(57)【要約】本発明は、サルモネラ ラクトース＋を含むサルモネラの検出および/または同定のための培地に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
カプリレート エステラーゼの発色基質またはその塩の1つと、ノニルフェノール エトキシレート ファミリー由来の界面活性剤とを含む、サルモネラ（Salmonella）の検出および/または同定のための培地。
【請求項２】
カプリレート エステラーゼの発色基質がカプリル酸のエステルである、請求項1記載の培地。
【請求項３】
カプリル酸エステルが、インドリル カプリレート誘導体およびヒドロキシ-キノリン カプリレート誘導体からなる群より選択される、請求項2記載の培地。
【請求項４】
カプリル酸エステルが、ハロゲノ-インドリル カプリレート誘導体（ブロモ-インドリル カプリレート、クロロ-インドリル カプリレート、フルオロ-インドリル カプリレート、ヨード-インドリル カプリレート、ジクロロ-インドリル カプリレート、クロロ-ブロモ-インドリル カプリレート、トリ-クロロ-インドリル カプリレート）およびメチル-インドキシル-カプリレート誘導体の誘導体を含む群より選択される、請求項3記載の培地。
【請求項５】
カプリル酸エステルが、6-クロロ-インドリル-カプリレート、5-ブロモ-インドリル-カプリレート、3-ブロモ-インドリル-カプリレート、6-フルオロ-インドリル-カプリレート、5-ヨード-インドリル-カプリレート、4,6ジクロロ-インドリル-カプリレート、6,7-ジクロロ-インドリル-カプリレート、5-ブロモ-4-クロロ-インドリル-カプリレート、5-ブロモ-6-クロロ-インドリル-カプリレート、4,6,7-トリクロロ-インドリル-カプリレート、N-メチル-インドリル-カプリレート、および8-ヒドロキシ-キノリン カプリレートの誘導体を含む群より選択される、請求項3または4記載の培地。
【請求項６】
誘導体が5-ブロモ-6-クロロ-3-インドリル カプリレートである、請求項5記載の培地。
【請求項７】
界面活性剤が、Tergitol（登録商標）NP-9、Igepal（登録商標）CO-630、およびTriton（登録商標）N-60を含む群より選択される、請求項1〜6のいずれか一項記載の培地。
【請求項８】
Tergitol NP-9が、培地中に0.5〜2.5 g/l、好ましくは1〜2 g/l、およびまたはさらに好ましくは1.3〜1.7 g/lの濃度で存在する、請求項7記載の培地。
【請求項９】
試料中のサルモネラを検出および/または同定するための方法であって、以下の段階を含む方法：
- 請求項1〜8のいずれか一項記載の培地に試料を接種する段階、および
- サルモネラの存在を示す色を検出する段階。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、サルモネラ（Salmonella）の検出および/または同定のための培地に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトにとって病原性であるサルモネラ細菌の検出および同定は、医療細菌学および食品産業衛生のモニタリングにおいて主要な問題である。
【０００３】
特に、この細菌は、ヒトにおいて腸チフス熱および食中毒の原因となる。
【０００４】
家禽畜産に起因する伝染の場合、胃腸管感染症を持つ鳥類は実際には病気ではないが、サルモネラ保有体（reservoir）として働く。これらの細菌は次に、食品、特に卵によって伝染しうる。サルモネラはまた、義務的通知を必要とする細菌である。
【０００５】
それゆえ、そのような伝染の規模を小さくし、汚染を抑えるために、感染場所、より詳しくは感染農場を検出するための大規模なシステムを設置することが必要である。
【０００６】
サルモネラの検出は通常、腸内細菌用のゲロース選択単離培地上で行われ、病原性腸内細菌の識別および疑わしいサルモネラ コロニーの検出が可能である。理想的な検出および/または同定培地は、のちほど各タイプのコロニーの1つを同定し、疑わしいサルモネラ コロニーを検出することができるように、腸内細菌の増殖および存在する様々な種の識別を可能にするものでなくてはならない。
【０００７】
より詳しくは、全体としてラクトース−であるサルモネラを検出することが重要である。しかし、遭遇するサルモネラ株全体に対して低いパーセンテージしか占めないが、しばしば大腸菌（Escherichia coli）として同定されるために疑陽性結果を生じるラクトース＋サルモネラ株の検出が可能であることも、とりわけ食品産業において重要である。
【０００８】
実は、ラクトース存在下で発酵することによって、サルモネラ細菌と他の腸内細菌科（Enterobacteriaceae）とを区別することができると長年全く誤って信じられていた。非常に長い間、大腸菌はラクトース＋であり、サルモネラはラクトース−であると認知されていた。それゆえ、ラクトース＋サルモネラ株の発見によって、腸内細菌のラクトース特性に基づく試験は信頼性に欠けることが明らかにされ、ラクトース＋サルモネラの検出の重要性が顕わになった。
【発明の開示】
【０００９】
本発明の目的は、本発明の培地を利用して、サルモネラの検出および同定に関して日常的に行われる試験を実施できるようにすることであり、例えば、浸漬法を用いて水の微生物学的品質に関するモニタリング方法を用いて、または接触法を使用して食品生産工場の微生物学的品質をモニタリングして行い、ペトリ皿を用いた固相または半固相培地上での従来の微生物学的試験を使用して病原性微生物に関する診断またはさらに試験を実施できるようにすることである。
【００１０】
本発明の目的は、汚染試料中のサルモネラの検出および識別の感度および選択性を、これら細菌に特有のエステラーゼ活性の検出が可能であって、他の腸内細菌からラクトース＋サルモネラを含むサルモネラをよりよく識別することができる培地によって、増加させることである。
【００１１】
当業者は、発色剤を用いてサルモネラを検出するよう意図された培地（特許FR 2 197 028, Rambach）を既に認識済みであるが、このタイプの培地はサルモネラと他の腸内細菌とを区別できる可能性がある一方で、ラクトース＋サルモネラを必ずしも特徴付けることはできない。
【００１２】
また、先行技術の培地は全般的に、サルモネラのラクトース−またはβ-ガラクトシダーゼ−特性に基づいている。
【００１３】
サルモネラの検出および/または同定のための本発明の培地は、エステラーゼ基質であってこれら酵素の影響下で培地に放出され、その結果サルモネラ コロニーを同定する、カプリレート（caprylate）またはその誘導体の1つに結合された色素原を含む。
【００１４】
それとは関係なく、本発明の培地の選択性および感度を増加してラクトース＋サルモネラの検出を可能にするため、該培地はまた、ノニルフェノール エトキシレート（nonylphenol ethoxylate）ファミリー由来の界面活性剤を含む。
【００１５】
予期せずして、このような界面活性剤を、良好なサルモネラ増殖に適合するふさわしい濃度で本発明の培地に加えることによって、サルモネラが容易に検出されるだけでなく、ラクトース＋サルモネラも検出されることが見出された。
【００１６】
本発明の範囲内で用いることができるノニルフェノール エトキシレートのうち、以下のものを特に挙げることができる：Igepal（登録商標）CO-630またはTriton（登録商標）N-60とも呼ばれる、Tergitol（登録商標）NP（The Dow Chemical Company販売）、特にTergitol（登録商標）NP-7およびTergitol（登録商標）NP-9。これはα-(ノニルフェニル)-ω-ヒドロキシポリ(オキシ-1,2-エタンジイル)である。
【００１７】
好ましくは、適した界面活性剤は、0.5および2.5 g/l、好ましくは1〜2 g/l、およびまたはさらに好ましくは1.3〜1.7 g/lの濃度で用いられる。
【００１８】
本発明の好ましい態様によると、色素原性化合物は、カプリル酸エステルであり、有利には、インドリル カプリレート誘導体およびヒドロキシ-キノリン カプリレート誘導体と、それらの塩とを含む群より選択される。これら誘導体のうち、以下のものを特に挙げることができる：ハロゲノ-インドリル カプリレート誘導体（ブロモ-インドリル カプリレート、クロロ-インドリル カプリレート、フルオロ-インドリル カプリレート、ヨード-インドリル カプリレート、ジクロロ-インドリル カプリレート、クロロ-ブロモ-インドリル カプリレート、トリ-クロロ-インドリル カプリレート）およびメチル-インドキシル-カプリレート誘導体。
【００１９】
さらにより詳しくは、カプリル酸エステルは、6-クロロ-インドリル-カプリレート、5-ブロモ-インドリル-カプリレート、3-ブロモ-インドリル-カプリレート、6-フルオロ-インドリル-カプリレート、5-ヨード-インドリル-カプリレート、4,6-ジクロロ-インドリル-カプリレート、6,7-ジクロロ-インドリル-カプリレート、5-ブロモ-4-クロロ-インドリル-カプリレート、5-ブロモ-6-クロロ-インドリル-カプリレート、4,6,7-トリクロロ-インドリル-カプリレート、N-メチル-インドリル-カプリレート、および8-ヒドロキシ-キノリン カプリレートの誘導体を含む群より選択される。
【００２０】
好ましくは、適した界面活性剤は、0.1〜0.4 g/l、好ましくは0.15〜0.3 g/lの濃度で用いられる。
【００２１】
当業者は、例えば、サルモネラにおいては見られない特徴、特にβ-ガラクトシダーゼ−について他の細菌を試験することによって、サルモネラ以外の細菌を除去することを目的として、本発明の培地を完成させる技能を完全に十分備えている。結果として、本発明の培地はまた、サルモネラを検出するために用いられるものとは異なる発色団に連結したβ-グルコシドの誘導体を含みうる。
【００２２】
本発明の培地はそれゆえ、固相または半固相培地上の何千もの他のコロニーの存在下でも、染色サルモネラ コロニーをよりはっきりと検出および同定することができる。実際、本発明の培地で検出されたサルモネラ コロニーは特定の色で染色されるが、他の微生物は異なる色で染色されるか、または全く染色されない。
【００２３】
本発明の範囲内におけるサルモネラ コロニーの検出は、コロニーの発酵後に、どのようなタイプの色素または特別な光の使用などの他の操作または介入を必要としないという意味において直接的である。
【００２４】
本発明はまた、任意の試料中のサルモネラを検出および/または同定するための方法であって、試験する試料を本発明の培地に接種する段階、およびサルモネラ コロニーの存在を示す色を検出する段階を含む方法に関する。
【００２５】
培地の形態および提示に応じて、および施された保護のタイプによって、接種は、それの表面上またはその本体の内部で、好ましくは接触、浸漬によって実施される。
【００２６】
以下の実施例は、本発明を例示する目的のみのために提供されるものであって、限定すると見なすべきものではない。
【００２７】
実施例：サルモネラの検出
I. 第1の一連の実験によって、いくつかの培地を、大腸菌（サルモネラの存在を調査する試料の片利共生細菌叢の主要構成成分）およびサルモネラ（特にラクトース＋サルモネラ）の検出および識別に関して試験した。
【００２８】
培地はそれぞれ、以下に列挙した他の化合物を基剤に加えたものからなる。
基剤（g/l）
肉または酵母抽出物 3
ペプトン 5
塩化ナトリウム 5
寒天 15
5-ブロモ-6-クロロ-3-インドリル カプリレート 0.2
5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル β グルコシド 0.1
培地A（g/l）
基剤
＋デオキシコール酸ナトリウム 2.5
培地B（g/l）
基剤
＋デオキシコール酸ナトリウム 1.5
＋Triton XL-80Nデオキシコレート 1.5
本発明の培地C（g/l）
基剤
＋デオキシコール酸ナトリウム 1.5
＋Tergitol NP-9デオキシコレート 1.5
【００２９】
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「＋」は、得られたモーヴ色の強さを表す。
【００３０】
本発明の培地（C）のみが、サルモネラ菌種とラクトース＋サルモネラとを大腸菌から区別することができる。
【００３１】
II. 別の一連の実験を、ラクトース＋株を含むサルモネラの検出に関して、上記本発明の培地CをXLT4培地（Xylose-Lysine-Teritol (Niaproof) 4）と比較することで構成した。
【００３２】
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【００３３】
本発明の培地（C）のみが、サルモネラの全ての株を検出することができた。
【国際調査報告】
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