(57)【要約】  本発明は、ピロリジンおよびインドリジン誘導体のマクロサイクル抗生物質およびその誘導体とのマクロライド接合体に関する。マクロライド接合体は５−リポオキシゲナーゼおよびシクロオキシゲナーゼの強力な阻害剤であり、それ故リユウマチタイプの障害の処置およびアレルギー誘発障害の防止に適している。マクロライド接合体は有意に増強された強度および有効性を持っている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式のマクロライド接合体、その薬学的に許容し得る塩、溶媒和物、水和物および立体化学異性体：
【化１】
2009502838.tif 000044
式中、Ｒ１はヒドロキシもしくはＣ１−Ｃ４アルコキシ、またはＲ１およびＲ４が一緒でそれらが結合する炭素原子と共にテトラヒドロフラン環であり；
Ｒ２１は、式
【化２】
2009502838.tif 000045
であって、基Ｒ２およびＲ３の一方はＯＲ９であり、他方はＮＲ６Ｒ７であり、
Ｒ４はＯＨ、ＯＲ１０、または式
【化３】
2009502838.tif 000046
であり；
Ｒ５はＨか、またはＲ４およびＲ５が一緒でそれらが結合する炭素原子と共にカルボニル基であり；
Ｒ６およびＲ７は同一または異なって、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＲ９Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｒ８はＨまたはＲ１０であり；
Ｒ９はＨまたはＲ１０であり；
Ｒ１０は式
【化４】
2009502838.tif 000047
であり；
ＸはＮＲ１１ＣＨ２，ＣＨ２ＮＲ１１，Ｃ＝０、またはＣ＝ＮＯＲ２０であり；
Ｒ１１はＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｒ２はＨ，Ｒ１０または
−（ＣＨ２）ｋ−Ｙ−（ＣＨ２）ｌ−Ｙ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ３であり；
Ｙは０または結合手であり；
ｋは１または２であり；
ｌは１，２または３であり；
ｍは０，１または２であり；
ｎは０，１，２または３であり；
ｏは１，２または３であり；
ｐは１，２または３であり；
Ｚは式
【化５】
2009502838.tif 000048
であって、式中、Ｒ１２およびＲ１３は同一または異なって、任意に１または２個のハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、フェノキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＣＦ３で置換されることができるフェニル、Ｏ，ＮまたはＳから選ばれた１，２または３個のヘテロ原子を含みそして任意に１または２個のハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＣＦ３で置換されることができる５または６員芳香複素環基、またはＯ，ＮまたはＳから選ばれた１，２または３個のヘテロ原子を含みそして任意に１または２個のハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＣＦ３で置換されることができるベンゾ縮合５または６員芳香複素環基から選ばれ；
Ａは結合手または任意にヒドロキシまたはＣ１−Ｃ４アルキルで置換されることができるＣ１−Ｃ８アルキレンであり；
Ｒ１４およびＲ１５は同一または異なって、ＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルであるか、またはＲ１４およびＲ１５の一方がＨ，Ｃ１−Ｃ４アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＣ１−Ｃ４アルコキシ−Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、他方がＯＨ，Ｃ１−Ｃ４アルコキシまたはＣ１−Ｃ４アルキルカルボニルオキシであり；
ＤはＢと、炭素原子を持っているＲ１６およびＲ１７の間の結合手か、またはＣＨ２であり；
Ｒ１６およびＲ１７は同一または異なって、ＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルか、またはＲ１６，Ｒ１７，Ｒ１８およびＲ１９のうちの二つが二重結合を形成し、他の二つがＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルである。
【請求項２】
Ｒ２がＯＲ９であり、Ｒ３がＮＲ６Ｒ７である請求項１のマクロライド接合体。
【請求項３】
Ｒ２がＯＲ１０であり、Ｒ３がＮＲ６Ｒ７であって、ここでＲ６およびＲ７がＣ１−Ｃ４アルキルである請求項２のマクロライド接合体。
【請求項４】
Ｒ２がＯＨであり、Ｒ３がＮＲ６Ｒ７であって、ここでＲ６はＣ１−Ｃ４アルキルであり、そしてＲ７はＲ１０Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキルである請求項２のマクロライド接合体。
【請求項５】
Ｒ２がＮＲ６Ｒ７であり、Ｒ３がＯＲ９である請求項１のマクロライド接合体。
【請求項６】
Ｒ６およびＲ７は同一または異なって、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、Ｒ３はＯＲ１０である請求項５のマクロライド接合体。
【請求項７】
Ｒ６がＣ１−Ｃ４アルキルでありＲ７がＲ１０Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、Ｒ３がＯＨである請求項５のマクロライド接合体。
【請求項８】
Ｒ４がＯＨか、または
【化６】
2009502838.tif 000049
である請求項１ないし７のいずれかのマクロライド接合体。
【請求項９】
Ｒ４およびＲ５が一緒でそれらが結合する炭素原子と共にカルボニル基を形成する請求項１ないし７のいずれかのマクロライド接合体。
【請求項１０】
ＸがＮＲ１１ＣＨ２，Ｃ＝ＮＯ（ＣＨ２）ｋＹ（ＣＨ２）ｌＹ（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ３、またはＣ＝ＮＯＲ１０であって、ここでＲ１１はＣ１−Ｃ４アルキルであり、そしてＹ，ｋ，ｌおよびｍは請求項１に定義したとおりである、請求項１ないし９のいずれかのマクロライド接合体。
【請求項１１】
Ｒ１０がＺまたは−ＣＯ−（ＣＨ２）ｏ−Ｙ−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−Ｚであって、ここでＹは結合手であり、そしてＺ，ｏおよびｐは請求項１に定義したとおりである、請求項１ないし１０のいずれかのマクロライド接合体。
【請求項１２】
式Ｉａを有する請求項１のマクロライド接合体：
【化７】
2009502838.tif 000050
式中、Ｒ４，Ｒ５，Ｒ２１およびＸは請求項１に定義したとおりである。
【請求項１３】
式ＩａａａないしＩａｆから選ばれた請求項１２のマクロライド接合体：
【化８】
2009502838.tif 000051
式中、Ｒ６およびＲ７は同一または異なってＣ１−Ｃ４アルキルであり；
【化９】
2009502838.tif 000052
式中、Ｒ６はＣ１−Ｃ４アルキルであり、Ｒ７はヒドロキシ−Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＲ１０Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；
【化１０】
2009502838.tif 000053
式中、Ｒ６およびＲ７は同一または異なって、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；
【化１１】
2009502838.tif 000054
式中、Ｒ６はＣ１−Ｃ４アルキルであり、Ｒ７はヒドロキシ−Ｃ１−Ｃ４−アルキルまたはＲ１０Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキルであり；
【化１２】
2009502838.tif 000055
式中、Ｒ６およびＲ７は同一または異なって、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；
【化１３】
2009502838.tif 000056
式中、Ｒ６はＣ１−Ｃ４アルキルであり、Ｒ７はヒドロキシ−Ｃ１−Ｃ４−アルキルまたはＲ１０−Ｃ１−Ｃ４−アルキルであり；
そして式ＩａａないしＩａｆにおいてＲ４はヒドロキシか、または
【化１４】
2009502838.tif 000057
であり、そしてＸ，Ｒ８およびＲ１０は請求項１に定義したとおりである。
【請求項１４】
式ＩａａないしＩａｆにおいて、ＸはＮＲ１１ＣＨ２である請求項１３のマクロライド接合体。
【請求項１５】
Ｒ１２およびＲ１３は、同一または異なって、フェニル、チエニル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、ピリジニル、ピリミジル、ベンゾフリル、キノリルまたはインドリルであり、そしてこれらは１または２個のハロゲンまたはＣＦ３で置換されてもよい請求項１ないし１４のいずれかのマクロライド接合体。
【請求項１６】
Ｒ１２およびＲ１３は、同一または異なって、フェニル、ハロゲン置換フェニル、チエニル、ハロゲン置換チエニル、またはベンゾフリルである請求項１５のマクロライド接合体。
【請求項１７】
Ｒ１４，Ｒ１５，Ｒ１８およびＲ１９がＨであり、そしてＲ１７がＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルである請求項１５または１６のマクロライド接合体。
【請求項１８】
Ｚが
【化１５】
2009502838.tif 000058
であり；
Ａが単結合またはＣ１−Ｃ８アルキレンであり；
Ｒ１２がフェニル、ハロゲン置換フェニル、チエニル、ハロゲン置換チエニル、またはベンゾフリルであり；
Ｒ１３がフェニルであり；
Ｒ１６およびＲ１７がＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１８およびＲ１９がＨである、請求項１ないし１４のいずれかのマクロライド接合体。
【請求項１９】
ＡがＣＨ２であり、Ｒ１２がクロロフェニル、クロロチエニルまたはベンゾフリルである請求項１８のマクロライド接合体。
【請求項２０】
Ｒ１２が４−クロロフェニル、５−クロロチエン−２−イルまたはベンゾフル−２−イルである請求項１９のマクロライド接合体。
【請求項２１】
Ｚが
【化１６】
2009502838.tif 000059
である請求項２０マクロライド接合体。
【請求項２２】
請求項１ないし２１のいずれかのマクロライド接合体と、薬学的に許容し得る補助剤とを含んでいる薬剤組成物。
【請求項２３】
非経口または局所製剤の形の請求項２２の薬剤組成物。
【請求項２４】
リユウマチタイプの障害のための薬剤組成物を製造するための請求項１ないし２１のいずれかのマクロライド接合体の使用。
【請求項２５】
リユウマチタイプの障害の処置を必要とする個人へ請求項１のマクロライド接合体の有効量を投与することを含む、そのような障害を処置する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピロリジンおよびインドリジン化合物のマクロライド接合体と、そしてそれらを含有する薬剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
マクロライドは、広範囲の生物学的活性を有する天然に得られるそして半合成化合物であるマクロ環状のラクトンである。これらの生物活性の最良に知られたものは、細菌リボソームへの結合によって達成される抗生物質活性である。生物学的活性を有するマクロライドは、例えば、ＵＳ３，４７８，０１８；ＵＳ３，６５２，５３７；ＵＳ４，３２８，３３４；ＵＳ５，５４３，４００；ＷＯ９５／０９６０１；ＷＯ０２／３２９１７；ＷＯ０２／５００９１；ＷＯ０２／０８７５９６；ＷＯ０３／４２２２８；ＷＯ０３／０７７８３０；ＷＯ０４／０５２９０４；ＷＯ０４／１０１５８５；ＷＯ０４／１０１５８６；ＷＯ０４／１０１５８７；ＷＯ０４／１０１５８８；ＷＯ０４／１０１１９０；ＷＯ０４／１０６３５３；およびＥＰ４６７  ３３１Ａに開示されている。
【０００３】
近年マクロサイクルは、活性物質がエステル結合のような化学結合を介してマクロサイクルへ共有しかし可逆的に結合し、マクロライド接合体を形成する薬物運搬体としての広い用途が発見されている。マクロサイクルと活性物質の間のリンカーを持つ、またはそのようなリンカーを持たないそのような接合体が知られている。例えば、ＷＯ０３／０７０１７３；ＷＯ０３／０７０１７４；およびＷＯ０３／０７０１７５を見よ。運搬体と薬物の間のリンカーを有する接合体は、さらにＷＯ０２／０５５５３１；ＷＯ０４／０５３１３，ＷＯ０４／００５３０９；ＷＯ０４／０９４４４９からも知られている。
【０００４】
このための原理は、多くのマクロライド抗生物質が好中性球、単球、好エオシン球、マクロファージ、肺胞マクロファージ、ＢおよびＴリンパ球、ＮＫ細胞、ジャイアント細胞、クプファー細胞、グリア細胞および類似の標的細胞を含む多数の免疫適合性細胞に蓄積し、そのため自家免疫病がマクロライド系プロドラッグを使用して処置することができる良く知られた性質である。いくつかの薬物クラスの例がマクロライドまたはマクロライド誘導抗生物質への接合から利益を受けることが示された。これらの薬物クラスはＣＯＸ阻害剤、コルチコステロイド、細胞分裂抑制剤およびＩＭＰＤＨ阻害剤を含む。アザライド誘導化合物は特に適しているように見える。一般に、細菌抵抗性を防止するため非抗生物質化合物を使用するのが望ましい。それ故抗バクテリア活性をなくすがしかし細胞および腸取り込みに関して有利な性質を保存する親マクロライドの修飾が望ましい。修飾はまた、開裂動力学に影響し、薬物半減期の変調が実現可能であることを意味するであろう。他方、細胞取り込みおよび他のパラメータはマクロライド運搬体分子へ連結された薬物の性格に依存するであろう。薬物の化学構造は免疫細胞への取り込みの基準ではない。むしろ類似の性質を持った類似の分子でも免疫細胞内への全く異なる取り込みを発揮し得る。ＷＯ０３／０７１７４の５８頁を見よ。このことはＵＳ５，２６０，４５１；ＵＳ５，９３９，４１５；およびＵＳ５，９５８，９４３に開示されている一群のピロリジンおよびインドリジン化合物について特に真理である。前記化合物の一つは、シクロオキシゲナーゼおよび５−リポオキシゲナーゼの有望な阻害剤であり、そして以下の構造式を有するリコフェロン（ＭＬ３０００）である。
【０００５】
【化１】
2009502838.tif 000002
【０００６】
これら化合物は高度に水不溶性であり、その上不安定であり、そのため高度に有効で安定な好適な薬剤投与形を調製するための問題である。
【０００７】
それ故本発明の課題は、改善された抗炎症活性を有し、そして安定な投与形を得ることを許容する上記ピロリジン化合物の修飾形を提供することである。
【０００８】
今や驚くべきことに、この課題は前記ピロリジンおよびインドリジン化合物のある種のマクロライド接合体によって解決されることが発見された。
【発明の開示】
【０００９】
本発明は下式のマクロライド接合体、その薬学的に許容し得る塩、溶媒和物、水和物および立体化学異性体に関する。
【化２】
2009502838.tif 000003
式中、Ｒ１はヒドロキシもしくはＣ１−Ｃ４アルコキシ、またはＲ１およびＲ４が一緒でそれらが結合する炭素原子と共にテトラヒドロフラン環であり；
Ｒ２１は、式
【化３】
2009502838.tif 000004
であって、基Ｒ２およびＲ３の一方はＯＲ９であり、他方はＮＲ６Ｒ７であり、
Ｒ４はＯＨ、ＯＲ１０、または式
【化４】
2009502838.tif 000005
であり；
Ｒ５はＨか、またはＲ４およびＲ５が一緒でそれらが結合する炭素原子と共にカルボニル基であり；
Ｒ６およびＲ７は同一または異なって、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＲ９Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｒ８はＨまたはＲ１０であり；
Ｒ９はＨまたはＲ１０であり；
Ｒ１０は式
【化５】
2009502838.tif 000006
であり；
ＸはＮＲ１１ＣＨ２，ＣＨ２ＮＲ１１，Ｃ＝０、またはＣ＝ＮＯＲ２０であり；
Ｒ１１はＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｒ２はＨ，Ｒ１０または
−（ＣＨ２）ｋ−Ｙ−（ＣＨ２）ｌ−Ｙ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ３であり；
Ｙは０または結合手であり；
ｋは１または２であり；
ｌは１，２または３であり；
ｍは０，１または２であり；
ｎは０，１，２または３であり；
ｏは１，２または３であり；
ｐは１，２または３であり；
Ｚは式
【化６】
2009502838.tif 000007
であって、式中、Ｒ１２およびＲ１３は同一または異なって、任意に１または２個のハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、フェノキシ、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＣＦ３で置換されることができるフェニル、Ｏ，ＮまたはＳから選ばれた１，２または３個のヘテロ原子を含みそして任意に１または２個のハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＣＦ３で置換されることができる５または６員芳香複素環基、またはＯ，ＮまたはＳから選ばれた１，２または３個のヘテロ原子を含みそして任意に１または２個のハロゲン、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＣＦ３で置換されることができるベンゾ縮合５または６員芳香複素環基から選ばれ；
Ａは結合手または任意にヒドロキシまたはＣ１−Ｃ４アルキルで置換されることができるＣ１−Ｃ８アルキレンであり；
Ｒ１４およびＲ１５は同一または異なって、ＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルであるか、またはＲ１４およびＲ１５の一方がＨ，Ｃ１−Ｃ４アルキル、ヒドロキシ−Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＣ１−Ｃ４アルコキシ−Ｃ１−Ｃ４アルキルであり、他方がＯＨ，Ｃ１−Ｃ４アルコキシまたはＣ１−Ｃ４アルキルカルボニルオキシであり；
ＤはＢと、炭素原子を持っているＲ１６およびＲ１７の間の結合手か、またはＣＨ２であり；
Ｒ１６およびＲ１７は同一または異なって、ＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルか、またはＲ１６，Ｒ１７，Ｒ１８およびＲ１９のうちの二つが二重結合を形成し、他の二つがＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルである。
【００１０】
さらに本発明は、少なくとも一つの基Ｚを含む式Ｉのマクロライド接合体を含んでいる薬剤組成物と、そしてリユウマチタイプの障害の処置のための薬剤組成物の製造のための前記マクロライド接合体の使用に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
用語「アルキル」は、直鎖または分岐鎖の指示した炭素数を含む炭素水素鎖を指す。そのようなアルキル基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチルおよびｔ−ブチルである。
【００１２】
用語「アルコキシ」は、アルキル基が前記定義である０−アルキル基を指す。
【００１３】
用語「ハロゲン」はフッ素、塩素、臭素またはヨウ素の基を意味する。
【００１４】
用語「アルキレン」は、指示した炭素数を含んでいる直鎖または分岐鎖アルキレンを指す。Ｃ１−Ｃ４アルキレンが、そして特に−ＣＨ２−，−ＣＨ２ＣＨ２−，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−および−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−が好ましい。
【００１５】
＃は基が接続する結合手を指示する。
【００１６】
５員環芳香複素環基の例は、チエニル、フリル、ピロリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリルおよびトリアゾリルである。
【００１７】
６員環芳香複素環基の例は、ピリジニル、ピリミジニルおよびトリアジニルである。
【００１８】
ベンゾ縮合芳香複素環基の例は、ベンゾチエニル、ベンゾフリル、インドリルおよびキノリニルである。
【００１９】
好ましい芳香複素環基はチエニル、クロロチエニル、フリルおよびベンゾフリルである。
【００２０】
式Ｉの化合物の生理学的に許容し得る塩は特に酸付加塩である。酸付加塩は、塩酸、硫酸またはリン酸のような無機酸、または酒石酸、クエン酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、マンデル酸、アスコルビン酸、グルコン酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸等のような有機酸で生成することができる。
【００２１】
式Ｉの化合物は不斉炭素原子を含んでいる。それ故それらはラセミ体、ラセミ混合物、単一エナンチオマー、ジアステレオマー、ジアステレオマー混合物、またはシン−およびアンチイソマー（Ｘ＝ＮＯＲ２０の場合）の形で存在し得る。それらの形のすべてが本発明に含まれる。
【００２２】
好ましくは、Ｒ１はヒドロキシか、またはＲ４およびそれらが結合する炭素原子を共にテトラヒドロフラン環を形成する。
【００２３】
好ましい具体例は、Ｒ２がＯＲ９であり、Ｒ３がＮＲ６Ｒ７である式Ｉの化合物である。そのような場合、Ｒ２は好ましくはＯＲ１０であり、そしてＲ３はＮＲ６Ｒ７であって、ここでＲ６およびＲ７はＣ１−Ｃ４アルキル、特にメチルである。代ってＲ２がヒドロキシであり、Ｒ３がＮＲ６Ｒ７であって、ここでＲ６はＣ１−Ｃ４アルキルであり、Ｒ７はＲ１０Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキルとである。
【００２４】
さらなる好ましい具体例は、Ｒ２がＮＲ６Ｒ７であり、Ｒ３がＯＲ９である式Ｉの化合物である。好ましくは、Ｒ３はＯＲ１０であり、Ｒ６およびＲ７はＣ１−Ｃ４アルキルである。代ってＲ３はヒドロキシであり、Ｒ６はＣ１−Ｃ４アルキルであり、Ｒ７はＲ１０Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキルである。
【００２５】
Ｒ２１は好ましくは
【化７】
2009502838.tif 000008
である。
【００２６】
Ｒ４は好ましくはヒドロキシ、または下記式
【化８】
2009502838.tif 000009
そして特に下記式の残基である。
【化９】
2009502838.tif 000010
ここでＲ８はＨまたはＲ１０である。
【００２７】
代って、Ｒ４とＲ５はそれらが結合する炭素原子と共にカルボニルを形成する。
【００２８】
Ｘは、好ましくは
ａ）以下の式
【化１０】
2009502838.tif 000011
をもたらすＮＲ１１ＣＨ２であり、ここでＲ１１はＣ１−Ｃ４アルキルであり、Ｒ１，Ｒ２１，Ｒ４およびＲ５は上で定義したとおりであり；
ｂ）Ｃ＝ＮＯ（ＣＨ２）ｋＹ（ＣＨ２）ｌＹ（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ３であって、ここでＹ，ｋ，ｌおよびｍは上で定義したとおりであり、そして好ましくはＹ，ｋ，ｌおよびｍは基Ｃ＝ＮＯＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ−ＣＨ３を与えるように選定され；または
ｃ）Ｃ＝ＮＯＲ１０であって、ここでＲ１０は上で定義したとおりである。
【００２９】
式Ｉのマクロライド接合体は、カルボキシル基を含んでいるピロリジンまたはインドリゾン薬物の残基を含んでいる。Ｚはカルボキシル基のヒドロキシル基を除去した後の前記薬物の残基である。Ｚは直接またはリンカーを介してマクロライド残基へ共有共合する。もし薬物残基がマクロライド残基へ直接結合していれば、その時Ｒ１０がＺである。もしそれがリンカーを介して結合するのであれば、Ｒ１０は好ましくは−〔−ＣＯ−（ＣＨ２）ｏ−Ｙ−（ＣＨ２）ｐ−Ｏ−〕−Ｚであって、ここでＹ，Ｚ，ｏおよびｐは上で定義したとおりである。好ましくはＹは結合手で、ｏ＋ｐ＝２または３である。
【００３０】
ピロリジンおよびインドリジン残基Ｚは式
【化１１】
2009502838.tif 000012
を有し、ここでＡ，Ｂ，Ｄ，Ｒ１２ないしＲ１９は上で定義したとおりである。Ａは好ましくはメチレンまたはエチレンである。
【００３１】
Ｂは好ましくはＣＨ２である。Ｄは好ましくはＢと、Ｒ１６およびＲ１７を担持する炭素原子との間の結合手である。
【００３２】
好ましくはＲ１６およびＲ１７は、互いに独立して水素か、またはＣ１−Ｃ４アルキルか、またはＲ１６，Ｒ１７，Ｒ１８およびＲ１９のうちの二つが二重結合を形成し、残りの二つがＨかまたはＣ１−Ｃ４アルキルである。Ｒ１８およびＲ１９は好ましくは水素である。
【００３３】
好ましくは、Ｒ１２およびＲ１３は同一または異なって、フェニル、チエニル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ベンゾフリルまたはキノリニルであり、そして任意に１または２個のハロゲンまたはＣＦ３で置換されていてもよい。好ましいハロゲン置換基はＦまたはＣｌである。Ｒ１２およびＲ１３はフェニル、ハロゲン置換フェニル、チエニル、ハロゲン置換チエニル、またはベンゾフリルが特に好ましい。
【００３４】
特に好ましい具体例によれば、Ｚは以下の式を有する。
【化１２】
2009502838.tif 000013
式中、Ａは結合手またはＣ１−Ｃ８アルキレン、特にＣＨ２またはＣＨ３ＣＨ２であり；
Ｒ１２は任意にハロゲンで置換されたフェニル、チエニルまたはベンゾフリル、特にクロロフェニル、クロロチエニルまたはベンゾフリルであり；
Ｒ１３はフェニルであり；そして
Ｒ１６およびＲ１７は水素またはＣ１−Ｃ４アルキルである。
【００３５】
さらに好ましい具体例においては、Ｒ１６およびＲ１７はメチルであり、Ｒ１２は４−クロロフェニル、５−クロロ−２−チエニルまたはベンゾフル−２−イルであり、そして最も好ましくはＺが次式の基である。
【化１３】
2009502838.tif 000014
【００３６】
特に好ましいマクロライド接合体は以下の式を有する。
【化１４】
2009502838.tif 000015
式中、Ｒ２１，Ｒ４，Ｒ５およびＸは上で定義したとおりである。
【００３７】
特に好ましい具体例は、式ＩａａないしＩａｆのマクロライド接合体である。
【化１５】
2009502838.tif 000016
式中、Ｒ６およびＲ７は同一または異なってＣ１−Ｃ４アルキルであり；
【化１６】
2009502838.tif 000017
式中、Ｒ６はＣ１−Ｃ４アルキルであり、Ｒ７はヒドロキシ−Ｃ１−Ｃ４アルキルまたはＲ１０Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；
【化１７】
2009502838.tif 000018
式中、Ｒ６およびＲ７は同一または異なって、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；
【化１８】
2009502838.tif 000019
式中、Ｒ６はＣ１−Ｃ４アルキルであり、Ｒ７はヒドロキシ−Ｃ１−Ｃ４−アルキルまたはＲ１０Ｏ−Ｃ１−Ｃ４−アルキルであり；
【化１９】
2009502838.tif 000020
式中、Ｒ６およびＲ７は同一または異なって、Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；
【化２０】
2009502838.tif 000021
式中、Ｒ６はＣ１−Ｃ４アルキルであり、Ｒ７はヒドロキシ−Ｃ１−Ｃ４−アルキルまたはＲ１０−Ｃ１−Ｃ４−アルキルであり；
そして式ＩａａないしＩａｆにおいてＲ４はヒドロキシか、または
【化２１】
2009502838.tif 000022
であり、そしてＸ，Ｒ８およびＲ１０は上で定義したとおりである。
【００３８】
製造のための出発原料の製造はＷＯ０３／０７０１７３，ＷＯ０３／０７０１７４およびＷＯ２００４／００５３０９に開示されているか、または類似の態様で実施することができる。また、本発明のマクロライド接合体はＷＯ０３／０７０１７３，ＷＯ０３／０７０１７４およびＷＯ２００４／００５３０９に開示された方法に類似して製造することができる。本発明のマクロライド接合体の製造はアジスロマイシン、エリスロマイシンまたはロキシスロマイシンから出発する。式ＩにおいてＸがＮＲ１１ＣＨ２である化合物は、アジスロマイシンから反応スキーム１および２に示すように変換することによって製造することができる。
【００３９】
反応スキーム１：
【化２２】
2009502838.tif 000023
中間体化合物Ｍ１を得るため、アジスロマイシンは塩酸または硫酸のような希薄鉱酸で処理される（ＷＯ０２／０７０１７４の実施例２参照）。この酸加水分解は高収率でデクラジノシル化生成物を与え、このものは種々の官能基の導入のための出発原料として使用することができ、または薬物を２’−位へ直接接合するために使用することができる。
【００４０】
アジスロマイシンは、Ｒ４およびＲ５がそれらが結合する炭素原子と共にカルボニル基を形成する式Ｉの化合物の製造のための出発原料である中間体Ｍ２へ直接変換することもできる。Ｍ２を得るため、ジクロロメタンのような塩素化炭化水素溶媒中ジメチルサルファイドとＮ−クロロスクシンイミドとが接触させられる。得られた沈澱物は次にアジスロマイシンと反応させられる。ＷＯ０３／０７０１７４実施例３を見よ。
【００４１】
アジスロマインシは中間体Ｍ６を与えるため、アジ化ナトリウムの存在下ジメチルホルムアミド中で加熱することができる。
【００４２】
反応スキーム２：
【化２３】
2009502838.tif 000024
反応スキーム２に示すように、アジスロマイシンはエピクロルヒドリンと反応によって中間体Ｍ３へ変換される。Ｍ３中のオキシラン環が次に種々の求核試薬、特に２級アミンおよびアミノアルコールによって開環される。反応スキーム２において、この反応は位置異性体Ｍ４およびＭ５を与えるようにヒドロキシエチルメチルアミンで示されている。
【００４３】
ＸがＣ＝０またはＣ＝ＮＯＲ２０である式Ｉの化合物は、下記式のエリスロマイシンＡまたはロキシスロマイシンから得ることができる。
【化２４】
2009502838.tif 000025
【００４４】
エリスロマイシンＡは、ヒドロキシアミンとの反応およびヒドロキシル基のエーテル化によって慣用の態様でケト基を対応するオキシムエーテル（ＸがＣ＝ＮＯＲ２０）へ変換することによって修飾することができる。代って、ロキシスロマイシンを出発原料として使用することができる。エリスロマイシン、そのオキシムエーテル、およびロキシスロマイシンは、薬物残基導入Ｚのための好適な出発原料を与えるため、反応スキーム１および２に示したように同じ反応へ服させることができる。
【００４５】
前記薬物残基Ｚは、薬物カルボキシル酸と前記出発原料のアルコール基の間のカップリング反応（エステル化）によって導入されることができる。このカップリング反応は、一般に薬物カルボキシル酸のための活性化ステップを含んでいる。活性化は前記中間体の存在下ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ−カルボニルジイミダゾールまたは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドによって好都合に実施することができる。カップリング反応の選択性は使用した出発原料と、そしてエステル化触媒に依存する。反応は−２０℃ないし５０℃の温度で実施することができる。氷浴温度から出発し、反応を環境温度で終わらせるのが最も便利である。好ましくは、反応はテトラヒドロフラン、ジオキサンまたはジメトキシエタンのようなエーテル、酢酸エチルのようなエステル、塩化メチレンのようなハロゲン化炭化水素、またはアセトニトリルのような有機溶媒中で実施される。反応混合物の後処理およびマクロライド接合体の精製は慣用の態様で実施される。精製は好ましくはシリカゲル上でアンモニアまたは揮発性アミンを含んでいる僅かに塩基性の溶離剤システムを使用するカラムクロマトグラフィーによって実施される。
【００４６】
本発明の化合物は安定であり、そしてリユウマチタイプの障害の処置およびアレルギーによって誘発される障害の予防に高度に活性である。このためそれらは効果的な抗炎症剤、鎮痛剤、解熱剤、抗アレルギー剤および気管支炎剤であり、または抗気管支縮活性を有する。それ故それらは血栓予防のためおよびアナフイラキシーおよび敗血症ショックの予防のために、そして乾癬、じん麻疹、急性および慢性発疹のようなアレルギー性および非アレルギー性皮膚障害の処置のために使用することができる。特にそれらは関節炎、特にリユウマチ性関節炎の処置に使用することができる。
【００４７】
本発明の化合物は、未接合薬物に比較して増大した化学的安定性および改善されたバイオアベイラビリティーを持っており、そして非経口的に投与することができる。
【００４８】
本発明による化合物は個々の治療活性化合物として、または他の治療活性化合物との混合物として投与することができる。それらはそのまま投与することができるが、しかし一般にはそれらは薬剤組成物の形で、すなわち薬学的に許容し得る補助剤、特に担体または希釈剤および／または添加剤との活性化合物の混合物として投与される。化合物または組成物は経腸的、例えば経口または経直腸的に、例えば静脈内または筋肉内投与することができるが、しかしそれらは好ましくは経口投与形で投与される。本発明化合物の安定性のため局所投与形を提供することができる。
【００４９】
薬剤組成物および薬剤担体または希釈剤の性格は希望する投与態様に依存する。経口組成物は、例えば錠剤またはカプセルとして依存することができ、そして結合剤（例えばシロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントまたはポリビニルピロリドン）、充填剤（例えば乳糖、ショ糖、メイズデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトール、またはグリシン）、滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレン、グリコールまたはシリカ）、崩壊剤（例えばデンプン）、または湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）のような慣用の補助剤を含むことができる。経口液剤は水性または油性懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップ、エリキサー、スプレー等の形で存在することができ、または水または他の適当な担体で再構成のためのドライパウダーとして存在することができる。このタイプの液剤は慣用の添加剤、例えば懸濁剤、喬味剤、希釈剤または乳化剤を含むことができる。非経口投与のため、慣用の薬剤担体を使用した溶液または懸濁液を使用することができる。
【００５０】
処置のコースにおいて本発明化合物の使用は、処置すべき個体、好ましくは哺乳類、特にヒト、農業動物またはペットへ原則として薬学的および獣医学的プラクティスに対応して処方された一以上の化合物の有効量を投与することを含む。そのような処置が指示されるかどうかおよびそれが実施されなければならない形は個々のケースに依存し、そして現在の徴候、症状および／または機能障害、リスク、特異性徴候、症状および／または機能障害の発展の医学的評価（診断）に服し、そしてさらなるファクターを含む。
【００５１】
原則として、処置は、約０．１ｍｇないし約１０００ｍｇ、そして特に約０．５ｍｇないし約１００ｍｇ／ｋｇ体重の毎日の投与量が処置される個人へ投与されるように、もし適切であれば他の活性化合物または活性化合物含有組成物と共にまたはそれに代って１日１回以上投与することによって実施される。
【００５２】
以下の実施例はそれに限定されることなく本発明を例証する。
【実施例】
【００５３】
溶媒および試薬は商業グレードで、一般にさらなる精製なしで使用された。もし乾燥溶媒が必要であれば、それらは分子ふるい４オングストローム上で乾燥され、その上に保たれた。ＴＬＣ分析はＭｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔのアルミ箔上のシリカゲル６０グループ上で実施された。可視化はアニスアルデヒド試薬を消光および染色に用いてＵＶによって行われた。カラムクロマトグラフィーはＭｅｒｃｋ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔのシリカゲル上の開放ガラスカラム中で実施された。
【００５４】
略号
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＭＳ：質量スペクトル分析
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＣＤＩ：Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール
ＥＤＣＩ：１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
【００５５】
実施例１：Ｍ４およびＭ５
【化２５】
2009502838.tif 000026
ＤＭＦ２０ｍｌ中のＷＯ０３／０７０１７４に記載されているように製造された２−エチル−３，４，１０−トリヒドロキシ−１３−（５−ヒドロキシ−４−メトキシ−４，６−ジメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−３，５，６，８，１０，１２，１４−ヘプタメチル−１１−（４−メチル−３，７−ジオキサ−ビシクロ〔４．１．０〕ペプト−２−イルオキシ）−１−オキサ−６−アザ−シクロペンタデカン−１５−オン（Ｍ３）４．５ｇの８０℃の溶液へ、２−ヒドロキシエチルアミン３ｇを加え、加熱を２０時間続けた。冷後大部分のＤＭＦを真空で蒸発した。残渣を酢酸エチル８０ｍｌに取った。この溶液を水と食塩水で洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、溶媒を真空で蒸発した。残渣をシリカゲル上でクロマトグラフィーし、クロロホルム：イソプロパノール：アンモニア（メタノール中７Ｍ）２０：１：１で溶出し、１．８ｇの化合物Ｍ５と、２．５ｇの化合物Ｍ４とを得た。
【００５６】
実施例２：Ｍ６
【化２６】
2009502838.tif 000027
ＤＭＦ１４０ｍｌ中のアジスロマイシン１２ｇの溶液を粉末アジ化ナトリウム５ｇの存在下還流へ４８時間加熱した。この期間後溶媒の大部分を真空蒸発し、そして残渣を水中へ注いだ。この混合物を酢酸エチルで抽出した。合併した有機抽出液を食塩水で洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、そして真空濃縮した。残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム：イソプロパノール：アンモニア（メタノール中７Ｍ）で溶出し、僅かに褐色の固体として３．６ｇのＭ６を得た。
【００５７】
実施例３：化合物１
【化２７】
2009502838.tif 000028
乾燥ＴＨＦ９ｍｌ中のアジスロマイシン１．５ｇのかきまぜ溶液を０℃へ冷やし、リコフェロン１．１ｇと、次にＤＣＣ０．５９ｇを加えた。１時間後混合物が環境温度へ来るのを許容し、さらに１２時間攪拌した。混合物を濾過し、濾液を真空濃縮した。残渣をトルエンに取り、そしてシリカゲル上のクロマトグラフィー（カラム１５ｃｍ×２．５ｃｍ）にかけ、クロロホルム：イソプロパノール：アンモニア（メタノール中７Ｍ）４０：１：１で溶出し、所望の生成物を得た。
【００５８】
実施例４：化合物２
【化２８】
2009502838.tif 000029
０．５ｇの化合物１を環境温度で１Ｍ  ＨＣｌに溶解した。３時間後混合物をジエチルエーテルで抽出した。有機相を捨て、氷冷した水相をｐＨ約１０へ調節するため炭酸カリウムで処理した。混合物をジクロロメタンで抽出した。合併した有機抽出液を食塩水で洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、真空下濃縮し、実施例７に記載したように得た生成物とＭＳおよびＴＬＣにより同一である所望の生成物を得た。
【００５９】
実施例５：化合物３
【化２９】
2009502838.tif 000030
ＴＨＦ６ｍｌ中のロキシスロマイシン１．２ｇの懸濁液を０℃へ冷却し、そして急速攪拌下リコフエロン８２０ｍｇ、続いてＤＣＣ４３０ｍｇを加えた。混合物を３０分間同じ温度に保ち、そして次に環境温度へ来るのを許容した。さらに１６時間後、混合物を濾過し、濾液を真空濃縮した。残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィーにかけ、クロロホルム：イソプロパノール：アンモニア（メタノール中７Ｍ）２５：１：１で溶出し、無色固体として所望の生成物１．５ｇを得た。
【００６０】
実施例６：化合物４
【化３０】
2009502838.tif 000031
丸底フラスコ中、乾燥ＴＨＦ２０ｍｌに５．９ｇのＭ２を懸濁した。混合物を氷浴中で０〜５℃へ冷やし、リコフエロン５．２ｇを加え、直ちにＤＣＣ２．８ｇを続いて加えた。混合物を同温度で０．５時間攪拌し、その後氷浴を除去した。混合物を環境温度においてさらに１２時間攪拌し、濾過した。残渣をジクロロメタン２０ｍｌで洗浄した。揮発分は真空中で除去した。残渣をトルエン５ｍｌとジクロロメタン５ｍｌに取り、シリカゲルカラム３５ｃｍ×４．５ｃｍへジクロロメタン：イソプロパノール：アンモニア（メタノール中７Ｍ）１００：１：１中のスラリーとして移した。溶出液としてジクロロメタン：イソプロパノール：アンモニア（メタノール中７Ｍ）３０：１：１まで変化するジクロロメタン：イソプロパノール：アンモニア（メタノール中７Ｍ）６０：１：１の６００ｍｌを使用した。生成物を含んでいる分画を集め、３０℃をこえない浴温において減圧下蒸発し、所望の生成物６．８ｇを得た。Ｒｆ＝０．２８（クロロホルム：イソプロパノール；アンモニア＝３０：１：１中）ＭＳ：４７６．７（Ｍ＋２Ｈ＋）
【００６１】
実施例７：化合物２
【化３１】
2009502838.tif 000032
乾燥ＴＨＦ２０ｍｌを丸底フラスコへ入れ、これへ５．９ｇのＭ1を懸濁した。混合物を氷浴中へ０〜５℃へ冷やし、そしてリコフエロン５．２を加え、その直後ＤＣＣ２．８ｇを加えた。混合物を同温度で０．５時間攪拌し、そして氷浴を除去した。混合物を環境温度でさらに１２時間攪拌し、濾過した。残渣をジクロロメタン２０ｍｌで洗った。すべての揮発分を真空で除去した。残渣をトルエン５ｍｌとジクロロメタン５ｍｌに取り、ジクロロメタン：イソプロパノール：アンモニア（メタノール中７Ｍ）１００：１：１のスラリーとしてパックしたシリカゲルのカラム３５ｃｍ×４．５ｃｍへ移した。溶出液として、ジクロロメタン：イソプロパノール：アンモニア（メタノール中７Ｍ）６０：１：１からジクロロメタン：イソプロパノール：アンモニア（メタノール中７Ｍ）３０：１：１まで変化する溶出液６００ｍｌを用いた。生成物を含んでいる集めた分画を３０℃をこえない温度の浴で減圧蒸発し、望みの生成物６．８ｇを得た。Ｒｆ＝０．２８（ジクロロメタン：イソプロパノール：アンモニア＝３０：１：１中）ＭＳ：４７６．７（Ｍ＋２Ｈ＋）
【００６２】
実施例８：化合物５
【化３２】
2009502838.tif 000033
ＴＨＦ５ｍｌ中の８００ｍｇの（２−ベンゾフラン−２−イル−６，６−ジメチル−１−フェニル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロリジン−３−イル）酢酸を環境温度においてＣＤＩ３５０ｍｇで処理した。５分後７００ｍｇのＭ２を加え、混合物を環境温度において２４時間攪拌した。混合物を真空濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、クロロホルム：イソプロパノール：アンモニア（メタノール中７Ｍ）４０：１：１で溶出し、僅かに褐色の固体として所望の生成物０．７５ｇを得た。Ｒｆ＝０．６３（クロロホルム：イソプロパノール：アンモニア＝３０：１：１中）。
【００６３】
実施例９：化合物８
【化３３】
2009502838.tif 000034
乾燥ＴＨＦ７ｍｌの１．１ｇのＭ２溶液を０℃へ冷やし、８００ｍｇの〔２−（５−クロロチオフェン−２−イル）６，６−ジメチル−１−フェニル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロリジン−３−イル〕酢酸を攪拌下に加え、続いて４７０ｍｇのＤＣＣを加えた。混合物を同温度で１時間急速に攪拌し、その後環境温度へ来るのを許容した。１２時間後混合物を濾過し、濾液を真空濃縮した。残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、クロロホルム：イソプロパノール：アンモニア（メタノール中７Ｍ）４０：１：１で溶出し、所望の生成物１．３ｇを得た。Ｒｆ＝０．６９（クロロホルム：イソプロパノール：アンモニア＝３０：１：１中）ＭＳ：４７５．７（Ｍ＋２Ｈ＋）
【００６４】
実施例１０：化合物７
【化３４】
2009502838.tif 000035
乾燥ＴＨＦ４ｍｌ中の６７０ｍｇのＭ４の溶液を０℃へ冷やし、リコフエロン６００ｍｇを攪拌下に加え、続いてＤＣＣ２９０ｍｇを加えた。３０分後混合物が環境温度へ来るのを許容し、そしてさらに１０時間攪拌した。混合物を濾過し、残渣を真空濃縮し、シリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、クロロホルム：イソプロパノール：アンモニア（メタノール中７Ｍ）４０：１：１で溶出し、所望の生成物０．７５ｇを得た。Ｒｆ＝０．４１（クロロホルム：イソプロパノール：アンモニア＝３０：１：１中）ＭＳ：５７０．７（Ｍ＋２Ｈ+）
【００６５】
実施例１１：化合物８
【化３５】
2009502838.tif 000036
乾燥ＴＨＦ４ｍｌ中の４３０ｍｇのＭ５の溶液を０℃へ冷やし、攪拌下リコフエロン６００ｍｇと、ＤＣＣ２９０ｍｇを加えた。３０分後混合物が環境温度へ昇温するのを許容し、そしてさらに１０時間攪拌した。混合物を濾過し、残渣を真空濃縮し、シリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、クロロホルム：イソプロパノール：アンモニア（メタノール中７Ｍ）４０：１：１で溶出し、望む生成物０．７５ｇを得た。Ｒｆ＝０．４（クロロホルム：イソプロパノール：アンモニア＝３０：１：１中）ＭＳ：５７０．７（Ｍ＋２Ｈ＋）
【００６６】
実施例１２：化合物９
【化３６】
2009502838.tif 000037
ＴＨＦ６ｍｌ中の１．５ｇのＭ６の溶液を０℃へ冷やし、急速攪拌下リコフエロン１．４ｇ、続いてＤＣＣ７７０ｍｇを加えた。混合物を同温度に３０分間維持し、その後環境温度へ昇温を許容した。さらに１０時間後混合物を濾過し、濾液を真空濃縮した。残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィーに付し、クロロホルム：イソプロパノール：アンモニア（メタノール中７Ｍ）４０：１：１で溶出し、所望の生成物１．７ｇを得た。Ｒｆ=０．４０（クロロホルム：イソプロパノール：アンモニア=３０：１：１中）ＭＳ：４６７．７（Ｍ+２Ｈ+）
【００６７】
実施例１３：化合物１０
【化３７】
2009502838.tif 000038
乾燥ＴＨＦ７ｍｌ中の２−ベンゾフラン−２−イル−６，６−ジメチル−１−フェニル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロリジン−３−イル）酢酸４００ｍｇの溶液を２００ｍｇのＣＤＩで処理した。１０分後２−ヒドロキシプロピオン酸１４０ｍｇを加え、混合物を４５℃へ１２時間加熱した。冷後混合物を真空濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、酢酸エチルで溶出してエステル２２０ｍｇを得た。このエステルを３００ｍｇのＭ２と共にＴＨＦ４ｍｌに溶解し、ＤＣＣ１００ｍｇを加えた。１６時間後混合物を濾過し、残渣を真空濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、クロロホルム：イソプロパノール：アンモニア（メタノール中７Ｍ）４０：１：１で溶出し、所望の生成物２９０ｍｇを得た。ＭＳ：５０７．８（Ｍ+２Ｈ+）
【００６８】
実施例１４：接合体の取り込み
接合体取り込みの決定のために、新たに引いたヘパリン化血液またはバッフィーコート調製物が使用される。バッフィーコート調製物が好ましい。それらはドナー血液から全血の単純な遠心（４７９５ｇ  １０分間）によって得ることができる。遠心後表面から血漿が採取され、その後白血球層の直下に横たわる赤血球層と共に免疫細胞がドナーバッグから押し出される。これは高収量と分配のための赤血球の十分な集団を確実にする。生成する細胞懸濁液５ｍｌをＴ２５培養フラスコ中に分配する。基質を最終濃度１ないし１０μＭの間まで加え、懸濁液を３７℃で５％ＣＯ２雰囲気中でインキュベートする。取り込み動態の分析のため、サンプルを基質添加後０，２，５，１０，３０，６０，９０，１８０または２４０分において引く。スクリーニング目的のため、サンプルを０および１２０分において採取する。
【００６９】
バッファーおよび溶液：
ＰＢＳ  ７３ｍＭ  ＮａＣｌ，２．７ｍＭ  ＫＣｌ，１．５ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４，８ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４，ｐＨ７．４
ＤＰＢＳ  １３７ｍＭ  ＮａＣｌ，３ｍＭ  ＫＣｌ，８ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４，１ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４，１ｍＭ  ＣａＣｌ２，０．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２，５ｍＭ  グルコース，ｐＨ７．４
【００７０】
血球分画の分離−密度勾配遠心
血球分画は密度勾配遠心を使用して調製される。単核球および多核球は、典型的にはＦｉｃｏｌｌまたは類似物（商業的供給社は：Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ，Ａｘｉｓ  Ｓｈｉｅｌｄ，１０３１９６６；Ｌｙｍｐｈｏｆｌｏｔ  ＨＬＡ，８２４０１０；またはＰＭＮ  Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉｕｍ  Ｒｏｂｂｉｎｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  １０６８−００−０を含む）を含んでいる溶液からなる粘稠な媒体上に血球懸濁液をレイヤーすることによって本質的に赤血球から分離される。レイヤーされた懸濁液は次に６００ｇで２０分遠心され、その後血球分画および血漿（インキュベーション媒質）分画がゆるやかな吸引によって除去され、ＰＢＳバッファー中２回洗浄され、その後血球数およびペレット体積が推計される。
【００７１】
分析：
化合物の取り込みは質量選択検出を伴ったクロマトグラフィー分析（ＬＣ／ＭＳ）を用いてモニターされる。取り込みはまた推計体積および総タンパク質に基づく血球の量に対して正規化される。これらのデータを得るため、血球調製物は水中に溶かされ、そして砕片が１６１００ｇにおいて１０分間沈降される。上清が回収され、タンパク質およびＤＮＡ含量のためにサブサンプルが採取される。上清中のタンパク質は溶液を１００％ｖ／ｖエタノールへもたらし、そして１６１００ｇにおいて１０分間再び遠心することによって分離される。化合物取り込みは、細胞の平均濃度を得るために細胞の細胞質体積に従って正規化される。細胞体積は溶解した細胞部分標本のＤＮＡ，タンパク質またはヘム含量を細胞数および溶解前のパック体積に対して相関させることによって推計される。
【００７２】
【表１】
2009502838.tif 000039
キー：−＝血球から除かれた
＋＝等しいか類似
＋＋＝＞血球中５倍増加
＋＋＋＝＞血球中１０倍増加
【００７３】
実施例１５：動物モデルにおける有効性
関節炎を抑制する薬物の有効性は動物モデルを使用して決定することができる。げつ歯動物においてコラーゲン誘発関節炎はリユウマチ性関節炎の良く確立された実験モデルであり、そして抗炎症薬の有効性をテストするために適切であると考えられている。このモデルは動物を外因性コラーゲン（例えばウシまたはニワトリ）で免疫化し、そして病気の出現後物質を投与することによって実施される。病気は応答を増加させるように後押しされ得る。ここで報告されるデータはＤＢＡＪ１マウスのネズミモデルを使用して得られた。日ゼロにおいて完全フロイドアジュバント中のコラーゲン懸濁液が尾基部に皮下注射された。日２０において、完全フロインドアジュバント中のコラーゲンが尾基部に近い位置に注射された。関節炎が発症した時、動物がランダムに処置グループに割り当てられた。モニターされた徴候は、体重、足スコア、足厚さおよび全体の状態を含んでいた。動物は１０日間観察され、処置された。マクロライド接合体は水中１．５％クエン酸塩、６％フラクトース中の溶液として処方された。結果は以下の表２に示されている。
【００７４】
【表２】
2009502838.tif 000040
＊すべての関節が以下に基いたスコアリング
システルに従ってグレード化された：
−：健全な足；＋：足の１本が炎症；＋＋：関節の２タイプが炎症（例えば足根骨および足指）；＋＋＋：足の二つの別の部分の３つの関節の炎症；＋＋＋＋：足全体が炎症
【００７５】
さらなる実験において、関節炎は上に記載したようにウシコラーゲンを用いて誘発された。動物は病気の陽性発症後１日１回化合物経口投与によって処置された。対照動物（未処置）との比較は処置後９日になされた。結果は以下の表３に示されている。
【００７６】
【表３】
2009502838.tif 000041
【００７７】
本発明はその詳細な説明に関して記載されたが、以上の説明は例証であり、特許請求の範囲に規定された本発明の範囲の限定を意図しないことを理解すべきである。他の局面、利益および修飾は特許請求の範囲内である。
【００７８】
参考文献
2009502838.tif 000042
2009502838.tif 000043
【国際調査報告】
2009502838.tif 000060
2009502838.tif 000061
2009502838.tif 000062