(57)【要約】  糖尿病又は乾癬のような自己免疫疾患を、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントを投与することによって治療する方法。その抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、治療の過程にわたって投与され、治療の過程の間、その抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、静脈内に投与される場合は、３００μｇ／ｋｇを超えない合計量で投与され、静脈内以外に投与される場合は、その静脈内投与の３００μｇ／ｋｇと生物的に同等な合計量を超えない合計量で投与される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｆｃ（ガンマ）受容体に対して結合しない又は低下した結合を有する抗ＣＤ３抗体及びそのフラグメントからなる群より選択された抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントを、治療過程の間に動物に投与することを含む自己免疫疾患の治療方法であって、治療過程の間に該抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントを投与する場合、静脈内に投与する場合は合計量が３００μｇ／ｋｇを超えず、静脈内以外に投与する場合は、合計量が３００μｇ／ｋｇの静脈内投与の生物的に同等な量を超えない、自己免疫疾患の治療方法。
【請求項２】
該自己免疫疾患が糖尿病である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該自己免疫疾患が乾癬である請求項１に記載の方法。
【請求項４】
該抗体又はフラグメントが治療的有効量で投与され、静脈内に投与される場合は合計量が１７５μｇ／ｋｇを超えず、静脈内以外に投与される場合は、合計量が１７５μｇ／ｋｇの静脈内投与の生物的に同等な量を超えない請求項１に記載の方法。
【請求項５】
該抗体又はフラグメントが、静脈内に投与される場合は１５０μｇ／ｋｇを超えない合計量で投与され、静脈内以外に投与される場合は、合計量が１５０μｇ／ｋｇの静脈内投与の生物的に同等な量を超えない請求項４に記載の方法。
【請求項６】
該抗体又はそのフラグメントが、静脈内に投与される場合は５０μｇ／ｋｇを超えない合計量で投与され、静脈内以外に投与される場合は、合計量が５０μｇ／ｋｇの静脈内投与の生物的に同等な量を超えない請求項５に記載の方法。
【請求項７】
該抗体又はフラグメントが、静脈内に投与される場合は少なくとも８μｇ／ｋｇの合計量で投与され、静脈内以外に投与される場合は、合計量が８μｇ／ｋｇの静脈内投与の生物的に少なくとも同等な量である請求項６に記載の方法。
【請求項８】
該抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントが、静脈内に投与される場合は０．１μｇ／ｋｇ・日を下回らない量で投与され、静脈内以外に投与される場合は、その量が０．１μｇ／ｋｇ・日のその静脈内投与の生物的に同等な量を下回らない請求項１に記載の方法。
【請求項９】
該抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントが、静脈内に投与される場合は３０μｇ／ｋｇ・日を上回らない量で投与され、静脈内以外に投与される場合は、その量が３０μｇ／ｋｇ・日のその静脈内投与の生物的に同等な量を上回らない請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
該抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントが、静脈内に投与される場合は２５μｇ／ｋｇ・日を上回らない量で投与され、静脈内以外に投与される場合は、その量が２５μｇ／ｋｇ・日のその静脈内投与の生物的に同等な量を上回らない請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
該抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントが、静脈内に投与される場合は２０μｇ／ｋｇ・日を上回らない量で投与され、静脈内以外に投与される場合は、その量が２０μｇ／ｋｇ・日のその静脈内投与の生物的に同等な量を上回らない請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
該抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントが、静脈内に投与される場合は１５μｇ／ｋｇ・日を上回らない量で投与され、静脈内以外に投与される場合は、その量が１５μｇ／ｋｇ・日のその静脈内投与の生物的に同等な量を上回らない請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
該抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントが、静脈内に投与される場合は１０μｇ／ｋｇ・日を上回らない量で投与され、静脈内以外に投与される場合は、その量が１０μｇ／ｋｇ・日のその静脈内投与の生物的に同等な量を上回らない請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
該治療過程が１０日間を超えない請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
該治療過程が８日間を超えない請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
該治療過程が６日間を超えない請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
該抗体又はフラグメントが静脈内に投与される請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
該動物が哺乳類である請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
該哺乳類が霊長類である請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
該霊長類がヒトである請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
Ｆｃ（ガンマ）受容体に対して結合しない又は低下した結合を有する抗ＣＤ３抗体及びそのフラグメントからなる群より選択された抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントを動物に投与することを含み、該抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ３抗体フラグメントが、動物にＴ細胞受容体変調をもたらすのに有効な量で投与される、動物にＴ細胞受容体変調をもたらす方法。
【請求項２２】
該抗体又はフラグメントが静脈内に投与される請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
該動物が哺乳類である請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
該哺乳類が霊長類である請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
該霊長類がヒトである請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
Ｆｃ（ガンマ）受容体に対して結合しない又は低下した結合を有する抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメント；許容される医薬担体；及び糖尿病の治療のための治療過程の間に該抗体又はフラグメントを投与するための説明書であって、該治療過程の間に、該抗ＣＤ３抗体又はフラグメントの合計量は、静脈内に投与する場合は３００μｇ／ｋｇを超えない量で投与されるとの説明書；を含む製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
−関連出願−
本出願は、２００６年６月６日に出願された米国仮特許出願の優先権を主張し、この仮特許出願は、２００６年６月６日に出願された米国特許出願第１１／４４７６２８号として出願され、この特許出願は、３７ＣＦＲ１．５３（ｃ）（２）の要件により２００７年４月１６日に仮特許出願として出願され、これらの出願の開示事項は、本願明細書に全体として参照して組み込まれる。
【０００２】
本発明は、糖尿病又は乾癬のような自己免疫疾患を治療するための抗ＣＤ３抗体の投与に関する。１つの態様において、本発明は、低下した用量レベルにおける抗ＣＤ３抗体又はそのフラグメントの投与、糖尿病又は乾癬のような自己免疫疾患の治療に関する。
【背景技術】
【０００３】
抗ＣＤ３抗体又はそのフラグメントは、糖尿病などの自己免疫疾患の治療に採用されてきた。例えば、特許文献１と特許文献２は、１回の服用あたり５〜２０ｍｇの量で抗ＣＤ３抗体又はそのフラグメントを投与する、糖尿病などの自己免疫疾患の治療を教示している。１つの態様において、抗ＣＤ３抗体は、１０〜１４日間にわたり５〜１０ｍｇ／日の量で投与される。
【０００４】
ヘロルドらは、１型糖尿病の患者に単クーロン抗ＣＤ３抗体、ｈＯＫＴ３γ１（Ａｌａ−Ａｌａ）を与える臨床研究を開示している。この研究において、患者は、１４日間にわたって５００μｇ／ｋｇの抗体の全用量を与えられる。１４日間にわたる治療過程で与えられる用量は下記の通りである。
【０００５】
第１日        １．４２μｇ／ｋｇ
第２日        ５．６７μｇ／ｋｇ
第３日        １１．３μｇ／ｋｇ
第４日        ２２．６μｇ／ｋｇ
第５〜１４日  ４５．４μｇ／ｋｇ
最初の被験者のコホートが治療された後、全用量は６２０μｇ／ｋｇに増加される（非特許文献１〜５）。５〜１４日間の治療の間に０．２５μｇ／ｍｌのピーク血清レベルが得られる（非特許文献６）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第７０４１２８９号明細書
【特許文献２】カナダ特許出願第２２２４２５６号明細書
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Herold, et al., Immunologic Research, Vol. 28, No. 2, pgs. 141-150 (2003)
【非特許文献２】Herold, et al., New Engl. J. Med., Vol. 346, No. 22, pgs. 1692-1698 (May 30, 2002)
【非特許文献３】Herold, et al., J. Clin. Invest.. Vol. 1 11, No. 3, pgs. 409-418 (February 2003)
【非特許文献４】Herold, et al., J. Clin. Invest.. Vol. 1 13, No. 3, pgs. 346-349 (February 2004)
【非特許文献５】Herold, et al., Diabetes. Vol. 54, pgs. 1763-1769 (June 2005)
【非特許文献６】Herold, et al., 2002; Herold, et al., Immunologic Research, 2003
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の態様にしたがうと、動物の自己免疫疾患を治療する方法が提供される。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
１つの実施形態において、その疾患は、確立された自然発症の進行中の疾患である。本方法は、Ｆｃ（ガンマ）受容体に結合しない又は低下した結合を有する抗ＣＤ３抗体及びそのフラグメントからなる群より選択された抗ＣＤ３抗体又はその抗ＣＤ３抗体フラグメントを動物に投与することを含む。抗ＣＤ３抗体又はその抗ＣＤ３抗体フラグメントは、治療過程の全体を通じて治療的有効量で投与され、治療過程の間、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの合計量は、静脈内に投与される場合、３００μｇ／ｋｇを超えない量で投与される。
【００１０】
本願明細書における「抗ＣＤ３抗体」、「抗ＣＤ３抗体フラグメント」という用語は、抗ＣＤ３抗体を認識する又はそれに結合する抗体又は抗体フラグメントを意味する。
【００１１】
当該技術で知られるように、用語「μｇ／ｋｇ」は、治療される動物の体重１ｋｇあたりに送達される抗体及び／又はそのフラグメントのマイクログラム単位の量を意味する。
【００１２】
１つの限定されない実施形態において、自己免疫疾患は糖尿病である。別な限定されない実施形態において、自己免疫疾患は乾癬である。
【００１３】
静脈内以外に投与されるならば、こうした投与から得られる曲線（ＡＵＣ）下の面積が、こうした抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの静脈内投与によって生じるＡＵＣの約８０％〜約１２０％であるような量で、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントが投与される。そして、こうした量は、静脈内投与と生物学的に同等な量と称される。
【００１４】
用語「曲線下の面積」と「ＡＵＣ」は製薬技術でよく知られた用語である。ＡＵＣ値は、時間の関数として治療薬の全身的濃度からのデータをグラフにプロットすることによって計算され、Ｘ軸は一般に時間を表わし、Ｙ軸は一般に治療薬の濃度を表わす。種々のデータ点を結び付けることによって形成した線の下の面積は、次いで、数値にまとめられる。抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントについてのＡＵＣ値は、種々の製剤及び／又は組成物において、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの投与の際に個々の患者に存在する生理的及び／又は環境的因子による患者間及び患者内の変化に支配されることがある。
【００１５】
１つの限定されない実施形態において、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、治療過程の全体を通じて静脈内に投与され、治療過程の間に投与される抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの合計量は、１７５μｇ／ｋｇを超えず、別の実施形態において、その量は１５０μｇ／ｋｇを超えず、ある実施形態において、その量は５０μｇ／ｋｇを超えず、あるいは、静脈内以外の投与の場合、その量の静脈内投与と生物的に同等な量である。
【００１６】
別の限定されない実施形態において、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、治療過程の全体を通じて静脈内に投与され、治療過程の間に投与される抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの合計量は、少なくとも８μｇ／ｋｇであり、あるいは、静脈内以外の投与の場合、その量の静脈内投与と生物的に同等な量である。
【００１７】
別の限定されない実施形態において、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、各々の治療日において、一般に、１日あたり０．１μｇ／ｋｇ以上の量で静脈内に投与され、あるいは、静脈内以外の投与の場合、その量の静脈内投与と生物的に同等な量である。
【００１８】
治療過程の全体を通じて、治療過程の各々の日に抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの同じ用量が与えられてもよく、あるいは、治療過程の各々の日に抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの別な用量が与えられてもよい。例えば、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの合計用量が３００μｇ／ｋｇを超えなければ、治療過程の日ごとに抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの用量が変わってもよい。１つの実施形態において、治療過程の任意の１日に静脈内に与えられる抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの量は、３０μｇ／ｋｇ／日を超えない。別の実施形態において、その量は２５μｇ／ｋｇ／日を超えない。さらに別の実施形態において、その量は２０μｇ／ｋｇ／日を超えない。さらに別の実施形態において、その量は１５μｇ／ｋｇ／日を超えず、さらに別の実施形態において、その量は１０μｇ／ｋｇ／日を超えず、あるいは、静脈内以外の投与の場合、その量の静脈内投与と生物的に同等な量を超えない量である。
【００１９】
１つの実施形態において、上述の種々の実施形態に関する治療過程は１０日間を超えない。別の実施形態において、治療過程は８日間を超えない。さらに別の実施形態において、治療過程は６日間を超えない。さらに別の実施形態において、治療過程は６日間を超えない。さらに別の実施形態において、治療過程は４日間を超えない。さらに別の実施形態において、治療過程は３日間を超えない。さらに別の実施形態において、治療過程は１日間を超えない。
【００２０】
１つの実施形態において、投与される抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの用量は、治療日が進むにつれて増加され、投与される抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの最大用量は、治療の最終日である。
【００２１】
別の実施形態において、治療過程の際、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの初期投与量は、治療の第１日に投与される。次いで、予め選択された最大の１日用量に達するまで、治療の各経過日とともに用量が増加される。次いで、治療の残りの日の各経過日に、その最大の１日用量が投与される。各場合において、治療過程にわたる全投与量は３００μｇ／ｋｇを超えない。
【００２２】
１つの実施形態において、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、治療の第１日に約４．３μｇ／ｋｇの量で、治療の第２日に約７．１μｇ／ｋｇの量で投与される。治療の第３日から第８又は９日は、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、こうした治療の各日に約１４．３μｇ／ｋｇの量で投与される。
【００２３】
別の実施形態において、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、治療の第１日に約１．４μｇ／ｋｇの量で、治療の第２日に約２．８μｇ／ｋｇの量で、治療の第３日に約４．３μｇ／ｋｇの量で投与される。治療の第４日から第８日は、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、こうした治療の各日に約７．１μｇ／ｋｇの量で投与される。
【００２４】
さらなる実施形態において、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、治療の第１日に約１．４μｇ／ｋｇの量で、治療の第２日に約２．８μｇ／ｋｇの量で、治療の第３日に約４．３μｇ／ｋｇの量で投与される。治療の第４日から第８日は、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、こうした治療の各日に約１０．７μｇ／ｋｇの量で投与される。
【００２５】
さらなる別の実施形態において、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、治療の第１日に約１．４μｇ／ｋｇの量で、治療の第２日に約２．８μｇ／ｋｇの量で、治療の第３日に約４．３μｇ／ｋｇの量で投与される。治療の第４日から第８日は、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、こうした治療の各日に約１４．３μｇ／ｋｇの量で投与される。
【００２６】
抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、又は皮下投与などによって全身投与されることができる。一般に、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントが、筋肉内又は皮下投与のような、静脈内投与以外の方法によって投与される場合、こうした投与から得られる曲線（ＡＵＣ）下の面積は、静脈内投与から得られる曲線下の面積の約８０％〜１２０％である。即ち、筋肉内又は皮下投与のような、静脈内投与以外の方法によって投与される場合、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、静脈内投与について上述した最大用量より高い又は低い用量で投与されてもよく、但し、こうした静脈内以外に投与される量が、最大の静脈内用量と生物学的に同等な用量に等しい量を超えないことが必要である。
【００２７】
抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、ヒトの抗体、動物の抗体、又はヒト以外の哺乳類の抗体、例えば、齧歯類の抗体であってもよく、限定されるものではないが、マウスやラットの抗体、キメラ抗体、又はヒト化抗体であってもよい。あるいは、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、ヒト、動物、キメラ、及び／又はヒト化部分の組み合わせを含むことができる。
【００２８】
抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、モノクロナールもしくはポリクロナール抗体又はそのフラグメントであってもよい。抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、１つの実施形態において、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのようなモノクロナール抗体又は抗体フラグメントである。
【００２９】
別の実施形態において、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、除去又は修飾されるＦｃ領域を有し、それによって、Ｆｃ（ガンマ）受容体に対する抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの結合が低下又は除去される。１つの実施形態において、Ｆｃ領域は無糖化され、それによって、Ｆｃ（ガンマ）受容体に対する結合が低下又は除去される。
【００３０】
例えば、ＩｇＧ抗体のヒトＦｃ領域は、Ｎ−グリコシル化モチーフＡｓｎ２９７−Ｘ２９８−Ｓｅｒ２９９又はＴｈｒ２９９の部分を構成する位置２９７のアスパラギン残基で無糖化されることが知られており、ここで、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸残基である。抗ＣＤ３抗体は、糖化できない別のアミノ酸で、Ｆｃ領域のＡｓｎ２９７の置換によって無糖化されてもよい。任意の別のアミノ酸を使用してもよい。１つの実施形態において、Ａｓｎ２９７はＡｌａ２９７で置換される。あるいは、Ａｓｎ２９７のグリコシル化は、モチーフの他のアミノ酸残基の１つを変えることによって、例えば、アミノ酸残基２９８をプロリンで、又はアミノ酸残基２９９をセリンもしくはトレオニン以外の任意のアミノ酸で置換することによって防ぐことができる。こうした無糖化を行う技術は、当業者によく知られており、例えば、部位特異的変異誘発によって行う。Ｆｃ領域のアミノ酸残基２９７で無糖化されるモノクロナール抗ＣＤ３抗体の例は、米国特許第５５８５０９７号明細書、同第５９６８５０９号明細書、及び同第６７０６２６５号明細書に記載されており、それらの内容は、本願明細書において参照して組み込まれる。
【００３１】
１つの実施形態において、抗ＣＤ３抗体は、ヒト化重鎖を含み、その重鎖の可変領域の相補性決定領域又はＣＤＲは、ラットＣＤＲであり、重鎖のその残りはヒトであり、キメラ領域がラット可変領域と定常領域であるキメラ軽鎖は、ヒト定常領域であり、但し、ラット可変領域のアミノ酸残基１、２、３、４、及び７の突然変異は除く。また、Ｆｃ領域の位置２９７におけるアスパラギン残基は、アラニンによって置換され、それによってＦｃ領域が無糖化される。こうした抗体は、以下、場合により「ＴＲＸ４抗体」と称される。軽鎖と重鎖のアミノ酸配列とＴＲＸ４抗体の軽鎖と重鎖をコード化するヌクレオチド配列が、図１に示されている。
【００３２】
別な実施形態において、Ｆｃ領域が糖化され、しかしながら、Ｆｃ領域のＡｓｎ２９７以外のアミノ酸領域が、除去され又は変化され、Ｆｃ（ガンマ）受容体に対する抗ＣＤ３抗体又はフラグメントの結合が低下又は除去される。
【００３３】
例えば、１つの実施形態において、Ｆｃ領域のアミノ酸残基Ｌｅｕ２３４とＬｅｕ２３５の各々は、Ａｌａ２３４とＡｌａ２３５に変化し、それによってＦｃ（ガンマ）受容体に対する結合が除去される。こうした抗体の例は、ｈＯＫＴ３γｌ（Ａｌａ−Ａｌａ）抗体であり、これは、ヒトＩｇＧｌ上のマウスのモノクロナール抗体ＯＫＴ３（米国特許第４６５８０１９号明細書）の結合領域を含み、アミノ酸残基Ｌｅｕ２３４とＬｅｕ２３５がアラニン残基で置換された、ヒト化抗ＣＤ３モノクロナール抗体である。このような抗体は、「Ｈｅｒｏｌｄ，ｅｔａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．２８，Ｎｏ．２，ｐｇｓ．１４１−１５０（２００３）」及び「Ｘｕ，ｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．２００，Ｎｏ．１，ｐｇｓ．１６−２６（２０００）」にさらに記載されている。こうした修飾は、ヒト化又はキメラ抗体に使用されてもよい。
【００３４】
別の実施形態において、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、ＩｇＡ又はＩｇＤのような、Ｆｃ（ガンマ）受容体に結合しないアイソタイプである。
【００３５】
１つの実施形態において、本発明にしたがって採用される抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、ヒトにおいて低下又は除去された分裂促進性を有し、即ち、こうした抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、ヒト血清の存在下で、有糸分裂を誘発せず、又は有糸分裂を誘発するのに低下した能力を有する。抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントが、非分裂促進的である又は低下した分裂促進性を有するか否かの判断は、当業者に公知の手法によって行うことができ、例えば、ヒト血清のインビトロにおける抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントのテストによる。
【００３６】
抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、動物における糖尿病又は乾癬のような自己免疫疾患を治療する目的で、上記の量で動物に投与される。動物は、ヒト、及びヒト以外の霊長類を含む哺乳類であることができる。
【００３７】
抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、許容される薬剤上の担体又は希釈剤と併せて投与することができる。適切な薬剤上の担体又は希釈剤には、限定されるものではないが、生理食塩水、ブドウ糖、乳酸リンゲル液、又はこれらの組み合わせ、水又は静脈内投与に使用される任意の他の生理溶液が挙げられる。適切な薬剤上の担体又は希釈剤の選択は、当業者の技術の範囲内である。
【００３８】
別の実施形態において、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、凍結乾燥される。こうした実施形態において、凍結乾燥された抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、投与のときに、上述のような担体又は希釈剤と混合される。
【００３９】
さらに別の実施形態において、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、ポリマーのような化合物と結合される。１つの実施形態において、ポリマーはポリアルキレングリコールである。１つの実施形態において、ポリアルキレングリコールは、ポリエチレングリコール又はＰＥＧである。
【００４０】
抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメント、及び許容される薬剤上の担体又は希釈剤は、無菌バイアルのような適切な容器に包装される。こうしたバイアルは、１つの実施形態において、治療過程にわたって抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントを投与する指示とともに包装され、その抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、治療過程にわたって静脈内に投与され、ここで、その抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの量は、治療過程にわたって、３００μｇ／ｋｇ／日を超えず、あるいは、治療過程にわたって静脈内以外に投与する指示とともに包装され、ここで、治療過程にわたって、投与される抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの全量は、上記の静脈内投与と生物的に同等な量を超えない。
【００４１】
抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントが凍結乾燥される場合、その凍結乾燥された抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントが第１の無菌バイアルに包装され、薬剤上の担体又は希釈剤が第２の無菌バイアルに包装される。２つのバイアルが、上記の指示に加えて、その薬剤上の担体又は希釈剤を抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントに添加した後、上記のように、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントと薬剤上の担体又は希釈剤を患者に投与するといった指示とともに包装される。
【００４２】
本発明の別な態様にしたがうと、動物にＴ細胞受容体変調をもたらす方法が提供される。この方法は、Ｆｃ（ガンマ）受容体に結合しない又は低下した結合を有する抗ＣＤ３抗体及びその抗ＣＤ３抗体フラグメントからなる群より選択された抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントを動物に投与することを含む。抗ＣＤ３抗体又はその抗ＣＤ３抗体フラグメントは、動物にＴ細胞受容体変調をもたらすのに有効な量で投与される。１つの実施形態において、動物は上記のものから選択される。
【００４３】
１つの実施形態において、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、上記のものから選択される。
【００４４】
本願における用語「Ｔ細胞受容体変調」は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）錯体分子又はＴ細胞表面上のサブユニットの数の低下を意味する。一般に、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）は、アルファとベータ（α／β）のサブユニットとガンマとデルタ（γ／δ）のサブユニットを含む。ＣＤ３錯体は、イプシロン、ガンマ、及びデルタのサブユニットを含む。ＣＤ３サブユニットとゼータサブユニットは、ＴＣＲのサブユニットと錯体を形成する。ＴＣＲ錯体分子又はサブユニットの数の減少は、限定されるものではないが、Ｔ細胞の表面上のＴＣＲ錯体分子又はサブユニットの再発現を超える速度のＴＣＲ錯体分子又はサブユニットの内部移行などの因子から生じることがある。１つの実施形態において、ＣＤ３／ＴＣＲ錯体に対する抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントの結合は、ＴＣＲのアルファ／ベータ又はガンマ／デルタのサブユニットの内部移行を規定し、こうした内部移行は、Ｔ細胞の表面上のこうしたＴＣＲのアルファ／ベータ又はガンマ／デルタのサブユニットの再発現を超える速度でもたらされる。
【００４５】
１つの実施形態において、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントは、上記の治療の量及び／又は過程で静脈内に投与され、あるいは、静脈内投与と生物学的の同等な量で静脈内以外に投与される。
【００４６】
抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメント、及び許容される薬剤上の担体（例えば、上述のもの）は、ＴＣＲ変調をもたらすのに有効な量で静脈内に抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体フラグメントを投与する指示とともに、あるいは、ＴＣＲ変調のための有効な静脈内量と生物的に同等な量で静脈内以外に投与する指示とともに、上記のように包装してもよい。
【００４７】
次に、本発明を以下の図面に関して説明する。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１Ａ】ＴＲＸ４抗体の軽鎖と重鎖のアミノ酸配列、及びＴＲＸ４抗体の軽鎖と重鎖をコード化する核酸配列を示す。
【図１Ｂ】ＴＲＸ４抗体の軽鎖と重鎖のアミノ酸配列、及びＴＲＸ４抗体の軽鎖と重鎖をコード化する核酸配列を示す。
【図１Ｃ】ＴＲＸ４抗体の軽鎖と重鎖のアミノ酸配列、及びＴＲＸ４抗体の軽鎖と重鎖をコード化する核酸配列を示す。
【図２】患者にＴＲＸ４抗体が与えられる前後の患者におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の平均絶対値を示すグラフである。
【図３】患者にＴＲＸ４抗体が与えられる前後の患者におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の平均絶対値を示すグラフである。
【図４】患者にＴＲＸ４抗体が与えられる前後の患者における、ＣＤ４＋Ｔ細胞上の抗ヒトＩｇＧを用いた細胞結合ＴＲＸ４抗体の検出を示すグラフである。
【図５】非競合性Ｔ細胞受容体抗体を用いた、患者にＴＲＸ４抗体が与えられる前後の、ＣＤ４＋Ｔ細胞を染色することによって検出された患者における、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）αβサイトの変調を示すグラフである。
【図６】患者にＴＲＸ４抗体が与えられる前後の、ビオチニル化ＴＲＸ４を用いて検出される、患者におけるＣＤ４＋Ｔ細胞上の遊離ＣＤ３サイトを示すグラフである。
【図７】３日間続けて０．１ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた患者コホートにおけるＣＤ４＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸ４抗体量の平均量（±標準偏差）を示すグラフである。
【図８】ＴＲＸ４を受け入れた４通りの患者コホートにおけるリンパ球の平均（±標準偏差）絶対数を示すグラフである。第１コホートは、３日間続けて０．１ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた。第２コホートは、３日間続けて０．５ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた。第３コホートは、第１日に０．１ｍｇのＴＲＸ４を受け入れ、第２日に０．３ｍｇのＴＲＸ４を受け入れ、第３日に０．５ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた。第４コホートは、１回の注射で０．３ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた
【図９】図８に関して上述した４通りのコホートにおけるＣＤ４＋リンパ球の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図１０】図８に関して上述した４通りのコホートにおけるＣＤ８＋リンパ球の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図１１】図８に関して上述した４通りのコホートにおけるＴ細胞受容体ポジティブ（ＴＣＲ＋）Ｔリンパ球（ＣＤ４＋とＣＤ８＋）の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図１２】図８に関して上述した４通りのコホートにおけるＣＤ２＋Ｔリンパ球（ＣＤ４＋とＣＤ８＋）の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図１３】第１日に０．１ｍｇのＴＲＸ４、第２日に０．２ｍｇのＴＲＸ４、第３日に０．３ｍｇのＴＲＸ４、及び第４日に０．５ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた患者コホートにおけるＴＲＸ４服用前後のＣＤ４＋細胞の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図１４】図１３に関して上述したコホートにおけるＣＤ４＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸ４抗体の平均値（±標準偏差）を示すグラフである。
【図１５】図１３に関して上述したコホートにおける、非競合性ＴＣＲ抗体を用い、ＴＲＸ４服用前後のＣＤ４＋Ｔ細胞を染色することによって検出されたＭＥＳＦ単位（±標準偏差）において測定されたＴＣＲαβサイトの変調を示すグラフである。
【図１６】図１３に関して上述したコホートにおける、ビオチニル化ＴＲＸ４を用いて検出された、ＴＲＸ４服用前後のＣＤ４＋Ｔ細胞上の、遊離ＣＤ３サイトのＭＥＳＦ単位で測定された数（±標準偏差）を示すグラフである。
【図１７】第１日に０．１ｍｇのＴＲＸ４、第２日に０．２ｍｇのＴＲＸ４、第３日に０．３ｍｇのＴＲＸ４、及び第４日に０．７５ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた患者コホートにおいて、非競合性ＴＣＲ抗体を用い、ＴＲＸ４服用前後のＣＤ４＋Ｔ細胞を染色することによって検出されたＭＥＳＦ単位（±標準偏差）において測定されたＴＣＲαβサイトの変調を示すグラフである。
【図１８】図１７に関して上述したコホートにおける、ビオチニル化ＴＲＸ４を用いて検出された、ＣＤ４＋Ｔ細胞上の遊離ＣＤ３サイトのＭＥＳＦ単位で測定された数（±標準偏差）を示すグラフである。
【図１９】第１日に０．０５ｍｇのＴＲＸ４、第２日に０．１ｍｇのＴＲＸ４、第３日に０．１５ｍｇのＴＲＸ４、及び第４日に０．２５ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた第１コホート（Ａ１／２）、第１日に０．１ｍｇのＴＲＸ４、第２日に０．２ｍｇのＴＲＸ４、第３日に０．３ｍｇのＴＲＸ４、及び第４日に０．５ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた第２コホート、第１日に０．１ｍｇのＴＲＸ４、第２日に０．２ｍｇのＴＲＸ４、第３日に０．３ｍｇのＴＲＸ４、及び第４日に０．７５ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた第３コホート、及び第１日に０．１ｍｇのＴＲＸ４、第２日に０．２ｍｇのＴＲＸ４、第３日に０．３ｍｇのＴＲＸ４、及び第４日に１．０ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた第４コホートの４通りの患者コホートにおけるリンパ球の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図２０】図１９に関して上述した４通りのコホートにおけるＣＤ４＋リンパ球の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図２１】図１９に関して上述した４通りのコホートにおけるＣＤ８＋リンパ球の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図２２】図１９に関して上述した４通りのコホートにおけるＴＣＲ＋Ｔリンパ球（ＣＤ４＋とＣＤ８＋）の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図２３】図１９に関して上述した４通りのコホートにおけるＣＤ２＋Ｔリンパ球（ＣＤ４＋とＣＤ８＋）の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図２４】第１日に０．１ｍｇのＴＲＸ４、第２日に０．２ｍｇのＴＲＸ４、第３日に０．３ｍｇのＴＲＸ４、及び第４日〜８日に各０．５ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた患者コホートにおける、標題「１型糖尿病又はＴＴＥＤＤにおける種々の複数投与レジメのＴＲＸ４治療評価」のプロトコルにしたがい、ＣＤ４＋Ｔ細胞上の抗ヒトＩｇＧ抗体によって検出された、ＣＤ４＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸ４抗体のＭＥＳＦ単位で測定した平均（±標準偏差）量を示すグラフである。
【図２５】図２４に関して上述した患者コホートにおける、ＣＤ８＋Ｔ細胞上の抗ヒトＩｇＧ抗体によって検出された、ＣＤ８＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸ４抗体のＭＥＳＦ単位で測定した平均（±標準偏差）量を示すグラフである。
【図２６】図２４に関して上述したコホートにおける、ビオチニル化ＴＲＸ４を用いて検出された、ＣＤ４＋Ｔ細胞上の遊離ＣＤ３サイトのＭＥＳＦ単位で測定した数（±標準偏差）を示すグラフである。
【図２７】図２４に関して上述したコホートにおける、ビオチニル化ＴＲＸ４を用いて検出された、ＣＤ８＋Ｔ細胞上の遊離ＣＤ３サイトのＭＥＳＦ単位で測定した数（±標準偏差）を示すグラフである。
【図２８】図２４に関して上述したコホートにおける、非競合性抗体を用いてＣＤ４＋Ｔ細胞上で検出された、ベースラインの％として表わしたＴＣＲサイトの数（±標準偏差）を示すグラフである。
【図２９】図２４に関して上述したコホートにおける、非競合性抗体を用いてＣＤ８＋Ｔ細胞上で検出された、ベースラインの％として表わしたＴＣＲサイトの数（±標準偏差）を示すグラフである。
【図３０】図２４に関して上述した患者コホートにおける、ＣＤ４＋Ｔ細胞の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図３１】図２４に関して上述した患者コホートにおける、ＣＤ８＋Ｔ細胞の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図３２】図２４に関して上述した患者コホートにおける、ＣＤ１９＋Ｂ細胞の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図３３】抗ＣＤ３抗体又はプラセボを受け入れた４通りの患者コホートにおけるリンパ球の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。第１コホート（ＥＵ）は、ＥＵフェーズＩＩ試験において、６日間連続して１日あたり８ｍｇの抗ＣＤ３抗体ＴＲＸ４を受け入れた。第２コホートはプラセボを受け入れた。第３コホート（ＴＴＥＤＤ）は、第１日に０．１ｍｇのＴＲＸ４、第２日に０．２ｍｇのＴＲＸ４、第３日に０．３ｍｇのＴＲＸ４、及び第４日〜８日に各０．５ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた。第４コホート（ＰＳＯ）は、１回の静脈内注射を１ｍｇのＴＲＸ４で受け入れた乾癬患者コホートである。
【図３４】図３３に関して上述した第１、第２、第３コホートにおけるＣＤ２＋Ｔリンパ球の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図３５】図３３に関して上述した４通りのコホートにおけるＣＤ８＋Ｔリンパ球の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図３６】図３３に関して上述した４通りのコホートにおけるＣＤ４＋Ｔリンパ球の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図３７】図３３に関して上述した４通りのコホートにおけるＴＣＲ＋Ｔリンパ球（ＣＤ４＋とＣＤ８＋）の平均（±標準偏差）絶対値を示すグラフである。
【図３８】図３３に関して上述した第１（ＥＵ）と第３（ＴＴＥＤＤ）のコホートにおけるサイトカインＴＮＦ−αとＩＬ−６の平均サイトカイン放出を示すグラフである。ここで、図２〜３８において、用語ＥＯＩは「最後の注入」を意味する。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
次に、本発明を以下の実施例に関して説明するが、それによって本発明の範囲が限定されると理解するべきではない。
【００５０】
以下の実施例において、投与量がμｇ／ｋｇで表わされている場合、その投与量は、患者の平均体重を７０ｋｇとして計算したものである。
【実施例１】
【００５１】
ヒト化された重鎖とキメラ軽鎖を有する抗ＣＤ３抗体であって、Ａｓｎ２９７がＡｌａ２９７に変異したアグリコシル化Ｆｃ領域を有するＴＲＸ抗体を、１型糖尿病と診断された３人の患者の各々に、３日間続けて０．５ｍｇ又は約７．１μｇ／ｋｇの用量で静脈に投与した。軽鎖と重鎖のアミノ酸配列、及びＴＲＸ４のこうした軽鎖と重鎖をコード化する拡散配列を図１に示す。投与の前、途中、及び後で、ＣＤ４＋とＣＤ８＋のＴリンパ球を計数した。リンパ球の絶対数は、完全血球数からの全白血球に、フローサイトメトリーによる異なる細胞測定によって求めたリンパ球の割合を掛算することによって求めた。ＣＤ４＋とＣＤ８＋のＴリンパ球の各々の絶対数は、ＣＤ４又はＣＤ８を有するリンパ球ゲートにおけるリンパ球の絶対数にリンパ球ゲートにおけるリンパ球の割合（前方と側面の光散乱パラメータに基づく）を掛算することによって計算した。図２と図３に示すように、投与の間に、末梢血における双方のＣＤ４＋とＣＤ８＋のＴリンパ球の一時的減少（リンパ球減少症）が観察された。リンパ球の数は、２週間以内にベースラインのレベルに回復した。
【００５２】
蛍光ラベルの抗ヒトＩｇＧ抗体試薬を用い、細胞結合ＴＲＸ４をＣＤ４＋とＣＤ８＋のＴ細胞で検出した。ＴＲＸ４を、ＴＲＸ４の各用量の投与の１時間後に、双方のＣＤ４＋とＣＤ８＋の細胞上で検出した。図４は、ＴＲＸ４投与の前と後のＣＤ４＋細胞上のＭＥＳＦ（等価可溶性蛍光プローブの分子）の単位で測定した抗ヒトＩｇＧを持つ細胞結合ＴＲＸ４の検出を示す。細胞結合ＴＲＸ４は、投与後に減少し、その値は、各用量の２４時間後にベースラインに近いレベルに戻った。
【００５３】
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の変調は、ＴＲＸ４の各用量後にＣＤ４＋とＣＤ８＋のＴ細胞上で観察した。図５は、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）で標識した非競合性ＴＣＲ抗体を用い、ＴＲＸ４投与の前後のＣＤ４＋Ｔ細胞を染色することによって検出したＴＣＲαβサイトの変調を示す。ＴＲＸ４の第２と第３の用量の前に、ベースラインの約８０％まで部分的変調が回復した。３週間までに、そのレベルは、ベースラインの約８０％であった。
【００５４】
遊離ＣＤ３サイトの数の減少は、ＴＲＸ４の各用量の後に観察された。図６は、ＭＥＳＦ単位で測定したＣＤ４＋Ｔ細胞における遊離ＣＤ３サイトのグラフである。遊離ＣＤ３サイトの数は、ＴＲＸ４の第２と第３の用量の前に、ベースラインの近くのレベルまで回復した。遊離ＣＤ３サイトの数は、ＴＲＸ４の第３用量（第５日）の後、直ぐにベースラインの近くのレベルまで回復した。
【００５５】
上記の結果は、薬力学的パラメータにおける多くの変化が観察されたことを示す。ＴＲＸ投与後に、双方のＣＤ４＋とＣＤ８＋のＴ細胞の一時的リンパ球減少症が生じた。また、ＴＲＸ４投与後に、細胞結合抗体と同時に、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体の部分的変調とＣＤ３の飽和が検出された。
【実施例２】
【００５６】
それぞれ６〜８名の被験者の２つのコホートで、３日間の用量増大研究又は状態変調計画を行う。コホートＡは、第１日に０．１ｍｇ（約１．４μｇ／ｋｇ）のＴＲＸ４抗体、第２日に０．３ｍｇ（約４．３μｇ／ｋｇ）のＴＲＸ４抗体、及び第３日に０．５ｍｇ（約７．１μｇ／ｋｇ）のＴＲＸ４抗体を受け入れる。コホートＢは、第１日に０．３ｍｇ（約４．３μｇ／ｋｇ）、第２日に０．５ｍｇ（約７．１μｇ／ｋｇ）、及び第３日に１．０ｍｇ（約１４．３μｇ／ｋｇ）を受け入れる。
【００５７】
上記の状態変調計画が完了した後、６〜８日の投与計画が行われ、ここで、各被験者は、付加的な治療用量に連結した、コホートＢについて実施例２に記載の同じ３日間の状態変調計画に供される。各被験者は、第１日に０．３ｍｇ（約４．３μｇ／ｋｇ）のＴＲＸ４、第２日に０．５ｍｇ（約７．１μｇ／ｋｇ）のＴＲＸ４、及び第３〜８日の各日に１．０ｍｇ（約１４．３μｇ／ｋｇ）のＴＲＸ４を受け入れる。
【００５８】
こうしたコホートが投与されながら、第４、６〜８日に与えられる用量が増加され、最大安全用量を求める。最大安全用量を特定した後、主試験におけるもう１つの投薬コホートが付加される。
【００５９】
主試験は、ランダムにされた二重盲検のプラセボによる盲検法であり、１を超える投与計画アームがプラセボと比較される。効能と安全性の追跡テストが、６、１２、１８、及び２４月に行われ、必要により、４８月まで行うこともできる。エンドポイントは、摂取後２、３、４時間の混合食事刺激のＣペプチドＡＵＣ、インスリン使用、及びヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）である。
【実施例３】
【００６０】
［ＴＲＸ４を投与された被験者からの薬物動態学的薬力学的データ］
この例において、ＴＲＸ４の薬物動態学的（ＰＫ）及び薬力学的（ＰＤ）パラメータを４つのコホートからの被験者において評価し、但し、コホート４は、例外として、連続日において、３つのＴＲＸ４静脈内用量の種々の順序を受け入れた。この例において、コホート１は、第１、２、３日の各日に０．１ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた。コホート２は、第１、２、３日の各日に０．５ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた。コホート３は、第１に０．１ｍｇのＴＲＸ４、第２に０．３ｍｇのＴＲＸ４、第３に０．５ｍｇのＴＲＸ４を受け入れ、コホート４は、０．３ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた。下記にさらに説明するように、Ｔ細胞の薬力学的パラメータは、末梢血区画におけるＴリンパ球とリンパ球サブセットの数と同時に、結合ＴＲＸ４のフローサイトメトリー評価、細胞膜からのＴ細胞受容体（ＣＤ３／ＴＣＲ複合体）の変調、及び抹消プールにおけるＴ細胞上のＴＲＸ４によるＣＤ３／ＴＣＲ複合体の飽和を含む。最も頻繁なＴＲＸ４の検出可能な量（０．０２μｇ／ｍＬ以上）は、０．５ｍｇの複数の静脈内ＴＲＸ４用量を与えられた被験者から得られたサンプルで観察された。同様に、Ｔ細胞に対するＴＲＸ４の一貫した結合、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体の変調と飽和、及び血液中の末梢Ｔ細胞の絶対数の一時的減少が、少なくとも１つの０．５ｍｇ用量を受けるコホートにおいて最も一貫して観察された。これらのコホートにおいて、Ｔ細胞膜に対するＴＲＸ４の一貫した検出可能な結合、及びＣＤ３／ＴＣＲ複合体の変調と部分的飽和が、最終用量の後、２４時間を超えて持続した。これらをもとに、多数の０．５ｍｇ超の用量を含む投与計画は、ＴＲＸ４結合を誘起しながらインビトロのＴ細胞機能を阻害することが知られるＴＲＸ４血清中濃度、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体の部分的又は完全的飽和、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体の部分的又は完全的変調、及びインビボの一時的リンパ球減少症をもたらすものと予測され、全ての関係のあるＰＤパラメータが、ＴＲＸ４機能と関連すると考えられる。
【００６１】
［薬力学的データのまとめ］
０．３ｍｇ超の静脈内用量のＴＲＸ４を受け入れた全ての被験者は、末梢におけるＴ細胞の再分布又は再輸送によって生じると思われる、血液中のリンパ球の数（双方のＣＤ４＋とＣＤ８＋のＴ細胞）において、迅速で一時的な減少を有した。殆どの投与計画について、ＣＤ４＋とＣＤ８＋のＴ細胞数は、一般に、通常範囲内にあり（ＣＤ４＋Ｔ細胞について０．５３〜１．７６×１０９／Ｌ、及びＣＤ８＋Ｔ細胞について０．３０〜１．０３×１０９／Ｌ）、例外として、０．３ｍｇ以上の用量後の多くの被験者において、通常範囲を下回る一時的減少がある。最もあり得る抹消リンパ球の減少は、再分布現象であったが、この理由は、全てのコホートにおいて、リンパ球減少症が一時的であり、細胞数が概して１４日でベースラインの少なくとも９０％まで回復し、細胞溶解の臨床上の証拠（ＬＤＨ、Ｋ＋等の増加）が観察されないためである。ＣＤ１９＋Ｂ細胞の数において有意な変化は観察されなかった。Ｂ細胞について観察された値は、全被験者について通常範囲内であった（０．０６〜０．６６×１０９／Ｌ）。ＴＲＸ４注入の途中と直後に観察されたＰＤ変化は、ＥＵにおいて行われたフェーズＩＩにおいて観察されたものと一貫しており（８ｍｇ×６）（Ｋｅｙｍｅｕｌｅｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｖｏｌ．３５２，ｐｇｓ  ２５９８−２６０８（Ｊｕｎｅ  ２３，２００５））、但し、リンパ球減少症の程度は、この例においては、それ程顕著ではなく、短い飽和であり、ＥＵ研究（Ｋｅｙｍｅｕｌｅｎ，２００５）において投与されたよりも低い用量のものと一貫した。
【００６２】
細胞結合ＴＲＸ４は、用量依存の様式で全コホートに検出された。細胞結合ＴＲＸ４は０．５ｍｇの用量の後の４８時間に検出された。部分的なＣＤ３／ＴＣＲ変調は、ＴＲＸ４投与後に３×０．１ｍｇを受け入れた被験者を除き、全コホートにおいて明らかであった。ＣＤ３／ＴＣＲ変調は、概して用量依存であった。０．５ｍｇの用量の後、８０％以上の変調が観察された。また、これらの用量後の２４時間にわたって部分的変調が持続した。変調は、ＥＵ研究において間接的に測定され、この例からここで提示のデータは、ＥＵ研究よりもＣＤ３／ＴＣＲ変調の程度が低く、ＣＤ３／ＴＣＲ変調の期間が短く、ＴＲＸ４の低い用量と一貫した。
【００６３】
遊離結合サイトの減少（ＴＲＸ４によるＣＤ３飽和を示す）は明白であり、Ｔ細胞に結合したＴＲＸ４の検出と同時に起きた。ＣＤ３飽和の範囲と期間は、概して用量依存であった。ＴＲＸ４の３つの用量を受け入れた（０．１ｍｇ×３は除く）コホートにおいて、第５日まで不完全飽和が存在した。
【００６４】
［薬物動態学的データ］
［ＴＲＸ４血清レベルの測定］
ＴＲＸ４血清レベルを、良好な実験室的実施又はＧＬＰの下で行われるＥＬＩＳＡアッセイによって測定した。血液サンプルは、ＴＲＸ４注入前、各注入の終了時、及び注入の終了から２時間に回収した。ＥＬＩＳＡアッセイは、１つ目は捕獲抗体として、２つ目は橋かけ抗体として、２つの抗ＴＲＸ４モノクロナール抗体を使用する。このアッセイの定量化限界（ＬＯＱ）は０．０１９９μｇ／ｍＬである。結果を下記の表１に示す。
【００６５】
全コホートからの大部分のサンプルについてのＴＲＸ４の血清濃度は、ＬＯＱより低いか又は辛うじて上である。ＬＯＱより高いＴＲＸ４濃度を有するサンプルの限られた数、評価される被験者の限られた数、及び患者間の変動のため、生成物の素質に関する薬物動態学的解析と明確な結論はなし得なかった。それにもかかわらず、ＴＲＸ４の検出可能レベルを含むサンプルの最大数はコホート２からであり、これは、被験者が多数の０．５ｍｇの用量を与えられた唯一のコホートである（コホート２）。このコホートにおいて、注入終了時の最大血清濃度は、何人かの被験者において０．１０μｇ／ｍＬに近づいたが、この発見は、各被験者において一貫せず、各用量後にも観察されなかった。第３の０．５ｍｇ用量の前の最下点血清濃度は、３人の被験者の２人において０．０２〜０．０３μｇ／ｍＬであり、一方、第３被験者は、非検出可能レベルを有した。他のコホートから与えられるデータが限られ、有意な比較的観察が導き得なかった。
【００６６】
【表１】
2009539841.tif 000002
【００６７】
［ＴＲＸを投与された被験者における薬力学的評価］
［リンパ球サブセット、細胞結合ＴＲＸ４、及びＣＤ３／Ｔ細胞受容体複合体の飽和と変調のフローサイトメトリー解析］
［循環するリンパ球表現形質と数の評価］
フローサイトメトリーの免疫表現型検査を使用し、全Ｔ細胞、ＣＤ４＋細胞、及びＣＤ８＋Ｔ細胞の末梢血リンパ球とサブセットにおける変化をモニターした。また、Ｂ細胞がＥＢウィルス（ＥＢＶ）の標的であるとしてＣＤ１９＋Ｂ細胞をモニターし、ＥＵにおいて行われたフェーズＩＩ検討（Ｋｅｙｍｅｕｌｅｎ，２００５）においてＥＢＶ再活性化が見られた。３用量コホートにおいてナチュラルキラー（ＮＫ）細胞をモニターし、ＮＫレベルにおける有意な変化は観察されなかった。ＣＤ２５、ＣＤ３８、ＣＤ６９、又はＨＬＤ−ＤＲと表示するＴ細胞と規定する活性化Ｔ細胞を３用量コホートにおいてモニターし、ＴＲＸ４投与後のどの被験者においても、活性化Ｔ細胞の増加は観察されなかった。
【００６８】
［絶対リンパ球数の計算方法］
１リットルあたりのリンパ球絶対数に、問題とするＣＤマーカーを有するリンパ球フローサイトメトリーのゲートにおけるリンパ球の割合（前面と側面の光散乱パラメータを用いて測定）を掛算することによって、ＣＤマーカーに基づき、１リットルあたりの各リンパ球サブセットの絶対数を計算した。低頻度で生じるリンパ球集団の正確な列挙を容易にするため、５００００の事象をフローサイトメトリーによって収集した。リンパ球の絶対数は、全白血球（ＷＢＣ）数（フローサイトメトリーのサンプルと同時に採取した血液学サンプルより）に、ＷＢＣ分画細胞数によって測定したリンパ球の割合を掛算することによって求めた。絶対的な数と割合は、各パラメータについて計算し、ベースラインからの変化は、各ポストベースライン評価について求めた。
【００６９】
［ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸ４の検出］
抗ヒトＩｇＧ抗体試薬を用い、ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の上の細胞結合ＴＲＸ４を検出した。等価可溶蛍光色素の分子（ＭＥＳＦ）として知られる標準的単位を用いることにより、蛍光強度を定量した。ＭＥＳＦ単位は、同じ蛍光色素で染色したサンプル溶液からの信号に対して、微細球標準からの蛍光の強度信号を比較することによって求めた。細胞集団のＭＥＳＦ値と結合抗体数の間には直接的関係がある。ＭＥＳＦの使用は、異なる日に採取したデータを標準化する。抗ヒトＩｇＧのＭＥＳＦを、細胞結合ＴＲＸ４の量を定量化するために使用した。
【００７０】
［ＣＤ３／Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の複合体の分析：ＣＤ３／ＴＣＲの変調と飽和］
ＣＤ３は、ＴＣＲ複合体の１つの成分である。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の約２倍の数のＣＤ３／ＴＣＲ複合体を発現する。ＣＤ３／ＴＣＲ複合体とその変調の表面発現レベルを評価するため、抗体ＢＭＡ０３１を用い、ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の双方について、αβＴＣＲ発現を測定した（Ａｂｅａｍ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ；Ｂｏｒｓｔ，ｅｔａｌ．，Ｈｕｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．９，  ｐｇｓ．１７５−１８８（１９９０））。ＴＲＸ血清レベルが１μｇ／ｍＬ未満のとき、ＣＤ３表面分子に結合したＴＲＸ４によってこの抗体の結合は阻止されない。この例に記載のいずれの被験者にも、１μｇ／ｍＬを超える血清レベルは検出されなかった。抗ＴＣＲαβ抗体のＭＥＳＦを使用し、Ｔ細胞上に存在するＣＤ３／ＴＣＲ複合体の数を定量した。
【００７１】
遊離ＴＲＸ結合サイト（先に投与したＴＲＸ４では非占有）を、ビオチニル化ＴＲＸ４で染色することによって検出した。結合したビオチニル化ＴＲＸ４のＭＥＳＦは、遊離ＴＲＸ結合サイトの有用性に直接比例する。
【００７２】
［コホートのまとめ］
明記がなければ、観察されたＰＤパラメータの変化は、ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞で同様であった。
【００７３】
［コホート１（０．１ｍｇ×３）（ｎ＝４）：］
［リンパ球数］
このコホートにおいて、ＴＲＸ４投薬後に循環するＴ細胞とＢ細胞は有意には変化しなかった。
【００７４】
［ＣＤ４＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸ４の検出］
ＣＤ４＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸ４の最大量を、ＴＲＸ４注入の最後に検出した（図７）。ＴＲＸ４の第２用量（３０００００ＭＥＳＦ単位）の後、ピーク量が生じたが、結合ＴＲＸ４は、より高い用量でコホートにおいて観察されたものよりもかなり低かった。第３日の後、全てのＴ細胞上で結合ＴＲＸ４は減少し、第１４日までに、Ｔ細胞の表面上に結合ＴＲＸ４は検出されなかった。
【００７５】
［Ｔ細胞受容体の分析］
ＴＲＸ４の投薬後、ＣＤ４＋Ｔ細胞上に、ＣＤ３／ＴＣＲ受容体複合体の有意な変調は観察されなかった（即ち、ＴＣＲαβのＭＥＳＦの減少がない）。
【００７６】
遊離ＣＤ３サイトにおける若干の一時的な減少が、ＴＲＸ４の第１注入の最後に、ＣＤ４＋Ｔ細胞において明らかであり、遊離ＣＤ３サイトが、注入終了の２時間後にベースラインに戻った。ＣＤ３の約３７％の飽和が、注入の最後に観察され、注入終了の２時間までにベースラインのレベルまで回復した。ＴＲＸ４の第２又は第３の用量の後、遊離ＣＤ３サイトの有意な減少は生じなかった。遊離ＣＤ３サイトは、本検討の残りの時間は、ベースラインのレベルに留まった。
【００７７】
［コホート２（０．５ｍｇ×３）（ｎ＝３、２被験者は３用量を受け入れ、１被験者は２用量を受け入れた）：］
［リンパ球数］
循環するＴ細胞数は、ＴＲＸ４の第１注入の後、全ての被験者において減少し、投薬の３日間、ベースラインのレベルの下を維持した。リンパ球数は、第４日に増加を始め、第５日までにベースラインのレベルに近くなった。循環するＢ細胞において有意な変化は観察されなかった。
【００７８】
［ＣＤ４＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸ４の検出］
最大のＴＲＸ４結合は、投薬の各日のＴＲＸ４注入の最後に、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で検出された。結合の量（各用量の後、約６０００００ＭＥＳＦ単位）は、コホート１において観察されたものより多く、ＴＲＸ４の高い用量と一致した。細胞結合ＴＲＸ４は、投薬終了から２時間後に依然として存在した（４０００００ＭＥＳＦ単位）。ＴＲＸ４結合は、ベースラインに近いレベルに回復し、一般に、第２用量と第３用量の前は検出されなかったが、しかしながら、ＴＲＸ４結合は、第５日まで第３用量の後に、ＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上に検出された。
【００７９】
［Ｔ細胞受容体の分析］
有意なＣＤ３／ＴＣＲ変調を、各ＴＲＸ４注入の最後に、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で観察した。第１用量の後に約６０％の変調、第２用量の後に約７０％の変調、及び第３用量の後に約８０％の変調を観察した。約４０％の変調が、全ての３つの用量の注入終了の２時間後に観察された。第２用量の前は、変調は明らかではなかった。約２０％の変調が、第３用量の前に明らかであった。第３用量の後、変調が第１４日まで明らかであった。
【００８０】
遊離ＣＤ３サイトにおける減少が、ＴＲＸ４の各注入の最後に、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で明らかであった。第１用量の後に約９０％の飽和、第２用量の後に約８０％の飽和、及び第３用量の後に約９５％の飽和を観察した。約５５％の飽和が、全ての３つの用量の注入終了の２時間後に観察された。第２と第３の用量の前は、有意な飽和は明らかではなかった。第３用量の後、部分的な飽和が第５日まで観察された。
【００８１】
［コホート３（０．１ｍｇ、０．３ｍｇ、０．５ｍｇ）（ｎ＝４）：］
［リンパ球数］
循環するＴ細胞は、ＴＲＸ４の０．３ｍｇと０．５ｍｇの用量の後、全ての被験者においてやや減少した。リンパ球数は、第４日に増加を始め、第５日までにベースラインのレベルに接近した。循環するＢ細胞において、有意な変化は観察されなかった。
【００８２】
［ＣＤ４＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸ４の検出］
各投薬日のＴＲＸ４注入の最後に、細胞結合ＴＲＸ４をＣＤ４＋Ｔ細胞上で検出した。用量の間に、ＴＲＸ４結合はベースラインに近いレベルに戻り、一般に、第２又は第３用量の前には検出されなかった。細胞結合ＴＲＸ４の増加は、用量依存の状態で生じ、０．５ｍｇの用量の後、ＴＲＸ４の最高値が検出された（０．１ｍｇの後に１０００００ＭＥＳＦ単位、０．３ｍｇの後に３０００００ＭＥＳＦ単位、０．５ｍｇの後に８０００００ＭＥＳＦ単位）。ＴＲＸ４は、第４日までに、Ｔ細胞の表面上にもはや検出されなかった。
【００８３】
［Ｔ細胞受容体の分析］
ＣＤ３／ＴＣＲ変調は、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で観察された。変調は用量依存であり、０．１ｍｇの後に１５％の変調、０．３ｍｇの後に５０％の変調、０．５ｍｇの後に８０％の変調が観察された。ＣＤ３／ＴＣＲ発現は、投薬の間に、ベースラインに近いレベルまで回復した。ＴＣＲ変調は、第５日以降は検出されなかった。
【００８４】
ＴＲＸ４の各注入の最後に、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で遊離ＣＤ３サイトの用量依存減少があった。０．１ｍｇ（４５％）と０．３ｍｇ（７０％）の後、一時的な部分的飽和が観察された。遊離ＣＤ３サイトは、最初の２つの注入の終了から２時間後に、ベースラインに近いレベルまで回復した。０．５ｍｇの後、９０％飽和が注入の最後に観察され、最後の注入から２時間後に、４５％飽和が依然として明らかであった。遊離ＣＤ３サイトにおける有意な減少は、第５日以降は観察されなかった。
【００８５】
［リンパ球数］
各コホートについて処置の開始から１４週間まで、平均の絶対リンパ球数、ＣＤ４＋リンパ球数、ＣＤ８＋リンパ球数、ＴＣＲ＋（ＣＤ４＋ＣＤ８＋）リンパ球数、及びＣＤ２＋リンパ球数を測定した。図８は、処置後から１４週間までの、４つのコホートの各々についての全リンパ球のメジアン合計数を示す。図９は、処置後から１４週間までの、４つのコホートの各々についてのＣＤ４＋Ｔリンパ球のメジアン合計数を示す。図１０は、処置後から１４週間までの、４つのコホートの各々についてのＣＤ８＋Ｔリンパ球のメジアン合計数を示す。図１１は、処置後から１４週間までの、４つのコホートの各々についてのＴＣＲ＋（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋）Ｔリンパ球のメジアン合計数を示す。図１２は、処置後から１４週間までの、４つのコホートの各々についてのＣＤ２＋Ｔリンパ球のメジアン合計数を示す。
【００８６】
全てのコホートのリンパ球数は、処置の開始から約５日間以内にベースライン又はそれに近いレベルまで回復し、そしてそのベースライン又はそれに近いレベルを維持した。
【実施例４】
【００８７】
本実施例において、ＴＲＸ４の薬物動態的パラメータと薬力学的パラメータを、種々の順番で連続日に４つのＴＲＸ４静脈内用量を受け入れた４つのコホートからの被験者において評価した。１人の患者を含むコホートＡ＊は、第１日に０．０５ｍｇのＴＲＸ４、第２日に０．１ｍｇのＴＲＸ４、第３日に０．１５ｍｇのＴＲＸ４、及び第４日に０．２５ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた。４人の患者を含むコホートＡは、第１日に０．１ｍｇのＴＲＸ４、第２日に０．２ｍｇのＴＲＸ４、第３日に０．３ｍｇのＴＲＸ４、及び第４日に０．５ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた。４人の患者を含むコホートＢは、第１日に０．１ｍｇのＴＲＸ４、第２日に０．２ｍｇのＴＲＸ４、第３日に０．３ｍｇのＴＲＸ４、及び第４日に０．７５ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた。１人の患者を含むコホートＣは、第１日に０．１ｍｇのＴＲＸ４、第２日に０．２ｍｇのＴＲＸ４、第３日に０．３ｍｇのＴＲＸ４、及び第４日に１．０ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた。
【００８８】
実施例３と同様に、Ｔ細胞の薬力学的パラメータは、末梢血区画におけるリンパ球とリンパ球サブセットの数、並びに、結合ＴＲＸ４のフローサイトメトリー評価、細胞膜からのＴ細胞受容体（ＣＤ３／ＴＣＲ複合体）の変調、及び末梢プールにおけるＴ細胞上のＴＲＸ４によるＣＤ３／ＴＣＲ複合体の変調を含んだ。実施例３と同様に、Ｔ細胞に対するＴＲＸ４の一貫した結合、ＣＤ３／ＴＣＲの変調と飽和、及び血液中の末梢Ｔ細胞の絶対数の一時的減少が、少なくとも１つの０．５ｍｇ用量を受け入れたコホートにおいて最も一貫して観察された。これらのコホートにおいて、Ｔ細胞膜に対するＴＲＸ４の一貫した結合、ＣＤ３／ＴＣＲの変調、及び部分的飽和が、最後の用量から２４時間を超えた後まで持続した。
【００８９】
また、０．３ｍｇ超のＴＲＸ４静脈内用量を受け入れた全ての被験者は、血液中のリンパ球（ＣＤ４＋細胞とＣＤ８＋細胞の双方）の数において、急激な一時的減少を有した。実施例３と同様に、殆どの投与計画について、ＣＤ４＋とＣＤ８＋のＴ細胞の数は、概ね、通常範囲内であったが（ＣＤ４＋Ｔ細胞について０．５３〜１．７６×１０９／Ｌ、ＣＤ８＋Ｔ細胞について０．３０〜１．０３×１０９／Ｌ）、ただし、０．３ｍｇ以上の用量後の多くの被験者において、通常範囲を下回る一時的減少があった。末梢血のリンパ球の減少は、実施例３と同様に、殆どは再分配現象であると考えられ、この理由は、全てのコホートにおいて、リンパ球減少症は一時的であり、細胞数は、大体、第１４日までにベースラインの少なくとも９０％まで回復し、細胞融解の臨床上の証拠（増加したＬＤＨ、Ｋ＋、等）が観察されなかったためである。また、ＣＤ１９＋Ｂ細胞の数に有意な変化は観察されなかった。Ｂ細胞について観察された値は、全ての被験者について通常範囲内であった（０．０６〜０．６６×１０９／Ｌ）。ＴＲＸ４注入の途中と直後に観察された薬力学的変化は、欧州で行われたフェーズＩＩにおいて観察されたものと一貫しており（８ｍｇ／日を６日間）（Ｋｅｙｍｅｕｌｅｎ，２００５）、但し、リンパ球減少症の程度は、この例においては、それ程顕著ではなく、短い期間であり、欧州研究（Ｋｅｙｍｅｕｌｅｎ，２００５）において投与されたよりも低いＴＲＸ４用量のものと一貫する。
【００９０】
実施例３と同様に、細胞結合ＴＲＸ４は、用量依存の状態で全ての被験者に検出された。細胞結合ＴＲＸ４は、０．５ｍｇ以上の用量の後、４８時間にわたって検出された。部分的ＣＤ３／ＴＣＲの変調は、ＴＲＸ４の投与の後、全ての被験者において明らかであった。ＣＤ３／ＴＣＲの変調は、大体は用量依存であった。０．５ｍｇ以上の用量の後、８０％以上の変調が観察された。また、これらの用量の後、２４時間にわたって部分的変調が持続した。変調は、ＥＵ研究（Ｋｅｙｍｅｕｌｅｎ，２００５）においては間接的に測定され、この例において本願明細書に提示のデータは、ＥＵ研究におけるよりも低い程度のＣＤ３／ＴＣＲ変調と短い期間のＣＤ３／ＴＣＲ変調を示し、低い用量のＴＲＸと一貫する。
【００９１】
ＴＲＸ４結合サイトの減少（ＴＲＸ４によるＣＤ３飽和を示す）が明らかであり、Ｔ細胞に結合したＴＲＸ４の検出と一致した。ＣＤ３飽和の範囲と期間は、大体、用量依存であった。最少の４用量コホート（０．０５ｍｇ、０．１ｍｇ、０．１５ｍｇ、０．２５ｍｇ）において、不完全な飽和が第５日まで存在した。別の４用量コホートにおいて、９０％以上の飽和が０．５ｍｇ以上の用量の後に観察され、注入後の２４時間に部分的飽和（約４０％）が存在した。ＴＲＸ４の４用量（０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．５ｍｇ）を受け入れた被験者において、第３週間までに不完全な飽和が存在した。第４用量が０．７５ｍｇ又は１ｍｇのいずれかでＴＲＸ４の４用量を受け入れた被験者において、第７日までに飽和が存在した。
【００９２】
［薬物動態学的データ］
［ＴＲＸ４の血清レベルの測定］
ＴＲＸ４の血清レベルを、実施例３において記載したＥＬＩＳＡアッセイを用いて測定した。実施例３と同様に、アッセイの計量限界（ＬＯＱ）は０．０１９９μｇ／ｍＬであった。結果を下記の表２に示す。
【００９３】
【表２】
2009539841.tif 000003
【００９４】
［ＴＲＸ４を投薬した被験者における薬力学的評価：リンパ球サブセット、表現型、及び数のフローサイトメトリー分析；細胞結合ＴＲＸ４；及びＣＤ３／Ｔ細胞の受容体複合体の飽和と変調］
実施例３と同様にしてフローサイトメトリーの免疫表現型検査を用い、末梢血リンパ球、全Ｔ細胞のサブセット、ＣＤ４＋Ｔ細胞、及びＣＤ８＋Ｔ細胞の変化をモニターし、また、ＣＤ１９＋Ｂ細胞をモニターした。
【００９５】
リンパ球とリンパ球サブセットの絶対数を、実施例３に記載したように、ＣＤマーカーに基づいて計算した。絶対数と割合は、各パラメータについて計算し、ベースラインからの変化は、各々のポストベースライン評価について求めた。
【００９６】
細胞結合ＴＲＸ４を、抗ヒトＩｇＧ抗体試薬を用いてＣＤ４＋とＣＤ８＋のＴ細胞上で検出し、実施例３に記載したようにして、標準的ＭＥＳＦ単位を用いて蛍光強度を定量した。
【００９７】
ＣＤ３／ＴＣＲ複合体の表面発現のレベルとその変調を評価する目的で、実施例３に記載したようにして、抗体ＢＭＡ０３１を用いてＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の双方についてαβＴＣＲを測定した。抗ＴＣＲαβ抗体のＭＦＳＦを用い、Ｔ細胞上に存在するＣＤ３／ＴＣＲ複合体の数を定量した。
【００９８】
ビオチニル化ＴＲＸ４で染色することにより、遊離ＴＲＸ４結合サイト（先に投与したＴＲＸ４で占拠されていない）を検出した。結合したビオチニル化ＴＲＸ４のＭＥＳＦは、遊離ＴＲＸ４結合サイトの利用能に直接比例する。
【００９９】
［コホートＡ＊（０．０５ｍｇ、０．１ｍｇ、０．１５ｍｇ、０．２５ｍｇ）（ｎ＝１）：］
［リンパ球数］
循環するＴ細胞数は、ＴＲＸ４の第１用量の後、穏やかに低下した。リンパ球数は、第１４日にベースラインのレベルに戻った。循環するＢ細胞の一時的減少が、投薬の第２日と第３日に観察された。
【０１００】
［ＣＤ４＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸ４の検出］
細胞結合ＴＲＸ４は、投薬の各日のＴＲＸ４注入の最後に、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で検出された（０．０５ｍｇの後に３０００００ＭＥＳＦ単位、０．１ｍｇの後に７０００００ＭＥＳＦ単位、０．１５ｍｇの後に８０００００ＭＥＳＦ単位、及び０．２５ｍｇの後に８００００ＭＥＳＦ単位）。細胞結合ＴＲＸ４の最大量は、第２用量と第３用量の後に検出された。第４用量の後に、細胞結合ＴＲＸ４の僅かな増加のみが検出され、これは、ＴＣＲ変調の同時発生によるものと思われた。ＴＲＸ４は、いずれの細胞サブセット上においても、第５日までにＴ細胞の表面上にもはや検出されなかった。
【０１０１】
［Ｔ細胞受容体の分析］
ＣＤ３／ＴＣＲ変調を、やや用量依存の状態でＣＤ４＋Ｔ細胞上で観察し、０．０５ｍｇの後に４５％の変調、０．１ｍｇの後に２０％の変調、０．１５ｍｇの後に２５％の変調、及び０．２５ｍｇの後に８０％の変調であった。ＣＤ３／ＴＣＲ変調は、第５日までにもはや検出できず、以降のレベルはベースラインに近かった。
【０１０２】
遊離ＣＤ３サイトにおける減少が、ＴＲＸ４の各用量の後にＣＤ４＋Ｔ細胞上で明らかであり、これは用量依存の状態で生じ、０．０５ｍｇの後に５０％の飽和、０．１ｍｇの後に７０％の飽和、０．１５ｍｇの後に８０％の飽和、及び０．２５ｍｇの後に９５％の飽和であった。これは、各注入の終了から２時間後に、ベースラインのレベルに近いレベルまで回復した。遊離ＣＤ３サイトにおける有意な減少は、第５日以降は観察されなかった。
【０１０３】
［コホートＡ（０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．５ｍｇ）（ｎ＝４）：
［リンパ球数］
循環するＣＤ４＋Ｔ細胞の数は、ＴＲＸ４の第１用量の後、穏やかに低下し、ベースラインまで回復した第７日まではそれを維持した（図１３）。循環するＢ細胞においては、有意な変化は観察されなかった。
【０１０４】
［ＣＤ４＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸ４の検出］
細胞結合ＴＲＸ４は、投薬の各日のＴＲＸ４注入の最後に、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で検出された（０．１ｍｇの後に２０００００ＭＥＳＦ単位、０．２ｍｇの後に３７５０００ＭＥＳＦ単位、０．３ｍｇの後に６０００００ＭＥＳＦ単位、及び０．５ｍｇの後に４５００００ＭＥＳＦ単位）（図１４）。細胞結合ＴＲＸ４の最大量は、ＴＲＸ４の第３用量と第４用量の後に検出された。細胞結合ＴＲＸ４は、０．５ｍｇ注入の終了から２時間後に依然として存在し（４０００００ＭＥＳＦ単位）、約２４時間の後にも検出可能なＴＲＸ４が依然として存在した。ＴＲＸ４は、第７日までにＴ細胞の表面上にもはや検出されなかった。
【０１０５】
［Ｔ細胞受容体の分析］
ＣＤ３／ＴＣＲ複合体の変調を、投薬後にＣＤ４＋Ｔ細胞上で観察した（図１５）。変調は用量依存性であり、０．１ｍｇの後に４５％の変調、０．２ｍｇの後に４０％の変調、０．３ｍｇの後に６０％の変調、及び０．５ｍｇの後に８０％の変調であった。変調の程度は、０．５ｍｇ用量の被験者の間で最も一貫していた。ＣＤ３／ＴＣＲ発現は、用量の間でベースラインに近いレベルまで回復し、その結果、第２、第３、及び第４の用量の前では変調は明らかではなかった。しかしながら、０．５ｍｇの第４用量の後、第３週間まで部分的ＣＤ３／ＴＣＲ変調が明らかであり、その後、ＣＤ３／ＴＣＲレベルはベースラインまで回復した。
【０１０６】
各注入の後、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で遊離ＣＤ３サイトの用量依存減少があり、０．１ｍｇの後に４０％の飽和、０．２ｍｇの後に７０％の飽和、０．３ｍｇの後に８５％の飽和、及び０．５ｍｇの後に９５％の飽和であった（図１６）。最後の注入の終了から２時間後に、６０％飽和が明らかであり、３５％飽和が、次の日にも依然として明らかであった。
【０１０７】
［コホートＢ（０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．７５ｍｇ）（ｎ＝４）：］
［リンパ球数］
循環する細胞の数は、ＴＲＸ４の第１用量の後、穏やかに低下し、ベースラインまで回復した第７日まではそれを維持した。循環するＢ細胞においては、有意な変化は観察されなかった。
【０１０８】
［ＣＤ４＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸ４の検出］
細胞結合ＴＲＸ４は、投薬の各日のＴＲＸ４注入の最後に、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で検出された（０．１ｍｇの後に２００００００ＭＥＳＦ単位、０．２ｍｇの後に４０００００ＭＥＳＦ単位、０．３ｍｇの後に４２００００ＭＥＳＦ単位、及び０．７５ｍｇの後に４８００００ＭＥＳＦ単位）。細胞結合ＴＲＸ４の最大量は、第３用量と第４用量の後に検出された。細胞結合ＴＲＸ４は、０．７５ｍｇ注入の終了から２時間後に依然として存在し（５５００００ＭＥＳＦ単位）、約２４時間の後にも検出可能なＴＲＸ４が依然として存在した（２０００００ＭＥＳＦ単位）。ＴＲＸ４は、第７日までにＴ細胞の表面上にもはや検出されなかった。
【０１０９】
［Ｔ細胞受容体の分析］
ＣＤ３／ＴＣＲの変調を、投薬後にＣＤ４＋Ｔ細胞上で観察した（図１７）。変調は用量依存性であり、０．１ｍｇの後に２０％の変調、０．２ｍｇの後に３０％の変調、０．３ｍｇの後に６０％の変調、及び０．７５ｍｇの後に８５％の変調であった。変調は、用量の間でベースラインに近いレベルまで回復し、その結果、第２、第３、及び第４の用量の前では変調は明らかではなかった。しかしながら、０．７５ｍｇの第４用量の後、最後の注入の終了から２時間後に５０％変調が依然として明らかであった。第２週間まで部分的ＣＤ３／ＴＣＲ変調が明らかであり、その後、ＣＤ３／ＴＣＲレベルはベースラインの近くを維持した。
【０１１０】
各注入の終了時に、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で遊離ＣＤ３サイトの用量依存減少があった。０．１ｍｇの後には有意な飽和は検出されず、０．２ｍｇの後に６０％の飽和、０．３ｍｇの後に８０％の飽和、及び０．７５ｍｇの後に９５％の飽和であった（図１８）。最後の注入の終了から２時間後に、７０％飽和が明らかであり、４０％飽和が、次の日（第５日）にも依然として明らかであった。ベースラインのレベルへの完全な戻りが第７日までに生じた。
【０１１１】
［コホートＣ（０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、１．０ｍｇ）（ｎ＝１）：］
［リンパ球数］
循環するＣＤ４＋Ｔ細胞の数は、ＴＲＸ４の各注入の最後に穏やかに低下したが、２４時間以内にベースラインに近いレベルまで回復した。循環するＢ細胞においては、有意な変化は観察されなかった。
【０１１２】
［ＣＤ４＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸ４の検出］
細胞結合ＴＲＸ４は、投薬の各日のＴＲＸ４注入の最後に、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で検出された（０．１ｍｇの後に８０００００ＭＥＳＦ単位、０．２ｍｇの後に１２０００００ＭＥＳＦ単位、０．３ｍｇの後に６０００００ＭＥＳＦ単位、及び１．０ｍｇの後に７５００００ＭＥＳＦ単位）。細胞結合ＴＲＸ４の最大量は、第２用量の後に検出された。細胞結合ＴＲＸ４は、１．０ｍｇ注入の終了から２時間後に依然として存在し（６０００００ＭＥＳＦ単位）、約２４時間の後にも検出可能なＴＲＸ４が依然として存在した（２０００００ＭＥＳＦ単位）。ＴＲＸ４は、第７日までにＴ細胞の表面上にもはや検出されなかった。
【０１１３】
［Ｔ細胞受容体の分析］
ＣＤ３／ＴＣＲの変調を、投薬後にＣＤ４＋Ｔ細胞上で観察した。変調は用量依存性であり、０．１ｍｇの後に２５％の変調、０．２ｍｇの後に７５％の変調、０．３ｍｇの後に８５％の変調、及び１．０ｍｇの後に８８％の変調であった。変調は、投薬の間でベースラインに近いレベルまで回復し、その結果、第２、第３、及び第４の用量の前では変調は明らかではなかった。最後の注入の終了から２時間後に５０％変調が依然として明らかであり、これは第５日においても依然として明らかであった。ＣＤ３／ＴＣＲレベルは、第７日までにベースラインに戻るように見えた。
【０１１４】
各注入の終了時に、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で遊離ＣＤ３サイトの減少が明らかであり、用量依存の状態で生じ、０．１ｍｇの後に５０％の飽和、０．２ｍｇの後に９５％の飽和、０．３ｍｇの後に９９％の飽和、及び１．０ｍｇの後に９７％の飽和であった。最後の注入の終了から２時間後に、５０％飽和が明らかであり、３０％飽和が、次の日（第５日）にも依然として明らかであった。ベースラインのレベルへの完全な戻りが第７日までに生じた。
【０１１５】
［リンパ球数］
各コホートについて処置の開始から１２又は１３週間まで、平均の絶対リンパ球数、ＣＤ４＋リンパ球数、ＣＤ８＋リンパ球数、ＴＣＲ＋（ＣＤ４＋ＣＤ８＋）リンパ球数、及びＣＤ２＋リンパ球数を測定した。図１９は、処置後から１３週間までの、４つのコホートの各々についての全リンパ球のメジアン合計数を示す。図２０は、処置後から１３週間までの、４つのコホートの各々についてのＣＤ４＋Ｔリンパ球のメジアン合計数を示す。図２１は、処置後から１３週間までの、４つのコホートの各々についてのＣＤ８＋Ｔリンパ球のメジアン合計数を示す。図２２は、処置後から１３週間までの、４つのコホートの各々についてのＴＣＲ＋（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋）Ｔリンパ球のメジアン合計数を示す。図２３は、処置後から１３週間までの、４つのコホートの各々についてのＣＤ２＋Ｔリンパ球のメジアン合計数を示す。
【実施例５】
【０１１６】
実施例３と実施例４で得られた薬物動態学的データと薬力学的データに基づき、８日間のＴＲＸ４投与計画を作成した。本実施例において、６人の患者のコホートにおける各患者は、第１日に０．１ｍｇのＴＲＸ４、第２日に０．２ｍｇのＴＲＸ４、第３日に０．３ｍｇのＴＲＸ４、第４〜８日の各日に０．５ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた。この計画又はプロトコルは「ＴＲＸ４  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ｍｕｌｔｉ−Ｄｏｓｅ  Ｒｅｇｉｍｅｎｓ  ｉｎ  Ｔｙｐｅ  １  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｌｌｉｔｕｓ，ｏｒ  ＴＴＥＤＤ」と称した。
【０１１７】
本実施例において、ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞上の細胞結合ＴＲＸ４を、抗ヒトＩｇＧ抗体試薬を用いて測定し、実施例３に記載のように、標準的なＭＥＳＦを用いることによって蛍光強度を定量した。結果を図２４と図２５にグラフに示す。
【０１１８】
ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞上の遊離ＴＲＸ４のＣＤ３結合サイト（先に投与したＴＲＸ４では非占有）を、実施例３に記載したようにして、ビオチニル化ＴＲＸ４で染色することによって検出した。結合したビオチニル化ＴＲＸ４のＭＥＳＦは、遊離ＴＲＸ４結合サイトの利用能に直接比例する。結果を図２６と図２７にグラフに示す。
【０１１９】
ＣＤ３／ＴＣＲ複合体とその変調の表面発現のレベルを評価する目的で、実施例３と同様にして、抗体ＢＭＡ０１を用いてＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞について、αβＴＣＲ発現を測定した。上述したように、この抗体の結合は、ＴＲＸ４血清レベルが１μｇ／ｍＬのときは、ＣＤ３表面分子に対する結合によっては阻止されない。抗ＴＣＲαβ抗体のＭＥＳＦは、Ｔ細胞上に存在するＣＤ３／ＴＣＲ複合体の数を定量するために使用された。結果は、ベースラインの値の割合として、図２８と図２９にグラフで示す。
【０１２０】
１リットルあたりのリンパ球と各リンパ球サブセットの絶対数は、実施例３に記載したように、ＣＤマーカーに基づいて計算した。絶対数と割合を、各パラメータについて計算し、ベースラインからの変化を、ポストベースライン評価について求めた。
【０１２１】
［ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸ４の検出］
ＣＤ４＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸ（図２４）とＣＤ８＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸ（図２５）の量は、各注入後の２時間以内にベースラインより高く有意に増加した後、次の日の注入前に減少した。しかしながら、第２日〜第８日の注入前のＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞に結合したＴＲＸの量は、ベースラインにあるか又はそれを上回った。結合の量は、第４日と第６日の注入後に最大であった。第８日の後にＴＲＸ４の注入を停止したとき、ＴＲＸ４の結合レベルは、第２週と第３週の間のベースラインに戻った。
【０１２２】
［Ｔ細胞受容体の分析］
ＴＲＸ４の各注入の後、ＣＤ４＋Ｔ細胞（図２６）とＣＤ８＋Ｔ細胞（図２７）の上の遊離ＣＤ３サイトの数が減少した。殆ど完全な飽和が、第７日の注入後に達成された。第８日の後に注入を停止すると、ＣＤ４＋Ｔ細胞上の遊離ＣＤ３＋サイトは、ほぼ第５週のベースラインの近くまで戻り（図２６）、ＣＤ８＋Ｔ細胞上の遊離ＣＤ３＋サイトは、ほぼ第４週のベースラインの近くまで戻った（図２７）。
【０１２３】
ＣＤ４＋Ｔ細胞（図２８）とＣＤ８＋Ｔ細胞（図２９）の上のＣＤ３／ＴＣＲ変調を、各ＴＲＸ４注入の最後に観察した。第５日〜第８日のそれぞれの注入の最後に、ＣＤ４＋Ｔ細胞上で８０％超の変調を観察した（図２８）。第５日〜第８日のそれぞれの注入の最後に、ＣＤ８＋Ｔ細胞上で約８０％の変調を観察した（図２９）。第８日の後に注入を停止すると、ＣＤ４＋Ｔ細胞の変調が、ほぼ第３週まで観察され（図２８）、ＣＤ８＋Ｔ細胞の変調もまた、ほぼ第３週まで観察された（図２９）。
【０１２４】
［リンパ球数］
ＴＲＸ４の第１注入の後、ＣＤ４＋Ｔ細胞数が減少し、投薬の８日間にわたってベースラインの下を維持した（図３０）。第７日のＴＲＸ４注入の後、レベルはベースラインの約２０％であった。注入が第８日の後に停止したとき、ＣＤ４＋Ｔ細胞数は徐々に増加したが、ほぼ第１０週まではベースラインに戻らなかった。
【０１２５】
また、ＣＤ８＋Ｔ細胞数は、ＴＲＸ４の第１注入の後に低下し、投薬の８日間を通じてベースラインのかなり下を維持した（図３１）。注入が第８日の後に停止したとき、ＣＤ８＋Ｔ細胞数は徐々に増加したが、ほぼ第６週まではベースラインに戻らなかった。
【０１２６】
ＣＤ１９＋Ｂ細胞数は、８日間の投与計画の全体を通して、かつ第１２週に至るまで、ベースライン又はその近くを維持した（図３２）。
【０１２７】
本願明細書に記載の８日間のＴＲＸ４投与計画で観察された薬力学的パラメータを、他のＴＲＸ４投与計画、即ち、（１）３５人の新たな発症１型糖尿病患者が６日間続けて８ｍｇのＴＲＸ４の注入を受ける欧州連合フェーズＩＩ治験（Ｋｅｙｍｅｕｌｅｎ，２００５）、及び（２）乾癬を患う４人の患者のコホートに各患者が１ｍｇのＴＲＸ４の一回の静脈注射を受ける検討と比較した。この検討は、下記の実施例６にさらに記載する。０．９％の生理食塩水を受け入れた４０人のグループのプラセボを対照標準として使用した。
【０１２８】
図３３は、本実施例で処置した６人の患者におけるリンパ球の平均合計数を、欧州連合フェーズＩＩ治験（ＥＵ）におけるヒト化アグリコシル化された抗ＣＤ３抗体で処置された患者（Ｋｅｙｍｅｕｌｅｎ，２００５）、及び１ｍｇのＴＲＸ４を与えられた４人の乾癬患者と比較して示す。図３３に示すように、本実施例において処置された６人の患者と乾癬患者のリンパ球の合計数は、１０週間にわたって互いに近似し、約３週間にわたってＥＵ治験の患者におけるリンパ球の合計数と近似した。そして、ＥＵ治験における患者は、リンパ球数の有意な上昇を有し、これはエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）が関与するＣＤ８＋Ｔ細胞のリンパ球増加症のためであった。
【０１２９】
図３４は、本実施例で処置した６人の患者におけるＣＤ２＋Ｔリンパ球の数とＥＵ検討で治療した１型糖尿病の患者におけるその数を示す。これらのグループにおけるＣＤ２＋Ｔリンパ球の数は、相互に第３週まで近似し、その後、ＥＵ検討において処置された患者のＣＤ２＋Ｔリンパ球の数に有意な増加が生じた。このことは、やはり、ＣＤ２＋Ｔリンパ球もまたＣＤ８＋であるため、ＥＢＶの関与するＣＤ８＋Ｔ細胞リンパ球増加症によるものであった。
【０１３０】
図３５は、本実施例で処置された６人の患者、並びに、ＥＵフェーズＩＩ治験において処置された１型糖尿病の患者、及び１ｍｇのＴＲＸ４を与えられた４人の乾癬患者におけるＣＤ８＋Ｔリンパ球の合計数を示す。本実施例で処置された６人の患者と乾癬患者のＣＤ８＋Ｔリンパ球の数は、１０週にわたって互いに近似し、一方、本実施例で処置した６人の患者とＥＵフェーズＩＩ治験で処置した１型糖尿病患者のＣＤ８＋Ｔリンパ球の数は、約２週にわたって相互に近似し、その後、ＥＵフェーズＩＩ治験で処置した１型糖尿病患者のＣＤ８＋Ｔリンパ球の数に有意な増加があった。このＣＤ８＋Ｔリンパ球の増加は、ＥＢＶの関与するＣＤ８＋Ｔ細胞リンパ球増加症によるものであった。
【０１３１】
図３６は、本実施例で処置された６人の患者、並びに、ＥＵフェーズＩＩ治験において処置された１型糖尿病の患者、及び１ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた４人の乾癬患者についてのＣＤ４＋Ｔリンパ球の数を示す。本実施例で処置された６人の患者、ＥＵフェーズＩＩ治験において処置された１型糖尿病の患者、及び１ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた４人の乾癬患者は、１０週にわたってＣＤ４＋Ｔリンパ球の数の同様な減少と増加を有した。
【０１３２】
図３７は、本実施例で処置された６人の患者、ＥＵフェーズＩＩ治験において処置された１型糖尿病の患者、及び１ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた４人の乾癬患者についてのＴＣＲ＋Ｔリンパ球の数を示す。こうしたＴＣＲ＋Ｔリンパ球はＣＤ４＋とＣＤ８＋である。本実施例で処置された６人の患者と４人の乾癬患者におけるＴＣＲ＋Ｔリンパ球の数は、１０週にわたって相互に近似する。本実施例で処置された６人の患者とＥＵフェーズＩＩ治験において処置された１型糖尿病の患者に、ＴＣＲ＋Ｔリンパ球の数の同様な変化が約２週にわたって観察され、その後、ＥＵフェーズＩＩ治験において処置された１型糖尿病の患者に、ＴＣＲ＋Ｔリンパ球の数に有意な増加があった。これは、ＥＢＶの関与するＣＤ８＋とＣＤ４＋のＴ細胞リンパ球増加症によるものであった。
【０１３３】
図３３〜３７に示すように、本実施例で処置された６人の患者の種々のリンパ球数に関して測定した薬力学的パラメータは、ＥＵフェーズＩＩ治験において処置された１型糖尿病の患者（Ｋｅｙｍｅｕｌｅｎ，２００５）、及び１ｍｇのＴＲＸ４を受け入れた４人の乾癬患者についてのものと同様であった。
【０１３４】
上述したように（Ｋｅｙｍｅｕｌｅｎ，２００５）、ヒト化アグリコシル化された抗ＣＤ３抗体ＴＲＸ４を受け入れたＥＵフェーズＩＩ治験における１型糖尿病の患者は、プラセボグループにおけるよりも、残余β細胞機能の良好な維持を有した。また、インスリン用量は、プラセボグループにおいては増加したが、ＣＤ３抗体で処置した患者においては増加しなかった。
【０１３５】
下記の実施例６にさらに詳しく説明するように、１ｍｇのＴＲＸ４の静脈注射を受け入れた４人の乾癬患者は、注入後８週に、乾癬面積重症度（ＰＡＳＩ）の点数に低下を示した。
【０１３６】
このように、本実施例に記載のようなＴＲＸ４を使用する治療計画は、糖尿病又は乾癬を治療するのに有効である抗ＣＤ３抗体を使用する別な治療計画に類似の薬力学的パラメータを有する。
【０１３７】
さらに、８日間の治療計画の各注入の終了から１時間後に、ＥＬＩＳＡアッセイ（Ｒ  ａｎｄ  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）によってサイトカインＴＮＦ−αとインターロイキン−６（ＩＬ−６）の放出を測定し、ｐｇ／ｍＬを単位とするＴＮＦ−αとＩＬ−６の各々の平均サイトカイン放出を測定した。第１〜８日の各日の平均サイトカイン放出濃度を、８ｍｇのＴＲＸ４の第１用量の注入の終了から１時間後に、ＥＵフェーズＩＩ治験（Ｋｅｙｍｅｕｌｅｎ，２００５）における患者の平均サイトカイン放出濃度と比較した。結果を図３８にグラフで示す。図３８に示すように、第１日に０．１ｍｇのＴＲＸ４、第２日に０．２ｍｇのＴＲＸ４、第３日に０．３ｍｇのＴＲＸ４、第４〜８日に０．５ｍｇのＴＲＸ４の投与計画は、ＥＵフェーズＩＩ治験に比較し、サイトカインＴＮＦ−αとＩＬ−６の放出に有意な減少を与えた。
【実施例６】
【０１３８】
本願明細書においてコホート１と称する４人の患者は、それぞれ体の表面の少なくとも１０％が感染した少なくとも中程度の乾癬との医師の診断を受けており、全身療法を受けるに適する又は受けていた。コホート１の各患者は、１時間にわたって静脈注射により１ｍｇのＴＲＸ４を与えられた。コホート１の患者は、いずれも、ＴＲＸ４を受け入れる前の４週間以内に、乾癬治療のための何らかの全身的薬剤又は何らかの強い免疫抑制剤を受け入れていなかった。ＴＲＸ４の投与の後、８週間にわたり、コホート１の患者は、いずれも、乾癬の局所又は全身治療を受けなかった。
【０１３９】
ＴＲＸ４投与の直後に、コホート１の全患者について、絶対リンパ球数が減少したことが観察された。この減少は、ＴＲＸ４の１時間の注入が終了した直後に観察され、第１日と第２日の間で最も顕著であり、リンパ球数の増加は、第３日に始まった。リンパ球数は、第６日までにベースラインに戻った。
【０１４０】
抗体でＴＣＲに染色を施すことによって検出されたＣＤ３／ＴＣＲ複合体の変調は、ＴＲＸ投与の直後に最も突出して観察され、投薬後の６日以内に、細胞表面上のＴＣＲ複合体が完全に回復した。ＴＲＸ４の血清レベルは、ＴＲＸ４の投与の完了の直後から投与後の１時間まで血液中に検出された。
【０１４１】
ベースラインのＰＡＳＩ点数を、ＴＲＸ４を受け入れる前の１日（第１日）に、コホート１の患者の各々について測定した。また、ＴＲＸ４を受け入れた後の第８週までの間、コホート１の患者の各々についてＰＡＳＩ点数を測定した。
【０１４２】
１ｍｇのＴＲＸ４の静脈内注射を受け入れたコホート１の４人の各患者の、ベースライン（第１日）と第８週におけるＰＡＳＩ点数を下記の表３に示す。
【０１４３】
【表３】
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【０１４４】
また、５人の患者（以降、「コホート２」と称する）は、２ｍｇのＴＲＸ４抗体を与えられ、７人の患者（以降、「コホート３」と称する）は、４ｍｇのＴＲＸ４抗体を与えられた。
【０１４５】
コホート１と同様に、コホート２とコホート３の各患者は、１時間にわたる静脈内注射によってＴＲＸ４を与えられた。
【０１４６】
コホート１と同様に、コホート２とコホート３の各患者は、体の表面積の少なくとも１０％が感染した少なくとも中位の乾癬の医師の診断を受けており、全身療法に適するか又は受けていた。
【０１４７】
コホート２とコホート３の患者はいずれも、ＴＲＸ４を受け入れる前の４週間以内に、乾癬の治療のための何らかの全身的薬剤又は何らかの強い免疫抑制剤を受け入れていなかった。
【０１４８】
ベースラインのＰＡＳＩ点数は、ＴＲＸ４を受け入れる前の１日（第１日）に、コホート２とコホート３の各患者について測定した。また、ＰＡＳＩ点数は、ＴＲＸ４を受け入れた後の第８週に、コホート２とコホート３の各患者について測定した。
【０１４９】
コホート２の患者１〜５のＰＡＳＩ点数を下記の表４に示す。ＴＲＸ４を受け入れて７週間後に、コホート２の患者５は、乾癬の治療のために使用される薬剤である０．０５％のハロベタゾールプロピオン酸エステルを含む局所的コルチコステロイドクリームを毎日局所適用されることを開始した。コホート２の残りの患者は、ＴＲＸ４を受け入れた後の８週間にわたり、乾癬のための局所的又は全身的治療は何ら受けなかった。
【０１５０】
２ｍｇのＴＲＸ４の静脈内注射を受け入れたコホート２の５人の各患者について、ベースライン（第１日）とＴＲＸ４投与から８週間後におけるＰＡＳＩ点数は、下記の通りであった。
【０１５１】
【表４】
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【０１５２】
コホート３の患者１〜７のＰＡＳＩ点数を下記の表５に示す。患者７以外は、コホート３の患者はいずれも、ＴＲＸ４を受け入れた後の８週間にわたり、乾癬のための局所的又は全身的治療は何ら受けなかった。患者７は、ＴＲＸ４を受け入れて１週間後、乾癬のための紫外線Ｂ光治療を開始した。
【０１５３】
【表５】
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【０１５４】
特許、文献（公開された特許出願を含む）、保管受入番号、及びデータベース受入番号のいずれの開示事項も、それぞれの特許、文献、保管受入番号、及びデータベース受入番号が具体的かつ個々に参照して組み込まれるならば、同じ範囲で参照して組み込まれる。
【０１５５】
ここで、本発明の範囲は、上記の具体的態様に限定されるものではないことを理解すべきである。本発明は、特許請求の範囲に中に含まれるなら、上記に具体的に記載した以外にも実施することができる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【国際調査報告】
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