(57)【要約】ピロリルインドリノンのアミノ酸誘導体およびそれらのアミドまたはエステル誘導体は、プロテインキナーゼの阻害剤として強化された予期せぬ薬剤特性を有し、癌等のプロテインキナーゼ活性異常に関する障害の治療に有用である。本発明の化合物は、ＶＥＧＦＲおよび／またはＰＤＧＦＲのプロテインキナーゼ活性を制御および／または調節することができる。さらに、本発明は、これらのキナーゼの機能異常に関する障害の治療手段を提供する。このような障害としては、膠芽細胞腫、黒色腫およびカポジ肉腫ならびに卵巣、肺、前立腺、膵臓、結腸および類表癌等の充実性腫瘍が挙げられる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式Ｉ：
【化１】
2009522276.tif 000033
［式中、
Ｒ１は、水素、ハロ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、アミド、スルホンアミド、シアノ、置換または非置換（Ｃ６−Ｃ１０）アリールからなる群から選択され、
Ｒ２は、水素、ハロ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ２−Ｃ８）アルコキシアルキル、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ６−Ｃ１０）アリールアミノからなる群から選択され、
Ｒ３は、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ６−Ｃ１０）アリール、（Ｃ５−Ｃ１０）ヘテロアリールおよびアミドからなる群から選択され、
Ｒ４は、水素および（Ｃ１−Ｃ６）アルキルからなる群から選択され、
Ｒ５は、αまたはβアミノ酸あるいはアミド結合を形成するαまたはβアミノ基を介して（Ｉ）のカルボニルに結合するαまたはβアミノアミド基である］
により表される化合物もしくは薬学的に許容される塩またはそのプロドラッグあるいはプロドラッグとして作用することができる物質。
【請求項２】
式中、Ｒ５が以下の構造：
【化２】
2009522276.tif 000034
［式中、
Ｒ６は、天然に存在するかまたは天然に存在しないアミノ酸またはその対応するアミド誘導体の側鎖であり、該アミド誘導体は、ＮＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８およびＲ９は、独立して水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ジヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルホスホン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホン酸、（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロキシアルキルカルボン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミド、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５−Ｃ８）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ６−Ｃ８）アリール、（Ｃ５−Ｃ８）ヘテロアリール、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルカルボン酸からなる群から選択され、あるいはＲ８およびＲ９は、Ｎと一緒になって、非置換であるか、あるいは１つまたは複数のヒドロキシル、ケトン、エーテルおよびカルボン酸で置換された（Ｃ５−Ｃ８）複素環を形成する）により表されるアミド窒素を有し；
Ｒ７は、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）Ｏ−アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）Ｏ−シクロアルキルからなる群およびＮＲ８Ｒ９により選択され；
ｎは、０または１である］
により表される請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ５がαアミノ酸であり、該αアミノ基が式Ｉのカルボニルに結合しアミド結合を形成する、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ５がαアミノアミドであり、該αアミノ基が式Ｉのカルボニルに結合しアミド結合を形成する、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ５がβアミノ酸であり、該βアミノ基が式Ｉのカルボニルに結合しアミド結合を形成する、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ５がβアミノアミドであり、該βアミノ基が式Ｉのカルボニルに結合しアミド結合を形成する請求項２に記載の化合物。
【請求項７】
以下の構造：
【化３】
2009522276.tif 000035
を有する請求項３に記載の化合物。
【請求項８】
以下の構造：
【化４】
2009522276.tif 000036
を有する請求項３に記載の化合物。
【請求項９】
以下の構造：
【化５】
2009522276.tif 000037
を有する請求項３に記載の化合物。
【請求項１０】
以下の構造：
【化６】
2009522276.tif 000038
を有する請求項４に記載の化合物。
【請求項１１】
以下の構造：
【化７】
2009522276.tif 000039
を有する請求項４に記載の化合物。
【請求項１２】
以下の構造：
【化８】
2009522276.tif 000040
を有する請求項４に記載の化合物。
【請求項１３】
以下の構造：
【化９】
2009522276.tif 000041
を有する請求項４に記載の化合物。
【請求項１４】
以下の構造：
【化１０】
2009522276.tif 000042
を有する請求項４に記載の化合物。
【請求項１５】
以下の構造：
【化１１】
2009522276.tif 000043
を有する請求項４に記載の化合物。
【請求項１６】
以下の構造：
【化１２】
2009522276.tif 000044
を有する請求項４に記載の化合物。
【請求項１７】
以下の構造：
【化１３】
2009522276.tif 000045
を有する請求項４に記載の化合物。
【請求項１８】
以下の構造：
【化１４】
2009522276.tif 000046
を有する請求項４に記載の化合物。
【請求項１９】
以下の構造：
【化１５】
2009522276.tif 000047
を有する請求項４に記載の化合物。
【請求項２０】
以下の構造：
【化１６】
2009522276.tif 000048
を有する請求項４に記載の化合物。
【請求項２１】
以下の構造：
【化１７】
2009522276.tif 000049
を有する請求項４に記載の化合物。
【請求項２２】
以下の構造：
【化１８】
2009522276.tif 000050
を有する請求項４に記載の化合物。
【請求項２３】
以下の構造：
【化１９】
2009522276.tif 000051
を有する請求項４に記載の化合物。
【請求項２４】
以下の構造：
【化２０】
2009522276.tif 000052
を有する請求項４に記載の化合物。
【請求項２５】
以下の構造：
【化２１】
2009522276.tif 000053
を有する請求項５に記載の化合物。
【請求項２６】
以下の構造：
【化２２】
2009522276.tif 000054
を有する請求項６に記載の化合物。
【請求項２７】
以下の構造：
【化２３】
2009522276.tif 000055
を有する請求項６に記載の化合物。
【請求項２８】
以下の構造：
【化２４】
2009522276.tif 000056
を有する請求項６に記載の化合物。
【請求項２９】
以下の構造：
【化２５】
2009522276.tif 000057
を有する請求項６に記載の化合物。
【請求項３０】
プロテインキナーゼの触媒活性を請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物または塩を用いて調節する方法。
【請求項３１】
前記プロテインキナーゼがＶＥＧＦＲおよびＰＤＧＦＲからなる受容体の群から選択される請求項３０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、プロテインキナーゼ阻害剤と癌および炎症等のプロテインキナーゼ活性異常に関する障害の治療時の使用に関する。さらに具体的には、本発明は、ピロリルインドリノンのアミノ酸誘導体およびそのアミドまたはエステル誘導体ならびにプロテインキナーゼ阻害剤として使用可能な薬学的に許容される塩に関する。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
プロテインキナーゼは、タンパク質のチロシン、セリンおよびトレオニン残基のヒドロキシル基のリン酸化を触媒する酵素である。多くの態様の細胞寿命（例えば、細胞成長、分化、増殖、細胞周期および生存率）は、プロテインキナーゼ活性に左右される。さらに、プロテインキナーゼ活性異常は、癌および炎症等の多くの障害に関連している。それゆえ、プロテインキナーゼ活性を調節する方法を同定するためにかなりの努力がなされている。特に、プロテインキナーゼ活性阻害剤として作用する小分子を同定する多くの試みがなされている。
【０００３】
いくつかのピロリルインドリノン誘導体は、プロテインキナーゼの阻害剤として優れた活性を示している（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４）。これらの化合物の臨床使用が期待されているが、相対的に水溶性および／または他の薬物特性が不良であるため、部分的に障害を来たしている。必要とされるのは、阻害活性および強化された薬剤特性の両方を有する１クラスの修飾プロリルインドリノン誘導体である。
【非特許文献１】Ｌａｒｉｄら、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．（２００２）１６，６８１
【非特許文献２】Ｓｍｏｌｉｃｈら、Ｂｌｏｏｄ，（２００１）９７，１４１３
【非特許文献３】Ｍｅｎｄｅｌら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００３）９，３２７
【非特許文献４】Ｓｕｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００３）４６，１１１６
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
要旨
本発明の一態様は、式Ｉにより表された以下の構造：
【０００５】
【化２６】
2009522276.tif 000002
［式Ｉにおいて、Ｒ１は、水素、ハロ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、アミド、スルホンアミド、シアノ、置換または非置換（Ｃ６−Ｃ１０）アリールからなる群から選択され；Ｒ２は、水素、ハロ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ２−Ｃ８）アルコキシアルキル、アミノ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミノ、（Ｃ６−Ｃ１０）アリールアミノからなる群から選択され；Ｒ３は、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ６−Ｃ１０）アリール、（Ｃ５−Ｃ１０）ヘテロアリールおよびアミドからなる群から選択され；Ｒ４は、水素および（Ｃ１−Ｃ６）アルキルからなる群から選択され；Ｒ５は、αまたはβアミノ酸あるいはアミド結合を形成するαまたはβアミノ基を介して（Ｉ）のカルボニルに結合するαまたはβアミド基である］を有する化合物もしくは薬学的に許容される塩またはそのプロドラッグあるいはプロドラッグとして作用することができる物質に関する。
好ましい実施形態において、Ｒ５は、以下の構造：
【０００６】
【化２７】
2009522276.tif 000003
［上記の構造式において、Ｒ６は、天然に存在するかまたは天然に存在しないアミノ酸またはその対応するアミド誘導体の側鎖であり、アミド誘導体は、ＮＲ８Ｒ９（式中、Ｒ８およびＲ９は、独立して水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ジヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルカルボン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルホスホン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルスルホン酸、（Ｃ１−Ｃ６）ヒドロキシアルキルカルボン酸、（Ｃ１−Ｃ６）アルキルアミド、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５−Ｃ８）ヘテロシクロアルキル、（Ｃ６−Ｃ８）アリール、（Ｃ５−Ｃ８）ヘテロアリール、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルカルボン酸からなる群から選択され、またはＲ８およびＲ９は、Ｎと一緒になって、非置換であるか、あるいは１つまたは複数のヒドロキシル、ケトン、エーテルおよびカルボン酸で置換された（Ｃ５−Ｃ８）複素環を形成する）により表されるアミド窒素を有し、Ｒ７は、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）Ｏ−アルキル、（Ｃ３−Ｃ８）Ｏ−シクロアルキルからなる群およびＮＲ８Ｒ９により選択され、ｎは０または１である］により表される。第１亜属において、Ｒ５は、αアミノ酸であり、式中、αアミノ基は、式Ｉのカルボニルに結合し、アミド結合を形成する。第１亜属内の好ましい化学種は、以下の構造により表される：
【０００７】
【化２８】
2009522276.tif 000004
第２亜属において、Ｒ５は、αアミノアミドであり、式中、αアミノ基は、式Ｉのカルボニルと結合し、アミド結合を形成する。第２亜属内の好ましい化学種は、以下の構造により表される：
【０００８】
【化２９】
2009522276.tif 000005
第３亜属において、Ｒ５は、βアミノ酸であり、式中、βアミノ基は、式Ｉのカルボニルと結合し、アミド結合を形成する。第３亜属内の好ましい化学種は、以下の構造により表される：
【０００９】
【化３０】
2009522276.tif 000006
第４亜属において、Ｒ５は、βアミノアミドであり、式中、βアミノ基は、式Ｉのカルボニルと結合し、アミド結合を形成する。第４亜属内の好ましい化学種は、以下の構造により表される：
【００１０】
【化３１】
2009522276.tif 000007
本発明の別の態様は、式Ｉの化合物または塩を用いてプロテインキナーゼの触媒活性を調節する方法に関する。好ましい様式において、プロテインキナーゼは、ＶＥＧＦおよびＰＤＧＦからなる受容体の群から選択される。
【００１１】
利用性：
本発明は、制限されないがＶＥＧＦＲおよび／またはＰＤＧＦＲのプロテインキナーゼ活性を制御および／または調節することができる化合物を提供する。従って、本発明は、これらのキナーゼの機能異常に関する障害の治療手段を提供する。このような障害には、膠芽細胞腫、黒色腫およびカポジ肉腫ならびに卵巣、肺、前立腺、膵臓、結腸および類表癌等の充実性腫瘍を含むがそれだけに限定されない。さらに、ＶＥＧＦＲ／ＰＤＧＦＲ阻害剤を再狭窄および糖尿病網膜症の治療に使用することもできる。
【００１２】
さらに、本発明は、ＶＥＧＦ受容体および／またはＰＤＧＦ受容体を含む経路を含めた受容体介在性経路による脈管形成および血管新生の阻害に関する。従って、本発明は、癌および血管の制御不能な形成を含む他の疾患の治療手段を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
合成プロトコール：
出発材料のＨＡＴＵエステル（１−１）を合成する一般的スキームをスキーム１に示す。
【００１４】
【化３２】
2009522276.tif 000008
ステップ１：
５−フルオロ−１、３−ジヒドロインドール−２−オン（１．６２ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）、５−ホルミル−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１．９６ｇ、１０．７ｍｍｏｌ）、ピロリジン（１２滴）および無水エタノールの混合物を加熱し、３時間還流した。混合物を２５℃に冷却し、固体を濾過により回収した。固体を、エタノール（３０ｍＬ）を用いて７２℃にて３０分間撹拌した。混合物を２５℃に冷却し、固体を再度、濾過により回収し、エタノール（６ｍＬ）で洗浄し、真空下において一晩乾燥し、橙色の固体（Ｚ）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３．０９４ｇ、９６％）を得た。ＬＣ−ＥＳＩＭＳ  実測値［Ｍ＋Ｈ］＋３０１（計算値Ｃ１６Ｈ１３ＦＮ２Ｏ３  ３００．０９）。
【００１５】
ステップ２：
（Ｚ）−５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（３．０９４ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１５ｍＬ）に懸濁し、５分間撹拌した。次いで、ＤＩＥＡ（２．７ｍＬ、１５．５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。ＨＡＴＵ（３．９１ｇ、１０．２８ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を完了まで２５℃にて撹拌した。ＬＣ／ＭＳにより反応の完了を検出した。ＤＭＦのほとんどを除去し、残留物をＡＣＮに懸濁し、さらに４０分間撹拌した。固体を濾過により回収し、ＡＣＮで洗浄し、高真空下において一晩乾燥した。（Ｚ）−３Ｈ−［１，２，３］トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジン−３−イル５−（（５−フルオロ−２−オキソインドリン−３−イリデン）メチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸塩（３．９７ｇ、９２％）を得た。ＬＣ−ＥＳＩＭＳ  実測値［Ｍ＋Ｈ］＋４１９（計算値Ｃ２１Ｈ１５ＦＮ６Ｏ３  ４１８．１２）。
【００１６】
実施例１−２３：一般スキーム：
【００１７】
【化３３】
2009522276.tif 000009
出発材料のＨＡＴＵエステル（１−１）の合成をスキーム１に示す。遊離カルボン酸１−２を調製するために、スキーム２に示すように、非保護アミノ酸（１．０当量）をＤＭＦ中１−１（１．０当量）およびＤＩＥＡ（１．５当量）溶液に添加した。溶液を２５℃にて一晩撹拌後、ＬＣ−ＭＳは、１−２の形成が完了したことを示し、出発材料は、残っていなかった。この溶液を直接次のステップに使用し、アミド１−３を調製した。従って、アミン（２当量）、ＨＡＴＵ（１．０ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１当量）を溶液に添加した。２５℃にて２時間撹拌後、ＬＣ−ＭＳ分析に基づき、反応を完了した。反応溶液を直接分取ＨＰＬＣにかけ、純粋アミド生成物１−３を得、続いて、これをＬＣ−ＭＳおよびＮＭＲ分光法により特徴付けた。
【実施例】
【００１８】
実施例１．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルカルバモイル−プロピル）−アミドの調製
【００１９】
【化３４】
2009522276.tif 000010
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル１−１）５２ｍｇから表題化合物５０ｍｇ（９６％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２２Ｈ２５ＦＮ４Ｏ３：  ４１３、観測値：４１３．    １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ）、δ  １３．６８  （ｓ，１Ｈ），１０．８９  （ｓ，１Ｈ），７．７６  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，９．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．７１  （ｓ，１Ｈ），７．６８  （ｔ，Ｊ  ＝  ５．６  Ｈｚ，１Ｈ），６．９３  （ｍ，１Ｈ），６．８４  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．４  Ｈｚ，８．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．３１  （ｍ，１Ｈ），３．１６  （ｍ，２Ｈ），３．０５  （ｓ，３Ｈ），２．８４  （ｓ，３Ｈ），２．４１  （ｓ，３Ｈ），２．３９  （ｓ，３Ｈ），１．０３  （ｄ，Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００２０】
実施例２．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−メチル−３−（モルホリン−４−イル）−３−オキソ−プロピル）−アミド
【００２１】
【化３５】
2009522276.tif 000011
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）５２ｍｇから表題化合物５６ｍｇ（９８％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２４Ｈ２７Ｆ２Ｎ４Ｏ４：  ４５５、観測値：４５５．    １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．６８  （ｓ，１Ｈ），１０．８９  （ｓ，１Ｈ），７．７５  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，９．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．７１  （ｓ，１Ｈ），７．６７  （ｔ，Ｊ  ＝  ５．６  Ｈｚ，１Ｈ），６．９２  （ｍ，１Ｈ），６．８３  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，８．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．５５  （ｍ，７Ｈ），３．４１  （ｍ，１Ｈ），３．３５  （ｍ，１Ｈ），３．２２  （ｍ，１Ｈ），３．１２  （ｍ，１Ｈ），２．４２  （ｓ，３Ｈ），２．４０  （ｓ，３Ｈ），１．０４  （ｄ，Ｊ  ＝  ７．２  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００２２】
実施例３．３−（｛５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル｝−アミノ）−酪酸
【００２３】
【化３６】
2009522276.tif 000012
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）２８ｍｇから表題化合物１４ｍｇ（５６％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２０Ｈ２０ＦＮ３Ｏ４：  ３８６、観測値：３８６．    １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．６６  （ｓ，１Ｈ），１２．２１  （ｓ，１Ｈ），１０．８９  （ｓ，１Ｈ），７．７６  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，Ｊ  ＝  ９．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．７１  （ｓ，１Ｈ），７．５７  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，１Ｈ），６．９２  （ｍ，１Ｈ），６．８３  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．２９  （ｍ，１Ｈ），４．０５  （ｍ，１Ｈ），３．３１  （ｄ，Ｊ  ＝  ９．６  Ｈｚ，２Ｈ），２．４１  （ｓ，３Ｈ），２．３８  （ｓ，３Ｈ），１．１７  （ｄ，Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００２４】
実施例４．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（２−ジメチルカルバモイル−１−メチル−エチル）−アミド
【００２５】
【化３７】
2009522276.tif 000013
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）５８ｍｇから表題化合物４２ｍｇ（７８％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２２Ｈ２５ＦＮ４Ｏ３：  ４１３、観測値：４１３．    １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．６６  （ｓ，１Ｈ），１０．８７  （ｓ，１Ｈ），７．７５  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，Ｊ  ＝  ９．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．７０  （ｓ，１Ｈ），７．５５  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９２  （ｍ，１Ｈ），６．８２  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．２９  （ｍ，１Ｈ），３．０１  （ｓ，３Ｈ），２．８２  （ｓ，３Ｈ），２．５８  （ｍ，１Ｈ），２．４２  （ｍ，１Ｈ），２．４１  （ｓ，３Ｈ），２．３９  （ｓ，３Ｈ），１．１８  （ｄ，Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００２６】
実施例５．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（１−メチル−３−（モルホリン−４−イル）−３−オキソ−プロピル）−アミド
【００２７】
【化３８】
2009522276.tif 000014
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）４８ｍｇから表題化合物４３ｍｇ（７３％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２４Ｈ２７ＦＮ４Ｏ４：  ４５５、観測値：４５５．      １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．５９  （ｓ，１Ｈ），１０．７９  （ｓ，１Ｈ），７．６７  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，Ｊ  ＝  ９．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．６３  （ｓ，１Ｈ），７．４７  （ｄ，Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，１Ｈ），６．８５  （ｍ，１Ｈ），６．７６  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．２３  （ｍ，１Ｈ），３．６０−３．３０  （ｍ，１０Ｈ），２．３５  （ｓ，３Ｈ），２．３２  （ｓ，３Ｈ），１．１１  （ｄ，Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００２８】
実施例６．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｓ）−１−ジメチルカルバモイル−２−ヒドロキシ−エチル）−アミド
【００２９】
【化３９】
2009522276.tif 000015
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）５０ｍｇから表題化合物４２ｍｇ（８４％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２１Ｈ２３ＦＮ４Ｏ４：  ４１５、観測値：４１５．    １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．７１  （ｓ，１Ｈ），１０．９１  （ｓ，１Ｈ），７．７６  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，Ｊ  ＝  ９．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．７２  （ｓ，１Ｈ），７．５６  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９２  （ｍ，１Ｈ），６．８４  （ｓ，１Ｈ），６．８３  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．９７  （ｍ，１Ｈ），３．６７  （ｍ，１Ｈ），３．５６  （ｍ，１Ｈ），３．１１  （ｓ，３Ｈ），２．８７  （ｓ，３Ｈ），２．４５  （ｓ，３Ｈ），２．４３  （ｓ，３Ｈ）。
【００３０】
実施例７．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｓ）−１−ヒドロキシメチル−２−（モルホリン−４−イル）−２−オキソ−エチル）−アミド
【００３１】
【化４０】
2009522276.tif 000016
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）５０ｍｇから表題化合物５１ｍｇ（９３％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２３Ｈ２５ＦＮ４Ｏ５：  ４５７、観測値：４５７．    １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．７１  （ｓ，１Ｈ），１０．９０  （ｓ，１Ｈ），７．７７  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，Ｊ  ＝  ９．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．７３  （ｓ，１Ｈ），７．６３  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９４  （ｍ，１Ｈ），６．８３  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．９７  （ｍ，１Ｈ），３．８０−３．４０  （ｍ，１１Ｈ），２．４５  （ｓ，３Ｈ），２．４３  （ｓ，３Ｈ）。
【００３２】
実施例８．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｒ）−１−ジメチルカルバモイル−２−ヒドロキシ−エチル−アミド
【００３３】
【化４１】
2009522276.tif 000017
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）６３ｍｇから表題化合物４０ｍｇ（６４％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２１Ｈ２３ＦＮ４Ｏ４：  ４１５、観測値：４１５．      １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．７１  （ｓ，１Ｈ），１０．９１  （ｓ，１Ｈ），７．７７  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，Ｊ  ＝  ９．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．７２  （ｓ，１Ｈ），７．５５  （ｄ，Ｊ  ＝  ７．６  Ｈｚ，１Ｈ），６．９３  （ｍ，１Ｈ），６．８４  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．９８  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ６．０  Ｈｚ，Ｊ  ＝  １４．０  Ｈｚ，１Ｈ），３．６７  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ６．４  Ｈｚ，Ｊ  ＝  １４．８  Ｈｚ，１Ｈ），３．５８  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ６．４  Ｈｚ，Ｊ  ＝  １４．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．１１  （ｓ，３Ｈ），２．８７  （ｓ，３Ｈ），２．４６  （ｓ，３Ｈ），２．４４  （ｓ，３Ｈ）。
【００３４】
実施例９．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（Ｒ）−１−ヒドロキシメチル−２−（モルホリン−４−イル）−２−オキソ−エチル）−アミド
【００３５】
【化４２】
2009522276.tif 000018
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）６３ｍｇから表題化合物３２ｍｇ（４７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２３Ｈ２５ＦＮ４Ｏ５：  ４５７、観測値：４５７．    １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．７１  （ｓ，１Ｈ），１０．９０  （ｓ，１Ｈ），７．７６  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，９．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．７２  （ｓ，１Ｈ），７．６３  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９２  （ｍ，１Ｈ），６．８３  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．９６  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ６．４  Ｈｚ，Ｊ  ＝  １４．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．７４  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ６．４  Ｈｚ，Ｊ  ＝  １４．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．６５  -  ３．３０  （ｍ，９Ｈ），２．４６  （ｓ，３Ｈ），２．４３  （ｓ，３Ｈ）。
【００３６】
実施例１０．（Ｓ）−２−（｛５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル｝−アミノ）−Ｎ＊１＊、Ｎ＊１＊、Ｎ＊４＊、Ｎ＊４＊−テトラメチル−スクシンアミド
【００３７】
【化４３】
2009522276.tif 000019
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）４２ｍｇから表題化合物３０ｍｇ（７３％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２４Ｈ２８ＦＮ５Ｏ４：  ４７０、観測値：４７０．    １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．６９  （ｓ，１Ｈ），１０．８９  （ｓ，１Ｈ），７．９５  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．７５  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．０  Ｈｚ，９．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．７０  （ｓ，１Ｈ），６．９３  （ｍ，１Ｈ），６．８３  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，８．４  Ｈｚ，１Ｈ），５．２６  （ｍ，１Ｈ），３．０８  （ｓ，３Ｈ），２．９８  （ｓ，３Ｈ），２．８４  （ｓ，３Ｈ），２．８０  （ｓ，３Ｈ），２．５５  （ｍ，２Ｈ），２．４０  （ｓ，３Ｈ），２．３７  （ｓ，３Ｈ）。
【００３８】
実施例１１．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［（Ｓ）−１−（モルホリン−４−カルボニル）−３−（モルホリン−４−イル）−３−オキソ−プロピル］−アミド
【００３９】
【化４４】
2009522276.tif 000020
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）５６ｍｇから表題化合物７０ｍｇ（９７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２８Ｈ３２ＦＮ５Ｏ６：  ５５４、観測値：５５４．      １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．６８  （ｓ，１Ｈ），１０．９１  （ｓ，１Ｈ），８．０８  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．７６  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，９．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．７１  （ｓ，１Ｈ），６．９３  （ｍ，１Ｈ），６．８３  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，８．４  Ｈｚ，１Ｈ），５．２８  （ｍ，１Ｈ），３．７５  （ｍ，２Ｈ），３．７０−２．５０  （ｍ，１６Ｈ），２．４１  （ｓ，３Ｈ），２．３８  （ｓ，３Ｈ）。
【００４０】
実施例１２．（Ｓ）−２−（｛５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸ビス−ジメチルアミド
【００４１】
【化４５】
2009522276.tif 000021
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）７５ｍｇから表題化合物６０ｍｇ（７８％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２５Ｈ３０ＦＮ５Ｏ４：  ４８４、観測値：４８４．      １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．６９  （ｓ，１Ｈ），１０．８８  （ｓ，１Ｈ），７．７５  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，９．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．７１  （ｓ，１Ｈ），７．７０  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９３  （ｍ，１Ｈ），６．８４  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．８８  （ｍ，１Ｈ），３．１３  （ｓ，３Ｈ），２．９４  （ｓ，３Ｈ），２．８６  （ｓ，３Ｈ），２．８２  （ｓ，３Ｈ），２．４４  （ｓ，３Ｈ），２．４２  （ｓ，３Ｈ），２．３４  （ｍ，２Ｈ），１．９５  （ｍ，１Ｈ），１．７４  （ｍ，１Ｈ）。
【００４２】
実施例１３．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［（Ｓ）−１−（モルホリン−４−カルボニル）−４−（モルホリン−４−イル）−４−オキソ−ブチル］−アミド
【００４３】
【化４６】
2009522276.tif 000022
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）７５ｍｇから表題化合物８２ｍｇ（９４％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２９Ｈ３４ＦＮ５Ｏ６：  ５６８、観測値：５６８．      １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．７０  （ｓ，１Ｈ），１０．９１  （ｓ，１Ｈ），８．３０  （ｍ，１Ｈ），７．７８  （ｍ，１Ｈ），７．７２  （ｓ，１Ｈ），６．９２  （ｍ，１Ｈ），６．８４  （ｍ，１Ｈ），４．９０  （ｍ，１Ｈ），３．８０  -  ３．３５  （ｍ，９Ｈ），３．１３  （ｍ，７Ｈ），２．４５  （ｓ，３Ｈ），２．４３  （ｓ，３Ｈ），２．５６  -  ２．３５  （ｍ，２Ｈ），１．９７  （ｍ，１Ｈ），１．７６  （ｍ，１Ｈ）。
【００４４】
実施例１４．（Ｓ）−４−ジメチルカルバモイル−２−（｛５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル｝−アミノ）−酪酸
【００４５】
【化４７】
2009522276.tif 000023
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）５０ｍｇから表題化合物４４ｍｇ（８１％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２３Ｈ２５ＦＮ４Ｏ５：  ４５７、観測値：４５７。
【００４６】
実施例１５．（Ｓ）−２−（｛５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル｝−アミノ）−５−モルホリン−４−イル−５−オキソ−ペンタン酸
【００４７】
【化４８】
2009522276.tif 000024
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）５０ｍｇから表題化合物４０ｍｇ（６７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２５Ｈ２７ＦＮ４Ｏ６：  ４９９、観測値：４９９．    １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．６９  （ｓ，１Ｈ），１２．５５  （ｓ，１Ｈ），１０．８９  （ｓ，１Ｈ），７．８８  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．７５  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，Ｊ  ＝  ９．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．７２  （ｓ，１Ｈ），６．９３  （ｍ，１Ｈ），６．８４  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．３６  （ｍ，１Ｈ），３．５３  （ｍ，４Ｈ），３．４２  （ｍ，４Ｈ），３．３１  （ｍ，２Ｈ），２．４４  （ｓ，３Ｈ），２．４２  （ｓ，３Ｈ），２．０８  （ｍ，１Ｈ），１．９３  （ｍ，１Ｈ）。
【００４８】
実施例１６．（Ｒ）−２−（｛５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル｝−アミノ）−５−モルホリン−４−イル−５−オキソ−ペンタン酸
【００４９】
【化４９】
2009522276.tif 000025
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）３７ｍｇから表題化合物３７ｍｇ（８４％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２５Ｈ２７ＦＮ４Ｏ６：  ４９９、観測値：４９９．    １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．６９  （ｓ，１Ｈ），１２．５７  （ｓ，１Ｈ），１０．９０  （ｓ，１Ｈ），７．８８  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．７６  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．８  Ｈｚ，９．２  Ｈｚ，１Ｈ），７．７２  （ｓ，１Ｈ），６．９２  （ｍ，１Ｈ），６．８４  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．３７  （ｍ，１Ｈ），３．５３  （ｍ，３Ｈ），３．４３  （ｍ，４Ｈ），３．３１  （ｍ，３Ｈ），２．４５  （ｓ，３Ｈ），２．４２  （ｓ，３Ｈ），２．０８  （ｍ，１Ｈ），１．９３  （ｍ，１Ｈ）。
【００５０】
実施例１７．（Ｒ）−２−（｛５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボニル｝−アミノ）−ペンタン二酸ビス−ジメチルアミド
【００５１】
【化５０】
2009522276.tif 000026
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）６０ｍｇから表題化合物２８ｍｇ（４１％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２５Ｈ３０ＦＮ５Ｏ４：  ４８４、観測値：４８４．    １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．６９  （ｓ，１Ｈ），１０．９０  （ｓ，１Ｈ），７．７６  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，９．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．７３  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，１Ｈ），７．７２  （ｓ，１Ｈ），６．９３  （ｍ，１Ｈ），６．８４  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．８８  （ｍ，１Ｈ），３．１３  （ｓ，３Ｈ），２．９３  （ｓ，３Ｈ），２．８６  （ｓ，３Ｈ），２．８２  （ｓ，３Ｈ），２．４４  （ｓ，３Ｈ），２．４２  （ｓ，３Ｈ），２．５０  −  ２．３０  （ｍ，２Ｈ），１．９５  （ｍ，１Ｈ），１．７４  （ｍ，１Ｈ）。
【００５２】
実施例１８．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸［（Ｒ）−１−（モルホリン−４−カルボニル）−４−（モルホリン−４−イル）−４−オキソ−ブチル］−アミド
【００５３】
【化５１】
2009522276.tif 000027
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）６０ｍｇから表題化合物３０ｍｇ（３８％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２９Ｈ３４ＦＮ５Ｏ６：  ５６８、観測値：５６８．      １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．７０  （ｓ，１Ｈ），１０．９１  （ｓ，１Ｈ），７．７７  （ｍ，２Ｈ），７．７２  （ｓ，１Ｈ），６．９３  （ｍ，１Ｈ），６．８３  （ｍ，１Ｈ），４．９１  （ｍ，１Ｈ），３．９０  -  ３．３５  （ｍ，１６Ｈ），２．４５  （ｓ，３Ｈ），２．４２  （ｓ，３Ｈ），２．５０  -  ２．３０  （ｍ，２Ｈ），１．９８  （ｍ，１Ｈ），１．７７  （ｍ，１Ｈ）。
【００５４】
実施例１９．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（１Ｓ，２Ｓ）−１−ジメチルカルバモイル−２−ヒドロキシ−プロピル）−アミド
【００５５】
【化５２】
2009522276.tif 000028
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）１２２ｍｇから表題化合物８４ｍｇ（６７％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２２Ｈ２５ＦＮ４Ｏ４：  ４２９、観測値：４２９．      １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．６９  （ｓ，１Ｈ），１０．８９  （ｓ，１Ｈ），７．７５  （ｍ，１Ｈ），７．７０  （ｓ，１Ｈ），７．６１  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．８  Ｈｚ，１Ｈ），６．９２  （ｍ，１Ｈ），６．８３  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．８１  （ｔ，Ｊ  ＝  ４．４  Ｈｚ，１Ｈ），３．９０  （ｍ，１Ｈ），３．１２  （ｓ，３Ｈ），２．８６  （ｓ，３Ｈ），２．４２  （ｓ，３Ｈ），２．３９  （ｓ，３Ｈ），１．１２  （ｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００５６】
実施例２０．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（１Ｒ，２Ｒ）−１−ジメチルカルバモイル−２−ヒドロキシ−プロピル）−アミド
【００５７】
【化５３】
2009522276.tif 000029
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）１２２ｍｇから表題化合物７８ｍｇ（６２％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２２Ｈ２５ＦＮ４Ｏ４：  ４２９、観測値：４２９．      １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．７０  （ｓ，１Ｈ），１０．９０  （ｓ，１Ｈ），７．７７  （ｍ，１Ｈ），７．７１  （ｓ，１Ｈ），７．６２  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，１Ｈ），６．９３  （ｍ，１Ｈ），６．８４  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．８２  （ｔ，Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，１Ｈ），３．９２  （ｍ，１Ｈ），３．１３  （ｓ，３Ｈ），２．８７  （ｓ，３Ｈ），２．４３  （ｓ，３Ｈ），２．４０  （ｓ，３Ｈ），１．１５  （ｄ，Ｊ  ＝  ２．８  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００５８】
実施例２１．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（１Ｒ，２Ｓ）−１−ジメチルカルバモイル−２−ヒドロキシ−プロピル）−アミド
【００５９】
【化５４】
2009522276.tif 000030
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）１２２ｍｇから表題化合物９０ｍｇ（７２％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２２Ｈ２５ＦＮ４Ｏ４：  ４２９、観測値：４２９．      １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．７３  （ｓ，１Ｈ），１０．９１  （ｓ，１Ｈ），７．７７  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，６．４  Ｈｚ，１Ｈ），７．７３  （ｓ，１Ｈ），７．２９  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９３  （ｍ，１Ｈ），６．８４  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．８５  （ｍ，１Ｈ），３．９７  （ｍ，１Ｈ），３．１２  （ｓ，３Ｈ），２．８７  （ｓ，３Ｈ），２．４３  （ｓ，３Ｈ），２．４１  （ｓ，３Ｈ），１．１０  （ｄ，Ｊ  ＝  ５．６  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００６０】
実施例２２．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸（（１Ｓ，２Ｒ）−１−ジメチルカルバモイル−２−ヒドロキシ−プロピル）−アミド
【００６１】
【化５５】
2009522276.tif 000031
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）１２２ｍｇから表題化合物９０ｍｇ（７２％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２２Ｈ２５ＦＮ４Ｏ４：  ４２９、観測値：４２９．      １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．７３  （ｓ，１Ｈ），１０．９１  （ｓ，１Ｈ），７．７６  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．８  Ｈｚ，６．８  Ｈｚ，１Ｈ），７．７３  （ｓ，１Ｈ），７．３０  （ｄ，Ｊ  ＝  ８．０  Ｈｚ，１Ｈ），６．９３  （ｍ，１Ｈ），６．８４  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．８  Ｈｚ，８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．８５  （ｍ，１Ｈ），３．９８  （ｍ，１Ｈ），３．１２  （ｓ，３Ｈ），２．８６  （ｓ，３Ｈ），２．４８  （ｓ，３Ｈ），２．４５  （ｓ，３Ｈ），１．１０  （ｄ，Ｊ  ＝  ６．０  Ｈｚ，３Ｈ）。
【００６２】
実施例２３．５−［５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−インドール−（３Ｚ）−イリデンメチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボン酸ジメチルカルバモイルメチル−アミド
【００６３】
【化５６】
2009522276.tif 000032
分取ＨＰＬＣにより出発材料（活性エステル）６６ｍｇから表題化合物２７ｍｇ（４６％）を得た。ＬＣ−ＭＳ：２５４ｎｍでの単一のピーク、ＭＨ＋  計算値Ｃ２０Ｈ２１ＦＮ４Ｏ３：  ３８５、観測値：３８５．      １Ｈ−ＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６，４００  ＭＨｚ），δ  １３．７１  （ｓ，１Ｈ），１０．９０  （ｓ，１Ｈ），７．７６  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，Ｊ  ＝  ９．６  Ｈｚ，１Ｈ），７．７３  （ｓ，１Ｈ），７．５５  （ｔ，Ｊ  ＝  ５．６  Ｈｚ，１Ｈ），６．９３  （ｍ，１Ｈ），６．８４  （ｄｄ，Ｊ  ＝  ４．４  Ｈｚ，８．４  Ｈｚ，１Ｈ），４．０８  （ｄ，Ｊ  ＝  ５．６  Ｈｚ，２Ｈ），３．００  （ｓ，３Ｈ），２．８７  （ｓ，３Ｈ），２．４９  （ｓ，３Ｈ），２．４６  （ｓ，３Ｈ）。
【００６４】
ＶＥＧＦＲ生化学アッセイ
以下の手法に従い、英国ダンディー市にあるＵｐｓｔａｔｅ  Ｌｔｄにより、化合物の生化学活性を分析した。最終反応量２５μｌにおいて、ＫＤＲ（ｈ）（５〜１０ｍＵ）をＭＯＰＳ８ｍＭ  ｐＨ７．０、ＥＤＴＡ０．２ｍＭ、ミエリン塩基性蛋白質０．３３ｍｇ／ｍｌ、酢酸Ｍｇ１０ｍＭおよび［（−３３Ｐ−ＡＴＰ）（特異活性およそ５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、必要な場合は濃縮）でインキュベートした。ＭｇＡＴＰ混合物の添加により、反応を開始する。室温にて４０分間のインキュベーション後、３％リン酸溶液５μｌを添加することにより、反応を停止する。次いで、反応液１０μｌをＰ３０フィルターマットに滴下し、リン酸７５ｍＭで５分間に３回およびメタノールで１回洗浄後、乾燥し、シンチレーションでカウントした。
【００６５】
細胞アッセイ：ＨＵＶＥＣ：ＶＥＧＦ誘導性増殖
ＨＵＶＥＣ細胞のＶＥＧＦ誘導性増殖において、化合物の細胞活性を分析した。ＨＵＶＥＣ細胞（Ｃａｍｂｒｅｘ、ＣＣ−２５１７）を３７℃および５％ＣＯ２にてＥＧＭ（Ｃａｍｂｒｅｘ、ＣＣ−３１２４）で維持した。ＨＵＶＥＣ細胞を細胞密度５０００個／ウェル（９６ウェルプレート）にてＥＧＭにプレートした。細胞接着（１時間）後、ＥＧＭ培地をＥＢＭ（Ｃａｍｂｒｅｘ、ＣＣ−３１２９）＋０．１％ＦＢＳ（ＡＴＴＣ、３０−２０２０）に置き換え、細胞を３７℃にて２０時間インキュベートした。培地をＥＢＭ＋１％ＦＢＳに置き換え、化合物をＤＭＳＯで連続希釈し、細胞を添加し、最終濃度０〜５０００ｎＭおよび１％ＤＭＳＯにした。３７℃にて１時間のプレインキュベーション後、細胞をＶＥＧＦ（Ｓｉｇｍａ、Ｖ７２５９）１０ｎｇ／ｍｌで刺激し、３７℃にて４５時間インキュベートした。４時間のＢｒｄＵ  ＤＮＡ取り込みにより、細胞増殖を測定し、ＢｒｄＵ標識をＥＬＩＳＡ（Ｒｏｃｈｅ  ｋｉｔ、１６４７２２２９）により定量化し、Ｈ２ＳＯ４  １Ｍを使用して反応を停止した。吸光度を６９０ｎｍの参照波長を使用し、４５０ｎｍにて測定した。
【国際調査報告】
2009522276.tif 000058