(57)【要約】  傷ついた筋肉細胞組織をもつ患者を処置するおよび／あるいは細胞の再増殖により筋肉の機能を改善するための再生の目的で組織を移植する器具および方法。特に器具および方法は細胞の変質の難局をなくす。器具は尖った先端をもつ中空のチューブ、中空のチューブ内に取り付けられた可動スタイレットおよびスタイレットの動きを抑える停止器具を備えている。方法は哺乳類の器官の第１の部位から完全な組織を切除しそして同じ器官の第２の部位に埋め込むことからなる【選択図】図１Ｃ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞再増殖による傷ついた心筋の修復のための器具で、器具は次からなる：
筋肉組織内に挿入するための先端をもつスリーブ；および
スリーブに関連して組織試料を動かすスリーブ内の可動部材。
【請求項２】
スリーブがチューブからなる請求項１の器具。
【請求項３】
チューブがステンレス鋼あるいはニチノールからなる請求項２の器具。
【請求項４】
チューブが約１００μｍと約１０００μｍの間の範囲の内径の孔をもつ請求項２の器具。
【請求項５】
スリーブが尖った先端をもつ請求項１の器具。
【請求項６】
スリーブが可動部材の動きを抑える停止器具をさらに含む請求項５の器具。
【請求項７】
停止器具がスリーブの内側壁に位置づけられ、停止器具が前記スリーブの先端から０．５から２．０ｃｍの範囲に位置づけられる先端表面をもつ請求項６の器具。
【請求項８】
チューブが切断用カニューレである請求項２の器具。
【請求項９】
可動部材がスリーブ内で軸方向に動くスタイレットを含む請求項１の器具。
【請求項１０】
後部停止部分および前部部分を含むスタイレット、停止器具および後部停止部分が前部部分の動きを制限する請求項９の器具。
【請求項１１】
器具がカテーテル本体をさらに含む請求項１の器具。
【請求項１２】
スリーブがカテーテル本体の先端に取り付けられる請求項１１の器具。
【請求項１３】
カテーテルが手前端でハンドルに取り付けられる請求項１１の器具。
【請求項１４】
ハンドルが可働部材に接続される推進器を含む請求項１３の器具。
【請求項１５】
推進器がケーブルで可働部材に接続される請求項１４の器具。
【請求項１６】
カテーテル本体が３０ｃｍから１００ｃｍの範囲の長さをもつ曲げられるチューブをさらに含む請求項１１の器具。
【請求項１７】
スリーブが先端開口をともなう内部孔そして５ｍｍから１５ｍｍの範囲の長さをもつ請求項１の器具。
【請求項１８】
スリーブが吸引器具と流体接続をする内部孔をもつ請求項１の器具。
【請求項１９】
スリーブが流体源と流体接続をする内部孔をもつ請求項１の器具。
【請求項２０】
ハンドルが半径方向にカテーテルの先端を動かす第２の推進器を含む請求項１３の器具。
【請求項２１】
ハンドルが可動部材の動きを抑えるスリーブ内の停止器具の動きを推進する第３の推進器を含む請求項１３の器具。
【請求項２２】
スリーブがハンドルに取り付けられる少なくとも２０ｃｍの長さをもつ曲がらないチューブ状本体をさらに含む請求項１の器具。
【請求項２３】
カテーテル本体が少なくとも４５ｃｍの長さをもつ請求項１２の器具。
【請求項２４】
カテーテル本体が少なくとも８０ｃｍの長さの曲げられる部分をもつ請求項１２の器具。
【請求項２５】
スタイレットがスタイレットの手前および先端側の間に流体の流れを作る一つあるいはそれ以上の開口をもつ請求項９の器具。
【請求項２６】
カテーテルがガイドカテーテル内をスライドする寸法の外径をもつ請求項１１の器具。
【請求項２７】
ガイドカテーテルがカテーテルの長軸に対して斜線角で曲がらないように位置づけられる先端をもつ請求項１２の器具。
【請求項２８】
ガイドカテーテルがガイドワイヤー上をスライドする請求項２７の器具。
【請求項２９】
スリーブが廃棄できる器具を提供するためハンドルから引き離せる請求項１の器具。
【請求項３０】
切除された組織試料をともなうスリーブがカテーテル切除器具から引き離されそして埋め込み器具に取り付けできる請求項１の器具。
【請求項３１】
埋め込み器具が胸部鏡的埋め込み器具を含む請求項３０の器具。
【請求項３２】
カテーテルが同心円的に位置づけられる少なくとも三つのチューブ状本体を含む請求項１１の器具。
【請求項３３】
組織試料を含むためのポリマーシースをさらに含む請求項１の器具。
【請求項３４】
組織試料を処置するためのシステムをさらに含む請求項１の器具。
【請求項３５】
斜線角でカテーテル本体の先端でスリーブを方向づけるための引っ張りワイヤーをさらに含む請求項１の器具。
【請求項３６】
患者の状態を観察するためのモニターをさらに含む請求項１の器具。
【請求項３７】
スリーブ内の流体圧力をモニターするための圧力検出器をさらに含む請求項１の器具。
【請求項３８】
１ｃｍから１０ｃｍの長さをもつ金属製スリーブをさらに含む請求項１の器具。
【請求項３９】
スリーブがガイドチューブに対して手動で引き延ばされる請求項１の器具。
【請求項４０】
哺乳類器官の第１の部位から哺乳類器官の第２の部位へ組織を移植する器具で、器具は次からなる：
尖った先端をもつ中空チューブ；および
組織試料を動かすため中空チューブ内を動けるスタイレット。
【請求項４１】
中空チューブ内のスタイレットの動きを制限する停止器具をさらに含む請求項４０の器具。
【請求項４２】
チューブがステンレス鋼あるいはニチノールを含む請求項４０の器具。
【請求項４３】
チューブが約２００μｍと約８００μｍの間の範囲の内径をもつ請求項４０の器具。
【請求項４４】
停止器具がチューブの内側壁に位置づけられ、停止器具が前記中空チューブの先端から０．５から２．０ｃｍの範囲に位置づけられる先端表面をもつ請求項４１の器具。
【請求項４５】
チューブが切断用カニューレである請求項４０の器具。
【請求項４６】
スタイレットがチューブ内を軸方向に動く請求項４０の器具。
【請求項４７】
チューブが胸部鏡挿入のための少なくとも１０ｃｍの長さをもつ請求項４０の器具。
【請求項４８】
チューブが５ｍｍから１５ｍｍの範囲の長さの試料部位をもつ請求項４０の器具。
【請求項４９】
チューブが手前端でハンドルに取り付けられる請求項４０の器具。
【請求項５０】
ハンドルがスタイレットの動きを促進するため推進器をもつ請求項４９の器具。
【請求項５１】
チューブが吸引器具と流体接続する請求項４０の器具。  
【請求項５２】
チューブが生理食塩水のような液体源と流体接続する請求項４０の器具。
【請求項５３】
チューブが脳組織を試料採取するため頭蓋骨の穿孔内をスライドする外径をもつ請求項４０の器具。
【請求項５４】
チューブが肝臓組織を切除あるいは挿入するため腹腔鏡器具チャンネル内をスライドするための寸法をもつ請求項４０の器具。
【請求項５５】
チューブが目の目網下スペース内に挿入するためプローブ内をスライドする外径をもつ請求項４０の器具。
【請求項５６】
停止器具がチューブに対して動くことができる請求項４１の器具。
【請求項５７】
ハンドルが試料容器に接続されている請求項４９の器具。
【請求項５８】
ハンドルが吸引推進器をもつ請求項４９の器具。
【請求項５９】
チューブがガイドに対して移動されることができる請求項４０の器具。
【請求項６０】
哺乳類の内部器官の第１の部位から哺乳類の内部器官の第２の部位へ筋肉組織を移植する方法で、方法は次からなる。
哺乳類の内部器官の第１の部位から組織試料を切除し；そして
哺乳類の内部器官の第２の部位に第２の部位における細胞の増殖を増加するために組織試料を埋め込む。
【請求項６１】
哺乳類の器官が心筋でありそして完全な心筋組織から組織試料を切除することからさらになる請求項６０の方法。
【請求項６２】
心筋の心室隔壁から組織試料を切除することからさらになる請求項６１の方法。
【請求項６３】
虚血性心筋組織内に組織試料を埋め込むことからさらになる請求項６０の方法。
【請求項６４】
細胞の変質なしに組織試料を埋め込むことからさらになる請求項６０の方法
【請求項６５】
脳組織試料切除しそして埋め込むことからさらになる請求項６０の方法。
【請求項６６】
複数の組織試料で複数の切除そして埋め込む段階を実施することからさらになる請求項６０の方法。
【請求項６７】
梗塞組織部位内に組織試料を埋め込むことにより心筋梗塞後に方法を実施することからさらになる請求項６０の方法。
【請求項６８】
被検者にカテーテルの先端を挿入し、切除される組織に隣接し先端を位置づけ、組織にチューブ状器具を挿入し、組織から組織試料を切除し、チューブ状器具が埋め込み部位に隣接するようにカテーテルを再位置づけし、チューブ状器具を組織試料を埋め込むために埋め込み部位内に挿入することからさらになる請求項６０の方法。
【請求項６９】
請求項６０の方法でさらに次からなる：
哺乳類心筋の第２の部位に組織試料を埋め込む前に組織試料で診察あるいは治療方法を実施する。
【請求項７０】
実施する段階が組織試料の組織足場内の細胞の特質を変質することからさらになる請求項６９の方法。
【請求項７１】
細胞の特質を変質する段階が組織足場から細胞構成成分を切除しそして組織足場内に材料を挿入することからなる請求項７０の方法。
【請求項７２】
組織足場内に血管新生蛋白質を挿入することからさらになる請求項７１の方法。
【請求項７３】
細胞材料を形成しそして細胞材料を組織足場内に挿入することからさらになる請求項７１の方法。
【請求項７４】
組織足場内にトランスフェクトされた心室心筋細胞あるいは内皮前駆細胞を挿入することからなる請求項７１の方法。
【請求項７５】
器官が脳からなる請求項６０の方法。
【請求項７６】
器官が肝臓からなる請求項６０の方法。
【請求項７７】
器官が目からなる請求項６０の方法。
【請求項７８】
ガイドカテーテルで外科手術サイトへチューブを導入するため経皮的カテーテル化を実施することからさらになる請求項６０の方法。
【請求項７９】
組織試料の胸部鏡的埋め込みを実施することからさらになる請求項６０の方法。
【請求項８０】
患者に少なくとも６個の組織の切除および埋め込み段階を実施することからさらになる請求項６０の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連申請との相互参照）
これはＵＳ申請Ｎｏ．１１／３３９，３２０、２００６年１月２５日付け申請の部分的延長であり、全内容をここに参照として組み入れる。
【０００２】
（発明の背景）
成人の心筋梗塞および虚血性心臓病は心筋細胞を損傷し弱める機能障害および不可逆の心筋細胞の喪失結果となり、もし処置をしないならば心筋細胞の損失と心臓の損傷は鬱血性心臓疾患となり数年内の心筋梗塞あるいは虚血症で死亡する運命に至る。
【０００３】
心筋機能は特に老人の間では、典型的に身体の本来の回復機構により元に戻すことができない。成人の心筋細胞の再生はまた限られる。さらに、心筋の移植は器官のドナーの不足により制約される。従って、成人の身体の自然の治癒の能力の補足のための筋形成および／あるいは心筋再生の手段および方法は強い研究および開発の課題となっている。
【０００４】
例えば、細胞の心筋症の細胞移植は心筋梗塞あるいは虚血症による心筋細胞の喪失を置き換える方法である。簡潔には、身体の他の部分から自己の細胞あるいは外来の細胞が心筋に移植された（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ）あるいは植え付けられた（ｅｎｇｒａｆｔｅｄ）細胞は分化し、現時点では理由は完全に知られていないが、心筋の機能の改善を提供する。
【０００５】
無数の異なる細胞の型はそのような細胞のあるいは細胞を基本とする治療のために使用される。例えば、細胞を基本とする治療は、制約なしに、成人の培養された心臓および骨格の筋肉心筋細胞あるいは筋芽細胞、同種の骨髄および／あるいは末梢血液からの前駆細胞、培養された間葉系および／あるいは胚性幹細胞を含んでいる。
【０００６】
細胞の増殖を強めるため、器官の出所に係わらず抽出された細胞は人工的に培養される。細胞の培養は同種の筋肉細胞、あるいは組織、血液細胞、幹細胞を採取し、より高い細胞の密度を提供するために生体外あるいは生体内で細胞あるいは組織を培養しそして心筋の損傷を受けた部分に培養された細胞を導入することを含んでいる。細胞の培養の歴史的問題は高価で、採取工程の潜在的な危険性、細胞を増殖する時間、および細胞を採取し移植するために必要な装置を含んでいる。
【０００７】
心筋の機能を改善する方法は流体容器の中に心筋のミクロな微粒をおいているドナーの箇所から心筋のミクロな微粒を回収し、心筋のミクロな流体を埋め込む（ｉｍｐｌａｎｔｉｎｇ）ことを含んでいる。
【０００８】
組織細胞の再生のシステムおよび方法の改善のため引き続いての必要性がある。
【０００９】
（発明の概要）
本発明は哺乳類の内部器官、例えば、心筋、脳、肝臓、腎臓、あるいは胆嚢の第１の部位から哺乳類の第２の部位に組織を移植する器具と方法を開示する。望ましくは、方法は哺乳類器官の第１の部位から組織試料を切除してそして哺乳類の第２の部位に組織試料を第２の部位で細胞の増殖を増加するため埋め込むことからなる。この実施態様において、切除および埋め込みの段階は細胞の変質の中間段階を含まないことが望ましい。組織の切除および埋め込みの間、組織の構造を保持することにより工程は多くの内在する幹細胞を増加する。
【００１０】
実施方法の一つの観点で、哺乳類の器官が心筋であるとき、方法は完全な心筋組織から、そしてもっと特別には心室の隔膜から組織試料を切除することをさらに含んでいる。心臓補助循環法のため切除される量は速く回復する健康な組織への打撃を最小とし、そして同時に損傷した部位内の心臓の機能を維持しあるいは改善するように選ばれる。
【００１１】
実施方法の他の一つの観点で、心筋の生体検査組織は虚血性心筋組織および／あるいは心筋梗塞（ＭＴ）部位に移植される。組織への損傷が起きた後はできるだけ速く手順を実施することが望ましい。しかしながら、手順は最初の障害の後、上手く実施されれば優位である。
【００１２】
他の実施態様で、本発明は傷ついた心筋細胞をもつ哺乳類の被験者を処置する方法を提供する。望ましくは、方法は哺乳類の心筋組織の第１の部位から組織試料を切除しそして傷ついた哺乳類の心筋組織の第２の部位に組織試料を細胞の増殖を強めるため埋め込むことからなる。傷ついた部位の寸法により外科医は任意に追加的組織の切除を行いそして細胞の再生速度を増大させるよう他の場所に埋め込むことからなる。かくして、２から１０あるいはそれ以上の埋め込みが担当患者に実施される。
【００１３】
さらに他の実施態様で、本発明は傷ついた心筋をもつ哺乳類被験者の心臓機能を改善する方法を提供する。望ましくは、哺乳類の心筋の第１の部位から組織試料を切除しそして哺乳類の第２の部位に細胞の再増殖による心臓機能を改善するために埋め込むことからなる。これは、例えば、改善された心臓の駆出率および収縮性を含んでいる。
【００１４】
本発明の望ましい実施態様は傷ついた心筋を細胞の再増殖により修復するための器具を含んでいる。望ましい実施態様において、心筋組織に挿入する尖った先端をもつスリ−ブ（ｓｌｅｅｖｅ）あるいはチューブ（ｔｕｂｅ）、チューブ内の組織試料を動かすためにチューブ内を調和して動くことができるスタイレット（ｓｔｙｌｅｔ）のような可動部材、そしてスタイレットの動きを抑えてチューブ内の位置決めをする停止器具を含んでいる。さらに実施器具は試料の変質なしに心筋の部分に埋め込むためにドナーの箇所から組織試料を取り戻しそして／あるいは哺乳類の器官の第１の部位からは哺乳類の器官の第２の部位へ組織を移植するために適している。器具は心筋組織を切除しそして埋め込むための開胸あるいは最小に浸入手順の間使用されあるいは組織を切除しそして埋め込むための経皮的カテーテルシステムと一緒に使用される。器具は２から５０ｍｍ3の範囲の組織容量を切除する。試料は血液が壊死を避けるような速度で試料を通して容易に動けるように望ましくは十分小さい。
【００１５】
中隔の厚みは１０と１３ｍｍの間のヒトの範囲で取られる生体組織の長さを決定する。試料採取チューブの長さは応用により５ｍｍと１５ｍｍの間を変化する。このように技術は組織容量と寸法の均一性を作るため中隔解剖の長所となる。これはまた組織の切断と損傷の必要なしに切断器具として働く生体組織器具となる。チューブは内径約１００から１０００μｍ、望ましくは２００から８００μｍである。これは血液の拡散範囲内にある試料の厚みを決定しそしてこれ故これら自身の血液供給で移植されるため埋め込みを要求しない。
【００１６】
本発明の他の好ましい提案の実施態様は切除された組織の全てあるいは部分は診断上および健康上の処置を受ける。カテーテル送致システムおよび心筋組織埋め込み手順は細胞部材の細胞外マトリックス（ｍａｔｒｉｘ）足場を空にする尿素で消化される中隔の生体組織をまた含んでいる。かくして人工のマトリックス足場は他の細胞部材で実質的に再度住み着くことができる。足場内の異なった細胞の型はかくして心筋内に埋め込まれそして心筋を再生し血管新生を促進するこれらの能力は評価される。これらの細胞の型は内皮細胞先駆体、平滑筋細胞先駆体あるいは心筋細胞先駆体を含んでいる。さらに幹細胞に由来する髄血液はこの方法と共に使用される。
【００１７】
かくして、本発明は組織の足場あるいは十分な固体数の細胞を器官の細胞再生を強めるため供給する細胞外供給組織構造を利用する。選択された容量の組織の利用によって試料の代わりに細胞外が埋め込みの再生性質をさらに改善するために利用される。
【００１８】
追加的に、細胞部材があるあるいはない足場は血管新生蛋白質（ＶＥＧＦ、ＦＧＦ−２、ＨＩＦ−１およびＰＲ３９）および他の増殖因子で浸されそしてそれにより心臓にある幹細胞が移動することができるプラットホームを形成しそしてそこで成熟した心室心筋細胞に増殖し分化するために栄養環境を見つける。
【００１９】
一般的に人工の細胞はこの足場伝達手段およびここで述べるカテーテルシステムを使用してまた埋め込まれる。例えば、心室心筋細胞あるいは内皮細前駆体をトランスフェクトされた（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ）ＶＥＧＦ、ＰＩ３  ＫｉｎａｓｅあるいはＡｋｔが埋め込まれる。これらの増殖因子および信号蛋白質は細胞の生き残りを強めアポトーシスを減らすことを示している。
【００２０】
この方法は個々の血管新生因子と筋細胞およびこれらのそれぞれの再生性質を評価し使用するために有効である。足場は裸のｃＤＮＡの市場で使用できる直接の内部心筋注入方法で見られる水準における短期間の増加よりむしろこれらの因子のさらなる維持された開放をもたらす。
【００２１】
本発明の望ましい実施態様は切除される器官の部分が望ましい長さの試料を提供するために選ばれる厚さをもつ試料の切除方法を採用する。例えば、５ｍｍの長さをもつ試料を埋め込むことが望ましい実施態様において、５mmの厚みをもつ中隔壁の部分が選ばれる。これは周囲の組織から試料の端を切断しあるいは切り離さねばならない困難を避ける。他の実施態様は試料採取器具が、  先端が第３心室あるいは他の腔に延びているように、試料採取される部位を通して挿入される脳の部分の試料採取を含んでいる。
【００２２】
脳の組織の再生は脳がまた制約された再生可能性をもっているので心筋と同様な仕方で行われる。脳卒中によって影響される患者は不可逆の中央の大脳動脈のようなある動脈の区域内のニューロンの損失をしばしば被る。ニューロンが酸素欠乏症に対してもっと敏感であるので、大脳動脈の再疎通をするための血栓溶解療法の執行は心筋梗塞の間心臓冠状動脈の再疎通よりもしばしば敏感である。ニューロンにある幹細胞が脳組織内に存在するならば、同様な方法が前頭葉からの脳組織あるいは不要な機能をもつ他の脳の部分が梗塞によって損傷を受けた脳の重要な優れた機能の箇所に埋込まれることにより応用される。ニューロン外科手順のための計算機援助の内視鏡は前頭葉の生体組織を得るために使用される。生体組織の場所は完全な箇所が損傷を受けていないことを確かめるため生体組織手順の前に定位放射線照射マッピングで前もって決める。その後に生体組織／埋め込みカテーテルは内視鏡の助けと脳梗塞の箇所へのＣＴガイダンスで挿入される。手順はまた、例えば、腹腔鏡器具のチャンネルを通して供給される試料採取チューブで肝臓再生を助けるために使用される。
【００２３】
本発明の他の望ましい実施態様は磁気共鳴画像（ＭＲＩ）による灌流、      梗塞の容量、壁の動作および駆出率の測定のような埋め込み後の器官の性能の測定あるいは監視する方法を含んでいる。
【００２４】
（図面の簡単な説明）
本発明は図面と合わせて本発明の詳細説明を参照してさらに完全に理解でき、図面は：
【００２５】
図１Ａは本発明に従う取り戻しおよび埋め込み器具の図示的実施態様を提供する；
【００２６】
図１Ｂはシース（ｔｈｅａｔｈ）に取り付けられた可動停止器具をもつ取り戻しおよび埋め込み器具の図示的実施態様を提供する；
【００２７】
図１Ｃは取り戻しおよび埋め込み器具、曲げられるカテーテルおよび制御ハンドルを含むシステムの図示的実施態様を提供する；
【００２８】
図１Ｄは吸引による柔らかい組織試料の取り戻しのためのシステムの図示的実施態様を提供する；
【００２９】
図１Ｅは真空補助取り戻しおよび埋め込み器具の図示的実施態様を提供する；
【００３０】
図２Ａはヒト筋肉のダイアグラムを提供する；
【００３１】
図２Ｂおよび２Ｃは本発明に従う曲がらない器具を使用する完全な筋肉組織を取り戻す方法の図示的実施態様を提供する；
【００３２】
図２Ｄは取込みストロークの間の取り戻しおよび埋め込み器具の図示的実施態様を提供する；
【００３３】
図３Ａは処置箇所とともにヒト筋肉のダイアグラムを提供する；
【００３４】
図３Ｂから３Ｄは心筋組織を本発明に従う曲がらない器具を使用して処置箇所内に埋め込む方法の図を提供する；
【００３５】
図３Ｅは埋め込みストロークの間の取り戻しおよび埋め込み器具の図示的実施態様を提供する；
【００３６】
図４Ａは処置箇所とともにヒト心筋のダイアグラムを提供する；
【００３７】
図４Ｂは本発明に従うカテーテルを基本とする器具を使用して処置箇所内に心筋組織を埋め込む方法の図を提供する；
【００３８】
図５ＡはＭＲＩにより測定した前壁と中隔壁心筋の灌流の比を図示する。
【００３９】
図５ＢはＭＲＩにより測定した処置動物の梗塞容量における改善を図示する；
【００４０】
図６Ａと６ＢはＭＲＩにより測定した前壁と中隔壁の壁の肥厚をそれぞれ図示する。
【００４１】
図７Ａと７ＢはＭＲＩにより測定した前壁と中隔壁の壁の動作を図示する。
【００４２】
図８ＡはＭＲＩにより測定した駆出率の改善を図示する；
【００４３】
図８Ｂはマイクロマノメーターカテーテルにより測定した処置動物における収縮性の改善を図示する；
【００４４】
図９Ａと９ＢはＴＴＣ染色により測定した前壁と中隔壁の梗塞寸法の変化をそれぞれ図示する；
【００４５】
図１０Ａから１０Ｄは非処置および処置動物の血管新生と抗アポトーシスの蛋白質発現の変化を示す；
【００４６】
図１１Ａは心筋梗塞に続く２および４週間で処置被検者の駆出率における劣化の防止を図示する：
【００４７】
図１１Ｂと１１Ｃは収縮性および拡張性の血行力学的評価を示す。
【００４８】
図１１Ｄは左心房圧力が処置被検者において通常に保たれそして非処置被験者において４週で上昇することを示す；
【００４９】
図１２Ａと１２Ｂは内部壁と中隔壁における処置動物の梗塞部位の改善を示す；
【００５０】
図１３は処置被験者の血管の数における３倍の増加を図示する；
【００５１】
図１４Ａと１４ＢはＶＥＧＦとＧＤＦ−２の血管新生の水準を示す；
【００５２】
図１５Ａと１５ＢはＭＭＰ−２とＴＩＭＰ−２に対するマトリックス分解酵素発現の水準を示す；
【００５３】
図１６は処置動物に対するｍｄｒ−１の増加を示す；
【００５４】
図１７は処置動物に対するｃ−ｋｉｔ陽性の減少を示す；および
【００５５】
図１８は本発明の望ましい実施態様に従った器官の部分の切除および埋め込みの方法を図示する。
【００５６】
（本発明の詳細説明）
本発明は哺乳類器官から組織試料を切除し同じ器官を他の部位にあるいは同じ個体の他の器官に組織試料を埋め込む器具と方法に関する。器具および方法は心臓補助循環法に使用され、これはヒト心筋を使用し、そして他の哺乳類の器官、例えば、肝臓、胆嚢、腎臓および脳でまた使用される。本発明は器官あるいは組織の移植が利用できないあるいは困難であり、あるいは現行の処置方法が適当でない心臓あるいは脳に関して特に重要である。
【００５７】
前記したように、種々の細胞、例えば、成人の培養された心臓および骨格筋細胞、間葉系および／あるいは胚性肝細胞、同種の骨髄および／あるいは末梢血からの前駆細胞が細胞の心臓補助循環法のために提案されている。
【００５８】
しかしながら、典型的に、梗塞ゾーンに埋め込まれた心臓幹細胞は完全に成熟した心室心筋細胞を形成しない。さらに特に、心臓幹細胞は小さく留まりそして完全に分化しないで、心臓幹細胞の小さい“島”を作る。
【００５９】
第１の実施態様において、本発明は哺乳類の器官の第１の部位から組織あるいは細胞を哺乳類の器官の第２の部位に移植する方法を提供する。さらに特に、方法は心室隔膜から切除された完全な心筋の生体組織を組織の心筋梗塞の部位に移植する。望ましくは、方法は細胞あるいは組織、すなわち完全な心筋の生体組織を哺乳類の器官の第１の部位、例えば、心筋あるいは心室隔膜から切除し、そして哺乳類の器官すなわち心筋梗塞あるいは虚血性心筋組織の第２の部位に細胞あるいは組織試料を埋め込むことからなる。さらに特に、細胞あるいは組織試料は細胞の変質を含まない中間段階なしに埋め込まれる。
【００６０】
本発明の他の観点は組織移植カテーテル器具である。組織移植カテーテル装置の本体はステンレス鋼あるいはニチノール（ｎｉｔｉｎｏｌ）、あるいは適当な高分子材料から作られた内径１００から８００μｍで外径が１．５mmあるいはそれ以下の中空のハイポチューブ（ｈｙｐｏｔｕｂｅ）である。チューブは長さ方向軸に沿って曲がらなく一定の長さをもっている。ある実施態様では、チューブは柔軟でなくあるいは曲がらない。他の実施態様で、スリーブあるいはチューブは曲がるかあるいは長さ方向の軸に対して全ての垂直方向に向くことができ、動脈システムあるいは心臓の空洞のような各種の身体の中に移動することができる。チューブは先端に尖った切断用の刃をもっている。任意に、閉鎖孔は器具の先端が希望するドナーの箇所に到達する前に組織で満たされることを防ぐように、取り戻す前の組織挿入の間、付け加えることができる。スタイレットはチューブ内に適合しそして組織の移植片あるいは生体組織の長さに相応する距離に対してチューブの先端内で取り戻せるように装着される。停止器具はスタイレットの動きの範囲を制限するようにチューブ内に装着される。例えば、停止器具はチューブの中を部分的に閉じることができ、組織移植片で移植カテーテルを装荷するときスタイレットが引き戻されるよう停止器具の上にスタイレットのベースにあるカラー（ｃｏｌｌａｒ）を休止させる。ハイポチューブの手元端はカテーテルの先端の部材の動きを制御するための種々な推進器に適応する制御ハンドルを装着している。例えば、他の実施態様で、制御ハンドルはチューブを延ばしたり引き込んだりするための一つあるいはそれ以上の推進器に適応しており、チューブ内のスタイレットを延ばしたり引き込んだりし、スタイレットの移動の長さあるいはチューブ内のスタイレット停止器具の位置を調整し、そしてチューブの曲がることのできる先端の曲がる動きを制御する。
【００６１】
一つの実施態様で、カテーテルは効果的なスタイレットの長さを変えるための機構、例えば、チューブ内の停止位置を動かすかあるいはスタイレットのチップとスタイレットのカラーの間の距離を変える機構を含んでいる。スタイレットの長さを調節することにより、組織移植片の寸法（すなわち長さ）は適当な長さに設定することができる。例えば、一つの実施態様で、スタイレットはドナーの箇所の組織の厚みに等しいかあるいは超える長さに設定し、それにより移植片が切除されるとき組織が傷つくことを防ぐ。
【００６２】
移植カテーテル器具の他の実施態様は三つの停止器具を採用している。停止器具のそれぞれの対は、生体組織の深さを決めそして調整されるため埋め込む間隔、例えば、器具の手元端の制御ハンドル上の異なる推進器の位置の間を変更することにより、離なされる。間隔は、例えば、１ｍｍ、２ｍｍ、３ｍｍ、４ｍｍ、５ｍｍ、あるいはそれ以上の増加である。適当な推進器の位置を使用することにより、生体組織標本の深さは、例えば、ドナーの組織箇所あるいは目標組織箇所の手術に基づいて手順の間、選ぶことができる。さらなる実施例の方法では、もし停止器具が３ｍｍの間隔で離され、そして推進器が三つの設定の間を選ぶならば、そうすれば３ｍｍ、６ｍｍ、あるいは９ｍｍの長さのいずれかの組織移植片が取り戻し時に選ばれる。
【００６３】
望ましくい実施態様において、器具は心室隔膜の厚みに相応する長さそしてチューブの先端の内径に相応する直径の心筋組織移植片を得ることできる。隔膜の全幅の移植片を取り込むことにより、移植方法は均一な組織容量と形状寸法を確かにする隔膜手術の利点を利用する。移植カテーテルは組織移植片を取り入れるとき切断器具として働き、切断や組織損傷を生じることなしに組織をドナーの箇所から切除できる。一つの実施態様において、カテーテルの先端は手元端から操作され、例えば、親指のクリック（ｃｌｉｃｋ）の動きによるスライド機構を所持していて、これは埋め込みの間静止したスタイレットに対してチューブの動き導く（図１Ｃ参照）。
【００６４】
移植カテーテルの他の実施態様は異なる外科手順に適用される。心筋組織移植のための開胸外科着手のために使用される実施態様において、チューブは曲がらなく約２０から４０ｃｍの長さで、望ましくは約３０ｃｍである。胸部鏡利用の移植カテーテルは  約４５から６５ｃｍの長さ、望ましくは約５５ｃｍの長さの曲がらないあるいは柔軟なチューブ状の本体をもっている。経皮的応用のために使用される実施態様において、カテーテルは曲がらない手元端および先端を除いて柔軟で任意に方向を向けることができる。ドナーあるいは    アクセプターの組織箇所への経皮的利用に対して、チューブは約８０から１００ｃｍの長さであり、望ましくは約９０ｃｍの長さである。脳、網膜あるいは脊髄への脳組織の移植のため使用する実施態様においては、チューブは曲がらなくそして約１から１０ｃｍの長さである。ある実施態様で、同じ制御ハンドルが種々の型の、例えば異なったチューブとともに提供される。
【００６５】
経皮的利用形態において、移植カテーテル器具はシースおよびガイドカテーテルを通して大腿骨動脈から大動脈弁を経て従来の方式で左心室に導入される。ガイドカテーテル、例えばホッケー棒状ガイドは、組織移植片標本を採取するために左心室中膜に対して移植カテーテルの位置決めをし、そしてそれから付随する蛍光鏡、電子放射線法、および／あるいは電磁気法のガイダンスを使用して処置箇所に向かって移動する。チューブはまた先端チップの切断刃をもちいて傷ついた部分に孔を開け、そしてスタイレットの助けにより移植片を注入することにより組織移植片を運ぶために使用される。スタイレットはハイポチューブが引き出されるよう内部ワイヤーとともに静止を保たれ、例えば、左心室壁の移植片を取り出す。ある実施態様で、移植カテーテルは蛍光鏡ガイドのための陰影剤の注入をする止血弁（側腕）を含んでいる。
【００６６】
他の実施態様で、移植カテーテルはガイドカテーテルを要求しないが、先端チップの尖った切断刃を保護するため付加的に外側のシースをもっており、左心室の梗塞箇所のような移植目標の壁に対し装置の先端の曲がらない部分を曲げるようにする（片寄らすことができるチップ）。この柔軟性をもたせる機構は曲がる気管支鏡に使用される“引っ張る”ワイヤー機構と同様かあるいは心血学インターベンションにおけるＶｅｎｔｕｒｅカテーテルと同様である（ウエブ参照）。Ｖｅｎｔｕｒｅカテーテルにおいて、先端のチップは外部ハンドルの親指の回転輪の時計方向の回転により９０°の角度よりも大きく革新的に曲げられる。これはカテーテル軸内のカテーテルの片側への張力を他の側に伝える引っ張りワイヤーにより機械的に行われる。
【００６７】
本発明の一つの観点において、単一の器具、これはバイオプトム（ｂｉｏｐｔｏｍ）と埋め込み装置を一体化した器具は細胞あるいは組織を切除しそして埋め込むための両方に使用される。図１に関して、そこには本発明に関する器具１０の図式的実施態様が示される。望ましくは、器具１０は中空のチューブあるいはカテーテル１２、内部スタイレット２０、および停止器具１６からなる。
【００６８】
望ましくは、中空チューブ１２はステンレス鋼あるいはニチノールで作られそして先端の周囲にかみそり形状の切断刃１１あるいはチューブ１２のチップ１３を含んでいる。中空チューブ１２は曲がらなく、単独の外科用設備のような構造にされそして配置されるか、あるいは代わりに、経皮的に曲がる軸の先端に取り付けられる曲がらないチップのような構造にされそして配置される。
【００６９】
効果的な試料採取および埋め込みは内径が約１００と約１０００μｍの間で、望ましくは約２００と約８００μｍの間のチューブ１２で実行される。しかしながら、より大きなあるいはより小さい直径のチューブ１２が、勿論、この開示の範囲および精神を犯すことなく利用できる。さらに、曲がらない外科用器具１０は長さが約３０センチメートル（ｃｍ）で曲がる軸に取り付けられた曲がらないチップは長さ約２ｃｍである。
【００７０】
停止器具あるいは部材１６、例えば、ゴムあるいはプラスチックのＯ−リングおよび中央の開口１９を含む同様なものは分離した距離、例えば、チューブ１２の先端チップ１３から約０．５と２．０ｃｍ間の距離に配置される。望ましくは、停止器具は、例えば接着して、固定して取り付けられるかあるいは中空チューブ１２の内周に密着して提供される。停止器具１６は取り込みストロークおよび埋め込みストロークの両方の間、スタイレット２０の動きを止めるかあるいは制限しそして取り込まれそして埋め込まれる心筋生体組織の寸法あるいは容量を制御する。
【００７１】
スタイレット２０はチューブ１２内の軸方向に動くような構造で配置される。望ましくは、スタイレット２０は前面あるいは先端部分１５、後ろあるいは手元部分１７、ストローク軸１４、および軸１８を含む。さらに望ましくは、スタイレット２０は停止器具１６が先端部分１５と手元部分１７の間にストローク軸１４が中央開口１９内で動けるように設置される構造にされそして配置される。
【００７２】
器具のある実施態様は上述の先端部分と一般的に同じ特徴をもつ取り外し可能な先端部分１３を、先端部分がカップリング６０でチューブ１２の中間部分と手前部分を結びつけられていることを除いて、提供する。このような実施態様で、スタイレット２０と一緒に先端チップおよび停止器具１６は先端からチューブの中央にスタイレット軸１８を送り込むことにより、そしてそれからカップリング６０でチューブ１２に先端部分１３を接続することによりチューブ１２に合致させる。任意に、接着あるいは他の機構がカップリングを安定させるため採用される。
【００７３】
図１Ｂは二つの可動停止器具１２０および１２２がスタイレット２０の移動の長さを調整するためにお互いに関してスライドさせることができるよう組みたてる内側シース上にある器具の先端部分の交換部品１００を示す。先端の停止器具の位置を変更することにより、シース１１４の動きを通して、スタイレットの位置は先端のスタイレット部分１５と先端の停止器具との相互作用により引き抜きに対して制限される。同様に、手元の停止器具１２２の位置を変えることにより、シース１１６の動きを通して、スタイレットの位置は、手前のスタイレット部分１７と手前の停止器具１２２との相互作用により試料の挿入を制限される。
【００７４】
図１Ｃは組織の取り戻しと埋め込み器具２１４を含み、上述のように曲がるハイポチューブ２１２とカップルし、言い換えれば、カップリング２１１を介して制御ハンドル２１０と接続するシステムの実施態様を図示する。このシステムで実施される多くの手順において、移植カテーテル器具はガイドカテーテル２１６を通して挿入される。制御ハンドルは器具の機能を制御するために利用される数多くの推進器を保有している。例として、この実施態様において、推進器２２０、２３０、２４０、および２５０はそれぞれスタイレットの引き戻しおよび引き延ばし、スタイレットの停止位置、チューブの引き延ばしおよび引き戻し、および先端チップ部分２１４の角度の曲げを制御する。推進器２２０の拡大図は一つの可能な制御の典型を示す。推進器スライド２２１は全て長さ方向の軸３１５に沿って、中間位置２２３とともに、２２４で完全なスタイレットの引き延ばしから、２２２で完全なスタイレットの引き込みまでトラック内に位置づけられる。クリック停止は便宜性と再現性のための制御機構に含まれる。制御ハンドルと推進器の形状（ｓｈａｐｅ）と様式（ｓｔｙｌｅ）は図式的に描写される。多くの実際の設計の選択が利用されそして技術としてよく知られている。制御ハンドルの推進器は様式と機構においてお互いに同様かあるいは同様でない。利用できる推進器の型はスライド、ボタン、レバー、回転取っ手および同様品を含む。チューブは取り外しができそして廃棄できそして試料移送のための埋め込み器具に再び取り付けられることに注目せよ。
【００７５】
図１Ｄにおいて、柔らかい組織移植片標本の取り戻しのためのシステム３００の実施態様が図示される。脳のような柔らかい組織は吸引技術によりドナーの箇所から取り出される。先端チップ３１４は既に記述した実施態様と同様である；しかしながらある変形において、スタイレットあるいは停止器具をもたない。チップは２重の胴をもつ曲がらないチューブ３１２に接続され、言い換えればカップリング３１１を通して制御ハンドル３１０に接続される。推進器３１６、３１７、３１８、および３１９はスタイレットの引き延ばしと引き込み、スタイレットの停止位置、チューブの引き延ばしと引き込み、そして先端チップ部分３１４の角度の曲がりを制御する。制御ハンドルの任意の追加品は生体組織の吸入のための制御された口３２１を通してチューブ３１２の一つの胴にカップルされ、真空供給３２０そして口３３１を通してチューブ３１２の第２の胴内に殺菌した生理食塩水の手動あるいはポンプ駆動注入のため、収集容器３４０に回収サイトから生体組織３４１を洗浄するために使用する殺菌した生理食塩水溜３３０を含んでいる。さらに任意のものは真空および生理食塩水供給の応用を制御するためハンドルに追加する付加的推進器を含んでいる。
【００７６】
図１Ｅは真空補助先端チップ４００を図示する。この実施様態において、緩やかな吸引がスタイレットの表面の穿孔４１６を通して先端スタイレット部分４１５に適用される。同様の穿孔４１８は真空源と手前のスタイレット部分４１５に留まっている組織の間の圧力が持続するよう手前のスタイレット部分４１７に存在する。陰圧が回収と埋め込みの間先端チップ内に組織移植片を留まらせるため使用される。真空は次のドナー組織へのチップの挿入および組織からチップの引き抜きの前に適用される。移植片がドナーの箇所の位置にある後に、真空は組織を離すためハイポチューブを引き抜く前に開放される。
【００７７】
図２Ａから２Ｄに関して、例えば、開胸手順のために、曲がらない器具１０を使用して心筋あるいは心室隔膜から完全な心筋生体組織を切除する段階が記述される。典型的に、開胸手順のために、器具１０は約３０ｃｍの長さである。
【００７８】
図２Ａは左心室２１、右心室２２、および心室隔膜２３を含むヒト心筋２５の図を提供する。図２Ｂおよび２Ｃに示すように、器具１０は例えば、３Ｆｒシースあるいは技術として良く知られた蛍光鏡可視化の技術を使用して、右心室２２の壁２４ａを通して挿入される。中空チューブ１２のかみそりの形状の刃１１、例えば、切断カニュ−レ（ｃａｎｎｕｌａ）は中隔２３に押し当てられる。かみそりの形状の刃１１はさらに移植片２３に進み、心筋生体組織２６は中空チューブ１２の先端１３に浸入し、前面部分１５に対して押しつけることによりスタイレット２０を置き換える。
【００７９】
中空チューブ１２の先端１３から、前面部分１５が離れた距離を移ると、例えば、約１ｃｍ、心筋生体組織を含む器具１０は取り去られる。
【００８０】
図２Ｄは器具１０の試料採取ストロークの実例図を提供する。特に、スタイレット２０は生体組織２６が中空チューブ１２に入るのでそれによって連続して後ろ方向に押される。停止器具１６と前面部分１５が接触すると、さらなるスタイレット２０の動きは止まりそして希望容量の生体組織２６が器具１０に入る。
【００８１】
図３Ａから３Ｆを参照して、曲がらない器具１０を使用して哺乳類の器官の第２の部位に心筋生体組織２６を埋め込む段階が記述される。望ましくは、器具１０は心筋生体組織２６を心臓表面の処理箇所２７に移送する。さらに望ましくは、上述したように、実施態様の方法は中間の、例えば、細胞培養段階を不要にする。従って、第１段階で取り戻された心筋生体組織２６は細胞培養なしに埋め込まれる。
【００８２】
図３Ａにおいて、心筋２５は処置箇所２７、例えば、左心室２１の壁２４ｂ内の心筋梗塞の傷あるいは虚血性心筋組織を含んでいる。図３Ｂから３Ｄに示すように、器具１０が処置箇所２７に関して適切に位置決めされた後、器具１０のかみそり形状の刃１１、例えば、切断カニューレが処置箇所２７を切断し；そして中空チューブ１２の先端チップ１３は離れた深さに進む。
【００８３】
中空チューブ１２の先端チップ１３が希望する深さの位置になると、中空チューブ１２は処置箇所から引き出される。中空チューブ１２は引き出されると、
スタイレット２０の軸１８はスタイレット２０を維持するために制御され、さらに望ましくは、スタイレット２０の前面部分１５は静止するかあるいは実質的に静止する。結果として、中空チューブ１２は処置箇所２７から続いて引き出され、スタイレット２０の前面部分１５は続いて心筋組織試料２６を突き出し、左心房２１の壁２４ｂの処置箇所２７内の心筋組織２６を残す。
【００８４】
図３Ｅは器具１０の埋め込みストロークの実例図を提供する。特に、処置箇所２７内への挿入後、中空チューブ１２は続いて処置箇所２７から引き出だされそしてスタイレット２０の前面部分１５は静止するかあるいは実質的に静止する。結果として、心筋組織２６はまた処置箇所２７に押し出される。停止器具１６と後部部分１７が接触すると、スタイレット２０のさらなる動きが停止しそして希望する心筋組織２６の容量が処置箇所２７に埋込まれる。
【００８５】
曲がらない外科用器具を使用して心筋組織２６を採取しそして埋め込む方法を記述してきたが、カテーテルを基本とするシステムを使用して心筋組織２６を採取しそして埋め込む方法を記述する。図４Ｂを参照して、望ましくは、カテーテルを基本とする器具４０は小さい、曲がらないチューブ４８からなり、チューブはプラスチックシースあるいはニチノールのような形状記憶材料を使用して作られたた経皮的に曲がる軸４２の末端４３で構成されそして配置される。
【００８６】
好ましい実施態様において、試料採取あるいは取り込の間、多目的カテーテルあるいは同様の器具が心臓隔膜にあるいは近くに位置される。例えば、蛍光鏡および／あるいはエコー心電図のガイドを使用して、多目的カテーテルが内部頸静脈に挿入され、心臓隔膜の適切な位置まで進む。これらの優れた技術は心臓隔膜に近づく他のポイントが可能であることを評価できそしておのおのはここに包含される。
【００８７】
多目的カテーテルは適切に位置付けされて、チューブ組立体４０はその先端４３で構造化され配置された経皮的に曲がる軸４２と曲がらないチューブ４８からなる。チューブ４８の尖った刃４６は完全な心筋組織試料４１を得るために隔膜に力をかける。尖った刃４６はさらに隔膜内に進むため、心筋組織４１は中空チューブ４８の先端４３に入り、前面部分４５に対して押しつけることによりスタイレット２０を置き変える。前面部分４５が離れた距離、例えば、曲がらないチューブ４８の先端４３から１ｃｍ場所を変えると、心筋組織４６を含む曲がらないチューブ４８は取り去られる。望ましくい実施態様において、隔膜壁の位置は壁の厚みが得られる試料の長さに一致して選ばれる。この場合において、試料採取チューブは壁を通って浸入し、それにより場所から試料の端を切断するかあるいは引き離す必要性をなくす。代わりに、試料採取器具は残っている組織から試料を取り入れるための切断道具あるいは刃を含んでいる。
【００８８】
図４Ａおよび４Ｂを参照して、心筋組織４６を曲がらないチューブ４８を伴う経皮的に曲がる軸４２を使用して哺乳類器官の第２の部位に心筋組織４６を埋め込む段階が記述される。望ましくは、チューブ組立体４０は心筋組織４６を処置箇所４７、例えば、心筋梗塞の傷あるいは虚血性心筋組織へ、心臓表面的に移送する。前述したように、実施態様の方法は中間段階の細胞の変質、すなわち細胞の培養段階をなくす。
【００８９】
本実施態様において、図４Ａにおいて、心筋４９は自由な壁４４内の処置箇所４７を含んでいる。ガイドカテーテルは最初に心筋４９、例えば、大腿骨動脈５０を通して導入され、そして処置箇所４７に位置づけられる。蛍光鏡および／あるいはエコー心電図のガイドは必要品として使用される。チューブ組立体４０はそれからガイドカテールを通して左心室に進入される。
【００９０】
曲がらないチューブ１０の尖った刃４１は処置箇所４７を突き破り、中空チューブ４８は処置箇所４７に導入されそして希望する深さに進む。中空チューブ４８は希望する深さに位置づけられ、中空チューブ４８は処置箇所４７から引き抜かれる。
【００９１】
中空チューブ４８は続いて引き抜かれるので、スタイレット２０の軸５１はスタイレット２０を保持するため、そして特に、スタイレット２０の前面部分４５は静止あるいは実質的に静止を保持するため制御される。結果として、中空チューブ４８は続いて引き抜かれるので、スタイレット２０の前面部分４５は引き続き心筋生体組織４６を押し出し、左心室の自由な壁４４の処置箇所４７内に心筋組織４６を残す。
【００９２】
実施態様の移植方法はまた傷ついた哺乳類心筋組織の部位の細胞増殖を増加しあるいは強めるためおよび／あるいは傷ついた心筋をもつ哺乳類被検者の心臓機能を改善するため使用される。同様に、実施態様の移植器具は、傷ついた心筋部位を修復するために、組織試料を心筋の部分に埋め込むためドナーの箇所から試料細胞の変質なしに取り戻すために使用される。
【００９３】
手順の効果を測定するために、１３頭の３０から４０ｋｇのヨークシャ豚が筋肉へのケタミン（ｋｅｔａｍｉｎｅ）（１０ｍｇ／ｋｇ）とイソフルラン（ｉｓｏｆｌｕｏｒａｎｅ）吸入麻酔で麻酔された。右大腿骨動脈が殺菌状態で外科的切除を経てさらされそして６Ｆｒ動脈シース（Ｃｏｒｄｉｓ、Ｍｉａｍｉ、Ｆｌｏｒｉｄａ）が挿入された。ヘパリン（Ｈｅｐａｒｉｎｅ）が投与された（１００ＩＵ／ｋｇ  ＩＶ）。左冠状動脈のカテーテル化が実施されそして６Ｆｒホッケー棒状ガイドカテーテル（Ｃｏｒｄｉｓ）が左大動脈に位置づけられた。０．０１４インチガイドワイヤーが左冠状動脈（ＬＡＤ）に進められそして２．７５ｍｍ×２０ｍｍの血管形成バルーン（Ｍａｖｅｒｒｉｃｋ  ｂａｌｌｏｏｎ、Ｇｕｉｄａｎｔ）が第１体角枝（Ｄ１）を取った後の中央ＬＡＤに置かれそして６０分間、前壁心筋梗塞を発生するために膨らまされた。場所は右前斜め前壁（３０％ＲＡＯ）と左前斜め前壁（６０％ＬＡＯ）の両方に所見が認められた。心室細動は外部除細動で終息されそして持続した心室性期外収縮はリドカイン（ｌｉｄｏｃａｉｎｅ）（１００ｍｇ  ＩＶ）、アミオダロン（ａｍｉｏｄａｒｏｎｅ）（７５−１５０ｍｇ  ＩＶ）および硫酸マグネシウム（２−４ｇ  ＩＶ）の丸薬と点滴で抑えられた。ＥＫＧがＳＴ上昇のため監視された。バルーンは６０分で縮まされそして取り外された。
【００９４】
心筋補助循環法が梗塞の緊急設定で実施された。第４肋間を通して右前壁開胸が実施され、心膜が開かれ、そして肺が引き込まれた。右心室の壁は切開されそして短い８Ｆシース（Ｃｏｒｄｉｓ）が挿入され、そして巾着縫合で安全にされた。バイオプトム（ｂｉｏｐｔｏｍｅ）（Ｃｏｏｋ  Ｉｎｃ、Ｂｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎ，ＩＮ）が８Ｆｒシースを通してＲＶに挿入されそして蛍光鏡ガイドに従い隔壁を目標とした。６個と１０個の間の試料（平均９個）が右心室隔膜から肝臓バイオプトム器具で得られた。本実施態様において、分離した挿入器具が使用される。試料はそれからマイクロピンセット挿入器具（引き込み可能なマイクロピンセットをもつ１６−ゲージ針）内に移送された。７頭の動物が筋肉挿入のため分散されそして他の６頭制の制御体が偽挿入を受けた。動物はそれから４週間回復されるようにした。
【００９５】
動物は梗塞４週間の後、１．５Ｔ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ  ＴｗｉｎＳｐｅｅｄ  Ｓｃａｎｎｅｒ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）でＭＲＩを受けた。次の測定が実施された：１）薄くなり、壁の動きがなくそして灌流画像に陰影のないことを示す心筋の箇所と決められる心筋壊死の範囲、２）休止する左心室駆出率（ＥＦ）、および３）磁気共鳴第１通過潅流解析を使用する心筋評価をし、そして４）遅延増強画像により評価される心筋梗塞容量。
【００９６】
動物は右肘前の位置に置かれそして整列の形をした心臓コイルが胸の周りに置かれた。機械的振動とガス麻酔が走査の間、継続された。偵察画像が心臓の短軸そして長軸の像を決定するため取得された。高速画像採用定常状態習得（ＦＩＥＳＴＡ）を使用してパルス系列が全体のＬＶ機能を評価した。短軸の映像が同期ＥＣＧでそして無呼吸で取得された。心臓は８から１０のLV短軸スライスでベースから先端へ画像化された。画像の変数は次の通りである：ＴＲ／ＴＭ＝３．８／１．７ｍｓ、フリップ角４５°、２２４×２２４マトリックス、隙間のない８ｍｍのスライス厚み、バンド幅１２５ｋＨｚ、視野２６ｃｍそして１ＮＥＸであつた。
【００９７】
ＭＲ灌流画像は短軸映像にそれぞれ適合される三つのスライスにおいて取得され、同期ＥＣＧおよび無呼吸の多相高速グラディエントエコー−エコー行列（ＥＧＰＥＴ−ＭＰ）パルス系列で心臓、心室中部、および心筋頂端断片を表す。ベースラインの画像として系列の３から５の心臓脈動開始の後、第１通過灌流画像が、０．１ｍｍｏｌ／ｋｇ体重ガドリニウム−ＤＴＰＡ（Ｍａｇｎｅｖｉｓｔ、Ｂｅｒｌｅｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＮＪ）の３．０ｍＬ／ｓｅｃの速度で注射の静脈注射の後、確保され、灌流ポンプで３．０ｍＬ／ｓｅｃで２０ｍＬの生理食塩水の流水が追加され、合計５０相がそれぞれのスライドに確保された。画像の変数は次を含む：ＴＲ／ＴＭ＝９．３／１．８ｍｓ、反転時間１６０ｍｓ、エコーの列の長さ４、１２８×１２８マトリックス、フリップ角２５°、スライスの厚み８ｍｍ、視野２６ｃｍ、区分の間隔２ｍｍ、バンド幅１２５ｋＨｚを含む。
【００９８】
梗塞の寸法は遅延増強ＭＲＩ技術を使用して解析された。画像は第１通過灌流画化の後１５分確保された。同期ＥＣＧ、無呼吸保持、２Ｄインターリービング、反転回復法、高速リコイルエコー、パルスシーケンスを使用して。全部で８から１０の連続する短軸スライスが全ＬＶをカバーするため基礎から頂点まで処方された。画像変数は次のようであつた：ＴＲ／ＴＭ＝６．７／３．２ｍｓ、反転回復時間１８０から２２０ｍｓ、フリップ角２０°、２５６×１１９２マトリックス、スライスの厚み８ｍｍ／隙間なし、バンド幅３１．２５ｋＨｚ、視野２６ｃｍ、そして２ＮＥＸ。反転回復時間は通常の心筋をゼロにするための要求されるように調節された。
【００９９】
全ての測定は市販のソフトウエア（ＭＡＳＳ  Ａｎａｌｙｓｉｓ、Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ）でブラインドされた検査者によってオフラインで解析された。心筋灌流解析のため、短軸画像がスライス部分と獲得時間に従って分類され、ＬＶ心内膜床欠損および心臓表面打撲傷が手動で引き出され、そしてスライス当り６個の等角切片（前壁、前壁側壁、下壁、下壁中隔、前壁中隔）は参照点として右心室の前壁中隔挿入を自動的になされた。６個の切片心筋信号の上向き勾配は、入力機能の測定と見なされる左心室腔における信号の上向き勾配によって区分された。
【０１００】
ＬＶ圧力は従来の方式でＬＶ中に置かれた高い精度のマイクロマノメーターカテーテルで測定された。ＬＶ圧力の変化割合（ｄＰ／ｄｔ）は１０ビートで測定されそして平均化された。全てのデータは数値的に記録されそしてオフライン分析のため保存された（Ｓｏｎｏｍｅｔｒｉｃ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｏｎｔａｒｉｏ  ＣａｎａｄａからのＳｏｎｏｓｏｆｔ）。
【０１０１】
梗塞と処置の後４週間、動物はペントバルビタールの致死注射で犠牲にされた。実験の終了で、心臓は採取されそして５個の標準スライスに切断された。頂点と中央のスライスはリン酸塩緩衝液に１％ＴＴＣで染色された（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）。心臓スライスは２０分、３８℃で培養された。染色されたスライスは綺麗なアセテートガラス上に置かれそして心筋部分は面積計で測定された。残った心臓筋肉組織はパラフィン取り込みおよびヘマトキシリンおよびエオシン染色のため緩衝された生理食塩水中１０％ホルマリン中に置かれた。組織はまた続く蛋白質分析（ＶＧＥＦ、ＦＧＦ−２、ＴＧＦ−ｂｅｔａ、およびＰＥＣＡＭ−１蛋白質発現のため）のため液化窒素中−８０℃で急速に凍結された。
【０１０２】
心筋細胞はＲＩＰＡ溶液（Ｂｏｓｔｏｎ  Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ；Ａｓｈｌａｎｄ、ＭＡ）によってホルマリン漬けされそして１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルで分劃された。蛋白質抽出物はポリビニリデン  ジフルオリド膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ；Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）に移された。ＶＧＥＦ、ＦＧＦ−２、ＴＧＦ−ｂｅｔａ、およびＰＥＣＡＭ−１がこれらのそれぞれの特別の抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ＣＡ）で検出された。イムノブロット法が強調化学蛍光ウエスターンブロッティング試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ；Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ  Ｈｅｉｇｈｔｓ、ＩＬ）により可視化された。画像濃度測定の全ての値はＩｍａｇｅＱｕａｎｔソフトウエアにより計量化されそして試料負荷により調整された。
【０１０３】
データ解析およびグラフ化はＳｔａｔｖｉｅｗソフトウエアパッケージを使用して実施された。グループは０．０５の統計的有意義検定のためｐ−値すそ切りでｔｏｗ−ｔａｉｌｅｄ  ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ検定を使用して比較された。データの標準分布はパラメーター的解析を実施する前に評価された。適当な補正が多重比較のためになされた。
【０１０４】
バルーン閉塞の心筋梗塞方法の最初の発生はバルーン閉塞の間の心室細動に続く死亡率２０％以下と関連づけられた。埋め込み手順に伴う付加的な死亡はなかった。動物は低血圧あるいは持続した不整脈なしに右心室隔膜の試料切除および前壁の埋め込みの両方を許した。細胞の定着は埋込み後４週間で次の経過的および形態測定評価によって示されるように生き残った。
【０１０５】
ＬＶ心筋はスライス当り６個の等角切片に分けられた。各スライスに対し、前壁、前壁中隔、および側壁は心筋信号強度増強対時間の最大上向き勾配に基づくＭＲ第１通過灌流によって測定された。非処置の中隔壁に対する処置前壁の灌流比は処置動物の１．２±０１２に対し制御されたものは０．８６±０．０５であった（ｐ<０．０１）。すなわち、灌流は制御された動物におけるよりも処置動物の前壁において大きかったがしかし処置がされなかった隔壁箇所では相違はなかった。結果は図５Ａに図示される。ＭＲＩにより評価された灌流の相違は梗塞容量の測定と同様に心筋機能の一般的な評価と相関した。
【０１０６】
ＭＲＩの遅延増強により測定された心筋梗塞の平均容量は、梗塞寸法を減少した心臓組織移植を示し、処置動物で２．２±１．５ｍＬ対制御された動物の５．４２±０．５ｍＬ（ｐ＝０．０４；図５Ｂ）であった。測定は灌流を評価するために使用した心筋の同じスライスでなされた。
【０１０７】
％壁の肥厚は統計的有意義検定に達する結果（ｐ＝０．０６９）で非処理対照物よりも処理動物の前壁において６倍大きかった（図６Ａおよび６Ｂ）。埋め込まれていない隔壁においてはそのような相違は見られなかった（ｐ＝０．４）。
同時に、壁運動の成績は制御体（ｐ＝０．１７）に比べて埋め込まれた動物の前壁において隣接する前壁における改善された収縮性の転換により隔壁と全く同様に増加する傾向にあった（図７Ａおよび７Ｂ）。二つのグループの間の総括駆出率（３２％対３７％、ｐ＝０．３５）は統計的有意義検定に達しなかった（図８Ａ）。
【０１０８】
最大のｄＰ／ｄｔによって測定した収縮性は処理したグループで１２９５±２１５ｍｍＨｇ／ｓそして制御グループで８１７±９１ｍｍＨｇ／ｓ（ｐ<０．０５）であり、総括心臓収縮心筋機能が処置動物において改善され（図８Ｂ）、％前壁肥厚ＭＲＩ結果と一致したことを示している。
【０１０９】
ＴＴＣによる心筋梗塞寸法の形態測定は梗塞寸法の心臓組織の移植の効果を決定するために行われた。梗塞寸法は中央ＬＡＤ（ポストＤ１）に各手順の間バルーンを位置づけることおよび６０分間膨脹を維持することにより制御された。手順を標準化したにもかかわらず梗塞寸法は解剖の変化により幾分変わった。人間は動物間の梗塞寸法を正確に制御できないため、前壁梗塞は隔壁がないところで処置されたので、前壁梗塞の寸法は中壁梗塞の寸法に対して標準化された。動物対動物の梗塞寸法の差を数えそして前壁の心臓組織移植の効果を分離するために我々は％前壁対隔壁梗塞寸法を比較した（図９Ａおよび９Ｂ）。処置動物と非処置動物の間の梗塞寸法に顕著な差はなかった。処置動物の前壁の％梗塞寸法１１±４．５％に対し非処置動物において２９±５％（ｐ＝０．０３）であった。隔壁箇所の％梗塞寸法に二つのグループ間の差はなかった（２１％対２２％；ｐ＝０．８８）。
【０１１０】
心臓補助循環法のための灌流および心筋機能における改善の基礎となる機構を説明するために、病理組織および蛋白質発現解析が梗塞した心筋に関して実施された。ＶＥＧＦ、ＦＧＦ−２、およびＰＥＣＡＭ−１蛋白質の水準は処置動物において著しく低くかった。さらにTGF−ｂｅｔａの水準は非梗塞ゾーンに比較して処置動物の梗塞前壁において低くなる傾向であった。ウエスターンしみからの濃度測定は図１０Ａから１０Ｄに示される。
【０１１１】
ここに記述することは安全で、効果的でそして全く完全な同種の心筋組織で、伝染の可能性のある合併症をもつ細胞の増殖および減少した細胞の生存のための必要性をなくす心臓補助循環法を実施する簡単な方法である。このアプローチは冠動脈バイパス移植片のような計画された再建術（ＣＡＢＧ）間、相当容易に実行できる。
【０１１２】
さらに重要なことに、全生体組織の埋め込みは、細胞の切断を避けてそして自然のサイトカインおよび細胞外マトリックス足場内の成長因子と同様に完全な組織構成を保持する。心臓補助循環法で処置された前壁内に局所的に観察される灌流の改善は、埋め込みの細胞外マトリックスからの増殖因子の分泌作用によることが可能である。我々のウエスターンしみ解析は、しかしながら、LV機能が平準化したため梗塞ゾーン内の血管新生因子発現（ＶＧＧＦ，ＦＧＦ−２）の減少した水準を示した。組織は埋め込み後４週間で採取された。かくして、水準は処置グループにおいて完全な修復過程と再建術を反映した。心臓の幹細胞は生体組織に含まれそして細動脈を分化し、そして梗塞ゾーンによる高い水準の血管新生の精密度のための必要性が部分的に減少されるに十分な再生能力を提供する。組織試料に含まれる内皮細胞は心外冠状血管に移動できそしてそれにより改善された灌流および改善された内皮機能に貢献できる内皮を修復することができる。
【０１１３】
幹細胞および心筋細胞の埋め込みは新しい心室心筋細胞に同調して鼓動する結果にはならないがしかし埋め込みサイトに付加的な隣接部位における再モデル化工程にプラスに影響することにより心筋機能を全般的にむしろ改善する。非処置動物に比べて処置動物の減少した梗塞容量は心筋再生が起きることを意味している。細胞外マトリックスを伴う心室心筋細胞および増殖因子の埋め込みは特有の細胞が好ましくない傷の中に挿入されるときよりも良い。この心臓補助循環法技術は、減少したフィリング圧力および壁の緊張から派生するような血行力学的測定における増大したピークの伸縮性（ｄＰ／ｄｔ）により証明されるように心筋機能における全般的な改善になった。現在のＭＲＩ測定は灌流および処置壁内の梗塞容積の減少の両方における改善を示している。付加すると、埋め込まれた前壁の％肥厚は、壁運動のスコアと同様に、非処置動物と比べ処置動物において改善された。これは前壁の収縮に埋め込みの直接的貢献を示している。非処置の隣接の隔壁における収縮性の改善は統計的に顕著でなく、そして心臓運動のスコアに僅かな改善傾向が前壁の伝わった運動によるようであった。駆出率の相違の大きさは動物の少ない数と個々の動物の変異性により、統計的に顕著ではなかった。機能的解析の結果はＴＴＣ染色の形態測定解析によりまた確認され、そして梗塞寸法は非処置の隔壁に比べて処置前壁において小さかった。経過的解析は埋め込み後４週間での移植組織の変異性を確認した。
【０１１４】
埋め込まれたグループと偽の手術をされたグループにおけるＭＲＩによる梗塞容量を比較する。隔壁の梗塞寸法により標準化された梗塞の寸法は二つのグループで差はなかった。梗塞容量は処置動物で４０％低かった。
【０１１５】
組織の切除および埋め込み手順の効果を梗塞後２週間組織で測定するために、１２頭のヨークシャ豚が麻酔されそして６Ｆｒカテーテルシースが左前冠状動脈に血管新生バルーンを挿入する目的で大動脈に挿入された。
【０１１６】
心室細動は終息されそして外部除細動そして持続した心室性期外収縮はリドカイン、アミオダロンおよび硫酸マグネシウムの丸薬と点滴で抑えられた。バルーンは６０分で縮まされそして取り外された。動物はここで記述するように心臓補助循環法が実施され、２週間回復させその後、述べるように、右心室壁は切開されそして短い８Ｆｒのシースが挿入された。バイオプトムが右心室に８Frシースを経て挿入され隔壁を目標とした。
【０１１７】
右心室隔壁から６個から１０個の試料が取得されそして試料は左前冠状動脈から約０．５ｃｍそしてＤ１／Ｄ２分裂で左心室冠状動脈内に埋め込まれた。
【０１１８】
心筋梗塞２週間後そして心臓補助循環法ベースライン時に電子放射線法が右心室駆出率の変化および部位壁運動、および左心室端心臓拡張寸法を評価するため実施された。２次元電子放射線法が仰向け位置の動物の左胸骨軸窓から実施された。
【０１１９】
端心臓収縮（ＥＳ）と端心臓拡張（ＥＤ）の左心室腔寸法がＭモードで決定された。駆出率は次の式で計算された：
（ＥＤ容積−ＥＳ容積  ）／ＥＤ容積  ×  １００
壁の運動は短い胸骨左縁軸観察で評価された。梗塞よって影響された頂点を可視化するために、心外の電子放射線法が胸部手術のときにまた実施され、標準の心外観察が得られた。測定は梗塞後４週間に器官の採取のとき繰り返された。
【０１２０】
左心室圧力は従来の方式で左心室中に置かれた高い精度のマイクロマノメーターカテーテルで測定された。左心室圧力の変化割合（ｄＰ／ｄｔ）は１０ビートで測定されそして平均化された。全てのデータは数値的に記録されそして前述したようにオフライン分析のため保存された
【０１２１】
左心室圧力は３．５ＪＬ５Ｆカテーテルで測定されそしてＳｏｎｏＳｏｆｔソフトウエアでまた記録された。これらの測定は、心筋梗塞後４週間の採取の時と同様に、最初の心筋梗塞の後埋込み２週間の時に取得された。
【０１２２】
実験の終わりに心臓は採取されそして五つの標準寸法のスライスに切断された。頂点と中央のスライスはリン酸塩緩衝液中１％トリフェニールテトラゾリウム塩化物（ＴＴＣ）で染色された。心臓スライスは２０分、３８℃で培養された。染色されたスライスは綺麗なアセテートガラス上に置かれそして梗塞面積は面積計で測定された。特に重要なこととして、独立した２人観察者が梗塞面積を測定しそして結果は統計的解析に従わされた。
【０１２３】
残った心臓筋肉組織はトリクローム染色と同様に、パラフィン取り込みおよびヘマトキシリン−エアシン染色のため緩衝された生理食塩水中１０％ホルマリン中に置かれた。組織はまた続く蛋白質分析のため、例えば、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ−２、ＰＥＣＡＭ−１および  反アポトーシス蛋白質ＩＡＰ染色およびマトリックスメタロプロテアーゼ発現のため液化窒素で−８０℃で急速に凍結された。動物はペントバルビタールの致死注射で犠牲とされた。
【０１２４】
心筋細胞はＲＩＰＡ溶液によってホルマリン漬けされそして１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルで分劃された。蛋白質抽出物はポリビニリデンジフルオリド膜に移送された。ＶＧＥＦ、ＦＧＦ−２、ＩＡＰ−２０およびＰＥＣＡＭがこれらのそれぞれの特別の抗体で検出された。イムノブロット法が強調化学蛍光ウエスターンブロッティング検査試薬により可視化された。
【０１２５】
画像濃度測定の全ての値はＩｍａｇｅＱｕａｎｔソフトウエアにより計量化されそしてＲｏｎｃｅａｕ  Ｒｅｄ染色による試料負荷比により調整され、そして梗塞寸法に標準化された。
【０１２６】
パラフィン組織は抗原回復技術、例えば、沸騰したクエン酸塩緩衝液への浸漬、を行った。免疫組織化学法がａｎｔｉ−ｓｃａ−１を１：２５０希釈、ｍｄｒ−１を１：４０希釈、そしてｃ−ｋｉｔを１：２００希釈を使用して実施された。アンチイソタイプの二次抗体（１：２５０希釈）およびジアミノキシベンジジン発現システムをもつ抗原性賦活化システムが初生の幹細胞を可視化するため使用された。切断部はヘマトキシリンで対比染色されそしてカバー  スリップされた。
【０１２７】
細胞は画像分析ソフトウエア、例えば、ＳｐｏｔＡｄｏｖａｎｃｅｄを使用して計算された。細胞は各動物においていくつかの代表的な１０倍被写界で数えられた。データは１０倍被写界当りの細胞の平均数で表される。
【０１２８】
データ解析およびグラフ化はＳｔａｔｖｉｅｗソフトウエアパッケージを使用して実施された。グループは０．０５の統計的有意義検定のためｐ−値すそ切りでｔｏｗ−ｔａｉｌｅｄ  ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ検定を使用して比較された。データの標準分布はパラメーター解析を実施する前に評価された。適当な補正が多重比較のためになされた。データはＴＴＣ染色データを除いて標準偏差をもつ平均値として表され、ここでは標準誤差は二つの別々の測定が動物当りでなされそして個々の試料として処理されたことを仮定して使用された。同様の分析が心筋梗塞の急性モデルにおいて実施された。
【０１２９】
バルーン閉塞の心筋梗塞方法の最初の発生はバルーン閉塞の間、心室細動に次いで死亡率２０から３０％と関連づけられた。心臓補助循環法手順に伴う付加的な死亡はなかった。動物は低血圧あるいは持続した不整脈なしに右心室隔膜および前壁の生体組織埋込みの両方を許した。細胞の定着は埋め込み後４週間の次の経過的および形態測定評価によって示されるように１００％に近づいた。
【０１３０】
心筋組織の処置動物は２および４週間梗塞後で同じ駆出率（４９％±６．５％対４６％±７．４％；ｐ＝０．５２）を維持した。対照的に図１１Ａに示されるように非処置動物においては駆出率は（５０％±１０．４％対３６％±８．７％；ｐ＝０．０３８）顕著に減少した。これは心筋組織の埋め込みは心筋梗塞の後続いておきる好ましくない変化を防止したことを示した。
【０１３１】
血行力学的評価結果は収縮（＋ｄＰ／ｄＴ）機能および拡張（−ｄＰ／ｄＴ）機能の両方においてエコーの結果と並行し、同様にフィリング圧力は梗塞後２および４週間の間、処置動物に変化がなかった（それぞれ、図１１Ｂ、１１Ｃおよび１１Ｄ）。左心房圧力は１７対１６（ｐ＝ＮＳ）、ｄＰ／ｄＴは８７４対７６３（ｐ＝ＮＳ）および−ｄＰ／ｄＴは７１６対６７６（ｐ＝ＮＳ）であつた。
【０１３２】
他方、非処置制御動物は＋ｄＰ／ｄＴ（９０６から６０９にダウン、ｐ＝０．００９）そして−ｄＰ／ｄＴ（８５０から５９９にダウン、ｐ＝０．０３３２）を顕著に減少した。これらは左心房圧力をまた増加した（１４から２０に上昇、ｐ＝０．０１６９）。これは再び心筋梗塞の後続いておきる左心室の機能の衰退を防止する心筋の役割を示している。
【０１３３】
ＴＴＣによる心筋梗塞寸法の形態計測は梗塞寸法の縮小についての心臓補助循環法の効果を確認するためになされた。前述したように、各手順および６０分間梗塞を維持する間、梗塞寸法は中央左前冠状動脈（後第１対角枝）にバルーンを位置づけることにより制御された。これは、しかしながら、動物間のいくつかの差異によるもであった。
【０１３４】
この差異および平均梗塞寸法は電子放射線法によって測定されたようにランダム化する以前の梗塞２週間後の動物グループの間の差異はなく、例えば、駆出率は二つのグループで５０％と４９％であつた；ｐ＝ＮＳ。非処置制御のものと心臓補助循環法処置の動物の間の梗塞寸法において顕著な相違があった。処置動物の前壁における％梗塞寸法は図１２Ａに示すように制御動物におけるよりも顕著に小さかった（２１．４％±３．３％対３３．４％±２．２％；ｐ＝０．００６）。急性心筋梗塞モデルと同じではなく、心筋再生における心筋組織の全般的な効果を示す図１２Ｂのように、非処置隔壁における梗塞寸法に顕著な相違がまたあった（１６．２％±３．３％対２７．１％±３％；ｐ値＝０．０２４）。
【０１３５】
ＴＴＣ染色評価は二人の独立した観察者の間に矛盾はなかった（相関係数＝０．８２、ｐ＝０．０００５）。
【０１３６】
Ｈ＆E（ヘマトキシリン−エアシン）およびトリクローム染色による微視的解剖解析は梗塞の拡大した箇所の存在および前壁中隔箇所における繊維症を確認した。処置動物において生き残った埋め込みは多くの組織部分で存在することが分かった。
【０１３７】
埋め込みに隣接しおよび梗塞部位の中でｍｄｒ−１に対して活性な初生幹細胞の注目すべき増加した数が見られた。これらの細胞は非処置の制御動物においては数多くなかった（１０倍被写界当り平均細胞数９＋６．２対１７＋３．９；ｐ＝０．０３８）。ｓｃａ−１細胞の数は二つのグループの間に顕著な差異はなかった（１３＋１３対１６＋２５；ｐ＝０．８４）。他方、ｃ−ｋｉＨ幹細胞は制御（非処置）動物において数が多かった（７．８＋６対０．６＋１．３；ｐ＝０．０３４）。
【０１３８】
従って、ｍｄｒ−１はプラスでそして多分ｓｃｒ−１はプラスの成体の心筋幹細胞が潜在的に埋め込みから梗塞部位内に始まりそして転移したことがこの結果から推論される。これは対照的に梗塞の後、骨髄から心臓の前駆細胞の取引であり、これは非処置動物のｃ−ｋｉＨ前駆細胞の増加した数に原因があるかも知れない。ＰＥＣＡＭ−１染色は処置動物において毛細血管と新しい血管の数の増加を示した（図１３）。
【０１３９】
心臓補助循環法よる心筋梗塞の改善が新しい血管新生蛋白質発現によって成立したかどうか調査するために、梗塞した心筋の解析が実施された。ＶＥＧＦ−２（２３ｋＤａ）蛋白質のレベルは処置動物のグループにおけるより２倍低い傾向があった（図１４Ａ）。同種の心室心筋細胞での処置は、梗塞ゾーン内の組織修復と同様に外因性の血管新生および増加した組織灌流の必要性を減少させることを示している。
【０１４０】
他方、ＰＧＦ−２レベルは両方のグループにおいてベースラインより３から４倍等しく上昇する傾向であった。
【０１４１】
心筋機能障害および左心室肥大を防ぐ心筋組織の観察した結果を考えると、マトリックスメタロプロテアーゼＭＭＰ−２および−９の発現は、好ましくない梗塞後再モデリングに含まれると知られているマトリックスメタロプロテアーゼ−２（ＴＩＭＰ−２）と同様に評価された。処置動物における維持された心筋機能はＭＭＰ−２の２倍低いレベルの傾向（図１５Ａ）およびＴＩＭＰ−２の２倍高いレベルの傾向（図１５Ｂ）と相関した。ＭＭＰ−９は心筋梗塞後のＭＭＰ−９の動力学から期待されるように両方の動物グループにおいて下向きに調整された。
【０１４２】
梗塞の潜在的な複雑性をもつ細胞の増殖および減少した細胞の生存の必要性をなくす実施態様の方法は冠状動脈バイパス移植片手術（ＣＡＧＢ）あるいは血行再建手術ができそうにない患者のためのビデオ援助による胸部鏡を介し計画した血行再建手術の手順の間実施できる。これらの結果は心臓細胞の埋め込みが拡大した前壁心筋梗塞後に観察される心筋機能の動かしえない退化を防ぐことを証明している。これは処置動物における血行動力学的パラメーターと同様に駆出率の保存の証拠となる。これは駆出率が急性心筋梗塞の設定において約３から７％増加する先の結果の効率を保っている。
【０１４３】
慢性虚血症の心臓補助循環法は、それぞれ雌のネズミの心筋梗塞後においてＳＰＥＣＴおよびＭＲＩ画像により梗塞寸法および収縮性が減少されることを示し、そして新しい血管が形成されたことを示した。この機構は処置動物の埋め込みサイトの周囲の梗塞ゾーン内のｍｄｒ−１活性幹細胞の全体の増加数を与える活動である（図１６）。ｍｄｒ−１活性細胞は心筋細胞、内皮細胞、平滑筋細胞および繊維質に分化することが示される。
【０１４４】
ｓｃａ−１は幹細胞に付加して内皮細胞に発現する。ｓｃａ−１の活性細胞が呈する数は多分ｓｃｓ−１活性幹細胞の真の数を混乱する内皮染色の理由でグループ間で等しかった。
【０１４５】
ｃ−ｋｉｔ活性細胞は多重の系統を再生できそしてｍｄｒ−１およびｓｃａ−１活性細胞よりもさらに多機能性がある。ｃ−ｋｉｔ活性細胞の増加は非処置試料において見つけられた（図１７）。未成熟のｃ−ｋｉｔ活性幹細胞はこの場合、骨髄から分岐されそして埋め込み−分岐したｍｄｒ−１およびｓｃａ−１心室心筋前駆細胞の欠落を与えられた梗塞箇所で高い数で回復された。
【０１４６】
成体のネズミに似た心筋において、ｓｃａ−１活性ｃ−ｋｉｔ非活性細胞は心原性転写要因を現すがしかし心臓前駆細胞になりそうな構造的遺伝子を現さない。事実、ｓｃａ−１活性ｃ−ｋｉｔ非活性細胞は梗塞境界ゾーンに生息しそしてこの部位の心筋細胞の数を１５％上昇させる。
【０１４７】
肥大した心臓において、ｃ−ｋｉｔ、ｍｄｒ−１、およびｓｃａ−１活性細胞はまた制御されたものと比較して増大された。これらの細胞の数は、しかしながら、ｓｃａ−１およびｍｄｒ−１細胞をこの桁で数が勝るｃ−ｋｉｔと等しくはなく、心臓の前駆細胞は分化の異なる段階で、これらの指標を現すことを示唆している。ｍｄｒ−１活性細胞はｃ−ｋｉｔ活性細胞よりもっと分化されそして、それ故、埋め込みの富化された環境により処理動物における大きな生き残りと分化速度をもつことが可能である。
【０１４８】
処理動物のｍｄｒ−１活性細胞におけるこの富化に対して異なった説明がある。埋め込みから梗塞および梗塞周辺ゾーンへの直接の移動よりもむしろこれらは、埋め込んだ組織により提供される生息信号に応じた心臓の心房および右心室の外側流れの器官系から、回復される。
【０１４９】
分娩後の心臓未分化細胞であるｉｓｌ−１細胞は心臓のこれらの部位においてさらに優勢でそして心筋梗塞の間に回復される。
【０１５０】
成人の心臓幹細胞の分化能力はこれらの老境、すなわち、テロメラーゼ逆転写トランスクリプターの発現によってだけでなく、心筋中の低下した栄養上の因子によっても同様に制限される。過去にこの問題はＮＯＧＡカテーテル電気機械的マッピングガイダンスを使用して梗塞周辺の活動していないゾーンに心臓未分化細胞を埋め込むことによって部分的に回避された。しかしながら、隣接する梗塞分化された心室心筋細胞と一緒に幹細胞を埋め込むことによって、分化に必要な栄養因子をもつ幹細胞が提供された。
【０１５１】
幹細胞は他の細胞より耐久性があると言われるけれども、これらは梗塞されそして灌流のない環境ではまた乏しく生き残る。かくして、埋め込みによって作られた血管新生後微少環境は生存できるｍｄｒ−１活性細胞の数を増加することにおいて他の装置的な因子であるかも知れない。
【０１５２】
急性心筋梗塞モデルにおけるこれらの測定と一致して、最初の心筋梗塞後４週間および心臓補助循環法処置後２週間においてＶＥＧＦ−２レベルは処置動物において低かった。心筋梗塞４週間後において、心筋機能の駆出率および他のパラメーターは心臓補助循環法での処置動物において回復したとき、ＶＥＧＦ−２水準は既に下方調整されていたことに注目せよ。非処置でそして低い心筋灌流と心筋機能障害をもつことを続けられた動物はなお上昇したＶＥＧＦ−２水準を維持した。
【０１５３】
本発明に従う他の実施態様１００において、試料は動物あるいはヒトの脳から採取されそして細胞の再生を提供するため損傷あるいは病気の組織に埋め込まれる。プローブあるいはカテーテルはまず身体に挿入され１０２、試料採取器が器官に挿入され１０４そして組織試料が切除される。採取器は試料の変質なしに埋め込みのため再位置付けされるかあるいは代わりに埋め込み１１０に先だって試料が測定されるか１０８あるいはその細胞の特性が変質される。器官の機能はそれから評価される１２０かあるいは監視される。
【０１５４】
本発明に従う一つの実施態様は同種の心筋組織移植のための開胸外科手術手順である。冠状動脈バイパス移植片（ＣＡＢＧ）のための開胸外科手術をうける最近の心筋梗塞を持つ患者が同じ手順で実施される心筋組織移植を受けることができる。患者は通常方式で２等分胸骨縦割法を受けそしてバイパスを設置することができる。心臓は完全に曝露され、心臓の壁は全て容易に評価される。生存する心筋区域に必要なバイパス移植片を縫い合わせた後（例えば、左中乳房動脈（ＬＩＭＡ）および潜在静脈移植片）、予備手術的タリウム核研究あるいは心臓の磁気共鳴遅延強化画像法により決定した生存しない傷つたい区域が同種の心筋組織移植により処置される。
【０１５５】
右心室自由壁が番号１１の刃で切開される。巾着縫合治療が行われ、そして６Ｆｒｅｎｃｈ大腿骨大動脈シース（長さ５ｃｍに切断）が右心室に挿入される。縫合はシースを場所内に確保し手順の終わりに切開の容易な修復をさせる。シースの側端腔を通して血管造影法造影剤が基底隔壁の位置を描写するため挿入される。右心筋移植カテーテル器具が６Ｆｒｅｎｃｈシースを通して挿入されそして蛍光鏡あるいは経食道電子放射線ガイダンスのもと基底隔壁に対して位置付けられる。心筋組織移植片が隔壁を完全に通したハイポチューブの尖った先端の挿入およびハイポチューブの引き込みにより得られる。器具は右心室から回収されそして心筋の傷跡に置かれる（例えば、前壁心筋梗塞の場合は前壁左心室壁）。尖った刃先は心筋壁に対して垂直（任意には４５°の角度で）位置づけられそしてスタイレットによって決まる深さで壁に挿入される。スタイレットはスライドする機構がハイポチューブの引き込みをさせ、左心室内の埋め込む生体組織を残す間、位置に保たれる。カテーテル器具はそれから前壁から動かされる。
【０１５６】
ハイポチューブは先端で切断刃先を曝すために前に進められそしてカテーテル器具はシースを通して右心室に再挿入される。心筋移植片切除および移植の過程はそれから梗塞ゾーンの寸法に依存して６から１０回繰り返される。
【０１５７】
本発明に従って心筋組織移植は開胸技術（すなわち開胸手術）により実施され、その間心臓は心拍停止にありそして循環が心肺バイパスによって維持される。しかしながら、心臓の停止の必要性はそのような手順に伴う危険性を高め、心臓の筋肉に虚血の損傷を起こしそして大動脈遮断やカニューレ挿入から起きる循環の栓塞による心拍あるいは他の傷害を起こす危険性を含んでいる。付加すると、全体の開胸手術は顕著な疾病率および死亡率を発生しそして回復を長引かせる。それ故、いくつかの実施態様で、本発明に従う心筋組織移植は心臓が脈を打っている間に、心臓の内部への胸部鏡の接近を使用して実施される。
【０１５８】
開胸鏡による試みにおいて、肋骨および胸骨は無傷に残りそして手順の間顕著に縮まらない。作業空間が患者の肺の一つを潰すことによるかあるいはジェット換気技術を使用して患者の胸腔に作られる。腹腔鏡あるいは腹腔外科手術顕微鏡のような観察鏡はそれから肋間隙を通して心臓の外側に作業空間を観察するため導入され、一方、貫通が形成されそして接近器具が導入される。観察鏡は手順の間観察することができるモニターに表示するため心臓のビデオ画像を提供するビデオカメラを含んでいる。代わりに、心臓は観察鏡のレンズを通してあるいは肋間隙に位置する套管針スリーブを通して直接観察される。胸腔内への接近は肋間の肋骨隙の小さい経皮的切開あるいは穴を通して得られる。套管針スリーブ、口、あるいは他の型の経皮的接近カニューレは胸腔への機器の導入を促進するために取り巻く組織を保護しそして収縮するようにこれらの切開あるいは穴に置かれる。小さい切開および／あるいは接近口は、胸の後部側の例えば、第３、第４，第５、あるいは第６肋骨間隙に置かれる。少なくともこのような三つの口は通常要求され、移植カテーテル器具導入のための一つ、内視鏡のような可視化装置導入のための一つ、縫合、回収、および他の目的の他の装置の導入のための一つである。代わりに、移植チューブあるいはカテーテル器具が腹腔鏡の生体組織検査チャンネルを通して挿入されるかあるいは可視化のためのファイバー光ケーブルを含んでいる。
【０１５９】
患者は従来の方法で心筋外科手術のため準備され、そして一般的な麻酔がされる。患者は胸の右後部側が上向きに配置するよう患者の左側に位置付けされる。２から３ｃｍ長さの二つから三つの小さい切開が通常第３、第４，あるいは第５肋間隙内の肋骨の間で行われる。胸部鏡接近口（例えば、套管針スリーブあるいは他のカニューレ）は各切開に隣接する組織を取り戻し、機器が胸腔内に導入されるので組織を外傷から保護するよう位置づけられる。接近口は肋骨の取り戻し、切断あるいは切除を要求されない外径で、望ましくは１４ｍｍ以下で、約１２ｍｍ以下の径の軸通路をもっている。接近口はまた断面が円形でなくあるいは二つの肋骨の間に導入されるとき円形を損なう柔軟な材料で作られる。右肺は右肺内に患者の気管を通してチューブを導入しそして肺を収縮するためのチューブを通して真空にすることによる従来の技術で収縮される。ビデオモニターに接続された胸部鏡のような腹腔可視化器具が胸腔の内部を可視化するために接近口の一つを通して導入される。
【０１６０】
心臓の前内部の可視化は心臓の内部を超音波的に画像化するために、患者の食道内、患者の胸の表面、あるいは心臓の外側と隣接するか接触する心臓腔に位置づけられる超音波プローブによって提供される。代わりに先端に半透明なバルブ（ｂｕｌｂ）あるいはバルーンをもつ腹腔鏡が心臓の内部をビデオベースあるいは直接の可視化のため、接近器具を通してあるいは心臓の壁の別の切開を通して導入される。末梢血管を通して心臓の血管内に導入される咽喉鏡は心臓内の可視化のため使用される。蛍光鏡は可視化のための付加的技術である。
【０１６１】
それから巾着縫合治療は接近器具が導入されることが望ましいサイト周りの心臓の壁になされる。これは胸腔内に縫合糸に取り付けられた曲がった縫合針を導入し、そして心臓の壁を通して円形のおおよそ１２から１４ｍｍの直径に心臓の壁を通して縫合の縫い目を形成する針をドライブするために、胸部鏡針ドライバーを使用して完遂される。二重の腕の縫合がまた使用され、ここでは縫合糸１１０が両端に針をもち、それぞれの針は巾着縫合の一つの半円部分を形成するため使用される。縫合糸は巾着縫合治療が行われる胸腔の外側に引き出すことを縫合の両端にさせる十分な長さであるかあるいは短くそして胸部鏡装置を使用して胸腔内で操縦される。縫合針はそれから胸部鏡用はさみを使用して糸から切り離なされる。
【０１６２】
約１０ｃｍの長さで約５ｍｍの内径のチューブ状接近器具は巾着縫合手術で取り囲まれる箇所にそれから導入される。接近器具は筋肉の心臓壁の貫通箇所周囲をシールするための手段等を含んでいる。シールをする手段は一つあるいは対をなす膨脹するバルーン、チューブ状本体の半径方向に膨脹する部分あるいは本体の先端にフランジを含んでいる。接近器具はチューブ状接近器具の内腔に位置決めできる閉鎖管をさらに含んでいる。閉鎖管は心臓の筋肉壁を貫通するための先端に刃のような手段をもっている。内腔を通じての心臓の血液の流出を防ぎ、内腔における止血を維持する間内腔を通して装置が導入されるようにするため、接近器具は内腔内の止血弁を含んでいる。
【０１６３】
隔壁生体組織が取り戻されそして梗塞ゾーンに移植されると、接近器具は心臓の壁の貫通から引き抜かれる。バルーンあるいは接近器具の半径方向に広がった部分は止血のため利用されているならば、まず萎むか半径方向に縮まる。接近器具の先端は引き込まれるので、接近器具を取り巻く心臓壁の巾着縫合は密に引っ張られ貫通を閉じる。それから結び目は腹腔鏡機器を使用して体腔内的かあるいは体腔外的のいずれかで巾着縫合内に形成され、その後結び目は身体腔内にそして心臓壁に対して、腹腔鏡結び目押し込み器を使用して押し込まれる。代わりとして、心臓壁内の貫通は接近器具が引き抜かれた後、腹腔鏡による縫合あるいは器械吻合技術を使用して閉じられる。全ての接近口はそれから引き抜かれ、経皮的切開そして貫通孔は閉じられ、そして患者は麻酔から回復される。
【０１６４】
首が準備されそして右内部頸部静脈は中央線挿入に対してなされたような同じ方式で、針で経皮的に穿刺される。６Ｆｒｅｎｃｈシースがワイヤーを越して内部頸部静脈に置かれる。このシースはＩＪからのバルーンチップＳｗａｎ−Ｇａｎｚカテーテルを上大静脈および右心房を経て右心室内へ挿入するために使用される。これはそれから５５ｃｍの多目的のガイドのあるカテーテルに交換される。５５ｃｍの長さの曲がらないハイポチューブを伴う心筋組織移植カテーテル器具はそれから器具の尖った刃先から構造を保護するため多目的ガイド内に置かれる。ガイドは、肺の流出気管系を傷つけないよう注意して蛍光鏡のガイダンスのもと隔壁に対する右心室に器具を位置づけされる。心筋組織が得られそしてハイポチューブ内に保護された後、移植カテーテル器具はガイドカテーテルおよびシースを通して取り去られそして５ｍｍ口を経て挿入される。  胸部鏡カメラの直接の可視化のもと、埋め込まれる左心室の壁は適切に曝露される。脈打つ心臓はグラスパーで安定化される。手順は６から１０の移植片が移植されるまで繰り返される。口サイトは２層の縫合で閉じられ、そして患者は抜管される。
【０１６５】
なお本発明に従う他の多の実施態様は同種の心筋組織移植のための血管内手順である。経皮的血管内手順は付随する経皮的冠動脈形成術になりそうなあるいは開胸外科手術に対する高い危険性を禁止したい患者に適している。このカテーテルを基本とする試みは重篤な大動脈狭窄症および大動脈弁切開沈着症の患者には適当でない。
【０１６６】
患者は標準的な方法で、６Ｆｒシースで大腿骨動脈穿刺を受ける。標準的な０．０３５インチのガイドワイヤーは大動脈に進められそしてピッグテイル（ｐｉｇｔａｉｌ）カテーテルが非浸襲的方式で左心室まで侵入するために使用される。ピッグテイルカテーテルはそれからホッケー棒状ガイドカテーテル、あるいは代わりに片寄らせることのできるチップの付いたシースをもつ移植カテーテル器具と交換される。ガイドカテーテル（あるいは片寄らせることのできるシース）はそれから蛍光鏡ガイダンスおよびＬＢＢＢの傷に対するＥＫＧ監視で中壁に対して位置づけされる。９０ｃｍ移植カテーテル器具はそれからガイドカテーテルを通して左室隔壁から心筋生体組織を得るため前に進められる。移植カテーテル器具はそれからガイドカテーテル内に引き抜かれ、そしてガイドカテーテルは処置箇所（左心室梗塞箇所）に対して位置づけされる。移植カテーテル器具は埋め込みのため心室壁内に進められる。ハイポチューブは梗塞箇所の後ろに埋め込み片を残している静止したスタイレット上に引き戻される。移植カテーテルはそれからガイドカテーテル内に引き戻される。生体組織取り戻しおよび埋め込みの過程は６から１０回繰り返される。
【０１６７】
いくつかの実施態様において、心筋生体組織は脱細胞され、梗塞箇所に埋め込まれる細胞外足場を残す。種々な方法が使用され、アルカリあるいは酸、洗浄剤および酵素で採取した組織を処置することを含んでいる。このような実施態様に対し、生体組織標本は容器内に吸引することにより集められる。容器から、これらは集められそして細胞を崩壊する薬剤を含む溶液に移送される。実施例として、組織標本は５０ｍＬの円錐形チューブ内に置かれそして１．０Ｍ水酸化ナトリウムに６０分間浸漬される。その後、これらは１５分間、２回脱イオン水で洗浄される。組織はそれから０．２Ｍ炭酸塩緩衝液の５％プロピレン酸化物溶液に浸漬され室温で７２時間振盪しながら培養される。組織はそれから脱イオン水で２０分間、２回洗浄されそしてそれから７０℃で４８時間オーブン内で乾燥される。Ｈ＆Ｅ染色後、目に見える核小体の欠如は脱細胞過程を確認するために使用される。この型の脱細胞の組織足場は埋め込む前に再細胞化されるように心筋梗塞箇所内に埋め込まれるか、あるいは埋め込む前に再細胞化される。再細胞化のため、足場は、培養地に希望する細胞の懸濁液に足場を添加しそして数時間から数日間バイオリアクターあるいは培養器内に懸濁液を置くことにより患者からの細胞（例えば、心室心筋細胞、線維母細胞、幹細胞、前駆細胞、あるいはこれらの混合物）で、部分的あるいは完全に細胞を足場に再び住むように、種付けされる。
【０１６８】
なお他の実施態様は同種の脳組織移植手順である。脳の生体組織を集めそして埋め込むための移植カテーテル器具は上述した足場負荷器具と同様である。脳組織移植カテーテル器具は器具に付属し、そして器具ハンドル内に任意に取り付けられた容器に脳生体組織標本の緩やかな吸引と収集を使用する。カテーテルの先端の内径はドナー側の被害を制限する１５０μｍである。採取されると、組織標本は無菌の生理食塩水に懸架され、例えば、再生因子あるいは他の薬剤で処置されるか、あるいはポリマー足場に組み込まれる。処置および／あるいは組み込みの次に、組織移植片は目標とする組織内に埋め込むため使用する移送カテーテル器具に受けとられる。
【０１６９】
定位置手術枠が患者の頭蓋骨に置かれる。切開は影響を受けない半球の前頭葉の予め決めた位置にされそして他の切開が梗塞位置上になされる。それからこれらの位置にドリル穴が開けられる。Ｆｒｅｅｄ等、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３４：７１０（２００１）が参照され、この方法で脳内に細胞を埋め込む説明のためここに引用された。曲がらない脳組織収集カテーテル器具はドナーの箇所のきり穴を通して挿入される。収集カテーテルは２重穴チューブを利用し、一つのチャンネルは組織移植片の吸引のためで、そして第２のチャンネルはドナーの箇所へ無菌の生理食塩水の流れを作り組織移植片を流体の流れの吸引チャンネル内に滑り込ませるためである。器具の横の口は組織の吸引チャンネルのためにカテーテル内を緩やかで、制御された陰圧にする真空器具に取り付けられ、組織はドナーの箇所から吸引された流体と一緒に標本容器内に集められる。患者は手順の間および神経学的状態を評価するためのＥＥＧ監視の元では眠っている。
【０１７０】
収集の後、組織移植片は３７℃培養器に置かれる。移植片はポリ乳酸ポリグリコール酸共重合体（ＰＬＧＡ）／ポリ−Ｌ−乳酸（ＰＬＬＡ）ポリマーを含むポリマーゲルに包まれ、実体顕微鏡およびマイクロ操縦機の助けで埋め込みのために準備される。製品説明およびＰＬＬＡ／ＰＬＧＡポリマー置換体の利用に対してここに参照されたＴｏｍｉｔａ等、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  ２３：１５７０（２００５）を見よ。代わりに、移植片は培養皿内のＰＬＬＡ／ＰＬＧＡポリマー層の上に置かれ梗塞箇所に挿入する前に少なくとも数時間増殖のため培養される。被覆された移植片は搬送カテーテルに取り込まれる。搬送カテーテルは開胸外科手術応用に使用された心筋移植カテーテルと同様である。それは引き込み可能なスタイレットを含む曲がらないハイポチューブをもっているが、しかし心臓用カテーテルよりも短く、長さ５ｃｍのハイポチューブをもっている。ハイポチューブの内径はポリマー足場被覆の付加した容積を許容するために、組織採集カテーテルの直径よりも大きくあるべきである；この場合において、搬送カテーテル内のハイポチューブの内径は３００μｍである。移植片を含む搬送カテーテルは梗塞サイト上のきり穴内に置かれる。脳埋め込みはそれからハイポチューブの孔を通してスタイレットを前に進ませることにより梗塞ゾーン内に穏やかに流し込まれる。最終的に、搬送カテーテルは梗塞サイトのきり穴から取り去られ、そしてドナーおよびレセプターの開口は閉じられる。
【０１７１】
本発明に従う他の実施態様は同種の脳組織移植のための血管内手順である。上述で提案された手順のこの変型において、ドナーの脳組織への接近は脳の  静脈洞構造を経て得られる。内頸への接近は脳卒中の反対側で得られる。５Ｆｒｅｎｃｈカテーテルは前頭葉を覆う層の静脈洞に進められる。この手順のための移植カテーテル器具は長さ３０ｃｍの曲げられる２重のチューブを含んでいる。このチューブは前頭葉内に静脈洞  の壁を通して前に進められ、そして脳組織移植片は吸引チャンネルに真空を適用し、そして第２チャンネル内に殺菌した生理食塩水を導入することにより標本容器に穏やかに吸引される。脳卒中と同側の内頸静脈は埋め込みのためカニューレされる。５Ｆｒｅｎｃｈガイドカテーテルは梗塞部位を覆う層の構造内に位置づけられそして搬送カテーテルはガイドカテーテルを通って挿入される。移植片は搬送カテーテルのスタイレットを前進することにより梗塞箇所に埋め込まれる。
【０１７２】
なお他の実施態様は網膜への同種の脳組織の移植のための手順である。脳生体組織は上述の方法により得られる。生体組織の網膜下への埋め込みは双眼外科手術顕微鏡を使用した直接観察のもとで実施されそして１％トロピカミドの局所的適用の後、瞳孔の散大を通して観察される。埋め込みの実施のため、結膜の切開および小さい強膜切開が特別精細な使い捨て外科用メスを使用して行われる。埋め込み片は直径１５０μｍでそしてｆｉｎｅ＃５Ｄｕｍｏｎｔ鉗子（Ｆｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｏｏｌｓ、Ｎｏｒｔｈ  Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｃｏｌｕｍｂｉａ、Ｃａｎａｄａ）使用してあるいは上述のような脳移送移植器具を使用して網膜下スペースに強膜切開を通して挿入される。埋め込みは標準の照明を使用して瞳孔を通じて可視化される。全ての外科手術の結論で、眼底試験は成功する移植片設置を確認するため外科用顕微鏡を介して実施される。
【０１７３】
本発明は特別な方法および装置と関連づけて記述してきたが、技術的に優れたこれらはここにある特別な実施態様は他の同等なものを認める。説明はいずれも実施例でありそして本発明の範囲を制限することはなくそしてこれらの同等物は以下に発表する特許請求項に包含されることは理解されることである。
【図面の簡単な説明】
【０１７４】
【図１Ａ】本発明に従う取り戻しおよび埋め込み器具の図示的実施態様を示す。
【図１Ｂ】シース（ｔｈｅａｔｈ）に取り付けられた可動停止器具をもつ取り戻しおよび埋め込み器具の図示的実施態様を示す。
【図１Ｃ】取り戻しおよび埋め込み器具、曲げられるカテーテルおよび制御ハンドルを含むシステムの図示的実施態様を示す。
【図１Ｄ】吸引による柔らかい組織試料の取り戻しのためのシステムの図示的実施態様を示す。
【図１Ｅ】真空補助取り戻しおよび埋め込み器具の図示的実施態様を示す。
【図２Ａ】ヒト筋肉のダイアグラムを示す。
【図２Ｂ】本発明に従う曲がらない器具を使用する完全な筋肉組織を取り戻す方法の図示的実施態様を示す。
【図２Ｃ】本発明に従う曲がらない器具を使用する完全な筋肉組織を取り戻す方法の図示的実施態様を示す。
【図２Ｄ】取込みストロークの間の取り戻しおよび埋め込み器具の図示的実施態様を示す。
【図３Ａ】処置箇所とともにヒト筋肉のダイアグラムを示す。
【図３Ｂ】心筋組織を本発明に従う曲がらない器具を使用して処置箇所内に埋め込む方法の説明図である。
【図３Ｃ】心筋組織を本発明に従う曲がらない器具を使用して処置箇所内に埋め込む方法の説明図である。
【図３Ｄ】心筋組織を本発明に従う曲がらない器具を使用して処置箇所内に埋め込む方法の説明図である。
【図３Ｅ】埋め込みストロークの間の取り戻しおよび埋め込み器具の図示的実施態様を示す。
【図４Ａ】処置箇所とともにヒト心筋のダイアグラムを示す。
【図４Ｂ】本発明に従うカテーテルを基本とする器具を使用して処置箇所内に心筋組織を埋め込む方法の説明図である。
【図５Ａ】ＭＲＩにより測定した前壁と中隔壁心筋の灌流の比を図示する説明図である。
【図５Ｂ】ＭＲＩにより測定した処置動物の梗塞容量における改善を図示する説明図である。
【図６Ａ】ＭＲＩにより測定した前壁と中隔壁の壁の肥厚をそれぞれ図示する説明図である。
【図６Ｂ】ＭＲＩにより測定した前壁と中隔壁の壁の肥厚をそれぞれ図示する説明図である。
【図７Ａ】ＭＲＩにより測定した前壁と中隔壁の壁の動作を図示する説明図である。
【図７Ｂ】ＭＲＩにより測定した前壁と中隔壁の壁の動作を図示する説明図である。
【図８Ａ】ＭＲＩにより測定した駆出率の改善を図示する説明図である。
【図８Ｂ】マイクロマノメーターカテーテルにより測定した処置動物における収縮性の改善を図示する説明図である。
【図９Ａ】ＴＴＣ染色により測定した前壁と中隔壁の梗塞寸法の変化をそれぞれ図示する説明図である。
【図９Ｂ】ＴＴＣ染色により測定した前壁と中隔壁の梗塞寸法の変化をそれぞれ図示する説明図である。
【図１０Ａ】非処置および処置動物の血管新生と抗アポトーシスの蛋白質発現の変化を示す説明図である。
【図１０Ｂ】非処置および処置動物の血管新生と抗アポトーシスの蛋白質発現の変化を示す説明図である。
【図１０Ｃ】非処置および処置動物の血管新生と抗アポトーシスの蛋白質発現の変化を示す説明図である。
【図１０Ｄ】非処置および処置動物の血管新生と抗アポトーシスの蛋白質発現の変化を示す説明図である。
【図１１Ａ】心筋梗塞に続く２および４週間で処置被検者の駆出率における劣化の防止を図示する説明図である。
【図１１Ｂ】収縮性および拡張性の血行力学的評価を示す説明図である。
【図１１Ｃ】収縮性および拡張性の血行力学的評価を示す説明図である。
【図１１Ｄ】左心房圧力が処置被検者において通常に保たれそして非処置被験者において４週で上昇することを示す説明図である。
【図１２Ａ】内部壁と中隔壁における処置動物の梗塞部位の改善を示す説明図である。
【図１２Ｂ】内部壁と中隔壁における処置動物の梗塞部位の改善を示す説明図である。
【図１３】処置被験者の血管の数における３倍の増加を図示する説明図である。
【図１４Ａ】ＶＥＧＦとＧＤＦ−２の血管新生の水準を示す説明図である。
【図１４Ｂ】ＶＥＧＦとＧＤＦ−２の血管新生の水準を示す説明図である。
【図１５Ａ】ＭＭＰ−２とＴＩＭＰ−２に対するマトリックス分解酵素発現の水準を示す説明図である。
【図１５Ｂ】ＭＭＰ−２とＴＩＭＰ−２に対するマトリックス分解酵素発現の水準を示す説明図である。
【図１６】処置動物に対するｍｄｒ−１の増加を示す説明図である。
【図１７】処置動物に対するｃ−ｋｉｔ陽性の減少を示す説明図である。
【図１８】本発明の望ましい実施態様に従った器官の部分の切除および埋め込みの方法を図示する説明図である。
【符号の説明】
【０１７５】
１０    器具
１１    切断刃
１２    カテーテル、チューブ
１３    チップ、先端部分
１４    ストローク軸
１５    先端のスタイレット部分、先端部分
１６    停止器具、部材
１７    後部部分、手元部分
１８、４２、５１、３１５    軸
１９    開口
２０    スタイレット
２１    左心室
２２    右心室
２３    心室隔膜
２５    ヒト心筋
２４ａ、２４ｂ、４４    壁
２５、４９    心筋
２６    心筋生体組織
２７    処理箇所
４０    器具、チューブ組立体
４１    心筋組織試料
４３    末端、先端
４５    前面部分
４６    刃、心筋組織
４８、３１２    チューブ
５０    大腿骨動脈
６０、２１１、３１１    カップリング
１００    交換部品
１１４、１１６    シース
１２０、１２２    可動停止器具
２１０、３１０    制御ハンドル
２１２    ハイポチューブ
２１４    埋め込み器具、先端チップ部分
２１６    ガイドカテーテル
２２０、２３０、２４０、２５０、３１６、３１７、３１８、３１９    推進器
２２１    推進器スライド
２２３    中間位置
３００    システム
３１４    先端チップ
３２０    真空供給
３２１、３３１    口
３３０    生理食塩水溜
３４０    収集容器
３４１    生体組織
４００    真空補助先端チップ
４１５、４１７    スタイレット部分
４１６、４１８    穿孔
【図１Ａ】
2009524484.tif 000003
【図１Ｂ】
2009524484.tif 000004
【図１Ｃ】
2009524484.tif 000005
【図１Ｄ】
2009524484.tif 000006
【図１Ｅ】
2009524484.tif 000007
【図２Ａ】
2009524484.tif 000008
【図２Ｂ】
2009524484.tif 000009
【図２Ｃ】
2009524484.tif 000010
【図２Ｄ】
2009524484.tif 000011
【図３Ａ】
2009524484.tif 000012
【図３Ｂ】
2009524484.tif 000013
【図３Ｃ】
2009524484.tif 000014
【図３Ｄ】
2009524484.tif 000015
【図３Ｅ】
2009524484.tif 000016
【図４Ａ】
2009524484.tif 000017
【図４Ｂ】
2009524484.tif 000018
【図５Ａ】
2009524484.tif 000019
【図５Ｂ】
2009524484.tif 000020
【図６Ａ】
2009524484.tif 000021
【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
2009524484.tif 000023
【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
2009524484.tif 000025
【図８Ｂ】
2009524484.tif 000026
【図９Ａ】
2009524484.tif 000027
【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
2009524484.tif 000029
【図１０Ｂ】
2009524484.tif 000030
【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【国際調査報告】
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