(57)【要約】  本発明は腎症遅延効果の高い、腎症患者向けの大豆蛋白素材を見出し、これを使用した腎症患者用途の食品を提供することを課題とした。  大豆の酸沈殿性蛋白質のうち、７Ｓグロブリンや１１Ｓグロブリン以外の酸沈殿性蛋白質の純度を高めた分画大豆蛋白、すなわち「非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白」に強い尿中アルブミン低下作用があるという知見を得て本発明を完成させるに到った。
2009110504.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白からなることを特徴とする、腎症患者の蛋白質補給用大豆蛋白素材。
【請求項２】
非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白を使用してなる腎症患者の蛋白質補給用食品。
【請求項３】
非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白を有効成分とする腎症患者の腎症進行遅延用食品。
【請求項４】
腎症患者の腎症の進行遅延のための非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白の使用。
【請求項５】
非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白を有効量使用することを特徴とする腎症患者の腎症の進行遅延方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は腎症患者用大豆蛋白素材及びこれを使用した食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年糖尿病患者数の急増に伴い、合併症としての腎疾患者も増加の一途をたどっている。このように腎症を発症した患者の治療として薬物療法とともに食事療法も重要な意義を持っている。代表的な食事療法として摂取蛋白を抑える低蛋白食療法がある。この低蛋白食による食事療法では一日当たりの蛋白質の摂取量は一般に0.8〜1.0ｇ／kg体重と定められている。【０００３】
腎症患者の食事療法として腎機能を保護するために、上記のように蛋白制限が行われるが、このような蛋白制限は身体を構成している蛋白質の崩壊につながり、血中の窒素化合物が増え、腎臓の負担が大きくなることも報告されている。また、摂取カロリーの不足を補うため必然的に糖質や脂質を多く取る必要がある。このような結果、肥満を引き起こし、メタボリックシンドローム等さまざまな二次障害を引き起こす問題点がある。【０００４】
腎臓に対して負荷が少ない蛋白質があれば、構成蛋白の補給や摂取カロリーの問題が解決し、腎症患者にとって非常に有益であると考える。大豆蛋白質（Soy Protein Isolate：SPI）は動物性蛋白質に比べて糖尿病性腎症の初期病態からの進展を遅延することが糖尿病モデル動物やII型糖尿病患者での試験において報告されている（非特許文献１，２，３）。また、動物性の蛋白と植物性の蛋白をバランスよく摂取することで腎症患者の進展を抑制することも報告されている（特許文献１）。しかし、やはり低蛋白療法に比べるとその遅延効果は十分ではなく、腎臓に対してより強い効果が認められる蛋白質が求められている。そのため、大豆蛋白の活性中心部分を含む画分を濃縮し、一般に通常量の使用でより強い効果が発揮できれば、より利用しやすくなる。【０００５】
（参考文献）
【非特許文献１】Sandra R. Teixeira et al., J. Nutr., 133, 673-678, 2003.
【非特許文献２】Joyce Trujillo et al., Am J Physiol Renal Physiol, 288, 1152, F108 - F116, 2005.
【非特許文献３】JW Anderson et al., Am. J. Clinical Nutrition, 68, 1347, 1998.
【特許文献１】特許公開２００７−１７６９０１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
食事療法では一日当たりの蛋白質の摂取量は一般に0.8〜1.0ｇ／kg体重と定められている。しかし低蛋白療法には体蛋白の崩壊や、高脂肪食や高炭水化物食に偏ってしまう等の問題がある。大豆蛋白は動物性蛋白と比較して腎症の進展を遅延させることが報告されているが、さらに効果の強い新しい蛋白素材のニーズが高い。したがって本発明は腎症遅延効果の高い、腎症患者向けの大豆蛋白素材を見出し、これを使用した腎症患者用途の食品を提供することを課題とした。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、大豆蛋白質はいくつかの蛋白の複合体であり、いずれかの画分に活性の中心が存在するのではないかと着想し、有効な画分の探索を行うこと、言い換えれば現在大豆蛋白質の成分としてよく知られている７Ｓグロブリンや１１Ｓグロブリンの他、他の蛋白質成分にも顕著な尿中アルブミン抑制活性を見出せないか種々検討を行った。
その結果、大豆の酸沈殿性蛋白質のうち、７Ｓグロブリンや１１Ｓグロブリン以外の酸沈殿性蛋白質の純度を高めた分画大豆蛋白、すなわち「非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白」に強い尿中アルブミン低下作用があるという知見を得て本発明を完成させるに到った。【０００８】
すなわち本発明は、
（１）非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白からなることを特徴とする、腎症患者の蛋白質補給用大豆蛋白素材、
（２）非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白を使用してなる腎症患者の蛋白質補給用食品、
（３）非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白を有効成分とする腎症患者の腎症進行遅延用食品、
（４）腎症患者の腎症の進行遅延のための非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白の使用、
（５）非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白を有効量使用することを特徴とする腎症患者の腎症の進行遅延方法、
を提供するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、従来の分離大豆蛋白などよりも腎症の進行を遅延させる作用の高い、腎症患者が蛋白質源として摂取することのできる、大豆蛋白質素材を提供することが可能となる。本発明において分画された非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白は、従来検討された大豆蛋白と同量摂取しても腎症の悪化が軽いため、身体を構成している蛋白質の崩壊を招くことが無く、しかも高脂肪食、高炭水化物食に偏らない腎症患者にとっては有益な蛋白素材を提供できる。腎症患者はこれを使用した食品を摂取することによりＱＯＬ（QUALITY OF LIFE）の向上にも役立つ。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明は腎症の初期進展の遅延活性の中心が、大豆蛋白質から分画した非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白にもあるという知見を得、これを使用して腎症患者用大豆蛋白素材としたものである。以下に本発明について詳細に説明する。【００１１】
本発明の「非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白」は大豆の酸沈殿性蛋白質の内、７Ｓグロブリン及び１１Ｓグロブリン以外のマイナーな酸沈殿性蛋白質（以下、脂質を多く随伴することから「ＬＰ（Lipophilic Proteins：脂質親和性タンパク質」と略することがある。）の純度を高めた大豆蛋白素材をいう（以下、「非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白」を「高LP-SPI」と称することがある。）。なおここにいう「酸沈殿性蛋白質」は、大豆の蛋白質の内、脱脂豆乳などの溶液のｐＨを酸性側（ｐH４〜６）に調整することにより沈殿する性質を有する蛋白質である。したがって、分離大豆蛋白に含まれる蛋白質がこれに相当し、分離大豆蛋白製造時に酸沈しないホエー中の蛋白質はこれに含まれない。【００１２】
「７Ｓグロブリン」は「β−コングリシニン」とも呼ばれ、３種のサブユニット（α’、α、β）から構成される糖蛋白質である。これらのサブユニットはランダムに組み合わされ、３量体を形成している。等電点はｐＨ４．８付近で分子量は１７万程度である。以下、単に「７Ｓ」と略記する。【００１３】
また、「１１Ｓグロブリン」は「グリシニン」とも呼ばれ、酸性サブユニットと塩基性サブユニットがジスルフィド結合によって結合し、それらが６分子集まって６量体を形成している。分子量は３６万程度である。以下、単に「１１Ｓ」と略記する。【００１４】
７Ｓ、１１Ｓはいずれも大豆に含まれる代表的な酸沈殿性蛋白質であり、プロテインボディーに貯蔵される主要な貯蔵蛋白質である。品種によっても異なると考えられるが、SDS電気泳動においてクマシーブリリアントブルー（CBB）染色後、デンシトメトリーによってピーク面積を測定した場合、従来の分離大豆蛋白（SPI）などでは大豆蛋白質全体の７０％以上を占める成分である。【００１５】
これに対し、ＬＰは７Ｓ，１１Ｓ以外の雑多な酸沈殿性蛋白質の集合体であり、上記SDS電気泳動法においては７Ｓや１１Ｓに比べてＣＢＢ染色がされにくい性質を有し、従来あまりその実態が認識されていなかったものであるので、この方法では正確な定量が困難である。
したがって簡易的に、７Ｓ，１１Ｓ，ＬＰの各蛋白質中の主要な蛋白質を選択し、それらの染色比率を求め、これらの比率からＬＰ含量を推定する以下の方法を採用することができる。【００１６】
〔ＬＰ含量の推定方法〕
(a) 各蛋白質中の主要な蛋白質として、７Ｓはαサブユニット及びα'サブユニット（α＋α'）、１１Ｓは酸性サブユニット（AS）、ＬＰは34kDa蛋白質及びリポキシゲナーゼ（P34＋Lx）を選択し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより選択された各蛋白質の染色比率を求める。電気泳動は表１の条件で行うことが出来る。
(b) Ｘ（％）＝（P34＋Lx）／｛（P34＋Lx）＋（α＋α’）＋AS｝×100（％）を求める。
(c) 低変性脱脂大豆から調製された分離大豆蛋白のＬＰ含量を加熱殺菌前に上記方法１，２の分画法により測定すると凡そ３８％となることから、Ｘ＝３８（％）となるよう（P34＋Lx）に補正係数k*＝6を掛ける。
(d) すなわち、以下の式によりＬＰ推定含量（Lipophilic Proteins Content Index、以下「LCI」と略する。）を算出する。【００１７】
（表１）
2009110504.tif 000003
【００１８】
（数式１）
2009110504.tif 000004
【００１９】
高LP-SPIのLCI値は少なくとも５０％以上であるのが好ましく、６０％以上であるのがよりLPの純度が高くなり好ましい。ちなみに一般の分離大豆蛋白のLCI値は４０％程度であるから、LCI値がこのレベルまで低くなると高LP-SPIとは言えない。【００２０】
次に、本発明の新規大豆蛋白である高LP-SPIの調製例を示す。高LP-SPIの調製方法はLPが濃縮される方法であれば特に限定されない。例えば全脂大豆から直接高LP-SPIを分画したい場合には、４〜６０℃で豆乳を抽出し、豆乳を遠心するなどして乳化層を採取し、その中に含まれる蛋白質をLP画分として回収し、高LP-SPIを得ることができる。
また７ＳとLPを含むか、或いは７Ｓ、１１Ｓ及びLPを含む大豆蛋白溶液（豆乳、分離大豆蛋白溶液、１１Ｓ除去分画大豆蛋白溶液など）から、７Ｓに富む画分や１１Ｓと７Ｓに富む画分を除去することにより得ることができる。脱脂大豆等から豆乳を抽出する際の温度は４〜６０℃、ｐＨは６〜９とするのが好ましい。
この方法のより具体的な例としては、予め１１Ｓに富む画分を除去して７Ｓ及びLPに富む蛋白含有液を調製し、これから７Ｓに富む画分を除去することにより行うことができる。予め１１Ｓに富む画分を除去する方法としては、１１Ｓの等電点であるｐＨ５．８〜６．４にｐＨ調整し、１１Ｓを選択的に沈殿・除去するなどの公知の方法を用いることができ、例えば以下の分画法を利用し、また適宜組み合わせて調製することができる。【００２１】
（１）タン・柴崎の方法（Thahn,V.H, and Shibasaki,K., J.Agric.FoodChem., 24, 117(1976).）による１１Ｓの除去法、
（２）１１Ｓの等電点付近で豆乳を抽出する方法（特開昭５５−１２４４５７号公報）、
（３）抽出時に少量のカルシウム塩を添加し、１１Ｓに富む画分を除去する方法（特開昭４８−５６８４３号公報）、
（４）ｐＨ１．２〜４．０の塩化ナトリウムまたは塩化カリウム存在下で１１Ｓに富む画分を不溶性し除去する方法を製造する方法（特開昭４９−３１８４３号公報）、
（５）等電点沈殿したスラリーをｐＨ５．０〜５．６に調整し、かつ塩化ナトリウム濃度を０．０１〜０．２Ｍのモル濃度に調整して、１１Ｓ画分を分離除去する方法（特開昭５８−３６３４５号公報）、
（６）１１Ｓグロブリンが低温下では溶解性が低下する現象（冷沈現象とよぶ）を利用したもので、大豆蛋白原料を亜硫酸化合物、グルタチオン化合物、またはシステイン化合物の存在下、かつｐＨ６．５以上の水系下処理しｐＨ５．５〜７．０かつ２０℃以下の範囲に調整して１１Ｓに富む不溶性画分を除去する方法（特開昭６１−１８７７５５号公報）、
（７）大豆蛋白を含む溶液にフィターゼを作用させ、該溶液をｐＨ５．６〜６．６に調整し、１１Ｓに富む不溶性画分として除去する方法（ＷＯ００／５８４９２号公報）、
（８）１１Ｓを欠損する大豆から大豆蛋白を水抽出する方法、等【００２２】
上記の１１Ｓを除去した分画大豆蛋白は、７Ｓリッチな大豆蛋白として過去にいくつもの実験に供されている。しかし、いずれの場合もLPの存在について示唆されていない。これはLPがＳＤＳ電気泳動法では染色されにくいことが原因である。本発明者らは、純度の高い、すなわちLPの混在の少ない７Ｓ分画大豆蛋白、１１Ｓ分画大豆蛋白と、LPの純度が高い高LP-SPIをサンプルとして用いることで、これらの各蛋白質の有する本来の機能を明確にすることができた。【００２３】
以上のような方法により得られる画分は７Ｓ及びLPに富む画分であり、LPもある程度濃縮されているが、本発明に使用する高LP-SPIとしてはこの画分からさらに７Ｓに富む画分が除去され、LPが高純度化されたものがより好ましい。LPをさらに高純度化する方法としては、例えばｐＨ４〜５．５の領域において、温度を４０〜６５℃に上げた後、再びｐH５．３〜５．７の領域で生じた不溶性画分を回収する方法（ＷＯ２００６／１２９６４７号公報参照）や、ナトリウム塩などの塩濃度を上げて７Ｓを選択的に可溶化する方法などを使用できる。これにより発生するLPに富む不溶性画分を回収し、７Ｓに富む可溶性画分を除去することで高LP-SPIを得ることができる。【００２４】
本発明者らは、大豆蛋白素材からLPの純度を高めた高LP-SPIを調製し、これを腎症発症モデルのマウスに摂取させ、高LP-SPIがマウスの尿中アルブミン濃度に及ぼす効果を確認した。その結果、高LP-SPIを蛋白質源として摂取しても、従来の分離大豆蛋白、７Ｓ分画大豆蛋白、１１Ｓ分画大豆蛋白に比較して、より強い尿中アルブミン上昇抑制効果を示すことがわかり、高LP-SPIが腎症患者の腎症の進行を遅延させるのに有効であり、蛋白質の補給源として非常に有効な蛋白素材であるとの知見を得た。【００２５】
高LP-SPIを有効量使用し、種々の形態の食品に調製することにより、腎症患者向けの蛋白質補給用食品とすることができる。そしてこの食品は腎症患者の腎症の進行を遅延するために用いることができる。該食品中における高LP-SPIの使用量は腎症患者の症状の度合い、性別、年齢等によって、適宜設定することができ、例えば１日に必要な蛋白質摂取量のうち所定の割合（例えば５〜１００％）が高LP-SPI由来となるように有効量として設定することができる。【００２６】
本発明の食品には、高LP-SPIを使用する以外に、腎症の遅延または治療効果のあるといわれる材料を併用することも可能である。【００２７】
本発明の食品の種類としては、一般的な食品形態である清涼飲料、粉末飲料、乳製品、豆乳、発酵豆乳、大豆蛋白飲料、プロテインパウダー、豆腐、納豆、油揚げ、厚揚げ、がんもどき、ハンバーグ、ミートボール、唐揚げ、ナゲット、各種総菜、焼き菓子、プロテインバー、シリアル、飴、ガム、ゼリー等の菓子類、タブレット、パン類、米飯類など、様々な食品に配合することができる。さらに、高LP-SPIを有効成分（関与する成分）として食品の包装やパンフレット等に尿中アルブミンの低減に関連する各種効能・効果を有する旨を記載した、健康用途の食品（特定保健用食品等）にもすることができる。
【実施例】
【００２８】
以下に本発明の実施例を記載する。【００２９】
〔試験例〕糖尿病性腎症の初期進行遅延作用の確認
WO2006/129647号公報の比較実験例２の実施例２、比較実験例３、実施例７及び実施例９の方法に準じて調製された高LP-SPI（LCI値71％）、11S分画大豆蛋白（LCI値12％）、７Ｓ分画大豆蛋白（LCI値12％）の各種素材と、市販の分離大豆蛋白（LCI値40％）をサンプルとして、各大豆蛋白の糖尿病性腎症の初期進行遅延効果について確認した。
AIN-93G組成（REEVES P.G.ら：J. NUTR., 123, 1939-1951, 1993.）に基づき、カゼイン「ビタミンフリーカゼイン」（オリエンタル酵母(株)製、以下「カゼイン」と記載する。）を粗蛋白量として20重量％含む配合食を対照として、蛋白質源をそれぞれ分離大豆蛋白質（比較例１）、11S分画大豆蛋白（比較例２）、7S分画大豆蛋白（比較例３）、又は高LP-SPI（実施例１）で置換した試験食（表２）を以下の方法で動物に摂取させた。モデル動物は8週齢のKKAy系雄マウス（日本クレア(株)販）を50匹使用した。１週間の予備飼育後、群間の平均体重および尿アルブミン量がほぼ同等になるように各群10匹ずつに群分けし、7週間の試験食飼育を行った。【００３０】
（表２）
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【００３１】
試験期間中２週間ごとに、朝９時より非絶食下でそれぞれのマウス尾より採血した。血液はヘパリン処理後、3000rpmで15分間遠心分離し、得られた血漿を血液サンプルとし、富士ドライケム7000（富士フィルム(株)）を用いて血糖値を測定した。２週間ごとの血糖値を表３及び図１に示した。なお、図１中の「LP」が高LP-SPI群である。【００３２】
（表３）２週間ごとのマウスの血糖値変化
2009110504.tif 000006
【００３３】
また、飼育期間２週間ごとにマウスを代謝ケージにいれ、24時間採尿した。得た尿を用いて、クレアチニン（CRE）濃度およびアルブミン（ALB）濃度を測定し、比（ALB/CRE）を算出した。２週間ごとのアルブミン/クレアチニン値を表４及び図２に示した。なお、図２中の「LP」が高LP-SPI群である。【００３４】
（表４）２週間ごとのマウスの尿アルブミン値の変化
2009110504.tif 000007
【００３５】
飼育期間６週目に４日間糞を採取し、糞中の窒素含量を測定した。摂取した餌中の窒素含量と糞中の窒素含量を比較し、見かけの蛋白吸収率を算出した。見かけの蛋白吸収率を表５及び図３に示した。【００３６】
（表５）摂取窒素含量と排出窒素含量より算出した見かけの蛋白吸収率
2009110504.tif 000008
【００３７】
以上の結果、高LP-SPIの摂取は、従来の分離大豆蛋白や７Ｓ・１１Ｓ分画大豆蛋白よりも顕著に尿中アルブミン上昇抑制作用が認められた。すなわち、本発明者らが分画した高LP-SPIは初期腎症の進展遅延作用の高い新素材であることが認められた。
血糖値に関しては他の画分と比較して７S画分が最も低くなり高LP-SPI画分に血糖低下効果は認められなかったことから、この高LP-SPIの腎症の進展遅延効果は血糖改善による効果ではないことが分かった。
また、高LP-SPI画分の蛋白吸収率は従来の大豆蛋白と変わらず、非常に高いにもかかわらず腎症の遅延効果が認められたことから、この新規の大豆蛋白素材は腎症患者に対して非常に有用な蛋白質であることが認められた。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】２週間ごとのマウスの血糖値の経時変化を示した表１の結果のグラフである。
【図２】２週間ごとのマウスの尿アルブミン値の経時変化を示した表２の結果のグラフである。
【図３】摂取窒素含量と排出窒素含量より算出した見かけの蛋白吸収率を示した表３の結果のグラフである。
【図１】
2009110504.tif 000009
【図２】
2009110504.tif 000010
【図３】
2009110504.tif 000011
【手続補正書】
【提出日】平成21年8月24日(2009.8.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白からなることを特徴とする、腎症患者用の蛋白質補給素材。
【請求項２】
請求項１記載の蛋白質補給素材を使用してなる腎症患者用の蛋白質補給用食品。
【請求項３】
請求項１記載の蛋白質補給素材を使用してなる腎症患者用の腎症の進行遅延用食品。
【請求項４】
非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白を添加することを特徴とする腎症患者の蛋白質補給用食品の製造法。
【請求項５】
非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白を添加することを特徴とする腎症の進行遅延用食品の製造法。
【請求項６】
非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白を有効成分とする尿中アルブミン上昇抑制剤。
【請求項７】
非７Ｓ・１１Ｓ−酸沈殿性大豆蛋白を有効成分とする腎症の進展遅延剤。
【国際調査報告】
2009110504.tif 000012
2009110504.tif 000013
2009110504.tif 000014
2009110504.tif 000015
2009110504.tif 000016
2009110504.tif 000017