(57)【要約】  特定の血漿中脂肪酸の組成比を、ＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤの病態を反映するマーカーとして利用して、又は、他の検査、マーカー等と組み合わせた、診断方法、治療方法の提供。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者の血漿中のオレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、及びオレイン酸／パルミチン酸比からなる群から選ばれる１以上の値を被験者の状態、又は治療効果を評価するための指標として投与される、ω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つを有効成分として含有する非アルコール性脂肪肝炎予防及び・又は治療用の医薬組成物。
【請求項２】
被験者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、及びオレイン酸／パルミチン酸比からなる群から選ばれる１以上の値を、被験者の状態、又は治療効果を評価するための指標として用いる、該被験者にω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つを有効成分として含有する医薬組成物を投与する、非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善・治療方法。
【請求項３】
（１）被験者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比及びオレイン酸／パルミチン酸比からなる群から選ばれる１以上の値を算出し、
（２）該被験者にω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つを有効成分として含有する医薬組成物を一定期間投与し、
（３）その後、再び、該被験者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比から選ばれる１以上の値を算出し、
（４）医薬組成物の投与前後の、オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比及びオレイン酸／パルミチン酸比からなる群から選ばれる１以上の値を比較して、被験者の状態、または治療効果を評価し、
（５）その評価に基づいて該被験者に該医薬組成物を投与する、
（６）非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善・治療方法。
【請求項４】
（１）被験者の血漿中のオレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比の少なくとも１つについて第１の決定を得る、
（２）該被験者にω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つを有効成分として含有する医薬組成物を投与する、
（３）該被験者の血漿中のオレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比の少なくとも１つについて第２の決定を得る、
（４）該被験者の状態を評価するために、第１の決定と第２の決定とを比較する、
（５）非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善・治療に適する該医薬組成物の適切な治療的用量を決定するために、第１と第２の決定の比較に基づいて、該被験者の治療を評価するステップを含む、
（６）非アルコール性脂肪肝炎に罹患している被験者の、非アルコール性脂肪肝炎を予防／改善・治療する方法。
【請求項５】
非アルコール性脂肪肝炎、またはＮＡＦＬＤ患者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比及びオレイン酸／パルミチン酸比からなる群から選ばれる１以上を低下させるための、ω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つを有効成分として含有する、非アルコール性脂肪肝炎、又はＮＡＦＬＤ患者の血中脂肪酸組成改善用医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患、特に非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善・治療方法及びそれに用いられる医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ウィルス性肝疾患、自己免疫疾患性肝疾患、ヘマクロトーシスやＷｉｌｓｏｎ病等の代謝性肝疾患などを除外して、飲酒歴のない人に発生する単純脂肪肝から脂肪性肝炎、線維症、肝硬変までの肝障害を含む疾患群は、一括して非アルコール性脂肪性肝疾患（ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ：以下、ＮＡＦＬＤと記す）と定義される。【０００３】
ＮＡＦＬＤは、さらに、肝生検（病理所見）により、一般に予後良好と考えられている単純性脂肪肝と、予後不良な非アルコール性脂肪肝炎（ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ：以下、ＮＡＳＨと記す）とに分類され、ＮＡＳＨは、ＮＡＦＬＤの重症型と考えられている。肝生検によりＮＡＳＨと判定される炎症、脂肪化、線維化ないし肝硬変、肝がんの病態は、他因と同じであり、アルコール性肝障害、ウィルス性肝炎や薬剤性肝障害の否定できる肝炎の多くがＮＡＳＨの病態であろうと推定される（非特許文献１参照）。【０００４】
米国では、人口の２０％がＮＡＦＬＤ、３％がＮＡＳＨであるとされる。日本でも一般診療においても比較的頻繁に遭遇する疾患であり、検診受診者におけるＮＡＦＬＤの頻度は８％であり、ＮＡＳＨの頻度は少なくとも成人の０．５〜１％と推定される。日本では、ＢＭＩ≧２５の成人肥満者が、男性で１３００万人、女性で１０００万人いることから、国内のＮＡＦＬＤは５００〜６００万人、ＮＡＳＨは約３０〜５０万人と推定される。また、ＮＡＦＬＤでのメタボリックシンドローム（以下、ＭｅｔＳと記す）診断基準に基づく、脂質代謝異常の合併頻度は約５０％、高血圧の合併頻度は約３０％、高血糖の合併頻度は約３０％、ＭｅｔＳの合併頻度は約４０％であり（非特許文献１参照）、生活習慣病の増加に伴い、今後、ＮＡＳＨの症例数の増加ならびに低年層への拡大が予想される。さらに肝炎を経て一部は星状細胞活性化による肝硬変、あるいは肝がんへの進行が臨床的な問題である。【０００５】
日本肝臓学会の「ＮＡＳＨ・ＮＡＦＬＤの診察ガイド」（非特許文献１）には、種々の病態改善を目指したＮＡＳＨの治療方法が試みられ、その有効性が報告されているが、確立した治療法がないのが現状であることが記載されている。【０００６】
具体的には、ビグアナイド薬（メトホルミン）、ＰＰＡＲ−γアゴニストのチアゾリジン誘導体（ピオグリタゾン、ロシグリタゾン）などのインスリン抵抗性改善薬；ビタミン、ベタイン（コリン誘導体）、Ｎ−アセチルシステインなどの抗酸化剤；フィブラート系薬剤（ＰＰＡＲ−αアゴニスト）、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害薬（スタチン）、プロブコールなどの高脂血症治療薬；ウルソデオキシコール酸、ポリエンホスファチジルコリン（ＥＰＬ）などの肝庇護剤；ロサルタンなどのアンジオテンシンＩＩ受容体拮抗剤などが記載される。【０００７】
イコサペント酸（以下、ＥＰＡ）ないし魚油のＮＡＳＨ・ＮＡＦＬＤに対する投与の報告例がある。たとえば、ω３多価不飽和脂肪酸（以下、ＰＵＦＡｓと記す）、具体的にはＥＰＡ−Ｅとドコサヘキサエン酸エチル（以下、ＤＨＡ−Ｅと記す）との２種混合系によるＮＡＦＬＤ患者における肝炎の改善（非特許文献２参照）がある。【０００８】
また、Ｔａｎａｋａらの最新の報告では、高純度ＥＰＡ−Ｅを２７００ｍｇ／日、１２ヶ月間投与し、アスパルテートアミノトランスフェレース（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼともいう。以下、ＡＳＴと記す）、アラニンアミノトランスフェレース（アラニンアミノトランスフェラーゼともいう。以下、ＡＬＴと記す）酵素観察、炎症性サイトカイン、酸化ストレスマーカー評価ならびに投与観察期間後の肝生検により、ＮＡＳＨを改善することが示される（非特許文献３参照）。【０００９】
また、ＮＡＳＨなどの脂肪肝の治療に、ペルオキソーム及び・又はミトコンドリアにおけるβ酸化を促進する薬剤としてω３ＰＵＦＡｓを適用する提案がある（特許文献１参照）。【００１０】
ＮＡＳＨと血漿中脂肪酸との関係については、ＮＡＳＨと血漿中脂肪酸蓄積との関連を評価するためにＮＡＳＨ患者22人と健常者6人とで、血漿総脂肪酸濃度（エステル＋遊離）、及び、遊離脂肪酸濃度が比較され、ＮＡＳＨ患者では、飽和脂肪酸と一価の脂肪酸濃度が高く、特にパルミチン酸（C16:0）、パルミトレイン酸（C16:1）、オレイン酸（C18:1）が高いことが示されている。デサチュラーゼ活性インデックスとしての、C18:1／C18:0、C20:4／C18:2は、ＮＡＳＨ患者とコントロール群で有意差がなかったことが記載されている（非特許文献４参照）。
一方、ω３ＰＵＦＡｓは、レプチン欠損により肥満・脂肪肝を呈するob/obマウスの肝臓の成熟型SREBP1cを低下させ、脂肪酸合成酵素（FAS）、ステアロイルCoAデサチュラーゼ（SCD1)などの脂肪合成関連酵素の遺伝子の発現を抑制し、肝臓における脂肪酸の、パルミチン酸（C16:0）、パルミトレイン酸（C16:1）、オレイン酸（C18:1）を低下させたことが示されている（非特許文献５参照）。【００１１】
NASH発症の機序として、肝細胞へのトリグリセリド（TG)の沈着（脂肪肝）が起こり(first hit)、さらに肝細胞障害要因（second hit）が加わり発症するとするtwo-hit-theory が広く指示されている。SREBP1cは、脂肪酸合成酵素群の転写を亢進させることが知られており、脂肪肝発症(first hit）に関与するといわれ（非特許文献１参照）、ω３ＰＵＦＡｓはSREBP1cを低下させることが知られている。
しかし、肝生検でＮＡＳＨと診断された被験者、つまり、second hitを経験した被験者に、一定期間ω３ＰＵＦＡｓを投与したときの特定の脂肪酸組成比の変動と、ＮＡＳＨ治療効果との関係については調べられたことがなかった。つまり、ω３ＰＵＦＡｓによるＮＡＳＨ治療効果が、一定期間の特定の脂肪酸組成の変動により予測、又は評価できることは知られていない。【００１２】
現在のところ、ＮＡＳＨの確定診断には肝生検が必須とされている。また、疾患治癒の判定には各種マーカーが用いられているが、必ずしも病態をパラレルに反映しているとはいえず、やはり、肝生検が必要と考えられている。しかし、肝生検には、患者の身体的負担、医療従事者の負担が大きいという問題があり、ＮＡＳＨ診断、病態を評価する、簡便な方法が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】国際公開第２００７／０８１７７３号パンフレット
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】日本肝臓学会編、「ＮＡＳＨ・ＮＡＦＬＤの診察ガイド」、文光堂出版、2006年8月22日
【非特許文献２】Alimentary Pharmacology & Therapeutics、2006年4月15日、第23巻、第8号、p.1143-1151
【非特許文献３】Journal of Clinical Gastroenterology、2008年、第42巻、第4号、p.413-418
【非特許文献４】Clinical Nutrition (2002) p.21(3) 219-223
【非特許文献５】Hepatology 38(6) (2003)  p.1529-1539
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明は、ＮＡＳＨの病態を反映する、有効な指標を提供し、当該指標を利用した治療方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、特定の血漿中脂肪酸の組成比が、ＮＡＳＨの病態を反映するよいマーカーとなること、さらには、ω３ＰＵＦＡｓによるＮＡＦＬＤ、特にＮＡＳＨの予防／改善・治療を行った被験者では、一定の検査、またはマーカーの組み合わせが、予防／改善・治療効果の指標として有効であることをあわせて見出し、本発明を完成した。【００１７】
すなわち、本発明は、当該指標を定期的に測定することによりＮＡＳＨ治療剤、例えばω３ＰＵＦＡｓ等の効果を判定し、投与した薬剤に対する被験者の反応性を確認しながら治療をすすめることができる、ＮＡＳＨ／ＮＡＦＬＤの治療方法、及び・又は肝硬変／肝癌への移行を抑制する方法を提供するものである。【００１８】
さらに、本発明は、血漿中若しくは肝臓中の特定の脂肪酸組成比、一定の検査、又はマーカーの組み合わせを指標とする、ＮＡＳＨの診断方法を提供する。【００１９】
さらに、本発明は、血漿中又は肝臓中の特定の脂肪酸組成比の高い被験者にω３ＰＵＦＡｓをはじめとするＮＡＳＨ治療剤の投与を開始する治療方法を提供する。【００２０】
さらに、本発明は、血漿中又は肝臓中の特定の脂肪酸組成比により、治療薬の投与に反応性のある被験者をスクリーニングする方法を提供する。【００２１】
さらに、本発明は、ω３ＰＵＦＡｓをはじめとするＮＡＳＨ治療剤の効果を判定しながら投与する方法を提供する。【００２２】
すなわち、本発明は以下のものである。
〔１〕被験者の血漿中、血清中、又は肝臓中脂肪酸組成比を指標として、被験者の状態、又は治療効果を評価する、ＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤの予防／改善・治療方法、又は、被験者の管理方法。
〔２〕被験者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比からなる群から選ばれる１以上を、被験者の状態、又は治療効果を評価するための指標として、該被験者にω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つを有効成分として含有する医薬組成物を投与する、非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善・治療方法。
〔３〕（１）被験者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比から選ばれる１以上を算出し、
（２）該被験者にω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つを有効成分として含有する医薬組成物を一定期間投与し、
（３）再び、該被験者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比から選ばれる１以上を算出し、
（４）医薬組成物の投与前後の、オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比から選ばれる１以上を比較して、被験者の状態、又は治療効果を評価し、
（５）その評価に基づいて該被験者に該医薬組成物を投与する、
（６）非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善・治療方法。【００２３】
〔４〕（１）被験者の血漿中のオレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比の少なくとも１つについて第１の決定を得る、
（２）該被験者にω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つを有効成分として含有する医薬組成物を投与し、
（３）該被験者の血漿中のオレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比の少なくとも１つについて第２の決定を得る、
（４）該被験者の状態を評価するために、第１の決定と第２の決定とを比較する、
（５）非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善・治療に適する該医薬組成物の適切な治療的用量を決定するために、第１と第２の決定の比較に基づいて、該被験者の治療を評価するステップを含む、
（６）非アルコール性脂肪肝炎に罹患している被験者の、非アルコール性脂肪肝炎を予防／改善・治療する方法。
〔５〕前記比較するステップが、第１の決定と第２の決定とを比較したときに、該被験者の血漿中のオレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比の少なくとも１つが低下しているかどうかの決定をさらに含む、〔４〕に記載の方法。
〔６〕前記医薬組成物が、第２の決定の前に１ヶ月間投与される、〔４〕又は〔５〕に記載の方法。【００２４】
〔７〕前記被験者の状態、又は治療効果の評価が、他の検査、又はマーカーを組み合わせて行われる、〔１〕ないし〔６〕のいずれかに記載の治療方法。
〔８〕前記予防／改善・治療方法を３ヶ月間以上続ける、〔１〕ないし〔７〕のいずれかに記載の治療方法。
〔９〕前記医薬組成物が、食事療法と併用される、〔１〕ないし〔８〕のいずれかに記載の治療方法。
〔１０〕前記ＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤの予防／改善・治療方法、又は、被験者の管理方法に用いられる、ω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つを有効成分として含有する医薬組成物。
〔１１〕被験者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比及びオレイン酸／パルミチン酸比からなる群から選ばれる１以上の値を、被験者の状態又は治療効果を評価するための指標として投与される、非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善・治療に用いられるための、ω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つを有効成分として含有する医薬組成物。
〔１２〕（１）被験者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比及びオレイン酸／パルミチン酸比からなる群から選ばれる１以上の値を算出し、
（２）ω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つを有効成分として含有する医薬組成物が、該血漿が採取された後の一定期間にわたって投与されたときの該被験者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比及びオレイン酸／パルミチン酸比からなる群から選ばれる１以上の値を算出し、
（３）（１）及び（２）で算出された値を比較して、被験者の状態又は治療効果が評価され、
（４）その評価に基づいて投与される、非アルコール性脂肪肝炎予防及び・又は治療用医薬組成物。【００２５】
〔１３〕非アルコール性脂肪肝炎又はＮＡＦＬＤ患者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比からなる群から選ばれる１以上の値を低下させるための、ω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つを有効成分として含有する医薬組成物。
〔１４〕非アルコール性脂肪肝炎、またはＮＡＦＬＤ患者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比及びオレイン酸／パルミチン酸比からなる群から選ばれる１以上を低下させるための、ω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つを有効成分として含有する、非アルコール性脂肪肝炎、又はＮＡＦＬＤ患者の血中脂肪酸組成改善用医薬組成物。
〔１５〕前記血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比及びオレイン酸／パルミチン酸比が、血漿遊離脂肪酸（ｐｌａｓｍａ  ｆｒｅｅ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）の組成比である、〔１０〕ないし〔１４〕のいずれかに記載の医薬組成物。
〔１６〕被験者の血漿中、血清中、又は肝臓中の脂肪酸組成比を、被験者の状態、又は治療効果を評価するための指標として、ＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤの予防／改善・治療、又は、被験者の管理に用いられる医薬を製造するための、ω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つの使用。
〔１７〕被験者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比からなる群から選ばれる１以上を、被験者の状態、又は治療効果を評価するための指標として、ＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤの予防／改善・治療、又は、被験者の管理に用いられる医薬を製造するための、ω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つの使用。
〔１８〕被験者の血漿中、血清中、又は肝臓中の脂肪酸組成比を、被験者の状態、又は治療効果を評価するための指標として、ＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤの予防／改善・治療、又は、被験者の管理に用いられるためのω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つ。
〔１９〕被験者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比からなる群から選ばれる１以上を、被験者の状態、又は治療効果を評価するための指標として、ＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤの予防／改善・治療、又は、被験者の管理に用いられるためのω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つ。
【発明の効果】
【００２６】
本発明により、ＮＡＳＨの予防／改善・治療効果を評価する指標が提供され、この指標を用いてより効果的にＮＡＳＨの予防／改善・治療を行うことが可能となる。さらに、特定の血漿中脂肪酸の組成比、他の検査、又はマーカーを指標として、簡便にＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨの予防／改善・治療効果が得られている被験者、効果が得られていない被験者を見分けることが可能となる。そして、効果が得られていない被験者に対しては、用量の変更、治療方針の変更を行い、より有効な治療を選択することができるため、臨床上有用である。治療効果の評価が容易であるため、肝生検の実施回数を減らすことができ、医師、患者の負担が軽減し、さらには医療事故等のリスクを減少することができる。【００２７】
さらには、１〜３ヶ月程度の比較的短期的な脂肪酸変動を観察することにより、被験者の状態を把握でき、その時点において治療が奏功しているか、奏功する見込みがあるかを判定できる。本発明で提供される指標は、ＮＡＳＨの他の検査値、マーカー変動に先んじてＮＡＳＨの病態を反映するため、指標として有用であり、この指標を治療方法に応用することで、被験者により適した治療を提供することが可能となる。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下に本発明を詳細に説明する。
本発明の第１の態様は、被験者の血漿中、血清中、又は肝臓中脂肪酸組成比を指標として、被験者の状態、又は治療効果を評価する、ＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤの予防／改善・治療方法、又は、被験者の管理方法である。
【００２９】
好ましくは、被験者の血漿中、血清中、又は肝臓中脂肪酸組成比を指標として、被験者にω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物を投与する、ＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤの予防／改善・治療方法、又は、被験者の管理方法である。
【００３０】
本発明の指標（マーカー）として用いられる脂肪酸としては、特に限定されないが、好ましくは、脂肪酸２４分画等の公知の手法により測定できる脂肪酸である。例えばミリスチン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸（１６：１）、ステアリン酸又はオレイン酸等が挙げられ、中でも、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸が好ましく、とりわけオレイン酸が好ましい。脂肪酸は、全脂肪酸中のモル％で算出することが望ましい。特に好ましくは、２種以上の脂肪酸の比であり、２種以上の脂肪酸についてその比を算出する場合、具体的な脂肪酸組成比としては、例えばオレイン酸（ＯＡ）／ステアリン酸（ＳＡ）比、ステアリン酸（ＳＡ）／パルミチン酸（ＰＡ）比、オレイン酸（ＯＡ）／パルミチン酸（ＰＡ）比、パルミトレイン酸／パルミチン酸比、ステアリン酸／ミリスチン酸比、パルミチン酸／ミリスチン酸比、等が挙げられ、ＯＡ／ＳＡ比、ＳＡ／ＰＡ比、ＯＡ／ＰＡ比が好ましい。例えば、上記の脂肪酸の３種、４種を組み合わせて用いて指標としてもよい。
脂肪酸２４分画は、脂肪酸を不飽和脂肪酸も含め、特定の２４種類に分画しガスクロマトグラフィーにより定量する検査方法である。具体的には、血漿中の脂肪酸を、例えばＦｏｌｃｈらの方法（Ｆｏｌｃｈ  Ｊ．ら  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２２６，  ４９７−５０９（１９５７））により抽出する。トリコサン酸（Ｔｒｉｃｏｓａｎｏｉｃ  ａｃｉｄ，Ｃ２３：０）を内部標準として、各脂肪酸を三フッ化ホウ素とメタノールにてメチルエステル体とし、各脂肪酸のメチルエステル体を、例えば、ＳＨＩＭＡＺＵ  ＧＣ−１７Ａなどのガスクロマトグラフィー装置（島津製作所社製）およびＢＰＸ７０などのキャピラリーカラム（０．２５ｍｍＩＤ×３０ｍ，  ＳＧＥ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｔｄ．製）を用いて測定、定量することができるが、これらに限定されない。
【００３１】
すなわち、本発明の治療方法は、望ましくは、血漿中脂肪酸組成比を指標とする治療効果又は疾患の程度の評価と医薬組成物の投与とが並行してまたは交互に繰り返し行われる治療方法である。
【００３２】
より具体的には、
（１）被験者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比から選ばれる１以上を算出し、
（２）該被験者にω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つを有効成分として含有する医薬組成物を一定期間投与し、
（３）その後、再び、該被験者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比から選ばれる１以上を算出し、
（４）医薬組成物の投与前後の、オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比から選ばれる１以上を比較して、被験者の状態、又は治療効果を評価し、
（５）その評価に基づいて該被験者に該医薬組成物を一定期間投与し、
（６）所望により、又は必要に応じて、（３）ないし（５）を繰り返す、
（７）非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善・治療方法である。
【００３３】
また、本発明の医薬組成物は、望ましくは、血漿中脂肪酸組成比を指標とする治療効果又は疾患の程度の評価と医薬組成物の投与とが交互に繰り返し行われる医薬組成物である。
【００３４】
治療前後の脂肪酸組成比を比較して治療効果の評価を行う場合、例えば、ＯＡ／ＳＡ比を指標として用いた場合には、一定期間治療を行った後における被験者のＯＡ／ＳＡ比が、治療前におけるＯＡ／ＳＡ比の値と比較して減少していれば、ＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤの予防／改善・治療効果が得られると評価できる。本発明の医薬組成物についても同様に、医薬組成物を一定期間投与した後における被験者のＯＡ／ＳＡ比が、投薬前におけるＯＡ／ＳＡ比の値と比較して減少していれば、医薬組成物による治療効果が発揮されていると評価できる。ＳＡ／ＰＡ比、ＯＡ／ＰＡ比についても、同様に評価できる。
【００３５】
治療効果の評価は、ＯＡ／ＳＡ比、ＳＡ／ＰＡ比、又はＯＡ／ＰＡ比のいずれか１つを指標として評価できるが、これらの脂肪酸比のうち２つ以上を用いて評価することが望ましく、その指標のひとつにＯＡ／ＳＡ比が含まれることが望ましい。
【００３６】
本明細書において脂肪酸組成比は、特に記載のない限り、血漿中、血清中、肝臓における脂肪酸組成比のいずれを用いてもよい。また、血液中のLDL,VLDLなど特定の分画における脂肪酸組成比を指標にすることもできる。しかし、測定の簡便さの点から、血漿中、又は血清中の脂肪酸組成比を用いることが望ましい。脂肪酸組成比の算出に用いる各脂肪酸の単位は特に限定されず、モル、モル％、重量、重量％等いずれを用いてもよいが、経時的に脂肪酸組成比を比較して評価する場合には、統一した単位、脂肪酸組成比の算出方法を用いる。とりわけ、全脂肪酸中のモル％により算出するのが望ましい。質量／体積濃度(μg/mlなど)、体積モル濃度（mol/Lなど）などが用いられてもよい。
【００３７】
また、本明細書において血漿中脂肪酸とは、特に記載のない限り、血漿中総脂肪酸（ｐｌａｓｍａ  ｔｏｔａｌ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）を指すが、被験者の状態、又は治療効果を評価するための指標として血漿中遊離脂肪酸（ｐｌａｓｍａ  ｆｒｅｅ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ）を用いてもよい。また、肝臓中脂肪酸とは、特に記載のない限り、肝臓中総脂肪酸を指すが、場合により、肝臓中遊離脂肪酸を用いてもよい。
【００３８】
脂肪酸組成の測定は、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が実施しうるいかなる方法を用いて行ってもよいが、常法に従って行うことが特に好ましい。
【００３９】
血漿中総脂肪酸組成は、被験者から採血して血漿を取り出し、Ｆｏｌｃｈ法などの方法により抽出した脂質から加水分解により遊離させた全ての脂肪酸について、ガスクロマトグラフィーなどにより分画して定量値、組成値を得て、脂肪酸組成比を算出することができる。臨床検査の一項目である全脂質中脂肪酸分画（例えば、ＳＲＬ株式会社等の受託臨床検査事業者によって実施可能である）を実施し、得られた個々の脂肪酸の値から算出することもできる。
【００４０】
血漿中遊離脂肪酸組成は、Ｆｏｌｃｈ法などの方法により抽出した脂質を薄層板展開を行うことで遊離型のみを掻きとり、抽出後に加水分解をおこないメチルエステル化処理の後、ガスクロマトグラフィーなどにより分画して定量値、組成値を得て、脂肪酸組成比を算出することができる。血清にも応用可能である。
【００４１】
肝臓の脂肪酸組成比も、常法に従い、測定可能である。例えば、Ｆｏｌｃｈ法などの方法に従い、肝臓組織５−１０ｍｇからクロロホルム／メタノール（２：１ｖｏｌ／ｖｏｌ）により脂質を抽出し、クロマトグラフィーにより分画する。これらの測定方法、算出方法等は特に限定されず、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が実施しうる任意の方法を用いることができることは言うまでもない。
【００４２】
本発明において、ω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物とは、ω３多価不飽和脂肪酸（ω３ＰＵＦＡｓ）、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つを有効成分として含有する医薬組成物をいう。
【００４３】
医薬組成物を一定期間投与して、その投薬前後で脂肪酸組成比を比較して治療効果を評価する場合、医薬組成物が投与される一定期間とは、特に限定されないが、７日間以上１年以下であることが望ましく、好ましくは１４日以上９ヶ月以下、より好ましくは１ヶ月以上６ヶ月以下、いっそう好ましくは１ヶ月以上３ヶ月以下、よりいっそう好ましくは１ヶ月である。
【００４４】
本発明のω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物を被験者に投与すると、多くの被験者のＯＡ／ＳＡ比は低下傾向を示し、投薬開始から１〜２月間程度は、ＯＡ／ＳＡ比の低下率は大きく、次第に低下率は小さくなる。ここで、本明細書において、脂肪酸組成比の低下率とは、一定期間あたり脂肪酸組成比の低下した割合をいい、例えば、ＯＡ／ＳＡ比の１ヶ月あたりの低下率は、（投薬前のＯＡ／ＳＡ比−１ヶ月投与後のＯＡ／ＳＡ比）／投薬前のＯＡ／ＳＡ比×１００（％）と算出する。
【００４５】
本発明の治療方法の好ましい態様は、ω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物を１ヶ月ないし２ヶ月間投与し、被験者の血漿中ＯＡ／ＳＡ比、ＳＡ／ＰＡ比、ＯＡ／ＰＡ比のいずれか１以上の値を投薬前後で比較する。投薬後のＯＡ／ＳＡ比、ＳＡ／ＰＡ比、ＯＡ／ＰＡ比のいずれかが、投薬前と比較して低下していれば、本発明の医薬組成物のＮＡＳＨ治療効果が得られると判断できる。
【００４６】
また、本発明の治療方法の好ましい態様では、ω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物を投与開始から１ヵ月後、２ヶ月後など、経時的に被験者の血漿中ＯＡ／ＳＡ比を測定し、投薬開始前のＯＡ／ＳＡ比の値と比較する。ＮＡＳＨ治療効果が得られるためには、投薬開始から１ヶ月の間のＯＡ／ＳＡ比の低下率が、望ましくは１％以上、より望ましくは２％以上、さらに望ましくは３％以上、いっそう望ましくは５％以上である。投薬開始から１〜２ヶ月間の低下率が大きければ、より本発明の医薬組成物のＮＡＳＨ治療効果が期待できる被験者であるので、そのままω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物の投与を継続する。投薬開始から２ヶ月あたりからその低下率が小さくなるが、その後は低下したＯＡ／ＳＡ比の値を維持するように、投薬を継続することが望ましい。
被験者にω３ＰＵＦＡｓを数か月以上投薬すると、投薬開始当初は変動していた血漿中の脂肪酸組成の変動がなくなることがある。例えば、ω３ＰＵＦＡｓの投薬中に、一定期間におけるＯＡ／ＳＡ比が不変となることがある。この場合には、脂肪酸の測定数値を治療前と比較したり、他の検査を併用して、治療効果が得られているか判断する。
【００４７】
一方、本発明の治療方法の好ましい態様は、本発明の医薬組成物を１ヶ月投薬した後のＯＡ／ＳＡ比、ＳＡ／ＰＡ比、ＯＡ／ＰＡ比のいずれか１以上が、又は２以上が、投薬前と比較して上昇、または不変の場合には、より治療効果を高めるために、（１）ω３ＰＵＦＡｓの用量の増加、（２）他の薬剤の追加、変更、（３）食事療法の追加、変更、（４）運動療法の追加、変更等を行うことが望ましい。
これに対して、ＯＡ／ＳＡ比、ＳＡ／ＰＡ比、ＯＡ／ＰＡ比のいずれか１以上が、又は２以上が、投薬前と比較して低下の場合には、治療効果があり、治療を続けることが有効である。
【００４８】
また、本発明の治療方法の好ましい態様では、本発明の医薬組成物を投与開始から２ヶ月の間のＯＡ／ＳＡ比の低下率が小さい被験者に対しても、上記の治療効果を高めるための手段をとることが望ましい。２ヶ月あたりのＯＡ／ＳＡ比の低下率が小さいとは、特に限定されないが、０．５％以下である。
【００４９】
すなわち、本発明の好ましい態様は、本発明のω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物を投薬開始してから１ヶ月間のＯＡ／ＳＡ比の低下率を、被験者の状態、又は治療効果を評価するための指標として、該被験者にω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物を投与する、非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善・治療方法である。
【００５０】
より好ましくは、本発明のω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物を投薬開始してから１ヶ月間のＯＡ／ＳＡ比の低下率を、被験者の状態、又は治療効果を評価するための指標として、１ヶ月あたりのＯＡ／ＳＡ比の低下率が１％以上になるように、該被験者にω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物を投与する、非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善・治療方法である。
【００５１】
とりわけ好ましくは、本発明のω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物を投薬開始してから１ヶ月間のＯＡ／ＳＡ比の低下率を、被験者の状態、又は治療効果を評価するための指標として、１ヶ月間のＯＡ／ＳＡ比の低下率が１％以上になるように、該被験者にω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物を投与し、その後、ＯＡ／ＳＡ比の低下率が小さくなった後は、その低下率を維持するようにω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物を投与する、非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善・治療方法である。
【００５２】
本発明の好ましい態様は、上記非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善・治療方法に用いられる、ω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物である。
【００５３】
本発明によれば、１〜３ヶ月程度の比較的短期的な脂肪酸変動を観察することにより、被験者の状態を把握でき、現時点での治療が奏功しているか、現時点での治療で十分か、治療を変更する必要があるか、奏功する見込みがあるかを評価することができる。ＮＡＳＨ治療を反映する他の検査、マーカーの変動に先んじて、評価ができるため、被験者により適した治療を提供することが可能となる。
【００５４】
本発明の予防／改善・治療方法は、少なくとも１ヶ月以上継続されることが望ましく、好ましくは３ヶ月以上、より好ましくは６ヶ月以上、さらに好ましくは１年以上、いっそう好ましくは３年以上、よりいっそう好ましくは５年以上の期間にわたり継続される。後述する他の検査、又はマーカーを指標にして治療を終了できると評価されるまで継続されることが望ましい。
【００５５】
本発明の医薬組成物は、少なくとも１ヶ月以上投与されることが望ましく、好ましくは３ヶ月以上、より好ましくは６ヶ月以上、さらに好ましくは１年以上、いっそう好ましくは３年以上、よりいっそう好ましくは５年以上の期間にわたり投与される。後述する他の検査、又はマーカーを指標にして治療を終了できると評価されるまで投与されることが望ましい。
【００５６】
治療効果の評価に基づいて該被験者に前記医薬組成物を投与する場合には、ＮＡＳＨ治療にとって望ましい被験者の状態、又は治療効果を得るために、（１）ω３ＰＵＦＡｓの用量の増減、（２）他の薬剤の追加、用量の増減、中止、又は休薬、（３）食事療法、又は運動療法の追加、変更等を、所望により、又は必要に応じて行ってもよい。
【００５７】
被験者の状態、又は治療効果の判断は、被験者自身又は医師が、被験者の身体的、精神的症状から判断し、判断手法は特に限定されないが、例えば、ＫｌｅｉｎｅｒらのＮＡＳスコアを用いた場合には、スコアが改善することをいう。Ｋｌｅｉｎｅｒらは、ＮＡＦＬＤの肝組織所見の中から３項目、すなわち脂肪肝（ｓｔｅａｔｏｓｉｓ）、肝細胞風船様腫大（ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｂａｌｌｏｏｎｉｎｇ）、実質炎症（ｌｏｂｕｌａｒ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）の程度をスコア化し（ＮＡＦＬＤ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｓｃｏｒｅ：ＮＡＳ）、ＮＡＳが５以上をＮＡＳＨとした。望ましい被験者の状態、又は治療効果とはＮＡＳスコアが１以上低下することが望ましく、より望ましくは２低下、さらに望ましくはＮＡＳスコアが４以下になることである。
【００５８】
Ｍａｔｔｅｏｎｉらは、ＮＡＦＬＤを病理所見から、ｔｙｐｅ１：脂肪肝のみ、ｔｙｐｅ２：脂肪肝プラス小葉内の炎症（ｌｏｂｕｌａｒ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）、ｔｙｐｅ３：脂肪肝プラス肝細胞風船様腫大（肝細胞膨化：ｂａｌｌｏｏｎｉｎｇ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、ｔｙｐｅ４：脂肪肝、肝細胞風船様腫大プラス肝線維化あるいはマロリー体形成に分類し、ｔｙｐｅ３、４をＮＡＳＨと診断することを提唱した。Ｂｒｕｎｔらは、ＮＡＳＨの病理所見を炎症（ｇｒａｄｉｎｇ）と線維化の程度（ｓｔａｇｉｎｇ）で評価・分類することを提案し、ＮＡＳＨの病理分類として広く用いられている。被験者の状態、又は治療効果はこれらの分類を使って判断してもよい。望ましい被験者の状態、又は治療効果とは、例えば、Ｍａｔｔｅｏｎｉらの分類を用いて、ｔｙｐｅ３がｔｙｐｅ２になる、ｔｙｐｅ４がｔｙｐｅ３になる等が挙げられ、例えば、Ｂｒｕｎｔらの分類を用いて、炎症（ｇｒａｄｉｎｇ）が改善すること、及び・又は、線維化の程度（ｓｔａｇｉｎｇ）が改善することなどをいう。
【００５９】
本発明の第２の態様は、被験者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比が３以上の被験者に投与を開始し、血漿中オレイン酸／ステアリン酸比が２．６未満になるまで投与を継続し、さらに、血漿中オレイン酸／ステアリン酸比が２．６未満に維持するよう本発明の医薬組成物の投与を継続する、非アルコール性脂肪肝炎、又はＮＡＦＬＤの予防／改善・治療方法である。この場合、血漿中脂肪酸組成比は、血漿中の総脂肪酸組成を用い、測定単位はモル、又はモル％を用いて算出する。血漿脂肪酸24分画の検査数値を用いて算出することが望ましい。
【００６０】
本発明の第３の態様は、検査、若しくはマーカー、又はこれらの組み合わせを被験者の状態、又は治療効果を評価するための指標として、該被験者にω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物を投与する、非アルコール性脂肪肝炎、又はＮＡＦＬＤの予防／改善・治療方法である。ここでいう検査、マーカーは、特に限定されず、脂肪酸組成比をマーカーのひとつとしてもよい。また、脂肪酸のモル％をマーカーのひとつとしてもよい。例えば、血漿中オレイン酸のモル％が健常人の平均値より高い被験者に対して、血漿中オレイン酸の測定数値を指標として、該被験者にω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物を投与することができる。
【００６１】
検査、マーカーとしては、例えば、画像診断（超音波（エコー）、ＣＴ、ＭＲＩなど）、インスリン抵抗性検査（ＨＯＭＡ−ＩＲなど）、血中インスリン値、食後血糖値、ＢＭＩ、血中酸化ストレスマーカー（チオレドキシン、マロンジアルデヒド、４−ｈｙｄｒｏｘｙｎｏｎｅｎａｌ、一酸化窒素など）、８−イソプロスタン、アディポサイトカイン（アディポネクチン、ＴＮＦα、レプチン、ＭＣＰ１、レジスチンなど）、線維化マーカー（ヒアルロン酸、ＩＶ型コラーゲン、プロコラーゲンIIIポリペプチド（ＰIIIＰ）、ＴＩＭＰ−１（Ｔｉｓｓｕｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−１）、ＣＴＧＦ（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）など）、ｓＴＮＦ−Ｒ、血小板数、血清フェリチン、血清鉄、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＡＬＴ／ＡＳＴ比、γ−ＧＴＰ、ＡＬＰ（アルカリホスターゼ）、ＫＩＣＧ、高感度ＣＲＰ、トリグリセリド（ＴＧ）、ＬＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ−Ｃ、総コレステロール、遊離脂肪酸（ＦＦＡ）、リン脂質、アルブミン、トータルプロテイン、トータルビリルビン、キニノーゲン、１７−ＯＨ−ｏｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ［ｏｍｅｇａ１−ＯＨ−ｏｌｅｉｃ  ａｃｉｄ］，１８−ＯＨ−ｏｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ［ｏｍｅｇａ−ｏｌｅｉｃ  ａｃｉｄ］、ＰＤＧＦ−Ａ、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６などが挙げられ、これらの検査は、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が実施しうる任意の方法で行うことができる。好ましくは、常法に従って実施することが可能である。
【００６２】
特に、本発明の医薬組成物の治療効果を評価するための指標として望ましいものとしては、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＡＬＰ、トータルビリルビン、チオレドキシン、フェリチン、ＭＣＰ１、ヒアルロン酸、ＩＶ型コラーゲン、ＴＩＭＰ−１、ＣＴＧＦ、ＴＧ、アルブミン、トータルプロテイン、１７−ＯＨ−ｏｌｅｉｃ  ａｃｉｄ［ｏｍｅｇａ１−ＯＨ−ｏｌｅｉｃ  ａｃｉｄ］，１８−ＯＨ−ｏｌｅｉｃ  ａｃｉｄ［ｏｍｅｇａ−ｏｌｅｉｃ  ａｃｉｄ］などが挙げられる。画像診断と組み合わせるのがより望ましい。
【００６３】
これらの検査、マーカーは、被験者の状態に合わせて組み合わせて選択されることが望ましい。
【００６４】
例えば、前記Ｍａｔｔｅｏｎｉらの分類でｔｙｐｅ４（脂肪肝、肝細胞風船様腫大プラス肝線維化あるいはマロリー体形成肝線維化）に分類される被験者は、ヒアルロン酸、ＩＶ型コラーゲン、ＴＩＭＰ−１、アルブミン、トータルプロテイン、ＡＬＰ、トータルビリルビンのいずれか１以上と、その他の検査（ＨＯＭＡ−ＩＲ、血中インスリン値、ＢＭＩ、ＴＧなど）と組み合わせて治療効果を評価する。
【００６５】
例えば、前記Ｍａｔｔｅｏｎｉらの分類でｔｙｐｅ３（脂肪肝プラス肝細胞風船様腫大）に分類される被験者は、ＭＣＰ１、ＡＳＴ、ＡＬＴ、チオレドキシン、フェリチン、血小板数、血中インスリン値、ＢＭＩ、などにより評価されることが望ましい。
【００６６】
これらの望ましい検査、マーカーは、ω３ＰＵＦＡｓによるＮＡＳＨの治療効果、すなわち、病理所見の改善などを反映して段階的に検査数値が改善するので、これらを測定することにより、肝生検の検査の必要性を減らし、被験者負担を軽減できる。
【００６７】
これらの検査、マーカーは、ω３ＰＵＦＡｓによるＮＡＳＨ治療効果が得られると段階的に検査数値が改善するため、ＮＡＳＨ治療の進行状況を把握するために有効である。また、これらの検査、マーカーは、疾患が治癒し、治療を終了する指標（目標値）を設定するために使用可能である。疾患が治癒したといえる場合の目標値設定は、各検査数値の正常値とすることができる。
【００６８】
本発明の医薬組成物は、これらの検査、又はマーカーを指標にして、目標とするマーカー値を達成するために投与される。本発明の医薬組成物は、ＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤ患者の画像による所見、検査値、又はマーカー値を改善させるための、ω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する医薬組成物である。本発明の治療方法は、これらの検査、マーカーを指標にして、目標値を達成するために、ω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物を投与する、ＮＡＳＨの予防／改善・治療方法である。
【００６９】
本発明の第４の態様は、ＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤ患者の血漿、血清、又は肝臓中の脂肪酸組成比を改善させるための、ω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する医薬組成物である。また、ＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤ患者の血漿中遊離脂肪酸組成比を改善するためのω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する医薬組成物である。
【００７０】
被験者の脂肪酸組成比を改善させるとは、例えば、ＯＡ／ＳＡ比についていえば、医薬組成物の一定期間投与後のＯＡ／ＳＡ比の値が、投与前の値と比較して、低下することをいう。ＳＡ／ＰＡ比、又はＯＡ／ＰＡ比についても同様に判断する。本発明の第４の態様の医薬組成物の製造方法及び使用方法は、第１の態様の治療方法で使用する医薬組成物と同様である。
【００７１】
本発明の第５の態様は、ω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する医薬組成物の投与による治療に応答する見込みのあるＮＡＳＨ、又はＮＡＦＬＤ患者を選択する方法である。ω３ＰＵＦＡｓに応答する見込みのあるＮＡＳＨ（又はＮＡＦＬＤ）患者とは、特に身体的症状の有無は問わないが、血漿中脂肪酸組成比のＯＡ／ＳＡ比が高値の被験者である。健常人の平均のＯＡ／ＳＡ比と比較してより高値を示す被験者であり、具体的には、血漿中ＯＡ／ＳＡ比が１．５以上のヒトを意味し、より好ましくは、２以上、とりわけ好ましくは３以上のヒトを意味する。ここでの測定単位はモル、モル％である。
【００７２】
また、本願発明のω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する医薬組成物の投与による治療に応答する見込みのあるＮＡＳＨ、又はＮＡＦＬＤ患者とは、投薬開始前と、ω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する医薬組成物の投薬開始から１ヶ月ないし３ヶ月後の血中脂肪酸濃度を測定し、ＯＡ／ＳＡ比、ＳＡ／ＰＡ比、ＯＡ／ＰＡ比から選ばれる１以上を比較して、血中脂肪酸比が低下している被験者である。
望ましくは、これらの血中脂肪酸比の低下率が大きい被験者であり、望ましくは、前記の望ましい脂肪酸組成比の低下率を示す被験者であって、このような被験者は、本発明の医薬組成物により、大きな治療効果が得られる。
上記被験者を対象として本願の医薬組成物の投与を継続することが好ましい。
【００７３】
すなわち、（１）被験者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比から選ばれる１以上を算出し、
（２）該被験者にω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩及びエステルからなる群から選ばれる少なくとも一つを有効成分として含有する医薬組成物を一定期間投与し
（３）その後、再び、該被験者の血漿中オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比から選ばれる１以上を算出し、
（４）医薬組成物の投与前後の、オレイン酸／ステアリン酸比、ステアリン酸／パルミチン酸比、オレイン酸／パルミチン酸比から選ばれる１以上を比較して、投与後の数値が低下している被験者に対して医薬組成物の投与を継続する、非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善・治療方法である。
【００７４】
また、定期的に血漿中のＯＡ／ＳＡ比、ＳＡ／ＰＡ比、ＯＡ／ＰＡ比の１以上を測定し、その値が前回測定時に比較して上昇している被験者では、肝病変（ＮＡＳＨ、又はＮＡＦＬＤ）が進展している可能性がある。
このような被験者には、これらの値が正常の範囲を超えているか否かに関わらず、早期に治療及び予防的治療を開始することができる。このような被験者は、ω３ＰＵＦＡｓへの反応性が期待できる。
すなわち、本願発明のω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する医薬組成物の投与による治療に応答する見込みのあるＮＡＳＨ、又はＮＡＦＬＤ患者とは、血漿中のＯＡ／ＳＡ比、ＳＡ／ＰＡ比、ＯＡ／ＰＡ比の１以上を測定して、過去１年以内の値と比較して、その値が上昇している被験者である。特に、血漿中脂肪酸組成比のＯＡ／ＳＡ比が前回の測定時と比較して０．５以上、より好ましくは１．０以上、さらに好ましくは１．５以上上昇した被験者を選択する。このとき、前回の測定は、過去１年以内に、より望ましくは過去６ヶ月以内に行われていることが望ましい。被験者の選択は、上記の指標による判断に加えて、肝機能の検査値の変動も考慮して判断されることが望ましい。このように選択した被験者に対して、ＮＡＳＨ治療効果を持つ任意の薬剤を投与する。薬剤は、被験者の身体状態に応じて適宜選択できるが、ω３ＰＵＦＡｓを使用することが好ましい。薬剤の投与は、患者の身体状況を観察しながら、用量の増減、他の薬剤の追加を行うことができる。
【００７５】
本願発明のω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する医薬組成物の投与による治療に応答する見込みのあるＮＡＳＨ、又はＮＡＦＬＤ患者とは、血中遊離脂肪酸濃度の高い被験者である。血中遊離脂肪酸濃度の測定は、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が実施しうる任意の方法によって、一般的に測定可能である。また、例えば、ＳＲＬ株式会社等の受託臨床検査事業者に委託する等によっても測定可能である。基準値は１４０〜８５０（μＥｑ／Ｌ）とされるが、食事の影響を受けやすいため、例えば、一夜絶食するなど条件を一定にして測定することが望ましい。血中遊離脂肪酸濃度の高い状態が長く続いている被験者が望ましく、例えば６ヶ月以上、より望ましくは１年以上継続している被験者が望ましい。血中遊離脂肪酸濃度が高いとは、健常者の血中遊離脂肪酸濃度の平均値と比較して高値を示すことをいう。
【００７６】
本願発明のω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する医薬組成物の投与による治療に応答する見込みのあるＮＡＳＨ、又はＮＡＦＬＤ患者とは、本発明の医薬組成物投与により、血中トリグリセリド値（ＴＧ）が低下する被験者である。中でも、投薬開始前に血中のＴＧ濃度は基準値以上で、本発明の医薬組成物投与開始から１〜６ヶ月程度は、ＴＧの低下がほとんど見られないが、その後次第にＴＧ値の低下が見られる被験者がより望ましい。
【００７７】
本願発明のω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する医薬組成物の投与による治療に応答する見込みのあるＮＡＳＨ、又はＮＡＦＬＤ患者とは、ＮＡＳＨの初期の被験者である。例えば、Ｂｒｕｎｔらの分類によれば、線維化分類（ｓｔａｇｉｎｇ）のステージ１もしくは２の被験者である。Ｂｒｕｎｔらは、ＮＡＳＨの病理所見を炎症（ｇｒａｄｉｎｇ）と線維化の程度（ｓｔａｇｉｎｇ）で評価・分類した。中でも線維化の程度（ｓｔａｇｉｎｇ）は、以下の４段階に分類されている。
ステージ１：中心静脈周囲性線維化（肝細胞周囲性）  限局性、あるいは広範囲、
ステージ２：中心静脈周囲性線維化と門脈域の線維化、
ステージ３：中心静脈周囲性線維化と架橋形成を伴う門脈域の線維化、
ステージ４：肝硬変
【００７８】
本願発明のω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する医薬組成物の投与による治療に応答する見込みのあるＮＡＳＨ、又はＮＡＦＬＤ患者とは、体内の酸化度が高い被験者である。例えば、活性酸素種（ＲＯＳ）の産生が促進している被験者、鉄の過剰蓄積のある被験者である。血清フェリチンの上昇、血清チオレドキシン濃度、８−イソプロスタン値の上昇により評価することができる。
【００７９】
本願発明のω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する医薬組成物の投与による治療に応答する見込みのあるＮＡＳＨ、又はＮＡＦＬＤ患者とは、炎症が高度に起こっている被験者である。例えば、ＭＣＰ１、高感度ＣＲＰなどの測定により評価できる。
【００８０】
本願発明のω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する医薬組成物の投与による治療に応答する見込みのあるＮＡＳＨ、又はＮＡＦＬＤ患者とは、ＡＳＴ、ＡＬＴが上昇している被験者である。
【００８１】
本願発明のω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する医薬組成物の投与による治療に応答する見込みのあるＮＡＳＨ、又はＮＡＦＬＤ患者とは、アディポネクチン遺伝子、ＴＮＦ遺伝子の１塩基遺伝子多型性（ＳＮＰ）のある被験者にも好ましく用いられる。
【００８２】
本発明の治療方法は、上記ω３ＰＵＦＡｓに応答する見込みのある被験者を選択し、被験者の脂肪酸組成比、他の検査、若しくはマーカー、又はこれらの組み合わせを指標に、ＥＰＡ−Ｅ等のω３ＰＵＦＡｓを有効成分とする医薬組成物を、必要があれば、その他の併用薬、食事制限などを組み合わせて治療し、検査数値の目標値を達成するまで投与する、ＮＡＳＨの治療方法でもある。
【００８３】
本発明の第６の態様は、肝生検によってＮＡＳＨと診断され、かつ、血漿中トリグリセリド（ＴＧ）が正常値より高い（高トリグリセライド血症）の被験者のための、ω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する、ＮＡＳＨの改善、治療用医薬組成物である。動脈硬化性疾患予防ガイドライン２００７年版（日本動脈硬化学会編集・発行）における診断基準に従い、血漿中ＴＧが高い、又は高トリグリセライド血症とは、空腹時採血による検査により、トリグリセリドが１５０ｍｇ／ｄＬ以上を示すことをいう。
【００８４】
また、「脂質異常症の被験者」にも望ましく用いられる。「脂質異常症」の語は、動脈硬化性疾患予防ガイドライン２００７年版（日本動脈硬化学会編集・発行）における診断基準に従い、高ＬＤＬコレステロール血症、すなわち、空腹時採血による血清中ＬＤＬコレステロール値が１４０ｍｇ／ｄＬ以上、低ＨＤＬコレステロール血症、すなわち、空腹時採血による血清中ＨＤＬコレステロール値が４０ｍｇ／ｄＬ未満、及び高トリグリセライド（トリグリセリドと同義、以下同）血症、すなわち、空腹時採血による血清中トリグリセライド値が１５０ｍｇ／ｄＬ以上、の少なくとも一つに該当する状態を意味する。
また、「脂質異常症」の語は、米国の国立衛生研究所（NIH）が２００１年５月に発行したＡＴＰIIIガイドライン（ATP III Guidelines At-A-Glance Quick Desk Reference）に従って、血清中ＬＤＬコレステロール値が１３０ｍｇ／ｄＬ以上、血清総コレステロール値が２００ｍｇ／ｄＬ以上、血清中ＨＤＬコレステロール値が４０ｍｇ／ｄＬ未満の少なくとも一つに該当する状態であってもよい。
【００８５】
本発明の第７の態様は、「肝生検によってＮＡＳＨと診断された被験者」又は、「画像診断等によって脂肪肝と判定された被験者で、かつ、ＡＳＴ又はＡＬＴの上昇を認める被験者」のための、ω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有するＮＡＳＨの改善、治療用医薬組成物である。
【００８６】
「脂肪肝」の判定は、肝細胞の１／３以上に脂肪滴が存在すれば脂肪肝と診断されるが、広義には、肝細胞の１０％以上に脂肪肝を認めれば脂肪肝と診断する。一般的に脂肪肝の判定は、超音波、エコー、ＣＴ、ＭＲＩなど画像診断によって行われるが、特に限定されない。例えば、エコー輝度からｂｒｉｇｈｔ  ｌｉｖｅｒと表現される所見を認めれば脂肪肝と診断できる。
【００８７】
ＡＳＴ（ＧＯＴともいう）、ＡＬＴ（ＧＰＴともいう）の上昇とは、通常、正常上限の２〜４倍になることをいい、ＡＳＴの正常値は１０〜４０ＩＵ／Ｌ程度、ＡＬＴの正常値は５〜４０ＩＵ／Ｌ程度といわれているが、正常値（基準値）は診断の目安であって、医療施設によっても異なる。ＡＳＴ、及びＡＬＴが正常でも肝生検によってＮＡＳＨと診断されることもある。
【００８８】
本発明の医薬組成物は、このような被験者に対して好ましく用いられ、投薬開始時期は特に限定されないが、好ましくは、上記診断を初めて受けてから、３年以内に投薬を開始することが望ましく、より望ましくは１年以内に投薬を開始することが望ましい。
【００８９】
本発明の第８の態様は、肝生検によってＮＡＳＨと診断され、かつ、ＡＳＴ、又はＡＬＴの上昇を認める被験者のＡＳＴ、又はＡＬＴを低下させるための、ω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有するＮＡＳＨの改善、治療用医薬組成物である。ＡＳＴ、又はＡＬＴを低下させるとは、投薬開始前の検査数値を低下させればよいが、好ましくは投薬開始前の検査数値の２／３に、より好ましくは１／２に、さらに好ましくは正常値（基準値）といわれる程度にまで低下させることが望ましい。
本発明の医薬組成物の使い方は上述のとおりである。
【００９０】
本発明の第９の態様は、被験者の血漿中、血清中、又は肝臓中のＯＡ／ＳＡ比、ＳＡ／ＰＡ比、ＯＡ／ＰＡ比、他の検査、若しくはマーカー、又はこれらの組み合わせを、肝生検によるＮＡＳＨ確定診断に代わるＮＡＳＨ発症のマーカーとして使用する方法である。ここでの脂肪酸組成比、他の検査、又はマーカーは、本発明の第１から３の態様で記載したとおり組み合わせて使用され、診断の信頼性を高めることができる。
【００９１】
本発明の第１０の態様は、被験者の脂肪酸組成比、他の検査、若しくはマーカー、又はこれらの組み合わせを指標として、脂肪肝をもつ被験者の中で、ＮＡＳＨに移行する可能性の高い被験者を見出す方法である。例えば、被験者のＯＡ／ＳＡ比、ＳＡ／ＰＡ比、又はＯＡ／ＰＡ比が継続的に高値を示す場合には、ＮＡＳＨ発症の危険性が高い。ＯＡ／ＳＡ比が１ヶ月以上、３ヶ月以上、６ヶ月以上、１年以上高値が持続する場合、ＮＡＳＨ発症の危険性が高まる。
【００９２】
本発明の第１１の態様は、脂肪肝をもつ被験者の中で、ＮＡＳＨに移行する可能性の高い被験者を見出し、検査値を指標に治療を開始する時期を見出し、治療を開始するＮＡＳＨの予防方法である。ＯＡ／ＳＡ比が１ヶ月以上、３ヶ月以上、６ヶ月以上、１年以上高値が持続する場合、又は、ＯＡ／ＳＡ比が前回の測定と比較して、上昇が続いている被験者は、他の検査、マーカーと総合的に判断して、ＮＡＳＨの予防を開始することが望ましい。
【００９３】
本発明の第１２の態様は、ω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する、ＮＡＳＨによる肝臓の線維化を改善するための医薬組成物である。改善するための指標としては、ＯＡ／ＳＡ比を指標とすることができる。本発明の医薬組成物は、好ましくは、食事療法と組み合わせて、血漿中ＯＡ／ＳＡ比を指標として、それが前回の測定値より低下するように投与する。
【００９４】
すなわち、好ましくは食事療法と組み合わせて、血漿中ＯＡ／ＳＡ比が前回の測定値と比較して低下するように投与される、ω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する、ＮＡＳＨによる肝臓の線維化を改善するための医薬組成物である。
【００９５】
対象となる被験者は、好ましくは、すでに肝臓が線維化している被験者である。具体的には、好ましくは、例えば、Ｍａｔｔｅｏｎｉらの分類によれば、ｔｙｐｅ３後期からｔｙｐｅ４に分類される被験者（脂肪肝プラス肝細胞風船様腫大プラス肝線維化あるいはマロリー形成）である。例えば、線維化マーカー（ヒアルロン酸、ＩＶ型コラーゲン、ＴＩＭＰ−１など）で肝の線維化が起きていると判断される被験者が好ましい。
【００９６】
本発明の第１３の態様は、ω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する、脂肪肝を有する被験者の肝臓の線維化を抑制するための医薬組成物である。また、ω３ＰＵＦＡｓを有効成分として含有する、ＮＡＦＬＤ、又はＮＡＳＨ患者の、肝癌への移行を抑制するための医薬組成物である。本発明の非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善・治療方法を用いることができる。
【００９７】
本発明の第１４の態様は、本願発明のω３ＰＵＦＡｓを用いるＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤの予防／改善・治療方法、又は被験者の管理方法を宣伝する方法である。本願発明のＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤの治療方法、又は被験者の管理方法に用いられるω３ＰＵＦＡｓを含有する医薬組成物を宣伝する方法である。
医師や被験者に対して、本願発明のＮＡＳＨ又はＮＡＦＬＤの治療方法、又は被験者の管理方法に関する情報を提供する。具体的には、被験者の一定期間における特定の脂肪酸組成の変動により、ω３ＰＵＦＡｓによるＮＡＳＨ治療効果の予測・評価ができること等の情報を提供し、宣伝することができる。宣伝方法の手段は問わないが、例えば、パンフレットの配布、電子媒体の頒布、インターネットを通じた情報提供などが挙げられる。
【００９８】
以上、本発明を実施するための最良の形態を説明したが、本発明の範囲から離れることなく好ましい変更を行うことが可能であることは言うまでも無い。
【００９９】
以上述べてきた本発明の各態様で用いた用語について、さらに詳しく以下に説明する。
【０１００】
多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡｓ）は、分子内に複数の炭素−炭素二重結合を有する脂肪酸と定義され、二重結合の位置により、ω３、ω６などに分類される。ω３ＰＵＦＡｓとしては、α−リノレン酸、ＥＰＡ、ドコサヘキサエン酸（以下、ＤＨＡと記す）などが例示される。本発明で用いられる「ＰＵＦＡｓ」の語は、特に断らない限りは、多価不飽和脂肪酸だけでなく、その製薬上許容される塩、あるいはエステル、アミド、リン脂質、グリセリドなどの多価不飽和脂肪酸誘導体も含む意味で用いられる。
【０１０１】
本発明で用いられるω３ＰＵＦＡｓは、合成品、半合成品又は天然品のいずれでもよく、これらを含有する天然油の形態でもよい。ここで、天然品とは、ω３ＰＵＦＡｓを含有する天然油から公知の方法によって抽出されたもの、粗精製されたもの、あるいはそれらを更に高度に精製したものを意味する。半合成品は、微生物などにより産生された多価不飽和脂肪酸を含み、また該多価不飽和脂肪酸あるいは天然の多価不飽和脂肪酸にエステル化、エステル交換等の化学処理を施したものも含まれる。本発明では、ω３ＰＵＦＡｓとして、これらのうちの１種を単独で、あるいは２種以上を組み合わせて用いることができる。
【０１０２】
本発明では、ω３ＰＵＦＡｓとして、具体的には、ＥＰＡ、ＤＨＡ、α−リノレン酸及びこれらの製薬学上許容しうる塩及びエステルが例示される。製薬学上許容しうる塩及びエステルは、ナトリウム塩、カリウム塩などの無機塩基、ベンジルアミン塩、ジエチルアミン塩などの有機塩基、アルギニン塩、リジン塩などの塩基性アミノ酸との塩及びエチルエステル等のアルキルエステルやモノ−、ジ−及びトリ−グリセリド等のエステルが例示される。好ましくはエチルエステルであり、特にＥＰＡ−Ｅ及び・又はＤＨＡ−Ｅが好ましい。とりわけ好ましいのは、ＥＰＡ−Ｅ（イコサペント酸エチルエステル）である。
【０１０３】
ω３ＰＵＦＡｓの純度は特に限定されないが、通常、本剤組成物の全脂肪酸中のω３ＰＵＦＡｓの含量として、好ましくは２５質量％以上、さらに好ましくは５０質量％以上、さらに好ましくは７０質量％以上、より好ましくは８５質量％以上であり、とりわけ好ましくは本剤組成物がω３ＰＵＦＡｓ以外の他の脂肪酸成分を実質的に含まない態様である。
【０１０４】
例えば、ＥＰＡ−Ｅ及びＤＨＡ−Ｅを用いる場合、ＥＰＡ−Ｅ／ＤＨＡ−Ｅの組成比及び全脂肪酸中のＥＰＡ−Ｅ＋ＤＨＡ−Ｅの含量比は特に問わないが、好ましい組成比として、ＥＰＡ−Ｅ／ＤＨＡ−Ｅは、０．８以上であることが好ましく、更に好ましくは、１．０以上、より好ましくは、１．２以上である。ＥＰＡ−Ｅ＋ＤＨＡ−Ｅは高純度のもの、例えば、全脂肪酸及びその誘導体中のＥＰＡ−Ｅ＋ＤＨＡ−Ｅ含量比が４０質量％以上のものが好ましく、５５質量％以上のものがさらに好ましく、８４質量％以上のものがさらに好ましく、９６．５質量％以上のものが更に好ましい。他の長鎖飽和脂肪酸含量は少ないことが好ましく、長鎖不飽和脂肪酸でもω６系、特にアラキドン酸含量は少ないことが望まれ、２質量％未満が好ましく、１質量％未満がさらに好ましい。
【０１０５】
本発明の組成物に用いられるＥＰＡ−Ｅ及び・又はＤＨＡ−Ｅは、魚油あるいは魚油の濃縮物に比べ、飽和脂肪酸やアラキドン酸等の心血管イベントに対して好ましくない不純物が少なく、栄養過多やビタミンＡ過剰摂取の問題もなく作用効果を発揮することが可能である。また、エステル体のため主にトリグリセリド体である魚油等に比べて酸化安定性が高く、通常の酸化防止剤添加により十分安定な組成物を得ることが可能である。
【０１０６】
このＥＰＡ−Ｅは、日本において、閉塞性動脈硬化症（ＡＳＯ）及び高脂血症治療薬として入手可能な高純度ＥＰＡ−Ｅ（９６．５質量％以上）含有軟カプセル剤（商品名エパデール：持田製薬社製）を用いることができる。また、ＥＰＡ−ＥとＤＨＡ−Ｅの混合物は、たとえば、米国で高ＴＧ血症治療薬として市販されているロバザ（Ｌｏｖａｚａ：グラクソ・スミス・クライン：ＥＰＡ−Ｅ約４６．５質量％、ＤＨＡ−Ｅ約３７．５質量％含有する軟カプセル剤）を使用することもできる。
【０１０７】
ω３ＰＵＦＡｓとして、精製魚油も使用できる。また、ω３ＰＵＦＡｓのモノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドまたはこれらの組合せなども好ましい態様の一つである。例えばインクロメガ（ｌｎｃｒｏｍｅｇａ）Ｆ２２５０、Ｆ２６２８、Ｅ２２５１、Ｆ２５７３、ＴＧ２１６２、ＴＧ２７７９、ＴＧ２９２８、ＴＧ３５２５及びＥ５０１５（クローダ  インターナショナル  ピーエルシー（Ｃｒｏｄａ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＰＬＣ、Ｙｏｒｋｓｈｉｒｅ、Ｅｎｇｌａｎｄ））、及びＥＰＡＸ６０００ＦＡ、ＥＰＡＸ５０００ＴＧ、ＥＰＡＸ４５１０ＴＧ、ＥＰＡＸ２０５０ＴＧ、ＥＰＡＸ７０１０ＥＥ、Ｋ８５ＴＧ、Ｋ８５ＥＥ及びＫ８０ＥＥ（プロノバ  バイオファーマ（Ｐｒｏｎｏｖａ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａ、Ｌｙｓａｋｅｒ、Ｎｏｒｗａｙ））などの種々のω３ＰＵＦＡｓ、その塩及びエステルを含有する製品が市販されており、これらを入手して使用することもできる。
【０１０８】
本発明の医薬組成物及び治療方法は、ω３ＰＵＦＡｓの他に、他の薬剤と組み合わせて、併用して用いられてもよい。本発明における他の薬剤は、特に限定されないが、本発明の効果を減弱しないことが好ましく、例えば、肝庇護剤、血糖降下剤、高脂血症治療薬、降圧剤、抗酸化剤、抗炎症剤などが例示される。
【０１０９】
ここで肝庇護剤としては、例えば、ウルソデオキシコール酸やベタインがあげられる。また、血糖降下剤としては、例えば、メトホルミンのようなビグアナイド薬、インスリンやインスリン誘導体、トルブタミド、グリクラジド、グリベンクラミド、グリメピリドのようなスルホニルウレア剤、ナテグリニド、レパグリニド、ミチグリニドのような速効型インスリン分泌促進剤、アカルボース、ボグリボース、ミグリトールのようなαグルコシダーゼ阻害剤、ピオグリタゾン、ロジグリタゾン、トログリタゾンのようなチアゾリジン類等があげられる。また、高脂血症治療薬としては、例えば、プラバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、フルバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、セリバスタチンのようなＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤やシンフィブラート、クロフィブラート、クリノフィブラート、ベザフィブラート、フェノフィブラートのようなフィブラート系薬剤、あるいはオルリスタットのような脂肪分解酵素阻害剤、エゼチミブがあげられる。また、降圧剤としては、例えば、カプトプリル、アラセプリル、イミダプリル、エナラプリル、シラザプリル、テモカプリル、デラプリル、リシノプリル、ベナゼプリルのようなアンジオテンシン変換酵素阻害剤、ロサルタン、バルサルタン、カンデサルタン、テルミサルタン、オルメサルタン、イルベサルタン、エプロサルタンのようなアンジオテンシン受容体阻害剤、アリスキレンのようなレニン阻害剤、アムロジピン、ニフェジピン、ベニジピン、ニカルジピン、ニルバジピン、シルニジピン、アゼルニジピン、マニジピン、ニトレンジピン、パルニジピン、ニソルジピン、エホニジピン、フェロジピン、アラニジピン、ジルチアゼム、ベラパミル、ベプリジルのようなカルシウム拮抗剤等があげられる。また、抗酸化剤としては、例えば、ビタミンＣやビタミンＥ等のビタミン類、Ｎアセチルシステイン、プロブコールなどがあげられる。また、抗炎症剤としては、例えば、ペントキシフィリン等のサイトカイン産生抑制剤、ロイコトリエン受容体拮抗剤、ロイコトリエン生合成阻害剤、ＮＳＡＩＤｓ、ＣＯＸ−２選択的阻害剤、Ｍ２／Ｍ３拮抗剤、コルチコステロイド、ファルネシル酸プレドニゾロンなどのステロイド、Ｈｉ（ヒスタミン）受容体拮抗剤、サラゾスルファピリジン、メサラジンなどのアミノサリチル酸、等があげられる。また、免疫抑制剤としては、例えば、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、タクロリムスなどがあげられる。また、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）用の抗ウイルス薬としては、例えば、インターフェロン、プロテアーゼ阻害剤、ヘリカーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤などがあげられる。
【０１１０】
本発明において予防とは、疾患の発症を予防することのみでなく、発症時期を遅延させることおよび発症率を低下させることも含む。本発明において改善とは、疾患の何らかのパラメーターを改善することのみでなく、患者の自覚症状や生活の質（Ｑｕaｌｉｔｙ  ｏｆ  ｌｉｆｅ）を改善することを含む。また、本発明において治療とは、既に疾患を発症した患者に薬物を投与することのみでなく、疾患を発症するリスクの高い患者に薬物を投与する予防的治療も含む。
【０１１１】
本発明において、有効成分の「併用」とは、有効成分を組合せて用いることであり、ω３ＰＵＦＡｓ及び他の薬剤を共に含む配合剤として投与すること、及びω３ＰＵＦＡｓと他の薬剤とがそれぞれ別個の製剤として同時期にもしくは時間差をおいて別々に投与されることを含む。「別個の製剤として同時期にもしくは時間差をおいて別々に投与される」態様には、（１）ω３ＰＵＦＡｓを投与される被験者に、他の薬剤を有効成分として含有する組成物を投与する態様、及び（２）他の薬剤を投与される被験者に、ω３ＰＵＦＡｓ有効成分として含有する組成物を投与する態様が含まれる。また、「併用」とは必ずしも被験者の体内、例えば血中において同時に存在する場合に限られないが、本発明において「併用」とは、いずれか一方の薬剤の作用・効果が被験者の体内に発現している状態で他方の薬剤を投与する使用態様をいう。本発明の組成物を用いてＮＡＦＬＤもしくはＮＡＳＨに関連する疾患の予防／改善または治療効果が得られるような使用態様である。好ましくは、被験者の体内、例えば血中において同時に存在する使用態様が望ましく、また好ましくは、被験者に対して、一方の薬剤を投与してから２４時間以内に他方の薬剤を投与する使用態様が好ましい。
【０１１２】
本発明の医薬における併用の形態は、特に限定されず、有効成分が組み合わされていればよい。このような薬剤の形態としては、例えば（１）有効成分を同時製剤化して得られる単一の製剤の投与、（２）有効成分を別々に製剤化して得られる２種類の製剤を組合せてキットとし、または組み合わせないで別々に用意し、同一投与経路での同時投与に使用する。（３）有効成分を別々に製剤化して得られる２種類の製剤を組合せてキットとし、または組み合わせないで別々に用意し、同一投与経路で時間差をおいて投与する。（４）有効成分を別々に製剤化して得られる２種類の製剤を組合せてキットとし、または組み合わせないで別々に用意し、異なる投与経路（同一被験者の異なる部位から投与する）で同時に投与する。（５）有効成分を別々に製剤化して得られる２種類の製剤を組合せてキットとし、または組み合わせないで別々に用意し、異なる投与経路（同一被験者の異なる部位から投与する）で時間差をおいて投与する。
【０１１３】
これらの時間差をおいて投与する場合は、例えば、ω３ＰＵＦＡｓと他の薬剤の順序での投与、または逆の順序での投与がある。同時に投与する場合、投与経路が同一であれば投与直前に両薬剤を混合してもよく、別々に投与しても良い、また種々の目的で計画的に投与時期をずらして用いることができる。具体的な例としては、一方の薬剤を投与し、その効果が発現し始める時期もしくは十分に発現している間に、他方の薬剤を投与して作用させる方法がある。また、一方の薬剤を徐放化して１日１回投与とし、他方の薬剤を１日複数回、例えば２ないし３回投与としてもよいし、同様に１日１回投与としてもよい。両薬ともに１日１回投与、さらには１日１回同時投与あるいは配合剤とすれば、被験者の服薬の負担を軽減し、服薬コンプライアンスが向上して予防／改善・治療効果及び副作用軽減効果も増すことが期待され、好ましい。また、例えば、両薬剤を投与し、その効果が発現し始める時期もしくは十分発現している時期に、一方の薬剤の投薬を中止する方法がある。薬剤の投薬を中止する場合には、段階的に薬剤の用量を減量してもよい。また、例えば、一方の薬剤の休薬期間に他方の薬剤を投与する方法が挙げられる。
【０１１４】
望ましくは、ω３ＰＵＦＡｓ及び他の薬剤を併用した治療効果が、併用の場合と同じ用量のω３ＰＵＦＡｓ及び他の薬剤を個々に用いて得られる治療効果の和よりも大きな効果を得られる態様が好ましい。ここでの治療効果とは、ＮＡＦＬＤもしくはＮＡＳＨに関連する疾患の予防／改善または治療効果あるいは肝硬変や肝癌への進行抑制であれば、特に限定されないが、上述の脂肪酸比の改善の他、例えば、画像検査（超音波、ＣＴ、ＭＲＩなど）、肝生検あるいは血漿中の線維化マーカー（ＩＶ型コラーゲン、ヒアルロン酸、ＴＩＭＰ−１等）により測定した肝線維化の程度、血清ＡＳＴやＡＬＴ値の減少、ＡＳＴ／ＡＬＴ比の減少、アディポネクチンの増加、ＴＮＦα減少、高感度ＣＲＰの減少や血中酸化ストレスマーカー（フェリチン、チオレドキシン）の減少、ＨＯＭＡ−ＩＲ改善などが例示される。その他のＮＡＦＬＤもしくはＮＡＳＨに関連する生化学的・病理学的あるいは病態パラメータにより予防／改善または治療効果をモニタリングしてもよい。
【０１１５】
本発明の組成物に用いられるω３ＰＵＦＡｓ及び他の薬剤の投与量及び投与期間は対象となる作用を現すのに十分な量及び期間とされるが、その剤形、投与方法、１日当たりの投与回数、症状の程度、体重、年齢等によって適宜増減することができる。
【０１１６】
経口投与する場合は、例えばＥＰＡ−Ｅ及び・又はＤＨＡ−Ｅとして０．１〜１０ｇ／日、好ましくは０．３〜６ｇ／日、より好ましくは０．６〜４ｇ／日、さらに好ましくは０．９〜２．７ｇ／日を１ないし３回に分けて投与するが、必要に応じて全量を１回あるいは数回に分けて投与してもよい。また、他の薬剤の投与量に応じて減量することも可能である。投与時間は食中ないし食後が好ましく、食直後（３０分以内）投与が更に好ましい。上記投与量を経口投与する場合、投与期間は１年以上、好ましくは２年以上、より好ましくは３．５年以上、更に好ましくは５年以上であるが、ＮＡＳＨに関連する病態あるいは生化学的指標などが継続している間、ＮＡＳＨの発症及び・又は再発の危険度が高い状態が続いている間は投与を継続することが望ましい。また、例えば１日おきに投与する、１週間に２〜３日投与する態様や、場合により１日〜３ヵ月程度、好ましくは１週間〜１ヵ月程度の休薬期間を設けることもできる。
【０１１７】
本発明の組成物に用いられる他の薬剤の投与量は、その薬剤単独での用法・用量の範囲内で使用されることが好ましいが、その種類、剤形、投与方法、１日当たりの投与回数は、症状の程度、体重、性別、年齢等によって適宜増減することができる。ω３ＰＵＦＡｓの投与量に応じて減量することも可能である。副作用軽減の観点で１日投与量をできるだけ減量し、徐放化錠を使用して１日１回投与とすることがより好ましい。上記投与量を経口投与する場合、投与期間は１年以上、好ましくは２年以上、より好ましくは３．５年以上、更に好ましくは５年以上であるが、ＮＡＳＨに関連する病態あるいは生化学的指標などが継続している間、ＮＡＳＨの発症及び・又は再発の危険度が高い状態が続いている間は投与を継続することが望ましい。また、例えば１日おきに投与する、１週間に２〜３日投与する態様や、場合により１日〜３ヵ月程度、好ましくは１週間〜１ヵ月程度の休薬期間を設けることもできる。
【０１１８】
ω３ＰＵＦＡｓ及び他の薬剤の併用では、ω３ＰＵＦＡｓ及び・又は他の薬剤の用量を一般的に使用される通常の用量より低く設定することも可能である。例えば、個々の薬剤を単独で治療効果を得るには不十分な用量を用いることも可能である。これにより、薬剤投与による副作用を軽減することができる利点を有する。
【０１１９】
ω３ＰＵＦＡｓ及び・又は他の薬剤単独の用量が、治療効果を得るには不十分な用量であって、ω３ＰＵＦＡｓ及び他の薬剤を併用した治療効果が、併用の場合と同じ用量のω３ＰＵＦＡｓ及び他の薬剤を個々に用いて得られる治療効果の和よりも大きな効果を得られるような使用態様も望ましい。
【０１２０】
ω３ＰＵＦＡｓ単独の用量が、治療効果を得るには不十分な用量とは、被験者の個々の状態や体型により変動し、限定されるものではないが、例えば、ＥＰＡ−Ｅ及び・又はＤＨＡ−Ｅの場合、１日あたりの投与量が、０．１ｇ以上２ｇ未満、好ましくは０．２ｇ以上１．８ｇ以下、さらに好ましくは０．３ｇ以上〜０．９ｇ以下、また好ましくは、０．３ｇ以上〜０．６ｇ以下である。
【０１２１】
他の薬剤及びω３ＰＵＦＡｓの１日投与量、投与回数あるいは投与比率は、特に限定されないが、肝線維化の程度、血清ＡＳＴやＡＬＴの減少、ＡＳＴ／ＡＬＴ比の減少、アディポネクチンの増加、ＴＮＦαの減少や血中酸化ストレスマーカーの減少、ＨＯＭＡ−ＩＲ改善などの検査値を確認しながら適宜増減できる。
【０１２２】
本発明の医薬組成物は、有効成分を化合物（精製の際に不可避的に含まれる他の成分を含む場合もある）をそのまま投与するか、或いは一般的に用いられる適当な担体または媒体、賦形剤、結合剤、滑沢剤、着色剤、香味剤、必要に応じて滅菌水や植物油、更には無害性有機溶媒あるいは無害性溶解補助剤（たとえばグリセリン、プロピレングリコール）、乳化剤、懸濁化剤（例えばツイーン８０、アラビアゴム溶液）、等張化剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、無痛化剤、嬌味剤、着香剤、保存剤、抗酸化剤、緩衝剤、着色剤などの添加剤と適宜選択組み合わせて適当な医薬用製剤に調製することができる。添加剤として、たとえば乳糖、部分α化デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、マクロゴール、トコフェロール、硬化油、ショ糖脂肪酸エステル、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酸化チタン、タルク、ジメチルポリシロキサン、二酸化ケイ素、カルナウバロウなどを含有しうる。
【０１２３】
特に、ω３ＰＵＦＡｓは高度に不飽和であるため、抗酸化剤たとえばブチレート化ヒドロキシトルエン、ブレチート化ヒドロキシアニソール、プロピルガレート、没食子酸、医薬として許容されうるキノン及びα−トコフェロールから選ばれる少なくとも１種を抗酸化剤として有効量含有させることが望ましい。
【０１２４】
製剤の剤形は、本発明の有効成分の併用形態によっても異なり、特に限定されないが、経口製剤としては、例えば、錠剤、フィルムコーティング錠、カプセル剤、マイクロカプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、経口用液体製剤、シロップ剤、ゼリー剤、吸入剤の形で、非経口製剤としては、例えば、軟膏、坐剤、注射剤（乳濁性、懸濁性、非水性）あるいは用時乳濁または懸濁して用いる固形注射剤、輸液製剤、経皮吸収剤などの外用剤で、経口及び静脈内あるいは動脈内、吸入、直腸内、膣内あるいは外用を問わず被験者に投与されるが、経口服用できる被験者に対しては、簡便な経口製剤が望ましく、とりわけカプセルたとえば、軟質カプセルやマイクロカプセルに封入して、あるいは錠剤、フィルムコーティング錠での経口投与が好ましい。また、腸溶製剤や徐放化製剤として経口投与してもよく、透析患者や嚥下困難な患者などにはゼリー剤として経口投与することも好ましい。
【０１２５】
本発明の組成物は、ω３ＰＵＦＡｓと他の薬剤とを別々に製剤して得られる２種類の製剤を組み合わせて使用する場合には、それぞれ公知の方法により製剤化する。また、本発明の組成物は、ω３ＰＵＦＡｓと他の薬剤とを有効成分とする配合剤とすることができる。
【０１２６】
本発明の医薬組成物を、ω３ＰＵＦＡｓと他の薬剤とを有効成分とする配合剤とする場合には、配合剤の剤形は特に限定されず、経口製剤としては、例えば、錠剤、フィルムコーティング錠、カプセル剤、マイクロカプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、経口用液体製剤、シロップ剤、ゼリー剤の形で、非経口製剤としては、例えば、注射剤、輸液製剤、経皮吸収剤などの外用剤で被験者に投与される。例えば、徐放化した製剤、あるいは、２剤を時間差で放出する製剤なども含む。
【０１２７】
本発明の配合剤は、有効成分に加え、薬学的に許容され得る賦形剤を含むことができる。適宜、公知の抗酸化剤、コーティング剤、ゲル化剤、嬌味剤、着香剤、保存剤、抗酸化剤、乳化剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、着色剤などを含有させてもよい。
【０１２８】
本発明の配合剤は、本発明の属する技術分野における通常の知識を有する者が実施しうる任意の方法によって製剤化することができる。好ましくは、常法に従って製剤化することが可能である。ω３ＰＵＦＡｓの粉末は、例えば、（Ａ）ＥＰＡ−Ｅ、（Ｂ）食物繊維、（Ｃ）デンプン加水分解物及び・又は低糖化還元デンプン分解物、及び（Ｄ）水溶性抗酸化剤を含有する水中油型乳化液を、高真空下で乾燥させ、粉砕処理する（特開平１０−９９０４６）など公知の方法により得られる。得られたＥＰＡ−Ｅの粉体と、ビグアナイド系血糖降下薬の粉体とを用いて、好ましくは常法に従い、顆粒剤、細粒剤、散剤、錠剤、フィルムコーティング錠、チュアブル錠、徐放錠、口腔内崩壊錠（ＯＤ錠）などを得ることができる。チュアブル錠であれば、例えば、ＥＰＡ−Ｅをヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの水溶性高分子溶液中に乳化し、得られた乳化液を乳糖などの添加剤に噴霧して粉粒体を得（特開平８−１５７３６２）、ビグアナイド系血糖降下薬の粉体と混合して打錠することなど公知の方法により得ることができる。徐放錠であれば、例えば（１）ＥＰＡ−Ｅ及びビグアナイド系血糖降下薬のいずれかを内層に、他方を外層に形成する、（２）各成分を含有する円盤状のマトリックスを２層に重ねる、（３）一成分を含有する粒状カプセルを他方の成分を含有するマトリックス中に埋め込む、（４）両剤を予め混合した後に何らかの徐放のための工夫が施される、などが挙げられる。各有効成分は放出速度を調整されていることが望ましく、両剤同時に放出されてもよいし、別々に時間差で放出されてもよい。口腔内崩壊錠であれば、例えば特開平８−３３３２４３など、口腔用フィルム製剤であれば、例えば特開２００５−２１１２４など、公知の方法に準じて製造することができる。
【０１２９】
本発明の配合剤は、有効成分の薬理作用を発現できるように、放出、吸収されることが望ましい。本発明の配合剤は、有効成分の放出性に優れる、有効成分の吸収性に優れる、有効成分の分散性に優れる、配合剤の保存安定性に優れる、被験者の服用利便性、あるいはコンプライアンスに優れる製剤の少なくともいずれか１以上の効果を持つことが望ましい。
【０１３０】
本発明の組成物は、動物とりわけ哺乳動物のＮＡＦＬＤ、特にＮＡＳＨの予防／改善または治療、再発予防あるいは肝硬変や肝癌への進行抑制に有効である。哺乳動物とは、例えば、ヒトやウシ、ウマ、ブタなどの家畜動物やイヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウスなどの家庭用動物等があげられ、好ましくはヒトである。特に、糖尿病、高脂血症、高ＴＧ血症、メタボリックシンドローム、高血圧、インスリン抵抗性を有するＮＡＳＨ患者において好ましく用いられる。尿酸値の高い被験者、全身の炎症状態の高い被験者、ω３ＰＵＦＡｓ以外に多種類の薬剤を服用している被験者、ω３ＰＵＦＡｓ以外の薬剤を服用により副作用の経験のある被験者などにも有効である。また、配合剤やキット剤とすることで被験者の服薬の負担を軽減し、服薬コンプライアンスを高めることで更に予防／改善または治療効果を高めることができる。
【０１３１】
以下に本発明の実施例を示すが、本発明は、実施例に限定して解釈されるべきではない。
【実施例１】
【０１３２】
ＮＡＳＨと確定診断された被験者を２群（各群１５例）に分けて、ＥＰＡ−Ｅ群にはエパデールＳ９００（ＥＰＡ−Ｅ９００ｍｇ含有）を、コントロール群にはプラセボを、それぞれ１日２回服用させる。被験者の状況に応じて投与量を適宜増減する。被験者のクライテリア、モニタリング、組織検査、統計学的解析等はAmerican Journal of Gastroenterology、2001年、第96巻、p.2711-2717の方法に準じ、１年間の投与期間中経時的にＡＬＴ、ＡＳＴ等の血液生化学検査、血漿中脂肪酸組成の測定を行うと共に、投与終了後に肝生検を行い、組織学的評価を行う。【０１３３】
ＥＰＡ−Ｅ群は、コントロール群と比較して、ＡＬＴ、ＡＳＴ等の血液生化学パラメーターの平均値は治療前に比べ低下する。また、ＥＰＡ−Ｅ群では、肝組織の病理学的検査像についても、Ｂｒｕｎｔらの方法による線維化ステージの平均はステージ２から１へ改善がみられる。【０１３４】
ＥＰＡ−Ｅ群１５例の中で、Ｂｒｕｎｔらの方法によるスコアの投薬前後における変化が１または２であった症例（有効群）と０であった症例（無効群）とに分けて、１年間の投与期間中経時的な血漿中脂肪酸組成の変化を解析する。投与開始前のＯＡ／ＳＡ比は、有効群と無効群の両群において差がない。投与開始から２ヶ月間におけるＯＡ／ＳＡ比は、両群とも低下傾向を示すものの、有効群は無効群と比較して、投与開始から２ヶ月間のＯＡ／ＳＡ比の低下率が大きい。ここで２ヶ月間のＯＡ／ＳＡ比の低下率は、（投与開始前のＯＡ／ＳＡ比−投与開始後２ヶ月におけるＯＡ／ＳＡ比）／投与開始前のＯＡ／ＳＡ比×１００（％）で算出する。投与開始後２ヶ月後の時点において、有効群のＯＡ／ＳＡ比は、無効群と比較して低値を示す。２ヶ月以降のＯＡ／ＳＡ比の変化は、両群ともそれぞれ若干低下傾向を示すが、投与開始から２ヶ月間と比較してその変化は小さい。有効群では、ヒアルロン酸、ＩＶ型コラーゲン、ＴＩＭＰ−１の値が段階的に低下する。一方、無効群では、ヒアルロン酸、ＩＶ型コラーゲン、ＴＩＭＰ−１の値は、ほとんど変化しない。
【実施例２】
【０１３５】
ＮＡＳＨと確定診断された被験者を、過去１年以内にＯＡ／ＳＡ比が前回の測定時と比較して上昇した被験者（ＯＡ／ＳＡ上昇群）と、それ以外の群（ＯＡ／ＳＡ非上昇群）とに分けて、ＥＰＡ−Ｅ群にはエパデールＳ９００（ＥＰＡ−Ｅ９００ｍｇ含有）を１日２回服用させる。被験者の状況に応じて投与量を適宜増減する。被験者のクライテリア、モニタリング、組織検査、統計学的解析等はAmerican Journal of Gastroenterology、2001年、第96巻、p.2711-2717の方法に準じ、１年間の投与期間中経時的にＡＬＴ、ＡＳＴ等の血液生化学検査、血漿中脂肪酸組成の測定を行うと共に、投与終了後に肝生検を行い、組織学的評価を行う。Ｋｌｅｉｎｅｒらの方法によるＮＡＳスコアにより治療効果を評価する。【０１３６】
ＯＡ／ＳＡ上昇群、ＯＡ／ＳＡ下降群の両群とも、１年間の投薬によりＮＡＳスコアの改善が見られる。しかし、ＯＡ／ＳＡ上昇群では、ＯＡ／ＳＡ非上昇群と比較して、ＮＡＳスコアの改善度が大きい。
【実施例３】
【０１３７】
肝線維化のあるＮＡＳＨ患者、すなわち、Ｂｒｕｎｔらの線維化の程度（Ｓｔａｇｉｎｇ）による評価でｓｔａｇｅ１または２に分類される被験者（１５例）を集めて試験を行う。１ヶ月毎の血中ＯＡ／ＳＡ比が前回の測定値より低下するように、食事制限、運動療法を行うとともに、ＥＰＡ−Ｅ９００ｍｇを１日２回投与し、１年間経過を観察する。被験者の中で、ＯＡ／ＳＡ比に変化が見られない被験者には、ＥＰＡ−Ｅ９００ｍｇを１日３回投与とする。【０１３８】
投与開始から１ヶ月間におけるＯＡ／ＳＡ比低下率が５％以上であった被験者をＡ群とし、投与開始から１ヶ月間におけるＯＡ／ＳＡ比低下率が１％未満であった被験者をＢ群とする。ここで１ヶ月間におけるＯＡ／ＳＡ比低下率は、（投与開始前のＯＡ／ＳＡ比−投与開始後１ヶ月におけるＯＡ／ＳＡ比）／投与開始前のＯＡ／ＳＡ比  ×  １００（％）で算出する。【０１３９】
治療開始から１年後に肝生検を実施すると、Ａ群はＳｔａｇｅ２の被験者は１または０に、Ｓｔａｇｅ１の被験者は０に、線維化が改善する。一方、Ｂ群は、わずかな線維化改善が見られるが、Ａ群ほど改善しない。
【実施例４】
【０１４０】
アディポネクチン遺伝子ＳＮＰ２７６の型には、Ｔ／Ｔ、Ｇ／Ｔ、Ｇ／Ｇがあるが、Ｇ／Ｇ型の人は、Ｔ／Ｔ型の人より、アディポネクチンの血中濃度が低いといわれている。【０１４１】
アディポネクチン遺伝子ＳＮＰ２７６の型がＧ／Ｇ型のＮＡＳＨ患者とＧ／Ｇ型以外のＮＡＳＨ患者（各群１５例）に対して、ＥＰＡ−Ｅ９００ｍｇ  １日２回、１年間投与する。Ｋｌｅｉｎｅｒらの方法によるＮＡＳスコアにより１年後の治療効果を評価する。Ｇ／Ｇ型のＮＡＳＨ患者群、Ｇ／Ｇ型以外のＮＡＳＨ患者群の両群とも、１年間の投薬によりＮＡＳスコアの改善が見られる。しかし、Ｇ／Ｇ型のＮＡＳＨ患者群では、Ｇ／Ｇ型以外のＮＡＳＨ患者群と比較して、ＮＡＳスコアの改善度が大きい。
【実施例５】
【０１４２】
ＮＡＳＨと確定診断された被験者に、本発明の治療方法を用いて治療を行う。
治療開始前に被験者の血漿中脂肪酸組成を測定し、ＯＡ／ＳＡ比を算出すると３．５である。エパデールＳ９００（ＥＰＡ−Ｅ９００ｍｇ含有）を１日２回服用させる。１ヵ月後、被験者のＯＡ／ＳＡ比は３．５のままである。被験者に食事指導を行い、運動療法を追加する。投薬開始から３ヵ月後、被験者のＯＡ／ＳＡ比は３．４に低下する。エパデールＳ９００（ＥＰＡ−Ｅ９００ｍｇ含有）を１日３回に増量する。投薬開始から６ヵ月後、被験者のＯＡ／ＳＡ比は３．２に低下する。その後、食事制限、運動療法を継続するとともに、エパデールＳ９００（ＥＰＡ−Ｅ９００ｍｇ含有）を１日３回の投薬も継続する。ＯＡ／ＳＡ比は３．２、３．１付近で維持される。【０１４３】
１年間の投与期間中経時的にＡＬＴ、ＡＳＴ等の血液生化学検査、血漿中脂肪酸組成の測定を行うと共に、投与終了後に肝生検を行い、組織学的評価を行う。Ｂｒｕｎｔらの方法による線維化ステージの平均はステージ２から１へ改善がみられる。ＡＬＴ、ＡＳＴ、ヒアルロン酸、ＩＶ型コラーゲン、ＴＩＭＰ−１の値も１年間にわたり低下する。
【実施例６】
【０１４４】
肝生検によりＮＡＳＨと診断された被験者３０例を２群に分けて、治療群２０例には高純度ＥＰＡ−Ｅ（９６．５質量％以上  商品名：エパデールＳ）2700mg／日、コントロール群１０例にはプラセボを12ヶ月間投薬する。
被験者は、投薬開始前、投薬開始から１ヶ月後、３ヶ月後、6ヵ月後、12ヵ月後等の時点で、次の各種検査が実施され、治療効果が評価される。
検査項目は、血漿中総脂肪酸、血漿中遊離脂肪酸、肝臓超音波、体重、ALT、AST、HbA1c、血糖値、HOMA−IR、TNFα、sTNF-R1、R2、フェリチン、チオレドキシン、TGF−β１、TIMP-1、ヒアルロン酸、などであり、適宜選択される。被験者の治療効果は、投薬開始から12ヵ月後に、NASスコアにより評価される。
治療群は、コントロール群と比較して、投薬開始から１２ヶ月後の平均のＮＡＳスコア改善度が大きい。ω３ＰＵＦＡｓはＮＡＳＨ治療薬として有用である。【０１４５】
治療群20例において、ＮＡＳスコア改善度と、投薬開始から１ヶ月間の血中脂肪酸比の変動との関係をみる。投薬開始から１ヶ月間の血中脂肪酸比の変動は、投薬開始前と、ω３ＰＵＦＡｓの投薬開始から１ヵ月後の血中脂肪酸濃度を測定し、
（１）オレイン酸／ステアリン酸比、（２）ステアリン酸／パルミチン酸比、
（３）オレイン酸／パルミチン酸比、（４）パルミトレイン酸／パルミチン酸比
のうちのいずれか１以上の比を算出し、投薬開始前と、投薬開始から１ヶ月後の数値を比較する。
ＮＡＳスコアが改善している被験者、すなわち、ω３ＰＵＦＡｓを投薬することにより、ＮＡＳＨ治療効果の得られる被験者の、投薬開始から１ヶ月後の前記血中脂肪酸濃度の比は、投薬開始前と比較して低下する。
すなわち、特に、投薬開始から１ヶ月後のオレイン酸／ステアリン酸比が、投薬開始前の数値と比較して低下している被験者は、ω３ＰＵＦＡｓの投薬によりＮＡＳＨ治療効果の得られる被験者であり、このような被験者を対象にω３ＰＵＦＡｓの投与を継続して、ＮＡＳＨの治療をすることができる。
ＮＡＳスコア改善度がより大きい被験者、すなわち、ω３ＰＵＦＡｓを投薬することにより、より大きなＮＡＳＨ治療効果の利益を得られる被験者は、投薬開始から１ヶ月間の前記血中脂肪酸比の低下率が大きい傾向がみられる。ω３ＰＵＦＡｓにより治療効果が得られるかどうかは、投薬開始前と、投薬開始から１ヵ月後の血中脂肪酸を測定し、特定の血中脂肪酸比の低下率をみることによって予測可能である。【０１４６】
前記血中脂肪酸比の算出に用いられる血中脂肪酸は、血漿中総脂肪酸、血漿中遊離脂肪酸のいずれを用いてもよい。また、血中脂肪酸比の低下率は、投薬開始前と一定期間投薬後の変動の比較のみではなく、投薬期間内における一定期間の変動を比較してもよい。
ω３ＰＵＦＡｓの投薬によるＮＡＳＨ治療効果は、血中脂肪酸比の変動のみではなく、TNFα、フェリチン、チオレドキシン、TIMP-1、TGF−β１などを適宜組み合わせて、総合的に評価してもよい。
【国際調査報告】
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