(57)【要約】  神経ペプチドを使用して、1種以上の血液細胞型の数の減少を有する哺乳動物を治療する。筋肉内投与、又は吸入を介しての投与は、該血液細胞数の増加をもたらす。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
1種以上の血液細胞型の減少を治療する方法であって：有効量のサブスタンスP又はその類似体を、1種以上の血液細胞型が減少している哺乳動物に筋肉注射することを含み、前記類似体が、[Met-OH11]-サブスタンスP、[Met-OMe11]-サブスタンスP、[Nle11]-サブスタンスP、[Pro9]-サブスタンスP、[Sar 9]-サブスタンスP、[Tyr 8]-サブスタンスP、[p-Cl-Phe 7,8]-サブスタンスP、[Sar 9,Met (O2)11]-サブスタンスP、及びアミノ酸主鎖 RPKPQQFFGLM-NH2 (配列番号：1)を有する類似体からなる群から選択され；前記血液細胞型が、赤血球、白血球、及び血小板からなる群から選択され；これにより前記血液細胞型の少なくとも1種の数を増加させる、前記方法。
【請求項２】
サブスタンスPが注射される、請求項1記載の方法。
【請求項３】
[Met-OH11]-サブスタンスPが注射される、請求項1記載の方法。
【請求項４】
[Met-OMe11]-サブスタンスPが注射される、請求項1記載の方法。
【請求項５】
[Nle11]-サブスタンスPが注射される、請求項1記載の方法。
【請求項６】
[Pro9]-サブスタンスPが注射される、請求項1記載の方法。
【請求項７】
[Sar 9]-サブスタンスPが注射される、請求項1記載の方法。
【請求項８】
[Tyr 8]-サブスタンスPが注射される、請求項1記載の方法。
【請求項９】
[p-Cl-Phe 7,8]-サブスタンスPが注射される、請求項1記載の方法。
【請求項１０】
[Sar 9,Met (O2)11]-サブスタンスPが注射される、請求項1記載の方法。
【請求項１１】
前記哺乳動物がヒトである、請求項1記載の方法。
【請求項１２】
前記ヒトが、治療前に2000個未満の白血球数を有する、請求項11記載の方法。
【請求項１３】
前記ヒトが、治療前に1500個未満の白血球数を有する、請求項11記載の方法。
【請求項１４】
前記ヒトが、治療前に1000個未満の白血球数を有する、請求項11記載の方法。
【請求項１５】
前記ヒトが、治療前に500個未満の白血球数を有する、請求項11記載の方法。
【請求項１６】
前記ヒトが、治療前に、1マイクロリットルあたり、女性の場合には4.2×106個未満、及び男性の場合には4.7×106個未満の赤血球数を有する、請求項11記載の方法。
【請求項１７】
治療前に、前記ヘモグロビン数が、女性の場合には1デシリットルあたり12グラム未満、又は男性の場合には1デシリットルあたり13.8グラム未満である、請求項11記載の方法。
【請求項１８】
前記ヘマトクリットが、治療前に、男性の40%未満、及び女性の場合には36％未満である、請求項11記載の方法。
【請求項１９】
前記血小板数が、治療前に、1平方ミリメートルあたり150,000個未満である、請求項11記載の方法。
【請求項２０】
前記注射ステップの後に、1種以上の血液細胞型の数をモニタリングすることをさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項２１】
前記注射ステップの前に、1種以上の血液細胞型の数をモニタリングすることをさらに含む、請求項1記載の方法。
【請求項２２】
前記注射ステップの後に、前記数値が、該哺乳動物についての正常範囲内の値に増加する、請求項1記載の方法。
【請求項２３】
前記哺乳動物がウシ科である、請求項1記載の方法。
【請求項２４】
前記哺乳動物がイヌである、請求項1記載の方法。
【請求項２５】
前記哺乳動物がネコである、請求項1記載の方法。
【請求項２６】
前記ヒトが放射線に被曝したヒトである、請求項1記載の方法。
【請求項２７】
前記ヒトが、致死量の放射線に被曝したヒトである、請求項1記載の方法。
【請求項２８】
前記血液細胞型の数が、疾患に起因して減少している、請求項1記載の方法。
【請求項２９】
前記血液細胞型の数が、薬剤の副作用に起因して減少している、請求項1記載の方法。
【請求項３０】
少なくとも1種の血液細胞型の数が、前記注射ステップの前及び後に測定される、請求項1記載の方法。
【請求項３１】
1種以上の血液細胞型の減少を治療する方法であって：有効量のサブスタンスP又はその類似体を、1種以上の血液細胞型が減少している哺乳動物に吸入を介して投与することを含み、前記類似体が、[Met-OH11]-サブスタンスP、[Met-OMe11]-サブスタンスP、[Nle11]-サブスタンスP、[Pro9]-サブスタンスP、[Sar 9]-サブスタンスP、[Tyr 8]-サブスタンスP、[p-Cl-Phe 7,8]-サブスタンスP、[Sar 9,Met (O2)11]-サブスタンスP、及びアミノ酸主鎖 RPKPQQFFGLM-NH2 (配列番号：1)を有する類似体からなる群から選択され；前記血液細胞型が、赤血球、白血球、及び血小板からなる群から選択され；これにより前記血液細胞型の少なくとも1種の数を増加させる、前記方法。
【請求項３２】
サブスタンスPが投与される、請求項31記載の方法。
【請求項３３】
[Met-OH11]-サブスタンスPが投与される、請求項31記載の方法。
【請求項３４】
[Met-OMe11]-サブスタンスPが投与される、請求項31記載の方法。
【請求項３５】
[Nle11]-サブスタンスPが投与される、請求項31記載の方法。
【請求項３６】
[Pro9]-サブスタンスPが投与される、請求項31記載の方法。
【請求項３７】
[Sar 9]-サブスタンスPが投与される、請求項31記載の方法。
【請求項３８】
[Tyr 8]-サブスタンスPが投与される、請求項31記載の方法。
【請求項３９】
[p-Cl-Phe 7,8]-サブスタンスPが投与される、請求項31記載の方法。
【請求項４０】
[Sar 9,Met (O2)11]-サブスタンスPが投与される、請求項31記載の方法。
【請求項４１】
前記哺乳動物がヒトである、請求項31記載の方法。
【請求項４２】
前記ヒトが、治療前に2000個未満の白血球数を有する、請求項41記載の方法。
【請求項４３】
前記ヒトが、治療前に1500個未満の白血球数を有する、請求項41記載の方法。
【請求項４４】
前記ヒトが、治療前に1000個未満の白血球数を有する、請求項41記載の方法。
【請求項４５】
前記ヒトが、治療前に500個未満の白血球数を有する、請求項41記載の方法。
【請求項４６】
前記ヒトが、治療前に、1マイクロリットルあたり、女性の場合には4.2×106個未満、及び男性の場合には4.7×106個未満の赤血球数を有する、請求項41記載の方法。
【請求項４７】
治療前に、前記ヘモグロビン数が、女性の場合には1デシリットルあたり12グラム未満、又は男性の場合には1デシリットルあたり13.8グラム未満である、請求項41記載の方法。
【請求項４８】
前記ヘマトクリットが、治療前に、男性の40%未満、及び女性の場合には36％未満である、請求項41記載の方法。
【請求項４９】
前記血小板数が、治療前に、1立方ミリメートルあたり150,000個未満である、請求項41記載の方法。
【請求項５０】
前記注射ステップの後に、1種以上の血液細胞型の数をモニタリングすることをさらに含む、請求項31記載の方法。
【請求項５１】
前記投与ステップの前に、1種以上の血液細胞型の数をモニタリングすることをさらに含む、請求項31記載の方法。
【請求項５２】
前記投与ステップの後に、前記数値が、該哺乳動物についての正常範囲内の値に増加する、請求項31記載の方法。
【請求項５３】
前記哺乳動物がウシ科である、請求項31記載の方法。
【請求項５４】
前記哺乳動物がイヌである、請求項31記載の方法。
【請求項５５】
前記哺乳動物がネコである、請求項31記載の方法。
【請求項５６】
前記ヒトが、放射線に被曝したヒトである、請求項31記載の方法。
【請求項５７】
前記ヒトが、致死量の放射線に被曝したヒトである、請求項31記載の方法。
【請求項５８】
前記血液細胞型の数が、疾患に起因して減少している、請求項31記載の方法。
【請求項５９】
前記血液細胞型の数が、薬剤の副作用に起因して減少している、請求項31記載の方法。
【請求項６０】
少なくとも1種の血液細胞型の数が、前記投与ステップの前及び後に測定される、請求項31記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、血液学の分野に関する。特に、本発明は、全ての原因由来の血液細胞の減少（depletion）に関する。より詳細には、本発明は、減少した血液細胞集団を有する個人の治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
赤血球は、酸素に結合し、身体を巡って酸素を輸送するヘモグロビンを発現する。組織の適切な酸素化は、一般的に赤血球、特にヘモグロビンの量及び機能に依存する。赤血球数の正常範囲は、男性については4.7〜6.1×106細胞/μl、及び女性については4.2〜5.4×106細胞/μlである。
【０００３】
赤血球は、貧血、溶血性貧血、出血、骨髄不全、腎疾患、白血病、多発性骨髄腫、栄養失調、グルコース-6-リン酸脱水素酵素の遺伝的欠損、及び鉄、葉酸、ビタミンB-12又はビタミンB-6の欠乏に起因して減少し得る。クロラムフェニコール、ヒダントイン、及びキニジンなどの薬剤は、赤血球数を減少させることができる。
【０００４】
血小板は、血液の適切な凝固に必要である。血小板数の低下は、骨髄機能不全（例えば、再生不良性貧血、癌、感染に起因する）、免疫血小板減少性紫斑病、薬剤誘導性血小板減少症（癌の化学療法など）、血栓性血小板減少性紫斑病、原発性血小板血症、播種性血管内凝固症候群、脾機能亢進症、大量輸血、白血病、溶血性貧血、及び脾臓又は肝臓障害から生じ得る。血小板の正常値は、15,000〜400,000/mm3である。
【０００５】
白血球は、細菌、真菌、寄生生物、及びウイルスなどの感染性病原体に対する防御に必要である。白血球は、好中球、桿状球、Tリンパ球、Bリンパ球、単球、好酸球、及び好塩基球を含む。白血球数の低下は、骨髄不全、毒性物質、自己免疫性疾患、脾臓又は肝臓障害、及び放射線被曝により引き起こされ得る。
【０００６】
ヘマトクリットは、全血における赤血球の百分率である。ヘマトクリットは、赤血球の数及びサイズの尺度である。男性についてのヘマトクリットの正常値は40.7〜50.3%であり、女性については36.1〜44.3%である。ヘモグロビンの正常値は、ヒト男性については13.8〜17.2gm/dLであり、ヒト女性については12.1〜15.1gm/dLである。正常より低いヘモグロビンは、貧血、溶血性貧血、エリスロポエチン欠乏、輸血反応、出血、鉛中毒、栄養失調、水分過剰により引き起こされ得る。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
これらが減少した状況において、血液細胞数を増加させることを助けるための手段についての技術に継続的な必要性がある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の概要）
本発明によると、1種以上の血液細胞型の減少を治療する方法が提供される。有効量のサブスタンスP又はその類似体を、1種以上の血液細胞型が減少している哺乳動物に筋肉注射する。該類似体は、[Met-OH11]-サブスタンスP、[Met-OMe11]-サブスタンスP、[Nle11]-サブスタンスP、[Pro9]-サブスタンスP、[Sar 9]-サブスタンスP、[Tyr 8]-サブスタンスP、[p-Cl-Phe 7,8]-サブスタンスP、[Sar 9,Met (O2)11]-サブスタンスP、及びアミノ酸主鎖 RPKPQQFFGLM-NH2 (配列番号：1)を有する類似体からなる群から選択される。赤血球、白血球、及び血小板などの血液細胞型の少なくとも1種の数が、前記注射の結果として増加する。
【０００９】
本発明によると、1種以上の血液細胞型の減少を治療する別の方法が提供される。有効量のサブスタンスP又はその類似体を、1種以上の血液細胞型が減少している哺乳動物に吸入を介して投与する。該類似体は、[Met-OH11]-サブスタンスP、[Met-OMe11]-サブスタンスP、[Nle11]-サブスタンスP、[Pro9]-サブスタンスP、[Sar 9]-サブスタンスP、[Tyr 8]-サブスタンスP、[p-Cl-Phe 7,8]-サブスタンスP、[Sar 9,Met (O2)11]-サブスタンスP、及びアミノ酸主鎖 RPKPQQFFGLM-NH2 (配列番号：1)を有する類似体からなる群から選択される。赤血球、白血球、及び血小板などの血液細胞型の少なくとも1種の数が、前記投与の結果として増加する。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の開示は、サブスタンスP又はその生体活性類似体が、血液細胞減少を逆転させ得ることである。減少した血液細胞集団は、以下の1種以上：赤血球、白血球、及び血小板であってよい。1種以上の血液細胞の減少、すなわち正常範囲を下回る数を有する哺乳動物、特にヒトを、例えば筋肉注射を介して治療して減少を逆転させ、該1種以上の血液細胞型の数を増加させることができる。好ましくは、血液細胞型は、治療により正常範囲に戻る。
【００１１】
サブスタンスP (RPKPQQFFGLM-NH2；配列番号：1)を、グリシン-伸長前駆体として合成し、翻訳後に生物学的に活性なC末端アミドに変換する。サブスタンスP、又はSar 9,Met (O2)11-サブスタンスPなどのその生体活性類似体は、減少した血液細胞集団を有する個体を治療するために投与することができる。生体活性類似体は、[Met-OH11]-サブスタンスP、[Met-OMe11]-サブスタンスP、[Nle11]-サブスタンスP、[Pro9]-サブスタンスP、[Sar 9]-サブスタンスP、[Tyr 8]-サブスタンスP、Sar 9,Met (O2)11-サブスタンスP、及び[p-Cl-Phe 7,8]-サブスタンスP、からなる群から選択することができる。同様の様式で機能する他の化合物は、サブスタンスP受容体（NK-1）への結合についてサブスタンスPと競合する能力、又はNK-1受容体を刺激する（agonize）する能力についてサブスタンスPと競合する能力によって同定することができる。サブスタンスPと同じアミノ酸主鎖を有する化合物は、ルーチン的に改変し、受容体アゴニスト活性について試験することができる。そのような活性についてのルーチンアッセイは当業者に既知であり、かつ使用することができる。
【００１２】
サブスタンスP又は類似体は、経筋肉注射を含む当業者に既知の任意の方法で投与することができる。リポソーム製剤、標的分子との抱合体（例えば、抗体、レクチン）、及びステント、移植片又は他の物理的送達媒体への組み込みなどの利用性において標的化及び改変を確実にするための機構を使用する製剤も使用できる。静脈内投与、エアロゾル吸入投与、局所投与、気管内投与、気管支内投与、鼻腔内投与、皮下投与、舌下投与、及び経口投与も使用できる。投与されたエアロゾル中のサブスタンスP又はその生物活性類似体の適切な濃度範囲は、1μＭ〜5000μMであり、50μＭ〜500μM、1μＭ〜10μM、50μＭ〜100μM、500μＭ〜1000μM、及び1000μＭ〜5000μMを含む。使用することができる典型的濃度は、1、10、50、75、100、300及び1000μMを含む。筋肉注射について、約0.1〜1.0ml/kg体重の容量を使用できる。
【００１３】
本発明の方法は、ヒト、ウマ、ヒツジ；サル、類人猿、テナガザル、チンパンジーなどの霊長類；マウス、ラット、モルモット、ハムスターなどの齧歯類；ウシなどの有蹄類；並びにラクダ及びラマなどのラクダ科動物；を含む、全ての哺乳動物に適用できる。血液細胞の減少は、複数の誘発剤：血液病、放射線被曝（治療的又は兵器化又は事故的）、薬剤使用の副作用などにより引き起こされ得る。誘因は、貧血、自己免疫性疾患、出血、骨髄不全、骨髄機能不全（例えば、再生不良性貧血、癌、感染に起因する）、鉄、葉酸、ビタミンB-12又はビタミンB-6の欠乏、薬剤誘導性血小板減少症（癌の化学療法など）、播種性血管内凝固症候群、エリスロポエチン欠乏、グルコース-6-リン酸脱水素酵素の遺伝的欠損、溶血性貧血、出血、脾機能亢進症、免疫血小板減少性紫斑病、腎疾患、鉛中毒、白血病、栄養失調、大量輸血、多発性骨髄腫、水分過剰、原発性血小板血症、放射線被曝、脾臓又は肝臓障害、血栓性血小板減少性紫斑病、毒性物質、及び輸血反応であり得る。
【００１４】
本発明の方法は、任意の血液細胞クラス又はサブクラスの数を増加させるために使用することができる。それらには、赤血球、白血球、及び血小板を含む。さらに、好中球、桿状球、Tリンパ球、Bリンパ球、単球、好酸球、及び好塩基球を含む。より詳細には、それらは、ヘルパーT細胞、CD45陽性細胞、抗原提示細胞、CD4陽性細胞、CD8陽性細胞、及びToll様受容体（TLR）型を発現しているT細胞を含む。
【００１５】
血液細胞の型、クラス、サブクラス及び亜型の数の測定は、当業者に既知の任意の方法にしたがって実施できる。多くのそのような方法は自動化されており、標準的な全血球計算で提供される。測定することができ、モニタリングに使用することができる血液のパラメータには、赤血球数、白血球数、血小板数、ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット、MCV、赤血球サイズ、任意の血液細胞型又は亜型の数などを含む。数、又は他の血液パラメータの測定は、治療の前及び／又は後に実施することができ、継続的なモニタリングの間、複数回実施することができる。
【００１６】
本発明は、本発明の実施の現在好ましい様式を含む具体的実施例に関して記載しているので、当業者は、添付の特許請求の範囲に記載している本発明の精神及び範囲内に含まれる、先に記載の系及び技術の多数の変形並びに置換があることを認識するであろう。
【実施例】
【００１７】
本調査のひとつの目的は、致死量の60Co放射線被曝への曝露の後のRadilex（商標）（[Sar 9,Met (O2)11]-サブスタンスP）の効果を測定することである。本調査の別の目的は、Radilex（商標）の筋肉注射が、8Gyの60Co放射レベルでのRadilex（商標）のエアロゾル吸入と同じくらい有効であり得るかを測定することである。
【００１８】
赤血球、白血球及び血小板について（群につき2匹の動物を5日ごとに順番）の採血を、貧血、好中球減少症、及び血小板減少症を評価するために取得した。赤血球、白血球及び血小板の数を、貧血、好中球減少症、及び血小板減少症を評価するために取得し、骨髄損傷及び／又は免疫系破壊の指標とした。
【００１９】
放射線被曝の2時間以内に、マウスはRadilex（商標）治療を受けた。Radilex（商標）投与量は、後肢筋への1回のIM注射を介して、1日1回、0.01mlの容量で、本調査の期間中(30日)、又は死亡するまで投与した。
【００２０】
以下の投与計画を9-11マウスの群で試験した：
10mM Radilex（商標） 1回の筋肉内処理 
1mM Radilex（商標） 1回の筋肉内処理 
1mM Radilex（商標） 毎日の筋肉内処理 
75uM Radilex（商標） 1回の筋肉内処理 
75uM Radilex（商標） 毎日の筋肉内処理 
10uM Radilex（商標）噴霧器を介して毎日
50uM Radilex（商標）噴霧器を介して毎日
75uM Radilex（商標）噴霧器を介して毎日
100uM Radilex（商標）噴霧器を介して毎日
200uM Radilex（商標）放射線被曝2時間後に噴霧器を介して1回の投与
1mM Radilex（商標）放射線被曝2時間後に噴霧器を介して1回の投与
10mM Radilex（商標）放射線被曝2時間後に噴霧器を介して1回の投与
放射線保護の確認。致死性被曝の影響はRadilex（商標）により逆転した。好中球減少症及び貧血は、生存動物で逆転した。
【００２１】
C57BL/6Jについて、正常な白血球数は、オスについては6.2±2.7K/μl、メスについては5.9±1.1である。正常なヘマトクリットは、オスについては45.4±1.7％、メスについては46.2±1.2％である。最も高い放射線量である8Gy*で生存しなかったマウスは、正常の1/10未満の白血球数、及び正常の半分未満のヘマトクリットを有していた。生存していたマウスは、平均で、正常の1/10以上の白血球数、及び正常の半分以上のヘマトクリットを有していた。群あたりのサンプルサイズが小さすぎるので統計的に証明することはできないが、生存するはずの数よりも多くのマウスが8Gyの線量で生存したことは明らかであり、これは薬物治療の有効性を示唆している。
【手続補正書】
【提出日】平成21年3月11日(2009.3.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2009538911000001.app
【国際調査報告】
2009538911.tif 000002