(57)【要約】  本明細書では、患者において病原性細胞を治療するための化合物、製薬組成物、および方法が記載される。本明細書に記載する化合物は、細胞毒性薬物およびビタミン受容体結合リガンドの結合体を含む。該結合体は、１個以上のスペーサーリンカー、ヘテロ原子リンカー、および放出型リンカーから形成されるリンカーも含む。【選択図】図１１
2009504783.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
受容体結合薬物送達結合体であって：
（ａ）受容体結合部分と；
（ｂ）２価リンカーと；
（ｃ）ビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体と、を含み；
受容体結合部分は２価リンカーに共有結合され；
ビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体は、２価リンカーに共有結合され；かつ
２価リンカーが、スペーサーリンカー、放出型リンカー、およびヘテロ原子リンカー、ならびにその組合せから成る群より選択される１つ以上の構成要素を含む、
受容体結合薬物送達結合体。
【請求項２】
式：（Ｂ）-（Ｌ）-（Ｄ）を有するビタミン受容体結合薬物送達結合体であって、
式中、（Ｌ）は、（ｌｓ）ａ、（ｌＨ）ｂ、および（ｌｒ）ｃ、ならびにその組合せから成る群より選択され；
ここで（ｌｒ）は放出型リンカーであり、（ｌｓ）はスペーサーリンカーであり、かつ（ｌＨ）はヘテロ原子リンカーであり；
（Ｂ）はビタミン受容体結合部分であり、かつ（Ｄ）は薬物、あるいはその類似体または誘導体であり；かつ
ａ、ｂ、およびｃはそれぞれ独立して、０、１、２、３、または４である、
ビタミン受容体結合薬物送達結合体。
【請求項３】
式：（Ｂ）-（Ｌ）-（Ｄ）を有するビタミン受容体結合薬物送達結合体であって、
式中、（Ｌ）は、（ｌｓ）ａおよび（ｌＨ）ｂ、ならびにその組合せから成る群より選択され；
ここで（ｌｓ）はスペーサーリンカーであり、（ｌＨ）はヘテロ原子リンカーであり；
かつａおよびｂはそれぞれ独立して、０、１、２、３、または４であり；かつ
（Ｂ）はビタミン受容体結合部分であり、かつ（Ｄ）はビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体である、
ビタミン受容体結合薬物送達結合体。
【請求項４】
２価リンカーが、ケタールを含む放出型リンカーを含む、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項５】
少なくとも１個のスペーサーリンカーがペプチドである、請求項４に記載の薬物送達結合体。
【請求項６】
２価リンカーが、式：
2009504783.tif 000072
の放出型リンカーを含み；
ｎが、１、２、３、および４から選択され；
Ｒａが、アルキルまたは場合により置換されたアリールアルキルであり、Ｒａが、水素または任意選択の置換基であり；かつ
（＊）原子が、受容体結合部分、２価リンカー、あるいはビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体にそれぞれ結合される、
請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項７】
２価リンカーが、カーボネートを含む放出型リンカーを含む、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項８】
少なくとも１個のスペーサーリンカーがペプチドである、請求項４に記載の薬物送達結合体。
【請求項９】
２価リンカーが、式：
2009504783.tif 000073
の放出型リンカーを含み、
式中、ｎおよびｍが、１、２、３、および４よりそれぞれ独立して選択される整数であり；かつ
（＊）原子が、受容体結合部分、２価リンカー、あるいはビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体にそれぞれ結合される、
請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項１０】
２価リンカーが、２価ジチオアルキルアミノ基または２価ジチオベンジルオキシカルボニル基を含む放出型リンカーを含む、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項１１】
少なくとも１個のスペーサーリンカーがペプチドである、請求項４に記載の薬物送達結合体。
【請求項１２】
２価リンカーが、式：
2009504783.tif 000074
の放出型リンカーを含み、
式中、ｎが、１、２、３、および４から選択され；かつ
（＊）原子が、受容体結合部分、２価リンカー、あるいはビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体にそれぞれ結合される、
請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項１３】
２価リンカーが、式：
2009504783.tif 000075
の放出型リンカーを含み、
式中、Ｒが、水素または任意の置換基であり；かつ
（＊）原子が、受容体結合部分、２価リンカー、あるいはビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体にそれぞれ結合される、
請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項１４】
２価リンカーが、式：
2009504783.tif 000076
の放出型リンカーを含み、
式中、Ｒが、水素、アルキル、アルコキシ、シアノ、またはニトロであり；かつ
（＊）原子が、受容体結合部分、２価リンカー、あるいはビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体にそれぞれ結合される、
請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項１５】
２価リンカーが、式：
2009504783.tif 000077
の放出型リンカーを含み、
式中、Ｒが、水素、アルキル、アルコキシ、シアノ、またはニトロであり；かつ
（＊）原子が、受容体結合部分、２価リンカー、あるいはビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体にそれぞれ結合される、
請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項１６】
ビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体が、窒素を介して２価リンカーに結合されたカルボキサミドを含む、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項１７】
少なくとも１個のスペーサーリンカーがペプチドである、請求項４に記載の薬物送達結合体。
【請求項１８】
ビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体が、酸素を介して２価リンカーに結合されたカルボキシラートを含む、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項１９】
少なくとも１個のスペーサーリンカーがペプチドである、請求項４に記載の薬物送達結合体。
【請求項２０】
２価リンカーが、ジスルフィドでない少なくとも１個の放出型リンカーを含む、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項２１】
ヘテロ原子リンカーが窒素、酸素、または硫黄原子、あるいは-ＮＨＲ１ＮＨＲ２-、-ＳＯ-、-Ｓ（Ｏ）２-、および-ＮＲ３Ｏ-から成る式の群より選択され、ここでＲ１、Ｒ２、およびＲ３が、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、置換アリール、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、およびアルコキシアルキルから成る群よりそれぞれ独立して選択される、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項２２】
スペーサーリンカーが、カルボニル、チオノカルボニル、アルキレン、シクロアルキレン、アルキレンシクロアルキル、アルキレンカルボニル、シクロアルキレンカルボニル、カルボニルアルキルカルボニル、１-アルキレンスクシンイミド-３-イル、１-（カルボニルアルキル）スクシンイミド-３-イル、アルキレンスルホキシル、スルホニルアルキル、アルキレンスルホキシアルキル、アルキレンスルホニルアルキル、カルボニルテトラヒドロ-２Ｈ-ピラニル、カルボニルテトラヒドロフラニル、１-（カルボニルテトラヒドロ-２Ｈ-ピラニル）スクシンイミド-３-イル、および１-（カルボニルテトラヒドロフラニル）スクシンイミド-３-イルから成る群より選択され、ここで前記スペーサーリンカーのそれぞれが１個以上の置換基Ｘ１によって場合により置換され；
ここで各置換基Ｘ１は、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、ハロ、ハロアルキル、スルフヒドリルアルキル、アルキルチオアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルキルカルボキシラート、アルキルアルカノアート、グアニジノアルキル、Ｒ４-カルボニル、Ｒ５-カルボニルアルキル、Ｒ６-アシルアミノ、およびＲ７-アシルアミノアルキルから成る群より独立して選択され、ここでＲ４およびＲ５は、アミノ酸、アミノ酸誘導体、およびペプチドから成る群よりそれぞれ独立して選択され、ここでＲ６およびＲ７は、アミノ酸、アミノ酸誘導体、およびペプチドから成る群よりそれぞれ独立して選択される、
請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項２３】
ヘテロ原子リンカーが窒素であり、ここで置換基Ｘ１およびヘテロ原子リンカーが、それらが結合するスペーサーリンカーとひとまとめにされて複素環を形成する、請求項２２に記載の薬物送達結合体。
【請求項２４】
複素環がピロリジン、ピペリジン、オキサゾリジン、イソオキサゾリジン、チアゾリジン、イソチアゾリジン、ピロリジノン、ピペリジノン、オキサゾリジノン、イソオキサゾリジノン、チアゾリジノン、イソチアゾリジノン、およびスクシンイミドから成る群より選択される、請求項２３に記載の薬物送達結合体。
【請求項２５】
放出型リンカーが、メチレン、１-アルコキシアルキレン、１-アルコキシシクロアルキレン、１-アルコキシアルキレンカルボニル、１-アルコキシシクロアルキレンカルボニル、カルボニルアリールカルボニル、カルボニル（カルボキシアリール）カルボニル、カルボニル（ビスカルボキシアリール）カルボニル、ハロアルキレンカルボニル、アルキレン（ジアルキルシリル）、アルキレン（アルキルアリールシリル）、アルキレン（ジアリールシリル）、（ジアルキルシリル）アリール、（アルキルアリールシリル）アリール、（ジアリールシリル）アリール、オキシカルボニルオキシ、オキシカルボニルオキシアルキル、スルホニルアルキル、イミノアルキリデニル、カルボニルアルキリデンイミニル、イミノシクロアルキリデニル、カルボニルシクロアルキリデンイミニル、アルキレンスルホニル、アルキレンチオ、アルキレンアリールチオ、およびカルボニルアルキルチオから成る群より選択され、ここで前記放出型リンカーのそれぞれが１個以上の置換基Ｘ２によって場合により置換され；
ここで各置換基Ｘ２は、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、ハロ、ハロアルキル、スルフヒドリルアルキル、アルキルチオアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルキルカルボキシラート、アルキルアルカノアート、グアニジノアルキル、Ｒ４-カルボニル、Ｒ５-カルボニルアルキル、Ｒ６-アシルアミノ、およびＲ７-アシルアミノアルキルから成る群より独立して選択され、ここでＲ４およびＲ５は、アミノ酸、アミノ酸誘導体、およびペプチドから成る群よりそれぞれ独立して選択され、かつここでＲ６およびＲ７は、アミノ酸、アミノ酸誘導体、およびペプチドから成る群よりそれぞれ独立して選択される、
請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項２６】
ヘテロ原子リンカーが窒素であり、ここで置換基Ｘ２およびヘテロ原子リンカーが、それらが結合する放出型リンカーとひとまとめにされて複素環を形成する、請求項２５に記載の薬物送達結合体。
【請求項２７】
複素環がピロリジン、ピペリジン、オキサゾリジン、イソオキサゾリジン、チアゾリジン、イソチアゾリジン、ピロリジノン、ピペリジノン、オキサゾリジノン、イソオキサゾリジノン、チアゾリジノン、イソチアゾリジノン、およびスクシンイミドから成る群より選択される、請求項２６に記載の薬物送達結合体。
【請求項２８】
ヘテロ原子リンカーが窒素であり、放出型リンカーおよびヘテロ原子リンカーがひとまとめにされてアルキレンアジリジン-１-イル、アルキレンカルボニルアジリジン-１-イル、カルボニルアルキルアジリジン-１-イル、アルキレンスルホキシルアジリジン-１-イル、スルホキシアルキルアジリジン-１-イル、スルホニルアルキルアジリジン-１-イル、またはアルキレンスルホニルアジリジン-１-イルを含む２価基を形成し、前記放出型リンカーのそれぞれが１個以上の置換基Ｘ２によって場合により置換され；
ここで各置換基Ｘ２は、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、ハロ、ハロアルキル、スルフヒドリルアルキル、アルキルチオアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルキルカルボキシラート、アルキルアルカノアート、グアニジノアルキル、Ｒ４-カルボニル、Ｒ５-カルボニルアルキル、Ｒ６-アシルアミノ、およびＲ７-アシルアミノアルキルから成る群より独立して選択され、ここでＲ４およびＲ５は、アミノ酸、アミノ酸誘導体、およびペプチドから成る群よりそれぞれ独立して選択され、かつここでＲ６およびＲ７は、アミノ酸、アミノ酸誘導体、およびペプチドから成る群よりそれぞれ独立して選択される、
請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項２９】
ヘテロ原子リンカーが窒素であり、かつ放出型リンカーおよびヘテロ原子リンカーがひとまとめにされてアルキレンアジリジン-１-イル、カルボニルアルキルアジリジン-１-イル、スルホキシルアルキルアジリジン-１-イル、またはスルホニルアルキルアジリジン-１-イルを含む２価基を形成する、請求項２８に記載の薬物送達結合体。
【請求項３０】
スペーサーリンカーが、カルボニル、チオノカルボニル、アルキレンカルボニル、シクロアルキレンカルボニル、カルボニルアルキルカルボニル、および１-（カルボニルアルキル）スクシンイミド-３-イルから成る群より選択され、ここで前記スペーサーリンカーそれぞれが１個以上の置換基Ｘ１によって場合により置換され；
ここで各置換基Ｘ１は、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、ハロ、ハロアルキル、スルフヒドリルアルキル、アルキルチオアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルキルカルボキシラート、アルキルアルカノアート、グアニジノアルキル、Ｒ４-カルボニル、Ｒ５-カルボニルアルキル、Ｒ６-アシルアミノ、およびＲ７-アシルアミノアルキルから成る群より独立して選択され、ここでＲ４およびＲ５は、アミノ酸、アミノ酸誘導体、およびペプチドから成る群よりそれぞれ独立して選択され、かつここでＲ６およびＲ７は、アミノ酸、アミノ酸誘導体、およびペプチドから成る群よりそれぞれ独立して選択され；
かつここでスペーサーリンカーが放出型リンカーに結合されて、アジリジンアミドを形成する、
請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項３１】
ビンカアルカロイドがビンブラスチン、デスアセチルビンブラスチン、ビンデシン、またはチオビンデシンである、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項３２】
ビンカアルカロイドが二重結合窒素原子を含むその誘導体であり、放出型リンカーがアルキレンカルボニルアミノおよび１-（アルキレンカルボニルアミノ）スクシンイミド-３-イルから成る群より選択され、かつ放出型リンカーが薬物窒素に結合されて、ヒドラゾンを形成する、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項３３】
ビンカアルカロイドが硫黄原子を含むその誘導体であり、放出型リンカーがアルキレンチオおよびカルボニルアルキルチオから成る群より選択され、かつ放出型リンカーが薬物硫黄に結合されて、ジスルフィドを形成する、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項３４】
ヘテロ原子リンカーが酸素であり、放出型リンカーがアルキレン（ジアルキルシリル）、アルキレン（アルキルアリールシリル）、アルキレン（ジアリールシリル）、（ジアルキルシリル）アリール、（アルキルアリールシリル）アリールおよび（ジアリールシリル）アリールから成る群より選択され、前記放出型リンカーのそれぞれが１個以上の置換基Ｘ２によって場合により置換され、かつ放出型リンカーが酸素に結合されて、シラノールを形成する、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項３５】
ヘテロ原子リンカーが酸素であり、スペーサーリンカーが１個以上の置換基Ｘ１によって場合により置換された１-アルキレンスクシンイミド-３-イルであり、かつ放出型リンカーがメチレン、１-アルコキシアルキレン、１-アルコキシシクロアルキレン、１-アルコキシアルキレンカルボニル、１-アルコキシシクロアルキレンカルボニルから成る群より選択され、前記放出型リンカーのそれぞれが１個以上の置換基Ｘ２によって場合により置換され；
ここで各置換基Ｘ２は、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アミノ、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、ハロ、ハロアルキル、スルフヒドリルアルキル、アルキルチオアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、カルボキシ、カルボキシアルキル、アルキルカルボキシラート、アルキルアルカノアート、グアニジノアルキル、Ｒ４-カルボニル、Ｒ５-カルボニルアルキル、Ｒ６-アシルアミノ、およびＲ７-アシルアミノアルキルから成る群より独立して選択され、ここでＲ４およびＲ５は、アミノ酸、アミノ酸誘導体、およびペプチドから成る群よりそれぞれ独立して選択され、かつここでＲ６およびＲ７は、アミノ酸、アミノ酸誘導体、およびペプチドから成る群よりそれぞれ独立して選択され；
かつここでスペーサーリンカーおよび放出型リンカーがそれぞれヘテロ原子リンカーに結合されて、スクシンイミド-１-イルアルキルアセタールまたはケタールを形成する、
請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項３６】
２価リンカーがヘテロ原子リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含み、これらがひとまとめにされて、メチルがアルキルまたは置換アリールによって場合により置換される３-チオスクシンイミド-１-イルアルコキシメチルオキシを形成する、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項３７】
２価リンカーがヘテロ原子リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含み、これらがひとまとめにされて、カルボニルが薬物、あるいはその類似体または誘導体と共にアシルアジリジンを形成する３-チオスクシンイミド-１-イルアルキルカルボニルを形成する、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項３８】
２価リンカーがヘテロ原子リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含み、これらがひとまとめにされて１-アルコキシシクロアルキルレンオキシを形成する、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項３９】
２価リンカーがスペーサーリンカー、ヘテロ原子リンカー、および放出型リンカーを含み、これらがひとまとめにされてアルキレンアミノカルボニル（ジカルボキシルアリーレン）カルボキシラートを形成する、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項４０】
２価リンカーがヘテロ原子リンカー、スペーサーリンカー、ヘテロ原子リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含み、これらがひとまとめにされて、２置換シリルがアルキルまたは場合により置換アリールによって置換される３-チオアルキルスルホニルアルキル（２置換シリル）オキシを形成する、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項４１】
２価リンカーが、天然型アミノ酸およびその立体異性体から成る群より選択される複数のスペーサーリンカーを含む、請求項１に記載の薬物送達結合体。
【請求項４２】
２価リンカーが放出型リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含み、これらがひとまとめにされて、カルボニルが薬物、あるいはその類似体または誘導体と共にカーボネートを形成する３-ジチオアルキルオキシカルボニルを形成する、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項４３】
２価リンカーが放出型リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含み、これらがひとまとめにされて、カルボニルが薬物、あるいはその類似体または誘導体と共にカーボネートを形成しかつアリールが場合により置換される３-ジチオアリールアルキルオキシカルボニルを形成する、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項４４】
２価リンカーが、放出型リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含み、これらがひとまとめにされて、アミノがビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体と共にビニル性アミドを形成する３-ジチオアルキルアミノを形成する、請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体。
【請求項４５】
アルキルがエチルである、請求項４４に記載の薬物送達結合体。
【請求項４６】
２価リンカーが放出型リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含み、これらがひとまとめにされて、カルボニルがビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体と共にカルバメートを形成する３-ジチオアルキルアミノカルボニルを形成する、請求項１に記載の薬物送達結合体。
【請求項４７】
アルキルがエチルである、請求項４６に記載の薬物送達結合体。
【請求項４８】
２価リンカーが放出型リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含み、これらがひとまとめにされて、カルボニルがビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体と共にカルバメートまたはカルバモイルアジリジンを形成する、３-ジチオアリールアルキルオキシカルボニルを形成する、請求項１に記載の薬物送達結合体。
【請求項４９】
請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体、およびそのための製薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む製薬組成物。
【請求項５０】
病原性細胞群を内部に持つ宿主動物において病原性細胞群を排除する方法であって、病原性細胞集団のメンバーがビタミン、あるいはその類似体または誘導体に対して接近可能な結合部位を有し、結合部位が病原性細胞によって特異的に発現、過剰発現または優先的に発現され、前記宿主に請求項１、２、または３に記載の薬物送達結合体、あるいはその製薬組成物を投与する工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、標的薬物送達で使用するための組成物および方法に関するものである。特に本発明は、ビンカアルカロイド、ならびにその類似体および誘導体のリガンド結合体、例えばビタミン受容体結合化合物およびビンカアルカロイドの結合体に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
哺乳類免疫系は、腫瘍細胞、他の病原性細胞、および侵入する外来病原体の認識および排除のための手段を提供する。免疫系は通常、強力な防御線を提供するが、癌細胞、他の病原性細胞、または感染性因子が宿主の免疫反応を逃れて、共存する宿主病原性と共に増殖または持続する多くの例がある。化学療法剤および放射線療法は、例えば分裂を繰り返す腫瘍を排除するために開発されてきた。しかしながら現在入手可能な化学療法剤および放射線療法投与計画の多くは、それらが病原性細胞を破壊するだけでなく、それらが正常な宿主細胞、例えば造血系の細胞にも影響を及ぼすために有害な副作用を有する。これらの抗癌剤の有害な副作用は、病原性細胞集団に対して選択的で、なおかつ宿主毒性の低い新たな治療法の開発の必要性を際立たせている。
【０００３】
研究者らは、病原性細胞を、このような細胞に細胞毒性化合物を標的指向化することによって破壊する治療プロトコルを開発してきた。これらのプロトコルの多くは、毒素の正常細胞への送達を最小限に抑えることを試みて、病原性細胞に特有の、または病原性細胞によって過剰発現された抗原に結合する抗体に結合された毒素を利用する。この手法を使用して、病原性細胞上の特異性抗原に対する抗体より成る、ある免疫毒素が開発され、該抗体はリシン、緑膿菌外毒素、ジフテリア毒素、および腫瘍壊死因子などの毒素に結合されている。これらの免疫毒素は、抗体によって認識される特異性抗原を持つ病原性細胞、例えば腫瘍細胞を標的とする（非特許文献１；２、特許文献１参照）。
【０００４】
宿主内の病原性細胞、例えば癌細胞または外来病原体の集団を標的とする別の手法は、独立した宿主毒性をも示しうる化合物投与の必要性を回避するために、病原性細胞に対する宿主免疫応答を向上させることである。免疫療法について報告された１つの方法は、抗体（例えば遺伝子組換え多重結合抗体）を腫瘍細胞の表面に結合させて、細胞表面で抗体の定常領域を提示して、それにより各種の免疫系媒介プロセスによって腫瘍細胞の死滅を誘発させることである（非特許文献３、特許文献２参照）。しかしながらこれらの手法は、腫瘍特異性抗原を定義することが困難なため、複雑になっている。
【特許文献１】Ｂｅｔｔｅｒ，Ｍ．Ｄ．，国際公開ＷＯ９１／０７４１８号，１９９１年５月３０日に公開。
【特許文献２】Soulillou,J.P.,米国特許第5,672,486号
【非特許文献１】Olsnes,S.,Immunol.Today,10,pp.291-295,1989
【非特許文献２】Melby,E.L.,Cancer Res.,53(8),pp.1755-1760,1993
【非特許文献３】De Vita,V.T.,Biologic Therapy of Cancer,2d ed.Philadelphia,Lippincott,1995
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
ビンカアルカロイド、ならびにその類似体および誘導体の結合体を本明細書で説明する。結合体はリガンド、例えば、ビンカアルカロイドならびにその類似体および誘導体に、場合によりリンカーを介して共有結合した細胞表面受容体のリガンドを含む。本明細書に記載する結合体で有用なビンカアルカロイドとしては、アルカロイドのビンカインドール-ジヒドロインドールファミリーのすべてのメンバー、これに限定されるわけではないが例えば、ビンデシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、カタランチン、ビンドリン、ロイロシン、ビノレルビン、イミドカルブ、シブトラミン、トルトラズリル、ビンブラスチン酸など、ならびにその類似体および誘導体が挙げられる。
【０００６】
一実施形態において、受容体結合型薬物送達結合体が記載される。薬物送達結合体は、リガンド（例えば細胞表面受容体のリガンド）、ビンカアルカロイド、および場合により２価リンカーを含み、一般に式
(Ｂ)−(Ｌ)−(Ｄ)
によって表される。式中、（Ｂ）は受容体結合部分を表し、これには例えば、限定されるわけではないが、ビタミン、およびそのビタミン受容体結合型類似体またはその誘導体、例えばビタミン受容体を結合できるビタミンならびにその類似体および誘導体が含まれ；（Ｄ）は、ビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体を表し；そして（Ｌ）は、２価リンカーを表す。２価リンカー（Ｌ）は複数のリンカーを含みうる。例えば２価リンカー（Ｌ）は、１個以上のスペーサーリンカー（ｌｓ）、および放出型リンカー（ｌｒ）を含むことができ、それぞれ他方およびリガンドならびにビンカアルカロイドに１個以上のヘテロ原子リンカー（ｌＨ）によって結合される。これらの各種リンカーは、２価リンカー（Ｌ）を構築するために選択され、いずれかの順序で配置されうる。実例として、２価リンカー（Ｌ）は次のうちの１つでありうる：
2009504783.tif 000003
式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、およびｅは整数、例えば０〜約４の範囲の整数であり、（ｌｓ）、（ｌＨ）、および（ｌｒ）はそれぞれ、スペーサーリンカー、放出型リンカー、ヘテロ原子リンカーである。２価リンカーのさらなる例証的な例は、米国特許出願公開第２００５／０００２９４２Ａ１号および国際公開ＷＯ２００６／０１２５２７号に記載されており、その開示の全体は参照により本明細書に組み入れられている。一変更形態において、１個以上の受容体結合リガンドが本明細書に記載する薬物送達結合体に含まれる。これらの受容体結合型リガンドのそれぞれが同じでありうる、または異なりうることが理解されるであろう。
【０００７】
本明細書に記載する薬物送達結合体の例証的な一実施形態において、２価リンカーは、少なくとも１個の放出型なリンカー（ｌｒ）を含む。本明細書に記載する薬物送達結合体の別の例証的な実施形態において、２価リンカーは、少なくとも２個の放出型リンカー（ｌｒ）２を含む。別の例証的な態様において、２価リンカー（Ｌ）は、ジスルフィド放出型リンカーでない、少なくとも１個の放出型リンカー（ｌｒ）を含む。別の例証的な態様において、２価リンカー（Ｌ）は、１個の放出型リンカーがジスルフィド放出型リンカーでない、少なくとも２個の放出型リンカー（ｌｒ）２を含む。１個を超える放出型リンカーが２価リンカーに含まれるとき、これらの放出型リンカーは隣接しうることが認識される。２個の放出型リンカーが２価リンカーにおいて隣接しているとき、２個の放出型リンカーは連携してビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体の放出を引き起こしうることがさらに認識される。
【０００８】
別の実施形態において、２価リンカーは、アミノ酸から形成されたペプチドである少なくとも１個のスペーサーリンカーを含む。一態様において、ペプチドは天然型アミノ酸、およびその立体異性体を含む。別の態様において、ペプチドは天然型アミノ酸、およびその立体異性体のみから形成される。
【０００９】
本明細書に記載するリガンドは一般に、細胞表面受容体のリガンドを含む。本明細書に記載する結合体において有用な例証的なリガンドとしては、これに限定されるわけではないが、ビタミン、およびビタミン受容体に結合する他の部分、トランスポーター、もしくはビタミンあるいはその類似体または誘導体に特異的に結合する他の表面提示タンパク質、ライブラリースクリーニングから同定されたペプチドリガンド、腫瘍細胞特異性ペプチド、腫瘍細胞特異性アプタマー、腫瘍細胞特異性炭水化物、腫瘍細胞特異性モノクローナルまたはポリクローナル抗体、抗体のＦａｂまたはｓｃＦｖ（すなわち単鎖可変領域）断片（例えば、ＥｐｈＡ２、または転移性癌細胞で特異的に発現するタンパク質、または特異的に影響を受ける他のタンパク質、に対する抗体のＦａｂ断片）、コンビナトリアルライブラリーに由来する小型有機分子、成長因子（例えばＥＧＦ、ＦＧＦ、インスリン、およびインスリン様成長因子）、および相同ポリペプチド、ソマトスタチンおよびその類似体、トランスフェリン、リポタンパク質複合体、胆汁塩、セレクチン、ステロイドホルモン、Ａｒｇ-Ｇｌｙ-Ａｓｐ含有ペプチド、レチノイド、各種のガレクチン、δ-オピオイド受容体リガンド、コレシストキニンＡ受容体リガンド、アンギオテンシンＡＴ１またはＡＴ２受容体に特異的なリガンド、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体λリガンド、β−ラクタム抗生物質（例えばペニシリン、抗菌薬を含む小型有機分子、ならびに腫瘍細胞の表面でまたは感染性生物で優先的に発現される受容体に特異的に結合する他の分子）、および受容体または他の細胞表面タンパク質の結晶構造に基づき特定の受容体の結合ポケット内に適合するように設計された抗菌薬および他の薬物、腫瘍抗原のリガンドまたは腫瘍細胞の表面で優先的に発現される他の分子のリガンド、あるいはこれらの分子のいずれかの断片が挙げられる。リガンド-ビンカ結合体の結合部位として機能しうる腫瘍特異性抗原は、タンパク質のエフリンファミリーのメンバーの細胞外エピトープ、例えばＥｐｈＡ２を含む。ＥｐｈＡ２発現は、正常細胞の細胞-細胞接合部に限定されるが、転移性腫瘍細胞ではＥｐｈＡ２は細胞表面全体に分布している。それゆえ転移性細胞のＥｐｈＡ２は、例えばビンカアルカロイドに結合した抗体のＦａｂ断片への結合のために接近するが、これに対して該タンパク質は正常細胞のＦａｂ断片への結合のためには接近できず、そのため転移性癌細胞に対して特異的にリガンド-ビンカ結合体を生じる。
【００１０】
他の実施形態において、製薬組成物が記載されている。製薬組成物は、本明細書に記載したリガンド-ビンカ結合体を、製薬的に許容される担体、賦形剤および／または希釈剤と組合せて含む。
【００１１】
別の実施形態において、病原性細胞の集団を内部に持つ宿主動物において病原性細胞の集団を排除する方法が記載される。例証的な一態様において、病原性細胞集団のメンバーは、受容体結合部分あるいはその類似体または誘導体に対する接近可能な結合部位を有し、その結合部位は病原性細胞によって特異的に発現、過剰発現または優先的に発現される。該方法は、本明細書で記載するように、宿主に本明細書に記載する薬物送達結合体、あるいはその製薬組成物を投与する工程を含む。
【００１２】
＝＝関連出願＝＝
本出願は、米国特許法１１９条（ｃ）に基づいて、その開示全体が参照により本明細書に組み入れられている、２００５年８月１９日に出願された米国仮特許出願第６０／７０９，９３６号の利益を主張する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
薬物、ならびにその類似体および誘導体のリガンド結合体を本明細書で説明する。結合体は、病原性細胞を含む細胞へ標的指向化されうる２つ以上の薬物に共有結合された、細胞表面受容体のリガンドを含めた、細胞受容体結合リガンドを含む。本明細書に記載する結合体は、リガンドを薬物に結合するための多価リンカーも含みうる。
【００１４】
一実施形態において、受容体結合薬物送達結合体が記載される。薬物送達結合体は、細胞表面受容体のリガンド、ビンカアルカロイド、および場合により２価リンカーを含み、一般に式
(Ｂ)−(Ｌ)−(Ｄ)
によって表され、式中、（Ｂ）は受容体結合部分を表し、これには例えば、限定されるわけではないが、ビタミン、およびそのビタミン受容体結合類似体またはその誘導体、例えばビタミン受容体を結合できるビタミンならびにその類似体および誘導体が含まれ；（Ｄ）は、ビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体を表し；そして（Ｌ）は、２価リンカーを表す。２価リンカー（Ｌ）は複数のリンカーを含みうる。例えば２価リンカー（Ｌ）は、１個以上のスペーサーリンカー（ｌｓ）と、放出型リンカー（ｌｒ）とを含み、それぞれ相互に、そしてリガンドおよびビンカアルカロイドに１個以上のヘテロ原子リンカー（ｌＨ）によって結合されている。これらの各種リンカーは、２価リンカーを構築するために選択され、いずれの順序でも配置されうる。実例として、２価リンカー（Ｌ）は次のうちの１つでありうる：
2009504783.tif 000004
式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、およびｅは整数、例えば０〜約４の範囲の整数であり、（ｌｓ）、（ｌＨ）、および（ｌｒ）はそれぞれ、スペーサーリンカー、放出型リンカー、ヘテロ原子リンカーである。２価リンカーのさらなる例証的な例は、米国特許出願公開第２００５／０００２９４２Ａ１号および国際公開ＷＯ２００６／０１２５２７号に記載されており、その開示の全体は参照により本明細書に組み入れられている。
【００１５】
受容体結合部分（Ｂ）、２価リンカー（Ｌ）、およびビンカアルカロイド薬物、あるいはその類似体または誘導体（Ｄ）を含む受容体結合薬物送達結合体が記載され、該受容体結合部分（Ｂ）および該ビンカアルカロイド薬物（Ｄ）はそれぞれヘテロ原子リンカー（ｌＨ）を介して２価リンカー（Ｌ）に結合される。２価リンカー（Ｌ）は、１個以上のスペーサーリンカー、ヘテロ原子リンカー、および放出型リンカー、ならびにその組合せをいずれの順序でも含む。
【００１６】
例えば２価リンカー、または２価リンカーの一部を形成するためにリンカーが共有結合的に組み立てられる方法の例証的な一実施形態において、ヘテロ原子リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーが結合されて式：
2009504783.tif 000005
の２価基を形成し、式は-（ｌｓ）５-（ｌｓ）’-（ｌｒ）-（ｌＨ）-としても表されうる。その式では、（ｌｓ）５はペンタペプチドＡｌａ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ａｓｐ-Ａｓｐ-ＯＨであり、（ｌｓ）’はＣＨ２ＣＨ２であり、（ｌｒ）はＳ-Ｓ-（ＣＨ２）２-Ｏ-Ｃ（Ｏ）であり、そして（ｌＨ）はＯである。放出型リンカー（ｌｒ）は、ω-アミノ基にて（ｌｓ）５のＬｙｓに結合される。
【００１７】
本明細書に記載する薬物送達結合体の説明的な一実施形態において、２価リンカーは、少なくとも１個の放出型なリンカー（ｌｒ）を含む。本明細書に記載する薬物送達結合体の別の例証的な実施形態において、２価リンカーは、少なくとも２個の放出型リンカー（ｌｒ）２を含む。別の説明的な態様において、２価リンカー（Ｌ）は、ジスルフィド放出型リンカーでない、少なくとも１個の放出型リンカー（ｌｒ）を含む。別の例証的な態様において、２価リンカー（Ｌ）は、１個の放出型リンカーがジスルフィド放出型リンカーでない、少なくとも２個の放出型リンカー（ｌｒ）２を含む。１個を超える放出型リンカーが２価リンカーに含まれるとき、これらの放出型リンカーは隣接しうることが認識される。２個の放出型リンカーが２価リンカーにおいて隣接しているとき、２個の放出型リンカーは連携してビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体の放出を引き起こしうることがさらに認識される。
【００１８】
本明細書で使用され、また開裂性リンカーとしても公知である「放出型リンカー」という用語は、生理学的条件下で切断されうる少なくとも１個の結合（例えばｐＨ不安定性、酸不安定性、酸化不安定性、または酵素不安定性結合）を含むリンカーを指す。結合切断を生じるこのような生理学的条件としては、例えば生理学的ｐＨにて、またはサイトゾルｐＨよりも低いｐＨを有するエンドソームなどの細胞器官への細分化の結果として生じる標準化学加水分解反応が挙げられることが認識されるべきである。
【００１９】
開裂性結合が放出型リンカーのどちらかまたは両方の端にて、本明細書に記載するように、放出型リンカー内の２個の隣接する原子を結合しうる、ならびに／あるいは他のリンカーまたは（Ｂ）および／または（Ｄ）を結合しうることが理解されるはずである。開裂性結合が放出型リンカー内の２個の隣接する原子を結合する場合、結合の切断後に、放出型リンカーは２個以上の断片に切断される。あるいは開裂性結合が放出型リンカーと別の部分、例えばヘテロ原子リンカー、スペーサーリンカー、別の放出型リンカー、薬物、あるいはその類似体または誘導体、あるいはビタミン、あるいはその類似体または誘導体との間にある場合、結合の切断後に、放出型リンカーは他の部分から分離される。
【００２０】
開裂性結合の不安定性は例えば、開裂性結合におけるまたはその付近の置換的な変更、例えば開裂性ジスルフィド結合に隣接したアルファ分岐取り込みを含むこと、加水分解されうるケイ素-酸素結合を有する部分におけるケイ素上の置換基の疎水性の上昇、加水分解されうるケタールまたはアセタールの部分を形成するアルコキシ基のホモログ化などによって調整されうる。
【００２１】
本明細書に記載する２価リンカーの開裂の例示的な機構は、次の１，４および１，６断片化機構を含み、
2009504783.tif 000006
式中、Ｘは、外来性または内在性求核試薬、グルタチオン、または生物還元剤などであり、ＺまたはＺ’のどちらかは、ビタミン、あるいはその類似体または誘導体、あるいは薬物、あるいはその類似体または誘導体、あるいは２価リンカーの他の部分と結合したビタミンまたは薬物部分である。上の断片化機構が協奏機構として示されているが、多数の別個の工程が２価リンカーから、提示の最終生成物への最終的な断片化を実施するために起こりうることが理解されるものとする。例えば、結合開裂は酸触媒によるカルバメート部分の脱離反応によっても起こりうることが認識され、この脱離反応は上の例に示されたベータ硫黄または二硫化物のアリール基またはそのどちらかによってもたらされる安定化により隣接基に（ａｎｃｈｉｍｅｒｉｃａｌｌｙ）補助されうる。この実施形態のこれらの変更態様において、放出型リンカーはカルバメート部分である。あるいは断片化は、ジスルフィド基に対する求核攻撃によって開始されて、開裂が引き起こされ、チオラートが形成される。チオラートによりカルボン酸またはカルバミン酸部分を分子間で置換して、対応するチアシクロプロパンを形成しうる。ベンジル含有２価リンカーの場合、例示のジスルフィド結合の切断の後、得られたフェニルチオラートはさらに断片化して、共鳴安定化中間体を形成することによってカルボン酸またはカルバミン酸を放出しうる。これらの場合にいずれにおいても、本明細書に記載する例証的な２価リンカーの放出性質は、存在する化学的、代謝的、生理学的、または生物学的条件に関連しうるどんな機構によっても実現されうる。
【００２２】
放出型リンカーの結合開裂のための他の例証的な機構は、次のようなオキソニウム補助開裂：
2009504783.tif 000007
を含み、式中、Ｚは、ビタミン、あるいはその類似体または誘導体、あるいは薬物、あるいはその類似体または誘導体であり、あるいはそれぞれが、２価リンカーの他の部分と併せたビタミンまたは薬物部分、例えば１個以上のスペーサーリンカー、ヘテロ原子リンカー、および／または他の放出型リンカーを含む薬物またはビタミン部分である。本実施形態において、酸触媒によるカルバメートの脱離反応は、ＣＯ２の放出およびＺに結合した窒素含有部分の放出と、水、または他のいずれかのルイス塩基によって捕捉されうるベンジルカチオンの形成につながる。
【００２３】
別の例証的な機構は、２価リンカーにおける結合の開裂に続いて、放出された官能基が、隣接基補助（ａｎｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｓｓｉｓｔｅｄ）開裂または切断とも呼ばれる、さらなる結合の切断または開裂を化学的に補助するような方法で、放出型リンカー、スペーサーリンカー、およびヘテロ原子リンカーの配置をともなう。このような２価リンカーまたはその部分の例証的な実施形態は、式：
2009504783.tif 000008
を有する化合物を含み、式中、Ｘはヘテロ原子、例えば窒素、酸素、または硫黄であり、ｎは、０、１、２、および３から選択される整数であり、Ｒは水素または置換基、例えばアリール環に正電荷を誘導的にまたは共鳴によって安定化できる置換基（例えばアルコキシなど）であり、ＺまたはＺ’のどちらかは、ビタミン、あるいはその類似体または誘導体、あるいは薬物、あるいはその類似体または誘導体、あるいは２価リンカーの他の部分と結合したビタミンまたは薬物部分である。これに限定されるわけではないが、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、ハロなどを含む他の置換基が、アリール環、ベンジル炭素、カルバメート窒素、アルカン酸、またはメチレン架橋に存在しうることが認識される。補助開裂には、ベンジリウム中間体、ベンジン中間体、ラクトン環化、オキソニウム中間体、ベータ脱離などをともなう機構が含まれうる。放出型リンカーの開裂に続く断片化に加えて、放出型リンカーの初期開裂が隣接基補助機構によって促進されうることがさらに認識される。
【００２４】
この本実施形態において、環化しうるヒドロキシアルカン酸は、例えばオキソニウムイオンによってメチレン架橋の開裂を促進し、結合開裂または放出型リンカーの結合開裂後の続いての断片化を促進する。あるいはメチレン架橋の酸触媒によるオキソニウムイオン補助開裂は、この例証的な２価リンカー、またはその断片の断片化のカスケードを開始しうる。あるいはカルバメートの酸触媒による加水分解は、環化しうるヒドロキシアルカン酸のベータ脱離を促進し、例えばオキソニウムイオンによってメチレン架橋の開裂を促進しうる。本明細書に記載する代謝的、生理学的、または細胞的条件下での結合切断または開裂の他の化学的機構がこのような断片化のカスケードを開始しうることが認識される。本明細書に記載する代謝的、生理学的、または細胞的条件下での結合切断または開裂の他の化学的機構がこのような断片化のカスケードを開始しうることが認識される。
【００２５】
一実施形態において、本明細書に記載する２価リンカーは、次の式
2009504783.tif 000009
の化合物であり、
式中、ｎは、１〜約４より選択される整数であり；ＲａおよびＲｂは、水素およびアルキル（例えば場合により分岐しているＣ１〜Ｃ４アルキルなどの低級アルキル）から成る群よりそれぞれ独立して選択され；あるいはＲａおよびＲｂは、結合した炭素原子とひとまとめにされて、炭素環を形成し；Ｒは、場合により置換されたアルキル基、場合により置換されたアシル基、または適切に選択された窒素保護基であり；そして（＊）は、薬物、ビタミン、造影剤、診断剤、他の２価リンカー、または結合体の他の部分への結合点を示す。
【００２６】
別の実施形態において、本明細書に記載する２価リンカーは、次の式
2009504783.tif 000010
の化合物を含み、式中、ｍは、１〜約４より選択される整数であり；Ｒは、場合により置換されたアルキル基、場合により置換されたアシル基、または適切に選択された窒素保護基であり；そして（＊）は、薬物、ビタミン、造影剤、診断剤、他の２価リンカー、または結合体の他の部分への結合点を示す。
【００２７】
別の実施形態において、本明細書に記載する２価リンカーは、次の式
2009504783.tif 000011
の化合物を含み、式中、ｍは、１〜約４より選択される整数であり；Ｒは、場合により置換されたアルキル基、場合により置換されたアシル基、または適切に選択された窒素保護基であり；そして（＊）は、薬物、ビタミン、造影剤、診断剤、他の２価リンカー、または結合体の他の部分への結合点を示す。
【００２８】
別の実施形態において、２価リンカーにおける結合の開裂に続いて、放出された官能基が、隣接基補助開裂または切断とも呼ばれる、さらなる結合の切断または開裂を化学的に補助するような方法で、放出型リンカー、スペーサーリンカー、およびヘテロ原子リンカーが配置されうる。このような２価リンカーまたはその一部分の例証的な実施形態は、式：
2009504783.tif 000012
を有する化合物を含み、式中、Ｘは、ヘテロ原子、例えば窒素、酸素、または硫黄であり、ｎは、０、１、２、および３から選択される整数であり、Ｒは水素または置換基、これは例えばアリール環に正電荷を誘導的にまたは共鳴によって安定化できる置換基（例えばアルコキシ）であり、記号（＊）は、２価リンカーを形成している付加スペーサーリンカー、ヘテロ原子リンカー、または放出型リンカーへの結合点、あるいは薬物、あるいはその類似体または誘導体、あるいはビタミン、あるいはその類似体または誘導体への結合点を示す。これに限定されるわけではないが、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、ハロなどを含む他の置換基が、アリール環、ベンジル炭素、アルカン酸、またはメチレン架橋に存在しうることが認識される。補助開裂には、ベンジリウム中間体、ベンジン中間体、ラクトン環化、オキソニウム中間体、ベータ脱離などをともなう機構が含まれうる。放出型リンカーの開裂に続く断片化に加えて、放出型リンカーの初期開裂が隣接基補助機構によって促進されうることがさらに認識される。
【００２９】
別の実施形態において、２価リンカーは、２価３-チオスクシンイミド-１-イルアルキルオキシメチルオキシ基を形成するために結合されたヘテロ原子リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含み、次の式
2009504783.tif 000013
によって表される。式中、ｎは、１〜６の整数であり、アルキル基は場合により置換され、メチルは、付加アルキル、または場合により置換されたアリール基によって任意に置換され、そのそれぞれが独立して選択された基Ｒによって表される。記号（＊）は、２価リンカー断片の、本明細書に記載する結合体の他の部分への結合点を示す。別の実施形態において、２価リンカーは、２価３-チオスクシンイミド-１-イルアルキルカルボニル基を形成するために結合されたヘテロ原子リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含み、次の式
2009504783.tif 000014
によって表される。式中、ｎは、１〜６の整数であり、アルキル基は場合により置換される。記号（＊）は、２価リンカー断片の、本明細書に記載する結合体の他の部分への結合点を示す。別の実施形態において、２価リンカーは、２価３-チオアルキルスルホニルアルキル（２置換シリル）オキシ基を形成するために結合されたヘテロ原子リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含み、２置換シリルは、アルキルおよび／または場合により置換されたアリール基によって置換される。
【００３０】
別の実施形態において、２価リンカーは、２価ジチオアルキルカルボニルヒドラジド基、または２価３-チオもしくは３-ジチオスクシンイミド-１-イルアルキルカルボニルヒドラジドを形成するために結合されたヘテロ原子リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含み、次の式
2009504783.tif 000015
によって表される。式中、ｎは、１〜６の整数であり、アルキル基は場合により置換され、ヒドラジドは、（Ｂ）、（Ｄ）、または２価リンカー（Ｌ）の他の部分と共にヒドラゾンを形成する。記号（＊）は、２価リンカー断片の、本明細書に記載する結合体の他の部分への結合点を示す。
【００３１】
別の実施形態において、２価リンカーは、２価３-チオスクシンイミド-１-イルアルキルオキシアルキルオキシアルキリデン基を形成するために結合されたヘテロ原子リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含み、次の式
2009504783.tif 000016
によって表される。式中、各ｎは、１〜６より独立して選択された整数であり、各アルキル基は、独立して選択され、そして、例えばアルキルまたは場合により置換されたアリールによって場合により置換され、ここでアルキリデンは、（Ｂ）、（Ｄ）、または２価リンカー（Ｌ）の他の部分と共にヒドラゾンを形成する。記号（＊）は、２価リンカー断片の、本明細書に記載する結合体の他の部分への結合点を示す。
【００３２】
別の実施形態において、２価リンカーは、２価３-チオまたは３-ジチオアリールアルキルオキシカルボニル基、３-チオまたは３-ジチオアリールアルキルアミノカルボニル基、２価３-チオまたは３-ジチオアルキルオキシカルボニル、あるいは２価３-チオまたは３-ジチオアルキルアミノカルボニルを形成するために結合されたヘテロ原子リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含み、ここでアルキルカルボニルは、（Ｂ）、（Ｄ）、または２価リンカー（Ｌ）の他の部分と共にカーボネート、カルバメート、または尿素を形成する。例示としては、アルキル基はエチルである。
【００３３】
別の実施形態において、２価リンカーは、２価３-ジチオアルキルアミノ基を形成するために結合されたヘテロ原子リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含み、ここでアミノは、（Ｂ）、（Ｄ）、または２価リンカー（Ｌ）の他の部分と共にビニル基含有アミドを形成する。例示としては、アルキル基はエチルである。
【００３４】
別の実施形態において、２価リンカーは、２価１-アルコキシシクロアルキレンオキシ基、２価アルキレンアミノカルボニル（ジカルボキシルアリーレン）カルボキシラート基、２価３-ジチオアルコキシカルボニル基、２価３-ジチオアルキルオキシカルボニルヒドラジド基、２価を形成するために結合されたヘテロ原子リンカー、スペーサーリンカー、および放出型リンカーを含む。
【００３５】
別の実施形態において、２価リンカーは、アミノ酸で形成されたペプチドである少なくとも１個のスペーサーリンカーを含む。一態様において、ペプチドは天然型アミノ酸、およびその立体異性体を含む。別の態様において、ペプチドは天然型アミノ酸、およびその立体異性体のみから形成される。
【００３６】
スペーサーリンカーおよび放出型リンカーのさらなる例証的な例を表１および２に示した。ここで（＊）は、別のリンカーへの、ビンカアルカロイド、またはその類似体もしくは誘導体への結合点、あるいは受容体結合部分への結合点を示す。
表１  企図されるスペーサーリンカーおよびヘテロ原子リンカー、およびその組合せ
2009504783.tif 000017
2009504783.tif 000018
表２  企図される放出型リンカーおよびヘテロ原子リンカー、およびその組合せ
2009504783.tif 000019
【００３７】
本明細書で言及するように、本明細書に記載する結合体に使用できるビンカ薬物としては、アルカロイドのビンカインドール−ジヒドロインドールファミリーのすべてのメンバー、例えばビンデシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、カタランチン、ビンドリン、ロイロシン、ビノレルビン、イミドカルブ、シブトラミン、トルトラズリル、ビンブラスチン酸など、ならびにその類似体および誘導体が挙げられる。例証的には、そのような類似体および誘導体としては、米国特許第４，２０３，８９８号に記載されている３−カルボキスアジド；米国特許第４，１６６，８１０号に記載されている４-デスアセチルビンブラスチン-３-カルボキスヒドラジドのＮ２-アルキルおよび他の誘導体；Ｎｅｕｓｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．７８３（１９６８）に記載されているロイロシンヒドラジド；Ｂａｒｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２１：８８（１９７８）に記載されているヒドラジド誘導体；米国特許第３，３９２，１７３号および同第３，３８７，００１号に記載されているＣ-４エステル誘導体；Ｌａｎｇｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．９５：２１４（１９７９）に記載されている酸化により生じるジカルボン酸誘導体；およびＥＰ０２４７７９２Ａ２に記載されているビンカヒドラジドが挙げられる。上記の特許および刊行物のそれぞれは、それがビンカ化合物を調製するための合成経路、および反応条件に関して開示する全てについて、参照により本明細書に組み入れられている。
【００３８】
例証的な一実施形態において、ビンカ薬物は、式
2009504783.tif 000020
の化合物であり、式中、
Ｒ１およびＲ２の一方がＨであり、他方がエチルであり、かつＲ３はＨであり、あるいはＲ１はエチルであり、Ｒ２およびＲ３はひとまとめにされて-Ｏ-を形成し；
Ｒ４、Ｒ７、およびＲ８は、Ｈ、アルキル、およびアシルからそれぞれ独立して選択され、
Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立して選択されたアルキルであり；
Ｒ９は、基-ＮＨＮＨＲであり、式中、Ｒは、Ｈ、アルキル、またはアシルであり；
Ｒ１０は、Ｈまたはアシルであり；かつ
Ｒ１１は、エチルである。
【００３９】
一態様において、ビンカ薬物は、上式の化合物であり、式中、Ｒ４およびＲ８はそれぞれＨであり；かつＲ５、Ｒ６、Ｒ９、およびＲ１０はそれぞれメチルである。
【００４０】
本明細書に記載する結合体において有用な細胞表面受容体のリガンドとしては、これに限定されるわけではないが、ビタミン、およびビタミン受容体に結合する他の部分、トランスポーター、あるいはビタミンまたはその類似体もしくは誘導体に特異的に結合する他の表面提示タンパク質、ライブラリースクリーニングから同定されたペプチドリガンド、腫瘍細胞特異性ペプチド、腫瘍細胞特異性アプタマー、腫瘍細胞特異性炭水化物、腫瘍細胞特異性モノクローナルまたはポリクローナル抗体、抗体のＦａｂまたはｓｃＦｖ（すなわち単鎖可変領域）断片（例えば、ＥｐｈＡ２に、または転移性癌細胞で特異的に発現または特異的に接近可能な他のタンパク質に対する抗体のＦａｂ断片）、コンビナトリアルライブラリーに由来する小型有機分子、成長因子（例えばＥＧＦ、ＦＧＦ、インスリン、およびインスリン様成長因子）、および相同ポリペプチド、ソマトスタチンおよびその類似体、トランスフェリン、リポタンパク質複合体、胆汁塩、セレクチン、ステロイドホルモン、Ａｒｇ-Ｇｌｙ-Ａｓｐ含有ペプチド、レチノイド、各種のガレクチン、δ-オピオイド受容体リガンド、コレシストキニンＡ受容体リガンド、アンギオテンシンＡＴ１またはＡＴ２受容体に特異的なリガンド、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体λリガンド、β-ラクタム抗体（例えばペニシリン、抗菌薬を含む小型有機分子、ならびに腫瘍細胞の表面でまたは感染性生物で優先的に発現される受容体に特異的に結合する他の分子）、受容体または他の細胞表面タンパク質の結晶構造に基づき特定の受容体の結合ポケット内に適合するように設計された抗菌薬および他の薬物、腫瘍抗原のリガンドまたは腫瘍細胞の表面で優先的に発現される他の分子のリガンド、あるいはこれらのいずれかの分子の断片が挙げられる。リガンド-ビンカ結合体の結合部位として機能しうる腫瘍特異性抗原の例としては、タンパク質のエフリンファミリーのメンバーの細胞外エピトープ、例えばＥｐｈＡ２が挙げられる。ＥｐｈＡ２発現は、正常細胞の細胞-細胞接合部に限定されるが、転移性腫瘍細胞ではＥｐｈＡ２は細胞表面全体に分布している。それゆえ転移性細胞のＥｐｈＡ２は、例えばビンカ化合物に結合した抗体のＦａｂ断片への結合のために接近可能であるが、これに対して該タンパク質は正常細胞のＦａｂ断片への結合のためには接近できず、そのため転移性癌細胞に対して特異的なリガンド-ビンカ結合体を生じる。
【００４１】
本明細書に記載する方法および化合物にしたがって使用されうるビタミンとしては、カルニチン、イノシトール、リポ酸、ピリドキサール、アスコルビン酸、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、リボフラビン、チアミン、ビオチン、ビタミンＢ１２、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、およびＫ，他の関連ビタミン分子、その類似体および誘導体、ならびにその組合せが挙げられる。これらのビタミン、ならびにその受容体結合類似体および誘導体は、薬物送達結合体を作製するために、本明細書に記載する２価リンカー（Ｌ）によってビンカ化合物に結合されうる例証的な標的実体を構成する。
【００４２】
例証的な一態様において、ビタミンは葉酸、葉酸類似体、またはその他の葉酸塩受容体結合分子でありうる。使用されうる葉酸塩の類似体の例としては、フォリン酸、プテロイルポリグルタミン酸、プテロイン酸およびその他のアミノ酸誘導体、ならびに葉酸塩受容体結合プテリジン、例えばテトラヒドロプテリン、ジヒドロ葉酸塩、テトラヒドロ葉酸塩、ならびにそのデアザおよびジデアザ類似体が挙げられる。「デアザ」および「ジデアザ」類似体という用語は、天然型葉酸構造において１または２個の窒素原子に代わって置換された炭素原子を有する当分野で認識された類似体を指す。例えばデアザ類似体としては、１-デアザ、３-デアザ、５-デアザ、８-デアザ、および１０デアザ類似体が挙げられる。ジデアザ類似体としては例えば、１，５-ジデアザ、５，１０-ジデアザ、８，１０-ジデアザ、および５，８-ジデアザ類似体が挙げられる。上記の葉酸類似体は、葉酸塩受容体に結合するその能力を反映して、慣例的に「葉酸塩」と呼ばれる。他の葉酸塩受容体結合類似体としては、アミノプテリン、アメトプテリン（メトトレキセート）、Ｎ１０-メチル葉酸、２-デアミノ-ヒドロキシ葉酸、デアザ類似体、例えば１-デアザメトプテリンまたは３-デアザメトプテリン、および３’，５’-ジクロロ-４-アミノ-４-デオキシ-Ｎ１０-メチルプテロイルグルタミン酸（ジクロロメトトレキセート）が挙げられる。薬物送達結合体の受容体媒介エンドサイトーシス輸送を開始させるために葉酸塩受容体に結合可能である他の適切なリガンドとしては、葉酸受容体に対する抗体が挙げられる。したがって例証的な一態様において、葉酸塩受容体に対する抗体と複合化したビンカ化合物は、複合体の膜透過輸送を引き起こすために使用されうる。
【００４３】
ビタミン類似体および／または誘導体の例証的な実施形態も、ビオチンの類似体および誘導体、例えばビオシチン、ビオチンスルホキシド、オキシビオチンおよび他のビオチン受容体結合化合物などを含む。本明細書に記載する他のビタミンの類似体および誘導体も本明細書で企図されることが認識される。
【００４４】
本明細書に記載する薬物送達結合体は、在来の合成方法によって調製されうる。合成方法は、ヘテロ原子リンカーの選択、ならびにスペーサーリンカーおよび放出型リンカーに存在する官能基に応じて選択されうる。一般に、関連する結合形成反応は、Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ，“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ａ  ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｇｒｏｕｐ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ，”ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８９）、およびＴｈｅｏｄｏｒａ  Ｅ．Ｇｒｅｅｎｅ  ＆  Ｐｅｔｅｒ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｏｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，”２ｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９１）に記載されており、その開示は全体が参照により本明細書に組み入れられている。さらなる合成経路および反応条件は、米国特許出願公開第２００５／０００２９４２Ａ１号に記載されている。
【００４５】
例示としては、本明細書に記載する薬物送達結合体は、線形および収束合成経路の両方を使用して調製されうる。このような経路で使用できる例証的な中間体としては、受容体結合部分、あるいはその類似体および誘導体、ならびにビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体への共有結合に適切なカップリング基をそれぞれの端に含む２価リンカーを含む中間体が挙げられる。このような経路で使用できる他の例証的な中間体としては、カップリング基を含む２価リンカーに結合された受容体結合部分、あるいはその類似体または誘導体を含む中間体が挙げられる。このような経路で使用できるその他の例証的な中間体としては、カップリング基を含む２価リンカーに結合された、ビンカアルカロイドあるいはその類似体または誘導体を含む中間体が挙げられる。どちらの場合でも、カップリング基は求核試薬、求電子試薬、またはそれらの前駆体でありうる。
【００４６】
合成中間体の例証的な一実施形態において、カップリング基はＭｉｃｈａｅｌ受容体であり、２価リンカーとしては、式-Ｃ（Ｏ）ＮＨＮ＝、-ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮ＝、または-ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨＮ＝を有する放出型リンカーを含む。例証的な一態様において、カップリング基および２価リンカーはひとまとめにされて、式：
2009504783.tif 000021
を有する化合物またはその保護誘導体を形成し、式中、（Ｄ）は、本明細書で例証するようなヒドラゾンを形成できるビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体であり；そしてｎは、１、２、３、または４などの整数である。本明細書に記載する受容体結合薬物送達結合体中間体の別の例証的な態様において、第２のリンカーが、第２のリンカーに含まれるアルキルチオール求核試薬を介して上式に共有結合される。別の例証的な態様において、受容体結合部分、あるいはその類似体または誘導体は、その部分に含まれるアルキルチオール求核試薬を介して上式に共有結合される。
【００４７】
別の例証的な実施形態において、カップリング基は例えば窒素、酸素、または硫黄等のヘテロ原子であり、２価リンカーは、受容体結合部分をカップリング基に共有結合する１個以上のヘテロ原子リンカーおよび１個以上のスペーサーリンカーを含む。例証的な一態様において、本明細書に記載する中間体は、式：
2009504783.tif 000022
を有する化合物またはその保護誘導体を含み、式中、Ｘは、酸素、窒素、または硫黄であり、ｍは、１、２または３などの整数であり、かつ（Ｂ）、ｌｓ、およびｌＨは本明細書で定義する通りである。例証的な一態様において、ｌＨは-ＮＨ-であり、ｍは１である。別の例証的な態様において、ｌＨは-ＮＨ-であり、ｍは１であり、Ｘは-Ｓ-である。
【００４８】
別の例証的な態様において、本明細書に記載する中間体は、式：
2009504783.tif 000023
を有する化合物またはその保護誘導体を含み、式中、Ｙは、Ｈまたは置換基、例証的には、これに限定されるわけではないが、ニトロ、シアノ、ハロ、アルキルスルホニル、カルボン酸誘導体などを含む電子吸引性置換基であり、かつ（Ｂ）およびｌｓは本明細書で定義する通りである。
【００４９】
本明細書に記載する中間体の別の例証的な実施形態において、カップリング基はＭｉｃｈａｅｌ受容体であり、２価リンカーは、受容体結合部分をカップリング基に共有結合する１個以上のヘテロ原子リンカーおよび１個以上のスペーサーリンカーを含む。例証的な一態様において、カップリング基および２価リンカーはひとまとめにされて、式：
2009504783.tif 000024
を有する化合物またはその保護誘導体を含み、式中、Ｘは、酸素、窒素、または硫黄であり、ｍおよびｎは、独立して選択された整数、例えば１、２、または３であり、かつ（Ｂ）、ｌｓおよび１Ｈは、本明細書で定義する通りである。別の例証的な態様において、ビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体は、ビンカアルカロイドに含まれるアルキルチオール求核試薬を介して上の式に共有結合される。
【００５０】
別の例証的な態様において、中間体は、式：
2009504783.tif 000025
を有する化合物またはその保護誘導体を含み、式中、ＡＡは１個以上のアミノ酸であり、例示的には、天然型アミノ酸またはその立体異性体から例証的に選択され、Ｘは、窒素、酸素、または硫黄であり、Ｙは、水素または置換基、例証的には、これに限定されるわけではないが、ニトロ、シアノ、ハロ、アルキルスルホニル、カルボン酸誘導体などを含む電子吸引性置換基であり、ｎおよびｍは、独立して選択される整数、例えば１、２、または３であり、ｐは、１、２、３、４、または５などの整数である。ＡＡは、例えば一般式：-Ｎ（Ｒ）-（ＣＲ’Ｒ”）ｑ-Ｃ（Ｏ）-を有する、他の任意のアミノ酸でもあり、式中、Ｒは、水素、アルキル、アシル、または適切な窒素保護基であり、Ｒ’およびＲ”は、水素または置換基であり、そのそれぞれが各存在に独立して選択され、ｑは、１、２、３、４、または５などの整数である。例証的には、Ｒ’およびＲ”は、これに限定されるわけではないが、天然型アミノ酸に存在する水素または側鎖、例えばメチル、ベンジル、ヒドロキシメチル、チオメチル、カルボキシル、カルボキシメチル、グアニジノプロピルなど、ならびにその誘導体および保護誘導体に独立して相当する。上記の式は、すべての立体異性変形を含む。例えばアミノ酸は、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、リジン、グルタミン、アルギニン、セリン、オルニチン、トレオニンなどから選択されうる。本明細書に記載するビタミン受容体結合薬物送達結合体中間体の別の例証的な態様において、薬物、あるいはその類似体または中間体は、アルキルチオール求核試薬を含む。
【００５１】
上の中間体のそれぞれは、在来の合成経路を使用して調製されうる。さらなる合成経路および反応条件は、米国特許出願第１０／７６５，３３６号および国際出願ＰＣＴ／ＵＳ／２００５／０２６０６８号に記載されている。
【００５２】
上の例証的な実施形態は、本明細書に記載する本発明の例示として意図され、本明細書に記載する本発明を制限するものとして、決して説明または解釈されるべきではない。例えば次の例証的なビタミン-薬物結合体によって一般に表される化合物は、本明細書によって記載されるように本明細書に含まれるものであり、
2009504783.tif 000026
式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立して、水素またはアルキル、例えばメチルであり；かつｌＨは、ヘテロ原子、例えば酸素、硫黄、任意に置換された窒素、または場合により保護された窒素などである。
【００５３】
別の実施形態において、本明細書に記載する化合物は、ケタール基を含む放出型リンカーから形成された２価リンカーを含む。一態様において、ケタール基は、任意に置換された２-、または４-オキシベンズアルデヒド、例えば式：
2009504783.tif 000027
の４-オキシベンズアルデヒドであり、式中、ｎは、１、２、３、および４から選択され；Ｒａは、アルキルまたは場合により置換されたアリールアルキルであり、Ｒａは、水素または任意選択の置換基であり；そして（＊）原子は、受容体結合部分、２価リンカー、またはビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体にそれぞれ結合される。
【００５４】
別の実施形態において、本明細書に記載する化合物は、カーボネートを含む放出型リンカーから形成された２価リンカーを含む。一態様において、カーボネートは、ビスアルキルカーボネートである。別の態様において、カーボネートは、ジチオ基およびアミノ基またはヒドラジノ基を含むビスアルキルカーボネートである。別の態様において、カーボネートは、式：
2009504783.tif 000028
の構造であり、式中、ｎおよびｍは、１、２、３、および４よりそれぞれ独立して選択され；かつ（＊）原子は、受容体結合部分、２価リンカー、またはビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体にそれぞれ結合される。
【００５５】
別の実施形態において、本明細書に記載する化合物は、２価ジチオアルキルアミノ基または２価ジチオベンジルオキシカルボニル基を含む放出型リンカーから形成された２価リンカーを含む。一態様において、２価ジチオアルキルアミノ基は、式：
2009504783.tif 000029
の構造であり、式中、ｎは、１、２、３、および４より選択され；かつ（＊）原子は、受容体結合部分、２価リンカー、またはビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体にそれぞれ結合される。一態様において、２価ジチオベンジルオキシカルボニル基は、式：
2009504783.tif 000030
の構造であり、式中、Ｒは、水素または任意選択の置換基であり；かつ（＊）原子は、受容体結合部分、２価リンカー、またはビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体にそれぞれ結合される。一態様において、２価ジチオベンジルオキシカルボニル基は、式：
2009504783.tif 000031
の構造であり、式中、Ｒは、水素、アルキル、アルコキシ、シアノ、またはニトロであり；かつ（＊）原子は、受容体結合部分、２価リンカー、またはビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体にそれぞれ結合される。一態様において、２価ジチオベンジルオキシカルボニル基は、式：
2009504783.tif 000032
の構造であり、式中、Ｒは、水素、アルキル、アルコキシ、シアノ、またはニトロであり；かつて（＊）原子は、受容体結合部分、２価リンカー、またはビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体にそれぞれ結合される。
【００５６】
別の実施形態において、本明細書に記載する化合物としては、結合体を形成するために窒素を介して２価リンカーに結合されるカルボキサミドを含む、ビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体が挙げられる。別の実施形態において、本明細書に記載する化合物としては、結合体を形成するために窒素原子を介して２価リンカーに結合されるカルボキスヒドラジドを含む、ビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体が挙げられる。一態様において、その結合は末端窒素を介して作られる。別の実施形態において、本明細書に記載する化合物としては、結合体を形成するために酸素を介して２価リンカーに結合されるカルボキシラートを含む、ビンカアルカロイド、あるいはその類似体または誘導体が挙げられる。
【００５７】
別の例証的な実施形態において、受容体結合部分（Ｂ）は、リンカー（Ｌ）-（Ｄ）が次の構造：
2009504783.tif 000033
であるときに、葉酸ではない。
別の例証的な実施形態において、受容体結合部分（Ｂ）は、リンカー（Ｌ）-（Ｄ）が次の構造：
2009504783.tif 000034
であるときに、葉酸ではない。
【００５８】
他の実施形態において、製薬組成物が記載されている。製薬組成物は、本明細書に記載した薬物送達結合体を、そのための製薬的に許容される担体、賦形剤および／または希釈剤と組合せて含む。
【００５９】
別の実施形態において、病原性細胞の集団を内部に持つ宿主動物において病原性細胞の集団を排除する方法が記載される。例証的な一態様において、病原性細胞集団のメンバーは、受容体結合部分、あるいはその類似体または誘導体に対するアクセス可能な結合部位を有し、その結合部位は病原性細胞によって独自に、発現、過剰発現または優先的に発現される。該方法は、本明細書で記載するように、宿主に本明細書に記載する薬物送達結合体、あるいはその製薬組成物を投与する工程を含む。
【００６０】
本明細書に記載する薬物送達結合体は、ヒト臨床医学的および獣医学的用途の両方に使用されうる。それゆえ病原性細胞の集団を持ち、薬物送達結合体によって治療される宿主動物はヒトであり、あるいは獣医学的用途の場合には、実験用動物、農業用動物、家畜、または野生動物でありうる。本明細書に記載する薬物送達結合体は、これに限定されるわけではないが、ヒト、例えばげっ歯類（例えばマウス、ラット、ハムスターなど）、ウサギ、サル、チンパンジー等の実験用動物、例えばイヌ、ネコ、およびウサギ等の家畜、例えばウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ等の農業用動物、および、例えばクマ、パンダ、ライオン、トラ、ヒョウ、ゾウ、シマウマ、キリン、ゴリラ、イルカ、およびクジラ等の飼育されている野生動物を含む宿主動物に投与されうる。
【００６１】
本明細書に記載する薬物送達結合体は、宿主動物における各種の病状および病原性細胞を治療するために使用されうる。本明細書で使用するように「病原性細胞」は、癌細胞、感染性因子（例えば細菌およびウィルス）、細菌またはウィルス感染細胞、疾患状態を引き起こすことができる活性化マクロファージ、リガンド受容体（例えばビタミン受容体あるいはビタミンの類似体または誘導体を結合する受容体）を特異的に発現する、優先的に発現する、または過剰発現する他の任意の種類の病原性細胞を意味する。病原性細胞は、薬物送達結合体による治療が疾患症状の低減をもたらす疾患状態を引き起こすいかなる細胞も含みうる。病原性細胞は、移植片対宿主病の原因である免疫系の細胞などの、ある状況の下で病原性であるが、他の状況では病原性でない宿主細胞でもありうる。
【００６２】
それゆえ病原性細胞の集団は、良性腫瘍および悪性腫瘍を含めて腫瘍原性である癌細胞集団でありうるか、またはそれは非腫瘍原性でありうる。癌細胞集団は、自然発生的に、または宿主動物の生殖細胞系に存在する変異または体細胞変異などのプロセスによって発生しうるか、あるいはそれは化学的に、ウィルスによって、または放射線によって誘発されうる。本発明は、癌腫、肉腫、リンパ腫、ホジキン病、黒色腫、中皮腫、バーキットリンパ腫、上咽頭癌、白血病、および骨髄腫などの癌を治療するために利用されうる。癌細胞集団としては、これに限定されるわけではないが、口腔癌、甲状腺癌、内分泌癌、皮膚癌、胃癌、食道癌、喉頭癌、膵臓癌、結腸癌、膀胱癌、骨癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮癌、乳癌、精巣癌、前立腺癌、直腸癌、腎臓癌、肝臓癌、および肺癌が挙げられる。
【００６３】
病原性細胞集団が癌細胞集団である実施形態において、薬物送達結合体投与の効果は、腫瘤の縮小または消滅あるいは腫瘍細胞増殖の阻害によって測定される治療応答である。腫瘍の場合、消滅は、原発性腫瘍の細胞の、あるいは転移した腫瘍細胞の、または原発性腫瘍から解離する過程にある細胞の消滅でありうる。腫瘍の外科的除去、放射線療法、化学療法、または生物療法を含むいずれかの治療手法による腫瘍の除去後に腫瘍の再発を防止するための、薬物送達結合体による予防的治療も企図される。予防的治療は、薬物送達結合体を用いた初期治療、例えば連日多回容量処方での治療、および／または（複数の）初回治療後に数日または数ヶ月の間隔を置いた追加治療または一連の治療でありうる。したがって上記の任意の病原性細胞集団の排除は、病原性細胞の数の減少、病原性細胞の増殖の阻害、病原性細胞の再発を防止する予防的治療、または疾患の症状の軽減を引き起こす病原性細胞の治療を含む。
【００６４】
癌細胞が排除される場合、本明細書に記載する方法は、腫瘍の外科的除去、放射線療法、化学療法、またはその他の免疫療法等の生物療法（これに限定されるわけではないが、モノクローナル抗体療法、免疫調節薬による治療、免疫エフェクタ細胞の養子移入、造血成長因子、サイトカインおよびワクチン接種による治療を含む）と組合せて使用されうる。
【００６５】
本明細書に記載する方法は、各種の感染性疾患を引き起こす病原性細胞の集団にも利用できる。例えば本発明は、細菌、酵母を含む菌類、ウィルス、ウィルス感染細胞、マイコプラズマ、および寄生生物などの病原性細胞の集団に利用できる。本明細書に記載する薬物送達結合体によって治療されうる感染性生物は、グラム陰性またはグラム陽性球菌または桿菌である細菌などの生物を含む、動物において病原を引き起こす当分野で認識された任意の感染性生物である。例えばプロテウス種、クレブシエラ種、プロビデンシア種、エルシニア種、エルウィニア種、エンテロバクター種、サルモネラ種、セラチア種、アエロバクター種、エシェリキア種、シュードモナス種、赤痢菌種、ビブリオ種、アエロモナス種、カンピロバクター種、ストレプトコッカス種、スタフィロコッカス種、ラクトバシラス種、ミクロコッカス種、モラクセラ種、バシラス種、クロストリジウム種、コリネバクテリウム種、エベルセラ（Ｅｂｅｒｔｈｅｌｌａ）種、ミクロコッカス種、マイコバクテリウム種、ナイセリア種、ヘモフィルス種、バクテロイデス種、リステリア種、エリジペロトリックス種、アシネトバクター種、ブルセラ種、パスツレラ種、ビブリオ種、フラボバクテリウム種、フゾバクテリウム種、ストレプトバシラス種、カリマトバクテリウム種、レジオネラ種、トレポネーマ種、ボレリア種、レプトスピラ種、アクチノミセス種、ノカルジア種、リケッチア種、および宿主動物において疾患を引き起こす他の任意の細菌種は、本明細書に記載する薬物送達結合体によって治療されうる。
【００６６】
特に興味深いのは、抗生物質耐性ストレプトコッカス種およびスタフィロコッカス種などの抗生物質に対して耐性である細菌、または抗生物質に対して感受性であるが、抗生物質によって治療できる反復性感染を引き起こすので、耐性生物が最終的に発生する細菌である。抗生物質に対して感受性であるが、抗生物質によって治療できる反復性感染を引き起こすので、耐性生物が最終的に発生する細菌は、これらの抗生物質耐性細菌株の発生を回避するために、抗生物質の非存在下で、または宿主動物に通常投与されるよりも低い用量の抗生物質と組合せて、本明細書に記載する薬物送達結合体によって治療されうる。
【００６７】
例えばＤＮＡおよびＲＮＡウィルス等のウィルスによって引き起こされた疾患も、本明細書に記載する薬物送達結合体によって治療されうる。このようなウィルスとしては、これに限定されるわけではないが、ＤＮＡウィルス、例えばパピローマウィルス、パルボウィルス、アデノウィルス、ヘルペスウィルス、およびワクシニアウィルス、ならびにＲＮＡウィルス、例えばアレナウィルス、コロナウィルス、リノウィルス、呼吸器合胞体ウィルス、インフルエンザウィルス、ピコルナウィルス、パラミキソウィルス、レオウィルス、レトロウィルス、レンチウィルス、およびラブドウィルスが挙げられる。
【００６８】
本明細書に記載する薬物送達結合体は、任意の、酵母を含む菌類、マイコプラズマ種、寄生生物、または動物で疾患を引き起こす他の感染性生物によって引き起こされた疾患を治療するためにも使用されうる。本明細書に記載する方法および薬物送達結合体によって治療されうる菌類の例としては、カビとして成長する、または酵母様菌類が挙げられ、これは、例えば白癬、ヒストプラスマ症、ブラストミセス症、アスペルギルス症、クリプトコッカス症、スポロトリクム症、コクシジオイデス症、パラコクシジオイデス症、ムコール症、色素酵母菌症、皮膚糸状菌症、プロトテカ症、フザリウム症、粃糠疹、菌腫、パラコクシジオイデス症、フェオフィホ真菌症、シュードアレシェリア症、スポロトリクム症、砂毛症、ニューモシスチス感染症、およびカンジダ症を引き起こす菌類を含む。 
【００６９】
本明細書に記載する薬物送達結合体は、これに限定されるわけではないが、サナダムシ（例えば条虫、矮小条虫、裂頭条虫属、およびエキノコッカス種）、吸虫（例えば肥大吸虫、異形吸虫、メタゴニムス、肝吸虫、肝蛭、肺吸虫、および住血吸虫種）、回虫（例えば蟯虫、鞭虫、豚回虫、鉤虫、アメリカ鉤虫、ストロンギロイデス、旋毛虫、ブケレリア、ブルギア、ロアオンコセルカ、およびドラクンクルス種）、アメーバ（例えばネグレリアおよびアカントアメーバ種）、ならびに原虫（例えばプラスモディウム、トリパノソーマ、リーシュマニア、トキソプラズマ、エントアメーバ、ジアルジア、イソスポラ、クリプトスポリジウム、およびエンテロシトゾーン種）によって引き起こされる感染を含む、寄生生物感染を治療するためにも使用されうる。
【００７０】
薬物送達結合体が対象とする病原性細胞は、これらの細胞がリガンド受容体、例えばビタミン、あるいはその類似体または誘導体の受容体を優先的に発現する場合、内在性病原体を持つ細胞、例えばウィルス-、マイコプラズマ-、寄生生物-、または細菌-感染細胞でもありうる。
【００７１】
一実施形態において、リガンドが、受容体、輸送体、またはリガンドを特異的に結合して、病原性細胞で優先的に発現される他の表面提示タンパク質へ結合する時に、薬物送達結合体は標的病原性細胞内へ内部移行されうる。そのような内部移行は例えば、受容体媒介エンドサイトーシスを通じて発生しうる。薬物送達結合体が放出型リンカーを含有する場合、リガンドおよびビンカ化合物は細胞内で解離して、ビンカはその細胞内標的に作用しうる。
【００７２】
別の例証的な実施形態において、薬物送達結合体のリガンドは、ビンカ化合物を病原性細胞の表面に密接に配置する病原性細胞に結合しうる。ビンカ化合物は次に、放出型リンカーの開裂によって放出されうる。例えばビンカ化合物は、放出型リンカーがジスルフィド基である場合、タンパク質ジスルフィドイソメラーゼによって放出されうる。ビンカ化合物は次に、受容体結合薬物送達結合体が結合されている病原性細胞によって取り込まれうるか、またはビンカ化合物はそれに近接した別の病原性細胞によって取り込まれうる。あるいはビンカ化合物は、放出型リンカーがジスルフィド基である細胞内のタンパク質ジスルフィドイソメラーゼによって放出されうる。ビンカ化合物は、あるベータ離脱機構について上述したような加水分解機構、例えば酸触媒による加水分解によって放出され、あるいはオキソニウムイオンまたはラクトニウムイオン産生機構を通じた隣接基補助開裂によっても放出されうる。放出型リンカーの選択は、ビンカ化合物が結合体から放出される機構を決定するであろう。このような選択は、薬物送達結合体が使用される条件によって事前に定義されうることが認識される。
【００７３】
リンカーが放出型リンカーを含まない別の例証的な実施形態において、薬物送達結合体のリガンド部分は、病原性細胞をビンカ化合物に結合できる他の分子による攻撃の標的とするために、病原性細胞の表面にビンカ化合物を有する病原性細胞に結合しうる。あるいは本実施形態において、薬物送達結合体は結合時に標的とした細胞内へ内部移行可能であり、リガンド部分およびビンカ化合物は細胞内でビンカ化合物と結合を維持することができ、ビンカ化合物はリガンド部分から解離せずにその効果を示す。
【００７４】
なお別の実施形態において、または上記の実施形態と組合せて、薬物送達結合体がビタミン受容体または別のリガンド受容体を結合する場合、結合体は、血清中に存在する溶解性ビタミン受容体またはアルブミンの様な血清タンパク質に結合可能であり、そのため非結合ビンカ化合物と比較して結合体の長期の循環と、非結合ビンカ化合物と比較して病原性細胞集団に対して結合体の活性上昇を引き起こす。
【００７５】
例えばビタミンの様なリガンドへの結合部位は、リガンドに特異的に結合できるリガンドの受容体を含み、ここで受容体または他のタンパク質は病原性細胞の集団で特異的に発現、過剰発現または優先的に発現される。病原性細胞によって特異的に発現、過剰発現または優先的に発現された表面提示タンパク質は通例、非病原性細胞には存在しないか、または低濃度で存在する受容体であり、病原性細胞の選択的排除の手段を与える受容体である。薬物送達結合体は、癌細胞または他の種類の病原性細胞上の受容体への高親和性結合が可能でありうる。高親和性結合はリガンドに固有でありうるか、または結合親和性は化学修飾リガンドの使用によって向上されうる。
【００７６】
本明細書に記載する薬物送達結合体は、追加の薬物が標的指向化されるかどうかにかかわらず、その他の任意の既知の薬物と共に併用療法で投与されうる。例証的な追加の薬剤としては、これに限定されるわけではないが、ペプチド、オリゴペプチド、レトロ-インベルソオリゴペプチド、タンパク質、少なくとも１個の非ペプチド結合がペプチド結合を置換するタンパク質類似体、アポタンパク、糖タンパク質、酵素、補酵素、酵素阻害薬、アミノ酸およびその誘導体、受容体および他の膜タンパク質、抗原およびそれに対する抗体、ハプテンおよびそれに対する抗体、ホルモン、脂質、リン脂質、リポソーム、毒素、抗体、鎮痛剤、気管支拡張薬、ベータ遮断薬、抗菌剤、降圧剤、心血管作動薬（抗不整脈薬、強心配糖体、抗狭心症薬、血管拡張薬を含む）、中枢神経系剤（刺激薬、向精神薬、抗躁薬、および抑制薬を含む）、抗ウィルス剤、抗ヒスタミン薬、化学治療剤を含む制癌剤、精神安定剤、抗うつ薬、Ｈ-２拮抗薬、抗痙攣薬、制嘔吐剤、プロスタグランジンおよびプロスタグランジン類似体、筋弛緩剤、抗炎症性物質、刺激薬、うっ血除去薬、鎮吐薬、利尿剤、鎮痙薬、抗喘息薬、抗パーキンソン病薬、去痰薬、鎮咳剤、粘液溶解薬、ならびにミネラルおよび栄養添加物が挙げられる。
【００７７】
別の例証的な態様において、追加の薬物は、内在性免疫応答を刺激できる化合物より選択されうる。適切な化合物としては、これに限定されるわけではないが、サイトカインまたは免疫細胞成長因子、例えばインターロイキン１〜１８、幹細胞因子、塩基性ＦＧＦ、ＥＧＦ、Ｇ-ＣＳＦ、ＧＭ-ＣＳＦ、ＦＬＫ-２リガンド、ＨＩＬＤＡ、ＭＩＰ-１α、ＴＧＦ-α、ＴＧＦ-β、Ｍ-ＣＳＦ、ＩＦＮ-α、ＩＦＮ-β、ＩＦＮ-γ、溶解性ＣＤ２３、ＬＩＦ、およびその組合せが挙げられる。
【００７８】
これらの免疫活性化因子の治療的に有効な組合せが使用されうる。一実施形態において、例えば約０．１ＭＩＵ／ｍ２／用量／日〜約１５ＭＩＵ／ｍ２／用量／日の範囲の量の連日多回用量処方におけるＩＬ-２の治療的有効量、および例えば約０．１ＭＩＵ／ｍ２／用量／日〜約７．５ＭＩＵ／ｍ２／用量／日の範囲の量の連日多回用量処方におけるＩＦＮ-αの治療的有効量は、病原性細胞を持つ宿主動物において病原性細胞を排除、減少または中和するために、薬物送達結合体と共に使用されうる（ＭＩＵ＝１００万国際単位；ｍ２＝平均的なヒトのおおよその体表面積）。別の実施形態において、ＩＬ-１２およびＩＦＮ-αは、インターロイキンおよびインターフェロンについての上記の治療的有効量で使用され、なお別の実施形態において、ＩＬ-１５およびＩＦＮ-αは、インターロイキンおよびインターフェロンについての上記の治療的有効量で使用されうる。代わりの実施形態において、ＩＬ-２、ＩＮＦ-αまたはＩＮＦ-γ、ならびにＧＭ-ＣＳＦは組合せて、上記の治療的有効量で使用されうる。他のインターロイキンおよびインターフェロン、ならびにコロニー刺激因子の組み合わせを含むサイトカインの他の有効な任意の組合せも使用されうる。
【００７９】
さらに追加の薬物は、当分野で既知の任意の薬物でありうる。それらの薬物は、細胞毒性または細胞増殖抑制性であり、腫瘍浸透性を向上させ、腫瘍細胞増殖を阻害し、アポトーシスを促進し、標的細胞の抗アポトーシス活性を低下させ、感染性因子によって引き起こされた疾患を治療するために使用され、病原性細胞に向けられた内在性免疫応答を向上させ、または任意の種類の病原性細胞によって引き起こされた疾患状態を治療するために有用である。例示的で適切な追加の薬物としては、アデノコルチコイドおよびコルチコステロイド、アルキル化剤、抗アンドロゲン、抗エストロゲン、アンドロゲン、アクラマイシンおよびアクラマイシン誘導体、エストロゲン、抗代謝産物（例えばシトシンアラビノシド、プリン類似体、ピリミジン類似体、およびメトトレキセート）、ブスルファン、カルボプラチン、クロランブシル、シスプラチンおよび他のプラチナ化合物、タモキシフェン、タキソール、パクリタキセル、パクリタキセル誘導体、タキソテール（登録商標）、シクロホスファミド、ダウノマイシン、リゾキシン、Ｔ２毒素、植物アルカロイド、プレドニゾン、ヒドロキシ尿素、テニポシド、マイトマイシン、ディスコデルモライド、非ビンカ微小管阻害薬、エポチロン、チューブリシン（ｔｕｂｕｌｙｓｉｎ）、シクロプロピルベンズ［ｅ］インドロン、ｓｅｃｏ-シクロプロピルベンズ［ｅ］インドロン、Ｏ-Ａｃ-ｓｅｃｏ-シクロブロピルベンズ［ｅ］インドロン、ブレオマイシンおよび他の任意の抗生物質、窒素マスタード、ニトロソ尿素、コルヒチン、コルヒチン誘導体、アロコルヒチン、チオコルヒチン、トリチルシステイン、ハリコンドリンＢ、ドラスタチン（例えばドラスタチン１０）、アマニチン（例えばα-アマニチン）、カンプトセシン、イリノテカン、および他のそのカンプトセシン誘導体、ゲルダナマイシンおよびゲルダナマイシン誘導体、エラムスチン、ノコダゾール、ＭＡＰ４、コルセミド、ビンデシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、カタランチン、ビンドリン、ロイロシン、ビノレルビン、イミドカルブ、シブトラミン、トルトラズリル、ビンブラスチン酸、メイタンシンならびにその類似体および誘導体、ゲムシタビン、炎症性剤および炎症誘発剤、ペプチドおよびペプチドミメティックシグナル伝達阻害薬、および任意の他の当分野で認識される薬物または毒素が挙げられる。併用療法で使用されうる他の薬物としては、ペニシリン、セファロスポリン、バンコマイシン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リファンピン、クロラムフェニコール、アミノグリコシド抗生物質、ゲンタマイシン、アンホテリシンＢ、アシクロビル、トリフルリジン、ガンシクロビル、ジドブジン、アマンタジン、リバビリン、および他の当分野で認識される任意の抗菌化合物が挙げられる。上記の追加の薬物のいずれかの類似体または誘導体も併用療法で使用されうる。
【００８０】
別の例証的な実施形態において、製薬組成物が提供される。製薬組成物は、１回以上の用量で投与されるときに宿主動物において病原性細胞の集団を排除するのに有効な薬物送達結合体の量を含む。薬物送達結合体は好ましくは、宿主動物に非経口的に、例えば皮内に、皮下に、筋肉内に、腹腔内に、静脈内に、または髄腔内に投与される。あるいは薬物送達結合体は、例えば経口投与の様な他の医療的に有用なプロセスによって宿主動物に投与することができ、そして任意の有効な用量および適切な治療剤形、例えば持続放出剤形が使用されうる。経口剤形に有用な賦形剤の例としては、これに限定されるわけではないが、コーンスターチ、ゼラチン、ラクトース、ステアリル酸マグネシウム、重炭酸ナトリウム、セルロース誘導体、およびナトリウムデンプングリコール酸が挙げられる。
【００８１】
非経口剤形の例としては、等張性生理的食塩水、５％グルコースまたは製薬的に許容されるその他の周知の液体、例えば液体アルコール、グリコール、エステル、およびアミド中の活性物質の水性溶液が挙げられる。本発明による非経口剤形は、薬物送達結合体の用量を含む復元可能な凍結乾燥物の形でありうる。本実施形態の一態様において、例えばその開示が参照により本明細書に組み入れられている、米国特許第４，７１３，２４９号；同第５，２６６，３３３号；および同第５，４１７，９８２号に記載されている生分解性炭水化物マトリクスなどの、当分野で既知の多数の持続放出剤形のいずれも投与可能であり、あるいは低速ポンプ（例えば浸透圧ポンプ）が使用されうる。
【００８２】
併用療法における追加の薬物は、薬物送達結合体の前、後、または薬物送達結合体と同時に宿主動物に投与可能であり、追加の薬物は、薬物送達結合体を含有する同じ組成物の一部として、または薬物送達結合体とは異なる組成物の一部として投与されうる。このような任意の併用療法が有効な用量での追加薬物投与に使用されうる。
【００８３】
別の例証的な態様において、２つ以上の種類の薬物送達結合体が使用されうる。例えば宿主動物は、異なるリガンドを持つ結合体、例えば組合された葉酸塩-ビンカおよびビタミンＢ１２-ビンカ結合体などを用いた同時投薬プロトコルで治療されうる。別の例証的な態様において、宿主動物は、２つ以上のリガンド、例えば複数の葉酸塩または複数のビタミンＢ１２を１つの結合体中に含む結合体により、または葉酸塩およびビタミンＢ１２リガンドの両方に結合されたビンカ化合物などの、同じ結合体中のリガンドの組合せを用いて治療されうる。さらに別の薬物送達結合体中に異なる種類のビンカ化合物を含む薬物送達結合体が使用されうる。
【００８４】
薬物送達結合体の日単位の処方量は、宿主の状態、治療される疾患状態、結合体の分子量、その投与経路および組織分布、ならびに放射線療法または併用療法の追加の薬物などの他の治療処置の同時使用の可能性に応じて著しく変化しうる。宿主動物へ投与される有効量は、体表面積、体重、および患者の状態の医師による評価に基づく。有効用量は、例えば約１ｎｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ〜約５００μｇ／ｋｇ、および約１μｇ／ｋｇ〜約１００μｇ／ｋｇの範囲で変化しうる。
【００８５】
薬物送達結合体を投与するため、任意の有効な投薬計画が使用されうる。例えば薬物送達結合体は、１回用量として投与されうるか、または分割されて、連日多回用量処方として投与されうる。さらに時差投薬計画、例えば週に１〜３日を連日治療の代用として使用することができ、本発明を定義する目的で、このような間欠的または時差連日投薬計画は、毎日の治療と同等と見なされ、企図される。例証的な一実施形態において、宿主動物は、病原性細胞の集合を排除するために薬物送達結合体の複数回注射によって治療される。一実施形態において、宿主は薬物送達結合体を複数回（好ましくは約２〜５０回まで）、例えば１２〜７２時間の間隔で、または４８〜７２時間の間隔で注射される。薬物送達結合体の追加の注射は宿主動物に、初回注射後の数日または数ヶ月の間隔で投与でき、追加の注射は病原性細胞によって引き起こされた疾患状態の再発を防止しうる。
【００８６】
例証的な一態様において、薬物送達結合体で使用されうるビタミンあるいはその類似体または誘導体は、活性化マクロファージ上で特異的に発現される受容体、例えば葉酸塩あるいはその類似体または誘導体を結合する葉酸塩受容体に結合するものを含みうる。葉酸塩結合体は例えば、宿主の疾患状態を引き起こす活性化マクロファージの活性を死滅または抑制するために使用されうる。そのようなマクロファージを標的とする結合体は、活性化マクロファージ媒介疾患状態にある宿主動物に投与されるときに、活性化マクロファージを死滅させる、またはマクロファージ機能を抑制するために、結合体されたビンカ化合物を活性化マクロファージの集合に集中させ結合させるように作用する。活性化マクロファージ集合の排除、減少、または非活性化は、治療される疾患状態の活性化マクロファージ媒介病原特徴を停止または低減するように作用する。活性化マクロファージによって媒介されることが既知の疾患の例としては、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、クローン病、乾癬、骨髄炎、多発性硬化症、アテローム硬化症、肺線維症、サルコイドージス、全身性硬化症、移植臓器拒絶（ＧＶＨＤ）および慢性炎症が挙げられる。薬物送達結合体の投与は通例、疾患状態の症状が低減または排除されるまで継続される。
【００８７】
活性化マクロファージを死滅させる、または活性化マクロファージの機能を抑制するために投与される薬物送達結合体は、宿主動物に非経口的に、例えば皮内に、皮下に、筋肉内に、腹腔内、または静脈内に製薬的に許容される担体と共に投与されうる。あるいは薬物送達結合体は宿主細胞に他の医療的に有用な手順で投与でき、有効用量は標準剤形または持続放出剤形で投与されうる。治療方法は単独で、または活性化マクロファージによって媒介される疾患状態の治療のために認められた他の治療方法と組合せて使用されうる。
【００８８】
本明細書に記載する本発明は、次の実施例によってさらに例証される；しかしながらこれらの実施例は単に本発明の例証として意図され、決して本発明を制限すると解釈されるべきでないことが理解されなければならない。例えば本明細書に示す各化合物において、リンカーを形成するのに使用されるアミノ酸の立体化学は場合により、天然ｌ配置または非天然ｄ配置から選択されうる。加えて本明細書では、これに限定されるわけではないが、ビンブラスチンの各種の他の類似体および誘導体、各種の他のスペーサー、ヘテロ原子、およびリンカー組合せ、およびその他を含む多くの変更形態が企図されうる。本明細書に記載する各実施例の化合物は、示されたようにＮＭＲ、ＭＳ、および／またはＵＶ分光法、および／またはＨＰＬＣによって特徴付けられ、特徴的な１Ｈ ＮＭＲシグナル、ＭＳシグナルなどを含む選択された分析データは必要に応じて記載される。
【実施例】
【００８９】
＝＝＝方法実施例＝＝＝
〔方法実施例１  マウスにおける腫瘍成長の阻害〕
本明細書に記載した化合物の抗腫瘍活性は、腫瘍担持動物へ静脈内（ｉ．ｖ．）投与したときに、皮下Ｍ１０９腫瘍を担持するＢａｌｂ／ｃマウスにおいて評価した。右腋窩の皮下組織への１ｘ１０６個のＭ１０９細胞の腫瘍播種の約１１日後（ｔ０の時点での腫瘍容積範囲＝６０〜８０ｍｍ３）、マウス（５／グループ）に週３回（ＴＩＷ）、規定の期間（例えば２〜３週間）にわたって、（ａ）体重１キログラムあたりの規定用量レベルの、本明細書に記載する薬物送達結合体、または（ｂ）等用量体積のＰＢＳ（対照群）をｉ．ｖ．注射した。腫瘍成長は、各処置グループで２日または３日間隔で測径器を使用して測定した。腫瘍体積は、式Ｖ＝ａｘｂ２／２を使用して計算し、式中、「ａ」は腫瘍の長さであり、「ｂ」は幅である（ミリメートルで表す）。
【００９０】
〔方法実施例２  マウスにおける腫瘍成長の阻害〕
本明細書に記載した化合物の抗腫瘍活性は、腫瘍担持動物へ静脈内（ｉ．ｖ．）投与したときに、皮下ＫＢ腫瘍を担持するｎｕ／ｎｕマウスにおいて評価した。右腋窩の皮下組織への１ｘ１０６個のＫＢ細胞の腫瘍播種の約８〜１１日後（ｔ０の時点の腫瘍容積範囲＝６０〜８０ｍｍ３）、マウス（５／グループ）に週３回（ＴＩＷ）、規定の期間（例えば２〜３週間）にわたって、（ａ）体重１キログラムあたりの規定用量レベルの本明細書に記載する薬物送達結合体、または（ｂ）等用量体積のＰＢＳ（対照群）をｉ．ｖ．注射した。腫瘍成長は、各処置グループで２日または３日間隔で測径器を使用して測定した。腫瘍体積は、式Ｖ＝ａｘｂ２／２を使用して計算し、式中、「ａ」は腫瘍の長さであり、「ｂ」は幅である（ミリメートルで表す）。
【００９１】
〔方法実施例３  細胞ＤＮＡ合成の阻害〕
本明細書に記載する化合物は、薬物が葉酸塩受容体陽性ＫＢ細胞の成長を阻害する能力を予測するｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイを使用して評価した。化合物は、本明細書に記載するプロトコルに従って調製した各化学療法薬に結合された葉酸塩を含んでいた。ＫＢ細胞を所定の期間にわたって３７℃にて、少なくとも１００倍過剰の葉酸の非存在下または存在下で、指示された濃度の葉酸-薬物結合体に暴露した。この細胞を次に新しい培地ですすぎ、新しい培地で７２時間にわたって３７℃でインキュベートした。細胞生存能力は、３Ｈ-チミジン取り込みアッセイを使用して評価した。
【００９２】
本明細書の図に示すように、用量依存性細胞毒性は測定可能であり、大半の場合でＩＣ５０値（新たに合成されたＤＮＡへの３Ｈ-チミジン取り込みを５０％低下させるのに必要な薬物結合体の濃度）は低いナノモル範囲であった。さらにこれらの結合体の細胞毒性は、過剰な遊離葉酸の存在下で低減され、観察された細胞死滅は葉酸塩受容体への結合によって仲介されることを示す。
【００９３】
〔方法実施例４  相対親和性アッセイ〕
葉酸塩と比較した葉酸塩受容体（ＦＲ）への本明細書に記載する化合物の親和性は、先に記載された方法（Ｗｅｓｔｅｒｈｏｆ，Ｇ．Ｒ．，Ｊ．Ｈ．Ｓｃｈｏｒｎａｇｅｌ，ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍ．４８：４５９-４７１）に多少の変更を加えて決定した。簡潔にはＦＲ陽性ＫＢ細胞を２４ウェル細胞培養プレートに密集して播種して、プラスチックに１８時間付着させた。使用済みのインキュベーション培地を指定されたウェルにて、試験品または葉酸の上昇濃度の非存在下または存在下で１００ｎＭ ３Ｈ-葉酸を添加した葉酸塩を含まないＲＰＭＩ（ＦＦＲＰＭＩ）と交換した。細胞を３７℃にて６０分間インキュベートして、次にＰＢＳ（ｐＨ７．４）によってすすぎ、次いでＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に１％ ＳＤＳ ５００μＬを添加した。次に細胞溶解液を収集して、シンチレーションカクテル５ｍＬを含有する個々のバイアルに添加し、次に放射能をカウントした。負の対照サンプルは、ＦＦＲＰＭＩ中に３Ｈ-葉酸のみを含有していた（競合物質なし）。正の対照サンプルは１ｍＭ葉酸の最終濃度を含有し、この正の対照サンプルで測定で得られたＣＭＰ（標識の非特異性結合を表す）はすべてのサンプルから引かれた。特に相対親和性は、ＫＢ細胞のＦＲに結合する３Ｈ-葉酸の５０％を置換するのに必要な化合物のモル比の逆数として定義され、ＦＲに対する葉酸の相対親和性は１に設定された。
【００９４】
〔方法実施例５  ４Ｔ−１腫瘍体積アッセイ〕
６〜７週齢マウス（メスＢａｌｂ／ｃ株）をインディアナ州インディアナポリスのＨａｒｌａｎ，Ｉｎｃ．より入手した。マウスをＨａｒｌａｎの葉酸を含まない固形飼料で、本実験の開始前および本実験中の合計３週間にわたって維持した。葉酸塩受容体-陰性４Ｔ-１腫瘍細胞（動物あたり１ｘ１０６細胞）を右腋窩の皮下組織に接種した。４Ｔ-１腫瘍平均容積が〜１００ｍｍ３である、腫瘍接種の約５日後に、マウス（５／グループ）に、週３回（ＴＩＷ）、３週間にわたって、３μｍｏｌ／ｋｇの薬物送達結合体、または等用量体積のＰＢＳ（対照群）をｉ．ｖ．注射した。腫瘍成長は、各処置グループで２日または３日間隔で測径器を使用して測定した。腫瘍体積は、式Ｖ＝ａｘｂ２／２を使用して計算し、式中、「ａ」は腫瘍の長さであり、「ｂ」は幅である（ミリメートルで表す）。
【００９５】
〔方法実施例６  体重測定〕
マウスの重量変化率は、関連する腫瘍容積アッセイに記載したサンプルのグラフに示すように、腫瘍接種後（ＰＴＩ）の指示された日にマウス（５マウス／グループ）において測定した。
【００９６】
〔方法実施例７  葉酸塩-ペプチドの一般的な調製〕
ペプチドを含む本明細書に記載するリンカーは、酸感受性Ｆｍｏｃ-ＡＡ-Ｗａｎｇ樹脂におけるＦｍｏｃ方法などの標準方法を使用したポリマー支持連続手法によって調製した。例証的には、葉酸塩含有ペプチジル断片Ｐｔｅ-Ｇｌｕ-（ＡＡ）ｎ-ＮＨ（ＣＨＲ２）ＣＯ２Ｈ（３）は、Ｗａｎｇ樹脂支持アミノ酸およびＦｍｏｃ保護アミノ酸合成からスキーム１に示す方法によって調製する。
＜スキーム１＞
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（ａ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ；（ｂ）Ｆｍｏｃ-ＡＡ-ＯＨ、ＰｙＢｏｐ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ；（ｃ）Ｆｍｏｃ-Ｇｌｕ-Ｏ-ｔ-ＢｕまたはＦｍｏｃ-Ｇｌｕ（γ-Ｏ-ｔ-Ｂｕ）-ＯＨ、ＰｙＢｏｐ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦ；（ｄ）Ｎ１０（ＴＦＡ）-Ｐｔｅ-ＯＨ；ＰｙＢｏｐ、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＳＯ；（ｅ）ＴＦＡＡ、（ＣＨ２ＳＨ）２、ｉ-Ｐｒ３ＳｉＨ；（ｆ）ＮＨ４ＯＨ、ｐＨ９〜１０。
【００９７】
本明細書に記載するプロセスのこの例示的な実施形態において、Ｒ１は、Ｆｍｏｃであり、Ｒ２は、所望の適切に保護されたアミノ酸側鎖であり、Ｗａｎｇは、２-クロロトリチル樹脂であり、ＤＩＰＥＡは、ジイソプロピルエチルアミンである。標準カップリング手順、例えばＰｙＢｏｐ、および本明細書に記載するまたは当分野で既知である他の手順が使用され、そこではカップリング剤が例証的に、効率的なカップリングを確実にするための活性化剤として利用される。Ｆｍｏｃ保護基は、標準条件下での各カップリング工程の後に、例えばピペリジン、テトラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＢＡＦ）などによる処置時に除去される。適切に保護されたアミノ酸構築ブロック、例えばＦｍｏｃ-Ｇｌｕ-ＯｔＢｕ、Ｎ１０-ＴＦＡ-Ｐ-ｔｅ-ＯＨなどが、スキーム１に記載され、Ｆｍｏｃ-ＡＡ-ＯＨによる工程（ｂ）で表されるように使用される。したがってＡＡは、適切に保護される任意のアミノ酸出発物質を指す。本明細書で使用するアミノ酸という用語は、１個以上の炭素によって隔離されたアミンおよびカルボン酸官能基の両方を有するいずれの試薬も指すものとし、天然型アルファおよびベータアミノ酸、ならびにこれらのアミノ酸のアミノ酸誘導体および類似体を含むことが理解される。特に保護される側鎖を有するアミノ酸、例えば保護セリン、トレオニン、システイン、アスパラギン酸なども、本明細書に記載する葉酸塩-ペプチド合成で使用されうる。さらなるガンマ、デルタ、またはより長い相同性アミノ酸も、本明細書に記載の葉酸塩-ペプチド合成で出発物質として含まれうる。さらに相同性側鎖、または交互の分岐構造を有するアミノ酸類似体、例えばノルロイシン、イソバリン、β-メチルトレオニン、β-メチルシステイン、β，β-ジメチルシステインなども、本明細書に記載する葉酸塩-ペプチド合成で出発物質として含まれうる。
【００９８】
式Ｆｍｏｃ-ＡＡ-ＯＨのＦｍｏｃ-保護アミノ酸（ＡＡ）を含むカップリングシーケンス（工程（ａ）および（ｂ））は、固体支持ペプチド（２）を調製するために「ｎ」回実施され、ここでｎは整数であり、０〜約１００に等しくてもよい。最後のカップリング工程後の、残存するＦｍｏｃ基が除去され（工程（ａ））、ペプチドが逐次的にグルタミン酸誘導体にカップリングされ（工程（ｃ））、脱保護されて、ＴＦＡ-保護プテロイン酸にカップリングされる（工程（ｄ））。次にペプチドは、トリフルオロ酢酸、エタンジチオール、およびトリイソプロピルシランによる処理時にポリマー支持体から開裂される（工程（ｅ））。これらの反応条件は、適切に保護されたアミノ酸側鎖の一部を形成しうるｔ-Ｂｕ、ｔ-Ｂｏｃ、およびＴｒｔ保護基の同時除去を引き起こす。ＴＦＡ保護基は、塩基による処理（工程（ｆ）時に除去されて、葉酸塩含有ペプチジル断片（３）を与える。
【００９９】
＝＝＝化合物実施例＝＝＝
〔実施例１］
2009504783.tif 000036
方法実施例７の一般手順（スキーム１）により、Ｗａｎｇ樹脂結合４-メトキシトリチル（ＭＴＴ）保護Ｃｙs-ＮＨ２を次のシーケンスに従って反応させた。１）ａ．Ｆｍｏｃ-Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；２）ａ．Ｆｍｏｃ-Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；３）ａ．Ｆｍｏｃ-Ａｒｇ（Ｐｂｆ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；４）ａ．Ｆｍｏｃ-Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；５）ａ．Ｆｍｏｃ-ＧＩｕ-ＯｔＢｕ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；６）Ｎ１０-ＴＦＡ-プテロイン酸、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ、ＭＴＴ、ｔＢｕ、およびＰｂｆ保護基はＴＦＡ／Ｈ２Ｏ／ＴＩＰＳ／ＥＤＴ（９２．５：２．５：２．５：２．５）によって除去され、ＴＦＡ保護基はｐＨ＝９．３のＮＨ４ＯＨ水溶液によって除去した。選択された１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ（ｐｐｍ）８．６８（ｓ，１Ｈ，ＦＡ  Ｈ-７），７．５７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，ＦＡ  Ｈ-１２＆１６），６．６７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９Ｈｚ，ＦＡ  Ｈ-１３＆１５），４．４０-４．７５（ｍ，５Ｈ），４．３５（ｍ，２Ｈ），４．１６（ｍ，１Ｈ），３．０２（ｍ，２Ｈ），２．５５-２．９５（ｍ，８Ｈ），２．４２（ｍ，２Ｈ），２．００-２．３０（ｍ，２Ｈ），１．５５-１．９０（ｍ，２Ｈ），１．４８（ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ＋Ｈ＋）１０４６。
【０１００】
〔実施例２〕
2009504783.tif 000037
方法実施例７の一般手順（スキーム１）により、Ｗａｎｇ樹脂結合４-メトキシトリチル（ＭＴＴ）保護Ｃｙs-ＮＨ２を次のシーケンスに従って反応させた。１）ａ．Ｆｍｏｃ-β-アミノアラニン（ＮＨ-ＭＴＴ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；２）ａ．Ｆｍｏｃ-Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；３）ａ．Ｆｍｏｃ-Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤIＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；４）ａ．Ｆｍｏｃ-Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；５）ａ．Ｆｍｏｃ-Ｇｌｕ-ＯｔＢｕ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；６）Ｎ１０-ＴＦＡ-プテロイン酸、ＰｙＢＯＰ、ＤIＰＥＡ。ＭＴＴ、ｔＢｕ、およびＴＦＡ保護基は、ａ．２％ヒドラジン／ＤＭＦ；ｂ．ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ／ＴＩＰＳ／ＥＤＴ（９２．５：２．５：２．５：２．５）によって除去した。次の表に示す試薬を調製で使用した：
2009504783.tif 000038
【０１０１】
カップリング工程は次のように実施した：ペプチド合成容器に樹脂を添加し、アミノ酸溶液、ＤＩＰＥＡ、およびＰｙＢＯＰを添加する。アルゴンを１時間通気して、ＤＭＦおよびＩＰＡで３回洗浄する。各アミノ酸カップリング前に、Ｆｍｏｃ脱保護のためにＤＭＦに希釈した２０％ピペリジンを３回（１０分間）使用する。継続して６回のカップリング工程をすべて完了させる。最後に樹脂をＤＭＦに希釈した２％ヒドラジンで３回（５分間）洗浄して、プテロイン酸のＴＦＡ保護基を開裂させる。
【０１０２】
次の試薬、９２．５％（５０ｍｌ）ＴＦＡ、２．５％（１．３４ｍｌ）Ｈ２Ｏ、２．５％（１．３４ｍｌ）トリイソプロピルシラン、２．５％（１．３４ｍｌ）エタンジチオール  を使用して樹脂からペプチド類似体を開裂させ、開裂工程を次のように実施した：開裂試薬２５ｍｌを添加して、１．５時間通気し、試薬を排出し、残りの試薬で３回洗浄した。約５ｍＬまで蒸発させて、エチルエーテル中に沈殿させる。遠心分離にかけた後、乾燥させる。精製は次のように実施した。カラム-Ｗａｔｅｒｓ  ＮｏｖａＰａｋ  Ｃ１８  ３００ｘｌ９ｍｍ；緩衝液Ａ＝１０ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ５；Ｂ＝ＣＡＮ；１％Ｂ〜２０％Ｂ、１５ｍｌ／分にて４０分間、３５０ｍｇ（６４％）まで；ＨＰＬＣ-ＲＴ  １０．３０７分、純度１００％、１Ｈ ＮＭＲスペクトルは割り当てられた構造と一致、そしてＭＳ（ＥＳ-）：１６２４．８、１４６３．２、１４６２．３、  ９７７．１、９７６．２、９７５．１、９７４．１、４８６．８、４７７．８。
【０１０３】
〔実施例３〕
2009504783.tif 000039
方法実施例７の一般手順（スキーム１）により、Ｗａｎｇ樹脂結合ＭＴＴ保護Ｃｙs-ＮＨ２を次のシーケンスに従って反応させた：１）ａ．Ｆｍｏｃ-Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；２）ａ．Ｆｍｏｃ-Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；３）ａ．Ｆｍｏｃ-Ａｒｇ（Ｐｂｆ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；４）ａ．Ｆｍｏｃ-Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；５）ａ．Ｆｍｏｃ-Ｇｌｕ（γ-ＯｔＢｕ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；６）Ｎ１０-ＴＦＡ-プテロイン酸、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ。ＭＴＴ、ｔＢｕ、およびＰｂｆ保護基はＴＦＡ／Ｈ２Ｏ／ＴＩＰＳ／ＥＤＴ（９２．５：２．５：２．５：２．５）によって除去され、ＴＦＡ保護基はｐＨ＝９．３のＮＨ４ＯＨ水溶液によって除去した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、割り当てられた構造と一致していた。
【０１０４】
〔実施例４〕
2009504783.tif 000040
方法実施例７の一般手順（スキーム１）により、Ｗａｎｇ樹脂結合ＭＴＴ保護Ｄ-Ｃｙs-ＮＨ２を次のシーケンスに従って反応させた：１）ａ．Ｆｍｏｃ-Ｄ-Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；２）ａ．Ｆｍｏｃ-Ｄ-Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；３）ａ．Ｆｍｏｃ-Ｄ-Ａｒｇ（Ｐｂｆ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；４）ａ．Ｆｍｏｃ-Ｄ-Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；５）ａ．Ｆｍｏｃ-Ｄ-Ｇｌｕ-ＯｔＢｕ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；６）Ｎ１０-ＴＦＡ-プテロイン酸、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ。ＭＴＴ、ｔＢｕ、およびＰｂｆ保護基はＴＦＡ／Ｈ２Ｏ／ＴＩＰＳ／ＥＤＴ（９２．５：２．５：２．５：２．５）によって除去され、ＴＦＡ保護基はｐＨ＝９．３のＮＨ４ＯＨ水溶液によって除去した。１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、割り当てられた構造と一致していた。
【０１０５】
〔実施例５〕
2009504783.tif 000041
２-［（ベンゾトリアゾール-１-イル-（オキシカルボニルオキシ）-エチルジスルファニル］-ピリジンＨＣｌ（６０１ｍｇ）およびＤＩＰＥＡ ３７８μＬを、０℃の、デスアセチルビンブラスチンヒドラジド（６６８ｍｇ）の５ｍＬＤＭＣ溶液中に逐次的に添加した。反応物を室温まで加温して、３時間撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭに希釈した１５％ ＭｅＯＨ）は、完全な変換を示した。混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（１：９ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製した。合せた画分を蒸発させ、ＤＣＭに再溶解させて、１０％ Ｎａ２ＣＯ３で洗浄し、塩水につけ、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、５５０ｍｇ（８０％）まで蒸発させた；ＨＰＬＣ-ＲＴ  １２．６５１分、純度９１％、１Ｈ ＨＭＲスペクトルは割り当てられた構造と一致した。ＭＳ（ＥＳＩ＋）：９８４．３、９８３．３、９８２．４、４９２．４、４９１．９、１４１．８。この手順のさらなる詳細は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられている、米国特許出願公開第２００５／０００２９４２Ａ１号に記載されている。
【０１０６】
〔実施例６〕
2009504783.tif 000042
デスアセチルビンブラスチンモノヒドラジド（１当量）は、その開示が参照により本明細書に組み入れられているＢａｒｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２１：８８-９６（１９７８）に従って調製して、新しい蒸留ＴＨＦ中でトリフルオロ酢酸１当量によって処理した。１０分間撹拌した後に、溶液をＮ-（４-アセチルフェニル）マレイミド１．０５当量によって処理した。アシルヒドラゾン形成は４５分後に完了して、溶媒を蒸発させた。
【０１０７】
ペプチジル断片Ｐｔｅ-Ｇｌｕ-Ａｓｐ-Ａｒｇ-Ａｓｐ-Ａｓｐ-Ｃｙｓ-ＯＨ（実施例１）（０．８５当量）を水に溶解させて、ｐＨは０．１Ｎ ＨＣｌによって２．５に調整して、ペプチドを沈殿させた。ペプチジル断片を遠心分離によって収集し、乾燥し、ＤＭＳＯに溶解した。得られた透明黄色の溶液に、ヒューニッヒ塩基（１５当量）およびアシルヒドラゾンＭｉｃａｈｅｌ付加体を添加した。１時間後、最終結合体をＨＰＬＣによって精製した。図１Ａおよび１Ｂは、葉酸塩対葉酸塩-デアセチルビンブラスチン結合体の相対結合親和性、結合体の３Ｈ-チミジン取り込みに対する効果をそれぞれ示す。図１Ａおよび１Ｂは、結合体（１４ｎＭ）のＩＣ５０と、葉酸塩が、葉酸塩受容体への結合について葉酸塩-デアセチルビンブラスチン結合体と競合することを示し、結合体の結合の特異性を証明している。アッセイは方法実施例３および４に従って実施した。
【０１０８】
図２は、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるＭ１０９腫瘍に対する実施例６（１．５μｍｏｌ／ｋｇ）の活性を示す。アッセイは方法実施例１に従って実施した。実施例６は、固形腫瘍の成長を阻害する。図３は、ＦＲ陽性Ｍ１０９腫瘍に対し、３週間にわたりＴＩＷで１０μｍｏｌ／ｋｇが与えられた実施例６の活性を示し、実施例６化合物の投薬は点線によって示されるように第２５日に終了した。アッセイは方法実施例１に従って実施した。実施例６は、固形腫瘍の成長を阻害する。
【０１０９】
図４Ａおよび４Ｂは、ＦＲ陽性１０９腫瘍およびＦＲ陰性４Ｔ-１腫瘍細胞それぞれに対する、３週間にわたる３μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷでの実施例６の活性を示す。アッセイは、方法実施例１および５にそれぞれ記載されたように実施した。実施例６は、固形Ｍ１０９腫瘍の成長を阻害するが、葉酸塩受容体（ＦＲ）陰性腫瘍は阻害しない。
【０１１０】
図５Ａおよび図５Ｂは、ＦＲ陽性ＫＢ腫瘍に対する、およびｎｕ／ｕｎマウスの体重（ｎｕ／ｕｎマウスはＫＢ腫瘍体積アッセイに使用した）に対する、３週間にわたる１０μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷでの実施例６の活性を示す。アッセイは方法実施例２および６にそれぞれ従って実施した。実施例６は、固形腫瘍の成長を阻害するが、マウスの体重に影響を及ぼさなかった。
【０１１１】
図６Ａおよび６Ｂは、３週間にわたる１、５、および１０μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷでの、ＦＲ陽性ＫＢ腫瘍（ｔ０の時点での平均腫瘍体積＝５０〜１００ｍｍ３）に、および実施例６の同じ濃度でのｎｕ／ｎｕマウスの体重（ｎｕ／ｎｕマウスはＫＢ腫瘍体積アッセイに使用した）にそれぞれ対する、実施例６の活性を示す。アッセイは方法実施例２および６にそれぞれ従って実施した。実施例６は、固形腫瘍の成長を阻害するが、マウスの体重にほとんど効果を持たない。
【０１１２】
図７Ａおよび７Ｂは、ＦＲ陽性ＫＢ腫瘍（ｔ０の時点での平均腫瘍体積＝１００〜１５０ｍｍ３）に対する、３週間にわたる１０μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷでの実施例６の活性を示す。実施例６対非結合ビンブラスチンの、Ｂａｌｂ／ｃマウスの体重に対する効果も示される。アッセイは方法実施例２および６にそれぞれ従って実施した。実施例６は、固形腫瘍の成長を阻害する。非結合ビンブラスチンは、最初にマウスの体重を減少させたが、マウスの体重は最終的に、おそらく腫瘍成長が理由で増加する。
【０１１３】
〔実施例７〕
2009504783.tif 000043
ＴＨＦ中のペプチジル断片Ｐｔｅ-Ｇｌｕ-Ａｓｐ-Ａｒｇ-Ａｓｐ-Ａｓｐ-Ｃｙｓ-ＯＨ（実施例１）を、黄色溶液のチオスルホナートまたはピリジルジチオ活性化ビンブラスチン（実施例５）のどちらかによって処理して、アルゴン存在下でｐＨ＞６．５の０．１Ｍ ＮａＨＣＯ３への溶解を生じた。凍結乾燥およびＨＰＬＣにより、収率７０％が得られた；選択された１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ８．６７（ｓ，１Ｈ，ＦＡ  Ｈ-７），７．５０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＶＬＢ  Ｈ-１１’），７．３０-７．４０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＶＬＢ  Ｈ-１４’），７．３５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，ＦＡ  Ｈ-１２＆１６），７．２５（ｍ，１Ｈ，ＶＬＢ  Ｈ-１３’），７．０５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＶＬＢ  Ｈ-１２’），６．５１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，ＦＡ  Ｈ-１３＆１５），６．４（ｓ，２Ｈ，ＶＬＢ  Ｈ-１４＆１７），５．７（ｍ，１Ｈ，ＶＬＢ  オレフィン），５．６５（ｍ，１Ｈ，ＶＬＢ  Ｈ-７），５．５（ｄ，１Ｈ，ＶＬＢ  オレフィン），５．５（ｍ，１Ｈ，ＶＬＢ  Ｈ-６），４．１５（ｍ，１Ｈ，ＶＬＢ  Ｈ-８’），３．８２（ｓ，３Ｈ，ＶＬＢ  Ｃ１８-ＣＯ２ＣＨ３），３．６９（ｓ，３Ｈ，ＶＬＢ  Ｃ１６-ＯＣＨ３），２．８（ｓ，３Ｈ，ＶＬＢ  Ｎ-ＣＨ３），１．３５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ，ＶＬＢ  Ｈ-３’），１．１５（ｍ，１Ｈ，ＶＬＢ  Ｈ-２’），０．９（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＶＬＢ  Ｈ-２１’），０．５５（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，ＶＬＢ  Ｈ-２１）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ，ｍ＋Ｈ＋）１９１８。図８は、葉酸塩対実施例７結合体の相対親和性を示す。アッセイは方法実施例４に従って実施した。
【０１１４】
図９Ａは、３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例７の効果、結合体（９ｎＭ）のＩＣ５０、および葉酸塩受容体への結合に関して葉酸塩が実施例７結合体と競合することを示し、結合体の結合特異性を証明している。図９Ｂは、実施例７の結合体（１００ｎＭ 実施例７）による処理ためのパルス時間に対する、３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例７の効果を、および葉酸塩受容体への結合に関して葉酸塩が実施例７の結合体と競合することを示し、結合体の結合特異性を証明している（１００ｎＭ 実施例７＋１００μＭ葉酸）。アッセイは方法実施例３に従って実施した。
【０１１５】
図１０Ａおよび１０Ｂは、実施例７の結合体による処理のパルス時間に対する、３Ｈ-チミジン取り込みへの１０および１００ｎＭの実施例７の効果を、そして葉酸塩受容体への結合に関して葉酸塩が実施例７の結合体と競合することを示し、結合体の結合特異性を証明している。アッセイは方法実施例３に従って実施した。
【０１１６】
図１１は、ＦＲ陽性ＫＢ腫瘍（ｔ０の時点での平均腫瘍体積＝５０〜１００ｍｍ３）に対する、３週間にわたる５μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷの実施例７の活性を示す。アッセイは方法実施例２に従って実施した。実施例7は、固形腫瘍の成長を阻害する。
【０１１７】
図１２は、ＦＲ陽性ＫＢ腫瘍に対する３週間にわたる５μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷの実施例７の活性を示す（ｎｕ／ｎｕマウスをＫＢ腫瘍容積アッセイに使用した）。アッセイは方法実施例２に従って実施した。実施例７および８は、固形腫瘍の成長を阻害する。
【０１１８】
図１３は、Ｂａｌｂ／ｃマウスのＭ１０９腫瘍に対する実施例7（１．５μｍｏｌ／ｋｇ）の活性を示す。 アッセイは方法実施例１に従って実施した。 実施例７は、固形腫瘍の成長を阻害する。
【０１１９】
図１４Ａおよび１４Ｂは、Ｂａｌｂ／ｃマウスのＭ１０９腫瘍に対する、およびＢａｌｂ／ｃマウスの体重（Ｂａｌｂ／ｃマウスはＭ１０９腫瘍体積アッセイに使用した）に対する、実施例７および８の活性を示す（それぞれ１０μｍｏｌ／ｋｇにて）。アッセイは方法実施例１および６にそれぞれ従って実施した。実施例７および８は、固形腫瘍の成長を阻害し、Ｂａｌｂ／ｃマウスの体重にほとんど効果を持たない。
【０１２０】
図１５は、ＦＲ陽性ＫＢ腫瘍+／-４０μｍｏｌ／ｋｇ ＥＣ２０（レニウム錯体）に対する、２週間にわたる２μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷの実施例７の活性を示す。実施例７は固形腫瘍の成長を阻害し、その阻害効果はＥＣ２０レニウム錯体によって防止（競合）される。ＥＣ２０（レニウム錯体）は、レニウムにキレート化された次の式：
2009504783.tif 000044
の化合物である。ＥＣ２０の調製は、米国特許出願公開第２００４／００３３１９５Ａ１号に記載されており、その合成手順の説明は参照により本明細書に組み入れられている。アッセイは方法実施例２に従って実施した。ＥＣ２０は、葉酸塩受容体において実施例７の競合相手として作用し、結果は、実施例７の効果の特異性を示している。
【０１２１】
図１６Ａおよび図１６Ｂは、ＦＲ陽性ＫＢ腫瘍に対する、３週間にわたる５μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷの実施例７および８の活性、ならびにｎｕ／ｎｕマウスの体重（ｎｕ／ｎｕマウスはＫＢ腫瘍体積アッセイに使用した）に対する、実施例７および８の効果を示す。アッセイは方法実施例２および６にそれぞれ従って実施した。結果は、ｎｕ／ｎｕマウスにおける皮下ＦＲ陽性ヒト上咽頭ＫＢ腫瘍異種移植片に対して、実施例７が実施例６よりも高い成長阻害活性を有することを示す。実施例７および８は、ｎｕ／ｎｕマウスの体重にはほとんど効果を持たない。
【０１２２】
実施例７は、次の表に示すように、ｓ．ｃ．ＫＢ腫瘍異種移植片を持つｎｕ／ｎｕマウスにおいて、非結合デスアセチルビンブラスチンヒドラジド（ＤＡＶＬＢＨ）よりも良好な治療指数を示した：
2009504783.tif 000045
（ａ）ＣＲは、対照群と比較して、試験化合物による処置に対し、完全寛解を示す動物の数（５回試験の合計）に相当する；（ｂ）％Ｔ／Ｃは、完全寛解を示していない動物の対照群に対する腫瘍率である；（ｃ）ＬＣＫは、完全寛解を示していない動物の細胞死滅の対数である；（ｄ）死亡５匹。
【０１２３】
〔実施例９〕
2009504783.tif 000046
方法実施例７の一般手順（スキーム１）により、Ｗａｎｇ樹脂結合４-メトキシトリチル（ＭＴＴ）保護ＣｙＳ-ＮＨ２を次のシーケンスに従って反応させた。１）ａ．Ｆｍｏｃ-β-アミノアラニン（ＮＨ-ＩｖＤｄｅ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；２）ａ．Ｆｍｏｃ-Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；３）ａ．Ｆｍｏｃ-Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；４）ａ．Ｆｍｏｃ-Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）-ＯＨ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；５）ａ．Ｆｍｏｃ-Ｇｌｕ-ＯｔＢｕ、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ；ｂ．２０％ピペリジン／ＤＭＦ；６）Ｎ１０-ＴＦＡ-プテロイン酸、ＰｙＢＯＰ、ＤＩＰＥＡ。ＭＴＴ、ｔＢｕ、およびＴＦＡ保護基は、ａ．２％ヒドラジン／ＤＭＦ；ｂ．ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ／ＴＩＰＳ／ＥＤＴ（９２．５：２．５：２．５：２．５）によって除去した。次の表に示す試薬を調製で使用した：
2009504783.tif 000047
【０１２４】
カップリング工程は次のように実施した：ペプチド合成容器に樹脂を添加し、アミノ酸のＤＭＦ溶液、ＤＩＰＥＡ、およびＰｙＢＯＰを添加する。アルゴンを１時間通気して、ＤＭＦおよびＩＰＡ １０ｍＬで３回洗浄する。各アミノ酸カップリング前に、Ｆｍｏｃ脱保護のためにＤＭＦ中の２０％ピペリジンを３回ｘ１０ｍＬ（１０分間）使用する。継続して６回のカップリング工程を完了させる。最後に樹脂を２％ヒドラジンのＤＭＦ希釈液によって３回ｘ１０ｍＬ（５分間）洗浄し、プテロイン酸のＴＦＡ保護基、およびβ-アミノアラニンのＩｖＤｄｅ保護基を開裂させる。最後に、ＤＩＰＥＡおよびＰｙＢｏｐを使用し、β-アミノアラニンの遊離アミンをＦｍｏｃ-チオプロピオン酸とＤＭＦ中でカップリングさせる。アルゴンを１時間通気して、ＤＭＦおよびＩＰＡ １０ｍＬで３回洗浄する。樹脂をアルゴン存在下で３０分間乾燥させる。
【０１２５】
次の試薬、９２．５％（５０ｍｌ）ＴＦＡ、２．５％（１．３４ｍｌ）Ｈ２Ｏ、２．５％（１．３４ｍｌ）トリイソプロピルシラン、２．５％（１．３４ｍｌ）エタンジチオールを使用して樹脂からペプチド類似体を開裂させ、開裂工程を次のように実施した：開裂試薬２５ｍｌを添加して、１．５時間通気し、排出させて、残りの試薬で３回洗浄した。約５ｍＬまで蒸発させて、エチルエーテル中に沈殿させる。遠心分離にかけて、乾燥させる。精製は次のように実施した。カラム-Ｗａｔｅｒｓ  ＮｏｖａＰａｋ  Ｃ１８  ３００ｘｌ９ｍｍ；緩衝液Ａ＝１０ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ５；Ｂ＝ＣＡＮ；１％Ｂ〜２０％Ｂ、１５  ｍｌ／分にて４０分間、４５０ｍｇ（６５％）まで；１Ｈ ＨＭＲスペクトルは割り当てられた構造と一致。
【０１２６】
〔実施例１０〕
2009504783.tif 000048
ポリプロピレン遠心分離ボトル内で、実施例２（８２ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）を水５ｍＬに溶解させて、アルゴンを１０分間通気した。別のフラスコで０．１Ｎ ＮａＨＣＯ３溶液に１０分間アルゴンを通気した。リンカー溶液のｐＨは、０．１Ｎ ＮａＨＣＯ３溶液を使用して約６．９に調整した。テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）５ｍＬ中のビンブラスチンヒドラジド誘導体（実施例５、９１ｍｇ、０．０９２ｍＭ）を上記溶液にゆっくり添加した。得られた透明溶液をアルゴン存在下で１５分間〜１時間撹拌した。反応の進行は、分析ＨＰＬＣ（１０ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ＝７．０、およびアセトニトリル）によって監視した。ＴＨＦを蒸発させて、水溶液を濾過して、分取精製ＨＰＬＣカラム（ＸＴｅｒｒａ  Ｃｏｌｕｍｎ，１９Ｘ３００ｍＭ）に注入した。１ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ＝７．０およびアセトニトリルによる溶出は、生成物を含有する純粋な画分を生じ、生成物は４８時間の凍結乾燥後に単離した（７８ｍｇ、５０％）；Ｃ８３Ｈ１０３Ｎ１９Ｏ２６Ｓ２；正確な質量：１８４５．６８；ＭＷ：１８４６．９５；ＨＰＬＣ-ＲＴ  １５．１１３分、純度１００％、１Ｈ ＨＭＲスペクトルは割り当てられた構造と一致した。ＭＳ（ＥＳ-）：１８４６．６、１８４５．５、９３３．３、９２４．２、９２３．３、９２２．５、６１５．６、  ６１４．７、５２５．０。
【０１２７】
図２１Ａおよび図２１Ｂは、葉酸塩対実施例１０の相対結合親和性、および３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例１０の効果、結合体のＩＣ５０（５８ｎＭ）と、葉酸塩が葉酸塩受容体への結合で結合体と競合することを示し、結合体の結合特異性を証明している。アッセイは方法実施例４および３にそれぞれ従って実施した。
【０１２８】
〔実施例１１〕
2009504783.tif 000049
実施例３を実施例５の代わりに使用することを除いて、実施例７に従って調製した。アルゴンを実施例３（３０２ｍｇ）の５ｍｌ水溶液に１０分間通気した。この溶液のｐＨは、飽和ＮａＨＣＯ３溶液を使用して６．８〜７．０に調整した。５ｍＬのＴＨＦ中の実施例５（２５８ｍｇ）を溶液に添加して、３０分間撹拌した。溶媒を蒸発させて、得られた混合物を濾過した。濾液を分取精製ＨＰＬＣによって（溶媒Ａ-１ｍＭリン酸塩緩衝液；溶媒Ｂ-アセトニトリル；Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｔｅｒｒａ  Ｃ１８，１９ｍｍＸ３００ｍｍ；勾配-３０分間で５％ Ｂ〜５０％ Ｂ）２４０ｍｇまで精製した；１Ｈ ＨＭＲスペクトルは割り当てられた構造と一致；ＭＳ（ＥＳＩ，ｍ＋Ｈ＋）１９１７．９，９６０．９，９６０．２，９５９．３，８１３．１，８１２．３，８０３．０，２９５．０。
【０１２９】
〔実施例１２〕
2009504783.tif 000050
実施例４を実施例５の代わりに使用することを除いて、実施例７に従って調製した。アルゴンを実施例４（４０ｍｇ）の水５ｍｌ中溶液に１０分間通気した。この溶液のｐＨは、飽和ＮａＨＣＯ３溶液を使用して６．８〜７．０に調整した。ＴＨＦ ５ｍＬ中の実施例５（３０ｍｇ）を溶液に添加して、３０分間撹拌した。溶媒を蒸発させて、得られた混合物を濾過した。濾液を分取精製ＨＰＬＣによって（溶媒Ａ-１ｍＭリン酸塩緩衝液；溶媒Ｂ-アセトニトリル；Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｔｅｒｒａ  Ｃ１８，１９ｍｍＸ３００ｍｍ；勾配-３０分間で５％ Ｂ〜５０％ Ｂ）４３ｍｇまで精製した；１Ｈ ＨＭＲスペクトルは割り当てられた構造と一致した。ＭＳ（ＥＳ-）：１９１７．５，１９１６．５，１９１５．６，９５９．２，９５８．４。
【０１３０】
図２６Ａおよび図２６Ｂは、ＦＲ陽性ＫＢ腫瘍に対する、ならびにｎｕ／ｎｕマウスの体重（ｎｕ／ｎｕマウスはＫＢ腫瘍体積アッセイに使用した）に対する、３週間にわたる２μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷの実施例１１および１２の活性を示す。アッセイは方法実施例２および６にそれぞれ従って実施した。実施例１１および１２は、固形腫瘍の成長を阻害するが、マウスの体重にほとんど効果を持たない。
【０１３１】
〔実施例１３〕
2009504783.tif 000051
ポリプロピレン遠心分離ボトル内で、実施例９（５６ｍｇ）を水７．５ｍＬに溶解させて、アルゴンを１０分間通気した。別のフラスコで０．１Ｎ ＮａＨＣＯ３溶液に１０分間アルゴンを通気した。実施例９溶液のｐＨは、０．１Ｎ ＮａＨＣＯ３溶液を使用して６．９に調整した。テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）７．５ｍＬ中の実施例５（４４ｍｇ）を実施例９溶液にゆっくり添加した。得られた透明溶液をアルゴン存在下で１５分間〜１時間撹拌した。反応の進行は、分析ＨＰＬＣ（１０ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ＝７．０、およびアセトニトリル）によって監視した。ＴＨＦを蒸発させて、水溶液を濾過して、分取精製ＨＰＬＣによって精製した。ｐＨ＝７．０の１ｍＭリン酸ナトリウムおよびアセトニトリルによる溶離は純粋な画分を生じ、この画分をプールして、周囲温度にて蒸発させて、得られた水溶液は０．１Ｎ ＨＣｌを使用してｐＨ４．０に調整した。実施例１３は、４８時間の凍結乾燥後に単離した（６１ｍｇ、６４％）。１Ｈ ＨＭＲスペクトルおよびＬＣＭＳデータは、割り当てられた構造と一致した。
【０１３２】
〔実施例１４〜３２〕
本明細書に記載するプロセスおよび条件に従って調製した。要求されたチオスルホナートまたはピリジルジチオ活性化ブンブラスチン、およびマレイミド活性化ビンブラスチン誘導体の調製についてのさらなる詳細は、米国特許出願公開第２００５／０００２９４２Ａ１号に記載されている。
【０１３３】
〔実施例１４〕
2009504783.tif 000052
【０１３４】
〔実施例１５〕
2009504783.tif 000053
【０１３５】
図１７は、実施例１４（ａ）および１５（ｂ）の３Ｈ-チミジン取り込みに対する効果（最初の２本の棒グラフ；それぞれ１００ｎＭにて１時間、７２時間追跡、ｎ＝２）と、葉酸塩受容体への結合について葉酸塩が実施例１４および１５と競合することを示し、結合体の結合特異性を証明する（後の２本の棒グラフ）。アッセイは方法実施例３に従って実施した。
【０１３６】
〔実施例１６］
2009504783.tif 000054
図１８は、実施例１６の３Ｈ-チミジン取り込みに対する効果（２時間パルス、４８時間追跡、ｎ＝２）と、葉酸塩受容体への結合について葉酸塩が実施例１６と競合することを示し、結合体の結合特異性を証明している。アッセイは方法実施例３に従って実施した。
【０１３７】
〔実施例１７〕
2009504783.tif 000055
図１９Ａは、非結合ビンカの３Ｈ-チミジン取り込みに対する効果を示す。図１９Ｂは、実施例１７の３Ｈ-チミジン取り込みに対する効果を示す。アッセイは方法実施例３に従って実施した。
【０１３８】
〔実施例１８〕
2009504783.tif 000056
【０１３９】
〔実施例１９〕
2009504783.tif 000057
【０１４０】
図２０Ａ、２０Ｂ、および２０Ｃは、実施例７と比較した、葉酸塩対実施例１８および１９の相対結合親和性（図２０）と、３Ｈ-チミジン取り込みに対するその効果（図２０Ｂおよび２０Ｃ）と、葉酸塩受容体への結合について葉酸塩が結合体と競合することを示し、結合体の結合特異性を証明している。アッセイは方法実施例３（図２０Ｂおよび２０Ｃ）および方法実施例４（図２０）に従って実施した。
【０１４１】
〔実施例２０〕
2009504783.tif 000058
図２２は、３Ｈ-チミジン取り込みへの実施例２０の効果と、葉酸塩受容体への結合について葉酸塩が結合体と競合することを示し、結合体の結合特異性を証明している。アッセイは方法実施例３に従って実施した。
【０１４２】
〔実施例２１〕
2009504783.tif 000059
図２３Ａおよび図２３Ｂは、葉酸塩対実施例２１の相対結合親和性と、３Ｈ-チミジン取り込みへの実施例２１の効果と、葉酸塩受容体への結合について葉酸塩が結合体と競合することを示し、結合体の結合特異性を証明している。アッセイは方法実施例４および３にそれぞれ従って実施した。
【０１４３】
〔実施例２２〕
2009504783.tif 000060
図２４Ａおよび２４Ｂは、葉酸塩対実施例２２の相対結合親和性と、３Ｈ-チミジン取り込みへの実施例２２の効果を示す。アッセイは方法実施例４および３にそれぞれ従って実施した。
【０１４４】
実施例２１および２２の実施例７に対する活性の比較
図２５Ａおよび図２５Ｂは、Ｂａｌｂ／ｃマウスのＭ１０９腫瘍に対する、（それぞれ３μｍｏｌ／ｋｇにて）、およびＢａｌｂ／ｃマウスの体重（Ｂａｌｂ／ｃマウスはＭ１０９腫瘍体積アッセイに使用した）に対する、１４Ｂと比較した実施例２１および２２の活性を示す。アッセイは方法実施例１および６にそれぞれ従って実施した。実施例２１、２２および７は、固形腫瘍の成長を阻害するが、マウスの体重にほとんど効果を持たない。
【０１４５】
〔実施例２３〕
2009504783.tif 000061
図２７Ａおよび図２７Ｂは、葉酸塩対実施例２３の相対結合親和性と、３Ｈ-チミジン取り込みへの実施例２３の効果と、結合体のＩＣ５０（１５ｎＭ）と、葉酸塩受容体への結合について葉酸塩が結合体と競合することを示し、結合体の結合特異性を証明している。アッセイは方法実施例４および３にそれぞれ従って実施した。
【０１４６】
〔実施例２４〕
2009504783.tif 000062
図２８Ａおよび図２８Ｂは、葉酸塩対実施例２４の相対結合親和性と、３Ｈ-チミジン取り込みへの実施例２４の効果、結合体のＩＣ５０（９ｎＭ）と、葉酸塩受容体への結合について葉酸塩が結合体と競合することを示し、結合体の結合特異性を証明している。アッセイは方法実施例４および３にそれぞれ従って実施した。
【０１４７】
〔実施例２５〕
2009504783.tif 000063
Ｃ１１６Ｈ１４０Ｎ３０Ｏ３２Ｓ２；ｍｏｌ重量：２５３０．６７；正確な質量：２５２８．９７；Ｃ，５５．０５；Ｈ，５．５８；Ｎ，１６．６０；Ｏ，２０．２３；Ｓ，２．５３。
【０１４８】
〔実施例２６〕
2009504783.tif 000064
【０１４９】
〔実施例２７〕
2009504783.tif 000065
【０１５０】
〔実施例２８〕
2009504783.tif 000066
【０１５１】
〔実施例２９〕
2009504783.tif 000067
【０１５２】
〔実施例３０〕
2009504783.tif 000068
【０１５３】
〔実施例３１〕
2009504783.tif 000069
【０１５４】
〔実施例３２〕
2009504783.tif 000070
【０１５５】
次の表は、ＫＢ細胞への活性、葉酸塩受容体競合、および本明細書に記載する選択された薬物送達結合体への相対葉酸塩受容体親和性の要約である：
2009504783.tif 000071
【図面の簡単な説明】
【０１５６】
【図１Ａ】３７℃、１時間における、葉酸受容体の実施例６（■、０．３５）対葉酸（●、１．０）の相対結合親和性を示す。
【図１Ｂ】過剰な葉酸を含む（■）および含まない（●）場合の３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例６の活性を示す；実施例６のＩＣ５０＝１４ｎＭ。
【図２】未処置対照群（●）と対比した、Ｂａｌｂ／ｃマウスのＭ１０９腫瘍に対して１．５μｍｏｌ／ｋｇで与えられたＴＩＷ（７回用量）の実施例６（■）の活性を示す。
【図３】未処置対照群（ａ）と対比した、ＦＲ陽性Ｍ１０９腫瘍に３週間にわたって１０μｍｏｌ／ｋｇで与えられたＴＩＷの実施例６（ｂ）の活性を示す（垂直点線は最終の処置日を示す）。
【図４Ａ】未処置対照群（■）と対比した、ＦＲ陽性Ｍ１０９腫瘍に対する３週間にわたる３μｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷでの実施例６（▲）の活性を示す。
【図４Ｂ】未処置対照群（ａ）と対比し、ＦＲ陰性４Ｔ-１腫瘍細胞に対する３週間にわたる３μｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷの実施例６（ｂ）の活性がないことを示す。
【図５Ａ】未処置対照群（■）と対比した、ｎｕ／ｎｕマウスにおけるＦＲ陽性ＫＢ腫瘍に対する３週間にわたる１０μｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷの実施例６（●）の活性を示す。
【図５Ｂ】未処置対照群（■）と対比し、ｎｕ／ｎｕマウスの体重に対する３週間にわたる１０μｍｏｌ／ｋｇＴＩＷの実施例６（●）による効果がないことを示す。
【図６Ａ】未処置対照群（ａ）と対比した、ｎｕ／ｎｕマウスにおけるＦＲ陽性ＫＢ腫瘍に対する３週間にわたる（垂直点線は最終処置日を示した）１μｍｏｌ／ｋｇ（ｂ）、５μｍｏｌ／ｋｇ（ｃ）、および１０μｍｏｌ／ｋｇ（ｄ）ＴＩＷの実施例６の活性を示す；ｔ０の時点で平均腫瘍体積＝５０〜１００ｍｍ３。
【図６Ｂ】未処置対照群（ａ）と対比し、ｎｕ／ｎｕマウスの体重に対する３週間にわたる１μｍｏｌ／ｋｇ（ｂ）、５μｍｏｌ／ｋｇ（ｃ）、および１０μｍｏｌ／ｋｇ（ｄ）ＴＩＷの実施例６による効果がないことを示す。
【図７Ａ】未処置対照群（ａ）と対比した、ｎｕ／ｎｕマウスにおける大型ＦＲ陽性ＫＢ腫瘍に対する３週間にわたる（垂直点線は最終処置日を示した）１０μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷでの実施例６（ｂ）の活性を示す；ｔ０の時点で平均腫瘍体積＝１００〜１５０ｍｍ３。
【図７Ｂ】非結合デスアセチルビンブラスチンモノヒドラジド（ｂ）と対比し、ｎｕ／ｎｕマウスの体重に対する３週間にわたる（垂直点線は最終処置日を示した）１０μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷの実施例６（ａ）による効果がないこと示す。
【図８】葉酸受容体における葉酸（●）と対比した、実施例７（ｂ、０．２）の相対結合親和性を示す。
【図９Ａ】過剰な葉酸を含む（ａ）および含まない（ｂ）場合の、ＦＲ陽性ＫＢ細胞中への３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例7の活性を示す；実施例7のＩＣ５０＝９ｎＭ。
【図９Ｂ】治療のパルス時間に対しての、過剰な葉酸を含む（ａ）および含まない（ｂ）場合の、ＦＲ陽性ＫＢ細胞への３Ｈ-チミジン取り込みでの１００ｎＭにおける実施例７の活性に対するインキュベーション時間の効果を示す。
【図１０Ａ】治療のパルス時間に対しての、過剰な葉酸を含む（ａ）および含まない（ｂ）場合の、４８時間で収集された２００２ＫＢ細胞への３Ｈ-チミジン取り込みでの１０ｎＭにおける実施例７の活性に対するインキュベーション時間の効果を示す。
【図１０Ｂ】治療のパルス時間に対しての、過剰な葉酸を含む（ａ）および含まない（ｂ）、４８時間で収集された２００２ＫＢ細胞への３Ｈ-チミジン取り込みでの１００ｎＭにおける実施例７の活性に対するインキュベーション時間の効果を示す。
【図１１】未処置対照群（■）に対しての、ＦＲ陽性ＫＢ腫瘍に対する３週間にわたる５μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷの実施例７（▼）の活性を示す；ｔ０の時点の平均腫瘍体積＝５０〜１００ｍｍ３。
【図１２】未処置対照群（ａ）と対比した、ｎｕ／ｎｕマウスにおけるＦＲ陽性ＫＢ腫瘍に対する３週間にわたる（垂直点線は最終処置日を示した）５μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷの実施例６および１４Ｂ（それぞれ（ｂ）および（ｃ））の活性を示す；ｔ０の時点で平均腫瘍体積＝５０〜８０ｍｍ３；実施例７は５／５の完全寛解を示す。
【図１３】未処置対照群（■）と対比した、Ｂａｌｂ／ｃマウスのＭ１０９腫瘍に対する１．５μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷの実施例7（■）の活性を示す。
【図１４Ａ】未処置対照群（ａ）と対比した、Ｂａｌｂ／ｃマウスのＭ１０９腫瘍に対する３週間にわたる（垂直点線は最終処置日を示した）それぞれ１０μｍｏｌ／ｋｇでの実施例６および７（それぞれ（ｂ）および（ｃ））の活性を示す；ｔ０の時点で平均腫瘍体積＝５０〜８０ｍｍ３。
【図１４Ｂ】Ｂａｌｂ／ｃマウスの体重に対し、３週間にわたる（垂直点線は最終処置日を示した）（それぞれ１０μｍｏｌ／ｋｇでの）実施例６および７（それぞれ（ｂ）および（ｃ））による効果がないことを示す。
【図１５】未処置対照群（ａ）と対比した、４０μｍｏｌ／ｋｇ ＥＣ２０（レニウム錯体）を含む（ｂ）および（ｃ）含まない場合のＦＲ陽性ＫＢ腫瘍に対する２週間にわたる２μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷでの実施例７の活性を示す；実施例７のみが４／５の完全寛解を示した；実施例７＋ＥＣ２０は０／５の完全寛解を示した。
【図１６Ａ】未処置対照群（ａ）と対比した、ｎｕ／ｎｕマウスにおけるＦＲ陽性ＫＢ腫瘍に対する３週間にわたる５μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷの実施例６および７（それぞれ（ｂ）および（ｃ））の活性を示す。
【図１６Ｂ】ｎｕ／ｎｕマウスの体重に対する３週間にわたる（それぞれ５μｍｏｌ／ｋｇでの）実施例６および７（それぞれ（ｂ）および（ｃ））の効果がないことを示す。
【図１７】ＦＲ陽性ＫＢ細胞への３Ｈ-チミジン取り込みに対する、実施例１４（ａ）および１５（ｂ）単独（左側棒グラフ：それぞれ１００ｎＭにて１時間、７２時間追跡、ｎ＝２）の、過剰な葉酸を含む同じ条件下での実施例１４（ａ）および１５（ｂ）（右側棒グラフ）と対比した活性を示す。
【図１８】ＫＢ細胞での３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例１６の活性を示す；ＩＣ５０は約２５０ｎＭである。
【図１９Ａ】ＫＢ細胞での３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例５の活性を示す。
【図１９Ｂ】ＫＢ細胞での３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例１７の活性を示す。
【図２０Ａ】葉酸受容体における、葉酸（ａ、１．０）に対しての、実施例１９（ｂ、０．０４６）、実施例１８（ｃ、０．１３）、および実施例７（ｄ）の相対結合親和性を示す。
【図２０Ｂ】過剰な葉酸を含む（ｂ）および含まない（ａ）場合のＫＢ細胞での３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例７の活性を示す；実施例７のＩＣ５０は約１６ｎＭである；そして過剰な葉酸を含む（ｄ）および含まない（ｃ）２００２ＫＢ細胞での３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例１９の活性を示す；実施例１９のＩＣ５０は約１００ｎＭである。
【図２０Ｃ】過剰な葉酸を含む（ｂ）および含まない（ａ）２００２ＫＢ細胞での３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例１８の活性を示す；実施例１８のＩＣ５０は約６ｎＭである。
【図２１Ａ】葉酸受容体における実施例１０（■、０．２４）対葉酸（●、１．０）の相対結合親和性を示す。
【図２１Ｂ】過剰な葉酸を含む（〇）および含まない（●）場合のＫＢ細胞への３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例１０の活性を示す；実施例１０のＩＣ５０は約５８ｎＭである。
【図２２】過剰な葉酸を含む（〇）および含まない（●）場合のＫＢ細胞への３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例２０の活性を示す；実施例２０のＩＣ５０は約５８ｎＭである。
【図２３Ａ】葉酸受容体における実施例２１（■、０．１６）対葉酸（●、１．０）の相対結合親和性を示す。
【図２３Ｂ】過剰な葉酸を含む（〇）および含まない（●）ＫＢ細胞への３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例２１の活性を示す。
【図２４Ａ】葉酸受容体における実施例２２（○、０．２６）対葉酸（●、１．０）に対しての、の相対結合親和性を示す。
【図２４Ｂ】過剰な葉酸を含む（〇）および含まない（●）ＫＢ細胞への３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例２２の活性を示す。
【図２５】Ｂａｌｂ／ｃマウスのＭ１０９腫瘍に対して、およびＢａｌｂ／ｃマウスの体重（Ｂａｌｂ／ｃマウスはＭ１０９腫瘍体積アッセイに使用した）に対する、７と比較した実施例２１および２２の活性を示す（それぞれ３μｍｏｌ／ｋｇにて）。図２５Ａは、未処置対照群（■）と対比した、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるＦＲ陽性Ｍ１０９腫瘍に対する３週間にわたるそれぞれ３μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷの実施例７（●）、実施例２１（▲）、および実施例２２（▼）の活性を示す。図２５Ｂは、未処置対照群（■）と対比した、Ｂａｌｂ／ｃマウスの体重に対する３週間にわたるそれぞれ３μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷでの実施例７（●）、実施例２１（▲）、および実施例２２（▼）による効果の非存在を示す。
【図２６】ＦＲ陽性ＫＢ腫瘍に対する、およびｎｕ／ｕｎマウスの体重（ｎｕ／ｕｎマウスはＫＢ腫瘍体積アッセイに使用した）に対する、３週間にわたる２μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷにおける実施例１１および１２の活性を示す。図２６Ａは、未処置対照群（■）と対比した、ｎｕ／ｎｕマウスにおけるＦＲ陽性ＫＢ腫瘍に対する３週間にわたる２μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷの実施例１１（●）および実施例１２（▼）の活性を示す。図２６Ｂは、未処置対照群（■）と対比し、ｎｕ／ｎｕマウスの体重に対する３週間にわたる２μｍｏｌ／ｋｇ ＴＩＷの実施例１１（●）および実施例１２（▼）による効果がないことを示す。
【図２７】葉酸塩対実施例２３の相対結合親和性、および３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例２３の効果、結合体のＩＣ５０（１５ｎＭ）と、葉酸塩が葉酸塩受容体への結合に際し結合体と競合することを示し、結合体の結合特異性を示している。アッセイは方法実施例４および３にそれぞれ従って実施した。図２７Ａは、葉酸受容体における実施例２３（■、０．５１）対葉酸（●、１．０）の相対結合親和性を示す。図２７Ｂは、過剰な葉酸を含む（〇）および含まない（●）場合のＫＢ細胞への３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例２３の活性を示す；実施例２３のＩＣ５０は約１５ｎＭである。
【図２８】実施例２４に対する葉酸塩の相対親和性効果、および３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例２４の効果、結合体のＩＣ５０（９ｎＭ）と、葉酸塩が葉酸塩受容体への結合に際し結合体と競合することを示し、結合体の結合特異性を証明している。図２８Ａは、葉酸受容体における実施例２４（■、０．４５）対葉酸（●、１．０）の相対結合親和性を示す。図２８Ｂは、過剰な葉酸を含む（〇）および含まない（●）ＫＢ細胞での３Ｈ-チミジン取り込みに対する実施例２４の活性を示す；実施例２４のＩＣ５０は約９ｎＭである。
【図１Ａ】
2009504783.tif 000078
【図１Ｂ】
2009504783.tif 000079
【図２】
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【図３】
2009504783.tif 000081
【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
2009504783.tif 000084
【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
2009504783.tif 000086
【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
2009504783.tif 000095
【図１２】
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【図１３】
2009504783.tif 000097
【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
2009504783.tif 000099
【図１５】
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【図１６Ａ】
2009504783.tif 000101
【図１６Ｂ】
2009504783.tif 000102
【図１７】
2009504783.tif 000103
【図１８】
2009504783.tif 000104
【図１９Ａ】
2009504783.tif 000105
【図１９Ｂ】
2009504783.tif 000106
【図２０Ａ】
2009504783.tif 000107
【図２０Ｂ】
2009504783.tif 000108
【図２０Ｃ】
2009504783.tif 000109
【図２１Ａ】
2009504783.tif 000110
【図２１Ｂ】
2009504783.tif 000111
【図２２】
2009504783.tif 000112
【図２３Ａ】
2009504783.tif 000113
【図２３Ｂ】
2009504783.tif 000114
【図２４Ａ】
2009504783.tif 000115
【図２４Ｂ】
2009504783.tif 000116
【図２５Ａ】
2009504783.tif 000117
【図２５Ｂ】
2009504783.tif 000118
【図２６Ａ】
2009504783.tif 000119
【図２６Ｂ】
2009504783.tif 000120
【図２７Ａ】
2009504783.tif 000121
【図２７Ｂ】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【国際調査報告】
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