(57)【要約】  眼表面における投与のための製剤の形態における神経成長因子（ＮＧＦ）が、脳組織及び脳構造体に影響を与える病態、特に海馬、大脳皮質、前脳基底部、内側中隔、ブローカ三角帯、マイネルト基底核、黒質緻密部、線状体及び小脳に影響を与える病態の治療及び／又は予防における使用のために提示される。外用の眼製剤、例えば、点眼剤又は軟膏の形態で適用され、ＮＧＦは眼表面から脳組織まで通過することができ、中枢神経系の病態において、特にアルツハイマー病及びパーキンソン病において治療的作用を発揮することが見出された。【特許請求の範囲】
【請求項１】
中枢神経系に影響を与える病態の治療及び／又は予防のための、眼表面における投与用の眼科製剤の製造のための、神経成長因子（ＮＧＦ）の使用。
【請求項２】
前記眼科製剤が、脳の構造体に影響を与える病態の治療及び／又は予防に適応される、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記眼科製剤が、脊髄に影響を与える病態の治療及び／又は予防に適応される、請求項１又は請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記病態が、外傷後由来の、感染性由来の、手術後由来の、自己免疫性由来の、栄養失調性由来の、変性性由来の、虚血性由来の及び炎症後由来の病態である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
前記眼科製剤が、ニューロン変性性脳病態の治療及び／又は予防に適応される、請求項１又は請求項２に記載の使用。
【請求項６】
前記眼科製剤が、皮質脊髄路のニューロン変性の治療及び／又は予防に適応される、請求項１〜３のいずれか１請求項に記載の使用。
【請求項７】
前記眼科製剤が、アルツハイマー病及びパーキンソン病の治療及び／又は予防に適応される、請求項５に記載の使用。
【請求項８】
前記眼科製剤が、製薬的に許容できる眼科用キャリヤーを有する溶液もしくは懸濁液（点眼液）、軟膏、ゲルもしくクリームの形態であるか、又は結膜嚢中に配置される侵食性眼内挿入物（ｅｒｏｄｉｂｌｅ  ｏｃｕｌａｒ  ｉｎｓｅｒｔｓ）もしくはポリマー膜「リザーバー」システムの形態であるか、又は治療用コンタクトレンズでの局所バンデージに添加される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
前記眼科製剤が１〜１，０００μｇ／ｍｌのＮＧＦを含有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
前記眼科製剤が点眼液の形態であり、１０〜５００μｇ／ｍｌのＮＧＦを含有する、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
前記点眼液が、２００〜２５０μｇ／ｍｌのＮＧＦを含有する、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記眼科製剤が一つ以上の活性な成分との組み合わせである、及び／又はキャリヤー分子と結合されている、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
前記ＮＧＦが、マウス由来もしくはヒト由来であるか、又は組換えヒトＮＧＦ、又はＮＧＦ受容体との結合によりＮＧＦ様作用を発揮する化合物である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルツハイマー病及びパーキンソン病のような中枢神経系の病態の治療のための点眼液における神経成長因子の使用に関する。より特定すると、本発明は、例えば点眼液又は眼軟膏の形態での、眼表面への単純な局所投与による、海馬、大脳皮質、前脳基底部、内側中隔、ブローカ三角帯、マイネルト基底核、黒質緻密部、線条体及び小脳のような脳の構造体に影響を与える病態の治療のための、神経成長因子（ＮＧＦ）と称されるニューロトロフィンの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
神経成長因子（ＮＧＦ）は、複合ニューロトロフィン群の主な分子であり、中枢神経系及び末梢神経系のコリン作動性ニューロンにおける、その栄養活性、刺激活性及び分化活性についてよく知られている。ＮＧＦは、ヒトを含む多くの哺乳動物の組織により生成され、神経系の成長及び分化の間に、血流中に多量、放出される。試験管内細胞系で行われている生物学的、生化学的及び分子的研究により、マウスＮＧＦとヒトＮＧＦとの間の非常に高い相同性が強調されている。更に、多くの他の動物種におけるように、ヒトにおいて、ＮＧＦは正常では１０−５０ｐｇ／ｍｌの濃度で脳脊髄液中及び血流中の両方に存在し、いくつかの炎症性病態（自己免疫疾患及びアレルギー性疾患等）では増加し、他の病態（糖尿病）においては低減する。
【０００３】
ＮＧＦは、セントルイスのワシントン大学の動物学研究所（Ｚｏｏｌｏｇｙ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）のリタ・レヴィ・モンタルチーニ（Ｒｉｔａ  Ｌｅｖｉ−Ｍｏｎｔａｌｃｉｎｉ）教授により見出され（Ｌｅｖｉ−Ｍｏｎｔａｌｃｉｎｉ  Ｒ．によるＨａｒｖｅｙ  Ｌｅｃｔ．、６０巻、２１７頁、１９６６年）、ニューロンの生物学的機能の発達及び保存並びに再生に影響を与えることができるというような、神経細胞成長及び分化の機構の研究において重要な段階を担っている。リタ・レヴィ・モンタルチーニ教授は、その分子を見出したことと末梢神経系及び中枢神経系の両方におけるその生物学的役割を特徴付けたことで、１９８６年にノーベル医学生理学賞を受賞した。
【０００４】
多くの試験管内及び生体内実験研究により、外科性由来の、化学性由来の、機械性由来の及び虚血性由来のニューロン損傷を防止することにおけるＮＧＦの生理病理学的重要性が示され、従って、ＮＧＦは、中枢神経系及び末梢神経系の多くの病態の治療における使用のための理想的な候補にされている（Ｈｅｆｔｉ  Ｆ．によるＪ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．、２５巻、１４１８頁、１９９４年；Ｆｒｉｃｋｅｒ  Ｊ．によるＬａｎｃｅｔ、３４９巻、４８０頁、１９９７年）。実際、ここ数年、パーキンソン病及びアルツハイマー病を患っている患者において、マウスのＮＧＦの脳内投与による臨床的試みが行われている（例えば、Ｏｌｓｏｎ  Ｌ．らによるＪ．Ｎｅｕｒａｌ  Ｔｒａｎｓ．：Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ  Ｓｅｃｔｉｏｎ、４巻、７９頁、１９９２年を参照）。それらの研究の結果により、動物モデルにおいて行われた観察が確立され、マウスＮＧＦの投与の後に起こり得る副作用がないことが強調された。この特徴は、後に、組み換えヒトＮＧＦで確認された（Ｐｅｔｔｙ  Ｂ．Ｇ．らによるＡｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、３６巻、２４４−２４６頁、１９９４年）。
【０００５】
その発見から、ＮＧＦの生物学的、生化学的、分子的、前臨床的及び臨床的効果の特徴付けにおける研究は、ほとんど、成体げっ歯類動物の顎下腺から単離されたＮＧＦのみを用いて行われているので、現在まで、最も多くの獲得されたデーターはマウスＮＧＦに関する。マウスＮＧＦの生化学的性質については、１９６８年にさかのぼった研究において特に記載されている（Ｌｅｖｉ−Ｍｏｎｔａｌｃｉｎｉ  Ｒ．及びＡｎｇｅｌｅｔｔｉ  Ｐ．Ｕ．によるＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、４８巻、５３４頁、１９６８年）。
【０００６】
マウス唾液腺中に含有されるＮＧＦは、７Ｓの沈降係数を有する１４０キロダルトンの分子複合体であり、３つのサブユニット、α−、β−及びγ−から成り、そのβ−が実際の活性形態を示す。βＮＧＦとして知られている後者は、２．５Ｓの沈降係数を有しており、あまり異ならない３つの方法により抽出され、精製されている（Ｂｏｃｃｈｉｎｉ  Ｖ．、Ａｎｇｅｌｅｔｔｉ  Ｐ．Ｕ．によるＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、６４巻、７８７−７９３頁、１９６９年；Ｖａｒｏｎ  Ｓ．らによるＭｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０３−２２９頁、１９７２年；Ｍｏｂｌｅｙ  Ｗ．Ｃ．らによるＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３８７巻、５３−６２頁、１９８６年）。
【０００７】
このように得られたβＮＧＦは１１８のアミノ酸の２つの同一の鎖から構成された約１３，０００ダルトンの二量体である。各鎖は、３つのジスルフィド架橋により安定化されており、一方、非共有結合により二量体構造の安定化が確保されている。その分子は非常に安定であり、水性及び油性の両方のほとんどすべての溶媒に可溶性であり、その生化学的特徴及び生物学的活性を変化させずに保つ。その分子の構造並びに物理的及び生化学的性質における更なる詳細については、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｌ．Ａ．及びＳｈｏｏｔｅｒ，Ｅ．Ｍ．によるＡｎｎ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、３巻、３５３頁、１９８０年に報告されている。
【０００８】
最近、結晶学的分析によりβＮＧＦの構造が更に明らかになってきた。前記分析により、それに沿って２つの鎖が結合して活性な二量体を生成する平らな表面の形成を可能にする、α２タイプの二次構造を有する３つの逆平行対のフィラメントの存在が明らかになった。それらのβＮＧＦ鎖において、多くの種々のアミノ酸が含有されている４つの「ループ」領域の存在が見出されている。それらの種々のアミノ酸は、恐らく、受容体認識特異性に関与している。
【０００９】
ＮＧＦの生物学的効果は、対応する標的細胞の表面に存在する２つの受容体により介されている。ＮＧＦの生物学的効果を選択的に阻止する多くの抗体の存在が、細胞系内及び生体内での両方におけるその活性の正確な特徴付け及び調節を可能にした。
【００１０】
より最近、ヒトＮＧＦが遺伝子組換え技術により合成されており（Ｉｗａｎｅ，Ｍ．らによるＢｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、１７１巻、１１６頁、１９９０年）、少量のヒトＮＧＦも現在市販されている。しかし、ヒトＮＧＦの生物学的活性は、マウスのＮＧＦ活性と比較して非常に低いことが直接的な実験により示されている。さらに、試験管内及び生体内の両方における現在入手できるほとんどすべてのヒトにおけるデーターがマウスＮＧＦを用いることにより得られており、そしてマウス由来の分子から生じる望ましくない副作用は今までに見出されていないことに留意しなくてはならない。
【００１１】
１９７０年代からの動物モデルにおいて行われた研究により、中枢神経系に関する病態におけるＮＧＦの可能な関与が示唆されている。ＮＧＦが、前脳基底部におけるコリン作動性ニューロンの萎縮及び老いたそして損傷を受けたラットにおいて生じる認知欠落と闘うことが観察されたことにより、中枢神経系の変性性病態の病理的機構におけるＮＧＦの関与が約３０年前に推測されている［Ｈｅｆｔｉ  Ｆ．によるＪ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、６（８）、２１５５−６２頁、１９８６年］。特に、近年、多くの実験的確認により、ＮＧＦ分子の体内合成の欠落と中枢神経系（ＣＮＳ）、末梢神経系（ＰＮＳ）及び皮膚の疾病のいくつかの特定の病態の発生との間の一貫した相関関係が指摘されている（Ｔｕｓｚｙｎｓｋｉ  Ｍ．Ｈ．らによるＪ．Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、１９巻、２０７頁、２００２年；Ｎａｋａｇａｗａｒａ  Ａ．らによるＮ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３２８巻、８４７−８５４頁、１９９３年；Ｄｅ  Ｓａｎｔｉｓ  Ｓ．らによるＣｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、６巻、９０−９５頁、２０００年；Ｋａｙｅ  Ｄ．Ｍ．らによるＣｉｒｃ．Ｒｅｓ．、８６巻、ｅ８０−ｅ８４、２０００年；Ｖｉｌｌｏｓｌａｄａ  Ｐ．らによるＪ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９１巻、１７９９−１８０６頁、２０００年；Ｓａｌｖｉｎｅｌｌｉ  Ｆ．らによるＪ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｇｕｌ．Ｈｏｍｅｏｓｔ．Ａｇｅｎｔｓ、１６巻、１７６−８０頁、２００２年）。
【００１２】
それらの考察から始まって、何人かの研究者達が、ＮＧＦの局所投与による、角膜潰瘍、糖尿病又は褥瘡からの潰瘍、及び関節リウマチに関連する血管炎のようなヒト内側組織の病態におけるＮＧＦの治療的使用に焦点を当てる研究を開始した（Ｃｏｓｔａ  Ｎ．らによるＡｎｎ．１ｓｔ．Ｓｕｐｅｒ．Ｓａｎｉｔａ、３８巻、１８７−１９４頁、２００２年；Ａｌｏｅ，Ｌ．及びＣａｌｚａ，Ｌ．編、Ｐｒｏｇ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．、１４６巻、１−５４４頁、２００４年；Ｌａｍｂｉａｓｅ  Ａ．らによるＮｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３３８巻、１１７４−１１８０頁、１９９８年；Ｂｅｒｎａｂｅｉ  Ｒ．らによるＴｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ、３５４巻、１８２頁、１９９９年；Ｌａｍｂｉａｓｅ  Ａ．らによるＡｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．、１１８巻、１４４６−１４４９頁、２０００年；Ｔｕｖｅｒｉ  Ｍ．らによるＴｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ、３５６巻、１７３９−１７４０頁、２０００年；Ｃｈｉａｒｅｔｔｉ  Ａ．らによるＡｒｃｈ．Ｄｉｓ．Ｃｈｉｌｄ．、８７巻、４４６−４８頁、２００２年；Ｌａｎｄｉ  Ｆ．らによるＡｎｎ．Ｉｎｔ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１３９巻、６３５−６４１頁、２００３年；Ｇｅｎｅｒｉｎｉ  Ｓ．らによるＥｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ、１１２巻、５４２−４頁、２００４年；Ａｌｏｅ  Ｌ．によるＰｒｏｇｒ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．、１４６巻、２７９−８９頁、２００４年）。残念なことに、それらの表面病理学について達成された進歩にもかかわらず、ニューロン変性性疾病の発生機序におけるそのニューロトロフィンの関与についての存在する多くの証拠にもかかわらず、ＮＧＦは、中枢神経系の疾病の治療において、いまだに用いられていない。
【００１３】
知られているように、アルツハイマー病（ＡＤ）は、記憶の及び主な認知能力の漸次の喪失をもたらす、年配者におけるニューロン変性性疾病である［Ｓｅｌｋｏｅ  Ｄ．Ｊ．によるＰｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．、８１（２）、７４１−６６頁、２００１年］。その疾病の散発性型（罹患した患者の９５％より多くに関する）、並びにＡＰＰ（アミロイド前駆体蛋白質）、ＰＳ１（プレセニリン１）及びＰＳ２（プレセニリン２）による遺伝子突然変異に関連づけられた家族性型（罹患した患者の５％未満）がある。その疾病の両方の型において、細胞の死滅、シナップスの欠損、及び高燐酸化形態で存在し、ＰＨＦ（二重ラセン状フィラメント）と称される分子凝集体中に配置されている蛋白質細胞骨格タウから成る細胞内神経原線維変化の形成により認知低下が伴われる。アルツハイマー病（ＡＤ）の他の組織病理的徴候は、アミロイド蛋白質（アミロイドβ−ペプチド、Ａβ）、ＡＰＰの病的な蛋白質分解により生成されるペプチド、の細胞外蓄積である。この蓄積は、アミロイド班又は老人班として現在知られているものを構成することになる。それらの細胞障害は主に海馬及び大脳皮質中に見出され、一方、前脳基底部及びマイネルト基底核においては、コリン作動性細胞の数の減少がある［Ｓａｐｅｒ  Ｃ．Ｂ．らによるＮｅｕｒｏｌｏｇｙ、３５（８）、１０８９−９５頁、１９８５年；Ｐａｌｍｅｒ  Ａ．Ｍ．によるＮｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ、５（４）、３８１−９１頁、１９９６年；Ｍｕｆｓｏｎ  Ｅ．Ｊ．らによるＪ．Ｃｈｅｍ．Ｎｅｕｒｏａｎａｔ．、２６（４）、２３３−４２頁、２００３年］。
【００１４】
ＡＤのこの特定の面は、コリンエステラーゼ阻害剤の使用に関する現在行われている治療の処方化をもたらしている（そして従って、正常の「コリン作動性」の機能化の回復を促進する）。現在入手できるすべての抗ＡＤ薬の作用はその疾病の部分的な遅延化に限定されるので、そしてその治療はその疾病の十分に早い段階で開始されるという条件では、それらの効果が全く不十分であることを強調しなくてはならない。
【００１５】
パーキンソン病（ＰＤ）は、人口において二番目に多い（ＡＤの次）ニューロン変性性病態であり、解剖学−病理学的見地から、黒質緻密部  −それら自体の投射を線状体に送る、メラニンを含有するドパミン作動性ニューロンにより構成されている神経核−  として知られているものの選択的変性により特徴付けられる。このニューロンの個体群の進行性変性及び結果として起こる線状体のドパミン作動性神経支配除去が、基底の機能構築を破壊する順次の変質を起こし、ＰＤの運動性症状の発現をもたらす。
【００１６】
黒質線状体におけるドパミンの欠損が、パーキンソン症候の原因である神経伝達物質の変質として最初に特定されてから４０年より長い年月が過ぎているという事実にもかかわらず、ＰＤの原因病理論及び生理病理学は、いくつかのほとんど知られていない領域を与え続けている。そのことは、ＰＤの治療における「最高の標準物質」としていまだになお考えられている、ドパミンの前駆物質であるＬ−ＤＯＰＡ（又はレボドパ）、に代わる有効な治療代替物がないことを意味している。
【００１７】
ここ２０年に亘る、生体内及び試験管内実験モデルで行われた研究により、新しい治療法の実験法を可能にする貴重な情報が提供されており、「深部脳刺激」（ＤＢＳ）のような、そのいくつかが臨床的な実施において成功裏に組み込まれている。しかし、最も最近の治療的な試みでさえ、数年に亘る長期のレボドパの摂取に必然的に伴う望ましくない作用（特にジスキネジア及び運動症状の日内変動）にもかかわらず、レボドパの高い地位に取って代わることができていない。現在における最も深刻な不利なことは、症候上の見地からＬ−ＤＯＰＡの場合ほどでない、又はＬ−ＤＯＰＡの場合にとどまらない、疾病に対処するための、しかし、黒質線状体レベルにおける再生機構を引き起こすためでは全くない場合に、ニューロン変性のプロセスの封じ込めを可能にするためでもある治療上の手段がないことである。換言すると、ＰＤの治療において、神経保護プロセス及び／又は神経修復プロセスに実際に関与する治療法が考案されるときにのみ、前への現実の飛躍がなされ得る。
【００１８】
神経成長因子にもどると、それらの治療におけるその使用に対する主な障害は、通常の投与法によっては取り込まれることができないような規模の濃度が脳組織に運ばれなくてはならないという事実にある。ＮＧＦの分子は全身投与による治療濃度において血液−脳関門を通過することができないので、実際、現在行われている研究のすべては、脳内（脳室内）に投与された場合のみのＮＧＦ有効性を示している。抗ＡＤ薬としてのＮＧＦ使用についての最も最近の治療法は、それらが局所的にＮＧＦを放出するような遺伝子組み換え細胞の脳内接種に基づいている［Ｔｕｓｚｙｎｓｋｉ  Ｍ．Ｈ．らによるＪ．Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、１９（１−２）、２０７頁、２００２年；Ｔｕｓｚｙｎｓｋｉ  Ｍ．Ｈ．らによるＮａｔ．Ｍｅｄ．、１１（５）、５５１−５頁、２００５年］。
【００１９】
引用された実験的な研究により、前記病態によりもたらされるニューロンの死滅を防ぐことにおいて又は少なくとも遅延させることにおいて、ＮＧＦの脳内投与が有効であることが示されている。さらに、それらの研究はいずれも、動物において副作用を示さなかった。しかし、すべての前記刊行物において、ＮＧＦは脳内注入により脳組織に投与されたことに注意しなくてはならない。
【００２０】
例えば、欧州特許ＥＰ  ０７２１３４３（Ｓｙｎｔｅｘ）は、前記病態の治療のために提示されたＮＧＦ系医薬製剤化に関しており、ＮＧＦ系製剤は、経口的に投与された場合、体に不十分にしか吸収されないという欠点を有し、唯一の可能な溶液は、非経口的な投与、注射又は点滴によるということを想起させている。提示されたＮＧＦ系製剤は、血液−脳関門を通過することができないので、その文献は  −脳組織に到達しなくてはならない生成物投与のために−  脳室内に埋め込まれたカニューレによるか又は徐放性器具又はポンプの脳内インプラントによる脳室内への注入又は点滴を提示した。
【００２１】
本願発明者の一人がその発明者である、それぞれ、ＷＯ９８／４８００２及びＷＯ００／４４３９６で公開されているＰＣＴ国際特許出願が、点眼液の形態における又は軟膏としてのような眼への外用投与のためのＮＧＦ使用の記載を含む唯一の特許文献であることが現在までに判明している。報告された実験的研究は、いかにＮＧＦの局所的投与が、眼の表面病態（角膜及び結膜）を成功裏に解決でき、予測しないことに、眼の内部組織に関する病態も成功裏に解決できることを示している。従って、ＮＧＦは、有効な先行治療が存在しない眼の病態を成功裏に治療するために適することが判明した。
【００２２】
中枢神経系病態のために、そして特にＡＤ及びＰＤのために、ＮＧＦの治療的活性は文献においてすでに報告されているが、関連組織への活性成分の容易な投与の問題についての解決法は現在までに提示されていない。事実上、活性成分がその場において連続的に放出されるように、脳内注入又は脳組織の内部への器具の埋め込みを用いる技術  −前記欧州特許ＥＰ０７２１３４３に記載された器具の場合におけるように−  は、注入中の解剖学的構造体の感染、出血及び傷のような、文献において報告されている種々の合併症のリスクを与える。それらの合併症は、慢性の病態の治療において、なおより頻繁に起こり得て、リスク−ベネフィットバランスの反転を生じる、治療の非適用性がもたらされ得る。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明により、予測しないことに、眼表面に点眼液の形態でＮＧＦを投与することにより、脳脊髄液を含むすべての脳組織において、このニューロトロフィンのレベルの増加を得ることができることが見出された。点眼液の形態で投与される場合、ＮＧＦは、中枢神経系レベルで通過することができ、その場で、特にアルツハイマー病及びパーキンソン病を含む脳の疾病（ニューロン変性性の及び虚血性の疾病）における、それ自体の治療能力を発揮することができる。
【００２４】
下記の実験報告において詳細に示されているように、投与される眼表面からのＮＧＦ分子の脳組織への輸送が、オートラジオグラフィー法（Ｌｅｖｉ−Ｍｏｎｔａｌｃｉｎｉ，Ｒ．及びＡｌｏｅ  Ｌ．によるＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２巻、７１１１−７１１５頁、１９８５年）及び免疫酵素定量法（ｉｍｍｕｎｏｅｎｚｙｍａｔｉｃ  ｄｏｓａｇｅ）（Ｂｒａｃｃｉ−Ｌａｕｄｉｅｒｏ，Ｌ．らによるＮｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．、１４７巻、９−１２頁、１９９２年）の両方を用いることにより示された。特に、後者の方法を、生理的食塩液中のＮＧＦの結膜点眼で処置されたラットに適用することにより、投与してから２時間後に、検査した脳の組織すべてにおいてＮＧＦ濃度の増加があることが見出された。濃度におけるこの増加は、約２４時間後にベースレベルまで次第に低減した。
【００２５】
この効果は、以前にすでに仮説が立てられたように、ＮＧＦが眼表面投与により直接関連していない眼の内部組織においてのみでなく、予期しないことに眼の外部の脳領域の組織においても、従って、特に中枢神経系においても治療作用をなし遂げることを可能にする。この面は、ＮＧＦの治療的有効性がすでに示されていたが、その当時、患者への危険性又は副作用を有しない活性成分の容易な投与を可能にする入手可能な薬理学的な投与が存在しなかったので、脳の病態にとって革新的である。
【００２６】
活性成分にとって望ましい作用部位が中枢神経系である場合、眼用のタイプの、すなわち点眼液又は軟膏の形態での治療剤の外用の局所的投与を有するという可能性は、すでに知られている非経口経路による及び脳内注入による投与と比較して重要な利点を与えることは明らかである。
【００２７】
従って、本発明は、特に、中枢神経系の病態の治療及び／又は予防のために眼表面における投与用の眼科製剤の生成のための神経成長因子（ＮＧＦ）の使用を提供する。
【００２８】
特に、本発明による製剤は、脳の構造体に影響を及ぼす病態の治療及び／もしくは予防、又は脊髄に影響を及ぼす病態の治療及び／もしくは予防に適応され得る。両方の場合において、ＮＧＦ系眼科製剤は、外傷後の特質、又は感染性、手術後、自己免疫性、栄養失調性、変性性、虚血性又は炎症後の特質の病態の治療に適応され得る。それらのなかに、本発明に導く研究の主な目的であった病態の他に、繰り返された機械的外傷に続く、そしてときには「ボクサー痴呆」として知られている認知症、又は脳血管疾患に続く認知症のような非変性性タイプの認知症の種々の形態も含まれ得る。
【００２９】
より特定すると、本発明によるＮＧＦ系眼科製剤は、ニューロン変性性脳病態、そのなかでもいくつかの形態の本発明の好ましい実施によりパーキンソン病及びアルツハイマー病の治療及び／又は予防に適応される。
【００３０】
本発明の他の形態により、本眼科製剤は又、その筋萎縮性側索硬化症が、ＮＧＦが正の効果を有し得る他の例を構成する、皮質脊髄のニューロン変性の治療及び／又は予防にも適用され得る。
【００３１】
本明細書の記載において、「神経成長因子」又は「ＮＧＦ」とは、ＮＧＦの生物学的に活性な形態、好ましくは、しかし排他的ではなく、天然もしくは組み換え体のサブユニットβ、しかし更に、対応する受容体に結合し、ＮＧＦの生体利用性を保つ、ＮＧＦのハイブリッドもしくは修飾された形態、又は更に、得られた生成物が特定の受容体に結合するのに十分な能力を明らかに維持するという条件でいくつかのアミノ酸が削除されているか置換されているＮＧＦフラグメントもしくはハイブリッドを意味することに注意しなくてはならない。これに関して、本発明には、例えば、トランスフェリンのようなキャリヤー蛋白質と結合したＮＧＦ系蛋白質、及びＮＧＦ受容体結合によりＮＧＦ様作用を発揮する化合物の使用も含まれる。
【００３２】
より特定すると、前記ＮＧＦ系眼科製剤は、眼に認容され、活性成分と相溶性である製薬的に認容される眼用キャリヤーを有する、溶液もしくは懸濁液（点眼薬又は点眼液）、軟膏、ゲルもしくはクリームの形態である。結膜嚢内に配置される侵食性眼内挿入物もしくはポリマー系膜「レザバー」システムのような徐放に基づいた、眼への投与の特定形態を構想することも可能である。代替として、ＮＧＦ、又はＮＧＦを含有する製剤は、治療用コンタクトレンズでの局所バンデージに添加され得る。
【００３３】
すでに注目されており、後に記載する実験データーにより確認されてもいるように、ＮＧＦの外用の局所的投与も、アルツハイマー病及びパーキンソン病の動物モデルにおけるニューロン変性を阻止することができることが判明した。眼表面における適用によるＮＧＦの投与により、脳ニューロンの欠損が存在するときにアルツハイマー病及びパーキンソン病の動物モデルにおける動物のニューロン生存及び行動改善が誘導される。
【００３４】
より特定すると、パーキンソン病における、点眼液として投与されたＮＧＦの効果は、１）黒質緻密部（ＳＮｃ）におけるアポトーシス性ニューロンの数の減少；２）ＳＮｃにおけるドパミン作動性（ＤＡｅｒｇｉｃ）ニューロンの数の増加；３）レヴィー小体（パーキンソン病に特有の細胞質タイプを含み、マーカーと考えられている）の数の減少；４）青班、視床下部、大脳皮質及び基底核を含む脳の他の領域におけるニューロンの数の増加；５）ラットの旋回運動行動（ｃｉｒｃｕｌａｒ  ｍｏｖｅｍｅｎｔ  ｂｅｈａｖｉｏｕｒ）（パーキンソン病の他の代表的な症候である旋回運動を有する空間的見当識障害）の増大である。
【００３５】
アルツハイマー病における、点眼液の形態で投与されたＮＧＦの効果は、１）海馬及び皮質領域におけるアポトーシス性ニューロンの数の減少；２）前脳基底部、海馬及び皮質領域におけるコリン作動性ニューロンの数の増加；３）アミロイド班の数の減少；４）Ａβ４２ペプチドレベルの低減（アルツハイマー病のマーカーであり、Ａβはアミロイドタンパクを表す）；５）炎症の低減；６）アセチルコリンレベルの増大である。
【００３６】
眼への局所的投与の後にＮＧＦが脳組織における生物学的作用を発揮できる可能性は予測不可能であり、特に、−先に強調したように−  ＮＧＦは複合構造を有するかなりのサイズ（２６，８００ダルトン）の分子であるという事実を考えると予測不可能であった。分子が脳組織において作用するためには  ―眼表面に滴下されたら―  脳領域においてそれ自体の生物学的活性を発揮するためには、眼の組織を通過し、視神経及び脳脊髄液に到達できなければならない今までの実施では、脳病態を治療するために眼への投与は用いられていない。それは、脳病態におけるＮＧＦの使用に関するすべての公知の研究は脳内投与のみを用いているという事実による。
【００３７】
事実上、複合構造及び高分子量を有するにもかかわらず、ＮＧＦは親水性及び疎水性の両方の構造基を有し、そのことが相同（脂質及び親水性）の解剖学的バリヤーを通過させることを可能にする。さらに、ＮＧＦの基本的特徴は、ＮＧＦが標的器官に、非常に低い濃度においても、生物学的に活性な濃度においては、一端到達すれば、組織それ自体によってＮＧＦの内因性生成が刺激され得ることである。ＮＧＦの内因性画分の存在はＮＧＦの組織への通過における実験の結果（後に示す）により明らかに確証されている。それらの結果は又、組織間の単純な拡散機構について仮説が立てられていたように、眼の外表面から脳に向けての濃度勾配は維持されないことも示している。
【００３８】
本発明による製剤を生成するために、ＮＧＦの抽出及び精製のために適する操作は前記文献に報告されている。本発明に関する実験には、本明細書中に簡単に報告されているＢｏｃｃｈｉｎｉ及びＡｎｇｅｌｅｔｔｉの技術が用いられた。オスの成体マウスの顎下腺を無菌条件下で抽出し、その組織を均質化し、遠心分離し、そして透析する。次にその懸濁液を連続的セルロースカラムを通し、それにＮＧＦを吸着させる。次に、０．４Ｍの塩化ナトリウム緩衝液によりカラムからそのＮＧＦを溶離させる。このように得られた試料を２８０ｎｍの波長において分光光度分析し、ＮＧＦ含有画分を特定する。それらの画分を透析し、滅菌条件下で凍結乾燥し、−２０℃において冷凍する。
【００３９】
本発明による、眼表面に投与するのに適する医薬生成物は、単独で又は一つ以上の他の活性成分と組み合わされて、好ましくは１〜１，０００μｇ／ｍｌのＮＧＦを含有する。本生成物が水性溶液（点眼液）の形態である場合、ＮＧＦ濃度は好ましくは１０−５００μｇ／ｍｌの範囲であり得て、更により好ましくは２００−２５０μｇ／ｍｌの範囲であり得る。点眼液の特定の配合物は、例えば、０．９％塩化ナトリウム生理的溶液中又は平衡生理食塩液［ＢＳＳ（登録商標）］中（両方の場合において、その溶液は涙液と等張であり、従って眼に良好に認容される）、２００μｇ／ｍｌのＮＧＦを含有し得る。しかし、低張性溶液を用いることも可能である。
【００４０】
生理食塩液中に含有されるＮＧＦは、単独で又は他の生物学的に活性な分子と組み合わされて及び／又は他のキャリヤー分子（トランスフェリンのような）と結合されて存在し得る。眼表面からの通過をさらに増大させるために、活性成分を安定化し、その製剤を良好に認容させるために溶液又は懸濁液を緩衝させるためのような、製薬技術において今までに用いられているものから選ばれる他の賦形剤が添加され得る。より特定すると、その緩衝液は、４−８の範囲内、好ましくはｐＨ６．５〜ｐＨ７．５の範囲内にｐＨを維持しなくてはならない。例えば、前記の塩化ナトリウム溶液は、眼への使用に適するように製薬分野でよく知られているいずれかの緩衝液、特に、同時に生理学的容量オスモル濃度（２９５−３０５ｍＯｓｍ／ｌ）を維持しつつ、７．０−７．４の生理的ｐＨを有するために、燐酸緩衝液又はトリズマ（トリヒドロキシメチル−アミノメタン）で緩衝され得る。
【００４１】
認容性は、ポリソルベート８０（又はツイーン８０）、デキストラン、ポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ４００）等のような賦形剤を用いることにより、さらに高められ得る。配合物は又、活性成分のバイオアベイラビリティ、安定性及び認容性を高めるために、ヒアルロン酸、メチルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン等のような粘度増大剤も含有し得る。ＮＧＦのバイオアベイラビリティは、ジメチルスルホキシド、タウロコール酸塩類、膜燐脂質類、及び眼への使用のために適する種々の界面活性剤のような、医薬の角膜浸透を増大する物質を用いることにより、さらに高められ得る。更に、汚染を防ぐために、抗菌活性を有する保存剤が配合物に添加され得る。
【００４２】
カルボキシメチルセルロース等のような物質は、懸濁液の形態において投与される生成物に添加され得る。軟膏、ゲル又は眼用クリームとしての配合物を用いることが望ましい場合、ＮＧＦキャリヤーは、ポリエチレングリコール、ポリアクリレート類、ポリエチレンオキシド類、脂肪酸類及びアルコール類又はラノリン、パラフィン等であり得る。
【００４３】
本発明の構成の範囲内で得られるいくつかの実験結果を単に例示的目的のために以下に記載する。
【００４４】
眼表面から脳へのＮＧＦの通過における研究
投与される外表面からＮＧＦの脳組織への眼内通過を評価するための最初の一組の試験において、６匹のウサギ一組において前記のオートラジオグラフィー法を用いた。結膜円蓋における点眼により、１０μｇのＩ１２５標識ＮＧＦ（濃度：２００μｇ／ｍｌ）を含有する点眼液一滴（５０μｌ）を各ウサギに点眼した。
【００４５】
先に記載した操作により精製し、続いてクロラミンＴ法（Ｌａｐａｃｋ  Ｐ．Ａ．によるＥｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．１２４巻、１６２０頁、１９９３年）によりＮａ−Ｉ１２５（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｉｔａｌｉａ、ＩＭＳ３０、１ｍＣｉ）に結合されたマウスＮＧＦを用いた。セファデックスＧ−２５カラムを用いることによるクロマトグラフィーにより、標識されたＮＧＦの量を測定した。沈殿により回収可能なＩ１２５で標識された生成物の量は９０％〜９５％であり、ほとんどの放射性生成物がＮＧＦに結合されていることを示した。ＮＧＦ−Ｉ１２５の比放射能は１〜１．５Ｃｉ／マイクロモルであった。
【００４６】
標識されたＮＧＦの投与から２時間後、それらの動物を殺し、脳を切離し、４％のパラホルムアルドヒド中に４８時間固定した。次に、３０％の蔗糖中で２４時間インキュベーションし、その試料を１５μｍ厚さ切片に低温保持装置を用いて切断し、それをゼラチン状の組織学的スライドガラスに載せ、写真用エマルジョン（Ｉｌｆｏｒｄ  Ｋ２）中に浸し、４℃において４週間インキュベーションした。次にその切片をエタノールで脱水し、キシレンでの処置の後にジパラキシリレン（ＤＰＸ）で固定し、ザイス（Ｚｅｉｓｓ）光学顕微鏡で検査した。
【００４７】
この実験により、眼表面に投与されたら、標識されたＮＧＦは眼内に貫通し、特定の受容体を表す種々の脳組織（皮質、海馬、前脳基底部、黒質、青班、視床下部及び基底核を含む）の細胞と結合することが示された。
【００４８】
第二の一組の試験では、前記の免疫酵素法を用いて、結膜円蓋における一滴のネズミＮＧＦの投与の後の、種々の脳組織におけるＮＧＦの量的レベルを測定した。全部で２４匹のラットを用い、種々の脳組織中のＮＧＦ濃度のベースレベルを測定するために、そのうちの６匹を即座に殺した。残りの動物を点眼投与から２時間後（６匹のラット）、６時間後（６匹のラット）及び２４時間後（６匹のラット）に殺した。
【００４９】
すべての場合において、脳脊髄液及び脳を回収し、異なる脳の領域（皮質、海馬、前脳基底部、黒質、青班、視床下部及び基底核を含む）を切離した。秤量した後、組織を、プロテアーゼ阻害剤を含有する緩衝蛋白質マトリックス（抽出緩衝液）中で超音波処置（Ｂｒａｕｎ  Ｂ超音波処理器を用いて）した。このような得られたホモジェネートを遠心分離（２０分間、１０，０００ｇ）し、免疫酵素法（ＥＬＩＳＡ）によりＮＧＦレベルを測定するために上澄み液を用いた。用いた技術は非常に感受性が高く、かつＮＧＦ特異性であり、５ｐｇ／ｍｌ以下の濃度を検出することができる。第一抗体としてヤギ抗ＮＧＦポリクローナルを用い、９．６のｐＨにおける０．０５Ｍの炭酸塩緩衝液中で希釈した。対照として、非特異的シグナルを決定するために、精製したヤギ免疫グロブリンを用いた。
【００５０】
一次抗体を含有する溶液及び対照の免疫グロブリンを含有する溶液を９６ウエルのポリスチレンプレート上に並行して分配した。それらのプレートを室温で１２時間インキュベーションし、次に非特異的部位を炭酸塩緩衝液プラス１％ＢＳＡでブロックした。それらのプレートをｐＨ７．４におけるトリス−ＨＣｌ  ５０ｍＭ、２００ｍＭのＮａＣｌ、０．５％のゼラチン及び０．１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００の溶液で洗滌した後、ＮＧＦ試料及び標準溶液をｐＨ７．２におけるトリス−ＨＣｌ  １００ｍＭ、４００ｍＭのＮａＣｌ、４ｍＭのＥＤＴＡ、０．２ｍＭのＰＭＳＥ、０．２ｍＭの塩化ベンゼトニウム、２ｍＭのベンズイミジン、４０Ｕ／ｍｌのアプロチニン、０．０５％のアジ化ナトリウム、２％のＢＳＡ及び０．５％のゼラチンの溶液で適切に希釈した。５０μｌ／ウエルの量におけるＮＧＦ試料及び対照溶液の三重反復分配（ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）後に、それらのプレートを二次抗体：４ｍＵ／ウエルの抗β−ＮＧＦ−ガラクトキシダーゼ［ベーリンガー・マンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ）（ドイツ）］とともに３７℃において２時間インキュベーションした。次に、洗滌後、１００ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１％のアジ化ナトリウム及び１％のＢＳＡを含有する溶液ｍｌ当り、４ｍｇのβ−ガラクトシル−クロロフェノールレッド［ベーリンガー・マンハイム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ）（ドイツ）］を含有する溶液１００μｌ／ウエルを分配した。
【００５１】
３７℃において２時間、クロモーゲンをインキュベーションした後、ＥＬＩＳＡリーダー［ダイナテック（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）］により５７５ｎｍの波長において光学濃度を測定した。非特異結合によるバックグラウンド値を差し引いた後にＮＧＦ標準及び試料の濃度値を計算した。ｐｇ／ｍｌ又はｐｇ／ｇとして表されるデーターが新たに秤量した組織を指す。下の表１にまとめた結果は、点眼液投与から２時間後のすべての脳組織におけるＮＧＦレベルの増加がいかにあるかを示しており、それらの値は、減少したとしても高いままであり、２４時間後にベースレベルに戻った。
【００５２】
【表１】
2009504724.tif 000002
【００５３】
パーキンソン病における点眼液の形態におけるＮＧＦ投与の効果における研究
パーキンソン病の治療のために眼表面におけるＮＧＦ投与の効果を評価するために、点眼液の形態におけるＮＧＦを、平衡生理食塩液中に希釈した２００μｇ／ｍｌの濃度で動物モデルに１日４回投与した。
【００５４】
パーキンソン病（ＰＤ）の特徴には、寡動、安静時震顫及び運動障害が含まれる。病理的特徴には主に、黒質緻密部（ＳＮｃ）におけるドパミン作動性（ＤＡｅｒｇｉｃ）ニューロン変性及びレヴィ小体の存在が含まれる。青班、視床下部、大脳皮質、基底核、自律神経系の中枢及び末梢構成部分を含む他の系統の変性も報告されている。ＳＮｃにおけるＤＡｅｒｇｉｃニューロンの約８０％喪失があるとき、パーキンソン病症状が見られる。生物学的マーカーの不存在下では、ＤＡｅｒｇｉｃ系統の初期の機能障害の予測性は疑問である。動物においてパーキンソン病（ＰＤ）の内発的な発症はないが、動物において同じ臨床的特徴を得るために、ＰＤの多くの動物実験モデルが用いられている。黒質線条体のドパミン作動性系統における傷を生じさせるために神経毒を用いる技術は、かなりの選択性及び再現性を有する。この実験において、用いた神経毒は６−ヒドロキシドパミン（６−ＯＨＤＡ）であった。
【００５５】
ラットを、塩化水和物（ｈｙｄｒａｔｅ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）の腹腔内注射により麻酔をした。右前脳内側部［Ｐａｘｉｎｏｓ及びＷａｔｓｏｎのアトラスからの座標：硬膜（ｄｕｒａｍａｄｒｅ）からＡＰ  ４．４ｍｍ、Ｌ  ＋１．２ｍｍ及びＶ  ７．８ｍｍ、両耳間線（ｉｎｔｅｒａｕｒａｌ  ｌｉｎｅ）の２．４ｍｍ下切開］の組織体における６−ＯＨＤＡ［シグマ（Ｓｉｇｍａ）］、８μｇ／３ｍｌの生理食塩液の定位注入によりドパミン作動性病変が生じた。
【００５６】
病変から１ヵ月後、すべてのラットにおいて、腹腔内にＤ−アンフェタミン（生理食塩液中５ｍｇ／ｋｇで）及び皮下に塩酸アポモルヒネ（５０μ／ｋｇ）での旋回運動行動が見られた。自動ローターメーター［Ｒｏｔｏｒｃｉｄ（キューバ）］を用いることにより旋回運動行動を評価し、３６０°／分の完全な円の数を自動的に記録した。Ｄ−アンフェタミン注射での９０分内で分当り少なくとも７完全同側性旋回及び４５分の間に分当り３．３完全対側性旋回について旋回運動行動を示すラットのみを実験研究に含ませた。
【００５７】
点眼液の形態におけるＮＧＦを平衡生理食塩液中２００μｇ／ｍｌの濃度で、１０匹のラットの結膜円蓋中に２ヶ月間、一日当り４回投与し、一方、対照として平衡生理食塩液のみを他の１０匹のラットの群に投与した。
【００５８】
処置期間（２ヶ月）の終わりに、再び、行動試験を行い、その後に、動物を殺し、それらの脳を取り出し、組織学的及び免疫組織化学的に評価した。得られたデーターを表２にまとめる。
【００５９】
【表２】
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【００６０】
先の実験は、点眼液の形態でのＮＧＦが、１）黒質緻密部（ＳＮｃ）におけるアポトーシス性ニューロンの数を減少させる；２）ＳＮｃにおけるドパミン作動性（ＤＡｅｒｇｉｃ）ニューロンの数を増加させる；３）レヴィ小体の数を減少させる；４）青班、海馬、大脳皮質及び基底核を含む他の脳領域におけるニューロンの数を増加させる；５）ラットの旋回運動行動を低減させることができることを示している。
【００６１】
アルツハイマー病についての点眼液の形態でのＮＧＦの効果の研究
アルツハイマー病の治療について眼表面におけるＮＧＦ投与の有効性を評価するために、点眼液の形態でのＮＧＦを、平衡生理食塩液中に希釈された２００μｇ／ｍｌの濃度において、１日４回、動物モデルに投与した。
【００６２】
記載した実験において、ヒト突然変異体ＡＰＰｓｗｅ及びＰＳ１  Ａ２４６Ｅの両方を発現する二重遺伝形質転換マウス（ＡＰＰ  ＰＳ１マウス）を用いた。それらのマウスは、高レベルの、約９ヶ月齢から始まるアミロイド班を発現する高度の原線維生成Ａβ４２ペプチドを発現する。最初のアミロイド班は鉤状回において（及び尾側皮質において）存在し、それらの沈着は後に海馬にまでそしてすべての皮質領域まで延びる。この特徴は、アミロイド班が内側側頭皮質構造体に広範に限定されてもいるアルツハイマー病の初期段階に、ある意味で似ている。
【００６３】
点眼液の形態におけるＮＧＦを平衡生理食塩液中２００μｇ／ｍｌの濃度で、１０匹のオスのマウス（９ヶ月齢）の結膜円蓋中に２ヶ月間、一日４回投与し、一方、平衡生理食塩液のみを他の１０匹のマウス（同じ歳及び性）の群に投与し、対照として用いた。
【００６４】
処置期間（２ヶ月）の終わりに、動物を殺し、それらの脳を取り出し、組織学的及び免疫組織化学的に評価した。得られたデーターを表３にまとめる。
【００６５】
【表３】
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【００６６】
上記実験は、点眼液の形態でのＮＧＦが、１）海馬及び皮質領域におけるアポトーシス性ニューロンの数を減少させる；２）前脳基底部、海馬及び皮質領域におけるコリン作動性ニューロンの数を増加させる；３）アミロイド班の数を減少させる；４）Ａβ４２ペプチドレベルを低減させる；５）炎症を低減させる；６）アセチルコリンレベルを増大させることができることを示している。
【００６７】
本発明のいくつかの特定の態様に関して本発明を開示したが、特許請求の範囲の範囲から逸脱せずに、当業者により変形又は改変がもたらされ得ることを理解すべきである。
【国際調査報告】
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