(57)【要約】本発明は、単一投与量のＣＤ２０特異的結合性分子を用いた、Ｂ細胞の異常活性が関与する疾患を処置するための材料および方法を提供する。一態様では、本発明は、患者に治療上有効な量のＣＤ２０特異的結合性分子の単一投与量を投与することを含む、Ｂ細胞の異常活性に関連する疾患を有する、または有すると疑われる対象を処置する方法を提供するものである。一実施形態では、ＣＤ２０特異的結合性分子は、ＣＤ２０特異的小型モジュラー免疫薬剤（ＳＭＩＰ）である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体に治療上有効な単一投与量のＣＤ２０特異的結合性分子を投与することを含む、Ｂ細胞の異常活性に関連する疾患を有する、または有する疑いのある個体を処置する方法。
【請求項２】
個体に治療上有効な単一投与量のＣＤ２０特異的結合性分子を投与することを含む、リウマチ疾患を有する、または有する疑いのある個体を処置する方法。
【請求項３】
前記リウマチ疾患が、慢性関節リウマチ、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、若年性関節リウマチ、乾癬性リウマチ、レイノー症候群、ライター症候群、サルコイドーシス、脊椎関節症、全身性進行性硬化症、および筋炎からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記疾患が慢性関節リウマチである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＣＤ２０特異的結合性分子の投与がＡＣＲスコア２０をもたらす、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記個体の生物学的試料におけるＢ細胞数が低減される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記個体の生物学的試料におけるＲＡＮＫリガンドの発現が低減される、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記生物学的試料が、血液、滑液、または滑液の生検である、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
個体に治療上有効な単一投与量のＣＤ２０特異的結合性分子を投与することを含む、炎症性大腸炎を有する、または有することが疑われる個体を処置する方法。
【請求項１０】
前記炎症性大腸炎が、潰瘍性大腸炎、およびクローン病からなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記疾患がクローン病である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＣＤ２０特異的結合性分子の投与が、クローン病活動性指数（ＣＤＡＩ）スコアの、約５０から約７０単位の範囲で改善をもたらす、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＣＤ２０特異的結合性分子の投与が、核周囲の抗好中球抗体（ｐＡＮＣＡ）、または抗Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ抗体（ＡＳＣＡ）における低減をもたらす、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記疾患が潰瘍性大腸炎である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
個体に治療上有効な単一投与量のＣＤ２０特異的結合性分子を投与することを含む、中枢神経系の自己免疫疾患を有する、または有することが疑われる個体を処置する方法。
【請求項１６】
前記中枢神経系の自己免疫疾患が、多発性硬化症、アレルギー性脳脊髄炎、視神経脊髄炎、ループス脊髄炎、およびループス脳炎からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記疾患が多発性硬化症である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＣＤ２０特異的結合性分子の投与が、少なくとも０．５の、拡大身体障害状態スケール（ＥＤＳＳ）上の低減をもたらす、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記疾患がアレルギー性脳炎である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記疾患が視神経脊髄炎である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
個体に治療上有効な単一投与量のＣＤ２０特異的結合性分子を投与することを含む、血管炎を有する、または有することが疑われる個体を処置する方法。
【請求項２２】
血管炎が、ベーチェット病、中枢神経系血管炎、チャーグ・シュトラウス症候群、寒冷グロブリン血症、巨細胞関節炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、過敏性血管炎／脈管炎、川崎病、白血球破壊性血管炎、ポリアンティティス（ｐｏｌｙａｎｔｉｔｉｓ）、結節性多発性動脈炎、多発性筋痛、多発性軟骨炎、リウマチ性血管炎、高安動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、肝炎による血管炎、家族性地中海熱、顕微鏡的多発性血管炎、コーガン症候群、ウィスコット・アルドリッチ症候群、および閉塞性血栓血管炎からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
個体に治療上有効な単一投与量のＣＤ２０特異的結合性分子を投与することを含む、特発性炎症性筋障害を有する、または有することが疑われる個体を処置する方法。
【請求項２４】
前記炎症性筋障害が、多発性筋炎、および皮膚筋炎からなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＣＤ２０特異的結合性分子の投与が、特発性炎症性筋障害診断基準（ＩＩＭＣ）アセスメントで述べられた５つの診断基準のうち少なくとも１つにおける低減をもたらす、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＣＤ２０特異的結合性分子の投与が、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、乳酸デヒドロゲナーゼ、アルドラーゼ、Ｃ−反応性タンパク質、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、および抗核抗体（ＡＮＡ）、筋肉炎特異的抗体（ＭＳＡ）、および抽出可能な核抗原に対する抗体からなる群から選択されるＩＩＭ関連因子における低減をもたらす、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＣＤ２０特異的結合性分子の投与が、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）レベルにおける低減をもたらす、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記結合性分子が第２の薬剤と組み合わせて投与される、請求項２、９、１５、２１、または２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記第２の薬剤が、Ｂ細胞特異的第２の結合性分子、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、および免疫抑制剤からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記第２の薬剤が、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、グルココルチコイド、関節炎を処置するための疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、および生体応答調節薬からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
個体に治療上有効な単一投与量のＣＤ２０特異的結合性分子を投与することを含む、Ｂ細胞の異常活性に関連する癌を有する、または有する疑いのある個体を処置する方法。
【請求項３０】
前記癌が、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞白血病、およびＢ細胞ミエローマからなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記癌が、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、中枢神経系リンパ腫、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、ヘアリー細胞白血病、慢性筋芽細胞白血病、小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、骨の孤立性形質細胞腫、骨外性形質細胞腫、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）の節外性周辺帯Ｂ細胞リンパ腫、節外性周辺帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大Ｂ細胞リンパ腫、血管内大型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、バーキットリンパ腫／白血病、悪性化の可能性を持つＢ細胞の増殖、リンパ腫様肉芽腫症、および移植後のリンパ球増殖性疾患からなる群から選択される、請求項２９または３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記個体におけるＢ細胞数が低減する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
血液、腫瘍生検、唾液、リンパ節、扁桃腺、骨髄、胸腺、および他のリンパ球に富む組織からなる群から選択される個体の生物学的試料が低減したＢ細胞数を有する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＣＤ２０特異的結合性分子が、第２の薬剤と組み合わせて投与される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３５】
前記第２の薬剤が、第２のＢ細胞特異的結合性分子、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、免疫抑制剤、化学療法剤、および放射線治療剤からなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記個体が、ＣＤ２０特異的結合性分子での処置に対して少なくとも部分的な反応を示す、請求項２９の方法。
【請求項３７】
前記個体が、リツキシマブでの処置、および他のどんなＣＤ２０結合性分子での処置に比べて改善した、ＣＤ２０結合性分子での処置に反応を示す、請求項２９に記載の方法。
【請求項３８】
前記個体がリツキシマブも投与される、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＣＤ２０特異的結合性分子が、ＣＤ２０特異的、小型モジュラー免疫薬剤（ＳＭＩＰ）ＴＲＵ−０１５である、請求項１、２、９、１５、２１、２２、または２９に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＣＤ２０特異的ＳＭＩＰが、約０．０１から約５０ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で投与される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＣＤ２０特異的ＳＭＩＰが、約０．０１５から約３０ｍｇ／ｋｇの投与量範囲で投与される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＣＤ２０特異的ＳＭＩＰが、約０．０１５、約０．０５、約０．１５、約０．５、約１．５、約５．０、約１５、または約３０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＣＤ２０特異的結合性分子のＣＤ２０に対する親和性が、約１ｎＭから約３０ｎＭの範囲である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＣＤ２０特異的結合性分子の半減期が、ｉｎ  ｖｉｖｏで約７から約３０日である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４５】
前記ＣＤ２０特異的結合性分子の投与が、前記個体におけるＢ細胞数に少なくとも２０％の低減をもたらす、請求項１、２、９、１５、２１、２２、または２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
ＣＤ２０特異的結合性分子の投与の結果として、前記個体におけるＢ細胞数が、少なくとも約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約１００％低減する、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
ＣＤ２０特異的結合性分子と、請求項１による方法を示すラベルとを含む製造品。
【請求項４８】
ＣＤ２０特異的結合性分子と、請求項２による方法を示すラベルとを含む製造品。
【請求項４９】
ＣＤ２０特異的結合性分子と、請求項９による方法を示すラベルとを含む製造品。
【請求項５０】
ＣＤ２０特異的結合性分子と、請求項１５による方法を示すラベルとを含む製造品。
【請求項５１】
ＣＤ２０特異的結合性分子と、請求項２１による方法を示すラベルとを含む製造品。
【請求項５２】
ＣＤ２０特異的結合性分子と、請求項２３による方法を示すラベルとを含む製造品。
【請求項５３】
ＣＤ２０特異的結合性分子と、請求項２９による方法を示すラベルとを含む製造品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２００５年７月２５日出願の米国仮特許出願第６０／７０２，４９８号および２００６年７月２７日出願の米国仮特許出願第６０／７０２，８７５号の優先権の利益を主張する。これらは、参考として本明細書に援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は、単一投与量のＣＤ２０特異的結合性分子を用いた、Ｂ細胞の異常活性が関与する疾患を処置するための材料および方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ヒトの免疫系は、その通常の役割では、身体を外来物質および病原体からの損傷から保護している。免疫系が身体を保護する一方法は、Ｂリンパ球またはＢ細胞と呼ばれる特殊化した細胞を生成することによるものである。Ｂ細胞は、外来物質または病原体に結合し、かつ、ある場合にはその破壊を媒介する抗体を生成する。
【０００４】
しかし、場合によっては、ヒトの免疫系、とりわけヒトの免疫系のＢリンパ球は、上手くいかず、疾患がもたらされる。Ｂ細胞の非制御の増殖を伴う癌は多数存在する。Ｂ細胞が、外来物質および病原体に結合する代わりに身体の部分に結合する抗体を生成することを伴う自己免疫疾患も、多数存在する。さらに、例えば、Ｂ細胞の抗原のＴ細胞への不適当な提示により、またはＢ細胞に関与する他の経路により、その病態においてＢ細胞に関与する、自己免疫疾患および炎症性疾患が多数存在する。例えば、Ｂ細胞を欠く自己免疫の傾向があるマウスは、自己免疫性の腎臓疾患、血管炎、または自己抗体を発症しない（Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９９４年、１８０巻、１２９５〜３０６頁）。興味深いことに、Ｂ細胞を所有するが免疫グロブリンの生成を欠く、これらの同じ自己免疫の傾向があるマウスは、実験的に誘発した場合に自己免疫疾患を発症し（Ｃｈａｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９９９年、１８９巻、１６３９〜４８頁）、Ｂ細胞は自己免疫疾患の発症において、不可欠な役割を果たすことを指摘している。
【０００５】
Ｂ細胞は、その細胞表面上の分子によって同定することができる。ＣＤ２０は、モノクローナル抗体によって同定される、第一のヒトＢ細胞系統特異的表面分子である。これは、細胞内部に位置しているアミノ末端およびカルボキシ末端の両方を有する、非グリコシル化の、疎水性の、３５ｋＤａのＢ細胞膜貫通リンタンパク質である。Ｅｉｎｆｅｌｄら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１９８８年、７巻、７１１〜１７頁。ＣＤ２０は、全ての正常な成熟Ｂ細胞によって発現されるが、前駆Ｂ細胞または形質細胞によって発現されない。ＣＤ２０に対する天然のリガンドは同定されておらず、Ｂ細胞の生物学におけるＣＤ２０の機能に対する理解は、未だ不完全である。
【０００６】
抗ＣＤ２０モノクローナル抗体は、Ｂ細胞の生存性および成長に影響を及ぼす（Ｃｌａｒｋら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８６年、８３巻、４４９４〜９８頁）。ＣＤ２０を広範に架橋すると、Ｂリンパ細胞系におけるアポトーシスを誘発することができ（Ｓｈａｎら、Ｂｌｏｏｄ、１９８８年、９１巻、１６４４〜５２頁）、細胞表面上でＣＤ２０を架橋すると、例えば、細胞の基質のチロシンのリン酸化の測定により検出して、シグナル伝達の規模が増大し、動態が向上すると報告されている（Ｄｅａｎｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９３年、１４６巻、８４６〜５３頁）。したがって、補体およびＡＤＣＣのメカニズムによる細胞の枯渇に加えて、ｉｎ  ｖｉｖｏでＣＤ２０モノクローナル抗体がＦｃ受容体に結合すると、ＣＤ２０の架橋により悪性のＢ細胞のアポトーシスを促進することがあり、ＳＣＩＤマウスモデルにおけるヒトリンパ腫のＣＤ２０治療の有効性は、ＣＤ２０モノクローナル抗体によるＦｃ受容体の結合によることがあるという理論と一致している（Ｆｕｎａｋｏｓｈｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ、１９９６年、１９巻、９３〜１０１頁）。ＣＤ２０ポリペプチドに複数回膜貫通ドメインが存在することで（Ｅｉｎｆｅｌｄら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１９８８年、７巻、７１１〜１７頁；Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９８８年、１６７巻、１９７５〜８０頁；Ｔｅｄｄｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９８８年、１４１巻、４３８８〜４３９４頁）、抗体結合後、ＣＤ２０のインターナリゼーションが防止され、これは、マウスＣＤ２０モノクローナル抗体である１Ｆ５を、Ｂ細胞リンパ腫を有する患者中に注射した場合に、悪性細胞の著しい枯渇および部分的な臨床反応をもたらし、Ｂ細胞の悪性腫瘍の治療に対する重要な特徴として認められている（Ｐｒｅｓｓら、Ｂｌｏｏｄ、１９８７年、６９巻、５８４〜９１頁）。
【０００７】
正常の成熟Ｂ細胞もＣＤ２０を発現するので、正常のＢ細胞は抗ＣＤ２０抗体治療により枯渇する（Ｒｅｆｆら、Ｂｌｏｏｄ、１９９４年、８３巻、４３５〜４４５頁）。しかし、処置が完了した後、正常のＢ細胞は、ＣＤ２０ネガティブＢ細胞前駆細胞から再生することができ、したがって、抗ＣＤ２０治療で処置した患者が著しい免疫抑制を経験することはない。
【０００８】
ＣＤ２０は、Ｂ細胞リンパ腫および慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）を含む、Ｂ細胞起源の悪性細胞によって発現される。ＣＤ２０は、急性リンパ性白血病などのプレＢ細胞の悪性腫瘍によっては発現されない。したがって、ＣＤ２０は、Ｂ細胞リンパ腫であるＣＬＬ、および、疾患の病因にＢ細胞が関与する他の疾患の治療に対する良好な標的である。他のＢ細胞の疾患には、Ｂ細胞が形質細胞に分化する間に自己抗体が生成される自己免疫疾患が含まれる。
【０００９】
様々なグループが、Ｂ細胞関連疾患を処置するための抗ＣＤ２０抗体の使用を調査している。ある処置は、Ｂ細胞リンパ腫を処置するための放射性核種の形態で調製された抗ＣＤ２０抗体（例えば、１３１Ｉ標識した抗ＣＤ２０抗体）、および、前立腺癌および乳癌の転移により引き起こされる骨痛の寛解のための８９Ｓｒ標識された形態からなる（Ｅｎｄｏ、Ｇａｎ  Ｔｏ  Ｋａｇａｋｕ  Ｒｙｏｈｏ、１９９９年、２６巻、７４４〜７４８頁）。
【００１０】
ＣＤ２０抗体に関する特許および特許公開には、米国特許第５７７６４５６号、第５７３６１３７号、第６３９９０６１号、および第５８４３４３９号、ならびに米国特許出願第２００２／０１９７２５５Ａ１号および第２００３／００２１７８１Ａ１号（Ａｎｄｅｒｓｏｎら）；米国特許第６４５５０４３Ｂ１号、およびＷＯ００／０９１６０号（Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ，Ａ．）；ＷＯ００／２７４２８号（Ｇｒｉｌｌｏ−ＬｏｐｅｚおよびＷｈｉｔｅ）；ＷＯ００／２７４３３号（Ｇｒｉｌｌｏ−ＬｏｐｅｚおよびＬｅｏｎａｒｄ）；ＷＯ００／４４７８８号（Ｂｒａｓｌａｗｓｋｙら）；ＷＯ０１／１０４６２号（Ｒａｓｔｅｔｔｅｒ，Ｗ．）；ＷＯ０１／１０４６１号（ＲａｓｔｅｔｔｅｒおよびＷｈｉｔｅ）；ＷＯ０１／１０４６０号（ＷｈｉｔｅおよびＧｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ）；米国出願第２００２／０００６４０４号、およびＷＯ０２／０４０２１号（ＨａｎｎａおよびＨａｒｉｈａｒａｎ）；米国出願第２００２／００１２６６５Ａ１号、およびＷＯ０１／７４３８８号（Ｈａｎｎａ，Ｎ．）；米国出願第２００２／０００９４４４Ａ１号、およびＷＯ０１／８０８８４号（Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ，Ａ．）；ＷＯ０１／９７８５８号（Ｗｈｉｔｅ，Ｃ．）；米国出願第２００２／０１２８４８８Ａ１号およびＷＯ０２／３４７９０号（Ｒｅｆｆ，Ｍ．）；ＷＯ０２／０６０９５５号（Ｂｒａｓｌａｗｓｋｙら）；ＷＯ０２／０９６９４８号（Ｂｒａｓｌａｗｓｋｙら）；ＷＯ０２／０７９２５５号（ＲｅｆｆおよびＤａｖｉｅｓ）；米国特許第６１７１５８６Ｂ１号、およびＷＯ９８／５６４１８（Ｌａｍら）；ＷＯ９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；ＷＯ９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；ＷＯ９９／５１６４２号、米国特許第６１９４５５１Ｂ１号、米国特許第６２４２１９５Ｂ１号、米国特許第６５２８６２４Ｂ１号、および米国特許第６５３８１２４号（Ｉｄｕｓｏｇｉｅら）；ＷＯ００／４２０７２号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；ＷＯ００／６７７９６号（Ｃｕｒｄら）；ＷＯ０１／０３７３４号（Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚら）；米国出願第２００２／０００４５８７Ａ１号、ならびにＷＯ０１／７７３４２号（ＭｉｌｌｅｒおよびＰｒｅｓｔａ）；米国出願第２００２／０１９７２５６号（Ｇｒｅｗａｌ，Ｉ．）；米国特許第６０９０３６５Ｂ１号、第６２８７５３７Ｂ１号、第６０１５５４２号、第５８４３３９８号、および第５５９５７２１号  （Ｋａｍｉｎｓｋｉら）；  米国特許第５５００３６２号、第５６７７１８０号、第５７２１１０８号、および第６１２０７６７号（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら）；米国特許第６４１０３９１Ｂ１号（Ｒａｕｂｉｔｓｃｈｅｋら）；米国特許第６２２４８６６Ｂ１号、およびＷＯ００／２０８６４号（Ｂａｒｂｅｒａ−Ｇｕｉｌｌｅｍ，Ｅ．）；ＷＯ０１／１３９４５号（Ｂａｒｂｅｒａ−Ｇｕｉｌｌｅｍ，Ｅ．）；ＷＯ００／６７７９５号（Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ）；ＷＯ００／７４７１８号（ＧｏｌｄｅｎｂｅｒｇおよびＨａｎｓｅｎ）；ＷＯ００／７６５４２号（Ｇｏｌａｙら）；ＷＯ０１／７２３３３号（ＷｏｌｉｎおよびＲｏｓｅｎｂｌａｔｔ）；米国特許第６３６８５９６Ｂ１号（Ｇｈｅｔｉｅら）；米国出願第２００２��００４１８４７Ａ１号（Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ，Ｄ．）；米国出願第２００３／００２６８０１Ａ１号（ＷｅｉｎｅｒおよびＨａｒｔｍａｎｎ）；ＷＯ０２／１０２３１２号（Ｅｎｇｌｅｍａｎ，Ｅ）、また、米国特許第５８４９８９８号、および欧州出願第３３０１９１号（Ｓｅｅｄら）；米国特許第４８６１５７９号、およびＥＰ３３２８６５Ａ２号（ＭｅｙｅｒおよびＷｅｉｓｓ）；ならびにＷＯ９５／０３７７０号（Ｂｈａｔら）が含まれ、その各々が明示的に参照として本明細書に組み入れられる。
【００１１】
ＣＤ２０特異的キメラモノクローナル抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖およびヒトκ軽鎖の定常領域に融合しているマウス起源の重鎖および軽鎖の可変領域からなり、ＣＤ２０への結合、およびＡＤＣＣを媒介し、補体を固定する能力を保持していると報告されている（Ｌｉｕら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９８７年、１３９巻、３５２１〜２６頁）。さらに別のキメラ抗ＣＤ２０抗体が、ＩＤＥＣハイブリドーマのＣ２Ｂ８から作成され、リツキシマブと命名された。上記で論じたリツキシマブの抗腫瘍活性のメカニズムは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体の固定、および悪性Ｂ細胞におけるアポトーシスを促進するシグナルの誘発を含めた、いくつかの活性の組合せであると考えられている。ＡＤＣＣは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的な細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が、標的細胞上に結合した抗体を認識し、引き続き標的細胞の溶解をもたらす、細胞媒介性の反応である。補体の固定、または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）は、分子が補体の存在下で標的を溶解する能力である。補体活性化経路は、補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）が、同種の抗原と複合している分子（例えば、抗体）に結合することにより開始する。サイズの大きいリツキシマブは、悪性Ｂ細胞を含むリンパ組織中への分子の最適な拡散を妨げ、それによりその抗腫瘍活性を制限している。
【００１２】
リツキシマブは、典型的には、抗体の、週４回の注入として４投与量で投与し（１投与量／週×４）、現在、低悪性度の、または濾胞性Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１９９８年、１２巻、１７６３〜１７７７頁；Ｌｅｇｅｔら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．、１９９８年、１０巻、５４８〜５５１頁）、および再発性のステージＩＩＩ／ＩＶの濾胞性リンパ腫（Ｗｈｉｔｅら、Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、１９９９年、２巻、９５〜１０１頁）を処置するのに用いられている。リツキシマブで処置可能な他の障害には、濾胞中心細胞リンパ腫（ＦＣＣ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、および小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）が含まれる（Ｎｇｕｙｅｎら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ．、１９９９年、６２巻、７６〜８２頁）。ＣＬＬを処置するために、リツキシマブの毎週注入の投与も用いられる（Ｌｉｎら、Ｓｅｍ  Ｏｎｃｏｌ．、２００３年、３０巻、４８３〜９２頁）。
【００１３】
抗ＣＤ２０抗体は、また、Ｂ細胞の自己抗体の生成に付随する自己免疫疾患に罹患している患者を処置するために、広く用いられている。例えば、リツキシマブは、ＲＡを含む複数の自己免疫／炎症性疾患を有する患者におけるＣＤ２０＋Ｂ細胞を枯渇させるのに、意義深い臨床上の利点を実証している（Ｅｄｗａｒｄｓ、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．、２００４年、３５０巻、２５４６〜８頁；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、２００３年、４８巻、２１４６〜５４頁）。ＲＡ患者に、メトトレキセート（ＭＴＸ）の継続投与量、およびリツキシマブ注入の２投与量の過程を投与した（Ｅｄｗａｒｄｓら、上述）。これらの患者は、対照群に比べてアメリカリウマチ学会（ＡＣＲ）の反応の改善を示した。
【００１４】
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の処置に対する治験では（Ｌｅａｎｄｒｏら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、２００２年、４６巻、２６７３〜７頁）、患者に高投与量のリツキシマブの注入を２回投与し、Ｂ細胞の枯渇および疾患状態の改善を実証した。ＳＬＥにおけるＢ細胞の枯渇の第２の試験では（Ｌｏｏｎｅｙら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ、２００４年、５０巻、２５８０〜９頁）、患者に、１００ｍｇ／ｍ２の単一の注入（低投与量）、３７５ｍｇ／ｍ２の単一の注入（中投与量）、または３７５ｍｇ／ｍ２の４回の注入（１週おき）（高投与量）として投与した。これらの患者は、Ｂ細胞の枯渇を示し、疾患スコアを改善したが、処置により自己抗体のレベルが変わることはなかった。リツキシマブの治験は、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症でも行われ（Ｔｒｅｏｎら、Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、２００１年、２４巻、２７２〜９頁）、この場合、患者はリツキシマブを４回注入後、ヘマトクリット（ＨＣＴ）および血小板（ＰＬＴ）計数値の増大を示した。
【００１５】
多発性硬化症を罹患している患者におけるリツキシマブ処置の最近の報告では、自己免疫疾患は中枢神経系に影響を及ぼし、リツキシマブ処置の過程は末梢Ｂ細胞を枯渇させるが、脳脊髄液におけるＢ細胞には殆ど作用がないことを指摘している（Ｍｏｎｓｏｎら、Ａｒｃｈ  Ｎｅｕｒｏｌ．、２００５年、６２巻、２５８〜６４頁）。
【００１６】
リツキシマブの使用に関するさらなる刊行物には、Ｓｔａｓｈｉら、「Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ａｎｔｉ−ＣＤ２０  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ａｄｕｌｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ  ｐｕｒｐｕｒａ」、Ｂｌｏｏｄ、２００１年、９８巻、９５２〜９５７頁；Ｍａｔｔｈｅｗｓ，Ｒ．、「Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｈｅｒｅｔｉｃｓ」、Ｎｅｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ  （２００１年４月７日）；Ｌｅａｎｄｒｏら、「Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ２２  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ」、Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ、２００２年、６１巻、８３３〜８８８頁；Ｌｅａｎｄｒｏら、「Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：  ｅａｒｌｙ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ｓａｆｅｔｙ，ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｄｏｓｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ」、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ、２００１年、４４巻、Ｓ３７０頁；Ｌｅａｎｄｒｏら、「Ａｎ  ｏｐｅｎ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ」、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ、２００２年、４６巻、２６７３〜２６７７頁；Ｅｄｗａｒｄｓら、「Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ａ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ  ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ｔｏ  ｄｅｐｌｅｔｅ  Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ」、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、２００１年、４０巻、２０５〜２１１頁；  Ｅｄｗａｒｄｓ  ら、「Ｂ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ」、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．、２００２年、３０巻、８２４〜８２８頁；  Ｅｄｗａｒｄｓら、「Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ，ａ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｃｈｉｍｅｒｉｃ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ：  Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｐｌａｃｅｂｏ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．」、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、２００２年、４６巻、Ｓ１９７頁；Ｌｅｖｉｎｅら、「ＩｇＭ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｅｓ：  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｕｓｉｎｇ  Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ」、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、１９９９年、５２巻、１７０１〜１７０４頁；  ＤｅＶｉｔａら、「Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ」、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、２００２年、４６巻、２０２９〜２０３３頁；  Ｈｉｄａｓｈｉｄａら、「Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ＤＭＡＲＤ−Ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｗｉｔｈ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ．」、Ａｎｎｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙで発表されたもの、２００２年１０月２４〜２９日、ルイジアナ州、ニューオーリンズ；  Ｔｕｓｃａｎｏ，Ｊ．、「Ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ−ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｗｉｔｈ  ｒｉｔｕｘｉｍａｂ」、ｔｈｅ  Ａｎｎｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙで発表されたもの、２００２年１０月２４〜２９日、ルイジアナ州、ニューオーリンズ、が含まれる。
【００１７】
リツキシマブ治療に関する問題は依然としてある。例えば、リツキシマブで処置した癌患者の大多数は、一般的に約６〜１２ヶ月内に再発し、リツキシマブ注入の２４時間以内に致死的な注入の反応が報告されている。これらの致死的な反応は、低酸素症、肺の浸潤、急性呼吸窮迫症候群、心筋梗塞、心室性浸潤、または心原性ショックを含む、複合した注入の反応に続く。致死的な結果の場合に透析を必要とする急性腎不全も、あるときには致死的な結果となる重症の粘膜皮膚反応を有するなど、リツキシマブ処置後の腫瘍崩壊症候群の背景で報告されている。さらに、静脈注射には高投与量のリツキシマブが必要とされる。というのは、上記に記載したように、分子が約１５０ｋＤａという大型であり、多くの腫瘍細胞が存在するリンパ組織中への拡散が制限されているからである。リツキシマブ処置のさらなる欠点は、複数の投与量のリツキシマブが、通常、４週間、毎週高投与量の治療を受けている患者に典型的に投与されるが（Ｍａｌｏｎｅｙら、Ｂｌｏｏｄ、１９９７年、９０巻、２１８８〜２１９５頁）、単一投与量のリツキシマブ抗体を投与しているヒトにおける投与量反応の試験では、高投与量の抗体を投与している対象に中程度のＢ細胞の枯渇がもたらされたことである（Ｍａｌｏｎｅｙら、Ｂｌｏｏｄ、１９９４年、８４巻、２４５７〜２４６６頁）。
【００１８】
モノクローナル抗体技術および遺伝子操作方法により、ヒトの疾患の診断および処置のための免疫グロブリン分子の急速な発達がもたらされている。抗体の、その同種の抗原に対する親和性を改善し、免疫原性に関連する問題を減らし、抗体のエフェクター機能を変えるために、タンパク質工学が適用されている。抗原結合性ドメインおよびエフェクター機能を付与するドメインが、免疫グロブリンのクラスとサブクラスの間で交換することができるという点で、免疫グロブリンのドメイン構造は操作しやすい。免疫グロブリンの構造および機能は、例えば、Ｈａｒｌｏｗら、編集、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第１４章、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、（１９８８年）に再考されている。組換え抗体技術の全局面に関する、広範囲にわたる概説および詳しい情報は、教科書である「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ニューヨーク州、１９９９年）に見ることができる。詳しい抗体操作の実験室プロトコールの包括的な集大成は、Ｒ．ＫｏｎｔｅｒｍａｎｎおよびＳ．Ｄｕｂｅｌ（編集）、「Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｌａｂ  Ｍａｎｕａｌ」（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ／Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２０００年）に見ることができる。
【００１９】
免疫グロブリン治療全体に関連する問題を克服するために、最近は、小型の免疫グロブリン分子が構築されている。単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）は、短いリンカーペプチドにより抗体軽鎖可変ドメインに連結している抗体重鎖可変ドメインを含んでいる（Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８８年、８５巻、５８７９〜８３頁）。可変領域の他に、各々の抗体鎖には１つまたは複数の定常領域がある。軽鎖には、単一の定常領域ドメインがある。したがって、軽鎖には、可変領域が１つ、および定常領域が１つある。重鎖にはいくつかの定常領域ドメインがある。ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤ抗体の重鎖には、３つの定常領域ドメインがあり、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３と呼ばれており、ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体における重鎖には４つの定常領域ドメインであるＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４がある。したがって、重鎖には１つの可変領域と、３つまたは４つの定常領域がある。
【００２０】
免疫グロブリンの重鎖は、また、３つの機能的な領域：Ｆｄ領域（ＶＨおよびＣＨ１を含むフラグメント、すなわち重鎖の２つのＮ末端ドメイン）、ヒンジ領域、ならびにＦｃ領域（定常領域に由来し、ペプシン消化後に形成される「フラグメント結晶化可能」領域）に分けることもできる。Ｆｄ領域は、軽鎖と組み合わさってＦａｂ（「抗原結合性フラグメント」）を形成する。抗原は、各Ｆａｂのアミノ末端で抗原結合性領域と立体化学的に反応するので、ＩｇＧ分子は２価であり、すなわち、２個の抗原分子に結合することができる。Ｆｃは、細胞上の免疫グロブリン受容体と、および補体カスケードの開始エレメントと相互作用するドメインを含んでいる。したがって、Ｆｃフラグメントは、補体の固定およびＦｃ受容体への結合などの、免疫グロブリンのエフェクター機能を担っていると、一般的に考えられている。
【００２１】
ｓｃＦｖ分子のサイズは小型なので、血漿および組織からの非常に速やかなクリアランスを示し、免疫グロブリン全体よりも効果的な組織中への浸透を表す。抗腫瘍のｓｃＦｖは、対応するキメラ抗体よりも、さらに速い腫瘍の浸透を示し、腫瘍塊を介するより均等な分布を示す（Ｙｏｋｏｔａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１９９２年、５２巻、３４０２〜０８頁）。ｓｃＦｖを別の一分子、例えば毒素に融合すると、特異的な抗原結合性活性および小型のｓｃＦｖを利用して、標的組織に毒素を送達する（Ｃｈａｕｄａｒｙら、Ｎａｔｕｒｅ、１９８９年、３３９巻、３９４頁；Ｂａｔｒａら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１９９１年、１１巻、２２００頁）。
【００２２】
ｓｃＦｖ分子は血清療法に利点をもたらすにもかかわらず、この治療の取組みにはいくつかの欠点が存在する。ｓｃＦｖの速やかなクリアランスにより正常な細胞における毒性の効果を低減することができるが、クリアランスがこのように速やかであると、標的組織への最小有効量の送達が妨げられることがある。患者に投与するのに十分な量のｓｃＦｖの製造は、収量に有害な影響を及ぼすｓｃＦｖの発現および単離が困難であるため、取り組みがいがあった。発現の間、ｓｃＦｖ分子は安定性を欠き、異なる分子からの可変領域の対形成により、凝集することが多い。さらに、哺乳動物の発現系ではｓｃＦｖ分子の生成レベルは低く、これは治療用にｓｃＦｖ分子を効率的に製造する可能性を制限するものである（Ｄａｖｉｓら、Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９０年、２６５巻、１０４１０〜１８頁；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ、１９９１年、１０巻、３６５５〜５９頁）。生成を改善するための戦略が開発されており、これには可変領域へのグリコシル化部位の付加が含まれる（Ｊｏｓｔ，Ｃ．Ｒ．、米国特許第５８８８７７３号、Ｊｏｓｔら、Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９４年、６９巻、２６２６７〜７３頁）。
【００２３】
ｓｃＦｖを治療に用いる別の欠点は、エフェクター機能の欠如である。免疫グロブリンの定常領域に関連する、細胞溶解性機能、ＡＤＣＣ、および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）のないｓｃＦｖは、疾患を処置するのに効果的ではないことがある。ｓｃＦｖ技術の発達は１２年以上昔に始まっているものの、現在、治療に認可されているｓｃＦｖ製品はない。
【００２４】
あるいは、ｓｃＦｖを、毒素など別の分子に融合することで、特異的な抗原結合性活性、および毒素を標的組織に送達するための小サイズのｓｃＦｖを利用することができると提唱されている。Ｃｈａｕｄａｒｙら、Ｎａｔｕｒｅ、１９８９年、３３９巻、３９４頁；Ｂａｔｒａら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１９９１年、１１巻、２２００頁。毒素のｓｃＦｖへの複合または融合は、したがって、強力な抗原特異的な分子をもたらす代替の戦略として提供されているが、このような複合体またはキメラとの投薬は、このような調製物の毒素部分のために、過剰な、および／または非特異的な毒性によって制限されることがある。毒素効果には、肝臓の酵素の超生理的な上昇、および血管漏出症候群、ならびに他の望ましくない効果が含まれ得る。さらに、免疫毒素は、宿主に投与する際にはそれ自体が高度に免疫原性であり、免疫毒素に対して産生された宿主の抗体は、個体の反復の治療的処置に対する潜在的な有用性を制限するものである。
【００２５】
他の操作された融合タンパク質は、小型モジュラー免疫薬剤（ＳＭＩＰ（登録商標））製品と呼ばれており、共同所有の米国特許公開第２００３／１３３９３９号、第２００３／０１１８５９２号、および２００５／０１３６０４９号、ならびに共同所有の国際特許公開ＷＯ０２／０５６９１０号、ＷＯ２００５／０３７９８９号、およびＷＯ２００５／０１７１４８号に記載されており、これらは全て本明細書に参照として組み入れられる。ＳＭＩＰ製品は、抗原、カウンターレセプターなどの同種の構造に対する結合性ドメイン；システイン残基を０、１、または２個有する、野生型ＩｇＧ１、ＩｇＡ、またはＩｇＥのヒンジ領域のポリペプチド、または突然変異のＩｇＧ１ヒンジ領域のポリペプチド；ならびに免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを特徴とする、新規な、結合性ドメイン−免疫グロブリン融合タンパク質である。ＳＭＩＰ製品は、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣが可能である。
【００２６】
抗体ベースの治療について広範囲にわたる研究が行われているものの、当技術分野では、Ｂ細胞の異常活性に関連する疾患を処置するための改善された方法が依然として必要とされている。本明細書に記載し、請求する本発明の方法は、このような改善された方法、および他の利点を提供するものである。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２７】
本発明は、Ｂ細胞の異常活性に関連する疾患におけるＢ細胞の集団のレベルを変調するための方法に関する。
【００２８】
一態様では、本発明は、患者に治療上有効な量のＣＤ２０特異的結合性分子の単一投与量を投与することを含む、Ｂ細胞の異常活性に関連する疾患を有する、または有すると疑われる対象を処置する方法を提供するものである。一実施形態では、ＣＤ２０特異的結合性分子は、ＣＤ２０特異的小型モジュラー免疫薬剤（ＳＭＩＰ）である。
【００２９】
「Ｂ細胞の異常活性」は、正常の、適切な、または期待した過程から逸脱した細胞の活性を意味する。例えば、細胞の異常な活性は、そのＤＮＡまたは他の細胞成分が損傷を受け、または欠損した細胞の不適切な増殖を含み得る。Ｂ細胞の異常活性には、その特徴が、不適切に高レベルの細胞分裂、不適切に低レベルのアポトーシス、もしくはその両方によりもたらされ、媒介され、または結果としてそれらになる疾患に関連する、細胞の増殖を含み得る。このような疾患は、癌性でも非癌性でも、良性でも悪性でも、以下にさらに十分に記載する、例えば、細胞、細胞のグループ、または組織の単一または複数の局所の異常な増殖を特徴とすることができる。Ｂ細胞の異常活性には、異常な抗体の生成、例えば、自己抗体の生成、または、典型的には正常レベルで望ましい抗体の過剰生成が含まれ得る。Ｂ細胞の異常活性は、Ｂ細胞のある種の亜集団で起こることがあるが、他の亜集団では起こらないことが企図される。Ｂ細胞の異常活性には、例えば、Ｔ細胞に対する不適切なＢ細胞抗原の提示による、またはＢ細胞が関与する他の経路によるＴ細胞の不適切な刺激も含まれ得る。
【００３０】
ＣＤ２０特異的結合性分子の「単一投与量」は、ＣＤ２０特異的結合性分子を週１回、または２週間に１回投与することを必要とする複数投与量の治療とは対照的に、処置の開始時にＣＤ２０特異的ＳＭＩＰの１投与量の、単一の継続的な注入の投与を意味する。一実施形態では、単一の継続的な注入は長期の皮下注入、静脈内注入などであってよい。単一の継続的な注入では、例えば、約１５分から約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約２４時間まで、または１日以上、または数週間（例えば、埋込み装置またはゲルデポー（ｇｅｌ  ｄｅｐｏｔ）からの徐放）などの期間、投与してもよい。単一の投与量を、他の治療または第２の薬剤と組み合わせて投与してもよく、本明細書に記載するように第２の治療用薬剤の投与と同時に、投与前に、または投与後に投与してもよい。本発明によると、単一の継続的な注入は、実際に考慮することによって必要とされるように、注入の短時間の中断を包含することがある。
【００３１】
「Ｂ細胞の異常活性に関連する疾患を有する対象または有すると疑われる対象」は、疾患または疾患の症状がＢ細胞の異常活性によってもたらされることがあり、Ｂ細胞の異常活性によって増悪することがあり、またはＢ細胞活性の制御により緩和することがある対象である。このような疾患の例には、例えば、Ｔ細胞に対する不適切なＢ細胞抗原の提示による、またはＢ細胞に関与する他の経路によるなどの、自己抗体の生成を特徴とする疾患、または不適切なＴ細胞の刺激を特徴とする疾患である、Ｂ細胞癌（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞白血病、Ｂ細胞ミエローマ）がある。
【００３２】
一態様では、本発明の方法により処置する個体は、本明細書に記載するＣＤ２０結合性分子での処置に対する反応の改善を示し、この反応は、リツキシマブでの処置、および他のどんなＣＤ２０結合性分子での処置に対する反応より良好である。リツキシマブおよび他のどんなＣＤ２０結合性分子での処置よりも改善されている反応は、本発明の分子による処置が、例えば、リツキシマブ単独、または他の薬剤と組み合わせたリツキシマブ（この場合、他の薬剤が他のＣＤ２０結合性分子ではない）などの、リツキシマブ治療を受けている患者における臨床上の反応よりも良好である臨床上の反応を患者にもたらす臨床上の反応を意味する。反応の改善は、当技術分野ではよく知られており本明細書に記載する臨床診断基準と比べることにより、評価される。例示の診断基準には、それだけには限定されないが、Ｂ細胞の枯渇の持続時間、全体のＢ細胞数における減少、生物学的試料におけるＢ細胞数の減少、腫瘍サイズにおける減少、処置後に存在および／または出現する腫瘍の数の減少、ならびに、例えば、国際予後指標を用いて、患者自身および医師が評価する全体の反応の改善が含まれる。改善は、臨床診断基準の１つまたは１つを超えるものにおけるものであってよい。本発明の方法での反応の改善は、例えば、リツキシマブ処置の毒性および／または不十分な有効性によるために、以前のまたは現在のリツキシマブでの処置に対する反応が不十分であったことによる可能性がある。
【００３３】
関連の一態様では、本発明の方法により処置した個体に、リツキシマブも投与する。一実施形態では、リツキシマブを処置の第一線として投与しておき、本発明の方法での処置を開始した場合に継続する。別の一実施形態では、本発明の方法での処置を開始した後に、リツキシマブ処置を中止する。
【００３４】
「リウマチ疾患を有する、または有することが疑われる対象」は、関節、軟骨、筋肉、神経、および腱などの部位が罹患している、関節起源または筋骨格系の疾患または障害に冒されている対象または個体である。リウマチ疾患を有する、または有することが疑われる対象は、以前に、リウマチ疾患を処置するための治療を受けたことがあってよい。一実施形態では、リウマチ疾患には、それだけには限定されないが、慢性関節リウマチ、強直性脊椎炎、皮膚筋炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、レイノー症候群、ライター症候群、サルコイドーシス、脊椎関節症、全身性進行性硬化症、および筋炎が含まれる。
【００３５】
「中枢神経系自己免疫疾患を有する、または有することが疑われる対象」、または「中枢神経系障害」は、脳および脊髄、または視神経などの領域を含む、中枢神経系を冒す疾患または障害に罹患している対象または個体である。中枢神経系自己免疫疾患を有する、または疑われる対象は、以前に、中枢神経系障害を処置するための治療を受けたことがあってよい。一実施形態では、中枢神経系自己免疫疾患には、それだけには限定されないが、多発性硬化症、アレルギー性脳脊髄炎、視神経脊髄炎、ループス脊髄炎、およびループス脳炎が含まれる。
【００３６】
「血管炎」は、血管における炎症に関連する疾患または障害を意味する。例示の血管炎の障害には、それだけには限定されないが、ベーチェット病、中枢神経系血管炎、チャーグ・シュトラウス症候群、寒冷グロブリン血症、巨細胞関節炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、過敏性血管炎／脈管炎、川崎病、白血球破壊性血管炎、ポリアンティティス（ｐｏｌｙａｎｔｉｔｉｓ）、結節性多発性動脈炎、多発性筋痛、多発性軟骨炎、リウマチ性血管炎、高安動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、肝炎による血管炎、家族性地中海熱、顕微鏡的多発性血管炎、コーガン症候群、ウィスコット・アルドリッチ症候群、および閉塞性血栓血管炎が含まれる。
【００３７】
「処置」または「処置すること」は、治療的処置、または予防もしくは防止的処置のいずれかを意味する。治療的処置は、処置を受けている個体における疾患の少なくとも１つの症状を改善することができ、または個体における進行性の疾患の悪化を遅らせ、もしくはさらなる関連疾患の発症を防ぐことができる。
【００３８】
ＣＤ２０特異的結合性分子の「治療上有効な投与量」または「有効な投与量」は、処置が開始される疾患の１つまたは複数の症状の改善をもたらすのに十分な化合物の量を意味する。個体に、有効成分を適用する場合、単独で投与する治療上有効な投与量はその成分単独を意味する。組合せを適用する場合、治療上有効な投与量は、投与が、組合せでも、連続的でも、または同時でも、治療効果をもたらす有効成分の総量を意味する。本発明は、１つまたは複数のＣＤ２０特異的結合性分子を、各々有効な投与量で、本発明の方法に従って投与してもよいことを特に企図するものである。
【００３９】
本発明が企図する方法は、Ｂ細胞癌（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫）、自己抗体の生成を特徴とする疾患、または、例えば、Ｔ細胞に対する不適切なＢ細胞抗原による、またはＢ細胞に関与する他の経路による、Ｔ細胞の不適切なＴ細胞の刺激を特徴とする疾患、などの疾患を処置するのに有用である。
【００４０】
Ｂ細胞癌には、Ｂ細胞リンパ腫［例えば、様々な形態のホジキン病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、または中枢神経系リンパ腫］、白血病［例えば、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリー細胞白血病、および慢性筋芽細胞白血病］、ならびにミエローマ（例えば、多発性骨髄腫など）が含まれる。さらなるＢ細胞癌には、小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、骨の孤立性形質細胞腫、骨外性形質細胞腫、粘膜関連の（ＭＡＬＴ）リンパ組織の節外性周辺帯Ｂ細胞リンパ腫、節外性周辺帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大型Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大Ｂ細胞リンパ腫、血管内大型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、バーキットリンパ腫／白血病、悪性化の可能性を持つＢ細胞の増殖、リンパ腫様肉芽腫症、および移植後のリンパ球増殖性疾患が含まれる。
【００４１】
自己抗体の生成を特徴とする障害は、しばしば自己免疫疾患とみなされる。自己免疫疾患には、それだけには限定されないが、関節炎、慢性関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、多発性軟骨炎、乾癬性関節炎、乾癬、皮膚炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、封入体筋炎、炎症性筋炎、中毒性表皮壊死症、全身性強皮症および硬化症、ＣＲＥＳＴ症候群、炎症性腸疾患に付随する反応、クローン病、潰瘍性大腸炎、呼吸窮迫症候群、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、髄膜炎、脳炎、ぶどう膜炎、大腸炎、糸球体腎炎、アレルギー状態、湿疹、喘息、Ｔ細胞の浸潤を伴う状態、および慢性炎症性反応、アテローム性動脈硬化、自己免疫性心筋炎、白血球接着不全症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、亜急性皮膚エリテマトーデス、円板状エリテマトーデス、ループス脊髄炎、ループス脳炎、若年発症型糖尿病、多発性硬化症、アレルギー性脳脊髄炎、視神経脊髄炎、リウマチ熱、シデナム舞踏病、サイトカインおよびＴリンパ球が媒介する急性および遅延性の過敏症に付随する免疫反応、結核、サルコイドーシス、ウェゲナー肉芽腫症およびチャーグ・シュトラウス症候群を含む肉芽腫症、無顆粒球症、血管炎（過敏性血管炎／脈管炎、ＡＮＣＡ、およびリウマチ性血管炎を含む）、再生不良性貧血、ダイアモンド・ブラックファン貧血、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）を含む免疫性溶血性貧血、悪性貧血、赤芽球癆（ＰＲＣＡ）、第ＶＩＩＩ因子欠損、血友病Ａ、自己免疫性好中球減少症、汎血球減少症、白血球減少症、白血球の血管外漏出を伴う疾患、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性障害、多臓器損傷症候群、重症筋無力症、抗原−抗体複合体が媒介する疾患、抗糸球体基底膜疾患、抗リン脂質抗体症候群、アレルギー性神経炎、ベーチェット病、キャッスルマン症候群、グッドパスチャー症候群、ランバート・イートン筋無力症候群、レイノー症候群、シェーグレン症候群、スティーヴンス・ジョンソン症候群、臓器移植拒絶、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、類天疱瘡水疱、天疱瘡、自己免疫性多腺性内分泌障害、血清反応陰性脊椎関節炎、ライター病、スティッフマン症候群、巨細胞性動脈炎、免疫複合体腎炎、ＩｇＡ腎症、ＩｇＭ多発神経炎またはＩｇＭ媒介神経炎、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性睾丸炎および卵巣炎を含む睾丸および卵巣の自己免疫疾患、原発性甲状腺機能低下症；自己免疫性甲状腺炎、慢性甲状腺炎（橋本甲状腺炎）、亜急性甲状腺炎、特発性甲状腺機能低下症、アジソン病、グレーブス病、自己免疫性多発内分泌腺症候群（すなわち、多発内分泌腺症候群）、インスリン依存性真性糖尿病（ＩＤＤＭ）およびシーハン症候群とも呼ばれるＩ型糖尿病を含む自己免疫性内分泌腺疾患；自己免疫性肝炎、リンパ球性間質性肺炎（ＨＩＶ）、閉塞性細気管支炎（非移植）対ＮＩＳＰ、ギラン・バレー症候群、大型血管炎（リウマチ性多発筋痛および巨細胞（高安）関節炎を含む）、中型血管炎（川崎病および結節性多発動脈炎を含む）、結節性多発動脈炎（ＰＡＮ）、強直性脊椎炎、バージャー病（ＩｇＡ腎症）、急速進行性糸球体腎炎、原発性胆汁性肝硬変、セリアック病（グルテン腸疾患）、寒冷グロブリン血症、肝炎に関連する寒冷グロブリン血症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、冠動脈疾患、家族性地中海熱、顕微鏡的多発性血管炎、コーガン症候群、ウィスコット・アルドリッチ症候群、および閉塞性血栓血管炎が含まれる。
【００４２】
慢性関節リウマチ（ＲＡ）は、関節の炎症を特徴とし、腫脹、疼痛、および機能喪失をもたらす慢性疾患である。長期間ＲＡを有する患者は、通常、進行性の関節破壊、変形、能力障害、および若年死も示す。
【００４３】
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、腎臓、皮膚、および関節を含む複数の器官における血管に対する反復性の傷害によってもたらされる、自己免疫疾患である。ＳＬＥの患者では、Ｔ細胞とＢ細胞との間の誤った相互作用により、細胞核を攻撃する自己抗体の生成がもたらされる。自己抗体は、ＳＬＥの少なくともいくつかの局面の原因であることに、一般的に同意されている。Ｂ細胞系統を枯渇させ、新しいＢ細胞が前駆体から産生されるときに免疫系をリセットする新しい治療は、ＳＬＥ患者に、利点が長持ちするという希望をもたらす。
【００４４】
多発性硬化症（ＭＳ）も、自己免疫疾患である。これは、中枢神経系の炎症、および脳、脊髄、および身体における神経線維を絶縁しているミエリンの破壊を特徴とする。ＭＳの原因は知られていないが、自己免疫Ｔ細胞が、この疾患の病因に主に寄与すると広く考えられている。しかし、高レベルの抗体が、ＭＳ患者の脳脊髄液中に存在し、いくつかの理論では、抗体の産生をもたらすＢ細胞の反応が疾患を媒介するのに重要であると予想されている。
【００４５】
クローン病および関連する疾患である潰瘍性大腸炎は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）と呼ばれる一群の疾患に属する、２つの主要な疾患のカテゴリーである。クローン病は、消化管または胃腸（ＧＩ）管の炎症を引き起こす慢性障害である。この疾患は口から肛門までのＧＩ管のあらゆる部位を伴うことがあるが、最も一般的には小腸および／または大腸を冒す。潰瘍性大腸炎では、ＧＩの関与は大腸に限られている。
【００４６】
クローン病は、好中球抗原に対する抗体、すなわち、「核周囲の抗好中球抗体」（ｐＡＮＣＡ）、および出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に対する抗体、すなわち「抗Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ抗体」（ＡＳＣＡ）を特徴とすることがある。潰瘍性大腸炎を有する患者の多くは、その血液にｐＡＮＣＡ抗体を有するがＡＳＣＡ抗体を有さず、一方、クローン病患者の多くはＡＳＣＡ抗体を表すがｐＡＮＣＡ抗体を表さない。クローン病を評価する一方法は、医師が収集した１８の予測変数スコアに基づく、クローン病活動性指数（ＣＤＡＩ）を用いることである。ＣＤＡＩ値が１５０以下であれば静止性の疾患に関連し、それを超える値であれば活動性の疾患であることを示し、値が４５０を超えると特に重篤な疾患であるとみられている（Ｂｅｓｔら、「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎｄｅｘ」、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、７０巻、４３９〜４４４頁、１９７６年）。しかし、最初の研究以来、２００から２５０の「自覚値」を健常スコアとして用いる研究者もいる。
【００４７】
自己免疫性甲状腺疾患は、甲状腺を刺激して甲状腺機能亢進症（グレーブス病）を引き起こし、または甲状腺を破壊して甲状腺機能低下症（橋本甲状腺炎）を引き起こす自己抗体の生成に起因する。甲状腺の刺激は、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）受容体に結合し活性化する自己抗体により引き起こされる。甲状腺の破壊は、他の甲状腺抗原と反応する自己抗体によって引き起こされる。
【００４８】
シェーグレン症候群は、身体の水分生成腺の破壊を特徴とする自己免疫疾患である。
【００４９】
免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）は、血小板に結合し、その破壊を引き起こす自己抗体によってもたらされる。
【００５０】
重症筋無力症（ＭＧ）は、神経筋接合部で発現されるアセチルコリン受容体に結合する自己抗体を特徴とし、随意筋群の衰弱をもたらす、慢性の自己免疫性神経筋障害である。
【００５１】
乾癬は、皮膚における自己免疫性の炎症を特徴とし、症例の３０％では関節炎にも関連している。
【００５２】
皮膚筋炎（ＤＭ）、および多発性筋炎（ＰＭ）を含む、特発性炎症性筋障害（ＩＩＭ）の処置も企図される。炎症性筋障害は、数々の類別スキームを用いて分類されている。Ｍｉｌｌｅｒの類別スキーム（Ｍｉｌｌｅｒ、Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．、１９９４年、２０巻、８１１〜８２６頁）は、２つの特発性炎症性筋障害（ＩＩＭ）、多発性筋炎（ＰＭ）、および皮膚筋炎（ＤＭ）を同定している。
【００５３】
多発性筋炎、および皮膚筋炎は、筋肉、およびＤＭの場合には皮膚を伴う、慢性の、衰弱性の炎症性疾患である。これらの障害は希であり、年間発生率は、米国では１年あたり、成人１００万人あたり約５から１０症例、小児１００万人あたり０．６から３．２症例が報告されている（Ｔａｒｇｏｆｆ、Ｃｕｒｒ  Ｐｒｏｂｌ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１９９１年、３巻、１３１〜１８０頁）。特発性炎症性筋障害（ＩＩＭ）は、著しい罹患率および死亡率に関連しており、罹患している成人の半数までが著しい機能障害を経験したと記載されている（Ｇｏｔｔｄｉｅｎｅｒら、Ａｍ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ．、１９７８年、４１巻、１１４１〜４９頁）。Ｍｉｌｌｅｒ（Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．、１９９４年、２０巻、８１１〜８２６頁、およびＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ａｌｌｉｅｄ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ、第７５章、ＫｏｏｐｍａｎおよびＭｏｒｅｌａｎｄ編集、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ、２００５年）は、ＩＩＭを診断するのに用いられる、５群の診断基準、すなわち、筋力低下、筋肉の生検の変性の証拠、筋肉に関連する酵素の血清レベルの上昇、筋疾患の電磁気の３徴候、皮膚筋炎における発疹の証拠を含む特発性炎症性筋障害基準（ＩＩＭＣ）アセスメントを発表し、また、第２の診断基準として自己抗体の証明も含まれている。
【００５４】
筋肉に関連する酵素および自己抗体を含む、ＩＩＭ関連の因子には、それだけには限定されないが、クレアチニンキナーゼ（ＣＫ）、乳酸デヒドロゲナーゼ、アルドラーゼ、Ｃ反応性タンパク質、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、および抗核自己抗体（ＡＮＡ）、筋肉炎特異的抗体（ＭＳＡ）、および抽出核抗原に対する抗体が含まれる。
【００５５】
本発明による「結合性分子」は、例えば、タンパク質（「タンパク質」はポリペプチドもしくはペプチドでもよい）、核酸、炭水化物、脂質、または標的に結合する小分子化合物であることができる。本発明が企図するタンパク質性の結合性分子は、抗体、または結合性の活性を保持する抗体フラグメントである。結合性分子を、当技術分野では標準の方法に従って修飾して、その結合親和性を改善し、その免疫原性を低減し、そのエフェクター機能を変更し、および／または個体の身体におけるその利用能を改善してもよい。このような修飾には、例えば、アミノ酸配列の修飾、または融合タンパク質としての発現が含まれ得る。このような融合タンパク質は、本発明による結合性分子でもある。本発明の、例示の結合性分子は、小型モジュラー免疫薬剤（ＳＭＩＰ（商標））である。
【００５６】
標的に「特異的」である結合性分子は、あらゆる他の標的よりも高い親和性でその標的に結合する。例えば、ＣＤ２０特異的結合性分子は、あらゆる他の標的よりも高い親和性でＣＤ２０に結合する。本発明の結合性分子の、その標的に対する親和性は、約１０４Ｍ−１に等しくまたはそれを超える、好ましくは約１０５Ｍ−１に等しくまたはそれを超える、より好ましくは約１０６Ｍ−１に等しくまたはそれを超える、さらにより好ましくは約１０７Ｍ−１に等しくまたはそれを超えるＫａであってよい。約１０７Ｍ−１よりもさらに高い親和性、例えば、約１０７Ｍ−１、約１０８Ｍ−１、約１０９Ｍ−１、および約１０１０Ｍ−１に等しくまたはそれを超える親和性が、さらにより好ましい。本発明による結合性分子の親和性は、例えば、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、５１巻、６６０頁（１９４９年）によって記載されたものなど、従来の技術を用いて容易に決定することができる。一実施形態では、ＣＤ２０特異的結合性分子のＣＤ２０に対する親和性は、１ｎＭから３０ｎＭの範囲である。
【００５７】
さらなる一態様では、ＣＤ２０特異的結合性分子の半減期は、ｉｎ  ｖｉｖｏで７から３０日である。
【００５８】
小型モジュラー免疫薬剤（ＳＭＩＰ）を作成するための方法は、以前に、共同所有の、米国出願第１０／６２７５５６号、ならびに米国特許公開第２００３／１３３９３９号、第２００３／０１１８５９２号、および第２００５／０１３６０４９号に記載されており、これらはその全文が本明細書に参照として組み入れられる。ＳＭＩＰは、抗原、カウンターレセプターなどのような同種の構造に対する結合性ドメイン；０、１、または２個のシステイン残基を有する、ＩｇＧ１、ＩｇＡ、またはＩｇＥヒンジ領域のポリペプチドまたは突然変異のＩｇＧ１ヒンジ領域のポリペプチド；および免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを特徴とする、新規な結合性ドメイン−免疫グロブリン融合タンパク質である。一実施形態では、結合性ドメイン分子は、システイン残基を１または２個有する。関連の一実施形態では、結合性ドメイン分子がシステイン残基を２個含む場合、第１のシステインは、重鎖および軽鎖の可変領域間の結合に関与するのが典型的であり、アミノ酸の欠失または置換がない。
【００５９】
本発明の方法に有用な分子の結合性ドメインは、免疫グロブリンなどの免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーの１つまたは複数に由来する、可変軽鎖および可変重鎖の結合性領域などの１つまたは複数の結合性領域を有すると企図される。さらに、これらの領域は、リンカーペプチドにより分けられているのが典型的であり、リンカーペプチドは、結合性分子におけるドメインまたは領域の結合と適合することが当技術分野では知られているあらゆるリンカーペプチドであってよい。例示のリンカーは、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎなどの（この場合ｎ＝３〜５である）Ｇｌｙ４Ｓｅｒリンカーモチーフをベースにしたリンカーである。本発明の方法で用いるための分子は、エフェクター機能、好ましくはＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣを提供するための免疫グロブリンの定常領域に由来する、十分なアミノ酸配列も含む。したがって、分子は、免疫グロブリンのＣＨ２ドメイン、または１つまたは複数の免疫グロブリンに由来するＣＨ２およびＣＨ３ドメインに由来する配列を有する。ＳＭＩＰは、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣが可能であるが、ジスルフィド連結した多量体を形成するその能力が十分発揮されない。
【００６０】
例示のＣＤ２０特異的ＳＭＩＰには、米国特許公開第２００３１３３９３９号および第２００３０１１８５９２号に記載されている抗ＣＤ２０モノクローナル抗体２Ｈ７に由来するＳＭＩＰが含まれる。ＳＭＩＰには、２Ｈ７ｓｃＦｖ−Ｉｇまたはその誘導体が含まれる。誘導体には、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃドメインおよび突然変異のＩｇＧ１ヒンジドメインを有するＣｙｔｏｘＢ−ＭＨＷＴＧ１Ｃ；突然変異のＦｃドメインを含むＣｙｔｏｘＢ−ＭＨＭＧ１Ｃ；ロイシン残基２３４が突然変異したＦｃ受容体を含むＭＧ１Ｈ／ＭＧ１Ｃ；ヒトＦｃドメインに融合しているヒトＩｇＡヒンジの部分を含むＣｙｔｏｘＢ−ＩｇＡＨＷＴＨＧ１Ｃ；ｌｌａｍａ  ＩｇＧ１ヒンジおよびＣＨ２ＣＨ３領域を含む２Ｈ７ｓｃＦｖ−ｌｌａｍａ  ＩｇＧ１；ｌｌａｍａ  ＩｇＧ２ヒンジおよびＣＨ２ＣＨ３領域を含む２Ｈ７ｓｃＦｖ−ｌｌａｍａ  ＩｇＧ２；ｌｌａｍａ  ＩｇＧ３ヒンジおよびＣＨ２ＣＨ３領域を含む２Ｈ７ｓｃＦｖ−ｌｌａｍａ  ＩｇＧ３が含まれる。
【００６１】
２Ｈ７  ｓｃＦｖ−Ｉｇ誘導体には、ヒンジ領域に点突然変異のある２Ｈ７ｓｃＦｖ突然変異体も含まれる。結合またはヒンジ領域における３つのシステイン残基全てがセリン残基に突然変異した２Ｈ７、ならびに野生型のＣＨ２およびＣＨ３ドメインのｓｃＦｖ  ＭＴＨ（ＳＳＳ）ＷＴＣＨ２ＣＨ３；最初の２個のシステイン残基がセリン残基で置換されている２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＭＴＨ（ＳＳＣ）；第１および第３のシステインがセリン残基で置換されている２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＭＴＨ（ＳＣＳ）；第２および第３のポジションのシステイン残基がセリンで置換されている２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＭＴＨ（ＣＳＳ）ＷＴＣＨ２ＣＨ３；重鎖可変領域におけるポジション１１のロイシンがセリンで置換されている２Ｈ７ｓｃＦｖ  ＶＨ１１ＳＥＲ  ＩｇＧ  ＭＴＨ（ＳＳＳ）ＷＴＣＨ２ＣＨ３；ＩｇＡヒンジ領域およびＷＴ  ＩｇＧ１ドメインを含む２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＩｇＡヒンジ−ＩｇＧ１  ＣＨ２−ＣＨ３；ＩｇＡヒンジ、ＣＨ２−ＣＨ３領域を含む２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＩｇＡヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３；ＩｇＡヒンジ、野生型ＩｇＡ  ＣＨ２および切断されたＩｇＡ  ＣＨ３ドメインを含み４カルボキシアミノ酸ＧＴＣＹを欠く２Ｈ７  ＩｇＡＷＨ  ＩｇＡＣＨ２−Ｔ４ＣＨ３。
【００６２】
ＩｇＧ  ＣＨ３領域に突然変異のある誘導体には、ポジション４０５（Ｋａｂａｔら、上述によるナンバリング）のフェニルアラニン残基がチロシンで置換されている２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＭＴＨ  ＷＴＣＨ２  ＭＴＣＨ３  Ｙ４０５；ポジション４０５のフェニルアラニンがアラニンで置換されている２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＭＴＨ  ＷＴＣＨ２  ＭＴＣＨ３  Ａ４０５、ポジション４０７のチロシン残基がアラニンで置換されているｓｃＦｖ  ＭＴＨ  ＷＴＣＨ２  ＭＴＣＨ３  Ａ４０７、２つの突然変異を含むｓｃＦｖ  ＭＴＨ  ＷＴＣＨ２  ＭＴＣＨ３  Ｙ４０５Ａ４０７、および２つの突然変異を含むｓｃＦｖ  ＭＴＨ  ＷＴＣＨ２  ＭＴＣＨ３  Ａ４０５Ａ４０７が含まれる。
【００６３】
２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＭＴＨ（ＣＣＳ）ＷＴＣＨ２ＣＨ３は、ＩｇＧ１ヒンジ領域における第３のシステイン残基がセリン残基で置換されている構築物である。２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＩｇＧ  ＭＴＨ（ＳＳＳ）ＭＴＣＨ２ＷＴＣＨ３  ＳＭＩＰは、突然変異のヒンジ（ＭＴ（ＳＳＳ））、および残基２３８（Ｗａｒｄらによる）のプロリンがセリンで置換されている突然変異のＣＨ２ドメインを含む。
【００６４】
２Ｈ７ｓｃＦｖ−Ｉｇ誘導体は、可変重鎖領域に点突然変異のある２Ｈ７  ｓｃＦｖ突然変異体も含む。以下の構築物は全て、重鎖可変領域におけるポジション１１のロイシンがセリンで置換されている突然変異体を含む：上記に記載した突然変異したヒンジ領域を含む２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＶＨ１１ＳＥＲ  ＩｇＧ  ＭＴＨ（ＳＳＳ−Ｓ）ＷＴＣＨ２ＣＨ３、２Ｈ７ｓｃＦｖ  ＶＨＬ１１Ｓ（ＣＳＳ−Ｓ）Ｈ  ＷＣＨ２  ＷＣＨ３；上記に記載した突然変異したヒンジ領域を含む２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＶＨＬ１１Ｓ（ＣＳＣ−Ｓ）Ｈ  ＷＣＨ２  ＷＣＨ３；ＩｇＡヒンジ、ＷＴ  ｉｇＡ  ＣＨ２、および切断されたＩｇＡ  ＣＨ３を含む２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＶＨＬ１１Ｓ  ＩｇＡＨ  ＩｇＡＣＨ２  Ｔ４ＣＨ３；ＩｇＥ  ＣＨ２〜４領域を含む２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＶＨＬ１１Ｓ  ＩｇＥＣＨ２  ＣＨ３  ＣＨ４；上記に記載した突然変異したヒンジ領域ならびにＩｇＥ  ＣＨ３およびＣＨ４領域を含む２Ｈ７  ＶＨＬ１１Ｓ  ｓｃＦｖ（ＳＳＳ−Ｓ）ＩｇＥＣＨ３  ＣＨ４；マウスＩｇＥ領域を含む２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＶＨＬ１１Ｓ  ｍＩｇＥ  ＣＨ２  ＣＨ３  ＣＨ４；上記に記載した突然変異、ならびに野生型ＣＨ２領域および突然変異したＣＨ３領域からなるマウスＩｇＡ定常領域を含む２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＶＨＬ１１Ｓ  ｍｌｇＡＨ  ＷＩＧＡＣＨ２  Ｔ４ＣＨ３；ヒトＩｇＧ１  ＣＨ２領域の残基３２２に突然変異を含み、リジンがセリンに変更している２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＶＨＬ１１Ｓ（ＳＳＳ−Ｓ）Ｈ  Ｋ３２２Ｓ  ＣＨ２  ＷＣＨ３；上記に記載した突然変異したヒンジ領域、および先に記載したＣＨ２領域を含む２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＶＨＬ１１Ｓ（ＣＳＳ−Ｓ）Ｈ  Ｋ３２２Ｓ  ＣＨ２  ＷＣＨ３；上記に記載した突然変異したヒンジ領域、および残基３３１のプロリンがセリンに変更している突然変異したＣＨ２領域を含む２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＶＨＬ１１Ｓ（ＳＳＳ−Ｓ）Ｈ  Ｐ３３１Ｓ  ＣＨ２  ＷＣＨ３；突然変異したヒンジ領域、およびＣＨ２領域における残基３３１にプロリンからセリンへの突然変異を含む２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＶＨＬ１１Ｓ（ＣＳＳ−Ｓ）Ｈ  Ｐ３３１Ｓ  ＣＨ２  ＷＣＨ３；突然変異したヒンジ領域、およびＣＨ２領域における残基２５６にスレオニンからアスパラギンへの突然変異を含む２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＶＨＬ１１Ｓ（ＳＳＳ−Ｓ）Ｈ  Ｔ２５６Ｎ  ＣＨ２  ＷＣＨ３；突然変異したヒンジ領域、および残基２５５〜２５８が、アルギニン、スレオニン、プロリン、グルタミン酸から、それぞれグルタミン、アスパラギン、アラニン、およびリジンに突然変異している一連の突然変異を含む２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＶＨＬ１１Ｓ（ＳＳＳ−Ｓ）Ｈ  ＲＴＰＥ／ＱＮＡＫ（２５５−２５８）  ＣＨ２  ＷＣＨ３；突然変異したヒンジ領域、およびポジション２９０にリジンからグルタミンへの変更を含む２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＶＨＬ１１Ｓ（ＳＳＳ−Ｓ）Ｈ  Ｋ２９０Ｑ  ＣＨ２  ＷＣＨ３；突然変異したヒンジ領域、およびポジション３３９にアラニンからプロリンへの変更を含む２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＶＨＬ１１Ｓ（ＳＳＳ−Ｓ）Ｈ  Ａ３３９Ｐ  ＣＨ２  ＷＣＨ３。
【００６５】
ＳＭＩＰ  ２Ｈ７  ｓｃＦｖ（ＳＳＳ−Ｓ）Ｈ  Ｐ２３８ＳＣＨ２  ＷＣＨ３は、突然変異したヒンジ領域、およびＣＨ２においてポジション２３８にプロリンからセリンへの変更を含み、２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＩｇＧ  ＭＴＨ（ＳＳＳ）ＭＴＣＨ２ＷＴＣＨ３と同じである。２Ｈ７  ｓｃＦｖ  ＩｇＡＨ  ＩＧＡＨＣＨ２  Ｔ１８ＣＨ３は、野生型ＩｇＡヒンジ、ならびにカルボキシ末端で１８個のアミノ酸の切断のあるＣＨ２領域およびＣＨ３領域を含む。
【００６６】
本発明の結合性分子は、結合性分子の活性を向上させる別のタンパク質からの、天然の、または操作された細胞外ドメインを含んでもよいことが企図される。一実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ１５４およびＣＴＬＡ４からなる群から選択される。
【００６７】
本発明の一態様では、ＣＤ２０特異的結合性分子を、薬剤組成物として投与する。ＣＤ２０特異的結合性分子を、ヒトまたは試験動物に投与するためには、１つまたは複数の薬学的に許容できる担体を含む組成物に結合性分子を配合することが好ましい。「薬学的に、または薬理学的に許容できる」の句は、以下に記載するような、当技術分野ではよく知られている経路を用いて投与する場合に、アレルギー性の、または他の有害な反応を生成しない分子の実在物および組成物を意味する。「薬学的に許容できる担体」には、あらゆる、および全ての臨床上有用な溶剤、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張化剤、ならびに吸収遅延剤などが含まれる。
【００６８】
さらに、化合物は、水または通常の有機溶剤とともに溶媒和化合物を形成することができる。このような溶媒和化合物も、企図されている。
【００６９】
ＣＤ２０特異的結合性分子の組成物を、経口で、局所に、経皮的に、非経口で、吸入スプレーにより、膣から、直腸から、または頭蓋内注射により投与することができる。本明細書で用いられる非経口の語には、皮下注射、静脈内、筋肉内、大槽内の注射、または注入の技術が含まれる。静脈内、皮内、筋肉内、乳房内、腹腔内、くも膜下腔内、眼球後、肺内の注射、および  または特定な部位における外科的埋め込みによる投与も企図される。一般的には、組成物には実質的に、パイロジェン、および受容者に有害でありえる他の不純物がない。注射、特に静脈内注射が好ましい。
【００７０】
本発明の方法で用いられるＣＤ２０特異的結合性分子を含む、本発明の薬剤組成物は、投与経路に応じて薬学的に許容できる担体または添加物を含むことができる。このような担体または添加物の例には、水、薬学的に許容できる有機溶剤、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルデンプンナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイン、ゼラチン、寒天、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、薬学的に許容できる界面活性剤などが含まれる。用いられる添加物は、それだけには限定されないが、上記またはその組合せから、適宜、本発明の剤形に応じて選択される。
【００７１】
薬剤組成物の製剤は、選択される投与の経路に従って変化する（例えば、溶液剤、乳剤）。投与すべき抗体を含む好適な組成物を、生理学的に許容できるビヒクルまたは担体で調製することができる。溶液剤または乳剤に対して、適切な担体には、食塩水および緩衝の媒体を含む、例えば、水性またはアルコール性／水性の溶液、乳液、または懸濁液が含まれる。非経口のビヒクルには、塩化ナトリウム溶液、リンゲルのデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル、または不揮発性油が含まれ得る。静脈内のビヒクルには、様々な添加物、保存剤、または液体、栄養剤、電解質補充薬が含まれ得る。
【００７２】
様々な水性の担体、例えば、水、緩衝水、０．４％食塩水、０．３％グリシン、または水性懸濁液は、有効化合物を、水性懸濁液の製造に適する賦形剤との混合で含むことができる。このような賦形剤は、懸濁化剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、およびアラビアゴムであり；分散剤または湿潤剤は、天然に存在するホスファチド、例えば、レシチン、または酸化アルキレンと脂肪酸の縮合生成品、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、またはエチレンオキサイドと長鎖脂肪族アルコールの縮合生成品、例えば、ヘプタデカエチル−エネオキシセタノール（ｅｎｅｏｘｙｃｅｔａｎｏｌ）、またはエチレンオキサイドと脂肪酸およびヘキシトールに由来する部分エステルの縮合生成品、例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、またはエチレンオキサイドと脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来する部分エステルの縮合生成品、例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエートであってよい。水性懸濁液は、１つまたは複数の保存剤、例えば、エチル、またはｎ−プロピル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸も含むことができる。
【００７３】
ＣＤ２０特異的結合性分子の組成物は、貯蔵用に凍結乾燥し、使用前に適切な担体で再構成することができる。この技術は、従来の免疫グロブリンで有効であることが示されている。あらゆる適切な凍結乾燥および再構成の技術を使用することができる。当業者であれば、凍結乾燥および再構成により、様々な程度の抗体活性の損失がもたらされることがあり、使用レベルを調節して補償しなければならないことがあることを理解するであろう。
【００７４】
水を加えることにより水性懸濁液を調製するのに適する分散可能な粉末剤および顆粒剤は、有効化合物を、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤、および１つまたは複数の保存剤との混合物で提供する。適切な分散剤または湿潤剤、および懸濁化剤は、上記にすでに言及したものによって例示される。
【００７５】
これらの製剤における、ＣＤ２０特異的結合性分子の濃度は、幅広く変化することができ、例えば、重量で、約０．５％未満から、通常約１％または少なくとも約１％から、１５または２０％程度であり、選択される投与の特定の様式に従って、液体の体積、粘度などに主に基づいて選択される。したがって、非経口の注射のための典型的な薬剤組成物は、滅菌緩衝水１ｍｌ、および抗体５０ｍｇを含むように作成することができる。静脈注入用の典型的な組成物は、滅菌リンゲル溶液２５０ｍｌ、および抗体１５０ｍｇを含むように作成することができる。非経口投与可能な組成物を調製するための実際の方法は、当業者には知られており、または明らかであり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、第１５版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ペンシルベニア州（１９８０年）に、より詳しく記載されている。抗体の有効な投与量は、１投与あたり、体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇから１０００ｍｇの範囲内である。
【００７６】
薬剤組成物は、滅菌の、注射可能な、水性の、油性の、懸濁液、分散剤、または、滅菌の注射可能な溶液剤もしくは分散剤を即時調製するための滅菌の粉末剤の形態であってよい。懸濁液は、公知技術に従って、上記で述べたこれらの適切な分散剤または湿潤剤、および懸濁化剤を用いて配合することができる。滅菌の注射可能な調製物は、非毒性の非経口投与で許容される希釈剤または溶剤における滅菌の注射可能な溶液剤または懸濁剤、例えば、１，３−ブタンジオールにおける溶液としてであってもよい。担体は、例えば、水、エタノール、多価アルコール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、これらの適切な混合物、植物油、リンゲル溶液、および等張の塩化ナトリウム溶液を含んでいる、溶剤または分散媒体であってよい。さらに、滅菌の不揮発性油を、溶剤または懸濁化媒体として、従来的に使用する。この目的では、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含む、あらゆる無刺激の不揮発性油を使用することができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、注射可能な調製物における使用が見出される。
【００７７】
全ての場合において、この形態は滅菌でなければならず、容易な注射能力が存在する範囲で液体でなければならない。例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散剤の場合は必要とされる粒子サイズを維持することにより、および界面活性剤の使用により、適当な流動性を維持することができる。これは、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対抗して保存しなければならない。微生物の作用の防止は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどの様々な抗菌および抗真菌の薬剤によってもたらされ得る。多くの場合では、糖類または塩化ナトリウムなどの等張化剤を含むことが望ましい。注射可能な組成物の長期間の吸収は、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延する薬剤の組成物における使用によりもたらされ得る。
【００７８】
投与に有用な組成物を、その有用性を増大するために、取込みまたは吸収の増強剤とともに配合してもよい。このような増強剤には、例えば、サリチル酸塩、グリココール酸／リノール酸エステル、グリコレート（Ｇｌｙｃｈｏｌａｔｅ）、アプロチニン、バシトラシン、ＳＤＳ、カプレートなどが含まれる。例えば、Ｆｉｘ  （Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、８５巻、１２８２〜１２８５頁、１９９６年）、ならびにＯｌｉｙａｉおよびＳｔｅｌｌａ（Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．、３２巻、５２１〜５４４頁、１９９３年）を参照されたい。
【００７９】
さらに、本発明における使用が企図される組成物の親水性および疎水性の性質のバランスは良好であり、したがって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび特にｉｎ  ｖｉｖｏの両方で使用するためにその有用性を増強するが、そのようなバランスを欠く他の組成物は実質的に有用性が劣る。特に、本発明における使用が企図される組成物は、身体における吸収およびバイオアベイラビリティーを許す水性媒体において好適な程度の可溶性を有し、一方では組成物が推定上の作用部位まで細胞膜を横切るのを可能にする、脂質におけるある程度の溶解性も有している。したがって、企図される抗体組成物は、標的の抗原活性の部位に送達することができる場合には、最大限に有効である。
【００８０】
一態様では、本発明の方法は、薬剤組成物を投与するステップを含む。
【００８１】
本発明の方法は、それだけには限定されないが、注射、経口の消化、経鼻、局所、経皮、非経口、吸入スプレー、膣、または直腸投与を含む、哺乳動物の対象内に直接または間接的に治療を導入するための、あらゆる医学的に許容できる手段を用いて行われる。本明細書で用いられる非経口の語には、皮下、静脈内、筋肉内、および大槽内の注射、ならびにカテーテルまたは注入の技術が含まれる。皮膚内、乳房内、腹腔内、くも膜下腔内、眼球後、肺内の注射、および  または特定の部位における外科の埋め込みによる投与も企図される。
【００８２】
一実施形態では、処置を必要とする癌または罹患している組織の部位で、部位中への直接の注射により、または製剤を内部的に送達できる持続性の送達もしくは徐放のメカニズムにより、投与を行う。例えば、生分解性の微粒子もしくはカプセル、または組成物の持続性の送達の可能な他の生分解性のポリマーの立体配置（例えば、可溶性のポリペプチド、抗体、または小分子）が、癌の近くに埋め込まれる本発明の製剤に含まれ得る。
【００８３】
治療用組成物を、複数の部位で患者に送達してもよい。複数の投与は同時に与えてもよく、または連続した期間にわたって投与してもよい。
【００８４】
本発明には、結合性分子の組成物を第２の薬剤と組み合わせた投与も企図される。本発明が企図する第２の薬剤を、以下の段落に列挙する。
【００８５】
第２の薬剤は、Ｂ細胞関連分子であってよい。本発明が企図する他のＢ細胞関連分子には、ＣＤ２０ではないＢ細胞表面分子に結合する結合性分子が含まれる。Ｂ細胞関連分子には、それだけには限定されないが、ＣＤ１９（Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４、またはＬｅｕ−１２とも呼ばれる）、ＣＤ２１、ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２；Ｌｅｕ−１４、Ｂリンパ球細胞接着分子、またはＢＬ−ＣＡＭとも呼ばれる）、ＣＤ２３、ＣＤ３７、ＣＤ４０（Ｂ細胞表面抗原ＣＤ４０；腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー５、ＣＤ４０Ｌ受容体、またはＢｐ５０とも呼ばれる）、ＣＤ８０（Ｔリンパ球活性化抗原ＣＤ８０；活性化Ｂ７−１抗原、Ｂ７、Ｂ７−１、またはＢＢ１とも呼ばれる）、ＣＤ８６（Ｔリンパ球活性化抗原ＣＤ８６；活性化Ｂ７−２抗原、Ｂ７０、ＦＵＮ−１、またはＢＵ６３とも呼ばれる）、ＣＤ１３７（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９とも呼ばれる）、ＣＤ１５２（細胞傷害性Ｔリンパ細胞タンパク質４、またはＣＴＬＡ−４とも呼ばれる）、Ｌ６（腫瘍関連抗原Ｌ６；膜貫通４スーパーファミリーメンバー１、膜成分表面マーカー１、またはＭ３Ｓ１とも呼ばれる）、ＣＤ３０（リンパ球活性化抗原ＣＤ３０；腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー８、ＣＤ３０Ｌ受容体、またはＫｉ−１とも呼ばれる）、ＣＤ５０（細胞間接着分子３（ＩＣＡＭ３）、またはＩＣＡＭ−Ｒとも呼ばれる）、ＣＤ５４（細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ１）、またはメジャーグループライノウィルス受容体とも呼ばれる）、Ｂ７−Ｈ１（活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞、および骨髄細胞によって発現される免疫抑制受容体に対するリガンド、ＰＤ−Ｌ１とも呼ばれる；Ｄｏｎｇら、「Ｂ７−Ｈ１，ａ  ｔｈｉｒｄ  ｍｅｍｂｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂ７  ｆａｍｉｌｙ，ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ」、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、１９９９年、５巻、１３６５〜１３６９頁を参照されたい）、ＣＤ１３４（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ受容体、ＡＣＴ３５抗原、またはＴＡＸ−転写性活性化糖タンパク質１受容体とも呼ばれる）、４１ＢＢ（４−１ＢＢリガンド受容体、Ｔ細胞抗原４−１ＢＢ、またはＴ細胞抗原ＩＬＡ）、ＣＤ１５３（腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー８、ＣＤ３０リガンド、またはＣＤ３０−Ｌとも呼ばれる）、ＣＤ１５４（腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー５、ＴＮＦ−関連活性化タンパク質、ＴＲＡＰ、またはＴ細胞抗原Ｇｐ３９とも呼ばれる）、およびトール受容体が含まれる。上記の構築標的、および／または標的抗原のリストは、例示にすぎず、網羅的なものではない。
【００８６】
第２の薬剤として本発明が企図するサイトカインおよび成長因子には、制限なく、１つまたは複数のＴＮＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＦＮ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍｅｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、トロンボポエチン、幹細胞因子、およびエリスロポエチンが含まれる。本発明による薬剤組成物には、他の知られているアンジオポエチン、例えば、Ａｎｇ−１、Ａｎｇ−２、Ａｎｇ−４、Ａｎｇ−Ｙ、および／またはヒトアンジオポエチン様ポリペプチド、および／または血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）も含まれ得る。本発明の薬剤組成物で用いるための成長因子には、アンジオゲニン、骨形成タンパク質−１、骨形成タンパク質−２、骨形成タンパク質−３、骨形成タンパク質−４、骨形成タンパク質−５、骨形成タンパク質−６、骨形成タンパク質−７、骨形成タンパク質−８、骨形成タンパク質−９、骨形成タンパク質−１０、骨形成タンパク質−１１、骨形成タンパク質−１２、骨形成タンパク質−１３、骨形成タンパク質−１４、骨形成タンパク質−１５、骨形成タンパク質受容体−１Ａ、骨形成タンパク質受容体−１Ｂ、脳由来神経栄養因子、繊毛様神経栄養因子、繊毛様神経栄養因子受容体α、サイトカイン誘導性好中球走化性因子１、サイトカイン誘導性好中球走化性因子２α、サイトカイン誘導性好中球走化性因子２β、β内皮細胞成長因子、エンドセリン１、上皮成長因子、上皮由来好中球誘引物質、線維芽細胞成長因子４、線維芽細胞成長因子５、線維芽細胞成長因子６、線維芽細胞成長因子７、維芽細胞成長因子８、線維芽細胞成長因子８ｂ、線維芽細胞成長因子８ｃ、線維芽細胞成長因子９、線維芽細胞成長因子１０、線維芽細胞成長因子酸性、維芽細胞成長因子塩基性、グリア細胞系由来神経栄養因子受容体α１、グリア細胞系由来神経栄養因子受容体α２、成長関連タンパク質、成長関連タンパク質α、成長関連タンパク質β、成長関連タンパク質γ、ヘパリン結合性上皮成長因子、肝細胞増殖因子、肝細胞成長因子受容体、インスリン様成長因子Ｉ、インスリン様成長因子受容体、インスリン様成長因子ＩＩ、インスリン様成長因子結合性タンパク質、ケラチノサイト成長因子、白血病抑制因子、白血病抑制因子受容体α、神経成長因子、神経成長因子受容体、ニューロトロフィン−３、ニューロトロフィン−４、胎盤成長因子、胎盤成長因子２、血小板由来内皮細胞成長因子、血小板由来成長因子、血小板由来成長因子Ａ鎖、血小板由来成長因子ＡＡ、血小板由来成長因子ＡＢ、血小板由来成長因子Ｂ鎖、血小板由来成長因子ＢＢ、血小板由来成長因子受容体α、血小板由来成長因子受容体β、プレＢ細胞成長刺激因子、幹細胞因子、幹細胞因子受容体、トランスフォーミング成長因子α、トランスフォーミング成長因子β、トランスフォーミング成長因子β１、トランスフォーミング成長因子β１．２、トランスフォーミング成長因子β２、トランスフォーミング成長因子β３、トランスフォーミング成長因子β５、潜在性トランスフォーミング成長因子β１、トランスフォーミング成長因子β結合性タンパク質Ｉ、トランスフォーミング成長因子β結合性タンパク質ＩＩ、トランスフォーミング成長因子β結合性タンパク質ＩＩＩ、腫瘍壊死因子受容体タイプＩ、腫瘍壊死因子受容体タイプＩＩ、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体、血管内皮成長因子、ならびにこれらのキメラタンパク質、および生物学的または免疫学的に活性なこれらのフラグメントが含まれる。
【００８７】
第２の薬剤として企図される化学療法剤の例には、それだけには限定されないが、アルキル化剤、例えばナイトロジェンマスタード（例えば、メクロレタミン、シクロホスファミド、イフォスファミド、メルファラン、およびクロラムブシル）；ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、およびセムスチン（メチル−ＣＣＮＵ））；エチレンイミン、およびメチルメラミン（例えば、トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、トリエチレンチオホスホラミド（チオテパ）、およびヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ、アルトレタミン））；アルキルスルホン酸塩（例えば、ブスルファン）；およびトリアジン（例えば、ダカバジン（ｄａｃａｂａｚｉｎｅ）（ＤＴＩＣ））；代謝拮抗薬、例えば、葉酸類似体（例えば、メトトレキセート、トリメトレキセート、およびペメトレキセド（多標的抗葉酸薬））；ピリミジン類似体（例えば、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、フルオロデオキシウリジン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド（ＡｒａＣ、シタラビン）、５−アザシチジン、および２，２’−ジフルオロデオキシシチジン）；およびプリン類似体（例えば、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アザチオプリン、２’−デオキシコホルミシン（ｄｅｏｘｙｃｏｆｏｒｍｙｃｉｎ）（ペントスタチン）、エリスロヒドロキシノニルアデニン（ｅｒｙｔｈｒｏｈｙｄｒｏｘｙｎｏｎｙｌａｄｅｎｉｎｅ）（ＥＨＮＡ）、フルダラビンホスフェート、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン、２−ＣｄＡ））；１型トポイソメラーゼ阻害薬、例えば、カムホテシン（ｃａｍｐｈｏｔｈｅｃｉｎ）（ＣＰＴ）、トポテカン、およびイリノテカン；ある種の天然製品、例えば、エピポドフィロトキシン（ｅｐｉｐｏｄｏｐｈｙｌｏｔｏｘｉｎ）（例えば、エトポシド、およびテニポシド）；およびビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビン）；抗腫瘍抗生物質、例えば、アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン、およびブレオマイシン；ある種の放射線増感剤、例えば、５−ブロモデオジウリジン（ｂｒｏｍｏｄｅｏｚｙｕｒｉｄｉｎｅ）、５−ヨードデオキシウリジン、およびブロモデオキシシチジン、白金配位錯体、例えば、シスプラチン、カルボプラチン、およびオキサリプラチン；置換された尿素、例えば、ヒドロキシウレア；ならびにメチルヒドラジン誘導体、例えば、Ｎ−メチルヒドラジン（ＭＩＨ）、およびプロカルバジンが含まれる。
【００８８】
化学療法剤、放射線治療剤、および他の活性かつ補助的な薬剤の非限定的な例を、表１にも示す。
【００８９】
【化１−１】
2009502936.tif 000002
【００９０】
【化１−２】
2009502936.tif 000003
【００９１】
【化１−３】
2009502936.tif 000004
自己免疫疾患を処置するために本発明が企図する第２の薬剤は、免疫抑制剤と呼ばれており、処置する個体の免疫系を抑制またはマスクするように作用する。免疫抑制剤には、例えば、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、鎮痛薬、グルココルチコイド、関節炎を処置するための疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、または生体応答調節薬が含まれる。ＤＭＡＲＤの記載における成分は、ＲＡ以外の他の自己免疫疾患の多くの処置においても有用である。
【００９２】
例示のＮＳＡＩＤは、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、ＶｉｏｘｘおよびＣｅｌｅｂｒｅｘなどのＣｏｘ−２阻害薬、ならびにシアル酸付加からなる群から選択される。例示の鎮痛薬は、アセトアミノフェン、オキシコドン、プロポルキシフェン・ハイグロクロライド（ｐｒｏｐｏｒｘｙｐｈｅｎｅ  ｈｙｇｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）のトラマドールからなる群から選択される。例示のグルココルチコイドは、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、またはプレドニゾンからなる群から選択される。例示の生体応答調節薬は、それだけには限定されないが、細胞表面マーカーに対して向けられている分子（例えば、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＴＬＡ４など）、アバタセプト、ＴＮＡ拮抗薬などのサイトカイン阻害薬（例えば、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ）、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）、およびインフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ））、ケモカイン阻害薬、および接着分子阻害薬。生体応答修飾薬には、モノクローナル抗体、および組換えの形態の分子が含まれる。例示のＤＭＡＲＤには、それだけには限定されないが、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキセート、ペニシラミン、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、金［経口（オーラノフィン）および筋肉内］、ならびにミノサイクリンが含まれる。
【００９３】
ＣＤ２０特異的結合性分子の組成物および第２の薬剤を、同一の製剤で同時に投与してもよいことが企図される。あるいは、薬剤を別の製剤で同時に投与し、この場合、同時とは、相互に３０分以内に薬剤を投与することである。
【００９４】
別の一態様では、ＣＤ２０特異的結合性分子の組成物を投与する前に、第２の薬剤を投与する。投与の前とは、抗体での処置前１週間から抗体投与の３０分前の範囲内に第２の薬剤を投与することを意味する。第２の薬剤を、ＳＭＩＰ組成物の投与に引き続き投与することがさらに企図される。引き続き投与は、抗体処置の３０分後から、抗体投与の１週間後までの投与を記載することを意味する。
【００９５】
ＣＤ２０特異的結合性分子を、第２の薬剤と組み合わせて投与する場合、投与には、放射線治療薬または放射線治療の使用も含まれることがさらに企図され、この場合、第２の薬剤はサイトカインもしくは成長因子、または化学療法剤である。抗体組成物と組み合わせて投与する放射線治療は、処置する医師が判断して、かつ癌に対して処置する患者に典型的に投与される投与量で投与される。
【００９６】
所与の投与量におけるＣＤ２０特異的結合性分子の組成物の量は、治療を投与する個体のサイズ、および処置する障害の特徴に従って変化する。例示の処置では、約１ｍｇ／日、約５ｍｇ／日、約１０ｍｇ／日、約２０ｍｇ／日、約５０ｍｇ／日、約７５ｍｇ／日、約１００ｍｇ／日、約１５０ｍｇ／日、約２００ｍｇ／日、約２５０ｍｇ／日、約４００ｍｇ／日、約５００ｍｇ／日、約８００ｍｇ／日、約１０００ｍｇ／日、約１６００ｍｇ／日、または約２０００ｍｇ／日を投与することが必要であり得る。投与量は、患者の体重に基づいて、０．０１から５０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与してもよい。関連の一実施形態では、ＣＤ２０特異的結合性分子を、０．０１５から３０ｍｇ／ｋｇの投与量の範囲で投与してよい。さらなる一実施形態では、ＣＤ２０特異的結合性分子を、約０．０１５、約０．０５、約０．１５、約０．５、約１．５、約５、約１５、または約３０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与する。
【００９７】
最初に動物モデルにおける、次いで臨床試験における、標準の投与量−反応の研究により、特定の疾患および患者の集団に対する最適の投与量が明らかになっている。
【００９８】
ＣＤ２０特異的結合性分子の組成物の投与は、単一投与量で処置した後、Ｂ細胞の集団を少なくとも約２０％低下させ、または減少させる。一実施形態では、Ｂ細胞の集団は、少なくとも約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、または約１００％低下し、または減少する。Ｂ細胞の枯渇は、Ｂ細胞の絶対的な計数値が正常範囲の下限よりも低い低下と定義される。Ｂ細胞の回復は、Ｂ細胞の絶対的な計数値が以下のいずれか：１）対象のベースライン値の７０％、または２）正常範囲まで、の回復と定義される。
【００９９】
ＣＤ２０特異的結合性分子の投与は、特定のＢ細胞のサブセットにおけるアポトーシスの増強ももたらす。アポトーシスは、ＤＮＡのフラグメント化、細胞の収縮、細胞のフラグメント化、膜の小胞の形成、またはアネキシンＶ染色により評価して膜の脂質組成の変化により明らかになり、評価される、細胞のプログラムされた細胞死の誘発を意味する。
【０１００】
さらに、ＣＤ２０特異的結合性分子の投与は、処置する疾患または障害において望ましい臨床効果をもたらす。例えば、慢性関節リウマチに罹患している患者では、ＣＤ２０分子を投与すると、患者の状態を臨床的に著しい量で改善し［例えば、アメリカリウマチ学会  Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ（ＡＣＲ２０）］、かつ／または関節の圧痛および腫脹における２０％の改善、および３／５の残りのＡＣＲ測定値における２０％の改善を達成する（Ｆｅｌｓｏｎら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、１９９５年、３８巻、７２７〜３５頁）。ＣＤ２０特異的結合性分子を投与した後、ＲＡ患者における改善に対する生物学的測定値には、タンパク質またはＲＮＡレベルにより測定して、サイトカインレベルにおける変化の測定が含まれる。対象のサイトカインには、それだけには限定されないが、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、インターフェロン、Ｂｌｙｓ、およびＡＰＲＩＬが含まれる。サイトカインの変化は、Ｂ細胞数の低下または活性化したＴ細胞の低下によるものと思われる。ＲＡ患者では、ＣＤ２０特異的結合性分子を投与する前および後に、骨の代謝回転（骨の再吸収および侵食）に関連するマーカーを測定する。関連するマーカーには、それだけには限定されないが、アルカリホスファターゼ、オステオカルシン、コラーゲン破壊フラグメント、ヒドロキシプロリン、酒石酸塩抵抗性酸ホスファターゼ、およびＲＡＮＫリガンド（ＲＡＮＫＬ）が含まれる。ＲＡの改善に関連する他の表示には、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベル、赤血球沈降速度（ＥＳＲ）、リウマチ因子、ＣＣＰ（環状シトルリン化ペプチド）抗体の測定、および全身のＢ細胞レベルの評価、およびフローサイトメトリーによるリンパ球計数が含まれる。特異的な因子は、滑膜の生検からの滑膜におけるＢ細胞レベル、ＲＡＮＫＬおよび他の骨因子および上記に記載したサイトカインのレベルの評価を含め、ＲＡ患者の滑膜から測定することもできる。
【０１０１】
関連の一態様では、ＣＤ２０特異的結合性分子の他の疾患に対する投与の効果を、当技術分野では知られている標準に従って測定する。例えば、ＣＤ２０特異的結合性分子を投与されているクローン病の患者は、１５０単位で寛解であるクローン病活動性指数（ＣＤＡＩ）において、約５０から約７０単位の範囲で改善を達成し、（Ｓｉｍｏｎｉｓら、Ｓｃａｎｄ．Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔ．、１９９８年、３３巻、２８３〜８頁）。１５０または２００のスコアは正常とみなされるが、４５０のスコアは重症の疾患のスコアであるとみなされる。ＣＤ２０特異的結合性分子の投与が、炎症性腸疾患に罹患している個体において、核周囲の抗好中球抗体（ｐＡＮＣＡ）、および抗Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ抗体（ＡＳＣＡ）における低減をもたらすことがさらに望ましい。
【０１０２】
ＣＤ２０特異的結合性分子を投与している成年および若年の筋肉炎患者が、例えば、測定した６つのコアセットのうちの３セットが約２０％改善し、コア測定値の２セットを超えないものが約２５％悪化しているなど、評価のコアセットにおける改善を達成することがさらに企図される（Ｒｉｄｅｒら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、２００４年、５０巻、２２８１〜９０頁を参照されたい）。
【０１０３】
ＣＤ２０特異的結合性分子を投与しているＳＬＥ患者が、全身性ループス活動性指標（ＳＬＡＭ）またはＳＬＥ疾患活性指数（ＳＬＥＤＡＩ）スコアにおいて、少なくとも１ポイントの改善を達成することが、さらに企図される（Ｇｌａｄｍａｎら、Ｊ  Ｒｅｕｍａｔｏｌ、１９９４年、２１巻、１４６８〜７１頁）（Ｔａｎら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、１９８２年、２５巻、１２７１〜７頁）。＞５のＳＬＡＭスコア、または＞２のＳＬＥＤＡＩスコアは、臨床上活性な疾患とみなされる。処置に対する反応は、２つの疾患活動性測定値（ＳＬＥ疾患活性指数［ＳＬＥＤＡＩ］および全身性ループス活動性指標）、および２つの生活の質の尺度（患者のグローバルアセスメント、およびＫｒｕｐｐ  Ｆａｔｉｇｕｅ  Ｓｅｖｅｒｉｔｙ  Ｓｃａｌｅ）における改善または安定化と定義してよい（Ｐｅｔｒｉら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、２００４年、５０巻、２８５８〜６８頁）。ＣＤ２０特異的結合性分子をＳＬＥ患者に投与することで、抗二重鎖ＤＮＡ抗体における低減がもたらされることがさらに望ましい。あるいは、改善はＢｒｉｔｉｓｈ  Ｉｓｌｅｓ  Ｌｕｐｕｓ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｇｒｏｕｐ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ（ＢＩＬＡＧ）を用いて測定してもよい。
【０１０４】
ＣＤ２０特異的結合性分子を投与されている多発性硬化症の患者が、Ｋｕｒｔｚｋｅの拡大身体障害状態スケール（ＥＤＳＳ）上で少なくとも０．５の臨床スコアの改善（Ｋｕｒｔｚｋｅ，Ｆ．、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、１９８３年、３３巻、１４４４〜５２頁）、またはＫｕｒｔｚｋｅスケール上で少なくとも１．０の臨床的疾患の悪化における遅延を達成することがさらに企図される（Ｒｕｄｉｃｋら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ、１９９７年、４９頁、３５８〜６３頁）。
【０１０５】
ＣＤ２０特異的結合性分子を投与されているＩＩＭに罹患している患者が、特発性炎症性筋障害診断基準（ＩＩＭＣ）評価に示されている５つの診断基準のうち少なくとも１つにおける低減を達成することがさらに企図される（Ｍｉｌｌｅｒ，Ｆ．、上述）。ＣＤ２０特異的結合性分子をＩＩＭ患者に投与すると、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、乳酸デヒドロゲナーゼ、アルドラーゼ、Ｃ−反応性タンパク質、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、および抗核抗体（ＡＮＡ）、筋肉炎特異的抗体（ＭＳＡ）、および抽出可能な核抗原に対する抗体からなる群から選択されるＩＩＭ関連因子における低減がもたらされることがさらに企図される。あるいは、Ｒｉｄｅｒら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、２００４年、５０巻、２２８１〜９０頁に記載した６つの診断基準のうち３つを満たし、２つを超えない診断基準が悪化している患者は、本発明による処置の対象であり得る。
【０１０６】
未ださらなる一実施形態では、Ｂ細胞癌に罹患している患者にＣＤ２０特異的結合性分子を投与し、当技術分野ではよく知られ、一般的に用いられている臨床診断基準に基づき、ならびに、腫瘍サイズにおける低減、腫瘍数における低減、および／または疾患の症状における改善など、以下に示すように、ＣＤ２０特異的結合性分子に対する全体的な有益な反応を実証する。
【０１０７】
例えば、米国国立癌研究所（ＮＣＩ）は、癌のクラスのいくつかを、「低悪性度」および「高悪性度」のリンパ腫の臨床カテゴリーに分けている。低悪性度のリンパ腫には、濾胞性細胞のリンパ腫、細胞学の「グレード」に分けられる、びまん性小リンパ球性リンパ腫／慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、リンパ形質細胞性／ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、辺縁帯リンパ腫、およびヘアリー細胞白血病が含まれる。高悪性度のリンパ腫には、びまん性混合型および大細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫／びまん性非切れ込み小細胞性リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、およびＡＩＤＳ関連のリンパ腫が含まれる。いくつかの場合では、高悪性度および濾胞性のリンパ腫の場合は、国際予後指標（ＩＰＩ）を用いる。ＩＰＩで考慮すべき因子には、年齢（６０歳未満対６０歳を超える）、血清乳酸デヒドロゲナーゼ（正常レベル対上昇）、一般状態（０または１対２〜４）（以下の定義を参照されたい）、疾患の段階（ＩまたはＩＩ対ＩＩＩまたはＩＶ）、および関与する結節外の部位（０または１対２〜４）が含まれる。リスク因子が２またはそれを超える患者は、無再発性の見込みが５０％未満であり、全体的に５年生存する。
【０１０８】
高悪性度のＩＰＩにおける一般状態を、以下のように定義する：グレードの内容：０  完全に活動的であり、制限なく疾患前の動作を全て行うことができる；１  身体的に激しい活動が制限されるが、移動ができ、軽度または坐位の性質の作業、例えば、軽度の家事、オフィスワークを行うことができる；２  歩行ができ、セルフケアが全てできるが、覚醒時間の約５０％までおよびそれを超えて、いかなる活動も行うことができない；３  限られたセルフケアしかできず、覚醒時間の５０％を超えてベッドまたは椅子に拘束されている；４  完全に不自由であり、いかなるセルフケアも行うことができず、完全にベッドまたは椅子に拘束されている；ならびに５  死。（Ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  Ｆａｃｔｏｒｓ  Ｐｒｏｊｅｃｔ．Ａ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ．、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．、３２９巻、９８７〜９４頁、１９９３年を参照されたい）
典型的には、リンパ種のグレードは、低グレードのリンパ腫が結節疾患として通常表れ、しばしば低悪性度または成長が遅いという診断基準を用いて、臨床的に評価される。中程度および高グレードの疾患は、通常、大型の結節外の粗大な腫瘍のあるさらにより高悪性度の疾患として存在する。
【０１０９】
腫瘍、特に非ホジキンリンパ腫の進行を測定するために、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒの分類システムも用いる。このシステムでは、成人ＮＨＬのステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、およびＩＶを、患者が、明確な、全身性の症状を有する（Ｂ）か、または有さない（Ａ）かに応じて、ＡおよびＢのカテゴリーに分類することができる。以下の症状を有する患者に、Ｂの呼称を与える：診断６ヶ月前に原因不明の体重の１０％を超えた減少、３８℃を超える原因不明の熱、およびひどい寝汗。ステージの定義は以下の通りである：ステージＩ−単一のリンパ節領域の関与、または単一のリンパ節外の器官もしくは部位の局在的な関与。ステージＩＩ−横隔膜の同じ側における２つまたはそれを超えるリンパ節領域の関与、または横隔膜の同じ側における他のリンパ節の領域を有する、または有さない、単一の関連するリンパ節外の器官もしくは部位、およびその領域のリンパ節の局在的な関与。ステージＩＩＩ−リンパ節外の器官もしくは部位の局所的な関与、脾臓の関与、または両方に付随する可能性のある、横隔膜の両側におけるリンパ節領域の関与。ステージＩＶ−付随するリンパ節の関与、または遠位の（非所属）結節性の関与のある孤立したリンパ節外器官の関与を有するまたは有さない、播種性の（多巣性の）１つまたは複数のリンパ節外の部位の関与。さらなる詳細については、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  Ｆａｃｔｏｒｓ  Ｐｒｏｊｅｃｔ；  Ａ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  ｌｙｍｐｈｏｍａ、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊ．Ｍｅｄ．、（１９９３年）３２９巻、９８４〜９９４頁を参照されたい。
【０１１０】
一態様では、ＣＤ２０特異的結合性分子の治療効果は、反応のレベルによって決定され、例えば、部分的な反応とは、その最初のサイズの半分未満に腫瘍が低減することと定義される。完全な反応とは、臨床上の、または放射線医学の評価によって確認して、疾患が全て除去されたことと定義される。一実施形態では、単一投与量のＣＤ２０特異的結合性分子を投与するる個体は、処置に対して少なくとも部分的な反応を示す。
【０１１１】
国立癌研究所との共同研究で開発されたＮＨＬを評価するためのＣｈｅｓｏｎ診断基準によると（Ｃｈｅｓｏｎら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．、１９９９年、１７巻、１２４４頁；Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚら、Ａｎｎ  Ｏｎｃｏｌ．、２０００年、１１巻、３９９〜４０８頁）、リンパ節が全て正常のサイズに戻り、脾臓のサイズが退行し、骨髄にリンパ腫がないという、疾患および疾患に伴う症状の、検出可能な臨床上の、およびエックス線撮影の証拠全てに完全な消滅があった場合に、完全な反応が得られている。
【０１１２】
患者の疾患が完全な消滅を示し、脾臓のサイズが退行しているが、リンパ節が７５％を超えて退行し、骨髄が中程度である場合に、未確定の完全な反応が得られている。未確定の完全な反応は、部分的な反応に対する診断基準を満たし、かつ超えるものである。全体の反応は、前進腫瘍組織量における少なくとも５０パーセントの低減と定義される。
【０１１３】
同様の診断基準が、様々な他の形態の癌または過増殖性の疾患に対して開発されており、当業者であれば容易に入手できる。例えば、ＣＬＬを評価するための診断基準を記載している、Ｃｈｅｓｏｎら、Ｃｌｉｎ  Ａｄｖ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｏｎｃｏｌ．、２００６年、４巻、４〜５頁；ＡＭＬに対する診断基準を記載している、Ｃｈｅｓｏｎら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．、２００３年、２１巻、４６４２〜９頁；骨髄異形成症候群に対する診断基準を記載している、Ｃｈｅｓｏｎら、Ｂｌｏｏｄ、２０００年、９６巻、３６７１〜４頁を参照されたい。
【０１１４】
別の一態様では、Ｂ細胞癌を有する患者におけるＣＤ２０結合性分子に対する治療上の反応は、治療を受けていない患者に比べた疾患の進行の減速として明らかである。減速した疾患の進行、または上記の因子のあらゆるものの測定は、骨スキャン、ＣＴスキャン、ガリウムスキャン、リンパ管造影図、ＭＲＩ、ＰＥＴスキャン、超音波などを含めた当技術分野ではよく知られている技術を用いて行うことができる。
【０１１５】
関連の一態様では、ＣＤ２０結合性分子の処置の効力を決定するために、個体の生物学的試料におけるＢ細胞の数を測定する。一実施形態では、生物学的試料は、血液、腫瘍の生検、リンパ節、扁桃腺、骨髄、胸腺、および他のリンパ球に富む組織から選択される。リンパ球に富む組織は、それだけには限定されないが、リンパ節、および関連する器官（脾臓、骨髄、扁桃腺、胸腺、粘膜リンパ組織）、腫瘍および炎症領域を含む、特にリンパ細胞に富む組織である。
【０１１６】
伝統的な治療を、本発明の治療と組み合わせて投与する場合は、投薬を改変してもよいことも明らかである。
【０１１７】
一態様では、本発明の方法により処置する個体は、リツキシマブでの処置、および他のどんなＣＤ２０結合性分子での処置に対する反応よりも良好である、本明細書に記載するＣＤ２０結合性分子での処置に対する反応の改善を示す。応答の改善は、当技術分野ではよく知られており、本明細書に記載してある臨床診断基準の比較により評価される。例示の診断基準には、それだけには限定されないが、Ｂ細胞の枯渇の持続時間、全体のＢ細胞数における低減、生物学的試料におけるＢ細胞数における低減、腫瘍のサイズにおける低減、処置後に存在および／または出現する腫瘍の数における低減、ならびに患者自身および医師により、例えば、国際予後指標を用いて、評価した全体の反応の改善が含まれる。
【０１１８】
本発明の方法により処置する個体は、例えば、疾患の症状が再出現し、治療の薬物動態学および／または薬力学によりそのような再処置が得策となる場合に、再処置してもよいことがさらに企図される。一実施形態では、単一投与量のＣＤ２０結合性分子で処置する個体に、別の単一投与量のＣＤ２０特異的結合性分子を投与する。当技術分野における通常の技術に基づいて、医師は、例えば、疾患の症状の再出現、または再処置を必要とするレベルまでの個体のＢ細胞の回復に基づいて、再処置を指示する時期を特定することができる。他の測定、または臨床診断基準および結果のマーカーの例を、さらに本明細書に記載する。本発明の方法により処置する個体を、処置の維持計画上に配置することができ、維持計画では、個体を、ＣＤ２０特異的結合性分子の薬物動態学的／薬力学的特徴に基づいて、単一投与量のＣＤ２０特異的結合性分子で再処置する。このような維持処置を、典型的には、最初の単一投与量の約３ヶ月から約２年後のどこかで投与する。例示の薬力学的データには、それだけには限定されないが、本明細書に記載する疾患の改善に対する生物学的尺度、例えば、血清におけるＣＤ２０特異的結合性分子のレベル、疾患の評価における改善（例えば、ＡＣＲ、ＳＬＡＭ、またはＩＰＩによる）、サイトカインまたは表面マーカーの発現における変化、自己抗体のレベル、および腫瘍サイズにおける変化。本発明の方法による処置に対する個体の反応における相違は、単一投与量のＣＤ２０特異的結合性分子での再処置のタイミングにおいて、必要とする相違であることができると、当技術分野ではさらに理解される。
【０１１９】
さらなる一態様として、本発明は、本発明の方法を実践するためのその使用を容易にする様式で包装された、１つまたは複数の化合物または組成物を含むキットを含む。一実施形態では、そのようなキットは、本方法を実践する上で化合物または組成物の使用を記載するラベルが容器に貼付され、または包装に含まれている、密封されたボトルまたは容器などの入れ物に包装されている、本明細書に記載するＣＤ２０特異的結合性分子の化合物または組成物（例えば、ＣＤ２０特異的結合性分子を単独で、または第２の薬剤と組み合わせて含む組成物）を含む。化合物または組成物が、単位投与量形態で包装されているのが好ましい。キットは、さらに、組成物を特定の投与経路に従って投与するのに、またはスクリーニングアッセイを実践するのに適する装置をさらに含んでもよい。キットが、抗体組成物の使用を記載するラベルを含むのが好ましい。
【０１２０】
本発明は、製造品も含む。このような製造品は、少なくとも１つのＣＤ２０特異的結合性分子を、任意選択で薬剤上の担体または希釈剤と一緒に、かつ本発明によるＣＤ２０特異的ＳＭＩＰの使用の方法を記載する少なくとも１つのラベルを含む。このような製造品は、任意選択で、投与のための第２の薬剤を少なくとも１つ、ＣＤ２０特異的ＳＭＩＰと関連付けて含むこともある。
【０１２１】
本発明は、Ｂ細胞の異常活性を阻害または防止するための、あるいはＢ細胞の異常活性を特徴とし、もしくはそれによって媒介される、対象における疾患、状態、もしくは障害の処置、または予防のための薬物の製造における、少なくとも１つのＣＤ２０特異的結合性分子を含む組成物の使用も必要とするものである。
【実施例】
【０１２２】
以下の実施例から、本発明のさらなる態様および詳細が明らかになるが、これらは限定的なものというよりも、説明的なものと企図される。実施例１では、ＣＤ２０特異的ＳＭＩＰの組換えの生成を記載する。実施例２では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＣＤ２０特異的ＳＭＩＰの活性を記載する。実施例３では、ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＢ細胞腫瘍系列に対する、ＣＤ２０特異的結合性分子の効果を記載する。実施例４では、非ヒトの霊長動物に対するＣＤ２０特異的ＳＭＩＰの単一投与量の投与を記載する。実施例５では、ヒトの患者に対するＣＤ２０特異的ＳＭＩＰの投与を記載する。実施例６では、特発性炎症性筋障害を処置するためのＣＤ２０特異的ＳＭＩＰの投与を記載する。実施例７では、慢性関節リウマチを有する患者を処置するためのＣＤ２０特異的ＳＭＩＰの投与を記載する。実施例８では、慢性関節リウマチ患者に対するＣＤ２０特異的ＳＭＩＰの投与の臨床上の結果を記載する。
【０１２３】
（実施例１）
ＣＤ２０特異的結合性分子の組換えの生成
ＣＤ２０特異的ＳＭＩＰは、共同所有の米国特許公開第２００３／１３３９３９号、第２００３／０１１８５９２号、および第２００５／０１３６０４９号に記載されている。例示のＳＭＩＰである、ＴＲＵ−０１５を、下記に記載するようにさらなる試験のために選択した。
【０１２４】
ＴＲＵ−０１５は、ＣＤ２０抗原に結合する、組換えの（マウス／ヒト）単鎖のタンパク質である。結合性ドメインは、公的に入手可能であるヒトＣＤ２０抗体配列に基づくものであった。結合性ドメインは、エフェクタードメインである、ヒトＩｇＧ１のＣＨ２およびＣＨ３ドメインに、修飾されたＣＳＳヒンジ領域により連結している。ＴＲＵ−０１５は、溶液中でダイマーとして存在し、このダイマーの理論上の分子量は約１０６０００ドルトンである。
【０１２５】
ＴＲＵ−０１５は、配列番号２のアミノ酸１〜２３からの２ｅ１２リーダーペプチドのクローニング配列；配列番号２におけるポジション３４に反映される、可変領域における残基１１でのリジンからセリンへの（ＶＨＬ１１Ｓ）アミノ酸置換のある、２Ｈ７マウス抗ヒトＣＤ２０軽鎖可変領域；配列番号２における残基１２９で始まる、ａｓｐ−ｇｌｙ３−ｓｅｒ−（ｇｌｙ４ｓｅｒ）２リンカー；重鎖領域の末端のセリン残基を欠く、すなわち、ＶＴＶＳＳからＶＴＶＳへ変更した、２Ｈ７マウス抗ヒトＣＤ２０重鎖可変領域；（ＣＳＳ）配列を含む修飾されたヒンジ領域を含む、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域、ならびに野生型ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。ＴＲＵ−０１５のヌクレオチドおよびアミノ酸の配列を、それぞれ配列番号１および２に記載してある。
【０１２６】
ＴＲＵ−０１５を生成するＣＨＯ細胞を、独自に開発した培地を用いて、バイオリアクターで培養した。ＴＲＵ−０１５を、ウイルス低減フィルターを含む、一連のクロマトグラフィーおよびろ過のステップを用いて精製した。次いで、材料を濃縮し、リン酸ナトリウム２０ｍＭおよびショ糖２４０ｍＭと配合し、ｐＨ６．０とした。組成物をろ過してから、１０ｍｇ／ｍＬの濃度でガラスバイアル中に充填する。各ガラスバイアルは、ＴＲＵ−０１５  ５ｍＬを含む（５０ｍｇ／バイアル）。
剤形および投与
ＴＲＵ−０１５は、リン酸ナトリウム２０ｍＭおよびショ糖２４０ｍＭを含みｐＨ６．０の、滅菌の、保存剤を含まない液体製剤に、ＴＲＵ−０１５  ５０ｍｇを含む（５ｍＬ［１０ｍｇ／ｍＬ］）、単回使用の、ガラスバイアルで供給される。ＴＲＵ−０１５は、静脈内（ＩＶ）注入として投与される。投薬は、体重により行われる（ｍｇ／ｋｇ）。ＴＲＵ−０１５のバイアルは、使用するまで−２０℃で凍結して貯蔵する。解凍後は、バイアルを速やかに使用し、または２から８℃で貯蔵する。
【０１２７】
（実施例２）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＣＤ２０特異的結合性分子の活性
ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＣＤ２０特異的ＳＭＩＰの有効性を評価するために、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性、およびアポトーシス活性などの、細胞特異的な活性に対する、投与のｉｎ  ｖｉｔｒｏ効果を最初に測定した。
抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性
ＴＲＵ−０１５のＡＤＣＣ活性を、Ｂ細胞標的（ＢＪＡＢ  Ｂリンパ腫細胞系）に対して、様々な投与量のＴＲＵ−０１５またはリツキシマブを用いて評価した。新鮮ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ、ＮＫ細胞を含むが好中球を含まない）に対するＴＲＵ−０１５の効果も測定した。２人の異なるドナーからのエフェクター細胞は、０．５および２．５μｇ／ｍｌの両方で約３０％の溶解を示した（図３）。このアッセイでは、ＴＲＵ−０１５は、ＡＤＣＣによりＣＤ２０＋標的細胞の溶解を誘発するその能力において、リツキシマブと匹敵していた。ＴＲＵ−０１５に類似するが、エフェクター領域における残基３３１にプロリンからセリンへの突然変異を有する（Ｐｒｏ３３１Ｓｅｒ）ＣＤ２０結合性分子はＡＤＣＣ活性を示すが、残基２３８にプロリンからセリンへの突然変異を有する構築物（Ｐｒｏ２３８Ｓｅｒ）はＡＤＣＣ活性はゼロである。
ＴＲＵ−０１５の補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性
補体の活性化は、リツキシマブとのインフュージョン反応と関連することが報告されている（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｋｏｌｋ、Ｂｒ．Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ．、２００１年、１１５巻、８０７〜１１頁）。さらに、慢性関節リウマチなどの慢性炎症性疾患における疾患の活動性は、補体の活性化に関連していると思われる。したがって、これらの問題に取り組むために、ＴＲＵ−０１５におけるＣＤＣ活性を減弱した。ＴＲＵ−０１５のＣＤＣ減弱のレベルを評価するために、ＣＤＣ活性を評価し、リツキシマブの活性と比較した。
【０１２８】
補体依存性細胞傷害は、ＴＲＵ−０１５が標的抗原であるＣＤ２０に結合している場合に、ＴＲＵ−０１５のＣＨ２ドメインに対する、補体カスケードの第一の構成成分の成分であるＣ１ｑの結合により開始する。ＣＤＣ活性を評価するために、ＴＲＵ−０１５を、ウサギの補体の存在下で、ＷＩＬ２−Ｓ細胞とインキュベートした［Ｄｙｎａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、Ｂｒｏｗｎ  Ｄｅｅｒ，ＷＩ］（Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．、１９９７年、２０２巻、１６３〜７１頁）。この実験は、ヒト血清およびヒト補体（Ｃ１ｑ）（Ｑｕｉｄｅｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、カリフォルニア州）を用いて行ってもよい。
【０１２９】
ＴＲＵ−０１５は、投与量依存の様式でＷＩＬ２−Ｓ細胞の死滅を媒介し、１μｇ／ｍｌでは約３０％の溶解、１０μｇ／ｍｌでは５０％の溶解、１μｇ／ｍｌでは約６５％の溶解を示したが、対照のタンパク質（ヒトＩｇＧ）はこれらの細胞でＣＤＣを媒介することができなかった。ＷＩＬ２−ｓ細胞に対するＴＲＵ−０１５の細胞傷害性の効果は補体依存性であった。というのはＴＲＵ−０１５は補体の非存在下（培地のみ）では、細胞傷害活性を示さなかったからである。これらの結果は、補体経路の補充は、それによりＴＲＵ−０１５が細胞傷害性を示す別のメカニズムであることを示している。しかし、リツキシマブと比べると、ＴＲＵ−０１５は、ＣＤＣによるＣＤ２０＋標的細胞の相対的な枯渇において、１０から１００倍活性が劣っており、ＴＲＵ−０１５はＣＤＣにより細胞を溶解するその能力が上首尾に減弱されることを示していた。それとは反対に、ＴＲＵ−０１５に類似しているが、エフェクター領域における残基３３１にプロリンからセリンへの突然変異を有する（Ｐ３３１Ｓ）ＣＤ２０結合性分子にはＣＤＣ活性がないことが示され、一方、残基２３８にプロリンからセリンへの突然変異を有する構築物（Ｐ２３８Ｓ）は、ＴＲＵ−０１５構築物に匹敵するＣＤＣ活性が示されている（図３）。
【０１３０】
これらのアッセイは、ＳＭＩＰ分子のエフェクター機能は、あるエフェクター機能を改善、維持、または欠失する様に分子の配列を変更することにより、修飾することができることを実証している。
ＴＲＵ−０１５のアポトーシス活性
ＴＲＵ−０１５およびリツキシマブを、ＣＤ２０＋Ｂ細胞リンパ腫系統（Ｒａｍｏｓ  Ｂ細胞）においてアポトーシスを誘発する能力について試験した。アポトーシスの誘発を、製造元のプロトコールに従ってフローサイトメトリーアッセイを使用することにより、市販のアッセイキット（ＢＤ／Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で供給されたアネキシンＶ／ヨウ化プロピジウムの結合により定量した。ＴＲＵ−０１５およびリツキシマブは、そのアポトーシス活性において類似しており、１０および２０μｇ／ｍｌの両方で約６０％の細胞の溶解を示した。
結合特異性
ラット脾細胞、マウス脾細胞、サル末梢血、およびＣＤ２０発現性ヒトＢ細胞リンパ腫細胞系ＷＩＬ２−Ｓに対するＴＲＵ−０１５結合の特異性を、ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｅｒフローサイトメトリー（ＢＤ／Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で評価した。ヒトＷＩＬ２−Ｓ細胞およびサル末梢血上でＴＲＵ−０１５に高い結合親和性が観察されたが、ラットまたはマウス脾細胞の場合はＴＲＵ−０１５の特異的な結合は検出されなかった。ヒト、マウス、およびラットのＢ細胞マーカーに直接ＦＩＴＣ連結した抗体を、この実験に対する対照として用いた。Ｂ細胞表面分子に対する市販の抗体で染色した場合に、細胞標本の３つ全てに、特異的なＢ細胞の結合が観察された。この結果を以下の表１にまとめ、染色した細胞のポジティブのパーセントとして表す。
【０１３１】
【表１】
2009502936.tif 000005
これらの結果は、ＴＲＵ−０１５は、ＣＤ２０に向けられたモノクローナル抗体であるリツキシマブに比べて、ＡＤＣＣによりＣＤ２０＋標的細胞の溶解を誘発するその能力において、少なくとも同等である、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの著しいエフェクター機能を実証したことを示している。これとは対照的に、ＴＲＵ−０１５は、リツキシマブに比べて、ＣＤＣによりＣＤ２０＋標的細胞の相対的な枯渇において、１０から１００倍活性が劣っていた。フローサイトメトリーアッセイでは、ＴＲＵ−０１５およびリツキシマブは、アポトーシス活性において類似していた。
【０１３２】
（実施例３）
ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＢ細胞腫瘍系統に対するＣＤ２０特異的結合性分子の効果
リツキシマブに比べて、ＴＲＵ−０１５は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＡＤＣＣによるＣＤ２０＋標的細胞の溶解を誘発する能力において少なくとも同等である、著しいエフェクター機能を実証している。ＴＲＵ−０１５は、ＣＤＣによりＣＤ２０＋標的細胞を死滅させる点では、リツキシマブほど強力ではなく、アポトーシス活性ではリツキシマブと類似する。ＴＲＵ−０１５は、マウスまたはラットのＣＤ２０に結合せず、したがってＴＲＵ−０１５の活性は、マウスの試験をヒトの細胞系で実施することを必要としている。
【０１３３】
ヒト細胞に対するＴＲＵ−０１５の活性をさらに確立するために、Ｒａｍｏｓ細胞系（バーキットリンパ腫に由来するヒトＢリンパ芽球腫細胞系）を用いて、確立されたヒトＣＤ２０発現性腫瘍の成長を阻害するＴＲＵ−０１５の能力を試験した。
【０１３４】
メス胸腺欠損ヌードマウスに、ヒトＣＤ２０発現性Ｒａｍｏｓ腫瘍を埋め込んだ。埋め込み８日後、マウスを腫瘍体積の等しいもので群に選別し（１群あたりｎ＝６〜８）、０、２、４、６、および８日目に、対照としてヒトＩｇＧ（１００μｇ）、またはＴＲＵ−０１５もしくはリツキシマブ（１００μｇ）を静脈注射した。腫瘍体積の平均群は３７０ｍｍ３であった。腫瘍を３回／週測定し、腫瘍体積を計算した。
【０１３５】
確立されたＲａｍｏｓ腫瘍異種移植片を有するマウスにＴＲＵ−０１５を投与すると、リツキシマブおよび対照で処置した動物に比べて、腫瘍体積における低減および生存時間の改善がもたらされた。ＴＲＵ−０１５を投与したマウスのうち、５０％がその腫瘍の完全な退行を達成し、生存は９０日以上であった。リツキシマブ群におけるマウスには、完全に腫瘍を回復できたものはなかった。ＴＲＵ−０１５処置動物の生存時間の中央値は、リツキシマブおよび対照処置動物に対するそれぞれ１１日および８日に比べて、６４．５日であった。
【０１３６】
増加数の試験動物を用いたさらなる実験では、さらなる統計上有意な結果がもたらされた。１群あたりに用いるマウスの総数をｎ＝４０〜４４匹に増大し、生存時間の平均および腫瘍サイズにおける変化を計算した。データセットの増大に対する生存率は、ＴＲＵ−０１５処置動物では９０日に、リツキシマブ処置マウスでは約５０日に改善した。ベースラインの腫瘍サイズの平均は２３１ｍｍ３であった。これらの動物における腫瘍の存在の分析により、ＴＲＵ−０１５マウスの約５０％は９０日間腫瘍フリーに留まり、リツキシマブまたは対照の処置を与えたマウスは腫瘍フリーではなかったことが示された。
【０１３７】
リツキシマブによる死滅に抵抗性を示したＢ細胞系統をマウスに埋め込むことにより、さらなる実験を行った。胸腺欠損のヌードマウスに、リツキシマブによる死滅に抵抗性であるＤａｕｄｉ腫瘍細胞を５×１０６個埋め込み、マウスに腫瘍を発症させた。埋め込み７日後、マウスを群に分け、０、２、４、６、および８日目に、ＴＲＵ−０１５（１００μｇ）、リツキシマブ（１００μｇ）、対照のＨｕＩｇＧ（１００μｇ）、またはＰＢＳで処置を与えた。３０、３００、および１０００μｇ／投与量の投与量を用いて、投与量の試験も行った。腫瘍を３回／週測定し、腫瘍体積を計算した。
【０１３８】
確立されたＤａｕｄｉ腫瘍異種移植片を有するマウスにＴＲＵ−０１５を投与すると、リツキシマブおよび対照で処置した動物に比べて、腫瘍体積における低減、および生存時間の改善がもたらされた。１０００μｇの投与量のＴＲＵ−０１５を投与したマウスは、埋め込み３０日後に約８５％の生存率を示し、４０日までに約６５％に低減した。１投与量あたりＴＲＵ−０１５  ３００μｇを投与したマウスは、４０日目に８５％の生存率を示し、ＴＲＵ−０１５／投与量  １００μｇを投与した動物の生存率は２５日までに約６５％であり、生存時間の中央値（ＭＳＴ）は約３６日を示した。ＴＲＵ−０１５  １０００および３００μｇを投与した群に対しては、５０％を超えた群メンバーがアッセイを行ったよりも長く生存したため、ＭＳＴは計算できなかった。ＴＲＵ−０１５  ３０μｇを投与したマウスは、２５日目に約２５％の生存率を示し、ＭＳＴは２３日を示した。
【０１３９】
リツキシマブで処置した動物は、ＴＲＵ−０１５を投与した動物に比べて低い生存率を示した。リツキシマブ１０００μｇ／投与量を投与した動物の生存率は、２０日目に約６５％であり、４０日目に２５％に低減し、ＭＳＴは２４日であった。リツキシマブ３００μｇ／投与量を投与したマウスは、２０日目に５０％の生存率を示し、４０日目までに２５％に低減し、ＭＳＴは２４日であった。リツキシマブ１００μｇまたはリツキシマブ３０μｇ／投与量を投与したマウスは、両方とも２０日目に２５％の生存率を示し、これは４０日目までに約１０％の生存に低減し、生存時間の中央値は、それぞれ１７および１６日を示した。
【０１４０】
このように、ＴＲＵ−０１５抗ＣＤ２０ＳＭＩＰは、抗ＣＤ２０キメラ抗体であるリツキシマブによる死滅に抵抗性であるＢ細胞腫瘍の死滅に効果的であり、ＴＲＵ−０１５処置動物の生存時間を有意に延長する。
【０１４１】
それによってＣＤ２０がこの効果を発揮する可能性のあるメカニズムを決定するために、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の枯渇実験を、Ｒａｍｏｓ腫瘍移植片を投与したマウスに対して行った。上記に記載したように、マウスにＲａｍｏｓ腫瘍系統を埋め込み、０、４、８、および１２日目に、全てのマウスにＮＫ細胞を枯渇するための抗Ａｓｉａｌｏ  ＧＭ１  ＩＶ抗体（ＷＡＫＯ、Ｄａｌｌａｓ、テキサス州）を投与した。次いで、マウスに、ＴＲＵ−０１５、リツキシマブ、またはＨｕＩｇＧＩＶのいずれかを、１、３、５、７、および９日目に投与した。
【０１４２】
ＴＲＵ−０１５を単独で投与したマウスは、１５日目に５０％の生存率を示し、３５日目に約３０％に低減したが、一方、ＴＲＵ−０１５およびＮＫ細胞枯渇性抗体を投与したマウスは、１５日目に生存率約４０％を示し、２５日目に約２０％に低減した。リツキシマブ単独を投与した動物は、１５日目に生存率約５０％を示し、２７日目までに１０％に低減し、一方リツキシマブ＋ＮＫ細胞枯渇性抗体を投与したマウスは、１５日目に生存率３０％を示し、２０日目に１０％に低減した。
【０１４３】
これらの結果は、ＮＫ細胞の枯渇により、Ｂ細胞枯渇性処置の有効性は低減するので、ＮＫ細胞は、ＴＲＵ−０１５およびリツキシマブ両方の作用機序で何かの役割を果たしている可能性があることを実証している。
【０１４４】
（実施例４）
ＣＤ２０特異的結合性分子の単一投与量の非ヒトの霊長動物への投与
上記に記載した結果は、ＴＲＵ−０１５は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＢ細胞の枯渇に有効であることを指摘している。ｉｎ  ｖｉｖｏでのＢ細胞の枯渇の効果を決定するために、カニクイザルに、ＣＤ２０特異的ＳＭＩＰを注入し、薬剤の薬物動態学および薬力学を測定した。
【０１４５】
最初の処置レジメンでは、カニクイザル（ｎ＝２／群）に、単一ＩＶ投与量の１０ｍｇ／ｋｇのＴＲＵ−０１５、またはＴＲＵ−０１５の他の前臨床バージョンを投与した。末梢血におけるＢ細胞のパーセント値を、ＣＤ２０＋およびＣＤ４０＋細胞を追跡するために非最適化したフローサイトメトリーのプロトコールを利用して決定した。６匹の動物全てが、３５日目までに末梢Ｂ細胞の著しい枯渇、および実質的な回復を示した。
【０１４６】
ｉｎ  ｖｉｖｏでＴＲＵ−０１５の薬物動態学（ＰＫ）および薬力学（ＰＤ）を測定するために、サルに、単一投与量の１０ｍｇ／ｋｇ  ＴＲＵ−０１５、別の前臨床のＣＤ２０に向けられた候補物質、リツキシマブ、またはＰＢＳのいずれかをＩＶ投与した（ｎ＝３／群）。ベースライン時に、次いで、投与後１および３日目、１２日間毎週、およびさらなる１２週間の間２週間ごとに末梢血を採取して、フローサイトメトリーにより分析した。この試験では、末梢血からのＢリンパ球のサブセットの速やかな枯渇が、ＴＲＵ−０１５およびリツキシマブで観察された。ＣＤ４０＋、またはＣＤ２０＋細胞の回復により測定して、ＴＲＵ−０１５でのＢ細胞の回復は、リツキシマブと匹敵していた。しかし、回復した細胞は、ＣＤ２０の発現が劣っていた。ＴＲＵ−０１５投与に関連する有害安全事象は、処置の間は起こらなかった。
【０１４７】
次いで、投与量範囲の試験を行い、１８頭のカニクイザル（ｎ＝３／群）に単一投与量のＴＲＵ−０１５（０．０１、０．１、１．０、もしくは１０ｍｇ／ｋｇ）、またはリツキシマブ（１０ｍｇ／ｋｇ）、またはＰＢＳをＩＶ注射した。様々な時間点で末梢血試料を採取し、フローサイトメトリーにより分析した。反応および回復を評価するために調べたマーカーの中に、ＣＤ１９およびＣＤ２０があった。
【０１４８】
単一ＩＶ投与後、リツキシマブ群および高投与量のＴＲＵ−０１５群（１．０および１０ｍｇ／ｋｇ）は、循環Ｂ細胞において類似の初期反応をもたらす傾向があった。一般的に、末梢血におけるＢリンパ球サブセットのＣＤ１９＋およびＣＤ２０＋は、これら３つの処置群全てにおいて効果的に枯渇した。試験の結果を図１Ａに示す。
【０１４９】
Ｂ細胞の枯渇の経過のさらなる分析では、ＴＲＵ−０１５を投与した対象は、注入１００日後までベースラインレベルの約３０％のＢ細胞のレベルを表していた。枯渇は、２００日目までベースラインレベルの約５５％を維持し、一方、リツキシマブ処置群は２００日目にベースラインの約６０％のＢ細胞の枯渇を示した（図１Ｂ）。
【０１５０】
この投与量範囲試験の結果は、ＴＲＵ−０１５に対する反応は投与量依存的であったことを実証している。リツキシマブ群および１０ｍｇ／ｋｇＴＲＵ−０１５群は、循環Ｂ細胞において類似の反応を示し、１０ｍｇ／ｋｇ群におけるＢ細胞の枯渇のパターンは、先の処置にみられたパターンを反復するものであった。一般的に、両方とも、末梢血においてＢリンパ球のサブセットを枯渇するのに、等しく有効であった。より低投与量のＴＲＵ−０１５は、投与量反応を示し、１ｍｇ／ｋｇの投与量は、投与後のＢ細胞の枯渇をもたらしたが、より高投与量よりも速やかに回復し、０．１ｍｇ／ｋｇの投与量は、部分的な枯渇のみをもたらし、０．０１ｍｇ／ｋｇの投与量には明らかな効果はなかった。
【０１５１】
投薬処置におけるＰＫおよびＰＤ分析では、カニクイザルからの血清試料を、フローサイトメトリーベースのアッセイにより分析して、リツキシマブ１０ｍｇ／ｋｇ、またはＴＲＵ−０１５の、０．０１ｍｇ／ｋｇの考えを概略している１０、１、０．１百万ガロンの、単一ＩＶ投与（５分にわたるゆっくりのボーラス）後の血漿濃度を決定した。投薬前、投与５および３０分後、投与４、２４、７２、および１６８時間後、ならびに試験１０、１４、２１、および２８日目に血清試料を収集した。１０ｍｇ／ｋｇ、および１ｍｇ／ｋｇの投与量のＴＲＵ−０１５の血清濃度対時間を、１０ｍｇ／ｋｇのリツキシマブと比較した。ＴＲＵ−０１５およびリツキシマブは、類似した血漿濃度のレベルを示し、最高レベルでは、ＴＲＵ−０１５は時間ゼロで約４００ｍｇ／ｍｌであり、一方、リツキシマブは約４５０ｍｇ／ｍｌであった。２つの化合物の血漿濃度は、投与７２時間後の約１００ｍｇ／ｍｌまで類似して低下した。リツキシマブもＴＲＵ−０１５（１０ｍｇ／ｋｇの投与量）も、投与１６８時間後に、血漿で依然として検出可能であった。ＴＲＵ−０１５のより低い投与量では、化合物は、血漿で中程度に検出可能であった。表２は、この処置レジメンからのＰＫパラメータを示している。
【０１５２】
【表２】
2009502936.tif 000006
このように、この試験は、ＴＲＵ−０１５の効果は投与量依存的であり、可逆的であり、再現性があることを実証している。
【０１５３】
（実施例５）
ＴＲＵ−０１５のヒト患者への投与
ヒト対象におけるＴＲＵ−０１５のＰＫおよびＰＤを評価するために、慢性関節リウマチを有する４０名の個体を、０．０１５から１５ｍｇ／ｋｇまでの範囲の、単一投与量のＴＲＵ−０１５で処置した。ＴＲＵ−０１５を、患者に単一の静脈投与量を、１５分から１２時間までの範囲の時間にわたって患者に投与した。患者には、以下の投与量を投与した：同齢集団１−０．０１５ｍｇ／ｋｇ、同齢集団２−０．０５ｍｇ／ｋｇ、同齢集団３−０．１５ｍｇ／ｋｇ、同齢集団４−０．５ｍｇ／ｋｇ、同齢集団５−１．５ｍｇ／ｋｇ、同齢集団６−５ｍｇ／ｋｇ、同齢集団７−１５ｍｇ／ｋｇ、および同齢集団８−５ｍｇ／ｋｇ。循環Ｂ細胞に対する影響を、ＴＲＵ−０１５注入後様々な時間点で、フローサイトメトリーにより末梢血におけるＣＤ１９＋細胞を測定することにより決定した。Ｂリンパ球の枯渇が、Ｂリンパ球の減少の度合いおよび持続時間の両方によって表して、投与量に関連する様式で、これらの患者で実証された（図２）。ＴＲＵ−０１５の単一投与量を、それぞれ５ｍｇ／ｋｇおよび１５ｍｇ／ｋｇ投与した同齢集団６および７における患者は、注入４週間後までに殆ど完全なＢ細胞の枯渇を実証したことを、結果は示していた。１．５ｍｇ／ｋｇのＴＲＵ−０１５を投与した患者では、４週間の期間にわたってＢ細胞の回復は１５％未満を示し、一方、０．５ｍｇ／ｋｇを投与した患者では、４週間の終わりまでにベースラインレベルの約４５％のＢ細胞を示した。これらの試験からはＰＫのデータは入手できなかった。
【０１５４】
これらの結果は、ＴＲＵ−０１５をヒト対象に投与量の範囲を超えて投与すると、このような処置を必要としている患者におけるＢ細胞の集団を効果的に減少させることを示している。
【０１５５】
（実施例６）
特発性炎症性筋障害におけるＣＤ２０特異的ＳＭＩＰの処置
特発性炎症性筋障害（ＩＩＭ）の現在のマネジメントには、高投与量のコルチコステロイド、典型的には少なくとも１ｍｇ／ｋｇ／日の投与量のプレドニゾンでの初期治療が伴われる。予後因子の芳しくない者、またはコルチコステロイドに対して抵抗性の者のいずれかに対しては、コルチコステロイドと併用してメトトレキセートおよびアザチオプリンがしばしば用いられる。静脈内の免疫グロブリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、タクロリムス、ミコフェノール酸モフェチル、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）拮抗薬、クロラムブシル、および上記の組合せが用いられている。殆どの薬物が対照試験からのデータの支持なしに用いられている（Ｍｉｌｌｅｒ、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ａｌｌｉｅｄ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ：Ａ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ．、第１５版、１６１４頁、２００５年）。
【０１５６】
最近、Ｌｅｖｉｎｅ（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、２００５年、５２巻、６０１〜６０７頁）は、Ｂ細胞枯渇性薬剤であるリツキシマブでの処置は、６名のＤＭ患者の同齢集団における筋肉炎を改善したことを実証するデータを公開した。さらに、高度に難治性の多発性筋炎を有する患者がＢ細胞枯渇性治療で改善したという実例報告がある。
【０１５７】
ＣＤ２０特異的ＳＭＩＰのＩＩＭの進行に対する効果を調べるために、ヒト患者を例示のＳＭＩＰである、ＴＲＵ−０１５で処置し、疾患の経過、Ｂ細胞の枯渇、Ｂ細胞の回復、およびＣＤ２０特異的ＳＭＩＰ処置の他の効果について追跡した。
【０１５８】
一処置群における患者に、単一投与量の５ｍｇ／ｋｇの、プラセボまたはＴＲＵ−０１５のいずれかを投与した。第２の処置群における患者を、プラセボ、または５ｍｇ／ｋｇのＴＲＵ−０１５のいずれかの、２投与量を投与するように無作為化し、最初の投与量をベースライン時に、第２の投与量を７日目に投与した。第３の処置群における患者を、単一投与量の１５ｍｇ／ｋｇの、プラセボまたはＴＲＵ−０１５のいずれかを投与するように無作為化した。活動性の多発性筋炎（ＰＭ）または皮膚筋炎（ＤＭ）を有する少なくとも６名の対象を、各処置群に登録する。各群には、約４名の活動性−処置、および２名のプラセボ−処置の対象が含まれていた。
【０１５９】
対象を、最短の１２週間、評価した。Ｂ細胞の枯渇の証拠のある対象を、４週間ごとに評価して、疾患の活動性およびＢ細胞の回復をモニターした。Ｂ細胞の枯渇を、Ｂ細胞の絶対的な計数値が正常範囲の下限を下回った低減と定義する。Ｂ細胞の回復を、Ｂ細胞の絶対的な計数値が以下のいずれかまで戻ったときと定義する：１）対象のベースライン値の７０％、または２）正常範囲。
【０１６０】
ＣＤ２０特異的ＳＭＩＰを投与する前に、疾患のベースラインアセスメント、および他の健康パラメータを得る。ベースラインアセスメントには、同時の薬物療法、バイタルサイン（血圧、脈拍、体温、および呼吸数）、標的とする理学的検査、手作業の筋力テスト、肺活量測定、対象のグローバルアセスメント／医師のグローバルアセスメント、ＨＡＱによる障害指数、筋肉炎活動性アセスメントツール（ＭＤＡＡＴ）、フローサイトメトリー、血液検査プロファイル（ＣＢＣと微分計数および血小板数）、尿検査、化学検査プロファイル（電解質、ＢＵＮ、クレアチニン、アルカリホスファターゼ、総タンパク、およびアルブミン）、ＬＦＴ（ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＬＤＨ）、筋肉酵素（ＣＰＫ、アルドラーゼ）、免疫グロブリン定量、遺伝子型解析用の血液試料、ならびに薬物濃度試験用、およびＴＲＵ−０１５に対する抗体試験用の血清試料の測定が含まれる。
【０１６１】
各対象を、ＴＲＵ−０１５またはプラセボを投薬する前に、メチルプレドニゾロン（例えば、ＳＯＬＵＭＥＤＲＯＬ（登録商標）１００ｍｇ  ＩＶ）、アセトアミノフェン、および抗ヒスタミン薬（例えば、ジフェンヒドラミン、ロラタジン、または類似の製品）で前投薬する。医師は、各対象を評価し、これら前投薬の好適な投与量を決定する。次いで、対象に、好適な投与量のＴＲＵ−０１５、またはプラセボを、ＩＶ注入により投与する。
【０１６２】
対象を、１、７、１４、２８、４７、５６、７０、および８４日目に、経過観察のアセスメントで評価する。対象を、８４日目を超えて、２８日間隔で、臨床的に好適とみなされるように追跡を続ける。少なくともＢ細胞が回復するまで、対象を追跡する。
【０１６３】
好適な量のＴＲＵ−０１５を、対象にＩＶ注入により投与する。ＴＲＵ−０１５の投薬は、体重による（ｍｇ／ｋｇ）。しかし、１１０ｋｇまたはそれを超える体重のあらゆる対象は、投与量を計算する目的で体重１１０ｋｇとみなされる。ＴＲＵ−０１５を、希釈剤（例えば、０．９％塩化ナトリウムＵＳＰ）とともに、ガラス製ＩＶボトルに調製する。化合物の注入を、１時間あたり２５ｍＬの速度で開始する。３０分後、毒性が観察されなかった場合は、速度を１時間あたり５０ｍＬまで上昇させてもよい。速度は、耐えられる限り２０〜３０分毎に、１時間あたり２５ｍＬ上昇させてもよい（１時間あたり２５０ｍＬを超えない）。
【０１６４】
１日目（投与１８〜２４時間後）、患者を以下の手順について評価する：同時の薬物治療、有害事象のアセスメント、バイタルサイン（血圧、脈拍、体温、および呼吸数）、標的とする理学的検査、フローサイトメトリー、および薬物濃度を試験するための血清。
【０１６５】
７日目（１週間）、患者を以下の手順について評価する：同時の薬物治療、有害事象のアセスメント、バイタルサイン、標的とする理学的検査、フローサイトメトリー、血液検査プロファイル（ＣＢＣと微分計数および血小板数）、尿検査、化学検査プロファイル（電解質、ＢＵＮ、クレアチニン、アルカリホスファターゼ、総タンパク、およびアルブミン）、ＬＦＴ（ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＬＤＨ）、筋肉酵素（ＣＰＫ、アルドラーゼ）、および薬物濃度を試験するための血清試料。
【０１６６】
１４日目（２週間）、２８日目（４週間）、４２日目（６週間）、５６日目（８週間）、７０日目（１０週間）、８４日目（１２週間）、およびその後４週間毎に、対象を以下の手順に対して評価する：同時の薬物療法、有害事象のアセスメント、バイタルサイン、標的とする理学的検査、手作業の筋力テスト、肺活量測定（８４日目のみ）、対象のグローバルアセスメント／医師のグローバルアセスメント、ＨＡＱによる障害指数、筋肉炎活動性アセスメントツール（ＭＤＡＡＴ）、および免疫グロブリン定量（２４週目のみ）。
【０１６７】
各々の以下の疾患の活動性の尺度を、処置の効果について評価する：医師のグローバル活動性アセスメント、対象のグローバル活動性アセスメント、筋力；各々をＫｅｎｄａｌｌの１０ポイントスケール上にスコアした、１５の筋肉群の評価（首の屈筋、三角筋、二頭筋、手首の伸筋、大殿筋、中殿筋、四頭筋、足首背屈筋）；身体機能：健康アセスメント質問表（ＨＡＱ）障害指数；筋肉関連酵素：ＣＰＫ、アルドラーゼ、ＡＳＴ、ＡＬＴ、ＬＤＨ；筋外活動性アセスメント：構造上の、皮膚性の、消化管の、関節の、心臓の、および肺の活動性を評価する、筋肉炎疾患活動性アセスメントツールからの６つの視覚的アナログスケールの複合。
【０１６８】
個体の結果の測定値のほかに、対象がＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｙｏｓｉｔｉｓ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｔｕｄｉｅｓ（ＩＭＡＣＳ）群により発表されている複合の反応診断基準を達成したか否かについて、対象を評価する（Ｒｉｄｅｒ、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．、２００４年、５０巻、２２８１〜９０頁）。これらの予備的な反応の診断基準は、レスポンダーを、６つのコアセットの測定値（上記に列挙した）のうち少なくとも３つにおいて２０％またはそれを超えた改善があり、診断基準の２つを超えないものが２５％またはそれを超えて悪化した個体として定義している。筋力が、２５％またはそれを超えて悪化した場合は、対象をレスポンダーとみなすことができない。
主要な臨床上の反応のアセスメント
臨床反応の主な評価は、筋肉酵素レベルの改善である。主要な有効性の分析は、ＴＲＵ−０１５処置した対象を、プラセボを投与した対象と比べて、１２週間を通してベースラインからの曲線下面積（ＡＵＣ）分析を用いて、ＣＰＫの改善の比較として測定されている。平均のＣＰＫおよびアルドラーゼのレベル、ＣＰＫおよびアルドラーゼにおける減少パーセント、ならびに意味ある改善（ベースラインから３０％の減少）までの時間も、評価する。
【０１６９】
二次的な評価は、ＴＲＵ−０１５処置対象を、プラセボを投与した対象と比べて、１２週間を通してベースラインからのＡＵＣ分析を用いて、手作業の筋力テストスコアの改善に基づき、上記に記載した１５の筋肉群の手作業の筋力テストにより決定した、筋肉強度における改善に基づくものである。さらに、平均の筋肉強度、筋肉強度におけるパーセント変化、および意味ある改善（ベースラインから１２％の改善）までの時間を、評価する。１５％改善までの時間も評価する。
【０１７０】
他の個体の各々の反応の尺度も評価する。平均の改善、パーセント変化、および意味ある改善までの時間を、医師および対象のグローバルアセスメント、ＨＡＱ障害指数、筋肉酵素（ＣＰＫおよびアルドラーゼ以外）、ならびに筋外活動性を用いて評価する。
【０１７１】
（実施例７）
慢性関節リウマチを有する患者におけるＣＤ２０特異的ＳＭＩＰの処置
ＲＡを有する患者では、Ｂ細胞は、抗原依存的なクローン増殖、親和性成熟、および形質細胞への分化を経験し、ＲＡの攻撃性に対してよく認識されている予後因子であるリウマチ因子を生成する。免疫複合体が媒介する炎症、および抗原の提示は、ＲＡの病原性において役割を果たすと考えられているＢ細胞のさらなる役割である。ヒトＲＡ滑膜−ＳＣＩＤマウスのキメラでの研究では、Ｔ細胞の活性化はＢ細胞依存的であることが示された（Ｔａｋｅｍｕｒａら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００１年、１６７巻、１０７２〜８０頁）。
【０１７２】
ＴＲＵ−０１５は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）により細胞の死滅を減弱することにより、炎症性疾患における使用に適応されてきた。しかし、強力なＡＤＣＣ活性は、ＴＲＵ−０１５において維持されており、ＴＲＵ−０１５に対する反応は、ＣＤ１６の多型性に対する感受性ほどではないと考えられる。
【０１７３】
ＣＤ２０特異的ＳＭＩＰの、慢性関節リウマチ患者に対する効果を評価するために、例示のＳＭＩＰであるＴＲＵ−０１５を用いて、２つの試験を行う。
【０１７４】
単一投与量の投与では、対象に、単一のＴＲＵ−０１５の静脈（ＩＶ）注入を、段階的に投与量を増大するやり方で、以下のレベルの１つで投与する（同齢１集団あたり対象４人以上）：０．０１５、０．０５、０．１５、０．５、１．５、５、１５、および３０ｍｇ／ｋｇ。活動性のＲＡは必要とされなかった。薬剤を、ＩＩＭを処置するために、上記に記載したように静脈から、同一の製剤、および類似の注入速度を用いて投与する。
【０１７５】
以下のデータを収集して、前臨床の評価を行う：同時の薬物療法、上記に記載した有害事象、標的とする理学的検査、バイタルサイン（血圧、脈拍、体温、および呼吸数）、フローサイトメトリー、血液検査プロファイル（ＣＢＣと微分計数および血小板数）、血液凝固プロファイル（ＰＴ／ＰＴＴ）、尿検査、化学検査プロファイル（電解質、ＢＵＮ、クレアチニン、ＡＳＴ、ＡＬＴ、アルカリホスファターゼ、総タンパク、およびアルブミン）、免疫グロブリン定量、リウマチ因子／ＣＣＰ抗体、遺伝子型解析、薬物濃度を評価するための、およびＴＲＵ−０１５に対する抗体試験用の血清試料、ならびに血清バンク、すなわち評価のための特定の日に対する血清試料のバンク（ｂａｎｋｉｎｇ）。
【０１７６】
１日目（投与１８〜２４時間後）、以下の、同時の薬物療法、有害事象のアセスメント、標的とする理学的検査、バイタルサイン、フローサイトメトリー、血液検査プロファイル、血液凝固プロファイル（ＰＴ／ＰＴＴ）、尿検査、化学検査プロファイル、薬物濃度を評価するための血清について患者を評価する。
【０１７７】
３日目（７２時間）、以下について患者を評価する：同時の薬物療法、有害事象のアセスメント、標的とする理学的検査、バイタルサイン、フローサイトメトリー、血液検査プロファイル（ＣＢＣと微分計数および血小板数）、薬物濃度を評価するための血清。
【０１７８】
７日目（１週間）、１４日目（２週間）、２１日目（３週間）、２８日目（４週間）、対象は以下の手順を完了している：同時の薬物療法、有害事象のアセスメント、標的とする理学的検査、バイタルサイン、フローサイトメトリー、血液検査プロファイル（ＣＢＣと微分計数および血小板数）、血液凝固プロファイル（ＰＴ／ＰＴＴ）［７日目、１４日目、および２８日目］、尿検査［７日目、１４日目、および２８日目］、化学検査プロファイル［７日目、１４日目、および２８日目］、免疫グロブリン定量［２８日目のみ］、リウマチ因子／ＣＣＰ抗体［１４日目および２８日目］、薬物濃度を評価するための［および２８日目のＴＲＵ−０１５に対する抗体を試験用の］血清試料、血清バンク［２８日目のみ］。
【０１７９】
Ｂ細胞の枯渇の証拠がある対象を、Ｂ細胞の回復の証拠があるまで、６週間、８週間、１０週間、および１２週間に上記に記載したアセスメントを継続する。評価には、上記の、およびそれに加えて、血液凝固プロファイル（ＰＴ／ＰＴＴ）［８週目および１２週目］、尿検査［８週目および１２週目］、化学検査プロファイル［８週目および１２週目］、免疫グロブリン定量［８週目および１２週目］、リウマチ因子／ＣＣＰ抗体［８週目および１２週目のみ］、薬物濃度を評価するための血清試料［６週目および８週目のみ］、ならびにＴＲＵ−０１５に対する抗体に対する試験［８週目のみ］、ならびに血清バンク［１２週目のみ］が含まれる。
【０１８０】
活動性疾患試験：第１の処置群における患者を、単一投与量の５ｍｇ／ｋｇの、プラセボまたはＴＲＵ−０１５のいずれかを投与するように無作為化する。第２の処置群における患者を、２投与量の、プラセボ、または２．５ｍｇ／ｋｇのＴＲＵ−０１５のいずれかを投与するように無作為化し、第１の投与量をベースライン時に、第２の投与量を７日目に投与する。第３の処置群における患者を、２投与量の、プラセボ、または７．５ｍｇ／ｋｇのＴＲＵ−０１５のいずれかに無作為化し、第１の投与量をベースライン時に、第２の投与量を７日目に投与する。第４の処置群における患者を、単一投与量の１５ｍｇ／ｋｇの、プラセボまたはＴＲＵ−０１５のいずれかを投与するように無作為化する。各処置群には、少なくとも６名の活動性ＰＭまたはＤＭの対象が登録されている。各群には、約１０名の活動性−処置、および２名のプラセボ−処置の対象が含まれている。
【０１８１】
上記で行った前臨床の評価の他に、活動性のＲＡを有する、この処置群における患者を以下について評価する：完全な関節のアセスメント（置換された関節は評価してはならない）、対象のグローバルアセスメント／医師のグローバルアセスメント、対象の疼痛のアセスメント、健康アセスメント質問票（ＨＡＱ）による障害指数、朝のこわばりの持続時間、ＣＲＰ、およびＥＳＲ。
【０１８２】
各患者を、上記実施例３に記載したように、メチルプレドニゾロン（例えば、ＳＯＬＵＭＥＤＲＯＬ  １００ｍｇ  ＩＶ）、アセトアミノフェン、および抗ヒスタミン薬で前投与する。
【０１８３】
対象を最短４週間モニターする。Ｂ細胞の枯渇が証明された対象を、その後２から４週毎にアセスメントして、Ｂ細胞の回復をモニターする。
【０１８４】
（実施例８）
ＴＲＵ−０１５で処置後の慢性関節リウマチ患者の臨床評価
ＲＡ患者の処置を、実施例７に記載した通りに行い、ＴＲＵ−０１５処置の効果を注入４２週後まで評価した。１群あたり少なくとも４名の患者に、ＴＲＵ−０１５を０．０１５、０．０５、０．１５、０．５、１．５、５、１５、または３０ｍｇ／ｋｇ（２×週間１５ｍｇ／ｋｇ処置）投与した。これらの患者群において、ＴＲＵ−０１５についての薬物動態学（ＰＫ）データを得た。表３は、ＴＲＵ−０１５を０．５、１．５、５、１５、または２×１５ｍｇ／ｋｇ投与した群に対する相対的なＰＫデータを示している。
【０１８５】
【表３】
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ＴＲＵ−０１５の消失半減期は、２８１〜４８４時間からの範囲であり、ＴＲＵ−０１５は、低投与量でもｉｎ  ｖｉｖｏでは半減期が長く、投与量の増大とともに増大することを示していた。さらに、ＴＲＵ−０１５投与に関連する、投与量制限毒性、または重症の有害事象はなかった。ＴＲＵ−０１５処置の有害副作用は殆ど報告されなかったが、頭痛（１３．５％）、上気道炎（１３．５％）、気管支炎（１０．８％）、末梢性浮腫（１３．５％）、そう痒症（１０％）、背痛（１３．５％）、関節痛（８．１％）、咳（８．１％）、出血斑（８．１％）、疲労（８．１％）、鼻咽頭炎（８．１％）、および尿路感染症（８．１％）が含まれた。ＴＲＵ−０１５を投与した対象にグレード３の異常が観察され、これにはグレード３のＡＳＴ／ＡＬＴ（ｎ＝１）、グレード３の低白血球（ｎ＝２）、およびグレード３の低好中球（ｎ＝３）が含まれた。処置の間、グレード４の有害事象は観察されず、グレード３は３つ観察されたにすぎず、これには、処置を終了せずに解決された発疹／気管支痙攣、薬物注入２週間後の関節痛、および注入に関連しない高血圧が含まれた。この実験において、ＴＲＵ−０１５患者が処置６カ月後に胆嚢炎を発症するという、１件の重症な有害事象が観察された。その後の試験では、１名の患者が、処置４週間後に、前立腺癌および前立腺生検後の菌血症／発熱を発症し、プラセボ群の患者１名が、以前に診断されたうっ血性心不全の悪化を示した。
【０１８６】
ＴＲＵ−０１５を投与したＲＡ患者におけるＢ細胞の枯渇の程度を測定し、処置を開始する前の患者のベースラインレベルの平均と比較した。図４は、ＴＲＵ−０１５を投与したＲＡ患者において、ＣＤ１９＋Ｂ細胞の数により測定したＢ細胞枯渇の持続時間を示す。少なくとも０．５ｍｇ／ｋｇのＴＲＵ−０１５を投与した患者は、注入後１日目までに、殆ど完全なＢ細胞の枯渇を示した。単一投与量の１５ｍｇ／ｋｇのＴＲＵ−０１５、または２×１５ｍｇ／ｋｇの投与量のいずれかを投与した患者は、注入８４日後にＢ細胞の完全な枯渇を示し、１６８日目までにベースラインの約１０〜１５％間に上昇した。５ｍｇ／ｋｇの投与量を投与した患者は、投与８４日後にベースラインのＢ細胞レベルの約１５〜２０％を示し、１６８日目までに約３５％に上昇した。単一投与量の１．５ｍｇ／ｋｇのＴＲＵ−０１５を投与した患者は、８４日目にベースラインの約３０％のＢ細胞レベルを示し、１６８日目までそのレベルを維持した。
【０１８７】
第２セットの処置レジメンでは、患者に、２×２．５ｍｇ／ｋｇの投与量で５ｍｇ／ｋｇを投与し、または２×７．５ｍｇ／ｋｇの投与量で１５ｍｇ／ｋｇを投与し、経時的にＢ細胞の枯渇を測定した。２×２．５ｍｇ／ｋｇの投与量におけるＢ細胞の枯渇の平均は、１×５ｍｇ／ｋｇを投与した患者のＢ細胞の枯渇を反映し、７２日目にベースラインの約１０％に低下し、１７２日目までにベースラインレベルの約３０％に上昇した。しかし、ＴＲＵ−０１５の１投与量の１５ｍｇ／ｋｇ、または２×７．５ｍｇ／ｋｇの投与量のいずれかを投与した患者の比較では、８４日目に、両群のＢ細胞レベルは殆ど完全に枯渇したが、１６８日目までには、２投与量を投与した場合に、ベースラインの約３５〜４０％まで上昇したのに比べて、単一投与量を投与した患者ではＢ細胞数にかすかな上昇があった（約１５％まで）ことを示していた（図５）。
【０１８８】
ＴＲＵ−０１５に対する中和抗体の存在について、対象全員を評価した。中和抗体について試験陽性だった血清試料はなかった。５ｍｇ／ｋｇおよび１５ｍｇ／ｋｇ群において対象からの血清試料の試験を評価し、中和抗体を実証したものはなかった。しかし、サンプリング時に、ＴＲＵ−０１５は血清中に依然として存在していた。
【０１８９】
処置中、患者をリウマチ因子（ＲＦ）抗体のレベルについて、やはりモニターし、ＲＦ＋またはＲＦ−患者と名付けた。処置後４２週までにこれらの群で達成した最大の臨床反応を、表４に示す。
【０１９０】
【表４】
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これらの結果は、ＴＲＵ−０１５は、慢性関節リウマチの処置に有効であることを実証している。ＴＲＵ−０１５治療は、概ね投与量に比例し、より大型のタンパク質での治療にみられるものと類似した血清半減期を示す薬物への曝露をもたらす。ＴＲＵ−０１５での処置では投与量反応が観察され、ＴＲＵ−０１５の投与量の上昇とともに、程度および期間においてＢ細胞の枯渇は概ね上昇し、長時間の間には細胞の１００％の枯渇が示された。さらに、現在までに、ＴＲＵ−０１５に対する中和抗体は検出されていない。
【０１９１】
上記の例示の実施例に述べたように、本発明において多くの修正形態および変更形態を当業者は思い付くと思われる。したがって、添付の特許請求の範囲において明らかになるような限定のみを、本発明に対して置くべきである。
【図面の簡単な説明】
【０１９２】
【図１Ａ】図１Ａは、ＣＤ２０特異的結合性分子であるＴＲＵ−０１５の単一投与量を投与した、非ヒトの霊長動物の投与量範囲試験における、Ｂ細胞の枯渇の評価を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、より長い時間経過にわたって測定し、Ｂ細胞の枯渇のパーセントとして示した、類似の実験におけるＢ細胞の枯渇のさらなる分析である。
【図２】図２は、ＣＤ２０特異的結合性分子であるＴＲＵ−０１５の単一投与量を投与した結果としての、ヒト患者におけるＢ細胞の枯渇の評価を示す。
【図３】図３は、ＡＤＣＣおよびＣＤＣアッセイにおける、ＴＲＵ−０１５および他のＣＤ２０結合性分子構築物の比較を示す。
【図４】図４は、投与量範囲の試験で、ＴＲＵ−０１５を投与したＲＡ患者における、ＣＤ１９＋Ｂ細胞の数により測定した、Ｂ細胞枯渇の期間を示す。
【図５】図５は、単一投与量の１５ｍｇ／ｋｇ  ＴＲＵ−０１５、または２×７．５ｍｇ／ｋｇ投与量のＴＲＵ−０１５を投与したＲＡ患者におけるＢ細胞の枯渇を示す。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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