(57)【要約】   トラッピング流路（２２）にあってトラップカラム（２３）の上流に混合液流路（３１）が接続され、混合液流路（３１）にはそれぞれ送液ポンプ（３５）、（３６）で吸引・送出される希釈液と添加剤との混合液が供給される。目的化合物を含む溶出液がトラップカラム（２３）に流されるとき、該溶出液は希釈液で希釈されるため溶出力が低下し、目的化合物はトラップカラム（２３）に捕集され易くなる。一方、溶出液中の移動相の溶解度が下がることで目的化合物のみならず夾雑物が析出し易くなるが、添加剤の作用により析出が抑制されるため、カラムトラップ（２３）や配管の詰まりを防止することができる。
2009044427.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体試料に含まれる目的成分をトラップカラムに捕集し、その後に該トラップカラムに溶出用溶媒を供給して目的成分を溶出させ、その溶出液中の溶媒を蒸発させて目的成分の固形物を回収する分取精製装置において、
a)その途中に前記トラップカラムが配設されたトラッピング流路と、
b)試料導入用溶媒に目的成分が溶解した溶液を前記トラッピング流路に送給する溶液送給手段と、
c)前記試料導入用溶媒の溶出力を下げるべく前記トラッピング流路にあって前記トラップカラムの手前で前記溶液に希釈液を合流させるための希釈液供給流路と、
d)前記希釈液供給流路にあって希釈液を送給する希釈液送給手段と、
e)前記希釈液の混合による前記溶媒の溶出力の低下により前記目的成分及び前記溶液中の夾雑物が析出することを防止するための添加剤を前記希釈液に混合する添加剤混合手段と、
を備えることを特徴とする分取精製装置。
【請求項２】
請求項１に記載の分取精製装置において、前記添加剤混合手段は、前記希釈液と前記添加剤との組成比を経時的に変化させることを特徴とする分取精製装置。
【請求項３】
請求項２に記載の分取精製装置において、前記添加剤混合手段は、
前記希釈液供給流路の途中に接続された添加剤供給流路と、
前記添加剤供給流路上にあって前記添加剤を吸引して送給する添加剤送給手段と、
前記希釈液と前記添加剤との組成比を経時的に変化させるように前記希釈液送給手段及び前記添加剤送給手段の送液流量を変化させる制御手段と、
を含むことを特徴とする分取精製装置。
【請求項４】
請求項２に記載の分取精製装置において、前記添加剤混合手段は、
前記希釈液送給手段により吸引される液体を前記希釈液と前記添加剤とで切り替える流路切替手段と、
前記希釈液と前記添加剤との組成比を経時的に変化させるように前記流路切替手段でのそれぞれの流路の接続時間を制御する制御手段と、
を含むことを特徴とする分取精製装置。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の分取精製装置であって、前記添加剤は、前記試料導入用溶媒における析出を防ぐとともに、さらに該溶媒の親水性又は疎水性を調整することで逆相モードにおける前記トラップカラムの固定相での目的成分に対する保持の度合いを調整することを特徴とする分取精製装置。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の分取精製装置であって、液体クロマトグラフの分離カラムに前記試料導入用溶媒に乗せて液体試料を導入し、該分離カラムからの溶出液を前記トラッピング流路へと供給して該溶出液中の目的成分を前記トラップカラムに捕集することを特徴とする分取精製装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、溶液に含まれる１乃至複数の成分を液体クロマトグラフを利用してそれぞれ分離した後に、各成分をそれぞれ精製して回収するための分取精製装置に関し、さらに詳しくは目的成分を一旦捕集するためのトラップカラムを利用した分取精製装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
例えば製薬分野などにおいては、化学合成により得られた各種の化合物をライブラリとして保管したり或いは詳細に分析したりするためのサンプルを収集するために、液体クロマトグラフを利用した分取精製装置が使用されている。こうした分取精製装置として、従来、特許文献１、特許文献２などに記載の装置が知られている。【０００３】
これら従来の装置では、試料溶液中の目的成分（化合物）を液体クロマトグラフにより時間的に分離することにより目的成分毎に別のトラップカラムに導入して一旦捕集する。その後に各トラップカラムに溶媒を流して該カラム内に捕集していた成分を短時間で溶出させることで、目的成分を高い濃度で含有する溶液を容器に回収する。こうして分取した各溶液について蒸発・乾固処理を行って溶媒を除去し、目的成分を固形物として回収する。【０００４】
こうした分取精製装置において目的成分の回収効率を上げるには、トラップカラムに目的成分を確実に捕集する必要がある。そのためには、目的成分を含む溶液をトラップカラムに導入する際の溶媒（移動相）の溶出力を可能な限り小さくしておくことが望ましい。例えばトラップカラムが逆相モードである場合、トラップカラムに充填された吸着剤は疎水性、移動相は親水性であり、一般的に移動相の親水性を高めるほど目的化合物を吸着剤に強く保持させることができる。このため、分取液体クロマトグラフのカラムで分離した目的化合物を含む溶出液をトラップカラムに導入する際に、別の送液ポンプにより送出した水をトラップカラムの入口手前で移動相に混入することでその移動相を希釈し、移動相の溶出力を下げるという操作が行われることがある。【０００５】
しかしながら、このようにして移動相の溶出力を下げると、移動相に対する目的化合物の溶解度が下がるのみならず夾雑物の溶解度も下がる。そのため、目的化合物や夾雑物が配管やトラップカラム内で析出し易くなり、目詰まりなどを生じて溶液が流れにくくなるといった不具合が起こるおそれがある。【０００６】
また、上記のように水などの希釈液を移動相に混合したとしても、化合物の種類などによってはトラップカラムの吸着剤で十分な保持力が得られずに、トラップカラムを通過してしまうものがある。こうなると分取精製が行えないのみならず、合成により得られた薬理化合物を失うおそれがある。もちろん、トラップカラムに充填する吸着剤の種類、移動相の種類、或いは送液速度などのトラップ条件を適切に設定することにより、トラップカラムでの化合物の捕集効率を上げることは可能であるが、製薬分野における分取精製では対象とする化合物が多種多様であり、各化合物に対してそれぞれ適切な条件を見い出すことは非常に面倒で手間とコストを要する作業である。そのため、多様な化合物に対してトラップ条件の変更の必要のない、より汎用性の高い分取精製手法が求められているが、従来の装置ではこうした対応が不可能であった。【０００７】
【特許文献１】特開平２−１２２２６０号公報
【特許文献２】特開２００３−１４９２１７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は上記課題に鑑みて成されたものであり、その主な目的とするところは、トラップカラムや配管などの詰まりを防止しつつ目的化合物を確実に高い効率でトラップカラムに捕集することができる分取精製装置を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記課題を解決するために成された本発明は、液体試料に含まれる目的成分をトラップカラムに捕集し、その後に該トラップカラムに溶出用溶媒を供給して目的成分を溶出させ、その溶出液中の溶媒を蒸発させて目的成分の固形物を回収する分取精製装置において、
a)その途中に前記トラップカラムが配設されたトラッピング流路と、
b)試料導入用溶媒に目的成分が溶解した溶液を前記トラッピング流路に送給する溶液送給手段と、
c)前記試料導入用溶媒の溶出力を下げるべく前記トラッピング流路にあって前記トラップカラムの手前で前記溶液に希釈液を合流させるための希釈液供給流路と、
d)前記希釈液供給流路にあって希釈液を送給する希釈液送給手段と、
e)前記希釈液の混合による前記溶媒の溶出力の低下により前記目的成分及び前記溶液中の夾雑物が析出することを防止するための添加剤を前記希釈液に混合する添加剤混合手段と、
を備えることを特徴としている。【００１０】
例えば試料導入用溶媒はアセトニトリルなどの有機溶媒、又はアセトニトリルと水との混合液などとすることができる。また希釈液は例えば水とすることができる。また、添加剤としては、目的成分や夾雑成分の溶解度を高めながらもトラップカラムからの溶出を著しく促進しないような、移動相に使用する有機溶媒に比べて極性の高い高極性化合物が適切である。このような添加剤の例として、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、単鎖アルコールなどを用いることができる。【００１１】
本発明に係る分取精製装置では、トラップカラムに目的成分を捕集する際に、溶液送給手段により目的成分が溶解した溶液をトラッピング流路に流すが、このとき、添加剤混合手段により添加剤が混入された希釈液を希釈液供給流路を経てトラッピング流路に流す。従って、目的成分が溶解した溶液は希釈液で希釈され、さらに添加剤が混入された状態でトラップカラムに導入される。溶液が希釈されることで試料導入用溶媒の溶出力は下がるから、溶液に溶解していた目的成分はトラップカラム中の固定相（例えば吸着剤）に捕捉され易くなり、確実な成分捕集が達成される。【００１２】
一方、試料導入用溶媒の希釈により、目的成分のみならず目的成分以外の各種の夾雑成分の溶解度も下がってこれら成分が固形物として析出し易くなるが、上記のような添加剤の作用により、目的成分や夾雑成分の析出が抑制され沈殿が生じにくくなる。そのため、トラップカラムやトラッピング流路を構成する配管の詰まりを防止することができる。【００１３】
但し、化合物の種類によってトラップカラムの固定相への吸着のし易さは異なるため、溶出力を下げる程度と目的成分・夾雑成分の析出を抑制する度合いとは適度に調整する必要がある。そこで、本発明に係る分取精製装置では、前記添加剤混合手段は、前記希釈液と前記添加剤との組成比を経時的に変化させるものとすることが好ましい。【００１４】
このために本発明に係る分取精製装置の一態様として、前記添加剤混合手段は、
前記希釈液供給流路の途中に接続された添加剤供給流路と、
前記添加剤供給流路上にあって前記添加剤を吸引して送給する添加剤送給手段と、
前記希釈液と前記添加剤との組成比を経時的に変化させるように前記希釈液送給手段及び前記添加剤送給手段の送液流量を変化させる制御手段と、
を含む構成とすることができる。【００１５】
この態様の構成は、希釈液と添加剤（又は希釈液に添加剤を予め異なる濃度で混合した複数の溶液）とをそれぞれ独立の送給手段（例えば送液ポンプ）で吸引・送出し、その下流側で希釈液と添加剤とを合流させるものであり、制御手段により両（又は何れか一方の）送給手段の送液流量を経時的に変化させることで希釈液と添加剤の混合比率を変化させる。即ち、これは、液体クロマトグラフにおける高圧グラジエント送液装置に相当するものである。【００１６】
また本発明に係る分取精製装置の別の態様として、前記添加剤混合手段は、
前記希釈液送給手段により吸引される液体を前記希釈液と前記添加剤とで切り替える流路切替手段と、
前記希釈液と前記添加剤との組成比を経時的に変化させるように前記流路切替手段でのそれぞれの流路の接続時間を制御する制御手段と、
を含む構成とすることができる。【００１７】
この態様の構成は、流路切替手段（例えば切替バルブ）で適宜選択された希釈液と添加剤と唯一の送給手段（例えば送液ポンプ）で吸引し、異なる時間に吸引された希釈液と添加剤とを送給手段において混合して希釈液供給流路からトラッピング流路へと送り込む。制御手段により、流路切替手段での希釈液と添加剤とが選択される時間を経時的に変化させることで、希釈液と添加剤の混合比率を変化させる。即ち、これは、液体クロマトグラフにおける低圧グラジエント送液装置に相当するものである。【００１８】
また例えば試料導入用溶媒の溶出力が非常に強い場合には、希釈液で希釈しても溶出力が十分には下がらず、目的成分がトラップカラムで十分に捕集されずに通り抜けてしまうおそれがある。そこで、こうした場合には、前記添加剤として、前記試料導入用溶媒における析出を防ぐとともに、さらに該溶媒の親水性又は疎水性を調整することで逆相モードにおける前記トラップカラムの固定相での目的成分に対する保持の度合いを調整可能な添加剤を採用するとよい。これにより、同一のトラップカラムで捕集可能な化合物の種類の幅が広くなり、装置の汎用性が広がる。【００１９】
本発明に係る分取精製装置は、例えば予め分取液体クロマトグラフのフラクションコレクタで目的成分を含むように分取された溶液を溶液供給流路に供給するようにしてトラップカラムに目的成分を捕集するようにしてもよいが、液体クロマトグラフと直結することでオンライントラッピングシステムを構築することもできる。即ち、液体クロマトグラフの分離カラムに前記試料導入用溶媒に乗せて液体試料を導入し、該分離カラムからの溶出液を前記トラッピング流路へと供給して該溶出液中の目的成分を前記トラップカラムに捕集する構成とすることができる。
【発明の効果】
【００２０】
本発明に係る分取精製装置によれば、トラップカラムや配管の詰まりを生じさせることなく、目的成分をトラップカラムに高い捕集効率で以て捕集させることができる。これにより、多種多様な化合物について安定した成分捕集を行い、こうした化合物の固形物を効率良く得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】本発明に係る分取精製装置の一実施例である分取液体クロマトグラフ装置の概略構成図。
【図２】トラップカラムからの溶出液の蒸発・乾固のための装置の構成の一例を示す図。
【図３】本発明に係る分取精製装置の他の実施例である分取液体クロマトグラフ装置の要部を示す構成図。
【符号の説明】
【００２２】
１…液体クロマトグラフ部
２…第１移動相容器
３…第２移動相容器
４、５…送液ポンプ
６…混合器
７…インジェクタ
８…分離カラム
９…第１検出器
１０…フラクションコレクタ
１１…第２検出器
２０…トラッピング部
２１、２６…６方バルブ
２２…トラッピング流路
２３…トラップカラム
２４…ミキシングコイル
２５…Ｔ字型ジョイント
２７…第１洗浄液容器
２８…第１洗浄液容器
２９、３８、４３…２方バルブ
３０、３５、３６、４０、４４…送液ポンプ
３１…混合液流路
３２…８方バルブ
３３…希釈液容器
３４…添加剤容器
３７…混合器
３９…溶出用溶媒容器
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
本発明に係る分取精製装置の一実施例を図１により説明する。図１は本発明に係る分取精製装置の一実施例である分取液体クロマトグラフ装置の概略構成図である。【００２４】
液体クロマトグラフ部（ＬＣ部）１は、第１及び第２送液ポンプ４、５、インジェクタ７、分離カラム８、第１検出器９、フラクションコレクタ１０、第２検出器１１などを含む。送液ポンプ４は第１移動相容器２に用意された例えば水などの第１移動相を吸引して送出し、送液ポンプ５は第２移動相容器３に用意された例えばアセトニトリルなどの有機溶媒である第２移動相を吸引して送出し、両移動相は混合器６により混合されてインジェクタ７を介して分離カラム８に供給される。本発明における溶液送給手段に相当する第１及び第２送液ポンプ４、５の流速は時間経過に伴ってそれぞれ変化するように制御することが可能であり、これによって第１及び第２移動相の成分比率が時間的に変化する高圧グラジエント方式の送液を行うことができる。もちろん、グラジエント送液を行わずに単一の移動相を用いてもよいし、一定の成分比率の移動相を用いてもよい。【００２５】
インジェクタ７では、オートサンプラにより選択された液体試料が所定のタイミングで移動相に自動注入される。液体試料は移動相に乗って分離カラム８に導入され、分離カラム８を通過する間に液体試料中の各種成分（化合物）は時間的に分離されて、分離カラム８の出口端から溶出する。分離カラム８の下流に設けられた第１検出器９としては、例えば紫外可視分光光度計を用いることができる。フラクションコレクタ１０は後述するように目的の化合物が含まれる溶出液をそれぞれ分けて回収するものであり、第２検出器１１はトラップカラム２３を通過した後の溶液に目的化合物が含まれているか否かを調べることにより、トラップ条件を検証するものである。【００２６】
トラッピング部２０は、後述のように流路を切り替えるために６方バルブ２１、２６と８方バルブ３２とを含む。これらバルブ２１、２６、３２はいずれも、図１中に示す実線と点線との２つの接続状態の切り替えが可能である。ＬＣ部１の第１検出器９からの溶出液は６方バルブ２１のａポートに導入され、そのｆポートはフラクションコレクタ１０の入口に接続されている。６方バルブ２１のｂポートとｅポートとの間には、途中にトラップカラム２３、ミキシングコイル２４、及びＴ字型ジョイント２５が設けられたトラッピング流路２２の両端が接続されている。また、６方バルブ２１のｃポートは６方バルブ２６のｆポートに接続され、Ｔ字型ジョイント２５の残りの一端は８方バルブ３２のｅポートに接続されており、この間は混合液流路３１となっている。【００２７】
第３送液ポンプ３０は、トラップカラム２３を含むトラッピング流路２２の洗浄又は溶出液から希釈液への置換のため、第１、第２洗浄液容器２７、２８に用意されている有機溶媒（ここではアセトニトリル）と水とを２方バルブ２９の切り替えに応じて選択的に送出する。本発明における希釈液送給手段に相当する第４送液ポンプ３５は希釈液容器３３に用意された希釈液（ここでは水だが有機溶媒などでもよい）を吸引して送出し、本発明における添加剤混合手段を構成する第５送液ポンプ３６は添加剤容器３４に用意された例えばジメチルスルホキシドなどの添加剤を吸引して送出し、希釈液と添加剤とは混合器３７により混合される。第４及び第５送液ポンプ３５、３６の流速をそれぞれ適宜に設定することにより、希釈液と添加剤との混合比率を任意に調整することができる。また、混合器３７と８方バルブ３２との間に配設された２方バルブ３８は、上記希釈液と添加剤との混合液と、第６送液ポンプ４０により溶出用溶媒容器３９から吸引された溶出力の強い例えばジクロロメタンなどの溶出用溶媒とを選択するものである。６方バルブ２１のｄポート、６方バルブ２６のｄポート、８方バルブ３２のｃ、ｈ、ｇポートはいずれも廃液口Ｐに接続されている。【００２８】
ＣＰＵなどを含む制御部４１は、予め設定されたプログラムに従って、第１検出器９からの検出信号を監視しつつ、ＬＣ部１及びトラッピング部２０のバルブ２１、２６、２９、３２、３８の切り替え動作、送液ポンプ４、５、３０、３５、３６、４０のオンオフ動作や送液速度、インジェクタ７の動作などを制御する。【００２９】
次にこの分取液体クロマトグラフによる動作を、トラップカラムへの成分捕集の動作を中心に説明する。
まずトラッピング部２０において６方バルブ２１を点線、６方バルブ２６及び８方バルブ３２を実線の接続状態とし、第３送液ポンプ３０により、２方バルブ２９で選択された第１洗浄液容器２７からアセトニトリル（ＡＣＮ）を吸引して送出する。すると、アセトニトリルは６方バルブ２６のａポート、ｆポートから、６方バルブ２１のｃポート、ｂポートを通りトラッピング流路２２中を流れ、６方バルブ２６のｅポート、ｄポートから廃液口Ｐへと排出される。これにより、トラップカラム２３、ミキシングコイル２４を含むトラッピング流路２２全体がアセトニトリルで洗浄され、この流路２２中に残存していた不所望の成分のうち有機溶媒に溶解する成分が除去される。【００３０】
次にバルブ２１、２６、３２の接続状態を同じに保ち、２方バルブ２９を点線で示す接続状態に切り替えて第３送液ポンプ３０により第２洗浄液容器２８から水を吸引して送出する。これにより、トラップカラム２３、ミキシングコイル２４を含むトラッピング流路２２全体が水で洗浄され、アセトニトリルが水に置換される。【００３１】
その後、第３送液ポンプ３０を停止する一方、第４及び第５送液ポンプ３５、３６を作動させ、それぞれの流速の比で決まる混合比で水と添加剤とが混合された混合液を送出する。このとき、２方バルブ３８は実線で示す接続状態とされ、混合液は８方バルブ３２のｄポート、ｅポートを経て混合液流路３１を流れ、Ｔ字型ジョイント２５を経てトラッピング流路２２に入り、ミキシングコイル２４、トラップカラム２３の方向（つまり図１中で下向き）に流れる。これにより、８方バルブ３２からＴ字型ジョイント２５までの混合液流路３１中及びトラッピング流路２２にあってＴ字型ジョイント２５からトラップカラム２３までの流路中が、単なる水から水と添加剤との混合液で置換される。なお、添加剤が吸引・送出されない場合、８方バルブ３２のｄポート、ｅポートを経た、混合液流路３１を含む希釈液容器３３からＴ字型ジョイント２５までの流路に希釈液が流れることになるから、この流路が本発明における希釈液供給流路に相当する。【００３２】
次いで、第４及び第５送液ポンプ３５、３６を停止し、再び第３送液ポンプ３０を作動させることで水を送出し、トラッピング流路２２の中の一部に溜まっていた混合液を廃液口Ｐまで押し出すことで、トラッピング流路２２全体を水で満たす。従って、８方バルブ３２からＴ字型ジョイント２５までの間の混合液流路３１中には水と添加剤との混合液が残り、トラッピング流路２２中は全て水が満ちた状態となる。【００３３】
６方バルブ２６を実線の接続状態から点線の接続状態に切り替え、第３送液ポンプ３０を停止し、第４及び第５送液ポンプ３５、３６の作動を再開する。６方バルブ２６の流路切り替えにより、６方バルブ２１のｃポートは、６方バルブ２６のｆポート、ｅポート、８方バルブ３２のｆポート、ｇポートを経て廃液口Ｐに連通する。そのため、第４及び第５送液ポンプ３５、３６の送液動作により、混合液流路３１を経てＴ字型ジョイント２５からトラッピング流路２２に送り込まれた混合液は、今度はミキシングコイル２４の方向はなく６方バルブ２１のｂポートの方向（図１で上方向）へと流れ、最終的には上述したように６方バルブ２６、８方バルブ３２を経て廃液口Ｐへ排出される。その結果、トラッピング流路２２の中で６方バルブ２１のｂポートとＴ字型ジョイント２５（厳密にはその分岐点）との間の流路中の水が混合液に置換される。また、混合液流路３１を含め、混合器３７とＴ字型ジョイント２５との間の流路中にも混合液が満ちる。一方、トラッピング流路２２の中で、Ｔ字型ジョイント２５から６方バルブ２１のｅポートとの間、つまりトラップカラム２３やミキシングコイル２４には水が満ちた状態となる。【００３４】
上記のようにトラッピング部２０における流路中に水又は混合液が満ちた状態を初期状態として、ＬＣ部１での分析、つまり成分分離動作が開始される。即ち、第１及び第２送液ポンプ４、５を作動させることで移動相を一定流量で分離カラム８に流し、所定のタイミングでインジェクタ７から移動相中に液体試料を注入する。このとき６方バルブ２１は点線で示す接続状態に保ち、分離カラム８からの溶出液をトラッピング流路２２に流さずに直接、フラクションコレクタ１０へと流すようにする。また、８方バルブ３２を点線で示す接続状態にし、第４及び第５送液ポンプ３５、３６を作動させる。これにより、水と添加剤との混合液が８方バルブ３２のｄポート、ｃポートを経て廃液口Ｐに排出される。【００３５】
注入された液体試料中の各種成分（化合物）は分離カラム８を通過する間に分離され、時間差がついて第１検出器９に到達し、その順番に検出される。制御部４１は第１検出器９による検出信号に基づいて目的化合物が溶出したことを検知すると、６方バルブ２１及び８方バルブ３２をともに実線で示す接続状態に切り替える。これにより、分離カラム８からの溶出液はトラッピング流路２２に流れ始め、また、水と添加剤との混合液がＴ字型ジョイント２５からトラッピング流路２２内に供給され始める。これにより、分離カラム８からの溶出液と混合液とが合流してミキシングコイル２４に導入され、そこで十分に混合される。上述のように上記混合液は希釈液である水と添加剤とを含むから、溶出液中の移動相は水で希釈され、溶出力が落ちる。【００３６】
移動相に溶解している目的化合物が第１検出器９を通過してからトラッピング流路２２に入るまでには流速や配管長さなどで決まる時間遅れがあり、その遅れ時間が経過するとトラッピング流路２２中に目的化合物が導入され始める。目的化合物はミキシングコイル２４を経てトラップカラム２３に流れ込むが、上述のようにその手前のミキシングコイル２４において水で希釈されることで移動相の溶出力が十分に低下しているため、目的化合物はトラップカラム２３に充填されている吸着剤の表面に吸着され、目的化合物が除去された移動相と混合液とがトラップカラム２３の出口端から出て６方バルブ２１を経てＬＣ部１と戻る。一般にここで回収したい化合物の多くは水には溶けにくいため、Ｔ字型ジョイント２５において水が移動相に合流した時点で移動相の溶解度が下がると、目的化合物やそれ以外の夾雑成分である様々な化合物が析出してしまうおそれがあるが、この実施例の装置では、添加剤の作用によりそうした化合物の析出が抑えられる。従って、析出した化合物がトラッピング流路２２中やトラップカラム２３などに詰まることを防止することができる。【００３７】
そうして目的化合物をトラップカラム２３に捕集したならば、ＬＣ部での成分分離を終了する。その後に引き続いてトラップカラム２３に捕集した目的化合物を回収する場合には、次のような手順をとる。即ち、２方バルブ３８が点線で示す接続状態に切り替えられ、第６送液ポンプ４０が作動されて溶出用溶媒であるジクロロメタンが混合液流路３１を経てトラッピング流路２２に供給され、トラップカラム２３に流される。なお、それに先立って洗浄液である水をトラップカラム２３を含むトラッピング流路２２に流すことにより、トラッピング流路２２に残存する不純物などを除去するようにしてもよい。トラップカラム２３にジクロロメタンが供給されると、捕集されていた目的化合物は短時間で溶出する。この目的化合物を含む溶出液が６方バルブ２１を経てフラクションコレクタ２１に導入され、所定の容器に回収される。回収された溶出液を加熱或いは真空遠心分離することで固形状の目的化合物を取り出すことができる。【００３８】
また、フラクションコレクタ１０として図２に示すような蒸発・乾固処理機能を持った装置を用いることで、トラップカラム２３からの化合物の脱離と蒸発・乾固とをオンラインで行うこともできる。即ち、目的化合物が捕集され、内部に水又は水を含む移動相が満ちたトラップカラム２３を略垂直に保持する。そして、トラップカラム２３の下端からジクロロメタンを低流速で導入する。ジクロロメタンの比重は水よりも大きく、且つ両者は相溶性に乏しいので、ジクロロメタンが導入されるに従いトラップカラム２３内に存在していた水は押し上げられ、トラップカラム２３の上端から排出流路５０に吐き出される。【００３９】
このとき、２方バルブ５２は図２中で点線で示す接続状態であり、水は廃液流路５４を経て廃液口Ｐへ廃棄される。トラップカラム２３に捕集されている目的化合物はジクロロメタンに溶解するため、トラップカラム２３の上端から出る溶出液の溶媒が水からジクロロメタンに変化すると目的化合物が含まれ始める。ジクロロメタンが出始めるまでに要する時間はトラップカラム２３の空隙の容量とジクロロメタンの送液速度とから計算できるから、この計算に基づいて求まる時間又はそれに適度の余裕を見込んだ時間が経過したならば２方バルブ５２を実線で示す接続状態に切り替える。なお、この切り替えに先立って、温調部６１は容器ラック５８に付設された温度センサ６０により温度を監視しつつヒータ５９に加熱電流を供給することにより、容器ラック５８を所定温度（例えば４０℃程度）に一定に保つようにする。【００４０】
２方バルブ５２が切り替えられると、目的化合物を含むジクロロメタンが分取流路５３に流れ、その下端の溶液ノズル５３ａから滴下する。このとき、開閉バルブ５６を開放すると窒素ガスがガス流路５５を経て供給され、ガス噴出ノズル５５ａから吹き出す。このガス流によって溶液ノズル５３ａから滴下する溶出液は微小液滴になって飛散し、容器ラック５８に収容されている回収容器５７の内周壁面に付着する。回収容器５７は容器ラック５８からの熱伝導により所定温度に加温されており、ジクロロメタンは高い揮発性を有しているので、回収容器５７の内周壁面に付着した液滴中の溶媒は速やかに蒸発し、目的化合物が固形物として析出する。２方バルブ５２を内蔵する分取ヘッド５１は、容器ラック５８に収容された複数の回収容器５７の任意のものの上に移動可能となっており、所定の回収容器５７に目的化合物を回収することができる。【００４１】
なお、化合物によっては水などの希釈液で移動相を希釈しただけではトラップカラム２３で十分な保持力を発揮できず、目的化合物を確実に捕集できない場合がある。そのような場合には、添加剤を適切に選ぶことにより、単に夾雑物などの析出を防止するのみならずトラップカラム２３での保持力を増加させ、確実な捕集を達成することができる。具体的には、例えば目的成分がイオン化された化合物であって、通常ではトラップカラムに十分に保持されないような場合、添加剤として反対電荷を帯びたイオンペア試薬を用いれば、目的成分とイオンペア試薬が疎水性のイオン対を形成することにより、トラップカラムの固定相への保持力を増加させることができる。このような添加剤の例としては、塩基性化合物に対して効果のあるイオンペア試薬としてペンタフルオロプロピオン酸又はヘプタフルオロ酪酸などが挙げられる。【００４２】
また、上記実施例の分取液体クロマトグラフ装置では、第４及び第５送液ポンプ３５、３６において時間経過に伴って流速を変化させることで希釈液と添加剤との混合比率を変化させるような送液を行うことで、トラップカラム２３での保持力が相違する様々な化合物を確実に捕集できるように捕集条件を調整することができる。それにより、本装置でトラップカラム２３に捕集可能な化合物の種類の幅が広がり、汎用性が高まる。【００４３】
また、図１に示した実施例では、希釈液と添加剤との混合液を調製するために、希釈液、添加剤それぞれを吸引・送出する送液ポンプ３５、３６を用いており、その下流側で両者を混合する、いわゆる高圧グラジエント送液の構成をとっていたが、低圧グラジエン送液の構成とすることもできる。図３はこのときの要部の構成図である。即ち、２方バルブ４３により希釈液と添加剤とを選択できるようにし、その選択した液体を送液ポンプ４４により吸引する。２方バルブ４３の切り替えを適宜のタイミングで行って希釈液と添加剤とを時分割で送液ポンプ４４に送り込むと、送液ポンプ４４の内部で希釈液と添加剤とが撹拌・混合され、混合液となって送出される。【００４４】
また上記実施例は、ＬＣ部１とトラッピング部２０とを直結し、分離カラム８で成分分離された溶出液を直接トラップカラム２３に導入して目的化合物を捕集するオンライントラッピングの構成としていたが、分離カラム８で成分分離された溶出液をフラクションコレクタにより分取し、その分取された溶出液をトラッピング部２０に導入して該溶出液中の目的化合物をトラップカラム２３に捕集するオフライントラッピングの構成としてもよい。【００４５】
また、上記実施例は本発明の一例にすぎないから、本発明の趣旨の範囲で適宜変更、修正、追加などを行っても本願請求の範囲に包含されることは明らかである。
【図１】
2009044427.tif 000003
【図２】
2009044427.tif 000004
【図３】
2009044427.tif 000005
【国際調査報告】
2009044427.tif 000006
2009044427.tif 000007
2009044427.tif 000008