(57)【要約】  本発明は、新規摂食抑制剤を提供することを、目的とする。  本発明はまた、末梢投与等の通常の投与形態でも、高い摂食抑制作用を表すＮＭＵ誘導体を提供することを、目的とする。  ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドに、特定の構造を有するリンカーを介して、メトキシポリエチレングリコールが結合しているニューロメジンＵ誘導体。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドに、リンカーを介して、メトキシポリエチレングリコールが結合しているニューロメジンＵ誘導体であって、式
2009044918.tif 000150
［式中、
Ｙは、ニューロメジンＵのＣ末端のアミノ配列の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列からなるポリペプチドを表し；
Ｘはメトキシポリエチレングリコールを表し；
Ｘ’は存在しないか、またはメトキシポリエチレングリコールを表し；式
2009044918.tif 000151
で表される部分はリンカーを表し、
Ｌａは、
2009044918.tif 000152
（式中、ｉは１〜５の整数を表し、ｋは１〜１００の整数を表す。）
から選択される２価または３価の基を表し；
Ｌｂは、
（ｉ）結合手、
（ｉｉ）式：−Ｂ１ａ−Ｑｂ１−Ｂ１ｂ−
（式中、
Ｂ１ａおよびＢ１ｂは、−ＣＯ−を表し、
Ｑｂ１は、
2009044918.tif 000153
（式中、ｐは２〜８の整数を表す。）
から選択される２価の基を表す。）で表される２価の基、
（ｉｉｉ）式：−Ｂ２ａ−Ｑｂ２−Ｂ２ｂ−
（式中、
Ｂ２ａは、−ＣＯ−を表し、
Ｂ２ｂは、
2009044918.tif 000154
を表し、
Ｑｂ２は、
2009044918.tif 000155
（式中、ｑは３〜１０の整数を表し、ｒは１〜１０の整数を表し、およびｔは１〜１０の整数を表す。）
から選択される２価の基を表す。）
で表される２価の基、または
（ｉｖ）式：−Ｂ３ａ−Ｑｂ３−Ｂ３ｂ−
（式中、
Ｂ３ａは、
2009044918.tif 000156
または結合手を表し、
Ｂ３ｂは、−ＣＯ−を表し、
Ｑｂ３は、−（ＣＨ２）ｎ１−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ２−
（式中、
ｎ１は０〜５の整数を表し、
ｎ２は０〜５の整数を表し、
Ｚは、結合手、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−、
2009044918.tif 000157
を表す。）
で表される２価の基を表す。）
で表される２価の基
を表し；
Ｌｃは、
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ−
（式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し、
Ｑｃは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−ＣＨ（−ＮＨＸ）−、
2009044918.tif 000158
（式中、
ｕは１〜１８の整数を表し、
ｖは１〜１２の整数を表し、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
Ｘは前記と同意義を表す。）
から選択される２価の基を表し、
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
Ｃｂは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
（式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000159
を表し、および
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
Ｃｂ’は、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表される２価の基を表し；
ｊは０〜３の整数を表す。
但し、Ｌａが、
2009044918.tif 000160
であって、かつＬｂが結合手である場合、Ｌｃは、結合手ではない；
および
Ｌａが、
2009044918.tif 000161
であって、かつ
Ｌｂが、式：−ＣＯ−Ｑｂ２−Ｂ２ｂ−
（式中、Ｑｂ２は、
2009044918.tif 000162
（ｒは２である）
Ｂ２ｂは、
2009044918.tif 000163
）で表される２価の基である場合、Ｌｃは、結合手ではない。］
で表されるニューロメジンＵ誘導体。
【請求項２】
ニューロメジンＵが、配列番号：１〜６のいずれか一つで表されるアミノ酸配列からなる、請求項１に記載のニューロメジンＵ誘導体。
【請求項３】
ポリペプチドが、ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の８アミノ酸からなる、請求項１に記載のニューロメジンＵ誘導体。
【請求項４】
ポリペプチドが、配列番号：２、４および６のいずれか一つで表されるアミノ酸配列からなる請求項３記載のニューロメジンＵ誘導体。
【請求項５】
式
2009044918.tif 000164
［式中、
Ｘは、メトキシポリエチレングリコールを表し；
ｉは１〜５の整数を表し；
Ｑｂ３は、式：−（ＣＨ２）ｎ１−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ２−
（式中、
ｎ１は０〜５の整数を表し、
ｎ２は０〜５の整数を表し、
Ｚは結合手、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−、
2009044918.tif 000165
で表わされる２価の基を表し；
Ｙは、ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドを表す。］
で表される請求項１に記載のニューロメジンＵ誘導体。
【請求項６】
式
2009044918.tif 000166
［式中、
Ｘは、メトキシポリエチレングリコールを表し；
ｉは１〜５の整数を表し；
Ｌｃは
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ−
（式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し、
Ｑｃは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−ＣＨ（−ＮＨＸ）−、
2009044918.tif 000167
（式中、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
Ｘは前記と同意義を表す。）を表し、
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）
から選択される２価の基を表し、
Ｃｂは、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
（式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000168
を表し、および
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
Ｃｂ’は、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表される２価の基を表し；
ｊ’は１〜３の整数を表し；および
Ｙは、ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドを表す。
Ｌｃは、繰り返しにおいて、同一であっても、異なっていてもよい。］
で表される請求項１に記載のニューロメジンＵ誘導体。
【請求項７】
式
2009044918.tif 000169
［式中、
Ｘは、メトキシポリエチレングリコールを表し；
ｉは１〜５の整数を表し；
Ｌｃは
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ’−
（式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し、
Ｑｃは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃは、結合手、−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、
2009044918.tif 000170
を表し、
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）で表される２価の基を表し、
Ｃｂ’は、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
（式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000171
を表し、
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
Ｃｂ’は、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）で表される２価の基を表し；
ｊ’は１〜３の整数を表し；および
Ｙは、ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドを表す。
Ｌｃは、繰り返しにおいて、同一であっても、異なっていてもよい。］
で表される請求項１に記載のニューロメジンＵ誘導体。
【請求項８】
請求項１に記載のニューロメジンＵ誘導体を含有する摂食抑制剤。
【請求項９】
請求項１に記載のニューロメジンＵ誘導体を含有する肥満症の予防または治療剤。
【請求項１０】
哺乳動物に対して請求項１に記載のニューロメジンＵ誘導体の有効量を投与することを特徴とする肥満症の予防・治療方法。
【請求項１１】
肥満症の予防・治療剤を製造するための請求項１に記載のニューロメジンＵ誘導体の使用。
【請求項１２】
ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドに、リンカーを介して、メトキシポリエチレングリコールが結合しているニューロメジンＵ誘導体であって、式
2009044918.tif 000172
［式中、
Ｙは、ニューロメジンＵのＣ末端のアミノ配列の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列からなるポリペプチドを表し；
Ｘはメトキシポリエチレングリコールを表し；
Ｘ’は存在しないか、またはメトキシポリエチレングリコールを表し；
式
2009044918.tif 000173
で表される部分はリンカーを表し、
ＬａＩＩＩは、式
2009044918.tif 000174
（式中、
Ｒは、結合手、−Ｏ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−ＳＯ２−、−ＳＯ２−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−、−ＣＯ−ＣＨ２−Ｓ−、または
2009044918.tif 000175
を表し、および
ｎＩＩＩは０〜５の整数を表す。）で表わされる２価または３価の基を表し；
ＬｂＩＩＩは、
−（ＣＨ２）ｉ−（式中、ｉは１〜５の整数を表す。）
を表し；
ＬｃＩＩＩは、
（ｉ）式：−ＮＨ−ＱｃＩＩＩ−ＣｂＩＩＩ−
（式中、
ＱｃＩＩＩは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−ＺｃＩＩＩ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
ＺｃＩＩＩは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−ＳＯ２−、−ＳＯ２−ＮＨ−、
2009044918.tif 000176
（式中、
ｕは１〜１８の整数を表し、
ｖは１〜１２の整数を表し、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
Ｘは前記と同意義を表す。）
から選択される２価の基を表し、
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
ＣｂＩＩＩは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−ＱｃＩＩＩ’−ＣｂＩＩＩ’−
（式中、
ＱｃＩＩＩ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−ＺｃＩＩＩ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、、
ＺｃＩＩＩ’は、
2009044918.tif 000177
から選択される２価の基を表し、および
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
ＣｂＩＩＩ’は、−ＣＯ−または−ＳＯ２−を表す。）を表し；、および
ｊＩＩＩは１〜３の整数を表す。］
で表されるニューロメジンＵ誘導体。
【請求項１３】
Ｌｃにおける最もＬｂに近い窒素原子から、ニューロメジンＵのＮ末端の窒素原子までの距離が、３．５〜３０Åである請求項１２に記載のニューロメジンＵ誘導体。
【請求項１４】
ＬｃＩＩＩが、
（ｉ）式：−ＮＨ−ＱｃＩＩＩ−ＣｂＩＩＩ−
［式中、
ＱｃＩＩＩは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−（ｍ１は０〜１５の整数）で表される２価の基を表し、
ＣｂＩＩＩは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。］
で表わされる２価の基である場合、
式：−ＮＨ−ＱｃＩＩＩ−ＣｂＩＩＩ−のＮＨの窒素原子から、ニューロメジンＵのＮ末端の窒素原子までの距離が、３．５〜７．０Åである請求項１２に記載のニューロメジンＵ誘導体。
【請求項１５】
ＬｃＩＩＩが、
（ｉ）式：−ＮＨ−ＱｃＩＩＩ−ＣｂＩＩＩ−
［式中、
ＱｃＩＩＩは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−ＺｃＩＩＩ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１０の整数を表し、
ＺｃＩＩＩは、−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−ＳＯ２−、−ＳＯ２−ＮＨ−、
2009044918.tif 000178
（式中、
ｕは１〜１０の整数を表し、
ｖは１〜１０の整数を表し、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基（Ｘは前記と同意義を表す。）を表し、
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表す）を表し、
ｍ２は０〜５の整数を表す。）
から選択される２価の基を表し、
ＣｂＩＩＩは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。］
で表わされる２価の基である場合、
式：−ＮＨ−Ｑｃ−Ｃｂ−におけるＮＨの窒素原子からＺｃにおける最も−（ＣＨ２）ｍ１−部に近い原子までの距離が、３．５〜１０Åであり、かつ
Ｚｃにおける最も−（ＣＨ２）ｍ１−部に近い原子からニューロメジンＵのＮ末端の窒素原子までの距離が、３．５〜７．０Åである請求項１２に記載のニューロメジンＵ誘導体。
【請求項１６】
ＬｃＩＩＩが、
（ｉｉ）式：−ＱｃＩＩＩ’−ＣｂＩＩＩ’−
［式中、
ＱｃＩＩＩ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000179
を表し、
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
ＣｂＩＩＩ’は、結合手、−ＣＯ−または−ＳＯ２−を表す。］
で表される２価の基である場合、
2009044918.tif 000180
における最もＬｂに近い窒素原子から、
ニューロメジンＵのＮ末端の窒素原子までの距離が、５〜１０Åである請求項１２に記載のニューロメジンＵ誘導体。
【請求項１７】
ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドに、リンカーを介して、メトキシポリエチレングリコールが結合しているニューロメジンＵ誘導体であって、式
2009044918.tif 000181
［式中、
Ｙは、ニューロメジンＵのＣ末端のアミノ配列の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列からなるポリペプチドを表し；
Ｘはメトキシポリエチレングリコール（但し、複数のＸで表されるメトキシポリエチレングリコールは、同一であっても異なっていてもよい。）を表し；
Ｌｂは、
（ｉ）結合手、
（ｉｉ）式：−Ｂ１ａ−Ｑｂ１−Ｂ１ｂ−
（式中、
Ｂ１ａおよびＢ１ｂは、−ＣＯ−を表し、
Ｑｂ１は、
2009044918.tif 000182
（式中、ｐは２〜８の整数を表す。）
から選択される２価の基を表す。）で表される２価の基、
（ｉｉｉ）式：−Ｂ２ａ−Ｑｂ２−Ｂ２ｂ−
（式中、
Ｂ２ａは、−ＣＯ−を表し、
Ｂ２ｂは、
2009044918.tif 000183
を表し、
Ｑｂ２は、
2009044918.tif 000184
（式中、ｑは３〜１０の整数を表し、ｒは１〜１０の整数を表し、およびｔは１〜１０の整数を表す。）
から選択される２価の基を表す。）
で表される２価の基、または
（ｉｖ）式：−Ｂ３ａ−Ｑｂ３−Ｂ３ｂ−
（式中、
Ｂ３ａは、
2009044918.tif 000185
または結合手を表し、
Ｂ３ｂは、−ＣＯ−を表し、
Ｑｂ３は、−（ＣＨ２）ｎ１−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ２−
（式中、
ｎ１は０〜５の整数を表し、
ｎ２は０〜５の整数を表し、
Ｚは、結合手、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−、
2009044918.tif 000186
を表す。）
で表される２価の基を表す。）
で表される２価の基を
表し；
Ｌｃは、
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ−
（式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し、
Ｑｃは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−ＣＨ（−ＮＨＸ）−、
2009044918.tif 000187
（式中、
ｕは１〜１８の整数を表し、
ｖは１〜１２の整数を表し、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
Ｘは前記と同意義を表す。）
から選択される２価の基を表し、
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）
から選択される２価の基を表し、
Ｃｂは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
（式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000188
を表し、および
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
Ｃｂ’は、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表される２価の基を表し；
ｋＩＶは１〜１００の整数を表し；
ｍＩＶは１〜１００の整数を表し；
ｐＩＶは１〜１００の整数を表し；および
ｊは０〜３の整数を表す。］
で表されるニューロメジンＵ誘導体。
【請求項１８】
ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドに、リンカーを介して、メトキシポリエチレングリコールが結合しているニューロメジンＵ誘導体であって、式
2009044918.tif 000189
［式中、
Ｙは、ニューロメジンＵのＣ末端のアミノ配列の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列からなるポリペプチドを表し；
Ｘは、メトキシポリエチレングリコール（但し、複数のＸで表されるメトキシポリエチレングリコールは、同一であっても異なっていてもよい。）を表し、
Ｘ’’は、ポリエチレングリコール（但し、複数のＸ’’で表されるポリエチレングリコールは、同一であっても異なっていてもよい。）を表し、
Ｌｃは、
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ−
（式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し、
Ｑｃは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−ＣＨ（−ＮＨＸ）−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−ＳＯ２−、−ＳＯ２−ＮＨ−、
2009044918.tif 000190
（式中、
ｕは１〜１８の整数を表し、
ｖは１〜１２の整数を表す。
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
Ｘは前記と同意義を表す。）
から選択される２価の基を表し、
）を表し、および
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）
から選択される２価の基を表し、
Ｃｂは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
（式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000191
を表し、
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
Ｃｂ’は、−ＣＯ−または−ＳＯ２−を表す。）
で表される２価の基を表し；
Ｒは、各出現において同一または異なって、
結合手、−Ｏ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−ＳＯ２−、−ＳＯ２−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−、−ＣＯ−ＣＨ２−Ｓ−、または
2009044918.tif 000192
）から選択される２価の基を表し；
ｈＶは０〜３の整数を表し；および
ｉＶ、ｊＶ、ｋＶ、ｍＶおよびｎＶは、それぞれ同一または異なって、０〜５の整数を表す。］
で表されるニューロメジンＵ誘導体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ニューロメジンＵ誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
ニューロメジンＵ  （Ｎｅｕｒｏｍｅｄｉｎ  Ｕ，  ＮＭＵ）は子宮平滑筋の収縮活性を指標にブタ小腸から２５アミノ酸残基からなるペプチド［配列番号：１］、あるいは８アミノ酸残基からなるペプチド［配列番号：２］として初めて単離された。これらのペプチドは、そのアミノ酸残基数から、ブタＮＭＵ−２５［配列番号：１］あるいはブタＮＭＵ−８［配列番号：２］と記される。ブタＮＭＵ−８［配列番号：２］はブタＮＭＵ−２５［配列番号：１］のＣ末端８残基からなり、ブタＮＭＵ−２５が切断されて生じたものである。
ヒトでは同様にＮＭＵ−２５［配列番号：３］が知られ、Ｃ末端８残基のアミノ酸配列［配列番号：４］はブタＮＭＵ−８と同一配列である。
また、ラットＮＭＵのアミノ酸残基数は２３であり、ＮＭＵ−２３［配列番号：５］と記され、Ｃ末端８残基のアミノ酸配列［配列番号：６］はブタＮＭＵ−８と１残基異なる。【０００３】
ＮＭＵの受容体としては、オーファンＧＰＣＲであったＦＭ３が先ず同定され、続いてＴＧＲ１が同定された。今日では、これらの受容体はそれぞれＮＭＵＲ１［配列番号：７］、ＮＭＵＲ２［配列番号：８］と呼ばれている。ＦＭ３が主に腸管に分布するのに対し、ＴＧＲ１は視床下部に局在する。
さらに、ＴＧＲ１の受容体として新規ペプチドがラット脳から単離された。このペプチドは視床下部内の視交叉上核に局在することから、視交叉上核（ｓｕｐｒａｃｈｉａｓｍａｔｉｃ  ｎｕｃｌｅｕｓ）の頭文字に因んでニューロメジンＳ（Ｎｅｕｒｏｍｅｄｉｎ  Ｓ，  ＮＭＳ）［配列番号：９］と命名された。
ヒトＮＭＳ［配列番号：１０］は３３アミノ酸残基からなるが、そのＣ末端８アミノ酸残基のアミノ酸配列はラットＮＭＵ−２３［配列番号：５］のＣ末端８残基のアミノ酸配列［配列番号：１１］と同一であった。
ＮＭＵＲ１、ＮＭＵＲ２はＮＭＵ、ＮＭＳ、ＮＭＵ−８にほぼ同等の親和性を表し、これらの受容体がＮＭＵとＮＭＳの共通配列であるＣ末端８残基からなるアミノ酸配列を強く認識していることが示唆された。
ラットＮＭＵ−２３のラット脳室内投与は摂食抑制をひき起こす。室傍核（ＰＶＮ）や弓状核（ＡＲＣ）に対するＮＭＵの局所投与は、脳室内投与の場合と同様に、摂食抑制作用を現すことが報告されており、ＮＭＵの作用部位はＰＶＮとＡＲＣであると考えられている。また、抗ＮＭＵ抗体の脳室内投与は摂食量を増加させることが示され、中枢のＮＭＵが生理的にも摂食抑制効果を及ぼしていることが示された。さらに、ＮＭＵ  ＫＯマウスが肥満の表現型をとること、ＮＭＵ過剰発現マウスが低体重、低摂食量を現すことも報告され、内因性のＮＭＵの生理的意義が明らかにされた。
また、ＮＭＵの脳室内投与が体温上昇、熱産生、酸素消費を上昇させることが報告されている。この作用は交感神経による脂肪組織と筋肉系の活性化によるものと考えられている。
ＮＭＵの脳室内投与により胃酸分泌抑制と胃排出抑制（ｇａｓｔｒｉｃ  ｅｍｐｔｙｉｎｇ）が起こることも報告されており、この作用はＣＲＨ分泌を経由した中枢性作用と考えられる。これらの作用は摂食量を低下させる方向に作用する。
末梢投与による腸管に対する作用は詳しく検討されていないが、ＮＭＵＲ１が腸管に発現していることから、ＮＭＵが末梢投与により、腸管に対して何らかの作用を及ぼすことも考えられる。そのような推察から、ＮＭＵ末梢投与による胃や腸管に対する作用が検討され、大腸特異的なｐｒｏｋｉｎｅｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙが見出されている。【０００４】
国際公開２００７／０７５４３９号パンフレットには、ＮＭＵを末梢投与することで摂食抑制効果が得られることが開示されている。
本発明者等もまた、独自に、ＮＭＵ−２３が末梢投与的にも摂食抑制作用を現すことを見出していた。一方、ＮＭＵ−８は受容体ＮＭＵＲ１やＮＭＵＲ２に対して十分に強いアゴニスト活性を有するにもかかわらず、末梢投与的には摂食抑制作用を現すことはなかった。
ニューロメジンＵが摂食抑制剤として有用であるためには、末梢投与等の通常の投与形態でも、高い摂食抑制作用を現すことがきわめて重要である。【０００５】
また、医薬分野における化学修飾用途に用いられるＰＥＧ誘導体としては、種々の化合物が公知である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、新規摂食抑制剤を提供すること、を目的とする。
本発明はまた、末梢投与等の通常の投与形態でも、高い摂食抑制作用を表すニューロメジンＵ誘導体を提供すること、を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、末梢投与的には摂食抑制作用を現さなかったことの原因は、ＮＭＵ−８の血中での不安定性にあると推測した。さらに、本発明者らは、血中安定性の高いＮＭＵ−８誘導体（または修飾体）であれば十分な摂食抑制作用を発揮すると推察した。そこで、ＮＭＵ−８にｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌの付加を行い、血中安定性の高いＮＭＵ−８誘導体、具体的には、
ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドに、
リンカーを介して、メトキシポリエチレングリコールが結合しているニューロメジンＵ誘導体を創製し、これらのＮＭＵ−８修飾体が末梢投与的にも十分に強い摂食抑制作用や体重減少作用を現すことを明らかにした。【０００８】
本知見に基づき、本発明者らは、更なる研究の結果、本発明を完成するに至った。【０００９】
すなわち、本発明は、以下の［１］〜[１８]等を提供するものである。
［１］
ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドに、リンカーを介して、メトキシポリエチレングリコールが結合しているニューロメジンＵ誘導体であって、式
2009044918.tif 000002
【００１０】
［式中、
Ｙは、ニューロメジンＵのＣ末端のアミノ配列の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列からなるポリペプチドを表し；
Ｘはメトキシポリエチレングリコールを表し；
Ｘ’は存在しないか、またはメトキシポリエチレングリコールを表し；式
2009044918.tif 000003
で表される部分はリンカーを表し、
Ｌａは、
2009044918.tif 000004
（式中、ｉは１〜５の整数を表し、ｋは１〜１００の整数を表す。）
から選択される２価または３価の基を表し；
Ｌｂは、
（ｉ）結合手、
（ｉｉ）式：−Ｂ１ａ−Ｑｂ１−Ｂ１ｂ−
（式中、
Ｂ１ａおよびＢ１ｂは、−ＣＯ−を表し、
Ｑｂ１は、
2009044918.tif 000005
（式中、ｐは２〜８の整数を表す。）
から選択される２価の基を表す。）で表される２価の基、
（ｉｉｉ）式：−Ｂ２ａ−Ｑｂ２−Ｂ２ｂ−
（式中、
Ｂ２ａは、−ＣＯ−を表し、
Ｂ２ｂは、
2009044918.tif 000006
を表し、
Ｑｂ２は、
2009044918.tif 000007
（式中、ｑは３〜１０の整数を表し、ｒは１〜１０の整数を表し、およびｔは１〜１０の整数を表す。）
から選択される２価の基を表す。）
で表される２価の基、または
（ｉｖ）式：−Ｂ３ａ−Ｑｂ３−Ｂ３ｂ−
（式中、
Ｂ３ａは、
2009044918.tif 000008
または結合手を表し、
Ｂ３ｂは、−ＣＯ−を表し、
Ｑｂ３は、−（ＣＨ２）ｎ１−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ２−
（式中、
ｎ１は０〜５の整数を表し、
ｎ２は０〜５の整数を表し、
Ｚは、結合手、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−、
2009044918.tif 000009
を表す。）
で表される２価の基を表す。）
で表される２価の基
を表し；
Ｌｃは、
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ−
（式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し、
Ｑｃは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−ＣＨ（−ＮＨＸ）−、
2009044918.tif 000010
（式中、
ｕは１〜１８の整数を表し、
ｖは１〜１２の整数を表し、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
Ｘは前記と同意義を表す。）
から選択される２価の基を表し、
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
Ｃｂは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
（式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000011
を表し、および
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
Ｃｂ’は、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表される２価の基を表し；
ｊは０〜３の整数を表す。
但し、Ｌａが、
2009044918.tif 000012
であって、かつＬｂが結合手である場合、Ｌｃは、結合手ではない；
および
Ｌａが、
2009044918.tif 000013
であって、かつ
Ｌｂが、式：−ＣＯ−Ｑｂ２−Ｂ２ｂ−
（式中、Ｑｂ２は、
2009044918.tif 000014
（ｒは２である）
Ｂ２ｂは、
2009044918.tif 000015
）で表される２価の基である場合、Ｌｃは、結合手ではない。］
で表されるニューロメジンＵ誘導体。【００１１】
［２］
ニューロメジンＵが、配列番号：１〜６のいずれか一つで表されるアミノ酸配列からなる、上記［１］に記載のニューロメジンＵ誘導体。【００１２】
［３］
ポリペプチドが、ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の８アミノ酸からなる、上記［１］に記載のニューロメジンＵ誘導体。【００１３】
［４］
ポリペプチドが、配列番号：２、４および６のいずれか一つで表されるアミノ酸配列からなる上記［３］に記載のニューロメジンＵ誘導体。【００１４】
［５］
式
2009044918.tif 000016
［式中、
Ｘは、メトキシポリエチレングリコールを表し；
ｉは１〜５の整数を表し；
Ｑｂ３は、式：−（ＣＨ２）ｎ１−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ２−
（式中、
ｎ１は０〜５の整数を表し、
ｎ２は０〜５の整数を表し、
Ｚは結合手、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−、
2009044918.tif 000017
で表わされる２価の基を表し；
Ｙは、ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドを表す。］
で表される上記［１］に記載のニューロメジンＵ誘導体。【００１５】
［６］
式
2009044918.tif 000018
［式中、
Ｘは、メトキシポリエチレングリコールを表し；
ｉは１〜５の整数を表し；
Ｌｃは
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ−
（式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し、
Ｑｃは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−ＣＨ（−ＮＨＸ）−、
2009044918.tif 000019
（式中、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
Ｘは前記と同意義を表す。）を表し、
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）
から選択される２価の基を表し、
Ｃｂは、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
（式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000020
を表し、および
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
Ｃｂ’は、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表される２価の基を表し；
ｊ’は１〜３の整数を表し；および
Ｙは、ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドを表す。
Ｌｃは、繰り返しにおいて、同一であっても、異なっていてもよい。］
で表される上記［１］に記載のニューロメジンＵ誘導体。【００１６】
［７］
式
2009044918.tif 000021
［式中、
Ｘは、メトキシポリエチレングリコールを表し；
ｉは１〜５の整数を表し；
Ｌｃは
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ’−
（式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し、
Ｑｃは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃは、結合手、−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、
2009044918.tif 000022
を表し、
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）で表される２価の基を表し、
Ｃｂ’は、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
（式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000023
を表し、
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
Ｃｂ’は、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）で表される２価の基を表し；
ｊ’は１〜３の整数を表し；および
Ｙは、ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドを表す。
Ｌｃは、繰り返しにおいて、同一であっても、異なっていてもよい。］
で表される上記［１］に記載のニューロメジンＵ誘導体。【００１７】
［８］
上記［１］に記載のニューロメジンＵ誘導体を含有する摂食抑制剤。
［９］
上記［１］に記載のニューロメジンＵ誘導体を含有する肥満症の予防または治療剤。
［１０］
哺乳動物に対して上記［１］に記載のニューロメジンＵ誘導体の有効量を投与することを特徴とする肥満症の予防・治療方法。
［１１］
肥満症の予防・治療剤を製造するための上記［１］に記載のニューロメジンＵ誘導体の使用。【００１８】
［１２］
ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドに、リンカーを介して、メトキシポリエチレングリコールが結合しているニューロメジンＵ誘導体であって、式
2009044918.tif 000024
［式中、
Ｙは、ニューロメジンＵのＣ末端のアミノ配列の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列からなるポリペプチドを表し；
Ｘはメトキシポリエチレングリコールを表し；
Ｘ’は存在しないか、またはメトキシポリエチレングリコールを表し；
式
2009044918.tif 000025
で表される部分はリンカーを表し、
ＬａＩＩＩは、式
2009044918.tif 000026
（式中、
Ｒは、結合手、−Ｏ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−ＳＯ２−、−ＳＯ２−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−、−ＣＯ−ＣＨ２−Ｓ−、または
2009044918.tif 000027
を表し、および
ｎＩＩＩは０〜５の整数を表す。）で表わされる２価または３価の基を表し；
ＬｂＩＩＩは、
−（ＣＨ２）ｉ−（式中、ｉは１〜５の整数を表す。）
を表し；
ＬｃＩＩＩは、
（ｉ）式：−ＮＨ−ＱｃＩＩＩ−ＣｂＩＩＩ−
（式中、
ＱｃＩＩＩは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−ＺｃＩＩＩ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
ＺｃＩＩＩは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−ＳＯ２−、−ＳＯ２−ＮＨ−、
2009044918.tif 000028
（式中、
ｕは１〜１８の整数を表し、
ｖは１〜１２の整数を表し、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
Ｘは前記と同意義を表す。）
から選択される２価の基を表し、
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
ＣｂＩＩＩは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−ＱｃＩＩＩ’−ＣｂＩＩＩ’−
（式中、
ＱｃＩＩＩ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−ＺｃＩＩＩ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、、
ＺｃＩＩＩ’は、
2009044918.tif 000029
から選択される２価の基を表し、および
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
ＣｂＩＩＩ’は、−ＣＯ−または−ＳＯ２−を表す。）を表し；、および
ｊＩＩＩは１〜３の整数を表す。］
で表されるニューロメジンＵ誘導体。【００１９】
［１３］
Ｌｃにおける最もＬｂに近い窒素原子から、ニューロメジンＵのＮ末端の窒素原子までの距離が、３．５〜３０Åである上記［１２］に記載のニューロメジンＵ誘導体。【００２０】
［１４］
ＬｃＩＩＩが、
（ｉ）式：−ＮＨ−ＱｃＩＩＩ−ＣｂＩＩＩ−
［式中、
ＱｃＩＩＩは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−（ｍ１は０〜１５の整数）で表される２価の基を表し、
ＣｂＩＩＩは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。］
で表わされる２価の基である場合、
式：−ＮＨ−ＱｃＩＩＩ−ＣｂＩＩＩ−のＮＨの窒素原子から、ニューロメジンＵのＮ末端の窒素原子までの距離が、３．５〜７．０Åである上記［１２］に記載のニューロメジンＵ誘導体。【００２１】
［１５］
ＬｃＩＩＩが、
（ｉ）式：−ＮＨ−ＱｃＩＩＩ−ＣｂＩＩＩ−
［式中、
ＱｃＩＩＩは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−ＺｃＩＩＩ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１０の整数を表し、
ＺｃＩＩＩは、−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−ＳＯ２−、−ＳＯ２−ＮＨ−、
2009044918.tif 000030
（式中、
ｕは１〜１０の整数を表し、
ｖは１〜１０の整数を表し、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
ｍ２は０〜５の整数を表す。）
から選択される２価の基を表し、
ＣｂＩＩＩは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。］
で表わされる２価の基である場合、
式：−ＮＨ−Ｑｃ−Ｃｂ−におけるＮＨの窒素原子からＺｃにおける最も−（ＣＨ２）ｍ１−部に近い原子までの距離が、３．５〜１０Åであり、かつ
Ｚｃにおける最も−（ＣＨ２）ｍ１−部に近い原子からニューロメジンＵのＮ末端の窒素原子までの距離が、３．５〜７．０Åである上記［１２］に記載のニューロメジンＵ誘導体。【００２２】
［１６］
ＬｃＩＩＩが、
（ｉｉ）式：−ＱｃＩＩＩ’−ＣｂＩＩＩ’−
［式中、
ＱｃＩＩＩ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000031
を表し、
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
ＣｂＩＩＩ’は、結合手、−ＣＯ−または−ＳＯ２−を表す。］
で表される２価の基である場合、
2009044918.tif 000032
における最もＬｂに近い窒素原子から、
ニューロメジンＵのＮ末端の窒素原子までの距離が、５〜１０Åである上記［１２］に記載のニューロメジンＵ誘導体。【００２３】
［１７］
ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドに、リンカーを介して、メトキシポリエチレングリコールが結合しているニューロメジンＵ誘導体であって、式
2009044918.tif 000033
［式中、
Ｙは、ニューロメジンＵのＣ末端のアミノ配列の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列からなるポリペプチドを表し；
Ｘはメトキシポリエチレングリコール（但し、複数のＸで表されるメトキシポリエチレングリコールは、同一であっても異なっていてもよい。）を表し；
Ｌｂは、
（ｉ）結合手、
（ｉｉ）式：−Ｂ１ａ−Ｑｂ１−Ｂ１ｂ−
（式中、
Ｂ１ａおよびＢ１ｂは、−ＣＯ−を表し、
Ｑｂ１は、
2009044918.tif 000034
（式中、ｐは２〜８の整数を表す。）
から選択される２価の基を表す。）で表される２価の基、
（ｉｉｉ）式：−Ｂ２ａ−Ｑｂ２−Ｂ２ｂ−
（式中、
Ｂ２ａは、−ＣＯ−を表し、
Ｂ２ｂは、
2009044918.tif 000035
を表し、
Ｑｂ２は、
2009044918.tif 000036
（式中、ｑは３〜１０の整数を表し、ｒは１〜１０の整数を表し、およびｔは１〜１０の整数を表す。）
から選択される２価の基を表す。）
で表される２価の基、または
（ｉｖ）式：−Ｂ３ａ−Ｑｂ３−Ｂ３ｂ−
（式中、
Ｂ３ａは、
2009044918.tif 000037
または結合手を表し、
Ｂ３ｂは、−ＣＯ−を表し、
Ｑｂ３は、−（ＣＨ２）ｎ１−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ２−
（式中、
ｎ１は０〜５の整数を表し、
ｎ２は０〜５の整数を表し、
Ｚは、結合手、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−、
2009044918.tif 000038
を表す。）
で表される２価の基を表す。）
で表される２価の基を
表し；
Ｌｃは、
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ−
（式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し、
Ｑｃは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−ＣＨ（−ＮＨＸ）−、
2009044918.tif 000039
（式中、
ｕは１〜１８の整数を表し、
ｖは１〜１２の整数を表し、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
Ｘは前記と同意義を表す。）
から選択される２価の基を表し、
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）
から選択される２価の基を表し、
Ｃｂは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
（式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000040
を表し、および
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
Ｃｂ’は、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表される２価の基を表し；
ｋＩＶは１〜１００の整数を表し；
ｍＩＶは１〜１００の整数を表し；
ｐＩＶは１〜１００の整数を表し；および
ｊは０〜３の整数を表す。］
で表されるニューロメジンＵ誘導体。【００２４】
［１８］
ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドに、リンカーを介して、メトキシポリエチレングリコールが結合しているニューロメジンＵ誘導体であって、式
2009044918.tif 000041
［式中、
Ｙは、ニューロメジンＵのＣ末端のアミノ配列の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列からなるポリペプチドを表し；
Ｘは、メトキシポリエチレングリコール（但し、複数のＸで表されるメトキシポリエチレングリコールは、同一であっても異なっていてもよい。）を表し、
Ｘ’’は、ポリエチレングリコール（但し、複数のＸ’’で表されるポリエチレングリコールは、同一であっても異なっていてもよい。）を表し、
Ｌｃは、
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ−
（式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し、
Ｑｃは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−ＣＨ（−ＮＨＸ）−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−ＳＯ２−、−ＳＯ２−ＮＨ−、
2009044918.tif 000042
（式中、
ｕは１〜１８の整数を表し、
ｖは１〜１２の整数を表す。
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
Ｘは前記と同意義を表す。）
から選択される２価の基を表し、
）を表し、および
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）
から選択される２価の基を表し、
Ｃｂは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
（式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000043
を表し、
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
Ｃｂ’は、−ＣＯ−または−ＳＯ２−を表す。）
で表される２価の基を表し；
Ｒは、各出現において同一または異なって、
結合手、−Ｏ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−ＳＯ２−、−ＳＯ２−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−、−ＣＯ−ＣＨ２−Ｓ−、または
2009044918.tif 000044
）から選択される２価の基を表し；
ｈＶは０〜３の整数を表し；および
ｉＶ、ｊＶ、ｋＶ、ｍＶおよびｎＶは、それぞれ同一または異なって、０〜５の整数を表す。］
で表されるニューロメジンＵ誘導体。
【発明の効果】
【００２５】
本発明のニューロメジンＵ誘導体は、高い安定性を有し、末梢投与等の通常の投与形態でも、高い摂食抑制作用を現し、摂食抑制剤として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
本明細書中、「直鎖Ｃ１−５アルキル」としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、およびｎ−ペンチルが挙げられる。
本発明のニューロメジンＵ誘導体は、ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドに、リンカーを介して、メトキシポリエチレングリコールが結合している。すなわち、本発明のニューロメジンＵ誘導体は、コンジュゲートである。
本発明で用いられるペプチドは、好ましくは、そのＮ末端のαアミノ基で、リンカーと結合する。
すなわち、本発明のニューロメジンＵ誘導体は、
式
2009044918.tif 000045
［式中、
Ｙは、ニューロメジンＵのＣ末端のアミノ配列の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列からなるポリペプチドを表し、
Ｘはメトキシポリエチレングリコールを表し、
Ｘ’は存在しないか、またはメトキシポリエチレングリコールを表し、
Ｌはリンカーを表す。］
で表される化合物またはその塩である。【００２７】
本明細書中、「ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチド」を、単に「本発明で用いられるペプチド」と略称する場合がある。
本明細書において、ペプチドは、ペプチド標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端がＣ末端（カルボキシル末端）で記載される。
「本発明で用いられるペプチド」は、好ましくは、そのＣ末端に、ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含む。
「ニューロメジンＵ」は、好ましくは、下記の配列番号：１〜６のいずれか１つで表されるアミノ酸配列からなる。
「本発明で用いられるペプチド」は、好ましくは、ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の８アミノ酸からなる。
「本発明で用いられるペプチド」は、好ましくは、配列番号：２、４および６のいずれか一つで表されるアミノ酸配列からなる。
「ニューロメジンＵのアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列」としては、ニューロメジンＵのアミノ酸配列と約６０％以上、好ましくは約７０％以上、さらに好ましくは約８０％以上、特に好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列などが挙げられる。【００２８】
本明細書におけるアミノ酸配列の相同性は、相同性計算アルゴリズムＮＣＢＩ  ＢＬＡＳＴ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ）を用い、以下の条件（期待値＝１０；ギャップを許す；マトリクス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；フィルタリング＝ＯＦＦ）にて計算することができる。アミノ酸配列の相同性を決定するための他のアルゴリズムとしては、例えば、Ｋａｒｌｉｎら，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ９０：  ５８７３−５８７７  （１９９３）に記載のアルゴリズム［該アルゴリズムはＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．０）に組み込まれている（Ａｌｔｓｃｈｕｌら，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，  ２５：  ３３８９−３４０２  （１９９７））］、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．，  ４８：  ４４４−４５３  （１９７０）に記載のアルゴリズム［該アルゴリズムはＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラムに組み込まれている］、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ，  ＣＡＢＩＯＳ，  ４：  １１−１７  （１９８８）に記載のアルゴリズム［該アルゴリズムはＣＧＣ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．０）に組み込まれている］、Ｐｅａｒｓｏｎら，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８５：  ２４４４−２４４８  （１９８８）に記載のアルゴリズム［該アルゴリズムはＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＦＡＳＴＡプログラムに組み込まれている］等が挙げられ、それらも同様に好ましく用いられ得る。【００２９】
本発明で用いられるペプチドは、好ましくは、ニューロメジンＵと実質的に同質の活性を有する。
「ニューロメジンＵと実質的に同質の活性」としては、ＦＭ３結合活性、ＴＧＲ１結合活性、および摂食抑制活性等が挙げられる。実質的に同質とは、それらの性質が性質的に（例、生理学的に、または薬理学的に）同質であることを表す。したがって、これらの活性が同等（例、約０．０１〜１００倍、好ましくは約０．１〜１０倍、より好ましくは０．５〜２倍）であることが好ましいが、これらの活性の高さは異なっていてもよい。これらの活性は、本明細書の実施例に記載の方法に準じて測定することができる。
また、本発明で用いられるペプチドには、例えば、
（１）  配列番号：１で表されるアミノ酸配列の１または２個以上（例えば、１〜１０個程度、１〜５個程度、１〜３個程度、１〜２個程度）のアミノ酸が欠失、付加、挿入、および／または置換しているアミノ酸配列（ただし、Ｃ末端に配列番号：２で表されるアミノ酸配列を含む）；
（２）  配列番号：３で表されるアミノ酸配列の１または２個以上（例えば、１〜１０個程度、好ましくは１〜５個程度、より好ましくは１〜３個程度、さらに好ましくは１〜２個程度）のアミノ酸が欠失、付加、挿入、および／または置換しているアミノ酸配列（ただし、Ｃ末端に配列番号：４で表されるアミノ酸配列を含む）；
（３）  配列番号：５で表されるアミノ酸配列の１または２個以上（例えば、１〜１０個程度、好ましくは１〜５個程度、より好ましくは１〜３個程度、さらに好ましくは１〜２個程度）のアミノ酸が欠失、付加、挿入、および／または置換しているアミノ酸配列（ただし、Ｃ末端に配列番号：６で表されるアミノ酸配列を含む）；
からなり、ニューロメジンＵと実質的に同質の活性を有するペプチドも含まれる。ここで、「実質的に同質の活性」とは、前述と同意義であり、従って、上記のアミノ酸の欠失、付加、挿入、置換、およびそれらの組合せは、ニューロメジンＵの活性に質的な影響を与えないものである必要がある。【００３０】
本発明で用いられるペプチドとして好ましくは、
アミノ酸配列Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−ＮＨ２（配列番号：１）からなるブタＮＭＵ−２５、
アミノ酸配列Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−ＮＨ２（配列番号：２）からなるブタＮＭＵ−８、
アミノ酸配列Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−ＮＨ２（配列番号：３）からなるヒトＮＭＵ−２５、
アミノ酸配列Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−ＮＨ２（配列番号：４）からなるヒトＮＭＵ−８、
アミノ酸配列Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−ＮＨ２（配列番号：５）からなるラットＮＭＵ−２３、および
アミノ酸配列Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−ＮＨ２（配列番号：６）からなるラットＮＭＵ−８、ならびに
、他の哺乳動物におけるそれらのホモログ、さらにはそれらの天然のアレル変異体などがあげられる。【００３１】
本発明で用いられるペプチドは、温血動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウシ、ウマ、トリ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジー）の細胞［例えば、脾細胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、杯細胞、内皮細胞、平滑筋細胞、線維芽細胞、線維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球、樹状細胞）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくはガン細胞］に由来するペプチドであっても、あるいはそれらの細胞が存在するあらゆる組織［例えば、脳、脳の各部位（例、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、脂肪組織、骨格筋、腹膜］に由来するペプチドであってよい。また、本発明で用いられるペプチドは、化学合成もしくは無細胞翻訳系で合成されたペプチドであってもよい。あるいは、本発明で用いられるペプチドは、そのアミノ酸配列をコードする塩基配列を含有する核酸を導入された形質転換体から産生された組換えペプチドであってもよい。【００３２】
Ｘ、およびＸ’で表わされる「メトキシポリエチレングリコール」、ならびにＸ’’ で表わされる「ポリエチレングリコール」は、直鎖状でもよく、分枝していてもよい。当該「メトキシポリエチレングリコール」および「ポリエチレングリコール」の分子量（または平均分子量）は、特に限定されるものではないが、それぞれ、好ましくは、約２０，０００ダルトン〜約４０，０００ダルトン、より好ましくは、約２５，０００ダルトン〜約３５，０００ダルトンの分子量（または、平均分子量）、更に好ましくは、約３０，０００ダルトンである。【００３３】
当該「メトキシポリエチレングリコール」は、式：ＭｅＯ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−で表わされる。ここで、ｎは、重合度（または、平均重合度）を表わし、好ましくは約３５０〜約１３５０、より好ましくは、約５５０〜約１３５０である。【００３４】
本発明のニューロメジンＵ誘導体におけるリンカー（すなわち、Ｌで表されるリンカー）は、メトキシポリエチレングリコールを本発明で用いられるペプチドに連結させることができるものであれば、特に限定されず、ポリペプチドのＰＥＧ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）に汎用されるリンカー等を用いることができる。【００３５】
［態様１］
本発明の一態様において、Ｌで表されるリンカーは、
式：  
2009044918.tif 000046
で表される。
本明細書中の式中の、（Ｘ）、（Ｘ’）、および（Ｌｂ）等の、結合手と連結した丸括弧で囲まれた記号は、化合物中の部分構造の方向を表す目的で用いられる。
当該態様１において、Ｌａは、
2009044918.tif 000047
（式中、ｉは１〜５の整数を表し、ｋは１〜１００の整数を表す。）
から選択される２価または３価の基である。
当該態様１において、Ｌｂは、
（ｉ）結合手、
（ｉｉ）式：−Ｂ１ａ−Ｑｂ１−Ｂ１ｂ−
［式中、
Ｂ１ａおよびＢ１ｂは、−ＣＯ−を表し、
Ｑｂ１は
2009044918.tif 000048
（式中、ｐは２〜８の整数を表す。）
から選択される２価の基を表す。］で表される２価の基、
（ｉｉｉ）式：−Ｂ２ａ−Ｑｂ２−Ｂ２ｂ−
［式中、
Ｂ２ａは、−ＣＯ−を表し、
Ｂ２ｂは、
2009044918.tif 000049
を表し、
Ｑｂ２は、
2009044918.tif 000050
（式中、ｑは３〜１０の整数を表し、ｒは１〜１０の整数を表し、およびｔは１〜１０の整数を表す。）
から選択される２価の基を表す。］
で表される２価の基、あるいは
（ｉｖ）式：−Ｂ３ａ−Ｑｂ３−Ｂ３ｂ−
［式中、
Ｂ３ａは、
2009044918.tif 000051
または結合手を表し、
Ｂ３ｂは、−ＣＯ−を表し、
Ｑｂ３は、−（ＣＨ２）ｎ１−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ２−
（式中、
ｎ１は０〜５の整数を表し、
ｎ２は０〜５の整数を表し、
Ｚは、結合手、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−、
2009044918.tif 000052
を表す。）
で表される２価の基を表す。］
で表される２価の基を表す。【００３６】
当該態様１において、Ｌｃは、
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ−
［式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し、
Ｑｃは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−ＣＨ（−ＮＨＸ）−、
2009044918.tif 000053
（式中、
ｕは１〜１８の整数を表し、
ｖは１〜１２の整数を表し、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
Ｘは前記と同意義を表す。）
から選択される２価の基を表し、
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
Ｃｂは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。］
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
［式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000054
を表し、および
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
Ｃｂ’は、−ＣＯ−を表す。］で表される２価の基を表す。
当該態様１において、ｊは０〜３の整数を表す。Ｌｃは、繰り返しにおいて、同一であっても、異なっていてもよい。ｊが０のとき、（Ｌｃ）ｊが結合手を表す事は、容易に理解されよう。
当該態様１において、Ｌａは、好ましくは、
2009044918.tif 000055
（式中、ｉは１〜５の整数を表し、ｋは１〜１００の整数を表す。）
から選択される２価または３価の基である。【００３７】
当該態様１において、
Ｌｂは、好ましくは、
（ｉ）結合手、
（ｉｉ）式：−Ｂ１ａ−Ｑｂ１−Ｂ１ｂ−
［式中、
Ｂ１ａおよびＢ１ｂは、−ＣＯ−を表し、
Ｑｂ１は
2009044918.tif 000056
（式中、ｐは２〜８の整数を表す。）
から選択される２価の基を表す。］で表される２価の基、
、あるいは
（ｉｖ）式：−Ｂ３ａ−Ｑｂ３−Ｂ３ｂ−
［式中、
Ｂ３ａは、
2009044918.tif 000057
または結合手を表し、
Ｂ３ｂは、−ＣＯ−を表し、
Ｑｂ３は、−（ＣＨ２）ｎ１−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ２−
（式中、
ｎ１は０〜５の整数を表し、
ｎ２は０〜５の整数を表し、
Ｚは、結合手、
2009044918.tif 000058
を表す。）
で表される２価の基を表す。］
で表される２価の基を表す。【００３８】
当該態様１において、Ｌｃは、
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ−
［式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し、
Ｑｃは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１１（より好ましくは２〜６）の整数を表し、
Ｚｃは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−ＣＨ（−ＮＨＸ）−、
2009044918.tif 000059
（式中、
ｕは１〜１８の整数を表し、
ｖは１〜１２の整数を表し、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
Ｘは前記と同意義を表す。）
から選択される２価の基を表し、
ｍ２は０〜１５（より好ましくは１〜４、さらに好ましくは１〜２）の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
Ｃｂは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。］
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
［式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000060
を表し、および
ｍ２’０を表す。）
Ｃｂ’は、−ＣＯ−を表す。］で表される２価の基を表す。【００３９】
当該態様１において、
（Ｌｃ）ｊとして好ましくは、例えば、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍｃ１−ＣＯ−、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍｃ２−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍｃ３−ＣＯ−、
2009044918.tif 000061
2009044918.tif 000062
2009044918.tif 000063
（式中、ｍｃ１は１〜１１の整数を表し、ｍｃ２およびｍｃ３はそれぞれ１〜５の整数を表し（但し、好ましくはｍｃ２とｍｃ３の和は４〜７である。）、ｍｃ４は１〜５の整数を表し、Ｘは前記と同意義を表す。）
から選択される２価の基である。【００４０】
当該態様１において、好ましくは、
2009044918.tif 000064
Ｌａが
（式中、ｉは１〜５の整数を表し、ｋは１〜１００の整数を表す。）
から選択される２価または３価の基であり；
Ｌｂが、
（ｉ）結合手、
（ｉｉ）式：−Ｂ１ａ−Ｑｂ１−Ｂ１ｂ−
［式中、
Ｂ１ａおよびＢ１ｂは、−ＣＯ−を表し、
Ｑｂ１は
2009044918.tif 000065
（式中、ｐは２〜８の整数を表す。）
から選択される２価の基を表す。］で表される２価の基、
、あるいは
（ｉｖ）式：−Ｂ３ａ−Ｑｂ３−Ｂ３ｂ−
［式中、
Ｂ３ａは、
2009044918.tif 000066
または結合手を表し、
Ｂ３ｂは、−ＣＯ−を表し、
Ｑｂ３は、−（ＣＨ２）ｎ１−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ２−
（式中、
ｎ１は０〜５の整数を表し、
ｎ２は０〜５の整数を表し、
Ｚは、結合手、
2009044918.tif 000067
を表す。）
で表される２価の基を表す。］
で表される２価の基であり；および
Ｌｃが
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ−
［式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し、
Ｑｃは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１１（より好ましくは２〜６）の整数を表し、
Ｚｃは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−ＣＨ（−ＮＨＸ）−、
2009044918.tif 000068
（式中、
ｕは１〜１８の整数を表し、
ｖは１〜１２の整数を表し、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
Ｘは前記と同意義を表す。）
から選択される２価の基を表し、
ｍ２は０〜１５（より好ましくは１〜４、さらに好ましくは１〜２）の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
Ｃｂは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。］
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
［式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000069
を表し、および
ｍ２’は０を表す。）
Ｃｂ’は、−ＣＯ−を表す。］で表される２価の基である。【００４１】
当該態様１において、
（Ｌｃ）ｊとして好ましくは、例えば、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍｃ１−ＣＯ−、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍｃ２−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍｃ３−ＣＯ−、
2009044918.tif 000070
2009044918.tif 000071
2009044918.tif 000072
（式中、ｍｃ１は１〜１１の整数を表し、ｍｃ２およびｍｃ３はそれぞれ１〜５の整数を表し（但し、好ましくはｍｃ２とｍｃ３の和は４〜７である。）、ｍｃ４は１〜５の整数を表し、Ｘは前記と同意義を表す。）
から選択される２価の基である。
Ｌａが
2009044918.tif 000073
であるときは、好ましくは、Ｌｂは結合手である。
Ｌａが
2009044918.tif 000074
であるときは、好ましくは、ｊは０、すなわち（Ｌｃ）ｊは結合手である。【００４２】
但し、好ましくは、Ｌａが、
2009044918.tif 000075
であって、かつＬｂが結合手である場合、Ｌｃは、結合手ではない。
また、好ましくは、Ｌａが、
2009044918.tif 000076
であって、かつ
Ｌｂが、式：−ＣＯ−Ｑｂ２−Ｂ２ｂ−
（式中、Ｑｂ２は、
2009044918.tif 000077
（ｒは２である）
Ｂ２ｂは、
2009044918.tif 000078
）で表される２価の基である場合、Ｌｃは、結合手ではない。【００４３】
Ｌで表されるリンカーとして好ましくは、
式
2009044918.tif 000079
（式中、
ｉは１〜５の整数を；
Ｑｂ３は、式：−（ＣＨ２）ｎ１−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ２−
（式中、
ｎ１は０〜５の整数を表し、
ｎ２は０〜５の整数を表し、
Ｚは結合手、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−、
2009044918.tif 000080
を表す。）
で表わされる２価の基を表す。）
で表される２価の基である。
なかでも好ましくは、
ｉが２であり、および
Ｚが結合手であるニューロメジンＵ誘導体である。【００４４】
Ｌで表されるリンカーとして、また、好ましくは、
2009044918.tif 000081
［式中、
ｉは１〜５の整数を表し；
Ｌｃは
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ−
（式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し；
Ｑｃは、
式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−ＣＨ（−ＮＨＸ）−
2009044918.tif 000082
（式中、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
Ｘは前記と同意義を表す。）を表し、
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）
から選択される２価の基を表し；および
Ｃｂは、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表される２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
（式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000083
を表し、および
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
Ｃｂ’は、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表される２価の基を表し；
ｊは１〜３の整数を表す。
Ｌｃは、繰り返しにおいて、同一であっても、異なっていてもよい。］
で表わされる２価の基である。【００４５】
なかでも好ましくは、
ｉが３であり、および
（Ｌｃ）ｊが
結合手、
−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍｃ１−ＣＯ−、
−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍｃ２−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍｃ３−ＣＯ−
2009044918.tif 000084
2009044918.tif 000085
2009044918.tif 000086
（式中、ｍｃ１は１〜１１の整数を表し、ｍｃ２およびｍｃ３はそれぞれ１〜５の整数を表し（但し、好ましくはｍｃ２とｍｃ３の和は４〜７である。）、ｍｃ４は１〜５の整数を表し、Ｘは前記と同意義を表す。）
であるニューロメジンＵ誘導体である。【００４６】
Ｌで表されるリンカーとしては、また、好ましくは、
2009044918.tif 000087
［式中、
ｉは１〜５の整数を表し；
Ｌｃは
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ−
（式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し、
Ｑｃは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃは、結合手、−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、
2009044918.tif 000088
【００４７】
を表し、および
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
Ｃｂは、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−をを表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
（式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000089
を表し、
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
Ｃｂ’は、−ＣＯ−を表す。）で表される２価の基を表し；
ｊは１〜３の整数を表す。
Ｌｃは、繰り返しにおいて、同一であっても、異なっていてもよい。］
で表わされる２価の基である。【００４８】
なかでも好ましくは、
ｉが３であり、および
（Ｌｃ）ｊが
結合手、
−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍｃ１−ＣＯ−、
−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍｃ２−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍｃ３−ＣＯ−
2009044918.tif 000090
2009044918.tif 000091
2009044918.tif 000092
（式中、ｍｃ１は１〜１１の整数を表し、ｍｃ２およびｍｃ３はそれぞれ１〜５の整数を表し（但し、好ましくはｍｃ２とｍｃ３の和は４〜７である。）、ｍｃ４は１〜５の整数を表し、Ｘは前記と同意義を表す。）
であるニューロメジンＵ誘導体である。【００４９】
［態様２］
本発明の別の一態様において、Ｌで表されるリンカーは、
式：  
2009044918.tif 000093
で表される。【００５０】
当該態様２において、
ＬａＩＩＩは、式
2009044918.tif 000094
（式中、
Ｒは、結合手、−Ｏ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−ＳＯ２−、−ＳＯ２−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−、−ＣＯ−ＣＨ２−Ｓ−、または
2009044918.tif 000095
を表し、
ｎＩＩＩは０〜５の整数を表す。）で表わされる２価または３価の基を表し；
ＬｂＩＩＩは、
−（ＣＨ２）ｉ−（式中、ｉは１〜５の整数を表す。）
を表し；  
ＬｃＩＩＩは、
（ｉ）式：−ＮＨ−ＱｃＩＩＩ−ＣｂＩＩＩ−
（式中、
ＱｃＩＩＩは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−ＺｃＩＩＩ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
ＺｃＩＩＩは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−ＳＯ２−、−ＳＯ２−ＮＨ−、
2009044918.tif 000096
（式中、
ｕは１〜１８の整数を表し、
ｖは１〜１２の整数を表し、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基（Ｘは前記と同意義を表す。）を表し、
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表す。）から選択される２価の基を表し、
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
ＣｂＩＩＩは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−ＱｃＩＩＩ’−ＣｂＩＩＩ’−
（式中、
ＱｃＩＩＩ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−ＺｃＩＩＩ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
ＺｃＩＩＩ’は、
2009044918.tif 000097
から選択される２価を表し、
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
ＣｂＩＩＩ’は、−ＣＯ−または−ＳＯ２−を表す。）を表し；および
ｊＩＩＩは１〜３の整数を表す。【００５１】
当該態様２において、好ましくは、
ＬａＩＩＩは、式
2009044918.tif 000098
（式中、
Ｒは、−Ｏ−を表し、
ｎＩＩＩは１の整数を表す。）で表わされる２価または３価の基を表す。【００５２】
当該態様２において、好ましくは、
ＬｂＩＩＩは、
−（ＣＨ２）ｉ−（式中、ｉは３の整数を表す。）
を表す。  
当該態様２において、好ましくは、
ＬｃＩＩＩは、
（ｉ）式：−ＮＨ−ＱｃＩＩＩ−ＣｂＩＩＩ−
（式中、
ＱｃＩＩＩは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−ＺｃＩＩＩ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０の整数を表し、
ＺｃＩＩＩは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、
2009044918.tif 000099
（式中、
ｕは１〜１８の整数を表し、
ｖは１〜１２の整数を表し、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基（Ｘは前記と同意義を表す。）を表し、
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表す。）から選択される２価の基を表し、
ｍ２は０〜１０の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
ＣｂＩＩＩは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−ＱｃＩＩＩ’−ＣｂＩＩＩ’−
（式中、
ＱｃＩＩＩ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−ＺｃＩＩＩ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０を表し、
ＺｃＩＩＩ’は、
2009044918.tif 000100
から選択される２価を表し、
ｍ２’は０〜２の整数を表す。）
ＣｂＩＩＩ’は、−ＣＯ−または−ＳＯ２−を表す。）を表し；および
ｊＩＩＩは１〜２の整数を表す。【００５３】
当該態様２において、好ましくは、
ＬａＩＩＩは、式
2009044918.tif 000101
（式中、
Ｒは、−Ｏ−を表し、
ｎＩＩＩは１の整数を表す。）で表わされる２価または３価の基であり；
ＬｂＩＩＩは、
−（ＣＨ２）ｉ−（式中、ｉは３の整数を表す。）
であり；および
ＬｃＩＩＩは、
（ｉ）式：−ＮＨ−ＱｃＩＩＩ−ＣｂＩＩＩ−
（式中、
ＱｃＩＩＩは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−ＺｃＩＩＩ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０の整数を表し、
ＺｃＩＩＩは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、
2009044918.tif 000102
（式中、
ｕは１〜１８の整数を表し、
ｖは１〜１２の整数を表し、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基（Ｘは前記と同意義を表す。）を表し、
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表す。）から選択される２価の基を表し、
ｍ２は０〜１０の整数を表す。）
で表される２価の基を表し、
ＣｂＩＩＩは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−ＱｃＩＩＩ’−ＣｂＩＩＩ’−
（式中、
ＱｃＩＩＩ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−ＺｃＩＩＩ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０を表し、
ＺｃＩＩＩ’は、
2009044918.tif 000103
から選択される２価を表し、
ｍ２’は０〜２の整数を表す。）
ＣｂＩＩＩ’は、−ＣＯ−または−ＳＯ２−を表す。）であり；および
ｊＩＩＩは１〜２の整数である。【００５４】
当該態様２において、好ましくは、Ｌｃにおける最もＬｂに近い窒素原子から、ニューロメジンＵのＮ末端の窒素原子までの距離が、３．５〜３０Åであり、より好ましくは、３．５〜１５Åである。【００５５】
また、当該態様２において、好ましくは、Ｌｃが、
（ｉ）式：−ＮＨ−ＱｃＩＩＩ−ＣｂＩＩＩ−
［式中、
ＱｃＩＩＩは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−（ｍ１は０〜１５の整数）で表される２価の基を表し、
ＣｂＩＩＩは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。］で表わされる２価の基を表す場合、
（ｉ）式：−ＮＨ−ＱｃＩＩＩ−ＣｂＩＩＩ−のＮＨの窒素原子から、ニューロメジンＵのＮ末端の窒素原子までの距離が、３．５〜７．０Åである。【００５６】
また、当該態様２において、好ましくは、ＬｃＩＩＩが、
（ｉ）式：−ＮＨ−ＱｃＩＩＩ−ＣｂＩＩＩ−
［式中、
ＱｃＩＩＩは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−ＺｃＩＩＩ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１０の整数を表し、
ＺｃＩＩＩは、−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−ＳＯ２−、−ＳＯ２−ＮＨ−、
2009044918.tif 000104
（式中、
ｕは１〜１０の整数を表し、
ｖは１〜１０の整数を表し、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基（Ｘは前記と同意義を表す。）を表し、
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表す）を表し、
ｍ２は０〜５の整数を表す。）
から選択される２価の基を表し、
ＣｂＩＩＩは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。］
で表わされる２価の基である場合、
式：−ＮＨ−Ｑｃ−Ｃｂ−におけるＮＨの窒素原子からＺｃにおける最も−（ＣＨ２）ｍ１−部に近い原子までの距離が、３．５〜１０Åであり、かつ
Ｚｃにおける最も−（ＣＨ２）ｍ１−部に近い原子からニューロメジンＵのＮ末端の窒素原子までの距離が、３．５〜７．０Åである。【００５７】
また、当該態様２において、好ましくは、Ｌｃが、
（ｉｉ）式：−ＱｃＩＩＩ’−ＣｂＩＩＩ’−
［式中、
ＱｃＩＩＩ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−ＺｃＩＩＩ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
ＺｃＩＩＩ’は、
2009044918.tif 000105
を表し、
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
ＣｂＩＩＩ’は、結合手、−ＣＯ−または−ＳＯ２−を表す。］で表される２価の基であり、
2009044918.tif 000106
における最もＬｂに近い窒素原子から、
ニューロメジンＵのＮ末端の窒素原子までの距離が、５〜１０Åである。【００５８】
当該態様２において、（Ｌｃ）ｊとしては好ましくは、前記態様１において、例示したものが挙げられる。【００５９】
これらの原子間距離は、化合物もしくは化合物の部分構造の三次元分子モデルを市販の分子モデリングおよび計算ソフト（たとえば、Gaussian, MOPAC, AMBER, CHARMM, MOE, Insightなど,菱化システムで販売）を用いて、延びた(extended)構造としてエネルギー安定化計算を実施し、出力された三次元の安定構造における原子間距離である。この原子間距離は各ソフトにおいて、X線結晶構造解析(例えばケンブリッジ構造データベースなど)から見積もられた原子間距離に相当するように、あらかじめパラメータを設定しており、通常の重原子20個程度の分子ならその誤差は0.2Å以下である。（AMBERの場合、J.Am.Chem. Soc, 106, 765 −784）【００６０】
［態様３］
上記態様１および態様２では２枝に分枝し、２つのメトキシポリエチレングリコールを結合できるリンカーを説明したが、本発明の別の一態様においては、より多くの数に分枝し、これにより、より多くの数のメトキシポリエチレングリコールを結合するリンカーを用いる。
例えば、４枝のリンカーの構造は、２枝のリンカーのアルキレン部分を分枝させることにより、容易に設計できる。
例えば、２枝のリンカーを有する本発明のニューロメジンＵ誘導体が次の構造：
2009044918.tif 000107
を有する場合、４枝のリンカーの構造は、次のように設計できる。
2009044918.tif 000108
【００６１】
また、例えば、２枝のリンカーを有する本発明のニューロメジンＵ誘導体が次の構造：
2009044918.tif 000109
を有する場合、４枝のリンカーの構造は、次のように設計できる。
2009044918.tif 000110
同様に、６枝、８枝、１０枝、・・・および３２分枝のリンカーを設計でき、これらもまた、本発明のニューロメジンＵ誘導体に用いることができる。【００６２】
以下に、４枝のリンカーを有する本発明のニューロメジンＵ誘導体を説明する。
［態様３−１］
本発明の別の一態様は、
ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドに、リンカーを介して、メトキシポリエチレングリコールが結合しているニューロメジンＵ誘導体であって、式
2009044918.tif 000111
［式中、
Ｙは、ニューロメジンＵのＣ末端のアミノ配列の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列からなるポリペプチドを表し；
Ｘはメトキシポリエチレングリコール（但し、複数のＸで表されるメトキシポリエチレングリコールは、同一であっても異なっていてもよい。）を表し；
Ｌｂは、
（ｉ）結合手、
（ｉｉ）式：−Ｂ１ａ−Ｑｂ１−Ｂ１ｂ−
（式中、
Ｂ１ａおよびＢ１ｂは、−ＣＯ−を表し、
Ｑｂ１は、
2009044918.tif 000112
（式中、ｐは２〜８の整数を表す。）
から選択される２価の基である。）で表される２価の基、
（ｉｉｉ）式：−Ｂ２ａ−Ｑｂ２−Ｂ２ｂ−
（式中、
Ｂ２ａは、−ＣＯ−を表し、
Ｂ２ｂは、
2009044918.tif 000113
を表し、
Ｑｂ２は、
2009044918.tif 000114
（式中、ｑは３〜１０の整数を表し、ｒは１〜１０の整数を表し、およびｔは１〜１０の整数を表す。）
から選択される２価を表す。）
で表される２価の基、または
（ｉｖ）式：−Ｂ３ａ−Ｑｂ３−Ｂ３ｂ−
（式中、
Ｂ３ａは、
2009044918.tif 000115
または結合手を表し、
Ｂ３ｂは、−ＣＯ−を表し、
Ｑｂ３は、−（ＣＨ２）ｎ１−Ｚ−（ＣＨ２）ｎ２−
（式中、
ｎ１は０〜５の整数を表し、
ｎ２は０〜５の整数を表し、
Ｚは、結合手、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＨ−ＣＯ−、
2009044918.tif 000116
を表す。）
で表される２価の基を表す。）
で表される２価の基を表し；
Ｌｃは、
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ−
（式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し、
Ｑｃは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃは、
（ａ）結合手、または
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（−ＮＨＲＺｃ１）−、−ＣＨ（ＲＺｃ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−ＣＨ（−ＮＨＸ）−、
2009044918.tif 000117
（式中、
ｕは１〜１８の整数を表し、
ｖは１〜１２の整数を表し、
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
Ｘは前記と同意義を表す。）を表し、および
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）
から選択される２価の基を表し、
Ｃｂは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
（式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000118
を表し、
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
Ｃｂ’は、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）で表される２価の基を表し；
ｋＩＶは１〜１００の整数を表し；
ｍＩＶは１〜１００の整数を表し；
ｐＩＶは１〜１００の整数を表し；および
ｊは０〜３の整数を表す。］
で表されるニューロメジンＵ誘導体である。【００６３】
なかでも好ましくは、
Ｌｂが結合手であり、
（Ｌｃ）ｊが
2009044918.tif 000119
であるニューロメジンＵ誘導体である。【００６４】
［態様３−２］
本発明の別の一態様は、ニューロメジンＵのアミノ配列のＣ末端の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列、からなるポリペプチドに、リンカーを介して、メトキシポリエチレングリコールが結合しているニューロメジンＵ誘導体であって、式
2009044918.tif 000120
［式中、
Ｙは、ニューロメジンＵのＣ末端のアミノ配列の少なくとも８アミノ酸を含み、かつニューロメジンＵのアミノ酸配列と同一または実質的に同一のアミノ酸配列からなるポリペプチドを表し；
Ｘは、メトキシポリエチレングリコール（但し、複数のＸで表されるメトキシポリエチレングリコールは、同一であっても異なっていてもよい。）を表し、
Ｘ’’は、ポリエチレングリコール（但し、複数のＸ’’で表されるポリエチレングリコールは、同一であっても異なっていてもよい。）を表し、
Ｌｃは、
（ｉ）式：−Ｃａ−Ｑｃ−Ｃｂ−
（式中、
Ｃａは、−ＮＨ−を表し、
Ｑｃは、式：−（ＣＨ２）ｍ１−Ｚｃ−（ＣＨ２）ｍ２−
（式中、
ｍ１は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃは、
（ａ）結合手、
（ｂ）−ＣＯ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＣＨ（ＮＨ２）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、−Ｃ（＝ＮＨ）−、−ＣＨ（−ＮＨＸ）−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−ＳＯ２−、−ＳＯ２−ＮＨ−、
2009044918.tif 000121
（式中、
ｕは１〜１８の整数を表し、
ｖは１〜１２の整数を表す。
ＲＺｃ１はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニル基、またはＸ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
ＲＺｃ２はアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル−カルボニルアミノ−直鎖Ｃ１−５アルキル基を表し、および
Ｘは前記と同意義を表す。）
から選択される２価の基を表し、
）を表し、および
ｍ２は０〜１５の整数を表す。）
から選択される２価の基を表し、
Ｃｂは、結合手、−ＣＯ−、または−ＳＯ２−を表す。）
で表わされる２価の基、または
（ｉｉ）式：−Ｑｃ’−Ｃｂ’−
（式中、
Ｑｃ’は、式：−（ＣＨ２）ｍ１’−Ｚｃ’−（ＣＨ２）ｍ２’−
（式中、
ｍ１’は０〜１５の整数を表し、
Ｚｃ’は、
2009044918.tif 000122
を表し、          
ｍ２’は０〜１５の整数を表す。）
Ｃｂ’は、−ＣＯ−または−ＳＯ２−を表す。）
で表される２価の基を表し；
Ｒは、各出現において同一または異なって、
結合手、−Ｏ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−Ｓ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＨ−ＳＯ２−、−ＳＯ２−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｎ＝ＣＨ−、−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−、−ＣＯ−ＣＨ２−Ｓ−、または
2009044918.tif 000123
）から選択される２価の基を表し；
ｈＶは０〜３の整数を表し；および
ｉＶ、ｊＶ、ｋＶ、ｍＶおよびｎＶは、それぞれ同一または異なって、０〜５の整数を表す。］
で表されるニューロメジンＵ誘導体である。【００６５】
Ｌで表されるリンカーとして、なかでも、好ましくは、
2009044918.tif 000124
である。【００６６】
なかでも好ましくは、
ｎＶが０であり、
Ｒが結合手であり、
（Ｌｃ）ｊが
2009044918.tif 000125
であるニューロメジンＵ誘導体である。【００６７】
［製造方法］
以下に、本発明のニューロメジン誘導体の製造方法を説明する。【００６８】
本発明のニューロメジン誘導体は、例えば、本発明で用いられるペプチドに、リンカーを介してメトキシポリエチレングリコールを結合させることにより、製造することができる。【００６９】
本発明のニューロメジン誘導体は、前述した温血動物の細胞または組織から自体公知のペプチドの精製方法によって調製することができる。具体的には、温血動物の組織または細胞をホモジナイズし、可溶性画分を逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーなどのクロマトグラフィー等で分離精製することによって、本発明のニューロメジン誘導体を調製することができる。【００７０】
また、本発明のニューロメジン誘導体は、市販品としても入手可能である。【００７１】
本発明のニューロメジン誘導体は、公知のペプチド合成法に従って製造することもできる。【００７２】
ペプチド合成法は、例えば、固相合成法、液相合成法のいずれであってもよい。本発明のニューロメジン誘導体を構成し得る部分ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合し、生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより目的とするペプチドを製造することができる。【００７３】
ここで、縮合や保護基の脱離は、自体公知の方法、例えば、以下の（１）〜（５）に記載された方法に従って行われる：
（１）  Ｍ．  Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ  および  Ｍ．Ａ．  Ｏｎｄｅｔｔｉ、Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９６６年）
（２）  ＳｃｈｒｏｅｄｅｒおよびＬｕｅｂｋｅ、Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９６５年）
（３）  泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、  丸善（株）  （１９７５年）
（４）  矢島治明および榊原俊平、生化学実験講座  １、蛋白質の化学ＩＶ、２０５、（１９７７年）
（５）  矢島治明監修、続医薬品の開発、第１４巻、ペプチド合成、広川書店
このようにして得られた本発明のニューロメジン誘導体は、公知の精製法により単離・精製することができる。【００７４】
さらに、本発明で用いられるペプチドは、それをコードする核酸を含有する形質転換体を培養し、得られる培養物から本発明で用いられるペプチドを分離精製することによって製造することもできる。【００７５】
本発明で用いられるペプチドをコードする核酸はＤＮＡであってもＲＮＡであってもよく、あるいはＤＮＡ／ＲＮＡキメラであってもよい。好ましくはＤＮＡが挙げられる。また、該核酸は二本鎖であっても、一本鎖であってもよい。二本鎖の場合は、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡまたはＤＮＡ：ＲＮＡのハイブリッドでもよい。一本鎖の場合は、センス鎖（即ち、コード鎖）であっても、アンチセンス鎖（即ち、非コード鎖）であってもよい。【００７６】
本発明で用いられるペプチドをコードするＤＮＡとしては、ゲノムＤＮＡ、温血動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、モルモット、ハムスター、ウサギ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウシ、ウマ、トリ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジー）のあらゆる細胞［例えば、脾細胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、線維芽細胞、線維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球、樹状細胞）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしくはガン細胞などや血球系の細胞］、あるいはそれらの細胞が存在するあらゆる組織［例えば、脳、脳の各部位（例、嗅球、扁頭核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、視床下核、大脳皮質、延髄、小脳、後頭葉、前頭葉、側頭葉、被殻、尾状核、脳染、黒質）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、末梢血球、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋、腹膜］由来のｃＤＮＡ、あるいは合成ＤＮＡなどが挙げられる。【００７７】
本発明で用いられるペプチドをコードするゲノムＤＮＡおよびｃＤＮＡは、上記した細胞・組織より調製したゲノムＤＮＡ画分および全ＲＮＡもしくはｍＲＮＡ画分をそれぞれ鋳型として用い、自体公知の方法にしたがって、例えば、Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ（以下、「ＰＣＲ法」と略称する）およびＲｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ−ＰＣＲ（以下、「ＲＴ−ＰＣＲ法」と略称する）によって、直接増幅することもできる。あるいは、本発明で用いられるペプチドをコードするゲノムＤＮＡおよびｃＤＮＡは、上記した細胞・組織より調製したゲノムＤＮＡおよび全ＲＮＡもしくはｍＲＮＡの断片を適当なベクター中に挿入して調製されるゲノムＤＮＡライブラリーおよびｃＤＮＡライブラリーから、自体公知の方法にしたがって、例えば、コロニーもしくはプラークハイブリダイゼーション法またはＰＣＲ法などにより、それぞれクローニングすることもできる。ライブラリーに使用するベクターとしては、バクテリオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどが挙げられるが、それらのいずれを用いてもよい。【００７８】
本発明のニューロメジン誘導体は、例えば、次のいずれかの方法で、合成することができる。
（１）本発明で用いられるペプチドのアミノ基に、活性エステルを有するＰＥＧ化試薬（例、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥＧＣ−３０ＴＳ（商品名）、日本油脂）を結合させる。
（２）本発明で用いられるペプチドのアミノ基に、アルデヒドを有するＰＥＧ化試薬（例、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−３００ＡＬ（商品名）、日本油脂）を結合させる。
（３）本発明で用いられるペプチドに二価性架橋試薬（例、ＧＭＢＳ（同仁化学）、ＥＭＣＳ（同仁化学）、ＫＭＵＳ（同仁化学）、ＳＭＣＣ（Ｐｉｅｒｃｅ））を結合させ、ついで、チオール基を有するＰＥＧ化試薬（例、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−３００−ＳＨ（商品名）、日本油脂）を結合させる。この場合、本発明のニューロメジン誘導体におけるリンカーは、ＰＥＧ試薬と二価性架橋試薬とに由来する。
（４）本発明で用いられるペプチドに、ＳＨ導入剤（例、Ｄ−システイン残基、Ｌ−システイン残基、Ｔｒａｕｔ’ｓ  試薬）を導入し、このチオール基に、マレイミド基を有するＰＥＧ化試薬（例、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−３００ＭＡ（商品名）、日本油脂）を反応させる。この場合、本発明のニューロメジン誘導体におけるリンカーは、ＰＥＧ試薬とＳＨ導入剤とに由来する。
（５）本発明で用いられるペプチドに、ＳＨ導入剤（例、Ｄ−システイン残基、Ｌ−システイン残基、Ｔｒａｕｔ’ｓ  試薬）を導入し、このチオール基に、ヨードアセトアミド基を有するＰＥＧ化試薬（例、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−３００ＩＡ（商品名）、日本油脂）を反応させる。この場合、本発明のニューロメジン誘導体におけるリンカーは、ＰＥＧ化試薬とＳＨ導入剤とに由来する。
（６）本発明で用いられるペプチドのＮ末端アミノ基に、ω−アミノカルボン酸あるいはα−アミノ酸をリンカーとして導入し、このリンカーに由来するアミノ基に、活性エステルを有するＰＥＧ化試薬（例、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥＧＣ−３０ＴＳ（商品名）、日本油脂）を反応させる。この場合、本発明のニューロメジン誘導体におけるリンカーは、ＰＥＧ化試薬とω−アミノカルボン酸、あるいはＰＥＧ化試薬とα−アミノ酸とに由来する。
（７）本発明で用いられるペプチドのＮ末端アミノ基に、ω−アミノカルボン酸あるいはα−アミノ酸をリンカーとして導入し、このリンカーに由来するアミノ基に、アルデヒド基を有するＰＥＧ化試薬（例、ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−３００ＡＬ（商品名）、日本油脂）を反応させる。この場合、本発明のニューロメジン誘導体におけるリンカーは、ＰＥＧ化試薬とω−アミノカルボン酸、あるいはＰＥＧ化試薬とα−アミノ酸とに由来する。【００７９】
上記の、各試薬は、例えば市販品として入手可能であり、各反応は、当業者に周知の方法を用いて行うことができる。【００８０】
本発明のニューロメジンＵ誘導体は、塩であってもよい。このような塩としては、例えば、無機塩基との塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩、塩基性または酸性アミノ酸との塩などが挙げられる。【００８１】
無機塩基との塩の好適な例としては、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；ならびにアルミニウム塩、アンモニウム塩などが挙げられる。【００８２】
有機塩基との塩の好適な例としては、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミンなどとの塩が挙げられる。【００８３】
無機酸との塩の好適な例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸などとの塩が挙げられる。【００８４】
有機酸との塩の好適な例としては、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などとの塩が挙げられる。【００８５】
塩基性アミノ酸との塩の好適な例としては、アルギニン、リジン、オルニチンなどとの塩が挙げられる。【００８６】
酸性アミノ酸との塩の好適な例としては、アスパラギン酸、グルタミン酸などとの塩が挙げられる。【００８７】
上記合成方法により、本発明のニューロメジンＵ誘導体が遊離の状態で得られる場合には、常法に従って塩に変換してもよく、また塩として得られる場合には、常法に従って遊離体又は他の塩に変換することもできる。かくして得られる本発明のニューロメジンＵ誘導体は、公知の手段例えば転溶、濃縮、溶媒抽出、分溜、結晶化、再結晶、クロマトグラフィーなどにより反応溶液から単離、精製することができる。【００８８】
本発明のニューロメジンＵ誘導体が、コンフィギュレーショナル  アイソマー（配置異性体）、ジアステレオマー、コンフォーマーなどとして存在する場合には、所望により、前記の分離、精製手段によりそれぞれを単離することができる。また、本発明のニューロメジンＵ誘導体がラセミ体である場合には、通常の光学分割手段によりＳ体及びＲ体に分離することができる。【００８９】
本発明のニューロメジンＵ誘導体に立体異性体が存在する場合には、この異性体が単独の場合及びそれらの混合物の場合も本発明に含まれる。【００９０】
また、本発明のニューロメジンＵ誘導体は、水和物又は非水和物であってもよい。また、本発明のニューロメジンＵ誘導体は、溶媒和物又は無溶媒和物であってもよい。【００９１】
本発明のニューロメジンＵ誘導体は同位元素（例、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ）などで標識されていてもよい。また、本発明のニューロメジンＵ誘導体は重水素で変換されていても良い。【００９２】
本発明のニューロメジンＵ誘導体は、摂食抑制剤、または肥満症の予防または治療剤として有用である。【００９３】
本発明のニューロメジンＵ誘導体は、通常、薬理学的に許容し得る担体と共に、自体公知の方法（例、日本薬局方に記載の方法）に従って製剤化して得られる医薬組成物として用いられる。【００９４】
薬理学的に許容される担体としては、製剤素材として慣用の各種有機あるいは無機担体物質が用いられ、その具体例としては、固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤；液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤などが挙げられる。製剤化の際には、必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤などの製剤添加物を用いてもよい。【００９５】
賦形剤の好適な例としては、乳糖、白糖、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビトール、デンプン、α化デンプン、デキストリン、結晶セルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アラビアゴム、プルラン、軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、キシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどが挙げられる。【００９６】
滑沢剤の好適な例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、コロイドシリカ、ポリエチレングリコール６０００などが挙げられる。【００９７】
結合剤の好適な例としては、α化デンプン、ショ糖、ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、結晶セルロース、白糖、Ｄ−マンニトール、トレハロース、デキストリン、プルラン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。【００９８】
崩壊剤の好適な例としては、乳糖、白糖、デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、軽質無水ケイ酸、炭酸カルシウムなどが挙げられる。【００９９】
溶剤の好適な例としては、注射用水、生理食塩水、リンゲル液、アルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ゴマ油、トウモロコシ油、オリーブ油、綿実油などが挙げられる。【０１００】
溶解補助剤の好適な例としては、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ−マンニトール、トレハロース、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなどが挙げられる。【０１０１】
懸濁化剤の好適な例としては、例えば、ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリンなどの界面活性剤；例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなどの親水性高分子；ポリソルベート類、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などが挙げられる。【０１０２】
等張化剤の好適な例としては、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビトール、ブドウ糖、キシリトール、果糖などが挙げられる。【０１０３】
緩衝剤の好適な例としては、リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩などの緩衝液などが挙げられる。【０１０４】
無痛化剤の好適な例としては、プロピレングリコール、塩酸リドカイン、ベンジルアルコールなどが挙げられる。【０１０５】
防腐剤の好適な例としては、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸などが挙げられる。【０１０６】
抗酸化剤の好適な例としては、亜硫酸塩、アスコルビン酸塩などが挙げられる。【０１０７】
着色剤の好適な例としては、水溶性着色タール色素（例、食用赤色２号および３号、食用黄色４号および５号、食用青色１号および２号などの食用色素）、不溶性レーキ色素（例、前記水溶性食用タール色素のアルミウム塩）、天然色素（例、β−カロチン、クロロフィル、ベンガラ）などが挙げられる。【０１０８】
甘味剤の好適な例としては、サッカリンナトリウム、グリチルリチン酸二カリウム、アスパルテーム、ステビアなどが挙げられる。【０１０９】
前記医薬組成物の剤形としては、例えば、錠剤（舌下錠、口腔内崩壊錠を含む）、カプセル剤（ソフトカプセル、マイクロカプセルを含む）、顆粒剤、散剤、トローチ剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などの経口剤；および注射剤（例、皮下注射剤、静脈内注射剤、筋肉内注射剤、腹腔内注射剤、点滴剤）、外用剤（例、経皮製剤、軟膏剤など）、坐剤（例、直腸坐剤、膣坐剤）、ペレット、経鼻剤、経肺剤（吸入剤）、点眼剤等の非経口剤が挙げられる。これらの製剤は、速放性製剤または徐放性製剤などの放出制御製剤（例、徐放性マイクロカプセル）であってもよい。【０１１０】
上記医薬組成物中のニューロメジンＵ誘導体の含量は、例えば、０．１〜１００重量％である。【０１１１】
以下に、経口剤および非経口剤の製造法について具体的に説明する。経口剤は、活性成分に、例えば、賦形剤（例、乳糖、白糖、デンプン、Ｄ−マンニトール、キシリトール、ソルビトール、エリスリトール、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸）、崩壊剤（例、炭酸カルシウム、デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、軽質無水ケイ酸）、結合剤（例、α化デンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、結晶セルロース、メチルセルロース、白糖、Ｄ−マンニトール、トレハロース、デキストリン）または滑沢剤（例、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、コロイドシリカ、ポリエチレングリコール６０００）などを添加して圧縮成形することにより製造される。【０１１２】
さらに、味のマスキング、腸溶化あるいは徐放化を目的として、自体公知の方法により、経口剤にコーティングを行ってもよい。コーティング剤としては、例えば、腸溶性ポリマー（例、酢酸フタル酸セルロース、メタアクリル酸コポリマーＬ、メタアクリル酸コポリマーＬＤ、メタアクリル酸コポリマーＳ、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルボキシメチルエチルセルロース）、胃溶性ポリマー（例、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、アミノアルキルメタアクリレートコポリマーＥ）、水溶性ポリマー（例、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、水不溶性ポリマー（例、エチルセルロース、アミノアルキルメタアクリレートコポリマーＲＳ、アクリル酸エチル・メタアクリル酸メチル共重合体）、ワックスなどが用いられる。コーティングを行う場合、上記コーティング剤とともに、ポリエチレングリコール等の可塑剤；酸化チタン、三二酸化鉄等の遮光剤を用いてもよい。【０１１３】
注射剤は、活性成分を分散剤（例、ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）８０（アトラスパウダー社製、米国）、ＨＣＯ  ６０（日光ケミカルズ製）、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム）、保存剤（例、メチルパラベン、プロピルパラベン、ベンジルアルコール、クロロブタノール、フェノール）、等張化剤（例、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、キシリトール、ブドウ糖、果糖）などと共に、水性溶剤（例、蒸留水、生理的食塩水、リンゲル液）あるいは油性溶剤（例、オリーブ油、ゴマ油、綿実油、コーン油などの植物油；プロピレングリコール、マクロゴール、トリカプリリン）などに溶解、懸濁あるいは乳化することにより製造される。この際、所望により、溶解補助剤（例、サリチル酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ−マンニトール、トレハロース、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム）、懸濁化剤（例、ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリンなどの界面活性剤；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなどの親水性高分子）、緩衝化剤（例、リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩などの緩衝液）、安定剤（例、ヒト血清アルブミン）、無痛化剤（例、プロピレングリコール、塩酸リドカイン、ベンジルアルコール）、防腐剤（例、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、塩化ベンザルコニウム、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸）等の添加物を用いてもよい。【０１１４】
外用剤は、活性成分を固状、半固状または液状の組成物とすることにより製造される。例えば、上記固状の組成物は、活性成分をそのまま、あるいは賦形剤（例、乳糖、Ｄ−マンニトール、デンプン、結晶セルロース、白糖）、増粘剤（例、天然ガム類、セルロース誘導体、アクリル酸重合体）などを添加、混合して粉状とすることにより製造される。上記液状の組成物は、注射剤の場合とほとんど同様にして製造される。半固状の組成物は、水性または油性のゲル剤、あるいは軟膏状のものがよい。また、これらの組成物は、いずれもｐＨ調節剤（例、リン酸、クエン酸、塩酸、水酸化ナトリウム）、防腐剤（例、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、塩化ベンザルコニウム、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸）などを含んでいてもよい。坐剤は、活性成分を油性または水性の固状、半固状あるいは液状の組成物とすることにより製造される。該組成物の製造の際に用いられる油性基剤としては、例えば、高級脂肪酸のグリセリド〔例、カカオ脂、ウイテプゾル類〕、中級脂肪酸トリグリセライド〔例、ミグリオール類〕、植物油（例、ゴマ油、大豆油、綿実油）などが挙げられる。水性基剤としては、例えば、ポリエチレングリコール類、プロピレングリコールなどが挙げられる。また、水性ゲル基剤としては、例えば、天然ガム類、セルロース誘導体、ビニール重合体、アクリル酸重合体などが挙げられる。【０１１５】
本発明のニューロメジンＵ誘導体の投与量は、投与対象、投与ルート、対象疾患、症状などによって適宜選択することができる。本発明のニューロメジンＵ誘導体を有効成分として含有する医薬組成物を成人患者に皮下投与する場合の投与量は、活性成分であるニューロメジンＵ誘導体の１回量として、通常約５〜５０００μｇ／ヒト、好ましくは約５０〜５００μｇ／ヒトである。この量を１日１回〜３回投与するのが望ましい。【０１１６】
本発明のニューロメジンＵ誘導体（以下、本発明化合物と称する場合がある。）は、例えば、その作用（例、摂食抑制効果、肥満症の予防または治療効果）の増強、本発明化合物の使用量の低減等を目的として、本発明化合物に悪影響を及ぼさない併用用薬剤と併用することができる。このような併用用薬剤としては、例えば、「糖尿病治療薬」、「糖尿病合併症治療薬」、「抗肥満薬」、および「高脂血症治療薬」等が挙げられる。これらの併用用薬剤は、２種以上を適宜の割合で組合せて用いてもよい。【０１１７】
上記「糖尿病治療薬」としては、例えば、インスリン製剤（例、ウシ、ブタの膵臓から抽出された動物インスリン製剤；大腸菌、イーストを用い遺伝子工学的に合成したヒトインスリン製剤；インスリン亜鉛；プロタミンインスリン亜鉛；インスリンのフラグメントまたは誘導体（例、ＩＮＳ−１）、経口インスリン製剤）、インスリン抵抗性改善剤（例、ピオグリタゾンまたはその塩（好ましくは、塩酸塩）、ロシグリタゾンまたはその塩（好ましくは、マレイン酸塩）、テサグリタザール（Ｔｅｓａｇｌｉｔａｚａｒ）、ラガグリタザール（Ｒａｇａｇｌｉｔａｚａｒ）、ムラグリタザール（Ｍｕｒａｇｌｉｔａｚａｒ）、エダグリタゾン（Ｅｄａｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、メタグリダセン（Ｍｅｔａｇｌｉｄａｓｅｎ）、ナベグリタザール（Ｎａｖｅｇｌｉｔａｚａｒ）、ＡＭＧ−１３１、ＴＨＲ−０９２１）、α−グルコシダーゼ阻害剤（例、ボグリボース、アカルボース、ミグリトール、エ
ミグリテート）、ビグアナイド剤（例、メトホルミン、ブホルミンまたはそれらの塩（例、塩酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩））、インスリン分泌促進剤［スルホニルウレア剤（例、トルブタミド、グリベンクラミド、グリクラジド、クロルプロパミド、トラザミド、アセトヘキサミド、グリクロピラミド、グリメピリド、グリピザイド、グリブゾール）、レパグリニド、ナテグリニド、ミチグリニドまたはそのカルシウム塩水和物］、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤（例、ヴィルダグリプチン（Ｖｉｌｄａｇｌｉｐｔｉｎ）、シタグリプチン（Ｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ）、サクサグリプチン（Ｓａｘａｇｌｉｐｔｉｎ）、Ｔ−６６６６、ＴＳ−０２１）、β３アゴニスト（例、ＡＪ−９６７７）、ＧＰＲ４０アゴニスト、ＧＬＰ−１受容体アゴニスト［例、ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１ＭＲ剤、ＮＮ−２２１１、ＡＣ−２９９３（ｅｘｅｎｄｉｎ−４）、ＢＩＭ−５１０７７、Ａｉｂ（８，３５）ｈＧＬＰ−１（７，３７）ＮＨ２、ＣＪＣ−１１３１］、アミリンアゴニスト（例、プラムリンチド）、ホスホチロシンホスファターゼ阻害剤（例、バナジン酸ナトリウム）、糖新生阻害剤（例、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、グルコース−６−ホスファターゼ阻害剤、グルカゴン拮抗剤）、ＳＧＬＵＴ（ｓｏｄｉｕｍ−ｇｌｕｃｏｓｅ  ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ）阻害剤（例、Ｔ−１０９５）、１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ阻害薬（例、ＢＶＴ−３４９８）、アジポネクチンまたはその作動薬、ＩＫＫ阻害薬（例、ＡＳ−２８６８）、レプチン抵抗性改善薬、ソマトスタチン受容体作動薬、グルコキナーゼ活性化薬（例、Ｒｏ−２８−１６７５）、ＧＩＰ（Ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｔｒｏｐｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ）等が挙げられる。【０１１８】
上記「糖尿病合併症治療薬」としては、例えば、アルドース還元酵素阻害剤（例、トルレスタット、エパルレスタット、ゼナレスタット、ゾポルレスタット、ミナルレスタット、フィダレスタット、ラニレスタット）、神経栄養因子およびその増加薬（例、ＮＧＦ、ＮＴ−３、ＢＤＮＦ、ＷＯ０１／１４３７２に記載のニューロトロフィン産生・分泌促進剤（例えば、４−（４−クロロフェニル）−２−（２−メチル−１−イミダゾリル）−５−［３−（２−メチルフェノキシ）プロピル］オキサゾール））、ＰＫＣ阻害剤（例、ルボキシスタウリン  メシレート（ｒｕｂｏｘｉｓｔａｕｒｉｎ  ｍｅｓｙｌａｔｅ））、ＡＧＥ阻害剤（例、ＡＬＴ９４６、ピマゲジン、Ｎ−フェナシルチアゾリウム  ブロマイド、ＥＸＯ−２２６、ピリドリン（Ｐｙｒｉｄｏｒｉｎ）、ピリドキサミン）、活性酸素消去薬（例、チオクト酸）、脳血管拡張剤（例、チアプリド、メキシレチン）、ソマトスタチン受容体作動薬（例、ＢＩＭ２３１９０）、アポトーシスシグナルレギュレーティングキナーゼ−１（ＡＳＫ−１）阻害薬、神経再生促進薬（例、Ｙ−１２８、ＶＸ−８５３、ｐｒｏｓａｐｔｉｄｅ）が挙げられる。【０１１９】
上記「抗肥満薬」としては、中枢性抗肥満薬（例、デキスフェンフルラミン、フェンフルラミン、フェンテルミン、シブトラミン、アンフェプラモン、デキサンフェタミン、マジンドール、フェニルプロパノールアミン、クロベンゾレックス；ニューロペプチドＹ拮抗薬（例、ＣＰ−４２２９３５）；カンナビノイド受容体拮抗薬（例、ＳＲ−１４１７１６、ＳＲ−１４７７７８）；
グレリン拮抗薬；１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ阻害薬（例、ＢＶＴ−３４９８））、膵リパーゼ阻害薬（例、オルリスタット、セティリスタット（ｃｅｔｉｌｉｓｔａｔ））、β３アゴニスト（例、ＡＪ−９６７７）、ペプチド性食欲抑制薬（例、レプチン、ＣＮＴＦ（毛様体神経
栄養因子））、コレシストキニンアゴニスト（例、リンチトリプト、ＦＰＬ−１５８４９）、摂食抑制薬（例、Ｐ−５７）等が挙げられる。【０１２０】
上記「高脂血症治療薬」としては、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤（例、プラバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、ピタバスタチンまたはそれらの塩（例、ナトリウム塩、カルシウム塩））、スクアレン合成酵素阻害剤（例、ＷＯ９７／１０２２４に記載の化合物、例えば、Ｎ−［［（３Ｒ，５Ｓ）−１−（３−アセトキシ−２，２−ジメチルプロピル）−７−クロロ−５−（２，３−ジメトキシフェニル）−２−オキソ−１，２，３，５−テトラヒドロ−４，１−ベンゾオキサゼピン−３−イル］アセチル］ピペリジン−４−酢酸）、フィブラート系化合物（例、ベザフィブラート、クロフィブラート、シムフィブラート、クリノフィブラート）、ＡＣＡＴ阻害剤（例、アバシマイブ（Ａｖａｓｉｍｉｂｅ）、エフルシマイブ（Ｅｆｌｕｃｉｍｉｂｅ））、陰イオ
ン交換樹脂（例、コレスチラミン）、プロブコール、ニコチン酸系薬剤（例、ニコモール（ｎｉｃｏｍｏｌ）、ニセリトロール（ｎｉｃｅｒｉｔｒｏｌ））、イコサペント酸エチル、植物ステロール（
例、ソイステロール（ｓｏｙｓｔｅｒｏｌ）、ガンマオリザノール（γ−ｏｒｙｚａｎｏｌ））等が挙げられる。【０１２１】
前記した併用用薬剤の投与時期は限定されず、本発明化合物と併用用薬剤とを、投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。併用用薬剤の投与量は、臨床上用いられている投与量に準ずればよく、投与対象、投与ルート、疾患、組み合わせ等により適宜選択することができる。【０１２２】
併用用薬剤の投与形態は、特に限定されず、投与時に、本発明化合物と併用用薬剤とが組み合わされていればよい。このような投与形態としては、例えば、１）本発明化合物と併用用薬剤とを同時に製剤化して得られる単一の製剤の投与、２）本発明化合物と併用用薬剤とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での同時投与、３）本発明化合物と併用用薬剤とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での時間差をおいての投与、４）本発明化合物と併用用薬剤とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での同時投与、５）本発明化合物と併用用薬剤とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での時間差をおいての投与（例えば、本発明化合物、併用用薬剤の順序での投与、あるいは逆の順序での投与）等が挙げられる。【０１２３】
本発明化合物と併用用薬剤との配合比は、投与対象、投与ルート、疾患等により適宜選択することができる。【０１２４】
本発明化合物は、食事療法（例、糖尿病の食事療法）、運動療法と併用することもできる。【０１２５】
本明細書において、アミノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ
ｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  による略号あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであり、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場合は、特に明示しなければＬ体を表すものとする。【０１２６】
Ｇｌｙ：グリシン
Ａｌａ：アラニン
Ｖａｌ：バリン
Ｌｅｕ：ロイシン
Ｉｌｅ：イソロイシン
Ｓｅｒ：セリン
Ｔｈｒ：スレオニン
Ｃｙｓ：システイン
Ｍｅｔ：メチオニン
Ｇｌｕ：グルタミン酸
Ａｓｐ：アスパラギン酸
Ｌｙｓ：リジン
Ａｒｇ：アルギニン
Ｈｉｓ：ヒスチジン
Ｐｈｅ：フェニルアラニン
Ｔｙｒ：チロシン
Ｔｒｐ：トリプトファン
Ｐｒｏ：プロリン
Ａｓｎ：アスパラギン
Ｇｌｎ：グルタミン
ｐＧｌｕ：ピログルタミン酸
Ｓｅｃ：セレノシステイン（ｓｅｌｅｎｏｃｙｓｔｅｉｎｅ）
本願明細書の配列表の配列番号は、以下の配列を表す。
（配列番号：１）ブタＮＭＵ−２５のアミノ酸配列を表す。
（配列番号：２）ブタＮＭＵ−８のアミノ酸配列を表す。
（配列番号：３）ヒトＮＭＵ−２５のアミノ酸配列を表す。
（配列番号：４）ヒトＮＭＵ−２５のＣ末端８アミノ酸残基（ヒトＮＭＵ−８）のアミノ酸配列を表す。
（配列番号：５）ラットＮＭＵ−２３のアミノ酸配列を表す。
（配列番号：６）ラットＮＭＵ−２３のＣ末端８アミノ酸残基（ラットＮＭＵ−８）のアミノ酸配列を表す。
（配列番号：７）ヒトＮＭＵＲ１のアミノ酸配列を表す。
（配列番号：８）ヒトＮＭＵＲ２のアミノ酸配列を表す。
（配列番号：９）ラットＮＭＳのアミノ酸配列を表す。
（配列番号：１０）ヒトＮＭＳのアミノ酸配列を表す。
（配列番号：１１）ヒトＮＭＳのＣ末端８アミノ酸残基（ヒトＮＭＳ−８）のアミノ酸配列を表す。
配列番号：１〜６、９〜１１のＣ末端はアミド化されている。
【図面の簡単な説明】
【０１２７】
【図１】ＮＭＵ−２３およびＮＭＳの摂食抑制活性を表すグラフである。
【図２】ＮＭＵ−２３およびＮＭＵ−８の摂食抑制活性を表すグラフである。
【図３Ａ】ＦＭ３膜画分における１２５Ｉ−ＮＭＵ８の平衡結合をスキャチャード・プロット解析によって示したグラフである。
【図３Ｂ】ＴＧＲ１膜画分における１２５Ｉ−ＮＭＵ８の平衡結合をスキャチャード・プロット解析によって示したグラフである。
【図４Ａ】ＦＭ３膜画分に対して濃度を変えたＮＭＵ誘導体およびＰＥＧ  コンジュゲートを添加したときの１２５Ｉ−ＮＭＵ８の結合阻害の様子を表したグラフである。
【図４Ｂ】ＴＧＲ１膜画分に対して濃度を変えたＮＭＵ誘導体およびＰＥＧ  コンジュゲートを添加したときの１２５Ｉ−ＮＭＵ８の結合阻害の様子を表したグラフである。
【図４Ｃ】ＦＭ３膜画分に対して濃度を変えたＮＭＵ誘導体およびＰＥＧ  コンジュゲートを添加したときの１２５Ｉ−ＮＭＵ８の結合阻害の様子を表したグラフである。
【図４Ｄ】ＴＧＲ１膜画分に対して濃度を変えたＮＭＵ誘導体およびＰＥＧ  コンジュゲートを添加したときの１２５Ｉ−ＮＭＵ８の結合阻害の様子を表したグラフである。
【図５】ＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートのマウス摂食抑制活性を表すグラフである。
【図６】ＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートのマウス摂食抑制活性を表すグラフである。
【図７】ＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートのマウス摂食抑制活性を表すグラフである。
【図８】ＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートのマウス摂食抑制活性を表すグラフである。
【図９】ＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートのマウス摂食抑制活性を表すグラフである。
【図１０】ＮＭＵ８  ＰＥＧコンジュゲートの１週間、皮下反復投与における食餌性肥満マウスの摂餌量と体重変化を表すグラフである。
【図１１】ＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートのマウス摂食抑制活性を表すグラフである。
【図１２】ＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの抗肥満活性を表すグラフである。
【実施例】
【０１２８】
以下に試験例、参考例、および実施例を挙げて、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【０１２９】
試験例１
ＮＭＵ−２３、ＮＭＳのマウス摂食抑制活性
日本チャールズリバーより納入された７週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（平均体重２４ｇ）を、納入後５〜１０日間、温湿度・調光時間が調節された飼育環境下（２５℃、１２時間明期−１２時間暗期、８：００にライト点灯）にて、１ケージあたり４匹ずつ群飼した。該マウスを５−８日間ハンドリングした後、フロアメッシュを敷いた各ケージに単飼し、ペプチド投与前３日間、腹腔内投与に馴化させた。馴化させた該マウスをペプチド投与前日の１８：００から１６時間絶食させ（ただし、水は自由に飲めるようにさせた）、次いで投与当日の１０：００に、生理食塩水に溶解したペプチド、すなわち７２０  μｇ／ｍｌ  ラットＮＭＵ−２３（ペプチド研究所）［配列番号：５］、またはラットＮＭＳ  （Ｂａｃｈｅｍ）［配列番号：９］  各溶液１００  μｌを投与量が３  ｍｇ／ｋｇになるように該マウスに腹腔内投与した。ペプチド溶液投与後、直ちに秤量済みのＭＦ飼料（オリエンタル酵母工業）を該マウスに与え自由に食べさせ、さらに３、６、２４時間後に飼料残量を秤量した。３、６、２４時間摂餌量は、最初に与えた飼料量から、それぞれ３、６、２４時間後の飼料残量を差し引くことにより算出した。結果を図１に示す。図１から明らかなように、ラットＮＭＵ−２３或いはラットＮＭＳは、３、６、２４時間摂餌量を有意に抑制した。［図１において、＊、＊＊、＊＊＊はＴ検定により検定し、危険率が、ぞれぞれ、０．０５、０．０１、０．００１より小さかったこと（Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１、Ｐ＜０．００１）を表す。］【０１３０】
試験例２
ＮＭＵ−２３、ＮＭＵ−８のマウス摂食抑制活性
日本チャールズリバーより納入された７週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（平均体重２５ｇ）を、納入後５〜１０日間、温湿度・調光時間が調節された飼育環境下（２５℃、１２時間明期−１２時間暗期、８：００にライト点灯）にて、１ケージあたり４匹ずつ群飼した。該マウスを５−８日間ハンドリングした後、フロアメッシュを敷いた各ケージに単飼し、ペプチド投与前３日間、腹腔内投与に馴化させた。馴化させた該マウスをペプチド投与前日の１８：００から１６時間絶食させ（ただし、水は自由に飲めるようにさせた）、次いで投与当日の１０：００に、生理食塩水に溶解したペプチド、すなわち７５０  μｇ／ｍｌ  ラットＮＭＵ−２３（ペプチド研究所）［配列番号：５］、または  ブタＮＭＵ−８（Ｂａｃｈｅｍ）［配列番号：２］、各溶液１００  μｌを投与量が３  ｍｇ／ｋｇになるように該マウスに腹腔内投与した。ペプチド溶液投与後、直ちに秤量済みのＭＦ飼料（オリエンタル酵母工業）を該マウスに与え自由に食べさせ、さらに３、６、２４時間後に飼料残量を秤量した。３、６、２４時間摂餌量は、最初に与えた飼料量から、それぞれ３、６、２４時間後の飼料残量を差し引くことにより算出した。結果を図２に示す。図２から明らかなように、ラットＮＭＵ−２３は、３、６時間摂餌量を有意に抑制した。［図２において、＊、＊＊はＴ検定により検定し、危険率が、それぞれ、０．０５、０．０１より小さかったこと（Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．０１）を表す。］【０１３１】
実施例１
ＰＥＧ−ＳＨを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートの調製
ブタＮＭＵ−８（Ｂａｃｈｅｍ）［配列番号：２］、３．５  μｍｏｌ（＝３．８５  ｍｇ）を５００  μｌのジメチルフォルムアミドに溶解し、さらに該溶液に５  μｍｏｌ（１０〜１３  ｍｇ）の二価性架橋試薬［ＧＭＢＳ、ＥＭＣＳ、ＫＭＵＳ（同仁化学）、またはＳＭＣＣ（Ｐｉｅｒｃｅ）］、および７．２  Ｍトリエチルアミン  ２．５  μｌ（１８  μｍｏｌｅ）を溶解して反応液とし、該反応液を室温・遮光下で一晩反応した。各反応液をＡ液（０．１％トリフルオロ酢酸／蒸留水）で２０倍に希釈し、Ａ液１００％−Ｂ液（０．１％トリフルオロ酢酸／８０％アセトニトリル）０％で平衡化したＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ，  ＯＤＳカラム（ＭＧＩＩ、１０  ｘ  ２５０  ｍｍ、資生堂）に流速４．５  ｍｌ／ｍｉｎでインジェクトした。Ａ液１００％−Ｂ液０％から徐々にＢ液濃度を上昇させ、各二価性架橋試薬が導入されたＮＭＵ−８を未反応ＮＭＵ−８や余剰二価性架橋試薬から分離して溶出し、精製された各二価性架橋試薬導入済みＮＭＵ−８を分取、凍結乾燥した。
得られた各凍結乾燥物を１０  ｍｌの２５％アセトニトリル−７５％蒸留水に溶解し、さらに各二価性架橋試薬導入済みＮＭＵ−８溶液に分子量３０ｋチオール導入ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ３００−ＳＨ、日本油脂）１８０  ｍｇ（６  μｍｏｌｅ）を溶解し、４℃・遮光下で二晩反応させた。各反応液に終濃度が０．１  Ｍになるように酢酸を加え、ＳＰ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｃ５０イオン交換カラム（容量５−１０  ｍｌ）にロードした。０．１  Ｍ酢酸、次いで１０  ｍＭ  ギ酸アンモニウム／  ０．１  Ｍ酢酸で該カラムを洗浄後、２  Ｍギ酸アンモニウムを用いて各ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート、すなわち、ＰＥＧ３０ｋ（ＧＭＢＳ）−ＮＭＵ−８［１］、ＰＥＧ３０ｋ（ＥＭＣＳ）−ＮＭＵ−８［２］、ＰＥＧ３０ｋ（ＫＭＵＳ）−ＮＭＵ−８［３］、およびＰＥＧ３０ｋ（ＳＭＣＣ）−ＮＭＵ−８［４］を該カラムから溶出した。【０１３２】
得られた各溶出液を、Ａ液１００％−Ｂ液０％で平衡化したＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫカラムＣ８カラム（ＳＧ３００、１０  ｘ  ２５０  ｍｍ、資生堂）に流速４．５  ｍｌ／ｍｉｎでインジェクトし、Ａ液５５％−Ｂ液４５％まで急激に上昇させた後、さらに４０分かけてＡ液４０％−Ｂ液６０％まで直線的に上昇させ、各ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートをそれぞれ溶出した。各ＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートのピークを分取し、さらに凍結乾燥した。得られた各ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート、すなわち、ＰＥＧ３０ｋ（ＧＭＢＳ）−ＮＭＵ−８［１］、ＰＥＧ３０ｋ（ＥＭＣＳ）−ＮＭＵ−８［２］、ＰＥＧ３０ｋ（ＫＭＵＳ）−ＮＭＵ−８［３］、およびＰＥＧ３０ｋ（ＳＭＣＣ）−ＮＭＵ−８［４］凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。【０１３３】
【表１】
2009044918.tif 000126
（ブタＮＭＵ−８は、いずれも、α−アミノ基においてリンカーに結合している。）【０１３４】
実施例２
ＰＥＧ−ＮＨＳを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製
ブタＮＭＵ−８（Ｂａｃｈｅｍ）［配列番号：２］、７．２  μｍｏｌ（８．０  ｍｇ）を５００  μｌのジメチルスルホキシドに溶解し、さらに該溶液に２２  μｍｏｌ（約６５０  ｍｇ）のｎ−ヒドロキシスクシミド導入ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥＧＣ−３０ＴＳ、日本油脂）を７  ｍｌのジメチルスルホキシドに溶解して加え、引き続いて２．５  μｌのトリエチルアミンを添加して、室温で４から６時間反応させた。反応液に終濃度が０．１  Ｍになるように酢酸を加え、さらに４２  ｍｌの０．１  Ｍ酢酸によって希釈した後、ＳＰ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｃ５０イオン交換カラム（容量５−１０  ｍｌ）にロードした。０．１  Ｍ酢酸、次いで１０  ｍＭ  ギ酸アンモニウム／  ０．１  Ｍ酢酸で該カラムを洗浄後、２  Ｍギ酸アンモニウム／２０％アセトニトリル、次いで３．２  Ｍギ酸アンモニウム／２０％アセトニトリルを用いてＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲート、すなわち、ＰＥＧ３０ｋ−ＮＭＵ−８［５］を該カラムから溶出した。
得られた溶出液を、Ａ液１００％−Ｂ液０％で平衡化したＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫカラムＣ８カラム（ＳＧ３００、１０  ｘ  ２５０  ｍｍ、資生堂）に流速４．５  ｍｌ／ｍｉｎでインジェクトし、Ａ液６０％−Ｂ液４０％まで急激に上昇させた後、さらに４０分かけてＡ液３０％−Ｂ液７０％まで直線的に上昇させ、ＰＥＧ３０ｋ−ＮＭＵ−８［５］を溶出した。ＰＥＧ３０ｋ−ＮＭＵ−８［５］のピークを分取し、さらに凍結乾燥した。得られたＰＥＧ３０ｋ−ＮＭＵ−８［５］凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。【０１３５】
【表２】
2009044918.tif 000127
（ブタＮＭＵ−８は、α−アミノ基においてＰＥＧ化試薬由来のリンカーに結合している。）【０１３６】
実施例３
ＰＥＧ−マレイミドを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製（１）
Ｎ末端にＬ−Ｃｙｓ残基を導入したラットＮＭＵ−８（Ａｎｙｇｅｎ）［配列番号：６］、７．６  μｍｏｌ（＝８．９  ｍｇ）を１０  ｍｌの１０  ｍＭリン酸Ｂｕｆｆｅｒ／２５％アセトニトリルに溶解し、さらに該溶液に２０．９  μｍｏｌ（６２７  ｍｇ）のＰＥＧ−マレイミド（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−３００ＭＡ，日本油脂）を加え、該反応液を４℃・遮光下で一晩反応した。各反応液に終濃度が０．１  Ｍになるように酢酸を加え、ＳＰ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｃ５０イオン交換カラム（容量５−１０  ｍｌ）にロードした。０．１  Ｍ酢酸、次いで１０  ｍＭギ酸アンモニウム／０．１  Ｍ酢酸で該カラムを洗浄後、２  Ｍギ酸アンモニウム／２０％アセトニトリル、次いで３．２  Ｍギ酸アンモニウム／２０％アセトニトリルを用いてＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲート、すなわちＰＥＧ３０ｋ−Ｃｙｓ−ＮＭＵ−８［６］を該カラムから溶出した。
得られた溶出液を、Ａ液１００％−Ｂ液０％で平衡化したＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫカラムＣ８カラム（ＳＧ３００、１０  ｘ  ２５０  ｍｍ、資生堂）に流速４．５  ｍｌ／ｍｉｎでインジェクトし、Ａ液６０％−Ｂ液４０％まで急激に上昇させた後、さらに４０分かけてＡ液３０％−Ｂ液７０％まで直線的に上昇させ、ＰＥＧ３０ｋ−Ｃｙｓ−ＮＭＵ−８［６］を溶出した。ＰＥＧ３０ｋ−Ｃｙｓ−ＮＭＵ−８［６］のピークを分取し、さらに凍結乾燥した。得られたＰＥＧ３０ｋ−Ｃｙｓ−ＮＭＵ−８［６］凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。なお、コンジュゲートの名称においては、アミノ酸のＬ体を表すＬ−の表記は省略する場合がある。【０１３７】
【表３】
2009044918.tif 000128
（ラットＮＭＵ−８は、α−アミノ基においてリンカーの一部分であるＬ−Ｃｙｓに結合している。）【０１３８】
実施例４
ＰＥＧ−マレイミドを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製（２）
ブタＮＭＵ−８（Ａｎｙｇｅｎ）［配列番号：２］、７．２  μｍｏｌ（８．１  ｍｇ）を５００  μｌのジメチルフォルムアミドに溶解し、さらに該溶液に７００  ｍＭトリエチルアミン  ３１  μｌ（２１．６  μｍｏｌ）、および２０  ｍｇのＴｒａｕｔ’ｓ試薬（Ｐｉｅｒｃｅ）を２４００  μｌのジメチルフォルムアミドに溶解した６０  ｍＭ  Ｔｒａｕｔ’ｓ溶液を６００  μｌ（３６  μｍｏｌ）を加えて反応液とし、該反応液を室温・遮光下で４時間反応した。反応液をＡ液（０．１％トリフルオロ酢酸／蒸留水）で２０倍に希釈し、Ａ液１００％−Ｂ液（０．１％トリフルオロ酢酸／８０％アセトニトリル）０％で平衡化したＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫカラムＣ１８カラム（ＭＧＩＩ、２０  ｘ  ２５０  ｍｍ、資生堂）に流速９．０  ｍｌ／ｍｉｎでインジェクトし、Ａ液７５％−Ｂ液２５％まで急激に上昇させた後、さらに４０分かけてＡ液６０％−Ｂ液４０％まで直線的に上昇させ、Ｔｒａｕｔ’ｓ−ＮＭＵ−８  を溶出した。ピークを分取後、凍結乾燥した。
得られた各凍結乾燥物を１０  ｍｌの１０  ｍＭリン酸Ｂｕｆｆｅｒ／２５％アセトニトリルに溶解し、さらに該溶液に２１．６  μｍｏｌ（７２０  ｍｇ）のＰＥＧ−マレイミド（日本油脂）を加え、該反応液を４℃・遮光下で一晩反応した。各反応液に終濃度が０．１  Ｍになるように酢酸を加え、ＳＰ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｃ５０イオン交換カラム（容量５−１０  ｍｌ）にロードした。０．１  Ｍ酢酸、次いで１０  ｍＭギ酸アンモニウム／０．１  Ｍ酢酸で該カラムを洗浄後、２  Ｍギ酸アンモニウム／２０％アセトニトリル、次いで３．２  Ｍギ酸アンモニウム／２０％アセトニトリルを用いてＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲート、すなわちＰＥＧ３０ｋ（Ｔｒａｕｔ）−ＮＭＵ−８［７］を該カラムから溶出した。
得られた溶出液を、Ａ液１００％−Ｂ液０％で平衡化したＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫカラムＣ８カラム（ＳＧ３００、１０  ｘ  ２５０  ｍｍ、資生堂）に流速４．５  ｍｌ／ｍｉｎでインジェクトし、Ａ液６０％−Ｂ液４０％まで急激に上昇させた後、さらに４０分かけてＡ液３０％−Ｂ液７０％まで直線的に上昇させ、ＰＥＧ３０ｋ（Ｔｒａｕｔ）−ＮＭＵ−８［７］を溶出した。ＰＥＧ３０ｋ（Ｔｒａｕｔ）−ＮＭＵ−８［７］のピークを分取し、さらに凍結乾燥した。得られたＰＥＧ３０ｋ（Ｔｒａｕｔ）−ＮＭＵ−８［７］凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。【０１３９】
【表４】
2009044918.tif 000129
（ブタＮＭＵ−８のα−アミノ基においてリンカーに結合している。）【０１４０】
実施例５
ＰＥＧ−ＮＨＳを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製（１）
ブタＮＭＵ−８（Ｂａｃｈｅｍ）［配列番号：２］、１８  μｍｏｌ（２０．０  ｍｇ）を５００  μｌのジメチルホルムアミドに溶解し、さらに該溶液に、あらかじめ２７  μｍｏｌ相当のＢｏｃ−ωアミノカルボン酸［Ｂｏｃ−Ａｚｅ（２）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｚｅ（３）−ＯＨ、Ｂｏｃ−β−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｂｕ（４）−ＯＨ、Ｂｏｃ−（４）Ａｍｂｚ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｐｅ（５）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｃｐ（６）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｏｃ（８）−ＯＨ、Ｂｏｃ−１１−Ａｍｉｎｏｕｎｄｅｃａｎｏｉｃ−Ａｃｉｄ、Ｂｏｃ−１２−Ａｍｉｎｏｄｏｄｅｃａｎｏｉｃ−Ａｃｉｄ（以上、渡辺化学工株式会社）、２−（４−Ｂｏｃ−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ）−２−ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔｉｃ−Ａｃｉｄ（ＡＬＤＲＩＣＨ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ）、３−（４−Ｂｏｃ−ｐｉｐｅｒａｚｉｎ−１−ＹＬ）ｐｒｏｐｉｎｉｃ−Ａｃｉｄ、および２−（４−Ｂｏｃ−ｐｉｐｅｒａｚｉｎ−Ｙ−ＹＬ）Ａｃｅｔｉｃ−Ａｃｉｄ−Ｈｙｄｒａｔｅ（以上、Ｆｌｕｏｒｏｃｈｅｍ．  Ｌｔｄ．）、４’−［Ｂｏｃ−ａｍｉｎｏ］［１，１’−ｂｉｐｈｅｎｙｌ］−２−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ、または３’−［Ｂｏｃ−ａｍｉｎｏ］［１，１’−ｂｉｐｈｅｎｙｌ］−４−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ（以上、Ｂｉｏ−Ｆａｒｍａ））を５００μｌのジメチルホルムアミドに溶解したものに対して２７μｍｏｌのシアノリン酸ジエチルと５４μｍｏｌのトリエチルアミンを加えた溶液を加え、室温で１時間反応させた。各反応液をＡ液（０．１％トリフルオロ酢酸／蒸留水）で２０倍に希釈し、Ａ液１００％−Ｂ液（０．１％トリフルオロ酢酸／８０％アセトニトリル）０％で平衡化したＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ，  Ｃ１８カラム（ＭＧＩＩ、２０  ｘ  ２５０  ｍｍ、資生堂）に流速９．０  ｍｌ／ｍｉｎでインジェクトした（Ｂｏｃ−１１−Ａｍｉｎｏｕｎｄｅｃａｎｏｉｃ−Ａｃｉｄ、およびＢｏｃ−１２−Ａｍｉｎｏｄｏｄｅｃａｎｏｉｃ−ＡｃｉｄについてはＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ，  Ｃ１カラム（ＵＧ１２０、２０  ｘ  ２５０  ｍｍ、資生堂）を使用）。Ａ液６０％−Ｂ液４０％まで急激に上昇させた後、６０分かけてＡ液３０％−Ｂ液７０％まで直線的に上昇させ、各Ｂｏｃ−ωアミノカルボン酸が導入されたＮＭＵ−８を未反応ＮＭＵ−８や余剰Ｂｏｃ−ωアミノカルボン酸から分離して溶出し、精製された各ω−アミノカルボン酸導入ＮＭＵ−８を分取、凍結乾燥した。【０１４１】
得られた各凍結乾燥物を２００μｌの蒸留水に溶解し、さらに２ｍｌのトリフルオロ酢酸を加え、室温で４５分間反応させることでＢｏｃ基を除去した。反応液をジエチルエーテルで１０倍に希釈し、よく混合した後、４℃，９５００ｒｐｍ，１５分間の条件で遠心した。上澄みをデカンテーションで捨て、ペレットに対して再度５ｍｌジエチルエーテルを加え、よく混合した後、同様の操作を繰り返した。得られたぺレットを室温で乾燥後、６ｍｌの０．１Ｍ酢酸に溶かし、Ａ液１００％−Ｂ液０％で平衡化したＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫカラムＣ１８カラム（ＭＧＩＩ、２０  ｘ  ２５０  ｍｍ、資生堂）に流速９．０  ｍｌ／ｍｉｎでインジェクトし、Ａ液７５％−Ｂ液２５％まで急激に上昇させた後、さらに６０分かけてＡ液４５％−Ｂ液５５％まで直線的に上昇させ、各ωアミノカルボン酸−ＮＭＵ−８コンジュゲートを溶出・分取し、凍結乾燥した。【０１４２】
得られたωアミノカルボン酸−ＮＭＵ−８コンジュゲート  ２．０  μｍｏｌ相当を５００  μｌのジメチルスルホキシドに溶解し、さらに該溶液に６．０  μｍｏｌ（約１８０  ｍｇ）のｎ−ヒドロキシスクシミド導入ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥＧＣ−３０ＴＳ、日本油脂）を１  ｍｌのジメチルスルホキシドに溶解して加え、引き続いて６．０  μｍｏｌのトリエチルアミンを添加して、室温で２時間反応させた。反応液に終濃度が０．１  Ｍになるように酢酸を加え、さらに４０  ｍｌの０．１  Ｍ酢酸によって希釈した後、ＳＰ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｃ５０イオン交換カラム（容量５−１０  ｍｌ）にロードした。０．１  Ｍ酢酸、次いで１０  ｍＭ  ギ酸アンモニウム／  ０．１  Ｍ酢酸で該カラムを洗浄後、２  Ｍギ酸アンモニウム／２０％アセトニトリル、次いで３．２  Ｍギ酸アンモニウム／２０％アセトニトリルを用いてＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートを該カラムから溶出した。
得られた溶出液を、Ａ液１００％−Ｂ液０％で平衡化したＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫカラムＣ８カラム（ＳＧ３００、２０  ｘ  ２５０  ｍｍ、資生堂）に流速９．０  ｍｌ／ｍｉｎでインジェクトし、Ａ液５５％−Ｂ液４５％まで急激に上昇させた後、さらに６０分かけてＡ液２５％−Ｂ液７５％まで直線的に上昇させ、ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［８−２２］を溶出した。ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートのピークを分取し、さらに凍結乾燥した。
得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［８］−［２２］の凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。【０１４３】
【表５−１】
2009044918.tif 000130
【０１４４】
【表５−２】
2009044918.tif 000131
【０１４５】
実施例６
ＰＥＧ−ＮＨＳを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製（２）
実施例５と同様の手法で得られたωアミノカルボン酸−ＮＭＵ−８コンジュゲートまたはＮＭＵ−８自身  ２．０  μｍｏｌ相当を５００  μｌのジメチルスルホキシドに溶解し、さらに該溶液に６．０  μｍｏｌ（〜２４０  ｍｇ）のｎ−ヒドロキシスクシミド導入分枝ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＧＣ２−４００ＧＳ２、日本油脂）を１  ｍｌのジメチルスルホキシドに溶解して加え、引き続いて６．０  μｍｏｌのトリエチルアミンを添加して、室温で２時間反応させた。反応液に終濃度が０．１  Ｍになるように酢酸を加え、さらに４０  ｍｌの０．１  Ｍ酢酸によって希釈した後、ＳＰ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｃ５０イオン交換カラム（容量５−１０  ｍｌ）にロードした。０．１  Ｍ酢酸、次いで１０  ｍＭ  ギ酸アンモニウム／  ０．１  Ｍ酢酸で該カラムを洗浄後、２  Ｍギ酸アンモニウム／２０％アセトニトリル、次いで３．２  Ｍギ酸アンモニウム／２０％アセトニトリルを用いてＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートを該カラムから溶出した。【０１４６】
得られた溶出液を、Ａ液１００％−Ｂ液０％で平衡化したＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫカラムＣ８カラム（ＳＧ３００、２０  ｘ  ２５０  ｍｍ、資生堂）に流速９．０  ｍｌ／ｍｉｎでインジェクトし、Ａ液５５％−Ｂ液４５％まで急激に上昇させた後、さらに６０分かけてＡ液２５％−Ｂ液７５％まで直線的に上昇させ、［２３］−［３７］のＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートを溶出した。ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートのピークを分取し、さらに凍結乾燥した。
得られた［２３−３８］のＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートの凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。【０１４７】
【表６−１】
2009044918.tif 000132
【０１４８】
【表６−２】
2009044918.tif 000133
【０１４９】
実施例７
ＰＥＧ−Ａｌｄｅｈｙｄｅを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製
実施例５と同様の手法で得られたωアミノカルボン酸−ＮＭＵ−８コンジュゲートまたはＮＭＵ−８自身１．０  μｍｏｌと３．０  μｍｏｌ（〜１００  ｍｇ）のアルデヒド基導入ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−３００ＡＬ、日本油脂）を１０００  μｌのジメチルホルムアミドに溶解し、さらに該溶液に２０  μｍｏｌ相当のシアノトリヒドロホウ酸ナトリウムを添加して、室温で２時間反応させた。反応液に終濃度が０．１  Ｍになるように酢酸を加え、さらに４０  ｍｌの０．１  Ｍ酢酸によって希釈した後、ＳＰ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｃ５０イオン交換カラム（容量５−１０  ｍｌ）にロードした。０．１  Ｍ酢酸、次いで１０  ｍＭ  ギ酸アンモニウム／  ０．１  Ｍ酢酸で該カラムを洗浄後、２  Ｍギ酸アンモニウム／２０％アセトニトリル、次いで３．２  Ｍギ酸アンモニウム／２０％アセトニトリルを用いてＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートを該カラムから溶出した。【０１５０】
得られた溶出液を、Ａ液１００％−Ｂ液０％で平衡化したＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫカラムＣ８カラム（ＳＧ３００、２０  ｘ  ２５０  ｍｍ、資生堂）に流速９．０  ｍｌ／ｍｉｎでインジェクトし、Ａ液５５％−Ｂ液４５％まで急激に上昇させた後、さらに６０分かけてＡ液２５％−Ｂ液７５％まで直線的に上昇させ、ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［３９−５４］を溶出した。ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートのピークを分取し、さらに凍結乾燥した。【０１５１】
得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［３９］−［５４］の凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。【０１５２】
【表７−１】
2009044918.tif 000134
【０１５３】
【表７−２】
2009044918.tif 000135
【０１５４】
実施例８
ＰＥＧ−ｉｏｄｏａｃｅｔａｍｉｄｅを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製
Ｎ末端にＣｙｓ残基を導入したラットＮＭＵ−８（Ａｎｙｇｅｎ）［配列番号：６］、１．４  μｍｏｌ（＝１．７  ｍｇ）と２．１μｍｏｌ（１２５ｍｇ）のヨードアセトアミド導入ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−３００ＩＡ）を１ｍｌの５０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ  ８．５），５  ｍＭ  ＥＤＴＡに溶解させ、そのまま遮光室温にて２時間穏やかに回転して反応させた。反応液に終濃度が０．１  Ｍになるように酢酸を加え、さらに４０  ｍｌの０．１  Ｍ酢酸によって希釈した後、ＳＰ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｃ５０イオン交換カラム（容量５−１０  ｍｌ）にロードした。０．１  Ｍ酢酸、次いで１０  ｍＭ  ギ酸アンモニウム／  ０．１  Ｍ酢酸で該カラムを洗浄後、２  Ｍギ酸アンモニウム／２０％アセトニトリル、次いで３．２  Ｍギ酸アンモニウム／２０％アセトニトリルを用いてＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートを該カラムから溶出した。【０１５５】
得られた溶出液を、Ａ液１００％−Ｂ液０％で平衡化したＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫカラムＣ８カラム（ＳＧ３００、２０  ｘ  ２５０  ｍｍ、資生堂）に流速９．０  ｍｌ／ｍｉｎでインジェクトし、Ａ液５５％−Ｂ液４５％まで急激に上昇させた後、さらに６０分かけてＡ液２５％−Ｂ液７５％まで直線的に上昇させ、ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［５５］を溶出した。ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートのピークを分取し、さらに凍結乾燥した。【０１５６】
得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［５５］の凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。【０１５７】
【表８】
2009044918.tif 000136
【０１５８】
試験例３
ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートの受容体結合試験
ヒトＦＭ３発現ＣＨＯ細胞（ｄｈｆｒ−）及びヒトＴＧＲ１発現ＣＨＯ細胞（ｄｈｆｒ−）を１０％  ｄｉａｌｙｚｅｄ  ＦＢＳ含有ＭＥＭα  （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）培地を用いて３７℃、５％二酸化炭素の条件で培養した。１０  ｍｌの０．１  ｍＭ  ＥＤＴＡ含有Ｄ−ＰＢＳ  （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で接着細胞を剥離し、４℃，１０００  ｒｐｍ，１０  ｍｉｎ条件で遠心し、細胞を回収した。得られた細胞ペレットに対して、ホモジナイズバッファー（１０  ｍＭ  ＮａＨＣＯ３  （ｐＨ７．４），５  ｍＭ  ＥＤＴＡ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ＝  ０．５  ｍＭ  ＰＭＳＦ，１０  μｇ／ｍｌ  Ｐｅｐｓｔａｔｉｎ  Ａ，２０  μｇ／ｍｌ  Ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ，４  μｇ／ｍｌ  Ｅ−６４）を１５  ｍｌ加え、ポリトロンホモジナイザー（Ｋｉｎｅｍａｔｉｃａ  ＧｍｂＨ）を用いて細胞膜を破砕し、４℃，１０００ｇ，１０  ｍｉｎ条件で遠心し、上清を収集した。これをさらに２回繰り返し、４℃，３０，０００  ｒｐｍ，６０  ｍｉｎ条件で超遠心後、ペレットに８  ｍｌのホモジナイズバッファーを加え、均一に懸濁して膜画分を調製した。ＦＭ３発現ＣＨＯ細胞膜画分のタンパク質濃度は１．２  ｍｇ／ｍｌであり、ＴＧＲ１発現ＣＨＯ細胞膜画分のタンパク質濃度は１．１  ｍｇ／ｍｌであった。【０１５９】
次に、放射標識リガンド１２５Ｉ−ＮＭＵ８と調製した各受容体発現細胞膜画分との反応性を反応バッファー（５０  ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  （ｐＨ  ６．８），  １  ｍＭ  ＥＤＴＡ，  ０．１％ＢＳＡ，    Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）を用いてスキャッチャード解析により調べた。反応バッファーで希釈されたＦＭ３膜画分（１００倍希釈）、ＴＧＲ１膜画分（５０倍希釈）１１０  μｌを用意し、濃度を変化させた１０  μｌの１２５Ｉ−ＮＭＵ８を添加し、２５℃，７５  ｍｉｎ反応後、１．５  ｍｌの氷冷した洗浄バッファー（２０  ｍＭ  Ｔｒｉｓ  （ｐＨ  ７．４），  １  ｍＭ  ＥＤＴＡ，  ５  ｍＭ  ＭｇＣｌ２，  ０．１％  ＣＨＡＰＳ）を加えた。直ちにポリエチレンイミン処理したグラスフィルターを取り付けたサンプルマニフォールド（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に通してろ過し、フィルターに残存する標識リガンド量をγカウンターにて測定した。この結果、ＦＭ３膜画分ではＫｄ  １６４  ｐＭ、Ｂｍａｘ  ４．８  ｐｍｏｌ／ｍｇ  ｐｒｏｔｅｉｎであり、ＴＧＲ１膜画分はＫｄ  １３５  ｐＭ、Ｂｍａｘ  ２．０  ｐｍｏｌ／ｍｇ  ｐｒｏｔｅｉｎであり、両膜画分ともに均一な結合サイトを有するものであった（図３Ａ（ＦＭ３／ＣＨＯ細胞膜画分）、図３Ｂ（ＴＧＲ１／ＣＨＯ細胞膜画分））。用いたＦＭ３およびＴＧＲ１膜画分のタンパク質濃度は１２および２２  μｇ／ｍｌである。【０１６０】
表９の各ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートの各受容体への親和性を、ＦＭ３膜画分またはＴＧＲ１膜画分への１２５Ｉ−ＮＭＵ８標識リガンド結合阻害により評価した。すなわち、ＮＭＵ誘導体やＰＥＧコンジュゲートの希釈列を用意し、希釈した各膜画分溶液２００  μｌに添加し、Ｖｏｒｔｅｘにてよく混合した後、標識リガンド２  μｌ（終濃度７５  ｐＭ）を加え、２５℃，６０分間反応させた。上述の操作で、ファイルターに残存する標識リガンドの結合量を測定し、グラフパッドＰＲＩＳＭを用いてＩＣ５０値を求めた（図４Ａ（ＦＭ３受容体結合）、図４Ｂ（ＴＧＲ１受容体結合）、図４Ｃ（ＦＭ３受容体結合）、図４Ｄ（ＴＧＲ１受容体結合）、表９）。図４Ａおよび図４Ｂにおいて、横軸は各誘導体の濃度の対数値を表し、縦軸はＮＭＵの結合により算出した０−１００％の残存放射活性により規格化した各誘導体の結合阻害率である。【０１６１】
【表９】
2009044918.tif 000137
【０１６２】
試験例４
ＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートのマウス摂食抑制活性
日本チャールズリバーより納入された７週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、導入後５〜１０日間、温湿度・調光時間が調節された飼育環境下（２５℃、１２時間明期−１２時間暗期、８：００にライト点灯）にて、１ケージあたり４匹ずつ群飼した。該マウスを５−８日間ハンドリングした後、フロアメッシュを敷いた各ケージに１匹ずつ単飼し、ペプチド（コンジュゲート）投与前３日間、腹腔内投与に馴化させた。馴化させた該マウスをペプチド（コンジュゲート）投与前日の１８：００から１６時間絶食させ（ただし、水は自由に飲めるようにさせた）、次いで投与当日の１０：００に、生理食塩水に溶解したペプチド（コンジュゲート）、すなわち２４．２  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ（ＧＭＢＳ）−ＮＭＵ−８［１］、２４．２  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ（ＥＭＣＳ）−ＮＭＵ−８［２］、２４．２  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ（ＫＭＵＳ）−ＮＭＵ−８［３］、および２４．２  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ（ＳＭＣＣ）−ＮＭＵ−８［４］、各溶液１００  μｌを投与量が１００  ｎｍｏｌ／ｋｇになるように該マウスに腹腔内投与した。ペプチド（コンジュゲート）溶液投与後、直ちに秤量済みのＭＦ飼料（オリエンタル酵母工業）を該マウスに与え自由に食べさせ、さらに３、６、２４時間後に飼料残量を秤量した。３、６、２４時間摂餌量は、最初に与えた飼料量から、それぞれ３、６、２４時間後の飼料残量を差し引くことにより算出した。結果を図５に示す。図５から明らかなように、各ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートは、３、６、２４時間摂餌量を有意に抑制した。【０１６３】
試験例５
ＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートのマウス摂食抑制活性
日本チャールズリバーより納入された７週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、導入後５〜１０日間、温湿度・調光時間が調節された飼育環境下（２５℃、１２時間明期−１２時間暗期、８：００にライト点灯）にて、１ケージあたり４匹ずつ群飼した。該マウスを５−８日間ハンドリングした後、フロアメッシュを敷いた各ケージに１匹ずつ単飼し、ペプチド（コンジュゲート）投与前３日間、腹腔への注射針（マイジェクター、インスリン投与用針付注射筒、テルモ）の針刺しを行い腹腔内投与に馴化させた。馴化させた該マウスをペプチド（コンジュゲート）投与前日の１８：００から１６時間絶食させ（ただし、水は自由に飲めるようにさせた）、次いで投与当日の１０：００に、生理食塩水に溶解したペプチド（コンジュゲート）、すなわち２．３９  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ（ＧＭＢＳ）−ＮＭＵ−８［１］、２．３９  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ（ＥＭＣＳ）−ＮＭＵ−８［２］、２．３９  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ（ＫＭＵＳ）−ＮＭＵ−８［３］、および２．３９  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ（ＳＭＣＣ）−ＮＭＵ−８［４］、各溶液１００  μｌを投与量が１０  ｎｍｏｌ／ｋｇになるように該マウスに腹腔内投与した。ペプチド（コンジュゲート）溶液投与後、直ちに秤量済みのＭＦ飼料（オリエンタル酵母工業）を該マウスに与え自由に食べさせ、さらに３、６、２４時間後に飼料残量を秤量した。３、６、２４時間摂餌量は、最初に与えた飼料量から、それぞれ３、６、２４時間後の飼料残量を差し引くことにより算出した。結果を図６に示す。図６から明らかなように、各ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートは、３、６、２４時間摂餌量を有意に抑制した。【０１６４】
試験例６
ＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートのマウス摂食抑制活性
日本チャールズリバーより納入された７週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、導入後５〜１０日間、温湿度・調光時間が調節された飼育環境下（２５℃、１２時間明期−１２時間暗期、８：００にライト点灯）にて、１ケージあたり４匹ずつ群飼した。該マウスを５−８日間ハンドリングした後、フロアメッシュを敷いた各ケージに１匹ずつ単飼し、ペプチド（コンジュゲート）投与前３日間、腹腔内投与に馴化させた。馴化させた該マウスをペプチド（コンジュゲート）投与前日の１８：００から１６時間絶食させ（ただし、水は自由に飲めるようにさせた）、次いで投与当日の１０：００に、生理食塩水に溶解したペプチド（コンジュゲート）、すなわち２４．５  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ−ＮＭＵ−８［５］、２４．５  μＭ  Ｍ  ＰＥＧ３０ｋ−Ｃｙｓ−ＮＭＵ−８［６］、２４．５  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ（Ｔｒａｕｔ）−ＮＭＵ−８［７］、２４．５  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ（ＳＭＣＣ）−ＮＭＵ−８［４］、各溶液１００  μｌを投与量が１００  ｎｍｏｌ／ｋｇになるように該マウスに腹腔内投与した。ペプチド（コンジュゲート）溶液投与後、直ちに秤量済みのＭＦ飼料（オリエンタル酵母工業）を該マウスに与え自由に食べさせ、さらに３、６、２４時間後に飼料残量を秤量した。３、６、２４時間摂餌量は、最初に与えた飼料量から、それぞれ３、６、２４時間後の飼料残量を差し引くことにより算出した。結果を図７に示す。図７から明らかなように、各ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートは、３、６、２４時間摂餌量を有意に抑制した。【０１６５】
試験例７
ＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートのマウス摂食抑制活性
日本チャールズリバーより納入された７週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、導入後５〜１０日間、温湿度・調光時間が調節された飼育環境下（２５℃、１２時間明期−１２時間暗期、８：００にライト点灯）にて、１ケージあたり４匹ずつ群飼した。該マウスを５−８日間ハンドリングした後、フロアメッシュを敷いた各ケージに１匹ずつ単飼し、ペプチド（コンジュゲート）投与前３日間、腹腔への注射針（マイジェクター、インスリン投与用針付注射筒、テルモ）の針刺しを行い腹腔内投与に馴化させた。馴化させた該マウスをペプチド（コンジュゲート）投与前日の１８：００から１６時間絶食させ（ただし、水は自由に飲めるようにさせた）、次いで投与当日の１０：００に、生理食塩水に溶解したペプチド（コンジュゲート）、すなわち２．５１  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ−ＮＭＵ−８［５］、２．５１  μＭ  Ｍ  ＰＥＧ３０ｋ−Ｃｙｓ−ＮＭＵ−８［６］、２．５１  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ（Ｔｒａｕｔ）−ＮＭＵ−８［７］、２．５１  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ（ＳＭＣＣ）−ＮＭＵ−８［４］、各溶液１００  μｌを投与量が１０  ｎｍｏｌ／ｋｇになるように該マウスに腹腔内投与した。ペプチド（コンジュゲート）溶液投与後、直ちに秤量済みのＭＦ飼料（オリエンタル酵母工業）を該マウスに与え自由に食べさせ、さらに３、６、２４時間後に飼料残量を秤量した。３、６、２４時間摂餌量は、最初に与えた飼料量から、それぞれ３、６、２４時間後の飼料残量を差し引くことにより算出した。結果を図８に示す。図８から明らかなように、各ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートは、３、６、２４時間摂餌量を有意に抑制した。【０１６６】
試験例８
ＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートのマウス摂食抑制活性
日本チャールズリバーより納入された７週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、導入後５〜１０日間、温湿度・調光時間が調節された飼育環境下（２５℃、１２時間明期−１２時間暗期、８：００にライト点灯）にて、１ケージあたり４匹ずつ群飼した。該マウスを５−８日間ハンドリングした後、フロアメッシュを敷いた各ケージに１匹ずつ単飼し、ペプチド（コンジュゲート）投与前３日間、腹腔への注射針（マイジェクター、インスリン投与用針付注射筒、テルモ）の針刺しを行い腹腔内投与に馴化させた。馴化させた該マウスをペプチド（コンジュゲート）投与前日の１８：００から１６時間絶食させ（ただし、水は自由に飲めるようにさせた）、次いで投与当日の１０：００に、生理食塩水に溶解したペプチド（コンジュゲート）、すなわち２４．３  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ（ＡＣＰ）−ＮＭＵ−８［１４］、２４．３  μＭ  （ＰＥＧ２０ｋ）２（ＡＣＰ）−ＮＭＵ−８［２９］、２４．３  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ（ＡＢ）−ＮＭＵ−８［１１］、２４．３  μＭ  （ＰＥＧ２０ｋ）２（ＡＢ）−ＮＭＵ−８［２６］、２４．３  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ（ＮＨ−ＡＢ）−ＮＭＵ−８［４２］、２４．３  μＭ  ＰＥＧ３０ｋ（ＳＭＣＣ）−ＮＭＵ−８［４］、各溶液１００  μｌを投与量が１００  ｎｍｏｌ／ｋｇになるように該マウスに腹腔内投与した。ペプチド（コンジュゲート）溶液投与後、直ちに秤量済みのＭＦ飼料（オリエンタル酵母工業）を該マウスに与え自由に食べさせ、さらに３、６、２４時間後に飼料残量を秤量した。３、６、２４時間摂餌量は、最初に与えた飼料量から、それぞれ３、６、２４時間後の飼料残量を差し引くことにより算出した。結果を図９に示す。図９から明らかなように、各ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートは、３、６、２４時間摂餌量を有意に抑制した。【０１６７】
試験例９
ＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートのマウス抗肥満活性
日本チャールスリバーより納入された５週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、納入後１８−２８週間、湿度・調光時間が調節された飼育環境下（２５℃、１２時間明期−１２時間暗期、８：００にライト点灯）にて、特殊飼料（５８％  Ｆａｔ高脂肪食、Ｄ１２３３１、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ  Ｉｎｃ．）により１ケージあたり５匹ずつ群飼した。該マウスを１−２週間に１回の頻度でハンドリングした後、明暗周期１２時間（０５００ｈにライト点灯）の条件に移動し、該マウスを１週間以上飼育して環境に馴化させた。馴化させた該マウス６０匹の平均体重が５０ｇ以上の時点で、該マウスは床敷きを敷いた各ケージに１匹ずつ単飼して１週間以上環境に馴化させ、飼料の食べこぼしを観察したマウスを除外し、平均値±２ＳＤの範囲内を満たすマウスを選抜した後、投与前日の体重で単変数完全無作為割り付けして３６匹を選抜した。馴化させた該マウスの体重と飼料量をペプチド（コンジュゲート）投与前日の１３３０−１４３０ｈの間に秤量した。該マウスをペプチド（コンジュゲート）投与当日の１３３０−１４３０ｈの間に体重と飼料量を秤量し、次いで、１５００−１６００ｈに生理食塩水に溶解したペプチド（コンジュゲート）、すなわち１３．５  μＭ、４．５  μＭ、１．３５μＭ、０．４５μＭ、または０．１３５μＭのＰＥＧ３０ｋ（ＥＭＣＳ）−ＮＭＵ−８［２］、各溶液１００  μｌを該マウス背部に皮下投与した。ペプチド（コンジュゲート）溶液投与後、該マウスは自由に摂食させ、翌日の１３３０−１４３０ｈに体重と飼料量を秤量するまでの間、該マウスは自由に行動させた。該マウスの体重と飼料量の秤量、および投与を７回繰り返し、７回目（７日目）の１５００−１６００ｈの間に投与した後、翌日（８日目）、１０日目の体重と飼料量を秤量した。１日の摂餌量は、与えた飼料量から、それぞれ翌日の飼料残量を差し引くことにより算出した。【０１６８】
体重および摂餌量の測定結果を図１０に示した。［図中、●：２７  ｎｍｏｌ／ｋｇ、○：９  ｎｍｏｌ／ｋｇ、△：２．７  ｎｍｏｌ／ｋｇ、▲：０．９  ｎｍｏｌ／ｋｇ、■：０．２７  ｎｍｏｌ／ｋｇ、□：生理食塩水。＃：７日目の摂餌量、あるいは体重変化をウイリアム検定により検定し、危険率が０．２５より小さかった（Ｐ  ＜  ０．２５）ことを表す。］【０１６９】
試験例１０
ＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートのマウス摂食抑制活性
日本チャールズリバーより納入された７週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、導入後５〜１０日間、温湿度・調光時間が調節された飼育環境下（２５℃、１２時間明期−１２時間暗期、８：００にライト点灯）にて、１ケージあたり４匹ずつ群飼した。該マウスを５−８日間ハンドリングした後、フロアメッシュを敷いた各ケージに１匹ずつ単飼し、ペプチド（コンジュゲート）投与前３日間、腹腔内投与に馴化させた。馴化させた該マウスをペプチド（コンジュゲート）投与前日の１８：００から１６時間絶食させ（ただし、水は自由に飲めるようにさせた）、次いで投与当日の１０：００に、生理食塩水に溶解したペプチド（コンジュゲート）、すなわち７．４７    μＭ、２．４９μＭ、０．７５μＭ、０．２５μＭ    ＰＥＧ３０ｋ（Ｎ−ＰＩＰ−ＡＣ）−ＮＭＵ−８  ［５１］、各溶液１００  μｌを投与量が３０、  １０、  ３、  １    ｎｍｏｌ／ｋｇになるように該マウスに腹腔内投与した。ペプチド（コンジュゲート）溶液投与後、直ちに秤量済みのＭＦ飼料（オリエンタル酵母工業）を該マウスに与え自由に食べさせ、さらに３、６時間後に飼料残量を秤量した。３、６時間摂餌量は、最初に与えた飼料量から、それぞれ３、６時間後の飼料残量を差し引くことにより算出した。結果を図１１に示す。図１１から明らかなように、ＰＥＧ３０ｋ−Ｎ−ＰＩＰ−Ａｃ−ＮＭＵ−８  は、３、６時間摂餌量を用量依存的に抑制した。＃：摂餌量をウイリアム検定により検定し、危険率が０．０２５より小さかった（Ｐ  ＜  ０．０２５）ことを示す。
実施例９
ＰＥＧ−ＮＨＳを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製（３）
実施例５と同様の手法で、ブタＮＭＵ−８（Ｂａｃｈｅｍ）［配列番号：２］とＢｏｃ−Ｇｌｙ（株式会社ペプチド研究所）、Ｂｏｃ−９−ａｍｉｎｏｎｏｎａｎｉｃ  ａｃｉｄ（Ｔｙｇｅｒ  Ｓｃｉ．  Ｉｎｃ．）、またはＢｏｃ−２−Ａｂｚ−ＯＨ、Ｂｏｃ−３−Ａｂｚ−ＯＨ、Ｂｏｃ−４−Ａｂｚ−ＯＨ（以上、渡辺化学工株式会社）を反応させ、ωアミノカルボン酸−ＮＭＵ−８コンジュゲートを得た。【０１７０】
実施例５と同様の手法で、得られたωアミノカルボン酸−ＮＭＵ−８コンジュゲートとｎ−ヒドロキシスクシミド導入ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥＧＣ−３０ＴＳ、日本油脂）を反応させ、得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［５６−６０］を凍結乾燥した。
得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［５６−６０］の凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。
【０１７１】
【表１０】
2009044918.tif 000138
【０１７２】
実施例１０
ＰＥＧ−ＮＨＳを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製（４）
Ｎ末端にＬ−Ｌｙｓ残基を導入したラットＮＭＵ−８（Ａｎｙｇｅｎ）とｎ−ヒドロキシスクシミド導入ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥＧＣ−３０ＴＳ、日本油脂）を、実施例５と同様の手法で反応させ、得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［６１］を凍結乾燥した。
得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［６１］の凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。【０１７３】
【表１１】
2009044918.tif 000139
【０１７４】
実施例１１
ＰＥＧ−ＮＨＳを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製（５）
ブタＮＭＵ−８（Ｂａｃｈｅｍ）［配列番号：２］、１８  μｍｏｌ（２０．０  ｍｇ）を５００  μｌのジメチルホルムアミドに溶解し、さらに該溶液に、あらかじめ２７  μｍｏｌ相当の  Ｆｍｏｃ−ｃｉｓ−１，４−ａｍｉｎｏｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ  ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ（渡辺化学工業株式会社）を５００μｌのジメチルホルムアミドに溶解したものに対して２７  μｍｏｌ相当のシアノトリヒドロホウ酸ナトリウム、５４μｍｏｌのトリエチルアミンを加えた溶液を加え、室温で１時間反応させた。反応液を１００μｌ程度までエバポレートにて濃縮し、さらに５４μｍｏｌ相当のジエチルアミンを加え、室温で２時間反応させることでＦｍｏｃ基を除去した。反応液を０．１  Ｍ酢酸を用いて中和後、０．１％ＴＦＡを含む蒸留水を添加して２０ｍＬに希釈し、Ａ液１００％−Ｂ液０％で平衡化したＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫカラムＣ１８カラム（ＭＧII、２０  ｘ  ２５０  ｍｍ、資生堂）に流速９．０ｍｌ／ｍｉｎでインジェクトし、Ａ液７５％−Ｂ液２５％まで急激に上昇させた後、さらに４０分かけてＡ液５０％−Ｂ液５０％まで直線的に上昇させ、ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［６２］を溶出した。ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲートのピークを分取し、さらに凍結乾燥した。
得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［６２］の凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。【０１７５】
【表１２】
2009044918.tif 000140
【０１７６】
試験例１１
ＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートのマウス抗肥満活性（２）
日本チャールスリバーより納入された５週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを、納入後２３週間、湿度・調光時間が調節された飼育環境下（２５℃、１２時間明期−１２時間暗期、８：００にライト点灯）にて、特殊飼料（５８％  Ｆａｔ高脂肪食、Ｄ１２３３１、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ  Ｉｎｃ．）により１ケージあたり５匹ずつ群飼した。該マウスを明暗周期１２時間（０４００ｈにライト点灯）の条件に移動し、１週間以上飼育して環境に馴化させた。馴化させた該マウスは床敷きを敷いたケージに単飼にしてペプチド（コンジュゲート）溶液投与開始前に６日間のハンドリング馴化を行った。飼料の食べこぼしを観察したマウスを除外し、体重が平均値±２ＳＤの範囲内を満たすマウスを選抜した後、投与前日の体重で単変数完全無作為割り付けして２４匹を選抜した。該マウスをペプチド（コンジュゲート）溶液投与当日の１３００−１５００ｈの間に体重を秤量し、生理食塩水に溶解したペプチド（コンジュゲート）、すなわち７．５  μＭ、２．５  μＭまたは０．７５  μＭのＰＥＧ３０ｋ（Ｎ−ＰＩＰ−ＡＣ）−ＮＭＵ−８  ［５１］、各該マウスの体重（ｇ）×４  μｌを該マウス背部に皮下投与した。ペプチド（コンジュゲート）溶液投与後、該マウスは自由に摂食させ、翌日の１３３０−１５００ｈに体重を秤量するまでの間、該マウスは自由に行動させた。該マウスの体重の秤量は任意日の１５００−１６００ｈの投与前に行った。投与量はもっとも近い日の体重をもとに算出し、該マウスへの投与は２６回繰り返した。【０１７７】
体重の測定結果を図１２に示した。［図中、●：３０  ｎｍｏｌ／ｋｇ、▲：１０  ｎｍｏｌ／ｋｇ、■：３  ｎｍｏｌ／ｋｇ、○：生理食塩水。＃：２６日目の体重変化をウイリアム検定により検定し、危険率が０．０２５より小さかった（Ｐ  ＜  ０．０２５）ことを示す。
製剤例１
（１）本発明化合物                          ５０ｍｇ
（２）ラクトース                            ３４ｍｇ
（３）トウモロコシ澱粉                  １０．６ｍｇ
（４）トウモロコシ澱粉（のり状）              ５ｍｇ
（５）ステアリン酸マグネシウム            ０．４ｍｇ
（６）カルボキシメチルセルロースカルシウム  ２０ｍｇ
計    １２０ｍｇ
常法に従い上記（１）〜（６）を混合し、錠剤機を用いて打錠することにより、錠剤が得られる。
実施例１２
ＰＥＧ−ＮＨＳを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製（６）
実施例５と同様の手法で得られたωアミノカルボン酸−ＮＭＵ−８コンジュゲート［Ｇｌｙ−ＮＭＵ−８、βＡｌａ−ＮＭＵ−８、またはＡＢ−ＮＭＵ−８］とＢｏｃ−ωアミノカルボン酸［Ｂｏｃ−Ｇｌｙ（株式会社ペプチド研究所）、Ｂｏｃ−β−Ａｌａ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｂｕ（４）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｐｅ（５）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ａｃｐ（６）−ＯＨ（以上、渡辺化学工株式会社）］を実施例５と同様の手法で反応させ、ωアミノカルボン酸（連接）−ＮＭＵ−８コンジュゲートを得た。【０１７８】
実施例５と同様の手法で、得られたωアミノカルボン酸（連接）−ＮＭＵ−８コンジュゲートとｎ−ヒドロキシスクシミド導入ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥＧＣ−３０ＴＳ、日本油脂）を反応させ、得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［６３−６９］を凍結乾燥した。【０１７９】
得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［６３−６９］の凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。【０１８０】
【表１３】
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【０１８１】
実施例１３
ＰＥＧ−Ａｌｄｅｈｙｄｅを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製（２）
実施例９、１０、１１、１２に記載したωアミノカルボン酸−ＮＭＵ−８コンジュゲートまたはＮ末端にＬ−Ｌｙｓ残基を導入したラットＮＭＵ−８（Ａｎｙｇｅｎ）とアルデヒド基導入ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−３００ＡＬ、日本油脂）を、実施例７と同様の手法で反応させ、得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［７０−８４］を凍結乾燥した。【０１８２】
【表１４−１】
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【０１８３】
【表１４−２】
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【０１８４】
実施例１４
ＰＥＧ−Ａｌｄｅｈｙｄｅを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製（３）
Ｆｍｏｃ固相合成法によりＮ末端にＯｒｎ（ＬまたはＤ、Ｎ末端α位アミノ基はＦｍｏｃ保護）−Ｐｈｇ（ＬまたはＤ）を導入したブタＮＭＵ−８、またはＮ末端にＯｒｎ（ＬまたはＤ、Ｎ末端α位アミノ基はＦｍｏｃ保護）−Ｇｌｙを導入したブタＮＭＵ−８をペプチド合成機（ＡＢＩ社）を用いて合成し、Ａ液１００％−Ｂ液０％で平衡化したＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫカラムＣ１８カラム（ＭＧＩＩ、２０  ｘ  ２５０  ｍｍ、資生堂）に流速９．０  ｍｌ／ｍｉｎでインジェクトし、Ａ液７５％−Ｂ液２５％まで急激に上昇させた後、さらに６０分かけてＡ液４５％−Ｂ液５５％まで直線的に上昇させ、精製した後、凍結乾燥した。【０１８５】
この凍結乾燥標品とアルデヒド基導入ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−３００ＡＬ、日本油脂）を、実施例７と同様の手法で反応させ、ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［８５−９０］を得た。さらに実施例１１と同様の手法でＦｍｏｃ基を除去し、ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［９１−９６］を得た。【０１８６】
得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［８５−９６］の凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。
【０１８７】
【表１５】
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【０１８８】
実施例１５
ＰＥＧ−Ａｌｄｅｈｙｄｅを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製（４）
Ｎ末端にＰｈｇ（ＬまたはＤ）またはＰｈｅ（ＬまたはＤ）を導入したブタＮＭＵ−８（Ｓｉｇｍａｇｅｎｏｓｙｓ）とＢｏｃ−Ａｐｅ（５）−ＯＨ（渡辺化学工株式会社）を、実施例５と同様の手法で反応させ、ωアミノカルボン酸−Ｐｈｇ（ＬまたはＤ）またはＰｈｅ（ＬまたはＤ）導入ＮＭＵ−８コンジュゲートを得た。【０１８９】
得られたωアミノカルボン酸−Ｐｈｇ（ＬまたはＤ）またはＰｈｅ（ＬまたはＤ）導入ＮＭＵ−８コンジュゲートおよびＮ末端にＰｈｇ（ＬまたはＤ）またはＰｈｅ（ＬまたはＤ）を導入したブタＮＭＵ−８（Ｓｉｇｍａｇｅｎｏｓｙｓ）とアルデヒド基導入ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−３００ＡＬ、日本油脂）を、実施例７と同様の手法で反応させ、ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［９７−１０４］を得た。
得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［９７−１０４］の凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。【０１９０】
【表１６】
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【０１９１】
実施例１６
ＰＥＧ−Ａｌｄｅｈｙｄｅを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製（５）
Ｎ末端にＬｙｓを導入したブタＮＭＵ−８（Ａｎｙｇｅｎ）とアルデヒド基導入ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−３００ＡＬ、日本油脂）を、ジメチルホルムアミドの代わりに０．１Ｍ酢酸（ｐＨ５．０の条件）にて実施例７と同様の手法で反応させ、選択的にα位のアミノ基に還元アミノ化反応をさせて、ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［１０５］を得た。【０１９２】
得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［１０５］の凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。【０１９３】
【表１７】
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【０１９４】
実施例１７
ＰＥＧ−Ａｌｄｅｈｙｄｅを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製（６）
ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［７５、１０５］とωアミノカルボン酸［Ｂｏｃ−Ｇｌｙ（株式会社ペプチド研究所）またはＢｏｃ−Ａｐｅ（５）−ＯＨ（渡辺化学工株式会社）］を実施例５と同様の手法を用いて反応させ、ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［１０６−１０９］を得た。【０１９５】
得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［１０６−１０９］の凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。【０１９６】
【表１８】
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【０１９７】
実施例１８
ＰＥＧ−Ａｌｄｅｈｙｄｅを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製（７）
ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［７５または１０５］とアルデヒド基導入ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−３００ＡＬ、日本油脂）を、実施例７と同様の手法で反応させ、ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［１１０］を得た。【０１９８】
得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［１１０］の凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。【０１９９】
【表１９】
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【０２００】
実施例１９
ＰＥＧ−Ａｌｄｅｈｙｄｅを用いたＮＭＵ−８  ＰＥＧ  コンジュゲートの調製（８）
ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［５１］とアルデヒド基導入ＰＥＧ（ＳＵＮＢＲＩＧＨＴ  ＭＥ−２００ＡＬ、ＭＥ−４００ＡＬ２、ＧＬ２−２００ＡＬ、ＧＬ４−４００ＡＬ、  ＧＬ２−４００ＡＬ、およびＧＬ３−４００ＡＬ１００Ｕ、日本油脂）を、実施例７と同様の手法で反応させ、ＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［１１１−１１６］を得た。【０２０１】
得られたＮＭＵ−８  ＰＥＧコンジュゲート［１１１−１１６］の凍結乾燥品を蒸留水に溶解し、ペプチド濃度をアミノ酸分析により測定した。
【０２０２】
【表２０】
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【産業上の利用可能性】
【０２０３】
本発明によれば、新規摂食抑制剤が提供される。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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