(57)【要約】シュードモナス細菌に関連する組成物および方法が提供される。当該組成物および方法は、シュードモナス細菌への感染症が関与する医学的症状の診断および治療に用いられ得る。このような感染症には、嚢胞性線維症を有する患者の肺における緑膿菌が挙げられる。本方法で有用な化合物は、治療剤と組み合わせて用いられ得るか、または治療剤に結合され得る。シュードモナス細菌は、コロニー形成のブロッキング、病原性因子の阻害、増殖の抑止または殺菌により阻害され得る。
2009504660.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式を有する化合物またはその生理学上許容され得る塩：
【化１】
2009504660.tif 000015
式中、
式中の２つの環を分離する−Ｏ−は、αまたはβ１−３結合であり；
Ｒ１は、ＯＨ、ＮＨＡｃ、６’硫酸化ＧｌｃＮＡｃ、６’カルボキシル化ＧｌｃＮＡｃ、ＧａｌＮＡｃ、Ｏグリコシド結合、Ｃグリコシド結合またはＳグリコシド結合により結合されたガラクトース、チオジガラクトシド、６’硫酸化ガラクトースおよび６’カルボキシル化ガラクトースから独立して選択されるが、ただし、４つのＲ１のうち３つは、ＯＨおよびＮＨＡｃから独立して選択され、かつ、１つのＲ１はＯＨでもＮＨＡｃでもない；
Ｒ２は、Ｈ、フコース、ガラクトース、アラビノース、フルクトース、マンノース、シクロヘキサン、置換されたシクロヘキサン、テトラヒドロピラン、置換されたテトラヒドロピラン、ピペリジン、置換されたピペリジン、ポリオールまたは置換されたポリオールであり；
Ｒ３は、（ＣＨ２）ｐ、ＮＨ２、−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−（ＮＨ）ｑ−Ｘまたは
【化２】
2009504660.tif 000016
式中、
ｍ、ｎおよびｑは、０〜１から独立して選択され、
ｐは、１〜２０であり、
Ｚは、Ｎ、ＯまたはＳであり、かつ、
Ｘは、ＮＨ−Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、置換されたＣ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ６−Ｃ１４アリール、置換されたＣ６−Ｃ１４アリール、Ｃ１−Ｃ１４ヘテロアリール、置換されたＣ１−Ｃ１４ヘテロアリール、非アリールＣ１−Ｃ１４複素環または置換された非アリールＣ６−Ｃ１４複素環、ＮＨＣＨ２Ｐｈ、Ｎ（ＣＨ２Ｐｈ）２、ＮＨＳＯ３Ｎａ、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＯＨ（オルト）、ＮＨＣＯＰｈ、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−Ｃｌ（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＯＭｅ（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＮＯ２（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−Ｐｈ（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ３（ＯＭｅ）２（メタ、パラ）、ＮＨＣＯ（２−ナフチル）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＯＣＨ２Ｐｈ（パラ）、Ｎ（ＣＨ２Ｐｈ）ＣＯＰｈ、ＮＨＣＯＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ、ＮＨＣＯＣＨＰｈ２、ＮＨＣＯＭｅ、ＮＨＣＯ（シクロ−Ｃ６Ｈ１１）、ＮＨＳＯ２−Ｃ６Ｈ４−Ｍｅ（パラ）、ＮＨＣＯＮＨＥｔ、ＮＨＣＯＮＨＰｈ、ＮＨＣＯＯＣＨ２−Ｃ６Ｈ４−ＮＯ２（パラ）、ＮＨＣＯＯＣＨ２（２−ナフチル）またはＮＨＣＯＯＣＨ２Ｐｈである）であり；
Ｒ４は、Ｈ、ＮＨＡｃ、−Ｏ−ラクトース、置換された−Ｏ−ラクトース、−Ｏ−ラクトサミン、置換された−Ｏ−ラクトサミン、Ｎ−グリコリルで置換されたＮＨＡｃ、ポリエチレングリコールまたは置換されたポリエチレングリコールであり；かつ、
Ｒ５は、Ｈ、ＮＨＡｃ、またはＮ−グリコリルで置換されたＮＨＡｃである、化合物。
【請求項２】
Ｒ１ａが、ＯＨでもＮＨＡｃでもない、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
Ｒ１ｂが、ＯＨでもＮＨＡｃでもない、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項４】
Ｒ１ｃがＯＨでもＮＨＡｃでもない、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項５】
Ｒ１ｄが、ＯＨでもＮＨＡｃでもない、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項６】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃまたはＲ１ｄが、６’硫酸化ＧｌｃＮＡｃまたは６’カルボキシル化ＧｌｃＮＡｃである、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項７】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃまたはＲ１ｄが、ガラクトースである、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項８】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃまたはＲ１ｄが、６’硫酸化ガラクトースまたは６’カルボキシル化ガラクトースである、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項９】
Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃまたはＲ１ｄが、チオジガラクトシドである、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項１０】
式中の２つの環を分離する−Ｏ−が、β１−３結合である、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項１１】
Ｒ２が、フコースである、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項１２】
Ｒ３が、−ＣＨ２−ＯＨである、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項１３】
Ｒ３が、
【化３】
2009504660.tif 000017
（式中、Ｘは請求項１のＲ３に従って定義される）
である、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項１４】
Ｘが、
【化４】
2009504660.tif 000018
である、請求項１３記載の化合物またはその塩。
【請求項１５】
Ｒ４が、Ｈである、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項１６】
Ｒ４が、ＮＨＡｃである、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項１７】
Ｒ５が、Ｈである、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項１８】
Ｒ５が、ＮＨＡｃである、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項１９】
前記化合物またはその塩が、薬学上許容され得る担体または希釈液と組み合わせられている、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の化合物またはその塩。
【請求項２０】
請求項１〜１８のいずれか１項に記載の化合物に結合された治療剤を含む、結合体。
【請求項２１】
前記結合体が、薬剤的に許容され得る担体または希釈液と組み合わされている、請求項２０記載の結合体。
【請求項２２】
前記化合物が、式：
【化５】
2009504660.tif 000019
を有する、請求項１記載の化合物またはその塩。
【請求項２３】
前記化合物またはその塩が、薬学上許容され得る担体または希釈液と組み合わされている、請求項２２記載の化合物またはその塩。
【請求項２４】
請求項２２記載の化合物に結合した治療剤を含む、結合体。
【請求項２５】
前記結合体が、薬学上許容され得る担体または希釈液と組み合わされる、請求項２４記載の結合体。
【請求項２６】
温血動物において、シュードモナス細菌感染症を阻害する方法であって、該動物に、請求項１記載の化合物を含む化合物を、該細菌の１またはそれより多くのレクチンを阻害するのに有効な量で投与することを含む、方法。
【請求項２７】
前記化合物が、治療剤に結合される、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
前記化合物が、薬学上許容され得る担体または希釈液と組み合わされる、請求項２６または請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
前記化合物が、他の抗菌性化合物と組み合わせられている、請求項２６または請求項２７記載の方法。
【請求項３０】
前記細菌が、緑膿菌である、請求項２６の方法。
【請求項３１】
シュードモナス細菌を検出する方法であって、試料と、請求項１記載の化合物を含む化合物に結合した診断薬とを、細菌またはそのレクチン産物が該試料中に存在する場合に該化合物がそれらに結合するのに十分な条件下で接触させること、および該試料中に存在する薬剤を検出することを含み、該試料中での薬剤の存在がシュードモナス細菌の存在を示す、方法。
【請求項３２】
前記細菌が、緑膿菌である、請求項３１の方法。
【請求項３３】
シュードモナス細菌を固相支持体上に固定化する方法であって、シュードモナス細菌を含む試料と、固相支持体上に固定化された請求項１記載の化合物を含む化合物とを、結合するのに十分な条件下で接触させること、および該試料を、該固相支持体から分離することを含む、方法。
【請求項３４】
シュードモナス細菌感染症を阻害する方法またはシュードモナス細菌を検出する方法に用いるための、請求項１〜１９または２２〜２３のいずれか１項に記載の化合物またはその塩。
【請求項３５】
シュードモナス細菌を阻害するための医薬の調製における、請求項１〜１９または２２〜２３のいずれか１項に記載の化合物またはその塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、概して、嚢胞性線維症を有する患者の肺における緑膿菌などのシュードモナス細菌による感染症およびコロニー形成などの、温血動物（例えば、ヒト）における疾患の診断および治療のための化合物、組成物および方法に関する。より詳細には、本発明は、シュードモナス細菌のＰＡ−ＩＬおよび／またはＰＡ−ＩＩＬレクチンの結合に選択的な１またはそれより多くの化合物の使用に関する。これらの化合物は、シュードモナス細菌のコロニー形成の診断および／または治療の介入に有用であるか、あるいは、シュードモナス細菌を標的とし、かつ効率的に抑止または殺菌するための薬剤に結合され得る。
【背景技術】
【０００２】
関連技術の説明
シュードモナス感染症は、種々の医学的症状で起こり、かつ、生命を脅かし得る。シュードモナスは、日和見性細菌である。危険な個体の例には、嚢胞性線維症患者、熱傷患者および呼吸装置上の患者が挙げられる。嚢胞性線維症は、シュードモナス細菌への感染症が関与し得る医学的症状の代表例として以下に記載される。
【０００３】
嚢胞性線維症（ＣＦ）は、類白色人種における最も一般的な致死的遺伝病である。ＣＦは、クロライドチャネルとして作用する嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子をコード化する遺伝子（ＣＦＴＲ）の変異によって引き起こされる。イオン移動を変化させるＣＦＴＲの遺伝的変異はまた、ＣＦＴＲおよび他の細胞表面分子のＮ−グリコシル化に影響する。患者の外分泌腺の全てが影響を受けるが、肺は、罹患および死亡の主要な部位である。グリコシル化の全体的変化は、緑膿菌による感染力の増加と関連する。ＣＦ患者由来の唾液のおよび呼吸器のムチンはまた、グリコシル化パターンの変化を含む。
【０００４】
ＣＦ患者の罹患および死亡の主な原因は、緑膿菌による慢性の肺コロニー形成であり、この結果、肺の破壊および死をもたらす頑強な好中球性炎症反応を伴う明白な肺感染症が生じる。緑膿菌によるコロニー形成は、病原性因子が協調的に分泌される細菌の相の固着の間に惹起される。炭水化物を結合する２つの病原性因子は、レクチンである。ＰＡ−ＩＬおよびＰＡ−ＩＩＬとして知られるこれらのレクチンは、これらのオリゴ糖構造に高親和性で結合し、かつ、強力な分子標的を表して、細菌のコロニー形成を阻止する。細菌により十分にコロニー形成されない患者は、優れた長期予後を維持する。個体におけるシュードモナス細菌によるコロニー形成の予防の分野において、現状ではアプローチが困難なので、改善された化合物、組成物および方法が必要である。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
発明の簡単な要旨
簡潔に説明すれば、本発明は、シュードモナスの検出のためおよびシュードモナス細菌が関与する疾患、例えば、ヒトの疾患などの診断および治療のための、シュードモナス細菌により発現されるＰＡ−ＩＩＬおよびＰＡ−ＩＬレクチンの両方、またはいずれか単独を利用する化合物、組成および方法を提供する。例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来のＰＡ−ＩＩＬレクチン、ＰＡ−ＩＬレクチンまたは両方のレクチンに高親和性結合を有する本発明の化合物は、ＣＦ患者に有利な治療効果を有するであろう。さらに、これらの化合物は、併用療法において抗生物質と組み合わせて投与されるか、または例えば抗生物質と結合体化されて、有効性が増加され得かつ用量が低減され得、それによって、多くの抗生物質の周知の有害事象が回避される。これらの結合部位が、細菌のコロニー形成および病原性に重要であると仮定すると、この結合体での治療に抵抗性となるようなこの標的中での変異は、結果として、細菌の非病原性型をもたらすであろう。
【０００６】
本発明の１つの実施態様は、以下の式を有する化合物またはその生理的に許容され得る塩を提供する：
【０００７】
【化６】
2009504660.tif 000003
［式中、
式中の２つの環を分離する−Ｏ−は、αまたはβ１−３結合であり；
Ｒ１は、ＯＨ、ＮＨＡｃ、６’硫酸化ＧｌｃＮＡｃ、６’カルボキシル化ＧｌｃＮＡｃ、ＧａｌＮＡｃ、Ｏグリコシド結合、Ｃグリコシド結合またはＳグリコシド結合により結合されたガラクトース、チオジガラクトシド、６’硫酸化ガラクトースおよび６’カルボキシル化ガラクトースから独立して選択されるが、ただし、４つのＲ１のうち３つは、ＯＨおよびＮＨＡｃから独立して選択され、かつ、１つのＲ１はＯＨでもＮＨＡｃでもない；
Ｒ２は、Ｈ、フコース、ガラクトース、アラビノース、フルクトース、マンノース、シクロヘキサン、置換されたシクロヘキサン、テトラヒドロピラン、置換されたテトラヒドロピラン、ピペリジン、置換されたピペリジン、ポリオールまたは置換されたポリオールであり；
Ｒ３は、（ＣＨ２）ｐ、ＮＨ２、−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−（ＮＨ）ｑ−Ｘまたは
【０００８】
【化７】
2009504660.tif 000004
（式中、
ｍ、ｎおよびｑは、０〜１から独立して選択され、
ｐは、１〜２０であり、
Ｚは、Ｎ、ＯまたはＳであり、かつ、
Ｘは、ＮＨ−Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、置換されたＣ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ６−Ｃ１４アリール、置換されたＣ６−Ｃ１４アリール、Ｃ１−Ｃ１４ヘテロアリール、置換されたＣ６−Ｃ１４ヘテロアリール、非アリールＣ１−Ｃ１４複素環または置換された非アリールＣ６−Ｃ１４複素環、ＮＨＣＨ２Ｐｈ、Ｎ（ＣＨ２Ｐｈ）２、ＮＨＳＯ３Ｎａ、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＯＨ（オルト）、ＮＨＣＯＰｈ、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−Ｃｌ（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＯＭｅ（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＮＯ２（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−Ｐｈ（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ３（ＯＭｅ）２（メタ、パラ）、ＮＨＣＯ（２−ナフチル）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＯＣＨ２Ｐｈ（パラ）、Ｎ（ＣＨ２Ｐｈ）ＣＯＰｈ、ＮＨＣＯＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ、ＮＨＣＯＣＨＰｈ２、ＮＨＣＯＭｅ、ＮＨＣＯ（シクロ−Ｃ６Ｈ１１）、ＮＨＳＯ２−Ｃ６Ｈ４−Ｍｅ（パラ）、ＮＨＣＯＮＨＥｔ、ＮＨＣＯＮＨＰｈ、ＮＨＣＯＯＣＨ２−Ｃ６Ｈ４−ＮＯ２（パラ）、ＮＨＣＯＯＣＨ２（２−ナフチル）またはＮＨＣＯＯＣＨ２Ｐｈである）であり；
Ｒ４は、Ｈ、ＮＨＡｃ、−Ｏ−ラクトース、置換された−Ｏ−ラクトース、−Ｏ−ラクトサミン、置換された−Ｏ−ラクトサミン、Ｎ−グリコリルで置換されたＮＨＡｃ、ポリエチレングリコールまたは置換されたポリエチレングリコールであり；かつ、
Ｒ５は、Ｈ、ＮＨＡｃ、またはＮ−グリコリルで置換されたＮＨＡｃである］。
【０００９】
本発明の化合物またはその塩は、薬学上許容され得る担体または希釈液との組み合わせであり得る。
【００１０】
本発明の他の実施態様は、上記化合物に結合した治療剤を含む結合体を提供する。
【００１１】
本発明の他の実施態様は、温血動物において、シュードモナス細菌感染症を阻害する方法であって、当該動物に、以下の式の化合物またはその生理学的に許容され得る塩を、当該細菌の１またはそれより多くのレクチンを阻害するのに有効な量で投与することを含む、方法を提供する：
【００１２】
【化８】
2009504660.tif 000005
［式中、
式中の２つの環を分離する−Ｏ−は、αまたはβ１−３結合であり；
Ｒ１は、ＯＨ、ＮＨＡｃ、６’硫酸化ＧｌｃＮＡｃ、６’カルボキシル化ＧｌｃＮＡｃ、ＧａｌＮＡｃ、Ｏグリコシド結合、Ｃグリコシド結合またはＳグリコシド結合により結合されたガラクトース、チオジガラクトシド、６’硫酸化ガラクトースおよび６’カルボキシル化ガラクトースから独立して選択されるが、ただし、４つのＲ１のうち３つは、ＯＨおよびＮＨＡｃから独立して選択され、かつ、１つのＲ１はＯＨでもＮＨＡｃでもない；
Ｒ２は、Ｈ、フコース、ガラクトース、アラビノース、フルクトース、マンノース、シクロヘキサン、置換されたシクロヘキサン、テトラヒドロピラン、置換されたテトラヒドロピラン、ピペリジン、置換されたピペリジン、ポリオールまたは置換されたポリオールであり；
Ｒ３は、（ＣＨ２）ｐ、ＮＨ２、−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−（ＮＨ）ｑ−Ｘまたは
【００１３】
【化９】
2009504660.tif 000006
（式中、
ｍ、ｎおよびｑは、０〜１から独立して選択され、
ｐは、１〜２０であり、
Ｚは、Ｎ、ＯまたはＳであり、かつ、
Ｘは、ＮＨ−Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、置換されたＣ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ６−Ｃ１４アリール、置換されたＣ６−Ｃ１４アリール、Ｃ１−Ｃ１４ヘテロアリール、置換されたＣ６−Ｃ１４ヘテロアリール、非アリールＣ１−Ｃ１４複素環または置換された非アリールＣ６−Ｃ１４複素環、ＮＨＣＨ２Ｐｈ、Ｎ（ＣＨ２Ｐｈ）２、ＮＨＳＯ３Ｎａ、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＯＨ（オルト）、ＮＨＣＯＰｈ、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−Ｃｌ（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＯＭｅ（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＮＯ２（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−Ｐｈ（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ３（ＯＭｅ）２（メタ、パラ）、ＮＨＣＯ（２−ナフチル）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＯＣＨ２Ｐｈ（パラ）、Ｎ（ＣＨ２Ｐｈ）ＣＯＰｈ、ＮＨＣＯＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ、ＮＨＣＯＣＨＰｈ２、ＮＨＣＯＭｅ、ＮＨＣＯ（シクロ−Ｃ６Ｈ１１）、ＮＨＳＯ２−Ｃ６Ｈ４−Ｍｅ（パラ）、ＮＨＣＯＮＨＥｔ、ＮＨＣＯＮＨＰｈ、ＮＨＣＯＯＣＨ２−Ｃ６Ｈ４−ＮＯ２（パラ）、ＮＨＣＯＯＣＨ２（２−ナフチル）またはＮＨＣＯＯＣＨ２Ｐｈである）であり；
Ｒ４は、Ｈ、ＮＨＡｃ、−Ｏ−ラクトース、置換された−Ｏ−ラクトース、−Ｏ−ラクトサミン、置換された−Ｏ−ラクトサミン、Ｎ−グリコリルで置換されたＮＨＡｃ、ポリエチレングリコールまたは置換されたポリエチレングリコールであり；かつ、
Ｒ５は、Ｈ、ＮＨＡｃ、またはＮ−グリコリルで置換されたＮＨＡｃである］。
【００１４】
別の実施態様では、本発明は、シュードモナス細菌を検出する方法であって、試料を、細菌またはそのレクチン産物がもし当該試料中に存在する場合、それに結合するのに十分な条件下で、上記化合物を含む化合物に結合した診断薬に接触させること、および試料の中に存在する薬剤を検出することを含み、当該試料中での薬剤の存在がシュードモナス細菌の存在を示す、方法を提供する。
【００１５】
別の実施態様では、本発明は、シュードモナス細菌を固相支持体上に固定化する方法であって、シュードモナス細菌を含む試料を、固相支持体上に固定化された上記化合物を含む化合物と結合するのに十分な条件下で、当該化合物と接触させること、および当該試料を、当該固相支持体から分離することを含む、方法を提供する。
【００１６】
別の実施態様では、本明細書中に記載の化合物および結合体は、シュードモナス細菌を阻害するための医薬の調製に用いられ得る。
【００１７】
本発明のこれらのおよび他の側面は、以下の詳細な説明および添付の図面を参照すれば明らかになるであろう。本明細書中に開示される全ての参照は、あたかもそれぞれが個々に援用されたかのように、その全体が参照として援用される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
発明の詳細な説明
上記のように、本発明は、シュードモナス細菌性レクチン（例えば、緑膿菌レクチン）を結合し、疾患の診断および治療に用いられ得る化合物および組成物を提供する。
【００１９】
グリコミメティック化合物
本明細書中で用いられる用語「グリコミメティック化合物」は、シュードモナス細菌由来のＰＡ−ＩＬレクチン、ＰＡ−ＩＩＬレクチンまたは両方のレクチンに高い親和性を有する化合物（その生理学上許容され得る塩を含む）を意味する。本発明のグリコミメティック化合物の構造の実施態様は、以下の式を有する：
【００２０】
【化１０】
2009504660.tif 000007
［式中、
式中の２つの環を分離する−Ｏ−は、αまたはβ１−３結合であり；
Ｒ１は、ＯＨ、ＮＨＡｃ、６’硫酸化ＧｌｃＮＡｃ、６’カルボキシル化ＧｌｃＮＡｃ、ＧａｌＮＡｃ、Ｏグリコシド結合、Ｃグリコシド結合またはＳグリコシド結合により結合されたガラクトース、チオジガラクトシド、６’硫酸化ガラクトースおよび６’カルボキシル化ガラクトースから独立して選択され；
Ｒ２は、Ｈ、フコース、ガラクトース、アラビノース、フルクトース、マンノース、シクロヘキサン、置換されたシクロヘキサン、テトラヒドロピラン、置換されたテトラヒドロピラン、ピペリジン、置換されたピペリジン、ポリオールまたは置換されたポリオールであり；
Ｒ３は、（ＣＨ２）ｐ、ＮＨ２、−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ２−（ＮＨ）ｑ−Ｘまたは
【００２１】
【化１１】
2009504660.tif 000008
（式中、
ｍ、ｎおよびｑは、０〜１から独立して選択され、
ｐは、１〜２０であり、
Ｚは、Ｎ、ＯまたはＳであり、かつ、
Ｘは、ＮＨ−Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、置換されたＣ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ６−Ｃ１４アリール、置換されたＣ６−Ｃ１４アリール、Ｃ１−Ｃ１４ヘテロアリール、置換されたＣ６−Ｃ１４ヘテロアリール、非アリールＣ１−Ｃ１４複素環または置換された非アリールＣ６−Ｃ１４複素環、ＮＨＣＨ２Ｐｈ、Ｎ（ＣＨ２Ｐｈ）２、ＮＨＳＯ３Ｎａ、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＣＯＯＨ（オルト）、ＮＨＣＯＰｈ、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−Ｃｌ（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＯＭｅ（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＮＯ２（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−Ｐｈ（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ３（ＯＭｅ）２（メタ、パラ）、ＮＨＣＯ（２−ナフチル）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＯＣＨ２Ｐｈ（パラ）、Ｎ（ＣＨ２Ｐｈ）ＣＯＰｈ、ＮＨＣＯＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ、ＮＨＣＯＣＨＰｈ２、ＮＨＣＯＭｅ、ＮＨＣＯ（シクロ−Ｃ６Ｈ１１）、ＮＨＳＯ２−Ｃ６Ｈ４−Ｍｅ（パラ）、ＮＨＣＯＮＨＥｔ、ＮＨＣＯＮＨＰｈ、ＮＨＣＯＯＣＨ２−Ｃ６Ｈ４−ＮＯ２（パラ）、ＮＨＣＯＯＣＨ２（２−ナフチル）またはＮＨＣＯＯＣＨ２Ｐｈである）であり；
Ｒ４は、Ｈ、ＮＨＡｃ、−Ｏ−ラクトース、置換された−Ｏ−ラクトース、−Ｏ−ラクトサミン、置換された−Ｏ−ラクトサミン、Ｎ−グリコリルで置換されたＮＨＡｃ、ポリエチレングリコールまたは置換されたポリエチレングリコールであり；かつ、
Ｒ５は、Ｈ、ＮＨＡｃ、またはＮ−グリコリルで置換されたＮＨＡｃである］。
【００２２】
本発明において有用なすべての化合物（または結合体）には、その生理学上許容され得る塩が挙げられる。
【００２３】
本発明のグリコミメティック化合物には、置換基Ｒ１〜Ｒ５を有する上記式を含む。Ｒ１〜Ｒ５の任意の置換基（すなわち、原子または基）が、「−」を有する場合、これは（Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ３−Ｒ５については環への、Ｒ１ｄについてはＣＨ２への、およびＲ２についてはＯへの）付加の位置を示し、ＣＨ２またはＣＨ３を表さない。上記式において、式中に図示された２つの環を結合する酸素（−Ｏ−）が存在する。酸素は、α１−３結合またはβ１−３結合中に存在し得る。
【００２４】
本明細書中で用いられるように、基が記載されていない線は、置換基を一般式で図示された構造に付加する結合を表す。本明細書中で用いられるように、「Ｃ６−Ｃ１４アリール」は、結合またはアルキル基で分離されるかまたは融合していてもよい１つまたは複数の環中に６〜１４個の炭素原子を有する芳香族置換基を意味する。本明細書中で用いられるように、「Ｃ１−Ｃ１４ヘテロアリール」は、芳香族置換基が環炭素の代わりに少なくとも１つのヘテロ原子（例えば、Ｎ、ＯまたはＳ）を有する以外は、「Ｃ６−Ｃ１４アリール」と同様である。アリールおよびヘテロアリールの例には、フェニル、ナフチル、ジフェニル、ピリジニルおよびピリミジニルが挙げられる。
【００２５】
Ｒ１は、上記式に図示するように、Ｒ１ａ、Ｒ１ｂ、Ｒ１ｃおよびＲ１ｄから構成される。Ｒ１ａは、２位の炭素に付加する。Ｒ１ｂは、３位の炭素に付加する。Ｒ１ｃは、４位の炭素に付加する。Ｒ１ｄは、６位の炭素に付加し、次いで、５位の炭素に付加する。
【００２６】
Ｒ１置換基の例には、ＧａｌＮＡｃ、６’硫酸化ＧｌｃＮＡｃおよび６’カルボキシル化ＧｌｃＮＡｃが挙げられる。略語「ＧｌｃＮＡｃ」は、Ｎ−アセチルグルコサミンを表し、「ＧａｌＮＡｃ」は、Ｎ−アセチルガラクトサミンを表す。他のＲ１置換基は、ＯＨ、ＮＨＡｃ、ガラクトース、チオジガラクトシド、６’硫酸化ガラクトースおよび６’カルボキシル化ガラクトースである。ガラクトースは、Ｏグリコシド結合、Ｃグリコシド結合またはＳグリコシド結合により結合される。上記式と共に記載されるＲ１がガラクトース、６’硫酸化ガラクトースまたは６’カルボキシル化ガラクトースである場合、実施態様のＲ１はα１−３結合で付加するが、結合はβであり得る。実施例において、４つのＲ１のうち１つのみがＯＨまたはＮＨＡｃ以外である（すなわち、ＯＨまたはＮＨＡｃ以外の列挙されたＲ１置換基のうち１つから選択される）。
【００２７】
Ｒ２置換基の例には、フコース、ガラクトース、アラビノース、フルクトースまたはマンノースなどの単糖が挙げられる。単糖は、Ｄ−およびＬ型を有する。このような単糖には、Ｌ−フコース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−アラビノース、Ｄ−フルクトースおよびＤ−マンノースが挙げられる。Ｒ２の単糖は、単糖の模倣物で置き換えられ得る。例えば、単糖環は、シクロヘキサン、置換されたシクロヘキサン、テトラヒドロピラン、置換されたテトラヒドロピラン、ピペリジン、置換されたピペリジン、ポリオールまたは置換されたポリオールで置換され得る。あるいは、または環の置換にさらに加えて、現存する置換基の代わりに、または置換基にさらに加えて、またはその両方で、環に置換基を加え得る。例えば、１またはそれより多くのヒドロキシル基は、アルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシなど）、ハロゲン化物（例えば、フッ素、塩素など）、エステルおよびアミドで置換され得る。同様に、例えば、シクロヘキサン、テトラヒドロピランまたはピペリジンの１またはそれより多くの水素は、上記基（アルコキシ、ハロゲン化物、エステルおよびアミド）で置換されて、置換されたシクロヘキサン、置換されたテトラヒドロピランまたは置換されたピペリジンをそれぞれ生じ得る。
【００２８】
Ｒ３置換基の例には、（ＣＨ２）ｐ（式中、ｐは、１−２０である）、−ＣＨ２−ＯＨ、ＮＨ２、−ＣＨ２−（ＮＨ）ｑ−Ｘおよび−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｚ）ｎ−Ｘ（式中、ｍ、ｎおよびｑは、独立して、０および１から選択され、かつ、Ｘは、ＮＨ−Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、置換されたＣ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ６−Ｃ１４アリール、置換されたＣ６−Ｃ１４アリール、Ｃ６−Ｃ１４ヘテロアリール、置換されたＣ１−Ｃ１４ヘテロアリール、非アリールＣ１−Ｃ１４複素環または置換された非アリールＣ１−Ｃ１４複素環である）が挙げられる。本明細書中で用いられるように、「Ｃ１−Ｃ８アルキル」は、直鎖または分枝鎖であり得る飽和炭化水素を意味する。例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルおよびｔ−ブチルである。「Ｃ１−Ｃ１４アリール」および「Ｃ６−Ｃ１４ヘテロアリール」は、上記で定義したとおりである。例は、上記に提供される。「置換されたＣ１−Ｃ１４アリール」は、少なくとも１つの環水素が、水素以外の１またはそれより多くの原子で置換されたＣ６−Ｃ１４アリールである。「置換されたＣ１−Ｃ１４ヘテロアリール」は、少なくとも１つの環水素またはヘテロ原子に付加した水素が、水素以外の１またはそれより多くの原子で置換されたＣ１−Ｃ１４ヘテロアリールである。このような原子には、炭素、酸素、窒素、イオウおよびハロゲンが挙げられる。「非アリールＣ１−Ｃ１４複素環」は、結合により分離され得るかまたは融合され得る１つまたは複数の環中に１〜１４個の炭素原子を（少なくとも１つのヘテロ原子と共に）有する非芳香族置換基を意味する。３員環の第３の原子は、Ｒ３が付加する炭素により提供され得る。例には、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、ならびにそれらの酸素およびイオウ等価体が挙げられる。「置換された非アリールＣ１−Ｃ１４複素環」は、少なくとも１つの環水素またはヘテロ原子に付加した水素が、１またはそれより多くの水素以外の原子で置換された非アリールＣ１−Ｃ１４複素環である。このような原子には、炭素、酸素、窒素、イオウおよびハロゲンが挙げられる。Ｒ３の例には、ＮＨＣＯＰｈ、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−Ｃｌ（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＯＭｅ（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＮＯ２（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−Ｐｈ（パラ）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ３（ＯＭｅ）２（メタ、パラ）、ＮＨＣＯ（２−ナフチル）、ＮＨＣＯ−Ｃ６Ｈ４−ＯＣＨ２Ｐｈ（パラ）、Ｎ（ＣＨ２Ｐｈ）ＣＯＰｈ、ＮＨＣＯＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ、ＮＨＣＯＣＨＰｈ２、ＮＨＣＯＭｅ、ＮＨＣＯ（シクロ−Ｃ６Ｈ１１）、ＮＨＳＯ２−Ｃ６Ｈ４−Ｍｅ（パラ）、ＮＨＣＯＮＨＥｔ、ＮＨＣＯＮＨＰｈ、ＮＨＣＯＯＣＨ２−Ｃ６Ｈ４−ＮＯ２（パラ）、ＮＨＣＯＯＣＨ２（２−ナフチル）またはＮＨＣＯＯＣＨ２Ｐｈが挙げられる。略語「Ｐｈ」は、「フェニル」を表す。
【００２９】
Ｒ４置換基の例には、Ｈ、ＮＨＡｃ、およびＮ−グリコリルで置換されたＮＨＡｃが挙げられる。これにはまた、−Ｏ−ラクトース、置換された−Ｏ−ラクトース、−Ｏ−ラクトサミン、置換された−Ｏ−ラクトサミン、ポリエチレングリコールおよび置換されたポリエチレングリコールも挙げられる。
【００３０】
Ｒ５置換基の例には、Ｈ、ＮＨＡｃ、およびＮ−グリコリルで置換されたＮＨＡｃが挙げられる。
【００３１】
非単糖の環置換基の例には、以下のものが挙げられる：
【００３２】
【化１２】
2009504660.tif 000009
【００３３】
【化１３】
2009504660.tif 000010
特定の実施例については、また、または代わりに、薬物などの診断剤または治療剤をグリコミメティック化合物に結合させて、結合が共有結合である結合体を形成することが有利であり得る。本明細書中で用いられるように、用語「治療剤」は、温血動物（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与して、疾患または他の望ましくない症状を予防または治療するか、あるいは治療の成功率を上げることが意図される任意の生理活性な剤を意味する。治療剤には、抗生物質、ホルモン、増殖因子、タンパク質、ペプチド類、遺伝子、非ウイルス性ベクターおよび他の化合物が挙げられる。
グリコミメティック化合物製剤
本明細書中に記載されたグリコミメティック化合物は、医薬組成物中に存在し得る。医薬組成物は、１またはそれより多くのグリコミメティック化合物を、１またはそれより多くの薬学上または生理学上許容され得る担体、希釈液または賦形剤と組み合わせて含む。このような組成物は、緩衝液（例えば、中性緩衝生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水）、炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、ショ糖またはデキストラン）、マンニトール、タンパク質、ポリペプチドまたはアミノ酸（例えば、グリシン）、抗酸化薬、キレート薬（例えば、ＥＤＴＡまたはグルタチオン）、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）および／または保存料を含み得る。さらに別の実施態様では、本発明の組成物は、凍結乾燥物として処方され得る。本発明の組成物は、任意の適切な投与様式、例えば、エアロゾル、局所、経口、経鼻、静脈内、頭蓋内、腹腔内、皮下または筋肉内投与用に処方され得る。
【００３４】
医薬組成物はまた、または代わりに、１またはそれより多くの活性剤、例えば、グリコミメティック化合物に結合し得るかまたは組成物中で遊離し得る薬物（例えば、抗生物質）を含む。剤のグリコミメティック化合物への付加は、共有結合的または非共有結合的であり得る。活性剤の例は、トブラマイシンである。トブラマイシンは、代表的には、単独で静脈内に投与されるかまたは吸入されてきた。
【００３５】
本明細書中に記載される組成物は、徐放処方物（すなわち、投与後に、調節剤の緩やかな遊離を達成するカプセルまたはスポンジなどの処方物）の一部として投与され得る。このような処方物は、一般に、周知技術を用いて調製され得、例えば、経口、経直腸または皮下埋め込みにより、または所望の標的部位への埋め込みにより、投与される。このような処方の範囲内で用いるための担体は生体適合性であり、かつ、生分解性でもあり得る；好ましくは、処方物は、制御薬放出の相対的定常値を提供する。徐放処方物内に含まれるグリコミメティック化合物の量は、埋め込みの部位、放出の速度および予想される持続時間、ならびに治療または予防される条件の性質に依存する。
【００３６】
グリコミメティック化合物は、一般に、治療上の有効量で、医薬組成物中に存在する。治療上の有効量は、シュードモナス感染症を伴う症状の測定されたまたは観察された応答などの、認識可能な患者の利益を生じる量である。
グリコミメティック化合物の使用方法
通常、本明細書中に記載されるグリコミメティック化合物は、シュードモナス（例えば、緑膿菌）細菌による感染症が関与する疾患（例えば、ヒトの疾患）において診断上のおよび／または治療上の結果を達成するために用いられ得る。このような診断上のおよび／または治療上の結果は、シュードモナス（例えば、緑膿菌）またはその産物が、最終的に、認識され得る診断上または治療上の結果を達成するのに十分な量および時間でグリコミメティック化合物と接触した場合、動物、好ましくは、ヒトなどの哺乳動物において、インビトロおよび／またはインビボで達成され得る。本発明の文脈において、治療上の結果は、例えば、肺感染症の予防に関連するであろう。ある条件では、治療上の結果は、シュードモナス（例えば、緑膿菌）またはその産物の阻害を伴うであろう（ここで、阻害とは、例えば、細菌の増殖の抑止または殺菌、あるいは細菌によるコロニー形成の防止をいう）。本明細書中で用いられる治療または治療上の結果には、治療または予防が挙げられる。
【００３７】
本発明のグリコミメティック化合物は、治療または予防される疾患に適した様式で投与され得る。投与の適切な用量および適切な持続時間および頻度は、患者の症状、患者の疾患の型および重症度、ならびに投与の方法などの因子により決定され得る。通常、適切な用量および治療の計画は、治療上および／または予防上の利益を提供するのに十分な量の調節剤を提供する。本発明の特に好ましい実施例では、グリコミメティック化合物は、０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重（より代表的には、０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ）の範囲の用量で、単回または複数回１日用量の計画において投与され得る。適切な用量は、一般に、実験モデルおよび／または臨床治験を用いて決定され得る。通常、効率的な治療を提供するのに十分な最小用量を用いることが好ましい。患者は、一般に、治療または予防される条件に適したアッセイを用いて治療上の有効性をモニターされ得、これは当業者によく知られているであろう。本明細書中に記載のグリコミメティック化合物は、他の抗菌化合物との組み合わせで（すなわち、同時にまたは順に）投与され得る。例えば、グリコミメティック化合物は、トブラマイシンとの組み合わせで投与され得る。
【００３８】
グリコミメティック化合物はまた、物質を、シュードモナス細菌、例えば、緑膿菌に標的化するのに用いられ得る。このような物質には、治療剤および診断剤が挙げられる。治療剤は、障害の治療または予防に利点を提供するか、または患者の生理学を制御するために標的細胞の特性を改変することが実証可能な分子、ウイルス、ウイルス性成分、細胞、細胞成分または任意の他の物質であり得る。治療剤はまた、インビボで生物活性を有する剤を産生する薬物またはプロドラッグであり得る。治療剤であり得る分子は、例えば、ポリペプチド、アミノ酸、核酸、ポリヌクレオチド、ヌクレオシド、ステロイド、多糖類または無機化合物であり得る。このような分子は、酵素、酵素阻害薬、ホルモン、受容体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、触媒作用ポリヌクレオチド、抗ウイルス薬、抗腫瘍薬、抗菌薬、免疫調節剤および殺細胞剤（例えば、ヨウ素、臭素、鉛、レニウム、ホミウム（ｈｏｍｉｕｍ）、パラジウムまたは銅などの放射性核種）を含む種々の方向のいずれかで機能し得る。診断薬には、金属および放射性薬物（例えば、ガリウム、テクネチウム、インジウム、ストロンチウム、ヨウ素、バリウム、臭素およびリン含有化合物）などの画像形成剤、造影剤、色素（例えば、蛍光色素および発色団）ならびに比色分析または蛍光定量反応を触媒する酵素が挙げられる。通常、治療剤および診断剤は、例えば、上述したような種々の技術を用いてグリコミメティック化合物に付加し得る。標的化の目的のため、グリコミメティック化合物は、本明細書中に記載のように患者に投与され得る。
【００３９】
グリコミメティック化合物はまた、インビトロで、例えば、種々の周知の細胞培養および細胞分離法で用いられ得る。例えば、グリコミメティック化合物は、スクリーニング、アッセイおよび培地中での増殖のために、シュードモナス細菌またはそれらの産物を固定化するのに用いられる固相支持体上に固定化（例えば、組織培養プレートまたは他の細胞培養支持体の内部表面に結合）され得る。このような結合は、任意の適した技術、例えば、上記の方法および他の標準的な技術により実施され得る。グリコミメティック化合物はまた、細胞の同定およびインビトロでのソーティングを促進するために用いられ得、このような細菌細胞の選択を可能にする。好ましくは、このような方法に用いるためのグリコミメティック化合物は、検出可能なマーカーである診断剤に結合される。適したマーカーは、当該分野で周知であり、放射性核種、発光性基、蛍光性基、酵素、色素、定常免疫グロブリン領域およびビオチンが挙げられる。好ましい実施例では、蛍光性マーカー、例えば、フルオレセインに結合したグリコミメティック化合物を、細胞と接触させ、次いで、これを蛍光標示式細胞分取器（ＦＡＣＳ）により分析する。
【００４０】
このようなインビトロでの方法は、一般に、試料（例えば、生物学的調製物）をグリコミメティック化合物のいずれか１つと接触させること、および試料中の化合物を検出することを含む。所望であれば、方法に、１またはそれより多くの洗浄工程を加えてもよい。例えば、試料とグリコミメティック化合物とを接触させた後であるが化合物の検出の前に、試料を洗浄してもよい（すなわち、非結合性グリコミメティック化合物を除去するために、液体と接触させ、次いで、液体を除去する）。あるいは、またはさらに加えて、検出プロセスの間に洗浄工程を加えてもよい。例えば、グリコミメティック化合物が、検出可能な物質に結合し得るマーカー（診断薬）を有する場合、試料を検出可能な物質と接触させた後であるが検出する前に、試料を洗浄することが望ましくあり得る。本明細書中で用いられる、句「試料中の化合物（または薬剤）を検出する」は、検出する試料に結合した化合物（または薬剤）を検出すること、または試料に結合していた化合物（または薬剤）を試料から分離した後に検出することを含む。
【００４１】
以下の実施例は、制限の目的ではなく、図解の目的で提供される。
【実施例】
【００４２】
実施例１
グリコミメティック１の合成
試薬および溶媒は、市販の供給元から受け取ったまま用いた。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、Ａｎａｌｔｅｃｈシリカゲルプレートを用いて行い、紫外光（２５４ｎｍ）染色により可視化した。反応の進行は、薄層クロマトグラフィーまたはＧＣによりモニタリングした。
【００４３】
Ｂ４誘導体の調製
【００４４】
【化１４】
2009504660.tif 000011
Ｂ４−２の調製
Ｂ４−１（１５０ｇ、３８５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（８００μＬ）中溶液を、ＺｒＣｌ４（８５ｇ、３６６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（８００ｍＬ）中スラリーに、０℃でゆっくり添加した。反応物を０℃で３０分撹拌した後、ＥｔＳＨ（３２ｍＬ、４２３ｍｍｏｌ）を添加し、反応は２時間以内に完了した。反応を、食塩水（５００ｍＬ）により停止した。層を分離し、有機層を飽和水性ＮａＨＣＯ３（１×５００ｍＬ）および食塩水（１×５００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、油状の残渣を得た。これをＭＴＢＥ（３００ｍＬ）に溶解し、溶液をヘプタン（１．２Ｌ）で希釈した。得られたスラリーを氷浴中で１時間撹拌した後、混合物を濾過して、化合物Ｂ４−２（１４３ｇ、９５％）を得た。
【００４５】
Ｂ４の調製
ＮａＯＭｅ（メタノール中０．５Ｍ、１．０９Ｌ、５４５ｍｍｏｌ）を、Ｂ４−２（７１０ｇ、３９２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４Ｌ）中溶液に、室温で添加した。２時間後、Ｄｏｗｅｘ  ５０ｗｘ８−２００樹脂（３５０ｇ）を、ｐＨが３．５〜４に達するまで添加した。樹脂を濾去し、濾液を濃縮して、油状の残渣にした。これをＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、再度濃縮して、Ｂ４（３６７ｇ、９０％）を固体として得た。
【００４６】
Ｂ４−３の調製
Ｂ４（１０ｇ、４４．６ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１２５ｍＬ）中溶液を、ＮａＨ（１４ｇ、３５７ｍｍｏｌ、鉱油中６０％）の無水ＤＭＦ（１２５ｍＬ）中懸濁液に、０℃で添加した。反応物を室温で３０分撹拌し、次いで０℃に冷却し、ＢｎＢｒ（４２ｍＬ、３５７ｍｍｏｌ）を慎重に加えた。反応物を室温で２時間撹拌し、次いで、氷浴中で冷却しながら、ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）で慎重に反応を停止した。水（２００ｍＬ）を添加し、混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。有機相を、水（２×５００ｍＬ）および食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、油状の残渣とした。ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：９）で溶出するシリカゲル上でのクロマトグラフィー精製により、Ｂ４（２０．６ｇ、７９％）を得た。
【００４７】
Ｂ２誘導体の調製
【００４８】
【化１５】
2009504660.tif 000012
Ｂ２−２の調製
トリエチルアミン（６．８Ｌ、４８．７ｍｏｌ）を、Ｂ２−１（１ｋｇ、６．１ｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（７４ｇ、０．６１ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１２Ｌ）溶液に添加し、次いで、Ａｃ２Ｏ（３．４６Ｌ、３６．６ｍｏｌ）を０〜１０℃で添加した。反応物を室温で一晩（ｏｖｅｒｓｉｇｈｔ）撹拌し、次いで、水（２５Ｌ）で反応停止した。層を分離した。有機相を、水（２５Ｌ）、飽和水性ＮａＨＣＯ３（２×１０Ｌ）および食塩水（１０Ｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、粗製Ｂ２−２を得た（２．１ｋｇ、＞定量的）。
【００４９】
Ｂ２−３の調製
Ｂ２−２（１．５ｋｇ、３．０１ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（６Ｌ）中溶液を、ＺｒＣｌ４（１ｋｇ、２．８６ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１．２Ｌ）中スラリーに、０〜５℃でゆっくり添加した。反応物を３０分撹拌した後、ＥｔＳＨ（３５１ｍＬ、３．１６ｍｏｌ）を加えた。反応物を、０℃で撹拌した。不完全な反応のため、反応の最初の３０時間、追加のＥｔＳＨ（３×３０５１ｍＬ）を添加した。２日後、混合物を食塩水（７．５Ｌ）で反応停止した。層を分離し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３（６Ｌ）および食塩水（６Ｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、油状の残渣を得た。残渣をＭＴＢＥ／ヘプタン（１：３）から再結晶して、Ｂ２−３の第１の画分を得た。母液を濃縮し、残渣を、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（２：８）で溶出するシリカゲル上でのクロマトグラフィーにより精製して、第２の画分を得た。合計５６０ｇのＢ２−３（２工程で３８％）を得た。
【００５０】
Ｂ２−４の調製
ＮａＯＭｅ（メタノール中２５重量％、１１９ｍｌ、５１９ｍｍｏｌ）を、Ｂ２−３（５７９ｇ、１．７３ｍｏｌ）のメタノール（２．３Ｌ）溶液に、室温でゆっくり添加した。１時間後、Ｄｏｗｅｘ  ５０ｗｘ８−２００樹脂（２９０ｇ）を添加し、反応物を３０分撹拌した。樹脂を濾去し、濾液を濃縮して、固体のＢ２−４（３６０ｇ、定量的）を得た。
【００５１】
Ｂ２の調製
Ｂ２−４（３６０ｇ、１．７３ｍｏｌ）のＴＨＦ（３．５Ｌ）中溶液を、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（ＴＨＦ中２０重量％、３．８８ｋｇ、６．９１ｍｏｌ）を用いて０℃で処理した。３０分後、ＢｎＢｒ（８２２ｍＬ、６．９１ｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で２時間撹拌し、次いで、１０℃に冷却した。一晩撹拌した後、反応を飽和水性ＮＨ４Ｃｌ（２Ｌ）で停止し、次いで、Ｃｅｌｉｔｅのパッドを通して濾過した。濾過物を、ＥｔＯＡｃ（５．５Ｌ）で抽出した。有機相を、食塩水（４Ｌ）で洗浄し、濃縮した。ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：９）で溶出するクロマトグラフィー精製により、Ｂ２（４６０ｇ、５６％）を得た。
【００５２】
Ｂ５誘導体の調製
【００５３】
【化１６】
2009504660.tif 000013
Ｂ５−２の調製
Ｂ５−１（１８４ｇ、６７６ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）およびＰｄ／Ｃ（１０重量％、５０％水湿潤；１９ｇ）のＴＨＦ（８００ｍＬ）中懸濁液を、５０ｐｓｉで、一晩、室温にて水素付加した。触媒を、パッドを通して室温で一晩濾去した。触媒を、Ｃｅｌｉｔｅのパッドを通して濾去し、フィルタパッドを酢酸エチルで洗浄し、合わせた濾液を濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶解し、次いで、溶液を、水（２５０ｍＬ）、水性炭酸水素ナトリウム（２５０ｍＬ）および次いで食塩水（２５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、Ｂ５−２を油状の残渣（２１７ｇ、定量的）として得た。
【００５４】
Ｂ５−３の調製
ＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ中２５重量％、２３６ｍＬ、１．０３ｍｏｌ）を、Ｂ５−２（１８９ｇ、６８９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６００ｍＬ）中溶液に、室温でゆっくり加えた。２時間後、Ｄｏｗｅｘ  ５０ｗｘ８−２００（３２０ｇ）を加えて、ｐＨを３．５〜４に調整した。樹脂を濾過し、濾液を濃縮した。残渣を、トルエンと、次いでアセトニトリルと共沸して、Ｂ５−３（１０２ｇ、定量的）をワックス状の固体として得た。
【００５５】
Ｂ５の調製
Ｂ５−３（６９ｇ、４６５ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（１．２Ｌ）中懸濁液を、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（７６．９ｍＬ、５１２ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸一水和物（４．５６ｇ、２４ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（７５ｍＬ）溶液で処理した。室温で１時間撹拌した後、反応物を１時間加熱還流し、次いで、室温に冷却し、Ｅｔ３Ｎ（３ｍＬ）で中和した。混合物を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（８００ｍＬ）に溶解した。溶液を、水（５００ｍＬ）および次いで食塩水（５００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、粗製物を得た。これを酢酸エチル（１００ｍＬ）に７０℃で溶解し、次いで、ヘプタン（２７０ｍＬ、５０ｍＬ部分）で処理した。混合物を室温に冷却し、濾過して、Ｂ５の第１の画分を得た。ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（３：７）で溶出するシリカゲル上での母液のクロマトグラフィー精製により、第２の画分を得た。合計８８ｇのＢ５（８０％）を得た。
【００５６】
グリコミメティック１の調製
【００５７】
【化１７】
2009504660.tif 000014
化合物１の調製
Ｂ５（２０ｇ、８７．４ｍｍｏｌ）、Ｂ４−２（４０ｇ、１０１．６ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヨードスクシンイミド（２５ｇ、１１０．１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２３０ｍｌ、無水）中懸濁液を、トリフルオロメタンスルホン酸（ＣＨ２Ｃｌ２中０．１５Ｍ、約２ｍｌ；使用前に新たに調製する）を用いて、０℃で、色が明るい赤褐色から濃褐色に変化するまで処理した。反応物を、氷浴中で４０分撹拌し、次いで、水性Ｎａ２ＣＯ３（８％、１００ｍＬ）で反応停止してｐＨ９にした。ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）で希釈した後、層を分離した。有機相を、水性Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（１０％、３７０ｍＬ）、次いで、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。ＭＴＢＥ／ヘプタン（６：４）で溶出するシリカゲル上でのクロマトグラフィー精製により、１（４０．８ｇ、８１％）を泡状物として得た。
【００５８】
化合物２の調製
ＮａＢＨ３ＣＮ（４２ｇ、６７０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２８０ｍＬ）中溶液を、化合物１（３８ｇ、６７ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（７０ｍＬ）中溶液に室温で加えた。次いで、モレキュラーシーブ（３Å、粉末、乾燥；３０ｇ）を加え、反応混合物を室温で３０分撹拌し、その後、０℃に冷却した。ＨＣｌ（無水Ｅｔ２Ｏ中、使用前に調製する；約９０ｍＬ）を、化合物１のＴＬＣが完全に消費するまでゆっくりと加えた。固体Ｎａ２ＣＯ３（３５ｇ）を、氷浴で冷却しながら反応物に滴下し、スラリーを１０分撹拌し、その後、Ｃｅｌｉｔｅのパッドを通して濾過した。濾過物をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で希釈し、飽和水性ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、濃縮して黄色油状物とした。この残渣を、トルエン（４００ｍＬ）と水（２００ｍＬ）との間で分配したが、３層が生じた。層を分離し、中間層をトルエン（６×４００ｍＬ）と水（６×１００ｍＬ）の間で繰り返し分配した。合わせた有機層を濃縮して、粗製の２（３５ｇ）を得た。ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（６：４）で溶出するシリカゲル上でのクロマトグラフィー精製により、２（２６ｇ、６８％）を油状の泡状物として得た。
【００５９】
化合物３の調製
パート１：Ｂｒ２（Ｐ２Ｏ５で蒸留、１．８ｍＬ、３４．８ｍｍｏｌ）を、Ｂ２（１３．９ｇ、２９ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）の溶液に、０℃で滴下した。反応物を氷浴中で４０分撹拌した後、シクロヘキサン（４ｍＬ）を、色が持続的な黄色に変化するまで添加した。
【００６０】
パート２：化合物２（１１ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）に溶解し、次いで、Ｅｔ４ＮＢｒ（２００℃、窒素下で２時間乾燥；６．１ｇ、２９ｍｍｏｌ）、無水ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）およびモレキュラーシーブ（４Å粉末、乾燥；１２ｇ）を添加した。反応混合物を室温で３０分攪拌した後、パート１からの溶液を加えた。反応混合物を、４０時間、室温で攪拌し、次いで、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅのパッドを用いて濾過した。濾過物を、水性Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（１０％、１００ｍＬ）、水（１００ｍＬ）、次いで食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：１）で溶出するシリカゲル上でのクロマトグラフィー精製により、３（１５ｇ、７８％）を油状の泡状物として得た。
【００６１】
化合物４の調製
ＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ中０．５Ｍ、４．６ｍＬ、２．２４ｍｍｏｌ）を、化合物３（１１ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中溶液に、室温で添加した。３時間後、ＡｃＯＨ（１ｍＬ）を添加し、ｐＨは４に達した。混合物を濃縮して、粗製の４（９．２ｇ、定量的）を得、これをさらに精製することなく、次の工程で用いた。
【００６２】
化合物５の調製
化合物４（９．２ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）およびジブチルスズオキシド（３．９２ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）の無水メタノール（１５０ｍＬ）中混合物を、４時間にわたり加熱還流し、次いで、反応物を蒸発乾固させた。残渣を、乾燥フラスコ中のトルエン（１５０ｍＬ、無水）中に溶解させた。臭化テトラブチルアンモニウム（３．６５ｇ、７．９１ｍｍｏｌ）および臭化アリル（１．６ｍＬ、１８．１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を、４時間にわたり加熱還流し、冷却し、次いで、濃縮した。残渣を、ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２（７：３）で溶出するシリカゲル上でのクロマトグラフィーにより精製して、５を得た（６．４ｇ、２工程で６７％）。
【００６３】
化合物６の調製
化合物５（６．３ｇ、７．３５ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）中溶液を、ＮａＨ（１．４７ｇ、３６．８ｍｍｏｌ、鉱油中６０％）の無水ＤＭＦ（３０ｍＬ）中懸濁液に、０℃で添加した。反応物を室温で３０分攪拌した後、０℃に冷却し、ＢｎＢｒ（３．９５ｍＬ、３３．１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で２時間撹拌し、次いで、氷浴中、ＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）で反応停止した。水（２０ｍＬ）および氷冷した水性ＨＣｌ（１Ｍ、１００ｍＬ）を添加し、次いで、ＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）で抽出した。層を分離し、有機相を、水（２００ｍＬ）、氷冷した飽和水性ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）および食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：４）で溶出するシリカゲル上でのクロマトグラフィー精製により、６（６．３６ｇ、７８％）を得た。
【００６４】
化合物７の調製
ＫＯｔＢｕ（１．５７ｇ、１４．０ｍｍｏｌ）を、室温で、ＤＭＳＯ（４０ｍＬ）中の化合物６（６．３ｇ、５．５９ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。スラリーを、予熱した油浴中で２時間、１００℃まで加熱した。反応物を室温に冷却した後、ＣＨ２Ｃｌ２（１５０ＭＬ）および水（１００ｍＬ）を加えた。層を分離し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（２×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を、水（３×１００ｍＬ）および次いで食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮して残渣とした（６．４ｇ）。これをアセトン（４０ｍＬ）および水（４ｍＬ）に溶解し、ＨｇＯ（黄色；３．３ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）を添加し、次いで、ＨｇＣｌ２（無水；３．３ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）のアセトン（４０ｍＬ）中溶液および水（４ｍＬ）を滴下した。３０分後、混合物をＣｅｌｉｔｅのパッドを通して濾過し、濾液を濃縮した。残渣を、ＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）と飽和水性ＮａＩ（３０ｍＬ）との間に分配した。有機層を、水（１００ｍＬ）および次いで食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：４）で溶出するシリカゲル上でのクロマトグラフィー精製により、７（４．３５ｇ、７２％）を黄色油状物として得た。
【００６５】
化合物８の調製
パート１：Ｂｒ２（Ｐ２Ｏ５で蒸留、０．３９ｍＬ、７．５９ｍｍｏｌ）を、Ｂ４−３（４．０３ｇ、６．９ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中溶液に、０℃で滴下した。反応物を氷浴中で４０分攪拌した後、シクロヘキサン（１ｍＬ）を、色が持続的な黄色に変化するまで加えた。
【００６６】
パート２：化合物７（３．７５ｇ、３．４５ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）に溶解し、次いで、Ｅｔ４ＮＢｒ（窒素下、２００℃で２時間乾燥、１．４５ｇ、６．９ｍｍｏｌ）、無水ＤＭＦ（１５ｍＬ）およびモレキュラーシーブ（４Å粉末、乾燥；４ｇ）を添加した。この混合物を室温で３０分攪拌した後、パート１からの溶液を添加した。反応物を室温で６０時間攪拌し、次いで、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅのパッドを通して濾過した。濾液を、水性Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（１０％、５０ｍＬ）、水（３０ｍＬ）および次いで食塩水（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１：３）で溶出するシリカゲル上でのクロマトグラフィー精製により、８（３．９４ｇ、７１％）を泡状物として得た。
【００６７】
グリコミメティック１の調製
８（３．９ｇ、２．４２ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＯＨ）２／Ｃ（２０重量％、５０％水分；２ｇ）のメタノール（１５０ｍＬ）、１，４−ジオキサン（１５ｍＬ）および酢酸（５ｍＬ）中懸濁液を、６０ｐｓｉで、室温で２０時間水素付加した。混合物を、Ｃｅｌｉｔｅのパッドを通して濾過し、濾液を濃縮した。ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（１０：９：１）で溶出するシリカゲル上でのクロマトグラフィー精製により、グリコミメティック１（１．０５ｇ、７０％）を白色固体として得た。
【００６８】
実施例２
グリコミメティックの合成（化合物ＸＸＶＩＩＩ）
化学構造を、図３Ａ〜３Ｂに図示する。
【００６９】
中間体ＸＶＩＶの合成：化合物ＸＶＩＩＩ（０．８ｇ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）中溶液に、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（０．５ｇ）およびｐ−トルエンスルホン酸（０．２ｍｇ）を添加し、混合物を、室温で６時間攪拌する。トリエチルアミン（０．２ｍＬ）を添加し、反応混合物を、室温で５分攪拌する。溶媒を留去し、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製して、中間体ＸＶＩＶを得る。
【００７０】
中間体ＸＸＶの合成：化合物ＸＶＩＶ（０．５ｇ）のジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中溶液に、水素化ナトリウム（０．１ｇ、油中６０％懸濁液）を攪拌しながら添加する。臭化ベンジル（０．２ｍＬ）を上記反応混合物に滴下し、室温で１６時間攪拌する。メタノール（０．５ｍＬ）を撹拌しながら添加し、反応混合物を濃縮して乾燥させる。ジクロロメタン（５０ｍＬ）を添加し、有機層を、冷１Ｎ  ＨＣｌ、冷炭酸水素ナトリウム溶液および冷水で連続的に洗浄する。有機層を乾燥（硫酸ナトリウム）させ、濾過し、濃縮して乾燥させる。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製して、化合物ＸＸＶを得る。
【００７１】
中間体ＸＸＶＩの合成：ＸＸＶ（０．４ｇ）のＴＨＦ（５ｍＬ）中冷溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（０．１ｇ）を添加する。ＨＣｌのエーテル中冷溶液を、泡立ちが止まるまで（ｐＨ２〜３）滴下する。反応混合物を、エーテル（５０ｍＬ）で希釈し、炭酸水素ナトリウムの冷水溶液および冷水で連続的に洗浄する。溶媒を留去し、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製して、化合物ＸＸＶＩを得る。
【００７２】
中間体ＸＸＶＩＩの合成：化合物ＸＸＶＩ（０．１ｇ）のジクロロメタン−ＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に、モレキュラーシーブ（４Ａ、０．１ｇ）および臭化テトラエチルアンモニウム（０．０５ｇ）を添加し、反応混合物を、アルゴン下、室温で１時間攪拌する。この反応混合物に、化合物ＸＶＩ（０．１ｇ）を添加し、反応混合物を、アルゴン下、室温で４８時間攪拌する。反応混合物を、ジクロロメタン（１０ｍＬ）で希釈し、冷飽和炭酸水素ナトリウム溶液および水で連続的に洗浄し、次いで、乾燥（硫酸ナトリウム）させ、濾過し、濃縮して乾燥させる。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製して、化合物ＸＸＶＩＩを得る。
【００７３】
化合物ＸＸＶＩＩＩの合成：化合物ＸＸＶＩＩ（０．０６ｇ）のジオキサン−水（５ｍＬ、６：１）中溶液に、酢酸（１０滴）および１０％Ｐｄ−Ｃ（０．０６ｇ）を添加する。反応混合物を、水素下で２０時間、激しく攪拌する。反応混合物を、Ｃｅｌｉｔｅのベッドを通して濾過し、溶媒を留去する。残渣をセファデックスＧ−１０のカラムを通して精製し、化合物ＸＸＶＩＩＩを得る。
【００７４】
実施例３
グリコミメティックの合成（化合物ＸＸＸＩＩＩ）
化学構造を、図３Ａ〜３Ｂに図示する。
【００７５】
中間体ＸＸＩＸの合成：化合物ＸＶＩＩＩ（２ｇ）のピリジン（２０ｍＬ）中溶液に、ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリルクロリド（０．６ｇ）を添加し、溶液を室温で１６時間攪拌する。溶媒を留去し、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製して、化合物ＸＸＩＸを得る。
【００７６】
中間体ＸＸＸの合成：化合物ＸＸＩＸ（１ｇ）のα，α−ジメトキシプロパン（１０ｍＬ）中懸濁液に、カンファースルホン酸（０．２ｇ）を添加し、反応混合物を室温で１６時間攪拌する。トリエチルアミン（０．２ｍＬ）を添加し、溶媒を留去する。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製して、化合物ＸＸＸを得る。
【００７７】
中間体ＸＸＸＩの合成：化合物ＸＸＸ（０．８ｇ）を、実施例２に記載した方法と同様の方法で、化合物ＸＶＩ（０．８ｇ）と反応させて、化合物ＸＸＸＩを得る。
【００７８】
中間体ＸＸＸＩＩの合成：化合物ＸＸＸＩ（０．５ｇ）のアセトニトリル（５ｍＬ）中溶液に、トリエチルアミン（０．１ｍＬ）、およびＨ２ＳｉＦ６（０．５ｍＬ、３５％）のアセトニトリル（１ｍＬ）中溶液を添加する。２時間後、反応混合物をジクロロメタン（５０ｍＬ）で希釈し、炭酸水素ナトリウムの冷飽和溶液および冷水で洗浄し、次いで乾燥（硫酸ナトリウム）させ、濾過し、濃縮して乾燥させる。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル）により精製して、化合物ＸＸＸＩＩを得る。
【００７９】
化合物ＸＸＸＩＩＩの合成：化合物ＸＸＸＩＩ（０．２ｇ）の水中６０％酢酸溶液を、６０℃で１時間加熱する。溶媒を留去し、粗製精製物を、ジオキサン−水（５ｍＬ、６：１）に溶解する。酢酸（１０滴）を添加し、次いで、１０％Ｐｄ−Ｃを添加する。懸濁液を水素下で２４時間振盪し、濾過し（Ｃｅｌｔｅベッド）、濃縮して乾燥させる。残渣を、セファデックスＧ−１０のカラムを通して精製し、化合物ＸＸＸＩＩＩを得る。
【００８０】
実施例４
グリコミメティックの合成（化合物ＸＸＸＶＩＩ）
化学構造を、図３Ａ〜３Ｂに図示する。
【００８１】
中間体ＸＸＸＩＶの合成：ＸＸＩＸ（１ｇ）のＤＭＦ溶液を、実施例２に記載した方法と同様の方法で、ＮａＨ（０．１４ｇ）および臭化ベンジル（０．４ｍＬ）で処理し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製して、化合物ＸＸＸＩＶを得る。
【００８２】
中間体ＸＸＸＶの合成：化合物ＸＸＸＩＶ（１ｇ）を、実施例３に記載した方法と同様の方法で、Ｈ２ＳｉＦ６で処理して、化合物ＸＸＸＶを得る。
中間体ＸＸＸＶＩの合成：中間体ＸＸＸＶ（０．５ｇ）を、実施例２に記載した方法と同様の方法で、中間体ＸＶＩ（０．４ｇ）と反応させて、化合物ＸＸＸＶＩを得る。
【００８３】
化合物ＸＸＸＶＩＩの合成：中間体ＸＸＸＶＩ（０．３ｇ）を、実施例２に記載した方法と同様の方法で水素付加し、セファデックスＧ−１０により精製して、化合物ＸＸＸＶＩＩを得る。
【００８４】
実施例５
ＰＡ−ＩＬアンタゴニスト活性のアッセイ
マイクロタイタープレート（プレート１）のウェルを、３７℃で２時間インキュベーションすることにより、ＰＡ−ＩＬ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）で被覆する。次いで、ウェルを、１：１ｖ／ｖでＳｔａｂｉｌｃｏａｔ（Ｓｕｒｍｏｄｉｃｓ、Ｅｄｅｎ  Ｐｒａｉｒｉｅ、ＭＮ）と混合したＴＢＳ−Ｃａ（５０ｍＭ  ＴｒｉｓＨＣｌ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＣａＣｌ２、ｐＨ７．４）中で希釈した１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を添加することにより、２時間にわたってブロックする。第２の低結合丸底マイクロタイタープレート（プレート２）中、試験アンタゴニストを、ＴＢＳ−Ｃａ／Ｓｔａｂｉｌｃｏａｔ（６０μｌ／ウェル）中の１％ＢＳＡで連続的に希釈する。ストレプトアビジン−ＨＲＰ（ＫＰＬ  Ｌａｂｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）と混合した、予め形成したα−ガラクトース−ＰＡＡ−ビオチン（ＧｌｙｃｏＴｅｃｈ  Ｃｏｒｐ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）の結合体を、プレート２（２μｇ／ｍＬの６０μｌ／ウェル）の各ウェルに添加する。次いで、プレート１をＴＢＳ−Ｃａで洗浄し、１００μｌ／ウェルをプレート２からプレート１に移す。室温で２時間のインキュベーション後、プレート１を洗浄し、１００μｌのＴＭＢ試薬（ＫＰＬ  Ｌａｂｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を各ウェルに加える。室温で５分のインキュベーション後、反応を、１００μｌ／ウェルの１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４を添加することにより停止し、４５０ｎｍでの光の吸光度を、マイクロタイタープレートリーダーにより決定する。
【００８５】
実施例６
ＰＡ−ＩＩＬアンタゴニスト活性のアッセイ
マイクロタイタープレート（プレート１）のウェルを、３７℃で２時間インキュベーションすることにより、ＰＡ−ＩＩＬ（Ｄｒ．Ｗｉｍｍｅｒｏｖａ，Ｍａｓａｒｙｋ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｒｎｏ，チェコ共和国）で被覆する。次いで、ウェルを、１：１  ｖ／ｖでＳｔａｂｉｌｃｏａｔ（Ｓｕｒｍｏｄｉｃｓ，Ｅｄｅｎ  Ｐｒａｉｒｉｅ，ＭＮ）と混合したＴＢＳ−Ｃａ（５０ｍＭ  ＴｒｉｓＨＣｌ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＣａＣｌ２  ｐＨ７．４）中で希釈した１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を添加することにより、２時間にわたってブロックする。第２の低結合丸底マイクロタイタープレート（プレート２）中、試験アンタゴニストを、ＴＢＳ−Ｃａ／Ｓｔａｂｉｌｃｏａｔ（６０μｌ／ウェル）中の１％ウシ血清アルブミンで連続的に希釈する。ストレプトアビジン−ＨＲＰ（ＫＰＬ  Ｌａｂｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）と混合した、予め形成したフコース−ＰＡＡ−ビオチン（ＧｌｙｃｏＴｅｃｈ  Ｃｏｒｐ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）の結合体を、プレート２（２μｇ／ｍＬの６０μｌ／ウェル）の各ウェルに添加する。次いで、プレート１をＴＢＳ−Ｃａで洗浄し、１００μｌ／ウェルをプレート２からプレート１に移す。室温で２時間のインキュベーション後、プレート１を洗浄し、１００μｌのＴＭＢ試薬（ＫＰＬ  Ｌａｂｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を各ウェルに加える。室温で５分のインキュベーション後、反応を、１００μｌ／ウェルの１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４を添加して停止し、４５０ｎｍでの光の吸光度を、マイクロタイタープレートリーダーにより決定する。
【００８６】
実施例７
頬細胞に結合したＰＡ−ＩまたはＰＡ−ＩＩレクチンの阻害アッセイ
頬の内側を擦ることにより頬細胞を得、２ｍｌのリン酸緩衝食塩水中に集める。細胞を４００ｇで７分間遠心分離して、細胞ペレットを生成する。上清を捨てる。冷ＴＢＳ−Ｃａ（５０ｍＭ  ＴｒｉｓＨＣｌ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２ｍＭ  ＣａＣｌ２  ｐＨ７．４）に再懸濁して、細胞の濃度を１０６細胞／ｍＬにする。０．１ｍＬアリコートを各管に添加する。ビオチン標識化ＰＡ−ＩまたはＰＡ−ＩＩを管に添加する（５μｌ／ウェルの１．０ｍｇ／ｍＬレクチン）。阻害剤を管に添加する（所望の濃度で５μｌ）。氷上で３０分インキュベートする。４００μｌの冷ＴＢＳ−Ｃａを各管に添加し、４００ｇで７分遠心分離することにより、細胞を１回洗浄する。上清を捨てる。細胞を、１００μｌの冷ＴＢＳ−Ｃａに再懸濁する。ストレプトアビジン−ＦＩＴＣ（１ｍｇ／ｍＬの２μｌ／管、ＫＰＬ  Ｌａｂｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を添加する。３０分間氷上でインキュベートする。細胞を、４００μｌの冷ＴＢＳ−Ｃａを各管に添加し、４００ｇで７分間遠心分離することにより１回洗浄する。上清を捨てる。細胞を、５００μｌの冷ＴＢＳ−Ｃａに再懸濁する。フローサイトメーターで分析する。
【００８７】
上記より、例示を目的として本発明の特定の実施態様が本明細書中に記載されてきたが、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、多様な改変がなされ得ることが理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００８８】
【図１】図１は、グリコミメティック化合物の合成を図解する図である。
【図２Ａ】図２Ａは、リンカーアームを含むグリコミメティック化合物の合成を図解する図である。
【図２Ｂ】図２Ｂは、抗菌剤トブラマイシンに対する図２Ａの化合物の結合体化を図解する図である。
【図３Ａ】図３Ａおよび３Ｂは、グリコミメティック化合物の合成を図解する図である。
【図３Ｂ】図３Ａおよび３Ｂは、グリコミメティック化合物の合成を図解する図である。
【図４】図４は、本明細書中に記載された１またはそれより多くのレクチンアッセイで用いられる３つの化合物（化合物Ａ、化合物Ｂおよびグリコミメティック１）の構造を図示する。
【図５】図５は、グリコミメティック１（「Ｇｌｙｃｍ１」）によるＰＡ−ＩＬレクチンの阻害を図解する。ＰＡ−ＩＬレクチンは、ガラクトース−結合レクチンであり、ガラクトース、メリビオース（Ｇａｌαｌ−６Ｇａｌ）およびグリコミメティック１により阻害されるが、フコース、化合物Ａまたは化合物Ｂでは阻害されない。
【図６】図６は、ＰＡ−ＩＩＬレクチンの阻害を図解する。フコース結合レクチン、ＰＡ−ＩＩＬは、フコース、化合物Ａおよびグリコミメティック１により阻害されるが、ガラクトースでは阻害されない。
【図７】図７は、ＰＡ−ＩＬを阻害するためのグリコミメティック１のＩＣ５０値の決定を示す。グリコミメティック１は、ガラクトース−結合レクチンＰＡ−ＩＬを、ガラクトースの約４〜５倍良好に阻害するが、一方、フコースは不活性である。
【図８】図８は、ＰＡ−ＩＩＬを阻害するためのグリコミメティック１のＩＣ５０値の決定を示す。グリコミメティック１は、フコース−結合レクチンＰＡ−ＩＩＬを、ガラクトースの約４〜５倍良好に阻害するが、一方、ガラクトースは不活性である。
【図９−１】図９は、ヒト上皮細胞へのＰＡ−ＩＩＬ結合の阻害を図解する。ヒト頬上皮細胞を、ビオチン標識化したＰＡ−ＩＩＬレクチンと共にインキュベートし、次いで、フルオレセイン標識化ストレプトアビジンに結合したレクチンを検出する。蛍光標識細胞を、蛍光性活性化細胞ソーティング（Ｂ）により定量する。ＰＡ−ＩＩＬレクチンのフコース（Ｄ）またはグリコミメティック１（ＥおよびＦ）でのインキュベーションは、細胞表面への結合を阻害する。ガラクトース（Ｃ）は、効果がない。
【図９−２】図９は、ヒト上皮細胞へのＰＡ−ＩＩＬ結合の阻害を図解する。ヒト頬上皮細胞を、ビオチン標識化したＰＡ−ＩＩＬレクチンと共にインキュベートし、次いで、フルオレセイン標識化ストレプトアビジンに結合したレクチンを検出する。蛍光標識細胞を、蛍光性活性化細胞ソーティング（Ｂ）により定量する。ＰＡ−ＩＩＬレクチンのフコース（Ｄ）またはグリコミメティック１（ＥおよびＦ）でのインキュベーションは、細胞表面への結合を阻害する。ガラクトース（Ｃ）は、効果がない。
【図９−３】図９は、ヒト上皮細胞へのＰＡ−ＩＩＬ結合の阻害を図解する。ヒト頬上皮細胞を、ビオチン標識化したＰＡ−ＩＩＬレクチンと共にインキュベートし、次いで、フルオレセイン標識化ストレプトアビジンに結合したレクチンを検出する。蛍光標識細胞を、蛍光性活性化細胞ソーティング（Ｂ）により定量する。ＰＡ−ＩＩＬレクチンのフコース（Ｄ）またはグリコミメティック１（ＥおよびＦ）でのインキュベーションは、細胞表面への結合を阻害する。ガラクトース（Ｃ）は、効果がない。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図９−３】
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【国際調査報告】
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2009504660.tif 000034
2009504660.tif 000035
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