(57)【要約】
2009537497.tif 000006  オーロラキナーゼ阻害剤及び排出トランスポーター阻害剤を含んでなる組合せであって、ここにおいて、オーロラキナーゼ阻害剤は、癌のような過剰増殖性疾病の治療において使用するための式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩である。
2009537497.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
オーロラキナーゼ阻害剤及び排出トランスポーター阻害剤を含んでなる組合せであって、ここにおいて、前記オーロラキナーゼ阻害剤が、以下の式（Ｉ）：
【化１】
2009537497.tif 000005
［式中：
ｍは、０、１、２又は３であり
Ｒ１は、ヒドロキシＣ１−４アルキル又はホスホノオキシＣ１−４アルキルであり；
Ｒ２は、水素、Ｃ１−４アルキル、ヒドロキシＣ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシＣ１−４アルキル又はヘテロシクリルであり；
或いはＲ１及びＲ２は、これらが接続している窒素と一緒に、窒素、酸素及び硫黄から選択される一つの更なる異種原子を所望により含有していてもよい４−ないし６−員の複素環を形成し、この窒素又は硫黄は、所望により酸化されていてもよく、そしてこの環は、Ｃ１−４アルキルで所望により置換されていてもよく；
Ｒ３は、水素又はＣ１−４アルコキシであり；
Ｒ４は、水素又はＣ１−４アルキルであり；
Ｒ５は、１又は２個のハロによって所望により置換されていてもよいアリールであり；そして
Ｒ６及びＲ７は、独立に水素又はＣ１−４アルキルである］
の化合物又は医薬的に受容可能なその塩である、前記組合せ。
【請求項２】
前記オーロラキナーゼ阻害剤が、２−｛３−［（７−｛３−［エチル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］プロポキシ｝キナゾリン−４−イル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル｝−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミド、リン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチル又は医薬的に受容可能なその塩である、請求項１に記載の組合せ。
【請求項３】
前記排出トランスポーター阻害剤が、レスペルピン（ｒｅｓｐｅｒｐｉｎｅ）、エラクリダル、フミトレモルギンＣ（ＦＴＣ）、ＦＴＣ類似体（ＫＯ１４３のような）、ＢＩＢ−Ｅ、フラボピリドール、ＣＩ１０３３（キナゾリン）、ゲフィチニブ（イレッサ）、ノボビオシン、ビリコダル（ＶＸ−７１０）、ＶＸ−８５３、ジエチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、エストロン、抗エストロゲン剤、タモキシフェン、並びにＴＡＧ−１１、ＴＡＧ−１３９、トレミフェン、メシル酸イマチニブ、ＣＩ１０３３、エストラジオール、エストリオール、ナリンゲニン、アカセチン、ケンフェロール及びナリンゲニン−７−グルコシドのような誘導体から選択される、請求項２に記載の組合せ。
【請求項４】
前記排出トランスポーター阻害剤が、クロルプロマジン、シクロスポリンＡ、ジルチアゼム、ニカルジピン、プロゲステロン、キニジン、トリフロペラジン、ベラパミル、ＢＩＢＷ２２ＢＳ、デキシニグルジピン、ガロパミル、ＰＳＣ８３３、Ｒｏｌｌ−２９３３、トリメトキシベンゾイルヨヒンビン、ビリコダル（ＶＸ−７１０）、エラクリダル（ＧＦ１２０９１８）、ゾスキダル（ＬＹ３３５９７９）、ＭＳ−２０９、ＯＣ−１４４−０９３、ラニキダル（Ｒ１０１９３３）、Ｓ９７８８、タリキダル（ＸＲ９５７６）、ＸＲ９０５１及びＯＮＴ−０９３から選択される、請求項２に記載の組合せ。
【請求項５】
癌のような過剰増殖性疾病の治療における使用のための、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の組合せ。
【請求項６】
癌のような過剰増殖性疾病の治療における使用のための医薬組成物であって、請求項１ないし５のいずれか１項に記載の組合せを、医薬的に受容可能な賦形剤又は担体と共に含んでなる、前記医薬組成物。
【請求項７】
請求項１記載の式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩及び医薬的に受容可能な賦形剤又は担体を含んでなる第１の組成物、並びに排出トランスポーター阻害剤及び医薬的に受容可能な賦形剤又は担体を含んでなる第２の組成物を含んでなる医薬組成物。
【請求項８】
癌のような過剰増殖性疾病の治療において使用するためのキットであって：−
ａ）請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩を、医薬的に受容可能な賦形剤又は担体と共に、第１の単位剤形中に；
ｂ）排出トランスポーター阻害剤を、医薬的に受容可能な賦形剤又は担体と共に、第２の単位剤形中に；及び
ｃ）前記第１及び第２の剤形を含有するための容器手段；
を含んでなる、前記キット。
【請求項９】
癌のような過剰増殖性疾病の治療を提供するための、ヒトのような温血動物への投与のための医薬の製造における、請求項１ないし５のいずれか１項記載の組合せの使用。
【請求項１０】
癌又は他の過剰増殖性疾病の治療のための方法であって、このような治療を必要とするヒトのような温血動物への、有効な量の請求項１ないし４のいずれか１項に記載の組合せの投与を含んでなる、前記方法。
【請求項１１】
癌又は他の過剰増殖性疾病の治療のための方法であって、このような治療を必要とするヒトのような温血動物への、有効な量の請求項１ないし４に記載の組合せの、同時、連続又は別個投与を含んでなる、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オーロラキナーゼ阻害剤及び排出トランスポーター阻害剤を含んでなる組合せに関する。この組合せは、癌のような過剰増殖性疾病の治療の新しい方法において有用である。本発明は、更にキット及び前記組合せを含んでなる医薬組成物、並びに前記組合せの癌のような過剰増殖性疾病の治療において使用するための医薬の製造における前記組合せの使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
癌（他の過剰増殖性疾病と共に）は、細胞増殖の正常な制御が喪失した場合に起こる制御されない細胞増殖によって特徴づけられる。この喪失は、その細胞分裂周期を通して細胞の連鎖を制御する細胞増殖経路に対する遺伝子的損傷の結果としてしばしば表れる。
【０００３】
真核生物において、タンパク質リン酸化の秩序正しいカスケードが、細胞分裂周期を制御すると考えられる。このカスケードにおいて重要な役割を演じるタンパク質キナーゼのいくつかのファミリーが確認されている。これらのキナーゼの多くのものの活性は、正常な組織と比較した場合、ヒトの腫瘍において増加する。これは、タンパクの質発現の増加したレベル（例えば遺伝子増幅の結果として）によって、又は活性化補助因子若しくは阻害タンパク質の発現の変化のいずれかによって起こることができる。
【０００４】
これらの細胞分裂周期制御因子の最初に確認され、そして最も広く研究されているものは、サイクリン依存性キナーゼ（又はＣＤＫ）であった。更に最近になって、細胞分裂周期を制御することにおいて重要な役割を演じるＣＤＫファミリーと構造的に別個であるタンパク質キナーゼが確認され、そして更に発癌において重要であるように見受けられた。これらは、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａオーロラ及びＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  Ｉｐｌ１タンパク質のヒト相同体を含む。これらの遺伝子、オーロラ−Ａ、オーロラ−Ｂ及びオーロラ−Ｃ（更にそれぞれオーロラ２、オーロラ１及びオーロラ３としても知られる）の三つのヒト同族体は、細胞分裂周期で制御されたセリン−トレオニンタンパク質キナーゼをコードする（Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．１１（２）：４９−５４中で要約されている）。これらは、Ｇ２及び有糸分裂を通して発現及びキナーゼ活性のピークを示す。いくつかの観察は、癌におけるヒトオーロラタンパク質の関与を関係づけている。
【０００５】
オーロラ−Ａ遺伝子は、乳房及び大腸腫瘍の両方を含むヒトの腫瘍においてしばしば増幅される領域である染色体２０ｑ１３に位置する。オーロラＡは、オーロラ−ＡのＤＮＡが増幅され、そしてｍＲＮＡが５０％より多い原発性ヒト直腸結腸癌において過剰発現するために、この単位複製配列の主要な標的遺伝子であることができる。これらの腫瘍において、オーロラ−Ａタンパク質レベルは、隣接する正常な組織と比較して非常に上昇するように見受けられる。更に、ヒトオーロラ−Ａによる齧歯類の線維芽細胞の形質移入は、形質転換に導き、軟寒天中で増殖する能力を与えられ、そしてヌードマウスに腫瘍を形成する（Ｂｉｓｃｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ．１７（１１）：３０５２−３０６５）。他の研究（Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．２０（２）：１８９−９３）は、オーロラ−Ａの人工的過剰発現が、癌の発症におけるイベントとして知られる中心体数の増加、及び異数体の増加に導くことを示している。
【０００６】
腫瘍細胞において、正常細胞と比較した場合、腫瘍細胞中のオーロラ−Ｂ（Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｃｈｒｏｍｓｏｍａ．１１０（２）：６５−７４）及びオーロラ−Ｃ（Ｋｉｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７４（１１）：７３３４−４０）の発現に増加があることも更に示されている。
【０００７】
オーロラ−Ｂは、癌細胞中で過剰発現し、そして増加したオーロラ−Ｂのレベルが、直腸結腸癌の進行期と相関することが示されている（Ｋａｔａｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９１：１１６０）。更に、オーロラ−Ｂの過剰発現が、セリン１０におけるヒストンＨ３のリン酸化の増加により異数体を誘導し、そしてオーロラ−Ｂを過剰発現している細胞が、転移を発症する更に攻撃的な腫瘍を形成することが報告されている（Ｏｔａ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ，２００２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２：５１６８−５１７７）。オーロラ−Ｂは、少なくとも三つの他のパッセンジャータンパク質、サバイビン、ＩＮＣＥＮＰ及びボレアリンと安定な複合体で存在する染色体パッセンジャータンパク質である（Ｃａｒｍｅｎａ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．２００３，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．４：８４２−８５４）。サバイビンも、更に癌中で上方制御され、そしてＢＩＲ（バキュロウイルスのアポトーシス抑制タンパク質（ＩＡＰ）の繰返し）領域を含有し、そして従って、アポトーシス及び／又は有糸分裂の破局から腫瘍細胞を保護する役割を演じることができる。
【０００８】
オーロラ−Ｃに関して、これの発現は、精巣に限定されていると考えられるが、しかしこれは、各種の癌系で過剰発現していることが見出されている（Ｋａｔａｙａｍａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ，２００３，Ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２２：４５１−４６４）。
【０００９】
重要なことに、ヒト腫瘍細胞系のアンチセンスオリゴヌクレオチド治療によるオーロラ−Ａ発現及び機能の抑止（ＷＯ  ９７／２２７０２及びＷＯ  ９９／３７７８８）が、細胞分裂周期の停止に導き、そしてこれらの腫瘍細胞系において抗増殖効果を発揮することも更に証明されている。更に、オーロラ−Ａ及びオーロラ−Ｂの小分子阻害剤が、ｓｉＲＮＡ治療により単独のオーロラ−Ｂ発現の選択的抑止を有する（Ｄｉｔｃｈｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．２００３，ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１６１（２）：２６７−２８０）ように、ヒト腫瘍細胞の抗増殖効果を有することが証明されている（Ｋｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．２００１，Ｐｏｓｔｅｒ  ＃２４５５，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｎｕａｌ  ｍｅｅｔｉｎｇ）。これは、オーロラ−Ａ及び／又はオーロラ−Ｂの機能の阻害が、ヒトの腫瘍及び他の過剰増殖性疾病の治療において有用であることができる抗増殖効果を有するものであることを示す。
【００１０】
これらの疾病に対する治療法としてのオーロラキナーゼの阻害は、細胞分裂周期の上流のシグナル伝達経路（例えば上皮細胞増殖因子（ＥＧＦＲ）又は他の受容体のような増殖因子受容体型チロシンキナーゼによって活性化されたもの）を標的とすることに対して有意な利益を有することができる。細胞分裂周期が、最終的にこれらの多様なシグナル伝達イベントの全ての下流であるために、オーロラキナーゼの阻害のような細胞分裂周期に向けられた療法は、全ての増殖する腫瘍細胞に対して活性であることが予想されるものであり、一方特異的シグナル伝達分子（例えばＥＧＦＲ）に向けられた方法は、これらの受容体を発現する腫瘍細胞のサブセットにおいてのみ活性であることが予想されるものである。これらのシグナル伝達経路間に、有意な“クロストーク”が存在し、一つの成分の阻害が、もう一つのものによって代償されることができることを意味していることも更に信じられる。
【００１１】
癌のような過剰増殖性疾病の治療において使用するためのオーロラＡ及び／又はオーロラＢキナーゼのいくつかの小分子阻害剤は、既に、例えばＷＯ０３／５５４９１及びＷＯ２００４／０５８７８１（これらの内容は、本明細書中に参考文献として援用される）から知られている。然しながら、このような阻害剤の細胞内の有効性は、これらが過剰増殖性細胞によって保持され及び／又はその内部に分布される程度に依存する。細胞中の阻害剤の活性は、阻害剤が、その細胞によって発現される細胞の排出トランスポーターの基質である場合、有意に減少される。排出トランスポーターは、トランスポーターの非存在における受動拡散によって細胞膜を通ることができる幅広い化学的に無関係な毒素及び薬物から細胞を保護する。その発現は、排出トランスポーターが薬物の全細胞内保持を減少するか、又は薬物の細胞内蓄積を作用の部位から離れて再分配する場合、薬物の活性の減少が観察される多剤耐性（ＭＤＲ）に連結している（Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０００，１２：４５０−４５８）。
【００１２】
Ｐ−糖タンパク質は、ＭＤＲにおいて役割を有することが確認された最初の排出トランスポーターであった（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１９８６，４７（３），３８１；Ｓｅｅｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｉｎｉ−ｒｅｖｉｅｗ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５，１３５−１５１）。癌において役割を有することが知られた他の排出トランスポーターは、ＢＣＲＰ、ＭＲＰ１及びＭＲＰ２を含む（Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｉｎｉ−Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５，５，１８３−１９５）。
【００１３】
ＢＣＲＰ（更にＡＢＣＧ２、ＭＸＲ、ＡＢＣＰとしても知られる）は、ＡＴＰ結合カセット膜トランスポーターのＡＢＣＧファミリーの６５５個のアミノ酸のメンバーであり（Ｙａｎａｓｅ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ＳＮＰｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ；Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｎｄ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．，２００５）、これは、毛細管内皮細胞、造血幹細胞、腸、肝臓、乳房、胎盤の母体胎児関門及び血液脳関門のような正常な細胞及び組織中で広く発現する（Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｖ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｆｆｌｕｘ  Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｌｅｖａｎｃｅ，Ｍｉｎｉ−Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５．２，２００５，１８３−９５；及びＬｏｓｃｈｅｒ  Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｅｆｆｌｕｘ  Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｂｒａｉｎ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂｒａｉｎ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｐｒｏｇ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ，７６．１，２００５，２２−７６）。ＢＣＲＰは、二量体として作用する半トランスポーターであり、そしてその機能的役割は、組織中に発現した毒性物質及び代謝産物の作用に対して保護することであると信じられる（Ｓｕｇｉｍｏｔｏ  Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ／Ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ．，９６．８，２００５，４５７−６５）。ＢＣＲＰは、ＡＴＰ依存性薬物の排出によって、トポテカン、ミトキサントロン、ドキソルビシン及びＳＮ−３８を含む（制約されるものではないが）多くの化合物に対する細胞中の多剤耐性を与えることが示されている（Ｄｏｙｌｅ  ＬＡ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＢＣＲＰ（ＡＢＣＧ２），Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２２．４７，２００３，７３４０−５８；及びＦｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）。ある種の腫瘍型における過剰発現は、不良な予後又は治療に対する抵抗性を伴うことができる（Ｙｏｈ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｍｐａｃｔｓ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  Ｐｌａｔｉｎｕｍ−ｂａｓｅｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｎｏｎ−Ｓｍａｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，１０．５，２００４，１６９１−９７）。
【００１４】
Ｐ−糖タンパク質（更にＰｇｐ、ＡＢＣＢ１及びＭＤＲ１としても知られる）は、細胞から基質を一方向性の様式で除去する、膜貫通型ＡＴＰ依存性排出トランスポーターである（Ｋｒｉｓｈｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ，２００１，１，１６３−１７４）。Ｐｇｐは、急性白血病、乳癌、卵巣癌、頭頚部癌、非ホジキンリンパ腫及びカポジ肉腫のような多くの血液学的及び固形腫瘍中で過剰発現することが知られ（Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．）、そして多剤耐性（ＭＤＲ）に寄与することが知られている（Ｓｅｅｌｉｇ  ｅｔ  ａｌ．）。ＢＣＲＰのように、Ｐｇｐは、アントラサイクリン（例えばドキソルビシン、ダウノルビシン及びエピルビシン）、ビンカアルカロイド（例えばビノレルビン、ビンクリスチン及びビンブラスチン）、エピポドフィロトキシン（例えばエトポシド及びテニポシド）、タキサン（例えばパクリタキセル及びドセタキセル）、トポテカン、ダクチノマイシン及びマイトマイシンＣのような、化学構造及び作用の機構において広く変化する各種の基質を有する（Ｔｈｏｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｏｎｔｒｏｌ，２００３  １０，２，１５９−１６５）。
【００１５】
基質構造及びメカニズムの幅広さは、ある特定の基質が、ＢＣＲＰ又はＰｇｐのような排出トランスポーターの基質であるものであるか否かを予想することを非常に困難にする。実際、基質の幅は、一般的に小分子医薬及び毒素から糖、アミノ酸、グリカン、コレステロール、リン脂質、ペプチド及びタンパク質の範囲の基質を伴う排出トランスポーターに共通の特徴である（Ｆｉｓｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）。
【００１６】
ＷＯ０３／５５４９１及びＷＯ２００４／０５８７８１は、排出トランスポーターの責務に、そして特にＢＣＰＲ及び／又はＰｇｐの責務の問題に注意を向けていない。従って彼等は、その中の阻害剤が、ＢＣＲＰ、Ｐｇｐ又はいずれもの他の排出トランスポーターの基質であるか否かを開示していない。
【発明の概要】
【００１７】
本出願人等は、多くのこれらの阻害剤が、事実排出トランスポーターの基質であり、そして従って抵抗性の細胞において減少した活性を有することを発見した。幸運にも、本出願人等は、更にこれらの細胞内活性を、ＢＣＲＰ活性及び／又はＰｇｐ活性の阻害剤のような排出トランスポーター活性の阻害剤との組合せで阻害剤を投与することによって亢進することができることも発見した。
【００１８】
従って、オーロラキナーゼ阻害剤及び排出トランスポーター阻害剤を含んでなる組合せが提供され、ここにおいて、オーロラキナーゼ阻害剤は、以下の式（Ｉ）：
【００１９】
【化１】
2009537497.tif 000003
【００２０】
［式中：
ｍは、０、１、２又は３であり
Ｒ１は、ヒドロキシＣ１−４アルキル又はホスホノオキシＣ１−４アルキルであり；
Ｒ２は、水素、Ｃ１−４アルキル、ヒドロキシＣ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシＣ１−４アルキル又はヘテロシクリルであり；
或いはＲ１及びＲ２は、これらが接続している窒素と一緒に、窒素、酸素及び硫黄から選択される一つの更なる異種原子を所望により含有していてもよい４−ないし６−員の複素環を形成し、この窒素又は硫黄は、所望により酸化されていてもよく、そしてこの環は、Ｃ１−４アルキルで所望により置換されていてもよく；
Ｒ３は、水素又はＣ１−４アルコキシであり；
Ｒ４は、水素又はＣ１−４アルキルであり；
Ｒ５は、１又は２個のハロによって所望により置換されていてもよいアリールであり；そして
Ｒ６及びＲ７は、独立に水素又はＣ１−４アルキルである］
の化合物又は医薬的に受容可能なその塩である。
【００２１】
本発明において、ある種の式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩が、一つ若しくはそれより多い不斉炭素又は硫黄原子により、光学的に活性な或いはラセミの形態で存在することができる限りは、本発明は、その定義中にオーロラキナーゼ阻害活性を、そして特にオーロラＡ及び／又はオーロラＢキナーゼ阻害活性を保有するいずれものこのような光学的に活性な又はラセミの形態を含むことは理解されることである。光学的に活性な形態の合成は、当技術において公知の有機化学の標準的な技術によって、例えば光学的に活性な出発物質からの合成によって、或いはラセミの形態の分割によって行うことができる。同様に、上述の活性は、本明細書中で言及される標準的な研究室の技術を使用して評価することができる。
【００２２】
本発明において、式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩が、互変異性の現象を示すことができ、そして本明細書内の式の図面が可能な互変異性の形態の一つのみを表すことができることは理解されることである。本発明が、オーロラキナーゼ阻害活性を、そして特にオーロラＡ及び／又はオーロラＢキナーゼ阻害活性を有するいずれもの互変異性の形態を包含し、そして式の図面内に使用されたいずれか一つの互変異性の形態に単に制約されないことは理解されることである。
【００２３】
ある種の式（Ｉ）の化合物及び医薬的に受容可能なその塩が、例えば水和された形態のような溶媒和された、並びに溶媒和されていない形態で存在することができることも更に理解されることである。本発明が、オーロラキナーゼ阻害活性を、そして特にオーロラＡ及び／又はオーロラＢキナーゼ阻害活性を有する、全てのこのような溶媒和された形態を包含することは理解されることである。
【００２４】
本発明は、式（Ｉ）の化合物、並びに医薬的に受容可能なその塩に関する。本発明の医薬的に受容可能な塩は、例えば、このような塩を形成するために十分に塩基性である、本明細書中で定義したとおりの式（Ｉ）の化合物の酸付加塩を含むことができる。このような酸付加塩は、制約されるものではないが、フマル酸塩、メタンスルホン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、クエン酸塩及びマレイン酸塩、並びにリン酸及び硫酸と形成される塩を含む。更に式（Ｉ）の化合物が十分に酸性である場合、塩は塩基塩であり、そして例は、制約されるものではないが、アルカリ金属、例えばナトリウム又はカリウム塩、アルカリ土類金属、例えばカルシウム又はマグネシウム塩、或いは有機アミン、例えばトリエチルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、モルホリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ジベンジルアミン又はリシンのようなアミノ酸塩を含む。
【００２５】
式（Ｉ）の化合物は、更にｉｎ  ｖｉｖｏで加水分解可能なエステルとして提供することもできる。カルボキシ又はヒドロキシ基を含有する式（Ｉ）の化合物のｉｎ  ｖｉｖｏで加水分解可能なエステルは、例えばヒト又は動物の体内で開裂して、母体酸又はアルコールを生じる医薬的に受容可能なエステルである。このようなエステルは、例えば試験動物に試験中の化合物を静脈内的に投与し、そしてその後試験動物の体液を検査することによって確認することができる。
【００２６】
本明細書において、一般的用語“アルキル”は、直鎖及び分枝鎖アルキル基の両方を含む。然しながら、“プロピル”のような個々のアルキル基に対する言及は、直鎖変種のみに対して特定的であり、そして“ｔｅｒｔ−ブチル”のような個々の分枝鎖アルキル基に対する言及は、分枝鎖変種のみに対して特定的である。
【００２７】
“ヘテロシクリル”は、４ないし１２個の環の原子を含有し、その１、２、３若しくは４個の環の原子が窒素、硫黄又は酸素から選択される、飽和、不飽和又は部分的に飽和の単環或いは二環式環であり、この環は、炭素又は窒素連結であることができ、ここにおいて、−ＣＨ２−基は、−Ｃ（Ｏ）−によって所望により置換されていることができ；ここにおいて、環の窒素又は硫黄原子は、所望により酸化されて、Ｎ−オキシド又はＳ−オキシド（類）を形成していてもよく；そしてここにおいて、環は、一つ又はそれより多いハロ又はＣ１−４アルキルによって所望により置換されていてもよい。例は、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、テトラヒドロ−２Ｈ−ピラニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル及びイミダゾリジニルを含む。
【００２８】
“ホスホノオキシ”は、一つの側面において式−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２の基である。然しながら、用語“ホスホノオキシ”は、更にナトリウム又はカリウムイオンのようなアルカリ金属イオン、或いはアルカリ土類金属イオン、例えばカルシウム又はマグネシウムイオンと形成されるもののようなこの基の塩も含む。
【００２９】
所望による置換基が、“１又は２個”の基又は置換基から選択される場合、この定義が、全ての置換基が規定された基の一つから選択される、即ち、全ての置換基が同一であるか、或いは置換基が規定された基の二つ又はそれより多くから選択される、即ち、置換基が同一ではないことを含むことは理解されることである。
【００３０】
本発明の化合物は、コンピューターソフトウェア（ＡＣＤ／Ｎａｍｅバージョン８．０）の援助により命名されている。
本発明の一つの側面において、オーロラキナーゼ阻害剤は：
ｍが、１又は２であり；
Ｒ１は、ヒドロキシＣ１−４アルキル又はホスホノオキシＣ１−４アルキルであり；
Ｒ２は、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシＣ１−４アルキル又は６−員の飽和のヘテロシクリルであるか；
或いはＲ１及びＲ２は、これらが接続している窒素と一緒に、窒素、酸素又は硫黄から選択される一つの更なる異種原子を所望により含有していてもよい６−員の複素環を形成し、この環は、Ｃ１−４アルキルで所望により置換されていてもよく；
Ｒ３は、水素であり；
Ｒ４は、水素であり；
Ｒ５は、１又は２個のハロによって所望により置換されていてもよいフェニルであり；そして
Ｒ６及びＲ７は、両方とも水素である；
式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩である。
【００３１】
もう一つの側面において、オーロラキナーゼ阻害剤は、２−｛３−［（７−｛３−［エチル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］プロポキシ｝キナゾリン−４−イル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル｝−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミド、リン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチル又は医薬的に受容可能なその塩である。
【００３２】
なおもう一つの側面において、オーロラキナーゼ阻害剤は、リン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチル又は医薬的に受容可能なその塩である。
【００３３】
本発明の一つの側面において、排出トランスポーター阻害剤は、ＢＣＲＰの活性の阻害剤である。本発明のもう一つの側面において、排出トランスポーター阻害剤は、Ｐｇｐの活性の阻害剤である。
【００３４】
特に、排出トランスポーター阻害剤は、レスペルピン、エラクリダル、フミトレモルギンＣ（ＦＴＣ）、ＦＴＣ類似体（ＫＯ１４３のような）、ＢＩＢ−Ｅ、フラボピリドール、ＣＩ１０３３（キナゾリン）、ゲフィチニブ（イレッサ）、ノボビオシン、ビリコダル（ＶＸ−７１０）、ＶＸ−８５３、ジエチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、エストロン、抗エストロゲン剤、タモキシフェン、並びにＴＡＧ−１１、ＴＡＧ−１３９、トレミフェン、メシル酸イマチニブ、ＣＩ１０３３、エストラジオール、エストリオール、ナリンゲニン、アカセチン、ケンフェロール及びナリンゲニン−７−グルコシドのような誘導体から選択することができる。ＢＣＲＰ活性を阻害することが信じられるこれらの排出トランスポーター阻害剤に関する更なる情報は、Ｄｏｙｌｅ  ＬＡ．ａｎｄ  Ｒｏｓｓ  ＤＤ．，Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＢＣＲＰ  （ＡＢＣＧ２），Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２２．４７，２００３，７３４０−５８及びＹａｎａｓｅ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ＳＮＰｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ；  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｎｄ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．，２００５中に見出すことができる。
【００３５】
排出トランスポーター阻害剤は、更にクロルプロマジン、シクロスポリンＡ、ジルチアゼム、ニカルジピン、プロゲステロン、キニジン、トリフロペラジン、ベラパミル、ＢＩＢＷ２２ＢＳ、デキシニグルジピン、ガロパミル、ＰＳＣ８３３、Ｒｏｌｌ−２９３３、トリメトキシベンゾイルヨヒンビン、ビリコダル（ＶＸ−７１０）、エラクリダル（ＧＦ１２０９１８）、ゾスキダル（ＬＹ３３５９７９）、ＭＳ−２０９、ＯＣ−１４４−０９３、ラニキダル（Ｒ１０１９３３）、Ｓ９７８８、タリキダル（ＸＲ９５７６）、ＸＲ９０５１及びＯＮＴ−０９３から選択することもできる。Ｐｇｐ活性を阻害することが信じられるこれらの排出トランスポーター阻害剤に関する更なる情報は、Ａ．Ｓｅｅｌｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅ．Ｇａｔｌｉｋ−Ｌａｎｄｗｏｊｔｏｗｉｃｚ，Ｍｉｎｉ−ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５，５，１３５−１５１中に見出すことができる。特に、排出トランスポーター阻害剤は、エラクリダル（ＧＦ１２０９１８）、ゾスキダル（ＬＹ３３５９７９）、ＭＳ−２０９、ＯＣ−１４４−０９３、ラニキダル（Ｒ１０１９３３）、Ｓ９７８８、タリキダル（ＸＲ９５７６）及びＸＲ９０５１から選択することができる。排出トランスポーター阻害剤は、更にＢＩＢＷ２２ＢＳ、デキシニグルジピン、ガロパミル、ＰＳＣ８３３、Ｒｏｌｌ−２９３３、トリメトキシベンゾイルヨヒンビン及びＶＸ−７１０から選択することもできる。別の方法として、排出トランスポーター阻害剤は、クロルプロマジン、シクロスポリンＡ、ジルチアゼム、ニカリジピン、プロゲステロン、キニジン、トリフロペラジン及びベラパミルから選択することもできる。
【００３６】
本発明の特別な側面において、排出トランスポーター阻害剤は、エラクリダルである。
本発明は、更にオーロラキナーゼ阻害剤並びにミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン、ＳＮ−３８、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシノール、フラボピリドール、ＣＩ１０３３、ＢＢＲ３３９０及びメトトレキセートから選択される化合物を含んでなる組合せも提供し、ここにおいて、オーロラキナーゼ阻害剤は、本明細書中で定義したとおりの式（Ｉ）の化合物である。本発明のこの側面の特別な態様において、オーロラキナーゼ阻害剤は、２−｛３−［（７−｛３−［エチル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］プロポキシ｝キナゾリン−４−イル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル｝−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミド、リン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチル又は医薬的に受容可能なその塩であり、そして更に特別にリン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチル又は医薬的に受容可能なその塩である。
【００３７】
本発明の特別な組合せは、２−｛３−［（７−｛３−［エチル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］プロポキシ｝キナゾリン−４−イル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル｝−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミド、リン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチル又は医薬的に受容可能なその塩、並びにレスペルピン、エラクリダル、フミトレモルギンＣ（ＦＴＣ）、ＦＴＣ類似体（ＫＯ１４３のような）、ＢＩＢ−Ｅ、フラボピリドール、ＣＩ１０３３（キナゾリン）、ゲフィチニブ（イレッサ）、ノボビオシン、ビリコダル（ＶＸ−７１０）、ＶＸ−８５３、ジエチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、エストロン、抗エストロゲン剤、タモキシフェン、並びにＴＡＧ−１１、ＴＡＧ−１３９、トレミフェン、メシル酸イマチニブ、ＣＩ１０３３、エストラジオール、エストリオール、ナリンゲニン、アカセチン、ケンフェロール及びナリンゲニン−７−グルコシドのような誘導体から選択される排出トランスポート阻害剤を含んでなる。本発明のこの側面の特別な態様において、オーロラキナーゼ阻害剤は、リン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチル又は医薬的に受容可能なその塩である。
【００３８】
本発明のもう一つの特別な組合せは、２−｛３−［（７−｛３−［エチル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］プロポキシ｝キナゾリン−４−イル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル｝−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミド、リン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチル又は医薬的に受容可能なその塩、並びにクロルプロマジン、シクロスポリンＡ、ジルチアゼム、ニカルジピン、プロゲステロン、キニジン、トリフロペラジン、ベラパミル、ＢＩＢＷ２２ＢＳ、デキシニグルジピン、ガロパミル、ＰＳＣ８３３、Ｒｏｌｌ−２９３３、トリメトキシベンゾイルヨヒンビン、ビリコダル（ＶＸ−７１０）、エラクリダル（ＧＦ１２０９１８）、ゾスキダル（ＬＹ３３５９７９）、ＭＳ−２０９、ＯＣ−１４４−０９３、ラニキダル（Ｒ１０１９３３）、Ｓ９７８８、タリキダル（ＸＲ９５７６）、ＸＲ９０５１及びＯＮＴ−０９３から選択される排出トランスポーター阻害剤を含んでなる。本発明のこの側面の特別な態様において、オーロラキナーゼ阻害剤は、リン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチル又は医薬的に受容可能なその塩である。
【００３９】
本発明のオーロラキナーゼ阻害剤は、ＷＯ０３／５５４９１及びＷＯ２００４／０５８７８１中に記載されている方法によって調製することができる。いずれもの必要な保護基の化学反応を含む式（Ｉ）の化合物を調製することを可能にするＷＯ０３／５５４９１及びＷＯ２００４／０５８７８１中に開示されている全ての情報は、本明細書中に参考文献として援用される。特に、ＷＯ２００４／０５８７８１中に与えられている２−｛３−［（７−｛３−［エチル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］プロポキシ｝キナゾリン−４−イル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル｝−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミド及びリン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチルを調製するための方法は、本明細書中に参考文献として援用される。
【００４０】
本明細書中に記載される排出トランスポーター阻害剤のあるものは、Ｄｏｙｌｅ  ＬＡ．ａｎｄ  Ｒｏｓｓ  ＤＤ．（Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ＢＣＲＰ  （ＡＢＣＧ２），Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２２．４７，２００３，７３４０−５８）及びＹａｎａｓｅ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．（Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ＳＮＰｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ；Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｎｄ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．，２００５）中に記載されている。これらは、当業者にとって既知の、そして当技術において利用可能な方法によって、そして特に上述の文献及び本明細書中に引用した参考文献中に言及されている方法によって調製することができる。
【００４１】
本明細書中に記載された他の排出トランスポーター阻害剤は、Ｓｅｅｌｉｇ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍｉｎｉ−Ｒｅｖｉｅｗ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５，１３５−１５１）による総説中に記載されている。これらは、当業者にとって既知の、そして当技術において利用可能な方法によって、そして特にＳｅｅｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．による総説及び本明細書中に引用した参考文献中に言及されている方法によって調製することができる。特にＳｅｅｌｉｇ  ｅｔ  ａｌ．による総説中で言及されているクロルプロマジン、シクロスポリンＡ、ジルチアゼム、ニカルジピン、プロゲステロン、キニジン、トリフロペラジン、ベラパミル、ＢＩＢＷ２２ＢＳ、デキシニグルジピン、ガロパミル、ＰＳＣ８３３、Ｒｏｌｌ−２９３３、トリメトキシベンゾイルヨヒンビン、ビリコダル（ＶＸ−７１０）、エラクリダル（ＧＦ１２０９１８）、ゾスキダル（ＬＹ３３５９７９）、ＭＳ−２０９、ＯＣ−１４４−０９３、ラニキダル（Ｒ１０１９３３）、Ｓ９７８８、タリキダル（ＸＲ９５７６）、ＸＲ９０５１及びＯＮＴ−０９３を調製するための方法は、本明細書中に参考文献として援用される。
【００４２】
用語“組合せ”が、組合せの成分の同時、連続又は別個投与を想定していることは理解されることである。本発明の一つの側面において、“組合せ”は、式（Ｉ）の化合物及び排出トランスポーター阻害剤の同時投与を想定している。本発明の更なる側面において、“組合せ”は、これらの薬剤の連続投与を想定している。本発明のもう一つの側面において、“組合せ”は、これらの薬剤の別個投与を想定している。これらの薬剤の投与が連続又は別個である場合、第２の成分の投与の遅れは、組合せ療法の相乗効果の利益を失うようであってはならない。従って、疑義の回避のために、本発明は、癌のような過剰増殖性疾患の治療において同時、連続又は別個で使用するための式（Ｉ）の化合物、又は医薬的に受容可能なその塩、及び排出トランスポーター阻害剤を含んでなる組合せを提供する。
【００４３】
本発明の治療は、反応速度、疾病の進行時間及び／又は生存率のような慣用的な手段によって評価することができる抗腫瘍効果を含む。本発明の抗腫瘍効果は、制約されるものではないが、腫瘍成長の阻害、腫瘍成長の遅延、腫瘍の退行、腫瘍の縮小、治療の中断における腫瘍の再成長の時間の増加及び疾病の進行の緩徐化を含む。例えば、本発明の組合せが、固形腫瘍を含む癌のための治療を必要とするヒトのような温血動物に投与された場合、このような治療の方法が、例えば：抗腫瘍効果の程度、反応速度、疾病進行の時間及び生存率の一つ又はそれより多くによって測定されるような効果を生じることが予想される。
【００４４】
本発明の特別な側面によれば、癌のような過剰増殖性疾病の治療において使用するための式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩及び排出トランスポーター阻害剤を含んでなる組合せが提供される。更に癌のような過剰増殖性疾病の治療において使用するための、２−｛３−［（７−｛３−［エチル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］プロポキシ｝キナゾリン−４−イル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル｝−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミド、リン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチル又は医薬的に受容可能なその塩、並びにレスペルピン、エラクリダル、フミトレモルギンＣ（ＦＴＣ）、ＦＴＣ類似体（ＫＯ１４３のような）、ＢＩＢ−Ｅ、フラボピリドール、ＣＩ１０３３（キナゾリン）、ゲフィチニブ（イレッサ）、ノボビオシン、ビリコダル（ＶＸ−７１０）、ＶＸ−８５３、ジエチルスチルベストロール（ＤＥＳ）、エストロン、抗エストロゲン剤、タモキシフェン、並びにＴＡＧ−１１、ＴＡＧ−１３９、トレミフェン、メシル酸イマチニブ、ＣＩ１０３３、エストラジオール、エストリオール、ナリンゲニン、アカセチン、ケンフェロール及びナリンゲニン−７−グルコシドのような誘導体から選択することができる排出トランスポーター阻害剤を含んでなる組合せも提供される。更に癌のような過剰増殖性疾病の治療において使用するための、２−｛３−［（７−｛３−［エチル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］プロポキシ｝キナゾリン−４−イル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル｝−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミド、リン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチル又は医薬的に受容可能なその塩、並びにクロルプロマジン、シクロスポリンＡ、ジルチアゼム、ニカルジピン、プロゲステロン、キニジン、トリフロペラジン、ベラパミル、ＢＩＢＷ２２ＢＳ、デキシニグルジピン、ガロパミル、ＰＳＣ８３３、Ｒｏｌｌ−２９３３、トリメトキシベンゾイルヨヒンビン、ビリコダル（ＶＸ−７１０）、エラクリダル（ＧＦ１２０９１８）、ゾスキダル（ＬＹ３３５９７９）、ＭＳ−２０９、ＯＣ−１４４−０９３、ラニキダル（Ｒ１０１９３３）、Ｓ９７８８、タリキダル（ＸＲ９５７６）、ＸＲ９０５１及びＯＮＴ−０９３から選択される排出トランスポーター阻害剤を含んでなる組合せが提供される。
【００４５】
本発明の治療的組合せは、適した医薬組成物の形態で投与することができる。本発明のこの側面によれば、癌のような過剰増殖性疾病の治療において使用するための医薬組成物が提供され、これは、本明細書中で先に定義したとおりの組合せを、医薬的に受容可能な賦形剤又は担体と共に含んでなる。
【００４６】
本明細書中に記載された組成物は、例えば錠剤又はカプセルとして経口投与、例えば滅菌溶液、懸濁液又は乳液として非経口注射（静脈内、皮下、筋肉内、血管内又は注入を含む）、例えば軟膏又はクリームとして局所投与、例えば座薬として直腸投与のために適した形態であることができ、或いは投与の経路は、領域放出又は局所放出による腫瘍への直接注射によることができる。本発明の他の態様において、組合せ治療の式（Ｉ）の化合物は、内視鏡的に、気管内的に、病巣内的に、経皮的に、静脈内的に、皮下的に、腹腔内的に又は腫瘍内的に放出することができる。一般的に、本明細書中に記載された組成物は、慣用的な方法で、当技術において公知である慣用的な賦形剤又は担体を使用して調製することができる。
【００４７】
錠剤の製剤のために適した医薬的に受容可能な賦形剤又は担体は、例えば、ラクトース、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム又は炭酸カルシウムのような不活性な賦形剤、コーンスターチ又はアルギン酸のような顆粒化及び崩壊剤；ゼラチン又はデンプンのような結合剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸又はタルクのような潤滑剤；４−ヒドロキシ安息香酸エチル又はプロピルのような保存剤、並びにアスコルビン酸のような抗酸化剤を含む。錠剤の製剤は、被覆されないか、或いはその崩壊性及びその後の胃腸管内における活性成分の吸収を変更するため、又はその安定性及び／又は外観を改良するためのいずれかのために、いずれの場合も慣用的な被覆剤及び当技術において公知の方法を使用して被覆することができる。
【００４８】
経口使用のための組成物は、活性成分が不活性の固体賦形剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム又はカオリンと混合された硬質ゼラチンカプセル、或いは活性成分が水又はラッカセイ油、液体パラフィン若しくはオリーブ油のような油と混合された軟質ゼラチンカプセルの形態であることができる。
【００４９】
本発明の組成物は、好都合には単位剤形で提供される。
製剤に対する更なる情報に対して、読者は、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｃｏｒｗｉｎ  Ｈａｎｓｃｈ；Ｃｈａｉｒｍａｎ  ｏｆ  Ｅｄｉｔｏｒｉａｌ  Ｂｏａｒｄ），Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ  １９９０の５巻の２５．２章を参照されたい。
【００５０】
式（Ｉ）の化合物は、一般的に、例えば、０．０５ｍｇ／ｋｇないし５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の日量が投与されるように、必要な場合分割投与で与えられて、投与されるものである。一般的に、非経口経路が使用される場合、より低い投与量が投与されるものである。従って、例えば、静脈内投与において、例えば０．０５ｍｇ／ｋｇないし２５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の投与量が、一般的に使用されるものである。同様に、吸入による投与において、例えば０．０５ｍｇ／ｋｇないし２５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の投与量が使用されるものである。典型的には、単位剤形は、約０．０５ｍｇないし２５ｍｇの式（Ｉ）の化合物を含有するものである。
【００５１】
排出トランスポーター阻害剤は、既知の臨床的習慣によって投与することができる。
本明細書中に記載された投与量及び予定は、特別な疾病状態及び患者の全体的状態によって変更することができる。例えば、毒性を減少するために、組合せ治療の成分の上述の投与量を減少することが必要であるか又は好ましいことであることができる。本発明の組合せ治療に加えて、一つ又はそれより多い更なる化学療法剤が使用される場合、投与量及び予定も、更に変更することができる。予定は、いずれもの特定の患者を治療している医師によって、その職業的技術及び知識を使用して決定することができる。
【００５２】
本発明による医薬組成物が、式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩、及び排出トランスポーター阻害剤、並びに医薬的に受容可能な賦形剤又は担体を含んでなる組成物を含むことは認識されるものである。このような組成物は、都合よくは癌のような過剰増殖性疾病に治療における同時投与のための本発明の治療的組合せ産物を提供する。
【００５３】
本発明による医薬組成物は、更に式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩及び医薬的に受容可能な賦形剤又は担体を含んでなる第１の組成物、並びに排出トランスポーター阻害剤及び医薬的に受容可能な賦形剤又は担体を含んでなる第２の組成物を含んでなる別個の組成物を含む。このような組成物は、都合よくは癌又は他の過剰増殖性疾病の治療における連続又は別個投与のための本発明の治療的組合せを提供するが、しかし別個の組成物は、更に同時に投与することもできる。
【００５４】
都合よくは、このような本発明の医薬組成物は、式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩を含有する適した組成物を伴う第１の容器、及び排出トランスポーター阻害剤を含有する適した組成物を伴う第２の容器を含んでなるキットを含んでなる。本発明のこの側面によれば：−
ａ）第１の単位剤形中の、医薬的に受容可能な賦形剤又は担体と一緒の式（Ｉ）の化合物又は医薬的に受容可能なその塩；
ｂ）第２の単位剤形中の、医薬的に受容可能な賦形剤又は担体と一緒の排出トランスポーター阻害剤；及び
ｃ）前記第１及び第２の剤形を含有する容器手段；
を含んでなる、癌のような過剰増殖性疾病の治療において使用するためのキットが提供される。
【００５５】
本発明のこの側面によれば、乳房、大腸、結腸直腸、肺、前立腺、膵臓又は膀胱癌或いは白血病又はリンパ腫の治療において使用するための、本明細書中で定義したとおりの組合せを、医薬的に受容可能な賦形剤又は担体と共に含んでなる医薬組成物も更に提供される。
【００５６】
本発明の更なる側面によれば、癌のような過剰増殖性疾病の治療において使用するための本明細書中で定義されたとおりの組合せが提供される。
本発明のこの側面によれば、乳房、大腸、結腸直腸、肺、前立腺、膵臓又は膀胱癌或いは白血病又はリンパ腫の治療において使用するための、本明細書中で先に定義したとおりの組合せも更に提供される。本明細書中で記述される白血病及びリンパ腫は、急性骨髄性白血病のような骨髄系統又はリンパ系統の腫瘍であることができる。
【００５７】
本発明の更なる側面によれば、癌のような過剰増殖性疾病の治療を提供するための、ヒトのような温血動物に対する投与のための医薬の製造における、本明細書中で先に定義したとおりの組合せの使用が提供される。
【００５８】
本発明のこの側面によれば、乳房、大腸、結腸直腸、肺、前立腺、膵臓又は膀胱癌或いは白血病又はリンパ腫の治療を提供するための、ヒトのような温血動物に対する投与のための医薬の製造における、本明細書中で先に定義したとおりの組合せの使用も更に提供される。
【００５９】
本発明の更なる側面によれば、癌又は他の過剰増殖性疾病の治療のための方法が提供され、これは、このような治療を必要とするヒトのような温血動物に、本明細書中で定義したとおりの組合せの有効な量の成分を投与することを含んでなる。
【００６０】
本発明のこの側面によれば、乳房、大腸、結腸直腸、肺、前立腺、膵臓又は膀胱癌或いは白血病又はリンパ腫の治療のための方法も更に提供され、これは、このような治療を必要とするヒトのような温血動物に、本明細書中で先に定義したとおりの組合わせの有効な量の成分を投与することを含んでなる。
【００６１】
本発明のこの側面によれば、癌のような過剰増殖性疾病の治療のための方法も更に提供され、これは、本明細書中で先に定義したとおりの組合わせの有効な量の成分の、このような治療を必要とするヒトのような温血動物への同時、連続又は別個投与を含んでなる。
【００６２】
本発明のこの側面によれば、乳房、大腸、結腸直腸、肺、前立腺、膵臓又は膀胱癌或いは白血病又はリンパ腫の治療のための方法も更に提供され、これは、本明細書中で先に定義したとおりの組合せ剤の有効な量の成分の、このような治療を必要とするヒトのような温血動物への同時、連続又は別個投与を含んでなる。
【００６３】
本明細書中で先に定義したとおりの本発明の組合せ治療剤は、単独の療法として投与することができるか、或いは更に、外科手術若しくは放射線療法又は更なる化学療法剤の投与を含むことができる。
【００６４】
外科手術は、本発明の組合せ治療剤の投与の前、最中又は後の部分的又は完全な腫瘍の切除の段階を含んでなることができる。
本発明の組合せ治療との所望による使用のための他の化学療法剤は、以下の分類の治療剤：−
（ｉ）アルキル化剤（例えばシス−プラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロランブシル、ブスルファン及びニトロソ尿素）；代謝拮抗剤（例えば５−フルオロウラシル及びテガフールのようなフルオロピリミジンのような葉酸代謝拮抗剤、ラルチトレキセド、メトトレキセート、シトシンアラビノシド及びヒドロキシ尿素；抗腫瘍性抗生物質（例えばアドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン−Ｃ、ダクチノマイシン及びミトラマイシンのようなアントラサイクリン）；抗有糸分裂剤（例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン及びビノレルビンのようなビンカアルカロイド、並びにタキソール及びタキソテールのようなタキソイド）；及びトポイソメラーゼ阻害剤（例えばエトポシド及びテニポシドのようなエピポドフィロトキシン、アムサクリン、トポテカン並びにカンプトテシン）のような、腫瘍内科学において使用されるような、他の抗増殖性／抗悪性腫瘍性薬物及びこれらの組合せ；
（ｉｉ）抗エストロゲン剤（例えばタモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン及びイドキシフェン（ｉｏｄｏｘｙｆｅｎｅ））、抗アンドロゲン剤（例えばビカルタミド、フルタミド、ニルタミド及び酢酸シプロテロン）、ＬＨＲＨアンタゴニスト又はＬＨＲＨアゴニスト（例えばゴセレリン、リュープロレリン及びブセレリン）、プロゲストーゲン（例えば酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害剤（例えばアナストロゾール、レトロゾール、ボロゾール（ｖｏｒａｚｏｌｅ）及びエキセメスタン）及びフィナステリドのような５α−レダクターゼの阻害剤のような、細胞分裂停止剤；
（ｉｉｉ）癌細胞の侵襲を阻害する薬剤（例えばマリマスタットのようなメタロプロテイナーゼ阻害剤、及びウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子受容体機能の阻害剤）；
（ｉｖ）成長因子機能の阻害剤、例えばこのような阻害剤は、成長因子抗体及び成長因子受容体抗体（例えば抗ｅｒｂｂ２抗体トラスツズマブ［ハーセプチンＴＭ］及び抗ｅｒｂｂ１抗体セツキシマブ［Ｃ２２５］）、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤及びセリン／トレオニンキナーゼ阻害剤、例えば上皮細胞成長因子ファミリーの阻害剤（例えば、Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ゲフィチニブ、ＡＺＤ１８３９）、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン（エルロチニブ、ＯＳＩ−７７４）及び６−アクリルアミド−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ＣＩ１０３３）のようなＥＧＦＲファミリーのチロシンキナーゼ阻害剤）、例えば、血小板由来成長因子ファミリーの阻害剤及び例えば肝細胞成長因子ファミリーの阻害剤を含む；
（ｖ）血管内皮成長因子の影響を阻害するもののような抗血管新生剤（例えば抗血管内皮細胞成長因子抗体ベバシズマブ［アバスチンＴＭ］、国際特許出願ＷＯ９７／２２５９６、ＷＯ９７／３００３５、ＷＯ９７／３２８５６及びＷＯ９８／１３３５４中に開示されているもののような化合物）、及び他の機構によって作用する化合物（例えばリノマイド、インテグリンαｖβ３機能の阻害剤及びアンジオスタチン）；
（ｖｉ）コンブレタスタチンＡ４並びに国際特許出願ＷＯ９９／０２１６６、ＷＯ００／４０５２９、ＷＯ００／４１６６９、ＷＯ０１／９２２２４、ＷＯ０２／０４４３４及びＷＯ０２／０８２１３中に開示されている化合物のような血管損傷剤；
（ｖｉｉ）アンチセンス療法、例えばＩＳＩＳ  ２５０３、抗−ｒａｓアンチセンスのような上記に収載した標的に向けられるもの；
（ｖｉｉｉ）例えば、異常ｐ５３或いは異常ＢＲＣＡ１又はＢＲＣＡ２のような異常遺伝子を置換えるアプローチ、シトシンデアミナーゼ、チミジンキナーゼ又は細菌性ニトロレダクターゼ酵素を使用するもののようなＧＤＥＰＴ（遺伝子特異的酵素プロドラッグ療法）アプローチ、及び多剤耐性遺伝子療法のような化学療法又は放射線療法に対する患者の許容性を増加するアプローチを含む、遺伝子療法的アプローチ；並びに
（ｉｘ）例えば、インターロイキン２、インターロイキン４又は顆粒球マクロファージコロニー刺激因子のようなサイトカインによる形質移入のような患者の腫瘍細胞の免疫原性を増加するためのｅｘ−ｖｉｖｏ及びｉｎ−ｖｉｖｏアプローチ、Ｔ細胞アネルギーを減少するアプローチ、サイトカインで形質移入された樹状細胞のような形質移入された免疫細胞を使用するアプローチ、サイトカインで形質移入された腫瘍細胞系を使用するアプローチ及び抗イディオタイプ抗体を使用するアプローチを含む、免疫療法アプローチ；
を含む。
【００６５】
このような併用治療は、治療の個々の成分の同時、連続又は別個投与によって達成することができる。このような組合せ産物は、本明細書中で先に記載した範囲内の投与量の本発明の組合せ、及びその認可された投与量の範囲の他の医薬的に活性な薬剤を使用する。
【００６６】
本発明の一つの側面によれば、本明細書中で先に定義した組合せの成分及び上記に定義したものから選択される更なる抗腫瘍剤を含んでなる細胞増殖性疾患（癌のような）の治療において使用するために適した組合せが提供される。
【００６７】
本発明のこの側面によれば、本明細書中で先に定義したとおりの組合せの成分、及び癌の併用治療のために上記で定義したとおりの更なる抗腫瘍剤を含んでなる医薬製品が提供される。
【発明を実施するための形態】
【００６８】
２−｛３−［（７−｛３−［エチル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］プロポキシ｝−キナゾリン−４−イル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル｝−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミドの調製
２−（３−｛［７−（３−クロロプロポキシ）キナゾリン−４−イル］アミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミド、ヨウ化カリウム、ジメチルアミン及びＮ−（エチルアミノ）エタノールを混合し、そして５０℃で７２時間加熱した。反応物をジクロロメタン（２０ｍｌ）で希釈し、そして４０Ｓシリカのバイオテージカラムに付加した。ジクロロメタン、続いて極性を増加してジクロロメタン：メタノール（９：１）、次いでジクロロメタン：メタノール：アンモニア（９：１：０．８）による溶出により、２−｛３−［（７−｛３−［エチル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］プロポキシ｝−キナゾリン−４−イル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル｝−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミドを、黄色の固体として得た：
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ  ｄ６）：１２．３１（ｍ，１Ｈ），１０．３９（ｓ，１Ｈ），１０．１５（ｍ，１Ｈ），８．５１（ｓ，２Ｈ），７．６２（ｄ，１Ｈ），７．３５（ｍ，２Ｈ），７．１６（ｍ，２Ｈ），６．９０（ｔ，１Ｈ），６．７８（ｍ，１Ｈ），４．２９（ｍ，１Ｈ），４．２０（ｔ，２Ｈ），３．７６（ｓ，２Ｈ），３．４５（ｍ，２Ｈ），３．３０（ｍ，４Ｈ），２．６１（ｔ，２Ｈ），１．８９（ｔ，２Ｈ），０．９５（ｔ，３Ｈ）：
ＭＳ（＋ｖｅ  ＥＳＩ）：５０８．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６９】
出発物質として使用した２−（３−｛［７−（３−クロロプロポキシ）キナゾリン−４−イル］アミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミドは、以下のように製造した：
ａ）２−アミノ−４−フルオロ安息香酸を、２−メトキシエタノール中に溶解した。酢酸ホルムアミジンを加え、そして混合物を還流で１８時間加熱した。反応物を冷却し、濃縮し、そして残渣を水酸化アンモニウム水溶液（０．０１Ｎ）中で１時間攪拌した。懸濁液を濾過し、水で洗浄し、そして五酸化リンで乾燥して、７−フルオロキナゾリン−４（３Ｈ）−オンを、オフホワイト色の固体として得た：
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ  ｄ６）：１２．３２（ｂｒｓ，１Ｈ），８．１９（ｄｄ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．４５（ｄｄ，１Ｈ），７．３９（ｍ，１Ｈ）：
ＭＳ（−ｖｅ  ＥＳＩ）：１６３（Ｍ−Ｈ）−，
ＭＳ（＋ｖｅ  ＥＳＩ）：１６５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７０】
ｂ）水素化ナトリウムを、０℃で１，３−プロパンジオールのジメチルホルムアミド中の溶液に加えた。７−フルオロキナゾリン−４（３Ｈ）−オンを分割して加え、そして反応混合物を６０℃で、次いで１１０℃で３時間加熱した。反応物を０℃に冷却し、水でクエンチし、そしてｐＨを５．９に調節した。得られた懸濁液を濾過し、水で、次いでエーテルで洗浄し、そして五酸化リンで乾燥して、７−（３−ヒドロキシプロポキシ）キナゾリン−４（３Ｈ）−オンを、白色の粉末として得た：
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ  ｄ６）：１１．９０（ｂｒｓ，１Ｈ），８．０４（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，１Ｈ），７．１０（ｍ，２Ｈ），４．１７（ｔ，２Ｈ），３．５８（ｔ，２Ｈ），１．９２（ｍ，２Ｈ）：
ＭＳ（＋ｖｅ  ＥＳＩ）：２２１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７１】
ｃ）７−（３−ヒドロキシプロポキシ）キナゾリン−４（３Ｈ）−オン及び塩化チオニルを混合した。ジメチルホルムアミドを加え、そして反応混合物を８５℃で１時間加熱した。混合物を室温に冷却し、トルエンで希釈し、そして乾燥状態まで蒸発した。これを塩化チオニルが除去されるまで繰返した。残渣をジクロロメタン中に溶解し、そして飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。水層をジクロロメタンで抽出した。有機物を混合し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、そして濃縮して、黄色の固体を得た。エーテルによる摩砕により、より溶解度の低い不純物を除去し、そしてエーテルの濾液を濃縮して、４−クロロ−７−（３−クロロプロポキシ）キナゾリンを、オフホワイト色の固体（８．５ｇ、７０％収率）として得た：
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ  ｄ６）：１３．２５（ｂｒｓ，１Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｄ，１Ｈ），７．１７（ｍ，２Ｈ），４．２１（ｔ，２Ｈ），３．８３（ｔ，２Ｈ），２．２３（ｍ，２Ｈ）：
ＭＳ（＋ｖｅ  ＥＳＩ）：２５７，２５９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７２】
ｄ）４−クロロ−７−（３−クロロプロポキシ）キナゾリン及び（３−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）酢酸を、ジメチルホルムアミド中で混合した。ジオキサン中の４ＭのＨＣｌの溶液を加え、そして反応物を９０℃で４０分間加熱した。溶液を室温に冷却し、水で希釈し、そしてセライトを通して濾過した。酸性の溶液をｐＨ４．９に塩基性化し、そして黄色の粉末を濾過した。（ｐＨ３で、赤色の固体が沈殿し、これを単離し、水中に懸濁し、そしてｐＨ１２に塩基性化した。ｐＨ４．８に注意深く調節して戻して、黄色い粉末の沈澱物を得て、これを最初の収穫物と混合した）。固体をジエチルエーテルで洗浄し、そして五酸化リンで乾燥して、（３−｛［７−（３−クロロプロポキシ）キナゾリン−４−イル］アミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）酢酸を、淡いオレンジ色の固体として得た：
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ  ｄ６）：１２．６０（ｂｒｓ，２Ｈ），１０．７８（ｂｒｓ，１Ｈ），８．６５（ｓ，１Ｈ），８．６０（ｄ，１Ｈ），７．２６（ｄ，１Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），６．６７（ｓ，１Ｈ），４．２８（ｔ，２Ｈ），３．８３（ｔ，２Ｈ），３．６７（ｓ，２Ｈ），２．２４（ｍ，２Ｈ）：
ＭＳ（−ｖｅ  ＥＳＩ）：３６０，３６２（Ｍ−Ｈ）−，
ＭＳ（＋ｖｅ  ＥＳＩ）：３６２，３６４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７３】
ｅ）３−フルオロアニリンを、（３−｛［７−（３−クロロプロポキシ）キナゾリン−４−イル］アミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）酢酸のピリジン中の懸濁液に加え、そして反応物を０℃に冷却した。オキシ塩化リンを滴下により加え、そして反応物を０℃で１時間攪拌した。反応物を周囲温度に温め、そして更なるオキシ塩化リンを加えた。反応物を４．５時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチル：エーテル（１００ｍｌ：３７ｍｌ）で希釈し、そして１８時間撹拌した。沈澱物を濾過し、水中に懸濁し、そして水酸化アンモニウム（７％）で中和した。得られた黄色の懸濁液を濾過し、水で洗浄し、そして乾燥（五酸化リン）して、２−（３−｛［７−（３−クロロプロポキシ）キナゾリン−４−イル］アミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミドを、オレンジ色の粉末として得た。
【００７４】
リン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチルの調製
リン酸ジ（ｔｅｒｔ−ブチル）２−［［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］−キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］（エチル）アミノ］エチルを、ジオキサン中に懸濁し、そして塩酸のジオキサン中の溶液（４．０Ｎ）で周囲温度で１５時間処理した。固体を濾過によって回収し、ジオキサンで洗浄し、真空中の５０℃で乾燥して、表題化合物を、淡黄色の二塩酸塩として得た：
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ  ｄ６）：１１．９８（ｓ，１Ｈ），１０．７９（ｓ，１Ｈ），８．９３（ｓ，１Ｈ），８．８３（ｄ，１Ｈ），７．６５（ｄ，１Ｈ），７．４７（ｄ，１Ｈ），７．３８（ｍ，３Ｈ），６．８９（ｔ，１Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ），４．３２（ｔ，２Ｈ），４．２８（ｍ，２Ｈ），３．８５（ｓ，２Ｈ），３．４２（ｍ，２Ｈ），３．３４（ｍ，２Ｈ），３．２７（ｑ，２Ｈ），２．２９（ｍ，２Ｈ），１．２８（ｔ，３Ｈ）：
ＭＳ（＋ｖｅ  ＥＳＩ）：５８７．８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７５】
出発物質として使用したリン酸ジ（ｔｅｒｔ−ブチル）２−［［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］−キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］（エチル）アミノ］エチルを、以下のように調製した：
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジエチルホスホルアミダイト（４１７μｍ、１．５ｍｍｏｌ）を、２−｛３−［（７−｛３−［エチル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］プロポキシ｝キナゾリン−４−イル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル｝−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミドのジメチルホルムアミド中の溶液にアルゴン下の周囲温度で、テトラゾールの存在中でゆっくりと加えた。混合物を周囲温度で１．５時間撹拌し、−１０℃に冷却し、そして過酸化水素（９．０Ｎ溶液）をゆっくりと加えた。得られた混合物を周囲温度で２時間攪拌した。次いで水中のメタ重亜硫酸ナトリウムを０℃で加え、そして混合物を周囲温度で０．５時間撹拌した。混合物を濃縮し、ジクロロメタン／メタノール（８：２）を加えてから、固体を濾過し、そしてジクロロメタン／メタノールで洗浄した。濾液の真空中の濃縮、それに続くジクロロメタン／メタノール（９０：１０）からジクロロメタン／メタノール／アンモニア（７．０Ｎ）（９０：１０：１）で溶出するシリカゲルのクロマトグラフィーにより、リン酸ジ（ｔｅｒｔ−ブチル）２−［［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］（エチル）アミノ］エチルを、淡黄色の固体として得た。
【００７６】
上記で二塩酸塩として合成したリン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチルを、更に以下の方法によって遊離塩基としても調製した：
上記で二塩酸塩として合成したリン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチルを、メタノール中で可溶化し、そして酸化シクロヘキサンを溶液に加えた。溶液を周囲温度で４８時間撹拌し、この時間中に白色の固体が沈澱した。混合物をジエチルエーテル（１００ｍｌ）で希釈し、そして固体を濾過によって回収し、エーテルで洗浄し、そして真空中で乾燥して、リン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチルの遊離塩基を、淡黄色の固体として得た：
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ  ｄ６）：１０．５３（ｓ，１Ｈ），８．５７（ｓ，１Ｈ），８．５４（ｄ，１Ｈ），７．６２（ｄ，１Ｈ），７．３７（ｍ，２Ｈ），７．２７（ｓ，１Ｈ），７．２１（ｄ，１Ｈ），６．８８（ｍ，１Ｈ），６．６５（ｓ，１Ｈ），４．２７（ｔ，２Ｈ），４．０５（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｓ，２Ｈ），３．２４（ｍ，２Ｈ），３．２１（ｔ，２Ｈ），３．１３（ｑ，２Ｈ），２．１８（ｍ，２Ｈ），１．２４（ｔ，３Ｈ）：
ＭＳ（＋ｖｅ  ＥＳＩ）：５８８（Ｍ＋Ｈ）＋．
Ｃ２６Ｈ３１ＦＮ７Ｏ６Ｐ＋３．０Ｈ２Ｏは、Ｃ，４８．７％；Ｈ，５．８％；Ｎ，１５．３％を必要とする；実測値Ｃ，４８．８％；Ｈ，５．３５％；Ｎ，１５．１５％。
【００７７】
リン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチルの調製（別経路）
７−（３−ヒドロキシプロポキシ）キナゾリン−４（３Ｈ）−オンの調製
２−アミノ−４−フルオロ安息香酸及び１，３−プロパンジオールを一緒に撹拌し、そして１２０℃に加熱した。酢酸ホルムアミジンを加え、そして混合物を３．５時間撹拌して、７−フルオロキナゾリン−４−オンを得た。次いで水酸化カリウムの１，３−プロパンジオール中の溶液を混合物に２時間５０分の時間をかけて加え、次いでこれを１５℃に冷却した。これに続いて、混合物を１２５℃で５時間加熱してから、７５℃に冷却した。希塩酸（約６重量／重量％）を、ｐＨ４．５が達成されるまで反応混合物にゆっくりと加えた。混合物を０℃に６時間かけて冷却し、そしてこの温度で更に１時間維持してから、粗製生成物を遠心によって単離した。粗製物質を水で洗浄し、そして真空中で乾燥してから、メタノール中に穏やかな還流で溶解し、そして減圧下の４２℃の温度で部分的に濃縮した。次いでこの溶液を０℃に３時間かけて冷却し、そして得られた生成物を濾過によって単離してから、真空中で乾燥した。７−（３−ヒドロキシプロポキシ）キナゾリン−４（３Ｈ）−オンを、７３％の収率で回収した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ  ｄ６）：１１．９０（ｂｒｓ，１Ｈ），８．０４（ｓ，１Ｈ），８．００（ｄ，１Ｈ），７．１０（ｍ，２Ｈ），４．１７（ｔ，２Ｈ），３．５８（ｔ，２Ｈ），１．９２（ｍ，２Ｈ）：
ＭＳ（＋ｖｅ  ＥＳＩ）：２２１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７８】
４−クロロ−７−（３−クロロプロポキシ）キナゾリンの調製
７−（３−ヒドロキシプロポキシ）キナゾリン−４（３Ｈ）−オン、トルエン及びＮ，Ｎ−ジイソプロピル−ホルムアミド（ＤＩＰＦ）を一緒に混合し、そして７６℃に加熱してから、塩化チオニルを１時間かけて７６℃で加えた。次いで更なる塩化チオニルを１時間かけて加え、その後、温度を７６℃で１時間維持した。混合物を１１時間還流して、透明な溶液を得て、これを３８℃に冷却し、そして真空蒸留にかけて、トルエン及び塩化チオニルを除去した。次いでトルエンを加え、そして溶液を３５℃に保ち、この間濾過助剤（セライト又はハーバーライト（ｈａｒｂｏｒｌｉｔｅ）及び活性炭）でこれを透明にした。得られた溶液を部分的に濃縮してから、ヘプタンを加え、そして混合物を０℃に冷却し、そして２３時間撹拌した。形成された明るい褐色の懸濁液を濾過によって単離し、冷ヘプタンで洗浄し、次いで真空中の３０℃で乾燥して、４−クロロ−７−（３−クロロプロポキシ）キナゾリン（６３．６％）を得た：
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ  ｄ６）：１３．２５（ｂｒｓ，１Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｄ，１Ｈ），７．１７（ｍ，２Ｈ），４．２１（ｔ，２Ｈ），３．８３（ｔ，２Ｈ），２．２３（ｍ，２Ｈ）：
ＭＳ（＋ｖｅ  ＥＳＩ）：２５７，２５９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７９】
（３−｛［７−（３−クロロプロポキシ）キナゾリン−４−イル］アミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）酢酸の調製
４−クロロ−７−（３−クロロプロポキシ）キナゾリンを、１モル当量の（３−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）酢酸のＮ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）中の溶液に加え、そして次いで１２時間放置した。生成物の結晶化が、種結晶の添加の有無及び貧溶媒としてのアセトニトリルの添加の有無にかかわらず起こることが観察された。得られた固体を濾過によって単離し、Ｎ−メチルピロリジノン及びアセトニトリルで洗浄し、そして次いで真空中で乾燥して、（３−｛［７−（３−クロロプロポキシ）キナゾリン−４−イル］アミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）酢酸・塩酸塩を、１モル当量のＮＭＰを含有するオフホワイト色の固体として得た：
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ  ｄ６）：８．９２（ｓ，１Ｈ），８．７９（ｄ，１Ｈ），７．４５（ｐｒ  ｏｆ  ｄ，１Ｈ），７．３８（ｄ，１Ｈ），６．７（ｓ，１Ｈ），６．６７（ｓ，  １Ｈ），４．３１（ｔ，２Ｈ），３．８５（ｔ，２Ｈ），３．７２（ｓ，２Ｈ），３．３（ｔ），２．７（ｓ，），２．２７（ｍ，２Ｈ），２．１８（ｔ），１．９（ｍ）：
ＭＳ（＋ｖｅ  ＥＳＩ）：３６２．１０１５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８０】
２−（３−｛［７−（３−クロロプロポキシ）キナゾリン−４−イル］アミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミドの調製
（３−｛［７−（３−クロロプロポキシ）キナゾリン−４−イル］アミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）酢酸・塩酸塩のＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）中の懸濁液に、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）を１５−２５℃（理想的には１５℃）の温度を維持しながら、続いてＮ−メチルモルホリンを更に温度を維持しながら加える。３−フルオロアニリン（理想的には１０−１５モル当量間の大過剰で）を、温度を２５℃より低く維持するような速度で加える。一方１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ・ＨＣｌ）を水中に溶解して、約４２重量／容量％の溶液を得る（存在する水の量は、方法の後の方の結晶化の結果に対して重要である）。この溶液を、反応物を２０−２５℃間に維持するように、制御された様式で８時間の時間をかけてスラリーに加える；次いで混合物に生成物の好ましい形態の結晶の種結晶を添加する（理想的には予想収量の約１％の量で）。混合物を約１６時間温度を維持（理想的には２０−２５℃）しながら撹拌し、次いで貧溶媒のアセトニトリルを、続いて水を制御された様式で、そして２０−２５℃間の温度を維持しながら加え、続いて約２１時間の長い間撹拌する；これは、生成物の回収及び形態を最適化するためである。物質を濾過によって単離し、そしてケーキをＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド：水：アセトニトリル（５：３：２の体積比）の混合物、アセトニトリルで洗浄し、そして次いで乾燥（真空中又は窒素の流れ下で）して、ある程度のＤＭＡを含有する２−（３−｛［７−（３−クロロプロポキシ）キナゾリン−４−イル］アミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミドを、約７６−７８％の収率で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ  ｄ６；残留ＤＭＡを含有）：１０．４（ｓ，１Ｈ），８．９（ｓ，１Ｈ），８．８（ｄ，１Ｈ），７．５９（ｐｒ  ｏｆ  ｍ，１Ｈ），７．４６（ｐｒ  ｏｆ  ｄ，１Ｈ），７．３３（ｍ，２Ｈ），７．２９（ｄ，１Ｈ），６．８５（ｍ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），４．３５（ｔ，２Ｈ），３．８５（ｔ，４Ｈ），２．９５（ｓ），２．８３（ｓ），２．５６（ｓ），２．２５（ｍ，２Ｈ），１．９５（ｓ）：
ＭＳ（＋ｖｅ）：４５５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８１】
２−｛３−［（７−｛３−［エチル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］プロポキシ｝−キナゾリン−４−イル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル｝−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミドの調製
２−（３−｛［７−（３−クロロプロポキシ）キナゾリン−４−イル］アミノ｝−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミド及び２−（エチルアミノ）エタノール（理想的には１２モル当量）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドに不活性雰囲気下（例えば窒素によって与えられるような）で加え、そして混合物を９０℃で撹拌しながら加熱した。１２−１６時間（理想的には１２時間）後、反応物を約８５℃に冷却し戻し、そして制御された様式で温度を８０−８５℃間に維持しながら水を加える。バッチを８０℃に調節し、そして生成物の好ましい形態の結晶の種結晶を添加（理想的には予想収量の約１％の量）する。混合物を、必要な形態で、そして良好な濾過速度を得るために十分な大きさの生成物が結晶するように、約２０時間かけて注意深く制御された様式で２０℃に冷却した。次いで生成物を濾過し、そして水／Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドの混合物及びアセトニトリルで洗浄し、そして水和された形態の生成物を得るために適当に脱液する。これに続いて、ケーキを、一定時間（理想的には２時間）でｉｎ  ｓｉｔｕの温アセトニトリル中でスラリー状態に（理想的には４０℃の温度で）し、次いで濾過し、更にアセトニトリルで洗浄し、そして次いで乾燥（真空中又は窒素の流れ下で）して、殆んど無水の２−｛３−［（７−｛３−［エチル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］プロポキシ｝−キナゾリン−４−イル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル｝−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミドを、オフホワイト色の固体として、８５−９０％の収率で得る。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ  ｄ６）：１０．５５（ｓ，１Ｈ），９．４５（ｂｒｓ，１Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），８．８（ｄ，１Ｈ），７．６３（ｐｒ  ｏｆ  ｍ，１Ｈ），７．４７（ｐｒ  ｏｆ  ｄ，１Ｈ），７．３７（ｍ，２Ｈ），７．３２（ｄ，１Ｈ），６．９（ｍ，１Ｈ），６．７７（ｓ，１Ｈ），４．３２（ｔ，２Ｈ），３．８３（ｂｒｓ，２Ｈ），３．７６（ｔ，２Ｈ），３．３５（ｍ，２Ｈ），３．２５（ｍ，４Ｈ），２．２５（ｍ，２Ｈ），１．２５（ｔ，３Ｈ）：
ＭＳ（＋ｖｅ  ＥＳＩ）：５０８．４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８２】
リン酸モノ（ｔｅｒｔ−ブチル）２−［［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］−キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］（エチル）アミノ］エチルの調製
２−｛３−［（７−｛３−［エチル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］プロポキシ｝−キナゾリン−４−イル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル｝−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミド及びピリジン・塩酸塩を、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド中で混合し、そして溶液を−１５℃に冷却した。次いでジ−ｔｅｒｔ−ブチルジエチルホスホルアミダイト（１．５−２．１モル当量）を温度を維持しながら加えた。反応混合物を、３０重量／重量％の過酸化水素（約４．２モル当量）で、温度を周囲温度より低く保ちながらｉｎ  ｓｉｔｕで処理した。残留した過酸化水素をメタ亜硫酸ナトリウム（１０重量／容量％溶液として）の添加によって、温度を４０℃より低く維持しながら破壊した。次いでリン酸ジｔｅｒｔ−ブチル２−［［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］（エチル）アミノ］エチルの得られた溶液を、４０℃に加熱し、そして水酸化ナトリウム溶液（２Ｍ）を加えて、ｐＨを５−６．５に調節した。温度及びｐＨを、種結晶の添加を伴って約９０分間維持した。次いで水を入れ、そしてｐＨを、回収を最適化するためにｐＨ８−９の範囲に更に調節した。温反応混合物を直接濾過して、リン酸モノｔｅｒｔ−ブチル２−［［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］−キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］（エチル）アミノ］エチルを得て、これをＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド／水の混合物及び水で洗浄し、そして最後に乾燥（真空中又は適した不活性ガスの流れで）して、リン酸モノ（ｔｅｒｔ−ブチル）２−［［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］−キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］（エチル）アミノ］エチルを、オフホワイト色の固体として８６−９３％間の収率で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ  ｄ６）：１０．４８（ｓ，１Ｈ），９．７５（ｂｒｓ，１Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），８．８５（ｄ，１Ｈ），７．６７（ｐｒ  ｏｆ  ｍ，１Ｈ），７．４８（ｐｒ  ｏｆ  ｄ，１Ｈ），７．３７（ｍ，２Ｈ），７．３（ｄ，１Ｈ），６．８７（ｍ，１Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），４．３４（ｔ，２Ｈ），４．２８（ｍ，２Ｈ），３．８８（ｓ，２Ｈ），３．５３（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｍ，２Ｈ），３．３３（ｍ，２Ｈ），２．３（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），１．３２（ｔ，３Ｈ）：
ＭＳ（＋ｖｅ  ＥＳＩ）：（Ｍ＋Ｈ）＋  ６４４．２７６１、断片（ブチルを除く）５８８．２１４７。
【００８３】
リン酸モノ（ｔｅｒｔ−ブチル）２−［［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］−キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］（エチル）アミノ］エチルの調製−別経路
ピリジン・塩酸塩のＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド中のスラリーに、２−｛３−［（７−｛３−［エチル（２−ヒドロキシエチル）アミノ］プロポキシ｝−キナゾリン−４−イル）アミノ］−１Ｈ−ピラゾール−５−イル｝−Ｎ−（３−フルオロフェニル）アセトアミド及びジ−ｔｅｒｔ−ブチルジエチルホスホルアミダイト（理想的には１モル当量）のＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドの溶液を、長い時間（理想的には３時間）をかけ、そして温度を−２０ないし−１０℃（理想的には−１５℃）に維持しながら入れた。続いてこれに更にジ−ｔｅｒｔ−ブチルジエチルホスホルアミダイト（理想的には０．５モル当量）を、更に−２０ないし−１０℃間の温度（理想的には−１５℃）を維持しながら１時間で加えた。
【００８４】
反応混合物を、３０重量／重量％の過酸化水素（約４．２モル当量）で、温度を−１０℃より低く（理想的には−１２ないし−８℃）保ちながらｉｎ  ｓｉｔｕで処理し、そして一定時間（理想的には１６時間）この温度で保つ。残留した過酸化水素を、メタ亜硫酸ナトリウム（１０重量／容量％水溶液として）の添加によって、温度を４０℃より低く維持しながら破壊する。
【００８５】
次いで、得られたリン酸ジｔｅｒｔ−ブチル２−［［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］（エチル）アミノ］エチルの溶液を、４０℃に加熱し、そして水酸化ナトリウム溶液（理想的には２Ｍ）を加えて、ｐＨ５．５−６．５（理想的にはｐＨ６）に適した結晶質物質の種結晶の添加を伴って調節した。温度を保ち、そしてｐＨ５−６の範囲を更なる水酸化ナトリウム溶液の添加によって少なくとも２時間維持する。次いで水を入れ、そしてｐＨを、ｐＨ８−９の範囲に（理想的にはｐＨ８．８）更に、温度を維持（理想的には４０℃、しかし３５−４５℃の範囲内）しながら１６時間、回収を最適化するように調節する。温反応混合物を直接濾過して、リン酸モノｔｅｒｔ−ブチル２−［［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］（エチル）アミノ］エチルを得て、これを水で数回洗浄し、そして最後に乾燥（真空中又は適した不活性ガスの流れ中のいずれかで）して、リン酸モノ（ｔｅｒｔ−ブチル）２−［［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］（エチル）アミノ］エチルを、オフホワイト色の固体として８６−９３％間の収率で得る。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ  ｄ６）：１０．４８（ｓ，１Ｈ），９．７５（ｂｒｓ，１Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），８．８５（ｄ，１Ｈ），７．６７（ｐｒ  ｏｆ  ｍ，１Ｈ），７．４８（ｐｒ  ｏｆ  ｄ，１Ｈ），７．３７（ｍ，２Ｈ），７．３（ｄ，１Ｈ），６．８７（ｍ，１Ｈ），６．８３（ｓ，１Ｈ），４．３４（ｔ，２Ｈ），４．２８（ｍ，２Ｈ），３．８８（ｓ，２Ｈ），３．５３（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｍ，２Ｈ），３．３３（ｍ，２Ｈ），２．３（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），１．３２（ｔ，３Ｈ）：
ＭＳ（＋ｖｅ  ＥＳＩ）：（Ｍ＋Ｈ）＋  ６４４．２７６１  断片（ブチルを除く）５８８．２１４７。
【００８６】
リン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチルの調製
リン酸モノ（ｔｅｒｔ−ブチル）２−［［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］（エチル）アミノ］エチルを、水／テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）の混合物中に懸濁し、そして１．５ないし３．０モル当量間の過剰の塩酸（理想的には２Ｍの濃度で１．５モル当量を含有する）で処理した。混合物を５５−６５℃（理想的には６０℃）に加熱し、そして６０℃で約１時間保つ。次いで熱溶液を水酸化ナトリウム（好ましくは２Ｍの濃度で、そして１．７モル当量を含有）を使用して塩基性化して、ｐＨ５．０−５．５の範囲のｐＨを得て、そして次いで５５−６５℃（理想的には６０℃）で生成物の好ましい形態の結晶の種結晶を添加（理想的には予想される収量の０．０５重量／重量％の量）する。混合物をこの温度で少なくとも１時間撹拌してから、水を加え、そしてスラリーを撹拌し、そして制御された様式で約１２時間かけて冷却してから、周囲温度で少なくとも４時間撹拌し、そして次いで生成物を濾過によって単離する。濾過ケーキを連続して水、次いでＴＨＦで洗浄し、そして真空中で、又は一定重量が得られるまで水蒸気で湿らせた不活性ガスを固体上を通過させることによる、加湿法のいずれかで乾燥する。真空中の乾燥後、固体のリン酸二水素２−｛エチル［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］アミノ｝エチルを、周囲条件下で一定重量まで平衡させて、水和された形態を、淡黄色の針状物質として得る。生成物を約８１％の収率で得る。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ  ｄ６）：
ＭＳ（＋ｖｅ  ＥＳＩ）：５８７．８（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ  ｄ６）：１０．５３（ｓ，１Ｈ），８．５７（ｓ，１Ｈ），８．５４（ｄ，１Ｈ），７．６２（ｄ，１Ｈ），７．３７（ｍ，２Ｈ），７．２７（ｓ，１Ｈ），７．２１（ｄ，１Ｈ），６．８８（ｍ，１Ｈ），６．６５（ｓ，１Ｈ），４．２７（ｔ，２Ｈ），４．０５（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｓ，２Ｈ），３．２４（ｍ，２Ｈ），３．２１（ｔ，２Ｈ），３．１３（ｑ，２Ｈ），２．１８（ｍ，２Ｈ），１．２４（ｔ，３Ｈ）：
ＭＳ（＋ｖｅ  ＥＳＩ）：５８８（Ｍ＋Ｈ）＋．
Ｃ２６Ｈ３１ＦＮ７Ｏ６Ｐ＋３．０Ｈ２Ｏは、Ｃ，４８．７％；Ｈ，５．８％；Ｎ，１５．３％を必要とする；実測値Ｃ，４８．８％；Ｈ，５．３５％；Ｎ，１５．１５％。
【００８７】
ＭＤＲ細胞中の活性
以下の試験法を、ＭＤＲ細胞中のリン酸二水素２−[［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］（エチル）アミノ]エチルの活性を証明するために使用することができる。
【００８８】
方法
ＵＩＣ２モノクローナル抗体（ＩｍｍｕｎｏｔｅｃｈのマウスモノクローナルＩｇＧ２ａ抗体クローンＵＩＣ２、カタログ番号：１８６４）は、Ｐｇｐの細胞外エピトープと特異的に反応し、そしてＭＤＲ細胞中に運搬された薬物の排出を阻害する。ｍＡｂ  ＵＩＣ２を、Ｐｇｐに仲介される排出を特異的に阻害し、そしてＭＤＲ細胞中のリン酸二水素２−[［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］（エチル）アミノ]エチルの活性を増加するために使用した。
【００８９】
ＭＣＦ７  ＡＤＲ細胞は、Ｐｇｐ及び他の排出トランスポーターを高度に発現することが知られている。
１日目；８×１０４のＭＣＦ７  ＡＤＲ細胞／ｍｌを、９６ウェルの１００μｌの培地（ＤＭＥＭ、１０％ＣＦＳ、１％グルタミン）中に入れ、そして３７℃で一晩付着するままにした。
【００９０】
２日目；ＭＣＦ７  ＡＤＲ細胞の三つのウェルを未処理のままにし；ＭＣＦ７  ＡＤＲ細胞の三つのウェルを１００ｎＭのオーロラキナーゼ阻害剤で処理し；ＭＣＦ７  ＡＤＲ細胞の３×３のウェルを異なった濃度のＵＩＣ  ｍＡｂ（供給業者によって提供された推奨作用濃度に基づいて、１０μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、及び０.１μｇ／ｍｌ）と共に３７℃で３０分間インキュベートし、そして次いで１００ｎＭのオーロラキナーゼ阻害剤（不活性であることが知られた投与量）を投与し；そしてＭＣＦ７  ＡＤＲ細胞の三つのウェルをマウスＩｇＧ１（Ｄａｋｏ  Ｘ０９３１）と共に３７℃で３０分間インキュベートし、そして次いで１００ｎＭのオーロラキナーゼ阻害剤を投与した。
【００９１】
２４時間後、光学顕微鏡を使用して細胞を検査し、そしていずれもの細胞の形態の変化を注記した。次いで細胞を１００μｌの３．７％のホルムアルデヒドで３０分間で室温で固定し、そして次いで自動プレート洗浄器を使用してＰＢＳで洗浄した。次いで１００μｌの０．５％のトリトンＸ−１００を含むＰＢＳを５分間で震盪機に加えた。プレートを１００μｌのＰＢＳで洗浄し、そして５０μｌの一次抗体（１％ＢＳＡ、０．５％ツイーンを含むＰＢＳ中の１：１０００のウサギ抗ホスホヒストンＨ３）を加えた。プレートを少なくとも１時間室温で震盪機上に放置し、その後抗体を除去し、そして細胞を二回ＰＢＳで洗浄した。暗所で５０μｌの二次抗体（１％ＢＳＡ、０．５％ツイーンを含むＰＢＳ中の１：１０，０００のＨｏｅｃｈｓｔ及び１：１０００のＡｌｅｘｚ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８抗ウサギ）を加え、そしてプレートを少なくとも１時間室温で放置した。二次抗体を除去し、そしてプレートを二回ＰＢＳで洗浄した。次いで２００μｌのＰＢＳを加え、そして１０分間震盪しながら放置した。ＰＢＳを除去した。１００μｌのＰＢＳを加え、そしてプレートを密閉してから、分析した。（分析前に、プレートを暗所に４℃で保存した）。
【００９２】
プレートを、Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ  ＡｒｒａｙｓｃａｎでＴａｒｇｅｔ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎアルゴリズムを使用して分析した。主要評価項目は、オーロラＢの阻害に伴うバイオマーカーであるホスホヒストンＨ３（ｐｈＨ３）の阻害であった。
【００９３】
【化２】
2009537497.tif 000004
【００９４】
大きな活性が、バイオマーカーｐｈＨ３の阻害の増加に伴う。従ってＵＩＣ２  ｍＡｂ（１０μｇ／ｍｌ）が、リン酸二水素２−[［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］（エチル）アミノ]エチルのＰｇｐ仲介の排出を阻害したことは明白である。
【００９５】
ＢＲＣＰを発現することが知られた細胞中のリン酸二水素２−[［３−（｛４−［（５−｛２−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−２−オキソエチル｝−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−７−イル｝オキシ）プロピル］（エチル）アミノ]エチルの活性は、更に本明細書中に記載されたものと類似のアッセイを使用して、しかしＭＣＦ７  ＡＤＲ細胞を、当技術において既知のヒト肺癌腫細胞系のＡ５２９細胞で置換え、そしてＢＣＲＰ特異的抗体（Ｃｈｅｍｉｃｏｎのマウスモノクローナル抗体ＢＸＰ−２１、カタログ番号１８６４）を使用して証明することができる。
【００９６】
抗体の使用に加えて、ＢＲＣＰ又はＰｇｐ機能を、本明細書中に記載したもののような小分子阻害剤を使用して、本明細書中に記載したものと類似の方法を使用して、しかし抗体を小分子阻害剤と置換えて阻害することも更に可能であるものである。
【国際調査報告】
2009537497.tif 000007
2009537497.tif 000008
2009537497.tif 000009
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