(57)【要約】  本発明は、分離チャンバ中の電気泳動のための方法に関し、この方法は、分別されたサンプルの改善された収集を提供するために、複数の逆流媒体流入口を通して分離チャンバの中へ、少なくとも２つの異なった特性の、１つまたは複数の逆流媒体を導入することを伴う。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
電気泳動のための方法であって、
（ａ）第１の端壁、第２の端壁、第１の側壁、第２の側壁および２つのプレートを備える分離チャンバを提供するステップであって、前記端壁、側壁およびプレートが分離空間を画定し、第１の電極および第２の電極が前記第１の側壁および前記第２の側壁に近接して前記分離チャンバ中にそれぞれ位置し、少なくとも１つのサンプル流入口が前記第１の端壁に近接して位置し、少なくとも１つの分離媒体流入口が前記第１の端壁に近接して位置し、複数の収集流出口が前記第２の端壁に近接して位置し、複数の逆流流入口が前記第２の端壁に近接して位置するステップと、
（ｂ）前記第１および第２の電極を介して前記チャンバ中に電界を発生するステップと、
（ｃ）前記少なくとも１つの分離媒体流入口を通して、前記分離チャンバへ分離媒体を導入するステップと、
（ｄ）前記少なくとも１つのサンプル流入口を通して、前記分離チャンバへ分離されるべきサンプルを導入するステップと、
（ｅ）前記複数の逆流媒体流入口を通して、前記分離チャンバへ１つまたは複数の逆流媒体を導入するステップであって、前記逆流媒体流入口のうち少なくとも２つを通して特性の異なる逆流媒体を導入するステップと、
（ｆ）前記複数の収集流出口を通して前記サンプルの分離された部分を収集するステップと
を備えることを特徴とする方法。
【請求項２】
平坦なプレートが重ねられ平行に配置され、前記逆流媒体流入口は、前記分離媒体の前記流れの方向に垂直な線に沿って配置されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
少なくとも２つの逆流媒体が導入され、前記少なくとも２つの逆流媒体がそれらの化学的特性、物理的特性または化学的特性および物理的特性の両方において相違していることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも２つの逆流媒体は、ｐＨ、粘性および導電率から成るグループから選択された１つまたは複数の特性において相違していることを特徴とする請求項３に記載の方法。
【請求項５】
複数の逆流媒体または単一の逆流媒体は、２つ以上の異なる直線流速で前記複数の逆流流入口を通って導入されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
単一の逆流媒体は、２つ以上の異なる直線流速で前記複数の逆流流入口を通って導入されることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
第１の流入口または第１の流入口のグループを通る第１の逆流媒体の直線流速の第２の隣接した流入口または第２の隣接した流入口のグループを通る第２の逆流媒体の直線流速に対する比は、約５：１以下であり、前記第１および第２の逆流媒体は同一かまたは異なることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記逆流媒体の流速の前記分離媒体の流速に対する比は、約１：１０と約１０：１の間にあることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項９】
分離媒体流入口の数は１から９であり、逆流媒体流入口の数は２から９であり、収集流出口の数は３から３８４であり、サンプル流入口の数は１から５であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記分離チャンバは、前記第１および第２の電極にそれぞれ隣接する第１および第２の導電性膜をさらに備えることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記複数の収集流出口は、前記分離媒体の前記流れの方向に垂直な線に沿って配置され、
隣接した収集流出口の間の距離は、約０．１ｍｍから約２ｍｍであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記逆流媒体のｐＨ値は、前記分離媒体のｐＨ値より大きいことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記流速は、前記サンプルの分離された部分の少なくとも２つの隣接した経路の間の距離の増加を提供するように選択されることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項１４】
前記流速は、前記サンプルの分離された部分の少なくとも２つの隣接した経路の間の距離の縮小を提供するように選択されることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項１５】
前記逆流媒体は、尿素、グリセロール、炭水化物およびグルコースから成るグループから選択された１つまたは複数の成分を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記第１および第２のプレート間の前記分離空間は、約０．１ｍｍから約１．５ｍｍの厚さを備えることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
温度を約２℃から約３５℃に維持するように前記分離チャンバの温度を調節するステップをさらに備えることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、逆流媒体を伴う連続的なキャリアフリーの偏向電気泳動のための方法および装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
フリーフロー電気泳動（ＦＦＥ）として知られている方法の原理は、特許文献１、非特許文献１、非特許文献２、および非特許文献３に説明されており、この技術は、産業および化学で使用される効率的な分析的および予備的方法の中で恒久的な位置を確保している。この技術を使用して、小さなイオンならびに大きな粒子の両方を分離することができるが、主な用途は蛋白質の分別であり、特に、酵素および他の生物学的に活性な蛋白質、膜粒子ならびに生存細胞さえも生物工学的な製造における蛋白質の分別である。分離されたサンプル成分の隔離を可能にする他の方法と比べて、ＦＦＥは、次の２つの主要な利点をもたらす。（ｉ）分離を連続的に行うことができ、１時間あたり数百ミリグラムあるいはグラム量もの純物質を得ることを可能にする。（ｉｉ）分離が穏やかであり、分離された成分の酵素の活性を維持する。ＦＦＥの技術は、複合蛋白質の分離および分別に特に有用であり、したがって、学術研究、製薬、バイオテクノロジーおよび臨床検査薬市場においてますます重要になっているプロテオミクス（ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ）の新興分野に適用可能である。例えば、プロテオームの（ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ）研究の発展にともなって、特に分解プロセスの信頼性に関して蛋白質分離性能の改善およびに汎用フロントエンドの需要が高まっている。
【０００３】
一般に、フリーフロー分離法は、任意の分子量のイオンならびに生体粒子を分離するのに適している。分離されるべきサンプルそれ自体が電気的に帯電されるか、または電荷がイオンの吸着または収着によって生成されるかどうかは、一般に問題にならない。連続的な偏向電気泳動のプロセス、および安定化媒体および逆流媒体による改善は、例えば特許文献２に反映されている。この特許によれば、逆流媒体は、分離媒体の流れの方向に逆行して分離空間に導入される。両媒体は分別流出口を通って放出され、結果として低空隙容量を有する分別が生じ、さらに、例えば非常に僅かな乱流で、分別流出口の領域で媒体の層流を維持している。フリーフロー電気泳動の様々なモードの議論は、例えば特許文献３に見られ、この開示は参照により本明細書に組み込まれる。
【０００４】
【特許文献１】独国特許第８０５３９９号明細書
【特許文献２】米国特許第５２７５７０６号明細書
【特許文献３】米国特許出願公開第２００４／００５０６９７号明細書
【特許文献４】米国特許第６６６０１４６号明細書
【非特許文献１】Barrolier, J. et al. in Z. Naturforschung, 1958, 13B, pages 754 to 755
【非特許文献２】Hannig, K. in Zeitschrift der Analytischen Chemie, 1961, 181, pages 244 to 254
【非特許文献３】Roman, M. et al. in Journal of Chromatography 1992, 592, pages 3 to 12
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
等電点電気泳動は、緩衝液にｐＨ勾配を加えるとともに、両性である生物学的材料に最も電界を集中させた電気泳動の技術である。蛋白質、ペプチド、およびウィルスなど両性の生体材料は、酸性媒体中でプラスに帯電され、基本媒体中でマイナスに帯電される。ＩＥＦの間、これらの材料は、横切って、すなわち流れの向きに横方向に確立されているｐＨ勾配中を、正味電荷を有せず安定した狭いゾーンを形成する等電点（ｐ１）に移動する。この等電点で、材料は横方向に移動することをやめて、焦点に集まるようになる。この技術には電圧依存性がない。拡散または流体移動のためにその等電点から離れるいかなる両性の生体材料も、ｐＨ勾配と電界の組合せの働きによって戻されることになるので、等電点電気泳動は、そのような高分解バンドをもたらす。集束プロセスは、このようにサンプルを純化し、比較的安定しているバンドへ集中させる。特に２次元のゲル中で電気泳動と結合されたとき、これはいくらかの最高の分解分離をもたらした強力なコンセプトである。しかし、ＩＥＦでは、各帯電した種の電気泳動の移動速度は、それが等電点に近づくのにともなって次第に低下する傾向があり、したがって、通常、高分解には長い滞留時間が必要とされる。さらに、蛋白質は、その等電点で低下した可溶性および生物活性の損失を有する。
【０００６】
これらの課題に対して提案された１つの解決法が、特許文献４に反映されている。この特許は、チャンバを通るキャリアの流れの向きに横方向の一様な流体の流れにより、電気泳動のサンプル速度に対向することを伴う装置および方法を開示している。これは、電極アレイと絶縁されたスクリーンの組合せを使用して、集束に必要な電場勾配および一様な横方向の流れを与えることにより実現される。しかし、この手法は実用的でないように思われる。
【０００７】
ゾーン電気泳動は、ＦＦＥで使用することができる別の分離モードである。ゾーン電気泳動は、主として電荷に基づき、またある程度は形態およびサイズに基づき、生体粒子を分離する。ＦＦＥで使用することができる別のモードは等速電気泳動（ＩＴＰ）である。ＩＴＰのＦＦＥは、非同質の分離媒体の使用を伴う。成分が初期サンプルの主要バンドから分離するとき、この成分は、局所的な条件に基づいて連続体の流れに対して横方向に加速または減速されるとき領域に入る。このいわゆる集束効果は、次いで、連続体からの所望の成分を分別するために使用される。
【０００８】
改善された分離のための他の方法が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、とりわけ、ＩＥＦプロセスで見つかったいくつかの典型的な問題に対する改善を含む、改善された分離のための方法を提供する。
【００１０】
一実施形態では、本発明は、
（ａ）第１の端壁、第２の端壁、第１の側壁、第２の側壁および２つのプレートを備える分離チャンバを提供するステップであって、端壁、側壁およびプレートが分離空間を画定し、第１の電極および第２の電極が第１の側壁および第２の側壁に近接して分離チャンバ内にそれぞれ位置し、少なくとも１つのサンプル流入口が第１の端壁に近接して位置し、少なくとも１つの分離媒体流入口が第１の端壁に近接して位置し、複数の収集流出口が第２の端壁に近接して位置し、複数の逆流流入口が第２の端壁に近接して位置するステップと、
（ｂ）第１および第２の電極を介してチャンバ内に電界を発生するステップと、
（ｃ）少なくとも１つの分離媒体流入口を通して、分離チャンバへ分離媒体を導入するステップと、
（ｄ）少なくとも１つのサンプル流入口を通して、分離チャンバへ分離されるべきサンプルを導入するステップと、
（ｅ）分離チャンバへ複数の逆流媒体流入口を通して、１つまたは複数の逆流媒体を導入するステップであって、逆流媒体流入口のうち少なくとも２つを通して特性の異なる逆流媒体を導入するステップと、
（ｆ）複数の収集流出口を通してサンプルの分離された部分を収集するステップと
を備える方法を提供する。
【００１１】
（１つまたは複数の導入ステップと生成ステップは、同時に行われても、あるいは上に示されたのと異なる順序で行われてもよい。）
逆流媒体の異なる特性は、例えば、化合物の化学的特性の差、化合物の物理的特性の差、または流れの特性、例えば単一化合物近傍の直線流速の差とすることができる。流入口間のこの個別の制御は、例えば、収集流出口近傍の条件を変えて、電気泳動プロセスにおいて時として必要とされる比較的長い滞留時間中の生物活性および可溶性をよりよく維持することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
図１は、先行技術による分離チャンバ１の概略図であり、一例として、その低い端壁１４に近接して、可撓性のチューブなどのチューブによって蠕動ポンプなど多チャンネルポンプの吸込チャンネルに接続されるポート（図示せず）を通常有する９つの流入口２０、２２、２４を有する。流入口２０に分離媒体が供給される。流入口２２および２４は、アノード３６およびカソード３２のための電極安定化媒体がそれぞれ供給される。検体を含むサンプルは、サンプル流入口２６を通って分離空間に注入される。すべての媒体は、層流条件の下で分離空間を通って流れる。（様々な流入口からの流れの方向は矢印によって示されている。）電極３２および３６は、側壁１６および１８に近接して、分離チャンバの両側と平行に配置されて電界を発生し、また、ポンプを用いた高流量での循環的流れの中で通常、浄化される。導電性である膜３４および３８は、分離空間から電極空間を分離し、流体力学的な流れによってもたらされる媒体のいかなる交流も抑止する。逆流媒体は、逆流要素３０を通って分離チャンバへ導入される。逆流により、収集流出口２８で流れおよび圧力の状態の調整および制御を可能にすることによって分離を向上する。
【００１３】
サンプルがチャンバを通って流れるとき、電極によって生成された電界が、サンプル内の成分の分離を引き起こす。例えば対象の検体である分離されたサンプルは、おおむね分離チャンバの上部すなわち出口壁１２に対して近接し、平行な線に沿って配置された収集流出口２８を通って収集される。収集された選択サンプル成分は、おおむねチユービングを通って収集容器に供給され、分析的または予備の目的に使用されてよい。適した収集容器は、例えばマイクロタイターウェル（ｍｉｃｒｏ−ｔｉｔｅｒ  ｗｅｌｌ）である。所望のサンプルが引き出される収集流出口を通って収集されない外側にあるサンプル成分、または異なる収集流出口を通って収集されるものは廃棄することができる。
【００１４】
図２に反映された本発明の一実施形態は、連続的なキャリアフリー偏向電気泳動のための方法である。この方法は、第１の（下方の）壁１１４および第２の（上方の）壁１１２、２つの側壁１１６および１１８、ならびに重ねられた２枚の平行な平坦なプレート（図示せず）を有する長方形の分離チャンバを備えるデバイス１００で行われる。これらの要素は、密封された分離チャンバをともに形成する。高圧電界を発生するように設計され、発生することができる２つの電極１３２および１３６がチャンバ内に配置され、分離空間を画定する助けになる。分離チャンバは、第１の端に、またはその近くに（すなわち近接して）、サンプルの注入のための少なくとも１つのサンプル流入口１２６および分離媒体の注入のための少なくとも１つの分離媒体流入口１２０を含む。（複数の流入口１２０の場合には、２つ以上の分離媒体を提供することができることに留意されたい。）第２の端に近接して、複数のサンプル収集流出口１２８および複数の逆流媒体流入口１３０が位置する。通常、収集流出口および逆流媒体流入口の両方とも流れの方向に垂直な線に沿って配置される。
【００１５】
個々の検体は、複数の収集流出口１２８を通って分離チャンバを出て、個々のチユービングを通って任意の適したタイプの個々の収集容器ヘおおむね導かれる。収集容器では、検体は分離媒体および逆流媒体と一緒に収集される。収集流出口の配列の個々の収集流出口１２８の間の距離は、適した分別／分離を提供するために、一般にできるだけ小さくするべきである。収集流出口の中心から測定された、個々の収集流出口の間の距離は、約０．１ｍｍから約２ｍｍ、より典型的には約０．３ｍｍから約１．５ｍｍとすることができる。
【００１６】
逆流媒体流入口１３０のうち少なくとも２つは、そこに導入された少なくとも２つの異なる特性の逆流媒体を有する。流れは、示された方向にあり、流入口１２０からの分離媒体の流れに対向する。
【００１７】
様々な実施形態において、分離媒体流入口１２０の数は、１から９または１から７の範囲であり、サンプル流入口１２６の数は、１から５または１から３の範囲であり、収集流出口１２８の数は、３から３８４または３から９６の範囲であり、また、逆流媒体流入口１３０の数は、２から９または３から７の範囲である。設けられた流入口および流出口の数は、一般に分離デバイスの寸法次第である。
【００１８】
一実施形態によれば、分離チャンバ１００は、分離媒体流入口１２０、サンプル注入用の３つのサンプル流入口１２６、３から９６個の収集流出口１２８および７つの逆流媒体流入口１３０を含む。
【００１９】
本発明の実施形態によれば、この方法は、様々なフリーフロー電気泳動プロセスおよびデバイスと組み合わせることができる。例えば、複数のデバイスを使用することができ、これらは、次いで並列および／または直列に配置される。あるいは、デバイスの収集流出口に集められた成分の流れは、対応するサンプル流入口にリサイクルされて、サンプル成分の滞留時間を増加することにより分解を改善することができるリサイクルプロセスを形成してもよい。さらに、様々なＦＦＥモード、例えばＩＥＦおよびゾーン、が可能である。
【００２０】
ＩＥＦの場合には、対象の成分の分離を容易にするために、特定のｐＨ値を有する媒体を選択することが有用である。一般に、ｐＨ値は、（諸）成分が適切に分離されることを確実にするために、対象の成分または諸成分の等電点に基づいて選択される。逆流媒体は、通常、分別流出口に接近する分離媒体のバッファリング容量を変更するか凌ぐことができるように選択され、したがって、同じ粘性および密度であるが、導電率および／またはｐＨ値および／またはそれらの化学成分が異なる材料とすることができる。一実施形態では、（諸）逆流媒体のｐＨ値は、（諸）分離媒体のｐＨ値より大きい。
【００２１】
通常の逆流媒体および分離媒体は、媒体の同一グループから選択され、通常、尿素、グリセロール、炭水化物グルコース（ｇｌｕｃｏｓｅ）および類似の化合物などの成分を含む。そのような媒体は、いくつかの供給元、例えばＧｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ社のＩｍｍｏｂｉｌｉｎｅ（商標）、Ａｍｐｈｏｌｉｎｅ（商標）、Ｐｈａｒｍａｌｙｔｅ（商標）、ＳＥＲＶＡ  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ社のＳｅｒｖａｌｙｔ（商標）、およびＢｅｃｔｏｎ，Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ社の類似の材料から商業的に入手可能である。
【００２２】
本発明の実施形態によれば、逆流媒体流入口１３０へ導入される逆流媒体は、逆流媒体流入口の全アレイを通じて同じ特性ではないが、流入口ごとおよび／または流入口のグループ間でそれらの特性が異なる（例えば異なる化学的および／または物理的特性を有する媒体、および／または異なる流動性の媒体）。流入口のグループ間で逆流媒体を変えるとき、同一特性の区分を形成するグループは、一実施形態では２から９個の個別の流入口であり、あるいは別の実施形態では３から約７個の流入口である。例えば、逆流媒体（Ａ）は、第１の逆流媒体区分（流入口１から１０）を通って注入され、第２の逆流媒体（Ｂ）は、媒体（Ａ）と比べて異なる流動性または異なる化学的特性および／または物理的特性であり、第２の区分（流入口１１から２０）を通って注入され、また、媒体（Ｂ）とは特性の異なる第３の逆流媒体（Ｃ）は、第３の区分（流入口２１から３０）を通って注入される。
【００２３】
化学的および物理的な相違は、ｐＨ値、粘性または導電率の差を含むが、これには限定されない。そのような異なる逆流媒体が使用される例は、図３Ａに反映されている。図３Ａでは、チャンバ２００は、２３０ａから２３０ｇまで複数の逆流流入口が設けられており、流入口２３０ａから２３０ｃは第１の媒体が提供され、流入口２３０ｄから２３０ｇは異なる媒体が提供される。上述の逆流媒体は、可溶性を向上し、生物活性を維持するように選択される。したがって、可溶性および生物活性の改善を実現するために、例えば隣接したサンプル経路２４０および２４２の中にある検体に基づいて、逆流媒体は、局所的なスケールで分離媒体のｐＨおよび／または導電率を変更するように選ばれる。（明瞭性のために、チャンバ２００の他の要素は示されていない。図３Ｂおよび図３Ｃの場合も同様である。）
【００２４】
他の特性の差には、逆流媒体に化学的または物理的相違が存在しない場合でも流速が含まれることがある。例えば、本発明の実施形態によれば、個々の逆流流入口を通って導入された個々の逆流媒体の直線流速は異なる。これにより、収集流出口の領域において流れプロファイルが異なる結果となり、場合によっては、分離された検体の隣接した流れ経路間の幾何学的距離の増加、または他の場合には検体の隣接した経路間の幾何学的距離の縮小をもたらすことがある。
【００２５】
分離された検体の隣接した経路間の増加した幾何学的距離の一例は、図３Ｂに示されている。この実施形態では、単一の逆流媒体が流入口３３０ａから３３０ｇに提供される。しかし、流入口３３０ｃからの流速は他の流入口より高い。この増加した流速は、サンプルの分離された成分の隣接した経路３４０と３４２の間に間隔の増加をもたらす。このアプローチは、例えば対象の検体が他の成分と接近して離間している傾向があり、したがって純粋なサンプルの収集が困難なとき、有用であり得る。
【００２６】
分離された検体の隣接した経路間の縮小された幾何学的距離の一例は、図３Ｃに示されている。この実施形態では、単一の逆流媒体が流入口４３０ａから４３０ｇに提供される。しかし、流入口４３０ｂおよび４３０ｄからの直線流速は、それらの間に配置された流入口４３０ｃからの直線流速より高い。流入口４３０ｃ周辺のこの増加された流速は、サンプルの分離された成分の隣接した経路４４０と４４２の間の間隔の縮小をもたらす。このアプローチは、例えば対象の（諸）検体がいくぶん広く離間される傾向があり、広い（諸）バンドを単一または数個の収集流出口に向けて集中させることが望まれるとき、またはある成分が沈殿し、そのような沈殿を１つの領域で収集することが望まれるとき、有用であり得る。
【００２７】
異なる逆流媒体流入口または流入口のグループを通して導入された逆流媒体の直線流速が異なる場合、そのような流入口または流入口のグループの流速の隣接した流入口または流入口のグループに対する比は、通常、約５：１以下または３：１以下である。
【００２８】
異なる化学的および／または物理的特性を有する逆流媒体ならびにこれらの異なる媒体の流速の差の両方を使用して流れを制御することも可能である。
【００２９】
分離媒体の流速の逆流媒体の流速に対する有用な比は、約１：１０から約１０：１であり、より典型的には約１：３から約３：１である。分離媒体および逆流媒体の実際の流速は、検体の最適の分離を得るために、器具の幾何学的寸法、使用される特定の分離モード（これらが必要な移動時間を変化させることがある）、分離されるべきサンプル、使用される分離媒体、および使用される（諸）逆流媒体を含む、様々な考慮事項に依存する。したがって、システム中へのすべての媒体の典型的な流速（安定化および逆流）は、０．３ｍＬ／時間から３０００ｍＬ／時間まで広範囲に及ぶことがある。
【００３０】
本発明の実施形態による装置は、分離媒体用の多チャンネルポンプ、サンプル用の多チャンネルポンプおよび逆流（諸）媒体用の多チャンネルポンプをさらに含む。このデバイスは、フラクションコレクタ（ｆｒａｃｔｉｏｎ  ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ）流出口および流出口チューブをさらに含む。通常、ポンプは多チャンネル蠕動ポンプである。
【００３１】
分離チャンバの底部プレートおよび上部プレートは、独立して、ガラス製あるいはＰＶＣ、ポリオレフィン、ポリカーボネート、プレキシガラス、ポリハロハイドロカーボンまたはＬｕｃｉｔｅ（登録商標）（重合されたメタクリル酸メチルから基本的に成るアクリル樹脂）など適したプラスチック製とすることができ、ポリマーで被覆したガラスが好ましい。最上部プレートおよび底部プレートは、ガスケットまたはシールとして働くスペーサによって、通常、分離される。
【００３２】
電極は、電界中で容易に酸化しないであろう白金などの金属で通常構成される。電極は、通常、イオン交換、ナイロンまたは酢酸セルロースの膜によって分離チャンバから分離される。電極は、プロセス中に生成された電気分解生成物を除去するために、通常、食塩水または緩衝溶液によって絶えず洗浄される。
【００３３】
分離空間（プレート間の空間）は、約０．１ｍｍから約１．５ｍｍ、好ましくは約０．３ｍｍから約１．０ｍｍの間の厚さを通常有する。
【００３４】
本発明の実施形態による温度制御も有用である。電解質溶液を通って電流が通過するとき、ジュール加熱として知られている現象によって導電媒体の温度は上昇する。流れる媒体の層流プロファイルに対してそのような加熱によってもたらされた外乱を低減するために、ジュール熱を周囲へ消散することが一般に望ましい。一実施形態では、分離チャンバは、分離チャンバの温度を制御するためのサーモスタットシステムなど温度制御デバイスに接続された流体流れチャンネルを収容する金属サポート上にその底部プレートを有するように配置される。有用な温度範囲は、約２℃から約３５℃であり、より典型的には約５℃から室温（約２５℃）である。
【００３５】
本発明は、イオン、ペプチド、生体高分子および生体粒子ならびに合成高分子および粒子の分析的および予備的分離に特に適するが、これに限定されない。
【００３６】
上記の説明的な実施形態は、本発明の単なる例示であり、本発明の範囲内に入るであろう多くの変更形態および代替形態のモードがあり、添付の特許請求の範囲に示す。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】先行技術による従来型ＦＦＥ分離チャンバの概略図である。
【図２】本発明の一実施形態による分離チャンバの概略図である。
【図３Ａ】様々な特性の逆流媒体を使用する本発明の一実施形態による方法を例証する図である。
【図３Ｂ】逆流媒体の流速が異なる本発明の一実施形態による方法を例証する図である。
【図３Ｃ】逆流媒体の流速が異なる本発明の一実施形態による方法を例証する図である。
【図１】
2009505119.tif 000003
【図２】
2009505119.tif 000004
【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
2009505119.tif 000007
【国際調査報告】
2009505119.tif 000008
2009505119.tif 000009
2009505119.tif 000010