(57)【要約】  スチルベン誘導体、ならびにＶＥＧＦ阻害剤およびより具体的にはＶＥＧＦトラップから選択された抗癌性化合物を含む抗腫瘍の組合せ。また、固形癌などの治療のために、これらの製剤を使用する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
固形腫瘍の治療のためのコンブレタスタチンの有効量と組み合わせたＶＥＧＦトラップから選択された抗癌性化合物の有効量を含む、製剤の組合せ。
【請求項２】
コンブレタスタチンが以下の式に該当する、固形腫瘍の治療のための前記コンブレタスタチンの有効量と組み合わせたＶＥＧＦトラップから選択された抗癌性化合物の有効量を含む、製剤の組合せ。
【化１】
2009520774.tif 000007
【請求項３】
前記コンブレタスタチンが塩酸塩の形態である、請求項２に記載の組合せ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スチルベン誘導体およびＶＥＧＦ阻害剤などの抗癌剤を含む治療的組合せに関する。
【０００２】
ＶＥＧＦ阻害剤は、血管内皮増殖因子の阻害剤であり、大半の場合、可溶性受容体、アンチセンス、ＲＮＡアプタマーおよび抗体から選択される生物学的製剤である。
【０００３】
本発明は、スチルベン誘導体とＶＥＧＦ阻害剤の組合せによる癌の特に固形腫瘍の治療、改善された癌の治療のためのこの組合せの使用、ならびに腫瘍などの治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）（治療（ｔｈｅｒａｐｙ））、抑制および寛解のためのこれら有効成分の使用などに関する。
【背景技術】
【０００４】
今日、多種多様な化学療法剤が、腫瘍（特に悪性固形腫瘍）の治療および抑制のために使用されている。これらの薬剤は、腫瘍を縮小させる効果を有し得るが、癌による薬剤に対する耐性獲得、腫瘍の再発などにより、これら公知の薬剤が回復をもたらすことをしばしば不可能にしている。したがって、他のより有効な抗癌剤が必要とされている。
【０００５】
主骨格としてシス−スチルベンを有するスチルベン誘導体が、強力な有糸分裂阻害活性および細胞毒性を持つことが知られているものの、大部分のスチルベン誘導体は、水難溶性のために医薬品として未だ利用可能でない。
【０００６】
また、チューブリン重合に対する阻害活性を有する特定のスチルベン誘導体が、水溶性が高いことが最近発見されている。そのような誘導体は、コンブレタスタチン−Ａ４のリン酸前駆体（米国特許第５５６１１２２号を参照）および米国特許第５６７４９０６号に記載のスチルベン誘導体を含む。これらのスチルベン誘導体の臨床的使用は、有望と見られる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、高い有効性を持つ抗癌剤の組合せを開発すること、特にスチルベン誘導体の有効性を改善することができる製剤を開発すること、特に悪性腫瘍の治療において安全に使用され、高い有効性を有する抗癌剤を開発および提供することである。
【０００８】
スチルベン誘導体をＶＥＧＦ阻害剤などの他の抗癌剤と共に投与すると、腫瘍の増殖を阻害する治療効果を向上することが知られている。
【０００９】
ＶＥＧＦトラップ（ＶＥＧＦ  Ｔｒａｐ）キメラタンパク質である、本発明において好ましくは使用されるＶＥＧＦ阻害剤の解説および調製は、特許出願ＷＯ００／７５３１９に記載されている。キメラタンパク質のいくつかの実施形態が存在する。
【００１０】
ＶＥＧＦトラップに該当する実施形態は、図２４（配列）において述べられるものである。本発明で使用されるＶＥＧＦトラップは、それ自体がＶＥＧＦＲ２受容体のＩｇドメインＤ３に融合し、そして次にＩｇＧ１  Ｆｃドメインに融合したＶＥＧＦＲ１受容体のＩｇドメインＤ２に融合したＶＥＧＦＲ１シグナル配列を含む融合タンパク質である（別名ＶＥＧＦＲ１Ｒ２−ＦｃΔＣ１またはＦｌｔ１Ｄ２．Ｆｌｋ１Ｄ３．ＦｃΔＣ１）。
【００１１】
現在、この新しい抗癌剤は、スチルベン誘導体と組み合わせると、特に固形腫瘍の治療に有効であることが認められている。有効なスチルベン誘導体は、コンブレタスタチンＡ−４および化合物の（Ｚ）−１−（３−アミノ−４−メトキシフェニル）−２−（３，４，５−トリメトキシフェニル）エタンの誘導体である（これらは式ＩＩの生成物を指す。）。これら２種の化合物は、強力な有糸分裂阻害活性および細胞毒性を示し、これらはチューブリン重合を阻害する。
【００１２】
コンブレタスタチンＡ−４は、以下の式を有する。
【００１３】
【化２】
2009520774.tif 000002
式（ＩＩ）の生成物は、以下の式を有する。
【００１４】
【化３】
2009520774.tif 000003
【００１５】
これらのコンブレタスタチンは、かろうじて水溶性であり、これらは例えば塩酸塩、酢酸塩、リン酸塩、メタンスルホン酸塩およびアミノ酸塩などの塩の形態で使用することができる。
【００１６】
薬学的に許容される塩、水和物および溶媒和物の形態であり得るスチルベン誘導体の製造、ならびに上記の化合物、その担体および／または薬学的に許容されるその希釈剤を含む経口および／または非経口医薬組成物の製造は、式（ＩＩ）および前駆体の生成物に関して、米国特許第５５２５６３２号、第５７３１３５３号および第５６７４９０６号に記載される。これらの特許（これらは参照により本明細書に組み込まれる。）は、これらを単独で使用すると、式（ＩＩ）のコンブレタスタチン生成物を含むスチルベン誘導体がインビボにおいて、制癌（ｃａｎｃｅｒｏｓｔａｔｉｃ）効果を有することを明らかにしている。
【００１７】
最近、式（ＩＩ）のコンブレタスタチンのセリン塩とＶＥＧＦトラップの組合せが、各化合物を単独で腫瘍を有する動物に投与した後、予測される減少と比較して、腫瘍容積の増大をかなり減少させることが発見されている。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
したがって、本発明は、例えば、２種の活性成分（すなわち、スチルベン誘導体およびＶＥＧＦトラップ）を同時または別々に含む、癌に対する化学療法薬物（癌化学療法剤）などの、新しい抗癌剤を提供するので有望である。
【００１９】
また、本発明は、スチルベン誘導体およびＶＥＧＦトラップを、２つの別々の製剤として調製し、それを必要とする患者に同時に、半同時に、別々にまたは連続して投与する併用療法を含む。
【００２０】
本発明の抗癌剤が投与される腫瘍は、動物特に、ヒトにおいて発現する全タイプの腫瘍を含む。好ましくは、本発明の抗癌剤は、ヒトに腫瘍細胞の増殖を阻害するために使用することができる。本発明の抗癌剤は、少なくとも２種の化合物が腫瘍を治療（ｃｕｒｅ）（治療（ｔｒｅａｔ））または抑制するために使用される製剤である。
【００２１】
抗癌剤の投与形態に特別な制限はない。抗癌剤は、静脈内に、非経口的に、および経口的にルーチンに投与される。また、本発明は、異なる投与形態を有する２種の化合物の組合せを含む抗癌剤を含む。
【００２２】
本発明で用いられるスチルベン誘導体は、主骨格としてシス−スチルベンを持ち、インビボにおいてチューブリン重合に対する阻害活性および／または抗腫瘍活性を示す。また、本発明のスチルベン誘導体は、インビボにおいてスチルベン誘導体へ変換することができる前駆体を含む。例えば、その塩、エステル、アミド、溶媒和物（溶媒和生成物）および水和物などの薬学的に許容されるすべての適切な派生形態は、スチルベン誘導体をインビボにおいて使用するとき、抗腫瘍活性を示すならば、本発明においてスチルベン誘導体として使用することができる。
【００２３】
式（ＩＩ）の生成物の前駆体は、好ましくはアミノ酸塩である。
【００２４】
アミノ酸は、αアミノ酸、βアミノ酸およびγアミノ酸を挙げることができる。好ましいアミノ酸の例は、グリシン、アラニン、ロイシン、セリン、リシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、スレオニン、バリン、イソロイシン、オルニチン、グルタミン、アスパラギン、チロシン、フェニルアラニン、システイン、メチオニン、アルギニン、−アラニン、トリプトファン、プロリン、ヒスチジンなどである。特にスレオニンおよびセリンは、製剤の効果および使用の安全性を考慮して好ましい。これらすべてのアミノ酸は、Ｌ型、Ｄ型またはＤＬ型であり得るが、Ｌ型が好ましい。
【００２５】
上記のように、本発明のスチルベン誘導体は、この構造にシス−スチルベン骨格を有する化合物であり、チューブリン重合に対する阻害活性および／または抗腫瘍活性を示す。そのようなスチルベン誘導体は、コンブレタスタチンＡ−４ならびに米国特許第４９９６２３７号、第５５６１１２２号および第５４３００６２号などの先行技術の公報において記載される式（ＩＩ）の生成物により例証される。これら特許公報において記載される先行技術のスチルベン誘導体、ならびに米国特許第５５２５６３２号および第５７３１３５３号に記載の式（ＩＩ）のコンブレタスタチンは、これらが本発明におけるスチルベン誘導体の定義に該当する限り、本発明のスチルベン誘導体のために使用することができる。
【００２６】
前述のスチルベン誘導体は、前述の公知の公報に記載の方法を含むルーチンの技術により製造することができる。
【００２７】
本発明のスチルベン誘導体は、スチルベン誘導体が動物の体内において前述の目的の活性を呈する限り、スチルベンの塩、エステルおよびその他の誘導体、ならびにインビボにおいてスチルベン誘導体に変換できる誘導体である。
【００２８】
上記の一般式（ＩＩ）により表される化合物は、以下の式（ＩＩａ）により表される化合物である。
【００２９】
【化４】
2009520774.tif 000004
【００３０】
式（ＩＩａ）の化合物は、水溶性であり、例えば、塩酸塩、酢酸塩、メタンスルホン酸塩などの塩の形態であり得る。
【００３１】
結果として、本発明の目的において、組合せは、成分の物理的結合により得られる組合せに限らず、同時または一定期間にわたり間隔をあけて別々に投与することができる組合せも含む。
【００３２】
本発明における好ましい実施形態の１つは、ＶＥＧＦトラップと組み合わせた腫瘍増殖を阻害するための化合物ＩＩａの有効量の使用である。
【００３３】
本発明の抗癌剤は、上記のように、非経口的に投与することができる。この場合、抗癌剤を、静脈内ボーラス投与するか、または当業者に公知の様々な方法により、薬学的に許容されるベクターを用いて静注内注入バックに調製することができる。好ましくは、医薬品を、例えば、単位薬剤形態および凍結乾燥製剤の形態などのルーチンの技術により調整し、また水または投与に適した他の液体輸液中に調製する。
【００３４】
本発明の抗癌剤のための製剤における２種の成分の比率は、所望の投与量および使用のための薬学的に許容されるベクターなどの一定数の要因により、広範囲に変動し得る。本発明の抗癌剤としての製剤におけるスチルベン誘導体の投与における量または組合せに関して、スチルベン誘導体は、製剤中に存在するＶＥＧＦトラップの１重量部あたり約０．０１から１００および特に約０．１から１０重量部の量で好ましくは使用される。したがって、２種の活性成分を含む本発明の製剤を患者に投与する必要があるとき、上記に定義した投与範囲となり得る量で投与される。
【００３５】
製剤を段階的に投与する必要のある場合、上記に定義した投与範囲は、別々の製剤の平均比として設定することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
本発明は、今、その好ましい実施形態に関してさらに詳細に説明される。前記の実施形態は、ほんの一例として示したもので、これらは本発明を制限することを意図するものではないことに留意する必要がある。
【００３７】
組合せの有効性は、この治療的な相乗作用を判定することにより実証することができる。組合せは、適量で単独に使用した最適の薬剤より治療的に優れている場合、治療的な相乗作用を示す（Ｔ．Ｈ．Ｃｏｒｂｅｔｔら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，６６，１１８７（１９８２））。
【００３８】
また、組合せの有効性を、試験において問題になっている別々の成分のそれぞれの最大耐量と組合せの最大耐量を比較することにより判定することができる。この有効性は、例えば、以下の式により判定されるｌｏｇ１０細胞殺傷（ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌ）により定量化できる。
ｌｏｇ１０細胞殺傷＝Ｔ−Ｃ（日）／３．３２×Ｔｄ
（式中、Ｔ−Ｃは、治療群（Ｔ）の腫瘍が所定の値（例えば１ｇ）に達するまで、および対照群（Ｃ）の腫瘍が同一の値に達するまでにかかる平均時間（日）である、腫瘍増殖の遅れを表し、Ｔｄは、対照群の腫瘍容量が倍加するために必要な時間（日）を表す。）。腫瘍増殖の対数期の間（Ｔ．Ｈ．Ｃｏｒｂｅｔｔら、Ｃａｎｃｅｒ，４０，２６６０．２６８０（１９７７）；Ｆ．Ｍ．Ｓｃｈａｂｅｌら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｐａｒｔ  Ｂ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７，３−５１，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．（１９７９））。生成物は、ｌｏｇ１０細胞殺傷が０．７以上の場合、活性であるとみなされる。生成物は、ｌｏｇ１０細胞殺傷が２．８を超える場合、非常に活性であるとみなされる。
【００３９】
各成分が一般に最大耐量を上回らない用量で存在する、それ自体の最大耐量で使用される組合せは、ｌｏｇ１０細胞殺傷が最良の成分のｌｏｇ１０細胞殺傷値（後者は単独で投与）より少なくとも１ｌｏｇ１０大きいとき、治療的な相乗作用を示す。
【００４０】
腫瘍増殖の阻害は、癌を患っているヒトへのコンブレタスタチンの有効量および後述するような第２の抗癌性化合物の有効量の投与を含む治療に対する反応から生じる。容認できる場合では、この投与により、腫瘍増殖を抑制し、その結果、腫瘍の測定可能な大きさを減少させる。最適な場合では、腫瘍は完全な退縮を起こす。
【００４１】
上記のように、治療する哺乳動物に本発明の抗癌剤を投与する方法に特定の制限は存在しない。これらは、経口的、または例えば、静脈内、皮下もしくは筋肉内など非経口的に投与することができる。迅速な効力のために、ボーラスのような静脈内注射または注入などのコンブレタスタチンの非経口投与が好ましい。本発明による製剤を投与する方法では、コンブレタスタチンを、他の抗癌剤と同時に投与するか、または２つを任意の順序で連続して投与することができる。コンブレタスタチンおよび第２の抗癌剤を投与するための最適な方法および最適な順序は、ルーチンの技術および本報告に含まれる情報により当業者が適切に選択することができる。
【００４２】
コンブレタスタチンとＶＥＧＦトラップを組み合わせた、腫瘍増殖を阻害する有効量は、この組合せの成分に感受性の腫瘍を患うヒトに投与できる治療単位に該当する。実際に望ましい治療単位は、用いられるコンブレタスタチンの個々の薬剤形状、用いられる第２の抗癌剤の個々の薬剤形状、治療されている個々の腫瘍細胞および治療されている個々の宿主によって変わる。特定の事前に確立された状態に対する最適治癒量は、試験治療単位（ｔｅｓｔ  ｃｕｒａｔｉｖｅ  ｕｎｉｔ）および本報告に含まれる情報により当業者が適切に選択することができる。
【００４３】
本発明の抗癌剤は、２種の活性成分が製剤中に混合物の形態で含まれ得るというように、前述のように少なくともコンブレタスタチンおよびＶＥＧＦトラップを含む製剤である。しかし、また、本発明の２種の活性成分は、連続および組合せで使用される異なる製剤に別々に含まれ得る。他の抗癌剤など他の薬剤（第３および第４の医薬成分など）を含むそのような製剤は、本発明で用いられる有効成分が本製剤に含まれる限り、本発明におのずと含まれ得る点に留意する必要がある。さらに、本発明における製剤のいずれか１つにおいて（本発明の２種の成分を含む１つの製剤および別々の製剤で、それぞれが組合せの使用のために、２種の成分のうちの１種を別々に含む。）、薬学的に許容されるベクター、希釈剤および他の物質が、本発明の抗癌剤に含まれることがあり得る。
【００４４】
本発明は、今、その好ましい実施形態に関してさらに詳細に説明される。前記の実施形態は、ほんの一例として示したもので、これらは本発明を制限することを意図するものではないことに留意する必要がある。前記の実施形態は、ほんの一例として示したもので、これらは本発明を制限することを意図するものではない。
【００４５】
注入用の医薬組成物を、それぞれ、続く化合物の化学式により表される式（ＩＩａ）およびＡ４のコンブレタスタチンを用いて以下の組成に従って調製した。
【００４６】
【化５】
2009520774.tif 000005
【００４７】
化合物（Ｉ）（リン酸塩の形態で）１０ｍｇおよび
生理食塩水９．５ｍｌ
化合物（ＩＩａ）（塩酸塩の形態で）５ｍｇ
０．５ｍｌおよび
生理食塩水９．５ｍｌ
【実施例】
【００４８】
抗腫瘍効果および試験
固形腫瘍の組合せの有効性は、以下の方法において実験的に判定することができる。実験にかける動物はメスＣ３Ｈ／ＨｅＮマウスであり、これらマウスに０日目にＭＡ１３／Ｃネズミ乳腺癌の断片３０から６０ｍｇを両側の皮下に移植する。早期の腫瘍治療の場合、移植された動物を、治療を受けることが予定される、または予定されない（対照）様々な群にランダムに割り付ける。進行癌の治療が懸案である場合、２００ｍｇを超える事前定義の腫瘍の大きさに達した腫瘍を有する動物を、腫瘍の大きさの範囲がある群から別の群まで同等になるように、様々な治療群および対照群に割り付ける。また、腫瘍を持たない動物に腫瘍を持つ動物と同様な治療を受けさせることが可能であり、このことにより腫瘍に及ぼす特定の作用から毒性を分離することを可能にする。通常、化学療法は、腫瘍の種類および所望の腫瘍の大きさによって、移植の３から２２日後から開始する。毎日、動物を観察および体重を量る。最低のポイントで２０％以上の体重減少（群の平均）または１０％以上の死亡率を誘発する用量を毒性とみなす。腫瘍活性を最高の非毒性用量で評価する。
【００４９】
腫瘍を、腫瘍が約２ｇに達するまで、または死亡が２ｇに達する前に起きた場合は動物が死亡するまで、週ごとに２または３回測定する。動物が屠殺されるとき、動物を剖検する。
【００５０】
抗腫瘍活性は、腫瘍増殖の遅れ、さらに腫瘍の倍加時間によって決まる、用量（ｍｇ／ｋｇ）、投与方法、投与時間、毒性およびｌｏｇ細胞殺傷などの様々な記録されたパラメータに従って判定する。
【００５１】
【表１】
2009520774.tif 000006
【国際調査報告】
2009520774.tif 000008
2009520774.tif 000009
2009520774.tif 000010
2009520774.tif 000011
2009520774.tif 000012
2009520774.tif 000013