(57)【要約】  髪および皮膚に対する様々な有益作用剤結合の寿命を向上させる方法が提供される。伝統的および非伝統的着色剤およびコンディショナーの髪および皮膚への塗布が、それぞれ髪または皮膚結合ペプチド組成物により改善される。髪または皮膚結合ペプチド組成物の存在は、髪または皮膚上で塗布された着色剤またはコンディショナーの寿命を延ばす役目を果たす。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）髪に対する親和性を有する髪有益作用剤を提供するステップと、
ｂ）髪結合ペプチドを含んでなる組成物を提供するステップと、
ｃ）有益作用剤と髪結合ペプチドを含んでなる組成物とを髪有益作用剤および髪結合ペプチドが髪に結合するのに十分な時間髪に塗布するステップと
を含んでなる、有益作用剤を髪に塗布する方法。
【請求項２】
髪有益作用剤が髪染め剤およびヘアコンディショナーよりなる群から選択される請求項１に記載の方法。
【請求項３】
髪染め剤が、染料、顔料、およびナノ粒子よりなる群から選択される請求項２に記載の方法。
【請求項４】
染料が、４−ヒドロキシプロピルアミノ−３−ニトロフェノール、４−アミノ−３−ニトロフェノール、２−アミノ−６−クロロ−４−ニトロフェノール、２−ニトロ−パラフェニレンジアミン、Ｎ，Ｎ−ヒドロキシエチル−２−ニトロ−フェニレンジアミン、４−ニトロ−インドール、２−ニトロ−５−グリセリルメチルアニリン、３−メチルアミノ−４−ニトロフェノキシエタノール、３−ニトロ−ｐ−ヒドロキシエチルアミノフェノール、ヒドロキシアントラキノンアミノプロピルメチルモルホリニウムメトサルフェート、ヘンナ、ＨＣブルー１、ＨＣブルー２、ＨＣイエロー４、ＨＣレッド３、ＨＣレッド５、ＨＣレッド７、ＨＣバイオレット１、ＨＣバイオレット２、ＨＣブルー７、ＨＣブルー１０、ＨＣブルー１２、ＨＣイエロー２、ＨＣイエロー６、ＨＣイエロー８、ＨＣイエロー１２、ＨＣオレンジ２、ＨＣオレンジ３、ＨＣブラウン２、Ｄ＆Ｃイエロー１、Ｄ＆Ｃイエロー３、Ｄ＆Ｃブルー１、分散ブルー３、分散バイオレット１、分散オレンジ、分散バイオレット４、分散ブラック９、塩基性オレンジ３１、塩基性イエロー５７、塩基性イエロー８７、ＨＣイエローＮｏ．９、塩基性ブルー２６、塩基性ブルー７、塩基性ブルー９９、塩基性バイオレット１４、塩基性バイオレット２、塩基性ブラウン１６、塩基性ブラウン１７、塩基性レッド２、塩基性レッド５１、酸性レッド３３、ブリリアントブラック１、エオジン誘導体、およびハロゲン化フルオレセイン誘導体よりなる群から選択される請求項３に記載の方法。
【請求項５】
顔料が、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．３６、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．３０、Ｄ＆ＣオレンジＮｏ．１７、グリーン３レーキ、Ｅｘｔ．イエロー７レーキ、オレンジ４レーキ、レッド２８レーキ、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．７と１１と３１と３４とのカルシウムレーキ、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．１２のバリウムレーキ、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．１３のストロンチウムレーキ、ＦＤ＆ＣイエローＮｏ．５およびＮｏ．６のアルミニウムレーキ、ＦＤ＆Ｃ  Ｎｏ．４０のアルミニウムレーキ、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．２１と２２と２７と２８とのアルミニウムレーキ、ＦＤ＆ＣブルーＮｏ．１のアルミニウムレーキ、Ｄ＆ＣオレンジＮｏ．５のアルミニウムレーキ、Ｄ＆ＣイエローＮｏ．１０のアルミニウムレーキ、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．３３のジルコニウムレーキ、クロモフタル（Ｃｒｏｍｏｐｈｔｈａｌ）（登録商標）イエロー、サンファスト（Ｓｕｎｆａｓｔ）（登録商標）マゼンタ、サンファスト（Ｓｕｎｆａｓｔ）（登録商標）ブルー、酸化鉄、炭酸カルシウム、水酸化アルミニウム、硫酸カルシウム、カオリン、フェロシアン化アンモニウム第二鉄、炭酸マグネシウム、カルミン、硫酸バリウム、雲母、オキシ塩化ビスマス、ステアリン酸亜鉛、マンガンバイオレット、酸化クロム、二酸化チタン、二酸化チタンナノ粒子、酸化亜鉛、酸化バリウム、群青、クエン酸ビスマス、ヒドロキシアパタイト、ジルコニウムケイ酸塩、およびカーボンブラック粒子よりなる群から選択される請求項３に記載の方法。
【請求項６】
ナノ粒子が、ポリスチレン、ポリメチルメタクリレート、ポリビニルトルエン、スチレン／ブタジエンコポリマー、およびラテックスよりなる群から選択される材料を含んでなる着色ポリマーナノ粒子である請求項３に記載の方法。
【請求項７】
ヘアコンディショナーが、カチオンポリマー、カチオン界面活性剤、脂肪アルコール、脂肪アミン、非イオン性ポリマー、シリコーン、シロキサン、ポリマーエマルジョン、およびナノ粒子よりなる群から選択される請求項２に記載の方法。
【請求項８】
髪有益作用剤と髪結合ペプチドを含んでなる組成物とを髪に同時に塗布する請求項１に記載の方法。
【請求項９】
髪結合ペプチドを含んでなる組成物の塗布に先だって、髪有益作用剤を髪に塗布する請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
髪有益作用剤の塗布に先だって、髪結合ペプチドを含んでなる組成物を髪に塗布する請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
髪結合ペプチドを含んでなる組成物が、髪有益作用剤と結合している髪結合ペプチドを含んでなる抱合体を含んでなる請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
髪有益作用剤が、髪染め剤およびヘアコンディショナーよりなる群から選択される請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
抱合体の髪結合ペプチドが有益作用剤と共有結合する請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
ステップ（ａ）の髪有益作用剤が場合により髪結合ペプチドと結合している請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
髪結合ペプチドをファージディスプレイ、酵母ディスプレイ、細菌ディスプレイ、およびコンビナトリアル固相ペプチド合成よりなる群から選択される方法によって、コンビナトリアル的に生じさせる請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
髪結合ペプチドを実験的に生じさせる請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
実験的に発生させたペプチドが、髪に対する親和性を有する正に帯電したアミノ酸を含んでなる請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
髪結合ペプチドが、配列番号１、２、３、４、５、６、８、９、１０、１１、１２、１６、１７、１８、１９、２０、２１、および５２よりなる群から選択される請求項１または１４に記載の方法。
【請求項１９】
ｄ）髪結合ペプチドを含んでなる組成物を髪結合ペプチドが髪に結合するのに十分な時間髪に再塗布するステップをさらに含んでなる請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
ｄ）高分子シーラントを含んでなる組成物を髪に塗布するステップをさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
高分子シーラントが、ポリ（アリルアミン）、ポリアクリレート、アクリレートコポリマー、ポリウレタン、カルボマー、メチコン、アモジメチコン、ポリエチレングリコール、蜜ろう、およびシロキサンよりなる群から選択される請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ａ）皮膚に対する親和性を有する皮膚有益作用剤を提供するステップと、
ｂ）皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物を提供するステップと、
ｃ）有益作用剤と皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物とを皮膚有益作用剤および皮膚結合ペプチドが皮膚に結合するのに十分な時間皮膚に塗布するステップ
を含んでなる有益作用剤を皮膚に塗布する方法。
【請求項２３】
皮膚有益作用剤が、皮膚コンディショナー、染料、顔料、および日焼け止めよりなる群から選択される請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
皮膚コンディショナーが、α−ヒドロキシ酸、β−ヒドロキシ酸、ポリオール、ヒアルロン酸、Ｄ，Ｌ−パンテノール、ビタミンＡパルミテート、ビタミンＥアセテート、ポリサリチレート、ソルビトール、シリコーン、シリコーン誘導体、ラノリン、天然油、トリグリセリドエステル、プロピレングリコール、グリセリン、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、クエン酸、酒石酸、グルカル酸、ガラクタル酸、３−ヒドロキシ吉草酸、サリチル酸、二酸化チタンナノ粒子、および１，３プロパンジオールよりなる群から選択される請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
染料が、４−ヒドロキシプロピルアミノ−３−ニトロフェノール、４−アミノ−３−ニトロフェノール、２−アミノ−６−クロロ−４−ニトロフェノール、２−ニトロ−パラフェニレンジアミン、Ｎ，Ｎ−ヒドロキシエチル−２−ニトロ−フェニレンジアミン、４−ニトロ−インドール、２−ニトロ−５−グリセリルメチルアニリン、３−メチルアミノ−４−ニトロフェノキシエタノール、３−ニトロ−ｐ−ヒドロキシエチルアミノフェノール、ヒドロキシアントラキノンアミノプロピルメチルモルホリニウムメトサルフェート、ヘンナ、ＨＣブルー１、ＨＣブルー２、ＨＣイエロー４、ＨＣレッド３、ＨＣレッド５、ＨＣレッド７、ＨＣバイオレット１、ＨＣバイオレット２、ＨＣブルー７、ＨＣブルー１０、ＨＣブルー１２、ＨＣイエロー２、ＨＣイエロー６、ＨＣイエロー８、ＨＣイエロー１２、ＨＣオレンジ２、ＨＣオレンジ３、ＨＣブラウン２、Ｄ＆Ｃイエロー１、Ｄ＆Ｃイエロー３、Ｄ＆Ｃブルー１、分散ブルー３、分散バイオレット１、分散オレンジ、分散バイオレット４、分散ブラック９、塩基性オレンジ３１、塩基性イエロー５７、塩基性イエロー８７、ＨＣイエローＮｏ．９、塩基性ブルー２６、塩基性ブルー７、塩基性ブルー９９、塩基性バイオレット１４、塩基性バイオレット２、塩基性ブラウン１６、塩基性ブラウン１７、塩基性レッド２、塩基性レッド５１、酸性レッド３３、ブリリアントブラック１、エオジン誘導体、ハロゲン化フルオレセイン誘導体、およびジヒドロキシアセトンよりなる群から選択される請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
顔料が、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．３６、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．３０、Ｄ＆ＣオレンジＮｏ．１７、グリーン３レーキ、Ｅｘｔ．イエロー７レーキ、オレンジ４レーキ、レッド２８レーキ、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．７と１１と３１と３４とのカルシウムレーキ、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．１２のバリウムレーキ、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．１３のストロンチウムレーキ、ＦＤ＆ＣイエローＮｏ．５のアルミニウムレーキ、ＦＤ＆ＣイエローＮｏ．６のアルミニウムレーキ、ＦＤ＆ＣＮｏ．４０のアルミニウムレーキ、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．２１、２２、２７、および２８のアルミニウムレーキ、ＦＤ＆ＣブルーＮｏ．１のアルミニウムレーキ、Ｄ＆ＣオレンジＮｏ．５のアルミニウムレーキ、Ｄ＆ＣイエローＮｏ．１０のアルミニウムレーキ、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．３３のジルコニウムレーキ、クロモフタル（Ｃｒｏｍｏｐｈｔｈａｌ）（登録商標）イエロー、サンファスト（Ｓｕｎｆａｓｔ）（登録商標）マゼンタ、サンファスト（Ｓｕｎｆａｓｔ）（登録商標）ブルー、酸化鉄、炭酸カルシウム、水酸化アルミニウム、硫酸カルシウム、カオリン、フェロシアン化アンモニウム第二鉄、炭酸マグネシウム、カルミン、硫酸バリウム、雲母、オキシ塩化ビスマス、ステアリン酸亜鉛、マンガンバイオレット、酸化クロム、二酸化チタン、二酸化チタンナノ粒子、酸化亜鉛、酸化バリウム、群青、クエン酸ビスマス、ヒドロキシアパタイト、ジルコニウムケイ酸塩、およびカーボンブラック粒子よりなる群から選択される請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
日焼け止めが、有機日焼け止めおよび無機日焼け止めよりなる群から選択される請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
有機日焼け止めが、パラ−アミノ安息香酸、パラ−アミノ安息香酸エチル、パラ−アミノ安息香酸アミル、パラ−アミノ安息香酸オクチル、パラ−アミノ安息香酸エチルヘキシルジメチル、エチレングリコールサリチレート、フェニルサリチレート、オクチルサリチレート、ベンジルサリチレート、ブチルフェニルサリチレート、ホモメンチルサリチレート、エチルヘキシルサリチレート、ＴＥＡ−サリチレート、ケイ皮酸ベンジル、パラ−メトキシケイ皮酸２−エトキシエチル、メトキシケイ皮酸エチルヘキシル、パラ−メトキシケイ皮酸オクチル、モノ（２−エチルヘキサン酸）ジパラ−メトキシケイ皮酸グリセリル、パラ−メトキシケイ皮酸イソプロピル、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、ヒドロキシメトキシベンゾフェノン、ヒドロキシメトキシベンゾフェノンスルホン酸、ヒドロキシメトキシベンゾフェノンスルホン酸塩、ジヒドロキシメトキシベンゾフェノン、ナトリウムジヒドロキシメトキシベンゾフェノンジスルホネート、ジヒドロキシベンゾフェノン、テトラヒドロキシベンゾフェノン、４−ｔｅｒｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン、フェニルベンゾイミダゾールスルホン酸、２，４，６−トリアニリノ−ｐ−（カルボ−２’−エチルヘキシル−１’−オキシ）−１，３，５−トリアジン、オクトクリレン、アントラニル酸メンチル、および２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾールよりなる群から選択される請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
無機日焼け止めが、二酸化チタン、酸化亜鉛、酸化鉄、および二酸化チタンナノ粒子よりなる群から選択される請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
皮膚有益作用剤と皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物とを皮膚に同時に塗布する請求項２２に記載の方法。
【請求項３１】
皮膚有益作用剤が、皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物の塗布に先だって皮膚に塗布される請求項２２に記載の方法。
【請求項３２】
皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物が、皮膚有益作用剤の塗布に先だって皮膚に塗布される請求項２２に記載の方法。
【請求項３３】
皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物が、皮膚有益作用剤と結合している皮膚結合ペプチドを含んでなる抱合体を含んでなる請求項２２に記載の方法。
【請求項３４】
皮膚有益作用剤が、皮膚着色剤および皮膚コンディショナーよりなる群から選択される請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
抱合体の皮膚結合ペプチドが有益作用剤と共有結合する請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
ステップ（ａ）の皮膚有益作用剤が場合により皮膚結合ペプチドと結合している請求項２２に記載の方法。
【請求項３７】
皮膚結合ペプチドが、配列番号７、８、９、１０、１１、および１２よりなる群から選択される請求項２２または３６に記載の方法。
【請求項３８】
ｅ）皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物を皮膚に再塗布するステップをさらに含んでなる請求項２２に記載の方法。
【請求項３９】
ｅ）高分子シーラントを含んでなる組成物を皮膚に塗布するステップをさらに含んでなる請求項２２に記載の方法。
【請求項４０】
高分子シーラントが、ポリ（アリルアミン）、ポリアクリレート、アクリレートコポリマー、ポリウレタン、カルボマー、メチコン、アモジメチコン、ポリエチレングリコール、蜜ろう、およびシロキサンよりなる群から選択される請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
着色剤とペプチドが互いに結合していない、髪染め剤および髪結合ペプチドを含んでなる髪染め剤組成物。
【請求項４２】
コンディショナーとペプチドが互いに結合していない、ヘアコンディショナーおよび髪結合ペプチドを含んでなる髪質改良組成物。
【請求項４３】
コンディショナーとペプチドが互いに結合していない、皮膚コンディショナーおよび皮膚結合ペプチドを含んでなる皮膚質改良組成物。
【請求項４４】
着色剤とペプチドが互いに結合していない、皮膚着色剤および皮膚結合ペプチドを含んでなる皮膚着色剤組成物。
【請求項４５】
配列番号１６、１７、１８、１９、２０、および２１よりなる群から選択される髪結合ペプチド。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本出願は、２００５年９月２８日に出願された米国仮特許出願第６０／７２１３２９号明細書の利益を主張する。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、パーソナルケア分野、特に髪および皮膚のトリートメントに関する。より具体的には、本発明はペプチドベースのシーラントの塗布により、伝統的および非伝統的着色剤、コンディショナー、およびその他の有益作用剤の効果を増強する方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
髪および皮膚のためのコンディショナーおよび着色剤についてはよく知られており、頻繁に使用されるパーソナルケア製品である。現行のコンディショナーおよび非酸化着色剤の主要問題は、それらが持続的効果に必要な耐久性を欠くことである。酸化染髪剤は持続的な色を提供するが、それらが含有する酸化剤は髪の損傷を引き起こす。ヘアケアおよびスキンケア組成物の耐久性を改善するために、ペプチドベースのヘアコンディショナー、髪染め剤、およびその他の有益作用剤が開発されている（ファング（Ｈｕａｎｇ）らの同時係属および同一所有者による特許文献１、および特許文献２）。ペプチドベースの日焼け止めについてもまた、述べられている（ブーゼマン−ウィリアムズ（Ｂｕｓｅｍａｎ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ）らの同時係属および同一所有者による特許文献３、およびロウ（Ｌｏｗｅ）らの同時係属および同一所有者による特許文献４）。ペプチドベースの有益作用剤は、髪または皮膚に高結合親和性を有する特異的ペプチド配列と、質改良剤または着色剤などの有益作用剤とをカップリングして調製される。ペプチド部分が髪または皮膚に結合することによって、有益作用剤を強力に付着させる。これらのペプチドベースの有益作用剤は改善された耐久性を提供するが、結合ペプチドと有益作用剤とのカップリングを必要とする。
【０００４】
髪に対する高結合親和性があるペプチドが、ファージディスプレイスクリーニング技術を使用して同定されている（ファング（Ｈｕａｎｇ）らの特許文献１；エステル（Ｅｓｔｅｌｌ）らの特許文献５；マレー（Ｍｕｒｒａｙ）らの特許文献６；ジャンセン（Ｊａｎｓｓｅｎ）らの特許文献７；およびジャンセン（Ｊａｎｓｓｅｎ）らの特許文献８）。さらに正に帯電したアミノ酸をベースにして実験的に発生させた髪および皮膚結合ペプチドが報告されている（ローテ（Ｒｏｔｈｅ）らの特許文献９）。
【０００５】
コーンウェル（Ｃｏｒｎｗｅｌｌ）らに付与された特許文献１０は、酸化染髪剤による髪の処理前または処理後のどちらかで、髪を塩基性アミノ酸、尿素、グアニジン、および塩またはそれらの混合物などの有機アミノ化合物と接触させるステップを含んでなる、酸化染髪剤で処理された髪からの色損失を低下させる方法について述べる。しかしその開示は、特異的髪結合または皮膚結合ペプチド、または着色剤およびコンディショナーのためのシーラントとして有益作用剤と結合している髪結合または皮膚結合ペプチドを含んでなる抱合体の使用については述べていない。
【０００６】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００５／００５０６５６号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開第２００５／０２２６８３９号明細書
【特許文献３】米国特許出願公開第２００５／０２４９６８２号明細書
【特許文献４】米国仮特許出願第６０／７３７０４２号明細書
【特許文献５】国際公開第０１７９４７９号パンフレット
【特許文献６】米国特許出願公開第２００２／００９８５２４号明細書
【特許文献７】米国特許出願公開第２００３／０１５２９７６号明細書
【特許文献８】国際公開第０４０４８３９９号パンフレット
【特許文献９】国際公開第２００４／０００２５７号パンフレット
【特許文献１０】米国特許第６，５５１，３６１号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
したがって解決すべき問題は、髪および皮膚のためのコンディショナーおよび着色剤の耐久性を増強する、施用が単純で容易な代案の方法を提供することである
【課題を解決するための手段】
【０００８】
出願人らは、ペプチドベースのシーラントの塗布によって、伝統的および非伝統的着色剤、コンディショナー、およびその他の有益作用剤の効果が増強することを発見して、既述の問題に対処した。
【０００９】
本発明は、伝統的および非伝統的な髪および皮膚着色剤、コンディショナー、およびその他の有益作用剤の寿命を増強するのに有用な新しいペプチドベースのシーラントに関する。本発明のシーラントは短いペプチドであり、髪または皮膚に特異的に結合するそれらの能力について選択される。これらの髪結合ペプチド（ＨＢＰ）または皮膚結合ペプチド（ＳＢＰ）は、着色剤、コンディショナーまたはいくつかのその他の有益作用剤と併せて、髪または皮膚に塗布される。
【００１０】
したがって本発明は、
ａ）髪に対する親和性を有する髪有益作用剤を提供するステップと、
ｂ）髪結合ペプチドを含んでなる組成物を提供するステップと、
ｃ）有益作用剤と髪結合ペプチドを含んでなる組成物とを髪有益作用剤および髪結合ペプチドが髪に結合するのに十分な時間髪に塗布するステップと
を含んでなる、有益作用剤を髪に塗布する方法を提供する。
【００１１】
場合により、結合ペプチドを含んでなる組成物を必要に応じて再塗布してもよい。代案の実施形態では、本発明の方法はまた、ポリマーシーラントを用いて髪への有益作用剤の結合をさらに増強してもよい。
【００１２】
同様に、本発明は、
ａ）皮膚に対する親和性を有する皮膚有益作用剤を提供するステップと、
ｂ）皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物を提供するステップと、
ｃ）有益作用剤と皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物とを皮膚有益作用剤および皮膚結合ペプチドが皮膚に結合するのに十分な時間皮膚に塗布するステップと
を含んでなる、有益作用剤を皮膚に塗布する方法を提供する。
【００１３】
さらに本発明は、髪染め剤と髪結合ペプチドとを含んでなる髪染め剤組成物、ならびにヘアコンディショナーと髪結合ペプチドとを含んでなる髪質改良組成物を提供する。同様に、本発明は、皮膚コンディショナーと皮膚結合ペプチドとを含んでなる皮膚質改良組成物、ならびに皮膚着色剤と皮膚結合ペプチドとを含んでなる皮膚着色剤組成物を提供する。
【００１４】
特定の実施形態では、本発明は、配列番号１６、１７、１８、１９、２０、および２１よりなる群から選択される、髪結合ペプチドを提供する。
【００１５】
配列説明
本明細書の一部を形成する以下の詳細な説明および添付の配列説明から、本発明の様々な実施形態をより完全に理解できる。
【００１６】
以下の配列は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．１．§８２１〜１．８２５（「ヌクレオチド配列および／またはアミノ酸配列開示を含む特許出願の要件−配列規則（Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ａｎｄ／ｏｒ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｉｓｃｌｏｓｕｒｅｓ−ｔｈｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｒｕｌｅｓ）」）を満たし、世界知的所有権機関（ＷＩＰＯ）標準ＳＴ．２５（１９９８年）およびＥＰＯおよびＰＣＴの配列表要件（規則５．２および４９．５（ａの２）、および実施細則第２０８号および附属書Ｃ）に準拠する。ヌクレオチドおよびアミノ酸配列データのために使用される記号および式は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８２２で述べられる規則に従う。
【００１７】
配列番号１〜６および５３〜６２は、髪結合ペプチドのアミノ酸配列である。
【００１８】
配列番号７、および６３〜７４は、皮膚結合ペプチドのアミノ酸配列である。
【００１９】
配列番号８〜１２は、実験的に発生させた髪および皮膚結合ペプチドのアミノ酸配列である。
【００２０】
配列番号１３〜１５は、ペプチドスペーサーのアミノ酸配列である。
【００２１】
配列番号１６〜２１は、複数コピー髪結合ペプチドのアミノ酸配列である。
【００２２】
配列番号２２は、ランダムペプチドのアミノ酸配列である。
【００２３】
配列番号２３は、複数コピー髪結合ペプチドＨＣ７７６０７のコード領域の核酸配列である。
【００２４】
配列番号２４は、ペプチドＴＢＰ１のアミノ酸配列である。
【００２５】
配列番号２５〜２９は、実施例５で述べられるようなＴＢＰ１遺伝子を調製するために使用されるオリゴヌクレオチドの核酸配列である。
【００２６】
配列番号３０は、合成ＤＮＡ断片ＴＢＰ１の核酸配列である。
【００２７】
配列番号３１〜３６は、実施例５で述べられるようなｐＩＮＫ１発現プラスミドを調製するために使用されるオリゴヌクレオチドプライマーの核酸配列である。
【００２８】
配列番号３７は、実施例５で述べられるＴＢＰ１０１ペプチドのアミノ酸配列である。
【００２９】
配列番号３８は、ＩＮＫ１０１のコード配列の核酸配列である。
【００３０】
配列番号３９は、実施例５で述べられるようなペプチドＴＢＰ１０１−ＤＰのアミノ酸配列である。
【００３１】
配列番号４０および４１は、実施例５で述べられるようなプラスミドｐＩＮＫ１０１の部位特異的変異誘発で使用されるオリゴマーの核酸配列である。
【００３２】
配列番号４２は、プラスミドｐＩＮＫ１０１−ＤＰの核酸配列である。
【００３３】
配列番号４３は、ペプチドＩＢＴ３のアミノ酸配列である。
【００３４】
配列番号４４、４５、および４８〜５１は、実施例５で述べられるような部位特異的変異誘発で使用されるオリゴヌクレオチドの核酸配列である。
【００３５】
配列番号４６および４７は、実施例５で述べられるような酵素ケトステロイドイソメラーゼの断片を増幅するために使用されるプライマーの核酸配列である。
【００３６】
配列番号５２は、Ｃ末端に付加されたシステイン残基を有する髪結合ペプチドのアミノ酸配列である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
本発明は、シーラントとして髪または皮膚結合ペプチドを使用して、着色剤、コンディショナー、およびその他の有益作用剤の効果を増強する方法に関する。本方法を使用して髪および皮膚を着色またはコンディショニングし、伝統的方法と比べて増強した耐久性を提供してもよいので、本発明は有用である。
【００３８】
ここでは以下の定義が使用され、特許請求の範囲および明細書の解釈のために参照すべきである。
【００３９】
「発明」または「本発明」という用語は、ここでの用法では非限定的用語であり、特定の発明のいかなる単一実施形態を指すことも意図されないが、明細書および特許請求の範囲で述べられるような全ての可能な実施形態を包含する。
【００４０】
「ＨＢＰ」は毛髪結合ペプチドを意味する。
【００４１】
「ＳＢＰ」は皮膚結合ペプチドを意味する。
【００４２】
「ＨＣＡ」はヘアコンディショナーを意味する。
【００４３】
「ＳＣＡ」は皮膚コンディショナーを意味する。
【００４４】
「ＢＡ」は有益作用剤を意味する。
【００４５】
「ペプチド」という用語は、ペプチド結合または修飾ペプチド結合によって互いにつながる２個以上のアミノ酸を指す。
【００４６】
「髪結合ペプチド」という用語は、高親和性で髪に結合するペプチド配列を指す。本発明の髪結合ペプチドは、長さが約７個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、より好ましくは約７個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、最も好ましくは約７〜約２０個のアミノ酸である。
【００４７】
「皮膚結合ペプチド」という用語は、高親和性で皮膚に結合するペプチド配列を指す。本発明の皮膚結合ペプチドは、長さが約７個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、より好ましくは約７個のアミノ酸〜約２５個のアミノ酸、最も好ましくは約７〜約２０個のアミノ酸である。
【００４８】
「有益作用剤」という用語は、皮膚または髪に塗布すると美容または予防効果を提供する薬剤を指す一般的用語である。有益作用剤としては、一般にパーソナルケア産業で使用されるその他の物質と並んで、典型的にコンディショナー、着色剤、芳香剤、白化剤、日焼け止めなどが挙げられる。
【００４９】
「毛髪」という用語は、ここでの用法ではヒト毛髪、眉、および睫毛を指す。
【００５０】
「皮膚」という用語は、ここでの用法ではヒト皮膚、またはブタ皮膚ビトロ−スキン（Ｖｉｔｒｏ−Ｓｋｉｎ）（登録商標）およびエピダーム（ＥｐｉＤｅｒｍ）（商標）などのヒト皮膚代替物を指す。皮膚は、体表面としてのここでの用法では一般に上皮細胞層を含んでなり、内皮細胞層をさらに含んでなってもよい。
【００５１】
「カップリング」および「カップリングされた」という用語は、ここでの用法ではあらゆる化学会合を指し、共有結合および非共有結合の双方の相互作用を含む。
【００５２】
「ストリンジェンシー」という用語は、本発明の毛髪結合および皮膚結合ペプチドの選択について用いられる場合、毛髪または皮膚からペプチドを溶出するのに使用される溶出剤（通常は洗剤）濃度を指す。より高い溶出剤濃度は、より厳密な条件を提供する。
【００５３】
「ペプチド−毛髪複合体」という用語は、ペプチド上の結合部位を通じて毛髪繊維に結合するペプチドを含んでなる構造を意味する。
【００５４】
「ペプチド−皮膚複合体」という用語は、ペプチド上の結合部位を通じて皮膚に結合するペプチドを含んでなる構造を意味する。
【００５５】
「ペプチド−基質複合体」という用語は、ペプチド−毛髪またはペプチド−皮膚複合体のどちらかを指す。
【００５６】
「ナノ粒子」という用語は、ここでは平均粒径１〜５００ｎｍの粒子と定義される。好ましくは粒子の平均粒径は約１〜２００ｎｍである。ここでの用法では、「粒度」および「粒径」は同じ意味を有する。ナノ粒子としては、限定されるものではないが、金属、半導体、ポリマー、またはその他の有機または無機粒子が挙げられる。
【００５７】
「アミノ酸」という用語は、タンパク質またはポリペプチドの基本的な化学構造単位を指す。具体的なアミノ酸を識別するのに、ここでは以下の略語が使用される。
【００５８】
【表１】
2009512639.tif 000002
【００５９】
「遺伝子」は、コード配列に先行する制御配列（５’非コード配列）およびその後ろの制御配列（３’非コード配列）を含めた特定のタンパク質を発現する核酸断片を指す。「天然遺伝子」は、それ自体の制御配列を有して自然界に見いだされる遺伝子を指す。「キメラ遺伝子」は、自然界には一緒に見られない制御およびコード配列を含んでなる天然遺伝子でないあらゆる遺伝子を指す。したがってキメラ遺伝子は、異なる供給源に由来するに由来する制御配列およびコード配列、あるいは同一供給源に由来するに由来するが、自然界に見られるのとは異なるやり方で配列された制御配列およびコード配列を含んでなってもよい。「外来性」遺伝子は、常態では宿主生物に見られないが、遺伝子移入によって宿主生物中に導入される遺伝子を指す。外来遺伝子は、非天然生物に挿入された天然遺伝子、またはキメラ遺伝子を含んでなることができる。
【００６０】
「合成遺伝子」は、当業者に知られた手順を使用して化学的に合成されるオリゴヌクレオチド構成単位から構築できる。これらの構成単位をライゲートしアニールして遺伝子セグメントを形成し、次にそれを酵素的にアセンブルして遺伝子全体を構成してもよい。ＤＮＡ配列に関連して「化学的に合成された」とは、構成要素ヌクレオチドが生体外でアセンブルされたことを意味する。ＤＮＡの手動化学合成は確立した手順を使用して達成されても良く、あるいはいくつかの市販の機器の１つを使用して自動化学合成を実施できる。したがってヌクレオチド配列の最適化に基づいて、遺伝子を最適な遺伝子発現のために調整し、宿主細胞のコドンバイアスを反映させることができる。当業者は、コドン利用が宿主によって好まれるコドンに偏っている場合の遺伝子発現成功の可能性を理解している。好ましいコドンの判定は、配列情報が利用できる宿主細胞に由来する遺伝子の調査に基づくことができる。
【００６１】
「ファージ」または「バクテリオファージ」という用語は、細菌に感染するウィルスを指す。本発明の目的では改変形態を使用してもよい。好ましいバクテリオファージは、Ｍ１３と称される「野生型」ファージに由来する。Ｍ１３系は細菌中で生育できるので、感染した細胞を破壊せずに新しいファージを連続的に作らせる。これは一本鎖ＤＮＡファージである。
【００６２】
「ファージディスプレイ」という用語は、バクテリオファージまたはファージミド粒子表面の機能性外来性ペプチドまたは小型タンパク質のディスプレイを指す。遺伝子改変ファージを使用して、ペプチドをそれらの未変性表面タンパク質のセグメントとして提示してもよい。異なる遺伝子配列のファージ集団によって、ペプチドのライブラリーを作り出してもよい。
【００６３】
「ＰＣＲ」または「ポリメラーゼ連鎖反応」は、特定のＤＮＡセグメント増幅のために使用される技術である（米国特許第４，６８３，１９５号明細書および米国特許第４，８００，１５９号明細書）。
【００６４】
ここで使用される標準リコンビナントＤＮＡおよび分子クローン化技術は当該技術分野で良く知られており、サムブルック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）Ｊ．、フリッチュ（Ｆｒｉｔｓｃｈ）Ｅ．Ｆ．、およびマニアティス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）Ｔ．、「分子クローニング：実験室マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）」、第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８９年、（以下マニアティス（Ｍａｎｉａｔｉｓ））；およびシルハビー（Ｓｉｌｈａｖｙ）Ｔ．Ｊ．、ベンナン（Ｂｅｎｎａｎ）Ｍ．Ｌ．、およびエンクイスト（Ｅｎｑｕｉｓｔ）Ｌ．Ｗ．「遺伝子融合実験（Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｓｉｏｎｓ）」、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８４年；およびオースベル（Ａｕｓｕｂｅｌ）Ｆ．Ｍ．ら、「分子生物学現代プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅによる出版、１９８７年、で述べられている。
【００６５】
本発明は、髪または皮膚結合ペプチドをシーラントとして使用して、着色剤、コンディショナー、およびその他の有益作用剤の効果を増強する方法を提供する。髪および皮膚結合ペプチドは、それぞれ髪または皮膚に対する結合親和性を有し、ファージディスプレイなどのコンビナトリアル法を使用して同定されてもよく、または実験的に発生させてもよい。さらに有益作用剤と結合している髪または皮膚結合ペプチドを含んでなる抱合体をシーラントとして使用してもよい。本発明の方法では、有益作用剤の塗布と同時、有益作用剤の塗布後、または有益作用剤の塗布前のいずれかでペプチドベースのシーラントを塗布して、髪または皮膚に有益作用剤をシールしてもよい。
【００６６】
髪結合および皮膚結合ペプチドの同定
ここで定義される髪結合ペプチド（ＨＢＰ）および皮膚結合ペプチド（ＳＢＰ）は、高親和性でそれぞれ髪または皮膚に特異的に結合するペプチド配列である。髪または皮膚結合ペプチドは有益作用剤に特異的親和性を有さないが、いくつかの有益作用剤、特に極性があるものと非特異的に相互作用してもよい。本発明の髪結合および皮膚結合ペプチドは、長さが約７個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸、より好ましくは約７個のアミノ酸〜約個の２５アミノ酸、最も好ましくは約７〜約２０個のアミノ酸である。適切な髪または皮膚結合ペプチドは、当該技術分野でよく知られている方法を使用して選択してもよく、または実験的に発生させてもよい。
【００６７】
髪結合または皮膚結合ペプチドは、参照によって本明細書に援用するファング（Ｈｕａｎｇ）らの同時係属および同一所有者による米国特許出願公開第２００５／００５０６５６号明細書で述べられるように、無作為に発生させて、次に関心のある基質に対するそれらの結合親和性に基づいて髪または皮膚サンプルに対して選択してもよい。ペプチドのランダムライブラリーの作成についてはよく知られており、細菌ディスプレイ（ケンプ（Ｋｅｍｐ），Ｄ．Ｊ．；Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８（７）：４５２０〜４５２４頁、１９８１年；およびへルマン（Ｈｅｌｆｍａｎ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０（１）：３１〜３５頁、１９８３年）酵母ディスプレイ（チェン（Ｃｈｉｅｎ）ら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８８（２１）：９５７８〜８２頁、１９９１年）、コンビナトリアル固相ペプチド合成（米国特許第５，４４９，７５４号明細書、米国特許第５，４８０，９７１号明細書、米国特許第５，５８５，２７５号明細書、米国特許第５，６３９，６０３号明細書）、およびファージディスプレイ技術（米国特許第５，２２３，４０９号明細書、米国特許第５，４０３，４８４号明細書、米国特許第５，５７１，６９８号明細書、米国特許第５，８３７，５００号明細書）をはじめとする多様な技術によって達成されてもよい。このような生物学的ペプチドライブラリーを発生させる技術は、当該技術分野でよく知られている。例示的な方法については、ダニ（Ｄａｎｉ），Ｍ．，Ｊ．、Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＆  Ｓｉｇｎａｌ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  Ｒｅｓ．、２１（４）：４４７〜４６８頁、２００１年；シドゥ（Ｓｉｄｈｕ）ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ３２８：３３３〜３６３頁、２０００年；ケイ（Ｋａｙ）ら、Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ、第８巻：５４５〜５５１頁、２００５年；およびブライアン・Ｋ・ケイ（Ｂｒｉａｎ  Ｋ．Ｋａｙ）、ジル・ウィンター（Ｊｉｌｌ  Ｗｉｎｔｅｒ）、およびジョン・マッカーティ（Ｊｏｈｎ  ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ）編、「ペプチドおよびタンパク質のファージ・ディスプレイ、実験室マニュアル（Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ、１９９６年、で述べられる。さらにファージディスプレイライブラリーは、マサチューセッツ州ビバリーのニュー・イングランド・バイオラブズ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ））などから市販される。
【００６８】
ペプチドを無作為に作り出す好ましい方法は、ファージディスプレイによる。ファージディスプレイは、生体外選択技術であり、その中ではペプチドまたはタンパク質がバクテリオファージの外被タンパク質に遺伝的に融合して、ファージビリオンの外面に融合ペプチドのディスプレイをもたらす一方、融合をコードするＤＮＡはビリオン中に存在する。ディスプレイされるペプチドとそれをコードするＤＮＡの間のこの物理的結合により、「バイオパニング」と称される単純な生体外選択手順によって、それぞれが対応するＤＮＡ配列に結合する膨大な数のペプチドの変異体のスクリーニングができるようになる。その最も単純な形態では、バイオパニングは、ファージディスプレイされた変異体のプールをプレートまたはビーズ上に固定化されている関心のある標的と共にインキュベートして、非結合ファージを洗い流し、ファージと標的との間の結合相互作用を中断して特異的に結合したファージを溶出して実施される。次に溶出されたファージを生体内で増幅し、プロセスを反復してファージプールの段階的な濃縮をもたらし、最も堅固な結合配列が選択される。３回以上の選択／増幅後、個々のクローンがＤＮＡ配列決定によって特性判定される。
【００６９】
具体的には、髪または皮膚結合ペプチドは、次の方法を使用して選択してもよい。上述の方法を使用して適切なペプチドライブラリーを生成し、またはライブラリーを販売元から購入する。ペプチドライブラリーを生成した後、次にライブラリーを適切量の試験基質、具体的には髪または皮膚サンプルと接触させる。サンプルと接触させるために、ペプチドライブラリーを適切な溶液に溶解する。試験基質を溶液に懸濁してもよく、またはプレートまたはビーズ上に固定してもよい。好ましい溶液は、界面活性剤を含有する緩衝生理食塩水溶液である。適切な溶液は、０．５％ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）（登録商標）２０添加トリス緩衝食塩水（ＴＢＳ）である。ペプチドの試験基質への質量移動速度を増大させるために、あらゆる手段で溶液をさらに撹拌して最大結合を得るのに要する時間を短縮してもよい。
【００７０】
接触時に、いくつかの無作為に作り出されたペプチドは、試験基質と結合してペプチド−基質複合体を形成する（すなわちペプチド−髪またはペプチド−皮膚複合体）。非結合ペプチドは、洗浄によって除去してもよい。あらゆる非結合材料を除去した後、試験基質に対して様々な程度の結合親和性を有するペプチドは、様々なストリンジェンシーを有する緩衝液中での選択洗浄によって分画されてもよい。使用する緩衝液のストリンジェンシーを増大させることは、ペプチド−基質複合体中で要求されるペプチドと試験基質との間の結合強度を増大させる。
【００７１】
限定されるものではないが、酸性ｐＨ（１．５〜３．０）と、塩基性ｐＨ（１０〜１２．５）と、ＭｇＣｌ２（３〜５Ｍ）およびＬｉＣｌ（５〜１０Ｍ）などの高い塩濃度と、水と、エチレングリコール（２５〜５０％）と、ジオキサン（５〜２０％）と、チオシアネート（１〜５Ｍ）と、グアニジン（２〜５Ｍ）と、尿素（２〜８Ｍ）と、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、ＤＯＣ（デオキシコール酸ナトリウム）、ノニデット（Ｎｏｎｉｄｅｔ）Ｐ−４０、トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ−１００、およびツイーン（Ｔｗｅｅｎ）（登録商標）２０などの様々な濃度の異なる界面活性剤とをはじめとする、ペプチド選択における緩衝溶液のストリンジェンシーを変化させてもよく、ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）（登録商標）２０が好ましい。これらの物質は、限定されるものではないが、トリス−ＨＣｌ、トリス−緩衝食塩水、トリス−ホウ酸、トリス−酢酸、トリエチルアミン、リン酸緩衝液、およびグリシン−ＨＣｌをはじめとする緩衝溶液中で調製されてもよく、トリス−緩衝食塩水溶液が好ましい。
【００７２】
試験基質に対して増大する結合親和性を有するペプチドは、増大するストリンジェンシーを有する緩衝液を使用して選択プロセスを反復することで溶出されてもよいものと理解される。溶出されたペプチドは、当該技術分野で既知のあらゆる手段によって同定および配列決定できる。
【００７３】
一実施形態では、本発明の毛髪結合または皮膚結合ペプチドを作り出すための以下の方法を使用してもよい。コンビナトリアルで作り出されたファージ−ペプチドのライブラリーを関心のある試験基質と接触させ、ファージ−ペプチド−基質複合体を形成する。ファージ−ペプチド−基質複合体を非複合ペプチドおよび非結合基質から分離し、結合したファージ−ペプチド複合体をファージ−ペプチド−基質複合体から好ましくは酸トリートメントによって溶出する。次に溶出したファージ−ペプチドを同定および配列決定する。例えば髪に結合するが皮膚には結合しないペプチド、または皮膚に結合するが毛髪には結合しないペプチドのように、１つの基質に結合するが別のものには結合しないペプチド配列を同定するために、サブトラクティブパニングステップを追加してもよい。具体的にはコンビナトリアルで作り出されたファージ−ペプチドのライブラリーを最初に非標的と接触させて、それに結合するファージ−ペプチドを除去する。次に非結合ファージ−ペプチドを所望の基質と接触させて、上のプロセスに従う。代案としてはコンビナトリアルで作り出されたファージ−ペプチドのライブラリーを非標的および所望の基質と同時に接触させてもよい。次にファージ−ペプチド−基質複合体をファージ−ペプチド−非標的複合体から分離し、所望のファージ−ペプチド−髪またはファージ−ペプチド−皮膚複合体のために上述の方法に従う。
【００７４】
代案としては、髪または皮膚に対する親和性がより高いペプチドを単離するための修正ファージディスプレイスクリーニング法を使用してもよい。修正法では、ファージ−ペプチド−基質複合体が上述のように形成される。次にこれらの複合体を溶出緩衝液で処理する。上述のあらゆる溶出緩衝液を使用してもよい。好ましくは溶出緩衝液は酸性溶液である。次に残留する溶出抵抗性ファージ−ペプチド−基質複合体を使用して、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＥＲ２７３８などの細菌宿主細胞に直接、感染させる。感染した宿主細胞をＬＢ（ルリア・ベルターニ）培地などの適切な増殖培地中で生育させ、ＩＰＴＧ（イソプロピルβ−Ｄ−チオガラクトピラノシド）およびＳ−Ｇａｌ（商標）添加ＬＢ培地などの適切な増殖培地を含有する寒天上に、この培養を播種する。生育後、ＤＮＡ単離および配列決定のためにプラークを採集し、関心のある基質に対する高結合親和性があるペプチド配列を同定する。代案としては参照によって本明細書に援用するジャンセン（Ｊａｎｓｓｅｎ）らの米国特許出願公開第２００３／０１５２９７６号明細書で述べられるように、適切なプライマーを使用してファージ−ペプチド−基質複合体にＰＣＲを直接実施して、ＰＣＲを使用して、上述の修正ファージディスプレイスクリーニング法から溶出抵抗性ファージ−ペプチドを同定してもよい
【００７５】
シャンプー抵抗性髪結合ペプチドは、参照によって本明細書に援用するオブライエン（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ）らの同時係属および同一所有者による米国特許出願公開第２００６／００７３１１１号明細書で述べられるように、修正バイオパニング法を使用して選択してもよい。同様に、それぞれワング（Ｗａｎｇ）らの同時係属および同一所有者による米国特許出願第１１／３５９１６３号明細書、およびワング（Ｗａｎｇ）らの同時係属および同一所有者による米国特許出願第１１／３５９１６２号明細書）によって述べられる方法を使用して、ヘアコンディショナー抵抗性髪結合ペプチド、およびスキンケア組成物抵抗性皮膚結合ペプチドを同定してもよい。これらの方法では、基質と接触させるために、ファージペプチドの最初のライブラリーを関心のあるマトリックス（すなわちシャンプーマトリックス、ヘアコンディショナーマトリックス、またはスキンケア組成物マトリックス）中に溶解し、または上述のように基質をファージペプチドライブラリーに接触させてファージ−ペプチド基質複合体が形成した後に、それを関心のあるマトリックスと接触させる。次に上述のようにバイオパニング法を行う。シャンプーマトリックス、ヘアコンディショナーマトリックス、またはスキンケア組成物マトリックスは、そのままの濃度の市販品またはその希釈物であってもよい。
【００７６】
適切な髪結合ペプチドおよび皮膚結合ペプチドは、ここで述べられる方法を使用して発生させてもよい。さらに全て参照によって本明細書に援用するファング（Ｈｕａｎｇ）らの同時係属および同一所有者による米国特許出願公開第２００５／００５０６５６号明細書と米国特許出願公開第２００５／０２２６８３９号明細書、エステル（Ｅｓｔｅｌｌ）らの国際公開第０１７９４７９号パンフレット、マレー（Ｍｕｒｒａｙ）らの米国特許出願公開第２００２／００９８５２４）号明細書、ジャンセン（Ｊａｎｓｓｅｎ）らの米国特許出願公開第２００３／０１５２９７６号明細書、ジャンセン（Ｊａｎｓｓｅｎ）らの国際公開第０４０４８３９９号パンフレット、オブライエン（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ）らの同時係属および同一所有者による米国特許出願公開第２００６／００７３１１１号明細書、ワング（Ｗａｎｇ）らの同時係属および同一所有者による米国特許出願第１１／３５９１６３号明細書、およびワング（Ｗａｎｇ）らの同時係属および同一所有者による米国特許出願第１１／３５９１６２号明細書で報告されるものなどのあらゆる既知の髪結合または皮膚結合ペプチドを使用してもよい。適切な髪結合および皮膚結合ペプチドの非限定的例を表１に示す。
【００７７】
代案としては、髪および皮膚結合ペプチド配列は、ローテ（Ｒｏｔｈｅ）らの国際公開第２００４／０００２５７号パンフレットで述べられるように、静電相互作用を通じて髪および皮膚に結合できる正に帯電したアミノ酸を含んでなるペプチドをデザインして、実験的に発生させてもよい。実験的に発生させた髪および皮膚結合ペプチドは、約７個のアミノ酸〜約５０個のアミノ酸を有し、リジン、アルギニン、およびヒスチジンなどの少なくとも約４０モル％の正に帯電したアミノ酸を含んでなる。ＨＲＫ、ＲＨＫ、ＨＫＲ、ＲＫＨ、ＫＲＨ、ＫＨＲ、ＨＫＸ、ＫＲＸ、ＲＫＸ、ＨＲＸ、ＫＨＸ、およびＲＨＸなどのトリペプチドモチーフを含有するペプチド配列が最も好ましく、式中、Ｘはあらゆる天然アミノ酸であることができるが、最も好ましくはグリシン、アラニン、プロリン、ロイシン、イソロイシン、バリン、およびフェニルアラニンなどの中性側鎖アミノ酸から選択される。さらにペプチド配列は、溶解性、粘度、および調合製品中のその他の構成成分との適合性をはじめとする最終用途中のその他の機能性要件を満たさなくてはならないものと理解され、したがって用途のニーズに従って変動する。場合によってはペプチドは、ヒスチジン、リジンまたはアルギニンを含まない、６０モル％までのアミノ酸を含有してもよい。適切な実験的に発生させた髪結合および皮膚結合ペプチドとしては、限定されるものではないが、配列番号８〜２が挙げられる（表１参照）。
【００７８】
異なる髪結合または皮膚結合ペプチドの混合物を使用することもまた、有益であろう。混合物中のペプチドは、有益な効果を緩和するペプチド間の相互作用がないように選択する必要がある。髪結合または皮膚結合ペプチドの適切な混合物は、当業者によって日常的実験法を使用して判定されてもよい。さらに直接に、またはスペーサーを通じてのいずれかで、２つ以上の髪結合ペプチドまたは皮膚結合ペプチドを共に結合して、ペプチドの基質に対する相互作用を増強することも望ましいかもしれない。複数ペプチド組成物を調製する方法、および適切なスペーサーについては下で述べる。非限定的例を表１に示す。
【００７９】
【表２】
2009512639.tif 000003
【００８０】
【表３】
2009512639.tif 000004
【００８１】
【表４】
2009512639.tif 000005
【００８２】
髪および皮膚結合ペプチドの生成
本発明の髪および皮膚結合ペプチドは、当該技術分野でよく知られている標準ペプチド合成法を使用して調製されてもよい（例えばスチュアート（Ｓｔｅｗａｒｔ）ら、「固体相ペプチド合成（Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ、１９８４年；ボダンスキー（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ）、「ペプチド合成の原理（Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８４年；およびペニングトン（Ｐｅｎｎｉｎｇｔｏｎ）ら、「ペプチド合成プロトコル（Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ）」、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、１９９４年、を参照されたい）。さらに多くの会社が、カスタムペプチド合成サービスを提供している。
【００８３】
代案としては、本発明のペプチドは、リコンビナントＤＮＡおよび分子クローニング技術を使用して調製されてもよい。髪結合または皮膚結合ペプチドをコードする遺伝子は、ファング（Ｈｕａｎｇ）らの米国特許出願公開第２００５／００５０６５６号明細書で述べられるように、そして本明細書の実施例５で実証されるように、異種宿主細胞中、特に微生物宿主細胞中で生成されてもよい。ペプチドがリコンビナントＤＮＡおよび分子クローニングによって調製される場合、Ｎ末端にプロリン（Ｐ）残基、および場合によりＣ末端にアスパラギン酸（Ｄ）残基をさらに含んでなるかもしれない。これらの追加的残基は、封入体形成を促進するために使用されるペプチドタグから、およびペプチド配列のタンデム反復間から、所望のペプチド配列を分離するためのＤＰ開裂部位の使用に由来する。
【００８４】
髪有益作用剤
当該技術分野で既知のあらゆる適切な髪有益作用剤を本発明の方法で使用してもよい。髪有益作用剤は髪に対する親和性を有する。ここでの用法では「髪に対する親和性を有する」とは、有益作用剤が髪表面に吸着され、または髪中に吸収されることを意味する。適切な髪有益作用剤としては、限定されるものではないが、髪染め剤およびヘアコンディショナーが挙げられる。
【００８５】
髪染め剤はここでの定義では、毛髪色を変化させるのに使用してもよい、あらゆる染料、顔料、ナノ粒子などである。髪染め剤は当該技術分野でよく知られており（例えば参照によって本明細書に援用するグリーンらの国際公開第０１０７００９号パンフレット、「ＣＦＴＡ国際色ハンドブック（ＣＦＴＡ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｌｏｒ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ）」、第２版、Ｍｉｃｅｌｌｅ  Ｐｒｅｓｓ、英国、１９９２年、および「化粧品ハンドブック（Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ）」米国食品医薬品局、ＦＤＡ／ＩＡＳ  Ｂｏｏｋｌｅｔ、１９９２年、を参照されたい）、様々な供給元から市販される（例えばペンシルベニア州ピッツバーグ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ）のベイヤー（Ｂａｙｅｒ）、ニューヨーク州タリータウン（Ｔａｒｒｙｔｏｗｎ、ＮＹ）のチバ・ガイギー（Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ）、ニュージャージー州ブリッジウォーター（Ｂｒｉｄｇｅ  Ｗａｔｅｒ、ＮＪ）のＩＣＩ、オーストリア国ウィーン（Ｖｉｅｎｎａ、Ａｕｓｔｒｉａ）のサンドス（Ｓａｎｄｏｚ）、ニュージャージー州マウントオリブ（Ｍｏｕｎｔ  Ｏｌｉｖｅ、ＮＪ）のＢＡＳＦ、およびドイツ国フランクフルト（Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）のヘキスト（Ｈｏｅｃｈｓｔ））。適切な髪染め剤としては、限定されるものではないが、４−ヒドロキシプロピルアミノ−３−ニトロフェノール、４−アミノ−３−ニトロフェノール、２−アミノ−６−クロロ−４−ニトロフェノール、２−ニトロ−パラフェニレンジアミン、Ｎ，Ｎ−ヒドロキシエチル−２−ニトロ−フェニレンジアミン、４−ニトロ−インドール、２−ニトロ−５−グリセリルメチルアニリン、３−メチルアミノ−４−ニトロフェノキシエタノール、３−ニトロ−ｐ−ヒドロキシエチルアミノフェノール、ヒドロキシアントラキノンアミノプロピルメチルモルホリニウムメトサルフェート、ヘンナ、ＨＣブルー１、ＨＣブルー２、ＨＣイエロー４、ＨＣレッド３、ＨＣレッド５、ＨＣレッド７、ＨＣバイオレット１、ＨＣバイオレット２、ＨＣブルー７、ＨＣブルー１０、ＨＣブルー１２、ＨＣイエロー２、ＨＣイエロー６、ＨＣイエロー８、ＨＣイエロー１２、ＨＣオレンジ２、ＨＣオレンジ３、ＨＣブラウン２、Ｄ＆Ｃイエロー１、Ｄ＆Ｃイエロー３、Ｄ＆Ｃブルー１、分散ブルー３、分散バイオレット１、分散オレンジ、分散バイオレット４、分散ブラック９、塩基性オレンジ３１、塩基性イエロー５７、塩基性イエロー８７、ＨＣイエローＮｏ．９、塩基性ブルー２６、塩基性ブルー７、塩基性ブルー９９、塩基性バイオレット１４、塩基性バイオレット２、塩基性ブラウン１６、塩基性ブラウン１７、塩基性レッド２、塩基性レッド５１、酸性レッド３３、ブリリアントブラック１、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．などのエオジン誘導体、およびＤ＆ＣレッドＮｏ．２７などのハロゲン化フルオレセイン誘導体、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．２１およびＤ＆ＣオレンジＮｏ．１０と組み合わさったＤ＆ＣレッドオレンジＮｏ．５などの染料、および顔料、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．３６、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．３０、Ｄ＆ＣオレンジＮｏ．１７、グリーン３レーキ、Ｅｘｔ．イエロー７レーキ、オレンジ４レーキ、およびレッド２８レーキ、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．��と１１と３１と３４のカルシウムレーキ、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．１２のバリウムレーキ、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．１３のストロンチウムレーキ、ＦＤ＆ＣイエローＮｏ．５のアルミニウムレーキ、ＦＤ＆ＣイエローＮｏ．６のアルミニウムレーキ、ＦＤ＆ＣＮｏ．４０のアルミニウムレーキ、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．２１と２２と２７と２８のアルミニウムレーキ、ＦＤ＆ＣブルーＮｏ．１のアルミニウムレーキ、Ｄ＆ＣオレンジＮｏ．５のアルミニウムレーキ、Ｄ＆ＣイエローＮｏ．１０のアルミニウムレーキ、Ｄ＆ＣレッドＮｏ．３３のジルコニウムレーキ、チバ・スペシャルティ・ケミカルズ（Ｃｉｂａ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）からのクロモフタル（Ｃｒｏｍｏｐｈｔｈａｌ）（登録商標）イエロー１３１ＡＫ、サン・ケミカル（Ｓｕｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）からのサンファスト（Ｓｕｎｆａｓｔ）（登録商標）マゼンタ１２２およびサン・ケミカル（Ｓｕｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）からのサンファスト（Ｓｕｎｆａｓｔ）（登録商標）ブルー１５：３、酸化鉄、炭酸カルシウム、水酸化アルミニウム、硫酸カルシウム、カオリン、フェロシアン化アンモニウム第二鉄、炭酸マグネシウム、カルミン、硫酸バリウム、雲母、オキシ塩化ビスマス、ステアリン酸亜鉛、マンガンバイオレット、酸化クロム、二酸化チタン、二酸化チタンナノ粒子、酸化亜鉛、酸化バリウム、群青、クエン酸ビスマス、およびヒドロキシアパタイトなどの白色ミネラル、およびジルコン（ジルコニウムケイ酸塩）、およびカーボンブラック粒子が挙げられる。
【００８６】
金属および半導体ナノ粒子もまた、それらの強力な発光のために髪染め剤として使用してもよい（ヴィック（Ｖｉｃ）らの米国特許出願公開第２００４／００１０８６４号明細書）。金属ナノ粒子としては、限定されるものではないが、金、銀、白金、パラジウム、イリジウム、ロジウム、オスミウム、鉄、銅、コバルト、およびこれらの金属から構成される合金の粒子が挙げられる。「合金」とはここでは均質な２種以上の金属の混合物と定義される。「半導体ナノ粒子」としては、限定されるものではないが、セレン化カドミウム、硫化カドミウム、硫化銀、硫化カドミウム、酸化亜鉛、硫化亜鉛、セレン化亜鉛、硫化鉛、ヒ化ガリウム、ケイ素、酸化スズ、酸化鉄、およびリン化インジウムの粒子が挙げられる。ナノ粒子は、適切な有機コーティングまたは単層の使用によって安定化させ水溶性にできる。ここでの用法では、単層保護されるナノ粒子は、安定化ナノ粒子の一タイプである。安定化水溶性金属および半導体ナノ粒子を調製する方法は当該技術分野で知られており、適切な例は参照によって本明細書に援用する同時係属および同一所有者による米国特許出願公開第２００４／０１１５３４５号明細書で、ファング（Ｈｕａｎｇ）らによって述べられる。ナノ粒子の色は粒度に依存する。したがってナノ粒子のサイズを調節することで、異なる色を得てもよい。
【００８７】
さらに付着、吸着、または吸収された染料を有する有機および無機ナノ粒子を髪染め剤として使用してもよい。例えば髪染め剤は着色ポリマーナノ粒子であってもよい。例示的なポリマーナノ粒子としては、限定されるものではないが、ポリスチレン、ポリメチルメタクリレート、ポリビニルトルエン、スチレン／ブタジエンコポリマー、およびラテックスなどの材料を含んでなる微小球が挙げられる。本発明で使用するためには、着色微小球は約１０ｎｍ〜約２μｍの直径を有する。微小球は、上述したようなあらゆる適切な染料を微小球にカップリングして着色してよい。染料は微小球表面に結合しても、または多孔性微小球の多孔性構造内に吸着されてもよい。共有結合を可能にするように官能性付与された、非染色および染色微小球をはじめとする適切な微小球は、インディアナ州フィッシャー（Ｆｉｓｈｅｒ、ＩＮ）のバング・ラボラトリーズ（Ｂａｎｇ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）などの会社から入手できる。
【００８８】
ここでの定義ではヘアコンディショナーは、毛髪の外見、手触り、および光沢を改善し、ならびに毛髪のボディまたはしなやかさを増大する作用薬である。ヘアコンディショナーとしては、限定されるものではないが、ナノ粒子などのスタイリング助剤、縮毛矯正助剤、髪強化助剤、およびボリューム仕上げ剤が挙げられる。ヘアコンディショナーは当該技術分野でよく知られており（例えばグリーン（Ｇｒｅｅｎ）ら、前出参照）、様々な供給元から市販される。ヘアコンディショナーの適切な例としては、限定されるものではないが、カチオン化グアーガム、ジアリル四級アンモニウム塩／アクリルアミド共重合体、四級化ポリビニルピロリドンおよびそれらの誘導体などのカチオン性ポリマーと、および様々なポリクオタニウム化合物と、長鎖アルキル基（すなわちＣ８〜Ｃ２４）と、塩化ステアラルコニウム、塩化セントリモニウム、およびサパミン塩酸塩などのカチオン性界面活性剤と、ベヘニルアルコールなどの脂肪アルコールと、ステアリルアミンなどの脂肪アミンと、ワックスと、エステルと、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、およびポリエチレングリコールなどの非イオン性ポリマーと、シリコーンと、デカメチルシクロペンタシロキサンなどのシロキサンと、アモジメチコンなどのポリマーエマルジョンと、シリカナノ粒子およびポリマーナノ粒子などのナノ粒子とが挙げられる。本発明の好ましいヘアコンディショナーは、下で述べるようにアミンまたはヒドロキシル官能基を含有して、毛髪結合ペプチドへのカップリングを容易にする。好ましいコンディショナーの例は、オクチルアミン（ＣＡＳ１１１−８６−４号）、ステアリルアミン（ＣＡＳ１２４−３０−１号）、オハイオ州シンチナチ（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ、ＯＨ）のコグニス（Ｃｏｇｎｉｓ  Ｃｏｒｐ．）からのベヘニルアルコール（ＣＡＳ６６１−１９−８号）、ビニル基末端シロキサン、ビニル基末端シリコーン（ＣＡＳ６８０８３−１９−２号）、ビニル基末端メチルビニルシロキサン、ビニル基末端メチルビニルシリコーン（ＣＡＳ６８９５１−９９−５号）、ヒドロキシル末端シロキサン、ヒドロキシル末端シリコーン（ＣＡＳ８０８０１−３０−５号）、アミノ修飾シリコーン誘導体、［（アミノエチル）アミノ］プロピルヒドロキシルジメチルシロキサン、［（アミノエチル）アミノ］プロピルヒドロキシルジメチルシリコーン、およびα−トリデシル−ω−ヒドロキシ−ポリ（オキシ−１，２−エタンジイル）（ＣＡＳ２４９３８−９１−８号）である。
【００８９】
皮膚有益作用剤
当該技術分野で既知のあらゆる適切な皮膚有益作用剤を本発明の方法で使用してもよい。皮膚有益作用剤は皮膚に対する親和性を有する。ここでの用法では「皮膚に対する親和性」を有するとは、有益作用剤が皮膚表面に吸着されることを意味する。適切な皮膚有益作用剤としては、限定されるものではないが、皮膚着色剤、皮膚コンディショナー、および日焼け止めが挙げられる。
【００９０】
皮膚着色剤は、皮膚の色を変化させるのに使用してもよいあらゆる染料、顔料、ナノ粒子などとして、ここで定義される。上述の染料、顔料、またはナノ粒子のいずれかを皮膚着色剤として使用してもよい。着色剤はまた、日光への曝露なしに皮膚に日焼けした外見を作り出す、ジヒドロキシアセトンなどのサンレス・タンニング剤であってもよい。
【００９１】
ここで定義される皮膚コンディショナーとしては、限定されるものではないが、皮膚を引き締めるアストリンゼン、死滅皮膚細胞を除去するスクラブ、滑らかで柔らかくしなやかな外見の維持を助ける柔軟化粧水、皮膚の最上層の含水量を増大させる保湿剤、皮膚表面からの水蒸発を遅延させる閉鎖剤、および乾燥または損傷した皮膚の外見を向上させ、または剥離を低下させ、しなやかさを復元する種々雑多な化合物が挙げられる。本発明の方法ではあらゆる既知の皮膚コンディショナーを使用してもよい。皮膚コンディショナーは当該技術分野でよく知られており（例えばグリーン（Ｇｒｅｅｎ）ら、前出参照）、様々な供給元から市販される。皮膚コンディショナーの適切な例としては、限定されるものではないが、α−ヒドロキシ酸、β−ヒドロキシ酸、ポリオール、ヒアルロン酸、Ｄ，Ｌ−パンテノール、ポリサリチル酸、ビタミンＡパルミテート、ビタミンＥアセテート、グリセリン、ソルビトール、シリコーン、シリコーン誘導体、ラノリン、天然油、およびトリグリセリドエステルが挙げられる。本発明の好ましい皮膚コンディショナーは、ポリサリチル酸、ミシガン州ミッドランド（Ｍｉｄｌａｎｄ、ＭＩ）のダウ・ケミカル（Ｄｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）からのプロピレングリコール（ＣＡＳ  ５７−５５−６号）、オハイオ州シンシナチ（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ、ＯＨ）のプロクター＆ギャンブル・カンパニー（Ｐｒｏｃｔｏｒ  ＆  Ｇａｍｂｌｅ  Ｃｏ．）からのグリセリン（ＣＡＳ５６−８１−５号）、デラウェア州ウィルミントン（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＤＥ）のデュポン・カンパニー（ＤｕＰｏｎｔ  Ｃｏ．）からのグリコール酸（ＣＡＳ  号７９−１４−１）、マサチューセッツ州ワード・ヒル（Ｗａｒｄ  Ｈｉｌｌ、ＭＡ）のアルファ・エーサー（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ）からの乳酸（ＣＡＳ  号５０−２１−５）、アルファ・エーサー（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ）からのリンゴ酸（ＣＡＳ６１７−４８−１号）、アルファ・エーサー（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ）からのクエン酸（ＣＡＳ７７−９２−９号）、アルファ・エーサー（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ）からの酒石酸（ＣＡＳ１３３−３７−９号）、グルカル酸（ＣＡＳ８７−７３−０号）、ガラクタル酸（ＣＡＳ５２６−９９−８号）、３−ヒドロキシ吉草酸（ＣＡＳ１０２３７−７７−１号）、アルファ・エーサー（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ）からのサリチル酸（ＣＡＳ６９−７２−７号）、およびデラウェア州ウィルミントン（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＤＥ）のデュポン・カンパニー（ＤｕＰｏｎｔ  Ｃｏ．）からの１，３プロパンジオール（ＣＡＳ５０４−６３−２号）である。ポリサリチル酸は、参照によってここに編入するホワイト（Ｗｈｉｔｅ）らに付与された米国特許第４，８５５，４８３号明細書で述べられる方法によって調製してもよい。グルカル酸は、メルボウ（Ｍｅｒｂｏｕｈ）らのＣａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．３３６：７５〜７８頁、２００１年で述べられる方法を使用して合成してももよい。３−ヒドロキシ吉草酸は、ブラムッチ（Ｂｒａｍｕｃｃｉ）らの国際公開第０２０１２５３０号パンフレットで述べられるようにして調製してもよい。
【００９２】
日焼け止めは、２９０〜４００ｎｍの波長の紫外線を吸収、反射、または散乱する物質である。本発明で使用される日焼け止めは有機日焼け止めまたは無機日焼け止めのどちらであってもよい。有機日焼け止めは、ここで波長２９０〜４００ｎｍの間の紫外線を吸収する有機化学物質として定義される。有機日焼け止めは、当該技術分野でよく知られている（例えば参照によって本明細書に援用するウディン（Ｗｏｄｄｉｎ）らに付与された米国特許第５，２１９，５５８号明細書、特に３欄３５行〜４欄２３行を参照されたい）。適切な例としては、限定されるものではないが、パラ−アミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、パラ−アミノ安息香酸エチル、パラ−アミノ安息香酸アミル、パラ−アミノ安息香酸オクチル、パラ−アミノ安息香酸エチルヘキシルジメチル（パディメートＯ）、エチレングリコールサリチレート、フェニルサリチレート、オクチルサリチレート、ベンジルサリチレート、ブチルフェニルサリチレート、ホモメンチルサリチレート（ホモサレート）、エチルヘキシルサリチレート（オクチサレート）、ＴＥＡ−サリチレート（トロラミンサリチレート）、ケイ皮酸ベンジル、パラ−メトキシケイ皮酸２−エトキシエチル（ジボダン・ルール・カンパニー（Ｇｉｖａｕｄａｎ−Ｒｏｕｒｅ  Ｃｏ．）から入手できるパラソル（Ｐａｒｓｏｌ）（登録商標）など）、メトキシケイ皮酸エチルヘキシル（オクチノキセート）、パラ−メトキシケイ皮酸オクチル、モノ（２−エチルヘキサン酸）ジパラ−メトキシケイ皮酸グリセリル、パラ−メトキシケイ皮酸イソプロピル、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、ヒドロキシメトキシベンゾフェノン（ベンゾフェノン−３）、ヒドロキシメトキシベンゾフェノンスルホン酸（ベンゾフェノン−４）およびその塩、ジヒドロキシメトキシベンゾフェノン（ベンゾフェノン−８）、ナトリウムジヒドロキシメトキシベンゾフェノンジスルホネート、ジヒドロキシベンゾフェノン、テトラヒドロキシベンゾフェノン、４−ｔｅｒｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン（アボベンゾン）、フェニルベンゾイミダゾールスルホン酸（エンスリゾール）、２，４，６−トリアニリノ−ｐ−（カルボ−２’−エチルヘキシル−１’−オキシ）−１，３，５−トリアジン、オクトクリレン、メンチルアントラニル酸（メラジメート）、および２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾールが挙げられる。
【００９３】
無機ＵＶ日焼け止め材料は、典型的に、限定されるものではないが、コグニス・カンパニー（Ｃｏｇｎｉｓ  Ｃｏ．）から入手できるサンスマート（ＳｕｎＳｍａｒｔ）などの二酸化チタン、酸化亜鉛、および酸化鉄をはじめとする、無機顔料および金属酸化物である。好ましい日焼け止めは二酸化チタンナノ粒子である。適切な二酸化チタンナノ粒子については、米国特許第５，４５１，３９０号明細書、米国特許第５，６７２，３３０号明細書、および米国特許第５，７６２，９１４号明細書で述べられる。二酸化チタンＰ２５は、ニュージャージー州パーシッパニー（Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）のデグサ（Ｄｅｇｕｓｓａ）から入手できる適切な市販品の例である。二酸化チタンナノ粒子のその他の販売元としては、フィンランド国ヘルシンキ（Ｈｅｌｓｉｎｋｉ、Ｆｉｎｌａｎｄ）のケミラ（Ｋｅｍｉｒａ）、ドイツ国デュースブルク（Ｄｕｉｓｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）のサックトルベン（Ｓａｃｈｔｌｅｂｅｎ）、および日本国大阪のテイカ株式会社が挙げられる。
【００９４】
二酸化チタンナノ粒子は、懸濁液中の粒子の粒度分布を測定する動的光散乱による測定で、典型的に１００ナノメートル（ｎｍ）未満の直径の平均粒度を有する。粒子は典型的に、約３ｎｍ〜約６０００ｎｍの範囲であってもよい凝集塊である。当該技術分野で既知のあらゆる方法を使用して、このような粒子を調製できる。方法は二酸化チタンナノ粒子が生成するという条件で、ハロゲン化チタンの気相酸化、または可溶性チタン複合体からの溶液沈殿を伴ってもよい。
【００９５】
二酸化チタンナノ粒子を調製する好ましい方法は、典型的に４００〜２０００℃の範囲の高温反応ゾーン内へ、酸素と、好ましくは四塩化チタンであるハロゲン化チタンとを注入することによる。反応ゾーン内に存在する高温条件下で、二酸化チタンのナノ粒子が形成し、高い表面積および狭いサイズ分布を有する。反応器内のエネルギー源はプラズマトーチなどのあらゆる熱源であってもよい。
【００９６】
有益作用剤と結合している髪または皮膚結合ペプチドを含んでなる抱合体
別の実施形態では、本発明のペプチドベースのシーラントとして、有益作用剤と結合している髪または皮膚結合ペプチドを含んでなる抱合体を使用する。カップリング相互作用は、水素結合、静電相互作用、疎水性相互作用、またはファンデルワールス相互作用などの共有結合または非共有結合の相互作用であってもよい。非共有結合的相互作用の場合、ペプチドを有益作用剤および任意のスペーサーと混合し、相互作用が起きるのに十分な時間放置してペプチドベースの抱合体を調製してもよい。非結合材料は、例えばクロマトグラフィー法などの当該技術分野で既知の方法を使用して、得られたペプチドベースの抱合体から分離してもよい。
【００９７】
ペプチドベースの抱合体はまた、ファング（Ｈｕａｎｇ）らの米国特許出願公開第２００５／００５０６５６号明細書で述べられるように、特異的髪結合ペプチドまたは皮膚結合ペプチドを有益作用剤に、直接、またはスペーサーを通じてのどちらかで共有結合的に付着して調製してもよい。無機日焼け止めおよび有機日焼け止めと皮膚結合ペプチドとの共有結合カップリングについては、それぞれブーゼマン−ウィリアムズ（Ｂｕｓｅｍａｎ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ）、前出およびロウ（Ｌｏｗｅ）ら、前出で述べられる。
【００９８】
あらゆる既知のペプチドまたはタンパク質抱合体化学を使用して、本発明で使用されるペプチドベースの抱合体を形成してもよい。抱合体化学は当該技術分野でよく知られている（例えばハマーソン（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ）、「生物抱合体技術（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９６年参照）。適切なカップリング剤としては、限定されるものではないが、カルボジイミドカップリング剤、酸塩化物、イソシアネート、エポキシド、マレイミド、および末端アミンおよび／またはカルボン酸基およびペプチド上のスルフヒドリル基に反応性であるその他の機能性カップリング試薬が挙げられる。さらにペプチド上の反応性アミンまたはカルボン酸基を保護して、ペプチドベースのシーラントのための所望の構造を作り出すことが必要かもしれない。ｔ−ブチルオキシカルボニル（ｔ−Ｂｏｃ）などのアミノ酸のための保護基の使用については、当該技術分野でよく知られている（例えばスチュワート（Ｓｔｅｗａｒｔ）ら、前出、ボダンスキー（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ）、前出、およびペニングトン（Ｐｅｎｎｉｎｇｔｏｎ）ら、前出を参照されたい）。場合によっては、毛髪結合または皮膚結合ペプチドへのカップリングのために、有益作用剤上に、カルボン酸、アルコール、アミン、イソシアネート、またはアルデヒド基などの反応性基を導入することが必要かもしれない。これらの修飾は、当該技術分野でよく知られている酸化、還元、ホスゲン化などの日常的化学反応を使用して行ってもよい。
【００９９】
スペーサーを介して、毛髪結合ペプチドまたは皮膚結合ペプチドと有益作用剤とを結合することもまた望ましいかもしれない。スペーサーは、作用薬がペプチドと毛髪または皮膚との結合を妨げないことを確実にするために、有益作用剤をペプチドから隔てる役割をする。スペーサーは、アルキル鎖、フェニル化合物、エチレングリコール、アミド、エステルなどの多様な分子のいずれであってもよい。スペーサーは、上述のいずれかのカップリング化学反応を使用して、ペプチドおよび有益作用剤に共有結合的に付着させてもよい。スペーサーの組み込みを容易にするために、ペプチドおよび有益作用剤へのカップリングのためのスペーサーおよび反応性基を両端に含有する二官能性架橋剤を使用してもよい。
【０１００】
さらにスペーサーは、あらゆるアミノ酸およびそれらの混合物から構成されるペプチドであってもよい。好ましいペプチドスペーサーは、アミノ酸プロリン、リジン、グリシン、アラニン、およびセリン、およびそれらの混合物から構成される。さらにペプチドスペーサーは、プロテアーゼカスパーゼ３部位などの特異的酵素開裂部位を含有してもよく、それは毛髪からの有益剤の酵素的除去を可能にする。ペプチドスペーサーは、長さが１〜約５０個のアミノ酸であってもよく、好ましくは１〜約２０個のアミノ酸である。例示的ペプチドスペーサーとしては、限定されるものではないが、配列番号１３〜１５が挙げられる。これらのペプチドスペーサーは、当該技術分野で既知のあらゆる方法によって、結合ペプチド配列に結合させてもよい。例えば上述の標準ペプチド合成法を使用して、結合ペプチド−ペプチドスペーサージブロックの全体を調製してもよい。さらに結合ペプチドおよびペプチドスペーサーブロックは、カルボジイミドカップリング剤（例えばハマーソン（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ）、生物抱合体技術（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９６年）を参照されたい）、およびペプチド上の末端アミンおよび／またはカルボン酸基と反応性の二酸塩化物、ジイソシアネート、およびその他の二官能性カップリング試薬を使用して組み合わせてもよい。代案としては上述のリコンビナントＤＮＡおよび分子クローニング技術を使用して、結合ペプチド−ペプチドスペーサージブロック全体を調製してもよい。スペーサーはまた、上述の方法を使用して調製されてもよい、ペプチドスペーサーおよび有機スペーサー分子の組み合わせであってもよい。
【０１０１】
ファング（Ｈｕａｎｇ）らの米国特許出願公開第２００５／００５０６５６号明細書で述べられるように、複数の髪結合または皮膚結合ペプチドを有益作用剤に結合させて、ペプチドベースの有益作用剤と髪または皮膚との間の相互作用を増強することもまた望ましいかもしれない。同一髪結合または皮膚結合ペプチドの複数コピー、または異なる髪結合または皮膚結合ペプチドの組み合わせのどちらかを使用してもよい。髪および皮膚結合ペプチドの複数コピーは、上述のように様々なスペーサーを含んでなってもよい。例示的な複数コピー髪結合ペプチドとしては、限定されるものではないが、配列番号１６〜２１が挙げられる。
【０１０２】
髪結合ペプチドを含んでなる組成物
髪結合ペプチドは様々な組成物から髪に塗布してもよい。例えば髪結合ペプチドは、髪結合ペプチドを含んでなる水溶液から髪に塗布してもよい。代案としては、髪結合ペプチドはヘアケア組成物から髪に塗布してもよい。ヘアケア組成物は、ここで、限定されるものではないが、シャンプー、コンディショナー、リンス、ローション、エアゾール、ゲル、ムース、およびヘアダイをはじめとする髪のトリートメントのための組成物として定義される。髪結合ペプチドは、組成物総重量に対して約０．０１重量％〜約１０重量％、好ましくは約０．０１重量％〜約５重量％の濃度で組成物中で使用される。この比率は、ヘアケア組成物タイプに応じて変動してもよい。さらに髪結合ペプチを含んでなる組成物は、髪有益作用剤をさらに含んでなってもよい。組成物が髪有益作用剤を含んでなる場合、有益作用剤は、上述のように髪結合ペプチドに結合してもよい。有益作用剤の濃度に対するペプチド濃度は、最良の結果のために最適化する必要があるかもしれない。複数コピー髪結合ペプチドをはじめとする適切な髪結合ペプチドについては上述される。さらに異なる髪結合ペプチドの混合物を組成物中で使用してもよい。混合物中の髪結合ペプチドは、有益な効果を緩和するペプチド間の相互作用がないように選択する必要がある。適切な髪結合ペプチド混合物は、日常的実験法を使用して当業者によって判定されてもよい。髪結合ペプチド混合物を組成物中で使用する場合、ペプチドの総濃度は組成物総重量に対して約０．０１重量％〜約１０重量％である。
【０１０３】
別の実施形態では、髪結合ペプチドは、上述のように髪有益作用剤と結合している髪結合ペプチドを含んでなる抱合体として、組成物中に存在してもよい。例えば有益作用剤はヘアダイであってもよく、抱合体はヘアコンディショナーと結合している髪結合ペプチドを含んでなってもよい。さらに有益作用剤はヘアダイであってもよく、抱合体は同一ヘアダイまたは別の髪染め剤のどちらかと結合している髪結合ペプチドを含んでなってもよい。これらの全てのそしてその他の可能な組み合わせは、本発明の範囲内である。
【０１０４】
髪結合ペプチドを構成する要素は、例えばその例が全て参照によってここに援用するフィリップ（Ｐｈｉｌｉｐｐｅ）らに付与された米国特許第６，２８０，７４７号明細書、およびオムラ（Ｏｍｕｒａ）らに付与された米国特許第６，１３９，８５１号明細書、およびカネル（Ｃａｎｎｅｌｌ）らに付与された米国特許第６，０１３，２５０号明細書で述べられる、ヘアケア組成物のための化粧用に許容可能な媒体をさらに含んでなってもよい。例えばこれらのヘアケア組成物は、水性、アルコール性または水性−アルコール性溶液であることができ、アルコールは好ましくは水性−アルコール性溶液総重量に対して約１〜約７５重量％の比率のエタノールまたはイソプロパノールである。さらにヘアケア組成物は、抗酸化剤、保存料、増量剤、界面活性剤、ＵＶＡおよび／またはＵＶＢサンスクリーン、香料、増粘剤、ウェッティング作用薬、およびアニオン性、非イオン性または両性ポリマー、および染料または顔料をはじめとするがこれに限定されるものではない、１つもしくはそれ以上の従来の化粧品または皮膚科的添加剤またはアジュバントを含有してもよい。
【０１０５】
皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物
皮膚結合ペプチドは、様々な組成物から皮膚に塗布してもよい。例えば皮膚結合ペプチドは、皮膚結合ペプチドを含んでなる水溶液から皮膚に塗布してもよい。代案としては、皮膚結合ペプチドはスキンケア組成物から皮膚に塗布される。スキンケア組成物は、ここでは、限定されるものではないが、スキンケア、皮膚洗浄、メークアップ、および皺取り製品をはじめとする皮膚のトリートメントのための組成物として定義される。皮膚結合ペプチドは、組成物総重量に対して約０．０１重量％〜約１０重量％、好ましくは約０．０１重量％〜約５重量％の濃度で、組成物中で使用される。この比率は、スキンケア組成物のタイプに応じて変動してもよい。さらに皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物は、皮膚有益作用剤をさらに含んでなってもよい。組成物が皮膚有益作用剤を含んでなる場合、有益作用剤は、上述のように皮膚結合ペプチドに結合してもよい。有益作用剤の濃度に対する皮膚結合ペプチドの濃度は、最良の結果のために最適化する必要があるかもしれない。複数コピー皮膚結合ペプチドをはじめとする適切な皮膚結合ペプチドについては上述される。さらに異なる皮膚結合ペプチドの混合物を組成物中で使用してもよい。混合物中の皮膚結合ペプチドは、有益な効果を緩和するペプチド間の相互作用がないように選択する必要がある。適切な皮膚結合ペプチド混合物は、日常的実験法を使用して当業者によって判定されてもよい。皮膚結合ペプチド混合物を組成物中で使用する場合、ペプチドの総濃度は組成物総重量に対して約０．０１重量％〜約１０重量％である。
【０１０６】
別の実施形態では、皮膚結合ペプチドは、上述のように皮膚有益作用剤と結合している皮膚結合ペプチドを含んでなる抱合体として組成物中に存在してもよい。例えば有益作用剤は皮膚コンディショナーであってもよく、抱合体は同一または異なる皮膚コンディショナーと結合している皮膚結合ペプチドを含んでなってもよい。有益作用剤は皮膚着色剤であってもよく、抱合体は皮膚コンディショナーと結合している皮膚結合ペプチドを含んでなってもよい。さらに有益作用剤は皮膚コンディショナーであってもよく、抱合体は日焼け止めと結合している皮膚結合ペプチドを含んでなってもよい。これらの全てのそしてその他の可能な組み合わせは、本発明の範囲内である。
【０１０７】
皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物は、その例が、例えばフィリップ（Ｐｈｉｌｉｐｐｅ）ら、前出で述べられる、スキンケア組成物のための化粧用に許容可能な媒体をさらに含んでなってもよい。例えば化粧用に許容可能な媒体は、概して組成物総重量に対して約１０〜約９０重量％の比率の脂肪物質を含有する無水組成物であってもよく、ここでは脂肪相は、少なくとも１つの液体、固体または半固体脂肪物質を含有する。脂肪物質としては、限定されるものではないが、油、ワックス、ガム、およびいわゆるペースト状脂肪物質が挙げられる。代案としては組成物は、油中水または水中油エマルジョンなどの安定した分散体の形態であってもよい。さらに組成物は、限定されるものではないが、抗酸化剤、保存料、増量剤、界面活性剤、ＵＶＡおよび／またはＵＶＢサンスクリーン、香料、増粘剤、ウェッティング剤、およびアニオン性、非イオン性または両性ポリマー、および染料または顔料をはじめとする、１つもしくはそれ以上の従来の化粧品または皮膚科的添加剤またはアジュバントを含有してもよい。
【０１０８】
有益作用剤を髪に塗布する方法
本発明のペプチドベースのシーラントを使用して、例えば着色剤またはコンディショナーなどの一般的な髪有益作用剤の耐久性を増強する。髪有益作用剤は、あらゆる適切な組成物から髪に塗布してもよい。髪有益作用剤は、上述のように髪結合ペプチドとの抱合体の形態で組成物中に存在してもよい。一実施形態では髪有益作用剤は、例えば一時的なヘアダイまたはヘアコンディショナーなどの従来のヘアケア組成物から髪に塗布される。これらのヘアケア組成物は当該技術分野でよく知られており、適切な組成物については上述される。
【０１０９】
一実施形態では髪有益作用剤は、髪有益作用剤が髪に結合するのに十分な時間、典型的に約５秒間〜約６０分間髪に塗布される。場合により髪をすすいで、髪に結合しなかった有益作用剤を除去してもよい。次に髪結合ペプチドを含んでなる組成物を髪結合ペプチドが髪に結合するのに十分な時間、典型的に約５秒間〜約６０分間髪に塗布する。髪結合ペプチドを含んでなる組成物は、髪からすすいでもまたは髪の上に残してもよい。
【０１１０】
別の実施形態では、髪結合ペプチドを含んでなる組成物は髪結合ペプチドが髪に結合するのに十分な時間、典型的に約５秒間〜約６０分間髪に塗布される。場合により髪をすすいで、髪に結合しなかった髪結合ペプチド組成物を除去してもよい。次に髪有益作用剤を髪有益作用剤が髪に結合するのに十分な時間、典型的に約５秒間〜約６０分間髪に塗布する。非結合髪有益作用剤は、髪からすすいでもまたは髪の上に残してもよい。
【０１１１】
別の実施形態では、髪有益作用剤と髪結合ペプチドを含んでなる組成物とを有益作用剤および髪結合ペプチドが髪に結合するのに十分な時間、典型的に約５秒間〜約６０分間髪に同時に塗布する。場合により、髪をすすいで、非結合有益作用剤と髪結合ペプチドを含んでなる組成物とを髪から除去してもよい。
【０１１２】
別の実施形態では、髪有益作用剤が髪結合ペプチドを含んでなる組成物の一部として提供される。その実施形態では、髪有益作用剤および髪結合ペプチドを含んでなる組成物は、髪有益作用剤および髪結合ペプチドが髪に結合するのに十分な時間、典型的に約５秒間〜約６０分間髪に塗布される。髪有益作用剤および髪結合ペプチドを含んでなる組成物は、髪からすすいでもまたは髪の上に残してもよい。
【０１１３】
上述のいずれかの方法において、有益作用剤の耐久性をさらに増強するために、場合により、髪有益作用剤と髪結合ペプチドを含んでなる組成物との塗布後に、髪結合ペプチドを含んでなる組成物を髪に再塗布してもよい。
【０１１４】
上述のいずれかの方法において、さらに有益作用剤の耐久性をさらに増強するために、場合により、髪有益作用剤と髪結合ペプチドを含んでなる組成物との塗布後に、高分子シーラントを含んでなる組成物を髪に塗布してもよい。高分子シーラントを含んでなる組成物は水溶液または高分子シーラントを含んでなるヘアケア組成物であってもよい。典型的に高分子シーラントは、組成物総重量を基準にして約０．２５重量％〜約１０重量％の濃度で組成物中に存在する。高分子シーラントはパーソナルケア製品技術分野でよく知られており、限定されるものではないが、ポリ（アリルアミン）、アクリレート、アクリレートコポリマー、ポリウレタン、カルボマー、メチコン、アモジメチコン、ポリエチレングリコール、蜜ろう、シロキサンなどが挙げられる。高分子シーラントの選択は、使用する特定の有益作用剤および髪結合ペプチドに左右される。最適な高分子シーラントは、日常的実験法を使用して当業者によって容易に判定されるであろう。
【０１１５】
有益作用剤を皮膚に塗布する方法
本発明のペプチドベースのシーラントは、例えば着色剤、コンディショナー、日焼け止め、芳香剤などの一般的な皮膚有益作用剤の耐久性を増強するのに使用される。皮膚有益作用剤は、あらゆる適切な組成物から皮膚に塗布してもよい。皮膚有益作用剤は、上述のように皮膚結合ペプチドとの抱合体の形態で組成物中に存在してもよい。一実施形態では有益作用剤は、例えば当該技術分野でよく知られている皮膚着色剤、皮膚コンディショナー、日焼け止めなどの従来のスキンケア組成物から皮膚に塗布してもよい。
【０１１６】
一実施形態では、皮膚有益作用剤は、皮膚有益作用剤が皮膚に結合するのに十分な時間、典型的に約５秒間〜約６０分間皮膚に塗布される。場合により、皮膚をすすいで皮膚に結合しなかった有益作用剤を除去してもよい。次に皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物が、皮膚結合ペプチド剤が皮膚に結合するのに十分な時間、典型的に約５秒間〜約６０分間皮膚に塗布される。皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物は、皮膚からすすいでもまたは皮膚の上に残してもよい。
【０１１７】
別の実施形態では、皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物は、皮膚結合ペプチドが皮膚に結合するのに十分な時間、典型的に約５秒間〜約６０分間皮膚に塗布される。場合により皮膚をすすいで、皮膚に結合しなかった皮膚結合ペプチド組成物を除去してもよい。次に皮膚有益作用剤を有益作用剤が皮膚に結合するのに十分な時間、典型的に約５秒間〜約６０分間皮膚に塗布する。非結合皮膚有益作用剤は、皮膚からすすいでもまたは皮膚の上に残してもよい。
【０１１８】
別の実施形態では、皮膚有益作用剤と皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物とを有益作用剤および皮膚結合ペプチドが皮膚に結合するのに十分な時間、典型的に約５秒間〜約６０分間皮膚に同時に塗布する。場合により、皮膚をすすいで、非結合有益作用剤および皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物を皮膚から除去してもよい。
【０１１９】
別の実施形態では、皮膚有益作用剤が皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物の一部として提供される。その実施形態では、皮膚有益作用剤および皮膚結合ペプチドがを含んでなる組成物が、皮膚有益作用剤および皮膚結合ペプチドが皮膚に結合するのに十分な時間、典型的に約５秒間〜約６０分間皮膚に塗布される。皮膚有益作用剤および皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物は、皮膚からすすいでもまたは皮膚の上に残してもよい。
【０１２０】
上述のいずれかの方法において、有益作用剤の耐久性をさらに増強するために、場合により、皮膚有益作用剤と皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物との塗布後に、皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物を皮膚に再塗布してもよい。
【０１２１】
上述のいずれかの方法において、さらに有益作用剤の耐久性をさらに増強するために、場合により、皮膚有益作用剤と皮膚結合ペプチドを含んでなる組成物との塗布後に、高分子シーラントを含んでなる組成物を皮膚に塗布してもよい。高分子シーラントを含んでなる組成物は水溶液または高分子シーラントを含んでなるスキンケア組成物であってもよい。典型的に高分子シーラントは、組成物総重量を基準にして約０．２５重量％〜約１０重量％の濃度で組成物中に存在する。高分子シーラントはパーソナルケア製品技術分野でよく知られており、限定されるものではないが、ポリ（アリルアミン）、アクリレート、アクリレートコポリマー、ポリウレタン、カルボマー、メチコン、アモジメチコン、ポリエチレングリコール、蜜ろう、シロキサンなどが挙げられる。高分子シーラントの選択は、使用する特定の有益作用剤および皮膚結合ペプチドに左右される。最適な高分子シーラントは、日常的実験法を使用して当業者によって容易に判定されるであろう。
【実施例】
【０１２２】
以下の実施例で本発明をさらに定義する。これらの実施例は、本発明の好ましい実施形態を示しながら、例示の目的のみで提供されるものと理解されるべきである。当業者は、上の考察およびこれらの実施例から本発明に必須の特徴を見極めることができ、その精神と範囲を逸脱することなく、本発明の様々な変更および修正をして、それを様々な用途および条件に適応できる。
【０１２３】
使用した略語の意味は次のとおり。「ｍｉｎ」は分を意味し、「ｈ」は時間を意味し、「ｓｅｃ」は秒を意味し、「μＬ」はマイクロリットルを意味し、「ｍＬ」はミリリットルを意味し、「Ｌ」はリットルを意味し、「ｎｍ」はナノメートルを意味し、「ｍｍ」はミリメートルを意味し、「ｃｍ」はセンチメートルを意味し、「μｍ」はマイクロメートルを意味し、「ｍＭ」はミリモル濃度を意味し、「Ｍ」はモル濃度を意味し、「ｍｏｌ」はモルを意味し、「ｍｍｏｌ」はミリモルを意味し、「μモル」はマイクロモルを意味し、「ｐｍｏｌ」はピコモルを意味し、「ｇ」はグラムを意味し、「μｇ」はマイクログラムを意味し、「ｍｇ」はミリグラムを意味し、「ｗｔ％」は重量パーセントを意味し、「ｖｏｌ％」は容積パーセントを意味し、「ＭＡＬＤＩ」はマトリックス支援レーザ脱離イオン化法を意味し、「ＯＤ６００」は６００ｎｍの波長で測定した光学濃度を意味し、「ｒｐｍ」は１分あたりの回転数を意味し、「ａｔｍ」は気圧を意味し、「ｋＰａ」はキロパスカルを意味し、「ＳＬＰＭ」は１分あたりの標準リットルを意味し、「ｐｓｉ」は平方インチあたりポンドを意味し、「ＲＣＦ」は相対遠心力を意味する。
【０１２４】
実施例１
コンビナトリアル的に発生させた髪結合ペプチドをシーラントとして使用した髪の染色
この実施例の目的は、シーラントとしての髪結合ペプチドと組み合わさったヘアダイを使用した髪の染色を実証することであった。この実施例で使用した髪結合ペプチドは、ファング（Ｈｕａｎｇ）らの米国特許出願公開第２００５／００５０６５６号明細書のファージディスプレイスクリーニングを使用して同定した。
【０１２５】
Ｃ末端に付加されたシステイン残基がある髪結合ペプチドＩＢ５（配列番号５２で示される）は、カリフォルニア州ダブリン（Ｄｕｂｌｉｎ、ＣＡ）のシンペップ（ＳｙｎＰｅｐ）から得た。このペプチド（２５ｍｇ）をウィスコンシン州ミルウォーキー（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）のアルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃｈ）からの１０ｇの塩基性バイオレット＃２（ＣＡＳ  ３２４８−９１−７）の１重量％原液の水溶液に添加して、溶液を一晩撹拌した。ニューヨーク州ベルロース（Ｂｅｌｌｅｒｏｓｅ、ＮＹ）のインターナショナル・ヘア・インポーツ・アンド・プロダクツ社（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈａｉｒ  Ｉｍｐｏｒｔｅｒｓ  ＆  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｉｎｃ．）からの天然白髪見本を１３ｍｍ×１００ｍｍ試験管内に挿入し、８ｍＬのペプチド／染料混合物を試験管に注入した。磁気撹拌機を使用して髪見本を撹拌して着色剤溶液と３０分間接触させ、次に取り出して３０分間風乾させた。
【０１２６】
次に大量の脱イオン水を使用して髪見本を水すすぎし、数日間にわたる５回のシャンプートリートメントがそれに続いた。シャンプートリートメントは、市販のシャンプーであるオハイオ州シンシナチ（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ、ＯＨ）のプロクター＆ギャンブル（Ｐｒｏｃｔｏｒ  ＆  Ｇａｍｂｌｅ）からのパンテーンプロ−Ｖシアボリューム（Ｐａｎｔｅｎｅ  Ｐｒｏ−Ｖ  Ｓｈｅｅｒ  Ｖｏｌｕｍｅ）を次のように髪に塗布することを伴った。２５セント硬貨大のシャンプー液を髪見本に均等に分布させて次に髪に３０秒間激しくすり込み、その後髪見本を水ですすいでシャンプーを除去した。次に髪見本を室温で乾燥させた。
【０１２７】
対照とするために、髪結合ペプチドシーラントの添加なしに上述の手順を繰り返した。次の尺度を使用して、対照と比較した色保持の目視観察を使用し、色耐久性を定性的に格付けした。
「同一」  対照と同一の色損失量を示す。
「普通」  対照と比べて色保持の少しの改善を示す。
「良好」  対照と比べて色保持の大きな改善を示す。
「非常に良好」  最小の色損失を示す。
【０１２８】
シャンプートリートメント後、染料および髪結合ペプチドシーラントで処理された髪見本の色は「非常に良好」と評価され、シャンプートリートメント後の着色剤損失が最小であったことが示唆された。髪結合ペプチドなしの対照は、シャンプートリートメント後に顕著な色損失を示した。これらの結果は、ヘアダイのためのシーラントとしての髪結合ペプチドの有効性を実証する。
【０１２９】
上述の１．０重量％濃度の代わりに０．７５重量％または０．５０重量％の濃度を有する塩基性バイオレット＃２の原液を使用して、この実験を反復した。０．７５重量％の染料濃度では、染料および髪結合ペプチドシーラントで処理された髪見本の色は「普通」と評価され、対照と比べて色保持に少しの改善があったことが示された。０．５０重量％染料濃度を使用すると、染料および髪結合ペプチドシーラントで処理された髪見本の色は「同一」と評価され、色損失が対照と同一であったことが示された。これらの結果は、染料濃度および染料と髪結合ペプチドとの比率が、最善の結果のために最適化される必要があることを実証する。
【０１３０】
実施例２
実験的に発生させた髪結合ペプチドをシーラントとして使用した髪の染色
この実施例の目的は、シーラントとしての髪結合ペプチドと組み合わさったヘアダイを使用した髪の染色を実証することであった。この実施例で使用した髪結合ペプチドは、実験的に発生させた。
【０１３１】
配列番号８で示される実験的に発生させた髪結合ペプチドは、カリフォルニア州ダブリン（Ｄｕｂｌｉｎ、ＣＡ）のシンペップ（ＳｙｎＰｅｐ）から得た。このペプチド（２７ｍｇ）をウィスコンシン州ミルウォーキー（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）のアルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃｈ）からの１０ｇの塩基性バイオレット＃２（ＣＡＳ  ３２４８−９１−７）の０．５重量％原液の水溶液に添加して、溶液を一晩撹拌した。ニューヨーク州ベルロース（Ｂｅｌｌｅｒｏｓｅ、ＮＹ）のインターナショナル・ヘア・インポーツ・アンド・プロダクツ社（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈａｉｒ  Ｉｍｐｏｒｔｅｒｓ  ＆  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｉｎｃ．）からの天然白髪見本を１３ｍｍ×１００ｍｍの試験管内に挿入し、８ｍＬのペプチド／染料混合物を試験管に注入した。磁気撹拌機を使用して髪見本を撹拌して着色剤溶液と３０分間接触させ、次に取り出して３０分間風乾させた。
【０１３２】
次に大量の脱イオン水を使用して髪見本を水すすぎし、数日間にわたる８回のシャンプートリートメントがそれに続いた。シャンプートリートメントは、市販のシャンプーであるオハイオ州シンシナチ（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ、ＯＨ）のプロクター＆ギャンブル（Ｐｒｏｃｔｏｒ  ＆  Ｇａｍｂｌｅ）からのパンテーンプロ−Ｖシアボリューム（Ｐａｎｔｅｎｅ  Ｐｒｏ−Ｖ  Ｓｈｅｅｒ  Ｖｏｌｕｍｅ）を次のように髪に塗布することを伴った。２５セント硬貨大のシャンプー液を髪見本に均等に分布させて次に髪に３０秒間激しくすり込み、その後髪見本を水ですすいでシャンプーを除去した。次に髪見本を室温で乾燥させた。
【０１３３】
対照とするために、髪結合ペプチドシーラントの添加なしに上述の手順を繰り返した。実施例１で述べられる尺度を使用して、対照と比較した色保持の目視観察を使用し、色耐久性を定性的に格付けした。
【０１３４】
シャンプートリートメント後、染料および髪結合ペプチドシーラントで処理された髪見本の色は「普通」と評価され、対照と比べて色保持に少しの改善があったことが示された。
【０１３５】
実施例３
ヘアコンディショナーと結合している髪結合ペプチドを含んでなる抱合体をシーラントとして使用した髪の染色
この実施例の目的は、シーラントとしてのヘアコンディショナーと共有結合した髪結合ペプチドを含んでなる抱合体と組み合わさったヘアダイを使用した、髪の染色を実証することであった。
【０１３６】
オクタデシル−髪結合ペプチド抱合体の調製
アルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃｈ）からのオクタデシルイソシアネート（７０ｍｇ、ＣＡＳ  Ｎｏ．１１２−９６−９）を５ｍＬのＮ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、Ｃ末端に付加されたシステイン残基を有する脱保護ＩＢ５ペプチド（配列番号５２で示される）の溶液（１０ｍＬのＤＭＦに溶解された１５０ｍｇ）に添加した。トリエチルアミン（３０ｍｇ）を添加して反応を触媒した。溶液を室温で１２０時間撹拌した。溶剤を蒸発させて１９１ｍｇの灰色がかった結晶性粉末を得た。生成物をガスクロマトグラフィー−ＭＡＬＤＩ質量分析法によって分析し、ペプチドに共有結合的に付着した１および２オクタデシル単位にそれぞれ一致する、１７１７および２０１３ｇ／ｍｏｌの分子量を有する２つの構成要素が含有されることを見いだした。
【０１３７】
髪染色
オクタデシル−髪結合ペプチド抱合体（２８ｍｇ）をウィスコンシン州ミルウォーキー（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）のアルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃｈ）からの１０ｇの塩基性バイオレット＃２（ＣＡＳ  ３２４８−９１−７）の０．５重量％原液の水溶液に添加して、溶液を一晩撹拌した。ニューヨーク州ベルロース（Ｂｅｌｌｅｒｏｓｅ、ＮＹ）のインターナショナル・ヘア・インポーツ・アンド・プロダクツ社（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈａｉｒ  Ｉｍｐｏｒｔｅｒｓ  ＆  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｉｎｃ．）からの天然白髪見本を１３ｍｍ×１００ｍｍの試験管内に挿入し、８ｍＬの抱合体／染料混合物を試験管に注入した。磁気撹拌機を使用して髪見本を撹拌して着色剤溶液と３０分間接触させ、次に取り出して３０分間風乾させた。
【０１３８】
次に大量の脱イオン水を使用して髪見本を水すすぎし、数日間にわたる８回のシャンプートリートメントがそれに続いた。シャンプートリートメントは、市販のシャンプーであるオハイオ州シンシナチ（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ、ＯＨ）のプロクター＆ギャンブル（Ｐｒｏｃｔｏｒ  ＆  Ｇａｍｂｌｅ）からのパンテーンプロ−Ｖシアボリューム（Ｐａｎｔｅｎｅ  Ｐｒｏ−Ｖ  Ｓｈｅｅｒ  Ｖｏｌｕｍｅ）を次のように髪に塗布することを伴った。２５セント硬貨大のシャンプー液を髪見本に均等に分布させて次に髪に３０秒間激しくすり込み、その後髪見本を水ですすいでシャンプーを除去した。次に髪見本を室温で乾燥させた。
【０１３９】
対照とするために、抱合体シーラントの添加なしに上述の手順を繰り返した。実施例１で述べられる尺度を使用して、対照と比較した色保持の目視観察を使用し、色耐久性を定性的に格付けした。
【０１４０】
シャンプートリートメント後に、染料およびオクタデシル−髪結合ペプチドシーラントで処理された髪見本の色は「良好」と評価され、対照と比べて色保持に大きな改善があったことが示された。
【０１４１】
実施例４
異なる髪結合ペプチド混合物をシーラントとして使用した髪の染色
この実施例の目的は、シーラントとしての２つの異なる髪結合ペプチド混合物と組み合わさったヘアダイを使用した、髪の染色を実証することであった。２つの異なる単一コピー髪結合ペプチドの混合物を使用した。
【０１４２】
この実施例で使用した髪結合ペプチドは、どちらもシンペップ（ＳｙｎＰｅｐ）から得られたＣ末端に付加されたシステイン残基を有する配列番号５２で示されるＩＢ５、および配列番号２で示されるＫＦ１１であった。ペプチドのそれぞれを０．１２５重量％の濃度で使用した。実施例１で使用される５回のシャンプー洗浄の代わりに８回のシャンプーを実施したこと以外は、塩基性バイオレット＃２濃度０．５０重量％で、実施例１で述べられた手順を使用した。
【０１４３】
シャンプートリートメント後に、染料および髪結合ペプチド混合物で処理された髪見本の色は「非常に良好」と評価され、シャンプートリートメント後の着色剤損失が最小であったことが示された。髪結合ペプチドなしの対照は、シャンプートリートメント後に顕著な色損失を示した。これらの結果は、異なる髪結合ペプチド混合物を使用して、髪色保持を改善してもよいことを示唆する。
【０１４４】
髪結合ペプチドＫＦ１１（配列番号２）と、実施例２で使用される実験的に発生させたペプチド（配列番号８）との混合物を使用して、この実験を反復した。これらの２つのペプチドでは、対照と比べてシャンプートリートメント後の色保持に改善がなかった。この結果は、２つの異なる髪結合ペプチド混合物を使用する場合、有益な効果を緩和する相互作用がペプチド間にないことを確実にするよう、注意を払うべきであることを示唆する。高度に極性の実験的に発生させたペプチドがＫＦ１１ペプチドと相互作用して、それによってシーラント効果を排除したと考えられる。
【０１４５】
実施例５
複数コピー髪結合ペプチドの生物学的生成
この実施例の目的は、リコンビナントＤＮＡおよび分子クローニング技術を使用して、配列番号１６で示される複数コピー髪結合ペプチドＨＣ７７６０７を調製することであった。複数コピー髪結合ペプチドは、それぞれ３コピーのＫＦ１１（配列番号２）およびＤ２１’（配列番号３）が、ペプチドスペーサーによって隔てられる６個の髪結合ペプチド配列を含んでなった。ペプチドは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中で封入体として発現させた。封入体形成を促進するために、追加的アミノ酸配列（すなわちペプチドタグ）が複数コピー髪結合ペプチド配列に縮合された。
【０１４６】
ＨＣ７７６０７遺伝子の構築
ニュージャージー州スコッチプレーンズ（Ｓｃｏｔｃｈ  Ｐｌａｉｎｓ、ＮＪ）のゲンスクリプト・コーポレーション（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ  Ｃｏｒｐ．）によって、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中の高レベル発現のためにコドン使用頻度を最適化し、反復性配列およびＲＮＡ二次構造を回避する、独自仕様の逆翻訳アルゴリズムを使用して、配列番号１６で示されるペプチドＨＣ７７６０７のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列がデザインされた。コーディングＤＮＡ配列は配列番号２３で示される。このコード配列中では、エンドヌクレアーゼであるＢａｍＨＩの認識部位はＮ末端に含まれ、２つの終止コドンそしてエンドヌクレアーゼであるＡｓｃＩおよびＨｉｎｄＩＩＩの認識部位はＣ末端に付加された。ゲンスクリプト・コーポレーション（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ  Ｃｏｒｐ．）によってこのコーディングＤＮＡ配列が合成オリゴヌクレオチドからアセンブルされ、ＢａｍＨＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ部位の間でプラスミドベクターｐＵＣ５７中へクローンされて、プラスミドｐＵＣ５７／ＨＣ７７６０７が得られた。ＤＮＡ配列は、ゲンスクリプト・コーポレーション（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ  Ｃｏｒｐ．）によって確認された。
【０１４７】
発現ベクターｐＬＸ１２１の構築
ＴＢＰ１０１ペプチド遺伝子のクローニング
ＴＢＰ１と称され、配列番号２４で示されるアミノ酸６８個の合成ペプチドをデザインした。表２に示すテキサス州ウッドランド（Ｗｏｏｄｌａｎｄｓ、ＴＸ）のシグマジェノシー（Ｓｉｇｍａ−Ｇｅｎｏｓｙｓ）から得られる合成オリゴヌクレオチドから、ＴＢＰ１と称されるペプチドＴＢＰ１の遺伝子をアセンブルした。
【０１４８】
【表５】
2009512639.tif 000006
【０１４９】
Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼを使用して、各オリゴヌクレオチドをＡＴＰでリン酸化した。得られたオリゴヌクレオチドを混合し５分間煮沸して、次に緩慢に室温に冷却した。最後にアニールしたオリゴヌクレオチドをＴ４ＤＮＡリガーゼにライゲートして、ＴＢＰ１０１ペプチドをコードする、配列番号３０で示される合成ＤＮＡ断片ＴＢＰ１を得た。
【０１５０】
ｐＩＮＫ１発現プラスミドの構築
製造業者の使用説明書に従って、カリフォルニア州カールスバッドのインビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ））からのタンパク質過剰発現のためのゲートウェイ（Ｇａｔｅｗａｙ）（商標）テクノロジー（Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）システムに、ＴＢＰ１を組み込んだ。第１のステップでは、標準ＰＣＲプロトコルに従って、カリフォルニア州ラホヤ（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）のストラタジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）からのｐｆｕＤＮＡポリメラーゼによって触媒されるＰＣＲ反応で、ＴＢＰ１ライゲーション混合物を使用した。ＴＢＰ１断片の増幅のために、配列番号３１で示されるプライマー５’ＴＢＰ１（５’−ＣＡＣ  ＣＧＧ  ＡＴＣ  ＣＡＴ  ＣＧＡ  ＡＧＧ  ＴＣＧ  Ｔ−３’）、および配列番号３２で示されるプライマー３’ＴＢＰ１（５’−ＴＣＡ  ＴＴＡ  ＴＧＣ  ＡＧＣ  ＣＡＧ  ＣＡＧ  ＣＧＣ−３’）を使用した。これらのプライマーのデザインのために、追加的配列ＣＡＣＣおよび別の停止コドンＴＧＡを増幅された断片の５’および３’末端に付加した。
【０１５１】
インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のｐＥＮＴＲ方向性ＴＯＰＯ（登録商標）クローニングキットを使用して、増幅されたＴＢＰ１をｐＥＮＴＲ／Ｄ−ＴＯＰＯベクター中に直接クローンして、ゲートウェイ（Ｇａｔｅｗａｙ）エントリープラスミドｐＥＮＴＲ−ＴＢＰ１を得た。このエントリープラスミドをインビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からのワンショットトップ１０（Ｏｎｅ  Ｓｈｏｔ  ＴＯＰ１０）大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株中で増殖させた。デュポン（ＤｕＰｏｎｔ）配列決定施設において、ＰＣＲ増幅およびクローニングの正確さをＤＮＡ配列決定によって判定した。
【０１５２】
製造業者の使用説明書に従って、カリフォルニア州ラホヤ（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）のストラタジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）からのクイックチェンジ（ＱｕｉｃｋＣｈａｎｇｅ）（登録商標）ＩＩ部位特異的変異誘発キット（カタログ番号２００５２３）、を使用して、部位特異的変異誘発によってプラスミドｐＥＮＴＲ−ＴＢＰ１をさらに修飾し、エンドヌクレアーゼＮｇｏＭＩ（ＧＣＣＧＧＣ）およびＫａｓＩ（ＧＧＣＧＣＣ）の認識部位を作り出した。エンドヌクレアーゼＮｇｏＭＩの認識部位を作り出すために、配列番号３３で示されるプライマーＡＧＧ−１−Ｆ、および配列番号３４で示されるプライマーＡＧＧ−１−Ｒを変異誘発で使用した。Ｋａｓｉ部位を作り出すために、配列番号３５で示されるプライマーＧＧＡ−１−Ｆ、および配列番号３６で示されるプライマーＧＧＳ−１−Ｒを変異誘発で使用した。変異誘発は、配列番号３７で示され、ＴＢＰ１０１と称される６８個のアミノ酸の合成ペプチドをコードするプラスミドｐＥＮＴＲ−ＴＢＰ１０１をもたらした。
【０１５３】
最後にエントリープラスミドをｐＤＥＳＴ１７と混合した。ＬＲ遺伝子組み換え反応をインビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からのＬＲクロナーゼ（Ｃｌｏｎａｓｅ）（商標）によって触媒した。目的プラスミドであるｐＩＮＫ１０１を構築し、ＤＨ５α大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株中で増殖した。遺伝子組み換え反応の正確さをＤＮＡ配列決定によって判定した。ＬＲ遺伝子組み換え反応のための全試薬はゲートウェイ（Ｇａｔｅｗａｙ）（商標）テクノロジー（Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）キットにより、インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）発現システム中で提供される。
【０１５４】
得られたプラスミドは、１１．６ｋＤａのタンパク質である組み換えタンパク質ＩＮＫ１０１のためのコード領域６Ｈ−ＴＢＰ１を含有した。このタンパク質配列は、６ｘＨｉｓタグと、ＴＢＰ１０１ペプチド配列の前のＦａｃｔｏｒ  Ｘａ認識部位を含むペプチドリンカーとを含む。制限部位ＮｄｅＩとＡｓｃＩとの間のＩＮＫ１０１のためのコード領域は、配列番号３８で示される。
【０１５５】
６ｘＨｉｓタグをコードする領域および続くリンカー（２８−ａａ）は、ＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩ制限酵素での消化によってｐＩＮＫ１０１から切除できる。
【０１５６】
６Ｈ−ＴＢＰ１コード配列の発現を試験するために、発現プラスミドｐＩＮＫ１０１をインビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からのＢＬ２１−ＡＩ大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株（カタログ番号Ｃ６０７０−０３）に形質転換した。組み換えタンパク質を生成するために、形質転換された細菌の１個のコロニーを５０ｍＬのＬＢ−アンピシリンブロス（１０ｇ／Ｌのバクト−トリプトン、５ｇ／Ｌのバクトイースト抽出物、１０ｇ／ＬのＮａＣｌ、１００ｍｇ／Ｌのアンピシリン、ｐＨ７．０）に接種して、培養を３７℃でＯＤ６００が０．６に達するまで振盪した。培養に０．５ｍＬの２０％Ｌ−アラビノースを添加して発現を誘発し、振盪をさらに４時間継続した。ポリアクリルアミドゲル電気泳動法による細胞タンパク質の分析は、ＴＢＰ１０１ペプチドの生成を実証した。
【０１５７】
ＴＢＰ１０１のアミノ酸配列中へのＤＰ開裂部位の導入
生成するペプチドを安定化タグから分離するための酸開裂部位として、低ｐＨにおいて特に不安定なＤＰペプチド結合（Ｍ．ランドン（Ｌａｎｄｏｎ）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．４７：１４５〜９頁、１９７７年）を使用した。このようにして、上流リンカーをコードする領域とＴＢＰ１０１配列との間に酸不安定性ＤＰ配列を含むように、配列番号３７で示されるＴＢＰ１０１のアミノ酸配列を改変し、配列番号３９で示されるＴＢＰ１０１−ＤＰを得た。
【０１５８】
６Ｈ−ＴＢＰ１遺伝子の頭の部分で、ＥＧジペプチド配列をコードする２つのコドンをＤＰジペプチドをコードするコドンに変化させる部位特異的変異誘発によって、プラスミドｐＩＮＫ１０１の配列を修飾した。製造業者の使用説明書に従って、カリフォルニア州ラホヤ（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）のストラタジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）からのクイックチェンジ（ＱｕｉｃｋＣｈａｎｇｅ）（登録商標）ＩＩ部位特異的変異誘発キット（カタログ番号２００５２３）を使用して、ＤＰ酸開裂部位を付加した。部位特異的変異誘発を実施するのに使用したオリゴヌクレオチドは、配列番号４０（トップストランド）および配列番号４１（ボトムストランド）で示される。
【０１５９】
得られたプラスミドをインビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からの化学的コンピテントトップ（ＴＯＰ）１０細胞（カタログ番号Ｃ４０４０−０６）に形質転換した。カリフォルニア州バレンシア（Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）のキアゲン（ＱＩＡＧＥＮ）からのキアプレップ・スピン（ＱＩＡｐｒｅｐ  Ｓｐｉｎ）ミニプレップキットを使用して、プラスミドＤＮＡを調製し、部位特異的変異を配列決定によって確認した。４個のヌクレオチド残基を（ＧＡＡからＧＡＴ、およびＧＧＴからＣＣＡに）変化させて、ＴＢＰ１０１の位置３２および３３のアミノ酸であるグルタミン酸（Ｅ）およびグリシン（Ｇ）をそれぞれアスパラギン酸（Ｄ）およびプロリン（Ｐ）に変化させた。ｐＩＮＫ１０１−ＤＰと称される得られたプラスミドは、配列番号４２で示される。
【０１６０】
プラスミドｐＩＮＫ１０１−ＤＰからのペプチド生成は、上述のようにして評価した。ｐＩＮＫ１０１−ＤＰは親ｐＩＮＫ１０１プラスミド同様に、封入体形態の不溶性ペプチドの生成をもたらした。
【０１６１】
タグＩＢＴ３のデザイン
相補的配列を用いて配列番号４４および４５で示されるシグマ・ジェノシス（Ｓｉｇｍａ  Ｇｅｎｏｓｙｓ）からの２つの合成オリゴヌクレオチドから、配列番号４３で示されてＩＢＴ３と称される配列を有する、ペプチドをコードするＤＮＡ配列をアセンブルした。オーバーハングを各オリゴヌクレオチドに含めて、制限部位ＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩに適合性の付着端を発生させた。オリゴ混合物（脱イオン水中各１００ｐｍｏｌ）を９９℃で１０分間加熱して、２つのオリゴをアニールし、次に混合物を室温に緩慢に放冷した。
【０１６２】
マサチューセッツ州ビバリー（Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）のニュー・イングランド・バイオラブズ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）からのバッファー（Ｂｕｆｆｅｒ）２中で、マサチューセッツ州ビバリー（Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）のニュー・イングランド・バイオラブズ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）からのＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩ制限酵素によってプラスミドｐＩＮＫ１０１−ＤＰを消化し、ゲートウェイ・クローニング・システムのａｔｔ部位を含む、親ｐＤＥＳＴ１７プラスミドからの６ｘＨｉｓタグおよびリンカーに相当する９０ｂｐの断片を放出した。消化プラスミドからのＮｄｅＩ−ＢａｍＨＩ断片をアガロースゲル電気泳動法によって分離し、キアゲン（ＱＩＡＧＥＮ）からのキアゲン・キアクイック（Ｑｉａｇｅｎ  ＱＩＡｑｕｉｃｋ）（登録商標）ゲル抽出キット（カタログ番号２８７０４）を使用してベクターを精製した。ニュー・イングランド・バイオラブズ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）からのＴ４ＤＮＡリガーゼ（カタログ番号Ｍ０２０２）によって、希釈されアニールされたオリゴ（およそ０．２ｐｍｏｌ）をＮｄｅＩ−ＢａｍＨＩ消化されたゲル精製プラスミド（およそ５０ｎｇ）に１２℃で１８時間ライゲートした。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）トップ（ＴＯＰ）１０形質転換体から単離されたプラスミドＤＮＡを分析し、予期されたプラスミドの配列を配列決定によって確認した。ｐＬＸ１２１と称されるこのプラスミドは、ＩＢＴ３−ＴＢＰ１０１と称されるペプチドをコードする。上で概要を述べたようにして、完成した配列確認済みコンストラクトを発現について試験した。
【０１６３】
ＫＳＩ（ＥＰ，Ｓ）融合パートナーの構築
ウィスコンシン州マディソン（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）のノバジェン／ＥＭＤサイエンシズ（Ｎｏｖａｇｅｎ／ＥＭＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）から市販されるプラスミドベクターｐＥＴ−３１ｂ（＋）は、酵素、ケトステロイドイソメラーゼ（ＫＳＩ）の断片をコードする配列を提供する。このＫＳＩ断片を関心のあるペプチドに融合させると、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中で不溶性封入体を形成する傾向がある。この融合パートナー配列に適応させるために、プラスミドｐＥＴ−３１ｂ（＋）をテンプレートとして、および配列番号４６および４７で示されるオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、ＰＣＲによって、ＫＳＩ断片を増幅した。
【０１６４】
得られたＰＣＲ生成物をエンドヌクレアーゼＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩで消化し、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＤＨ１０Ｂ中において、これもまたＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩで消化したプラスミドｐＬＸ１２１中にクローンした。最終コンストラクトをＫＳＩ−１０１ＤＰと命名し、それが含有するプラスミドをｐＩＮＫ１０１＿ＤＰ＿ＫＳＩと命名した。
【０１６５】
次にストラタジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）からのクイックチェンジ（ＱｕｉｃｋＣｈａｎｇｅ）部位特異的変異誘発によって、ＫＳＩタンパク質生成物から酸不安定性ＤＰ配列を除去してそれをＥＰに変化させ、同時にＫＳＩ配列中の唯一のＣ残基を除去してそれをＳに変化させて、プラスミドｐＩＮＫ１０１＿ＤＰ＿ＫＳＩを修飾した。この目的で、配列番号４８および４９、配列番号５０および５１で示される２対のオリゴを同時に使用した。得られたプラスミドをｐＩＮＫ１０１＿ＤＰ＿ＫＳＩ（ＥＰ，Ｓ）と命名した。
【０１６６】
ＫＳＩ−ＨＣ７７６０７およびＫＳＩ（ＥＰ）−ＨＣ７７６０７遺伝子融合の構築
ＤＮＡプラスミドｐＩＮＫ１０１＿ＤＰ＿ＫＳＩおよびｐＩＮＫ１０１＿ＤＰ＿ＫＳＩ（ＥＰ，Ｓ）をエンドヌクレアーゼＢａｍＨＩおよびＡｓｃＩで消化し、プラスミドｐＵＣ５７／ＨＣ７７６０７（上述）に由来するＨＣ７７６０７をコードする断片ＢａｍＨＩ−ＡｓｃＩで、ＴＢＰ１０１をコードする断片を置換した。得られたプラスミドは、Ｔ７遺伝子１０プロモーターと作動的に結合するＫＳＩ−ＨＣ７７６０７およびＫＳＩ（ＥＰ，Ｓ）融合タンパク質をコードする。これらのプラスミドを最初に非発現性株大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＴＯＰ１０中でクローンし、次に発現性株大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１−ＡＩ中に転移した。
【０１６７】
発酵：
最初にバッチ様式、次に流加様式で実施される６−Ｌ発酵中で、上述の組み換え大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株を生育させた。発酵媒体の組成を表３に示す。発酵媒体のｐＨは６．７であった。発酵媒体を高圧蒸気滅菌によって滅菌した後、塩酸チアミン（４．５ｍｇ／Ｌ）、グルコース（２２．１ｇ／Ｌ）、微量元素、（表４参照）（１０ｍＬ／Ｌ）、アンピシリン（１００ｍｇ／Ｌ）の滅菌した構成要素と、接種材料（種）（１２５ｍＬ）とを添加した。必要に応じて水酸化アンモニウム（２０容積％）またはリン酸（２０容積％）を使用してｐＨを調節した。添加した構成要素は、高圧蒸気滅菌または濾過のどちらかで滅菌した。
【０１６８】
【表６】
2009512639.tif 000007
【０１６９】
【表７】
2009512639.tif 000008
【０１７０】
発酵の操作条件を表５に要約する。グルコースの初期濃度は２２．１ｇ／Ｌであった。最初の残留グルコースが消耗したら、あらかじめ計画された指数的グルコース供給を開始して、発酵の流加相を開始した。グルコース供給（表６および７参照）は５００ｇ／Ｌのグルコースを含有し、５ｇ／Ｌの酵母抽出物で栄養強化されていた。供給培地の構成要素は、高圧蒸気滅菌または濾過のどちらかで滅菌した。目的は、０．２５ｇ／ｇの（生物由来資源からグルコースへの）生産係数を仮定して、０．１３ｈ−１の特定の生育速度を維持し、発酵容器内の酢酸レベルを非常に低い値（すなわち０．２ｇ／Ｌ未満）に保つことであった。グルコース供給を操作終了まで継続した。選択された時点（すなわち発酵経過時間１５時間）における２ｇ／ＬのＬ−アラビノースの大量瞬時投与によって、誘導を開始した。以下の時点で、発酵ブロス１Ｌあたり５ｇの酵母抽出物を送達する大量瞬時投与を発酵容器に添加した。誘導の１時間前、誘導時、および誘導の１時間後。発酵経過時間１９．９７時間で誘導の４．９７時間後に、発酵操作を完了した。
【０１７１】
【表８】
2009512639.tif 000009
【０１７２】
【表９】
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【０１７３】
【表１０】
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【０１７４】
ペプチドＨＣ７７６０７の単離および精製
発酵操作完了後、全発酵ブロスを１２，０００ｐｓｉ（８２，７００ｋＰａ）のＡＰＶモデル２０００ゴーリン（Ｇａｕｌｉｎ）タイプホモジナイザーに３回通過させた。各均質化に先だってブロスを５℃未満に冷却した。均質化したブロスをニュージャージー州ノースベール（Ｎｏｒｔｈｖａｌｅ、ＮＪ）のウエストファリア・セパレーター社（Ｗｅｓｔｆａｌｉａ  Ｓｅｐａｒａｔｏｒ  Ｉｎｃ．）からのウエストファリア・ウィスパーフュージ（Ｗｅｓｔｆａｌｉａ  ＷｈｉｓｐｅｒＦｕｇｅ）（商標）積層ディスク遠心分離機によって６００ｍＬ／分および１２，０００ＲＣＦで即座に処理し、懸濁細胞残骸および溶解不純物から封入体を分離した。回収したペーストを１５ｇ／Ｌ（乾燥ベース）で水に再懸濁し、ＮａＯＨを使用してｐＨを１０．０に調節した。懸濁液を１２，０００ｐｓｉ（８２，７００ｋＰａ）のＡＰＶ  ２０００ゴーリン（Ｇａｕｌｉｎ）タイプホモジナイザーに単回通過させて、厳密な混合を提供した。均質化したｐＨ１０の懸濁液をウエストファリア・ウィスパーフュージ（Ｗｅｓｔｆａｌｉａ  ＷｈｉｓｐｅｒＦｕｇｅ）（商標）積層ディスク遠心分離機内で６００ｍＬ／分および１２，０００ＲＣＦで即座に処理し、洗浄した封入体を懸濁細胞残骸および溶解不純物から分離した。回収したペーストを１５ｇｍ／Ｌ（乾燥ベース）で純水に再懸濁した。懸濁液を１２，０００ｐｓｉ（８２，７００ｋＰａ）のＡＰＶ  ２０００ゴーリン（Ｇａｕｌｉｎ）タイプホモジナイザーに単回通過させて、厳密な洗浄を提供した。均質化した懸濁液をウエストファリア・ウィスパーフュージ（Ｗｅｓｔｆａｌｉａ  ＷｈｉｓｐｅｒＦｕｇｅ）（商標）積層ディスク遠心分離機内で、６００ｍＬ／分および１２，０００ＲＣＦで即座に処理し、洗浄した封入体を懸濁細胞残骸およびＮａＯＨから分離した。
【０１７５】
回収したペーストを２５ｇ／Ｌ（乾燥ベース）で純水に再懸濁し、ＨＣｌを使用して混合物をｐＨ２．２に調節した。ジチオスレイトール（ＤＴＴ、１０ｍＭ）を添加して、ジスルフィド結合を切断した。酸性化した懸濁液を７０℃で１４時間加熱してＤＰ部位開裂を完了し、生成ペプチドから融合ペプチドを分離した。生成物を５℃に冷却して１２時間保持した。混合物を９０００ＲＣＦで３０分間遠心分離し、上清をデカントした。次に上清を０．２μｍ膜で濾過した。
【０１７６】
濾過生成物を０．１容積％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）添加の１０％アセトニトリル、９０％水でプレコンディショニングした１０μｍのＣ１８媒体を含有する２２×２５０ｍｍ逆相クロマトグラフィーカラムに装入した。０．１容積％ＴＦＡ水溶液中１０％から２５％のアセトニトリルで傾斜する、水およびアセトニトリルの勾配でカラムを溶出して、生成物を精製された状態で回収した。生成ペプチドを含有する溶出液を収集し、凍結乾燥前に真空蒸発によって２：１で濃縮した。２２０ｎｍでの分光光度検出を使用して、生成ペプチドの溶出をモニターし追跡した。
【０１７７】
実施例６
複数コピー髪結合ペプチドをシーラントとして使用した髪の染色
この実施例の目的は、シーラントとしての複数コピー髪結合ペプチドと組み合わさったヘアダイを使用した髪の染色を実証することであった。この実施例で使用した複数コピー髪結合ペプチドは、実施例５で述べられるようにして調製した。
【０１７８】
染髪
配列番号１６、（２８ｍｇ）で示されるこの複数コピー髪結合ペプチドをウィスコンシン州ミルウォーキーのアルドリッチ（Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ））からの１０ｇの塩基性バイオレット＃２（ＣＡＳ  ３２４８−９１−７）の０．５重量％原液の水溶液に添加して、溶液を一晩撹拌した。ニューヨーク州ベルロース（Ｂｅｌｌｅｒｏｓｅ、ＮＹ）のインターナショナル・ヘア・インポーツ・アンド・プロダクツ社（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈａｉｒ  Ｉｍｐｏｒｔｅｒｓ  ＆  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｉｎｃ．）からの天然白髪見本を１３ｍｍ×１００ｍｍ試験管内に挿入し、８ｍＬのペプチド／染料混合物を試験管に注入した。磁気撹拌機を使用して髪見本を撹拌して着色剤溶液と３０分間接触させ、次に取り出して３０分間風乾させた。
【０１７９】
次に大量の脱イオン水を使用して髪見本を水すすぎし、数日間にわたる８回のシャンプートリートメントがそれに続いた。シャンプートリートメントは、市販のシャンプーであるオハイオ州シンシナチ（Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ、ＯＨ）のプロクター＆ギャンブル（Ｐｒｏｃｔｏｒ  ＆  Ｇａｍｂｌｅ）からのパンテーンプロ−Ｖシアボリューム（Ｐａｎｔｅｎｅ  Ｐｒｏ−Ｖ  Ｓｈｅｅｒ  Ｖｏｌｕｍｅ）を次のように髪に塗布することを伴った。２５セント硬貨大のシャンプー液を髪見本に均等に分布させて次に髪に３０秒間激しくすり込み、その後髪見本を水ですすいでシャンプーを除去した。次に髪見本を室温で乾燥させた。
【０１８０】
対照とするために、髪結合ペプチドシーラントの添加なしに上述の手順を繰り返した。実施例１で述べられる尺度を使用して、対照と比較した色保持の目視観察を使用し、色耐久性を定性的に格付けした。
【０１８１】
シャンプートリートメント後、染料および複数コピー髪結合ペプチドシーラントで処理された髪見本の色は「非常に良好」と評価され、色損失は最小であったことが示された。
【０１８２】
実施例７〜１２
シーラントとして髪結合ペプチドを使用した髪の染色
これらの実施例の目的は、シーラントとしての様々な髪結合ペプチドと組み合わさったヘアダイを使用した髪の染色を実証することであった。色保持は、分光分析測定技術を使用して定量化した。
【０１８３】
ペンシルベニア州フィラデルフィア（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ）のアビー・カラー（Ａｂｂｅｙ  Ｃｏｌｏｒ）から得られたレッド染料Ｎｏ．３３（ＣＡＳＮｏ．３５６７−６６−６）を０．０７重量％の濃度で使用して、実施例１で述べられるようにして染髪を実施した。表８に列挙するように様々な髪結合ペプチドを使用した。髪を染めた後、実施例１で述べられるようにそれを脱イオンで１回すすぎ、次にシャンプートリートメントを１回施した。
【０１８４】
ミシガン州グランドビル（Ｇｒａｎｄｖｉｌｌｅ、ＭＩ）のＸライト社（Ｘ−Ｒｉｔｅ、Ｉｎｃ．）からのＸライト（Ｘ−Ｒｉｔｅ）（登録商標）ＳＰ７８（商標）球形分光光度計を使用して、着色髪サンプルを光センサー内に入れてシャンプー後の色強度を測定し、光度計応答を表すＬ＊、ａ＊、およびｂ＊パラメーターを計算した。未着色髪について初期ベースラインＬ＊値が測定され、全ての測定値は、３回の個々の測定のを平均であった。ΔＥ値は、式１を使用して計算された。
ΔＥ＝（（Ｌ＊１-Ｌ＊２）２＋（ａ１−ａ２）２＋（ｂ１−ｂ２）２）１／２  （１）
式中、
Ｌ＊＝明度変数、ａ＊およびｂ＊は国際照明委員会（ＣＩＥ）によって定義されるＣＩＥＬＡＢ色空間の色度座標である（「正確な色のコミュニケーション−感覚から計測手段への色コントロール（Ｐｒｅｃｉｓｅ  Ｃｏｌｏｒ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ−Ｃｏｌｏｒ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｆｒｏｍ  Ｆｅｅｌｉｎｇ  ｔｏ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ）」、ミノルタ・カメラ社（Ｍｉｎｏｌｔａ  Ｃａｍｅｒａ  Ｃｏ．）、１９９６年）。より大きなΔＥ値はより良い色保持の徴候である。結果を表８に要約する。
【０１８５】
【表１１】
2009512639.tif 000012
【０１８６】
表８の結果から分かるように、染料のためのシーラントとしての髪結合ペプチドの使用は、ΔＥ値によって測定されるように、染料単独（実施例１２）の使用、またはシーラントとしてのランダムペプチドの使用（実施例１１）よりも顕著により良い髪色保持を提供した。
【０１８７】
実施例１３
異なる髪結合ペプチド混合物をシーラントとして使用した髪の染色
この実施例の目的は、シーラントとしての２つの異なる髪結合ペプチド混合物と組み合わさったヘアダイを使用した、髪の染色を実証することであった。単一コピー髪結合ペプチドおよび複数コピー髪結合ペプチドの混合物を使用した。
【０１８８】
この実施例で使用した髪結合ペプチドは、シンペップ（ＳｙｎＰｅｐ）から得られたＣ末端に付加されたシステイン残基を有する配列番号５２で示されるＩＢ５、および実施例５で述べられるようにして調製された配列番号１６で示される複数コピー髪結合ペプチドＨＣ７７６０７であった。ペプチドのそれぞれを０．１２５重量％の濃度で使用した。塩基性バイオレット＃２濃度０．５０重量％で、実施例４で述べられる手順を使用した。
【０１８９】
８回のシャンプー洗浄からなるシャンプートリートメント後に、染料および髪結合ペプチド混合物で処理された髪見本の色は「非常に良好」と評価され、シャンプートリートメント後に着色剤損失が最小であったことが示された。髪結合ペプチドなしの対照は、シャンプートリートメント後に顕著な色損失を示した。これらの結果は、異なる髪結合ペプチド混合物を使用して、髪色保持を改善してもよいことを示唆する。
【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成20年8月26日(2008.8.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2009512639000001.app
【国際調査報告】
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