(57)【要約】本発明は、天然ＧＬＰ−１ペプチドと同様またはより優れた生物活性を有し、したがってＧＬＰ活性と関連する疾患または障害の治療または予防に有用な、新規なヒトグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）受容体モジュレーターを提供する。本発明の化合物は、ＩＩ型糖尿病患者のインスリン分泌を刺激し得るが、他の有益なインスリン分泌反応をも生じ得る化学修飾されたペプチドを含む。これら本発明の合成ペプチドＧＬＰ−１受容体モジュレーターは、タンパク質切断に対する安定性の増加を示し、経口または非経口投与のための理想的な治療薬の候補である。本発明のペプチドは、糖尿病の有効性モデルにおいて、望ましい薬物動態的性質および望ましい効力を示す。
2009538360.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１
式Ｉ
の配列を含む単離ポリペプチドであって、
式中、
Ｘａａ１は、ヒスチジンまたはチアゾリルアラニンなどの、イミダゾールまたはチアゾール環を含む天然もしくは非天然アミノ酸であり、前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、水素、または１個もしくは複数のアルキル基、または１個もしくは複数のハロ基によって所望により置換されていてもよく、前記アミノ酸の遊離アミノ基は、ヒドロキシル基またはアルコキシ基によって所望により置換されていてもよく、または水素、アルキル、アシル、ベンゾイル、アルキルオキシカルボニル、メチルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、ヘテロシクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アラルキルカルバモイル、ヘテロシクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルもしくはヘテロアリールスルホニルによって所望により置換されていてもよく、ここで
Ｘａａ１が、ヒスチジンまたはチアゾリルアラニンの脱アミノ酸（炭素原子のいずれかは、アルキル、ハロ、またはヒドロキシル基によって所望により置換されていてもよい）であるように、Ｘａａ１のアミノ基は所望により存在していなくてもよく；
Ｘａａ２は、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）、（Ｌ）−アラニン、（Ｄ）−アラニン、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン、Ｎ−メチル−Ｄ−アラニン、（Ｌ）−プロリン、（Ｓ）−α−メチル−プロリン［α−Ｍｅ−Ｐｒｏ］、（Ｌ）−アゼチジン（Ａｚｔ）、（Ｓ）−α−メチル−アゼチジン（α−Ｍｅ−Ａｚｔ）、（Ｌ）−バリン、および（Ｒ）−または（Ｓ）−イソバリンからなる群から選択される天然もしくは非天然アミノ酸であり、ここで前記アミノ酸の炭素原子は、１個もしくは複数のアルキル基またはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ３は、カルボン酸を含むアミノ酸側鎖を含有する天然もしくは非天然アミノ酸、例えばアスパラギン酸またはグルタミン酸であり、ここで前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、１個もしくは複数のアルキル基またはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ４は、グリシンであり；
Ｘａａ５は、（Ｌ）−スレオニン、（Ｌ）−アロ−スレオニン、（Ｌ）−セリン、（Ｌ）−ノルバリン、（Ｌ）−ノルロイシンからなる群から選択される天然もしくは非天然アミノ酸であり、ここで前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、１個もしくは複数のアルキル基またはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ６は、二置換されたα炭素を含む天然もしくは非天然アミノ酸であり、前記アミノ酸側鎖の１つは、芳香族環または芳香族複素環であり、例えばα−メチル−フェニルアラニン、α−メチル−２−フルオロフェニルアラニン、およびα−メチル−２，６−ジフルオロフェニルアラニンであり、ここで
前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、１個もしくは複数のアルキル基によって所望により置換されていてもよく、および前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、１個もしくは複数のハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ７は、ヒドロキシル基によって置換されているアミノ酸側鎖を含む天然もしくは非天然アミノ酸、例えばＬ−スレオニンまたはＬ−アロ−スレオニンであり、ここで前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、１個もしくは複数のアルキルまたはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ８は、Ｌ−セリン、Ｌ−ヒスチジンおよびＬ−アスパラギンからなる群から選択される天然もしくは非天然アミノ酸であり、ここで前記アミノ酸の炭素原子の１個もしくは複数は、１個もしくは複数のアルキル基またはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ９は、カルボン酸を含むアミノ酸側鎖を含有する天然もしくは非天然アミノ酸、例えばＬ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸であり、ここで前記アミノ酸の炭素原子の１個もしくは複数は、１個もしくは複数のアルキルまたはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ１０は、式ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶ：
【化１】
2009538360.tif 000111
の天然もしくは非天然アミノ酸であり；
上式中、Ｒ３、Ｒ４およびＲ６は、水素、アルキル、メチル、エチル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ハロゲン、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、シアノ、アミノ、アミノアルキル、カルボキシル、カルボキシアルキル、アルコキシ、メトキシ、アリールオキシ、カルボキサミド、置換カルボキサミド、アルキルエステル、アリールエステル、アルキルスルホニル、およびアリールスルホニルからなる群からそれぞれ選択され；
そして
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５は、それぞれＣまたはＮ（ただし、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５の少なくとも１個は、Ｎである）であり；
Ｘａａ１１は、式ＩＩａ、ＩＩＩａ、またはＩＶａ：
【化２】
2009538360.tif 000112
の天然もしくは非天然アミノ酸であり；
上式中、前記アミノ酸のＣ末端カルボニル炭素は窒素に結合して、カルボキサミド（ＮＨ２）、アルキルカルボキサミド（ＮＨＲ１）、またはジアルキルカルボキサミド（ＮＲ１Ｒ２）を形成し；
Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、アルキルまたはアリールアルキル基であり；
Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ６ａは、水素、アルキル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ハロゲン、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、シアノ、アミノ、アミノアルキル、カルボキシル、カルボキシアルキル、アルコキシ、メトキシ、アリールオキシ、カルボキサミド、置換カルボキサミド、アルキルエステル、アリールエステル、アルキルスルホニル、およびアリールスルホニルからなる群からそれぞれ選択され；
Ｒ７は、水素、メチル、およびエチルからなる群から選択され；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５は、それぞれＣまたはＮ（ただし、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５の少なくとも１個は、Ｎである）であり；そして
Ｘａａ１０が、式ＩＩのアミノ酸である場合は、Ｘａａ１１は、式ＩＩａのアミノ酸ではない、
単離ポリペプチド。
【請求項２】
Ｘａａ１０は、式ＩＩの天然もしくは非天然アミノ酸である、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項３】
Ｘａａ１０は、式ＩＩＩの天然もしくは非天然アミノ酸である、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項４】
Ｘａａ１１は、式ＩＶａの天然もしくは非天然アミノ酸である、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項５】
前記Ｘａａ１は、Ｌ−Ｈｉｓ、Ｄ−Ｈｉｓ、Ｌ−Ｎ−メチル−Ｈｉｓ、Ｄ−Ｎ−メチル−Ｈｉｓ、Ｌ−４−チアゾリルＡｌａ、Ｄ−４−チアゾリルＡｌａ、デス−アミノ−Ｈｉｓ、デス−アミノ−チアゾリルＡｌａ、３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロパノイル、（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−ヒドロキシプロパノイル（Ｌ−β−イミダゾールラクチル）からなる群から選択され、そして
末端アミノ基が存在する場合は、前記末端アミノ基は、水素、アルキル、ジアルキル、アシル、ベンゾイル、アルキルオキシカルボニル、メチルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、ヘテロシクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アラルキルカルバモイル、ヘテロシクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルまたはヘテロアリールスルホニルによって所望により置換されていてもよい、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項６】
前記Ｘａａ２は、Ｌ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｌ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、Ｌ−Ｐｒｏ、（Ｓ）−α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ（α−Ｍｅ−Ｐｒｏ）、（Ｌ）−アゼチジン（Ａｚｔ）、（Ｓ）−α−メチル−アゼチジン（α−Ｍｅ−Ａｚｔ）およびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択される、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項７】
前記Ｘａａ３は、Ｌ−Ｇｌｕ、Ｌ−Ａｓｐ、およびＬ−Ｇｌａからなる群から選択される、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項８】
前記Ｘａａ４はＧｌｙである、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項９】
前記Ｘａａ５は、Ｌ−Ｔｈｒ、Ｌ−ＮＩｅ、Ｌ−Ｎｖａ、Ｌ−ＡｏｃおよびＬ−アロ−Ｔｈｒからなる群から選択される、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１０】
前記Ｘａａ６は、Ｌ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｅｔ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−２−フルオロ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−３−フルオロ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−２，３−ジ−フルオロ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−２，６−ジ−フルオロ−Ｐｈｅ、およびＬ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ（ペンタ−フルオロ）からなる群から選択される、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１１】
前記Ｘａａ７は、Ｌ−ＴｈｒまたはＬ−アロ−スレオニンである、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１２】
前記Ｘａａ８は、Ｌ−Ｓｅｒ、Ｌ−Ｈｉｓ、およびＬ−Ａｓｎからなる群から選択される、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１３】
前記Ｘａａ９は、Ｌ−Ａｓｐである、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１４】
Ｘａａ１０は、式ＶＩ：
【化３】
2009538360.tif 000113
（式中、Ｒ３は、アルキルおよびハロゲンからなる群から選択され、そして
Ｒ６は、ヒドロキシルおよびメトキシからなる群から選択される）
によってさらに定義される、式ＩＩの天然もしくは非天然アミノ酸である、
請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１５】
式ＩＩの前記天然もしくは非天然アミノ酸は、４−［（４’−メトキシ−２’−エチル）−フェニル］フェニルアラニン、４−［（４’−エトキシ−２’−エチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４’−メトキシ−２’−メチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４’−エトキシ−２’−メチル）フェニル］フェニルアラニン、４−（２’−エチルフェニル）フェニルアラニン、４−（２’−メチルフェニル）フェニルアラニン、４−［（３’，５’−ジメチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（３’，４’−ジメトキシ）フェニル］フェニルアラニン、および４−［（２’−エチル−４’−ヒドロキシ）−フェニル］フェニルアラニンからなる群から選択される、請求項２に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１６】
Ｘａａ１１は、式ＶＩａ：
【化４】
2009538360.tif 000114
（式中、Ｒ３ａは、メチル、エチルおよびフルオロからなる群から選択され、そして
Ｒ７は、水素およびメチルからなる群から選択される）
によってさらに定義される、式ＩＶａの天然もしくは非天然アミノ酸である、
請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１７】
Ｘａａ１１は、式ＶＩＩａ：
【化５】
2009538360.tif 000115
（式中、Ｒ３ａは、メトキシであり、そして
Ｒ７は、水素およびメチルからなる群から選択される）
によってさらに定義される、式ＩＶａの天然もしくは非天然アミノ酸である、
請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１８】
式ＩＩＩの前記天然もしくは非天然アミノ酸は、４−［２’−（４’−メトキシ−６’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（４’−メトキシ−６’−メチル）ピリジル］−４−フェニルアラニン、４−［２’−（６’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（６’−メチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（３’，５’−ジメチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（４’−メトキシ−６’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［３’−（４’−メトキシ−６’−メチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［３’−（２’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン、および４−［３’（６’−メチル）ピリジル）フェニルアラニンからなる群から選択される、請求項３に記載の単離ポリペプチド。
【請求項１９】
前記Ｘａａ１０は、前記式ＩＶの天然もしくは非天然アミノ酸である、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項２０】
式ＩＶの前記天然もしくは非天然アミノ酸は、４−［（４’−メトキシ−２’−エチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−［（４’−メトキシ−２’−メチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−（２’−エチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２’−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−［（３’，５’−ジメチル）フェニル］−３−ピリジルアラニンおよび４−［（２’−エチル−４’−ヒドロキシ）フェニル］−３−ピリジルアラニンからなる群から選択される、請求項１９に記載の単離ポリペプチド。
【請求項２１】
前記Ｘａａ１１は、前記式ＩＩａの天然もしくは非天然アミノ酸である、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項２２】
式ＩＩａの前記天然もしくは非天然アミノ酸は、４−（２’−メチルフェニル）フェニルアラニン、４−（２’−フルオロフェニル）フェニルアラニン、４−（２’−クロロフェニル）フェニルアラニン、４−［（３’，４’−ジメトキシ）フェニル］フェニルアラニン、および４−［（３’，５’−ジメチル）フェニル］フェニルアラニンからなる群から選択され、ここで、
前記アミノ酸のＣ末端カルボニル炭素は窒素に結合して、カルボキサミド（ＮＨ２）、アルキルカルボキサミド（ＮＨＲ１）またはジアルキルカルボキサミド（ＮＲ１Ｒ２）（式中、Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、アルキルまたはアリールアルキル基である）を形成し、
Ｒ７は、水素およびメチルからなる群から選択される、
請求項２１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項２３】
前記Ｘａａ１１は、前記式ＩＩＩａの天然もしくは非天然アミノ酸である、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項２４】
式ＩＩＩａの前記天然もしくは非天然アミノ酸は、４−［（６’−メチル）−２’−ピリジル］フェニルアラニン、４−［（６’−メチル）−３’−ピリジル］フェニルアラニン、４−［（６’−エチル）−２’−ピリジル）］フェニルアラニン、および４−［（６’−エチル）−３’−ピリジル）］フェニルアラニンからなる群から選択され、そして
前記アミノ酸のＣ末端カルボニル炭素は窒素に結合して、カルボキサミド（ＮＨ２）、アルキルカルボキサミド（ＮＨＲ１）またはジアルキルカルボキサミド（ＮＲ１Ｒ２）（式中、Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、アルキルまたはアリールアルキル基である）を形成し、
Ｒ７は、水素およびメチルからなる群から選択される、
請求項２３に記載の単離ポリペプチド。
【請求項２５】
式ＩＶａの前記天然もしくは非天然アミノ酸は、４−（２’−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２’−フルオロフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−［（３’，５’−ジメチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−（４’−トリフルオロメチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、および４−（２’−エチルフェニル）−３−ピリジルアラニンからなる群から選択される、請求項４に記載の単離ポリペプチド。
【請求項２６】
Ｘａａ１は、Ｌ−Ｈｉｓ、Ｄ−Ｈｉｓ、Ｌ−Ｎ−メチル−Ｈｉｓ、Ｄ−Ｎ−メチル−Ｈｉｓ、Ｌ−α−メチル−Ｈｉｓ、Ｄ−α−メチル−Ｈｉｓ、Ｌ−４−チアゾリルアラニン、Ｄ−４−チアゾリルアラニン、デス−アミノ−Ｈｉｓ、デス−アミノ−チアゾリルアラニン、３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロパノイル、（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−ヒドロキシプロパノイル（Ｌ−β−イミダゾールラクチル）および、（Ｒ）および（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−メトキシプロパノイルからなる群から選択されるアミノ酸であり、
末端アミノ基が存在する場合は、前記末端アミノ基は、水素、アルキル、アシル、ベンゾイル、アルキルオキシカルボニル（例えば、メチルオキシカルボニル）、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、ヘテロシクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アラルキルカルバモイル、ヘテロシクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルまたはヘテロアリールスルホニルによって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ２は、Ｌ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｌ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、Ｌ−Ｐｒｏ、（Ｓ）−α−メチル−プロリン［α−Ｍｅ−Ｐｒｏ］、（Ｌ）−アゼチジン（Ａｚｔ）、（Ｓ）−α−メチル−アゼチジン（α−Ｍｅ−Ａｚｔ）、およびアミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ３は、Ｌ−Ｇｌｕ、Ｌ−Ａｓｐ、およびＬ−Ｇｌａからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ４は、Ｇｌｙからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ５は、Ｌ−Ｔｈｒ、Ｌ−ＮＩｅ、Ｌ−Ｎｖａ、Ｌ−ＡｏｃおよびＬ−アロ−Ｔｈｒからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ６は、Ｌ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｅｔ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−２−フルオロ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−３−フルオロ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−２，３−ジ−フルオロ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−２，６−ジ−フルオロ−Ｐｈｅ、およびＬ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ（ペンタ−フルオロ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ７は、Ｌ−ＴｈｒおよびＬ−アロ−スレオニンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ８は、Ｌ−Ｓｅｒ、Ｌ−Ｈｉｓ、およびＬ−Ａｓｎからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ９は、Ｌ−Ａｓｐであり；
Ｘａａ１０は、式ＩＩ、ＩＩＩ、およびＩＶのアミノ酸からなる群から選択される天然もしくは非天然アミノ酸であり；
式ＩＩは、４−［（４’−メトキシ−２’−エチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（２’−エチル−４’−ヒドロキシ）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４’−エトキシ−２’−エチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４’−メトキシ−２’−メチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４’−エトキシ−２’−メチル）フェニル］フェニルアラニン、４−（２’−エチルフェニル）フェニルアラニン、４−（２’−メチルフェニル）フェニルアラニン、４−［（３’，５’−ジメチル）フェニル］フェニルアラニンおよび４−［（３’，４’−ジメトキシ）フェニル］フェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
式ＩＩＩは、４−［２’−（４’−メトキシ−６’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（４’−メトキシ−６’−メチル）ピリジル］−４−フェニルアラニン、４−［２’−（６’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（６’−メチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（３’，５’−ジメチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（４’−メトキシ−６’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［３’−（４’−メトキシ−６’−メチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［３’−（２’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン、および４−［３’−（６’−メチル）ピリジル）フェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
式ＩＶは、４−［（４’−メトキシ−２’−エチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−［（４’−メトキシ−２’−メチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−（２’−エチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２’−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、および４−［（３’，５’−ジメチル）フェニル］−３−ピリジルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸であり；ならびに、
Ｘａａ１１は、式ＩＩａ、ＩＩＩａ、およびＩＶａのアミノ酸からなる群から選択される天然もしくは非天然アミノ酸であり；
式ＩＩａは、４’−（２−メチルフェニル）フェニルアラニン、４’−（２’−フルオロフェニル）フェニルアラニン、および４−［（３’，５’−ジメチル）フェニル］フェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
式ＩＩＩａは、４−（６’−メチル−２’−ピリジル）フェニルアラニン、４−（６’−メチル−２’−ピリジル）フェニルアラニン、４−（６’−エチル−２’−ピリジル）フェニルアラニン、および４−（６’−エチル−３’−ピリジル）フェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
式ＩＶａは、４−（２’−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２’−フルオロフェニル−３−ピリジルアラニン、４−［（３’，５’−ジメチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−（４’−トリフルオロメチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、および４−（２’−エチルフェニル）−３−ピリジルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
前記Ｃ末端カルボニル炭素は窒素に結合して、カルボキサミド（ＮＨ２）、アルキルカルボキサミド（ＮＨＲ１）、またはジアルキルカルボキサミド（ＮＲ１Ｒ２）（式中、Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、アルキルまたはアリールアルキル基である）を形成し、
Ｒ７は、水素およびメチルからなる群から選択され、そして
Ｘａａ１０が式ＩＩのアミノ酸である場合は、Ｘａａ１１は式ＩＩａのアミノ酸ではない、
請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項２７】
以下の群
【表１】
2009538360.tif 000116
【表２】
2009538360.tif 000117
【表３】
2009538360.tif 000118
【表４】
2009538360.tif 000119
【表５】
2009538360.tif 000120
からなる群から選択される、請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項２８】
以下の群：
【表６】
2009538360.tif 000121
【表７】
2009538360.tif 000122
からなる群から選択される、単離ポリペプチド。
【請求項２９】
該単離ポリペプチドは、式：
【化６】
2009538360.tif 000123
を含む、単離ポリペプチド。
【請求項３０】
式Ｉの単離ポリペプチドまたは配列番号１〜１５７および１５９〜１７９のペプチドのいずれかを含むポリペプチド、ならびに医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項３１】
式Ｉの単離ポリペプチドまたは配列番号１〜１５７および１５９〜１７９のペプチドのいずれかを含むポリペプチド、ならびに糖尿病薬、抗肥満薬、降圧剤、抗アテローム硬化剤および脂質低下剤からなる群から選択される少なくとも１種類の治療剤を含む、医薬的な組合せ。
【請求項３２】
前記糖尿病薬は、ビグアナイド、スルホニル尿素、グルコシダーゼ阻害剤、ＰＰＡＲγアゴニスト、ＰＰＡＲα／γデュアルアゴニスト、ａＰ２阻害剤、ＤＰＰ４阻害剤、インスリン増感剤、グルカゴン様ペプチド−ｌ（ＧＬＰ−ｌ）、インスリン、ＳＧＬＴ−２阻害剤、ＧＰＲ１１９モジュレーター、およびメグリチニドからなる群から選択される少なくとも１種類の薬物である、請求項３１に記載の組合せ。
【請求項３３】
前記糖尿病薬は、メトホルミン、グリブリド、グリメピリド、グリピリド、グリピジド、クロルプロパミド、グリクラジド、アカルボース、ミグリトール、ピオグリタゾン、トログリタゾン、ロシグリタゾン、インスリン、ファルグリタザル、イサグリタゾン、レグリタザル、バラグリタゾン、ＣＡＳ  ＲＮ：３３５１４９−０８−１、（Ｚ）−１，４−ビス｛４−［（３，５−ジオキソ−１，２，４−オキサジアゾリジン−２−イル）メチル］フェノキシ｝ブタ−２−エン、リボグリタゾン、ラファエグロン、レパグリニド、ナテグリニド、（Ｓ）−２−ベンジル−４−オキソ−４−（シス−ペルヒドロイソインドール−２−イル）酪酸カルシウム塩、テサグリタザール、Ｌ−フェニルアラニン、Ｎ−［（１Ｚ）−１−メチル−３−オキソ−３−フェニル−１−プロペニル］−４−［３−（５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリル）プロピル］、ベンズアミド、５−［（２，４−ジオキソ−５−チアゾリジニル）メチル］−２−メトキシ−Ｎ−［［４−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル］、エキセナチド、８−３７−グルカゴン様ペプチドＩ（ヒト）、Ｎ−［３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロピル］−２６−Ｌ−アルギニン−３４−［Ｎ６−（１−オキソオクチル）−Ｌ−リシン］、８−３６−グルカゴン関連ペプチド１（オクトドン デグー）、Ｎ−［３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−１−オキソプロピル］−２６−Ｌ−アルギニン−３４−［Ｎ６−（１−オキソオクチル）−Ｌ−リシン］−３６ａ、およびビルダグリプチンからなる群から選択される少なくとも１種類の薬物である、請求項３２に記載の組合せ。
【請求項３４】
前記抗肥満薬は、ＣＢ−１アンタゴニストもしくはインバースアゴニスト、Ｙ２受容体アゴニスト、Ｙ４受容体アゴニスト、ベータ３アドレナリンアゴニスト、リパーゼ阻害剤、セロトニン再取り込み阻害剤、ドーパミン再取り込み阻害剤、セロトニンおよびドーパミン再取り込み阻害剤、甲状腺受容体β化合物、ならびに食欲抑制剤からなる群から選択される少なくとも１種類の薬物である、請求項３１に記載の組合せ。
【請求項３５】
前記抗肥満薬は、リモナバン、ＭＫ−０３６４、ＳＬＶ−３１９、オルリスタット、セチリスタット、ラファブレゴン、ベンゼンスルホンアミド、Ｎ−［４−［２−［［（２Ｓ）−３−［（６−アミノ−３−ピリジニル）オキシ］−２−ヒドロキシプロピル］アミノ］エチル］フェニル］−４−（１−メチルエチル）、ベンゼンスルホンアミド、Ｎ−［４−［２−［［３−［（６−アミノ−３−ピリジニル）オキシ］−２−ヒドロキシプロピル］アミノ］エチル］フェニル］−４−（１−メチルエチル）−（Ｓ）ＣＡＳ  ＲＮ：３３５１４９−２５−２、シブトラミン、トピラマート、アキソキン、デキサンフェタミン、フェンテルミン、フェニルプロパノールアミンおよびマジンドールからなる群から選択される少なくとも１種類の薬物である、請求項３４に記載の組合せ。
【請求項３６】
前記脂質低下薬は、ＭＴＰ阻害剤、コレステロールエステル転送タンパク、ＨＭＧ  ＣｏＡ還元酵素阻害剤、スクアレンシンテターゼ阻害剤、フィブル酸誘導体、ＬＤＬ受容体活性のアップレギュレーター、リポキシゲナーゼ阻害剤、またはＡＣＡＴ阻害剤からなる群から選択される少なくとも１種類の薬物である、請求項３１に記載の組合せ。
【請求項３７】
前記脂質低下薬は、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ニスバスタチン、ビサスタチン、フェノフィブラート、ゲンフィブロジル、クロフィブラート、アバシミブ、アセトアミド、Ｎ−［２，６−ビス（１−メチルエチル）フェニル］−２−（テトラデシルチオ）−、１（３Ｈ）−イソベンゾフラノン、３−（１３−ヒドロキシ−１０−オキソテトラデシル）−５，７−ジメトキシ、トルセトラピブ、および／または（３α、４α、５α）−４−（２−プロペニルコレスタン−３−オール）からなる群から選択される少なくとも１種類の薬物である、請求項３６に記載の組合せ。
【請求項３８】
治療を必要としている哺乳動物に式Ｉの単離ポリペプチドまたは配列番号１〜１７９のペプチドのいずれかを含むペプチドの治療有効量を投与することを含む、糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、創傷治癒、インスリン抵抗性、高血糖症、高インスリン血症、Ｘ症候群、糖尿病性合併症、遊離脂肪酸もしくはグリセロールの血中濃度上昇、高脂血症、肥満症、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化症または高血圧の進行もしくは発症を治療しまたは遅延させるための方法。
【請求項３９】
糖尿病薬、抗肥満薬、降圧剤、抗アテローム硬化剤および脂質低下剤からなる群から選択される、１種もしくは複数の治療剤の治療有効量を、同時にまたは順次に投与することをさらに含む、請求項３８に記載の治療または遅延させるための方法。
【請求項４０】
抗糖尿病薬は、ビグアニド、スルホニル尿素、グルコシダーゼ阻害剤、ＰＰＡＲγアゴニスト、ＰＰＡＲα／γ二重アゴニスト、ａＰ２阻害剤、ＤＰＰ４阻害剤、インスリン感受性改善薬、グルカゴン様ペプチド(ＧＬＰ−ｌ)、インスリン、ＳＧＬＴ−２阻害剤、ＧＰＲ１１９モジュレーター、およびメグリチナイドからなる群から選ばれる少なくとも１つの薬物であり、該抗糖尿病薬は更にメトホルミン、グリブリド、グリメピリド、グリピリド、グリピジド、クロルプロパミド、グリクラジド、アカルボース、ミグリトール、ピオグリタゾン、トログリタゾン、ロシグリタゾン、インスリン、ファルグリタザル、イサグリタゾン、レグリタザル、バラグリタゾン、CAS RN:335149-08-1、(Ｚ)−１,４−ビス{４−[(３,５−ジオキソ−１,２,４−オキサジアゾリジン−２−イル)メチル]フェノキシ}ブタ−２−エン、リボグリタゾン、ラファエグロン、レパグリニド、ナテグリニド、(Ｓ)−２−ベンジル−４−オキソ−４−(シス−ペルヒドロイソインドール−２−イル)酪酸カルシウム塩、テサグリタザル、Ｌ−フェニルアラニン、Ｎ−[(１Ｚ)−１−メチル−３−オキソ−３−フェニル−１−プロピル]−４−[３−(５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリル)プロピル]、ベンズアミド、５−[(２,４−ジオキソ−５−チアゾリジニル)メチル]−２−メトキシ−Ｎ−[[４−(トリフルオロメチル)フェニル]メチル]、エキセナチド、８−３７−グルカゴン様ペプチドＩ(ヒト)、Ｎ−[３−(１Ｈ−イミダゾール−４−イル)−１−オキソプロピル]−２６−Ｌ−アルギニン−３４−[Ｎ６−(１−オキソオクチル)−Ｌ−リシン]、８−３６−グルカゴン関連ペプチド１(オクトドンデグー)、Ｎ−[３−(１Ｈ−イミダゾール−４−イル)−１−オキソプロピル]−２６−Ｌ−アルギニン−３４−[Ｎ６−(１−オキソオクチル)−Ｌ−リシン]−３６ａ、およびビルダグリプチンからなる群から選ばれる少なくとも１つの薬物として定義され；
抗肥満薬は、ＣＢ−１アンタゴニストまたはインバースアゴニスト、Ｙ２受容体アゴニスト、Ｙ４受容体アゴニスト、ベータ３アドレナリン作動性アゴニスト、リパーゼ阻害剤、セロトニン再取り込み阻害剤、ドーパミン再取り込み阻害剤、セロトニンおよびドーパミン再取り込み阻害剤、甲状腺受容体ベータ化合物、および食欲低下薬からなる群から選ばれる少なくとも１つの薬物であり、該抗肥満薬は更にリモナバント、ＭＫ−０３６４、ＳＬＶ−３１９、オルリスタット、セチリスタット、ラファブレゴン、ベンゼンスルホンアミド、Ｎ−[４−[２−[[(２Ｓ)−３−[(６−アミノ−３−ピリジニル)オキシ]−２−ヒドロキシプロピル]アミノ]エチル]フェニル]−４−(１−メチルエチル)、ベンゼンスルホンアミド、Ｎ−[４−[２−[[３−[(６−アミノ−３−ピリジニル)オキシ]−２−ヒドロキシプロピル]アミノ]エチル]フェニル]−４−(１−メチルエチル)−(Ｓ) CAS RN:335149-25-2、シブトラミン、トピラメート、アクソカイン、デキサンフェタミン、フェンテルミン、フェニルプロパノールアミンおよびマジンドールからなる群から選ばれる少なくとも１つの薬物として定義され；
脂質低下薬は、ＭＴＰ阻害剤、コレステリルエステル転送タンパク質、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、スクアレン合成酵素阻害剤、フィブリン酸誘導体、ＬＤＬ受容体活性の上昇調節薬、リポキシゲナーゼ阻害剤、およびＡＣＡＴ阻害剤からなる群から選ばれる少なくとも１つの薬物であり、該脂質低下薬は更に、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ニスバスタチン、ビサスタチン、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、アバシマイブ、アセトアミド、Ｎ−[２,６−ビス(１−メチルエチル)フェニル]−２−(テトラデシルチオ)−,１(３Ｈ)−イソベンゾフラノン、３−(１３−ヒドロキシ−１０−オキソテトラデシル)−５,７−ジメトキシ,トルセトラピブおよび(３アルファ,４アルファ,５アルファ)−４−(２−プロピルコレスタン−３−オール)からなる群から選ばれる少なくとも１つの薬物として定義される、
請求項３９記載の方法。
【請求項４１】
下記の構造式：
【化７】
2009538360.tif 000124
（式中、Ｐは、水素またはフルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）またはｔ−ブチルオキシカルボニル（ｔ−Ｂｏｃ）であり、Ｒ３ａは、メチル、エチルおよびフルオロからなる群から選択され、Ｒ７は、水素およびメチルからなる群から選択される）
を含む、化合物。
【請求項４２】
下記の構造式：
【化８】
2009538360.tif 000125
（式中、Ｐは、水素またはフルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）またはｔ−ブチルオキシカルボニル（ｔ−Ｂｏｃ）であり、Ｒ３ａは、メトキシであり、Ｒ７は、水素およびメチルからなる群から選択される）
を含む、化合物。
【請求項４３】
Ｘａａ１はＬ−ヒスチジンであり、およびＸａａ１のアミノ基は置換されておらず；
Ｘａａ２は、下記の式：
【化９】
2009538360.tif 000126
からなる群から選択され；
Ｘａａ３は、Ｌ−グルタミン酸またはＬ−ヒスチジンであり；
Ｘａａ４は、グリシンであり；
Ｘａａ５は、Ｌ−スレオニンであり；
Ｘａａ６は、下記の式：
【化１０】
2009538360.tif 000127
からなる群から選択され；
Ｘａａ７は、Ｌ−スレオニンであり；
Ｘａａ８は、下記の式：
【化１１】
2009538360.tif 000128
からなる群から選択され；
Ｘａａ９は、Ｌ−アスパラギン酸であり；
Ｘａａ１０は、式ＩＩの天然もしくは非天然アミノ酸であり、式ＩＩの前記天然もしくは非天然アミノ酸は、下記の式：
【化１２】
2009538360.tif 000129
からなる群から選択され；
Ｘａａ１１は、式ＩＶａの天然もしくは非天然アミノ酸であり、式ＩＶａの前記天然もしくは非天然アミノ酸は、下記の式：
【化１３】
2009538360.tif 000130
からなる群から選択され；そして、
Ｒ１およびＲ７は、水素およびメチルからなる群から選択される、
請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項４４】
Ｘａａ１は、下記の群：
【化１４】
2009538360.tif 000131
から選択され；
Ｘａａ２は、下記の群：
【化１５】
2009538360.tif 000132
から選択され；
Ｘａａ３は、Ｌ−グルタミン酸またはＬ−ヒスチジンであり；
Ｘａａ４はグリシンであり；
Ｘａａ５はＬ−スレオニンであり；
Ｘａａ６は、下記の群：
【化１６】
2009538360.tif 000133
から選択され；
Ｘａａ７は、Ｌ−スレオニンであり；
Ｘａａ８は、下記の群：
【化１７】
2009538360.tif 000134
から選択され；
Ｘａａ９は、Ｌ−アスパラギン酸であり；
Ｘａａ１０は、式ＩＩの天然もしくは非天然アミノ酸であり、式ＩＩの前記天然もしくは非天然アミノ酸は、下記の群：
【化１８】
2009538360.tif 000135
から選択され；
Ｘａａ１１は、式ＩＶａの天然もしくは非天然アミノ酸であり、式ＩＶａの前記天然もしくは非天然アミノ酸は、下記の群：
【化１９】
2009538360.tif 000136
から選択され；
Ｒ１およびＲ７は、水素およびメチルからなる群から選択される、
請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項４５】
Ｘａａ１は、
【化２０】
2009538360.tif 000137
であり； 
Ｒ８は、
【化２１】
2009538360.tif 000138
からなる群から選択され；
Ｘａａ２は、
【化２２】
2009538360.tif 000139
からなる群から選択され；
Ｘａａ３は、Ｌ−グルタミン酸またはＬ−ヒスチジンであり；
Ｘａａ４は、グリシンであり；
Ｘａａ５は、Ｌ−スレオニンであり；
Ｘａａ６は、
【化２３】
2009538360.tif 000140
からなる群から選択され；
Ｘａａ７は、Ｌ−スレオニンであり；
Ｘａａ８は、
【化２４】
2009538360.tif 000141
からなる群から選択され；
Ｘａａ９は、Ｌ−アスパラギン酸であり、
Ｘａａ１０は、式ＩＩの天然もしくは非天然アミノ酸であり、式ＩＩの前記天然もしくは非天然アミノ酸は、
【化２５】
2009538360.tif 000142
からなる群から選択され；
Ｘａａ１１は、式ＩＶａの天然もしくは非天然アミノ酸であり、式ＩＶａの前記天然もしくは非天然アミノ酸は、
【化２６】
2009538360.tif 000143
からなる群から選択され；そして、
Ｒ１およびＲ７は、水素およびメチルからなる群から選択される、
請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項４６】
Ｘａａ１は、
【化２７】
2009538360.tif 000144
（式中、Ｒ９は、水素およびメチルからなる群から選択される）
であり；
Ｘａａ２は、
【化２８】
2009538360.tif 000145
からなる群
から選択され；
Ｘａａ３は、Ｌ−グルタミン酸またはＬ−ヒスチジンであり；
Ｘａａ４は、グリシンであり；
Ｘａａ５は、Ｌ−スレオニンであり；
Ｘａａ６は、
【化２９】
2009538360.tif 000146
からなる群から選択され；
Ｘａａ７は、Ｌ−スレオニンであり；
Ｘａａ８は、
【化３０】
2009538360.tif 000147
からなる群から選択され；
Ｘａａ９は、Ｌ−アスパラギン酸であり；
Ｘａａ１０は、式ＩＩの天然もしくは非天然アミノ酸であり、式ＩＩの前記天然もしくは非天然アミノ酸は、下記の群：
【化３１】
2009538360.tif 000148
から選択され；
Ｘａａ１１は、式ＩＶａの天然もしくは非天然アミノ酸であり、式ＩＶａの前記天然もしくは非天然アミノ酸は、下記の群：
【化３２】
2009538360.tif 000149
から選択され；そして、
Ｒ１およびＲ７は、水素およびメチルからなる群から選択される、
請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項４７】
配列Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｂｉｐ(２−Ｅｔ−４’−ＯＨ)−ピリジルアラニン（配列番号：１７７）を含有するポリペプチドであって、ＧＬＰ−１受容体と結合しそして活性化する、該ポリペプチド。
【請求項４８】
該ポリペプチドは更にプロリンを含む、請求項４７記載のポリペプチド。
【請求項４９】
該プロリンは該アミノ末端残基から２番目の残基であり、そしてアルファメチルプロリンである、請求項４８記載のポリペプチド。
【請求項５０】
該ピリジルアラニンは４−(２’−メチルフェニル)−３−ピリジルアラニンである、請求項４７記載のポリペプチド。
【請求項５１】
該ポリペプチドは更にアミノ末端カルバメートを含む、請求項４７記載のポリペプチド。
【請求項５２】
該Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｂｉｐ(２−Ｅｔ−４−ＯＨ)−ピリジルアラニン残基は該ポリペプチドのそれぞれ７番目、８番目、９番目および１０番目の位置に存在し、そして２位はアルファメチルプロリンを含む、請求項４７記載のポリペプチド。
【請求項５３】
該ポリペプチドは配列番号：１５８を含有するペプチドである、請求項４７記載のポリペプチド。
【請求項５４】
配列番号：１５８を含有するポリペプチド。
【請求項５５】
配列番号：１５８の単離ポリペプチドおよび医薬的に許容する担体を含有する、医薬組成物。
【請求項５６】
配列番号：１５８の単離ポリペプチド、および抗糖尿病薬、抗肥満薬、降圧薬、抗アテローム硬化症薬、および脂質低下薬からなる群から選ばれる少なくとも１つの治療薬を含有する、医薬的な組み合わせ。
【請求項５７】
抗糖尿病薬は、ビグアニド、スルホニル尿素、グルコシダーゼ阻害剤、ＰＰＡＲγアゴニスト、ＰＰＡＲα／γ二重アゴニスト、ａＰ２阻害剤、ＤＰＰ４阻害剤、インスリン感受性改善薬、グルカゴン様ペプチド(ＧＬＰ−ｌ)、インスリン、ＳＧＬＴ−２阻害剤、ＧＰＲ１１９モジュレーター、およびメグリチナイドからなる群から選ばれる少なくとも１つの薬物である、請求項５６記載の組み合わせ。
【請求項５８】
抗糖尿病薬は、メトホルミン、グリブリド、グリメピリド、グリピリド、グリピジド、クロルプロパミド、グリクラジド、アカルボース、ミグリトール、ピオグリタゾン、トログリタゾン、ロシグリタゾン、インスリン、ファルグリタザル、イサグリタゾン、レグリタザル、バラグリタゾン、CAS RN:335149-08-1、(Ｚ)−１,４−ビス{４−[(３,５−ジオキソ−１,２,４−オキサジアゾリジン−２−イル)メチル]フェノキシ}ブタ−２−エン、リボグリタゾン、ラファエグロン、レパグリニド、ナテグリニド、(Ｓ)−２−ベンジル−４−オキソ−４−(シス−ペルヒドロイソインドール−２−イル)酪酸カルシウム塩、テサグリタザル、Ｌ−フェニルアラニン、Ｎ−[(１Ｚ)−１−メチル−３−オキソ−３−フェニル−１−プロピル]−４−[３−(５−メチル−２−フェニル−４−オキサゾリル)プロピル]、ベンズアミド、５−[(２,４−ジオキソ−５−チアゾリジニル)メチル]−２−メトキシ−Ｎ−[[４−(トリフルオロメチル)フェニル]メチル]、エキセナチド、８−３７−グルカゴン様ペプチドＩ(ヒト)、Ｎ−[３−(１Ｈ−イミダゾール−４−イル)−１−オキソプロピル]−２６−Ｌ−アルギニン−３４−[Ｎ６−(１−オキソオクチル)−Ｌ−リシン]、８−３６−グルカゴン関連ペプチド１(オクトドンデグー)、Ｎ−[３−(１Ｈ−イミダゾール−４−イル)−１−オキソプロピル]−２６−Ｌ−アルギニン−３４−[Ｎ６−(１−オキソオクチル)−Ｌ−リシン]−３６ａ、およびビルダグリプチンからなる群から選ばれる少なくとも１つの薬物である、請求項５７記載の組み合わせ。
【請求項５９】
抗肥満薬は、ＣＢ−１アンタゴニストまたはインバースアゴニスト、Ｙ２受容体アゴニスト、Ｙ４受容体アゴニスト、ベータ３アドレナリン作動性アゴニスト、リパーゼ阻害剤、セロトニン再取り込み阻害剤、ドーパミン再取り込み阻害剤、セロトニンおよびドーパミン再取り込み阻害剤、甲状腺受容体ベータ化合物、および食欲低下薬からなる群から選ばれる少なくとも１個の薬物である、請求項５６記載の組み合わせ。
【請求項６０】
抗肥満薬は、リモナバント、ＭＫ−０３６４、ＳＬＶ−３１９、オルリスタット、セチリスタット、ラファブレゴン、ベンゼンスルホンアミド、Ｎ−[４−[２−[[(２Ｓ)−３−[(６−アミノ−３−ピリジニル)オキシ]−２−ヒドロキシ−プロピル]アミノ]エチル]フェニル]−４−(１−メチルエチル)、ベンゼンスルホンアミド、Ｎ−[４−[２−[[３−[(６−アミノ−３−ピリジニル)オキシ]−２−ヒドロキシ−プロピル]アミノ]エチル]フェニル]−４−(１−メチルエチル)−(S) CAS RN:335149-25-2、シブトラミン、トピラメート、アクソカイン、デキサンフェタミン、フェンテルミン、フェニルプロパノールアミン、およびマジンドールからなる群から選ばれる少なくとも１個の薬物である、請求項５９記載の組み合わせ。
【請求項６１】
脂質低下薬は、ＭＴＰ阻害剤、コレステリルエステル転送タンパク質、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、スクアレン合成酵素阻害剤、フィブリン酸誘導体、ＬＤＬ受容体活性の上昇調節薬、リポキシゲナーゼ阻害剤、およびＡＣＡＴ阻害剤からなる群から選ばれる少なくとも１個の薬物である、請求項５６記載の組み合わせ。
【請求項６２】
脂質低下薬は、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ニスバスタチン、ビサスタチン、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、クロフィブラート、アバシマイブ、アセトアミド、Ｎ−[２,６−ビス(１−メチルエチル)フェニル]−２−(テトラデシルチオ)−,１(３Ｈ)−イソベンゾフラノン、３−(１３−ヒドロキシ−１０−オキソテトラデシル)−５,７−ジメトキシ、トルセトラピブ、および(３アルファ,４アルファ,５アルファ)−４−(２−プロペニルコレスタン−３−オール)からなる群から選ばれる少なくとも１個の薬物である、請求項６１記載の組み合わせ。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
本出願は、参照により本明細書にその内容全体が組み込まれている、２００６年５月２６日に出願された米国特許出願第６０／８０９，１３４号の優先権を主張する。
【技術分野】
【０００２】
本明細書において開示されおよび特許請求されている主題は、天然ペプチドであるＧＬＰ−１の優れた生物学的特性を示し、ＧＬＰ−１天然配列と比較してタンパク質切断に対する増加した安定性を示し、したがって糖尿病状態の寛解に有用である、新規なヒトグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）ペプチド受容体モジュレーター、アゴニストまたは部分アゴニストを提供する。
【背景技術】
【０００３】
ＧＬＰ−１は、グルコース代謝ならびに消化管分泌および代謝において制御的機能を有する重要な消化管ホルモンである。ヒトＧＬＰ−１は、例えば回腸末端部内のＬ細胞内において、および脳内において合成されるプレプログルカゴン由来のアミノ酸３０個のペプチドである。プレプログルカゴンがプロセッシングされ、ＧＬＰ−１（７−３６）アミドおよびＧＬＰ−２を生成することは、主にＬ細胞において起こる。ＧＬＰ−１は、通常食物摂取に反応して分泌され、特に炭水化物および脂質は、ＧＬＰ−１分泌を刺激する。ＧＬＰ−１は、インスリン放出の非常に強力で効果的な刺激物質として同定されてきた。ＧＬＰ−１は、血漿グルカゴン濃度を低下させ、胃内容排出を遅延させ、インスリン生合成を刺激し、インスリン感受性を高める（Ｎａｕｃｋ，１９９７，Ｈｏｒｍ．Ｍｅｔａｂ．Ｒｅｓ．４７：１２５３〜１２５８）。ＧＬＰ−１はまた、耐糖能異常を有する被験者においてグルコースを知覚しおよび応答するベータ細胞の能力も高める（Ｂｙｒｎｅ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，２８：７２〜７８，１９９８）。ヒトにおけるＧＬＰ−１インスリン分泌効果は、部分的には上昇したインスリン濃度によって、および部分的には高められたインスリン感受性によって、グルコース代謝率を増加させる（Ｄ’Ａｌｅｓｓｉｏ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，２８：７２〜７８，１９９４）。ＧＬＰ−１は、上述のその薬理学的性質によって、ＩＩ型糖尿病の治療のための非常に望ましい治療剤となっている。
【０００４】
さらに、最近の研究によって、わずかに生理学的な量を超えるＧＬＰ−１の注入が、通常の被験者の満腹感を相当高め、食物摂取を減少させることが示されてきた（Ｆｌｉｎｔ，Ａ．，Ｒａｂｅｎ，Ａ．，Ａｓｔｒｕｐ，Ａ．およびＨｏｌｓｔ，Ｊ．Ｊ．によるＪ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ，１０１：５１５〜５２０，１９９８；Ｇｕｔｓｗｉｌｌｅｒ，Ｊ．Ｐ．，Ｇｏｋｅ，Ｂ．，Ｄｒｅｗｅ，Ｊ．，Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄ，Ｐ．，Ｋｅｔｔｅｒｅｒ，Ｓ．，Ｈａｎｄｓｃｈｉｎ，Ｄ．，Ｗｉｎｔｅｒｈａｉｄｅｒ，Ｒ．，Ｃｏｎｅｎ，Ｄ、ならびにＢｅｇｌｉｎｇｅｒ，Ｃ．によるＧｕｔ４４：８１〜８６，１９９９）。食物摂取および満腹感に及ぼす効果はまた、肥満の被験者においても維持されることが報告されてきた（Ｎａｓｌｕｎｄ，Ｅ．，Ｂａｒｋｅｌｉｎｇ，Ｂ．，Ｋｉｎｇ，Ｎ．，Ｇｕｔｎｉａｋ，Ｍ．，Ｂｌｕｎｄｅｌｌ，Ｊ．Ｅ．，Ｈｏｌｓｔ，Ｊ．Ｊ．，Ｒｏｓｓｎｅｒ，Ｓ．およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｐ．Ｍ．によるＩｎｔ．Ｊ．Ｏｂｅｓ．Ｒｅｌａｔ．Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｏｒｄ．，２３：３０４〜３１１，１９９９）。
【０００５】
上記の研究において、ＧＬＰ−１が胃内容排出に対する顕著な効果も生じることが予測された。胃内容排出は、食後グルコース変動をもたらす。インスリン分泌の刺激に加えて、ＧＬＰ−１は、転写因子である脾臓−十二指腸ホメオボックス−１（ＩＤＸ−１）の発現を刺激し、一方でＢ細胞新生を刺激し、したがって糖尿病の効果的な治療剤および／または予防剤となり得ることも示されてきた（Ｓｔｏｆｆｅｒｓ，Ｄ．Ａ．，Ｋｉｅｆｆｅｒ，Ｔ．Ｊ．Ｈｕｓｓａｉｎ，Ｍ．Ａ．，Ｄｒｕｃｋｅｒ，Ｄ．Ｊ．，Ｂｏｎｎｅｒ−Ｗｅｉｒ，Ｓ．，Ｈａｂｅｎｅｒ，Ｊ．Ｆ．およびＥｇａｎ，Ｊ．Ｍ．によるＤｉａｂｅｔｅｓ，４０：７４１〜７４８，２０００）。ＧＬＰ−１はまた、胃酸分泌を抑制することも示されており（Ｗｅｔｔｅｒｇｒｅｎ，Ａ．，Ｓｃｈｊｏｌｄａｇｅｒ，Ｂ．，Ｍｏｒｔｅｎｓｅｎ，Ｐ．Ｅ．，Ｍｙｈｒｅ，Ｊ．，Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ，Ｊ．，Ｈｏｌｓｔ，Ｊ．Ｊ．，Ｄｉｇ．Ｄｉｓ．Ｓｃｉ．，３８：６６５〜６７３，１９９３）、胃潰瘍に対する予防を実現し得る。
【０００６】
ＧＬＰ−１は、インクレチンホルモン、例えば食事誘発性のインスリン分泌を増加させる腸管ホルモンである（Ｈｏｌｓｔ，Ｊ．Ｊ．，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，６：１００５〜１０１７，１９９９）。これは、プログルカゴンをコードするグルカゴン遺伝子の産物である。この遺伝子は、膵臓のＡ細胞中だけでなく、腸粘膜の内分泌Ｌ細胞中においても発現する。プログルカゴンは、１６０個のアミノ酸を含有するペプチド（タンパク質）である。プログルカゴンのさらなるプロセッシングにより、ａ）グルカゴン、ｂ）Ｎ末端のおそらく不活性なフラグメント、およびｃ）「主要プログルカゴンフラグメント」と通常称される大きなＣ末端フラグメントの生成をもたらす。このフラグメントは、生物学的に不活性と考えられている。このフラグメントは、膵臓および消化管のＬ細胞内の両方に存在するが、ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−２と通常称される２種類の高度に相同なペプチドをもたらす「主要プログルカゴンフラグメント」の分解産物が観察されるのは腸内のみである。これらの２種類のペプチドは、重要な生物活性を有する。それ自体では、Ｌ細胞内に存在するＧＬＰ−１のアミノ酸配列は、プログルカゴンの７８〜１０７部分と同一である。
【０００７】
このようなペプチドの血清半減期は極めて短いため、現在ＧＬＰ−１型分子の使用を伴う治療には著しい問題が生じている。例えば、ＧＬＰ−１（７−３７）は、５分未満の血清半減期を有する。したがって、長時間に亘る薬力学的プロファイルを有する、生物活性のあるＧＬＰ−１受容体モジュレーター、アゴニストまたはアンタゴニストに対する大きな必要性が存在する。開示されおよび特許請求されたこの対象が対象としているのは、この必要性および他の必要性である。
【０００８】
本明細書において開示されているのは、天然ペプチドであるＧＬＰ−１と同様のまたはより優れた生物学的特性を示し、したがって糖尿病および関連した状態の寛解に有用な、ＧＬＰ−１受容体モジュレーター、アゴニストまたは部分アゴニストとして作用する新規なペプチドである。
【発明の概要】
【０００９】
（発明の概要）
本明細書に記載する合成単離ペプチドは、ＧＬＰ−１受容体の望ましくはアゴニストまたは部分アゴニストとして、ＧＬＰ−１受容体を調節することができる。これらの合成ペプチドは、ＧＬＰ−１と比較して、食後の血漿グルコース低下および同時に起こる血漿インスリン濃度の上昇を含めた同様なｉｎ  ｖｉｖｏの効力および優れた薬物動態的性質を示し、したがってこれらは、皮下、肺、鼻、口腔への処方または徐放性処方に理想的な治療用の候補である。
【００１０】
本発明の第１の実施形態は、式Ｉの配列
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１
を含む単離ポリペプチドであり、
式中、
Ｘａａ１は、ヒスチジンまたはチアゾリルアラニンなどの、イミダゾールまたはチアゾール環を含む天然もしくは非天然アミノ酸であり、前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、水素、または１個もしくは複数のアルキル基、または１個もしくは複数のハロ基によって所望により置換されていてもよく、前記アミノ酸の遊離アミノ基は、ヒドロキシル基もしくはアルコキシ基によって置換されていてもよく、または水素、アルキル、アシル、ベンゾイル、アルキルオキシカルボニル（例えば、メチルオキシカルボニル）、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、ヘテロシクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アラルキルカルバモイル、ヘテロシクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルもしくはヘテロアリールスルホニルによって所望により置換されていてもよく、ここで
Ｘａａ１が、ヒスチジンまたはチアゾリルアラニンの脱アミノ酸（炭素原子のいずれかは、アルキル、ハロ、またはヒドロキシル基によって所望により置換されていてもよい）であるように、Ｘａａ１のアミノ基は所望により存在していなくてもよく、
Ｘａａ２は、α−アミノ−イソ酪酸（Ａｉｂ）、（Ｄ）−アラニン、（Ｌ）−アラニン、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン、Ｎ−メチル−Ｄ−アラニン、（Ｌ）−プロリン、（Ｓ）−α−メチル−プロリン、（Ｌ）−アゼチジン（Ａｚｔ）、（Ｓ）−α−メチル−アゼチジン（α−Ｍｅ−Ａｚｔ）、（Ｌ）−バリン、および（Ｒ）−または（Ｓ）−イソバリンからなる群から選択される天然もしくは非天然アミノ酸であり、ここで前記アミノ酸の炭素原子は、１個もしくは複数のアルキル基またはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ３は、カルボン酸を含むアミノ酸側鎖を含有する天然もしくは非天然アミノ酸、例えばアスパラギン酸またはグルタミン酸であり、ここで前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、１個もしくは複数のアルキル基またはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ４は、グリシンであり；
Ｘａａ５は、（Ｌ）−スレオニン、（Ｌ）−アロ−スレオニン、（Ｌ）−セリン、（Ｌ）−ノルバリン、（Ｌ）−ノルロイシンからなる群から選択される天然もしくは非天然アミノ酸であり、ここで前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、１個もしくは複数のアルキル基またはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ６は、二置換されたα炭素を含む天然もしくは非天然アミノ酸であり、前記アミノ酸側鎖の１つは、芳香族環または芳香族複素環であり、例えばα−メチル−フェニルアラニン、α−メチル−２−フルオロフェニルアラニン、およびα−メチル−２，６−ジフルオロフェニルアラニンであり、ここで
前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、１個もしくは複数のアルキル基によって所望により置換されていてもよく、および前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、１個もしくは複数のハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ７は、ヒドロキシル基によって置換されているアミノ酸側鎖を含む天然もしくは非天然アミノ酸、例えばＬ−スレオニンまたはＬ−アロ−スレオニンであり、ここで前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、１個もしくは複数のアルキルまたはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ８は、Ｌ−セリン、Ｌ−ヒスチジンおよびＬ−アスパラギンからなる群から選択される天然もしくは非天然アミノ酸であり、ここで前記アミノ酸の炭素原子の１個もしくは複数は、１個もしくは複数のアルキル基またはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ９は、カルボン酸を含むアミノ酸側鎖を含有する天然もしくは非天然アミノ酸、例えばＬ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸であり、ここで前記アミノ酸の炭素原子の１個もしくは複数は、１個もしくは複数のアルキルまたはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ１０は、式ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶ：
【化１】
2009538360.tif 000003
の天然もしくは非天然アミノ酸であり；
上式中、Ｒ３、Ｒ４およびＲ６は、水素、メチル、エチル、アルキル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ハロゲン、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、シアノ、アミノ、アミノアルキル、カルボキシル、カルボキシアルキル、メトキシ、アルコキシ、アリールオキシ、カルボキサミド、置換カルボキサミド、アルキルエステル、アリールエステル、アルキルスルホニル、およびアリールスルホニルからなる群からそれぞれ選択され；
そして
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５は、それぞれＣまたはＮ（ただし、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５の少なくとも１個は、Ｎである）であり；
Ｘａａ１１は、式ＩＩａ、ＩＩＩａ、またはＩＶａ：
【化２】
2009538360.tif 000004
の天然もしくは非天然アミノ酸であり；
上式中、前記アミノ酸のＣ末端カルボニル炭素は窒素に結合して、カルボキサミド（ＮＨ２）、アルキルカルボキサミド（ＮＨＲ１）、またはジアルキルカルボキサミド（ＮＲ１Ｒ２）を形成し；
Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、アルキルまたはアリールアルキル基であり；
Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ６ａは、水素、アルキル（例えば、メチル、エチル）、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ハロゲン、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、シアノ、アミノ、アミノアルキル、カルボキシル、カルボキシアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、カルボキサミド、置換カルボキサミド、アルキルエステル、アリールエステル、アルキルスルホニル、およびアリールスルホニルからなる群からそれぞれ選択され；
Ｒ７は、水素、メチル、およびエチルからなる群から選択され； 
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５は、それぞれＣまたはＮ（ただし、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５の少なくとも１個は、Ｎである）であり；そして
Ｘａａ１０が、式ＩＩのアミノ酸である場合は、Ｘａａ１１は、式ＩＩａのアミノ酸ではない。
【００１１】
式ＩＩの天然もしくは非天然アミノ酸は、複数のＲ３、Ｒ４またはＲ６基をさらに含み得る。式ＩＩＩの天然もしくは非天然アミノ酸は、複数のＲ３、Ｒ４またはＲ６基をさらに含み得る。式ＩＶの天然もしくは非天然アミノ酸は、複数のＲ３、Ｒ４またはＲ６基をさらに含み得る。式Ｖの天然もしくは非天然アミノ酸は、１個もしくは複数のＲ４またはＲ５基をさらに含み得る。
【００１２】
式ＩＩａの天然もしくは非天然アミノ酸は、複数のＲ３ａ、Ｒ４ａまたはＲ６ａ基をさらに含み得る。式ＩＩＩａの天然もしくは非天然アミノ酸は、複数のＲ３ａ、Ｒ４ａまたはＲ６ａ基をさらに含み得る。式ＩＶａの天然もしくは非天然アミノ酸は、複数のＲ３ａ、Ｒ４ａまたはＲ６ａ基をさらに含み得る。
【００１３】
式Ｉの第１の実施形態のＸａａ１０はまた、式ＶＩ：
【化３】
2009538360.tif 000005
の化合物でもよく、
上式中、Ｒ３は、アルキル（例えば、メチル、エチル）およびハロゲン（例えば、フルオロ、クロロ）からなる群から選択され、Ｒ６は、ヒドロキシルおよびメトキシからなる群から選択される。
【００１４】
式Ｉの第１の実施形態のＸａａ１１はまた、式ＶＩａ：
【化４】
2009538360.tif 000006
の化合物でもよく；
上式中、Ｒ３ａは、メチル、エチルおよびフルオロからなる群から選択され、Ｒ７は、水素およびメチルからなる群から選択される。
【００１５】
式Ｉの第１の実施形態のＸａａ１１はまた、式ＶＩＩａ：
【化５】
2009538360.tif 000007
の化合物でもよく；
上式中、Ｒ３ａは、メトキシであり、Ｒ７は、水素およびメチルからなる群から選択される。
【００１６】
他の実施形態では、
Ｘａａ１は、Ｌ−Ｈｉｓ、Ｄ−Ｈｉｓ、Ｌ−Ｎ−メチル−Ｈｉｓ、Ｄ−Ｎ−メチル−Ｈｉｓ、Ｌ−４−チアゾリルＡｌａ、Ｄ−４−チアゾリルＡｌａ、デス−アミノ−Ｈｉｓ、デス−アミノ−チアゾリルＡｌａ、３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロパノイル、（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−ヒドロキシプロパノイル（Ｌ−β−イミダゾールラクチル(imidazolelactyl)）、（Ｓ）または（Ｒ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−メトキシプロパノイル（ＩＭｅＯｐ）からなる群から選択され、そして
末端アミノ基が存在する場合は、前記末端アミノ基は、水素、アルキル、ジアルキル、アシル、ベンゾイル、アルキルオキシカルボニル（例えば、メチルオキシカルボニル）、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、ヘテロシクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アラルキルカルバモイル、ヘテロシクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルまたはヘテロアリールスルホニルによって所望により置換されていてもよい。
【００１７】
Ｘａａ２は、Ｌ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｌ−Ａｌａ、Ｎ−メチル−Ｄ−Ａｌａ、Ｌ−Ｐｒｏ、（Ｓ）−α−メチル−Ｌ−Ｐｒｏ、（Ｌ）−アゼチジン（Ａｚｔ）、（Ｓ）−α−メチル−アゼチジン（α−Ｍｅ−Ａｚｔ）およびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択される。
【００１８】
Ｘａａ３は、Ｌ−Ｇｌｕ、Ｌ−Ａｓｐ、およびＬ−Ｇｌａからなる群から選択される。
【００１９】
Ｘａａ４は、Ｇｌｙである。
【００２０】
Ｘａａ５は、Ｌ−Ｔｈｒ、Ｌ−ＮＩｅ、Ｌ−Ｎｖａ、Ｌ−ＡｏｃおよびＬ−アロ−Ｔｈｒからなる群から選択される。
【００２１】
Ｘａａ６は、Ｌ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｅｔ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−２−フルオロＰｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−３−フルオロＰｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−２，３−ジ−フルオロＰｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−２，６−ジ−フルオロＰｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ（ペンタ−フルオロ）からなる群から選択され、そして
Ｘａａ７は、Ｌ−ＴｈｒまたはＬ−アロ−スレオニンである。
【００２２】
Ｘａａ８は、Ｌ−Ｓｅｒ、Ｌ−Ｈｉｓ、およびＬ−Ａｓｎからなる群から選択される。
【００２３】
Ｘａａ９は、Ｌ−Ａｓｐである。
【００２４】
Ｘａａ１０は、式ＩＩの天然もしくは非天然アミノ酸である。
【００２５】
式ＩＩの天然もしくは非天然アミノ酸は、４−［（４’−メトキシ−２’−エチル）−フェニル］フェニルアラニン、４−［（４’−エトキシ−２’−エチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４’−メトキシ−２’−メチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４’−エトキシ−２’−メチル）フェニル］フェニルアラニン、４−（２’−エチルフェニル）フェニルアラニン、４−（２’−メチルフェニル）フェニルアラニン、４−［（３’，５’−ジメチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（３’，４’−ジメトキシ）フェニル］フェニルアラニン、４−［（２’−エチル−４’−ヒドロキシ）フェニル］フェニルアラニンからなる群から選択され、そして
Ｘａａ１０は、式ＩＩＩの天然もしくは非天然アミノ酸である。
【００２６】
式ＩＩＩの天然もしくは非天然アミノ酸は、４−［２’−（４’−メトキシ−６’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（４’−メトキシ−６’−メチル）ピリジル］−４−フェニルアラニン、４−［２’−（６’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（６’−メチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（３’，５’−ジメチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（４’−メトキシ−６’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［３’−（４’−メトキシ−６’−メチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［３’−（２’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン、および４−［３’（６’−メチル）ピリジル）フェニルアラニンからなる群から選択され、そして
Ｘａａ１０は、式ＩＶの天然もしくは非天然アミノ酸である。
【００２７】
式ＩＶの天然もしくは非天然アミノ酸は、４−［（４’−メトキシ−２’−エチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−［（４’−メトキシ−２’−メチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−（２’−エチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２’−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−［（３’，５’−ジメチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、および４−［（２’−エチル−４’−ヒドロキシ）フェニル］−３−ピリジルアラニンからなる群から選択され、そして
Ｘａａ１１は、式ＩＩａの天然もしくは非天然アミノ酸である。
【００２８】
式ＩＩａの天然もしくは非天然アミノ酸は、４−（２’−メチルフェニル）フェニルアラニン、４−（２’−フルオロフェニル）フェニルアラニン、および４−［（３’，５’−ジメチル）フェニル］フェニルアラニンからなる群から選択され、そして
Ｘａａ１１は、式ＩＩＩａの天然もしくは非天然アミノ酸である。
【００２９】
式ＩＩＩａの天然もしくは非天然アミノ酸は、４−［（６’−メチル）−２’−ピリジル］フェニルアラニン、４−［（６’−メチル）−３’−ピリジル］フェニルアラニン、４−［（６’−エチル）−２’−ピリジル）］フェニルアラニン、および４−［（６’−エチル）−３’−ピリジル）］フェニルアラニンからなる群から選択され、そして
Ｘａａ１１は、式ＩＶａの天然もしくは非天然アミノ酸である。
【００３０】
式ＩＶａの天然もしくは非天然アミノ酸は、４−（２’−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２’−フルオロフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−［（３’，５’−ジメチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−（４’−トリフルオロメチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、および４−（２’−エチルフェニル）−３−ピリジルアラニンからなる群から選択され、そして、
前記アミノ酸のＣ末端カルボニル炭素は窒素に結合して、カルボキサミド（ＮＨ２）、アルキルカルボキサミド（ＮＨＲ１）またはジアルキルカルボキサミド（ＮＲ１Ｒ２）（式中、Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、アルキルまたはアリールアルキル基である）を形成する。
【００３１】
他の態様では、
Ｘａａ１は、Ｌ−Ｈｉｓ、Ｄ−Ｈｉｓ、Ｌ−Ｎ−メチル−Ｈｉｓ、Ｄ−Ｎ−メチル−Ｈｉｓ、Ｌ−４−チアゾリルＡｌａ、Ｄ−４−チアゾリルＡｌａ、デス−アミノ−Ｈｉｓ、デス−アミノ−チアゾリルＡｌａ、３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロパノイル、（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−ヒドロキシプロパノイル（Ｌ−β−イミダゾールラクチル(imidazolelactyl)）、および（Ｓ）または（Ｒ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−メトキシプロパノイル（ＩＭｅＯｐ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
末端アミノ基が存在する場合は、前記末端アミノ基は、水素、アルキル、アシル、ベンゾイル、アルキルオキシカルボニル（例えば、メチルオキシカルボニル）、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、ヘテロシクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アラルキルカルバモイル、ヘテロシクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルまたはヘテロアリールスルホニルによって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ２は、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラニン、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン、Ｎ−メチル−Ｄ−アラニン、Ｌ−プロリン、（Ｓ）−α−メチル−プロリン、（Ｌ）−アゼチジン（Ａｚｔ）、（Ｓ）−α−メチル−アゼチジン（α−Ｍｅ−Ａｚｔ）およびα−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ３は、Ｌ−Ｇｌｕ、Ｌ−Ａｓｐ、およびＬ−Ｇｌａからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ４は、Ｇｌｙであり；
Ｘａａ５は、Ｌ−Ｔｈｒ、Ｌ−ＮＩｅ、Ｌ−Ｎｖａ、Ｌ−ＡｏｃおよびＬ−アロ−Ｔｈｒからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ６は、Ｌ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｅｔ−Ｐｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−２−フルオロＰｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−３−フルオロＰｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−２，３−ジ−フルオロＰｈｅ、Ｌ−α−Ｍｅ−２，６−ジ−フルオロＰｈｅ、およびＬ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ（ペンタ−フルオロ）からなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ７は、Ｌ−ＴｈｒおよびＬ−アロ−スレオニンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ８は、Ｌ−Ｓｅｒ、Ｌ−Ｈｉｓ、およびＬ−Ａｓｎからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ９は、Ｌ−Ａｓｐであり；
Ｘａａ１０は、式ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶのアミノ酸からなる群から選択される天然もしくは非天然アミノ酸であり；
式ＩＩは、４−［（２’−エチル−４’−ヒドロキシ）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４’−メトキシ−２’−エチル）フェニル］フェニルアラニン、４−［（４’−メトキシ−２’−メチル）フェニル］フェニルアラニン、４−（２’−エチルフェニル）フェニルアラニン、４−（２’−メチルフェニル）フェニルアラニン、４−［（３’，５’−ジメチル）フェニル］フェニルアラニン、および４−［（３’，４’−ジメトキシ）フェニル］フェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
式ＩＩＩは、４−［２’−（４’−メトキシ−６’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（４’−メトキシ−６’−メチル）ピリジル］−４−フェニルアラニン、４−［２’−（６’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（６’−メチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（３’，５’−ジメチル）ピリジル］フェニルアラニン；４−［２’−（４’−メトキシ−６’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン；４−［３’−（４’−メトキシ−６’−メチル）ピリジル］フェニルアラニン；４−［３’−（２’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン、および４−［３’−（６’−メチル）ピリジル）フェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
式ＩＶは、４−［（２’−エチル−４’−ヒドロキシ）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−［（４’−メトキシ−２’−エチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−［（４’−メトキシ−２’−メチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−（２’−エチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２’−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、および４−［（３’，５’−ジメチル）フェニル］−３−ピリジルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ１１は、式ＩＩａ、ＩＩＩａ、およびＩＶａのアミノ酸からなる群から選択される天然もしくは非天然アミノ酸であり；
式ＩＩａは、４−（２’−メチルフェニル）フェニルアラニン、４−（２’−フルオロフェニル）フェニルアラニン、および４−［（３’，５’−ジメチル）フェニル］フェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
式ＩＩＩａは、４−［２’−（６’−メチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（６’−メチル）ピリジル］フェニルアラニン、４−［２’−（６’−エチル）ピリジル］フェニルアラニン、および４−［３’−（６’−エチル）ピリジル］フェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
式ＩＶａは、４−（２’−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−（２’−フルオロフェニル）−３−ピリジルアラニン、４−［（３’，５’−ジメチル）フェニル］−３−ピリジルアラニン、４−（４’−トリフルオロメチルフェニル）−３−ピリジルアラニン、および４−（２’−エチルフェニル）−３−ピリジルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸であり；
Ｘａａ１０が、式ＩＩのアミノ酸である場合は、Ｘａａ１１は、式ＩＩａのアミノ酸ではなく；
Ｃ末端カルボニル炭素が窒素に結合して、カルボキサミド（ＮＨ２）、アルキルカルボキサミド（ＮＨＲ１）、またはジアルキルカルボキサミド（ＮＲ１Ｒ２）（式中、Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、アルキルまたはアリールアルキル基であり）を形成し；そして
Ｘａａ１０およびＸａａ１１は、両方が同時に式ＩＩのアミノ酸ではない。
【００３２】
他の実施形態は、以下の配列のいずれかを含む単離ポリペプチドを含む。
【表１】
2009538360.tif 000008
【表２】
2009538360.tif 000009
【表３】
2009538360.tif 000010
【表４】
2009538360.tif 000011
【表５】
2009538360.tif 000012
【表６】
2009538360.tif 000013
【表７】
2009538360.tif 000014
【表８】
2009538360.tif 000015
【表９】
2009538360.tif 000016
【表１０】
2009538360.tif 000017
【表１１】
2009538360.tif 000018
【表１２】
2009538360.tif 000019
【表１３】
2009538360.tif 000020
【表１４】
2009538360.tif 000021
【表１５】
2009538360.tif 000022
【表１６】
2009538360.tif 000023
【表１７】
2009538360.tif 000024
【００３３】
他の実施形態には、
【化６】
2009538360.tif 000025
【化７】
2009538360.tif 000026
の構造を有する単離ポリペプチドが含まれる。
【００３４】
別の実施態様は、配列：Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｂｉｐ（２−Ｅｔ−４’−ＯＨ）−ピリジルアラニン（配列番号：１７７）またはＴｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｂｉｐ（２−Ｅｔ−４’−ＯＨ）ピリジルアラニン（配列番号：１７９）を含有するポリペプチド（該ポリペプチドはＧＬＰ−１受容体と結合しそしてこれを活性化する）を含む。該ペプチドは更に、該アミノ末端残基から二番目の残基上にプロリン（例えば、アルファメチルプロリン）；置換ピリジルアラニン（例えば、４−(２’−メチルフェニル)−３−ピリジルアラニン）；および、アミノ末端カルバメートを含み得る。
【００３５】
配列番号：１７７または１７９の上記の配列は、それぞれ該配列を含有するペプチドの７番目、８番目、９番目および１０番目に存在し得る。該ペプチドは更に、２位のプロリン（例えば、アルファメチルプロリン）を含み得る。配列番号１７７の配列を含有する典型的なペプチドは配列番号：１５８のペプチドである。配列番号１７９の配列を含有する典型的なペプチドは配列番号：１５７のペプチドである。
【００３６】
他の実施形態は、式Ｉの単離ポリペプチドまたは配列番号１〜１７９の少なくとも１つを含むペプチドを含む医薬組成物である。
【００３７】
他の実施形態は、式Ｉの単離ポリペプチドまたは配列番号１〜１７９のいずれかを含むペプチド、ならびに糖尿病薬、抗肥満薬、降圧剤、抗アテローム硬化剤および脂質低下剤からなる群から選択される少なくとも１種類の治療剤を含む、医薬的な組合せに関する。
【００３８】
他の実施形態は、糖尿病薬がビグアナイド、スルホニル尿素、グルコシダーゼ阻害剤、ＰＰＡＲγアゴニスト、ＰＰＡＲα／γデュアルアゴニスト、ａＰ２阻害剤、ＤＰＰ４阻害剤、ＳＧＬＴ−２阻害剤、インスリン増感剤、グルカゴン様ペプチド−ｌ（ＧＬＰ−ｌ）、ＧＰＲ１１９モジュレーター、インスリンおよびメグリチニドからなる群から選択される、式Ｉの単離ポリペプチドまたは配列番号１〜１７９のいずれかを含むペプチドの医薬的な組合せに関する。
【００３９】
他の実施形態は、糖尿病薬がメトホルミン、グリブリド、グリメピリド、グリピリド、グリピジド、クロルプロパミド、グリクラジド、アカルボース、ミグリトール、ピオグリタゾン、トログリタゾン、ロシグリタゾン、マルグリタザー、インスリン、Ｇｌ−２６２５７０、イサグリタゾン、ＪＴＴ−５０１、ＮＮ−２３４４、Ｌ８９５６４５、ＹＭ−４４０、Ｒ−１１９７０２、ＡＪ９６７７、レパグリニド、ナテグリニド、ＫＡＤ１１２９、ＡＲ−ＨＯ３９２４２、ＧＷ−４０９５４４、ＫＲＰ２９７、ＡＣ２９９３、ＬＹ３１５９０２、およびＮＶＰ−ＤＰＰ−７２８Ａからなる群から選択される、式Ｉの単離ポリペプチドまたは配列番号１〜１７９のいずれかを含むペプチドの医薬品の上記の組合せに関する。
【００４０】
他の実施形態は、抗肥満薬が、ＣＢ−１アンタゴニスト（もしくは、インバースアゴニスト）、ＭＣＨＲ−１アンタゴニスト、ＤＧＡＴ阻害剤、ベータ３アドレナリンアゴニスト、リパーゼ阻害剤、セロトニン（およびドーパミン）再取り込み阻害剤、甲状腺受容体β化合物、ならびに食欲抑制剤からなる群から選択される、式Ｉの単離ポリペプチドまたは配列番号１〜１７９のいずれかを含むペプチドの医薬品の上記の組合せに関する。
【００４１】
他の実施形態は、抗肥満薬がオルリスタット、ＡＴＬ−９６２、ＡＪ９６７７、Ｌ７５０３５５、ＣＰ３３１６４８、アコンプリア、ＭＫ−０３６４、ＳＬＶ−３１９、シブトラミン、トピラマート、アキソキン、デキサンフェタミン、フェンテルミン、フェニルプロパノールアミンおよびマジンドールからなる群から選択される、式Ｉの単離ポリペプチドまたは配列番号１〜１７９のいずれかを含むペプチドの医薬品の上記の組合せに関する。
【００４２】
他の実施形態は、脂質低下薬がＭＴＰ阻害剤、コレステロールエステル転送タンパク、ＨＭＧ  ＣｏＡ還元酵素阻害剤、スクアレンシンテターゼ阻害剤、フィブル酸誘導体、ＬＤＬ受容体活性のアップレギュレーター、リポキシゲナーゼ阻害剤、およびＡＣＡＴ阻害剤からなる群から選択される、式Ｉの単離ポリペプチドまたは配列番号１〜１７９のいずれかを含むペプチドの医薬品の上記の組合せに関する。
【００４３】
他の実施形態は、脂質低下薬がプラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ニスバスタチン、ビサスタチン、フェノフィブラート、ゲンフィブロジル、クロフィブラート、アバシミブ、ＴＳ−９６２、ＭＤ−７００、ＣＰ−５２９４１４、およびＬＹ２９５４２７からなる群から選択される、式Ｉの単離ポリペプチドまたは配列番号１〜１７９のいずれかを含むペプチドの医薬品の上記の組合せに関する。
【００４４】
他の実施形態は、治療を必要としている哺乳動物に、治療有効量の式Ｉの単離ポリペプチドまたは配列番号１〜１７９のいずれかを含むペプチドを投与することを含む、糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、創傷治癒、インスリン抵抗性、高血糖症、高インスリン血症、Ｘ症候群、糖尿病性合併症、遊離脂肪酸もしくはグリセロールの血中濃度上昇、高脂血症、肥満症、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化症または高血圧の進行もしくは発症を治療または遅延させるための方法に関する。
【００４５】
他の実施形態は、糖尿病薬、抗肥満薬、降圧剤、抗アテローム硬化剤、脂質低下剤、および式Ｉの単離ポリペプチドまたは配列番号１〜１７９のいずれかを含むペプチドからなる群から選択される１種もしくは複数の治療剤の治療有効量を、同時にまたは順次に投与することを含む、このような糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、創傷治癒、インスリン抵抗性、高血糖症、高インスリン血症、Ｘ症候群、糖尿病性合併症、遊離脂肪酸もしくはグリセロールの血中濃度上昇、高脂血症、肥満症、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化症または高血圧の進行もしくは発症を治療または遅延させるための方法に関する。
【００４６】
他の実施形態は、治療を必要としている哺乳動物に医薬品の上記の組合せのいずれかの治療有効量を投与することを含む、糖尿病、糖尿病性網膜症、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、創傷治癒、インスリン抵抗性、高血糖症、高インスリン血症、Ｘ症候群、糖尿病性合併症、遊離脂肪酸もしくはグリセロールの血中濃度上昇、高脂血症、肥満症、高トリグリセリド血症、アテローム性動脈硬化症または高血圧の進行もしくは発症を治療または遅延させるための方法に関する。
【００４７】
本発明の内容の別の態様は、リガンド結合アッセイの開発のための放射標識としての該開示するペプチドの使用である。例えば、実施例：１６４のペプチドは該放射性同位体１２５Ｉを用いて調製し得て、そして得られた放射標識ペプチドを用いて結合アッセイを開発することができる。別に、同じ目的のために、配列番号：１６４のペプチドを、当業者にとって知られる方法を用いる、触媒的なトリチウム標識によって、配列番号：１５８のペプチドの放射標識形態に変換し得る。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】図１は、ｏｂ／ｏｂマウスのｉｐＧＴＴにおける血漿グルコースに及ぼす化合物Ｉの皮下注射の効果を例示する図面である。
【図２】図２は、ｏｂ／ｏｂマウスのｉｐＧＴＴにおける血漿インスリンに及ぼす化合物Ｉの皮下注射の効果を例示する図面である。
【図３】図３は、ｏｂ／ｏｂマウスのｉｐＧＴＴにおける血漿グルコースに及ぼす配列番号：９の化合物の皮下注射の効果を例示する図面である。
【図４】図４は、ｏｂ／ｏｂマウスのｉｐＧＴＴにおける血漿インスリンに及ぼす配列番号：９の化合物の皮下注射の効果を例示する図面である。
【図５】図５は、ｏｂ／ｏｂマウスのｉｐＧＴＴにおける血漿グルコースに及ぼす配列番号：１１８の化合物の皮下注射の効果を例示する図面である。
【図６】図６は、ｏｂ／ｏｂマウスのｉｐＧＴＴにおける血漿グルコースに及ぼす配列番号：１５１の化合物の皮下注射の効果を例示する図面である。
【図７】図７は、ｏｂ／ｏｂマウスのｉｐＧＴＴにおける血漿インスリンに及ぼす配列番号：１５１の化合物の皮下注射の効果を例示する図面である。
【図８】図８は、ｏｂ／ｏｂマウスのｉｐＧＴＴにおける血漿グルコースに及ぼす配列番号：１５８の化合物の皮下注射の効果を例示する図面である。
【図９】図９は、ｏｂ／ｏｂマウスのｉｐＧＴＴにおける血漿インスリンに及ぼす配列番号：１５８の化合物の皮下注射の効果を例示する図面である。
【００４９】
（詳細な記載）
本明細書に記載する合成単離ペプチドは、望ましくはＧＬＰ−１受容体のアゴニストまたは部分アゴニストとして、ＧＬＰ−１受容体を調節することができる。これらの合成ペプチドは、ＧＬＰ−１と比較して、食後の血漿グルコース低下および同時に起こる血漿インスリン濃度の上昇を含めた、同様なインビボでの効力および優れた薬物動態的性質を示し、したがってこれらは、皮下、肺、鼻、口腔への処方または徐放性処方に理想的な治療用の候補となっている。
【００５０】
本明細書において開示されおよび特許請求されている対象には、式Ｉ
Ｘａａ１−Ｘａａ２−Ｘａａ３−Ｘａａ４−Ｘａａ５−Ｘａａ６−Ｘａａ７−Ｘａａ８−Ｘａａ９−Ｘａａ１０−Ｘａａ１１
式Ｉ
の配列を含む単離ポリペプチドが含まれ、
式中、
Ｘａａ１は、ヒスチジンまたはチアゾリルアラニンなどの、イミダゾールまたはチアゾール環を含む天然もしくは非天然アミノ酸であり、前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、水素、または１個もしくは複数のアルキル基、または１個もしくは複数のハロ基によって所望により置換されていてもよく、前記アミノ酸の遊離アミノ基は、水素、ヒドロキシル、アルキル、アシル、ベンゾイル、アルコキシ、アルキルオキシカルボニル（例えば、メチルオキシカルボニル）、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、ヘテロシクリルオキシカルボニル、ヘテロアリールアルキルオキシカルボニル、アルキルカルバモイル、アリールカルバモイル、アラルキルカルバモイル、ヘテロシクリルスルホニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、アリールアルキルスルホニル、ヘテロアリールアルキルスルホニルまたはヘテロアリールスルホニルよって所望により置換されていてもよく；ここで
Ｘａａ１は、ヒスチジンまたはチアゾリルアラニンの脱アミノ酸（炭素原子のいずれかは、アルキル、ハロ、またはヒドロキシル基によって所望により置換されていてもよい）であるように、Ｘａａ１のアミノ基は所望により存在していなくてもよく；
Ｘａａ２は、α−アミノイソ酪酸、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラニン、Ｎ−メチル−Ｌ−アラニン、Ｎ−メチル−Ｄ−アラニン、Ｌ−プロリン、（Ｓ）−α−メチル−プロリン、Ｌ−アゼチジン（Ａｚｔ）、（Ｌ）−α−メチル−アゼチジン（α−Ｍｅ−Ａｚｔ）、Ｌ−バリン、および（Ｒ）−または（Ｓ）−イソバリンからなる群から選択される天然もしくは非天然アミノ酸であり、前記アミノ酸の炭素原子は、１個もしくは複数のアルキル基またはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ３は、カルボン酸を含むアミノ酸側鎖を含有する天然もしくは非天然アミノ酸、例えばアスパラギン酸またはグルタミン酸であり、ここで前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、１個もしくは複数のアルキル基またはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ４は、グリシンであり；
Ｘａａ５は、Ｌ−スレオニン、Ｌ−アロ−スレオニン、Ｌ−セリン、Ｌ−ノルバリン、Ｌ−ノルロイシンからなる群から選択される天然もしくは非天然アミノ酸であり、ここで前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、１個もしくは複数のアルキル基またはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ６は、二置換されたα炭素を含む天然もしくは非天然アミノ酸であり、前記アミノ酸側鎖の１つは、芳香族環または芳香族複素環であり、例えばα−メチル−フェニルアラニン、α−メチル−２−フルオロフェニルアラニン、α−メチル−２，６−ジフルオロフェニルアラニンであり、ここで
前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、１個もしくは複数のアルキル基によって所望により置換されていてもよく、および前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、１個もしくは複数のハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ７は、ヒドロキシル基によって置換されているアミノ酸側鎖を含む天然もしくは非天然アミノ酸、例えばＬ−スレオニンまたはＬ−アロ−スレオニンであり、ここで前記アミノ酸の炭素原子のいずれかは、１個もしくは複数のアルキルまたはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ８は、Ｌ−セリン、Ｌ−ヒスチジンおよびＬ−アスパラギンからなる群から選択される天然もしくは非天然アミノ酸であり、ここで前記アミノ酸の炭素原子の１個もしくは複数は、１個もしくは複数のアルキル基またはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ９は、カルボン酸を含むアミノ酸側鎖を含有する天然もしくは非天然アミノ酸、例えばＬ−アスパラギン酸またはＬ−グルタミン酸であり、ここで前記アミノ酸の炭素原子の１個もしくは複数は、１個もしくは複数のアルキルまたはハロ基によって所望により置換されていてもよく；
Ｘａａ１０は、式ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶ：
【化８】
2009538360.tif 000027
の天然もしくは非天然アミノ酸であり；
上式中、Ｒ３、Ｒ４およびＲ６は、水素、アルキル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ハロゲン、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、シアノ、アミノ、アミノアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、カルボキシル、カルボキシアルキル、カルボキサミド、置換カルボキサミド、アルキルエステル、アリールエステル、アルキルスルホニル、およびアリールスルホニルからなる群からそれぞれ選択され；
そして
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５は、それぞれＣまたはＮ（ただし、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５の１個は、Ｎである）であり；
Ｘａａ１１は、式ＩＩａ、ＩＩＩａ、またはＩＶａ：
【化９】
2009538360.tif 000028
の天然もしくは非天然アミノ酸であり、
前記アミノ酸のＣ末端カルボニル炭素は窒素に結合して、カルボキサミド（ＮＨ２）、アルキルカルボキサミド（ＮＨＲ１）、またはジアルキルカルボキサミド（ＮＲ１Ｒ２）を形成し；
Ｒ１およびＲ２のそれぞれは、アルキルまたはアリールアルキル基であり；
Ｒ３ａ、Ｒ４ａおよびＲ６ａは、水素、アルキル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ハロゲン、ヒドロキシル、ヒドロキシアルキル、シアノ、アミノ、アミノアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、カルボキシル、カルボキシアルキル、カルボキサミド、置換カルボキサミド、アルキルエステル、アリールエステル、アルキルスルホニル、およびアリールスルホニルからなる群からそれぞれ選択され；
Ｒ７は、水素、メチル、およびエチルからなる群から選択され；そして
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５は、それぞれＣまたはＮ（ただし、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、およびＸ５の１個は、Ｎである）であり；
Ｘａａ１０が、式ＩＩのアミノ酸である場合は、Ｘａａ１１は、式ＩＩａのアミノ酸ではない。
【００５１】
好ましい実施態様は、配列：Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｂｉｐ（２−Ｅｔ−４’−ＯＨ）−ピリジルアラニン（配列番号：１７７）またはＴｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｂｉｐ（２−Ｅｔ−４’−ＯＨ）ピリジルアラニン（配列番号：１７９）を含有するポリペプチド（該ポリペプチドはＧＬＰ−１受容体と結合しそしてこれを活性化する）である。該ペプチドは更に、該アミノ末端残基から２番目の残基にプロリン（例えば、アルファメチルプロリン）；置換ピリジルアラニン（例えば、４−(２’−メチルフェニル)−３−ピリジルアラニン）；および、アミノ末端カルバメートを含み得る。
【００５２】
好ましいペプチドは、配列番号：１５７および１５８のペプチドを含み、そしてこれらのペプチドは医薬組成物および医薬的な組み合わせ中に含まれ得る。
【００５３】
本明細書において提供される定義は、特定の例に置いて他に限定されることがなければ、この明細書を通して使用される用語に、制限なく適用される。
【００５４】
アミノ酸およびペプチド化学の当業者であれば、アミノ酸には、一般構造式：
【化１０】
2009538360.tif 000029
（式中、ＲおよびＲ’は、本明細書において説明する通り）によって表される化合物が含まれることを認識している。
【００５５】
別段の指示がない限り、「アミノ酸」という用語には、本明細書において単独でまたは他の基の一部として用いる場合、「α」炭素と称される同じ炭素に連結したアミノ基およびカルボキシル基が制限なしに含まれ、Ｒおよび／またはＲ’は、水素を含めた天然または非天然の側鎖であり得る。「α」炭素での「Ｓ」絶対配置は、一般に「Ｌ」または「天然」配置と称される。「Ｒ」および「Ｒ’」（主要）置換基の両方が水素と等しい場合は、このアミノ酸はグリシンであり、キラルではない。
【００５６】
別段の指示がない限り、「アミノ−アルコール」という用語には、本明細書において単独でまたは他の基の一部として用いる場合、カルボキシ基が、バリノール、グリシノール、アラニノール、アリールアラニノール（arylalaninol）、ヘテロアリールアラニノール（heteroarylalaninol）などのメチルアルコールに置換された（還元された）、天然または非天然のアミノ酸が制限なしに含まれる。
【００５７】
別段の指示がない限り、「アルキル」という用語には、本明細書において単独でまたは他の基の一部として用いる場合、直鎖中に１〜４０個の炭素、好ましくは１〜２０個の炭素、さらに好ましくは１〜８個の炭素を含有する、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、４，４−ジメチルペンチル、オクチル、２，２，４−トリメチルペンチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、その様々な分枝鎖異性体などの、直鎖および分枝鎖両方の炭化水素が制限なしに含まれる。さらに、アルキル基は、本明細書に記載されている場合、任意の利用可能な炭素原子上で、これらだけに限らないが、このような鎖に一般に結合するアルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシ、アリールアルキルオキシ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルキルオキシ、アルカノイル、ハロ、ヒドロキシル、チオ、ニトロ、シアノ、カルボキシル、カルボニル
【化１１】
2009538360.tif 000030
、カルボキサミド、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミド、アルキルアミノ、アリールアミド、ヘテロアリールアミド、アジド、グアニジノ、アミジノ、ホスホン、ホスフィン、スルホン、スルホンアミド、ハロアリール、ＣＦ３、ＯＣＦ２、ＯＣＦ３、アリールオキシ、ヘテロアリール、シクロアルキルアルコキシアルキル、シクロヘテロアルキルなどなどの１個もしくは複数の官能基によって、所望により置換されていてもよく、トリフルオロメチル、３−ヒドロキシヘキシル、２−カルボキシプロピル、２−フルオロエチル、カルボキシメチル、シアノブチルなどのアルキル基を形成し得る。
【００５８】
別段の指示がない限り、「アルケニル」という用語には、本明細書において単独でまたは他の基の一部として用いる場合、直鎖中に、１個もしくは複数の二重結合を有する２〜４０個の炭素、好ましくは１〜３個の二重結合を有する２〜２０個の炭素、より好ましくは１〜２個の二重結合を有する２〜８個の炭素を含有する、直鎖および分枝鎖両方の炭化水素が制限なしに含まれ、「アルキル」のために上述したように、任意の炭素は所望により置換されていてもよい。
【００５９】
別段の指示がない限り、「アルキニル」という用語には、本明細書において単独でまたは他の基の一部として用いる場合、直鎖中に、１個もしくは複数の三重結合を有する２〜４０個の炭素、好ましくは１〜３個の三重結合を有する２〜２０個の炭素、より好ましくは１〜２個の三重結合を有する２〜８個の炭素を含有する、直鎖および分枝鎖両方の炭化水素が制限なしに含まれ、「アルキル」のために上述したように、任意の炭素は所望により置換されていてもよい。
【００６０】
別段の指示がない限り、「シクロアルキル」という用語には、本明細書において単独でまたは他の基の一部として用いる場合、単環式アルキル、二環式アルキルおよび三環式アルキルを含めた、付加または縮合した１〜３個の環を含有する、飽和もしくは部分不飽和（１個または２個の二重結合を含有する）環状炭化水素基が制限なしに含まれ、環を形成する全部で３〜２０個の炭素、好ましくは各環を形成する４〜７個の炭素を含有し、アリールのために上述したように１個の芳香環に縮合していてもよく、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロデシル、シクロドデシル、シクロヘキセニル、
【化１２】
2009538360.tif 000031
が含まれ、
これらの基のいずれも、任意の利用可能な炭素原子を通して、水素、ハロ、ハロアルキル、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルケニル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルキニル、シクロアルキルアルキル、フルオレニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、アリールアルコキシ、アリールチオ、アリールアゾ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヒドロキシ、ニトロ、オキソ、シアノ、カルボキシル、カルボニル
【化１３】
2009538360.tif 000032
、カルボキサミド、アミノ、置換アミノ（このアミノには、１個または２個の置換基（これはアルキル、アリールまたは定義において述べた他のアリール化合物のいずれかである）が含まれる）、アミド、アジド、グアニジノ、アミジノ、ホスホン、ホスフィン、スルホン、スルホンアミド、チオール、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アリールチオアルキル、アルコキシアリールチオ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アリールスルフィニル、アリールスルフィニルアルキル、アリールスルホニルアミノまたはアリールスルホンアミノカルボニル、または上記で示したアルキル置換基のいずれかから選択される１個または複数の基によって所望により置換されていてもよい。
【００６１】
「アリール」という用語は、本明細書において単独でまたは他の基の一部として用いる場合、環部分（フェニルまたはナフチルなど）中に６〜１０個の炭素を含有する単環式および二環式芳香族基を制限なしに示し、「アリール」（アリール、シクロアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロシクロアルキル環など）に縮合した１〜３個のさらなる環が所望により含まれていてもよく、任意の利用可能な炭素原子を通して、水素、アルキル、ハロ、ハロアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルケニル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アルキニル、シクロアルキルアルキル、フルオレニル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、アリールオキシ、アリールオキシアルキル、アリールアルコキシ、アリールチオ、アリールアゾ、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールアルキルオキシ、ヘテロアリールアルキルオキシアルキル、ヒドロキシ、ニトロ、オキソ、シアノ、アミノ、置換アミノ（このアミノには、１個または２個の置換基（これはアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、またはアリールまたは定義において述べた他のアリール化合物のいずれかである）が含まれる）、チオール、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アリールチオアルキル、アルコキシアリールチオ、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルキルアミノカルボニル、シクロアルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、ヘテロアリールアミノカルボニル、ヘテロアリールアルキルアミノカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アリールスルフィニル、アリールスルフィニルアルキル、アリールスルホニルアミノまたはアリールスルホンアミノカルボニル、または上記で示したアルキル置換基のいずれかから選択された１個または複数の基によって所望により置換されていてもよい。
【００６２】
「アリールアルキル」という用語は、本明細書において単独でまたは他の基の一部として用いる場合、ベンジル、フェネチルまたはナフチルプロピルなどのアリール置換基を有する上記で定義したアルキル基を制限なしに示し、前記アリールおよび／またはアルキル基は、上記で定義したように所望により置換されていてもよい。
【００６３】
「アルコキシ」、「アリールオキシ」、「ヘテロアリールオキシ」「アリールアルキルオキシ」、または「ヘテロアリールアルキルオキシ」という用語は、本明細書において単独でまたは他の基の一部として用いる場合、酸素原子１個を介して連結している上記の定義によるアルキルまたはアリール基が制限なしに含まれる。
【００６４】
「ヘテロシクロ」、「複素環」、「ヘテロシクリル」または「複素環式」という用語は、本明細書で使用する場合、非置換または置換の安定した４、５、６、または７員環の単環式環系を制限なしに示し、これは飽和または不飽和であってよく、炭素原子および窒素、硫黄、酸素から選択された１〜４個のヘテロ原子および／またはＳＯまたはＳＯ２基（ここで、窒素および硫黄ヘテロ原子は、所望により酸化されていてもよく、ならびに窒素ヘテロ原子は、所望により四級化されていてもよい）からなる。複素環は、任意のヘテロ原子または炭素原子で結合していてもよく、これによって安定的な構造がもたらされる。このような複素環基の例には、これらだけに限らないが、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキソピロリジニル、オキソピペラジニル、オキソピペリジニルおよびオキサジアゾリルが含まれる。ヘテロシクロ基は、「アルキル」または「アリール」のために説明したものなどのような１個もしくは複数の官能基によって所望により置換されていてもよい。
【００６５】
「ヘテロシクロアルキル」という用語は、本明細書において単独でまたは他の基の一部として用いる場合、ヘテロシクロアルキル置換基を有する上記で定義したアルキル基を制限なしに示し、前記「ヘテロシクロ」および／またはアルキル基は、上記で定義したように所望により置換されていてもよい。
【００６６】
「ヘテロアリール」という用語は、本明細書で使用する場合、窒素、硫黄、酸素から選択される１個もしくは複数のヘテロ原子および／またはＳＯまたはＳＯ２基を含有する、５、６または７員環の芳香族複素環を制限なしに示す。このような環は、他のアリールまたはヘテロアリール環に縮合していてもよく、可能なＮ−酸化物を含んでもよい。このようなヘテロアリール基の例には、それだけに限らないが、フラン、ピロール、チオフェン、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、イソオキサゾール、オキサゾール、イミダゾールなどが挙げられる。ヘテロアリール基は、「アルキル」または「アリール」のために説明したものなどの鎖に通常結合している１個もしくは複数の官能基によって所望により置換されていてもよい。
【００６７】
「ヘテロアリールアルキル」という用語は、本明細書において単独でまたは他の基の一部として用いる場合、ヘテロアリール置換基を有する、上記で定義したアルキル基を制限なしに示し、前記ヘテロアリールおよび／またはアルキル基は、上記で定義したように所望により置換されていてもよい。
【００６８】
「受容体モジュレーター」という用語は、ＧＬＰ−１受容体で作用して下流シグナル伝達事象の制御能力を変化させる化合物を示す。受容体モジュレーターの例には、標準的な薬理学の教科書（例えば、Ｅ．Ｍ．ＲｏｓｓおよびＴ．Ｐ．ＫｅｎａｋｉｎによるＧｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第１０版（２００１）ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ，Ｃｈａｐｔｅｒ２，ｐｐ．３１〜４３）に記載のアゴニスト、アンタゴニスト、部分アゴニスト、インバースアゴニスト、アロステリックアンタゴニストおよびアロステリック相乗因子が含まれる。
【００６９】
当業者であれば、本事案および当技術分野において提供されるような用語の意味は容易に理解するであろう。
【００７０】
「糖尿病および関連した疾患または関連した状態」という用語は、ＩＩ型糖尿病、Ｉ型糖尿病、耐糖能異常、肥満症、高血糖症、Ｘ症候群、代謝異常症侯群、糖尿病性合併症、および高インスリン血症を制限なしに示す。
【００７１】
「脂質調節」または「脂質降下」薬という用語は、本明細書において用いられる場合、治療的に脂質障害を治療するための、ＬＤＬを減少させ、および／またはＨＤＬを上昇させ、および／またはトリグリセリドを減少させ、および／または総コレステロールを減少させる薬物、ならびに／あるいは他の公知の機構を制限なしに示す。
【００７２】
本明細書に記載する治療剤の投与には、治療剤の治療有効量を投与することが制限なしに含まれる。「治療有効量」という用語は、本明細書で使用する場合、本明細書に記載するＧＬＰ−１受容体モジュレーターの組成物の投与によって治療可能な状態を治療または予防する治療剤の量を、制限なしに示す。その量は、検証可能な治療的または予防的または寛解的な効果を示すのに十分な量である。この効果には、例えば本明細書において記載された状態の治療または予防が、制限なしに含まれ得る。被験者にとっての厳密な有効量は、被験者の大きさおよび健康、治療する状態の性質および程度、治療する医師の勧め、ならびに投与のために選択される治療法または治療法の組合せに依存するであろう。したがって、あらかじめ厳密な有効量を特定することは有用ではない。
【００７３】
本明細書において開示されおよび特許請求されているペプチドは、示した表および図に例示されているように、グルコース低下の有効性モデル（ｏｂ／ｏｂマウスモデル）における比較可能な曝露を有する優れた効力と、優れた薬物動態（イヌにおける皮下注射により測定）とを示す。
【化１４】
2009538360.tif 000033
【化１５】
2009538360.tif 000034
【表１８】
2009538360.tif 000035
【表１９】
2009538360.tif 000036
表３ａおよび表３ｂ
ヒトまたはマウスのＧＬＰ−１受容体を発現するＣＨＯ細胞におけるｃＡＭＰ合成の刺激についての効力および有効性
【表２０】
2009538360.tif 000037
【表２１】
2009538360.tif 000038
【００７４】
表３ａおよび３ｂについて、配列番号：１７３および配列番号：１７４の化合物、および配列番号：１７５および配列番号：１７６の化合物をジアステレオマーの混合物として製造し、そして異性体ＡおよびＢとしてＨＰＬＣによって分離した（実施例３１）。３−(１Ｈ−イミダゾール−４−イル)−２−メトキシプロパノイル（ＩＭｅＯｐ）Ｘａａ１基の絶対配置は、決定しなかった。
【００７５】
本明細書に記載するペプチドおよびその類似体は、Ｇ．ＢａｒａｎｙおよびＲ．Ｂ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄによる「Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ」第２巻「Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐａｒｔ  Ａ」，ｐｐ．３〜２８４，Ｅ．ＧｒｏｓｓおよびＪ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８０、ならびにＪ．Ｍ．ＳｔｅｗａｒｔおよびＪ．Ｄ．Ｙｏｕｎｇによる「Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」第２版，Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，１９８４において記載されているものなどの、様々な固相技術を使用して化学合成によって製造することができる。望ましい方法は、アミノ酸側鎖の一時的保護のためのｔｅｒｔ−ブチル基と組み合わせた、α−アミノ基の一時的保護のためのＦｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）基をベースとする（例えば、Ｅ．ＡｔｈｅｒｔｏｎおよびＲ．Ｃ．Ｓｈｅｐｐａｒｄによる「Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ」第９巻「Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐａｒｔ  Ｃ」中の「Ｔｈｅ  Ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ  Ａｍｉｎｏ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ」ｐｐ１〜３８，Ｓ．ＵｎｄｅｎｆｒｉｅｎｄおよびＪ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，１９８７を参照されたい）。
【００７６】
ペプチドは、不溶性ポリマー担体（これは「樹脂」とも称される）上でのペプチドのＣ末端から開始される段階的方法で合成することができる。合成は、アミドまたはエステル結合の形成によって、ペプチドのＣ末端アミノ酸を樹脂に添加することによって開始する。これによって、それぞれＣ末端アミドまたはカルボン酸として、生成ペプチドの最終的な切り出しが可能となる。あるいは、Ｃ末端アミノアルコールが存在する場合には、Ｃ末端残基を、本明細書に記載する２−メトキシ−４−アルコキシベンジルアルコール樹脂（ＳＡＳＲＩＮ（商標）、Ｂａｃｈｅｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｉｎｃ．社製、Ｋｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｒｕｓｓｉａ、ＰＡ）と結合させることができ、そしてペプチド配列アセンブリの完成後、得られたペプチドアルコールを、ＬｉＢＨ４のＴＨＦ溶液と共に切り出す（Ｊ．Ｍ．ＳｔｅｗａｒｔおよびＪ．Ｄ．Ｙｏｕｎｇによる上記のｐ．９２を参照されたい）。
【００７７】
合成で使用されるＣ末端アミノ酸および全ての他のアミノ酸は、α−アミノ保護基が合成中に選択的に除去され得るように、異なる保護基で保護されたα−アミノ基および側鎖官能基（存在する場合）を有する必要がある。アミノ酸のカップリングは、活性エステルとしてのそのカルボキシル基の活性化、およびその基と樹脂に添加されたＮ末端アミノ酸のブロックされていないα−アミノ基との反応によって行われる。全てのペプチド配列がアセンブルされるまで、一連のα−アミノ基脱保護およびカップリングを繰り返す。次いで、通常副反応を制限するための適当な捕捉剤の存在下で、側鎖官能基を同時に脱保護することによってペプチドを樹脂から切り出す。得られたペプチドを、逆相ＨＰＬＣによって最終的に精製する。
【００７８】
最終的なペプチド前駆体として必要とされるペプチジル−樹脂の合成には、市販の架橋ポリスチレンポリマー樹脂（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ；Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を使用する。Ｃ末端カルボキサミドのための好ましい固体担体は、４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）−フェノキシアセチル−ｐ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂（ＲｉｎｋアミドＭＢＨＡ樹脂）、９−Ｆｍｏｃ−アミノ−キサンテン−３−イルオキシ−メリフィールド樹脂（Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂）、４−（９−Ｆｍｏｃ）アミノメチル−３，５−ジメトキシフェノキシ）バレリル−アミノメチル−メリフィールド樹脂（ＰＡＬ樹脂）である。第１およびそれに続くアミノ酸のカップリングは、それぞれＤＩＣ／ＨＯＢＴ、ＨＢＴＵ／ＨＯＢＴ、ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰから、またはＤＩＣ／ＨＯＡＴ、ＨＡＴＵ／ＨＯＡＴから生成されたＨＯＢＴまたはＨＯＡＴ活性エステルを使用して行うことができる。保護ペプチドフラグメントのための好ましい固体担体は、２−クロロトリチルクロリド樹脂および９−Ｆｍｏｃ−アミノ−キサンテン−３−イルオキシ−メリフィールド樹脂（Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂）である。第１のアミノ酸の２−クロロトリチルクロリド樹脂への添加は、ジクロロメタンおよびＤＩＥＡ中でＦｍｏｃ保護アミノ酸を樹脂と反応させることによって最良に行われる。必要に応じて、アミノ酸の溶解を容易にするために少量のＤＭＦを添加し得る。
【００７９】
本明細書に記載する１１ｍｅｒペプチド類似体の合成は、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｔｅｃｈ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（ＭＰＳ３９６）またはＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．ペプチド合成機（ＡＢＩ４３３ａ）などのペプチド合成機を使用して行うことができる。ＭＰＳ３９６を使用した場合、９６個までのペプチドが同時に合成された。ＡＢＩ４３３ａ合成機を使用した場合、個々のペプチドは順次合成された。両方の場合とも、段階的な固相ペプチド合成は、本明細書に記載するＦｍｏｃ／ｔ−ブチル保護方法を使用して行った。
【００８０】
Ｘａａ１０位およびＸａａ１１位に存在する非天然で非市販のアミノ酸を、２種類の方法の一方でペプチド鎖に組み込んだ。第１の方法では、ＢｏｃまたはＦｍｏｃ保護の非天然アミノ酸を、適切な有機合成手順を用いて溶液中で調製した。次いで、得られた誘導体をペプチドの段階的合成に使用した。あるいは、必要とされる非天然アミノ酸を、有機合成化学の手順を用いて直接樹脂上で形成した。非天然非市販のアミノ酸がＸａａ６位または任意の他のＸａａ位に組み込むために必要とされる場合は、必要とされるＦｍｏｃ保護非天然アミノ酸を溶液中で合成した。次いで、このような誘導体を段階的な固相ペプチド合成において使用した。
【００８１】
有用なＦｍｏｃアミノ酸誘導体を下記に示す。
固相合成に使用されるオルトゴナル保護アミノ酸の例
【化１６】
2009538360.tif 000039
固相合成に使用される保護アミノ酸
【化１７】
2009538360.tif 000040
【００８２】
それぞれのペプチドのペプチジル−樹脂前駆体は、任意の標準的手順を使用して切断および脱保護され得る（例えば、Ｄ．Ｓ．ＫｉｎｇらＩｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．３６，１９９０，２５５〜２６６を参照されたい）。望ましい方法は、捕捉剤として、水の存在下でのＴＦＡと、ＴＩＳとの使用である。通常ペプチジル−樹脂を、ＴＦＡ／水／ＴＩＳ（９４：３：３、ｖ：ｖ：ｖ、１ｍＬ／ペプチジル樹脂１００ｍｇ）中、室温にて２〜６時間撹拌する。次いで、使用済み樹脂を濾過し、ＴＦＡ溶液を減圧下で濃縮または乾燥する。得られた粗ペプチドを、分取ＨＰＬＣによる精製のために、沈殿後にＥｔ２Ｏで洗浄するか、あるいはＤＭＳＯまたは５０％酢酸水溶液に直接再溶解する。
【００８３】
所望の純度のペプチドは、分取ＨＰＬＣ、例えば、Ｗａｔｅｒｓ  Ｍｏｄｅｌ４０００またはＳｈｉｍａｄｚｕ  Ｍｏｄｅｌ  ＬＣ−８Ａ液体クロマトグラフを使用して、精製によって得ることができる。粗ペプチド溶液を、ＹＭＣ  Ｓ５ＯＤＳ（２０×１００ｍｍ）カラムに注入し、１４〜２０ｍＬ／ｍｉｎの流量で、流出液を２２０ｎｍのＵＶ吸光度によってモニターしながら、共に０．１％ＴＦＡで緩衝した水中のＭｅＣＮの直線グラジエントを用いて溶出する。精製ペプチドの構造は、エレクトロスプレーＭＳ分析によって確認することができる。
【００８４】
下記の略号を、本明細書の実施例および他の場所で使用する。
Ｐｈ＝フェニル
Ｂｎ＝ベンジル
ｉ−Ｂｕ＝イソブチル
ｉ−Ｐｒ＝イソプロピル
Ｍｅ＝メチル
Ｅｔ＝エチル
Ｐｒ＝ｎ−プロピル
Ｂｕ＝ｎ−ブチル
ｔ−Ｂｕ＝ｔｅｒｔ−ブチル
Ｔｒｔ＝トリチル
ＴＭＳ＝トリメチルシリル
ＴＩＳ＝トリイソプロピルシラン
Ｅｔ２Ｏ＝ジエチルエーテル
ＨＯＡｃまたはＡｃＯＨ＝酢酸
ＭｅＣＮまたはＡｃＣＮ＝アセトニトリル
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＦＥ＝α，α，α−トリフルオロエタノール
Ｅｔ２ＮＨ＝ジエチルアミン
ＮＭＭ＝Ｎ−メチルモルホリン
ＮＭＰ＝Ｎ−メチルピロリドン
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ｎ−ＢｕＬｉ＝ｎ−ブチルリチウム
Ｐｄ／Ｃ＝パラジウム炭素
ＰｔＯ２＝酸化白金
ＴＥＡ＝トリエチルアミン
ｍｉｎ＝分
ｈまたはｈｒ＝時間
Ｌ＝リットル
ｍＬまたはｍｌ＝ミリリットル
μＬ＝マイクロリットル
ｇ＝グラム
ｍｇ＝ミリグラム
ｍｏｌ＝モル
ｍｍｏｌ＝ミリモル
ｍｅｑ＝ミリ当量
ｒｔまたはＲＴ＝室温
ｓａｔまたはｓａｔ’ｄ＝飽和
ａｑ．＝水性
ｍｐ＝融点
Ｂｉｐ＝ビフェニルアラニン
ＬｉＢＨ４＝水素化ホウ素リチウム
Ｍｇ＝マグネシウム
ＢＯＰ試薬＝ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス−ジメチルアミノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（カストロ試薬）
ＰｙＢＯＰ試薬＝ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＢＴＵ＝２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＡＴＵ＝Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＣＴＵ＝２−（６−クロロ−１−Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＴＦＦＨ＝テトラメチル−フルオロホルムアミジニウムヘキサフルオロホスフェート
ＤＭＡＰ＝４−（ジメチルアミノ）ピリジン
ＤＩＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン
ＥＤＡＣ＝３−エチル−３’−（ジメチルアミノ）プロピル−カルボジイミド塩酸塩（または１−［（３−（ジメチル）アミノ）プロピル］）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩）
ＦｍｏｃまたはＦＭＯＣ＝フルオレニルメチルオキシカルボニル
ＢｏｃまたはＢＯＣ＝ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
Ｃｂｚ＝カルボベンジルオキシまたはカルボベンゾキシまたはベンジルオキシカルボニル
ＨＯＢＴまたはＨＯＢＴ・Ｈ２Ｏ＝１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物
Ｃｌ−ＨＯＢｔ＝６−クロロ−ベンゾトリアゾール
ＨＯＡＴ＝１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー
ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィー
ＬＣ／ＭＳ＝高速液体クロマトグラフィー／質量分析法
ＭＳまたはＭａｓｓ  Ｓｐｅｃ＝質量分析法
ＮＭＲ＝核磁気共鳴
ＳｃまたはＳＣ＝皮下
ＩＰまたはｉｐ＝腹腔内
ＧＴＴ＝グルコース負荷試験。
【００８５】
ペプチド化学の当業者であれば、アミノ酸はＤおよびＬ異性体の両方として存在し、本明細書において開示されおよび特許請求されている対象（配列表中に提示されている対象を含む）には、本明細書に記載するペプチドの合成に組み込まれているアミノ酸のため異性体のいずれかまたはその混合物の使用が含まれることを認識している。
【００８６】
式ＩＶａのアミノ酸合成のための基本手順
式ＩＶａの保護アミノ酸は、いくつかの方法によって調製することができる。例えば（反応式Ａ）、ヨードブロモ複素環ｉ（式中、Ｘ３＝Ｎである）は、標準的文献における方法によってパラジウムが媒介する触媒作用を介してボロン酸とカップリングすることができ、これによりアリール複素環式臭化物ｉｉをもたらし、これはリチオ化と、アシル化剤（ジメチルホルムアミドなど）との反応とによってアルデヒドｉｉｉがもたらされる。アルデヒドは、水酸化ホウ素ナトリウムまたは同様の薬物によってアルコールｉｖに還元され、対応する臭化物ｖは４８％臭化水素酸中のｉｖの長時間の還流によって調製される。オドネルの方法（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ３９  ８７７５（１９９８））の後の、キラル触媒を用いたｔｅｒｔ−ブチル２−（ジフェニルメチレンアミノ）アセテートのｖによるアルキル化によってキラルエステルｖｉが生じ、これを強力な無水酸による脱保護およびＦｍｏｃ−Ｃｌによって処理することによって、主に１種類のキラル型のＦｍｏｃ  ｔ−ブチルエステルｖｉｉがもたらされる。一般的な有機溶媒からのｖｉｉの再結晶によって、鏡像体過剰率＞９５％のｖｉｉｉがもたらされる。強力な無水酸を使用したエステルの除去によって式ＩＶａの化合物がもたらされる。
【００８７】
あるいは、式ＩＶａの化合物は、メチル複素環ｉｘのラジカル誘発臭素化（反応式Ｂ）によって調製することができ、ブロモメチル複素環ｘが生じる。上記のようなオドネルの方法によるｘのアルキル化、および同様の再結晶によって、高い鏡像体過剰率のキラルエステルｘｉｉｉがもたらされる。反応式Ａで説明したようなボロン酸カップリングによって、式ＩＶａの化合物がもたらされる。
【００８８】
反応式Ａ
【化１８】
2009538360.tif 000041
ａ）Ｒ３ａＲ６ａＣ６Ｈ３Ｂ（ＯＨ）２、Ｐｄ（Ｐｈ３Ｐ）４、トルエン／１０％Ｎａ２ＣＯ３  ｂ）ｓ−ＢｕＬｉ、ＤＭＦ／トルエン  ｃ）ＮａＢＨ４／ＭｅＯＨ  ｄ）４８％ＨＢｒ、還流  ｅ）ＰｈＣ＝ＮＣＨ２ＣＯ２ｔＢｕ、キラル触媒、２−ｔｅｒｔ−ブチルイミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジメチル−ペルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリン／ＴＨＦ  ｆ）ｉ．１５％クエン酸  ｉｉ、ＦｍｏｃＣｌ、Ｎａ２ＣＯ３／ＴＨＦ−Ｈ２Ｏ  ｇ）再結晶  ｈ）ＴＦＡ
【００８９】
反応式Ｂ
【化１９】
2009538360.tif 000042
ａ）ＮＢＳ、ＡＩＢＮ／ＣＣｌ４  ｂ）ＰｈＣ＝ＮＣＨ２ＣＯ２ｔＢｕ、キラル触媒、２−ｔｅｒｔ−ブチルイミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジメチル−ペルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリン／ＴＨＦ  ｃ）ｉ．１５％クエン酸  ｉｉ．ＦｍｏｃＣｌ、Ｎａ２ＣＯ３／ＴＨＦ−Ｈ２Ｏ  ｄ）再結晶  ｅ）Ｒ３ａＲ６ａＨ３Ｂ（ＯＨ）２、Ｐｄ（Ｐｈ３Ｐ）４／トルエン−１０％Ｎａ２ＣＯ３  ｆ）ＴＦＡ
【００９０】
化合物ｉｘは、オキシ臭化リンで処理することによってヒドロキシ複素環ｘｉｖから調製することができる（反応式Ｃ）。
反応式Ｃ
【化２０】
2009538360.tif 000043
【００９１】
中間体ｉｘの別の合成は、亜鉛−銅カップリングによってｘｖであるメチル−３−ヨード−アラネートとｉとを使用する（反応式Ｄ）。
反応式Ｄ
【化２１】
2009538360.tif 000044
【００９２】
アリールピリミジニルメチルブロミドｘｘｉｉｉ（Ｘ２、Ｘ３＝Ｎ、Ｘ１、Ｘ４＝ＣＲ４ａ）は、アリールニトリルｘｖから調製することができる（反応式Ｅ）。
反応式Ｅ
【化２２】
2009538360.tif 000045
【００９３】
ヒドロキシピリミジンｘｖｉは、ニトリルをヒドロキシルアミン塩酸塩で処理することによってｘｖから調製する。ピリミジンｘｖｉｉはｘｖｉの水素添加から生じる。ｘｖｉｉのエノールメチレンマロネート（ｅｎｏｌｍｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｍａｌｏｎａｔｅ）ｘｖｉｉｉとの縮合によって、ピリミジンｘｉｘが生じ、これはオキシ塩化リンによる塩素化によってｘｘが生じる。接触水素化を介する脱ハロゲン化によってｘｘｉがもたらされ、ＤｉＢＡｌによる還元によってアルコールｘｘｉｉが生じる。アルコールをオキシ臭化リンで処理することによって、不安定な臭化物ｘｘｉｉｉが生じ、これは保護アミノ酸ｖｉを生じさせるために、反応式Ａにおけるように即座に使用しなくてはならない。
【００９４】
式ＩＶａの化合物（Ｒ７＝Ｍｅ）は、カパディアの方法（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６６  １９０３（２００１））によってオキサゾリジンｘｘｉｖから調製される（反応式Ｆ）。したがって、ヘキサメチルジシラザンカリウムまたは他の強力な塩基を使用したｘｘｉｖのｖによるアルキル化は、ｘｘｖをもたらす。ｘｘｖの強酸加水分解とそれに続くアミンの保護（Ｆｍｏｃ−ＣｌまたはＦｍｏｃ−ＯＳｕなどによる）によって、式ＩＶａのタイプの化合物が生じる。
反応式Ｆ
【化２３】
2009538360.tif 000046
【００９５】
以下の実施例は、本明細書中に記載しおよび特許請求する本発明の様々な方法および具体的な実施態様を例示する。当業者は、該実施例は本発明の範囲を限定するものではなく、むしろ当業者が本発明の実施態様を実行するために導くのに役立つと認識すべきである。別の実施態様が意図され、これは本発明の明細書および特許請求の範囲によって包含される。
【実施例】
【００９６】
（実施例１）
ペプチドの同時固相ペプチド合成
ＭＰＳ−３９６ペプチド合成機で同時自動合成プロトコルを用いたペプチド鎖伸長の前に、バッチ式で下記の手動手順を用いて、Ｘａａ１０位およびＸａａ１１位にアミノ酸を含有するジペプチジル樹脂を調製した。手動カップリングにおいて使用するＮ−α−Ｆｍｏｃ保護ビフェニルアラニンまたはフェニル−ヘテロアリール−アラニン誘導体の合成を、上記の一般的実験および実施例１０〜１９に記載する。
【００９７】
いくつかの類似体を合成するのに十分な９−Ｆｍｏｃ−アミノキサンテン−３−イルオキシ−メリフィールド樹脂（Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂、ローディング：０．５〜０．７ｍｍｏｌ／ｇ）の量を、ＤＭＦによる洗浄（４×１０ｍＬ／ｇ、５分間）によって膨張させた。次いで、Ｆｍｏｃ基を、それぞれ５分および１５分間、２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液（１０ｍＬ／ｇ）で２回処理することによって除去した。樹脂をＤＭＦ（４×１０ｍＬ／ｇ）およびＮＭＰ（４×１０ｍＬ／ｇ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ−Ｌ−４−（２’−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン−ＯＨ（ＨＣｌ塩）（１．１当量）（または式ＩＶａで表される任意の他のアミノ酸）と、ＰｙＢＯＰ（１．１当量）と、ＤＩＥＡ（３．３当量）とをＮＭＰに溶かした０．５Ｍ溶液を樹脂に加えた。次いで、樹脂を１６〜２４時間振盪しボルテックスした。定性的ニンヒドリン試験を用いてカップリング完了をモニターした。樹脂を排出し、ＮＭＰ（３×１０ｍＬ／ｇ）およびＤＭＦ（３×１０ｍＬ／ｇ）で洗浄し、１０％無水酢酸のＤＣＭ（１０ｍＬ／ｇ）溶液で９０分間処理した。ＤＣＭ洗浄（４×１０ｍＬ／ｇ）後に、ＤＩＣ／ＨＯＡｔが媒介する第２の手動カップリングサイクルを、２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液によるＦｍｏｃ基の除去から開始し、カップリング工程において式ＩＩによって示されたようなＦｍｏｃ保護ビフェニルアラニン類似体を使用して次いで行った。この合成反応式によって、所望のＦｍｏｃ保護ジペプチジル−Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂が生成した。
【００９８】
次いで、一連の設計した類似体合成に必要なこのようなジペプチジル−樹脂を、下記の方法で１回の操作当たり９６ペプチドまでのＭＰＳ自動合成において使用した。ジペプチジル−樹脂を、リアクターのウェル毎に樹脂０．０１〜０．０２５ｍｍｏｌ（２０〜５０ｍｇ）に相当する容量で、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｔｅｃｈ  ＭＰＳ３９６合成機の９６ウェルリアクター中に、ジクロロメタン／ＤＭＦ（６０：４０）中の懸濁液として添加した。リアクターを装置上に置き、排出した。次いで、ウェルをＤＭＦ（０．５〜１．０ｍＬ、３×２ｍｉｎ）で洗浄し、あらかじめ設定した配列合成表によって決定されているそれぞれのペプチド配列をアセンブルするのに必要な数の自動カップリングサイクルを行った。
【００９９】
９６の化合物の典型的な０．０２５ｍｍｏｌ／ウェルの同時合成に使用する詳細な段階的合成プロトコルを下記に説明する。このプロトコルは、個々の操作毎に１２〜９６の範囲の類似体のアレイの同時合成に適用される。一般的な合成プロトコルを、反応式１に示す。
反応式１
ＧＬＰ−１受容体モジュレーターペプチド類似体の自動合成
【化２４】
2009538360.tif 000047
【０１００】
合成を開始する前に、下記の試薬溶液を調製し、必要に応じ装置上に置いた：１．５Ｍ（１５％）ピペリジンのＤＭＦ溶液；０．５Ｍ ＤＩＥＡのＮＭＰ溶液；ＮＭＰ中の０．３６Ｍ ＤＩＣ；ＤＭＦ中の１Ｍ（１０％）無水酢酸。必要とされるＦｍｏｃ保護アミノ酸を、ＨＯＡｔ／ＮＭＰ ０．３６Ｍに溶かした０．３６Ｍ溶液として調製し、３２位のアミノ酸ラック中の適当な位置に置いた。
【０１０１】
上記で調製したＦｍｏｃ保護ジペプチジル−樹脂を、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンで処理（１．０ｍＬ；１×５分；１×１５分）することによって脱保護した。次いで、樹脂をＮＭＰで洗浄した（８×１．０ｍＬ）。
【０１０２】
次のアミノ酸（通常、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨまたは他のＦｍｏｃ−アミノ酸、必要であれば適当なオルトゴナル保護を用いる）のカップリングは、全てのウェルに、適当なＦｍｏｃ−アミノ酸（０．０７５ｍｍｏｌ、３．０当量）と、ＨＣＴＵ（０．０７５ｍｍｏｌ、３．０当量）と、ＤＩＥＡ（０．１５ｍｍｏｌ、６．０当量）とをＮＭＰ（１ｍＬ）に溶かした溶液を手動操作により添加することによって行われた。カップリングを３時間進行させた。窒素圧（３〜５ｐｓｉ）によるリアクター排出の後、ウェルをＮＭＰで洗浄した（４×１．０ｍＬ）。
【０１０３】
次のカップリングサイクルは、上記のようにＦｍｏｃ基の除去で開始し、この位置で所望の配列置換によって必要とされるＦｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨまたは異なるＦｍｏｃ−アミノ酸のカップリングを伴った。Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨのために説明したものと同じ方法でカップリングが行われた。次のカップリング工程は同様に行われ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨまたは他の選択されたＦｍｏｃ−アミノ酸のいずれかを、必要に応じてこの配列位置に組み込んだ。
【０１０４】
次のＦｍｏｃ−アミノ酸（例えば、Ｆｍｏｃ−α−メチル−Ｐｈｅ−ＯＨまたはその類似体）は、下記によりカップリングした。通常の方法によるＦｍｏｃ脱保護の後に、Ｆｍｏｃ−アミノ酸（１〜５当量）、ＨＯＡｔ（１〜５当量）およびＤＩＣ（１〜５当量）を、ＮＭＰ（１．０ｍＬ）中の溶液として手動操作で加え、カップリングを１６〜２４時間継続させた。この場合は、カップリングは繰り返さなかった。通常のカップリング後の洗浄の後に、ペプチジル−樹脂を本明細書に記載するように無水酢酸でキャッピングした。
【０１０５】
次のカップリング工程は、この位置での配列置換による必要に応じて、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨまたは置換類似体を伴った。Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨまたは置換類似体の１０当量を使用し、カップリングが１６時間継続し、使用したカップリング試薬がＮＭＰ中のＤＩＣ／ＨＯＡｔであることを除いては、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨおよびその類似体の最初のＭＰＳカップリングのために説明したようにカップリングを行った。通常のカップリング後の洗浄の後に、ペプチジル−樹脂を、ＤＣＭ中の１０％無水酢酸でキャッピングした（１×１ｍＬ×６０分）。
【０１０６】
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨのカップリングで説明したものと同じカップリングプロトコルを用い、次の３個のアミノ酸残基のために繰り返した。所望の１１ｍｅｒペプチド類似体の配列アセンブリを完成させるために、上記の項に記載したＦｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ残基として、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨをカップリングした。特定の配列位置で必要とされる市販および非市販の非天然アミノ酸のカップリングのために、６位（Ｘａａ６）の新規なアミノ酸のために上記したものと同様の１回のカップリングプロトコルを使用した。
【０１０７】
最後に、Ｆｍｏｃ基を上記のようにＤＭＦ中の２０％ピペリジンで除去し、ペプチジル−樹脂をＤＭＦ（４×１．０ｍＬ）およびＤＣＭ（４×１．０ｍＬ）で洗浄した。次いで、１０〜１５分間定圧の窒素ガス（５ｐｓｉ）をかけることにより、これらをリアクターブロック上で乾燥した。
【０１０８】
切断／脱保護
下記のようにＴＦＡ切断混合物で処理することによって、所望のペプチドをそのそれぞれのペプチジル−樹脂から切断／脱保護した。ＴＦＡ／ＤＣＭ／トリ−イソプロピルシラン（７０：２８：２）（１．０ｍＬ）の溶液を、リアクターブロック中の各ウェルに加え、次いで１０分間ボルテックスした。これをさらに２回繰り返し、ウェルからのＴＦＡ溶液を、リアクターの底にある対応する９６−バイアルブロック中に配置されている風袋計量済のバイアル中に陽圧によって回収した。バイアルにふたをして、さらに９０分間穏やかにボルテックスした。バイアルのふたを取って、ＳｐｅｅｄＶａｃ（商標）（Ｓａｖａｎｔ  ）中で約０．２ｍＬの容量に濃縮した。次いで、ジイソプロピルエーテル（３ｍＬ）を加えることにより粗ペプチドを沈殿させ、短時間ボルテックスした。沈殿物を遠心分離によりペレット化し、上清をデカントした。バイアルをＳｐｅｅｄＶａｃ（商標）（Ｓａｖａｎｔ）内で乾燥し、通常＞１００％の収率（２０〜４０ｍｇ）で粗ペプチドを得た。粗ペプチドを、下記の通り分取ＨＰＬＣによる精製のために０．６％水酸化アンモニウム２ｍＬ中に直接溶解した。
【０１０９】
粗ペプチドの分取ＨＰＬＣによる精製
Ｗａｔｅｒｓ  Ｍｏｄｅｌ４０００またはＳｈｉｍａｄｚｕ  Ｍｏｄｅｌ  ＬＣ−８Ａ液体クロマトグラフで分取ＨＰＬＣを行った。粗ペプチドの各溶液を、ＹＭＣ  Ｓ５ＯＤＳ（２０×１００ｍｍ）カラム中に注入し、両方とも０．１％ＴＦＡで緩衝した水中のＭｅＣＮの直線グラジエントを用いて溶出した。使用した典型的なグラジエントは、１５分に亘る０．１％ＴＦＡ／水中の２０％〜５０％の０．１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮであり、１４ｍＬ／分の流量で、流出液を２２０ｎｍでＵＶ検出することを伴った。溶出した所望の生成物は、通常１０〜１１分後に不純物からよく分離し、フラクションコレクター上で１つの１０〜１５ｍＬ画分で通常回収した。所望のペプチドを、ＨＰＬＣ画分の凍結乾燥によってアモルファスの白色粉末として得た。
【０１１０】
精製ペプチドのＨＰＬＣ分析
上記のように分取ＨＰＬＣによる精製後、各ペプチドを分析用ＲＰ−ＨＰＬＣによって、ＳＣＬ−１０Ａシステムコントローラー、ＳＩＬ−１０Ａ自動注入装置、ＳＰＤ１０ＡＶもしくはＳＰＤ−Ｍ６Ａ  ＵＶ／ＶＩＳ検出器、またはＳＰＤ−Ｍ１０Ａダイオードアレイ検出器で構成されるＳｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−１０ＡＤあるいはＬＣ−１０ＡＴ分析用ＨＰＬＣシステムで分析した。ＹＭＣ  ＯＤＳ  Ｓ３（４．６×５０ｍｍ）カラムを使用し、下記のグラジエントの１つを用いて溶出を行った。８分に亘り１０〜７０％Ｂ／Ａ、２．５ｍＬ／分（方法Ａ）。８分に亘り５〜８０％Ｂ／Ａ、２．５ｍＬ／分（方法Ｂ）。８分に亘り５〜７０％Ｂ／Ａ、２．５ｍＬ／分（方法Ｃ）。８分に亘り２５〜７５％Ｂ／Ａ、２．５ｍＬ／分（方法Ｄ）。８分に亘り２０〜７５％Ｂ／Ａ、２．５ｍＬ／分（方法Ｅ）。８分に亘り１５〜７０％Ｂ／Ａ、２．５ｍＬ／分（方法Ｆ）。８分に亘り１０〜９０％Ｂ／Ａ、２．５ｍＬ／分。（方法Ｇ）、８分に亘り２０〜６５％Ｂ／Ａ、２．５ｍＬ／分（方法Ｈ）。８分に亘り５〜９０％Ｂ／Ａ、２．０ｍＬ／分（方法Ｉ）。８分に亘り５〜９０％Ｂ／Ａ、２．５ｍＬ／分（方法Ｊ）。８分に亘り２０〜８０％Ｂ／Ａ、２．５ｍＬ／分（方法Ｋ）。８分に亘り１０〜１００％Ｂ／Ａ、２．５ｍＬ／分（方法Ｌ）。８分に亘り１０〜７５％Ｂ／Ａ、２．５ｍＬ／分（方法Ｍ）。移動相Ａ：０．１％ＴＦＡ／水、移動相Ｂ：０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル。純度は典型的には＞９０％であった。
【０１１１】
質量分析法による特性決定
各ペプチドをエレクトロスプレー質量分析法（ＥＳ−ＭＳ）によって、フローインジェクションまたはＬＣ／ＭＳモードで特性決定した。Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＳＳＱ７０００シングル４重極質量分析計（ＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を全ての分析において、正イオンおよび負イオンエレクトロスプレーモードで使用した。１．０秒のスキャン時間で、３００〜２２００ａｍｕ質量範囲に亘って完全なスキャンデータを得た。４重極は、単位分割で操作した。フローインジェクション分析のために、質量分析計をＷａｔｅｒｓ  ６１６ＨＰＬＣポンプ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｒｐ．社製、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）に接続し、ＨＴＳ  ＰＡＬオートサンプラー（ＣＴＣ  Ａｎａｌｙｔｉｃｓ、Ｚｗｉｎｇｅｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を備えた。０．１％水酸化アンモニウムと共に５０：５０水：アセトニトリルを含有する移動相に、試料を注入した。分析のための流量は、０．４２ｍＬ／分であり、注入容量は６μｌであった。ＴｈｅｒｍｏＳｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  Ｃｏｎｓｔａｍｅｔｒｉｃ３５００液体クロマトグラフ（ＴｈｅｒｍｏＳｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）およびＨＴＳ  ＰＡＬオートサンプラーを、ＬＣ／ＭＳ分析のために使用した。Ｌｕｎａ  Ｃ１８、５ミクロンカラム（２×３０ｍｍ）（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ）を用いて、クロマトグラフ分離を行った。分析のための流量は、１．０ｍＬ／分であり、エレクトロスプレーインターフェースへの流量が４００μｌ／分となるようにカラム流出液を分離した。４分に亘る０％〜１００％Ｂ／Ａの直線グラジエントを行い、移動相Ａは９８：２水：アセトニトリルおよび酢酸アンモニウム１０ｍＭ、ならびに移動相Ｂは１０：９０水：アセトニトリルおよび酢酸アンモニウム１０ｍＭであった。ＵＶ反応を２２０ｎｍでモニターした。２００μｌの５０：５０Ｈ２Ｏ：ＭｅＣＮ（０．０５％ＴＦＡ）に試料を溶解した。注入容量は５μｌであった。
【０１１２】
全ての場合において、実験的に測定した分子量は、計算したモノアイソトピック分子量の０．５ダルトン以内であった。
【０１１３】
（実施例２）
Ａ．Ｎ−アシル化ペプチド類似体合成の基本手順（反応式２）
Ｎ−アシル化ペプチド類似体の合成を、反応式２に示すように本明細書に記載するように調製した１１ｍｅｒ保護ペプチジル−樹脂中間体（１）（０．０１５ｍｍｏｌ）から開始した。本明細書に記載する手順を使用してＦｍｏｃ基を除去し、本明細書に記載されている一般的方法で説明するカップリングプロトコルを用いて、得られた樹脂中間体２を、適切なＦｍｏｃ保護アミノ酸またはカルボン酸とカップリングさせた。適当な無水物が利用できる場合は、ＮＭＰ中の無水物５当量を使用してＮ−アシル化を行った。本明細書に記載する一般的方法によって、得られたＮ−アシル化１１ｍｅｒ類似体（３）を切断／脱保護し、分取ＨＰＬＣにより精製した。
【０１１４】
反応式２
残基#１置換／誘導体化ペプチド類似体の合成
【化２５】
2009538360.tif 000048
【０１１５】
Ｂ．ペプチド類似体のＮ−カルバメート誘導体合成の基本手順
ペプチド類似体のＮ−カルバメート誘導体の合成は、本明細書に記載のように調製された保護ペプチジル−樹脂中間体（１）（０．０１５ｍｍｏｌ）から開始することができる。本明細書に記載する手順を使用してＦｍｏｃ基を除去し、得られた樹脂中間体２を、第三級アミンなどの適当な塩基の存在下で適切なクロロギ酸アルキル／アリールと反応させ、あるいはジカーボネートまたは活性カーボネート（ｐ−ニトロフェニルまたはフェニルまたはヒドロキシ−スクシンイミジルカーボネートなど）と反応させる。
【０１１６】
Ｃ．ペプチド類似体のＮ−尿素誘導体合成の基本手順
ペプチド類似体（例えば、１１ｍｅｒ）のＮ−尿素誘導体の合成は、本明細書に記載のように調製された保護ペプチジル−樹脂中間体（１）（０．０２５ｍｍｏｌ）から開始することができる。本明細書に記載する手順を使用してＦｍｏｃ基を除去し、得られた樹脂中間体２を、例えば、Ｋ．ＢｕｒｇｅｓｓらによるＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９７，１１９，１５５６〜１５６４に記載の通り調製された適切なイソシアネートと反応させることができる。あるいは、樹脂中間体２は、適切なカルバモイルクロリドと反応させることができる。同様に、１０ｍｅｒペプチド類似体のＮ−尿素誘導体は、保護１０ｍｅｒペプチジル−樹脂中間体から開始し、Ｆｍｏｃ除去、得られたペプチジル−樹脂中間体と適切なイソシアネートまたはカルバモイルクロリドとの反応によって調製することができる。
【０１１７】
Ｄ．ペプチド類似体のＮ−スルホンアミド合成の基本手順
ペプチド類似体（例えば、１１ｍｅｒ）のＮ−スルホンアミドの合成は、本明細書に記載のように調製された保護ペプチジル−樹脂中間体（１）（０．０２５ｍｍｏｌ）から開始することができる。本明細書に記載する手順を使用してＦｍｏｃ基を除去し、得られた樹脂中間体２を適切なスルホニルクロリドと反応させることができる。同様に、１０ｍｅｒペプチド類似体のＮ−スルホンアミドは、保護１０ｍｅｒペプチジル−樹脂中間体から開始して、Ｆｍｏｃ除去、得られたペプチジル−樹脂中間体と適切なスルホニルクロリドとの反応によって調製することができる。
【０１１８】
Ｅ．ペプチド類似体のＮ−スルファミド誘導体合成の基本手順
ペプチド類似体（例えば、１１ｍｅｒ）のＮ−スルホニル尿素誘導体の合成は、本明細書に記載のように調製されたペプチジル−樹脂中間体（１）（０．０２５ｍｍｏｌ）から開始することができる。本明細書に記載する手順を使用してＦｍｏｃ基を除去し、得られた樹脂中間体２を適切なスルファモイルクロリドＲ４Ｒ５Ｎ−ＳＯ２−Ｃｌと反応させ、スルファミド中間体を得る（例えば、Ｐ．ＤａｖｅｒｎらのＪ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．２，１９９４（２），３８１〜３８７を参照されたい）。同様に、１０ｍｅｒペプチド類似体のＮ−スルファミド誘導体は、保護１０ｍｅｒペプチジル−樹脂中間体から開始して、Ｆｍｏｃの除去、得られたペプチジル−樹脂中間体と適切なスルファモイルクロリドＲ４Ｒ５Ｎ−ＳＯ２−Ｃｌとの反応によって調製することができる。
【０１１９】
（実施例３）
Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｏｄｅｌ ４３３Ａペプチド合成機を使用したペプチド類似体の固相合成
下記は、グレードアップしたＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｍｏｄｅｌ ４３３Ａペプチド合成機を使用した、典型的なペプチド類似体の固相合成のための概要である。合成機のグレードアップしたハードウェアおよびソフトウェアによって、カップリングのフィードバック制御を伴うＦｍｏｃ脱保護工程の伝導率モニタリングが可能となった。このプロトコルは、０．０５〜１．０ｍｍｏｌの合成スケール範囲を可能にした。
【０１２０】
２種類の非天然Ｃ末端アミノ酸の取込みは、ペプチド類似体の同時合成と関連して上記で説明した。このようなＦｍｏｃ保護ジペプチジル樹脂を、このＡＢＩ合成で使用した。Ｆｍｏｃ保護ジペプチジル−樹脂（０．１ｍｍｏｌ）を、装置上の適当な大きさの容器中に入れ、ＮＭＰで６回洗浄し、２２％ピペリジン／ＮＭＰによる２回の処理（それぞれ２分および８分）によって脱保護した。モニタリングオプションの条件が満足されるまで、１回または２回のさらなるモニターされている脱保護工程を行った（最後２回の伝導率に基づいた脱保護ピーク間の差異が１０％未満）。脱保護の総時間は１０〜１２分であった。脱保護されたジペプチジル−樹脂を、ＮＭＰで６回洗浄し、次いで次のアミノ酸とカップリングさせた。この手順を、次の工程において使用する例によって例示する。
【０１２１】
したがって、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨを、下記の方法を用いて次にカップリングさせた。Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（１ｍｍｏｌ、１０当量）を、ＮＭＰ ２ｍＬで溶解し、ＤＭＦ（２．２ｍＬ）中のＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ０．４５ＭとＤＩＥＡ／ＮＭＰ ２Ｍ（１ｍＬ）とをそれに続いて添加することによって活性化させた。次いで、活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸の溶液を、反応容器に移し、脱保護工程からのフィードバックに応じてカップリングを３０〜６０分間進行させた。次いで、樹脂をＮＭＰで６回洗浄し、所望の配列のアセンブリを完成するために、上記のように８回のさらなる脱保護／カップリングサイクルを行った。続いて使用されたＦｍｏｃ−アミノ酸は、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−α−メチル−Ｐｈｅ（２−フルオロ）−ＯＨまたはその類似体、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｉｂ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨであった。最後に、Ｆｍｏｃ基を上記のようにＮＭＰ中の２２％ピペリジンで除去し、ペプチジル−樹脂をＮＭＰおよびＤＣＭで６回洗浄し、減圧下で乾燥した。
【０１２２】
あるいは、修飾したカップリングプロトコルを使用し、それに従ってＦｍｏｃ保護アミノ酸（０．２６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．５２ｍＬ）中のＨＯＡｔ０．５Ｍと、ＤＩＣ（４０μＬ）とを連続的に添加することによって活性化させ、これを手動操作で反応容器に移し、１４〜１８時間カップリングさせた。
【０１２３】
切断／脱保護
所望のペプチドを、ＴＦＡ／水／トリ−イソプロピルシラン（９６：２：２）（３．０ｍＬ）の溶液で２時間処理することによって、そのそれぞれのペプチジル−樹脂から切断／脱保護した。この樹脂を濾過し、ＴＦＡ（１．０ｍＬ）ですすぎ、混合したＴＦＡ濾液をＥｔ２Ｏ ３５ｍＬに加えた。得られた沈殿物を遠心分離によって回収し、最後に乾燥し粗ペプチド生成物２３２ｍｇを白色固体として得た。これを本明細書に記載する分取ＨＰＬＣによって精製した。使用したグラジエントは、４０分に亘る０．１％ＴＦＡ／水中の１５％〜４５％の０．１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮであった。純粋な生成物を含有する画分をプールし凍結乾燥し、純粋な生成物２８．４ｍｇ（回収率１８％）を得た。
【０１２４】
（実施例４）
式ＩＩ〜ＩＶおよびＩＩａ〜ＩＶａによって示されたＸａａ１０位およびＸａａ１１位でのビフェニルアラニン類似体の合成
Ｘａａ１０位およびＸａａ１１位残基が、式ＩＩ〜ＩＶおよびＩＩａ〜ＩＶａによって示された置換アミノ酸類似体（すなわちビフェニルアラニン類似体（Ｂｉｐ類似体）またはヘテロ−ビフェニルアラニン類似体）によって示されるそれらの類似体のために、ペプチド鎖へのそれらの組込みを下記の２種類のアプローチのうちの１つによって行った。
【０１２５】
アプローチＡ：固相鈴木縮合
アプローチＡにおいて、固相鈴木縮合を行い、標的ペプチドを得るためにその後の固相ペプチド合成を行うのに適切な方法で必要とされる修飾ビフェニルアラニンまたはヘテロ−ビフェニルアラニン残基を調製した。標的ペプチドにおけるＸａａ１１位のアミノ酸が、修飾ビフェニルアラニンまたはヘテロ−ビフェニルアラニン残基によって示されている場合、これは反応式３に示すように調製された。Ｂｏｃα−アミン保護基の除去後に、上記の項で説明したように複数のペプチド合成を用いて鎖伸長を続け、所望のペプチドまたはその誘導体を得た。修飾したビフェニルアラニンまたはヘテロ−ビフェニルアラニン類似体が、標的ペプチドのＸａａ１０位にある場合は、必要とされるアミノ酸を、反応式４において示されるように固体担体上の適切なジペプチドを使用して調製した。
【０１２６】
次いで、必要とされる修飾ビフェニルアラニンまたはヘテロ−ビフェニルアラニン誘導体を含有する得られたジペプチジルセグメントを用い、標的ペプチドまたはその誘導体の合成を行った。Ｘａａ１０位およびＸａａ１１位の両方が新規なビフェニルアラニンまたはヘテロ−ビフェニルアラニン残基を必要とする場合は、反応式６（下記）に示すように２種類の順次の固相鈴木反応を行った。
Ｘａａ１１位で式ＩＩ〜ＩＶおよびＩＩａ〜ＩＶａによって示されたアミノ酸を含有するＳｙｎｐｈａｓｅ（商標）ランタンの調製のための一般手順（鈴木カップリング）
【０１２７】
反応式３
【化２６】
2009538360.tif 000049
【０１２８】
一般手順Ａ
クノル(Knorr)結合（Ｂｏｃ−アミノ酸−樹脂）を介して、あるいはアミノ酸−クノル結合（Ｂｏｃ−ジペプチド−樹脂）を介して直接結合しているＮ−α−Ｂｏｃ−４−ヨードフェニルアラニン残基によって誘導体化されたＳｙｎｐｈａｓｅ（商標）ランタン（Ａシリーズ（０．０７５ｍｍｏｌ／ランタン））またはＤシリーズ（（０．０３５ｍｍｏｌ／ランタン）、Ｍｉｍｏｔｏｐｅｓ社製）を、スクリューキャップ付きの１３×１００ｍｍガラス製培養管中に入れた。（下記の手順はＤシリーズランタンのために使用した。同様の割合の反応剤をＡシリーズランタンに関わる反応に使用した。）アリール−またはヘテロアリール−ボロン酸（０．１４０ｍｍｏｌ、４当量）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド０．３０ｍｌで溶解した。
【０１２９】
リン酸カリウム（０．２８０ｍｍｏｌ、８当量、２Ｍ水溶液０．１４ｍｌ）、続いてテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）触媒４．０ｍｇ（約１０ｍｏｌ％、０．００３５ｍｍｏｌ）を含有するＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド溶液０．１０ｍｌを、アリール−またはヘテロアリール−ボロン酸溶液に添加した。得られた混合物を窒素流で覆い、反応容器のふたを密封し、オービタルシェーカー上に置いている間８０℃で１７〜２０時間保った。Ｂｏｃ基切断前に、ランタンを３×１ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドおよび３×１ｍｌのジクロロメタン（最低３分／洗浄サイクル）で洗浄した（下記の一般手順を参照されたい）。
【０１３０】
一般手順Ｂ
異なる触媒を用いる以外は、反応は一般手順Ａのように行われた。この手順のために、使用した触媒はジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）であった。Ｄシリーズランタンスケールの反応のために、約１０ｍｏｌ％（０．００３５ｍｏｌ）の触媒を使用した。
【０１３１】
Ｂｏｃ基切断のための手順
方法Ａ
（下記の手順は、Ｄシリーズランタン（０．０３５ｍｍｏｌ／ランタン）に適用する。同様の適切に計量した手順をＡシリーズランタン（０．０７５ｍｍｏｌ／ランタン）に使用した。）一般手順ＡまたはＢにおいて説明したように調製したＢｏｃ保護ランタンを、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル、２，６−ルチジンおよびジクロロメタン（容量で１：１：３）からなる試薬溶液０．５ｍｌで処理した。各１時間の２回の穏やかに撹拌しながらの試薬処理後に、４×１．０ｍｌのジクロロメタン、３×１．０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、および３×１．０ｍｌのジクロロメタンで、樹脂を洗浄した。次いでランタンに、ペプチド合成配列中の次のアシル化（カップリング反応）を行った。
【０１３２】
方法Ｂ
一般手順ＡまたはＢにおいて説明したように調製したＢｏｃ保護ランタンを、無水１，４−ジオキサン中の１ＮのＨＣｌ ０．５ｍｌで、穏やかに撹拌しながら室温で１時間処理した。ランタンを２×１．０ｍｌの１，４−ジオキサン、２×１．０ｍｌの１０％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンのＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド溶液（ｖｏｌ：ｖｏｌ）、３×１．０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、および３×１．０ｍｌのジクロロメタンで洗浄し、次のアシル化（カップリング反応）工程が可能な状態である遊離アミノ−ランタンを得た。
【０１３３】
（実施例６）
Ｘａａ１０位に修飾したビフェニルアラニン残基を含有するランタンの調製のための一般手順
鈴木カップリングのために上記（ＡまたはＢ）で説明した基本手順を用いて、反応式４に示す通りＳｙｎｐｈａｓｅ（商標）ランタンに（Ｘａａ１１位で）結合しているアミノ酸で開始して、Ｘａａ１０位に修飾Ｐｈｅを含有する必要とされるジペプチジルランタンを得た。
【０１３４】
反応式４
【化２７】
2009538360.tif 000050
【０１３５】
（実施例７）
Ｘａａ１０位およびＸａａ１１位の両方において式ＩＩ〜ＩＶおよびＩＩａ〜ＩＶａにより示されるアミノ酸を含有するランタンを調製するための基本手順
Ｘａａ１１位が修飾された類似体のために上記で説明した手順（反応式１）を使用し、鈴木カップリング手順を２回連続して行うことにより、下記の反応式６で例示するように、Ｘａａ１０位およびＸａａ１１位の両方において修飾フェニルアラニン残基を含有するジペプチジルランタンが生成した。
【０１３６】
（実施例８）
Ｓｙｎｐｈａｓｅ（商標）ランタン上でのアシル化／ペプチド伸長のための基本手順
Ｆｍｏｃ脱保護のための手順
ＤシリーズのＳｙｎＰｈａｓｅ（商標）ランタン（０．０３５ｍｍｏｌ／ランタンローディング）を、８：２Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ピペリジン（ｖｏｌ：ｖｏｌ）０．５ｍｌに加えた。穏やかな撹拌を行った。１時間後に、ランタンを３×１．０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよび３×１．０ｍｌのジクロロメタンで洗浄し、ランタンに少なくとも３分の浸漬／洗浄を行った。
【０１３７】
アシル化／アミノ酸カップリングのための手順（反応式５）
側鎖およびα−アミン保護アミノ酸（０．１０５ｍｍｏｌ）を、１：１Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ジクロロメタン０．５ｍｌで溶解した。この溶液に、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（０．１０５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．３１５ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（０．１０５ｍｍｏｌ）を加えた。アミノ酸溶液を１０分間静置し、その後α−アミン脱保護ペプチド（０．０３５ｍｍｏｌ／ランタン）を含有するＤシリーズランタンを、溶液に加えた。バイアルのふたを閉め、１６〜２０時間穏やかに撹拌した。次いで、ランタンを３×１．０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよび３×１．０ｍｌのジクロロメタンで洗浄し、ランタンに３〜５分の浸漬／洗浄サイクルを行った。
【０１３８】
反応式５
【化２８】
2009538360.tif 000051
【０１３９】
反応式６
【化２９】
2009538360.tif 000052
【０１４０】
（実施例９）
フラグメント縮合を介するペプチド調製のための一般手順
アプローチＡにおいて、実施例７において説明するようにＸａａ１０位およびＸａａ１１位において、式ＩＩ〜ＩＶおよびＩＩａ〜ＩＶａによって表される必要とされるアミノ酸を調製するために、固相鈴木縮合を行った。Ｘａａ１０位アミノ酸からのＢｏｃα−アミン保護基の除去後に、ジペプチドを担体から切断した。次いで、ジペプチドを、側鎖が完全に保護された９個のアミノ酸ペプチドにカップリングさせた（下を参照されたい）。それに続く側鎖の脱保護および精製によって、所望のペプチド生成物を得た。上記の手順の変形として、Ｘａａ１０位およびＸａａ１１位のアミノ酸が組み込まれたジペプチドを、反応式１０Ｂにおいて説明するように固体担体上にある間に、側鎖が完全に保護された９個のアミノ酸ペプチドにカップリングしてもよい。
【０１４１】
アプローチＡ：溶相フラグメント縮合
アプローチＡにおいて、（実施例７において説明するように）固相鈴木縮合およびアシル化を行い、Ｓｙｎｐｈａｓｅ（商標）ランタンに結合し、Ｎ末端α−アミンがＢｏｃ保護またはＦｍｏｃ保護された所望のジペプチドを調製した。ジペプチドを、酸性条件下でランタン担体から切断した。Ｂｏｃ保護Ｎ末端α−アミンの場合、酸性切断によって、反応式７に示されるように同時のα−アミンの脱保護をもたらし、これらを精製するか、あるいは直接フラグメントカップリング配列に組み込んだ。
【０１４２】
反応式８に示されるように、Ｆｍｏｃ保護Ｎ末端α−アミンを含有するジペプチドを、酸性条件下で切断し、Ｎ末端α−アミンを溶液中で脱保護した。これらのジペプチドを精製し、次いでフラグメントカップリング配列に組み込んだ。
【０１４３】
Ｓｙｎｐｈａｓｅ（商標）ランタンからのジペプチドの切断のための手順
手順Ａ（Ｂｏｃ保護ジペプチド、反応式７を参照されたい）
ＤシリーズＳｙｎｐｈａｓｅ（商標）ランタンを、１ドラムガラス製バイアル中に置いた。１：１トリフルオロ酢酸／ジクロロメタンの溶液（０．５ｍＬ）をバイアルに加えた。バイアルのふたをして、オービタルシェーカー（１００ｒｐｍ）上で２時間穏やかに撹拌した。切断溶液を新しいバイアルに移し、さらなる１：１トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン０．５ｍＬをランタンに加えた。再びバイアルのふたをして、オービタルシェーカー（１００ｒｐｍ）上で２時間穏やかに撹拌した。第２の切断溶液を第１の溶液に加え、ランタンをジクロロメタンですすいだ。リンス液を切断溶液に加え、溶媒を蒸発し、α−アミンのＴＦＡ塩としてジペプチドを得た。
【０１４４】
反応式７
【化３０】
2009538360.tif 000053
【０１４５】
手順Ｂ（Ｆｍｏｃ保護ジペプチド、反応式８を参照されたい）
上記の手順Ａにおけるように、Ｆｍｏｃ保護ジペプチドをＳｙｎｐｈａｓｅ（商標）ランタンから切断した。ランタンをジクロロメタンですすいで、混合したリンス液／切断溶液から溶媒を蒸発した。（１ドラムバイアル中の）得られた残渣に、８：２ ジメチルホルムアミド／ピペリジン（ｖｏｌ：ｖｏｌ）０．４０ｍＬを加えた。バイアルにふたをして、４５分間反応させた。残りの溶媒を蒸発し、得られた生成物をＣ−１８カラムおよびＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／ＴＦＡ溶媒系を使用してＨＰＬＣによって精製し、（溶媒蒸発後に）α−アミンのＴＦＡ塩としてジペプチドを得た。
【０１４６】
反応式８
【化３１】
2009538360.tif 000054
【０１４７】
側鎖保護９ｍｅｒペプチドＣ末端カルボン酸の固相合成のための手順（反応式９Ａ）
Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（５当量）と、０．５ＭのＨＯＡｔ／ＤＭＦ（５当量）と、ＤＩＣ（５当量）とをＮＭＰに溶かした溶液（５ｍＬ）を、（Ｌ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−２−クロロトリチル樹脂（３．０ｇ、２．１６ｍｍｏｌ）と共に室温で１８時間ボルテックスした。ＮＭＰによる数回の洗浄後、１．５Ｍのピペリジン／ＤＭＦで２回処理（５分および１０分）することによってＦｍｏｃ基を除去した。これらのカップリングおよび脱保護工程を７回繰り返し、所望の配列をアセンブルしたが、それらのカップリングのために１．１当量および１．５当量のＦｍｏｃ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ（２−Ｒ−６−Ｒ”）−ＯＨおよびＢｏｃ−（Ｌ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨをそれぞれ使用し、ＨＡＴＵ／ＨＯＡｔおよびＤＩＥＡ（４当量）を、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨを（Ｓ）−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ（２−Ｒ−６−Ｒ”）−ペプチジル−樹脂にカップリングするために使用した。
【０１４８】
アセンブリ完成と共に、ペプチジル−樹脂をＤＣＭで洗浄し、次いで、ＤＣＭ／ＡｃＯＨ／ＴＦＥ（８：１：１、ｖ：ｖ：ｖ）で室温にて１時間処理することによって、保護９ｍｅｒペプチドＣ末端カルボン酸を樹脂から切り出した。樹脂を濾過し、濾液が乾燥するまで蒸発し、ＡｃＣＮ／水（２：１）に再溶解し凍結乾燥し（２回）、８１％純粋な生成物２．７７７ｇを得て、さらなる精製をせずにこれをそれに続くフラグメントカップリング工程に使用した。
【０１４９】
反応式９Ａ
【化３２】
2009538360.tif 000055
【０１５０】
側鎖保護Ｎ−メトキシカルボニル９ｍｅｒペプチドＣ末端カルボン酸の固相合成のための手順（反応式９Ｂ）
Ｎ−Ｆｍｏｃ側鎖保護８ｍｅｒペプチジル−（ｏ−Ｃｌ）−トリチル樹脂（３．５ｍｍｏｌ）を上記のように調製した（反応式９Ａ）。Ｆｍｏｃ除去およびＤＭＦ洗浄の後に、ペプチジル−樹脂（３．５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（９．８ｍＬ、５．３３ｍｍｏｌ）中のＨＯＡｔ０．５４６Ｍ中のＮ−α−メチルオキシカルボニル−Ｎ−ｉｍ−トリチル−Ｌ−ヒスチジン（２．４ｇ、５．３３ｍｍｏｌ）で処理し、その後ＤＭＦ（１０ｍＬ）およびＤＩＣ（０．６３３ｍＬ、５．３３ｍｍｏｌ）を加えた。７２時間撹拌した後、Ｎ−誘導体化９ｍｅｒペプチジル−樹脂をＤＭＦ（４×５０ｍＬ）およびＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で洗浄し、保護９ｍｅｒペプチドＣ末端カルボン酸を、室温で３時間のＤＣＭ／ＡｃＯＨ／ＴＦＥ（８：１：１、ｖ：ｖ：ｖ）で処理することによって樹脂から切り出した。樹脂を濾過し、濾液を乾燥するまで蒸発し、ＡｃＣＮ／水（１：１．４）に再溶解し、凍結乾燥し（２回）、７１％純粋な生成物４．０５ｇを得て、さらなる精製をせずにこれをそれに続くフラグメントカップリング工程に使用した。
【０１５１】
反応式９Ｂ
【化３３】
2009538360.tif 000056
【０１５２】
溶相フラグメントカップリング反応のための手順
これらの反応は、１ドラムバイアル中の単一の化合物フォーマット中と、２ｍｌ ９６ウェルプレート中の化合物の並行配列中との両方で行った。（反応式１０に示す）以下の説明は、単一の化合物の場合に適用するが、９６ウェルプレート中で行われる反応においても完全に同様である。
【０１５３】
ジペプチドのＴＦＡ塩（０．０１ｍｍｏｌ）を、１．５ｍｌガラスバイアル中に０．５％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを含有するＴＨＦ ０．２５ｍｌに溶解した。マクロ孔質カーボネート樹脂（ＭＰ−カーボネート、０．０３ｍｍｏｌ、Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を、バイアルに加えた。バイアルにふたをして、室温で２時間撹拌した。溶液を濾過し、過剰な溶媒を蒸発によって除去した。
【０１５４】
側鎖保護９ｍｅｒペプチドＣ末端カルボン酸（０．００８ｍｍｏｌ）およびＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ、０．００８ｍｍｏｌ）を含有する９：１クロロホルム／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの溶液 ０．１５ｍｌを、ジペプチドアミンを含有するバイアルに加えた。ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ、０．０８ｍｍｏｌ）を、９：１クロロホルム／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド ０．０５ｍｌの溶液に加えた。バイアルにふたをして、反応物をオービタルシェーカー上で室温にて１６時間撹拌した。残りの溶媒をバイアルから蒸発させた。
【０１５５】
１１ｍｅｒペプチド側鎖およびＮ末端α−アミンを、９７．５：２．５トリフルオロ酢酸／トリイソプロピルシラン（ＴＦＡ／ＴＩＳ） ０．４０ｍｌによって１時間に亘り脱保護した。残りの溶媒を蒸発させ、次いで１１ｍｅｒペプチド生成物を、ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／ＴＦＡ溶媒系を使用し、所望の生成物塊の検出による流出液の回収を開始させて、ＨＰＬＣによって精製した。
【０１５６】
反応式１０Ａ
【化３４】
2009538360.tif 000057
【０１５７】
反応式１０Ｂ
【化３５】
2009538360.tif 000058
【０１５８】
アプローチＢ：溶液中の鈴木カップリングを用いた式ＩＩ〜ＩＶおよびＩＩａ〜ＩＶａで表されるＦｍｏｃ−アミノ酸類似体の合成
下記の実施例は、式ＩＩ〜ＩＶおよびＩＩａ〜ＩＶａで表されるいくつかのＦｍｏｃ−アミノ酸類似体の合成を例示する。次いで、これらを本明細書に記載する１１ｍｅｒおよび他のペプチド類似体の固相合成に使用した。
【０１５９】
（実施例１０）
Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２’−エチル−４’−メトキシ−ビフェニルアラニン［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−Ｂｉｐ（２’−Ｅｔ−４’−ＯＭｅ）］の合成
反応式１１は、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２’−エチル−４’−メトキシ−ビフェニルアラニンの合成を説明する。
【０１６０】
反応式１１
【化３６】
2009538360.tif 000059
【０１６１】
Ｂｏｃ−Ｌ−チロシン−Ｏ−トリフレート
Ｂｏｃ−Ｌ−チロシンメチルエステル２５ｇ（８５ｍｍｏｌ）と、２，６−ルチジン３６．２５ｇ（３３９ｍｍｏｌ、４当量）とを乾燥ＤＣＭ ２００ｍＬ中に溶かした溶液に、Ｎ２下で−４０℃に保ちゆっくりと３０分に亘り、ＤＣＭ（１００ｍｌ）中のトリフルオロメタンスルホン酸無水物 ４７．７４ｍｇ（１６９．５ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。溶液を−４０℃でさらに２時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析によって、反応が完了したことが示された。水 ２０ｍＬを加えることによって反応をクエンチした。層を分離し、有機層を、１ＮのＨＣｌ ３×２００ｍｌ、飽和Ｎａ２ＣＯ３ ２００ｍｌ、水 ２００ｍｌおよびブラインで２００ｍＬ洗浄した。有機層を、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、減圧下で乾燥し、赤色油として粗生成物を得た。これをシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル３００ｇ、ヘキサン中の０〜５０％ＥｔＯＡｃのグラジエント）にかけた。生成物を含有する画分を減圧下で濃縮し、所望の化合物（２７ｇ、収率７５％）を白色固体として得た。
【０１６２】
２−エチル−４−メトキシ−フェニルボロン酸
方法Ａ
メチルトリフェニルホスホニウムブロミド（１９９．５ｇ、０．４６５ｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（８００ｍｌ）中の懸濁液を１０分間パージし、１０℃に冷却した。ｎ−ブチルリチウム（１６９ｍＬ、０．４６５ｍｏｌ、２．７５Ｍ溶液）を３０分に亘りゆっくりと加え、１時間撹拌した。乾燥ＴＨＦ（３００ｍＬ）中の２−ブロモ−５−メトキシベンズアルデヒド（１００ｇ、０．４６５ｍｏｌ）を３０分かけてゆっくりと加えた。添加の後、反応混合物を１時間撹拌した。石油エーテル（２Ｌ）を加え、反応混合物をさらに３０分撹拌した。反応混合物をシリカゲルパッド上で濾過した。このパッドをジエチルエーテルで洗浄した。混合した有機洗浄剤を３０℃未満で濃縮し、粗生成物を、溶離液として１００％石油エーテルを使用して６０〜１２０シリカゲルクロマトグラフィーによって精製した。収率：９２ｇ、９０％（淡黄色液体として）。
【０１６３】
酢酸エチル（６５０ｍＬ）中の２，２’−ビピリジル（２４．３ｇ、０．１５ｍｏｌ）および２−ブロモ−５−メトキシスチレン（６５ｇ、０．３１ｍｏｌ）を、０℃に冷却した。溶液をパージし、１０％パラジウム炭素（１６．２５ｇ、２５％）を窒素流下で加えた。反応混合物を、Ｐａｒｒシェーカー中で水素下２ｋｇの圧力下で３日間撹拌した。反応の進行をＨＰＬＣによってモニターした。反応混合物をセライトで濾過し、濾液を硫酸水素カリウムの５％溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、３０℃未満で濃縮した。収率：６０ｇ、９１％（淡黄色液体として）。
【０１６４】
４−ブロモ−３−エチルアニソール（９４ｇ、０．４３７ｍｏｌ）をＴＨＦで溶かした溶液（９００ｍＬ）を、−７８℃に冷却した。ｎ−ブチルリチウム（２４９ｍＬ、０．５５ｍｏｌ）を同じ温度にて滴下で添加した。−７８℃で１時間撹拌を続けた。トリ−ｎ−ブチルボレート（１７７ｍＬ、０．６５５ｍｏｌ）を−７８℃にてゆっくりと加えた。冷却槽を取り除き、反応混合物を０℃に加熱し、０℃にて１．５Ｎの塩酸でクエンチした。有機層を分離した。水層を酢酸エチルで抽出し、混合した有機層をブラインで洗浄し、濃縮した。得られた残渣を石油エーテル中で３０分間撹拌した。得られた固体を濾過し、真空下で乾燥した。収率：６５ｇ、８２％（白色固体として）。
【０１６５】
方法Ｂ（反応式１２を参照されたい）
乾燥アセトン（５００ｍＬ）中の３−エチルフェノール（５０ｇ、０．４ｍｏｌ、９８％純度、Ｆｌｕｋａ社製）およびＫ２ＣＯ３（２８３ｇ、２．０５ｍｏｌ）混合物に、ヨウ化メチル（２９０ｇ、２．０５ｍｏｌ）を加えた。反応混合物をオートクレーブに移し、７０℃で一晩還流した。反応混合物をセライトパッドで濾過した。パッドをアセトンで洗浄し、混合した濾液および洗浄液を濃縮した。生成物をＤＣＭで溶解し、濾過し、乾燥するまで蒸発した。収率：５０ｇ、９０％（茶色の液体として）。
【０１６６】
アセトニトリル溶液（１Ｌ）中の３−エチルアニソール（５０ｇ、０．３６７６ｍｏｌ）およびＮ−ブロモスクシンイミド（７２ｇ、０．４ｍｏｌ）を暗所において室温にて８時間撹拌した。反応混合物を４０℃未満で濃縮し、得られた残渣をＣＣｌ４で再溶解し、濾過した。濾液を濃縮し、生成物を分留によって精製した。収率：３５ｇ、４３％（淡黄色液体として）。
【０１６７】
４−ブロモ−３−エチルアニソールを、方法Ａにおいて説明するように対応するボロン酸に変換した。
【０１６８】
反応のスケールアップの目的で、グリニャール方法を使用して４−ブロモ−３−エチルアニソールの２−エチル−４−メトキシ−ボロン酸への変換を行うことができる。このような方法は、方法Ａにおいて説明するように、４−ブロモ−３−エチルアニソールとＴＨＦ中のＭｇ（１．１当量）との反応と、得られたグリニャール中間体とホウ酸トリ−ｎ−ブチルまたはホウ酸トリメチルとのそれに続く反応によるグリニャール試薬の形成を伴う。
【０１６９】
反応式１２
【化３７】
2009538360.tif 000060
【０１７０】
Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２’−エチル−４’−メトキシ−ビフェニルアラニン
乾燥トルエン（６００ｍＬ）中のＢｏｃ−Ｌ−チロシン−Ｏ−トリフレート（８１ｇ、０．１９ｍｏｌ）を、１０分間窒素でパージした。Ｋ２ＣＯ３（３６ｇ、０．２６ｍｏｌ）の水溶液２００ｍｌを加え、２−エチル−４−メトキシ−フェニルボロン酸（３６ｇ、０．２ｍｏｌ）を続いて加え、反応混合物を１０分間窒素を用いてパージした。Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１６．１８ｇ、０．０１４ｍｏｌ）、エタノール（２００ｍＬ）およびＴＨＦ（４００ｍＬ）を加え、反応混合物を４時間撹拌しながら１００℃に加熱した。反応混合物を真空下で濃縮し、残渣をＤＣＭ（１．０Ｌ）で溶解した。有機層を１０％水酸化ナトリウム溶液、１５％クエン酸溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。粗生成物を、石油エーテル中の１０％酢酸エチルと共に６０〜１２０メッシュのシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製した。収率：５０ｇ、６５％（黄色い液体として）。
【０１７１】
ＴＨＦ（４５０ｍＬ）中のＢｏｃ−（Ｓ）−２’−エチル−４’−メトキシ−ビフェニルアラニン（６０ｇ、０．１４６ｍｏｌ）のメチルエステルとメタノール（８５ｍＬ）との混合物に、水酸化ナトリウム（２４ｇ、０．５８ｍｏｌ）の水溶液８５ｍＬを加えた。反応混合物を室温で一晩撹拌し、濃縮し、残渣を水（１００ｍＬ）に溶解し、ジエチルエーテルで洗浄した。２０％クエン酸を用いて水層をｐＨ１まで酸性化し、酢酸エチルで抽出した。抽出物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥するまで蒸発した。収率：５５ｇ、９４％（無色液体として）。
【０１７２】
Ｂｏｃ−（Ｓ）−２’−エチル−４’−メトキシ−ビフェニルアラニン（５５ｇ、０．１３８ｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ（１リットル）で溶解し、乾燥ＨＣｌガスを室温で６時間パージした。得られた固形生成物を濾過し、真空下で乾燥した。収率：４６ｇ、１００％。
【０１７３】
ＴＨＦ（７００ｍＬ）中の遊離のアミノ酸塩酸塩（３０ｇ、０．０８９ｍｏｌ）に、ＮａＨＣＯ３（２９ｇ、０．３５８ｍｏｌ）の水溶液（２４０ｍＬ）を加えた。Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ（３０ｇ、０．０８９ｍｏｌ）を、３０分かけて一部分ずつ加えた。反応混合物を、一晩室温で撹拌した。ＴＨＦを真空下で除去し、水（２．０Ｌ）を加えた。清澄な溶液をエーテルで抽出し、いかなる不純物も除去した。水溶液を、ｐＨ１に酸性化し、酢酸エチルで抽出した。有機層を水およびブラインで洗浄し、乾燥するまで蒸発した。収率：３７ｇ、８０％。
【０１７４】
（実施例１１）
Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２’−エチル−４’−ヒドロキシ−ビフェニルアラニン［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−Ｂｉｐ（２’−Ｅｔ−４’−ＯＨ）］の合成
下記の反応式１３は、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２’−エチル−４’−ヒドロキシ−ビフェニルアラニン［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−Ｂｉｐ（２’−Ｅｔ−４’−ＯＨ）］の合成を説明する。
【０１７５】
反応式１３
【化３８】
2009538360.tif 000061
【０１７６】
（Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（２’−エチル−４’−メトキシビフェニル−４−イル）プロパン酸［Ｆｍｏｃ−Ｂｉｐ（２’−Ｅｔ−４’−ＯＭｅ）−ＯＨ］４．４６ｇ（８．５５ｍｍｏｌ）のジクロロメタンに溶かした撹拌した溶液（３４ｍＬ）に、三臭化ホウ素 １Ｍをジクロロメタン（２１．２ｍｍｏｌ）に溶かした溶液 ２１．４ｍＬを、−１２℃にてアルゴン下で２０分間かけて加えた。反応混合物を撹拌し、ｉｎ  ｓｉｔｕで室温にまで温め、それと共に灰色のスラリーが形成された。３時間後に、反応混合物を、急速に撹拌中の水３００ｍＬに室温にてゆっくりと加えた。１時間後に、反応混合物を、ジクロロメタン（１００ｍＬ部分）で２回抽出した。有機抽出物を混合し、乾燥（ＭｇＳＯ４）、濾過、蒸発し、黄褐色の泡４．６５ｇを得た。所望の生成物を逆相ＨＰＬＣによって精製した（Ｌｕｎａ  ５μＣ１８  ３０×１００ｍｍカラム、５０％〜１００％のグラジエント（１０分）、溶離液として（９００：１００：１〜１００：９００：１水／アセトニトリル／ＴＦＡ）。流量４０ｍＬ／分。２２０ｎｍでＵＶ検出）。プール画分の部分蒸発によって、粘着性の物質がもたらされ、これを残りの溶液からデカントし、水で洗浄し、ジクロロメタンで再溶解し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過、蒸発し、白色アモルファス固体として生成物を得た（３．５０ｇ、収率８１％）。ＨＰＬＣ／ＭＳ：保持時間＝５．５２分［Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ  Ｃ１８（４．６×７５ｍｍ）カラム、０％〜１００％のグラジエント（８分）、（溶離液として９０：１０：０．１〜１０：９０：０．１水／ＡｃＣＮ／ＴＦＡ）。流量２．５ｍＬ／分。２２０ｎｍでＵＶ検出］[M+H]+ = 508。1H NMR (DMSO-d6): δ 12.77 (br s, 1H), 9.29 (s, 1H), 7.86 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 7.38 (m, 2H), 7.28 (m, 4H), 7.11 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 6.85 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 6.57 (dd, J = 2.2, 8.3 Hz, 1H), 4.20 (m, 5H), 3.32 (br s, 1H), 3.10 (dd, J = 4.4, 13.8 Hz, 1H), 2.90 (dd, J = 10.5, 13.2 Hz, 1H), 2.37 (q, J = 7.7 Hz, 2H), 0.91 (t, J = 7.7 Hz, 3H).
【０１７７】
上記の生成物２．２８ｇを、キラルＨＰＬＣでさらに精製した（ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ、１０μｍ、５０×５００ｍｍカラム、定組成溶離（ｎ−ヘプタン／アセトニトリル／メタノール／ＴＦＡ、８３９：８０：８０：１）、流量６０ｍＬ／分。２１７ｎｍでＵＶ検出）。プール画分の蒸発と、それに続くクロロホルム（３×２０ｍＬ）による再蒸発によって、オフホワイトのアモルファス固体として生成物を得た（２．１７ｇ、収率９５％）。逆相ＨＰＬＣ、保持時間＝２１．４２分。［ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  Ｃ１８  ３μｍ（４．６×１５０ｍｍ）カラム、１０％〜１００％Ｂのグラジエント（３０分）、（緩衝液Ａ：０．１％ＴＦＡの水溶液、緩衝液Ｂ：０．１％ＴＦＡのＡｃＣＮ溶液）。流量１ｍＬ／分。２１７ｎｍでＵＶ検出］。ＭＳ分析：［Ｍ＋ＮＨ３］＋＝５２５．３および［Ｍ−Ｈ］−＝５０６．２。キラルＨＰＬＣ分析：＞９９％ｅｅ、保持時間＝１２．１７分［ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ（登録商標）ＡＤ、１０μｍ、４．６×２５０ｍｍカラム、定組成溶離（ｎ−ヘプタン／ＡｃＣＮ／メタノール／ＴＦＡ、７９９：１００：１００：１）、流量１ｍＬ／分。２１７ｎｍでＵＶ検出］。［α］２５Ｄ＝−１２．６（ＤＭＦ中のｃ＝１．０）。
【０１７８】
（実施例１２）
（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−４−（２’−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン塩酸塩］の合成
下記の反応式１４は、（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩の合成を説明する。
【０１７９】
反応式１４
【化３９】
2009538360.tif 000062
【０１８０】
５−ブロモ−２−ｏ−トリルピリジン
５−ブロモ−２−ヨードピリジン ９１０ｍｇ（３．２１ｍｍｏｌ）と、２−ｏ−トリルボロン酸 ４３６ｍｇ（３．２１ｍｍｏｌ、１．０当量）とを、トルエン ８ｍＬと、２Ｍの水性炭酸ナトリウム ３．２ｍＬとの中でアルゴンパージし排気したスラリーに、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム ３６ｍｇ（０．０３２ｍｍｏｌ、０．０１当量）を加えた。反応混合物をパージし、アルゴンでさらに２回排気し、次いでアルゴン下で１５時間還流した。反応物を冷却し、水およびＥｔＯＡｃの間で分配した。層を分離し、水層をもう一度ＥｔＯＡｃで抽出した。有機抽出物を混合し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過、濃縮し、減圧下で乾燥して、オレンジ色の油として粗生成物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー（７：３ ＣＨ２Ｃｌ２／ヘキサン）による精製によって、黄色い油として表題化合物を得た（６６６ｍｇ、収率８４％）。
【０１８１】
６−ｏ−トリルニコチンアルデヒド
上記の化合物（０．５０ｍｍｏｌ）１２５ｍｇをＴＨＦ（２．０ｍＬ）に溶かした撹拌した溶液に、ｎＢｕＬｉ ２２０μＬをヘキサン（２．５Ｍ、０．５５ｍｍｏｌ、１．１当量）に溶かした溶液を、アルゴン下で−７４℃にて５分に亘り加え、温度は−７１℃を超えて上昇させなかった。薄縁色の溶液が形成され、３０分後に濃緑色になった。４５分後に、ＤＭＦ ４９．４μＬ（０．６１ｍｍｏｌ、１．２当量）を加え、反応物を−４０℃に温めた。１４時間後に、鮮やかなオレンジ色の溶液が形成された。反応物を１０％クエン酸でクエンチし、混合物を２０分間室温にてすばやく撹拌した。得られた鮮黄色の溶液をＥｔＯＡｃで２回抽出した。有機抽出物を混合し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、濾過、濃縮して、黄色い油を得た。次いで得られた粗混合物を、溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：２４）を使用して、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し（２．５×１０ｃｍカラム）、白色固体を得た（ｍｐ８２〜８４℃、９０．３ｍｇ、収率９１％）。
【０１８２】
（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）メタノール
６−ｏ−トリルニコチンアルデヒド１．０７０ｇ（５．４３ｍｍｏｌ）をエタノール １９ｍＬに溶かした溶液に、０〜５℃で水酸化ホウ素ナトリウム２８７ｍｇ（７．５ｍｍｏｌ、１．４当量）を加えた。２時間後に、反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム溶液でクエンチし、３０分後に、ジクロロメタンおよびブラインの間で分配した。有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮し、無色の油として表示した生成物を得た。（１．０８ｇ、収率１００％）
【０１８３】
５−（ブロモメチル）−２−ｏ−トリルピリジンヒドロブロミド
（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）メタノール ４．４９ｇ（２２．５ｍｍｏｌ）を４８％臭化水素酸 ７５ｍＬで溶かした溶液を、６４時間加熱還流した。反応混合物を部分的に冷却し、黄褐色の固体残留物がフラスコ内に残るまで、過剰な臭化水素酸を真空蒸留（２Ｔｏｒｒで１１０℃）によって除去した。蒸留装置および真空ポンプの間に配置した大きなＫＯＨペレットトラップを使用して蒸留を行った。固体残渣をジエチルエーテル中でスラリーにし、濾過し、窒素流下で乾燥し、生成物７．３８ｇを得た（収率９５％）。
【０１８４】
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（ジフェニルメチレンアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパノエート
５−（ブロモメチル）−２−ｏ−トリルピリジンヒドロブロミド ８００ｍｇ（２．３３ｍｍｏｌ）と、ｔｅｒｔ−ブチル ２−（ジフェニルメチレンアミノ）アセテート ６８９ｍｇ（２．３３ｍｍｏｌ、１．０当量）と、Ｏ−アリル−Ｎ−（９−アントラセニルメチル）シンコニジニウムブロミド １４１ｍｇ（０．２３３ｍｍｏｌ、０．１当量）とをジクロロメタン １４ｍＬ中で撹拌した混合物に、２−ｔ−ブチルイミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジメチル−ペルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリン １．６８７ｍＬ（５．８３ｍｍｏｌ、２．５当量）を、−７８℃にてアルゴン下で５分に亘り加えた。反応混合物を−７８℃で１０時間撹拌し、次いでｉｎ  ｓｉｔｕで室温にまで温めた。混合物を、溶離液（５×１０ｃｍカラム）として酢酸エチル／ジクロロ−メタン（１：４）を使用して、シリカゲルクロマトグラフィーによって直接精製し、黄褐色の油を得た（１．１０ｇ、収率１００％）。
【０１８５】
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパノエート
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（ジフェニルメチレンアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパノエート １．１０ｇ（２．３３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ ９ｍＬに溶かした撹拌した溶液に、水 ９ｍＬ中のクエン酸 ２．７９５ｇ（１４．５４ｍｍｏｌ、６．５当量）を、アルゴン下で室温にて加えた。２０時間後に、反応混合物を水（５ｍＬ）で希釈し、エーテル（１０ｍＬ）で２回洗浄した。次いで、水相を固体炭酸ナトリウムでｐＨ９とし、ジクロロメタンで２回抽出した。
【０１８６】
ジクロロメタン抽出物を混合し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。得られた油をＴＨＦ １０ｍＬで溶解し、１０％炭酸ナトリウム溶液 ７．２ｍＬ、次いで９−フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド ７０３ｍｇ（２．５６ｍｍｏｌ、１．１当量）で室温にて処理した。１４時間後に反応混合物をジクロロメタンで２回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過、濃縮し、溶離液（２．５×１０ｃｍカラム）として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：１９）を使用して、シリカゲル上のクロマトグラフィーによって精製し、無色の油を得た（１．０８２ｇ、収率９１％）。７：１ ヘキサン：ジクロロメタン ２０ｍＬからの再結晶によって、白色固体 ２８７ｍｇがもたらされた。母液を濃縮し、表題化合物であるアモルファス白色固体を得た（７７９ｍｇ、収率６３％）。キラルＨＰＬＣ分析（４．６×２５０ｍｍＡＤカラム、溶離液として３８：１：１ ヘプタン：メタノール：エタノール、流量１ｍｌ／分）は、９８％ｅｅを示した。
【０１８７】
（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ｏ−トリルピリジン−３−イル）プロパノエート １．７５ｇ（３．１９ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（５．０ｍＬ）で溶かした溶液（塩化カルシウムが充填された乾燥管によって空気から保護されている）を、室温にて２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で４０℃未満にて濃縮し、得られたオレンジ色の油をエーテル １０ｍＬで溶解し、これに１ＭのＨＣｌ／エーテル ５ｍＬの溶液を加えた。得られた白色固体を濾過し、エーテルで洗浄し、白色粉末として所望の化合物を得た（１．６５ｇ、収率１００％）。
【０１８８】
（実施例１３）
（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−４−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩の合成
下記の反応式１５は、３−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩の合成を説明する。
【０１８９】
反応式１５
【化４０】
2009538360.tif 000063
【０１９０】
２−ブロモ−５−（ブロモメチル）ピリジン
５−メチル−２−ブロモピリジン １０．３２０ｇ（６０．０ｍｍｏｌ）と、再結晶Ｎ−ブロモスクシンイミド ５．３３９ｇ（３０．０ｍｍｏｌ、０．５当量）とを四塩化炭素 １５０ｍＬ中で撹拌したスラリーに、ＡＩＢＮ ２００ｍｇを加えた。反応混合物を、アルゴンで２回パージし、排気し、アルゴン下で還流させた。９０分後に反応混合物を室温に冷却し、濾過し、濾液を濃縮して黄色い油を得た。混合物は、５３％（ｍｏｌ）の未反応５−メチル−２−ブロモピリジン、４３％の表題生成物、および４％の２−ブロモ−５−（ジブロモメチル）ピリジンを含有することがプロトンＮＭＲによって示された。混合物は、次の手順のためにさらに精製せずに、すぐ使用した。
【０１９１】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパノエート
２−ブロモ−５−（ブロモメチル）ピリジン（規格上２６．４ｍｍｏｌ）と、ｔｅｒｔ−ブチル ２−（ジフェニルメチレンアミノ）アセテート７．７９８ｇ（２６．４ｍｍｏｌ、１．０当量）と、Ｏ−アリル−Ｎ−（９−アントラセニルメチル）シンコニジニウムブロミド１．６０ｇ（２．６４ｍｍｏｌ、０．１当量）とをジクロロメタン １００ｍＬ中で撹拌した混合物に、２−ｔ−ブチル イミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジメチル−ペルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリン １１．４６ｍＬ（３９．６ｍｍｏｌ、１．５当量）を、アルゴン下で−７８℃にて５分に亘り加えた。反応混合物を−７８℃で７時間撹拌し、次いでｉｎ  ｓｉｔｕで室温にまで温めた。次いで、反応混合物を濃縮し、ＴＨＦ ７５ｍＬに再溶解し、水７５ｍＬ中のクエン酸（２２ｇ）で処理した。７時間激しく撹拌した後、混合物をエーテル（７５ｍＬ）で２回抽出した。有機抽出物を混合し、水（２５ｍＬ）で１回洗浄した。水様抽出物を混合し、固体炭酸ナトリウムでｐＨ８にした。水溶液を、次の反応のためにさらに処理をせずに使用した。
【０１９２】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパノエート
上記の水溶液を、９−フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド ７．５４５ｇ（２７．５ｍｍｏｌ、１．０４当量）をＴＨＦ ７５ｍＬに溶かした溶液に室温で加えた。１４時間後に、反応混合物を酢酸エチルで２回抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過、濃縮し、溶離液として酢酸エチル／ジクロロ−メタン（１：２４）（１２×２５ｃｍカラム）を使用して、シリカゲル上のクロマトグラフィーによって精製し、無色の油を得た（７．２５ｇ、収率９１％）。５：１ ヘキサン／ジクロロメタン １２０ｍＬからの再結晶によって、少量の白色固体を得て、それを濾過した。母液を濃縮し、表題化合物であるアモルファス白色固体を得た（４．９６ｇ、収率６２％）。キラルＨＰＬＣ分析（４．６×２５０ｍｍＡＤカラム、溶離液として３８：１：１ ヘプタン：メタノール：エタノール、流量１ｍＬ／分）は、９７．２％ｅｅを示した。
【０１９３】
２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリジン−３−イル）プロパノエート １．０２ｇ（１．９５ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（３．０ｍＬ）で溶かした溶液（塩化カルシウムが充填された乾燥管によって空気から保護されている）を、室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で３５℃未満にて濃縮し、得られたオレンジ色の油をジクロロメタン ３ｍＬで溶解し、それに１ＭのＨＣｌ／エーテル ６ｍＬの溶液を加えた。得られた白色固体を濾過し、エーテルで洗浄し、表題化合物を白色粉末として得た（８４５ｍｇ、収率８６％）。
【０１９４】
（実施例１４）
（２Ｓ）２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−４−（２’−エチルフェニル）−３−ピリジルアラニン］の合成
下記の反応式１６は、（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩の合成を説明する。
【０１９５】
反応式１６
【化４１】
2009538360.tif 000064
【０１９６】
（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）プロパノエート １．７５ｇ（３．３５ｍｍｏｌ）と、２−エチルフェニルボロン酸 １．００５ｇ（６．７０ｍｍｏｌ、２当量）とを１：１ イソプロパノール／トルエン ５０ｍＬ中で撹拌したスラリーに、２Ｍの水性炭酸ナトリウム溶液２５．０ｍＬを加えた。反応混合物を、アルゴンで２回パージし、排気し、次いでビス（トリシクロヘキシルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド １２４ｍｇ（０．１６７ｍｍｏｌ、０．０５当量）を加え、混合物をアルゴンで再びパージし、排気した。すばやく撹拌した混合物をアルゴン下で８０℃に加熱した。２０時間後に、反応混合物を室温に冷却し、部分濃縮してイソプロパノールを除去した。残渣を酢酸エチルおよび水の間で分配し、水相を酢酸エチルでもう一度抽出した。有機抽出物を混合し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過、濃縮し、茶色い油を得た。溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：９）（５×１５ｃｍカラム）を使用して、シリカゲル上のクロマトグラフィーによる精製によって、所望の化合物を無色の油として得た（１．２５ｇ、収率７７％）。
【０１９７】
（２Ｓ）２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−４−（６−（２−エチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート １．５３ｇ（２．７９ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（５．０ｍＬ）で溶かした溶液（塩化カルシウムが充填された乾燥管によって空気から保護されている）を、室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で３５℃未満にて濃縮し、得られたオレンジ色の油をエーテルで溶解し、これに１ＭのＨＣｌ／エーテル ６ｍＬの溶液を加えた。得られた白色固体を濾過し、エーテルで洗浄し、所望の生成物を白色粉末として得た（１．３８ｇ、収率９３％）。
【０１９８】
（実施例１５）
（２Ｓ）２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチル−４−メトキシ）フェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−４−［（２’−エチル−４’−メトキシ）フェニル］−３−ピリジルアラニン］の合成
下記の反応式１７は、（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチル−４−メトキシ）フェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩の合成を説明する。
【０１９９】
反応式１７
【化４２】
2009538360.tif 000065
【０２００】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチル−４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）プロパノエート ６１３ｍｇ（１．１７ｍｍｏｌ）と、２−エチルフェニルボロン酸 ４２２ｍｇ（２．３４ｍｍｏｌ、２当量）とを１：１ イソプロパノール／トルエン ２０ｍＬ中で撹拌したスラリーに、２Ｍの水性炭酸ナトリウム溶液 １０．０ｍＬを加えた。反応混合物を、アルゴンで２回パージし、排気し、次いでビス（トリシクロヘキシルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド ４３．２ｍｇ（０．０５９ｍｍｏｌ、０．０５当量）を加え、混合物をアルゴンで再びパージし、排気した。急速に撹拌した混合物をアルゴン下で８０℃に加熱した。９時間後に、反応混合物を室温に冷却し、部分濃縮して、イソプロパノールを除去した。残渣を酢酸エチルおよび水の間で分配し、水相を酢酸エチルでもう一度抽出した。有機抽出物を混合し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過、濃縮し、茶色い油を得た。溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（３：１７）を使用して（５×１５ｃｍカラム）、シリカゲル上のクロマトグラフィーによる精製によって、予想された化合物を無色の油として得た（４０１ｍｇ、収率５９％）。
【０２０１】
（２Ｓ）２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチル−４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸塩酸塩
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチル−４−メトキシフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート４０１ｍｇ（０．６９ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（２．０ｍＬ）で溶かした溶液（塩化カルシウムが充填された乾燥管によって空気から保護されている）を、室温で２時間撹拌した。反応混合物を減圧下で３０℃未満にて濃縮し、得られたオレンジ色の油をエーテルで溶解し、これに１ＭのＨＣｌ／エーテル ２ｍＬの溶液を加えた。得られた白色固体を濾過し、エーテルで洗浄し、所望の生成物を白色粉末として得た（３３６ｍｇ、収率８４％）。
【０２０２】
（実施例１６）
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−メチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエートの代替合成
下記の反応式１８は、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−メチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエートの代替合成を説明する。
【０２０３】
反応式１８
【化４３】
2009538360.tif 000066
【０２０４】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−メチルフェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモ−ピリジン−３−イル）プロパノエート １．７５ｇ（３．３５ｍｍｏｌ）と、２−メチルフェニルボロン酸 ９１３ｍｇ（６．７０ｍｍｏｌ、２当量）とを１：１ イソプロパノール／トルエン ５０ｍＬ中で撹拌したスラリーに、２Ｍの水性炭酸ナトリウム溶液 ２５．０ｍＬを加えた。反応混合物を、アルゴンで２回パージし、排気し、次いでビス（トリシクロヘキシルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド １２４ｍｇ（０．１６７ｍｍｏｌ、０．０５当量）を加え、混合物をアルゴンで再びパージし、排気した。
【０２０５】
急速に撹拌した混合物を、アルゴン下で８０℃にて加熱した。２０時間後に、反応混合物を室温に冷却し、部分濃縮してイソプロパノールを除去した。残渣を酢酸エチルおよび水の間で分配し、水相を酢酸エチルでもう一度抽出した。有機抽出物を混合し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過、濃縮し、茶色い油を得た。溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：９）（５×１５ｃｍカラム）を使用して、シリカゲル上のクロマトグラフィーによる精製によって、所望の化合物を無色の油として得た（１．８１ｇ、収率９０％）。
【０２０６】
（実施例１７）
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチルフェニル）ピリダジン−３−イル）プロパノエート［Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−４−（２’−エチルフェニル）−２，３−ピリダジルアラニン（pyridazylalanine）］の合成
下記の反応式１９は、（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチルフェニル）ピリダジン−３−イル）プロパノエートの合成を説明する。
【０２０７】
反応式１９
【化４４】
2009538360.tif 000067
【０２０８】
３−ブロモ−６−メチルピリダジン
３−メチル−６−ピラジノール（２０．０ｍｍｏｌ）２．２０ｇおよびオキシ臭化リン（４５．６ｍｍｏｌ、２．３当量）１３．０６ｇの混合物を撹拌し、５０分間１３０℃に加熱した（予熱した油浴）。固体反応混合物を氷浴中で冷却し、〜２０ｇのかき氷を加えた。得られた溶液を氷浴中で冷却し、５０％ＫＯＨを加え中和した。得られた固体を回収し、水で洗浄し、１５時間風乾した。溶離液としてエーテル／ジクロロメタン（３：１７）（５×１５ｃｍカラム）を使用して、シリカゲルクロマトグラフィーによる精製によって、淡黄色の固体として表題化合物を得た（１．３７ｇ、収率３９％）。
【０２０９】
３−ブロモ−６−（ブロモメチル）ピリダジン
３−ブロモ−６−メチルピリダジン １．００ｇ（５．７８ｍｍｏｌ）と、再結晶Ｎ−ブロモスクシンイミド １．０３ｇ（５．７９ｍｍｏｌ、１．０当量）とを四塩化炭素 ２０ｍＬで溶かした溶液に、ＡＩＢＮ ９５ｍｇを加えた。反応混合物を、アルゴンで２回パージし、排気し、アルゴン下で還流させた。３時間後に、反応混合物を室温に冷却し、濾過し、濾液を濃縮し、黄色の油を得た。溶離液としてヘキサン／ジクロロメタン（１：９）（５×１２ｃｍカラム）を使用して、シリカゲルクロマトグラフィーによって、混合物を直接精製し、無色の油を得た（４４４ｍｇ、収率３０％）。
【０２１０】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリダジン−３−イル）プロパノエート
３−ブロモ−６−（ブロモメチル）ピリダジン ３７４ｍｇ（１．４８ｍｍｏｌ）と、ｔｅｒｔ−ブチル ２−（ジフェニルメチレンアミノ）アセテート ４３９ｍｇ（１．４８ｍｍｏｌ、１．０当量）と、Ｏ−アリル−Ｎ−（９−アントラセニルメチル）シンコニジニウムブロミド １１２ｍｇ（０．１８６ｍｍｏｌ、０．１２当量）とをジクロロメタン ４ｍＬ中で撹拌した混合物に、２−ｔ−ブチルイミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジメチル−ペルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリン ０．６４５ｍＬ（２．２３ｍｍｏｌ、１．５当量）を、アルゴン下で−７８℃にて５分に亘り加えた。反応混合物を−７８℃で１時間撹拌し、次いで−４０℃にｉｎ  ｓｉｔｕで温めた。１６時間後に、溶離液として酢酸エチル／ジクロロ−メタン（１：９）（５×１０ｃｍカラム）を使用して、シリカゲルクロマトグラフィーによって、混合物を直接精製し、黄色の油を得た（５４０ｍｇ、収率７８％）。
【０２１１】
上記の生成物をＴＨＦ １０ｍＬに溶かした撹拌した溶液に、アルゴン下で室温にて１５％水性クエン酸 １０ｍＬを加えた。１６時間後に、反応混合物を水（５ｍＬ）で希釈し、エーテル（１０ｍＬ）で２回洗浄した。
【０２１２】
次いで、水相を固体炭酸ナトリウムでｐＨ９にし、ジクロロメタンで２回抽出した。ジクロロメタン抽出物を混合し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。得られた油をＴＨＦ５ｍＬで溶解し、１０％炭酸ナトリウム溶液 ５ｍＬ、次いで９−フルオレニルメチルオキシカルボニルクロリド ４８０ｍｇ（１．８６ｍｍｏｌ、１．３当量）で室温にて処理した。６時間後に、反応混合物をジクロロメタンで２回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過、濃縮し、溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：５）（５×１５ｃｍカラム）を使用して、シリカゲル上のクロマトグラフィーによって精製し、無色の油を得た（５０７ｍｇ、収率６５％）。キラルＨＰＬＣ分析（４．６×２５０ｍｍＡＤカラム、溶離液として３８：１：１ ヘプタン：メタノール：エタノール、流量１ｍＬ／分）は、４０％ｅｅを示した。
【０２１３】
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−（２−エチルフェニル）ピリダジン−３−イル）プロパノエート
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−ブロモピリダジン−３−イル）プロパノエート ５０７ｍｇ（０．９６７ｍｍｏｌ）と、２−エチルフェニルボロン酸 ２９０ｍｇ（１．９３ｍｍｏｌ、２当量）とを１：１イソプロパノール／トルエン １６ｍＬ中で撹拌したスラリーに、２Ｍの水性炭酸ナトリウム溶液 ８．０ｍＬを加えた。反応混合物を、アルゴンで２回パージし、排気し、次いでビス（トリシクロヘキシルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド ３５．７ｍｇ（０．０４８ｍｍｏｌ、０．０５当量）を加え、混合物を、アルゴンで再びパージし、排気した。急速に撹拌した混合物を、アルゴン下で９０℃に加熱した。
【０２１４】
８時間後に、反応混合物を室温に冷却し、部分濃縮してイソプロパノールを除去した。残渣を酢酸エチルおよび水の間で分配し、水相を酢酸エチルでもう一度抽出した。有機抽出物を混合し、濃縮し、残渣をＴＨＦ ２ｍＬで再溶解した。この溶液に、９−フルオレニルメチルクロロホルメート ３００ｍｇ（１．１７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン １００μＬを加えた。２１時間後に、反応混合物を、酢酸エチルで希釈し、ブラインで１回洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。溶離液として酢酸エチル／ジクロロメタン（１：２）（２．５×１５ｃｍカラム）を使用して、シリカゲル上のクロマトグラフィーによる精製によって、所望の化合物を無色の油として得た（４２８ｍｇ、収率８１％）。
【０２１５】
（実施例１８）
（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（５−ｏ−トリルピリジン−２−イル）プロパン酸［Ｂｏｃ−（Ｓ）−４−（２’−メチルフェニル）−２−ピリジルアラニン）］の合成
下記の反応式２０は、（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（５−ｏ−トリルピリジン−２−イル）プロパン酸の合成を説明する。
【０２１６】
反応式２０
【化４５】
2009538360.tif 000068
【０２１７】
（Ｓ）−メチル ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（５−ブロモピリジン−２−イル）プロパノエート
亜鉛−銅合金 ２１０ｍｇ（Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｖｅ第５巻、８５５ページにおけるように調製した）および３−ヨードアラニン ５８０ｍｇ（１．７６ｍｍｏｌ）のアルゴンパージし排気したスラリーを、ベンゼン７ｍＬで溶解し、これにＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド０．５ｍＬを加えた。スラリーを密封したフラスコ内で４０分間超音波処理し、次いで５−ブロモ−２−ヨードピリジン ５００ｍｇ（１．７６ｍｍｏｌ、１．０当量）およびビス（トリ−フェニルホスフィン）二塩化パラジウム ８２ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ、０．０６当量）を加えた。
【０２１８】
反応混合物をさらに２回アルゴンパージと排気を行い、次いでアルゴン下で１５時間７０℃で加熱した。反応物を冷却し、水およびＥｔＯＡｃの間で分配した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃでもう１回抽出した。有機抽出物を混合し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過、濃縮、減圧下で乾燥して、黄色い油として粗生成物を得た。溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／ヘキサン（３：１）（２．５×１５ｃｍカラム）を使用して、シリカゲルクロマトグラフィーによる精製によって、予想された化合物を黄色い油として得た（２８８ｍｇ、収率４６％）。
【０２１９】
（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（５−ｏ−トリルピリジン−２−イル）プロパン酸
（Ｓ）−メチル ２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（５−ブロモピリジン−２−イル）プロパノエート ２８５ｍｇ（０．７９ｍｍｏｌ）と、２−メチルフェニルボロン酸 １６２ｍｇ（１．１９ｍｍｏｌ、１．５当量）とを１，２−ジメトキシエタン ７ｍＬ中で撹拌したスラリーに、炭酸ナトリウム １６８ｍｇ（１．５９ｍｍｏｌ、２．０当量）および水０．５ｍＬを加えた。反応混合物を、アルゴンで２回パージし、排気し、次いでビス（トリシクロヘキシルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド ２９ｍｇ（０．０４０ｍｍｏｌ、０．０５当量）を加え、混合物をアルゴンで再びパージし、排気した。急速に撹拌した混合物をアルゴン下で８０℃に加熱した。
【０２２０】
１４時間後に、反応混合物を室温に冷却し、１Ｎの水酸化ナトリウム溶液４ｍＬを加えた。反応混合物を１時間７０℃に加熱した。室温に冷却した後、混合物をエーテルで１回抽出した。水相を１０％硫酸水素ナトリウム溶液でｐＨ３に酸性化し、次いでＤＣＭで２回抽出した。ＤＣＭ抽出物を混合し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過、濃縮し、黄色い半固体を得た。分取逆相ＨＰＬＣ（ＹＭＣ  ＯＤＳ  Ｓ５  ３０×１００ｍｍカラム、１０％〜９０％アセトニトリル／水のグラジエント（１０分）、０．１％ＴＦＡ）による精製によって、所望の生成物を白色のアモルファス固体として（濃縮後に）得た（４６．５ｍｇ、収率１７％）。
【０２２１】
（実施例１９）
下記の反応式２１は、（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−フェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエートの類似体の一般合成を説明する。
【０２２２】
反応式２１
【化４６】
2009538360.tif 000069
【０２２３】
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−［（３−クロロ−４−フルオロ）フェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート
丸底フラスコに、Ｆｍｏｃ−Ｌ−ブロモ−３−ピリジルアラニン（０．５７３ｍｍｏｌ）３００ｍｇ、３−クロロ−４−フルオロフェニルボロン酸（１．１４５ｍｍｏｌ、２当量） ２００ｍｇ、２Ｍの炭酸ナトリウム溶液（２．２９ｍｍｏｌ、４当量） １．１４５ｍＬ、トルエン ５ｍＬ、イソプロパノール（isopropylnol）５ｍＬおよびＰｄＣｌ２（ＰＣｙ）３）２（０．０５７３ｍｍｏｌ、０．１当量）４２ｍｇを加えた。反応溶液を、８０℃になる前にアルゴンで５時間パージした。反応物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ５０ｍＬで希釈した。溶液を水（３０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。原油をシリカゲルクロマトグラフィー（シリカゲル１２ｇｍ、０〜４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンのグラジエント）にかけ、所望の化合物２４５ｍｇを油として得た（収率７５％）。
【０２２４】
（２Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−［（３−クロロ−４−フルオロ）フェニル）ピリジン−３−イル）プロパン酸
（２Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル ２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−（６−［（３−クロロ−４−フルオロ）フェニル）ピリジン−３−イル）プロパノエート（２４０ｍｇ、０．４２９ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン ３ｍＬの溶液に、ＴＦＡ（３ｍＬ）を加えた。反応物を５時間室温で撹拌した。溶媒を乾燥するまで蒸発し、残渣を分取ＨＰＬＣ（メタノール−水のグラジエント、０．１％ＴＦＡ）にかけた。生成物を含有する画分の濃縮によって、所望の化合物 ２００ｍｇをＴＦＡ塩として得た（収率９３％）。
【０２２５】
（実施例２０）
１０位および１１位に非天然非市販のアミノ酸を含有するジペプチジル樹脂から開始するペプチドの一般的合成
１０位および１１位に非天然非市販のアミノ酸を含有するジペプチジル樹脂を、ＭＰＳ−３９６ペプチド合成機で同時自動合成プロトコルを用いてペプチド鎖伸長を続ける前に、下記の手順を用いてＡｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｔｅｃｈ  ＡＣＴ９０合成機によってバッチ式モードで調製した。
【０２２６】
いくつかのペプチド類似体を合成するのに十分な量の９−Ｆｍｏｃ−アミノキサンテン−３−イルオキシ−メリフィールド樹脂（Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂、ローディング：０．５ｍｍｏｌ／ｇ、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社製）を、ＤＭＦ（２×１０ｍＬ／ｇ、１分）で洗浄することによって膨潤させた。次いで、ＤＭＦ（１０ｍＬ／ｇ）中の２０％ピペリジンによる２回の処理を、それぞれ５分および１５分行ってＦｍｏｃ基を除去した。樹脂をＤＭＦ（２×１０ｍＬ／ｇ）およびＮＭＰ（４Ｘ１０ｍＬ／ｇ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−４−（２’−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン−ＯＨ（ＨＣｌ塩）（１．２当量）またはその類似体と、ＰｙＢＯＰ（１．０７当量）と、ＨＯＢｔ（１．０７当量）と、ＤＩＥＡ（３．６当量）とをＮＭＰに溶かした溶液を、樹脂に加えた。次いで、樹脂を１８時間振盪またはボルテックスした。定性的ニンヒドリン試験を用いてカップリング完了をモニターした。樹脂を排出し、ＮＭＰ（３×１０ｍＬ／ｇ）およびＤＣＭ（３×１０ｍＬ／ｇ）で洗浄し、任意の未反応アミンをＤＣＭ（ｖ／ｖ）中の２．６％無水酢酸、２．４％ＤＩＥＡで３０分間キャッピングした。ＤＭＦ洗浄（３×１０ｍＬ／ｇ）の後、キャッピングプロトコルを、ＤＣＭ（ｖ／ｖ）中の１０％無水酢酸、２％ＤＩＥＡで３０分間繰り返した。Ｆｍｏｃ定量アッセイは、０．３９ｍｍｏｌ／グラム置換を示した。
【０２２７】
次いで、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンによるＦｍｏｃ基の除去から開始し、何回かのＤＭＦ洗浄の後に、脱保護した樹脂に、Ｆｍｏｃ−Ｌ−（２’−エチル−４’−メトキシ）ビフェニルアラニン−ＯＨ（１．２７当量）またはその類似体と、ＨＯＢｔ（１．２９当量）とをＮＭＰ（４ｍＬ）に溶かした溶液（５分間ボルテックスした）を加えることによって、第２の手動カップリングサイクルを上記のように行った。次いで、ＤＩＣ（１．２７当量）を樹脂スラリーに加え、樹脂を１５時間振盪またはボルテックスした。樹脂を排出し、ＮＭＰ（３×１０ｍＬ／ｇ）およびＤＣＭ（３×１０ｍＬ／ｇ）で洗浄し、次いでＤＣＭ（１０ｍＬ）中の５．０％無水酢酸、１．０％ ＤＩＥＡで３０分間キャッピングした。最後に樹脂をＤＣＭ（３×１０ｍＬ／ｇ）で洗浄した。この合成反応式によって、所望のＦｍｏｃ保護ジペプチジル−Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂が生成した。
【０２２８】
Ｆｍｏｃ基を上記で説明したように除去した。Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（３当量）と、ＨＯＢｔ（３当量）とをＮＭＰ（２ｍＬ）に溶かした溶液を、５分ボルテックスし、次いでＤＩＣ（３当量）を加えた。得られた溶液を樹脂に加えた。次いで樹脂を２時間振盪またはボルテックスした。樹脂を排出し、ＮＭＰ（３×１０ｍＬ／ｇ）およびＤＣＭ（３×１０ｍＬ／ｇ）で洗浄した。定性的ニンヒドリン試験を用いてカップリング完了をモニターした。
【０２２９】
樹脂上にＸａａ７からＸａａ１１へと所望の配列をアセンブルするために、この樹脂をさらなる２回の上記のような脱保護／カップリングサイクルにかけた。順次使用したＦｍｏｃ−アミノ酸は、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｌ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨであった。下記のプロトコルを用いてＦｍｏｃ−［（Ｓ）−２−フルオロ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ］−ＯＨをカップリングした。Ｆｍｏｃ−［（Ｓ）−２−フルオロ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ］−ＯＨ（１．５当量）と、ＰｙＢＯＰ（１．５当量）と、ＨＯＢｔ（１．５当量）と、ＤＩＥＡ（３．０当量）とをＮＭＰ（２ｍＬ）に溶かした溶液を、樹脂に加えた。次いで、樹脂を２時間振盪またはボルテックスした。樹脂を排出し、ＮＭＰ（３×１０ｍＬ／ｇ）およびＤＣＭ（３×１０ｍＬ／ｇ）で洗浄した。
【０２３０】
残基Ｘａａ５をカップリングするために、Ｆｍｏｃ基を上記で説明したように除去した。Ｆｍｏｃ−Ｔｈｅ（ｔＢｕ）−ＯＨ（５当量）と、２−Ｃｌ−ＨＯＢｔ（５当量）と、ＤＩＣ（５当量）とをＮＭＰ（４ｍＬ）で溶かした溶液を、短時間ボルテックスし、次いで樹脂に加えた。次いで樹脂を、１８時間振盪またはボルテックスした。樹脂を排出し、ＮＭＰ（３×１０ｍＬ／ｇ）およびＤＣＭ（３×１０ｍＬ／ｇ）で洗浄した。樹脂を、ＤＣＭ（１０ｍＬ／ｇ）中の１０．０％無水酢酸で３０分間キャッピングした。ＤＣＭ洗浄（３×１０ｍＬ／ｇ）の後、Ｆｍｏｃ基を上記で説明したように除去し、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、残基Ｘａａ４を、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨのために説明したようにカップリング／脱保護した。得られた使用したＸａａ４〜Ｘａａ１１ペプチジル−樹脂を、下記のように異なる１１ｍｅｒペプチド類似体を合成するために使用した。
【０２３１】
配列番号：１１８の化合物の合成
上記で説明したＸａａ４〜Ｘａａ１１ペプチジル−樹脂（０．０６７ｍｍｏｌ）の試料を、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（５当量）と、残基Ｘａａ３と、ＨＯＡｔ０．５Ｍ（５当量）とをＤＭＦに溶かした溶液（５分間事前にボルテックス）、ならびにＤＩＣ（５当量）と共に１８時間ボルテックスした。樹脂を排出し、ＤＭＦ（４×３ｍＬ）で洗浄した。残基Ｘａａ３のために上記で説明したように、樹脂に結合したペプチド（０．０３４ｍｍｏｌ）を脱保護し、Ｆｍｏｃ−［（Ｓ）−α−Ｍｅ−Ｐｒｏ］−ＯＨ（５当量）とカップリングし、樹脂に結合したＦｍｏｃ−［Ｘａａ２〜Ｘａａ１１］−ペプチドを得た。
【０２３２】
樹脂（０．０１７ｍｍｏｌ）を脱保護し、残基Ｘａａ２のために説明したようにＢｏｃ−Ｌ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（５当量）とカップリングさせた。ＴＦＡ／水／トリ−イソプロピルシラン（９４：３：３）（５．０ｍＬ）の溶液で３時間処理することによって、所望のペプチドをそのそれぞれのペプチジル−樹脂から切断／脱保護した。樹脂を濾過し、ＴＦＡ（１．０ｍＬ）ですすぎ、混合したＴＦＡ濾液を蒸発し、粗ペプチド生成物３９ｍｇを油状固形物として得た。これを分取ＨＰＬＣによって、２０分に亘る０．１％ＴＦＡ／水中の５％〜６５％の０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮのグラジエントを用いて精製した。純粋な生成物を含有する画分をプールし、凍結乾燥し、配列番号：１１８の化合物５．４ｍｇ（回収率１８．９％）を得た。
【０２３３】
配列番号：１１９の化合物の合成
上記の合成において説明したＦｍｏｃ−［Ｘａａ３〜Ｘａａ１１］−ペプチジル−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂（０．０１５ｍｍｏｌ）の試料を、Ｆｍｏｃ−［Ｎ−メチル−（Ｄ）−Ａｌａ］−ＯＨ（５当量）と、ＨＯＡｔ０．５Ｍ（５当量）とをＤＭＦに溶かした溶液（５分間事前にボルテックスする）、ならびにＤＩＣ（５当量）と共に４時間ボルテックスした。樹脂を排出し、ＤＭＦ（４×３ｍＬ）で洗浄した。樹脂を排出し、ＤＭＦ（４×３ｍＬ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ基をＤＭＦ（３ｍＬ）中の２０％ピペリジンで５分および１５分処理することによって除去した。上記の合成で説明したように、樹脂をＤＭＦ（８×３ｍＬ）で洗浄し、次いでＢｏｃ−Ｌ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（５当量）とカップリングした。ＴＦＡ／水／トリ−イソプロピルシラン（９４：３：３）（５．０ｍＬ）の溶液で３時間処理することによって、所望のペプチドをそのそれぞれのペプチジル−樹脂から切断／脱保護した。樹脂を濾過し、ＴＦＡ（１．０ｍＬ）ですすぎ、混合したＴＦＡ濾液を蒸発した。得られた油状固形物を（１：１）アセトニトリル／水（２ｍＬ）で溶解し、分取ＨＰＬＣによって、２０分に亘る０．１％ＴＦＡ／水中の５％〜６５％の０．１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮのグラジエントを用いて精製した。純粋な生成物を含有する画分をプールし、凍結乾燥し、配列番号：１１９の化合物５．２ｍｇ（回収率１８．５％）を得た。
【０２３４】
配列番号：１３３の化合物の合成
上記の合成において説明したＦｍｏｃ脱保護［Ｘａａ２〜Ｘａａ１１］−ペプチジル−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂（０．０１７ｍｍｏｌ）の試料を、デス−アミノ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（５当量）と、ＨＡＴＵ（５当量）とをＤＭＦ（５当量）中の０．５ＨＯＡｔで溶かした溶液、ならびに２ＭのＤＩＥＡをＮＭＰ（５当量）で溶かした溶液と共に１８時間ボルテックスした。樹脂を排出し、ＤＭＦ（６×２ｍＬ）およびＤＣＭ（３×２ｍＬ）で洗浄した。ＴＦＡ／水／トリ−イソプロピルシラン（９４：３：３）（５．０ｍＬ）の溶液で３時間処理することにより、所望のペプチドを、そのそれぞれのペプチジル−樹脂から切断／脱保護した。樹脂を濾過し、ＴＦＡ（１．０ｍＬ）ですすぎ、混合したＴＦＡ濾液を蒸発した。得られた油状固形物（３２ｍｇ）を（１：１）アセトニトリル／水（２ｍＬ）で溶解し、分取ＨＰＬＣによって、２０分に亘る０．１％ＴＦＡ／水中の５％〜６５％の０．１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮのグラジエントを用いて精製した。純粋な生成物を含有する画分をプールし、凍結乾燥し、配列番号：１３３の化合物７．４ｍｇ（回収率２４．６％）を得た。
【０２３５】
配列番号：１２０の化合物の合成
上記で説明したように調製したＦｍｏｃ脱保護［Ｘａａ１０〜Ｘａａ１１］−ジペプチジル−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）の試料を、実施例３において説明したようにＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ４３３ａペプチド合成機のＦａｓｔＭｏｃ（商標）プロトコルを用いて９回のさらなるカップリングサイクルにかけた。
【０２３６】
Ｆｍｏｃ保護ジペプチジル−樹脂（０．０５ｍｍｏｌ）を、装置上の適当な大きさの容器に置き、ＮＭＰで６回洗浄し、２０％ピペリジン／ＮＭＰによる２回の処理（各２分および８分）によって脱保護した。モニタリングオプションの条件が満足されるまで、モニターされている脱保護工程をさらに１回行った。脱保護の総時間は１０〜１２分であった。脱保護されたジペプチジル−樹脂をＮＭＰで６回洗浄し、次いで次のアミノ酸とカップリングさせた。この手順を、次の工程において使用する実施例によって例示する。
【０２３７】
Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨを、下記の方法を用いて次にカップリングした。Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（１ｍｍｏｌ、２０当量）をＮＭＰ ２ｍＬで溶解し、ＤＭＦ（２．２ｍＬ）中のＨＢＴＵ／ＨＯＢｔ ０．４５ＭおよびＤＩＥＡ／ＮＭＰ ２Ｍ（１ｍＬ）をそれに続いて加えることによって活性化した。次いで、活性化Ｆｍｏｃ保護アミノ酸の溶液を、反応容器に移し、脱保護工程からのフィードバックに応じてカップリングを３０〜６０分間継続した。次いで、樹脂をＮＭＰで６回洗浄し、カップリングプロトコルを繰り返した。所望のＸａａ４〜Ｘａａ１１配列のアセンブリを完成させるために、これに上記のように５回のさらなる脱保護／カップリングサイクルを行った。順次カップリングしたＦｍｏｃ−アミノ酸は、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｓ）−２−フルオロ−α−Ｍｅ−Ｐｈｅ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨであった。最後に、ペプチジル−樹脂をＮＭＰおよびＤＣＭで６回洗浄した。Ｆｍｏｃ保護ジペプチジル−樹脂（０．０２５ｍｍｏｌ）を、ＡＣＴ  ３９６Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒへ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド／ジクロロメタン（５５：４５）のスラリー中で加えた。実施例１において説明したように、樹脂をＤＭＦで２回洗浄し、１．５Ｍのピペリジン／ＤＭＦで２回処理することにより脱保護した。ＤＭＦ（４．０当量）中のＨＯＡｔ０．５Ｍ、およびＤＩＣ（４．０当量）をそれに続いて加えることによって、Ｆｍｏｃ−Ｌ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（４．０当量）を活性化し、反応容器に手動操作で移し、２時間カップリングさせた。樹脂を、１分間ボルテックスしながらＮＭＰ（４×０．５ｍＬ）ですすいだ。上記のカップリングのために説明したように、Ｆｍｏｃ基の脱保護後に、Ｆｍｏｃ−［（Ｓ）−α−Ｍｅ−Ｐｒｏ］−ＯＨを、下記のようにカップリングした。Ｆｍｏｃ−［（Ｓ）−α−Ｍｅ−Ｐｒｏ］−ＯＨ（２．４当量）を、ＤＭＦ（２．４当量）中のＨＯＡｔ０．５Ｍ（ＮＭＰ（０．１２ｍＬ）で希釈）、およびＤＩＣ（２．４当量）をそれに続いて加えることによって活性化した。溶液を手動操作で反応容器に移し、１８時間カップリングさせた。樹脂を、ＮＭＰですすいだ。Ｆｍｏｃ基の脱保護後に、アミノ酸（４当量）をＤＭＦ（４当量）中のＨＯＡｔ０．５Ｍで溶かした溶液（ＮＭＰ（０．２ｍＬ）で希釈）、およびＤＩＣ（４当量）を、反応容器に手動操作で加えることによって、Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨをカップリングした。カップリング反応物を１８時間カップリングさせた。樹脂を、ＮＭＰですすいだ。上記のカップリングのために説明したようにＦｍｏｃ基を除去した。ペプチドのＴＦＡ切断／脱保護を、実施例１において説明するように行った。これを分取ＨＰＬＣによって、２０分に亘る０．１％ＴＦＡ／水中の１０％〜６０％の０．１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮのグラジエントを用いて精製した。純粋な生成物を含有する画分をプールし、凍結乾燥し、配列番号：１２０の化合物２１．７ｍｇ（回収率４２％）を得た。
【０２３８】
（実施例２１）
配列番号：１５１の化合物の合成
Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｔｅｃｈ  Ｍｏｄｅｌ９０合成機の５０ｍＬリアクター中でＳｉｅｂｅｒアミド樹脂 ２．６７ｇ（０．５６ｍｍｏｌ／ｇ、１．５ｍｍｏｌ）から開始して、合成を始めた。段階的アセンブリのために使用した全体的な脱保護／カップリング反復サイクルは以下の通りであった。
１．ＤＭＦ洗浄１回×２０ｍｌ×１分
２．ＤＭＦ中の２０％ピペリジン１回×２０ｍｌ×５分
３．ＤＭＦ中の２０％ピペリジン１回×２０ｍｌ×１５分
４．ＤＭＦ洗浄３回×２０ｍｌ×１分
５．ＮＭＰ洗浄４回×２０ｍｌ×１分
６．カップリング工程（下記を参照されたい）
７．ＤＭＦ洗浄４回×１５ｍｌ×１分
８．カイザーニンヒドリン試験またはＨＰＬＣによる切断／脱保護および質量スペクトル分析
【０２３９】
上記の工程１〜５を用いて、Ｆｍｏｃ基をＳｉｅｂｅｒアミド樹脂から除去した。Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−４−（２’−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニン（０．７３ｇ、１．５０ｍｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（０．７８ｇ、１．５０ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（０．３９ｇ、１．５０ｍｍｏｌ）を、ＮＭＰ（５ｍｌ）で溶解し、次いでこの溶液を樹脂に加え、次いでＤＩＥＡ（０．３９ｇ、３．０５ｍｍｏｌ）を加えた。カップリング混合物を１６時間ボルテックスした。樹脂をＤＣＭ中の１０％無水酢酸で処理し（１×５０ｍｌ×６０ｍｉｎ）、ＤＣＭで洗浄し（４×５０ｍｌ×１ｍｉｎ）、減圧下で一晩乾燥した。Ｆｍｏｃ測定試験は、０．４５６ｍｍｏｌ／グラムの置換を示した。樹脂３．１１ｇ（１．４２ｍｍｏｌ）で合成を続けた。樹脂脱保護の後に、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｂｉｐ（２’−Ｅｔ−４’−ＯＭｅ）−ＯＨ（０．９８ｇ、１．９ｍｍｏｌ）と、ＨＣＴＵ（０．７８ｇ、１．９ｍｍｏｌ）とをＮＭＰ（５ｍＬ）に溶かした溶液を、樹脂に加え、次いでＤＩＥＡ（０．４８ｇ、３．８０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１６時間ボルテックスした。ＮＭＰで洗浄した後、カイザーニンヒドリン試験は陰性であった。樹脂脱保護の後に、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸β−ｔ−ブチルエステル（０．６４８７ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）を、ＮＭＰ（１０ｍＬ）中のＨＣＴＵ（１．０３ｇ、２．４９ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．６５ｇ、５．０３ｍｍｏｌ）を用いて４８時間カップリングさせた。樹脂脱保護の後に、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−ｉｍ−トリチル−Ｌ−ヒスチジン（３．８５ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１１．５ｍＬ、６．３ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（０．９６ｍＬ、６．３ｍｍｏｌ）中のＨＯＡｔ０．５４６Ｍを使用して１６時間カップリングさせた。このプロトコルを繰り返し、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−スレオニン（２．５ｇ、６．３０ｍｍｏｌ）を樹脂にカップリングさせた。樹脂脱保護の後に、ＤＭＦ（３．４ｍＬ、１．８７ｍｍｏｌ）中のＨＯＡｔ０．５４６Ｍ中のＮ−α−Ｆｍｏｃ−α−メチル−２−フルオロ−Ｌ−フェニルアラニン（０．７８ｇ、１．８６ｍｍｏｌ）、次いでＤＭＦ（３．５ｍＬ）中のＤＩＣ（０．２４ｇ、１．８７ｍｍｏｌ）を樹脂に加え、カップリングを４時間継続させた。樹脂脱保護の後に、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−スレオニン（４．９７ｇ、１２．５０ｍｍｏｌ）を、ＨＯＡｔ０．５４６ＭをＤＭＦ（２５ｍＬ、１２．５０ｍｍｏｌ）で溶かした溶液、およびＤＩＣ（１．５８ｇ、１２．５２ｍｍｏｌ）を使用して１６時間カップリングさせた。樹脂をＤＭＦ（２０ｍＬ）中の１０％無水酢酸で１時間キャッピングし、ＤＭＦで洗浄した（４×２０ｍＬ）。Ｆｍｏｃ基を除去し、上記のＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸β−ｔ−ブチルエステルカップリング工程のために説明したようにＮ−Ｆｍｏｃ−グリシン（１．１１ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）を９０分間カップリングさせ、次いでＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グルタミン酸γ−ｔ−ブチルエステル（１．６０ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）を同様にカップリングさせた。ペプチジル−樹脂（０．０３０ｍｍｏｌ）の一部を脱保護し、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−α−メチル−Ｌ−プ��リン（２１．２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．１１０ｍｌ、０．８３ｍｍｏｌ）中のＨＯＡｔ０．５４６ＭおよびＤＭＦ（０．１ｍＬ）中のＤＩＣ（７．６ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を使用して１６時間カップリングさせた。最後に、ＮＭＰ（０．９ｍＬ）中のＬ−β−（Ｎ−１−トリチル）イミダゾール乳酸（３９．８ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（３８ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を、ペプチジル−樹脂（０．０１ｍｍｏｌ）の一部に加え、次いでＤＩＥＡ（１７．４ｍＬ、０．１０ｍｍｏｌ）を加えた。１時間ボルテックスし、ＮＭＰで洗浄した後、カップリングを上記のように繰り返し、４８時間継続した。樹脂に結合したペプチドを、ＴＦＡ／ＴＩＳ／水（９４：３：３）（２ｍＬ）で２．５時間処理し、次いでＴＦＡ／ＴＩＳ／水（９４：３：３）で２回すすいだ（各２×１ｍＬ）。混合した濾液を減圧濃縮し、粗ペプチド１８．１ｍｇ（９２％）を得た。これを（１：１）アセトニトリル／水２ｍＬで溶解し、この溶液をＬｕｎａ［Ｃ１８（２）、５μｍ］Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘカラム（２５０×２１．２ｍｍＩ．Ｄ．）に充填した。５０分に亘り溶媒Ａ中の１５％〜５５％溶媒Ｂのグラジエント（流量１５ｍｌ／分）でカラムを溶出した。溶媒Ａ：水中の０．１％ＴＦＡ。溶媒Ｂ：ＡｃＣＮ中の０．１％ＴＦＡ。純粋な生成物を含有する画分をプールし、凍結乾燥し、配列番号：１５１の化合物４．２ｍｇを得た。
【０２４０】
（実施例２２）
（Ｓ）−３−（Ｎ−１−トリチル−イミダゾール−４−イル）−２−ヒドロキシプロパン酸（Ｌ−β−（Ｎ−１−トリチル）イミダゾール乳酸）の合成
下記の反応式２２は、（Ｓ）−３−（Ｎ−１−トリチル−イミダゾール−４−イル）−２−ヒドロキシプロパン酸の合成を説明する。
【０２４１】
反応式２２
【化４７】
2009538360.tif 000070
【０２４２】
（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−ヒドロキシプロパン酸（０．５２６５ｇ、３．０ｍｍｏｌ）およびトリチルクロリド（１．２９９１ｇ、４．７ｍｍｏｌ）を、１００ｍＬフラスコに入れた。ピリジン／アセトニトリル １：１（２０ｍＬ）を撹拌しながら加えた。フラスコを油浴中５０°〜５５℃にて４時間加熱した。ロータリーエバポレーター上で溶媒をほぼ乾燥するまで除去した。残渣に同容量の水および酢酸エチル（各３０ｍＬ）を加えた。混合物を約２０分間撹拌した。生成した固体を濾過により回収し、水（２×１０ｍＬ）、次いで酢酸エチル（２×１０ｍＬ）で洗浄し、減圧下で乾燥した。収率：０．６９５３ｇ（５８％）。
【０２４３】
（実施例２３）
（Ｓ）−３−（Ｎ−１−（２，４−ジニトロフェニル）イミダゾール−４−イル）−２−ヒドロキシプロパン酸（Ｌ−β−（Ｎ−１−（２，４−ジニトロフェニル）イミダゾール乳酸）の合成
下記の反応式２３は、（Ｓ）−３−（Ｎ−１−（２，４−ジニトロフェニル）イミダゾール−４−イル）−２−ヒドロキシプロパン酸の合成を説明する。
【０２４４】
反応式２３
【化４８】
2009538360.tif 000071
【０２４５】
（Ｓ）−３−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−２−ヒドロキシプロパン酸一水和物（０．８９７１ｇ、５．２ｍｍｏｌ）、ＡｃＣＮ（６０ｍＬ）、ＤＩＥＡ（１．３４３８ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）および１−フルオロ−２，４−ジニトロベンゼン（０．９５６４ｇ、５．１ｍｍｏｌ）を、丸底フラスコ中に入れ、アルミ箔で覆い、一晩撹拌した。反応混合物を濾過し、溶媒を減圧下で除去した。油状残渣をジイソプロピルエーテルで粉砕し（２×２０ｍＬ）、次いでクロロホルム（２０ｍＬ）で溶解し、クロロホルムおよびＡｃＣＮから再蒸発させた。ＤＣＭ（６０ｍＬ）を加えることによって、沈殿物を生成させ、さらにＤＣＭ（３０ｍＬ）を加えた後に、これを室温で撹拌した。固体生成物を回収し、ＤＣＭ（２×１０ｍＬ）で洗浄し、一晩減圧下で乾燥した。収率：１．３７ｇ（８３％）。
【０２４６】
（実施例２４）
配列番号：１５８の化合物の合成
方法Ａ  フラグメントカップリング（反応式１０Ａおよび１０Ｂ）
８ｍｌリアクター中で、Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂０．１８９６ｇ（０．５６ｍｍｏｌ／ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）から開始して合成を手動操作で行った。下記のサイクルを、Ｆｍｏｃ基を樹脂から除去するために使用した。
１．ＤＭＦ洗浄１回×２ｍｌ×５分
２．ＤＭＦ中の２０％ピペリジン１回×２ｍｌ×５分
３．ＤＭＦ中の２０％ピペリジン１回×２ｍｌ×１５分
４．ＤＭＦ洗浄８回×２ｍｌ×１分
【０２４７】
Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−４−（２’−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニンＨＣｌ塩（０．０５４９ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）およびＰｙＢＯＰ（０．０６６７ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍｌ）で溶解した。この溶液を脱保護された樹脂に加え、次いでＤＭＦ（１ｍＬ）中のＤＩＥＡ（０．０４２３ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。樹脂を３．５時間ボルテックスし、ＤＭＦおよびＤＣＭ（４×２ｍＬ×１分）で洗浄した。樹脂を、ＤＣＭ（２ｍＬ）中の１０％無水酢酸で一晩処理し、ＤＣＭ（６×２ｍｌ×１分）で洗浄し、減圧下で１時間乾燥した。収率：０．２５０８ｇ。Ｆｍｏｃ測定試験は、０．３５ｍｍｏｌ／グラムの置換を示した。樹脂０．０８３ｇ（０．０２９ｍｍｏｌ）を、次の工程で使用した。
【０２４８】
上記のサイクル１〜４を用いた樹脂脱保護の後に、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｂｉｐ（２’−Ｅｔ−４’−ＯＨ）−ＯＨ（０．０２５１ｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）と、ＨＯＢｔ（０．００８４ｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（０．００６７ｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）とをＤＭＦ（１ｍｌ）に溶かした溶液を樹脂に加えた。１６時間ボルテックスした後に、ペプチジル−樹脂を、ＤＭＦ、次いでＤＣＭ（４×１ｍＬ×１分）で洗浄した。上記の工程１〜３を用いてＦｍｏｃ基を除去し、ＤＭＦ、次いでＤＣＭによる洗浄（４×１ｍＬ×１分）を行った。
【０２４９】
ペプチド−樹脂を、トリフルオロ酢酸／トリイソプロピルシラン／水 ９６：２：２（２×１ｍＬ×１０分）で処理した。濾液を回収し、減圧下で残渣に濃縮し、これをジイソプロピルエーテルで粉砕し、遠心分離にかけ、固体生成物を得た。これをジイソプロピルエーテルで洗浄し、減圧下で乾燥して、ジペプチド ０．０２４４ｇを得た。ジペプチドをＴＨＦ（１ｍＬ）中の０．２％ＤＩＥＡで溶解し、マクロ孔質トリエチルアンモニウムメチルポリスチレンカーボネート樹脂（０．０６８２ｇ、０．２１１ｍｍｏｌ、Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）で２時間処理した。樹脂ビーズを除去し、ＴＨＦ中の０．２％ ＤＩＥＡで洗浄した（２×１ｍＬ）。混合した濾液および洗浄液を減圧下で乾燥した。得られた残渣に、側鎖保護Ｎ−メチルオキシカルボニルＸａａ１−Ｘａａ９  ９ｍｅｒペプチド（５５．８ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）と、ＨＯＢｔ（５．４７ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（６μＬ、０．０３５ｍｍｏｌ）とをＣＨＣｌ３／ＤＭＦ９：１（１ｍＬ）に溶かした溶液を加えた。生成した溶液を一晩ボルテックスした。減圧下での溶媒除去後、得られた残渣をトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）中の２％トリイソプロピルシランで９０分処理し、その後ジイソプロピルエーテル（２０ｍＬ）を加えた。沈殿した固体を乾燥し、１．５％水酸化アンモニウム ２ｍＬで溶解した。ｐＨを酢酸で〜９．５に調節した。この溶液を、Ｌｕｎａ［Ｃ１８（２）、５μｍ］Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘカラム（２５０×２１．２ｍｍｌ．Ｄ．）に充填した。６０分に亘る溶媒Ｂの２０％〜５０％グラジエント（流量１５ｍｌ／分）でカラムを溶出した。溶媒Ａ：水中の０．１％ＴＦＡ。溶媒Ｂ：ＡｃＣＮ中の０．１％ＴＦＡ。純粋な生成物を含有する画分をプールし、凍結乾燥し、配列番号：１５８の化合物５．５ｍｇを得た。
【０２５０】
配列番号：１５８の化合物の合成のための異なるフラグメントカップリング手順は、反応式１０Ｂで説明した方法に従った。この実施例で先に説明したように調製したＮ−α−Ｆｍｏｃ−４−（２’−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニル−Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂０．１１８２ｇ（０．４７ｍｍｏｌ／ｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）から開始して、８ｍｌリアクター中において手動操作で合成を行った。Ｆｍｏｃ基を樹脂から除去するために使用したサイクルは、上記で説明したものと同じであった。Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｂｉｐ（２’−Ｅｔ−４’−ＯＨ）−ＯＨ（０．０４１９ｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）を、上記で説明したように樹脂に結合した。ＤＣＭ（２ｍＬ）中の１０％ 無水酢酸による３０分間の樹脂の処理、ＤＣＭ洗浄（６×２ｍｌ×１分）およびＦｍｏｃ基の除去の後に、側鎖保護Ｎ−メチルオキシカルボニルＸａａ１〜Ｘａａ９  ９ｍｅｒペプチド（０．１３４７ｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）と、ＨＯＢｔ（０．０１３０ｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（０．０１１８ｇ、０．９４ｍｍｏｌ）とを、ＤＣＭ（０．１ｍＬ）およびＤＭＦ（０．４５ｍＬ）に溶かした溶液を、脱保護されたジペプチジル−樹脂に加え、混合物を４．５時間ボルテックスした。樹脂をＤＭＦおよびＤＣＭで洗浄し（４×２ｍＬ×１分）、次いでトリフルオロ酢酸中の２％トリイソプロピルシラン、２％水で処理し（５×１ｍＬ×３分）、濾液を回収し、７５分間静置した。溶媒を減圧下で除去し、生成した残渣をジイソプロピルエーテル（２０ｍＬ）で粉砕し、粗ペプチドを固体（０．０８１８ｇ）として得た。これを上記のように精製したが、使用したグラジエントは１２０分に亘る溶媒Ａ中の２５％〜３５％の溶媒Ｂ（流量１５ｍｌ／分）であった。溶媒Ａ：水中の０．１％ＴＦＡ；溶媒Ｂ：ＡｃＣＮ中の０．１％ＴＦＡ。純粋な生成物を含有する画分をプールし、凍結乾燥し、配列番号：１５８の化合物１９ｍｇを得た。
【０２５１】
方法Ｂ  段階的伸長（反応式１）
Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｔｅｃｈ  Ｍｏｄｅｌ９０合成機において５０ｍＬリアクター中で、Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂１．４６ｇ（０．７２ｍｍｏｌ／ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）から開始して合成を行った。段階的アセンブリのために使用した全体的な脱保護／カップリング反復サイクルは、以下の通りであった。
１．ＤＭＦ洗浄１回×１５ｍｌ×１分
２．ＤＭＦ中の２０％ピペリジン１回×１５ｍｌ×５分
３．ＤＭＦ中の２０％ピペリジン１回×１５ｍｌ×１５分
４．ＤＭＦ洗浄４回×１５ｍｌ×１分
５．ＮＭＰ洗浄４回×１５ｍｌ×１分
６．カップリング工程（下記を参照されたい）
７．ＤＭＦ洗浄４回×１５ｍｌ×１分
８．ＤＣＭ洗浄４回×１５ｍｌ×１分
９．カイザーニンヒドリン試験またはＨＰＬＣによる切断／脱保護および質量スペクトル分析
【０２５２】
上記の工程１〜５を用いてＳｉｅｂｅｒアミド樹脂からＦｍｏｃ基を除去した。Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−４−（２−メチルフェニル）−３−ピリジルアラニンＨＣｌ塩（１．０９７７ｇ、２．１３ｍｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（１．０９７２ｇ、２．１１ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ一水和物（０．３２２８ｇ、２．１１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（８ｍｌ）で溶解した。ＤＩＥＡ（０．８０５２ｇ、６．２３ｍｍｏｌ）を、この溶液に加え、次いでこれを樹脂に加えた。カップリング混合物を１６時間ボルテックスした。樹脂をＤＣＭ中の１０％無水酢酸で処理し（１×１５ｍＬ×６０分）、ＤＣＭで洗浄し（６×１５ｍｌ×１分）、減圧下で６時間乾燥した。収率：１．６８１６ｇ。Ｆｍｏｃ測定試験は、０．４８ｍｍｏｌ／グラムの置換を示した。樹脂０．８６０２ｇ（０．４１ｍｍｏｌ）によって合成を続けた。樹脂脱保護の後に、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−（Ｌ）−Ｂｉｐ（２’−Ｅｔ−４’−ＯＨ）−ＯＨ（０．２６６０ｇ、０．５２４ｍｍｏｌ）と、ＨＯＢｔ（０．０７９６ｇ、０．５２０ｍｍｏｌ）と、ＤＩＣ（０．０６４７ｇ、０．５１３ｍｍｏｌ）とをＤＭＦ（８ｍｌ）に溶かした溶液を樹脂に加え、混合物を１６時間ボルテックスした。ＤＭＦおよびＤＣＭで洗浄した後、カイザーニンヒドリン試験は陰性であった。樹脂脱保護の後に、ＤＭＦ／ＤＣＭ（１：１）（６ｍｌ）中のＨＯＢｔ（０．１８９３ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（０．１５６６ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）を使用して、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸β−ｔ−ブチルエステル（０．６４８７ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）を４５分間カップリングさせた。同じカップリングサイクルを、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−セリン（０．４７５０ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）およびＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−スレオニン（０．４９２４ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）によって繰り返した。樹脂脱保護の後に、ＤＭＦ／ＤＣＭ（１：１）（６ｍｌ）中のＨＯＢｔ（０．１２７１ｇ、０．８３０ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（０．１０４４ｇ、０．８２７ｍｍｏｌ）を使用して、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−α−メチル−２−フルオロ−Ｌ−フェニルアラニン（０．３４９７ｇ、０．８３４ｍｍｏｌ）を１時間カップリングさせた。樹脂脱保護の後に、ＨＯＡｔ０．５Ｍを、ＤＭＦ（８．３ｍＬ、４．１５ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（０．５２４０ｇ、４．１５ｍｍｏｌ）に溶かした溶液を使用して、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−スレオニン（１．６４１３ｇ、４．１４ｍｍｏｌ）を１６時間カップリングさせた。ＤＭＦおよびＤＣＭ洗浄の後に、ウェット樹脂３ｍｇをＴＦＡ／ＴＩＳ／水（９６：２：２）１ｍｌで１．５時間処理した。樹脂を濾過し、溶媒をｓｐｅｅｄ−ｖａｃ中で除去した。残渣を水／ＡｃＣＮ（１：１） ２ｍｌで溶解した。ＨＰＬＣおよびＭＳ分析は、カップリングしていないペプチドを示さなかった。上記のＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸β−ｔ−ブチルエステルカップリング工程のために説明したように、Ｆｍｏｃ基を除去し、Ｎ−Ｆｍｏｃ−グリシン（０．３６９１ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）を１時間カップリングし、次いでＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グルタミン酸γ−ｔ−ブチルエステル（０．５２９７ｇ、１．２４ｍｍｏｌ���を同じ方法でカップリングした。次いで、ＤＭＦ／ＤＣＭ １：１（６ｍｌ）中のＨＯＢｔ（０．１２７１ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（０．１０４２ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）を使用して、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−α−メチル−Ｌ−プロリン（０．２９０２ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）を３．５時間カップリングした。Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−α−メチル−２−フルオロ−Ｌ−フェニルアラニンにカップリングしているＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−スレオニンのために説明したように、最後にＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−ｉｍ−トリチル−Ｌ−ヒスチジン（２．５５６４ｇ、４．１３ｍｍｏｌ）を１２時間カップリングした。上記のようにペプチジル−樹脂から切り出した脱保護ペプチド試料は、ＭＳによって、いくつかのカップリングしていないペプチドを示した。Ｆｍｏｃ基を手動操作で除去し、ＤＭＦおよびＤＣＭ洗浄の後に、Ｎ−（メチルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミド（０．２１６３ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（６ｍＬ）に溶かした溶液を加え、混合物を１６時間ボルテックスした。ペプチド−樹脂をＤＣＭで洗浄した（４×１０ｍＬ×１分）。カイザーニンヒドリン試験は陰性であった。Ｎ−メチルオキシカルボニル−誘導体化ペプチジル−樹脂を、ＴＦＡ／ＴＩＳ／水（９６：２：２）（１０ｍＬ）で１０分間処理し、次いでそれぞれ５ｍＬでさらに２回処理した。混合した濾液をさらに２時間室温にて静置した。約４ｍＬに減圧濃縮した後、溶液をジエチルエーテル（５０ｍＬ）に撹拌しながら滴下で添加した。得られた固体を濾過により回収し、ジエチルエーテルで洗浄し（２×５ｍｌ）、減圧下で乾燥して、粗ペプチド０．６９１ｇ（９２％）を得た。この実施例の方法Ａで説明した手順を使用して、これを分取ＨＰＬＣで精製した。
【０２５３】
（実施例２５）
Ｎ−（メチルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミド［２，５−（ジオキソピロリジン−１−イル）メチルカルボナート］の合成
下記の反応式２４は、Ｎ−（メチルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミド［２，５−（ジオキソピロリジン−１−イル）メチルカルボナート］の合成を説明する。
【０２５４】
反応式２４
【化４９】
2009538360.tif 000072
【０２５５】
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド６４．６１ｇ（０．５６１ｍｏｌ）と、メチルクロロホルメート５８．９５ｇ（０．６２４ｍｏｌ）とをＴＨＦ（９００ｍＬ）中で撹拌した溶液に、アルゴン下で−５℃にて、温度が＋３℃未満に保たれるような速度でトリエチルアミン８２．６ｍＬ（０．５９３ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を撹拌し、室温まで温めた。１５時間後に、得られたスラリーを濾過し、固体をＴＨＦ（１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を減圧下で蒸発し、白色固体を得た。ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（２：１、１５０ｍＬ）からの再結晶によって、所望の生成物を白い結晶として得た（ｍｐ８４〜８６℃、７９．４ｇ、収率８２％）。
【０２５６】
（実施例２６）
（Ｒ，Ｓ）−３−（１−（２，４−ジニトロフェニル）−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロピオン酸［α−メチル−β−［１−（２，４−ジニトロフェニル）−イミダゾール−４−イル］プロピオン酸、Ｉｍｐ（ＤＮＰ）］の合成
１−トシル−４（５）−ヒドロキシメチルイミダゾール
下記の手順を、Ａｇｒ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，３８（５），１０９７〜１０９９，１９７４から適用した。Ｎａ２ＣＯ３（８．４ｇ、０．０８ｍｏｌ）を水（４０ｍＬ）に溶かした溶液に、４−（ヒドロキシメチル）イミダゾール塩酸塩（２．７ｇ、０．０２ｍｏｌ）を加えた。完全に溶解すると同時に、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（４．５８ｇ、０．０２４ｍｏｌ）を酢酸エチル（３０ｍＬ）で溶かした溶液を、５分かけて滴下で添加した。反応混合物を５時間撹拌した。層を分離し、さらなる酢酸エチルを加えた（２０ｍＬ）。有機相を０．１ＭのＮａ２ＣＯ３（２×２０ｍＬ）、水（１×２０ｍＬ）、次いで飽和ＮａＣｌ（１×２０ｍＬ）で洗浄した。酢酸エチルを２ｇのＭｇＳＯ４および１ｇの活性炭で１０分間処理した。セライトパッドを通して濾過することにより固体を除去し、溶媒をロータリーエバポレーター上で除去した。残渣の結晶化が開始された。新鮮な酢酸エチルを加え（１０ｍＬ）、溶液をヒートガンで加熱し、固体を再溶解した。生成物を一晩室温で結晶化させた。結晶質を回収し、酢酸エチル（５ｍＬ）、次いでエチルエーテル（１０ｍＬ）で洗浄し、３．５９ｇの恒量まで減圧下で乾燥した。
【０２５７】
１−トシル−４（５）−アセトキシメチルイミダゾール
１−トシル−４（５）−ヒドロキシメチルイミダゾール（２．５２ｇ、１０ｍｍｏｌ）を、クロロホルム（１０ｍｌ）で溶解した。これにトリエチルアミン（２．０２ｇ、２０ｍｍｏｌ）を室温にて滴下で添加し、次いで無水酢酸（１．３３ｇ、１３ｍｍｏｌ）を１５分かけて滴下で添加した。混合物を室温で撹拌し、４日間ＬＣ／ＭＳでモニターした。クロロホルムを減圧により除去し、残渣を酢酸エチル（６０ｍｌ）で溶解した。有機層を、０．１Ｍの炭酸水素ナトリウム、水、次いで飽和塩化ナトリウムで連続的に洗浄した（それぞれ全て１×４０ｍｌ）。有機層を、活性炭および硫酸マグネシウムで同時に処理し、次いでセライトパッドによって濾過した。溶媒を減圧によって除去し、生成した残渣を暖かい酢酸エチル（１０ｍｌ）で溶解した。この溶液に、ジエチルエーテル ２０ｍｌをゆっくりと加えた。溶液を一晩室温で結晶化させた。結晶を回収し、ジエチルエーテル（２×１０ｍｌ）で洗浄し、減圧下で一晩乾燥して、１．５５ｇを得た。
【０２５８】
メチル−α−カルボメトキシ−α−メチル−β−４−（１−トシルイミダゾール）−プロピオネート
下記の手順を、Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，１９（７&８），１１５７〜１１６５，１９８９から適用した。１−トシル−４（５）−アセトキシメチルイミダゾール（０．３５１６ｇ、１．２ｍｍｏｌ）と、メチルマロン酸ジメチル（０．１４８５ｇ、１．０ｍｍｏｌ）とをＡｃＣＮ（２ｍｌ）に溶かした溶液を、粉末化ＫＯＨ（０．１６９４ｇ、３．０ｍｍｏｌ）とテトラブチルアンモニウムブロミド（０．０４９６ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）とをＡｃＣＮ（１ｍｌ）中で撹拌した懸濁液に加えた。反応は４０分後に完了したことが、ＨＰＬＣ分析で判定された。反応混合物をエチルエーテル（１００ｍｌ）中に注ぎ、セライトパッドで濾過し、溶媒を減圧下で蒸発によって除去した。残油を、酢酸エチル ３０ｍｌで溶解し、０．１ＭのＮａＨＣＯ３（１×１５ｍｌ）、飽和ＮａＣｌ（１×１５ｍｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、生成した油をデシケーター中に真空下３日間放置し、０．２０７ｇを得た。
【０２５９】
α−メチル−β−４−イミダゾールプロピオン酸
メチル−α−カルボメトキシ−α−メチル−β−４−（１−トシルイミダゾール）−プロピオネート（０．１８６ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を、メタノール ２ｍｌで溶解した。これに１．０ＮのＮａＯＨ １．５ｍｌを加え、反応物を一晩撹拌した。分取ＨＰＬＣによる精製後に、凍結乾燥によって得られた生成物（０．１３６６ｇ）を、１．０ＮのＮａＯＨ ５ｍＬと共に溶解し、ＰＴＦＥで裏打ちしたキャップで密封した１６×１００ｍｍのスクリューキャップチューブ中で、１００℃にて２時間加熱し、次いで濃ＨＣｌ ２ｍＬを加え、１４５℃にて６時間加熱した。所望の脱カルボキシル化生成物が形成した。全ての溶液を濾過し、ＹＭＣ  Ｇ−３４０−１０Ｐ  ＯＤＳ５０×２０ｍｍ分取ＨＰＬＣカラムに充填した。６０分に亘る０．１％ＴＦＡ／水中の０％〜６０％の０．１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮのグラジエントで生成物を溶出した。グラジエントにおける１１〜１３分に対応する画分をプールし、凍結し、凍結乾燥し、生成物３２ｍｇを得た。
【０２６０】
α−メチル−β−［１−（２，４−ジニトロフェニル）−イミダゾール−４−イル］プロピオン酸
α−メチル−β−４−イミダゾールプロピオン酸（０．０３０５ｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）と、炭酸水素ナトリウム（０．０６１７ｇ、０．７３４ｍｍｏｌ）とを水（１ｍＬ）で溶かした溶液（ｐＨ ８．０４）に、２，４−ジニトロフルオロベンゼン（０．０３２３ｇ、０．１７４ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（１．０ｍＬ）で溶かした溶液を加えた。反応混合物を一晩ボルテックスした。ＭｅＣＮを減圧下で除去し、残渣を水 ２ｍＬに再溶解し、濾過し、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）５μｍ １００×２１．２ｍｍ分取ＨＰＬＣカラムに、それぞれ１．５および０．５ｍＬの２つのアリコートで充填した。４０分に亘る０．１％ＴＦＡ／水中の０％〜８０％の０．１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮのグラジエントによって生成物を溶出した。グラジエントにおける１２．５〜１４．５分に対応する画分をプールし、Ｓａｖａｎｔ  ＳｐｅｅｄＶａｃ（商標）中で一晩乾燥した。上記のように、ＤＭＳＯ中で水不溶性粗生成物を溶解し、次いで分取ＨＰＬＣによって、さらなる生成物を回収した。混合した画分は、凍結乾燥後に純粋な生成物 ３１ｍｇを生成した。
【０２６１】
（実施例２７）
配列番号：１３７および１３８の化合物の合成
（Ｒ，Ｓ）−３−（１−（２，４−ジニトロフェニル）−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロピオン酸を、下記で説明するように適切なＸａａ２〜Ｘａａ１１−ペプチジル−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂にカップリングさせた。
【０２６２】
（Ｒ，Ｓ）−３−（１−（２，４−ジニトロフェニル）−イミダゾール−４−イル）−２−メチルプロピオン酸（０．０２６７ｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）と、６−Ｃｌ−ＨＯＢｔ（０．０１５１ｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）と、ＨＣＴＵ（０．０３６０ｇ、０．０８７ｍｍｏｌ）とをＮＭＰ／ＤＣＭ（３：１）１ｍＬに溶かした溶液に、ＤＩＥＡ（０．０３１５ｇ、０．２４４ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を短時間ボルテックスし、次いで実施例１９において説明するように調製した適切なＦｍｏｃ脱保護Ｘａａ２〜Ｘａａ１１−ペプチジル−Ｓｉｅｂｅｒ樹脂に加えた。カップリングを１６時間継続させた。ペプチジル−樹脂をＮＭＰ、次いでＤＣＭで洗浄し（３×１．５ｍＬ×１分）、次いでＤＣＭ中の１０％無水酢酸で処理し（１×２ｍＬ×９０分）、次いでＤＣＭ、続いてＤＭＦ洗浄を行った（３×１．５ｍＬ×１分）。ペプチジル−樹脂を、ＤＭＦ（１．５ｍＬ）中の１０％チオフェノールで１時間処理し、ＤＭＦおよびＤＣＭで洗浄した（４×１．５ｍＬ×１分）。次いで、ペプチジル−樹脂をＴＦＡ／ＤＣＭ／ＴＩＳ（３：１．９：０．１）（１ｍＬ）で１０分間処理し、濾過した。濾液を回収し、さらに１時間穏やかにボルテックスした。ＴＦＡ混合物を、ｓｐｅｅｄ−ｖａｃ中で約０．５ｍＬに濃縮し、ＭＴＢＥ ４ｍＬに加えた。１時間後に、沈殿した生成物を遠心分離によって回収し、洗浄し、次いで乾燥し、粗生成物 ０．０８４１ｇを得た。これを分取ＨＰＬＣによって下記の通り精製した。粗ペプチドを溶解し、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）（５μｍ、２５０×３０ｍｍ）カラムに注入し、４０分に亘る０．１％ＴＦＡ／水中の２０％〜５０％の０．１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮの直線グラジエント（流量１５ｍＬ／分）で、流出液による２１７ｎｍでのＵＶ検出を伴う溶出を行った。所望の生成物を含有する画分をプールし、凍結乾燥し、９７．５％純粋なペプチド２６．７ｍｇを得た。
【０２６３】
ペプチドの分取キラルＨＰＬＣ精製
ジアステレオ異性のペプチド混合物（１０ｍｇ）を、ＭｅＣＮ／ＭｅＯＨで溶解した。溶液をＣｈｉｒｏｂｉｏｔｉｃ  Ｖ２．２×５０ｃｍ、５μｍカラムに充填し、ＭｅＣＮ／ＭｅＯＨ／Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）３／ＣＨ３ＣＯＯＨ：６５／３５／０．５／０．５で２０ｍＬ／ｍｉｎで溶出した。異性体Ａを２９〜３５分間回収した。異性体Ｂを３６〜４４分間回収した。第２の操作を上記のように行った。異性体Ａを含有する画分を混合し、約５ｍＬに濃縮し、水／ＭｅＣＮ（４：１）で希釈し、溶液を凍結乾燥した。異性体Ｂを同様に処理した。生成した残渣を、分取ＨＰＬＣによってＴＦＡ塩に変換した。各ペプチドを、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２）５μｍ １００×２１．２ｍｍカラムに注入し、４０分に亘る０．１％ ＴＦＡ／水中の２０％〜５０％の０．１％ＴＦＡ／ＭｅＣＮの直線グラジエント（流量１０ｍＬ／分）によって、流出液による２１７ｎｍでのＵＶ検出を伴う溶出を行った。所望の生成物を含有する画分をプールし、凍結し、凍結乾燥し、精製ペプチド異性体Ａ ６．０ｍｇおよび精製ペプチド異性体Ｂ ４．９ｍｇを得た。
【０２６４】
（実施例２８）
(＋)−および(−)−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)−２−メチルプロピオン酸［α−メチル−β−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロピオン酸、Ｉｍｐ(Ｔｒｔ)］(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)メタノールの合成
反応式２５
【化５０】
2009538360.tif 000073
４−ヒドロキシメチルイミダゾール（４．５３ｇ、３４ｍｍｏｌ）およびトリフェニルメチルクロリド（１０．５４ｇ、３８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５０ｍＬ）中に溶解した。このものに、撹拌しながらＤＩＥＡ（１３．４６ｇ、１０４ｍｍｏｌ）を加え、そして該反応混合物を１４時間撹拌した。該反応混合物を水（７５０ｍＬ）中にそそぎ、そして約３０分間撹拌した。得られた固体を集め、水（３×２５ｍＬ）およびジイソプロピルエーテル（３×２５ｍＬ）を用いて洗浄し、そしてこれを真空下で乾燥して、(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)メタノール（１１．５５ｇ、９９％）を得た。純度（ＨＰＬＣ）：９３％；保持時間、６．３７分；カラム：Phenomenex Luna C18(2)（5μm、50×4.6mm)；勾配：１０分間かけて１０％〜１００％Ｂ／Ａ、１．２５ｍＬ／分。溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ。ＥＳ−ＭＳ：(Ｍ＋Ｈ)＋＝３４１．１。
【０２６５】
４−(クロロメチル)−１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール
反応式２６
【化５１】
2009538360.tif 000074
氷／水を用いて冷却した、ジクロロメタン（７５ｍＬ）中の４−ヒドロキシメチル−１−トリメチルイミダゾール（６．１３ｇ、１８ｍｍｏｌ）の懸濁液に、塩化チオニル（５．０ｇ、４２ｍｍｏｌ）を６分間かけて滴下した。該氷／水浴を除き、そして該反応液を更に３０分間撹拌した。該ＤＣＭおよびＳＯＣｌ２を減圧下で除去した。得られた固体をジイソプロピルエーテル（２００ｍＬ）を用いてトリチュレートし、ろ過によって集め、そして真空下で乾燥して、８３％純度の４−(クロロメチル)−１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール（７．３７ｇ、＞１００％）を得た。保持時間、７．３３分；カラム：YMC ODS-A（3μm、50×4.6mm）；勾配：１０分間かけて１０％〜１００％Ｂ／Ａ、１．２５ｍＬ／分。溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ。ＬＣ／ＭＳ：ＥＳＩ(Ｍ＋Ｈ)＋＝３５９．２。
【０２６６】
２−メチル−２−((1-トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)メチル)マロン酸ジメチル
反応式２７
【化５２】
2009538360.tif 000075
４−(クロロメチル)−１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール（２．７３ｇ、７．６ｍｍｏｌ）および２−メチルマロン酸ジメチル（２．２２ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）をＡｃＣＮ（３０ｍＬ）中に溶解した。この溶液を、ＡｃＣＮ（２ｍＬ）中で撹拌する新たに微粉砕したＫＯＨ（０．８９ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）およびテトラメチルブチルアンモニウムブロミド（０．２５ｇ、０．８ｍｍｏｌ）に６分間かけて加えた。３時間撹拌後に、別の微粉砕したＫＯＨ（０．８９ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）を加え、そして該混合物を終夜撹拌した。
【０２６７】
該固体をろ過によって除去し、そして該溶媒を減圧下で除去した。該残渣をＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）中に溶解し、そしてこれを水（２×２０ｍＬ）、次いで飽和ＮａＣｌ（１×２０ｍＬ）を用いて洗浄した。該ＥｔＯＡｃを減圧下で除去して、油状物残渣（３．４６ｇ）を得た。このものを、フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル６０（２５０ｇ、０．０４０〜０．０６３ｍｍの粒子サイズ）カラム（５．０×３０ｃｍ）、溶出液としてＣＨＣｌ３／ＥｔＯＡｃ（９：１）を使用する）によって精製した。２５ｍＬのフラクションを集め、そして純粋な生成物をフラクション５３〜７２中に見出した。これらを貯蔵し、そして溶媒を減圧下で除去した。該得られた残渣をＣＨＣｌ３（〜１５ｍＬ）から２回再蒸発させ、次いで乾燥して、９８％純度の２−メチル−２−((１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)メチルマロン酸ジメチル（１．７２ｇ）を得た。保持時間：１３．０２分；カラム：YMC ODS-A（3μm、50×4.6mm)；勾配：２０分間かけて１０％〜１００％Ｂ／Ａ、１．２５ｍＬ／分。溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ。ＬＣ／ＭＳ：ＥＳＩ (Ｍ＋Ｈ)＋＝４６９．３。１Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ)：δ 1.42 (s, 3H), 3.15 (s, 2H), 3.63 (s, 6H), 6.48 (s, 1H), 7.05-7.15 (m, 6H), 7.26 (s, 1H) 7.28-7.37 (m, 9H)。
【０２６８】
２−メチル−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸メチル
反応式２８
【化５３】
2009538360.tif 000076
ＮＭＰ（５ｍＬ）中の２−メチル−２−((１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)メチル)マロン酸ジメチル（０．７３４４ｇ、１．５７ｍｍｏｌ）に、ＮａＣｌ（０．２１２ｇ）および水（０．３ｍＬ）を加え、そして該混合物を４．５時間加熱還流（２０２℃）した。該反応混合物を、分液ろうと中で水（２０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）の間で分配した。該水層をＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）を用いて抽出し、そして該有機層を合わせて水（２×２０ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ（１×２０ｍＬ）を用いて洗浄し、そしてＭｇＳＯ４を用いて乾燥した。該ＥｔＯＡｃを減圧下で除去して、油状物残渣（０．８ｇ）を得た。このものを、ＣＨＣｌ３（５×２０ｍＬ）、続いて２０％ＥｔＯＡｃ／ＣＨＣｌ３（８×２０ｍＬ）を用いて、シリカゲルパッド（シリカゲル６０の１３．５ｇ、０．０４０〜０．０６３ｍｍの粒子サイズ）を通して溶出することによって精製した。該生成物を含有するフラクションを乾燥して、７９％純度の２−メチル−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸メチル（０．４５ｇ）を得た。保持時間、７．３５分；カラム：YMC ODS-A（3μm, 50×4.6mm）；勾配：１０分間かけて１０％〜１００％Ｂ／Ａ、１．２５ｍＬ／分。溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ。ＬＣ／ＭＳ：ＥＳＩ (Ｍ＋Ｈ)＋＝４１１．３。
【０２６９】
２−メチル−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸メチルのエナンチオマーのキラル分離
イソプロパノール（２ｍＬ）およびＮ−ヘプタン（１６ｍＬ）中のラセミの２−メチル−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸メチルの溶液を、キラルセルＯＤカラム（２０ｍｍ内径×５００ｍｍ、Chiral Technologies Inc.社製）上に、一度に１〜２．５ｍＬロードし、そして３％イソプロパノール／ヘプタンを用いて１０ｍＬ／分で溶出した。より速く溶出するエナンチオマーを５８〜７０分のフラクションで集め；より遅く溶出するエナンチオマーを７５〜１００分のフラクションで集めた。各エナンチオマーは、溶媒を減圧下で除去しそして真空下で乾燥することによって得た。これは、９８％純度の生成物であるより速く溶出するエナンチオマー（０．２０５ｇ）を与えた。保持時間、９．２８分；カラム: Phenomenex Luna C18(2)（5μm、50×4.6mm）；勾配：１５分間かけて１０％〜１００％Ｂ／Ａ、１．２５ｍＬ／分。溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ。ＬＣ／ＭＳ：ＥＳＩ(Ｍ＋Ｈ)＋＝４１１．３；旋光度、[α]Ｄ＝＋１２．９°（ＣＨＣｌ３中、ｃ＝１．０５）。
【０２７０】
より遅く溶出するエナンチオマーの収量は０．２０３ｇ（９８％純度）であった；ＲＴ、９．２７分。より速く溶出する異性体についての記載と同じカラムおよび勾配を使用した。ＬＣ／ＭＳ：ＥＳＩ(Ｍ＋Ｈ)＋＝４１１．３；旋光度、[α]Ｄ＝−１３．５°(ＣＨＣｌ３中、ｃ＝１．１６）。
【０２７１】
(＋)−および(−)−２−メチル−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸
反応式２９
【化５４】
2009538360.tif 000077
２−メチル−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸のより速く溶出するエナンチオマー（０．１８６ｇ、０．４５３ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（２ｍＬ）および１Ｎ ＬｉＯＨ（０．４５ｍＬ）中で２時間撹拌することによって加水分解した。ＨＰＬＣ分析は、生成物への５０％変換を示す。ほとんど完全な変換（９７．５％）には、２つの更なる１Ｎ ＬｉＯＨ（各０．１ｍＬ）の添加、および総計３６時間の撹拌を必要とした。減圧下での濃縮および水（２０ｍＬ）の添加後に、水層をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）を用いて抽出し、そしてＤＣＭ抽出物を合わせて、水、飽和塩化ナトリウム（各１×２０ｍＬ）を用いて洗浄し、そしてＭｇＳＯ４を用いて乾燥した。該ＤＣＭを除去し、そして得られた固体を真空下で乾燥して、９７％純度の(＋)−２−メチル−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸（０．１７２８ｇ）を得た。保持時間、９．３６分；カラム：YMC ODS-A（3μm、50×4.6mm）；勾配：１５分間かけて１０％〜１００％Ｂ／Ａ、１．２５ｍＬ／分。溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ。ＬＣ／ＭＳ：ＥＳＩ(Ｍ＋Ｈ)＋＝３９７．３０、(Ｍ−Ｈ)−＝３９５．３０。旋光度、[α]Ｄ＝＋１２．８°(ＣＨＣｌ３中のｃ＝１．０３)。１Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤ３ＯＤ、５００ＭＨｚ)：δ 1.13 (d, 3H), 2.57-2.65 (m, 1H), 2.67-2.80 (m, 1H), 2.82-2.92 (m, 1H), 6.75 (s, 1H), 7.10-7.17 (m, 6H), 7.34-7.41 (m, 9H), 7.58 (s, 1H)。
【０２７２】
２−メチル−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸メチルのより遅く溶出するエナンチオマー（０．１８１ｇ、０．４４２ｍｍｏｌ）を、より速く溶出するエナンチオマーについて上記するとおりに加水分解して、９７％純度の(−)−２−メチル−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸（０．１６３ｇ）を得た。保持時間、９．３２分（(＋)−異性体について記載するのと同じカラムおよび勾配)。ＬＣ／ＭＳ：ＥＳＩ (Ｍ＋Ｈ)＋＝３９７．２４、(Ｍ−Ｈ)−＝３９５．２６。旋光度、[α]Ｄ＝−１２．２°（ＣＨＣｌ３中のｃ＝１．０３）。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ、５００ＭＨｚ）：δ 1.12 (d, 3H), 2.56-2.64 (m, 1H), 2.68-2.78 (m, 1H), 2.82-2.90 (m, 1H), 6.69 (s, 1H), 7.10-7.16 (m, 6H), 7.34-7.39 (m, 9H), 7.45 (s, 1H)。
【０２７３】
（実施例２９）
配列番号：１６７、１６８、１６９、および１７０の化合物の合成
配列番号：１６７，１６８、１６９および１７０の保護Ｘａａ２−Ｘａａ１１ペプチド配列は、以下の洗浄および脱保護のプロトコールを用いて、Sieber Amide樹脂（９．５６ｇ、０．７２ｍｍｏｌ／グラム、６．８８ｍｍｏｌ）から出発してAdvanced ChemTech Model 90合成機上で構築した。
１．ＤＭＦ洗浄 １×８５ｍＬ×１分、
２．２０％ピペリジン／ＤＭＦ １×８５ｍＬ×５分、
３．２０％ピペリジン／ＤＭＦ １×８５ｍＬ×１５分、
４．ＤＭＦ洗浄 ３×８５ｍＬ×１分、
５．ＮＭＰ洗浄 ３×８５ｍＬ×１分。
【０２７４】
ＮＭＰ（７０ｍＬ）中の(Ｓ)−２−(((９Ｈ−フルオレン−９−イル)メトキシ)カルボニルアミノ)−３−(６−ｏ−トリルピリジン−３−イル)プロパン酸ＨＣｌ塩（６．７０ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）、ＰｙＢＯＰ（７．２９ｇ、１４．０ｍｍｏｌ）、およびＨＯＢｔモノ水和物（２．１４ｇ、１４．０ｍｍｏｌ）の溶液を該脱保護した樹脂に加え、続いてＤＩＥＡ（７．２８ｇ、５６．３ｍｍｏｌ）を加え、そして該混合物を、樹脂試料についてのカイザーニンヒドリン(Kaiser ninhydrin)試験が陰性となるまで（４．５時間）、渦巻いた。該樹脂をＤＭＦ（３×８５Ｌ×１分）、次いでＤＣＭ（７×８５ｍＬ×１分）を用いて洗浄し、そして真空下で乾燥して１１．３４４ｇを得た。Ｆｍｏｃ測定は、０．５３ｍｍｏｌ／グラムの置換を与えた。上記の工程１〜４による該樹脂の脱保護および６回のＤＭＦ洗浄後に、ＤＭＦ（５０ｍＬ）およびＤＩＣ（０．９４ｇ、７．４５ｍｍｏｌ）中の(Ｓ)−２−(((９Ｈ−フルオレン−９−イル)メトキシ)カルボニルアミノ)−３−((２’−エチル−４’−ヒドロキシ)ビフェニル−４−イル)プロパン酸[Ｆｍｏｃ−(Ｓ)−(２'−エチル−４’ヒドロキシ)−Ｂｉｐ−ＯＨ]（３．７９ｇ、７．４７ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔモノ水和物（１．１４ｇ、７．４４ｍｍｏｌ）の溶液を該樹脂に加え、そして該混合物を２０時間渦巻いた。樹脂試料が僅かに陽性のカイザーニンヒドリン試験を与えた後に、該ペプチジル−樹脂をＤＭＦおよびＤＣＭ（共に、４×８５ｍＬ×１分間）を用いて洗浄し、次いでこれをＤＣＭ中の１０％無水酢酸（１×１００ｍＬ×３０分間）を用いて処理した。該ペプチジル−樹脂をＤＣＭ（４×８５ｍＬ×１分間）を用いて洗浄し、そして約１ｍｍｏｌを取り出して、真空下で乾燥した。
【０２７５】
該ジペプチジル−樹脂（２．５０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を、Advanced ChemTech Model 90合成機上の５０ｍＬ反応容器中にロードした。該Ｆｍｏｃ基を以下のサイクルを用いて除去した。
１．ＤＭＦ洗浄 １×２５ｍＬ×１分、
２．２０％ピペリジン／ＤＭＦ １×２５ｍＬ×５分、
３．２０％ピペリジン／ＤＭＦ １×２５ｍＬ×１５分、
４．ＤＭＦ洗浄 ８×２５ｍＬ×１分。
【０２７６】
ＤＭＦ（５ｍＬ）およびＤＩＣ（０．３８２９ｇ、３．０３ｍｍｏｌ）中のＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸β−ｔ−ブチルエステル（１．２３４５ｇ、３．００ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔモノ水和物（０．４５９９ｇ、３．００ｍｍｏｌ）の溶液を該脱保護したペプチジル樹脂に加え、そして該混合物を２時間渦巻いて陰性のカイザーニンヒドリン試験を得た。該ペプチド−樹脂をＤＭＦ、次いでＤＣＭ（共に、４×２５ｍＬ×１分間）を用いて洗浄し、そしてModel 90合成機上の２つの反応容器中に等しく分割した。次いで、該合成を下記の通り続けた。該Ｆｍｏｃ基を以下のサイクルを用いて除去した。
１．ＤＭＦ洗浄 １×１２ｍＬ×１分間、
２．２０％ピペリジン／ＤＭＦ １×１２ｍＬ×５分間、
３．２０％ピペリジン／ＤＭＦ １×１２ｍＬ×１５分間、
４．ＤＭＦ洗浄 ８×１２ｍＬ×１分間。
【０２７７】
ＤＭＦ／ＤＣＭ（１：１）（１０ｍＬ）およびＤＩＣ（０．１９５５ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）中のＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｎ−ｉｍ−トリチル−Ｌ−ヒスチジンまたはＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−セリン（０．９２８２ｇ、１．５０ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔモノ水和物（０．２２９６ｇ、１．５０ｍｍｏｌ）の溶液を該脱保護した樹脂に加えた。９０分後に、該ペプチド−樹脂をＤＭＦおよびＤＣＭ（共に、４×１２ｍＬ×１分間）を用いて洗浄し、そして陰性のカイザーニンヒドリン試験を得た。上記の通り該Ｆｍｏｃ基の除去後に、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−トレオニン（０．６００６ｇ、１．５１ｍｍｏｌ）を上記の工程に記載する通りカップリングさせ、続いて該Ｆｍｏｃ基を除去した。Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−α−メチル−２−フルオロ−Ｌ−フェニルアラニン（０．４１６７ｇ、０．９９３ｍｍｏｌ）のカップリングを、ＤＭＦ／ＤＣＭ（１：１）（１０ｍＬ）およびＤＩＣ（０．１２６０ｇ、０．９９８ｍｍｏｌ）中のアミノ酸およびＨＯＢｔモノ水和物（０．１５２９ｇ、０．９９８ｍｍｏｌ）の溶液を脱保護したペプチジル−樹脂と４時間混合することによって行なった。ＤＭＦおよびＤＣＭ（共に、４×１２ｍＬ×１分間）洗浄後に、該ペプチド−樹脂の試料は陰性のカイザーニンヒドリン試験を与えた。該Ｆｍｏｃ基を除去するために、上記の工程１〜４を行なった。
【０２７８】
該Ｆｍｏｃ基の除去後に、Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−Ｏ−ｔ−ブチル−Ｌ−トレオニン（１．９８８０ｇ、５．００ｍｍｏｌ）を、０．５Ｍ ＨＯＡｔ／ＤＭＦ（１０．０ｍＬ、５．００ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（０．６３６０ｇ、５．０４ｍｍｏｌ）中の該アミノ酸の溶液を脱保護したペプチジル−樹脂と１６時間混合することによってカップリングさせた。ＤＭＦおよびＤＣＭの洗浄（共に、４×１２ｍＬ×１分間）後に、湿性ペプチジル−樹脂の試料をＴＦＡ／トリイソプロピルシラン／水（９６：２：２）の１ｍＬを用いて１．５時間かけて切断し、そしてＨＰＬＣおよびＭＳ分析後に、唯一の非常に少量の非カップリングペプチドを示した。該ペプチド−樹脂をＤＣＭ中の１０％無水酢酸（１×１２ｍＬ×１時間）を用いて処理し、次いでこれをＤＣＭ（６×１２ｍＬ×１分間）を用いて洗浄した。該Ｆｍｏｃ基の除去後に、Ｎ−Ｆｍｏｃ−グリシン（０．８９４１ｇ、３．０１ｍｍｏｌ）およびＮ−α−Ｆｍｏｃ−Ｌ−グルタミン酸γ−ｔ−ブチルエステル（１．２７６５ｇ、３．００ｍｍｏｌ）を、溶液として、ＤＭＦ／ＤＣＭ（１：１）（２０ｍＬ）中のＨＯＢｔモノ水和物（０．４６０４ｇ、３．０１ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（０．３８８５ｇ、３．０８ｍｍｏｌ）と連続して２時間カップリングさせた。各カップリング工程後に、陰性のカイザーニンヒドリン試験を得た。その結果得た該２個のペプチジル−樹脂を各々、フリットを備えた別個の３５ｍＬシリンジに移し、そして真空下で乾燥した。次いで、該合成を、各ペプチジル−樹脂の０．２８ｍｍｏｌを用いて続けた。Ｆｍｏｃ基の除去後に、更なる８ｍＬのＤＭＦを用いて希釈した、０．５Ｍ ＨＯＡｔ／ＤＭＦ（２．２４ｍＬ、１．１２ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（０．１４１３ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）中のＮ−α−Ｆｍｏｃ−α−メチル−Ｌ−プロリン（０．３９４３ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）の溶液を２個の等量に分割し、これを該脱保護ペプチド−樹脂の各々に加えた。１２時間渦巻きそしてＤＭＦおよびＤＣＭ（共に、３×８ｍＬ×１分間）を用いて洗浄後に、該ペプチジル−樹脂の０．０２ｍｍｏｌアリコートをAdvanced ChemTech Ω396合成機上の３〜４個の反応ウェル中に置いた。該Ｆｍｏｃ基を以下の通り除去した：
１．２０％ピペリジン／ＤＭＦ １×１ｍＬ×５分間、
２．２０％ピペリジン／ＤＭＦ １×１ｍＬ×１５分間、
３．ＮＭＰ洗浄 ８×１ｍＬ×１分間。
【０２７９】
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の(＋)−２−メチル−３−(1−トリチル−1Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸（７９．９ｍｇ、０．２０２ｍｍｏｌ）、ＴＦＦＨ（０．０５３８ｇ、０．２０４ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（０．０５３２ｇ、０．４１２ｍｍｏｌ）の溶液を２個の等量に分け、このものを、関連する脱保護したペプチド樹脂に加え、１２時間撹拌後に、ＮＭＰ（２×１ｍＬ×１分間）、次いでＤＣＭ（３×１ｍＬ×１分間）を用いて洗浄した。ＴＦＡ／ＴＩＳ／水（９６：２：２）を用いて小さい樹脂試料を切断し、続いて生成物のＨＰＬＣおよびＭＳ分析により、ほとんど完結したカップリングを示した。該ペプチド−樹脂を、ＤＣＭ中の１０％無水酢酸（１×１ｍＬ×１時間）を用いて処理し、次いでＤＣＭ（６×１．５ｍＬ×１分間）を用いて洗浄した。
【０２８０】
該ペプチド樹脂をＴＦＡ／ＴＩＳ／水（９６：２：２（３×１ｍＬ×３０分間））を用いて処理し、そして該ろ液を集め、speed-vac中でほとんど乾固するまで濃縮した。該粗ペプチドをジイソプロピルエーテル（５ｍＬ）を加えることによって沈降させ、ジイソプロピル得エーテルを用いて洗浄し、そして乾燥した。該粗ペプチドをYMC ODS-A（10μm、250×20mm）カラムを用いて本明細書中に記載する通り、プレパラティブＨＰＬＣによって精製した。使用する勾配は、６０分間かけて２５％〜５５％Ｂ／Ａとした。溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ／水；溶媒Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ；流速、１５ｍＬ／分。純粋な生成物を含有するフラクションを貯蔵し、そして凍結乾燥した。配列番号：１６９（または、１７０）の化合物を９５％純度の生成物として得た。保持時間、２２．０分（カラム：YMC ODS-AQ 3μm（4.6×150mm）；勾配：６０分間かけて１５〜４５％Ｂ／Ａ、１ｍＬ／分）。ＥＳ−ＭＳ分析：(Ｍ＋Ｈ)＋＝１５９０．０、(Ｍ＋２Ｈ)＋／２＝７９５．９。
【０２８１】
配列番号：１６７（または、１６８）の化合物を９６％純度の生成物（７．２ｍｇ、９％回収）を得た。保持時間、２２．７分（YMC ODS-AQ 3μm（4.6×150mm）；勾配：６０分間かけて１５〜４５％Ｂ／Ａ、１ｍＬ／分）。ＥＳ−ＭＳ分析：(Ｍ＋Ｈ)＋＝１５３９．８、(Ｍ＋２Ｈ)＋／２＝７７０．９。
【０２８２】
（実施例３０）
配列番号：１５７の化合物の合成
ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＦｍｏｃ−Ｈｉｓ(Ｔｒｔ)−ＯＨ（０．１２７８ｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）、ＴＦＦＨ（０．０５４２ｇ、０．２０５ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（０．０５３３ｇ、０．４１２ｍｍｏｌ）溶液を、実施例２９に記載する通り製造した関連する脱保護したペプチド樹脂に加えた。該カップリングを、０．５Ｍ ＨＯＡｔ／ＤＭＦ（０．４０ｍＬ）およびＤＭＦ（０．４０ｍＬ）中のＦｍｏｃ−Ｈｉｓ(Ｔｒｔ)−ＯＨ（０．１２５７ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（０．０２６２ｇ、０．２１ｍｍｏｌ）の溶液を用いて繰り返した。該ペプチド−樹脂を以下の通り脱保護した。
１．２０％ピペリジン／ＤＭＦ １×１ｍＬ×５分間、
２．２０％ピペリジン／ＤＭＦ １×１ｍＬ×１５分、
３．ＤＭＦ洗浄 ８×１ｍＬ×１分間、
４．ＤＣＭ洗浄 ３×１ｍＬ×１分間。
【０２８３】
２,５−ジイソピロリジン−１−イルメチルカーボネート（０．０２４１ｇ、０．１４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（０．５ｍＬ）中に溶解し、これを脱保護した樹脂に加え、そして該混合物を１４時間渦巻いた。ＤＣＭ（４×１ｍＬ×１分間）を用いて洗浄後に、樹脂試料は陰性のカイザーニンヒドリン試験を与えた。該粗生成物を該樹脂から切断し、そして実施例２９中に記載する通り沈降させて、生成物（４０ｍｇ）を得た。これを実施例２９に記載する通り（使用する勾配を６０分間かけて２０％〜５５％Ｂ／Ａとすることを除く）によって精製した。純粋な生成物を含有するフラクションを貯蔵し、そして凍結乾燥して、９７％純度の生成物（１２．０ｍｇ（３０％回収））を得た。保持時間、３３．３分（カラム、YMC ODS-AQ 3μm（4.6×150mm)；勾配：６０分間かけて１５〜５５％Ｂ／Ａ、１ｍＬ／分）。ＥＳ−ＭＳ分析：(Ｍ＋Ｈ)＋＝１６４８．８、(Ｍ＋２Ｈ)＋／２＝８２４．９。
【０２８４】
（実施例３１）
配列番号１７５および１７６の化合物の合成
０．５Ｍ ＨＯＡｔ／ＤＭＦ（０．２０２ｍＬ、０．１０１ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（０．２ｍＬ）中の２−メトキシ−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸（０．０４１７ｇ、０．１０１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．０３９０ｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．０２８４ｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）の溶液を、実施例２９に記載する通りに製造したＦｍｏｃ−脱保護したＸａａ２−Ｘａａ１１ペプチジル−樹脂（０．０１０ｍｏｌ）（ここで、Ｘａａ８はＨｉｓである）に加えた。１４時間渦巻いた後に、該ペプチド−樹脂をＤＭＦおよびＤＣＭ（共に、３×１ｍＬ×１分間）を用いて洗浄し、次いでＤＣＭ中の１０％無水酢酸（１×１ｍＬ×３０分間）を用いて処理し、続いてＤＣＭ洗浄（６×１ｍＬ×１分間）を行なった。該ペプチド生成物を、実施例２９に記載する通りに、ＴＦＡ／ＴＩＳ／水（９６：２：２）を用いて該樹脂から遊離させそして脱保護した。
【０２８５】
該粗ペプチドを、６０分間かけて３０％〜４０％Ｂ／Ａの勾配を用いて本明細書中に記載する通り、プレパラティブＨＰＬＣによって精製した。溶媒Ａ：水／ＡｃＣＮ（９５：５）中の１０ｍＭ リン酸ナトリウム ｐＨ７；溶媒Ｂ：水／ＡｃＣＮ（２０：８０）中の１ｍＭ リン酸ナトリウム ｐＨ７；カラム：Phenomenex Luna C18(2)、5μm（250×21.2mm）；流速：１５ｍＬ／分。速く溶出するジアステレオマー（異性体Ａ）を含有するフラクションを貯蔵し、そして約５ｍＬまで濃縮した。この溶液を、２０分間かけて０％〜１００％Ｂ／Ａの勾配を用いてPhenomenex Luna C18(2)カラム（5μm、100×21.2mm）中に溶出することによって脱塩した。溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ／水；溶媒Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ；流速、１５ｍＬ／分。該生成物を含有するフラクションを貯蔵し、そして凍結乾燥して配列番号：１７５（または１７６）の９３％純度の化合物（１．２ｍｇ）を得た。保持時間、４０．４分；カラム：YMC ODS-AQ 3μm（4.6×150mm）；勾配：６０分間かけて１５〜４５％Ｂ／Ａ、１ｍＬ／分。ＥＳ−ＭＳ分析：(Ｍ＋Ｈ)＋＝１６０５．６、(Ｍ＋２Ｈ)＋／２＝８０３．５。
【０２８６】
配列番号：１７６（または１７５）の化合物は、最初のプレパラティブＨＰＬＣ工程からのより遅く溶出するジアステレオマーを含有するフラクションから上記の通り得た。収量：９６％純度の生成物の３．０ｍｇ。保持時間：４０．７分（上記と同じ分析用ＨＰＬＣ条件下）。ＥＳ−ＭＳ分析：(Ｍ＋Ｈ)＋＝１６０５．７、(Ｍ＋２Ｈ)＋／２＝８０３．７。
【０２８７】
（実施例３２）
２−メトキシ−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸の合成
２−メトキシ−２−((１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)メチル)マロン酸ジメチル
反応式３０
【化５５】
2009538360.tif 000078
ＡｃＣＮ（１０ｍＬ）中の４−(クロロメチル)−１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール（０．３６５５ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）および２−メトキシマロン酸ジメチル（０．１８２２ｇ、１．２５ｍｍｏｌ）溶液を、ＡｃＣＮ（２ｍＬ）中の新たに微粉砕した水酸化カリウム（０．１７６０ｇ、３．１４ｍｍｏｌ）および臭化テトラブチルアンモニウム（０．０５２１ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の撹拌スラリーにすばやく加えた。１６時間後に、該反応液を酢酸エチル（２０ｍＬ）を用いて希釈し、そしてセライトパッドを通してろ過し、これをＥｔＯＡｃ（２×５ｍＬ）を用いて洗浄した。有機層を合わせて水（２×１０ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ（１×１０ｍＬ）を用いて洗浄し、そしてＭｇＳＯ４を用いて乾燥した。溶媒の除去時に得た油状物の残渣（０．４１ｇ）を、溶出液としてＣＨＣｌ３／ＥｔＯＡｃ（９：１）を用いてシリカゲル６０（４２ｇ、０．０４０〜０．０６３ｍｍの粒子サイズ）の２．５×３０ｃｍカラム上でのクロマトグラフィーによって精製し、そして７２×２５ｍＬのフラクションを集めた。フラクション２８〜７２を貯蔵し乾燥して、８５．９％純度の２−メトキシ−２−((１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)メチル)マロン酸ジメチル（０．１６２８ｇ、３３％）を得た。保持時間、７．５２分：カラム：YMC ODS-A（3μm、50×4.6mm）；勾配：１０分間かけて１０％〜１００％Ｂ／Ａ、１．２５ｍＬ／分。溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ。ＬＣ／ＭＳ：ＥＳＩ (Ｍ＋Ｈ)＋＝４８５．３。１Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ)：δ 3.39 (s, 3H), 3.49 (s, 2H), 3.69 (s, 6H), 6.70 (s, 1H), 6.99-7.03 (m, 6H), 7.30-7.35 (m, 9H), 7.92 (s, 1H)。
【０２８８】
２−メトキシ−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸メチル
反応式３１
【化５６】
2009538360.tif 000079
ＮＭＰ（２ｍＬ）および水（０．３ｍＬ）中の２−メトキシ−２−((１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)メチル)マロン酸ジメチル（０．１５２０ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）および塩化ナトリウム（０．０３９８ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の溶液を２０１℃まで１時間加熱した。室温まで冷却後に、酢酸エチル（１５ｍＬ）を加え、そして該有機層を水（２×１０ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム（１×１０ｍＬ）を用いて洗浄し、次いでＮａＳＯ４を用いて乾燥した。溶媒の除去により、粗生成物（０．１０３０ｇ）を得た。このものを、溶出液としてＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（９８：２）を使用するシリカゲル６０（１１ｇ、０．０４０〜０．０６３ｍｍの粒子サイズ）カラム（２．５×１０ｃｍ）上でのクロマトグラフィーによって精製し、そして１２ｍＬフラクションを集めた。フラクション２〜１０を貯蔵し乾燥し、そして該残渣を、上記の通り（５ｇのシリカゲルを使用し、そして溶出液をＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（９９：１）とする点を除く）再度精製した。フラクション１０〜１６を貯蔵し、乾燥後に、９４．５％純度の２−メトキシ−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸メチル（０．０５９２ｇ、４５％）を得た。保持時間：７．２９分；カラム：YMC ODS-A（3μm、50×4.6 mm）；勾配：１０分間かけて１０％〜１００％Ｂ／Ａ、１．２５ｍＬ／分。溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ。ＬＣ／ＭＳ：ＥＳＩ (Ｍ＋Ｈ)＋＝４２７．１。
【０２８９】
２−メトキシ−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸
反応式３２
【化５７】
2009538360.tif 000080
テトラヒドロフラン（１ｍＬ）、メタノール（１ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）中の２−メトキシ−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸メチル（０．０５９２ｇ、０．１３９ｍｍｏｌ）の溶液に、２Ｎ ＮａＯＨ（０．２７８ｍＬ）を加え、そして該反応混合物を１．７５時間撹拌した。該有機溶媒を除去し、そして１Ｎ ＫＨＳＯ４（５ｍＬ）および酢酸エチル（１０ｍＬ）を加えた。該有機層を水（２×５ｍＬ）、次いで飽和塩化ナトリウム（１×５ｍＬ）を用いて洗浄し、そしてＭｇＳＯ４を用いて乾燥した。該水層を合わせてＤＣＭ（２×１０ｍＬ）を用いて再抽出し、そしてＭｇＳＯ４を用いて乾燥した。真空下で溶媒の除去および乾燥により、９２．６％純度の２−メトキシ−３−(１−トリチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル)プロパン酸（０．０５５２ｇ、９６％）を得た。保持時間、６．８０分；カラム：Phenomenex Luna C18(2)（5μm、50×4.6mm）；勾配：１０分間かけて１０％〜１００％Ｂ／Ａ、１．２５ｍＬ／分。溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ／水、溶媒Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ。ＬＣ／ＭＳ：ＥＳＩ (Ｍ＋Ｈ)＋＝４１３．１。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、５００ ＭＨｚ）：δ 3.10-3.18 (m, 1H), 3.31-3.38 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 4.26-4.31 (m (1H), 6.86 (s, 1H), 7.04-7.11 (m, 6H), 7.37-7.47 (m, 9H), 8.16 (s, 1H)。
【０２９０】
（実施例３３）
配列番号１６４の化合物の合成
反応式３３
【化５８】
2009538360.tif 000081
ＡｃＣＮ（０．６１０ｍＬ）およびヨウ化ナトリウム水溶液（３．９３ｍｇ／ｍＬ、０．６１０ｍＬ、０．０１６ｍｍｏｌ）中の配列番号：１５８の化合物（０．０２１１ｇ、０．０１３２ｍｍｏｌ）の溶液に、水／ＡｃＣＮ（１：１）中のクロラミンＴの溶液（１０．０５ｍｇ／ｍＬ、０．５４０ｍＬ、０．０１６ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を３５分間渦巻き、ろ過し、そして該生成物を本明細書中に記載する通りプレパラティブＨＰＬＣによって精製した。カラム：Phenomenex Luna C18(2)（5μm、250×21.2mm）；勾配：６０分間かけて１５％〜７５％Ｂ／Ａ。溶媒Ａ：０．１％ＴＦＡ／水；溶媒Ｂ：０．１％ＴＦＡ／ＡｃＣＮ；流速、１５ｍＬ／分。純粋な生成物を含有するフラクションを貯蔵し凍結乾燥して、９９％純度のヨウ化ペプチド（１１．６ｍｇ）を得た。保持時間、３０．４１分；カラム：YMC ODS-AQ（3μm、4.6×150 mm）；勾配：６０分間かけて１５〜７５％Ｂ／Ａ、１ｍＬ／分。溶媒Ａ：水／ＡｃＣＮ（９５：５）中の１０ｍＭ リン酸ナトリウム、ｐＨ ７．５；溶媒Ｂ：水／ＡｃＣＮ（２０：８０）中の１ｍＭ リン酸ナトリウム、ｐＨ ７．５。ＥＳ−ＭＳ分析：(Ｍ＋Ｈ)＋＝１７２５．０、(Ｍ＋２Ｈ)＋／２＝８６３．０。
【０２９１】
（実施例３４）
例示的なペプチドを表３Ｃに示す。
【表２２】
2009538360.tif 000082
【表２３】
2009538360.tif 000083
【表２４】
2009538360.tif 000084
【表２５】
2009538360.tif 000085
【表２６】
2009538360.tif 000086
【表２７】
2009538360.tif 000087
【表２８】
2009538360.tif 000088
【表２９】
2009538360.tif 000089
【表３０】
2009538360.tif 000090
【表３１】
2009538360.tif 000091
【表３２】
2009538360.tif 000092
【表３３】
2009538360.tif 000093
【表３４】
2009538360.tif 000094
【表３５】
2009538360.tif 000095
【表３６】
2009538360.tif 000096
【表３７】
2009538360.tif 000097
【表３８】
2009538360.tif 000098
【０２９２】
【化５９】
2009538360.tif 000099
【化６０】
2009538360.tif 000100
【化６１】
2009538360.tif 000101
【化６２】
2009538360.tif 000102
【０２９３】
アミノ酸およびペプチド化学の当業者であれば、４位またはパラ位にフェニル置換基を有するアミノ酸であるフェニルアラニンは、別の方法では４−（フェニル）フェニルアラニンまたは４，４’−ビフェニルアラニンとして定義することができ、したがって「Ｂｉｐ」と略記し得ることを認識している。本明細書における「アミノ酸の略語および構造」の項および表において示される略語のために、ビフェニルアラニンというアミノ酸は、例えば、「Ｂｉｐ（２’−Ｍｅ）」と略記することができ、これはその４位が２’−メチルフェニル基と置換されている（２’−メチル基がフェニル環の結合点に対してオルトである）フェニルアラニンを表すことが意図されている。
【０２９４】
（実施例３５）
環状ＡＭＰ測定
ＧＬＰ−１受容体は、Ｇ−タンパク質がカップリングした受容体である。生物活性のある形態であるＧＬＰ−１（７−３６）−アミドは、ＧＬＰ−１受容体と結合し、シグナル伝達を通してアデニル酸シクラーゼの活性化をもたらし、細胞内のｃＡＭＰ濃度を増加させる。ＧＬＰ−１受容体の刺激におけるペプチドのアゴニズムをモニターするために、細胞内のｃＡＭＰ含量をアッセイすることによってアデニル酸シクラーゼの活性をモニターした。全長ヒトグルカゴン様ペプチド１受容体は、ＣＨＯ−Ｋ１細胞中に安定的に発現し、系統が確立された。ＧＬＰ−１の飽和用量に応答するｃＡＭＰ含量の最も大きい増加でクローンを選別し、クローンＣＨＯ−ＧＬＰ１Ｒ−１９を選択した。
【０２９５】
ハムＦ１２栄養培地（Ｇｉｂｃｏ#１１７６５−０５４）、１０％ＦＢＳ、１×Ｌ−グルタミン、１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、および０．４ｍｇ／ｍｌ  Ｇ４１８中で細胞を培養した。組織培養用９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに、ＣＨＯ−ＧＬＰ−１Ｒ−１９細胞（培地１００μｌ中に２０，０００個）を蒔き、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃にて一晩インキュベーションした。アッセイの日に、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）１００μｌで１回洗浄した。アッセイを始める前に全てのペプチドを連続的に希釈するためにＢｉｏｍｅｋ２０００を使用した。１００％ＤＭＳＯ中で段階希釈を行った。Ｐｌａｔｅｍａｔｅ  Ｐｌｕｓを使用するアッセイ開始の前にペプチドプレートを作製した。化合物 １．５μＬをＶ底プレートに移し、３−イソブチル−１−メチルキサンチン（非選択的ホスホジエステラーゼ阻害剤）１００μＭを補充したアッセイ緩衝液１５０μＬをプレートに添加し、１：１００希釈で最終濃度１％のＤＭＳＯを得た。
【０２９６】
ｃＡＭＰ標準曲線を得るために、０．２〜２５．６ｐｍｏｌ／ウェルの範囲のｃＡＭＰの段階希釈を溶解試薬１（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｃＡＭＰ  ＳＰＡキット）中で行った。５０μｌの各ｃＡＭＰ標準を手動で添加し、混合試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ  ｃＡＭＰ  ＳＰＡキット）７０μｌをマルチドロップを使用して添加した。次いで、プレートを密封し、１５時間後にＴｒｉｌｕｘカウンター上で計数した。ＣＰＭをｃＡＭＰのｐｍｏｌに変換するために、この標準曲線を使用した。
【０２９７】
Ｐｌａｔｅｍａｔｅ  Ｐｌｕｓ上のｃＡＭＰアッセイプロトコル
細胞プレートおよびペプチドプレートをＰｌａｔｅｍａｔｅに装填した。培地をウェルから吸引し、廃棄した。次いで、１ウェル当たり１００μＬのペプチド／緩衝液混合物をペプチドプレートから加え、アッセイを開始した。インキュベーションの３０分後に、ペプチド／緩衝液を除去し、溶解試薬１溶液５０μＬをウェル毎に加えた。プレートを室温で１時間保持、または冷蔵し密封する場合は一晩保持した。ｃＡＭＰ検出試薬（ＳＰＡビーズに結合している事前に混合された１２５Ｉ−ｃＡＭＰ類似体、抗ｃＡＭＰ抗体および抗ウサギ抗体、全てＡｍｅｒｓｈａｍ  ｃＡＭＰ  ＳＰＡキットより）７０μＬを、マルチドロップを使用して加え、プレートを密封した。１５時間後にプレートをＴｒｉｌｕｘカウンターで計数した。
【０２９８】
化合物の用量依存を、半対数濃度で二組決定した。各９６ウェルプレート中で、ＧＬＰ−１（対照）および５種類の化合物（二組）を、７つの半対数用量で操作した。最大活性を決定するための参照標準の役割を果たすために、１０ｎＭのＧＬＰ−１を１０個の別のウェルに蒔いた。環状ＡＭＰの公知の量を使用して標準曲線を決定した。処理した細胞によって合成されたｃＡＭＰの量は、環状ＡＭＰ標準曲線から決定し、最大のＧＬＰ−１刺激による活性の割合を計算し、対数化合物濃度に対してプロットした。非線形回帰曲線の当てはめ（４パラメータＳ字形用量反応曲線）によってデータを分析し、化合物のＥＣ５０を決定した。例えば、本明細書に記載するペプチドは、０．０００５ｎＭ〜１０ｎＭの範囲の、より好ましくは０．０００５ｎＭ〜０．２００ｎＭの範囲のＥＣ５０値を有する。
【０２９９】
あるいは、上記のように、ＧＬＰ−１受容体を発現するＣＨＯ細胞を、３８４ウェルプレートのウェル毎に細胞１０，０００個を蒔き、５％ＣＯ２中で３７℃にて一晩培養した。ペプチジルＧＬＰ−１受容体アゴニストでの処理後に、細胞内のｃＡＭＰ濃度をＨｉｔｈｕｎｔｅｒ（商標）ＸＳ  ｃＡＭＰキット（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ（登録商標））でメーカーのプロトコルに従って測定した。
【０３００】
（実施例３６）
Ｉｎ  ｖｉｖｏ研究
各マウスが投与溶液の同一の容量／重量を受けるように、ｎｍｏｌ／ｋｇで投与されることとなる用量と当量の濃度（ｎｍｏｌ／ｍｌ）で適当なビヒクル中にペプチドを溶解した。雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ−ｏｂ／ｏｂマウス（生後１０週間）を、投与する血漿グルコースおよび体重に基づいて１群毎に６匹のマウスの群に無作為化した。一晩の絶食の後に、マウスの重量を量り、実験室中に入れた。その環境で３０分後に、マウスの尻尾先端から採血し（−３０分時点）、ビヒクルまたはビヒクルに溶解したペプチド（０．１ｍＬ溶液／１００ｇ体重）で直ちに皮下（ｓｃ）注射した。０時点にマウスから採血し、次いで腹腔内に５０％グルコース（２ｇ／ｋｇ）を注射し、腹腔内グルコース負荷試験（ｉｐＧＴＴ）を開始した。グルコース注射の３０分、６０分、１２０分および１８０分後にマウスから採血した。血液試料をカリウムＥＤＴＡ中に入れて、試験中氷上に置いて、次いで３０００ｒｐｍで４℃にて１０分間遠心分離した。Ｃｏｂａｓシステムによるグルコース分析のために、血漿試料を１１倍に希釈した。別の血漿試料 ５μｌを、試料希釈剤（インスリンＥＬＩＳＡアッセイキット、Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｃ．社製）２０μｌで５倍に希釈し、超高感度マウスインスリンＥＬＩＳＡキット（Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｃｈｅｍ  Ｉｎｃ．社製）を使用する次の分析のために−２０℃で保存した。
【０３０１】
ｏｂ／ｏｂマウス（インスリン抵抗性のマウスモデル）における化合物Ｉ、ならびに配列番号：９、１１８、１５１および１５８の化合物のｉｎ  ｖｉｖｏでのグルコース低下特性を下記に説明する。化合物Ｉの皮下投与は、腹腔内グルコース負荷試験（ｉｐＧＴＴ）において食後のグルコース変動曲線を弱め、血漿グルコースの曲線下面積（ＡＵＣ）は０〜１８０分で用量依存的に減少した（図１）。化合物ＩのＥＤ５０は、５０ｎｍｏｌ／ｋｇであると決定された。これらの動物の食後の血漿インスリン濃度において、同時に起こる統計的に有意な用量依存的増加があった（図２）。化合物Ｉで処理された動物における血漿グルコースおよびインスリンの変化の間の相関性は、グルコース低下効果が前記化合物によるインスリン放出の刺激によって媒介されることが示唆される（図１および図２）。
【０３０２】
さらに有意および予想外に、配列番号：９、１１８、１５１および１５８の化合物は、ｏｂ／ｏｂマウスへの皮下投与に続いて、食後の血漿グルコースにおける（０〜１８０分または２１０分の間に）時間依存的な統計的に有意な減少をもたらした（図３、５、６および７）。食後のグルコースへの配列番号：９の化合物の効果は、１〜１００ｎｍｏｌ／ｋｇで用量依存的であり、血漿グルコースＡＵＣは１００ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で８５．８％減少した（図３）。配列番号：９の化合物のＥＤ５０は、５ｎｍｏｌ／ｋｇであると決定された。これらの動物において、血漿グルコースへの配列番号：９の化合物の効果もまた、食後のインスリンにおける有意な増加を伴う（図４）。インスリンの効果は、３０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量でＡＵＣにおいて最大増加が１８７．７％であり用量依存的であるように思われる（図４）。
【０３０３】
食後のグルコースへの配列番号：１１８の化合物の効果は、１〜３０ｎｍｏｌ／ｋｇで食用量依存的であり、血漿グルコースＡＵＣは３０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で８１％減少した（図５）。配列番号：１１８の化合物のＥＤ５０は、２．５ｎｍｏｌ／ｋｇであると決定された。
【０３０４】
食後のグルコースへの配列番号：１５１の化合物の効果は、０．０３〜３ｎｍｏｌ／ｋｇで食用量依存的であり、血漿グルコースＡＵＣは３ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で６７％減少した（図６）。配列番号：１５１の化合物のＥＤ５０は、１ｎｍｏｌ／ｋｇであると決定された。
【０３０５】
食後のグルコースへの配列番号：１５８の化合物の効果は、０．１〜１０ｎｍｏｌ／ｋｇで食用量依存的であり、血漿グルコースＡＵＣは１０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で６６％減少した（図７）。配列番号：１５１の化合物のＥＤ５０は、２ｎｍｏｌ／ｋｇであると決定された。
【０３０６】
（実施例３７）
イヌにおける薬物動態学的試験
雄ビーグル犬における配列番号：９、１１８、１５１および１５８の化合物の薬物動態パラメータを決定した（ｎ＝３−４、１４±１ｋｇ）。一晩の絶食の後、各動物は、大腿骨静脈による静脈内ボーラス（６７μｇ／ｋｇ）として、または肩甲骨近くに投与される皮下注射（６７μｇ／ｋｇ）によって、配列番号：９、１１８、１５１および１５８の化合物を与えられた。各動物は、クロスオーバーデザインに従って、投与の間に１週間の休薬をはさみ静脈内および皮下用量の両方を受けた。両方の投与経路のための投与ビヒクルは、プロピレングリコール：ｐＨ７．４リン酸緩衝液（５０：５０）または０．２ＭのＴｒｉｓ（ｐＨ８．０）であった。静脈内投与の投与前、投与後０．０８３時間、０．２５時間、０．５時間、０．７５時間、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、２４時間および３０時間、皮下投与の投与前、投与後０．２５時間、０．５時間、０．７５時間、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、２４時間および３０時間において、連続的な血液試料を、ＥＤＴＡを含有する微量遠心機管中に回収した。約０．３ｍＬの血液を各時点で回収した。血液試料は直ちに４℃にて遠心分離した。得られた血漿をドライアイスで凍らせ、−２０℃で保存した。血漿薬物濃度を下記に説明するＬＣ−ＭＳ／ＭＳアッセイを用いて決定した。
【０３０７】
ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによる配列番号：１５８の化合物の定量化
内部標準を含有する２容のＡｃＣＮで血漿タンパクを沈殿させることによる分析のために、ｉｎ  ｖｉｖｏのイヌ試験からの血漿試料を調製した。試料をボルテックス混合し、沈殿したタンパク質を遠心分離により除去した。得られた上清を９６ウェルプレートに移し、１０μＬをＴＦＣ−ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析のために注入した。
【０３０８】
該ＴＦＣ−ＨＰＬＣシステム（Cohesive TX-1 Flux, Aria 2300 System）は、ロード用ポンプ、溶出用ポンプ、およびＣＴＣ ＰＡＬオートサンプラー（Cohesive Technologies, Franklin, MA）から構成される。使用するカラムは、分析用カラムとしてPhenomenex Synergi Fusion-RP（C18、2.0×50mm、4μ）（Phenomenex, Torrance, CA）、およびオンラインサンプル処理のための抽出カラムとしてTurbo-Flow (TF) HTLC Cycloneカラム（0.5×50mm）（Cohesive Technologies, Franklin, MA）とした。移動相Ａは１０ｍＭ ギ酸アンモニウムおよび０．１％ギ酸／水からなり、そして移動相Ｂは０．１％ギ酸／ＡｃＣＮからなる。Turbo-Flowクロマトグラフィーを用いてよりきれいな試料を得た。速い勾配溶出は分析物の分離について使用した。該試料をTurbo-Flow HTLC Cycloneカラム中に注入し、そして分析物を１００％Ｈ２Ｏを１．５ｍＬ／分で用いる生物学的な液体の構成成分から分離した。該ＴＦカラムをバックフラッシュし、そして分析物をＴＦからＨＰＬＣ分析用カラムへバック溶出（０．３ｍＬ／分で、２分間かけて６０％Ｂまで上昇し、そこで３０秒間保持する）して、該分析物を該ＨＰＬＣカラムから質量分析計に分離し溶出した。両方のカラムを更に数分間洗浄し、次いで両方のカラムを最初の条件で再度平衡とした
【０３０９】
ＨＰＬＣをＳｃｉｅｘ  ＡＰＩ４０００質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）と接続し、ＴｕｒｂｏＩｏｎｓｐｒａｙイオン源を備え付けた。超高純度窒素を、噴霧ガスおよびターボガスとして使用した。ターボガスの温度を３００℃に設定し、インターフェースヒーターを６０℃に設定した。データ収集は、選択反応モニタリング（ＳＲＭ）を利用した。配列番号：１５８の化合物のマルチプルチャージのイオン種、すなわち（Ｍ＋２Ｈ）２＋種を、Ｑ１内で選択し、Ｑ２内で３．５×１０−３ｔｏｒｒの圧力で高純度窒素による衝突解離を行い、Ｑ３内で引き続きモニターされる特異的なプロダクトイオンを形成した。イオン変換および電圧を以下に要約する（表４）。
【表３９】
2009538360.tif 000103
【０３１０】
１〜１０００ｎＭの範囲の標準的な曲線濃度を、二組分析した。曲線を、濃度の逆数（１／Ｘ２）で重みをつけた直線回帰に適合させた。標準物質と同じ濃度でブランクマトリックス中において調製した品質管理（ＱＣ）試料も、各分析用セットで分析した。配列番号：１５８の化合物のための、ＱＣの８０％超の計算濃度は名目上濃度の２０％以内であり、許容できるアッセイ性能を示した。
【０３１１】
データ分析
配列番号：１５８の化合物の血漿濃度対時間データを、ＫＩＮＥＴＩＣＡＴＭソフトウェアプログラムを使用したノンコンパートメント法によって分析した。ＣｍａｘおよびＴｍａｘ値を実験的観察から直接記録した。ＡＵＣ０−ｎおよびＡＵＣｔｏｔ値を、線形および対数台形加重の組合せを使用して計算した。静脈内投与後に、総血漿クリアランス（ＣＬＰ）、最終半減期（ｔ１／２）、平均滞留時間（ＭＲＴ）、および定常状態分布容積（Ｖｓｓ）を計算した。総血液クリアランス（ＣＬＢ）は、総血漿クリアランスおよび血液と血漿の濃縮倍率を使用して計算した。ＣＬＢおよびＶｓｓ値を、文献に報告されている標準的な肝血流および体内総水分量の各々と比較した。配列番号：１５８の化合物の皮下投与後の投与量で標準化したＡＵＣ値の、静脈内投与後の同じＡＵＣ値に対する比を取ることによって、皮下の絶対的バイオアベイラビリティ（％として表す）を推定した。
【０３１２】
イヌにおける薬物動態の結果
雄ビーグル犬における静脈内（ＩＶ）および皮下（ＳＣ）投与後の、配列番号：９、１５１および１５８の化合物の薬物動態パラメータを、表５Ａ、５Ｂ、および５Ｃにおいて各々要約する。
【０３１３】
配列番号：１５８の化合物は、低い全身クリアランスを示す（０．５１±０．０８ｍＬ／ｍｉｎ／ｋｇ）。定常状態分布容積（Ｖｓｓ）は、０．１５±０．０２Ｌ／ｋｇであり、限られた血管外分布を示した。推定排出半減期は４．４±０．４時間、および平均滞留時間は４．９±０．７時間であった。６７μｇ／ｋｇの皮下投与後のピーク濃度（Ｔｍａｘ）への到達時間は、１．４±０．７時間であった。皮下投与後の最高血漿濃度（Ｃｍａｘ）は、２７９±８２ｎＭであった。イヌにおける配列番号：１５８の化合物の皮下バイオアベイラビリティは、１１０±４９％であった。
【０３１４】
【表４０】
2009538360.tif 000104
【表４１】
2009538360.tif 000105
【表４２】
2009538360.tif 000106
【０３１５】
（実施例３８）
非経口投与経路
下記の組成を有する経肺／吸入または経鼻デリバリーのための液体処方を、下記で説明するように調製する。
【表４３】
2009538360.tif 000107
【０３１６】
秤量した量のペプチドを、最適ｐＨの水の一部で溶解する。Ｃａｐｔｉｓｏｌを薬液に加え、約５分間撹拌する。ＮａＯＨおよびＨＣｌを加えｐＨを所望の値（５〜８）に調節する。精製水の最終用量が１ｍＬとなるように加える。保存料、抗酸化剤、緩衝塩、および共溶媒などの他の非活性成分を、ｐＨ調節前に必要に応じて加えてもよい。所望の目標容量となるよう水を加える。
【０３１７】
上記の溶液処方は、シリンジ式Ｍｉｃｒｏｓｐｒａｙｅｒまたはジェット式もしくは超音波ネブライザーによる微粒子スプレーとして肺に投与することができる。上記の溶液は、定量スプレー式点鼻薬ポンプまたはシリンジ式Ｍｉｃｒｏｓｐｒａｙｅｒで鼻腔に送達できる。
【０３１８】
下記の組成を有する経肺／吸入または経鼻デリバリーのための乾燥粉末処方を、下記で説明するように調製する。
【表４４】
2009538360.tif 000108
【０３１９】
好ましくは５ミクロン未満の空気動力学的中央粒子径（ＭＭＡＤ）を有する、ペプチドの秤量した量を、吸入グレードのラクトース３０〜１００μｍ（Ｒｅｓｐｉｔｏｓｅ、ＤＭＶ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社製）と共にＴｕｒｂｕｌａ（登録商標）ミキサー内で５分間ブレンドする。上記の乾燥粉末ブレンドは、粉末吹入器または乾燥粉末吸入器によって、肺に送達できる。
【０３２０】
下記の組成を有する経肺／吸入または経鼻デリバリーのための懸濁剤処方を、下記で説明するように調製する。
【表４５】
2009538360.tif 000109
【０３２１】
微粉状にしたペプチドを、レシチンおよびハイドロフルオロカーボン（ＨＦＡ）などの噴霧剤ガスの混合物中に均一に懸濁させる。懸濁剤を加圧計量吸入器に移す。
【表４６】
2009538360.tif 000110
【０３２２】
ペプチドを（上記で説明した）溶液としてペントバルビタールの腹腔内注射で麻酔した雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに投与した。肺へのデリバリーを評価するために、薬物をシリンジ式Ｍｉｃｒｏｓｐｒａｙｅｒで気管内に導入し、あるいは鼻腔内デリバリーのために各鼻孔へピペットで注入した。カニューレを挿入した頸動脈からヘパリン化バキュテイナーに、４時間に亘って血液試料を回収した。血液試料を遠心分離にかけ、単離した血漿をＬＣ／ＭＳによる分析まで−８０°Ｃで保存した。血漿中濃度時間曲線から薬物動態パラメータを計算し、表に示した。３匹のラットを各投与経路に使用した。データは平均±標準偏差として示す。Ｔｍａｘを中央値として示す。
【０３２３】
有用性および組合せ
Ａ．有用性
本明細書に記載されている対象は、優れた特性を有し、ＧＬＰ−１受容体モジュレーターとして作用する新規なペプチドを提供する。例えば、ペプチドは、ＧＬＰ−１受容体へのアゴニスト活性を有する。さらに、本明細書に記載するペプチドは、ＧＬＰ−１天然配列と比較して、タンパク質切断に対する安定性の増加を示す。
【０３２４】
したがって、本明細書に記載する化合物は、それだけに限らないが、糖尿病（好ましくは、ＩＩ型、耐糖能異常、インスリン抵抗性、ならびにネフロパシー、網膜症、ニューロパシーおよび白内障などの糖尿病性合併症）、高血糖症、高インスリン血症、高コレステロール血症、遊離脂肪酸もしくはグリセロール血中濃度上昇、高脂血症、高トリグリセリド血症、肥満症、創傷治癒、組織虚血、アテローム性動脈硬化症、高血圧、ＡＩＤＳ、腸疾患（壊死性腸炎、微絨毛封入体病またはセリアック病など）、炎症性腸症候群、化学療法による腸粘膜萎縮もしくは障害、神経性食欲不振症、骨粗鬆症、代謝異常症侯群、ならびに炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎など）の進行もしくは発症を治療しまたは遅延させることが挙げられる、種々の症状および障害を治療するために、哺乳動物、好ましくはヒトに投与することができる。本明細書に記載する化合物は、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）の血中濃度を増加させるために利用することもできる。
【０３２５】
さらに、Ｊｏｈａｎｎｓｓｏｎ  Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，８２，７２７〜３４（ｌ９９７）で詳述されている「Ｘ症候群」または代謝症候群と集合的に称される状態、疾患および疾病は、本明細書に記載する化合物を使用して治療することができる。
【０３２６】
Ｂ．組合せ
本明細書において開示されおよび特許請求されている対象には、有効成分として、式Ｉの化合物の少なくとも１種類の治療有効量を、単独でまたは医薬担体または希釈剤と組み合わせて含む医薬組成物が含まれる。所望により、本明細書に記載する化合物は、単独で、本明細書に記載する他の化合物と組み合わせて、あるいは１種もしくは複数の他の治療剤、例えば糖尿病薬または他の医薬活性物質と組み合わせて使用することができる。
【０３２７】
本明細書に記載する化合物は、他のＧＬＰ−１受容体モジュレーター（例えば、アゴニスト、もしくはペプチドアゴニストなどの部分アゴニスト）、あるいは糖尿病薬、抗高血糖剤、抗高脂血症薬／脂質低下薬、（食欲抑制剤／食欲調節剤を含めた）抗肥満薬、ならびに降圧剤を含めた、上記の障害の治療に有用な他の適切な治療剤と組み合わせて使用し得る。さらに、本明細書に記載する化合物は、下記の治療剤の１種もしくは複数と組み合わせ得る。不妊治療剤、多嚢胞性卵巣症候群治療剤、成長障害治療剤、虚弱性治療剤、関節炎治療剤、移植における同種異系移植片拒絶の予防剤、自己免疫疾患治療剤、抗ＡＩＤＳ薬、抗骨粗鬆症剤、免疫調節性疾患治療剤、抗血栓剤、心血管疾患治療剤、抗生物質製剤、抗精神病薬、慢性炎症性腸疾患もしくは症候群の治療剤、および／または神経性食欲不振症治療剤。
【０３２８】
本明細書に記載する化合物と共に組み合わせて使用するために適切な糖尿病薬の例には、ビグアナイド（例えば、メトホルミンまたはフェンホルミン）、グルコシダーゼ阻害剤（例えば、アカルボースまたはミグリトール）、（インスリン分泌促進剤もしくはインスリン感受性改善剤を含めた）インスリン、メグリチニド（例えば、レパグリニド）、スルホニル尿素（例えば、グリメピリド、グリブリド、グリクラジド、クロルプロパミドおよびグリピジド）、ビグアナイド／グリブリドの組合せ（例えば、Ｇｌｕｃｏｖａｎｃｅ（登録商標））、チアゾリジンジオン（例えば、トログリタゾン、ロシグリタゾンおよびピオグリタゾン）、ＰＰＡＲ−αアゴニスト、ＰＰＡＲ−γアゴニスト、ＰＰＡＲα／γデュアルアゴニスト、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、脂肪酸結合タンパク質（ａＰ２）の阻害剤、ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、およびＳＧＬＴ２阻害剤が挙げられる。
【０３２９】
他の適切なチアゾリジンジオンには、（米国特許第５，５９４，０１６号に開示されている）Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ  ＭＣＣ−５５５、Ｇｌａｘｏ−Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  ＧＬ−２６２５７０、エングリタゾン（ＣＰ−６８７２２、Ｐｆｉｚｅｒ社製）またはダルグリタゾン（ＣＰ−８６３２５、Ｐｆｉｚｅｒ社製、イサグリタゾン（ＭＩＴ／Ｊ＆Ｊ社製）、ＪＴＴ−５０１（ＪＰＮＴ／Ｐ＆Ｕ社製）、Ｌ−８９５６４５（Ｍｅｒｃｋ社製）、Ｒ−１１９７０２（三共／ＷＬ社製）、ＮＮ−２３４４（Ｄｒ．Ｒｅｄｄｙ／ＮＮ社製）、またはＹＭ−４４０（山之内製薬社製）が挙げられる。
【０３３０】
適切なＰＰＡＲα／γデュアルアゴニストには、マルグリタザー（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ社製）、ＡＲ−ＨＯ３９２４２（Ａｓｔｒａ／Ｚｅｎｅｃａ社製）、ＧＷ−４０９５４４（Ｇｌａｘｏ−Ｗｅｌｌｃｏｍｅ社製）、ＫＲＰ２９７（Ｋｙｏｒｉｎ  Ｍｅｒｃｋ社製）、ならびにＭｕｒａｋａｍｉらにより「Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒ  Ａｃｔｓ  Ａｓ  ａ  Ｃｏｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｌｐｈａ  （ＰＰＡＲ  ａｌｐｈａ）  ａｎｄ  ＰＰＡＲ  ｇａｍｍａ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  ＰＰＡＲ  ａｌｐｈａ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｎ  Ａｂｎｏｒｍａｌ  Ｌｉｐｉｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｉｎ  Ｌｉｖｅｒ  ｏｆ  Ｚｕｃｋｅｒ  Ｆａｔｔｙ  Ｒａｔｓ」Ｄｉａｂｅｔｅｓ４７，１８４１〜１８４７（１９９８）において開示されているもの、ならびにその開示が参照により本明細書に組み込まれている２０００年９月１８日に出願された米国特許出願第０９／６４４，５９８号（そこで示されている投与量を用い、そこで好ましいと示されている化合物は本明細書において使用されるのに好ましい）において開示されているものが挙げられる。
【０３３１】
適切なａＰ２阻害剤には、１９９９年９月７日に出願された米国特許出願第０９／３９１，０５３号、および２０００年３月６日に出願された米国特許出願第０９／５１９，０７９号において開示されているものが挙げられる（本明細書に示した投与量を用いる）。
【０３３２】
本明細書に記載する化合物と組み合わせて使用し得る適切なＤＰＰ４阻害剤には、ＷＯ９９／３８５０１号、ＷＯ９９／４６２７２号、ＷＯ９９／６７２７９号（ＰＲＯＢＩＯＤＲＵＧ）、ＷＯ９９／６７２７８号（ＰＲＯＢＩＯＤＲＵＧ）、ＷＯ９９／６１４３１号（ＰＲＯＢＩＯＤＲＵＧ）において開示されているもの；ＨｕｇｈｅｓらによりＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３８（３６），１１５９７〜１１６０３，１９９９において開示されているＮＶＰ−ＤＰＰ７２８Ａ（１−［［［２−［（５−シアノピリジン−２−イル）アミノ］エチル］アミノ］アセチル］−２−シアノ−（Ｓ）−ピロリジン）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社製）；ＬＡＦ２３７；サクサグリプチン；ＭＫ０４３１；ＹａｍａｄａらによりＢｉｏｏｒｇ．＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．８（１９９８）１５３７〜１５４０において開示されているＴＳＬ−２２５（トリプトフィル−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸）；ＡｓｈｗｏｒｔｈらによりＢｉｏｏｒｇ．＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．第６巻Ｎｏ．２２，ｐｐ１１６３〜１１６６および２７４５〜２７４８（１９９６）において開示されている２−シアノピロリジドおよび４−シアノピロリジドが挙げられる（上記の参照文献に示されている投与量で使用する）。
【０３３３】
適切なメグリチニドには、ナテグリニド（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社製）またはＫＡＤ１２２９（ＰＦ／Ｋｉｓｓｅｉ社製）が挙げられる。
【０３３４】
本明細書に記載するＧＬＰ−１受容体モジュレーター（例えば、アゴニストまたは部分アゴニスト）と組み合わせて使用し得る他の適切なグルカゴン様ペプチド−ｌ（ＧＬＰ−１）化合物の例には、ＧＬＰ−１（１−３６）アミド、ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、ＧＬＰ−１（７−３７）（Ｈａｂｅｎｅｒの米国特許第５，６１４，４９２号において開示されている）、ならびにＡＣ２９９３（Ａｍｙｌｉｎ社製）、ＬＹ−３１５９０２（Ｌｉｌｌｙ社製）およびＮＮ２２１１（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ社製）が挙げられる。
【０３３５】
本明細書に記載する化合物と組み合わせて使用するのに適切な抗高脂血症薬／脂質低下薬の例には、１種もしくは複数のＭＴＰ阻害剤、ＨＭＧ  ＣｏＡ還元酵素阻害剤、スクアレンシンテターゼ阻害剤、フィブル酸誘導体、ＡＣＡＴ阻害剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、コレステロール吸収阻害剤、回腸Ｎａ＋／胆汁酸共輸送体阻害剤、ＬＤＬ受容体活性のアップレギュレーター、胆汁酸捕捉剤、コレステロールエステル転送タンパク阻害剤（例えば、ＣＰ−５２９４１４（Ｐｆｉｚｅｒ社製））および／またはニコチン酸およびその誘導体が挙げられる。
【０３３６】
上記のように使用し得るＭＴＰ阻害剤には、それらの全てが参照により本明細書中に組み込まれている米国特許第５，５９５，８７２号、米国特許第５，７３９，１３５号、米国特許第５，７１２，２７９号、米国特許第５，７６０，２４６号、米国特許第５，８２７，８７５号、米国特許第５，８８５，９８３号および米国特許第５，９６２，４４０号において開示されているものが挙げられる。
【０３３７】
式Ｉの１種もしくは複数の化合物と組み合わせて使用し得るＨＭＧ  ＣｏＡ還元酵素阻害剤には、米国特許第３，９８３，１４０号において開示されているメバスタチンおよび関連化合物、米国特許第４，２３１，９３８号において開示されているロバスタチン（メビノリン）および関連化合物、米国特許第４，３４６，２２７号において開示されているプラバスタチンおよび関連化合物、米国特許第４，４４８，７８４号および同４，４５０，１７１号において開示されているシンバスタチンおよび関連化合物が挙げられる。本明細書において使用し得る他のＨＭＧ  ＣｏＡ還元酵素阻害剤には、それだけに限らないが、米国特許第５，３５４，７７２号において開示されているフルバスタチン、米国特許第５，００６，５３０号および同５，１７７，０８０号において開示されているセリバスタチン、米国特許第４，６８１，８９３号、同５，２７３，９９５号、同５，３８５，９２９号および同５，６８６，１０４号において開示されているアトルバスタチン、米国特許第５，０１１，９３０号において開示されているアタバスタチン（Ｎｉｓｓａｎ／Ｓａｎｋｙｏ社製ニスバスタチン（ＮＫ−１０４））、米国特許第５，２６０，４４０号において開示されているビサスタチン（Ｓｈｉｏｎｏｇｉ−Ａｓｔｒａ／Ｚｅｎｅｃａ社製（ＺＤ−４５２２））、ならびに米国特許第５，７５３，６７５号において開示されている関連するスタチン化合物、米国特許第４，６１３，６１０号において開示されているメバロノラクトン誘導体のピラゾール類似体、国際出願第８６／０３４８８号において開示されているメバロノラクトン誘導体のインデン類似体、米国特許第４，６４７，５７６号において開示されている６−［２−（置換ピロール−１−イル）−アルキル）ピラン−２−オンおよびその誘導体、Ｓｅａｒｌｅ社製ＳＣ−４５３５５（３−置換ペンタン二酸誘導体）ジクロロ酢酸、国際出願第８６／０７０５４号において開示されているメバロノラクトンのイミダゾール類似体、仏国特許第２，５９６，３９３号において開示されている３−カルボキシ−２−ヒドロキシ−プロパン−ホスホン酸誘導体、２，３−二置換ピロール、欧州特許出願第０２２１０２５号において開示されているフランおよびチオフェン誘導体、米国特許第４，６８６，２３７号において開示されているメバロノラクトンのナフチル類似体、米国特許第４，４９９，２８９号において開示されているオクタヒドロナフタレン、欧州特許出願第０１４２１４６（Ａ２）号において開示されているメビノリンのケト類似体（ロバスタチン）、および米国特許第５，５０６，２１９号および同第５，６９１，３２２号において開示されているキノリンおよびピリジン誘導体が挙げられる。
【０３３８】
所望の脂質低下剤は、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、フルバスタチン、セリバスタチン、アタバスタチンおよびＺＤ−４５２２である。
【０３３９】
さらに、ＧＢ２２０５８３７に開示されているような、ＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼを阻害するのに有用なホスフィン酸化合物は、本明細書に記載する化合物と組み合わせて使用するのに適切である。
【０３４０】
本明細書において使用するのに適切なスクアレンシンテターゼ阻害剤には、それだけに限らないが、米国特許第５，７１２，３９６号において開示されているα−ホスホノ−スルホネート；イソプレノイド（ホスフィニル−メチル）ホスホネートを含めた、ＢｉｌｌｅｒらによりＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９８８，第３１巻，Ｎｏ．１０，ｐｐ１８６９〜１８７１で開示されているもの；ならびに例えば、米国特許第４，８７１，７２１号および同第４，９２４，０２４号およびＢｉｌｌｅｒ，Ｓ．Ａ．，Ｎｅｕｅｎｓｃｈｗａｎｄｅｒ，Ｋ．，Ｐｏｎｐｉｐｏｍ，Ｍ．Ｍ．およびＰｏｕｌｔｅｒ，Ｃ．Ｄ．によるＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ，２，１〜４０（１９９６）において開示されている他の公知のスクアレンシンテターゼ阻害剤が挙げられる。
【０３４１】
さらに、本明細書において使用するのに適切な他のスクアレンシンテターゼ阻害剤には、Ｐ．Ｏｒｔｉｚ  ｄｅ  ＭｏｎｔｅｌｌａｎｏらによりＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９７７，２０，２４３〜２４９において開示されているテルペノイドピロホスフェート；ＣｏｒｅｙおよびＶｏｌａｎｔｅによりＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９７６，９８，１２９１〜１２９３において開示されているファルネシル二リン酸類似体Ａおよびプレスクアレンピロホスフェート（ＰＳＱ−ＰＰ）類似体；ＭｃＣｌａｒｄ，Ｒ．Ｗ．らによりＪ．Ａ．Ｃ．Ｓ．，１９８７，１０９，５５４４において報告されているホスフィニルホスホネート；ならびにＣａｐｓｏｎ，Ｔ．Ｌ．によりＰｈＤ  ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ，Ｊｕｎｅ，１９８７，Ｄｅｐｔ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｕ  ｏｆ  Ｕｔａｈ，アブストラクト、目次、ｐｐ１６、１７、４０〜４３、４８〜５１、要約において報告されているシクロプロパンが挙げられる。
【０３４２】
式Ｉの１種もしくは複数の化合物と組み合わせて使用し得るフィブル酸誘導体には、フェノフィブラート、ゲンフィブロジル、クロフィブラート、ベザフィブラート、シプロフィブラート、クリノフィブラートなど；米国特許第３，６７４，８３６号において開示されているプロブコールおよび関連化合物（プロブコールおよびゲンフィブロジルが好ましい）；コレスチラミン、コレスチポールおよびＤＥＡＥ−セファデックス（Ｓｅｃｈｏｌｅｘ（登録商標）、Ｐｏｌｉｃｅｘｉｄｅ（登録商標））などの胆汁酸捕捉剤；ならびにリポスタビル（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ社製）、Ｅｉｓａｉ  Ｅ−５０５０（Ｎ−置換エタノールアミン誘導体）、イマニキシル（ＨＯＥ−４０２）、テトラヒドロリプスタチン（ＴＨＬ）、イスチグマスタニルホス−ホリルコリン（ＳＰＣ、Ｒｏｃｈｅ社製）、アミノシクロデキストリン（田辺製薬社製）、Ａｊｉｎｏｍｏｔｏ  ＡＪ−８１４（アズレン誘導体）、メリナミド（住友社製）、Ｓａｎｄｏｚ５８−０３５、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ  ＣＬ−２７７，０８２およびＣＬ−２８３，５４６（二置換尿素誘導体）、ニコチン酸、アシピモクス、アシフラン、ネオマイシン、ｐ−アミノサリチル酸、アスピリン、米国特許第４，７５９，９２３号において開示されているポリ（ジアリルメチルアミン）誘導体、米国特許第４，０２７，００９号において開示されている４級アミンポリ（ジアリルジメチルアンモニウムクロリド）およびイオネン、ならびに他の公知の血清コレステロール低下剤が挙げられる。
【０３４３】
式Ｉの１種もしくは複数の化合物と組み合わせて使用し得るＡＣＡＴ阻害剤には、Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ２４，９〜１５（１９９９）（アバシミブ）、「Ｔｈｅ  ＡＣＡＴ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｃｌ−１０１１  ｉｓ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ａｏｒｔｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｓｔｒｅａｋ  ａｒｅａ  ｉｎ  ｈａｍｓｔｅｒｓ」，ＮｉｃｏｌｏｓｉらによるＡｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ（Ｓｈａｎｎｏｎ，Ｉｒｅｌ）（１９９８），１３７（１），７７〜８５、「Ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｆｉｌｅ  ｏｆ  ＦＣＥ  ２７６７７：ａ  ｎｏｖｅｌ  ＡＣＡＴ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｗｉｔｈ  ｐｏｔｅｎｔ  ｈｙｐｏｌｉｐｉｄｅｍｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ＡｐｏＢ１００−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ」，Ｇｈｉｓｅｌｌｉ，Ｇｉａｎｃａｒｌｏ，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｄｒｕｇ  Ｒｅｖ．（１９９８），１６（１），１６〜３０、「ＲＰ７３１６３：ａ  ｂｉｏａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｌｋｙｌｓｕｌｆｉｎｙｌ−ｄｉｐｈｅｎｙｌｉｍｉｄａｚｏｌｅ  ＡＣＡＴ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」，Ｓｍｉｔｈ，Ｃ．らによるＢｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．（１９９６），６（１），４７〜５０、「ＡＣＡＴ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｆｏｒ  ｈｙｐｏｌｉｐｉｄｅｍｉｃ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｉｍａｌｓ」，Ｋｒａｕｓｅらによる編：Ｒｕｆｆｏｌｏ，Ｒｏｂｅｒｔ  Ｒ．，Ｊｒ．；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ，Ｍａｎｎｆｒｅｄ  Ａ．，Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  Ｐａｔｈｗａｙｓ（１９９５）１７３〜９８，Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ：ＣＲＣ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．、「ＡＣＡＴ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｎｔｉ−ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ」，ＳｌｉｓｋｏｖｉｃらによるＣｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９４），１（３），２０４〜２５、「Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｃｙｌ−ＣｏＡ：ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  Ｏ−ａｃｙｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＣＡＴ）ａｓ  ｈｙｐｏｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉｃ  ａｇｅｎｔｓ．６．Ｔｈｅ  ｆｉｒｓｔ  ｗａｔｅｒ−ｓｏｌｕｂｌｅ  ＡＣＡＴ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｗｉｔｈ  ｌｉｐｉｄ−ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｃｙｌ−ＣｏＡ：ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＣＡＴ）．７．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  Ｎ−ｐｈｅｎｙｌ−Ｎ’−［（１−ｐｈｅｎｙｌｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ］ｕｒｅａｓ  ｗｉｔｈ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｈｙｐｏｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ」，ＳｔｏｕｔらＣｈｅｍｔｒａｃｔｓ：Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９９５），８（６），３５９〜６２において開示されているもの、あるいはＴＳ���９６２（大正製薬社製）が挙げられる。
【０３４４】
脂質低下剤は、ＭＤ−７００（大正製薬社製）およびＬＹ２９５４２７（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ社製）などのＬＤ２受容体活性のアップレギュレーターでもよい。
【０３４５】
本明細書に記載する化合物と組み合わせて使用するのに適切なコレステロール吸収阻害剤の例には、ＳＣＨ４８４６１（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ社製）、ならびにＡｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ１１５，４５〜６３（１９９５）およびＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４１，９７３（１９９８）において開示されているものが挙げられる。
【０３４６】
本明細書に記載する化合物と組み合わせて使用するのに適切な回腸Ｎａ＋／胆汁酸共輸送体阻害剤の例には、Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ，２４，４２５〜４３０（１９９９）において開示されている化合物が挙げられる。
【０３４７】
式Ｉの１種もしくは複数の化合物と組み合わせて使用し得るリポキシゲナーゼ阻害剤には、ＷＯ９７／１２６１５において開示されているベンズイミダゾール誘導体などの１５−リポキシゲナーゼ（１５−ＬＯ）阻害剤、ＷＯ９７／１２６１３において開示されている１５−ＬＯ阻害剤、ＷＯ９６／３８１４４において開示されているイソチアゾロン、ならびにＳｅｎｄｏｂｒｙらにより「Ａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｅｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔｓ  ｗｉｔｈ  ａ  ｈｉｇｈｌｙ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  １５−ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｌａｃｋｉｎｇ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ  ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ」，Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（１９９７）１２０，１１９９〜１２０６、およびＣｏｒｎｉｃｅｌｌｉらにより「１５−Ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ  ａｎｄ  ｉｔｓ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ：Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ」Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ，１９９９，５，１１〜２０において開示されている１５−ＬＯ阻害剤が挙げられる。
【０３４８】
本明細書に記載する化合物と組み合わせて使用するのに適切な降圧剤の例には、βアドレナリン遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬（Ｌ型およびＴ型、例えば、ジルチアゼム、ベラパミル、ニフェジピン、アムロジピンおよびミベフラジル）、利尿剤（例えば、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、フルメチアジド、ヒドロフルメチアジド、ベンドロフルメチアジド、メチルクロロチアジド、トリクロロメチアジド、ポリチアジド、ベンズチアジド、エタクリン酸トリクリナフェン、クロルタリドン、フロセミド、ムソリミン、ブメタニド、トリアムテレン、アミロリド、スピロノラクトン）、レニン阻害剤、ＡＣＥ阻害剤（例えば、カプトプリル、ゾフェノプリル、ホシノプリル、エナラプリル、セラノプリル、シラゾプリル、デラプリル、ペントプリル、キナプリル、ラミプリル、リシノプリル）、ＡＴ−１受容体アンタゴニスト（例えば、ロサルタン、イルベサルタン、バルサルタン）、ＥＴ受容体アンタゴニスト（例えば、シタキセンタン、アトロセンタン（ａｔｒｓｅｎｔａｎ）、ならびに米国特許第５，６１２，３５９号および同６，０４３，２６５号において開示されている化合物）、デュアルＥＴ／ＡＩＩアンタゴニスト（例えば、ＷＯ００／０１３８９において開示されている化合物）、中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）阻害剤、バソペプシダーゼ阻害剤（デュアルＮＥＰ−ＡＣＥ阻害剤）（例えば、オマパトリラットおよびゲモパトリラット）、ならびに硝酸塩が挙げられる。
【０３４９】
本明細書に記載する化合物と組み合わせて使用するのに適切な抗肥満薬の例には、ＮＰＹ受容体アンタゴニスト、ＮＰＹ−Ｙ２またはＮＰＹ−Ｙ４受容体アゴニスト、オキシントモジュリン、ＭＣＨアンタゴニスト、ＧＨＳＲアンタゴニスト、ＣＲＨアンタゴニスト、β３アドレナリンアゴニスト、リパーゼ阻害剤、セロトニン（およびドーパミン）再取り込み阻害剤、甲状腺受容体β薬、ＣＢ−１アンタゴニストならびに／または食欲抑制剤が挙げられる。
【０３５０】
本明細書に記載する化合物と組み合わせて所望により使用してもよいβ３アドレナリンアゴニストには、ＡＪ９６７７（武田薬品工業／大日本製薬社製）、Ｌ７５０３５５（Ｍｅｒｃｋ社製）、またはＣＰ３３１６４８（Ｐｆｉｚｅｒ社製）または米国特許第５，５４１，２０４号、同５，７７０，６１５号、同５，４９１，１３４号、同５，７７６，９８３号および同５，４８８，０６４号において開示されている他の公知のβ３アゴニストが挙げられ、ＡＪ９６７７、Ｌ７５０，３５５およびＣＰ３３１６４８が好ましい。
【０３５１】
本明細書に記載する化合物と組み合わせて所望により使用してもよいリパーゼ阻害剤の例には、オルリスタットまたはＡＴＬ−９６２（Ａｌｉｚｙｍｅ社製）が挙げられ、オルリスタットが好ましい。
【０３５２】
式Ｉの化合物と組み合わせて所望により使用してもよいセロトニン（およびドーパミン）再取り込み阻害剤は、シブトラミン、トピラマート（Ｊｏｈｎｓｏｎ  &  Ｊｏｈｎｓｏｎ社製）またはアキソキン（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ社製）であってよく、シブトラミンおよびトピラマートが好ましい。
【０３５３】
本明細書に記載する化合物と組み合わせて所望により使用してもよい甲状腺受容体β化合物の例には、ＷＯ９７／２１９９３（Ｕ．Ｃａｌ  ＳＦ）、ＷＯ９９／００３５３（ＫａｒｏＢｉｏ社製）およびＷＯ００／０３９０７７（ＫａｒｏＢｉｏ社製）において開示されている甲状腺受容体リガンドが挙げられ、ＫａｒｏＢｉｏ社による出願の化合物が好ましい。
【０３５４】
本明細書に記載する化合物と組み合わせて所望により使用してもよいＣＢ−１アンタゴニストの例には、ＣＢ−１アンタゴニストおよびリモナバント（ＳＲ１４１７１６Ａ）が挙げられる。
【０３５５】
ＮＰＹ−Ｙ２およびＮＰＹ−Ｙ４受容体アゴニストの例には、各々、ＰＹＹ（３−３６）および膵臓ポリペプチド（ＰＰ）が挙げられる。
【０３５６】
本明細書に記載する化合物と組み合わせて所望により使用してもよい食欲抑制剤には、デキサンフェタミン、フェンテルミン、フェニルプロパノールアミンまたはマジンドールが挙げられ、デキサンフェタミンが好ましい。
【０３５７】
適切な抗精神病薬の例には、クロザピン、ハロペリドール、オランザピン（Ｚｙｐｒｅｘａ（登録商標））、Ｐｒｏｚａｃ（登録商標）およびアリピプラゾール（Ａｂｉｌｉｆｙ（登録商標））が挙げられる。
【０３５８】
上記の特許および特許出願は、参照により本明細書中に組み込まれている。
【０３５９】
上記の他の治療剤は、本明細書に記載する化合物と組み合わせて使用される場合、例えば、医師用卓上参考書に示されている量で、上記で示した特許におけるように、または当業者によって別に決定されるように使用され得る。
【０３６０】
投与量および処方
式Ｉの適切なペプチド、またはより具体的な配列番号１〜１７９のいずれか１つを含有するペプチドは、製剤の形態で、化合物単独としておよびまたは許容できる担体と混合して、糖尿病および他の関連する疾患を治療するために患者に投与することができる。糖尿病治療の当業者であれば、このような治療を必要とするヒトを含めた哺乳動物への化合物の投与量および投与経路を容易に決定することができる。投与経路としては、これらだけに限らないが、経口、口腔内、直腸、経皮、頬側、鼻腔内、肺、皮下、筋内、皮内、舌下、結腸内、眼球内、静脈内、または腸投与が挙げられ得る。化合物は、許容できる薬局実務（Ｆｉｎｇｌらの「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」，Ｃｈ．１，ｐ．１，１９７５；「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」，１８版，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０）に基づいた投与経路に従って処方される。
【０３６１】
医薬的に許容されるペプチド組成物は、錠剤、カプセル剤（これらの各々には、徐放性または持続放出処方が含まれる）、丸剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、ｉｎ  ｓｉｔｕゲル、ミクロスフィア、結晶複合体、リポソーム、マイクロエマルション、チンキ剤、懸濁剤、シロップ剤、エアゾールスプレーおよび乳剤などの多数の剤形で投与することができる。本明細書に記載する組成物は、全て医薬技術における当業者に周知の剤形を用いて、経口、静脈内（ボーラスまたは注入）、腹腔内、皮下、経皮または筋内の形態で投与することもできる。組成物は単独で投与し得るが、一般に選択した投与経路および標準的薬務に基づいて選択された医薬担体と共に投与されるであろう。
【０３６２】
本明細書に記載する組成物の投与計画は、特定の薬物の薬力学的特性およびその機序および投与経路；レシピエントの種、年齢、性別、健康状態、病状、および体重；症状の性質および程度；併用療法の種類；治療の頻度；投与経路、患者の腎機能および肝機能、ならびに所望の効果などの公知の要因に応じて当然ながら変わるであろう。医師または獣医師であれば、病態の進行を予防し、対抗し、または阻止するのに必要な薬の有効量を決定し、処方することができる。
【０３６３】
一般的ガイダンスとして、示された効果のために使用される場合には、有効成分の１日経口投与量は、約０．００１〜１０００ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０．０１〜１００ｍｇ／体重ｋｇ／日、最も好ましくは約０．６〜２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であろう。静脈内では、有効成分の１日投与量は、示された効果のために使用される場合では、定速注入の期間１分当たり０．００１ｎｇ〜１００．０ｎｇ／体重Ｋｇの範囲であろう。このような定速静脈内注入は、好ましくは１分当たり体重１Ｋｇ当たり０．０１ｎｇ〜５０ｎｇ、最も好ましくは１分当たり体重１Ｋｇ当たり０．０１ｎｇ〜１０．０ｍｇの割合で投与することができる。本明細書に記載する組成物は、１回の日用量で投与してもよく、または１日総投与量を、毎日２回、３回、または４回の分割用量で投与してもよい。本明細書に記載する組成物はまた、所望の日／週／月の期間に亘って薬物の持続放出を可能にするであろうデポ処方によって投与してもよい。
【０３６４】
本明細書に記載する組成物は、適切な鼻腔内ビヒクルの局所使用による鼻腔内形態で、または経皮的皮膚パッチを使用した経皮的経路によって、投与することができる。経皮的デリバリー系の形態で投与する場合には、用量投与は当然ながら、投与計画の間、断続性ではなくむしろ連続的であろう。
【０３６５】
組成物は、意図する投与形態（すなわち、経口錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、噴霧剤によって発生するまたは発生しないエアゾールスプレー、およびシロップ剤）に関して適切に選択され、ならびに従来の薬務との整合性が取れている、適切な医薬品の希釈剤、賦形剤、または担体（本明細書において医薬担体と集合的に称される）と共に混合物中で通常投与される。
【０３６６】
例えば、錠剤またはカプセル剤の形態の経口投与のために、活性薬物成分は、これらに限定されないがラクトース、デンプン、スクロース、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、第二リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、およびソルビトールなどの、経口無毒性の医薬的に許容される不活性な担体と組み合わせることができる。液体形態の経口投与のために、経口薬物成分は、これらに限定されないがエタノール、グリセロール、および水などの、任意の経口無毒性の医薬的に許容される不活性な担体と組み合わせることができる。さらに、所望または必要な場合には、適切な結合剤、滑沢剤、崩壊剤、および着色剤もまた、混合物に組み込むことができる。適切な結合剤には、これらだけに限らないが、デンプン、ゼラチン；これらに限定されないがグルコースまたはβラクトース、コーン甘味料などの天然糖；アカシア、トラガカントなどの天然および合成のガム；またはアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、およびワックスが含まれる。これらの剤形中に使用される滑沢剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、および塩化ナトリウムが挙げられる。崩壊剤には、それだけに限らないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、およびキサンタンガムが挙げられる。
【０３６７】
本明細書に記載する組成物はまた、混合ミセル、または小さな単膜小胞、大きな単膜小胞、および多重膜小胞などのリポソームデリバリー系の形態で投与してもよい。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンなどの種々のリン脂質から形成することができる。薬物吸収を高めるために浸透エンハンサーを加えてもよい。
【０３６８】
プロドラッグは、薬剤の数多くの望ましい性質（すなわち、溶解度、バイオアベイラビリティ、製剤化など）を高めることが知られているため、本明細書に記載する化合物は、プロドラッグの形態でデリバーし得る。したがって、本発明は、ここで特許請求されている化合物のプロドラッグ、これをデリバーする方法、およびこれを含有する組成物をカバーすることを意図する。
【０３６９】
本明細書に記載する組成物はまた、薬物担体として可溶性ポリマーと結合し得る。このようなポリマーには、ポリビニル−ピロリドン、ピラン共重合体、ポリヒドロキシプロピル−メタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタミドフェノール、またはパルミトイル残基で置換されているポリエチレンオキシド−ポリリシンを挙げることができる。さらに、本明細書に記載する組成物は、薬物の制御放出を達成するのに有用な種類の生分解性ポリマー、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸およびポリグリコール酸のコポリマー、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアシレート、ならびにヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマーと組み合わせることができる。
【０３７０】
投与に適切な剤形（医薬組成物）は、投与単位毎に約０．０１ミリグラム〜約５００ミリグラムの有効成分を含有し得る。このような医薬組成物において、有効成分は組成物の全重量に基づいて約０．５〜９５重量％の量で通常存在するであろう。
【０３７１】
ゼラチンカプセル剤は、有効成分、ならびにラクトース、デンプン、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、およびステアリン酸などの粉末担体を含有し得る。同様の希釈剤を用いて、圧縮錠剤を作製することができる。錠剤およびカプセル剤は共に、ある期間に亘って薬剤の連続放出を実現するために、徐放性製品として製造することができる。圧縮錠剤は、不快な味を隠し、錠剤を空気から保護するために糖衣またはフィルムコートすることができ、あるいは消化管内における選択的分解のために腸溶コートすることができる。
【０３７２】
経口投与のための液体剤形は、患者の許容性を増加させるために、着色剤および香味剤を含有することができる。
【０３７３】
一般に、水、適切な油、食塩水、デキストロース（グルコース）水溶液、および関連する糖液、およびプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコールは、非経口液のための適切な担体である。非経口投与のための溶液は、有効成分の水溶性塩、適切な安定化剤、および必要に応じて緩衝物質を含有することが好ましい。亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、またはアスコルビン酸などの抗酸化剤の単独もしくは組合せは、適切な安定化剤である。クエン酸およびその塩、ならびにナトリウムＥＤＴＡもまた使用される。さらに非経口液は、塩化ベンザルコニウム、メチル−またはプロピル−パラベン、およびクロロブタノールなどの保存料を含有することができる。
【０３７４】
適切な医薬担体は、この分野における標準的参照文献であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎの「Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」，Ｎｉｎｅｔｅｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９５において説明されている。
【０３７５】
本明細書に記載する化合物の投与のための代表的な有用な医薬品剤形を、下記の通り例示することができる。
【０３７６】
カプセル剤
多数のユニットカプセル剤は、粉末有効成分１００ミリグラム、ラクトース１５０ミリグラム、セルロース５０ミリグラム、およびステアリン酸マグネシウム６ミリグラムを、標準的な２片からなる硬ゼラチンカプセルに充填することによって調製することができる。
【０３７７】
軟ゼラチンカプセル剤
ダイズ油、綿実油またはオリーブ油などの消化しやすい油中の有効成分の混合物を調製し、これを容積式ポンプを用いてゼラチンに注入することによって、有効成分１００ミリグラムを含有する軟ゼラチンカプセル剤を形成し得る。カプセル剤は、洗浄し乾燥すべきである。
【０３７８】
錠剤
錠剤は、例えば投与単位が、有効成分１００ミリグラム、コロイド状二酸化ケイ素０．２ミリグラム、ステアリン酸マグネシウム５ミリグラム、微結晶性セルロース２７５ミリグラム、デンプン１１ミリグラム、およびラクトース９８．８ミリグラムであるように、従来の手順により調製し得る。嗜好性を高めまたは吸収を遅延させるために、適切なコーディングを利用し得る。
【０３７９】
注射剤
本明細書に記載するペプチド組成物の注射可能な処方は、規制機関により承認されてきたような賦形剤の利用を必要としてもしなくてもよい。このような賦形剤には、それだけに限らないが、溶媒および共溶媒、可溶化剤、乳化剤または増粘剤、キレート剤、抗酸化剤および還元剤、抗菌性保存料、緩衝液およびｐＨ調整剤、充填剤、保護剤および等張化剤、ならびに特別な添加剤が挙げられる。注射可能な処方は、無菌で、発熱物質がなく、および溶液の場合は、粒子状物質がない必要がある。
【０３８０】
注射による投与に適切な非経口組成物は、共溶媒または他の賦形剤を含有してもしなくてもよい医薬的に許容される緩衝液中の、例えば１．５重量％の有効成分を撹拌することにより調製され得る。溶液は、塩化ナトリウムで等張化し、無菌化するべきである。
【０３８１】
懸濁剤
水性懸濁剤は、例えば各５ｍＬが、微粉化した有効成分１００ｍｇ、カルボキシメチルセルロースナトリウム２０ｍｇ、安息香酸ナトリウム５ｍｇ、ソルビトール溶液１．０ｇ、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、およびバニリン０．０２５ｍＬまたは他の味のよい香味剤を含有するように、経口および／または非経口投与のために調製することができる。
【０３８２】
生分解性微粒子
注射により投与するのに適切な徐放性非経口組成物は、例えば、溶媒中に適切な生分解性ポリマーを溶解し、ポリマー溶液に組込みをする活性剤を加え、溶媒をマトリックスから除去することによって調製することができ、したがって活性剤がマトリックス全体に亘って分散しているポリマーマトリックスが形成される。
【０３８３】
本明細書において説明されおよび特許請求されている対象の多くの改変および変形が、上記の教示に照らして可能である。したがって、特許請求の範囲において列挙されている対象は、添付の特許請求の範囲内で、本明細書に特に記載した以外に実施することができると理解される。
【０３８４】
特許請求の範囲において列挙されている対象は、特許請求されている対象の単一の実施形態として意図している記載されている特定の実施形態によって、範囲が限定されない。本明細書に示され記載されたもの以外に、機能的に同等である方法および構成要素が、上記の説明および添付図面から当業者にとって明らかであろう。このような修正は、添付の特許請求の範囲内であると意図する。本明細書において引用された全ての参照文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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