(57)【要約】ガンの症状または感染症状を処置するために、弱毒化された細菌および結合化合物を投与するための試薬ならびに方法が提供される。結合化合物には、抗体、または抗体に由来する抗原結合部位が含まれる。本発明の１つの実施形態において、ガンまたは感染性の症状に対して該症状を有している哺乳動物において免疫応答を刺激する方法が提供され、該方法は、該哺乳動物に有効量のＬｉｓｔｅｒｉａおよび：ａ．該症状の抗原に特異的に結合する抗体；またはｂ．該症状の抗原に特異的に結合し、また抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する免疫細胞にも特異的に結合する抗体の抗原結合部位に由来する結合化合物を投与する工程を含み、ここで、該Ｌｉｓｔｅｒｉａと該抗体または結合化合物との組み合わせが該応答の刺激に有効である。
2009504787.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガンまたは感染性の症状に対して該症状を有している哺乳動物において免疫応答を刺激する方法であって、該哺乳動物に有効量のＬｉｓｔｅｒｉａおよび：
ａ．該症状の抗原に特異的に結合する抗体；または
ｂ．該症状の抗原に特異的に結合し、また抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する免疫細胞にも特異的に結合する抗体の抗原結合部位に由来する結合化合物
を投与する工程を含み、
該Ｌｉｓｔｅｒｉａと該抗体または結合化合物との組み合わせが該応答の刺激に有効である、方法。
【請求項２】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａと前記抗体または結合化合物とを同時に投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａと前記抗体または結合化合物とを同時に投与しない、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａが弱毒化されている、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
抗体の前記抗原結合部位に由来する前記結合化合物にさらにＦｃ領域またはＦｃ領域誘導体が含まれている、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記Ｆｃ領域誘導体が：
ａ．前記ＡＤＣＣを媒介する細胞によって発現される活性化受容体に対する高い親和性；または
ｂ．該ＡＤＣＣを媒介する細胞によって発現される阻害性受容体に対する低い親和性
の一方または両方を有している、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記Ｆｃ領域誘導体に以下の変異：
ａ．Ｓ２９８Ａ；
ｂ．Ｅ３３３Ａ；または
ｃ．Ｋ３３４Ａ
の１つ以上が含まれているＩｇＧ１  Ｆｃ領域が含まれており、該変異は前記ＡＤＣＣを媒介する細胞の活性化の増大を媒介するのに有用である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記結合化合物には：
ａ．二重特異的抗体であって、該二重特異的抗体の第１の結合部位は前記症状の前記抗原に特異的に結合し、該二重特異的抗体の第２の結合部位は前記ＡＤＣＣを媒介する免疫細胞に特異的に結合する、二重特異的抗体；または
ｂ．前記症状の該抗原に特異的に結合する抗体のペプチド模倣物
が含まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａは代謝的に活性であり、本質的に：
ａ．コロニーの形成；
ｂ．複製；または
ｃ．分裂
の１つ以上ができない、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａは本質的には代謝的に不活性である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
弱毒化された前記Ｌｉｓｔｅｒｉａは：
ａ．増殖；
ｂ．細胞から細胞への拡散；
ｃ．細胞への結合もしくは侵入；
ｄ．複製；または
ｄ．ＤＮＡ修復
の１つ以上が弱められている、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａは：
ａ．ａｃｔＡ変異；
ｂ．ｉｎｌＢ変異；
ｃ．ｕｖｒＡ変異；
ｄ．ｕｖｒＢ変異；
ｅ．ｕｖｒＣ変異；
ｆ．核酸標的化化合物；または
ｇ．ｕｖｒＡＢ変異および核酸標的化化合物
の１つ以上によって弱められている、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記核酸標的化化合物はソラレンである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記症状には、腫瘍、ガン、または前ガン状態の障害の１つ以上が含まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記症状には感染が含まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記症状には：
ａ．Ｂ型肝炎；
ｂ．Ｃ型肝炎；
ｃ．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）；
ｄ．サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）；
ｅ．エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）；または
ｆ．リーシュマニア
の１つ以上による感染が含まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記症状が肝臓の症状である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記免疫応答が前記症状の細胞に対する免疫応答である、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記免疫応答には先天免疫応答が含まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記免疫応答には適応的免疫応答が含まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＬｉｓｔｅｒｉａがＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａには異種抗原をコードする核酸が含まれている、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
弱毒化された前記Ｌｉｓｔｅｒｉａが１つの試薬であり、前記抗体または結合化合物が第２の試薬であり、さらに、前記哺乳動物に第３の試薬を投与する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記第３の試薬に：
ａ．サイトカインのアゴニストもしくはアンタゴニスト；
ｂ．Ｔ制御性細胞（Ｔｒｅｇ）の阻害剤；または
ｃ．シクロホスファミド（ＣＴＸ）
の１つ以上が含まれる、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
有効量の前記Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の免疫応答と比較して、前記免疫応答には：
ａ．ＮＫ細胞；
ｂ．ＮＫＴ細胞；
ｃ．樹状細胞（ＤＣ）；
ｄ．単球もしくはマクロファージ；
ｅ．好中球；
ｆ．ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）；または
ｇ．ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメインタンパク質（ＮＯＤタンパク質）
の１つ、または任意の組み合わせの活性化、あるいはそれらによる炎症が含まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
有効量のＬｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の発現と比較して、前記免疫応答に：
ａ．ＣＤ６９；
ｂ．インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）；
ｃ．インターフェロン−α（ＩＦＮα）もしくはインターフェロンβ（ＩＦＮβ）；
ｄ．インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）；
ｅ．単球走化性タンパク質（ＭＣＰ−１）；または
ｆ．インターロイキン−６（ＩＬ−６）
の１つまたは任意の組み合わせの発現の増大が含まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記刺激には：
ａ．前記Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の割合と比較した、前記哺乳動物の肝臓の白血球の集団中のＮＫ細胞の割合の増加；または、
ｂ．前記Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の発現と比較した、肝臓のＮＫ細胞による活性化マーカーの発現の増大
が含まれる、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
ＮＫ細胞の割合の前記増大が、弱毒化された前記Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の割合よりも、少なくとも：
ａ．５％；
ｂ．１０％；
ｃ．１５％；
ｄ．２０％；または、
ｅ．２５％
大きい、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記投与されるＬｉｓｔｅｒｉａは：
ａ．前記哺乳動物に対して経口では投与しない；または、
ｂ．他のタイプの細菌が少なくとも９９％含まれていない組成物として前記哺乳動物に投与する；
の一方または両方である、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
ガンまたは感染性の症状を有している哺乳動物の該症状を処置する方法であって、該哺乳動物に対して、有効量のＬｉｓｔｅｒｉａを：
ａ．該症状の抗原に特異的に結合する抗体；または
ｂ．該症状の抗原に特異的に結合し、そしてＡＤＣＣを媒介する免疫細胞にも特異的に結合する抗体に由来する結合化合物
とともに投与する工程を含み、該Ｌｉｓｔｅｒｉａと該抗体または結合化合物との組み合わせが、該症状の緩和または軽減に有効である方法。
【請求項３２】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａと前記抗体または結合化合物とを同時に投与する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記Ｌｉｓｔｅｉｒａと前記抗体または結合化合物とを同時には投与しない、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａが弱毒化されている、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
抗体の前記抗原結合部位に由来する前記結合化合物には、さらに、Ｆｃ領域またはＦｃ領域誘導体が含まれている、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記Ｆｃ領域誘導体が：
ａ．前記ＡＤＣＣを媒介する細胞によって発現される活性化受容体に対する高い親和性；または
ｂ．該ＡＤＣＣを媒介する細胞によって発現される阻害性受容体に対する低い親和性
の一方または両方を有している、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記Ｆｃ領域誘導体には、以下の変異：
ａ．Ｓ２９８Ａ；
ｂ．Ｅ３３３Ａ；または
ｃ．Ｋ３３４Ａ
の１つ以上が含まれているＩｇＧ１  Ｆｃ領域が含まれており、該変異は該ＡＤＣＣを媒介する細胞の活性化の増大を媒介するのに有用である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記結合化合物に：
ａ．二重特異的抗体であって、該二重特異的抗体の第１の結合部位は前記症状の抗原に特異的に結合し、該二重特異的抗体の第２の結合部位は前記ＡＤＣＣを媒介する免疫細胞に特異的に結合する、二重特異的抗体；または
ｂ．該症状の抗原に特異的に結合する抗体のペプチド模倣物
が含まれる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３９】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａは代謝的に活性であり、そして本質的には：
ａ．コロニーの形成；
ｂ．複製；または
ｃ．分裂
の１つ以上ができない、請求項３１に記載の方法。
【請求項４０】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａは本質的には代謝的に不活性である、請求項３１に記載の方法。
【請求項４１】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａは：
ａ．増殖；
ｂ．細胞から細胞への拡散；
ｃ．細胞への結合もしくは侵入；
ｄ．複製；または
ｄ．ＤＮＡ修復
の１つ以上が弱められている、請求項３１に記載の方法。
【請求項４２】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａは：
ａ．ａｃｔＡ変異；
ｂ．ｉｎｌＢ変異；
ｃ．ｕｖｒＡ変異；
ｄ．ｕｖｒＢ変異；
ｅ．ｕｖｒＣ変異；
ｆ．核酸標的化化合物；または
ｇ．ｕｖｒＡＢ変異および核酸標的化化合物
の１つ以上によって弱められている、請求項３１に記載の方法。
【請求項４３】
前記核酸標的化化合物はソラレンである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記症状には、ガン、腫瘍、または前ガン状態の障害が含まれる、請求項３１に記載の方法。
【請求項４５】
前記症状には感染が含まれる、請求項３１に記載の方法。
【請求項４６】
前記症状には：
ａ．Ｂ型肝炎；
ｂ．Ｃ型肝炎；
ｃ．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）；
ｄ．サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）；
ｅ．エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）；または
ｆ．リーシュマニア
の１つ以上による感染が含まれる、請求項３１に記載の方法。
【請求項４７】
前記症状が肝臓の症状である、請求項３１に記載の方法。
【請求項４８】
前記免疫応答が前記症状の細胞に対する免疫応答である、請求項３１に記載の方法。
【請求項４９】
前記処置によって先天免疫応答の刺激が生じる、請求項３１に記載の方法。
【請求項５０】
前記処置によって適応的免疫応答の刺激が生じる、請求項３１に記載の方法。
【請求項５１】
前記哺乳動物がヒトである、請求項３１に記載の方法。
【請求項５２】
前記ＬｉｓｔｅｒｉａがＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである、請求項３１に記載の方法。
【請求項５３】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａには、異種抗原をコードする核酸が含まれている、請求項３１に記載の方法。
【請求項５４】
前記Ｌｉｓｔｅｒｉａが第１の試薬であり、前記抗体または結合化合物が第２の試薬であり、さらに、前記哺乳動物に第３の試薬を投与する工程を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項５５】
前記第３の試薬には：
ａ．サイトカインのアゴニストもしくはアンタゴニスト；
ｂ．Ｔ制御性細胞（Ｔｒｅｇ）の阻害剤；または
ｃ．シクロホスファミド（ＣＴＸ）
の１つ以上が含まれる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
有効量の前記Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の免疫応答と比較して、前記処置により：
ａ．ＮＫ細胞；
ｂ．ＮＫＴ細胞；
ｃ．樹状細胞（ＤＣ）；
ｄ．単球もしくはマクロファージ；
ｅ．好中球；
ｆ．ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）；またはヌクレオチド結合オリゴマー化ドメイン（ＮＯＤ）タンパク質
の１つ、または任意の組み合わせの活性化、あるいはそれらによる炎症が生じる、請求項３１に記載の方法。
【請求項５７】
有効量の前記Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の発現と比較して、前記処置により：
ａ．ＣＤ６９；
ｂ．インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）；
ｃ．インターフェロン−α（ＩＦＮα）もしくはインターフェロンβ（ＩＦＮβ）；
ｄ．インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）；
ｅ．単球走化性タンパク質（ＭＣＰ−１）；または
ｆ．インターロイキン−６（ＩＬ−６）
の１つまたは任意の組み合わせの発現の増大が生じる、請求項３１に記載の方法。
【請求項５８】
前記処置により：
ａ．前記Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の割合と比較した、前記哺乳動物の肝臓の白血球中のＮＫ細胞の割合の増加；または、
ｂ．該Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の発現と比較した、肝臓のＮＫ細胞による活性化マーカーの発現の増大
が生じる、請求項３１に記載の方法。
【請求項５９】
ＮＫ細胞の割合の前記増大が、前記Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の割合よりも、少なくとも：
ａ．５％；
ｂ．１０％；
ｃ．１５％；
ｄ．２０％；または、
ｅ．２５％
大きい、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記症状を有しており、前記Ｌｉｓｔｅｒｉａ、抗体、または結合化合物を投与しない適切な対照の哺乳動物との比較によって決定した場合に、前記処置によって前記哺乳動物の生存性が高まる、請求項３１に記載の方法。
【請求項６１】
前記症状には、ガン細胞、腫瘍、または感染性物質の１つ以上が含まれ、前記処置によって、前記哺乳動物において：
ａ．腫瘍またはガン細胞の数；
ｂ．腫瘍の大きさ；または
ｃ．感染性物質の力価
の１つ以上が減少する、請求項３１に記載の方法。
【請求項６２】
前記投与されたＬｉｓｔｅｒｉａは：
ａ．前記哺乳動物に対して経口では投与しない；または、
ｂ．他のタイプの細菌が少なくとも９９％含まれていない組成物として該哺乳動物に投与する；
の一方または両方である、請求項３１に記載の方法。
【請求項６３】
請求項１または請求項３１に記載の方法において使用されるキットであって：
（ａ）Ｌｉｓｔｅｒｉａが含まれている組成物；および
（ｂ）（ｉ）前記症状の抗原に特異的に結合する抗体、もしくは（ｉｉ）該症状の抗原に特異的に結合し、ＡＤＣＣを媒介する免疫細胞にも特異的に結合する抗体の抗原結合部位に由来する結合化合物が含まれている組成物
が含まれており、そして任意選択的に、該組成物の使用についての説明書が含まれており、組成物が適切な容器の中にパッケージされているキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（優先権および利益の主張）
本出願は、米国仮特許出願第６０／７０９，７００号（発明の名称「ＡＮＴＩＢＯＤＹ−ＭＥＤＩＡＴＥＤ  ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ」、２００５年８月１９日出願、シーラス  コーポレーションに譲渡されている）に対する優先権および利益を主張し、この米国出願は本明細書中でその全体が参考として援用される。
【０００２】
（合衆国政府の支援を受けた研究もしくは開発に関する言及）
本出願は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ＮＨＩ  １Ｋ２３ＣＡ１０４１６０−０１の下で、米国政府の支援によって部分的に行われた。米国政府は、本発明に対し一定の権利を有する。
【０００３】
（発明の分野）
本発明は、ガン、腫瘍、腫瘍の転移、前ガン状態の障害、および感染を処置するための免疫活動（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ）を高めるための組成物ならびに方法に関する。この方法には、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）を抗体と組み合わせて使用することが含まれる。
【背景技術】
【０００４】
（発明の背景）
ガン、腫瘍、および感染は、免疫系を調節する試薬で処置される。免疫系を調節する試薬としては、ワクチン、抗体、アジュバント、サイトカイン、および低分子（例えば、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドおよびイミダゾキノリン）が挙げられる（例えば、Ｂｅｃｋｅｒ（２００５）Ｖｉｒｕｓ  Ｇｅｎｅｓ  ３０：２５１−２６６；Ｓｃｈｅｔｔｅｒ  ａｎｄ  Ｖｏｌｌｍｅｒ（２００４）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌ．７：２０４−２１０；Ｍａｊｅｗｓｋｉら、（２００５）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．４４：１４−１９）Ｈｏｆｍａｎｎら、（２００５）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｖｉｒｏｌ．３２：８６−９１；Ｈｕｂｅｒら、（２００５）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ３３：２５−２９；Ｃａｒｔｅｒ（２００１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｓ．Ｃａｎｃｅｒ  １：１１８−１２９；Ｄｅｃｈａｎｔ  ａｎｄ  Ｖａｌａｅｒｉｕｓ（２００１）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖｓ．Ｏｎｃｏｌ．３９：６９−７７；Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒら、（２００４）Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ６２：２０３８−３０４３を参照のこと）。ワクチンとしては、伝統的なワクチン（不活化させられた完全な生物体、抽出物、もしくは抗原）、Ｔ細胞ワクチン、樹状細胞（ＤＣ）ワクチン、および核酸をベースとするワクチン（例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ａｍａｒａ（２００５）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．Ｓｕｐｐｌ．１１：Ｓ２５−Ｓ３２；Ｐｌｏｔｋｉｎ（２００５）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．Ｓｕｐｐｌ．１１：Ｓ５−Ｓ１１；Ｐａｓｈｉｎｅら、（２００５）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．Ｓｕｐｐｌ．１１：Ｓ６３−Ｓ６８；Ｌａｒｃｈｅ  ａｎｄ  Ｗｒａｉｔｈ（２００５）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．Ｓｕｐｐｌ．１１：Ｓ６９−Ｓ７６を参照のこと）。免疫系を調節するために有用である別の試薬は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ（Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ；Ｌｍ）であり、この試薬は、ガンおよび腫瘍の処置に有用であることが証明されている（例えば、Ｂｒｏｃｋｓｔｅｄｔら、（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１：１３８３２−１３８３７；Ｂｒｏｃｋｓｔｅｄｔら、（２００５）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１１：８５３−８６０；Ｓｔａｒｋｓら、（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：４２０−４２７；Ｓｈｅｎら、（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９２：３９８７−３９９１を参照のこと）。
【０００５】
動物の実験用の腫瘍を処置するためにグラム陽性細菌Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓを使用することに関心が集まっている。Ｌｉｓｔｅｒｉａは、腫瘍内注射によって投与されている（非特許文献１）。実験用の腫瘍細胞株との混合物として投与されたか、または腫瘍の中に直接注入されたＬｉｓｔｅｒｉａ（熱で死滅したもの、もしくは生存しているものの両方）は、インビボで腫瘍細胞の増殖を阻害した（例えば、非特許文献１；Ｙｏｕｄｉｍ（１９７６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：５７９−５８４；Ｙｏｕｄｉｍ（１９７７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．３７：５７２−５７７；Ｆｕｌｔｏｎら、（１９７９）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２５：７０８−７１６；Ｋｅｌｌｅｒら、（１９８９）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４４：５１２−３１７；Ｋｅｌｌｅｒら、（１９９０）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：６９５−６９８；Ｐａｃｅら、（１９８５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４：９７７−９８１を参照のこと）。関連する研究によっては、Ｌｉｓｔｅｒｉａが全身に広がっている場合（または、Ｌｉｓｔｅｒｉａが、投与された腫瘍細胞の部位とは異なる部位に投与された場合）には、腫瘍の増殖の阻害は存在しないことが明らかにされた（非特許文献２）。Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ  ＢＣＧもまた、この細菌が通常はゆっくり増殖し、そして遺伝子操作または形質導入による改変に抵抗性があるので、免疫応答を刺激するために使用されている。
【０００６】
Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ（Ｌｍ）は、肝臓および脾臓について、そして、小腸などの他の組織についてはある程度の自然な向性を有している（例えば、Ｄｕｓｓｕｒｇｅｔら、（２００４）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５８：５８７−６１０；Ｇｏｕｉｎら、（２００５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．８：３５−４５；Ｃｏｓｓａｒｔ（２００２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２９１：４０１−４０９；Ｖａｚｑｕｅｚ−Ｂｏｌａｎｄら、（２００１）Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．１４：５８４−６４０；Ｓｃｈｌｕｔｅｒら、（１９９９）Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌ．２０１：１８８−１９５；Ｋｕｒｓａｒら、（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：６３８２−６３８７；Ｎｉｓｈｉｋａｗａら、（１９９８）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｏｌ．４２：３２５−３２７を参照のこと）。細菌が腸内に留まる場合には、血流への透過は、リステリアタンパク質（例えば、ａｃｔＡおよびインターナリンＡ）によって媒介される（例えば、Ｍａｎｏｈａｒら、（２００１）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ６９：３５４２−３５４９；Ｌｅｃｕｉｔら、（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１：６１５２−６１５７；Ｌｅｃｕｉｔ  ａｎｄ  Ｃｏｓｓａｒｔ（２００２）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８：５３７−５４２を参照のこと）。一旦、細菌が宿主細胞に侵入すると、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓの生活環には、ファゴリソソームおよび細胞質ゾルからの回避が含まれる。この生活環は、ファゴリソソームの内側にとどまるＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍの生活環とは対照的である（例えば、Ｃｌｅｍｅｎｓら、（２００２）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７０：５８００−５８０７；Ｓｃｈｌｕｔｅｒら、（１９９８）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ６６：５９３０−５９３８；Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚら、（２００４）Ｃｅｌｌ  １１９：７５３−７６６を参照のこと）。Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓのファゴリソソームからの回避は、リステリアタンパク質（例えば、リステリオリジン（ＬＬＯ）、ＰＩ−ＰＬＣ、およびＰＣ−ＰＬＣ）によって媒介される（例えば、Ｐｏｒｔｎｏｙら、（２００２）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１５８：４０９−４１４を参照のこと）。
【０００７】
代謝的に活性なＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓおよび熱で死滅したＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓはいずれも免疫応答の研究に使用されているので、これらの２種類の調製物が同じ方法では免疫系を刺激しないことに留意されるべきである。代謝的に活性なＬｉｓｔｅｒｉａと熱で死滅したＬｉｓｔｅｒｉａとの間での相違に関して、そして、本発明がいずれの機構にも限定されることなく、そして本発明がいずれかの機構によっても排除されることもなく、熱で死滅したＬｉｓｔｅｒｉａが免疫応答を生じることが見出されていること、しかし、防御は長期間持続するものではないこと；熱で死滅したＬｉｓｔｅｒｉａはＣＤ８＋Ｔ細胞を誘導することができるが、このＣＤ８＋Ｔ細胞は機能が低下していること；通常、代謝がブロックされているＬｉｓｔｅｒｉａは、交差提示によって免疫応答を刺激することができるが、ＭＨＣクラスＩエピトープの交差提示によっては刺激することはできないこと；リステリオリジン（ＬＬＯ）を発現することができないＬｉｓｔｅｒｉａ（例えば、熱で死滅したＬｉｓｔｅｒｉａ）は細胞質に入ることができず、そして例えば、ＩＬ−１２、ＭＣＰ−１、ＣＤ４０、およびＣＤ８０を効率よく誘導することができないことに留意されるべきである（例えば、非特許文献３；Ｖａｚｑｕｅｚ−Ｂｏｌａｎｄら、（２００１）Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖｓ．１４：５８４−６４０；Ｂｒｚｏｚａら、（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：２６４１−２６５１；Ｓｅｒｂｉｎａら、（２００３）Ｉｍｍｕｎｉｙｕ  １９：８９１−９０１；Ｊａｎｄａら、（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：５６４４−５６５１；Ｋｕｒｓａｒら、（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：３１６７−３１７２；Ｂｒｕｎｔら、（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：３５４０−３５４６；Ｌａｕｖａｕら、（２００１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９４：１７３５−１７３９を参照のこと）。
【０００８】
本出願では、Ｃｅｒｕｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに譲渡された、２００５年８月１９日に提出されたＰａｒｄｏｌｌらの米国特許出願番号６０／７０９，６９９の米国仮特許出願ＩＭＭＵＮＯＲＥＣＲＵＩＴＭＥＮＴ  ＡＮＤ  ＡＣＴＩＶＡＴＩＯＮ  ＦＯＲ  ＡＮＴＩ−ＴＵＭＯＲ  ＴＲＥＡＴＭＥＮＴが、それらの全体において参照により組み入れられる。本明細書と同時に提出され、同じ指定代理人によって所有されている、対応する米国基本出願ＬＩＳＴＥＲＩＡ−ＭＥＤＩＡＴＥＤ  ＩＭＭＵＮＯＲＥＣＲＵＩＴＭＥＮＴ  ＡＮＤ  ＡＣＴＩＶＡＴＩＯＮ，ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＯＦ  ＵＳＥ  ＴＨＥＲＥＯＦもまた、参照により組み入れられる。本出願にはまた、２００６年３月３０日に提出され、Ｃｅｒｕｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに譲渡された、ＥＮＧＩＮＥＥＲＥＤ  ＬＩＳＴＥＲＩＡ  ＡＮＤ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＯＦ  ＵＳＥ  ＴＨＥＲＥＯＦ、米国特許出願番号１１／３９５，１９７も、その全体が参照により取り込まれる。
【非特許文献１】Ｂａｓｔら、（１９７５）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．５４：７５７−７６１
【非特許文献２】Ｙｏｕｄｉｍら、（１９７４）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．５２：１９３−１９８
【非特許文献３】Ｅｍｏｔｏら、（１９９７）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ６５：５００３−５００９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
腫瘍、ガン、前ガン状態の障害、異形成、腫瘍の血管形成、および感染を処置するための方法は、多くの場合には効果がない。本発明では、例えば、転移性肝臓ガンの処置のために免疫活動、免疫の強化（ｉｍｍｕｎｏａｃｔｉｖａｔｉｏｎ）、および抗体媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を高めることにおいて使用される抗体ならびにＬｉｓｔｅｒｉａを提供することにより、この必要性が満たされる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（発明の概要）
本発明は、部分的に、抗体とＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓとの投与によって腫瘍細胞に対する免疫応答が高まり、そして腫瘍細胞の死滅が促進されることの認識に基づいている。
【００１１】
本発明のいくつかの態様は、免疫応答を刺激し、そして高めることに関する。
【００１２】
該症状を有している哺乳動物のガンの症状または感染症状に対する免疫応答を刺激する方法が提供される。該方法は、哺乳動物に対して、Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび、以下：ａ．症状の抗原に特異的に結合する抗体；またはｂ．症状の抗原に特異的に結合し、そして抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する免疫細胞にも特異的に結合する抗体の抗原結合部位に由来する結合化合物；のうちの一方または両方の有効量を投与する工程を含み、Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび抗体、または結合化合物の組み合わせは、応答の刺激に有効である。
【００１３】
Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび抗体、または結合化合物を同時に投与する方法もまた提供される。さらに、Ｌｉｓｔｅｉｒａおよび抗体、または結合化合物を同時には投与しない方法が提供される。Ｌｉｓｔｅｒｉａが弱毒化されている方法もまた提供される。加えて、抗体の抗原結合部位に由来する結合化合物に、さらに、Ｆｃ領域またはＦｃ領域誘導体が含まれている方法が提供される。
【００１４】
Ｆｃ領域の誘導体が以下：ａ．ＡＤＣＣを媒介する細胞によって発現された活性化受容体に対する高い親和性；または、ｂ．ＡＤＣＣを媒介する細胞によって発現された阻害性受容体に対する低い親和性；のうちの一方または両方を有している方法が提供されることにも留意されたい。別の態様においては、Ｆｃ領域誘導体に、以下の変異：ａ．Ｓ２９８Ａ；ｂ．Ｅ３３３Ａ；または、ｃ．Ｋ３３４Ａ；のうちの１つ以上が含まれているＩｇＧ１  Ｆｃ領域が含まれている方法であって、該変異が、ＡＤＣＣを媒介する細胞の活性化の増大を媒介することに有用である方法が提供される。
【００１５】
なお別の態様においては、結合化合物に二重特異的抗体が含まれており、そして、二重特異的抗体の第１の結合部位が症状の抗原に特異的に結合し、そして二重特異的抗体の第２の結合部位がＡＤＣＣを媒介する免疫細胞に特異的に結合する方法が提供される。結合化合物が症状の抗原に対して特異的に結合する抗体のペプチド模倣物である方法もまた提供される。Ｌｉｓｔｅｒｉａが代謝的に活性であり、以下：ａ．コロニーの形成；ｂ．複製；またはｃ．分裂；のうちの１つ以上が本質的に不可能である方法もまた意図される。別の態様においては、Ｌｉｓｔｅｒｉａが本質的には代謝的に不活性である方法が意図される。弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａが、以下：ａ．増殖；ｂ．細胞から細胞への拡散；ｃ．細胞への結合もしくは侵入；ｄ．複製；またはｅ．ＤＮＡ修復；のうちの１つ以上において弱められている方法が提供されることにも留意されたい。
【００１６】
弱毒化に関しては、Ｌｉｓｔｅｒｉａが以下：ａ．ａｃｔＡ変異；ｂ．ｉｎｌＢ変異；ｃ．ｕｖｒＡ変異；ｄ．ｕｖｒＢ変異；ｅ．ｕｖｒＣ変異；ｆ．核酸標的化化合物；またはｇ．ｕｖｒＡＢ変異および核酸標的化化合物；のうちの１つ以上によって弱毒化されている方法が提供される。別の態様においては、核酸標的化化合物がソラレンである、方法が提供される。加えて、症状に、腫瘍、ガン、または前ガン状態の障害の１つ以上が含まれる方法が提供される。さらに、症状に感染が含まれる方法も意図される。症状に、以下：ａ．Ｂ型肝炎；ｂ．Ｃ型肝炎；ｃ．サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）；ｄ．ＨＩＶ；ｅ．エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）；またはｆ．リーシュマニア（ｌｅｉｓｈｍａｎｉａｓｉｓ）；のうちの１つ以上による感染が含まれる方法が提供されることにもまた留意されたい。さらに、本発明により、症状が肝臓の症状である、方法が提供される。免疫応答が症状の細胞に対する免疫応答である方法もまた提供される。加えて、免疫応答に先天免疫応答が含まれる方法も提供される。免疫応答に適応的免疫応答が含まれる方法が提供されることにもまた留意されたい。さらに、哺乳動物がヒトである方法が意図される。ＬｉｓｔｅｒｉａがＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである方法が付加される。Ｌｉｓｔｅｒｉａに異種抗原をコードする核酸が含まれている方法がさらに提供される。Ｌｉｓｔｅｒｉａが第１の試薬であり、そして抗体または結合化合物が第２の試薬であり、哺乳動物に対して第３の試薬を投与する工程をさらに含む方法もまた提供される。第３の試薬に以下：ａ．サイトカインのアゴニストまたはアンタゴニスト；ｂ．Ｔ制御性細胞（Ｔｒｅｇ）の阻害剤；またはｃ．シクロホスファミド（ＣＴＸ）；のうちの１つ以上が含まれる方法もまた提供される。そして、有効量のＬｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の免疫応答と比較して、免疫応答に以下：ａ．ＮＫ細胞；ｂ．ＮＫＴ細胞；ｃ．樹状細胞（ＤＣ）；ｄ．単球もしくはマクロファージ；ｅ．好中球；ｆ．ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、またはｇ．ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメインタンパク質（ＮＯＤタンパク質）；のうちの１つ、または任意の組み合わせの活性化、あるいはそれらによる炎症が含まれる方法も提供される。別の態様は、有効量のＬｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の発現と比較して、免疫応答に、以下：ａ．ＣＤ６９；ｂ．インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）；ｃ．インターフェロン−α（ＩＦＮα）もしくはインターフェロンβ（ＩＦＮβ）；ｄ．インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、ｅ．単球走化性タンパク質（ＭＣＰ−１）、またはインターロイキン−６（ＩＬ−６）；のうちの１つまたは任意の組み合わせの発現の増大が含まれる方法である。本発明にはまた、刺激によって、ａ．Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の割合（％）と比較した、哺乳動物の肝臓の白血球の集団中のＮＫ細胞の割合（％）の増加；あるいは、ｂ．Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の発現と比較した、肝臓のＮＫ細胞による活性化マーカーの発現の増大が生じる方法も含まれる。さらに、肝臓の白血球の集団の中のＮＫ細胞の割合（％）の増大が、Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の割���（％）と比較して、少なくとも：ａ．５％；ｂ．１０％；ｃ．１５％；ｄ．２０％；または、ｅ．２５％大きい方法が提供される。本発明の別の態様は、投与されるＬｉｓｔｅｒｉａを、以下：ａ．哺乳動物に対して経口投与しない；または、ｂ．他のタイプの細菌が少なくとも９９％含まれていない組成物として哺乳動物に投与する；のうちの一方または両方を実施する方法である。
【００１７】
以下の態様は処置方法に関する。
【００１８】
本発明により、症状を有している哺乳動物のガンの症状または感染症状を処置するための方法であって、哺乳動物に対して、有効量のＬｉｓｔｅｒｉａを、以下：ａ．症状の抗原に特異的に結合する抗体；またはｂ．症状の抗原に特異的に結合し、そしてＡＤＣＣを媒介する免疫細胞にも特異的に結合する抗体に由来する結合化合物；のうちの１つまたは両方とともに投与する工程を含み、Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび抗体、または結合化合物の併用が、症状の緩和または軽減に有効である方法が提供される。Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび抗体、または結合化合物を同時に投与する方法もまた提供される。Ｌｉｓｔｅｉｒａおよび抗体、または結合化合物を同時には投与しない方法もまた提供される。さらに、Ｌｉｓｔｅｒｉａが弱毒化されている方法が提供される。そして、抗体の抗原結合部位に由来する結合化合物に、さらに、Ｆｃ領域またはＦｃ領域誘導体が含まれている方法もまた提供される。別の態様によっては、Ｆｃ領域の誘導体が以下：ａ．ＡＤＣＣを媒介する細胞によって発現された活性化受容体に対する高い親和性；または、ｂ．ＡＤＣＣを媒介する細胞によって発現された阻害性受容体に対する低い親和性；のうちの一方または両方を有している方法が提供される。本発明のなお別の態様によっては、Ｆｃ領域誘導体に、以下：ａ．Ｓ２９８Ａ；ｂ．Ｅ３３３Ａ；または、ｃ．Ｋ３３４Ａ；の変異のうちの１つ以上が含まれているＩｇＧ１  Ｆｃ領域が含まれている方法が提供される。
【００１９】
該変異は、ＡＤＣＣを媒介する細胞の活性化の増大を媒介することに有用である。そして、結合化合物に二重特異的抗体が含まれており、そして、二重特異的抗体の第１の結合部位が症状の抗原に特異的に結合し、そして二重特異的抗体の第２の結合部位がＡＤＣＣを媒介する免疫細胞に特異的に結合する方法が意図される。結合化合物が症状の抗原に対して特異的に結合する抗体のペプチド模倣物である方法もまた提供される。Ｌｉｓｔｅｒｉａが代謝的に活性であり、以下：ａ．コロニーの形成；ｂ．複製；またはｃ．分裂；のうちの１つ以上が本質的に不可能である方法が、本発明において提供されることにもまた留意されたい。さらに、Ｌｉｓｔｅｒｉａが本質的には代謝的に不活性である方法が意図される。本発明に、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａが、以下：ａ．増殖；ｂ．細胞から細胞への拡散；ｃ．細胞への結合もしくは侵入；ｄ．複製；またはｅ．ＤＮＡ修復；のうちの１つ以上において弱められている方法が含まれることにも留意されたい。Ｌｉｓｔｅｒｉａが以下：ａ．ａｃｔＡ変異；ｂ．ｉｎｌＢ変異；ｃ．ｕｖｒＡ変異；ｄ．ｕｖｒＢ変異；ｅ．ｕｖｒＣ変異；ｆ．核酸標的化化合物；またはｇ．ｕｖｒＡＢ変異および核酸標的化化合物；のうちの１つ以上によって弱毒化されている方法もまた意図される。さらに、核酸標的化化合物がソラレンである方法が意図される。症状に、ガン、腫瘍、または前ガン状態の障害が含まれる方法もまた利用することができる。本発明には、さらに、症状に感染が含まれる方法が含まれる。なお別の態様においては、本発明には、症状に以下：ａ．Ｂ型肝炎；ｂ．Ｃ型肝炎；ｃ．ＣＭＶ；ｄ．ＨＩＶ；ｅ．ＥＢＶ；またはｆ．リーシュマニア；のうちの１つ以上による感染が含まれる方法が含まれる。そして、本発明により、症状が肝臓の症状である方法が提供される。また、免疫応答が症状の細胞に対する免疫応答である方法も提供される。なおさらなる態様においては、本発明により、免疫応答に先天免疫応答が含まれる方法が提供される。免疫応答に適応的免疫応答が含まれる方法が提供されることにもまた留意されたい。哺乳動物がヒトである方法もまた含まれる。ＬｉｓｔｅｒｉａがＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである方法が本発明に含まれる。Ｌｉｓｔｅｒｉａに異種抗原をコードする核酸が含まれている方法が本発明によって意図される。さらに、Ｌｉｓｔｅｒｉａが第１の試薬であり、そして抗体または結合化合物が第２の試薬であり、哺乳動物に対して第３の試薬を投与する工程をさらに含む方法が提供される。
【００２０】
そして、第３の試薬に以下：ａ．サイトカインのアゴニストまたはアンタゴニスト；ｂ．Ｔ制御性細胞（Ｔｒｅｇ）の阻害剤；またはｃ．シクロホスファミド（ＣＴＸ）；のうちの１つ以上が含まれる方法が提供される。本発明によって、さらに、有効量のＬｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の免疫応答と比較して、免疫応答に以下：ａ．ＮＫ細胞；ｂ．ＮＫＴ細胞；ｃ．樹状細胞（ＤＣ）；ｄ．単球もしくはマクロファージ；ｅ．好中球；または、ｆ．ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）もしくはｇ．ヌクレオチド結合オリゴマー化ドメインタンパク質（ＮＯＤ）タンパク質；のうちの１つ、または任意の組み合わせの活性化、あるいは炎症が含まれる方法が提供されることにもまた留意されたい。意図される別の態様は、有効量の弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の発現と比較して、免疫応答に、以下：ａ．ＣＤ６９；ｂ．インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）；ｃ．インターフェロン−α（ＩＦＮα）もしくはインターフェロンβ（ＩＦＮβ）；ｄ．インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、ｅ．単球走化性タンパク質（ＭＣＰ−１）、または、ｆ．インターロイキン−６（ＩＬ−６）；のうちの１つまたは任意の組み合わせの発現の増大が含まれる方法である。加えて、刺激によって、ａ．Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の割合（％）と比較した、肝臓の白血球中のＮＫ細胞の割合（％）の増加；あるいは、ｂ．Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の発現と比較した、肝臓のＮＫ細胞による活性化マーカーの発現の増大が生じる方法が提供される。そしてまた、肝臓の白血球中のＮＫ細胞の割合（％）の増大は、Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しない場合の割合（％）と比較して、少なくとも：ａ．５％；ｂ．１０％；ｃ．１５％；ｄ．２０％；または、ｅ．２５％大きい方法も含まれる。そして、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、抗体、または結合化合物を投与していない、症状を有している適切な対照の哺乳動物との比較によって決定した場合に、処置によって症状に対する哺乳動物の生存性が増大する方法も含まれる。さらに、該処置によって、哺乳動物の生存性が少なくとも：ａ．５日；ｂ．１０日；ｃ．１５日；またはｄ．２０日長くなる方法もまた提供される。症状に、ガン細胞、腫瘍、または感染性物質の１つ以上が含まれ、そして処置によって、哺乳動物において以下：ａ．腫瘍またはガン細胞の数；ｂ．腫瘍の大きさ；またはｃ．感染性物質の力価；の１つ以上が減少する方法が本発明に含まれる。本発明の別の態様は、投与されるＬｉｓｔｅｒｉａが、以下：ａ．哺乳動物に対して経口では投与しない；または、ｂ．他のタイプの細菌が少なくとも９９％含まれていない組成物として哺乳動物に投与する；のうちの一方または両方である方法である。
【００２１】
以下の態様は、上記に開示された個々の態様に関する。
【００２２】
本発明には、感染性障害に対して免疫系を刺激する方法であって、感染性障害がＬｉｓｔｅｒｉａ感染である方法が含まれる。また、感染性障害に対して免疫系を刺激する方法であって、感染性障害がＬｉｓｔｅｒｉａ感染ではなく、したがって、リステリア感染症が排除される方法も含まれる。
【００２３】
本明細書中に開示される態様のそれぞれには、弱毒化されていないＬｉｓｔｅｒｉａを使用する方法が含まれる。また、態様のそれぞれには、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａを使用する方法も含まれる。
【００２４】
本明細書中に開示される態様のそれぞれには、少なくとも１つの腫瘍抗原をコードする核酸が含まれているＬｉｓｔｅｒｉａ、少なくとも１つのガン抗原をコードする核酸が含まれているＬｉｓｔｅｒｉａ、少なくとも１つの異種抗原をコードする核酸が含まれているＬｉｓｔｅｒｉａ、ならびに、少なくとも１つの腫瘍抗原、ガン抗原、および／または異種抗原を発現するＬｉｓｔｅｒｉａを使用する方法ならびに試薬が含まれる。
【００２５】
本明細書中に開示される態様のそれぞれには、腫瘍抗原をコードする核酸が含まれていないＬｉｓｔｅｒｉａ、ガン抗原をコードする核酸が含まれていないＬｉｓｔｅｒｉａ、異種抗原をコードする核酸が含まれていないＬｉｓｔｅｒｉａ、ならびに、腫瘍抗原、ガン抗原、および／または異種抗原を発現しないＬｉｓｔｅｒｉａを使用する方法ならびに試薬が含まれる。
【００２６】
本明細書中に開示される態様のそれぞれには、リステリア以外の感染性生物に由来する抗原をコードする核酸が含まれているＬｉｓｔｅｒｉａを使用する方法ならびに試薬が含まれる。上記で開示された態様のそれぞれには、ウイルスまたは寄生虫に由来する抗原をコードする核酸が含まれているＬｉｓｔｅｒｉａを使用する方法および試薬が含まれる。
【００２７】
本明細書中に開示される態様のそれぞれには、リステリア以外の感染性生物に由来する抗原をコードする核酸が含まれていないＬｉｓｔｅｒｉａを使用する方法および試薬が含まれる。上記に開示される態様のそれぞれには、ウイルスまたは寄生虫に由来する抗原をコードする核酸が含まれていないＬｉｓｔｅｒｉａを使用する方法および試薬が含まれる。
【００２８】
本明細書中に開示される態様のそれぞれには、動物性タンパク質をベースとする培地にて増殖することによっては調製されないが、様々なタイプの培地にて増殖することによって調製されるＬｉｓｔｅｒｉａもまた含まれる。上記に開示される態様のそれぞれにはまた、動物性タンパク質に由来するペプチドが含まれている培地にて増殖させることによっては調製されないが、様々なタイプの培地にて増殖することによって調製されるＬｉｓｔｅｒｉａもまた含まれる。さらに、上記に開示される態様のそれぞれには、経口ではない経路、または腸ではない経路によるＬｉｓｔｅｒｉａの投与が含まれる。加えて、上記に開示される態様のそれぞれには、腸管内腔からリンパ管または血流への移動が必要ではない経路によるＬｉｓｔｅｒｉａの投与が含まれる。
【００２９】
本明細書中に開示される態様のそれぞれには、さらに、Ｌｉｓｔｅｒｉａを腫瘍に直接注射しないか、または、ガン、前ガン状態の障害、腫瘍、もしくは感染に罹患している部位に直接注射しない方法が含まれる。
【００３０】
加えて、本明細書中に開示される態様のそれぞれには、腫瘍への直接の注射による、ガンの病変への直接の注射による、および／または感染の病変への直接の注射による、Ｌｉｓｔｅｒｉａの投与が含まれる。また、本発明には、投与を、腫瘍内への直接の注射によって行わない、ガンの病変への直接の注射によって行わない、および／または、感染の病変への直接の注射によって行わない、上記態様のそれぞれが含まれる。
【００３１】
本明細書中に開示される態様の任意のものにおいてそうであるように、異種抗原が腫瘍抗原であるか、または腫瘍抗原に由来するワクチンが提供される。本明細書中に開示される態様の任意のものにおいてそうであるように、異種抗原がガン抗原であるか、またはガン抗原に由来するワクチンもまた提供される。さらに、本明細書中に開示される態様の任意のものにおいてそうであるように、異種抗原が感染性生物（例えば、ウイルス、細菌、または多細胞生物）の抗原であるか、または感染性生物の抗原に由来するワクチンが提供される。
【００３２】
さらなる態様により、本明細書中に開示される態様の任意のものにおいてそうであるように、異種抗原が腫瘍抗原であるか、または腫瘍抗原に由来する核酸が提供される。本明細書中に開示される態様の任意のものにおいてそうであるように、異種抗原がガン抗原であるか、またはガン抗原に由来する核酸もまた提供される。さらに、本明細書中に開示される態様の任意のものにおいてそうであるように、異種抗原が感染性生物（例えば、ウイルス、細菌、または多細胞生物）の抗原であるか、または感染性生物の抗原に由来する核酸が提供される。
【００３３】
別の態様においては、本明細書中に開示される態様の任意のものにおいてそうであるように、異種抗原が腫瘍抗原であるか、または腫瘍抗原に由来するＬｉｓｔｅｒｉａが提供される。本明細書中に開示される態様の任意のものにおいてそうであるように、異種抗原がガン抗原であるか、またはガン抗原に由来するＬｉｓｔｅｒｉａもまた提供される。さらに、本明細書中に開示される態様の任意のものにおいてそうであるように、異種抗原が感染性生物（例えば、ウイルス、細菌、または多細胞生物）の抗原であるか、または感染性生物の抗原に由来するＬｉｓｔｅｒｉａが提供される。
【００３４】
上記で開示される態様のそれぞれにはまた、動物性タンパク質または食肉タンパク質をベースとする培地にて増殖することによっては調製されないが、様々なタイプの培地にて増殖することによって調製される、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａも含まれる。食肉タンパク質または動物性タンパク質をベースとする培地にて増殖することによっては調製されないが、酵母および／または植物に由来するタンパク質をベースとする培地にて増殖することによって調製される、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａが提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３５】
（発明の詳細な説明）
添付の特許請求の範囲を含めて、本明細書中で使用される場合には、単数形の用語（例えば、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」）には、その状況が他に明確に特定されていない限りは、それらの対応する複数形が含まれる。本明細書中で引用される全ての参考文献は、それぞれの個々の刊行物、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号によってアクセスされる配列、特許出願、特許、配列表、配列表のヌクレオチド配列またはオリゴペプチドもしくはポリペプチド配列、ならびに、上記刊行物および特許文献中の図表が詳細に、かつ個別に引用により組み入れられていることが示されているかのように同程度に、参照により本明細書中に組み入れられる。
【００３６】
Ｉ．定義
遺伝子、または遺伝子をコードする細菌における変異を示すために使用される省略形は以下のとおりである。例として、省略形「Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡ」は、ａｃｔＡ遺伝子の一部または全体が欠失させられていることを意味する。デルタの記号（Δ）は欠失を意味する。Ｌｍは、「Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ」を意味する。上付き文字のマイナスの記号を含む省略形（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ａｃｔＡ−）は、ａｃｔＡ遺伝子が、例えば、欠失、点変異、またはフレームシフト変異（しかし、これらのタイプの変異に限定されない）によって変異させられていることを意味する。指数は省略される場合がある。例えば、「３ｅ７」は３×１０７を意味する。
【００３７】
「投与」、「投与する」、および「処置／処理」は、それらがヒト、哺乳動物、哺乳動物被験体、動物、脊椎動物被験体、プラセボ被験体、研究用被験体、実験用被験体、細胞、組織、臓器、または生物学的流体に対して適用される場合には、外因性のリガンド、試薬、プラセボ、低分子、医薬品、治療薬、診断薬、または組成物を、被験体、細胞、組織、臓器、または生物学的流体などに接触させることを意味するが、これらに限定されない。「投与」、「投与する」、および「処置／処理」は、治療方法、薬物動態的方法、診断方法、研究方法、プラセボによる方法、および実験方法をいうことができる。細胞の処理には、細胞への試薬の接触、さらには、流体が細胞と接触する流体への試薬の接触が含まれる。「投与（Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」、「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」、および「処置／処理」にはまた、試薬、診断用組成物、結合組成物、または別の細胞による、例えば、細胞のインビトロおよびエキソビボでの処理が含まれる。状況に応じて、被験体の「処置」は、被験体に処置が必要であること（例えば、被験体に、試薬の投与によって緩和されると予想される障害が含まれている状況）を暗に意味することができる。
【００３８】
哺乳動物に投与される、投与される抗体、または抗体に由来する結合化合物には、被験体または哺乳動物によってその全体が生成される抗体は含まれない。言い換えると、本発明の投与される抗体には、：（１）ガンの障害を有している哺乳動物が腫瘍抗原を生合成する、または感染を有している哺乳動物が細菌抗原、ウイルス抗原などを生合成する；および（２）抗原が、抗体を生合成するように哺乳動物の免疫系を刺激する；ように生成される抗体は含まれない。哺乳動物の免疫系は、抗体、およびＡＤＣＣに寄与し得る抗体を生産し得るが、この抗体は、本発明の投与される抗体または結合組成物には含まれない。
【００３９】
アゴニストは、リガンドおよび受容体に関係している場合には、受容体を刺激する分子、分子の組み合わせ、複合体、または試薬の組み合わせを含む。例えば、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）のアゴニストには、ＧＭ−ＣＳＦ、ムテイン、またはＧＭ−ＣＳＦの誘導体、ＧＭ−ＣＳＦのペプチド模倣物、ＧＭ−ＣＳＦの生物学的機能を模倣する低分子、またはＧＭ−ＣＳＦ受容体を刺激する抗体を含めることができる。アンタゴニストは、リガンドおよび受容体に関係している場合には、受容体をアンタゴナイズする分子、分子の組み合わせ、または複合体を含む。「アンタゴニスト」には、受容体の構成的な活性を阻害する任意の試薬が含まれる。構成的な活性は、リガンド／受容体の相互作用の不在下で現れる活性である。「アンタゴニスト」にはまた、受容体の刺激された（または調節された）活性を阻害するかまたは妨げる任意の試薬が含まれる。例として、ＧＭ−ＣＳＦ受容体のアンタゴニストには、ＧＭ−ＣＳＦに結合して、ＧＭ−ＣＳＦのＧＭ−ＣＳＦ受容体への結合を妨げる抗体、もしくはＧＭ−ＣＳＦ受容体に結合して、ＧＭ−ＣＳＦの受容体への結合を妨げる抗体、または、不活性な立体構造の受容体をロックする抗体が含まれるが、これはいずれの限定も意味しない。
【００４０】
「抗体」は、抗原を特異的に認識して結合する免疫グロブリン遺伝子またはその断片に由来するフレームワーク領域が含まれているポリペプチドを意味する。免疫グロブリン遺伝子には、κ、λ、α、γ、δ、ε、およびμ定常領域遺伝子、ならびに、無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。軽鎖は、κまたはλのいずれかとして分類される。重鎖は、γ、μ、α、δ、またはεとして分類され、これらは次いで、それぞれ、免疫グロブリンのクラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを定義する。「部分的なヒト化」または「キメラ」抗体には、ヒトの重鎖および軽鎖定常領域に連結した、例えば、マウス起源の重鎖および軽鎖可変領域が含まれる。「ヒト化」または「完全なヒト化」抗体には、ヒトの抗体フレームワークに繋がれた親抗体（例えば、マウス抗体）の６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来するアミノ酸配列が含まれる。「ヒト」抗体は、１００％ヒト起源であるアミノ酸配列が含まれている抗体であり、抗体を、例えば、ヒト、動物、細菌、またはウイルスである宿主において発現させることができる（Ｂａｃａら、（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４；Ｃｌａｒｋ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：３９７−４０２）。
【００４１】
抗体断片は、様々なペプチダーゼでの消化によって、または組換え技術によって生産することができる。例えば、ペプシンは、ヒンジ領域中のジスルフィド結合より下で抗体を消化してＦ（ａｂ’）２を生成し、これは、それ自体がジスルフィド結合によってＶＨ−ＣＨ１に連結した軽鎖であるＦａｂの二量体である。Ｆ（ａｂ’）２を、ヒンジ領域中のジスルフィド結合を切断する穏やかな条件下で還元させることができ、それによって、Ｆ（ａｂ’）２二量体をＦａｂ’単量体に変換する。Ｆａｂ’単量体は、原則として、ヒンジ領域部分を有しているＦａｂである。「Ｆｖ」断片には、互いに堅く会合している１つの重鎖と１つの軽鎖可変ドメインとの二量体が含まれる。１つの可変ドメイン（または、抗原に特異的であるＣＤＲが３個だけ含まれているＦｖの半分）は、完全な結合部位よりも親和性は低いが、抗原を認識して結合する能力を有している。「抗体」は、完全な抗体の改変によって生産される抗体断片、組換えＤＮＡ方法を使用して新しく合成された抗体組成物、単鎖抗体、ファージディスプレイ法によって生産された抗体、およびモノクローナル抗体を意味することができる（Ｃａｂｉｌｌｙらに交付された米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｏｒｅらに交付された米国特許第４，６４２，３３４号；Ｑｕｅｅｎら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：１００２９−１００３３；Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７）。
【００４２】
「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）は、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を意味し、すなわち、集団に含まれている個々の抗体ポリペプチドが、少量で存在し得るポリペプチド鎖中の可能性のある天然変異、またはグリコシル化、ジスルフィドの形成、もしくは、折り畳みに関する不均一性などを除いて同一であることを意味する。「モノクローナル抗体」は、オリゴ糖の成分のいずれの特徴を示唆または限定せず、また、オリゴ糖の成分に関しては、均一性が存在する場合も、また、非均一性が存在しない場合もある。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、１つの抗原性部位またはエピトープに対して指向している。ポリクローナル抗体調製物には、通常、様々なエピトープに対して指向した様々な抗体が含まれる。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらを他の免疫グロブリンが混入していないハイブリドーマの培養によって合成することができる点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均質な集団から得られるという抗体の特性を示し、そして、任意の特定の方法による抗体の生産が必要であるとは解釈されない。「モノクローナル抗体」にはまた、抗原認識部位および結合部位が含まれている抗体断片（例えば、ファージ抗体ライブラリーに由来する断片）のクローンも含まれる。「ダイアボディー」は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結させられた重鎖可変ドメイン（ＶＨ）ドメインが含まれている断片をいう（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８）。
【００４３】
「抗原提示細胞」（ＡＰＣ）は、Ｔ細胞に対する抗原を提示するために使用される免疫系の細胞である。ＡＰＣには、樹状細胞、単球、マクロファージ、辺縁帯クッパー（ｍａｒｇｉｎａｌ  ｚｏｎｅ  Ｋｕｐｆｆｅｒ）細胞、小神経膠細胞、ランゲルハンス（Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ）細胞、Ｔ細胞、およびＢ細胞が含まれる（例えば、Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｐｉｎｔｏ  ａｎｄ  Ｍｏｒｅｎｏ（２００５）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３５：１０９７−１１０５を参照のこと）。樹状細胞は、少なくとも２種類の系統において生じる。第１の系統には、プレ−ＤＣ１、骨髄ＤＣ１、および成熟ＤＣ１が含まれる。第２の系統には、ＣＤ３４＋＋ＣＤ４５ＲＡ−初期前駆多能性細胞、ＣＤ３４＋＋ＣＤ４５ＲＡ＋細胞、ＣＤ３４＋＋ＣＤ４５ＲＡ＋＋ＣＤ４＋ＩＬ−３Ｒα＋＋プロ−ＤＣ２細胞、ＣＤ４＋ＣＤ１１ｃ−形質細胞様プレＤＣ２細胞、リンパ様ヒトＤＣ２形質細胞由来ＤＣ２、および成熟ＤＣ２（例えば、Ｇｉｌｌｉｅｔ  ａｎｄ  Ｌｉｕ（２００２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９５：６９５−７０４；Ｂａｕｅｒら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：５０００−５００７；Ａｒｐｉｎａｔｉら（２０００）Ｂｌｏｏｄ  ９５：２４８４−２４９０；Ｋａｄｏｗａｋｉら（２００１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９４：８６３−８６９；Ｌｉｕ（２００２）Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６３：１０６７−１０７１を参照のこと）。
【００４４】
「弱毒化」および「弱毒化された」には、宿主に対する毒性が低くなるように改変された、細菌、ウイルス、寄生虫、腫瘍細胞などが含まれる。宿主は、ヒトもしくは動物宿主、または臓器、組織、もしくは細胞であり得る。限定ではない例として挙げられる細菌は、宿主細胞に対する結合を減少させる、１つの宿主細胞から別の宿主細胞への広がりを減少させる、細胞外増殖を減少させる、または宿主細胞の中での細胞内増殖を減少させるように弱められ得る。弱毒化は、例えば、毒性、ＬＤ５０、臓器からのクリアランスの速度、競合指数の指標（単数または複数）を測定することによって評価することができる（例えば、Ａｕｅｒｂｕｃｈら（２００１）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ６９：５９５３−５９５７を参照のこと）。一般的には、弱毒化によっては、ＬＤ５０の増大、および／またはクリアランス速度の少なくとも２５％の増大；より一般的には、少なくとも５０％；最も一般的には、少なくとも１００％（２倍）；通常は、少なくとも５倍；より通常は、少なくとも１０倍；最も通常は、少なくとも５０倍；多くの場合には、少なくとも１００倍；より多くの場合には、少なくとも５００倍；そして最も多くの場合には、少なくとも１０００倍；通常は、少なくとも５０００倍；より通常は、少なくとも１０，０００倍；そして最も通常は、少なくとも５０，０００倍；そして便利であるのは、少なくとも１００，０００倍の増大が生じる。
【００４５】
「弱毒化された遺伝子」には、宿主、宿主内での増殖、もしくは宿主内での生存性に対して、毒性、病状、または病原性を媒介する遺伝子が含まれ、遺伝子は、毒性、病状、もしくは病原性を和らげ、低下させ、または排除する方法で変異される。低下または排除は、変異している遺伝子によって媒介される病原性または毒性を、変異していない（すなわち、親）遺伝子によって媒介される病原性または毒性と比較することによって評価することができる。「変異遺伝子」には、遺伝子の調節領域、遺伝子のコード領域、遺伝子の非コード領域、またはそれらの任意の組み合わせの中での、欠失、点変異、およびフレームシフト変異が含まれる。
【００４６】
弱毒化は、例えば、熱処理または化学改変によって行うことができる。弱毒化はまた、例えば、代謝、細胞外増殖、または細胞内増殖を調節する核酸の遺伝的改変、病原性因子（例えば、リステリアのｐｒｆＡ、ａｃｔＡ、リステリオシリン（ＬＬＯ）、接着媒介因子（例えば、インターナリン）、ｍｐｌ、ホスファチジルコリンホスホリパーゼＣ（ＰＣ−ＰＬＣ）、ホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼＣ（ＰＩ−ＰＬＣ；ｐｌｃＡ遺伝子）、上記の任意の組み合わせなど）をコードする核酸の遺伝的改変によって行うこともできる。弱毒化は、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの生物学的機能を、適切な親Ｌｉｓｔｅｒｉａによって示される対応する生物学的機能と比較することによって評価することができる。
【００４７】
本発明には、核酸標的化物質または核酸標的化化合物（例えば、架橋剤、ソラレン、ナイトロジェンマスタード、シスプラチン、かさ高い付加物、紫外線、γ線照射、それらの任意の組み合わせなど）で処理されることによって弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの使用が含まれる。Ｌｉｓｔｅｒｉａはまた、少なくとも１つの核酸修復遺伝子（例えば、ｕｖｒＡ、ｕｖｒＢ、ｕｖｒＡＢ、ｕｖｒＣ、ｕｖｒＤ、ｕｖｒＡＢ、ｐｈｒＡ、および／またはｒｅｃＡ）を変異させることによって弱毒化させることもできる。さらに、本発明には、核酸標的化物質と、核酸修復遺伝子を変異させることの両方によって弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの使用が含まれる。加えて、本発明には、光感受性核酸標的化物質（例えば、ソラレン）で、または光感受性核酸架橋剤（例えば、ソラレン）、続いて、紫外線への暴露で処理されたＬｉｓｔｅｒｉａの使用も含まれる（例えば、Ｄｕｂｅｎｓｋｙらの米国特許公開番号Ｕ．Ｓ．２００４／０２２８８７７、およびＤｕｂｅｎｓｋｙらの同Ｕ．Ｓ．２００４／０１９７３４３を参照のこと）。
【００４８】
「ガンの症状」および「ガンの障害」には、ガン、腫瘍、転移、腫瘍の血管形成、および前ガン状態の障害（例えば、異形成）が含まれるが、これらはいずれの限定も意味しない。
【００４９】
「保存的に改変された改変体」は、アミノ酸配列および核酸配列の両方に適用される。特定の核酸配列に関して用いられる場合には、保存的に改変された改変体は、同じアミノ酸配列、または１つ以上の保存的置換を有しているアミノ酸配列をコードする核酸を意味する。保存的置換の例は、以下のグループの１つの中のアミノ酸の、同じグループの別のアミノ酸での交換である（Ｌｅｅらに交付された米国特許第５，７６７，０６３号；Ｋｙｔｅ  ａｎｄ  Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ（１９８２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１３２）。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；
（３）酸性；Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性；Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の方向性に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ；および
（７）小さいアミノ酸：Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｓｅｒ。
【００５０】
「有効量」には、医学的症状または障害の症候または兆候を緩和する、反転させる、和らげる、妨げる、または診断することができる量が含まれるが、これらに限定されない。特に明記されない限り、明白に、または文脈によって、「有効量」は、症状を緩和するために十分な最少量には限定されない。有効量にはまた、所望される免疫応答を生じる量が含まれる。
【００５１】
「細胞外液体」には、例えば、血清、血漿、血液、間質液、脳脊髄液、分泌される体液、リンパ液、胆汁、汗、および尿が含まれる。「細胞外液体」には、コロイドまたは懸濁物（例えば、全血または凝固した血液）が含まれ得る。
【００５２】
「遺伝子」は、オリゴペプチドまたはポリペプチドをコードする核酸配列を意味する。オリゴペプチドまたはポリペプチドは生物学的に活性、抗原的に活性、生物学的に不活性、または抗原的に不活性などであり得る。用語「遺伝子」には、例えば、特異的なオリゴペプチドまたはポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の合計；ＯＲＦとイントロンをコードする核酸との合計；ＯＲＦと作動可能に連結されたプロモーター（単数または複数）との合計；ＯＲＦおよび作動可能に連結されたプロモーター（単数または複数）および任意のイントロンの合計、ＯＲＦおよび作動可能に連結されたプロモーター（単数または複数）、イントロン（単数または複数）、およびプロモーター（単数または複数）、および他の調節エレメント（例えば、エンハンサー（単数または複数））の合計が含まれる。用語「遺伝子」にはまた、抗原、またはペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質の抗原的に活性な断片が含まれているペプチドをコードする核酸をいうこともできる。用語「遺伝子」には、コードされる遺伝子が先天免疫応答および／または適応的免疫応答の抗原性の刺激に加えて、何らかの生物学的活性を有していることを必ずしも意味してはいない。発現不可能な配列をコードする核酸配列は、一般的には、偽遺伝子と考えられる。用語「遺伝子」にはまた、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、またはリボザイムなどのリボ核酸をコードする核酸配列も含まれる。
【００５３】
細菌の「増殖」には、細菌の生理機能、ならびに、コロニー形成、複製、リステリアのタンパク質含有量の増加、リステリアの脂質含有量の増加に関係している細菌の核酸が含まれるが、これらに限定されない。別途明記されない限り、明白に、または文脈によって、細菌の増殖には、宿主細胞の外側での細菌の増殖、および宿主細胞の中での増殖も含まれる。増殖関連遺伝子には、エネルギー生産（例えば、解糖）、栄養の輸送、転写、翻訳、および複製を媒介する遺伝子が含まれるが、これらに限定されない。
【００５４】
「増殖」は、リステリアの分野で使用される用語として、感染した宿主細胞の細胞質の中での細菌の増殖および複製をいい、そして一般的には、インビトロでの増殖はいわない。例えば、「増殖」について高度に特異的である遺伝子は、インビトロでの増殖には寄与していない、そして、従来の細菌培養液または寒天の中での増殖には感知できるほどには寄与していないが、感染した細胞の細胞質の中での細胞内増殖および複製にはある程度または大きく寄与しているタンパク質をコードする遺伝子である。
【００５５】
慣用的には、本発明で使用される弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの増殖は、親Ｌｉｓｔｅｒｉａ株の増殖の多くとも８０％であり、より通常は、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの増殖は、親Ｌｉｓｔｅｒｉａ株の増殖の多くとも７０％であり、最も慣用的は、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの増殖は、親Ｌｉｓｔｅｒｉａ株の増殖の多くとも６０％であり、通常は、本発明の弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの増殖は、親Ｌｉｓｔｅｒｉａ株の増殖の多くとも５０％であり；より通常は、増殖は、親株の増殖の多くとも４５％であり；最も通常は、増殖は、親株の増殖の４０％であり；多くの場合には、増殖は、親株の増殖の多くとも３５％であり、より多くの場合には、増殖は、親株の増殖の多くとも３０％であり；そして最も多くの場合には、増殖は親株の増殖の多くとも２５％であり；通常は、増殖は、親株の増殖の多くとも２０％であり；より通常は、増殖は、親株の増殖の多くとも１５％であり；最も通常は、増殖は、親株の増殖の多くとも１０％であり；典型的には、増殖は、親株の増殖の多くとも５％であり；より典型的には、本発明で使用される弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの増殖は、親株の増殖の多くとも１％であり；そして、多くの場合には、増殖は検出不可能である。親株および弱毒化された株の増殖は、両方の生物の細胞外での増殖を測定することによって比較することができる。親株および弱毒化された株の増殖はまた、両方の生物の細胞内増殖を測定することによって比較することもできる。
【００５６】
用語「増殖関連遺伝子」は、細胞内増殖の速度を、それが細胞外増殖の速度を刺激するよりも少なくとも２０％大きく；より通常は、それが細胞外増殖の速度を刺激するよりも少なくとも３０％大きく；最も通常は、それが細胞外増殖を刺激する速度よりも少なくとも４０％大きく；通常は、それが細胞外増殖を刺激する速度よりも少なくとも６０％大きく；より通常は、それが細胞外増殖を刺激する速度よりも少なくとも８０％大きく、細胞内増殖の速度を刺激し；最も通常は、これは、それが細胞外増殖を刺激する速度よりも少なくとも１００％（２倍）大きく；多くの場合には、それが細胞外増殖を刺激する速度よりも少なくとも３倍大きく；より多くの場合には、それが細胞外増殖を刺激する速度よりも少なくとも４倍大きく；そして最も多くの場合には、それが細胞外増殖を刺激する速度よりも少なくとも１０倍大きく；典型的には、それが細胞外増殖を刺激する速度よりも少なくとも５０倍大きく；そして最も典型的には、それが細胞外増殖を刺激する速度よりも少なくとも１００倍大きく、細胞内増殖の速度を刺激する同じ量により細胞内増殖の速度を刺激する遺伝子を含む。
【００５７】
「免疫症状」または「免疫障害」には、（例えば、長期にわたる感染に対するか、または長期にわたるガンに対する）免疫系の無効な、不適切な、または病理学的応答によって生じる障害、症状、症候群、または疾患が含まれる（例えば、Ｊａｃｏｂｓｏｎら（１９９７）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．８４：２２３−２４３を参照のこと）。「免疫症状」または「免疫障害」には、例えば、病理学的炎症、炎症障害、および自己免疫障害または疾患が含まれる。「免疫症状」または「免疫障害」はまた、感染、長期にわたる感染、および増殖性の症状（例えば、ガン、腫瘍、および血管形成（免疫系による根絶に抵抗する感染、腫瘍、およびガンが含まれる））をも意味することができる。「免疫症状」または「免疫障害」にはまた、感染性物質によって誘導されるガンも含まれ、これには、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、エプスタイン・バー（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ）ウイルス、パピローマウイルス、ポリオーマウイルス、カポジ肉腫、へルペスウイルス、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、およびＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉによって誘導されるガンの限定ではない例が含まれる（例えば、Ｙｏｕｎｇ  ａｎｄ  Ｒｉｃｋｉｎｓｏｎ（２００４）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ４：７５７−７６８；Ｐａｇａｎｏら、（２００４）Ｓｅｍｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．１４：４５３−４７１；Ｌｉら（２００５）Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．１５：２６２−２７１を参照のこと）。
【００５８】
「先天免疫」、「先天応答」、および「先天免疫応答」には、病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）の認識によって生じる応答が含まれるが、これに限定されない。「先天応答」には、ＮＯＤタンパク質（ヌクレオチド−結合オリゴマー化ドメインタンパク質）によって媒介されるｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）によって媒介されるか、またはスカベンジャー受容体、マンノース受容体、もしくはβ−グルカン受容体によって媒介される応答が含まれ得る（例えば、Ｐａｓｈｉｎｅら（２００５）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．Ｓｕｐｐｌ．１１：Ｓ６３−Ｓ６８を参照のこと）。「先天応答」は、リガンドファミリーの任意のメンバーによってＴＬＲを刺激することができるという事実によって特徴付けられる（単に、異なる構造を有している１つのリガンドによるのではない）。さらに、「先天応答」は、ＴＬＡを刺激するリガンドが、抗原に対する応答を促進することができる点で顕著であり、リガンドは抗原に対していずれの構造的な同一性も、または、いずれの構造的な類似性も有している必要はない。先天応答にはまた、オプソニンまたはレクチンによって媒介される生理学的活性も含まれる（例えば、Ｄｏｈｅｒｔｙ  ａｎｄ  Ａｒｄｉｔｉ（２００４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１４：１６９９−１７０３；Ｔｖｉｎｎｅｒｅｉｍら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：１９９４−２００２；Ｖａｎｋａｙａｌａｐａｔｉら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：１３０−１３７；Ｋｅｌｌｙら（２００２）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３：８３−９０；Ａｌｖａｒｅｚ−Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚら（１９９３）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ６１：３６６４−３６７２；Ａｌｖａｒｅｚ−Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚら（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０１：８３−８９；Ｒｏｏｓら（２００４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４：２５８９−２５９８；Ｔａｋｅｄａ  ａｎｄ  Ａｋｉｒａ（２００５）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １７：１−１４；Ｗｅｉｓｓら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：４４６３−４４６９；Ｃｈａｍａｉｌｌａｒｄら（２００３）Ｃｅｌｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５：５８１−５９２；Ｐｈｉｌｐｏｔｔ  ａｎｄ  Ｇｉｒａｒｄｉｎ（２００４）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：１０９９−１１０８を参照のこと）。
【００５９】
「標識された」組成物は、分光工学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、放射性による、もしくは化学的方法によって、直接または間接的のいずれかで検出することができる。例えば、有用な標識としては、３２Ｐ、３３Ｐ、３５Ｓ、１４Ｃ、３Ｈ、１２５Ｉ、安定な放射性同位元素、エピトープタグ、蛍光色素、電子密度の高い試薬、物質、もしくは酵素（例えば、酵素結合免疫アッセイにおいて使用されるもの）、またはフルオレット（ｆｌｕｏｒｅｔｔｅｓ）が挙げられる（例えば、Ｒｏｚｉｎｏｖ  ａｎｄ  Ｎｏｌａｎ（１９９８）Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．５：７１３−７２８を参照のこと）。
【００６０】
「リガンド」は、受容体のアゴニストまたはアンタゴニストである、低分子、ペプチド、ポリペプチド、膜会合もしくは膜結合分子を意味する。「リガンド」にはまた、アゴニストまたはアンタゴニストではなく、そしてアゴニストまたはアンタゴニスト特性を有していない結合物質も含まれる。慣例により、リガンドが第１の細胞に膜結合されている場合には、受容体は通常は、第２の細胞に存在する。第２の細胞は、第１の細胞と同じ性質を有している場合も、また、異なる性質を有している場合もある。リガンドまたは受容体は、完全に細胞内にあってよい、すなわち、細胞質ゾル、核、またはいくつかの他の細胞内区画にあってよい。リガンドまたは受容体は、その位置を、例えば、細胞内区画から血漿膜の外表面へと変化させ得る。リガンドと受容体との複合体は、「リガンド受容体複合体」と呼ばれる。リガンドおよび受容体がシグナル伝達経路に関係している場合には、リガンドは、シグナル伝達経路の上流の位置に存在し、そして受容体は下流の位置に存在する。
【００６１】
本明細書中で使用される場合は、用語「キット」は、互いに（しかし、必ずしも同時ではない）使用されるようにパッケージされ、そして／または販売される成分をいう。キットには、別々の容器に、抗体が含まれている組成物と、Ｌｉｓｔｅｒｉａが含まれている組成物とが含まれ得る。キットにはまた、別の容器に薬学的に許容される賦形剤が含まれ得る。キットにはまた、哺乳動物への投与に適している免疫原性組成物が処方されるように複数の成分を混合するための説明書も含まれ得る。
【００６２】
「代謝的に活性」である細菌には、コロニーの形成が十分に機能しないか、または実質的に妨げられているが、転写は原則としては損なわれていないＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ；複製が十分に機能しないか、または実質的に妨げられているが、転写は本質的に損なわれていないＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ；あるいは、細胞分裂が十分に機能しないか、または実質的に妨げられているが、転写は本質的には損なわれていないＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓを含む細菌が含まれる。「代謝的に活性」である細菌にはまた、コロニー形成、複製、および／または細胞分裂が十分に機能しないか、または実質的に妨げられているが、代謝（例えば、翻訳、分泌、輸送、呼吸、醗酵、解糖、運動性）の指標は損なわれていないか、または本質的には損なわれていない、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓを含む細菌が含まれる。Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓの代謝についての様々な指標が開示されている（例えば、Ｋａｒｌｉｎら（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０１：６１８２−６１８７；Ｇｉｌｂｒｅｔｈら、（２００４）Ｃｕｒｒ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４９：９５−９８を参照のこと）。
【００６３】
本発明の代謝的に活性な細菌には、コロニー形成、複製、および／または細胞分裂が、適切な親（すなわち、対照の）細菌のものの５％未満である細菌、通常は、適切な親（すなわち、対照の）細菌のものと比較した場合の代謝が、親のものの少なくとも２０％である、より通常は、親のものの少なくとも３０％、最も通常は、親のものの少なくとも４０％、典型的には、親のものの少なくとも５０％、より典型的には、親のものの少なくとも６０％、最も典型的には、親のものの少なくとも７０％、通常は、親のものの少なくとも８０％、より通常は、親のものの少なくとも９０％、そして最も通常は、親の細菌のものと区別できない細菌、そして別の態様においては、親のものよりも大きい細菌が含まれる。
【００６４】
本発明の代謝的に活性な細菌には、コロニーの形成、複製、および／または細胞分裂が、適切な親の（すなわち、対照の）細菌のものの０．５％未満である細菌、適切な親の（すなわち、対照の）細菌のものと比較した場合の代謝が、親のものの少なくとも２０％である、より通常は、親のものの少なくとも３０％である、最も通常は、親のものの少なくとも４０％である、典型的には、親のものの少なくとも５０％、より典型的には、親のものの少なくとも６０％、最も典型的には、親のものの少なくとも７０％、通常は、親のものの少なくとも８０％、より通常は、親のものの少なくとも９０％、そして最も通常は、もとの細菌のものとは区別できない細菌、そして別の態様においては、親のものよりも大きい細菌が含まれる。コロニーの形成、複製、および／または細胞分裂は、複製を促進する（例えば、凍結されていない）条件下で測定される。本質的には代謝的に不活性な細菌には、熱で死滅した細菌が含まれるが、これに限定されない。本質的には代謝的に不活性な細菌の残っている代謝活性は、例えば、脂質の酸化、スルフヒドリルの酸化、重金属によって触媒される反応が原因であり得るか、または、熱処理に対して安定である酵素によるものであり得る。
【００６５】
「核酸」は、一本鎖、二本鎖の形態、またはマルチ鎖（ｍｕｌｔｉ−ｓｔｒａｎｄｅｄ）の形態のいずれかである、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド、およびそれらのポリマーを意味する。用語「核酸」は、状況に応じて、遺伝子、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、およびポリヌクレオチドと交換可能に使用され得る。特定の核酸配列はまた、「対立遺伝子改変体」および「スプライシング改変体」も暗黙のうちに含まれ得る。
【００６６】
「作動可能に連結された」は、プロモーターとｍＲＮＡをコードする核酸とに関連して、プロモーターをその核酸の転写を開始させるために使用できることを意味する。
【００６７】
「ペプチド」は、複数のアミノ酸がペプチド結合によって互いに結合しているアミノ酸の短い配列を意味する。ペプチドは、遊離の状態で存在する場合も、また、別の部分（例えば、巨大分子、脂質、オリゴ糖もしくは多糖、および／またはポリペプチド）に結合している場合もある。ペプチドがポリペプチド鎖に取り込まれている場合には、用語「ペプチド」は、なおも、アミノ酸の短い配列を特異的に言うように使用される場合もある。「ペプチド」は、ペプチド結合、またはいくつかの他のタイプの結合によって別の部分に連結され得る。ペプチドは、少なくとも２アミノ酸の長さであり、一般的には、約２５アミノ酸未満の長さであり、最大の長さは、慣習または状況の関数である。用語「ペプチド」および「オリゴペプチド」は、交換可能に使用される場合もある。
【００６８】
「タンパク質」は、一般的には、ポリペプチド鎖が含まれているアミノ酸の配列を意味する。タンパク質はまた、ポリペプチドの三次元構造をも意味し得る。「変性したタンパク質」は、いくらかの三次元構造が残されている、一部が変性したポリペプチド、あるいは、本質的にはランダムな三次元構造（すなわち、完全に変性している）を意味する。本発明には、ポリペプチド改変体（例えば、グリコシル化、リン酸化、硫酸化、ジスルフィド結合の形成、脱アミド化、異性体化、シグナル配列もしくはリーダー配列のプロセシングにおける切断点、共有結合および非共有結合した補因子、酸化型改変体などが含まれる）を使用する方法が含まれる。ジスルフィド結合したタンパク質の形成が記載されている（例えば、Ｗｏｙｃｅｃｈｏｗｓｋｙ  ａｎｄ  Ｒａｉｎｅｓ（２０００）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．４：５３３−５３９；Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎら（１９９５）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：１８−２３を参照のこと）。
【００６９】
「前ガン状態の症状」には、異形成、前ガン結節；再生結節（ｍａｃｒｏｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｎｏｄｕｌｅ）（ＭＲＮ）；低悪性度の異形成性結節（ｌｏｗ−ｇｒａｄｅ  ｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  ｎｏｄｕｌｅ）（ＬＧ−ＤＮ）；高悪性度の過形成性結節（ＨＧ−ＤＮ）；胆管上皮異形成；変性肝細胞の病巣（ＦＡＨ）；変性肝細胞の結節（ＮＡＨ）；染色体の平衡失調；テロメラーゼの異常な活性化；テロメラーゼの触媒サブユニットの再発現；内皮細胞マーカー（例えば、ＣＤ３１、ＣＤ３４、およびＢＮＨ９）の発現が含まれるが、これらに限定されない。なぜならこれらは、組織、臓器、または細胞に影響を及ぼす可能性があるからである（例えば、Ｔｅｒｒａｃｃｉａｎｏ  ａｎｄ  Ｔｏｒｎｉｌｌｏ（２００３）Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ  ９５：７１−８２；Ｓｕ  ａｎｄ  Ｂａｎｎａｓｃｈ（２００３）Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｐａｔｈｏｌ．３１：１２６−１３３；Ｒｏｃｋｅｎ  ａｎｄ  Ｃａｒｌ−ＭｃＧｒａｔｈ（２００１）Ｄｉｇ．Ｄｉｓ．１９：２６９−２７８；Ｋｏｔｏｕｌａら（２００２）Ｌｉｖｅｒ  ２２：５７−６９；Ｆｒａｃｈｏｎら（２００１）Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．３４：８５０−８５７；Ｓｈｉｍｏｎｉｓｈｉら、（２０００）Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ  Ｐａｎｃｒｅａｔ．Ｓｕｒｇ．７：５４２−５５０；Ｎａｋａｎｕｍａら（２００３）Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ  Ｐａｎｃｒｅａｔ．Ｓｕｒｇ．１０：２６５−２８１を参照のこと）。ガンおよび異形成を診断するための方法が開示されている（例えば、Ｒｉｅｇｌｅｒ（１９９６）Ｓｅｍｉｎ．Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．Ｄｉｓ．７：７４−８７；Ｂｅｎｖｅｇｎｕら（１９９２）Ｌｉｖｅｒ  １２：８０−８３；Ｇｉａｎｎｉｎｉら（１９８７）Ｈｅｐａｔｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．３４：９５−９７；Ａｎｔｈｏｎｙ（１９７６）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．３６：２５７９−２５８３を参照のこと）。
【００７０】
「組換え」は、例えば、核酸、細胞、動物、ウイルス、プラスミド、ベクターなどに関して使用される場合には、外因性の非天然核酸の導入、天然核酸の変更、あるいは、組換え体である核酸、細胞、ウイルス、プラスミド、もしくはベクターに由来する全体または一部における誘導による改変を示す。組換え体タンパク質は、例えば、組換え体核酸、ウイルス、プラスミド、ベクターなどに由来するタンパク質を意味する。「組換え体細菌」には、ゲノムが組換え方法によって、例えば、変異、欠失、挿入、および／または再配置によって操作されている細菌が含まれる。「組換え体細菌」にはまた、組換え体である追加されたゲノム核酸（例えば、プラスミドまたは第２の染色体）を含むように改変された細菌も含まれる。
【００７１】
「試料」は、ヒト、動物、プラセボに由来する試料、または研究用の試料（例えば、細胞、組織、臓器、体液、気体、エアゾール、スラリー、コロイド、または凝固した物質）を意味する。「試料」は、インビボで、例えば、ヒトもしくは動物から取り出されることなく試験される場合があり、また、インビトロで試験される場合もある。試料は、例えば、組織学的方法による処理の後で試験される場合もある。「試料」はまた、例えば、体液もしくは組織試料が含まれている細胞、または、体液もしくは組織試料から分離された細胞をも意味する。「試料」はまた、ヒトもしくは動物から新しく取り出された細胞、組織、臓器、または体液、あるいは、処理されるかもしくは保存されている細胞、組織、臓器、または体液を意味する場合もある。
【００７２】
「特異的に」または「選択的に」結合するは、リガンド／受容体、核酸／相補性核酸、抗体／抗原、または他の結合対（例えば、サイトカイン受容体に対するサイトカイン）に関して言及される場合には、タンパク質と他の生物製剤の不均質な集団の中のタンパク質の存在の決定要因である結合反応を示す。したがって、記載される条件下では、特異的なリガンドは特定の受容体に結合し、そして試料中に存在する他のタンパク質には有意な量では結合しない。特異的な結合はまた、例えば、意図される方法の結合化合物、核酸リガンド、抗体、または抗体の抗原結合部位に由来する結合組成物が、任意の他の結合化合物との親和性よりも、多くの場合には少なくとも２５％大きい、より多くの場合には、少なくとも５０％大きい、最も多くの場合には、少なくとも１００％（２倍）大きい、通常は、少なくとも１０倍大きい、より通常は、少なくとも２０倍大きい、そして最も通常は、少なくとも１００倍大きい親和性でその標的に結合することを意味することもできる。
【００７３】
好ましい態様においては、抗体は、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析によって決定される場合には、約１０９リットル／ｍｏｌより大きい親和性を有しているであろう（Ｍｕｎｓｅｎら、（１９８０）Ａｎａｌｙｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０−２３９）。いくつかの結合化合物が、１つ以上の標的に対して特異的に結合できること、例えば、抗体は、その抗原に対して、さらに、Ｆｃ受容体に対して特異的に結合することは、当業者に理解される。
【００７４】
細菌の「拡散」には、「細胞から細胞への拡散」、すなわち、例えば、ベシクルによって媒介される、第１の宿主細胞から第２の宿主細胞への細菌の伝染が含まれる。拡散に関係している機能としては、例えば、アクチンテールの形成、仮足様の伸張の形成、および二重膜液胞（ｄｏｕｂｌｅ−ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｖａｃｕｏｌｅ）の形成が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７５】
通常、本発明の弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの拡散は、親Ｌｉｓｔｅｒｉａ株の拡散の多くとも９０％であり；より通常は、拡散は親株の拡散の多くとも８０％であり；最も通常は、拡散は親株の拡散の多くとも７０％であり；多くの場合には、拡散は親株の拡散の多くとも６０％であり；より多くの場合には、拡散は親株の拡散の多くとも５０％であり；そして最も多くの場合には、拡散は親株の拡散の多くとも４０％であり；通常は、拡散は親株の拡散の多くとも３０％であり；より通常は、拡散は親株の拡散の多くとも２０％であり；最も通常は、拡散は親株の拡散の多くとも１０％であり；慣用的には拡散は親株の拡散の多くとも５％であり；より慣用的には本発明の弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの拡散は、親株の拡散の多くとも１％であり；そして、最も慣用的には拡散が検出不可能である。
【００７６】
「治療有効量」は、患者に利点を示す、すなわち、処置される症状の症候の軽減、予防、または緩和を引き起こすために十分である、試薬あるいは薬学的組成物の量として定義される。試薬または薬学的組成物に診断薬が含まれる場合には、「診断的に有効な量」は、シグナル、画像、または他の診断用のパラメーターを生じるために十分である量として定義される。薬学的処方物の有効量は、個体の感度、個体の年齢、性別、および体重、ならびに、個体の特有の応答などの要因にしたがって変わるであろう（例えば、Ｎｅｔｔｉらに交付された米国特許第５，８８８，５３０号を参照のこと）。
【００７７】
「ワクチン」には、予防用ワクチンが含まれる。ワクチンにはまた、治療用ワクチン、例えば、ワクチンによって提供される抗原もしくはエピトープが関係している症状または障害が含まれている哺乳動物に投与されるワクチンも含まれる。
【００７８】
ＩＩ．概要
本発明により、いくつかの態様においては、試薬であるＬｉｓｔｅｒｉａ（例えば、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、または他のリステリア種）の１つを投与する工程を含む、例えば、肝臓、膵臓、消化管、肺、脳、転移（単数もしくは複数）などの免疫障害、腫瘍、ガン、前ガン状態の障害、もしくは感染を処置または予防する方法が提供される。本発明の方法においては、Ｌｉｓｔｅｒｉａは一般的な免疫動員剤（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｒｕｉｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）として機能し、これにより、Ｌｉｓｔｅｒｉａが蓄積している１つ以上の部位での炎症または免疫細胞の活性化の増大が生じる。Ｌｉｓｔｅｒｉａは異種抗原（例えば、腫瘍抗原）を発現するように操作される必要はないので、本発明の任意の１つの態様によって、単に１種類の腫瘍のタイプだけではなく複数の腫瘍のタイプ（それぞれの腫瘍のタイプが様々な抗原性プロフィールを発現している）に対する免疫応答を刺激することができる。本発明のＬｉｓｔｅｒｉａはまた、少なくとも１つの異種抗原（例えば、腫瘍細胞、ウイルス、または病原体の抗原）をコードする核酸が含まれるように改変することもできる。
【００７９】
別の組織からの肝臓への転移、例えば、結腸から肝臓への転移を処置する、さらには、肝臓から別の組織への転移を処置する方法および試薬が提供される（例えば、Ｙａｓｕｉ  ａｎｄ  Ｓｈｉｍｉｚｕ（２００５）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１０：８６−９６；Ｒａｓｈｉｄｉら（２０００）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６：２４６４−２４６８；Ｓｔｏｅｌｔｚｉｎｇら（２００３）Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌ．１０：７２２−７３３；Ａｍｅｍｉｙａら（２００２）Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．９：３５−４７を参照のこと）。
【００８０】
特定の態様においては、本発明により、肝臓における新しい腫瘍形成によって、または肝臓の別の部分からの肝臓への転移によって、または消化管、結腸、直腸、卵巣、神経系、内分泌組織、神経内分泌組織、乳房、肺、もしくは体の他の部分からの肝臓への転移によって生じる肝臓の腫瘍を処置することができる（例えば、Ｌｉｕら（２００３）Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．９：１９３−２００；Ｃｏｒｍｉｏら（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  １３：１２５−１２９；Ｓａｒｍｉｅｎｔｏ  ａｎｄ  Ｑｕｅ（２００３）Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｎ．Ａｍ．１２：２３１−２４２；Ａｔｈａｎｂａｓａｋｉｓら（２００３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．１５：１２３５−１２４０；Ｄｉａｚら（２００４）Ｂｒｅａｓｔ  １３：２５４−２５８を参照のこと）。
【００８１】
免疫応答（ＮＫ細胞応答が含まれる）の経路は、一般的には、マウスおよび霊長類（ヒトが含まれる）において互いに類似している。Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓに対する免疫応答には、先天応答、さらには適応的応答が含まれる。先天応答は、通常は、好中球、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、ＤＣ、単球／マクロファージ、およびｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の高い活性を用いて同定される。Ｌｉｓｔｅｒｉａに対する先天応答には、マウスおよびヒトの中での細胞（例えば、好中球、ＮＫ細胞、および単球）の早期の動員（ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ）が含まれる。ＴＬＲの活性は、例えば、ＩＬ−１−Ｒ関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）、ＮＦ−κＢ、ＪＮＫの活性、ＩＬ−１８前駆体のカスパーゼ−１依存性切断、またはＩＲＦ−３の活性化を測定することによって評価することができる（例えば、Ｔａｋｅｄａら（２００３）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：３３５−３７６を参照のこと）。
【００８２】
適応的免疫の経路もまた、一般的には、マウスおよび霊長類（ヒトが含まれる）において互いに類似している。
【００８３】
マウスおよびヒトのＮＫ細胞は、２つのサブセットとして存在しており、一方のサブセットはＩＬ−１２受容体サブユニット（ＩＬ−１２Ｒβ２）の発現が高く、そして他方はこの受容体サブユニットの発現は低い。ＮＫ細胞によって発現される阻害性受容体に関して、マウスＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞のＫＩＲに類似しているｇｐ４９Ｂを発現し、そしてマウスＮＫ細胞は、ヒトＮＫ細胞上のＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａに類似しているＬｙ−４９Ａを発現する。ＮＫ細胞上の活性化受容体に関しては、マウスおよびヒトのＮＫ細胞はいずれも、ＮＫＧ２Ｄを発現する（例えば、Ｃｈａｋｉｒら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：４９８５−４９９３；Ｓｍｉｔｈら（２０００）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１：１３４１−１３５４；Ｅｈｒｌｉｃｈら（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：１９２２−１９３１；Ｐｅｒｉｔｔら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：５８２１−５８２４を参照のこと）。
【００８４】
ＮＫＴ細胞は、ヒトおよびマウスのいずれにも存在している。ヒトおよびマウスのＮＫＴ細胞は、グリセルアミドに対して同じ反応性を示す。ヒトおよびマウスのＮＫＴ細胞はＴＬＲを発現し、そして表現形および機能的な類似性を示す。ＮＫＴ細胞は腫瘍に対する免疫応答を媒介し、ＤＣによって産生されたＩＬ−１２はＮＫＴ細胞に対して作用して、ＮＫＴ細胞がＩＦＮγを産生し、次いでＮＫ細胞を活性化させるように、そしてＣＤ８＋Ｔ細胞が腫瘍を死滅させるように刺激する（例えば、Ｃｏｕｅｄｅｌら（１９９８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４３９１−４３９７；Ｓａｋａｍｏｔｏら（１９９９）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０３：Ｓ４４５−Ｓ４５１；Ｓａｉｋｈら（２００３）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８８：１５６２−１５７０を参照のこと）。ＮＫＴ細胞は、Ｌｉｓｔｅｒｉａに対する応答において役割を担っている（例えば、Ｅｍｏｔｏら（１９９７）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ６５：５００３−５００９；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら（２００３）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：４８３−５１３；Ｓｉｄｏｂｒｅら（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０１：１２２５４−１２２５９を参照のこと）。
【００８５】
マウスおよびヒトのいずれにおいても、単球は、マクロファージおよび樹状細胞への前駆細胞である。マウスのＣＸ３ＣＲ１ｌｏｗ単球は、ヒトのＣＤ１４ｈｉｇｈＣＤ１６−単球に相当する。マウスのＣＸ３ＣＲ１ｈｉｇｈ単球は、ヒトのＣＤ１４ｌｏｗＣＤ１６ｈｉｇｈに相当する（Ｓｕｎｄｅｒｋｏｔｔｅｒら（２００４）Ｊ．ＩＭｍｕｎｏｌ．１７２：４４１０−４４１７）。
【００８６】
マウスおよびヒトはいずれも、樹状細胞についての２つの系統を有しており、樹状細胞は、プレ−樹状細胞（プレ−ＤＣ１およびプレ−ＤＣ２）にそれらの起源を有している。ヒトおよびマウスはいずれも、プレ−ＤＣ１細胞とプレ−ＤＣ２細胞を有している。プレ−ＤＣ１細胞はＣＤ１１ｃ＋ＣＤ８α＋ＣＤ１１ｂ−ＤＣへと成熟し、これは、ＴＨ１型の免疫応答を誘導する特性を有している。プレ−ＤＣ２細胞はＣＤ１１ｃ＋ＣＤ８α−ＣＤ１１ｂ＋ＤＣへと成熟し、これは、ＴＨ２型免疫応答を誘導する特性を有している（Ｂｏｏｎｓｔｒａら（２００３）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９７：１０１−１０９；Ｄｏｎｎｅｎｂｅｒｇら（２００１）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ７２：１９４６−１９５１；Ｂｅｃｋｅｒ（２００３）Ｖｉｒｕｓ  Ｇｅｎｅｓ  ２６：１１９−１３０）。マウスおよびヒトはいずれも、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）を有しており、マウスおよびヒトのｐＤＣはいずれも、ウイルスによる刺激に応答してインターフェロン−αを発現する（Ｃａｒｉｎｅら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１：６４６６−６４７７）。さらに、マウスおよびヒトはいずれも骨髄ＤＣを有しており、例えば、マウスおよびヒトの骨髄ＤＣはいずれもＣＣＬ１７を発現することができる（Ｐｅｎｎａら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：６６７３−６６７６；Ａｌｆｅｒｉｎｋら（２００３）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９７：５８５−５９９）。
【００８７】
マウスおよびヒトはいずれも、ＣＤ８＋Ｔ細胞を有している。マウスおよびヒトのＣＤ８＋Ｔ細胞にはいずれにも同様のサブセット、すなわち、中心性メモリーＴ細胞およびエフェクターメモリーＴ細胞が含まれている（例えば、Ｗａｌｚｅｒら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：２７０４−２７１１を参照のこと）。ＣＤ８＋Ｔ細胞の免疫応答は、これらは例えば、ＣＤ１２７およびＩＬ−２の発現に適用できるので、マウスおよびヒトのＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれについても類似している（Ｆｕｌｌｅｒら（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：５９２６−５９３０）。
【００８８】
Ｌｉｓｔｅｒｉａは、ＤＣの成熟を誘導する。Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓは、例えば、ＣＤ８６のリステリアによって刺激される発現によって測定されるように、ヒトおよびマウスの樹状細胞の両方の成熟を刺激する（例えば、Ｋｏｌｂ−ｍａｕｒｅｒら（２０００）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ６８：３６８０−３６８８；Ｂｒｚｏｚａら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：２６４１−２６５１；Ｅｓｐｌｕｇｕｅｓら（２００５）Ｂｌｏｏｄ  １０５：４３９９−４４０６；Ｐａｓｃｈｅｎら（２０００）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：３４４７−３４５６を参照のこと）。
【００８９】
マウスおよびヒトの好中球はいずれも、Ｌｉｓｔｅｒｉａによって刺激される（例えば、Ｋｏｂａｙａｓｈｉら（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１００：１０９４８−１０９５３；Ｔｏｒｒｅｓら（２００４）７２：２１３１−２１３９；Ｓｉｂｅｌｉｕｓら（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ６７：１１２５−１１３０；Ｔｖｉｎｎｅｒｅｉｍら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：１９９４−２００２を参照のこと）。好中球はマーカーであるＧｒ−１（Ｇｒ１およびＬｙ−６Ｇとしても知られている）によって検出または特性決定することができる。Ｇｒ−１を測定する方法が利用可能である（例えば、Ｄｕｍｏｒｔｉｅｒら（２００３）Ｂｌｏｏｄ  １０１：２２１９−２２２６；Ｂｌｉｓｓら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：４５１５−４５２１を参照のこと）。
【００９０】
ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）には、約１０個の受容体の１つのファミリーが含まれ、これらによって細菌成分、ウイルス成分、およびそれらのアナログ（リポ多糖（ＬＰＳ）、リポタイコ酸、ペプチドグリカン成分、リポタンパク質、核酸、フラジェリン、およびＣｐＧ−ＤＮＡが含まれる）に対する先天応答が媒介される。ヒトおよびマウスはいずれも、以下のｔｏｌｌ様受容体を発現する：ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、およびＴＬＲ９（Ｊａｎｓｓｅｎｓ  ａｎｄ  Ｂｅｙａｅｒｔ（２００３）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂ．Ｒｅｖｓ．１６：６３７−６４６）。
【００９１】
マウスおよびヒトシステムによるＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓに対する応答には、ＩＦＮ−γの発現が含まれる（例えば、Ｗａｙ  ａｎｄ  Ｗｉｌｓｏｎ（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：５９１８−５９２２；Ｏｕａｄｒｈｉｒｉら（１９９９）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  １８０：１１９５−１２０４；Ｎｅｉｇｈｂｏｒｓら（２００１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９４：３４３−３５４；Ｃａｌｏｒｉｎｉら（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  １９：２５９−２６４；Ａｎｄｅｒｓｓｏｎら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：５６００−５６０６を参照のこと）。
【００９２】
マウスおよびヒトのシステムの両方によるＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓに対する応答には腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の発現が含まれる（例えば、Ｆｌｏら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｏｌ．１６４：２０６４−２０６９；Ｃａｌｏｒｉｎｉら（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  １９：２５９−２６４；Ｂｒｚｏｚａら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：２６４１−２６５１を参照のこと）。
【００９３】
マウスおよびヒトでの実験によって示されるように、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓに対する応答には、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）の発現が含まれる（例えば、Ｂｒｚｏｚａら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：２６４１−２６５１；Ｃｌｅｖｅｌａｎｄら（１９９６）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ６４：１９０６−１９１２；Ａｎｄｅｒｓｓｏｎら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：５６００−５６０６を参照のこと）。
【００９４】
マウスおよびヒトの免疫細胞の実験において決定されているように、ＣＤ６９は免疫細胞の活性化についてのマーカーである（例えば、Ｐｉｓｅｇｎａら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：６８−７４；Ｇｅｒｏｓａら（２００２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９５：３２７−３３３；Ｂｏｒｒｅｇｏら（１９９９）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ９７：１５９−１６５を参照のこと）。
【００９５】
以下はサイトカイン、例えば、インターフェロン−γおよびＭＣＰ−１に関する。インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）は、ヒトおよびマウスの両方によって発現される。ＩＦＮ−γは、腫瘍および微生物である病原体に対する、さらには、腫瘍の血管形成に対する免疫系の応答における重要なサイトカインである。ＩＦＮ−γは、例えば、肝炎ウイルスに対するワクチンの投与、ＩＦＮ−γの投与、または抗ＩＦＮ抗体の投与実験によれば、肝臓の腫瘍およびウイルス性の肝炎に対する免疫応答を媒介する（例えば、Ｇｒａｓｓｅｇｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｏｐｆｌ（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２９：５８４−５８８；Ｔａｎｎｅｎｂａｕｍ  ａｎｄ  Ｈａｍｉｌｔｏｎ（２０００）Ｓｅｍｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．１０：１１３−１２３；Ｂｌａｎｋｅｎｓｅｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｑｉｎ（２００３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：１４８−１５４；Ｆｉｄｌｅｒら（１９８５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：４２８９−４２９６；Ｏｋｕｓｅら（２００５）Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．６５：２３−３４；Ｐｉａｚｚｏｌｌａら（２００５）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：１４２−１５２；Ｘｕら（２００５）Ｖａｃｃｉｎｅ  ２３：２６５８−２６６４；Ｉｒｉｅら（２００４）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １１１：２３８−２４５を参照のこと）。
【００９６】
単球走化性タンパク質（ＭＣＰ−１；ＣＣＬ２）は、ヒトおよびマウスによって発現される。ＭＣＰ−１は腫瘍のマクロファージ浸潤を促進する。ＭＣＰ−１は、肝炎ウイルス感染に対する免疫応答を媒介する。さらに、投与されたＭＣＰ−１は、マクロファージによる腫瘍の根絶を促進する。他の実験においては、ＭＣＰ−１は、ウイルス性肝炎に対する薬物療法の効率と関係している（例えば、Ｎａｋａｍｕｒａら（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１１：１−７；Ｌｕｏら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：３７０８−３７１６；Ｐａｎａｓｉｕｋら（２００４）Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１０：３６６３９−３６４２を参照のこと）。
【００９７】
免疫応答には、タンパク質、ペプチド、タンパク質もしくはペプチドを発現する細胞に対する応答、ならびに、他の物質（例えば、核酸、オリゴ糖、糖脂質、および脂質）に対する応答が含まれ得る。例えば、ウイルスに対する免疫応答には、ウイルスのペプチド、ウイルスの核酸、ウイルスの糖脂質、またはウイルスのオリゴ糖に対する免疫応答が含まれ得る（例えば、Ｐｅｋｖｉｇら（１９９５）Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：５９３−６０２；Ｗａｉｓｍａｎら（１９９６）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：７−１４；Ｃｅｒｕｔｔｉら（２００５）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４２：３２７−３３３；Ｏｓｃｈｍａｎｎら（１９９７）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ２５：２９２−２９７；Ｐａｒａｄｉｓｏ  ａｎｄ  Ｌｉｎｄｂｅｒｇ（１９９６）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．８７：２６９−２７５を参照のこと）。
【００９８】
多種多様な腫瘍、ウイルス、細菌、および他の病原体は、ＮＫ細胞およびＮＫＴ細胞により攻撃される。ＮＫ細胞およびＮＫＴ細胞の標的としては、例えば、結腸腺ガン、神経芽細胞腫、肉腫、リンパ腫、乳ガン、黒色腫、赤白血病腫瘍、白血病、肥満細胞腫、結腸ガン、乳腺ガン、卵巣腺ガン、繊維肉腫、黒色腫、肺ガン、横紋筋肉腫、神経膠腫、腎細胞ガン、胃ガン、肺小細胞ガン、肝臓への転移によって生じるガン、ならびに、広範なウイルス（Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、単純ヘルペスウイルス。ガンマヘルペスウイルス、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、ＨＩＶ、デング熱ウイルスが含まれる）および広範な細菌（例えば、マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）、およびブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ））が挙げられる（例えば、Ｖｕｊａｎｏｖｉｃら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：１１１７−１１２６；Ｋａｓｈｉｉら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：５３５８−５３６６；Ｇｉｅｚｅｍａｎ−Ｓｍｉｔｓら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：７１−７６；Ｔｕｒｎｅｒら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：８９−９４：Ｋａｗａｒａｄａら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：５２４７−５２５３；Ｓｃｏｔｔ−Ａｌｇａｒａ  ａｎｄ  Ｐａｕｌ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２：７５７−７６８；Ｋａｒｎｂａｃｈら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：２５６９−２５７６；Ｗｅｓｔｗｏｏｄら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１：７５７−７６１；Ｒｏｄａら、（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７５：１６１９−１６２７；Ｐｏｇｇｉら（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：２６５３−２６６０；Ｍｅｔｅｌｉｔｓａら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：３１１４−３１２２；Ｗｅｉら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：３８１１−３８１９；Ｂａｋｋｅｒら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：５２３９−５２４５；Ｍａｋｒｉｇｉａｎｎｉｓら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：１４１４−１４２５；Ｇｏｌｄｉｎｇら（２００１）Ｍｉｃｒｏｂｅｓ  Ｉｎｆｅｃｔ．３：４３−４８；Ｌａｉら（１９９０）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６１：１２６９−１２７５；Ｏｈｇａら（２００２）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．４４：２０３−２１５；Ｗａｋｉｍｏｔｏら（２００３）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１０：９８３−９９０；Ｃｈｅｎら（２００５）Ｊ．Ｖｉｒａｌ  Ｈｅｐａｔ．１２：３８−４５；Ｂａｂａら（１９９３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．４０：４７−６０；Ｌｉら（２００４）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．７６：１１７１−１１７９；Ｓｃａｌｚｏ（２００２）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１０：４７０−４７４；Ａｈｌｅｎｓｔｉｅｌ  ａｎｄ  Ｒｅｈｅｒｍａｎｎ（２００５）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ４１：６７５−６７７；Ｃｈｅｎら（２００５）Ｊ．Ｖｉｒａｌ  Ｈｅｐａｔ．１２：３８−４５；Ｓｕｎ  ａｎｄ  Ｇａｏ（２００４）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１２７：１５２５−１５３９；Ｌｉら（２００４）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．７６：１１７１−１１７９；Ａｈｍ���ｄ  ａｎｄ  Ａｌｖａｒｅｚ（２００４）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．７６：７４３−７５９；Ｃｏｏｋ（１９９７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．９：１２３９−１２４７；Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｒｉｏｒｄａｎ（２０００）Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．１５（補足）Ｇ１７−Ｇ２５；Ｖａｒａｎｉ  ａｎｄ  Ｌａｎｄｉｎｉ（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．４８：３９−４４；Ｒｕｂｉｎ（１９９７）Ｃｌｉｎ．Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ．１：４３９−４５２；Ｌｏｈら（２００５）Ｊ．Ｖｉｏｌ．７９：６６１−６６７；Ｓｈｒｅｓｔａら（２００４）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ３１９：２６２−２７３；Ｆｊａｅｒら（２００５）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ９：６８−７３；Ｌｉら（２００４）Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１０：３４０９−３４１３；Ｃｏｌｌｉｎら（２００４）Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．４１：１７４−１７５；Ｏｈｇａら（２００２）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．４４：２０３−２１５を参照のこと）。
【００９９】
ＮＫ細胞は、広範な寄生性の生物および原虫（例えば、トキソプラズマ症、トリパノソーマ症、リーシュマニア症、およびマラリア症の原因となるもの）を排除することができる（例えば、Ｋｏｒｂｅｌら（２００４）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．３４：１５１７−１５２８；Ｍａｖｏｕｎｇｏｕら（２００３）Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗ．１４：１３４−１４２；Ｄｏｏｌａｎ  ａｎｄ  Ｈｏｆｆｍａｎ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：８８４−８９２を参照のこと）。
【０１００】
ＩＩＩ．抗体によって媒介される治療効果
本発明の方法によって、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、さらには他の機構による免疫応答を刺激することができる。ＡＤＣＣは、ＮＫ細胞、マクロファージ、および好中球によって媒介され得る。本発明により、腫瘍、ガン、前ガン状態の障害、および／または感染に対する免疫応答を刺激するＬｉｓｔｅｒｉａおよび抗体を投与する工程を含む方法が提供される。本発明はいずれの作用機構にも限定されないが、抗体によって媒介される細胞傷害性には、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）が含まれ得、投与された抗体は、そのＦｃ領域を介して細胞傷害性細胞に、そしてその可変領域を介して標的細胞に結合して、標的細胞の溶解または食作用を生じる。抗体の作用の別のシナリオにおいては、投与された抗体のＦｃ領域は樹状細胞に結合し、一方、抗体の可変領域は、瀕死の標的細胞に結合し、即座の結果は、樹状細胞による標的細胞の取り込みの増加であり、そして下流での結果は、標的細胞に由来するエピトープの提示（交差提示）の増加である（例えば、Ｂｒａｄｙ（２００５）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７３：６７１−６７８；Ｄｈｏｄａｐｋａｒら（２００５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０２：２９１０−２９１５；Ｄｈｏｄａｐｋａｒ  ａｎｄ  Ｄｈｏｄａｐｋａｒ（２００５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０２：６２４３−６２４４；Ｇｒｏｈら、（２００５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０２：６４６１−６４６６を参照のこと）。
【０１０１】
本発明により、抗体、ならびに抗体の抗原結合部位が含まれている結合化合物；抗体のＦｃ受容体結合部位；抗体の抗原結合部位および抗体のＦｃ受容体結合部位の両方を、媒介される細胞の細胞傷害性における使用のために利用する方法が提供される。「抗原結合部位」には、抗体の抗原結合部位に由来する組成物および分子が含まれる。「抗体のＦｃ受容体結合部位」には、抗体のＦｃ受容体結合部位に由来する組成物および分子が含まれる。
【０１０２】
本発明により、ペプチド模倣物を利用する方法が提供される。これには、腫瘍、ガン、感染性物質、ウイルス、細菌、原虫などの抗原に特異的に結合する抗体のペプチド模倣物が含まれる。ペプチド模倣物（抗体のペプチド模倣物が含まれる）は、確立された方法によって設計され、調製される（例えば、Ｃａｓｓｅｔら（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１８：１９８−２０５；Ｃａｓｓｅｔら（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３０７：１９８−２０５；［著者が記載されていない］（２０００）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８：１３７；Ａｎｄｒａｄｅ−Ｇｏｒｄｏｎら（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９６：１２２５７−１２２６２；Ｓａｔｏ  ａｎｄ  Ｓｏｎｅ（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３７１：６０３−６０８；Ｐａｒｋら（２０００）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８：１９４−１９８；Ｅｎｇｌｅｍａｎら（１９９７）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９９：２２８４−２２９２；Ｍａｒｔｉｎ−Ｍｏｅら（１９９５）Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｒｅｓ．８：７０−７６；Ｖｅｎｋａｔｅｓｈら（２００２）Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ２３：５７３−５８０；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  ａｎｄ  Ｌａｕｗｅｒｅｙｓ（１９９９）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１２：１３１−１４０；Ｍａｒｙａｎｏｆｆら（２００３）Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ａｇｅｎｔｓ  １：１３−３６；Ｙｏｓｈｉｍｏｒｉら（２００５）Ａｐｅｐｔｏｓｉｓ  １０：３２３−３２９；Ｋａｄｏｎｏら（２００５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３２６：８５９−８６５を参照のこと）。
【０１０３】
腫瘍、ガン、および感染、または感染性物質に対する免疫応答を媒介するために抗体を使用する方法が利用可能である（例えば、Ｐｒｅｓｔａ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：２３７−２５６．；Ｐｒｅｓｔａら（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３０：４８７−４９０；Ｃｌｙｎｅｓら（２０００）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．６：４４３−４４６；Ｇｒｅｅｎら（２００２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２：６８９１−６９００；Ｄｅｃｈａｎｔ  ａｎｄ  Ｖａｌｅｒｉｕｓ（２００１）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３９：６９−７７；Ｓｏｎｄｅｌ  ａｎｄ  Ｈａｎｋ（２００１）Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．１５：７０３−７２１；Ｓｕｌｉｃａら（２００１）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：３７１−４１４；Ｃａｒｔｅｒ（２００１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  １：１１８−１２９；Ｓｕｎ（２００３）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．２７：５３９−５４８；Ｄａｅｒｏｎ（１９９７）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４；Ｗａｒｄ  ａｎｄ  Ｇｈｅｔｉｅ（１９９５）Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：７７−９４；Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２を参照のこと）。
【０１０４】
本発明はいずれの特定の機構にも限定されないが、以下の議論は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）に関する。ＡＤＣＣは、投与された抗体のＦｃ領域によって媒介され得る（Ｐｒａｎｇｅら、前出；Ｙｏｋａｙａｍａ  ａｎｄ  Ｐｌｏｕｇａｓｔｅｌ（２００３）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３：３０４−３１６；Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ  ａｎｄ  Ｖａｌｉａｎｔｅ（１９９３）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：２１８−２３４）。しかし、本発明は、Ｆｃ領域が含まれている投与された抗体、またはＦｃ領域が含まれている抗体に由来する結合化合物に必ずしも限定されない。抗原結合部位およびＦｃ領域が含まれることの代わりに、意図される結合化合物には、二官能性抗体を含めることができる。意図される二官能性抗体または多官能性抗体には、腫瘍抗原に特異的に結合する第１の結合部位と、Ｆｃ受容体に特異的に結合する第２の結合部位とが含まれ得る。
【０１０５】
腫瘍細胞、ガン細胞、または感染性物質の抗原に特異的に結合する第１の抗体に由来する第１の抗原結合部位と、ＮＫ細胞、単球、またはＡＤＣＣを媒介する他の細胞に特異的に結合する第２の抗体に由来する第２の抗原結合部位とが含まれている二官能性抗体もまた、この方法での使用のために提供される。第２の抗体は、例えば、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、単球、もしくはγδＴ細胞のマーカーまたは膜会合タンパク質に特異的に結合することができる。第２の抗体は、例えば、活性化ＫＩＲ−Ｌ（２ＤＳ１から５；３ＤＳ１）；阻害性ＫＩＲ−Ｌ（２ＤＬ１から２ＤＬ５；３ＤＬ１−３ＤＬ３）；ＣＤ９４／ＣＤ１５９ａ（ＮＫＧ２Ａ）；ＣＤ８５ｊ（ＩＬＴ−２／ＬＩＲ−１）；ＣＤ５６；ＣＤ５７；ＣＤ６２（Ｌ−セレクチン）；ＣＤ１６２Ｒ（ＰＥＮ５）；ＣＤ１２２（ＩＬ−２受容体のサブユニット）；ＮＫｐ８０；ＮＫｐ４６；ＮＫｐ３０；ＣＤ１６１（ＮＫＲＰ−１発現）；ＮＫ１．１；ＤＸ５に特異的に結合することができる（例えば、Ｐａｓｃａｌら（２００４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４：２９３０−２９４０；Ｓｉｖｏｒｉら（２００３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３３：３４３９−３４４７；Ｔａｋａｙａｍａら（２００３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０８：２１１−２１９；Ｖｅｒｎｅｒｉｓら（２００１）Ｂｉｏｌ．Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．７：５３２−５４２；Ｒｉｓｃｈｅｒら（２００４）Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１２６：５８３−５９２を参照のこと）。
【０１０６】
本発明には、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｙｔｏｇｅｎｅｓ細菌が含まれる）を、抗体または抗体に由来する結合化合物とともに投与する方法が含まれる。Ｌｉｓｔｅｒｉａは弱毒化されていてよい。限定されないが、Ｌｉｓｔｅｒｉａは、増殖、拡散、細胞への侵入、増殖と拡散、増殖と細胞への侵入、拡散と宿主細胞への侵入、またはこれらの３つ全て（増殖、拡散と、宿主細胞への進入）において弱毒化させることができる。さらに、本発明により、Ｌｉｓｔｅｉｒａ細菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ細菌が含まれる）を、抗体または抗体に由来する結合組成物（もしくは化合物）とともに投与する試薬および方法であって、Ｌｉｓｔｅｒｉａを、抗原をコードする核酸が含まれるように操作する試薬および方法が提供される。抗原は、腫瘍抗原、ガン抗原、感染性生物の抗原、病原体抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、寄生虫に由来する抗原、リステリア抗原、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌に対して異種である抗原、またはＬｉｓｔｅｒｉａ細菌に由来する抗原であり得るか、あるいはそれらに由来し得る。
【０１０７】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌が、抗原をコードする核酸が含まれるように操作される場合には、抗原は、投与された抗体が特異的に結合するものであり得、また、抗原は、投与された抗原が特異的には結合しないものでもあり得る。
【０１０８】
加えて、本発明には、１つ以上の抗体が投与される試薬および方法が含まれ、例えば、第１の投与された抗体は第１の抗原に特異的に結合することができ、第２の投与された抗体は第２の抗原に特異的に結合することができる。さらに、本発明により、１つ以上の抗原をコードするポリヌクレオチドが含まれているＬｉｓｔｅｒｉａが提供される。例えば、ポリヌクレオチドには、第１の抗原をコードする第１の核酸と、第２の抗原をコードする第２の核酸とが含まれる。上記試薬および方法の任意の、および全ての組み合わせが提供される。
【０１０９】
本発明のＬｉｓｔｅｒｉａは、抗原（例えば、脂質、リン脂質、糖脂質、オリゴ糖、糖ペプチド、または糖タンパク質）の生合成に必要な酵素を発現するように操作することができる。
【０１１０】
Ｆｃ受容体の発現および／または活性を調節する試薬および方法が提供される。本発明には、阻害性Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＢ）を阻害または低下させる、ならびに、活性化Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＩ）を増大、刺激、または活性化させる試薬および方法が含まれる。
【０１１１】
抗体が投与される場合、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）もまた、腫瘍、ガン、前ガン状態の障害、または感染に対する免疫応答に寄与し得る。ＣＤＣによって少なくとも一部が作用する治療用抗体としては、リツキサン（Ｒｉｔｕｘａｎ）（登録商標）、ハーセプチン（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）（登録商標）、カンパス（Ｃａｍｐａｔｈ）（登録商標）、ＭＴ２０１（抗Ｅｐ−ＣＡＭ  ＩｇＧ１）、および抗Ｅｐ−ＣＡＭ（ＩｇＧ２ａ）が挙げられる（例えば、Ｐｒａｎｇら（２００５）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ９２：３４２−３４９を参照のこと）。本発明により、ＣＤＣ（例えば、β−グルカン）の刺激とともに、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、抗体を投与する試薬および方法が提供される（Ｈｏｎｇら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６３：９０２３−９０３１）。真菌のβ−グルカン、およびそのアナログは、ＣＤＣを促進することができる（例えば、Ｈｏｎｇら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，６３：９０２３−９０３１を参照のこと）。
【０１１２】
一旦、腫瘍細胞が死滅するかまたは瀕死状態にある（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞の作用によって）と、瀕死状態の腫瘍細胞は、樹状細胞（ＤＣ）によって取り込まれ得、次いで、ＤＣは腫瘍抗原を提示（交差提示）する。死滅したかまたは瀕死状態にある細胞の取り込みは、腫瘍細胞に特異的な抗体を投与することによって促進させることができ、それにより、抗腫瘍抗体と腫瘍細胞の複合体が生じる。この複合体にはＤＣのＦｃ受容体が結合する。一旦結合すると、抗体／腫瘍細胞複合体（または抗体／抗原複合体）はＤＣに取り込まれる（例えば、Ｄｈｏｄａｐｋａｒら（２００５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０２：２９１０−２９１５；Ｄｈｏｄａｐｋａｒ  ａｎｄ  Ｄｈｏｄａｐｋａｒ（２００５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０２：６２４３−６２４４；Ｇｒｏｈら（２００５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０２：６４６１−６４６６を参照のこと）。本発明での使用に利用可能なものは、ＤＣによる取り込みを促進させることに使用される、および／またはＤＣによる交差提示を促進させることにおいて使用される、抗腫瘍抗体、感染性物質に対する抗体、抗病原体抗体などである。活性化Ｆｃ受容体に対する結合を促進するように、阻害性Ｆｃ受容体に対する結合を低下させるように、またはそれらの両方のために改変される操作が提供される。本発明の１つの目的は、１つ以上の阻害性Ｆｃ受容体を阻害またはノックアウトすることである。
【０１１３】
阻害性Ｆｃ受容体に特異的に結合する第１の抗体と、腫瘍、感染、病原体などを経験している患者への投与に使用される、および該阻害性Ｆｃ受容体に対する第２の抗体（抗腫瘍抗体；抗病原体抗体）の結合を低下または妨げる関連方法もまた提供される（例えば、Ｄｈｏｄａｐｋａｒら（２００５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０２：２９１０−２９１５を参照のこと）。
【０１１４】
本発明の試薬および方法は、投与される抗体または抗体に由来する結合化合物の作用機構（例えば、ＡＤＣＣまたはＣＤＣ）に限定されず、また、限定されるべきではない。
【０１１５】
ＩＶ．抗体およびその誘導体
本発明に有用なモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、およびヒト化抗体を調製することができる（例えば、Ｓｈｅｐｅｒｅｄ  ａｎｄ  Ｄｅａｎ（編）（２０００）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｒ（編）（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐｐ．１３９−２４３；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６２０５−６２１３；Ｈｅら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９−１０３５；Ｔａｎｇら（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２７３７１−２７３７８を参照のこと）。限定でない例として提供されるヒト化抗体には、ヒト抗体のフレームワークに繋がれた親マウス抗体の６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来するアミノ酸配列が含まれ得る。
【０１１６】
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を用いた、抗体（または抗体に由来する結合化合物）をヒト化させる、抗体への相補物の結合を変化させる（または、抗体に対する結合化合物へと）、抗体への（または、抗体に由来する結合化合物への）組織因子の結合を改変する、Ｆｃ受容体への抗体の結合を改変する、および抗体（または抗体に由来する結合化合物）を改変する試薬および方法が利用可能である（例えば、Ｉｄｕｓｏｇｉｅら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：２５７１−２５７５；Ｐｒｅｓｔａら（２００１）Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８５：３７９−３８９；Ｌｅｏｎｇら（２００１）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  １６：１０６−１１９；Ｐｒｅｓｔａ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：２３７−２５６；Ｐｒｅｓｔａら（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３０：４８７−４９０；Ｐｒｅｓｔａ（２００３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．１３：５１９−５２５；Ｃａｒｔｅｒ  ａｎｄ  Ｐｒｅｓｔａの米国特許公開番号ＵＳ２００４／０２３６０７８；Ｒａｓｍｕｓｓｅｎら（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９８：１０２９６−１０３０１を参照のこと）。
【０１１７】
ヒト化の代わりとしては、完全なヒト抗体、さらには、ファージに提示されるヒト抗体ライブラリー、またはトランスジェニックマウスに含まれるヒト抗体ライブラリーの使用が挙げられる（例えば、Ｖａｕｇｈａｎら（１９９６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３０９−３１４；Ｂａｒｂａｓ（１９９５）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１：８３７−８３９；ｄｅ  Ｈａａｒｄら（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：１８２１８−１８２３０；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｍａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７；Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．１５：１４６−１５６；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｃｈａｍｅｓ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−３７７；Ｂａｒｂａｓら（２００１）Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｋａｙら（１９９６）Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ｄｅ  Ｂｒｕｉｎら（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：３９７−３９９を参照のこと）。
【０１１８】
本発明で使用されるＦｖ断片、Ｆａｂ断片、単鎖抗体、単ドメイン抗体（ｓｉｎｇｌｅ  ｄｏｍａｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、および二重特異的抗体は記載されている（例えば、Ｍａｌｅｃｋｉら（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９９：２１３−２１８；Ｃｏｎｒａｔｈら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：７３４６−７３５０；Ｄｅｓｍｙｔｅｒら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２６２８５−２６２９０、Ｋｏｓｔｅｌｎｅｙら（１９９２）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１４８：１５４７−１５５３；Ｗｉｌｌｕｄａら（１９９９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，５９：５７５８−５７６７；Ｋｕｆｅｒらの米国特許出願番号２００５／０１３６０５０を参照のこと）。
【０１１９】
利用可能なものは、腫瘍抗原に特異的な第１の結合部位（抗体から、または抗体に由来する）と、Ｆｃ受容体に特異的な第２の結合部位（抗体から、または抗体に由来する）とが含まれている二官能性抗体である。活性化Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＩ）に特異的な結合部位と、腫瘍抗原または感染性物質の抗原に特異的な結合部位とが含まれている二官能性抗体が意図される。Ｆｃ受容体に特異的な１つ以上の結合部位と、腫瘍抗原または感染性物質の抗原に特異的な１つ以上の結合部位とが含まれている多官能性抗体もまた意図される（例えば、Ｒｅｎｎｅｒら（２００１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５０：１０２−１０８；Ｋｕｄｏら（１９９９）Ｔｏｈｏｋｕ  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：２７５−２８８；Ｆａｎｇｅｒら（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：７２−８１；Ｂｒｕｅｎｋｅら（２００４）Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１２５：１６７−１７９を参照のこと）。
【０１２０】
抗体の抗原結合部位と共に使用される様々なＦｃ領域もまた、利用可能である。抗体は、多数のクラスおよびサブクラスに存在しており、それぞれが特徴的なＦｃ領域を有している。それぞれのＦｃ領域は、様々なＦｃ受容体に対して、様々な相対的特異性で結合することができる。例えば、ＦｃγＲＩＩＩ（活性化受容体）は、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３に（これらの抗体クラスのＦｃ領域に）優先的に結合し、一方、ＦｃγＲＩＩｂ（阻害性受容体）はＩｇＧ１にはほとんど結合しない。したがって、ＩｇＧ１クラスの抗体は、ＩｇＧ３クラスの抗体よりもＡＤＣＣを刺激することにおいてより大きな効果を有し得る。同様の道筋に沿って、Ｆｃ領域の中での多数の変異によって、ＦｃγＲＩＩＩａ（活性化受容体）に対する結合を増大させることができ、そしてＦｃγＲＩＩｂ（阻害性受容体）に対する結合を低下させることができる。利用可能なものは、変異（例えば、Ｓ２９８Ａ；Ｅ３３３Ａ；Ｋ３３４Ａ；および／またはＤ２６４Ａ）、ならびに、ＡＤＣＣを改善する抗体に結合させられたオリゴ糖の変更であり、例えば、フコース欠損ＩｇＧ１はＡＤＣＣの改善を示す。本発明の試薬には、活性化Ｆｃ受容体に対する結合が増大しており、および／または阻害性Ｆｃ受容体に対する結合が低下している抗体が含まれる（例えば、Ｇｅｓｓｎｅｒら（１９９８）Ａｎｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．７６：２３１；Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００１）２７６：６５９１−６６０４；Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−２６７４０；Ｐｒｅｓｔａら（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３０：４８７−４９０；Ｃｌｙｎｅｓら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ  ４：４４３−４４６を参照のこと）。
【０１２１】
抗原断片は他の物質に連結させることができ、例えば、免疫原として使用されるポリペプチドに融合または共有結合させることができる。抗原およびその断片は、様々な免疫原（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシ血清アルブミン、またはオボアルブミン）に融合または共有結合させることができる（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９４）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，第２巻、９．３−９．４、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照のこと）。適切な抗原性のペプチドは、アルゴリズム（例えば、Ｐａｒｋｅｒら（１９８６）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２５：５４２５−５４３２；Ｊａｍｅｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗｏｌｆ（１９８８）Ｃａｂｉｏｓ  ４：１８１−１８６；または、Ｈｏｐｐ  ａｎｄ  Ｗｏｏｄｓ（１９８３）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４８３−４８９のアルゴリズム）を使用して、ポリペプチド標的から選択することができる。
【０１２２】
抗原の精製は抗体の作成に必須ではない。免疫化は、ＤＮＡベクターでの免疫化によって行うことができる（例えば、Ｗａｎｇら（１９９７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２２８：２７８−２８４を参照のこと）。あるいは、動物は、目的の抗原を有している細胞で免疫化させることができる。その後、脾細胞を免疫化された動物から単離することができ、そして脾細胞は、ハイブリドーマを産生するように、骨髄腫細胞株と融合させることができる。得られたハイブリドーマは、機能のアッセイまたは生物学的アッセイによって所望される抗体の産生についてスクリーニングすることができる。すなわち、アッセイは、精製された抗原の所有には依存しない。細胞での免疫化は、精製された抗原での免疫化よりも抗体の作成について優れていることを立証することができる（例えば、Ｍｅｙａａｒｄら（１９９７）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７：２８３−２９０；Ｗｒｉｇｈｔら（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：２３３−２４２；Ｐｒｅｓｔｏｎら（１９９７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：１９１１−１９１８；Ｋａｉｔｈａｍａｎａら（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１６３：５１５７−５１６４を参照のこと）。
【０１２３】
抗体のスクリーニングおよび抗原結合特性は、例えば、表面プラズモン共鳴または酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって測定することができる。本発明の抗体は、抗体の標的抗原および関連する結合したタンパク質を単離することにおいて、アフィニティークロマトグラフィーに使用することができる。本発明により、抗腫瘍治療のための高力価抗体（ｈｉｇｈ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、中力価抗体（ｍｏｄｅｒａｔｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、および低力価抗体（ｌｏｗ  ａｎｔｏｂｏｄｙ）が提供される。腫瘍の治療においては、高親和性抗体は表面に結合するだけであるが、一方、中親和性抗体（ｍｏｄｅｒａｔｅ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）は腫瘍全体に広がることができ、より高い治療効果を生じ得る（例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎら（２００４）Ｊ．Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｒｅｓ．３：２２８−２３４；Ｓａｎｔａｌａ  ａｎｄ  Ｓａｖｉｒａｎｔａ（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４：１５９−１６３；Ｌｅｕｋｉｎｇら（２００３）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ２：１３４２−１３４９；Ｓｅｉｄｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｉｔｔ（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２６７：１６５−１７１；Ｎｅｒｉら（１９９７）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：１２７１−１２７５；Ｊｏｎｓｓｏｎら（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７；Ｈｕｂｂｌｅ（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １８：３０５−３０６；Ｗｉｌｃｈｅｋら（１９８４）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１０４：３−５５；Ａｄａｍｓら（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：４８５；Ａｄａｍｓら、（２００１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：４７５０を参照のこと）。
【０１２４】
抗原、抗原性断片、およびエピトープは、本発明の抗体の作成での使用に利用可能である（表３）。例えば、抗体を作成するために、および抗原を発現する組換え体である細菌を調製するためにも、抗原の発現に使用される核酸もまた利用可能である（表３）。
【０１２５】
ＩＶ．Ｆｃ領域改変体
いくつかの抗体エフェクター機能はＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって媒介される。Ｆｃ受容体は抗体のＦｃ領域に結合する。ＦｃＲは、免疫グロブリンイソ型に対するそれらの特異性によって定義され；ＩｇＧ抗体に対するＦｃ受容体はＦｃγＲと呼ばれ、ＩｇＥに対するＦｃ受容体はＦｃεＲと呼ばれ、ＩｇＡに対するＦｃ受容体はＦｃαＲと呼ばれるなどである。ＦｃγＲの３つのサブクラスが同定されている：ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）。個々のＦｃγＲサブクラスは２つまたは３つの遺伝子によってコードされており、そして異なるＲＮＡスプライシングによって複数の転写物へと導かれるので、ＦｃγＲイソ型には広範な多様性が存在している。ＦｃγＲＩサブクラス（ＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＢ、およびＦｃγＲＩＣ）をコードする３種類の遺伝子は、染色体１の長いアームの領域１ｑ２１にクラスターを形成しており；ＦｃγＲＩＩイソ型（ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、およびＦｃγＲＩＩＣ）をコードする遺伝子とＦｃγＲＩＩＩ（ＦｃγＲＩＩＩＡおよびＦｃγＲＩＩＩＢ）をコードする２つの遺伝子は全て、領域１ｑ２２にクラスターを形成している。これらの異なるＦｃＲサブタイプは様々な細胞のタイプ上で発現させられる（例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２を参照のこと）。例えば、ヒトにおいては、ＦｃγＲＩＩＩＢは、好中球上でしか見られないが、ＦｃγＲＩＩＩＡはマクロファージ、単球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、およびＴ細胞のサブ集団上で見られる。注目すべきは、ＦｃγＲＩＩＩＡは、ＡＤＣＣに関与している細胞のタイプのうちの１つであるＮＫ細胞上に存在しているＦｃＲだけである（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号を参照のこと）。
【０１２６】
ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩは免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）の受容体である；ＦｃγＲＩは、その細胞外ドメインの中に３個のＩｇＳＦドメインを有しており、一方、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩはそれらの細胞外ドメインの中に２つしかＩｇＳＦドメインを有していない（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号）。
【０１２７】
本発明での使用に利用可能なものは、Ｆｃ領域が含まれているもとのポリペプチドの改変体である。この改変体は、親ポリペプチドよりも、ヒトエフェクター細胞の存在下でＡＤＣＣをより効率よく媒介するか、またはＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）により高い親和性で結合し、そしてＦｃ領域の中に少なくとも１つのアミノ酸改変が含まれる。このポリペプチドのＦｃ領域には、通常、ヒトＦｃ領域（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）が含まれる。ポリペプチド改変体にはまた、典型的には、Ｆｃ領域の２５６位、２９０位、２９８位、３１２位、３２６位、３３０位、３３３位、３３４位、３６０位、３７８位、または４３０位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にアミノ酸改変（例えば、置換）も含まれ、Ｆｃ領域中の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔと同じＥＵ  ｉｎｄｅｘのナンバリングである（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号）。
【０１２８】
加えて、利用可能なものは、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）結合親和性が変化している改変体Ｆｃ領域が含まれているポリペプチドである。このポリペプチドには、Ｆｃ領域の２３８位、２３９位、２４８位、２４９位、２５２位、２５４位、２５５位、２５６位、２５８位、２６５位、２６７位、２６８位、２６９位、２７０位、２７２位、２７６位、２７８位、２８０位、２８３位、２８５位、２８６位、２８９位、２９０位、２９２位、２９４位、２９５位、２９６位、２９８位、３０１位、３０３位、３０５位、３０７位、３０９位、３１２位、３１５位、３２０位、３２２位、３２４位、３２６位、３２７位、３２９位、３３０位、３３１位、３３３位、３３４位、３３５位、３３７位、３３８位、３４０位、３６０位、３７３位、３７６位、３７８位、３８２位、３８８位、３８９位、３９８位、４１４位、４１６位、４１９位、４３０位、４３４位、４３５位、４３７位、または４３９位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にアミノ酸改変が含まれ、Ｆｃ領域中の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔと同じＥＵ  ｉｎｄｅｘのナンバリングである。改変体Ｆｃ領域には、極めて多くの場合に、改変体ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域（例えば、改変体ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）が含まれている。親ポリペプチドが非ヒトマウスＦｃ領域を有している場合には、本明細書中で特定された残基とは異なる残基がＦｃＲの結合に影響を与える可能性がある。例えば、マウスＩｇＧ２ｂ／マウスＦｃγＲＩＩシステムにおいては、ＩｇＧ  Ｅ３１８が結合に重要であることが明らかにされているが（Ｌｕｎｄら（１９９２）Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５３−５９）、一方、Ｅ３１８ＡはヒトＩｇＧ／ヒトＦｃγＲＩＩシステムにおいては効果がない（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号を参照のこと）。
【０１２９】
ポリペプチド改変体は、ＦｃγＲＩに対する結合の低下を示し得、これには、Ｆｃ領域の２３８位、２６５位、２６９位、２７０位、３２７位、または３２９位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にアミノ酸改変が含まれ、Ｆｃ領域中の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔと同じＥＵ  ｉｎｄｅｘのナンバリングである（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号）
ポリペプチド改変体は、ＦｃγＲＩＩに対する結合の低下を示し得、これには、Ｆｃ領域の２３８位、２６５位、２６９位、２７０位、２９２位、２９４位、２９５位、２９８位、３０３位、３２４位、３２７位、３２９位、３３３位、３３５位、３３８位、３７３位、３７６位、４１４位、４１６位、４１９位、４３５位、４３８位、または４３９位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にアミノ酸改変が含まれ、Ｆｃ領域中の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔと同じＥＵ  ｉｎｄｅｘのナンバリングである（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号）
目的のポリペプチド改変体は、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合の低下を示し得、これには、Ｆｃ領域の２３８位、２３９位、２４８位、２４９位、２５２位、２５４位、２６５位、２６８位、２６９位、２７０位、２７２位、２７８位、２８９位、２９３位、２９４位、２９５位、２９６位、３０１位、３０３位、３２２位、３２７位、３２９位、３３８位、３４０位、３７３位、３７６位、３８２位、３８８位、３８９位、４１６位、４３４位、４３５位、または４３７位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にアミノ酸改変が含まれ、Ｆｃ領域中の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔと同じＥＵ  ｉｎｄｅｘのナンバリングである（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号）。
【０１３０】
別の態様においては、ＦｃγＲ結合親和性が変化しているポリペプチド改変体は、ＦｃγＲに対する結合の改善を示し、そしてこれには、Ｆｃ領域の２５５位、２５６位、２５８位、２６７位、２６８位、２７２位、２７６位、２８０位、２８３位、２８５位、２８６位、２９０位、２９８位、３０１位、３０５位、３０７位、３０９位、３１２位、３１５位、３２０位、３２２位、３２６位、３３０位、３３１位、３３３位、３３４位、３３７位、３４０位、３６０位、３７８位、３９８位、または４３０位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にアミノ酸改変が含まれ、Ｆｃ領域中の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔと同じＥＵ  ｉｎｄｅｘのナンバリングである（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号）。
【０１３１】
例えば、ポリペプチド改変体は、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合の増大を示し得、そして状況に応じて、さらにＦｃγＲＩＩに対する結合の低下を示し得る。例示的なそのような改変体には、Ｆｃ領域の２９８位および／または３３３位にアミノ酸改変が含まれ、Ｆｃ領域中の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔと同じＥＵ  ｉｎｄｅｘのナンバリングである（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号）。
【０１３２】
ポリペプチド改変体は、ＦｃγＲＩＩに対する結合の増大を示し得、そしてＦｃ領域の２５５位、２５６位、２５８位、２６７位、２６８位、２７２位、２７６位、２８０位、２８３位、２８５位、２８６位、２９０位、３０１位、３０５位、３０７位、３０９位、３１２位、３１５位、３２０位、３２２位、３２６位、３３０位、３３１位、３３７位、３４０位、３７８位、３９８位、または４３０位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にアミノ酸改変が含まれ、Ｆｃ領域の中の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔと同じＥＵ  ｉｎｄｅｘのナンバリングである。ＦｃγＲＩＩに対する結合の増大を有しているそのようなポリペプチド改変体は、状況に応じてさらに、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合の低下を示し得、そして例えば、Ｆｃ領域の２６８位、２７２位、２９８位、３０１位、３２２位、または３４０位のアミノ酸位置の任意の１つ以上のアミノ酸改変が含まれ、Ｆｃ領域中の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔと同じＥＵ  ｉｎｄｅｘのナンバリングである（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号）。
【０１３３】
新生児性のＦｃ受容体（ＦｃＲｎ）結合親和性が変更されている改変体Ｆｃ領域が含まれているポリペプチドもまた、利用可能である。このポリペプチドには、Ｆｃ領域の２３８位、２５２位、２５３位、２５４位、２５５位、２５６位、２６５位、２７２位、２８６位、２８８位、３０３位、３０５位、３０７位、３０９位、３１１位、３１２位、３１７位、３４０位、３５６位、３６０位、３６２位、３７６位、３７８位、３８０位、３８２位、３８６位、３８８位、４００位、４１３位、４１５位、４２４位、４３３位、４３４位、４３５位、４３６位、４３９位、または４４７位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にアミノ酸改変が含まれ、Ｆｃ領域中の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔと同じＥＵ  ｉｎｄｅｘのナンバリングである。ＦｃＲｎに対する結合が低下しているそのようなポリペプチド改変体には、Ｆｃ領域の２５２位、２５３位、２５４位、２５５位、２８８位、３０９位、３８６位、３８８位、４００位、４１５位、４３３位、４３５位、４３６位、４３９位、または４４７位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にアミノ酸改変が含まれ得、Ｆｃ領域中の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔと同じＥＵ  ｉｎｄｅｘのナンバリングである。あるいは、上記のポリペプチド改変体は、ＦｃＲｎに対する結合の増大を示し得、そしてこれには、Ｆｃ領域の２３８位、２５６位、２６５位、２７２位、２８６位、３０３位、３０５位、３０７位、３１１位、３１２位、３１７位、３４０位、３５６位、３６０位、３６２位、３７６位、３７８位、３８０位、３８２位、４１３位、４２４位、または４３４位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にアミノ酸改変が含まれ、Ｆｃ領域中の残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔと同じＥＵ  ｉｎｄｅｘのナンバリングである（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号）。
【０１３４】
Ｆｃ領域改変体は、以下のように分類することができる。結合特性とＦｃ領域中での置換の位置とが列挙される：
クラス１Ａ。全てのＦｃγＲに対する結合が低下している（２３８、２６５、２６９、２７０、２９７＊、３２７、３２９）。アスタリスク＊は、グリコシル化されたバージョンを意味する。
【０１３５】
クラス１Ｂ。ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩの両方に対する結合が低下している（２３９、２９４、２９５、３０３、３３８、３７３、３７６、４１６、４３５）。
【０１３６】
クラス２。ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩの両方に対する結合が改善されている（２５６、２９０、３１２、３２６、３３０、３３９＊、３７８、４３０）。アスタリスク＊は、記載される他のＦｃ改変と組み合わされていることが好ましいことを意味する（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号）。
【０１３７】
クラス３。ＦｃγＲＩＩに対する結合が改善されており、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合には影響はない（２５５、２５８、２６７、２７６、２８０、２８３、２８５、２８６、３０５、３０７、３０９、３１５、３２０、３３１、３３７、３９８）。
【０１３８】
クラス４。ＦｃγＲＩＩに対する結合が改善されており、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合は低下している（２６８、２７２、３０１、３２２、２４０）。
【０１３９】
クラス５。ＦｃγＲＩＩに対する結合が低下しており、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合には影響はない（２９２、３２４、３３５、４１４、４１９、４３８、４３９）。
【０１４０】
クラス６。ＦｃγＲＩＩに対する結合が低下しており、そしてＦｃγＲＩＩＩに対する結合は改善されている（２９８、３３３）。
【０１４１】
クラス７。ＦｃγＲＩＩに対する結合には影響はなく、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合は低下している（２４８、２４９、２５２、２５４、２７８、２８９、２９３、２９６、３３８、３８２、３８８、３８９、４３４、４３７）。
【０１４２】
クラス８。ＦｃγＲＩＩに対する結合には影響はなく、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合は改善されている（３３４、３６０）。
【０１４３】
ＡＤＣＣ活性が改善されたＦｃ領域を作成するためには、本発明のポリペプチドは、既存のＡＤＣＣ活性を有していることが好ましい。例えば、これには、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域が含まれる。１つの態様においては、ＡＤＣＣが改善されている改変体は、天然配列ＩｇＧ１またはＩｇＧ３  Ｆｃ領域と、改変体の抗原結合領域とを有している抗体よりも実質的により効率よくＡＤＣＣを媒介する。別の態様としては、改変体には、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、および３３４位の残基のうちの２個または３個の置換が含まれるか、または本質的にそれらから構成される。最も通常には、２９８位、３３３位、および３３４位の残基が（例えば、アラニン残基で）置換される。さらに、ＡＤＣＣ活性が改善されているＦｃ領域改変体を作成するためには、当業者は、一般的には、ＡＤＣＣを媒介するために重要なＦｃＲであると思われるＦｃγＲＩＩＩに対する結合親和性が改善されているＦｃ領域改変体となるように操作するであろう。例えば、当業者は、そのような改変体を作成するために、２５６位、２９０位、２９８位、３１２位、３２６位、３３０位、３３３位、３３４位、３６０位、３７８位、または４３０位のアミノ酸位置の任意の１つ以上に、親Ｆｃ領域中にアミノ酸改変（例えば、置換）を導入することができる。ＦｃγＲＩＩＩに対する結合親和性が改善されている改変体はさらに、ＦｃγＲＩＩに対して低い結合親和性、特に、阻害性ＦｃγＲＩＩＢ受容体に対する低い親和性を有し得る（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号）。
【０１４４】
アミノ酸改変（単数または複数）は、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインに導入することができる。ＣＨ２ドメインはＦｃＲ結合活性に重要であるが、これはまた、そのより低いヒンジ領域（ｌｏｗｅｒ  ｈｉｎｇｅ  ｒｅｇｉｏｎ）以外のＦｃ領域の一部にもなり得る。
【０１４５】
Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）結合親和性または活性が変化している改変体ＩｇＧ  Ｆｃ領域を作成するための改変に有用なアミノ酸位置としては、Ｆｃ領域の２３８位、２３９位、２４８位、２４９位、２５２位、２５４位、２５５位、２５６位、２５８位、２６５位、２６７位、２６８位、２６９位、２７０位、２７２位、２７６位、２７８位、２８０位、２８３位、２８５位、２８６位、２８９位、２９０位、２９２位、２９３位、２９４位、２９５位、２９６位、２９８位、３０１位、３０３位、３０５位、３０７位、３０９位、３１２位、３１５位、３２０位、３２２位、３２４位、３２６位、３２７位、３２９位、３３０位、３３１位、３３３位、３３４位、３３５位、３３７位、３３８位、３４０位、３６０位、３７３位、３７６位、３７８位、３８２位、３８８位、３８９位、３９８位、４１４位、４１６位、４１９位、４３０位、４３４位、４３５位、４３７位、４３８位、または４３９位のアミノ酸位置の任意の１つ以上が挙げられる。通常は、そのような改変体を作成するための鋳型として使用されるもとのＦｃ領域には、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域が含まれる。残基３３１が置換される場合には、親Ｆｃ領域は、好ましくは、ヒト以外の天然配列ＩｇＧ３であり、または３３１位に置換が含まれている改変体Ｆｃ領域は、好ましくは、ＦｃＲに対する結合（例えば、ＦｃγＲＩＩに対して）の増大を示す（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号）。
【０１４６】
ＦｃγＲに対する結合が低下しているＦｃ領域改変体を作成するためには、当業者は、Ｆｃ領域の２３８位、２３９位、２４８位、２４９位、２５２位、２５４位、２６５位、２６８位、２６９位、２７０位、２７２位、２７８位、２８９位、２９２位、２９３位、２９４位、２９５位、２９６位、２９８位、３０１位、３０３位、３２２位、３２４位、３２７位、３２９位、３３３位、３３５位、３３８位、３４０位、３７３位、３７６位、３８２位、３８８位、３８９位、４１４位、４１６位、４１９位、４３４位、４３５位、４３７位、４３８位、または４３９位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にアミノ酸改変を導入することができる。
【０１４７】
ＦｃγＲＩに対する結合の低下を示す改変体としては、２３８位、２６５位、２６９位、２７０位、３２７位、または３２９位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にＦｃ領域のアミノ酸改変が含まれている改変体が挙げられる。
【０１４８】
ＦｃγＲＩＩに対する結合の低下を示す改変体としては、２３８位、２６５位、２６９位、２７０位、２９２位、２９４位、２９５位、２９８位、３０３位、３２４位、３２７位、３２９位、３３３位、３３５位、３３８位、３７３位、３７６位、４１４位、４１６位、４１９位、４３５位、４３８位、または４３９位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にＦｃ領域のアミノ酸改変が含まれている改変体が挙げられる。
【０１４９】
ＦｃγＲＩＩＩに対する結合の低下を示すＦｃ領域改変体としては、２３８位、２３９位、２４８位、２４９位、２５２位、２５４位、２６５位、２６８位、２６９位、２７０位、２７２位、２７８位、２８９位、２９３位、２９４位、２９５位、２９６位、３０１位、３０３位、３２２位、３２７位、３２９位、３３８位、３４０位、３７３位、３７６位、３８３位、３８８位、３８９位、４１６位、４３４位、４３５位、または４３７位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にＦｃ領域のアミノ酸改変が含まれている改変体が挙げられる（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号）。
【０１５０】
１つ以上のＦｃγＲに対する結合が改善されている改変体もまた作成することができる。そのようなＦｃ領域改変体には、Ｆｃ領域の２５５位、２５６位、２５８位、２６７位、２６８位、２７２位、２７６位、２８０位、２８３位、２８５位、２８６位、２９０位、２９８位、３０１位、３０５位、３０７位、３０９位、３１２位、３１５位、３２０位、３２２位、３２６位、３３０位、３３１位、３３３位、３３４位、３３７位、３４０位、３６０位、３７８位、３９８位、または４３０位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にアミノ酸改変が含まれ得る。
【０１５１】
例えば、ＦｃγＲ結合活性が改善されている改変体は、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合の増大を示し得、そして状況に応じてさらに、ＦｃγＲＩＩに対する結合の低下を示し得る；例えば、改変体には、Ｆｃ領域の２９８位および／または３３３位にアミノ酸改変が含まれ得る。
【０１５２】
ＦｃγＲＩＩに対する結合が増大している改変体には、Ｆｃ領域の２５５位、２５６位、２５８位、２６７位、２６８位、２７２位、２７６位、２８０位、２８３位、２８５位、２８６位、２９０位、３０１位、３０５位、３０７位、３０９位、３１２位、３１５位、３２０位、３２２位、３２６位、３３０位、３３１位、３３７位、３４０位、３７８位、３９８位、または４３０位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にアミノ酸改変が含まれている改変体が挙げられる。そのような改変体はさらに、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合の低下も示し得る。例えば、これらには、２６８位、２７２位、２９８位、３０１位、３２２位、または３４０位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にＦｃ領域のアミノ酸改変が含まれ得る（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号）。
【０１５３】
ＦｃγＲに対する結合を変化させることが好ましいが、新生児性の受容体（ＦｃＲｎ）に対する結合親和性が変化しているＦｃ領域改変体もまた意図される。ＦｃＲｎに対する親和性が改善されているＦｃ領域改変体はより長い血清半減期を有すると予想され、そしてそのような分子は、例えば、慢性疾患または障害を処置するために、投与されるポリペプチドのより長い半減期が所望される場合には、哺乳動物の処置方法において有用な用途を有するであろう。対照的に、ＦｃＲｎ結合親和性が低下しているＦｃ領域改変体は、より短い半減期を有すると予想され、そしてそのような分子は、例えば、（例えば、インビボでの診断用の画像化のために、またはより長い期間にわたり血流中に循環させる場合に毒性の副作用を有しているポリペプチドについてなど）循環時間の短縮が有効であり得る場合に、哺乳動物に投与することができる。ＦｃＲｎ結合親和性が低下しているＦｃ領域改変体は、胎盤を横切ることはほとんどないと予想され、したがって、妊娠中の女性の疾患または障害の処置に利用することができる（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号）。
【０１５４】
ＦｃＲｎに対する結合親和性が変化しているＦｃ領域改変体としては、２３８位、２５２位、２５３位、２５４位、２５５位、２５６位、２６５位、２７２位、２８６位、２８８位、３０３位、３０５位、３０７位、３０９位、３１１位、３１２位、３１７位、３４０位、３５６位、３６０位、３６２位、３７６位、３７８位、３８０位、３８２位、３８６位、３８８位、４００位、４１３位、４１５位、４２４位、４３３位、４３４位、４３５位、４３６位、４３９位、または４４７位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にＦｃ領域のアミノ酸改変が含まれている改変体が挙げられる。ＦｃＲｎに対する結合の低下を示す改変体には、一般的には、２５２位、２５３位、２５４位、２５５位、２８８位、３０９位、３８６位、３８８位、４００位、４１５位、４３３位、４３５位、４３６位、４３９位、または４４７位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にＦｃ領域のアミノ酸改変が含まれるであろう；そしてＦｃＲｎに対する結合が増大している改変体には、通常、２３８位、２５６位、２６５位、２７２位、２８６位、３０３位、３０５位、３０７位、３１１位、３１２位、３１７位、３４０位、３５６位、３６０位、３６２位、３７６位、３７８位、３８０位、３８２位、４１３位、４２４位、または４３４位のアミノ酸位置の任意の１つ以上にＦｃ領域のアミノ酸改変が含まれるであろう（Ｐｒｅｓｔａに交付された米国特許第６，７３７，０５６号）。
【０１５５】
さらに、本発明には、抗体の機能的特性または薬物動態特性を変化させるためにＦｃ領域の中に１つ以上の変更が作成されている抗体の使用が含まれる。そのような変更により、Ｃ１ｑ結合およびＣＤＣ（補体依存性細胞傷害性）の低下または増大、あるいは、ＦｃγＲ結合と抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の低下または増大が生じ得る。置換は、例えば、重鎖定常領域の２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２９７位、３１８位、３２０位、および３２２位のアミノ酸位置の１つ以上に作成することができ、それによって、改変されていない抗体と比較して、エフェクター機能の変化が生じ、一方、抗原に対する結合は維持される（例えば、いずれもＷｉｎｔｅｒらに交付された、米国特許第５，６２４，８２１号および同第５，６４８，２６０号を参照のこと）。さらなる参考文献は、ＡＤＣＣを増大させる変更されたＦｃ領域を有している抗体が開示されているＷＯ００／４２０７２、およびＦｃＲＩに結合する抗体の能力を変化させ、それによってＣ１ｑに結合する抗体の能力を低下させ、次いで固定成分（ｆｉｘ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）に対する抗体の能力を低下させる、ＣＨ２ドメインのＮ末端領域に変異を有している抗体が開示されているＷＯ９４／２９３５１が含まれ得る。Ｓｈｉｅｌｄｓは、組み合わせ改変体、例えば、Ｔ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、およびＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｌ３３４Ａを教示しており、これによってＦｃγＲＩＩＩに対する結合が改善されている（Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４）（Ｔｅｅｌｉｎｇらの米国特許出願番号２００４／０２０８８７３）。
【０１５６】
様々なＩｇＧサブクラスは、ＦｃγＲに対して様々な親和性を有しており、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、通常、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４よりも受容体に対して実質的により良好に結合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａら（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３０：４８７−４９０；Ｊｅｆｆｅｒｉｓら（２００２）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ８２：５７−６５を参照のこと）。ＦｃγＲは全て、ＩｇＧ  Ｆｃの同じ領域に結合するが、なおも異なる親和性を有する：高親和性結合因子であるＦｃγＲＩは、ＩｇＧ１については１０−８Ｍ−１のＫｄを有しており、一方、低親和性受容体であるＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩは、一般的には、それぞれ、１０−６および１０−５で結合する。ＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂの細胞外ドメインは９６％同一であるが、ＦｃγＲＩＩＩｂには細胞内シグナル伝達ドメインは含まれていない（Ｔｅｅｌｉｎｇらの米国特許出願番号２００４／０２０８８７３）。さらに、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ／ｃ、およびＦｃγＲＩＩＩａは、免疫受容体チロシンをベースとする活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を有している細胞内ドメインを有していることを特徴とする、免疫複合体によって誘発される活性化のポジティブな調節因子であるが、ＦｃγＲＩＩｂは、チロシンをベースとする阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を有しており、したがって阻害性である。このように、前者は活性化受容体と呼ばれ、そしてＦｃγＲＩＩｂは阻害性受容体と呼ばれる。受容体はまた、様々な免疫細胞での発現パターンと、そしてレベルも異なる。なお別のレベルの複雑さは、ヒトのプロテオームの中の多数のＦｃγＲ多型性の存在でもある。臨床的有意性のある特に関係する多型は、Ｖ１５８／Ｆ１５８  ＦｃγＲＩＩＩａである。ヒトＩｇＧ１は、Ｆ１５８アロタイプよりもＶ１５８アロタイプに対してより大きな親和性で結合する。この親和性の差、ならびにおそらくは、ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰに対するその効果は、抗ＣＤ２０抗体リツキシマブの効力についての有意な決定要因であることが示されている。Ｖ１５８アロタイプを有している患者は、リツキシマブでの処置に対して好ましく応答する；しかし、親和性が低いＦ１５８アロタイプを有している患者はほとんど応答しない（Ｃａｒｔｒｏｎら（２００２）Ｂｌｏｏｄ  ９９：７５４−７５８）。およそ１０〜２０％のヒトは、Ｖ１５８／Ｖ１５８ホモ接合型であり、４５％はＶ１５８／Ｆ１５８ヘテロ接合型であり、そして３５〜４５％のヒトはＦ１５８／Ｆ１５８ホモ接合型である（Ｌｅｈｒｅｎｂｅｃｈｅｒら（１９９９）Ｂｌｏｏｄ  ９４：４２２０−４２３２；Ｃａｒｔｒｏｎら（２００２）Ｂｌｏｏｄ  ９９：７５４−７５８）。したがって、８０〜９０％のヒトは弱いレスポンダーであり、すなわち、彼らはＦ１５８  ＦｃγＲＩＩＩａの少なくとも１つの対立遺伝子を有している（Ｌａｚａｒらの米国特許出願番号２００５／００５４８３２）。
【０１５７】
本発明における用途のために、１つ以上の本明細書中の実験方法を用いて性質決定されているＦｃ改変体もまた、利用可能である。１つの局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される位置における、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：
【０１５８】
【数１−１】
2009504787.tif 000003
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである。１つの局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される位置における、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：
【０１５９】
【数１−２】
2009504787.tif 000004
【０１６０】
【数２−１】
2009504787.tif 000005
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである。好ましい局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：
【０１６１】
【数２−２】
2009504787.tif 000006
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである。種々の代替の局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される：
【０１６２】
【数２−３】
2009504787.tif 000007
【０１６３】
【数３】
2009504787.tif 000008
【０１６４】
【数４−１】
2009504787.tif 000009
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである（Ｌａｓａｒらの米国特許出願第２００５／００５４８３２号）。
【０１６５】
本発明における用途のために、以下からなる群より選択されるＦｃ改変体もまた、利用可能である：
【０１６６】
【数４−２】
2009504787.tif 000010
【０１６７】
【数５】
2009504787.tif 000011
【０１６８】
【数６−１】
2009504787.tif 000012
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである（Ｌａｓａｒらの米国特許出願第２００５／００５４８３２号）。
【０１６９】
本発明における用途のために、１つ以上のＦｃγＲに対してより高い親和性で結合するＦｃ改変体もまた、利用可能である。１つの局面において、このＦｃ改変体は、親ＦｃポリペプチドのＦｃγＲについての親和性よりも、１倍より高いＦｃγＲについての親和性を有する。代替の局面において、このＦｃ改変体は、親ＦｃポリペプチドのＦｃγＲについての親和性よりも、５倍より高いＦｃγＲについての親和性を有する。好ましい局面において、このＦｃ改変体は、親ＦｃポリペプチドのＦｃγＲについての親和性よりも、５倍〜３００倍高いＦｃγＲについての親和性を有する。１つの局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される位置における、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：
【０１７０】
【数６−２】
2009504787.tif 000013
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである。好ましい局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：
【０１７１】
【数６−３】
2009504787.tif 000014
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである。最も好ましい局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される：
【０１７２】
【数６−４】
2009504787.tif 000015
【０１７３】
【数７−１】
2009504787.tif 000016
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである（Ｌａｓａｒらの米国特許出願第２００５／００５４８３２号）。
【０１７４】
１つの局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される位置における、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：
【０１７５】
【数７−２】
2009504787.tif 000017
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである。代表的な局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：
【０１７６】
【数７−３】
2009504787.tif 000018
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである。別の代表的な局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される：
【０１７７】
【数７−４】
2009504787.tif 000019
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである（Ｌａｓａｒらの米国特許出願第２００５／００５４８３２号）。
【０１７８】
本発明における用途のために、エフェクター細胞の存在下で、より効果的にエフェクター機能を媒介するＦｃ改変体もまた、利用可能である。１つの局面において、このＦｃ改変体は、親Ｆｃポリペプチドによって媒介されるよりも、より大きなＡＤＣＣを媒介する。代表的な局面において、このＦｃ改変体は、親Ｆｃポリペプチドによって媒介されるよりも、５倍より大きなＡＤＣＣを媒介する。より代表的な局面において、このＦｃ改変体は、親Ｆｃポリペプチドによって媒介されるよりも、５倍〜１０００倍大きなＡＤＣＣを媒介する。１つの局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される位置における、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：
【０１７９】
【数７−５】
2009504787.tif 000020
【０１８０】
【数８−１】
2009504787.tif 000021
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである。通常の局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：
【０１８１】
【数８−２】
2009504787.tif 000022
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである。より通常の局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される：
【０１８２】
【数８−３】
2009504787.tif 000023
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである（Ｌａｓａｒらの米国特許出願第２００５／００５４８３２号）。
【０１８３】
本発明における用途のために、１つ以上のＦｃγＲに対してより低い親和性で結合するＦｃ改変体もまた、提供される。１つの局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される位置における、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：
【０１８４】
【数８−４】
2009504787.tif 000024
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである。通常の局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される位置における、アミノ酸置換を含む：
【０１８５】
【数９−１】
2009504787.tif 000025
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである。より通常の局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される：
【０１８６】
【数９−２】
2009504787.tif 000026
【０１８７】
【数１０−１】
2009504787.tif 000027
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである（Ｌａｓａｒらの米国特許出願第２００５／００５４８３２号）。
【０１８８】
エフェクター細胞の存在下で、ＡＤＣＣを媒介する効果がより低いＦｃ改変体が、使用され得る。１つの局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される位置における、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：
【０１８９】
【数１０−２】
2009504787.tif 000028
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである。通常の局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される位置における、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：
【０１９０】
【数１０−３】
2009504787.tif 000029
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである。従来的な局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される：
【０１９１】
【数１０−４】
2009504787.tif 000030
【０１９２】
【数１１−１】
2009504787.tif 000031
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである（Ｌａｓａｒらの米国特許出願第２００５／００５４８３２号）。
【０１９３】
親Ｆｃポリペプチドの非グリコシル化形態と比較して改善された機能および／または溶解特性を有するＦｃ改変体が、使用され得る。本明細書中の改善された機能としては、Ｆｃリガンドに対する結合親和性が挙げられるが、これに限定されない。本明細書中の改善された溶解特性としては、安定性および溶解性が挙げられるが、これに限定されない。１つの局面において、この非グリコシル化Ｆｃ改変体は、グリコシル化親Ｆｃポリペプチドに匹敵するかこれより高い親和性で、ＦｃγＲに結合する。代替の局面において、このＦｃ改変体は、親Ｆｃポリペプチドのグリコシル化形態の０．４倍以内の親和性で、ＦｃγＲに結合する。１つの局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される位置における、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む：
【０１９４】
【数１１−２】
2009504787.tif 000032
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである。通常の局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される、アミノ酸置換を含む：
【０１９５】
【数１１−３】
2009504787.tif 000033
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである。最も好ましい局面において、このＦｃ改変体は、以下からなる群より選択される：
【０１９６】
【数１１−４】
2009504787.tif 000034
【０１９７】
【数１２】
2009504787.tif 000035
ここで、このＦｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵ  ｉｎｄｅｘの番号付けである（Ｌａｓａｒらの米国特許出願第２００５／００５４８３２号）。
【０１９８】
ＦｃγＲＩＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩａに対する親和性が高くなるように変更された変異体もまた提供される。ＦｃγＲＩＩＩａに対して高い親和性を有しており、ＦｃγＲＩＩＢに対しては低い親和性を有しているかまたは親和性を有していない変異体もまた提供される。さらに、ＦｃγＲＩＩＩＡおよびＦｃγＲＩＩＢに対して高い親和性を有している変異体が提供される（Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎらの米国特許出願番号２００５／０００６４５１４）。
【０１９９】
Ｖ．腫瘍細胞、感染性物質などの抗原に対する抗体
本発明では、表３のタンパク質、またはタンパク質に由来するオリゴペプチドもしくはエピトープに特異的に結合する抗体、または抗体に由来する結合化合物を利用することができる。本発明ではまた、表３の、少なくとも１つのタンパク質、またはタンパク質に由来するオリゴペプチドもしくはエピトープをコードする核酸が含まれている、細菌のゲノム（例えば、リステリアのゲノム）または細菌（例えば、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）も利用することができる。核酸は、プラスミドベースであるか、または染色体ベースであり得る。すなわち、核酸は、細菌のゲノムに組み込むことができる。コードされるタンパク質は、細胞内（細菌内）にあるように、細菌から分泌されるように、細菌の細胞壁に結合するように、そして／または細菌の細胞膜に結合するように操作することができる。
【０２００】
【化１】
2009504787.tif 000036
【０２０１】
【化２】
2009504787.tif 000037
【０２０２】
【化３】
2009504787.tif 000038
【０２０３】
【化４】
2009504787.tif 000039
【０２０４】
【化５】
2009504787.tif 000040
【０２０５】
【化６】
2009504787.tif 000041
【０２０６】
【化７】
2009504787.tif 000042
【０２０７】
【化８】
2009504787.tif 000043
【０２０８】
【化９】
2009504787.tif 000044
【０２０９】
【化１０】
2009504787.tif 000045
【０２１０】
【化１１】
2009504787.tif 000046
さらなる態様においては、本発明で使用されるＬｉｓｔｅｒｉａ以外の抗原は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に由来し得、例えば、ｇｐ１２０；ｇｐ１６０；ｇｐ４１、ｇａｇ抗原（例えば、ｐ２４  ｇａｇもしくはｐ５５  ｇａｇ）、ならびにＨＩＶのｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｔ、ｖｉｒ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、およびＬＴＲ領域に由来するタンパク質である。意図される異種抗原としては、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１型および２型に由来する抗原、サイトメガロウイルスに由来する抗原、エプスタイン・バーウイルスに由来する抗原、または水痘帯状疱疹ウイルスに由来する抗原が挙げられる。肝炎ウイルス（ｈｅｐｔａｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）（例えば、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、δ型、Ｅ型、またはＧ型肝炎）に由来する抗原もまた意図される。さらに、抗原には、ピコナウイルス科（ポリオウイルス；ライノウイルス）；カルシウイルス科；トガウイルス科（風疹ウイルス；デング熱ウイルス）；フラビウイルス科；コロナウイルス科；レオウイルス科；ビルナウイルス科；ラブドウイルス科；オルトミクソウイルス科；フィロウイルス科；パラミクソウイルス科（おたふく風邪ウイルス；麻疹ウイルス）；ブンヤウイルス科；アレナウイルス科；レトロウイルス科（ＨＴＬＶ−１；ＨＩＶ−１）；パピローマウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルスなどに由来する抗原も含まれる。
【０２１１】
なお別の態様においては、本発明により、例えば以下の、細菌および寄生虫による感染：サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、ボレリア（Ｂｏｒｒｅｌｉａ）、クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、ボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）、プラスモジウム、トキソプラズマ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ、ジフテリア（Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ）、百日咳（Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、破傷風（Ｔｅｔａｎｕｓ）、細菌もしくは真菌による肺炎、中耳炎（Ｏｔｉｔｉｓ  Ｍｅｄｉａ）、淋病（Ｇｏｎｏｅｅｈｅａ）、コレラ（Ｃｈｏｌｅｒａ）、腸チフス（Ｔｙｐｈｏｉｄ）、髄膜炎（Ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ）、伝染性単核症（Ｍｏｎｏｎｕｃｌｅｏｓｉｓ）、疫病（Ｐｌａｇｕｅ）、細菌性赤痢（Ｓｈｉｇｅｌｌｏｓｉｓ）、サルモネラ中毒（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌｏｓｉｓ）、レジオネラ症（Ｌｅｇｉｏｎｅａｉｒｅ'ｓＤｉｓｅａｓｅ）、ライム病（Ｌｙｍｅ  ｄｉｓｅａｓｅ）、ハンセン病（Ｌｅｐｒｏｓｙ）、マラリア（Ｍａｌａｒｉａ）、鉤虫症（Ｈｏｏｋｗｏｒｍ）、オンコセルカ症（Ｏｎｃｈｏｃｅｒｃｉａｓｉｓ）、住血吸虫症（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓ）、トリパノソーマ症（Ｔｒｙｐａｎａｓｏｍｅｓ）、リーシュマニア症（Ｌｅｓｈｍａｎｉａ）、ランブル鞭毛虫症（Ｇｉａｒｄｉａ）、アメーバ症（Ａｍｏｅｂｉａｓｉｓ）、フィラリア症（Ｆｉｌａｒｉａｓｉｓ）、ボレリア（Ｂｏｒｅｌｉａ）、および旋毛虫病（Ｔｒｉｃｈｉｎｏｓｉｓ）を予防および処置する試薬ならびに方法が提供される（例えば、Ｄｅｓｐｏｍｍｉｅｒら（２０００）Ｐａｒａｓｉｔｉｃ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，第４版，Ａｐｐｌｅ  Ｔｒｅｅｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｕ．Ｓ．Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ（２００２）２１ｓｔ  Ｃｅｎｔｕｒｙ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｆｏｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ（ＣＤＣ）Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ（ＥＩＤ）−Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  １９９５  ｔｏ  ２００２  ｗｉｔｈ  Ａｃｃｕｒａｔｅ  ａｎｄ  Ｄｅｔａｉｌｅｄ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｎ  Ｄｏｚｅｎｓ  ｏｆ  Ｓｅｒｉｏｕｓ  Ｖｉｒｕｓ  ａｎｄ  Ｂａｃｔｅｒｉａ  Ｉｌｌｎｅｓｓｅｓ−Ｈａｎｔａｖｉｒｕｓ、Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ，ＡＩＤＳ，Ｍａｌａｒｉａ，ＴＢ，Ｐｏｘ，Ｂｉｏｔｅｒｒｏｒｉｓｍ，Ｓｍａｌｌｐｏｘ，Ａｎｔｈｒａｘ，Ｖａｃｃｉｎｅｓ，Ｌｙｍｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｒａｂｉｅｓ，Ｗｅｓｔ  Ｎｉｌｅ  Ｖｉｒｕｓ，Ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ  Ｆｅｖｅｒｓ，Ｅｂｏｌａ，Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ（Ｃｏｒｅ  Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｅｒｉｅｓ）を参照のこと）。
【０２１２】
ＡＤＣＣを媒介するために本発明において使用される抗体は入手することができ、これには、例えば、メソテリン（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ）、ＰＳＣＡ、プロテイナーゼ−３、ｗｔ−１、ＲＡＳ、または他の抗原に特異的に結合する抗体が含まれる（表４）。本発明によってはまた、腫瘍抗原に特異的に結合する第１の結合部位（第１の抗体に由来する）と、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）；ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；またはＦｃαＲＩ（ＣＤ８９））に特異的に結合する第２の結合部位（第２の抗体に由来する）とが含まれている二重特異的抗体も提供される（例えば、Ｐｅｉｐｐ  ａｎｄ  Ｖａｌｅｒｉｕｓ（２００２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３０：５０７−５１１を参照のこと）。さらに、本発明によってはまた、腫瘍抗原に特異的に結合する第１の結合部位（第１の抗体に由来する）と免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞または単球）の任意の膜会合抗原もしくは膜結合抗原に特異的に結合する第２の結合部位（第２の抗体に由来する）とが含まれている二重特異的抗体も提供される。
【０２１３】
【化１２】
2009504787.tif 000047
【０２１４】
【化１３】
2009504787.tif 000048
【０２１５】
【化１４】
2009504787.tif 000049
【０２１６】
【化１５】
2009504787.tif 000050
【０２１７】
【化１６】
2009504787.tif 000051
ＶＩ．感染の処置
いくつかの態様においては、本発明に利用可能なものは、感染（例えば、肝臓の感染）に対する免疫応答を刺激する方法および試薬である。これらには、向肝性ウイルス、および肝炎を媒介するウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、およびサイトメガロウイルス）による感染が含まれる。本発明により、他の向肝性ウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス、エプスタイン・バーウイルス、およびデング熱ウイルス）を処置する方法が意図される。例えば、ＮＫ細胞は、これらのウイルスに対する免疫応答を媒介することが示されている（例えば、Ａｈｌｅｎｓｔｉｅｌ  ａｎｄ  Ｒｅｈｅｒｍａｎｎ（２００５）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ４１：６７５−６７７；Ｃｈｅｎら（２００５）Ｊ．Ｖｉｒａｌ  Ｈｅｐａｔ．１２：３８−４５；Ｓｕｎ  ａｎｄ  Ｇａｏ（２００４）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１２７：１５２５−１５３９；Ｌｉら（２００４）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．７６：１１７１−１１７９；Ａｈｍａｄ  ａｎｄ  Ａｌｖａｒｅｚ（２００４）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．７６：７４３−７５９；Ｃｏｏｋ（１９９７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．９：１２３９−１２４７；Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｒｉｏｒｄａｎ（２０００）Ｊ．Ｇａｓｔｅｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．１５（補足）Ｇ１７−Ｇ２５；Ｖａｒａｎｉ  ａｎｄ  Ｌａｎｄｉｎｉ（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．４８：３９−４４；Ｒｕｂｉｎ（１９９７）Ｃｌｉｎ．Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ．１：４３９−４５２；Ｌｏｈら（２００５）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７９：６６１−６６７；Ｓｈｒｅｓｔａら（２００４）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ３１９：２６２−２７３；Ｆｊａｅｒら、（２００５）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ９：６８−７３；Ｌｉら（２００４）Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．Ｇａｓｔｅｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１０：３４０９−３４１３；Ｃｏｌｌｉｎら（２００４）Ｊ．Ｈｅｐａｔｏｌ．４１：１７４−１７５；Ｏｈｇａら（２００２）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．４４：２０３−２１５を参照のこと）。
【０２１８】
別の態様においては、本発明により、寄生虫感染（例えば、肝臓の寄生虫感染）を処置する方法および試薬が提供される。これらには、肝吸虫（例えば、Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉｓ、Ｆａｓｃｉｏｌａ  ｈｅｐａｔｉｃａ、Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓ）、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ、Ａｓｃａｒｉｓ  ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ、および蠕虫が含まれるが、これらに限定されない。蠕虫としては、例えば、線虫（回虫）、条虫（サナダムシ）、および吸虫（扁形動物または吸虫類）が挙げられる。ＮＫ細胞、さらには他の免疫細胞は、これらの感染に応答する（例えば、Ｔｌｉｂａら（２００２）Ｖｅｔ．Ｒｅｓ．３３：３２７−３３２；Ｋｅｉｓｅｒ  ａｎｄ  Ｕｔｚｉｎｇｅｒ（２００４）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．５：１７１１−１７２６；Ｋａｅｗｋｅｓ（２００３）Ａｃｔａ  Ｔｒｏｐ．８８：１７７−１８６；Ｓｒｉｖａｔａｎａｋｕｌら（２００４）Ａｓｉａｎ  Ｐａｃ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｅｖ．５：１１８−１２５；Ｓｔｕａｆｆｅｒら（２００４）Ｊ．Ｔｒａｖｅｌ．Ｍｅｄ．１１：１５７−１５９；Ｎｙｌｅｎら（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３１：４５７−４６７；Ｂｕｋｔｅら（２００４）Ａｂｄｏｍ．Ｉｍａｇｉｎｇ  ２９：８２−８４；Ｓｉｎｇｈ  ａｎｄ  Ｓｉｖａｋｕｍａｒ（２００３）４９：５５−６０；Ｗｙｌｅｒ（１９９２）Ｐａｒｉｓｉｔｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ８：２７７−２７９；Ｗｙｎｎら（２００４）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２０１：１５６−１６７；Ａｓｓｅｍａｎら（１９９６）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．５４：１１−２０；Ｂｅｃｋｅｒら（２００３）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．１３０：６５−７４；Ｐｏｃｋｒｏｓ  ａｎｄ  Ｃａｐｏｚｚａ（２００５）Ｃｕｒｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．Ｒｅｐ．７：６１−７０；Ｈｓｉｅｈら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：２６９９−２７０４；Ｋｏｒｔｅｎら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：５１９９−５２０６；Ｐｏｃｋｒｏｓ  ａｎｄ  Ｃａｐｏｚｚａ（２００４）Ｃｕｒｒ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｒｅｐ．６：２８７−２９６を参照のこと）。
【０２１９】
本発明のなお別の態様によっては、細菌感染（例えば、向肝性細菌によるもの）を処置する方法および試薬が提供される。例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ、およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種を処置する方法ならびに試薬が提供される。ＮＫ細胞、さらには、免疫系の他の細胞も、これらの細菌感染に応答する（例えば、Ｃｏｏｋ（１９９７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｇａｓｔｅｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．９：１２３９−１２４７；Ｖａｎｋａｙａｌａｐａｔｉら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：１３０−１３７；Ｓｅｌｌａｔｉら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：４１３１−４１４０；Ｊａｓｏｎら（２０００）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓ．１８２：４７４−４８１；Ｋｉｒｂｙら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：４４５０−４４５９；Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗｉｃｋ（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：２４９６−２５０３；Ｈａｙａｓｈｉら（２００４）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．４３：５２１−５２３；Ａｋｃａｙら（２００４）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒａｃｔ．５８：６２５−６２７；ｄｅ  ｌａ  Ｂａｒｒｅｒａら（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１０５−１１３を参照のこと）。
【０２２０】
ＶＩＩ．感染性因子を含む、リステリア遺伝子およびタンパク質
Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓは、宿主の中での増殖またはコロニー形成に関与している様々な遺伝子および遺伝子産物を発現する（表５）。これらの遺伝子および遺伝子産物のいくつかは、「感染性因子」と分類される。感染性因子は、宿主細胞への細菌の感染を促進する。これらの感染性因子には、ａｃｔＡ、リステリオリジン（ＬＬＯ）、プロテイン６０（ｐ６０）、インターナリンＡ（ｉｎｌＡ）、インターナリンＢ（ｉｎｌＢ）、ホスファチジルコリンホスホリパーゼＣ（ＰＣ−ＰＬＣ）、ホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼＣ（ＰＩ−ＰＬＣ；ｐｌｃＡ遺伝子）が含まれる。多数の他のインターナリン（例えば、ＩｎｌＣ２、ＩｎｌＤ、ＩｎｌＥ、およびＩｎｌＦ）が特性決定されている（Ｄｒａｍｓｉら（１９９７）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ６５：１６１５−１６２５）。Ｍｐｌ（ｐｒｏＰＬ−ＰＬＣをプロセシングして活性なＰＬ−ＰＬＣとするメタロプロテアーゼ）もまた、感染性因子である（Ｃｈａｋｒａｂｏｒｔｙら（２０００）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２９０：１６７−１７４；Ｗｉｌｌｉａｍｓら（２０００）Ｊ．Ｂａｃｔ．１８２：８３７−８４１）。これらの感染性因子、さらには、増殖または拡散に関係している多数の他の因子をコードしている核酸配列は入手することができる（表５）。何ら限定を意味しないが、本発明での使用に利用可能なものは、表５の遺伝子または配列の１つ以上において変更されている、変異されている、または弱毒化されているＬｉｓｔｅｒｉａ細菌である。
【０２２１】
表５により、当業者は、様々なＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株中の対応する遺伝子またはコード配列を同定すること、そして、本発明の方法において使用される弱毒化されたＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓを調製することができる。
【０２２２】
【化１７】
2009504787.tif 000052
【０２２３】
【化１８】
2009504787.tif 000053
ｈｌｙ遺伝子によってコードされるリステリオリジン（ＬＬＯ）は、ファゴリソソームからの、そして宿主細胞の細胞質への細菌の回避を媒介する。ＬＬＯはまた、１つの宿主細胞から近隣の宿主細胞への細菌の効率的な移動も媒介する。拡散の間には、ＬＬＯは、二重膜小胞から近隣細胞の細胞質への細菌の回避を媒介する（例えば、Ｇｌｏｍｓｋｉら（２００３）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７１：６７５４−６７６５；Ｇｅｄｄｅら（２０００）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６８：９９９−１００３；Ｇｌｏｍｓｋｉら（２００２）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１５６：１０２９−１０３８；Ｄｕｂａｉｌら（２００１）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１４７：２６７９−２６８８；Ｄｒａｍｓｉ  ａｎｄ  Ｃｏｓｓｓａｒｔ（２００２）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１５６：９４３−９４６を参照のこと）。
【０２２４】
ＡｃｔＡはＬｉｓｔｅｒｉａの表面タンパク質であり、これは、宿主細胞のアクチンを動員する。言い換えると、ＡｃｔＡは、宿主細胞のアクチンおよび細胞骨格の他のタンパク質をアセンブリするための足場としての役割を担い、アセンブリは、細菌の表面で生じる。ＡｃｔＡは、宿主細胞の細胞質を介したＬｉｓｔｅｒｉａの推進を媒介する。ＡｃｔＡ変異体は、食胞から回避することができるが、宿主の細胞質ゾル内で「微小コロニー」として成長し、そして細胞から細胞へと拡散しない（例えば、Ｍａｃｈｎｅｒら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：４００９６−４０１０３；Ｌａｕｅｒら（２００１）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４２：１１６３−１１７７；Ｐｏｒｔｎｏｙら（２００２）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１５８：４０９−４１４を参照のこと）。
【０２２５】
インターナリンＡは、哺乳動物の膜結合タンパク質であるＥ−カドヘリンについてのリガンドである。インターナリンＢは、哺乳動物の膜結合タンパク質のうちの少数（例えば、Ｍｅｔ受容体（ＨＧＦ−Ｒ／Ｍｅｔとしても知られている）およびｇＣ１ｑ−Ｒ）ならびにプロテオグリカンについてのリガンドである。Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓは、インターナリン関連タンパク質ファミリーの約２４のメンバー（例えば、ｉｒｐＡ遺伝子によってコードされるインターナリン）を発現することができる（例えば、Ｂｉｅｒｎｅ  ａｎｄ  Ｃｏｓｓａｒｔ（２０００）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．１１５：３３５７−３３６７；Ｓｃｈｌｕｔｅｒら（１９９８）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６６：５９３０−５９３８；Ｄｏｒｍａｎｎら（１９９７）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６５：１０１−１０９を参照のこと）。
【０２２６】
ソルターゼタンパク質は、インターナリンＡのプロセシングおよび成熟を触媒する。２種類のソルターゼ：ｓｒｔＡおよびｓｒｔＢが、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓにおいて同定されている。ｓｒｔＡ変異体は、ヒトの腸細胞および肝細胞を用いた実験において決定されているように、細菌のインターナリゼーションが不完全である。したがって、成熟インターナリンＡが、腸細胞および幹細胞による取り込みに必要である。ｓｒｔＡ変異体は、他の取り込み機構（例えば、インターナリン、例えば、ＩｎｌＢ）を利用することができる細胞になおも取り込ませることができる（例えば、Ｂｉｅｒｎｅら（２００２）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４３：８６９−８８１を参照のこと）。
【０２２７】
２つのホスホリパーゼＰＩ−ＰＬＣ（ｐｌｃＡ遺伝子によってコードされる）およびＰＣ−ＰＬＣ（ｐｌｃＢ遺伝子によってコードされる）もまた、感染性因子である。ＰＩ−ＰＬＣは宿主ファゴソームの溶解を媒介して、細菌の細胞質ゾルへの回避を可能にする。ＰＣ−ＰＬＣにおける細菌の変異体は低い感染性を示し、そして、細胞から細胞への伝達を媒介する二重膜小胞内に蓄積することが明らかにされている（例えば、Ｃａｍｉｌｌｉら（１９９３）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．８：１４３−１５７；Ｓｃｈｕｌｔｅｒら（１９９８）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６６：５９３０−５９３８を参照のこと）。
【０２２８】
ｉａｐ遺伝子によってコードされるプロテインｐ６０は、細胞内移動、および細胞から細胞への拡散を媒介する。細胞内移動および拡散は、ｉａｐ遺伝子変異体でははるかに少ない（Ｐｉｌｇｒｉｍら（２００３）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７１：３４７３−３４８３）。
【０２２９】
利用可能なものは、少なくとも１つの調節因子（例えば、プロモーターまたは転写因子）が弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａである。ＡｃｔＡの発現は、２つの異なるプロモーターによって調節され、一方は、ａｃｔＡのすぐ上流にあるプロモーターであり、第２のプロモーターは、ａｃｔＡの上流にあるｍｐｌ遺伝子の前にある（Ｌａｕｅｒら（２００２）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１８４：４１７７−４１８６）。本発明により、不活化された、変異された、または欠失された数なくとも１つのａｃｔＡプロモーターをコードする核酸が提供される。転写因子ｐｒｆＡは、多数のＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ遺伝子（例えば、ｈｌｙ、ｐｌｃＡ、ａｃｔＡ、ｍｐｌ、ｐｒｆＡ、およびｉａｐ）の転写に必要である。ＰｒｆＡの調節特性は、例えば、ＰｒｆＡ依存性プロモーター（ｐｉｎｌＣ）およびＰｒｆＡボックスによって媒介される。本発明により、不活化された、変異された、または欠失されたＰｒｆＡ、ＰｉｎｌＣ、ＰｒｆＡボックスなどの少なくとも１つをコードする核酸が提供される（例えば、Ｌａｌｉｃ−Ｍｕｌｌｔｈａｌｅｒら（２００１）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４２：１１１−１２０；Ｓｈｅｔｒｏｎ−Ｒａｍａら（２００３）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４８：１５３７−１５５１；Ｌｕｏら（２００４）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５２：３９−５２を参照のこと）。まとめると、ｉｎｌＡおよびｉｎｌＢは、５つのプロモーターによって調節される（Ｌｉｎｇｎａｕら（１９９５）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６３：３８９６−３９０３）。本発明により、これらのプロモーターの１つ以上が弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａが提供される。
【０２３０】
本発明に利用可能なものは、ＤＮＡ架橋剤（例えば、ソラレン）での処理によって、およびＤＮＡ修復を媒介する少なくとも１つの遺伝子（例えば、組換え修復遺伝子（例えば、ｒｅｃＡ））または紫外線損傷修復遺伝子（例えば、ｕｖｒＡ、ｕｖｒＢ、ｕｖｒＡＢ、ｕｖｒＣ、ｕｖｒＤ、ｐｈｒＡ、ｐｈｒＢ）を不活化することによって弱められたＬｉｓｔｅｒｉａ細菌である（例えば、Ｄｕｂｅｎｓｋｙらの米国特許公開番号２００４／０２２８８７７およびＤｕｂｅｎｓｋｙらの２００４／０１９７３４３を参照のこと）。
【０２３１】
ＶＩＩＩ．Ｌｉｓｔｅｒｉａ株
本発明に利用可能なものは、本発明の弱められたＬｉｓｔｅｒｉａを作成または操作する多数のＬｉｓｔｅｒｉａ株である（表６）。本発明のＬｉｓｔｅｒｉａは、この表に開示される株に限定されない。
【０２３２】
【化１９】
2009504787.tif 000054
【０２３３】
【化２０】
2009504787.tif 000055
ＩＸ．投与されるＬｉｓｔｅｒｉａおよび投与される抗体の併用
Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび抗体、または抗体に由来する結合組成物は、同時に投与することができる。すなわち、これらの試薬のそれぞれについての投与は、互いに一部重複するかまたは完全に重複する間隔で行うことができる。Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび抗体、または抗体に由来する結合組成物は、互いに重複しない時間の間隔で投与することができる。例えば、第１の試薬（Ｌｉｓｔｅｒｉａまたは抗体）は、ｔ＝０から１時間の時間枠で投与することができ、一方、第２の試薬（抗体またはＬｉｓｔｅｒｉａ）は、ｔ＝１から２時間の時間枠で投与することができる。また、第１の試薬は、ｔ＝０から１時間の時間枠で投与することができ、一方、第２の試薬は、ｔ＝２〜３時間、ｔ＝３〜４時間、ｔ＝４〜５時間、ｔ＝５〜６時間、ｔ＝６〜７時間、ｔ＝７〜８時間、ｔ＝８〜９時間、ｔ＝９〜１０時間などの時間枠のいずれかで投与することができる。さらに、第２の試薬は、例えば、ｔ＝−２〜３時間、ｔ＝−３〜４時間、ｔ＝−４〜５時間、ｔ＝−５〜６時間、ｔ＝−６〜７時間、ｔ＝−７〜８時間、ｔ＝−８〜９時間、ｔ＝−９〜１０時間などの時間枠のいずれかで投与することができる。
【０２３４】
別の例を提供するためには、第１の試薬（Ｌｉｓｔｅｒｉａまたは抗体）は、ｔ＝０から１日の時間枠で投与することができ、一方、第２の試薬（抗体またはＬｉｓｔｅｒｉａ）は、ｔ＝１から２日の時間枠で投与することができる。また、第１の試薬は、ｔ＝０から１日の時間枠で投与することができ、一方、第２の試薬は、ｔ＝２〜３日、ｔ＝３〜４日、ｔ＝４〜５日、ｔ＝５〜６日、ｔ＝６〜７日、ｔ＝７〜８日、ｔ＝８〜９日、ｔ＝９〜１０日などの時間枠のいずれかで投与することができる。さらに、第２の試薬は、例えば、ｔ＝−２〜３日、ｔ＝−３〜４日、ｔ＝−４〜５日、ｔ＝−５〜６日、ｔ＝−６〜７日、ｔ＝−７〜８日、ｔ＝−８〜９日、ｔ＝−９〜１０日などの時間枠のいずれかで投与することができる。
【０２３５】
１つの態様においては、Ｌｉｓｔｅｒｉａの投与は、ｔ＝０時間で開始することができ、この投与によって、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度のピーク（または最大プラトー）が生じ、そして、抗体の投与は、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の９５％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の９０％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の８５％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の８０％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の７５％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の７０％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の６５％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の６０％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の５５％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の５０％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の４５％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の４０％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の３５％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の３０％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の２５％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の２０％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の１５％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の１０％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の５％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の２．０％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の０．５％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の０．２％に達したほぼその時点で、血漿Ｌｉｓｔｅｒｉａ濃度が上記ピーク濃度の０．１％、または上記ピーク濃度未満に達したほぼその時点で開始される。
【０２３６】
別の態様においては、抗体または結合化合物の投与は、ｔ＝０時間で開始することができ、抗体または結合化合物の血漿濃度のピーク（または最大プラトー）を生じ、そして、Ｌｉｓｔｅｒｉａの投与は、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の９５％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の９０％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の８５％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の８０％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の７５％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の７０％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の６５％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の６０％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の５５％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の５０％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の４５％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の４０％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の３５％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の３０％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の２５％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の２０％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の１５％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の１０％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の５％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の２．０％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の０．５％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の０．２％に達したほぼその時点で、血漿抗体濃度が上記ピーク濃度の０．１％、または上記ピーク濃度未満％に達したほぼその時点で開始される。Ｌｉｓｔｅｒｉａまたは抗体の変化はインビボで起こり得ると考えられているので、上記濃度は、完全な試薬の測定後に、または完全な試薬の識別可能な分解産物の測定後に評価することができる。
【０２３７】
上記に開示された投与スケジュールは、投与されるＬｉｓｔｅｒｉａに関して相対的な投与される抗体に対して、およびＬｉｓｔｅｒｉａに関して相対的な投与されるさらに別の試薬（例えば、サイトカイン、弱毒化された腫瘍細胞、サイトカインを発現している弱毒化された腫瘍細胞、または低分子）に対して適用される。
【０２３８】
当業者は、血漿以外の生物学的区画（例えば、全血、血清、尿、胆汁、肝臓生検）を、試薬の投与のタイミングに使用できることを理解するであろう。
【０２３９】
Ｌｉｓｔｅｒｉａは、複数回の用量で（例えば、１用量、２用量、３用量、４用量、５用量、６用量、７用量、８用量、９用量、１０用量など）で投与することができる。抗体または結合組成物もまた、複数回の用量で（例えば、１用量、２用量、３用量、４用量、５用量、６用量、７用量、８用量、９用量、１０用量など）で投与することができる。複数回の用量が使用される場合には、Ｌｉｓｔｅｒｉａを複数回の用量で投与することができ、一方、抗体はわずかに１用量が使用される。また、Ｌｉｓｔｅｒｉａを１用量として投与することができ、一方では、多用量の抗体が使用される。
【０２４０】
Ｘ．投与されるＬｉｓｔｅｒｉａと共に投与される試薬
本発明での使用に利用可能なものは、Ｌｉｓｔｅｒｉａ（例えば、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａ）と組み合わせて投与する試薬である。これらの試薬としては、生物学的試薬（例えば、サイトカイン）、樹状細胞、抗体／エピトープ複合体、ワクチン、ならびに低分子試薬（例えば、５−フルオロウラシル）、加えて、制御性Ｔ細胞を調節する試薬（例えば、シクロホスファミドまたは抗ＣＴＬＡ４抗体）が挙げられる。これらの試薬は、Ｌｉｓｔｅｒｉａとともに投与することができ、また、Ｌｉｓｔｅｒｉａとは別に（Ｌｉｓｔｅｒｉａの前または後に）投与することもできる。例えば、試薬は、Ｌｉｓｔｅｒｉａの直前（または直後）に、同じ日に、Ｌｉｓｔｅｒｉａの１日前（後）に、１週間前（後）に、１ヶ月前（後）に、あるいは、２ヶ月前（後）などに投与することができる。
【０２４１】
ｉ．生物学的試薬。本発明の生物学的試薬または巨大分子には、サイトカインのアゴニストもしくはアンタゴニスト、サイトカインのアゴニストもしくはアンタゴニストをコードする核酸、サイトカインを発現している細胞、またはアゴニストもしくはアンタゴニスト抗体が含まれる。生物学的試薬としては、ＴＨ−１サイトカイン、ＴＨ−２サイトカイン、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＦＬＴ３−リガンド、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮγ、サイトカイン受容体、可溶性サイトカイン受容体、ケモカイン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、ＣＤ４０リガンド、または免疫プロテオソームサブユニットでのプロテオソームサブユニットの置き換えを刺激する試薬が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４２】
本発明での使用に利用可能なものは、生物学的試薬（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、または誘導性タンパク質−１０）、あるいは、生物学的試薬を発現するように操作された細胞である。他の意図される試薬としては、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ２８、ＣＤ４０リガンド、またはＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）のアゴニスト、および可溶性となるように操作されたか、もしくは膜に結合するように操作された新規の形態が挙げられる（例えば、Ｋａｒｎｂａｃｈら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：２５６９−２５７６；Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄら（１９９８）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：３８９−４１８；Ｐａｒｎｅｙ  ａｎｄ  Ｃｈａｎｇ（２００３）Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．１０：３７−４３；Ｇｒｉら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：９９−１０６；Ｃｈｉｏｄｏｎｉら（１９９９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０：１２５−１３３；Ｅｎｚｌｅｒら（２００３）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９７：１２１３−１２１９；Ｓｏｏ  Ｈｏｏら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：７３４３−７３４９；Ｍｉｈａｌｙｏら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：５３３８−５３４５；Ｃｈａｐｏｖａｌら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：６９７７−６９８４を参照のこと）。
【０２４３】
何ら限定を意味しないが、本発明により以下の生物製剤が提供される。例えば、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ１−α、ＴＮＦ−α、およびインターロイキン−２は、多数の腫瘍のタイプの処置に有効である（例えば、Ｎａｋａｍｏｔｏら（２０００）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２０（６Ａ）：４０８７−４０９６；Ｋａｍａｄａら（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：６４１６−６４２０；Ｌｉら（２００２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２：４０２３−４０２８；Ｙａｎｇら（２００２）Ｚｈｏｎｇｈｕａ  Ｗａｉ  Ｋｅ  Ｚａ  Ｚｈｉ  ４０：７８９−７９１；Ｈｏｖｉｎｇら（２００５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６５：４３００−４３０８；Ｔｓｕｃｈｉｙａｍａら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１０：２６０−２６９；Ｓａｋａｉら（２００１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．８：６９５−７０４を参照のこと）。
【０２４４】
本発明により、Ｆｌｔ３−リガンドアゴニスト、およびＬｉｓｔｅｒｉａと併用されるＦｌｔ３−リガンドアゴニストが含まれる試薬および方法が提供される。Ｆｌｔ３−リガンド（Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３リガンド）は、抗腫瘍免疫応答を生じることができるサイトカインである（例えば、Ｄｒａｎｏｆｆ（２００２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１８８：１４７−１５４；Ｍａｃｈら（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：３２３９−３２４６；Ｆｕｒｕｍｏｔｏら（２００４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１３：７７４−７８３；Ｆｒｅｅｄｍａｎら（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．９：５２２８−５２３７；Ｍａｃｈら（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：３２３９−３２４６を参照のこと）。
【０２４５】
別の態様においては、本発明により、少なくとも１つの腫瘍抗原、または感染性物質抗原を発現する樹状細胞（ＤＣ）の投与が意図される。ＤＣによる抗原の発現は、例えば、ペプチド負荷、腫瘍細胞の抽出、腫瘍細胞との融合、ｍＲＮＡでの形質導入、またはベクターによるトランスフェクションによって媒介され得る。関連する方法は記載されている（例えば、Ｋｌｅｉｎら（２０００）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１：１６９９−１７０８；Ｃｏｎｒａｄ  ａｎｄ  Ｎｅｓｔｌｅ（２００３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．５：４０５−４１２；Ｇｉｌｂｏａ  ａｎｄ  Ｖｉｅｗｅｇ（２００４）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１９９：２５１−２６４；Ｐａｃｚｅｓｎｙら（２００３）Ｓｅｍｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．１３：４３９−４４７；Ｗｅｓｔｅｒｍａｎｎら（１９９８）Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．５：２６４−２７１を参照のこと）。
【０２４６】
ｉｉ．低分子試薬。本発明の方法および試薬には、低分子試薬、例えば、５−フルオロウラシル、メトトレキセート、イリノテカン、ドキソルビシン、プレドニソン、ドロスタチン−１０（Ｄ１０）、コンブレタスタチンＡ−４、マイトマイシンＣ（ＭＭＣ）、ビンクリスチン、コルヒチン、ビンブラスチン、真菌のβ−グルカン、シクロホスファミドなども含まれる（例えば、Ｈｕｒｗｉｔｚら（２００４）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５０：２３３５−２３４２；Ｐｅｌａｅｚら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：６６０８−６６１５；Ｈａｖｅｓら（１９９０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ  ９：１９４−２０４；Ｔｕｒｋら（２００４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２００：７７１−７８２；Ｇｈｉｒｉｎｇｈｅｌｌｉら（２００４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４：３３６−３４４；Ａｎｄｒａｄｅ−Ｍｅｎａ（１９９４）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅａｃｔ．１６：９５−１０３；Ｃｈｒｉｓｃｈｉｌｌｅｓら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  １０：３９６−４０３を参照のこと）。分子ではない組成物（例えば、塩およびイオン）もまた意図される。
【０２４７】
シクロホスファミドのアナログが提供される（例えば、Ｊａｉｎら（２００４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４７：３８４３−３８５２；Ａｎｄｅｒｓｓｏｎら（１９９４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５４：５３９４−５４００；Ｂｏｒｃｈ  ａｎｄ  Ｃａｎｕｔｅ（１９９１）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３４：３０４４−３０５２；Ｌｕｄｅｍａｎら（１９７９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２２：１５１−１５８；Ｚｏｎ（１９８２）Ｐｒｏｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９：２０５−２４６を参照のこと）。
【０２４８】
先天免疫応答を刺激する低分子試薬、例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、イミキモド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）、およびαＧａｌＣｅｒもまた本発明に含まれる。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ９を介して免疫応答を媒介する（例えば、Ｃｈａｇｎｏｎら（２００５）Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１：１３０２−１３１１；Ｓｐｅｉｓｅｒら（２００５）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｆｅｂ．３（ｅｑｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ）；Ｍａｓｏｎら（２００５）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１：３６１−３６９；Ｓｕｚｕｋｉら（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４：８７５４−８７６０；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら（２００３）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：４８３−５１３；Ｔａｋｅｄａら（２００３）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：３３５−３７６；Ｍｅｔｅｌｉｔｓａら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：３１１４−３１２２を参照のこと）。
【０２４９】
他の有用な低分子試薬としては、細菌のペプチドグリカンに由来するもの、例えば、特定のＮＯＤ１リガンドおよび／またはＮＯＤ２リガンド（例えば、ジアミノピメリン酸が含まれているムロペプチド（例えば、ＭｃＣａｆｆｒｅｙら（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），１０１：１１３８６−１１３９１；Ｒｏｙｅｔ  ａｎｄ  Ｒｅｉｇｈｈａｒｔ（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１３：６１０−６１４；Ｃｈａｍａｉｌｌａｒｄら（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：７０２−７０７；Ｉｎｏｈａｒａ  ａｎｄ  Ｎｕｎｅｚ（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３：３７１−３８２；Ｉｎｏｈａｒａら（２００４）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｎｏｖ．１９［ｅｑｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ］を参照のこと）。
【０２５０】
ｉｉｉ．制御性Ｔ細胞。本発明には、Ｔ制御性細胞（Ｔｒｅｇｓ；サプレッサーＴ細胞）の活性を調節する試薬および方法が含まれる。Ｔｒｅｇ細胞活性の弱毒化または阻害によっては、腫瘍細胞の免疫系による死滅を促進することができる。Ｔｒｅｇ細胞の活性を阻害する多数の試薬が同定されている。これらの試薬としては、例えば、シクロホスファミド（ａ．ｋ．ａ．Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）；ＣＴＸ）、抗ＣＤ２５抗体、ＧＩＴＲ−ＬまたはＧＩＴＲの調節因子、Ｆｏｒｋｈｅａｄボックス転写因子（Ｆｏｘ）の調節因子、ＬＡＧ−３の調節因子、抗ＩＬ−２Ｒ、および抗ＣＴＬＡ４が挙げられる（例えば、Ｐａｒｄｏｌｌ（２００３）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：８０７−８３９；Ｅｒｃｏｌｉｎｉら（２００５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１：１５９１−１６０２；Ｈａｅｒｙｆａｒら（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：３３４４−３３５１；Ｅｒｃｏｌｉｎｉら（２００５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１：１５９１−１６０２；Ｍｉｈａｌｙｏら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：５３３８−５３４５；Ｓｔｅｐｈｅｎｓら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：５００８−５０２０；Ｓｃｈｉａｖｏｎｉら（２０００）Ｂｌｏｏｄ  ９５：２０２４−２０３０；Ｃａｌｍｅｌｓら（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．Ｏｃｔ．０８（ｅｑｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ）；Ｍｉｎｃｈｅｆｆら（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．Ｓｅｐｔ．１７［ｅｑｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ］；Ｍｕｒｉｇｌａｎら（２００４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２００：１４９−１５７；Ｓｔｅｐｈｅｎｓら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：５００８−５０２０；Ｃｏｆｆｅｒ  ａｎｄ  Ｂｕｒｇｅｒｉｎｇ（２００４）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：８８９−８９９；Ｋａｌｉｎｉｃｈｅｎｋｏら（２００４）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１８：８３０−８５０；Ｃｏｂｂｏｌｄら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：６００３−６０１０；Ｈｕａｎｇら（２００４）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２１：５０３−５１３を参照のこと）。ＣＴＸは免疫系に対して２つのモードの効果を示し、低用量のＣＴＸがＴｒｅｇｓを阻害する（例えば、Ｌｕｔｓｉａｋら（２００５）Ｂｌｏｏｄ  １０５：２８６２−２８６８を参照のこと）。
【０２５１】
ＣＴＬＡ４遮断薬（例えば、抗ＣＴＬＡ４遮断抗体）は、増殖性障害（例えば、ガンおよび感染）に対する免疫応答を促進することができる（例えば、Ｚｕｂａｉｒｉら（２００４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４：１４３３−１４４０；Ｅｓｐｅｎｓｃｈｉｅｄら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０：３４０１−３４０７；Ｄａｖｉｌａら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６３：３２８１−３２８８；Ｈｏｄｉら（２００３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１００：４７１２−４７１７を参照のこと）。本発明で抗ＣＴＬＡ４抗体などが使用される場合は、本発明は、Ｔｒｅｇの阻害のために使用には必ずしも限定されず、本発明にＴｒｅｇの阻害が必ずしも含まれない。
【０２５２】
リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）遮断薬（例えば、抗ＬＡＧ−３抗体または可溶性ＬＡＧ−３（例えば、ＬＡＧ−３  Ｉｇ））は、増殖性障害に対する免疫応答を促進することができる。抗体ＬＡＧ−３抗体は、Ｔｒｅｇの活性を低下させる（例えば、Ｈｕａｎｇら（２００４）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２１：５０３−５１３；Ｔｒｉｅｂｅｌ（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：６１９−６２２；Ｗｏｒｋｍａｎ  ａｎｄ  Ｖｉｇｎａｌｉ（２００３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３３：９７０−９７９；Ｃａｐｐｅｌｌｏら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６３：２５１８−２５２５；Ｗｏｒｋｍａｎら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：５４５０−５４５５；Ｍａｃｏｎ−Ｌａｍａｉｔｒｅ  ａｎｄ  Ｔｒｉｅｂｅｌ（２００５）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １１５：１７０−１７８を参照のこと）。
【０２５３】
ｉｖ．ワクチン。腫瘍抗原、腫瘍抗原をコードする核酸、腫瘍抗原をコードする核酸が含まれているベクター、腫瘍抗原が含まれている細胞、腫瘍細胞、または弱毒化された腫瘍細胞が含まれているワクチンの使用が本発明に含まれる。腫瘍抗原をコードする核酸（例えば、コドンが最適化させられた核酸、または２つ以上の異なる腫瘍抗原をコードする核酸、または腫瘍抗原の再配置されたエピトープを発現する核酸（例えば、エピトープの自然界での順序はＡＢＣＤであり、操作された順序はＡＤＢＣである）、あるいは、少なくとも２つの異なる腫瘍抗原が含まれている融合タンパク質をコードする核酸に由来する試薬が提供される。本発明には、開示される抗原の変異体、ムテイン、スプライス改変体、断片、短縮型改変体、可溶性改変体、細胞外ドメイン、細胞内ドメイン、成熟配列などをコードする核酸の使用が含まれるが、これらに限定されない。これらの抗原のエピトープ、オリゴペプチド、およびポリペプチドをコードする核酸が提供される。コドンが最適化された態様、すなわち、Ｌｉｓｔｅｒｉａの中での発現のために最適化させられた態様もまた提供される。
【０２５４】
腫瘍細胞、弱毒化された腫瘍細胞、またはサイトカインもしくは他の免疫調節剤を発現するように操作された組換え体腫瘍細胞が含まれているワクチンが、本発明での使用のために提供される。例えば、腫瘍細胞は、免疫応答を調節する物質（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、またはＩＮＦγ）を発現するように操作することができる（例えば、Ｊａｆｆｅｅらに交付された米国特許第６，０３３，６７４号および同第６，３５０，４４５号；Ｇｏｌｕｍｂｅｋら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５４：７１３−７１６；Ｅｗｅｎｄら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２３：４３８−４４８；Ｚｈｏｕら（２００５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６５：１０７９−１０８８；Ｐｏｒｇａｄｏｒら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：１４５８−１４７０；Ｐｏｌｏｓｏら（２００１）Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．６：Ｄ７６０−７７５を参照のこと）。ワクチンは、ゲルマトリックスによって投与することができる（例えば、Ｓａｌｅｍら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：５１５９−５１６７を参照のこと）。
【０２５５】
本発明ではまた、腫瘍抗原を発現するように操作された樹状細胞（または他のＡＰＣ）が含まれているワクチンも使用される場合がある（例えば、Ａｖｉｇａｎ（１９９９）Ｂｌｏｏｄ  Ｒｅｖ．１３：５１−６４；Ｋｉｒｋ  ａｎｄ  Ｍｕｌｅ（２０００）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１１：７９７−８０６を参照のこと）。例えば、合成のペプチド、精製された抗原、オリゴ糖、および腫瘍細胞溶解物の、腫瘍抗原の供給源としての使用もまた提供される（例えば、Ｌｅｗｉｓら（２００３）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：８１−１１２；Ｒａｚｚａｑｕｅら（２０００）Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：６４４−６４７；Ｍｅｎｇ  ａｎｄ  Ｂｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄ（２００２）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１９：９２６−９３２；Ｌｅ  Ｐｏｏｌｅら（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１４：６４１−６４８を参照のことの）。さらに、本発明では、熱ショックタンパク質が使用される場合がある。この場合、熱ショックタンパク質は、腫瘍特異的免疫を誘発する（例えば、Ｕｄｏｎｏら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：３０７７−３０８１；Ｗａｎｇら（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．２９：１３１−１３７を参照のこと）。
【０２５６】
本発明で使用されるＬｉｓｔｅｒｉａは、少なくとも１つの異種抗原、例えば、少なくとも１つの腫瘍抗原をコードする核酸を含むように操作することができるが、これは必ずしも必要ではない。Ｌｉｓｔｅｒｉａは、組換え以外の方法によって、または組換え方法によって（例えば、プラスミド、組換え体プラスミドによって、ゲノムの化学的突然変異誘発によって、またはゲノムの組換えによる改変によって）改変することができる。Ｌｉｓｔｅｒｉａは、少なくとも１つの抗原をコードする核酸が含まれているプラスミドによって、少なくとも１つの抗原をコードする核酸が含まれているトランスポゾンによって、少なくとも１つの抗原をコードする核酸での部位特異的組み込みによって、または少なくとも１つの抗原をコードする核酸での相同組換えによって改変することができるが、これらに限定されない（例えば、Ｃａｍｉｌｌｉら（１９９３）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．８：１４３−１５７；Ｃａｍｉｌｌｉ（１９９２）Ｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｕｎｉｖ．ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，Ｄｏｃｔｏｒａｌ  ｔｈｅｓｉｓ；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら（１９９８）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ６６：３５５２−３５６１；Ｓｋｏｂｌｅら（２０００）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１５０：５２７−５３７；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｙｏｕｎｇｍａｎ（１９９２）Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ  ７４：７０５−７１１；Ｌｅｉら（２００１）Ｊ．Ｂａｃｔ．１８３：１１３３−１１３９；Ｌｉ  ａｎｄ  Ｋａｔｈａｒｉｏｕ（２００３）Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６９：３０２０−３０２３；Ｌａｕｅｒら（２００２）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１８４：４１７７−４１８６を参照のこと）。
【０２５７】
あるいは、または加えて、ワクチンは、核酸ワクチン、リポソーム、可溶性抗原、微粒子抗原、コロイド状抗原、結合抗原、操作された腫瘍細胞、または弱毒化された腫瘍細胞として投与することができる。ワクチンは、核酸ワクチン、リポソーム、可溶性抗原、微粒子抗原、コロイド状抗原、結合抗原、操作された腫瘍細胞、または弱毒化された腫瘍細胞の形態とすることができる。投与方法のリストは、本発明を限定するようには意図されない。
【０２５８】
ＸＩ．治療用組成物
本明細書中に提供されるＬｉｓｔｅｒｉａおよび抗体、または抗体の結合部位に由来する結合化合物、さらには、ワクチン、低分子、生物学的試薬、およびアジュバントは、単独で、または薬学的に許容される賦形剤と一緒にのいずれかで、免疫障害、増殖性障害、ガン、または感染性障害に対する適切な免疫応答を誘導するために十分な量で、宿主に投与することができる。免疫応答には、特異的応答、非特異的応答、先天応答、適応的免疫、一次免疫応答、二次免疫応答、メモリー免疫応答、免疫細胞の活性化、免疫細胞の増殖、免疫細胞の分化、およびそれらの任意の組み合わせが含まれ得るが、これらに限定されない。
【０２５９】
「薬学的に許容される賦形剤」または「診断的に許容される賦形剤」は、滅菌の蒸留水、生理食塩水、リン酸緩衝化溶液、アミノ酸をベースとする緩衝液、または重炭酸塩緩衝化溶液が含まれるように意味されるが、これらに限定されない。選択される賦形剤、および使用される賦形剤の量は、投与の態様に応じて様々であろう。投与は、経口、静脈内、皮下、皮膚、皮内、筋肉内、非経口、臓器内、病変内、鼻内、吸入、眼内、筋肉内、血管内、直腸内、腹腔内、またはさまざまな周知の投与経路のいずれか１つであり得る。投与には、注射、注入、またはそれらの組み合わせが含まれ得る。
【０２６０】
本発明のＬｉｓｔｅｒｉａは、例えば、凍結、凍結乾燥させて、懸濁物として、細胞ペーストとして、または固体のマトリックスもしくはゲルマトリックスと複合体化させて保存することができる。
【０２６１】
特定の患者についての有効量は、処置される症状、患者の全体的な健康状態、方法の経路、および投与用量、ならびに副作用の重篤度などの因子に応じて変化し得る。特定の患者についての有効量は、処置される症状、患者の全体的な健康状態、投与経路、および投与用量、ならびに副作用の重篤度のような要因に応じて変化し得る。処置および診断の方法についての指針を使用することができる（例えば、Ｍａｙｎａｒｄら（１９９６）Ａ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ＳＯＰｓ  ｆｏｒ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ；Ｄｅｎｔ（２００１）Ｇｏｏｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｕｒｃｈ  Ｐｕｂｌ．，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫを参照のこと）。
【０２６２】
いくつかの態様においては、本発明で使用されるＬｉｓｔｅｒｉａは、１用量で投与することができ、また複数回の用量で投与することもでき、個々の用量には、少なくとも１０００個のＬｉｓｔｅｒｉａ細胞／ｋｇ体重；通常は、少なくとも１０，０００個の細胞；より通常は、少なくとも１００，０００個の細胞；最も通常は、少なくとも１００万個の細胞；多くの場合は、少なくとも１０００万個の細胞；より多くの場合には、少なくとも１億個の細胞；最も多くの場合には、少なくとも１０億個の細胞；通常は、少なくとも１００億個の細胞のＬｉｓｔｅｉｒａ細胞／ｋｇ体重、あるいはそれ以上が含まれる。本発明によっては、Ｌｉｓｔｅｒｉａの投与単位が、ソラレンでの処理の前のＣＦＵ等量であるコロニー形成単位（ＣＦＵ）である上記用量、あるいは、単位がＬｉｓｔｅｒｉａ細胞の数である上記用量が提供される。
【０２６３】
他の態様においては、本発明で使用されるＬｉｓｔｅｒｉａは、１用量または複数回の用量で投与することができ、それぞれの用量には、１０７から１０８個のＬｉｓｔｅｒｉａ／体重７０ｋｇ（または、表面積１．７平方メートルあたり；もしくは肝臓重量１．５ｋｇあたり）；２×１０７から２×１０８個のＬｉｓｔｅｒｉａ／体重７０ｋｇ（または、表面積１．７平方メートルあたり；もしくは肝臓重量１．５ｋｇあたり）；５×１０７から５×１０８個のＬｉｓｔｅｒｉａ／体重７０ｋｇ（または、表面積１．７平方メートルあたり；もしくは肝臓重量１．５ｋｇあたり）；１０８から１０９個のＬｉｓｔｅｒｉａ／体重７０ｋｇ（または、表面積１．７平方メートルあたり；もしくは肝臓重量１．５ｋｇあたり）；２．０×１０８から２．０×１０９個のＬｉｓｔｅｒｉａ／体重７０ｋｇ（または、表面積１．７平方メートルあたり；もしくは肝臓重量１．５ｋｇあたり）；５．０×１０８から５．０×１０９個のＬｉｓｔｅｒｉａ／体重７０ｋｇ（または、表面積１．７平方メートルあたり；もしくは肝臓重量１．５ｋｇあたり）；１０９から１０１０個のＬｉｓｔｅｒｉａ／体重７０ｋｇ（または、表面積１．７平方メートルあたり；もしくは肝臓重量１．５ｋｇあたり）；２×１０９から２×１０１０個のＬｉｓｔｅｒｉａ／体重７０ｋｇ（または、表面積１．７平方メートルあたり；もしくは肝臓重量１．５ｋｇあたり）；５×１０９から５×１０１０個のＬｉｓｔｅｒｉａ／体重７０ｋｇ（または、表面積１．７平方メートルあたり；もしくは肝臓重量１．５ｋｇあたり）；１０１１から１０１２個のＬｉｓｔｅｒｉａ／体重７０ｋｇ（または、表面積１．７平方メートルあたり；もしくは肝臓重量１．５ｋｇあたり）；２×１０１１から２×１０１２個のＬｉｓｔｅｒｉａ／体重７０ｋｇ（または、表面積１．７平方メートルあたり；もしくは肝臓重量１．５ｋｇあたり）；５×１０１１から５×１０１２個のＬｉｓｔｅｒｉａ／体重７０ｋｇ（または、表面積１．７平方メートルあたり；もしくは肝臓重量１．５ｋｇあたり）；１０１２から１０１３個のＬｉｓｔｅｒｉａ／体重７０ｋｇ（または、表面積１．７平方メートルあたり）；２×１０１２から２×１０１３個のＬｉｓｔｅｒｉａ／体重７０ｋｇ（または、表面積１．７平方メートルあたり；もしくは肝臓重量１．５ｋｇあたり）；５×１０１２から５×１０１３個のＬｉｓｔｅｒｉａ／体重７０ｋｇ（または、表面積１．７平方メートルあたり；もしくは肝臓重量１．５ｋｇあたり）；あるいは、それ以上が含まれる。
【０２６４】
Ｌｉｓｔｅｒｉａの数は、例えば、顕微鏡下で個々の細菌をカウントすることによって、またはコロニー形成単位（ＣＦＵ）をカウントすることによって決定することができる。マウスの肝臓は、本発明のＬｉｓｔｅｒｉａの投与時点では、約１．５グラムの重量である。ヒトの肝臓は約１．５キログラムの重量である。
【０２６５】
上記用量の１つ以上の使用もまた提供され、用量は、１日に１回の注射、２日おきに１回の注射、３日おきに１回の注射、４日おきに１回の注射、５日おきに１回の注射、６日おきに１回の注射、または７日おきに１回の注射によって投与され、注射のスケジュールは、例えば、わずか１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、２週間、３週間、４週間、５週間、またはそれ以上維持される。本発明にはまた、上記用量とスケジュールとの組み合わせ（例えば、比較的多量のＬｉｓｔｅｒｉａの初回用量、それに続く比較的少量のＬｉｓｅｔｒｉａの用量）も含まれる。
【０２６６】
抗体、モノクローナル抗体、結合抗体、または抗体の抗原結合部位に由来する結合組成物および／もしくは抗体のＦｃ受容体結合部位に由来する結合組成物、サイトカイン、ならびに免疫応答の媒介因子が投与される。本発明により、用量（例えば、０．００１〜０．００５ｍｇ／ｋｇ体重；０．００５〜０．０１ｍｇ／ｋｇ；０．０１〜０．５ｍｇ／ｋｇ；０．５〜１．０ｍｇ／ｋｇ；１．０〜５．０ｍｇ／ｋｇ；５．０〜１０．０ｍｇ／ｋｇ；１０〜５０ｍｇ／ｋｇ；５０〜１００ｍｇ／ｋｇ；１００〜５００ｍｇ／ｋｇ；５００〜１０００ｍｇ／ｋｇ；および１０００〜５０００ｍｇ／ｋｇが提供されるが、これらに限定されない。
【０２６７】
さらに、本発明により、少なくとも０．００１ｍｇ／ｋｇ体重；少なくとも０．００５ｍｇ／ｋｇ；少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ；少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇ；少なくとも１．０ｍｇ／ｋｇ；少なくとも５．０ｍｇ／ｋｇ；少なくとも１０〜５０ｍｇ／ｋｇ；少なくとも５０ｍｇ／ｋｇ；少なくとも１００ｍｇ／ｋｇ；少なくとも５００ｍｇ／ｋｇ；および少なくとも１０００ｍｇ／ｋｇ体重の用量が提供されるが、これらに限定されない。
【０２６８】
本発明により、例えば、少なくとも１．０ｍｇ／ｍ２；少なくとも２．５ｍｇ／ｍ２；少なくとも５．０ｍｇ／ｍ２；少なくとも１０ｍｇ／ｍ２；少なくとも２５ｍｇ／ｍ２；少なくとも５０ｍｇ／ｍ２；少なくとも１００ｍｇ／ｍ２；少なくとも２５０ｍｇ／ｍ２；少なくとも１０００ｍｇ／ｍ２；および少なくとも２５００ｍｇ／ｍ２の用量が提供される。
【０２６９】
例えば、１回／週、２回／週、３回／週、４回／週、５回／週、６回／週、７回／週、２週間おきに１回、３週間おきに１回、４週間おきに１回、５週間おきに１回などの投与スケジュールを、本発明に利用することができる。投与スケジュールには、例えば、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、および１２ヶ月の全期間のわたる投与が含まれる。
【０２７０】
上記投与スケジュールのサイクルが提供される。このサイクルは、例えば、約７日おきに；１４日おきに；２１日おきに；２８日おきに；３５日おきに；４２日おきに；４９日おきに；５６日おきに；６３日おきに；７０日おきになどで繰り返すことができる。投与を行わない間隔をサイクルの間に存在させることができ、間隔は、例えば、約７日；１４日；２１日；２８日；３５日；４２日；４９日；５６日；６３日；７０日などであり得る。この状況では、用語「約」は、±１日、±２日、±３日、±４日、±５日、±６日、または±７日を意味する。
【０２７１】
本発明には、経口であるＬｉｓｔｅｒｉａの投与方法が含まれる。静脈内であるＬｉｓｔｅｒｉａの投与方法もまた提供される。さらに、筋肉内であるＬｉｓｔｅｒｉａの投与方法が提供される。本発明により、食肉をベースとするか、または食肉または動物性製品に由来するポリペプチドが含まれている培地で増殖させることによって調製された、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌、またはＬｉｓｔｅｒｉａ細菌の培養物もしくは懸濁物が提供される。また、食肉または動物性の産物が含まれていない培地で増殖させることによって調製された、植物のポリペプチドが含まれている培地で増殖させることによって調製された、酵母の産物をベースとはしない培地で増殖させることによって調製された、または、酵母のポリペプチドが含まれている培地で増殖させることによって調製された、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌、またはＬｉｓｔｅｒｉａ細菌の培養物もしくは懸濁物も、本発明によって提供される。
【０２７２】
本発明には、経口ではないＬｉｓｔｅｒｉａの投与方法が含まれる。静脈内ではないｉｓｔｅｒｉａの投与方法もまた提供される。さらに、筋肉内ではないＬｉｓｔｅｒｉａの投与方法が提供される。本発明により、食肉をベースとはしないか、または食肉または動物による産物に由来するポリペプチドが含まれていない培地で増殖させることによって調製された、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌、またはＬｉｓｔｅｒｉａ細菌の培養物もしくは懸濁物が提供される。植物性のポリペプチドが含まれている（すなわち、酵母の産物をベースとするか、または酵母のポリペプチドが含まれている）植物性の産物をベースとする培地の中で増殖させることによって調製された、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌、またはＬｉｓｔｅｒｉａ細菌の培養物もしくは懸濁物もまた本発明によって提供される。
【０２７３】
さらなる治療薬（例えば、サイトカイン、化学療法薬、抗生物質、または放射線）との同時投与、またはそれらでの処置のための方法は当業者に周知である（Ｈａｒｄｍａｎら（編）（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第１０版，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｐｏｏｌｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（編）（２００１）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｒ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ；Ｃｈａｂｎｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇｏ（編）（２００１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ）。
【０２７４】
投与される抗体、サイトカイン、または他の治療薬によって毒性が生じる場合には、適切な用量は、治療効果が毒性作用を上回る用量である。一般的には、本発明の最適な投与量は、患者の生命を脅かさないかまたは治療薬の効力を低下させることのないレベルに、全ての毒性作用を限定しつつ、治療効果を最大にする投与量である。毒性作用、または抗治療効果の兆候としては、例えば、抗イディオタイプ応答、治療用抗体に対する免疫応答、アレルギー反応；血液学的毒性および血小板毒性、アミノトランスフェラーゼ、アルカリホスファターゼ、クレアチンキナーゼの上昇、神経毒性、吐き気、および嘔吐が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ｈｕａｎｇら（１９９０）Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３６：４３１−４３４を参照のこと）。
【０２７５】
治療用抗体についての用量、投与スケジュール、および毒性を評価する方法は開示されている（例えば、Ｊａｙｓｏｎら（２００２）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９４：１４８４−１４９３；Ｗｅｌｔら（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．９：１３３８−１３４６；Ｋｉｐｓら（２００３）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．１６７：１６５５−１６５９；Ｔｏｌｃｈｅｒら（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２１：２１１−２２２；Ｍａｃｉｅｊｅｗｓｋｉら（２００３）Ｂｌｏｏｄ  １０２：３５８４−３５８６；Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏら（２００３）Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３０：１４２６−１４３５；Ｌｅｏｎａｒｄら（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２１：３０５１−３０５９；Ｔｏｂｉｎａｉ（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５２：補足１：Ｓ９０−Ｓ９６；Ｓｃｏｔｔら（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．９：１６３９−１６４７；Ｇｈｏｓｈら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２；Ｈａｓｓａｎら（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０：１６−１８；Ｌｅｂｗｏｈｌら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：２００４−２０１３；Ｏ’Ｂｒｉｅｎら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  ９８：２６５７−２６６３を参照のこと）。
【０２７６】
治療薬の有効量は、通常は、症状を少なくとも１０％、より通常は、少なくとも２０％、最も通常は、少なくとも３０％、典型的には、少なくとも４０％、より典型的には、少なくとも５０％、最も典型的には、少なくとも６０％、多くの場合は、少なくとも７０％、より多くの場合は、少なくとも８０％、そして最も多くの場合は、少なくとも９０％、便利には、少なくとも９５％、より便利には、少なくとも９９％、そして最も便利には、少なくとも９９．９％減少させるか、あるいは緩和するであろう量である。
【０２７７】
本発明の試薬および方法により、わずかに１回のワクチン接種が含まれる；または１回目のワクチン接種が含まれる；または少なくとも１回の追加のワクチン接種；少なくとも２回の追加のワクチン接種；あるいは、少なくとも３回の追加のワクチン接種が含まれる、ワクチン接種の方法が提供される。追加のワクチン接種のためのパラメーターの指針を利用することができる（例えば、Ｍａｒｔｈ（１９９７）Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ  ２５：１９９−２０３；Ｒａｍｓａｙら（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．７５：３８２−３８８；Ｇｈｅｒａｒｄｉら（２００１）Ｈｉｓｔｏｌ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．１６：６５５−６６７；Ｌｅｒｏｕｘ−Ｒｏｅｌｓら（２００１）Ａｃｔａ  Ｃｌｉｎ．Ｂｅｌｇ．５６：２０９−２１９；Ｇｒｅｉｎｅｒら（２００２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２：６９４４−６９５１；Ｓｍｉｔｈら（２００３）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｖｉｒｏｌ．７０：補足１：Ｓ３８−Ｓ４１；Ｓｕｐｕｌｖｅｄａ−Ａｍｏｒら（２００２）Ｖａｃｃｉｎｅ  ２０：２７９０−２７９５を参照のこと）。
【０２７８】
治療薬および診断薬の処方物は、生理学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することによって、例えば、凍結乾燥させられた粉末、スラリー、水性溶液または懸濁液の形態で、保存のために調製される場合がある（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｓｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓら（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ：Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ：Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｗｅｉｎｅｒ  ａｎｄ  Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．を参照のこと）。
【０２７９】
本発明によってはまた、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細胞、リステリア細胞培養物、または凍結乾燥させられた細胞の調製物と、仕切り（ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）とが含まれているキットも提供される。加えて、本発明により、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細胞、リステリア細胞培養物、または凍結乾燥させられた細胞調製物と、試薬とが含まれているキットが提供される。Ｌｉｓｔｅｒｉａ細胞、リステリア細胞培養物、または凍結乾燥させられた細胞調製物と、使用または廃棄についての説明書とが含まれているキットもまた提供される。さらに、本発明により、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細胞、リステリア細胞培養物、または凍結乾燥させられた細胞調製物と、仕切りおよび試薬とが含まれているキットが提供される。
【０２８０】
さらに、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細胞および抗体（または抗体に由来する結合化合物）が含まれているキットが提供される。使用のための説明書および抗体（または抗体に由来する結合化合物）が含まれているキットも利用することができる。さらに、仕切りと、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細胞および抗体（または抗体に由来する結合化合物）とが含まれているキットが提供される。Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌と、Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌を抗体とともに使用するための説明書とが含まれているキットもまた提供される。さらに、抗体と、抗体をＬｉｓｔｅｒｉａ細菌と共に使用するための説明書とが含まれているキットが提供される。
【０２８１】
本発明により、投与されたＬｉｓｔｅｒｉａに応答する組織または臓器の炎症を評価するためのキットおよび方法が提供される。炎症には、免疫細胞、白血球、リンパ球、好中球、ＮＫ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｂ細胞、プレ樹状細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、好酸球、好塩基球、および／または肥満細胞の数（生物学的区画の中で見られるもの）の増大、あるいは上記の任意の組み合わせなどが含まれる。本発明のキットによってはまた、上記の細胞の１つ以上の成熟状態または活性化状態を評価するための方法も提供される。細胞およびそれらの数を同定するためには、臓器、組織、または腫瘍を、免疫細胞を分散させるためのメッシュフィルターに通過させ、Ｐｅｒｃｏｌｌ（登録商標）を使用して精製し、そして蛍光活性化細胞選別法（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｓｏｒｔｉｎｇ）（ＦＡＣＳ）によって同定することができる（例えば、Ｗｏｏら（１９９４）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５８：４８４−４９１；Ｇｏｏｓｓｅｎｓら（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １３２：１３７−１４４を参照のこと）。炎症は、組織１グラムあたりの細胞の数、または炎症を起こしていない状態による数と比較した組織１グラムあたりの細胞数の増加として測定することができる。Ｌｉｓｔｅｒｉａによって誘導される組織の損傷を評価する方法（例えば、白血球増加症、リンパ球減少症、および／または血清トランスアミナーゼについてのアッセイ）もまた利用することができる（Ａｎｇｅｌａｋｏｐｏｕｌｏｓら（２００２）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７０：３５９２−３６０１；Ｒｏｃｈｌｉｎｇ（２００１）Ｃｌｉｎ．Ｃｏｒｎｅｒｓｔｏｎｅ  ３：１−１２；Ｒｏｅ（１９９３）Ｃｌｉｎ．Ｉｎｔｅｓｔｉｖｅ  Ｃａｒｅ  ４：１７４−１８２）。
【０２８２】
Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび以下：（ａ）ガン性または感染性の障害もしくは症状の抗原に特異的に結合する抗体；あるいは、（ｂ）それらの症状の抗原に特異的に結合し、そして抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する免疫細胞にも特異的に結合する抗体の抗原結合部位に由来する結合化合物；の１つ以上が含まれているキットが提供される。Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび、以下：（ａ）同時；あるいは、（ｂ）ガン性もしくは感染性の症状の抗原に特異的に結合する抗体、またはそれらの症状の抗原に特異的に結合し、そして抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を媒介する免疫細胞にも特異的に結合する抗体の抗原結合部位に由来する結合化合物とは異なるタイミング、または異なる時間間隔の間；のうちの一方または両方でＬｉｓｔｅｒｉａを投与するための説明書とが含まれているキットも提供される。
【０２８３】
ＸＩＩ．使用
本発明により、増殖性の症状または障害を処置するための免疫細胞の動員および／または活性化に使用される少なくとも１つの他の試薬と組み合わせてＬｉｓｔｅｒｉａを投与する方法が提供される。第２の試薬は、好ましくは、個体がそれについて処置される症状の抗原に特異的に結合する抗体であるか、また、あるいは、抗体の抗原結合部位に由来する結合化合物である。抗原結合化合物は、ＡＤＣＣを媒介する免疫細胞にも特異的に結合する。組織もしくは臓器の症状または障害を処置する方法が提供され、Ｌｉｓｔｅｒｉａは、例えば肝臓に自然に蓄積する。本発明は、肝障害を処置することに限定されないが、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓは向肝性の細菌であることに留意されるべきである。Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与する方法（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、経口、尿管による、生殖管による、消化管による、または吸入による）を利用することができる（Ｄｕｓｔｏｏｒら（１９７７）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １５：９１６−９２４；Ｇｒｅｇｏｒｙ  ａｎｄ  Ｗｉｎｇ（２００２）Ｌ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．７２：２３９−２４８；Ｈｏｆら（１９９７）Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖｓ．１０：３４５−３５７；Ｓｃｈｌｕｔｅｒら（１９９９）Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌ．２０１：１８８−１９５；Ｈｏｆ（２００４）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．５：１７２７−１７３５；Ｈｅｙｍｅｒら（１９８８）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  １６（補遣２）：Ｓ１０６−１１１；Ｙｉｎら（２００３）Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  １１１：５２４−５３０）。
【０２８４】
本発明により、乳ガン、卵巣ガン、子宮頸ガン、外陰ガン、子宮内膜ガン、前立腺ガン、精巣ガン、肺ガン、気管支ガン、口腔ガン、咽頭ガン、下咽頭ガン、鼻咽頭ガン、喉頭ガン、食道ガン、胃ガン、小腸ガン、結腸ガン、直腸ガン、消化管カルチノイド腫瘍、膀胱ガン、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、皮膚の黒色腫、皮膚ガン（黒色腫以外）、腎臓ガン、ウィルムス腫瘍、尿管ガン、膵臓ガン、頭部のガン、頸部のガン、甲状腺ガン、脳のガン、眼および眼窩のガン、網膜芽細胞腫、多発性骨髄腫、肝臓ガン、胆道系のガン、胆嚢ガン、胆管ガン、白血病、急性および慢性リンパ芽球性白血病、急性および慢性骨髄性白血病、心臓を含む柔組織のガン、柔組織の肉腫、肋膜のガン、悪性中皮腫、骨のガン、関節のガン、鼻のガン、鼻腔のガン、中耳のガン、腹膜のガン、網のガン、腸間膜のガンを予防および／または処置する方法が意図される（例えば、Ｄｅｖｉｔａら（編）（２００４）Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，第７版．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｌｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ；Ｃａｓｃｉａｔｏ（編）（２００４）Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，第５版．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ．；Ｐｉｚｚｏ  ａｎｄ  Ｐｏｐｌａｃｋ（編）（２００１）Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｌａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，第４版．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ．；Ｒｕｂｉｎら（編）（２００１）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｍｕｌｔｉ−Ｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｆｏｒ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ  ａｎｄ  Ｓｔｕｄｅｎｔｓ，第８版、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａ．，ＰＡ．；Ｓｃｈｅｉｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｊｕｒｃｉｃ（２００４）Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡを参照のこと）。
【０２８５】
本発明により、異常に増殖している細胞の数の減少、ガン細胞の数の減少、腫瘍細胞の数の減少、腫瘍の容積の減少、生物学的液体もしくは組織（例えば、血清）の単位あたりの感染性生物または病原体の数の減少、ウイルス力価（例えば、血清）の減少が生じるが、これらに限定されない。この場合、これらは通常、少なくとも５％減少され、より通常は、少なくとも１０％減少され、もっとも通常は、少なくとも１５％減少され、好ましくは、少なくとも２０％減少され、より好ましくは少なくとも２５％減少され、最も通常は、少なくとも３０％減少され、通常は、少なくとも４０％減少され、より通常は、少なくとも５０％減少され、最も通常は、少なくとも６０％減少され、慣用的には、少なくとも７０％減少され、より慣用的には、少なくとも８０％減少され、最も慣用的には、少なくとも９０％減少され、そしてなおも最も慣用的には、少なくとも９９％減少される。減少の単位は、腫瘍細胞数／哺乳動物被験体；腫瘍細胞数／肝臓；腫瘍細胞数／脾臓；腫瘍細胞の質量／哺乳動物被験体；腫瘍細胞の質量／肝臓；腫瘍細胞の質量／脾臓；肝臓１グラムあたりのウイルス粒子もしくはウイルス数または力価；細胞あたりのウイルス粒子もしくはウイルス数または力価；血液１ｍｌあたりのウイルス粒子もしくはウイルス数または力価などであり得るが、これらに限定されない。
【０２８６】
本発明により、例えば、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、樹状細胞、および他のＡＰＣ、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、およびγδＴによって媒介される先天応答を刺激する試薬および方法が提供される。
【０２８７】
例えば、ＡＰＣ（肝臓に移動するＡＰＣ、肝臓で成熟させられるＡＰＣ、または肝臓内に配置されるＡＰＣ、例えば、樹状細胞（ＤＣ）、クッパー（Ｋｕｐｆｅｒ）細胞、または肝臓洞様血管内皮細胞（ＬＳＥＣ））によって媒介される先天応答を刺激する試薬および方法が提供される。本発明は、別途記載しない限りまたは文脈により、先天応答を媒介する受容体、シグナル伝達分子、または細胞に限定されない。
【０２８８】
Ｌｉｓｔｅｒｉａを調製するために使用される増殖培地は、化学分析、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、質量スペクトル分析、ガスクロマトグラフィー、分光高度測定法などによって特性決定することができる。増殖培地はまた、その培地の成分に特異的な抗体によって特性決定することもでき、成分は、Ｌｉｓｔｅｒｉａとの混入物質として（例えば、リステリアの粉末、凍結乾燥させられた調製物、または細胞ペーストの中の混入物質として）存在する。ペプチドもしくはタンパク質抗原、または糖脂質、糖ペプチド、もしくはリポペプチド抗原に特異的な抗体は、動物を起源とする混入物質を検出するために考案されたＥＬＩＳＡアッセイにおいて使用することができる。動物起源の抗原、または抗原性断片を検出することに使用される抗体が利用可能である（例えば、Ｆｕｋｕｔａら（１９７７）Ｊｐｎ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．１８：６９６−７０４；ＤｅＶａｙ  ａｎｄ  Ａｄｌｅｒ（１９７６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３０：１４７−１６８；Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら、（１９８４）Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４６：３４−４１；Ｋａｗａｋｉｔａら（１９７９）Ｊｐｎ．Ｃｉｒ．Ｊ．４３：４５２−４５７；Ｈａｎｌｙら（１９９４）Ｌｕｐｕｓ  ３：１９３−１９９；Ｈｕｐｐｉら（１９８７）Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．１２：６５９−６６５；Ｑｕａｃｋｅｎｂｕｓｈら（１９８５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２２５：２９１−２９９を参照のこと）。本発明により、免疫系に対するＬｉｓｔｅｒｉａの影響の試験を容易にするキットおよび診断方法が提供される。試験には、１つのＬｉｓｔｅｒｉａ株を、別のＬｉｓｔｅｒｉａ株と、または親Ｌｉｓｔｅｒｉａ株を変異したＬｉｓｔｅｒｉａ株と比較する工程が含まれ得る。試験方法には、例えば、食作用、拡散、抗原提示、Ｔ細胞の刺激、サイトカイン応答、宿主の毒性、ＬＤ５０、および病理学的症状を緩和する効率が含まれる。
【０２８９】
本発明により、増殖性の障害、腫瘍、ガン、免疫障害、および／または感染性物質に対する被験体、宿主、患者、試験被験体、実験用被験体、獣医学的被験体などの生存性を高める方法が提供される。感染性物質は、ウイルス、細菌、もしくは寄生虫、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。この方法には、例えば、懸濁液、ボーラス、ゲル、マトリックス、注射、または注入などとしてＬｉｓｔｅｒｉａを投与する工程が含まれる。投与されたＬｉｓｔｅｒｉａは、適切な対照（何も投与されていない対照、またはプラセボが投与された対照など）と比較して、通常は、少なくとも１日、より通常は、少なくとも４日、最も通常は、少なくとも８日、通常は、少なくとも１２日；より通常は、少なくとも１６日；最も通常は、少なくとも２０日、多くの場合は、少なくとも２４日；より多くの場合は、少なくとも２８日；最も多くの場合は、少なくとも３２日、慣用的には、少なくとも４０日、より慣用的には、少なくとも４８日；最も慣用的には、少なくとも５６日；典型的には、少なくとも６４日；より典型的には、少なくとも７２日；最も典型的には、少なくとも８０日；一般的には、少なくとも６ヶ月間；より一般的には、少なくとも８ヶ月間；最も一般的には、少なくとも１０ヶ月間；通例では、少なくとも１２ヶ月間；より通例は、少なくとも１６ヶ月間；そして最も通例では、少なくとも２０ヶ月間、またはそれ以上に生存性を高める。
【０２９０】
本発明により、上記で開示された態様のそれぞれが提供され、投与されるＬｉｓｔｅｒｉａは、他のタイプの細菌を少なくとも９０％含まない組成物、他のタイプの細菌を少なくとも９５％含まない組成物、他のタイプの細菌を少なくとも９９％含まない組成物、または他のタイプの細菌を少なくとも９９．９％含まない組成物として投与される。他のタイプの細菌としては、例えば、上記で開示されたもの以外のＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓの血清型が挙げられる。他のタイプの細菌にはまた、例えば、Ｌ．ｗｅｌｓｈｉｍｅｒｉ、Ｌ，ｓｅｅｌｉｇｅｒｉ、Ｌ．ｉｎｎｏｃｕａ、Ｌ．ｇｒａｙｉ、Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）も含まれる（Ｓｉｌｖａら（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｆｏｏｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．８１：２４１−２４８；Ｐｉｎｉ  ａｎｄ  Ｇｉｌｂｅｒｔ（１９８８）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｆｏｏｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６：３１７−３２６；Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｔｓ（２００３）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｔｅｓｔｓ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ，Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｂｏａｒｄ  ｏｆ  Ｔｒｕｓｔｅｅｓ，ｐｐ．２１４８−２１６２）。
【０２９１】
本発明により、死滅しているが代謝的に活性な（ＫＢＭＡ）Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌、またはＬｉｓｔｅｒｉａ株が提供される（例えば、Ｂｒｏｃｋｓｔｅｄｔら（２００５）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．［Ｊｕｌｙ  ２４  ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ］を参照のこと）。ＫＢＭＡ  Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌は代謝的に活性であるが、例えば、寒天にてコロニーを形成することはできない。少なくとも１つのＤＮＡ修復遺伝子の不活化変異（例えば、ΔｕｖｒＡＢ）は、低濃度の核酸架橋剤（例えば、ソラレン）濃度を使用してＬｉｓｔｅｒｉａを死滅させることができ、これらの濃度は、コロニーの形成を防ぐためには十分であるが、実質的に代謝を損傷させるには十分ではない。ソラレン／ＵＶＡ光での限定された処置、および／または鎖間ゲノム架橋を作成することに高度に特異的である核酸架橋剤での処置の結果は、細菌細胞を死滅させるが、代謝的活性を維持することである。
【０２９２】
上記で開示された方法のそれぞれでは、Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび賦形剤、Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび担体、Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび緩衝液、Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび試薬、Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび薬学的に許容される担体、Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび農業的に許容される担体、Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび獣医学的に許容される担体、Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび安定剤、Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび保存剤などが含まれている組成物の投与が意図される。
【０２９３】
本発明により、ガン性（新生物、悪性腫瘍、ガン、腫瘍、および／または前ガン状態の障害、過形成など）ならびに感染性（感染）の両方の症状を処置する試薬および方法が提供される。ガン性（新生物、悪性腫瘍、ガン、腫瘍、および／または前ガン状態の障害、過形成など）ならびに感染性の両方の障害を処置する試薬および方法が提供される。特定のウイルス（例えば、パピローマウイルスおよびポリオーマウイルス）による感染の場合には、結果は、ガン性の症状であり得、そしてここでは、症状はガン性と感染性との両方である。ガン性であり、かつ感染性でもある症状（限定ではない例として、ウイルス感染によってガン性の細胞が生じる場合、およびガン性の細胞がウイルスによってコードされる抗原を発現する場合）を検出することができる。別の限定ではない例としては、ガン性であり、かつ感染性もである症状は、腫瘍細胞に対する免疫応答にウイルスをコードする抗原に対する特異的認識が含まれている症状である（例えば、Ｍｏｎｔｅｓａｎｏら（１９９０）Ｃｅｌｌ  ６２：４３５−４４５；Ｉｃｈａｓｏ  ａｎｄ  Ｄｉｌｗｏｒｔｈ（２００１）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２０：７９０８−７９１６；Ｗｉｌｓｏｎら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：３９３３−３９４１；Ｄａｅｍｅｎら（２００４）Ａｎｔｉｖｉｒ．Ｔｈｅｒ．９：７３３−７４２；Ｂｏｕｄｅｗｉｊｎら（２００４）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９６：９９８−１００６；Ｌｉｕら（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０１：１４５６７−１４５７１を参照のこと）。
【０２９４】
本発明により、複数回の用量により弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａ（例えば、ＬｍΔａｃｔＡまたはＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ）、および複数回の用量により弱毒化された腫瘍ワクチンを投与する方法が提供される。１つの態様においては、弱毒化された腫瘍は、サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）をコードする核酸を含むように操作される。別の態様においては、弱毒化された腫瘍は、サイトカインをコードする核酸を含むようには操作されない。
【０２９５】
本発明により、例えば、腫瘍、ガン、感染性物質、ウイルス、寄生虫、または細菌抗原に対する適応的免疫（長期にわたる適応的免疫；メモリー応答；およびリコール応答が含まれる）を刺激するための、代謝的に活性なＬｉｓｔｅｒｉａの投与が含まれる方法が提供される。本発明には、さらに、１つ以上のサイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ、弱毒化された腫瘍、サイトカインを発現する弱毒化された腫瘍、またはＴｒｅｇｓの阻害剤（例えば、シクロホスファミド（ＣＴＸ））の投与がさらに含まれている上記方法が含まれる。別の態様においては、上記発明には、Ｌｉｓｔｅｒｉａが異種抗原（例えば、腫瘍細胞に由来する抗原、ガン細胞、または感染性物質）を発現するようには操作されていない上記方法が含まれる。
【０２９６】
本発明により、弱毒化させられた腫瘍細胞（例えば、照射された転移性細胞）とともに、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａ（例えば、ＬｍΔａｃｔＡまたはＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ）を投与する工程が含まれている方法が提供され、細胞は、サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）を発現するように操作されている。本発明においては、Ｌｉｓｔｅｒｉａは、任意の異種抗原（例えば、腫瘍または感染性物質の抗原）をコードする任意の核酸が含まれるようには操作されない。本発明の別の態様においては、Ｌｉｓｔｅｒｉａは、異種抗原をコードする核酸を含むように操作される。別の態様においては、投与には、腫瘍抗原（例えば、投与される弱毒化された腫瘍細胞の腫瘍抗原）を特異的に認識する抗体または抗体に由来する結合組成物も含まれる。
【０２９７】
ＸＩＩＩ．一般的方法
生化学および分子生物学の標準的な方法は記載されている（例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，第３版．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ，第２１７巻，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｉｎｎｉｓら（編）（１９９０）ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．を参照のこと）。標準的な方法はまた、Ａｕｓｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．第１〜４巻，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹにも見ることができる（これには、細菌細胞でのクローニングおよびＤＮＡの突然変異誘発（第１巻）、哺乳動物細胞および酵母でのクローニング（第２巻）、糖結合体およびタンパク質の発現（第３巻）、ならびにバイオインフォマティックス（第４巻）が記載されている）。融合タンパク質を産生させる方法が記載されている（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（２００５）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ；Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．（２００５）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ；Ｌｉｕら（２００１）Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｅｐｔ．Ｓｃｉ．２：１０７−１２１；Ｇｒａｄｄｉｓら（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：２８５−２９７を参照のこと））。スプライスオーバーラップエクステンションＰＣＲ、および関連する方法が記載されている（例えば、Ｈｏｒｔｏｎｒら（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ８：５２８−５３５；Ｈｏｒｔｏｎら（１９８９）Ｇｅｎｅ  ７７：６１−６８；Ｈｏｒｔｏｎ（１９９５）Ｍｏｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：９３−９９；Ｗａｒｒｅｎｓら（１９９７）Ｇｅｎｅ  １８６：２９−３５；Ｇｕｏ  ａｎｄ  Ｂｉ（２００２）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９２：１１１−１１９；Ｊｏｈｎｓｏｎ（２０００）Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ４１：２０１−２０９；Ｌａｎｔｚら（２０００）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．５：８７−１３０；Ｇｕｓｔｉｎ  ａｎｄ  Ｂｕｒｋ（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３０：８５−９０；ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ（登録商標）Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔ，Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡを参照のこと）。宿主の最適なコドンに適合させるためのシグナルペプチド、分泌タンパク質、および異種抗原のコドン選択の操作が記載されている（Ｓｈａｒｐら（１９８７）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５：１２８１−１２９５；Ｕｃｈｉｊｉｍａら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：５５９４−５５９９）。
【０２９８】
タンパク質を精製する方法（例えば、免疫沈降、カラムクロマトグラフィー、電気泳動、等電点電気泳動法、遠心分離、および結晶化）が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，第１巻，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。タンパク質の化学分析、化学改変、翻訳後修飾、およびグリコシル化が記載されている。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，第２巻，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｗａｌｋｅｒ（編）（２００２）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｗｏｔａ，ＮＪ；Ｌｕｎｄｂｌａｄ（１９９５）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬを参照のこと。結合相互作用を特性決定するための技術が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第４巻，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｐａｒｋｅｒら（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｃｒｅｅｎ．５：７７−８８；Ｋａｒｌｓｓｏｎら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １４５：２２９−２４０；Ｎｅｒｉら（１９９７）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：１２７１−１２７５；Ｊｏｎｓｓｏｎら（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：６２０−６２７；Ｆｒｉｇｕｅｔら（１９８５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ７７：３０５−３１９；Ｈｕｂｂｌｅ（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １８：３０５−３０６；Ｓｈｅｎら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：４７３１１−４７３１９）。
【０２９９】
例えば、抗原性断片、リーダー配列、タンパク質の折り畳み、機能性ドメイン、グリコシル化部位、および配列アラインメントを決定するためのソフトウェアパッケージを利用することができる（例えば、Ｖｅｃｔｏｒ  ＮＴＩ（登録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）；ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｐａｃｋａｇ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）；ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ  Ｃｏｒｐ．，Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｂａｙ，Ｎｅｖａｄａ）；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １６：７４１−７４２；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｎｏｔｅ  １６：７４１−７４２；Ｗｒｅｎら（２００２）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｐｒｏｇｒａｍｓ  Ｂｉｏｍｅｄ．６８：１７７−１８１；ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３３：１７−２１；ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：４６８３−４６９０を参照のこと）。コード配列（ＣＤＳ）を決定する方法が利用可能である（Ｆｕｒｏｎｏら（２００３）Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．１３：１４７８−１４８７）。
【０３００】
ＭＨＣクラスＩおよび／またはＭＨＣクラスＩＩに結合するペプチドを同定するコンピューターアルゴリズム（例えば、ＢＩＭＡＳ；ＳＹＦＰＥＩＴＨＩ）が利用可能である（Ｔｈｏｍａｓら（２００４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２００：２９７−３０６）。これらのアルゴリズムにより、同定されたペプチドが含まれているタンパク質をコードする本発明の核酸を提供することができる。
【０３０１】
リステリアのタンパク質および核酸の配列は、ワールドワイドウェブ上で：（１）ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ；（２）ｇｅｎｏｌｉｓｔ．Ｐａｓｔｅｕｒ（「ｌｉｓｔｉｌｉｓｔ」をクリックする）；および（３）ｔｉｇｒ．ｏｒｇ（「ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｒｅｓｏｕｒｃｅ」をクリックする）で見ることができる。
【０３０２】
ＡＰＣによるＬｉｓｔｅｒｉａのインターナリゼーションを評価するために、およびＡＰＣによるリステリアによってコードされる抗原の提示を評価するために、複数の方法が利用可能である。Ｔ細胞に対するこれらの抗原の提示方法、およびＴ細胞の抗原依存性感作を評価する方法を利用することができる。適切なＡＰＣはマウスＤＣ２．４細胞株であり、一方、適切なＴ細胞は、Ｂ３Ｚ  Ｔ細胞ハイブリドーマである（例えば、２００３年７月２４日に提出された米国仮特許出願番号６０／４９０／０８９；Ｓｈｅｎら（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：２７２３−２７３０；Ｋａｗａｍｕｒａら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：５７０９−５７１５；Ｇｅｇｉｎａｔら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：１８７７−１８８４；Ｓｋｏｂｅｒｎｅら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：２２０９−２２１８；Ｗａｎｇら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０９１−１０９７；Ｂｕｌｌｏｃｋら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：２３５４−２３６１；Ｌｉｐｐｏｌｉｓら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：５０８９−５０９７を参照のこと）。樹状細胞（ＤＣ）の調製、ＤＣのエキソビボでの改変、および改変されたＤＣの投与（例えば、ガン、病原体、もしくは感染性物質の処置のための）のための方法を利用することができる（例えば、Ｒｉｂａｓら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２７：３５４−３６７；Ｇｉｌｂｏａ  ａｎｄ  Ｖｉｅｗｅｇ（２００４）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１９９：２５１−２６３；Ｄｅｅｓら（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５３：７７７−７８５；Ｅｒｉｋｓｓｏｎら（２００４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４：１２７２−１２８１；Ｇｏｌｄｓｚｍｉｄら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１：５９４０−５９４７；Ｃｏｕｇｈｌｉｎ  ａｎｄ  Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．２：４６６−４７０；Ｃｏｌｉｎｏ  ａｎｄ  Ｓｎａｐｐｅｒ（２００３）Ｍｉｃｒｏｂｅｓ  Ｉｎｆｅｃｔ．５：３１１−３１９を参照のこと）。
【０３０３】
免疫細胞を特性決定するＥｌｉｓｐｏｔアッセイおよび細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）が利用可能である（例えば、Ｌａｌｖａｎｉら（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．ＭＥｄ．１８６：８５９−８６５；Ｗａｌｄｒｏｐら（１９９７）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９９：１７３９−１７５０；Ｈｕｄｇｅｎｓら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８８：１９−３４；Ｇｏｕｌｄｅｒら（２００１）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５：１３３９−１３４７；Ｇｏｕｌｄｅｒら（２０００）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９２：１８１９−１８３１；Ａｎｔｈｏｎｙ  ａｎｄ  Ｌｅｈｍａｎ（２００３）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２９：２６０−２６９；Ｂａｄｏｖｉｎａｃ  ａｎｄ  Ｈａｒｔｙ（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３８：１０７−１１７を参照のこと）。
【０３０４】
ガン、転移、および血管形成の実験において動物を使用する方法、ならびに、ヒトの処置を推定するために動物の腫瘍データを使用する方法が利用可能である（例えば、Ｈｉｒｓｔ  ａｎｄ  Ｂａｌｍａｉｎ（２００４）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ４０：１９７４−１９８０；Ｇｒｉｓｗｏｌｄら（１９９１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．１０：２５５−２６１；Ｈｏｆｆｍａｎ（１９９９）Ｉｎｖｅｓｔ．Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ  １７：３４３−３５９；Ｂｏｏｎｅら（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：２−９；Ｍｏｕｌｄｅｒら（１９８８）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．１４：９１３−９２７；Ｔｕｖｅｓｏｎ  ａｎｄ  Ｊａｃｋｓ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．１２：１０５−１１０；Ｊａｃｋｓｏｎ−Ｇｒｕｓｂｙ（２００２）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２１：５５０４−５５１４；Ｔｅｉｃｈｅｒ，Ｂ．Ａ．（２００１）Ｔｕｍｏｒ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ；Ｈａｓａｎら（２００４）Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ７：１−１６；Ｒａｄｏｖａｎｏｖｉｃら（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｓ．１１７：９７−１１４；Ｋｈａｎｎａ  ａｎｄ  Ｈｕｎｔｅｒ（２００４）Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ２６：５１３−５２３；Ｃｒｎｉｃ  ａｎｄ  Ｃｈｒｉｓｔｏｆｏｒｉ（２００４）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．４８：５７３−５８１を参照のこと）。
【０３０５】
結腸直腸ガンの肝臓転移は、腫瘍細胞の原発性肝臓注射（ｐｒｉｍａｒｙ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、門静脈注射、または全脾臓注射を使用して生じさせることができる（例えば、Ｓｕｈら（１９９９）Ｊ．Ｓｕｒｇｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ７２：２１８−２２４；Ｄｅｎｔ  ａｎｄ  Ｆｉｎｌｅｙ−Ｊｏｎｅｓ（１９８５）Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ５１：５５３−５４１；Ｙｏｕｎｇら（１９８６）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．７６：７４５−７５０；Ｗａｔｓｏｎら（１９９１）Ｊ．Ｌｓｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．４９：１２６−１３８を参照のこと）。
【０３０６】
本発明の広範な範囲は、以下の実施例を参照して最もよく理解される。以下の実施例は、いずれの特異的な態様に対しても本発明を限定することを意図しない。
【実施例】
【０３０７】
Ｉ．実施例で使用した標準的方法
本発明の作業で使用したＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株が記載されている（例えば、Ｂｒｏｃｋｓｔｅｄｔら（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０１：１３８３２−１３８３７を参照のこと）。Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢは、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）からＰＴＡ−５５６２として入手することができる。Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡΔｕｖｒＡＢは、ＡＴＣＣからＰＴＡ−５５６３として入手することができる。
【０３０８】
多数の動物種様モデルを使用し、これらのモデルはＢＡＬＢ／ｃマウス、および同系の結腸直腸ガン株ＣＴ２６（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２６３８）を利用した。本発明で使用したモデルには：（１）皮下ＣＴ２６腫瘍；および（２）外科手術によって二等分された脾臓の半分への腫瘍細胞の注射、その直後の注射された半分の切除（ヘミ脾臓モデル）を含めた。ヘミ脾臓モデルによって、脾臓の中に原発性の腫瘍を生じさせることなく、結腸直腸ガンの肝臓転移を確立させた。ヘミ脾臓方法により、注射された脾臓の原発性の腫瘍の存在を伴うことなく、門脈の循環を通じた腫瘍細胞を有している肝臓の播種が可能である。示すように、マウスをＧＭ−ＣＳＦを分泌する腫瘍ワクチンで処置し、ワクチン接種は腫瘍のチャレンジの３日後に開始した。
【０３０９】
ＣＴ２６（不死化マウス結腸直腸ガン細胞株（メチルコランテリンに対するＢＡＬＢ／ｃバックグラウンドマウスの直腸組織の暴露によって作成した））を使用して、本実験で使用した腫瘍を確立させた（Ｃｏｒｂｅｔｔら（１９７５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．３５：２４３４−２４３９）。ワクチン細胞株は、複製欠損ＭＦＧレトロウイルスベクターを使用してマウスＧＭ−ＣＳＦを分泌するように形質導入したＣＴ２６細胞から誘導した（Ｄｒａｎｏｆｆら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：３５３９−３５４３）。腫瘍細胞株を、９００ｍｌのＲＰＭＩ培地、１００ｍｌの１０％熱不活化ウシ胎児血清、１０ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシン（１０，０００Ｕ／ｍｌ）、１０ｍｌのＭＥＭ非必須アミノ酸（１０ｍＭ）、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（１Ｍ）、１０ｍｌのピルビン酸ナトリウム（１００ｍＭ）、および１０ｍｌのＬ−グルタミン酸（２００ｍＭ）を含む（ｖｏｌ／ｖｏｌ）腫瘍培地で増殖させた。
【０３１０】
皮下腫瘍モデルの実験のために、ＢＡＬＢ／ｃマウスに、０．０５ｍｌのＨＢＳＳに懸濁させた１０万個のＣＴ２６結腸直腸ガン細胞を左下の乳首の下に注射した。腫瘍を、対照マウスの中で２８日間増殖させた。キャリパーを使用して３次元で、１週間に２回腫瘍を測定した。処置したマウスには、１週間に２回の原則でＧＭ−ＣＳＦを分泌する腫瘍細胞をワクチン接種した。
【０３１１】
ヘミ脾臓注射は以下のように行った、ＢＡＬＢ／ｃマウスを麻酔し、そして脾臓を露出させた。脾臓を２つのヘミ脾臓に分け、血管茎（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｐｅｄｉｃｌｅｓ）は完全なまま残した。２７ゲージ針を使用し、０．４ｍｌのＨＢＳＳ緩衝液中の約１０万個の生存しているＣＴ２６細胞を脾臓に注射し、それによって細胞を肝臓へと移動させた。ガンが含まれているヘミ脾臓を排出する血管茎をクリップで結紮し、そしてＣＴ２６が混入しているヘミ脾臓を切除し、腫瘍細胞が含まれていない機能性のヘミ脾臓を残した。
【０３１２】
示した１つの実験を除く全ての実験において、ワクチン（腫瘍細胞ワクチン）を、γ線で腫瘍細胞を処理することによって調製した。この１つの実験では、ワクチンを、光化学的処理によって調製した（ソラレンおよびＵＶ線）。示した場合を除く全ての実験において、投与した接種物において使用した病原性ＣＴ２６腫瘍細胞（ワクチンにおいて使用した弱毒化されたＣＴ２６ではない）の数は、約１０万個の細胞であった。γ線または光化学的処理を行った目的の腫瘍細胞は、抗原（単数または複数）を提供することができ、そして免疫調節剤（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）を発現することができるが、増殖および／または複製できない弱毒化された腫瘍細胞を生じる。ＧＭ−ＣＳＦをコードする核酸がワクチンの一部として使用される場合には、用語「ＧＭワクチン」および「ＧＭ−ＣＳＦワクチン」は交換可能に使用される場合がある。
【０３１３】
一般的には、Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与したマウスは、２０〜２５グラムの重量であり、そして約０．００６６平方メートルの表面積を有していた。
【０３１４】
抗ＣＤ１６／３２、抗ＣＤ６９、抗ＣＤ２５、および抗ＣＤ３は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）による。ＮＫ細胞およびＮＫ−Ｔ細胞の数の合計を以下の混合物を使用して決定した：全ての白血球を染色するため、、残りの肝臓細胞からこれらを分離するためのＣＤ４５、および分析からＢ細胞を排除するためのＣＤ１９。その後、ＤＸ−５に対するＣＤ３の２パラメーターのプロットを、Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＤＸ−５−）、ＮＫ細胞（ＤＸ−５＋ＣＤ３−）、およびＮＫ−Ｔ細胞（ＣＤ３＋ＤＸ−５＋）を同定するために使用した。シクロホスファミドはＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）によるものであり、そして動物への注射の前にＨＢＳＳの中に溶解させた。
【０３１５】
弱毒化させたＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ（例えば、ＬｍΔａｃｔＡおよびＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ）の調製、腫瘍抗原ＡＨ１−Ａ５をコードする核酸を操作する試薬および方法、またはＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ（Ｌｍ）中のオボアルブミンをコードする核酸の調製、肝臓網のトランスフェラーゼを測定する方法、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ（登録商標））のための装置、および腫瘍の転移を測定する方法が記載されている（Ｂｒｏｃｋｓｔｅｄｔら（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０１：１３８３２−１３８３７）。
【０３１６】
ＩＩ．抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）
ＡＤＣＣを以下の実験計画にしたがって明らかにした。Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ（Ｌｍ）をマウスに投与し、その後、免疫系と相互作用させるための時間の間隔をおき、その後、刺激された脾臓細胞の除去、脾臓細胞の標的細胞への暴露、および標的細胞の脾臓細胞による溶解を可能にするためのインキュベーションを行った。標的細胞の溶解は、脾臓細胞の起源がＬｍで処置されたマウスである場合に増強され、さらなる増強は、抗体の付加とともに起こった。
【０３１７】
図１Ａから１Ｄは、ＡＤＣＣにおけるＬｍと抗体の間での相乗作用を示している。
【０３１８】
相乗効果は、Ｌｉｓｔｅｒｉａのみ、抗体のみ、またはＬｉｓｔｅｒｉａおよび抗体を投与した場合の、死滅の割合（％）を比較することによって明らかであるように生じた。数を見ると、図１Ａは、抗体だけでの死滅が約３％であったことを示している。Ｌｉｓｔｅｒｉａだけを用いた場合には約１１％であったが、抗体とＬｉｓｔｅｒｉａとの組み合わせを用いた場合には、死滅は約１９％であった。図１Ｃは、同じ効果、すなわち、抗体だけでの死滅が約３％であり、Ｌｉｓｔｅｒｉａだけを用いた場合の死滅は約８％であり、相乗効果は、抗体とＬｉｓｔｅｒｉａとの両方の投与後に示される（約２０％の示す）ことを示している（図１Ｃ）。
【０３１９】
ｉ．方法
詳細には、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢをマウスに投与し、２４時間後に脾臓を取り出し、そして添加した抗体の存在下および不在下での、標的の腫瘍細胞のインビトロで脾臓細胞によって媒介される溶解を決定した。抗体は、マウスハイブリドーマに由来するヒト化抗体であり、抗体は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）に特異的であった。
【０３２０】
マウスを３つの方法で調製した。Ｃ５７Ｂｌ／６マウスを以下で処置した：（１）ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ（１×１０７ｃｆｕ）（実験用マウス）；（２）１００マイクログラムのポリ（Ｉ：Ｃ）（ポジティブ対照マウス）；または（３）ハンクス（Ｈａｎｋｓ）緩衝化塩溶液（ＨＢＳＳ）（ネガティブ対照マウス）。
【０３２１】
ポリ（Ｉ：Ｃ）は、インビボまたはインビトロで投与された場合にも、免疫細胞を活性化させる（例えば、Ｌａｓｋａｙら（１９９３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：２２３７−２２４１；Ｓｃｈｍｉｄｔら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：１３８−１４３；Ｇｅｒｏｓａら（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：７２７−７３４を参照のこと）。
【０３２２】
細菌、ポリ（Ｉ：Ｃ）、またはＨＢＳＳの投与の２４時間後に脾臓を回収し、単細胞懸濁物を調製し、そして懸濁物を標的細胞（５１Ｃｒを負荷したＡ４３１細胞）と混合した。標的細胞との脾臓細胞懸濁物の混合後、標的細胞の溶解を評価した。
【０３２３】
Ａ４３１細胞は、表皮扁平上皮細胞ガン細胞株（ＣＲＬ−１５５５、アメリカンタイプカルチャーコレクション、Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）である。標的細胞は以下のうちの１つと予め混合した：
（１）ＨＢＳＳ；
（２）抗表皮成長因子受容体抗体、Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（２または２０マイクログラム／ｍｌ；最終濃度）；または
（３）抗表皮成長因子受容体抗体、Ｃ２２５抗体（１または１０マイクログラム／ｍｌ；最終濃度）、その後に３０分のインキュベーション。
【０３２４】
Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）はＩｍｃｌｏｎｅ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）によるものである。Ｃ２２５抗体はアメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）によるＡＴＣＣ番号ＨＢ−８５０８であった。
【０３２５】
一旦、標的細胞を抗体とともにインキュベートし、その後、細胞を脾臓細胞と混合し、脾臓細胞によって媒介される標的細胞の溶解が、４時間生じることが許容される。溶解を５１Ｃｒの放出を測定することによって評価した。溶解アッセイには、０．２ｍｌ中に一定の数の標的細胞（５，０００個の細胞）を含めた。脾臓細胞の集団には、様々な免疫細胞（ＮＫ細胞が含まれる）が含まれていた。インキュベーション混合物では、標的細胞に対するＮＫ細胞の割合を、約０．１０から約１０．０までの特定の比として存在するように制御した（図１Ａから１Ｄ）。
【０３２６】
ｉｉ．結果
以下は、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢで処置したマウスから単離した脾臓細胞に関する。これらのＬｉｓｔｅｒｉａに曝された脾臓細胞を用いた場合には、標的細胞の死滅は、ＮＫ細胞／標的細胞の比の増大とともに増大し、死滅はＥｒｂｉｔｕｘ（登録商標）によって（図１Ａ、上部の３つの曲線）、さらには、Ｃ２２５抗体によっても（図１Ｃ、上部の３つの曲線）刺激されることが明らかとなった。最も高いＮＫ細胞／標的細胞比では、標的細胞のＬｉｓｔｅｒｉａに曝された脾臓細胞による死滅の割合（％）は約１１％（抗体なし）、および約１９％（２０マイクログラム／１ｍｌのＥｒｂｉｔｕｘ（登録商標））であった（図１Ａ）。他の抗体源（Ｃ２２５）を用いた場合には、結果は以下の通りであった（図１Ｃ）。最も高いＮＫ細胞／標的細胞比では、標的細胞のＬｉｓｔｅｒｉａに曝された脾臓細胞による死滅の割合は約８％（抗体なし）、および約２１％（１０マイクログラム／ｍｌ  Ｃ２２５）であった（図１Ｃ）。ポジティブ対照のインキュベーションにおいては、脾臓細胞の源がポリ（Ｉ：Ｃ）で処置したマウスである場合には、ポリ（Ｉ：Ｃ）での処置は、標的細胞の脾臓細胞による死滅を増大させることが明らかとなり、この死滅は、抗体を添加することによってさらに増大した（図１Ｂ、上部の３つの曲線、および図１Ｄ、上部の３つの曲線）。
【０３２７】
結果は以下の通りである（図１Ａから１Ｄ）。図１Ａから１Ｄのそれぞれの下部の３つの曲線は対照を示し、全ての対照に、ＨＢＳＳで処置されたマウスから単離された脾臓細胞が含まれた。対照マウス（Ｌｉｓｔｅｒｉａなし、およびポリ（Ｉ：Ｃ）なし）に由来する脾臓細胞を用いた場合には、標的細胞の約２から４％が死滅し、ＮＫ細胞／標的細胞の様々な比によって死滅した割合（％）にはほとんど変化がないか、または全く変化はなかった。
【０３２８】
上記の実験に使用した脾臓細胞の３つの源を、いくらか詳細に実験した。繰り返すために、脾臓細胞の３つの源を、以下の注射の２４時間後に単離した：（１）Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ（１×１０７ｃｆｕ）；（２）１００マイクログラムのポリ（Ｉ：Ｃ）；または、（３）ＨＢＳＳ。単離した脾臓細胞を、抗ＮＫ１．１抗体および抗ＣＤ６９抗体をプローブとして利用して、フローサイトメトリーによって分析した。抗ＮＫ１．１抗体を使用して、細胞がＮＫ細胞であるかどうかを決定し、そして抗ＣＤ６９抗体を使用して、各ＮＫ細胞の活性化状態を評価した。抗体は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡによるものであった。
【０３２９】
結果は以下の通りである（図２）。ネガティブ対照である脾臓細胞（ＨＢＳＳで処置）を用いた場合には、ＮＫ細胞は約３．５％が脾臓細胞から構成されており、そして、平均フィコエリスリン（ＰＥ）蛍光強度、ＮＫ細胞による反射ＣＤ６９発現は１６９であった（図２）。
【０３３０】
Ｌｉｓｔｅｒｉａでの処置を行った場合には、ＮＫ細胞は約０．９５％が脾臓細胞から構成されており、そして平均フィコエリスリン（ＰＥ）蛍光強度、反射ＣＤ６９発現は１０，０１１であった（図２）。
【０３３１】
ポジティブ対照である脾臓細胞（ポリＩ：Ｃで処置）を用いた場合には、ＮＫ細胞は、約１．０％が脾臓細胞の合計によって構成されており、そして平均フィコエリスリン（ＰＥ）蛍光強度、反射ＣＤ６９発現は１４，５４６であった（図２）。
【０３３２】
Ｌｉｓｔｅｒｉａで、またはポリ（Ｉ：Ｃ）での処置後に生じる脾臓ＮＫ細胞の活性化（図２）は、Ｌｉｓｔｅｒｉａまたはポリ（Ｉ：Ｃ）での処置後の、脾臓細胞依存性標的細胞の溶解における増大（図１から１Ｄ）と一致している。
【０３３３】
ＩＩＩ．弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与（ワクチンを伴わない）は肝臓腫瘍（ヘミ脾臓注射モデルによって作成した）に対する生存性を高める
肝臓腫瘍は、マウスにおいて以下のように誘導した。ＣＴ２６腫瘍細胞を、肝臓腫瘍の形成を開始するために、０日目（ｔ＝０日目）に全てのマウスに投与した。マウスを、Ｌｉｓｔｅｒｉａなしで（−■−、小さい四角の下部の曲線）、示した量のＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡで（−◇−、白色の菱形−；▲−、三角；−●−、黒色の丸）；または、示した量のＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ（−▽−反対向きの三角；−■−、大きい四角の上部の曲線；−◆−、黒色の菱形）（図１Ａ）、静脈内（ｉ．ｖ．）で処置した。
【０３３４】
以下は、マウスに投与したＬｉｓｔｅｒｉａの投与回数に関する。「１×」は、示したＬｉｓｔｅｒｉａ株を、腫瘍の移植後ｔ＝３日目にだけ投与したことを意味する（わずか１用量）。「３×」は、示したＬｉｓｔｅｒｉａ株を、ｔ＝３日目、６日目、および９日目に投与したことを意味する。「５×」は、示したＬｉｓｔｅｒｉａ株を、ｔ＝３日目、６日目、９日目、１２日目、および１５日目に投与したことを意味する。投与したＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡ細胞の数は約１×１０７コロニー形成単位（ＣＦＵ）であり、一方、投与したＬｉｓｔｅｒｉａΔａｃｔＡΔｉｎｌＢの数は約２×１０７ＣＦＵであった（図３Ａ）。
【０３３５】
結果は以下のとおりである。腫瘍を有しているマウスにＬｉｓｔｅｒｉａを投与しなかった場合には、５０％のマウスが２５日目までに死亡し、一方、４２日目までには１００％が死亡した。対照的に、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡまたはＬｉｓｔｅｒｉａΔａｃｔＡΔｉｎｌＢで処置したマウスは高い生存性を示した。例えば、ｔ＝２５日では、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡまたはＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢのいずれかを投与したマウスは全て、少なくとも９０％の生存率を示した。生存率は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡを用いた場合に最も高く、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡは３×または５×用量で投与された（図３Ａ）。
【０３３６】
別の実験（図３Ｂ）においては、ＣＴ２６腫瘍細胞で処置したマウスに、Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しなかった（−■−；四角）；Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡを投与した（３日おき、全部で３用量）（−◆−；菱形）；Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡを投与した（１週間に１回；全部で３用量）（−△−；白色の三角）；Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与した（３日おき、全部で３用量）（−●−；黒色の丸）；またはＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与した（１週間に１回、全部で３用量）；（−▽−；反対向きの白色の三角）。結果は、処置を行わなかった場合には全ての動物がｔ＝３０日までに死亡し、一方、Ｌｉｓｔｅｒｉａでの処置によって、ｔ＝１００日で５０％までの動物の生存率が生じたことを明らかにしている（図１Ｂ）。重ねて、図１Ａ、Ｂのデータを得るために使用したＬｉｓｔｅｒｉは、異種抗原をコードするいずれの核酸をも含むようには操作しなかった。
【０３３７】
なお別の実験（図３Ｃ）においては、ＣＴ２６腫瘍細胞を接種したマウスを以下のように処置した。細菌を、グルコースを含まない酵母培養液で増殖させ、細菌をｉ．ｖ．で投与した。マウスには、Ｌｉｓｔｅｒｉａを投与しなかった（−◆−；菱形）；Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与した（３×１０７ＣＦＵ、３日おき、全部で３用量）（−■−；四角）；Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与した（３×１０５ＣＦＵ、３日おき、全部で３用量）（−▲−；黒色の三角）；Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与した（３×１０３ＣＦＵ、３日おき、全部で３用量）（−●−；黒色の丸）；Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与した（３×１０７ＣＦＵ、１週間に１回、全部で３用量）（−□−；白色の四角）；Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与した（３×１０５ＣＦＵ，１週間に１回；全部で３用量）（−△−；白色の三角）；Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与した（３×１０３ＣＦＵ，１週間に１回、全部で３用量）（−○−；白色の丸）。行うことができる観察は、処置を行わなかった場合には全ての動物がｔ＝３０日までに死亡し、一方、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ（３×１０７ＣＦＵ）を１週間に１回投与したマウス（−□−；白色の四角）は、最も高い生存性を有していたことである。
【０３３８】
Ｌｉｓｔｅｒｉａで処置した腫瘍を保有しているマウスの実験（ここでは、Ｌｉｓｔｅｒｉａは、異種抗原を発現するようには操作しなかった）を継続し、これらの継続した研究にはシクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）；ＣＴＸ）の投与を含めた（図３Ｄおよび３Ｅ）。ＣＴＸでの処置の日（ｔ＝４日）は一定とし、一方、Ｌｉｓｔｅｒｉａの投与の日を変化させた（図３Ｄ）。投与した場合には、ＣＴＸは５０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）で与えた。Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓの用量は全て３×１０７であり、細菌は、グルコースを含まない酵母培養液の中で増殖させることによって調製した。以下に図の説明を提供する：処置を行わなかったマウスによるデータ（−■−：黒色の四角）；ＣＴＸだけで処置したマウスによるデータ（４日目の注射）（−●−；黒色の丸）；Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢだけを投与したマウスによるデータ（３日目、１０日目、１７日目にＬｉｓｔｅｒｉａを投与した）（−▲−；黒色の三角）；ＣＴＸ（４日目）およびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与したマウスによるデータ（５日目、１２日目、および１９日目にＬｉｓｔｅｒｉａを投与した）（−○−；白色の丸）；ＣＴＸ（４日目）およびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与したマウスによるデータ（６日目、１３日目、および２０日目にＬｉｓｔｅｒｉａを投与した）（−□−；白色の四角）；ＣＴＸ（４日目）およｂＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与したマウスによるデータ（７日目、１４日目、２１日目にＬｉｓｔｅｒｉａを投与した）（−△−；白色の三角）；ＣＴＸ（４日目）およびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与したマウスによるデータ（８日目、１５日目、および２２日目にＬｉｓｔｅｒｉａを投与した）（−▽−；白色の反対向きの三角）；ならびに、ＣＴＸ（４日目）およびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与したマウスによるデータ（１２日目、１９日目、および２６日目にＬｉｓｔｅｒｉａを投与した）（−◇−；白色の菱形）。結果は以下のとおりである。処置を行わなかった（ＣＴＸなし；Ｌｉｓｔｅｒｉａなし）場合には、ｔ＝約５０日でのマウスの生存性は約２０％であった（−■−黒色の四角）。ＣＴＸだけを用いた場合には、生存性は、ｔ＝５０日では約６０％であった（−●−；黒色の丸）。ＣＴＸと細菌との両方を含めたいくつかのプロトコールでは、生存性は、ｔ＝６０日後には９０〜１００％の間であった（ｔ＝５日目、６日目、または７日目でＬｉｓｔｅｒｉａを投与した）。
【０３３９】
図３Ｄは、ＣＴＸの投与（ｔ＝４日目）だけにより、生存性にいくらかの上昇が生じ、そしてＣＴＸ（ｔ＝４日目）およびＬｉｓｔｅｒｉａ（５日目、１２日目、および１９日目にＬｉｓｔｅｒｉａを投与した；６日目、１３日目、および２０日目にＬｉｓｔｅｒｉａを投与した；あるいは、７日目、１４日目、および２１日目にＬｉｓｔｅｒｉａを投与した）によって、なおさらに高い生存性が生じたことを明らかにしている。
【０３４０】
以下は、ＣＴＸ＋Ｌｉｓｔｅｒｉａによって生存性を改善することができることを明らかにしており、そして、この組み合わせ投与をどの程度の長期投与によって遅らせることができるか、および報告する組み合わせによってもなお生存性を改善することができるかを示す試験を明らかにする。
【０３４１】
図３Ｅは併用療法と、遅延型の併用療法（ｄｅｌａｙｉｎｇ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）との効果を示す。この図では、「併用療法」は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ（いずれの異種抗原をも発現するようには操作されていない）とシクロホスファミドとの併用を意味する。処置を行わなかった場合には、動物の半分がｔ＝約３２日までに死亡した。投与した場合には、ＣＴＸを５０ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．）で与えた。Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓの用量は全て３×１０７であり、細菌はグルコースが含まれていない酵母培養液で増殖させることによって調製した。
【０３４２】
併用投与のスケジュールをｔ＝４日目で開始した場合（４日目にＣＴＸ、そして５日目、１２日目、および１９日目にＬｉｓｔｅｒｉａ）（−▽−；白色の反対向きの三角）には、ほぼ最大の生存性が見られ、そしてここでは動物の９０％がｔ＝６０日目に生存していた。併用投与のスケジュールをいくらか遅らせ、ｔ＝７日目に開始した場合（７日目にＣＴＸ、そして８日目、１５日目、および２２日目にＬｉｓｔｅｒｉａ）には、ｔ＝４８日目に約９０％の動物が生存しており、ｔ＝５３日目には約半分が生存していた（−◇−；白色の菱形）。併用療法の開始をさらに遅らせ、そしてｔ＝１２日で開始した場合（ｔ＝１２日目にＣＴＸ，そして１３日目、２０日目、および２７日目にＬｉｓｔｅｒｉａ）には、生存性は比較的低かった（−○−；白色の丸）（図３Ｅ）。
【０３４３】
その結果を図３Ｆ、３Ｇ、および３Ｈに示した実験には、マウスに注射すると予め決定されたタイプの免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＮＫ細胞）を枯渇させる枯渇抗体の使用を含めた。
【０３４４】
図３Ｆに示す結果は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ（いずれの腫瘍抗原をも発現するようには操作されていない）が２回目のワクチンを投与しない場合に腫瘍に対する生存性を改善する機構についての知見を提供する。（ＧＶＡＸはこの特定の実験では使用しなかった。）
図３Ｆについての実験方法は以下のとおりである：０日目に、雌のＢａｌｂ／ｃマウスに１×１０５個のＣＴ２６細胞を、ヘミ脾臓外科手術によって移植し、そして様々な処置グループにランダマイズした。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞ならびにＮＫ細胞の枯渇を、腫瘍細胞の移植の１週間前に開始し、その後、６日目および１３日目に、それぞれ、ＧＫ１．５（抗ＣＤ４）、２．４３（抗ＣＤ８）、および抗ＡｓｉａｌｏＧＭ（抗ＮＫ）抗体をさらに２回注射した。それぞれのリンパ球の集団の枯渇をマウスの別々のコホートにおいてフローサイトメトリーによって確認した。対照を除いて、３×１０７ｃｆｕのＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢでの１週間に１回の処置を３日目に開始し、そしてマウスを生存性について追跡した。
【０３４５】
図３Ｆは、ＣＴ２６腫瘍を接種したマウスの生存割合を示し、ＣＴ２６腫瘍細胞を接種したマウスは、示したように、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢで処置したか、または、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを含めずに処置した。処置したマウスには、抗体を投与しなかったか、または、示したように、ＣＤ４＋Ｔ細胞；ＣＤ８＋Ｔ細胞；もしくはＮＫ細胞を特異的に枯渇させる抗体を投与したかのいずれかとした。結果は、枯渇抗体を投与しなかったＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢをマウスに投与した場合；抗ＣＤ４＋Ｔ細胞抗体を投与した後のＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢをマウスに投与した場合；または抗ＣＤ８＋Ｔ細胞抗体を投与した後のＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢをマウスに投与した場合の、最大またはほぼ最大の生存性を明らかにした。対照的に、低い生存性は、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与しなかった場合、またはＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを、抗ＮＫ細胞抗体を投与したマウスに投与した場合に生じた。これらの結果は、腫瘍細胞の最初の接種後のＮＫ細胞のＬｍによって媒介される刺激が腫瘍に対する生存性について主に重要であり、一方、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞は生存性に対して比較的重要ではないことを示している。
【０３４６】
以下は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ（いずれの腫瘍抗原をも発現するようには操作されていない）が、ＧＭ−ＣＳＦワクチンと一緒に腫瘍に対する生存性を改善する機構に関する。図３Ｇは、ＣＴ２６腫瘍に対するマウスの生存性を明らかにし、ＣＴ２６腫瘍細胞を接種したマウスを、ＣＤ４＋Ｔ細胞（−▲−；ＧＫ１．５抗体）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（−△−；２．４３抗体）、またはＮＫ細胞（−×−；抗アシアロ−ＧＭ１抗体）を特異的に枯渇させる試薬とともに、または他の試薬を伴わずに（−●−；処置なし、ＮＴ）、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡおよびＧＭ−ＣＳＦワクチンで処置した。示した抗体での処置は、肝臓内腫瘍細胞の移植前の２週間とした。ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、またはＮＫ細胞の９０％を越える抗体依存性の枯渇を、それぞれのグループから１匹もしくは２匹の動物に由来する肝臓および脾臓のフローサイトメトリー分析によって確認した。結果は、腫瘍細胞を有しているマウスの最大の生存性が、マウスをＬｉｓｔｅｒｉａおよびワクチンで処置した場合（−○−）、またはマウスをＣＤ４＋Ｔ細胞枯渇抗体と共に、Ｌｉｓｔｅｒｉａおよびワクチンで処置した場合（−▲−；ＧＫ１．５抗体）に生じたことを明らかにしている。対照的に、腫瘍細胞を有しているマウスを、ＣＤ８＋Ｔ細胞を枯渇させる抗体、またはＮＫ細胞を枯渇させる抗体とともに、Ｌｉｓｔｅｒｉａおよびワクチンで処置した場合には、生存性は低かった（治療薬を投与しなかった場合と同程度に低かった）。
【０３４７】
いくつかの実施形態においては、本発明により、ガンに対する生存性を改善するための方法が提供される。この方法は、Ｌｉｓｔｅｒｉａと弱毒化された腫瘍細胞とを投与することによる。この場合、弱毒化された腫瘍細胞は、抗原性の特性をガンと共有しており、そして、ガンに対する生存性は、ＮＫ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介されるが、これらに限定されない。さらに、いくつかの実施形態においては、本発明により、Ｌｉｓｔｅｒｉａおよび弱毒化された感染性物質を投与することによる、感染性物質（例えば、ウイルス、細菌、寄生虫）に対する生存性を改善するための方法もまた提供され、弱毒化された感染性物質は、抗原性の特性を感染性物質と共有しており、感染性物質に対する生存性は、ＮＫ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介されるが、これらに限定されない。
【０３４８】
図３Ｈは、ＣＤ２６腫瘍細胞の接種後のＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを先に注射された、長期間生存しているマウス（ｌｏｎｇ  ｔｅｒｍ  ｓｕｒｖｉｖｏｒ）を、ＣＴ２６腫瘍細胞で再度チャレンジした枯渇実験の結果を示す。簡単に説明すると、実験用マウスの複数のグループに、ＣＴ２６腫瘍細胞（１×１０５個のＣＴ２６細胞）を、ヘミ脾臓モデルによって、ｔ＝０日目に接種し、そして、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ（１×１０７個の細菌／用量）をｔ＝３日目、１０日目、および１７日目（３用量）を続いて注射した。ｔ≧１００日では、約５０〜６０％のマウスがなおも生存しており、これらは長期間生存しているマウスであった。腫瘍特異的Ｔ細胞免疫を評価するために、長期間生存しているマウスを、ＣＴ２６細胞（２×１０５個のＣＴ２６細胞）で皮下に再チャレンジした。
【０３４９】
ＣＤ２６腫瘍細胞での再チャレンジの前に、抗ＣＤ４抗体または抗ＣＤ８抗体を、長期間生存しているマウスのいくつかに投与した。実験で使用した抗ＣＤ４抗体および抗ＣＤ８抗体は、Ｃｅｒｕｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｃｏｎｃｏｒｄ，ＣＡで調製したが、枯渇実験に適している抗ＣＤ４抗体および抗ＣＤ８抗体は、市販によって入手した（例えば、Ｉｎｖｉｔｏｒｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）。枯渇抗体を、ＣＴ２６細胞での再チャレンジの８日前、４日前、および１日前に注射した（０．２５ｍｇをｉ．ｐ．で注射した）。Ｔ細胞サブセットの枯渇はフローサイトメトリー分析によって確認した。ＣＴ２６細胞での再チャレンジに対するマウスの生存性を、ＣＴ２６細胞の再チャレンジの投与後に少なくとも６０日間待った後に決定した。
【０３５０】
実験用マウスの再チャレンジの時点で、未処置のマウス（対照）にもまたＣＴ２６細胞を接種した。対照マウスは、ＣＴ２６腫瘍細胞またはＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢのいずれに対してもこれまでに曝されていない、すなわち、これらは、ＣＴ２６細胞およびＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢのいずれも投薬されていない。
【０３５１】
図３Ｈに示す結果は、対照グループにおいては、２０匹のマウスのうちの１匹しかＣＴ２６細胞での再チャレンジを生き延びることができなかったことを示している。実験グループ（すなわち、長期間生存しているマウス）においては、約３分の２のマウス（３３匹のマウスのうちの２１匹）が腫瘍細胞での再チャレンジを生き延びた。しかし、実験用マウスに抗ＣＤ４抗体または抗ＣＤ８抗体のいずれかをもまた投与した場合には、ほとんどのマウスが腫瘍細胞での再チャレンジに応答して死亡した。これらの結果は、腫瘍抗原をコードするいずれの核酸も含まれていない操作された細菌であるＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢが、長期間にわたる腫瘍特異的適応的（メモリー）免疫応答を刺激することができること、そしてこの長期間にわたる適応的免疫応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞依存性であることを明らかにしている。
【０３５２】
ＩＶ．Ｌｉｓｔｅｒｉａは肝臓の再生においては毒性作用を誘発しなかった。
【０３５３】
以下の対照実験によって、部分肝切除からの回復についての経時的変化を評価した（表４）。部分肝切除は、肝臓腫瘍の処置に一般的に使用されている。部分肝切除からの回復についての経時的変化は、肝臓の酵素（血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）；血清アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ））の放出によって評価した（例えば、Ｎａｔｈｗａｎｉら（２００５）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ４１：３８０−３８３；Ｃｌａｖｉｅｎら（２００３）Ａｎｎ  Ｓｕｒｇ．２３８：８４３−８５０を参照のこと）。血清酵素レベルは、部分肝切除後ｔ＝３日目までに基底レベルに達したことが明らかになった（表４）。
【０３５４】
表４．部分肝切除後の周期的な平均血清酵素レベル
【０３５５】
【化２１】
2009504787.tif 000056
以下の対照実験は、ＬｉｓｔｅｒｉａについてのＬＤ５０は、正常マウスにおいても、ヘミ脾臓マウスにおいても、同じであるかまたは類似していることを明らかにしている。正常なマウスにおいては、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡについてのＬＤ５０は１．０×１０８個の細菌（以下の専門用語：１．０ｅ８を使用して表現することもできる）であり、そしてＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢについては２から５×１０８個の細菌であった。ヘミ脾臓マウスにおいては、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡについてのＬＤ５０は、１．２３×１０８個の細菌（以下の専門用語：１．２３ｅ８を使用して表現することもできる）であり、そしてＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢについては、１．４９×１０８個の細菌以上であった（表５）。
【０３５６】
未処置のマウス、または部分肝切除を行ったマウスをＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡまたはＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢで滴定して、部分肝切除がＬｉｓｔｅｒｉａの毒性に影響を与えるかどうかを決定した（表５）。ｔ＝０日目に、マウスに外科手術を行わなかったか、または部分肝切除を行った（約４０％）。ｔ＝３日目に、全てのマウスに示した量のＬｉｓｔｅｒｉａを投与した（表５）。
【０３５７】
表５．Ｌｉｓｔｅｒｉａでのチャレンジ後の未処置のマウスおよび部分肝切除したマウスの生存性
【０３５８】
【化２２】
2009504787.tif 000057
【０３５９】
【化２３】
2009504787.tif 000058
Ｖ．Ｌｉｓｔｅｒｉａの投与により肝臓の免疫細胞を活性化する。
【０３６０】
Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓをマウスに投与し、続いて、肝臓および脾臓から免疫細胞を抽出し、これらの細胞を同定することによって決定される免疫応答のインビボでの調節の評価を行った。示した場合を除き、Ｌｉｓｔｅｒｉａをｔ＝０時間でマウスに投与し、続いてｔ＝２４時間で屠殺した。経時的変化の実験においては、示した場合には、マウスをｔ＝２４時間またはｔ＝４８時間で屠殺した。肝臓および脾臓をホモジナイズし、分散させた。細胞を、ハンクス緩衝化塩溶液（Ｈａｎｋｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｐｌｕｔｉｏｎ）（ＨＢＳＳ）で２回洗浄し、その後、４％のＨＡＢおよび抗ＣＤ１６／３２抗体によって氷上で１５分間ブロックした。ＨＡＢは、「ハンクスアジド緩衝剤（Ｈａｎｋｓ  Ａｚｉｄｅ  Ｂｕｆｆｅｒ）」であり、これには、１％のウシ血清アルブミン、０．１％のアジ化ナトリウム、および１ｍＭのＥＤＴＡが含まれている。
【０３６１】
目的の細胞マーカーに特異的な抗体を添加し、細胞を氷上で３０分間インキュベートした。細胞を３回洗浄し、その後、１％のホルムアルデヒドに懸濁させ、そして蛍光活性化細胞選別法（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｓｏｒｔｉｎｇ）（ＦＡＣＳ）によって分析した。Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ（ΔａｃｔＡまたはΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ）を、ゼロＬＤ５０等量（ＨＢＳＳのみ）；０．０１  ＬＤ５０等量；０．１  ＬＤ５０等量；または０．２５  ＬＤ５０等量で投与した。表６には、以下の実験において試験したパラメーターのいくつかを開示する。
【０３６２】
表６．肝臓および脾臓から抽出した免疫細胞において測定したパラメーター
【０３６３】
【化２４】
2009504787.tif 000059
【０３６４】
【化２５】
2009504787.tif 000060
結果は以下のとおりである（図４Ａから４Ｄ）。ＮＫ細胞の割合（全白血球に対する割合（％））は、Ｌｉｓｔｅｒｉａの用量の増大とともに肝臓において増大した。用量が増大するに伴い、ＮＫ細胞である全白血球の割合（％）は、約７％（ＨＢＳＳだけを投与した、細菌は投与しなかった）、約２０％（０．０１  ＬＤ５０の用量）；約３５％（０．１  ＬＤ５０）；そして約４４％（０．２５  ＬＤ５０）増大した（図４Ａ）。発現したＣＤ６９の平均蛍光強度によって評価した肝臓でのＮＫ細胞の活性化は、約１０（細胞が存在しない条件での値をゼロとした任意の単位）（ＨＢＳＳのみ、細菌なし）から約１００に（０．０１  ＬＤ５０）；約１３０に（０．１  ＬＤ５０）、約１９０に（０．２５  ＬＤ５０）増大した（図４Ｃ）。表記「ＨＢＳＳだけを投与した」は、細菌を投与しなかったこと、そしてデータ点が対照値を示すことを意味する。図４Ｂおよび４Ｄには脾臓についてのデータを開示する。
【０３６５】
以下はＮＫＴ細胞に関する。肝臓中のＮＫＴ細胞の活性化は、Ｌｉｓｔｅｒｉａの投与とともに増大し、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ａｃｔＡの投与後の活性化は、約５（ＨＢＳＳのみ、細菌なし）；２００（０．０１  ＬＤ５０）；３００（０．１  ＬＤ５０）；および４００（０．２５  ＬＤ５０）であった（図５Ａおよび５Ｃ）。Ｌｉｓｔｅｒｉａ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ）の他の欠損変異体の投与後にも、最大活性化は、０．２５  ＬＤ５０の投与によって見られた。（用語「最大活性化」は、示した用量を用いて見られた最大活性化を意味し、より高い用量によってそれ以上高い活性化状態を得ることができないことを必ずしも意味するものではない。）（図５Ａおよび５Ｃ）。図５Ｂおよび５Ｄには脾臓についてのデータを明らかにする。
【０３６６】
図６Ａおよび６Ｂには全肝臓Ｔ細胞を用いた結果を開示する。
【０３６７】
以下は、肝臓中のＣＤ４＋Ｔ細胞に関する（図６Ｃから６Ｆ）。Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡの投与後には、活性化は約０（ＨＢＳＳのみ、細菌なし）、１００（０．０１  ＬＤ５０）、３５０（０．１  ＬＤ５０）、および６００（０．２５  ＬＤ５０）であった。他のＬｉｓｔｅｒｉａ株であるＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与した場合には、最大活性化はまた、最も高い用量で生じた（図６Ａ、Ｃ、およびＥ）。図６Ｂ、Ｄ、およびＦには脾臓のデータを開示する。
【０３６８】
以下は、肝臓の中のＣＤ８＋Ｔ細胞に関する（図７Ａから７Ｄ）。肝臓中のＣＤ８＋Ｔ細胞のＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡでの活性化は、約０（ＨＢＳＳのみ、細菌なし）、６０（０．０１  ＬＤ５０）、１２０（０．１  ＬＤ５０）、および２３０（０．２５  ＬＤ５０）であった。他のＬｉｓｔｅｒｉａ株であるＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢの投与によっては、同様の活性化プロフィールが生じた（図７Ａおよび７Ｃ）。図７Ｂおよび７Ｄには脾臓のデータを示す。
【０３６９】
以下は好中球に関する（図８Ａおよび８Ｂ）。肝臓の好中球は、投与したＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡの３種類の用量の全てについて、約１％（ＨＢＳＳのみ、細菌なし）から約４〜５％に増大した。Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与した場合には、好中球は全白血球のうちの約５〜１０％を占めた（図８Ａ）。図８Ｂには脾臓のデータを示す。
【０３７０】
ＣＤ２５を発現するＣＤ４＋Ｔ細胞の存在もまた、個々の細胞上で発現されたＣＤ２５の平均量として測定した（図９Ａから９Ｄ）。ＣＤ２５の発現は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡまたはＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢの投与後に測定した。肝臓のＣＤ４＋Ｔ細胞および脾臓のＣＤ４＋Ｔ細胞によるデータを示す（図９Ａから９Ｄ）。
【０３７１】
以下は樹状細胞、すなわち、ＣＤ８＋αネガティブ樹状細胞に関する。対照マウスにはＨＢＳＳを投与し、一方、実験マウスには、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡ（ｏｖａを発現している）を投与した。全脾臓細胞と比較したこれらの樹状細胞の割合（％）を、数日間の時間経過にわたって決定した。この実験の目的は、この樹状細胞の集団に対する投与したＬｉｓｔｅｒｉａの効果を決定することである。（この目的を評価するためには、Ｌｉｓｔｅｒｉａがｏｖａを発現している場合には、関連しているとは予想されない。）ＤＣの成熟もまた、マーカーであるＣＤ８０およびＣＤ８６による評価として測定した。ＣＤ８０およびＣＤ８６は、ＤＣの成熟マーカーである（Ｇｅｒｏｓａら（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：７２７−７３４；Ｋｕｂｏら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：７２４９−７２５８）。これらの樹状細胞については、対照の処置（ＨＢＳＳ塩溶液）によっては、比較的一定した割合の値（２．０％（１日目）；１．９％（２日目）；１．９％（４日目）；１．６％（７日目））が生じた。実験の処置（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡ  ｏｖａ）によっては、このタイプの樹状細胞の割合（％）は顕著に増大した（３．４％（１日目）；７．３％（２日目）；２．０％（４日目）；１．９％（７日目））。ＣＤ８０およびＣＤ８６マーカーに関しては、以下の結果が明らかになった。マウスの対照の処置（ＨＢＳＳ塩溶液）によっては、脾臓から単離したＤＣについて以下のＣＤ８０の相対的発現値が生じた：１０５（１日目）；７８（２日目）；９１（３日目）、５３（４日目）。実験の処置（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡ  ｏｖａ）によっては、これらのＣＤ８０の発現値の劇的な増大が、すなわち、１日目および２日目に生じた：３７２（１日目）；２９８（２日目）；９８（３日目）；１０２（７日目）。以下のデータは他のマーカーであるＣＤ８６に関する。対照の処置（ＨＢＳＳ塩溶液）によっては、これらのＣＤ８６の発現値が生じた：３１（１日目）；１８（２日目）；３０（４日目）；および３０（７日目）。実験の処置によっては、１日目および２日目にＣＤ８６の発現の劇的な増大が誘発された：２５７（１日目）；８０（２日目）；３８（４日目）；および２４（７日目）。
【０３７２】
樹状細胞の集団および樹状細胞の成熟に関する上記の結果は、多数の理由から、腫瘍および感染に対する免疫応答に重要である。２つの例を挙げると、ＤＣ集団数を増大させるかまたはＤＣの成熟を促進する投与されたＬｉｓｔｅｒｉａは、ＮＫ細胞の機能を促進し、そして制御性Ｔ細胞の抑制作用も緩和すると予想される（例えば、Ｇｅｒｏｓａら（２００５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：７２７−７３４；Ｋｕｂｏら（２００４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７３：７２４９−７２５８を参照のこと）。
【０３７３】
ＶＩ．弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与を行った実験の経時的変化、ならびに、ＮＫ細胞および好中球の刺激を開示するデータ
マウスには、ＨＢＳＳ，Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡ、またはＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与し、２４時間後（Ｄ１）または４８時間後（Ｄ２）に屠殺し、その後、全白血球数との比較としてＮＫ細胞または好中球の数の決定を行った。肝臓から回収した白血球の分析によるデータは、ＮＫ細胞として存在している白血球の割合（％）が、ＨＢＳＳの用量を用いた場合にはいずれの日についても同じであり（約６％）、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡの用量を用いた場合にはいずれの日についても同じ（約１６％）であり、そして、他のＬｉｓｔｅｒｉａ株であるＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢの投与後にはｔ＝４８時間（１０％）よりもｔ＝２４時間（１４％）でいくらか高かったことを明らかにしている（図１０Ａ）。図１０Ｂには脾臓のデータが開示される。
【０３７４】
肝臓から回収した好中球の分析によるデータは、ＨＢＳＳを投与したマウスのデータを明らかにしており、好中球は肝臓の白血球の約０．２から０．８％を占める。Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡの投与の１日後には、好中球は肝臓の白血球の約３％を占めており、実験の他の条件下で見られた割合の値（％）よりも小さかった（図１１Ａ）。図１１Ｂには、脾臓のデータを開示する。
【０３７５】
別の実験によって、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢをマウスに投与することにより、活性化させられたＮＫ細胞のインビボでの作成が生じることが明らかになった。この場合、活性化させらたＮＫ細胞は、インビトロにおいて、ＹＡＣ−１細胞を死滅させる高い能力を示す。ＹＡＣ−１細胞は、慣用的にはＮＫ細胞標的として使用される。Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、３×１０７ｃｆｕのＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ、またはネガティブ対照媒体を注射した。２４時間、４８時間、または７２時間の遅延の後に、リンパ球を肝臓または脾臓から採取し、そして採取したリンパ球（ＮＫ細胞を含む）をクロムで標識したＹＡＣ−１細胞（標的細胞）と混合し、その後、４時間インキュベートした。４８時間の時点で採取したリンパ球を用いた場合には、例えば、肝臓のＮＫ細胞は標的細胞の約５０％の溶解を生じた（一方、リンパ球が媒体で処置したマウスに由来する場合には、わずかに３％しか標的細胞の溶解は起こらなかった）。４８時間の時点で採取したリンパ球を用いた場合には、脾臓のＮＫ細胞は、標的細胞の約３０％の溶解を生じた（一方、リンパ球が媒体で処置したマウスに由来する場合には、わずかに７％しか標的細胞の溶解は起こらなかった）。したがって、本発明の方法により、ＮＫ細胞の肝臓でのレベルを活性化および／または増大させるためのＬｍの投与が提供され、ＮＫ細胞は、標的細胞の溶解に有効である。
【０３７６】
ＶＩＩ．Ｌｉｓｔｅｒｉａの投与により肝臓中の免疫細胞の数を増加させる（経時的変化の実験）。
【０３７７】
以下には、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡの投与後の肝臓での様々な免疫細胞の蓄積の経時的変化を開示する。この実験は、ＧＭ−ＣＳＦ（ＧＶＡＸ）を発現するように操作された腫瘍細胞だけを投与することによって生産されたか、または、ＧＶＡＸとともにＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡを投与することによって生産された免疫細胞の蓄積に対する影響を説明する。
【０３７８】
Ｂａｌｂ／ｃマウスを以下の条件下で処置し、その後、肝臓中の様々な免疫細胞の数を測定した。処置は以下とした：
（１）未処置のマウス（いずれの腫瘍細胞も投与しなかった）；
（２）処置を行わなかった（ＮＴ）マウス（腫瘍細胞を投与したが、Ｌｉｓｔｅｒｉａでは処置を行わず、そしてＧＶＡＸでも処置をしなかった）；
（３）腫瘍細胞およびＧＶＡＸを投与した；
（４）腫瘍細胞およびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡ（Ｌｍ−ａｃｔＡ）を投与した；ならびに
（５）腫瘍細胞、ＧＶＡＸ、およびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡ（Ｌｍ−ａｃｔＡ）を投与した。
【０３７９】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡを投与した場合には、投与した細菌の数は１×１０７ＣＦＵであった。同定し、カウントした免疫細胞は以下であった：ＮＫ細胞（図１２Ａ）；ＮＫＴ細胞（図１２Ｂ）；ＣＤ８＋Ｔ細胞（図１２Ｃ）；形質細胞様樹状細胞（形質細胞様ＤＣ）（図１２Ｄ）；骨髄ＤＣ（図１２Ｅ）；および腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（図１２Ｆ）。腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（肝臓中）の活性化状態は、インターフェロン−γ（ＩＮＦγ  ｍＲＮＡ）の発現を測定することによって評価した（図１２Ｇ）。ＮＫ細胞（肝臓中）の活性化状態もまた評価し、活性化は、ＩＦＮγ  ｍＲＮＡを測定することによって評価した（図１２Ｈ）。
【０３８０】
結果は以下の通りである。一般的なベースライン集団の範囲に関して、肝臓中の樹状細胞（ＤＣ）は、最も低い集団の範囲に存在する傾向があり、一方、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、およびＣＤ８＋Ｔ細胞は、最も高い集団の範囲に存在する傾向があった。全ての細胞のタイプについてのベースラインは、未処置のマウスについては一定であった（図１２Ａ〜１２Ｆ）。Ｌｉｓｔｅｒｉａだけを腫瘍を有しているマウスに投与した場合には、ＮＫ細胞の集団は、ｔ＝約９日にピークを示した（図１２Ａ）；ＮＫＴ細胞の集団は、少なくとも１７日目までは増大する傾向を示した（図１２Ｂ）；ＣＤ８＋Ｔ細胞は、少なくとも１７日目までは規則的な増大傾向を示した（図１２Ｃ）；形質細胞様ＤＣは、ｔ＝約９日にピークを示した（図１２Ｄ）；骨髄ＤＣ集団は、ｔ＝約１３日でピークとなった（図１２Ｅ）；一方、腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞はｔ＝１３日でピークとなった（図１２Ｆ）。
【０３８１】
ＧＶＡＸは単独で、免疫細胞の全ての集団を増大させた（図１２Ａ〜１２Ｆ）。ＧＶＡＸと組み合わせたＬｉｓｔｅｒｉａは、ＮＫＴ細胞（図１２Ｂ）；ＣＤ８＋Ｔ細胞（図１２Ｃ）；形質細胞様ＤＣ（図１２Ｄ）；および腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（図１２Ｆ）の場合には、付加的効果または相乗効果が明らかであった。
【０３８２】
多数の免疫細胞の活性化状態を評価し、評価は、インターフェロン−γ（ＩＮＦ−γ）ｍＲＮＡのアッセイによって行った。腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞によって発現されたＩＦＮ−γ  ｍＲＮＡについてのアッセイによって、発現の最大の増大がマウスへのＬｉｓｔｅｒｉａとＧＶＡＸとの両方の投与を用いた場合に生じたことが明らかになった（図１２Ｇ）。ＮＫ細胞によって発現されたＩＦＮ−γ  ｍＲＮＡについてのアッセイもまた、発現の最大の増大マウスがへのＬｉｓｔｅｒｉａとＧＶＡＸとの両方の投与を用いた場合に生じたことを示した（図１２Ｈ）。ＬｉｓｔｅｒｉａとＧＶＡＸとの両方を投与したマウスに関しては、腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞によるＩＦＮ−γの発現の追跡において差が記録された。すなわち、ＣＤ８＋Ｔ細胞による発現はより遅い時間で最も高く、一方、ＮＫ細胞による発現は、より早い時間で最も高かった（図１２ＧおよびＨ）。
【０３８３】
以下は図１２Ｉに関する。図１２Ｉは、ＣＴ２６腫瘍細胞を接種したマウスの肝臓から得たＣＤ８＋Ｔ細胞の分析を示し、マウスにはまた、例えば、様々な治療薬をも投与した。治療的処置（対照を含む）には、治療的処置なし（ＮＴ）；Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡ；ＧＭ−ＣＳＦワクチンのみ（ＧＶＡＸ）；およびＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡとＧＶＡＸとを含めた。治療的処置なし（ＮＴ）の場合には、腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合（％）は２．６３％であった。
【０３８４】
結果は以下のとおりであった。Ｌｉｓｔｅｒｉａだけを用いた場合には、腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合がより高かった（３．５％）；ＧＶＡＸだけを用いた場合にもまた、腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合（％）がより高かった（３．９１％）。しかし、ＬｉｓｔｅｒｉａとＧＶＡＸとを用いた場合には、腫瘍抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の発現の割合（％）がはるかに高く（６．３８％）、このことは、ＬｉｓｔｅｒｉａとＧＭ−ＣＳＦワクチンとの間での相乗効果を示している（図１２Ｉ）。
【０３８５】
詳細には、図は、肝臓転移を有している処置したマウスの肝臓に浸潤する腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の分析を示す。１３日目に屠殺したマウスの肝臓から単離し、そして抗ＣＤ８（ＦＩＴＣ）およびＬｄ−ＡＨ１四量体（サイクローム（ｃｙｃｈｒｏｍｅ））で染色した細胞についての特異的フローサイトメトリーを示す。ＡＨ１は、ＣＴ−２６特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞によって認識される免疫優性ＭＨＣクラスＩ拘束腫瘍抗原であることに留意されたい。実験には、ポジティブ対照およびネガティブ対照（ポジティブ対照としてのＡＨ１−特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞クローン；およびネガティブ対照としての未処置の腫瘍を有していないマウスに由来する肝臓ＣＤ８＋細胞）を含めた。データは、３匹のマウスのプールし、そして処理した肝臓からの結果を示す。ＣＴ−２６／ＧＭ−ＣＳＦとＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡとの両方での処置によって、肝臓のＡＨ１特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の最も高いレベルが生じた。
【０３８６】
ＶＩＩＩ．ＧＭ−ＣＳＦを発現する弱毒化された腫瘍細胞の投与によっては腫瘍に対する生存性が増大し、一方、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡまたはＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢでを有している腫瘍細胞株の投与によっては、腫瘍に対する生存性がさらに増大した。
【０３８７】
腫瘍を有しているマウスを、以下を投与することによって処置した：（１）塩水のみ（ＨＢＳＳ）；（２）サイトカインを分泌する腫瘍細胞株（サイトカインＧＭ−ＣＳＦを発現するＣＴ２６細胞）を含むワクチン（ＧＭ−ＣＳＦワクチン）；（３）ワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａΔａｃｔＡ；または（４）ワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ。
【０３８８】
０．０５ｍｌのＨＢＳＳ中の腫瘍細胞（１×１０５個のＣＴ２６細胞）をヘミ脾臓に投与し、続いて、０．２５ｍｌのＨＢＳＳのフラッシュを行った。照射したＧＭ−ＣＳＦを発現するＣＴ２６細胞（１×１０６個の細胞）（「ワクチン」としても知られている）を、０．３０ｍｌのＨＢＳＳ中で、１つの部位につき０．１０ｍｌの注射によって（皮下：ｓ．ｃ．）投与した。Ｌｉｓｔｅｒｉａを、０．１  ＬＤ５０等量で投与し、投与は０．２０ｍｌのＨＢＳＳ（ｉ．ｐ．）中、または０．１０ｍｌのＨＢＳＳ（静脈内；ｉ．ｖ．）で行った。実験の過程の間の様々な投与についての時系列は以下のとおりである：腫瘍（ｔ＝０日目）；ワクチン（ｔ＝３日目）；ワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａ（ｔ＝６日目）；ワクチン（ｔ＝１３日目）；およびワクチン（ｔ＝２１日目）。実験の条件には、処置なし（−■−；黒色の四角）；ワクチンのみ（−◆−；菱形）；ワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡ（−▲−；黒色の三角）；ならびにワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ（−●−；黒色の丸）を含めた。ＣＴ２６腫瘍細胞はｔ＝０日目に投与し、一方、ＧＭ−ＣＳＦワクチンはｔ＝３日目に投与し、そしてＬｉｓｔｅｒｉａはｔ＝６日目に投与した。図１３Ａおよび１３Ｂについては、Ｌｉｓｔｅｒｉａの用量は１×１０７ＣＦＵであった。
【０３８９】
図１３Ａには、実験の間の時間（日数）に対するマウスの生存率（％）を開示する。結果は、「処置なし」のグループにおいては、ｔ＝４０日までの生存性はゼロであったこと、そしてワクチンだけのグループにおいてはいくらか高く、ｔ＝５５日目までには生存していたマウスはゼロであったことを明らかにしている。ワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａのグループは顕著に高い生存性を生じ、ワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡのグループならびにワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢのグループのいずれにおいても、ｔ＝４８日では約２８％の生存性であった。一方、ｔ＝７５日では、ワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡのグループにおいて２８％の生存性が見られ、そしてワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢのグループにおいては約１５％の生存性が見られた（図１３Ａ）。図１３Ｂは、上記と同じ実験の反復試行によるデータを示す。重ねて、処置を行わなかったマウスは最も低い生存性を示し、ｔ＝９０日ではわずかに１匹のマウスしか生存していなかった。重ねて、ＧＭ−ＣＳＦワクチンとＬｉｓｔｅｒｉａとを投与したマウスは、最も高い生存性を示した。ここでは、ＧＭ−ＣＳＦワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡを投与した１０匹のマウスのうちの６匹が、ｔ＝９０日でなおも生存しており、そしてＧＭ−ＣＳＦワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与した１０匹のマウスのうちの４匹が、ｔ＝９０日で生存していた（図１３Ｂ）。
【０３９０】
本発明により、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉ（例えば、Ｌ，ｍｏｎｏｓｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡまたはＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ）を弱毒化された腫瘍細胞（例えば、照射された転移性細胞）とともに投与する工程を含む方法が提供され、細胞は、サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）を発現するように操作されている。本発明においては、Ｌｉｓｔｅｒｉａは、いずれの異種抗原（例えば、腫瘍または感染性物質の抗原）をコードするいずれの核酸を含むようにも操作されない。本発明の別の態様においては、Ｌｉｓｔｅｒｉａは、異種抗原をコードする核酸を含むように操作される。
【０３９１】
ＩＸ．シクロホスファミドは腫瘍に対する生存性を増大させる。
【０３９２】
シクロホスファミド（ＣＴＸ）の投与によって、以下の３種類の条件のそれぞれの下での腫瘍を有しているマウスの生存性が増大した：
（１）ＧＭ−ＣＳＦワクチンだけで処置したマウス；
（２）ＧＭ−ＣＳＦワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡで処置したマウス；
（３）ＧＭ−ＣＳＦワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢで処置したマウス。
【０３９３】
マウスに０日目にＣＴ２６腫瘍細胞を接種した（図１４）。腫瘍を作成するために使用したＣＴ２６腫瘍細胞の用量は１０万個の細胞であった。治療的処置は以下のとおりであった：処置なし（−■−；黒色の四角）；ＧＭ−ＣＳＦワクチンだけでの処置（−◇−；白色の菱形）；ＧＭ−ＣＳＦワクチンおよびシクロホスファミド（ＣＴＸ）での処置（−△−白色の三角）；ＧＭ−ＣＳＦおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡでの処置（−●−；黒色の丸）；ＧＭ−ＣＳＦ、シクロホスファミド、およびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡでの処置（−▽−；白色の反対向きの三角）；ＧＭ−ＣＳＦおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ（−□−；白色の四角）；またはＧＭ−ＣＳＦ、シクロホスファミド、およびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢでの処置（−◆−；黒色の菱形）（図１５）。ＣＴＸは、１００ｍｇのＣＴＸ／体重１ｋｇで（腹腔内に；ｉ．ｐ．）投与した。シクロホスファミドはＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）によるものであり、動物への注射の前にＨＢＳＳに溶解させた。
【０３９４】
腫瘍細胞を０日目に投与した。この実験のために、ＧＭ−ＣＳＦワクチンを投与したそれぞれのマウスに、３用量のＧＭ−ＣＳＦワクチン（ｔ＝３日目、１５日目、および３１日目）を投与した。シクロホスファミドを投与した場合には、１用量だけを投与し、ｔ＝２日目に投与した。Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡは、ｔ＝６日目、１９日目、および３４日目（１×１０７ＣＦＵ）に投与した。Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢもまた同じ日に、そして同じ用量（ｔ＝６日目、１９日目、および３４日目（１×１０７ＣＦＵ））で投与した（図１４）。
【０３９５】
最も低い生存率は、処置を行わなかったグループ、およびＧＭ−ＣＳＦワクチンだけを投与したマウスにおいて見られた（図１４）。ＧＭ−ＣＳＦワクチンとＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡとで処置したマウスは、生存時間の顕著な延長を示し、約３０％の生存性がｔ＝４０日目に見られた。以下はＣＴＸを投与したグループに関する。ＧＭ−ＣＳＦワクチンにＣＴＸだけを補充した場合には、９０％の生存性がｔ＝４５日目に見られた。より高い生存率は、ＧＭ−ＣＳＦワクチンにＣＴＸとＬｉｓｔｅｒｉａとを補充した場合に見られた。例えば、ＧＭ−ＣＳＦワクチンにＣＴＸとＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを補充した場合には、生存率はｔ＝５５日目には１００％であった（−◆−；黒色の菱形）（図１５）。
【０３９６】
本発明により、Ｔ制御性細胞（例えば、ＣＴＸ）の作用を阻害する試薬を伴って、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉ（例えば、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡまたはＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ）を弱毒化された腫瘍細胞（例えば、放射線照射された転移性細胞）とともに投与する工程を含む方法が提供され、細胞は、サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）を発現するように操作されている。本発明においては、Ｌｉｓｔｅｒｉａは、いずれの異種抗原（例えば、腫瘍または感染性物質の抗原）をコードするいずれの核酸を含むようにも操作されない。
【０３９７】
Ｘ．ワクチンの一定の投与を用いた、Ｌｉｓｔｅｒｉａでの腫瘍を有しているマウスの滴定。
【０３９８】
図１５Ａから１５Ｃには、様々な数のＬｉｓｔｅｒｉａを、腫瘍を有しているマウスに投与した（ワクチンの一定の投与）場合の結果を開示する。詳細には、実験には、ＣＴ２６細胞腫瘍を有しているマウスをＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡ（一定のＧＭ−ＣＳＦワクチンでの処置）またはＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ（一定のＧＭ−ＣＳＦワクチンでの処置）で滴定することを含めた。
【０３９９】
以下の実験においては、腫瘍を有しているマウスを、様々な量の弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａで「滴定」した。全ての場合において、ＧＭ−ＣＳＦワクチンを３日（ｔ＝３日目、１７日目、および３１日目）投与し、そして全ての場合において、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡ（またはＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ）を３日（ｔ＝６日目、２０日目、および３４日目）投与した。
【０４００】
マウスにＣＴ２６腫瘍細胞を接種した。マウスには処置を行わなかった（−■−；四角）；ＧＭ−ＣＳＦワクチンだけを投与した（−▲−；三角）；３×１０７個のＬｉｓｔｅｒｉａとともにＧＭ−ＣＳＦワクチンを投与した（−▼−；反対向きの三角）；１×１０７個のＬｉｓｔｅｒｉａとともにＧＭ−ＣＳＦワクチンを投与した（−◆−；菱形）；または３×１０６個のＬｉｓｔｅｒｉａと共にＧＭ−ＣＳＦワクチンを投与した（−●−；黒色の丸）のいずれかとした。図１５Ａは、投与した弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａが１つの病原性遺伝子だけ欠失している場合（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡ）（３×１０６個から３×１０７個の細菌の範囲）の結果を示しており、一方、図１５Ｂは、２つの異なる病原性遺伝子が欠失しているＬｉｓｔｅｒｉａ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ）（３×１０６個から３×１０７個の細菌の範囲）を用いた結果を示す。図１５Ｃもまた、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを用いた結果を示しており、細菌は、３×１０３個から３×１０７個の細菌の範囲で投与した。
【０４０１】
最も低い生存率は、処置を行わなかったマウス、またはＧＭ−ＣＳＦワクチンだけを投与したマウスにおいて見られた。ＧＭ−ＣＳＦワクチンを伴うＬｉｓｔｅｒｉａの投与によっては生存性が改善され、低い細菌用量のレベルから中程度の細菌用量のレベル（３×１０３個から３×１０５個の細菌）が、同様の生存性の改善を提供するようであった。ここでは、３×１０６個の細菌の用量は、１×１０７個の細菌と同程度に作用するようであった。なおさらに良好な生存性は、より高い用量（３×１０７個の細菌）で見られた。高い細菌用量（ＧＭ−ＣＳＦワクチンを用いた）では、約３０〜４０％の生存性が、ｔ＝５３日で見られた（図１５ＡおよびＢ）。
【０４０２】
図１５Ｃは、最も高い生存率が、投与された細菌の最も高いレベルを用いて得られたことを示している（３×１０７個の細菌：−▲−；三角）。この場合、７０％の生存性がｔ＝３５日で見られた。生存性は、３×１０６個の細菌の投与を用いた場合には同程度であったか、またはわずかに低かった（−●−；黒色の丸）。なお低いレベルの生存性は、より少ない数の細菌（３×１０５個の細菌；−▼−；反対向きの三角）（３×１０４個の細菌；−■−；四角）（３×１０３個の細菌；−◆−；菱形）を投与した場合に見られた。投与した細菌のレベルのうちの１つ（３×１０５個の細菌；−▼−；三角）では、生存性は、処置なしのグループよりもいくらか良好であることが明らかになったが、生存性は、ｔ＝３０日以降の時間では「処置なし」のグループと同程度に低かった。「処置なし」のグループ（−■−；四角）およびＧＭ−ＣＳＦワクチンだけのグループ（−◆−：菱形）による結果は示したとおりであった。
【０４０３】
本発明により、複数回の用量による弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａ（例えば、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡまたはＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ）と、複数回の用量による弱毒化された腫瘍ワクチンとの投与方法が提供される。１つの態様においては、弱毒化された腫瘍は、サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）をコードする核酸を含むように操作される。別の態様においては、弱毒化された腫瘍は、サイトカインをコードする核酸を含むようには操作されない。
【０４０４】
ＸＩ．Ｌｉｓｔｅｒｉａ（腫瘍抗原をコードする核酸は含まれていない）は肺への腫瘍の転移を減少させる。
【０４０５】
図１６は、肺腫瘍（肝臓腫瘍ではない）によるデータを示す。図１６には、様々な用量の投与したＬｉｓｔｅｒｉａに対する肺腫瘍の応答を示している用量応答曲線を開示する。腫瘍は、脾臓に注射されたＣＴ２６細胞から生じる。図には、対照実験が開示され、腫瘍細胞を接種したマウスを塩溶液（ＨＢＳＳ）で処置した。腫瘍抗原をコードするいずれの核酸も含まれていないＬｉｓｔｅｒｉ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢでの処置（１×１０７個の細菌を投与した）、およびポジティブ対照である腫瘍抗原（ＡＨ１−Ａ５）（ｇｐ１００に由来するエピトープ）をコードする核酸を含むように操作されたＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢでの処置（１×１０７個の細菌を投与した）による結果も示す。塩水での処置を行った場合には、約５０の肺転移が存在していた。いずれの腫瘍抗原をも発現するようには操作されていないＬｉｓｔｅｒｉａを用いた場合には、肺転移の数は半分に減少した（約２５〜３０の肺転移）。ＡＨ１−Ａ５を発現するように操作したＬｉｓｔｅｒｉａを用いた場合には、原則として肺転移はゼロであった（図１６）。
【０４０６】
ＸＩＩ．Ｌｉｓｔｅｒｉａ（腫瘍抗原をコードする核酸を含むようには操作されていない）は腫瘍に対する長期にわたる適応的免疫を刺激する。
【０４０７】
図１７および１８は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ（いずれの異種抗原をもコードするようには操作されていないＬｉｓｔｅｒｉａ）での腫瘍を有しているマウスの処置により、腫瘍（すなわち、腫瘍の抗原）に対する適応的免疫が刺激されることを示している。マウスには、最初にＣＴ２６腫瘍細胞を、ヘミ脾臓モデルによって接種（ｔ＝０日）し、その後、以下で処置した：
（１）いずれの治療薬でも処置を行わなかった（「未処置のマウス」）；
（２）Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ（ＣＴ２６腫瘍細胞の接種後ｔ＝３日で開始した３サイクルのＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ）。Ｌｉｓｔｅｒｉａの投与は、３週間にわたり１週間に１回とした。Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢは、いずれの腫瘍抗原をも発現するようには操作されていない）；
（３）Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを伴うＧＭ−ＣＳＦワクチン（ｔ＝６日でのＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢの１回の注射）。ＧＭ−ＣＳＦワクチンの投与は、へミ脾臓への腫瘍の注射の３日後に開始した（すなわち、３日目、６日目、および１０日目に行った）；または、
（４）シクロホスファミド（ＣＴＸ）（５０ｍｇ／ｋｇ）。
【０４０８】
ｔ＝１００日目（再チャレンジの直前）、およびｔ＝１０７日（再チャレンジ後）に、それぞれのグループの生存しているマウスを、ＣＴ２６細胞の免疫優性抗原（ＡＨ１抗原）に対する長期間の免疫について評価した（Ｅｌｉｓｐｏｔアッセイ）。最初のＥｌｉｓｐｏｔアッセイ（再チャレンジ前）を、適応的免疫応答を評価することにおける使用についてのベースラインアッセイとした。第２のＥｌｉｓｐｏｔアッセイ（１０７日；再チャレンジ後）を使用して、適応的免疫応答を評価した。１０２日目に、全てのマウスにＣＴ２６腫瘍細胞を皮下への再チャレンジによって接種した。皮下へのＣＴ２６腫瘍細胞の再チャレンジは、２×１０５個の細胞を用いて行った（ヘミ脾臓に最初に注射した用量の２倍）。図１７は、ＣＴ２６腫瘍細胞を用いた再チャレンジを示す：
（１）いずれの治療薬でもこれまでに処置されていないマウスのグループにおいては、検出可能な抗ＡＨ１免疫を刺激することはできなかった（「処置なし」のグループ）；
（２）Ｌｉｓｔｅｒｉ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢだけを最初に投与したマウスにおいては、検出可能な、または中程度のＥｌｉｓｐｏｔ応答が生じた；
（３）ＧＭ−ＣＳＦワクチンとＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢとの両方を最初に投与したマウスにおいては、より強いＥｌｉｓｐｏｔ応答が生じた；そして
（４）シクロホスファミド（ＣＴＸ）だけを最初に投与したマウスにおいては、中程度のＥｌｉｓｐｏｔ応答が生じた（図１７）。
【０４０９】
簡単に言うと、結果は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢだけ；ＧＭ−ＣＳＦワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ；またはシクロホスファミド（ＣＴＸ）だけでの処置によって、免疫系に対して長期間にわたる効果を生じさせることができることを示している。長期間にわたる効果によっては、明らかに、再チャレンジに対する検出可能な免疫応答が生じた。
【０４１０】
腫瘍の容積を、ＣＴ２６腫瘍細胞での再チャレンジ後に評価した（図１８）。皮下注射によって生じた腫瘍は、皮膚の下に隆起として現れた。これらの腫瘍の直径を局所的に測定した。結果は、再チャレンジ後に、再チャレンジによって生じた腫瘍は成長し、容積が増大したことを示している。しかし、腫瘍の成長は、いずれの治療薬もこれまでに投与されなかった動物において最大であり、一方、腫瘍の増殖は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢだけで、またはＧＭ−ＣＳＦワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢで最初に処置した動物においては有意に阻害された（図１８）。
【０４１１】
再チャレンジ実験において試験した多数のマウスは、腫瘍を有していないことが明らかになった。これらの腫瘍を有していないマウスに関しては、結果は、未処置のマウス（治療的処置なし）のうち（全部で２匹の未処置のマウスのうち）、再チャレンジ後に腫瘍を有していなかったものはなかったこと；ＣＴＸだけのマウスのうち（全部で４匹のＣＴＸだけのマウスのうち）の約５０％が腫瘍を有していなかったこと；一方、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢだけで処置したマウスのうち（全部で１１匹のＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢだけのマウスのうち）の約７５％、そしてＧＭ−ＣＳＦワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢで処置したマウスのうち（全部で１１匹のＧＭ−ＣＳＦワクチンおよびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢのマウスのうち）の約９０％が腫瘍を有していなかったことを示している。
【０４１２】
以下は、ＣＴ２６細胞ではなく、ＭＣ３８細胞によって誘導した腫瘍に関する。ＭＣ３８細胞を接種したＣ５７ＢＬ／６マウスを用いた別の実験は、全ての対照マウスがｔ＝４３日までに死亡し、半分はｔ＝約３８日までに死亡したことを示している。３×１０７ｃｆｕのＬｍΔＡｃｔＡΔｉｎｌＢを投与した（ｔ＝３日目、１０日目、および１７日目に投与）実験用マウスは、少なくともｔ＝９０日まで生存していた。ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢで処置したグループにおいては、約半分のマウスがｔ＝５０日までに死亡し、ｔ＝９０日までに約８０％が死亡した。ＭＣ３８細胞についての上記の記録は、ＣＴＸを投与しなかった実験を意味する。簡単に言うと、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢは、いずれのＣＴＸも投与しなかった場合にも、ＭＣ３８細胞に対する生存性を改善させた。先に記載したように、ＣＴ２６腫瘍細胞はＢａｌｂ／ｃマウスに由来するものであり、一方、ＭＣ３８腫瘍細胞はＣ５７Ｂｌ／６マウスに由来するものであり、この場合、Ｂａｌｂ／ｃマウスはＴｈ２型レスポンダーであり、そしてＣ５７Ｂｌ／６マウスはＴｈ１型レスポンダーである。
【０４１３】
本発明により、例えば、腫瘍、ガン、感染性物質、ウイルス、寄生虫、または細菌抗原に対する適応的免疫（長期間にわたる適応的免疫；メモリー応答；およびリコール応答を含む）を刺激するための、代謝的に活性であるＬｉｓｔｅｒｉａの投与を含む方法が提供される。本発明には、サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）、弱毒化された腫瘍、サイトカインを発現する弱毒化された腫瘍、またはＴｒｅｇｓの阻害剤（例えば、シクロホスファミド（ＣＴＸ））の１つ以上の投与がさらに含まれている上記方法が含まれる。別の態様においては、上記発明には、Ｌｉｓｔｅｒｉａが異種抗原（例えば、腫瘍細胞、ガン細胞、または感染性物質に由来する抗原）を発現するようには操作されていない上記方法が含まれる。
【０４１４】
例えば、腫瘍、ガン、感染性物質、ウイルス、寄生虫、または細菌抗原に対する適応的免疫（長期間にわたる適応的免疫；メモリー応答；およびリコール応答を含む）を刺激するための、代謝的に活性である弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与を含む方法もまた提供される。本発明には、サイトカイン（例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）、弱毒化された腫瘍、サイトカインを発現する弱毒化された腫瘍、またはＴｒｅｇｓの阻害剤（例えば、シクロホスファミド）（ＣＴＸ）の１つ以上の投与がさらに含まれている上記方法が含まれる。別の態様においては、上記方法には、Ｌｉｓｔｅｒｉａが異種抗原（例えば、腫瘍細胞、ガン細胞、または感染性物質に由来する抗原）を発現するようには操作されていない上記方法が含まれる。
【０４１５】
ＸＩＩＩ．サイトカイン
Ａ．マウスのサイトカイン
マウスの中でのサイトカインの発現に対するＬｉｓｔｅｒｉａの影響を、図１９、ならびに、図２０Ａ、２０Ｂ、および２０Ｃに示す。
【０４１６】
図１９は、Ｌｉｓｔｅｒｉａの投与によって多数のサイトカインの発現が刺激されることを示している。Ｌｉｓｔｅｒｉａの１回の静脈内投与後の血清サイトカインレベルを示す。マウスのコホート（１つのグループについて３匹）を、塩（ＨＢＳＳ）、または０．１  ＬＤ５０のＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡ、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔｉｎｌＢ、または野生型Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓの１回の静脈内投与の２４時間後に血清をサンプリングした。アッセイしたサイトカインは、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）のｐ７０サブユニット；ＴＮＦα；ＩＮＦγ；ＭＣＰ−１；ＩＬ−１０；およびＩＬ−６であった。サイトカインレベルは、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｂｅａｄ  Ａｒｒａｙ（ＣＢＡ）キット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，Ｃａ）を使用して決定した。結果は、平均＋／−ＳＤとして表す。結果は、野生型のＬｉｓｔｅｒｉａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡ；およびＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔｉｎｌＢが、インターフェロン−γ；ＭＣＰ−１；およびＩＬ−６の発現を刺激したことを示している。これらの３つのうち、野生型のＬｉｓｔｅｒｉａまたはＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡの投与によって、これらのサイトカインの発現の最も顕著な増大が生じた。
【０４１７】
本発明は、ＩＮＦ−γ；ＭＣＰ−１；ＩＬ−６；またはＩＮＦ−γおよびＭＣＰ−１の両方；ＩＮＦ−γおよびＩＬ−６の両方；またはＩＬ−６およびＭＣＰ１−の両方；またはＭＣＰ−１、ＩＬ−６、およびＩＦＮ−γの３つ全ての発現を刺激するための方法を提供する。これらの方法には、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡ；Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔｉｎｌＢ；または弱毒化された変異体Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与する工程が含まれる。
【０４１８】
ＭＣＰ−１依存性免疫応答；ＩＦＮ−γ依存性免疫応答；またはＩＬ−６依存性免疫応答を刺激するための方法も提供される。これらの方法には、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡ；Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔｉｎｌＢ；または弱毒化された変異体Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与する工程が含まれる。さらに、ＩＦＮ−γおよびＭＣＰ−１の両方に依存する免疫応答；ＩＦＮ−γおよびＩＬ−６の両方に依存する免疫応答；ＭＣＰ−１およびＩＬ−６の両方に依存する免疫応答；あるいは、ＩＦＮ−γ、ＭＣＰ−１、およびＩＬ−６の３つ全てに依存する免疫応答を刺激するための方法が提供される。この方法には、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡ；Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔｉｎｌＢ；または弱毒化された変異体Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与する工程が含まれる（図１９）。
【０４１９】
以下は、図２０Ａ、２０Ｂ、および２０Ｃに関する。Ｌｉｓｔｅｒｉａ（いずれの異種抗原をも発現するようには操作されていない）は、肝臓に対するＮＫ細胞の活性化および動員を誘発し、これらの効果は、インターフェロン−βによって媒介されることが示された。以下は、ＩＦＮ−α／βシグナル伝達がＬｉｓｔｅｒｉａに応答した肝臓へのＮＫ細胞の活性化および動員に必要であることを示している。肝臓を、１つの実験グループあたり３匹のそれぞれのマウスから１×１０７ｃ．ｆ．ｕ．のＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡの１回のＩＶ投与の２４時間後に採取した。採取した肝臓を処理し、そして白血球の集団を、フローサイトメトリーを用いた前方および側方散乱によってカウントした。ＮＫ細胞の区画を、ＤＸ５および／またはＣＤ６９の両方についてポジティブに染色された細胞をカウントすることによって評価した。結果は、Ｌｉｓｔｅｒｉａの投与を行った場合、ＮＫ細胞でのＣＤ６９の発現は、約２５０（Ｌｉｓｔｅｒｉａなし）の基底レベルから約１５００（ｙｅｓ  Ｌｉｓｔｅｒｉａ）にまで増大したことを示している（図１９Ａ）。この増大は、マウスがＩＦＮ受容体ノックアウトマウスである場合には顕著に小さく、したがって、ＮＫ細胞の活性化に対するＬｉｓｔｅｒｉａの影響におけるインターフェロン−α／βの役割を示している。ＮＫ細胞の動員に関しては、図１９Ｂは、全ての肝臓白血球細胞のうちのＮＫ細胞の割合が、約１３％（Ｌｉｓｔｅｒｉａなし）から約３０％（ｙｅｓ  Ｌｉｓｔｅｒｉａ）に増大したことを示し、この効果は、ＩＦＮ受容体ノックアウトマウスにおいては低かった。
【０４２０】
ＮＫ細胞数を評価することに加えて、血清サイトカインを、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡ／ΔｉｎｌＢの１回のＩＶ投与の２４時間後に測定した。５匹のマウスのコホートに、図に示した用量でＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢの１回のＩＶ投与を投与し、血清を２４時間後にサンプリングした。先天的活性化についてのポジティブ対照は、１００マイクログラムのポリＩ：Ｃの１回のＩＶ用量からなった（図２０Ｃ）。結果は、血清ＭＣＰ−１を増加させることにおけるＬｉｓｔｅｒｉａの劇的な効果を明らかにしている。詳細には、マウスをＬｉｓｔｅｒｉａ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢで滴定し、滴定には、０個；１０，０００個；１０万個；１００万個；および１０００万個の細菌を投与したものを含めた。重ねて、結果は、ＬｉｓｔｅｒｉａがＭＣＰ−１の発現の増大を刺激することを示している。ＤＸ５の発現を評価するための方法を利用することができる（例えば、Ａｒａｓｅら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：１１４１−１１４４を参照のこと）。
【０４２１】
サイトカインレベルを血清中で測定し、血清は、Ｌｉｓｔｅｒｉａまたはｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストの投与後の様々なタイミングでマウスから採取した血液に由来した。処置グループは以下であった：（１）塩水（ＨＢＳＳ）での処置のみ（０．２ｍｌ）；（２）Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ（１×１０７個の細菌）；（３）Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  Δｈｌｙ（リステリオリジンをコードする遺伝子が欠失している）（３×１０８個の細菌）；（４）死滅させられたが、代謝的には活性である（ＫＢＭＡ）Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ（３×１０８個の細菌）（例えば、Ｂｒｏｃｋｓｔｅｄｔら（２００５）Ｎａｔ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １１：８５３−８６０を参照のこと）；（５）熱で死滅したＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ（３×１０８個の細菌）；（６）ポリ（Ｉ：Ｃ）（０．１ｍｇ）；または（７）ＣｐＧ（０．１ｍｇ）。末梢血をさまざまなタイミングで採血し、サイトカイン濃度について評価した（Ｍｏｕｓｅ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ／Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ＬＩＮＣＯｐｌｅｘ（登録商標）Ｋｉｔ  Ｃａｔａｌｏｇ＃ＭＣＹＴＯ−７０Ｋ；Ｌｉｎｃｏ，Ｓｔ．Ｃｈａｒｌｅｓ，ＭＯ；またはＢＤ（登録商標）Ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｂｅａｄ  Ａｒｒａｙ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）。ＣｐＧは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入したＣｐＧ  ＯＤＮ  １８２６であった。サイトカインレベルは、細菌またはＴＬＲアゴニストの投与後２時間、４時間、８時間、１２時間、および２４時間で採血した試料について測定した。
【０４２２】
測定したサイトカインには、顆粒球−コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）；インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）；インターロイキン−α（ＩＬ−１α）；インターロイキン−６（ＩＬ−６）；インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）；インターロイキン−１２ｐ７０（ＩＬ−１２ｐ７０）；インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）；ＩＰ−１０；ＫＣ（ＩＬ−８のマウスオルトログ）；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１ａ；およびＴＮＦを含めた。
【０４２３】
以下のサイトカインもまた測定した。これらのサイトカインの場合には、これらは血清では検出されなかった：ＩＬ−１β；ＩＬ−２；ＩＬ−４；ＩＬ−５；ＩＬ−７；ＩＬ−９；ＩＬ−１５；ＩＬ−１７；および顆粒球−単球−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）。簡単に言うと、これらのサイトカインは、記載した条件下では検出されなかった。
【０４２４】
表７にはいくつかの結果を開示する。
【０４２５】
【化２６】
2009504787.tif 000061
【０４２６】
【化２７】
2009504787.tif 000062
【０４２７】
【化２８】
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【０４２８】
【化２９】
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【０４２９】
【化３０】
2009504787.tif 000065
Ｂ．サルのサイトカイン
サイトカインの発現を、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与したヒト以外の霊長類において測定した。カニクイザル（雄および雌の両方）に、媒体、１×１０７、３×１０８、または１×１０１０ｃｆｕのＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを投与した。全部で３２匹のカニクイザル（それぞれの性別について１６匹）を、４種類の用量のグループにランダムに割り当てた。
【０４３０】
投与は、合計５回の用量を１週間に１回の３０分間の（ｉ．ｖ．）注入によって行った。連続する血清および血漿試料を、以下のそれぞれのサイトカインについて分析した：ＩＬ−１Ｒα；ＩＦＮγ；ＴＮＦα；ＭＣＰ−１；ＭＩＰ−１β；およびＩＬ−６（図２１Ａ〜Ｆ）。図２１Ｇにもまたカニクイザルによるサイトカインの発現を示し、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢの最初の注入後のサイトカインの発現を開示する。ＩＬ−６、ＩＦＮγ、ＴＮＦ、ＭＩＰ−１β、およびＭＣＰ−１を、示したように最初の注入後に測定した（図２１Ｇ）。これらのサイトカインのそれぞれの血清レベルは、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢに特異的に応答して増大し、増大は全て、用量依存性を示していた。
【０４３１】
ＸＩＶ．最適な抗腫瘍活性にはＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓによる細胞質への侵入が必要である。
【０４３２】
肝臓特異的ＣＴ−２６転移は、わずかに改良を加えたＪａｉｎら、Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．Ｏｎｃｏｌ．１０：８１０−８２０（２００３）に記載されているプロトコールにしたがって確立させた。ＣＴ２６は、Ｂａｌｂ／ｃマウスに由来する、Ｎ−ニトロソ−Ｎ−メチルウレタンによって誘導したマウスの結腸腺ガン細胞株である。細胞を、１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）とペニシリン／ストレプトマイシン（５０Ｕ／ｍｌ）とを有するダルベッコ改変イーグル（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ）培地（ＤＭＥＭ）の培養物で維持した。
【０４３３】
０日目に、雌のＢａｌｂ／ｃマウスに、ヘミ脾臓外科手術によって１×１０５個のＣＴ２６細胞を移植した。簡単に説明すると、Ｂａｌｂ／ｃマウスをイソフルランで麻酔し、左側複切開を行って脾臓を露出させた。脾臓を、２つの中サイズのＨｏｒｉｚｏｎチタン外科手術用クリップ（Ｗｅｃｋ  Ｃｌｏｓｕｒｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，ＮＣ）を使用して２つのヘミ脾臓に分け、血管茎（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｐｅｄｉｃｌｅｓ）は完全なまま残した。２７ゲージ針を使用し、１０５個の生存しているＣＴ２６細胞を脾臓の一方の半分に注射した。その後、ＣＴ−２６腫瘍細胞を、脾臓静脈および門脈静脈へと移動させ、肝臓の中に蓄積させた。ガンが含まれているヘミ脾臓を排出する血管茎を結紮し、そしてＣＴ２６が混入しているヘミ脾臓を切除し、腫瘍細胞が含まれていない機能性のヘミ脾臓を残した。
【０４３４】
細胞質への細菌の侵入が不可欠であることを理解するために、腫瘍を有しているマウスに、生存しているＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ、熱で死滅した（ＨＫ）ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ、またはＬＬＯを生産することができないＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ（Δｈｌｙ、食胞を回避することができない）のいずれかで免疫化した。Ｌｉｓｔｅｒｉａを適切な濃度になるようにＨＢＳＳ中に希釈して、１００または２００μｌの最終容量でマウスに静脈内投与した。３日間確立された肝臓転移を有しているＢａｌｂ／ｃマウスを、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ（３ｅ７  ｃｆｕ）で、熱で死滅したＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ（３ｅ８  ｃｆｕ）、またはΔｈｌｙ  Ｌｍ（３ｅ８  ｃｆｕ）で処置した。ワクチン接種は、３日目、１０日目、および１７日目に行った。生存割合を、それぞれのグループについて図２２に示す（１つのグループあたりｎ＝６〜１０匹のマウス）。
【０４３５】
ＨＫ−ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ、およびＬＬＯ−欠損Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓはいずれも、未処置の対照（ＭＳＴ  ３１日）と比較して平均生存率を有意に延長させた（それぞれ、ＭＳＴ  ４０および５２日）が、大部分の動物は腫瘍負荷に屈してしまった。これは、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢで処置したマウスとは実に対照的である。ここでは、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢで処置したマウスのうちの８０％が、実験の間中腫瘍を有していないままであった（図２２）。これらの結果は、最適なＬｍによって誘導される抗腫瘍活性には細胞質への侵入が必要であることを示している。
【０４３６】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ株は、特許手続きのための微生物寄託の国際認識に関するブダペスト条約の規定の下で、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ），１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｎ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ２０１１０−２２０９，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ（Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ  １５４９，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，２０１０８，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ）に、２００３年１０月３日に寄託し、そして登録番号ＰＴＡ−５５６２が割り当てられた。別のＬｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ株であるΔａｃｔＡΔｕｖｒＡＢ株もまた、２００３年１０月３日に、特許手続きのための微生物寄託の国際認識に関するブダペスト条約の規定の下でＡＴＣＣに寄託し、これには登録番号ＰＴＡ−５５６３が割り当てられた。
【図面の簡単な説明】
【０４３７】
【図１Ａ】図１Ａは、Ｌｉｓｔｅｒｉａで処置されたマウス由来の脾細胞による腫瘍細胞の死滅の増加を示す。この増加はＥｒｂｉｔｕｘ（登録商標）によって刺激された。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ポリ（Ｉ：Ｃ）で処置されたマウスから調製された脾細胞による腫瘍細胞の死滅の増加を示す。この増加はＥｒｂｉｔｕｘ（登録商標）によって刺激された。
【図１Ｃ】図１Ｃは、Ｌｉｓｔｅｒｉａで処置されたマウス由来の脾細胞による腫瘍細胞の死滅の増加を示す。この増加はＣ２２５抗体によって刺激された。
【図１Ｄ】図１Ｄは、ポリ（Ｉ：Ｃ）で処置されたマウスから調製された脾細胞による腫瘍細胞の死滅の増加を示す。この増加はＣ２２５抗体によって刺激された。
【図２】図２は、ＣＤ６９の発現によって評価されたＮＫ細胞の活性化を示す。ＮＫ細胞の供給源である脾細胞は、３種類の条件：（１）ハンクス緩衝化塩溶液（Ｈａｎｋｓ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ；（２）ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ；または（３）ポリ（Ｉ：Ｃ）で処置されたマウスから単離された。
【図３Ａ】図３Ａから３Ｅは、生存性のデータを開示する。図３Ａは、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡまたはＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢの投与によって腫瘍に対する生存性が改善されたことを示す。細菌は、いずれの異種抗原をも発現するようには操作されなかった。この図は、様々な数の用量（すなわち、１用量、３用量、または３用量）に反応した生存性を示す。
【図３Ｂ】図３Ａから３Ｅは、生存性のデータを開示する。図３Ｂもまた、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡまたはＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢの投与によって腫瘍に対する生存性が増大したことを示す。細菌はいずれの異種抗原をも発現するようには操作されなかった。この図は、様々な数の用量（すなわち、３日間の間隔での複数回の用量、または１週間の間隔での複数回の用量）に反応した生存性を示す。
【図３Ｃ】図３Ａから３Ｅは、生存性のデータを開示する。図３Ｃは、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢによって腫瘍に対する生存性が増大したことを明らかにしている。細菌は、いずれの異種抗原をも発現するようには操作されなかった。用量は３日の間隔で提供され、そして、３種類のレベルの細菌のうちの１種類が投与された。また、用量は、１週間の間隔でも提供され、ここでも再度、３種類のレベルの細菌のうちの１種類が投与された。
【図３Ｄ】図３Ａから３Ｅは、生存性のデータを開示する。図３Ｄは、ＣＴＸの単独の投与（ｔ＝４日目で）によって、生存性にある程度の増大が生じること、そしてＣＴＸ（ｔ＝４日目で）とＬｉｓｔｅｒｉａ（５日目、１２日目、および１９日目に投与されたＬｉｓｔｅｒｉａ；６日目、１３日目、および２０日目に投与されたＬｉｓｔｅｒｉａ；または、７日目、１４日目、および２１日目に投与されたＬｉｓｔｅｒｉａ）との投与によって、なおさらに大きな生存性が生じたことを示す。
【図３Ｅ】図３Ａから３Ｅは、生存性のデータを開示する。図３Ｅは、ＣＴＸとＬｉｓｔｅｒｉａΔａｃｔＡΔｉｎｌＢとを用いる併用療法の段階的な遅延の結果を開示している。
【図３Ｆ】図３Ｆは、ＣＴ２６腫瘍に対するマウスの生存性を明らかにする。ＣＴ２６腫瘍細胞が接種されたマウスは、示すようにＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢで、またはＬｍΔａｃｔΔｉｎｌＢで処置された。マウスにはまた、示すように、抗体が投与されなかったか、あるいは、ＣＤ４＋Ｔ細胞；ＣＤ８＋Ｔ細胞；またはＮＫ細胞を特異的に枯渇させる抗体が投与された。
【図３Ｇ】図３Ｇは、ＣＴ２６腫瘍に対するマウスの生存性を明らかにする。ＣＴ２６腫瘍細胞が接種されたマウスは、ＣＤ４＋Ｔ細胞；ＣＤ８＋Ｔ細胞；またはＮＫ細胞を特異的に枯渇させる試薬とともに、ＬｉｓｔｅｒｉａΔａｃｔＡおよびＧＭ  ＣＳＦ（ＧＶＡＸ）で、処置された。
【図３Ｈ】図３Ｈは、腫瘍の再チャレンジ後、６０日では腫瘍を有していなかったマウスの割合（％）を明らかにする。結果は、対照マウス（「対照」）と、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢが予め注射され、続いて、ＣＴ２６が接種された長期間にわたって生存しているマウスとについて示す。長期間にわたって生存しているマウスについては、枯渇抗体（ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）の注射が行なわれずに再チャレンジされた（「抗体なし」）、続いて抗ＣＤ４＋抗体が注射された（「抗ＣＤ４＋抗体」）、または続いて抗ＣＤ８＋抗体が注射された（「抗ＣＤ８＋抗体」）。
【図４Ａ】図４Ａは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によって肝臓ＮＫ細胞の用量依存性の増加が生じたことを示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によっては、脾臓ＮＬ細胞の割合（％）が増大させられることはなかったことを示す。
【図４Ｃ】図４Ｃは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によって、用量依存性の様式で肝臓ＮＫ細胞によるＣＤ６９の発現が増大したことを明らかにしている。
【図４Ｄ】図４Ｄは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によって、脾臓ＮＫ細胞によるＣＤ６９の発現が増大したことを明らかにしている。
【図５Ａ】図５Ａは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によって肝臓ＮＫＴ細胞の増加が生じたことを開示している。
【図５Ｂ】図５Ｂは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によっては、脾臓ＮＫＴ細胞の割合（％）は増加しなかったことを開示している。
【図５Ｃ】図５Ｃは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によって肝臓ＮＫＴ細胞によるＣＤ６９の発現が増大したことを示す。
【図５Ｄ】図５Ｄは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によって脾臓ＮＫＴ細胞によるＣＤ６９の発現が増大したことを示す。
【図６Ａ】図６Ａは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によっては、肝臓または脾臓の中の白血球の割合（％）としてのＴ細胞の合計の増加は生じなかったことを示す。
【図６Ｂ】図６Ｂは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によっては、肝臓または脾臓の中の白血球の割合（％）としてのＴ細胞の合計の増加は生じなかったことを示す。
【図６Ｃ】図６Ｃは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によっては、肝臓または脾臓の中の白血球の割合（％）としてのＣＤ４＋Ｔ細胞の増加は生じなかったことを開示している。
【図６Ｄ】図６Ｄは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によっては、肝臓または脾臓の中の白血球の割合（％）としてのＣＤ４＋Ｔ細胞の増加は生じなかったことを開示している。
【図６Ｅ】図６Ｅは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によって肝臓のＣＤ４＋Ｔ細胞によるＣＤ６９の用量依存性の発現が刺激されたことを示す。
【図６Ｆ】図６Ｆは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によって脾臓のＣＤ４＋Ｔ細胞によるＣＤ６９の発現が刺激されたことを示す。
【図７Ａ】図７Ａは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によっては、肝臓または脾臓の中の白血球の割合（％）としてのＣＤ８＋Ｔ細胞の増加は生じなかったことを示す。
【図７Ｂ】図７Ｂは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によっては、肝臓または脾臓の中の白血球の割合（％）としてのＣＤ８＋Ｔ細胞の増加は生じなかったことを示す。
【図７Ｃ】図７Ｃは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によって肝臓のＣＤ８＋Ｔ細胞によるＣＤ６９の発現が増大したことを示す。
【図７Ｄ】図７Ｄは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によって脾臓のＣＤ８＋Ｔ細胞によるＣＤ６９の発現が増大したことを示す。
【図８Ａ】図８Ａは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によってＧＲ−１＋好中球として存在している肝臓の白血球の合計の割合（％）が増大したことを明らかにしている。
【図８Ｂ】図８Ｂは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によってＧＲ−１＋好中球として存在している脾臓の白血球の合計の割合（％）が増大したことを明らかにしている。
【図９Ａ】図９Ａは、ＣＤ２５を発現している肝臓のＣＤ４＋Ｔ細胞の割合（％）が増大したことを示す。
【図９Ｂ】図９Ｂは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によって肝臓のＣＤ４＋Ｔ細胞によるＣＤ２５の発現の平均が増大したことを示す。
【図９Ｃ】図９Ｃは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与が、ＣＤ２５を発現している脾臓のＣＤ４＋Ｔ細胞の割合（％）に対してはほとんど影響がないか、または全く影響がないことを示す。
【図９Ｄ】図９Ｄは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与が、脾臓のＣＤ４＋Ｔ細胞によるＣＤ２５の発現に対してはほとんど影響がないか、または全く影響がないことを示す。
【図１０Ａ】図１０は経時的な実験を開示する。図１０Ａは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によってＮＫ細胞である肝臓の白血球の割合（％）が増大したことを示す。
【図１０Ｂ】図１０は経時的な実験を開示する。図１０Ｂは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与は、ＮＫ細胞である脾臓の白血球の割合（％）に対してはほとんど影響がないか、または全く影響がないことを示す。
【図１１Ａ】図１１は経時的な実験を開示する。図１１Ａは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によって、好中球である肝臓の白血球の割合（％）が増大したことを示す。
【図１１Ｂ】図１１は経時的な実験を開示する。図１１Ｂは、弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によって、好中球である脾臓の白血球の割合（％）が増大したことを示す。
【図１２Ａ】図１２は、サイトカイン（ＧＭ−ＣＳＦ）を発現するように操作された弱毒化された腫瘍細胞が含まれているワクチンの投与を用いた結果を開示している。このワクチンはＧＶＡＸと呼ばれる。用語「ＧＶＡＸ」、「ＧＭワクチン」および「ＧＭ−ＣＳＦワクチン」は交換可能に使用してよい。図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、および１２Ｉは、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡ（このＬｉｓｔｅｒｉａは、異種抗原をコードする核酸が含まれるようには改変されていない）の投与後の肝臓での免疫応答を開示している。ＬｉｓｔｅｒｉａとＧＶＡＸワクチンとの両方の投与後の肝臓の中での免疫応答もまた示す。追跡された免疫応答は、ＮＫ細胞の数（図１２Ａ）；ＮＫＴ細胞の数（図１２Ｂ）；ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｃ）、形質細胞様ＤＣ細胞の数（図１２Ｄ）；骨髄性ＤＣ細胞の数（図１２Ｅ）；腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｆ）；ならびに、インターフェロン−γをコードするｍＲＮＡの発現によって評価される細胞の活性化（図１２Ｇおよび１２Ｈ）を含む。図１２Ｉは、ＣＴ２６腫瘍細胞で処置されたマウスの肝臓に由来するＣＤ８＋Ｔ細胞のＦＡＣＳ分析を示し、マウスにはまた、例えば、様々な治療薬も投与されている。
【図１２Ｂ】図１２は、サイトカイン（ＧＭ−ＣＳＦ）を発現するように操作された弱毒化された腫瘍細胞が含まれているワクチンの投与を用いた結果を開示している。このワクチンはＧＶＡＸと呼ばれる。用語「ＧＶＡＸ」、「ＧＭワクチン」および「ＧＭ−ＣＳＦワクチン」は交換可能に使用してよい。図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、および１２Ｉは、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡ（このＬｉｓｔｅｒｉａは、異種抗原をコードする核酸が含まれるようには改変されていない）の投与後の肝臓での免疫応答を開示している。ＬｉｓｔｅｒｉａとＧＶＡＸワクチンとの両方の投与後の肝臓の中での免疫応答もまた示す。追跡された免疫応答は、ＮＫ細胞の数（図１２Ａ）；ＮＫＴ細胞の数（図１２Ｂ）；ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｃ）、形質細胞様ＤＣ細胞の数（図１２Ｄ）；骨髄性ＤＣ細胞の数（図１２Ｅ）；腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｆ）；ならびに、インターフェロン−γをコードするｍＲＮＡの発現によって評価される細胞の活性化（図１２Ｇおよび１２Ｈ）を含む。図１２Ｉは、ＣＴ２６腫瘍細胞で処置されたマウスの肝臓に由来するＣＤ８＋Ｔ細胞のＦＡＣＳ分析を示し、マウスにはまた、例えば、様々な治療薬も投与されている。
【図１２Ｃ】図１２は、サイトカイン（ＧＭ−ＣＳＦ）を発現するように操作された弱毒化された腫瘍細胞が含まれているワクチンの投与を用いた結果を開示している。このワクチンはＧＶＡＸと呼ばれる。用語「ＧＶＡＸ」、「ＧＭワクチン」および「ＧＭ−ＣＳＦワクチン」は交換可能に使用してよい。図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、および１２Ｉは、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡ（このＬｉｓｔｅｒｉａは、異種抗原をコードする核酸が含まれるようには改変されていない）の投与後の肝臓での免疫応答を開示している。ＬｉｓｔｅｒｉａとＧＶＡＸワクチンとの両方の投与後の肝臓の中での免疫応答もまた示す。追跡された免疫応答は、ＮＫ細胞の数（図１２Ａ）；ＮＫＴ細胞の数（図１２Ｂ）；ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｃ）、形質細胞様ＤＣ細胞の数（図１２Ｄ）；骨髄性ＤＣ細胞の数（図１２Ｅ）；腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｆ）；ならびに、インターフェロン−γをコードするｍＲＮＡの発現によって評価される細胞の活性化（図１２Ｇおよび１２Ｈ）を含む。図１２Ｉは、ＣＴ２６腫瘍細胞で処置されたマウスの肝臓に由来するＣＤ８＋Ｔ細胞のＦＡＣＳ分析を示し、マウスにはまた、例えば、様々な治療薬も投与されている。
【図１２Ｄ】図１２は、サイトカイン（ＧＭ−ＣＳＦ）を発現するように操作された弱毒化された腫瘍細胞が含まれているワクチンの投与を用いた結果を開示している。このワクチンはＧＶＡＸと呼ばれる。用語「ＧＶＡＸ」、「ＧＭワクチン」および「ＧＭ−ＣＳＦワクチン」は交換可能に使用してよい。図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、および１２Ｉは、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡ（このＬｉｓｔｅｒｉａは、異種抗原をコードする核酸が含まれるようには改変されていない）の投与後の肝臓での免疫応答を開示している。ＬｉｓｔｅｒｉａとＧＶＡＸワクチンとの両方の投与後の肝臓の中での免疫応答もまた示す。追跡された免疫応答は、ＮＫ細胞の数（図１２Ａ）；ＮＫＴ細胞の数（図１２Ｂ）；ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｃ）、形質細胞様ＤＣ細胞の数（図１２Ｄ）；骨髄性ＤＣ細胞の数（図１２Ｅ）；腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｆ）；ならびに、インターフェロン−γをコードするｍＲＮＡの発現によって評価される細胞の活性化（図１２Ｇおよび１２Ｈ）を含む。図１２Ｉは、ＣＴ２６腫瘍細胞で処置されたマウスの肝臓に由来するＣＤ８＋Ｔ細胞のＦＡＣＳ分析を示し、マウスにはまた、例えば、様々な治療薬も投与されている。
【図１２Ｅ】図１２は、サイトカイン（ＧＭ−ＣＳＦ）を発現するように操作された弱毒化された腫瘍細胞が含まれているワクチンの投与を用いた結果を開示している。このワクチンはＧＶＡＸと呼ばれる。用語「ＧＶＡＸ」、「ＧＭワクチン」および「ＧＭ−ＣＳＦワクチン」は交換可能に使用してよい。図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、および１２Ｉは、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡ（このＬｉｓｔｅｒｉａは、異種抗原をコードする核酸が含まれるようには改変されていない）の投与後の肝臓での免疫応答を開示している。ＬｉｓｔｅｒｉａとＧＶＡＸワクチンとの両方の投与後の肝臓の中での免疫応答もまた示す。追跡された免疫応答は、ＮＫ細胞の数（図１２Ａ）；ＮＫＴ細胞の数（図１２Ｂ）；ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｃ）、形質細胞様ＤＣ細胞の数（図１２Ｄ）；骨髄性ＤＣ細胞の数（図１２Ｅ）；腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｆ）；ならびに、インターフェロン−γをコードするｍＲＮＡの発現によって評価される細胞の活性化（図１２Ｇおよび１２Ｈ）を含む。図１２Ｉは、ＣＴ２６腫瘍細胞で処置されたマウスの肝臓に由来するＣＤ８＋Ｔ細胞のＦＡＣＳ分析を示し、マウスにはまた、例えば、様々な治療薬も投与されている。
【図１２Ｆ】図１２は、サイトカイン（ＧＭ−ＣＳＦ）を発現するように操作された弱毒化された腫瘍細胞が含まれているワクチンの投与を用いた結果を開示している。このワクチンはＧＶＡＸと呼ばれる。用語「ＧＶＡＸ」、「ＧＭワクチン」および「ＧＭ−ＣＳＦワクチン」は交換可能に使用してよい。図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、および１２Ｉは、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡ（このＬｉｓｔｅｒｉａは、異種抗原をコードする核酸が含まれるようには改変されていない）の投与後の肝臓での免疫応答を開示している。ＬｉｓｔｅｒｉａとＧＶＡＸワクチンとの両方の投与後の肝臓の中での免疫応答もまた示す。追跡された免疫応答は、ＮＫ細胞の数（図１２Ａ）；ＮＫＴ細胞の数（図１２Ｂ）；ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｃ）、形質細胞様ＤＣ細胞の数（図１２Ｄ）；骨髄性ＤＣ細胞の数（図１２Ｅ）；腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｆ）；ならびに、インターフェロン−γをコードするｍＲＮＡの発現によって評価される細胞の活性化（図１２Ｇおよび１２Ｈ）を含む。図１２Ｉは、ＣＴ２６腫瘍細胞で処置されたマウスの肝臓に由来するＣＤ８＋Ｔ細胞のＦＡＣＳ分析を示し、マウスにはまた、例えば、様々な治療薬も投与されている。
【図１２Ｇ】図１２は、サイトカイン（ＧＭ−ＣＳＦ）を発現するように操作された弱毒化された腫瘍細胞が含まれているワクチンの投与を用いた結果を開示している。このワクチンはＧＶＡＸと呼ばれる。用語「ＧＶＡＸ」、「ＧＭワクチン」および「ＧＭ−ＣＳＦワクチン」は交換可能に使用してよい。図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、および１２Ｉは、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡ（このＬｉｓｔｅｒｉａは、異種抗原をコードする核酸が含まれるようには改変されていない）の投与後の肝臓での免疫応答を開示している。ＬｉｓｔｅｒｉａとＧＶＡＸワクチンとの両方の投与後の肝臓の中での免疫応答もまた示す。追跡された免疫応答は、ＮＫ細胞の数（図１２Ａ）；ＮＫＴ細胞の数（図１２Ｂ）；ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｃ）、形質細胞様ＤＣ細胞の数（図１２Ｄ）；骨髄性ＤＣ細胞の数（図１２Ｅ）；腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｆ）；ならびに、インターフェロン−γをコードするｍＲＮＡの発現によって評価される細胞の活性化（図１２Ｇおよび１２Ｈ）を含む。図１２Ｉは、ＣＴ２６腫瘍細胞で処置されたマウスの肝臓に由来するＣＤ８＋Ｔ細胞のＦＡＣＳ分析を示し、マウスにはまた、例えば、様々な治療薬も投与されている。
【図１２Ｈ】図１２は、サイトカイン（ＧＭ−ＣＳＦ）を発現するように操作された弱毒化された腫瘍細胞が含まれているワクチンの投与を用いた結果を開示している。このワクチンはＧＶＡＸと呼ばれる。用語「ＧＶＡＸ」、「ＧＭワクチン」および「ＧＭ−ＣＳＦワクチン」は交換可能に使用してよい。図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、および１２Ｉは、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡ（このＬｉｓｔｅｒｉａは、異種抗原をコードする核酸が含まれるようには改変されていない）の投与後の肝臓での免疫応答を開示している。ＬｉｓｔｅｒｉａとＧＶＡＸワクチンとの両方の投与後の肝臓の中での免疫応答もまた示す。追跡された免疫応答は、ＮＫ細胞の数（図１２Ａ）；ＮＫＴ細胞の数（図１２Ｂ）；ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｃ）、形質細胞様ＤＣ細胞の数（図１２Ｄ）；骨髄性ＤＣ細胞の数（図１２Ｅ）；腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｆ）；ならびに、インターフェロン−γをコードするｍＲＮＡの発現によって評価される細胞の活性化（図１２Ｇおよび１２Ｈ）を含む。図１２Ｉは、ＣＴ２６腫瘍細胞で処置されたマウスの肝臓に由来するＣＤ８＋Ｔ細胞のＦＡＣＳ分析を示し、マウスにはまた、例えば、様々な治療薬も投与されている。
【図１２Ｉ】図１２は、サイトカイン（ＧＭ−ＣＳＦ）を発現するように操作された弱毒化された腫瘍細胞が含まれているワクチンの投与を用いた結果を開示している。このワクチンはＧＶＡＸと呼ばれる。用語「ＧＶＡＸ」、「ＧＭワクチン」および「ＧＭ−ＣＳＦワクチン」は交換可能に使用してよい。図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ、１２Ｆ、１２Ｇ、１２Ｈ、および１２Ｉは、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡ（このＬｉｓｔｅｒｉａは、異種抗原をコードする核酸が含まれるようには改変されていない）の投与後の肝臓での免疫応答を開示している。ＬｉｓｔｅｒｉａとＧＶＡＸワクチンとの両方の投与後の肝臓の中での免疫応答もまた示す。追跡された免疫応答は、ＮＫ細胞の数（図１２Ａ）；ＮＫＴ細胞の数（図１２Ｂ）；ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｃ）、形質細胞様ＤＣ細胞の数（図１２Ｄ）；骨髄性ＤＣ細胞の数（図１２Ｅ）；腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の数（図１２Ｆ）；ならびに、インターフェロン−γをコードするｍＲＮＡの発現によって評価される細胞の活性化（図１２Ｇおよび１２Ｈ）を含む。図１２Ｉは、ＣＴ２６腫瘍細胞で処置されたマウスの肝臓に由来するＣＤ８＋Ｔ細胞のＦＡＣＳ分析を示し、マウスにはまた、例えば、様々な治療薬も投与されている。
【図１３Ａ】図１３は、サイトカイン（ＧＭ−ＣＳＦ）を発現するように操作された弱毒化された腫瘍細胞が含まれているワクチンの投与を用いた結果を開示している。このワクチンはＧＶＡＸと呼ばれる。用語「ＧＶＡＸ」、「ＧＭワクチン」および「ＧＭ−ＣＳＦワクチン」は交換可能に使用してよい。図１３Ａは、ワクチンの単独での投与によって、生存性のある程度の増大が生じたが、ワクチンを伴う弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によってはさらに大きな生存性が生じたことを示す。投与された細菌の数は、１０７コロニー形成単位（ｌｅ７コロニー形成単位；ＣＦＵ）であった。
【図１３Ｂ】図１３は、サイトカイン（ＧＭ−ＣＳＦ）を発現するように操作された弱毒化された腫瘍細胞が含まれているワクチンの投与を用いた結果を開示している。このワクチンはＧＶＡＸと呼ばれる。用語「ＧＶＡＸ」、「ＧＭワクチン」および「ＧＭ−ＣＳＦワクチン」は交換可能に使用してよい。図１３Ｂは、ワクチンの単独での投与によって、生存性のある程度の増大が生じたが、ワクチンを伴う弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａの投与によってはさらに大きな生存性が生じたことを示す。投与された細菌の数は、１０７コロニー形成単位（ｌｅ７コロニー形成単位；ＣＦＵ）であった。
【図１４】図１４は、ワクチン（ＧＭ）の単独での投与によっては、生存性にわずかな改善しか生じなかったが、ワクチンおよび弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａ（ＧＭ＋Ｌｍ  ａｃｔＡまたはＧＭ＋Ｌｍ  ＡｃｔＡ／ｉｎｌＢ）の投与によっては、さらに大きな生存性が生じ、一方、ＧＭワクチンおよび弱毒化されたＬｉｓｔｅｒｉａ、ならびにシクロホスファミド（ＣＴＸ）の投与によっては、なおさらに大きな生存性が生じたことを示す。
【図１５Ａ】図１５ＡからＣは、腫瘍に対する生存性を示す。動物には、ワクチン（ＧＭ）が単独で、またはワクチン（ＧＭ）および様々なレベルの弱毒化されたＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓが投与された。図１５Ａは、３×１０６ＣＦＵ、１×１０７ＣＦＵ、または３×１０７ＣＦＵで投与されたＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡ（欠失変異体）を用いた生存性のデータを示す。
【図１５Ｂ】図１５ＡからＣは、腫瘍に対する生存性を示す。動物には、ワクチン（ＧＭ）が単独で、またはワクチン（ＧＭ）および様々なレベルの弱毒化されたＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓが投与された。図１５Ｂは、３×１０６ＣＦＵ、１×１０７ＣＦＵ、または３×１０７ＣＦＵで投与されたＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ（欠失変異体）を用いた生存性のデータを開示している。
【図１５Ｃ】図１５ＡからＣは、腫瘍に対する生存性を示す。動物には、ワクチン（ＧＭ）が単独で、またはワクチン（ＧＭ）および様々なレベルの弱毒化されたＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓが投与された。図１５Ｃは、ワクチンだけを用いた、または、３×１０３ＣＦＵ、３×１０４ＣＦＵ、３×１０５ＣＦＵ、３×１０６ＣＦＵ、もしくは３×１０７ＣＦＵで投与されたＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを用いた、生存性についてのデータを明らかにしている。
【図１６】図１６は、Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ  ΔａｃｔＡΔｉｎｌＢを用いた肺腫瘍の処置を開示している。
【図１７】図１７は、ＣＴ２６腫瘍細胞での再チャレンジによって生じるメモリー応答（Ｅｌｉｓｐｏｔアッセイ）を示す。腫瘍が接種されたマウスは、最初に、治療薬を用いることなく、Ｌｉｓｔｅｒｉａだけで、ＧＭ−ＣＳＦワクチンとＬｉｓｔｅｒｉａとで、またはシクロホスファミド（ＣＴＸ）だけで処置された。
【図１８】図１８は、ＣＴ２６腫瘍細胞での再チャレンジによって生じる腫瘍の腫瘍容積を示す。腫瘍が接種されたマウスは、最初に、治療薬を用いることなく、Ｌｉｓｔｅｒｉａだけで、ＧＭ−ＣＳＦワクチンとＬｉｓｔｅｒｉａとで、またはシクロホスファミド（ＣＴＸ）だけで処置された。
【図１９】図１９はサイトカインの発現を示す。
【図２０】図２０は、ＮＫ細胞の活性化および動員、ならびにＭＣＰ−１の発現を開示している。
【図２１Ａ】図２１Ａは、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢの投与後の、サルにおけるＩＬ−１αの発現を開示している。
【図２１Ｂ】図２１Ｂは、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢの投与後の、サルにおけるインターフェロン−γ（ＩＦＮγ）の発現を開示している。
【図２１Ｃ】図２１Ｃは、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢの投与後の、サルにおける腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦα）の発現を明らかにしている。
【図２１Ｄ】図２１Ｄは、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢの投与後の、サルにおけるＭＣＰ−１の発現を開示している。
【図２１Ｅ】図２１Ｅは、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢの投与後の、サルにおけるＭＩＰ−１βの発現を明らかにしている。
【図２１Ｆ】図２１Ｆは、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢの投与後の、サルにおけるインターロイキン−６（ＩＬ−６）の発現を開示している。
【図２１Ｇ】図２１Ｇは、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢの投与後の、サルにおける様々なサイトカインの発現を開示している。
【図２２】図２２は、ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ、熱で死滅した（ＨＫ）ＬｍΔａｃｔＡΔｉｎｌＢ、およびΔｈｌｙ  Ｌｍによって誘導された抗腫瘍活性の比較を示す。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図３Ｆ】
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【図３Ｇ】
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【図３Ｈ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図６Ｆ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図９Ｄ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１２Ｅ】
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【図１２Ｆ】
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【図１２Ｇ】
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【図１２Ｈ】
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【図１２Ｉ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２１Ｃ】
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【図２１Ｄ】
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【図２１Ｅ】
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【図２１Ｆ】
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【図２１Ｇ】
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【図２２】
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【国際調査報告】
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