(57)【要約】  本発明は、式ＩＡ【化１】2009520768.tif 000014〔式中、基および記号は本明細書に定義の意味を有する〕のヘテロアリールアリールウレア、プロテインキナーゼ依存疾患の処置における当該化合物の使用；当該ヘテロアリールアリールウレアを含む医薬組成物、当該新規化合物の製造法および当該ヘテロアリールアリールウレアの使用を含む処置法に関する。
2009520768.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式ＩＡ
【化１】
2009520768.tif 000011
〔式中、
Ｘ、ＹおよびＺの２個はＮ（窒素）であり、３個目はＣＨまたはＮであり（好ましくはＹおよびＺがＮであり、そしてＺがＣＨである）；そして
式中、
Ｒ１はヒドロキシ、フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルオキシ、ピペラジン−１−イルもしくは４−（フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イルで置換されているフェニル；または（ｉ）ハロもしくはＣ１−Ｃ７−アルコキシおよびさらに、（ｉｉ）ヒドロキシ、フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルオキシ、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ピロリジノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、１−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペリジン−４−イル、モルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、チオモルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、ピペラジン−１−イル、４−（フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル、４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−カルボニルで置換されているフェニルであり；
Ｒ２は水素、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシまたはハロであり；
Ｒ３は水素、Ｃ１−Ｃ７−アルキルまたはフェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、
Ｒ４は互いに独立して、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ハロまたはＣ１−Ｃ７−アルコキシであり、
そしてｎは０、１、２、３、４または５であるか；
または、
Ｒ１はヒドロキシ、フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルオキシ、ピペラジン−１−イル、４−（フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル；Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ピロリジノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、１−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペリジン−４−イル、モルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、チオモルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−カルボニルで置換されているフェニル；またはこの段落に記載の１個の置換基、およびさらにハロおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシから選択される置換基を担持しているフェニルであり；
Ｒ２は水素、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシまたはハロであり；
Ｒ３は水素、Ｃ１−Ｃ７−アルキルまたはフェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、
Ｒ５は水素（好ましい）、Ｃ１−Ｃ７−アルキルまたはフェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、そして
ｎは３、４または５であり、そしてＲ４はＣ１−Ｃ７−アルキル、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシおよびハロから選択されるが、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシおよびハロが各々少なくとも１個存在しているか、または
ｎは２であり、そしてＲ４の一方はハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、他方のＲ４はＣ１−Ｃ７−アルコキシであるか；または
ｎは３、４または５であり、そしてＲ４はハロ、ヨードおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシから選択されるが、ハロ、ヨードおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシが各々少なくとも１個存在しているか；または
ｎは３、４または５であり、そしてＲ４はハロ、ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキルおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシから選択されるが、ハロ、ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキルおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシが各々少なくとも１個存在しているか；
または、
ＹおよびＺはＮ（窒素）であり、そしてＸはＣＨであり、
式中、
Ｒ１はＮ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル−ピペラジン−１−イルで１置換されている３−ピリジルであり
Ｒ２は水素であり、
Ｒ３は水素であり、
Ｒ４は互いに独立して、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ハロまたはＣ１−Ｃ７−アルコキシであり、
Ｒ５は水素であり、そして
ｎは１、２、３、４または５である〕；
の化合物、あるいは、
Ｒ１が４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３が水素であり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物；
または
Ｒ１が３−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物、
または
Ｒ１が３−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物、
または、
Ｒ１が４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物、
または、
Ｒ１が４−（１−エチル−ピペリジン−４−イル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物、
または、
Ｒ１が４−（４−エチル−ピペラジン（pipeazin）−１−イル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がエチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物、
または、
Ｒ１が４−（４−エチル−ピペラジン−１−カルボニル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物、
または２種以上の式ＩＡの化合物の混合物、
またはその塩、プロドラッグ、Ｎ−オキシドまたはエステル。
【請求項２】
Ｘ、ＹおよびＺの２個がＮであり（窒素）、３個目がＣＨまたはＮであり（好ましくはＹおよびＺがＮであり、そしてＺがＣＨである）；そして
式中、
Ｒ１がヒドロキシ、フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルオキシ、ピペラジン−１−イルもしくは４−（フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イルで置換されているフェニル；または（ｉ）ハロもしくはＣ１−Ｃ７−アルコキシ、およびさらに（ｉｉ）ヒドロキシ、フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルオキシ、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ピロリジノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、１−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペリジン−４−イル、モルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、チオモルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、ピペラジン−１−イル、４−（フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル、４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−カルボニルで置換されているフェニルであり；
Ｒ２が水素、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシまたはハロであり；
Ｒ３が水素、Ｃ１−Ｃ７−アルキルまたはフェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、
Ｒ４が互いに独立して、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ハロまたはＣ１−Ｃ７−アルコキシであり、
Ｒ５が水素（好ましい）、Ｃ１−Ｃ７−アルキルまたはフェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、そして
ｎが０、１、２、３、４または５であるか；
または
Ｒ１がヒドロキシ、フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルオキシ、ピペラジン−１−イル、４−（フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル；Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ピロリジノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、１−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペリジン−４−イル、モルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、チオモルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−カルボニルで置換されているフェニル；またはこの段落に記載の１個の置換基、およびさらにハロおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシから選択される置換基を担持しているフェニルであり；
Ｒ２が水素、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシまたはハロであり；
Ｒ３が水素、Ｃ１−Ｃ７−アルキルまたはフェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、
Ｒ５が水素（好ましい）、Ｃ１−Ｃ７−アルキルまたはフェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、そして
ｎが３、４または５であり、そしてＲ４がＣ１−Ｃ７−アルキル、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシおよびハロから選択されるが、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシおよびハロが各々少なくとも１個存在しているか；または
ｎが２であり、そしてＲ４の一方がハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、他方のＲ４がＣ１−Ｃ７−アルコキシであるか；または
ｎが３、４または５であり、そしてＲ４がハロ、ヨードおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシから選択されるが、ハロ、ヨードおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシが各々少なくとも１個存在しているか；または
ｎが３、４または５であり、そしてＲ４がハロ、ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキルおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシから選択されるが、ハロ、ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキルおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシが各々少なくとも１個存在している、
請求項１の式ＩＡの化合物、あるいは、
Ｒ１が４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３が水素であり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物；または
Ｒ１が３−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物；または
Ｒ１が３−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物；または
Ｒ１が４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物；または
Ｒ１が４−（１−エチル−ピペリジン−４−イル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物；または
Ｒ１が４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がエチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物；または
Ｒ１が４−（４−エチル−ピペラジン−１−カルボニル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物；
または２種以上の式ＩＡの化合物の混合物、
またはその塩、プロドラッグ、Ｎ−オキシドまたはエステル。
【請求項３】
下記化合物群から選択される、請求項１の式ＩＡの化合物：
１−［６−（４−ベンジルオキシ−フェニルアミノ）−ピリミジン−４−イル］−３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−ウレア、
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−［６−（４−ヒドロキシ−フェニルアミノ）−ピリミジン−４−イル］−１−メチル−ウレア、
１−｛６−［４−（４−ベンジル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−ウレア、
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−１−［６−（４−ピペラジン−１−イル−フェニルアミノ）−ピリミジン−４−イル］−ウレア、
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［２−フルオロ−４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア、
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−２−メトキシ−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア、
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−３−フルオロ−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア、
３−（５−メトキシ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−｛６−［３−クロロ−４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア、
１−｛６−［２−クロロ−４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−ウレアおよび
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−２−フルオロ−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア；
またはその塩、プロドラッグ、Ｎ−オキシドまたはエステル。
【請求項４】
下記化合物群から選択される、請求項１の式ＩＡの化合物：
１−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−３−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−ウレア、
３−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア、
３−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−｛６−［４−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア、
３−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−メチル−（６−｛４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−エトキシ］−フェニルアミノ｝−ピリミジン−４−イル）−ウレア、
３−（２−クロロ−６−ヨード−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ｝−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア、
３−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−｛６−［４−（４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア、
３−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−［６−（３−ジメチルアミノメチル−フェニルアミノ）−ピリミジン−４−イル］−１−メチル−ウレア、
３−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−｛６−［３−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア、
３−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−メチル−１−｛６−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア、
３−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−メチル−１−｛６−［３−フルオロ−４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア、
３−（２，４−ジクロロ−５−メトキシ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレアおよび
３−（５−メトキシ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア；
またはその塩、プロドラッグ、Ｎ−オキシドまたはエステル。
【請求項５】
下記化合物群から選択される、請求項１の式ＩＡの化合物：
１−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−３−｛６−［４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−ウレア、
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−１−｛６−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−ウレア、
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［３−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア、
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−１−｛６−［４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−ウレア、
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（１−エチル−ピペリジン−４−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア、
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−エチル−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−ウレア；および
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−カルボニル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア；
またはその塩、プロドラッグ、Ｎ−オキシドまたはエステル。
【請求項６】
下記化合物群から選択される、請求項１の式ＩＡの化合物：
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［６−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−３−イルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア；および
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［６−（４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−３−イルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア、
またはその塩、プロドラッグ、Ｎ−オキシドまたはエステル。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載の式ＩＡの化合物またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、Ｎ−オキシドもしくはエステル、および少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項８】
動物またはヒトの処置、とりわけＦＧＦＲの阻害に応答する疾患の処置に使用するための、請求項１〜６のいずれかに記載の式ＩＡの化合物またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、Ｎ−オキシドもしくはエステル。
【請求項９】
タンパク質キナーゼ、とりわけＦＧＦＲ依存性疾患の処置用医薬組成物の製造のための、請求項１に記載の式ＩＡの化合物、またはその薬学的に許容される塩、プロドラッグ、Ｎ−オキシドまたはエステルの使用。
【請求項１０】
請求項１〜６のいずれかに記載の式ＩＡの化合物の製造法であって、
式ＩＩＡ
【化２】
2009520768.tif 000012
〔式中、Ｒ４およびｎは式ＩＡの化合物で定義のとおりである〕
のアニリン化合物を、
式ＩＩＩＡ
【化３】
2009520768.tif 000013
〔式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ、ＹおよびＺは式ＩＡの化合物で定義のとおりである〕
のアミンと、ビス反応性炭酸誘導体の存在下で反応させる工程；
および所望により、式ＩＡの化合物を異なる式ＩＡの化合物に変換する工程、得られる式ＩＡの化合物の塩を遊離化合物または異なる塩に変換する工程、得られる式ＩＡの遊離化合物をその塩に変換する工程、および／または得られる式Ｉの化合物のアイソマーの混合物を個々のアイソマーに分離する工程
を含む、方法。
【請求項１１】
チロシンキナーゼ（とりわけＦＧＦＲ）依存性疾患の処置法であって、かかる処置を必要とする対象に、当該処置に有効量の式ＩＡの化合物、そのプロドラッグのＮ−オキシド、塩、エステルを投与することを含んでなる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の要約：
本発明は、新規化合物、製剤、方法および使用に関する。より具体的には、新規ヘテロアリールアリールウレア、および／またはタンパク質キナーゼ依存性疾患の処置における、またはそれに有用な医薬製剤の製造における、ヘテロアリールアリールウレアとして記載され得る化合物の使用またはその使用を含む方法に関する。本発明はさらに、前記疾患の処置における当該化合物の使用法、ヘテロアリールアリールウレアを含む医薬組成物、および当該新規ヘテロアリールアリールウレアの製造法に関する。本発明は下記他の対象物に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景：
タンパク質キナーゼ（ＰＫ）は、細胞タンパク質中の特定のセリン、スレオニンまたはチロシンのリン酸化を触媒する酵素である。これらの基質タンパク質の翻訳後修飾は、細胞増殖、活性化および／または分化を制御する分子スイッチとして作用する。異常または過剰ＰＫ活性は、良性および悪性増殖性障害を含む多くの疾患状態で観察される。多くの場合、増殖性障害のような疾患をインビトロで、そして多くの場合インビボで、ＰＫ阻害剤を使用することによって、処置することが可能である。
【０００３】
キナーゼは大きく２つのグループ、セリンおよびスレオニンのリン酸化に特異的なものと、チロシンのリン酸化に特異的なものとに分けられる。さらにいくつかのキナーゼは、チロシンならびにセリン／スレオニン残基をリン酸化することができ、「二重特異性」キナーゼと呼ばれる。
【０００４】
タンパク質キナーゼはまた、細胞内でのそれらの位置によって特徴付けることができる。いくつかのキナーゼは細胞膜の外のリガンドと結合することができる膜貫通受容体タンパク質である。リガンドとの結合によって受容体タンパク質キナーゼの触媒活性が変化する。他のものは膜貫通ドメインを欠いた非受容体タンパク質であり、さらに他のものは、膜貫通タンパク質の細胞外（ecto）部分に触媒活性を有するか、または溶解性細胞外タンパク質として分泌される、ｅｃｔｏ−キナーゼである。
【０００５】
多くのキナーゼは、それらの基質が他のキナーゼ（その活性がそれらのリン酸化状態によって制御される）を含んでいてもよい制御カスケードに含まれる。したがって、下流エフェクターの活性を、経路の活性化からもたらされるリン酸化によって調節する。
【０００６】
受容体タンパク質チロシンキナーゼ（ＲＰＴＫ）は、内因性、リガンド刺激性チロシンキナーゼ活性に寄与する膜貫通受容体のサブクラスである。ＲＰＴＫ活性は厳密に制御されている。構造的に突然変異または変化しているとき、ＲＰＴＫは、細胞性形質転換または少なくとも脱制御を引き起こす発がんタンパク質となり得る。原理上、がんに関与する全てのＲＰＴＫについて、発がん性脱制御が、触媒ドメインの通常の抑制を保証する自己制御メカニズムの１種以上の緩和または動揺によってもたらされる。既知のＲＰＴＫの半分以上が、ヒト悪性腫瘍と関連する突然変異または過剰発現形態においてくり返し発見されている（散発的な症例を含む；Blume-Jensen et al., Nature 411: 355-365（2001)）。
【０００７】
ＲＰＴＫ過剰発現は、二量体の濃度を上昇させることによって、構造的なキナーゼ活性を導く。しばしば乳がんおよび肺癌腫において増幅されるＮｅｕ／ＥｒｂＢ２および上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ならびに骨格および増殖性障害に関連する繊維芽増殖因子（ＦＧＦＲ）が例である（Blume-Jensen et al., 2001）。
【０００８】
血管新生は、新しい毛細血管が既存の血管から形成されるメカニズムである。所望により、血管系は、組織および臓器の適切な機能を維持するための新しい毛細血管のネットワークを形成する能力を有している。成人においては、しかし、血管新生は相当に限定され、創傷治癒プロセスおよび月経中の子宮内膜の新血管形成においてのみ起こる。Merenmies et al., Cell Growth ＆ Differentiation, 8, 3-10（1997)参照。他方、望ましくない血管新生は様々な疾患、例えば網膜症、乾癬、リウマチ性関節炎、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、がん（固形腫瘍）のホールマークである。Folkman, Nature Med., 1, 27-31（1995)。血管形成プロセスに含まれることが見出されているタンパク質キナーゼには、増殖性因子受容体チロシンキナーゼファミリーの３つのメンバー：ＶＥＧＦ−Ｒ２（血管内皮増殖性因子受容体２、ＫＤＲ（キナーゼ挿入ドメイン受容体）およびＦＬＫ−１とも知られている）；ＦＧＦ−Ｒ（繊維芽増殖因子受容体）；およびＴＥＫ（Ｔｉｅ−２とも知られている）が含まれる。
【０００９】
ＴＥＫ（Ｔｉｅ−２とも知られている）は、血管新生に関与することが見出されている内皮細胞においてのみ発現されている受容体チロシンキナーゼである。因子アンギオポイエチン−１の結合によって、ＴＥＫのキナーゼドメインの自己リン酸化が起こり、そして新しく形成される血管の突然変異を促進する内皮細胞と周囲−内皮支持細胞の相互作用を媒介すると考えられているシグナル変換プロセスが起こる。他方、因子アンギオポイエチン−２は、アンギオポイエチン−１のＴＥＫに対する活性に拮抗すると考えられており、血管新生を妨害する。Maisonpierre et al., Science, 277, 55-60（1997)。
【００１０】
Ａｄ−ＥｘＴｅｋ、Ｔｉｅ−２の溶解性アデノウイルス発現細胞外ドメインの投与によって、臨床的に関連のある腫瘍転移のマウスモデルにおいて原発性腫瘍の外科的切除の時点で送達したとき、腫瘍転移が阻害された（Lin et al., Proc Natl Acad Sci USA 95, 8829-8834（1998)）。ＥｘＴｅｋによるＴｉｅ−２の阻害は、アンギオポイエチンリガンドの隔離および／または天然Ｔｉｅ−２受容体とのヘテロ二量体形成の結果であり得る。この研究は、Ｔｉｅ−２シグナル伝達経路の阻害が、第１に健康な生物には十分耐用性であり得て、そして第２に、治療的価値を提供し得ることを証明している。
【００１１】
フィラデルフィア染色体は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）のホールマークであり、ｂｃｒ遺伝子のＮ−末端エキソンと、ｃ−ａｂｌ遺伝子の主要Ｃ−末端部分（エキソン２−１１）を含むハイブリッド遺伝子を担持する。遺伝子産物は２１０ｋＤのタンパク質（ｐ２１０  Ｂｃｒ−Ａｂｌ）である。Ｂｃｒ−Ａｂｌタンパク質のＡｂｌ部分は、野生型ｃ−ａｂｌでは厳密に制御されているがＢｃｒ−Ａｂｌ融合タンパク質では構造的に活性化されているａｂｌ−チロシンキナーゼを含む。この脱制御化チロシンキナーゼは細胞の変形および脱制御的増殖を導く複数の細胞シグナル伝達経路と相互作用する（Lugo et al., Science 247, 1079 [1990]）。
【００１２】
Ｂｃｒ−Ａｂｌタンパク質の突然変異形はまた、同定されている。Ｂｃｒ−Ａｂｌ突然変異形の詳細な説明は公表されている（Cowan-Jones et al, Mini Reviews in Medicinal Chemistry, 2004, 4 285-299）。
【００１３】
ＥｐｈＢ４（ＨＴＫとも呼ばれる）およびそのリガンドエフリンＢ２（ＨＴＫＬ）は、血管ネットワークの確立および決定に重要な役割を果たしている。静脈上皮上で、ＥｐｈＢ４は特異的に発現されるが、血管形成の初期段階には、エフリンＢ２は特異的および相互に、動脈内皮細胞で発現される。機能不全遺伝子はマウスの胚致死を導き、そして胚は、エフリンＢ２およびＥｐｈＢ４のいずれかの場合、毛細血管コネクション形成に同様の欠損を示す。いずれも、胚形成の間、造血および血管形成の第１部位で発現される。適切な造血、内皮、血管芽および原始中葉胚形成のための重要な役割は確立された。ＥｐｈＢ４欠損は、胚幹細胞の中葉胚分化の結果に変化をもたらす。哺乳類組織のＥｐｈＢ４の異所性発現は、障害のあるアーキテクチャ、異常な組織機能および悪性腫瘍の素因をもたらす（例えば、N. Munarini et al., J. Cell. Sci. 115, 25-37（2002)参照）。これらおよび他のデータから、不適当なＥｐｈＢ４の発現は悪性腫瘍の形成に関与しており、したがってＥｐｈＢ４の阻害が悪性腫瘍、例えばがん等に対抗するためのツールであると予期され得ると結論されている。
【００１４】
ｃ−Ｓｒｃ（ｐ６０  ｃ−Ｓｒｃとも知られている）は、細胞質非受容体チロシンキナーゼである。ｃ−Ｓｒｃは、多くのポリペプチド増殖因子、例えば上皮増殖因子（ＥＧＦ）および血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）からマイトジェンシグナルへの変換に関与する。ｃ−Ｓｒｃは乳がん、膵臓がん、神経芽腫等において過剰発現される。突然変異性ｃ−Ｓｒｃは、ヒト結腸がんにおいて同定された。ｃ−Ｓｒｃは、細胞外マトリックスと細胞質アクチン細胞骨格のクロストークの制御に関与する多くのタンパク質をリン酸化する。ｃＳｒｃ活性の調節は、細胞増殖、分化および死に関連する疾患に関係し得る。Bjorge, J. D., et. al.（2000) Oncogene 19(49):5620-5635; Halpern, M. S., et. al.（1996) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 93(2), 824-7; Belsches, A. P., et. al.（1997) Frontiers in Bioscience [Electronic Publication] 2:D501-D518; Zhan, X., et. al（2001) Chemical Reviews 101:2477-2496; Haskell, M. D., et. al.（2001) Chemical Reviews 101:2425-2440参照。
【００１５】
現在、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）受容体チロシンキナーゼは、骨髄性およびいくつかのリンパ性白血病の病因における最も重要なメディエーターであると考えられている。ＦＬＴ３リガンドによる白血病細胞のＦＬＴ３の活性化によって、受容体の二量体化と、細胞増殖を促進し、アポトーシスを阻害する経路におけるシグナル変換を導く（Blood, Vol. 98, No. 3, pp.885-887（2001)）。
【００１６】
ＡＭＬ治療のためのチロシンキナーゼ阻害剤の使用は、キナーゼ触媒ドメインにおける突然変異の獲得によって妨害され、そしてＢＣＲ−ＡＢＬの場合、これらの突然変異はイマチニブに対する抵抗性を与える。
【００１７】
ＦＬＴ３はＡＭＬおよびいくつかの場合急性リンパ性白血病において広く発現される。ＦＬＴ３における突然変異の活性化は、ＡＭＬを有する患者における高い危険性を与える。したがって、ＦＬＴ３は治療行為において有望な標的である。
【００１８】
血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）チロシンキナーゼは、多くの腫瘍、例えば小細胞性肺がん、前立腺がんおよびグリア芽腫において、ならびに多くの腫瘍の間質および血管区画において発現される。ＰＤＧＦおよびＰＤＧＦ受容体（ＰＤＧＦＲ）両方の発現が、膵臓がんにおいて観察された（Ebert M et al., Int J Cancer, 62:529-535（1995)）。
【００１９】
Ｒａｆセリン／スレオニンキナーゼは、細胞外の刺激に応答して複雑な転写プログラムを制御するＲａｓ／マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル伝達モジュールの本質的な構成要素である。Ｒａｆ遺伝子は、ｒａｓ発がん遺伝子と結合することが知られている高度に保存されているセリン−スレオニン特異的タンパク質キナーゼをコードする。それらは受容体チロシンキナーゼ、ｐ２１  ｒａｓ、Ｒａｆタンパク質キナーゼ、Ｍｅｋ１（ＥＲＫアクチベーターまたはＭＡＰＫＫ）キナーゼおよびＥＲＫ（ＭＡＰＫ）キナーゼからなると考えられており、最終的に転写因子をリン酸化するシグナル変換経路の一部である。この経路において、ＲａｆキナーゼはＲａｓによって活性化され、そして二重特異性スレオニン／チロシンキナーゼである、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼの２個のアイソフォーム（Ｍｅｋ１およびＭｅｋ２と呼ばれる）をリン酸化および活性化する。Ｍｅｋアイソフォームはいずれも、マイトジェン活性化キナーゼ１および２（ＭＡＰＫ、細胞外リガンド制御キナーゼ１および２、またはＥｒｋ１およびＥｒｋ２とも呼ばれる）を活性化する。ＭＡＰＫは、転写因子を含む多くの基質をリン酸化し、そうすることによってそれらの転写プログラムをセットアップする。Ｒａｓ／ＭＡＰＫ経路におけるＲａｆキナーゼの関与によって、多くの細胞機能、例えば増殖、分化、生存、発がん性形質転換およびアポトーシスに影響し、それらを制御する。
【００２０】
Ｒａｆの多くのシグナル伝達経路における本質的な役割および位置は、哺乳類細胞における脱制御および優性阻害的Ｒａｆ突然変異を用いた試験から、そして生化学および遺伝子技術モデル生物を用いた試験から示された。多くの場合、細胞チロシンリン酸化を刺激する受容体によるＲａｆの活性化は、Ｒａｓの活性に依存しており、このことはＲａｓがＲａｆの上流で機能していることを示している。活性化によって、Ｒａｆ−１は次に、Ｍｅｋ１をリン酸化および活性化し、これはシグナルの下流エフェクター、例えばＭＡＰＫ（マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ）への伝播をもたらす（Crews et al.（1993) Cell 74:215）。Ｒａｆセリン／スレオニンキナーゼは、動物細胞の増殖に関与する１次的Ｒａｓエフェクターであると考えられる（Avruch et al.（1994) Trends Biochem. Sci. 19:279）。
【００２１】
Ｒａｆキナーゼは、３個の異なるアイソフォーム、Ｒａｆ−１（ｃ−Ｒａｆ）、Ａ−Ｒａｆ、およびＢ−Ｒａｆを有しており、これらはＲａｓと相互作用する能力、ＭＡＰＫキナーゼ経路の活性化能、組織分布およびサブ−細胞局在によって区別される（Marias et al., Biochem. J. 351: 289-305, 2000; Weber et. al., Oncogene 19:169-176, 2000; Pritchard et al., Mol. Cell. Biol. 15:6430-6442, 1995）。
【００２２】
近年の研究によって、皮膚母斑におけるＢ−Ｒａｆ突然変異が色素細胞性新生物形成の開始の重要なステップであると見出された（Pollock et. al., Nature Genetics 25: 1-2, 2002）。さらに、最も最近の研究では、Ｂ−Ｒａｆのキナーゼドメインにおける変異の活性化が、黒色腫の約６６％、結腸癌腫の１２％、および肝臓がんの１４％で発生していることが明らかになった（Davies et. al., Nature 417:949-954, 2002）（Yuen et. al., Cancer Research 62:6451-6455, 2002）（Brose et. al., Cancer Research 62:6997-7000, 2002）。
【００２３】
Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路のＲａｆキナーゼレベルでの阻害剤は、受容体チロシンキナーゼの過剰発現または変異、細胞内チロシンキナーゼの活性化を有する腫瘍、異常発現Ｇｒｂ２（Ｓｏｓ交換因子によってＲａｓの刺激を可能とするアダプタータンパク質）を有する腫瘍、ならびにＲａｆそれ自体の変異の活性化を含む腫瘍に対する治療薬剤として潜在的に有効であり得る。従前の臨床試験において、Ｂ−Ｒａｆも阻害するＲａｆ−１キナーゼの阻害剤は、がん治療における治療薬剤としての期待が示された（Crump, Current Pharmaceutical Design 8: 2243-2248, 2002; Sebastien et. al., Current Pharmaceutical Design 8: 2249-2253, 2002）。
【００２４】
ＲＮＡアンチセンス技術の使用による細胞系におけるＲａｆ発現の阻害は、ＲａｓおよびＲａｆ介在腫瘍原性の両方を抑制することが見出された（Kolch et al., Nature 349:416-428, 1991; Monia et al., Nature Medicine 2(6):668-675, 1996）。
【００２５】
繊維芽増殖因子
正常な増殖、ならびに組織修復およびリモデリングには、増殖因子およびそれらの受容体の活性化の特異的かつ繊細な制御が必要である。繊維芽増殖因子（ＦＧＦ）は、発展的に制御され、そして広い種類の組織で発現されている２０個の構造的に関連したポリペプチドのファミリーを構成する。ＦＧＦは増殖、細胞遊走および分化を刺激し、そして骨格および肢発達、創傷治癒、組織修復、造血、血管新生、および腫瘍原性に主要な役割を果たす（Ornitz, Novartis Found Svmp 232: 63-76; discussion 76-80, 272-82（2001)参照）。
【００２６】
ＦＧＦの生物学的活性は、タンパク質キナーゼのＲＰＴＫファミリーに属する特異的細胞表面受容体によって媒介される。これらのタンパク質は、細胞外リガンド結合ドメイン、１個の膜貫通ドメインおよび細胞内チロシンキナーゼドメインからなり、ＦＧＦの結合によってリン酸化を受ける。４種のＦＧＦＲは、最近同定された：ＦＧＦＲ１（Ｆｌｇ、ｆｍｓ様遺伝子、ｆｌｔ−２、ｂＦＧＦＲ，Ｎ−ｂＦＧＦＲまたはＣｅｋ１とも呼ばれる）、ＦＧＦＲ２（Ｂｅｋ−細菌性発現キナーゼ−、ＫＧＦＲ、Ｋｓａｍ，ＫｓａｍｌおよびＣｅｋ３とも呼ばれる）、ＦＧＦＲ３（Ｃｅｋ２とも呼ばれる）およびＦＧＦＲ４。全ての成熟ＦＧＦＲは、Ｉｇドメイン（「酸性ボックス」ドメイン）、膜貫通ドメインおよび細胞内キナーゼドメイン間に酸性領域を有する、アミノ末端シグナルペプチド、３個の細胞外免疫グロブリン様ドメイン（ＩｇドメインＩ、ＩｇドメインＩＩ、ＩｇドメインＩＩＩ）からなる共通構造を共有する（Ullrich andSchlessinger, Cell 61: 203,1990 ; Johnson and Williams（1992) Adv. Cancer Res. 60: 1-41）。異なるＦＧＦＲアイソフォームは異なるＦＧＦリガンドに対する異なる結合親和性を有しており、したがってＦＧＦ８（アンドロゲン誘導性増殖因子）およびＦＧＦ９（グリア活性化因子）がＦＧＦＲ３に対して増加した選択性を有すると思われる（Chellaiah et al. J Biol. Chem 1994 ; 269: 11620）。
【００２７】
表面結合部位の他の主要なクラスには、ＦＧＦファミリーの全てのメンバーの高親和性相互作用および活性化が必要な、ヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）が含まれる。ヘパラン硫酸構造変異体の組織特異的発現は、ＦＧＦのリガンド−受容体特異性および活性を与える。
【００２８】
ＦＧＦＲ関連疾患
近年、軟骨形成不全、最も一般的な形態のヒト小人症を含む、骨格異常の数の増加は、ＦＧＦＲの突然変異によってもたらされることが発見されている。
【００２９】
ＦＧＦ−Ｒ１、ＦＧＦ−Ｒ２およびＦＧＦＲ３の異なるドメインにおける特定の点変異は、頭蓋骨癒合症候群および小人症候群として分類される常染色体優性ヒト骨格形成異常に関連する（Coumoul and Deng, Birth Defects Research 69: 286-304（2003)）。ＦＧＦ−Ｒ３変異関連骨格形成異常には、軟骨低形成症、発育遅延および黒色表皮症を有する重症軟骨形成不全（ＳＡＤＤＡＮ）、ならびに致死性異形成（ＴＤ）が含まれる（； Webster et al., Trends Genetics 13（5): 178-182（1997); Tavormina et al., Am. J. Hum. Genet., 64: 722-731（1999)）。ＦＧＦＲ３突然変異は、２種の頭蓋骨癒合症表現型においても記載されている：ミュンケ冠状頭蓋骨癒合症（Bellus et al., Nature Genetics, 14: 174-176（1996); Muenke et al., Am. J. Hum.Genet., 60 : 555-564（1997)）および黒色表皮症を有するクルゾン症候群（Meyers et al., Nature Genetics, 11 : 462-464（1995)）。クルゾン症候群は、ＦＧＦＲ２の特異的点突然変異に関係し、パイファー症候群の家族性および散発性の両形態がＦＧＦＲ１およびＦＧＦＲ２の突然変異に関係している（Galvin et al., PNAS USA, 93: 7894-7899（1996); Schell et al., Hum Mol Gen, 4: 323-328（1995)）。ＦＧＦＲの突然変異は、突然変異した受容体の構造的活性化および受容体タンパク質チロシンキナーゼ活性の上昇をもたらし、細胞および組織を分化不能にする。
【００３０】
具体的には、軟骨形成不全突然変異は、突然変異した受容体の安定性の上昇をもたらし、受容体の活性化を下方制御から解離させ、軟骨細胞の成熟を制限し、骨生長を阻害する（Vajo et al., Endocrine Reviews, 21(1) : 23-39（2000)参照）。
【００３１】
様々なタイプのがんにおけるＦＧＦＲ３を活性化する突然変異についての、証拠が蓄積されている。
【００３２】
２種の一般的な上皮がんである膀胱がんおよび頸部がん、ならびに多発性骨髄腫における構造的に活性化されたＦＧＦＲ３は、癌腫におけるＦＧＦＲ３の発がん役の第１の証拠である。さらに、ごく最近の研究では、良性表皮腫瘍の大部分においてＦＧＦＲ３活性化突然変異の存在が報告されている（Logie et al., Hum Mol Genet 2005）。ＦＧＦＲ３は現在、膀胱がんにおいて最も頻繁に変異している発がん遺伝子であり、全膀胱がん症例中約５０％、表在性膀胱腫瘍の約７０％において変異していると思われる（Cappellen, et al., Nature Genetics 1999, 23;19-20; van Rhijn, et al., Cancer Research 2001, 61: 1265-1268; Billerey, et al, Am. J. Pathol. 2001, 158:1955-1959, WO 2004/085676）。また、ＦＧＦＲ３の過剰発現は膀胱がん（表在性および侵襲性）において報告された（Gomez-Roman et al. Clinical Cancer Research 2005）。
【００３３】
染色体転座ｔ（４，１４）の結果としてＦＧＦＲ３の異常な過剰発現は、多発性骨髄腫症例の１０〜２５％で報告されている（Chesi et al., Nature Genetics 1997, 16: 260-264; Richelda et al., Blood 1997, 90 :4061-4070; Sibley et al., BJH 2002, 118: 514-520; Santra et al., Blood 2003, 101: 2374-2476）。ＦＧＦＲ３活性化突然変異は、ｔ（４，１４）を有する多発性骨髄腫の５〜１０％において見られ、腫瘍進行と関連する（Chesi et al., Nature Genetics 1997, 16: 260-264; Chesi et al., Blood, 97（3): 729-736（2001); Intini, et al, BJH 2001, 114: 362-364）。
【００３４】
この文脈において、ＦＧＦＲ３シグナル伝達の結果はしばしば、細胞タイプ特異的であると思われる。軟骨細胞において、ＦＧＦＲ３過活性化は生長阻害をもたらすが（Omitz, 2001参照）、骨髄腫細胞においては、それは腫瘍進行に寄与する（Chesi et al.,2001）。
【００３５】
ＦＧＦＲ３活性の阻害は、Ｔ細胞介在炎症性または自己免疫疾患を処置するための手段、例えばリウマチ性関節炎（ＲＡ）、コラーゲンＩＩ関節炎、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、乾癬、若年発症糖尿病、シェーグレン病、甲状腺疾患、サルコイドーシス、自己免疫性ブドウ膜炎、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎）、セリアック病および重症筋無力症を含むが、これらに限定されないＴ細胞介在炎症性または自己免疫疾患の処置を意味することが見出された。ＷＯ  ２００４／１１０４８７参照。
【００３６】
ＦＧＦＲ３突然変異からもたらされる障害は、ＷＯ  ０３／０２３００４およびＷＯ  ０２／１０２９７２にも記載されている。
【００３７】
ＦＧＦＲ３および他のＦＧＦＲ（とりわけ例えば異常なＦＧＦ２３血清レベルとの関係における）によって促進される疾患のうち、さらに常染色体優性低リン酸血症性くる病（ＡＤＨＲ）、Ｘ染色体連鎖低リン酸血症性くる病（ＸＬＨ）、腫瘍誘導性骨軟化症（ＴＩＯ）、線維性骨異形成異常（ＦＨ）が記載される（X. Yu et al., cytokine ＆ Growth Factor Reviews 16, 221-232（2005), and X. Yu et al., Therapeutic Apheresis and Dialysis 9(4), 308-312（2005)参照）。
【００３８】
ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２およびＦＧＦＲ４の遺伝子増幅および／または過剰発現は、乳がんに関係する（Penault-Llorca et al., Int J Cancer 1995; Theillet et al., Genes Chrom. Cancer 1993; Adnane et al., Oncogene 1991; Jaakola et al., Int J Cancer 1993; Yamada et al., Neuro Res 2002）。ＦＧＦＲ１およびＦＧＦＲ４の過剰発現はまた、膵臓腺がんおよび星状細胞腫に関連する（Kobrin et al., Cancer Research 1993; Yamanaka et al., Cancer Research 1993; Shah et al., Oncogene 2002; Yamaguchi et al., PNAS 1994; Yamada et al., Neuro Res 2002）。前立腺がんはまた、ＦＧＦＲ１過剰発現に関する（Giri et al., Clin Cancer Res 1999）。
【００３９】
ＦＧＦ／ＦＧＦＲはまた、血管新生に関与する。したがって、ＦＧＦＲ系を標的とすることは、原発性腫瘍ならびに転移の処置のための抗血管形成治療として予期されている（例えば、Presta et al., Cytokine ＆ Growth Factors Reviews 16, 159-178（2005)）。
【００４０】
とりわけＦＧＦＲ３（例えばＦＧＦＲ３ｂ）における突然変異はまた、扁平上皮細胞癌腫症例におけるこれら受容体の構造的活性化の原因であると記載された（例えば、Y. Zhang et al, Int. J. Cancer 117, 166-168（2005)参照）。
【００４１】
ＦＧＦＲ、とりわけＦＧＦＲ１の上昇した（とりわけ気管支）発現は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）と関連すると報告された（例えば、A. Kranenburg et al., J. Pathol. 206, 28-38（2005)参照）。
【００４２】
ＦＧＦ−Ｒ１遺伝子座に関与し、そしてＦＧＲ−Ｒ１の活性化形態をもたらす染色体転座は、８ｐ１１骨髄増殖性症候群＝好酸球性骨髄増殖性症候群（ＥＭＳ）の原因であると報告された（D. Macdonald et al., Cross NCP（2002) Acta Haematologica 107: 101-107参照）。
【００４３】
ＦＧＦＲ、とりわけＦＧＦＲ１またはＦＧＦＲ４に拮抗する方法はまた、肥満、糖尿病および／またはそれらに関連する疾患、例えばメタボリック症候群、心臓血管疾患、高血圧、異常コレステロールおよびトリグリセリドレベル、皮膚障害（例えば感染、静脈瘤、黒色表皮症、湿疹、運動不耐性、２型糖尿病、インシュリン抵抗性、高コレステロール血症、胆石症損傷、血栓塞栓症、冠状動脈または血管制限（例えばアテローム性動脈硬化症）、日中の眠気、睡眠時無呼吸、末期腎疾患、胆嚢疾患、痛風、熱障害、免疫応答障害、呼吸機能障害、損傷後感染、不妊、肝臓疾患、腰疼痛、産科および婦人科合併症、膵炎、卒中、手術合併症、緊張性尿失禁および／または消化器障害の処置に有用であると記載されている（例えばＷＯ  ２００５／０３７２３５  Ａ２参照）。
【００４４】
酸性繊維芽増殖因子（とりわけＦＧＦ−１）およびＦＧＦＲ１はまた、網膜芽細胞における異常なシグナル伝達に関与しており、ＦＧＦ−１の結合によって増殖すると記載されている（例えば、S. Siffroi-Fernandez et al., Arch. Ophthalmology 123, 368-376（2005)参照）。
【００４５】
滑膜肉腫の増殖は、繊維芽増殖因子シグナル伝達経路の妨害によって阻害されることが見出された（例えば、T. Ishibe et al., Clin. Cancer Res. 11(7), 2702-2712（2005)参照）。
【００４６】
さらに、甲状腺癌腫の症例におけるＦＧＦＲの関与が示され得る。
【００４７】
上皮増殖因子ファミリーおよび関連疾患
上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）およびＥｒｂＢ−２キナーゼは、それらのファミリーメンバーのＥｒｂＢ−３およびＥｒｂＢ−４と共に多数の哺乳類細胞、例えばヒト細胞、とりわけ上皮細胞、免疫系の細胞および中枢および末梢神経系の細胞のシグナル伝達に重要な役割を果たすタンパク質チロシンキナーゼ受容体である。例えば、様々な細胞タイプにおいて、受容体関連タンパク質チロシンキナーゼのＥＧＦ誘導活性化は、細胞分割およびしたがって細胞数の増殖のための必要条件である。最も重要なことには、ＥＧＦ−Ｒ（ＨＥＲ−１）および／またはＥｒｂＢ−２（ＨＥＲ−２）の過剰発現が多くのヒト腫瘍の多数のフラクションにおいて観察されている。例えばＥＧＦ−Ｒは、非小細胞性肺がん、扁平上皮癌腫（頭部および頸部）、乳がん、胃がん、卵巣がん、結腸がんおよび前立腺がん、ならびに神経膠腫において過剰発現していることが見出された。ＥｒｂＢ−２は、扁平上皮癌腫（頭部および頸部）、乳がん、胃がんおよび卵巣がん、ならびに神経膠腫において過剰発現していることが見出された。
【００４８】
タンパク質キナーゼが関与している上記全ての症例において、異常な活性の調節（とりわけかかるキナーゼの活性の阻害）は、上記疾患において有用であると合理的に期待され得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００４９】
異常な構造的受容体タンパク質チロシンキナーゼ活性、とりわけＦＧＦＲ活性をブロックし、それによって上記突然変異と関係する臨床症状を解決し、そして様々な生物学的機能を調節することができる高度に親和性（affine）でかつ、／または選択的な分子に対する要請が今も存在する。
【００５０】
多数のタンパク質キナーゼ阻害剤ならびに多数の増殖性および他のＰＫ関連疾患を考慮すると、ＰＫ阻害剤として、したがってこれらのタンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）関連疾患の処置に有用である新規クラスの化合物を提供することについて、不変の必要性が存在する。要求されているものは、新規クラスの薬学的に有利なＰＫ阻害化合物である。
【課題を解決するための手段】
【００５１】
発明の一般的な説明：
本発明者らは、以下により詳細に記載している、ヘテロアリールアリールウレアに属すると記載し得る化合物が、多数のタンパク質チロシンキナーゼ、とりわけ本明細書に記載のいずれかのキナーゼ、よりとりわけＦＧＦＲの阻害を示すことを見出した。
【発明の効果】
【００５２】
本明細書に記載の化合物によって阻害されるキナーゼの例は、とりわけＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３およびＦＧＦＲ４であり得る。他の阻害されるキナーゼは、受容体チロシンキナーゼＶＥＧＦ−Ｒ、とりわけＶＥＧＦ受容体ＫＤＲ（ＶＥＧＦ−Ｒ２）である。記載の化合物はこれらの１個以上、および／または他のタンパク質チロシンキナーゼの阻害に、および／またはこれらの酵素の突然変異体の阻害に適している。これらの活性を考慮すると、当該化合物は、キナーゼのかかるタイプ、とりわけ記載のものの、とりわけ異常または過剰な活性に関連する疾患の処置に使用することができる。
【００５３】
記載の化合物は、異なる形態、例えば遊離酸、遊離塩基、エステルおよび他のプロドラッグ、塩および互変異性体で存在していてもよく、例えば、記載には当該化合物の全ての異型が含まれる。
【００５４】
保護の程度には、本発明の化合物を含むかまたは含むと称する偽製品または不正品が、実際にかかる化合物が含まれているかに関わりなく、そしてかかる化合物が治療上有効量で含まれているかに関わりなく、含まれる。したがって、保護の範囲に含まれるのは、パッケージが本発明の種または医薬製剤もしくは組成物を含んでいると表示している説明または指示書を含むパッケージ、およびかかる製剤、組成物または種であるかもしくはそれらを含む、またはそれらであるかもしくはそれらを含むと称する製品である。
【００５５】
本明細書の記載および特許請求の範囲を通じて、文脈によってそうではないことが必要とされない限り、単数形は複数形を包含する。とりわけ、不定冠詞を使用するとき、文脈によってそうではないことが必要とされない限り、本明細書は複数および単数を予期しているものと理解される。
【００５６】
本発明の具体的な局面、態様または例との関係で記載される特性、数字、特徴、化合物、化学基または基は、それが不可能でない限り、本明細書に記載のあらゆる他の局面、態様または例に適用可能であると理解される。
【００５７】
本明細書の記載および特許請求の範囲を通じて、「含む」および「からなる」なる用語、およびその用語の変形、例えば「含んでいる」および「含む」は、「それらに限定されないが含む」ことを意味しており、他の基、添加物、成分、数または工程を排除することを意図していない（および排除しない）。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５８】
開示のさらなる局面および態様は、下記説明および特許請求の範囲に記載されている。
【００５９】
発明の詳細な説明
本発明者らは、新規な式ＩＡ：
【化１】
2009520768.tif 000003
〔式中、
Ｘ、ＹおよびＺの２個はＮ（窒素）であり、３個目はＣＨまたはＮであり（好ましくはＹおよびＺがＮであり、そしてＺがＣＨである）；そして
式中、
Ｒ１はヒドロキシ、フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルオキシ、ピペラジン−１−イルもしくは４−（フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イルで置換されているフェニル；または（ｉ）ハロもしくはＣ１−Ｃ７−アルコキシおよびさらに、（ｉｉ）ヒドロキシ、フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルオキシ、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ピロリジノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、１−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペリジン−４−イル、モルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、チオモルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、ピペラジン−１−イル、４−（フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル、４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−カルボニルで置換されているフェニルであり；
Ｒ２は水素、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシまたはハロであり；
Ｒ３は水素、Ｃ１−Ｃ７−アルキルまたはフェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、
Ｒ４は互いに独立して、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ハロまたはＣ１−Ｃ７−アルコキシであり、
そしてｎは０、１、２、３、４または５であるか；
【００６０】
または、
Ｒ１はヒドロキシ、フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルオキシ、ピペラジン−１−イル、４−（フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル；Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ピロリジノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、１−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペリジン−４−イル、モルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、チオモルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−カルボニルで置換されているフェニル；またはこの段落に記載の１個の置換基、およびさらにハロおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシから選択される置換基を担持しているフェニルであり；
Ｒ２は水素、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシまたはハロであり；
Ｒ３は水素、Ｃ１−Ｃ７−アルキルまたはフェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、
Ｒ５は水素（好ましい）、Ｃ１−Ｃ７−アルキルまたはフェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、そして
【００６１】
ｎは３、４または５であり、そしてＲ４はＣ１−Ｃ７−アルキル、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシおよびハロから選択されるが、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシおよびハロが各々少なくとも１個存在しているか、または
ｎは２であり、そしてＲ４の一方はハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、他方のＲ４はＣ１−Ｃ７−アルコキシであるか；または
ｎは３、４または５であり、そしてＲ４はハロ、ヨードおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシから選択されるが、ハロ、ヨードおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシが各々少なくとも１個存在しているか；または
ｎは３、４または５であり、そしてＲ４はハロ、ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキルおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシから選択されるが、ハロ、ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキルおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシが各々少なくとも１個存在しているか；
【００６２】
または、
ＹおよびＺはＮ（窒素）であり、そしてＸはＣＨであり、
式中、
Ｒ１はＮ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル−ピペラジン−１−イルで１置換されている３−ピリジルであり
Ｒ２は水素であり、
Ｒ３は水素であり、
Ｒ４は互いに独立して、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ハロまたはＣ１−Ｃ７−アルコキシであり、
Ｒ５は水素であり、そして
ｎは１、２、３、４または５である〕；
の化合物、あるいは、
【００６３】
Ｒ１が４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３が水素であり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物；
または
Ｒ１が３−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物、
または
Ｒ１が３−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物、
または、
Ｒ１が４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物、
または、
【００６４】
Ｒ１が４−（１−エチル−ピペリジン−４−イル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物、
または、
Ｒ１が４−（４−エチル−ピペラジン（pipeazin）−１−イル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がエチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物、
または、
Ｒ１が４−（４−エチル−ピペラジン−１−カルボニル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、Ｒ５が水素であり、ＹおよびＺがＮであり、そしてＸがＣＨである、式ＩＡの化合物、
または２種以上の式ＩＡの化合物の混合物、
または、各（本明細書に記載の）式ＩＡの化合物の場合において、その塩、プロドラッグ、Ｎ−オキシドまたはエステルが、タンパク質キナーゼ活性に関連する障害、とりわけをタンパク質チロシンキナーゼ調節化合物、よりとりわけＦＧＦｒ調節化合物によって処置することができる疾患の処置に有用であることを見出した。
【００６５】
したがって本発明は、１個以上の式ＩＡの化合物、その塩、プロドラッグ、Ｎ−オキシドまたはエステルに、ならびに上記使用、方法および医薬製剤に関する。
【００６６】
とりわけ本発明は、
Ｘ、ＹおよびＺの２個がＮであり（窒素）、３個目がＣＨまたはＮであり（好ましくはＹおよびＺがＮであり、そしてＺがＣＨである）；そして
（Ａ）Ｒ１がヒドロキシ、フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルオキシ（とりわけベンジルオキシ）、ピペラジン−１−イルもしくは４−（フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル（とりわけ４−ベンジル−ピペラジン−１−イル）で置換されているフェニル；または（ｉ）（１回）ハロ（とりわけフルオロもしくはクロロ）もしくはＣ１−Ｃ７−アルコキシ（とりわけメトキシ）、およびさらに（ｉｉ）（１回）ヒドロキシ、フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルオキシ（とりわけベンジルオキシ）、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル（とりわけジメチルアミノメチル）、ピロリジノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ（とりわけ２−ピロリジノ−エトキシ）、１−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペリジン−４−イル（とりわけ１−エチル−ピペリジン−４−イル）、モルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ（とりわけ２−モルホリノ−エトキシ）、チオモルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ（とりわけ２−チオモルホリノ−エトキシ）、ピペラジン−１−イル、４−（フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル（とりわけ４−ベンジルピペラジン−１−ｌ）、４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル（とりわけ４−（メチル、エチルもしくはイソプロピル）−ピペラジン−１−イル）、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルキル（とりわけ２−［４−（メチルもしくはエチル）−ピペラジン−１−イル］−エチル）、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル（とりわけジメチルアミノメチル）、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ（とりわけ２−（ジメチルアミノ）−エトキシ）、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ（とりわけ２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−エトキシ）もしくは［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−カルボニル（とりわけ４−エチルピペラジン−１−カルボニル）で置換されているフェニルであり；
Ｒ２が水素（好ましい）、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシまたは（好ましくない）ハロであり；
Ｒ３が水素（好ましい）、Ｃ１−Ｃ７−アルキル（好ましい）またはフェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、
Ｒ４が互いに独立して、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ハロまたはＣ１−Ｃ７−アルコキシであり、
Ｒ５が水素（好ましい）、Ｃ１−Ｃ７−アルキルまたはフェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、そして
ｎが０、１、２、３、４または５であるか；
または
【００６７】
（Ｂ）Ｒ１がヒドロキシ、フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルオキシ（とりわけベンジルオキシ）、ピペラジン−１−イル、４−（フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル（とりわけ４−ベンジル−ピペラジン−１−イル）、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル（とりわけジメチルアミノメチル）、ピロリジノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ（とりわけ２−ピロリジノ−エトキシ）、１−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペリジン−４−イル（とりわけ１−エチル−ピペリジン−４−イル）、モルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ（とりわけ２−モルホリノ−エトキシ）、チオモルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ（とりわけ２−チオモルホリノ−エトキシ）、４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル（とりわけ４−（メチル、エチルもしくはイソプロピル）−ピペラジン−１−イル）、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルキル（とりわけ２−［４−（メチルもしくはエチル）−ピペラジン−１−イル］−エチル）、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル（とりわけジメチルアミノメチル）、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ（とりわけ２−（ジメチルアミノ）−エトキシ）、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ（とりわけ２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−エトキシ）もしくは［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−カルボニル（とりわけ４−エチルピペラジン−１−カルボニル）で置換されているフェニル；またはこの段落に記載の１個の置換基、およびさらにハロおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシから選択される置換基を担持しているフェニルであり；
Ｒ２が水素（好ましい）、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシまたは（好ましくない）ハロであり；
Ｒ３が水素（好ましい）、Ｃ１−Ｃ７−アルキル（好ましい）またはフェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、
Ｒ５が水素（好ましい）、Ｃ１−Ｃ７−アルキルまたはフェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、そして
ｎが３、４または５であり、そしてＲ４がＣ１−Ｃ７−アルキル、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシおよびハロから選択されるが、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｃ１−Ｃ７−アルコキシおよびハロが各々少なくとも１個存在しているか；または
ｎが２であり、そしてＲ４の一方がハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキルであり、他方のＲ４がＣ１−Ｃ７−アルコキシであるか；または
ｎが３、４または５であり、そしてＲ４がハロ、ヨードおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシから選択されるが、ハロ、ヨードおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシが各々少なくとも１個存在しているか；または
ｎが３、４または５であり、そしてＲ４がハロ、ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキルおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシから選択されるが、ハロ、ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキルおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシが各々少なくとも１個存在しているか；または
【００６８】
（Ｃ）１−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−３−｛６−［４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−ウレア（式ＩＡでは、Ｒ１が４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３が水素であり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、そしてＲ５が水素である）、
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−１−｛６−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−ウレア（式ＩＡでは、Ｒ１が３−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、そしてＲ５が水素である）、
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［３−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア（式ＩＡでは、Ｒ１が３−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、そしてＲ５が水素である）、
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−１−｛６−［４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−ウレア（式ＩＡでは、Ｒ１が４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、そしてＲ５が水素である），
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（１−エチル−ピペリジン−４−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア（式ＩＡでは、Ｒ１が４−（１−エチル−ピペリジン−４−イル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、そしてＲ５が水素である）、
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−エチル−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−ウレア（式ＩＡでは、Ｒ１が４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がエチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、そしてＲ５が水素である）または
３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−カルボニル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア（式ＩＡでは、Ｒ１が４−（４−エチル−ピペラジン−１−カルボニル）−フェニルアミノであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ３がメチルであり、Ｒ４が２−および６−クロロならびに３−および５−メトキシであり、ｎが４であり、そしてＲ５が水素である）、
の名を有する式ＩＡの化合物
（ここで、これらの各化合物において、式ＩＡのＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｘ、ＹおよびＺに対応する基ならびにｎは、これらの化合物について与えられたそれぞれの意味によって定義される）；
（ここで、これらの各化合物において、ＹおよびＺは窒素であり、そしてＸがＣＨである）；
および各（本明細書に記載の）式ＩＡの化合物の場合において、その塩、プロドラッグ、Ｎ−オキシドまたはエステルに関する。
【００６９】
ひとつの態様において、本発明は式ＩＡ
〔式中、ＹおよびＺがＮであり（窒素）、そしてＸがＣＨであり、
式中、
Ｒ１がＮ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル−ピペラジン−１−イルで１置換されている３−ピリジルであり、
Ｒ２が水素であり、
Ｒ３が水素であり、
Ｒ４が互いに独立して、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ハロまたはＣ１−Ｃ７−アルコキシであり、
Ｒ５が水素であり、そしてｎが１、２、３、４または５である〕
の化合物を提供する。
【００７０】
かかる態様において、好ましくはＲ４は互いに独立して、ハロまたはＣ１−Ｃ７−アルコキシであり、そしてｎは好ましくは３、４または５、最も好ましくは４である。
【００７１】
好ましい定義
本明細書で使用されている一般的な用語は、好ましくはこの開示の文脈内において、特に指示がない限り下記意味を有する：
接頭語「低級」または「Ｃ１−Ｃ７」は、最大７個までの鎖内原子、とりわけ最大４個までの鎖内原子を有する基を意味する。アルキルおよび脂肪族の具体的なクラスには、１、２、３または４個の炭素原子が含まれる。この基は、直鎖であるか、または１個もしくは複数の分枝を有する分枝鎖である。
【００７２】
低級アルキルまたはＣ１−Ｃ７−アルキルは、好ましくは、１〜７個の炭素原子、好ましくは１、２、３もしくは４個の炭素原子を含むアルキルであって、直鎖または分枝鎖である；例えば、低級アルキルは、ブチル、例えばｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、プロピル、例えばｎ−プロピルまたはイソプロピル、エチルまたはメチルである。低級アルキルの例はメチル、エチルまたはイソプロピルである。
【００７３】
複数形を化合物、塩等に使用するとき、これは１個の化合物、塩等も意味している。
【００７４】
フェニルがＲ１中に式ＩＡのＲ１をＮＲ５と結合している環として存在するとき、置換基ヒドロキシ、フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキルオキシ、ピペラジン−１−イル、４−（フェニル−Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル；Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ピロリジノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、１−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペリジン−４−イル、モルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、チオモルホリノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、Ｎ−モノ−もしくはＮ，Ｎ−ジ−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−アミノ−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ１−Ｃ７−アルコキシ、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−カルボニルは、好ましくはＮＲ３の結合に対して３または４位に存在している。
【００７５】
任意の不斉炭素原子が、（Ｒ）−、（Ｓ）−または（Ｒ，Ｓ）−立体配置、好ましくは（Ｒ）−または（Ｓ）−立体配置中に存在していてもよい。あらゆる不飽和を有する基は、シス、トランスまたは（シス、トランス）形で存在している。したがって、化合物は異性体の混合物として、または純粋な異性体として、好ましくはエナンチオマー純粋なジアステレオマーとして存在していてもよい。
【００７６】
本発明はまた、記載の化合物の可能性のある互変異性体に関する。
【００７７】
遊離形の式ＩＡの化合物と、例えば新規化合物、および互変異性体または互変異性体の混合物ならびにそれらの塩の精製または同定における中間体として使用することができるそれらの塩の間の密接な関係を考慮すると、適当かつ便宜であるとき、特に記載がない限り、これらの化合物についての本明細書のあらゆる記載は、これらの化合物の対応する互変異性体、またはこれらのいずれかの塩についても言及しているものと理解される。
【００７８】
互変異性体は例えば、各々最低１個結合水素を有するアミノまたはヒドロキシが、隣接原子と二重結合で結合している炭素原子と結合している場合に存在し得る（例えば、ケト−エノールまたはイミン−エナミン互変異性）。
【００７９】
「化合物・・・、その互変異性；またはその塩」等が記載されているとき、これは「化合物・・・その互変異性体、または化合物および／または互変異性の塩」を意味する。
【００８０】
ハロゲン（ハロ）は、とりわけフッ素、塩素、臭素、またはヨウ素、とりわけ（好ましくは式Ｉの化合物において）フッ素、塩素、またはヨウ素である。
【００８１】
ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキルは、１個以上の水素原子がハロゲン原子によって置換されているＣ１−Ｃ７−アルキル、例えばトリフルオロメチルを意味する。
【００８２】
［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−カルボニルは、［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−Ｃ（＝Ｏ）−を意味する。
【００８３】
本発明は、上記式ＩＡの化合物、およびその塩、エステル、Ｎ−オキシドまたはプロドラッグに関する。したがって、１つの局面において本発明は、式ＩＡの化合物、および／またはその塩、エステル、Ｎ−オキシドまたはプロドラッグである製品を提供する。
【００８４】
塩は、とりわけそれらが塩形成基を形成するとき、とりわけ式ＩＡ（またはその例示的な式）の化合物の薬学的に許容される塩である。
【００８５】
塩形成基は、塩基性または酸性を有する基またはラジカルである。少なくとも１個の塩基性基または少なくとも１個の塩基性ラジカル、例えばアミノ、ペプチド結合を形成しない２級アミノ基または３級アミノのような塩基性窒素を有する化合物は、例えば塩酸、硫酸もしくはリン酸のような無機酸と、または適当な有機カルボン酸またはスルホン酸、例えば脂肪族モノ−もしくはジ−カルボン酸、例えばトリフルオロ酢酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、ヒドロキシマレイン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸もしくはシュウ酸、またはアミノ酸、例えばアルギニンもしくはリシン、芳香族性カルボン酸、例えば安息香酸、２−フェノキシ−安息香酸、２−アセトキシ−安息香酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、芳香族性−脂肪族カルボン酸、例えばマンデル酸もしくは桂皮酸、ヘテロ芳香族性カルボン酸、例えばニコチン酸もしくはイソニコチン酸、脂肪族スルホン酸、例えばメタン−、エタン−もしくは２−ヒドロキシエタンスルホン酸、または芳香族性スルホン酸、例えばベンゼン−、ｐ−トルエン−もしくはナフタレン−２−スルホン酸と、酸付加塩を形成することができる。複数の塩基性基が存在するとき、１または複数酸付加塩を形成することができる。
【００８６】
酸性基、カルボキシ基またはフェノール性ヒドロキシ基を有する化合物カルボキシは、金属塩またはアンモニウム塩、例えばアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、例えばナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩もしくはカルシウム塩、またはアンモニアもしくは適当な有機アミン、例えば３級モノアミン、例えばトリエチルアミンもしくはトリ−（２−ヒドロキシエチル）−アミン、またはヘテロ環式塩基、例えばＮ−エチル−ピペリジンもしくはＮ，Ｎ’−ジメチルピペラジンとのアンモニウム塩を形成することができる。塩の混合物が可能である。
【００８７】
酸性基および塩基性基を両方有する化合物は、分子内塩を形成することができる。
【００８８】
単離または精製の目的で、そして中間体としてさらに使用する化合物の場合に、薬学的に許容されない塩、例えばピクリン酸塩を使用することもできる。薬学的に許容される非毒性の塩のみを治療目的で使用することができ、したがってそれらの塩が好ましい。
【００８９】
遊離形の新規化合物またはそのＮ−オキシドと、例えば新規化合物の精製または同定における中間体として使用することができる塩を含むそれらの塩形のものとの密接な関係を考慮すると、本明細書の遊離化合物（式ＩＡの化合物、中間体および出発物質を含む）についてのあらゆる記載は、適当かつ便宜であるとき、対応するＮ−オキシド、および／または塩、水和物、溶媒和物、および／または当該化合物またはそれらのＮ−オキシドの結晶形についても記載しているものと理解される。
【００９０】
式ＩＡ（またはその例示的な式）の化合物は、本明細書に記載のとおり、有利な薬理学的特性を有する。
【００９１】
生物学
本発明の化合物のＢｃｒ−Ａｂｌ、ｃ−ＫＩＴ、ＥｐｈＢ４、ＥＧＦ−Ｒ、ＶＥＧＦ−Ｒ２（ＫＤＲ）、ＦＧＦ−Ｒ、Ｔｉｅ−２（Ｔｅｋ）、Ｒｅｔ、ＰＤＧＦＲ、ｒａｆ、ＦＬＴ３、ｃ−ｓｒｃおよび／またはＦＧＦＲ３受容体チロシンキナーゼ活性の阻害剤としての効果を、下記のとおりに示すことができる：
下記「阻害剤」、「活性化合物」等は、式ＩＡの化合物を意味する。
【００９２】
Ｂｃｒ−Ａｂｌに対する活性試験：
ｐ２１０  Ｂｃｒ−Ａｂｌ発現ベクターｐＧＤｐ２１０Ｂｃｒ／Ａｂｌ（３２Ｄ−ｂｃｒ／ａｂｌ）でトランスフェクトしたマウス骨髄前駆細胞系３２Ｄｃｌ３を、J. Griffin（Dana Faber Cancer Institue, Bosten, MA, USA）から得た。細胞は融合Ｂｃｒ−Ａｂｌタンパク質を、構成的に活性なａｂｌキナーゼとともに発現し、増殖因子とは無関係に増殖する。細胞をＲＰＭＩ  １６４０（ＡＭＩＭＥＤ）、１０％胎児ウシ血清、２ｍＭグルタミン（Gibco）（「完全培地」）中で増殖し、バイアルあたり２×１０６細胞のアリコートを凍結培地（９５％ＦＣＳ、５％ＤＭＳＯ（SIGMA））中で凍結することによってワーキングストックを製造する。解凍後、細胞を最大１０〜１２代の間で、実験のために使用する。抗体抗−ａｂｌ  ＳＨ３ドメイン（ｃａｔ．  ＃  ０６−４６６、Upstate Biotechnology）をＥＬＩＳＡのために使用する。ｂｃｒ−ａｂｌリン酸化の検出のために、ＺＹＭＥＤ（ｃａｔ．  ＃  ０３−７７２２）のアルカリホスファターゼ（ＰＹ１０（ＡＰ））で標識した抗−ホスホチロシン抗体Ａｂ  ＰＹ２０を使用する。比較および標準化合物として、（Ｎ−｛５−［４−（４−メチル−ピペラジノ−メチル）−ベンゾイルアミド］−２−メチルフェニル｝−４−（３−ピリジル）−２−ピリミジン−アミンのメタンスルホン酸塩（モノメシレート）（ＳＴＩ５７１）（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）またはＧｌｉｖｅｃ（登録商標）として市販、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を使用する。ストック溶液１０ｍＭをＤＭＳＯ中で製造し、−２０℃で貯蔵する。細胞アッセイのために、ストック溶液を完全培地で、２段階（１：１００および１：１０）で希釈し、１０μＭの出発濃度を得て、その後完全培地で連続３倍希釈を行う。この方法を用いると溶解度の問題は発生しない。試験化合物を同様に処理する。アッセイのために、５０μｌ中２００’０００個の３２Ｄ−ｂｃｒ／ａｂｌ細胞を９６ウェル丸底組織培養プレートにウェルあたり播種する。試験化合物の連続３倍希釈液をウェルあたり５０μｌ、細胞に加える（３連）。試験化合物の最終濃度は、例えば５μＭから０．０１μＭの範囲である。未処理細胞を対照として使用する。化合物を細胞と共に、９０分間３７℃、５％  ＣＯ２でインキュベートし、その後組織培養プレートを１３００ｒｐｍ（Beckman GPR 遠心分離機）で遠心分離し、ペレット状細胞を除去しないように注意しながら注意深く吸飲して上清を除去する。細胞ペレットを溶解バッファー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  塩化ナトリウム、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、１％  ＮＰ−４０（非イオン性界面活性剤、Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany）、２ｍＭ  ナトリウムオルト−バナデート、１ｍＭ  フェニルメチルスルホニルフルオライド、５０μｇ／ｍｌ  アプロチニンおよび８０μｇ／ｍｌ  ロイペプチン）１５０μｌを加えて溶解し、ＥＬＩＳＡのために速やかに使用するか、または使用するまで−２０℃で凍らせて貯蔵する。抗体−ａｂｌ  ＳＨ３ドメイン抗体をウェルあたり５０μｌＰＢＳ中２００ｎｇで、黒色ＥＬＩＳＡプレート（Packard HTRF-96 黒色プレート; 6005207）に一晩、４℃でコーティングする。
【００９３】
０．０５％  ツイーン２０（ＰＢＳＴ）および０．５％  ＴｏｐＢｌｏｃｋ（Juro, Ｃａｔ．  ＃  ＴＢ  ２３２０１０）を含むＰＢＳ２００μｌ／ウェルで３回洗浄した後、残存タンパク質結合部位をＰＢＳＴ  ２００μｌ／ウェル、３％  ＴｏｐＢｌｏｃｋで４時間、室温でブロックし、その後未処理または試験化合物処理細胞（ウェルあたりタンパク質合計２０μｇ）の溶解液と共に、３〜４時間、４℃でインキュベートする。３回洗浄後、ブロッキングバッファーで０．５μｇ／ｍｌに希釈したＰＹ２０（ＡＰ）（Zymed）５０μｌ／ウェルを加え、一晩インキュベートする（４℃）。全インキュベーション工程についてプレートをプレートシーラー（Costar、ｃａｔ．  ＃  ３０９５）で被覆する。最後に、プレートを洗浄バッファーで３回、脱イオン水で１回洗浄し、ＡＰ基質ＣＰＤＳｔａｒ  ＲＴＵ  ９０μｌ／ウェルをＥｍｅｒａｌｄ  ＩＩと共に加える。Packard Top Seal（商標）−Ａプレートシーラー（ｃａｔ．  ＃  ６００５１８５）でシールしたプレートを４５分間、室温暗所でインキュベートし、蛍光を、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｔｏｐ  Ｃｏｕｎｔ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（Top Count）で秒あたりのカウント（ＣＰＳ）を測定して定量する。ＥＬＩＳＡの最終最適版について９６ウェル組織培養プレート中で増殖、処理および溶解した細胞溶解物５０μｌを、これらのプレートから直接、Ｕｐｓｔａｔｅのウサギポリクローナル抗−ａｂｌ−ＳＨ３ドメインＡＢ  ０６−４６６で予めコーティングされたＥＬＩＳＡプレートに移す。抗−ホスホチロシンＡＢ  ＰＹ２０（ＡＰ）の濃度を０．２μｇ／ｍｌに減少し得る。上記のとおり、洗浄し、ブロッキングし、蛍光基質と共にインキュベーションする。定量を下記の通り行う：未処理３２Ｄ−ｂｃｒ／ａｂｌ細胞から得られたＥＬＩＳＡ読み取り値（ＣＰＳ）と、アッセイバックグラウンド（細胞溶解液を含まない全ての成分）の読み取り値の差を計算し、これらの細胞に存在する構造的にリン酸化されたｂｃｒ−ａｂｌタンパク質を１００％反映しているものと考える。ｂｃｒ−ａｂｌキナーゼ活性における化合物の活性を、ｂｃｒ−ａｂｌリン酸化の減少率として表現する。ＩＣ５０値を用量応答曲線から、グラフ内挿または外挿によって決定する。本発明の化合物は、好ましくはＩＣ５０値１５ｎＭ〜５００μＭ、最も好ましくは１５ｎＭ〜２００μＭを示す。
【００９４】
細胞アッセイのために、化合物をＤＭＳＯに溶解し、完全培地で希釈して１０μＭの出発濃度を得て、その後完全培地で連続３倍希釈を行う。‘ｗｔ’−Ｂｃｒ−ＡｂｌまたはＢｃｒ−Ａｂｌ変異体（例えばＴ−３１５−Ｉ）を発現している３２ＤまたはＢａ／Ｆ３細胞を、完全培地５０μｌ中２００’０００個で９６ウェル丸底組織培養プレートにウェルあたり播種する。試験化合物の連続３倍希釈液をウェルあたり５０μｌ、細胞に加える（３連）。未処理細胞を対照として使用する。化合物を細胞と共に、９０分間３７℃、５％  ＣＯ２でインキュベートし、その後組織培養プレートを１３００ｒｐｍ（Beckman GPR 遠心分離機）で遠心分離し、ペレット状細胞を除去しないように注意しながら注意深く吸飲して上清を除去する。細胞ペレットを溶解バッファー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  塩化ナトリウム、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、１％  ＮＰ−４０、２ｍＭ  ナトリウムオルト−バナデート、１ｍＭ  フェニルメチルスルホニルフルオライド、５０μｇ／ｍｌ  アプロチニンおよび８０μｇ／ｍｌ  ロイペプチン）１５０μｌを加えて溶解し、ＥＬＩＳＡのために速やかに使用するか、または使用するまで−２０℃で凍らせて貯蔵する。
【００９５】
ウサギポリクローナル抗−ａｂｌ−ＳＨ３ドメインＡｂ  ０６−４６６を、ウェルあたり５０μｌＰＢＳ中５０ｎｇで、黒色ＥＬＩＳＡプレート（Packard HTRF-96 黒色プレート; 6005207）に一晩、４℃でコーティングした。０．０５％  ツイーン２０（ＰＢＳＴ）および０．５％  ＴｏｐＢｌｏｃｋ（Juro, Ｃａｔ．  ＃  ＴＢ  ２３２０１０）を含むＰＢＳ２００μｌ／ウェルで３回洗浄した後、残存タンパク質結合部位をＰＢＳＴ  ２００μｌ／ウェル、３％  ＴｏｐＢｌｏｃｋで４時間、室温でブロックし、その後未処理または試験化合物処理細胞（ウェルあたりタンパク質合計２０μｇ）の溶解液５０Ｌと共に、３〜４時間、４℃でインキュベートする。３回洗浄後、ブロッキングバッファーで０．５μｇ／ｍｌに希釈し、アルカリホスファターゼ（Zymed）で標識した抗ホスホチロシンＡｂ  ＰＹ２０（ＡＰ）５０μｌ／ウェルを加え、一晩インキュベートする（４℃）。全インキュベーション工程についてプレートをプレートシーラー（Costar）で被覆する。最後に、プレートを洗浄バッファーで３回、脱イオン水で１回洗浄し、ＡＰ基質ＣＰＤＳｔａｒ  ＲＴＵ  ９０μｌ／ウェルをＥｍｅｒａｌｄ  ＩＩと共に加える。Packard Top Seal（商標）−Ａプレートシーラーでシールしたプレートを４５分間、室温暗所でインキュベートし、蛍光を、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｔｏｐ  Ｃｏｕｎｔ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  Ｃｏｕｎｔｅｒ（Top Count）で秒あたりのカウント（ＣＰＳ）を測定して定量する。
【００９６】
未処理３２Ｄ−Ｂｃｒ／ａｂｌ細胞から得られたＥＬＩＳＡ読み取り値（ＣＰＳ）と、アッセイバックグラウンド（細胞溶解液を含まない全ての成分）の読み取り値の差を計算し、これらの細胞に存在する構造的にリン酸化されたＢｃｒ−ａｂｌタンパク質を１００％反映しているものと考える。Ｂｃｒ−ａｂｌキナーゼ活性における化合物の活性を、Ｂｃｒ−ａｂｌリン酸化の減少率として表現する。ＩＣ５０（およびＩＣ９０）値を用量応答曲線から、グラフ外挿によって決定する。
【００９７】
本発明の化合物は、好ましくは自己リン酸化の阻害および  Ｂａ／Ｆ３トランスフェクト細胞、とりわけＴ３１５ＩのＢｃｒ−Ａｂｌ突然変異のＩＬ−３独立増殖の阻害について、ＩＣ５０値５０ｎＭ〜５００μＭを示す。
【００９８】
３２Ｄ  ｃｌ３細胞をAmerican Type Culture Collection（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１１３４６）から得て、Ｂａ／Ｆ３細胞をGerman Collection of Microorganisms and Cell Cultures（DSMZ, Braunschweig and DSMZ No. ACC 300）から得る。
Palacios et al., Nature, 309: 1984, 126, PubMed ID 6201749.
Palacios et al., Cell, 41: 1985, 727, PubMed ID 3924409
【００９９】
Ｂａ／Ｆ３．ｐ２１０細胞およりマウス造血３２Ｄ  ｃｌ３細胞（３２Ｄ  ｐ２１０細胞）を、ＩＬ−３−依存マウス造血Ｂａ／Ｆ３細胞系を、ｐ２１０ＢＣＲ−ＡＢＬ（Ｂ２Ａ２）ｃＤＮＡを含むｐＧＤベクターでトランスフェクトして得る。
Daley and Baltimore, 1988; Sattler et al., 1996; Okuda et al., 1996.
Daley, G.Q., Baltimore, D.(1988) Transformation of an interleukin 3-dependent hematopoietic cell line by the chronic myeloid leukemia-specific p210 BCR-ABL protein. PNAS 85,9312-9316.
Sattler M, Salgia R, Okuda K, Uemura N, Durstin MA, Pisick E, et al.(1996) The proto-oncogene product p120CBL and the adaptor proteins CRKL and c-CRK link c-ABL, p190BCR-ABL and p210BCR-ABL to the phosphatidylinositol-3’ kinase pathway. Oncogene  12, 839-46.
Okuda K, Golub TR, Gilliland DG, Griffin JD.(1996) p210BCR-ABL, p190BCR-ABL, and TEL/ABL activate similar signal transduction pathways in hematopoietic cell lines. Oncogene 13, 1147-52.
【０１００】
ｃ−ＫＩＴ活性試験
バキュロウイルスドナーベクターｐＦｂａｃＧ０１  ＧＩＢＣＯを使用して、ヒトｃ−Ｋｉｔの細胞質キナーゼドメインのアミノ酸５４４−９７６のアミノ酸領域を発現する組換えバキュロウイルスを製造する。ｃ−Ｋｉｔの細胞質ドメインのコーディング配列をＰＣＲで、ヒト子宮ｃ−ＤＮＡライブラリー（Clontech）から増幅する。増幅したＤＮＡフラグメントおよびｐＦｂａｃＧ０１ベクターをＢａｍＨ１およびＥｃｏＲＩで消化して、ライゲーションに適合するようにする。これらのＤＮＡフラグメントのライゲーションによって、バキュロウイルスドナープラスミドｃ−Ｋｉｔが得られる。ウイルスの製造、Ｓｆ９細胞におけるタンパク質の発現およびＧＳＴ−融合タンパク質の精製を下記のとおりに行う：
【０１０１】
ウイルスの製造：ｃ−Ｋｉｔキナーゼドメインを含むトランスファーベクターｐＦｂａｃＧ０１−ｃ−Ｋｉｔを、ＤＨ１０Ｂａｃ細胞系（GIBCO）にトランスフェクトし、そしてトランスフェクトした細胞を選択寒天プレートに播種する。融合配列がウイルス性ゲノム（バクテリアによって担持されている）に挿入されていないコロニーは青色を示す。１個の白色コロニーを採取し、ウイルス性ＤＮＡ（bacmid）をバクテリアから、標準的なプラスミド精製法によって単離する。Ｓｆ９細胞またはＳｆ２１細胞  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎを、２５ｃｍ２フラスコ内で、ウイルス性ＤＮＡでＣｅｌｌｆｅｃｔｉｎ試薬を用いてトランスフェクトする。
【０１０２】
Ｓｆ９細胞における小規模タンパク質発現の測定：ウイルス含有培地をトランスフェクト細胞培養物から回収し、その力価を上昇させる感染のために使用する。２周の感染の後に得たウイルス含有培地を、大規模タンパク質発現に使用する。大規模タンパク質発現のために、１００ｃｍ２丸底組織培養プレートに５×１０７細胞／プレートを播種し、ウイルス含有培地１ｍＬ（約５ＭＯＩ）で感染させる。３日後、細胞をプレートから掻爬し、５００ｒｐｍで５分間遠心分離する。１０〜２０の細胞ペレット、１００ｃｍ２プレートを、氷冷溶解バッファー（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１％  ＮＰ−４０、１ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍＭ  ＰＭＳＦ）５０ｍＬに再懸濁する。細胞を氷上で１５分間攪拌し、５０００ｒｐｍで２０分間遠心分離する。
【０１０３】
ＧＳＴタグ化タンパク質の精製：遠心分離した細胞溶解物を、グルタチオン−セファロースカラム（Pharmacia）にロードし、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、２００ｍＭ  ＮａＣｌ  １０ｍＬで３回洗浄する。ＧＳＴタグ化タンパク質を、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  還元−グルタチオン、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＤＴＴ、１０％  グリセロールを１０回（１回１ｍＬ）適用して溶出し、−７０℃で貯蔵する。
【０１０４】
キナーゼアッセイ：精製ＧＳＴ−ｃ−Ｋｉｔでのチロシンタンパク質キナーゼアッセイを、酵素タンパク質２００〜１８００ｎｇ（具体的な活性に依存する）、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．６、３ｍＭ  ＭｎＣｌ２、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、１０μＭ  Ｎａ３ＶＯ４、５μｇ／ｍＬ  ポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１、１％  ＤＭＳＯ、１．０μＭ  ＡＴＰおよび０．１μ  Ｃｉ［γ３３Ｐ］ＡＴＰを含む最終体積３０μＬ中で行う。活性を阻害剤の存在下または非存在下で、［γ３３Ｐ］ＡＴＰからの３３Ｐのポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１基質への取り込みの測定によってアッセイする。アッセイ（３０μＬ）を９６ウェルプレートで、環境温度で２０分間、下記条件下で行い、１２５ｍＭ  ＥＤＴＡ２０μＬを加えて終了する。その後、反応混合物４０μＬをＩｍｍｏｂｉｌｏｎ−ＰＶＤＦ膜（Millipore, Bedford, MA, USA）（予め５分間メタノールに浸漬し、水でリンスし、５分間０．５％  Ｈ３ＰＯ４に浸漬した）に移し、真空源を取り外した真空マニフォールドにマウントする。全サンプルをスポットした後、真空を接続し、各ウェルを０．５％  Ｈ３ＰＯ４２００μＬでリンスする。膜を除去し、シェーカー上で１．０％  Ｈ３ＰＯ４で４回、エタノールで１回洗浄する。膜を、環境温度で乾燥し、Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ９６ウェルフレームに乗せ、Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  ＴＭ（Packard）１０μＬ／ウェルを加えた後に、数える。４つの濃度（通常０．０１、０．１、１および１０μＭ）での各化合物の阻害率の直線回帰分析（２連）によってＩＣ５０値を計算する。タンパク質キナーゼ活性１単位を、［γ３３Ｐ］ＡＴＰから基質タンパク質への１分あたり、タンパク質１ｍｇあたり、３７℃で移動した１ナノモルの３３Ｐ  ＡＴＰと定義する。好ましくは５０ｎＭ〜５００ｎＭのＩＣ５０を、本発明の式ＩＡの化合物で見出すことができる。
【０１０５】
ＥｐｈＢ４活性試験
式ＩＡの化合物の阻害剤またはＥｐｈｒｉｎ  Ｂ４受容体（ＥｐｈＢ４）キナーゼとしての効果を、下記の通り示すことができる：
Ｂａｃ−ｔｏ−Ｂａｃ（商標）（Invitrogen Life Technologies, Basel, Switzerland）ＧＳＴ融合発現ベクターの製造：ＥｐｈＢクラスの全細胞質コーディング領域を、ＰＣＲによって、ヒト胎盤または脳由来のｃＤＮＡライブラリーからそれぞれ増幅する。ヒトＥｐｈＢ４受容体（SwissProt Database、受託番号Ｐ５４７６０）の５６６−９８７アミノ酸領域を発現する組換えバキュロウイルスを製造する。ＧＳＴ配列をｐＦａｓｔＢａｃ１（登録商標）ベクター（Invitrogen Life Technologies, Basel, Switzerland）にクローン化し、ＰＣＲ増幅する。ＥｐｈＢ４受容体ドメインをコード化するｃＤＮＡをそれぞれ、ＧＳＴ配列の３’側フレームに、この修飾ＦａｓｔＢａｃ１ベクターにクローン化して、ｐＢａｃ−ｔｏ−Ｂａｃ（商標）ドナーベクターを製造する。形質転換から生じた１個のコロニーを植菌して、小規模プラスミド製造のために一晩培養する。プラスミドＤＮＡの制限酵素分析によって、複数のクローンが予期されるサイズの挿入物を含むことが明らかになる。自動配列決定によって、挿入物および約５０ｂｐの隣接ベクター配列を両ストランドについて確認する。
【０１０６】
ウイルスの製造：各キナーゼのウイルスを、特に記載がない限り、ＧＩＢＣＯから供給されたプロトコルにしたがって製造する。簡単に説明すると、キナーゼドメインを含むトランスファーベクターをＤＨ１０Ｂａｃ細胞系（GIBCO）にトランスフェクトし、選択寒天プレートに置く。融合配列がウイルス性ゲノム（バクテリアによって担持されている）に挿入されていないコロニーは青色を示す。１個の白色コロニーを採取し、ウイルス性ＤＮＡ（bacmid）をバクテリアから、標準的なプラスミド精製法によって単離する。Ｓｆ９細胞またはＳｆ２１細胞を、２５ｃｍ２フラスコ内で、ウイルス性ＤＮＡでＣｅｌｌｆｅｃｔｉｎ試薬を用いてトランスフェクトする。
【０１０７】
ＧＳＴタグ化キナーゼの精製：遠心分離した細胞溶解物をグルタチオン−セファロースカラム（Pharmacia）にロードし、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、２００ｍＭ  ＮａＣｌ  １０ｍＬで３回洗浄する。ＧＳＴタグ化タンパク質を、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  還元−グルタチオン、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＤＴＴ、１０％  グリセロールを１０回（１回１ｍＬ）適用して溶出し、−７０℃で貯蔵する。
【０１０８】
タンパク質キナーゼアッセイ：タンパク質キナーゼの活性を阻害剤の存在下または非存在下で、［γ３３Ｐ］ＡＴＰからの３３Ｐの、基質としてのグルタミン酸とチロシンのポリマー（ポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）への取り込みの測定によってアッセイする。精製したＧＳＴ−ＥｐｈＢ（３０ｎｇ）でのキナーゼアッセイを、１５〜３０分間、環境温度で、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、３〜５０ｍＭ  ＭｎＣｌ２、０．０１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、１％  ＤＭＳＯ、１ｍＭ  ＤＴＴ、３μｇ／ｍＬ  ポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１（Sigma; St. Louis, Mo., USA）および２．０〜３．０μＭ  ＡＴＰ（γ−［３３Ｐ］−ＡＴＰ  ０．１μＣｉ）を含む最終体積３０μＬで行う。アッセイを、１２５ｍＭ  ＥＤＴＡ２０μＬを加えて終了する。その後、反応混合物４０μＬをＩｍｍｏｂｉｌｏｎ−ＰＶＤＦ膜（Millipore, Bedford, MA, USA）（予め５分間メタノールに浸漬し、水でリンスし、５分間０．５％  Ｈ３ＰＯ４に浸漬した）に移し、真空源を取り外した真空マニフォールドにマウントする。全サンプルをスポットした後、真空を接続し、各ウェルを０．５％  Ｈ３ＰＯ４２００μＬでリンスする。膜を除去し、シェーカー上で１．０％  Ｈ３ＰＯ４で４回、エタノールで１回洗浄する。膜を、環境温度で乾燥し、Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ９６ウェルフレームに乗せ、Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ（商標）（Packard）１０μＬ／ウェルを加えた後に、数える。４つの濃度（通常０．０１、０．１、１および１０μＭ）での各化合物の阻害率の直線回帰分析（２連）によってＩＣ５０値を計算する。タンパク質キナーゼ活性１単位を、［γ３３Ｐ］ＡＴＰから基質タンパク質への１分あたり、タンパク質１ｍｇあたり、３７℃で移動した１ナノモルの３３Ｐ  ＡＴＰと定義する。好ましくは５０ｎＭ〜５００ｎＭのＩＣ５０を、本発明の式ＩＡの化合物で見出すことができる。
【０１０９】
ＥＧＦ−Ｒ活性試験：
ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の阻害を、既知の方法を使用して、例えばＥＧＦ受容体の組換え細胞内ドメイン［ＥＧＦ−Ｒ  ＩＣＤ；例えば、E. McGlynn et al., Europ. J. Biochem. 207, 265-275(1992)参照］を使用して示すことができる。阻害剤なしの対照と比較して、式ＩＡの化合物は、例えば０．０５〜５００μＭの濃度で、酵素活性を５０％阻害する（ＩＣ５０）。
【０１１０】
ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の阻害に加えて、またはそれに代えて、式ＩＡの化合物はまた、この受容体ファミリーの他のメンバー、例えばＥｒｂＢ−２を阻害する。阻害活性（ＩＣ５０）はおよそ０．０１〜５００μＭの範囲である。ＥｒｂＢ−２チロシンキナーゼ（ＨＥＲ−２）の阻害を、例えばＥＧＦ−Ｒタンパク質チロシンキナーゼについて用いた方法と同様に測定することができる［C. House et al., Europ. J. Biochem. 140, 363-367(1984)参照］。ＥｒｂＢ−２キナーゼを単離することができ、そしてその活性を、自体公知のプロトコル、例えばT. Akiyama et al., Science 232, 1644(1986)によって測定することができる。
【０１１１】
ＶＥＧＦ−Ｒ２（ＫＤＲ）活性試験：
ＶＥＧＦ誘導受容体自己リン酸化の阻害を、トランスフェクトされたＣＨＯ細胞のような細胞のインビトロ実験で確認することができる。これは、ヒトＶＥＧＦ−Ｒ２受容体（ＫＤＲ）を恒常的に発現しており、６ウェル細胞培養プレート中完全培養培地（１０％胎児ウシ血清＝ＦＣＳ）に播種し、３７℃で５％ＣＯ２下で、約８０％コンフルエンシーを示すまでインキュベートする。被検化合物を培養培地（ＦＣＳなし、０．１％ウシ血清アルブミンを含む）で希釈し、細胞に加える。（対照は試験化合物を含まない培地を含む）。３７℃で２時間インキュベーションした後、組換えＶＥＧＦを加える；最終ＶＥＧＦ濃度は２０ｎｇ／ｍｌである。さらに５分間３７℃でインキュベーションした後、細胞を氷冷ＰＢＳ（リン酸緩衝化食塩水）で２回洗浄し、速やかにウェルあたり１００μｌの溶解バッファーに溶解する。溶解物を遠心分離して細胞核を除去し、上清のタンパク質濃度を、市販のタンパク質アッセイ（BIORAD）を用いて測定する。溶解物を速やかに使用することができ、所望により−２０℃で貯蔵することができる。
【０１１２】
サンドイッチＥＬＩＳＡを行ってＶＥＧＦ−Ｒ２リン酸化を測定する：ＶＥＧＦ−Ｒ２のモノクローナル抗体（例えばＭａｂ  １４９５．１２．１４；H. Towbin, Novartisによって製造、または同等のモノクローナル抗体）を黒色ＥＬＩＳＡプレート（ＰａｃｋａｒｄのＯｐｔｉＰｌａｔｅ（商標）ＨＴＲＦ−９６）に不動化する。プレートを洗浄し、残存遊離タンパク質結合部位を３％ＴｏｐＢｌｏｃｋ（登録商標）（Juro、Ｃａｔ．  ＃  ＴＢ２３２０１０）で、リン酸緩衝化食塩水とツイーン２０（登録商標）（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート、ICI/Uniquema）（PBST）中で飽和させる。細胞溶解物（ウェルあたりタンパク質２０μｇ）をこれらのプレート中で、一晩４℃で、アルカリホスファターゼ（ＰＹ２０：ＺｙｍｅｄのＡＰ）と結合した抗ホスホチロシン抗体と共にインキュベートする。（プレートを再び洗浄しそして）抗ホスホチロシン抗体の捕捉リン酸化受容体との結合を、蛍光ＡＰ基質（ＣＤＰ−Ｓｔａｒ、使用準備済み、Ｅｍｅｒａｌｄ  ＩＩと共に；Applied Biosystems）を用いて示す。蛍光をＰａｃｋａｒｄ  Ｔｏｐ  Ｃｏｕｎｔ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  Ｃｏｕｎｔｅｒで測定する。陽性対照（ＶＥＧＦで刺激）のシグナルと、陰性対照（ＶＥＧＦで刺激せず）のものとの差は、ＶＥＧＦ誘導性ＶＥＧＦ−Ｒ２リン酸化（＝１００％）に対応する。試験物質の活性を、ＶＥＧＦ誘導性ＶＥＧＦ−Ｒ２リン酸化の阻害率として計算し、最大阻害の半分を誘導する物質の濃度をＩＣ５０（５０％阻害のための阻害用量）と定義する。好ましくは２０ｎＭ〜５００μＭの範囲のＩＣ５０値が、本発明の式ＩＡの化合物について見出され得る。
【０１１３】
組換えタンパク質キナーゼＲｅｔ（Ｒｅｔ−Ｍｅｎ２Ａ）、Ｔｉｅ−２（Ｔｅｋ）およびＦＧＦＲ３−Ｋ６５０Ｅ活性試験：
組換えタンパク質キナーゼのクローニングおよび発現：（Ｒｅｔ）；バキュロウイルスドナーベクターｐＦＢ−ＧＳＴＸ３を使用して、Ｒｅｔの野生型キナーゼドメインに対応するヒトＲｅｔ−Ｍｅｎ２Ａの細胞質内キナーゼドメインの６５８−１０７２アミノ酸領域を発現する組換えバキュロウイルスを製造する。Ｒｅｔの細胞質ドメインのコーディング配列を、ＰＣＲによって、Dr. James Fagin、College of Medicine, University of Cincinnati(Novartis 共同研究者)から受領したプラスミドｐＢＡＢＥｐｕｒｏ  ＲＥＴ−Ｍｅｎ２Ａから増幅する。増幅したＤＮＡフラグメントおよびｐＦＢ−ＧＳＴＸ３ベクターを、ＳａｌＩおよびＫｐｎＩでの消化によってライゲーションに適合させる。これらのＤＮＡフラグメントのライゲーションによって、バキュロウイルスドナープラスミドｐＦＢ−ＧＸ３−Ｒｅｔ（−Ｍｅｎ２Ａ）が得られる。
【０１１４】
（Ｔｉｅ−２／Ｔｅｋ）：バキュロウイルスドナーベクターｐＦｂａｃＧ０１を使用して、ＧＳＴとＮ末端で融合しているヒトＴｅｋの細胞質キナーゼドメイン（共同調査に基づき、Dr. Marme, Institute of Molecular Medicine, Freiburg, Germanyから提供）の７７３−１１２４アミノ酸領域を発現する組換えバキュロウイルスを製造する。Ｔｅｋを、ＥｃｏＲＩ切除およびＥｃｏＲＩ消化ｐＦｂａｃＧ０１へのライゲーションによってｐＦｂａｃＧ０１トランスファーベクターに再クローン化する（ＦＢＧ−Ｔｉｅ２／Ｔｅｋ）。
【０１１５】
（ＦＧＦＲ−３−Ｋ６５０Ｅ）：バキュロウイルスドナーベクターｐＦａｓｔＢａｃＧＳＴ２を使用して、ＦＧＦＲ−３、Ｎ−ｔｅｒｍｉｎａｌｌｙ  ｆｕｓｅｄ  ｔｏ  ＧＳＴとＮ末端で融合しているヒトＦＧＦＲ−３の細胞質キナーゼドメイン（共同調査に基づき、Dr. Jim Griffin, Dana Farber Cancer Institute, Boston, USAから提供）の４１１−８０６アミノ酸（ａａ）領域を発現する組換えバキュロウイルスを製造する。アミノ酸４１１−８０６をコード化するＤＮＡをＰＣＲで増幅し、ｐＦａｓｔＢａｃ−ＧＴ２ベクターに挿入してｐＦＢ−ＧＴ２−ＦＧＦＲ３−ｗｔを得る。このプラスミドを順に使用して、Ｋ６５０で変異を有するＦＧＦＲ３（４１１−８０６）をコード化するベクターを、ｐＦＢ−ＧＴ２−ＦＧＦＲ３−Ｋ６５０Ｅを製造するためのＳｔｒａｔａｇｅｎｅ  ＸＬ−Ｓｉｔｅ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔを使用して製造する。ウイルスの製造、Ｓｆ９細胞におけるタンパク質の発現およびＧＳＴ融合タンパク質の精製を、下記のとおり行う。
【０１１６】
ウイルスの製造：キナーゼドメインを含むトランスファーベクターを、ＤＨ１０Ｂａｃ細胞系（GIBCO）にトランスフェクトし、選択寒天プレートに置く。融合配列がウイルス性ゲノム（バクテリアによって担持されている）に挿入されていないコロニーは青色を示す。１個の白色コロニーを採取し、ウイルス性ＤＮＡ（bacmid）をバクテリアから、標準的なプラスミド精製法によって単離する。Ｓｆ９細胞またはＳｆ２１細胞  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎを、２５ｃｍ２フラスコ内で、ウイルス性ＤＮＡでＣｅｌｌｆｅｃｔｉｎ試薬を用いてトランスフェクトする。
【０１１７】
Ｓｆ９細胞における小規模タンパク質発現の測定：ウイルス含有培地をトランスフェクト細胞培養物から回収し、その力価を上昇させる感染のために使用する。２周の感染の後に得たウイルス含有培地を、大規模タンパク質発現に使用する。大規模タンパク質発現のために、１００ｃｍ２丸底組織培養プレートに５×１０７細胞／プレートを播種し、ウイルス含有培地１ｍＬ（約５ＭＯＩ）で感染させる。３日後、細胞をプレートから掻爬し、５００ｒｐｍで５分間遠心分離する。１０〜２０の細胞ペレット、１００ｃｍ２プレートを、氷冷溶解バッファー（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１％  ＮＰ−４０、１ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍＭ  ＰＭＳＦ）５０ｍＬに再懸濁する。細胞を氷上で１５分間攪拌し、５０００ｒｐｍで２０分間遠心分離する。
【０１１８】
ＧＳＴタグ化タンパク質の精製：遠心分離した細胞溶解物を、グルタチオン−セファロースカラム（Pharmacia）にロードし、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、２００ｍＭ  ＮａＣｌ  １０ｍＬで３回洗浄する。ＧＳＴタグ化タンパク質を、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  還元−グルタチオン、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＤＴＴ、１０％  グリセロールを１０回（１回１ｍＬ）適用して溶出し、−７０℃で貯蔵する。
【０１１９】
酵素活性の測定：精製ＧＳＴ−Ｒｅｔ、ＧＳＴ−ＴｅｋまたはＧＳＴ−ＦＧＦＲ−３−Ｋ６５０Ｅでのチロシンタンパク質キナーゼアッセイを、最終体積３０μＬ、最終濃度下記のとおりで行う：ＧＳＴ−Ｒｅｔ１５ｎｇを含むＲｅｔ、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、３μｇ／ｍＬ  ポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１、１％  ＤＭＳＯおよび２．０μＭ  ＡＴＰ（γ−［３３Ｐ］−ＡＴＰ  ０．１μＣｉ）。ＧＳＴ−Ｔｅｋ１５０ｎｇを含むＴｅｋ、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、３ｍＭ  ＭｎＣｌ２、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、０．０１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、２５０μｇ／ｍＬ  ＰＥＧ２０’０００、１０μｇ／ｍＬ  ポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１、１％  ＤＭＳＯおよび４．０μＭ  ＡＴＰ（γ−［３３Ｐ］−ＡＴＰ  ０．１μＣｉ）。ＧＳＴ−ＦＧＦＲ−３−Ｋ６５０Ｅ  １０ｎｇを含むＦＧＦＲ−３−Ｋ６５０Ｅ、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、３ｍＭ  ＭｎＣｌ２、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、０．０１ｍＭ  ＰＥＧ２０’０００、１０μｇ／ｍＬ  ポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１、１％  ＤＭＳＯおよび４．０μＭ  ＡＴＰ（γ−［３３Ｐ］−ＡＴＰ  ０．１μＣｉ）。活性を阻害剤の存在下または非存在下で、［γ３３Ｐ］ＡＴＰからの３３Ｐのポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１への取り込みの測定によってアッセイする。アッセイを９６ウェルプレートで、環境温度で２０分間、下記条件下で行い、１２５ｍＭ  ＥＤＴＡ２０μＬを加えて終了する。その後、反応混合物４０μＬをＩｍｍｏｂｉｌｏｎ−ＰＶＤＦ膜（Millipore, Bedford, MA, USA）（予め５分間メタノールに浸漬し、水でリンスし、５分間０．５％  Ｈ３ＰＯ４に浸漬した）に移し、真空源を取り外した真空マニフォールドにマウントする。全サンプルをスポットした後、真空を接続し、各ウェルを０．５％  Ｈ３ＰＯ４２００μＬでリンスする。膜を除去し、シェーカー上で１．０％  Ｈ３ＰＯ４で４回、エタノールで１回洗浄する。膜を、環境温度で乾燥し、Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ９６ウェルフレームに乗せ、Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  ＴＭ（Packard）１０μＬ／ウェルを加えた後に、数える。４つの濃度（通常０．０１、０．１、１および１０μＭ）での各化合物の阻害率の直線回帰分析（２連）によってＩＣ５０値を計算する。タンパク質キナーゼ活性１単位を、［γ３３Ｐ］ＡＴＰから基質タンパク質への１分あたり、タンパク質１ｍｇあたり、３７℃で移動した１ナノモルの３３Ｐ  ＡＴＰと定義する。好ましくは５０ｎＭ〜５００ｎＭのＩＣ５０を、本発明の式ＩＡの化合物で見出すことができる。
【０１２０】
ＦＧＦＲ３（酵素アッセイ）
精製ＦＧＦＲ３（Upstate）でのキナーゼ活性アッセイを、キナーゼバッファー（３０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、１５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、４．５ｍＭ  ＭｎＣｌ２、１５μＭ  Ｎａ３ＶＯ４および５０μｇ／ｍＬ  ＢＳＡ）中酵素０．２５μｇ／ｍＬおよび基質（５μｇ／ｍＬビオチン−ポリ−ＥＹ（Ｇｌｕ、Ｔｙｒ）（CIS-US, Inc.）および３μＭ  ＡＴＰ）を含む最終体積１０μＬで行う。２つの溶液を製造する：キナーゼバッファー中ＦＧＦＲ３酵素を含む第１の溶液５μｌを、第１に３８４−フォーマットＰｒｏｘｉＰｌａｔｅ（登録商標）（Perkin-Elmer）に分配し、ＤＭＳＯに溶解した化合物５０ｎＬを加え、その後キナーゼバッファー中基質（ポリ−ＥＹ）およびＡＴＰを含む第２の溶液５μｌを各ウェルに加える。反応物を室温で１時間インキュベートし、ＨＴＲＦ検出混合物（３０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．５、０．５Ｍ  ＫＦ、５０ｍＭ  ＥＴＤＡ、０．２ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、１５μｇ／ｍＬ  ストレプトアビジン−ＸＬ６６５（CIS-US, Inc.）および１５０ｎｇ／ｍＬ  クリプテート結合抗−ホスホチロシン抗体（CIS-US, Inc.）を含む）１０μＬを加えて停止する。室温で１時間インキュベーションしてストレプトアビジン−ビオチン相互作用をさせ、時間分解蛍光シグナルをＡｎａｌｙｓｔ  ＧＴ（Molecular Devices Corp.）で読み取る。１２個の濃度（５０μＭ〜０．２８ｎＭで１：３希釈）での各化合物の阻害率の直線回帰分析によってＩＣ５０値を計算する。このアッセイにおいて、本発明の化合物は、２ｎＭ〜４００μＭ、より好ましくは５ｎＭ〜１００μＭのＩＣ５０を有し得る。
【０１２１】
ＦＧＦＲ３（細胞アッセイ）
本発明の化合物（＝式ＩＡの化合物）を、ＦＧＦＲ３細胞キナーゼ活性に依存する形質転換Ｂａ／Ｆ３−ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３細胞増殖活性の阻害能について試験する。Ｂａ／Ｆ３−ＴＥＬ−ＦＧＦＲ３を懸濁液中で８００，０００細胞／ｍＬまで、培養培地として１０％胎児ウシ血清を補ったＲＰＭＩ１６４０で培養する。細胞を３８４ウェルフォーマットプレートに５０μＬ培養培地中５０００細胞／ウェルに分配する。本発明の化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解および希釈する。１：３連続希釈の１２点をＤＭＳＯで製造し、典型的には１０ｍＭ〜０．０５μＭの濃度勾配とする。細胞に希釈化合物５０ｎＬを加え、細胞培養インキュベーター内で４８時間インキュベートする。細胞増殖によって作られる還元環境をモニターするために使用することができるＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）（TREK Diagnostic Systems）を細胞に、最終濃度１０％で加える。さらに４時間、３７℃で細胞培養インキュベーター内でインキュベーションした後、還元ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）（励起波長５３０ｎｍ、放射波長５８０ｎｍ）からの蛍光シグナルをＡｎａｌｙｓｔ  ＧＴ（Molecular Devices Corp.）で定量する。１２個の濃度での各化合物の阻害率の直線回帰分析によってＩＣ５０値を計算する。好ましくは２ｎＭ〜４００μＭのＩＣ５０値を、本発明の式ＩＡの化合物について見出すことができる。
【０１２２】
Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｐｒｏｆｉｌｅｒ（商標）−放射性酵素フィルター結合アッセイ
本発明の化合物を、キナーゼのパネルの個々のメンバーを阻害する能力について評価する（一部の、非限定的なキナーゼのリストには、Ａｂｌ、ＢＣＲ−Ａｂｌ、ＢＭＸ、ＦＧＦＲ３、Ｌｃｋ、ＪＮＫ１、ＪＮＫ２、ＣＳＫ、ＲＡＦ、ＭＫＫ６およびＰ３８が含まれる）。化合物を２連で、最終濃度１０μＭでこの一般的なプロトコルに従って試験する。キナーゼバッファー組成物と基質は、「Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｐｒｏｆｉｌｅｒ（商標）」パネルに含まれる異なるキナーゼのために変化することに注意する。化合物を２連で、最終濃度１０μＭでこの一般的なプロトコルに従って試験する。キナーゼバッファー組成物と基質は、「Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｐｒｏｆｉｌｅｒ（商標）」パネルに含まれる異なるキナーゼのために変化することに注意する。キナーゼバッファー（２．５μＬ、１０×−所望によりＭｎＣｌ２を含む）、活性キナーゼ（０．００１〜０．０１ユニット；２．５μＬ）、キナーゼバッファー中特定のまたはポリ（Ｇｌｕ４−Ｔｙｒ）ペプチド（５〜５００μＭまたは．０１ｍｇ／ｍｌ）、およびキナーゼバッファー（５０μＭ；５μＬ）をエッペンドルフ内で氷上で混合する。Ｍｇ／ＡＴＰ混合（１０μＬ；６７．５（または３３．７５）ｍＭ  ＭｇＣｌ２、４５０（または２２５）μＭ  ＡＴＰおよび１μＣｉ／μｌ［γ−３２Ｐ］−ＡＴＰ（３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ））を加え、反応物を約３０℃で約１０分間インキュベートする。反応混合物を、２ｃｍ×２ｃｍのＰ８１（ホスホセルロース、陽性荷電ペプチド基質のために）またはＷｈａｔｍａｎ  Ｎｏ．１（ポリ（Ｇｌｕ４−Ｔｙｒ）ペプチド基質のために）の四角い紙にスポットする（２０μＬ）。アッセイスクウェアを４回、各５分間、０．７５％リン酸で洗浄し、アセトンで５分間、１回洗浄する。アッセイスクウェアをシンチレーションバイアルに移し、シンチレーションカクテル５ｍｌを加え、ペプチド基質への３２Ｐ取り込み（ｃｐｍ）をＢｅｃｋｍａｎシンチレーションカウンターで定量する。阻害率を各反応について計算する。
【０１２３】
式ＩＡの化合物はまた、他のチロシンタンパク質キナーゼ、例えばとりわけ、増殖制御およびヒト細胞を含む動物、とりわけ哺乳類細胞の形質転換に関与しているｃ−Ｓｒｃキナーゼを阻害することができる。適当なアッセイはAndrejauskas-Buchdunger et al., Cancer Res. 52, 5353-8(1992)に記載されている。この試験アッセイを使用して、式ＩＡの化合物は例えば０．０５〜５００μＭの範囲のｃ−Ｓｒｃの阻害についてのＩＣ５０値を示す。
【０１２４】
さらに、式ＩＡの化合物はまた、ｂ−ｒａｆ（Ｖ５９９Ｅ）を阻害するために使用することができる。Ｂ−Ｒａｆ−Ｖ５９９Ｅの活性を、阻害剤の存在下または非存在下で、［γ３３Ｐ］ＡＴＰからの３３Ｐの（Ｈｉｓ）−ＩκＢへの取り込みを測定することによってアッセイする。試験化合物をＤＭＳＯ（１０ｍＭ）に溶解し、−２０℃で貯蔵する。連続希釈をＤＭＳＯで新たに製造し、さらに純水で希釈して３％ＤＭＳＯ中３倍濃度の試験溶液を得る。アッセイの最終体積（３０μｌ）は、試験溶液（１％ＤＭＳＯ）１０μｌ、アッセイ混合物（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、３ｍＭ  ＭｎＣｌ２、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｎＭ  ＤＴＴ、３μｇ／ｍｌ（Ｈｉｓ）−ＩκＢ１０μｌ  １％ＤＭＳＯおよび３．５μＭ  ＡＴＰ［γ３３Ｐ］−ＡＴＰ  ０．１μＣｉ）、および酵素希釈物（ＧＳＴ−Ｂ−Ｒａｆ−Ｖ５９９Ｅ  ６００ｎｇ）１０μｌを含む。ピペッティング工程を、ＭｕｌｔｉＰＲＯＢＥ  Ｉｉｘ、ＭｕｌｔｉＰＲＯＢＥ  ＩＩＬｘまたはＨａｍｉｌｔｏｎＳＴＡＲロボットで、９６ウェルフォーマットで行うようにプログラムする。アッセイを文献に記載の通りに行い（C. Garcia-Echeverria et al., Cancer Cel.. 5, 231-9(2004)参照）、１２５ｍＭ  ＥＤＴＡ２０μｌを加えて終了する。フィルター結合法によるリン酸化ペプチドの結合を、下記の通りに行う：反応混合物４０μＬをＩｍｍｏｂｉｌｏｎ−ＰＶＤＦ膜（予め５分間メタノールに浸漬し、水でリンスし、５分間０．５％  Ｈ３ＰＯ４に浸漬した）に移し、真空源を取り外した真空マニフォールドにマウントする。全サンプルをスポットした後、真空を接続し、各ウェルを０．５％  Ｈ３ＰＯ４２００μＬでリンスする。膜を除去し、シェーカー上で１．０％  Ｈ３ＰＯ４で４回、エタノールで１回洗浄する。膜を、環境温度で乾燥し、Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ９６ウェルフレームに乗せ、Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ（商標）１０μＬ／ウェルを加えた後に、数える。プレートを最終的にシールし、マイクロプレートシンチレーションカウンター（TopCount NXT, TopCount NXT HTS）で数える。フラッシュプレート法の場合は、キナーゼ反応をポリスチレンベースのプラスチックプレート中で行い、６０分後に１２５ｍＭ  ＥＤＴＡ２０μｌを加えて停止する。捕捉のために（６０分、ＲＴ）、ビオチニル化基質をＮｉｃｋｅｌ被覆フラッシュプレートに移す。アッセイプレートをＰＢＳで３回洗浄し、室温で乾燥する。その後、プレートをシールし、マイクロプレートシンチレーションカウンター（TopCount NXT, TopCount NXT HTS）で数える。４つの濃度（通常０．０１、０．１、１および１０μＭ）での、または１０μＭから開始してその後１：３希釈で８個のポイントのＩＣ５０として、各化合物の阻害率の直線回帰分析（２連）によってＩＣ５０値を計算する。ｂ−ｒａｆ阻害について、式ＩＡの化合物は好ましくは、０．０５〜５００μＭのＩＣ５０値を示す。
【０１２５】
ＦＬＴ３受容体キナーゼ
ＦＬＴ３標的化合物を調査するために、２つの異なる種類のアッセイを行うことができる：
Ｆｌｔ３キナーゼ活性を下記の通り測定する：バキュロウイルスドナーベクターｐＦｂａｃＧ０１（GIBCO）を使用して、ヒトＦｌｔ３の細胞質キナーゼドメインのアミノ酸５６３−９９３のアミノ酸領域を発現する組換えバキュロウイルスを製造する。Ｆｌｔ３の細胞質ドメインのコーディング配列をＰＣＲで、ヒトｃ−ＤＮＡライブラリー（Clontech）から増幅する。増幅したＤＮＡフラグメントおよびｐＦｂａｃＧ０１ベクターをＢａｍＨ１およびＥｃｏＲＩで消化して、ライゲーションに適合するようにする。これらのＤＮＡフラグメントのライゲーションによって、バキュロウイルスドナープラスミドＦｌｔ−３（１．１）が得られる。ウイルスの製造、Ｓｆ９細胞におけるタンパク質の発現およびＧＳＴ−融合タンパク質の精製を下記のとおりに行う：
【０１２６】
ウイルスの製造：ｃ−Ｋｉｔキナーゼドメインを含むトランスファーベクターｐＦｂａｃＧ０１−Ｆｌｔ−３を、ＤＨ１０Ｂａｃ細胞系（GIBCO）にトランスフェクトし、そしてトランスフェクトした細胞を選択寒天プレートに播種する。融合配列がウイルス性ゲノム（バクテリアによって担持されている）に挿入されていないコロニーは青色を示す。１個の白色コロニーを採取し、ウイルス性ＤＮＡ（bacmid）をバクテリアから、標準的なプラスミド精製法によって単離する。Ｓｆ９細胞またはＳｆ２１細胞（American Type Culture Collection）を、フラスコ内で、ウイルス性ＤＮＡでＣｅｌｌｆｅｃｔｉｎ試薬を用いてトランスフェクトする。
【０１２７】
Ｓｆ９細胞における小規模タンパク質発現の測定：ウイルス含有培地をトランスフェクト細胞培養物から回収し、その力価を上昇させる感染のために使用する。２周の感染の後に得たウイルス含有培地を、大規模タンパク質発現に使用する。大規模タンパク質発現のために、１００ｃｍ２丸底組織培養プレートに５×１０７細胞／プレートを播種し、ウイルス含有培地１ｍＬ（約５ＭＯＩ）で感染させる。３日後、細胞をプレートから掻爬し、５００ｒｐｍで５分間遠心分離する。１０〜２０の細胞ペレット、１００ｃｍ２プレートを、氷冷溶解バッファー（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１％  ＮＰ−４０、１ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍＭ  ＰＭＳＦ）５０ｍＬに再懸濁する。細胞を氷上で１５分間攪拌し、５０００ｒｐｍで２０分間遠心分離する。
【０１２８】
ＧＳＴタグ化タンパク質の精製：遠心分離した細胞溶解物を、グルタチオン−セファロースカラム（Pharmacia）にロードし、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、２００ｍＭ  ＮａＣｌ  １０ｍＬで３回洗浄する。ＧＳＴタグ化タンパク質を、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  還元−グルタチオン、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＤＴＴ、１０％  グリセロールを１０回（１回１ｍＬ）適用して溶出し、−７０℃で貯蔵する。
【０１２９】
酵素活性の測定：精製ＧＳＴ−Ｆｌｔ２でのチロシンタンパク質キナーゼアッセイを、酵素タンパク質２００〜１８００ｎｇ（具体的な活性に依存する）、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．６、３ｍＭ  ＭｎＣｌ２、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、１０μＭ  Ｎａ３ＶＯ４、５μｇ／ｍＬ  ポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１、１％  ＤＭＳＯ、１．０μＭ  ＡＴＰおよび０．１μ  Ｃｉ［γ３３Ｐ］ＡＴＰを含む最終体積３０μＬ中で行う。活性を阻害剤の存在下または非存在下で、［γ３３Ｐ］ＡＴＰからの３３Ｐのポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）基質への取り込みの測定によってアッセイする。アッセイ（３０μＬ）を９６ウェルプレートで、環境温度で２０分間、下記条件下で行い、１２５ｍＭ  ＥＤＴＡ２０μＬを加えて終了する。その後、反応混合物４０μＬをＩｍｍｏｂｉｌｏｎ−ＰＶＤＦ膜（Millipore, Bedford, MA, USA）（予め５分間メタノールに浸漬し、水でリンスし、５分間０．５％  Ｈ３ＰＯ４に浸漬した）に移し、真空源を取り外した真空マニフォールドにマウントする。全サンプルをスポットした後、真空を接続し、各ウェルを０．５％  Ｈ３ＰＯ４２００μＬでリンスする。膜を除去し、シェーカー上で１．０％  Ｈ３ＰＯ４で４回、エタノールで１回洗浄する。膜を、環境温度で乾燥し、Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ９６ウェルフレームに乗せ、Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  ＴＭ（Packard）１０μＬ／ウェルを加えた後に、数える。４つの濃度（通常０．０１、０．１、１および１０μＭ）での各化合物の阻害率の直線回帰分析（２連）によってＩＣ５０値を計算する。タンパク質キナーゼ活性１単位を、［γ３３Ｐ］ＡＴＰから基質タンパク質への１分あたり、タンパク質１ｍｇあたり、３７℃で移動した１ナノモルの３３Ｐ  ＡＴＰと定義する。好ましくは５０ｎＭ〜５００ｎＭのＩＣ５０を、本発明の式ＩＡの化合物で見出すことができる。
【０１３０】
あるいはまたはさらに、細胞利用アッセイを行って突然変異ＦＬＴ３チロシンキナーゼ受容体の阻害剤を同定することができる。一般的な技術には、増殖についての突然変異ＦＬＴ３に依存する細胞系に対する可能性のある阻害剤の効果を、増殖についての突然変異ＦＬＴ３に依存しない細胞系と比較することを含む。２種の異なる形態の変異、活性化ＦＬＴ３を発現する細胞系を使用する：
−ＦＬＴ３突然変異を、受容体の膜近傍ドメイン内の「内部直列重複」（ＩＴＤ）と共に発現するＢａ／Ｆ３−ＦＬＴ３−ＩＴＤ細胞。
−８３５位のアスパラギンがチロシンに変化している突然変異を有するＦＬＴ３受容体を発現するＢａ／Ｆ３−ＦＬＴ３−Ｄ８３５Ｙ細胞。
【０１３１】
好ましくは、式ＩＡの化合物は、Ｂａ／Ｆ３−ＦＬＴ３−ＩＴＤおよびＢａ／Ｆ３−Ｄ８３５Ｙ細胞の両方の増殖を、５０ｎＭ〜５００μＭのＩＣ５０で阻害することができるが、一方でそれらは通常、形質転換していないＢａ／Ｆ３細胞の増殖を５００ｎＭの濃度まで阻害せず、そして式ＩＡの化合物のＢａ／Ｆ３−ＦＬＴ３−ＩＴＤ細胞に対する増殖阻害効果は、別の生存シグナルを提供するため高濃度のＩＬ−３を加えることによって、逆転し得る。ＬＴ３−依存細胞系の増殖を阻害するために必要な濃度で、式ＩＡの化合物は、突然変異ＦＬＴ３受容体（超活性化キナーゼ）を有さない様々なヒト白血病およびリンパ腫細胞に対して細胞毒性ではないことが示され得て、これは当該薬剤が細胞毒性薬剤として予期せぬ高い特異性を有することが示唆される。全体として、これらの結果は式ＩＡの化合物が、突然変異ＦＬＴ３受容体チロシンキナーゼ活性の強力な阻害剤であり、そして突然変異ＦＬＴ３受容体を有する患者の処置に使用するための有望な候補である。とりわけ、式ＩＡの化合物はＦＬＴ３受容体チロシンキナーゼ活性の阻害を、０．０５〜５００μＭの濃度で示すことができる。
【０１３２】
本明細書に記載の阻害試験に基づいて、本発明の式ＩＡの（またはその例示式の）化合物は、タンパク質キナーゼに依存する（＝とりわけ調節、より具体的にはその阻害に応答性の）障害、とりわけ増殖性疾患、例えば上記「発明の背景」の項に記載の疾患に対する治療効果を示す。
【０１３３】
式Ｉの化合物の抗腫瘍活性をインビボで示すための実験も存在する。例えば、式ＩＡの化合物が膀胱がんの増殖を阻害するかを試験するために、下記試験系を行うことができる：
ＲＴ−１１２ヒト尿膀胱移行細胞癌腫細胞系を、本発明に記載の化合物のインビボ活性を試験するためのインビボモデルとして使用する。この細胞系を、未処置原発性尿膀胱がんを有する女性患者（年齢は知らず）に由来する（１９７３年）。この細胞系は高レベルのＦＧＦ−Ｒ３を発現する。
【０１３４】
５×１０６細胞をマトリゲルと共に、メスヌードマウス（ｎ＝８）の横腹に皮下的に埋め込み、腫瘍を発現させる。腫瘍サイズを２〜３日ごとに、キャリパーを用いて手作業で測定する。動物重量を動物の健康の指標としてモニターする。
【０１３５】
阻害剤での処置を、腫瘍体積が〜１００ｍｍ３（〜７日）に達したときに開始する。マウスを腫瘍体積に従ってランダム化し、ビークル（ＮＭＰ／ＰＥＧ３００）または試験化合物（ｎ＝８）で１４日間処置する。投与経路は経口胃管法であり、スケジュールは１×日／７×週である。抗腫瘍活性を、Ｔ／Ｃ％（（処置動物の腫瘍体積の平均変化／対照動物の腫瘍体積の平均変化）×１００）として計算する。
【０１３６】
異種移植片腫瘍サイズをキャリパーを用いて手作業で測定し、腫瘍体積を式（Ｗ×Ｈ×Ｌ）×π／６（式中、幅（Ｗ）、高さＳ（Ｈ）および長さ（Ｌ）は３つの最大径である）を用いて見積もる。
【０１３７】
統計的評価を、ＳｉｇｍａＳｔａｔ  ２．０３を用いて行う。２個以上の動物群が実験に含まれるとき、統計的評価を絶対腫瘍体積または評価日の体重に基づいて、片側ＡＮＯＶＡ試験を使用して行う。対照群を他の処置群全てと比較するとき、Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ  ａｄ  ｈｏｃ  ｐｏｓｔ試験を使用する。全群を互いに対して評価するとき、ＴｕｋｅｙおよびＳＮＫ（Student-Newman-Keuls）ａｄ  ｈｏｃ  ｐｏｓｔ試験を使用する。
【０１３８】
腫瘍サンプルを切除し、液体窒素でスナップ凍結する。腫瘍を凍結したままで粉砕する。凍結粉末のアリコートを、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含む１％トリトン抽出バッファーに溶解する。溶解物を遠心分離でクリアーにし、タンパク質濃度を測定する。タンパク質溶解物を使用してＦＧＦＲ受容体および腫瘍の経路の阻害の程度を決定する。
【０１３９】
本発明の式ＩＡの化合物は、１０ｍｇ／ｋｇ以上の用量で腫瘍増殖を阻害し、そして逆行を誘導し得る。
【０１４０】
本発明に記載の式ＩＡの化合物によって阻害されるキナーゼの例は、上記ｃ−ＡｂｌおよびＢｃｒ−Ａｂｌ、とりわけＢｃｒ−Ａｂｌの阻害であり得る。他の阻害キナーゼは、受容体チロシンキナーゼＶＥＧＦ−Ｒ、とりわけＶＥＧＦ受容体ＫＤＲ（ＶＥＧＦ−Ｒ２）である。本発明の化合物はまた、Ｂｃｒ−Ａｂｌキナーゼの突然変異形態を阻害する。記載の化合物は、これらの１個以上、および／または他のタンパク質チロシンキナーゼおよび／または非受容体チロシンキナーゼＲａｆの阻害に、および／またはこれらの突然変異体の阻害に適当である。これらの活性を考慮すると、当該化合物はかかるタイプのキナーゼ、とりわけ記載のものの、とりわけ異常または過剰な活性に関与する疾患の処置に使用することができる。
【０１４１】
かかるタンパク質キナーゼ活性を調節する能力は、好ましくはかかるタンパク質キナーゼ活性の阻害に関する。
【０１４２】
例えば、ＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ活性の阻害剤として、本発明の化合物は１次的には血管の増殖を阻害し、そしてしたがって、例えば脱制御血管新生によって引き起こされる様々な疾患、とりわけ眼新血管形成によって引き起こされる疾患、とりわけ網膜症、例えば糖尿病性網膜症または加齢性黄斑変性、乾癬、血管芽腫、例えば血管腫、メサンギウム細胞増殖性障害、例えば慢性もしくは急性腎疾患、例えば糖尿病性網膜症、悪性腎硬化症、血栓性微小血管症候群または移植片拒絶、またはとりわけ、炎症性腎疾患、例えば糸球体腎炎、とりわけメサンギウム増殖性糸球体腎炎、溶血性尿毒症症候群、糖尿病性腎症、高血圧性腎硬化症、粉瘤、動脈再狭窄、自己免疫性疾患、糖尿病、子宮内膜症、慢性喘息、およびとりわけ腫瘍性疾患（固形腫瘍、または白血病および他の「液性腫瘍」、とりわけｃ−ｋｉｔ、ＫＤＲ、Ｆｌｔ−１もしくはＦｌｔ−３を発現するもの）、例えばとりわけ乳がん、結腸がん、肺がん（とりわけ小細胞性肺がん）、前立腺がんまたはカポジ肉腫に対して有効であり得る。式ＩＡの（またはその例示式の）化合物（またはそのＮ−オキシド）は、腫瘍の増殖を阻害し、そしてとりわけ腫瘍の転移性拡大および微小転移の増殖の予防に適している。
【０１４３】
本発明の化合物の標的キナーゼの１つのクラスは、Ｂｃｒ−Ａｂｌ突然変異である。この突然変異Ｇｌｕ２５５→リシン、Ｇｌｕ２５５→バリンまたはＴｈｒ３１５→イソロイシン、もっともとりわけＴｈｒ３１５→イソロイシン突然変異は、とりわけ記載され得る。
【０１４４】
他のＢｃｒ−Ａｂｌ突然変異には、Ｍｅｔ２４４→Ｖａｌ、Ｐｈｅ３１７→Ｌｅｕ、Ｌｅｕ２４８→Ｖａｌ、Ｍｅｔ３４３→Ｔｈｒ、Ｇｌｙ２５０→Ａｌａ、Ｍｅｔ３５１→Ｔｈｒ、Ｇｌｙ２５０→Ｇｌｕ、Ｇｌｕ３５５→Ｇｌｙ、Ｇｌｎ２５２→Ｈｉｓ、Ｐｈｅ３５８→Ａｌａ、Ｇｌｎ２５２→Ａｒｇ、Ｐｈｅ３５９→Ｖａｌ、Ｔｙｒ２５３→Ｈｉｓ、Ｖａｌ３７９→Ｉｌｅ、Ｔｙｒ２５３→Ｐｈｅ、Ｐｈｅ３８２→Ｌｅｕ、Ｇｌｕ２５５→Ｌｙｓ、Ｌｅｕ３８７→Ｍｅｔ、Ｇｌｕ２５５→Ｖａｌ、Ｈｉｓ３９６→Ｐｒｏ、Ｐｈｅ３１１→Ｉｌｅ、Ｈｉｓ３９６→Ａｒｇ、Ｐｈｅ３１１→Ｌｅｕ、Ｓｅｒ４１７→Ｔｙｒ、Ｔｈｒ３１５→Ｉｌｅ、Ｇｌｕ４５９→ＬｙｓおよびＰｈｅ４８６→Ｓｅｒが含まれる。
【０１４５】
式ＩＡの化合物はとりわけ、Ｆｌｔ−３のチロシンキナーゼドメインの阻害によるＡＭＬの処置に有用である。本発明のさらなる態様は、治療上有効量の請求項の化合物の投与を含む、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の処置法である。
【０１４６】
式ＩＡの化合物（またはそれらの、とりわけ薬学的に許容される、塩）は、ＦＧＦＲ阻害能のために、（とりわけ異常な）増殖、組織修復、リモデリング；細胞遊走、細胞分化、骨および／または肢形成、創傷治癒、シグナル伝達、造血および／または血管新生、ならびに腫瘍形成、または腫瘍もしくはがん、例えば転移および転移形成の処置に、とりわけヒトの腫瘍、例えば小細胞性肺がん、扁平上皮癌腫（頭部および頸部）、乳がん、胃がん、例えば膵臓がん、卵巣腺がん、結腸がんおよび／または前立腺がん、および星細胞腫、神経膠腫、膀胱がん、上皮がん、例えば膀胱がんまたは頸部がん、多発性骨髄腫、扁平上皮癌腫（頭部および頸部）、例えば経口扁平上皮細胞癌腫、網膜芽腫、肉腫、例えば滑膜癌腫、および／または皮膚腫瘍；８ｐ１１骨髄増殖性症候群＝好酸球性骨髄増殖性症候群（ＥＭＳ）；骨格異常、小人症、例えば軟骨形成不全、軟骨低形成症および小人症候群、骨格形成異常、例えば低軟骨形成、発育の遅延を伴う重症軟骨形成不全、黒色表皮症、致死性異形成、頭蓋骨癒合症表現型、例えばミュンケ冠状頭蓋骨癒合症および黒色表皮症を有するクルゾン症候群、パイファー症候群、抑制性軟骨突然変異、骨増殖阻害；炎症性または自己免疫性疾患、例えばリウマチ性関節炎（ＲＡ）、コラーゲンＩＩ関節炎、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、乾癬、若年性発症糖尿病、シェーグレン病、甲状腺疾患、サルコイドーシス、自己免疫性ブドウ膜炎、炎症性腸疾患（クローン病および潰瘍性大腸炎）、セリアック病および／または；常染色体優性低リン酸血症性くる病（ＡＤＨＲ）、Ｘ染色体連結低リン酸血症性くる病（ＸＬＨ）、腫瘍誘導性骨軟化症（ＴＩＯ）、繊維性骨形成異常（ＦＨ）；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；肥満、糖尿病および／またはそれに関連する疾患、例えばメタボリック症候群、心臓血管疾患、高血圧、異常コレステロールレベルおよびトリグリセリドレベル、皮膚障害（例えば感染、静脈瘤、黒色表皮症、湿疹、運動不耐症、２型糖尿病、インシュリン抵抗性、高コレステロール血症、胆石症、整形外科的傷害、血栓塞栓疾患、冠状動脈または血管制限（例えばアテローム性動脈硬化症）、日中の眠気、睡眠時無呼吸、末期腎臓疾患、胆嚢疾患、痛風、熱障害、免疫応答障害、呼吸機能障害、損傷後感染、不妊、肝臓疾患、腰疼痛、産科および婦人科合併症、膵炎、卒中、手術合併症、緊張性尿失禁および／または消化器障害の処置に有用である。
【０１４７】
哺乳類の軟骨の局所的新軟骨形成を促進するための方法であって、軟骨に局所的に、あるキナーゼ阻害剤を投与することを含んでなる方法は、ＷＯ２００６／０３８１１２に記載されている。おどろくべきことに、本明細書に定義の式ＩＡの化合物を同じ方法に使用し得ることを見出した。したがって、本発明はまた、哺乳類の軟骨の局所的新軟骨形成を促進するための方法であって、軟骨に局所的に、上記定義の式（ＩＡ）のウレア誘導体、またはその薬学的に許容される塩、水和物、溶媒和物、エステル、Ｎ−オキシド保護誘導体、個々のアイソマーおよびアイソマーの混合物、あるいはそのプロドラッグを、局所的新軟骨形成を促進するのに有効な量で投与することを含んでなる方法に関する。式ＩＡの化合物はさらに、新軟骨形成に関連する骨関節炎の処置に有用である。
【０１４８】
「処置」なる用語には、例えば疾患の発症のおそれがあるかまたはあり得ることを示す突然変異または変化が見出された患者における予防的処置または前記疾患、とりわけ上記疾患の１種以上の好ましくは治療的（これらに限定されないが、緩和、治療、症状軽減、症状減少、疾患もしくは症状抑制、進行の遅延、キナーゼ制御および／またはキナーゼ阻害を含む）処置も含む。
【０１４９】
動物の処置が好ましい。動物は、好ましくは温血動物、より好ましくは哺乳類である。ヒト（一般的に「動物」の範囲内でもある）が、とりわけ患者または上記疾患のリスクが（例えば何らかの突然変異または他の特徴のために）予見されるヒトである。
【０１５０】
医薬組成物、方法および使用
本発明はまた、式ＩＡ（またはその例示式）の化合物またはそのＮ−オキシドを有効成分として含む医薬組成物であって、かつとりわけ上記疾患の処置に使用することができる組成物に関する。
【０１５１】
本発明の薬理学的に許容される化合物は、例えば薬学的に有効な量の式ＩＡ（またはその例示式）の化合物またはその薬学的に許容される塩を有効成分として、顕著な量の１種以上の無機または有機、固体または液体の薬理学的に許容される担体と共に、またはその混合物を含む医薬組成物の製造のために使用することができる。
【０１５２】
本発明はまた、温血動物、とりわけヒト（または温血動物、とりわけヒトに由来する細胞または細胞系、例えばリンパ球）への投与に適した、チロシンタンパク質キナーゼ活性の阻害に応答する疾患、とりわけ式ＩＡ（またはその例示式）の化合物の使用が好ましいと記載されている上記疾患の１種の処置、または本発明のより広い局面において、予防のための医薬組成物であって、式ＩＡ（またはその例示式）の新規化合物またはその薬学的に許容される塩を前記阻害に有効な量で、少なくとも１種の薬学的に許容される担体と共に含んでなる医薬組成物に関する。
【０１５３】
温血動物、とりわけヒトへの経腸投与、例えば経鼻、頬側、直腸、またはとりわけ経口投与のための、および非経腸投与、例えば静脈内、筋肉内または皮下投与のための組成物がとりわけ好ましい。組成物は有効成分を単独で、または好ましくは薬学的に許容される担体と共に含む。有効成分の投与量は処置する疾患および種、年齢、体重および個体の状態、個体の薬物動力学データ、ならびに投与形態に依存する。
【０１５４】
本発明はとりわけ、式ＩＡ（またはその例示式）の化合物、互変異性体、Ｎ−オキシドまたは薬学的に許容される塩、またはその水和物もしくは溶媒和物、および少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【０１５５】
本発明はまた、ヒトまたは動物の予防的またはとりわけ治療的管理法に使用するための医薬組成物、（とりわけ腫瘍の処置用組成物の形態での）その製造法、および疾患（とりわけ腫瘍）、とりわけ上記のものの処置法に関する。
【０１５６】
本発明はまた、式ＩＡ（またはその例示式）の化合物またはそのＮ−オキシドを活性成分（有効成分）として含む医薬組成物の製造のための、方法または式ＩＡ（またはその例示式）の化合物またはそのＮ−オキシドの使用に関する。
【０１５７】
医薬組成物は、約１％〜約９５％の有効成分を含み、単一投与形態は好ましい態様において約２０％〜約９０％の有効成分を含み、そして形態は好ましい態様において約５％〜約２０％の有効成分を含む。単位投与形態は、例えばコーティング錠、非コーティング錠、アンプル、バイアル、座薬、またはカプセル剤である。さらなる投与形態は、例えば軟膏、クリーム、ペースト、フォーム、チンキ、スプレー等である。例えば、カプセル剤は約０．０５ｇ〜約１．０ｇの有効成分を含む。
【０１５８】
本発明の医薬組成物を、自体公知の方法、例えば常套の混合、造粒、コーティング、溶解または凍結乾燥によって製造する。
【０１５９】
有効成分の溶液、および懸濁液または分散剤、とりわけ等張水溶液、分散剤または懸濁剤が好ましく、これは例えば有効成分を単独でまたは担体と共に含む凍結乾燥組成物の場合には使用前に調製することができる。医薬組成物は滅菌されていてよく、および／または賦形剤、例えば保存剤、安定化剤、湿潤剤および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧を制御するための塩、および／またはバッファーを含んでいてもよく、そして自体公知の方法、例えば常套の溶解および凍結乾燥法によって製造される。当該溶液または懸濁液は、増粘剤または可溶化剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルピロリドンまたはゼラチンを含んでいてもよい。
【０１６０】
油中懸濁液は、油成分として注射目的に慣用の、植物、合成または半合成油を含む。それらはそれ自体、とりわけ、酸性成分として８〜２２、とりわけ１２〜２２個の炭素原子を有する長鎖脂肪酸、例えばラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マーガリン酸、ステアリン酸、アラキドン酸、ベヘン酸または対応する不飽和酸、例えばオレイン酸、エライジン酸、エルカ酸、ブラシド酸もしくはリノレン酸を含む液体脂肪酸エステルとして記載され、所望により抗酸化剤、例えばビタミンＥ、β−カロチンまたは３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシトルエンを加える。それらの脂肪酸エステルのアルコール成分は、最大６個の炭素原子を有しており、モノまたはトリヒドロキシ、例えばモノ、ジまたはトリヒドロキシアルコール、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールまたはペンタノール、またはそのアイソマー、とりわけグリコールおよびグリセロールである。以下に脂肪酸エステルの例を記載する：エチルオレエート、イソプロピルミリステート、イソプロピルパルミテート、「Ｌａｂｒａｆｉｌ  Ｍ  ２３７５」（ポリオキシエチレングリセロールトリオレエート、Gattefosse, Paris）、「Ｍｉｇｌｙｏｌ  ８１２」（Ｃ８〜Ｃ１２鎖長を有する飽和脂肪酸のトリグリセリド、Huels AG, Germany）、とりわけ植物油、例えば綿実油、アーモンド油、オリーブ油、ヒマシ油、ゴマ油、ダイズ油およびよりとりわけ、ラッカセイ油である。
【０１６１】
注射組成物は滅菌条件下で常套の方法で製造する；同じものを、組成物をアンプルまたはバイアルに導入し、容器を封することに適用する。
【０１６２】
経口投与用医薬組成物を、有効成分と固体担体を組み合わせることによって、所望により得られた混合物を造粒し、そして所望によりまたは必要により、適当な賦形剤を錠剤、糖衣錠核またはカプセルに加えた後に混合物を処理することによって、得ることができる。測定した量の有効成分を分散または放出することができる可塑性担体にそれらを導入することも可能である。
【０１６３】
適当な担体は、とりわけ増量剤、例えば糖、例えばラクトース、サッカロース、マンニトールまたはソルビトール、セルロース製剤および／またはリン酸カルシウム、例えばリン酸３カルシウムまたはリン酸水素カルシウム、および結合剤、例えばコーン、コムギ、コメまたはポテトスターチを使用する例えばデンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドン、および／または所望により、崩壊剤、例えば上記デンプン、および／またはカルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸またはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムである。賦形剤はとりわけ、流動調節剤および滑沢剤、例えばケイ酸、タルク、ステアリン酸またはその塩、例えばステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム、および／またはポリエチレングリコールである。糖衣錠核は、適当な、所望により腸溶、コーティングをされており、とりわけ、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよび／またはチタンジオキシドを含んでいてもよい濃縮糖溶液、または適当な有機溶媒のコーティング溶液、または腸溶コーティング溶液の製造のために、適当なセルロース製剤、例えばエチルセルロースフタレートまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートの溶液を使用する。カプセル剤はゼラチン製乾燥充填カプセル剤、ゼラチンと可塑剤、例えばグリセロールまたはロルビトールを含む軟密封カプセル剤である。乾燥充填カプセル剤は、顆粒形態の有効成分を、例えば増量剤、例えばラクトース、結合剤、例えばデンプン、および／または流動促進剤、例えばタルクまたはステアリン酸マグネシウム、および所望により安定化剤を含んでいてもよい。軟カプセル剤において、有効成分を好ましくは、適当な油状賦形剤、例えば脂肪油、パラフィン油、または液体ポリエチレングリコールに溶解または懸濁する。安定化剤および／または抗菌剤を加えることも可能である。染料または顔料を錠剤または糖衣コーティング、またはカプセルケースに、例えば異なる用量の有効成分を同定または支持する目的で、加えることもできる。
【０１６４】
錠剤核は、適当な、所望により腸溶、コーティングをされており、とりわけ、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよび／またはチタンジオキシドを含んでいてもよい濃縮糖溶液、または適当な有機溶媒もしくは溶媒混合物のコーティング溶液、または腸溶コーティング溶液の製造のために、適当なセルロース製剤を使用する。
【０１６５】
経口投与用医薬組成物はまた、ゼラチンからなる硬カプセル剤、およびゼラチンおよび可塑剤からなる軟密封カプセル剤を含む。硬カプセル剤は有効成分を顆粒の形態で、例えば増量剤、結合剤および／または流動促進剤、および所望により安定化剤との組合せで含んでいてもよい。軟カプセル剤において、有効成分は好ましくは、適当な液性賦形剤中に溶解または懸濁しており、安定化剤および界面活性剤を加えてもよい。
【０１６６】
直腸投与に適した医薬組成物は、例えば有効成分と座薬ベースの組合せからなる座薬である。
【０１６７】
非経腸投与のために、増粘剤物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび／またはデキストラン、および所望により安定化剤を含む水溶性形態、例えば水溶性塩の有効成分の水溶液、または水性注射用懸濁液が適している。有効成分は所望により賦形剤と共に、凍結乾燥形態であってもよく、そして非経腸投与の前に適当な溶媒を加えることによって溶液とすることができる。
【０１６８】
例えば非経腸投与に使用するような溶液は、輸液溶液として使用することもできる。
【０１６９】
本発明は同様に、本明細書に記載の１種の疾患（病的状態）、とりわけチロシンキナーゼ、さらにとりわけ上記のもの、最もとりわけＦＧＦＲに応答する疾患、とりわけ対応する腫瘍性疾患の処置法に関する。式ＩＡ（またはその例示式）の化合物またはそのＮ−オキシド（これはまた、塩、エステルなども含む）をそれ自体、またはとりわけ医薬組成物の形態で、予防的または治療的に、好ましくは前記疾患に有効な量で、好ましくはかかる処置を必要とする動物に、好ましくは温血動物、例えばヒトに、投与することができる。約７０ｋｇの体重を有する個体の場合、投与される１日用量は例えば、約０．００１ｇ〜約１２ｇ、好ましくは例えば約０．１ｇ〜約３ｇの本発明の化合物である。「約」とは好ましくは、それぞれ与えられた数字から最大１０％の逸脱、より好ましくは１％未満の逸脱であることを意味する。
【０１７０】
「応答する」疾患は、何らかの有利な効果が見出され得ることが示され得るものである。
【０１７１】
本発明はまた、タンパク質キナーゼ依存性疾患の処置法であって、温血動物、例えばヒトに、１種以上の細胞増殖抑制剤または細胞毒性化合物、例えばＧｌｉｖｅｃ（登録商標）を、本発明の化合物との組合せで、同時にまたは別の時点で投与することを含んでなる方法を提供する。「同時」なる用語は、速やかに連続して、または他方の直後を意味すると理解される。
【０１７２】
本発明はまた、式ＩＡ（またはその例示式）の化合物またはそのＮ−オキシド、またはその薬学的に許容される塩、とりわけ好ましいと記載されている式ＩＡ（またはその例示式）の化合物それ自体、または少なくとも１種の薬学的に許容される担体との医薬製剤の形態での使用であって、１種以上の上記疾患、好ましくはタンパク質キナーゼの阻害に応答する疾患、とりわけ腫瘍疾患、よりとりわけＡｂｌチロシンキナーゼの阻害に応答する白血病の治療的および予防的管理のための使用に関する。
【０１７３】
各場合に使用される好ましい投与量、組成物および医薬製剤（医薬）の製造は上記の通りである。
【０１７４】
式ＩＡ（またはその例示式）の化合物はまた、他の抗増殖性薬剤との組合せで有利に使用することができる。抗増殖性薬剤には、これらに限定されないが、アロマターゼインヒビター、抗エストロゲン剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、微小管活性花材、アルキル化剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ＣＯＸ−２阻害剤、ＭＭＰ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、抗新生物代謝拮抗剤、プラチナ化合物、タンパク質キナーゼ活性およびＡＴＰアーゼ活性を減少する化合物、さらなる抗血管形成化合物、ゴナドレリンアゴニスト、抗アンドロゲン剤、ベンガミド、ビスホスホネート、抗増殖性抗体、テモゾロミド（ＴＥＭＯＤＡＬ（登録商標））、デキサメタゾンのようなエステロイド、ベルケイドのようなプロテアソーム阻害剤、および／またはサリドマイドが含まれる。
【０１７５】
「アロマターゼインヒビター」なる用語は、本明細書において使用するとき、エストロゲン生産を阻害し、すなわち基質のアンドロステンジオンおよびテストステロンのエストロンおよびエストラジオールへのそれぞれの変換を阻害する化合物に関する。かかる用語には、これらに限定されないが、ステロイド、とりわけエキセメスタンおよびホルメスタン、およびとりわけ非ステロイド、とりわけアミノグルテチミド、ボロゾール、ファドロゾール、アナストロゾールおよび、極めてとりわけ、レトロゾールが含まれる。エキセメスタンは例えば、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。ホルメスタンは例えば、ＬＥＮＴＡＲＯＮ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。ファドロゾールは例えば、ＡＦＥＭＡ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。アナストロゾールは例えば、ＡＲＩＭＩＤＥＸ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。レトロゾールは例えば、ＦＥＭＡＲＡ（商標）またはＦＥＭＡＲ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。アミノグルテチミドは例えば、ＯＲＩＭＥＴＥＮ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。
【０１７６】
アロマターゼインヒビターである抗新生物薬剤を含む本発明の組合せ剤が、ホルモン受容体陽性乳がんの処置にとりわけ有用である。
【０１７７】
「抗エストロゲン剤」なる用語は、本明細書において使用するとき、エストロゲン受容体レベルでエストロゲンの効果と拮抗する化合物に関する。かかる用語には、これらに限定されないが、タモキシフェン、フルベストラント、ラロキシフェンおよびラロキシフェン塩酸塩が含まれる。タモキシフェンは例えば、ＮＯＬＶＡＤＥＸ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。ラロキシフェン塩酸塩は例えば、ＥＶＩＳＴＡ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。フルベストラントは、ＵＳ  ４，６５９，５１６に記載の通りに製剤することができるか、または例えば、ＦＡＳＬＯＤＥＸ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。
【０１７８】
「トポイソメラーゼＩ阻害剤」なる用語には、本明細書において使用するとき、これらに限定されないが、トポテカン、イリノテカン、９−ニトロカンプトテシンおよび巨大分子カンプトテシン結合ＰＮＵ−１６６１４８（ＷＯ９９／１７８０４の化合物Ａ１）が含まれる。イリノテカンは例えば、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。トポテカンは例えば、ＨＹＣＡＭＴＩＮ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。
【０１７９】
「トポイソメラーゼＩＩ阻害剤」なる用語には、本明細書において使用するとき、これらに限定されないが、アントラサイクリン、ドキソルビシン（リポソーム製剤を含む、例えばＣＡＥＬＹＸ（商標））、エピルビシン、イダルビシンおよびネムロビシン、アントラキノンミトキサントロンおよびロソキサントロン、およびポドフィロトキシン、エトポシド、およびテニポシドが含まれる。エトポシドは例えば、ＥＴＯＰＯＰＨＯＳ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。テニポシドは例えば、ＶＭ  ２６−ＢＲＩＳＴＯＬ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。ドキソルビシンは例えば、ＡＤＲＩＢＬＡＳＴＩＮ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。エピルビシンは例えば、ＦＡＲＭＯＲＵＢＩＣＩＮ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。イダルビシンは例えば、ＺＡＶＥＤＯＳ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。ミトキサントロンは例えば、ＮＯＶＡＮＴＲＯＮ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。
【０１８０】
「微小管活性化剤」なる用語は、微小管安定化および微小管脱安定化剤に関し、これらに限定されないが、タキサン、パクリタキセルおよびドセタキセル、ビンカアルカロイド、例えばビンブラスチン、とりわけビンブラスチン硫酸塩、ビンクリスチン、とりわけビンクリスチン硫酸塩、ビノレルビン、ディスコデルモリドおよびエポチロン、例えばエポチロンＢおよびＤを含む。ドセタキセルは例えば、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。ビンブラスチン硫酸塩は例えば、ＶＩＮＢＬＡＳＴＩＮ  Ｒ．Ｐ．（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。ビンクリスチン硫酸塩は例えば、ＦＡＲＭＩＳＴＩＮ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。
【０１８１】
「アルキル化剤」なる用語には、本明細書において使用するとき、これらに限定されないが、シクロホスファミド、イフォスファミドおよびメルファランが含まれる。シクロホスファミドは例えば、ＣＹＣＬＯＳＴＩＮ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。イフォスファミドは例えば、ＨＯＬＯＸＡＮ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。
【０１８２】
「ヒストンデアセチラーゼ阻害剤」なる用語は、ヒストンデアセチラーゼを阻害し、抗増殖性活性を有する化合物に関する。
【０１８３】
「ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤」なる用語は、ファルネシルトランスフェラーゼを阻害し、抗増殖性活性を有する化合物に関する。
【０１８４】
「ＣＯＸ−２阻害剤」なる用語は、シクロオキシゲナーゼタイプ２酵素（ＣＯＸ−２）を阻害し、抗増殖性活性を有する化合物、例えばセレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ（登録商標））、ロフェコキシブ（Ｖｉｏｘｘ（登録商標））およびルミラコキシブ（ＣＯＸ１８９）に関する。
【０１８５】
「ＭＭＰ阻害剤」なる用語は、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）を阻害し、抗増殖性活性を有する化合物に関する。
【０１８６】
「ｍＴＯＲ阻害剤」なる用語は、ラパマイシンの哺乳類標的（ｍＴＯＲ）を阻害し、抗増殖性活性を有する化合物、例えばシロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、エベロリムス（Ｃｅｒｔｉｃａｎ（商標））、ＣＣＩ−７７９およびＡＢＴ５７８に関する。
【０１８７】
「抗新生物代謝拮抗剤」なる用語には、これらに限定されないが、５−フルオロウラシル、テガフール、カペシタビン、クラドリビン、シタラビン、フルダラビンリン酸塩、フルオロウリジン、ゲムシタビン、６−メルカプトプリン、ヒドロキシウレア、メトトレキセート、エダトレキセート、およびこれらの化合物の塩、およびさらに、ＺＤ  １６９４（ＲＡＬＴＩＴＲＥＸＥＤ（商標））、ＬＹ２３１５１４（ＡＬＩＭＴＡ（商標））、ＬＹ２６４６１８（ＬＯＭＯＴＲＥＸＯＬ（商標））およびＯＧＴ７１９が含まれる。
【０１８８】
「プラチナ化合物」なる用語には、本明細書において使用するとき、これらに限定されないが、カルボプラチン、シスプラチンおよびオキサリプラチンが含まれる。カルボプラチンは例えば、ＣＡＲＢＯＰＬＡＴ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。オキサリプラチンは例えば、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。
【０１８９】
「タンパク質キナーゼ活性を減少する化合物およびさらなる抗血管形成化合物」なる用語には、本明細書において使用するとき、これらに限定されないが、例えば血管上皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ｃ−Ｓｒｃ、タンパク質キナーゼＣ、血小板誘導性増殖因子（ＰＤＧＦ）、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ｃ−Ｋｉｔ、Ｆｌｔ−３、インシュリン様増殖因子受容体（ＩＧＦ−ＩＲ）およびサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）の活性を減少する化合物、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ阻害剤（Ｐｌ３Ｋ）およびタンパク質キナーゼＢ（ＰＫＢ）阻害剤（例えばＷＯ  ２００５／０５４２３８およびＷＯ  ２００５／０５４２３７に記載のもの）、熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）（ＡＴＰアーゼ酵素）の阻害剤、およびタンパク質キナーゼ活性の減少とは異なる作用機構を有する抗血管形成化合物が含まれる。
【０１９０】
ＶＥＧＦの活性を減少する化合物は、とりわけＶＥＧＦ受容体、とりわけＶＥＧＦ受容体のチロシンキナーゼ活性を阻害する化合物、およびＶＥＧＦと結合する化合物であり、そしてとりわけ、ＷＯ  ９８／３５９５８、ＷＯ  ００／０９４９５、ＷＯ  ００／２７８２０、ＷＯ  ００／５９５０９、ＷＯ  ９８／１１２２３、ＷＯ  ００／２７８１９、ＷＯ  ０１／５５１１４、ＷＯ  ０１／５８８９９およびＥＰ  ０  ７６９  ９４７に一般的かつ具体的に記載されている化合物、タンパク質およびモノクローナル抗体；M. Prewett et al in Cancer Research 59(1999) 5209-5218、F. Yuan et al in Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 93, pp. 14765-14770, December 1996、Z. Zhu et al in Cancer Res. 58, 1998, 3209-3214, and by J. Mordenti et al in Toxicologic Pathology, vol. 27, no. 1, pp 14-21, 1999に記載のもの；ＷＯ  ００／３７５０２およびＷＯ  ９４／１０２０２に記載のもの；M. S. O’Reilly et al, Cell 79, 1994, 315-328に記載のＡｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ（商標）；およびM. S. O’Reilly et al, Cell 88, 1997, 277-285に記載のＥｎｄｏｓｔａｔｉｎ（商標）である；
【０１９１】
ＥＧＦの活性を減少する化合物は、とりわけＥＧＦ受容体、とりわけＥＧＦ受容体のチロシンキナーゼ活性を阻害する化合物、およびＥＧＦと結合する化合物であり、そしてとりわけ、９７／０２２６６、ＥＰ  ０  ５６４  ４０９、ＷＯ  ９９／０３８５４、ＥＰ  ０５２０７２２、ＥＰ  ０  ５６６  ２２６、ＥＰ  ０  ７８７  ７２２、ＥＰ  ０  ８３７  ０６３、ＷＯ  ９８／１０７６７、ＷＯ  ９７／３００３４、ＷＯ  ９７／４９６８８、ＷＯ  ９７／３８９８３およびとりわけ、ＷＯ  ９６／３３９８０に一般的かつ具体的に記載されている化合物である；
【０１９２】
ｃ−Ｓｒｃの活性を減少する化合物には、これらに限定されないが、下記定義のｃ−Ｓｒｃタンパク質チロシンキナーゼ活性を阻害する化合物およびＳＨ２相互作用阻害剤、例えばＷＯ９７／０７１３１およびＷＯ９７／０８１９３に記載のものが含まれる；
ｃ−Ｓｒｃタンパク質チロシンキナーゼ活性を阻害する化合物には、これらに限定されないが、ピロロピリミジンの構造クラスに属する化合物、とりわけピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、プリン、ピラゾピリミジン、とりわけピラゾ［３，４−ｄ］ピリミジン、ピラゾピリミジン、とりわけピラゾ［３，４−ｄ］ピリミジンおよびピリドピリミジン、とりわけピリド［２，３−ｄ］ピリミジンが含まれる。好ましくは、当該用語は、ＷＯ  ９６／１００２８、ＷＯ  ９７／２８１６１、ＷＯ９７／３２８７９およびＷＯ９７／４９７０６に記載のものに関する；
【０１９３】
タンパク質キナーゼＣの活性を減少する化合物は、とりわけ、化合物がタンパク質キナーゼＣであるＥＰ  ０  ２９６  １１０（ＷＯ  ００／４８５７１に記載の医薬組成物）に記載のスタウロスポリン誘導体である；
【０１９４】
タンパク質キナーゼ活性を減少し、かつ本発明の化合物との組合せ剤において使用することができるさらなる具体的な化合物は、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）／Ｇｌｉｖｅｃ（登録商標））、ＰＫＣ４１２、Ｉｒｅｓｓａ（商標）（ＺＤ１８３９）、ＰＫＩ１６６、ＰＴＫ７８７、ＺＤ６４７４、ＧＷ２０１６、ＣＨＩＲ−２００１３１、ＣＥＰ−７０５５／ＣＥＰ−５２１４、ＣＰ−５４７６３２、ＫＲＮ−６３３およびＳＵ５４１６である；
タンパク質キナーゼ活性を減少する以外の作用機構を有する抗血管形成化合物には、これらに限定されないが、例えばサリドマイド（ＴＨＡＬＯＭＩＤ）、セレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ）およびＺＤ６１２６が含まれる。
【０１９５】
「ゴナドレリンアゴニスト」なる用語には、本明細書において使用するとき、これらに限定されないが、アバレリクス、ゴセレリンおよびゴセレリン酢酸塩が含まれる。ゴセレリンはＵＳ  ４，１００，２７４に記載されており、例えばＺＯＬＡＤＥＸ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。
アバレリクスは例えば、ＵＳ  ５，８４３，９０１に記載のとおりに製剤することができる。
【０１９６】
「抗アンドロゲン剤」なる用語には、本明細書において使用するとき、これらに限定されないが、例えばＵＳ  ４，６３６，５０５に記載のとおりに製剤することができるビカルタミド（ＣＡＳＯＤＥＸ（商標））が含まれる。
【０１９７】
「ベンガミド」なる用語は、抗増殖特性を有するベンガミドおよびその誘導体に関する。
【０１９８】
「ビスホスホネート」なる用語には、本明細書において使用するとき、これらに限定されないが、エトリドン酸、クロドロン酸、チルドロン酸、パミドロン酸、アレンドロン酸、イバンドロン酸、リセドロン酸およびゾレドロン酸が含まれる。エトリドン酸は例えば、ＤＩＤＲＯＮＥＬ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。クロドロン酸は例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。チルドロン酸は例えば、ＳＫＥＬＩＤ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。パミドロン酸は例えば、ＡＲＥＤＩＡ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。アレンドロン酸は例えば、ＦＯＳＡＭＡＸ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。イバンドロン酸は例えば、ＢＯＮＤＲＡＮＡＴ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。リセドロン酸は例えば、ＡＣＴＯＮＥＬ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。ゾレドロン酸は例えば、ＺＯＭＥＴＡ（商標）の商品名で、例えば市販されている形態で投与することができる。
【０１９９】
「抗増殖性抗体」なる用語には、本明細書において使用するとき、これらに限定されないが、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標））、トラスツズマブ−ＤＭ１、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（商標））、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（商標））、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ＰＲＯ６４５５３（抗−ＣＤ４０）および２Ｃ４抗体が含まれる。
【０２００】
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の処置のために、式ＩＡ（またはその例示式）の化合物を、標準的な白血病治療との組合せで、とりわけＡＭＬの処置に使用される治療との組合せで使用することができる。とりわけ、式ＩＡ（またはその例示式）の化合物を例えば、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤および／またはＡＭＬの処置に有用な他の薬剤、例えばＤａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ、Ａｒａ−Ｃ、ＶＰ−１６、Ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ、Ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ、Ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ、ＣａｒｂｏｐｌａｔｉｎｕｍおよびＰＫＣ４１２との組合せで投与することができる。
【０２０１】
コード番号、一般名または商品名で同定されている活性剤の構造は、標準的な概説書「Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ」の現行版、またはデータベース、例えばＰａｔｅｎｔｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（例えばIMS World Publications）から得ることができる。
【０２０２】
式ＩＡ（またはその例示式）の化合物との組合せ剤において使用することができる上記化合物は、上記文献のような文献に記載のとおりに製造および投与することができる。
【０２０３】
本明細書に記載の「共投与」または「組合せ投与」などの用語は、選択した治療薬剤を１体の患者に投与することを意味し、そして薬剤を必ずしも同じ投与経路でまたは同じ時点で投与しない処置レジメンを含むことを意図する。
【０２０４】
「使用」なる用語を本明細書において記述（動詞または名詞として）するとき（式ＩＡの化合物またはその（とりわけ薬学的に許容される）塩の使用に関する）、便宜かつ適当であるとき、特に記載がない限り、これは（特に記載がない限り、または文脈によって異なると示唆されていない限り）それぞれ本明細書の下記態様の１個以上を含む（特に記載がない限り）：タンパク質（とりわけチロシン）キナーゼ調節（とりわけ阻害）に応答性の疾患の処置における使用、タンパク質キナーゼ調節（とりわけ阻害）に応答性の疾患の処置用医薬組成物の製造のための使用、タンパク質キナーゼ調節（とりわけ阻害）に応答性の疾患および／または増殖性疾患の処置における式ＩＡの化合物の１種以上の使用法、式ＩＡの化合物の１種以上を含む前記タンパク質キナーゼ調節（とりわけ阻害）応答性の疾患の処置用医薬組成物、および前記タンパク質キナーゼ調節（とりわけ阻害）応答性の疾患の処置における式ＩＡの化合物の１種以上。とりわけ、処置される、式ＩＡの化合物の「使用」に好ましい疾患は、上記（とりわけチロシン）タンパク質キナーゼ調節（とりわけ阻害）応答性（「依存」だけでなく「支持」も意味し、タンパク質キナーゼの調節、とりわけ阻害に疾患が応答性である、すなわちタンパク質キナーゼ活性によって疾患発現が支持されるかまたは引き起こされさえする状況を含む）疾患、またはとりわけ本明細書に記載の増殖性疾患である。好ましくは、タンパク質キナーゼ調節（とりわけ阻害）応答性の疾患は、本明細書二期債の１種以上のキナーゼ、より好ましくはＦＧＦＲの阻害に応答するものである。
【０２０５】
製造法
式ＩＡの化合物を、他の化合物について当該技術分野において原理的に知られている方法と同様に、式ＩＡの新規化合物についての方法が同様の方法として新規であるように製造し、好ましくは
式ＩＩＡ
【化２】
2009520768.tif 000004
〔式中、Ｒ４およびｎは式ＩＡの化合物で定義のとおりである〕
のアニリン化合物を式ＩＩＩＡ
【化３】
2009520768.tif 000005
〔式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｘ、ＹおよびＺは式ＩＡの化合物で定義のとおりである〕
のアミンと、反応性炭酸ビス誘導体の存在下で反応させ；
そして所望により、式ＩＡの化合物を異なる式ＩＡの化合物に変換する、得られた式ＩＡの化合物の塩を遊離化合物または他の塩に変換する、得られた式ＩＡの遊離化合物をその塩に変換する、および／または得られた式Ｉの化合物の異性体混合物を個々の異性体に分離することによって、製造する。
【０２０６】
反応において、反応性炭酸ビス誘導体は好ましくは、炭酸無水物、またはより好ましくは炭酸ジハロゲニド、とりわけ炭酸ジクロライド（ホスゲン）である。反応は好ましくは、第１に式ＩＩＡの化合物（好ましい）または式ＩＩＩＡの化合物を反応性炭酸ビス誘導体と反応させて対応するイソシアネートとし、それに（それぞれ式ＩＩＩＡまたはＩＩＡの）他の化合物を加えて行う。第１の反応は好ましくは適当な溶媒、例えばエーテル、例えばジオキサン中で、高温で、例えば２０℃から反応混合物の還流温度でおこない、そして好ましくは、その後得られたイソシアネート溶液の濃度を濃縮してイソシアネートを固体形態または油状形態で得ることができる。イソシアネートの第２の反応は、適当な溶媒、とりわけＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）および／またはトルエンを加えた後に、高温で、例えば２０℃から反応混合物の還流温度で行い、そしてそれぞれ式ＩＩＩＡまたはＩＩＡの補充アミンを加えた後に行う。
【０２０７】
反応はいずれも、好ましくは保護ガス、とりわけ窒素またはアルゴン下で行う。
【０２０８】
任意の反応および変換
式ＩＡの化合物は異なる式Ｉの化合物に変換することができる。
【０２０９】
例えば、Ｒ１がベンジルオキシフェニルアミノまたは４−ベンジル−ピペラジン−１−イル−フェニルアミノである式ＩＡの化合物において、ベンジル基は、例えば貴金属触媒、例えば炭素パラジウムの存在下で、適当な溶媒、例えばアルコール、例えばメタノール中で、適当な温度、例えば０〜５５℃で、ピペラジン窒素からの除去の場合、さらに酸、例えばＨＣｌの存在下で、水素添加によって除去することができベンジル基に代えて水素が存在する対応する化合物を得る。
【０２１０】
式ＩＡの化合物を対応するＮ−オキシドに変換することができる。反応は、適当な酸化剤、好ましくはペルオキシド、例えばｍ−クロロペル安息香酸と共に、適当な溶媒、例えばハロゲン化炭化水素、典型的にはクロロホルムまたはジクロロメタン中で、または低級アルカンカルボン酸、典型的には酢酸中で、好ましくは０℃〜反応混合物の沸点、とりわけおよそ室温で行う。
【０２１１】
非酸化形態の本発明の化合物を、本発明の化合物のＮ−オキシドから、還元剤（例えば、硫黄、硫黄ジオキシド、トリフェニルホスフィン、ホウ化水素リチウム、水素化ホウ素ナトリウム、三塩化リン、トリブロマイド等）で、適当な不活性有機溶媒（例えばアセトニトリル、エタノール、ジオキサン水溶液等）中で、０〜８０℃で処理することによって製造することができる。
【０２１２】
少なくとも１個の塩形成基を有する式ＩＡの化合物の塩を、自体公知の方法で製造することができる。例えば、塩基性基（例えば塩基性窒素）を有する式ＩＡの化合物の酸付加塩を、常套の方法で、例えば式ＩＡの化合物を適当なアニオン交換試薬で処理することによって得ることができる。酸性基を有する式ＩＡの化合物の塩を、当該化合物を金属化合物、例えば適当な有機カルボン酸のアルカリ金属塩、例えば２−エチルヘキサン三のナトリウム塩で、有機アルカリ金属またはアルカリ土類金属化合物、例えば対応するヒドロキシド、カルボネートまたは水素カルボネート、例えば水酸化ナトリウムもしくは水酸化カリウム、カルボネートまたは水素カルボネートと、対応するカルシウム化合物と、またはアンモニアもしくは適当な有機アミンと、好ましくは使用する塩形成試薬の化学量論的量またはわずかに過剰量で処理することによって形成することができる。酸性および塩基性塩形成基、例えば遊離カルボキシル基と遊離アミノ基を有する式ＩＡの化合物の分子内塩は、酸付加塩のような塩の等電点に、例えば弱塩基で中和することによって、またはイオン交換試薬で処理することによって形成することができる。
【０２１３】
式ＩＡの化合物（＝本発明の化合物）の塩を、常套の方法で遊離化合物に変換することができ；金属またはアンモニウム塩を、例えば適当な酸で処理することによって、そして酸付加塩を例えば適当な塩基性試薬で処理することによって、異なる塩に変換することができる。いずれの場合においても、適当なイオン交換試薬を使用することができる。
【０２１４】
立体異性体の混合物、例えばジアステレオマー混合物を、それらの対応するアイソマーに自体公知の方法で、適当な分離法で、分離することができる。ジアステレオマー混合物は例えば、それらの個々のジアステレオマーに、分画結晶化、クロマトグラフィー、溶媒分配等で分離することができる。この分離は出発化合物のレベルで、または式ＩＡの化合物それ自体で行うことができる。エナンチオマーを、ジアステレオマー塩の形成によって、例えばエナンチオマー純水なキラル酸との塩形性によって、またはキラルリガンドを含むクロマトグラフィー基質を用いたクロマトグラフィー、例えばＨＰＬＣによって、分離することができる。それらのラセミ混合物から化合物の立体異性体の分離を行うことができる技術のより詳細な記載は、Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, “Enantiomers, Racemates and Resolutions”, John Wiley And Sons, Inc., 1981に見出すことができる。
【０２１５】
本発明の化合物のプロドラッグ誘導体を、当業者に既知の方法で製造することができる（例えば、さらに詳しくはSaulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985参照）。例えば、適当なプロドラッグを、本発明の非誘導体化合物を適当なカルバミル化剤（例えば、１，１−アシルオキシアルキルカルバノクロリデート、パラ−ニトロフェニルカルボネート等）と反応させることで製造することができる。
【０２１６】
本発明の化合物の保護誘導体を、当業者に既知の方法で製造することができる。保護基の製造および除去のために使用可能な技術の詳細な記載は、T. W. Greene, “Protecting Groups in Organic Chemistry”, 3rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999に見出すことができる。
【０２１７】
本発明の化合物を、簡便には、本発明の方法中に溶媒和物（例えば水和物）として製造することができる。本発明の化合物の水和物を、簡便には、水／有機溶媒混合物から、ジオキシン、テトラヒドロフランまたはメタノールのような有機溶媒を用いて製造することができる。
【０２１８】
中間体および最終生成物を、標準的な方法、例えばクロマトグラフィー法、分配法、（再）結晶化等を用いて後処理および／または精製することができる。
【０２１９】
出発物質
とりわけ式ＩＩＡおよびＩＩＩＡの、出発物質および中間体（いずれの場合もその塩を含む）を、実施例に記載の方法と同様に、当業者に既知の方法または同様の方法で製造することができ、および／またはそれらを商業的に入手可能である。
【０２２０】
出発物質を例えば、好ましくは下記のとおりに製造することができる：
出発物質および中間体においてＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｘ、Ｙ、Ｚおよびｎを使用するとき、これらの記号は好ましくは、特に記載がない限り、式ＩＡの化合物に定義の意味を有する。
【０２２１】
１個以上のハロ基を担持する式ＩＩＡの化合物を、例えばスルフリルクロライドのような無機酸ハライドと、適当な溶媒、例えばアセトニトリル、ジクロロメタンおよび／またはテトラヒドロフラン中で、好ましくは−４０〜２５℃で、対応する式ＩＩＡの化合物（式中、Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ハロ−Ｃ１−Ｃ７−アルキル、ハロおよびＣ１−Ｃ７−アルコキシから選択される４個までの他の基Ｒ４が存在し、アミノ基が例えばアセチルまたはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（保護基の導入については例えば、下記実施例または一般的な製造条件参照）によって保護されている）をハロゲン化し、その後保護基（例えば、水酸化カリウムのようなアルカリ金属ヒドロキシドで、エタノールのような適当な溶媒中で、高温、例えば３０℃〜混合物の還流温度で処理することによってアセチルを、ＨＣｌのような酸で、適当な溶媒、例えばジオキサン中で、−２０〜３０℃で処理することによってｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルを）を除去することによって製造することができる。
【０２２２】
Ｒ４＝Ｃ１−Ｃ７−アルキル、とりわけメチルを、式ＩＩＡの前駆体化合物を強塩基、例えばブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルリチウムで、適当な溶媒、例えばペンタンおよびテトロヒドロフラン中で、−８０℃〜０℃の好ましい温度で反応させた後、フェニル環（とりわけ既にＣ１−Ｃ７−アルコキシ基Ｒ４が存在するとき）を、対応する式ＩＩＡの前駆体化合物（前段落のとおりにアミノ基の保護および脱保護を有する）において、Ｃ１−Ｃ７−アルキルハロゲニド（例えばアイオダイド）で、適当な溶媒、例えばテトロヒドロフラン中で、好ましくは−５０〜２５℃でアルキル化することによって導入することができる。  
【０２２３】
式ＩＩＩＡの化合物を、例えば下記の通り、式ＶＩＡ
【化４】
2009520768.tif 000006
〔式中、Ｈａｌはハロゲン、とりわけクロロまたはブロモである〕
の化合物を式ＶＡ
【化５】
2009520768.tif 000007
のアミンと、酸、例えば酢酸または塩酸の存在下で、適当な溶媒、例えば水またはジオキサン中で、高温、例えば５０〜１６０℃で（所望によりチューブ内で）反応させることによって製造することができる。
【０２２４】
あるいは、式ＩＩＩＡの化合物（式中、Ｒ１は［４−（Ｃ１−Ｃ７−アルキル）−ピペラジン−１−イル］−カルボニルで置換されているフェニルである）を、上記定義の式ＩＶＡの化合物を式ＶＩＡ
【化６】
2009520768.tif 000008
〔式中、Ａは水素Ｃ１−Ｃ７−アルコキシまたはハロである〕
の化合物と、酸、例えばＨＣｌの存在下で、適当な溶媒、例えばジオキサン中で、高温、例えば５０〜１７０℃で（例えばマイクロウェーブオーブン中で）反応させ、次に得られた式ＶＩＩＡ
【化７】
2009520768.tif 000009
〔式中、基は式ＩＶＡおよびＶＩＡで定義のとおりである〕
の化合物をカップリング試薬、例えばプロピルホスホン酸無水物の存在下で、適当な溶媒、例えばＤＭＦ中で、窒素塩基、例えばトリエチルアミンおよび／または４−ジメチルアミノ−ピリジンの存在下で、好ましくは０〜５０℃で、対応する式ＩＩＩＡの化合物に反応させることによってことによって得ることができる。
【０２２５】
Ｒ５が水素である式ＶＡの化合物を、例えばアミノ基（ＮＲ３）に代えてニトロ基が存在する対応する化合物を、例えば鉄粉で、エタノール、水および酢酸中で、高温、例えば３０〜１００℃で、あるいは水素で、触媒、例えばラネーニッケルの存在下で、メタノール中で、例えば０〜５０℃で還元することによって得ることができる。いずれの場合においても、他の常套の溶媒が可能である。Ｒ５がＣ１−Ｃ７−アルキルである対応する式ＶＡの化合物を、例えば対応するＣ１−Ｃ７−アルキルハロゲニドでアルキル化することによって得ることができる。
【０２２６】
対応する出発物質および式ＶＡの他の化合物を、実施例に記載の方法と同様にまたはそれによって、当該技術分野で既知の方法によって得ることができるか、またはそれらを商業的に入手可能である。
【０２２７】
一般的な製造条件
下記を、本明細書に記載の全ての方法に一般的に適用するが、本明細書に具体的に記載されている反応条件が好ましい：
本明細書に記載のあらゆる反応において、具体的に記載されていなくとも、適当または望まれるとき、ある反応に酸化することが望ましくない官能基を保護するために保護基を使用することができ、そしてそれらを適当または所望の段階で導入および／または除去することができる。したがって、保護および／または脱保護の具体的な記載がない反応が本明細書に記載されているときは常に、保護基の使用を含む反応が、可能なものとして含まれる。
【０２２８】
この開示の範囲内において、式ＩＡの具体的な所望の最終生成物の構成要素ではない容易に除去可能な基のみが、文脈がそうでないことを示していない限り、「保護基」を意味する。かかる保護基による官能基の保護、保護基それ自体およびそれらの除去に適用可能な反応は、例えば標準的な参考文献、例えばJ. F. W. McOmie, “Protective Groups in Organic Chemistry”, Plenum Press, London and New York 1973、T. W. Greene and P. G. M. Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis”, Third edition, Wiley, New York 1999、“The Peptides”; Volume 3(editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981、“Methoden der organischen Chemie”(Methods of Organic Chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974、H.-D. Jakubke and H. Jeschkeit, “Aminosaeuren, Peptide, Proteine”(Amino acids, Peptides, Proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982、およびJochen Lehmann, “Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate”(Chemistry of Carbohydrates: Monosaccharides and Derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974に記載されている。保護基の特徴は、それらが容易に（すなわち望ましくない二次的反応の発生がなく）、例えば加溶媒分解、還元、光分解または生理的な条件下で（例えば酵素切断によって）除去することができることである。
【０２２９】
上記全ての工程を、自体公知の反応条件下で、好ましくは具体的に記載のもので、溶媒または希釈剤なしで、または通常それらの存在下で（好ましくは溶媒または希釈剤は使用する試薬に対して不活性であり、それらを溶解する）、触媒、縮合剤または中和剤、例えばイオン交換試薬、例えばカチオン交換試薬の存在下で、例えばＨ＋形態で、反応および／または反応物の性質に依存して、低温、常温または高温で、例えば約−１００℃〜約１９０℃、好ましくは約−８０℃〜約１５０℃で、好ましくは−８０℃〜−６０℃で、室温で、−２０〜４０℃で、または還流温度で、大気圧下で、または高圧が適当なとき密封容器中で、および／または不活性雰囲気下、例えばアルゴンまたは窒素雰囲気下で、行うことができる。
【０２３０】
任意の具体的な反応に適している溶媒から選択される溶媒は、具体的に記載のもの、または例えば、水、低級アルキル−低級アルカノエート、例えば酢酸エチルのようなエステル、脂肪族エーテル、例えばジエチルエーテル、または環状エーテル、例えばテトラヒドロフランまたはジオキサンのようなエーテル、ベンゼンまたはトルエンのような液体芳香族性炭化水素、メタノール、エタノールまたは１−もしくは２−プロパノールのようなアルコール、アセトニトリルのようなニトリル、塩化メチレンまたはクロロホルムのようなハロゲン化炭化水素、ジメチルホルムアミドまたはジメチルアセトアミドのような酸アミド、ヘテロ環式窒素塩基、例えばピリジンまたはＮ−メチルピロリジン−２−オンのような塩基、低級アルカン酸無水物、例えば無水酢酸のようなカルボン酸無水物、シクロヘキサン、ヘキサンまたはイソペンタンのような環状、直鎖または分枝鎖炭化水素、あるいはそれらの混合物、例えば水溶液を、方法の説明に特に記載がない限り、含む。かかる溶媒混合物はまた、例えばクロマトグラフィーまたは分配による後処理に使用することができる。
【０２３１】
本発明はまた、方法の任意の段階で中間体として入手可能な化合物を出発物質として使用して、残りの工程を実施するか、または出発物質を反応条件下で形成するか、もしくは誘導体の形態、例えば保護形態もしくは塩の形態で使用する方法の形態、あるいは本発明の方法で得られる化合物を、当該製造条件下またはさらにインサイチュで処理して製造する方法の形態に関する。本発明の方法において、出発物質は好ましくは、好ましいと記載されている式ＩＡの化合物を得るために使用する。本発明はまた、新規中間体および／または出発物質に関する。実施例に記載のものと同一または同様の反応条件および新規中間体がとりわけ好ましい。
【０２３２】
本発明の好ましい態様：
好ましい態様ならびにより一般的な範囲の本明細書に記載の態様において、あらゆる１個以上または全ての一般的な表現または記号は、互いに独立して、本明細書に記載の対応するより具体的な定義に置き換えることができ、これによって本発明のより好ましい態様を得ることができる。
【０２３３】
請求項に記載の態様が好ましく、したがってこれらを参照により本明細書の一部とする。上記グループＡ、ＢまたはＣの１個に記載の式ＩＡの化合物がとりわけ好ましい。実施例に記載の式ＩＡの化合物の１個以上、ならびにその（とりわけ薬学的に許容される）塩が極めて好ましい。
【実施例】
【０２３４】
実施例：
下記実施例を本発明の説明のために、その範囲を限定することなく、提供する。温度は摂氏度で測定する。特に記載がない限り、反応は室温で行う。各物質の移動距離の溶離剤の移動距離に対する比であるＲｆ値は、シリカゲル薄層プレート５×１０ｃｍ  ＴＬＣプレート、シリカゲルＦ２５４（Merck, Darmstadt, Germany）で、下記溶媒系を用いた薄層クロマトグラフィーによって測定する。
【０２３５】
分析ＨＰＬＣ条件：
系１
直線グラジエント２０−１００％  ＣＨ３ＣＮで５分＋１００％  ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）で１．５分；２１５ｎｍで検出、流速１ｍＬ／分、３０℃。カラム：Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ  １００−３  Ｃ１８（７０×４．０ｍｍ）。
【０２３６】
略語および頭字語：
ＡｃＯＨ      酢酸
ＡＰＩ−ＭＳ  大気圧イオン化質量分析
brine         ＮａＣｌの飽和水溶液
セライト      Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）（The Celite Corporation）＝珪藻土を利用したフィルタリング手段
ＣＨ３ＣＮ    アセトニトリル
ＤＣＭ        ジクロロメタン
ｃｏｎｃ．    濃
ＤＩＥＡ      ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ      ４−ジメチルアミノ−ピリジン
ＤＭＦ        ジメチルホルムアミド
ＤＭＰ        １，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２−（１Ｈ）−ピリミジノン
ＤＭＳＯ      ジメチルスルホキシド
ｅｑｕｉｖ    当量
ＥＳＩ−ＭＳ  エレクトロスプレーイオン化質量分析
Ｅｔ２Ｏ      ジエチルエーテル
Ｅｔ３Ｎ      トリエチルアミン
ＥｔＯＡｃ    酢酸エチル
ＥｔＯＨ      エタノール
ＨＮＯ３      硝酸
Ｈ２ＳＯ４      硫酸
ｈ            時間
Ｈｅｘ        ヘキサン
ＨＣｌ        塩酸
Ｈ２Ｏ        水
ＨＰＬＣ      高速液体クロマトグラフィー
Ｌ            リットル
ＬｉＯＨ      リチウムヒドロキシド
Ｍｅ          メチル
ＭｅＯＨ      メタノール
ｍＬ          ミリリットル
ｍｉｎ        分
ｍ．ｐ．      融点
ＭＰＬＣ      中圧液体クロマトグラフィー
ＭＳ          質量分析
ＮａＨ        水素化ナトリウム
Ｎａ２ＣＯ３    炭酸ナトリウム
ＮａＨＣＯ３    重炭酸ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４    硫酸ナトリウム
ＮＨ３ａｑ      アンモニア水溶液
ＮＭＰ        １−メチル−２−ピロリドン
ＮＭＲ        核磁気共鳴
ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）  ［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（ＩＩ）
Ｐｄ（ＰＰｈ３）４  テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）
Ｐｄ（ＰｈＣＮ）２Ｃｌ２  塩化ビス（ベンゾニトリル）パラジウム（ＩＩ）
Ｐｈ          フェニル
Ｒｆ          フロントの比（ＴＬＣ）
ＲＴ          室温
ＴＢＴＵ      Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート
ＴＦＡ        ＣＦ３ＣＯＯＨ（トリフルオロ酢酸）
ＴＨＦ        テトラヒドロフラン
ＴＬＣ        薄層クロマトグラフィー
ＴＲ            保持時間
ｗｔ．        重量
【０２３７】
マイクロウェーブ装置：  Ｅｍｒｙｓ  Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ（Biotage）。
反応スキームの例
【化８】
2009520768.tif 000010
【０２３８】
実施例１：１−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−３−｛６−［４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−ウレア
ホスゲン（トルエン中２０％、０．８ｍＬ、１．５８ｍｍｏｌ、２．４当量）を、ジオキサン（２．５ｍＬ）中２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシアニリン（１７５ｍｇ、０．７９ｍｍｏｌ、１．２当量）溶液に、アルゴン雰囲気下で加える。混合物を還流温度に加熱し、１時間攪拌し、ＲＴに冷却し、そして真空下で濃縮する。得られたイソシアネートをＮＭＰ（２ｍＬ）中Ｎ−［４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニル］−ピリミジン−４，６−ジアミン（２０８．５ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）溶液に、７５℃でアルゴン雰囲気下で加える。反応混合物を７５℃で２時間攪拌し、ＲＴに冷却し、そしてＤＣＭおよびＮａＨＣＯ３飽和水溶液で希釈する。水層を分離し、ＤＣＭで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９６：４）で精製し、得られた物質をＭｅＯＨ中で粉砕して、表題化合物を白色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：５６２．９／５６４．９  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝２．９９ｍｉｎ（純度：１００％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．３６（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９３：７）。
【０２３９】
工程１．１：Ｎ−［４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニル］−ピリミジン−４，６−ジアミン
Ｈ２Ｏ（１ｍＬ）中６−クロロ−ピリミジン−４−イルアミン（１９４ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ、１．３当量）、４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニルアミン（２５６ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）および氷酢酸（５ｍＬ）の混合物を１６時間１００℃で攪拌する。溶媒を蒸発した後、残渣をＤＣＭ中に取り、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で希釈する飽和水溶液で希釈する。水層を分離し、ＤＣＭで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃ中で粉砕して、表題化合物を灰色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：３１６．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．００ｍｉｎ（純度：９５％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２２（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９３：７）。
【０２４０】
工程１．２：４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニルアミン
４−（２−クロロ−エチル）−モルホリンクロライド（４．２ｇ、２２ｍｍｏｌ、１．２当量）を１回で、ＤＭＦ（３２ｍＬ）中４−アミノフェノール（２ｇ、１８．３ｍｍｏｌ）と微粉末水酸化ナトリウム（１．８７ｇ、４５．８ｍｍｏｌ、２．５当量）の混合物に、アルゴン雰囲気下で加える。反応混合物を２３．５時間ＲＴで攪拌する。得られた黒色懸濁液をろ過する。炉液をＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、塩水で洗浄する（２×６０ｍＬ）。有機相を乾燥し（硫酸ナトリウム）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＥｔＯＨ、９５：５→７：３）で精製して、表題化合物を黄褐色固体として得る：ＡＰＩ−ＭＳ：２２３．２  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０。３１（ＤＣＭ／ＥｔＯＨ、９：１）．
【０２４１】
工程１．３：２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシアニリン
エタノール（１．３Ｌ）中Ｎ−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−アセトアミド（３４．５ｇ、２６４ｍｍｏｌ）溶液に、２Ｍ  ＫＯＨ（０．７２Ｌ）を加える。反応混合物を還流温度に加熱し、４４時間還流温度で攪拌し、ＲＴに冷却する。得られた懸濁液を０℃に冷却し、１時間攪拌し、ろ過する。残渣を少量の冷ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ（１：１）で、そして冷Ｈ２Ｏで中性になるまで洗浄し、乾燥して表題化合物を白色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２２２．０／２２４．０  ［ＭＨ］＋、ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．５２（Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：１）。
【０２４２】
工程１．４：Ｎ−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−アセトアミド
スルフリルクロライド（２６．９ｍＬ、３２５ｍｍｏｌ、１．９３当量）をＣＨ３ＣＮ（５００ｍＬ）中Ｎ−（３，５−ジメトキシフェニル）−アセトアミド（３２．９ｇ、１６９ｍｍｏｌ）の、冷（０°Ｃ）懸濁液に７分間で、アルゴン雰囲気下で加える。得られた黄色混合物を３０分間攪拌し、重炭酸ナトリウム（２５０ｍＬ）の飽和水溶液の滴下によってクエンチする。得られた沈殿を真空ろ過で回収し、Ｈ２Ｏ（３００ｍＬ）で洗浄し、乾燥して乾燥生成物２０ｇ（バッチ１）を得る。炉液をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（３００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×３００ｍＬ）で抽出する。有機相をＨ２Ｏおよび塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ、１：１→２：１）で精製して生成物８．８ｇ（バッチ２）を得る。バッチ１と２を合併し、ヘキサン中で混合する。固体をろ過して回収し、ヘキサンで洗浄し、乾燥して表題化合物を白色固体として得る。ＥＳＩ−ＭＳ：２６４．０／２６６．０  ［ＭＨ］＋、ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１５（Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：１）。
【０２４３】
工程１．５：Ｎ−（３，５−ジメトキシ−フェニル）−アセトアミド
無水酢酸（１３ｍＬ、１３７ｍｍｏｌ、１．０５当量）を、トルエン（１１０ｍＬ）中３，５−ジメトキシアニリン（２０ｇ、１３１ｍｍｏｌ）懸濁液に１５分で、内部温度３５〜４５℃に保ったまま、加える。反応混合物を２０分間、ＲＴで攪拌する。得られた濃灰色懸濁液をヘキサン（５５ｍＬ）で希釈し、ろ過する。フィルターの残渣をトルエン／Ｈｅｘ（２：１、７０ｍＬ）およびＨｅｘで洗浄し、乾燥して表題化合物を白色固体として得る。ＡＰＩ−ＥＳ−ＭＳ：１９６．１  ［ＭＨ］＋、ｔＲ＝３．０３ｍｉｎ（純度：１００％、系１）。
【０２４４】
実施例２：３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−１−｛６−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−ウレア
ホスゲン（トルエン中２０％、１ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ、２．４当量）をジオキサン（２．５ｍＬ）中２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシアニリン（２２１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１．２当量）溶液に、アルゴン雰囲気下で加える。混合物を還流温度に加熱し、１時間攪拌し、ＲＴに冷却し、真空下で濃縮する。得られたイソシアネートをトルエン（５ｍＬ）中Ｎ−メチル−Ｎ’−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−ピリミジン−４，６−ジアミン（工程２．１）（２５９ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）溶液に、還流温度でアルゴン雰囲気下で加える。反応混合物を３時間攪拌し、ＲＴに冷却し、ＤＣＭおよびＮａＨＣＯ３飽和水溶液で希釈する。水層を分離し、ＤＣＭで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）で精製して、表題化合物を黄色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：５６０．０／５６２．０  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．２６ｍｉｎ（純度：９９％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．３７（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９：１）。
【０２４５】
工程２．１：Ｎ−メチル−Ｎ’−［３−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニル］−ピリミジン−４，６−ジアミン
ジオキサン（７ｍＬ）中（６−クロロ−ピリミジン−４−イル）−メチル−アミン（３８５ｍｇ、２．６８ｍｍｏｌ、１．１当量）、３−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニルアミン（５００ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ）および４Ｎ  ＨＣｌの混合物を密封チューブ内で１５０℃で１７．５時間加熱する。溶媒を除去し、残渣をＤＣＭおよびＮａＨＣＯ３飽和水溶液で希釈する。水層を分離し、ＤＣＭおよびＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９５：５）で抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルＭＰＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）で精製して、表題化合物をベージュ色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：３１３．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．００ｍｉｎ（純度：１００％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．０５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９：１）。
【０２４６】
工程２．２：３−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−フェニルアミン
ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中１−メチル−４−（３−ニトロ−ベンジル）−ピペラジン（６．９ｇ、２９．１４ｍｍｏｌ）およびラネーニッケル（２ｇ）の懸濁液を５時間ＲＴで、水素雰囲気下で攪拌する。反応混合物をセライトパッドでろ過し、濃縮して表題化合物を黄色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２０６．１  ［ＭＨ］＋。
【０２４７】
工程２．３：１−メチル−４−（３−ニトロ−ベンジル）−ピペラジン
３−ニトロベンジルクロライド（５ｇ、２９．１４ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルピペラジン（３．９ｍＬ、３４．９７ｍｍｏｌ、１．２当量）、炭酸カリウム（８ｇ、５８．２８、２当量）およびアセトン（１００ｍＬ）の混合物を１５分間還流温度で攪拌する。反応混合物をＲＴに冷却し、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルＭＰＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）で精製して表題化合物を褐色油状物として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２３６．０  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．４０ｍｉｎ（純度：１００％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．３１（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９：１）。
【０２４８】
実施例３：３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［３−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例２に記載の方法と同様にして製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：５５９．９／５６１．９  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．７５ｍｉｎ（純度：１００％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．３７（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９２：８）。
【０２４９】
工程３．１：Ｎ−［３−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を、工程２．１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：３１３．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．２０ｍｉｎ（純度：１００％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９：１）。
【０２５０】
工程３．２：３−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミン
表題化合物を工程２．２に記載の方法と同様に製造する：ＡＰＩ−ＭＳ：２０６．２  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．３１（ＤＣＭ／ＥｔＯＨ、９：１）。
【０２５１】
工程３．３：１−エチル−４−（３−ニトロ−フェニル）−ピペラジン
１−フルオロ−３−ニトロベンゼン（３．２ｍＬ、２９．７ｍｍｏｌ）とＮ−エチル−ピペラジン（７．６ｍＬ、５９．４ｍｍｏｌ、２当量）の混合物を還流温度に加熱し、１１７時間攪拌する。反応混合物をＲＴに冷却し、Ｈ２Ｏ（４０ｍＬ）およびＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９：１、８０ｍＬ）で希釈する。水層を分離し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９：１）で抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１：０→９５：５）で精製して、表題化合物を褐色油状物として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２３６．０  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝２．４９ｍｉｎ（純度：９９％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２６（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９５：５）。
【０２５２】
実施例４：３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−１−｛６−［４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−ウレア
表題化合物を実施例１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：５７７．０／５７９．０  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．５３ｍｉｎ（純度：９５％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．４０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９３：７）。
【０２５３】
工程４．１：Ｎ−メチル−Ｎ’−［４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−フェニル］−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程１．１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：３３０．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．１０ｍｉｎ（純度：１００％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１６（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９３：７）。
【０２５４】
実施例５：１−［６−（４−ベンジルオキシ−フェニルアミノ）−ピリミジン−４−イル］−３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例２に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：５５３．９／５５５．９  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝５．１６ｍｉｎ（純度：１００％、系１）。
【０２５５】
工程５．１：Ｎ−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程１．１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：３０７．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．７２ｍｉｎ（純度：１００％、系１）。
【０２５６】
実施例６：３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−［６−（４−ヒドロキシ−フェニルアミノ）−ピリミジン−４−イル］−１−メチル−ウレア
１−［６−（４−ベンジルオキシ−フェニルアミノ）−ピリミジン−４−イル］−３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−ウレア（実施例５）（６７ｍｇ、０．１２１ｍｍｏｌ）、炭素パラジウム（２０ｍｇ）、およびＭｅＯＨ（３．５ｍＬ）の懸濁液を３時間、ＲＴで水素雰囲気下で攪拌する。反応混合物をセライトパッドでろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製して表題化合物を褐色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：４６４．２／４６６．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．９１ｍｉｎ（純度：１００％、系１）。
【０２５７】
実施例７：１−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−３−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−ウレア
表題化合物を実施例２に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：５２６．１／５２８．１  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．１２ｍｉｎ（純度：１００％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１３（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９３：７）。
【０２５８】
工程７．１：Ｎ−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程１．１に記載の方法と同様に製造する１：ＥＳＩ−ＭＳ：２９９．１  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．００ｍｉｎ（純度：＞９５％、系１）。
【０２５９】
工程７．２：４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−アニリン
ＭｅＯＨ（１２０ｍＬ）中１−エチル−４−（４−ニトロ−フェニル）−ピペラジン（６．２ｇ、２６．３５ｍｍｏｌ）およびラネーニッケル（２ｇ）の懸濁液を、７時間ＲＴで、水素雰囲気下で攪拌する。反応混合物をセライトパッドでろ過し、濃縮して表題化合物を紫色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２０６．１  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９：１）。
【０２６０】
工程７．３：１−エチル−４−（４−ニトロ−フェニル）−ピペラジン
１−ブロモ−４−ニトロベンゼン（６ｇ、２９．７ｍｍｏｌ）と１−エチルピペラジン（７．６ｍＬ、５９．４ｍｍｏｌ、２当量）の混合物を８０℃で１５時間加熱する。ＲＴに冷却後、反応混合物を水およびＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９：１で希釈する。水層を分離し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９：１で抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（硫酸ナトリウム）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９：１）で精製して、表題化合物を黄色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２３６．０  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝２．３５ｍｉｎ（純度：１００％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．５０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９：１）。
【０２６１】
工程７．４：２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル−アミン
ＨＣｌ（９１ｍＬ、３６０ｍｍｏｌ、８当量、ジオキサン中４Ｎ）をジオキサン（１５０ｍＬ）中（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−カルバミン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１３．８ｇ、４５．７ｍｍｏｌ）の冷（１０℃）溶液にアルゴン雰囲気下で滴下する。反応混合物をＲＴに温め、２４時間攪拌し、濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液および塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をＤＣＭ／Ｈｅｘから結晶化して精製して、表題化合物を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：２０２．０  ［ＭＨ］＋、ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．３７（ＤＣＭ）。
【０２６２】
工程７．５：（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ＤＣＭ（１４０ｍＬ）中スルフリルクロライド（６．７ｍＬ、７９．８ｍｍｏｌ、１．０５当量）溶液を、ＴＨＦ（３３０ｍＬ）中（３，５−ジメトキシ−２−メチル−フェニル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２０．４ｇ、７６．３ｍｍｏｌ）の冷（−１５℃）溶液に、アルゴン雰囲気下で７５分間滴下する。反応混合物を３時間、−１５℃で攪拌し、氷／Ｈ２Ｏ（４００ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液（４００ｍＬ）、およびＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）の混合物に注ぐ。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出する。合併した有機相をＨ２Ｏ（３×２００ｍＬ）および塩水（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をジエチルエーテル中で粉砕し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｈｅｘ／アセトン、９５：５）で精製して、表題化合物を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：３０２．２  ［ＭＨ］＋、ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１３（Ｈｅｘ／アセトン、９：１）。
【０２６３】
工程７．６：（３，５−ジメトキシ−２−メチル−フェニル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ｔｅｒｔ−ブチルリチウム（２００ｍＬ、３４０ｍｍｏｌ、２．４当量、ペンタン中１．７Ｍ）溶液を、ＴＨＦ（２５０ｍＬ）中（３，５−ジメトキシ−フェニル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３６．１ｇ、１４２ｍｍｏｌ）の冷（−６５℃）溶液に、アルゴン雰囲気下で滴下する。混合物を１５分間、−６５℃で攪拌し、−２５℃に温める。ＴＨＦ（１４０ｍＬ）中ヨウ化メチル（１０．７ｍＬ、１７１ｍｍｏｌ、１．２当量）溶液を加える。反応混合物を１時間、−２５℃で攪拌し、氷／Ｈ２Ｏ（３００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）の混合物に注ぐ。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（２×１５０ｍＬ）で抽出する。合併した有機相をＨ２Ｏ（３×１５０ｍＬ）および塩水（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｈｅｘ／アセトン、９５：５→９：１→４：１）で精製して、表題化合物を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：２６８．１  ［ＭＨ］＋、ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２５（Ｈｅｘ／アセトン、９：１）。
【０２６４】
工程７．７：（３，５−ジメトキシ−フェニル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ＴＨＦ（２００ｍＬ）中ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカルボネート（１４５ｇ、６５１ｍｍｏｌ、１．３当量）溶液を、ＴＨＦ（１．５Ｌ）中３，５−ジメトキシアニリン（７８．２ｇ、５００ｍｍｏｌ）溶液に、ＲＴで、アルゴン雰囲気下で滴下する。反応混合物を還流温度に４．５時間加熱し（加熱すると、相当のガス発生が観察される）、ＲＴに冷却し、濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃ（８００ｍＬ）およびＨ２Ｏ（８００ｍＬ）で希釈する。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出する。合併した有機相を０．１Ｎ  ＨＣｌ（２００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ、および塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をＤＣＭ／Ｈｅｘから結晶化して、表題化合物を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：２５２．１  ［Ｍ−Ｈ］−、ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．３４（Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、３：１）。
【０２６５】
実施例８：３−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：５４０．１／５４２．１  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．５６ｍｉｎ（純度：１００％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１３（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９３：７）。
【０２６６】
実施例９：３−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−｛６−［４−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：５１５．２／５１７．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．４７ｍｉｎ（純度：＞９５％、系１）。
【０２６７】
工程９．１：Ｎ−［４−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−フェニル］−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程１．１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：２８８．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝０．９５ｍｉｎ（純度：９５％、系１）。
【０２６８】
工程９．２：４−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−フェニルアミン
表題化合物を工程１．２に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：１８１．２  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１８（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、７：３）。
【０２６９】
実施例１０：３−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−メチル−（６−｛４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−エトキシ］−フェニルアミノ｝−ピリミジン−４−イル）−ウレア
表題化合物を実施例２に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：５７０．０  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．２０ｍｉｎ（純度：９０％、系１）、ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１３（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９３：７）。
【０２７０】
工程１０．１：Ｎ−メチル−Ｎ’−｛４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−エトキシ］−フェニル｝−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程１．１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：３４３．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．００ｍｉｎ（純度：９５％、系１）、ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２３（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９：１）。
【０２７１】
実施例１１：３−（２−クロロ−６−ヨード−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ｝−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例１に記載の方法と同様に製造する：  ＥＳＩ−ＭＳ：６５１．８／６５３．７  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．２０ｍｉｎ（純度：９５％、系１）、ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１８（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９３：７）。
【０２７２】
工程１１．１  Ｎ−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程１．１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：３１３．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．１０ｍｉｎ（系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２１（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９３：７）。
【０２７３】
工程１１．２：２−クロロ−６−ヨード−３，５−ジメトキシ−フェニル−アミン
ＨＣｌ（６．４６ｍＬ、２６ｍｍｏｌ、９．１当量、ジオキサン中４Ｎ）をジオキサン（１０ｍＬ）中（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．２８ｇ、２．８５ｍｍｏｌ、純度９２％）の冷（−１０℃）溶液に、アルゴン雰囲気下で加える。反応混合物をＲＴに温め、１．５時間攪拌する。残渣をＥｔＯＡｃおよび氷／水で希釈し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液を加えて塩基性にする。層を分離する。水層をＥｔＯＡｃで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ）で精製して、表題化合物を得る。ＡＰＩ−ＥＳ−ＭＳ：３１４．０  ［ＭＨ］＋、ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．５３（ＤＣＭ）。
【０２７４】
工程１１．３：（２−クロロ−６−ヨード−３，５−ジメトキシ−フェニル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中スルフリルクロライド（０．９２ｍＬ、１１．０ｍｍｏｌ、１．１６当量）溶液を、ＴＨＦ（４８ｍＬ）中（２−ヨード−３，５−ジメトキシ−フェニル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３．６ｇ、９．４９ｍｍｏｌ）の冷（−１５℃）溶液に３０分間、アルゴン雰囲気下で滴下する。反応混合物を１時間、−１５℃で攪拌し、氷／Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液（８０ｍＬ）、およびＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）の混合物に注ぐ。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで抽出する（２×１００ｍＬ）。合併した有機相をＨ２Ｏ（３×６０ｍＬ）および塩水（６０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ）で精製し、ＤＣＭ／Ｈｅｘから結晶化して、表題化合物を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：４１１．９、４１３．９  ［Ｍ−Ｈ］−、ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１８（ＤＣＭ／Ｈｅｘ、７：３）。
【０２７５】
工程１１．４：（２−ヨード−３，５−ジメトキシ−フェニル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ｔｅｒｔ−ブチルリチウム（１４．１ｍＬ、２４ｍｍｏｌ、２．４当量、ペンタン中１．７Ｍ）溶液を、ＴＨＦ（１８ｍＬ）中（３，５−ジメトキシ−フェニル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．５３ｇ、１０ｍｍｏｌ）の冷（−６５℃）溶液に、１５分間、アルゴン雰囲気下で滴下する。混合物を１５分間、−６５℃で攪拌し、−２５℃に温める。過剰のヨウ化トリフルオロメチルを黄色反応混合物にバブルする。得られた黒色混合物を氷／Ｈ２Ｏ（６０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）の混合物に注ぐ。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで抽出する（２×３０ｍＬ）。合併した有機相をＨ２Ｏ（３×４０ｍＬ）、および塩水（６０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／Ｈｅｘ、２：１）で精製して表題化合物を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：３８０．１  ［ＭＨ］＋、ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２７（ＤＣＭ／Ｈｅｘ、２：１）。
【０２７６】
工程１１．５：（３，５−ジメトキシ−フェニル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ＴＨＦ（１００ｍＬ）中ジ−ｔｅｒｔ．−ブチル−ジカルボネート（６９．５ｇ、３１２ｍｍｏｌ、１．３当量）溶液を、ＴＨＦ（６００ｍＬ）中３，５−ジメトキシアニリン（３７．５ｇ、２４０ｍｍｏｌ）溶液に加える。反応混合物を還流温度に３時間加熱し、ＲＴに冷却し、一晩攪拌し、濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）とＨ２Ｏ（５００ｍＬ）で分配する。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで抽出する（２×１００ｍＬ）。合併した有機相を０．１Ｎ  ＨＣｌ（２×１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏおよび塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をヘキサンで粉砕して精製して、表題化合物を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：２５４．１  ［ＭＨ］＋、ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．４２（Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、３：１）。
【０２７７】
実施例１２：３−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−｛６−［４−（４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：５５４．０／５５５．０  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．４９ｍｉｎ（純度：＞９５％、系１）、ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１３（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９３：７）。
【０２７８】
工程１２．１：Ｎ−［４−（４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程１．１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：２８８．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝０．９５ｍｉｎ（純度：９５％、系１）。
【０２７９】
工程１２．２：４−（４−イソプロピルピペラジン−１−イル）−アニリン
ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中１−イソプロピル−４−（４−ニトロ−フェニル）−ピペラジン（５．１８ｇ、２０．８０ｍｍｏｌ）および５％炭素パラジウム（０．５ｇ）の懸濁液を２．７時間ＲＴで、水素雰囲気下で攪拌する。反応混合物をセライトパッドでろ過し、濃縮して表題化合物を紫色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２２０．１  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝０．９５ｍｉｎ（系１）。
【０２８０】
工程１２．３：１−イソプロピル−４−（４−ニトロ−フェニル）−ピペラジン
１−ブロモ−４−ニトロベンゼン（６ｇ、２９．７ｍｍｏｌ）と１−エチルピペラジン（７．６ｍＬ、５９．４ｍｍｏｌ、２当量）の混合物を８０℃に１５時間加熱する。ＲＴに冷却後、反応混合物を濃縮する。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９５：５）で残渣を精製して、表題化合物を黄色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２５０．１  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝２．５７ｍｉｎ（純度：１００％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１６（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９５：５）。
【０２８１】
実施例１３：１−｛６−［４−（４−ベンジル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例２に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：６２１．９／６２３．９  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝４．０４ｍｉｎ（純度：１００％、系１）。
【０２８２】
工程１３．１：Ｎ−［４−（４−ベンジル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程１．１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：３７５．１  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝２．３６ｍｉｎ（純度：９５％、系１）。
【０２８３】
工程１３．２：４−（４−ベンジル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミン
鉄粉（５．４ｇ、９７ｍｍｏｌ、４当量）を１−ベンジル−４−（４−ニトロ−フェニル）−ピペラジン（７．２ｇ、２４．２ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（１５０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（４０ｍＬ）、およびＡｃＯＨ（２０ｍＬ）の８０℃の混合物に少量ずつ加える。反応混合物を１．７５時間８０℃で攪拌し、ＲＴに冷却し、濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃおよびＮａ２ＣＯ３飽和水溶液で希釈する。層を分離し、水相をＥｔＯＡｃで抽出する。合併した有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮して表題化合物を得る：ＥＳ−ＭＳ：２６８．３  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．３０ｍｉｎ（系１）で一ピーク。
【０２８４】
工程１３．３：１−ベンジル−４−（４−ニトロ−フェニル）−ピペラジン
１−ブロモ−４−ニトロベンゼン（５ｇ、２４．８ｍｍｏｌ）と１−ベンジルピペラジン（８．６ｍＬ、４９．５ｍｍｏｌ、２当量）の混合物を８０℃に１７時間加熱する。反応混合物をＲＴに冷却し、ＤＣＭ／Ｈ２Ｏで希釈する。層を分離し、水相をＤＣＭで抽出する。合併した有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：１）で精製して、表題化合物を黄色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２９８．３  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．２５ｍｉｎ（純度：１００％、系１）。
【０２８５】
実施例１４：３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−１−［６−（４−ピペラジン−１−イル−フェニルアミノ）−ピリミジン−４−イル］−ウレア
１−｛６−［４−（４−ベンジル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−メチル−ウレア（１００ｍｇ、０．１６１ｍｍｏｌ）（実施例１３）、炭素パラジウム（３０ｍｇ）、ＭｅＯＨ（６ｍＬ）、およびＨＣｌ（３７％、１６μＬ）の懸濁液を、５日間ＲＴで、水素雰囲気下で攪拌する。反応混合物をろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ中ＤＣＭ／２Ｎ  ＮＨ３、９５：５）で精製して、表題化合物をベージュ色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：５３２．０／５３４．０  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．３９ｍｉｎ（純度：１００％、系１）。
【０２８６】
実施例１５：３−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−［６−（３−ジメチルアミノメチル−フェニルアミノ）−ピリミジン−４−イル］−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例２に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：４８５．０／４８７．０  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．６９ｍｉｎ（純度：１００％、系１）。
【０２８７】
実施例１６：３−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−｛６−［３−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例２に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：５４０．０／５４２．０  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．７４ｍｉｎ（純度：１００％、系１）。
【０２８８】
実施例１７：３−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−メチル−１−｛６−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例２に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：５４１．０／５４３．０  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．６６ｍｉｎ（純度：１００％、系１）。
【０２８９】
工程１７．１：Ｎ−メチル−Ｎ’−［４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程２．１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：３１４．１  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．１５ｍｉｎ（系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９：１）。
【０２９０】
工程１７．２：４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニルアミン
表題化合物を工程１．２に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：２０７．１  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２２（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１：１）。
【０２９１】
実施例１８：３−（２−クロロ−３，５−ジメトキシ−６−メチル−フェニル）−１−メチル−１−｛６−［３−フルオロ−４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例２に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：５７８．９／５８０．９  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．９６ｍｉｎ（純度：１００％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．３８（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９２：８）。
【０２９２】
工程１８．１：Ｎ−［３−フルオロ−４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程１．１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：３３２．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．３０ｍｉｎ（系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．３７（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９９：１）。
【０２９３】
工程１８．２：３−フルオロ−４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニルアミン
ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中１−［２−（２−フルオロ−４−ニトロ−フェノキシ）−エチル］−ピロリジン（１．２５ｇ、４．９２ｍｍｏｌ）および１０％炭素パラジウム（０．２ｇ）の懸濁液を１時間、ＲＴで、水素雰囲気下で攪拌する。反応混合物をセライトパッドでろ過し、濃縮して表題化合物を褐色油状物として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２２５．１  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝０．８０ｍｉｎ（系１）。
【０２９４】
工程１８．３：１−［２−（２−フルオロ−４−ニトロ−フェノキシ）−エチル］−ピロリジン
１−（２−クロロ−エチル）−ピロリジンヒドロクロライド（１．２ｇ、７．０ｍｍｏｌ、１．１当量）を、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中２−フルオロ−４−ニトロフェノール（１ｇ、６．４ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（５．２ｇ、１５．９ｍｍｏｌ、２．５当量）の懸濁液に加える。得られた混合物を８０℃に加熱し、１８時間攪拌する。さらに１−（２−クロロ−エチル）−ピロリジンヒドロクロライド（１ｇ）を加え、混合物を３時間、８０℃で攪拌する。反応混合物をＲＴに冷却し、ＥｔＯＡｃおよびＨ２Ｏで希釈する。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで抽出する。有機相をＨ２Ｏで洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）で精製して、表題化合物を黄色固体として得る。ＥＳＩ−ＭＳ：２５５．１  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝２．５７ｍｉｎ（系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．５５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）。
【０２９５】
実施例１９：３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（１−エチル−ピペリジン−４−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例２に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：５５８．９／５６０．９  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．８５ｍｉｎ（純度：１００％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１４（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）。
【０２９６】
工程１９．１：Ｎ−［４−（１−エチル−ピペリジン−４−イル）−フェニル−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程１．１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：３１２．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．３ｍｉｎ（系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２７（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９２：８）。
【０２９７】
工程１９．２：４−（１−エチル−ピペリジン−４−イル）−フェニルアミン
ＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中１−エチル−４−（４−ニトロ−フェニル）−ピペリジン（０．８ｇ、４．９２ｍｍｏｌ）および１０％炭素パラジウム（０．１ｇ）の懸濁液を、３時間ＲＴで、水素雰囲気下で攪拌する。反応混合物をセライトパッドでろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）で精製して、表題化合物を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：２０５．１  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２９（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）。
【０２９８】
工程１９．３：１−エチル−４−（４−ニトロ−フェニル）−ピペリジン
トリアセトオキシホウ化水素ナトリウム（３．１ｇ、１４．６ｍｍｏｌ、３当量）を、ＤＣＭ（２０ｍＬ）中４−（４−ニトロ−フェニル）−ピペリジン（１ｇ、４．９ｍｍｏｌ）およびアセトアルデヒド（０．８２ｍＬ、１４．６ｍｍｏｌ、３当量）の冷（５℃）溶液に加える。反応混合物を１時間、５℃で攪拌し、ＤＣＭおよびＮａＨＣＯ３飽和水溶液で希釈する。層を分離し、水層をＤＣＭで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９８：２）で精製して、表題化合物を黄色油状物として得る。ＥＳＩ−ＭＳ：２３５．１  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝２．６４ｍｉｎ（純度：８５％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１４（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９８：２）。
【０２９９】
工程１９．４：４−（４−ニトロ−フェニル）−ピペリジン
ＡｃＯＨ（４０ｍＬ）中濃Ｈ２ＳＯ４（２．６５ｍＬ）溶液およびＡｃＯＨ（２０ｍＬ）中濃ＨＮＯ３（２．１ｍＬ）溶液を、ＡｃＯＨ（４０ｍＬ）中４−フェニルピペリジン溶液に、温度を２０℃未満に保ったまま、連続して滴下する。濃Ｈ２ＳＯ４（４０ｍＬ）を加える（冷却しない；内部温度は６０℃に達する）。反応混合物をＲＴに冷却し、氷／水（１００ｇ）に注ぎ、固体ＮａＨＣＯ３（１５０ｇ）を加えて中性にし、そしてＤＣＭで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をＥｔ２Ｏ中で粉砕して精製して、表題化合物を黄色固体として得る。ＥＳＩ−ＭＳ：２０７．１  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝２．４２ｍｉｎ（系１）。
【０３００】
実施例２０：３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−エチル−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−ウレア
表題化合物を実施例２に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：５７３．９／５７５．９  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．６９ｍｉｎ（純度：１００％、系１）。
【０３０１】
工程２０．１：Ｎ−エチル−Ｎ’−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程１．１に記載の方法と同様に製造する：  ＥＳＩ−ＭＳ：３２７．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．５ｍｉｎ（系１）。
【０３０２】
実施例２１：３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［２−フルオロ−４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例２に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：５７８．９／５８０．９  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．７９ｍｉｎ（純度：１００％、系１）。
【０３０３】
工程２１．１：Ｎ−［２−フルオロ−４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニル］−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程２．１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：３３２．２  ［ＭＨ］＋。
【０３０４】
工程２１．２：２−フルオロ−４−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−フェニルアミン
ＭｅＯＨ（４０ｍＬ）中１−［２−（３−フルオロ−４−ニトロ−フェノキシ）−エチル］−ピロリジン（１．９６ｇ、７．７ｍｍｏｌ）と１０％炭素パラジウム（０．２ｇ）の懸濁液を０．５時間ＲＴで、水素雰囲気下で攪拌する。反応混合物をセライトパッドでろ過し、濃縮して表題化合物を得る。ＥＳＩ−ＭＳ：２２５．１  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝０．９５ｍｉｎ（系１）。
【０３０５】
工程２１．３：１−［２−（３−フルオロ−４−ニトロ−フェノキシ）−エチル］−ピロリジン
１−（２−クロロ−エチル）−ピロリジンヒドロクロライド（２．６ｇ、１５．４ｍｍｏｌ、１．３当量）を、ＤＭＦ（４０ｍＬ）中２−フルオロ−４−ニトロフェノール（１．８４ｇ、１１．７ｍｍｏｌ）と炭酸セシウム（９．１ｇ、２７．９ｍｍｏｌ、２．５当量）の混合物に加える。得られた混合物を８０℃に加熱し、３時間攪拌する。反応混合物をＲＴに冷却し、ＤＣＭおよびＨ２Ｏで希釈する。層を分離し、水層をＤＣＭで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９７：３）で精製して、表題化合物１．９６ｇを黄色固体として得る。ＥＳＩ−ＭＳ：２５５．１  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝２．５５ｍｉｎ（純度：９３％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．４０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９３：７）。
【０３０６】
実施例２２：３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−２−メトキシ−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例２に記載の方法と同様に製造する。ＡＰＩ−ＭＳ：５８９．９／５９１．８  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．５９ｍｉｎ（系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１３（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋０．５％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）。
【０３０７】
工程２２．１：Ｎ−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−２−メトキシ−フェニル］−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程１．１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：３４３．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．３０ｍｉｎ（系１）。
【０３０８】
工程２２．２：４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−２−メトキシ−フェニルアミン
ＭｅＯＨ（８０ｍＬ）中１−エチル−４−（３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−ピペラジン（４ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）とラネーニッケル（１ｇ）の懸濁液を１０．５時間ＲＴで、水素雰囲気下で攪拌する。反応混合物をセライトパッドでろ過し、濃縮して表題化合物を褐色油状物として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２３６．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝０．９５ｍｉｎ（系１）。
【０３０９】
工程２２．３：１−エチル−４−（３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル）−ピペラジン
表題化合物を工程２４８．３に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：２６６．１  ［ＭＨ］＋。
【０３１０】
実施例２３：３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−カルボニル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例２３３に記載の方法と同様に製造する：ＡＰＩ−ＭＳ：５８７．８／５８９．８  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．５８ｍｉｎ（純度：９４．８％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．４７（ＭｅＯＨ中ＤＣＭ／２Ｎ  ＮＨ３、９：１）。
【０３１１】
工程２３．１：（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−［４−（６−メチルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ）−フェニル］−メタノン
プロピルホスホン酸無水物（ＤＭＦ中５０％、２．７２ｍＬ、４．７ｍｍｏｌ、２当量）を、ＤＭＦ（２５ｍＬ）中４−（６−メチルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ）−安息香酸（０．５７０ｇ、２．３３ｍｍｏｌ）、Ｎ−エチル−ピペラジン（０．３３ｍＬ、２．５７ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＤＭＡＰ（７ｍｇ）、およびＥｔ３Ｎ（３．３ｍＬ、２３．３ｍｍｏｌ、１０当量）の溶液に、ＲＴでアルゴン雰囲気下で加える。反応混合物をＲＴで１時間攪拌し、ＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ２Ｏで洗浄する。水層をＥｔＯＡｃで抽出する。合併した有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ→ＭｅＯＨ中ＤＣＭ／２Ｎ  ＮＨ３、８６：１４）で精製して、表題化合物を黄色泡状物として得る：ＥＳ−ＭＳ：３４１．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．００ｍｉｎ（系１）；Ｒｆ＝０．３３（ＣＨ２Ｃｌ２／２  Ｎ  ＮＨ３  ｉｎ  ＭｅＯＨ、９：１）。
【０３１２】
工程２３．２：４−（６−メチルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ）−安息香酸
表題化合物を工程２．１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：２４５．０  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．５８ｍｉｎ（系１）。
【０３１３】
実施例２４：３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−３−フルオロ−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例２に記載の方法と同様に製造する：ＡＰＩ−ＭＳ：５７７．９／５７９．９  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．８７ｍｉｎ（純度：９０％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）。
【０３１４】
工程２４．１：Ｎ−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−３−フルオロ−フェニル］−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程２．１に記載の方法と同様に製造するが、反応混合物を１５分間１６０℃で、マイクロウェーブ装置中で攪拌する。粗生成物をＥｔＯＡｃ中で粉砕して精製して、表題化合物を得る：ＥＳＩ−ＭＳ：３３１．２  ［ＭＨ］＋。
【０３１５】
工程２４．２：４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−３−フルオロ−フェニルアミン
ＭｅＯＨ（６ｍＬ）中１−エチル−４−（２−フルオロ−４−ニトロ−フェニル）−ピペラジン（１．２４ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）とラネーニッケル（１３ｍｇ）の懸濁液を１７時間ＲＴで、水素雰囲気下で攪拌する。反応混合物をセライトパッドでろ過し、濃縮して表題化合物を紫色油状物として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２２４．１  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝０．９０ｍｉｎ（系１）。
【０３１６】
工程２４．３：１−エチル−４−（２−フルオロ−４−ニトロ−フェニル）−ピペラジン
Ｎ−エチルピペラジン（０．９６ｍＬ、７．６ｍｍｏｌ、１．２当量）を、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中３，４−ジフルオロニトロベンゼン（０．７ｍＬ、６．３２ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（１．７４ｇ、１２．６ｍｍｏｌ、２当量）の混合物に加える。反応混合物を９０℃で１７時間攪拌し、ＲＴに冷却し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９７：３）で精製して、表題化合物を黄色固体として得る：ＥＳ−ＭＳ：２５４．１  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝２．６５ｍｉｎ（系１）；Ｒｆ＝０．３０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９３：７）。
【０３１７】
実施例２５：３−（２，４−ジクロロ−５−メトキシ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
ホスゲン（トルエン中２０％、０．５４ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ、２．０当量）を、ジオキサン（２ｍＬ）中２，４−ジクロロ−５−メトキシ−３−トリフルオロメチルアニリン（１５６ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ、１．２当量）溶液に、窒素雰囲気下で加える。混合物を還流温度に加熱し、７５分間攪拌し、ＲＴに冷却し、真空下で濃縮する。得られた固体の２，４−ジクロロ−５−メトキシ−３−トリフルオロメチル−フェニルイソシアネートを、トルエン６ｍＬ中Ｎ−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン（１５６ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ；工程２５．５参照）の沸騰溶液に、窒素雰囲気下で少量ずつ加える。反応混合物を１１０℃で３．３時間攪拌し、ＲＴに冷却し、ＤＣＭおよびＮａＨＣＯ３飽和水溶液で希釈する。水層を分離し、ＤＣＭで２回抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。得られた固体を２部のＭｅＯＨで粉砕して、表題化合物を得る：ＥＳＩ−ＭＳ：５９８／６００  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝５．１ｍｉｎ（純度：９７％、系１）。
【０３１８】
工程２５．１：２，４−ジクロロ−５−メトキシ−３−トリフルオロメチルアニリン
水（１．８７ｍＬ）中ＫＯＨの２Ｍ溶液を、ＥｔＯＨ（３ｍＬ）中Ｎ−（２，４−ジクロロ−５−メトキシ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−アセトアミド（１０４ｍｇ、０．３４４ｍｍｏｌ）溶液に加える。３．５時間、８０℃で攪拌し、ＲＴに冷却した後、溶媒を蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃおよびＮａＨＣＯ３飽和水溶液中に取る。分離した水層をＥｔＯＡｃで２回抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮して、表題化合物を得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２５８／２６０  ［Ｍ−Ｈ］−；ｔＲ＝４．８ｍｉｎ（系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．５４（ＥｔＯＡｃ）。
【０３１９】
工程２５．２：Ｎ−（２，４−ジクロロ−５−メトキシ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−アセトアミド
Ｎ−（５−メトキシ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−アセトアミド（２３３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）溶液を窒素雰囲気下で、氷バス（沈殿）中で冷却する。ＤＭＣ中ＳＯ２Ｃｌ２の１Ｍ溶液１．９３ｍＬを加える。２時間後、さらにＳＯ２Ｃｌ２溶液１．９３ｍＬを加え、攪拌を合計４時間、０℃で継続する。懸濁液をＤＣＭおよびＮａＨＣＯ３飽和水溶液で希釈する。分離した有機相をＤＣＭで２回抽出する。有機相を水および塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ、７：３）によって、表題化合物を得る：ｍｐ：１４３−１４４℃；ＡＰＩ−ＭＳ：３００／３０２  ［Ｍ−Ｈ］−；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２３（Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：１）；1H-NMR(DMSO-d6) δ 2.13(s, H3C), 3.88(s, H3C), 7.84(s, Hフェニル), 9.81(s, HN)。
【０３２０】
工程２５．３：Ｎ−（５−メトキシ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−アセトアミド
無水酢酸（１．２２ｍＬ、１２．８ｍｍｏｌ）を、トルエン（１０ｍＬ）中５−メトキシ−３−トリフルオロメチル−アニリン（２．２９ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）溶液に、１０分間、２５〜３３℃で加える。ＲＴで９０分後、ヘキサン（１０ｍＬ）を加え、懸濁液を２０分間攪拌する。ろ過し、トルエン／ヘキサン２：１およびヘキサンで洗浄して、表題化合物を得る：ｍｐ：１２３−１２４℃；ＡＰＩ−ＭＳ：２３４  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２７（Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ、１：１）。
【０３２１】
工程２５．４：５−メトキシ−３−トリフルオロメチル−アニリン
ＭｅＯＨ（１４０ｍＬ）中３−メトキシ−５−ニトロベンゾトリフルオリド（６．１９ｇ、２８ｍｍｏｌ）溶液をＰｄ−Ｃ（０．６２ｇ、１０％）の存在下で水素化し、触媒をろ過で除去し、得られたろ液を真空下で濃縮して表題化合物を得る：ＡＰＩ−ＭＳ：１９０  ［Ｍ−Ｈ］−；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．７（ＥｔＯＡｃ）。
【０３２２】
工程２５．５：Ｎ−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン
ジオキサン（１５ｍＬ）中４−（４−エチルピペラジン−１−イル）−アニリン（１ｇ、４．８８ｍｍｏｌ）（実施例２３８、工程２３８．１と同様に製造）、（６−クロロ−ピリミジン−４−イル）−メチル−アミン（１．８１ｇ、１２．６８ｍｍｏｌ、１．３ｅｑ．）および４Ｎ  ＨＣｌの混合物を密封チューブ中で１５０℃で５時間加熱する。反応混合物を濃縮し、ＤＣＭおよび重炭酸ナトリウム飽和水溶液で希釈する。水層を分離し、ＤＣＭで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（硫酸ナトリウム）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９３：７）で精製し、ジエチルエーテル中で粉砕して、表題化合物を白色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：３１３．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝１．１０ｍｉｎ（系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２１（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９３：７）。
【０３２３】
実施例２６：３−（５−メトキシ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
ホスゲン（トルエン中２０％、１．６２ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ、２．０当量）をジオキサン（６ｍＬ）中５−メトキシ−３−トリフルオロメチルアニリン（３４４ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ、１．２当量）溶液に、窒素雰囲気下で加える。混合物を還流温度に加熱し、８０分間攪拌し、ＲＴに冷却し、真空下で濃縮する。４５分間、得られた油状のトルエン中５−メトキシ−３−トリフルオロメチル−フェニルイソシアネートの濃縮溶液を、トルエン１８ｍＬ中Ｎ−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン（４６８ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ；工程２４２．１）の沸騰溶液に窒素雰囲気下で、少量ずつ加える。反応混合物を１１０℃で４時間攪拌し、ＲＴに冷却し、ＤＣＭおよびＮａＨＣＯ３飽和水溶液で希釈する。水層を分離し、ＤＣＭで２回抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、４９：１→２４：１）によって、表題化合物を得る：ＡＰＩ−ＭＳ：５３０／５３２  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．４（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、９：１）；ｔＲ＝４．３ｍｉｎ（純度：１００％、系１）。
【０３２４】
実施例２７：３−（５−メトキシ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−｛６−［３−クロロ−４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
ＤＣＭ中ＳＯ２Ｃｌ２の１Ｍ溶液０．４ｍＬ部を、アセトニトリル（６ｍＬ）中３−（５−メトキシ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア（１０５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）（実施例２６）の氷冷懸濁液に、２７時間にわたってくり返し加える。反応物をＨＰＬＣ分析に供する。反応混合物（出発物質を含む）をＤＣＭおよびＮａＨＣＯ３飽和水溶液で希釈する。水層を分離し、ＤＣＭで２回抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。ＮａＨＣＯ３を有するフラクションを含む生成物を中和し、部分濃縮し、ＤＣＭで抽出した後、逆相ＭＰＬＣ（Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ＋０．１％  ＴＦＡ）によって表題化合物を得る：ＡＰＩ−ＭＳ：５６４／５６６  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２８（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）；1H-NMR(DMSO-d6) δ 1.02(t, H3C), 2.37(q, H2C), 2.51(m, 4H), 2.92(m, 4H), 3.33(s, H3C), 3.82(s, H3C), 6.48(s, 1H), 6.90(s, 1H), 7.12(d, 1H), 7.43(m, 2H), 7.59(s, 1H), 7.82(s, 1H), 8.55(s, 1H), 9.66(s, HN), 12.33(s, HN)。
【０３２５】
実施例２８：１−｛６−［２−クロロ−４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例２に記載の方法と同様に製造する（還流温度で１時間２０分攪拌する）：ＥＳＩ−ＭＳ：５９３．８／５９５．８  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．８０ｍｉｎ（純度：９５％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．４５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）。
【０３２６】
工程２８．１：Ｎ−［２−クロロ−４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程１．１に記載の方法と同様に製造する：ＥＳＩ−ＭＳ：３４７．１／３４９．１  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）。
【０３２７】
工程２８．２：２−クロロ−４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミン
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中１−（３−クロロ−４−ニトロ−フェニル）−４−エチル−ピペラジン（１ｇ、３．７ｍｍｏｌ）およびラネーニッケル（０．１ｇ）の懸濁液を８時間ＲＴで、水素雰囲気下で攪拌する。反応混合物をセライトパッドでろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）で精製して、表題化合物をオフホワイト固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２４０．１／２４２．１  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝０．９０ｍｉｎ（系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．４６（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）。
【０３２８】
工程２８．３：１−（３−クロロ−４−ニトロ−フェニル）−４−エチル−ピペラジン
Ｎ−エチルピペラジン（４．３ｍＬ、３４．３ｍｍｏｌ、１．２当量）をＤＭＦ（５０ｍＬ）中２−クロロ−４−フルオロニトロベンゼン（５ｇ、２８．６ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（７．９ｇ、５７．１ｍｍｏｌ、２当量）の混合物に加える。反応混合物を１００℃で６時間攪拌し、ＲＴに冷却し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をジエチルエーテル中で粉砕して精製して、表題化合物５．６ｇを黄色固体として得る：ＥＳ−ＭＳ：２７０．０  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝２．９０ｍｉｎ（系１）。
【０３２９】
実施例２９：３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−２−フルオロ−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例２に記載の方法と同様に製造する（還流温度で１時間攪拌し、生成物を抽出するためにＤＣＭに代えてＥｔＯＡｃを用いる）：ＥＳＩ−ＭＳ：５７７．９／５７９．９  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝４．００ｍｉｎ（純度：＞９５％、系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．３５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９７：３）。
【０３３０】
工程２９．１：Ｎ−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−２−フルオロ−フェニル］−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程２．１に記載の方法と同様に製造するが、反応混合物を１時間１６０℃で、マイクロウェーブ装置中で攪拌し、生成物を抽出するためにＤＣＭに代えてＥｔＯＡｃを用いる。表題化合物：ＥＳＩ−ＭＳ：３３１．１  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）。
【０３３１】
工程２９．２：４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−２−フルオロ−フェニルアミン
ＭｅＯＨ（１４０ｍＬ）中１−エチル−４−（３−フルオロ−４−ニトロ−フェニル）−ピペラジン（７ｇ、２７．７ｍｍｏｌ）および炭素Ｐｄ（１０％）（０．３５ｇ）の懸濁液を３時間ＲＴで、水素雰囲気下で攪拌する。反応混合物をセライトパッドでろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）で精製して、表題化合物を白色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２２４．１  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．５４（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）。
【０３３２】
工程２９．３：１−エチル−４−（３−フルオロ−４−ニトロ−フェニル）−ピペラジン
Ｎ−エチルピペラジン（４．８ｍＬ、３７．７ｍｍｏｌ、１．２当量）をＤＭＦ（５０ｍＬ）中２，４−ジフルオロニトロベンゼン（５ｇ、３１．４ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（８．７ｇ、６２．９ｍｍｏｌ、２当量）の混合物に加える。反応混合物を１００℃で６時間攪拌し、ＲＴに冷却し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）で精製して、表題化合物を黄色油状物として得る：ＥＳ−ＭＳ：２５４．１  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．６７（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＋１％  ＮＨ３ａｑ、９５：５）。
【０３３３】
実施例３０：３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［６−（４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−３−イルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例１に記載の方法と同様に製造する（イソシアネート形成のために２当量のホスゲンを用い、続く工程で１６時間、７０℃で攪拌し、生成物の抽出のためにＤＣＭに代えてＥｔＯＡｃを使用する）：ＥＳＩ−ＭＳ：５７４．８／５７６．８  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．３２ｍｉｎ（系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．１０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ３ａｑ、９４：５：１）。
【０３３４】
工程３０．１：Ｎ−［６−（４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−３−イル］−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程１．１に記載の方法と同様に製造する。表題化合物：ＥＳＩ−ＭＳ：３２８．２  ［ＭＨ］＋。
【０３３５】
工程３０．２：６−（４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−３−イルアミン
鉄粉（１．４ｇ、２５．３ｍｍｏｌ、４当量）、１−イソプロピル−４−（５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン（１．５８ｇ、６．３２ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）、およびＡｃＯＨ（２．５ｍＬ）の混合物を２時間、９０℃で攪拌し、ＲＴに冷却し、アンモニア水溶液の添加によって塩基性にし、セライトパッドでろ過し、部分的に濃縮してＥｔＯＨを除去する。水性残渣を塩化ナトリウムで飽和し、ＥｔＯＡｃおよびＤＣＭで抽出する。合併した有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ３ａｑ、９１：８：１）で精製して、表題化合物を紫色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２２１．１  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ３ａｑ、９１：８：１）。
【０３３６】
工程３０．３：１−イソプロピル−４−（５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン（ＮＶＰ−ＢＫＴ２９３）
Ｎ−イソプロピルピペラジン（１．８ｍＬ、１２．７ｍｍｏｌ、２当量）を、ＤＣＭ（５ｍＬ）中２−クロロ−５−ニトロピリジン（１ｇ、６．３ｍｍｏｌ）の冷（５℃）混合物に加える。反応混合物をＲＴに温め、１６時間攪拌し、ＤＣＭ／Ｈ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出する。有機相を塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮して表題化合物を黄色固体として得る：ＥＳ−ＭＳ：２５１．２  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝２．２０ｍｉｎ（系１）。
【０３３７】
実施例３１：３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［６−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−３−イルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−ウレア
表題化合物を実施例１に記載の方法と同様に製造する（イソシアネート形成のために２当量のホスゲンを用い、続く工程で４時間、還流温度で攪拌し、生成物の抽出のためにＤＣＭに代えてＥｔＯＡｃを使用する）：ＥＳＩ−ＭＳ：５６０．８／５６２．８  ［ＭＨ］＋；ｔＲ＝３．２０ｍｉｎ（系１）；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．３５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ３ａｑ、９４：５：１）。
【０３３８】
工程３１．１：Ｎ−［６−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−３−イル］−Ｎ’−メチル−ピリミジン−４，６−ジアミン
表題化合物を工程１．１に記載の方法と同様に製造する。表題化合物：ＥＳＩ−ＭＳ：３１４．２  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２０（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ３ａｑ、９１：８：１）。
【０３３９】
工程３１．２：６−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−ピリジン−３−イルアミン
ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中１−エチル−４−（５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン（１．４ｇ）およびラネーニッケル（１４０ｍｇ）懸濁液を１０時間、ＲＴで、水素雰囲気下で攪拌する。反応混合物をセライトパッドでろ過し、濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ３ａｑ、９４：５：１）で精製して、表題化合物を紫色固体として得る：ＥＳＩ−ＭＳ：２０７．１  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２６（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ３ａｑ、９４：５：１）。
【０３４０】
工程３１．３：１−エチル−４−（５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン
表題化合物を工程３０．３に記載の方法と同様に製造するが、Ｎ−エチルピペラジンを使用する。表題化合物：ＥＳ−ＭＳ：２３７．１  ［ＭＨ］＋；ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２５（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ３ａｑ、９６：３：１）。
【０３４１】
実施例３２：軟カプセル剤
各々上記実施例１〜２９のいずれか１個に記載の式ＩＡの化合物のいずれかを０．０５ｇ、有効成分として含む軟ゼラチンカプセル５０００個を、下記の通りに製造する：
組成
有効成分                ２５０ｇ
Ｌａｕｒｏｇｌｙｃｏｌ  ２リットル
製造法：粉砕した有効成分をＬａｕｒｏｇｌｙｋｏｌ（商標）（プロピレングリコールラウレート、Gattefosse S.A., Saint Priest, France）に懸濁し、湿潤粉砕機で粉砕して約１〜３μｍの粒度にする。混合物０．４１９ｇ部を軟ゼラチンカプセルに、カプセル充填機を用いて導入する。
【０３４２】
実施例３３：式ＩＡの化合物を含む錠剤
上記実施例１〜２９のいずれか１個に記載の式ＩＡの化合物のいずれかを１００ｍｇ、有効成分として含む錠剤を、下記組成で下記の通りに製造する：
組成
有効成分                    １００ｍｇ
結晶ラクトース              ２４０ｍｇ
Ａｖｉｃｅｌ                ８０ｍｇ
ＰＶＰＰＸＬ                ２０ｍｇ
Ａｅｒｏｓｉｌ              ２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム    ５ｍｇ
−−−−−−
４４７ｍｇ
【０３４３】
製造：有効成分を担体物質と混合し、打錠機（Ｋｏｒｓｃｈ  ＥＫＯ、スタンプ径１０ｍｍ）で圧縮する。
Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）は微結晶セルロース（FMC, Philadelphia, USA）である。ＰＶＰＰＸＬは架橋ポリビニルポリピロリドン（BASF, Germany）である。Ａｅｒｏｓｉｌ（登録商標）は、シリコンジオキシド（Degussa, Germany）である。
【国際調査報告】
2009520768.tif 000015
2009520768.tif 000016
2009520768.tif 000017
2009520768.tif 000018
2009520768.tif 000019