(57)【要約】  本発明は、ＩＬ−１阻害剤を投与することによって、対象における血管石灰化を抑制、阻害又は防止する方法に関する。本発明において有用であるＩＬ−１阻害剤としては、アナキンラ、ＩＬ−１抗体、ＩＬ−１ＲＩ抗体、ＩＬ−１トラップ分子、可溶性ＩＬ−１受容体、抗ＩＬ−１／ＩＬ−１Ｒペプチド及びペプチボディなどが挙げられる。
2009512710.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における血管石灰化を阻害、抑制又は防止する医薬品の製造のためのＩＬ−１阻害剤の使用。
【請求項２】
対象が慢性腎不全に罹患している、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
対象が末期腎不全に罹患している、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
対象が透析前である、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
対象が尿毒症に罹患している、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
対象がＩ又はＩＩ型真性糖尿病に罹患している、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
対象が心血管障害を有する、請求項１に記載の使用。
【請求項８】
ＩＬ−１阻害剤が、アナキンラである、又はアナキンラの配列を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
ＩＬ−１阻害剤がＩＬ−１ＲＩ抗体である、請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
ＩＬ−１阻害剤がカルシウム様化合物と組み合わせて投与される、請求項１に記載の使用。
【請求項１１】
ＩＬ−１阻害剤がシナカルセットＨＣＬと組み合わせて投与される、請求項１に記載の使用。
【請求項１２】
ＩＬ−１阻害剤が、ビタミンＤステロールと組み合わせて投与される、請求項１に記載の使用。
【請求項１３】
ＩＬ−１阻害剤がＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）と組み合わせて投与される、請求項１に記載の使用。
【請求項１４】
対象の血清クレアチニンレベルを低下させる医薬品の製造におけるＩＬ−１阻害剤の使用。
【請求項１５】
対象が、対象へのビタミンＤステロールの投与によって誘発される高い血清クレアチニンレベルを有する、請求項１４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に、医薬品の分野に関し、より詳細には、血管石灰化を抑制、治療又は防止する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＩＬ−１系
これまでに発見された最も強力な炎症性サイトカインの１つはインターロイキン１（ＩＬ−１）である。ＩＬ−１は、多数の疾患及び病状における重要な媒介物質であると考えられる。ＩＬ−１は、（これだけではないが）マクロファージ／単球系譜の細胞によって産生され、２つの形態、すなわち、ＩＬ−１アルファ（ＩＬ−１α）及びＩＬ−１ベータ（ＩＬ−１β）として産生され得る。ＩＬ−１系の第３のサイトカインは、拮抗物質として作用し、ＩＬ−１受容体拮抗物質（ＩＬ−１ｒａ）と称される。
【０００３】
３種類の公知のＩＬ−１受容体サブユニットがある。活性な受容体複合体は、Ｉ型受容体（ＩＬ−１  ＲＩ）とＩＬ−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）からなる。ＩＬ−１  ＲＩは、３種類の天然リガンド（ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ及びＩＬ−１ｒａ）の結合を担い、ＩＬ−１ＲＡｃＰの非存在下で、これらの結合を担うことができる。しかし、シグナル伝達には、ＩＬ−１アルファ又はＩＬ−１ベータとＩＬ−１ＲＡｃＰとの相互作用が必要である。ＩＬ−１ｒａは、ＩＬ−１ＲＡｃＰと相互作用せず、したがってシグナル伝達することができない。第３の受容体サブユニットであるＩＩ型受容体（ＩＬ−１  ＲＩＩ）は、ＩＬ−１アルファ又はＩＬ−１ベータと結合するが、細胞内ドメインを欠いているので、シグナル伝達することができない。代わりに、ＩＬ−１  ＲＩＩは、膜結合型と開裂分泌型の両方においておとり受容体として作用することによって、ＩＬ−１生理活性を阻害する。Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ  （１９９６）  Ｂｌｏｏｄ  ８７：２０９５−２１４７を参照されたい。
【０００４】
ＩＬ−１ｒａは、ＩＬ−１  ＲＩに結合することによってＩＬ−１アルファ及びＩＬ−１ベータを阻害するが、細胞内シグナル又は生物学的反応を伝達しない。ＩＬ−１ｒａは、インビトロとインビボの両方でＩＬ−１の生物活性を阻害し、敗血症ショック、リウマチ様関節炎、移植片対宿主病、発作及び心臓虚血の動物モデルにおいて有効であることが判明した。Ｅ．コリ（Ｅ．  ｃｏｌｉ）中で産生されるＩＬ−１ｒａの組換え体は、現在、米国及び欧州において医薬品としての使用が認可されている。この薬物は、一般名がアナキンラであり、商品名Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）として市販されている。
【０００５】
血管石灰化
血管石灰化は、慢性腎疾患（ＣＫＤ）の周知の一般的合併症であり、心血管の罹患率及び死亡率のリスクを増大させる（Ｇｉａｃｈｅｌｌｉ，  Ｃ．  Ｊ．  Ａｍ．  Ｓｏｃ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  １５：２９５９−６４，  ２００４；  Ｒａｇｇｉ，  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｏｌｌ．  Ｃａｒｄｉｏｌ．  ３９：６９５−７０１，  ２００２）。ＣＫＤにおける血管石灰化の原因はまだ解明されていないが、関連する危険因子としては、年齢、性別、高血圧、透析までの時間、糖尿病及び糖不耐性、肥満、喫煙などが挙げられる（Ｚｏｃｃａｌｉ  Ｃ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  Ｄｉａｌ．  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  １５：４５４−７，  ２０００）。しかし、これらの従来の危険因子は、患者集団における心血管の原因による高い死亡率を十分に説明していない。最近の観察によれば、血清のカルシウムとリンの積（Ｃａ×Ｐ）が高くなるカルシウムとリンの代謝におけるある異常は、末期腎不全患者における、動脈石灰化の発生の一因となり、恐らくは循環器疾患の一因となる（Ｇｏｏｄｍａｎ，  Ｗ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４２：１４７８−８３，  ２０００；  Ｇｕｅｒｉｎ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  Ｄｉａｌ．  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  １５：１０１４−２１，  ２０００；  Ｖａｔｔｉｋｕｔｉ，  Ｒ．  ＆  Ｔｏｗｌｅｒ，  Ｄ．  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  Ｍｅｔａｂ．，  ２８６：Ｅ６８６−９６，  ２００４）。
【０００６】
進行型ＣＫＤの別の特徴は、高い副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）レベルと鉱質代謝の乱れとを特徴とする二次性副甲状腺機能亢進症（ＨＰＴ）である。二次性ＨＰＴ患者において認められるカルシウム、リン及びＣａ×Ｐの増加は、血管石灰化の高いリスクと関連がある（Ｃｈｅｒｔｏｗ，  Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．  ６２：２４５−５２，  ２００２；  Ｇｏｏｄｍａｎ，  Ｗ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３４２：１４７８−８３，  ２０００；  Ｒａｇｇｉ，  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｏｌｌ．  Ｃａｒｄｉｏｌ．  ３９：６９５−７０１，  ２００２）。カルシウム系リン酸塩結合剤、活性ビタミンＤステロール投与など、二次性ＨＰＴに対して一般に使用される治療的介入は、血管石灰化の発生又は増悪を伴う高カルシウム血症及び高リン酸塩血症をもたらし得る（Ｃｈｅｒｔｏｗ，  Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．  ６２：２４５−５２，  ２００２；  Ｔａｎ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ  ５１：３１７−２３，  １９９７；  Ｇａｌｌｉｅｎｉ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ  ４２：１１９１−８，  １９９２）。
【０００７】
血管石灰化は、慢性腎不全の重要な、重篤になり得る合併症である。２つのパターンの血管石灰化が特定された（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ，  Ｄ  ＆  Ｓｈａｎａｈａｎ，  Ｃ．  Ｈｅｒｚ  ２６：２４５−５１，  ２００１）。通常、尿毒症患者には両方のタイプが存在する（Ｃｈｅｎ，  Ｎ．  ＆  Ｍｏｅ，  Ｓ．  Ｓｅｍｉｎ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  ２４：６１−８，  ２００４）。第１の中膜石灰化は、平滑筋細胞から骨芽細胞様細胞への表現型の転換と併せて、血管の中膜において発生する。他方のアテローム発生は、脂質の多いマクロファージ及び内膜増殖を伴う。
【０００８】
中膜壁の石灰化は、比較的若年の慢性腎不全患者において発生し得、腎疾患の非存在下でも、真性糖尿病患者に一般的である。動脈の中膜壁中のカルシウムの有無によって、このタイプの血管石灰化をアテローム性動脈硬化症に付随する血管石灰化から区別する（Ｓｃｈｉｎｋｅ  Ｔ．  ＆  Ｋａｒｓｅｎｔｙ  Ｇ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ  Ｄｉａｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  １５：１２７２−４，  ２０００）。アテローム硬化型の血管石灰化は、動脈の内膜層に沿った粥状斑において発生する（Ｆａｒｚａｎｅｈ−Ｆａｒ  Ａ．  ＪＡＭＡ  ２８４：１５１５−６，  ２０００）。石灰化は、通常、大きい、十分に発達した病変部において最大であり、年齢と伴に増加する（Ｗｅｘｌｅｒ  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９４：１１７５−９２，  １９９６；  Ｒｕｍｂｅｒｇｅｒ  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒｏｃ  １９９９；  ７４：２４３−５２．）。アテローム性動脈硬化症患者における動脈石灰化の程度は、疾患の重症度に一般に対応する。中膜壁の石灰化と異なり、アテローム硬化型の血管病変部は、カルシウムを含んでも、含まなくとも、動脈の内腔を侵害し、血流を損なう。動脈硬化巣内のカルシウムの局所的な沈着は、酸化脂質及び他の酸化的ストレスによる炎症、並びに単球及びマクロファージによる浸潤のために起こり得る（Ｂｅｒｌｉｎｅｒ  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９１：２４８８−９６，  １９９５）。
【０００９】
一部の末期腎不全患者は、カルシフィラキシス又は石灰化性尿毒症性動脈病（ｃａｌｃｉｆｉｃ  ｕｒｅｍｉｃ  ａｒｔｅｒｉｏｌｏｐａｔｈｙ）と呼ばれる重篤な閉塞性動脈疾患を発症する。この症候群は、小動脈中の広範なカルシウム沈着を特徴とする（Ｇｉｐｓｔｅｉｎ  Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．  Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  １３６：１２７３−８０，  １９７６；  Ｒｉｃｈｅｎｓ  Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ａｍ  Ａｃａｄ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  ６：５３７−９，  １９８２）。この疾患の患者においては、動脈石灰化及び血管閉塞は、組織の虚血及び壊死をもたらす。末梢血管が関与すると、下腿の皮膚の潰よう化、又は足若しくは手の指の壊疽を生じ得る。腹壁、大腿及び／又はでん部の皮膚及び皮下脂肪組織の虚血及び壊死は、石灰化性尿毒症性動脈病の近位型（ｐｒｏｘｉｍａｌ  ｆｏｒｍ）の特徴である（Ｂｕｄｉｓａｖｌｊｅｖｉｃ  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  ７：９７８−８２，  １９９６；  Ｒｕｇｇｉａｎ  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ａｍ．  Ｊ．  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓ．  ２８：４０９−１４，  １９９６）。この症候群は、肥満の個体においてより頻繁に発生し、理由は不明であるが、女性は男性よりも罹患する頻度が高い（Ｇｏｏｄｍａｎ  Ｗ．  Ｊ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  １５（６）：Ｓ８２−Ｓ８５，  ２００２）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
血清の鉱質レベルを正常化する、又は血管組織若しくは移植片の石灰化を抑制、阻害若しくは防止する現行療法は、効力が限られ、容認できない副作用を生じる。したがって、血管石灰化を阻害及び防止する有効な方法が求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、ＩＬ−１阻害剤の治療有効量を対象に投与することを含む、対象における血管石灰化を阻害、抑制又は防止する方法を提供する。一態様においては、血管石灰化は、アテローム硬化型石灰化であり得る。別の態様においては、血管石灰化は中膜石灰化であり得る。
【００１２】
一態様においては、対象は、慢性腎不全又は末期腎不全に罹患し得る。別の態様においては、対象は透析前であり得る。更に別の態様においては、対象は尿毒症に罹患し得る。別の態様においては、対象はＩ又はＩＩ型真性糖尿病に罹患し得る。別の主題においては、対象は心血管障害に罹患し得る。一態様においては、対象はヒトであり得る。
【００１３】
一態様においては、ＩＬ−１阻害剤は、一般名アナキンラの分子であり得る。別の態様においては、ＩＬ−１阻害剤は、以下の図４に示す配列（配列番号１）を有する分子であり得、以下「Ｆｃ−ＩＬ−１ｒａ」と記述する。更に別の態様においては、ＩＬ−１阻害剤は、ＩＬ−１受容体に対する抗体であり得る。ＩＬ−１受容体に対する好ましい抗体は、２００４年５月２０日に公開された米国特許出願公開第２００４／００９７７１２号（米国特許出願第１０／６５６，７６９号）に記載されている。更に別の態様においては、ＩＬ−１阻害剤は、ＩＬ−１トラップ分子であり得る。
【００１４】
一態様においては、本発明の方法に使用されるＩＬ−１阻害剤は、Ｎ−（（６−（メチルオキシ）−４’−（トリフルオロメチル）−１，１’−ビフェニル−３−イル）メチル）−１−フェニルエタンアミン、又は薬剤として許容されるその塩であり得る。
【００１５】
一態様においては、本発明は、ビタミンＤステロールをあらかじめ対象に投与する、血管石灰化を阻害、抑制又は防止する方法を提供する。一態様においては、ビタミンＤステロールは、カルシトリオール、アルファカルシドール、ドキセルカルシフェロール、マキサカルシトール又はパリカルシトールであり得る。一態様においては、ＩＬ−１阻害剤をビタミンＤステロールの投与前又は投与後に投与することができる。別の態様においては、ＩＬ−１阻害剤をビタミンＤステロールと組み合わせて投与することができる。
【００１６】
一態様においては、ＩＬ−１阻害剤をＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）と組み合わせて投与することができる。
【００１７】
本発明は、治療上有効なＩＬ−１阻害剤を対象に投与することを含む、対象の血清クレアチニンレベルを低下させる方法を更に提供する。一態様においては、対象は、対象へのビタミンＤステロールの投与によって誘発される高い血清クレアチニンレベルを有し得る。
【００１８】
発明の詳細な説明
最近の科学文献では、血管石灰化に対するサイトカインの効果を検討することが示唆されている。Ｙａｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００４），  Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ  Ｊ．  Ｕｒｏｌ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  ３８：４０５−１６は、末期腎不全（ＥＳＲＤ）患者において彼らが「炎症及び大きな酸化的ストレスと内皮障害との強い関連性」とみなすものを見出した。Ｍａｌｂｅｒｔｉ  ａｎｄ  Ｒａｖｉｎｉ（２００５），  Ｇｉｏｒｎａｌｅ  Ｉｔａｌｉａｎｏ  ｄｉ  Ｎｅｆｒｏｌｏｇｉａ（２２  Ｓｕｐｐｌ．）  ３１：Ｓ４７−５２は、血管石灰化が、一般集団よりも、又は正常な腎機能を有する循環器疾患患者よりも、透析患者においてより頻繁であることに注目し、ＥＳＲＤ患者の栄養及び心血管状態に対する消炎処置の効果を検討することを示唆している。Ｍｏｅ  ａｎｄ  Ｃｈｅｎ（２００５），  Ｂｌｏｏｄ  Ｐｕｒｉｆ．  ２３：６４−７１は、サイトカインなどの炎症媒介物質が、血管石灰化に対して直接の刺激効果を有し得ることに注目し、サイトカインによって媒介される炎症を抑制することが「血管石灰化を制限する妥当な治療手法」であることを示唆している。しかし、この文献は、血管石灰化を媒介し得る炎症性サイトカインを特定していない。
【００１９】
Ｎｉｃｋｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００），  Ｊ．  Ｅｘｐｅｒ．  Ｍｅｄ．  １９１：３０３−１１は、ＩＬ−１ｒａを欠くマウスが、大動脈の変曲点及び分岐点において動脈の致死的炎症を発症することを見出した。Ａｒａｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８），  Ｊ．  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２３：１２１−８は、１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３がＩＬ−１の合成を増大させることを見出した。しかし、この文献は、血管石灰化の防止におけるＩＬ−１受容体の拮抗作用の決定的な役割を明らかにしていない。
【００２０】
本発明は、ＩＬ−１阻害剤を用いて血管石灰化を抑制、阻害又は防止する方法を対象とする。
【００２１】
ＩＬ−１阻害剤全般
「ＩＬ−１」とはＩＬ−１α及びＩＬ−１βを指す。
【００２２】
本明細書では「ＩＬ−１阻害剤」とは、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１  ＲＩ、ＩＬ−１受容体アクセサリータンパク質（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）、インターロイキン１変換酵素（ＩＣＥ）との直接又は間接的相互作用、ＩＬ−１α又はβの受容体を介してシグナル伝達を媒介するタンパク質との直接又は間接的相互作用、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１  ＲＩ又はＩＬ−１  ＲＩＩの発現又は放出を制御するタンパク質との直接又は間接的相互作用によって、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β又はＩＬ−１受容体Ｉ型（ＩＬ−１  ＲＩ）の生理活性を低下させる分子を指す。ＩＬ−１の阻害は、ＩＬ−１の転写、発現、又はＩＬ−１産生細胞からの放出の下方制御；遊離ＩＬ−１の結合；ＩＬ−１とその受容体の結合の妨害；ＩＬ−１受容体複合体の形成（すなわち、ＩＬ−１受容体Ｉ型とＩＬ−１  ＲａｃＰの結合）の妨害；及びその受容体との結合後のＩＬ−１シグナル伝達の調節の妨害を含めて、幾つかの機序によって生じる。したがって、「ＩＬ−１阻害剤」という用語は、アナキンラ、ＩＬ−１  ＲＩ抗体などのＩＬ−１ベータ阻害剤及びＩＬ−１受容体拮抗物質（ＩＬ−１ｒａ）を含むが、これらだけに限定されない。
【００２３】
ＩＬ−１阻害剤クラスは以下のものを含み、以下で更に詳述する。
【００２４】
以下に示す、ＩＬ−１ｒａ、抗ＩＬ−１受容体モノクローナル抗体などのインターロイキン１受容体拮抗物質、
可溶性ＩＬ−１受容体、抗ＩＬ−１モノクローナル抗体などのＩＬ−１結合タンパク質、
ＩＬ−１ベータの産生及び分泌を阻害するのに使用することができる、インターロイキン１ベータ変換酵素（ＩＣＥ）又はカスパーゼＩの阻害剤（例えば、その開示を参照により本明細書に援用する、国際公開第９９／４６２４８号、同９９／４７５４５号及び同９９／４７１５４号）、
インターロイキン１ベータプロテアーゼ阻害剤、
並びにＩＬ−１のインビボ合成又は細胞外放出を遮断する化合物及びタンパク質。
【００２５】
「ＩＬ−１結合タンパク質」という用語は、ＩＬ−１と結合し、したがってＩＬ−１ベータがＩＬ−１  ＲＩに結合して生理活性を発揮するのを防止する分子を指す。したがって、ＩＬ−１ベータ阻害剤としては、ＩＬ−１ベータ抗体、ＩＬ−１ベータに結合するペプチド、ＩＬ−１ベータに結合するペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｉｅｓ）、可溶性ＩＬ−１受容体分子、及びＩＬ−１トラップ分子が挙げられるが、これらだけに限定されない。
【００２６】
「ＩＬ−１受容体拮抗物質」という用語は、ＩＬ−１  ＲＩ若しくはＩＬ−１ＲＡｃＰに結合する分子、又はＩＬ−１  ＲＩとＩＬ−１ＲＡｃＰの相互作用を防止する分子を指す。したがって、「ＩＬ−１受容体拮抗物質」という用語は、アナキンラ、Ｆｃ−ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−１  ＲＩ抗体、ＩＬ−１ＲＡｃＰ抗体、ＩＬ−１  ＲＩ又はＩＬ−１  ＲＡｃＰに結合するペプチド、及びＩＬ−１  ＲＩ又はＩＬ−１  ＲＡｃＰに結合するペプチボディを含むが、これらだけに限定されない。
【００２７】
例示的なＩＬ−１阻害剤は、以下の参考文献に開示されている：
米国特許第５，７４７，４４４号、同５，３５９，０３２号、同５，６０８，０３５号、同５，８４３，９０５号、同５，３５９，０３２号、同５，８６６，５７６号、同５，８６９，６６０号、同５，８６９，３１５号、同５，８７２，０９５号、同５，９５５，４８０号、同５，９６５，５６４号、
国際公開第９８／２１９５７号、同９６／０９３２３号、同９１／１７１８４号、同９６／４０９０７号、同９８／３２７３３号、同９８／４２３２５号、同９８／４４９４０号、同９８／４７８９２号、同９８／５６３７７号、同９９／０３８３７号、同９９／０６４２６号、同９９／０６０４２号、同９１／１７２４９号、同９８／３２７３３号、同９８／１７６６１号、同９７／０８１７４号、同９５／３４３２６号、同９９／３６４２６号、同９９／３６４１５号、
欧州特許出願第５３４９７８号及び同８９４７９５号、並びに
仏国特許出願ＦＲ  ２７６２５１４号。
【００２８】
ＩＬ−１受容体拮抗物質
本発明では、以下で考察するＩＬ−１ｒａ並びにその変種及び誘導体を「ＩＬ−１ｒａタンパク質」と総称する。以下で考察する、上記参考文献に記載の分子並びにその変種及び誘導体を「ＩＬ−１阻害剤」と総称する。
【００２９】
ＩＬ−１ｒａは、天然のインターロイキン１阻害剤として作用するヒトタンパク質であり、ＩＬ−１α及びＩＬ−１βを含むＩＬ−１ファミリーメンバーの１メンバーであるヒトタンパク質である。（ＩＬ−１ｒａ並びにその変種及び誘導体を含めた）好ましい受容体拮抗物質、並びにその製造及び使用方法は、（参照により本明細書に組み込む）国際公開第９１／０８２８５号、同９１／１７１８４号、ＡＵ  ９１７３６３６、国際公開第９２／１６２２１号、同９３／２１９４６号、同９４／０６４５７号、同９４／２１２７５号、ＦＲ  ２７０６７７２、国際公開第９４／２１２３５号；ＤＥ  ４２１９６２６号、国際公開第９４／２０５１７号、同９６／２２７９３号、同９７／２８８２８号、同９９／３６５４１号、米国特許第５，０７５，２２２号及び同６，５９９，８７３号に記載されている。ＩＬ−１ｒａとしては、グリコシル化及び非グリコシル化ＩＬ−１受容体拮抗物質などが挙げられる。
【００３０】
具体的には、ＩＬ−１ｒａの３つの有用な形態及びその変種が、５，０７５，２２２号特許に開示され、記載されている。その第１のものは’２２２号特許では「ＩＬ−１ｉ」と呼ばれ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって２２−２３ｋＤ分子として特徴づけられ、約４．８の等電点を有し、Ｍｏｎｏ  Ｑ  ＦＰＬＣカラムから約５２ｍＭ  ＮａＣｌのＴｒｉｓ緩衝剤溶液、ｐＨ７．６で溶出する。第２のＩＬ−１ｒａβは、２２−２３ｋＤタンパク質として特徴づけられ、Ｍｏｎｏ  Ｑカラムから４８ｍＭ  ＮａＣｌで溶出する。ＩＬ−１ｒａα及びＩＬ−１ｒａβはグリコシル化されている。第３のＩＬ−１ｒａｘは、２０ｋＤタンパク質として特徴づけられ、Ｍｏｎｏ  Ｑカラムから４８ｍＭ  ＮａＣｌで溶出し、グリコシル化されていない。５，０７５，２２２号特許は、阻害剤をコードする遺伝子を単離し、遺伝子を適切なベクター及び細胞タイプにクローニングし、遺伝子を発現させて、阻害剤を製造する方法も開示している。
【００３１】
得られる分子が生物活性である（例えば、ＩＬ−１阻害能を有する）ことを前提に、ＩＬ−１ｒａのアミノ酸配列内で、欠失、挿入及び置換の多数の組合せ（個々に、又は一括して「変種」）が可能であることを当業者は理解されたい。特定の変種は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，０７５，２２２号及び米国特許出願第１１／０９７，４５３号に記載されている。
【００３２】
「ＩＬ−１受容体拮抗物質」という用語は、修飾ＩＬ−１ｒａ、及びＩＬ−１ｒａを含む融合タンパク質も更に含む。例示的な融合タンパク質としては、Ｆｃ−ＩＬ−１ｒａ（図４、配列番号１）、及び米国特許第６，２９４，１７０号に記載の分子が挙げられる。
【００３３】
抗体
「ＩＬ−１ベータ抗体」及び「ＩＬ−１ベータに対する抗体」とは、ＩＬ−１ベータに特異的に結合する抗体を指す。ＩＬ−１ベータ抗体の一例は、ＭＡｂ  ２０１として知られ、市販されている。追加のＩＬ−１ベータ抗体は、以下に記載するように製造することができる。ＩＬ−１抗体の更なる例は、（参照により本明細書に援用する）国際公開第９５０１９９７号、同９４０２６２７号、同９００６３７１号、ＥＰ  ３６４７７８、ＥＰ  ２６７６１１、ＥＰ  ２２００６３及び米国特許第４，９３５，３４３号に記載されている。
【００３４】
ＩＬ−１βに対して特異的結合親和性を有する抗体は、標準方法によって製造することができる。或いは、抗体は、例えばＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｉｎｃ．、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、Ｍｉｎｎから、市販されている場合もある。「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖Ｆｖ抗体断片、Ｆａｂ断片及びＦ（ａｂ）２断片を含む。ポリクローナル抗体は、免疫動物の血清中に含まれる特定の抗原に特異的である抗体分子の不均一な集団である。ポリクローナル抗体は、周知の方法によって製造することができる。
【００３５】
同様に、「ＩＬ−１  ＲＩ抗体」及び「ＩＬ−１  ＲＩに対する抗体」とは、ＩＬ−１  ＲＩに特異的に結合する抗体を指す。ＩＬ−１  ＲＩ抗体の例は、その開示を参照により本明細書に組み込むＥＰ  ６２３  ６７４、及び２００４年５月２０日に公開された米国特許出願公開第２００４／００９７７１２号（米国特許出願第１０／６５６，７６９号）に記載されている。追加のＩＬ−１  ＲＩ抗体は、以下に記載するように製造することができる。
【００３６】
「抗体」という用語は、無傷の抗体、又は特異的結合に対して無傷の抗体と競合する結合性断片を指し、キメラ抗体、ヒト化抗体、全ヒト抗体及び二重特異性抗体を含む。ある実施形態においては、結合性断片は、組換えＤＮＡ技術によって製造される。別の実施形態においては、結合性断片は、無傷の抗体の酵素切断又は化学切断によって製造される。結合性断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ及び単鎖抗体が挙げられるが、これらだけに限定されない。
【００３７】
「重鎖」という用語は、完全長重鎖、及びＩＬ−１  ＲＩに対する特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有するその断片を含む。完全長重鎖は、可変領域ドメインＶＨと、３個の定常領域ドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。ＶＨドメインはポリペプチドのアミノ末端に存在し、ＣＨ３ドメインはカルボキシル末端に存在する。
【００３８】
「軽鎖」という用語は、完全長軽鎖、及びＩＬ−１  ＲＩに対する特異性を付与するのに十分な可変領域配列を有するその断片を含む。完全長軽鎖は、可変領域ドメインＶＬと定常領域ドメインＣＬを含む。重鎖同様、軽鎖の可変領域ドメインは、ポリペプチドのアミノ末端に存在する。
【００３９】
モノクローナル抗体は、抗原内に含まれる特別なエピトープに対する抗体の均一な集団であり、標準ハイブリドーマ技術によって調製することができる。特に、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ，  Ｇ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  １９７５，  ２５６：４９５に記載のものなど、培養連続細胞系による抗体分子の製造を規定する任意の技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｓｂｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ，  １９８３，  ４：７２；  Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  １９８３，  ８０：２０２６）、及びＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ，  Ｉｎｃ．，  １９８３，  ｐｐ．７７−９６）によって得ることができる。かかる抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びその任意のサブクラスを含めて、任意の免疫グロブリンクラスであり得る。本発明のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、インビトロ又はインビボで培養することができる。
【００４０】
キメラ抗体は、ネズミモノクローナル抗体に由来する可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域とを含む分子など、異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。キメラ抗体は、標準技術によって製造することができる。
【００４１】
ＩＬ−１βに対して特異的結合親和性を有する抗体断片を公知技術によって生成することができる。例えば、かかる断片としては、抗体分子のペプシン消化によって製造することができるＦ（ａｂ’）２断片、及びＦ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を還元することによって生成することができるＦａｂ断片が挙げられるが、これらだけに限定されない。或いは、Ｆａｂ発現ライブラリーを構築することができる。例えば、Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２４６：１２７５を参照されたい。単鎖Ｆｖ抗体断片は、Ｆｖ領域の重鎖断片と軽鎖断片をアミノ酸架橋（例えば、１５から１８アミノ酸）によって連結して、単鎖ポリペプチドを得ることによって形成される。単鎖Ｆｖ抗体断片は、標準技術によって製造することができる。例えば、米国特許第４，９４６，７７８号を参照されたい。
【００４２】
「Ｆａｂ断片」は、１本の軽鎖と１本の重鎖のＣＨ１及び可変領域とを含む。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。
【００４３】
「Ｆａｂ’断片」は、１本の軽鎖と１本の重鎖を含み、重鎖は、鎖間ジスルフィド結合が２本の重鎖間に形成されてＦ（ａｂ’）２分子を形成することができるように、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインの間に追加の定常領域を含む。
【００４４】
「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、２本の軽鎖と、鎖間ジスルフィド結合が２本の重鎖間で形成されるように、ＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメインの間に定常領域の一部を含む２本の重鎖とを含む。
【００４５】
「Ｆｖ領域」は、重鎖と軽鎖の両方の可変領域を含むが、定常領域を欠く。
【００４６】
「単鎖抗体」は、重鎖と軽鎖の可変領域が柔軟なリンカーによって連結されて、抗原結合性領域を形成する単一のポリペプチド鎖を形成したＦｖ分子である。単鎖抗体は、（参照により本明細書に援用する）国際公開第８８／０１６４９号並びに米国特許第４，９４６，７７８号及び同５，２６０，２０３号に詳細に考察されている。
【００４７】
「多重特異性」又は「多官能」抗体以外の「二価の抗体」は、ある実施形態においては、同一の抗原特異性を有する結合性部位を含むと理解される。
【００４８】
「二重特異性」又は「二官能性」抗体は、２組の異なる重鎖／軽鎖対と２個の異なる結合性部位とを有するハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合、又はＦａｂ’断片の連結を含めて、ただしこれらだけに限定されない種々の方法によって製造することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ＆  Ｌａｃｈｍａｎｎ（１９９０），  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ７９：３１５−３２１；  Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４８：１５４７−１５５３を参照されたい。
【００４９】
好ましい抗体は、２００４年５月２０日に公開された米国特許出願公開第２００４／００９７７１２号（以下、’７１２出願と記述する。）に記載されている。以下から選択される重鎖可変領域を有する抗体が特に好ましい。
【００５０】
【化１】
2009512710.tif 000003
2009512710.tif 000004
【００５１】
上記は、’７１２出願の配列番号１０、１４及び１６である。これらの配列を組み入れた抗体は、’７１２出願に記載のとおりに調製することができる。その全部を参照により本明細書に組み込む’７１２出願の配列番号２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４及び３６から選択される配列を有する重鎖の全部又は免疫学的に機能的な断片を含む抗体が最も好ましい。
【００５２】
以下から選択される軽鎖可変領域を有する抗体も特に好ましい。
【００５３】
【化２】
2009512710.tif 000005
【００５４】
上記は、’７１２出願の配列番号１２及び１８である。これらの配列を組み入れた抗体は、’７１２出願に記載のとおりに調製することができる。その全部を参照により本明細書に援用する、’７１２出願の配列番号３８及び４０から選択される配列を有する軽鎖の全部又は免疫学的に機能的な断片を含む抗体が最も好ましい。
【００５５】
配列番号４０８から４１０を重鎖可変領域として記述したが、当業者は、（例えば、軽鎖可変領域として）抗体中又は別の分子（例えば、Ｆｃ融合分子）中の異なる位置でＩＬ−１Ｒと結合するこれらの配列を使用することができる。同様に、配列番号４１１及び４１２を軽鎖可変領域として記述したが、当業者は、（例えば、重鎖可変領域として）抗体中又は別の分子（例えば、Ｆｃ融合分子）中の異なる位置でＩＬ−１Ｒと結合するこれらの配列を使用することができる。同じ技術を使用して、追加のＩＬ−１ベータ抗体、又はＩＬ−１ベータ抗体由来の分子を調製することができる。すなわち、ＭＡｂ２０１重鎖及び軽鎖の各可変領域を、抗体枠組み内の異なる位置で、また、異なる分子形態で、使用することができる。この段落に記載するかかる全分子は本発明の範囲内である。
【００５６】
ペプチド及びペプチボディ
ファージディスプレイペプチドライブラリーは、目的タンパク質のペプチド作動物質及び拮抗物質を特定する際に強力な方法として出現した。例えば、（その各々を参照により本明細書に組み込む）Ｓｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０），  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３８６；  Ｄｅｖｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０），  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：４０４；１９９６年１２月１９日に公開された国際公開第９６／４０９８７号；１９９８年４月１６日に公開された国際公開第９８／１５８３３号並びに米国特許第５，２２３，４０９号、同５，７３３，７３１号、同５，４９８，５３０号、同５，４３２，０１８号、同５，３３８，６６５号及び同５，９２２，５４５号を参照されたい。かかるライブラリーにおいては、ランダムペプチド配列は、繊維状ファージのコートタンパク質との融合によって示される。典型的には、示されたペプチドは、抗体に固定された、受容体の細胞外ドメインに対して親和溶出される。保持されたファージは、親和精製及び再増殖（ｒｅｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ）を繰り返すことによって濃縮することができる。最適な結合ペプチドの配列を決定して、構造的に関係する１つ以上のペプチドファミリー内の重要な残基を特定することができる。例えば、Ｃｗｉｒｌａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７），  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７６：１６９６−９を参照されたい。ここでは、２種類のファミリーが特定された。ペプチド配列は、残基をアラニンスキャンニングによって、又はＤＮＡレベルでの変異誘発によって、安全に置換し得ることも示唆し得る。変異誘発ライブラリーを作製し、スクリーニングして、最適なバインダーの配列を更に最適化することができる。Ｌｏｗｍａｎ（１９９７），  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｂｉｏｍｏｌ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  ２６：４０１−２４。
【００５７】
ファージディスプレイなどの技術を用いて、ペプチドＩＬ−１阻害剤を生成することができる。かかるペプチドは、その各々を参照により本明細書に組み込む米国特許第５，６０８，０３５号、同５，７８６，３３１号、同５，８８０，０９６号及び同６，６６０，８４３号に記載のように生成される。かかるペプチドは、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコール、又は他の半減期延長成分と連結し得る（米国特許第６，６６０，８４３号参照）。Ｆｃドメインに連結されたかかるペプチドを「ペプチボディ」と称する。ＩＬ−１及びＩＬ−１受容体以外の標的を対象とするペプチボディは、ヒト臨床試験において効力を示した。ペプチボディ用の適切な幾つかのペプチドを下記表１に示す。
【００５８】
【表１】
2009512710.tif 000006
2009512710.tif 000007
2009512710.tif 000008
2009512710.tif 000009
2009512710.tif 000010
2009512710.tif 000011
2009512710.tif 000012
2009512710.tif 000013
2009512710.tif 000014
2009512710.tif 000015
2009512710.tif 000016
2009512710.tif 000017
2009512710.tif 000018
【００５９】
上記ペプチドは、表４のペプチド、並びに上記米国特許第６，６６０，８４３号の（参照により本明細書に組み込む。）配列番号２１２、９０７−９１０、９１７、９７９、２１３から２７１、６７１から９０６、９１１から９７８、及び９８０から１０２３に対応し、当分野で公知の方法によって調製することができる。かかるペプチドは、本発明のＩＬ−１阻害剤の範囲内である。
【００６０】
表１に記載のペプチドなどのペプチドを使用して、次式の分子及びその多量体を作製することができる。
【００６１】
Ｉ         （Ｘ１）ａ−Ｆ１−（Ｘ２）ｂ
ＩＩ        Ｘ１−Ｆ１
ＩＩＩ      Ｆ１−Ｘ２
ＩＶ        Ｆ１−（Ｌ１）ｃ−Ｐ１
Ｖ          Ｆ１−（Ｌ１）ｃ−Ｐ１−（Ｌ２）ｄ−Ｐ２
式中、
Ｆ１は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、デキストラン、好ましくはＦｃドメインなどの半減期延長ビヒクルであり、
Ｘ１及びＸ２は、−（Ｌ１）ｃ−Ｐ１、−（Ｌ１）ｃ−Ｐ１−（Ｌ２）ｄ−Ｐ２、−（Ｌ１）ｃ−Ｐ１−（Ｌ２）ｄ−Ｐ２−（Ｌ３）ｅ−Ｐ３及び−（Ｌ１）ｃ−Ｐ１−（Ｌ２）ｄ−Ｐ２−（Ｌ３）ｅ−Ｐ３−（Ｌ４）ｆ−Ｐ４から各々独立に選択され、
Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３及びＰ４は各々独立に、薬理学的に活性なＩＬ−１拮抗ペプチドの配列であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４は各々独立にリンカーであり、
ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ及びｆは各々独立に０又は１であり、ただしａとｂの少なくとも一方は１である。
【００６２】
Ｆ１がＦｃドメインである上記式の分子は「ペプチボディ」と命名された。ペプチボディは、上記米国特許第６，６６０，８４３号に記載のように調製することができる。ペプチボディを含めて、全ビヒクル連結ペプチド分子は、本明細書の意味内のＩＬ−１阻害剤である。
【００６３】
可溶性ＩＬ−１受容体
「可溶性ＩＬ−１受容体分子」とは、可溶性ＩＬ−１  ＲＩ（ｓＩＬ−１  ＲＩ）、可溶性ＩＬ−１  ＲＩＩ（ｓＩＬ−１  ＲＩＩ）及び可溶性ＩＬ−１ＲＡｃＰ（ｓＩＬ−１ＲＡｃＰ）；ｓＩＬ−１  ＲＩ、ｓＩＬ−１  ＲＩＩ及びＩＬ−１ＲＡｃＰの断片；「ＩＬ−１トラップ」分子、及びヒト血清アルブミン、トランスチレチン又はＦｃドメインとの融合タンパク質を含めた、ｓＩＬ−１  ＲＩ、ｓＩＬ−１  ＲＩＩ、ｓＩＬ−１ＲＡｃＰ及び任意のその断片の融合タンパク質、並びに上記のいずれかの誘導体（例えば、ポリエチレングリコールに連結された可溶性受容体）を指す。可溶性ＩＬ−１受容体分子は、その開示を参照により本明細書に組み込む米国特許第５，４９２，８８８号、同５，４８８，０３２号、同５，４６４，９３７号、同５，３１９，０７１号及び同５，１８０，８１２号に記載されている。
【００６４】
ＩＬ−１受容体の断片としては、ＩＬ−１α及びβと結合し、ＩＬ−１活性をインビトロ及びインビボで阻害する、ヒトＩ型ＩＬ−１受容体の残基８６−９３に対応する合成ポリペプチドが挙げられるが、これだけに限定されない。Ｔａｎｉｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １８８：９１２を参照されたい。
【００６５】
ＩＬ−１トラップ
ＩＬ−１トラップは、参照により本明細書に組み込む米国特許第５，８４４，０９９号に基本的に記載されているとおりである。手短に述べると、ＩＬ−１トラップは、ヒトサイトカイン受容体細胞外ドメインとヒトＩｇＧ１のＦｃ部分とを含む融合タンパク質である。ＩＬ−１トラップは、ＩＬ−１シグナル伝達に必要な両方の受容体成分、すなわち、ＩＬ−１  Ｉ型受容体（ＩＬ−１ＲＩ）とＩＬ−１受容体アクセサリータンパク質（ＡｃＰ）の細胞外ドメインを単一の分子に取り込んでいる。ＩＬ−１トラップは、両方の受容体成分を含むので、ＩＬ−１α及びＩＬ−１βとピコモルの親和性で結合する。一方、ＡｃＰの非存在下でＩＬ−１ＲＩ単体は、約１ｎＭの親和性で結合する。ＩＬ−１トラップは、ＡｃＰ、ＩＬ−１ＲＩ及びＦｃの細胞外ドメインをコードする配列を介在リンカー配列なしに直線状に融合することによって作製された。融合タンパク質をコードする発現構築体をチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞に移入し、ＩＬ−１トラップを培地に分泌する高産生系を単離する。ＩＬ−１トラップは、タンパク質分子量が２０１ｋＤの２量体糖タンパク質であり、グリコシル化を含めた全分子量が約２５２ｋＤである。Ｆｃ領域中のジスルフィド結合は、２量体を共有結合によって連結する。
【００６６】
血管石灰化
本明細書では「血管石灰化」とは、血管における細胞外基質ヒドロキシアパタイト（リン酸カルシウム）結晶沈着物の形成、成長又は沈着を意味する。血管石灰化は、冠動脈、弁、大動脈及び他の血管の石灰化を包含する。この用語は、アテローム硬化型石灰化及び中膜壁石灰化を含む。
【００６７】
「アテローム硬化型石灰化」とは、動脈の内膜層に沿った粥状斑において発生する血管石灰化を意味する。
【００６８】
本明細書では「中膜石灰化」「中膜壁石灰化」又は「メンケベルク硬化症」とは、動脈の中膜壁におけるカルシウムの存在を特徴とする石灰化を意味する。
【００６９】
血管石灰化を阻害することに関連した「阻害すること」とは、細胞外基質ヒドロキシアパタイト結晶沈着物の形成、成長又は沈着を防止する、遅延させる、又は逆転させることを意味するものとする。
【００７０】
「治療」又は「治療すること」という用語は、病理学的血管石灰化症状の発達を阻害する、又は逆転させるＩＬ−１阻害剤のある量を、必要な人に投与することを含む。
【００７１】
「防止」又は「防止すること」という用語は、臨床的に明らかな血管石灰化障害全体の開始を防止すること、若しくはその進行を防止／遅延させること、又は血管石灰化障害個々の前臨床的に明らかな段階の開始を防止することを含む。この用語は、血管石灰化障害を発生するリスクのあるものの予防処置を含む。
【００７２】
「治療有効量」という句は、障害の重症度及び発生頻度の改善目標を達成するＩＬ−１阻害剤量である。障害の重症度の改善としては、血管石灰化の逆転、血管石灰化の進行の減速などが挙げられる。一態様においては、「治療有効量」とは、血清クレアチニンレベルを低下させる、又は血清クレアチニンレベルの増加を防止する、ＩＬ−１阻害剤の量を意味する。
【００７３】
本明細書では「対象」という用語は、石灰化を示す、又は発症するリスクのある、ヒト又は他のほ乳動物を意味するものとする。かかる個体は、例えば、アテローム性動脈硬化症、狭窄、再狭窄、腎不全、糖尿病、プロテーゼ移植、組織傷害、年齢関連性の血管疾患などの症状に関連した血管石灰化を有し得、又は発症するリスクがあり得る。これらの症状の予後及び臨床の徴候は当分野で公知である。本発明の方法による治療を受ける個体は、例えば、糖尿病、慢性腎疾患、腎不全、腎移植又は腎臓透析に関連した全身的な鉱質の不均衡を有し得る。
【００７４】
ヒトアテローム性動脈硬化症、腎不全、高リン酸塩血症、糖尿病、年齢関連性の血管石灰化、及び血管石灰化に関連した他の症状の信頼できる指標である動物モデルは、当分野で公知である。例えば、Ｙａｍａｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｘｐ．  Ｐａｔｈ．，は、血管壁石灰化の実験モデルを記載している。２５：  １８５−１９０，  １９８４。
【００７５】
血管石灰化の評価
血管石灰化を検出及び測定する方法は、当分野で周知である。一態様においては、石灰化を測定する方法としては、血管におけるカルシウム−リン沈着の程度を検出及び測定する直接的方法が挙げられる。
【００７６】
一態様においては、血管石灰化を測定する直接的方法は、単純レントゲン写真、冠動脈造影法；デジタルサブトラクション蛍光透視を含めた蛍光透視；透視シネ撮影法；従来のらせん電子ビームコンピュータ断層撮影法；血管内超音波検査（ＩＶＵＳ）；磁気共鳴画像法；経胸郭及び経食道心エコー法などのインビボ画像処理方法を含む。当業者は、最も一般的には、蛍光透視及びＥＢＣＴを用いて、石灰化を非侵襲的に検出する。冠動脈の介入者（ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌｉｓｔ）は、透視シネ撮影法及びＩＶＵＳを用いて、血管形成術前の特定の病変部における石灰化を評価する。
【００７７】
一態様においては、血管石灰化は、単純レントゲン写真によって検出することができる。この方法の利点は、フィルムの入手が容易なこと及び低コストであるが、欠点は低感度である。Ｋｅｌｌｅｙ  Ｍ．  ＆  Ｎｅｗｅｌｌ  Ｊ．  Ｃａｒｄｉｏｌ  Ｃｌｉｎ．  １：５７５−５９５，  １９８３。
【００７８】
別の態様においては、蛍光透視によって冠動脈の石灰化を検出することができる。蛍光透視は、中程度から大型の石灰化を検出することができるが、小型の石灰沈着の検出能力は低い。Ｌｏｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｏｌｌ．  Ｃａｒｄｉｏｌ．  １９：１１６７−１１７２，  １９９２。蛍光透視は、入院患者と外来患者の両方の状況で広範に利用可能であり、比較的安価であるが、幾つかの欠点がある。低度から中度の感度にすぎない上に、蛍光透視によるカルシウムの検出は、操作者の技術と経験、及び検討する視野数に依存する。他の重要な要因としては、蛍光透視装置の変動、患者の体型、重層化した解剖構造、及び椎骨、弁輪などの構造における重層化した石灰化などが挙げられる。蛍光透視では、カルシウムの定量が不可能であり、フィルム資料は一般に得られない。
【００７９】
更に別の態様においては、従来のコンピュータ断層撮影法（ＣＴ）によって血管検出を検出することができる。カルシウムはＸ線を減衰させるので、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）は、血管石灰化の検出感度が極めて高い。従来のＣＴは、冠動脈石灰化の検出能力が蛍光透視よりも優れていると考えられるが、その制限は走査時間が長いことであり、その結果、モーションアーチファクト、容積平均、呼吸による位置ずれ（ｂｒｅａｔｈｉｎｇ  ｍｉｓｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、及び粥腫量の定量不能が生じる。Ｗｅｘｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９４：１１７５−１１９２，  １９９６。
【００８０】
更に別の態様においては、走査時間が従来のＣＴよりもかなり短いらせん又はスパイラルコンピュータ断層撮影法によって石灰化を検出することができる。断面の重ね合わせによってもカルシウム検出が改善される。Ｓｈｅｍｅｓｈ等は、らせんＣＴによる冠動脈カルシウムの画像処理が、血管造影的に重要な冠動脈の閉塞性疾患と比較して、９１％の感度及び５２％の特異性を有すると報告した。Ｓｈｅｍｅｓｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ  １９７：７７９−７８３，  １９９５。しかし、他の予備的データによれば、これらのより短い走査時間でも、特に単一のらせんＣＴを用いても、石灰沈着は心臓の動きのためにぼやけ、小型の石灰化を見ることができない場合がある。Ｂａｓｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９２（ｓｕｐｐｌ  Ｉ）：Ｉ−６５１，  １９９５。したがって、らせんＣＴは、石灰化の検出において、蛍光透視及び従来のＣＴよりも依然として優れている。二重らせんＣＴスキャナーは、より高い分解能及びより薄いスライス性能のために、冠動脈石灰化の検出において単一らせんスキャナーよりも高感度であると考えられる。Ｗｅｘｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（前掲）。
【００８１】
別の態様においては、電子ビームコンピュータ断層撮影法（ＥＢＣＴ）を血管石灰化の検出に使用することができる。ＥＢＣＴは、標準Ｘ線管ではなく、電子銃及び固定タングステン「標的」を用いてＸ線を発生させるので、走査時間が極めて短い。当初はシネ又は超高速ＣＴと呼ばれたが、最新のスパイラルスキャナーも走査時間が１秒未満であるので、標準ＣＴスキャンから区別するためにＥＢＣＴという用語が現在は使用される。冠動脈のカルシウムを検出するために、走査スライス厚さ３ｍｍで１００ｍｓでＥＢＣＴ画像が得られる。軸方向の３０から４０の隣接する走査が、テーブル移動（ｔａｂｌｅ  ｉｎｃｒｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ）によって得られる。１回又は２回の連続した別々の息止め中に通常は得られる走査は、心臓の動きの影響を最小限に抑えるために、心電図シグナルによってＲＲ間隔の８０％において、拡張期の終端近く、かつ心房収縮前に作動する。画像収集時間が短いと、心臓の収縮に関係するモーションアーチファクトが実質的に排除される。混濁していない冠動脈は、ＥＢＣＴによって容易に特定される。というのは、動脈周囲の脂肪のＣＴ密度は低いので、冠動脈中の血液と顕著なコントラストを生じ、一方、壁在のカルシウムは、血液よりもＣＴ密度が高いので明白だからである。さらに、スキャナーソフトウェアによって、カルシウム面積及び密度を定量することができる。任意の採点システムが、Ｘ線減衰係数、又はハウンスフィールド単位で測定されるＣＴ値、及び石灰化沈着の面積に基づいて考案された。Ａｇａｔｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｏｌｌ．  Ｃａｒｄｉｏｌ．  １５：８２７−８３２．  １９９０。冠動脈のカルシウムのスクリーニング試験は、わずか数秒の走査時間しか必要とせず、１０又は１５分間以内に終了することができる。電子ビームＣＴスキャナーは、従来のＣＴスキャナー又はスパイラルＣＴスキャナーよりも高価であり、比較的少数の場所で利用可能である。
【００８２】
一態様においては、血管内超音波検査（ＩＶＵＳ）を使用して、血管石灰化、特に、冠動脈のアテローム性動脈硬化症を検出することができる。Ｗａｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ８５：２３０５−２３１０，  １９９２。カテーテル先端に取り付けられた回転反射鏡を備えた変換器を用いることによって、心臓のカテーテル処置中の冠動脈の断面画像を得ることができる。ソノグラムは、動脈の内腔だけでなく、動脈壁の厚さ及び組織特性についての情報も提供する。石灰化は、シャドウイングによって高エコー域として見られる。線維性の非石灰化粥腫は、シャドウイングなしで高エコー域として見られる。Ｈｏｎｙｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｍｅｄ．  １：３０５−３１１．  １９９１。他の画像処理様式に対して、ＩＶＵＳの使用上の欠点は、ＩＶＵＳが侵襲的であり、選択的冠動脈造影法と併せてのみ現在は実施され、樹状冠動脈（ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｔｒｅｅ）の限られた部分しか可視化しないことである。侵襲的ではあるが、この技術は、臨床的に重要である。というのは、冠動脈造影図で正常所見の患者においてアテローム硬化の関与を示すことができ、バルーン血管形成術及び粥腫切除装置の選択の前に、狭窄病変部の形態学的特性を規定するのに役立つからである。Ｔｕｚｃｕ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｏｌｌ．  Ｃａｒｄｉｏｌ．  ２７：８３２−８３８，  １９９６。
【００８３】
別の態様においては、血管石灰化を磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によって測定することができる。しかし、ＭＲＩの冠動脈石灰化検出能力にはある程度限界がある。微小石灰化は、多量の軟部組織を含むボクセルの信号強度を実質的に変えないので、かかるカルシウム収集物の正味のコントラストは低い。したがって、少量の石灰化をＭＲＩで検出することは困難であり、冠動脈石灰化の検出において、ＭＲＩに関する報告はなく、その予想される役割もない。Ｗｅｘｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（前掲）。
【００８４】
別の態様においては、血管石灰化を経胸郭（表面）心エコー法によって測定することができる。経胸郭（表面）心エコー法は、特に僧帽弁及び大動脈弁の石灰化の検出に感度が高い。しかし、冠動脈の可視化は、利用可能な外部音響窓が限られているのでまれにしか記述されない。経食道心エコー法は、近位の冠動脈を可視化できることが多い、広範に利用可能な方法である。Ｋｏｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｒｄｉｏｌ．  ４３：２０２−２０６，  １９９４。Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ８８：２５３２−２５４０，  １９９３。
【００８５】
別の態様においては、血管石灰化をＶａｎ  Ｋｏｓｓａ法によって生体外で評価することができる。この方法は、電気化学列におけるそれぞれの順位のために、銀イオンを炭酸イオン又はリン酸イオンによって溶液から追い出すことができるという原理に依拠する。銀親和反応は、本質的に光化学的であり、活性化エネルギーは強力な可視光又は紫外線から供給される。組織の炭酸イオン又はリン酸イオンの実証し得る形態は、カルシウムイオンと常に結合しているので、この方法は、組織のカルシウム沈着部位を実証するものとみなすことができる。
【００８６】
石灰化を直接測定する他の方法としては、蛍光免疫染色及び濃度測定が挙げられるが、これらだけに限定されない。別の態様においては、血管石灰化を評価する方法としては、血管石灰化の決定要因及び／又は危険因子を測定する方法が挙げられる。かかる要因としては、リン、カルシウム及びカルシウム×リンの積、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、低比重リポタンパクコレステロール（ＬＤＬ）、高比重リポタンパクコレステロール（ＨＤＬ）、トリグリセリド並びにクレアチニンの各血清レベルが挙げられるが、これらだけに限定されない。これらの要因を測定する方法は当分野で周知である。血管石灰化を評価する他の方法としては、骨形成要因の評価が挙げられる。かかる要因としては、骨特異的アルカリホスファターゼ（ＢＳＡＰ）、オステオカルシン（ＯＣ）、Ｉ型コラーゲンのカルボキシ末端プロペプチド（ＰＩＣＰ）、Ｉ型コラーゲンのアミノ末端プロペプチド（ＰＩＮＰ）などの骨形成マーカー；Ｉ型コラーゲンの架橋Ｃ−テロペプチド（ＩＣＴＰ）、酒石酸抵抗性酸性ホスファターゼ、ＴＲＡＣＰ及びＴＲＡＰ５Ｂ、コラーゲン架橋のＮ−テロペプチド（ＮＴｘ）、コラーゲン架橋のＣ−テロペプチド（ＣＴｘ）などの血清骨吸収マーカー；ヒドロキシプロリン、遊離及び総ピリジノリン（Ｐｙｄ）、遊離及び総デオキシピリジノリン（Ｄｐｄ）、コラーゲン架橋のＮ−テロペプチド（ＮＴｘ）、コラーゲン架橋のＣ−テロペプチド（ＣＴｘ）などの尿骨吸収マーカーなどが挙げられる。
【００８７】
治療方法
一態様においては、本発明は、個体における血管石灰化を阻害、抑制又は防止する方法を提供する。この方法は、本発明のＩＬ−１阻害剤の治療有効量を個体に投与することを含む。一態様においては、本発明の化合物の投与は、細胞外基質ヒドロキシアパタイト結晶沈着物の形成、成長又は沈着を遅延させ、又は逆転する。本発明の別の態様においては、本発明の化合物の投与は、細胞外基質ヒドロキシアパタイト結晶沈着物の形成、成長又は沈着を防止する。
【００８８】
本発明の方法を使用して、アテローム硬化型石灰化及び中膜石灰化、並びに血管石灰化を特徴とする他の症状を防止又は治療することができる。一態様においては、血管石灰化は、慢性腎不全又は末期腎不全を伴い得る。別の態様においては、血管石灰化は、透析前若しくは透析後又は尿毒症を伴い得る。更に別の態様においては、血管石灰化は、Ｉ又はＩＩ型真性糖尿病を伴い得る。更に別の態様においては、血管石灰化は、心血管障害を伴い得る。
【００８９】
一態様においては、ＩＬ−１阻害剤の有効量を投与すると、大動脈石灰化を起こさずに血清ＰＴＨを低下させることができる。別の態様においては、ＩＬ−１阻害剤を投与すると、血清クレアチニンレベルを低下させることができ、又は血清クレアチニンレベルの増加を防止することができる。別の態様においては、ＩＬ−１阻害剤を投与すると、副甲状腺（ＰＴ）の肥厚化を減衰させることができる。
【００９０】
併用療法の一態様においては、本発明のＩＬ−１阻害剤は、カルシウム様物質（ｃａｌｃｉｍｉｍｅｔｉｃｓ）、ビタミンＤ及び（カルシトリオール、アルファカルシドール、ドキセルカルシフェロール、マキサカルシトール、パリカルシトールなどのビタミンＤステロールを含めた）その類似体などのビタミン及びその類似体、抗生物質、炭酸ランタン、ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）などの高脂血症治療薬、降圧薬、（ステロイド性及び非ステロイド性）抗炎症薬、炎症誘発性サイトカイン阻害剤（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）、ＫＩＮＥＲＥＴ（登録商標））、並びに心血管作動薬と一緒に使用することができる。ビタミンＤステロール及び／又はＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）。一態様においては、本発明の組成物は、カルシウム様物質、ビタミンＤステロール及び／又はＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）の投与前に、投与と同時に、又は投与後に投与することができる。本発明の併用療法によって症状を治療する投与計画は、患者のタイプ、年齢、体重、性別及び健康状態、疾患の重症度、投与経路、並びに使用する特定の化合物を含めて、種々の要因に応じて選択され、したがって広範に変わり得る。
【００９１】
本発明によれば、ＩＬ−１阻害剤は、単独で投与することができ、又はビタミンＤステロール及び／又はＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）などの血管石灰化を治療する他の薬物と組み合わせて投与することができる。ビタミンＤステロールとしては、カルシトリオール、アルファカルシドール、ドキセルカルシフェロール、マキサカルシトール、パリカルシトールなどが挙げられる。一態様においては、ＩＬ−１阻害剤は、ビタミンＤステロールの投与前又は投与後に投与することができる。別の態様においては、ＩＬ−１阻害剤は、ビタミンＤステロールと同時投与することができる。本発明の方法を実施して、血管組織に対するカルシトリオールの鉱化作用を減弱させることができる。一態様においては、本発明の方法を使用して、カルシウム、リン及びＣａ×Ｐ積の血清レベルを増加させるカルシトリオールの作用を逆転し、それによって血管石灰化を防止又は阻害することができる。別の態様においては、本発明の方法を使用して、血清クレアチニンレベルを安定化又は低下させることができる。一態様においては、疾患によるクレアチニンレベル増加に加えて、クレアチニンレベルの更なる増加は、カルシトリオールなどのビタミンＤステロール治療によるものであり得る。
【００９２】
また、外科的及び非外科的治療と併せて、ＩＬ−１阻害剤を投与することができる。一態様においては、本発明の方法を透析と一緒に差止（ｉｎｊｕｎｃｔｉｏｎ）において実施することができる。
【００９３】
以下の実施例は、本発明をより詳細に説明するためのものであって、その範囲を限定するものと解釈すべきではない。
【実施例１】
【００９４】
ラットにおいてアデニンによって誘発される二次性副甲状腺機能亢進症（ＳＨＰＴ）及び石灰化、並びにＦｃ−ＩＬ−１ｒａによる大動脈石灰化の防止
この実験は、図１に示すプロトコルを使用した。
【００９５】
栄養補助食品として含まれるアデニン（０．７５％）を成体の雄性スプレーグドーリーラットに給餌した。化学的性質の分析（総血清カルシウム、亜リン酸、血中尿素窒素［ＢＵＮ］、クレアチニン、ＰＴＨ）用血液を、薬物療法前、薬物療法０日（前処置）及び２１日目に麻酔下のラットの眼か後方の洞から採取した。ＰＴＨレベル用血液（０．５ｍｌ）をＳＳＴ（凝固活性化剤）ブランドの血液管に採取し、凝固させた。血清を除去し、評価するまで−７０℃で保存した。ラットＰＴＨ（１−３４）免疫放射線測定キット（Ｉｍｍｕｔｏｐｉｃｓ、Ｓａｎ  Ｃｌｅｍｅｎｔｅ、ＣＡ）を用いて、供給業者の指示に従って、ＰＴＨレベルを定量した。カルシウム及び亜リン酸を血液化学分析計（ＡＵ  ４００；  Ｏｌｙｍｐｕｓ、Ｍｅｌｖｉｌｌｅ、ＮＹ）によって測定した。
【００９６】
固定された（ホルマリン、ＰＢＳ）摘出大動脈からＤｘａスキャナー（Ｐｉｘｉｍｕｓ  ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｒ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて骨塩量を定量することによって、血管石灰化を評価した。
【００９７】
このモデルにおいては、食餌中のアデニンによって誘発されるＣＫＤ／ＳＨＰＴは、かなりの腎機能障害（高ＢＵＮ、クレアチニン）及び大動脈石灰化をもたらす。Ｆｃ−ＩＬ−１ｒａは、このモデルにおいて大動脈石灰化（大動脈の低骨塩量）の発生を防止したが（図２）、ＢＵＮ、クレアチニンレベルには影響を及ぼさなかった。また、Ｆｃ−ＩＬ−１ｒａは、このモデルにおいて副甲状腺サイズを減少させ（図３Ａ）、血清ＰＴＨレベルを低下させた（図３Ｂ）。
【実施例２】
【００９８】
ビタミンＤによって誘発された血管石灰化に対するＩＬ−１ｒａの効果
この実験に用いたプロトコルは以下のように要約することができる。
【００９９】
ＰＩＬＯＴ：血管石灰化に対するＩＬ−１ｒａの効果。
【０１００】
ビタミンＤ  １００ｎｇ×３週間±ＩＬ−１Ｒａ（皮下）→ＶＣ用大動脈
雌性Ｌｅｗｉｓラット２５０ｇ（ポンプ移植）
Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｃｏｒｐ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）製１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールとして供給されたビタミンＤ３を９０％エタノールに溶解させて、１ｍＭ原液を調製し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で最終希釈するまで−２０℃で保存した。ビタミンＤ３（０．１μｇ、ＰＢＳ  ０．２ｍｌの投与量）を皮下（ｓ．ｃ．）注射によって投与した。
【０１０１】
ＩＬ−１ｒａ
投与量  ５ｍｇ／ｋｇ／ｈ  ＳＣ注入
終点：Ｖｏｎ  Ｋｏｓｓａ
群（ｎ＝６／群）
１．ビタミンＤ  １００ｎｇ
２．  ビタミンＤ  １００ｎｇ＋ＩＬ１−Ｒａ（５ｍｇ／ｋｇ／ｈ  ＳＣ）
３．  ビタミンＤ  １００ｎｇ＋ビヒクル（ポンプ）
４．  ビヒクル（ｎ＝２）
２１日間の処置
屠殺：ｖｏｎ  Ｋｏｓｓａ染色用に大動脈を切除
【実施例３】
【０１０２】
ビタミンＤによって誘発された血管石灰化に対するＦｃ−ＩＬ−１ｒａの効果
この実験に用いたプロトコルは以下のように要約することができる。
【０１０３】
ＰＩＬＯＴ：血管石灰化に対するＦｃ  ＩＬ−１ｒａの効果。
【０１０４】
ビタミンＤ  １００ｎｇ×３週間±Ｆｃ  ＩＬ−１Ｒａ（皮下）→ＶＣ用大動脈
雌性Ｌｅｗｉｓラット２５０ｇ及び／又は雄性ＳＤラット（２５０ｇ）
Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｃｏｒｐ（Ｄ−１５３０  −．１ｍｇ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）製１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールとして供給されたビタミンＤ３を９０％エタノールに溶解させて、１ｍＭ原液を調製し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で最終希釈するまで−２０℃で保存した。ビタミンＤ３（０．１μｇ、ＰＢＳ  ０．２ｍｌの投与量）を皮下（ｓ．ｃ．）注射によって投与した。
【０１０５】
Ｆｃ  ＩＬ−１ｒａ
投与量１００ｍｇ／ｋｇ  ＳＣ／日
終点：Ｖｏｎ  Ｋｏｓｓａ
群（ｎ＝６／群）
１．  ビタミンＤ  １００ｎｇ
２．  ビタミンＤ  １００ｎｇ＋Ｆｃ  ＩＬ１−Ｒａ（１００ｍｇ／ｋｇ／ｄ  ＳＣ）
３．  ビタミンＤ  １００ｎｇ＋ビヒクル（ポンプ）
４．  ビヒクル（ｎ＝２）
２１日間の処置
屠殺：ｖｏｎ  Ｋｏｓｓａ染色用に大動脈を切除
【実施例４】
【０１０６】
ＩＬ−１ｒａ−Ｆｃ（ＩＬ−１阻害剤）を用いた、カルシトリオール（ビタミンＤ３）によって誘発された大動脈石灰化の抑制
ＩＬ−１受容体拮抗物質Ｆｃ−ＩＬ−１ｒａ、カルシトリオール、Ｆｃ−ＩＬ−１ｒａ＋カルシトリオールの組合せ）又はその対応するビヒクルを、部分的腎摘出（５／６Ｎｘ）によって誘発された慢性腎疾患（ＣＫＤ）及び二次性副甲状腺機能亢進症（ＳＨＰＴ）のげっ歯類動物モデルに投与した。実験概念図を図５に示す。投与群を下記表２に示す。
【０１０７】
【表２】
2009512710.tif 000019
【０１０８】
大動脈を処置第４週（ｔｒｔ  ｗｋ４）に切除し、固定し、染色した。処置の内容を知らない病理医が、無機化（Ｖｏｎ  Ｋｏｓｓａ）及び重症度を決定し、採点した（石灰化スコア：０＝石灰化なし、１＝最小、２＝軽度、３＝中度、４＝顕著、５＝重度）。
【０１０９】
（部分的（５／６）腎摘出によって誘発された）二次性副甲状腺機能亢進症に伴う定着した慢性腎疾患のげっ歯類動物モデルに全身投与されたＦｃ−ＩＬ−１ｒａは、血管石灰化を起こさなかったのに対して、カルシトリオールは、顕著から重度の大動脈石灰化を起こした。処置開始前の８週間で尿毒症が確立されたモデルにおいて、Ｆｃ−ＩＬ−１ｒａは、カルシトリオール（ビタミンＤ３）によって誘発された大動脈石灰化を減衰させた（図６）。また、カルシトリオールで処置した尿毒症対象における重度の石灰化の発生率（４／８又は５０％）は、Ｆｃ−ＩＬ−１ｒａと組み合わせてカルシトリオールを投与した動物において減少した（１／８又は１２．５％）。
【０１１０】
上記明細書は多数の定義を含む。これらの定義は、特に限定しない限り、本明細書を通して使用する用語に当てはまる。定義は、各用語の複数形及び単数形に等しく当てはまる。
【０１１１】
本明細書に引用する全刊行物、特許及び特許出願を、個々の刊行物又は特許出願が参照により本明細書に組み込まれるように具体的かつ個別に示されたごとく、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１２】
上記発明を、明瞭に理解できるように図示及び実施例によってある程度詳細に記述したが、添付した特許請求の範囲の精神又は範囲から逸脱することなく、ある変更及び改変がなされ得ることは、本発明の教示に照らして当業者には容易に明らかとなる。
【図面の簡単な説明】
【０１１３】
【図１】慢性腎疾患（ＣＫＤ）及び二次性副甲状腺機能亢進症（ＳＨＰＴ）のアデニンモデルの実験概念図である。
【図２】ＣＫＤの動物モデルにおけるＦＣ−ＩＬ−１ｒａを用いた大動脈血管石灰化の防止を示すグラフである。図２のアステリスクは、試験条件下で（ｐ＝０．００５；独立ｔ検定；対照（Ａ５Ｓ）ビヒクル（赤；ｎ＝４）；Ｆｃ−ＩＬ−１ｒａ（青の陰影付き、ｎ＝７））、Ｆｃ−ＩＬ−１ｒａで処理した７匹の動物のうち７匹で石灰化が起こらなかった（骨塩量０ｇ／ｃｍ２）ことを示す。
【図３】ＣＫＤ／ＳＨＰＴの動物モデルにおけるＦｃ−ＩＬ−１ｒａによる副甲状腺サイズ（Ａ）及び血清ＰＴＨ（Ｂ）の減少を示すグラフである。図３Ａにおいて、アステリスク（＊）は、Ａ５Ｓビヒクル対照とＦｃ−ＩＬ−１ｒａの副甲状腺野生型／体野生型を示す；ｐ＝０．００９；独立ｔ検定；対照（ビヒクル、Ａ５Ｓ）、赤；ｎ＝８）；Ｆｃ−ＩＬ−１ｒａ、（青、ｎ＝１３）。図３Ｂにおいて、ポンド記号（＃）は、Ａ５Ｓビヒクル対照とＦｃ−ＩＬ−１ｒａの血清ＰＴＨを示す；ｐ＝０．０２８；独立ｔ検定；対照（ビヒクル、Ａ５Ｓ）、赤；ｎ＝４）；Ｆｃ−ＩＬ−１ｒａ、（青、ｎ＝７）。
【図４】本明細書でＦｃ−ＩＬ−１ｒａと称する分子のアミノ酸配列（配列番号１）を示す図である。
【図５】ＣＫＤ及び二次性ＨＰＴの５／６腎摘出モデルの実験概念図である。
【図６】Ｆｃ−ＩＬ−１ｒａで処理した尿毒症ラットにおいて、カルシトリオールによって誘発された大動脈石灰化の減衰を示すグラフである。
【図１】
2009512710.tif 000020
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
2009512710000001.app
【国際調査報告】
2009512710.tif 000026
2009512710.tif 000027
2009512710.tif 000028