(57)【要約】【課題】  アリル含有非対称ジスルフィド、特にアリルメルカプトカプトプリル（ＣＰＳＳＡ）のような治療的に活性なアリル含有非対称ジスルフィドを調製する新規な方法を提供する。【解決手段】  この方法は反応性基を持つアリルをチオール含有化合物と、チオ硫酸塩の存在下に、反応させ、それによりアリル含有非対称ジスルフィドを得ることを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アリル含有非対称ジスルフィドを調製する方法であって、反応性基を持つアリルをチオール含有化合物と、チオ硫酸塩の存在下に、反応させ、それによりアリル含有非対称ジスルフィドを得ることを含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
ワンポット法であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記反応性基を持つ前記アリル及び前記チオ硫酸塩を含む第一混合物を準備すること；
続いて前記チオール含有化合物を含む第二混合物を前記第一混合物に添加すること；及び
前記第一混合物と前記第二混合物を混合すること；
を含むことを特徴とする請求項１及び２のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
前記第一混合物を準備することが、前記反応性基を持つ前記アリルと前記チオ硫酸塩を１時間から２０時間の範囲の時間の間、混合することにより実現されることを特徴とする請求項１及び２のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記時間が１０時間から２０時間の範囲であることを特徴とする請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記反応が塩基性条件下に実施されることを特徴とする請求項１及び２のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記反応が約−５０℃から約５０℃の範囲の温度で実行されることを特徴とする請求項１及び２のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記反応が水性媒体中で実行されることを特徴とする請求項１及び２のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記反応性基を持つアリルと前記チオール含有化合物との間のモル比が約１０：１から約１：１０の範囲であることを特徴とする請求項１及び２のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記比が約５：１から約１：５の範囲であることを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記反応性基を持つアリルと前記チオ硫酸塩との間のモル比が約５：１から約１：５の範囲であることを特徴とする請求項１及び２のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記比が約１：１であることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記反応性基がハロゲン化物、トシレート及びスルホニルクロライドからなる群から選ばれることを特徴とする請求項１及び２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記反応性基がハロゲン化物であることを特徴とする請求項１及び２のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記反応性基が臭化物であることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記第一混合物中の前記反応性基を持つアリルの濃度が約０．１Ｍから約１０Ｍの範囲であることを特徴とする請求項１及び２のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記濃度が約１Ｍから約５Ｍの範囲であることを特徴とする請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記第一混合物中の前記チオ硫酸塩の濃度が約０．１Ｍから約１０Ｍの範囲であることを特徴とする請求項１及び２のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記濃度が約１Ｍから約５Ｍの範囲であることを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記チオール含有化合物がアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）−阻害プロリン誘導体であることを特徴とする請求項１及び２のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記チオール含有化合物がカプトプリル、その誘導体または類似体であることを特徴とする請求項１，２及び２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
前記チオ硫酸塩がチオ硫酸ナトリウム、チオ硫酸カリウム、チオ硫酸カルシウム、及びチオ硫酸アンモニウムからなる群から選ばれることを特徴とする請求項１及び２のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
アリル含有非対称ジスルフィドを精製することをさらに含むことを特徴とする請求項１及び２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
前記精製がカラムクロマトグラフィー、再結晶及び／またはそれらの組合せにより実現されることを特徴とする請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記反応性基を持つアリルが臭化アリルであり、前記チオール含有化合物がカプトプリルであり、前記アリル含有非対称ジスルフィドがＣＰＳＳＡであることを特徴とする請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
請求項１の方法により得られたアリル含有非対称ジスルフィド。
【請求項２７】
一般式：
Ａ−Ｓ−Ｓ−Ｂ
を持つアリル含有非対称ジスルフィドを調製する方法であって、ここで：
Ａはチオール含有化合物の残基であり；
Ｂはアリル残基であり；そして
ＡとＢは異なっており、
この方法は一般式Ｂ−Ｘを持つ化合物、ここでＸは反応性基である、をチオ硫酸塩の存在下に、一般式Ａ−ＳＨを持つチオール含有化合物と反応させ、それにより非対称ジスルフィドを得ることを含むことを特徴とする方法。
【請求項２８】
ワンポット法であることを特徴とする請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記一般式Ｂ−Ｘを持つ化合物と前記チオ硫酸塩を含む第一混合物を準備すること；
続いて前記一般式Ａ−ＳＨを持つ化合物を含む第二混合物を前記第一混合物に添加すること；及び
前記第一混合物と前記第二混合物を混合すること；
を含むことを特徴とする請求項２７及び２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
前記第一混合物を準備することが、前記一般式Ｂ−Ｘを持つ化合物と前記チオ硫酸塩を１時間から２０時間の範囲の時間の間、混合することにより実現されることを特徴とする請求項２７及び２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
前記時間が１０時間から２０時間の範囲であることを特徴とする請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記反応が塩基性条件下に実施されることを特徴とする請求項２７及び２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
前記反応が約−５０℃から約５０℃の範囲の温度で実行されることを特徴とする請求項２７及び２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
前記反応が水性媒体中で実行されることを特徴とする請求項２７及び２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
前記一般式Ｂ−Ｘを持つ化合物と、前記一般式Ａ−ＳＨを持つ化合物との間のモル比が約１０：１から約１：１０の範囲であることを特徴とする請求項２７及び２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
前記比が約５：１から約１：５の範囲であることを特徴とする請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記一般式Ｂ−Ｘを持つ化合物と前記チオ硫酸塩との間のモル比が約５：１から約１：５の範囲であることを特徴とする請求項２７及び２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
前記比が約１：１であることを特徴とする請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
Ｘがハロゲン化物であることを特徴とする請求項２７及び２８のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
前記ハロゲン化物が臭化物であることを特徴とする請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記一般式Ｂ−Ｘを持つ化合物の濃度が約０．１Ｍから約１０Ｍの範囲であることを特徴とする請求項２７及び２８のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
前記濃度が約１Ｍから約５Ｍの範囲であることを特徴とする請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記チオ硫酸塩の濃度が約０．１Ｍから約１０Ｍの範囲であることを特徴とする請求項２７及び２８のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
前記濃度が約１Ｍから約５Ｍの範囲であることを特徴とする請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記一般式Ａ−ＳＨを持つ化合物がアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）−阻害プロリン誘導体であることを特徴とする請求項２７及び２８のいずれかに記載の方法。
【請求項４６】
前記一般式Ａ−ＳＨを持つ化合物がカプトプリル、その誘導体または類似体であることを特徴とする請求項２７，２８及び４５のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
前記チオ硫酸塩がチオ硫酸ナトリウム、チオ硫酸カリウム、チオ硫酸カルシウム、及びチオ硫酸アンモニウムからなる群から選ばれることを特徴とする請求項２７及び２８のいずれかに記載の方法。
【請求項４８】
アリル含有非対称ジスルフィドを精製することをさらに含むことを特徴とする請求項２７及び２８のいずれかに記載の方法。
【請求項４９】
前記精製がカラムクロマトグラフィー、再結晶及び／またはそれらの組合せにより実現されることを特徴とする請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
請求項２７の方法により得られたことを特徴とするアリル含有非対称ジスルフィド。
【請求項５１】
９５％より高い純度を持つことを特徴とするアリル含有非対称ジスルフィド。
【請求項５２】
９９％より高い純度を持つことを特徴とする請求項５１に記載のアリル含有非対称ジスルフィド。
【請求項５３】
アリルメルカプトカプトプリル（ＣＰＳＳＡ）であることを特徴とする請求項５１及び５２のいずれかに記載のアリル含有非対称ジスルフィド。
【請求項５４】
前記Ｂ−Ｘが臭化アリルであり、前記Ａ−ＳＨがカプトプリルであり、前記アリル含有非対称ジスルフィドがＣＰＳＳＡであることを特徴とする請求項２７〜５３のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化学合成の分野、特にアリルメルカプトカプトプリル（ＣＰＳＳＡ）のような非対称ジスフィドを調製する新規な方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
カプトプリル（Ｄ−３−メルカプト−２−メチルプロパノイル−Ｌ−プロリン）、並びにその関連アゼチジン及びプロリン誘導体は、アンギオテンシンＩのアンギオテンシンＩＩへの変換を遮断するアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）の競争的阻害剤である。従って、カプトプリル及びその誘導体は、多数の形態の高血圧を治療するための治療剤として利用されてきた［例えば、米国特許第４０４６８８９号、Ｏｎｄｅｔｔｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９６：４４１−４４４（１９７７）；Ｔｈｉｎｄ  Ｇ．Ｓ．，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｅ  Ｄｒｕｇｓ  Ｔｈｅｒ．４：１９９−２０６（１９９０）；Ｃｕｓｈｍａｎら、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  １７：５８９−５９２（１９９１）；Ｍｉｇｄａｌｏｆら、Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ  Ｒｅｖ  １５：８４１−８６９（１９８４）；及びＭａｔｅｒｓｏｎら、Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  １５４４：５１３−５２３（１９９４）参照］。
【０００３】
カプトプリル及びその誘導体は活性チオール（−ＳＨ）基を含み、それがＡＣＥ活性部位の亜鉛イオンに結合し、かくしてその阻害効果を増大する。
【０００４】
しかし、カプトプリルは水溶液中では実質的に安定であるが、哺乳動物（人間を含む）の血液または血漿中ではカプトプリルの活性−ＳＨ基は容易に酸化を受け、チオール−ジスルフィド交換反応に加わる。この特徴はカプトプリルによるＡＣＥ阻害の比較的短い期間の要因となる。
【０００５】
カプトプリルはさらに、システイン及びグルタチオンとのチオール−スルフィド交換反応を介して、共有結合的（可逆的ではあるが）に血漿タンパク質に結合することが見出された［Ｍｉｇｄａｌｏｆら（１９８４）上記］。この反応はＡＣＥ活性部位とのカプトプリル反応と競争し、このようにしてＡＣＥを阻害するために利用可能に残る投与されたカプトプリルの実際量を減らす。従って、典型的には比較的大量のカプトプリルがＡＣＥ阻害のためには必要である。
【０００６】
最近、カプトプリルコンジュゲートの新規なファミリーが開示された［例えばＷＯ  ０２／０９６８７１及びＭｉｒｏｎらのＡｍｅｒ．Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，２００４，１７，７１−７３参照、両者はここにあたかも完全に記載されたかのように参考として組込まれる］。このファミリーの代表的メンバーは、カプトプリルとアリシンとの反応生成物であるアリルメルカプトカプトプリル（ＣＰＳＳＡ）である。
【０００７】
ＷＯ  ０２／０９６８７１及びＭｉｒｏｎら（上記）の教示によれば、ＣＰＳＳＡは、以下のスキーム１に示されるようにアリシンとカプトプリルの反応を介して調製される。
2009524648.tif 000002
【０００８】
さらに、ＷＯ  ０２／０９６８７１及びＭｉｒｏｎら（上記）の教示によれば、ＣＰＳＳＡは、未変性カプトプリルと比べると改善された血圧降下性を示す。
【０００９】
ＣＰＳＳＡの調製に使用されるアリシンは、にんにくから誘導される生物活性化合物である。それは酵素アリイナーゼ（アリインリアーゼＥＣ４．４．１．４）とその基質、アリイン（Ｓ−アリル−Ｌ−システインスルホキシド）の相互作用から天然に生成される［Ａ．Ｓｔｏｌｌ及びＥ．Ｓｅｅｂｅｃｋ，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１１（１９５１）３７７−４００］。
【００１０】
最近数年間で、種々の研究が、高血圧［Ｅｌｋａｙａｍら、Ａｍ．Ｊ．ｏｆ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  １４（２０００）３７７−３８１］及び心臓血管危険因子［Ａｂｒａｍｏｖｉｔｚら、Ｃｏｒｏｎ．Ａｒｔｅｒｙ．Ｄｉｓ．１０（１９９９）５１５−９］への効果を含むアリシンの多くの健康上の恩恵を証明している。
【００１１】
アリシンは、その反応性のため遊離チオール基と迅速に反応することができかつ容易に生体膜に浸透することができる不安定な短命分子である［Ｒａｂｉｎｋｏｖら、Ｂｉｏｃｈｉｍ，．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １３７９（１９９８）２３３−２４４；Ｍｉｒｏｎら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １４６３（２０００）２０−３０］。従って、アリシンは、異なる代謝経路に影響を及ぼすことに高い能力があると考えられる［Ｋ．Ｃ．Ａｇａｒｗａｌ，Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．１６（１９９６）１１１−１２４］。
【００１２】
しかし、アリシンの高い不安定性は、生体外で、人間の血液中で［Ｆｒｅｅｍａｎ及びＫｏｄｅｒａ，Ｊ．Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  ａｎｄ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．４３（１９９５）２３３２−２３３８］、ラットで証明されたように生体内で［Ｌａｃｈｍａｎｎｅｔら、Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ  ４４（１９９４）７３４−７４３］ともにアリシンが血液中でその投与後数分で崩壊するという欠点を持つ。従って、アリシンの治療効果は消化管に接近した標的に制限される。
【００１３】
カプトプリルとアリシンの両者は高血圧に対し効果的な薬剤であるが、各薬剤は異なる機構により作用する。
【００１４】
上に検討したように、カプトプリル及びアリシンの単独の使用は高反応性、不安定性、及び／または競争的反応により制限される。
【００１５】
対照的に、ＷＯ  ０２／０９６８７１及びＭｉｒｏｎら（上記）で教示されたＣＰＳＳＡ及びその誘導体は、ＡＣＥ−阻害カプトプリルの利点とアリシンの薬効とを兼ね備え、一方でこれらの成分のそれぞれと関連する制限を回避する。ＷＯ  ０２／０９６８７１及びＭｉｒｏｎら（上記）でさらに教示されたように、ＣＰＳＳＡ並びにその誘導体及び類似体は、チオール基が殆どジスルフィド形である血清タンパク質と非常にゆるやかに反応する。従って、これらの化合物は哺乳動物の血液または血漿中で安定であり、効果的な血圧降下活性を達成するための高投与の要求が回避される。例えば、ＷＯ  ０２／０９６８７１は、ＣＰＳＳＡの投与が実行された直後に、ＣＰＳＳＡが血圧を有意に下げ、ラット中のトリグリセリド及びインシュリンの血清レベルを正常レベル近くに減らしたことを示す。同様な効果はカプトプリル自体のほぼ２倍の投与で観察された。
【００１６】
ＣＰＳＳＡは（上記スキーム１で示されたように）カプトプリルとアリシンの反応により比較的良好な収率（約９０％）で得られるが、ＷＯ  ０２／０９６８７１で開示された方法は出発物質としてアリシンの使用により制限される。上に検討したように、アリシンは高度に不安定であり、従って得ること及び取扱うことが困難である。加えて、アリシンはにんにくの刺激臭を招く化合物であるので、アリシンを利用する方法を実行することは不便と不愉快を伴なうかもしれない。
【００１７】
ＣＰＳＳＡのような非対称ジスルフィドは、好都合な条件下での対称ジスルフィドへの不均化反応傾向のために調節ホルモン、薬剤及び酵素活性剤または阻害剤としての種々の生化学的な方法におけるそれらの重要な役割のために一般的に知られている。例えば、アルキル２−イミダゾリルジスルフィド化合物は抗癌剤として作用することが知られている［Ｈａｓｈａｓｈら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９１：１６８６−１６９２，２００２］。別の例では、米国特許第４０４９６６５号は、ピリジン−１−オキサイドの非対称ジスルフィド及びその酸付加塩は抗菌剤として有用であったことを教示する。同様に、米国特許第４４８７７８０号は、ペニシラミンとシステインの反応により生成された非対称ジスルフィドが慢性関節リウマチの治療で首尾よく使用されることを述べている。
【００１８】
幾つかの合成法が非対称ジスルフィドを調製するために文献中に発表されている。これらは、例えばアゾジカルボン酸ジエチル［Ｍｕｋａｙａｍａら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９６８，５９０７］、チオイミド［Ｂｏｕｓｔａｎｙら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９７０，３５４７］、チオニトリル［Ｓｔｒｅｅｔら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｃｈｅｍ，Ｃｏｍｍｕｎ．１９７７，４０７］、アルキルチオサルフェート［Ｓｗａｎ，Ｎａｔｕｒｅ，１９５７，１８０，１４３］、チオアルコキシトリアルキルホスホニウム塩［Ｏｈｍｏｒｉら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，１９８７，３５，４４７３］、ジチオペルオキシエステル［Ｌｅｒｉｖｅｒｅｎｄら、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１９９４，７６１］、アルキルチオジアルキルスルホニウム塩［Ｄｕｂｓら、Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９７６，５９，１３０７］、トシルチオレート［Ｆｉｅｌｄら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９６８，３３，３８６５］及びスルフェニルチオカーボネート［Ｂｒｏｉｓら、Ｊ．Ａｍｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９７０，９２，７６２９］のような出発物質の使用を含む。
【００１９】
しかし、これらの方法は、許容可能な収率で生成物を得るために、例えばアリルチオサルフェートのような反応中間物の単離及び精製を必要とする。さらに、大規模な量でこれらの方法を実施することは非常に困難である。さらにより重要なことに、これらの方法は有機溶媒に可溶なスルフィドのために開発され、水溶性チオールと共に使用するためには適していない。
【００２０】
一方では一般的に非対称ジスルフィドの有望な治療性、特にＣＰＳＳＡの優れた血圧降下性を、かつ他方で非対称ジスルフィドを調製するための既知の方法の欠点、特にアリシンを使用する欠点があることから、一般的に非対称ジスルフィド、特にＣＰＳＳＡの調製のための上記の制限のない改善された方法に対して広く認められた要求があり、かつそれを持つことは非常に有利であるであろう。
【発明の開示】
【００２１】
本発明者らは、有望な非対称ジスルフィドＣＰＳＳＡを調製するための新規な方法を設計しかつ首尾よく実行し、そこでは出発物質としてアリシンを使用し、中間体を単離することは回避され、さらに生成物は高収率かつ高純度で得られる。この方法は有利にはワンポット法として実行され、他の関連非対称ジスルフィドを調製するために容易に使用されることができる。
【００２２】
本発明の一態様によれば、アリル含有非対称ジスルフィドを調製する方法が提供され、この方法は反応性基を持つアリルをチオール含有化合物と、チオ硫酸塩の存在下に、反応させ、それによりアリル含有非対称ジスルフィドを得ることを含む。
【００２３】
以下に述べられる本発明の好適な実施態様でのさらなる特徴によれば、この方法はワンポット法である。
【００２４】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、この方法は：
反応性基を持つアリル及びチオ硫酸塩を含む第一混合物を準備すること；
続いてチオール含有化合物を含む第二混合物を第一混合物に添加すること；及び
第一混合物と第二混合物を混合すること；
を含む。
【００２５】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、第一混合物を準備することは、反応性基を持つアリルとチオ硫酸塩を１時間から２０時間の範囲の時間の間、混合することにより実現される。好ましくは、その時間は１０時間から２０時間の範囲である。
【００２６】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、反応は塩基性条件下に実施される。
【００２７】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、反応は約−５０℃から約５０℃の範囲の温度で実行される。
【００２８】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、反応は水性媒体中で実行される。
【００２９】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、反応性基を持つアリルとチオール含有化合物との間のモル比は約１０：１から約１：１０の範囲である。好ましくはこの比は約５：１から約１：５の範囲である。
【００３０】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、反応性基を持つアリルとチオ硫酸塩との間のモル比は約５：１から約１：５の範囲である。好ましくは、この比は約１：１である。
【００３１】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、反応性基はハロゲン化物、トシレート及びスルホニルクロライドからなる群から選ばれる。
【００３２】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、反応性基はハロゲン化物である。好ましくは、ハロゲン化物は臭化物である。
【００３３】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、第一混合物中の反応性基を持つアリルの濃度は約０．１Ｍから約１０Ｍの範囲である。好ましくは、この濃度は約１Ｍから約５Ｍの範囲である。
【００３４】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、第一混合物中のチオ硫酸塩の濃度は約０．１Ｍから約１０Ｍの範囲である。好ましくは、この濃度は約１Ｍから約５Ｍの範囲に及ぶ。
【００３５】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、チオール含有化合物はアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）−阻害プロリン誘導体である。
【００３６】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、チオール含有化合物はカプトプリル、その誘導体または類似体である。
【００３７】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、チオ硫酸塩はチオ硫酸ナトリウム、チオ硫酸カリウム、チオ硫酸カルシウム、及びチオ硫酸アンモニウムからなる群から選ばれる。
【００３８】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、この方法はさらに、アリル含有非対称ジスルフィドを精製することを含む。好ましくは、この精製はカラムクロマトグラフィー、再結晶及び／またはそれらの組合せにより実現される。
【００３９】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、反応性基を持つアリルは臭化アリルであり、チオール含有化合物はカプトプリルであり、アリル含有非対称ジスルフィドはＣＰＳＳＡである。
【００４０】
本発明の別の態様によれば、ここに述べられた方法により得られたアリル含有非対称ジスルフィドが提供される。
【００４１】
本発明のなお別の態様によれば、
一般式：
Ａ−Ｓ−Ｓ−Ｂ
を持つアリル含有非対称ジスルフィドを調製する方法が提供され、ここで：
Ａはチオール含有化合物の残基であり；
Ｂはアリル残基であり、そして
ＡとＢは異なっており、
この方法は一般式Ｂ−Ｘを持つ化合物（ここでＸは反応性基である）をチオ硫酸塩の存在下に、一般式Ａ−ＳＨを持つチオール含有化合物と反応させ、それにより非対称ジスルフィドを得ることを含む。
【００４２】
以下に述べられる本発明の好適な実施態様でのさらなる特徴によれば、この方法は：
一般式Ｂ−Ｘを持つ化合物とチオ硫酸塩を含む第一混合物を準備すること；
続いて一般式Ａ−ＳＨを持つ化合物を含む第二混合物を第一混合物に添加すること；及び
第一混合物と第二混合物を混合すること；
を含む。
【００４３】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、一般式Ｂ−Ｘを持つ化合物とチオ硫酸塩との間のモル比は約５：１から約１：５の範囲である。好ましくは、この比は約１：１である。
【００４４】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、Ｘはハロゲン化物である。好ましくは、ハロゲン化物は臭化物である。
【００４５】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、一般式Ｂ−Ｘを持つ化合物の濃度は約０．１Ｍから約１０Ｍの範囲である。好ましくは、この濃度は約１Ｍから約５Ｍの範囲である。
【００４６】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、一般式Ａ−ＳＨを持つ化合物はアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）−阻害プロリン誘導体である。
【００４７】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、一般式Ａ−ＳＨを持つ化合物はカプトプリル、その誘導体または類似体である。
【００４８】
本発明のなお別の態様によれば、ここに述べられた方法により得られたアリル含有非対称ジスルフィドが提供される。
【００４９】
本発明の追加の態様によれば、９５％より大きい純度を持つアリル含有非対称ジスルフィドが提供される。好ましくは、９９％より大きい純度を持つ。
【００５０】
以下に述べられる本発明の好適な実施態様でのさらなる特徴によれば、ここに述べられたアリル含有非対称ジスルフィドはアリルメルカプトカプトプリル（ＣＰＳＳＡ）である。
【００５１】
述べられた好適な実施態様でのなおさらなる特徴によれば、Ｂ−Ｘは臭化アリルであり、Ａ−ＳＨはカプトプリルであり、アリル含有非対称ジスルフィドはＣＰＳＳＡである。
【００５２】
本発明は、ＣＰＳＳＡのような非対称ジスルフィドを調製するための効率的なかつ実施するのが簡単な方法を提供することにより現在知られた構成の欠点に首尾よく対処する。
【００５３】
別途定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての技術的用語および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を持つ。本明細書中に記載される方法および材料と類似または同等の方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、好適な方法および材料が下記に記載される。矛盾する場合には、定義を含めて、本特許明細書が優先する。加えて、材料、方法および実施例は例示にすぎず、限定であることは意図されない。
【００５４】
本明細書中で使用される用語「方法」は、所与の課題を達成するための様式、手段、技術および手順を示し、これには、化学、薬理学、生物学、生化学および医学の技術分野の実施者に知られているそのような様式、手段、技術および手順、または、知られている様式、手段、技術および手順から、化学、薬理学、生物学、生化学および医学の技術分野の実施者によって容易に開発されるそのような様式、手段、技術および手順が含まれるが、それらに限定されない。
【００５５】
本明細書中で使用される場合、単数形態（“ａ”、“ａｎ”および“ｔｈｅ”）は、文脈がそうでないことを明確に示さない限り、複数の参照物を包含する。例えば、用語「化合物（ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」または用語「少なくとも１つの化合物」は、その混合物を含めて、複数の化合物を包含し得る。
【００５６】
本開示を通して、本発明の様々な態様が範囲形式で提示され得る。範囲形式での記載は単に便宜上および簡潔化のためであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈すべきでないことを理解しなければならない。従って、範囲の記載は、具体的に開示された可能なすべての部分範囲、ならびに、その範囲に含まれる個々の数値を有すると見なさなければならない。例えば、１〜６などの範囲の記載は、具体的に開示された部分範囲（例えば、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６など）、ならびに、その範囲に含まれる個々の数値（例えば、１、２、３、４、５および６）を有すると見なさなければならない。このことは、範囲の広さにかかわらず、適用される。
【００５７】
数値範囲が本明細書中で示される場合には常に、示された範囲に含まれる任意の言及された数字（分数または整数）を含むことが意味される。第１の示された数字および第２の示された数字「の範囲にある／の間の範囲」という表現、および、第１の示された数字「から」第２の示された数「まで及ぶ／までの範囲」という表現は、交換可能に使用され、第１の示された数字と、第２の示された数字と、その間のすべての分数および整数とを含むことが意味される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５８】
本発明は、アリル含有非対称ジスルフィド、特にアリルメルカプトカプトプリル（ＣＰＳＳＡ）、その類似体及び誘導体を調製する新規な方法である。この方法は、取扱うのが便利な出発物質を利用し、かつ中間体を単離する必要を回避しながら、ワンポット法として効率的に実施されることができる。
【００５９】
本発明の少なくとも１つの実施態様を詳細に説明する前に、本発明は、その適用において、下記の説明に示される細部または実施例によって例示される細部に限定されないことを理解しなければならない。本発明は、他の実施態様が可能であり、または様々な方法で実施することができ、または様々な方法で実施される。また、本明細書中で用いられる表現および用語は説明のためであり、従って限定として見なされるべきではないことを理解しなければならない。
【００６０】
上に検討したように、アリルメルカプトカプトプリル（ＣＰＳＳＡ）及びその誘導体及び類似体のようなアリル含有非対称ジスルフィド化合物は優れた血圧降下性を持つことが示されている［ＷＯ  ０２／０９６８７１及びＭｉｒｏｎら、（２００４）（上記）］。これらの高活性アリル含有非対称ジスルフィド化合物（例えばＣＰＳＳＡ）は、高血圧及び心臓血管危険因子への効果を含む多くの健康上の利益を持つアリシン（にんにくから誘導された生物学的に活性な化合物）のコンジュゲート、及びカプトプリルのようなアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）−阻害プロリン誘導体化合物のコンジュゲートである。
【００６１】
ＣＰＳＳＡ、並びにその誘導体及び類似体は、哺乳動物の血液または血漿中で安定であることが示されており、従ってそれらの使用は、カプトプリルのような非コンジュゲートＡＣＥ−阻害プロリン誘導体化合物による場合に多い血圧降下効果を生成するための高投与を使用する必要を回避する。
【００６２】
上に検討したように、これらの新規なコンジュゲート、すなわちＣＰＳＳＡ及びその類似体及び誘導体はＡＣＥ−阻害プロリン誘導体化合物のチオール基をアリシンと反応することにより調製されている。アリシンとカプトプリルの反応によりＣＰＳＳＡを調製するための例示的方法は上のスキーム１に示されている。
【００６３】
この方法は、比較的高収率（９０％より高い）をもたらすけれども、不安定な短命分子であるアリシンの高反応性により大きく影響を受ける。しかし、アリシンの反応性は逆にこの物質を得ること及び取扱うことを困難とし、従って上記方法の実行を複雑にする。加えて、アリシンはにんにくの刺激臭の原因となる化合物であるので、それを用いることは非常に不快なかつ不愉快なことが多い。
【００６４】
上に検討したように、アリル含有非対称ジスルフィドは有望な治療特性を持つ。しかし、上にさらに検討したように、一般的に非対称ジスルフィド、特にアリル含有非対称ジスルフィドを調製するための現在知られた方法は、使用するのが不便な出発物質及び中間体の面倒で高価なかつ時間のかかる単離及び精製工程を含む多くの欠点を持つ。これらの工程の幾つかはさらに、水溶性チオールで水性媒体中で実行されるためには適していない。
【００６５】
ＣＰＳＳＡのようなアリル含有非対称ジスルフィドを調製するための新規かつ改良された方法のための調査において、本発明者らはアリシン以外のチオール含有アリル種をチオール含有化合物に導入し、それによりアリル含有非対称ジスルフィドを得ることは、出発物質としてのアリシンの使用を回避しながら、このファミリーの化合物の調製のための代替方法として役立ちうることを想起した。本発明者らはさらに、かかる種を現場で調製することは反応中間体を分離しかつ精製する面倒な仕事を回避することができることを想起した。さらに、かかる方法は水性媒体中で実施されることができ、かつ水溶性チオールによる実行のために適していることを想起した。
【００６６】
この目的のために、本発明者らは、チオール含有化合物と反応し、それによりアリル含有非対称ジスルフィドを得るためのアリルチオ硫酸塩の水性媒体中での現場調製に基づく新規な方法を設計しかつ首尾よく実行した。
【００６７】
以下の実施例の欄において示されるように、有望な治療用途を持つ例示的アリル含有非対称ジスルフィドとしてのＣＰＳＳＡは、例外的に高純度形態でこの方法により首尾よく調製された。以下の実施例の欄においてさらに示されるように、この方法は、反応中間体を単離することなくワンポット法として首尾よく実施され、さらに水性媒体中で首尾よく有利に実施された。
【００６８】
従って、ここに述べられた新規な方法はアリル含有非対称ジスルフィドを調製するための新規な方法として有利に利用されることができ、そこでは入手可能で取扱いが容易な出発物質が使用され、反応中間体を単離する必要性が回避される。従って、この方法は、高純度生成物を提供しながら効率的に規模を拡大されかつ工業的規模で利用されることができる。
【００６９】
従って、本発明の一態様によれば、アリル含有非対称ジスルフィドを調製する方法が提供される。この方法は、反応性基を持つアリル化合物をチオ硫酸塩の存在下にチオール含有化合物と反応させることにより成し遂げられる。
【００７０】
ここで使用されるように、用語「アリル」（「ａｌｌｙｌ」また「ａｌｌｙｌｉｃ」）は、記号Ｂとしても示され、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２基を含む化学種を意味する。この種は、化合物の一部を形成することができ、または安定なまたは準安定なアリルラジカルとしてまたは例えば式＋ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２のアリルカチオンのような荷電種として存在することができる。表現「アリル含有」は、少なくとも一つのアリル基を含む化合物を指す。用語「アリル位置」は、アリル基のＣ＝Ｃ二重結合に隣接した位置を指す。例えば、アリル炭素は、Ｃ＝Ｃ結合に隣接して位置した炭素原子である。
【００７１】
ここで使用される用語「ジスルフィド」は、二つの硫黄ラジカル間の強い共有結合であるジスルフィド架橋としても業界で言及されるジスルフィド結合（−Ｓ−Ｓ−結合）を含む化合物を意味する。ジスルフィド化合物中のジスルフィド結合は典型的には二つの残基を結合し、それぞれがジスルフィド結合中の硫黄ラジカルの一つに結合され、従ってジスルフィド化合物は式Ｒ′−Ｓ−Ｓ−Ｒ″を持つ。
【００７２】
ここで使用されるように、用語「非対称ジスルフィド」は硫黄−硫黄結合を分割したときにそれ自身の鏡像でない硫黄−硫黄結合を持ついずれかの化合物を指す。この用語は特に、一般式Ｒ′−Ｓ−Ｓ−Ｒ″を持つジスルフィド並びにＲ′−Ｓ−Ｓ−Ｙ−Ｓ−Ｓ−Ｒ″の一般式を持つ（ビス）ジスルフィドを含み、ここでＲ′，Ｒ″及びＹ（もし存在するなら）は、Ｒ′とＲ″が異なる残基または基であるという条件で、例えばアルキル、シクロアルキル、アリル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、アミン、ヒドロキシ等を含むジスルフィド結合（単数または複数）中の硫黄ラジカルに結合されることができるいずれかの残基または基である。
【００７３】
従って、用語「非対称ジスルフィド」は、ジスルフィド結合の両側の基が異なっていることを意味し、従って上の式中のＲ′とＲ″は互いに異なる。
【００７４】
さらに、ここで使用される用語「非対称ジスルフィド」はまた、参照されている特別な非対称ジスルフィドの全ての生化学的均等物、すなわち塩、プロドラッグ、前駆体等を包含する。
【００７５】
表現「アリル含有非対称ジスルフィド」はそれゆえ、ここに定義された少なくとも一つのアリル基を含むここに定義された非対称ジスルフィドを意味する。
【００７６】
アリル含有非対称ジスルフィドはさらに、ここでは一般式Ｉにより表わされる：
Ａ−Ｓ−Ｓ−Ｂ
式Ｉ
式中、Ａはここに定義されている用語であるチオール含有化合物の残基であり；そしてＢはここに定義されている用語であるアリル残基またはアリル含有残基であり、さらにＡとＢは同じではない。
【００７７】
好ましくは、本実施態様の方法により得られたアリル含有非対称ジスルフィドはＡＣＥ−阻害プロリン化合物のアリル誘導体である。
【００７８】
本発明の現在最も好ましい実施態様によれば、アリル含有非対称ジスルフィドはアリルメルカプトカプトプリル（ＣＰＳＳＡ）、その類似体、塩及び化学誘導体を含む。
【００７９】
ここに全体を通して使用される用語「類似体」は、主題とする分子（例えばＣＰＳＳＡ）に構造的に関連し、従って同じ生物学的活性を発揮する化合物を指す。
【００８０】
用語「誘導体」は、化学的に変性されているがその主要部分を変化していないままである主題とする分子（例えばＣＰＳＳＡ）を指す。その限定されない例は追加のまたは異なる置換基により置換されている主題の分子、主題の分子の一部が酸化または加水分解された主題の分子等を含む。
【００８１】
ここでさらにＸとして示されている用語「反応性基」は、ここでは「反応性基を持つアリル」の文脈で使用される。ここで使用されるこの用語は、典型的には結合形成を導く化学反応を受けることができる化学基を意味する。結合は共有結合、イオン結合、水素結合等であることができ、好ましくは共有結合である。結合形成を導く化学反応は、例えば求核及び求電子置換、求核及び求電子付加反応、脱離反応、付加環化反応、転位反応、芳香族相互作用、疎水性相互作用、静電相互作用及び二つ以上の成分間の相互作用をもたらすいずれかの他の既知の反応を含む。
【００８２】
ここで述べられた方法に含まれた反応の性質は主として求核的であるから、本発明の文脈内で使用するのに適した例示的反応性基は脱離基である。
【００８３】
ここで使用される表現「脱離基」は、化学反応時に有機分子からの脱離を容易に受ける不安定原子、基または化学部分を意味し、一方脱離はその後の脱離原子、基または部分の相対的安定性により容易にされる。典型的には、強酸の共役塩基であるいずれかの基が良好な脱離基として作用することができる。従って、本実施態様による好適な脱離基の代表的例は、アセテート、トシレート、ヒドロキシ、チオヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン化物、ハロゲン化スルホニル、アミン、アジ化物、シアネート、チオシアネート、ニトロ及びシアノを含むが、これらに限定されない。
【００８４】
好ましくは、脱離基はハロゲン化物である。
【００８５】
用語「ハロゲン化物」または「ハロ」はフッ化物、塩化物、臭化物またはヨウ化物を意味する。
【００８６】
より好ましくは、ハロゲン化物は臭化物である。
【００８７】
以下の実施例の欄に見ることができるように、臭化アリルにより反応を実行することは、塩化アリルによる同じ反応に比べて、より良い結果（より高い収率及び未反応カプトプリルのより低い百分率割合）を与えた（臭化アリルによる実施例１〜４対塩化アリルによる実施例５〜６参照）。
【００８８】
ここで使用される用語「チオ硫酸塩」は、チオ硫酸基を含む化合物を意味する。「チオ硫酸基」は、式−（Ｓ−Ｓ（＝Ｏ）２−Ｏ）２−により表わされることができるＳ２Ｏ３２−基を意味する。それゆえ、チオ硫酸塩は、陰イオン及び陽イオンであるチオ硫酸基を含むことができ、従ってチオ硫酸基の塩である。チオ硫酸塩の例は、チオ硫酸ナトリウム、チオ硫酸カリウム、チオ硫酸カルシウム、及びチオ硫酸アンモニウムを含むが、それらに限定されない。チオ硫酸塩は無水またはその水和物の形のいずれかであることができる。
【００８９】
用語「水和物」は化合物（例えばチオ硫酸塩）と水との間に形成される可変化学量論的複合体（例えばジ−、トリ−、テトラ−、ペンタ−、ヘキサ−等）を指す。典型的には、水分子は非共有分子間力により化合物に結合される。
【００９０】
ここで使用されるように、用語「チオール」は、業界で知られかつ「チオヒドロキシ」としてここで互換的に「チオヒドロキシ」と呼ばれるが、−ＳＨ基を意味する。
【００９１】
表現「チオール含有化合物」は、ここでＡ−ＳＨとして示されるが、少なくとも一つの−ＳＨ基を含む化合物を指す。この点で、Ａは前記チオール含有化合物の残基として定義される。
【００９２】
本発明の現在最も好ましい実施態様によれば、ここで述べられた方法により調製された得られた非対称ジスルフィドはＣＰＳＳＡであるから、本実施態様による好適なチオール含有化合物はカプトプリル（ＣＰＳＨ）、その誘導体及び類似体、並びに他のチオール含有ＡＣＥ−阻害プロリン誘導体を含む。
【００９３】
チオール含有化合物が一つ以上の非対称官能基を含む場合、全ての立体異性体（例えば鏡像体、ジアステレオマー）及びそれらのラセミ形が本実施態様により包含されることに注意すべきである。
【００９４】
従って、ここで与えられた新規な方法は新規な方法に基づいており、そこではアリル含有非対称ジスルフィドはアリル化合物とチオ硫酸塩からのアリルチオ硫酸塩の現場調製、及び続いての現場で得られたアリルチオ硫酸塩のチオール含有化合物との反応を通して得られる。
【００９５】
この方法は、ジスルフィド結合を介して共有結合されたチオール含有化合物と希望のアリル残基コンジュゲートであるアリル含有非対称ジスルフィドを調製するために役立ちうる。上に検討したように、例示的なかかるコンジュゲートはＣＰＳＳＡであり、そこではアリシンの残基が残基カプトプリルに結合される。ＣＰＳＳＡの有益な治療効果は化合物中のこれらの二つの残基の存在に原因がある。
【００９６】
従って、現場で調製されたアリルチオ硫酸塩を構成するアリル化合物とチオ硫酸塩、及びチオール含有化合物を適切に選ぶことにより、いずれの希望のアリル含有非対称ジスルフィドもこの方法を用いて調製されることができる。
【００９７】
以下の実施例の欄において詳述されるように、ＣＰＳＳＡは、この方法に従って臭化アリルとチオ硫酸ナトリウムからのアリルチオ硫酸塩の現場調製、及び続いての現場で得られたアリルチオ硫酸塩とカプトプリルの反応により、調製された。
【００９８】
本実施態様によるＣＰＳＳＡの調製に使用されたアリルチオ硫酸塩は、最終生成物中でカプトプリル残基に結合されたアリル残基がカプトプリルとアリシンを反応することにより得られた残基と同じであるように選ばれる。従って、ＣＰＳＳＡは、得ることと取扱うことの両者が困難でありかつ不快なかつ不愉快な臭いを持つアリシン自体の使用を回避しながら、この方法により合成的に調製されることができる。
【００９９】
上にさらに検討したように、一般的に非対称ジスルフィド、特にアリル含有非対称ジスルフィドを調製する現在知られた方法は、その方法で得られた中間生成物の分離、単離または精製を必要とする欠点を持つ。これらの中間生成物は例えばアリルチオ硫酸塩を含む。
【０１００】
本発明者らは、今や驚くべきことに、ここに述べられた方法を使用することにより、中間生成物（単数または複数）を単離及び精製する必要性を回避しながらアリル含有非対称ジスルフィドがワンポット法で都合良く調製されることができ、それにより、アリル含有非対称ジスルフィドは以下に詳述するように非常に高純度で得られることを発見した。
【０１０１】
ワンポット法としてこの方法を実施することは非常に有利である。なぜなら、中間体を単離しかつ精製する必要性を回避することにより、この方法は単純化され、費用効果的であり、従って容易に規模拡大されることができるからである。
【０１０２】
ここで使用される表現「ワンポット法」は、方法に含まれる全ての反応及び／または手順がいずれの中間生成物の如何なる分離、単離または精製手順の必要なしに、同時にまたは連続的に実施される方法を意味する。種々の反応及び／または手順は結果的に同時にまたは間隔をおいてのいずれかで実行されることができる。如何なる疑問も明らかにするために、この表現は文字どおりに単一ポット内で実施される方法を必ずしも指さないことは注意されるべきである。従って、例えばろ過またはデカンテーションのような物理的手段による特定の機械的不純物の除去を含む方法もまた、この用語により包含される。
【０１０３】
本発明の好適な実施態様によれば、ここで述べられた方法は、ここに定義された反応性基を持つアリル、及びチオ硫酸塩を含む第一混合物を準備することにより実現される。この第一混合物に、チオール含有化合物を含む第二混合物が添加され、二つの混合物が混合され、それにより必要な生成物を得る。
【０１０４】
さらに、本発明の好適な実施態様によれば、第一混合物は、反応性基を持つアリルとチオ硫酸塩を単に混合することにより（例えば撹拌により）得られる。いずれかの特別な機構に拘束されることなしに、アリル化合物とチオ硫酸塩は現場で反応性種のアリルチオ硫酸塩を形成し、それがその後、最終希望生成物を提供するように、添加されたチオール含有化合物と反応することが考えられる。
【０１０５】
さらに、本発明の好適な実施態様によれば、第二混合物はチオール含有化合物を水性溶媒中で単に溶解することにより得られる。
【０１０６】
ここで述べられた方法を実施するための最適条件のための調査において、本発明者らは、最終生成物の収率及び純度に関して工程効率の種々のパラメーターの影響を試験しながら、この方法を繰返し実施した。
【０１０７】
以下の実施例の欄において示されるように、幾つかのパラメーターが工程効率に影響を及ぼすことを見出した。これらは、反応の時間の長さ、ｐＨ条件、反応性基を持つアリル及びチオ硫酸塩の濃度、及び反応性基を持つアリルとチオール含有化合物との間のモル比を含む。
【０１０８】
従って、例えば、前記反応性基を持つアリルとチオ硫酸塩の混合は好ましくは、約１時間から約２０時間の範囲の時間の間に実現されるべきであることが見出された。以下の実施例の欄において見られることができるように（例えば実施例１〜６参照）、満足すべき結果は、前記反応性基を持つアリルとチオ硫酸塩の混合が３，５，１０（一夜）及び１５時間の間で実現されたときに得られ、最良の結果はこの混合が１０時間（一夜）及び１５時間の間で実施されたときに得られた。
【０１０９】
以下で使用される「約」は±１０％を指す。
【０１１０】
従って、第一混合物を得るために前記反応性基を持つアリルとチオ硫酸塩を混合することは、好ましくは約１時間から約２０時間、より好ましくは約５時間から約２０時間、さらに好ましくは約１０時間から約２０時間の範囲の時間の間で実現される。
【０１１１】
さらに、反応は好ましくは塩基性条件下に実施されるべきであることが見出された。用語「塩基性条件」は、７より高い反応混合物のｐＨを指す。かかるｐＨを維持することは、好ましくは緩衝剤の存在下にこの方法を実施することにより達成される。本発明のこの文脈で使用するための好適な緩衝剤は、例えば水素オルトリン酸二ナトリウム緩衝剤のようなリン酸塩緩衝剤を含む。
【０１１２】
従って、本発明の好適な実施態様によれば、この方法は塩基性条件下に実施される。本発明のさらなる実施態様によれば、この方法はここで述べたように緩衝剤の存在下で実施される。
【０１１３】
明細書、実施例及び請求項を通して現れる濃度は全て、母溶液、すなわち溶液を反応溶液に混合する前のその溶液中の各反応物の濃度に関する。従って、以下で言及されるアリル及びチオ硫酸塩濃度は第一混合物中のこれらの反応物の濃度に関する。同様に、以下で言及されるチオール含有化合物の濃度は第二混合物中のこの反応物の濃度（すなわち、それが他の反応物と混合される前のもの）に関する。
【０１１４】
上記を考慮すると、この方法は反応性基を持つアリルとチオ硫酸塩の両者の濃度がそれぞれ好ましくは約０．１Ｍから約１０Ｍの範囲の溶液を使用して実現されることができることが示された。より好ましくは、これらの反応物のそれぞれの濃度は約１Ｍから約５Ｍの範囲である。
【０１１５】
本発明の方法によるＣＰＳＳＡの調製を示す以下の図２に見られるように、反応性基を持つアリルとチオール含有化合物の化学量論比は１：１モル比である。しかし、本発明を実施に移している間に、反応は好ましくは約１０：１から約１：１０、より好ましくは約５：１から約１：５の範囲のモル比で実現されることができることが見出された。特に、さらにより好ましくは、反応性基を持つアリルはチオール含有化合物に比べて過剰に保たれるべきであることが見出された。
【０１１６】
以下の実施例の欄において示されるように、反応をアリル系試薬の大過剰で実行することは、得られたＣＰＳＳＡ生成物の極めて高い純度（９９％より高い）及び比較的高い収率（６０％より高い）をもたらした。例えば、４：１のアリル：ＣＰＳＨのモル比は９９．５％の純度により特徴付けられた生成物をもたらし、７１％収率で得られ（実施例１参照）、２．６：１のアリル：ＣＰＳＨのモル比は９８．７％の純度により特徴付けられた生成物をもたらし、６０％収率で得られ（実施例１参照）、そして１．４：１のアリル：ＣＰＳＨのモル比は９６％純度により特徴付けられた生成物をもたらし、５９％収率で得られた（実施例２参照）。
【０１１７】
この方法は約−５０℃から約５０℃の範囲の温度で実現されることができる。好ましくは、第一と第二混合物を混合することは−１０℃から＋３０℃の間の周囲温度で実行される。本発明の好適な実施態様では、混合は周囲温度（例えば室温（ｒｔ）、１５〜３０℃）で実行され、その後、生成物の沈殿を容易にするために好ましくは約０℃までの冷却段階を行なう。
【０１１８】
この方法はさらに、溶媒の存在下に実現されることができる。いずれの溶媒も使用されることができるけれども、反応物の水中での溶解性を考えると、反応を水性媒体中で実行するのが望ましい。従って、本発明の好適な実施態様では、この方法は、好ましくは水である水性溶媒中で実現される。
【０１１９】
水性媒体中でこの方法を実施することは、安全で、費用効果的で、環境に優しく、従って大規模方法のために非常に適している。背景技術の欄で詳細に検討したように、非対称ジスルフィドの調製のための現在知られた方法は、有機媒体中の反応に焦点を当てることにより、チオールのような水溶性試薬と共に使用するためには適していない。
【０１２０】
さらに、本発明の好適な実施態様によれば、反応性基を持つアリルとチオ硫酸塩を反応させるモル比は約５：１から約１：５の範囲であることができる。好ましくは、この比は化学量論的に１：１モル比である。
【０１２１】
アリル含有非対称ジスルフィドの調製後に、得られた生成物の精製を行なう。従って、本発明の好適な実施態様では、上に述べられた方法で得られた生成物は一つ以上の精製工程を受ける。好ましくは、アリル含有非対称ジスルフィドを精製することは、一つ以上の抽出、カラムクロマトグラフィー、及び再結晶により実現される。
【０１２２】
以下の実施例の欄において詳述されるように、この方法により得られたアリル含有非対称ジスルフィドは高い純度により特徴付けられる。以下の実施例１〜４に示されるように、本発明の方法に従うことにより、９５％以上の純度（９６％及び９７％）を持つ化合物が得られることができる。事実、９９％を越える純度が上記方法を用いて容易に得られた。
【０１２３】
従って、本発明のなお別の態様によれば、９５％より高い純度を持つアリル含有非対称ジスルフィドが提供される。好ましくは、アリル含有非対称ジスルフィドは９７％より高い、より好ましくは９９％より高い純度を持つ。
【０１２４】
かかる極めて高い純度は、高純度レベルの試薬を使用することが必要である医薬及び分析的用途において最も有利である。
【０１２５】
本発明の追加の目的、利点及び新規な特徴は、下記実施例を考察すれば、当業技術者には明らかになるであろう。なお、これらの実施例は本発明を限定するものではない。さらに、先に詳述されかつ本願の特許請求の範囲の項に特許請求されている本発明の各種実施態様と側面は各々、下記実施例の実験によって支持されている。
【実施例】
【０１２６】
上記説明とともに、以下の実施例を参照して本発明を例示する。なお、これらの実施例によって本発明は限定されない。
【０１２７】
材料及び分析方法
カプトプリルはＴｅｖａ，Ｉｓｒｅｅｌから得られた。全ての他の化学薬品はＳｉｇｍａ，Ａｌｄｒｉｃｈ及びＭｅｒｃｋから得られた。
【０１２８】
生成物分離は、ＬｉＣｈｒｏｓｏｒｂ  ＲＰ−１８（７ｍｍ）カラム、及び移動相として０．０５％のトリフルオロ酢酸を含む水中の６０％メタノールの混合物を用いて、ＨＰＬＣ上で実行された。流速は１．０ｍｌ／分に保たれた。
【０１２９】
生成物識別及び分離は、ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒｅ  １００  ＲＰ−１８（５ｍｍ）カラム、及び移動相として０．０５％のトリフルオロ酢酸を含む水中の６０％メタノールの混合物を用いて、ＨＰＬＣにより実行され、流速は１．０ｍｌ／分に保たれ、検出器は２２０ｎｍで操作された。滞留時間はカプトプリルに対しては３．１分、ＣＰＳＳＡに対しては９．７分であった。
【０１３０】
生成物の純度は１Ｈ−ＮＭＲ，ＩＲ，ＵＶ−可視及び融点測定を用いて確認された。
【０１３１】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルはＣＤＣｌ３溶液を用いてＢｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ２５０  ＤＰＸ装置上で記録され；化学シフトは内部標準としてのＭｅ４Ｓｉからのダウンフィールドのｐｐｍで表わされる。
【０１３２】
ＩＲスペクトルはＫＢｒペレットを用いてＮｉｃｏｌｅｔ  Ｐｒｏｔｅｇｅ  ４６０  ＦＴＩＲ装置上に記録された。
【０１３３】
ＵＶスペクトルは１：１  ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ混合物の２ｍｌ中の０．１５ｍｇＣＰＳＳＡの溶液に対し、ＨＰ８４５２ＡダイオードアレイＵＶ−可視分光計上に記録された。
【０１３４】
融点はＳｔｕａｒｔ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＳＭＰ  １０装置を用いて２℃／分の温度勾配により決定された。
【０１３５】
化学合成
本発明の好適な実施態様によるアリルメルカプトカプトプリル（ＣＰＳＳＡ）を調製するための一般的な方法は、以下のスキーム２に示されている。この方法は、以下の実施例１〜６に示されるように、その効率に対する種々のパラメーターの影響を試験しながら実施された。
2009524648.tif 000003
【０１３６】
実施例１
臭化アリル（４８ｍｌ、０．５５６モル）を水（１８９．６ｍｌ）中の無水チオ硫酸ナトリウム（８８．２グラム、０．５５８モル）の溶液に添加すると、その後約１分で溶液が黄色に変わった。次いで得られた混合物を室温で一夜撹拌し、貯蔵のため冷温室（約４℃）内に保持した。溶液は、使用前に機械的不純物を除去するためにろ過された。次いで、この溶液の一部（１９７ｍｌ、０．４モル）を別のフラスコに移動し、０．５Ｍ水素オルトリン酸二ナトリウム溶液（３４ｍｌ）と混合した。
【０１３７】
別個のフラスコ中で、０．５Ｍ水素オルトリン酸二ナトリウム溶液（１７０ｍｌ）中にカプトプリル（２１．７グラム、０．１モル）を溶解することにより均一なカプトプリル（ＣＰＳＨ）溶液を調製した。この間、混合物を窒素雰囲気下に水浴中で加熱した。カプトプリル溶液を、先に調製されたチオ硫酸アリル溶液を含むフラスコに添加し、撹拌を、窒素雰囲気下に２時間室温で続け、その後氷浴中で（約５℃に）冷却した。混合物を約３の最終ｐＨに酸性化するように４Ｍ  ＨＣｌ（１５．９ｍｌ）を、冷却された混合物に添加すると、白い固体の沈殿が観察された。この混合物を次いで冷温室（約４℃）内に５日間置き、毎日ＨＰＣＬにより監視した。５日後、沈殿物を水で洗浄し、粗生成物を二度水中でスラリー化し、ろ過した。その後、沈殿物を空気中で乾燥した。続いてデシケーター中で減圧下Ｐ２Ｏ５上で追加的に乾燥した。生成物を次いでヘキサン中でスラリー化し、ろ過した。デシケーター中での乾燥後、純粋なアリルメルカプトカプトプリル（ＣＰＳＳＡ）を得た（２０．８７グラム、０．０８６モル、７２％収率）。
【０１３８】
ＨＰＬＣにより決定された最終生成物の純度は９９．４６％であった。
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【０１３９】
同じ実験を、チオ硫酸アリル溶液の１２８ｍｌ（０．２６モル）を使用して繰返し、高純度生成物（９８．７４％純度、１７．３３グラム、０．０７１モル、６０％収率）を得た。
【０１４０】
実施例２
臭化アリル（１７．３ｍｌ、０．２モル）を水（５０ｍｌ）中のチオ硫酸ナトリウム５水和物（４９．６グラム、０．２モル）の溶液に添加し、得られた混合物を、最初の二相が消え、反応混合物が均一になるまで、室温で１５時間撹拌した。水素オルトリン酸二ナトリウム（約８．０のｐＨを持つ０．５Ｍ水溶液の５０ｍｌ）を添加し、得られたチオ硫酸アリル溶液を氷浴中で冷却した。カプトプリル（ＣＰＳＨ）溶液を、窒素雰囲気下で０．５Ｍ水素オルトリン酸二ナトリウム溶液（２５０ｍｌ）中にカプトプリル（３２グラム、０．１４７モル）を溶解することにより調製した。このカプトプリル溶液を、反応混合物のｐＨを約８．０に維持しながら、撹拌及び窒素の泡立ち下にチオ硫酸アリル溶液に添加した。撹拌を１時間０℃で続け、別の１時間室温で続けた。反応混合物をその後再び氷浴中で冷却し、混合物を２〜３の範囲の最終ｐＨに酸性化するように、窒素雰囲気下に、４Ｍ  ＨＣｌ（３５ｍｌ）を添加した。混合物を次いで、白色固体の沈殿が観察されるまで、冷蔵庫（＋４℃）内に４日間置いた。沈殿物をろ過し、注意深く水で洗浄し、かつ減圧下に乾燥した。粗生成物（２３グラム）をｎ−ヘキサン（１００ｍｌ）で１時間処理し、白色固体をその後ろ過し、減圧乾燥し、純粋なＣＰＳＳＡ（２１グラム、０．０８６モル、５９％収率）を与えた。
【０１４１】
ＨＰＬＣにより決定された最終生成物の純度は９６％であった。
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【０１４２】
実施例３
臭化アリル（１７．３ｍｌ、０．２モル）を水（５０ｍｌ）中のチオ硫酸ナトリウム５水和物（４９．６グラム、０．２モル）の溶液に添加し、その混合物を、最初の二相が消え、反応混合物が均一になるまで、室温で５時間撹拌した。反応混合物を次いで氷浴中で冷却し、撹拌した。カプトプリル（ＣＰＳＨ）溶液を、窒素雰囲気下で０．５Ｍ水素オルトリン酸二ナトリウム溶液（３００ｍｌ）中にカプトプリル（３２グラム、０．１４７モル）を溶解することにより調製した。このカプトプリル溶液を、反応混合物のｐＨを約８．０に維持しかつ反応の進行をＨＰＬＣにより監視しながら、撹拌及び窒素の泡立ち下に反応混合物に添加した。撹拌を３０分間０℃で続け、温度を次いで室温に上昇した。混合物を２〜３の範囲の最終ｐＨに酸性化するように、窒素雰囲気下に、４Ｍ  ＨＣｌ（３５ｍｌ）を添加した。混合物をその後酢酸エチル（各１５０ｍｌの３アリコート）で抽出し、有機相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、蒸発しかつ減圧下に乾燥し、ＨＰＬＣにより決定された７５％のＣＰＳＳＡと２２％のカプトプリルを含む油（２６グラム）として粗生成物を与えた。ＣＰＳＳＡは次のようにカラムクロマトグラフィーにより精製された：粗ＣＰＳＳＡ（５グラム）を酢酸エチル中に溶解し、この溶液をヘキサンにより予備平衡されたシリカゲル６０で充填されたカラム（１０×１００ｃｍ）上に装填した。カラムをまず６００ｍｌの６０：４０の酢酸エチル：ヘキサン混合物により溶出し、次いで５：３５：６０のメタノール：酢酸エチル：ヘキサン混合物により溶出し、ＨＰＬＣにより決定された９２％の純度を持つ固体（１５グラム、０．０５２モル、３６％収率）として半純粋のＣＰＳＳＡを与えた。ジエチルエーテル−ヘキサン混合物（１：１）からの半純粋の固体の再結晶は高純度ＣＰＳＳＡの１１グラム（０．０４５モル、３１％収率）を与えた。
【０１４３】
ＨＰＬＣにより決定された最終生成物の純度は９７％であった。
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【０１４４】
実施例４
臭化アリル（０．１７３ｍｌ、２ミリモル）を水（５ｍｌ）中のチオ硫酸ナトリウム５水和物（５００ミリグラム、２ミリモル）の溶液に添加し、得られた混合物を、最初の二相が消え、反応混合物が均一になるまで、室温で１５時間撹拌した。反応混合物を次いで氷浴中で冷却し、撹拌した。カプトプリル（ＣＰＳＨ）溶液を、窒素雰囲気下で０．５Ｍ水素オルトリン酸二ナトリウム溶液の３ｍｌ中にカプトプリル（４３２ミリグラム、２ミリモル）を溶解することにより調製した。このカプトプリル溶液を、混合物のｐＨを約８．０に維持しながら、撹拌及び窒素の泡立ち下にチオ硫酸アリル混合物に添加した。撹拌はＨＰＬＣにより反応の進行を監視しながら続けられた。０℃で３０分の撹拌後、反応混合物はＨＰＬＣにより決定された７０％のＣＰＳＳＡと１５％の未反応カプトプリルを含んでいた。
【０１４５】
実施例５
塩化アリル（０．１４４ｍｌ、２ミリモル）を５ｍｌの水中のチオ硫酸ナトリウム５水和物（５００ミリグラム、２ミリモル）に添加し、その混合物を、最初の二相が消え、反応混合物が均一になるまで、室温で３時間撹拌した。反応混合物を次いで氷浴中で冷却し、撹拌した。カプトプリル（ＣＰＳＨ）溶液を、窒素雰囲気下で０．５Ｍ水素オルトリン酸二ナトリウム溶液（３ｍｌ）中にカプトプリル（４３２ミリグラム、２ミリモル）を溶解することにより調製した。このカプトプリル溶液を、反応混合物のｐＨを約８．０に維持しながら、撹拌及び窒素の泡立ち下に反応混合物に添加した。撹拌はＨＰＬＣにより反応の進行を監視しながら続けられた。０℃で４０分の撹拌後、反応混合物はＨＰＬＣにより決定された３０％のＣＰＳＳＡと２０％の未反応カプトプリル並びに他の生成物を含んでいた。
【０１４６】
実施例６
塩化アリル（０．７２０ｍｌ、１０ミリモル）を水（１５ｍｌ）中のチオ硫酸ナトリウム５水和物（２．４８グラム、１０ミリモル）の溶液に添加し、得られた混合物を、最初の二相が消え、反応混合物が均一になるまで、室温で１５時間撹拌した。その後、水を減圧下に蒸発し、沈殿した白色固体（１．７６グラム）をエチルアルコールで洗浄し、乾燥し、０．５Ｍの水素オルトリン酸二ナトリウム緩衝液（１０ｍｌ）中に再溶解した。混合物を氷浴中で冷却し、撹拌した。カプトプリル（ＣＰＳＨ）溶液を、窒素雰囲気下で０．５Ｍ水素オルトリン酸二ナトリウム溶液（３ｍｌ）中にカプトプリル（９２０ミリグラム、４.２ミリモル）を溶解することにより調製した。このカプトプリル溶液を、反応混合物のｐＨを約８．０に維持しながら、撹拌及び窒素の泡立ち下にチオ硫酸アリル混合物に添加した。撹拌はＨＰＬＣにより反応の進行を監視しながら続けられた。０℃で３０分の撹拌後、反応混合物はＨＰＬＣにより決定された３８％のＣＰＳＳＡと４３％の未反応カプトプリルを含んでいた。
【０１４７】
明確にするため別個の実施態様で説明されている本発明の特定の特徴は単一の実施態様に組み合わせて提供することもできることは分かるであろう。逆に、簡潔にするため単一の実施態様で説明されている本発明の各種の特徴は別個にまたは適切なサブコンビネーションで提供することもできる。
【０１４８】
本発明はその特定の実施態様によって説明してきたが、多くの別法、変更及び変形があることは当業者には明らかであることは明白である。従って、本発明は、本願の請求項の精神と広い範囲の中に入るこのような別法、変更及び変形すべてを包含するものである。本願で挙げた刊行物、特許及び特許願はすべて、個々の刊行物、特許及び特許願が各々あたかも具体的にかつ個々に引用提示されているのと同程度に、全体を本明細書に援用するものである。さらに、本願で引用又は確認したことは本発明の先行技術として利用できるという自白とみなすべきではない。