(57)【要約】  本発明は、式(Ｉ)：【化１】2009512732.tif 000017の有機化合物、特に、増殖性疾患、とりわけ固形腫瘍疾患の進行遅延または処置のために電離放射線と組み合わせて使用するための医薬組成物に関する。
2009512732.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
処置を必要とする対象における増殖性疾患を処置する方法であって；
(ａ)式(Ｉ)：
【化１】
2009512732.tif 000015
〔式中、
Ｒ１はＨ；ハロ；または直鎖Ｃ１−Ｃ６アルキル、とりわけメチル、エチルまたはｎ−プロピルであり、これらのメチル、エチルおよびｎ−プロピル置換基は非置換であるか、または以下にアルキル置換基について記載の１個以上の置換基で置換されており；
Ｒ２はＨ；Ｃ１−Ｃ１０アルキル、好ましくはＣ１−Ｃ６アルキル、例えば、メチル、エチルまたは−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキルアルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６；−(ＣＨ２)ｎＯＣ(Ｏ)Ｒ６；アミノアシル；ＨＯＮ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ＝Ｃ(Ｒ１)−アリール−アルキル−；および−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；
Ｒ３およびＲ４は、同一または異なり、かつ独立して、Ｈ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；アシル；またはアシルアミノであるか、または
Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素と一緒になって、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＳまたはＣ＝ＮＲ８であるか、または
Ｒ２は、それが結合している窒素と一緒になって、そしてＲ３は、それが結合している炭素と一緒になって、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；ヘテロアリール；多ヘテロアリール；非芳香族性多ヘテロ環；または混合アリールおよび非アリール多ヘテロ環式環を形成でき；
Ｒ５はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アシル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；付加塩；非芳香族性多環；混合アリールおよび非アリール多環；多ヘテロアリール；非芳香族性多ヘテロ環；および混合アリールおよび非アリール多ヘテロ環から選択され；
ｎ、ｎ１、ｎ２およびｎ３は、同一または異なり、かつ独立して、０−６から選択され、ｎ１が１−６であるとき、各炭素原子は所望によりかつ独立してＲ３および／またはＲ４で置換されていてよく；
ＸおよびＹは、同一または異なり、かつ独立して、Ｈ；ハロ；Ｃ１−Ｃ４アルキル、例えばＣＨ３およびＣＦ３；ＮＯ２；Ｃ(Ｏ)Ｒ１；または９；ＳＲ９；ＣＮ；およびＮＲ１０Ｒ１１から選択され；
Ｒ６はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジルおよび２−フェニルエテニル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；またはＯＲ１２；およびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
Ｒ７はＯＲ１５；ＳＲ１５；Ｓ(Ｏ)Ｒ１６；ＳＯ２Ｒ１７；ＮＲ１３Ｒ１４；およびＮＲ１２ＳＯ２Ｒ６から選択され；
Ｒ８はＨ；または１５；ＮＲ１３Ｒ１４；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；およびヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルから選択され；
Ｒ９はＣ１−Ｃ４アルキル、例えば、ＣＨ３およびＣＦ３；Ｃ(Ｏ)−アルキル、例えば、Ｃ(Ｏ)ＣＨ３；およびＣ(Ｏ)ＣＦ３から選択され；
Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なり、かつ独立して、Ｈ；Ｃ１−Ｃ４アルキル；および−Ｃ(Ｏ)−アルキルから選択され；
Ｒ１２はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキルアルキル；アリール；混合アリールおよび非アリール多環；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；およびヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルから選択され；
Ｒ１３およびＲ１４は、同一または異なり、かつ独立して、Ｈ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；アミノアシルから選択されるか；または
Ｒ１３およびＲ１４は、それらが結合している窒素と一緒になって、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；ヘテロアリール；多ヘテロアリール；非芳香族性多ヘテロ環；または混合アリールおよび非アリール多ヘテロ環であり；
Ｒ１５はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；および(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１６はＣ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；多ヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；および(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１７はＣ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；芳香族性多環；ヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；多ヘテロアリールおよびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
ｍは０−６から選択される整数であり；そして
ＺはＯ；ＮＲ１３；Ｓ；およびＳ(Ｏ)から選択される。〕
ＨＤＡＣまたはそれらの薬学的に許容される塩と
(ｂ)電離放射線
の組合せを投与することを含む、方法。
【請求項２】
(ａ)式(Ｉ)の化合物と
(ｂ)電離放射線
の組合せを投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
(ａ)式(III)：
【化２】
2009512732.tif 000016
のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド、またはそれらの薬学的に許容される塩と
(ｂ)電離放射線
の組合せを投与することを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
対象が増殖性疾患を有する温血動物である請求項１、２または３のいずれかに記載の方法であって、請求項１、２または３のいずれかに記載の組合せを該動物に増殖性疾患に対して併用で治療的に有効となるように投与することを含む、方法。
【請求項５】
電離放射線と組み合わせて使用するための、増殖性疾患に対して併用で治療的に有効な量の式(Ｉ)の化合物および少なくとも１種の薬学的に許容される担体を投与することを含む、請求項１から４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
そのような処置を必要とする対象における増殖性疾患の進行を遅延するための、請求項１、２、３、４または５に記載の方法。
【請求項７】
増殖性疾患の処置のための、請求項１、２、３、４または５のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
請求項１、２または３に記載した増殖性疾患の進行遅延または処置のための式(Ｉ)の化合物の、電離放射線と組み合わせて使用するための薬剤の製造のための使用。
【請求項９】
増殖性疾患が固形腫瘍である、請求項６、７または８に記載の方法。
【請求項１０】
薬学的に許容される形態の式(Ｉ)の化合物を、増殖性疾患の処置のために電離放射線と組み合わせて使用するための指示書と共に含む、包装物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、増殖性疾患、とりわけ固形腫瘍疾患の進行遅延または処置のために電離放射線と組み合わせて使用するための、有機化合物、特に、医薬組成物に関する。
【発明の開示】
【０００２】
発明の概要
我々は、ある種のヒストンデアセチラーゼ阻害剤、すなわち、ＨＤＡＣが、電離放射線と組み合わせて使用したとき、増殖性疾患、とりわけ固形腫瘍疾患の進行遅延または処置のために有効であることを本発明により発見した。
【０００３】
図面の簡単な記載
図１は、Ｈ４６０細胞株のクローン原性分析におけるＬＢＨ５８９および０−６Gyを使用した各処置の平均生存分率および標準誤差を示す。
図２は、ＬＢＨ５８９によるＨＤＡＣ阻害のアポトーシス効果のAnnexin V-FITC/PIフローサイトメトリー分析の結果を記載する。
図３は、ヒト肺癌細胞株の感作に対するＬＢＨ５８９の能力を確認するための、ＤＡＰＩ染色により決定された核の肥満化(pyknotic nuclei)の平均パーセンテージおよび標準誤差を示す。
図４は、開裂したカスパーゼ３およびアクチンのウェスタンイムノブロットを示す。ＬＢＨ５８９は、ＬＢＨ５８９および照射で処置した細胞におけるアポトーシスの役割を確認するためにカスパーゼ３開裂を誘発する。
図５は、ＬＢＨ５８９での各処置群についての、腫瘍容積(Ａ)および腫瘍増殖遅延(Ｂ)における増加倍率を示す。
図６Ａは、ＬＢＨ５８９およびＩＲの組合せで処置したＨ２３細胞系の代表的写真を示す。
図６Ｂは、ＩＲ２４時間後に存在するγ−Ｈ２ＡＸフォーカスを示す。
図７は、抗ＨＤＡＣ４抗体およびローダミン標識二次抗体でプローブし、その後ＤＡＰＩで対比染色したＨ４６０細胞系の代表的写真を示す。
【０００４】
発明の詳細な記載
従って、本発明は、処置を必要とする対象における増殖性疾患、とりわけ固形腫瘍疾患の進行を遅延または処置する方法であって、該対象に有効量の式(Ｉ)：
【化１】
2009512732.tif 000003
〔式中、
Ｒ１はＨ；ハロ；または直鎖Ｃ１−Ｃ６アルキル、とりわけメチル、エチルまたはｎ−プロピルであり、これらのメチル、エチルおよびｎ−プロピル置換基は非置換であるか、または以下にアルキル置換基について記載の１個以上の置換基で置換されており；
Ｒ２はＨ；Ｃ１−Ｃ１０アルキル、好ましくはＣ１−Ｃ６アルキル、例えば、メチル、エチルまたは−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキルアルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６；−(ＣＨ２)ｎＯＣ(Ｏ)Ｒ６；アミノアシル；ＨＯＮ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ＝Ｃ(Ｒ１)−アリール−アルキル−；および−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；
Ｒ３およびＲ４は、同一または異なり、かつ独立して、Ｈ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；アシル；またはアシルアミノであるか、または
Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素と一緒になって、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＳまたはＣ＝ＮＲ８であるか；または
Ｒ２は、それが結合している窒素と一緒になって、そしてＲ３は、それが結合している炭素と一緒になって、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；ヘテロアリール；多ヘテロアリール；非芳香族性多ヘテロ環；または混合アリールおよび非アリール多ヘテロ環式環を形成でき；
Ｒ５はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アシル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；芳香族性多環；非芳香族性多環；混合アリールおよび非アリール多環；多ヘテロアリール；非芳香族性多ヘテロ環；および混合アリールおよび非アリール多ヘテロ環から選択され；
ｎ、ｎ１、ｎ２およびｎ３は、同一または異なり、かつ独立して、０−６から選択され、ｎ１が１−６であるとき、各炭素原子は所望によりかつ独立してＲ３および／またはＲ４で置換されていてよく；
ＸおよびＹは、同一または異なり、かつ独立して、Ｈ；ハロ；Ｃ１−Ｃ４アルキル、例えばＣＨ３およびＣＦ３；ＮＯ２；Ｃ(Ｏ)Ｒ１；または９；ＳＲ９；ＣＮ；およびＮＲ１０Ｒ１１から選択され；
Ｒ６は、Ｈ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジルおよび２−フェニルエテニル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；またはＯＲ１２；およびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
Ｒ７はＯＲ１５；ＳＲ１５；Ｓ(Ｏ)Ｒ１６；ＳＯ２Ｒ１７；ＮＲ１３Ｒ１４；およびＮＲ１２ＳＯ２Ｒ６から選択され
Ｒ８は、Ｈ；または１５；ＮＲ１３Ｒ１４；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；およびヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルから選択され；
Ｒ９は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、例えば、ＣＨ３およびＣＦ３；Ｃ(Ｏ)−アルキル、例えば、Ｃ(Ｏ)ＣＨ３；およびＣ(Ｏ)ＣＦ３から選択され；
Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なり、かつ独立して、Ｈ；Ｃ１−Ｃ４アルキル；および−Ｃ(Ｏ)−アルキルから選択され；
Ｒ１２は、Ｈ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキルアルキル；アリール；混合アリールおよび非アリール多環；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；およびヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルから選択され；
Ｒ１３およびＲ１４は、同一または異なり、かつ独立して、Ｈ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；アミノアシルから選択されるか、または
Ｒ１３およびＲ１４は、それらが結合している窒素と一緒になって、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；ヘテロアリール；多ヘテロアリール；非芳香族性多ヘテロ環；または混合アリールおよび非アリール多ヘテロ環であり；
Ｒ１５は、Ｈ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；および(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１６は、Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；多ヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；および(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１７は、Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；芳香族性多環；ヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；多ヘテロアリールおよびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
ｍは０−６から選択される整数であり；そして
ＺはＯ；ＮＲ１３；Ｓ；およびＳ(Ｏ)から選択される。〕
のＨＤＡＣまたはそれらの薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法を提供する。
【０００５】
必要に応じて、“非置換”は、置換基がないか、または唯一の置換基が水素であることを意味する。
【０００６】
ハロ置換基は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨード、好ましくはフルオロまたはクロロから選択される。
【０００７】
アルキル置換基は、特記されない限り、直鎖および分枝鎖−Ｃ１−Ｃ６アルキルを含む。適当な直鎖および分枝鎖−Ｃ１−Ｃ６アルキル置換基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、２−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチルなどを含む。特記されない限り、アルキル置換基は非置換アルキル基および、不飽和、すなわち、１個以上の二重または三重Ｃ−Ｃ結合が存在すること；アシル；シクロアルキル；ハロ；オキシアルキル；アルキルアミノ；アミノアルキル；アシルアミノ；およびＯＲ１５、例えば、アルコキシ含む、１個以上の適当な置換基で置換されているアルキル基の両方を含む。アルキル基のための好ましい置換基は、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、オキシアルキル、アルキルアミノおよびアミノアルキルを含む。
【０００８】
シクロアルキル置換基は、特記されない限り、Ｃ３−Ｃ９シクロアルキル基、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどを含む。特記されない限り、シクロアルキル置換基は、非置換シクロアルキル基およびＣ１−Ｃ６アルキル、ハロ、ヒドロキシ、アミノアルキル、オキシアルキル、アルキルアミノおよびＯＲ１５、例えばアルコキシを含む１個以上の適当な置換基で置換されているシクロアルキル基の両方を含む。シクロアルキル基のための好ましい置換基は、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、オキシアルキル、アルキルアミノおよびアミノアルキルを含む。
【０００９】
アルキルおよびシクロアルキル置換基についての上記の定義は、他の置換基、例えば、限定しないが、アルコキシ、アルキルアミン、アルキルケトン、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アルキルスルホニルおよびアルキルエステル置換基などのアルキル部分にも適用される。
【００１０】
ヘテロシクロアルキル置換基は、窒素、硫黄、酸素から選択される１−３個のヘテロ原子を含む、３から９員脂肪族環、例えば４から７員脂肪族環を含む。適当なヘテロシクロアルキル置換基の例は、ピロリジル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロチオフラニル、ピペリジル、ピペラジル、テトラヒドロピラニル、モルホリノ、１,３−ジアザパン、１,４−ジアザパン、１,４−オキサゼパンおよび１,４−オキサチアパンを含む。特記されない限り、本環は、非置換であるか、または炭素原子を、Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；ハロ；アミノ；アルキルアミノおよびＯＲ１５、例えば、アルコキシを含む１個以上の適当な置換基で置換されている。特記されない限り、窒素ヘテロ原子は、非置換であるか、またはＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；アシル；アミノアシル；アルキルスルホニル；およびアリールスルホニルで置換されている。
【００１１】
シクロアルキルアルキル置換基は、式−(ＣＨ２)ｎ５−シクロアルキル(式中、ｎ５は１−６の数である)の化合物を含む。適当なアルキルシクロアルキル置換基は、シクロペンチルメチル、シクロペンチルエチル、シクロヘキシルメチルなどを含む。このような置換基は、非置換であるか、またはアルキル部分またはシクロアルキル部分を、アルキルおよびシクロアルキルについて上記のものを含む、適当な置換基で置換されている。
【００１２】
アリール置換基は、非置換フェニル、およびＣ１−Ｃ６アルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；Ｏ(ＣＯ)アルキル；オキシアルキル；ハロ；ニトロ；アミノ；アルキルアミノ；アミノアルキル；アルキルケトン；ニトリル；カルボキシアルキル；アルキルスルホニル；アミノスルホニル；アリールスルホニルおよびＯＲ１５、例えばアルコキシを含む１個以上の適当な置換基で置換されているフェニルを含む。好ましい置換基は、Ｃ１−Ｃ６アルキル；シクロアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アルコキシ；オキシアルキル；ハロ；ニトロ；アミノ；アルキルアミノ；アミノアルキル；アルキルケトン；ニトリル；カルボキシアルキル；アルキルスルホニル；アリールスルホニルおよびアミノスルホニルを含む。適当なアリール基の例は、Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシフェニル、トリフルオロメチルフェニル、メトキシフェニル、ヒドロキシエチルフェニル、ジメチルアミノフェニル、アミノプロピルフェニル、カルボエトキシフェニル、メタンスルホニルフェニルおよびトリルスルホニルフェニルを含む。
【００１３】
芳香族性多環は、ナフチル、およびＣ１−Ｃ６アルキル；アルキルシクロアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；オキシアルキル；ハロ；ニトロ；アミノ；アルキルアミノ；アミノアルキル；アルキルケトン；ニトリル；カルボキシアルキル；アルキルスルホニル；アリールスルホニル；アミノスルホニルおよびＯＲ１５、例えばアルコキシを含む１個以上の適当な置換基で置換されているナフチルを含む。
【００１４】
ヘテロアリール置換基は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個以上のヘテロ原子、例えば、１−４個のヘテロ原子を含む、５から７員芳香環を有する化合物を含む。典型的ヘテロアリール置換基は、フリル、チエニル、ピロール、ピラゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、ピリジン、ピリミジン、イソオキサゾリル、ピラジンなどを含む。特記されない限り、ヘテロアリール置換基は、非置換であるか、または炭素原子を、アルキル、上記で定義のアルキル置換基、および他のヘテロアリール置換基を含む、１個以上の適当な置換基で置換されている。窒素原子は、非置換であるか、または、例えば、Ｒ１３で置換されており；とりわけ有用なＮ置換基はＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アシル、アミノアシルおよびスルホニルを含む。
【００１５】
アリールアルキル置換基は、式−(ＣＨ２)ｎ５−アリール、−(ＣＨ２)ｎ５−１−(ＣＨ−アリール)−(ＣＨ２)ｎ５−アリールまたは−(ＣＨ２)ｎ５−１ＣＨ(アリール)(アリール)(ここで、アリールおよびｎ５は上記で定義の通りである)の基を含む。このようなアリールアルキル置換基は、ベンジル、２−フェニルエチル、１−フェニルエチル、トリル−３−プロピル、２−フェニルプロピル、ジフェニルメチル、２−ジフェニルエチル、５,５−ジメチル−３−フェニルペンチルなどを含む。アリールアルキル置換基は、非置換または、アルキル部分もしくはアリール部分もしくは両方を、アルキルおよびアリール置換基として上記のとおり置換されている。
【００１６】
ヘテロアリールアルキル置換基は、式−(ＣＨ２)ｎ５−ヘテロアリール(ここで、ヘテロアリールおよびｎ５は上記で定義の通りであり、架橋基は、ヘテロアリール部分の炭素または窒素に連結している)の基、例えば２−、３−または４−ピリジルメチル、イミダゾリルメチル、キノリルエチルおよびピロリルブチルを含む。ヘテロアリール置換基は、非置換であるか、またはヘテロアリールおよびアルキル置換基について上記の通り置換されている。
【００１７】
アミノアシル置換基は、式−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｈ)(ＮＲ１３Ｒ１４)−(ＣＨ２)ｎ−Ｒ５(ここで、ｎ、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ５は上記の通りである)の基を含む。適当なアミノアシル置換基は、天然および非天然アミノ酸、例えばグリシニル、Ｄ−トリプトファニル、Ｌ−リシニル、Ｄ−またはＬ−ホモセリニル、４−アミノブチリックアシルおよび±−３−アミン−４−ヘキセノイルを含む。
【００１８】
非芳香族性多環置換基は、各環が４から９員であり得て、そして各環が０個、１個またはそれ以上の二重および／または三重結合を含み得る、二環式および三環式縮合環系を含む。非芳香族性多環の適当な例は、デカリン、オクタヒドロインデン、ペルヒドロベンゾシクロヘプテンおよびペルヒドロベンゾ−[ｆ]−アズレンを含む。このような置換基は、非置換であるか、またはシクロアルキル基について上記の通り置換されている。
【００１９】
混合アリールおよび非アリール多環置換基は、各環が４から９員であり得て、そして少なくとも１個の環が芳香族性である、二環式および三環式縮合環系を含む。混合アリールおよび非アリール多環の適当な例は、メチレンジオキシフェニル、ビス−メチレンジオキシフェニル、１,２,３,４−テトラヒドロナフタレン、ジベンゾスベラン、ジヒドロアントラセン(dihdydroanthracene)および９Ｈ−フルオレンを含む。このような置換基は、非置換であるか、またはニトロでまたはシクロアルキル基について上記の通り置換されている。
【００２０】
多ヘテロアリール置換基は、各環が独立して５または６員であり得て、そして縮合環系が芳香族性であるようにＯ、ＮまたはＳから選択される１個以上のヘテロ原子、例えば、１個、２個、３個または４個のヘテロ原子を含む、二環式および三環式縮合環系を含む。多ヘテロアリール環系の適当な例は、キノリン、イソキノリン、ピリドピラジン、ピロロピリジン、フロピリジン、インドール、ベンゾフラン、ベンゾチオフラン、ベンズインドール、ベンゾオキサゾール、ピロロキノリンなどを含む。特記されない限り、多ヘテロアリール置換基は、非置換であるか、または炭素原子を、アルキル、上記で定義のアルキル置換基および式−Ｏ−(ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ(ＣＨ３)(ＣＨ２))１−３Ｈの置換基を含む１個以上の適当な置換基で置換されている。窒素原子は、非置換であるか、または、例えば、Ｒ１３で置換されており、とりわけ有用なＮ置換基はＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アシル、アミノアシルおよびスルホニルを含む。
【００２１】
非芳香族性多ヘテロ環式置換基は、各環が４から９員であり得て、Ｏ、ＮまたはＳから選択される１個以上のヘテロ原子、例えば、１個、２個、３個または４個のヘテロ原子を含み、そして０個または１個以上のＣ−Ｃ二重または三重結合を含む、二環式および三環式縮合環系を含む。非芳香族性多ヘテロ環の適当な例は、ヘキシトール、ｃｉｓ−ペルヒドロ−シクロヘプタ[ｂ]ピリジニル、デカヒドロ−ベンゾ[ｆ][１,４]オキサゼピニル、２,８−ジオキサビシクロ[３.３.０]オクタン、ヘキサヒドロ−チエノ[３,２−ｂ]チオフェン、ペルヒドロピロロ[３,２−ｂ]ピロール、ペルヒドロナフチリジン、ペルヒドロ−１Ｈ−ジシクロペンタ[ｂ,ｅ]ピランを含む。特記されない限り、非芳香族性多ヘテロ環式置換基は、非置換であるか、または炭素原子上を、上記で定義のアルキルおよびアルキル置換基を含む、１個以上の置換基で置換されている。窒素原子は、非置換であるか、または、例えば、Ｒ１３で置換されており、とりわけ有用なＮ置換基は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アシル、アミノアシルおよびスルホニルを含む。
【００２２】
混合アリールおよび非アリール多ヘテロ環置換基は、各環が４から９員であり得て、Ｏ、ＮまたはＳから選択される１個以上のヘテロ原子を含み、そして少なくとも１個の環が芳香族性であるべきである、二環式および三環式縮合環系を含む。適当な混合アリールおよび非アリール多ヘテロ環の例は、２,３−ジヒドロインドール、１,２,３,４−テトラヒドロキノリン、５,１１−ジヒドロ−１０Ｈ−ジベンズ[ｂ,ｅ][１,４]ジアゼピン、５Ｈ−ジベンゾ[ｂ,ｅ][１,４]ジアゼピン、１,２−ジヒドロピロロ[３,４−ｂ][１,５]ベンゾジアゼピン、１,５−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｂ][１,４]ジアゼピン−４−オン、１,２,３,４,６,１１−ヘキサヒドロ−ベンゾ[ｂ]ピリド[２,３−ｅ][１,４]ジアゼピン−５−オンを含む。特記されない限り、混合アリールおよび非アリール多ヘテロ環式置換基は、非置換であるか、または炭素原子を、−Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−ＯＨ、アルキルおよび上記で定義のアルキル置換基を含む、１個以上の適当な置換基で置換されている。窒素原子は非置換であるか、または、例えば、Ｒ１３で置換されており；とりわけ有用なＮ置換基は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アシル、アミノアシルおよびスルホニルを含む。
【００２３】
アミノ置換基は、一級、二級および三級アミンおよび塩形で四級アミンを含む。アミノ置換基の例は、モノ−およびジ−アルキルアミノ、モノ−およびジ−アリールアミノ、モノ−およびジ−アリールアルキルアミノ、アリール−アリールアルキルアミノ、アルキル−アリールアミノ、アルキル−アリールアルキルアミノなどを含む。
【００２４】
スルホニル置換基は、アルキルスルホニルおよびアリールスルホニル、例えば、メタンスルホニル、ベンゼンスルホニル、トシルなどを含む。
【００２５】
アシル置換基は、式−Ｃ(Ｏ)−Ｗ、−ＯＣ(Ｏ)−Ｗ、−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−Ｗまたは−Ｃ(Ｏ)ＮＲ１３Ｒ１４(ここで、ＷはＲ１６、Ｈまたはシクロアルキルアルキルである)の基を含む。
【００２６】
アシルアミノ置換基は、式−Ｎ(Ｒ１２)Ｃ(Ｏ)−Ｗ、−Ｎ(Ｒ１２)Ｃ(Ｏ)−Ｏ−Ｗおよび−Ｎ(Ｒ１２)Ｃ(Ｏ)−ＮＨＯＨの置換基を含み、そして、Ｒ１２およびＷは上記で定義の通りである。
【００２７】
Ｒ２置換基ＨＯＮ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ＝Ｃ(Ｒ１)−アリール−アルキル−は、式
【化２】
2009512732.tif 000004
の基である。
【００２８】
置換基の各々の選択は、以下を含む：
Ｒ１がＨ、ハロまたは直鎖Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｒ２がＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６、アミノアシルおよび−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；
Ｒ３およびＲ４が、同一または異なり、かつ独立して、ＨおよびＣ１−Ｃ６アルキルから選択されるか、または
Ｒ３およびＲ４が、それらが結合している炭素と一緒になって、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＳまたはＣ＝ＮＲ８であり；
Ｒ５が、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、芳香族性多環、非芳香族性多環、混合アリールおよび非アリール多環、多ヘテロアリール、非芳香族性多ヘテロ環、および混合アリールおよび非アリール多ヘテロ環から選択され；
ｎ、ｎ１、ｎ２およびｎ３が、同一または異なり、かつ独立して、０−６から選択され、ｎ１が１−６であるとき、各炭素原子は非置換であるか、または独立してＲ３および／またはＲ４で置換されており；
ＸおよびＹが、同一または異なり、かつ独立して、Ｈ、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ＣＦ３、ＮＯ２、Ｃ(Ｏ)Ｒ１、または９、ＳＲ９、ＣＮおよびＮＲ１０Ｒ１１から選択され；
Ｒ６が、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アルキルシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、またはＯＲ１２およびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
Ｒ７が、ＯＲ１５、ＳＲ１５、Ｓ(Ｏ)Ｒ１６、ＳＯ２Ｒ１７、ＮＲ１３Ｒ１４およびＮＲ１２ＳＯ２Ｒ６から選択され；
Ｒ８が、Ｈ、または１５、ＮＲ１３Ｒ１４、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択され；
Ｒ９が、Ｃ１−Ｃ４アルキルおよびＣ(Ｏ)−アルキルから選択され；
Ｒ１０およびＲ１１が、同一または異なり、かつ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキルおよび−Ｃ(Ｏ)−アルキルから選択され；
Ｒ１２が、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択され；
Ｒ１３およびＲ１４が、同一または異なり、かつ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキルおよびアミノアシルから選択され；
Ｒ１５が、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキルおよび(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１６が、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキルおよび(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１７が、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキルおよびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
ｍが０−６から選択される整数であり；そして
ＺがＯ、ＮＲ１３、ＳおよびＳ(Ｏ)から選択される；
またはそれらの薬学的に許容される塩。
【００２９】
有用な式(Ｉ)の化合物は、ｎ２およびｎ３の一方が０であり、そして他方が１である化合物、とりわけＲ２がＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨである化合物を含み、Ｒ１、Ｘ、Ｙ、Ｒ３およびＲ４の各々がＨである化合物を含む。
【００３０】
一つの適当なヒドロキサメート化合物類は、式(Ｉａ)：
【化３】
2009512732.tif 000005
〔式中、
ｎ４は０−３であり；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６、アミノアシルおよび−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；そして
Ｒ'５はヘテロアリール；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；芳香族性多環；非芳香族性多環；混合アリールおよび非アリール多環；多ヘテロアリールまたは混合アリール；および非アリール多ヘテロ環である。〕
の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩である。
【００３１】
他の適当なヒドロキサメート化合物類は、式(Ｉａ)：
【化４】
2009512732.tif 000006
〔式中、
ｎ４は０−３であり；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６、アミノアシルおよび−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；
Ｒ'５はアリール；アリールアルキル；芳香族性多環；非芳香族性多環および混合アリール；および非アリール多環、とりわけアリール、例えばｐ−フルオロフェニル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル、例えばｐ−メトキシフェニル、およびｐ−Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル；およびアリールアルキル、例えばベンジル、オルト−、メタ−またはパラ−フルオロベンジル、オルト−、メタ−またはパラ−クロロベンジル、オルト−、メタ−またはパラ−モノ−、ジ−またはトリ−Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキルベンジル、例えばオルト−、メタ−またはパラ−メトキシベンジル、ｍ,ｐ−ジエトキシベンジル、ｏ,ｍ,ｐ−トリメトキシベンジルおよびオルト−、メタ−またはパラ−モノ−、ジ−またはトリ−Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル、例えばｐ−メチル、ｍ,ｍ−ジエチルフェニルである。〕
の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩である。
【００３２】
他の興味深い種類は、式(Ｉｂ)：
【化５】
2009512732.tif 000007
〔式中
Ｒ２’はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ６シクロアルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；(ＣＨ２)２−４ＯＲ２１から選択され、ここで、Ｒ２１はＨ、メチル、エチル、プロピルおよびｉ−プロピルであり；そして
Ｒ５”は非置換１Ｈ−インドル−３−イル、ベンゾフラン−３−イルまたはキノリン−３−イル、または置換１Ｈ−インドル−３−イル、例えば５−フルオロ−１Ｈ−インドル−３−イルまたは５−メトキシ−１Ｈ−インドル−３−イル、ベンゾフラン−３−イルまたはキノリン−３−イルである。〕
の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩である。
【００３３】
他の興味深いヒドロキサメート化合物類は、式(Ｉｃ)：
【化６】
2009512732.tif 000008
〔式中、
Ｚ１を含む環は芳香族性または非芳香族性であり、この非芳香環は飽和または不飽和であり、
Ｚ１はＯ、ＳまたはＮ−Ｒ２０であり；
Ｒ１８はＨ；ハロ；Ｃ１−Ｃ６アルキル(メチル、エチル、ｔ−ブチル)；Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル；アリール、例えば、非置換フェニルまたは４−ＯＣＨ３もしくは４−ＣＦ３で置換されているフェニル；またはヘテロアリール、例えば２−フラニル、２−チオフェニルまたは２−、３−もしくは４−ピリジルであり；
Ｒ２０はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ１−Ｃ６アルキル−Ｃ３−Ｃ９シクロアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；アシル、例えば、アセチル、プロピオニルおよびベンゾイル；またはスルホニル、例えば、メタンスルホニル、エタンスルホニル、ベンゼンスルホニルおよびトルエンスルホニルであり；
Ａ１は、独立してＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；−ＯＲ１９；ハロ；アルキルアミノ；アミノアルキル；ハロ；またはヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルである１、２または３置換基であり；
Ｒ１９はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルおよび−(ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ(ＣＨ３)(ＣＨ２))１−３Ｈから選択され；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６、アミノアシルおよび−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；
ｖは０、１または２であり；
ｐは０−３であり；そして
ｑは１−５であり、そしてｒは０であるか、または
ｑは０であり、そしてｒは１−５である。〕
の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩である。他の可変置換基は上記で定義の通りである。
【００３４】
とりわけ有用な式(Ｉｃ)の化合物は、Ｒ２がＨ、または−(ＣＨ２)ｐＣＨ２ＯＨであり、ここで、ｐが１−３である化合物、とりわけＲ１がＨである化合物；例えば、Ｒ１がＨであり、そしてＸおよびＹが各々Ｈであり、そしてｑが１−３であり、そしてｒが０であるか、またはｑが０であり、そしてｒが１−３である化合物、とりわけＺ１がＮ−Ｒ２０である化合物である。これらの化合物の中で、Ｒ２が好ましくはＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであり、そしてｑとｒの合計が好ましくは１である。
【００３５】
他の興味深いヒドロキサメート化合物類は、式(Ｉｄ)：
【化７】
2009512732.tif 000009
〔式中、
Ｚ１はＯ、ＳまたはＮ−Ｒ２０であり；
Ｒ１８はＨ；ハロ；Ｃ１−Ｃ６アルキル(メチル、エチル、ｔ−ブチル)；Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル；アリール、例えば、非置換フェニルまたは４−ＯＣＨ３もしくは４−ＣＦ３で置換されているフェニル；またはヘテロアリールであり；
Ｒ２０はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキル−Ｃ３−Ｃ９シクロアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；アシル、例えば、アセチル、プロピオニルおよびベンゾイル；またはスルホニル、例えば、メタンスルホニル、エタンスルホニル、ベンゼンスルホニル、トルエンスルホニルであり；
Ａ１は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＲ１９またはハロである１、２または３置換基であり；
Ｒ１９はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；およびヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルから選択され；
ｐは０−３であり；そして
ｑは１−５であり、そしてｒは０であるか、または
ｑは０であり、そしてｒは１−５である。〕
の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩である。他の可変置換基は上記で定義の通りである。
【００３６】
とりわけ有用な式(Ｉｄ)の化合物は、Ｒ２がＨまたは−(ＣＨ２)ｐＣＨ２ＯＨであり、ここで、ｐが１−３である化合物、とりわけＲ１がＨである化合物；例えば、Ｒ１がＨであり、そしてＸおよびＹが各々Ｈであり、そして、ｑが１−３であり、そしてｒが０であるか、またはｑが０であり、そしてｒが１−３である化合物である。これらの化合物の中で、Ｒ２が好ましくはＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであり、ｑとｒの合計が好ましくは１である。
【００３７】
本発明は、さらに、式(Ｉｅ)：
【化８】
2009512732.tif 000010
の化合物またはそれらの薬学的に許容される塩に関する。可変置換基は上記で定義の通りである。
【００３８】
とりわけ有用な式(Ｉｅ)の化合物は、Ｒ１８がＨ、フルオロ、クロロ、ブロモ、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、置換Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル基、非置換フェニル、パラ位を置換されているフェニル、またはヘテロアリール、例えば、ピリジル環である化合物である。
【００３９】
有用な式(Ｉｅ)の化合物の他の群は、Ｒ２がＨまたは−(ＣＨ２)ｐＣＨ２ＯＨであり、ここで、ｐが１−３である化合物、とりわけＲ１がＨである化合物；例えば、Ｒ１がＨであり、そしてＸおよびＹが各々Ｈであり、そしてｑが１−３であり、そしてｒが０であるか、またはｑが０であり、そしてｒが１−３である化合物である。これらの化合物の中でＲ２が好ましくはＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであり、そしてｑとｒの合計が好ましくは１である。これらの化合物の中でｐが好ましくは１であり、そしてＲ３およびＲ４が好ましくはＨである。
【００４０】
有用な式(Ｉｅ)の化合物の他の群は、Ｒ１８がＨ、メチル、エチル、ｔ−ブチル、トリフルオロメチル、シクロヘキシル、フェニル、４−メトキシフェニル、４−トリフルオロメチルフェニル、２−フラニル、２−チオフェニル、または２−、３−もしくは４−ピリジルであり、ここで、２−フラニル、２−チオフェニルおよび２−、３−または４−ピリジル置換基は非置換であるか、またはヘテロアリール環について上記の通り置換されており；Ｒ２がＨまたは−(ＣＨ２)ｐＣＨ２ＯＨであり、ここで、ｐが１−３である化合物；とりわけＲ１がＨであり、そしてＸおよびＹが各々Ｈであり、そしてｑが１−３であり、そしてｒが０であるか、またはｑが０であり、そしてｒが１−３である化合物である。これらの化合物の中でＲ２が好ましくはＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであり、そしてｑとｒの合計が好ましくは１である。
【００４１】
Ｒ２０がＨまたはＣ１−Ｃ６アルキル、とりわけＨである式(Ｉｅ)の化合物は、上記の式(Ｉｅ)の化合物の下位群の各々の重要なメンバーである。
【００４２】
Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[(２−ヒドロキシエチル)[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドおよびＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドまたはそれらの薬学的に許容される塩は、重要な式(Ｉｅ)の化合物である。
【００４３】
本発明は、さらに、式(Ｉｆ)：
【化９】
2009512732.tif 000011
の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩に関する。可変置換基は上記で定義の通りである。
【００４４】
有用な式(Ｉｆ)の化合物は、Ｒ２がＨまたは−(ＣＨ２)ｐＣＨ２ＯＨであり、ここで、ｐが１−３である化合物、とりわけＲ１がＨである化合物；例えば、Ｒ１がＨであり、そしてＸおよびＹが各々Ｈであり、そしてｑが１−３であり、そしてｒが０であるか、またはｑが０であり、そしてｒが１−３である化合物を含む。これらの化合物の中でＲ２が好ましくはＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであり、そしてｑとｒの合計が好ましくは１である。
【００４５】
Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(ベンゾフル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドまたはそれらの薬学的に許容される塩は、重要な式(Ｉｆ)の化合物である。
【００４６】
上記の化合物は、しばしば、薬学的に許容される塩の形で使用される。薬学的に許容される塩は、適当なとき、薬学的に許容される塩基付加塩および酸付加塩、例えば、金属塩、例えばアルカリおよびアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩およびアミノ酸付加塩およびスルホン酸塩を含む。酸付加塩は、無機酸付加塩、例えば塩酸塩、硫酸塩およびリン酸塩；ならびに有機酸付加塩、例えばアルキルスルホン酸塩、アリールスルホン酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸および乳酸塩を含む。金属塩の例は、アルカリ金属塩、例えばリチウム塩、ナトリウム塩およびカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばマグネシウム塩およびカルシウム塩、アルミニウム塩および亜鉛塩を含む。アンモニウム塩の例は、アンモニウム塩およびテトラメチルアンモニウム塩である。有機アミン付加塩の例は、モルホリンおよびピペリジンとの付加塩である。アミノ酸付加塩の例は、グリシン、フェニルアラニン、グルタミン酸およびリシンとの塩である。スルホン酸塩は、メシル酸塩、トシル酸塩およびベンゼンスルホン酸塩を含む。
【００４７】
式(Ｉ)の範囲内のさらなるＨＤＡＩ化合物、およびそれらの合成は、２００２年３月２１日公開のＷＯ０２／２２５７７に開示されており、それは引用によりその全体を本明細書に包含させる。ＷＯ０２／２２５７７の範囲内の２個の好ましい化合物は、式(II)：
【化１０】
2009512732.tif 000012
のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[(２−ヒドロキシエチル)｛２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドまたはそれらの薬学的に許容される塩、および式(III)：
【化１１】
2009512732.tif 000013
のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド(ＬＢＨ５８９)またはそれらの薬学的に許容される塩である。
【００４８】
さらに、本発明は、増殖性疾患の処置のための、式(Ｉ)の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩またはプロドラッグエステルの、電離放射線と組み合わせた使用を提供する。
【００４９】
さらなる局面において、本発明は、増殖性疾患、とりわけ固形腫瘍の処置のための、式(Ｉ)のＨＤＡＣ、またはそれらの薬学的に許容される塩またはプロドラッグエステルの、電離放射線と組み合わせた使用を提供する。
【００５０】
さらなる局面において、本発明は、増殖性疾患、とりわけ固形腫瘍の処置のための、電離放射線と組み合わせた、活性成分としての式(Ｉ)のＨＤＡＣ、またはそれらの薬学的に許容される塩またはプロドラッグエステルを提供する。
【００５１】
さらに別の局面において、本発明は、式(Ｉ)のＨＤＡＣ、またはそれらの薬学的に許容される塩またはプロドラッグエステルを、増殖性疾患、とりわけ固形腫瘍の処置のために電離放射線と組み合わせて使用するための指示書と共に含む、包装物を提供する。
【００５２】
ここで使用する用語“進行遅延”は、処置すべき増殖性疾患の初期相にある患者への本組合せの投与を意味する。
【００５３】
ここで使用する用語“固形腫瘍疾患”は、神経膠腫、甲状腺癌、乳癌、卵巣癌、結腸および一般にＧＩ管の癌、子宮頸癌、肺癌、特に、小細胞肺癌、および非小細胞肺癌、頭頚部癌、膀胱癌、前立腺の癌またはカポジ肉腫を含むが、これらに限定されない。本発明の一つの好ましい態様において、処置すべき腫瘍疾患は、神経膠腫、前立腺の癌または甲状腺癌である。本組合せは、固形腫瘍の増殖だけでなく、液性腫瘍も阻害する。さらに、腫瘍タイプおよび使用する具体的組合せに依存して、腫瘍容積の減少を得ることができる。ここに記載の組合せはまた腫瘍の転移性拡散および微小転移の増殖または発症を予防するのにも適する。
【００５４】
組合せは、式(Ｉ)のＨＤＡＣを、電離放射線の別々の同時のまたは連続した投与なしに投与したときに得ることができない、相乗作用(ここで、電離放射線の投与は、継続的、連続的または散発的である)、または、式(Ｉ)のＨＤＡＣ誘導体の別々の、同時のまたは連続した投与(ここで、投与は継続的、連続的または散発的であり得る)なしに、電離放射線を投与したときに得られないであろう効果が存在するように、一定線量の電離放射線の投与と組み合わせた一定量の式(Ｉ)のＨＤＡＣの投与を意味する。
【００５５】
好ましくは、組合せは、
１)式(Ｉ)のＨＤＡＣを、電離放射線の前もっての同時のまたは後の投与なしに投与したとき(ここで、投与は継続的、連続的または散発的であり得る)；
２)電離放射線を、式(Ｉ)のＨＤＡＣの前もっての同時のまたは後の投与なしに投与したとき(ここで、投与は継続的、連続的または散発的であり得る)；
得られないであろう、相乗的抗増殖効果および／またはクローン原性細胞死滅効果が存在するように、一定線量の電離放射線と組み合わせた一定量の式(Ｉ)のＨＤＡＣの投与を意味する。
【００５６】
上記および下記で記載する用語“電離放射線”は、電磁線(例えばＸ線およびガンマ線)または粒子(例えばアルファおよびベータ粒子)のいずれかとして生じる電離放射線を意味する。電離放射線は、照射治療を含むが、これに限定されない治療において提供され、当分野で既知である[Hellman, Principles of Radiation Therapy, Cancer, in Principles and Practice of Oncology, pp. 248-275, Devita et al., Ed., 4th Edition, Vol. 1 (1993)参照]。
【００５７】
(ａ)遊離形または薬学的に許容される塩の形で存在し得る式(Ｉ)のＨＤＡＣおよび所望により少なくとも１種の薬学的に許容される担体；および
(ｂ)電離放射線：
を含む組合せを、以後「本発明の組合せ」と呼ぶ。
【００５８】
固形腫瘍疾患のような増殖性疾患の性質は多因性である。ある種の状況下で、異なる作用機序の薬剤を組合せ得る。しかしながら、異なる作用機序を有する薬剤の何らかの組合せを単に考えることが、必ずしも有益な効果を有する組合せに至るものではない。
【００５９】
本発明の組合せにおいて、式(Ｉ)のＨＤＡＣ、および薬学的に許容される塩およびプロドラッグ誘導体は、好ましくは、適切な治療的有効量の活性成分を、所望により投与に適当な無機または有機の、固体または液体の、薬学的に許容される担体と共に含む、医薬製剤の形で使用する。
【００６０】
別の態様において、電離放射線を前処置として、すなわち、「本発明の組合せ」での処置を開始する前に与える；電離放射線単独を、一定期間、例えば、２〜３日または数週間の電離放射線の毎日の投与を、患者に投与する。
【００６１】
ＨＤＡＣ医薬組成物は、例えば、経腸、例えば経口、直腸、エアロゾル吸入または経鼻投与用組成物、非経腸、例えば静脈内または皮下投与用組成物、または経皮投与用組成物(例えば、受動的またはイオン泳動的(iontophoretic))、または局所投与用組成物であり得る。
好ましくは、ＨＤＡＣ医薬組成物は、経口投与に適する。
【００６２】
本発明の医薬組成物は、それ自体既知の方法で製造でき、治療的有効量の少なくとも１種の薬理学的に活性な組合せパートナーを単独でまたは、とりわけ経腸または非経腸投与に適当な１種以上の薬学的に許容される担体と共に含む、ヒトを含む哺乳動物(温血動物)への経腸、例えば経口または直腸、および非経腸投与に適する組成物である。
【００６３】
新規医薬組成物は、例えば、約１０％から約１００％、好ましくは約２０％から約６０％の活性成分を含む。経腸または非経腸投与のための組合せ治療用医薬製剤は、例えば、単位投与形態、例えば糖衣錠、錠剤、カプセルまたは坐薬、およびさらにアンプルのものである。他に指示がない限り、これらはそれ自体既知の方法で、例えば、慣用の混合、造粒、糖コーティング、溶解または凍結乾燥工程の手段により製造する。各投与形態の個々の用量に含まれる組合せパートナーの単位含量は、必要な有効量が複数投与単位の投与により達成できるため、それ自体有効量を構成する必要がないことは認識されるであろう。
【００６４】
経口投与形態用組成物の製造において、例えば、粉末、カプセルおよび錠剤のような経口固体製剤の場合、例えば、水、グリコール、油、アルコール、香味剤、防腐剤、着色剤；または担体、例えばデンプン、糖、微結晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、滑剤、結合剤、崩壊剤などのような何らかの通常の医薬媒体を用いることができ、固体経口製剤が、液体製剤よりも好ましい。投与が容易なために、錠剤およびカプセルが最も有利な経口投与単位形態を代表し、この場合、固体医薬担体を明らかに用いる。
【００６５】
特に、「本発明の組合せ」の各組合せパートナーの治療的有効量を、同時にまたは連続的にそして任意の順番で投与でき、そしてこれら不腔成分を別々にまたは固定組合せとして投与してよい。例えば、本発明に従う増殖性疾患の進行を遅延または処置する方法は、併用で治療的有効量、好ましくは相乗的有効量、例えば、ここに記載の量に対応する毎日のまたは毎週の量での：
(ｉ)第一組合せパートナーの投与；および
(ii)第二組合せパートナーの投与を含み、
ここで、組合せパートナーの投与は同時でも任意の順番で連続的でもよい。「本発明の組合せ」の個々の組合せパートナーは、別々に治療の経過中の異なる時点でまたは同時に投与してよい。さらに、用語投与はまた、インビボで本組合せパートナーそれ自体に変換する式(Ｉ)のＨＤＡＣのプロドラッグの使用も包含する。本発明は、故に、同時のまたは交互の処置のこのような全てのレジメを包含すると理解すべきであり、そして用語“投与”はそれに従い解釈すべきである。
【００６６】
電離放射線および式(Ｉ)のＨＤＡＣの、相互に関連した投与量は、好ましくは相乗的である比率内である。
【００６７】
温血動物がヒトであるならば、式(Ｉ)の化合物の投与量は、好ましくは適当な用量は、毎日１００−１,５００mg、例えば、２００−１,０００mg／日、例えば２００、４００、５００、６００、８００、９００または１,０００mg／日の範囲であり、１日１回または２回投与する。細胞死受容体リガンドの適当な投与量および頻度は、処置する適応症の性質および重症度、望む応答、患者の状態などに依存する。
【００６８】
式(Ｉ)の化合物の特定の投与形態および投与量は、患者の詳細、とりわけ年齢、体重、ライフスタイル、活動レベルなどを考慮して担当医が選択し得る。
【００６９】
式(Ｉ)のＨＤＡＣの投与量は、活性成分の有効性および作用期間、投与形態、電離放射線の有効性および作用期間および／または処置すべき対象の性別、年齢、体重および個々の状態のような種々の因子に依存し得る。
【００７０】
電離放射線の線量は、電離放射線の有効性および作用期間、投与形態、投与の位置、式(Ｉ)のＨＤＡＣの有効性および作用期間および／または処置すべき対象の性別、年齢、体重および個々の状態のような種々の因子に依存し得る。電離放射線の線量は、一般に、放射線吸収線量、時間および画分の観点から定義し、担当医により注意深く定義すべきである。
【００７１】
本発明の一つの好ましい態様において、本組合せは電離放射線および上記式(III)のヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドまたはそれらの薬学的に許容される塩を含む。
【００７２】
さらに、本発明は、増殖性疾患を有する温血動物を処置する方法であって、該動物に「本発明の組合せ」を増殖性疾患に対して併用で治療的に有効な方法で投与することを含む方法に関し、ここで、これらの組合せパートナーは、それらの薬学的に許容される塩の形でも存在できる。
【００７３】
さらに、本発明は、増殖性疾患の進行遅延または処置のための、および、増殖性疾患の進行遅延または処置用薬剤の製造のための「本発明の組合せ」の使用に関する。
【００７４】
以下の実施例は、単に説明であり、いかなる方法でも本発明の範囲を限定することを意図しない：
【実施例】
【００７５】
実施例１
腫瘍モデル。ＬＬＣ、Ｈ４５０およびＨ２３細胞株をＡＴＴＣから得る。これらの細胞株は、後肢のいずれかへのｓ.ｃ.注射後に、ヌードマウスにおいて腫瘍を形成する。細胞をトリプシン処理し、血球計により計数する。細胞を完全培地で洗浄し、１０６細胞を後肢または背面皮膚フォールド・ウィンドー内にｓ.ｃ.注射する。
【００７６】
ウェスタンイムノブロット。ＬＬＣ、Ｈ４５０およびＨ２３細胞を、ＤＭＥＭ／Ｆ−１２培地(Gibco)中で一晩血清欠乏させる。次いで、細胞を１０μMの化合物IIIで１時間処置するおよび／または３Gyで照射する。細胞を２回ＰＢＳで洗浄し、溶解緩衝液(２０nM  Ｔｒｉｓ、１５０mM  ＮａＣｌ、１mM  ＥＤＴＡ、１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、２.５mM  Ｎａ  ＰＰ、１mM  フェニルメチルスルホニルフルオリド、および１μg／mLロイペプチン)を添加する。タンパク質濃度をBio-Rad法で定量する。二十(２０)μgの総タンパク質を各ウェルに充填し、試験する標的タンパク質のサイズに依存して、７％または１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルで分離する。タンパク質をニトロセルロース膜(Hybond ECL;Amersham, Arlington Heights, IL)に移し、カスパーゼ３、開裂カスパーゼ３、ホスホ−Ａｋｔ、Ａｋｔ、ＰＤＧＦＲαおよびβ(Cell Signaling；１：１０００)に対する一次抗体でプローブする。ブロットを洗浄し、ヤギ抗ウサギ二次抗体(Sigma；１：１０００)でプローブする。
【００７７】
アポトーシス定量。ＬＬＣ細胞におけるアポトーシスの形態学分析を、顕微鏡下で、ヨウ化プロピジウム染色を使用して行う。アポトーシス細胞を、それらの核凝縮および分裂に従い同定する。簡単に言うと、ＬＬＣ細胞を３GyおよびＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド(ＬＢＨ５８９)(１００nM)または両方で処理する。２４時間後、細胞を数回ＰＢＳで洗浄し、３０％メタノールで透過処理し、ＰＢＳ中ヨウ化プロピジウムで染色する。アポトーシスおよび非アポトーシス細胞を、複数の無作為に選択した視野において計測し、データをアポトーシス細胞のパーセントとして示す。アポトーシスは、全および開裂カスパーゼ３のウェスタンブロット分析の使用により確認する。
【００７８】
腫瘍容積評価。ＬＬＣ、Ｈ４５０およびＨ２３細胞を、各々Ｃ５７ＢＬ６およびヌードマウスにインプラントする。０.１mLの細胞培地に懸濁した１０６生存細胞を、後肢にｓ.ｃ.注射する。各群のマウスは１２匹のマウスから成り、ほぼ同じ平均腫瘍容積を作るために２群に分類する。照射、コントロール、照射、ＬＢＨ５８９単独および照射前に与えたＬＢＨ５８９での処置時(０日目)のマウスの腫瘍の平均容積は、およそ２００mm３である。照射されたマウスを、１４０μLのケタミンで固定し、腫瘍担持後肢以外の全身を鉛で遮蔽する。合計２１Gyの線量を０−４、７および８日目に７分画線量で投与する。ＬＢＨ５８９群は、−１および６日目に食道注入を介してｐ.ｏ.投与されたＬＢＨ５８９を受ける。
【００７９】
処置群。
【表１】
2009512732.tif 000014
【００８０】
１２匹のヌードマウスにＬＬＣについて上記したのと同じ方法でＨ４５０およびＨ２３細胞をインプラントした。コントロールでの照射、照射、ＬＢＨ５８９およびＬＢＨ５８９と照射での処置時(０日目)のマウスの腫瘍の平均容積は２００mm３である。
【００８１】
腫瘍容積を０、２、４、７、９、１１、１４、１６、１８、２０および２２日目に皮膚カリパスを使用して測定した。腫瘍容積を、楕円のための式(πｄ３／６)に由来する式(ａ×ｂ×ｃ／２)から計算した。データを元(０日目)の腫瘍容積のパーセントとして計算し、各処置群について分別腫瘍容積±ＳＤとしてグラフ化した。
【００８２】
腫瘍組織学セクション。Ｃ５７ＢＬ６マウスに、０.１mLの細胞培地に懸濁した１０６  ＬＬＣ細胞を、右後肢にｓ．ｃ．注射する。腫瘍を１４日間増殖させる。３匹のマウスはＬＢＨ５８９で処置し、３匹のマウスは未処置コントロールである。処置１時間後マウスを殺し、腫瘍を集め、ホルムアルデヒドで固定し、切断する。次いで、ＬＢＨ５８９処置マウスおよびコントロールからの切片をホスホ−Ａｋｔ抗体(Cell Signaling  １：１０００)についてプローブする。ＴＵＮＥＬ染色を我々が記載した通りに行う。
【００８３】
統計分析。統計分析をＳＰＳＳおよびＲソフトウェアを使用して行い、個々のデータ点のステューデントのｔ検定を使用したｐ値および標準偏差を計算する。
【００８４】
結果。ＬＢＨ５８９は、電離放射線の細胞毒性作用に対してＮＳＣＬＣを感作する。Ｈ４６０細胞株のクローン原性分析は、ＬＢＨ５８９および０−６Gyを使用して行った。図１は、各処置群の平均生存分率および標準誤差を示す(ｎ＝３)。細胞を懸濁し、血球計で計測し、特異的細胞密度で播種した。付着したら、細胞をＬＢＨ５８９で１時間または１８時間、その後０、２、４、または６Gyで処理した。ＩＲ後に培地を変え、細胞を１０日間増殖させた。示すのは、コロニーの関連フラクションの平均および標準誤差である(ｎ＝３)。
【００８５】
未処置コントロール細胞は、６Gyが生存の１ログ減少しかもたらさず、実質的な放射線耐性を証明した。ＩＲの１時間および１８時間前のＬＢＨ５８９の使用は、用量応答曲線の下方傾斜の増加により明らかな通り、未処置細胞と比較して、コロニー生存の相乗的減少をもたらした。ＬＢＨ５８９単独で１８時間の処置は顕著に低下したコロニー形成率をもたらしたが、単独で１時間は、コントロールと比較して何らコロニー形成率の低下をもたらさなかった。これらのデータは、ＬＢＨ５８９が、ＮＳＣＬＣ細胞株における電離放射線の細胞毒性作用を増強することを示す。
【００８６】
ＬＢＨ５８９は照射誘発アポトーシスを増加する。アポトーシスに対するＬＢＨ５８９によるＨＤＡＣ阻害の効果を試験するために、３種のインビトロ実験を行った。図２は、アポトーシスのAnnexin V-FITC/PIフローサイトメトリー分析の結果を示す。Ｈ２３およびＨ４６０細胞株を２５nM  ＬＢＨ５８９で１８時間処理し、次いで３Gyで照射した。二十(２０)時間後、細胞を回収し、Annexin-FITCおよびPIで染色し、フローサイトメトリーにより分析した。各処置条件についてアポトーシス細胞の数および標準誤差(ｎ＝３)を示す。＊コントロールと比較してＰ＜０.０５。
【００８７】
３Gyの前の２５nM  ＬＢＨ５８９の使用は、アポトーシス細胞の数を、コントロールと比較してＨ２３細胞系については７％から３０％に(Ｐ＜０.００１)およびＨ４６０細胞系については６から２５％に(Ｐ＝０.００３)有意に増加させた。ＩＲ単独またはＬＢＨ５８９単独の使用は、わずかな上昇しか生じず、組み合わせた処置の効果は、相加効果により予測されるよりも大きかった。
【００８８】
ＬＢＨ５８９が、ヒト肺癌細胞株を照射誘発アポトーシスについて感作する能力を確認するために、核形態学試験を行った。図３は、ＤＡＰＩ染色により決定した核の肥満化の平均パーセンテージおよび標準誤差を示す。ＬＢＨ５８９およびＩＲで処理した細胞のＤＡＰＩ染色。細胞をスライド上で二次培養し、２５nM  ＬＢＨ５８９で１８時間、続いて３Gyで処理した。十八(１８)時間後、細胞を固定し、ＤＡＰＩで染色した。顕微鏡での手動計測により決定した核の肥満化および標準誤差(ｎ＝３)を示す。＊コントロールと比較してＰ＜０.０５。
【００８９】
３Gy１８時間前の２５nM  ＬＢＨ５８９の使用は、Ｈ２３(Ｐ＜０.００１)およびＨ４６０(Ｐ＝０.０４２)細胞株について、１０％を超えて核の肥満化の割合を増加させた。各々未処理Ｈ２３およびＨ４６０細胞は、１％未満のアポトーシス核を有し、３Gyで処置したＨ２３およびＨ４６０細胞は３％および２％アポトーシス核を有し、そしてＬＢＨ５８９単独で処置したＨ２３およびＨ４６０細胞は、４％および２％アポトーシス核を有した。
【００９０】
カスパーゼ３の開裂を分析し、ＬＢＨ５８９および照射で処理した細胞におけるアポトーシスの役割を確認した。ウェスタンブロット分析をＨ２３およびＨ４６０全細胞ライセートで行った。図４は、開裂カスパーゼ３およびアクチンのウェスタンイムノブロットを示す。ＬＢＨ５８９はカスパーゼ３開裂を誘発した。Ｈ２３およびＨ４６０細胞を２５nM  ＬＢＨ５８９で１８時間処理し、次いで３Gyで照射した。６時間後、タンパク質を抽出し、定量し、１２％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルで流し、移し、そして、開裂カスパーゼ３およびアクチンに対する抗体でプローブした。Ｈ２３およびＨ４６０細胞株からのカスパーゼ３、開裂カスパーゼ３、およびアクチンの免疫ブロットを示す。
【００９１】
カスパーゼ３開裂の増加は、ＬＢＨ５８９での処置後、Ｈ２３およびＨ４６０細胞株の両方で明白であった。ＩＲ前のＬＢＨ５８９の使用は、Ｈ４６０細胞におけるカスパーゼ３開裂を増加させた。この増加は、しかしながら、Ｈ２３細胞系では顕著ではなかった。
【００９２】
ＬＢＨ５８９は、インビボで腫瘍増殖遅延を増強する。Ｈ４６０細胞をマウスの後肢に注射した。腫瘍形成後、マウスを２回の４０mg  ＬＢＨ５８９経口用量および／または７日間にわたる５回の３Gy画分により処置した。図５は、各処置群の腫瘍容積(Ａ)および腫瘍増殖遅延(Ｂ)の増加倍率を示す。ＬＢＨ５８９単独の使用は、穏やかな、しかし有意な２日間の腫瘍増殖遅延をもたらした(Ｐ＜０.００１)。ＩＲ単独は、増殖を約４日間遅延させた(Ｐ＜０.００１)。組合せ処置は、腫瘍増殖を約２０日間、有意に遅延させ(Ｐ＜０.００１)、ＨＤＡＣ阻害がＮＳＣＬＣ腫瘍増殖に対するＩＲの効果を増強することを示す。加えて、ＬＢＨ５８９を受けたマウスは、体重減少および運動性によりモニターして、試験の経過中、最少の毒性の徴候を示した。
【００９３】
図５Ｂは、異種移植腫瘍モデルにおけるＬＢＨ５８９および電離放射線の効果を示す。Ｈ４６０細胞をヌードマウスの後肢に注射し、１週間増殖させた。マウスを４群に分けた：コントロール、３Gy、ＬＢＨ５８９  ４０mg、ＬＢＨ  ４０mg＋３Gy。ＬＢＨ５８９を、ＩＲの１時間前に経口胃管栄養法により投与した。マウスを２回のＬＢＨ５８９で、および最初の７日間にわたり、３Gyの５画分で処置した。Ａ、各処置群についての、腫瘍容積の平均増加倍率および標準誤差を示す(ｎ＝５)。Ｂ、参照として腫瘍容積の１０倍増加を使用して計算した平均腫瘍増殖遅延および標準誤差を示す。
【００９４】
ＬＢＨ５８９は、照射誘発γ−Ｈ２ＡＸフォーカスの期間を延長する。免疫染色を行い、ＤＮＡ二本鎖切断点(breaks)に存在するγ−Ｈ２ＡＸフォーカスを試験した。図６Ａは、ＬＢＨ５８９およびＩＲの組合せで処置したＨ２３細胞系の代表的写真を示す。γ−Ｈ２ＡＸフォーカスの赤色染色およびＤＡＰＩ対比染色の青色染色を示す。３Gyは、γ−Ｈ２ＡＸフォーカスを、早くも処置３０分後に誘発した。これらのフォーカスは、ＩＲ単独で処置した細胞株において６時間後までに消失した。２０時間のＬＢＨ５８９単独の使用は、γ−Ｈ２ＡＸフォーカスの穏やかな増加をもたらした。相対的に、ＩＲの１８時間前に添加したＬＢＨ５８９は、γ−Ｈ２ＡＸフォーカスの期間をＩＲの２４時間後(ＬＢＨ５８９投与４２時間後)まで延長した。さらに、γ−Ｈ２ＡＸフォーカスは、アポトーシスを受けている細胞において、ＩＲの１８時間および２４時間後に見られた(矢印)。興味深いことに、ＨＤＡＣ阻害を伴わない照射での処置後のアポトーシスを受けている細胞において、γ−Ｈ２ＡＸフォーカスは存在しなかった。同様の結果がＨ４６０細胞系で見られた(補足的図Ｓ１)。
【００９５】
図６Ｂは、ＩＲ２４時間後に存在するγ−Ｈ２ＡＸフォーカスの数を示す。ＬＢＨ５８９は、照射した肺癌細胞におけるγ−Ｈ２ＡＸフォーカスの期間を延長する。Ｈ２３細胞系は、２５nM  ＬＢＨ５８９および／または３Gyの示す処置を受けた。抗γ−Ｈ２ＡＸ抗体をローダミン・レッド標識二次抗体での免疫染色に使用した(赤色)。細胞をＤＡＰＩで対比染色した(青色)。ＩＲの示す時間後の、Ｈ２３細胞株(Ａ)の代表的写真を示す。矢印はアポトーシス細胞を指す。Ｂ、γ−Ｈ２ＡＸ核フォーカスを有する細胞の平均および標準誤差を示す。＊コントロールと比較してＰ＜０.０５。３Gy単独およびＬＢＨ５８９単独での処置は、γ−Ｈ２ＡＸの急速な消失をもたらした(２４時間で＜５％)。ＩＲの前のＬＢＨ５８９の使用は、γ−Ｈ２ＡＸフォーカの消失を顕著に遅らせ、２４時間で両細胞株に６０％残存フォーカスがあった(Ｐ＜０.００１)。ＬＢＨ５８９およびＩＲでの処置後のγ−Ｈ２ＡＸフォーカスの期間の増加は、ＨＤＡＣ阻害がＤＮＡ修復過程を妨害し、この機構が恐らく照射の細胞毒性効果に対してＮＳＣＬＣを感作する。
【００９６】
照射された肺癌細胞株のＨＤＡＣ４核移行。
ＨＤＡＣ４の免疫染色をＨ２３およびＨ４６０細胞株で行い、ＨＤＡＣ４局在化に対するＬＢＨ５８９の効果を同定した。図７は、抗ＨＤＡＣ４抗体およびローダミン標識二次抗体(赤色)でプローブし、次いでＤＡＰＩで対比染色(青色)したＨ４６０細胞系の代表的写真を示す。未処置細胞およびＬＢＨ５８９単独で処置した細胞は、細胞質および核においてバックグラウンドＨＤＡＣ４染色を示した。Ｈ４６０細胞を３Gyで処理したとき、ＨＤＡＣ４は２時間で核に局在し、極少のＨＤＡＣ４が細胞質に存在した。しかしながら、ＩＲの前に添加したＬＢＨ５８９は、ＨＤＡＣ４核局在化を著しく制限した。同様の効果がＨ２３細胞系で見られた。これらの結果は、細胞質および核タンパク質のウェスタンブロット分析のために抗ＨＤＡＣ４抗体を使用したＨ４６０細胞系において確認された。
【図面の簡単な説明】
【００９７】
【図１】Ｈ４６０細胞株のクローン原性分析におけるＬＢＨ５８９および０−６Gyを使用した各処置の平均生存分率および標準誤差を示す。
【図２】ＬＢＨ５８９によるＨＤＡＣ阻害のアポトーシス効果のAnnexin V-FITC/PIフローサイトメトリー分析の結果を記載する。
【図３】ヒト肺癌細胞株の感作に対するＬＢＨ５８９の能力を確認するための、ＤＡＰＩ染色により決定された核の肥満化の平均パーセンテージおよび標準誤差を示す。
【図４】開裂したカスパーゼ３およびアクチンのウェスタンイムノブロットを示す。ＬＢＨ５８９は、ＬＢＨ５８９および照射で処置した細胞におけるアポトーシスの役割を確認するためにカスパーゼ３開裂を誘発する。
【図５】ＬＢＨ５８９での各処置群についての、腫瘍容積(Ａ)および腫瘍増殖遅延(Ｂ)における増加倍率を示す。
【図６Ａ】ＬＢＨ５８９およびＩＲの組合せで処置したＨ２３細胞系の代表的写真を示す。
【図６Ｂ】ＩＲ２４時間後に存在するγ−Ｈ２ＡＸフォーカスを示す。
【図７】抗ＨＤＡＣ４抗体およびローダミン標識二次抗体でプローブし、その後ＤＡＰＩで対比染色したＨ４６０細胞系の代表的写真を示す。
【図１】
2009512732.tif 000018
【図２】
2009512732.tif 000019
【図３】
2009512732.tif 000020
【図４】
2009512732.tif 000021
【図５Ａ】
2009512732.tif 000022
【図５Ｂ】
2009512732.tif 000023
【図６Ａ】
2009512732.tif 000024
【図６Ｂ】
2009512732.tif 000025
【図７】
2009512732.tif 000026
【手続補正書】
【提出日】平成19年5月23日(2007.5.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
処置を必要とする対象における増殖性疾患を処置する方法であって；
(ａ)式(III)：
【化１】
2009512732.tif 000027
のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド、またはそれらの薬学的に許容される塩と
(ｂ)電離放射線
の組合せを投与することを含む、方法。
【請求項２】
対象が増殖性疾患を有する温血動物である請求項１に記載の方法であって、請求項１に記載の組合せを該動物に増殖性疾患に対して併用で治療的に有効となるように投与することを含む、方法。
【請求項３】
電離放射線と組み合わせて使用するための、増殖性疾患に対して併用で治療的に有効な量の式(III)の化合物および少なくとも１種の薬学的に許容される担体を投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
そのような処置を必要とする対象における増殖性疾患の進行を遅延するための、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
請求項１に記載した増殖性疾患の進行遅延または処置のための式(III)の化合物の、電離放射線と組み合わせて使用するための薬剤の製造のための使用。
【請求項６】
増殖性疾患が固形腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
薬学的に許容される形態の請求項１に記載の式(III)の化合物を、増殖性疾患の処置のために電離放射線と組み合わせて使用するための指示書と共に含む、包装物。
【国際調査報告】
2009512732.tif 000028
2009512732.tif 000029
2009512732.tif 000030
2009512732.tif 000031
2009512732.tif 000032