(57)【要約】  本明細書中に記載の技術は、子癇前症（ＰＥ）の検出方法又は予測方法に関する。本明細書中に記載の技術はまた、ＰＥの検出方法又は予測方法を実施するための診断キット等の商用パッケージに関する。特に、本明細書中に記載の技術は、生化学マーカーレベルの決定による子癇前症の予測方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検者から得られる母系サンプル中の可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル及びマトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベルを決定することを含む、子癇前症（ＰＥ）の予測方法。
【請求項２】
１つ又は複数の血流力学的変数を測定することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記被検者から得られる子宮動脈波形中の拡張期切痕の存在を決定することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記子宮動脈波形はドップラー超音波によって得られる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
標準的方法によって前記被検者の血圧を決定することを更に含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記被検者の収縮期血圧（ＳＢＰ）が決定される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記被検者の平均動脈圧（ＭＡＰ）が決定される、請求項５又は６に記載の方法。
【請求項８】
前記母系サンプル中の胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）レベルを決定することをさらに含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記母系サンプル中のプラスミノゲンアクチベーターインヒビター−２（ＰＡＩ−２）レベルを決定することをさらに含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
レプチン、プラスミノゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡＩ−１）、総胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）、及び細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ）のうちの１つ又は複数のマーカーのレベルを決定することをさらに含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記母系サンプルは血液である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記母系サンプルは１２週〜３８週の間で採取される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記母系サンプルは２０週〜３６週の間で採取される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
被検者から得られる母系サンプル中の可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル及びマトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベルを決定することを含み、低ＭＭＰ−９及び高ｓＴＮＦαＲ１によって陽性と予測される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
被検者から得られる母系サンプル中のＭＭＰ−９レベル及びｓＴＮＦαＲ１レベルを決定すること、及び前記被検者から得られる子宮動脈波形中の拡張期切痕の存否を決定することを含み、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＭＭＰ−９、及び切痕の存在によって陽性と予測される、請求項３に記載の方法。
【請求項１６】
被検者から得られる母系サンプル中の可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル及び胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）レベルを決定することを含み、高ｓＴＮＦαＲ１及び低ＰＬＧＦによって陽性と予測される、子癇前症（ＰＥ）の予測方法。
【請求項１７】
被検者から得られる母系サンプル中のｓＴＮＦαＲ１レベル及びＰＬＧＦレベルを決定すること、及び前記被検者から得られる子宮動脈波形中の拡張期切痕の存否を決定することを含み、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＰＬＧＦ、及び切痕の存在によって陽性と予測される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
被検者から得られる母系サンプル中の可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル、マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベル、及び胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）レベルを決定することを含み、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＭＭＰ−９及び低ＰＬＧＦによって陽性と予測される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
被検者から得られる母系サンプル中の可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル、マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベル、及びプラスミノゲンアクチベーターインヒビター−２（ＰＡＩ−２）レベルを決定することを含み、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＭＭＰ−９及び低ＰＡＩ−２によって陽性と予測される、請求項９に記載の方法。
【請求項２０】
被検者から得られる母系サンプル中のマトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベル、可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル、及び前記被検者の収縮期血圧（ＳＢＰ）レベルを決定することを含み、低ＭＭＰ−９、高ｓＴＮＦαＲ１、及び高ＳＢＰによって陽性と予測される、請求項６に記載の方法。
【請求項２１】
被検者から得られる母系サンプル中のマトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベル、可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル、及び前記被検者の平均動脈圧（ＭＡＰ）レベルを決定することを含み、低ＭＭＰ−９、高ｓＴＮＦαＲ１、及び高ＭＡＰによって陽性と予測される、請求項７に記載の方法。
【請求項２２】
被検者から得られる母系サンプル中のマトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベル、可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル、及びレプチンレベルを決定することを含み、低ＭＭＰ−９、高ｓＴＮＦαＲ１、及び高レプチンによって陽性と予測される、請求項１０に記載の方法。
【請求項２３】
被検者から得られる母系サンプル中の可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル、マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベル、及び総ＰＬＧＦレベルを決定することを含み、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＭＭＰ−９、及び低総ＰＬＧＦによって陽性と予測される、請求項１０に記載の方法。
【請求項２４】
被検者から得られる母系サンプル中の可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル、マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベル、及びプラスミノゲン活性化インヒビター−１（ＰＡＩ−１）レベルを決定することを含み、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＭＭＰ−９、及び高ＰＡＩ−１によって陽性と予測される、請求項１０に記載の方法。
【請求項２５】
被検者から得られる母系サンプル中の可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル、マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベル、及びＩＣＡＭレベルを決定することを含み、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＭＭＰ−９、及び高ＩＣＡＭによって陽性と予測される、請求項１０に記載の方法。
【請求項２６】
被検者から得られる母系サンプル中の胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）レベル、マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベル、可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴ
ＮＦαＲ１）レベル、及びプラスミノゲン活性化インヒビター−２（ＰＡＩ−２）レベルを決定すること、及び、前記被検者から得られる子宮動脈波形中の拡張期切痕の存在及び該被検者の収縮期血圧（ＳＢＰ）を決定することを含み、低ＰＬＧＦ、低ＭＭＰ−９、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＰＡＩ−２、高ＳＢＰ、及び切痕の存在によって陽性と予測される、請求項９に記載の方法。
【請求項２７】
請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法を実施するための診断キットであって、測定される前記マーカーのレベルを決定するために必要な試薬を備える診断キット。
【請求項２８】
被検者由来の子宮動脈波形を得るための装置をさらに備える、請求項２７に記載のキット。
【請求項２９】
被検者由来の収縮期血圧（ＳＢＰ）又は平均動脈圧（ＭＡＰ）を得るための装置をさらに備える、請求項２７又は２８に記載のキット。
【請求項３０】
前記被検者の子癇前症リスクレベルを計算するためのアルゴリズムを使用してプログラミングされている電子デバイスをさらに備える、請求項１４〜２９のいずれか一項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書中に記載の技術は、子癇前症（ＰＥ）の検出方法又は予測方法に関する。本明細書中に記載の技術はまた、ＰＥの検出方法又は予測方法を実施するための診断キット等の商用パッケージに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＰＥはすべての妊婦の４％に影響を及ぼし、英国、米国、及び他の国家における妊産婦死亡の主な原因である。この疾患又は発症の兆しは、選択的未熟分娩の最大原因であり、全未熟児出産の約１５％を占める。英国国立臨床研究所（UK National Institute for Clinical Excellence）（ＮＩＣＥ）は、出産前のテーラーメード治療を行うために、女性は妊娠早期に子癇前症（ＰＥ）リスクを評価することを推奨している。管理のための重要な原則は、子癇前症の女性を同定することであり、それにより、適切な監視（通常、入院患者）及び診療行為（通常、出産）を開始することできる。世界中の国に類似のガイドラインが存在する。
【０００３】
国際妊娠高血圧会議（the International Society for the Study of Hypertension in
Pregnancy）のガイドライン(Davey et al., Am. J. Obstet Gynecol; 158: 892-98, 1988)に従って、タンパク尿を伴う妊娠性高血圧（以前は正常血圧の女性）をＰＥと定義し、又はタンパク尿を伴う重症妊娠性高血圧（慢性高血圧症の女性）を重症ＰＥと定義する。慢性高血圧症の女性について、新たなタンパク尿の発症により、多重ＰＥが定義される。少なくとも４時間毎に９０ｍｍＨｇ以上の拡張期血圧の２回の記録、及び少なくとも４時間毎に１１０ｍｍＨｇ以上の重篤な血圧、又は少なくとも１２０ｍｍＨｇの拡張期血圧の１回の記録で妊娠高血圧症と定義する。２４時間に３００ｍｇ以上のタンパク質の排泄又は２４時間の回収が利用できない場合の中間尿のディップスティック分析若しくはカテーテル尿検体についての２＋以上の値の２回の記録でタンパク尿と定義する。女性は、以前に正常血圧であった女性又は妊娠２０週前に慢性高血圧症であった女性に分類される。したがってＰＥの検出は、主に、妊婦の血圧測定及びタンパク尿試験を使用して行われる。罹患した女性及び早産児に対するこれらの手順及び治療に医療財源を割くことが強く要求されている。女性のリスクを正確に判定することにより、妊婦管理コストを劇的に減少させることができる。
【０００４】
ＰＥ（未熟分娩以外）の広く使用されている治療法はないが、広く使用されていないが、妊娠１６週以降のビタミンＣ及びビタミンＥの栄養補助食品を投与された高いＰＥリスクの女性のＰＥの発症が有意に減少したことが記載されている（Chappell et al., The Lancet, 354, 810-816, 1999;及びRumbold & Crowther, Vitamin C supplementation in pregnancy (Cochrane Review, 2002, updated 2004))。メタ分析により、低用量のアスピリンがＰＥの発生率を１５％減少させるのに有効であることも示唆される(Duley et al.,
Cochrane Review, 2004)。ビタミンＣ及びビタミンＥの栄養補助食品の多数の他の試験は、国際的に進行中である。したがって、安価且つ安全で、広く利用可能な診療が有効であると近々証明される可能性が高い。
【０００５】
より正確且つ確固たる女性のリスク判定は、これらの予防的治療から利益を得る可能性が最も高い女性を標的とするであろう。リスクがより低いと同定された女性は、妊婦管理をあまり集中せず、且つ費用を安くすることができる。さらに、ＰＥリスクのある女性の正確な予測により、医療財源を最もリスクの高い女性に回すことができ、それにより、低リスクの女性の出生前外来（antenatal visit）の軽減によって医療費を大幅に節約することができるだろう。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
広く受け入れられたＰＥの早期の発見又は予測方法は存在しない。上記のように、疾患過程が十分に定着している場合、血圧が上昇し、尿中タンパク質が検出される。後にＰＥを発症する女性におけるドップラー超音波による子宮動脈への血流異常の検出がいくつかの予測に使用されてきているが、この異常は比較的非特異的であることが見出されており、この理由のために、日常的な臨床上の診療で適用されていない。
【０００７】
いくつかの血漿／尿生化学マーカーがこの疾患過程で異常であることを示しているにも関わらず、１つのマーカーも予測のための指標としての使用に十分な感度を示すと証明されていない。例えば、ＰＥの予測のための指標としての胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）のみの使用が提唱されているが、このマーカーの予測能力を何らかの確実性をもって判定することができなかった。例えば、国際公開ＷＯ９８／２８００６号は、ＰＥの発症を予測するためにＰＬＧＦ単独、又は血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）と組み合わせた検出を提案している。
【０００８】
さらに、母体血のＰＡＩ−１／ＰＡＩ−２比に対するビタミン補給の効果が以前に開示されており(Chappell et al., 1999, Lancet, 354, 810-816)、他には確立されたＰＥにおけるＰＡＩ−１／ＰＡＩ−２の上昇(Reith et al., 1993, British Journal of Obstetrics and Gynaecology, 100, 370-4)、及び後にＰＥを発症した女性におけるＰＡＩ−１の上昇(Halligan et al., 1994, British Journal of Obstetrics and Gynaecology, 101, 488-92)が報告されている。ＰＬＧＦは、確立されたＰＥを罹患した女性で減少することが示されており(Torry et al., 1998, American Journal of Obstetrics and Gynaecology, 179, 1539-44)、疾患発症前に低いことが示唆される。レプチンは、正常な妊婦の妊娠期間に伴って増加することが見出されている(Highman et al., 1998, American Journal of Obstetrics and Gynaecology, 178, 1010-5)。レプチンは確立されたＰＥでさらに上昇することも示されており、最初の報告は、Mise et al., Journal of Endocrinology and Metabolism, 83, 3225-9, 1998によって公表されている。さらに、Anim-Nyame et al., Hum. Reprod., 15, 2033-6, 2000は、ＰＥ前のレプチン濃度の上昇が臨床的に明らかであることを示している。この所見は、Chappell et al., (American Journal of Obstetrics and Gynaecology 2002; 187(1): 127-36)によって報告されており、これには、ビタミン補給がＰＥリスクのある女性における血漿レプチンを減少させることも示されている。
【０００９】
国際公開ＷＯ０２／３７１２０号及びChappell et al., (American Journal of Obstetrics and Gynaecology 2002; 187(1): 127-36)では、感度及び特異性が良好なＰＥの予測試験が開示されている。この試験は、特異的血液マーカーのみ（すなわち、ＰＬＧＦ）、ＰＡＩ−２、ＰＡＩ−１とＰＡＩ−２との比、及びレプチンの少なくとも１つとの組み合わせに基づく。例えば、アルゴリズムｌｏｇe（ＰＬＧＦ）−３×（ＰＡＩ−１／ＰＡＩ−２）を使用した妊娠２４週で８８％の特異性と８０％の感度が得られるという結果が得られた。
【００１０】
血流力学マーカーとの、又は血流力学マーカーを除いた、生化学マーカーの一定の組み合わせによってＰＥの予測方法が改善されることがここで認められた。特に、２つ以上の特定の生化学マーカー、任意選択的に、１つ若しくは複数の生化学マーカー及び／又は１つ若しくは複数の血流力学マーカーを含む組合わせが、ＰＥの初期の検出又は予測に効果的である。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本明細書中に記載の技術は、生化学マーカーのレベルの決定による子癇前症の予測方法を提供する。１つの態様では、子癇前症（ＰＥ）の予測方法は、被検者から得られる母系サンプル中の可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル及びマトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベルを決定することを含む。別の態様では、ＰＥの予測方法は、被検者から得られる母系サンプル中のｓＴＮＦαＲ１レベル及び胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）レベルを決定することを含む。
【００１２】
上記の決定により、高い特異性及び感度で個体がＰＥを発症する可能性を判定することが可能であることが見出された。この方法で陰性と同定された真の陰性（ＰＥを発症しない女性）の比率を特異性と定義する。この方法で陽性と同定された真の陽性（ＰＥを発症する女性）の比率を感度と定義する。
【００１３】
子宮動脈波形における拡張期切痕の存在により、ＰＥが予測される。高い収縮期血圧及び拡張期血圧（ＳＢＰ及びＤＢＰ）の値並びに平均動脈圧（ＭＡＰ）もまた、続発性ＰＥ（subsequent PE）を示す。したがって、１つ又は複数の生化学マーカーを使用したＰＥの予測方法は、１つ又は複数の血流力学的変数を測定することをさらに含むことができる。血流力学的変数は、ＰＥに関連する任意のパラメータ又は異常であり得る。例えば、血流力学的変数は、拡張期切痕又は異常な耐性指数（resistance index）等の、被検者から得られた子宮動脈波形の任意のパラメータ又は異常（例えば、異常な耐性指数（Ｒ１）又は拍動指数（pulsatility index）（Ｐ１））であり得る。血流力学的変数は、収縮期血圧（ＳＢＰ）、拡張期血圧（ＤＢＰ）又は平均動脈圧（ＭＡＰ、ＤＢＰ＋（ＳＢＰ−ＤＢＰ）／３として定義される）等の血圧であり得る。例えば、被検者の収縮期血圧（ＳＢＰ）、拡張期血圧（ＤＢＰ）、又は平均動脈圧（ＭＡＰ、ＤＢＰ＋（ＳＢＰ−ＤＢＰ）／３として定義される）を決定することができる。被検者の血圧を正確に決定することが可能な任意の既知の技術を使用して、被検者の血圧を決定することができる。被検者の血圧をさらに決定することにより、方法の特異性及び感度がさらに改善される。被検者の血圧は、被検者から得られる血圧データの再調査又は分析によって決定することができる。
【００１４】
本明細書中に記載のＰＥの予測方法は、被検者から得られる子宮動脈波形中の拡張期切痕の存在を決定することをさらに含み得る。拡張期切痕の存在をさらに決定することにより、本方法の特異性及び感度がさらに改善される。子宮動脈波形を、任意の適切な方法（例えば、ドップラー超音波）によって得ることができる。
【００１５】
上記で言及した特異的な組み合わせは、被検者がＰＥを発症する可能性が高いか否かを判定するのに特に有用であることが見出された。上記のマーカーの測定及び任意選択的に子宮動脈波形及び／又は血圧の測定値の決定により、高い特異性及び感度で個体がＰＥを発症する可能性が高いか否かを判定することが可能であることも見出された。
【００１６】
後にＰＥを発症した被検者においてｓＴＮＦαＲ１レベルが上昇することが見出された。ＭＭＰ−９レベルは、このような女性で減少することが見出された。胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）は、健康な妊娠で通常観測される顕著な上昇を示すことができなかった。ＰＡＩ−２もこのような女性で減少することが見出された。レプチン、ＰＡＩ−１、及びＩＣＡＭのレベルは、このような女性で上昇することが見出された。
【００１７】
マーカーの組み合わせは、ＰＥの予測の感度及び特異性が高いことが証明された。特に、ＭＭＰ−９及びｓＴＮＦαＲ１自体又は他のバイオマーカー若しくは血流力学的測定（例えば、拡張期切痕又は血圧）を共に含む組み合わせは、続いておこるＰＥの高い感度及び特異性を示す予測マーカーであることが見出された。このような組み合わせでは、低ＰＬＧＦ、低ＰＡＩ−２、ＳＢＰの上昇、ＤＢＰの上昇、ＭＡＰの上昇、及び拡張期切痕の存在のうち任意の１つ又は複数の選択を伴った高ｓＴＮＦαＲ１と低ＭＭＰ−９によって
陽性と予測される。
【００１８】
上記組み合わせの試験では、妊娠期間中にＰＬＧＦは通常増加するのに対し、ＰＥを発症する（すなわち、陽性と予測される）被検者については妊娠期間中にＰＬＧＦレベルは増加せず、ＭＭＰ−９レベルは減少することが見出された。
【００１９】
したがって、本明細書中に記載のＰＥの予測方法は被検者から得られる母系サンプル中の、例えば、総ＰＬＧＦ、レプチン、プラスミノゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡＩ−１）、ｓＴＮＦαＲ１、ＭＭＰ−９、及び細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ）のようなさらなるマーカーの１つ又は複数のレベルを決定することをさらに含むことができる。これらのさらなるマーカーのうちの１つ又は複数がこの方法の特異性及び感度の改善に有用であることが見出された。一例として、ｓＴＮＦαＲ１レベル及びＭＭＰ−９レベルを決定する方法は、母系サンプル中のプラスミノゲンアクチベーターインヒビター−２（ＰＡＩ−２）レベルを決定することをさらに含むことができる。ＰＡＩ−２の存在のさらなる決定により、方法の特異性及び感度がさらに改善される。マーカーの組み合わせのさらなる特定の例を、本明細書において以下に記載する。
【００２０】
本明細書中に記載の技術は、被検者から得られる母系サンプル中の可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル及びマトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベルを決定すること、並びに被検者から得られる子宮動脈波形中の拡張期切痕の存在を決定することを含み、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＭＭＰ−９、及び拡張期切痕の存在によって陽性と予測されるＰＥの予測方法を提供する。
【００２１】
本技術によって提供される他の方法は、被検者から得られる母系サンプル中の可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル及び胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）レベルを決定することを含み、高ｓＴＮＦαＲ１及び低ＰＬＧＦによって陽性と予測される。所望に応じて、この方法は、被検者から得られる子宮動脈波形中の拡張期切痕の存在を決定することをさらに含むことができ、高ｓＴＮＦαＲ１及び低ＰＬＧＦ並びに拡張期切痕の存在によって陽性と予測される。
【００２２】
本技術は、被検者から得られる母系サンプル中の可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル、マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベル、及びＰＬＧＦレベルを決定することを含み、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＭＭＰ−９、及び低ＰＬＧＦによって陽性と予測されるＰＥの予測方法を提供する。
【００２３】
被検者から得られる母系サンプル中の可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル、マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベル、及びプラスミノゲン活性化インヒビター−２（ＰＡＩ−２）レベルを決定することを含み、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＭＭＰ−９、及び低ＰＡＩ−２によって陽性と予測されるＰＥの予測方法も提供する。
【００２４】
被検者から得られる母系サンプル中の可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル及びマトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベルを決定すること、及び被検者の収縮期血圧（ＳＢＰ）を決定することを含み、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＭＭＰ−９、及び高ＳＢＰによって陽性と予測されるＰＥの予測方法をさらに提供する。ＳＢＰの決定の代わりに、又はそれに加えて、本方法は、被検者の平均動脈圧（ＭＡＰ）を決定することを含むことができ、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＭＭＰ−９、及び高ＭＡＰによって陽性と予測される。
【００２５】
本明細書中に記載の技術は、被検者から得られる母系サンプル中の可溶性組織壊死因子
α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）レベル、マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）レベル、及び別のマーカーのレベルを決定することを含むＰＥの予測方法を提供する。例えば、他のマーカーはレプチンとすることができ、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＭＭＰ−９、及び高レプチンによって陽性と予測される。別の例として、マーカーは、総ＰＬＧＦとすることができ、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＭＭＰ−９、及び低総ＰＬＧＦによって陽性と予測される。さらなる一例として、マーカーはプラスミノゲン活性化インヒビター−１（ＰＡＩ−１）とすることができ、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＭＭＰ−９、及び高ＰＡＩ−１によって陽性と予測される。別の例として、マーカーはＩＣＡＭとすることができ、高ｓＴＮＦαＲ１、低ＭＭＰ−９、及び高ＩＣＡＭによって陽性と予測される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
本明細書中で使用される場合、用語「予測」は、子癇前症に関して使用する場合、妊娠中の個体における子癇前症の発症の見込み、リスクの判定、又は可能性の評価を意味する。この用語には、初期ＰＥの検出が含まれる。
【００２７】
妊婦から採取した母系サンプルは、上記マーカーを測定することが可能である任意のサンプルとすることができる。例えば、サンプルは血液とすることができる。他の例示的なサンプル型には、血清、他の血液画分、及び尿が含まれる。例えば、体液又は組織サンプルから回収した細胞（シトロホブラスト（cytrophoblast）細胞及び合胞体栄養膜細胞母系細胞のような母系細胞中のバイオマーカーレベルを決定することもできる。母系サンプルを、約妊娠１０週からの任意の時点で採取することができる。例えば、サンプルを、妊娠１２週〜３８週の間又は２０週〜３６週の間に採取することができる。さらに、母系サンプルを、以下の期間のうちの１つ又は複数の間に中に採取することができる：妊娠１１〜１４週、妊娠１５〜１７週、妊娠１９〜２１週、及び妊娠２３〜３５週。
【００２８】
可溶性組織壊死因子α受容体１（ｓＴＮＦαＲ１）は、当業者に既知の標準的用語である。特に、ヒト形態のｓＴＮＦαＲ１の配列は、ＮＣＢＩタンパク質データベースにアクセッション番号ＧＩ：３３９７５０、バージョンＡＡＡ６１２０１．１で示されている。Fuchs et al., Genomics, 13, 219-224, 1992も参照のこと。R&D Systemsから市販されているＥＬＩＳＡアッセイを含む、多数のｓＴＮＦαＲ１検出方法が存在する。
【００２９】
マトリックスメタロプロテイナーゼ−９（ＭＭＰ−９）は、当業者に既知の標準的用語である。特に、ヒト形態のＭＭＰ−９の配列は、ＮＣＢＩタンパク質データベースにアクセッション番号ＧＩ：７４２７２２８７、バージョンＮＰ＿００４９８５．２で示されている。市販のＯｎｃｏｇｅｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＭＭＰ−９  ＥＬＩＳＡ（商標）を含む、多数のＭＭＰ−９検出方法が存在する。
【００３０】
胎盤成長因子（ＰＬＧＦ）は、当該技術分野で使用される標準的用語であり、別途指示しない限り、個体中に見出される遊離形態を言う。ヒトＰＬＧＦのアミノ酸配列は既知である（ＮＣＢＩタンパク質データベースのアクセッション番号ＸＰ０４０４０５、＋．ＧＩ：２０１４９５４３、バージョンＮＰ＿００２６２３．２）。R&D Systems Inc.から市販されているＱｕａｎｔｉｋｉｎｅヒトＰＬＧＦ免疫試験を含む、多数のＰＬＧＦ検出方法が存在する。
【００３１】
遊離ＰＬＧＦは、任意の他のタンパク質との複合体ではないＰＬＧＦをいう。ＰＬＧＦの結合形態は、例えば、Ｆｌｔ１のような１つ又は複数のタンパク質との複合体であるＰＬＧＦを言う。
【００３２】
プラスミノゲンアクチベーターインヒビター−２（ＰＡＩ−２）は、当該技術分野で使用される標準的用語であり、当業者に自明である。特に、ヒト形態のＰＡＩ−２の配列は
、ＮＣＢＩタンパク質データベースにアクセッション番号ＧＩ：１５６７４０９、バージョンＣＡＡ０２０９９．１で示されている。Biopool Internationalから市販されているＴｉｎｔ  Ｅｌｉｚｅ  ＰＡＩ−２キットを含む、多数のＰＡＩ−２検出方法が存在する。
【００３３】
プラスミノゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡＩ−１）は、当該技術分野で使用される標準的用語であり、当業者に自明である。特に、ヒト形態のＰＡＩ−１の配列は、ＮＣＢＩタンパク質データベースにアクセッション番号ＧＩ：１８９５４２、バージョンＡＡＡ６０００３．１で示されている。Ginsburg et al., J. Clin. Invest., 78, 1673-1680, 1986も参照のこと。Biopool Internationalから市販されているＴｉｎｔ  Ｅｌｉｚｅ  ＰＡＩ−１キットを含む、多数のＰＡＩ−１検出方法が存在する。
【００３４】
レプチンは、当該技術分野で使用される標準的用語であり、当業者に自明である。特に、ヒト形態のレプチンの配列は、ＮＣＢＩタンパク質データベースにアクセッション番号ＧＩ：６６４７４４６３、バージョンＡＡＹ４６７９７．１で示されている。Ａｕｔｏ  Ｄｅｌｆｉａアッセイを含む、多数のレプチン検出方法が存在する。
【００３５】
細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ）は、当該技術分野で使用される標準的用語であり、当業者に自明である。特に、２つのイソ型のヒト形態のＩＣＡＭの配列は、ＮＣＢＩタンパク質データベースにアクセッション番号ＧＩ：３３３４０６７３、バージョンＡＡＱ１４９０１．１及びアクセッション番号ＧＩ：３３３４０６７５、バージョンＡＡＱ１４９０２．１で示されている。多数のＩＣＡＭ検出方法（Ａｕｔｏ  Ｄｅｌｆｉａアッセイが含まれる）が存在する。
【００３６】
疑いを回避するために、上記マーカーの特定の配列を、本出願の優先日にデータベース中に存在するバージョンに関して定義する。
【００３７】
マーカーの特定の配列は例示である。当業者は、ヒト集団中に多型変異型が存在すると理解するであろう。このような多型変異型は、一般に、いくつかのアミノ酸（例えば、１〜５又は１〜３アミノ酸）が異なるだけである。
【００３８】
拡張期切痕は、当業者に既知の標準的用語である。特に、この用語は、子癇前症を含む後期の異常な妊娠の結果に関連している子宮動脈波形の拡張期初期中の窪みを言う(Chien
et al., BJOG., 2000, 107(2), 196-208)。拡張期切痕は、いくつかの異なる異常な妊娠結果となるリスクのある妊婦の子宮動脈ドップラー波形内に持続し得る。拡張期切痕の存在のみでは、ＰＥを示唆しない。
【００３９】
上記のように、子宮動脈波形を、ドップラー超音波を使用して測定することができる。子宮動脈波形を測定するためのドップラー超音波の使用は、当業者に既知である(Chien et al. BJOG. 2000; 107 (2): 196-208)。
【００４０】
子宮動脈波形を、妊娠約１０週からの任意の時点で測定することができる。例えば、妊娠１２週又は２０週〜２５週の間から測定物を採取することができる。
【００４１】
免疫試験の実施方法は当業者に既知であり、多数の市販のシステムが免疫試験の実施及び結果の検出のために利用可能である。一例として、ＡＵＴＯＤＥＬＦＩＡシステム（登録商標）及びＤＥＬＦＩＡ（登録商標）システム（PerkinElmer）は、免疫試験の実施のために特に設計され、最適化されている自動化システムである。理解されるように、任意の適切な方法を使用してマーカーを検出することができる。
【００４２】
収縮期血圧（ＳＢＰ）、拡張期血圧（ＤＢＰ）又は平均動脈圧（ＭＡＰ、ＤＢＰ＋（ＳＢＰ−ＤＢＰ）／３として定義される）等の被検者の血圧を、英国Microlifeから市販されているＭｉｃｒｏｌｉｆｅ  ＢＰ  ３ＢＴＯ−Ａ振動測定血圧モニタリングデバイスを使用して決定することができる。英国高血圧協会（British Hypertension Society）の修正プロトコールに従って、これは、正常血圧の妊娠、非タンパク質尿ＨＢＰ、及び子癇前症での使用が立証されている(Cuckson et al., Blood Pressure Monitoring, 2002, 7(6), 319-324)。
【００４３】
上記で言及したマーカーのレベルが正常値を超えるか（高）又はそれ未満である（低）であるか否かを判定するために、通常、妊婦の関連集団（relevant population：適切な母集団）の正常レベルを決定する。関連集団は、例えば、民族的背景又はマーカーの正常レベルに影響を及ぼし得る任意の他の特徴に基づいて定義することができる。マーカーの正常レベルを確立するための関連集団を、例えば、ＰＥリスクの低さ（すなわち、既往ＰＥ、糖尿病、以前の高血圧等のＰＥの既知のリスクマーカーが存在しない）に基づいて選択する。正常レベルがわかると、測定レベルを比較し、標準的な統計的方法を使用して相違の有意性を判定することができる。測定レベルと正常レベルとの間に実質的相違（すなわち、統計的に有意な相違）が存在する場合、レベルが測定された個体がＰＥを発症する臨床的に重要なリスクが存在する。このリスクを定量し、尤度比の使用による比率として表すことができる。
【００４４】
例えば、リスク判定は、ＰＥを発症することのない同じ妊娠期間の健康な妊婦で観測される値の分布に基づいて、各マーカー及び測定（拡張期切痕の有無を除く）のための標準偏差スコアを決定することを含むことができる。決定は、ロジスティック回帰又は正常分布の多変量モデリング、又はいくつかの他の適切な統計的方法のいずれかに基づいて、標準偏差スコアを単一の組み合わせた予測物質と組み合わせることをさらに含むことができる。
【００４５】
特に、標準リスクサブセット（付録１）を使用して、妊娠期間にわたる各マーカーの正常範囲を確立する。この目的のために、各値を、独立した観測値として処理する。次いで、結果を標準偏差スコア（Ｚスコア）として表し、これは、いくつの標準偏差の各結果がその妊娠期間での期待値に由来するかを表す。妊娠期間にわたる非正規性並びに平均及び標準偏差の両方の変化について調整する。
【００４６】
本明細書中に記載の予測方法の１つの態様では、付録２に記載のマーカー由来のＺスコアを、付録３に記載のアルゴリズムを使用して組み合わせることができる（全てロジスティック回帰に由来する）。
【００４７】
感度及び特異性のレベルを、被検者がＰＥリスクがあると見なされるレベルの変化によって変化させることができる。いくつかの状況では（例えば、ＰＥリスクの低い多数の女性をスクリーニングする場合）、高特異性を有することが重要である。他の状況では、高感度と高特異性との間でバランスが取れていることが重要であり得る（例えば、ＰＥリスクが高い各女性を考慮した場合、高感度と高特異性との間でバランスを取ることが必要である）。表２は、９５％（偽陽性率＝５％）、９０％（偽陽性率＝１０％）、及び８５％（偽陽性率＝１５％）での特異性の固定に基づく多数のマーカーの組み合わせの能力を示す。
【００４８】
本明細書中に記載の技術は多数の利点を付与する。診療（例えば、ビタミン栄養補助食品）の正確な標的の手助けに加えて、妊婦管理の階層化及び新生児の特別な医療費の削減によって、相当な医療費の節約を期待することができる。研究開発領域では、高リスク患者の同定により、その後の臨床試験が非常に容易になるであろう。現在、不適切な予測方
法により、多数の妊婦が臨床試験で不必要に診療されている。
【００４９】
上記の方法を、診断指標（尿酸レベル等）のための他の試験と組み合わせて行うことができる。
【００５０】
ＰＥ発症を防止するための予防的治療の有効性をモニタリングするための方法にも使用することができ、この方法では、ＰＥ発症リスクの減少が予防的治療の効果を示す。
【００５１】
２０種を超える生化学マーカーは、ＰＥの確立に関連することが以前に示されており、予測指標としての使用を評価するための任意の前向きな縦断的研究において、本明細書中に開示のマーカーと測定との特定の組み合わせの選択に至る論理的な理由は存在しないであろう。
【００５２】
さらなる一態様では、本明細書中に記載の方法を実施するための研究キット又は診断キット等の商用パッケージを提供する。このようなキットは、ＰＥの検出又は予測のために選択するマーカーレベルの決定に有用な試薬を含むことができる。マーカーの測定のための適切な薬剤には、抗体及び他の標的結合分子、酵素結合免疫測定試薬、ＲＩＡ試薬、及びウェスタンブロッティング用試薬が含まれる。キットはまた、子宮動脈波形を測定するための装置（例えば、ドップラー超音波装置）を含むことができる。キットはまた、被検者の血圧を測定するための装置を含むことができる。キットはまた、被検者のＰＥ発症リスクを計算するためのアルゴリズムを使用してプログラミングされたコンピュータ、説明書、及び本明細書中に記載の方法の実施に有用な他の品目を含み得る。
【００５３】
本明細書中に記載の方法及び商用パッケージは、子癇前症と類似の原因及び／又は症状を有する妊娠関連障害又は症候群の検出又は予測に有用であり得る。このような子癇前症関連障害又は症候群には、例えば、妊娠誘導性高血圧、ＨＥＬＬＰ症候群、子宮内成長遅延、多重妊娠中毒症が含まれるが、これらに限定されない。
【００５４】
この技術の特定の態様を、例として以下に記載する。
【実施例】
【００５５】
ＰＥについての危険因子（慢性高血圧症、糖尿病、既往のＰＥ、慢性腎臓疾患、抗リン脂質症候群、最初の妊娠における体型指数が３０未満、異常な子宮動脈ドップラー波形）を有する、採用した１９８人の妊婦から血液サンプル得て、動脈ドップラーを行った。１７２人が分析に利用可能であった。残りは、流産（ｎ＝５）、死産（ｎ＝３）、妊娠中絶（ｎ＝２）、及び追跡不能（ｎ＝６）又は研究の辞退（ｎ＝１０）のために含まれなかった。１９人の女性がＰＥを発症した。残りの１５３人の女性は、高リスクコントロール群（ＨＲ）を形成する。さらに、以前にいかなるリスク因子も有しない９５人の未経産婦を、「標準リスク」コントロール（ＳＲ）として採用した。これらの女性のうちの７０人は、期限終了時に正常な妊娠結果が得られ、これらから標準的リスクコントロールを選択した。
【００５６】
妊娠１１〜１４週で血液サンプルを採取し、その後、１５〜１７週、１９〜２１週及び２３〜３５週で採取した。出産後、１９症例の子癇前症が、高リスクコントロールと１：２で適合し、生化学マーカーについては１：２で標準的リスクコントロールと適合した。１２、１６、２０、及び２４週での血液マーカー及びドップラー超音波の結果（拡張期切痕、耐性指数（ＲＩ）、拍動指数（ＰＩ））の単独及び組み合わせを考慮した。測定したバイオマーカーは以下であった：遊離ＰＬＧＦ、結合ＰＬＧＦ、総ＰＬＧＦ、可溶性Ｆｌｔ−１、レプチン、ＰＡＩ−１、ＰＡＩ−２、ＭＭＰ−９、ＩＣＡＭ、及び可溶性ＴＮＦαＲ１（ｓＴＮＦαＲ１）。ｓＴＮＦαＲ１以外のこれらの全てを、この目的のために開
発したＡｕｔｏ  Ｄｅｌｆｉａアッセイを使用して測定した。ｓＴＮＦαＲ１を、市販のＥＬＩＳＡアッセイ（R&D System）を使用して測定した。耐性指数及び拡張期切痕の存在は、子宮動脈ドップラー波形に由来した。
【００５７】
妊娠期間調整尤度比スコアを、症例及びコントロールの両方における１３の指標（遊離ＰＬＧＦ、結合ＰＬＧＦ、総ＰＬＧＦ、ＭＭＰ−９、レプチン、ＰＡＩ−１、ＰＡＩ−２、ｓＦｌｔ−１、ｓＴＮＦαＲ１、ＩＣＡＭ、拍動指数（ＰＩ）、拡張期切痕、及び耐性指数（ＲＩ））についての症例及びコントロールの両方における基準範囲の確立によって作成した。結合ＰＬＧＦは、遊離ＰＬＧＦ及び総ＰＬＧＦの予測力に何も付加しないことが認められ、さらなる考慮から除外した。アッセイに技術的問題があったので、可溶性Ｆｌｔも排除した。比較のために、国際公開ＷＯ０２／３７１２０号で考慮したマーカーの組み合わせも示す。
【００５８】
標準リスクサブセット（付録１）を使用して、妊娠期間にわたる各マーカーの正常範囲を確立した。この目的のために、各値を、独立した観測値として処理した。次いで、全ての結果を標準偏差スコア（Ｚスコア）として表し、これは、いくつの標準偏差の各結果がその妊娠期間での期待値に由来するかを示す。下記に記載し、付録２に詳述する方法に従って、妊娠期間にわたる非正規性並びに平均及び標準偏差の両方の変化について調整が行われた。
【００５９】
これらの妊娠期間調整Ｚスコアを、外来ごとの比較と共に以下の付録２にまとめる。平均及びＳＤを、統計計算パッケージＳｔａｔａ（リリース９）(StataCorp, College Station, Texas)でパネルデータを実行するAmemiya T著(1973) 「Regression analysis when the dependent variable is truncated Normal」（Econometrica 41: 997-1016）に記載の方法に従った−２及び＋２（健常者から異常値で打ち切り）で打ち切るトービット回帰によって評価した。Liang K-Y及びZeiger SL著(1986)「Longitudinal analysis using generalised linear models」（Biometrika 73: 13-22）の方法に従った変量効果Tobit回帰（−２及び＋２で打ち切り）及び一般化推定方程式の両方によって有意性検定を行った。この検定は、Binder DA (1983)著「On the variances of asymptotically normal estimators from complex surveys」（International Statistical Review 51: 279-292）に記載の健常人の標準誤差を使用し、統計計算パッケージＳｔａｔａ（リリース９）(StataCorp, College Station, Texas)でパネルデータを実行した。
【００６０】
検定は、極端な値及び反復測定が可能である方法である点が異なる。２つの方法による結果は類似しているが、同一ではない。
【００６１】
個々の指標の能力を、以下の表１に示す。受信者動作特性（ＲＯＣ）領域を感度並びに５％、１０％、１５％の偽陽性率（ＦＰＲ）（９５％、９０％、及び８５％の特異性と等価）が得られるように選択された臨界値についての陽性予測値（ＰＰＶ）と共に示す。全てのこれらの値は医療統計学の当業者に既知であり、例えば、Douglas Altman著「Practical Statistics in Medical Research」（Chapman & Hall, London (1991) pp 409-419）に関する標準的なテキストに説明されている。ＰＰＶは、陽性の試験結果が得られた場合に女性が罹患する確率である。これを、(有病率×感度)/(有病率×感度＋(１−有病率)×(１−特異性))として計算することができる。これらの計算の目的のために、５％の有病率は低リスクの女性、１５％は高リスクの女性と推測される。
【００６２】
これらの結果に基づいて、任意選択的に、拡張期切痕、血圧（ＳＢＰ又はＭＡＰ）、ＰＡＩ−１、ＰＡＩ−２、レプチン、及びＩＣＡＭのうちの１つ又は複数と共に、ＭＭＰ−９、ＰＬＧＦ、及び可溶性ｓＴＮＦαＲ１をさらなる研究のために選択する。二次項を用いない単純ロジスティック回帰を使用して、これらの指標の予測される能力を、表２に示
す。さらに、ロジスティック回帰は、医療統計学の当業者に既知の標準的方法であり、Altman (1991), pages 351-364に説明されており、Ｓｔａｔａバージョン９(StataCorp, College Station, Texas)等の統計パッケージで実行される。
【００６３】
５％の偽陽性率（９５％の特異性）について、生化学マーカーのみを使用した高リスクの女性における検出率（ＤＲ）は５６％であり、６６％の陽性予測値が得られる。収縮期血圧を含めることによってＤＲが８４％に上昇し、ＰＰＶが７５％に上昇する。標準的リスクの女性では、同じ組み合わせにより、ＤＲが８０％になり、ＰＰＶが４６％になる。
【００６４】
結論として、本明細書中に記載の方法は、子癇前症を発症し続ける可能性が高い５人の女性のうちの少なくとも４人を同定することができ、正確に使用した場合、試験を受ける２０人の女性のうちのたった１人しか偽陽性にならない。単独で、これはほとんどの女性に必要な出生前外来数を低減し、最もリスクの高い女性に注意を向けることができる。
【００６５】
本明細書中に引用した全ての文献は、参照により援用される。
【００６６】
表１：個々の指標及び構築された組み合わせの性能
個々のマーカーを、他の場所に記載のように標準化する。標準的な組み合わせは、国際公開ＷＯ０２／３７１２０号に記載されている。
遊離ＰＬＧＦ、総ＰＬＧＦ、ＰＡＩ２、ＭＭＰ−９、ｌｏｇe（遊離ＰＬＧＦ）−３×（ＰＡＩ１：ＰＡＩ２）、ＰＡＩ２×遊離ＰＬＧＦの値が低い場合、子癇前症と予測される。
可溶性ＦＬＴ、ＭＭＰ−２、インヒビン、ＶＥＧＦ、及びアディポネクチンと同様に、既に公表されている組み合わせ：レプチン／遊離ＰＬＧＦ、ｌｏｇe（遊離ＰＬＧＦ）−３×（ＰＡＩ１：ＰＡＩ２）、ＰＡＩ１：ＰＡＩ２比、ＰＡＩ２×遊離ＰＬＧＦ（国際公開ＷＯ０２／３７１２０号）を比較のために含む。可溶性ＦＬＴ、ＭＭＰ−２、ＶＥＧＦ、及びアディポネクチンの値が低い場合、ＰＥと予測されるように分析される。
【表１−１】
2009524014.tif 000002
【表１−２】
2009524014.tif 000003
【表１−３】
2009524014.tif 000004
【表１−４】
2009524014.tif 000005
【表１−５】
2009524014.tif 000006
【００６７】
表２
【表２−１】
2009524014.tif 000007
【表２−２】
2009524014.tif 000008
【００６８】
〔付録１〕
選択されたＰＥ予測物質についての正常範囲−正常な結果が標準リスクの女性で確立される。
変換は以下の３つの構成要素を有する：
・ほとんどの場合、ｌｏｇ及びべき変換を使用して、適切なガウス（正規）分布を達成する。
・各妊娠期間での平均値を、二次曲線によって評価し（示さず）、変動指数（それにより、標準偏差）を一次関数によって評価する。
・全被検者について、Ｚスコア（標準偏差スコア）（標準偏差数を示す）を評価し、値は、その妊娠期間での期待値を超えるか又は下回る。
標準的リスクの女性を示すプロットを確立する（示さず）。３％、５０％、９７％の基準ラインは平均を超えるか又は下回る−２、０、２のＳＤを示す。
得られた変換により、平均値及び値の分散（spread of the values）の両方に及ぼす標準
的リスクの女性における妊娠期間の影響が除去される。これらを使用して、高リスクコントロール及びＰＥ症例の値を標準化する。
ＰＡＩ２／ＰＡＩ１比及びレプチン（ｐｇ／ｍＬ）／遊離ＰＬＧＦ（ｐｇ／ｍＬ）を使用して、比を１を超えるように維持する。PAI2＜2×PAI1の3人の被検者を、PAI1、ＰＡＩ２、及びこれらを含む全ての組み合わせの評価から除外した。
どのようにして処方物を使用するのかを理解するために、１９週及び６日の妊娠期間で１９４．１１の遊離ＰＬＧＦ及び６６のＤＢＰの女性を考慮する。ＤＢＰを最初に考慮する。懸念される変換は存在しないので、過程は比較的簡潔である。
ＤＢＰの期待値＝７５．１−１．０９×妊娠期間（週）＋．０２６９５×妊娠期間(週）2＝７５．１−１．０９×（１９＋６／７）＋．０２６９５×（１９＋６／７）2
＝６４．１
ＤＢＰのＳＤ＝（０．１１３＋０．０００７６×妊娠期間（週））×期待値
＝（０．１１３＋０．０００７６×（１９＋６／７））×６４．１
＝８．２１
Ｚスコアは、（実際の値−期待値）／標準偏差
＝（６６−６４．１）／８．２１
＝０．２３
遊離ＰＬＧＦを考慮するにあたって、２つの変換を考慮する。ｌｏｇ10（遊離ＰＬＧＦ）の期待値を最初に取り組む。次いで、実際の値及び期待値は、指数０．６６９でべき乗される。これらの新規の値についての標準偏差及びＺスコアを算出する。
ｌｏｇ10（遊離ＰＬＧＦ）の実際の値は、ｌｏｇ10（１９４．１１）＝２．２８８である。
ｌｏｇ10（遊離ＰＬＧＦ）の期待値＝−．９６８１＋．２６１×妊娠期間（週）−．００４４５×妊娠期間（週）2
＝−．９６８１＋．２６１×（１９＋６／７）−．００４４５×（１９＋６／７）2
＝２．４６
これらを指数０．６６９でべき乗することにより、１．７４０及び１．８２６が得られる。
ｌｏｇ10（遊離ＰＬＧＦ）0.669の標準偏差
＝（−０．００５０×妊娠期間（週）＋０．１８４）×．６６９×（期待値.669）
＝（−０．００５０×（１９＋６／７）＋０．１８４）×．６６９×（２．４６.669）＝０．１０３
Ｚスコアは、ここでも（実際の値−期待値）／標準偏差
＝（１．７４−１．８２６）／０．１０３
＝−０．８４
【表３−１】
2009524014.tif 000009
【表３−２】
2009524014.tif 000010
【００６９】
〔付録２〕
外来及び結果群によるＺスコアの評価された平均及びＳＤ
平均及びＳＤを、健常者の標準誤差（ＳＥ）を使用した一般化推定方程式（ＧＥＥ）によって評価する。ＳＥに基づいて、グラフをエラーバーと共に示す。ＧＥＥモデル及び変量効果トービット回帰（−２及び＋２で打ち切り）の両方に基づいて有意性検定を行う。ＧＥＥアプローチによって各女性（むしろ、各血液サンプル）に等しく荷重され、反復測定が可能になり、標準誤差が修正される。
【表４−１】
2009524014.tif 000011
【表４−２】
2009524014.tif 000012
【表４−３】
2009524014.tif 000013
【００７０】
［付録３］
Ｚスコアの複合予測値への組み合わせ及び臨界値に対する評価
各複合値について、選択されたＺスコア（付録１に記載のように計算する）を、それぞれ
固定したパラメータを掛け、合計し、さらなる定数を加える。予測スコアが高いほど、ＰＥリスクが高い。ＰＥを発症しない女性は、一般に負のスコアである。
ＰＥ対高リスク及びＰＥ対標準的なリスクのコントロールの予測のためのパラメータを個別に得る。得られた値を、以下に列挙した臨界値とする。行列形態でパラメータを示す。変数名を下記のように略す。
ｚ＿遊離ｐｌｇｆ:Ｚ（遊離ＰＬＧＦ）
ｚ＿ｍｍｐ９：Ｚ（ＭＭＰ−９）
ｚ＿ｓｔｎｆｒｌ：Ｚ（ｓＴＮＦαＲ１）
ｚ＿ｐａｉ２：Ｚ（ＰＡＩ−２）
ｚ＿ｓｂｐ：Ｚ（ＳＢＰ）
切痕:ドップラー超音波スキャンにおいて動脈切痕が存在する場合のみ付加する
ｚ＿ｍａｐ：Ｚ（ＭＡＰ）
ｚ＿レプチン:Ｚ（レプチン）
ｚ＿総ｐｌｇｆ＿ｓｒ：Ｚ（総ＰＬＧＦ）
ｚ＿ｐａｉ１：Ｚ（ＰＡＩ−１）
ｚ＿ｓｉｃａｍ：Ｚ（ｉｃａｍ）
原理を証明するために、定期的な外来で測定されたｓＴＮＦαＲ１及びＭＭＰ−９を有する標準的なリスクの女性（すなわち、ＰＥに対する特定のリスク因子を有しない）を考慮する。計算の際、ｓＴＮＦαＲ１がわずかに高く（Ｚスコア＝１．２）、ＭＭＰ−９がごくわずかに低い（Ｚスコア＝−０．７）ことが見出される。いずれの値も単独では懸念を生じないであろう。管理上の理由のために、診療所は５％を超える偽陽性を取り扱うことを望まないので、必要な５％のＦＰＲ及び０．１２の臨界値を設定した。
第１の行列を使用して、女性の予測スコアは１．０４３２０２９×１．２−．３４６９６０３１×０．７−１．２８６３１８６＝−．２８である。これは、臨界値よりも低いので、試験を陰性と見なす。ＦＰＲが１０％である場合も試験は陰性であろうが、診療所が−．３２の臨界値が得られる１５％のＦＰＲを設定した場合、陽性として処理されるであろう。
ドップラー超音波スキャンを行い、切痕が認められない場合、第２の行列を使用するであろう。予測スコアは、．６１０９０６１２×１．２−．５９７０９５０５×０．７−２．１９６６０３１＝−１．９（明白な陰性の結果）であろう。切痕が存在する場合、２．７５４５６１８をスコアに付加し、．８７が得られる。この値は、臨界値の表の２行目と比較する必要がある。ここで、結果は５％のＦＰＲで陰性であるが、１０％又は１５％のＦＰＲで陽性である。
【表５−１】
2009524014.tif 000014
【表５−２】
2009524014.tif 000015
【表５−３】
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【表５−４】
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【表５−５】
2009524014.tif 000018
【表５−６】
2009524014.tif 000019
【表５−７】
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【表５−８】
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【国際調査報告】
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