(57)【要約】  本発明は、IL-17産生ヘルパーT細胞（Th17細胞）を特異的に検出するためのポリヌクレオチドマーカー又はタンパク質マーカー、及びこれらの存在を検出することを含むことを特徴とするTh17細胞の検出方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
インターロイキン17A、インターロイキン22及びインターロイキンtifbからなる群より選択されるサイトカインをコードする遺伝子；
ケモカインCCモチーフリガンド20であるケモカインをコードする遺伝子；
インターロイキン17受容体E、インターロイキン1受容体1、インターロイキン27受容体A、Gタンパク質共役受容体15、スタビリン1、ポドプラニン、膜貫通及び免疫グロブリンドメイン含有1、メラノコルチン2受容体、膜貫通タンパク質176A、プロゲスチン及びアディポQ受容体ファミリーメンバーVIII 、クローディンドメイン含有1、ELVOLファミリーメンバー７、リンパ球抗原6複合体K遺伝子座、Gタンパク質共役受容体183（エプスタイン-バーウィルス誘導遺伝子2）、キラー細胞レクチン様受容体サブファミリーBメンバー1F、トランスフェリン受容体2、ニューロン特異的遺伝子ファミリーメンバー2、膜貫通タンパク質176B、アミロイドベータ（A4）前駆体様タンパク質2、免疫グロブリン連結鎖、Ig様ドメイン接着分子2、Fc受容体IgG低アフィニティーIIb、カンナビノイド受容体2、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー14、アクアポリン3、C1q及び腫瘍壊死因子関連タンパク質3、シナプトタグミンXI、カリウムチャネル四量体化ドメイン含有12、アポリポタンパク質L7b（発現遺伝子配列BC085284）、アポリポタンパク質L7e（アポリポタンパク質L 3類似体）、溶質キャリアーファミリー34メンバー3、レチノール結合タンパク質1細胞性、細胞性レチノール結合タンパク質I類似体、カリウム大伝導性カルシウム活性化チャネル（サブファミリーMベータメンバー4）、カルシウム活性化カリウムチャネルベータ4サブユニット類似体、SYS1ゴルジ局在膜内在タンパク質ホモログ（RIKEN cDNA 2610042O14遺伝子）、及び溶質キャリアーファミリー38メンバー6（発現遺伝子配列AW322671）からなる群より選択される膜タンパク質をコードする遺伝子；
POUドメインクラス2関連因子1、T細胞特異的転写因子7、WWドメイン含有転写調節体1、毛髪鼻指節骨症候群I、中心体タンパク質290、及びアタキシン2結合タンパク質1からなる群より選択される転写・翻訳因子をコードする遺伝子；
糖尿病付随性Ras関連体、乳癌抗エストロゲン抵抗3、Rab38（RAS癌遺伝子ファミリーのメンバー）、センタウリンガンマ2、SH3及びPXドメイン2B、FERM, RhoGEF及びプレクストリンドメインタンパク質2、不能ホモログ2、B細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1a、B細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1b及びB細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1dからなる群より選択されるシグナル分子をコードする遺伝子；
形質転換増殖因子ベータ誘導である接着分子をコードする遺伝子；
シトクロムP450ファミリー1サブファミリーbポリペプチド1、EHドメイン含有3、マトリックスメタロペプチダーゼ13、カルボキシペプチダーゼD、炭酸脱水酵素13、グルコサミニル（N-アセチル）トランスフェラーゼ2 I分枝酵素、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA2、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA6A、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA6B、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA10、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA7C、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA5、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA9、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA1、UDPグリコシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA8類似体、UDP-GlcNAc：ベータGalベータ-1,3-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ8、骨形成タンパク質1、ウリジンホスホリラーゼ1、ミオシンIII B、ベータサイトAPP切断酵素2、マスト細胞プロテアーゼ1、COX10ホモログ,シトクロムc酸化酵素集合タンパク質,ヘムA：ファルネシルトランスフェラーゼ、ダイナミン3、前立腺酸性ホスファターゼ、cGMP特異的ホスホジエステラーゼ5A、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有7、RIKEN cDNA 1300007F04遺伝子、RIKEN cDNA 1810062O18遺伝子、ホスファターゼオーファン1（発現遺伝子配列AI447357、ABI 遺伝子ファミリーメンバー3）及び多発性外骨腫1からなる群より選択される酵素をコードする遺伝子；
セリン（又はシステイン）ペプチダーゼインヒビタークレードBメンバー1a、タンパク質ホスファターゼ1調節（インヒビター）サブユニット14c、精巣特異的cAMP依存性タンパク質キナーゼインヒビターベータ、メタロプロテイナーゼ組織インヒビター1、セリン（又はシステイン）ペプチダーゼインヒビタークレードIメンバー1、アミロイドベータ（A4）前駆体タンパク質及びWAP四ジスルフィドコアドメイン2からなる群より選択される酵素インヒビターをコードする遺伝子；
富システイン分泌タンパク質LCCLドメイン含有2である分泌タンパク質をコードする遺伝子；
プラスチン1（発現遺伝子配列AI427122）、免疫グロブリン重鎖複合体、免疫グロブリン重鎖1a（血清IgG2a）、 免疫グロブリン重鎖2（血清IgA）、免疫グロブリン重鎖Ia、免疫グロブリン重鎖（J558ファミリー）、免疫グロブリン重鎖（ガンマポリペプチド）、免疫グロブリンmu鎖類似体、免疫グロブリン重鎖V領域3前駆体類似体、免疫グロブリン重鎖可変領域、免疫グロブリン重鎖V領域102前駆体類似体、免疫グロブリン重鎖3、ネブレッテ、ルミカン、殺菌性／透過性増加タンパク質様2、ケルヒ様8、3連モチーフタンパク質2、PDZ及びLIMドメイン5、ケラチン86、キネシンファミリーメンバー3C、キネシンファミリーメンバー1B及びキネシンファミリーメンバー5Cからなる群より選択される構造タンパク質をコードする遺伝子；
中脚上性櫛様4、高可動性グループATフック2偽遺伝子1、RIKEN cDNA 2310007L24遺伝子、RIKEN cDNA 2310002J15遺伝子、配列101類似ファミリーメンバーB（RIKEN cDNA 1500005K14遺伝子）、発現遺伝子配列AI646023及びGRAMドメイン含有3から選択される遺伝子、並びに
TOX高可動性グループボックスファミリーメンバー2（発現遺伝子配列AI851523）、RIKEN cDNA 6030439D06遺伝子、RIKEN cDNA 9030418K01遺伝子、発現遺伝子配列AU015680、配列番号１の塩基配列を有するポリヌクレオチド、及び配列番号２の塩基配列を有するポリヌクレオチドから選択される発現遺伝子配列断片（EST）
からなる群より選択されるポリヌクレオチドであるIL-17産生ヘルパーT細胞（Th17細胞）検出用ポリヌクレオチドマーカー。
【請求項２】
インターロイキン17A、インターロイキン22、及びインターロイキンtifbからなる群より選択されるサイトカインをコードする遺伝子；
インターロイキン1受容体1、インターロイキン27受容体A、Gタンパク質共役受容体15、スタビリン1、アポリポタンパク質L7b（発現遺伝子配列BC085284）、アポリポタンパク質L7e（アポリポタンパク質L 3類似体）、C1q及び腫瘍壊死因子関連タンパク質3、カンナビノイド受容体2、Fc受容体IgG低アフィニティーIIb、Gタンパク質共役受容体183（エプスタイン-バーウィルス誘導遺伝子2）、レチノール結合タンパク質1細胞性、細胞性レチノール結合タンパク質I類似体、リンパ球抗原6複合体K遺伝子座、溶質キャリアーファミリー38メンバー6（発現遺伝子配列AW322671）、シナプトタグミンXI、膜貫通タンパク質176A、膜貫通タンパク質176B、及び腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー14からなる群より選択される膜タンパク質をコードする遺伝子；
T細胞特異的転写因子7及びWWドメイン含有転写調節体1から選択される転写・翻訳因子をコードする遺伝子；
B細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1a、B細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1b及びB細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1d、不能ホモログ2、糖尿病付随性Ras関連体、及びSH3及びPXドメイン2Bからなる群より選択されるシグナル分子をコードする遺伝子；
形質転換増殖因子ベータ誘導である接着分子をコードする遺伝子；
前立腺酸性ホスファターゼ、UDP-GlcNAc：ベータGalベータ-1,3-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ8、骨形成タンパク質1、炭酸脱水酵素13、シトクロムP450ファミリー1サブファミリーbポリペプチド1、グルコサミニル（N-アセチル）トランスフェラーゼ2 I分枝酵素、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA2、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA6A、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA6B、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA10、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA7C、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA5、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA9、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA1、UDPグリコシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA8類似体、マトリックスメタロペプチダーゼ13、cGMP特異的ホスホジエステラーゼ5A、ホスファターゼオーファン1（発現遺伝子配列AI447357、ABI 遺伝子ファミリーメンバー3）、及びウリジンホスホリラーゼ1からなる群より選択される酵素をコードする遺伝子；
セリン（又はシステイン）ペプチダーゼインヒビタークレードBメンバー1a及びメタロプロテイナーゼ組織インヒビター1から選択される酵素インヒビターをコードする遺伝子；
富システイン分泌タンパク質LCCLドメイン含有2である分泌タンパク質をコードする遺伝子；
キネシンファミリーメンバー5C及びルミカンから選択される構造タンパク質をコードする遺伝子、並びに
RIKEN cDNA 6030439D06遺伝子及びRIKEN cDNA 9030418K01遺伝子から選択される発現遺伝子配列断片（EST）
からなる群より選択される、請求項１に記載のTh17細胞検出用ポリヌクレオチドマーカー。
【請求項３】
インターロイキン17Aであるサイトカインをコードする遺伝子；
インターロイキン1受容体1、アポリポタンパク質L7b（発現遺伝子配列BC085284）、アポリポタンパク質L7e（アポリポタンパク質L 3類似体）、カンナビノイド受容体2、Fc受容体IgG低アフィニティーIIb、溶質キャリアーファミリー38メンバー6（発現遺伝子配列AW322671）、及び膜貫通タンパク質176Aからなる群より選択される膜タンパク質をコードする遺伝子；
B細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1a、B細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1b及びB細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1dからなる群より選択されるシグナル分子をコードする遺伝子；
マトリックスメタロペプチダーゼ13である酵素をコードする遺伝子；
メタロプロテイナーゼ組織インヒビター1である酵素インヒビターをコードする遺伝子、及び
富システイン分泌タンパク質LCCLドメイン含有2である分泌タンパク質をコードする遺伝子
からなる群より選択される、請求項１に記載のTh17細胞検出用ポリヌクレオチドマーカー。
【請求項４】
請求項１に記載の遺伝子によりコードされるタンパク質からなる、Th17細胞検出用タンパク質マーカー。
【請求項５】
細胞を含む試料中で、請求項１に記載のTh17細胞検出用ポリヌクレオチドマーカー又は請求項４に記載のTh17細胞検出用タンパク質マーカーの存在を検出することを含むことを特徴とする、Th17細胞を検出する方法。
【請求項６】
請求項１に記載のTh17細胞検出用ポリヌクレオチドマーカーと特異的にハイブリダイズするプローブを含むことを特徴とするDNAチップ又はマイクロアレイ。
【請求項７】
請求項１に記載のTh17細胞検出用ポリヌクレオチドマーカーを増幅するための核酸プライマー。
【請求項８】
請求項４に記載のTh17細胞検出用タンパク質マーカーと特異的に結合することを特徴とする抗体。
【請求項９】
請求項６に記載のDNAチップ若しくはマイクロアレイ、請求項７に記載の核酸プライマー又は請求項８に記載の抗体を含むことを特徴とするTh17細胞検出用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、IL-17産生ヘルパーT細胞（以下、「Th17細胞」という）を検出するためのマーカー及びTh17細胞を検出する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
慢性関節リウマチ（以下、「RA」という）は、関節炎を主な臨床症状とする全身性の炎症性自己免疫疾患である。RAは、関節の痛みのような自覚症状及び腫脹の程度、骨X線による知見などに基づく視覚的な手法によりその病勢が判断されているが、定量的な指標が確立されていない。よって、治療効果を継続的にモニターする定量的方法も確立されていないのが現状である。【０００３】
RAは、自己免疫疾患であるが、その原因はいまだに明らかになっていない。細菌感染などが引き金となり、免疫細胞群及びサイトカイン群の複雑なネットワークを介して関節組織の炎症が起きると考えられている。
免疫反応の中心を担うのは、ヘルパーT細胞群である。未熟なヘルパーT細胞（ナイーブT細胞）が抗原提示細胞から抗原を提示されると、ヘルパーT細胞に分化するが、このときに特定のサイトカインが存在することにより、ナイーブT細胞は４種類の細胞種に分化誘導される。4種類の細胞種とは、インターフェロン（IFN）-γを産生するヘルパーT細胞（Th1細胞）、インターロイキン（IL）-4を産生するヘルパーT細胞（Th2細胞）、IL-17を産生するヘルパーT細胞（Th17細胞）及び免疫抑制効果を有する制御性T細胞（Treg細胞）である。【０００４】
これらのヘルパーT細胞のうち、Th17細胞がRAの発症に関与し得ることが明らかになっている。【０００５】
IL-17のレベルがRA患者の関節滑液中において変形関節炎の患者の関節滑液中よりも有意に高いことや、RA患者由来の滑液組織中のT細胞にIL-17陽性細胞が存在することから、IL-17がRAの病態形成、特に関節・骨破壊に深く関与することが示されている（特開２０００−１８６０４６号公報（特許文献１））。特許文献１では、IL-17をRAの診断マーカーとして用いることができると記載している。【０００６】
特開２００７−５０６１００号公報（特許文献２）には、RA患者からの末梢血血清中のサイトカインを分析したところ、IFN-γ、IL-1β、TNF-α、G-CSF、GM-CSF、IL-6、IL-4、IL-10、IL-13、IL-5及びIL-7がRA患者において有意に高い値であり、IL-2、CXCL8/IL-8、IL-12及びCCL2/MCP-1は高い値ではなかったことが記載されている。【０００７】
また、Ivanovら（Cell, 2006, 126, p.1121-1133：非特許文献１）、Stumhoferら（Nature Immunology, 2006, vol.7, p.937-945：非特許文献２）、Wilsonら（Nature Immunology, 2007, vol.8, p.950-957：非特許文献３）などの研究により、Th17細胞について、
以下のことが明らかになっている。
- RORγtとよばれる核内受容体がTh17細胞の分化に重要な役割を果たす。
- IL-6、IL-23及びTGF-βにより、未熟なヘルパーT細胞（ナイーブT細胞）からTh17細胞への分化が誘導される。
- IL-17A、IL-17F、IL-6、IL-22、IL-26、TNF、IFN-γ、CCL20を発現する。
- Th17細胞の表面には、IL-23受容体やIL-12受容体βが存在する。【０００８】
非特許文献１〜３では、IL-17に特異的な抗体を用いたELISA（酵素結合免疫吸着法）を用いてIL-17の量を測定している。
しかし、IL-17の量を測定するだけでなく、Th17細胞自体を検出する方法を確立することにより、自己免疫疾患、好ましくはRA、潰瘍性大腸炎、クローン病及び多発性硬化症（脳炎及び／又は脊髄炎）、特に好ましくはRA及び多発性硬化症（脳炎）とTh17細胞との関連をより深く理解することができると考えられる。
【特許文献１】特開２０００−１８６０４６号公報
【特許文献２】特開２００７−５０６１００号公報
【非特許文献１】Ivanovら, "The Orphan Nuclear Receptor RORγt Directs the Differentiation Program of Proinflammatory IL-17+ T Helper Cells", Cell, 2006, 126, p.1121-1133
【非特許文献２】Stumhoferら, "Interleukin 27 negatively regulates the development of interleukin 17-producing T helper cells during chronic inflammation of the central nervous system" Nature Immunology, 2006, vol.7, p.937-945
【非特許文献３】Wilsonら, "Development, cytokine profile and function of human interleukin 17-producing helper T cells" Nature Immunology, 2007, vol.8, p.950-957
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明者らは、Th17細胞を特異的に検出することを可能にする分子マーカー、特にTh17細胞が関連すると考えられている疾患において高発現する分子マーカーを見出すことを目的とした。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らはまず、マウス脾臓から単離したナイーブT細胞を分化させて得られたTh17細胞において特異的に発現する遺伝子及び発現遺伝子配列断片（EST）を同定した。次に、本発明者らは、このようにTh17細胞を用いて同定した遺伝子及び発現遺伝子配列断片（EST）から、Th17細胞が関連すると考えられている疾患のモデルマウス（関節炎モデル及び／又は脳脊髄炎モデル）を用いて、該疾患モデルにおいて高発現する遺伝子及びESTを抽出し、本発明を完成した。【００１１】
よって、本発明は、
インターロイキン17A（Interleukin 17A）、インターロイキン22（Interleukin 22）及びインターロイキンtifb（Interleukin tifb）からなる群より選択されるサイトカインをコードする遺伝子；
ケモカインCCモチーフリガンド20（Chemokine, CC motif, ligand 20）であるケモカインをコードする遺伝子；
インターロイキン17受容体E（Interleukin 17 receptor E）、インターロイキン1受容体1（Interleukin 1 receptor 1）、インターロイキン27受容体A（Interleukin 27receptor A）、Gタンパク質共役受容体15（G protein-coupled receptor 15）、スタビリン1（Stabilin 1）、ポドプラニン（Podoplanin）、膜貫通及び免疫グロブリンドメイン含有1（Transmembrane and immunoglobulin domain containing 1）、メラノコルチン2受容体（Melanocortin 2 receptor）、膜貫通タンパク質176A（Transmembrane protein 176A）、プロゲスチン及びアディポQ受容体ファミリーメンバーVIII （Progestin and adipoQ receptor family member VIII）、クローディンドメイン含有1（Claudin domain containing 1）、ELVOLファミリーメンバー７（ELOVL family member 7）、リンパ球抗原6複合体K遺伝子座（Lymphocyte antigen 6 complex, locus K）、Gタンパク質共役受容体183（エプスタイン-バーウィルス誘導遺伝子2）（G protein-coupled receptor 183（Epstein-Barr virus induced gene 2））、キラー細胞レクチン様受容体サブファミリーBメンバー1F（Killer cell lectin-like receptor subfamily B member 1F）、トランスフェリン受容体2（Transferrin receptor 2）、ニューロン特異的遺伝子ファミリーメンバー2（Neuron specific gene family member 2）、膜貫通タンパク質176B（Transmembrane protein 176B）、アミロイドベータ（A4）前駆体様タンパク質2（Amyloid beta (A4) precursor-like protein 2）、免疫グロブリン連結鎖（Immunoglobulin joining chain）、Ig様ドメイン接着分子2（Adhesion molecule with Ig like domain 2）、Fc受容体IgG低アフィニティーIIb（Fc receptor, IgG, low affinity IIb）、カンナビノイド受容体2（Cannabinoid receptor 2）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー14（Tumor necrosis factor receptor superfamily, member 14）、アクアポリン3（Aquaporin 3）、C1q及び腫瘍壊死因子関連タンパク質3（C1q and tumor necrosis factor related protein 3）、シナプトタグミンXI（Synaptotagmin XI）、カリウムチャネル四量体化ドメイン含有12（Potassium channel tetramerisation domain containing 12）、アポリポタンパク質L7b（発現遺伝子配列BC085284）（Apolipoprotein L 7b（expressed sequence BC085284））、アポリポタンパク質L7e（アポリポタンパク質L 3類似体）（Apolipoprotein L7e（similar to apolipoprotein L, 3））、溶質キャリアーファミリー34メンバー3（Solute carrier family 34 (member 3)）、レチノール結合タンパク質1細胞性（Retinol binding protein 1, cellular）、細胞性レチノール結合タンパク質I類似体（similar to cellular retinol binding protein I）、カリウム大伝導性カルシウム活性化チャネル（サブファミリーMベータメンバー4）（Potassium large conductance calcium-activated channel (subfamily M, beta member 4)）、カルシウム活性化カリウムチャネルベータ4サブユニット類似体（similar to calcium activated potassium channel beta 4 subunit）、SYS1ゴルジ局在膜内在タンパク質ホモログ（RIKEN cDNA 2610042O14遺伝子）（SYS1 Golgi-localized integral membrane protein homolog（RIKEN cDNA 2610042O14 gene））、及び溶質キャリアーファミリー38メンバー6（発現遺伝子配列AW322671）（Solute carrier family 38, member 6（expressed sequence AW322671））からなる群より選択される膜タンパク質をコードする遺伝子；【００１２】
POUドメインクラス2関連因子1（POU domain, class 2, associating factor 1）、T細胞特異的転写因子7（Transcription factor 7 (T-cell specific)）、WWドメイン含有転写調節体1（WW domain containing transcription regulator 1）、毛髪鼻指節骨症候群I（Trichorhinophalangeal syndrome I）、中心体タンパク質290（Centrosomal protein 290）、及びアタキシン2結合タンパク質1（Ataxin 2 binding protein 1）からなる群より選択される転写・翻訳因子をコードする遺伝子；
糖尿病付随性Ras関連体（Ras-related associated with diabetes）、乳癌抗エストロゲン抵抗3（Breast cancer anti-estrogen resistance 3）、Rab38（RAS癌遺伝子ファミリーのメンバー）（Rab38 (member of RAS oncogene family）)、センタウリンガンマ2（Centaurin, gamma 2）、SH3及びPXドメイン2B（SH3 and PX domains 2B）、FERM, RhoGEF及びプレクストリンドメインタンパク質2（FERM, RhoGEF and pleckstrin domain protein 2）、不能ホモログ2（Disabled homolog 2）、B細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1a（B-cell leukemia/lymphoma 2 related protein A1a）、B細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1b（B-cell leukemia/lymphoma 2 related protein A1b）及びB細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1d（B-cell leukemia/lymphoma 2 related protein A1d）からなる群より選択されるシグナル分子をコードする遺伝子；
形質転換増殖因子ベータ誘導（Transforming growth factor beta induced）である接着分子をコードする遺伝子；【００１３】
シトクロムP450ファミリー1サブファミリーbポリペプチド1（Cytochrome P450, family 1, subfamily b, polypeptide 1）、EHドメイン含有3（EH-domain containing 3）、マトリックスメタロペプチダーゼ13（Matrix metallopeptidase 13）、カルボキシペプチダーゼD（Carboxypeptidase D）、炭酸脱水酵素13（Carbonic anhydrase 13）、グルコサミニル（N-アセチル）トランスフェラーゼ2 I分枝酵素（Glucosaminyl (N-acetyl) transferase 2, I-branching enzyme）、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA2（UDP glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide A2）、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA6A （UDP glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide A6A）、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA6B（UDP glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide A6B）、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA10（UDP glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide A10）、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA7C（UDP glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide A7C）、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA5（UDP glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide A5）、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA9（UDP glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide A9）、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA1（UDP glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide A1）、UDPグリコシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA8類似体（Similar to UDP glycosyltransferase 1 family, polypeptide A8）、UDP-GlcNAc：ベータGalベータ-1,3-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ8（UDP-GlcNAc:betaGal beta-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase 8）、骨形成タンパク質1（Bone morphogenetic protein 1）、ウリジンホスホリラーゼ1（Uridine phosphorylase 1）、ミオシンIII B（Myosin III B）、ベータサイトAPP切断酵素2（beta-site APP-cleaving enzyme 2）、マスト細胞プロテアーゼ1（Mast cell protease 1）、COX10ホモログ,シトクロムc酸化酵素集合タンパク質,ヘムA：ファルネシルトランスフェラーゼ（COX10 homolog, cytochrome c oxidase assembly protein, heme A: farnesyltransferase）、ダイナミン3（Dynamin 3）、前立腺酸性ホスファターゼ（Acid phosphatase, prostate）、cGMP特異的ホスホジエステラーゼ5A（Phosphodiesterase 5A  (cGMP-specific）)、パタチン様ホスホリパーゼドメイン含有7（Patatin-like phospholipase domain containing 7）、RIKEN cDNA 1300007F04遺伝子（RIKEN cDNA 1300007F04 gene）、RIKEN cDNA 1810062O18遺伝子（RIKEN cDNA 1810062O18 gene）、ホスファターゼオーファン1（発現遺伝子配列AI447357、ABI 遺伝子ファミリーメンバー3）（Phosphatase, orphan 1（expressed sequence AI447357、ABI gene family, member 3））及び多発性外骨腫1（Exostoses (multiple) 1）からなる群より選択される酵素をコードする遺伝子；【００１４】
セリン（又はシステイン）ペプチダーゼインヒビタークレードBメンバー1a（Serine (or cysteine) peptidase inhibitor, clade B, member 1a）、タンパク質ホスファターゼ1調節（インヒビター）サブユニット14c（Protein phosphatase 1, regulatory (inhibitor) subunit 14c）、精巣特異的cAMP依存性タンパク質キナーゼインヒビターベータ（Protein kinase inhibitor beta (cAMP dependent, testis specific）)、メタロプロテイナーゼ組織インヒビター1（Tissue inhibitor of metalloproteinase 1）、セリン（又はシステイン）ペプチダーゼインヒビタークレードIメンバー1（Serine (or cysteine) peptidase inhibitor, clade I, member 1）、アミロイドベータ（A4）前駆体タンパク質（Amyloid beta (A4) precursor protein）及びWAP四ジスルフィドコアドメイン2（WAP four-disulfide core domain 2）からなる群より選択される酵素インヒビターをコードする遺伝子；
富システイン分泌タンパク質LCCLドメイン含有2（Cysteine-rich secretory protein LCCL domain containing 2）である分泌タンパク質をコードする遺伝子；【００１５】
プラスチン1（発現遺伝子配列AI427122）（Plastin 1（expressed sequence AI427122））、免疫グロブリン重鎖複合体（immunoglobulin heavy chain complex）、免疫グロブリン重鎖1a（血清IgG2a）（immunoglobulin heavy chain 1a (serum IgG2a)）、 免疫グロブリン重鎖2（血清IgA）（immunoglobulin heavy chain 2(serum IgA)）、免疫グロブリン重鎖Ia（immunoglobulin heavy chain Ia）、免疫グロブリン重鎖（J558ファミリー）（immunoglobulin heavy chain (J558 family)）、免疫グロブリン重鎖（ガンマポリペプチド）（immunoglobulin heavy chain (gamma polypeptide)）、免疫グロブリンmu鎖類似体（similar to immunoglobulin mu-chain）、免疫グロブリン重鎖V領域3前駆体類似体（similar to immunoglobulin heavy chain V region3 precursor）、免疫グロブリン重鎖可変領域（immunoglobulin heavy chain variable region）、免疫グロブリン重鎖V領域102前駆体類似体（similar to immunoglobulin heavy chain V region 102 precursor）、免疫グロブリン重鎖3（immunoglobulin heavy chain 3）、ネブレッテ（Nebulette）、ルミカン（Lumican）、殺菌性／透過性増加タンパク質様2（Bactericidal/permeability-increasing protein-like 2）、ケルヒ様8（Kelch-like 8）、3連モチーフタンパク質2（Tripartite motif protein 2）、PDZ及びLIMドメイン5（PDZ and LIM domain 5）、ケラチン86（Keratin 86）、キネシンファミリーメンバー3C（Kinesin family member 3C）、キネシンファミリーメンバー1B（Kinesin family member 1B）及びキネシンファミリーメンバー5C（Kinesin family member 5C）からなる群より選択される構造タンパク質をコードする遺伝子；【００１６】
中脚上性櫛様4（Sex comb on midleg-like 4）、高可動性グループATフック2偽遺伝子1（High mobility group AT-hook 2, pseudogene 1）、RIKEN cDNA 2310007L24遺伝子（RIKEN cDNA 2310007L24 gene）、RIKEN cDNA 2310002J15遺伝子（RIKEN cDNA 2310002J15 gene）、配列101類似ファミリーメンバーB（RIKEN cDNA 1500005K14遺伝子）（Family with sequence similarity 101, member B（RIKEN cDNA 1500005K14 gene））、発現遺伝子配列AI646023（expressed sequence AI646023）及びGRAMドメイン含有3（GRAM domain containing 3）から選択される遺伝子、並びに
TOX高可動性グループボックスファミリーメンバー2（発現遺伝子配列AI851523）（TOX high mobility group box family member 2（expressed sequence AI851523））、RIKEN cDNA 6030439D06遺伝子（RIKEN cDNA 6030439D06 gene）、RIKEN cDNA 9030418K01遺伝子（RIKEN cDNA 9030418K01 gene）、発現遺伝子配列AU015680（expressed sequence AU015680）、配列番号１の塩基配列を有するポリヌクレオチド、及び配列番号２の塩基配列を有するポリヌクレオチドから選択される発現遺伝子配列断片（EST）
からなる群より選択されるポリヌクレオチドであるTh17細胞検出用ポリヌクレオチドマーカーである。【００１７】
本発明は、好ましくは、
インターロイキン17A、インターロイキン22、及びインターロイキンtifbからなる群より選択されるサイトカインをコードする遺伝子；
インターロイキン1受容体1、インターロイキン27受容体A、Gタンパク質共役受容体15、スタビリン1、アポリポタンパク質L7b（発現遺伝子配列BC085284）、アポリポタンパク質L7e（アポリポタンパク質L 3類似体）、C1q及び腫瘍壊死因子関連タンパク質3、カンナビノイド受容体2、Fc受容体IgG低アフィニティーIIb、Gタンパク質共役受容体183（エプスタイン-バーウィルス誘導遺伝子2）、レチノール結合タンパク質1細胞性、細胞性レチノール結合タンパク質I類似体、リンパ球抗原6複合体K遺伝子座、溶質キャリアーファミリー38メンバー6（発現遺伝子配列AW322671）、シナプトタグミンXI、膜貫通タンパク質176A、膜貫通タンパク質176B、及び腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー14からなる群より選択される膜タンパク質をコードする遺伝子；【００１８】
T細胞特異的転写因子7及びWWドメイン含有転写調節体1から選択される転写・翻訳因子をコードする遺伝子；
B細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1a、B細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1b及びB細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1d、不能ホモログ2、糖尿病付随性Ras関連体、及びSH3及びPXドメイン2Bからなる群より選択されるシグナル分子をコードする遺伝子；
形質転換増殖因子ベータ誘導である接着分子をコードする遺伝子；【００１９】
前立腺酸性ホスファターゼ、UDP-GlcNAc：ベータGalベータ-1,3-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ8、骨形成タンパク質1、炭酸脱水酵素13、シトクロムP450ファミリー1サブファミリーbポリペプチド1、グルコサミニル（N-アセチル）トランスフェラーゼ2 I分枝酵素、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA2、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA6A、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA6B、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA10、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA7C、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA5、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA9、UDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA1、UDPグリコシルトランスフェラーゼ1ファミリーポリペプチドA8類似体、マトリックスメタロペプチダーゼ13、cGMP特異的ホスホジエステラーゼ5A、ホスファターゼオーファン1（発現遺伝子配列AI447357、ABI 遺伝子ファミリーメンバー3）、及びウリジンホスホリラーゼ1からなる群より選択される酵素をコードする遺伝子；【００２０】
セリン（又はシステイン）ペプチダーゼインヒビタークレードBメンバー1a及びメタロプロテイナーゼ組織インヒビター1から選択される酵素インヒビターをコードする遺伝子；
富システイン分泌タンパク質LCCLドメイン含有2である分泌タンパク質をコードする遺伝子；
キネシンファミリーメンバー5C及びルミカンから選択される構造タンパク質をコードする遺伝子、並びに
RIKEN cDNA 6030439D06遺伝子及びRIKEN cDNA 9030418K01遺伝子から選択される発現遺伝子配列断片（EST）
からなる群より選択されるポリヌクレオチドであるTh17細胞検出用ポリヌクレオチドマーカーである。【００２１】
本発明は、より好ましくは、
インターロイキン17Aであるサイトカインをコードする遺伝子；
インターロイキン1受容体1、アポリポタンパク質L7b（発現遺伝子配列BC085284）、アポリポタンパク質L7e（アポリポタンパク質L 3類似体）、カンナビノイド受容体2、Fc受容体IgG低アフィニティーIIb、溶質キャリアーファミリー38メンバー6（発現遺伝子配列AW322671）、及び膜貫通タンパク質176Aからなる群より選択される膜タンパク質をコードする遺伝子；
B細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1a、B細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1b及びB細胞白血病／リンパ腫2関連タンパク質A1dからなる群より選択されるシグナル分子をコードする遺伝子；
マトリックスメタロペプチダーゼ13である酵素をコードする遺伝子；
メタロプロテイナーゼ組織インヒビター1である酵素インヒビターをコードする遺伝子、及び
富システイン分泌タンパク質LCCLドメイン含有2である分泌タンパク質をコードする遺伝子
からなる群より選択されるポリヌクレオチドであるTh17細胞検出用ポリヌクレオチドマーカーである。【００２２】
本発明は、上記の遺伝子によりコードされるタンパク質からなるTh17細胞検出用タンパク質マーカーも提供する。
さらに、本発明は、細胞を含む試料中で、上記のTh17細胞検出用ポリヌクレオチドマーカー又はTh17細胞検出用タンパク質マーカーの存在を検出することを含む、Th17細胞を検出する方法を提供する。
また、本発明は、Th17細胞検出用ポリヌクレオチドマーカーを検出するためのDNAチップ又はマイクロアレイ、プライマーを含むプローブ、及びTh17細胞検出用タンパク質マーカーを検出するための抗体、並びにこれらのうち少なくとも1つを含むTh17細胞検出用キットも提供する。
【発明の効果】
【００２３】
本発明のポリヌクレオチドマーカー又はタンパク質マーカーを検出することにより、Th17細胞を特異的に検出することができる。よって、本発明のマーカーを用いることにより、種々の細胞を含む試料からTh17細胞を単離できる。例えば、本発明のマーカーを用いることにより、患者から採取した組織などの細胞を含む試料においてTh17細胞を特異的に検出することができる。それゆえ、Th17細胞が関与すると考えられている疾患、例えば自己免疫疾患、好ましくはRA、潰瘍性大腸炎、クローン病及び多発性硬化症（脳炎及び／又は脊髄炎）、特に好ましくはRA及び多発性硬化症（脳炎）に該患者が罹患している可能性を検出することができると考えられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
本発明のTh17細胞検出用ポリヌクレオチドマーカーは、上記の遺伝子及びESTからなる群より選択されるポリヌクレオチド、その変異型及び断片から選択される。
上記のポリヌクレオチドマーカーは、ナイーブT細胞から分化する他のヘルパーT細胞（Th1、Th2及びTreg細胞）に比べてTh17細胞において特異的に存在することが見出されたポリヌクレオチド、その変異型又は断片である。上記のポリヌクレオチドマーカーは、好ましくは、上記の自己免疫疾患モデルマウスにおいて高発現することが見出されたポリヌクレオチド、その変異型又は断片である。上記のポリヌクレオチドマーカーは、より好ましくは、上記の自己免疫疾患モデルマウスにおいて、IL-17発現量又は病態と関連することが見出されたポリヌクレオチド、その変異型又は断片である。
ゆえに、該ポリヌクレオチドマーカーを検出することにより、Th17細胞をTh1、Th2及びTreg細胞と区別して特異的に検出すること、及びTh17細胞が関与すると考えられている疾患の生体における活動性指標の検討ができる。【００２５】
本明細書において、遺伝子とは、当該技術において一般的に用いられるものと同等の意味を有し、mRNAに転写されてタンパク質に翻訳されることとなるゲノム上の一部分のことである。【００２６】
本明細書において、発現遺伝子配列断片（EST）とは、当該技術において一般的に用いられるものと同等の意味を有し、ある遺伝子の一部分の配列であって、該遺伝子がmRNAに翻訳されていることの目印となる配列のことである。
また、シグナル分子とは、細胞膜、細胞質、核などに存在し、細胞内外からの刺激に応答して活性化される一連のシグナル伝達物質を意味する。接着分子とは、細胞膜表面に存在し、細胞外マトリックスや他の細胞膜表面の分子と結合し、物理的接着、シグナル伝達、細胞構造の変化などを惹起する分子群を意味する。構造タンパク質とは、主に細胞内に存在し、細胞形態の構築や維持、運動、シグナル分子の輸送などを行う分子群を意味する。【００２７】
本明細書において、あるポリヌクレオチドがTh17細胞において「特異的に発現する」との表現は、Th17細胞以外の細胞でのそのポリヌクレオチドの発現に比べて、Th17細胞におけるそのポリヌクレオチドの発現が有意に高いことを意味する。具体的には、Th17細胞におけるそのポリヌクレオチドの発現が、Th17細胞以外の細胞でのそのポリヌクレオチドの発現の約3倍以上であることを意味する。好ましくは、Th17細胞におけるそのポリヌクレオチドの発現が、Th17細胞以外のヘルパーT細胞（Th1細胞、Th2細胞及びTreg細胞）でのそのポリヌクレオチドの発現の約3倍以上である。【００２８】
本発明のポリヌクレオチドマーカーの塩基配列は、すでに公知である。これらは、例えばUnigene（米国国立医学図書館の国立生物情報センター（National Center for Biotechnology Information：NCBI）により提供されるデータベース）から得ることができる。本発明のポリヌクレオチドマーカーの塩基配列のUnigeneコードは、以下の表２に示す。【００２９】
本明細書において、ポリヌクレオチドの「変異型」とは、上記の遺伝子又はESTにより検出され得る遺伝子がコードするタンパク質の性質を変化させないような変異が導入されたポリヌクレオチドを意味する。このような変異は、上記の遺伝子又はESTの公知の塩基配列からの１若しくは複数のヌクレオチドの欠失又は置換、或いは１若しくは複数のヌクレオチドの付加を含む。【００３０】
上記の変異型は、上記の各遺伝子又はESTの公知の塩基配列と、通常は少なくとも80％、より好ましくは少なくとも85％、さらに好ましくは少なくとも約90％、特に好ましくは少なくとも95％の相同性を有する。
本明細書において、塩基配列及びアミノ酸配列の相同性は、BLASTN、BLASTP、BLASTX又はTBLASTN（例えばhttp://www.ncbi.nlm.nih.govから利用可能）を標準設定で用いて算出されるものを意味する。【００３１】
上記のポリヌクレオチドマーカーは、DNA又はRNAのいずれであってもよく、上記の遺伝子そのもの（DNA）、mRNA、cDNA又はcRNAのいずれであってもよい。【００３２】
本発明のポリヌクレオチドマーカーとしての遺伝子によりコードされるタンパク質を検出することにより、Th17細胞を検出することもできる。よって、上記の遺伝子によりコードされるタンパク質からなるTh17細胞検出用タンパク質マーカーも、本発明の一つである。【００３３】
このようなタンパク質マーカーの配列は、上記のUnigeneなどから得られたポリヌクレオチドマーカーの塩基配列に基づいて得ることができる。また、上記のようなNCBIにより提供されるデータベースから入手することもできる。本発明のタンパク質マーカーのアミノ酸配列についてのNCBIのコード番号は、以下の表２に示す。【００３４】
上記のTh17細胞検出用タンパク質マーカーは、上記の遺伝子によりコードされるタンパク質、その機能的に同等な変異型及びそれらの断片から選択されるものであってよい。
上記のタンパク質の機能的に同等な変異型とは、上記のタンパク質の機能を変化させないような変異が導入されたタンパク質を意味する。このような変異は、上記の公知のタンパク質のアミノ酸配列からの１若しくは複数のアミノ酸の欠失又は置換、或いは１若しくは複数のアミノ酸の付加を含む。
上記のタンパク質の機能的に同等な変異型は、上記の各タンパク質の公知のアミノ酸配列と、通常は少なくとも80％、より好ましくは少なくとも85％、さらに好ましくは少なくとも約90％、特に好ましくは少なくとも95％の相同性を有する。【００３５】
上記のポリヌクレオチドマーカーに特異的にハイブリダイズできる分子は、上記のマーカーを検出するために用いることができるので、Th17細胞検出用プローブとして有用である。該プローブは、上記のポリヌクレオチドマーカーに特異的にハイブリダイズできるDNA、RNAなどの核酸プローブ、ペプチドプローブのいずれであってもよい。Th17細胞検出用プローブとしては、特に、ポリヌクレオチドマーカーを検出するための核酸プローブ、特にDNAプローブが好ましい。【００３６】
本明細書において、「特異的にハイブリダイズできる」とは、ストリンジェントな条件下で標的核酸分子（上記のポリヌクレオチドマーカー）にハイブリダイズできることを意味する。
本明細書において、ストリンジェントな条件とは、Th17細胞検出用プローブが標的ポリヌクレオチドマーカーに、該標的ポリヌクレオチドマーカー以外のポリヌクレオチドよりも検出可能に大きい程度（例えばバックグラウンドの少なくとも2倍を超える）でハイブリダイズできる条件である。なおストリンジェントな条件は、通常、配列依存性であり、そして種々の環境において異なる。一般的に、ストリンジェントな条件は、規定のイオン強度およびｐＨでの特定の配列の熱的融点（thermal melting point）よりも、約5℃低くなるように選択される。このTmは、（規定されたイオン強度、pHおよび核酸組成の下で）上記の標的配列に相補的なプローブの50%が平衡してハイブリダイズする温度である。【００３７】
このような条件は、従来公知のポリヌクレオチド同士のハイブリダイゼーション法、例えばPCR法、マイクロアレイ法、サザンブロット法などにおいてポリヌクレオチド同士のハイブリダイゼーションに用いられる条件であってよい。具体的には、pH 7.0〜9.0で塩濃度が約1.5 M Naイオンより低い、より具体的には約0.01〜1.0 M Naイオン濃度(又は他の塩)であり、少なくとも約30℃の条件が挙げられる。より具体的には、例えば、マイクロアレイ法におけるストリンジェントな条件は、37℃で50%ホルムアミド、1 M NaCl、1% SDS中でのハイブリダイゼーション、及び60〜65℃での0.1×SSC中での洗浄を含む。また、ＰＣＲ法におけるストリンジェントな条件は、pH7〜9、0.01〜0.1 MのTris HCl、0.05〜0.15 M Kイオン濃度（又は他の塩）、少なくとも約55℃の条件が挙げられる。【００３８】
上記のTh17細胞検出用核酸プローブの配列は、当該技術常識及び上記のポリヌクレオチドマーカーの配列に基づいて、上記のポリヌクレオチドマーカーに特異的にハイブリダイズできるように、当業者が適宜決定できる。
上記のTh17細胞検出用核酸プローブは、例えば、一般に利用可能なプライマー設計ソフトウェア（例えばPrimer3 (http://frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3.cgiから利用可能)やDNASIS Pro (日立ソフトウェアエンジニアリング株式会社)）を用いて決定できる。【００３９】
上記のTh17細胞検出用核酸プローブは、当該技術において公知のポリヌクレオチドの合成方法により作製できる。【００４０】
上記のTh17細胞検出用核酸プローブは、当該技術において通常用いられる標識物質により標識されていてもよい。標識されたTh17細胞検出用核酸プローブを用いることにより、Th17細胞検出用ポリヌクレオチドマーカーの検出、すなわちTh17細胞の検出を簡便に行うことができる。
上記の標識物質は、32Ｐのような放射性同位体、フルオレセインのような蛍光物質、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼのような酵素、ビオチンなどの当該技術において通常用いられる標識物質であり得る。【００４１】
上記のTh17細胞検出用核酸プローブは、1種のみを用いるか、又は複数種を組み合わせて用いることにより、Th17細胞を特異的に検出できる。例えば、当該技術において公知の方法を用いて該プローブ1種以上を基板上に固定化することにより、Th17細胞検出用ポリヌクレオチドマーカーを検出するためのDNAチップ又はマイクロアレイを作製することができる。
上記のTh17細胞検出用核酸プローブは、例えば、PCR法により上記のポリヌクレオチドマーカーを増幅するための2種以上のプライマーのセットであり得る。【００４２】
上記のタンパク質マーカーに特異的に結合できる分子は、上記のマーカーを検出するために用いることができるので、Th17細胞を検出するために有用である。このような分子は、タンパク質マーカーに特異的に結合できるDNA、RNAなどの核酸アプタマー、抗体などのいずれであってもよいが、より好ましくは抗体である。また、Th17細胞特異的マーカーが酵素の場合、該酵素に基質を作用させて発色、発光、蛍光などを生じさせることにより、検出することができる。【００４３】
上記のTh17細胞検出用抗体は、例えば次のような従来公知の手順により作製できる。上記のポリヌクレオチドマーカーの遺伝子の塩基配列又はタンパク質マーカーのアミノ酸配列に基づいて、タンパク質マーカーのアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするDNA分子を適切な発現ベクターに導入する。得られた発現ベクターを適切な宿主細胞に導入し、得られた形質転換細胞を培養して、目的のタンパク質を得る。得られたタンパク質を精製して免疫原とし、免疫原と所望によりアジュバントとを用いて、適切な哺乳動物、例えばラット、マウスなどを免疫する。免疫された動物の脾臓細胞などから、目的の免疫原に対する抗体を産生する抗体産生細胞をスクリーニングにより選択する。得られた抗体産生細胞を、ミエローマ細胞と融合させてハイブリドーマを得て、これをスクリーニングすることにより、上記の遺伝子によりコードされるタンパク質に特異的結合性を有する抗体を産生する抗体産生ハイブリドーマを得ることができる。得られた抗体産生ハイブリドーマを培養することにより、目的の抗体を得ることができる。【００４４】
上記のTh17細胞を検出するために用いることができる核酸アプタマーは、例えば次のような従来公知の手順により作製できる。ランダムな核酸の塩基配列を有する核酸ライブラリーを公知の手法により作成し、試験管内進化法（SELEX法）などにより標的のタンパク質（上記のタンパク質マーカー）に特異的に結合できるアプタマーを選択することができる。【００４５】
上記のTh17細胞検出用タンパク質マーカーに特異的に結合できる分子は、当該技術において通常用いられる標識物質により標識されていてもよい。標識されたTh17細胞検出用抗体を用いることにより、Th17細胞検出用タンパク質マーカーの検出、すなわちTh17細胞の検出を簡便に行うことができる。
上記の標識物質は、32Ｐのような放射性同位体、フルオレセインのような蛍光物質、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼのような酵素、ビオチンなどの当該技術において通常用いられる標識物質であり得る。【００４６】
細胞を含む試料中で、上記のTh17細胞検出用ポリヌクレオチドマーカー又はTh17細胞検出用タンパク質マーカーの存在を検出することによりTh17細胞を検出する方法も、本発明の一つである。
本発明の方法において、細胞を含む試料としては、哺乳動物から採取した生体試料又は人工的に培養した細胞を含む試料が挙げられる。生体試料としては、血液、組織、関節液、脳脊髄液、胸水、腹水などが挙げられる。【００４７】
上記のポリヌクレオチドマーカーの存在を検出する方法のある実施形態について説明する。  まず、細胞を含む試料から、フェノール抽出及びエタノール沈殿、市販のDNA抽出キットなどを用いる当該技術において公知の方法により核酸（DNA又はRNA）を抽出する。
次いで、得られた核酸試料中の上記のポリヌクレオチドマーカーの存在を検出する。この検出においては、上記のTh17細胞検出用核酸プローブを用いることが好ましい。
上記のポリヌクレオチドマーカーは、PCR法、RT-PCR法、リアルタイムPCR法、LAMP（Loop-mediated isothermal amplification）法のような核酸増幅法、サザンハイブリダイゼーション、ノザンハイブリダイゼーション、FISH（蛍光in situハイブリダイゼーション）のようなハイブリダイゼーション法、DNAチップ又はマイクロアレイ法などの当該技術において公知の方法により検出できる。これらの方法を、上記のストリンジェントな条件下で行い、上記のTh17細胞検出用核酸プローブがハイブリッドを形成したことを、上記の標識物質を検出することなどにより検出して、ポリヌクレオチドマーカーの存在を検出できる。【００４８】
次に、上記のTh17細胞検出用タンパク質マーカーの存在を検出する方法のある実施形態について説明する。例えば、検出対象であるタンパク質マーカーが細胞内部に存在するタンパク質である場合、当該技術において公知の方法を用いて、細胞からタンパク質を抽出する。細胞からのタンパク質の抽出は、超音波による細胞の破砕、細胞可溶化液を用いる可溶化などの公知の方法により行うことができる。そして、タンパク質マーカーに特異的に結合する分子を用いて、得られたタンパク質試料中の上記のタンパク質マーカーを検出することができる。具体的には、タンパク質マーカーは、酵素結合免疫吸着法（ELISA）、ウェスタンブロッティング法などの当該技術において公知の方法により検出できる。検出において、タンパク質マーカーに特異的に結合する分子は、上記のTh17細胞検出用抗体を用いることが好ましい。【００４９】
例えば、検出対象であるタンパク質マーカーが分泌タンパク質である場合、タンパク質マーカーに特異的に結合する分子を用いて、上記細胞を含む試料中に分泌されたタンパク質マーカーを検出することができる。また、上記細胞を含む試料から細胞（リンパ球）を採取し、抗CD3抗体、抗CD28抗体、コンカナバリンA、PHA（フィトヘマグルチニン）、PMA（ホルボールミリステートアセテート）、イオノマイシンなどを用いて、採取した細胞を刺激する。そして、タンパク質マーカーに特異的に結合する分子を用いて、分泌されたタンパク質マーカーを検出することができる。具体的には、タンパク質マーカーは、ELISA、ウェスタンブロッティング法などの当該技術において公知の方法により検出できる。検出において、タンパク質マーカーに特異的に結合する分子は、上記のTh17細胞検出用抗体を用いることが好ましい。【００５０】
例えば、検出対象であるタンパク質マーカーが細胞の表面に存在するタンパク質である場合、タンパク質マーカーに特異的に結合する分子を用いて、上記細胞を含む試料中の細胞の表面に存在するタンパク質マーカーを検出することができる。また、上記細胞を含む試料から細胞の膜画分を採取し、タンパク質マーカーに特異的に結合する分子を用いて、得られた膜画分中の上記のタンパク質マーカーを検出することができる。具体的には、酵素結合免疫吸着法（ELISA）、ウェスタンブロッティング法などの当該技術において公知の方法により検出できる。また、検出対象であるタンパク質マーカーが細胞の表面に存在するタンパク質である場合、フローサイトメトリ（FCM）に基づく方法により検出することもできる。検出において、タンパク質マーカーに特異的に結合する分子は、上記のTh17細胞検出用抗体を用いることが好ましい。【００５１】
例えば、FCMによりタンパク質マーカーを検出する場合、次のような手順で検出を行うことができる。
まず、細胞を含む試料を、適切な標識物質で標識された上記のTh17細胞検出用抗体と接触させる。存在するのであればTh17細胞は、この標識された抗体と細胞表面で結合する。よって、標識物質と結合した細胞を含む試料をフローサイトメータに通すことにより、Th17細胞を検出できる。また、所望により標識物質と結合したTh17細胞を、セルソーターを用いて弁別・分取することもできる。
このようなFCMの方法は、当業者に公知であり、反応の条件は当業者により適宜決定される。
【実施例】
【００５２】
本発明を、実施例により詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。【００５３】
実施例１：マウス由来培養Th17細胞における高発現遺伝子の解析
１．マウス脾臓からのナイーブT細胞の単離
BALB/cマウス脾臓を摘出し、脾臓細胞を含む試料を得た。塩化アンモニウムを用いて試料中の赤血球を溶血した後、磁気ビーズ（Polyscience社製）を用いて試料からCD8、B細胞、単球、マクロファージ、顆粒球及び赤芽球の細胞分画を除去して、CD4陽性（CD4+）T細胞を粗精製した。得られたCD4+T細胞から、フローサイトメータを用いたソーティングによりナイーブT細胞の画分（CD4+/CD25neg/CD44low/CD62high）を純化した。同様にして、C57/BL6マウスの脾臓細胞からナイーブT細胞を純化した。【００５４】
２．ナイーブT細胞からTh1、Th2、Treg、Th17細胞への分化培養
上記の１．で得られたBALB/cマウス由来ナイーブT細胞を、抗CD3抗体をコーティングした24ウェルプレートに、0.5〜2.0×106細胞／2 ml／ウェルの細胞密度で播種した。表１に示す各サイトカイン及び抗体、並びに抗CD28抗体を添加したT細胞培地（PRMI1640、10%ウシ胎児血清（FBS）、10 mM HEPES、1 mMピルビン酸ナトリウム、2 mM L-グルタミン酸、50μM 2-メルカプトエタノール、100 U/mlペニシリン、100 mg/mlストレプトマイシン）中で、細胞を37℃、5% CO2のインキュベータ内で培養した。培養開始から３日後に表１のサイトカイン及び抗体を培地に添加し、さらに２〜１１日間培養した。このようにして、BALB/cマウス由来ナイーブT細胞からTh1、Th2、Treg、Th17細胞への分化を誘導した。また、同様にして、上記の１．で得られたC57/BL6マウス由来ナイーブT細胞からTh1、Th2、Treg、Th17細胞への分化を誘導した。【００５５】
【表１】
2009107785.tif 000002
【００５６】
３．フローサイトメータによる細胞分化の確認
２．のようにして分化培養した細胞（2.5×105細胞）を含む溶液に、ホルボールミリステートアセテート（PMA；50 ng/ml）及びイオノマイシン（1μM）を加えて細胞を刺激した。４時間後にブレフェルディンA（10μg/ml）を添加してさらに２時間培養した。培養終了後、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（PBS）で洗浄し、4%パラホルムアルデヒドで固定した。固定後、サポニン緩衝液（0.5%サポニン、0.5% BSA、1 mMアジ化ナトリウム（PBS中））で細胞を処理して細胞膜の透過性を亢進させた。その後、細胞に抗IFN-γ、抗IL-4及び抗IL-17の各抗体を反応させた。反応後にサポニン緩衝液、及び0.5%ウシ血清アルブミン（BSA）含有PBSで洗浄し、FACS Canto II（BDバイオサイエンス社）を用いて解析して、Th1、Th2、Treg及びTh17の各細胞への分化を確認した。【００５７】
４．トータルRNAの調製
上記の２．で5日間培養したBALB/cマウス由来Th1、Th2、Treg及びTh17の各細胞をPBSで洗浄後、遠心してペレットにし、−80℃にて凍結保存した。RNeasy Plus Mini Kit（QIAGEN社）を用いてペレットからトータルRNAを調製し、解析まで−80℃にて保管した。同様にして、上記の２．で5日間培養したC57/BL6マウス由来Th1、Th2、Treg及びTh17の各細胞から、トータルRNAを調製した。【００５８】
５．マイクロアレイ発現解析
One-Cycle Target Labeling and Control Reagents（Affymetrix）を用いて、上記の４．で調製したトータルRNA（1〜5μg）をcDNAに逆転写し、さらにビオチン化cRNAへの転写反応を行った。15μgのビオチン化cRNAをGeneChip Mouse Genome 430 2.0 Array（Affymetrix）に加え、GeneChip Hybridization Oven 640（Affymetrix）中で45℃、60 rpmの条件下でハイブリダイゼーションを16時間行った。ハイブリダイゼーション後、GeneChip Fluidic Station 450（Affymetrix）を用いて洗浄及び蛍光標識を行ったマイクロアレイ（DNAチップ）を、GeneChip Scanner 3000 7G（Affymetrix）を用いてスキャンし、蛍光強度のデータを取得した。【００５９】
６．マウスTh17細胞に特異的に発現する遺伝子の選択
上記の５．で得られた蛍光強度のデータに基づいて、発現解析ソフトウェアArray Assist（メディビック社）を用いてデータを標準化した。そして、各遺伝子の蛍光強度を、ハウスキーピング遺伝子のグリセルアルデヒド3リン酸脱水素酵素（GAPDH）の蛍光強度で除して、各遺伝子の相対蛍光強度を算出した。Th17細胞の各遺伝子の相対蛍光強度を、Th1、Th2及びTreg細胞のものと比較した。そして、BALB/cマウス及びC57/BL6マウスの少なくともいずれか一方において、Th17細胞における相対蛍光強度が、Th1、Th2又はTreg細胞のいずれからも3倍以上高い遺伝子を、Th17細胞に特異的に発現している遺伝子（Th17細胞検出用ポリヌクレオチドマーカー）として同定した。
得られた遺伝子を、以下の表２に示す。
なお、表２には、各遺伝子のAffymetrixのProbe Set ID、Probe Set IDに対応するUnigeneコード、Probe Set IDに対応する遺伝子タイトル、遺伝子がコードするタンパク質の機能を示す。また、表２には、BALB/cマウス又はC57/BL6マウスにおける、Th1、Th2及びTreg細胞での相対蛍光強度に対するTh17細胞での相対蛍光強度の比（それぞれTh17/Th1、Th17/Th2及びTh17/Treg）を示す。
さらに、表２には、各遺伝子がコードするタンパク質のアミノ酸配列を示すNCBIコードも合わせて記載する。【００６０】
【表２−１】
2009107785.tif 000003
【００６１】
【表２−２】
2009107785.tif 000004
【００６２】
【表２−３】
2009107785.tif 000005
【００６３】
【表２−４】
2009107785.tif 000006
【００６４】
【表２−５】
2009107785.tif 000007
【００６５】
なお、Th17細胞において特異的に発現していることがすでに知られている遺伝子RAR関連オーファン受容体ガンマ（RAR-related orphan receptor gamma）の相対蛍光強度の比を、表３に示す。【００６６】
【表３】
2009107785.tif 000008
【００６７】
これらの結果から、表２に示す各遺伝子が、従来Th17細胞において特異的に発現していることが知られている表３の遺伝子と同様に、Th17細胞において特異的に発現していることが示された。上記実験１．〜５．を4回繰り返したところ、Th17細胞における上記各遺伝子の相対蛍光強度は、Th1、Th2又はTreg細胞のいずれからも3倍以上高い結果となった。【００６８】
実施例２：疾患モデルマウスにおける高発現遺伝子の解析
１．疾患モデルマウスの作製
１）SKG関節炎モデルマウス（以下、「関節炎モデルマウス」という）の作製
以下の方法により関節炎モデルマウスを作製した。
a）菌体成分の調製及びマウスへの投与
アルカリ糞便菌（Alcaligenes faecalis）からのカードラン（curdlan）（SIGMA）をPBSに懸濁し、カードラン調製物（50 mg/ml）を得た（以下、菌体成分という）。該菌体成分を7〜8週齢のSKG関節炎自然発症マウス（メス）（Nature, vol 426, pp.454-460 (2003), 日本クレアから購入）に、1匹につき200μl腹腔内投与した。さらに、4週間後に該菌体成分をマウス1匹につき200μl腹腔内投与した。【００６９】
b）関節炎の重症度の判定
重症度を下記のスコアを用いて判定した。
スコア０：正常
スコア１：関節の軽度な炎症
スコア２：関節の軽度な炎症及び腫脹
スコア３：関節の中度な炎症及び腫脹
スコア４：関節の重度な炎症及び腫脹
スコア５：関節の重度な炎症、腫脹及び関節の変形
スコア６：関節の重度な炎症、腫脹、関節の変形、歩行困難及び衰弱【００７０】
上記基準に従って、解析に用いるマウスを選別した。前記菌体成分の投与後30日目以降に、関節炎症状が出現する。解析には、菌体成分投与後3週間にスコア0と判定された2個体、投与後8週間にスコア3と判定された2個体、投与後12週間にスコア5と判定された2個体（以下、「極期の関節炎モデルマウス」という）、投与後20週間にスコア6と判定された2個体、及び菌体成分未投与で20週間経過したスコア0と判定された2個体を使用した（計10個体）。なお、対照マウスとして、BALB/cマウス（オリエンタル酵母）を2個体用いた。【００７１】
２）実験的脳脊髄炎（experimental allergic encephalomyelitis：EAE）（急性型）モデルマウス（以下、「脳炎モデルマウス」という）の作製
以下の方法により脳炎モデルマウスを作製した。
a）抗原エマルジョンの作製及びマウスへの投与
不完全フロインド・アジュバント（Difco Laboratories）と結核菌体成分Mycobacterium Tuberculosis H37Ra（Difco Laboratories）を混合して、40mg/mlの完全フロインド・アジュバント(CFA)を作製した。PLP（139位〜151位）ペプチド（PLP；myelin proteolipid protein）（北海道システムサイエンスにペプチド合成委託、アミノ酸配列：HSLGKWLGHPDKF）(2 mg/ml、PBSに溶解)とCFAを等量混合し，ダブルハブニードル（テクノケミカル株式会社）を用いてシリンジを往復させて混和し、抗原エマルジョンを作製した。8〜10週齢のSJLマウス（メス）（日本チャールズリバー）の背部の毛をバリカンで剃り，該マウス腰部の正中線の左右2箇所ずつに、前記抗原エマルジョンを1ml シリンジで50μlずつ皮下注射した。さらに該注射の同日に、PBSに溶解した百日咳毒素Pertussis Toxin（List Biological Laboratories）（2μg/ml）200μlを尾静脈注射によって、該マウスに投与した。【００７２】
b）脳脊髄炎の重症度の判定
重症度を下記のスコアを用いて判定した。
スコア０：正常
スコア1：尻尾の完全麻痺
スコア2：後肢の部分的麻痺
スコア3：後肢の完全麻痺
スコア4：前肢の麻痺
スコア5：全身麻痺による瀕死状態又は死亡【００７３】
上記基準に従って、解析に用いるマウスを選別した。前記抗原エマルジョン投与後10〜14日目に脳脊髄炎症状が出現する。その後、投与後15〜20日目に症状が寛解して消失する。症状の極期の解析には、投与後14日目にスコア2以上と判定された5個体（以下、「極期の脳炎モデルマウス」という）を使用した。症状の寛解期の解析には、投与後18日目のスコア0の5個体（以下、「寛解期の脳炎モデルマウス」という）を使用した（計10個体）。また、脳炎モデルマウスに対する対照マウスとして、百日咳毒素のみを腹腔内投与したSJLマウスを5個体用いた。【００７４】
２．トータルRNAの調製
１）関節炎モデルマウスの組織からのトータルRNAの調製
関節炎モデルマウスの関節部位の皮膚をハサミで除き、足趾を切離して足関節部組織を摘出した。採取した足関節部組織を液体窒素内で凍結保存した。凍結した足関節部組織から（RNeasy Plus Mini kit（QIAGEN）及びQIAshredder（QIAGEN）を用いてトータルRNAを調製した。同様に、対照マウスのトータルRNAも調製した。【００７５】
２）脳炎モデルマウスの組織からのトータルRNAの調製
脳炎モデルマウスを解剖して頭部及び尾部を切り離し、脊柱を取り出した。該脊柱の尾椎の椎孔から注射器でPBSを注入し、その圧力により脊髄を摘出した。採取した脊髄を液体窒素内で凍結した。凍結した脊髄組織をホモジナイザ（アズワン株式会社）で粉砕し、RNeasy Plus Mini kit（QIAGEN）及びQIAshredder（QIAGEN）を用いてトータルRNAを調製した。同様に、対照マウスのトータルRNAも調製した。【００７６】
３．マイクロアレイによる各疾患モデルマウスの遺伝子発現の解析
マイクロアレイを用いて、Th17細胞検出用マーカーの候補として選択された115遺伝子について、疾患モデルマウスにおける発現解析を行った。関節炎モデルマウス、脳炎モデルマウス及びそれぞれのモデルマウスに対応する対照マウスから調製したトータルRNAを解析に用いた。
One-Cycle Target Labeling and Control Reagents（Affymetrix）又はTwo-CycleTarget Labeling and Control Reagents （Affymetrix）を用いて、上記の各トータルRNA（One-cycleの場合は、1〜5μg、Two-Cycleの場合は、10〜100μg）を、取扱説明書に従ってcDNAに逆転写し、さらにビオチン化cRNAへの転写反応を行った。15μgのビオチン化cRNAをGeneChip Mouse Genome 430 2.0 Array（Affymetrix）に入れ、GeneChip Hybridization Oven 640（Affymetrix）中で45℃、60 rpmの条件下でハイブリダイゼーションを16時間行った。ハイブリダイゼーション後、GeneChip Fluidic Station 450（Affymetrix）を用いて洗浄及び蛍光標識を行ったマイクロアレイを、GeneChip Scanner 3000 7G（Affymetrix）を用いてスキャンし、蛍光強度データを取得した。【００７７】
発現解析ソフトウェアGene Spring GX（Agilent）を用いて、上記データを標準化した。そして、各遺伝子の蛍光強度をGAPDHの蛍光強度で除して、各遺伝子の相対蛍光強度を算出した。そして、各疾患モデルマウス及び対照マウスの各遺伝子の相対蛍光強度の平均値を、解析に用いた個体数により算出した。本実施例において、該平均値を、各疾患モデルマウス及び対照マウスの各遺伝子の発現量として扱う。
さらに、対照マウスに対する疾患モデルマウスの遺伝子発現の比を算出するために、各疾患モデルマウスの各遺伝子の発現量を、対応する対照マウスの各遺伝子の発現量でそれぞれ除した。本実施例において、得られた各値を、関節炎モデルマウス及び脳炎モデルマウスの各遺伝子の発現比として扱う。例えば、ある遺伝子の発現比が2の場合、該遺伝子が疾患モデルマウスにおいて対照マウスよりも2倍多く発現することを示す。【００７８】
４． 疾患モデルマウスに高発現する遺伝子の同定
１）遺伝子の発現比による同定
本発明者らは、各疾患モデルマウスの症状の極期における遺伝子発現に着目した。つまり、健常時（対照マウス）における発現量に対する極期での各遺伝子の発現比が2以上であることを、疾患モデルマウスに高発現する遺伝子の抽出条件（以下、「抽出条件1」という）として、極期においてその発現が増加している遺伝子を同定した。【００７９】
培養したTh17細胞で高発現することが確認された遺伝子から、極期の関節炎モデルマウスに高発現する遺伝子を、抽出条件1に基づいて同定した。この結果を表４に示す。
同様に、極期の脳炎モデルマウスに高発現する遺伝子も、抽出条件1に基づいて同定した。この結果を表５に示す。【００８０】
２）各遺伝子発現量とIL-17A遺伝子の発現量との間の相関による同定
本発明者らはまた、疾患モデルマウスのIL-17A遺伝子発現量の動態に着目した。つまり、疾患モデルマウスの各遺伝子発現量とIL-17A遺伝子発現量との間の「ピアソンの積率相関係数」が0.6以上であることを、IL-17A遺伝子発現と相関する遺伝子の抽出条件（以下、「抽出条件２」という）として、IL-17A遺伝子発現量の変化に応じて、その発現量が変化する遺伝子を同定した。なお、当該分野において該相関係数が0.6以上であることは、統計的に有意であると考えられている。【００８１】
本実施例において、ピアソンの積率相関係数は、下記のように算出した。
同一の疾患モデルにおいて、該相関係数を算出したい遺伝子の発現量をx、IL17A遺伝子の発現量をyとした。また、各疾患モデルにおける各マウスのi値を次のように設定した；
関節炎モデルにおいては、
- 対照マウスは、i = 1、
- 前記菌体成分未投与のマウスは、i = 2、及び
- 前記菌体投与後3週間のマウスは、i = 3。
脳炎モデルにおいては、
- 対照マウスは、i = 1、
- 前記抗原エマルジョン投与後9日のマウスは、i = 2、
- 前記抗原エマルジョン投与後14日のマウスは、i = 3、
- 前記抗原エマルジョン投与後18日のマウスは、i = 4、及び
- 前記抗原エマルジョン投与後24日のマウスは、i = 5。【００８２】
上記で定義した各値及び式  (x, y) = [(xi, yi)] (i = 1, 2, …, n)  より、2組の数値からなるデータ列を作成した。なお、関節炎モデルにおいては、n = 3、脳炎モデルにおいては、n = 5である。
ピアソンの積率相関係数の算出には、下記の式を用いた。式中の、オーバーラインの付いたx及びyは、それぞれx =｛xi｝及びy =｛yi｝の平均値である。【００８３】
【数１】
2009107785.tif 000009
【００８４】
a）関節炎モデルマウスについて
関節炎モデルマウスのIL-17A遺伝子発現量は、未発症としてスコア0と判定される菌体成分投与後3週間において、すでに上昇が認められた。そこで、対照マウス、前記菌体成分未投与マウス、及び前記菌体成分投与後3週間の関節炎モデルマウスにおける、IL-17A遺伝子の発現量と前記４．１）で同定した各遺伝子の発現量との間のピアソンの積率相関係数を算出した。
算出した相関係数及び上記抽出条件2に基づいて、関節炎モデルマウスにおいてIL-17A遺伝子発現と相関する遺伝子を同定した。この結果を表４において、＊を付して示す。【００８５】
【表４−１】
2009107785.tif 000010
【００８６】
【表４−２】
2009107785.tif 000011
【００８７】
b）脳炎モデルマウスについて
対照マウス並びに上記抗原エマルジョン投与後9、14、18及び24日の脳炎モデルマウスにおける、IL-17A遺伝子の発現量と前記４．１）で同定した遺伝子の発現量との間のピアソンの積率相関係数を算出した。
算出した相関係数及び上記抽出条件2に基づいて、脳炎モデルマウスにおいてIL-17A遺伝子発現と相関する遺伝子を同定した。この結果を表５において、＊を付して示す。【００８８】
３）脳炎モデルマウスの病態と各遺伝子発現量との間の相関による同定
脳炎モデルにおいては、前記抗原エマルジョン投与後10〜14日目に脳脊髄炎症状が出現し、投与後15〜20日目に症状が寛解して消失する。そこで、本発明者らは、脳炎モデルマウスの病態と各遺伝子発現量との間の相関に着目した。つまり、極期での各遺伝子発現量に対する寛解期での各遺伝子発現量の比が0.7以下であることを、脳炎モデルマウスにおいて病態と相関する遺伝子の抽出条件（以下、「抽出条件3」という）として、その発現が極期に増加し、且つ寛解期に減少する遺伝子を同定した。
上記４．２）b）で同定した遺伝子から、抽出条件3に基づいて、脳炎モデルマウスに高発現する遺伝子を同定した。この結果を表５において、＃を付して示す。【００８９】
【表５−１】
2009107785.tif 000012
【００９０】
【表５−２】
2009107785.tif 000013
【００９１】
【表５−３】
2009107785.tif 000014
【００９２】
４）まとめ
関節炎モデルマウス及び脳炎モデルマウスを用いて、抽出条件２及び３により同定されたモデルマウスに高発現する遺伝子のタイトルを表６に示す。該表中において、○はそのモデルマウスにおいて抽出条件を満たす遺伝子を、−は抽出条件を満たさない遺伝子を示す。関節炎モデルマウス及び脳炎モデルマウスの両方において抽出条件を満たす遺伝子は、＊を付して示した。【００９３】
【表６】
2009107785.tif 000015
【００９４】
本出願は、２００８年２月２８日に出願された日本国特許出願特願２００８−０４８１９７号に関し、この特許請求の範囲、明細書、及び要約書の全ては本明細書中に参照として組み込まれる。
【配列表】
2009107785000001.app
【国際調査報告】
2009107785.tif 000016
2009107785.tif 000017
2009107785.tif 000018
2009107785.tif 000019