(57)【要約】体液中の特定の検体を検出することにより動物の排卵周期をモニタリングする方法、排卵周期をモニタリングし、そして雌性哺乳類の妊娠可能性を決定するためのコンピュータプログラム製品、装置、データ処理システム及びキットが、開示される。１つの態様において、哺乳類（例えばヒト）の妊娠可能性を、体液中の特定の検体を検出することにより測定又は評価する。本明細書に記載する方法及び装置により検出される特定の検体はホルモン、ホルモン誘導体及びホルモン代謝産物、例えばエストロゲン代謝産物及びプロゲステロン代謝産物を包含する。
2009512871.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類における妊娠可能性を測定するための方法であって：
哺乳類雌性対象から体液試料を得る工程；
該試料を固相捕捉要素と接触させる工程であって、該捕捉要素は第１結合剤及び第２結合剤を含み、該第１結合剤はエストロゲン代謝産物と結合することができ、該第２結合剤はプロゲステロン代謝産物と結合することができる、工程；
該エストロゲン代謝産物及び該プロゲステロン代謝産物の排出速度を決定する工程；並びに、
該エストロゲン代謝産物及び該プロゲステロン代謝産物の相対排出速度に基づいて該雌性対象の排卵周期状態を決定する工程
を含む方法。
【請求項２】
前記エストロゲン代謝産物がエストロングルクロニドである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記プロゲステロン代謝産物がプレグナンジオールグルクロニドである、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記エストロゲン代謝産物がエストロングルクロニドであり、前記プロゲステロン代謝産物がプレグナンジオールグルクロニドである、請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記第１結合要素がエストロングルクロニドに結合できる抗体を含み、前記第２結合要素がプレグナンジオールグルクロニドに結合できる抗体を含む、請求項４記載の方法。
【請求項６】
エストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドの一方又は両方を、ポリクローナル抗体に結合することにより検出する、請求項５記載の方法。
【請求項７】
エストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドの一方又は両方を、モノクローナル抗体又はその結合フラグメントに結合することにより検出する、請求項５記載の方法。
【請求項８】
前記結合要素が単一の固相膜又はストリップであり、両方の検体を該ストリップへの結合の後に検出する、請求項１記載の方法。
【請求項９】
前記捕捉要素が単一の側方流動ストリップである、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記試験ストリップがエストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドと結合する抗体又は抗体フラグメントを含む、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
試験ストリップ上のエストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドに対する抗体が検出要素と会合することができる、請求項２〜１０の何れか１項に記載の方法。
【請求項１２】
試験ストリップ上のエストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドに対する抗体が検出要素にコンジュゲートしている、請求項２〜１０の何れか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記検出要素が比色ではない、請求項１１又は１２記載の方法。
【請求項１４】
前記検出要素が常磁性体粒子である、請求項１１又は１２記載の方法。
【請求項１５】
前記哺乳類が畜産動物である、請求項１記載の方法。
【請求項１６】
前記哺乳類がウシである、請求項１記載の方法。
【請求項１７】
前記エストロゲン代謝産物及び前記プロゲステロン代謝産物の排出速度を少なくとも１のウシ排卵周期の過程に渡って決定されるウシエストロゲン代謝産物及びプロゲステロン代謝産物の値の編集物と比較する工程を含む、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
ウシエストロゲン代謝産物及びプロゲステロン代謝産物の値の前記編集物が電子データベースである、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記哺乳類がウマである、請求項１記載の方法。
【請求項２０】
前記哺乳類がヒトである、請求項１記載の方法。
【請求項２１】
前記体液が尿である、請求項１記載の方法。
【請求項２２】
前記尿試料の容量を決定することを更に含む、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
前記体液が一度収集された尿である、請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
前記体液が時間間隔を参照することなく収集された尿である、請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
前記体液が特定の時間期間に渡って収集された尿である、請求項２１記載の方法。
【請求項２６】
前記体液が特定の時間期間に関わらず収集された尿である、請求項２１記載の方法。
【請求項２７】
前記エストロゲン代謝産物及び前記プロゲステロン代謝産物の排出速度を定量する前に、前記尿試料の容量を調節する、請求項２１記載の方法。
【請求項２８】
前記体液が特定の時間期間に関わらず収集された尿であり、前記排出速度が決定されるよりも前に、試料容量調節工程を必要に応じて試料容量調節を行う試料分注装置により実施する、請求項１記載の方法。
【請求項２９】
前記体液が特定の時間期間に関わらず収集された尿であり、試料容量調節工程をアルゴリズムに従って実施する、請求項１記載の方法。
【請求項３０】
前記体液が特定の時間期間に関わらず収集された尿であり、試料容量調節工程を尿試料のスペクトル分析に基づいたアルゴリズムに従って実施する、請求項１記載の方法。
【請求項３１】
前記体液が特定の時間期間に関わらず収集された尿であり、試料容量調節工程を尿試料の比重に基づいたアルゴリズムに従って実施する、請求項１記載の方法。
【請求項３２】
前記アルゴリズムがコンピュータアルゴリズムである、請求項２９、３０又は３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記体液が少なくとも３時間の時間期間に渡って収集された尿である、請求項１記載の方法。
【請求項３４】
前記体液が少なくとも３時間の時間期間に渡って収集された尿であり、前記容量を規格化された容量に調節する、請求項１記載の方法。
【請求項３５】
前記体液が少なくとも３時間の時間期間に渡って収集された尿であり、前記容量を約１５０ｍｌ／ｈｒに等しい規格化された容量に調節する、請求項１記載の方法。
【請求項３６】
最適な妊娠可能性のための時間枠を決定する、請求項１記載の方法。
【請求項３７】
排卵日を決定する、請求項１記載の方法。
【請求項３８】
前記雌性対象のインビトロの妊娠を実施するための最適な妊娠可能性のための時間枠を決定する工程を更に含む、請求項１記載の方法。
【請求項３９】
前記容量を調節するための工程が容量を規格化することを含む、請求項３２記載の方法。
【請求項４０】
排出速度を決定する前に尿容量の偏りの補正のためのアルゴリズムを使用する工程を更に含む、請求項１記載の方法。
【請求項４１】
常磁性粒子を有する固相試験ストリップを使用し、各々の前記エストロゲン代謝産物を第１常磁性粒子により検出し、前記プロゲステロン代謝産物を第２常磁性粒子により検出する、請求項１記載の方法。
【請求項４２】
前記エストロゲン代謝産物及び前記プロゲステロン代謝産物の量を定量する、請求項１記載の方法。
【請求項４３】
前記エストロゲン代謝産物及び前記プロゲステロン代謝産物の閾値量を正又は負の値として検出する、請求項１記載の方法。
【請求項４４】
月経周期内の最大妊娠可能性の期間を決定するために使用する、請求項１記載の方法。
【請求項４５】
試料を毎日採取し、前記エストロゲン代謝産物及び前記プロゲステロン代謝産物の排出速度を設定時間間隔に対して毎日定量する、請求項１記載の方法。
【請求項４６】
排出速度を測定するために携帯用検出器を用いる工程を含む、請求項１記載の方法。
【請求項４７】
前記携帯用検出器がプロゲステロン又はプロゲステロン代謝産物の排出速度の履歴値を含むデータベースと連絡している、請求項２２記載の方法。
【請求項４８】
前記携帯用検出器がエストロゲン又はエストロゲン代謝産物に関する排出速度の履歴値を含むデータベースと連絡している、請求項２２記載の方法。
【請求項４９】
請求項１の方法を実施するための試験ストリップ。
【請求項５０】
エストロゲン代謝産物と結合できる第１結合要素及びプロゲステロン代謝産物と結合できる第２結合要素を含む試験ストリップ。
【請求項５１】
前記第１結合要素及び前記第２結合要素が抗体又はそのフラグメントである、請求項４２記載の試験ストリップ。
【請求項５２】
エストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドを検出及び定量するための定量的試験ストリップ。
【請求項５３】
請求項１の方法を実施するためのキットであって、該キットが固相捕捉要素のための容器及び該キットの使用説明書を含み、該捕捉要素が第１結合剤及び第２結合剤を含み、該第１結合剤はエストロゲン代謝産物と結合でき、該第２結合剤はプロゲステロン代謝産物と結合できるキット。
【請求項５４】
請求項１の方法を実施するための読み取り機であって、該読み取り機が：
固相捕捉要素のためのホルダー；
測光信号又は電子活性信号を検出するための検出要素；及び、
該測光信号又は電子活性信号を送信及び／又は分析するための手段
を含む読み取り機。
【請求項５５】
哺乳類における妊娠可能性を測定するための方法であって：
哺乳類雌性対象から体液試料を得る工程；
該試料を第１結合剤及び第２結合剤と接触させる工程であって、該第１結合剤はエストロゲン代謝産物と結合することができ、該第２結合剤はプロゲステロン代謝産物と結合することができる、工程；
該エストロゲン代謝産物及び該プロゲステロン代謝産物の排出速度を決定する工程；並びに、
該エストロゲン代謝産物及び該プロゲステロン代謝産物の相対排出速度に基づいて該雌性対象の排卵周期状態を決定する工程
を含む方法。
【請求項５６】
妊娠可能性モニターであって：
試料分注器；
試料中の少なくとも２の検体の存在を検出するためのセンサ；
計算するためのプロセッサ；
エストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドの排出速度のデータを含む中央データベース又は内部データ格納部への連絡手段；
を含む妊娠可能性モニター。
【請求項５７】
請求項１記載の方法の使用に関する情報を提供するため、及び、周期的にデータの表示を可能にするためのホームユーザーのためのコンピュータプログラム。
【請求項５８】
エストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドの排出速度の履歴値を含む月経周期の電子データベースと連絡したコンピュータを伴う使用に適する、尿中エストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドの排出速度の表示及び分析のためのコンピュータプログラム製品。
【請求項５９】
哺乳類における妊娠可能性を測定するための方法であって：
雌性対象から体液試料を得る工程；
該試料をプロゲステロン代謝産物と結合することができる結合剤を含む捕捉要素と接触させる工程；
該プロゲステロン代謝産物の排出速度を定量する工程；
該プロゲステロン代謝産物の排出速度に基づいて該雌性対象の排卵周期状態を決定する工程
を含む方法。
【請求項６０】
哺乳類における妊娠可能性を測定するための方法であって：
雌性対象から体液試料を得る工程；
該試料をエストロゲン代謝産物と結合することができる捕捉要素と接触させる工程；
該エストロゲン代謝産物の排出速度を定量すること；
同じ卵巣周期内で作製されたエストロゲン代謝産物排出速度に対して該エストロゲン代謝産物の排出速度を比較すること；並びに、
該雌の排卵周期状態を決定する工程
を含む方法。
【請求項６１】
非ヒト哺乳類における妊娠可能性を測定するための方法であって：
非ヒト雌性対象から体液試料を得る工程；
該試料を捕捉要素と接触させる工程であって、該捕捉要素は第１結合剤及び第２結合剤を含み、該第１結合剤はエストロゲン代謝産物と結合することができ、該第２結合剤はプロゲステロン代謝産物と結合することができる、工程；
該エストロゲン代謝産物及び該プロゲステロン代謝産物の排出速度を定量する工程；
該エストロゲン代謝産物及び該プロゲステロン代謝産物の相対排出速度に基づいて該雌性対象の排卵周期状態を決定する工程
を含む方法。
【請求項６２】
１以上の遠隔地在住対象の生理学的状態をモニタリングする方法であって、中央データ処理システムは１以上の対象モニタリングシステムに連絡され、それからデータを受信するように構成されており、各対象モニタリングシステムは対象データの受信、格納及び分析の１以上を行うことができ、下記：
分析用に対象から試料を得る工程；
対象モニタリングシステムに付随する検体検出器に該試料を接触させる工程；
該検出装置上で検体に対応する測光信号又は電子活性信号を測定し、そして１つ以上の分析物を検出する工程；
該対象モニタリングシステムと該中央データ処理システムとの間でデータの交換を行う工程；
該対象の履歴又は実時間の生理学的状態の評価データを含むコンピュータプログラム製品アウトプットを生成する工程であって、該コンピュータプログラム製品アウトプットが中央データ処理システムと連絡している、工程；
１以上の対象モニタリングシステムからの該対象データを分析する工程；
該コンピュータプログラムにより実施される分析に基づいて該対象の状態を決定する工程；並びに、
同定された対象の状態及び１以上の対象に対する治療管理推奨事項を連絡、送信又は表示する工程；
を含む方法。
【請求項６３】
治療管理が必要な１以上の遠隔地在住対象の生理学的状態をモニタリングする方法であって、中央データ処理システムは１以上の対象モニタリングシステムに連絡され、それからデータを受信するように構成されており、各対象モニタリングシステムは対象データの受信、格納及び分析の１以上を行うことができ、下記：
分析用に対象から試料を得る工程；
対象モニタリングシステムに付随する検体検出器に該試料を接触させる工程；
該検出装置上で検体に対応する測光信号又は電子活性信号を測定し、そして１つ以上の分析物を検出する工程；
コンピュータ実行可能なアルゴリズムを用いて液容量の偏りに関する容量補正を実施する工程；
１以上の検体の排出速度を定量する工程；
対象モニタリングシステムから中央データ処理システムに情報を送信する工程；
該対象の履歴及び／又は実時間の生理学的状態の評価データを含むコンピュータプログラム製品アウトプットを生成する工程であって、該コンピュータプログラム製品アウトプットが中央データ処理システムと連絡している、工程；
１以上の対象モニタリングシステムからの該対象データを分析する工程；
個々の履歴データ及び／又は対象集団の履歴データによる統計学的比較により個々の妊娠可能状態評価及び／又は妊娠可能性終点の妊娠可能状態予測の精度を最適化する工程；
該コンピュータプログラムにより実施される分析に基づいて該対象の状態を決定する工程；並びに、
該中央データ処理システム及び／又は対象モニタリングシステムと連絡している少なくとも１の遠隔地在住クライアントを介して、同定された対象の状態及び１以上の対象に対する治療管理推奨事項を連絡、送信及び／又は表示する工程；
を含む方法。
【請求項６４】
妊娠可能性管理が必要な複数の遠隔地在住対象の妊娠可能性状態をモニタリングする方法であって、中央データ処理システムは複数の該当する対象モニタリングシステムに連絡され、それよりデータを受信するように構成されており、各対象モニタリングシステムは対象データの受信、格納及び分析を行うことができ、下記：
対象に関連する検出装置を同定する工程；
検出装置の同定を確認する工程；
対象に関連する対象モニタリングシステムの同定を確認する工程；
分析用に該対象から体液試料を得る工程；
該対象モニタリングシステム上の検出に適する検出装置上に該試料を捕捉する工程；
該検出装置を評価すること及び該検出装置上の検体からの信号を測定することによりコンピュータプログラム製品Ａ（アルゴリズムＡ）；及び／又はコンピュータプログラム製品Ｂ（アルゴリズムＢ）へのインプットを与える工程；
対象モニタリングシステムから送信された得られた対象データを対象コンピュータＣＰＵ及び／又は中央データ処理システムへのその送信と実質的に同時に分析することにより、該コンピュータプログラム製品（アルゴリズムＡ）により実施された分析に基づいて対象の妊娠可能状態を決定する工程；
該コンピュータプログラム製品Ａ及び／又はコンピュータプログラム製品Ｂからの妊娠可能状態評価データを含むコンピュータプログラム製品アウトプットＡ（データベースＡ）及び／又はコンピュータプログラム製品アウトプットＢ（データベースＢ）を生成する工程；
該コンピュータプログラム製品アウトプットＡ（データベースＡ）及び／又は該コンピュータプログラム製品アウトプットＢ（データベースＢ）を該対象からの追加的な妊娠可能状態評価データの検出及び分析から生じた追加的な妊娠可能状態評価データインプットを用いて更新する工程；
該中央データ処理システムにおける複数の対象モニタリングシステムから対象データを得る工程であって、該対象データは妊娠可能状態評価データを含む、工程；
該中央データ処理システムにおける複数の対象モニタリングシステムから送信された該対象データを、医師又は指定された健康管理専門家のコンピュータへのその送信と実質的に同時に分析する工程；
該コンピュータプログラム製品Ｂ（アルゴリズムＢ）により実施された分析に基づき、そして、より広範な対象集団からの妊娠可能状態評価データに対して比較する場合の潜在異常を含めて、個々の対象の妊娠可能性問題を同定するために、該対象の妊娠可能状態を決定する工程；
該中央データ処理システム及び／又は該当する対象モニタリングシステムと連絡した少なくとも１の遠隔地在住クライアントを介して、各該当する対象に関する同定された対象妊娠可能状態及び妊娠可能性管理推奨事項を連絡、送信及び／又は表示する工程；並びに、
妊娠可能状態及びより広範な対象集団からの妊娠可能状態評価データに対して比較する場合の潜在異常を含めて、個々の対象の妊娠可能性問題に関する情報を送信する工程；
を含む方法。
【請求項６５】
治療管理が必要な１以上の遠隔地在住対象の生理学的状態をモニタリングする方法であって、中央データ処理システムは１つ以上の対象モニタリングシステムに連絡され、それよりデータを受信するように構成されており、各対象モニタリングシステムは対象データの受信、格納及び分析を行うことができ、下記：
分析用に該対象から試料を得る工程；
該対象モニタリングシステム上の検出に適する検出装置上に該試料を捕捉する工程；
該検出装置を評価し、また、該検出装置上の検体からの信号を測定する工程；
対象モニタリングシステムから送信された得られた対象データを該中央データ処理システムへのその送信と実質的に同時に分析することにより、該対象の臨床又は生理学的な状態を決定する工程；
該中央データ処理システムと連絡した該対象の履歴及び／又は実時間の生理学的状態の評価データを含むコンピュータプログラム製品アウトプット（データベース）を生成する工程；
該中央データ処理システムにおける１又は複数の対象モニタリングシステムから送信された該対象データを、医師又は指定された健康管理専門家のコンピュータへのその送信と実質的に同時に分析する工程；
該コンピュータプログラムにより実施された分析に基づき、そして、より広範な対象集団からの臨床又は生理学的状態の評価データに対して比較する場合の潜在異常を含めて、個々の対象の臨床又は生理学的問題を同定するために、対象の臨床又は生理学的状態を決定する工程；並びに、
該中央データ処理システム及び／又は該当対象モニタリングシステムと連絡している少なくとも１の遠隔地在住クライアントを介して、より広範な対象集団からの臨床又は生理学的状態評価データに対して比較する場合の潜在異常を含めて、同定された対象の生理学的状態及び治療管理推奨事項を連絡、送信及び／又は表示する工程；
を含む方法。
【請求項６６】
前記対象試料が歯肉滲出液、汗、皮脂、膣液、全血液、血清、血漿、脳脊髄液、尿、リンパ液、呼吸器、腸及び泌尿器の管の外部分泌物、涙液、唾液、乳汁又は白血球から選択される、請求項６２〜６５の何れか１項に記載の方法。
【請求項６７】
前記試料が尿を含む、請求項６９記載の方法。
【請求項６８】
前記検出装置が多孔性物質、ガラス繊維、膜、紙、ストリップ、パッド、ナイロン、ニトロセルロース又はポリエステル物質から選択される固相捕捉要素を含む、請求項６２〜６５の何れか１項に記載の方法。
【請求項６９】
前記検体検出装置が１以上の代謝産物の検出に適する側方流動を含む、請求項６８記載の方法。
【請求項７０】
前記検出装置が常磁性粒子包埋アッセイ検出パッドを含む、請求項６８記載の方法。
【請求項７１】
前記検体が測光信号又は電子活性検出信号を生成する、請求項６８記載の方法。
【請求項７２】
前記電子活性検体を常磁性粒子にコンジュゲートする、請求項６８記載の方法。
【請求項７３】
前記検体がホルモン又はホルモン代謝産物から選択される、請求項６８記載の方法。
【請求項７４】
前記検体がエストロゲン、プロゲステロン、テストステロン又はそれらの代謝産物を含む群から選択される、請求項７３記載の方法。
【請求項７５】
前記検体が尿中ホルモン代謝産物である、請求項７４記載の方法。
【請求項７６】
前記尿中ホルモン代謝産物がエストロン３−スルフェート、２−ヒドロキシエストロン、４−ヒドロキシエストロン、２−メトキシエストロン、４−メトキシエストロン、２−メトキシエストロン３−スルフェート、２−メトキシエストロン３−グルクロニド、１６アルファ−ヒドロキシエストロン、エストラジオール−１７α、エストラジオール１７β、１６−グルクロニド−エストリオール；エストラジオール−１７ベータ３−グルクロニド；エストラジオール−１７ベータ３−スルフェート、２−ヒドロキシ−エストラジオール−１７β、２−メトキシ−エストラジオール−１７β、２−メトキシ−エストラジオール−１７ベータ３−スルフェート、２−メトキシ−エストラジオール−１７ベータ３−グルクロニド、６β−ヒドロキシ−エストラジオール−１７β、２−メトキシエストラジオール、１７−エピエストリオール、２−ヒドロキシエストラジオール、１６−ケトエストラジオール、１６β−ヒドロエストロン、１６−エピエストリオールを含む群から選択される、請求項７５記載の方法。
【請求項７７】
前記エストロゲン又はその代謝産物がエストラジオール、エストロン、エストリオール、２（ＯＨ）エストロン、４ヒドロキシ−エストロン、１６α−ヒドロキシエストロン、２−メトキシエストロン及び４−メトキシエストロンを含む群から選択される、請求項７６記載の方法。
【請求項７８】
前記エストロゲン代謝産物がエストロングルクロニド（ＥＩＧ）である、請求項７７記載の方法。
【請求項７９】
前記プロゲステロン又はプロゲステロン代謝産物が５β−プレグナン−３α、２０α−ジオールグルクロニド、５β−プレグナン−３α−オール−２０−１−（５β−プレグネノロン）及び５α−プレグナン−３α−オール−２０−１−（５α−プレグネノロン）を含む群から選択される、請求項７６記載の方法。
【請求項８０】
前記プロゲステロン代謝産物がプレグナンジオールグルクロニド（ＰｄＧ）である、請求項７９記載の方法。
【請求項８１】
前記分析及び／又は評価をコンピュータ実行可能なアルゴリズムにより実施する、請求項６２〜６５記載の方法。
【請求項８２】
前記データベースが前記中央データ処理システムと連絡した前記対象の履歴又は実時間の生理学的状態評価データを含む、請求項８１記載の方法。
【請求項８３】
前記データベースが前記中央データ処理システムと連絡した前記対象の履歴又は実時間の妊娠可能性状態の評価データを含む、請求項８２記載の方法。
【請求項８４】
前記データベースが前記中央データ処理システムと連絡した前記対象の履歴又は実時間の尿中代謝産物排出速度状態評価データを含む、請求項８３記載の方法。
【請求項８５】
前記データベースが前記中央データ処理システムと連絡した前記対象の履歴又は実時間の尿中グルクロニド排出速度状態評価データを含む、請求項８４記載の方法。
【請求項８６】
前記対象の臨床又は生理学的状態を、より広範な対象集団及び／又は該個体からの臨床又は生理学的状態評価データとの比較に基づいて決定する、請求項８１記載の方法。
【請求項８７】
前記連絡を、送信機、警報器、受信機、電話、モデム、携帯電話、ケーブル、インターネット接続、ワールドワイドウェブリンク、テレビ、閉回路モニター、コンピュータ、表示画面、留守番電話、ファクシミリ機器又はプリンタを含む群から選択される装置により実施する、請求項８１記載の方法。
【請求項８８】
前記データベースが生理学的データ及び挙動データよりなる群から選択されるデータよりなる、請求項８１記載の方法。
【請求項８９】
前記データが尿中代謝産物データ；血中グルコース測定；体温測定；食餌、運動、ストレス及び疾患の有無に関係する評価データよりなる群から選択される、請求項９０記載の方法。
【請求項９０】
前記アルゴリズムが特定の対象の生殖状態に基づいた特定の妊娠可能性養生法の効力を最適化する、請求項８１記載の方法。
【請求項９１】
前記アルゴリズムが対象入力データに基づいて対象の自己モニタリング及び妊娠可能性管理養生法に対する自動調節を行うように構成されている、請求項８９記載の方法。
【請求項９２】
前記アルゴリズムが前記対象の妊娠可能性又は排卵周期に影響する可能性がある他の非妊娠可能性適応症に対する併用療法の作用の評価に有用なデータベースを含有する、請求項８９記載の方法。
【請求項９３】
対象の妊娠可能性管理データをモニタリングするのに適する前記ＳＭＳが常磁性検体信号を検出することができる、請求項８１記載の方法。
【請求項９４】
前記データベースが妊娠可能状態関連値、健康状態、食餌、運動及び服薬；最終測定の日時情報；及び活動養生法の規定された経過に関するデータを含有する、請求項８１記載の方法。
【請求項９５】
前記アルゴリズムが前記対象により前記ＳＭＳに入力された前記データに適用されるものとしての医師又は健康管理専門家の処方に従って対象の排卵変動に対する調節を計算する、請求項８１記載の方法。
【請求項９６】
ＳＭＳ内で使用するための前記妊娠可能性アルゴリズムが妊娠可能性管理アルゴリズムを包含し、医師又は他の健康管理専門家が回顧的及び／又は補充的な調節養生法を特定できるようにする、請求項８１記載の方法。
【請求項９７】
投薬相互作用情報の前記データベースが複数の医薬の対象の使用に関連する情報に関するデータベースを対象が照会できるように構成されている、請求項８１記載の方法。
【請求項９８】
投薬相互作用情報の前記データベースが各対象に関する特定の履歴的妊娠可能性データプロフィール及び／又は対象の集団に関する履歴的妊娠可能性プロフィールに関するデータベースを対象が照会できるように構成されている、請求項８１記載の方法。
【請求項９９】
雌における分娩後状態を診断及び治療するための方法であって：
哺乳類雌性対象から体液試料を得る工程；
該試料を固相捕捉要素と接触させる工程であって、該捕捉要素がエストロゲン又はエストロゲン代謝産物と結合することができる結合剤を含む、工程；
該エストロゲン又はエストロゲン代謝産物を定量する工程；及び、
該エストロゲン又はエストロゲン代謝産物の量に基づいて該雌性対象における分娩後状態を診断する工程；及び、
検出された該エストロゲン又はエストロゲン代謝産物の量に基づいて該分娩後状態を治療する工程；
を含む方法。
【請求項１００】
前記エストロゲン又はエストロゲン代謝産物の量に基づいてホルモン補充物を投与する工程を含む、請求項９９記載の方法。
【請求項１０１】
雌における閉経及び／又は閉経に伴う症状を治療するための方法であって：
哺乳類雌性対象から体液試料を得る工程；
該試料を固相捕捉要素と接触させる工程であって、該捕捉要素がエストロゲン又はエストロゲン代謝産物と結合することができる結合剤を含む、工程；
該エストロゲン又はエストロゲン代謝産物を定量する工程；及び、
検出された該エストロゲン又はエストロゲン代謝産物の量に基づいて該雌性対象における分娩後状態を診断する工程；及び、
検出された該エストロゲン又はエストロゲン代謝産物の量に基づいて閉経及び／又は閉経に伴う症状を治療する工程；
を含む方法。
【請求項１０２】
前記閉経が自然閉経、閉経周辺期、誘導閉経、早期閉経又は閉経後の１つとして特徴付けられる、請求項１０１記載の方法。
【請求項１０３】
哺乳類における癌を検出する方法であって：
哺乳類対象から体液試料を得る工程；
該試料を固相捕捉要素と接触させる工程であって、該捕捉要素がホルモン又はホルモン代謝産物と結合することができる結合剤を含む、工程；
該代謝産物の量又は排出速度を決定する工程；
該ホルモン又はホルモン代謝産物の量又は排出速度を該哺乳類対象が癌を有する確率に関連付ける工程；及び、
該ホルモン又はホルモン代謝産物の量又は排出速度に基づいて該患者に対する治療プロトコルを推奨する工程；
を含む方法。
【請求項１０４】
前記対象が乳癌を有することが疑われる雌であり、前記ホルモン又はホルモン代謝産物がエストロゲン又はエストロゲン代謝産物である、請求項１０３に記載の癌を検出する方法。
【請求項１０５】
哺乳類雌における生殖障害を検出する方法であって：
哺乳類対象から体液試料を得る工程；
該試料を固相捕捉要素と接触させる工程であって、該捕捉要素がホルモン又はホルモン代謝産物と結合することができる結合剤を含む、工程；
該ホルモン又はホルモン代謝産物の量又は排出速度を決定する工程；
該ホルモン又はホルモン代謝産物の量又は排出速度を該哺乳類対象が不妊に関連する無排卵、原因不明の不妊、閉経周辺期の月経過多、閉経後出血、早期閉経、無月経、ホルモン不均衡、リビド低減、慢性疲労、神経質、骨粗鬆症、月経前症候群、排卵出血、機能不全性子宮出血、ホルモン補充療法、外科的閉経症候群、月経過少、過剰刺激卵巣、多嚢胞性卵巣疾患、習慣性流産、稽留流産及び切迫流産から選択される１以上の障害を有する確率に関連付ける工程；及び、
該ホルモン又はホルモン代謝産物の量又は排出速度に基づいて該患者に対する治療プロトコルを推奨する工程；
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の引用）
本出願は、米国仮特許出願第６０／７２９，５５４号（２００５年１０月２４日出願、Ｒｏｂｅｒｔ  ＧｉｌｍｏｕｒおよびＬｅｎ  Ｂｌａｃｋｗｅｌｌによる、発明の名称「Ｏｖｕｌａｔｉｏｎ  Ｃｙｃｌｅ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ」）からの優先権を主張し、その内容は、本明細書中でその全体が参考として援用される。
【０００２】
（分野）
分野は例えば哺乳類排卵周期をモニタリングするための方法、装置、キット及びシステムを包含する。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
本発明を理解するのに有用であり得る情報が以下に包含される。本明細書に記載する情報の何れも本記載又は請求項の本発明の先行技術又はそれに関連するものであること、及び、特定的又は含蓄的に言及した何れの出版物又は文書も先行技術であることを承認するものでは全く無い。
【０００４】
排卵月経周期の潜在的な妊娠可能期間、場合により妊娠可能時期と称されるものは、雌が交接行為から妊娠可能となる期間である。ヒトにおいては、この期間は精子の妊娠可能な寿命を考慮して排卵前６日までに開始し、そして卵子の妊娠可能な寿命を考慮して排卵後１日に終了する。Ａｕｓｔｉｎ  ＣＲ，Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｆｅｒｔｉｌ  Ｓｕｐｐｌ２２：７５−８９（１９７５）。合衆国におけるカップルの１０％超が妊娠を達成することが困難となっている。Ｃｈａｎｄｒａ  Ａ．，Ｆａｍ  Ｐｌａｎｎ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ３０：３４−４２（１９９８）。これらのカップルの大部分は医療介入を必要とする。しかしながら一部は排卵周期の妊娠可能時期の間に交接を行うこと及びそれを周期の最も妊娠可能な期間に時限させることにより、妊娠を達成しており、そして排卵周期の正確な決定はヒトの妊娠可能性及び不妊の管理において多くの現実的用途を有している。
【０００５】
排卵周期のモニタリング及び決定はまた、動物の飼育における妊娠可能性及び生殖の管理においても非常に重要である。牧場及び家畜動物産業のかなりの資源がこれらの動物の生殖及び繁殖の管理に投じられている。動物繁殖業の経済的考慮により、所有者は生殖周期及びどのようにしてそれを管理して操作するかについて、理解することが必要となる。酪農産業においては、例えば、繁殖期の間に妊娠する雌ウシのパーセンテージは農場の利益に直接影響する。馬飼育業においては、発情及び排卵の周期は光周期条件に関連しており、人工照明の使用及び薬品治療などの管理手段を用いることにより、許容できる量の確実性を持って予測することが困難な場合が頻繁であった生殖系に渡る最低限の制御を行おうとする育種者の支援が試みられてきた。動物の発情期／排卵周期の検出、モニタリングおよび調整が生殖管理の影響を大きくすることが理解されている一方で、この領域での改善に対するかなりの要求及び熱検出を最大にすることによる生殖効率の改善の見込みが依然として存在し、受胎率はこれらの業界での大きなチャンスになり得る。本明細書に記載する、特許請求される発明は、この満たされていない要求を取り扱う。
【０００６】
排卵周期は多くの研究の対称となってきた。例えば、黄体形成ホルモン（ＬＨ）及び卵巣ホルモン、エストラジオール及びプロゲステロンの分泌のパターンが検討されてきた。集団の個々のメンバーの妊娠可能状態にホルモンをどのように相関付けてよいかを含め、大集団の試料でのこれら及び他のホルモンの測定に関する臨床試験が報告されている。これらの試験に伴う１つの問題点は雌の大集団から得られたデータは個体相互間の大きな変動や同じ個体内での周期間の変動を考慮していない。例えば正常な長さの周期（平均２８日）を報告している個体女性集団において、一部の個体は極めて短期の周期長を示す場合がある。全周期は２０〜２１日に、そして極端な例においては更に短い間隔に圧縮され得る。これらの短縮された周期はほんの時たま、或いはより頻繁に生じると考えられる。これらの短縮化された周期の間の妊娠期は極めて早期に生じる。即ち、妊娠可能性を正確にモニタリングする場合の１つの難題は個体間及び特定の個体の周期間の排卵周期の変動に起因している。
【０００７】
臨床試験から得られたデータは実験室で測定されており、医師又は健康管理専門家により解釈される。精度及び信頼性の基準を維持するためには、実験室及び診療室が認可されていなければならず、そして、アッセイを実施し、品質管理を維持し、そして、結果を解釈するために十分訓練を受けた担当者を雇用しなければならない。即ち排卵モニタリングアッセイの使用の別の障害は、大部分のアッセイが現時点では高度な実験室機器により、そのような機器の使用に熟練した者により行うことができるのみであるという点である。これは対象にとって不都合であり、高価となる。
【０００８】
検体を生理学的状態のバイオマーカーとして測定可能とする種々のイムノアッセイ技法及び検出装置が入手可能である。検体の検出の為に使用される分析系に包含されるものとしては、クロマトグラフィアッセイ系が挙げられる。このようなクロマトグラフィ系はオフィス内診断のためのケア装置の１点として医師及び医療技術者により頻繁に使用されている。イムノクロマトグラフィとして知られている操作法におけるイムノアッセイと組み合わせて使用されるクロマトグラフィ系はアッセイすべき分子に対する抗体に連結されており、コンジュゲートを形成する標識試薬又は粒子の使用を可能にする。次にこのコンジュゲートを試料と混合し、アッセイすべき分子が標本中に存在する場合は、標識試薬連結抗体はアッセイすべき分子に結合し、これによりアッセイすべき分子が存在するという表示を与える。標識試薬又は粒子は色、磁気特性、放射能、別の分子との特異的な反応性、又は、他の物理的又は化学的特性により同定可能であり得る。使用する特定の反応はアッセイすべき分子の性質及び試験すべき試料により変動する。
【０００９】
イムノクロマトグラフィアッセイは一般的に、検出すべき検体−抗体複合体の性質及びその複合体を生成するために必要な工程に応じて、「サンドイッチ」型アッセイ及び「競合」アッセイに分類してよい。抗原検出の場合は、サンドイッチイムノクロマトグラフィ操作法では、検出可能な検体を有する試料を検体に対する抗体と混合する。抗体は典型的には移動性であり、そして標識又は試薬、例えば染料添加ラテックス、コロイド状金属ゾル又は放射性同位体に連結される。抗体−検体複合体を含有する混合物を、捕捉領域を含有するクロマトグラフィ媒体の使用により分離する。この捕捉領域は目的の検体に対する固定化抗体を含有する。検体と標識抗体との複合体がクロマトグラフィ媒体上の固定化抗体の領域にまで到達すると、結合が起こり、そして結合した標識抗体が領域内に局在化する。このことは所望の検体の存在を示している。この技法は定性的な結果を得るために使用できる。試験ストリップに対して実施されたサンドイッチイムノアッセイの例はＧｒｕｂｂ等への米国特許第４，１６８，１４６号；Ｔｏｍ等への米国特許第４，３６６，２４１号、Ｃｈａｎｄｌｅｒ等への米国特許第６，０１７，７６７号及び第５，９９８，２２０号；及びＰｉａｓｉｏ等への米国特許第４，３０５，９２４号に記載されている。他のイムノアッセイ、例えば側方流動アッセイ系及び分子診断の分野における成分もまた記載されている（Ｍ．Ｓｕｒｍａｎｉａｎ，ＩＶＤ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｏｃｔｏｂｅｒ，２００４及びＷ．Ｒ．Ｓｅｉｔｚ，“Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  Ｌａｂｅｌｓ  Ｂａｓｅｄ  ｏｎ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ，”Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１７：１２０−１２６（１９８４）を参照のこと）。
【００１０】
競合イムノアッセイにおいては、固定化された成分が対照として既知量存在し、移動成分は未知量で存在する。未知量の移動成分はその免疫化学的反応特性を妨害しない測定可能な部分の付加によりタグ付けされている同じ成分の既知量で補充される。タグは例えば放射性同位体、発色団、粒子、蛍光団又は酵素を包含できる。固相に免疫化学的に結合したタグ付けされた物質の量は同じ結合部位に関して競合する溶液中の未タグ付き成分の量に依存している。存在する未知成分の量は結合したタグ付き成分の量に反比例している。
【００１１】
イムノクロマトグラフィアッセイに加えて酵素系のクロマトグラフィアッセイも使用できる。抗原−抗体反応の代わりに酵素的に触媒された反応を用いる以外は同様の技法が用いられる。酵素的に触媒された反応は検出可能な生成物を頻繁に形成する。
【００１２】
側方流動診断試験を含めた膜系の診断試験の代表例は当該分野で知られている。Ｍａｙ等への米国特許第５，６０２，０４０号及びＯｓｉｋｏｗｉｃｚ等への米国特許第５，０７５，０７８号を参照のこと。読み取りが通常は光学的に行われる側方流動アッセイ法及び器具類の例は、Ｒｏｓｅｎｓｔｅｉｎへの米国特許第５，５９１，６４５号；Ｓｈｕｌｅｒ等への米国特許第５，７９８，２７３号；Ｍａｙ等への米国特許第５，６２２，８７１号；Ｍａｙ等への米国特許第５，６０２，０４０号；Ｃｈａｒｌｔｏｎ等への米国特許第５，７１４，３８９号；Ｓｙへの米国特許第５，８７９，９５１号；Ｖａｌｋｉｒｓ等への米国特許第４，６３２，９０１号；Ｃｅｒｎｙへの米国特許第５，９５８，７９０号を参照のこと。例えば試料の受信、コンジュゲートの格納及び放出、及び、試料中の検体の有無に関して試験及び対照系統を担持するなどの、所定の機能をそれぞれ有する数種の異なるパッド又は膜の例は全てＫａｎｇ等への米国特許第５，５５９，０４１号、第５，７２８，５８７号及び第６，０２７，９４３号に記載されている。カーボンブラック免疫化学標識又はレポーター分子を有するパッドはＫａｎｇ等への米国特許第５，２５２，４９６号において参照されている。アッセイの他の代表的な例は側方流動ディップスティック試験（Ｒｏｓｅｎｓｔｅｉｎへの米国特許第５，５９１，６４５号）及び例えばＬａｍｂｏｔｔｅ等への米国特許第５，２９５，７５４号、Ｂｒｏｗｎ等への米国特許第４，９１６，０５６号及びＢｒｏｗｎ等への米国特許第５，１４９，６２２号に記載されているフロースルー試験を包含する。
【００１３】
種々の固相試験装置、例えば尿中検体を調べる場合の使用に容易に適合してよいディップスティック及びクロマトグラフィストリップもまた当該分野で知られている。本発明の教示に従った使用に容易に適合できるアッセイの代表例は、例えば、Ｂａｋｅｒ等への米国特許第５，５００，３５０号、Ｂａｋｅｒ等への米国特許第５，６０４，１１０号、Ｓｔｉｓｏへの米国特許第４，９９９，２８５号、Ｆｒｉｅｓｅｎへの米国特許第４，８６１，７１１号、Ｍａｙ等への米国特許第５，６０２，０４０号、Ｍａｙ等への米国特許第５，６２２，８７１号、Ｍａｙ等への米国特許第５，６５６，５０３号、Ｍａｙ等への米国特許第６，１８７，５９８号、Ｍａｙ等への米国特許第６，２２８，６６０号、Ｍａｙ等への米国特許第６，８１８，４５５号、Ｍａｙ等への米国特許出願第２００１０４１３６８号、Ｍａｙ等への米国特許出願第２００１００８７７４号、Ｄａｖｉｓ等への米国特許第６，３５２，８６２号、Ｄａｖｉｓ等への米国特許出願第２００３１４３７５５号、Ｄａｖｉｓ等への米国特許出願第２００３２０７４６５号及びＤａｖｉｓ等への米国特許出願第２００３２１９９０８号に記載されている。
【００１４】
排卵のモニタリングの為に開発された自宅用アッセイは黄体形成ホルモン（ＬＨ）の尿中レベルをモニタリングするためのサンドイッチアッセイの使用に基づいたものを包含する。ＬＨレベルは排卵の約１日前に最高値に達し、そしてレベルの変化は一般的に、ＬＨの変化の測定がカラーコードの付いた標準化されたチャートの上で人間の眼により可視性となるために十分大きい。
【００１５】
しかしながら、検体濃度の変化がそれほど劇的であることは稀であり、このため、データを正確に測定しようとすればより感度の高い機器の使用が必要となる。十分に正確ではないアッセイは特に非専門家による誤解釈を被りやすい。例えば非特許文献１を参照のこと。例えば、単純な目視試験による自宅用試験を用いている女性は、特に自身の卵巣の活動の地震による先入観と試験標示結果とが合致しない場合に他者が試験を異なって解釈すると、試験結果を誤読する可能性がある。絶対的な読み取りによるより定量的なアッセイがこの誤読を防止するためには望ましい。
【００１６】
エストロングルクロニド（Ｅ１Ｇ）及びプレグナンジオールグルクロニド（ＰｄＧ）の自宅用測定のために卵巣モニターを使用する試みが行われている。参照により本明細書に組み込まれる非特許文献２。この研究においては、卵巣モニタリングの結果をラジオイムノアッセイから得られた結果と比較した。報告によれば、周期の５０％において、卵巣モニター試験における尿の偏りが、より信頼性のあるものとして報告されているラジオイムノアッセイと比較してＥ１Ｇの上昇開始の同定において最大３日間の遅れをもたらしている。前出４６９。モニターを使用して得られたＥ１Ｇ値はＲＩＡにより得られたものよりも高値であり、そしてこれはアッセイの必要な感度を得るために必要な比較的大量の尿中の妨害物質及び延長されたインキュベーション時間により生じる偏りに起因するプロフィールの垂直的置き換えに起因するものとして報告されている。前出４７４。
【００１７】
臨床現場において実施されるアッセイの精度に匹敵し、そして簡素かつ便利で費用効率の高い良好な自宅用及びオンサイトの妊娠可能状態アッセイが必要とされている。定量的ストリップの使用は、正確ではあるものの本明細書に記載するもののような定量的ストリップシステムにより与えられる使用機会を有さないという不都合を被っている前出のＢｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｌ．Ｆ．等の記載したもの（非特許文献２）のようなモニターよりもオンサイト及び自宅用の妊娠可能性管理のためのより柔軟なシステムを提供する。そのようなアッセイはかなりの節約をもたらし、そして、卵巣の活動の正確かつ費用効率的な毎日のモニタリングを可能にする。更に、他のストリップシステムより改善された精度を有する定量的自宅用アッセイキットも必要である。本発明は本明細書においてこれら及び他の要求を取り扱う。
【非特許文献１】Ｂｒｏｗｎ  ＪＢ等のＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ＆Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，１５７（４Ｐｔ２）：１０８２−９（１９８７）
【非特許文献２】Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｌ．Ｆ．等、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ６８：４６５−４７６（２００３）
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１８】
（簡潔な要旨）
本明細書及び請求項に記載した本発明は多くの属性及び実施形態、例えば限定しないが、本発明の開示において、そして他の箇所において記載、説明又は参照するものを有する。本発明は本発明の開示に含まれる特徴又は実施形態に限定されず、又それらに制約されるものではなく、それらは説明を目的とするのみであり、制限するものではない。
【００１９】
雌性動物における排卵周期をモニタリングするのに使用するための方法及び装置が包含される。方法及び装置は例えば雌性動物の妊娠可能性を測定するため、及び妊娠可能性管理を提供するために有用な情報を提供する。
【００２０】
１つの態様において、哺乳類（例えばヒト）の妊娠可能性を、体液中の特定の検体を検出することにより測定又は評価する。本明細書に記載する方法及び装置により検出される特定の検体はホルモン、ホルモン誘導体及びホルモン代謝産物、例えばエストロゲン代謝産物及びプロゲステロン代謝産物を包含する。検体は本明細書に記載した免疫学的手段により、又は現在知られているか後に発見される方法により検出できる。
【００２１】
排卵周期をモニタリングするのに有用な適当なホルモン代謝産物は尿中グルクロニドを包含する。検出のための特定のホルモン代謝産物はエストロングルクロニド（Ｅ１Ｇ）、即ちエストロゲン代謝産物、そしてプレグナンジオールグルクロニド（ＰｄＧ）、即ちプロゲステロン代謝産物を包含する。検体は所望の親和性及び特異性によって結合する結合剤に結合することにより検出できる。適当な結合剤は抗体、例えばエストロングルクロニドに対する抗体及びプレグナンジオールグルクロニドに対する抗体を包含する。
【００２２】
１つの実施形態は、（ａ）雌性対象から体液試料を得る工程；（ｂ）試料をエストロゲン代謝産物と結合可能な第１結合剤及びプロゲステロン代謝産物と結合可能な第２結合剤を有する捕捉要素と接触させる工程；（ｃ）該エストロゲン代謝産物及び該プロゲステロン代謝産物の排出速度を定量する工程；（ｄ）及び該エストロゲン代謝産物及び該プロゲステロン代謝産物の相対排出速度に基づいて該雌性対象の排卵周期の状態を決定する工程；を含む、哺乳類の妊娠可能性を決定する方法に関する。相対排出速度は場合により比として表されていてよい。
【００２３】
一部の実施形態においては、結合剤は固相捕捉要素、例えばストリップ、膜等に固定化する。特定の実施形態においては、エストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドをイムノアッセイ手段、例えば限定しないが、本明細書に記載する手順により検出する。更なる特定の実施形態においては、エストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドをイムノアッセイ手段により定量する。
【００２４】
１つ、２つ又はそれより多い検体を、単一の体液試験装置、例えば多数の試験ストリップを読み取ることができる装置を用いて、代替的には、２つ以上の異なる検体の検出のための単一ストリップを読み取ることができる装置により、１つのアッセイで評価又は測定することができる。１つの例示的な実施形態では、エストロングルクロニドン対する抗体及びプレグナンジオールグルクロニドに対する抗体を含む単一のストリップが提供される。検体の検出は例えば所定の閾値に基づいた簡素な陽性又は陰性の形式により達成できる。他の実施形態においては、検体の量を定量する。特定の実施形態においては、検体の排出速度を定量的ストリップ／装置の使用により決定する。特定の実施形態では、常磁性粒子がストリップに包埋又は固定化されている固相試験ストリップを使用する。
【００２５】
別の態様において、例えばエストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドなどの目的の検体を検出できる検体検出器も提供する。特定の実施形態にでは、検体検出器は携帯用であり、そして自宅又は野外の場所での使用に適している。携帯用であるか否かに関わらず、検出器は電子データベースと連絡していてよい。特定の実施形態は１以上のエストロゲン代謝産物及び／又は１以上のプロゲステロン代謝産物に関する履歴及び他のレベル／排出速度の値を含む電子データベースと連絡している携帯用検出器を包含する。
【００２６】
検体検出器の一部の実施形態は側方流動アッセイ形式を利用する。検体検出器の特定の実施形態は検体、例えば限定しないが、エストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドを検出するために常磁性又は超常磁性の粒子を利用する。
【００２７】
別の態様において、妊娠可能性モニタリングシステムを提供する。本発明によるモニタリングシステムは試験ストリップに固定された試料容量を提供する試料分注器を有する妊娠可能性モニターを含んでよい。本発明において提供される妊娠可能性モニターの特定の実施形態は試験ストリップへの調節された試料容量を分注する試料分注器を含む。
【００２８】
一部の実施形態では、調節された尿容量を計算するためにアルゴリズムを使用する。妊娠可能性モニターの実施形態は試料中の検体の有無を検出するためのセンサ、計算を実施するためのプロセッサ、及び外部のデータベース又は内部の格納データベースに連絡するための手段の１以上を包含してよい。
【００２９】
一部の実施形態では、尿由来の特定のホルモン代謝産物の排出速度を決定し、そして特定の検体に関するデータの編集物と比較する。データの編集物は電子データベースの形態であってよく、特定の実施形態では、データの編集物は動物の特定の種に又は特定の個体、又は、個体又は個体群のセット又はサブセットに特に関連するものである。特定のデータベースは種々の選択された条件下で決定されたエストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドの排出速度に関するデータに関する。例えば特定の実施形態では、少なくとも１つのウシ排卵周期に対するエストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドの排出速度を提供する。
【００３０】
特定の実施形態では、特定の検体に関する排出速度を決定又は提供するための方法の部分として特定の時間間隔に渡り尿試料を収集する。一部の実施形態では、尿を少なくとも３時間の期間に渡って収集し、そして尿試料の容量を測定し、そして次に収集期間の時間間隔に相当する規格化された容量に調節する。
【００３１】
特定の実施形態では、尿試料の容量は代謝産物、例えばエストロゲン代謝産物及び／又はプロゲステロン代謝産物の排出速度を決定するよりも前に規格化する。一部の実施形態では、容量を規格化することは、尿容量の偏りの補正のためのコンピュータアルゴリズムを用いながら排出速度を調節することを含む。
【００３２】
別の態様では、雌性動物における妊娠可能性を測定又は定量するため、例えば雌性対象の月経周期内における最適な妊娠可能性に関わる時間枠を決定するため、排卵周期の状態に関して得られた情報を用いる。
【００３３】
本明細書に記載した本発明の実施形態は雌性対象のインビトロの妊娠を実施するための最適な妊娠可能性に関わる時間枠を決定するのに有用である。
【００３４】
本明細書に記載する他の実施形態は分娩後状態に罹患した、又はそれを有することが疑われる雌性対象のモニタリング及び／又は治療に有用である。
【００３５】
本明細書に記載した本発明の実施形態はまた、雌性対象における閉経及び／又は閉経に関連する症状（例えば自然閉経、閉経周辺期、誘導閉経、早期閉経及び閉経後）を検出及び／又は治療するのに有用でもある。
【００３６】
本明細書に記載した本発明の実施形態はまた、閉経に伴うホルモン補充物の投与に有用である。
【００３７】
本明細書に記載した本発明の実施形態はまた、代謝産物及び／又は検体の測定又は癌の検出に有用である。特定の実施形態では、ホルモン代謝産物を特定の癌の検出のためにモニタリングする（例えば乳癌をモニタリングするエストロゲンレベル）。
【００３８】
本発明の実施形態により診断及び／又は治療される他の状態は、不妊に関連する無排卵、原因不明の不妊、閉経症候群（閉経周辺期の月経過多、閉経後出血）、早期閉経、無月経、ホルモン不均衡（特定されず）、リビド低減、慢性疲労、神経質、骨粗鬆症、月経前症候群、排卵出血、機能不全性子宮出血、ホルモン補充療法、外科的閉経症候群、月経過少、過剰刺激卵巣、多嚢胞性卵巣疾患、習慣性流産（現時点で再妊娠）、稽留流産及び切迫流産を包含する。
【００３９】
別の態様において、本発明の実施形態は長いシェルフライフを有する検出装置（例えばホルモン測定用ストリップ）を作製する場合に使用される。
【００４０】
特定の実施形態では、１以上のホルモン代謝産物を１日以上、又は毎日所望の期間又は回数測定する。排出速度を決定又は分析するため、又は、検体レベルを分析するための１以上の閾値を設定するために、提供されるアルゴリズムを用いてよい。一部の実施形態では、特定の検体に対する排出速度はデータベースに連絡している検体検出装置と連絡しているデータベースに格納されている。
【００４１】
本明細書で提供する検体排出速度を決定する１つの方法は、尿容量調節を適用することを含む。特定の実施形態は尿容量の補正を利用する。代替の実施形態においては、例えば、尿容量補正は例えば検体の定量又は検体の排出速度の決定において値を調節するためにアルゴリズムを適用することにより行う。一部の実施形態では、尿試料容量の補正は特定の期間に関連して、又は関連することなく、対象から尿を収集する場合を含め、試料に対して行われる比重決定を参照しながら実施される。一部の実施形態では、尿試料容量補正は、特定の期間に関連して、又は関連することなく、対象から尿を収集する場合を含め、試料の分光分析に基づいて実施される。
【００４２】
別の態様において、本発明の方法を実施するのに使用するためのデータ処理システムが提供される。特定の実施形態は、治療管理が必要な１以上の遠隔地在住対象の生理学的状態をモニタリングする方法に関する。
【００４３】
１つのデータ処理システムにおいて、中央データ処理システムは１以上の対象モニタリングシステムと連絡し、そしてこれよりデータを受信するように構成されている。各対象モニタリングシステムは対象データの受信、格納及び／又は分析の１以上が可能である。対象をモニタリングする方法の例は、以下：分析用に対象から試料を得る工程；対象モニタリングシステムに付随する検体検出器に試料を接触させる工程；検出装置上で検体に相当する測光信号又は電子活性信号を測定する工程；該対象モニタリングシステムと該中央データ処理システムとの間でデータの交換を行う工程；該対象の履歴及び／又は実時間の生理学的状態の評価データを含むコンピュータプログラム製品アウトプットを生成する工程であって、該コンピュータプログラム製品アウトプットが中央データ処理システムと連絡している工程；１以上の対象モニタリングシステムに由来する該対象データを分析する工程；該コンピュータプログラムにより実施される分析に基づいて対象の状態を決定する工程；及び、同定された対象の状態及び／又は１以上の対象に対する治療管理推奨事項を連絡、送信又は表示する工程により実施できる。
【００４４】
特定の実施形態では、対象モニタリングシステムと組み合わせた側方流動アッセイシステムに適する検出装置を用いて、試料に対してアッセイを実施する。対象モニタリングシステムにおいて使用するための検出装置は、特定の検体から生じる測光信号又は電子活性信号を検出できる場合がある。
【００４５】
一部の実施形態では、対象データは対象モニタリングシステムから例えば中央データ処理システムに送信されることにより対象の臨床及び／又は生理学的状態を決定する。対象モニタリングシステムから送信された特定の対象データは、対象の臨床又は生理学的状態を決定するために、例えば中央データ処理システムへのデータの送信と実質的に同時に分析される。他の態様では、対象の臨床又は生理学的状態の決定は、コンピュータ実行可能なアルゴリズムを用いた、液容量の偏りに関する容量決定的な調節を伴う又は伴わない体液排出速度のレシオメトリック決定を包含する。
【００４６】
一部の実施形態では、方法は例えば中央データ処理システムと連絡している対象又は他の対象の履歴及び実時間の生理学的状態の評価データを含むコンピュータプログラム製品アウトプット（例えばデータベース）の生成を包含する。
【００４７】
一部の実施形態では、方法は、例えば中央データベース又はデータ処理システムに、そして例えば医師又は指定された健康管理専門家のコンピュータ又は他のデータ受信装置に、１以上の対象モニタリングシステムから送信された対象データを送信及び／又は分析することを包含する。特定の実施形態では、例えば中央データ格納及び／又は処理システムに１以上の対象モニタリングシステムから送信された対象データを、医師又は指定された健康管理専門家のコンピュータ又は他のデータ受信装置へのその送信と実質的に同時に、送信及び／又は分析することを包含する。
【００４８】
一部の実施形態では、方法は個々の対象の臨床及び／又は生理学的状態を同定するためのコンピュータプログラムにより実施される分析に基づいて対象の臨床又は生理学的状態を決定することを包含する。特定の他の実施形態において、プログラムはより広範な対象の群及び／又は集団からの臨床又は生理学的状態の評価データに対して比較する場合の潜在異常を評価する。
【００４９】
一部の実施形態では、方法は中央データ格納／処理システム及び／又は該当する対象モニタリングシステムと連絡した少なくとも１の遠隔地在住クライアントを介して各該当する対象に関する同定された対象の臨床及び／又は生理学的状態及び治療管理推奨事項を連絡、送信及び／又は表示することの１以上を含む。
【００５０】
一部の実施形態では、方法は個々の履歴データ又は対象集団の履歴データを用いて統計学的比較に基づいて個々の妊娠可能状態評価及び／又は妊娠可能性終点の妊娠可能状態予測の精度を最適化することを含む。一部の実施形態では、方法はより広範な対象の群又は集団からの臨床又は生理学的状態の評価データに対して比較する場合の個々の対象の臨床及び／又は生理学的状態に関連する情報を送信することを含む。
【００５１】
一部の実施形態では、方法は中央データ処理システム及び／又は該当する対象モニタリングシステムと連絡している少なくとも１の遠隔地在住クライアントを介して各該当対象に関する同定された対象の臨床及び／又は生理学的状態及び治療管理推奨事項を連絡、送信及び／又は表示することを含む。一部の実施形態では、方法はより広範な対象の群及び／又は集団からの臨床又は生理学的状態の評価データに対して比較する場合の潜在異常を包含する個々の対象の臨床又は生理学的状態及び臨床及び／又は生理学的問題に関連する情報を送信することを含む。
【００５２】
別の実施形態では、方法は対象モニタリングシステム上、又はこれを用いた検出に適する検出装置上の試料の分析及び捕捉のために対象から試料を得ることにより実施される。検出装置を評価し、そして１以上の検体に対応する信号を検出装置にて又はこれを用いて測定する。得られた対象データを分析して対象の臨床又は生理学的状態を決定する。対象データは好ましくは短期間内で、例えば中央データ処理システムへの対象データの送信と実質的に同時に対象モニタリングシステムから送信された対象データを分析する等により分析する。中央データ格納又は処理システムと連絡している１以上の対象の履歴及び／又は実時間の生理学的状態の評価データを含むコンピュータプログラム製品アウトプット（例えばデータベース）を生成させる。対象データは１以上の対象モニタリングシステムから、中央データ格納又は処理システムに、そして、医師又は指定された健康管理専門家のコンピュータ又は他のデータ受信／表示装置に送信される。好ましくは、対象データは１以上の対象モニタリングシステムから、中央データ格納又は処理システムに、そして、医師又は指定された健康管理専門家のコンピュータ又は他のデータ受信／表示装置に、短期間内に、例えば実質的に同時に送信される。対象の臨床又は生理学的状態は、より広範な対象集団からの臨床又は生理学的状態の評価データに対して比較する場合の潜在異常を含め、個々の対象の臨床又は生理学的問題を同定するために、コンピュータプログラムにより実施される分析に基づいて決定する。対象の臨床又は生理学的状態、例えば何れかの検出された異常は、対象の妊娠可能性を示すものであってよい。より広範な対象集団からの臨床又は生理学的状態の評価データに対して比較する場合の潜在異常の同定などの、個々の対象の臨床又は生理学的な問題を同定することを含め、１以上の対象の臨床又は生理学的状態をコンピュータプログラムにより実施される分析に基づいて決定する。対象の臨床又は生理学的状態はデータの検討又は分析の実施に基づいて決定してよい。このことは、より広範な対象の群及び／又は集団からの臨床又は生理学的状態の評価データに対して比較する場合の潜在異常の同定を含め、個々の対象の臨床及び／又は生理学的問題の同定を包含し得る。対象の臨床及び／又は生理学的状態は連絡、送信及び／又は表示される。治療管理推奨事項は中央データ格納又は処理システム及び／又は該当する対象モニタリングシステムと連絡している１以上の遠隔地在住対象に対して行うことができる。方法は典型的には例えば１以上の対象モニタリングシステムに連絡し、それからデータを受信するように構成された中央データ処理システムを用いることにより実施され、その場合、各対象モニタリングシステムは対象データの受信、格納及び分析の１以上が可能である。
【００５３】
特定の実施形態では、データベースは生理学的データ及び挙動データよりなる群から選択されるデータを含有する。他の実施形態では、データベースは履歴及び実時間の生理学的状態の評価データを含む。他の実施形態では、データベースは履歴及び実時間の妊娠可能状態の評価データを含む。特定の態様において、データベースは履歴及び実時間の尿中代謝産物排出速度に関するデータを含む。特定の他の実施形態では、データベースは尿中代謝産物排出速度に関連するレシオメトリック決定に関する履歴データ及び実時間のデータを含む。更に別の態様において、データベースは履歴及び実時間の例えば尿中グルクロニド排出速度に関するデータを含む。更に別の実施形態では、データベースは尿中代謝産物、血中グルコース測定、体温測定、病気の有無、及び食餌、運動及びストレスに関係する１以上の評価データに関連する生理学的データを含有する。特定の実施形態では、データベースは全般的健康状態、食餌、運動及び服薬；最終測定の日時情報；及び活動養生法の規定された経過に関するデータを含有する。一部の実施形態では、投薬相互作用情報のデータベースは複数の医薬の対象の使用に関連する情報に関するデータベースを対象が照会できるように構成されている。他の実施形態では、投薬相互作用情報のデータベースは、各対象に関する特定の履歴的妊娠可能性データプロフィール及び／又は対象の群及び／又は集団に関する履歴的妊娠可能性プロフィールに関するデータベースを対象が照会できるように構成されている。
【００５４】
１つの態様において、アルゴリズムは、より広範な対象の集団、群及び／又は対象からの臨床及び／又は生理学的状態の評価データに対する比較に基づいて対象の臨床及び／又は生理学的状態を評価する。他の態様において、アルゴリズムは対象によりシステムに入力されたデータに適用されるものとしての医師又は他の健康管理専門家の処方に従って対象の排卵変動に対する調節を計算する。別の態様において、アルゴリズムは特定の対象の生殖状態に基づいた特定の妊娠可能性養生法の効力を最適化する。更に別の態様において、アルゴリズムは対象入力データに基づいて対象の自己モニタリング及び妊娠可能性管理養生法に対する自動調節を行うように構成されている。
【００５５】
特定の実施形態では、アルゴリズムは対象の妊娠可能性又は排卵周期に影響する可能性がある他の非妊娠可能性適応症に対する併用療法の作用の評価に有用なデータベースを含有する。
【００５６】
特定の実施形態では、アルゴリズムは医師又は他の健康管理専門家からの相互作用的インプットが回顧的及び／又は補充的な調節養生法を特定できるようにする。
【００５７】
特定の実施形態では、対象の妊娠可能性管理データをモニタリングするのに適する対象モニタリングシステムは、常磁性検体信号を検出することができる。
【００５８】
一部の実施形態では、システム連絡を送信機、警報器、受信機、電話、モデム、携帯電話、ケーブル、インターネット接続、ワールドワイドウェブリンク、テレビ、閉回路モニター、コンピュータ、表示画面、留守番電話、ファクシミリ機器又はプリンタを含む群から選択される装置により実施する。
【００５９】
本明細書に提供する本発明の多大な利点はそれらの高度な精度、高水準な利用性及び使用し易さである。更に、本明細書に提供する特定の実施形態は極めて安定であり、長いシェルフライフを有する。このことは老化、熱又は湿度、又は他の物理的特性により影響されない非常に安定なプラットホームを与える。診断薬（例えばストリップ）は、結果を得るためには、即時に、並びに、数日又は数ヶ月後に読み取ることができる。即ち特定の実施形態では、女性が旅行中（例えばキャンプ、船旅等）に試験を行い、その後帰宅時に、全ての試験を読み取ることができ、そしてＥＩＧ又はＰＤＧのレベルを不在期間全体に渡って観察することができる。このことは、例えば周期、妊娠可能性に関する療法、又はホルモン補充療法をモニタリングするために使用できる。
【００６０】
本発明の試験のこの新しい形態は、新規であり、必要性が大きい。使用し易さ及びこの安定性は、コンプライアンスを助長し、現状技術よりも遥かに好都合で効率的なプロトコルを与える。更に別の好都合な点は、手持ち式の読み取り機を使用する場合に使用し易さが更に増強される点である。これにより、結果を医師が受信でき、そして医師の推奨を遠隔地から行うことができるように、都合の良い時に何時でも自己試験を実施することができるようになる。或いは、例えば、推奨事項は、例えば最大妊娠可能性の期間を教示するべく、コンピュータより行ってよい。
【００６１】
本明細書に記載する本発明の多大な利点はそれらの高い精度、高水準な利用性及び使用し易さである。更に、本明細書に提供する特定の実施形態は極めて安定であり、長いシェルフライフを有する。このことは老化、熱又は湿度、又は他の物理的特性により影響されない極めて安定なプラットホームを与える。診断薬（例えばストリップ）は、結果を得るためには、即時に、並びに、数日又は数ヶ月後に読み取ることができる。即ち特定の実施形態においては、女性が旅行中（例えばキャンプ、船旅等）に試験を行い、その後帰宅時に、全ての試験を読み取ることができ、そしてＥＩＧ又はＰＤＧのレベルを不在期間全体に渡って観察することができる。このことは、例えば周期、妊娠可能性に関する療法、又はホルモン補充療法をモニタリングするのに使用できる。
【００６２】
本発明の試験のこの新しい形態は、新規であり、必要性が大きい。使用し易さ及びこの安定性は、コンプライアンスを助長し、現状技術よりも遥かに好都合で効率的なプロトコルを与える。更に別の好都合な点は、手持ち式の読み取り機を使用する場合に使用し易さが更に増強される点である。これにより、結果を医師が受信でき、そして医師の推奨を遠隔地から行うことができるように、都合の良い時に何時でも自己試験を実施することができるようになる。或いは、例えば、推奨事項は、例えば最大妊娠可能性の期間を教示するべく、コンピュータより行ってよい。
【００６３】
本明細書及び請求項に記載した本発明のこれら及び他の態様及び実施形態は、出願及び請求項から、そしてその全体に渡って明確化され、その全てはその書面による説明の部分と見なされる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６４】
（詳細な説明）
本発明の実施においては当業者の知る分子生物学（例えば組み換え技法）、微生物学、細胞生物学、生化学、核酸化学及び免疫学の種々の従来の技法を使用してよい。そのような技法は文献において詳細に説明されており、そして限定することなく例示すればＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：  Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ．，第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋ等、１９８９）及びＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：  Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ．，第３版（Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｒｕｓｓｅｌ，２００１）、本明細書では総称して個々に“Ｓａｍｂｒｏｏｋ”；ＯＬＩＧＯＮＵＣＬＥＯＴＩＤＥ  ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ（ＭＪ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；ＡＮＩＭＡＬ  ＣＥＬＬ  ＣＵＬＴＵＲＥ（ＲＪ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ＆ＣＣ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；ＧＥＮＥ  ＴＲＡＮＳＦＥＲ  ＶＥＣＴＯＲＳ  ＦＯＲ  ＭＡＭＭＡＬＩＡＮ  ＣＥＬＬＳ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ＆Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ等編、１９８７，２００１年までの補遺を包含）；ＰＣＲ：  ＴＨＥ  ＰＯＬＹＭＥＲＡＳＥ  ＣＨＡＩＮ  ＲＥＡＣＴＩＯＮ，（Ｍｕｌｌｉｓ等編、１９９４）；ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ等編、１９９１）；ＴＨＥ  ＩＭＭＵＮＯＡＳＳＡＹ  ＨＡＮＤＢＯＯＫ（Ｄ．Ｗｉｌｄ編、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ  ＮＹ，１９９４）；ＢＩＯＣＯＮＪＵＧＡＴＥ  ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ（Ｇｒｅｇ  Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６）；ＭＥＴＨＯＤＳ  ＯＦ  ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＡＮＡＬＹＳＩＳ（Ｒ．Ｍａｓｓｅｙｅｆｆ，Ｗ．Ｈ．Ａｌｂｅｒｔ及びＮ．Ａ．Ｓｔａｉｎｅｓ編、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ：  ＶＣＨ  Ｖｅｒｌａｇｓ  ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ  ｍｂＨ，１９９３），Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ及びＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９９９）ＵＳＩＮＧ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：  Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（本明細書では総称して個々にＨａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ），Ｂｅａｕｃａｇｅ等編、ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＮＵＣＬＥＩＣ  ＡＣＩＤ  ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２０００）；及びＡｇｒａｗａｌ．編、ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＦＯＲ  ＯＬＩＧＯＮＵＣＬＥＯＴＩＤＥＳ  ＡＮＤ  ＡＮＡＬＯＧＳ，ＳＹＮＴＨＥＳＩＳ  ＡＮＤ  ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，１９９３）が包含される。
【００６５】
特段の記載が無い限り、以下の用語は、本明細書及び添付請求項において使用する場合には以下の意味を有する。以下、又は明細書中の他の箇所において定義しない用語は、当該分野で知られているその意味を有するものとする。
【００６６】
「検体」とは本明細書においては、試験試料中に存在し得る検出すべき物質である。検体は天然に存在する特異的結合メンバー（例えば抗体）が存在するか、又は、特異的結合メンバーを製造できる何れかの物質であってよい。即ち、検体はアッセイにおいて１以上の特異的結合メンバーに結合できる物質である。「検体」とは又、何れかの抗原性物質、ハプテン、抗体及びこれらの組み合わせを包含する。特異的結合対のメンバーとして、検体は、例えば炭水化物の決定への特異的結合対のメンバーとしてのレクチンの使用等、天然に存在する特異的結合相手（対）により検出できる。検体は蛋白質、ペプチド、アミノ酸、ホルモン、ステロイド、ビタミン、薬品（治療目的及び不法目的で投与されるものを包含する）、細菌、ウィルス及び上記物質の何れかの代謝産物又はそれに対する抗体を包含する。このような抗体の製造の詳細、及び特異的結合メンバーとしての使用の適切性は当該分野で良く知られている。当業者であれば又、選択された検体の体液中の「濃度」は絶対的な項として測定される必要は無いことも理解されるものである。検体濃度は例えば体液の同じ試料中に存在する参照検体の濃度に対して相対的な範囲又は比として等、相対的な項として測定してよい。一般的に、実際の濃度に対して相対的な数的データに変換可能である信号を与える様式において検体をアッセイすれば十分であり、その結果、そのようなデータは実際の濃度において有意な変化が起こっているか否かを決定するために周期での異なる段階において得られた同様のデータと比較することができる。従って、以下に示す明細書及び請求項が検体の「濃度」又は「決定」に言及する場合は、この表現は広範に理解されなければならない。
【００６７】
本明細書においては、以下のアミノ酸（及びその残基）に対して以下略語を使用することができる：アラニン（Ａｌａ、Ａ）；アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）；アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）；アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）；システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）；グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）；グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）；グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）；ヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）；イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）；ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）；リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）；メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）；フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）；プロリン（Ｐｒｏ、Ｐ）；セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）；スレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）；トリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）；チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）；及びバリン（ＶａＬ、Ｖ）。
【００６８】
「アミノ酸配列」という用語はオリゴペプチド、ペプチド、ポリペプチド又は蛋白質の配列、これらの何れかのフラグメント、及び天然に存在する、又は合成の分子、並びに例えばコンピュータと組み合わせた使用に適する上記の電子又は他の表示を指す。
【００６９】
本明細書では、測光的な検体信号は、例えば可視光、蛍光及びリン光を含め、当該分野で知られた方法及び手段により可視及び不可視の両方により検出可能なスペクトル波長の透過により特徴付けられる信号を包含する。
【００７０】
本明細書では、電子活性である検体信号は電場及び磁場を検出するための当該分野で知られた方法及び手段により検出可能な電場及び磁場の発生により特徴付けられる信号を包含する。代表的な検体信号は例えば磁場における常磁性粒子及び／又は超磁性粒子からの信号を包含する。
【００７１】
「抗体」という用語は最も広範な意味において使用し、所望の生物学的活性を示す限り、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体、及びアゴニスト及びアンタゴニスト抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、抗体フラグメント（例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ）、及び、抗体誘導体（例えば組み換え又は合成）も包含する。これらの抗体、結合部分又はそのフラグメント、ヒンジ部分又はそのフラグメント、及びエフェクタ領域又はその部分は全て本発明の構成において有用である。
【００７２】
「抗体フラグメント」という用語は完全長抗体の一部分を指し、抗原結合又は可変領域を包含する。抗体フラグメントの例はＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖフラグメントを包含する。抗体のパパイン消化は各々が単一の抗原結合部位を有するＦａｂフラグメントと称される２つの同一の抗原結合フラグメント及び残余のＦｃフラグメントを生成する。ペプシン処理は抗原を交差結合することができる２つの抗原結合フラグメントを有するＦ（ａｂ’）２フラグメント及び残余の他のフラグメント（ｐＦｃ’と称する）を得る。本明細書においては、抗体に関する「結合フラグメント」とはＦｖ、Ｆ（ａｂ）及びＦ（ａｂ’）２フラグメント及びその機能的突然変異体及び類縁体を指す。Ｆ（ａｂ’）とも表記されるＦａｂフラグメントもまた、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ’フラグメントは抗体ヒンジ領域からの１以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端における数残基の付加によりＦａｂフラグメントとは異なっており、Ｆａｂ’−ＳＨは本明細書においては定常ドメインのシステイン残基が遊離のチオール基を有するＦａｂ’に関する表記である。Ｆ（ａｂ’）フラグメントはＦ（ａｂ’）２ペプシン消化産物のヒンジシステインにおけるジスルフィド結合の切断により生成される。抗体フラグメントの別の化学的カップリングも当該分野で知られている。
【００７３】
「結合蛋白質」は抗体、モノクローナル抗体、抗体フラグメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖフラグメントを包含する）、線状抗体、一本鎖抗体分子、抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体、又は他の抗原結合蛋白質を包含し、その何れもキメラ、ヒト化又は他で対象において低免疫原性となるように改変されたものであってよい。
【００７４】
「モノクローナル抗体」という用語は本明細書においては、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を指し、即ち集団を構成する個々の抗体は少量において存在し得る可能な天然に生じる突然変異を除き同一である。モノクローナル抗体は例えばＫｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５（１９７５）に初めて記載されたハイブリドーマ法により作製してよく、或いは、例えば当該分野で知られる通り組み換え法により作製してよい。モノクローナル抗体はまたＣｌａｃｋｓｏｎ等、Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８（１９９１）並びにＭａｒｋｓ等、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載の技法を用いてファージ抗体ライブラリから単離してもよい。
【００７５】
一般的に、「生物学的に活性な」という用語は特定の機能を有する分子を指す。機能的活性は天然に存在する分子より低値、高値、又は概ね同じであってよい。
【００７６】
本明細書においては、「誘導体」という用語はポリペプチド、ポリヌクレオチド又は他の分子の化学的修飾を包含する。本発明に関する場合、「誘導体ポリペプチド」、例えばグリコシル化、ｐｅｇ化又は何れかの同様のプロセスにより修飾されたものは、少なくとも１の活性を保持している。例えば、結合蛋白質の「誘導体」という用語は、例えばポリエチレングリコール分子、糖類、ホスフェート、及び／又は他のこのような分子の１以上の付加により化学的に修飾されている結合蛋白質、変異体又はフラグメントを包含する。ポリペプチドはまた、例えば基準ポリペプチドと相対比較してアミノ酸の置換、欠失又は挿入を有することにより基準ポリペプチドから「誘導され」ていてよい。したがって、ポリペプチドは野生型ポリペプチドから、又は何れかの他のポリペプチドから「誘導され」ていてよい。本明細書においては、ポリペプチドを含め、化合物は、特定の原料から、例えば特定の生物、組織型から、又は、特定のポリペプチド、核酸又は特定の生物又は特定の組織型に存在する他の化合物から、「誘導され」ていてもよい。
【００７７】
本明細書においては、「妊娠期」という表現は、精子及び卵子の正常な生存性のために、交接により妊娠が可能である排卵事象に及ぶ、雌性月経周期の間隔を意味するために使用する。
【００７８】
本明細書に記載する結合蛋白質に関する「高い親和性」という用語は少なくとも約１０６Ｍ−１又は１０７Ｍ−１、好ましくは少なくとも約１０８Ｍ−１、より好ましくは少なくとも約１０９Ｍ−１又はそれより高値、更に好ましくは少なくとも約１０１０Ｍ−１又はそれより高値、例えば約１０１２Ｍ−１又はそれより高値までの会合定数（Ｋａ）を指す。
【００７９】
「指示試薬」は本明細書に記載されるものを含め、本発明において有用な種々のアッセイ形式において使用してよい。「指示試薬」は検体に対する特異的結合メンバーにコンジュゲート（結合）された外的手段により検出することができる測定可能な信号を発生することができる「信号発生化合物」を含む。「特異的結合メンバー」は本明細書においては、特異的結合対のメンバーを意味する。即ちこれは、分子の一方が化学的又は物理的手段を介して第２分子に特異的に結合する２つの異なる分子である。検体に対する特異的結合対の抗体メンバーであることに加えて、指示試薬はまた、何れかのハプテン−抗ハプテン系、例えばビオチン又は抗ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン又はビオチン、炭水化物又はレクチン、相補ヌクレオチド配列、エフェクタ又は受容体分子、酵素コファクタ及び酵素、酵素阻害剤又は酵素等を含め、何れかの特異的結合対のメンバーであることもできる。免疫反応性の特異的結合メンバーは、サンドイッチアッセイの場合のように検体か、又は、競合アッセイの場合のように捕捉試薬の何れかに、又は、間接的アッセイの場合のように補助的な特異的結合メンバーに結合することができる、抗体、抗原又は抗体／抗原複合体であることができる。
【００８０】
本明細書においては、「インターネット」という用語は「イントラネット」などの「コンピュータネットワーク」という用語を組み込んでおり、そして、インターネットへのアクセスに言及する場合は常時、直接接続されたコンピュータネットワークにも同様にアクセスすることを意味していると理解しなければならない。本明細書においては、「コンピュータネットワーク」という用語は公的にアクセスできるコンピュータネットワーク及びプライベートのコンピュータネットワークを組み込んでおり、そしてモデムダイアルアップ接続も支援すると理解しなければならない。
【００８１】
「単離された」分子（例えば、ポリペプチド又はポリヌクレオチド）はその本来の環境の外部に存在するか、又はその本来の環境（例えば天然に存在する場合は天然環境）から取り出されている分子を指す。例えば生存している動物中に存在する天然に存在するポリヌクレオチド又はポリペプチドは単離されていないが、天然系における共存物質（例えば蛋白質、脂質、炭水化物、核酸）の一部又は全てから分離されている同じポリヌクレオチド又はポリペプチドは単離されている。
【００８２】
「リガンド」という用語は本明細書においては、抗原、抗体、ハプテン、ホルモン及びその受容体、デオキシリボ核酸、及び、対応する特異的結合物質を与えることができる他の有機物質を指す。
【００８３】
治療目的の「哺乳類」はヒト、家畜及び牧場動物、非ヒト霊長類及び動物園、協議用又は愛玩用の動物、例えばイヌ、ウマ、ネコ、ウシ等を含め、哺乳類に分類される何れかの動物を指す。
【００８４】
「試料」という用語は本明細書に記載する本発明の方法により試験できる生物学的な試料を包含し、そしてヒト及び動物の体液、例えば歯肉滲出液、汗、皮脂、涙液、膣液、全血液、血清、血漿、脳脊髄液、尿、リンパ液及び呼吸系、腸及び泌尿器系の種々の外部への分泌液、涙液、唾液、乳汁、白血球、骨髄腫等、生物学的な液、例えば細胞培養上澄み、固定組織標本及び固定細胞標本を包含する。例えば本明細書に記載するアッセイ形式を用いて希釈および試験できる何れの物質も本発明の範囲内に包含される。
【００８５】
意図される種々の「信号発生化合物」（標識）は発色団、触媒、例えば酵素、発光化合物、例えばフルオレセイン及びローダミン、化学発光化合物、放射性元素、及び直接可能性標識を包含する。酵素の例はアルカリホスファターゼ、セイヨウワサビパーオキシダーゼ、ベータガラクトシダーゼ等を包含する。特定の標識の選択は重要ではないが、自身で、又は、別の物質１つ以上と組み合わせて信号を発生することができる。標識は又、可視性標識、例えばコロイド状金、着色ラテックス粒子、又は不可視性標識、例えば常磁性粒子（ＰＭＰ）、例えば超常磁性粒子、又は抗体、もしくは認識標識の粒子へのコンジュゲーションを可能とする表面特性を有する他のＰＭＰであることもできる。
【００８６】
「治療有効量」という用語は例えば研究者、獣医、医学博士又は医師により探求されている例えば組織、系、動物又はヒトにおける所望の応答を示す対象化合物の量を意味する。「治療」とは、治療的な処置及び予防的又は防止的な対策の両方を指す。治療の必要な者とは、既に状態を有しているもの、並びに状態を防止又は促進すべきか、又はその進行を停止又は緩徐化又はモニタリングすべき者を包含する。
【００８７】
１つの態様において、本発明は雌性動物（例えば哺乳類）における排卵周期をモニタリングすることに関する。当業者の知る通り、本発明は方法、コンピュータプログラム製品、装置、データ処理システム又はキットとして具現化してよい。本発明の種々の態様から与えられる情報は、例えば雌性哺乳類の妊娠可能性を測定するのに有用であり、そのことは更に妊娠可能性の増強、又は、受胎防止に有用である。本発明の１つの態様は体液中の特定の検体を検出することにより哺乳類（ヒトを含む）の妊娠可能性を測定することを包含する。
【００８８】
血液、歯肉滲出液、糞便物質、乳汁、粘膜、汗、皮脂、涙液、尿、唾液及び膣液を包含する種々の体液を試験してよい。特定の体液が特定の動物種に対して好ましい場合があり、２種以上の体液を分析できる。本明細書に記載する方法、キット及び装置は医学的試験操作法の実施に熟練していない者により好都合に使用できる。一部の実施形態において、それらは携帯可能であるため、自宅用で、又は、特定の動物が位置する環境において使用できる。体液がヒト対象由来である場合、試料は対象自身により、又は別の者により採取できる。或いは、試料は直接の人的関与無く、例えば自動収集装置又は処理の一部として採取される。
【００８９】
検体濃度は絶対的な項として、又は相対的な項として、例えば体液の同じ試料中に存在する参照検体の濃度に対して相対的な比として測定してよい。検体は例えば当該分野で知られた免疫学的操作法により検出できる。本発明における目的の検体は例えばホルモン、ホルモン誘導体、及びホルモン代謝産物、例えばエストロゲン代謝産物及びプロゲステロン代謝産物（例えば妊娠可能性を指示するもの）を包含する。
【００９０】
検出され得るエストロゲン代謝産物の例は、エストロン３−スルフェート、２−ヒドロキシエストロン、４−ヒドロキシエストロン、２−メトキシエストロン、４−メトキシエストロン、２−メトキシエストロン３−スルフェート、２−メトキシエストロン３−グルクロニド、１６アルファ−ヒドロキシエストロン、エストラジオール−１７α、エストラジオール１７β、１６−グルクロニド−エストリオール；エストラジオール−１７ベータ３−グルクロニド；エストラジオール−１７ベータ３−スルフェート、２−ヒドロキシ−エストラジオール−１７β、２−メトキシ−エストラジオール−１７β、２−メトキシエストラジオール−１７ベータ３−スルフェート、２−メトキシ−エストラジオール−１７ベータ３−グルクロニド、６β−ヒドロキシ−エストラジオール−１７β、２−メトキシエストラジオール、１７−エピエストリオール、２−ヒドロキシエストラジオール、１６−ケトエストラジオール、１６β−ヒドロエストロン、１６−エピエストリオールを包含する。特定の実施形態において、エストロゲン及びその代謝産物は例えばエストラジオール、エストロン、エストリオール、２（ＯＨ）エストロン、４ヒドロキシ−エストロン、１６α−ヒドロキシエストロン、２−メトキシエストロン及び４−メトキシエストロンを包含する。検出に特に適しているエストロゲン代謝産物はエストロングルクロニドである。
【００９１】
特定の実施形態に関する目的の検体はプロゲステロン及びプロゲステロン代謝産物を包含する。プロゲステロンの主な尿中代謝産物は、例えば、５β−プレグナン−３α、２０α−ジオールグルクロニドを包含する。プロゲステロンの血漿中代謝産物は、例えば、５β−プレグナン−３α−オール−２０−１−（５β−プレグネノロン）及び５α−プレグナン−３α−オール−２０−１−（５α−プレグネノロン）を包含する。検出に特に適しているプロゲステロン代謝産物はプレグナンジオールグルクロニド（ＰｄＧ）である。
【００９２】
結合剤
目的の検体は本明細書に記載する結合剤に対して所望の親和性で結合することができる。適当な結合剤は抗体又はそのフラグメント、リガンド及び結合剤の対、受容体等を包含する。特定の実施形態はエストロングルクロニドと結合できる抗体又はそのフラグメントを含む第１結合剤、及び、プレグナンジオールグルクロニドと結合できる抗体又はそのフラグメントを含む第２結合剤を有する。エストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドは例えば結合剤として機能するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体を使用することにより検出してよい。
【００９３】
エストロゲン代謝産物の検出に適当な抗体は例えばマウス抗エストロン３グルクロニドモノクローナル抗体（未コンジュゲート、クローンＭ７０２１９３１、Ｆｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ製）；マウス抗エストロンスルフェート（ＥＳ）モノクローナル抗体（未コンジュゲート、クローンＭ５６２６１、Ｆｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ製）；及び抗エストロン３グルクロニドモノクローナル抗体（未コンジュゲート、クローン９．Ｆ．２５、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ．，Ｓｗａｍｐｓｃｏｔｔ製、ＭＡ０１９０７）を包含する。プロゲステロン代謝産物の検出に有用な代表的な抗体は、例えば、抗プレグナンジオール−３−アルファ−グルクロニドモノクローナル抗体、未コンジュゲート、クローン８．Ｆ．２３３（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ．，Ｓｗａｍｐｓｃｏｔｔ，ＭＡ０１９０７）を包含する。
【００９４】
Ｅ１Ｇに対して特に適している抗体は文献に記載されている。例えば、各々参照により本明細書に組み込まれるＬｅｗｉｓＪＧ等、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ５９（４）２８８−１９１（１９９４）及びＨｅｎｄｅｒｓｏｎＫ．Ｍ．等、Ｃｌｉｎ  Ｃｈｉｍ  Ａｃｔａ．Ｄｅｃ２９；２４３（２）：１９１−２０３（１９９５）を参照のこと。ＰｄＧに対して特に適している抗体は市販されている（Ｅａｓｔ  Ｃｏａｓｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｎｏｒｔｈ  Ｂｅｒｗｉｃｋ，Ｍａｉｎｅ）。
捕捉要素
本発明は、本明細書に記載するか当該分野で知られたものを含め、検体（例えばホルモン及びホルモン代謝産物）を固定化又は捕捉するための種々の機能的手段を使用してよい。結合剤は１以上の捕捉要素に固定化又は別途結合させてよい。捕捉要素は好ましくは固相に会合させるが、液相の捕捉要素を使用してもよい。適当な捕捉要素は多孔性物質、例えばガラス繊維、膜、紙、ストリップ、パッド等を包含する。適当な膜はナイロン、ニトロセルロース、ポリエステル材料等を包含する。
【００９５】
特定の実施形態では、雌性動物の排卵周期をモニタリングするのに特に適している試験ストリップ及びキットが提供される。単一の側方流動ストリップなどの単一のストリップ上に１、２又はそれより多い検体を捕捉してよい。例えば、一部の実施形態では、単一の捕捉要素（例えばストリップ）が１以上の検体を検出できるように、１より多い抗体を単一の捕捉要素に固定化してよい。抗体又は他の結合剤を検出要素にコンジュゲート又は会合させてよい。１つの実施形態において、エストロングルクロニドに対する抗体及びプレグナンジオールグルクロニドに対する抗体を含む単一のストリップが提供される。
【００９６】
複数のストリップ（例えば２つ以上のストリップ）に対して試験を実施できる単一の体液試験装置、又は、単一のストリップ上で独立して２以上の検体を検出する装置を用いて行うアッセイを含め、単一のアッセイにおいて１つ以上の検体を測定できる。１つの実施形態はエストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドを検出及び定量するための単一の定量的試験ストリップに関する。２種以上の異なる検体を同じ試料液体中で検出する実施形態においては、各検体の検出のための効率を最大限にするように均衡された反応条件を有することが望ましい。
【００９７】
１つの実施形態において、第１検体のためのストリップアッセイは第１検体に対して特異的な抗体を含む検出のための標識された粒子を使用する。ストリップは固定化された検体又はその類縁体を含む検出領域を有する。各標識された粒子は複数の同一の抗体分子を含んでよい。各粒子上の特定の検体に対する生物学的に活性な抗体の量を標準化できる。検出領域における検体又は検体類縁体の濃度は粒子上の抗体の有効濃度（モル濃度）の過剰量でなければならない。試験において使用できる粒子−標識抗体の量は試料中の予測される検体濃度に対して過剰量でなければならない。これらのレベルは、試料中の遊離の検体の存在が粒子上の抗体への遊離の検体の結合の有意なレベルをもたらし、これにより検出領域内の固定化された検体／類縁体への粒子標識の結合を抑制するように調節することができる。平均の粒子は、検出領域における粒子の結合を確保するために十分な数の活性な抗体分子であるが、この結合に対して試料中の検体の存在が限定的な作用を有するような量において有することが望ましい場合がある。従って、本実施形態では、検出領域において粒子が結合することになる程度は試料液体中の検体の濃度に反比例する。
【００９８】
ストリップアッセイの特定の実施形態では、液体試料が粒子標識物質に接触してそれを検出領域まで運ぶように、粒子標識抗体を検出領域から上流に配置させる。このアッセイでは、遊離の検体と粒子標識抗体との間の潜在反応が、これらの試薬が検出領域に到達するよりも前に、少なくとも実質的に競合することが好ましい。このアッセイでは、粒子が検出領域の固定化検体／類縁体に結合する程度は、粒子上に残存している残留未複合化抗体の関数である。即ち、検出領域の固定化検体／類縁体の濃度は、それらがこの領域を通過する際に粒子の効率的な捕捉を促進するには高値であることが必要である。又、試料液体中の遊離の検体への粒子標識抗体の先行する結合の効率を高めるためには、粒子上の抗体は検体に対する高い親和性をすることが望ましい。この親和性は、典型的には、少なくとも約１０８、好ましくは少なくとも約１０９、より好ましくは少なくとも約１０１０リットル／モルである。
【００９９】
抗体又は抗原は膜上の試験及び対照系列に分注でき、そしてアンカー蛋白質（例えばアビジン、ストレプトアビジン、ビオチン）とカップリングさせてよい。膜はバルク蛋白質（例えばカゼイン、ウシ血清アルブミン）を含有するブロッキング緩衝液を用いてブロックし、その長期間の安定性及び流動特性のために界面活性剤で処理してよい。特定の試薬をストリッピング溶液に添加することにより、より一貫した分注及び結合を確保し、そして試験及び対照系列における親水性を防止してよい（Ｔｗｅｅｎ２０を極めて低濃度で使用する）。
【０１００】
特定の実施形態では、低濃度のアルコールを使用して蛋白質を膜上に沈殿させることにより結合を助けてよい。パッドを親水性にするためには、特にそれがガラス繊維又はポリエステルパッドである場合に、界面活性剤を使用してよい。特定の実施形態では、重合体を添加することによりパッドを硬化させ、そして流量を制御してよい。特定の実施形態では、抗体又は他の生化学的試薬を添加することにより赤血球又はムチンを捕捉してよい。更に別の実施形態では、試料がコンジュゲートパッドに到達するとき所望のｐＨであるように緩衝成分を使用してよい。
【０１０１】
化学的及び生物学的な処理を、試料に対して、それが捕捉要素と接触するよりも前の種々の時点において実施できる。そのような処理は例えば、試料から、赤血球を除去すること、又はムチン又は他の干渉成分を除去することを、それが捕捉要素に到達するよりも前に行うことを包含してよい。特定の実施形態では、試料を前処理して試験に使用される抗原部位の利用性を促進するか、或いは干渉成分を除去した後に試料を添加する。
検体検出
本発明は、本明細書に記載するか当該分野で知られたものを含め、検体（例えばホルモン及びホルモン代謝産物）を検出するための種々の機能的手段を使用してよい。検出試薬は検体が検出可能となるように検体又は結合要素と複合体を形成してよい。これらは検体特異的結合分子（例えば抗体）及び種々の可能なレポーター分子、例えば酵素（例えばセイヨウワサビパーオキシダーゼ）、染料、放射性核種、発光基、蛍光基、ビオチン、コロイド状粒子（Ｒｅｅｄ等への米国特許第７，１２２，１９６号及びＹｇｕｅｒａｂｉｄｅ等への米国特許第６，５８６，１９３号参照）、金属コロイド、例えばコロイド状金及びセレン、非金属コロイド、ナノ粒子、重合体ビーズ及びラテックスビーズ、カーボンブラック標識（Ｋａｎｇ等への米国特許第５，２５２，４９６号）及び金属ゾル試薬及びコンジュゲート（Ｂｒｏｏｋｓ，Ｊｒ．等への米国特許第５，５１４，６０２号）との間の複合体、並びにリポソーム媒介担体染料分子及び非視覚のレポーター分子又は標識、例えば常磁性粒子の使用を包含してよい。検出要素（例えばコンジュゲート）は可視標識（例えばコロイド状金、コロイド状ラテックス粒子）又は不可視標識（例えば常磁性粒子）に結合した生物学的成分（例えば抗体、抗原、ハプテン）であってよい。レポーター基への結合剤のコンジュゲーションは当業者の知る標準的な方法を用いて達成してよく、そして、多くの市販源（例えばＺｙｍｅｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．及びＰｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，１１１）から種々のレポーター基へのコンジュゲートを購入してよい。
【０１０２】
検体の検出は当該分野で知られた標準的なアッセイ技法により達成できる。検体は所定の閾値に基づいた簡素な陽性又は陰性の形式で検出できる。一部の実施形態では、検体の量を定量することが好ましい。これは例えば絶対的な定量又は排出速度の定量であってよい。検体はその検体に相当するストリップ上のバンド強度を測定することにより定量できる。一部の実施形態では、複数の検体を多重のアッセイにおいて検出又は定量する。別の態様において、検体の排出速度は特定の実施形態における定量ストリップの使用により検出する。他の実施形態において、抗体−粒子（例えばナノ粒子）のコンジュゲートは実施せず、むしろナノ粒子と共に抗体又は結合剤が水和することにより結合又は固定化が起こる（参照により本明細書に組み込まれるＬｉｎ等のＷＯ２００５／０５１２９５Ａ２、表題「Ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃａｌｌｙ  Ｂｒａｎｃｈｅｄ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  Ａｓｓａｙｓ」を参照のこと）。
【０１０３】
特定の実施形態では、捕捉要素、例えばパッド、膜、試験ストリップ等を常磁性粒子媒介検出と組み合わせて使用する。常磁性粒子は目的の検体に関する磁性の指紋又は署名を与える。
【０１０４】
常磁性粒子検出アッセイ及びシステムの使用は、常套の免疫検出手段に対して検出の効率及び制度が向上する。生物学的分離の用途においては、コロイド状常磁性粒子標識は磁性ナノ粒子に目的の検体を選択的に連結する抗体の能力を利用している。
検出器
本発明は、本明細書に記載するか当該分野で知られたものを含め、検体（例えばホルモン及びホルモン代謝産物）の検出のための検出器の種々の機能的手段を使用してよい。目的の検体を検出するための検出器は、例えば実験室の設定において、又は自宅又は野外の場所において利用してよい。特定の実施形態は特定の代謝産物の排出速度を測定するための使用が可能な携帯用検出器に関する。他の実施形態では、検出器は携帯用ではない。検出器は、携帯用か否かに関わらず、データベースと連絡していてよい。データベースは電子式、例えばコンピュータ又はインターネット系であってよい。即ち、特定の実施形態では、エストロゲン代謝産物１つ以上及び／又はプロゲステロン代謝産物１つ以上を含め、目的の検体に関する排出速度の履歴値を含む電子データベースと連絡している携帯用検出器を利用する。
【０１０５】
超常磁性粒子の検出に基づいた生化学的検体の検出、モニタリング及び／又は分析に有用な機器は当該分野で知られている。代表的な機器は、例えば、Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｄｅｓｉｇｎ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｃａｌｉｆ  のＭａｇｎｅｔｉｃ  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｄｅｒ  （ＭＡＲ）並びに別途報告されているものを包含し、例えば参照により全体が本明細書に組み込まれるＣａｔｔ等へのＷＯ９５／１３５３１、Ｃａｔｔ等へのＥＰ−Ａ−８３３１４５、Ｓｉｍｍｏｎｄｓへの米国特許第６，０４６，５８５号、Ｓｉｍｍｏｎｄｓへの米国特許６，２７５，０３１、Ｓｉｍｍｏｎｄｓ等への米国特許第６，４３７，５６３号、ＬａＢｏｒｄｅ等への米国特許出願第２００４０２１４３４７号、及びＬａＢｏｒｄｅへのＵＳ第６，６０７，９２２号を参照のこと。超常磁性粒子は典型的にはサンドイッチアッセイ形式において検体に結合する。検出器は例えば検出領域において捕獲された免疫複合体中の磁性粒子の総質量により表示される局所的磁場を測定できる。次に、実験的に確立された検量線により、得られた値を目的の分子の数に補正してよい。代表的な機器は既存のアッセイ形式及び化学的技法、例えば、側方流動膜、ＤＮＡアレイ及びディップスティックアッセイに適合可能である。
【０１０６】
磁性粒子は常套の方法により標的粒子にカップリングすることにより磁性結合複合体試料を形成してよい。標的粒子は例えば原子、個々の分子及び生物学的細胞を包含してよい。磁性結合複合体試料は所定の位置において数個〜数百個の粒子の蓄積物として付着させてよい。
データベース及びシステム
別の態様において、妊娠可能性モニタリングシステムが提供される。本発明はデータベース、ハードウエア及びソフトウエア及び検体をモニタリングするため及び妊娠可能性をモニタリングするためのシステム、例えば本明細書に記載するか当該分野で知られたものの種々の機能的手段を使用してよい。卵巣モニタリングシステムは完全にハードウエアの実施形態、完全にソフトウエアの実施形態、又は、ソフトウエアとハードウエアとの態様を組み合わせた実施形態の形を取ってよい。それらは例えば媒体として具現化されたコンピュータ読み取り可能なプログラムコード手段を有するコンピュータ読み取り可能な保存媒体上のコンピュータプログラム製品として具現化してよい。ハードディスク、ＣＤ−ＲＯＭ、光学的格納装置又は磁気的格納装置を包含する何れかの適当なコンピュータ読み取り可能な媒体を利用してよい。
【０１０７】
本発明の実施形態は、方法、装置（システム）及びコンピュータプログラム製品のフローチャート図を参照しながら以下に説明する。フローチャート図の各ブロック及びフローチャート図のブロックの組み合わせはコンピュータプログラム命令により実施できる。これらのコンピュータプログラムの命令は汎用コンピュータ、特殊目的コンピュータ又は他の機械製作用のプログラム可能なデータ処理設備にロードしてよく、これらは、検体検出システムと組み合わせて単一の装置としてよく、これにより、コンピュータ又は他のプログラム可能なデータ処理設備上で実行される命令がフローチャートブロックにおいて特定される機能を実施するための手段を創生するようにしてよい。
【０１０８】
コンピュータプログラム命令はまた特定の様式において機能するようにコンピュータ又は他のプログラム可能なデータ処理設備に指示することができるコンピュータ使用可能なメモリ中に格納してよく、これにより、コンピュータ使用可能なメモリ中に格納された命令がフローチャートブロックにおいて特定される機能を実施する命令手段を包含する製造物品を形成するようにしてよい。コンピュータプログラム命令はまたコンピュータ又は他のプログラム可能なデータ処理設備上にロードすることによりコンピュータ又は他のプログラム可能な設備上で実施される一連の操作工程がコンピュータ実施プロセスを作製するように誘導し、これにより、コンピュータ又は他のプログラム可能な設備上で実行される命令がフローチャートブロックにおいて特定される機能を実施するための工程を与えるようにしてよい。
【０１０９】
従って、フローチャート図のブロックは特定された機能を実施するための手段の組み合わせ、特定された機能を実施するための工程の組み合わせ及び特定された機能を実施するためのプログラム命令手段に対応している。フローチャート図の各ブロック及びフローチャート図におけるブロックの組み合わせは特定された機能又は工程を実施する特殊目的ハードウエア系コンピュータシステム又は特殊目的ハードウエア及びコンピュータ命令の組み合わせにより実施できる。
【０１１０】
本発明を実施するためのコンピュータプログラムはＤｅｌｐｈｉ及びＪａｖａ（登録商標）などの種々のオブジェクト指向型のプログラミング言語において書いてよい。しかしながら、他のオブジェクト指向型のプログラミング言語、例えばＣ＋＋及びＳｍａｌｌｔａｌｋ並びに常套のプログラミング言語、例えばＦＯＲＴＲＡＮ又はＣＯＢＯＬも本発明の範囲内に意図される。
【０１１１】
本発明に従って、妊娠可能性管理の必要のある遠隔地在住対象の妊娠可能状態評価データを獲得し、分析し、格納し、そして送信するために提供されるシステムの実施形態を図１において模式的に示す。示すように、複数の遠隔地在住対象モニターシステム（ＳＭＳ）が連絡リンクを介して中央データ処理システム（ＣＤＰＳ）と直接連絡を樹立するように構成されている。連絡リンクは送信機、警報器、受信機、電話、モデム、携帯電話、ケーブル、インターネット接続、ワールドワイドウェブリンク、テレビ、閉回路モニター、コンピュータ、表示画面、留守番電話、ファクシミリ機器又はプリンタを含む群から選択される装置であることができる。
【０１１２】
遠隔地在住健康管理提供者の複数の中央処理装置（ＣＰＵ）が連絡リンクを介してＣＤＰＳサーバとの健康管理提供者ＣＰＵの連絡を樹立するように構成されている。特定の実施形態では、連絡リンクはインターネット又はイントラネットリンクである。他の実施形態では、連絡リンクは移動電話テキストメッセージサービスである。他の連絡様式も入手可能であれば使用してよい。
【０１１３】
ＳＭＳ又はＣＤＰＳサーバ又はコンピュータ使用可能な媒体内に具現化されたプログラムコードを実行するように構成されている他の装置は本発明の種々の機能及び種々の操作方法を実施するための手段として操作される。本発明の実施形態は種々のクライアント−サーバ連絡プロトコル、例えば限定しないが、ＴＣＰ／ＩＰプロトコルなどの特定のプロトコルと共に使用してよい。
【０１１４】
卵巣周期モニタリング及び妊娠可能性管理に関する数種の実施形態を本明細書において説明する。しかしながら、臨床又は治療の効果を促進又は達成するために生理学的及び／又は生物学的パラメータのモニタリング及び評価が必要である広範な種類の医学的状態に関するアッセイもまた意図される。
【０１１５】
ＳＭＳは対象からデータを収集するための主な手段として、そして、症例管理者又は健康管理提供者のための対象とのインターフェイスとしての手段として作用する。ＳＭＳの代表的な特徴は例えば、小型又は携帯性、データ処理能力及びリンク要素との連絡のためのビルトイン又は装着可能な外的手段、体液からのデータ収集能力、健康状態に関する対象提供データに関するデータ収集能力、及び、医療／妊娠可能性の養生法への対象のコンプライアンスのモニタリング能力を包含してよい。ＳＭＳはまた、ＣＤＰＳサーバとの双方向の連絡を可能にするように機能してよい。ＳＭＳはまた、収集した対象データを分析し、生又は予め記録された応答及び／又は医師又は健康管理の専門家の指示に基づいた妊娠可能性管理推奨事項を送達するように機能してよい。ＳＭＳは特定の時間間隔において、又は実時間においてＣＤＰＳサーバに対象データをダウンロードするための能力、メッセージを連絡するための能力、医師又は健康管理提供者への更新、命令及び妊娠可能性管理の養生法、固定又は偶発的な自己モニタリングスケジュール、又はＣＤＰＳサーバからの他のフィードバックを提供してよい。
【０１１６】
ＳＭＳを介して収集された対象データは生理学的データ（例えば尿中代謝産物、血中グルコース測定値、体温等）、又は挙動データ（例えば食餌、運動、ストレス、疾患の存在に関係する評価）を包含してよい。特定の実施形態では、収集された対象データは尿中代謝産物データである。特定の実施形態では、ＳＭＳは特定の妊娠可能性養生法の効力を最適化するための特定の対象の生殖状態に関連するアルゴリズムを含む。特定の実施形態では、ＳＭＳは対象入力データに基づいて対象の自己モニタリング及び妊娠可能性管理養生法に対する自動調節を行うように構成されていてよい。特定の実施形態では、ＳＭＳはまた、対象の妊娠可能性又は排卵周期に影響する可能性がある他の非妊娠可能性適応症に対する併用療法の作用を対象が評価することを助けるためのデータベースを含有する。
【０１１７】
特定の実施形態では、対象は定期的にそのＳＭＳ内のデータを記録すること、及びＣＤＰＳサーバにデータを送信することに対して責任を負う。他の実施形態では、ＣＤＰＳサーバへのデータの送信は高度に自動化され、対象からのインプットの必要性は殆ど、又は全く無い。特定の実施形態では、対象は標準的な電話端子にＳＭＳを差し込むことによりシステムを使用し、そしてボタンを押しながらＣＤＰＳサーバＣＰＵとの連絡を樹立することができる。各ＳＭＳはデータ送信が必要な場合は対象にプロンプトし、そして例えばアラーム駆動タイマーなどの注意喚起装置を用いてデータの送信を開始し、終了する能力を有する。
【０１１８】
他の実施形態では、ＳＭＳはテキスト、グラフィック、ユーザープロンプト及び種々の他の情報を表示するためのユーザーインターフェイスを含有する。特定の他の実施形態では、ＳＭＳユーザーインターフェイスはＣＤＰＳサーバと対象との間の連絡の主な手段として作用してよい。特定の実施形態で」は、ＳＭＳはまた、ＣＤＰＳサーバへの送信スケジュールを対象に通知し；妊娠可能性に関連する緊急の状態を対象に通知するか、他では医学的注意を迅速に求め；そして過去の性能に基づいて対象に動機付的フィードバックを提供する（例えばデータの記録及びＣＤＰＳサーバへのデータの送信についてスケジュール通り実施していることに対して対象に報酬を与える等）ように構成されていてよい。対象の妊娠可能性管理データをモニタリングするための適当なＳＭＳはＱｕａｎｔｕｍ  Ｄｅｓｉｇｎ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）により製造されている。ＳＭＳの他の代表的な特徴は例えば、Ｓｉｍｍｏｎｄｓへの米国特許第６，０４６，５８５号；Ｓｉｍｍｏｎｄｓへの米国特許第６，２７５，０３１；Ｓｉｍｍｏｎｄｓ等への米国特許第６，４３７，５６３号；ＬａＢｏｒｄｅへの米国特許第６，６０７，９２２号及びＬａＢｏｒｄｅ等への米国特許出願第２００４０２１４３４７号に記載されているもののようなシステム及びサブシステムを包含してよい。ＳＭＳの実施形態は例えばディスプレイ、キーボード、検体測定器；内部データ格納、内部格納された妊娠可能性モニタリングアルゴリズム及び／又はソフトウエア、並びにＳＭＳを操作するため、及び、ＣＤＰＳサーバと連絡するためのデータプロセッサ又はＣＰＵを包含してよい。特定の実施形態では、ＳＭＳは対象入力データ及び内部ソフトウエアを使用して例えば尿中代謝産物などの代謝性副生成物の測定により排卵状態を連続的にモニタリングする。
【０１１９】
一部の実施形態において、ＳＭＳ検体測定器を用いて妊娠可能状態関連値を記録する場合は、内部ソフトウエアは例えば限定しないが、健康状態、食餌、運動及び服薬を包含する種々の情報について対象を照会してよい。一部の実施形態において、ＳＭＳ内部ソフトウエアは対象による使用を容易にするためにメニュー主導型であってよい。特定の実施形態において、妊娠可能性モニタリングＳＭＳ内に入力されたデータは日時情報と共に格納され、そしてアラーム開始されることができる（例えば対象又はＳＭＳはタスク又は機能を実施するためにプロンプトされることができる）。特定の実施形態において、ＳＭＳ内部ソフトウエアは入力されたデータを分析し、そして対象に対してその妊娠可能状態及び規定された養生法を連続的に通知する。特定の実施形態において、ＳＭＳ内部ソフトウエアは対象によりＳＭＳに入力されたデータに適用される通り、医師又は健康管理専門家の処方に従って、対象の排卵変動に対して調節を計算する。
【０１２０】
特定の実施形態において、ＳＭＳの内部ソフトウエアはＣＤＰＳサーバを介して症例管理者により構成可能である。症例管理者は対象の妊娠可能性管理意養生法に対し、そして対象の固定された又は偶発的な自己モニタリングスケジュールに対して調節を行うことができる。これらの調節はＣＤＰＳサーバへの日常的データ転送の間にＳＭＳ内で自動的に行うことができる。妊娠可能性管理を提供することに加えて、ＳＭＳは重要な検査のスケジュール予約について対象に想起させるために使用できる。
【０１２１】
特定の実施形態において、妊娠可能性管理アルゴリズムは医師又は他の健康管理専門家が回顧的及び／又は補助的な調節養生法を特定できるようにする。特定の実施形態において、ＳＭＳは投薬相互作用情報のデータベースを含有し、そして、複数の服薬の対象による使用に関連した情報についてデータベースを対象が照会できるように構成されている。特定の実施形態において、ＳＭＳは例えば投薬相互作用情報、各対象に関する特定の履歴的妊娠可能性データプロフィール、及び対象の集団に関する履歴的妊娠可能性プロフィールを含有してよい外部データベースと連絡しているように構成されていてよい。特定の実施形態において、対象はＳＭＳとＣＤＰＳサーバとの間に連絡が樹立された場合にＣＤＰＳサーバ内に位置するデータベースを照会してよい。ＳＭＳはまた、対象が他の外部データベースとの連絡を樹立できるように構成されていてもよい。
【０１２２】
ＳＭＳの他の特徴は種々の周辺装置にＳＭＳを接続するための接続スロット；地上通信線電話系統への接続装置；及び周辺装置との連絡のための赤外線ポートを包含してよい。妊娠可能性管理が必要な対象のための追加的なＳＭＳの特徴は参照により全体が本明細書に組み込まれるＳｉｍｍｏｎｄｓへの米国特許第６，０４６，５８５号；Ｓｉｍｍｏｎｄｓへの米国特許第６，２７５，０３１号；Ｓｉｍｍｏｎｄｓ等への米国特許第６，４３７，５６３；ＬａＢｏｒｄｅへの米国特許第６，６０７，９２２号及びＬａＢｏｒｄｅ等への米国特許出願第２００４０２１４３４７号に記載されている。
【０１２３】
ＳＭＳに対する連絡のモダリティはＣＤＰＳサーバとの地上通信線電話連絡に限定されない。特定の実施形態において、ＳＭＳは限定しないが、種々の連絡技術を用いてＣＤＰＳサーバと連絡してよい。例えば、ＳＭＳはＣＤＰＳサーバと連絡するために無線連絡技術を組み込んでいてよい。特定の実施形態において、ＳＭＳはまた、ＣＤＰＳサーバと連絡するために直接衛星連絡技術を組み込んでいてよい。
【０１２４】
対象によりＳＭＳに入力されるデータは本明細書において意図する連絡手段を介して中央データ処理システムＣＤＰＳに送信される。ＣＤＰＳサーバはネットワークにおいて配列された１以上のデータ処理装置であってよい。好ましくは、直接連絡接続をＳＭＳとＣＤＰＳサーバとの間に樹立する。或いは、間接連絡接続をインターネット又は本明細書に記載する他のネットワークを介してＳＭＳとＣＤＰＳサーバとの間に樹立され得る。連絡サーバは好ましくは、クライアント−サーバ連絡の分野の当業者の理解する通り、ＳＭＳとＣＤＰＳサーバとの間で上下方向の連絡を取り扱うために利用される。ＣＤＰＳサーバという用語は本明細書においては、対象データを格納及び操作するためのデータベース、並びに他のサーバ機能、例えば限定しないが、ウエブサーバ、アプリケーションサーバ、ｅ−メールサーバ、ファックスサーバ、ＡＶＭサーバ等を包含する。
【０１２５】
特定の実施形態において、ＣＤＰＳサーバは各対象のＳＭＳから送信されたデータを分析して格納する。このデータはインターネット、イントラネット又は本明細書において記載又は意図する他の様式の連絡を解してデータにアクセスできる認可された症例管理者又は中央専門家が使用可能なものとされる。特に、ＣＤＰＳサーバは対象ＳＭＳから送信されたデータを用いて対象の妊娠可能性の問題を同定して優先順位をつける。これにより症例管理者は緊急の妊娠可能性問題を有する対象又は即座に行動をとる必要のある対象に対して第１にその注意を集中させることができる。特定の実施形態において、ＣＤＰＳサーバはデータに対しそれがＳＭＳから送信されているときに実時間の分析を実施することにより、迅速な配慮が必要な妊娠可能性関連緊急な状況を同定する。そのような緊急事態が同定されれば、症例管理者による介入を伴うことなく、ＳＭＳへのＣＤＰＳサーバからの連絡を介して対象は即座に通知を受けることができる。或いは、症例管理者が通知を受けて、そして電話、ｅ−メール、ファックス又は本明細書において意図する他の様式の連絡を解して直接、対象と接触できる。
【０１２６】
特定の実施形態において、ＣＤＰＳサーバは対象がＣＤＰＳサーバにデータをダウンロードした場合に対象に関する妊娠可能性計画プログラムを症例管理者が変更できることを含む、種々の他の機能を実施する。特定の実施形態において、ＣＤＰＳサーバは対象との連絡が起こっていることを確認することを症例管理者に想起させるため、及び介入又は医療上の配慮を必要とする状態が解決されていることを確認するための、「カムアップシステム」を包含してよい。特定の実施形態において、ＣＤＰＳサーバはまた、自動的に対象支給物使用（例えば試験ストリップ、パッド又は他の検出装置）を追跡するように構成されていてよく、そしてこの情報は対象への交換品支給の随時送達を行うために使用してよい。特定の実施形態において、ＣＤＰＳサーバは対象により利用された医療用支給物の製造者及び販売者と連絡するように構成されていてよい。支給品の対象使用をモニタリングすることにより、医療用支給品が対象に送達できるようにＣＤＰＳサーバを介して直接製造者及び販売者に注文を出すことができる。特定の実施形態において、別個の倉庫データベースをＣＤＰＳサーバに付加することにより対象データの複雑な分析を支援してよく、そして、対象の妊娠可能性養生法及び投薬用量に対して行う予測的な変更を検討するためにも使用してよい。
【０１２７】
症例管理者クライアント（ＣＰＵ）
特定の実施形態において、症例管理者は同じネットワークに接続された症例管理者ＣＰＵ（ＣＭＣ）を介してＣＤＰＳサーバにアクセスする。ＣＭＣは好ましくはＣＭＣとＣＤＰＳサーバとの間のインターネット接続上でＣＤＰＳサーバと連絡している。特定の実施形態において、データの暗号化を利用してよく、そして他のセキュリティ方法を実施することによりＳＭＳとＣＤＰＳサーバとの間、及び、ＣＭＣとＣＤＰＳサーバ又はＳＭＳとの間で情報を転送してよい。本明細書において示す実施形態の目的のためにＣＭＣとして作用してよい代表的な装置は限定しないが、デスクトップコンピュータ及び携帯用計算装置、例えば携帯端末（ＰＤＡ）を包含する。特定の実施形態において、ＣＭＣは好ましくは中央処理装置、ディスプレイ、ポインティング装置、キーボード、持続性のデータ格納へのアクセス、及びインターネットに接続するためのインターネット接続を包含する。特定の実施形態において、インターネット接続は伝統的な電話回線、ＩＳＤＮリンク、Ｔ１リンク、Ｔ３リンクに接続したモデムを介して、ケーブルテレビを介して、イーサネット（登録商標）のネットワークを介して等、行ってよい。特定の実施形態において、インターネット接続は第３者機関、例えば「インターネットサービスプロバイダ」（ＩＳＰ）を介して行ってよい。特定の実施形態において、インターネット接続はインターネットへのＣＭＣの直接接続により、又は、インターネットに接続された別の装置を介して間接的に行ってよい。後者の場合、ＣＭＣは典型的にはローカル又はワイド区域のネットワーク（ＬＡＮ又はＷＡＮ）を介してこの装置に接続される。特定の好ましい実施形態において、ＣＭＣとＣＤＰＳサーバとの間のデータの転送速度は一万四千四百ボー（１４，４００ボー）以上である。しかしながら、より低値のデータ転送速度も使用してよい。
【０１２８】
当該分野で知られる通り、本明細書に列挙するものに限定されること無く、本発明の実施形態を実施するためには種々のプロセッサを利用してよい。カラーディスプレイが好ましいが、白黒ディスプレイ又は標準的な放送又はケーブルテレビのモニターも使用してよい。特定の実施形態において、ＣＭＣは好ましくはＷｉｎｄｏｗｓ（登録商標）３．１、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）９５、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）ＮＴ、Ｕｎｉｘ（登録商標）、Ｍａｃ／Ａｐｐｌｅオペレーティングシステム又はＯＳ／２（登録商標）オペレーティングシステムのいずれかを利用する。しかしながら、コンピュータ的な能力を有さない端末、例えばＩＢＭ（登録商標）３２７０端末又はネットワークコンピュータ（ＮＣ）又は限定されたコンピュータ能力を有するもの、例えばネットワークＰＣ（ＮｅｔＰＣ）をクライアントの収容能力においてインターネットにアクセスするために本明細書に示す実施形態に従って利用してよい。
【０１２９】
特定の実施形態において、症例管理者は複数の対象の妊娠可能状態を検討するためにＣＭＣを介してＣＤＰＳサーバにアクセスする。特定の実施形態において、症例管理者は好ましくは、全対象の活動及びその登録された対象に関するデータ、例えばデータ送信履歴、処方の検討、分析及び調節を、ＣＤＰＳサーバからダウンロードされた情報を介して検討することができる。ＣＭＣにより、症例管理者は、即座の配慮が必要な医学的状態を有する対象が最優先に表示される階層構造の問題点指向型の形式を含め、種々の形式において対象データを検討することができる。特定の実施形態において、ＣＭＣは症例管理者が又ＣＤＰＳサーバに格納された特定の対象データを追加、編集及び削除できるようにしてよい。特定の実施形態において、ＣＭＣはまた、各ＳＭＳと直接インターフェイスで連絡することにより対象に情報を提供し、そして、そこに含まれる条件特異的なソフトウエアを修飾することができる。
システムセキュリティ
特定の実施形態に従って妊娠可能性の管理が必要な遠隔地在住対象の妊娠可能状態評価データをモニタリングするためのシステムへのアクセスは、症例管理者及び他のユーザーにデータを検討及び／又は編集するための特定の枠内の特権を与えるログオンセキュリティを用いて制御してよい。これらの権利は機密の臨床健康データを検討するための能力を特定のユーザーに限定することができ、そして、何れかの臨床データを編集するか対象妊娠可能性関連養生法又は調節アルゴリズムにおける特定の分野を変更する能力を限定するために使用してよい。同様のアクセス制御は種々のレベルにおいて対象の妊娠可能性又は医学的状態を定義するデータに適用してよい。特定の実施形態において、柔軟な構成及び関連するセキュリティは多くのサブシステムに広がる、遠隔地在住対象の妊娠可能状態をモニタリングするためのシステムの要素であってよい。
【０１３０】
多くの値に関するデフォルト値及び分類はシステムレベルで提供されてよい。デフォルト値は階層的な様式で修飾してよく、そして種々のレベルにおける独自性を可能にするためにユーザーのアクセス権利により部分的には制御されてよい。特定の実施形態において、検出装置は独特の同定数、例えば試験ストリップＩＤ番号又はバーコードでコード化してよい。
操作
特定の実施形態において、対象データはＳＭＳからＣＤＰＳサーバにより得られる。ＣＤＰＳサーバは得られたデータを分析することにより緊急の配慮を必要とする妊娠可能状態にある対象を同定する。ＣＤＰＳサーバはまた、緊急度又は重症度に応じて同定された対象の状態に優先順位をつける。ＣＤＰＳサーバは症例管理者に対し、ＣＤＰＳサーバと連絡しているクライアントを介して、優先順に並べられた同定された妊娠可能状態を有する対象の選択可能なリストを表示してよい。特定の実施形態において、ＣＤＰＳサーバは各々の同定された妊娠可能状態を治療するための選択肢を、クライアントを介して症例管理者に提示してよい。特定の実施形態において、医師処方又は健康管理専門家処方の妊娠可能性養生法又はその変法をＳＭＳから得られた対象データに基づいて実施してよい。特定の実施形態において、妊娠可能性管理情報を直接対象に、又は対象のＳＭＳに、症例管理者により、中央データ処理システムと連絡しているクライアントを介して連絡してよい。
ＳＭＳからのデータの獲得
好ましい実施形態において、ＣＤＰＳサーバがＳＭＳから対象データを獲得すると、妊娠可能性データ分析がアルゴリズムＢにより実施されてよい。特定の実施形態において、ＣＤＰＳサーバに送信されたデータは迅速な配慮が必要な「緊急事態」妊娠可能状態を同定する目的でデータの送信と実質的に同時に分析する。好ましくは、この分析はＣＤＰＳサーバとデータを送信しているＳＭＳとの間にまだ連絡が樹立されている間に実施する。緊急状態が同定されない場合は、ＳＭＳから得られたデータをＣＤＰＳサーバデータベース（データベースＢ）内に格納して後の分析及び検索に付す。特定の実施形態において、データベースは対象の集団に渡る比較分析用に得られた情報を含有してよい。特定の実施形態において、緊急状態が同定されれば、どのような行動を対象が取るべきかに関する命令がＳＭＳにダウンロードされる。例えば、対象は特定の行動を即座に取るか、又は、即座に医療上の配慮を求めるように命令されてよい。特定の実施形態においては、ＣＤＰＳサーバは新しい妊娠可能性養生法をＳＭＳに連絡するか、又は、電話、ＡＶＭ、ｅ−メール、ファクシミリ送信等により対象に連絡してよい。更に、同定された緊急状態に応答して対象の次の行動過程が変更されるように、ＳＭＳ内又はＣＤＰＳサーバ内に格納された妊娠可能性アルゴリズムに対して変更を行ってもよい。更に、変更は対象の固定又は偶発的な自己モニタリングスケジュールに対して行ってもよい。次にＳＭＳから得られたデータをＣＤＰＳサーバデータベース内に格納して後の分析及び検索に付す。
対象データの分析
特定の実施形態において、症例管理者に、１以上の妊娠可能状態を解決するための種々の選択肢が提供される。特定の実施形態において、症例管理者に、対象に接触する選択肢が提供されてよい。症例管理者は電話、ｅ−メール、ＡＶＭ及びファクシミリ送信により対象に接触してよい。症例管理者に、対象のＳＭＳ又はＣＤＰＳサーバ内の何れかの妊娠可能性養生法又は自己モニタリングスケジュールを調節する選択肢が提供される。症例管理者が対象のＳＭＳ内の養生法を調節するように決定した場合、本発明はＣＤＰＳサーバと対象ＳＭＳとの間に連絡が樹立される次回にＣＤＰＳサーバを介してこの修飾を促進する。特定の実施形態において、対象は、症例管理者により行われた修飾を受信するためにＳＭＳ及びＣＤＰＳサーバの間に連絡を樹立するようにプロンプトされてよい。
【０１３１】
特定の実施形態において、症例管理者は対象に健康管理提供者の訪問の予定を立てさせる選択肢、又は、専門的な妊娠可能性の医学的インプットを模索する選択肢が提示されてよい。これらの選択肢が選択されれば、本発明は健康管理提供者を訪問するように対象に予定を立てさせること、又は、医療専門家からインプットを得ることを促進する。特定の実施形態において、症例管理者は特定の妊娠可能状態に対して行動は必要ではないことを提示してよく、そして、入手可能なデータを検討した後に特定の対象に関する活動的な状態のリストから同定された妊娠可能状態を除去してよい。特定の実施形態において、操作はＣＤＰＳサーバへのＳＭＳからのデータの送信の直後にＣＤＰＳサーバにより実施される。
対象への治療情報の連絡
特定の実施形態において、症例管理者はメッセージが対象のＳＭＳにダウンロードされるか、電話、ＡＶＭ、ｅ−メール及びファクシミリ送信により送信されるように選択及び／又は調整してよく、これは正しい挙動を強化するか、誤適合された挙動を改変するように設計されている。
【０１３２】
特定の実施形態において、症例管理者は医師又は健康管理専門家の職場訪問の予定を立てるように対象に求めるメッセージを構成してもよく、そして更に又ＳＭＳ送信スケジュールを改変してよい（これは次回送信の後に影響し得る）。特定の実施形態において、職場訪問予約の予定を立てることに関する特殊メッセージは、指名された専門家との面会予約を取るように対象に求め、その電話番号を示すものである。特定の実施形態において、ＳＭＳは予約を取ったかに関して毎日対象に照会し、そして次に予約日がＣＤＰＳにアップロードされるように誘導する。予約日が受理された後、ＳＭＳは予約が実際に確保されているかどうか確認するように対象に照会することができる。
【０１３３】
症例管理者が対象の妊娠可能状態又は処方に関する質問を有する場合、症例管理者はユーザーインターフェイスを使用して医療専門家からのインプットを模索してよい。特定の実施形態において、症例管理者は電話、ｅ−メール、ＡＶＭ及びファクシミリ送信などの種々の方法において対象と連絡してよい。特定の実施形態において、本発明は対象に対して指向されたテキストメッセージ、手紙、ファックス及びｅ−メールなどのテキスト系連絡に包含させるための予め構成されたテキストを提供する。特定の実施形態において、症例管理者は診療室の担当者又は健康管理に関与する他の提供者との対象の面会予約を促進して追跡するために本発明を利用してよい。対象の面会予約の予定を立てる決定がなされた後、予定された面会予約日時の記録がＣＤＰＳサーバにインプットされるまで、周期的なフォローアップを必要とするシステム作業残余を発生させてよい。症例管理者は、対象のＳＭＳを用いることにより予約を取るように対象にプロンプトしてよく、そしてその後、それがなされた後に面会予約日を対象に照会してよい。他の接触方法を使用して対象に面会予約を取るようにプロンプトし、その後、日時に関して症例管理者に通知してよい（例えばｅ−メール、ＡＶＭ、電話及びファクシミリ送信による）。特定の実施形態において、ＳＭＳはまた面会予約の遵守を評価するために用いてよい。特定の実施形態において、本発明はまた面会予約の遵守（対象がその面会予約を確保しているかどうか）を追跡する。特定の実施形態において、健康管理提供者は面会予約が対象により確保されていることを確認するため、そして、ＣＤＰＳサーバに関連する実験又は検査のデータを供給するために連絡を送ることができる。ＣＤＰＳサーバに直接アクセスできない提供者との面会予約遵守を追跡するためには、症例管理者は書簡及び関連のフォローアップ残余を作製することにより、所望により確認及び関連する臨床データを得てよい。
【０１３４】
特定の実施形態において、現在の対象データセットをより早期のデータと、そして、他の適切な対象のデータと比較するために、パターン分析、多重回帰、時間シリーズ及び他の型の分析を利用した統計学的分析を場合により実施してよい。
【０１３５】
特定の実施形態において、毎日データを入力し、そしてグラフィックディスプレイを得るためにコンピュータプログラムを使用する。コンピュータプログラムは妊娠可能性モニタリングのためのデータを解釈するためのアルゴリズム、並びに、試験の実施の詳細に関するヘルプにユーザーがアクセスできるためのメニューを有する。プログラムはユーザーモード及びアドバイザーモードを有する。ユーザーモードはユーザーが自身のファイルをアドバイザーにｅ−メールできるようにし、そしてアドバイザーがそれをアドバイザーコピー内に開き、周期を明確化できるようにする。アドバイザーモードもまたデータベースにアクセスできる。本発明の別の態様は、個体の妊娠可能状態に関してユーザーと中央アドバイザリー設備との間のデータの連絡のためのシステムを包含する。同様に、データ解釈アルゴリズムを有するウエブ系インターフェイス及びクライアントビリングインターフェイスも提供される。
方法
本明細書に記載する本発明は雌性動物（例えば哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類等）における排卵周期状態を決定するため、又は妊娠可能性を測定するために使用してよい。典型的には動物は哺乳類、例えばヒト、家畜動物、非家畜動物、牧場動物（例えばウシ又はウマ）及び愛玩動物である。
【０１３６】
本明細書に記載するアッセイについては、雌性動物が定期的な月経周期を呈する必要は無い。特定の実施形態において、以前の月経周期からの情報は妊娠可能性のモニタリングにおいては使用しない。本明細書に記載するアッセイは、例えば、正常周期の妊娠の達成又は回避、授乳後の妊娠可能性の回腹、閉経への接近、不妊の管理、ゴナドトロピン療法等に使用できる。
【０１３７】
特定の実施形態は卵巣周期をモニタリングするのに有用な迅速で非侵襲性の、実験室における正確な試験に関する。本明細書に記載するエストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニド試験は卵胞の生育及び黄体の樹立に関する指標である。例えばエストロングルクロニド排出速度が増大すれば、卵胞が生育中であることが高度に確実である。プレグナンジオールグルクロニド排出速度が増大すれば、黄体形成が少なくともある程度まで起こっていることが高度に確実である。月経周期の指標として作用するプレグナンジオールグルクロニドの閾値の範囲が特定の実施形態において使用される。参照により本明細書に組み込まれるＶｉｇｉｌ，Ｐ．等のＦｅｒｔｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ，Ｓ１６７，（１９９８）及びＢｌａｃｋｗｅｌｌ，Ｌ．Ｆ．等のＳｔｅｒｏｉｄｓ，６３，５．（１９９８）に記載されている閾値を使用してよい。
【０１３８】
特定の実施形態において、エストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドは各々検出又は定量される。他の実施形態において、測定される唯一の検体はプレグナンジオールグルクロニドである。本明細書に記載した大部分の用途において、エストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドが測定すべき最も有用な検体である。しかしながら、他の検体も測定してよい。卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）は上昇するが、卵巣事象が例えば超音波又は機能試験により確認されない場合は、以下の事象は推測されるが照明されない。例えば排卵を伴うことなく黄体形成ホルモン急増／上昇を有する場合がある。また、検出可能な尿中黄体形成ホルモン急増／上昇を有さないが、排卵がなお起こっていることがプレグナンジオールグルクロニド及びエストロングルクロニドの排出パターンにより示される場合もある。
【０１３９】
他の態様において、尿からの特定のホルモンの代謝産物の排出速度を決定する。１時点以上において得られた排出速度又は他のデータを例えば特定の動物、特定の個体、又は個体のセットから得られたデータの編集物と比較することができる。そのようなデータの編集物は例えば基準曲線又はグラフ、電子データベース等の形態であってよい。特定の検体に関する、特に動物種における、種々の条件下の排出速度のデータ編集物が本明細書において提示される。例えば、ヒト及びウシにおける周期的尿試料から得られたエストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドに関する基準曲線を本明細書において提示する（実施例４及び６；図４、図５、図７Ａ及び図７Ｂ参照）。参照により本明細書に組み込まれるＢｒｏｗｎ，Ｊ．Ｂ．等、Ｐｒｏｇｒ．Ｂｉｏｌ．ＣＬｉｎ．Ｒｅｓ．，２８５，１１９．（１９８８）に記載されているヒトにおける基準曲線を利用してよい。
【０１４０】
種特異的検体データベースは独特であり、特性の動物における排卵周期状態を決定するための正確なデータベースを与える場合に特に適している。例えば、特定の実施形態において、少なくとも１のウシ排卵周期に関するエストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドの排出速度が提供される。ウシエストロゲン代謝産物及びプロゲステロン代謝産物の値のこの編集物もまた電子データベースとして提供される。
【０１４１】
特定の実施形態において、試料のために使用される体液は尿であり、そしてこれは特定の時間間隔に渡って収集される。適当な時間間隔は、例えば、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、そして最大２４時間を包含する。他の時間間隔、例えば上記した時間間隔の画分、又はより大きい時間間隔も使用してよい。一部の実施形態において、尿は少なくとも３時間の期間に渡って収集される。別の実施形態において、尿は少なくとも３時間の期間に渡って収集され、そして尿試料の容量を測定し、次に、収集期間の時間間隔に相当する規格化された容量に調節される。試料容量を規格化する工程は特定の検体の排出速度を定量するよりも前に実施してよい。例えば、特定の実施形態において、尿試料の容量はエストロゲン代謝産物及びプロゲステロン代謝産物に関する排出速度を決定するよりも前に規格化する。
【０１４２】
特定の実施形態において、尿は少なくとも３時間の期間に渡ってヒト女性から収集され、そして容量は約１５０ｍｌ／ｈｒに等しい規格化された容量に調節される。他の試料容量調節も可能であり、例えばヒト女性からの尿収集を調節すること、及び、約１００ｍｌ／ｈｒ、約２００ｍｌ／ｈｒ、約２５０ｍｌ／ｈｒ、約３００ｍｌ／ｈｒ、約３５０ｍｌ／ｈｒ、約４００ｍｌ／ｈｒ、約５００ｍｌ／ｈｒ、約１０００ｍｌ／ｈｒ等に等しい規格化された容量に調節することを包含する。別の容量調節又は希釈を行ってもよい。試料容量及び／又は排出速度はコンピュータアルゴリズムにより調節又は規格化してよい。体液（例えば尿、乳汁）を非ヒト雌性動物から収集する場合は、何れの試料容量調節も典型的には動物及び体液に応じたものとなる。
【０１４３】
特定の実施形態において、エストロゲン代謝産物及びプロゲステロン代謝産物の排出速度はある設定の時間間隔で毎日定量される。適当な時間間隔は例えば、約２〜約４日、約２〜約５日、約２〜約６日、約２〜約７日、約２〜約８日、約２〜約９日、約２〜約１０日、約２〜約１２日、約２〜約１５日、約２〜約２０日、約２〜約２５日、約２〜約２８日、及び、約２〜約３０日の間を包含する。
【０１４４】
別の態様において、排卵周期状態に関して得られた情報を用いて、該雌性対象の月経周期内における最適な妊娠可能性に対する時間枠を決定することを含め、雌性動物における妊娠可能性を測定する。即ち、本発明の種々の態様は該雌性対象のインビトロの妊娠を実施するための最適な妊娠可能性に対する時間枠を決定するために有用である。
【０１４５】
特定の実施形態において、エストロゲン代謝産物及びプロゲステロン代謝産物の排出速度はある設定の時間間隔で毎日定量される。適当な時間間隔は例えば、約２〜約４日、約２〜約５日、約２〜約６日、約２〜約７日、約２〜約８日、約２〜約９日、約２〜約１０日、約２〜約１２日、約２〜約１５日、約２〜約２０日、約２〜約２５日、約２〜約２８日、及び、約２〜約３０日の間を包含する。
【０１４６】
別の態様においては、排卵周期状態に関して得られた情報を用いて、該雌性対象の月経周期内における最適な妊娠可能性に対する時間枠を決定することを含め、該雌性動物における妊娠可能性を測定する。即ち、本発明の種々の態様は該雌性対象のインビトロの妊娠を実施するための最適な妊娠可能性に対する時間枠を決定するために有用である。
【０１４７】
特定の実施形態において、１以上のホルモン代謝産物を１日以上、又は毎日、所望の期間中測定する。エストロングルクロニドの統計学的に有意な増大が起こっているかどうかについて、信頼性のある決定を行うために、例えば１時点〜１時点以上においてエストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドの排出速度を分析するために使用するアルゴリズムが本明細書において提供される。アルゴリズムはストリップアッセイから求められたエストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドのレベルを分析するための１以上の閾値を設定するために使用できる。これらの閾値から、臨床検査室において実施される試験と同等の精度で、妊娠可能状態に関する種々の予測を診療地点、自宅又は臨床現場において行うことができる。
【０１４８】
ＰｄＧ排出速度閾値は、それが実質的にはこれまで到達又は超過されず、そして介在する月経出血を伴うことなく排卵が後続するＰｄＧ排出のレベルを示すことから、実質的に全ての女性に適用されるように決定することができる。特定の実施形態において、これはＰｄＧについて７μｍｏｌ／２４ｈの排出速度で設定される。この値は黄体期不妊の開始を呈するための閾値として使用される。ＰｄＧの排出速度がこの値以上になれば、周期がもはや妊娠可能性ではなくこれ以上の試験は必要ないという判断がなされる（参照により本明細書に組み込まれるＢｌａｃｋｗｅｌｌ，Ｌ．Ｆ．等、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ，６３，５．（１９９８）参照）。
【０１４９】
Ｅ１Ｇの排出速度に関する閾値もまた特定の実施形態において有用である。Ｅ１Ｇ排出速度の統計学的に有意な上昇及びそれに後続するＥ１Ｇ排出速度の低下は、参照により本明細書に組み込まれるＢｌａｃｋｗｅｌｌ，Ｌ．Ｆ．等、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ，５７，５５４（１９９２）に記載の通り、成長中の卵胞の存在を示し得る。卵胞が成長を開始すれば、それは２つの可能な宿命、即ち継続して排卵に至り、その時点でＥ１Ｇ排出速度の急激な低下が生じるか、又は、閉鎖によるもので、その場合は、やはりＥ１Ｇ排出速度の急激な低下が生じる場合もある。ＰｄＧ排出速度が所定の閾値以上にまで上昇すると、排卵が起こっている可能性が高いと判断される。このことはＰｄＧについては１０μｍｏｌ／２４ｈと設定され得る所定のレベルをレベルが超過するまで、ＰｄＧのモニタリングを継続することにより確認できる。
【０１５０】
実際には、Ｅ１Ｇ排出速度の閾値の使用は、Ｅ１Ｇ排出速度が異なる女性の間ではより変動性が高いため、試験において適用することはより困難となる。また、エストロングルクロニドに変換される卵巣エストラジオールの画分は個体間で変動する。特定の実施形態において、これらの問題は、参照により本明細書に組み込まれるＢｒｏｗｎ，Ｊ．Ｂ．及びＢｌａｃｋｗｅｌｌ，Ｌ．Ｆ．のＴｈｅ  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｍｏｎｉｔｏｒ．Ｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  Ｍａｎｕａｌ．  Ｏｖｕｌａｔｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｒｅ．Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ（ＩＳＢＮ０９０８４８２０３０５）（１９８９）に記載されているとおり、個々の女性に対してＥ１Ｇの排出速度を決定し、これを妊娠可能性期の開始のマーカーとして使用することにより無くすことができる。
【０１５１】
特定の実施形態において、Ｅ１Ｇ及びＰｄＧの両方に関する排出速度を直列させて測定することにより妊娠可能性スペクトルにおける一般的位置の決定を提供する。Ｅ１Ｇ及びＰｄＧの両方の排出速度が共に所定の閾値未満である場合、女性が早期の卵胞不妊期にあるか、又は無月経の状態（月経期不在）にあると判定できる。所定のＥ１Ｇ閾値を超過すれば、所定のＰｄＧ閾値を超過しない場合には、女性が妊娠期にあると判定できる。この所定のＰｄＧ閾値を超過すれば、女性が黄体期不妊期にあり、その周期においてはもはや妊娠できないと判定できる。
【０１５２】
特定の実施形態において、特定の検体の排出速度を検体モニタリング装置と連絡している中央データベースに格納する。検体モニタリング装置は、例えば有線又は無線の接続を介して中央データベースに連絡していてよい。
【０１５３】
特定の実施形態において、エストロングルクロニド及びプレグナンジオールグルクロニドの排出速度が共に所定の閾値以下である場合、女性が不妊状態にあると判定できる。エストロングルクロニドの排出における統計学的に有意な上昇が生じるか、又は、排出速度が特定の閾値以上にまで上昇したがプレグナンジオールグルクロニドが特定の閾値以下であれば、女性が潜在的に妊娠可能状態と判定される。プレグナンジオールグルクロニドが閾値レベル以上に上昇すれば、女性が排卵していると判定できる。プレグナンジオールグルクロニド排出速度はまた、黄体の質、黄体期の不全、十分又は短期であるかどうかの指標にもなる。
【０１５４】
本明細書に記載する検体排出速度を決定する１つの方法は尿容量調節を適用することを含む。特定の実施形態は尿容量の補正を利用する。尿容量補正はインサイチュで尿試料を希釈することにより実施できる。そのような方法では先ずユーザーに対し時限的尿試料を収集する方法を指導する。２４時間の期間に渡る検体排出速度が比較のためには有用であり得るが、２４時間未満の収集時間も使用してよい。雌性対象（例えばクライアント／ユーザー）は収集時間に従って較正されている容器内に、時期開始時の初回排出は除くが時期終了時の最終排出は包含する全ての尿を収集してよい。次に試料を水（水道水又は蒸留水を提供できる）で希釈して最も近い１５分間に対し１５０ｍｌ／ｈｒの収集量とする。即ち、特定の実施形態において、３．５時間収集物を希釈して約５２５ｍｌとし、そして希釈試料の小区分のみをアッセイ用に保持する必要がある。
【０１５５】
１つの実施形態において、妊娠可能性モニターは試験ストリップに固定された試料容量を与える試料分注器を含む。別の実施形態において、妊娠可能性モニターは調節された、又は規格化された試料容量を試験ストリップに提供する試料分注器を含む。代替の実施形態において、尿容量補正は、アルゴリズムを適用することにより値を調節し、これにより排出速度を求めることにより行う。アルゴリズムは例えば、コンピュータプログラム又はインターネット系であってよい。例えば、コンピュータプログラムは、システムの使用に関する情報を提供するため、及び毎日データを表示可能とするために、ホームユーザーにより使用され得る。
【０１５６】
尿容量の変動を補正するためには、尿を規格化する測定を実施することが必要である。１つの実施形態において、これは固定された時間の期間に渡って尿の全てを収集すること、及び全ての尿が収集の時間当たり同じ総容量を有するように一定容量に希釈することにより達成される。動物の場合これは不可能である。従って、これらの場合においては、ホルモン濃度のデータの規格化することができる測定を行う必要がある。
【０１５７】
そのような測定の１つはクレアチニンである。これはＪａｆｆｅ反応及びそして各日のホルモン濃度を尿中のクレアチニンの量で割ったものにより測定できる。図１３はそのような計算によるＰｄＧプロフィールに対するスムージング作用を示す。
【０１５８】
別の態様において、尿試料容量補正は試料に対して行う比重決定を参照しながら行う。この測定は本明細書に記載するモニタリング装置の任意の成分により行うことができる。試料の比重は試料の屈折率の測定を介して決定する。屈折率を用いて試料の濃度を計算し、これを用いて検体排出速度を計算する。
【０１５９】
代替法は補正を行うために比重を使用することである。例えば、１５０ｍｌ／ｈに希釈した尿試料の平均の比重が既知であれば、次に希釈因子を何れかの尿試料に対してその比重に基づいて算出することができる。これを月経周期に対して行い、そして通常の希釈試料と比較した場合のこれに基づいてＰｄＧ排出速度を求めた。結果は図１４に示す。
酪農関連の操作法
別の態様において、本明細書に記載した排卵周期モニタリング法及び装置は非ヒト動物種に対して使用される。特定の実施形態において、該当する発情期と排卵の周期とを検出、モニタリング又は分析することを含む動物の妊娠可能性状態を決定するための方法が提供される。酪農産業においては、ウシにおいて若雌が二次性徴期（初回排卵）に達した後、又は、分娩後の発情休止期（発情周期が無い期間）の後、発情周期発生期間が開始される。発情周期は若雌すなわち雌性ウシに対して妊娠する機会を約２１日毎にもたらす。各発情周期の間、卵胞は波状パターンにおいて発達し、これはホルモン濃度の変化により制御される。更に、黄体（ＣＬ）が卵胞の排卵の後に発生する。それが存在している間はこの黄体ＣＬは他の卵胞が排卵されることを抑制する。各発情周期の長さは各直立発情期の間の日数により測定される。
【０１６０】
発情休止は正常な発情周期を動物が呈さない場合に生じる。これは若雌では二次性徴期に達する前、及び、分娩（分娩）後の雌性ウシにおいて生じる。発情休止期中は、正常な卵胞波が生じるが、直立発情及び排卵は起こらない。従って、発情休止期中は若雌又は雌性ウシは妊娠できない。直立発情、別称直立熱（ｓｔａｎｄｉｎｇ  ｈｅａｔ）は各発情周期の最も目視し易い兆候である。これは雌性が性的受容性である期間である。ウシにおける発情は通常は約１５時間持続するが、６時間未満〜概ね２４時間の範囲に変動する場合がある。ウシにおいては、雌が直立し他の動物によるマウンティングを可能にする期間が性的受容期間である。雌性動物は徐々に直立発情に進入する。直立発情の前には神経質で落ち着きが無くなる（例えば雄ウシを探して柵沿いに歩行するか、通常よりも多く啼く）。雄ウシ又は他の雌ウシによりマウンティングされるべく直立する前に、通常は他の動物にマウンティングしようとする。これらの兆候は直立発情が起こるまで進行する。雌ウシが直立発情中である可能性を示す他の兆候は、尾部尖端の粗放性、明確な膣粘液放出及び外陰部膨大である。しかしながら、雌ウシが発情していることの唯一の決定的兆候は他の動物にマウンティングされるべく直立していることである。直立発情の後、存在する排卵卵胞は典型的には排卵し、それが含有している卵を放出する。優性な卵胞の破裂は排卵と称され、そして直立発情開始後２４〜３２時間に起こる。排卵卵胞からの卵の放出の後、卵は雌性生殖管内に進入し、雌が交尾していれば妊娠する。各直立発情の後、新しい発情周期が開始される。通常周期の動物においては、各直立発情の間の間隔は約２１日（図２）のはずであるが、正常な発情周期の長さの範囲は１７〜２４日である。生殖効率を評価する場合、直立発情の間隔が１７〜２４日であることを理解することが重要である。次の（期待される）発情期の前の３〜４日は血清中プロゲステロンレベルが急激に低下する。これはＰｄＧ排出速度をモニタリングすることにより尿中で明確に観察される。
【０１６１】
特定の化合物（例えばホルモン、代謝産物等）は本明細書においては以下の通り略記する。Ｅ１Ｇ−エストロングルクロニド；ＰｄＧ−プレグナンジオールグルクロニド、ＰＭＰ−常磁性粒子、ＭＥＳ−２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸、ナトリウム塩、ＥＤＣ−１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、Ｍａｂ−モノクローナル抗体、Ａｂ−抗体、ＢＳＡ−ウシ血清アルブミン、ＥＤＴＡ−エチレンジアミン４酢酸、ＰＥＧ−ポリエチレングリコール、ＤＣＣ−ジシクロカルボジイミド、ＮＨＳ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ＤＭＦ−ジメチルホルムミド、Ｔ−試験、Ｃ−対照、ＭＡＲ−磁気試験読み取り機又は磁気試験読み取り、ＳＤ−標準偏差、ＲＩＡ−ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ−酵素結合免疫吸着アッセイ、ＯＭ−卵巣モニター、ＬＨ−黄体形成ホルモン、ＨＭＧ−ヒト閉経ゴナドトロピン、ＩＵ−国際単位、ＧＴ−ゴナドトロピン、ＨＣＧ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン、ＥＤＯ−排卵推定日、ΔＴ−卵巣モニター送信単位の変化、ＢＩＰ−基礎不妊パターン。
【０１６２】
以下の実施例は限定目的ではなく、説明目的に提示する。
【実施例】
【０１６３】
（実施例１）ポリクローナル抗−ＰｄＧ２１３−５抗体−金コンジュゲートの製造
ポリクローナル抗−ＰｄＧＡｂ２１３−５はオクタン酸沈殿とその後の硫酸アンモニウムカットにより部分的に精製した。抗体を１０ｍＭリン酸塩緩衝液ｐＨ７．４で１／１０希釈した。金試料はＢｒｉｔｉｓｈ  Ｂｉｏｃｅｌｌ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌの４０ｎｍ微小球から作製し、０．０２ＭＫ２ＣＯ３でｐＨ７．８に調節した。金溶液（１０ｍＬ）をＡｂの１／１０希釈駅１００μＬ＋１０ｍＭリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．４）４００μＬに添加し、ボルテックス混合し、そして室温で５〜１０分間放置した。ブロッキング緩衝液（１０ｍＭリン酸塩ｐＨ７．４緩衝液中１０％ＢＳＡ３００μＬ）を添加し、溶液を激しくボルテックスしながら混合し、そして１０分放置した。次に混合物を１時間６０００ｒｐｍで遠心分離し、上澄みを廃棄し、沈殿を保存緩衝液（アジドを添加したＰＢＳ中２％ＢＳＡ）１ｍＬで３回洗浄した。コンジュゲートを保存緩衝液１ｍＬに再懸濁した。微小球との抗体のコンジュゲーションは参照により本明細書に組み込まれるＨｅｎｄｅｒｓｏｎ  Ｋ．ａｎｄ  Ｓｔｅｗａｒｔ  Ｊ．，Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔｉｌ．Ｄｅｖ，１２，１８３−１８９（２０００）に記載の通り実施した。
【０１６４】
（実施例２）ヒトにおける妊娠回避および妊娠達成のための方法
妊娠回避
成長中の卵胞はＥ１Ｇの毎日の排出速度を増大させることによりその存在をシグナリングする。参照により本明細書に組み込まれるＢｌａｃｋｗｅｌｌ，Ｌ．Ｆ．ａｎｄ  Ｂｒｏｗｎ  Ｊ．Ｂ．，Ｓｔｅｒｏｉｄｓ，５７，５４４（１９９２）。排卵はＥ１Ｇ排出速度の最高値および上昇するＰｄＧ排出速度により示される。参照により本明細書に組み込まれるＢｌａｃｋｗｅｌｌ，Ｌ．Ｆ．等、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ，６３，５（１９９８）。黄体は急速に上昇するＰｄＧ排出速度により示される。正常な周期は３つの逐次的な期、即ち（１）Ｅ１Ｇ及びＰｄＧ両方の排出の低速度の継続により示される卵巣が静止期（又は不活性）である場合の可変長の不妊期（Ｉ）；（２）Ｅ１Ｇ排出速度の初回の統計学的に有意な上昇があるがＰｄＧの排出速度はなお低値であることにより示される、卵がその生命支援システム（卵胞）中で生育している場合の可変長の妊娠可能期（Ｆ）；及び（３）７μｍｏｌ／２４ｈの閾値を超過する急速に上昇するＰｄＧ排出速度により示される、卵胞が黄体となる排卵後の固定された長さ（１０〜１４日）の第２不妊期（ＩＬ）よりなる。
【０１６５】
ＰｄＧ排出速度が１６〜１８日後になお上昇していれば妊娠の可能性がある。順序はＩ、Ｆそして次にＩＬであるが、排卵が起こり、そしてＰｄＧ排出速度が上昇している場合のみである。データは常磁性読み取り機によりストリップから読み取られ、そして読み取り機に格納される。読み取り機はストリップのバンド強度を相当するＥ１Ｇ又はＰｄＧ濃度にバンド強度を関連付ける標準曲線又は検量線と比較する。標準曲線は読み取り機に格納され、そして使用されるべきストリップのバッチ同定情報に適用される。ある範囲の標準曲線を典型的には適用する。尿試料が時限性であり、１５０ｍｌ／ｈｒに希釈される場合、排出速度は時限性で希釈された尿試料を用いて樹立された標準曲線から直接得られる。ストリップからの読み取りは読み取り機のＣＰＵに格納され、そして一部のＰｄＧハーフストリップについて下記に示す通り周期日又は日付とともにアレイとして格納される（表１）。ハーフストリップは吸着パッドを有し、そして対照及び捕捉の系統の両方を取り込んでいる。尿及び抗体試薬をウェル内で混合し、そしてストリップをウェルに浸積する。一方、全ストリップを使用する場合は、抗体試薬は典型的にはコンジュゲートパッド上で乾燥し、ストリップを唯一の液体成分として尿中に浸積する。
【０１６６】
（表１．ＣＰＵ中に格納されたＰｄＧストリップデータ）
【０１６７】
【表１】
2009512871.tif 000003
正常なヒトの月経周期をモニタリングする方法を以下の工程を用いて実施する。（１）出血の初日（又は現在出血している日）を入力する；（２）モニターが第６日に試験を開始すべきことをシグナリングする（周期の最初の５〜６日には妊娠が起こる可能性は殆どない）；（３）試験はＦ（妊娠可能）又はＩ（不妊）をシグナリングする；（４）Ｉが示されれば、Ｆ（Ｅ１Ｇ排出速度において統計学的に有意な上昇による）が示されるまで試験を継続し、そして次に５日間中断する。Ｆがすでに５日間待機していれば、さらに進んで工程５；（５）試験を再開し、ＩＬがシグナリングされるまで継続する（上昇中のＰｄＧ排出速度による）；（６）次に試験を停止して出血が起こるのを待ち、起こった時点で手順を再開する。
【０１６８】
「正常」周期には多くの変形例が可能であり、全てが実際に異常ではない。すべては同じ試験システム及び同じ原則によりカバーされ得る。無排卵周期はストリップで測定した場合のＥ１Ｇ及びＰｄＧの何れかの排出速度の上昇がないことを示す。ＩがＦに変化するまで試験し、次に上記した通り継続する。正常な周期の別の変形例は数個の卵胞が潜在的に成長を開始し、そして１つが排卵する前に死滅する場合に起こる（ベースラインを超えたＥ１Ｇ排出速度の変動により示される）。この場合、Ｅ１Ｇ排出速度は上昇しているが、このあとにＰｄＧ排出速度が上昇するまでＩＬが示されることはないため、Ｆが示されることになる。従って試験は更に多くの日数継続する必要がある。Ｆがシグナリングされたのち５日間待機することができ、そしてＩＬが次の２日間以内に後続しなかった場合は、さらに５日間待機し、そして再試験をすることを繰り返す。
妊娠達成
正常周期の場合と同様、ただし、「周期中間の」Ｅ１Ｇピークが観察されるまで、そしてこの値からＥ１Ｇ排出速度が低下する日に交接の日程を合わせる。ストリップから測定された排出速度はこれを最も妊娠可能性の高い日（Ｐｋ）としてシグナリングする。１８日後の試験では妊娠が発見されると考えられる。ストリップから測定したＰｄＧ排出速度がなお上昇していれば、妊娠が示され、そして妊娠試験が行われることになる。妊娠が起こっていなかった場合、完全な周期のモニタリングが推奨され、そして低減した妊娠可能性の型が試験により測定されたＰｄＧ排出速度の絶対レベルから同定されることになる。
【０１６９】
（実施例３）初回Ｅ１Ｇ上昇の同定のためのアルゴリズム
Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｌ．Ｆ．ａｎｄ  Ｂｒｏｗｎ  Ｊ．Ｂ．，Ｓｔｅｒｏｉｄｓ  Ｎｏｖ；５７（１１）：５５４−６２に記載のＴｒｉｇｇの追跡信号アルゴリズムの適合である正常周期の初回Ｅ１Ｇ上昇の同定方法が開発されている。追跡信号アルゴリズムはＥ１Ｇ上昇の予測的検出を与えるために改変されている。方法を実施するには、先ず、４つの開始パラメータを求める。このアルゴリズムのための開始パラメータはｉ）指数的に平滑化された平均の初期値（ＥＳＡ（０））、ｉｉ）平均の平均偏差の初期値（ＭＡＤ（０））、ｉｉｉ）予測誤差の初期値（ＦＥ（０））及びｉｖ）平滑化された予測誤差の初期値（ＳＦＥ（０））を包含する。ＦＥ（０）及びＳＦＥ（０）はゼロ値に設定できる。典型的には、ＥＳＡ（０）及びＭＡＤ（０）はベースライン期がある場合は周期の最初の６ベースライン日から計算する。この場合、追跡信号は６日後に警告を与えることができるのみである。前回の周期から、又は集団平均から、特定の女性に対してＥＳＡ（０）の値を測定手順における初回Ｅ１Ｇ排出速度として設定し、そしてＭＡＤ（０）を平均値に設定する場合、Ｅ１Ｇデータの毎日の予測分析が与えられる。平滑化定数（α）は６日間の仮説的ベースラインに相当する値において設定される（０．２８６の値（Ｎ＝６））。統計学的有意性は後期の日よりもむしろ早期の日にＥ１Ｇ排出速度における初回の統計学的に有意な上昇を認識する方が良いということに基づいてＥ１Ｇデータに対して設定する。選択された平滑化定数については、追跡信号０．７２がＥ１Ｇ排出の有意な上昇が起こっていることの９５％累積確率を表す（参照により本明細書に組み込まれるＢａｔｔｙ  Ｍ，Ｏｐｅｒａｔｉｏｎ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｑｕａｔｅｒｌｙ，２０：３１９−３２５（１９６９）を参照）。
【０１７０】
Ｅ１Ｇの初回上昇の同定は図３に示す通りである。ＥＳＡ（０）値は２２．３μｍｏｌ／２４ｈ（Ｅ１Ｇ排出速度について記録された最初の値）に設定し、そして、ＭＡＤ（０）はこの女性に関する排卵前周期データの平均値である１０．０に設定した。０．８５の追跡信号を周期第７日におけるＥ１Ｇデータについて計算され、従ってこれを潜在的妊娠可能期間の開始として使用している（９５％信頼レベルにおいて初回の統計学的に有意なＥ１Ｇの上昇の日）。追跡信号は初日から周期各日について計算しており、したがってアルゴリズムは正確に予想される。ベースライン計算は必要ではない。ＰｄＧ排出速度の上昇は単にすべての女性に適用される７μｍｏｌ／２４ｈの閾値との比較により測定する（参照により本明細書に組み込まれるＢｌａｃｋｗｅｌｌ，Ｌ．Ｆ．等、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ，６３，５（１９９８））。
【０１７１】
（実施例４）標準曲線
時限及び希釈ヒト尿試料について使用するためのＥ１Ｇ及びＰｄＧの標準曲線を図４及び５に示す。図４はＥ１Ｇ卵白アルブミンコンジュゲートを噴霧しているストリップから得たＥ１Ｇに関する標準曲線である。図５は捕捉物質としてのＰｄＧ−ＢＳＡをストリップに噴霧しているＰｄＧに関する標準曲線である。ハーフストリップ（コンジュゲートパッドを欠失している）により得られたデータを導入されたＥ１Ｇ又はＰｄＧ代謝産物のレベル（２４時間当たりの量の単位において）に対してプロットすることにより標準濃度に対するストリップにより得られた信号の関係を示す。即ち、これらは尿中濃度を読み取ることができるストリップを用いて得られた検量線である。両方の曲線の感度は時限尿試料を用いながらＥ１Ｇ及びＰｄＧの月経周期レベルを測定するのに十分である。このようにして得られたＥ１Ｇ及びＰｄＧの排出速度の月経周期プロフィールを図６に示す。
【０１７２】
（実施例５）Ｅ１Ｇ及びＰｄＧのヒト月経周期プロフィール
ヒト月経周期プロフィールを図６に示す。次に色強度の読み取りに関するストリップにより月経周期を分析することにより、Ｅ１Ｇ及びＰｄＧに関する以下の月経周期プロフィールを得た。ＰｄＧのデータはＥ１Ｇのピークが検出された後に収集するのみとした。この周期について、初回の統計学的に有意なＥ１Ｇ上昇は第１１日に観察され、Ｅ１Ｇピーク日は周期第１５日であり、排卵後不妊の開始は周期第１９日であり、妊娠可能期間は８日となった。
【０１７３】
（実施例６）ウシ妊娠可能性測定
ヒトデータの場合と同様、相当する標準曲線を乳牛由来の尿試料を用いて得た（図７Ａ及び７Ｂ）。Ｅ１Ｇ及びＰｄＧデータはＥＬＩＳＡアッセイを用いて得た。図７ＡはＥ１Ｇの標準曲線を示し、図７ＢはＰｄＧの標準曲線を示す。
【０１７４】
ウシの一日当たりＥ１Ｇ及びＰｄＧ排出速度プロフィールの雌ウシ由来のものを図８に示す。一日当たりのデータはウシ６８から得られたものであり、そして、図はこの期間におけるＥ１Ｇ及びＰｄＧの排出を示している。ＰｄＧのデータは前回の周期由来の黄体を示す。これは次回のブリングの４日前に顕著な低下を示す。Ｅ１Ｇ排出速度はおおむね黄体消滅開始時にピーク値に達するため、両方の信号がこの雌ウシのこの周期においては次回のブリングの約４日前に起こる。
【０１７５】
図９は二回目に無排卵となった雌ウシ６８に関する２つの連続した周期を示す。１回目の周期は上記したものと同様である。これらの周期はすべてクレアチニン排出を用いることにより尿容量の変動について補正してある。明らかに、二回目の周期には有意なＥ１Ｇの排出は観察されず、そしてその後のモニタリングでも第４５日〜５９日にＰｄＧの上昇は観察されず、その無排卵の性質を確認していた。図９はクレアチニン又は比重の何れかにより尿容量に関して補正した場合の尿中のＥ１Ｇ及びＰｄＧのデータから得られたデータの効力を示す。図９において、２個目の黄体（第２９日〜４５日のＰｄＧレベルの上昇により示される）はＥ１Ｇの前回の上昇に起因しており、これは優性な卵胞の存在を示している。初回ＰｄＧピーク（第７〜２３日）は前回の卵胞から生じており、これはモニタリング開始より前に存在していたはずである。第３周期が期待された場合はＰｄＧの上昇が顕著となる。また、Ｅ１Ｇの上昇は第２周期において顕著となった。即ち、この雌ウシは一部の女性と同様、第３周期では排卵しなかった。
【０１７６】
次回の発情の予測される発生は第２２〜２５日および第４１〜４５日にＰｄＧの極めて急激な減少により示される。即ち、このパラメータは次回発情を予測する場合には有用であるが、一部の周期においてはこのＰｄＧの急激な低下には排卵が後続しない。第４５日の後のＰｄＧの上昇がなかったことがこの事実を証明している。尿容量に関する補正を行わない場合、初回周期におけるＰｄＧに関する濃度の生データは発情の予測を可能とはしない（図１０）。次回の発情が第１１日〜２５日のこれらのＰｄＧ値から予測できないことは明白である。尿容量の変動に関する補正及び排出速度に近づくパラメータの計算の利点は雌ウシ２２８に関する図１３からも明らかである。この雌ウシに関しては、次回の発情は濃度の生データにおける低下から示され得るが、クレアチニンで補正した後は明らかにより明白となる。
【０１７７】
ウシに関する代替の操作法は、ストリップを用いて同じ尿試料においてＥ１Ｇ及びＰｄＧの両方を測定し、そして尿容量における変動の影響が消失し得るＥ１Ｇ／ＰｄＧを計算することである。この比の影響及び動物のブリング挙動とのその関連を図１１に示す。破線は牧場主の報告によるブリング挙動を示す。Ｅ１Ｇ／ＰｄＧのピークとブリングとの間には良好な合致が観察される。しかしながら、ホルモンデータが無排卵を示している第２周期（第２５〜６０日）においては比からはブリングが予測されなかったが、動物は依然としてブリング挙動を示していたことに留意しなければならない（疑似発情）。プレグナンジオールグルクロニドはまた雌ウシ６８に関して図１２に示す通り乳汁中にも検出され、尿のデータを反映していた。しかしながらレベルははるかに低値であり、そして、乳汁容量の変動に関する補正は行っていない。
【０１７８】
最後に、ラテックスビーズコンジュゲートを用いてハーフストリップによる決定の前に尿試料を希釈することの根拠として比重を用いることの影響が図１４に示されている。図１４は比重による希釈が１５０ｍｌ／収集時間にまで希釈した尿を用いた場合に得られたものと同様のプロフィールを与えることを示している。プロフィールはこれらの標準曲線上でその精度の限界において標準曲線から読み取られる最高の値を除き、同様である。
【０１７９】
実施した１つの実験において（図示せず）、４匹の雌ウシを試験し、そして４匹の雌ウシ中３匹が交尾により妊娠し、それは２１日後にＰｄＧの上昇したレベルにより検出された。即ち、動物の発情／排卵の周期の正確な検出、モニタリング及び調整は生殖管理の有効性を増大することができる。
【０１８０】
（実施例７）容量調節
クレアチニンに基づいた容量調節によるＰｄＧのプロフィール
尿容量の変動を補正するためには、尿を規格化する測定を実施することが必要である。１つの実施形態において、これは固定された時間の期間に渡って尿の全てを収集すること、及び全ての尿が収集時間当たり同じ総容量を有するように一定容量に希釈することにより達成される。動物の場合これは不可能である。従って、これらの場合においては、尿中のクレアチニンの量との比較によってホルモン濃度データを規格化し得る測定を行う必要がある。これはＪａｆｆｅ反応及びそして各日のホルモン濃度を尿中のクレアチニンの量で割ったものにより測定できる。図１３はそのような補正によるＰｄＧプロフィールに対するスムージング作用を示す。全般的プロフィールは尿容量補正を行わなくてもこの雌ウシに関しては認識可能であったが、クレアチニン補正を用いる場合が明確に良好となる。ＰｄＧ／クレアチニンのほぼ１０倍の低下は後続するＰｄＧ排出上昇により示されるとおり、第２３日付近で起こった次回の発情の予測された開始を示している。
比重に基づく容量補正によるＰｄＧプロフィール
代替法は補正を行うために比重を使用することである。例えば、１５０ｍｌ／ｈに希釈した尿試料の平均の比重が既知であれば、次に希釈因子を何れかの尿試料に対してその比重に基づいて算出することができる。これを月経周期に対して行い、そして通常時の希釈試料と比較した場合のこれに基づいてＰｄＧ排出速度を求めた。結果は図１４に示す。図１５はＰｄＧの上昇と低下の連続した周期を示し、そして第３周期において雌ウシを交尾させた。ＰｄＧは予測された通り上昇したが、２１〜２４日後に再度低下することはなく、雌ウシ（Ｎｏ．２２８）が妊娠していることが示された。これは後に獣医師の診断により確認された。図１６は同じ尿試料についてハーフストリップ法により得られた測定値と卵巣モニター法により得られた測定値との間のＥ１Ｇ及びＰｄＧに関する排出速度のプロフィールにおける同様性を示している。Ｅ１Ｇ排出速度の決定に関する卵巣モニターデータとストリップデータとの間の合致は、自宅用ストリップと卵巣モニターによるものとの間の定量的等価性を示していた。
【０１８１】
（実施例８）コンジュゲートした常磁性粒子の製造
Ｅ１ＧはＢｏｌｌｅｎｂａｃｋ等、Ｊ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ７７：３３１０−３３１５（１９５５）及びＣｏｎｒｏｗ＆Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ，Ｊ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３６：８６３−７０（１９７１）のスキームに本質的に従って合成し、ＢＳＡ−Ｅ１Ｇ捕捉物質の作製のため、およびＥ１Ｇ標準物質のための試薬として使用した。
【０１８２】
Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙより購入したＰｄＧ（カタログ番号Ｐ−３６３５）はＢＳＡ−ＰｄＧ捕捉物質の作製のため、およびＥ１Ｇ標準物質のための試薬として使用した。
Ｅ１Ｇ常磁性粒子（ＰＭＰ）コンジュゲーションプロトコル
０．１ＭのＭＥＳ，ｐＨ７．０緩衝役（９００μＬ）中に希釈したカルボキシル修飾磁性ラテックス粒子（ＰＭＰ）（Ｒ００−３９Ｅｓｔａｐｏｒ，Ｍｅｒｃｋ）の１０％懸濁液（１０ｍｇ、１００μＬ）を一定の振とうを行いながら１５分間室温で１０ｍｇのＥＤＣ（ＰＭＰ：ＥＤＣ１：１）で活性化した。次に磁性粒子を強力な磁石で引き下ろし、そして上澄みを廃棄した。次に０．１Ｍホウ酸塩緩衝液、ｐＨ８．２中の活性化ラテックスをマウスモノクローナルＥ１Ｇ抗体（クローン２、ＩｇＧ２ａ，κ、プロテインＡアフィニティクロマトグラフィにより精製、リン酸塩緩衝食塩水に対して透析、そして凍結乾燥、Ｃａｎｔｅｒｂｕｒｙ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃｈｒｉｓｔｃｈｕｒｃｈ，Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ）の１．０ｍｇ／ｍＬ溶液１．０ｍＬと反応させた。混合物を回転および超音波処理２分間により十分混合し、次に３時間室温で振とうした。ラテックスを３０分間室温で振とうすることにより蒸留水中１０％ＢＳＡ５０μＬでブロックした。次にコンジュゲートした磁性粒子を再度強力な磁石で引き下ろし、上澄みを廃棄した。ペレットをコンジュゲート希釈液１．０ｍｌ内に再懸濁し、１０ｍｇ／ｍＬのラテックスコンジュゲートを得た。
【０１８３】
コンジュゲート希釈液は１０ｍＭホウ酸塩緩衝液、０．２５％デキストラン、０．２５％Ｔｗｅｅｎ２０、１．０％ＢＳＡ、２ｍＭＥＤＴＡ４ナトリウム塩、０．１５％ＰＥＧ（ＭＷ１０，０００）、２０％スクロース、５％トレハロース、０．０９５％アジド、ｐＨ７．８よりなった。
ＰｄＧ常磁性粒子コンジュゲーションプロトコル
これはＥ１Ｇ抗体をマウスモノクローナル抗体ＰｄＧ抗体（クローン１、ＩｇＧ２ｂκ、プロテインＡアフィニティクロマトグラフィにより精製、水に対して透析、そして凍結乾燥、Ｃａｎｔｅｒｂｕｒｙ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃｈｒｉｓｔｃｈｕｒｃｈ，Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ）と置き換えた以外はＥ１ＧＰＭＰコンジュゲートと全く同様に実施した。
Ｅ１Ｇ捕捉物質
Ｅ１Ｇ捕捉物質は活性エステル法により合成したＢＳＡ−Ｅ１Ｇコンジュゲートとした。活性エステル試薬は乾燥条件下に新しく蒸留したＤＭＦ中１：３：１比のＤＣＣ：ＮＨＳ：Ｅ１Ｇを用いて作製した。ＮＨＳ及びＤＣＣの１．２Ｍ保存溶液はＤＭＦ中に製造した。ＮＨＳ保存溶液１１８μＬをＤＭＦ４１μＬ中に溶解したＥ１Ｇの４６．５μモルに添加し、その後、ＤＣＣ保存溶液４１μＬを添加した。２時間後、活性エステル試薬を一夜４℃において１％ＮａＨＣＯ３２ｍｌに溶解したＢＳＡ４３ｍｇに穏やかに攪拌しながら滴下することにより、７２：１のＥ１Ｇ活性エステル：ＢＳＡ比とした。次に混合物を質量分析用に０．０２％アジ化ナトリウムを含有する３０ｍＭの酢酸アンモニウム緩衝液ｐＨ５．７３中に２４時間に渡り（３×１Ｌ）透析し、そして次に５分間２５００Ｇで遠心分離し、そして得られた透明な上澄みを白色沈殿から分離した。次に試料（２．５ｍＬ）を透析緩衝液で予め平衡化させておいたＰＤ１０カラム（カタログ番号１７−０８５１−０１、Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に通した。全ての試料をカラム内に流した時点で溶離液の収集を開始した（３．５ｍＬ）、最終蛋白質濃度は８．４ｍｇ／ｍＬであった（クーマシー蛋白質アッセイ）。
【０１８４】
［ＢＳＡ−画分、ＩｇＧ非含有、脂肪酸欠乏、Ｇｉｂｃｏ，カタログ番号３００３６−５７８］。
ＰｄＧ捕捉物質
ＰｄＧ捕捉物質はＥ１Ｇに関して示したものと同じプロトコルに従って合成したＢＳＡ−ＰｄＧコンジュゲートであり、そして終濃度は７．６ｍｇ／ｍＬであった。
【０１８５】
（実施例９）Ｅ１Ｇアッセイのためのニトロセルロース膜の製造
ＢＳＡ−Ｅ１Ｇ捕捉物質を１０ｍＭリン酸塩緩衝液ｐＨ７．４に対して透析し、同じ緩衝液を用いて２ｍｇ／ｍｌに希釈した後に噴霧した。ＦＦ６０ニトロセルロース膜（３５ｍｍ、Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ＆Ｓｃｈｕｅｌｌ／Ｗｈａｔｍａｎ）に試験系統としてＢＳＡ−Ｅ１Ｇを、そして、対照系統として同じ緩衝液中のヤギ抗マウスＩｇＧ（ＤＣＮ，ＣＡ，ＵＳＡ）０．５ｍｇ／ｍｌを噴霧した。試験系統及び対照系統は６ｍｍ離して噴霧し、その際試験系統はＢｉｏｊｅｔディスペンサ（ＸＹＺ３０５０，Ｂｉｏｄｏｔ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて膜の底部から１２ｍｍとした。膜は７５μＬ／ｃｍの比率でストリップし、そして強制気流対流オーブン中で２時間３７℃において乾燥した。
ＰｄＧアッセイのためのニトロセルロース膜の製造
これはＢＳＡ−Ｅ１ＧをＢＳＡ−ＰｄＧ捕捉物質で置き換えた他は上記と同一の操作法を用いて実施した。
【０１８６】
（実施例１０）  Ｅ１ＧＰＭＰコンジュゲートパッドの製造
ガラス繊維コンジュゲートパッド（９ｍｍ×３００ｍｍ、カタログ番号ＧＦＣＰ２０３０００，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を室温で３０分間、０．５％カゼイン、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０及び０．２％タウラノール及び０．５％アジドを含有する１０ｍＭホウ酸塩緩衝液ｐＨ８．０中に浸積することにより前処理した。次にパッドをペーパータオル上に置き、強制気流対流オーブン中、一夜３７℃で乾燥した。処理したパッドは乾燥剤と共に密封ホイルパウチ内に保存した。Ｅ１ＧＰＭＰコンジュゲートは、１．５ｍｇ／ｍｌの濃度までコンジュゲート希釈液（コンジュゲーションプロトコル参照）中に希釈し、短時間ボルテックスし、そして次に２分間ウォーターバス中で超音波処理することにより製造した。次にコンジュゲートを、Ａｉｒｊｅｔディスペンサ（Ｂｉｏｄｏｔ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて１２μＬ／ｃｍの比率で乾燥パッド上に噴霧した。噴霧したパッドは強制気流対流オーブン中で２時間３７℃において乾燥し、そして乾燥剤と共に密封ホイルパウチ内に保存した。
Ｅ１ＧＰＭＰコンジュゲートパッドの製造
これはＥ１ＧＰＭＰをＰｄＧＰＭＰで置き換えた他は上記と同一の操作法を用いて実施した。
試料パッドの製造
ＣＯ４８セルロース試料パッド（１４ｍｍ×２３０ｍｍ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を試料パッド緩衝液（０．２ＭＴｒｉｓ、４．０％Ｔｗｅｅｎ２０、０．０５％アジ化ナトリウム、ｐＨ７．６）中、室温で３０分間浸積することにより前処理した。吸収剤ペーパータオルでパッドをブロットすることにより過剰な緩衝液を除去し、そして次にパッドを強制気流対流オーブン中で５時間３７℃において乾燥し、そして乾燥剤と共に密封ホイルパウチ内に保存した。
試験ストリップの積層、切断及び組立
対照系統を上方に向けながらニトロセルロース膜をバッキングカード（Ｍａｇｎａ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）の中央部分上に積層し、その後４７０セルロースウイックパッド（１８ｍｍ×３００ｍｍ、Ｓｃｈｌｉｅｃｈｅｒ＆Ｓｈｕｅｌｌ／Ｗｈａｔｍａｎｎ）をバッキングカードの上端に置き、膜との最終重複を１．５ｍｍとした。ＰＭＰコンジュゲートは２ｍｍ分だけ膜の下端に重複させ、その後バッキングカードの下端と試料パッドを積層することにより１〜２ｍｍのＰＭＰコンジュゲートパッドの最終重複とした。組み立てたカードをスライサーの中心にピンホールが来るように７．６２ｍｍに切断した（Ｍａｇｎａ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）。ストリップはそのカセット（Ｍａｇｎａ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）内に入れ、そして乾燥剤と共に密封ホイルパウチ内に保存した。
【０１８７】
（実施例１１）Ｅ１Ｇ標準曲線及びＥ１Ｇ月経周期排出速度
標準物質を製造するためのブランク尿は４歳半の女児より入手し、１５０ｍＬ／ｈｒに等しい排出速度となるように時間希釈した。時間希釈ブランク尿の連続希釈により１〜１０００ｎｍｏｌ／２４ｈｒ（又は０．１２４〜１２４ｎｇ／ｍｌ）の範囲に対応した標準物質を製造し、そして次に水で更に１／２に希釈した。標準曲線はカセットのアプリケーションウェル−に標準物質１４０μＬを添加し、そしてＭａｇｎａ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ磁気試験読み取り機で１５分後に対照及び試験系統のＭＡＲ値を読み取ることにより実施した。標準曲線は対照系統を用いて試験系統に関するＭＡＲ読み取り値により割ることにより得た（Ｔ／Ｃ）。得られた一点標準曲線のデータ及びフィットに関しては、表２及び図１７を参照のこと。
【０１８８】
（表２：Ｅ１ＧＭＡＲ標準曲線）
【０１８９】
【表２】
2009512871.tif 000004
月経周期に渡るＥ１Ｇの１日当たり排出速度を２５歳女性により提供された尿試料から測定した。記録された期間に渡り一夜尿試料を毎日収集し、次に水道水で時間希釈して１５０ｍＬ／ｈｒとした。次に時間希釈尿試料を各々更に１／２に希釈した後に１４０μＬをＥ１Ｇカセットに添加した。ＭＡＲの結果はＴ／Ｃで表示し、Ｅ１Ｇ排出速度（ｎｍｏｌ／２４ｈｒ）は相当する標準曲線から計算した。周期の試料はまた、同じ時間希釈尿を用いるが追加の１／２希釈を行うことなく、卵巣モニターＥ１Ｇアッセイ系（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｌ．Ｆ．等、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ  ６８：４６５−４７６（２００３））により分析した。両方のセットのデータとも、２連で収集し、平均で表した。２つのアッセイ系により測定したＥ１Ｇ平均排出速度の比較については表３を参照のこと（ＮＢ：周期の第１１及び１９日については試料収集が無かった）。
【０１９０】
（表３：ＭＡＲシステム及び卵巣モニターにより測定した場合の月経周期Ｅ１Ｇ排出速度）
【０１９１】
【表３】
2009512871.tif 000005
卵巣モニター誘導のＥ１Ｇ排出速度はＭＡＲ誘導の値より高値であるため、周期を規格化することにより２システムで得られたホルモン排出速度のパターンを比較できるようにした。これには、完全周期に対する平均のＥ１Ｇ排出速度のデータについて各方法が各個体の周期日の排出速度を差し引かれ、そして次にそれらの値を平均の差の標準偏差で割ることが必要であった（標準の正規変数変換）。規格化されたデータを図１８に示す。
【０１９２】
規格化されたパターンは優れた一致を示している。ＭＡＲＥ１Ｇ排出速度は有効な参考試験と同様に卵胞の生育及び成熟に関して同じ情報を保有している（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｌ．Ｆ．等、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ  ６８：４６５−４７６（２００３））。尿中Ｅ１Ｇ排出レベルの初回持続上昇の日を妊娠可能な第１日として定義した。その理由は、Ｅ１Ｇは生物学的に活性なエストロゲン、エストラジオールのバイオマーカーであり、そして増大はエストラジオールの発生源である潜在的に排卵している卵胞の選択を示す。ＭＡＲ及び卵巣モニター試験の両方とも第７日において実験誤差より高値の有意な上昇をもたらした。簡単な計算によりモニターデータに関するベースライン平均は１５５ｎｍｏｌ／２４ｈｒ、標準偏差が２５．３となる。計算はベースライン期間を定義し、そしてこの期間に渡る最高及び最低の排出速度の平均をとることにより行う。例えば、この周期においては、ベースラインは周期第２〜６日よりなる。１８０及び１２９ｎｍｏｌ／２４ｈｒの平均はベースライン期間の排出速度の平均に近似する。標準偏差への近似はベースライン期間における平均と最高の排出速度との間の差により与えられる。値が２３２ｎｍｏｌ／２４ｈｒである場合、排出速度が平均＋２標準偏差（２０５ｎｍｏｌ／２４ｈｒ）を超過する初日は第７日である（表２）。ＭＡＲデータについては、計算によれば平均は８．８ｎｍｏｌ／２４ｈｒ（ＳＤ＝５．６）となり、即ち、閾値は２０ｎｍｏｌ／２４ｈｒであり、これは明らかに第７日において９１．３ｎｍｏｌ／２４ｈｒのＥ１Ｇ排出速度により超過されており、卵巣内に成長中の卵胞が存在することを示している。第１１日の試料は欠失しており、そしてこれは両方のアッセイによるＥ１Ｇ排出のピーク日である可能性が最も高い。
【０１９３】
（実施例１２）ＰｄＧ標準曲線及びＰｄＧ月経周期排出速度
標準物質を製造するためのブランク尿は４歳半の女児より入手し、１５０ｍＬ／ｈｒに等しい排出速度となるように時間希釈した。時間希釈ブランク尿の連続希釈により０．０１〜５００ｎｍｏｌ／２４ｈｒ（又は１．３８〜６９，０００ｎｇ／ｍｌ）の範囲に対応した標準物質を製造し、そして次に水で更に１／５に希釈した。標準曲線はカセットのアプリケーションウェル−に標準物質１４０μＬを添加し、そしてＭａｇｎａ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ磁気試験読み取り機で１５分後に対照及び試験系統のＭＡＲ値を読み取ることにより実施した。標準曲線は対照系統を用いて試験系統に関するＭＡＲ読み取り値により割ることにより得た（Ｔ／Ｃ）。得られた一点標準曲線のデータ及びフィットに関しては、表４及び図１９を参照のこと。
【０１９４】
（表４：ＰｇＤＭＡＲ標準曲線）
【０１９５】
【表４】
2009512871.tif 000006
月経周期の第７〜２６日に渡るＰｄＧの１日当たり排出速度を３３歳女性により提供された尿試料から測定した。記録された期間に渡り日中の尿試料を毎日収集し、次に水道水で時間希釈して１５０ｍＬ／ｈｒとした。次に時間希釈尿試料を各々更に１／５に希釈した後に１４０μＬをＰｄＧカセットに添加した。ＭＡＲの結果はＴ／Ｃで表し、ＰｄＧ排出速度（ｎｍｏｌ／２４ｈｒ）は相当する標準曲線から計算した。周期の試料は又、同じ時間希釈尿を用いるが追加の１／２希釈を行うことなく、卵巣モニターＥ１Ｇ試験系（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｌ．Ｆ．等、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ６８：４６５−４７６（２００３）により、そして更にＨｅｎｄｅｒｓｏｎ  Ｋ．Ｍ．等、Ｃｌｉｎ  Ｃｈｉｍ  Ａｃｔａ．Ｄｅｃ２９；２４３（２）：１９１−２０３（１９９５）の変法を用いて追加的１／５０希釈を行いながらＥＬＩＳＡによっても分析した。全ての組のデータを２連で収集し、平均で表したが、例外として３日間のＭＡＲデータの場合はＴ／Ｃ値は対照系統を決定するための読み取り機の誤作動により計算することができず、これらの日については、結果は必然的に単一点となっている。３種の異なるアッセイ系により測定したＰｄＧ平均排出速度の比較については表５を参照のこと（ＮＢ：周期の最初の６日間については試料収集が無かった）。
【０１９６】
（表５：ＭＡＲシステム、卵巣モニター及びＥＬＩＳＡにより測定した場合の月経周期ＰｄＧ排出速度）
【０１９７】
【表５】
2009512871.tif 000007
卵巣モニター誘導のＰｄＧ排出速度はＭＡＲ誘導の値より高いため、周期を規格化することにより３システムで得られたホルモン排出速度のパターンを比較できるようにした。これは前回のＥ１Ｇデータについて記載したとおり標準の正規変数変換を用いて実施した。規格化されたデータを図２０に示す。
【０１９８】
ＭＡＲカセットで得られた絶対的なＰｄＧ排出速度は低値であるが、プロフィールは方法の実験誤差内で同一である。排卵後のＰｄＧの上昇は全ての場合において第１６日には顕著である。卵巣モニターＰｄＧ妊娠可能性マーカーは以下の通り設定される。即ち、妊娠可能性の終了をマークするＰｄＧ閾値は≧６．３μｍｏｌ／２４ｈｒに設定され（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｌ．Ｆ．等、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ６３，５．（１９９８））、排卵マーカーの生化学的証明は９μｍｏｌ／２４ｈｒに設定され、そして十分な黄体（妊娠支援可能）の証明のためのマーカーは１３μｍｏｌ／２４ｈｒに設定される。ＭＡＲシステムに関して規格化すれば、これはそれぞれ２．２、４．６及び６μｍｏｌＰｄＧ／２４ｈｒの排出速度読み取り値に解釈される。卵巣モニター及びＭＡＲシステムの両方につき、これらの３閾値は両システムに対してそれぞれ第１６、１９及び２０日に到達され、例えば、データを規格化すると、２システムは重要なＰｄＧ妊娠可能性マーカーの全てにつき同じ日を与えることがわかった。
【０１９９】
（実施例１３）月経周期データへの適用
妊娠可能性期間の開始のマーカーとしてのＥ１Ｇ排出速度
データはＭＡＲ試験の結果が参考試験（卵巣モニター又は自宅用ＥＬＩＳＡアッセイ）を模倣していることを確認する。即ち、成長中の卵胞の有無及びその成熟までの成長に後続して、Ｅ１Ｇ排出速度の上昇及び排卵が起こり得、そして黄体の質はＰｄＧ排出速度の規模によりモニタリングできる。時間希釈尿試料により、そして、妊娠可能時期の開始に関するＴｒｉｇｇの追跡信号により求められる先行するベースラインを超える初回の統計学的に有意な上昇の日（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｌ．Ｆ．ａｎｄ  Ｂｒｏｗｎ  Ｊ．Ｂ．、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ５７：５５４（１９９２））からＥ１Ｇ排出の周期中間ピークの後の日までを用いた場合のＥ１Ｇ排出速度について、公になっているＲＩＡデータ（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｌ．Ｆ．等、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ  ６８：４６５−４７６（２００３））から２０周期について与えられる排卵の予測的警告は図５に示す通りとなった。これは時間希釈尿試料を用いたＥ１Ｇ排出速度のモニタリングから予測されるべき警告であり、そして、おそらくは最長の精子生存時間（＞６日）の場合を除き、妊娠を回避するためには十分早期である５．７日（Ｎ＝２０）の平均警告を与える（Ａｕｓｔｉｎ  ＣＲ，Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｆｅｒｔｉｌ  Ｓｕｐｐｌ  ２２：７５−８９（１９７５））。妊娠のわずか６％のみが３日超の精子生存時間によることが推定されている（Ｗｉｌｃｏｘ等、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ３３３：１５１７−２１（１９９５））。更に、Ｅ１Ｇに基づいた排卵の短い警告期間の周期を有する女性は、これがより長いＥ１Ｇ上昇の周期を有する女性に与えられる警告の日数である場合よりも、妊娠可能期の開始の十分な警告を有していた可能性が高い。その理由は、このようなＥ１Ｇに基づいた排卵の短い警告期間の周期は精子生存期間延長を支援するとは考えにくく、なぜならばエストロゲンの機能の１つは妊娠可能粘液の刺激であり、これがない場合は精子の生存はますます短くなるためである。初回上昇日から推定排卵日を図２１に示す。より大規模な研究（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｌ．Ｆ．ａｎｄ  Ｂｒｏｗｎ  Ｊ．Ｂ．、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ  ５７：５５４（１９９２））によれば、エストロゲン排出速度の初回の統計学的に有意な上昇の検出は６．５±１．４日の切迫した排卵の警告を与えることがわかっている。これらの数値はＰＭＰカセットアッセイにより決定されたＥ１Ｇ排出速度に適用される。
妊娠可能期の終了のマーカーとしてのＰｄＧ排出速度
妊娠可能性の終了の何れのマーカーも周期中間のＥ１Ｇ（又はＬＨ）のピーク日よりも前にそれが起こることを正確に説明しているはずがないことは広く受け入れられている。表６に示す通り、ＲＩＡで分析された２０周期について、ＰｄＧの閾値を超えた最も早期の日は周期中間のＥ１Ｇピーク排出速度の日の２日後に来ている（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｌ．Ｆ．等、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ  ６８：４６５−４７６（２００３））。ＰｄＧ閾値を使用することは、排卵との時間的関連を超えて伸長する妊娠可能期間の終了を定義するための他のマーカーよりも追加的な利点を有している。尿中ＰｄＧの発生源であるプロゲステロンの高い循環系中濃度は不妊粘液の生産の刺激を介して不妊に関連している。実際、これはプロゲステロンのみのミニピルの作用の主な手段の１つである（排卵は周期の５０％において防止されるのみであると推定されていた）。更に、排卵前の期間のプレグナンジオール（プロゲステロンとＰｄＧとの間の中間体）の高い循環系中レベルは不妊及び高い自然流産率に関連していることが知られている。最後に、卵巣モニターの経験年数の推定合計４０００の女性全体を通して、この閾値マーカーの使用に起因する妊娠がないという事実は、妊娠可能期間の終了を判定するためのその有効性について、最も強い証拠を与えている（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｌ．Ｆ．等、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ  ６３，５（１９９８））。Ｅ１ＧピークからＰｄＧカットオフ日の数を図２２に示す。
【０２００】
ＭＡＲカセットの再現性が卵巣モニターと合致し得ると仮定すれば、ＭＡＲ試験による時間希釈尿の使用（例えば水和状態について試料を補正）は公になっているＰｄＧ排出速度データにより示されるものと同様の警告を与えることになる。
抗体並びにＭＡＲＥ１Ｇ及びＰｄＧ標準曲線の位置
最良の結果のためには、測定を標準曲線の動作範囲ないで行うことが必須である。例えば図１７に示すＥ１Ｇ標準曲線は標準物質及び試料を１／２に希釈する場合に約１〜１００ｎｍｏｌ／２４ｈｒの排出速度範囲に渡って最適である。しかしながら、月経周期Ｅ１Ｇ排出速度の正常な範囲は約８〜４６５ｎｍｏｌ／２４ｈｒであるため、１／２の追加的希釈を行ったとしても、試験からの信号は標準曲線の低値部分のみを包含することになる。計算によれば、そして実験で確認された点として、Ｅ１Ｇ標準物質の追加的な１／５希釈及び時間希釈試料は月経周期尿の測定のためのＭＡＲカセットからの最適な応答を与えることになる。換言すれば、現在のカセットは２〜４０ｎｍｏｌ／２４ｈｒの範囲に渡って最良に操作されている。
【０２０１】
ＭＡＲＰｄＧ試験システムにおいて使用されている現在の抗体と同様、最適なＰｄＧ標準曲線は０．００２〜１０μｍｏｌ／２４ｈｒの排出速度範囲に対応している。
【０２０２】
即ち、現在の抗体はＥ１Ｇ試験のためには時間希釈試料の１／５希釈を、そしてＰｄＧ試験のためには１／２５希釈を必要とする。
【０２０３】
通常の周期においてこれらの希釈を回避するためには、正常な月経周期については時間希釈試料の希釈が必要とならないような特徴を有する新しい抗体を作製する必要がある。これは標準的なハイブリドーマ技法又はより低感度の抗体用の他の近代的な抗体作製技法により製造されるクローンをスクリーニングすることにより達成できる。伝統的には、市販の抗体の製造者は最低の可能な検出限界を与えるクローンを選択する。本発明の目的で、クローンはより低感度の特性を有するが、時間希釈、及び恐らくは未希釈の尿試料におけるＥ１Ｇ及びＰｄＧの排出速度の測定のために理想的なクローンが選択され得る。
【０２０４】
また、既存のＥ１Ｇ及びＰｄＧモノクローナル抗体に対して選択する場合には元々形成されている代替クローンにより望ましい特性が無いか再検討してもよい。上記した通り、クローンが高力価、高親和性の抗体（低検出限界）を与えない場合は、最大の選択性がほぼ常時求められているＥＬＩＳＡアッセイでは、通常はそれ以上検討されない。
【０２０５】
代替の解決法は適切なステロイド類縁体を用いて作製された捕捉物質及び捕捉蛋白質に対するリンカーを用いることにより、より低感度の標準曲線を与える市販の抗体捕捉物質結合対を見出することである。この場合、入手可能なモノクローナル抗体に対するステロイドリンカーコンジュゲートを含め、種々のステロイド誘導体のスクリーニングを行う。同じ抗体を用いた場合であってもそのようなスクリーニングからは異なる感度の標準曲線が得られる場合があることを示す一部証拠が存在する。
【０２０６】
例えば、Ｅ１Ｇグルコースオキシダーゼコンジュゲートと共に使用した場合のモノクローナル抗体（Ｗａｌｌａｃｅｖｉｌｌｅ  Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｒｅ（ＷＡＲＣ），Ｕｐｐｅｒ  Ｈｕｔｔ，Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ）は、５０００ｎｍｏｌ／２４ｈｒの中間点を有する標準曲線を与えており、これは予め希釈した尿試料で使用するためには感度が低過ぎる。このアッセイ系は本明細書に記載したＰＭＰカセットアッセイよりも２５０倍低感度であった。８炭素リンカーを有するエストロンＢＳＡコンジュゲートをこの抗体と共に使用した場合、標準曲線はなお低感度となった。一方、同じ抗体は、尿試料中のＥ１Ｇの月経周期排出速度を測定するために６−ケトエストロンカルボキシメチル−オキシム及びエストロンヘミスクシネートコンジュゲートと共に使用される（Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ  Ｋ．Ｍ．等、Ｃｌｉｎ  Ｃｈｉｍ  Ａｃｔａ．Ｄｅｃ  ２９；２４３（２）：１９１−２０３（１９９５））。従って、正しいリンカーの選択により所望の感度の標準曲線を得ることができる。
【０２０７】
表面プラズモン共鳴及びＥ１Ｇに対するＷＡＲＣモノクローナル抗体を用いた結合研究によれば、結合は使用する捕捉蛋白質及びリンカーの関数であることが示された。
【０２０８】
（表６：表面プラズモン共鳴により測定したＢＳＡコンジュゲート結合）
【０２０９】
【表６】
2009512871.tif 000008
６−アミノヘキサン酸部分で連結されたＢＳＡＥ１Ｇコンジュゲート（ＢＳＡ−Ｃ５−Ｅ１Ｇ）は、それが最小数のＥ１Ｇ分子／蛋白質及び最低感度の標準曲線を有していたため、最良の結合をもたらした。より低結合のコンジュゲートの多くがより高感度の標準曲線を与えると期待される。
試験の精度
側方流動又はディップスティックアッセイの共通の問題点はコンジュゲートパッドからの着色された試薬の放出の一貫性である。定量的試験の精密さはこの特徴に大きく依存している。コンジュゲート適用、再水和、流量及び放出された粒子の数の変動などの要因が全て組み合わさって精密さを下げる。従って、次の段階では、コンジュゲートパッドをアッセイ系から外し、そしてチューブ又はシリンジ内の凍結乾燥した試料と置き換える。即ち、次にコンジュゲートを再水和させ、尿試料の存在下に再懸濁し、そしてカセットの試料パッドに適用することができる。この方法により、試験の精密さは劇的に向上する。図１８及び８に示す通り参考アッセイにより得られる卵巣の活動の関数としての値の変化と平行し、１０％未満の変動係数を有する排出速度の獲得は独特である。これらのデータは、例えば図１９及び２０に示す通り、その態様の全てにおいて、ヒトを含めた哺乳類の生殖生物学へのＥ１Ｇ及びＰｄＧの排出速度の適用に関して存在する大量の文献及び他のデータにアクセスできる（Ｂａｉｒｄ等、Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ７１（１）：４０−４９（１９９９））。
【０２１０】
疎水性物質とのコンジュゲートの結合を回避し、そして、シリンジ又は関連の装置を使用することにより、女性が時間希釈尿試料を収集し、次いで自動的に試料の小分量を取り出し、そして設定された容量を正確にカセットに適用できるようになる装置を想定することができる。
結果の計算
カセット試験からのアウトプットは試験系統及び１以上の対照系統に局在化する結合した常磁性粒子の磁気強度よりなる。コンジュゲートパッド放出の変動は、単一のホルモンの濃度の反復実験により単純に観察することができ、その場合、それは自身を全般的な大きなストリップ毎の変動又は高度なストリップ毎の反復性とそれに伴う時折の極端な除外値として表示する。変動のこれらの型の両方とも、割合（Ｔ／Ｔ＋Ｃ）として、又は、比（Ｔ／Ｃ）として、対照系統に対するデータを表示することにより部分的に補正できる。即ち、最良フィット線からの大きな偏移及び一点異常を示す標準曲線を回避するために、Ｔ対ｌｏｇ［ホルモン］の単純なプロットを対照系統補正データの使用で置き換えた。しかしながら、Ｃ及び（Ｔ＋Ｃ）は共にホルモン濃度への依存性を示す（例えば標準曲線を示す）ため、ｌｏｇ［ホルモン］に対して３つの方法（Ｔ、Ｔ／Ｃ又はＴ／（Ｔ＋Ｃ））によりプロットした標準曲線の間には有意な差がある。図２３はＰｄＧＭＡＲ標準曲線補正法に影響する要因を示している。
標準曲線は以下の式：
【０２１１】
【化１】
2009512871.tif 000009
への非直線回帰により適合させる。
【０２１２】
式中Ｙ∝は最低読み取り値（無限大標準排出速度における）、Ｙ０はゼロ排出速度における読み取り値であり、そしてＥＣ５０は標準曲線の中間点における排出速度である。
【０２１３】
Ｅ１Ｇ又はＰｄＧの標準物質が尿試料と同様に希釈される限り、Ｅ１Ｇ又はＰｄＧの排出速度は単に、ｎｍｏｌ／２４ｈｒ（Ｅ１Ｇ）又はμｍｏｌ／２４ｈｒ（ＰｄＧ）において適切な標準曲線から外挿することにより求められる。
【０２１４】
（実施例１４）時間希釈尿試料を用いた容量調節
尿に基づく定量的アッセイは典型的には尿中の検体の濃度と検体の排出速度との間の相違に着目しなければならない。明らかに、単位時間当たりの尿生産速度が大きいほど、検体はより希釈されることになり、これはそれが一定速度で膀胱内に放出される場合でも当てはまる。本発明の方法の重要な利点の１つは、１５０ｍＬ／尿収集時間の一定の排出速度に時間希釈された尿試料において排出速度を決定する点である。時間希釈尿試料の分析は、この方法が水和状態の変動に対して補正を行うという理由のみならず、尿試料間の如何なるマトリックス作用も最小限とされる（それをより一定にすることにより）という理由によっても、可能な最も正確なデータを与える（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｌ．Ｆ．等、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ  ６８：４６５−４７６（２００３）参照）。
【０２１５】
部分補正は初日午前中排尿試料を収集することにより作製できる。この方法は、水分摂取及びエネルギー消費は日中が最も変動するため、尿生産速度は夜間に渡る方がより一定であるという前提に基づいている。しかしながら、本発明者等の研究室における経験によれば、月経周期の持続時間に渡り、早朝尿試料における尿生産速度（ｍＬ／ｈｒ）の範囲は、因数１０のオーダーである。補正の他の手段はクレアチニン濃度で割ることである。この方法はクレアチニンの排出（筋肉質量に関連する）は一定であるという前提に基づいている。しかしながら、クレアチニン排出は年齢に従って減少し、そして栄養状態と共に変動し、そして中等度から重度の運動により影響されることがわかっている。
【０２１６】
特に不妊患者に対して使用するための最も簡素な操作法は、較正された容器に既知時間に渡る試料を収集（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｌ．Ｆ．等、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ  ６８：４６５−４７６（２００３）に記載）し、そして１５０ｍＬ／ｈｒに希釈することである。簡便のために２４時間当たりとして表示されるが、収集時間は、３時間程の短時間であってよい。
【０２１７】
尿容量に対する補正を可能にする化学的特性に基づく新しい方法を開発してよい。
【０２１８】
（実施例１５）排出速度の例示される適用
正確で再現性のあるＰＭＰカセットアッセイが存在すれば、Ｅ１Ｇ及びＰｄＧの排出速度の適用は多数が可能である。本発明者等は妊娠可能性及び不妊の全ての臨床及び自宅用途の態様においてＥ１Ｇ及びＰｄＧの排出速度を使用するためのプロトコルを開発することを意図している。プロトコルの原理は以下の通りである。
【０２１９】
Ｅ１Ｇ排出速度の初回の統計学的に有意な上昇は成長中の卵胞の存在、従って、潜在的な妊娠可能性の開始を示す。
【０２２０】
卵巣モニターの場合の６．３μｍｏｌ／２４ｈｒ又はＰＭＰカセットアッセイの場合のそれと同等であるもののような閾値を超えるＰｄＧ排出速度の上昇は妊娠可能性の終了を示す。
【０２２１】
Ｅ１Ｇ排出速度の周期中間のピークとそれに後続するＰｄＧ排出の速度における僅かな上昇は排卵及び妊娠達成のための交接について最高の妊娠可能性時期を示す。
【０２２２】
排卵の生化学的証明は９μｍｏｌ／２４ｈｒの卵巣モニターアッセイ相当より高いＰｄＧ排出速度の上昇により与えられる。
【０２２３】
十分な黄体は１３μｍｏｌ／２４ｈｒの卵巣モニターアッセイ相当より高いＰｄＧ排出速度の上昇により示される。
【０２２４】
以下の実施例はこれらの試験を妊娠可能性及び不妊の臨床及び個人による管理に組み込んでよい方法の代表例である。考察する実験の大部分は卵巣モニターを用いた自宅モニタリングにより得られている。しかしながら、卵巣モニターのデータにＰＭＰカセットアッセイが実質的に同等であるとすれば、記載したプロトコルはＰＭＰ相当分に何れかの閾値を調節することによりＰＭＰカセットアッセイに直接移し変えられる。
１．妊娠の回避−正常周期
尿試料を収集し、最低３時間の収集について時間に従って希釈した（１５０ｍＬ／ｈｒ）。尿はＥ１Ｇについては５０μＬの時間希釈尿、ＰｄＧについては１０μＬの時間希釈尿を用いて卵巣モニターにより分析した。結果は単位時間当たりの透過光単位における変化として報告し；Ｅ１Ｇ試験についてはΔＴ／２０分、そしてＰｄＧ試験についてはΔＴ／５分とした。これは対象自身により自宅で決定される典型的な周期である。Ｅ１Ｇ排出速度は周期の卵胞期では毎日測定し、そしてＥ１Ｇピーク日が判明すれば、測定はＰｄＧに切り替えた。
【０２２５】
（表７：妊娠回避に関して収集された卵巣モニター周期データ）
【０２２６】
【表７】
2009512871.tif 000010
妊娠可能期の開始は見かけ上は第１３日であり、その時点でＥ１Ｇの排出速度は前回のベースライン平均を超える。これは卵巣アロマターゼの活性の発現を示し、そして、エストロゲン環境により卵が包囲されている優性な卵胞が存在することを示している。この卵胞は排卵において、又は、閉鎖において、その寿命を終えることになる。上昇はベースラインとして５〜１２日を取ることにより計算してよい。概ねの平均は（５３＋９８）／２即ち７５．５（［最低＋最高／２］）である。概ねの標準偏差は（９８−７５．５）即ち２．５（最高−平均）である。ＳＤの二倍は４５であるため、閾値は（７５．５＋４５）即ち１２０．５（平均＋２ＳＤ）となる。この計算された排出速度を超える初日は目視評価と合致して第１３日である。ピークＥ１Ｇ日は第１６日であり、これは最も妊娠可能性の日として第１７日を示している。妊娠可能性の終了は、ＰｄＧ値がＰｄＧ閾値を超えるため第１８日である（１８０ΔＴ／５分−卵巣モニターＰｄＧチューブのこの組に付き６．３μｍｏｌ／２４ｈｒと同等）。
【０２２７】
Ｅ１Ｇ及びＰｄＧのプロフィールが卵巣モニターにより得られたものと平行していたため、同様のアルゴリズムをＭＡＲカセットデータに適用できる（図８及び２０参照）。ＭＡＲカセットプラットホーム上の重要な値は前臨床研究において完結させる必要がある。
【０２２８】
第１３日が妊娠可能時期の第１日であることから、上記したデータを第１２日後の交接を回避することにより妊娠を回避するために利用できる（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，Ｌ．Ｆ．ａｎｄ  Ｂｒｏｗｎ  Ｊ．Ｂ．，Ｓｔｅｒｏｉｄｓ，５７，５４４（１９９２））。ＰｄＧ値がカットオフを超えれば、交接（上記実施例においては第１８日）は、次回出血まで周期は不妊であるため、再開してよい。このプロトコルの使用の例は、Ｂｒｏｗｎ等、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ−Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １６５：２００８−１１（１９９１）に記載されている。明らかに、本発明は同様の用途に役立つ。
２．連続体（Ｃｏｎｔｉｎｕｕｍ）を介して進路設定する場合の妊娠の回避
無月経から完全妊娠可能排卵周期までの女性により経験される卵巣の活動の範囲は、連続体と称される（Ｂｒｏｗｎ，ＪＢ，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｂａｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｂｌｅｍｓ  ｏｆ  ｎａｔｕｒａｌ  Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ａ  ｍｅｅｔｉｎｇ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｐｏｎｔｉｆｉｃａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｉｎ  Ｒｏｏｍ（１９９４））。連続体を経由する進行は初潮に先行する年から初潮後約３年まで、そして分娩後妊娠可能に戻る間にも明確に観察され、その間、連続体を経由する回帰は女性が閉経に近づくに従って経験される。連続体の下端に包含される他の女性（例えば生殖能力が正常より劣る卵巣活動性を有するもの）には、非機能性出血を有する女性及び経口避妊薬の使用後に妊娠可能に戻っている女性が包含される。不全である卵巣活動はまたプロのスポーツ選手及び究極的な身体的又は精神的なストレスが伴っている環境にあるか、体重減少にある他の女性においても共通している。２０〜４０歳の群内であっても、無ストレス女性における完全排卵周期の発生率は僅か９０％である。
【０２２９】
周期ごとの連続体における女性の位置の変化は予測不能であり；連続体における一部の段階は省略される場合もあり、そして完全排卵周期は何れの時点においても起こりえる。連続体の不妊領域の一次的通過により生じる症状における混乱はＮＦＰにおける未計画妊娠の主な原因の１つである。
【０２３０】
大部分の自然家族計画方法に関わる問題点はそれらが主に連続体の上端の女性、例えば妊娠可能性の伝統的なパターンを示す定期的排卵周期を有する女性にのみ適合している点である。これらの方法が不規則な周期を有する「他の」女性を考慮すれば、ガイドラインは通常は生涯に渡る長期で過剰な非交接期間及び実際は頻繁に低妊娠可能性が伴う状態がガイドラインには備わっている。
【０２３１】
妊娠回避のために卵巣モニターを使用する女性の多くは、不規則な周期及び自然家族計画のより伝統的な方法がそれらに対してもたらしている関連問題点が理由となって、それを行っている。計画とは異なる妊娠を既に経験しているこのサブグループの比率は特に高値（５０％）である（Ｂｒｏｗｎ等、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ−Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  １６５：２００８−１１（１９９１））。これらの女性の場合、モニターの魅力は方法が与える安全性であり；ホルモン試験は妊娠可能性のそれらの期間及び連続体内における変化点を精密に定義できるようにする。連続体の期間全体を通じて卵巣モニターを使用するためのガイドラインは極めて直接的である。Ｅ１Ｇレベルが上昇すれば、優勢な卵胞が存在し、妊娠可能性を想定できる。Ｅ１Ｇレベルが低下すれば、周期はＰｄＧ試験により排卵について試験しなければならない。ＰｄＧ閾値が不妊に達すれば、次回月経出血まで安全であると想定してよい。卵巣モニターホルモンアッセイにより決定されるものとしての連続体内の異なる位置について以下に概説する。
【０２３２】
卵巣活動が完全に不在である場合、Ｅ１Ｇ及びＰｄＧのレベルは均一に低値のままであり、そして月経は起こらない。明らかに、これは連続体の最低レベルを示しており、そして絶対的不妊と関連している。この状況は永久又は一時的であってよい。
【０２３３】
Ｅ１Ｇレベルが出血エピソードの間で上昇して下降するように観察されるがＰｄＧレベルは均一に低値である場合、周期は無排卵である。無排卵周期は２つの主要な範疇に分類される。最も一般的な型においては、Ｅ１Ｇレベルが上昇して卵胞が発達したことを示すが、エストロゲンの上昇はＬＨ急増をトリガーするためには不十分であり、そして卵胞は閉鎖により死滅し、これによりＥ１Ｇレベルは低下し、エストロゲンの離脱により出血が起こる。他の無排卵周期においては、Ｅ１Ｇレベルは上昇して定常状態に達し、そして値はこの定常値に可変の長さの期間留まる。Ｅ１Ｇの定常レベルは通常の排卵前Ｅ１Ｇピークよりも通常は低値であり、そして、突破口現象として最終的には出血が起こり、例えば延長された期間に渡る循環系中のエストラジオールの上昇したレベルは維持不可能なレベルにまで子宮内膜層の過剰な増殖をもたらす。
【０２３４】
未破壊の黄体形成した卵胞は連続体の次の段階を示す。これらの周期において、Ｅ１Ｇレベルは上昇して下降するが、完全排卵ＬＨピークを誘発するには低値すぎるエストラジオールレベルを示す。しかしながら、これは卵胞の一部のＬＨ媒介黄体形成を誘発するには十分である。部分的黄体形成はＥ１Ｇ低下後のＰｄＧレベルの最低限の上昇をもたらすが、その最適未満のレベルは卵胞が決して排卵性にならなかったことの証拠を与えている。ＰｄＧレベルが２日間以上４．５〜６．３μｍｏｌ／２４ｈｒに上昇すれば、黄体形成未破壊卵胞を有するものとして周期が定義される。
【０２３５】
上記した無排卵状態の全てが、介在する出血を伴うか伴うことなく、その直後に妊娠可能排卵応答を示すという事実は、連続体内で移動がある場合に女性が直面する困難な点の一部を明らかにしている。
【０２３６】
短期又は不全な黄体期を有する周期は連続体における次の工程を示している。不全な黄体期とはＰｄＧの値が５μｍｏｌ／２４ｈｒを超えるまで上昇するが、９μｍｏｌ／２４ｈｒの排卵閾値まで到達しないものであり、そして短期の黄体期とはＰｄＧ値が９μｍｏｌ／２４ｈｒを超えるが排卵後の段階の持続が１１日間以下であるものである。両方の周期が通常の卵胞期を伴っているが、その黄体期が妊娠を支援できないため、周期は不妊である。
【０２３７】
妊娠可能排卵周期は連続体において最高のレベルを示す。妊娠可能周期は明確なＥ１Ｇピークとその後の排卵及び黄体期を特徴としており、これは９μｍｏｌ／２４ｈｒのＰｄＧ排出速度を超過し、最低１２日間持続する。これらの最小限のレベルにおいては、妊娠率は周期当たり２５％となる。より高値のＥ１Ｇ及びＰｄＧ値（ＰｄＧ３６μｍｏｌ／２４ｈｒ）はより一般的であり、そして、周期当たり７０％の妊娠率を伴っている（Ｂｒｏｗｎ，ＪＢ，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｂａｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｂｌｅｍｓ  ｏｆ  ｎａｔｕｒａｌ  Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ａ  ｍｅｅｔｉｎｇ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｐｏｎｔｉｆｉｃａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｉｎ  Ｒｏｏｍ（１９９４））。エストロゲン類縁体及びゴナドトロピンの投与は更に妊娠可能性を上昇させ、そして過剰排卵を誘発することにより多胎妊娠の可能性を増大させる。このような治療は長期の不妊を有する患者において４７％の妊娠率を与えている（Ｂｒｏｗｎ，ＪＢ，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｂａｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｂｌｅｍｓ  ｏｆ  ｎａｔｕｒａｌ  Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ａ  ｍｅｅｔｉｎｇ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｐｏｎｔｉｆｉｃａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｉｎ  Ｒｏｏｍ（１９９４））。
３．授乳後の妊娠可能性への回復
ホルモン系の避妊が禁忌である場合、家族計画は困難になる。妊娠の機会は完全母乳育児の場合は恐らくは２％未満（Ｋｅｎｎｅｄｙ等、Ｃｏｎｔｒａｃｅｐｔｉｏｎ３９：４７７−９６（１９８９））あるが、妊娠可能性が回腹し、妊娠の機会が増大する時期が存在する。初回分娩後月経出血の前に排卵周期が起こる場合がある。卵巣ホルモンのモニタリングは、妊娠可能性を回復するこの時期を女性が安全に通過する場合の指針となる。以下の期がメルボルン実験に基づいて認識されている（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，Ｌ．Ｆ．等、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ，６３，５．（１９９８）参照）。
Ｅ１Ｇベースラインの確率：
これは毎日、連続して、Ｅ１Ｇに関する尿試料を７日間の期間に渡り試験することにより行う。モニターデータの適用の経験のある仲介者が結果を通知され、そしてベースラインＥ１Ｇレベルが女性に対して確立される。各女性が個体として取り扱われなければならない。
分娩後０〜６ヶ月の間の使用：
Ｅ１Ｇ排出速度は週２回確認する。Ｅ１Ｇ排出速度がベースラインレベルより低値である場合は、女性は可変の日数の不妊期にある。Ｅ１Ｇ排出速度が低値であれば、実験は６〜７日間が経過するよりも前には新しい卵胞が発生しないであろうことを示唆しており、従って、無制限交接のための１週間の安全が示される。Ｅ１Ｇ排出速度がベースラインより高値にあるか、又は、Ｂｉｌｌｉｎｇｓ排卵方法に記載の通り基本的不妊粘液パターン（ＢＩＰ）における変化がある場合は、毎日のＥ１Ｇ試験を継続する。追加的な試験のための用法をクライアントに進言する仲介者は通知を受けてよい。６ヶ月より早期に妊娠可能に回復する過去の経験がある場合は、Ｅ１Ｇ排出速度は０〜２ヶ月から週２回確認しなければならず、その後は週３回に増加させる。
分娩後６〜９ヶ月の間の使用：
Ｅ１Ｇ排出速度は３日毎に確認する。個体のベースライン値以下となった場合は、女性は不妊期にあるが、無制限交接のために可能な自由時間は少なくなる。Ｅ１Ｇ排出速度がベースラインより高いか、又はＢＩＰに変化があった場合は、毎日Ｅ１Ｇ試験を継続する。仲介者は追加的な試験を進言することになる（恐らくはインターネット又はリーダーアルゴリズムを介して）。
９ヶ月〜離乳までの使用：
Ｅ１Ｇ排出速度は２日毎に確認する。ベースラインレベル以下であれば、女性は不妊期にある。Ｅ１Ｇ排出速度がベースラインより高いか、ＢＩＰに変化があれば、毎日Ｅ１Ｇ試験を継続する。仲介者は追加的な試験を進言することになる。
結果の解釈に関するコメント
Ｉ  不妊日：ｉ）ベースライン値以下のＥ１Ｇ排出速度。ｉｉ）カットオフ又は閾値を超えたＰｄＧ値。
ＩＩ  妊娠可能日：個体のベースライン値を超えた上昇Ｅ１Ｇ排出速度及びそれに伴う低ＰｄＧ排出速度。
【０２３８】
ベースラインを超えたＥ１Ｇ排出速度の上昇は潜在的妊娠可能期の開始を示す。Ｅ１Ｇ値はピークに達するまで３〜７日間上昇を続ける。次にそれらは急激に低下する。低下日にＰｄＧ測定を開始しなければならない。低下日のＰｄＧ排出速度は低値となるが、上昇を続け、そして第３日にはＰｄＧカットオフ値（又は閾値）に接近するか、又はこれを超過する。カットオフに達すれば排卵は既に起こっており、そして妊娠可能期は終了している。周期の残余については更に試験をする必要はない。
【０２３９】
Ｅ１Ｇ排出速度が基本的不妊パターン（ＢＩＰ）における変化を伴わずにベースラインを超えるのは僅か１日のみである。上昇Ｅ１Ｇ排出速度日は交接に使用できないが、Ｅ１Ｇのベースライン排出速度及び継続中の基本的不妊粘液パターンを伴う翌日は不妊期の回復を示している。
【０２４０】
Ｅ１Ｇ排出速度が２日以上そのレベルを超えたままであれば、Ｅ１Ｇ排出速度の周期中間低下を待ちながら交接を保留することが推奨され、ＰｄＧ測定をこの日に開始する。ＰｄＧ排出速度がカットオフまで上昇すれば、排卵が起こっており、そして後期の不妊日が開始しており、そして交接は再開してよい。しかしながら、ＰｄＧ排出速度がＥ１Ｇ低下後２日又は３日に低値に留まっていれば、Ｅ１Ｇ排出速度の試験を再開又は継続する。Ｅ１Ｇ排出速度がベースラインに戻り、そして低値のＰｄＧ排出速度を伴いながら３日間ベースラインに留まっていれば、不妊期が回復している。交接は基本的不妊パターンと組み合わせてＥ１Ｇベースラインを適用しながら再開することができる。
【０２４１】
一部の周期においては、ＰｄＧ排出速度は上昇するが出血開始前にカットオフに到達しない。他の周期においては、カットオフまでのＰｄＧの上昇は緩徐である。Ｅ１Ｇピーク後第４日に交接を再開できるが、ただし、ＰｄＧ値の明確な上昇が記録されており、そしてカットオフ値の４分の３に達していることが必要である。これは「４分の３カットオフルール」として知られている。しかしながら、このルールを最初に使用する前に、そしてその適用に疑問がある場合は、仲介者に相談しなければならない。
【０２４２】
卵巣の活動をモニタリングする場合、ステレオタイプのパターンは予測されず、そして女性が何を期待しようともホルモン値を無視することはできず；それらが悪いとはいえない。
例示的適用
４．５ヶ月の間完全母乳栄養のＣＢ。クライアントは自宅でモニタリングを開始し、そしてベースラインが確立した。潜在的妊娠可能に関するアドバイスは上記ガイドラインに基づいて熟練したモニター技術者により行われた。
【０２４３】
（表８：授乳後妊娠可能性回復のための卵巣モニターの使用（妊娠回避））
【０２４４】
【表８】
2009512871.tif 000011
４．妊娠の達成
Ｅ１Ｇ及びＰｄＧ排出速度を測定するための卵巣モニターを使用した良好な受胎の例を以下に示す。
【０２４５】
Ｅ１Ｇ排出速度低下の日を交接時限とすることは、妊娠を達成する手段として、困難が経験されている場合には有効である。この女性は自身の尿試料を収集し、交接を行う前に、Ｅ１Ｇ排出速度の低下の日が確認されるまで待機した。彼女は２回目のこのような周期において受胎を果たした。
【０２４６】
（表９：妊娠を達成するための卵巣モニターの使用）
【０２４７】
【表９】
2009512871.tif 000012
Ｅ１Ｇピーク排出日は第１３日であり、唯一の記録された交接活動は第１４日に行われている（Ｅ１Ｇ排出速度が下降した日）。ＰｄＧ排出速度は次の２日間低値に維持されていたがその後上昇を開始し、第１７日には６．３μｍｏｌ／２４ｈｒのモニター閾値に概ね到達した。第２０日に得られたＰｄＧ値は、ＰｄＧ排出速度が＞１３μｍｏｌ／２４ｈｒであったため排卵が起こったこと（生化学的）、及び、黄体期が十分であったことを確認するものであった。第３３日に妊娠試験の陽性結果が観察されている。
【０２４８】
一般的に、受胎を達成することが困難な場合において考えられる最初の治療法は受胎可能な排卵の証拠を得るための月経周期の分析となるはずである。即ち、完全な周期に関するＥ１Ｇ及びＰｄＧ排出速度の測定は、患者が排卵中であるか、黄体期が十分であるか、又は、それが短期であるかどうかに関する評価を可能にする。これらの要因の全てが受胎の障壁となる。Ｅ１Ｇ排出速度が１日当たり平均１４０％まで上昇して周期中間ピークに達し、そしてその後ＰｄＧ排出速度が４〜６μｍｏｌ／２４ｈｒを経て上昇し、６．３μｍｏｌ／２４ｈｒ（黄体形成）に達し、次に９μｍｏｌ／２４ｈｒ（排卵）を経て最終的に１３μｍｏｌ／２４ｈｒ（十分な黄体期）となり、黄体期の長さが１２〜１６日（正常な黄体期の長さ）となれば、周期は正常な受胎可能性の排卵のものとなる。次に、臨床介入を更に行う前に、Ｅ１Ｇ排出速度の低下（極めて劇的である）を用いながら３ヶ月間の交接時限が可能な選択肢となり、そして男性の受胎能不全、又は非内分泌的原因の女性受胎能不全の場合においてそれは受胎を助けるものとなり得る。この時間内に妊娠が起こらない場合は更に治療を模索しなければならない。周期のパラメータの何れかが以上である場合は、臨床的補助が推奨され、そしてモニタリングが好都合である。
５．ゴナドトロピン治療
漸増用量操作法（Ｂｒｏｗｎ等、Ｊ  ｏｆ  Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ＆Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ  ７６（４）：２８９−３０７（１９６９））を用いたゴナドトロピン療法の性能を支援するためのＥ１Ｇ及びＰｄＧ排出速度の適用を本明細書においてＳｉｍｏｎ  Ｔｈｏｒｎｔｏｎ博士（１９９０）によるＭＤ論文に基づいて記載する。この操作法においては、ゴナドトロピン（ＨＭＧ）を低用量で投与し、この量を、Ｅ１Ｇ排出速度の上昇により示される通り卵巣から適切な応答が誘発されるまで、漸増する。
ビリングコード
特定の実施形態において、特定の診断を独特のビリングコードに割り付けるが、これは例えば患者、健康管理提供者又は保険会社に対する診断の電子的送信を可能にするものである。
【０２４９】
（表１０：ビリングコードの割付）
【０２５０】
【表１０】
2009512871.tif 000013
漸増用量操作法
ＨＭＧの初期用量の選択。患者の最初の周期において、開始用量は１日当たり７５国際単位（ＩＵ）とする。患者が前回の周期を有する場合は、選択する用量は前回満足できる卵胞の発達がもたらしたものと同じものとする。前回の周期において過剰刺激又は刺激亢進があり、周期が撤回された場合は、選択される用量は前回過剰刺激をもたらしたものより低値とする。
【０２５１】
注射開始時。無月経及び低ゴナドトロピン（ＧＴ）レベルを有する患者はプロゲステロン離脱に応答して出血する可能性は低く、従って、注射はベースラインＥ１Ｇ値が実施された直後に開始してよい。内因性ＧＴ活性を有する希発月経患者においては、治療周期は自発的又はプロゲステロン誘導の離脱出血の２週間以内に開始する。
【０２５２】
ベースラインＥ１Ｇ排出速度。ベースラインＥ１Ｇ排出速度試験を実施し、そして値が低値（＜１００ｎｍｏｌ／２４ｈｒ）である場合は治療を開始してよい。Ｅ１Ｇ値が＞１００ｎｍｏｌ／２４ｈｒである場合は、これは自発的な卵巣の活動又は妊娠の何れかによるものと考えられる。従って妊娠は除外される。患者が最近の周期を有していない場合は、プロゲステロン離脱出血で誘導する。患者が極めて肥満であり、妊娠しておらず、そして最近の周期を有している場合は、Ｅ１Ｇ値が＞１００ｎｍｏｌ／２４ｈｒであっても治療を開始してよい。
【０２５３】
卵胞期。ＨＭＧの注射を開始し、そして４〜５日間毎日行う。毎日のＥ１Ｇ試験をＨＭＧ注射の第５日から実施し、ＨＣＧ注射を行うまで毎日継続する。結果を前週のＥ１Ｇベースライン排出速度と比較する。変化がない場合は、ＨＭＧ用量をＨＭＧ注射の第６日に約１．３〜１．５の因数で増大させる。この用量を更に４〜５日間継続し、そして毎日のＥ１Ｇモニタリングを継続する。４〜５日後このＨＭＧ増量に応答が無かった場合は、ＨＭＧ用量を再度増大させ、毎日のモニタリングを継続する。約１．３〜１．５の漸増用量段階（７５ＩＵ、１１２．５ＩＵ、１５０ＩＵ、２２５ＩＵ、３００ＩＵ）を応答が観察されるまで４〜５日間隔で継続する。Ｅ１Ｇ排出速度は増大したが２００ｎｍｏｌ／２４ｈｒに達する前に「定常状態」となった場合は、試料を反復使用して「定常状態」を確認する。Ｅ１Ｇ値が翌日上昇できなかった場合は、ＨＭＧ用量を増大させる。応答があれば、Ｅ１Ｇ値が２００ｎｍｏｌ／２４ｈｒに到達するまでＨＭＧを継続する。超音波スキャンを翌日のために準備する。理想的には、膣内超音波スキャンとし、これは本来の腹部による方法と比較して優れた質の卵胞画像化を可能にする。大部分の場合において、単回の超音波スキャンのみで周期を管理することが可能である。超音波スキャンの日に主要卵胞の大きさが＜１８〜１９ｍｍである場合は、主要卵胞が１日当たり約２ｍｍ成長しており、ＨＣＧを与えるために適切な日が相応に推定される。主要卵胞が＜１４ｍｍである場合はその後４８時間以内に再度スキャンすることによりＨＣＧ投与前に存在する卵胞の大きさ及び数について明確な理解を得ることが推奨される。
【０２５４】
排卵ＨＣＧ注射。ＨＣＧの排卵注射は主要卵胞が１８〜１９ｍｍに達した時点で投与する。ＨＣＧが理想的には投与されるべき日において、Ｅ１Ｇ排出速度が過剰に急速に上昇（毎日倍加又はほぼ倍加）している場合、Ｅ１Ｇ値が＞７５０ｎｍｏｌ／２４ｈｒである場合、又は１８ｍｍ以上の成熟卵胞が３個より多くが存在している場合には、ＨＣＧ注射は通常は見合わせる。選択されるＨＣＧの用量はその患者に対し排卵をもたらす最小限の用量とする。これは通常は最終ＨＭＧ投薬後３６時間に投与される。通常の開始用量は３０００ＩＵ又は５０００ＩＵである。交接は通常はＨＣＧ投与日の晩、翌日の晩及び早期黄体期における２日毎が推奨される。
【０２５５】
黄体期、第０日。ＨＣＧ投与当日（＝第０日）、ＰｄＧ試験を実施することにより早期の黄体形成が起こっているかどうかがわかり、又、黄体期におけるＰｄＧの後の変化のためのベースラインを確立することができる。
【０２５６】
黄体期、第＋３日。Ｅ１Ｇ及びＰｄＧ試験を実施する。試験はＥ１Ｇ及びＰｄＧの考えられる黄体期パターンの良好な指針を与える。Ｅ１Ｇ値が低下（正常周期パターンと同様）すれば、この周期において過剰刺激は考えにくく、黄体期支援注射（ＨＣＧ１０００ＩＵ）は、それが終末に低下していれば第＋６日に自信を持って投与できる。
【０２５７】
黄体期、第＋６日。Ｅ１Ｇ及びＰｄＧ試験を両方とも実施する。Ｅ１Ｇが＞１０００ｎｍｏｌ／２４ｈｒであるか、患者が疼痛を有している場合は、黄体期支援注射は行わない。ＰｄＧ値はなお上昇中であるはずである。
【０２５８】
黄体期、第＋９日及び第＋１２日。保持注射を行っている場合は、必要な試験は排卵を確認（＞１２．２μｍｏｌ／２４ｈｒ）するための第＋９日のＰｄＧ排出速度試験のみである。排卵が確認されれば、保持注射を第＋９日及び第＋１２日に行い、第＋２２日に行う妊娠試験までは更に試験を行う必要はない。保持注射を行っていない場合は、Ｅ１Ｇ及びＰｄＧ排出速度試験を第＋９日及び第＋１２日に実施する。両方ともなお高値で上昇中であれば、黄体期支援注射は行わない。しかしながら、Ｅ１Ｇ又はＰｄＧの排出速度に低下があり、そして患者が疼痛を有していない場合は、１又は２回の期支援注射を第＋９日及び第＋１２日に行う。
【０２５９】
後期黄体期。患者の好奇心のために第＋１５、＋１８及び＋２１日にＰｄＧ排出速度試験を行ってよい。レベルがなお上昇中であれば、これは受胎周期を示唆するものである。しかしながら患者の管理は変更せず、そして予後には特段の価値はない。
【０２６０】
患者が第＋２２日までに周期を有さない場合は、妊娠試験を実施する（身体から全ての外因性ＨＣＧが除去される第＋２２日まで待機）。
【０２６１】
妊娠試験が陽性である場合は、早期のスキャンを計画して胎児数、位置及び生存性を確認する。
【０２６２】
第２及び連続する周期。受胎が初回周期の間に起こっていなかった場合は、次の時期の後に治療が推奨される。第２治療周期において使用する用量は初回に得られた応答により異なり、従ってＨＭＧの開始用量は初回において良好な応答をもたらしたものとなる。患者のＨＭＧの必要性が決定されれば、それらは通常は周期毎に再現性のあるものとなる。しかしながら疑問があれば次に低値のＨＭＧ用量を使用し、前回と同様に用量を漸増する。初回周期に排卵が起こった場合は、同じ用量のＨＣＧを後の周期において使用する。排卵が起こらなかった場合は、ＨＣＧ用量は排卵が起こるまで次の周期において漸増させる（５０００、１０，０００、２０，０００ＩＵ等）。
【０２６３】
自宅結果の解釈。ＧＴ排卵誘導の自宅モニタリングのためのＥ１Ｇ及びＰｄＧの排出速度試験の使用は、正常周期結果の知識、及び、診療地点モニタリングで起こり得る、可能性のある問題点に依存している。
【０２６４】
異なるプロトコルを書くことができるが、今回の試験のようにＥ１Ｇ及びＰｄＧ排出速度の測定に容易にアクセスできるということは、証明された安全で成功率の高い療法に容易にアクセスできるようにする。
６．ＰＭＰの動物の妊娠可能性への適用
全ての酪農家は人工授精プログラムのための発情期を特定するための簡素で安価な方法に関心を持っている。その好ましい液は明らかに乳汁であるが、本発明者等は発情期を検出するための尿中のＥ１Ｇ及びＰｄＧの測定を一部改良した。
【０２６５】
人の場合と同様、雌ウシのホルモンプロフィールは尿生成速度の一部補正から利益を被っている。図２４は尿容量を補正することなくＥＬＩＳＡにより得られたＰｄＧ尿中プロフィールを示し、図２６はクレアチニンにより尿容量を補正した後の同じデータを示す。尿容量に関してデータを補正することによりどの程度プロフィールが変更されたかが注目される。補正後は、プロフィールは極めて急勾配で広いピークに変換される。ブリングが観察される日は尿収集期間の第２４日であった。
【０２６６】
図２５はまた、クレアチニン排出について補正したＥ１Ｇの尿中排出データを示す。雌ウシの発情期の周期は、黄体期のプロゲステロン生産が卵胞発達および次の周期のエストロゲン生産と明確に重複しているという点において女性とは異なっている。排卵はＥ１Ｇ低下の日の近辺において起こる（ヒトの場合と同様）。これは前回の黄体期からのＰｄＧレベルの低下と一致していることから、尿生産速度の比率に関する補正は雌ウシにおける発情期の検出のためには厳密に必要なわけではない。代わりに、Ｅ１Ｇ／ＰｄＧ比を使用できる。Ｅ１Ｇ及びＰｄＧに対するクレアチニン濃度は共に各々個々の日に関して必然的に同じであるため、単位は効率的に相殺しあい、ｍｏｌ／Ｌとしてのデータの収集は十分になる−図２６参照。図２６はどのようにすればＥ１Ｇ／ＰｄＧ比を使用する場合に発情日をピーク値からの大きな低下の日として容易に予測できるかを示している。
【０２６７】
ＰＭＰカセットを用いて得られた標準曲線は希釈することなくヒトの月経周期で使用するには感度が高すぎるが、雌ウシの尿は有意により低値の濃度で排出される。即ち、ＰＭＰカセットで得られた標準曲線は未希釈の雌ウシ尿での使用に適している場合がある。収集の３０日間に渡って最低及び最高のＰｄＧ濃度（μｍｏｌ／Ｌ）の日はそれぞれ第２８日及び８日であった（図８参照）。リットル当たりの単位を用いた尿容量の補正を行っていないため、最高値と最低値との間の比は一般的に補正因子を用いて測定したものよりも高くなり、標準曲線は一般的により広範囲に対応しているはずであり、従って、可能な値の完全な範囲を考慮することができる。例えば、低レベルのＰｄＧを生産して高容量の尿を排出している雌ウシから高レベルのＰｄＧを生産して低容量の尿を排出している雌ウシのレベルまで、測定が可能となるはずである。即ちここで明らかなことは、データがクレアチニンに関して補正（μｍｏｌＰｄＧ／ｍｍｏｌクレアチニン）される場合、最高ｖｓ最低の排出速度に関するＰｄＧ比は５．３であるが、尿中の生ＰｄＧ濃度（μｍｏｌＰｄＧ／Ｌ）に関する最高ｖｓ最低に関するＰｄＧ比を用いる場合は、比３６．９となり、即ち、未補正データ（μｍｏｌＰｄＧ／Ｌ）を測定するための標準曲線は７倍広い範囲を必要とする。
【０２６８】
ＰｄＧ含有量に関する２の最も極端な試料を３連で希釈せずＰＭＰカセット上で直接使用し、値を標準曲線から読み取り、やはり３連で収集した等価なＥＬＩＳＡデータと比較した。第８日はＥＬＩＳＡ上で０．０６μｍｏｌ／Ｌ、そしてＰＭＰカセット上で０．４１μｍｏｌ／Ｌの値を示した。第２８日はＥＬＩＳＡ上で０．０１６５μｍｏｌ／Ｌ、そしてＰＭＰカセット上で０．０１７７μｍｏｌ／Ｌの値を示した。
【０２６９】
即ち、ＥＬＩＳＡデータとＰＭＰカセットデータとの間の合致は雌ウシの発情周期に渡って得られる未希釈尿中のＰｄＧ値の究極的な範囲においては例外的であった。ＰＭＰカセットを用いて得られた標準曲線の位置は更に希釈することなくヒト試料で使用できるためにはかなり高感度であったが、それらは雌ウシの発情周期に渡って遭遇すると考えられるＰｄＧ値の測定には対しては、少なくとも当初は例外的に、十分適していると考えられる。
【０２７０】
上記より、当然ながら、本発明の特定の実施形態は説明を目的として本明細書に記載しているが、種々の変形を本発明の精神及び範囲を外れることなく行ってよい。従って本発明は添付の請求項による以外には制限されない。
【０２７１】
本明細書で参照又は言及した全ての特許、特許出願、刊行物、科学文献、ウエブサイト及び他の文書及び資料は本発明が属する技術の当業者の技術水準を示しており、各々のそのような参照された文書及び資料はそれらが参照により全体が本明細書に組み込まれるか、全体が本明細書に記載される場合と同じ程度まで、参照により組み込まれる。更に、本出願の全ての請求項及び優先権出願、例えば限定されないが出願当初の請求項は全体が本明細書に組み込まれ、そして本発明の書面による説明の一部を構成するものとする。出願人はそのような特許、特許出願、刊行物、科学文献、ウエブサイト、電子的に入手できる情報及び他の参照された文書又は資料から得られる全ての材料及び情報を本明細書に物理的に組み込む権利を保有している。出願人は例えば何れかの出願当初の請求項を包含する上記言及した請求項を、書面による説明の何れかの部分を包含する本文書の何れかの部分に物理的に組み込む権利を保有している。
【０２７２】
本明細書に記載した特定の方法及び組成物は代表的な好ましい実施形態であり、そして例示的であって、本発明の範囲を限定することを意図していない。他の目的、態様及び実施形態は本明細書を検討すれば当業者の知る通りであり、そして請求項の範囲により定義される通り本発明の精神内に包含される。当業者のよく知る通り、本発明の範囲及び精神を外れることなく本明細書に開示した本発明に対して種々の置き換えや変更を行ってよい。本明細書に説明として記載した本発明は適宜、本質的には本明細書において特に開示していない何れかの要素又は限定の不在下に実施してもよい。即ち、例えば、本明細書における各々の場合、本発明の実施形態又は実施例においては、「含む」、「より本質的になる」及び「よりなる」という用語は何れも、本明細書における他の２つの用語と置き換えてよい。更に又、「含む」、「包含する」、「含有する」等という用語は広範囲に限定なく読むべきとする。本明細書に説明のために記載した方法及びプロセスは異なる順序の工程において適宜実施してよく、本明細書又は請求項に示した工程の順序に限定される必要はない。本明細書及び添付請求項において、単数表記のものは特段の記載が無い限り複数も指すものとする。即ち、例えば、「宿主細胞」と言及した場合、そのような宿主細胞の複数（例えば培養物又は集団）を包含する。如何なる状況においても、特許は本明細書に記載した特定の実施例又は実施形態又は方法に限定されると解釈してはならない。如何なる状況においても、特許商標局の何れの審査官又は何れの他の職員により行われる如何なる陳述も、そのような陳述が特定的に、そして無条件又は無制限に出願人の応答書面において明白に承認されない限り、特許を限定するものとは見なさない。
【０２７３】
使用した用語及び表現は、限定ではなく説明の用語として使用しており、そのような用語及び表現の使用においては報告及び記載した特徴又はその部分と等価な如何なるものも排除しておらず、むしろ、種々の変更が請求項に記載した本発明の範囲内で可能である。即ち、本発明は好ましい実施形態及び任意の特徴により特定的に開示してきたが、本明細書に開示した概念の変更及び改変は当業者により意図されてよく、そしてそのような変更及び改変は添付請求項により定義される本発明の範囲内に包含されると見なされることを、理解しなければならない。
【０２７４】
本発明は本明細書において広範かつ全般的に記載してある。全般的な開示に属するより狭小範囲の物質種及び下位の属の区分も、同様に本発明の部分を形成する。これには、削除されたものが本明細書において特に言及されたか否かに関わらず、属から如何なる要件も除外する条件付け又は排他的限定を含む本発明の全般的な説明が包含される。
【０２７５】
他の実施形態は後続の請求項内に包含される。更に、本発明の特徴又は態様がマーカッシュ群の用語において記載されている場合、当業者の知る通り、本発明はマーカッシュ群の何れかの個々のメンバー又はメンバーの下位の群に関しても記載されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【０２７６】
【図１】図１はヒト用途のための妊娠可能性管理システムの模式図である。
【図２】図２は非ヒト用途のための妊娠可能性管理システムの模式図である。
【図３】図３は修飾されたＴｒｉｇｇの追跡信号アルゴリズムを用いたＥ１Ｇの初回上昇を同定するために使用したＲＩＡデータの例を示す。追跡信号はアルゴリズムが正確に予想されるように、周期の開始（最初の日）から周期の各日について計算した。ベースライン計算は必要ではない。
【図４】図４はＥ１Ｇ卵白アルブミンコンジュゲートが噴霧されたストリップを利用したヒト尿試料中のＥ１Ｇの測定に関する標準曲線を示す。
【図５】図５は捕捉物質としてのＰｄＧ−ＢＳＡが噴霧されたストリップを利用したヒト尿試料中のＥ１Ｇの測定に関する標準曲線を示す。
【図６】図６はストリップ上の色強度により測定された尿中ホルモン排出速度に基づいたＥ１Ｇ及びＰｄＧに関する月経周期プロフィールを示す。ＰｄＧデータはＥ１Ｇピークが検出された後にのみ収集した。
【図７】図７Ａ及び７Ｂは尿試料中で測定した場合の乳牛におけるＥ１Ｇ及びＰｄＧの測定に関する標準曲線である。Ｅ１Ｇ及びＰｄＧデータはＥＬＩＳＡアッセイにより得た。
【図８】図８は雌ウシ６８からの毎日のＥ１Ｇ及びＰｄＧ排出速度プロフィールを示す。
【図９】図９は２連続周期に基づいた雌ウシ６８からの毎日のＥ１Ｇ及びＰｄＧ排出速度プロフィールを示す。これらの周期は全てクレアチニン排出の使用により尿容量の変動について補正している。
【図１０】図１０はクレアチニンプロフィールに従って尿容量に関する調節を行う前の個体ウシ（雌ウシ６８）に関するＰｄＧ濃度プロフィールを示す。
【図１１】図１１は尿容量の変動に関して調節するための動物のブリング（いじめ（ｂｕｌｌｉｎｇ））とＦ１Ｇ／ＰｄＧ比との間の緊密な相関を示している。
【図１２】図１２は乳汁中で測定（雌ウシ６８）において測定したプレグナンジオールグルクロニドの濃度のプロフィールを示す。プロフィールは尿中のデータからのものと同様であるが、乳汁試料由来のＰＧレベルは遥かに低値であり、そして、乳汁容量の変動についての補正は行っていない。
【図１３】図１３はクレアチニン測定に基づいた規格化によるＰｄＧ濃度プロフィールに対する平滑化作用を示す（Ｊａｆｆｅ反応）。
【図１４】図１４は比重補正に基づいた規格化により側方流動ストリップを用いて得られたＰｄＧ排出速度プロフィールに対する平滑化作用を示す。
【図１５】図１５はクレアチニン補正によるＰｄＧに関するＥＬＩＳＡアッセイを用いたＰｄＧ測定の使用を介した妊娠の決定を示す。
【図１６】図１６は同じ尿試料についてハーフストリップ法により得られた測定値と卵巣モニター法により得られた測定値との間のＥ１Ｇ及びＰｄＧに関する排出速度プロフィールの同様性を示している。
【図１７】図１７はＥ１ＧＭＡＲ標準曲線を示す。
【図１８】図１８はＭＡＲシステム及び卵巣モニターにより測定された規格化された月経周期のＥ１Ｇ排出速度を示す。
【図１９】図１９はＰｄＧＭＡＲ標準曲線を示す。
【図２０】図２０はＭＡＲシステム及び卵巣モニターにより測定された規格化された月経周期のＰｄＧ排出速度を示す。
【図２１】図２１は初回上昇日〜排卵推定日を示す。
【図２２】図２２はＥ１Ｇピーク〜ＰｄＧカットオフ日までの日を示す
【図２３】図２３はＰｄＧＭＡＲ標準曲線補正法に影響する要因を示す。
【図２４】図２４は周期中の雌ウシにおける尿容量について補正を行わないＰｄＧの尿中排出を示す。
【図２５】図２５は周期中の雌ウシにおける尿容量について補正を行ったＰｄＧの尿中排出を示す。
【図２６】図２６は周期中の雌ウシにおける尿容量について補正を行ったＥ１Ｇ及びＰｄＧの尿中排出を示す。
【図２７】図２７は発情期を検出するための雌ウシにおけるＥ１Ｇ／ＰｄＧの尿中排出の比を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【国際調査報告】
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