(57)【要約】  プレニルフラボノイドの水溶解性及びバイオアベイラビリティーを増加させるための方法及び製剤が開示される。該製剤は、癌を含む疾患状態を治療するために使用されることができる。
2009502973.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の：
ａ）プレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物；及び
ｂ）非イオン性界面活性剤、
を含む、水溶性製剤。
【請求項２】
前記プレニルフラボノイドがプレニルカルコン又はプレニルフラバノンである、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
前記プレニルフラボノイドが、以下の：キサントフモール、キサントガレノール、デスメチルキサントフモール（２’，４’，６’，４−テトラヒドロキシ−３−Ｃ−プレニルカルコン）、２’，４’，６’，４−テトラヒドロキシ−３’−Ｃ−ゲラニルカルコン、デヒドロシクロキサントフモール、デヒドロシクロキサントフモール水和物、５’−プレニルキサントフモール、テトラヒドロキサントフモール、４’−Ｏ−５’−Ｃ−ジプレニルキサントフモール、カルコナリンゲニン、イソキサントフモール、６−プレニルナリンゲニン、８−プレニルナリンゲニン、６，８−ジプレニルナリンゲニン、４’，６’−ジメトキシ−２’，４−ジヒドロキシカルコン、４’−Ｏ−メチルキサントフモール、６−ゲラニルナリンゲニン、８−ゲラニルナリンゲニンから成る群から選ばれる、請求項１に記載の製剤。
【請求項４】
本質的に以下の：
ａ）プレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物；及び
ｂ）非イオン性界面活性剤、
から成る、請求項１に記載の製剤。
【請求項５】
前記製剤が非アルコール性製剤である、請求項１に記載の製剤。
【請求項６】
前記製剤が非プロトン性溶媒和物製剤である、請求項１に記載の製剤。
【請求項７】
前記プレニルフラボノイドが、少なくとも０．０１ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項８】
前記プレニルフラボノイドが、少なくとも１ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項９】
前記が、少なくとも０．０１重量％の濃度で存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項１０】
前記プレニルフラボノイドが、２０重量％の濃度で存在する、請求項１に記載の製剤。
【請求項１１】
１ｍｇ〜５ｍｇのプレニルフラボノイドを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項１２】
少なくとも１０ｍｇのプレニルフラボノイドを含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項１３】
前記非イオン性界面活性剤が、非イオン性水溶性モノ−、ジ−、又はトリ−グリセリド；ポリエチレングリコールの非イオン性水溶性モノ−又はジ−脂肪酸エステル；非イオン性水溶性ソルビタン脂肪酸エステル；ポリグリコライズドグリセリド；非イオン性水溶性トリブロックコポリマー；あるいはその誘導体である、請求項１に記載の製剤。
【請求項１４】
前記非イオン性界面活性剤が、非イオン性水溶性モノ−、ジ−、又はトリ−グリセリドである、請求項１に記載の製剤。
【請求項１５】
前記非イオン性界面活性剤がポリオキシルヒマシ油である、請求項１に記載の製剤。
【請求項１６】
前記非イオン性界面活性剤が、マクロゴールグリセロールリシノレート、又はマクロゴールグリセロールヒドロキシステアレートである、請求項１に記載の製剤。
【請求項１７】
前記非イオン性界面活性剤が、マクロゴールグリセロールヒドロキシステアレートである、請求項１に記載の製剤。
【請求項１８】
前記製剤が経口製剤である、請求項１に記載の製剤。
【請求項１９】
前記経口製剤がソフトジェルカプセルである、請求項１８に記載の製剤。
【請求項２０】
前記経口製剤が錠剤である、請求項１８に記載の製剤。
【請求項２１】
前記経口製剤が飲料である、請求項１８に記載の製剤。
【請求項２２】
前記製剤が注射用製剤である、請求項１に記載の製剤。
【請求項２３】
前記製剤が局所用製剤である、請求項１に記載の製剤。
【請求項２４】
前記プレニルフラボノイドがホップに由来する、請求項１に記載の製剤。
【請求項２５】
さらに医薬として許容可能な賦形剤を含む、請求項１に記載の製剤。
【請求項２６】
前記プレニルフラボノイドがキサントフモールである、請求項１に記載の製剤。
【請求項２７】
プレニルフラボノイドを水に溶解する方法であって、以下のステップ：
ａ．プレニルフラボノイドと非イオン性界面活性剤を併合して、界面活性剤−プレニルフラボノイド混合物を形成し；そして
ｂ．上記界面活性剤−プレニルフラボノイド混合物と水を併合し、それによって上記プレニルフラボノイドを水に溶解する、
を含む、前記方法。
【請求項２８】
前記プレニルフラボノイドがキサントフモールである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記非イオン性界面活性剤がポリオキシルヒマシ油である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
治療を必要とする対象における癌、肥満、糖尿病、循環器疾患、脂質代謝異常、加齢黄斑変性症に関連した失明、高コレステロール、又は糖尿病性網膜変性症の治療方法であって、有効量の請求項１に記載の製剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項３１】
治療を必要とする対象におけるＶＥＧＦ介在性疾患状態の治療方法であって、有効量の請求項１に記載の製剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項３２】
前記疾患状態が、加齢黄斑変性症に関連した失明又は糖尿病性網膜変性症である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
治療を必要とする対象におけるＡＣＡＴ介在性疾患状態の治療方法であって、有効量の請求項１に記載の製剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項３４】
前記疾患状態が肥満、糖尿病、循環器疾患、又は脂質代謝異常である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
治療を必要とする対象におけるＤＧＡＴ介在性疾患状態の治療方法であって、有効量の請求項１に記載の製剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項３６】
前記疾患状態が肥満、糖尿病、循環器疾患、又は脂質代謝異常である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
対象におけるプレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物のバイオアベイラビリティーを促進する方法であって、以下のステップ：
（ａ）前記プレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物及び非イオン性界面活性剤を併合して界面活性剤−プレニルフラボノイド混合物を形成し；そして
（ｂ）前記界面活性剤−プレニルフラボノイド混合物を前記対象に投与し、それによって、前記プレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物のバイオアベイラビリティーを促進する、
を含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
フラボノイドは、自然の中に豊富にあり、そして植物及び動物において広範囲の生理活性を表す。現在、４，０００超のフラボノイドが天然に存在すると考えられる。フラボノイドの生理活性のいくつかは、抗炎症性、抗ウイルス性、抗菌性、抗細菌性、エストロゲン活性、抗酸化性、抗アレルゲン性、抗発ガン性、及び抗増殖性の薬用特性を含む。
【０００２】
ホップ（Humulus lupulis L.）は、何世紀にもわたってビールの醸造において苦味剤として使用されてきた。ホップは、フムロン、コフムロン、アドフムロンなどのアルファ酸、並びにルプロンおよびコルプロンなどのベータ酸を含む。ホップは、キサントフモール、イソキサントフモール、デスメチルキサントフモール、８−プレニルナリンゲニン、及び６−プレニルナリンゲニンなどの多くのフラボノイドも含む。キサントフモールは、融点１７２℃の黄色−オレンジ色の物質である。ホップの典型的なエタノール抽出は、３．４６mg/gの全フラボノイド含量の中から約３mg/g（３％）のキサントフモールを得る。乾燥ホップは、約０．２〜１．０重量％のキサントフモールを含む。
【０００３】
キサントフモール及び他のホッププレニルフラボノイドは、以下の：（１）前発ガン物質の代謝活性化の阻害、（２）発ガン物質解毒酵素の誘導、並びに（３）炎症シグナル及び血管新生の阻害による腫瘍成長の阻害などの様々な細胞メカニズムを低マイクロモル濃度で妨害するその作用によって癌化学予防剤として認められてきた。Stevens, et al., Phytochemistry 65: 1317-1330 (2004)。Stevens, et al., Chemistry and Biology of Hops Flavonoids；及びStevens, J. Am. Soc. Brew. Chem. 56(4): 136-145 (1998)も参照のこと。キサントフモール及び他の5つのプレニル化ホップフラボノイドの抗増殖及び細胞毒性効果が、乳癌（MCF-7）、結腸癌（HT-29）、及び卵巣がん（A-2780）細胞中でインビトロで試験された。Miranda, et al., Drug Metab. Dispos.28: 1297-1302 (1999)。キサントフモールは、2日間の処置後、IC50値がそれぞれ１３及び０．５２Mで、MCF-7及びA-2780細胞の増殖を用量依存的に阻害した。Gerhauserらは、キサントフモールが、シクロオキシゲナーゼ（恒常的なCOX-1及び誘導性のCOX-2）酵素をそれぞれ１７及び４２μMのIC50値で阻害して、内因性のプロスタグランジン合成を阻害することによって、有効な抗炎症剤であることができることを示した。Gerhauser et al., Mol. Cancer Ther. 1:959-969(2002)。キサントフモール、イソキサントフモール、８−プレニルナリンゲニン、及びホップ由来の９個の他のプレニルフラボノイドが、cDNA-から発現されたヒトシトクロームP450酵素、Cyp1A1、Cyp1B1、及びCyp1A2を強力に阻害することが示された（Henderson et al., Xenobiotica 30: 235-251 (2000)）。血管新生に対する８−プレニルナリンゲニンの効果が、Pepperらにより研究され、彼らは、内皮細胞が誘導されて３次元のコラーゲンゲル中に浸潤して毛細管様の管を形成するというインビトロのモデルにおいて、８−プレニルナリンゲニンが血管新生を阻害することを実証した。Pepper et al., J. Cell Physiol. 199: 98-10 (2004)。
【０００４】
ホップからより高レベルのプレニルフラボノイドを抽出するためにエタノールが使用されてよい。ホップのエタノール抽出物の典型的なプレニルフラボノイド成分は、キサントフモール（３mg/g）、デスメチルキサントフモール（０．３４mg/g）、イソキサントフモール（０．０５２mg/g）、６−プレニルナリンゲニン（０．０６１mg/g）、及び８−プレニルナリンゲニン（０．０１５mg/g）である。超臨界二酸化炭素抽出は、かなり低レベル又は不存在レベルのプレニルフラボノイドを含む傾向がある。実際、これらの化合物は標準的なCO2抽出物中にはほとんど存在せず、それは、プレニルフラボノイドが二酸化炭素存在下で事実上不溶性であるためである。
【０００５】
任意の治療用分子がヒトの体の膜を通過して輸送されるためには、該分子は、腸液の水層中に溶解性でなくてはならない。溶解しないと、該薬物はブリックダスト（brick-dust）のようにGI管を通過するであろう。キサントフモールなどのプレニルフラボノイドは、事実上水に不溶性であり、動物における経口投与の薬理動態研究は、非常に低いバイオアベイラビリティーを実証した。
【０００６】
プレニルフラボノイドの多くの望ましい性質により、インビボでの投薬のためにプレニルフラボノイドの、より水に可溶性の製剤及び／又は促進されたバイオアベイラビリティーを有することは有利であろう。
【発明の開示】
【０００７】
発明の簡単な要約
一の側面において、本発明は、プレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物及び非イオン性界面活性剤を含む、水溶性製剤を提供する。
【０００８】
他の側面において、本発明は、治療を必要とする対象における癌、肥満、糖尿病、循環器疾患、脂質代謝異常、（加齢黄斑変性症に伴う視覚の喪失などの）加齢黄斑変性症、高コレステロール、又は（糖尿病性網膜変性症などの）網膜変性症の治療方法を提供する。該方法は、有効量の本発明の水溶性製剤を対象に投与することを含む。
【０００９】
他の側面においては、本発明は、治療を必要とする対象におけるVEGF介在性の病気の状態を治療する方法を提供する。該方法は、有効量の本発明の水溶性製剤を対象に投与することを含む。
【００１０】
他の側面においては、本発明は、治療を必要とする対象におけるDGAT介在性の病気の状態を治療する方法を提供する。該方法は、有効量の本発明の水溶性製剤を対象に投与することを含む。
【００１１】
他の側面においては、本発明は、治療を必要とする対象におけるACAT介在性の病気の状態を治療する方法を提供する。該方法は、有効量の本発明の水溶性製剤を対象に投与することを含む。
【００１２】
他の側面においては、本発明は、プレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物の対象におけるバイオアベイラビリティーを促進する方法を提供する。該方法は、プレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物、及び非イオン性界面活性剤を併合して、界面活性剤−プレニルフラボノイド混合物を形成することを含む。界面活性剤−プレニルフラボノイド混合物は対象に投与され、それによってプレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物のバイオアベイラビリティーを促進する。
【００１３】
他の側面においては、本発明は、プレニルフラボノイドを水に溶解する方法を提供する。該方法は、プレニルフラボノイドを非イオン性界面活性剤と併合して界面活性剤−プレニルフラボノイド混合物を形成することを含む。該界面活性剤−プレニルフラボノイド混合物は、水と併合され、それによってプレニルフラボノイドを水に溶解する。
【００１４】
発明の詳細な説明
Ｉ．定義
本明細書中で使用される略語は、化学及び生物学分野における慣用の意味を有する。
【００１５】
「医薬として許容可能な塩」という用語は、本明細書に記載の化合物上に見出される特別な置換基部分に依存して、比較的無毒性の酸又は塩基により調製される活性化合物の塩を含むことを意味する。本発明の製剤が比較的酸性の官能基を有する場合、かかる化合物の中性形態と十分量の所望の塩基を、そのまま又は好適な不活性溶媒中で接触させることによって、塩基付加塩が得られる。医薬として許容可能な塩基付加塩の例は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ、又はマグネシウム塩、或いは類似の塩を含む。本発明の製剤が、比較的塩基性の官能基を有する場合、かかる化合物の中性形態と十分量の所望の酸を、そのまま又は好適な不活性溶媒中で接触させることによって、酸付加塩が得られることができる。医薬として許容可能な酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、一水素炭酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、硫酸、一水素硫酸、ヨウ化水素酸、又はリン含有酸などの無機酸から得られるもの、並びに、酢酸、プロピオン酸、イソブチル酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などの比較的無毒性の有機酸から得られる塩を含む。アルギン酸塩などのアミノ酸の塩、及びグルクロン酸又はガラクツロン酸などの有機酸の塩も含まれる（例えば、Berge et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19を参照のこと）。本発明の一定の特別の製剤は、該化合物が塩基又は酸付加塩のいずれかに変換されることを可能とする塩基性及び酸性両方の官能基を含む。
【００１６】
化合物の中性形態は、塩を塩基又は酸と接触させて、親化合物を慣用方法で単離することによって、再生されることが好ましい。化合物の親形態は、極性溶媒中での溶解度などの一定の物理的性質において様々な塩形態と異なる。
【００１７】
塩形態に加えて、本発明は、プロドラッグ形態の化合物を提供する。本明細書に記載の化合物のプロドラッグは、生理学的条件下で容易に化学変化を受けて本発明の製剤を提供する化合物である。さらに、プロドラッグは、エキソビボ環境において化学的又は生化学的方法によって本発明の製剤に変換されることができる。例えば、好適な酵素又は化学試薬を含む経皮パッチリザーバー中に入れた場合、プロドラッグはゆっくりと本発明の製剤に変換されることができる。
【００１８】
本発明の一定の製剤は、非溶媒和形態並びに水和形態を含む溶媒和形態で存在することができる。一般に、溶媒和形態は、非溶媒和形態と等価であり、本発明の範囲内に含まれる。本発明の一定の製剤は、複数の結晶形態又はアモルファス形態で存在してよい。一般に、すべての物理学的形態は、本発明により考慮される用途のために等価であり、そして本発明の範囲に含まれることを意図される。
【００１９】
本発明の一定の製剤は、不斉炭素原子（光学中心）又は二重結合を有し；ラセミ体、ジアステレオマー、互変異性体、立体異性体及び個々の異性体は、本発明の範囲内に含まれる。本発明の製剤は、合成及び／又は単離するのに不安定過ぎるとして本分野で知られているものを含まない。
【００２０】
本発明の製剤は、かかる化合物を構成する原子の１つ以上において非自然の比率の同位体原子も含んでよい。例えば、化合物は、トリチウム（3H）、ヨウ素-125（125I）、又は炭素-14（14C）などの放射性同位体で放射能標識されてよい。本発明の製剤のすべての同位体変異体は、放射活性を有するか否かに関わらず、本発明の範囲内に含まれる。
【００２１】
「治療」という用語は、寛解；緩解；症状の消失或いは傷害、病理又は状態を患者にとってより耐えられるものとすること；変性又は減退の速度を遅くすること；変性の終点を衰弱度のより低いものとすること；患者の身体的又は精神的健康を改善することなどの、任意の主観的又は客観的パラメータを含む、傷害、病理又は状態の治療又は回復における成功の指標をさす。症状の治療又は回復は、理学的検査、神経精神医学的検査及び／又は精神医学的評価の結果を含む、主観的又は客観的なパラメータに基づくことができる。例えば、本発明の方法は、意識又は認知における障害の発生率を減少させることによって、患者のせん妄を上手く治療する。
【００２２】
本明細書中で使用されるとおり、「癌」という用語は、白血病、癌腫、及び肉腫を含む、哺乳動物において見出されるすべての型の癌、新生物又は悪性腫瘍をさす。例示的な癌は、脳、乳房、子宮頚部、結腸、頭部及び頚部、肝臓、腎臓、肺、非小細胞肺癌、メラノーマ、中皮腫、卵巣、肉腫、胃、子宮の癌及び髄芽腫を含む。さらなる例は、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、卵巣癌、横紋筋肉腫、本態性血小板増多症、本態性マクログロブリン血症、原発性脳腫瘍、癌、悪性膵臓インスリノーマ、悪性カルチノイド、膀胱癌、前癌性皮膚病変、精巣癌、リンパ腫、甲状腺癌、神経芽細胞腫、食道がん、泌尿生殖器癌、悪性高カルシウム血症、子宮内膜癌、副腎皮質癌、膵内分泌部及び膵外分泌部の新生物、及び前立腺癌を含む。
【００２３】
「白血病」という用語は、造血器官の進行性で悪性の病気を広くさし、そして一般的に白血球並びに血液及び骨髄中のそれらの前駆体のゆがんだ増殖及び発達を特徴とする。白血病は一般に、以下の：（１）病気の持続及び特性−急性又は慢性；（２）関与する細胞のタイプ；骨髄系（骨髄性）、リンパ系（リンパ向性）、又は単球系；及び（３）血液中の異常細胞の数が増加するか又は増加しない−白血病性または無白血病性（亜白血病性）、に基づいて臨床的に分類される。P388白血病モデルは、インビボの抗白血病活性を予想するものとして広く受け入れられてきた。P388アッセイにおいて陽性である化合物は一般に、治療される白血病のタイプに関わらず、何らかのレベルのインビボでの抗白血病活性を示すと考えられる。したがって、本発明は、白血病の治療方法、そして好ましくは、急性の非リンパ球性白血病、慢性のリンパ球性白血病、急性の顆粒球性白血病、慢性の顆粒球性白血病、急性の前骨髄球性白血病、成人T細胞白血病、無白血球性白血病、白血球性白血病、好塩基球性白血病、芽細胞性白血病、ウシ白血病、慢性骨髄球性白血病、皮膚白血病、胎児性白血病、好酸球性白血病、グロス白血病（Gross's leukemia）、ヘアリーセル白血病、血球性白血病（hemoblastic leukemia）、血球芽細胞性白血病、組織球性白血病、幹細胞白血病、急性単球性白血病、白血球減少性白血病、リンパ管性白血病、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、リンパ向性白血病、リンパ様白血病、リンパ肉腫細胞性白血病、マスト細胞白血病、巨核球性白血病、小骨髄芽球性白血病、単球性白血病、骨髄芽球性白血病、骨髄球性白血病、骨髄顆粒球性白血病、骨髄単球性白血病、ネーゲリ白血病、形質細胞性白血病、多発性骨髄腫、形質細胞性白血病、前骨髄球性型白血病、リーダー（Rieder）細胞白血病、シリングス（Schilling's）白血病、幹細胞白血病、亜白血病性白血病、及び未分化型白血病を治療する方法を含む。
【００２４】
「肉腫」という用語は、一般に、胚性結合組織のような物質からできていて、通常は繊維状又は均一な物質中に密に詰め込まれた細胞からなる。治療されることのできる肉腫は、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、アベメシー（Abemethy's）肉腫、脂肪性肉腫、脂肪肉腫、胞巣状軟部肉腫、エナメル上皮肉腫、ブドウ状肉腫、緑色腫、絨毛癌、胎芽性肉腫、ウィルムス腫瘍肉腫、子宮内膜肉腫、間質肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維芽細胞性肉芽腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、ホジキン肉腫、特発性多発性色素性出血性肉腫、B細胞の免疫芽球性肉腫、リンパ腫、T細胞の免疫芽球性肉腫、ジェンセン肉腫、カポシ肉腫、クッパー細胞肉腫、血管肉腫、白血肉腫症、悪性間葉肉腫、傍骨性骨肉腫、網状赤血球性肉腫、ラウス肉腫、血清嚢胞性肉腫（serocystic sarcoma）、滑膜肉腫、及び血管拡張性肉腫を含む。
【００２５】
「黒色腫」という用語は、皮膚及び他の器官のメラニン細胞系から生じる腫瘍を意味すると解釈される。治療されることのできる黒色腫は、悪性黒色腫（acrallentiginous melanoma）、メラニン欠乏性黒色腫、良性の若年性黒色腫、クラウドマン（Cloudman's）黒色腫、S91黒色腫、ハーディングパッシー（Harding-Passey）黒色腫、若年性黒色腫、黒子型悪性黒色腫、悪性黒色腫、結節型悪性黒色腫、爪甲下黒色腫、及び表在性拡大性悪性黒色腫などを含む。
【００２６】
「癌腫」という用語は、上皮細胞から作られた悪性の新増殖物であって、周囲の組織に浸潤し、転移を引き起こす傾向があるものをさす。治療されることのできる例示的な癌腫は、腺房癌腫、小葉癌、腺様嚢胞癌、腺様嚢胞癌、腺腫（carcinoma adenomatosum）、副腎皮質の癌腫、肺胞癌、肺胞上皮癌、基底細胞癌、基底細胞癌（carcinoma basocellulare)、類基底細胞癌、基底扁平細胞癌、気管支肺胞上皮癌、細気管支癌、気管支原性肺癌、脳状癌腫、胆管細胞癌、絨毛癌、膠様癌、面庖癌、体癌、脳状癌腫、鎧状癌腫、皮膚癌、円柱状癌腫、円柱細胞癌、膵管癌、デュラム癌腫（carcinoma durum）、胚性癌腫、脳様癌腫、類表皮癌腫、上皮のアデノイド癌腫、外方増殖性癌腫、潰瘍性癌腫、線維性癌腫、ゼラチン状癌腫（gelatiniforni carcinoma）、ゼラチン状癌腫、巨細胞癌腫、巨細胞癌腫（carcinoma gigantocellulare）、腺癌腫、顆粒膜細胞腫、毛母体癌腫、ヘマトイド癌腫、肝細胞癌腫、ピュルトレ細胞腫、ガラス体癌腫、ヒペメフロイド癌腫（hypemephroid carcinoma）、幼児型胎児性癌、非浸潤性癌、上皮内癌腫、上皮内癌、クロンペッカー癌腫（Krompecher's carcinoma）、クルキツキー細胞癌腫（Kulchitzky-cell carcinoma）、大細胞癌腫、レンズ核癌腫、レンズ核癌腫（carcinoma lenticulare）、脂肪癌腫、リンパ上皮性癌腫、髄様癌（carcinoma medullare）、髄様癌、黒色癌、軟部癌腫（carcinoma molle）、粘液性癌（mucinous carcinoma）、粘液性癌（carcinoma muciparum）、印環細胞癌、粘表皮癌、粘液癌（carcinoma mucosum）、粘液癌、粘性腫様癌腫（carcinoma nysomatodes）、鼻咽頭癌、燕麦細胞癌、骨化性癌腫、類骨癌腫、乳頭癌、門脈周囲癌腫、前浸潤癌、有棘細胞癌、糊状の癌腫（pultaceous carcinoma）、腎臓の腎細胞癌、予備細胞癌腫、肉芽腫様癌腫（carcinoma sarcomatodes）、シュナイダー乳頭腫、硬癌、陰嚢癌、印環細胞癌、単純癌、小細胞癌、ソラノイド癌腫（solanoid carcinoma）、球状細胞癌、紡錘型細胞癌、海綿体癌腫、扁平上皮癌、扁平上皮細胞癌、紋扼型癌腫（string carcinoma）、血管拡張性癌腫、血管拡張性癌腫（carcinoma telangiectodes）、移行上皮癌、結節性癌腫（carcinoma tuberosum）、結節性癌腫、疣状癌、及びビローサム癌腫（carcinoma villosum）などを含む。
【００２７】
「抗新生物性」という用語は、癌の成長を阻害又は予防することを意味する。「癌の成長を阻害すること又は予防すること」は、所与の療法又は治療のない場合に比較して癌の成長を減少させることを含む。化合物が抗新生物性であるかを判定するために有用な細胞毒性アッセイは、癌治療法の分野で周知であり、かつ広く多様な癌のために利用可能である。
【００２８】
本明細書中で使用される「併用療法」又は「補助的療法」は、その薬物を必要とする患者が、本発明の製剤とともにその病気のための他の薬物を与えられるか又は治療されることを意味する。この併用療法は、患者が最初に1つの薬物で治療され、そして次に他の薬物で治療される連続的療法であっても、又は2つの薬物が同時に投与されてもよい。本発明は、本発明の水溶性製剤を用いる併用療法又は補助的療法を含む。
【００２９】
「患者」は、ヒトを含む哺乳動物対象をさす。
【００３０】
本明細書中で使用される「滲出型加齢黄斑変性症（AMD）」という用語は、網膜において新たな血管の成長の損傷及び漏出がおこり、治療をせずに放置すると失明にいたり得る目の状態又は病気をさす。AMDは加齢に関連する失明の主要な原因である。
【００３１】
本明細書中で使用される「糖尿病性網膜変性症」という用語は、糖尿病に関連した眼球の病態である。糖尿病は、網膜に栄養を与える血管の損傷を引き起こし、これは血管の漏出又は破壊を引き起こすことができ、異常な新生血管の成長を刺激する。糖尿病性網膜変性症は、糖尿病患者における失明の主要原因の1つであり、米国だけで４００万人を超える成人が罹患する。
【００３２】
ＩＩ．導入
水溶性製剤中のプレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物の溶解度及び／またはバイオアベイラビリティーを増加させるために、非イオン性の界面活性剤が使用されてよいことが発見された。したがって、水溶性製剤中でのプレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物と非イオン性界面活性剤の新規な組み合わせが、プレニルフラボノイドの投与における予想外の改善を提供する。
【００３３】
ＩＩＩ．水溶性製剤
一の側面において、本発明は、プレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物及び非イオン性界面活性剤を含む、水溶性製剤を提供する。本明細書中で使用される「プレニルフラボノイド」は、オキソ基で置換されたC3アルキレンを介してフェニルに結合した置換又は非置換のフェノールを有する、プレニル化化合物をさす。C3アルキレンは、（カルコンなどの）直鎖配置として存在しても、又は他の原子と結合して（フラバノンなどの）置換又は非置換の環を形成してもよい。プレニルフラボノイドは、（ホップなどの）自然源から得るか、又は化学的に合成されてもよい。Tabat et al., Phytochemistry 46: 683-687 (1997)。
【００３４】
本明細書中で使用される「プレニル化」化合物は、場合により、（−CH2-CH-C(CH3)=CH2又は−CH2-C(OH)-C(CH3)=CH2などの）ヒドロキシル化プレニル互変異性体、そして場合により、以下の式：
【化１】
2009502973.tif 000003
を有するヒドロキシル化環状プレニル誘導体である、（ゲラニル化化合物などの）−CH2-CH=C(CH3)2基が結合した化合物をさす。
【００３５】
式（I）においては、破線で表した結合ｚは、二重結合又は単結合を表す。R1及びR2は、独立して水素又はOHである。波線の記号は、プレニル化化合物の残りの部分に結合するポイントを表す。
【００３６】
したがって、本発明において有用なプレニルフラボノイドは、プレニルカルコン及び／又はプレニルフラバノンを含む。いくつかの実施態様においては、プレニルフラボノイドは、キサントフモール、キサントガレノール(xanthogalenol)、デスメチルキサントフモール（２’，４’，６’，４−テトラヒドロキシ−３−Ｃ−プレニルカルコン）、２’，４’，６’，４−テトラヒドロキシ−３’−Ｃ−ゲラニルカルコン、デヒドロシクロキサントフモール、デヒドロシクロキサントフモール水和物、５’−プレニルキサントフモール、テトラヒドロキサントフモール、４’−Ｏ−５’−Ｃ−ジプレニルキサントフモール、カルコナリンゲニン（chalconaringenin）、イソキサントフモール、６−プレニルナリンゲニン、８−プレニルナリンゲニン、６，８−ジプレニルナリンゲニン、４’，６’−ジメトキシ−２’，４−ジヒドロキシカルコン、４’−O−メチルキサントフモール、６−ゲラニルナリンゲニン、８−ゲラニルナリンゲニン、並びにその代謝物及び／又は誘導体を含む。いくつかの実施態様においては、プレニルフラボノイドはキサントフモール、キサントフモール代謝物、又はその誘導体である。いくつかの実施態様においては、プレニルフラボノイドはキサントフモールである。
【００３７】
プレニルフラボノイドは、ホップなどの自然源から得ることができる。したがって、水溶性製剤は、ホップ又はホップ抽出物、及び非イオン性界面活性剤を含んでよく、ここで、ホップ又はホップ抽出物はプレニルフラボノイドを含む。プレニルフラボノイドは、当業者に知られた、精製、分画、又は分離方法を介して単離されることができる。例えば、Tabata et al., Phytochemistry 46(4): 683-687 (1997)を参照のこと。
【００３８】
本明細書中で使用される「非イオン性界面活性剤」は、（中性の水溶液などの）中性の溶液中でイオン化されない（すなわち、荷電していない）傾向のある界面活性剤である。有用な非イオン性界面活性剤は、たとえば、非イオン性水溶性モノ−、ジ−、及びトリ−グリセリド；ポリエチレングリコールの非イオン性水溶性モノ−、ジ−脂肪酸エステル；（SPAN 80及びTWEEN 20（ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノオレエート）などのモノオレイン酸ソルビタンなどの）非イオン性水溶性ソルビタン脂肪酸エステル；ポリグリコライズドグリセリド；（（POLOXAMER 406(PLURONIC F-127)などのポリ（エチレンオキシド）／ポリ−（プロピレンオキシド）／ポリ（エチレンオキシド）トリブロックコポリマーなどの）非イオン性水溶性トリブロックコポリマー及びその誘導体を含む。
【００３９】
非イオン性水溶性モノ−、ジ−及びトリ−グリセリドの例は、（MIGLYOL840などの）プロピレングリコールジカルピレート／ジカプレート、（CAPMUL及びIMWITOR 72などの）中鎖モノ−及びジグリセリド、（LAVRAFAC、MIGLYOL 810又は820、CRODAMOL GTCCPN及びSOFTISON 378などの、カプリル酸及びカプリン酸トリグリセリドなどの）中鎖トリグリセリド、（PECEOLなどのグリセリルモノオレエート及びMAISINEなどのグリセリルモノリノレートなどの）長鎖モノグリセリド、（マクロゴールグリセロールリシノレート、マクロゴールグリセロールヒドロキシステアレート、マクロゴールセトステアリルエーテルなどの）ポリオキシルヒマシ油及びその誘導体を含む。
【００４０】
ポリエチレングリコールの非イオン性水溶性のモノ−及びジ−脂肪酸エステルは、ｄ−α−トコフェリルポリエチレングリコール1000スクシネート（TPGS）、ポリエチレングリコール66012−ヒドロキシステアレート（SOLUTOL HS 15）、ポリオキシルオレエート及び（PEG 400モノステアレート及びPEG 1750モノステアレートなどの）ポリオキシルステアレート及びその誘導体を含む。
【００４１】
ポリグリコライズドグリセリドは、ポリオキシエチル化オレイン酸グリセリド、ポリオキシエチル化リノレン酸グリセリド、ポリオキシエチル化カプリル酸／カプリン酸グリセリド、及びその誘導体を含む。特別な例は、LABRAFIL M-1944CS、LABRAFIL M-2125CS、LABRASOL, SOFTIGEN、及びGELUCIREを含む。
【００４２】
いくつかの実施態様においては、非イオン性の界面活性剤は、ポリオキシルヒマシ油、又はその誘導体である。有効なポリオキシルヒマシ油は、ヒマシ油又は水素化ヒマシ油を様々な量のエチレンオキシドと反応させることによって合成されることができる。マクロゴールグリセロールリシノレートは、８３％の比較的疎水性の、及び１７％の比較的親水性の成分の混合物である。比較的疎水性の部分の主要成分は、グリセロールポリエチレングリコールリシノレートであり、比較的親水性の部分の主要成分は、ポリエチレングリコール及びグリセロールエトキシレートである。マクロゴールグリセロールヒドロキシステアレートは、約７５％の比較的疎水性の混合物であり、その主要部分はグリセロールポリエチレングリコール１２−オキシステアレートである。
【００４３】
いくつかの実施態様においては、水溶性製剤は、非アルコール性製剤である。本明細書中で使用される「非アルコール性」製剤は、メタノール、エタノール、プロパノール又はブタノールを含まない(又はごく微量にのみ含む)製剤である。他の実施態様においては、製剤はエタノールを含まない(又はごく微量にのみ含む)。
【００４４】
いくつかの実施態様においては、製剤は非−非プロトン性の溶媒和製剤である。本明細書中で使用される「非−非プロトン性の溶媒和された」という用語は、水溶性の非プロトン性溶媒が存在しないか又はごく微量にのみ含まれることを意味する。水溶性の非プロトン性溶媒は、水溶性の非界面活性性溶媒であって、その中で水素原子が酸素又は窒素に結合しておらず、そしてしたがって水素結合を供与できないものをいう。
【００４５】
いくつかの実施態様においては、水溶性製剤は極性非プロトン性溶媒を含まない(又はごく微量にのみ含む)。極性非プロトン性溶媒は、その分子が分子の双極子モーメントをしめすが、その水素原子が酸素又は窒素原子に結合していない、非プロトン性溶媒である。極性非プロトン性溶媒の例は、アルデヒド、ケトン、ジメチルスルホキシド（DMSO）、及びジメチルホルムアミド（DMF）を含む。他の実施態様においては、水溶性製剤はジメチルスルホキシドを含まない(又はごく微量にのみ含む)。したがって、いくつかの実施態様においては、水溶性製剤はDMSOを含まない。関連する実施態様においては、水溶性製剤はDMCO又はエタノールを含まない。
【００４６】
さらに他の実施態様においては、水溶性製剤は非極性非プロトン性溶媒を含まない(又はごく微量にのみ含む)。非極性非プロトン性溶媒は、その分子が約０の分子双極子を示す、非プロトン性の溶媒である。例は、アルカン、アルケン及びアルキンなどの炭化水素を含む。
【００４７】
本発明の水溶性製剤は、水に溶解された製剤（すなわち、水性製剤）を含む。
【００４８】
いくつかの実施態様においては、水溶性製剤は、本質的にプレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物、非イオン性界面活性剤から成る。「本質的にプレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物、非イオン性界面活性剤から成る水溶性製剤」は、プレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物、非イオン性界面活性剤、及び場合により、保存剤、味の増進剤、緩衝剤、水などの、栄養補助製剤中で有用であると本分野で広く知られた追加の成分を含む。本明細書中で使用される「本質的にプレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物、非イオン性界面活性剤から成る水溶性製剤」は、上記製剤の新規性及び創作性を破壊する成分を含まない。
【００４９】
ＩＶ．方法
他の側面においては、本発明は、治療を必要とする対象における、癌、肥満、糖尿病、循環器疾患、脂質代謝異常、（加齢黄斑変性症に関連する失明などの）加齢黄斑変性症、高コレステロール、又は（糖尿病性網膜変性症などの）網膜変性症を治療する方法を提供する。該方法は、本発明の水溶性製剤の有効量を対象に投与することを含む。「癌」という用語は上記で詳細に定義されている。
【００５０】
いくつかの実施態様においては、コレステロール低下療法を必要とする対象におけるコレステロールの低下方法が提供される。該方法は、本発明の水溶性製剤の有効量を対象に投与することを含む。コレステロールの低下は、総コレステロールの低下又は低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の低下であってよい。
【００５１】
他の側面においては、本発明は、治療を必要とする対象におけるＶＥＧＦ介在性疾患状態の治療方法を提供する。該方法は、本発明の水溶性製剤の有効量を対象に投与することを含む。
【００５２】
いくつかの実施態様においては、治療を必要とする対象の網膜のＶＥＧＦ介在性の血管透過性及び／又は異常な血管成長を減少させるために方法が提供される。該方法は、本発明の水溶性製剤の有効量を対象に投与することを含む。
【００５３】
他の実施態様においては、治療を必要とする対象における加齢黄斑変性症を治療するために方法が提供される。該方法は、本発明の水溶性製剤の有効量を対象に投与することを含む。
【００５４】
さらに他の実施態様においては、治療を必要とする対象における糖尿病性黄斑浮腫を治療するために方法が提供される。該方法は、本発明の水溶性製剤の有効量を対象に投与することを含む。
【００５５】
血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）は、血管内皮細胞に特異的な拡散性のタンパク質であり、血管の生理学的及び病理学的成長の制御において主要な役割を演じる。ＶＥＧＦは、動脈、静脈、及びリンパ管に存在する脈管の内皮細胞の成長を促進するが、脈管の漏出も誘導する能力がある。この透過性促進活性は、この分子と他の病理学的状態との間を関連付けるものである。例えば、ＶＥＧＦは大部分のヒト腫瘍において発現され、腫瘍の血管新生及び転移において決定的な役割を演じる。さらに、ＶＥＧＦは、癌、（滲出型加齢黄斑変性症を含む）加齢黄斑変性症に関連した失明、及び（糖尿病性網膜変性症／糖尿病性黄斑浮腫などの）網膜変性症に導く病理学的過程に直接関与する。
【００５６】
したがって、いくつかの実施態様においては、ＶＥＧＦの活性を減少させる方法が提供される。該方法は、ＶＥＧＦと本発明の水溶性製剤を接触させることによって、研究目的のためにインビトロ又はインサイチュで実施されてよい。或いは、本発明の水溶性製剤の有効量を対象に投与することによって、該対象においてＶＥＧＦの活性が減少させられてよい。
【００５７】
ＶＥＧＦの阻害は、ＫＯＰ２．１６内皮細胞などの好適な細胞株においてインビトロで測定可能であり、又はマイルズアッセイなどの他の技術を用いて測定可能である。
【００５８】
他の側面においては、本発明は、治療を必要とする対象におけるＤＧＡＴ介在性疾患状態を治療する方法を提供する。該方法は、本発明の水溶性製剤の有効量を対象に投与することを含む。
【００５９】
アシルＣｏＡ：ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）は、トリグリセリド合成の主要経路における最終反応を触媒する、普遍的に発現するミクロソーム酵素である。ＤＧＡＴ酵素欠乏マウスは、食餌誘発性の肥満に耐性があり、インスリン及びレプチン感受性が増加している。研究は、インビボでのＤＧＡＴの治療的阻害は、肥満及び糖尿病両方の有効な治療となることを示唆する。したがって、いくつかの実施態様においては、ＤＧＡＴ介在性疾患状態は、肥満、糖尿病、循環器疾患及び／又は（糖尿病に関連するコレステロール上昇、トリグリセリド上昇及び／又は脂質代謝異常を含む）脂質代謝異常である。本発明の水溶性製剤はまた、対象の代謝速度又はエネルギーレベルを増加させるためにも使用されてよい。
【００６０】
したがって、いくつかの実施態様においては、ＤＧＡＴの活性を減少させる方法が提供される。該方法は、ＤＧＡＴと本発明の水溶性製剤を接触させることによって、研究目的のためにインビトロ又はインサイチュで実施されてよい。或いは、ＤＧＡＴの活性は、本発明の水溶性製剤の有効量を対象に投与することによって、対象において減少させられてよい。
【００６１】
他の側面においては、本発明は、治療を必要とする対象におけるＡＣＡＴ介在性疾患状態を治療する方法を提供する。該方法は、本発明の水溶性製剤の有効量を対象に投与することを含む。いくつかの実施態様においては、病気の状態は、肥満、糖尿病、循環器疾患、及び／又は（糖尿病に関連するコレステロール上昇、トリグリセリド上昇及び／又は脂質代謝異常を含む）脂質代謝異常である。
【００６２】
アシル−コエンザイムＡコレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）は、コレステロールをエステル化する酵素である。エステル化されていない「遊離」コレステロールが肝臓中のアポＢ含有リポタンパク質内にパッケージされるためには、それはＡＣＡＴによってエステル化されなくてはならない。ＡＣＡＴの阻害は、肝臓によるコレステロール排出を促進すること、並びに小腸中でのコレステロール吸収を阻害することによって抗アテローム生成性であると考えられる。ＡＣＡＴの阻害はまた、動脈壁中のマクロファージ内でのコレステリルエステルの蓄積を阻害することができ、これが抗アテローム性動脈硬化効果を生じる。ＡＣＡＴの阻害は、泡沫細胞の形成を減少させることによって、内皮のマクロファージにおける遊離のコレステロールのエステル化コレステロールへの変換を障害することを介して、脈管系への直接効果を有する。通常は、ＡＣＡＴ阻害剤は血漿脂質レベルに顕著に影響することなく、動脈壁中の脂質の蓄積を予防すると考えられる。
【００６３】
いくつかの実施態様においては、ＡＣＡＴの活性を減少させる方法が提供される。該方法は、ＡＣＡＴと本発明の水溶性製剤を接触させることによって、研究目的のためにインビトロ又はインサイチュで実施されてよい。或いは、ＡＣＡＴの活性は、本発明の水溶性製剤の有効量を対象に投与することによって、対象において減少させられてよい。
【００６４】
他の側面においては、本発明は対象におけるプレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物のバイオアベイラビリティーを促進させる方法を提供する。該方法は、該プレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物及び非イオン性界面活性剤を併合して、界面活性剤−プレニルフラボノイド混合物を形成することを含む。該界面活性剤−プレニルフラボノイド混合物は、対象に投与されることによってプレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物のバイオアベイラビリティーを促進する。バイオアベイラビリティーは、非イオン性の界面活性剤の不存在下でのプレニルフラボノイドのバイオアベイラビリティーに比べて促進される。
【００６５】
他の側面においては、本発明は、プレニルフラボノイドを水に溶解させる方法を提供する。該方法は、プレニルフラボノイドを非イオン性の界面活性剤と併合して、界面活性剤−プレニルフラボノイド混合物を形成することを含む。該界面活性剤−プレニルフラボノイド混合物は水と併合されることによってプレニルフラボノイドを水に溶解させる。該溶液は場合によって溶解度を増加させるために加熱されてよい。加熱温度は、典型的には、プレニルフラボノイド及び／又は非イオン性界面活性剤の化学的分解を回避するように選択される。
【００６６】
対象は、本発明の方法の一つを用いて治療される生物である。いくつかの実施態様においては、対象は、ヒト又は家畜などの哺乳動物対象である。
【００６７】
本発明の水溶性製剤の有効量は、（ヒト対象などの）対象における特定の疾患状態を治療することなどの、本発明の方法の意図された目的を達成するために十分な量である。
【００６８】
Ｖ．用量及び剤形
（ＤＧＡＴ、ＶＥＧＦ、及び／又はＡＣＡＴの調節を介するなどの）疾患の治療に適したプレニルフラボノイドの量は、「治療的有効用量」と定義される。投薬スケジュール及びこの用途のための有効量、すなわち、「投薬計画」は、疾患又は状態の段階、疾患又は状態の重篤度、患者の健康の一般的状態、患者の身体状況、年齢などを含む、様々な因子に依存するであろう。患者のための投薬計画の計算においては、投与様式も考慮される。
【００６９】
投薬計画は、本分野で周知の薬物動態パラメータ、すなわち、吸収速度、バイオアベイラビリティー、代謝、クリアランスなど、も考慮される（例えば、Hidalgo-Aragones (1996) J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 58:611-617; Groning (1996) Pharmazie 51:337-341; Fotherby (1996) Contraception 54:59-69; Johnson (1995) J. Pharm. Sci. 84:1144-1146; Rohatagi (1995) Pharmazie 50:610-613; Brophy (1983) Eur. J. Clin. Pharmacol. 24:103-108; 上記のRemingtonの最新版を参照のこと）。技術水準は、医師が個々の患者、プレニルフラボノイド及び治療される疾患又は状態のために投薬計画を決定することを可能とする。
【００７０】
プレニルフラボノイド製剤の単回又は複数回投与は、患者が要求しかつ耐えられる用量及び頻度に依存して投与されることができる。製剤は、疾患状態を有効に治療するために十分量の活性剤を提供しなければならない。経口投与とは対照的に特に薬物が解剖学的に隔離された部位、血流中へ、体腔内へ、又は器官の管腔内へ投与される場合には、より低い用量が使用可能である。実質的により高い用量は局所投与において使用可能である。腸管外投与可能なプレニルフラボノイド製剤の実際の調製方法は、当業者に知られているか又は明らかであり、上記のRemingtonなどの刊行物により詳細に記載されている。「Receptor Mediated Antisteroid Action」Agarwal, et al. eds., De Gruyter, New York (1987)中のNiemanも参照のこと。
【００７１】
いくつかの実施態様においては、プレニルフラボノイドは、少なくとも５重量％、１０重量％、２０重量％、２５重量％、３０重量％、３５重量％、４５重量％、４５重量％又は５０重量％の濃度で水溶性製剤中に存在する。他の実施態様においては、プレニルフラボノイドは、（重量で）０．０１％、０．１％、１％〜８０％、５％〜５０％、１０％〜３５％、又は２０％〜２５％の濃度で水溶性製剤中に存在する。プレニルフラボノイドは、（飲料製剤中などに）４液量オンスあたり０．５〜５ｍｇ又は４液量オンスあたり約１ｍｇの濃度で存在してもよい。他の実施態様においては、プレニルフラボノイドは、０．０１ｍｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。（ソフトジェルタブレット製剤などの）いくつかの濃縮製剤においては、プレニルフラボノイドは、約１〜５ｍｇ／ｍｌ又は約２ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも１ｍｇ／ｍｌで存在してよい。
【００７２】
他の実施態様においては、少なくとも０．５ｍｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、又は１ｇのプレニルフラボノイドが水溶性製剤中に存在する。他の実施態様においては、０．１ｍｇ〜２ｇ、０．５ｍｇ〜１ｇ、１ｍｇ〜５００ｍｇ、１ｍｇ〜１００ｍｇ、１ｍｇ〜５０ｍｇ、１ｍｇ〜１０ｍｇ、又は１ｍｇ〜５ｍｇのプレニルフラボノイドが水溶性製剤中に存在する。
【００７３】
いくつかの実施態様においては、水溶性製剤は医薬組成物の形態である。医薬組成物は、プレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物、非イオン性界面活性剤及び医薬として許容可能な賦形剤を含んでよい。本発明のプレニルフラボノイドを含む医薬組成物が許容可能な担体中に製剤化された後、それは適切な容器中に置かれ、そして適応とされた状態の治療のためにラベルされることができる。プレニルフラボノイドの投与のためには、かかるラベル付けは、投与の量、頻度及び方法に関する使用説明書などを含むだろう。1つの実施態様においては、本発明は、ヒトにおけるせん妄の治療のためのキットを提供し、これは、プレニルフラボノイド並びに適応症、用量及びプレニルフラボノイドの投与のスケジュールを教示する使用説明書を含む。
【００７４】
経口、腸管外及び局所用剤形などの任意の適切な剤形が、本発明の水溶性製剤の投与に有用である。経口製剤は、錠剤、ピル、散剤、ドラジェ、（ソフトジェルカプセルなどの）カプセル、液体、ロゼンジ、ジェル、シロップ、スラリー、飲料、懸濁液などの、患者による摂取に好適なものを含む。本発明の製剤はまた、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、十二指腸内、又は腹腔内に注射によって投与されることもできる。本明細書に記載の製剤はまた、鼻腔内などの吸入によって投与されることができる。さらに、本発明の製剤は、経皮的に投与されることができる。製剤はまた、坐剤、吸入剤、散剤及びエアロゾル製剤を含む、眼内、膣内、及び直腸内経路によって投与されることもできる（ステロイド吸入剤の例については、Rohatagi, J. Clin. Pharmacol. 35:1187-1193, 1995; Tjma, Ann. Allergy Asthma Immunol. 75:107-111, 1995を参照のこと）。したがって、本明細書に記載の製剤は、経口投与に適している。
【００７５】
本発明の製剤から医薬組成物を調製するために、医薬として許容可能な担体は固体又は液体のいずれかであることができる。固体製剤は、散剤、錠剤、ピル、カプセル、カシェ、坐剤、及び分散性の粒剤を含む。固体担体は、希釈剤、風味剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤又は封入材料として作用してもよい、1つ以上の物質であることができる。製剤化及び投与のための技術の詳細は、科学的文献及び特許文献中に十分に記載されており、Remington's Pharmaceutical Sciences, Maack Publishing Co, Easton PA（「Remington's」）の最新版などを参照のこと。
【００７６】
好適な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、（トウモロコシ、小麦、コメ、ジャガイモ、又は他の植物からの）スターチ、ゼラチン、トラガント、低温溶融ワックス、ココアバター、スクロース、マンニトール、ソルビトール、（メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、又はカルボキシメチルセロルースナトリウムなどの）セルロース、及び（アラビア及びトラガントゴムを含む）ゴム、並びにゼラチン及びコラーゲンなどのタンパク質を含む。所望により、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸又はアルギン酸ナトリウムなどのその塩などの崩壊剤又は共溶解剤が加えられてよい。散剤中では、担体は微細に分割された固体であり、これは微細に分割された活性成分と混合されている。錠剤中では、活性成分は必要な結合特性を有する担体と好適な比率で混合され、所望の形状及びサイズに圧縮される。
【００７７】
ドラジェコアには、濃縮された糖溶液などの好適なコーティングが提供され、これはまた、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールジェル、ポリエチレングリコール、及び／又は二酸化チタニウム、ラッカー液及び好適な有機溶媒又は溶媒混合物を含んでもよい。製品の同定のため、又は活性化合物の量（すなわち、用量）を特徴付けるために、着色剤又は色素が錠剤又はドラジェのコーティングに添加されてよい。本発明の医薬製剤はまた、ゼラチン製のプッシュフィットカプセル並びにソフトな密封されたゼラチン製のカプセル及びグリセロール又はソルビトールなどのコーティングなどを用いて経口で使用可能である。プッシュフィットカプセルは、ラクトース又はスターチなどの充填剤又は結合剤、タルク又はステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、そして場合により安定化剤と混合されたプレニルフラボノイドを含むことができる。ソフトカプセルにおいては、プレニルフラボノイド化合物は、安定化剤を含むか又は含まない、脂肪油、液体パラフィン、又は液体ポリエチレングリコール中に溶解又は懸濁されてよい。
【００７８】
坐剤を調製するためには、脂肪酸グリセリド又はココアバターの混合物などの低温溶融ワックスが先ず溶融され、そして攪拌などによって活性成分がその中に均一に分散される。そして、溶融した均一混合物は便利なサイズの型に注がれ、放冷され、そしてそれによって固化する。
【００７９】
液体製剤は、溶液、懸濁液、飲料及びエマルジョン、例えば、水又は水／プロピレングリコール溶液、を含む。腸管外注射のためには、液体製剤はポリエチレングリコール水溶液中の溶液として製剤されることができる。
【００８０】
経口用途に好適な水溶液及び飲料は、活性成分を水に溶解し、そして好適な着色剤、風味剤、安定化剤及び増粘剤を所望により加えることによって調製されることができる。経口用途に好適な水性懸濁液は、微細に分割された活性成分を、天然又は合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガントゴム及びアカシアゴムなどの粘ちょうな物質、及び（レシチンなどの）天然ホスファチド、(ステアリン酸ポリオキシエチレンなどの)アルキレンオキシドと脂肪酸の縮合産物、（ヘプタデカエチレンオキシセタノールなどの）エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールの縮合産物、（ポリオキシエチレンソルビトールモノオレイン酸などの）エチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトールから得られた部分エステルとの縮合産物、または（ポリオキシエチレンソルビタンモノ−オレイン酸などの）エチエチレンオキシドと脂肪酸及びヘキシトール無水物から得られた部分エステルの縮合産物などの分散剤又は湿潤剤とともに水中に分散させることによって作られることができる。水性懸濁液はまた、エチル又はｎ−プロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸などの１つ以上の保存剤、1つ以上の着色剤、1つ以上の風味剤及びスクロース、アスパルテーム又はサッカリンなどの１つ以上の甘味剤も含むことができる。製剤はモル浸透圧濃度に関して調節されることができる。
【００８１】
固体製剤も含まれ、これらは使用直前に経口投与のための液体製剤に変換されることを意図される。かかる液体製剤は、溶液、懸濁液及びエマルジョンを含む。これらの製剤は、活性成分に加えて着色剤、風味剤、安定化剤、緩衝剤、人工及び天然の甘味剤、分散剤、増粘剤、溶解剤などを含んでよい。
【００８２】
油性懸濁液は、プレニルフラボノイドを、ラッカセイ油、オリーブ油、ゴマ油又はココナツ油などの植物油中に、或いは液体パラフィンなどの鉱油中に、或いはこれらの混合物中に懸濁することによって製剤されることができる。油性懸濁液は、蜜蝋、硬質パラフィン、又はセチルアルコールなどの増粘剤を含むことができる。グリセロール、ソルビトール又はスクロースなどの甘味剤が添加されておいしい経口製剤を提供することができる。これらの製剤は、アスコルビン酸などの抗酸化剤を添加することによって保存されることができる。注射用の油性ビヒクルの例としては、Minto, J. Pharmacol. Exp. Ther. 281:93-102, 1997を参照のこと。本発明の製剤はまた、水中油型エマルジョンの形態であることもできる。油相は、上記の植物油又は鉱油或いはこれらの混合物であることができる。好適な乳化剤は、アカシアゴム及びトラガントゴムなどの天然ゴム、大豆レシチンなどの天然のホスファチド、ソルビタンモノオレエートなどの脂肪酸及びヘキシトール無水物からのエステル又は部分エステル、並びにポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなどのこれらの部分エステルとエチレンオキシドとの縮合産物を含む。エマルジョンはまた、甘味剤及び風味剤を、シロップ及びエリキシルの製剤におけるように含むことができる。かかる製剤はまた、粘滑剤、保存剤又は着色剤も含むことができる。
【００８３】
本発明の製剤は、局所経路によって経皮的に送達されることができ、アプリケータースティック、溶液、懸濁液、エマルジョン、ジェル、クリーム、軟膏、ペースト、ゼリー、ペイント（paint）、散剤及びエアロゾルとして製剤されることができる。
【００８４】
製剤はまた、体内での遅い放出のためのミクロスフィアとして送達されることもできる。例えば、ミクロスフィアはゆっくりと皮下に放出される薬物含有ミクロスフィアの皮内注射を介するか（Rao, J. Biomater Sci. Polym. Ed. 7:623-645, 1995を参照のこと）；生物分解性かつ注射可能なジェル製剤として（例えば、Gao Pharm. Res. 12:857-863, 1995を参照のこと）；又は経口投与のためのミクロスフィア（例えば、Eyles, J. Pharm. Pharmacol. 49:669-674, 1997を参照のこと）として投与されることができる。経皮及び皮内経路のどちらも何週又は何ヶ月もの持続的な送達を提供する。
【００８５】
本発明の製剤は、塩として提供されることができ、且つ塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、マレイン酸、コハク酸を含むがこれらに限定されない多くの酸とともに形成されることができる。塩は、対応する遊離塩基の形態よりも水溶液又は他のプロトン性溶媒中により溶解性である傾向がある。他の場合においては、製剤は、使用前に緩衝液と併合される、pH範囲が４．５〜５．５の、１mM〜５０mMヒスチジン、０．１％〜２％スクロース、２％〜７％マンニトール中の凍結乾燥散剤であってよい。
【００８６】
他の実施態様においては、本発明の製剤は、静脈内（IV）投与又は体腔又は器官の管腔中への投与などの腸管外投与に有用である。投与のための製剤は一般に、医薬として許容可能な担体中に溶解されたプレニルフラボノイドの溶液を含む。使用されることのできる許容可能なビヒクル及び溶媒の中には、水及びリンゲル液、等張性塩化ナトリウムがある。さらに、滅菌固定油は溶媒又は懸濁媒として便利に使用可能である。この目的のために、合成モノ−又はジグリセリドを含む、任意のブランドの固定油が使用されることができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸も同様に注射可能な製剤中で使用されることができる。これらの溶液は、無菌であり、そして一般に望ましくないものを含まない。これらの製剤は、慣用の周知滅菌技術によって滅菌されてよい。製剤は、生理学的条件を近似するために必要な酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどのｐH調節剤及び緩衝剤、毒性調節剤のような医薬として許容可能な補助剤を含んでよい。これらの製剤中のプレニルフラボノイドの濃度は広く変化することができ、そして、選択された特定の投与様式及び患者の必要に従って、主に液体体積、粘度、体重などに基づいて選択されるであろう。IV投与のためには、製剤は滅菌注射用水性又は油性の懸濁液などの滅菌注射用製剤であることができる。この懸濁液は、好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を用いる知られた技術にしたがって製剤されることができる。滅菌注射用製剤はまた、１，３−ブタンジオール溶液などの無毒性の腸管外で許容可能な希釈剤又は溶媒中の注射用溶液または懸濁液であることもできる。
【００８７】
他の実施態様においては、本発明の製剤は、細胞膜と融合するか又はエンドサイトーシスをうけるリポソームを使用することによって、すなわち、エンドサイトーシスにより生じた細胞の膜表面タンパク質受容体に結合する、リポソームに結合したリガンド又はオリゴヌクレオチドに直接結合したリガンドを使用することによって、送達されることができる。リポソームを用いることによって、特にリポソーム表面が標的細胞に特異的なリガンドを担持するかそうでなければ特定の器官に優先的に導かれる場合、プレニルフラボノイドの送達の焦点をインビボの標的細胞に当てることができる(例えば、Al-Muhammed, J. Microencapsul. 13: 293-306, 1996; Chonn, Curr. Opin. Biotechnol. 6:698-708, 1995; Ostro, Am. J. Hosp. Pharm. 46:1576-1587, 1989を参照のこと）。
【００８８】
製剤は、単位用量形態で投与されてよい。かかる形態においては、製剤は適切な量の活性成分を含む単位用量に細分されている。単位用量形態は、パッケージされた製剤であることができ、該パッケージはバイアル又はアンプル中の小包錠剤、カプセル及び散剤などの個々の量の製剤を含む。単位用量形態はまた、カプセル、錠剤、カシェ、又はロゼンジ自体であることができ、或いは、包装された形態の適切な数のこれらのいずれかであることもできる。
【００８９】
単位用量製剤中の活性成分の量は、多様であるか又は特定の適用及び活性成分の力価にしたがって調節されてよい。所望により、組成物は他の適合性の治療剤も含むことができる。
【００９０】
ＶＩ．アッセイ
対象である非イオン性の界面活性剤は、それらがプレニルフラボノイド又はプレニルフラボノイド代謝物を溶解する能力について、任意の適切な方法を用いてアッセイされてよい。典型的には、非イオン性の界面活性剤は、プレニルフラボノイドと接触させられ、そして機械的に及び／またはシェーカー又はソニケーター装置を用いて自動的に混合される。水は場合により、例えば、プレニルフラボノイド及び／または界面活性剤が粉末形態である場合には、添加されてよい。溶解度を増加させるために、溶液は場合により加熱されてよい。加熱温度は、プレニルフラボノイド及び非イオン性界面活性剤の化学的分解を防ぐために選択される。
【００９１】
プレニルフラボノイドの溶解性の程度を決定するために、得られた溶液は、コロイド状粒子について視覚的に検査されてよい。或いは、溶解性の程度を決定するために、溶液は濾過されて分析されてもよい。例えば、濾液中に存在するプレニルフラボノイドの濃度を決定するために分光光度計が使用されてよい。典型的には、濃度対ＵＶ／可視光吸収の標準曲線を得るために、試験溶液は一連の既知量の濾過前のプレニルフラボノイド溶液を含む陽性対照と比較される。或いは、溶液中のプレニルフラボノイドの量を決定するために、高速液体クロマトグラフィーが使用されてよい。
【００９２】
本分野では、ハイスループット溶解度アッセイ法が周知である。典型的には、これらの方法は、様々な量の非イオン性界面活性剤、プレニルフラボノイド及び場合により他の共溶媒と溶液を自動的に分散及び混合することを含む。そして、得られた溶液は、上記の任意の適切な方法を用いて溶解性の程度を決定するために分析されてよい。
【００９３】
例えば、改変されたトラックエッチドポリカーボネート、０．４μmメンブレンを有するMillipore MultiScreen Solubilityフィルタープレート（登録商標）は、フィルタープレート及びカバーを含む使い捨ての９６ウエル組立製品である。この装置は、１００〜３００μＬの体積範囲の水溶解性サンプルを処理することを目的とする。真空ろ過設計は、標準的なマイクロタイタープレート真空マニホールドに適合している。プレートは、濾液の収集において使用されるための標準的な９６ウエルマイクロタイター受容プレートにフィットするようにも設計される。MultiScreen Solubilityフィルタープレート（登録商標）が開発され、そして(標準的な真空を用いて)一貫した濾過フロー時間、低度の水性抽出可能化合物、高いサンプル濾液回収率、及び溶解度アッセイを実施するのに必要とされるそのサンプルインキュベート能力について品質管理試験を受けた。低結合性メンブレンは特に、水性媒体中に溶解した有機化合物の高い回収率のために開発された。
【００９４】
水溶解度アッセイは、溶液を混合し、インキュベートしそしてMiltiScreen Solubilityフィルタープレートにおいて濾過することによってプレニルフラボノイドの溶解度を決定することを可能とする。ろ液が真空ろ過によって９６ウエル収集プレート中に移された後、それは、溶解度を決定するために、UV/可視光分光法によって分析される。さらに、化合物、特にUV/可視光の吸収が低い化合物及び／又は純度の低い化合物についての溶解度を決定するためにLC/MS又はHPLCが使用可能である。水溶解度の定量のためには、水溶解度を決定する前に各化合物について標準的較正曲線が決定され、そして分析されてよい。
【００９５】
試験溶液は、濃縮された薬物又は化合物のアリコートを加えることによって調製されてよい。溶液は、カバーをした９６ウエルMultiScreen Solubilityフィルタープレート中、室温で１．５時間混合される。その後、不溶性の沈殿を除くために、溶液は９６ウエルポリプロピレンV底収集プレート中へ濾過される。完全に濾過された後、１６０μL／ウエルが収集プレートから９６ウエルUV分析プレートに移され、そして４０μL／ウエルのアセトニトリルで希釈される。被験化合物の吸収プロフィールを決定するために、UV/可視光分析プレートは、UV/可視光マイクロプレート分光光度計で２６０〜５００nmでスキャンされる。
【００９６】
したがって、当業者は広く多様な非イオン性界面活性剤をアッセイして、様々なプレニルフラボノイド化合物を溶解するそれらの能力を決定することができる。
【００９７】
本明細書中で使用される用語及び表現は、限定ではなく説明のためのものであり、かかる用語及び表現の使用は、示されそして記載された特徴の等価物又はその一部を排除することを意図されず、権利請求された発明の範囲内で様々な改変が可能であることは理解される。さらに、本発明の任意の実施態様の任意の1つ以上の特徴は、本発明の範囲をはなれることなく、本発明の任意の他の実施態様の任意の他の1つ以上の特徴と組み合わされてよい。例えば、製剤の特徴は、本明細書中に記載の病気の状態を治療する方法に等しく適用可能である。本明細書中に引用されたすべての刊行物、特許及び特許出願は、その全体が参考文献として本明細書中に援用される。
【実施例】
【００９８】
ＶＩＩ．実施例
以下の実施例は、本発明の一定の実施態様を例解することを意味し、そして本発明の範囲を制限することを意図されない。
【００９９】
ルシファーイエローは、Molecular Probes（Eugene, OR）から購入した。Hanks緩衝液及び他のすべての化学物質はSigma-Aldrich（St. Louis, MO）から入手した。
【０１００】
実施例１
非イオン性界面活性剤マクロゴールグリセロールヒドロキシステアレートを含む、キサントフモールの水溶性組成物を製剤した。このポリオキシルヒマシ油を、（重量で２０％超のキサントフモールを含む）粉末キサントフモール抽出物とともに加熱、攪拌することによって、溶解されたキサントフモールを含む透明な緑がかった粘ちょうな溶液（以下、「キサントフモールジェル製剤」という）を生成した。粉末キサントフモール抽出物は、２０％キサントフモール、少量のクロロフィル、及び特徴づけされない残余の樹脂から成るが、いかなるα酸、β酸、又は８−プレニルナリンゲニンも含まなかった。キサントフモールジェル製剤は、マクロゴールグリセロールヒドロキシステアレート４０（１００ml）及び粉末キサントフモール抽出物（１０グラム）からなり、１０：１の界面活性剤：プレニルフラボノイド比を示す。
【０１０１】
溶解されたキサントフモールの水溶液は、キサントフモールジェル製剤に水を加えることによって達成された（以下、「水性キサントフモール製剤」という）。より特別には、水性キサントフモール製剤は、温水中でキサントフモールジェル製剤を加温して、キサントフモールの透明な水溶液を形成することによって調製された。この水性キサントフモール製剤は望ましくない風味を有さなかった。水性キサントフモール製剤は、水（２００ml）、マクロゴールグリセロールヒドロキシステアレート４０（１００ml）、及び粉末キサントフモール抽出物（１０グラム）からなり、２０：１０：１の水：界面活性剤：プレニルフラボノイド比を示した。水性キサントフモール製剤をHPLCで分析し、そして、０．６％、又は６mg/mlのキサントフモールを含むことがわかった。
【０１０２】
実施例２
濃度の増加するキサントフモール（１μM〜１００μM）を単離された肝臓ミクロソームに加えてHMG-CoAレダクターゼアッセイを実施した。キサントフモールはHMG-CoAレダクターゼ活性に効果を及ぼさなかった。陽性対照として、アトルバスタチン（１０nM及び１μM）を同じアッセイにおいて試験し、これらはそれぞれ、レダクターゼ活性を５８％及び８７％阻害した。以下のプロトコールは、Telford et al. ATVB 2002; 22:1884-1891中で公開されている。
【０１０３】
14C−酢酸のコレステロール中への取り込みをHepG2細胞において試験した。５００nM未満のキサントフモール濃度については、このパラメータは何の影響も観察されなかった。この濃度より高いと、コレステロール合成を用量応答性に阻害した（０．５μM〜１００μM）。図１を参照のこと。IC50は、約２０μMであった。同じHepG2細胞アッセイ系において、アトルバスタチン（１０nM及び１μM）は、コレステロール中への酢酸の取り込みをそれぞれ、２０％及び８０％阻害した。
【０１０４】
実施例３
pH７．４のHank's Balanced Salt Solution（１０mM Hepes及び１５mMグルコース）中の粉末キサントフモール抽出物の溶解度を、キサントフモールジェル製剤に比較した。少なくとも１mgの粉末キサントフモール抽出物又は１００mgのキサントフモールジェル製剤を、１mlの緩衝液と併合して、１mg/ml以上の粉末キサントフモール抽出物混合物及び１mg/ml以上のキサントフモールジェル製剤混合物をそれぞれ作製した。ベンチトップボルテクサーを用いて、上記混合物を２時間振とうし、そして室温で一夜静置した。ボルテキシング及び一夜の静置の後、粉末キサントフモール抽出物混合物を０．４５μMナイロンシリンジフィルター（Whatman, カタログ番号6789-0404）を通して濾過し、これは最初にサンプルで飽和していた。
【０１０５】
ボルテキシング及び一夜の静置の後、キサントフモールジェル製剤混合物を１４，０００rpmで１０分間遠心分離した。ろ液又は上清を２回続けてサンプリングし、分析の前に５０：５０のアッセイ緩衝液：アセトニトリルの混合物で１０、１００、及び１０，０００倍に希釈した。
【０１０６】
５０：５０のアッセイ緩衝液：アセトニトリルの混合物中で調製した標準物質に対して、両方の混合物をエレクトロスプレーイオン化を用いるLC/MS/MSでアッセイした。標準物質濃度は、１．０μMから３．０nMの範囲であった。結果を以下の表１に示す。
【０１０７】
【表１】
2009502973.tif 000004
【０１０８】
表１に示すとおり、粉末キサントフモール抽出物及びキサントフモールジェル製剤はそれぞれ、pH７．４のHank's Balanced Salt Solution中で平均溶解度、０．６１μM及び１７８０μMを示した。
【０１０９】
実施例４
フィルターを通るキサントフモールジェル製剤の非特異的結合及び細胞のない状態での拡散Pappを決定するために、細胞を含まない（ブランク）微小孔性の０．４ミクロンメンブレンフィルターを通るキサントフモールジェルの透過性を試験した。pH７．４のHanks緩衝液（１０mMのHEPES及び１５ｍMのグルコースを含むHanks Balanced Salt Solution(HBSSg)）中、２μMのキサントフモール濃度において、キサントフモールジェル製剤を２連でアッセイした。供与サンプルを１２０分で集めた。受容サンプルを６０及び１２０分で集めた。見かけの透過性係数、Papp、及び回収パーセントを以下のように計算した。
【０１１０】
Papp＝(dCr/dt) × Vr/(A × C0)
回収パーセント＝１００×((Vr × Crfinal)+(Vd × Cdfinal))/(Vd × C0)
ここで、
dCr/dtは、μMs-1で表した、受容コンパートメント中の塁積濃度対時間の傾きである。
Vrは、受容コンパートメントのcm3で表した体積である。
Vdは、供与コンパートメントのcm3で表した体積である。
Aは、細胞を含まないインサートの面積である（１２ウエルのトランスウエルについては、１．１３cm2）。
Crfinalは、インキュベーション時間の最後における、μMで表した累積受容濃度である。
Cdfinalは、インキュベーション時間の最後における、μMで表した供与濃度である。
C0は、μMで表した、投与溶液の最初の濃度である。
【０１１１】
非特異的結合評価の結果を表２に示し、これは、細胞を含まないフィルターを横切るキサントフモールの透過性（１０-6cm/s）及び回収率を示す。
【０１１２】
【表２】
2009502973.tif 000005
【０１１３】
(A)細胞を含まないメンブレンを通る低速度の拡散（２０×１０-6cm/s未満）は、測定された透過性に影響を及ぼしうる、自由拡散の欠如を示唆するかもしれない。
【０１１４】
(B)非特異的結合などによりもたらされる低い回収率は、測定された透過性に影響を及ぼすであろう。
【０１１５】
実施例５
Caco-2細胞単層を横切るキサントフモールの透過性を試験するために、Caco-2細胞単層を、１２ウエルCoster Transwell（登録商標）プレート中のコラーゲンコートした微小孔性のポリカーボネートメンブレン上でコンフルエンスまで増殖させた。プレートの詳細及びそれらの認証を以下の表３に示す。先の実施例と同様に、被験物質も、水性キサントフモール製剤であり、投与濃度は、アッセイ緩衝液（HBSSg）中、２μMであった。細胞単層に、頂部側（AからB）又は側底側（BからA）に投与し、そして湿度を与えたインキュベーター中、５％CO2、３７℃でインキュベートした。１２０分において、サンプルを供与チャンバーから取り出し、そして受容チャンバーからは６０及び１２０分でサンプルを集めた。各測定を２連で実施した。透過性実験の間に細胞単層が損傷されていないことを確認するために、被験物質に供した後、各単層についてルシファーイエローの透過性も測定した。すべてのサンプルを、キサントフモールについて、エレクトロスプレーイオン化を用いるLC/MS/MSによってアッセイした。みかけの透過性（Papp）及び回収パーセントを上記のように計算した。キサントフモール透過性の結果を表４に示し、これは、Caco-2細胞単層を横切るキサントフモールの透過性（１０-6cm/s）及び回収を示す。すべての単層がルシファーイエローによる実験後の一貫性制御のPappが０．８×１０-6cm/s未満をパスした。
【０１１６】
【表３】
2009502973.tif 000006
【０１１７】
【表４】
2009502973.tif 000007
【０１１８】
(A)吸収能の分類
Papp（AからB）≧１．０×１０-6cm/s                          高度
１．０×１０-6cm/s＞Papp（AからB）≧０．５×１０-6cm/s      中度
Papp（AからB）＜０．５×１０-6cm/s                          低度
【０１１９】
(B)以下の：
Papp（BからA）≧１．０×１０-6cm/sであり、かつ、Papp（BからA）／Papp（AからB）の比≧３．０の場合、流出は顕著であると考えられる。
【０１２０】
(C)非特異的結合などにより生じる低度の回収率は、測定された透過性に影響しうる。
【０１２１】
実施例６
以下の製剤を、以下に記載のとおりに調製した：精製キサントフモール９８％（５重量％）、プロピレングリコール（１５重量％）、風味剤（適量）、ポビドン（１０重量％）、及び水（７０重量％）。
【０１２２】
プロピレングリコールを約１００°Fまで温め、精製キサントフモール（９８％）を、透明な黄色がかった溶液が得られるまで混合した。温かい混合物を攪拌しながらゆっくりと水に加えた。最後に、ポビドン及び風味剤を加えた。
【０１２３】
実施例７
以下の製剤を以下に記載のとおりに調製した：８−プレニルナリンゲニン９８％（１０重量％）、マクロゴールグリセロールヒドロキシステアレート４０（９０重量％）。
【０１２４】
マクロゴールグリセロールヒドロキシステアレート４０を透明になるまで温めた。８−プレニルナリンゲニンを、見えなくなるまで、溶液中にゆっくりと混合又はボルテキシングした。得られた溶液は透明であった。透明な溶液を場合により水及び風味剤に加えて、おいしい味の飲料を作り出すか、又はソフトジェルカプセル中に封入した。
【図面の簡単な説明】
【０１２５】
【図１】図１は、HepG2細胞中でのキサントフモールによる用量応答性のコレステロール合成阻害を、濃度をμMで、対照活性の％として表す。
【図１】
2009502973.tif 000008
【国際調査報告】
2009502973.tif 000009