(57)【要約】  化合物（ｔｒａｎｓ−４−｛４−［（｛５−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル｝カルボニル）アミノ］フェニル｝シクロヘキシル）酢酸の新規結晶形、ならびにそれらの結晶形の製造方法、それらを含む医薬組成物、および医療処置におけるそれらの結晶形の使用を提供する。2009539954.tif 000013
2009539954.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２−シータ（２θ）＝１６．８、２１．４および２２．７°にピークをもつ粉末Ｘ線回折パターンを有する（ｔｒａｎｓ−４−｛４−［（｛５−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル｝カルボニル）アミノ］フェニル｝シクロヘキシル）酢酸の結晶形。
【請求項２】
２−シータ（２θ）＝４．７、９．３、１６．８、２１．４および２２．７°にピークをもつ粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項１に記載の（ｔｒａｎｓ−４−｛４−［（｛５−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル｝カルボニル）アミノ］フェニル｝シクロヘキシル）酢酸の結晶形。
【請求項３】
実質的に図１に示す粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項１または２に記載の（ｔｒａｎｓ−４−｛４−［（｛５−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル｝カルボニル）アミノ］フェニル｝シクロヘキシル）酢酸の結晶形。
【請求項４】
２−シータ（２θ）＝８．４、１３．８および１６．７°にピークをもつ粉末Ｘ線回折パターンを有する（ｔｒａｎｓ−４−｛４−［（｛５−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル｝カルボニル）アミノ］フェニル｝シクロヘキシル）酢酸の結晶形。
【請求項５】
２−シータ（２θ）＝７．０、８．４、１３．８、１６．７、２１．６および２４．３°にピークをもつ粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項４に記載の（ｔｒａｎｓ−４−｛４−［（｛５−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル｝カルボニル）アミノ］フェニル｝シクロヘキシル）酢酸の結晶形。
【請求項６】
２−シータ（２θ）＝４．８、５．６、７．０、８．４、１３．８、１６．７、１９．５、２０．０、２１．６および２４．３°にピークをもつ粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項４または５に記載の（ｔｒａｎｓ−４−｛４−［（｛５−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル｝カルボニル）アミノ］フェニル｝シクロヘキシル）酢酸の結晶形。
【請求項７】
実質的に図５に示す粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項４、５または６に記載の（ｔｒａｎｓ−４−｛４−［（｛５−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル｝カルボニル）アミノ］フェニル｝シクロヘキシル）酢酸の結晶形。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物を医薬的に許容できる佐剤、希釈剤またはキャリヤーと混合して含む医薬製剤。
【請求項９】
医薬として使用するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載される化合物。
【請求項１０】
ＤＧＡＴ１の阻害が必要であるかまたは望ましい状態を処置する医薬を製造するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載される化合物の使用。
【請求項１１】
ＤＧＡＴ１の阻害が必要であるかまたは望ましい状態を処置する方法であって、療法有効量の請求項１〜７のいずれか１項に記載される化合物をその処置が必要な患者に投与することを含む前記方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
本発明は、新規な結晶性化合物、より具体的には下記の式（Ｉ）に示す（ｔｒａｎｓ−４−｛４−［（｛５−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル｝カルボニル）アミノ］フェニル｝シクロヘキシル）酢酸の新規結晶形に関する。この化合物は、アセチルＣｏＡ（アセチル補酵素Ａ）：ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ１）活性の阻害薬である。本発明はまた、それらの結晶形の製造方法、それらの結晶形を含む医薬組成物、および医療処置におけるそれらの結晶形の使用に関する。
【０００２】
【化１】
2009539954.tif 000003
【０００３】
本出願人の出願中の国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ２００５／００４７２６には、ＤＧＡＴ１を阻害するオキサジアゾール含有化合物が記載されている。その出願に式（Ｉ）の化合物が例示され（国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ２００５／００４７２６；ＷＯ２００６／０６４１８９の例５４１）、酢酸からの再結晶後に結晶性固体として得られ、以後は結晶形１として知られている。結晶形１に関する粉末Ｘ線回折パターンを図２Ａに示し、結晶形１に関する酢酸溶媒和物の熱データを図２Ｂに示す。
【０００４】
本発明者らは今回、意外かつ予想外に式（Ｉ）の薬剤を他の結晶形で製造しうることを見いだした；以下において結晶形２および結晶形３と呼ぶ。そのような多形は、異なる溶解性および／または安定性および／または生物学的利用能および／または異なる不純物プロフィール（たとえば製造および／または単離の方法のため生じる微量の不純物）、ならびに／あるいは取扱い、微細化および／または錠剤成形がより容易な結晶形をもつ可能性がある。
【０００５】
本発明によれば、２−シータ（２θ）＝２１．４および２２．７°にピークをもつ粉末Ｘ線回折パターンを有する（Ｉ）の結晶形、結晶形２が提供される。
本発明によれば、２−シータ（２θ）＝１６．８、２１．４および２２．７°にピークをもつ粉末Ｘ線回折パターンを有する（Ｉ）の結晶形、結晶形２が提供される。
【０００６】
本発明によれば、２−シータ（２θ）＝４．７、９．３、１６．８、２１．４および２２．７°にピークをもつ粉末Ｘ線回折パターンを有する（Ｉ）の結晶形、結晶形２が提供される。
【０００７】
本発明によれば、２−シータ（２θ）＝４．７、９．３、１６．８、２１．４、２２．７、２３．３および２５．９°にピークをもつ粉末Ｘ線回折パターンを有する（Ｉ）の結晶形、結晶形２が提供される。
【０００８】
本発明によれば、２−シータ（２θ）＝４．７、９．３、１６．２、１６．８、１７．７、１８．１、１８．６、２１．４、２２．７、２３．３、２５．９および２９．２°にピークをもつ粉末Ｘ線回折パターンを有する（Ｉ）の結晶形、結晶形２が提供される。
【０００９】
結晶形２に関する粉末Ｘ線回折パターンを図１に示す。結晶形１と２の比較を図３に示し、結晶形２に関する熱データを図４に示す（無水物形の結晶形２）。
本発明によれば、実質的に図１に示す粉末Ｘ線回折パターンを有する（Ｉ）の結晶形、結晶形２が提供される。
【００１０】
本発明によれば、２−シータ（２θ）＝８．４、１３．８および１６．７°にピークをもつ粉末Ｘ線回折パターンを有する（Ｉ）の結晶形、結晶形３も提供される。
本発明によれば、２−シータ（２θ）＝７．０、８．４、１３．８、１６．７、２１．６および２４．３°にピークをもつ粉末Ｘ線回折パターンを有する（Ｉ）の結晶形、結晶形３も提供される。
【００１１】
本発明によれば、２−シータ（２θ）＝４．８、５．６、７．０、８．４、１３．８、１６．７、１９．５、２０．０、２１．６および２４．３°にピークをもつ粉末Ｘ線回折パターンを有する（Ｉ）の結晶形、結晶形３も提供される。
【００１２】
結晶形３に関する粉末Ｘ線回折パターンを図５に示し、結晶形３に関する熱データを図６に示す（無水物形の結晶形３）。
本発明によれば、実質的に図５に示す粉末Ｘ線回折パターンを有する（Ｉ）の結晶形、結晶形３も提供される。
【００１３】
表１、２および３は、それぞれ結晶形２、１および３に関する主ピークを示す。
本発明により得られる結晶形２および３は、それぞれ実質的に化合物（Ｉ）の他の結晶形および非結晶形を含まない。用語”実質的に他の結晶形および非結晶形を含まない”は、目的結晶形が化合物（Ｉ）の他のいずれかの結晶形を５０％未満、好ましくは２０％未満、より好ましくは１０％未満、より好ましくは５％未満含有することを意味すると理解すべきである。
【００１４】
粉末Ｘ線回折パターンは、結晶性材料の試料をＳｉｅｍｅｎｓシリコン単結晶（ＳＳＣ）ウェーハマウントに載せ、試料を顕微鏡スライドガラスで広げて薄層にすることにより測定された。試料を毎分３０回転で遠心し（計測統計値を改善するため）、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄ５０００粉末Ｘ線回折計（Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ，Ｂａｎｎｅｒ  Ｌａｎｅ  Ｃｏｖｅｎｔｒｙ  ＣＶ４  ９ＧＨ）を用いて４０ｋＶおよび４０ｍＡで作動する銅ロングファインフォーカス（ｌｏｎｇ−ｆｉｎｅ  ｆｏｃｕｓ）管により発生する波長１．５４０６オングストロームのＸ線で照射した。コリメートしたＸ線源を、Ｖ２０に設定した自動開度可変スリットに通し、反射光を２ｍｍの散乱防止スリットおよび０．２ｍｍの検出スリットへ向けた。試料を０．０２°の２−θ増分につき１秒間（連続走査モード）、２°から４０°の２−θ範囲にわたってθ−θモードで露光した。この計測器は検出器としてシンチレーション計数器を備えていた。制御およびデータ取得は、Ｄｉｆｆｒａｃ＋ソフトウェアで作動するＤｅｌｌ  Ｏｐｔｉｐｌｅｘ  ６８６  ＮＴ  ４．０  Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎにより行われた。
【００１５】
測定条件（たとえば装置、試料調製または使用する機器）に応じて１以上の測定誤差をもつ粉末Ｘ線回折パターンが得られる可能性があることは当業者に自明である。特に、粉末Ｘ線回折パターンの強度が測定条件および試料調製に応じて変動する可能性があることは一般に知られている。たとえば、ピークの相対強度はたとえば３０ミクロンを超える大きさの結晶粒および不統一なアスペクト比により影響を受ける可能性があり、これが試料の分析に影響を及ぼす可能性があることを、当業者は認識しているであろう。反射の位置は回折計中に試料を置く厳密な高さおよび回折計のゼロ検量により影響を受ける可能性があることも、当業者は認識しているであろう。試料の表面平面性もわずかな影響を及ぼす可能性がある。したがって、本明細書に提示した回折パターンデータを絶対と解釈すべきでないことは、当業者に認識されるであろう（これ以上の情報についてはＪｅｎｋｉｎｓ，Ｒ  ＆  Ｓｎｙｄｅｒ，Ｒ．Ｌ．  ’Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｘ−Ｒａｙ  Ｐｏｗｄｅｒ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｒｙ’  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９９６を参照）。
【００１６】
したがって、化合物（Ｉ）の結晶形はそれぞれ図１および５に示す粉末Ｘ線回折パターンと同一の粉末Ｘ線回折パターンを提示する結晶に限定されず、それぞれ図１および５に示すものと実質的に同じ粉末Ｘ線回折パターンを提示する結晶はいずれも本発明の範囲に含まれることを理解すべきである。
【００１７】
結晶形２および３は、標準法に従って示差走査熱量測定（ＤＳＣ）および熱重量測定分析（ＴＧＡ）など当技術分野で既知の分析技術により特性分析することもできる；たとえばＨｏｅｈｎｅ，Ｇ．Ｗ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ（１９９６），Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ベルリン、に記載。
【００１８】
ＤＳＣの開始／ピーク温度値およびＴＧＡに関する重量損失値が機器毎または試料毎にわずかに変動する可能性があり、したがって熱トレース図に引用した数値を絶対とみなすべきでないことは理解されるであろう。用いた技術を以下にさらに詳細に記載する。
【００１９】
示差走査熱量測定は、分析機Ｍｅｔｔｌｅｒ  ＤＳＣ８２０ｅを用いて実施された。一般に、有孔蓋付きの４０μｌアルミニウム皿に入れた５ｍｇ未満の材料を温度範囲２５〜３２５℃にわたって毎分１０℃の一定の加熱速度で加熱した。窒素を用いるパージガスを使用した−流速毎分１００ｍｌ。
【００２０】
熱重量測定分析は分析機Ｍｅｔｔｌｅｒ  ＴＧ８５１を用いて実施された。一般に、７０μｌのアロックス（ａｌｏｘ）（酸化アルミニウム）るつぼに入れた３〜１２ｍｇの材料を温度範囲２５〜３２５℃にわたって毎分１０℃の一定の加熱速度で加熱した。ヘリウムを用いるパージガスを使用した−流速毎分５０ｍｌ。
【００２１】
結晶形２および３は後記の実施例の説明に従って結晶化できる。
したがって本発明の他の観点においては、式（Ｉ）の化合物の結晶形２の製造方法であって、化合物（Ｉ）を製造し、水およびメタノールから単離し、次いで得られた固体の水中懸濁液を撹拌し（たとえば１〜５日間、たとえば３日間）、得られた固体を単離する（たとえば濾過、場合により水で洗浄、および乾燥による）ことを含む方法が提供される。
【００２２】
本発明の他の観点においては、式（Ｉ）の化合物の結晶形２の製造方法であって、化合物（Ｉ）の水中懸濁液を撹拌することを含む方法が提供される。
本発明の他の観点においては、式（Ｉ）の化合物の結晶形３の製造方法であって、アセトニトリル中における化合物（Ｉ）の結晶形１および２の混合物を高められた温度（たとえば３０〜７０℃、特に５０℃またはその付近）で撹拌し（たとえば１〜５日間、たとえば３日間）、得られた固体を単離する（たとえば濾過、場合により適切な溶媒で洗浄、および乾燥による）ことを含む方法が提供される。
【００２３】
本発明の他の態様によれば、本明細書に開示するいずれかの方法または実施例により得られる新規結晶形の式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の他の観点によれば、前記または後記に定める結晶形２または結晶形３を医薬的に許容できる賦形剤またはキャリヤーと共に含む医薬組成物が提供される。
【００２４】
本発明組成物は下記のために適切な剤形であってもよい：経口用（たとえば錠剤、トローチ剤、硬または軟カプセル剤、水性または油性懸濁液剤、乳剤、分散性の散剤または顆粒剤、シロップ剤またはエリキシル剤）、局所用（たとえばクリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、または水性もしくは油性の液剤もしくは懸濁液剤）、吸入による投与（たとえば微細に分割した散剤または液体エアゾル剤）、吹入による投与（たとえば微細に分割した散剤）、または非経口投与（たとえば、静脈内、皮下、筋肉内または筋肉内投与用の無菌の水性もしくは油性液剤、または直腸投与用坐剤）。
【００２５】
本発明の組成物は、当技術分野で周知の常法によって一般的な医薬賦形剤を用いて得ることができる。したがって、経口用組成物はたとえば１種類以上の着色剤、甘味剤、着香剤および／または保存剤を含有することができる。
【００２６】
錠剤配合物に適切な医薬的に許容できる賦形剤には、たとえば不活性希釈剤、たとえば乳糖、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウムまたは炭酸カルシウム、造粒剤および崩壊剤、たとえばトウモロコシデンプンまたはアルゲン酸；結合剤、たとえばデンプン；滑沢剤、たとえばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルク；保存剤、たとえばｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはプロピル；ならびに酸化防止剤、たとえばアスコルビン酸が含まれる。錠剤配合物はコーティングしなくてもよく、あるいはそれらの崩壊およびその後の消化管内における有効成分の吸収を改変するために、あるいはそれらの安定性および／または外観を改善するために、コーティングしてもよく、いずれの場合も当技術分野で周知の一般的なコーティング剤および方法を用いる。
【００２７】
経口用組成物は、有効成分を不活性固体希釈剤、たとえば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合した硬ゼラチンカプセル剤、あるいは有効成分を水または油、たとえばラッカセイ油、流動パラフィンもしくはオリーブ油と混合した軟ゼラチンカプセル剤の形であってもよい。
【００２８】
水性懸濁液剤は、一般に有効成分を微粉末状で１種類以上の下記のものと共に含有する：懸濁化剤、たとえばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニル−ピロリドン、トラガントゴムおよびアラビアゴム；分散剤または湿潤剤、たとえばレシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸の縮合物（たとえばポリオキシエチレンステアレート）、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールの縮合物、たとえばヘプタデカエチレンオキシセタノール、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合物、たとえばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールの縮合物、たとえばヘプタデカエチレンオキシセタノール、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合物、たとえばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、またはエチレンオキシドと脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導される部分エステルとの縮合物、たとえばポリエチレンソルビタンモノオレエート。水性懸濁液剤は、１種類以上の保存剤（たとえばｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはプロピル）、酸化防止剤（たとえばアスコルビン酸）、着色剤、着香剤、および／または甘味剤（たとえばショ糖、サッカリンまたはアスパルテーム）を含有することもできる。
【００２９】
油性懸濁液剤は、有効成分を植物油（たとえばラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油またはヤシ油）または鉱油（たとえば流動パラフィン）に懸濁させることにより配合することができる。油性懸濁液剤は、増粘剤、たとえば密ろう、パラフィンまたはセチルアルコールを含有することもできる。美味な経口製剤を得るために、甘味剤、たとえば前記のもの、および着香剤を添加することができる。これらの組成物は、酸化防止剤、たとえばアスコルビン酸の添加により保存処理することができる。
【００３０】
水の添加により水性懸濁液を調製するのに適切な分散性の散剤および顆粒剤は、一般に有効成分を分散剤または湿潤剤、懸濁化剤、および１種類以上の保存剤と共に含有する。適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤は既に前記に述べたものにより例示される。追加の賦形剤、たとえば甘味剤、着香剤および着色剤が存在してもよい。
【００３１】
本発明の医薬組成物は、水中油型乳剤の形であってもよい。油相は植物油、たとえばオリーブ油もしくはラッカセイ油、または鉱油、たとえば流動パラフィン、またはこれらのいずれかの混合物であってもよい。適切な乳化剤は、たとえば天然ゴム、たとえばアラビアゴムまたはトラガントゴム、天然ホスファチド、たとえば大豆、レシチン、脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導されるエステルまたは部分エステル（たとえばソルビタンモノオレエート）、およびこの部分エステルとエチレンオキシドの縮合物、たとえばポリエチレンソルビタンモノオレエートであってもよい。乳剤は甘味剤、着香剤および保存剤を含有してもよい。
【００３２】
シロップ剤およびエリキシル剤には、甘味剤、たとえばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、アスパルテームまたはショ糖を配合することができ、粘滑剤、保存剤、着香剤および／または着色剤を含有させてもよい。
【００３３】
医薬組成物は、無菌の注射用水性または油性懸濁液剤の形であってもよく、これらは既知の手法に従い、前記に述べた１種類以上の適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて配合できる。無菌注射用製剤は、非経口用として許容できる無毒性の希釈剤または溶剤中における、無菌の注射用液剤または懸濁液剤、たとえば１，３−ブタンジオール中の液剤であってもよい。
【００３４】
吸入による投与のための組成物は、微細に分割した固体または液滴を含有するエアゾールとして有効成分を配分するように調整した、一般的な加圧エアゾール剤の形であってもよい。一般的なエアゾール噴射剤、たとえば揮発性のフッ素化炭化水素または炭化水素を使用でき、計量した量の有効成分を配分するようにエアゾール器具を調整するのが好都合である。
【００３５】
配合物に関するこれ以上の情報については、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｃｏｒｗｉｎ  Ｈａｎｓｃｈ；編集長），Ｖｏｌｕｍｅ  ５，Ｃｈａｐｔｅｒ  ２５．２，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ  １９９０、および疎水性薬物の経口による生物学的利用能の改善のための粒度低下：Ｇ．Ｇ．Ｌｉｖｅｒｓｉｄｇｅ，Ｋ．Ｃ  Ｃｕｎｄｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，１２（１９９５），９１−９７が参照される（これらの関連セクションを本明細書に援用する）。
【００３６】
１種類以上の賦形剤と組み合わせて単一剤形を調製するための有効成分の量は、処置されるホストおよび特定の投与経路に応じて必然的に異なるであろう。たとえばヒトに経口投与するための配合物は、一般に０．５ｍｇ〜２ｇの有効薬剤化合物を適切かつ好都合な量の賦形剤と混合して含有するであろう；賦形剤の量は全組成物の約５〜約９８重量％であってよい。投与単位剤形は、一般に約１〜約５００ｍｇの有効成分を含有するであろう。投与経路および投与計画に関するこれ以上の情報については、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｃｏｒｗｉｎ  Ｈａｎｓｃｈ；編集長），Ｖｏｌｕｍｅ  ５，Ｃｈａｐｔｅｒ  ２５．３，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ  １９９０が参照される。
【００３７】
本発明の他の観点によれば、ヒトまたは動物の身体を療法により処置する方法に使用するための、前記または後記に定める結晶形２または結晶形３が提供される。
本発明者らは、本発明化合物がＤＧＡＴ１活性を阻害し、したがってそれらがトリグリセリド合成および／または体重減量および／または血糖低下に及ぼす効果のため重要であることを見いだした。ＤＧＡＴ１の役割に関する情報は、本出願人の国際特許出願ＷＯ２００５／０４４２５０およびそれの参考文献に含まれている。
【００３８】
本発明の他の態様は、医薬として使用するための結晶形２または結晶形３である。好都合には、これはヒトなどの温血動物においてＤＧＡＴ１活性の阻害を発生させる医薬として使用するための結晶形２または結晶形３である。特に、これはヒトなどの温血動物において糖尿病および／または肥満症を処置する医薬として使用するための結晶形２または結晶形３である。
【００３９】
したがって本発明の他の観点によれば、ヒトなどの温血動物においてＤＧＡＴ１活性の阻害を発生させる際に用いる医薬の製造における、結晶形２または結晶形３の使用が提供される。
【００４０】
したがって本発明の他の観点によれば、ヒトなどの温血動物において糖尿病および／または肥満症を処置する際に用いる医薬の製造における、結晶形２または結晶形３の使用が提供される。
【００４１】
本発明の他の観点によれば、ヒトなどの温血動物においてＤＧＡＴ１活性の阻害を発生させる際に使用するための、結晶形２または結晶形３を医薬的に許容できる賦形剤またはキャリヤーと共に含む医薬組成物が提供される。
【００４２】
本発明の他の観点によれば、ヒトなどの温血動物において糖尿病および／または肥満症を処置する際に使用するための、結晶形２または結晶形３を医薬的に許容できる賦形剤またはキャリヤーと共に含む医薬組成物が提供される。
【００４３】
本発明の他の観点によれば、その処置を必要とするヒトなどの温血動物においてＤＧＡＴ１活性の阻害を発生させる方法であって、該動物に有効量の前記または後記に定める結晶形２または結晶形３を投与することを含む方法が提供される。
【００４４】
本発明の他の観点によれば、その処置を必要とするヒトなどの温血動物において糖尿病および／または肥満症を処置する方法であって、該動物に有効量の前記または後記に定める結晶形２または結晶形３を投与することを含む方法が提供される。
【００４５】
前記のように、特定の疾病状態の治療処置または予防処置に必要な投与量は、処置されるホスト、投与経路、および処置する疾病の重症度に応じて必然的に異なるであろう。好ましくは、１〜５０ｍｇ／ｋｇの一日量を使用する。ただし一日量は、処置されるホスト、特定の投与経路、および処置する疾病の重症度に応じて必然的に異なるであろう。したがって、最適量はいずれか特定の患者を処置する専門家が決定できる。前記のように、本発明に定める化合物はそれらがＤＧＡＴ１の活性を阻害する能力のため重要である。したがって本発明化合物は、糖尿病、より具体的にはＩＩ型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）およびそれから生じる合併症（たとえば網膜障害、神経障害および腎障害）、糖耐性障害（ＩＧＴ）、空腹時血糖障害、代謝性アシドーシス、ケトーシス、代謝障害症候群、関節炎、骨粗鬆症、肥満症および肥満症関連障害（末梢血管疾患（間欠性跛行を含む）、心不全およびある種の心筋障害、心筋虚血、脳虚血および再潅流、高脂血症、アテローム硬化症、不妊症ならびに多嚢胞卵巣症候群を含む）を含む広範な疾病状態の予防、遅延または治療に有用な可能性がある；本発明化合物は、筋虚弱、皮膚疾患、たとえばアクネ、アルツハイマー病、各種の免疫調節性疾患（たとえば乾癬）、ＨＩＶ感染症、炎症性腸症候群および炎症性腸疾患、たとえばクローン病および潰瘍性大腸炎にも有用である。
【００４６】
特に、本発明化合物は、糖尿病および／または肥満症および／または肥満症関連障害の予防、遅延または治療に重要である。１観点において、本発明化合物は糖尿病の予防、遅延または治療に用いられる。他の観点において、本発明化合物は肥満症の予防、遅延または治療に用いられる。他の観点において、本発明化合物は肥満症関連障害の予防、遅延または治療に用いられる。
【００４７】
本明細書に記載するＤＧＡＴ１活性の阻害を唯一の療法として、または処置すべき適応症に対する他の１種類以上の物質および／または処置と組み合わせて適用できる。そのような併用処置は、処置の個々の構成要素の同時、逐次または個別投与により達成できる。同時処置は、単一錠剤または個別の錠剤中において行なうことができる。たとえば、そのような併用処置はメタボリックシンドローム［腹部肥満症（人種別および性別のカットポイントに対する腰周囲により測定）プラス下記のうちの２つとして定義：高トリグリセリド血症（＞１５０ｍｇ／ｄｌ；１．７ｍｍｏｌ／ｌ）；低ＨＤＬｃ（男性については＜４０ｍｇ／ｄｌまたは＜１．０３ｍｍｏｌ／ｌ、女性については＜５０ｍｇ／ｄｌまたは１．２９ｍｍｏｌ／ｌ）、または低ＨＤＬ（高密度リポタンパク質）のための治療中；高血圧症（ＳＢＰ＞１３０ｍｍＨｇ，ＤＢＰ＞８５ｍｍＨｇ）または高血圧症のための治療中；および高血糖症（空腹時血糖値＞１００ｍｇ／ｄｌもしくは５．６ｍｍｏｌ／ｌ、または糖耐性障害もしくは既存の糖尿病）−Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ、およびＩＡＳ／ＮＣＥＰから入力］の処置に有益な可能性がある。
【００４８】
そのような併用療法には下記の主カテゴリーを含めることができる：
１）抗肥満症療法薬、たとえば食物摂取、栄養素吸収またはエネルギー消費に作用することにより体重減量を生じるもの、たとえばオルリスタット（ｏｒｌｉｓｔａｔ）、シブトラミン（ｓｉｂｕｔｒａｍｉｎｅ）など；
２）インスリン分泌促進薬：スルホニル尿素類（たとえばグリベンクラミド（ｇｌｉｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ）、グリピジド（ｇｌｉｐｉｚｉｄｅ））、食事グルコース調節薬（たとえばレパグリニド（ｒｅｐａｇｌｉｎｉｄｅ）、ナテグリニド（ｎａｔｅｇｌｉｎｉｄｅ））を含む；
３）インクレチン作用を改善する薬剤（たとえばジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害薬、およびＧＬＰ−１アゴニスト）；
４）インスリン感受性増強薬：ＰＰＡＲガンマアゴニスト（たとえばピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）およびロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ））、ならびにＰＰＡＲアルファおよびガンマ活性を合わせもつ薬剤を含む；
５）肝グルコースバランスを調節する薬剤（たとえばメトホルミン（ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ）、フルクトース１，６−ビスホスファターゼ阻害薬、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害薬、グリコーゲンシンターゼキナーゼ阻害薬、グルコキナーゼ活性化薬）；
６）腸からのグルコース吸収を減少させるために設計された薬剤（たとえばアカルボース（ａｃａｒｂｏｓｅ））；
７）腎臓によるグルコース再吸収を阻害する薬剤（ＳＧＬＴ阻害薬）；
８）持続型高血糖症の合併症を治療するために設計された薬剤（たとえばアルドースレダクターゼ阻害薬）；
９）抗異脂肪血症薬、たとえばＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬（たとえばスタチン類）；ＰＰＡＲアルファアゴニスト（フィブレート類、たとえばゲムフィブロジル（ｇｅｍｆｉｂｒｏｚｉｌ））；胆汁酸分泌促進薬（コレスチラミン（ｃｈｏｌｅｓｔｙｒａｍｉｎｅ））；コレステロール吸収阻害薬（植物スタノール類、合成阻害薬）；胆汁酸吸収阻害薬（ＩＢＡＴｉ）、ならびにニコチン酸および類似体（ナイアシンおよび徐放性製剤）；
１０）抗高血圧症薬、たとえばベータ遮断薬（たとえばアテノロール（ａｔｅｎｏｌｏｌ）、インデラル（ｉｎｄｅｒａｌ））；ＡＣＥ阻害薬（たとえばリシノプリル（ｌｉｓｉｎｏｐｒｉｌ））；カルシウムアンタゴニスト（たとえばニフェジピン（ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ））；アンギオテンシン受容体アンタゴニスト（たとえばカンデサルタン（ｃａｎｄｅｓａｒｔａｎ））、アルファ−アンタゴニスト、および利尿薬（たとえばフロセミド（ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ）、ベンゾチアジド（ｂｅｎｚｔｈｉａｚｉｄｅ））；
１１）止血調節薬、たとえば抗血栓薬、線維素溶解の活性化薬および抗血小板薬；トロンビンアンタゴニスト；Ｘａ因子阻害薬；ＶＩＩａ因子阻害薬）；抗血小板薬（たとえばアスピリン、クロピドグレル（ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ））；抗凝固薬（ヘパリンおよび低分子量類似体、ヒルジン（ｈｉｒｕｄｉｎ））およびワルファリン（ｗａｒｆａｒｉｎ）；
１２）グルカゴンの作用に拮抗する薬剤；ならびに
１３）抗炎症薬、たとえば非ステロイド系抗炎症薬（たとえばアスピリン）およびステロイド系抗炎症薬（たとえばコルチゾン（ｃｏｒｔｉｓｏｎｅ））。
【００４９】
本発明の化合物形態の有用性は下記により証明できる：
ヒト酵素アッセイ
ＤＧＡＴ１阻害薬を同定するためのインビトロアッセイには、昆虫細胞膜に発現したヒトＤＧＡＴ１を酵素源として用いる（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９９８，９５，１３０１８−１３０２３）。要約すると、ｓｆ９細胞にヒトＤＧＡＴ１コード配列を含む組換えバキュロウイルスを感染させ、４８時間後に収集した。細胞を音波処理により溶解し、２８０００ｒｐｍ、４℃、４１％ショ糖勾配上で１時間の遠心分離により膜を単離した。中間相の膜画分を採集し、洗浄し、液体窒素中に保存した。
【００５０】
ＤＧＡＴ１活性をＣｏｌｅｍａｎが記載した方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １９９２，２０９，９８−１０２）の変法によりアッセイした。１〜１０μＭの化合物を、０．４μｇの膜タンパク質、５ｍＭのＭｇＣｌ２および１００μＭの１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロールと共に、全アッセイ体積２００μｌでプラスチック試験管内においてインキュベートした。１４Ｃオレオイル補酵素Ａ（最終濃度３０μＭ）の添加により反応を開始し、室温で３０分間インキュベートした。１．５ｍＬの２−プロパノール：ヘプタン：水（８０：２０：２）の添加により反応を停止した。放射性トリオレイン生成物を１ｍＬのヘプタンおよび０．５ｍＬの０．１Ｍ炭酸緩衝液  ｐＨ９．５の添加により有機相中へ分離した。上部のヘプタン層の一部を液体シンチログラフィーで計数することによりＤＧＡＴ１活性を定量した。この試験で、式（Ｉ）の化合物は２．５ｎＭのＩＣ５０をもつ。
【００５１】
式（Ｉ）の化合物および対応する医薬的に許容できる酸塩がＤＧＡＴ１活性を阻害する能力は、下記の全細胞アッセイ１）および２）を用いてさらに証明できる：
１）３Ｔ３細胞におけるトリグリセリド合成の測定
マウス脂肪細胞３Ｔ３細胞を６ウェルプレート内でウシ新生仔血清含有培地において集密状態まで培養した。１０％のウシ胎仔血清、１μｇ／ｍＬのインスリン、０．２５μＭのデキサメタゾンおよび０．５ｍＭのイソブチルメチルキサンチンを含有する培地中でインキュベートすることにより、細胞の分化を誘導した。４８時間後、１０％のウシ胎仔血清および１μｇ／ｍＬのインスリンを含有する培地中にさらに４〜６日間、細胞を維持した。実験のために培地を無血清培地に交換し、ＤＭＳＯに溶解した化合物（最終濃度０．１％）と共に３０分間、細胞をプレインキュベートした。０．２５ｍＭの酢酸ナトリウムおよび１μＣｉ／ｍＬの１４Ｃ−酢酸ナトリウムを各ウェルにさらに２時間添加しておくことにより、新規脂質生成を測定した（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９７６，２５１，６４６２−６４６４）。細胞をリン酸緩衝化生理食塩水中で洗浄し、１％ドデシル硫酸ナトリウムに溶解した。タンパク質推定キット（Ｐｅｒｂｉｏ）を用いるタンパク質測定のために一部を取り出した；Ｌｏｗｒｙ法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９５１，１９３，２６５−２７５）に基づく。ヘプタン：プロパン−２−オール：水（８０：２０：２）混合物、続いて少量の水およびヘプタンを用いて、脂質を有機相中へ抽出した；Ｃｏｌｅｍａｎ法（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１９９２，２０９，９８−１０４）に従う。有機相を採集し、溶媒を窒素流下で蒸発させた。抽出物をイソヘキサン：酢酸（９９：１）に溶解し、順相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ  ｄｉｏｌ−５、４×２５０ｍｍカラム、ならびにイソヘキサン：酢酸（９９：１）およびイソヘキサン：プロパン−２−オール：酢酸（８５：１５：１）の勾配溶媒系、流速１ｍＬ分を用いて脂質を分離した；ＳｉｌｖｅｒｓａｎｄおよびＨａｕｘの方法（１９９７）に従う。トリグリセリド画分中への放射性標識の取込みを、ＨＰＬＣ機器に接続したＲａｄｉｏｍａｔｉｃ  Ｆｌｏ−ｏｎｅ検出器（Ｐａｃｋａｒｄ）により分析した。
【００５２】
２）ＭＣＦ７細胞におけるトリグリセリド合成の測定
ヒト乳房上皮（ＭＣＦ７）細胞を６ウェルプレート内でウシ胎仔血清含有培地において集密状態まで培養した。実験のために培地を無血清培地に交換し、ＤＭＳＯに溶解した化合物（最終濃度０．１％）と共に３０分間、細胞をプレインキュベートした。５０μＭの酢酸ナトリウムおよび３μＣｉ／ｍＬの１４Ｃ−酢酸ナトリウムを各ウェルにさらに３時間添加しておくことにより、新規脂質生成を測定した（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９７６，２５１，６４６２−６４６４）。細胞をリン酸緩衝化生理食塩水中で洗浄し、１％ドデシル硫酸ナトリウムに溶解した。タンパク質推定キット（Ｐｅｒｂｉｏ）を用いるタンパク質測定のために一部を取り出した；Ｌｏｗｒｙ法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９５１，１９３，２６５−２７５）に基づく。ヘプタン：プロパン−２−オール：水（８０：２０：２）混合物、続いて少量の水およびヘプタンを用いて、脂質を有機相中へ抽出した；Ｃｏｌｅｍａｎ法（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１９９２，２０９，９８−１０４）に従う。有機相を採集し、溶媒を窒素流下で蒸発させた。抽出物をイソヘキサン：酢酸（９９：１）に溶解し、順相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ  ｄｉｏｌ−５、４×２５０ｍｍカラム、ならびにイソヘキサン：酢酸（９９：１）およびイソヘキサン：プロパン−２−オール：酢酸（８５：１５：１）の勾配溶媒系、流速１ｍＬ分を用いて脂質を分離した；ＳｉｌｖｅｒｓａｎｄおよびＨａｕｘの方法（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔ．Ｂ，１９９７，７０３，７−１４）に従う。トリグリセリド画分中への放射性標識の取込みを、ＨＰＬＣ機器に接続したＲａｄｉｏｍａｔｉｃ  Ｆｌｏ−ｏｎｅ検出器（Ｐａｃｋａｒｄ）により分析した。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】結晶形２に関するＸ線回折パターン。
【図２Ａ】結晶形１に関するＸ線回折パターン。
【図２Ｂ】結晶形１（酢酸溶媒和物）に関する熱データ。
【図３】結晶形１と２に関するＸ線回折パターンの比較。
【図４】結晶形２に関する熱データ。
【図５】結晶形３に関するＸ線回折パターン。
【図６】結晶形３（無水物）に関する熱データ。
【００５４】
本発明をここで下記の実施例により説明する：
実施例
本発明をここで下記の実施例により説明する；実施例中、別途記載しない限り：
（ｉ）温度を摂氏（℃）で示す；操作は室温または周囲温度、すなわち１８〜２５℃の範囲の温度で、アルゴンなどの不活性ガス雰囲気下に実施された；
（ｉｉ）有機溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた；溶媒の蒸発はロータリーエバポレーターを用いて減圧下に（６００〜４０００Ｐａ；４．５〜３０ｍｍＨｇ）、最高６０℃の浴温で実施された；
（ｉｉｉ）クロマトグラフィーはシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーを意味する；Ｂｉｏｔａｇｅカートリッジと述べた場合、これはＫＰ−ＳＩＬ（商標）シリカを収容したカラムを意味する、６０Å粒度、３２−６３ｍＭ；供給：Ｂｉｏｔａｇｅ，Ｄｙａｘ  Ｃｏｒｐ．部門，１５００  Ａｖｏｎ  Ｓｔｒｅｅｔ  Ｅｘｔｅｎｄｅｄ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，ＶＡ  ２２９０２，ＵＳＡ；
（ｉｖ）一般に反応経過をＴＬＣにより追跡し、反応時間は説明のために示したにすぎない；
（ｖ）収量は説明のために示したにすぎず、必ずしも綿密なプロセス開発により得ることができるものではない；より多量の物質が必要な場合は製造を繰り返した；
（ｖｉ）ＮＭＲデータ（１Ｈ）を示した場合、それはテトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対比した百万分率（ｐｐｍ）で示す主診断プロトンに関するデルタ値の形であり、３００または４００ＭＨｚで（別途記載しない限り）、別途記載しない限りペルジュウテリオジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ６）を溶媒として用いて測定された；ピーク多重度をたとえば以下のように示す：ｓ，一重線；ｄ，二重線；ｄｄ，二重の二重線；ｄｔ，二重の三重線；ｄｍ，二重の多重線；ｔ，三重線，ｑ，四重線；ｍ，多重線；ｂｒ，幅広い；
（ｖｉｉ）化学記号はそれらの通常の意味をもつ；ＳＩ単位および記号を用いる；
（ｖｉｉｉ）溶媒比を体積：体積（ｖ／ｖ）により示す；
（ｉｘ）質量スペクトル（ＭＳ）（ループ）は、ＨＰ  １１００検出器を備えたＭｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ  ＬＣで記録された；別途記載しない限り、引用した質量イオンは（ＭＨ＋）である；
（ｘ）ＬＣＭＳ（液体クロマトグラフィー−質量分析）は、Ｗａｔｅｒｓ  ９９６  Ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ  ａｒｒａｙ検出器を備えたＷａｔｅｒｓ  ２７９０  ＬＣおよびＭｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＭＤ  ＭＳからなるシステムで、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）Ｇｅｍｉｎｉ  ５ｕ  Ｃ１８  １１０Ａ  ５０ｘ２ｍｍカラムを用い、流速１．１ｍｌ／分で溶離して記録された；５％（水／アセトニトリル（１：１）＋１％ギ酸）および最初の４分間にわたってアセトニトリル０％から９５％まで上昇する勾配、残り（９５−０％）は水。ＨＰＬＣ保持時間を報告した場合、別途記載しない限りこれらはこのシステムにおける分（ｍｉｎｕｔｅ）である；別途記載しない限り、引用した質量イオンは（ＭＨ＋）である；
（ｘｉ）相分離カートリッジと述べた場合、ＩＳＯＬＵＴＥ  Ｐｈａｓｅ  Ｓｅｐａｒａｔｏｒ  ７０ｍｌカラムを用いた；供給：Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｎｅｗ  Ｒｏａｄ，Ｈｅｎｇｏｅｄ，Ｍｉｄ  Ｇｌａｍｏｒｇａｎ，ＣＦ８２  ８ＡＵ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ；
（ｘｉｉ）ＳｉｌｉＣｙｃｌｅカートリッジと述べた場合、これはＵｌｔｒａ  Ｐｕｒｅ  Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ、粒度２３０〜４００メッシュ、孔径４０〜６３ｕｍを意味する；供給：ＳｉｌｉＣｙｃｌｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，１２００  Ａｖｅ  Ｓｔ−Ｊｅａｎ−Ｂａｐｔｉｓｔｅ，Ｓｕｉｔｅ  １１４，Ｑｕｅｂｅｃ  Ｃｉｔｙ，Ｑｕｅｂｅｃ  Ｇ２Ｅ  ５Ｅ８，ＣＡＮＡＤＡ；
（ｘｉｉｉ）Ｉｓｃｏ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎと述べた場合、Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ｃｏｍｐａｎｉｏｎクロマトグラフィー機器を用いた；供給：ＩＳＯＣ  Ｉｎｃ．  Ａｄｄｒｅｓｓ  Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  ＩＳＯＣ  Ｉｎｃ，４７００  Ｓｕｐｅｒｉｏｒ  Ｓｔｒｅｅｔ，Ｌｉｎｃｏｌｎ，ＮＥ  ６８５０４，ＵＳＡ；
（ｘｉｖ）マイクロ波と述べた場合、これはＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ  ｓｉｘｔｙまたはＳｍｉｔｈ  Ｃｒｅａｔｏｒマイクロ波を意味する；供給：Ｂｉｏｔａｇｅ，Ｄｙａｘ  Ｃｏｒｐ．部門，１５００  Ａｖｏｎ  Ｓｔｒｅｅｔ  Ｅｘｔｅｎｄｅｄ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，ＶＡ  ２２９０２，ＵＳＡ；
（ｘｖ）ＧＣＭＳと述べた場合、ガスクロマトグラフィー−質量分析は、ＡＯＣ  ２０ｉ自動サンプリング装置を備え、’ＧＣＭＳ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ’ソフトウェア、バージョン２．０により制御されるＱＰ−２０１０  ＧＣ−ＭＳシステムで実施された；供給：Ｓｈｉｍａｄｚｕ，Ｍｉｌｔｏｎ  Ｋｅｙｎｅｓ，ＭＫ１２  ５ＲＥ，ＵＫ；ＧＣカラムは、長さ２５ｍ、内径０．３２ｍｍ、膜厚０．５２μｍのＤＢ−５ＭＳであった；供給：Ｊ  ＆  Ｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｆｏｌｓｏｍ，ＣＡ，ＵＳＡ；
（ｘｖｉ）遠心分離と述べた場合、これはＧｅｎｅｖａｃ  ＥＺ−２ｐｌｕｓを意味する；供給：Ｇｅｎｅｖａｃ  Ｌｉｍｉｔｅｄ，Ｔｈｅ  Ｓｏｖｅｒｉｅｇｎ  Ｃｅｎｔｒｅ，Ｆａｒｔｈｉｎｇ  Ｒｏａｄ，Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＩＰ１  ５ＡＰ，ＵＫ；
（ｘｖｉｉ）キラルクロマトグラフィーと述べた場合、これは一般に２０μｍ  Ｍｅｒｃｋ  ５０ｍｍ  Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤカラム（Ｃｈｉｒａｌ  Ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ  Ｐｈａｓｅ；供給：Ｃｈｉｒａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｅｕｒｏｐｅ，Ｐａｒｃ  ｄ’Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ，Ｂｄ．  Ｇｏｎｔｈｉｅｒ  ｄ’Ａｎｄｅｒｎａｃｈ，６７４０４  Ｉｌｌｋｉｒｃｈ  Ｃｅｄｅｘ，Ｆｒａｎｃｅ）を用い、ＭｅＣＮ／２−プロパノール／ＡｃＯＨ（９０／１０／０．１）を溶離剤として用いて、流速８０ｍＬ／分、波長３００ｎｍで、Ｇｉｌｓｏｎ分取用ＨＰＬＣ機器（２００ｍｌヘッド）により実施される；
（ｘｖｉｉｉ）融点はＢｕｃｈｉ  ５３０装置で測定され、未補正である；
（ｘｉｘ）当量（ｅｑｕｉｖ）と述べた場合、これはモル当量を意味するものとする；
（ｘｘ）以下において、または前記もしくは後記の方法セクションにおいて、下記の略号を用いる場合がある：
Ｅｔ２Ｏまたはエーテル  ジエチルエーテル
ＤＭＦ  ジメチルホルムアミド
ＤＣＭ  ジクロロメタン
ＤＭＥ  １，２−ジメトキシエタン
ＭｅＯＨ  メタノール
ＥｔＯＨ  エタノール
Ｈ２Ｏ  水
ＴＦＡ  トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ  テトラヒドロフラン
ＤＭＳＯ  ジメチルスルホキシド
ＨＯＢｔ  １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＥＤＣＩ（ＥＤＡＣ）  １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
ＤＩＰＥＡ  ジイソプロピルエチルアミン
ＤＥＡＤ  アゾジカルボン酸ジエチル
ＥｔＯＡｃ  酢酸エチル
ＮａＨＣＯ３  重炭酸ナトリウム／炭酸水素ナトリウム
Ｋ３ＰＯ４  リン酸カリウム
ＰＳ  ポリマー支持された
ＢＩＮＡＰ  ２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’ビナフチル
Ｄｐｐｆ  １，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン
ｄｂａ  ジベンジリデンアセトン
ＰＳ−ＣＤＩ  ポリマー支持されたカルボニルジイミダゾール
ＣＨ３ＣＮまたはＭｅＣＮ  アセトニトリル
ｈ  時間
ｍｉｎ  分
ＨＡＴＵ  Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキソフルオロホスフェート
ＮａＯＨ  水酸化ナトリウム
ＡｃＯＨ  酢酸
ＤＭＡ  ジメチルアセトアミド
ｎＢｕＬｉ  ｎ−ブチルリチウム
ＭｇＳＯ４  硫酸マグネシウム
Ｎａ２ＳＯ４  硫酸ナトリウム
ＣＤＣｌ３  ジュウテロクロロホルム
ＣＤ３ＯＤ  ペルジュウテリウム化メタノール
Ｂｏｃ  ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル。
【００５５】
実施例１：結晶形２（ｔｒａｎｓ−４−｛４−［（｛５−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル｝カルボニル）アミノ］フェニル｝シクロヘキシル）酢酸
【００５６】
【化２】
2009539954.tif 000004
【００５７】
水（中間体１のモル当たり２．２３Ｌ）中の水酸化リチウム１水和物（１０当量）を、メチル（ｔｒａｎｓ−４−｛４−［（｛５−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル｝カルボニル）アミノ］フェニル｝シクロヘキシル）アセテート（中間体１；１当量）のメタノール（中間体１のモル当たり９．３８Ｌ）中における撹拌懸濁液に添加した。反応混合物を３０℃で２時間撹拌し、次いで０℃に冷却し、濃塩酸でｐＨ２の酸性にした（温度を１０℃より低く維持しながら）。生成した白色沈殿を濾過し、水およびメタノールで洗浄し、次いで５０℃で真空乾燥すると、表題化合物が固体として得られた（８２％の収率）。次いでこの固体を水（化合物のｇ当たり約２８ｍｌ）に撹拌しながら懸濁し、次いで懸濁液を３日間撹拌した。次いで固体を濾別し、真水で洗浄した（低速濾過）。得られた白色固体を一定重量になるまで５０℃で高真空乾燥オーブン内において乾燥させ、分析した（図１、３および４を参照）。
【００５８】
中間体１：メチル（ｔｒａｎｓ−４−｛４−［（｛５−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル｝カルボニル）アミノ］フェニル｝シクロヘキシル）アセテート
３，４−ジフルオロイソチオシアネート（１．２当量）を、メチル［ｔｒａｎｓ−４−（４−｛［ヒドラジノ（オキソ）アセチル］アミノ｝フェニル）シクロヘキシル］アセテート（中間体２，１当量）のＤＭＡ（（中間体２のモル当たり約５．３Ｌ）中における撹拌懸濁液に添加し、混合物を４５℃に加熱し、２時間撹拌した。ＥＤＡＣ（１．２当量）を添加し、得られた混合物を８５℃に加熱し、３時間撹拌した。水（中間体２のモル当たり約４．３Ｌ）を添加した。沈殿を濾別し、水で洗浄し、次いで真空乾燥して、表題化合物を黄色固体として得た。
【００５９】
中間体２：メチル［ｔｒａｎｓ−４−（４−｛［ヒドラジノ（オキソ）アセチル］アミノ｝フェニル）シクロヘキシル］アセテート
【００６０】
【化３】
2009539954.tif 000005
【００６１】
ｉ）メチル２−［４−（４−ヒドロキシフェニル）シクロヘキシリデン］アセテート
【００６２】
【化４】
2009539954.tif 000006
【００６３】
トリメチルホスホノアセテート（１７０ｍＬ，１．０５ｍｏｌ）を、水素化ナトリウム（鉱油中６０％，２７．５ｇ，１．１４ｍｏｌ）のＴＨＦ（３．５Ｌ）中における撹拌懸濁液（１２℃に冷却）に滴加した。添加の終了後、反応混合物を周囲温度にまで高め、１時間撹拌した。別個の容器において、Ｎ，Ｎ−テトラメチルグアニジン（１４４ｍＬ，１．１４ｍｏｌ）を、４−（４−ヒドロキシフェニル）シクロヘキサン−１−オン（２３５ｇ，０．９５ｍｏｌ）のＴＨＦ（１．２Ｌ）中における懸濁液に添加し、反応混合物を周囲温度で１時間撹拌した。ホスホノアセテート混合物を１０℃に冷却し、残留発熱がみられなくなるまで温度を８〜１２℃に制御しながらグアニジン溶液を徐々に添加した。温度を周囲温度にまで高め、反応混合物を１６時間撹拌した。混合物を塩化アンモニウム希水溶液（２．４Ｌ）と酢酸エチル（２．４Ｌ）の間で分配した。水相を分離し、酢酸エチル（１．２Ｌ）で抽出した。有機相を合わせてブライン（２．４Ｌ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空濃縮すると灰白色固体が残った。この固体をエーテルとヘキサンの混合物（２：１；４７０ｍＬ）に懸濁し、濾過し、エーテルとイソヘキサンの混合物（２：１；２４０ｍＬ）で洗浄して、生成物を白色固体として得た（２８５ｇ，９４％）。１ＨＮＭＲ  δ  １．３５−１．５５（２Ｈ，ｍ），１．８５−２．０５（４Ｈ，ｍ），２．２５−２．４０（２Ｈ，ｍ），２．６５−２．７５（１Ｈ，ｍ），３．６０（３Ｈ，ｓ），３．８０（１Ｈ，ｍ），６．６６（２Ｈ，ｄ），６．９９（２Ｈ，ｄ），９．１０（１Ｈ，ｓ）。
【００６４】
ｉｉ）ｔｒａｎｓ−メチル２−［４−（４−ヒドロキシフェニル）シクロヘキシル］アセテート
【００６５】
【化５】
2009539954.tif 000007
【００６６】
カーボン上１０％パラジウム（５０％の水で湿潤，６．９ｍｍｏｌ）を、乾燥ＴＨＦ（４００ｍＬ）中のメチル２−［４−（４−ヒドロキシフェニル）シクロヘキシリデン］アセテート（１００ｇ，０．４１ｍｏｌ）に添加した。反応混合物を３０℃で水素雰囲気下に（２バール）加熱した。混合物をＣｅｌｉｔｅで濾過すると固体が残り、これをＴＨＦ（５０ｍＬ）で洗浄した。ＴＨＦ溶液を真空濃縮すると残留物が残り、これを酢酸エチルで洗浄した。粗製混合物を高温の酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解し、次いで周囲温度に冷却した。氷水で冷却した後、沈殿を濾過し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で洗浄して、表題化合物を固体として得た（４２ｇ，４２％）。１ＨＮＭＲ  δ  １．０２−１．１７（２Ｈ，ｍ），１．３１−１．４６（２Ｈ，ｍ），１．６６−１．８２（５Ｈ，ｍ），２．２３（２Ｈ，ｄ），２．２８−２．３８（１Ｈ，ｍ），３．６３（３Ｈ，ｓ），６．６６（２Ｈ，ｄ），６．９９（２Ｈ，ｄ），９．１０（１Ｈ，ｓ）。
【００６７】
ｉｉｉ）ｔｒａｎｓ−メチル２−［４−（４−アミノフェニル）シクロヘキシル］アセテート
【００６８】
【化６】
2009539954.tif 000008
【００６９】
ｔｒａｎｓ−メチル２−［４−（４−ヒドロキシフェニル）シクロヘキシル］アセテート（２．８２ｇ，１１．４ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（２．３２ｍＬ，１３．３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４０ｍＬ）中における溶液を４℃に冷却し、トリフルオロメタンスルホニルクロライド（１．４２ｍＬ，１３．３ｍｍｏｌ）を３０分間かけて、温度を６℃より低く維持しながら添加した。反応混合物を４℃で４５分間撹拌し、次いで１５℃に高めた。撹拌を停止し、反応混合物を１６時間放置した。混合物を氷水（１８ｍＬ）に注入し、層を分離し、水層をＤＣＭ（７ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせて２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２ｍＬ）、次いでブライン（９ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空濃縮すると、中間体トリフレートが黄色固体として残った（４．５９ｇ，１０６％）。これをさらに精製せずに使用した。
【００７０】
中間体トリフレート（１２ｇ，３２ｍｍｏｌ）を、炭酸セシウム（１４．４ｇ，４４ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（０．４３ｇ，１．９ｍｍｏｌ）、ＢＩＮＡＰ（１．２ｇ，１．９ｍｍｏｌ）およびベンゾフェノンイミン（７．９ｍＬ，４７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）中における混合物に添加した。撹拌を開始し、容器を排気し、窒素で５回パージした。撹拌混合物を１６時間、加熱還流した。反応混合物を周囲温度に冷却し、真空濃縮すると残留物が残った。この残留物をエーテル（３６０ｍＬ）と水（２１０ｍＬ）の間で分配し、層を分離した。水層をエーテル（３ｘ３６０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせて乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、真空濃縮すると粗製の黄色の油が残り、これをさらに精製せずに使用した。
【００７１】
粗製イミン（２１ｇ，５１ｍｍｏｌ）をメタノール（３００ｍＬ）に溶解し、溶液を４℃に冷却した。１Ｍ塩酸溶液（１００ｍＬ）を、温度を７℃より低く維持しながら徐々に添加した。この懸濁液を１６時間かけて周囲温度に高めた。メタノールを真空中で除去し、得られた混合物を水（１００ｍＬ）で希釈した。この水性混合物をエーテル（２ｘ３０ｍＬ）で洗浄し、有機層を合わせて１Ｍ塩酸溶液（２ｘ３０ｍＬ）で洗浄した。水層を合わせて１０％炭酸ナトリウム水溶液でｐＨ９の塩基性にすると沈殿が生成した。酢酸エチル（３ｘ２００ｍＬ）を添加し、層を分離した。有機層を合わせて乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、沈殿が生成するまで真空濃縮した。混合物を冷却し、濾過し、ヘキサン（２０ｍＬ）で洗浄すると、生成物が淡黄色固体として得られた。濾液を真空濃縮するとさらに生成物が得られ、これらを合わせて真空濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより１０−５０％ＥｔＯＡｃおよびイソヘキサンの勾配を溶離剤として用いて精製し、生成物を黄色固体として得た（５．１ｇ，２工程の合計収率６５％）。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）  δ  ０．９８−１．０６（２Ｈ，ｍ），１．３３−１．４２（２Ｈ，ｍ），１．７２−１．８１（５Ｈ，ｍ），２．１６−２．１８（２Ｈ，ｍ），２．２８−２．３４（１Ｈ，ｍ），３．６１（３Ｈ，ｓ），６．６８（２Ｈ，ｄ），６．９６（２Ｈ，ｄ）。
【００７２】
ｉｖ）メチル（｛４−［ｔｒａｎｓ−４−（２−メトキシ−２−オキソエチル）シクロヘキシル］フェニル｝アミノ）（オキソ）−アセテート
【００７３】
【化７】
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【００７４】
メチルクロロ（オキソ）アセテート（０．８４２ｍＬ）を、ｔｒａｎｓ−メチル２−［４−（４−アミノフェニル）シクロヘキシル］アセテート（１７４０ｍｇ）およびピリジン（０．６８９ｍＬ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中における溶液に０℃で添加した。添加の終了後、混合物を周囲温度に高め、６４時間撹拌した。この溶液をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、次いで乾燥および真空濃縮して表題化合物（２２６７ｍｇ）を固体として得た。１ＨＮＭＲ  δ  ７．６０（２Ｈ，ｄ），７．１８（２Ｈ，ｄ），３．８３（３Ｈ，ｓ），３．５８（３Ｈ，ｓ），２．５８−３５（１Ｈ＋ＤＭＳＯ，ｍ），２．２１（２Ｈ，ｄ），１．７５（５Ｈ，ｍ），１．４３（２Ｈ，ｍ），１．１２（２Ｈ，ｍ）；ＭＳ  ｍ／ｅ  （Ｍ−Ｈ）−  ３３２。
【００７５】
ｉｖ）ヒドラジン水和物（０．３６１ｍＬ）を、メチル（｛４−［ｔｒａｎｓ−４−（２−メトキシ−２−オキソエチル）シクロヘキシル］フェニル｝アミノ）（オキソ）アセテート（２２６０ｍｇ）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）中における撹拌溶液に添加した。混合物を１時間撹拌した。沈殿を濾別し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、真空下で一夜乾燥させて表題化合物（中間体２，１８４５ｍｇ）を固体として得た。１ＨＮＭＲ  δ  １０．４４（１Ｈ，ｓ），１０．２０（１Ｈ，ｓ），７．７０（２Ｈ，ｄ），７．２１（２Ｈ，ｄ），４．６０（２Ｈ，ｓ），３．６０（３Ｈ，ｓ），２．４２（１Ｈ，ｍ），１．７９（５Ｈ，ｍ），１．４５（２Ｈ，ｍ），１．１１（２Ｈ，ｍ）；ＭＳ  ｍ／ｅ  ＭＨ＋  ３３４。
【００７６】
実施例２：結晶形３（ｔｒａｎｓ−４−｛４−［（｛５−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル｝カルボニル）アミノ］フェニル｝シクロヘキシル）酢酸
結晶形２（実施例１に従って製造；約２０ｍｇ）を、マグチックスターラーを収容した小バイアルに入れた。少量の結晶形１を種結晶として添加し、アセトニトリル（約１ｍｌ）を添加した。バイアルを蓋で密閉し、ホットプレート撹拌機に乗せて５０℃で３日間撹拌し続けた。３日後、バイアルを撹拌機から取り出し、蓋を取り、残りの溶媒を自然蒸発させた。得られた結晶形３の固体を分析した（図５および６ならびに表３を参照）。
【００７７】
結晶形１の物質を下記に従って製造した：
メチル２−［４−［４−［［５−［（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ］１，３，４−オキサジアゾール−２−カルボニル］アミノ］−フェニル］シクロヘキシル］アセテート（実施例１を参照；１当量）を、窒素下で撹拌しながらメタノール／テトラヒドロフラン（１４ｖｏｌ／７ｖｏｌ）に懸濁し、水酸化リチウム（１０当量）の水（５ｖｏｌ）中における溶液を添加した。黄色溶液が生成し、これを３０℃に加熱した（（ｌｃ／ｍｓ）によれば２時間後に終了）。次いで混合物を０℃に冷却し、温度を１０℃より低く維持しながら濃塩酸でｐＨ２の酸性にした。白色沈殿が生成し、これを濾別し、水およびメタノールで洗浄した。得られた生成物を５０℃で高真空下に乾燥させると白色固体が得られた。この固体を水（５０ｖｏｌ）に懸濁し、周囲温度で２４時間撹拌し、次いで６０℃に２時間加熱し、一夜放冷した。固体を濾別し、真空乾燥して生成物を得た（ＴＨＦ  ０．５７ｗ／ｗが存在）。
【００７８】
【表１】
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【００７９】
【表２】
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【００８０】
【表３】
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【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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