(57)【要約】  本発明は、抗原認識分子またはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物の、リガンドと受容体間との相互作用をブロックするための使用を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原認識分子またはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物の、リガンドと受容体間との相互作用をブロックするための使用。
【請求項２】
抗原認識分子が、Ｔ細胞受容体またはその断片である、請求項１に記載の組成物の使用。
【請求項３】
抗原認識分子が、免疫グロブリンまたはその断片である、請求項１に記載の組成物の使用。
【請求項４】
免疫グロブリン断片が、単一免疫グロブリン可変ドメインを含んでいる、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
単一免疫グロブリン可変ドメインが、ＶＨまたはＶＨＨドメインを含んでいる、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
免疫グロブリンまたはその断片が、ヒトまたはラマ免疫グロブリンもしくはその断片である、請求項３〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
脂質ベースの担体が、ミセルを含んでいる、請求項１〜６のいずれかに記載の使用。
【請求項８】
脂質ベースの担体が、ポリエチレングリコール誘導体化された脂質を含んでいる、請求項１〜７のいずれかに記載の使用。
【請求項９】
抗原認識分子またはその断片が、脂質ベースの担体に共有結合されている、請求項１〜８のいずれかに記載の使用。
【請求項１０】
リガンド−受容体の相互作用が、第１の細胞が第２の細胞、ウイルス、増殖プロモーター、サイトカインまたはホルモンに結合するのを仲介する、請求項１〜９のいずれかに記載の使用。
【請求項１１】
リガンド−受容体の相互作用が、第１の細胞が感染体に結合するのを仲介する、請求項１〜１０のいずれかに記載の使用。
【請求項１２】
感染体が、ロタウイルス、ＨＩＶ、インフルエンザウイルス、ヘリコバクターピロリまたはカンジダアルビカンスである、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
抗原認識分子またはその断片が、ロタウイルスＶＰ４付着因子、ＨＩＶｇｐ２０、インフルエンザヘマグルチニン、ヘリコバクターピロリＢａｂＡ付着因子、またはカンジダアルビカンスＳＡＰ２もしくはＭＰ６５ビルレンス因子から選択される抗原に結合する、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
疾患を予防または治療するための医薬を調製するための、抗原認識分子またはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物の使用であって、該疾患が、リガンドが受容体に結合することによって仲介され、該組成物が、リガンドが受容体に結合するのをブロックすることができる、上記組成物の使用。
【請求項１５】
抗原認識分子が、Ｔ細胞受容体またはその断片である、請求項１４に記載の組成物の使用。
【請求項１６】
抗原認識分子が、免疫グロブリンまたはその断片である、請求項１４に記載の組成物の使用。
【請求項１７】
疾患が、感染性の疾患、癌、自己免疫疾患または炎症性の症状である、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８】
抗原認識分子またはその断片が、リガンドまたは受容体に結合する、請求項１４〜１７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９】
医薬が、経口投与用である、請求項１４〜１８のいずれかに記載の使用。
【請求項２０】
リガンドおよび／または受容体に、抗原認識分子またはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物を接触させることを含む、リガンドと受容体との相互作用を阻害するための方法であって、該抗原認識分子またはその断片がリガンドおよび／または受容体に結合し、それによってリガンドと受容体との相互作用が阻害される、上記方法。
【請求項２１】
抗原認識分子が、Ｔ細胞受容体またはその断片である、請求項２０に記載のリガンドと受容体との相互作用を阻害するための方法。
【請求項２２】
抗原認識分子が、免疫グロブリンまたはその断片である、請求項２０に記載のリガンドと受容体との相互作用を阻害するための方法。
【請求項２３】
抗原認識分子またはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物の治療的に有効な量を、被験体に投与することを含む、疾患を予防または治療するための方法であって、該疾患が、リガンドが受容体に結合することによって仲介され、該組成物が、リガンドの受容体への結合をブロックする、上記方法。
【請求項２４】
抗原認識分子が、Ｔ細胞受容体またはその断片である、請求項２３に記載の疾患を予防または治療するための方法。
【請求項２５】
抗原認識分子が、免疫グロブリンまたはその断片である、請求項２３に記載の疾患を予防または治療するための方法。
【請求項２６】
免疫グロブリンまたはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物であって、該組成物が、リガンドの受容体への結合を阻害することができ、該リガンドの受容体への結合は、ヒトまたは動物の疾患の誘発または進行に関連する、上記組成物。
【請求項２７】
医薬で使用するための、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
単一免疫グロブリン可変ドメインと脂質ベースの担体とを含んでなる組成物。
【請求項２９】
免疫グロブリン断片または単一免疫グロブリン可変ドメインが、ＶＨまたはＶＨＨドメインを含んでいる、請求項２６〜２８のいずれかに記載の組成物。
【請求項３０】
免疫グロブリン、その断片、または単一免疫グロブリン可変ドメインが、ヒトまたはラマ由来である、請求項２６〜２９のいずれかに記載の組成物。
【請求項３１】
脂質ベースの担体が、ミセルを含んでいる、請求項２６〜３０のいずれかに記載の組成物。
【請求項３２】
脂質ベースの担体が、ポリエチレングリコール誘導体化された脂質を含んでいる、請求項２６〜３１のいずれかに記載の組成物。
【請求項３３】
免疫グロブリン、その断片、または単一免疫グロブリン可変ドメインが、脂質ベースの担体に共有結合されている、請求項２６〜３２のいずれかに記載の組成物。
【請求項３４】
免疫グロブリン、その断片、または単一免疫グロブリン可変ドメインが、ホルモン、増殖プロモーター、サイトカイン、または感染体に関連する抗原に結合する、請求項２６〜３３のいずれかに記載の組成物。
【請求項３５】
組成物が、脂質ベースの担体によって担持されたさらなる治療用薬剤を含まない、請求項２６〜３４のいずれかに記載の組成物。
【請求項３６】
組成物が、脂質ベースの担体によって担持されたさらなる治療用薬剤を含んでいる、請求項２６〜３４のいずれかに記載の組成物。
【請求項３７】
脂質ベースの担体がミセルを含み、さらなる治療用薬剤が、ミセルのコアによって担持された難水溶性の薬物である、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３８】
２種以上の単一免疫グロブリン可変ドメインポリペプチドを含み、それぞれのポリペプチドが異なる抗原に特異的に結合することができる、請求項２８〜３７のいずれかに記載の組成物。
【請求項３９】
脂質ベースの担体が、リポソームを含んでいる、請求項２６〜３０、３２〜３６、または３８のいずれかに記載の組成物。
【請求項４０】
免疫グロブリン断片または単一免疫グロブリン可変ドメインが、ＶＬドメインを含んでいる、請求項２６〜２８または３０〜３９のいずれかに記載の組成物。
【請求項４１】
Ｔ細胞受容体またはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物。
【請求項４２】
Ｔ細胞受容体またはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物の、治療用薬剤を細胞に送達させるための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リガンドと受容体との相互作用をブロックするための組成物および方法の分野、さらには細胞表面分子を至適にターゲッティングするための組成物および方法の分野に関する。特に、本発明は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体もしくはその断片を含む治療用薬剤、およびその投与の方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ここ数年、モノクローナル抗体を治療用途に使用することについて、相当な関心が寄せられている。通常の抗体は、少なくとも４本のポリペプチド鎖を含んでいる大きなマルチサブユニット蛋白分子である。例えば、ヒトＩｇＧは、２本の重鎖と２本の軽鎖を有しており、これらはジスルフィド結合されていて、官能性の抗体を形成している。通常のＩｇＧのサイズは約１５０ｋＤである。抗体完全体（例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ）は、そのサイズが相対的に大きいので、例えば組織浸透での問題のため、その治療的有用性は限られている。抗原結合機能と溶解性を保持している、より小さい抗体断片を特定し、そしてそれを作ることに相当な努力が集中されてきた。
【０００３】
抗体の重および軽ポリペプチド鎖には、抗原相互作用に直接参加する可変（Ｖ）領域と、構造的な支持、および免疫エフェクターとの非抗原特異的相互作用における機能を提供する定常（Ｃ）領域とが含まれている。通常の抗体の抗原結合性ドメインは２つの別々のドメイン、すなわち重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ：これはＶκかＶλであり得る）を含んでいる。抗原結合性の部位そのものは６本のポリペプチドループ、すなわちＶＨドメインからの３本（Ｈ１、Ｈ２およびＨ３）、およびＶＬドメインからの３本（ＬＩ、Ｌ２およびＬ３）で形成されている。インビボでは、遺伝子セグメントの組み換え再配列によってＶＨドメインおよびＶＬドメインをコードするＶ遺伝子のさまざまな一次レパートリーがつくられる。Ｃ領域には、軽鎖Ｃ領域（ＣＬ領域と呼ばれる）および重鎖Ｃ領域（ＣＨ１領域、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域と呼ばれる）が含まれている。
【０００４】
プロテアーゼ消化の後、多くの、自然に生じる抗体のより小さい抗原結合性断片が特定されている。これらとしては、例えば、「Ｆａｂ断片」（ＶＬ〜ＣＬ〜ＣＨ１〜ＶＨ）、「Ｆａｂ’断片」（重鎖ヒンジ領域を有するＦａｂ）、および「Ｆ（ａｂ’）２断片」（重鎖ヒンジ領域によって接合されたＦａｂ’断片同士のダイマー）が挙げられる。組み換え法を用いて、合成のペプチドリンカーによって接合されたＶＬとＶＨとから構成されている「単一鎖Ｆｖ」（可変断片）または「ｓｃＦｖ」と呼ばれるさらにより小さい抗原結合性の断片が作出されている。
【０００５】
自然に（例えばヒトおよび大部分の他の哺乳動物で）生じる抗体の抗原結合性のユニットが１対のＶ領域（ＶＬ／ＶＨ）を含んでいることは一般的に知られているが、ラクダ科の種は、主として完全に機能する、高度に特異的な、軽鎖配列を欠く抗体を発現している。このラクダ重鎖抗体は、その定常領域を介してダイマー化されている単一重鎖のホモダイマーとして存在している。
【０００６】
このラクダ重鎖抗体の可変ドメインはＶＨＨドメインと呼ばれ、ＶＨ鎖の断片として単離された場合、抗原を高い特異性で結合させる能力を保持している（非特許文献１、非特許文献２）。抗原結合性の単一ＶＨドメインは、例えば、免疫化マウス脾臓由来ゲノムＤＮＡから増幅し、大腸菌中で発現させたネズミＶＨ遺伝子のライブラリーからも明らかになっている（非特許文献３）。Ｗａｒｄらは、この単離された単一ＶＨドメインを「ドメイン抗体（domain antibodies）」にちなんで「ｄＡｂ」と命名した。用語「ｄＡｂ」は、本明細書では、特異的に抗原を結合させる単一免疫グロブリン可変ドメイン（ＶＨまたはＶＬ）ポリペプチドを意味することになる。「ｄＡｂ」は、抗原を他のＶドメインからは独立して結合させる。しかしながら、本明細書でこの用語が使用される場合、「ｄＡｂ」は、他のＶＨまたはＶＬドメインとのホモ−またはヘテロ−マルチマー中にも存在し得る。この場合、これらの他のドメインは、ｄＡｂが抗原に結合するのには必要とされず、すなわち、ｄＡｂは、これらの追加的なＶＨまたはＶＬドメインとは独立して抗原を結合させる。
【０００７】
このように、単一免疫グロブリン可変ドメイン（例えば、ＶＨＨ）は、非常に小さな抗原結合性の抗体ユニット（２つの超可変領域のみを有するミニ体）である。治療で使用するのには、原則として、ヒト抗体が好ましいが、これは主として、患者に投与した場合、免疫反応を引き起こす恐れがあまりないためであるが、これらは、ナイーブライブラリーから選択されるので、アフィニティを改善するためのミューテーションとセレクションのプロセスが通常必要とされる。上記したように、単離された非ラクダＶＨドメインは、相対的に不溶性の傾向があり、また、多くの場合、ほとんど発現もされない。ラクダＶＨＨをヒト抗体のＶＨドメインと比較すると、ヒトＶＨドメインのＶＨ／ＶＬ境界面に相当するラクダＶＨＨドメイン枠組領域におけるいくつかの重要な差異が明らかである。ヒトＶＨ３のこれらの残基をミューテーションして、ＶＨＨ配列により近く似させること（具体的には、Ｇｌｙ４４をＧｌｕに、Ｌｅｕ４５をＡｒｇに、およびＴｒｐ４７をＧｌｙに）が行われて、抗原結合活性を維持し、その上発現性と溶解性が改善された「ラクダ化」ヒトＶＨドメインが作られている（非特許文献４）。本明細書で使用する可変ドメインアミノ酸ナンバリングは、Ｋａｂａｔのナンバリング法（非特許文献５）に従ったものである。Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ（特許文献１）は、Ｔｒｐ１０３のＡｒｇへのミューテーションは、非ラクダＶＨドメインの溶解性を改善することを報告している。ＤａｖｉｅｓおよびＲｉｅｃｈｍａｎｎ（非特許文献６）も、ラクダ化ヒトＶＨドメインのファージディスプレイ型レパートリーの作製、およびアフィニティが１００〜４００ｎＭの範囲でハプテンを結合させるクローンのセレクションを報告しているが、蛋白抗原に結合するように選択されたクローンのアフィニティはより弱いものであった。
【０００８】
ラクダＶＨＨドメインは元々可溶性であって、ヒトＶＨとの相同性を大きくして、ヒト用途に対するその既に非常に低い免疫原性ポテンシャルをおおむね除去するための若干の変更以外はミューテーションの必要なく、高アフィニティクローンとして誘導され得る。ラクダＶＨＨは、また、いくつかのウイルス種の特徴である「キャニオン」にそれが浸透していくのを容易にする特に目立つＨ３抗原結合性のループも有している。
【０００９】
Ｐｌａｓｋｉｎら（特許文献２）およびＲｅｉｔｅｒら（非特許文献７）は、非常に安定であり、且つナノモル範囲のアフィニティで蛋白抗原を結合させる大腸菌発現マウス抗体単離ＶＨドメインを記載している。Ｗｉｎｔｅｒら（特許文献３）は、実験的抗原リゾチームを１９ｎＭの解離定数で結合させるマウスＶＨドメイン抗体断片を記載している。
【００１０】
Ｅｎｔｗｉｓｔｌｅら（特許文献４）は、実験的抗原を結合させるヒトＶＨ単一ドメイン抗体断片を記載しており、ブルセラ抗原に特異的なｓｃＦｖを１１７ｎＭのアフィニティで結合させるＶＨドメイン、および抗ＦＬＡＧ  ＩｇＧを結合させるＶＨドメインが挙げられている。
【００１１】
Ｔａｎｈａら（非特許文献８）は、実験的抗原として用いられた２種のモノクロナール抗体を結合させ、且つ解離定数がマイクロモル範囲にあるラクダ化ヒトＶＨドメインのセレクションを記載している。
【００１２】
Ｓａｌｆｅｌｄら（特許文献５）は、１０−８Ｍ以下のアフィニティでヒトＴＮＦ−ａを結合させ、ヒトＴＮＦ−αの解離についてのｏｆｆ−ｒａｔｅ（Ｋｏ）が１０−３ｓｅｃ−１以下であり、標準Ｌ９２９細胞アッセイでヒトＴＮＦ−α活性を中和するヒト抗体を記載している。
【００１３】
これらの進展にもかかわらず、免疫グロブリンおよびその断片は、商業的に作るにはなお一般的に高くつき、また凝集、蛋白分解（例えば低ｐＨで）、変性も起こりやすい。つまり、有効性が改善された（すなわち、同じ治療効果を得るのにより少ない抗体を必要とする）、さらにはより安定である、特に温度や酸性、蛋白分解性の胃環境に対して相対的に非感受性であるという点（経口投与にとっては重要）でより安定である、新規な製剤および免疫グロブリンを送達するための新規な方法に対するニーズがなおある。
【００１４】
特定の細胞系に治療用薬剤を標的送達するのには免疫ミセルまたはリポソームが用いられてきた（非特許文献９および特許文献６を参照されたい）。しかしながら、リポソームまたはミセル中の抗体は、それ自体、治療効果を提供するためには用いられておらず、単に、ミセル中に入れられた治療用薬剤を送達することが望まれている細胞系に、リポソームまたはミセルを確実に結合させるために用いられている。
【特許文献１】国際公開第０３／０３５６９４号パンフレット
【特許文献２】国際公開第００／２９００４号パンフレット
【特許文献３】国際公開第９０／０５１４４号パンフレット
【特許文献４】国際公開第０２／０５１８７０号パンフレット
【特許文献５】米国特許第６０９０３８２号明細書
【特許文献６】米国特許第６２１４３８８号明細書
【非特許文献１】Hamers-Casterman et al., 1993, Nature 363: 446-448；
【非特許文献２】Gahroudi et al., 1997, FEBS Lett. 414: 521-526
【非特許文献３】Ward et al.、1989、Nature 341: 544-546
【非特許文献４】Davies & Riechmann, 1994, FEBS Lett. 339: 285-290
【非特許文献５】Kabat et al., 1991, Sequences of Immunological Interest, 5th ed. U. S. Dept. Health & Human Services, Washington, D. C.
【非特許文献６】1995, Biotechnology N. Y. 13: 475-479
【非特許文献７】1999, J. Mol. Biol. 290:685-698
【非特許文献８】2001, J. Biol. Chem. 276:24774-24780
【非特許文献９】Torchilin V.P. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 2003, 100, 6039
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
よって本発明は、抗原認識分子またはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物の、リガンドと受容体との相互作用をブロックするための使用を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
１つの実施形態で本発明は、Ｔ細胞受容体またはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物の、リガンドと受容体との相互作用をブロックするための使用を提供する。
【００１７】
さらなる実施形態で本発明は、免疫グロブリンまたはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物の、リガンドと受容体との相互作用をブロックするための使用を提供する。
【００１８】
さらなる態様で、本発明は、疾患を予防または治療するための医薬を調製するための、抗原認識分子またはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物の使用を提供するものであり、ここでは該疾患は、リガンドが受容体に結合することによって仲介され、また該組成物は、リガンドが受容体に結合するのをブロックすることができる。
【００１９】
さらなる態様で、本発明は、疾患を予防または治療するための医薬を調製するための、Ｔ細胞受容体またはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物の使用を提供するものであり、ここでは該疾患は、リガンドが受容体に結合することによって仲介され、また該組成物は、リガンドが受容体に結合するのをブロックすることができる。
【００２０】
さらなる態様で、本発明は、疾患を予防または治療するための医薬を調製するための、免疫グロブリンまたはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物の使用を提供するものであり、ここでは該疾患は、リガンドが受容体に結合することによって仲介され、また該組成物は、リガンドが受容体に結合するのをブロックすることができる。
【００２１】
さらなる態様で、本発明は、リガンドおよび／または受容体に、抗原認識分子またはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物を接触させることを含む、リガンドと受容体との相互作用を阻害するための方法を提供するものであり、ここでは該抗原認識分子またはその断片はリガンドおよび／または受容体に結合し、それによってリガンドと受容体との相互作用が阻害される。
【００２２】
さらなる態様で、本発明は、リガンドおよび／または受容体に、Ｔ細胞受容体またはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物を接触させることを含む、リガンドと受容体との相互作用を阻害するための方法を提供するものであり、ここでは該Ｔ細胞受容体またはその断片はリガンドおよび／または受容体に結合し、それによってリガンドと受容体との相互作用が阻害される。
【００２３】
さらなる態様で、本発明は、リガンドおよび／または受容体に、免疫グロブリンまたはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物を接触させることを含む、リガンドと受容体との相互作用を阻害するための方法を提供するものであり、ここでは該免疫グロブリンまたはその断片はリガンドおよび／または受容体に結合し、それによってリガンドと受容体との相互作用が阻害される。
【００２４】
さらなる態様で、本発明は、抗原認識分子またはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物の治療的に有効な量を被験体に投与することを含む、疾患を予防または治療するための方法を提供するものであり、ここでは該疾患は、リガンドが受容体に結合することによって仲介され、また該組成物は、リガンドが受容体に結合するのをブロックする。
【００２５】
さらなる態様で、本発明は、Ｔ細胞受容体またはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物の治療的に有効な量を被験体に投与することを含む、疾患を予防または治療するための方法を提供するものであり、ここでは該疾患は、リガンドが受容体に結合することによって仲介され、また該組成物は、リガンドが受容体に結合するのをブロックする。
【００２６】
さらなる態様で、本発明は、免疫グロブリンまたはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物の治療的に有効な量を被験体に投与することを含む、疾患を予防または治療するための方法を提供するものであり、ここでは該疾患は、リガンドが受容体に結合することによって仲介され、また該組成物は、リガンドが受容体に結合するのをブロックする。
【００２７】
さらなる態様で、本発明は、治療用薬剤を細胞に送達するための、Ｔ細胞受容体またはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物の使用を提供する。
【００２８】
好ましい態様では、この組成物は、抗原認識分子と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物についての、本明細書で記載したあらゆる機能的可能性を有している。
【００２９】
さらなる態様で、本発明は、免疫グロブリンまたはその断片と脂質ベースの担体とを含んでなる組成物を提供するものであり、ここでは該組成物は、リガンドが受容体に結合するのを阻害することができ、該リガンドの受容体への結合は、ヒトまたは動物の疾患の誘発または進行と関連する。
【００３０】
さらなる態様で、本発明は、Ｔ細胞受容体またはその断片と、脂質ベースの担体と、場合により治療用薬剤とを含んでなる組成物を提供する。
【００３１】
さらなる態様で、本発明は、医療で使用するための、上記のいずれかで定義された組成物を提供する。
【００３２】
さらなる態様で、本発明は、単一免疫グロブリン可変ドメインと脂質ベースの担体とを含んでなる組成物を提供する。
【００３３】
本発明では、リガンドとの相互作用がブロックされ得るそのような受容体は、「リガンド受容体」とも呼ばれ得る。この受容体は、Ｔ細胞受容体とは異なる。
【００３４】
有利なことに、本発明は、抗体およびその断片のための、代替的なおよび／または改良された製剤および送達システムを提供することを目的とする新規な組成物およびその使用を提供する。本発明の実施形態によれば、同じ治療効果が、遊離の抗体を用いる先行技術の方法に比べてずっと少ない量の免疫グロブリンまたはその断片を用いて達成され得る。別の形態では、本発明による組成物は、保存寿命つまり安定性が良くなっている（例えば温度または低ｐＨに対して）という点での特長を示し得る。
【００３５】
「免疫グロブリンまたはその断片」とは、抗体、または抗体から誘導される任意のポリペプチド配列、特に特異的に抗原を結合させることができる断片を意味する。つまりこの用語には、完全な通常の抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭ）ならびに完全抗体およびその断片のキメラ形態およびヒト化形態が含まれる。より好ましいのは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖまたは単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ断片）のような断片である。最も好ましいのは、単一免疫グロブリン可変ドメイン含有断片（「ドメイン抗体」としても知られる）である。
【００３６】
「単一免疫グロブリン可変ドメイン」またはＳＶＤとは単一のＶＨ、ＶＨＨまたはＶＬ領域（いずれも、特異的に抗原を結合させることができる）を含んでいる断片を意味する。好ましくはこの単一免疫グロブリン可変ドメインはＶＨドメインであるか、またはＶＨＨドメインである。単一免疫グロブリン可変ドメインは、典型的には、折り畳まれたポリペプチドからなるドメインであり、これには免疫グロブリン可変ドメインの特徴を示す配列が含まれており、またこれは特異的に抗原を結合させる（すなわち、有用には、５００ｎＭ以下の解離定数でもって）。それゆえに「単一免疫グロブリン可変ドメイン」には完全な抗体可変ドメインと並んで修飾された可変ドメインも含まれ、例えば、１つ以上のループが、抗体可変ドメインの特徴ではない配列によって置換されているもの、あるいはトランケーションされている、またはＮ−もしくはＣ末端エクステンションを含んでいる抗体可変ドメイン、あるいは５００ｎＭ以下（例えば、４５０ｎＭ以下、４００ｎＭ以下、３５０ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、２５０ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、１５０ｎＭ以下、１００ｎＭ以下）の解離定数と完全長ドメインの標的抗原特異性とを維持している可変ドメイン折り畳み断片である。「ドメイン抗体」または「ｄＡｂ」は、この用語が本明細書で使用される場合、「単一免疫グロブリン可変ドメインポリペプチド」と同じである。つまり免疫グロブリン断片は、基本的には、単一免疫グロブリン可変ドメイン（例えば単一ＶＨまたはＶＨＨドメイン）からなり得る。
【００３７】
用語「単一免疫グロブリン可変ドメインポリペプチド」には、単離された単一免疫グロブリン可変ドメインのみならず、単一免疫グロブリン可変ドメインポリペプチド配列の１つ以上のモノマーを含んでいるより大きいポリペプチドも包含される。単一免疫グロブリン可変ドメインポリペプチドの２つ以上のモノマーを含んでいるそのようなより大きいポリペプチドは、協働して抗原分子を結合させるＶＨとＶＬとのドメインを含んでいるｓｃＦｖポリペプチドとは際立って違っている。本明細書で記載するこのポリペプチド中の各モノマーは、互いに独立して抗原を結合させることができる。つまり、単一免疫グロブリン可変ドメインを含んでなる組成物が本明細書で言及された場合、その組成物は、一部の実施形態では、上記で定義した単一免疫グロブリン可変ドメインポリペプチド、すなわち、単一免疫グロブリン可変ドメインの２つ以上のモノマーを含んでいる、またはそれらからなっているポリペプチドを含み得る。
【００３８】
免疫グロブリンまたはその断片はいずれの種からも誘導され得るが、好ましくはヒト免疫グロブリンまたはその断片、すなわちヒト生殖系列免疫グロブリン領域から誘導されるものである。さらなる好ましい実施形態では、免疫グロブリンまたはその断片は、ラクダ科の動物、例えばラクダまたはラマから誘導され、そのような種から誘導されるキメラ形態やヒト化形態も含まれる。最も好ましいのは、ヒトまたはラマ単一免疫グロブリン可変ドメイン、特にヒトＶＨドメインまたはラクダＶＨＨドメインである。
【００３９】
用語「特異的に結合させる」とは、本明細書で使用する場合、例えばＢＩＡｃｏｒｅ表面プラズモン共鳴システムとＢＩＡｃｏｒｅ動態評価ソフトウェア（例えば、バージョン２．１）とを用いた表面プラズモン共鳴解析によって測定される解離定数（Ｋｄ）が１μＭ以下でもって、免疫グロブリン可変ドメインによって抗原が結合されることを意味する。特異的結合相互作用のためのアフィニティまたはＫｄは、好ましくは、約５００ｎＭ以下、より好ましくは約３００ｎＭ以下である。
【００４０】
本明細書で使用する用語「抗原」とは、抗体または抗体の結合性領域（例えば可変ドメイン）によって結合される分子を意味する。抗原は、ペプチド、ポリペプチド、蛋白、核酸、脂質、炭水化物、あるいはその他の分子であり得る。一般的には、免疫グロブリン可変ドメインは、特定の抗原に対する標的特異性で選択される。
【００４１】
「脂質ベースの担体」とは、免疫グロブリンまたはその断片を送達または投与のために安定に組み込むことができる任意の脂質含有物質を意味する。脂質ベースの担体は、好ましくは、免疫グロブリンまたはその断片がない状態で、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、あるいは最も好ましくは少なくとも９５％（重量）の脂質を含んでいる。つまり、脂質ベースの担体は、ミセル、ラメラ構造体、リポソーム、あるいはその他の脂質構造体を含めて、いずれの脂質含有超分子集合体も含み得る。
【００４２】
好ましくは、脂質ベースの担体は、微粒子状物質であり、例えばユニラメラベシクルおよびマルチラメラベシクルも含めてベシクル含有物質である。「ベシクル」とは、主として球状の任意の脂質ベースの粒子を意味するものとし、脂質二重層含有粒子（例えばリポソーム）やミセルが挙げられる。本発明で使用するのに適している免疫リポソームは、一般的には、米国特許第６２１４３８８号明細書（特に９〜２１欄）に記載されているようにして調製され得る（参照により本明細書に組み込む）。
【００４３】
最も好ましくは、脂質ベースの担体は、免疫グロブリンまたはその断片と組み合わせられた免疫ミセルとも呼ばれる、複数のミセルを含んでいる。本発明で使用するのに適している免疫ミセルは、Torchilin et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 100(10), 6039-6044 (2003)、Torchilin et al., Biophys. Acta 1511, 397-411 (2001)、またはTorchilin et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 98, 8786-8791 (2001)に記載されているようにして調製され得る（それぞれを、参照により本明細書に組み込む）。
【００４４】
脂質ベースの担体は、上記した形態の２つ以上の、さまざまな割合での混合物、例えばミセルとリポソームとの混合物、あるいはミセルとリポソームとラメラ構造体との混合物を含んでいてもよい。好ましくは、脂質ベースの担体は、少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも７５％、最も好ましくは少なくとも９０％（重量）のミセルを含んでいる。別の実施形態では、脂質ベースの担体は、少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも７５％、最も好ましくは少なくとも９０％（重量）のリポソームを含んでいる。
【００４５】
脂質ベースの担体は、任意の適切な脂質物質を含み得る。脂質は、好ましくは、両親媒性の脂質で、例えば疎水性の部分と極性のヘッド部分を有しているものである。より好ましくは、脂質は、ベシクル−またはミセル−形成性の脂質、すなわち、水中で、リポソーム、または最も好ましくはミセルのようなベシクルを自発的に形成することができる脂質である。主として２本鎖の両親媒性の物質（すなわち、２つの長鎖アシル基を含んでいる脂質）を含有している脂質混合物はリポソームを形成する傾向にあり、１本鎖両親媒性の物質（例えば単一のアシル鎖を含んでいる脂質）はミセルを形成する傾向にある。しかしながら、アシル鎖の数および鎖の長さの両方が、ミセル形成とリポソーム形成間のバランスに影響する。
【００４６】
ミセルは球状のコロイド状のナノ粒子であり、この中に多くの両親媒性分子が自己集合する。水中では、両親媒性分子の疎水セグメントがミセルのコアを形成し、分子の親水性部分がミセルコロナを形成する。本発明で用いるミセルは、好ましくは、１〜２００ｎｍ、より好ましくは５〜５０ｎｍの直径を有している。
【００４７】
用語「脂質ベースの担体」には、あらゆる両親媒性の脂質様成分、特にベシクルつまりミセルを形成させるために用いられ得るものが包含されるものとする。特に好ましい担体の成分はリン脂質、例えばホスファチジルコリン（ＰＣ）やホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）あるいはＰＣとＰＥの混合物である。好ましい実施形態では、ホスファチジルコリンが担体のバルク構成成分として用いられ、ＰＥが、免疫グロブリンまたはその断片が連結される成分として用いられる。
【００４８】
脂質ベースの担体に用いられる脂質は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような親水性ポリマーを含ませるために修飾され得る。ポリエチレングリコール部分は、脂質にコンジュゲート化され得る。親水性ポリマーの付加は、リポソームまたはミセルの循環寿命時間を長くすることができ、血液中での粒子の半減時間の延長がもたらされる。特に好ましい脂質は、ポリエチレングリコール誘導体化された脂質、特にＰＥＧとジアシル脂質のコンジュゲート（例えばＰＥＧ−ＰＥコンジュゲート）である。
【００４９】
免疫グロブリンまたはその断片は、好ましくは、脂質ベースの担体に、例えば脂質つまりＰＥＧ−脂質コンジュゲートにコンジュゲート化させることによって、共有結合している。より好ましくは脂質ベースの担体は、リン脂質−ＰＥＧ−［免疫グロブリン／免疫グロブリン断片］コンジュゲート（例えばＰＥ−ＰＥＧ−ＳＶＤコンジュゲート）を、特にミセルの形態で含んでいる。
【００５０】
用語「リガンド」とは、特定の「受容体」に特異的に結合して結合複合体を形成することができる分子を言う。つまりリガンドとその対応する受容体は特異的結合ペアを形成する。
【００５１】
本発明の組成物は、特定のリガンドが特定の受容体に結合するのをブロックまたは阻害するために用いられ得る。一般的には、本発明の使用および方法は、インビトロ、インビボまたはエックスビボで行われ得る。
【００５２】
本発明の組成物は、好ましくは、ヒトまたは動物の疾患に係わっている、またはそれを仲介しているリガンド−受容体相互作用をブロックするために用いられる。例えば、免疫グロブリンまたはその断片は、疾患の誘発または進行に係わっているリガンドまたは受容体に特異的に結合し得る。これによって、本発明の組成物は、リガンドまたは受容体を発現している細胞系に組成物を単にターゲッティングするのではなく、免疫グロブリンまたはその断片が反応性であるリガンド−受容体相互作用をブロックすることで治療効果を提供し得る。
【００５３】
好ましくは、リガンド−受容体相互作用（これは、本組成物によってブロックされる）は、通常、第１の細胞が、第２の細胞、ウイルス、増殖プロモーター、サイトカインまたはホルモンに結合するのを仲介する。例えば、特定の受容体が第１の細胞によって発現され得、そして典型的にはその細胞表面に見いだされる（例えば細胞膜の外側に現れる）。この受容体に結合するリガンドが、第２の細胞によって発現され得るし（典型的には細胞膜上に位置している）、あるいはウイルスの表面に見いだされ得るし（コート蛋白として）、あるいは遊離の形態でも見いだされ得る（例えば、増殖プロモーター、サイトカインまたはホルモンの場合では、リガンドは、遊離の分子として細胞外液中に見いだされる）。免疫グロブリンまたはその断片は、リガンド−受容体相互作用つまりリガンド−受容体複合体を通るシグナル伝達に干渉するならば、このリガンドかまたは受容体のどちらかに特異的に結合し得る。好ましくは免疫グロブリンまたはその断片は、第２の細胞またはウイルスによって発現されているリガンドに結合するか、または直接増殖因子、サイトカインまたはホルモンに結合する。つまり本発明は、１つの細胞系がもう１つの細胞系に結合するのをブロックするために、または特定の受容体を発現している細胞が遊離の細胞外リガンドに結合するのをブロックするために用いられ得る。
【００５４】
１つの好ましい実施形態では、リガンド−受容体相互作用は、第１の細胞が感染性の外的病原因子に結合するのを仲介する（本発明の組成物が無い状態で）。典型的には第１の細胞は、感染性の外的病原因子によって発現されているリガンドが結合することができる受容体を発現している。好ましくは、免疫グロブリンまたはその断片は、この感染性の外的病原因子によって発現されている抗原（リガンド）に結合する。感染性の外的病原因子は、真核細胞、好ましくは哺乳動物（より好ましくはヒト）細胞を感染させることができる、例えば、ウイルス、バクテリア、原虫、あるいはその他の任意の外的病原因子であり得る。
【００５５】
特に好ましい実施形態ではこの感染性の外的病原因子は、ロタウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイルス、ヘリコバクターピロリまたはカンジダアルビカンスである。これらの実施形態では、免疫グロブリンまたはその断片は、好ましくは、ロタウイルスＶＰ４付着因子、ＨＩＶｇｐ２０、インフルエンザヘマグルチニン、ヘリコバクターピロリＢａｂＡ付着因子またはカンジダアルビカンスＳＡＰ２もしくはＭＰ６５ビルレンス因子から選択される抗原に結合する。
【００５６】
これらの標的抗原のアミノ酸配列は知られている。上記した抗原のいくつかについての配列は、例えば、Kobayashi et al., Arch Virol. 1991;121(1-4):153-62、Gorziglia et al., J. Virol., Jul 1992, 4407-4412, Vol 66, No. 7、De Bernadis F. et al. J. Infect. Dis. 1999, 179, 201-208、Ilver et al., Science. 1998 Jan 16;279(5349):373-7、およびLa Valle et al. Infect. Immun. 2000, 68, 6777-6784に記載されている（それぞれを、参照により本明細書に組み込む）。抗原のアミノ酸配列が与えられると、当業者なら、公知の手法を用いて、特異的にその抗原を結合させる免疫グロブリンポリペプチドを作出・セレクションする際に使用される抗原を作出することができる。
【００５７】
特定の抗原に結合する抗体またはその断片を作出・セレクションするための方法は当技術分野では知られており、ポリペプチドのラージライブラリーから結合性抗体または断片をセレクションするためのインビトロの手法が特に挙げられる。１つの特に好ましい手法はファージディスプレイであり、これは、動物を免疫化する必要性なしに、選択された標的に特異的な抗体断片を単離することを可能にするものである。別の手法としては、動物、好ましくはラマのようなラクダ科の動物が抗原で免疫化され得、よく知られているように、その抗原に特異的なモノクローナル抗体を発現しているハイブリドーマクローンのセレクションがもたらされる。免疫グロブリンおよびその断片、特に単一免疫グロブリン可変ドメインを作出、セレクション、および精製するための適切な手法は、Hudson et al. Nature Medicine 9(1), 129-133 (2003)、およびHolt et al. Trends in Biotechnology 21 (11), 484-490 (2003)、ならびに国際公開第２００５／０３５５７２号パンフレット（特に２７〜４７ページ）で論議されている（これらのそれぞれを、参照により本明細書に組み込む）。
【００５８】
上述したように、本発明は、例えば培養細胞や組織が係わる手順中で、あるいはその他の実験システム中で、インビトロでリガンド−受容体相互作用をブロックするために用いられ得る。しかしながら、本発明の組成物は、好ましくは、ヒトまたは動物の疾患、特に感染性疾患、癌、自己免疫疾患または炎症状態を予防または治療するためのインビボでの方法の中で用いる。そのような病態の例としては、胃潰瘍、慢性膣カンジダ症、インフルエンザ、ロタウイルス感染およびＨＩＶ感染、乳癌、前立腺癌、血管新生増殖因子依存二次性腫瘍沈着、甲状腺中毒症および喘息が挙げられる。これらの病態の予防または治療で使用される組成物の有効性は、公知のインビトロ試験または動物モデルを用いて評価することができる。
【００５９】
典型的には免疫ミセルまたは免疫リポソームの形態にある本発明の組成物を含んでいる医薬組成物は、標準的な手法により調製され得、そして医薬的に許容される賦形剤をさらに含み得る。一般的には、医薬的に許容される賦形剤としては、標準生理食塩水が用いられるものである。他の適している賦形剤としては、例えば、水、緩衝水、０．４％生理食塩水、０．３％グリシンなどが挙げられ、アルブミン、リポ蛋白、グロブリンなどの、安定性を向上させるための糖蛋白を含んでいる。これらの組成物は、通常の、よく知られた滅菌方法によって滅菌され得る。得られた水性溶液は、使用のために包装され得るし、あるいは無菌処置条件下で濾過して凍結乾燥され得、凍結乾燥された調製物は投与の前に滅菌水性溶液と合わせられる。本組成物は、生理的条件に近づけるための、例えばｐＨ調整・緩衝剤、浸透圧調整剤などの医薬的に許容される補助的な物質を必要に応じ含み得、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムなどを含み得る。さらに、本発明の脂質含有組成物（典型的にはリポソームまたはミセル懸濁液）は、貯蔵の際のフリーラジカルによる損傷や脂質過酸化による損傷から脂質を保護する脂質保護剤を含み得る。アルファトコフェロールのような脂質親和性フリーラジカルクエンチャーや、フェリオキサミンのような水溶性の鉄−特異的キレート剤も適している。
【００６０】
典型的には免疫リポソームまたは免疫ミセルである脂質ベースの担体の、本医薬製剤中での濃度は大きく変化し得る。すなわち、約０．０５％から、通常は約２〜５％で、最大１０〜３０％（重量）まで変化し得、選択されるその特定の投与の方式に従って、主に液量、粘度などによって選択される。刺激性の脂質を含む組成物は、投与される部位での炎症を小さくするために低濃度に希釈され得る。
【００６１】
投与される組成物（典型的には免疫リポソームまたは免疫ミセルである）の量は、用いるその特定の免疫グロブリンまたはその断片、治療を受けているその疾患状態、さらにはその臨床医の判断によって決まるものである。
【００６２】
投与される本組成物の量は、一般的には、治療的に有効な用量を送達するものであれば十分であろう。治療的に有効な用量を送達するために必要な免疫リポソームの量は、当技術分野で知られているアップテイクアッセイにより決定することができる。上述したように、リポソームまたはミセルなどの脂質ベースの担体を用いることにより、典型的には、治療効果を生じさせるのに必要である免疫グロブリンまたはその断片の量を、脂質ベースの担体が無い状態で必要とされる用量の、例えば５０％未満、１０％未満、あるいは１％未満に減らすことができる。典型的な免疫リポソームまたは免疫ミセルの投薬量は、一般的には、１日あたり約０．０１〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１日あたり約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重であろう。
【００６３】
本発明の組成物は、任意の適切な経路によって、例えば静脈内的あるいは非経口的に投与され得る。しかしながら、本発明組成物、特に単一免疫グロブリン可変ドメインを含有している組成物の利点は、それらが酸および蛋白分解に対して抵抗性があるので、経口投与に適していることである。
【００６４】
好ましくは、本医薬組成物は、非経口的に、すなわち、動脈内的、静脈内的、腹腔内的、皮下的、あるいは筋肉内的に投与される。より好ましくは、本医薬組成物は、ボーラス注入により静脈内的または腹腔内的に投与される。この用途に適している好ましい製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed. (1985)に見いだされる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６５】
次に、本発明を、以下のより具体的な実施形態により説明する。
【００６６】
脂質ベースの担体は、好ましくは、ミセルを含んでいる。
【００６７】
本発明の好ましい実施形態により、表面抗体を有するミセル（免疫ミセル）が提供されるが、これは、１つ以上の特徴的な表面マーカーを有する細胞と、もう１つの細胞、微生物、あるいは増殖プロモーターまたはホルモンのような分子構造体との間の任意の相互作用をブロックするように、その細胞のターゲッティングを至適化する。表面抗体は、ｓｃＦｖやＦａｂなどの任意の抗体断片であってもよいが、好ましい製剤は、標的細胞特性マーカー（複数も）に特異的な、抗体重鎖もしくは軽鎖の単一可変ドメイン（ＳＶＤ）、またはＳＶＤ同士の任意の組み合わせを含んでいる。この抗体断片は、ベシクル形成脂質ミセルの表面に提供されている。
【００６８】
抗体重鎖および軽鎖の可変ドメインには、抗原に接触する構造体が含まれている。この単離された単一可変ドメイン（ＳＶＤ）は設計することが可能である（Holt et al., Trends Biotechnol. 2003, 21, 484）。それらは、抗原上にあるその同系の部位に結合して、別の細胞または分子とのその相互作用をブロックすることができる。ＳＶＤは、上皮細胞上にある同系受容体に結合した後コロニー形成する多くの微生物上にある特異的部位の相互作用をブロックすることが明らかになっている。ヒトを治療するのに必要とされるＳＶＤの量をスケールアップするためには、非常に高いコストがかかり、製造も不利なものとなる。本発明の実施形態は、ＳＶＤを、脂質ミセル表面上の密な単層として提供することにより、この問題を克服しており、その結果、そのような量のほんの一部のみが必要である。
【００６９】
単一可変ドメイン抗体断片は大量に生産するのが経済的であり、環境条件に対するその安定性も非常に頑丈である。ＳＶＤ免疫ミセルを用いるのは、そのミセル表面には、断片が多結合価式で連結されていることからくる、標的に対してのきわめて高い親和性を有する断片のフレキシブルな配列からなる単層が提供されているので、可溶性のモノマーの形態にある可変ドメイン断片を用いるのに比較してきわめて経済的である。
【００７０】
本発明は、標的細胞上の特性受容体に送達されるように至適化された、新規な、脂質ミセルの表面上に密配列として提供されている単一可変領域ドメイン抗体断片（ＶＨ）を提供するものである。これは、感染性の外的病原因子と、標的細胞上のその同系受容体との相互作用をブロックすること、あるいはホルモンまたは増殖因子もしくはサイトカインと、その受容体との相互作用をブロックすること、あるいは１つの体細胞と、他の体細胞との相互作用を立体的に阻害することができる。ＳＶＤの種は、アフィニティ成熟ヒトＶＨファージライブラリーから誘導されたもの、または免疫ラマ由来高アフィニティ重鎖抗体から誘導されたものが好ましい。
【００７１】
本発明で用いられるＳＶＤは、インタクト抗体に対し、さらにはＦａｂ断片やｓｃＦｖ断片に対して、多くの利点を有している：
【００７２】
１）  これらは、高濃度（例えばピキア酵母での発酵によりｇ／Ｌ）で経済的に発現させることが可能である。
【００７３】
２）  ミセルは、リポソームに比べて、維持すべき複雑な二重層脂質構造がないのでより安定である。
【００７４】
３）  モノマー状可溶性抗体の有効性に比べて、ミセル表面上の密抗体配列は、それぞれのミセルをその標的細胞に連結する多数の結合からもたらされるきわめて高い親和性を有している。これが、いわゆる、「多結合価のボーナス効果（bonus effect of multivalency）」（Roitt, Essential Immunology, 10th edn., 2001, p.90）である。この特長は、担体として脂質ベースの担体、特にミセルを使用していることから生じるものであることを注目されたい。したがって、ＳＶＤ以外の免疫グロブリン断片にも適用可能であるが、ＳＶＤが特に好ましい。さらに、脂質膜中での免疫グロブリン、特にＳＶＤの横方向の易動性により、その標的分子が細胞表面上にあるように、それらを幾何学的に２次元空間中で並ばせる柔軟性も提供される。
【００７５】
４）  抗体の免疫ミセル型プレゼンテーションの有効性が可溶型モノマーに比べてこのようにずっと大きいことの結果として、治療を提供することについての非常に大きな節約が可能である。典型的には、ミセル型形態で必要とされる抗体の量は、可溶型形態が用いられた場合に必要とされる量の１／１００以下程度である。
【００７６】
５）  全抗体分子またはＦａｂ断片を用いるのに比べて、ＳＶＤ断片は、高濃度でより容易に発現され、脂質ベースの担体、特にそれを含んでいる免疫ミセルは頑丈であり、またそれらが凝集、蛋白分解および変性に対して抵抗性があるので長期の保存寿命を有しており、その結果、免疫ミセルは、基本的には、温度によって影響されず、それゆえに冷蔵も必要としない。低ｐＨを耐えるというそれらの能力は、それらを、胃での分解に対して抵抗性があるものとし、これによって経口投与が薦められるのである。
【００７７】
６）  さらに、そのサイズが小さいので、免疫ミセルの大きさは、全免疫グロブリンまたはＦａｂ断片を有するものよりもより小さいものとなり、これは、腫瘍アクセスにとっては明らかな利点である。サイズが小さいことはまた、それぞれの個々のミセル表面上により多くの断片を詰め込むことを可能にする。サイズが小さいことの、腫瘍撮像にとってのもう１つの利点は、それが体から迅速にクリアランスされることである。
【００７８】
７）  それぞれのＳＶＤ断片は単一可変ドメインを含んでいるので、ＶＨとＶＬ断片の異なる特異性のペアリングや、特異性が異なる２つのＶＨを有する免疫ミセルを創出することが可能であり、その結果、２つの完全に異なる標的、さらには２つの異なるエピトープを結合させることができる、特異的に腫瘍を治療するためのデュアルターゲッティングミセルが提供され、これは従来の免疫グロブリンでは可能でなかったことであり、またＦａｂやｓｃＦｖなどの組み換え抗体断片では実現するのがより困難であった。
【００７９】
本発明のミセルは、追加的な医薬薬剤が何にも無くても、治療効果を提供するために用いられ得る。しかしながら、一部の実施形態では、本発明のミセルの疎水性コアは、難水溶性の薬剤（例えばタキソール）のような１種以上の治療用の薬剤を送達するためのカーゴー（積荷）スペースとして追加的に用いられ得る。ミセルによるカプセル化は、難溶性の薬物のバイオアベイラビリティを大きくし、生体環境での破壊からそれらを保護し、さらにはそれらの薬理動態や生体分布をも効果的に改善する。つまり本発明はまた、ポリエチレングリコール誘導体化された脂質を含んでいて、脂質親和性または両親媒性の物質、例えば難溶性の薬物（例えばタキソール）を含有しているミセルを、特性表面マーカーを有する標的細胞の中に内在化させることを提供するものである。
【００８０】
別の実施形態で、本発明は、特にｓｉＲＮＡのような医薬薬剤も含めた親水性の物質を取り込むための小リポソームを細胞内部に送達して特定の事象をブロックするための使用も提供する。いくつかの文献は、標的細胞中への内在化を至適化するための免疫リポソームの使用を記載している（例えば、ＡＵ２００３２４１０２８、米国特許出願公開第２００１／０１６１９６号明細書、国際公開第００／５０００８号パンフレット、欧州特許出願公開第１３５２６６２号明細書、国際公開第９７／３８７３１号パンフレット、米国特許第６２１４３８８号明細書、国際公開第９６／１４８６４号明細書、米国特許第５７８６２１４号明細書、ＩＮ１８２５５０、国際公開第９１／０３２５８号パンフレット、米国特許第４９５７７３５号明細書）。米国特許第６２１４３８８号明細書［１９９６］は、特性細胞表面マーカーを標的にするモノクローナル抗体のＦａｂ’断片を有する免疫リポソームを記載している。インタクトモノクローナル抗体を有するリポソーム（Boot E.P. et al. Arthritis Res. Ther., 2005, 7(3), R604-15）は、ＣＤ１３４を標的にして、活性化されたＴヘルパー細胞に特異的薬物送達をすることができる。
【００８１】
１つの好ましい実施形態で、本発明は、Ｃ．アルビカンスが、そのビルレンス因子ＳＡＰ２（De Bernardis et al. J. Infect. Dis. 1999, 179, 201）を介して膣上皮に連結されるのをブロックして、慢性膣カンジダ症を治療するのを至適化するＳＶＤ−免疫ミセルを提供する。この免疫ミセルは、共有結合でカップリングするためのＣ末端疎水性アラニンもしくはパルミトイル基テール、またはＣ末端システインを有するヒト抗カンジダＳＡＰ２アフィニティ成熟ＶＨを含んでいる。標的として特に好ましいのは、胃潰瘍および胃癌に関連しているとされる生物であるＨ．ピロリ上にあるＢａｂＡ付着因子、および若者で広がっている下痢の原因であるロタウイルス上にあるＶＰ４付着因子である。標的としては、乳癌上のＨｅｒ２のような癌細胞上にある増殖因子受容体、腫瘍血管内皮上の血管新生因子受容体、さらには関節リウマチをもつ患者の滑膜炎症部位中のマクロファージなどの細胞上にあるサイトカイン受容体も好ましい。その他の標的としては、ロタウイルスＶＰ４のようなウイルス上のビルレンス因子、インフルエンザヘマグルチニン、およびＨＩＶｇｐ１２０がある。
【００８２】
本発明はまた、脂質ベースの担体、例えば免疫ミセルを、特性細胞表面マーカーを有する細胞、すなわち免疫グロブリンまたはその断片が誘導されているリガンドまたは受容体を発現している細胞の中に内在化させるさらなるステップを含む、上記で定義した方法を提供するものである。この方法は、好ましくは、その細胞に、ポリエチレングリコールの脂質誘導体を有する標的免疫ミセルを接触させることを含む。このミセルは、限定するものではないが、脂質親媒性および両親媒性の放射性同位物質、ダウノマイシン、イダルビシン、ミトキサントロン、ミトマイシン、シスプラチンおよびその他のＰｌａｔｉｎｕｍ  ＩＩ類似薬のような抗癌薬、ビンクリスチン、エピルビシン、アクラシノマイシン、メトトレキセート、エトポシド、ドキソルビシン、シトシンアラビノシドおよびフルオロウラシル、ポリペプチドならびに抗生物質も含めて、任意の適切な治療用薬剤（好ましくは難溶性の薬物）を含み得る。
【００８３】
本発明は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子と、内部的に誘導されたプロセス済み蛋白もしくは他の断片との組み合わせを発現している細胞を認識するＴ−リンパ球抗原受容体（Roitt's Essential Immunology ,11th Edition, 2006, p.63）を含んでいるアルファ／ベータ鎖の可変領域から誘導される単一ドメイン断片から形成されるミセルにもその適用範囲が広められ得る。特に、これらの、いわゆるＴＣＲナノ体を有するミセルは、抗生物質のような適切な治療用薬物を内部的に感染しているマクロファージに送達することができると考えられる。他のものは、細胞傷害性の薬物を、癌細胞またはウイルス感染細胞に、あるいは自己免疫疾患で抗原を決定的に表出している、つまり細胞傷害性のＴ細胞の代わりをしている樹状細胞またはＢ細胞に送達することができると考えられる。これは、ミセルの吸入が感染細胞との直接の接触を提供するであろうウイルス性呼吸器疾患で、さらには制御性Ｔ細胞が細胞傷害性Ｔ細胞の作用を弱めている状況で特に有利であると考えられる。ガンマ／デルタＴＣＲナノ体を有するミセルは、粘膜感染症と闘う特殊な用途があり得ると考えられる。モノクローナル可溶性Ｔ細胞受容体の治療活性ポテンシャルを役立たせようとする試みは、そのＭＨＣ抗原複合体に対する固有アフィニティが非常に低いことを悩んでいるが、本発明に包含されるミセルの多結合価によって克服される欠点である。
【００８４】
ミセル表面を覆う抗体分子を含むミセルは、標準の方法を用いて、当業者なら誰によっても作製され得る。例えば、脂質鎖は、ＳＶＤのペプチド鎖上のある種のアミノ酸残基（限定するものではないが、第一級アミノ基、カルボキシル基、ヒドロキシ基またはスルフヒドリル基が挙げられる）にコンジュゲート化され得、ここではそのような脂質鎖は、（直鎖か分枝鎖の、飽和か不飽和の、無置換かハロゲン原子で置換された）、長鎖炭化水素脂肪酸から誘導され得る。このようにして形成された抗体−脂質コンジュゲートは、予備形成されたミセルと一緒にインキュベートすることによってか、またはミセルの前駆体としての役割を果たす可溶化された両親媒性の成分を含んでいる洗剤溶液中でインキュベートし、その後透析してその洗剤を除去することによって、ミセル中に取り込まれ得る。
【００８５】
免疫ミセルを作製する第２の方法は、標準の方法を用いて、抗体分子を、直接、予備形成されたミセルにコンジュゲート化させる方法であり（例えば、Torchilin V.P. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 2003, 100, 6039）、この予備形成ミセルは両親媒性物質を含んでおり、これは、蛋白鎖上の残基（限定するものではないが、第一級アミノ基、カルボキシル基、ヒドロキシ基またはスルフヒドリル基が挙げられる）に連結させることができる官能基をミセルの表面に提供している。
【００８６】
ミセルのサイズは１０ｎｍから２００ｎｍまでさまざまであり得、また抗体のミセル被覆率も全表面積の１％から１０％までで変化し得る。
【００８７】
ミセルを形成させるのに用いられ得る両親媒性の成分は当技術分野では知られているものであって、ポリエチレングリコール修飾脂質エーテル、ポリエチレングリコール修飾脂質エステル、胆汁酸塩、脂肪酸およびその塩、ナトリウムドキュセート、パルミトイルコリン、パルミトイルカルニチン、イオン化された場合正または負の電荷を含む長鎖炭化水素、リン脂質、リゾホ脂質、ポリエチレングリコール修飾リン脂質、トリグリセリド、脂質−コンジュゲート化オリゴペプチド、置換誘導体、同族体、類似体、ならびにこれらの混合物を挙げることができる。
【００８８】
当業者なら、本明細書のどこにでも記載されている本発明の実施形態の中で言及されている免疫グロブリンまたはその断片は、本発明に従って、Ｔ細胞受容体またはその断片によって置き換えられ得ることを理解するであろう。
【実施例】
【００８９】
（実施例１）
遊離ＰＥＧ末端がｐ−ニトロフェニルカルボニル（ｐＮＰ）によって活性化されたポリエチレングリコール−２０００−ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−２０００−ＰＥ）を用いる手順により免疫ミセルを調製する。ほんの少量のｐＮＰ−ＰＥＧ−ＰＥを加えることでミセルはＰＥＧ−ＰＥから調製される。ＰＥ残基がミセルコアを形成し、ｐＮＰ基が、アミノ基含有リガンドがウレタン（カルバメート）結合の形成を経て連結されるのを可能にする。
【００９０】
ＰＥおよびＰＥＧ−２０００−ＰＥは、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ社から商業的に入手可能である。ｐＮＰ−ＰＥＧ−ＰＥは、Torchilin et al., Biophys. Acta 1511, 397-411 (2001)に記載されているようにして合成される。脂質フィルムを、真空下でｐＮＰ−ＰＥＧ−ＰＥの混合溶液からクロロホルムを除去することにより調製する。ミセルを形成させるためには、このフィルムを５０℃で５ｍＭクエン酸Ｎａ緩衝生理食塩水（ｐＨ５．０）中に再水和させて、５分間ボルテックスする。
【００９１】
ラマＶＨＨ抗ロタウイルスＶＰ４を、Kobayashi et al., Arch Virol. 1991;121(1-4):153-62またはGorziglia et al., J. Virol., Jul 1992, 4407-4412, Vol 66, No. 7に記載されているようにＶＰ４抗原を用いて、免疫化ラマから誘導されたＶＨＨドメインのライブラリーをスクリーニングすることにより得る。このラマＶＨＨ抗ロタウイルスＶＰ４を、Torchilin VP et al., PNAS (2003); 100; 6039-6044に記載されている方法を用いて平均直径が３０ｎｍのｐＮＰ−ＰＥＧ−ＰＥミセルに取り込む。１０６ＣＫ５ロタウイルス粒子で感染させたＭＡ１０４哺乳動物細胞系の培養液をこのミセル組み込み体と一緒にインキュベートして、ウイルスプラーク形成を阻害するその有効性を、このＳＶＤの可溶型形態と比較する。
【００９２】
（実施例２）
Ｍ１９９液体媒体中１．５×１０３細胞／ｍｌの濃度にあるカンジダアルビカンスの、ポリスチレンプラスチックへの付着を、コロニーを計数することにより測定する（San Millan R. et al. Microbiology 1996, 142, 2271）。抗ＳＡＰ２  ＳＶＤを、De Bernadis F. et al. J. Infect. Dis. 1999, 179, 201-208に記載されているように、ＳＡＰ２抗原に対してパニングして、ヒト免疫グロブリンライブラリーのファージディスプレイスクリーニングにより得る。この単一ドメイン（ＳＶＤ）ヒト抗カンジダＳＡＰ２クローンの可溶型形態を、同じＳＶＤを含んでいるミセル懸濁液と比べて、相対阻害活性を比較する。
【００９３】
（実施例３）
ヘリコバクターピロリＢａｂＡに特異的な単一ドメインヒト抗体ＶＨ断片を、Ilver et al., Science. 1998 Jan 16;279(5349):373-7に記載されているようにそのＢａｂＡ付着因子に対してパニングして、ヒト免疫グロブリンライブラリーのファージディスプレイスクリーニングにより得る。ヒト血清アルブミンにそのＢａｂＡ付着因子によってコンジュゲート化された固定化Ｌｅｗｓ  ｂへのヘリコバクターピロリの結合を表面プラズモン共鳴により測定する（Hirmo S. et al. Analyt. Biochem. 1998, 257, 63）。ＢａｂＡに特異的なクローン化された単一ドメインヒト抗体ＶＨ断片の可溶型形態をミセル型形態と比較して、それらの相対阻害特性を評価する。
【００９４】
（実施例４）
抗ＳＡＰ２  ＳＶＤを実施例２に記載されているようにして得る。偽発情下に維持され且つ０．１ｍｌ生理食塩水中１０７酵母細胞を接種した卵巣摘出ラット（Cassone et al. Curr. Mol. Med. 2005, 5, 377）に、抗ＳＡＰ２  ＳＶＤの可溶型形態、およびミセル型形態を膣内注入する。この２つのＳＶＤ調製物を、カンジダ微生物のクリアランスを促進するそれらの相対能力について比較する。
【００９５】
（実施例５）
４日齢の子マウスに、１０μｌの可溶型形態かミセル型形態の、実施例１に記載されているようにして得たＳＶＤ抗ロタウイルスＶＰ４を、１日２回、５日間、ピペット先端を用いて給餌する。１日目の後、子マウスを、２×１０７ｐｆｕ含有ロタウイルス懸濁液１０μｌで感染させ、実験の６日の間、毎日腹部を触診することにより下痢症状について評価する。これによって、ＳＶＤの可溶型形態とミセル型形態の相対有効性を比較する。
【００９６】
（実施例６）
実施例１に記載されているようにして得られるＳＶＤ抗ＨＩＶｇｐ１２０の可溶型形態およびミセル型形態を、ＣＤ４保有細胞系が、ＳＶＤのセレクションにｇｐ１２０を提供しているＨＩＶの元の株によって、およびＳＶＤモノマーによりほんの弱く中和された別の株によって感染するのをブロックするその能力について比較する。
【００９７】
（実施例７）
インフルエンザ感染細胞標的に細胞傷害性のネズミＴ細胞系Ｔ細胞受容体のアルファ鎖およびベータ鎖のＮ末端可変領域ドメインを標準の手順を用いてクローン化する。このクローンを、Ｃ末端システインを含むよう工作し、必要な場合は、Ｔ細胞受容体ヘテロダイマーを安定化させるために、ロイシンジッパーセグメントを生じるｆｏｓおよびｊｕｎ遺伝子配列を組み込むことになる。別の方法としては、可変領域ドメインを、適切なリンカー配列によって接合することでもよい。クローンを大腸菌中で発現させて、そのモノマーを、実施例１に記載されているようにしてミセルに組み込むが、この場合は、インターフェロン合成を開始させ且つＭＨＣの表面発現を増大させる二重効果があるであろうポリ−ＩＣのような抗ウイルス薬を追加的に組み込む。このミセル組み込み体が細胞傷害性Ｔ細胞の代わりをすることができるかどうかを確かめるために、このミセルの標的細胞に対する細胞傷害有効性を、Ｔ細胞受容体遺伝子を提供している元の細胞傷害性細胞系のそれ、および負の対照としての役割を果たす関連のない特異性を有する細胞傷害性細胞系のそれと比較する。
【国際調査報告】
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