、メタノール中、ナトリウムメトキシド（先に調製された溶液１．４ｍＬ，５．０ｍｍｏｌ）とを連続的に加えた。混合物を２６時間攪拌したところ、濃密沈殿物の形成が観察された。この後、水（３ｍＬ）を反応混合物へ加える。この溶液を氷酢酸で酸性化し、塩化メチレン（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機フラクションをＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させ、標題の生成物０．４６ｇを白色固体物として得た。
収率，８７％、ｍ．ｐ．１５７‐１５８℃、ＩＲ３４０７，３２２６，１６６３，１６０８ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１１．４４（ｓ，１Ｈ），１０．３４（ｓ，１Ｈ），８．６６（ｓ，１Ｈ），７．７３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．４９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．３６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），７．３０（ｔａ，１Ｈ，Ｊ＝５．１Ｈｚ），７．２６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），６．９７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），６．５６（ｓ，１Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．１６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，Ｊ′＝５．９Ｈｚ），１．９３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．５１‐１．４５（ｍ，２Ｈ），１．４３‐１．３８（ｍ，２Ｈ），１．２４‐１．１７（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１６８．９，１６０．９，１５８．２，１３５．７，１３２．８，１２８．７，１２７．９，１２７．３，１２６．２，１２５．９，１２４．３，１２２．７，１１４．０，１０７．１，５５．１，３２．１，２８．７，２６．０，２４．８；Ｃ２４Ｈ２７Ｎ３Ｏ４の分析計算値：Ｃ，６８．３９；Ｈ，６．４６；Ｎ，９．９７．実測値：Ｃ，６８．２５；Ｈ，６．４２；Ｎ，９．９８％．
【００４４】
実施例７
下記構造式のＮ‐〔５‐（ヒドロキシカルバモイル）ペンチル〕‐３‐フェニル‐５‐（４‐メトキシカルボニル）‐４‐ニトロ‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミドの製造：
【化２９】
2009521519.tif 000030
この物質は実施例６の場合と実質的に類似した方法を用いて製造し、標題の化合物を黄色固体物として得た。
収率，８４％、ｍ．ｐ．１２６‐１２７℃、ＩＲ３３９７，３１８５，１６６８，１６２８，１５０７，１３５６ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１２．５９（ｂｓ，１Ｈ），１０．３３（ｓ，１Ｈ），８．６６（ｓ，１Ｈ），７．５３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．４４‐７．３９（ｍ，３Ｈ），７．３５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．０３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），６．７１（ｔａ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．０３（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，Ｊ′＝６．０Ｈｚ），１．８８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．４０‐１．３４（ｍ，２Ｈ），１．２４‐１．１８（ｍ，２Ｈ），１．０３‐０．９６（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１６８．９，１５９．９，１５９．４，１３３．３，１３２．０，１３１．１，１３０．９，１２９．９，１２８．０，１２７．６，１２３．３，１２１．４，１２１．１，１１３．５，５５．２，３２．０，２８．４，２５．７，２４．７；Ｃ２４Ｈ２６Ｎ４Ｏ６の分析計算値：Ｃ，６１．７９；Ｈ，５．６２；Ｎ，１２．０１．実測値：Ｃ，６１．７１；Ｈ，５．５９；Ｎ，１２．０４％．
【００４５】
これら最後の実施例で表された概念を理解しやすくさせる目的で、前記実施例の化合物に至る合成の様々な段階が、以下に含まれるスキーム１において示される：
【化３０】
2009521519.tif 000031
【００４６】
実施例８
下記構造式のＮ‐〔５‐（ヒドロキシカルバモイル）ペンチル〕‐３‐（４‐メトキシフェニル）‐５‐フェニル‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミドの製造：
【化３１】
2009521519.tif 000032
この物質は実施例６の場合と実質的に類似した方法を用いて製造し、標題の化合物を薄黄色固体物として得た。収率，８０％、ｍ．ｐ．１４２℃、ＩＲ３４１７，３２５６，１６６３，１６１３，１５４７，１３０６ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１２．５９（ｂｓ，１Ｈ），１０．３３（ｓ，１Ｈ），８．６６（ｓ，１Ｈ），７．５３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．４４‐７．３９（ｍ，３Ｈ），７．３５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．０３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），６．７１（ｔａ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．０３（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１２．４３Ｈｚ，Ｊ′＝６．３５Ｈｚ），１．９４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．５４‐１．４５（ｍ，２Ｈ），１．４５‐１．３７（ｍ，２Ｈ），１．２８‐１．１６（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１６９．０，１６１．０，１５８．０，１３２．６，１３１．６，１２９．９，１２８．６，１２７．８，１２７．２，１２６．６，１２４．５，１２３．１，１１３．４，１０８．１，５５．０，３２．２，２８．８，２６．１，２４．９；Ｃ２４Ｈ２７Ｎ３Ｏ４の分析計算値：Ｃ，６８．３９；Ｈ，６．４６；Ｎ，９．９７．実測値：Ｃ，６８．２７；Ｈ，６．４３；Ｎ，９．９９％．
【００４７】
実施例９
下記構造式のＮ‐〔５‐（ヒドロキシカルバモイル）ペンチル〕‐３‐（４‐メトキシフェニル）‐５‐（フェニル）‐４‐ニトロ‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミドの製造：
【化３２】
2009521519.tif 000033
この物質は実施例６の場合と実質的に類似した方法を用いて製造し、標題の化合物を淡黄色固体物として得た。収率，９４％、ｍ．ｐ．１５５℃、ＩＲ３３９７，３１５５，１６３８，１４９７，１３５６ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１１．５９（ｓ，１Ｈ），１０．３４（ｓ，１Ｈ），８．６８（ｓ，１Ｈ），７．６３‐７．５３（ｍ，２Ｈ），７．５２‐７．４１（ｍ，３Ｈ），７．２９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），６．９９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），６．７２（ｔａ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１２．０２Ｈｚ，Ｊ′＝６．２４Ｈｚ），１．８９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．５０‐１．３３（ｍ，２Ｈ），１．３３‐１．１６（ｍ，２Ｈ），１．１４‐０．９８（ｍ，２Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１６８．９，１５９．４，１５８．８，１３３．０，１３１．６，１３１．２，１２９．３，１２９．１，１２９．０，１２８．０，１２３．５，１２１．０，１１３．５，５５．０，３２．０，２８．３，２５．７，２４．６；Ｃ２４Ｈ２６Ｎ４Ｏ６の分析計算値：Ｃ，６１．７９；Ｈ，５．６２；Ｎ，１２．０１．実測値：Ｃ，６１．４０；Ｈ，５．７７；Ｎ，１１．８０％．
【００４８】
実施例１０
下記構造式の４‐（４‐アミノブチル）‐１‐メチルセミカルバジドの製造：
【化３３】
2009521519.tif 000034
メタノール（３０ｍＬ）中、ジ-tert-ブチルジカーボネート（１０．９ｇ，５１ｍｍｏｌ）の混合物をトリエチルアミン（３０ｍＬ，２１５ｍｍｏｌ）およびメタノール（３００ｍＬ）中、１，４‐ジアミノブタン（１１．１２ｇ，１５０ｍｍｏｌ）の溶液へ滴下した。得られた混合物を環境温度で１６時間攪拌した。この後、トリエチルアミンおよびメタノールを減圧下で蒸発させた。得られた油状物を塩化メチレン（１００ｍＬ）に溶解し、１０％炭酸ナトリウム（２×５０ｍＬ，水溶液）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させた。こうして一保護アミン（７．８ｇ，４１．４２ｍｍｏｌ）を得た。
塩化メチレン（４３８ｍＬ）中、一保護アミン（６ｇ，３１．８６ｍｍｏｌ）およびトリホスゲン（３．４８ｇ，１１．７２ｍｍｏｌ）の溶液に、水（４３８ｍＬ）中重炭酸ナトリウム（１８．２３ｇ，６３．７２ｍｍｏｌ）の溶液を環境温度で滴下する。得られた二相系を激しく１．５時間攪拌した。この後、有機相をデカントし、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させた。得られた油状物（４．３ｇ，２０ｍｍｏｌ）をメタノール（６．８ｍＬ）に溶解し、メチルヒドラジン（１．１ｍＬ，２０．８ｍｍｏｌ）および水（４．０５ｍＬ）の別な既調製溶液に０℃でゆっくり滴下した。混合物を０℃で４５分間攪拌した。この後、沈殿物を濾過し、３．４９２ｇの白色固体物を得たが、その分光性は４‐（４-tert-ブトキシカルボニルアミノブチル）‐１‐メチルセミカルバジドと一致すると判断された。
他の溶液、塩化メチレン（２２ｍＬ）中、トリフルオロ酢酸（４．９６ｍＬ，４４ｍｍｏｌ）を０℃において、塩化メチレン（２７．５ｍＬ）中、既得沈殿物（０．５００ｇ，１．９２ｍｍｏｌ）の溶液に３０分間かけてゆっくり加えた。混合物を２時間攪拌した。この後、トルエン（５０ｍＬ）を加え、それを半量となるまで減圧下で蒸発させ、その工程を数回繰り返した。こうして、標題の化合物のアンモニウム塩のトリフルオロアセテート（０．７２０ｇ，２．６３ｍｍｏｌ）を得た。
収率，６８％、ＩＲ３３８７，３１１５，１６７３ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）７．８８（ｓ，３Ｈ），７．４２‐７．１５（ｍ，２Ｈ），３．７８‐３．６４（ｍ，１Ｈ），３．５８（ｓ，３Ｈ），３．１６‐２．９７（ｍ，２Ｈ），２．９５‐２．７３（ｍ，２Ｈ），１．８０‐１．３８（ｍ，４Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１５９．０，１５８．６，１５８．１，１５７．７，１５６．７，５１．１，２６．３，２４．３．
【００４９】
実施例１１
下記構造式の１‐〔４‐〔５‐（４‐メトキシフェニル）‐４‐ニトロ‐３‐（チオフェン‐２‐イル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド〕ブチル〕‐３‐（２‐メチルアミン）尿素の製造：
【化３４】
2009521519.tif 000035
ＤＭＦ（６．２５ｍＬ）中、５‐（４‐メトキシフェニル）‐４‐ニトロ‐３‐（チオフェン‐２‐イル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸（０．４３４ｇ，１．２５ｍｍｏｌ）および４‐（４‐アミノブチル）‐１‐メチルセミカルバジドのアンモニウム塩のトリフルオロアセテート（０．３４５ｇ，１．２５ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却した。次いで、トリエチルアミン（０．９８ｍＬ，７．０４ｍｍｏｌ）、１‐ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．２１０ｇ，１．３７ｍｍｏｌ）、Ｎ‐（３‐ジメチルアミノプロピル）‐Ｎ′‐エチルカルボジイミドクロロヒドレート（０．２６３ｇ，１．３７ｍｍｏｌ）、およびＮ‐メチルモルホリン（０．１４ｍＬ，１．２５ｍｍｏｌ）を連続的に加えた。得られた混合物を０℃において２時間、更に環境温度において９６時間攪拌した。この後、酢酸エチル（２５０ｍＬ）を加え、得られた溶液を水（８０ｍＬ）、１Ｎ  Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（８０ｍＬ，水溶液）、水（８０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３（８０ｍＬ，飽和水溶液）、およびＮａＣｌ（８０ｍＬ，飽和水溶液）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させ、標題の化合物０．４００ｇ（０．８２ｍｍｏｌ）を得た。
収率，６５．６％、ｍ．ｐ．１８５‐１８７℃、ＩＲ３４０８，３１６１，１６３９，１５１１ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ３）１０．４（ｓ，１Ｈ），７．５６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，Ｊ′＝０．８），７．５４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．２０‐７．１５（ｍ，３Ｈ），６．９８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），５．７４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），４．６６（ｓ，１Ｈ），３．８６（ｓ，４Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．１３‐３．０４（ｍ，４Ｈ），１．３１‐１．２４（ｍ，４Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ３）１６０．７，１５９．６，１５７．０，１３４．６，１３２．９，１３１．５，１３０．９，１２９．５，１２８．７，１２７．６，１２３．２，１２１．１，１１３．９，１１３．７，５５．４，５２．１，４０．５，３８．７，２７．０，２６．２；Ｃ２２Ｈ２６Ｎ６Ｏ５Ｓの計算分子イオン：ｍ／ｚ４８６．１４．実測値：４７１．１（Ｍ＋‐Ｍｅ）．
【００５０】
実施例１２
下記構造式の１‐（４‐アミノメチル）‐３‐（ベンジルオキシ）尿素の製造：
【化３５】
2009521519.tif 000036
この物質は、実施例１０の場合と実質的に類似した方法を用い、但し、メチルヒドラジンの代わりにベンジルオキシアミンを用いて製造した。前記の付加‐脱保護順序後、標題の化合物を対応アンモニウム塩のトリフルオロアセテートとして得た。
収率，６８％、ＩＲ３７５９，３３５６，１６４８ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）７．８２（ｓ，３Ｈ），７．５２‐７．２８（ｍ，７Ｈ），５．００（ｓ，２Ｈ），３．０９‐２．９２（ｍ，２Ｈ），２．９０‐２．６８（ｍ，２Ｈ），１．６８‐１．３２（ｍ，４Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＤＭＳＯ‐ｄ６）１５９．６，１５８．２，１５７．７，１３６．４，１２８．５，１２８．１，１２７．８，７７．２，３８．０，２６．６，２４．３，２４．０；Ｃ１３Ｈ２０Ｎ３Ｏ２の計算分子イオン：ｍ／ｚ２３７．３２．実測値：２３８．０．
【００５１】
実施例１３
下記構造式の１‐〔４‐〔３，５‐ビス（３，５‐ジメトキシフェニル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド〕ブチル〕‐３‐（ベンジルオキシ）尿素の製造：
【化３６】
2009521519.tif 000037
この物質は、実施例１１の場合と実質的に類似した方法を用い、３，５‐ビス（３，５‐ジメトキシフェニル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボン酸および１‐（４‐アミノメチル）‐３‐（ベンジルオキシ）尿素のアンモニウム塩のトリフルオロアセテートから製造した。
収率，８１％、ＩＲ３４０７，３２１６，１６８８，１５９７ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ３）９．８７（ｓ，１Ｈ），７．４４‐７．３２（ｍ，５Ｈ），７．１３（ｓ，１Ｈ），６．７７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），６．６２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．２Ｈｚ），６．５０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．６Ｈｚ），６．４３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），６．０３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），５．６２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．３Ｈｚ），４．８０（ｓ，２Ｈ），３．８５（ｓ，６Ｈ），３．８２（ｓ，６Ｈ），３．２８（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，Ｊ′＝５．９Ｈｚ），３．１５（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，Ｊ′＝６．５Ｈｚ），１．４１‐１．２９（ｍ，４Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ３）１６１．２，１６０．０，１３７．６，１３５．４，１３４．１，１３３．２，１３０．８，１２９．２，１２８．８，１２８．７，１２７．７，１２２．２，１１０．０，１０７．４，１０３．０，１００．０，９９．８，７８．６，７２．３，１０．１，６８．１，５５．４，３９．１，３８．８，２７．１，２６．６；Ｃ３３Ｈ３８Ｎ４Ｏ７の計算分子イオン：ｍ／ｚ６０２．６８．実測値：６０３．２．
【００５２】
実施例１４
下記構造式の１‐〔４‐〔３，５‐ビス（３，５‐ジメトキシフェニル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド〕ブチル〕‐３‐ヒドロキシ尿素の製造：
【化３７】
2009521519.tif 000038
酢酸エチル（６６ｍＬ）およびエタノール（１６．５ｍＬ）中、１‐〔４‐〔３，５‐ビス（３，５‐ジメトキシフェニル）‐１Ｈ‐ピロール‐２‐カルボキサミド〕ブチル〕‐３‐（ベンジルオキシ）尿素（０．２００ｇ，０．３３ｍｍｏｌ）の溶液を調製し、それに触媒１０％Ｐｄ‐Ｃ（０．１１６ｇ，０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を水素流下環境温度において５時間攪拌した。この後、得られた懸濁物をセライトで濾過し、濾液を減圧下において蒸発させた。こうして、標題の生成物を無色油状物として得た。
収率，７１％、ＩＲ３４１６，３２４４，２９４８，１５９８ｃｍ−１、１Ｈ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ３）１０．３（ｓ，１Ｈ），６．７８（ｓ，２Ｈ），６．６０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ），６．５３‐６．４４（ｍ，２Ｈ），６．３９（ｓ，１Ｈ），６．１７‐６．０２（ｍ，１Ｈ），４．８１（ｓ，１Ｈ），３．８６‐３．７８（ｍ，１３Ｈ），３．３４‐３．１６（ｍ，４Ｈ），１．４８‐１．３３（ｍ，４Ｈ）；１３Ｃ‐ＮＭＲ（δｐｐｍ，ＣＤＣｌ３）１６１．２，１３７．６，１３４．６，１３４．５，１３３．３，１２８．３，１２８．２，１２２．１，１２２．０，１０９．７，１０７．５，１０３．３，９９．９，９９．６，５５．６，５５．５，３９．０，３８．９，３８．７，２７．２，２７．０，２６．８；Ｃ２６Ｈ３２Ｎ４Ｏ７の計算分子イオン：ｍ／ｚ５１２．５５．実測値：５１３．２（Ｍ＋），４９７．１（Ｍ＋‐ＯＨ）．
【００５３】
これら最後の実施例で表された概念を理解しやすくさせる目的で、実施例１０、１１、１２、１３、および１４で記載された化合物に至る合成の様々な段階を、以下に含まれるスキーム２により示す：
【化３８】
2009521519.tif 000039
【００５４】
【化３９】
2009521519.tif 000040
スキーム３．阻害作用が図１、２、３、４、５、６、および７において示される化合物の展開式
【００５５】
実施例１５
ヒストンデアセチラーゼ活性の阻害能のインビトロ測定
本実施例および次の実施例で行なわれる方法をより説明する目的の下、キラルピロリジンの誘導体が含まれたスキーム３において示される化合物で得られた結果が、この環式系の活性を本発明の対象、ピロール類と比較する目的で提示される。
【００５６】
合成された化合物のヒストンデアセチラーゼの阻害能を調べるために、様々な濃度の合成化合物の存在下において、細胞系ＨＣＴ１１６およびＭＯＬＴ４の核抽出物と、トリチウム標識アセチル化ヒストンとをインキュベートし、その後でシンチレーションカウンターを用いて遊離アセチル基の濃度を測定することにより、インビトロ研究を行なった。
【００５７】
核抽出物の調製
懸濁状態の細胞（８×１０６）を８００ｒｐｍで５分間遠心し、ＰＢＳで洗浄し、緩衝液Ａ（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５，１５ｍＭ  ＫＣｌ，２ｍＭ  ＭｇＣｌ２，０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ，２ｍＭ  ２‐メルカプトエタノール，緩衝液５０ｍＬ毎に１錠のＥＤＴＡフリーのプロテアーゼ阻害剤）２ｍＬに再懸濁した。緩衝液Ｂ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ，１Ｍ  ＫＣｌ，３０ｍＭ  ＭｇＣｌ２，０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ，２ｍＭ  ２‐メルカプトエタノール）１３５μＬを加え、次いでそれらを４℃において２．７×１０３ｒｐｍで５分間遠心し、上澄みを除去した。ペレットを緩衝液Ａ２ｍＬに再懸濁し、２ｍＬホモゲナイザー中で５回攪拌した。それを再び４℃において７．８×１０３ｒｐｍで８分間遠心し、ペレットを緩衝液Ａ２ｍＬに再懸濁し、ホモゲナイザー中で５回攪拌した。硫酸アンモニウム２００μＬをそれに加え、次いで４℃においてロータリーミキサーで３０分間混ぜた。それを４℃において１２×１０３ｒｐｍで１０分間遠心し、上澄みを緩衝液Ｃ（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５，１０％グリセロール，１ｍＭ  ＥＤＴＡ，１ｍＭ  ２‐メルカプトエタノール，１．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２，緩衝液５０ｍＬ毎に１錠のＥＤＴＡフリーのプロテアーゼ阻害剤）２００ｍＬ中、４℃において２時間にわたりＭＷＣＯ３５００膜により透析した。この後、膜の内容物を回収し、下記の研究に用いた。
【００５８】
化合物の阻害活性のインビトロ測定
示された方法を用いて得られた核抽出物３０μＬに、緩衝液Ｃ（上記参照）５５μＬ、対応阻害剤溶液５μＬ、およびトリチウム標識過アセチル化ヒストン１０μＬを加え、得られた混合物を３７℃で１時間インキュベートした。
【００５９】
塩酸（最終濃度１Ｍ）および酢酸（最終濃度０．４Ｍ）の溶液３７．５μＬの添加によりインキュベートを止めた。酢酸エチル７００μＬを得られた溶液に加え、それを１０，０００ｒｐｍで５分間遠心し、最後に（遊離トリチウム化酢酸を含有する）上層をシンチレーション計数に用いた。上層５００μＬおよびシンチレーション液５ｍＬを混ぜることによりシンチレーションカウンター用のサンプルを調製した。
【００６０】
前記方法に従い得られた最も代表的なデータが図１および２において示されている。図１の結果は細胞系ＨＣＴ１１６に相当し、図２の結果は細胞系ＭＯＬＴ４に相当する。
【００６１】
実施例１６
ヒストンの全シンチレーションの測定
Ｈ３およびＨ４ヒストンのアセチル化の程度の定量が下記の方法を用いて行なわれた。
【００６２】
Jurkatヒト細胞系（前骨髄球性白血病）を様々な濃度の本発明の対象、ＨＤＡＣ阻害化合物で２４時間処理した。この後、１％Nonidet-Ｐ４０およびプロテアーゼ阻害剤含有のＲＳＢ緩衝液（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５，１０ｍＭ  塩化ナトリウムおよび３ｍＭ塩化マグネシウム）を該細胞へ加えることにより核を単離した。ヒストンを抽出するために、０．２５Ｍ塩酸を核へ加え、混合物を４℃で１６時間攪拌した。次いで、８倍容量のアセトンを加えることによりヒストンを沈殿させた。得られたヒストン混合物を、０．３％トリフルオロ酢酸中アセトニトリル勾配（２０〜６０％）でＣ１８カラムを用いる逆相高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により分離した。
【００６３】
Ｈ３およびＨ４ヒストンの各フラクションの非アセチル化、一、二、三、および四アセチル化種の分離を、シリカキャピラリー（６０．２ｃｍ×７５μｍ，有効長さ５０ｃｍ）を用いる高性能キャピラリー電気泳動（ＨＰＣＥ）で行なった。用いられた溶離条件は：２５℃、電圧１２ｋＶ、２１４ｎｍの吸光検出器と、１１０ｍＭリン酸（ｐＨ２．０）およびＨＰＭセルロース（０．０３％ｗｔ／ｖｏｌ）の溶離緩衝液であった。
【００６４】
各注入前に、システムを０．１Ｍ  ＮａＯＨで３分間洗浄し、次いで更に０．５Ｍ  Ｈ２ＳＯ４で２分間洗浄し、それを溶離緩衝液で３分間平衡化させた。洗浄緩衝液および溶液を０．４５μｍの孔径で濾過されたMilli‐Ｑ水で調製した。サンプルを０．３ｐｓｉの圧力下３秒間で注入した。全てのサンプルを二重に分析した。
【００６５】
本発明の対象、様々な分子で得られたある代表的データが図３で示される。
【００６６】
実施例１７
アポトーシス誘導の測定
染色剤として市販YoProキットを用い、フローサイトメトリー分析を用いて細胞質膜の透過性の変化を調べることにより、アポトーシス細胞の定量を行った。行なわれる方法が次に説明される。ヒト系ＨＣＴ１１６およびＨＬ６０の細胞（１０６細胞／処理）を様々な濃度の本発明の対象、ＨＤＡＣ阻害剤化合物で２４時間処理した。この期間後、細胞を冷ＰＢＳ１×で２回洗浄し、それらをＰＢＳ１×  １ｍＬに再懸濁し、YoPro １μＬおよびヨウ化プロピジウム１μＬを加えた。混合物を光から保護しながら氷中で３０分間インキュベートした。フローサイトメトリーを用いてアポトーシス細胞の量を測定した。
【００６７】
最も代表的なデータが図４および５において示される。結腸ＨＣＴ１１６モデルのヒト癌腫に関するデータが図４において表される。ヒト急性骨髄性白血病ＨＬ６０モデルに関するデータが図５において表される。
【００６８】
実施例１８
インビボ生物活性の測定
インビボ腫瘍成長において記載された化合物の一部の効果を観察する目的で、６週齢雌性無胸腺ヌードマウス（Harlam Sprague Dawley，Indianapolis，ＩＮ，ＵＳＡ）を用いて研究を行なった。研究では、２×１０６細胞の系ＨＣＴ１１６（ヒト結腸癌腫）および１０７  ＭＯＬＴ４細胞（ヒトＴ細胞急性リンパ芽球白血病）をＰＢＳに再懸濁された２００μＬ／動物の最終接種容量で皮下接種した。腫瘍が１００ｍｍ３の平均容量に達したら、各マウスに対応分子の２０μＭ溶液２００μＬの１日量を腹腔内注射（１０ｍｇ／ｋｇ体重）で投与した。接種のストレスを模擬するために、マウスのコントロール群にＰＢＳ２００μＬを投与した。マウスを２４時間毎に秤量し、腫瘍を球体ジオメトリーと仮定して、較正ミリメートル測定器を用いて腫瘍容量を測定した（容量＝ｄ３×π／６）。腫瘍が１〜１．５ｃｍ３の容量（Ethical-Humanitarian Human End Point）に達したら、マウスを屠殺し、腫瘍を抽出し、秤量した。
【００６９】
最も代表的なデータが図７および８において示される。ヒト結腸癌腫ＨＣＴ１１６モデルに関するデータが図７において表される。図８において、ヒト線維芽細胞白血病ＭＯＬＴ４モデルに関するデータが表される。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】図１は、陽性コントロールとして用いられるＴＳＡ（tricostatin Ａの頭字語）およびＳＡＨＡ（suberoylanilide hydroxamic acidの頭字語）と比較した、細胞系ＨＣＴ１１６（ヒト結腸癌腫）のヒストンのデアセチラーゼ活性に及ぼす、本発明の対象、化合物の一部においてインビトロ試験された効果を示す。
【図２】図２は、陽性コントロールとして用いられた、ＴＳＡおよびＳＡＨＡと比較した、細胞系ＭＯＬＴ４（ヒト線維芽細胞白血病）のヒストンのデアセチラーゼ活性に及ぼす、本発明の対象、化合物の代表例のインビトロ効果を示す。
【図３】図３は、１０μＭの濃度において本発明の対象、一部の化合物により処理されたJurkatヒト前骨髄球性白血病細胞系のＨ３およびＨ４ヒストンの、ＨＰＣＥ（高性能キャピラリー電気泳動）を用いた、アセチル化レベルの定量を示す。
【図４】図４は、異なる濃度のＳＡＨＡおよび本発明の対象、二種の阻害剤の存在下における、アポトーシスおよび壊死細胞のパーセンテージの測定値を示す。コントロールサンプルおよびＤＭＳＯにより処理されたサンプルにおいて、得られたデータも含まれている。示されたデータはヒト結腸癌腫モデルＨＣＴ１１６に相当する。
【図５】図５は、異なる濃度のＳＡＨＡおよび本発明の対象、二種の阻害剤の存在下における、アポトーシスおよび壊死細胞のパーセンテージの測定値を示す。コントロールサンプルおよびＤＭＳＯにより処理されたサンプルにおいて得られたデータも含まれている。示されたデータはヒト急性骨髄性白血病モデルＨＬ６０に相当する。
【図６】図６は、本発明の対象、化合物の一部の腹腔内投与により引き起こされた、無胸腺ヌードマウスにおけるヒト結腸癌腫ＨＣＴ１１６の腫瘍成長の阻害を示す。実施例１８において詳細に記載された方法に従い、異種インプラントが脾臓内において行なわれ、阻害剤が腹腔内に注射された。
【図７】図７は、ヒト線維芽細胞白血病モデルＭＯＬＴ４における、本発明の対象、化合物の一部の無胸腺ヌードマウスにおけるインビボ抗腫瘍活性を示す。実施例１７において詳細に記載された方法に従い、異種インプラントが脾臓内において行なわれた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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