(57)【要約】本発明は、新規の３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン誘導体、それらの製造のための方法、およびその使用に関する。さらなる態様において、本発明は、癌および／もしくはＢ細胞悪性腫瘍の治療、免疫抑制の誘発もしくは維持、移植拒絶反応、移植片対宿主病、自己免疫障害、炎症疾患、血管疾患および線維症の治療、神経再生の刺激、または真菌感染症の治療における、これらの３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン誘導体の使用を提供する。
2009537502.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
４０−ヒドロキシ位が、カルボン酸エステルとして、エーテルとして、ホスフィン酸エステルとして、アセタールとして、またはグリコシルとして誘導体化されることを特徴とする、ラパマイシンの３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）誘導体。
【請求項２】
下記の式（Ｉ）の化合物：
【化３３】
2009537502.tif 000034
［式中、
Ｘは、結合またはＣＨ２を表し、
Ｒ１は、ケト基または（Ｈ，Ｈ）を表し、
Ｒ２は、ＯＨまたはＯＭｅを表し、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨまたはＯＭｅを表し、
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立にＨまたはＯＨを表し、
Ｒ６は、−Ｒ７、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−ＰＯＲ１９Ｒ２０またはＹ−Ｒ１５を表し、
Ｒ７は、−（ＣＲ８Ｒ９）ｍ（ＣＲ１０Ｒ１１）ｐＣＲ１２Ｒ１３Ｒ１４を表し、
Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立にＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニルまたはＣ２〜Ｃ４アルキニルを表し、それらの基のいずれかは、−ＰＯ（ＯＨ）２、−ＣＦ２ＰＯ（ＯＨ）２、−ＯＨ、−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ２で場合によって置換されていてよいか、あるいは、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立にＨ、トリフルオロメチルまたはＦを表し、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、それぞれ独立にＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニルまたはＣ２〜Ｃ４アルキニルを表し、それらの基のいずれかは、−ＰＯ（ＯＨ）２、−ＣＦ２ＰＯ（ＯＨ）２、−ＯＨ、−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ２で場合によって置換されていてよいか、あるいは、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、Ｈ、−（ＣＲ８Ｒ９）ｑＮＨ２、−（ＣＲ８Ｒ９）ｑＯＨ、ＣＦ３、Ｆ、ＣＯＯＨから独立に選択されてよいか、あるいは、Ｒ１０とＲ１１またはＲ１２とＲ１３またはＲ１３とＲ１４は、それらが結合した炭素と一緒になって、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１個または複数のヘテロ原子を含有し、５個までの−（ＣＲ８Ｒ９）ｑＯＨ、−（ＣＲ８Ｒ９）ｑＮＨ２またはＣＯＯＨ基で場合によって置換されている、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルまたは３〜６員のヘテロアルキル環を形成してよく、
Ｙ＝結合、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−であり、
Ｒ１５は、
【化３４】
2009537502.tif 000035
を表し、
Ｒ１６は、それぞれ独立にＨまたはＯＨであり、
Ｒ１７は、Ｈ、ＯＨおよびＮＨ２から独立に選択され、
Ｒ１８は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨおよび−ＣＯＯＨから独立に選択され、
但し、Ｒ１６、Ｒ１７およびＲ１８から選択される２個以下の基は、ＨまたはＣＨ３を表し、
Ｒ１９およびＲ２０は、それぞれ独立にＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルを表すか、あるいは、Ｒ１９とＲ２０は一緒になって＝ＣＨ２を表し、
ｍ、ｐおよびｑは、それぞれ独立に０〜４の間の整数を表し、
但し、Ｒ７部分は、１２個を超える炭素原子を含有せず、−ＰＯ（ＯＨ）２、−ＣＦ２ＰＯ（ＯＨ）２、−ＣＯＯＨ、ＯＨまたはＮＨ２から選択される少なくとも１個の官能基を含有する］
または薬学的に許容されるその塩。
【請求項３】
Ｒ６は−Ｒ７を表す、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ６は−Ｃ（Ｏ）Ｒ７を表す、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ７は７個以下の炭素原子を含有する、請求項２から４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ７は５個以下の炭素原子を含有する、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ７は、−ＰＯ（ＯＨ）２、−ＣＦ２ＰＯ（ＯＨ）２、−ＯＨ、−ＣＯＯＨおよび−ＮＨ２から選択される２個の基を含有する、請求項２から６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ７は、−ＣＯＯＨ、ＯＨおよびＮＨ２から選択される少なくとも１個の官能基を含有する、請求項２から７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
ｐは０または１を表す、請求項２から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
ｍは０または１を表す、請求項２から９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
ｑは０、１または２を表す、請求項２から１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１１はＨを表す、請求項２から１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１２はＨを表す、請求項２から１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ１３はＨまたはＯＨを表す、請求項２から１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
ｐは１を表し、Ｒ１０はＭｅ、ＯＨまたはＣＨ２ＯＨを表す、請求項２から１４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
ｐは１を表し、Ｒ１１はＭｅ、ＨまたはＣＨ２ＯＨを表す、請求項２から１５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
ｍおよびｐはどちらも０を表し、Ｒ１２およびＲ１３はどちらもＨを表し、Ｒ１４は−（ＣＲ８Ｒ９）ｑ−ＯＨ［式中、ｑ＝０または１であり、Ｒ８およびＲ９はどちらもＨを表す］を表す、請求項２に記載の化合物。
【請求項１８】
ｐは１を表し、ｍは０を表し、Ｒ１０およびＲ１１はどちらもＨを表し、Ｒ１２はＨを表し、Ｒ１３はＨ、ＯＨまたはＮＨ２を表し、Ｒ１４は−（ＣＲ８Ｒ９）ｑ−ＯＨ［式中、ｑ＝０または１であり、Ｒ８およびＲ９はどちらもＨを表す］を表す、請求項２に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ６は、ヒドロキシ酢酸、３−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロピオン酸、２，３−ジヒドロキシプロピオン酸、３−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチルプロピオン酸または２，２−ビス（ヒドロキシメチル）プロピオン酸とのエステルの形成から誘導される残基を表す、請求項２に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ６は、ヒドロキシ酢酸、３−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロピオン酸、２，３−ジヒドロキシプロピオン酸、３−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチルプロピオン酸または２，２−ビス（ヒドロキシメチル）プロピオン酸とのエーテルの形成から誘導される残基を表す、請求項２に記載の化合物。
【請求項２１】
３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）−４０−Ｏ−［２，２−ビス（ヒドロキシメチル）プロピオニル］ラパマイシン、または薬学的に許容されるその塩である、請求項２に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ６は−ＰＯＲ１９Ｒ２０を表す、請求項２に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ１９およびＲ２０は、どちらもＣＨ３を表すか、またはどちらもＣＨ２ＣＨ３を表す、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ６はＹ−Ｒ１５を表す、請求項２に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ１５基は、
【化３５】
2009537502.tif 000036
を表す、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ１５は、グルコース、グルコサミン、グルクロン酸またはアラビノースとアセタールを形成することによって形成される部分である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ１５は、Ｄ−グルコースとアセタールを形成することによって形成される部分である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｒ１５は、Ｄ−グルコサミンとアセタールを形成することによって形成される部分である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒ１５は、Ｄ−グルクロン酸とアセタールを形成することによって形成される部分である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｒ１５は、
【化３６】
2009537502.tif 000037
を表す、請求項２４に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｒ１５は、フルクトースとアセタールを形成することによって形成される部分である、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｒ１５は、
【化３７】
2009537502.tif 000038
を表す、請求項２４に記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒ１５は、グルクロン酸とエステルを形成することによって形成される部分である、請求項３２に記載の化合物。
【請求項３４】
Ｙは結合を表す、請求項２４から３３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３５】
Ｙは−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−を表す、請求項２４から３３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３６】
Ｙは−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−を表す、請求項２４から３３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３７】
医薬品として使用するための、請求項１から３６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３８】
癌および／もしくはＢ細胞悪性腫瘍の治療、免疫抑制の誘発もしくは維持、移植拒絶反応、移植片対宿主病、自己免疫障害、炎症疾患、血管疾患および線維症の治療、神経再生の刺激、または真菌感染症の治療において使用するための、請求項１から３６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３９】
癌またはＢ細胞悪性腫瘍の治療において医薬品として使用するための、請求項１から３６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４０】
請求項１から３６のいずれか一項に記載の化合物を、１つまたは複数の薬学的に許容される希釈剤または担体とともに含む、医薬組成物。
【請求項４１】
癌および／もしくはＢ細胞悪性腫瘍の治療、免疫抑制の誘発もしくは維持、移植拒絶反応、移植片対宿主病、自己免疫障害、炎症疾患、血管疾患および線維症の治療、神経再生の刺激、または真菌感染症の治療のための方法であって、有効量の請求項１から３６のいずれか一項に記載の化合物を患者に投与するステップを含む方法。
【請求項４２】
癌および／またはＢ細胞悪性腫瘍の治療の方法であって、有効量の請求項１から３６のいずれか一項に記載の化合物を患者に投与するステップを含む方法。
【請求項４３】
癌および／もしくはＢ細胞悪性腫瘍の治療、免疫抑制の誘発もしくは維持、移植拒絶反応、移植片対宿主病、自己免疫障害、炎症疾患、血管疾患および線維症の治療、神経再生の刺激、または真菌感染症の治療のための薬剤の調製における、請求項１から３６のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項４４】
前記薬剤は、癌またはＢ細胞悪性腫瘍の治療用のものである、請求項４３に記載の使用。
【請求項４５】
請求項２から３６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物の調製のための方法であって、
（ａ）式（ＩＩ）の化合物：
【化３８】
2009537502.tif 000039
またはその保護誘導体を、
式（ＩＩＩ）の化合物：
ＨＯ−Ｒ６  （ＩＩＩ）
またはその活性誘導体
［式中、基Ｒ６は、式（Ｉ）の化合物またはその保護誘導体について上記で定義されている通りである］
と反応させるステップ、あるいは
（ｂ）式（Ｉ）の化合物またはその塩を、式（Ｉ）の別の化合物または別の薬学的に許容されるその塩に変換するステップ、あるいは
（ｃ）式（Ｉ）の被保護化合物を脱保護するステップ
を含む方法。
【請求項４６】
（ｉ）請求項１から３６のいずれか一項に記載の化合物と、（ｉｉ）１つまたは複数のその他の治療効果のある薬剤とを含む、組成物またはパーツのキット。
【請求項４７】
前記１つまたは複数のその他の治療効果のある薬剤は、メトトレキサート、ロイコボリン、アドリアマイシン、プレドニゾン、ブレオマイシン、シクロホスファミド、５−フルオロウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ドキソルビシン、タモキシフェン、トレミフェン、酢酸メゲストロール、アナストロゾール、ゴセレリン、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体（例えば、ＨｅｒｃｅｐｔｉｎＴＭ）、カペシタビン、塩酸ラロキシフェン、ＥＧＦＲ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、Ｈｓｐ９０阻害剤、アザチオプリン、コルチコステロイド、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、ＦＫ５０６、ミコフェノール酸モフェチル、ＯＫＴ−３、ＡＴＧ、アムホテリシンＢ、フルシトシン、エキノカンジン、グリセオフルビン、イミダゾール、およびトリアゾール系抗真菌剤の群より選択される、請求項４６に記載の組成物またはパーツのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規の３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン誘導体、その製造方法、およびその使用に関する。さらなる態様において、本発明は、癌および／もしくはＢ細胞悪性腫瘍の治療、免疫抑制の誘発もしくは維持、移植拒絶反応、移植片対宿主病、自己免疫障害、炎症疾患、血管疾患および線維症の治療、神経再生の刺激、または真菌感染症の治療における、これらの３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン誘導体の使用を提供する。
【背景技術】
【０００２】
ラパマイシン（シロリムス）（図１）は、１，２，３−トリカルボニル部分がピペコリン酸ラクトン（Ｐａｉｖａら、１９９１年）と結合した、ストレプトミセス・ハイグロスコピクスＮＲＲＬ５４９１（Ｓｅｈｇａｌら、１９７５年、Ｖｅｚｉｎａら、１９７５年；米国特許第３９２９９９２号、米国特許第３９９３７４９号）によって産生される脂溶性マクロライドである。本発明の目的のために、Ｆｉｎｄｌａｙらの番号付け規約（１９８０年）またはＣｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ（１１ｔｈ  Ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ  Ｉｎｄｅｘ、１９８２〜１９８６年、ｐ６０７１９  ＣＳ）よりも、ＭｃＡｌｐｉｎｅらの番号付け規約（１９９１年）によってラパマイシンを記載する。
【０００３】
ラパマイシンは、化合物が呈する広範な活性スペクトルにより、重要な薬理学的値を有する。ラパマイシンは、主としてカンジダ属種に対してであるが、糸状菌に対しても、中等度の抗真菌活性を示す（Ｂａｋｅｒら、１９７８年、Ｓｅｈｇａｌら、１９７５年、Ｖｅｚｉｎａら、１９７５年、米国特許第３９２９９９２号、米国特許第３９９３７４９号）。ラパマイシンは、種々の細胞型におけるシグナル変換経路を標的とすることによって、例えば、細胞周期のＧ１期からＳ期への進行を可能にするシグナル伝達経路を阻害することによって、細胞増殖を阻害する（Ｋｕｏら、１９９２年）。Ｔ細胞において、ラパマイシンはＩＬ−２受容体からのシグナル伝達、および、免疫抑制をもたらすＴ細胞のその後の自己増殖を阻害する。ラパマイシンは多数の哺乳動物細胞型の増殖を阻害することから、ラパマイシンの阻害効果はＴ細胞に限定されない（Ｂｒｕｎｎら、１９９６年）。したがって、ラパマイシンは、臓器同種移植片拒絶反応の防止および自己免疫障害の治療における治療的応用が確立または予測された、強力な免疫抑制剤である（Ｋａｈａｎら、１９９１年）。４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチル−ラパマイシン（ＳＤＺ  ＲＡＤ、ＲＡＤ００１、サーティカン、エベロリムス）は、自己免疫性の薬理効力を示し、抗癌剤としても研究中の、ラパマイシンの半合成類縁体である（Ｓｅｄｒａｎｉ，  Ｒ．ら、１９９８年、Ｋｉｒｃｈｎｅｒら、２０００年、米国特許第５６６５７７２号、Ｂｏｕｌａｙら、２００４年）。この薬物の免疫抑制剤としての承認は、２００３年にヨーロッパにおいて得られた。ラパマイシンエステル誘導体ＣＣＩ−７７９（Ｗｙｅｔｈ−Ａｙｅｒｓｔ社製）は、インビトロで細胞成長を阻害し、インビボで腫瘍成長を阻害する（Ｙｕら、２００１年）。ＣＣＩ−７７９は、現在、潜在的な抗癌剤としての第ＩＩＩ相臨床試験中である。慢性尋常性乾癬の治療（ＫｉｒｂｙおよびＧｒｉｆｆｉｔｈｓ、２００１年）、ＰＣ１２細胞における神経突起伸長の刺激等の効力の潜在的使用（Ｌｙｏｎｓら、１９９４年）、機械的損傷後の血管細胞および平滑筋細胞によるサイトカインに対する増殖応答の遮断（Ｇｒｅｇｏｒｙら、１９９３年）におけるラパマイシンの価値および同種移植片線維症の予防（ＷａｌｌｅｒおよびＮｉｃｈｏｌｓｏｎ、２００１年）におけるその役割は、研究の盛んな分野である（ＫａｈａｎおよびＣａｍａｒｄｏ、２００１年）。近年の報告は、ラパマイシンが、長期にわたる免疫抑制療法を受けている臓器同種移植片患者において、その他の免疫抑制レジメンを受けている患者より癌の発生率が低いことと関連すること、および、この癌発生率の低下が血管新生の阻害によるものであることを明らかにしている（Ｇｕｂａら、２００２年）。イムノフィリンリガンドの神経栄養活性がそれらの免疫抑制活性と無関係であること（Ｓｔｅｉｎｅｒら、１９９７年）、および、国際特許出願ＷＯ０１／０３６９２において概説されているような成熟ステロイド受容体複合体（ｍａｔｕｒｅ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｃｏｍｐｌｅｘ）の崩壊によって神経成長刺激が促進されることが報告されている。脂質異常症および血小板減少症等の副作用、ならびに潜��的な催奇形作用も報告されている（Ｈｅｎｔｇｅｓら、２００１年、ＫａｈａｎおよびＣａｍａｒｄｏ、２００１年）。
【０００４】
ラパマイシンのポリケチド骨格は、計７個のプロピオン酸および７個の酢酸単位の全ての頭−尾（ｈｅａｄ−ｔｏ−ｔａｉｌ）縮合によって、Ｉ型ポリケチド合成酵素（ｒａｐＰＫＳ、Ｐａｉｖａら、１９９１年）を含む極めて大きい多機能タンパク質によるシキミ酸由来のシクロヘキサンカルボン酸のスターター単位が合成される。Ｌ−リシン由来のアミノ酸、ピペコリン酸は、アミド結合によってポリケチド骨格の最後のアセテートに縮合され（Ｐａｉｖａら、１９９３年）、続いてラクトン化が大員環を形成する。
【０００５】
３個のラパマイシンＰＫＳ遺伝子、ＮＲＰＳをコードする遺伝子およびフランキング後期遺伝子配列のそれぞれ、ならびに対応するポリペプチドについてのヌクレオチド配列は、Ａｐａｒｉｃｉｏら、１９９６年およびＳｃｈｗｅｃｋｅら、１９９５年によって同定され、アクセッション番号Ｘ８６７８０でＮＣＢＩに寄託されており、この配列への訂正がＷＯ０４／００７７０９において近年公開された。
【０００６】
ラパマイシン生合成クラスターの第１の酵素フリー産物は、プレラパマイシンに指定されている（ＷＯ０４／００７７０９、Ｇｒｅｇｏｒｙら、２００４年）。完全に処理されたラパマイシンの製造は、ラパマイシン後期遺伝子、ＲａｐＪ、ＲａｐＮ、ＲａｐＯ、ＲａｐＭ、ＲａｐＱ、およびＲａｐＩによってコードされた酵素によるポリケチド／ＮＲＰＳコアのさらなる処理を必要とする。
【０００７】
これまでに特徴付けられているラパマイシンの薬理作用は、ＦＫＢＰと称される細胞質受容体との相互作用によって媒介されると考えられている。真核性Ｔ細胞中の主要な細胞内ラパマイシン受容体はＦＫＢＰ１２（ＤｉＬｅｌｌａおよびＣｒａｉｇ、１９９１年）であり、結果として生じる複合体は、標的タンパク質と特異的に相互作用して、細胞のシグナル伝達カスケードを阻害する。
【０００８】
ラパマイシン−ＦＫＢＰ１２複合体の標的は、酵母内においてＴＯＲ（ラパマイシンの標的）として同定されており（Ａｌａｒｃｏｎら、１９９９年）、哺乳動物タンパク質は、ＦＲＡＰ（ＦＫＢＰ−ラパマイシン関連タンパク質）またはｍＴＯＲ（哺乳動物のラパマイシンの標的）として知られている（Ｂｒｏｗｎら、１９９４年）。
【０００９】
神経細胞中のｍＴＯＲシグナル伝達と局所的タンパク質合成との間の結合；翻訳制御に関与するタンパク質のリン酸化状態に対するその影響：転写レベルおよび翻訳レベルにおける翻訳機構の構成成分の豊富さ；アミノ酸透過酵素活性の制御、および代謝経路に関与する多くの酵素の転写の協調について説明されている（Ｒａｕｇｈｔら、２００１年）。ラパマイシン感受性のシグナル伝達経路は、胚脳の発達、学習、および記憶形成において重要な役割を果たすとも考えられている（Ｔａｎｇら、２００２年）。酵母内のＴＯＲタンパク質に関する研究は、栄養感受性のシグナル伝達経路を調節する上でのそれらの役割も明らかにした（Ｈａｒｄｗｉｃｋら、１９９９年）。同様に、ｍＴＯＲは、プロテインキナーゼＢ（Ａｋｔ）の作用、およびインスリンシグナル伝達において重要な役割を担うという作用に対する直接標的として定義されている（Ｓｈｅｐｈｅｒｄら、１９９８年、Ｎａｖｅら、１９９９年）。哺乳動物のＴＯＲは、アクチン細胞骨格の極性形成および翻訳開始の調節にも関係している（Ａｌａｒｃｏｎら、１９９９年）。ｍＴＯＲ等のホスファチジルイノシトール３−キナーゼは、細胞周期の進行、接着、細胞生存、および血管新生等、腫瘍の発症機構のいくつかの態様において機能的である（ＲｏｙｍａｎｓおよびＳｌｅｇｅｒｓ、２００１年）。
【００１０】
ラパマイシンおよびラパマイシン類縁体の薬物動態研究は、溶液中においてより安定で、代謝性攻撃（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ａｔｔａｃｋ）に対してより耐性があり、かつ／または、細胞膜の改良された透過性および流出物の減少を有し、それによって、改良された経口バイオアベイラビリティを呈することができる、新規ラパマイシン化合物の開発の必要性を実証している。
【００１１】
化学的に利用可能な分子の部位を使用して合成された一連のラパマイシン類縁体が報告されている。下記化合物の説明は、図１に記載されているラパマイシン分子の番号方式に適応させた。誘導体化または置き換えのための、分子上における化学的に利用可能な部位は、Ｃ４０およびＣ２８ヒドロキシル基（例えば、特許文献１、特許文献２）、Ｃ３９およびＣ１６メトキシ基（例えば、特許文献３、特許文献４）、Ｃ３２、Ｃ２６、およびＣ９ケト基（例えば、米国特許第５３７８８３６号、米国特許第５１３８０５１号、米国特許第５６６５７７２号）を含む。Ｃ１７、Ｃ１９、および／またはＣ２１におけるトリエンを標的とした水素化は、抗真菌活性の保持をもたらしたが、免疫抑制の相対的損失ももたらした（例えば、特許文献５、特許文献６）。分子の安定性における顕著な改良（例えば、Ｃ３２、Ｃ４０、および／またはＣ２８におけるオキシムの形成、特許文献７、特許文献８）、代謝性攻撃に対する耐性（例えば、特許文献９）、バイオアベイラビリティ（例えば、特許文献１０、米国特許第５９５５４５７号、ＷＯ９８／０４２７９）、および、プロドラッグの製造（例えば、米国特許第６０１５８１５号、米国特許第５４３２１８３号）は、誘導体化によって達成された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】米国特許第５６６５７７２号明細書
【特許文献２】米国特許第５３６２７１８号明細書
【特許文献３】国際公開第９６／４１８０７号パンフレット
【特許文献４】米国特許第５７２８７１０号明細書
【特許文献５】米国特許第５３９１７３０号明細書
【特許文献６】米国特許第５０２３２６２号明細書
【特許文献７】米国特許第５５６３１４５号明細書
【特許文献８】米国特許第５４４６０４８号明細書
【特許文献９】米国特許第５９１２２５３号明細書
【特許文献１０】米国特許第５２２１６７０号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
しかしながら、より広範なラパマイシン誘導体の必要性が残る。そのようなラパマイシン誘導体は、広範囲な状態の治療において優れた有用性を有するであろう。本発明は、一連の新規の３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン誘導体を提供する。そのような化合物は、医学において、特に、癌および／もしくはＢ細胞悪性腫瘍の治療、免疫抑制の誘発もしくは維持、移植拒絶反応、移植片対宿主病、自己免疫障害、炎症疾患、血管疾患および線維症の治療、神経再生の刺激、または真菌感染症の治療のために有用である。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、ラパマイシンの３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）誘導体、これらの化合物の調製のための方法、これらの化合物への中間体、およびこれらの化合物を医学において使用するための方法を提供する。
【００１５】
その最も広い態様において、本発明は、４０−ヒドロキシ位が、カルボン酸エステルとして、エーテルとして、ホスフィン酸エステルとして、アセタールとして、またはグリコシルとして誘導体化されることを特徴とする、ラパマイシンの３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）誘導体を提供する。
【００１６】
３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシンが、カルボン酸エステルとして、エーテルとして、またはアセタールとして誘導体化される場合、誘導体化基は、好ましくは１２個を超えない炭素原子（特に７個以下、特に５個以下の炭素原子）を含有する。好ましくは、−ＣＦ２ＰＯ（ＯＨ）２、−ＰＯ（ＯＨ）２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨおよび−ＮＨ２から選択される、好ましくは−ＣＯＯＨおよび−ＯＨから、より好ましくは−ＯＨから選択される、少なくとも１個の官能基（特に少なくとも２個の官能基）を含有する。
【００１７】
３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシンが、グリコシル基から誘導されるアセタールとして誘導体化される場合、好ましくは、各グリコシルは、好ましくは１２個を超えない炭素原子（特に７個以下、特に６個以下の炭素原子）を含有する糖またはグリコシドから形成される。例としては、単糖類および二糖類、特に５および６員環を形成する単糖類が挙げられる。好ましくは、−ＣＯＯＨ、−ＯＨおよび−ＮＨ２から選択される、好ましくは−ＮＨ２および−ＯＨから、より好ましくは−ＯＨから選択される少なくとも１個の官能基（特に少なくとも２個の官能基）を含有する。
【００１８】
３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシンが、ホスフィン酸エステルとして誘導体化される場合、好ましくは、アルキル基は、好ましくは４個を超えない炭素原子を含有し、一例は、ホスフィン酸で形成されたエステルである。
【００１９】
誘導体化部分の具体例を以下に示す。
【００２０】
より具体的な態様において、本発明は、下記の式（Ｉ）の３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン誘導体、または薬学的に許容されるその塩：
【００２１】
【化１】
2009537502.tif 000003
［式中、
Ｘは、結合またはＣＨ２を表し、
Ｒ１は、ケト基または（Ｈ，Ｈ）を表し、
Ｒ２は、ＯＨまたはＯＭｅを表し、
Ｒ３は、Ｈ、ＯＨまたはＯＭｅを表し、
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立にＨまたはＯＨを表し、
Ｒ６は、−Ｒ７、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−ＰＯＲ１９Ｒ２０またはＹ−Ｒ１５を表し、
Ｒ７は、−（ＣＲ８Ｒ９）ｍ（ＣＲ１０Ｒ１１）ｐＣＲ１２Ｒ１３Ｒ１４を表し、
Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立にＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニルまたはＣ２〜Ｃ４アルキニルを表し、それらの基のいずれかは、−ＰＯ（ＯＨ）２、−ＣＦ２ＰＯ（ＯＨ）２、−ＯＨ、−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ２で場合によって置換されていてよいか、あるいは、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立にＨ、トリフルオロメチルまたはＦを表し、
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、それぞれ独立にＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニルまたはＣ２〜Ｃ４アルキニルを表し、それらの基のいずれかは、−ＰＯ（ＯＨ）２、−ＣＦ２ＰＯ（ＯＨ）２、−ＯＨ、−ＣＯＯＨまたは−ＮＨ２で場合によって置換されていてよいか、あるいは、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３およびＲ１４は、Ｈ、−（ＣＲ８Ｒ９）ｑＮＨ２、−（ＣＲ８Ｒ９）ｑＯＨ、ＣＦ３、Ｆ、ＣＯＯＨから独立に選択されてよいか、あるいは、Ｒ１０とＲ１１またはＲ１２とＲ１３またはＲ１３とＲ１４は、それらが結合した炭素と一緒になって、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１個または複数のヘテロ原子を含有し、５個までの−（ＣＲ８Ｒ９）ｑＯＨ、−（ＣＲ８Ｒ９）ｑＮＨ２またはＣＯＯＨ基で場合によって置換されている、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルまたは３〜６員のヘテロアルキル環を形成してよく、
Ｙ＝結合、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−であり、
Ｒ１５は、
【００２２】
【化２】
2009537502.tif 000004
を表し、
Ｒ１６は、それぞれ独立にＨまたはＯＨであり、
Ｒ１７は、Ｈ、ＯＨおよびＮＨ２から独立に選択され、
Ｒ１８は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨおよび−ＣＯＯＨから独立に選択され、
但し、Ｒ１６、Ｒ１７およびＲ１８から選択される２個以下の基は、ＨまたはＣＨ３を表し、
Ｒ１９およびＲ２０は、それぞれ独立にＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルを表し、
ｍ、ｐおよびｑは、それぞれ独立に０〜４の間の整数を表し、
但し、Ｒ７部分は、１２個を超える炭素原子を含有せず、−ＰＯ（ＯＨ）２、−ＣＦ２ＰＯ（ＯＨ）２、−ＣＯＯＨ、ＯＨまたはＮＨ２から選択される少なくとも１個の官能基を含有する］または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００２３】
上記の構造は代表的な互変異性体を示すものであり、本発明は、式（Ｉ）の化合物のすべての互変異性体、例えば、エノール化合物が図示されている場合のケト化合物およびその逆を包含する。
【００２４】
特定の立体異性体が具体的に（例えば、構造式中の関連する立体中心における太線もしくは点線の結合によって、構造式中においてＥもしくはＺ配置を有するものとして二重結合を描写することによって、または、立体化学規定の命名法を使用することによって）示されているのでない限り、すべての立体異性体が純化合物およびその混合物として本発明の範囲内に含まれる。別段の明示がない限り、個々の鏡像異性体、ジアステレオマー、幾何異性体、ならびにそれらの組合せおよび混合物は、すべて本発明によって包含される。多形結晶形態および溶媒和物および水和物も、本発明の範囲内に包含される。
【００２５】
さらなる態様において、本発明は、医薬品として使用するための、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容されるその塩としての３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン誘導体を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】ラパマイシンの構造を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
（定義）
冠詞「ａ」および「ａｎ」は、本明細書において、１つの、または１つを超える（すなわち、少なくとも１つの）その冠詞の文法的な目的語を指すために使用される。例として、「ａｎ  ａｎａｌｏｇｕｅ（類縁体）」は、１つの類縁体または１つを超える類縁体を意味する。
【００２８】
本明細書において使用する場合、「類縁体」という用語は、別のものと構造的には同様であるが組成（原子同士の置き換え、または特定の官能基の有無等）においてわずかに異なる化学化合物を指す。
【００２９】
特に、「３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン類縁体」という用語は、ＷＯ２００４／００７７０９の方法によって製造され、式（ＩＩ）で示される通りの３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン化合物を指す。これらの化合物は「親化合物」とも称され、本出願において、これらの用語は相互交換可能に使用される。本出願において、「３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン類縁体」という用語は、３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン自体への言及を含む。
【００３０】
本明細書において使用する場合、「誘導体」という用語は、半合成（ｓｅｍｉ−ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ）有機化学によってそれらの親化合物から改変された化学化合物を指す。
【００３１】
特に、「３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン誘導体」という用語は、親化合物の半合成改質によって製造された、上記式（Ｉ）の３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン誘導体、または薬学的に許容されるその塩を指す。これらの化合物は、「本発明の化合物」または「ラパマイシンの３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）誘導体」とも称され、本出願において、これらの用語は相互交換可能に使用される。
【００３２】
本明細書において使用する場合、「自己免疫障害」という用語は、一般に組織への慢性の炎症性損傷によって特徴付けられる、自己抗原に対して適応的免疫応答が展開される場合の状態を指す。本発明の範囲内に含まれるがそれらに限定されない自己免疫障害は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ、重症筋無力症、インスリン依存性糖尿病、および多発性硬化症である。
【００３３】
本明細書において使用する場合、「炎症疾患」という用語は、炎症系が過剰反応して組織損傷および／または無用な副作用を引き起こす場合の状態を含む。過剰反応は、非自己抗原、自己抗原に対してであり得るか、または自然に発生し得る。炎症性疾患は、アレルギー（過敏反応としても知られている）を含む。炎症疾患の例は、乾癬、皮膚炎、湿疹、脂漏症、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含むがこれらに限定されない）、肺炎症（喘息、慢性閉塞性肺疾患、肺気腫、急性呼吸促迫症候群、および気管支炎を含む）、関節リウマチ、および眼ブドウ膜炎を含むがこれらに限定されない。
【００３４】
本明細書において使用する場合、「癌」という用語は、皮膚中の、または、例えば乳房、前立腺、肺、腎臓、膵臓、胃、もしくは腸であるがこれらに限定されない体内臓器中の、細胞の悪性または良性の成長を指す。癌は、隣接組織内へ浸潤し、遠隔臓器、例えば、骨、肝臓、肺、または脳に広がる（転移する）傾向がある。本明細書において使用する場合、癌という用語は、黒色腫、リンパ腫、白血病、線維肉腫、横紋筋肉腫、および肥満細胞腫等であるがこれらに限定されない転移性腫瘍細胞型と、結腸直腸癌、前立腺癌、小細胞肺癌および非小細胞肺癌、乳癌、膵癌、膀胱癌、腎癌、胃癌、膠芽細胞腫、原発性肝癌、ならびに卵巣癌等であるがこれらに限定されない組織の癌腫型との両方を含む。
【００３５】
本明細書において使用する場合、「Ｂ細胞悪性腫瘍」という用語は、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫、および非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む障害の群を含む。これらは、血液および造血臓器の腫瘍性疾患である。これらの疾患は、骨髄および免疫系の機能不全を引き起こし、宿主が感染症および出血に対して高度の感受性を示すようにする。
【００３６】
本明細書において使用する場合、「血管疾患」という用語は、過剰増殖性の血管障害（例えば、再狭窄および血管閉塞）、血管移植片のアテローム性動脈硬化症、循環器疾患、脳血管疾患、および末梢血管疾患（例えば、冠動脈疾患、動脈硬化、アテローム性動脈硬化症、非アテローム性動脈硬化症、または血管壁損傷）を含むがこれらに限定されない。
【００３７】
本明細書において使用する場合、「神経再生」という用語は、神経細胞成長の刺激を指し、神経突起伸長および神経細胞の機能回復を含む。神経再生が著しい治療有効性を持ち得る疾患および障害は、物理的損傷（例えば、脊髄損傷または外傷、坐骨または顔面神経の病変または損傷）または病状（例えば、糖尿病）によって引き起こされるかにかかわらず、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、三叉神経痛、舌咽神経痛、ベル麻痺、筋ジストロフィー、脳卒中、進行性筋萎縮症、進行性延髄遺伝性筋萎縮症（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｂｕｌｂａｒ  ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ  ｍｕｓｃｕｌａｒ  ａｔｒｏｐｈｙ）、頸部脊椎症、ギランバレー症候群、認知症、末梢神経障害、および末梢神経損傷を含むがこれらに限定されない。
【００３８】
本明細書において使用する場合、「線維症」という用語は、細胞外マトリックスの過剰産生に関連する疾患を指し、サルコイドーシス、ケロイド、糸球体腎炎、末期腎不全、肝線維症（肝硬変、アルコール性肝疾患、および脂肪性肝炎を含むがこれらに限定されない）、慢性移植腎症、外科的癒着、脈管障害、心臓線維症、肺線維症（特発性肺線維症および潜源性線維化肺胞炎を含むがこれらに限定されない）、黄斑変性症、網膜および硝子体網膜症、ならびに化学療法または放射線誘発線維症を含む（がこれらに限定されない）。
【００３９】
本明細書において使用する場合、「移植片対宿主病」という用語は、同種幹細胞／骨髄移植後に観察される合併症を指す。これは、ドナーからの感染防御細胞が患者の体を異なるものまたは異質なものとして認識したときに発生する。続いて、これらの感染防御細胞は、あたかも感染症を攻撃するかのように、患者の体内の組織を攻撃する。移植片対宿主病は、移植後の最初の１００日以内に発生する場合には急性として、移植後１００日を超えて発生する場合には慢性として分類される。一般的に関与する組織は、肝臓、消化管、および皮膚を含む。慢性移植片対宿主病は、幹細胞／骨髄移植後の患者の約１０〜４０パーセントにおいて発生する。
【００４０】
本明細書において使用する場合、「バイオアベイラビリティ」という用語は、薬物またはその他の物質が、投与後、吸収される、または、生物活性部位において利用可能になるまでの程度または割合を指す。この特性は、化合物の溶解性、内臓における吸収速度、タンパク質結合および代謝の程度等を含む多数の要因に依存する。本明細書には、当業者によく知られているバイオアベイラビリティに関する種々の試験が記載されている（Ｔｒｅｐａｎｉｅｒら、１９９８年、Ｇａｌｌａｎｔ−Ｈａｉｄｎｅｒら、２０００年も参照）。
【００４１】
「水溶性」という用語は、本願において使用する場合、水性媒体、例えば、ｐＨ７．４のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中における溶解性を指す。
【００４２】
式（Ｉ）の化合物等の本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される無機または有機の酸または塩基、および第四級アンモニウム酸付加塩から形成される従来の塩を含む。適切な酸性塩のさらに具体的な例は、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、フマル酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、グリコール酸塩、ギ酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、パルモン酸塩（ｐａｌｍｏｉｃ）、マロン酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、フェニル酢酸塩、グルタミン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、フマル酸塩、トルエンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化水素酸塩、リンゴ酸塩、ステアリン酸塩、タンニン酸塩等を含む。シュウ酸等の他の酸は、それ自体が薬学的に許容されるものではないが、本発明の化合物および薬学的に許容されるその塩を得るときの中間体として有用な塩の調製において有用となり得る。適切な塩基性塩のさらに具体的な例は、ナトリウム、リチウム、カリウム、マグネシウム、アルミニウム、カルシウム、亜鉛、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミンおよびプロカイン塩を含む。以後、本発明による化合物に言及する場合は、式（Ｉ）の化合物および薬学的に許容されるその塩の両方を含む。
【００４３】
アルキル、アルケニル、およびアルキニル基は、直鎖であっても、分枝していてもよい。
【００４４】
Ｃ１〜Ｃ４アルキル基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピルおよびｎ−ブチルを含む。
【００４５】
Ｃ２〜Ｃ４アルケニル基の例は、エテニルおよび２−プロペニルを含む。
【００４６】
Ｃ２〜４アルキニル基の例は、エチニルを含む。
【００４７】
Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基は、場合によって分枝していてよい３〜６個の炭素原子を含むシクロアルキル環を指す。例としては、シクロプロピル、シクロブチル、メチル−シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが挙げられる。
【００４８】
Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される１個または複数のヘテロ原子を含有する３〜６員のヘテロアルキル環は、１個または２個のヘテロ原子、特に１個のヘテロ原子を含有する環を含む。例としては、フラン、ピラン、オキセタン、オキシラン、ピペリジン、ピロリジン、アゼチジン、アジリジン、チイラン、チエタン、チオフェン、チオピランおよびモルホリンが挙げられる。
【００４９】
３〜６員のヘテロアルキル環のための任意の置換基例としては、−ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、ＮＨ２、ＣＨ２ＮＨ２、およびＣＯＯＨが挙げられる。一般に、３〜６員のヘテロアルキル環は、置換されていなくてもよいし、１または２個、例えば１個の置換基によって置換されていてもよい。
【００５０】
本発明は、上記に示したように、３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン誘導体（本発明の化合物）、これらの化合物の調製のための方法、これらの化合物への中間体、およびこれらの化合物を薬に使用するための方法を提供する。
【００５１】
好ましくは、Ｒ７は、７個以下、特に５個以下の炭素原子を含有する。
【００５２】
Ｒ７は、好ましくは、−ＰＯ（ＯＨ）２、−ＯＨ、−ＣＯＯＨおよび−ＮＨ２、より好ましくは−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、または−ＮＨ２、特に−ＣＯＯＨおよびＯＨ、中でも特にＯＨから選択される少なくとも１個の官能基を含有する。好ましくは、Ｒ７は、２個以上の置換基、例えば２−ＯＨ基を含有する。
【００５３】
好適には、Ｘは、ＣＨ２を表す。
【００５４】
好適には、ｐは、０または１を表す。
【００５５】
好適には、ｍは、０または１を表す。
【００５６】
好適には、ｑは、０、１または２を表す。
【００５７】
好適には、Ｒ１１は、Ｈを表す。好適には、Ｒ１２は、Ｈを表す。
【００５８】
好適には、Ｒ１３は、ＨまたはＯＨを表す。
【００５９】
ｐが１を表す場合、好適には、Ｒ１０は、Ｍｅ、ＯＨまたはＣＨ２ＯＨを表す。
【００６０】
ｐが１を表す場合、好適には、Ｒ１１は、Ｍｅ、ＨまたはＣＨ２ＯＨを表す。
【００６１】
ｍおよびｐがどちらも０を表す場合、好適には、Ｒ１２およびＲ１３はどちらもＨを表し、Ｒ１４は−（ＣＲ８Ｒ９）ｑ−ＯＨ［式中、ｑ＝０または１であり、Ｒ８およびＲ９はどちらもＨを表す］を表す。
【００６２】
ｐが１を表し、ｍが０を表す場合、好適には、Ｒ１０およびＲ１１はどちらもＨを表し、Ｒ１２はＨを表し、Ｒ１３はＨ、ＯＨまたはＮＨ２を表し、Ｒ１４は−（ＣＲ８Ｒ９）ｑ−ＯＨ［式中、ｑ＝０または１であり、Ｒ８およびＲ９はどちらもＨを表す］を表す。
【００６３】
Ｒ６が−ＰＯＲ１５Ｒ１６を表す場合、好適には、Ｒ１５およびＲ１６は、どちらもＣＨ３を表すか、またはどちらもＣＨ２ＣＨ３を表す。
【００６４】
好適には、Ｒ６は、ヒドロキシル酢酸、３−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロピオン酸、２，３−ジヒドロキシプロピオン酸、３−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチルプロピオン酸または２，２−ビス（ヒドロキシメチル）プロピオン酸とのエステルの形成から誘導される残基を表す。
【００６５】
化合物のセットの一例において、Ｒ６は、Ｃ（Ｏ）Ｒ７を表す。
【００６６】
好ましくは、Ｒ７は、ヒドロキシ酢酸、３−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロピオン酸、２，３−ジヒドロキシプロピオン酸、３−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチルプロピオン酸および２，２−ビス（ヒドロキシメチル）プロピオン酸からなるリストより選択される酸、特に２，２−ビス（ヒドロキシメチル）プロピオン酸と、大環アルコールとの縮合によって形成される部分である。
【００６７】
Ｒ１５が
【００６８】
【化３】
2009537502.tif 000005
を表す場合、
この部分の例としては、（ｉ）グルコース（すなわち、Ｒ１８はＣＨ２ＯＨを表し、そして各Ｒ１６およびＲ１７はＯＨを表す）、例えばＤ−グルコース、（ｉｉ）グルコサミン（すなわち、Ｒ１８はＣＨ２ＯＨを表し、各Ｒ１６はＯＨを表し、Ｒ１７は、ＮＨ２を表す）、例えばＤ−グルコサミン、（ｉｉｉ）グルクロン酸（すなわち、Ｒ１８はＣＯＯＨを表し、各Ｒ１６およびＲ１７はＯＨを表す）、例えばＤ−グルクロン酸、ならびに（ｉｖ）アラビノース（すなわち、Ｒ１８はＨを表し、各Ｒ１６およびＲ１７はＯＨを表す）、例えばＤ−アラビノースとアセタールを形成することによって形成される部分が挙げられる。
【００６９】
Ｒ１５が
【００７０】
【化４】
2009537502.tif 000006
を表す場合、
この部分の例としては、フルクトース（すなわち、Ｒ１６はそれぞれＯＨを表す）、例えばＤ−フルクトースの残基とアセタールを形成することによって形成される部分が挙げられる。
【００７１】
Ｒ１５が
【００７２】
【化５】
2009537502.tif 000007
を表す場合、
この部分の例としては、グルクロン酸（すなわち、各Ｒ１６はＯＨを表す）、例えばＤ−グルクロン酸の残基とエステルを形成することによって形成される部分が挙げられる。
【００７３】
概して、本発明の化合物は、式（ＩＩ）の親化合物の半合成誘導体化によって調製される。
【００７４】
したがって、式（Ｉ）の本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩を調製するための方法は、
（ａ）式（ＩＩ）の親化合物：
【００７５】
【化６】
2009537502.tif 000008
またはその保護誘導体を、式（ＩＩＩ）の化合物：
ＨＯ−Ｒ６  （ＩＩＩ）
またはＲ６の活性誘導体と反応させるステップ、
（ｂ）式（Ｉ）の化合物またはその塩を、式（Ｉ）の別の化合物または別の薬学的に許容されるその塩に変換するステップ、あるいは、
（ｃ）式（Ｉ）の被保護化合物を脱保護するステップ
を含む。
【００７６】
上記で使用されている「活性誘導体」という用語は、（限定ではなく、例として）エステルの場合、カルボン酸、ハロゲン化アシル、混合無水物、対称無水物またはカルボン酸エステル；エーテルの場合、ハロゲン化アルキル、アルキルメシラート、アルキルトリフラート、アルキルトシラート、または他の適切に活性化されたアルキル誘導体；リン酸エステルおよびホスホン酸エステルの場合、クロロホスフェート、ジアルキルシアノホスフェート、ジアルキルジアルキルホスホルアミデート、またはクロロホスファイト；あるいは、グリコシル基から誘導されるアセタールの場合、グリコシルドナー、例えば、ハロゲン化グリコシル、チオグリコシド、１−Ｏ−アシルグリコシド、オルトエステル、１−Ｏもしくは１−Ｓカーボネート、トリクロロイミデート、４−ペンテニルグリコシド、グリコシルリン酸エステル、１−Ｏ−スルホニルまたは１−Ｏ−シリル化グリコシドを使用するものを指す。
【００７７】
プロセス（ａ）において、式（ＩＩ）の親化合物は、ＷＯ２００４／００７７０９に記載されている通りに調製され得る。
【００７８】
本明細書において提供される具体的な方法および参考文献に加えて、当業者は、Ｖｏｇｅｌ’ｓ  ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｆｕｒｎｉｓｓら、１９８９年）およびＭａｒｃｈ’ｓ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｏｒｇａｎｉｃ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ＳｍｉｔｈおよびＭａｒｃｈ、２００１年）を含むがこれらに限定されない、合成方法のための標準教科書的な文献を参考にしてもよい。
【００７９】
さらに、本ヒドロキシル基は、当業者に利用可能である多数の標準的なヒドロキシ保護戦略のうちの１つによって、保護することができる。ヒドロキシル基は、置換アルキルエーテル、置換ベンジルエーテルおよびシリルエーテルを含むがこれらに限定されないエーテルを形成することによって保護され得る。シランの活性型（塩化シリルまたはシリルトリフラートを含むがこれらに限定されない）を、適切な塩基の存在下で親化合物と反応させることにより、エーテル、好ましくは、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、およびｔ−ブチルジフェニルシリルを含むがこれらに限定されないシリルエーテルが形成される。その後、この保護基は、酸加水分解またはフッ化物補助開裂（ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｃｌｅａｖａｇｅ）のいずれかによって除去され得る。１，２−ジオールは、アセトン誘導体の縮合に基づき、アセトニドとして保護され得る。これは、酸触媒作用によって除去され得る。
【００８０】
式（ＩＩ）の親化合物は、半合成（すなわち、プロセス（ａ））用のテンプレートとして使用され得る。Ｃ−４０におけるペンダントヒドロキシル基は、当業者に既知である多数の合成変換を介し、例えばアシル化、アルキル化、グリコシル化、またはリン酸化によって官能化され得る。
【００８１】
プロセス（ａ）において、Ｒ６が式−Ｃ（Ｏ）Ｒ７またはＹ−Ｒ１５［式中、Ｒ１５は、
【００８２】
【化７】
2009537502.tif 000009
を表し、Ｙ＝結合である］の部分を表す場合、ヒドロキシエステルの形成、またはＯ−アシル化は、式（ＩＩ）の化合物のヒドロキシル基を、好ましくは活性化形態の対応するカルボン酸、例えば式（ＩＩＩＡｉ）もしくは（ＩＩＩＡｉｉ）の化合物：
【００８３】
【化８】
2009537502.tif 000010
と、または、式（ＩＩＩＢ）の化合物：
【００８４】
【化９】
2009537502.tif 000011
［式中、Ｗは、カルボン酸を求核攻撃に対して活性化する基である］と反応させることによって媒介され得る。カルボン酸は、限定ではなく、例として、ハロゲン化アシル（例えば、Ｗ＝Ｃｌ）、混合無水物（すなわち、Ｗ＝ＯＣ（Ｏ）Ｒ’）、対称無水物（Ｗ＝ＯＣ（Ｏ）Ｒ７）、またはカルボン酸エステル（すなわち、Ｗ＝ＯＲ’）の形成によって活性化され得る。
【００８５】
式（ＩＩＩＡｉ）、（ＩＩＩＡｉｉ）、または（ＩＩＩＢ）の化合物は、当業者に公知の標準的な方法を使用して、市販のカルボン酸から調製でき、特定の態様において、式（ＩＩＩＡｉ）［式中、Ｒ７は、−（ＣＲ８Ｒ９）ｍ（ＣＲ１０Ｒ１１）ｐＣＲ１２Ｒ１３Ｒ１４である］の化合物は、米国特許第５３６２７１８号、米国特許第５６６５７７２号、またはＥＰ０６６３９１６に記載されている方法を使用して調製され得る。
【００８６】
好ましくは、親化合物は、有機媒体中において、塩基の存在下で酸塩化物または混合無水物のいずれかと反応する。使用され得る塩基は、ピリジン、４，４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、２，６−ルチジン、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、その他のトリアルキルアミン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、または１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノン−５−エン（ＤＢＮ）を含むがこれらに限定されない。
【００８７】
プロセス（ａ）において、Ｒ６が式−Ｃ（Ｏ）Ｒ７またはＹ−Ｒ１５［式中、Ｒ１５は、
【００８８】
【化１０】
2009537502.tif 000012
を表し、そしてＹ＝−Ｃ（Ｏ）Ｏ−または−（ＣＨ２）２−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−である］の部分を表す場合、これらのヒドロキシエステルの形成には、式（ＩＩ）の化合物のヒドロキシル基を、式（ＩＶ）の化合物：
【００８９】
【化１１】
2009537502.tif 000013
［式中、Ｔ＝結合または−Ｏ（ＣＨ２）２−であり、そしてＲ２１は、アルキルまたはアリール基、好ましくはアリール基、特にパラ−ニトロフェニル基である］等の活性カーボネートを形成する試薬と反応させることが必要である。
【００９０】
続いて、式（ＩＶ）の化合物は、式（ＩＩＩ）の化合物と反応して、カーボネートリンカーを介して４０−ヒドロキシル基と結合したＲ６を有する化合物を生成し得る（ＷＯ２００４／１０１５８３）。
【００９１】
同様に、適切に活性化された選択したアルキル誘導体と反応させることにより、Ｃ−４０における異なるヒドロキシエーテルで親化合物を誘導体化し、親化合物の４０−Ｏ−アルキル誘導体である本発明の化合物を形成することができる。活性化されたアルキル基は、ハロゲン化アルキル（ＲＣｌ、ＲＩ、ＲＢｒ）、アルキルメシラート（ＲＯＳ（Ｏ）２ＣＨ３）、アルキルトリフラート（ＲＯＳ（Ｏ）２ＣＦ３）、アルキルトシラート（ＲＯＳ（Ｏ）２ＰｈＭｅ）の形成を含むがこれらに限定されない多数の方法のうちの１つによって活性化されたアルキル基を指す。活性化されたアルキル基は、その後、有機媒体中において、適切な塩基の存在下で親化合物と反応され得る。その他の反応位置におけるアルキル化を回避するために、反応条件を最適化するための標準的な方法が当業者によって用いられ得る。
【００９２】
同様に、親化合物はリン酸化されてもよく、そしてリン酸エステルの脱保護後、親化合物の４０−Ｏ−ホスホ−誘導体である本発明の化合物、または親化合物の４０−Ｏ−ジアルキルホスホ−誘導体である本発明の化合物と、当業者に公知の方法によって作製されるこれらの誘導体の塩とを生成し得る。リン酸エステルは、直接的に、または、Ｏ−ホスファイト（すなわち、（Ｒ’Ｏ）２ＰＯＲ）を介して間接的に、形成され得、この３価の亜リン酸塩は酸化され（好ましくは、ｍＣＰＢＡ等であるがこれに限定されない過酸の作用によって）５価のリン酸塩になる。直接的なリン酸化法は、親化合物を、保護されているクロロホスフェート（例えば、（ＢｎＯ）２Ｐ（Ｏ）Ｃｌ、（アルキルＯ）２Ｐ（Ｏ）Ｃｌ）と、好ましくは有機媒体中のＤＭＡＰの存在下において反応させること、または、親化合物を、オキシ塩化リン（ＰＯＣｌ３）と、トリエチルアミン等の塩基の存在下で反応させ、続いて、得られたＯ−ジクロロホスフェート（すなわち、ＲＯＰ（Ｏ）Ｃｌ２）の酸加水分解をすること、またはジアルキルシアノホスフェートとのカップリングを含むがこれらに限定されない（ＷＯ０１／８１３５５）。ジアルキルまたはジアリールクロロホスフェートは、ジアルキルまたはジアリールホスファイト（すなわち、（ＲＯ）２Ｐ（Ｏ）Ｈ）を、塩基の存在下で四塩化炭素と反応させることにより、インサイチュで生成され得る。Ｏ−ホスファイトを（Ｏ−ホスフェートへの酸化のために）形成する方法は、親化合物を、ジアルキルジアルキルホスホルアミデート（好ましくはジアルキルジイソプロピルホスホリルアミデート（ｄｉａｌｋｙｌ  ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｍｉｄａｔｅ））と、塩基（好ましくはテトラゾール）の存在下でカップリングすること、または、塩基の存在下でクロロホスファイトを使用してカップリングすることを含むがこれらに限定されない（Ｅｖａｎｓら、１９９２年）。保護基の選定は重要であり、リン酸エチルエステルおよびリン酸メチルエステルは、酸性または塩基性条件下で容易に加水分解可能なものではない。好ましくは、保護基は、ベンジルエステル（ヨウ化ナトリウム／クロロトリメチルシランによって促進される加水分解によって開裂される（ＷＯ０１／８１３５５））、または２−シアノエチルエステル（弱塩基触媒の開裂によって開裂される）を含むがこれらに限定されない。同様に、親化合物の４０−Ｏ−ジアルキルホスホノ−誘導体である本発明の化合物は、親化合物を、（上述のように）適切に活性化されたホスホン酸ジアルキルまたはジアルキルホスファイトと反応させることによって生成できる。
【００９３】
プロセス（ａ）において、Ｒ１５が式
【００９４】
【化１２】
2009537502.tif 000014
または
【００９５】
【化１３】
2009537502.tif 000015
の部分を表す場合、グリコシド結合の形成、またはＯ−グリコシル化は、ヒドロキシル基を対応するグリコシルドナー（好ましくは活性型の対応するグリコシルドナー）（ＴｏｓｈｉｍａおよびＴａｔｓｕｔａ（１９９３年）を参照）、例えば式（ＩＩＩＣ）の化合物：
【００９６】
【化１４】
2009537502.tif 000016
と、または、式（ＩＩＩＤ）の化合物：
【００９７】
【化１５】
2009537502.tif 000017
と反応させることによって媒介され得る。
【００９８】
ハロゲン化グリコシル（Ｚ＝Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ）、チオグリコシド（Ｚ＝ＳＭｅ、ＳＥｔ、ＳＰｈ、ＳＰｙ、ＳＣＮ）、１−Ｏ−アシルグリコシド（Ｚ＝ＯＣ（Ｏ）Ｒ）、オルトエステル（Ｚ＝ＯＣ（Ｍｅ）（Ｒ）（式（ＩＩＩＣ／ＩＩＩＤ）のＯ−Ｃ２））、１−Ｏもしくは１−Ｓカーボネート（Ｚ＝ＯＣ（Ｓ）ＳＭｅ、Ｚ＝ＯＣ（Ｏ）イミダゾール、Ｚ＝ＯＣ（Ｓ）イミダゾール、Ｚ＝ＳＣ（Ｓ）ＯＥｔ）、トリクロロイミデート（Ｚ＝ＯＣ（＝ＮＨ）ＣＣｌ３）、４−ペンテニルグリコシド（Ｚ＝ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、リン酸エステル（例えば、Ｚ＝ＯＰ（Ｏ）（ＯＰｈ）２）、１−Ｏ−スルホニル（Ｚ＝トシル）、または１−Ｏ−シリル化グリコシド（Ｚ＝ＯＴＭＳまたはＯＴＢＳ）を含むがこれらに限定されない「グリコシルドナー」を使用して、親化合物は、有機媒体中において、活性剤（ルイス酸または重金属塩等、ＴｏｓｈｉｍａおよびＴａｔｓｕｔａ、１９９３年を参照）の存在下で優先的にグリコシル化され得る。使用される具体的なグリコシルドナーおよび反応条件は、αまたはβグリコシドのいずれが形成されるかを決定することになる。アシル化について前述したように、親化合物中に存在する任意のヒドロキシル基は保護またはマスクされ得るので、１当量のグリコシルドナーを使用することで４０−Ｏ−アシル化がもたらされる。グリコシルドナー上の残留ヒドロキシルは、例えば、Ｏ−アセテート、Ｏ−ベンゾエート、１，２−アセトニドとして保護されているはずであり、そのため、さらなる脱保護が必要となる。さらに、グリカール等の２−デオキシグリコシルドナーを使用して（還元ステップも必要である）、親化合物の２’−デオキシ−グリコシドを調製することができ、２，６−アンヒドロ−２−チオ糖（２，６−ａｎｈｙｄｒｏ−２−ｔｈｉｏｓｕｇａｒ）のような２，６−ジデオキシグリコシルドナーを使用して、親化合物の２’，６’−ジデオキシ−グリコシドを調製することができる。
【００９９】
プロセス（ｂ）において、当業者に公知である従来の方法により、塩形成および交換が実行され得る。式（Ｉ）の化合物の相互変換は、公知のプロセスによって実行され得、例えば、ヒドロキシおよびケト基は、本明細書の他の箇所に記載されているような酸化／還元によって相互変換され得る。式（Ｉ）の化合物［式中、Ｒ６は、−ＰＯ（ＯＨ）２を表す］は、式（Ｉ）の対応する化合物［式中、Ｒ６は、ＯＨを表す］をリン酸化することによって調製され得る。適切な条件は、本明細書の他の箇所において提供される。
【０１００】
プロセス（ａ）および（ｃ）において、保護基およびそれらの除去手段の例は、Ｔ  Ｗ  Ｇｒｅｅｎｅ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｊ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９１年）に見られ得る。適切なヒドロキシル保護基は、加水分解によって除去され得るアルキル（例えば、メチル）、アセタール（例えば、アセトニド）、およびアシル（例えば、アセチルまたはベンゾイル）と、触媒的加水分解によって除去され得るアリールアルキル（例えば、ベンジル）、または、酸加水分解もしくはフッ化物イオン補助開裂によって除去され得るシリルエーテルとを含む。
【０１０１】
プロセス（ａ）に加えて、式（Ｉ）の本発明の化合物［式中、Ｒ６は、Ｒ７を表す］は、リパーゼ触媒エステル交換によって合成され得る。限定ではなく、例として、式（ＩＩ）の親化合物は、Ｇｕら（２００５年）によって記載されている反応条件において、リパーゼＰＳ−Ｃ「アマノ」ＩＩの存在下で、本明細書の実施例においてさらに示すように、式（Ｖ）のビニルエステルと反応され得る。この方法論は、ビニルエステルの使用に限定されるものではなく、エステル交換は、他のリパーゼまたはエステラーゼによって触媒され得る。
【０１０２】
【化１６】
2009537502.tif 000018
本発明の他の化合物は、それ自体が公知の方法によって、または上述したものに類似する方法によって調製され得る。
【０１０３】
本発明の新規化合物は、免疫抑制剤、抗真菌剤、抗癌剤、抗炎症剤、神経再生剤、または、移植拒絶反応、移植片対宿主病、自己免疫障害、血管疾患、および／もしくは線維症の治療のための薬剤として有用な化合物を製造するために直接的に、ならびに、さらなる半合成または生物変換用のテンプレートとして、有用である。ラパマイシンおよびその類縁体の半合成誘導体化のための方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、
【０１０４】
【化１７】
2009537502.tif 000019
に記載されているそれらの方法の改変を含む（がこれらに限定されない）。
【０１０５】
中間体（例えば、式（ＩＩ）の化合物）の上記構造は、互変異性化に供され得、代表的な互変異性体が図示されている場合、すべての互変異性体、例えば、エノール化合物が図示されている場合のケト化合物およびその逆、が言及されることを意図していることが理解される。
【０１０６】
さらなる態様において、本発明は、薬における本発明の化合物の使用を提供する。さらなる態様において、本発明は、免疫抑制の誘発もしくは維持、神経再生の刺激、または、癌、Ｂ細胞悪性腫瘍、真菌感染症、移植拒絶反応、移植片対宿主病、自己免疫障害、炎症疾患、血管疾患および線維症の治療のための薬剤の、あるいは創傷治癒の調節において使用するための薬剤の調製における、本発明の化合物の使用を提供する。
【０１０７】
当業者であれば、ルーチン実験により、真菌の成長を阻害するこれらの化合物の能力を測定することができるであろう（例えば、Ｂａｋｅｒ，  Ｈ．ら、１９７８年、ＮＣＣＬＳ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｂｒｏｔｈ  ｄｉｌｕｔｉｏｎ  ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｅｓｔｉｎｇ  ｆｏｒ  ｙｅａｓｔｓ：  Ａｐｐｒｏｖｅｄ  ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｍ２７−Ａ、１７巻、９号、１９９７年）。さらに、当業者であれば、ルーチン実験により、腫瘍細胞の成長を阻害するこれらの化合物の能力を測定することができるであろう（Ｄｕｄｋｉｎ，  Ｌ．ら、２００１年、Ｙｕら、２００１年参照）。さらなる態様において、本発明の化合物は、免疫抑制を誘発するために有用であり、これらの分野における化合物の効力を測定するためのアッセイは、当業者に周知であり、例えば、免疫抑制活性、Ｗａｒｎｅｒ，  Ｌ．Ｍ．ら、１９９２年、Ｋａｈａｎら（１９９１年）ならびにＫａｈａｎおよびＣａｍａｒｄｏ（２００１年）；同種移植片、Ｆｉｓｈｂｅｉｎ，  Ｔ．Ｍ．ら、２００２年、Ｋｉｒｃｈｎｅｒら、２０００年；自己免疫／炎症／喘息、Ｃａｒｌｓｏｎ，  Ｒ．Ｐ．ら、１９９３年、Ｐｏｗｅｌｌ，  Ｎ．ら、２００１年；Ｉ型糖尿病、Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈ，  Ａ．ら、２００２年；乾癬、Ｒｅｉｔａｍｏ，  Ｓ．ら、２００１年；関節リウマチ、Ｆｏｅｙ，  Ａ．ら、２００２年；線維症、Ｚｈｕ，  Ｊ．ら、１９９９年、Ｊａｉｎ，  Ｓ．ら、２００１年、Ｇｒｅｇｏｒｙら、１９９３年であるがこれらに限定されない。
【０１０８】
免疫抑制を誘発する本発明の化合物の能力は、本目的のために使用される標準的な試験において実証され得る。さらなる態様において、本発明の化合物は、抗線維化、神経再生、および抗血管新生機構に関して有用であり、当業者であれば、ルーチン実験により、血管新生を防止するこれらの化合物の能力を測定することができるであろう（例えば、Ｇｕｂａ，  Ｍ．ら、２００２年）。当業者であれば、ルーチン実験により、例えば薬剤溶出ステントにおける、血管の過剰増殖性疾患を治療するためのこれらの化合物の有用性を測定することができるであろう（例えば、Ｍｏｒｉｃｅ，  Ｍ．Ｃ．ら、２００２年）。また、当業者であれば、ルーチン実験により、これらの化合物の神経再生能力を測定することができるであろう（例えば、Ｍｙｃｋａｔｙｎ，  Ｔ．Ｍ．ら、２００２年、Ｓｔｅｉｎｅｒら、１９９７年）。
【０１０９】
本発明は、本発明の化合物を薬学的に許容される担体とともに含む、医薬組成物も提供する。
【０１１０】
当業者であれば、下記および実施例中に記載されているものを含むがこれらに限定されない当業者に公知のインビボおよびインビトロの方法を使用して、本発明の化合物の薬物動態およびバイオアベイラビリティを測定することができ、下記ならびにＧａｌｌａｎｔ−Ｈａｉｄｎｅｒら、２０００年およびＴｒｅｐａｎｉｅｒら、１９９８年およびそれらの中の参考文献に記載されているものを含むがこれらに限定されない代替的なアッセイが、当業者には周知である。化合物のバイオアベイラビリティは、多数の要因（例えば、水溶性、内臓における吸収速度、タンパク質結合および代謝の程度）によって測定され、その要因のそれぞれは、下記に記載するようなインビトロ試験によって測定され得るものであり、当業者には、これらの要因のうちの１つまたは複数における改良が、化合物のバイオアベイラビリティにおける改良につながることが十分に理解される。あるいは、化合物のバイオアベイラビリティは、以下でさらに詳細に記載するようなインビボの方法を使用して計測され得る。
【０１１１】
（Ｃａｃｏ−２透過アッセイ）
インビトロテクノロジー社（ＩＶＴ社、米国メリーランド州ボルティモア）によって提供されるような、融合性のＣａｃｏ−２細胞（Ｌｉ，  Ａ．Ｐ．、１９９２年、Ｇｒａｓｓ，  Ｇ．Ｍ．ら、１９９２年、Ｖｏｌｐｅ，  Ｄ．Ａ．ら、２００１年）を、２４ウェルのコーニングコースター社製トランスウェルフォーマットで使用することができる。頂端チャンバに、０．１５ｍＬのハンクス平衡緩衝液（ＨＢＢＳ）ｐＨ７．４、１％ＤＭＳＯ、０．１ｍＭのルシファーイエローを収納する。基底チャンバに、０．６ｍＬのＨＢＢＳ  ｐＨ７．４、１％ＤＭＳＯを収納する。続いて、対照群および試験群を加湿インキュベータ内において３７℃でインキュベートし、１３０ｒｐｍで１時間振とうする。ルシファーイエローは、（接着結合間の）傍細胞ルートのみを介して透過し、ルシファーイエローの高い見掛けの透過率（Ｐａｐｐ）は、アッセイ中の細胞損傷を示し、そのようなウェルはすべて除いた。プロプラノロール（公知の輸送効果のない、良好な受動透過）およびアセブタロール（Ｐ−糖タンパク質の能動流出によって減衰された不十分な受動透過）を参照化合物として使用する。化合物は、頂端または基底チャンバに化合物を塗布する（０．０１ｍＭ）ことにより、単方向および双方向フォーマットで試験され得る。頂端または基底チャンバ内の化合物を、ＨＰＬＣ−ＭＳによって分析する。結果は、見掛けの透過率Ｐａｐｐ（ｎｍ／ｓ）および流束比（ＡからＢ対ＢからＡ）として表現される。
【０１１２】
【化１９】
2009537502.tif 000020
体積アクセプター（Ｖｏｌｕｍｅ  Ａｃｃｅｐｔｏｒ）：０．６ｍＬ（Ａ＞Ｂ）および０．１５ｍＬ（Ｂ＞Ａ）
単層の面積：０．３３ｃｍ２
Δ時間：６０分。
【０１１３】
流束比の正値は、細胞の頂端面からの能動流出を示す。
【０１１４】
（ヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ）安定性アッセイ)
肝ホモジネートは、ある一定量の化合物に、ＣＹＰ４５０ｓ（例えば、ＣＹＰ２Ｃ８、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ１Ａ、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｅ１）、エステラーゼ、アミダーゼ、およびフラビンモノオキシゲナーゼ（ＦＭＯ）を含む第Ｉ相（酸化）酵素に対する固有の脆弱性を提供する。
【０１１５】
ヒト肝ミクロソームに曝露した状態で、試験化合物の経時的な化合物の消失をＬＣ−ＭＳによってモニタリングすることにより、それらの半減期（Ｔ１／２）を測定することができる。０．００１ｍＭの化合物を、肝臓のヒトミクロソーム細胞亜画分（０．２５ｍｇ／ｍＬタンパク質および補因子として飽和レベルのＮＡＤＰＨ）とともに、３７℃、０．１ＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．４で４０分間インキュベートする。所定の時間間隔で、アセトニトリルを試験試料に添加して、タンパク質を沈殿させ、代謝を停止させる。試料を遠心分離し、ＨＰＬＣ−ＭＳによって親化合物について分析する。
【０１１６】
（インビボバイオアベイラビリティアッセイ）
インビボアッセイを使用して、化合物のバイオアベイラビリティを計測することもできる（例えば、Ｃｒｏｗｅら、１９９９年を参照）。一般に、化合物を、腹腔内（ｉ．ｐ．）または静脈内（ｉ．ｖ．）および経口（ｐ．ｏ．）の両方で試験動物（例えば、マウスまたはラット）に投与し、そして一定間隔で血液試料を採取して、薬物の血漿中濃度が時間とともにどのように変動するかを検査する。時間に伴う血漿中濃度の経時変化は、標準モデルを使用して、化合物の絶対的バイオアベイラビリティをパーセントとして算出するために使用され得る。一般的なプロトコールの例を以下に記載する。
【０１１７】
本発明の化合物または親化合物３ｍｇ／ｋｇをｉ．ｖ．で、または、本発明の化合物または親化合物１０ｍｇ／ｋｇをｐ．ｏ．で、マウスに投薬する。５分、１５分、１時間、４時間、および２４時間間隔で血液試料を採取し、試料中における本発明の化合物または親化合物の濃度をＨＰＬＣによって測定する。続いて、血漿中濃度の経時変化を使用して、血漿中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ−体循環に到達する未変化体薬物の総量に正比例する）、最大（ピーク）血漿中薬物濃度、最大血漿中薬物濃度が発生する時間（ピーク時）等の主要パラメータを導出することができ、バイオアベイラビリティの精密測定において使用される付加的要因は、化合物の終末半減期、全身クリアランス、定常状態分布容積、およびＦ％を含む。続いて、非コンパートメントまたはコンパートメント法によってこれらのパラメータを分析し、算出されたパーセントのバイオアベイラビリティを得るが、この種の方法の例については、Ｇａｌｌａｎｔ−Ｈａｉｄｎｅｒら、２０００年およびＴｒｅｐａｎｉｅｒら、１９９８年およびそれらの中の参考文献およびそれらの中の参考文献を参照されたい。
【０１１８】
本発明の前述の化合物およびその配合物は、任意の従来の方法によって投与され得、限定ではなく例として、それらは、非経口で、経口で、局所的に（口腔、舌下、または経皮を含む）、医療機器（例えば、ステント）を介して、吸入によって、または注射（皮下または筋肉内）を介して、投与され得る。治療は、単一用量、またはある期間にわたる複数用量からなり得る。
【０１１９】
本発明の化合物は単独で投与することが可能だが、１つまたは複数の許容される担体とともに医薬配合物として存在することが好ましい。担体は、本発明の化合物と適合性があるという意味で「許容される」ものでなくてはならず、そのレシピエントに有害であってはならない。適切な担体の例は、以下でさらに詳細に説明されている。
【０１２０】
本発明の化合物は、単独で、またはその他の治療剤と組み合わせて投与され得、２つ（以上）の薬剤の同時投与は、それぞれの使用される用量を著しく低下させることを可能にし、それにより、見られる副作用を減少させる。
【０１２１】
一実施形態において、本発明の化合物は、免疫抑制の誘発または維持のための、移植拒絶反応、移植片対宿主病、自己免疫障害、または炎症疾患の治療のための別の治療剤と同時投与され、好ましい薬剤は、免疫調節剤、例えば、アザチオプリン、コルチコステロイド、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、ＦＫ５０６、ミコフェノール酸モフェチル、ＯＫＴ−３、およびＡＴＧを含むがこれらに限定されない。
【０１２２】
代替的な実施形態において、本発明の化合物は、癌またはＢ細胞悪性腫瘍の治療のための別の治療剤と同時投与され、好ましい薬剤は、メトトレキサート、ロイコボリン、アドリアマイシン、プレドニゾン、ブレオマイシン、シクロホスファミド、５−フルオロウラシル、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ドキソルビシン、タモキシフェン、トレミフェン、酢酸メゲストロール、アナストロゾール、ゴセレリン、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体（例えば、ＨｅｒｃｅｐｔｉｎＴＭ）、カペシタビン、塩酸ラロキシフェン、ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）、ＴａｒｃｅｖａＴＭ、ＥｒｂｉｔｕｘＴＭ）、ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ＡｖａｓｔｉｎＴＭ）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ＶｅｌｃａｄｅＴＭ）、Ｇｌｉｖｅｃ（登録商標）、またはＨｓｐ９０阻害剤（例えば、１７−ＡＡＧ）を含むがこれらに限定されない。さらに、本発明の化合物は、放射線治療または外科手術を含むがこれらに限定されないその他の療法と組み合わせて投与され得る。
【０１２３】
一実施形態において、本発明の化合物は、血管疾患の治療のための別の治療剤と同時投与され、好ましい薬剤は、ＡＣＥ阻害剤、アンギオテンシンＩＩ受容体拮抗薬、フィブリン酸誘導体、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、βアドレナリン遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、酸化防止剤、抗凝固剤、および抗血小板剤（ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）（例えば、ＰｌａｖｉｘＴＭ）を含むがこれらに限定されない。
【０１２４】
一実施形態において、本発明の化合物は、神経再生の刺激のための別の治療剤と同時投与され、好ましい薬剤は、神経栄養因子、例えば、神経成長因子、グリア由来成長因子、脳由来成長因子、毛様体神経栄養因子、およびニューロトロフィン−３を含むがこれらに限定されない。
【０１２５】
一実施形態において、本発明の化合物は、真菌感染症の治療のための別の治療剤と同時投与され、好ましい薬剤は、アムホテリシンＢ、フルシトシン、エキノカンジン（例えば、カスポファンギン、アニデュラファンギン、またはミカファンギン）、グリセオフルビン、イミダゾールまたはトリアゾール系抗真菌剤（例えば、クロトリマゾール、ミコナゾール、ケトコナゾール、エコナゾール、ブトコナゾール、オキシコナゾール、テルコナゾール、イトラコナゾール、フルコナゾール、またはボリコナゾール）を含むがこれらに限定されない。
【０１２６】
当業者には明らかなように、同治療レジメンの一部として、同時投与により、２つ以上の治療剤を患者に送達するあらゆる手段が含まれる。２つ以上の剤を単一の配合物で同時に投与してもよいが、これは必須ではない。薬剤は、異なる配合物で、異なる時間に投与され得る。
【０１２７】
配合物は、好都合にも、単位用量形態で存在し得、薬剤学の技術分野において周知の方法のいずれかによって調製され得る。そのような方法は、活性成分（本発明の化合物）を、１つまたは複数の副成分を構成する担体と会合させるステップを含む。概して、配合物は、活性成分を液体担体もしくは微粉化した固体担体または両方と均一かつ密接に会合させ、その後、必要に応じて産物を形状化することによって調製される。
【０１２８】
本発明の化合物は、通常、経口または任意の非経口ルートで、活性成分を含む医薬配合物の形態で、場合によって、薬学的に許容される用量形態の、非毒性で有機または無機の酸付加塩または塩基付加塩の形態で、投与される。障害および治療される患者、ならびに投与ルートに応じて、組成物は可変用量で投与され得る。
【０１２９】
例えば、本発明の化合物は、経口で、口腔内に、または舌下に、即時−、遅延−、または制御放出適用のための、錠剤、カプセル剤、オビュール剤（ｏｖｕｌｅ）、エリキシル剤、溶液、または懸濁液の形態で投与され得、これらは香味剤または着色剤を含有し得る。
【０１３０】
経口投与に適切な本発明の化合物の溶液または懸濁液は、賦形剤、例えばＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、分散剤、例えばポリソルベート８０、界面活性剤、および可溶化剤、例えばポリエチレングリコール、ホサール（Ｐｈｏｓａｌ）５０ＰＧ（ホスファチジルコリン、大豆脂肪酸、エタノール、モノ／ジグリセリド、プロピレングリコール、およびパルミチン酸アスコルビルからなる）も含有し得る。
【０１３１】
そのような錠剤は、微結晶性セルロース、ラクトース（例えば、ラクトース一水和物または無水ラクトース）、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、第二リン酸カルシウム、およびグリシン等の賦形剤、デンプン（好ましくは、トウモロコシ、バレイショ、タピオカデンプン）、デンプングリコール酸ナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、および特定の複合ケイ酸塩等の崩壊剤、ならびに、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、マクロゴール８０００、スクロース、ゼラチン、およびアカシア等の顆粒化結合剤を含有し得る。さらに、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセリル、およびタルク等の滑沢剤が含まれ得る。
【０１３２】
同様の種類の固体組成物が、ゼラチンカプセル内の充填剤として用いられ得る。この点で好ましい賦形剤は、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖、または高分子量ポリエチレングリコールを含む。水性懸濁液および／またはエリキシル剤の場合、本発明の化合物は、種々の甘味剤もしくは香味剤、着色物質、または染料と、乳化剤および／または懸濁化剤と、および、水、エタノール、プロピレングリコール、およびグリセリン等の希釈剤、ならびにそれらの組合せと組み合わせられ得る。
【０１３３】
錠剤は、場合によって１つまたは複数の副成分とともに、圧縮または成形によって作製され得る。圧縮錠剤は、粉末または顆粒等の遊離流動形態の活性成分を、場合によって、結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、保存料、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤、または分散剤と混合し、適切な機械内で圧縮することによって調製され得る。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿潤化した粉末化合物の混合物を、適切な機械内で成形することによって作製され得る。錠剤は、場合によって、被覆されるかまたは刻み目をつけられてもよいし、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを望ましい放出プロフィールを提供する種々の割合で使用して、中の活性成分の遅い放出または制御放出を提供するように配合され得る。
【０１３４】
経口投与に適した本発明に従う配合物は、カプセル剤、カシェ剤、または錠剤等、それぞれ所定量の活性成分を含有する別個の単位として；粉末または顆粒として；水性液体または非水液体中の溶液または懸濁液として；あるいは、水中油型乳濁液または油中水型乳濁液として存在し得る。活性成分は、ボーラス、舐剤、またはペーストとして存在し得る。
【０１３５】
口内の局所投与に適した配合物は、香味基剤、通常スクロースおよびアカシアまたはトラガカント中に活性成分を含むトローチ剤；ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシア等の不活性基剤中に活性成分を含む香錠；ならびに、適切な液体担体中に活性成分を含む洗口液を含む。
【０１３６】
上記で特に述べた成分に加えて、本発明の配合物は、問題の配合物の種類を考慮して、当該技術分野で慣行の他の薬剤を含み得ること、例えば、経口投与に適したものは、香味剤を含み得ることを理解すべきである。
【０１３７】
局所投与に適応する医薬組成物は、軟膏、クリーム、懸濁液、ローション、粉末、溶液、ペースト、ゲル、含浸包帯剤、噴霧剤、エアロゾルまたは油、経皮デバイス、散布粉末等として配合され得る。これらの組成物は、従来の方法によって活性薬剤を含有するように調製され得る。したがって、それらは、保存料、薬物透過を補助するための溶媒、クリームまたは軟膏中の皮膚軟化剤、およびローション用のエタノールまたはオレイルアルコールのような、適合性のある従来の担体および添加物を含み得る。そのような担体は、組成物の約１％〜約９８％までで存在し得る。より通常には、そのような担体は、組成物の約８０％までを形成する。単なる例示として、クリームまたは軟膏は、望ましいコンシステンシーを有するクリームまたは軟膏を製造するために十分な分量で、約５〜１０重量％の化合物を含有して、十分な分量の親水性材料と水とを混合することによって調製され得る。
【０１３８】
経皮投与に適応する医薬組成物は、長期間にわたってレシピエントの表皮に密着したままであることが意図される別個のパッチとして存在し得る。例えば、活性薬剤は、イオン導入によってパッチから送達され得る。
【０１３９】
外部組織、例えば口および皮膚への適用の場合、組成物は、好ましくは局所軟膏またはクリームとして適用される。軟膏中に配合される場合、活性薬剤は、パラフィン系または水混和性軟膏基剤のいずれかとともに用いられ得る。
【０１４０】
あるいは、活性薬剤は、水中油型クリーム基剤または油中水型基剤とともに、クリーム中に配合される場合もある。
【０１４１】
非経口的投与の場合、流体単位用量形態は、活性成分と、例えば水、アルコール、ポリオール、グリセリン、および植物油であるがこれらに限定されない無菌ビヒクルとを利用して調製され、水が好ましい。活性成分は、使用されるビヒクルおよび濃度に応じて、ビヒクル中に懸濁または溶解され得る。溶液を調製するとき、活性成分は、適切なバイアルまたはアンプル内に充填して密閉される前に、注射用水中に溶解され、ろ過滅菌され得る。
【０１４２】
有利なことに、局所麻酔薬、保存料、および緩衝剤等の薬剤は、ビヒクル中に溶解され得る。安定性を向上させるために、バイアル内に充填して真空下で水を除去した後、組成物を凍結させてもよい。続いて、乾燥した凍結乾燥粉末がバイアル内に密閉され、使用前に液体を再構成するために、付属するバイアルの注射用水が供給され得る。
【０１４３】
非経口懸濁液は、活性成分が溶解される代わりにビヒクル中に懸濁され、ろ過によって滅菌を実現できないことを除き、溶液と実質的に同じ方式で調製される。活性成分を無菌ビヒクル中に懸濁させる前にエチレンオキシドに曝露することで滅菌され得る。有利なことに、界面活性剤または湿潤剤が組成物中に含まれ、活性成分の均一分布を容易にする。
【０１４４】
本発明の化合物は、当該技術分野において公知の医療機器を使用して投与され得る。例えば、一実施形態において、本発明の医薬組成物は、米国特許第５３９９１６３号、米国特許第５３８３８５１号、米国特許第５３１２３３５号、米国特許第５０６４４１３号、米国特許第４９４１８８０号、米国特許第４７９０８２４号、または米国特許第４５９６５５６号において開示されているデバイス等、無針皮下注射器具によって投与され得る。本発明において有用な周知のインプラントおよびモジュールの例としては、制御された速度で薬剤を分散するための埋め込み型マイクロ注入ポンプを開示している米国特許第４４８７６０３号、皮膚を経由して薬剤を投与するための治療機器を開示している米国特許第４４８６１９４号、正確な注入速度で薬剤を送達するための薬剤注入ポンプを開示している米国特許第４４４７２３３号、持続的な薬物送達のための可変流量の埋め込み型注入装置を開示している米国特許第４４４７２２４号、マルチチャンバコンパートメントを有する浸透圧薬物送達システムを開示している米国特許第４４３９１９６号、および、浸透圧薬物送達システムを開示している米国特許第４４７５１９６号が挙げられる。具体的な実施形態において、３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン誘導体は、例えば、ＷＯ０１／８７２６３および関連出版物に記載されているもの、またはＰｅｒｉｎが記載しているもの（Ｐｅｒｉｎ，  ＥＣ、２００５年）に対応する、薬剤溶出ステントを使用して投与され得る。当業者には、他多数のそのようなインプラント、送達システム、およびモジュールが公知である。
【０１４５】
本発明の化合物の投与される用量は、特定の化合物、関与する疾患、被検者、疾患の性質および重症度、被検者の身体状態、ならびに、選択された投与ルートによって変動する。適切な用量は、当業者によって容易に判断され得る。
【０１４６】
組成物は、投与の方法に応じて、０．１重量％、好ましくは５〜６０％、より好ましくは１０〜３０重量％の本発明の化合物を含有し得る。
【０１４７】
当業者には、本発明の化合物の個々の用量の最適な分量および間隔が、治療されている状態の性質および程度、投与の形態、ルート、および部位、ならびに治療されている特定の被検者の年齢および状態によって決定されること、さらに、使用される適切な用量を最終的に医師が判断することが認識される。この投薬を適切な回数だけ繰り返してよい。副作用が発現した場合、通常の臨床業務に従って、投薬の量および／または頻度は変更または減少され得る。
【実施例】
【０１４８】
一般的な方法および材料
材料
すべての試薬を商業的供給元から得て、特に明記しない限り、それ以上精製することなく使用した。
【０１４９】
培養物
Ｓ．ハイグロスコピカスＭＧ２−１０［ＪＭＮＯＱＬｈｉｓ］を、培地１の寒天プレート（下記参照）上に２８℃で維持した。培地１上で成長させた後、胞子ストックを調製し、蒸留水中の２０％ｗ／ｖグリセロール：１０％ｗ／ｖラクトース内で保存し、−８０℃で保管した。０．１ｍＬの凍結ストックを、２５０ｍＬフラスコ中の５０ｍＬの培地２（下記参照）に播種することにより、植物培養物を調製した。培養物を、２８℃、３００ｒｐｍで３６〜４８時間インキュベートした。
【０１５０】
製造方法
植物培養物を、培地３内に２．５〜５％ｖ／ｖで播種した。２６℃、３００ｒｐｍで６〜７日間、培養を行った。
【０１５１】
給餌手順
播種の２４〜４８時間後に、選択したカルボン酸の給餌／添加を行い、特に明記しない限り、１〜２ｍＭで給餌した。
【０１５２】
培地１：
【０１５３】
【化２０】
2009537502.tif 000021
その後、１２１℃で２０分間オートクレーブ処理することにより、培地を滅菌した。
【０１５４】
培地２：ＲａｐＶ７種培地
【０１５５】
【化２１】
2009537502.tif 000022
その後、１２１℃で２０分間オートクレーブ処理することにより、培地を滅菌した。
【０１５６】
滅菌後、０．１６ｍＬの４０％グルコースをそれぞれ７ｍＬの培地に添加した。
【０１５７】
培地３：ＭＤ６培地（発酵培地）
【０１５８】
【化２２】
2009537502.tif 000023
滅菌前に、０．４ｍＬのシグマ社製α−アミラーゼ（ＢＡＮ２５０）を１Ｌの培地に添加した。
【０１５９】
培地を１２１℃で２０分間滅菌した。
【０１６０】
滅菌後、０．３５ｍＬの無菌４０％フルクトースおよび０．１０ｍＬのＬ−リシン（水中１４０ｍｇ／ｍＬ、ろ過滅菌済み）をそれぞれ７ｍＬに添加した。
【０１６１】
培地４：ＲａｐＶ７ａ種培地
【０１６２】
【化２３】
2009537502.tif 000024
その後、１２１℃で２０分間オートクレーブ処理することにより、培地を滅菌した。
【０１６３】
培地５：ＭＤ６／５−１培地（発酵培地）
【０１６４】
【化２４】
2009537502.tif 000025
培地を１２１℃で３０分間滅菌した。
【０１６５】
滅菌後、１リットル当たり１５ｇのフルクトースを添加した。
４８時間後、０．５ｇ／ＬのＬ−リシンを添加した。
【０１６６】
分析方法
方法Ａ
注射量：０．００５〜０．１ｍＬ（感度に応じて必要とされる通り）。アジレント社製「スフェリソルブ」「ラピッドレゾルーション（Ｒａｐｉｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）」カートリッジＳＢ  Ｃ８、３ミクロン、３０ｍｍ×２．１ｍｍでＨＰＣＬを実行し、下記移動相を流した：
移動相Ａ：純水中０．０１％ギ酸
移動相Ｂ：アセトニトリル中０．０１％ギ酸
流速：１ｍＬ／分。
【０１６７】
線形勾配を使用して、０分で５％Ｂから２．５分で９５％Ｂとし、４分まで９５％Ｂに保持し、次のサイクルまで５％Ｂに戻した。２５４ｎｍにおけるＵＶ吸光度によって、および／またはマイクロマス社（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ）製クワトロマイクロ質量分析計（Ｑｕａｔｔｒｏ−Ｍｉｃｒｏ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）を使用するエレクトロスプレーイオン化（陽または陰）質量分析によって検出を行った。
【０１６８】
方法Ｂ
注射量：０．０２ｍＬ。５０℃に維持された、３ミクロンＢＤＳ  Ｃ１８ハイパーシル（サーモハイパーシル−キーストーン社（ＴｈｅｒｍｏＨｙｐｅｒｓｉｌ−Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  Ｌｔｄ）製）カラム、１５０×４．６ｍｍでＨＰＬＣを実行し、下記移動相を流した：
移動相Ａ：アセトニトリル（１００ｍＬ）、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）、１Ｍ酢酸アンモニウム（１０ｍＬ）に脱イオン水を加え１Ｌにしたもの
移動相Ｂ：脱イオン水（１００ｍＬ）、トリフルオロ酢酸（１ｍＬ）、１Ｍ酢酸アンモニウム（１０ｍＬ）にアセトニトリルを加え１Ｌにしたもの
流量：１ｍＬ／分。
【０１６９】
５５％Ｂ〜９５％Ｂの線形勾配を１０分間使用し、続いて、９５％Ｂで２分、５５％Ｂまで０．５分、５５％Ｂでさらに２．５分とした。２８０ｎｍにおけるＵＶ吸光度により、化合物検出を行った。
【０１７０】
方法Ｃ
ＨＰＬＣシステムは、アジレント社製ＨＰ１１００を備えるものであり、４０℃に維持された、３ミクロンＢＤＳ  Ｃ１８ハイパーシル（サーモハイパーシル−キーストーン社製）カラム、１５０×４．６ｍｍで実行し、下記移動相を流した：
移動相Ａ：脱イオン水
移動相Ｂ：アセトニトリル
流速：１ｍＬ／分。
【０１７１】
システムをブルカーダルトニクス社製エスカイヤ３０００エレクトロスプレー質量分析計と連結させた。５００〜１０００ダルトンの走査範囲にわたり、陽陰切り替えを使用した。
【０１７２】
５５％Ｂ〜９５％Ｂの線形勾配を１０分間使用し、続いて、９５％Ｂで２分、５５％Ｂまで０．５分、５５％Ｂでさらに２．５分とした。
【０１７３】
合成方法
特に明記しない限り、反応はすべて、市販の乾燥溶媒を使用して無水条件下で行った。ＬＣ−ＵＶ−ＭＳにより、エレクトロスプレー源を装備するブルカーダルトニクス社製エスカイヤ３０００＋質量分析計と連結されたアジレント社製１１００ＨＰＬＣにおいて反応をモニタリングした。１０分間の水：アセトニトリル  ｖ：ｖ  ３０：７０〜１００％アセトニトリルの線形勾配、続いて１００％アセトニトリルにおける５分間のアイソクラティックな期間を用いて、１ｍＬ／分におけるフェノメネクス社製ハイパークローン（Ｈｙｐｅｒｃｌｏｎｅ）カラム、ＢＤＳ  Ｃ１８  ３ｕ（１５０×４．６ｍｍ）で、分離を達成した。
【０１７４】
抗癌活性のインビトロバイオアッセイ
オンコテスト（Ｏｎｃｏｔｅｓｔ）試験施設である、実験腫瘍学研究所（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）（オンコテストＧｍｂＨ、フライブルク）で、単層増殖アッセイにおける、１２のヒト腫瘍細胞系のパネルの抗癌活性を調べるための化合物のインビトロ評価が行われ得る。１２の選択した細胞系の特徴が表１にまとめられている。
【０１７５】
【化２５】
2009537502.tif 000026
オンコテスト細胞系は、Ｒｏｔｈら、１９９９年によって記載されているように、ヒト腫瘍異種移植片から確立される。ドナーの異種移植片の起源は、Ｆｉｅｂｉｇら、１９９９年によって記載された。その他の細胞系は、ＮＣＩ（Ｈ４６０、ＳＦ−２６８、ＯＶＣＡＲ−３、ＤＵ１４５、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８）から得るか、またはＤＳＭＺ、ドイツ、ブラウンシュヴァイク（ＬＮＣＡＰ）から購入するかのいずれかである。
【０１７６】
特別の明記のない限り、細胞系はすべて、ＲＰＭＩ１６４０培地と、１０％ウシ胎仔血清と、０．１ｍｇ／ｍＬのゲンタマイシンとを含有する「調合済み」培地（ＰＡＡ、ドイツ、ケルベ（Ｃｏｌｂｅ））中、加湿雰囲気（９５％空気、５％ＣＯ２）内、３７℃で成長させる。
【０１７７】
単層アッセイ−プロトコールの簡単な説明
改変されたヨウ化プロピジウムアッセイを使用して、１２のヒト腫瘍細胞系の成長に対する試験化合物の効力を評価することができる（Ｄｅｎｇｌｅｒら、（１９９５年））。
【０１７８】
手短に述べると、トリプシン処理によって対数期の培養物から細胞を収穫し、計数し、９６ウェル平底マイクロタイタープレートに、細胞系に応じた細胞密度（５〜１００００生存細胞／ウェル）で平板培養する。細胞に指数増殖を再開させるために２４時間回復させた後、０．０１ｍＬの培養培地（１プレート当たり６個の対照ウェル）または試験化合物を含有する培養培地をウェルに添加する。各濃縮物を３通りに平板培養する。化合物を２つの濃縮物に塗布（０．００１μＭおよび０．０１μＭ）する。４日間の連続曝露に続いて、試験化合物を有する細胞培養培地と有さない細胞培養培地とを０．２ｍＬのヨウ化プロピジウム（ＰＩ）水溶液（７ｍｇ／Ｌ）に置き換える。生細胞の割合を計測するために、プレートを凍結させて細胞を透過化処理する。プレートを解凍した後、サイトフローラ（Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ）４０００マイクロプレートリーダー（励起５３０ｎｍ、発光６２０ｎｍ）を使用して、生存細胞の総数に直接の因果関係を与える蛍光性を計測する。
【０１７９】
成長阻害は、処理済み／対照  ×  １００（％Ｔ／Ｃ）として表現される。活性化合物の場合、ＩＣ５０およびＩＣ７０値は、化合物濃度対細胞生存率をグラフ化することによって推定され得る。
【０１８０】
（実施例１）
３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシンの発酵および単離
ＷＯ０４／００７７０９に記載されている方法に従って、３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシンを製造した。手短に述べると、ラパマイシン遺伝子ｒａｐＪ、ｒａｐＭ、ｒａｐＮ、ｒａｐＯ、ｒａｐＱ、およびｒａｐＬを担持する適切な発現ベクターでＳ．ハイグロスコピカスＭＧ２−１０の培養物を変換して、Ｓ．ハイグロスコピカスＭＧ２−１０［ｒａｐＪＭＮＯＱＬｈｉｓ］菌株を製造した。ＷＯ０４／００７７０９に記載されている方法を使用して、Ｓ．ハイグロスコピカスＭＧ２−１０［ｒａｐＪＭＮＯＱＬｈｉｓ］の培養物を成長させ、シクロへプタンカルボン酸で給餌した。培養抽出物のＬＣＭＳおよびＬＣＭＳｎ分析は、製造されたラパマイシン類縁体のｍ／ｚ比がラパマイシンのものより低い１６原子質量単位であり、Ｃ−３６で３−ヒドロキシシクロヘプチル部分と置き換えられた３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル部分と一致することを示した。
【０１８１】
（実施例２）
３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシンのリパーゼ触媒エステル化を経た３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）−４０−Ｏ−［２，２−ビス（ヒドロキシメチル）プロピオニル］ラパマイシン
無水ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（２ｍＬ）中の、３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン（１０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）、ビニル２，２，５−トリメチル［１．３−ジオキサン］−５−カルボキシレート（１００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、リパーゼＰＳ−Ｃ「アマノ」ＩＩ（１００ｍｇ）、および分子篩０．５ｎｍ（５０ｍｇ）の混合物を、アルゴン雰囲気下、４３℃まで加熱した。７２時間後、ＬＣ／ＭＳモニタリングは、出発原料の完全変換を示した。ＴＨＦ（１０ｍＬ）を添加し、混合物をセライトのパッドでろ過した。酵素をＴＨＦ（２×１０ｍＬ）で洗浄し、組み合わせた有機抽出物を減圧濃縮した。残留物をＴＨＦ（７．５ｍＬ）中に溶解し、Ｈ２ＳＯ４（２．５ｍＬ、０．５Ｎ）を添加した。溶液を室温で５時間静置させ、引き続き、ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ、５％）および水（１０ｍＬ）の添加によって反応物をクエンチした。水性混合物をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出し、組み合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥した。溶媒を除去し、産物を半固体として得た。この材料をＬＣＭＳによって分析し、予期した産物を主成分として含有することが示された。
【０１８２】
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ１０３６．６［Ｍ＋Ｎａ］＋。ナトリウム付加物の断片化により、予期した通り、ｍ／ｚ８６３．５、７４２．４、６１４．３、５７４．３、および４４１．４のイオンを得た。
【０１８３】
（実施例３）
３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）−４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン
３．１．  ２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシエチルトリフラート
６ｍＬのジクロロメタン中の２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）−エチレングリコール（１２５ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）および２，６−ルチジン（０．０８ｍＬ、０．６９ｍｍｏｌ）の溶液を、−７８℃まで冷却した。トリフルオロメタンスルホン酸無水物（０．１１ｍＬ、０．６５ｍｍｏｌ）を５分間かけて添加し、−７８℃でさらに１５分間攪拌し続け、トリフラートの形成を完了させた。下記３．２に記載されている通りの反応のために、トリフラートをインサイチュで使用した。
【０１８４】
３．２．  ４０−Ｏ−［２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）］エチル−３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシン
３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシンおよび２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピリジンを、室温にて、２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシエチルトリフラートで処理する。続いて、この溶液を、窒素の緩流で元の体積の３分の１になるまで濃縮し、結果として生じた懸濁液を、室温でさらに７２時間攪拌する。その期間の後、飽和炭酸水素ナトリウム溶液および水を添加し、混合物を約３０分間攪拌する。有機層を分離し、水相を酢酸エチルで２回抽出する。組み合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮して、無色油を得る。ヘキサンからヘキサン／アセトン（ｖ：ｖ  １：１）の勾配を使用するシリカカラムクロマトグラフィーによる精製により、産物を無色固体として得る。
【０１８５】
３．３．  ３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）−４０−Ｏ−（２−ヒドロキシ）エチルラパマイシン
アセトン中の４０−Ｏ−［２−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）］エチル−３６−デス（３−メトキシ−４−ヒドロキシシクロヘキシル）−３６−（３−ヒドロキシシクロヘプチル）ラパマイシンの溶液を、室温にて、硫酸（０．５Ｎ）で処理する。溶液を室温で約３時間静置させ、引き続き、飽和炭酸水素ナトリウム溶液および水の添加によってクエンチする。続いて、水性混合物を酢酸エチルで３回抽出し、組み合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥する。減圧濃縮により無色固体が得られ、さらにＨＰＬＣ（水／アセトニトリル  ｖ：ｖ  ２０／８０）によって精製され得る。
【０１８６】
参考文献：
【０１８７】
【化２６】
2009537502.tif 000027
【０１８８】
【化２７】
2009537502.tif 000028
【０１８９】
【化２８】
2009537502.tif 000029
【０１９０】
【化２９】
2009537502.tif 000030
【０１９１】
【化３０】
2009537502.tif 000031
【０１９２】
【化３１】
2009537502.tif 000032
【０１９３】
【化３２】
2009537502.tif 000033
【図１】
2009537502.tif 000040
【国際調査報告】
2009537502.tif 000041
2009537502.tif 000042
2009537502.tif 000043