(57)【要約】本発明は、ＳＨ基を保有する物質、このましくは、ペプチドの、たとえば、分子内ジスルフィド架橋の形成によるジスルフィド架橋の形成のための改善された方法に関する。ここでは、複素環の少なくとも１つの窒素原子を有する化合物（たとえば、カフェインまたはカフェイン類似物質）が、反応の触媒として用いられる。驚くべきことに、この複素環化合物を加えると、ジスルフィド架橋保有生成物の収率および純度が上昇したことが示された。
2009520739.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジスルフィド結合の形成の方法であって、該方法において、ジスルフィド架橋の形成に必要とされる少なくとも１つの化合物を含む流体媒体における反応を実施する工程を特徴とし、ここで、該化合物は、以下の群から選択される：
（ａ）  化合物であって、該化合物は、その構造において、少なくとも1つの窒素原子を有する飽和または不飽和の６員複素環を有し、ここで該複素環は、該窒素原子の隣の炭素原子に少なくとも１つのヒドロキシ基もしくは本発明によるオキソ基（＝Ｏ）を有し、ここで、該複素環は、ヒドロキシ基が存在する場合不飽和である、化合物；および
（ｂ）以下の一般式を有する化合物：
【化１０１】
2009520739.tif 000049
ここで、該置換基Ａは、水素、必要に応じて置換されたアルキル基、必要に応じて置換されたアリール基または３〜１０員環でかつ１〜３個の窒素、酸素および／またはイオウのようなヘテロ原子を有する飽和または不飽和の複素環であり、ここで、該複素環は置換されていないか、または一つまたは複数がハロゲン、１〜４炭素原子のアルキル、シアノ、ニトロ、３〜６炭素原子のシクロアルキル、ヒドロキシ、１〜４炭素原子のアルコキシおよび／またはメルカプトである、化合物、
であることを特徴とする方法。
【請求項２】
前記化合物は、別の形態によるに基づく：
（ａ）以下の構造
【化１０２】
2009520739.tif 000050
ここで、複素環は、それぞれ独立して、置換基Ｒ１〜Ｒ６が選択され、飽和または不飽和であり、対応して１または複数の二重結合を有し得；
−Ｖ、Ｗ，Ｘ、ＹおよびＺは、それぞれ、炭素原子または窒素原子のいずれかであり、ここで、この複素環は、合計して３を超えない、好ましくは２を超えない窒素を有し；
−Ｒ１は、ヒドロキシ基または本願発明によるオキソ基（＝Ｏ）のいずれかであり；
−Ｒ２およびＲ３は、それぞれ互いに独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル基もしくはアリール基、必要に応じて置換された-(CH2)nCOOX（ここで、ｎは０〜１０であり、Ｘは水素、アルキルまたは電子吸引基、官能基（たとえば、特に、ヒドロキシ基、本発明の基づくオキソ基（＝Ｏ）、-CONH2またはオキシム（＝Ｎ−ＯＨ）である）、あるいはＲ２はＲ３と一緒になって、５または６員環であり、この環は必要に応じてヘテロ原子を有しうるものであり、必要に応じてさらに置換基を有するか、あるいは、Ｒ２および／Ｒ３は存在せず；
−Ｒ４およびＲ５は、それぞれ互いに独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル基もしくはアリール基、電子吸引基、官能基（たとえば、特にヒドロキシ基、本発明によるオキソ基（＝Ｏ），カルボキシ基、-CONH2またはオキシム（＝Ｎ−ＯＨ）であるか、あるいはＲ４はＲ５と一緒になって、５または６員環であり、この環は必要に応じてヘテロ原子を有しうるものであり、あるいはＲ５はＲ６と一緒になって、５または６員環であり、この環は必要に応じてヘテロ原子を有しうるものであり、必要に応じてさらに置換基を有するか、あるいは、Ｒ４および／Ｒ５は存在せず；
−Ｒ６は、水素または必要に応じて置換されたアルキル基もしくはアリール基であるか、あるいはＲ６はＲ５と一緒になって、５または６員環であり、この環は必要に応じてヘテロ原子を有しうるものであり、必要に応じてさらに置換基を有するか、Ｒ６は存在しない、
ことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記化合物は、以下の構造を含む：
【化１０３】
2009520739.tif 000051
ここで、該複素環は、それぞれ独立して、置換基Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４およびＲ６が飽和または不飽和であり、そして対応して１または複数の二重結合を有することができ；ここで、
−Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル基またはアリール基、必要に応じて置換された基-(CH2)nCOOX（ここで、ｎは０から１０であり、Ｘは水素またはアルキルである）、電子吸引置換基、官能基（例えば、特に、ヒドロキシ基、本発明に基づくオキソ基（＝Ｏ），-CONH2またはオキシム（＝Ｎ−ＯＨ））であり、あるいはＲ２はＲ３と一緒になって５員環または６員環であり、ここでこれは必要に応じてヘテロ原子を有することができ、必要に応じてさらなる置換基を有するか、あるいは、Ｒ２および／またはＲ３は存在せず；
−Ｒ４は、水素または必要に応じて置換されるアルキル基またはアリール基あるいはＲ４は存在せず；
−Ｒ６は、水素または必要に応じて置換されるアルキル基またはアリール基あるいはＲ６は存在しない、
ことを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記化合物は、以下の一般式のウラシル誘導体である：
【化１０４】
2009520739.tif 000052
ここで、Ｒ４およびＲ６は、互いに独立して、水素または必要に応じて置換されたアルキル基もしくはアリール基であり、好ましくは、水素または分岐したもしくは分岐していないＣ１−Ｃ１０アルキル基であり、特に好ましくは、Ｃ１−Ｃ４アルキル基もしくは水素である、
ことを特徴とする、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記化合物は以下の一般式でその基本構造が表されるプリン誘導体の化合物に関するものであって、
【化１０５】
2009520739.tif 000053
ここで、５員環は不飽和であり、そして対応する二重結合が存在し、さらにここで、
−Ｒ４およびＲ６は、互いに独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル基もしくは必要に応じて置換されたアリール基であり、好ましくは、水素、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル基または必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール基であり；特に好ましくは、水素、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル基または必要に応じて置換されたＣ６アリール基であり；特に、水素または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ３アルキル基であり；
−Ｒ７，Ｒ８およびＲ９は、それぞれ互いに独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル基、必要に応じて置換されたアルキル基アリール基、必要に応じて置換された基-（ＣＨ２）ｎＣＯＯＸ（ここで、ｎは０から１０であり、Ｘは水素またはアルキルである）、または官能基であり；好ましくは、水素、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル基、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール基であり、必要に応じて置換された基-（ＣＨ２）ｎＣＯＯＸ（ここで、ｎは１から１０であり、Ｘは水素またはＣ１−Ｃ８アルキルである）であり；より好ましくは、水素、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル基、必要に応じて置換されたＣ６アリール基であり、必要に応じて置換された基-（ＣＨ２）ｎＣＯＯＸ（ここで、ｎは１から６であり、Ｘは水素またはＣ１−Ｃ６アルキルである）であり；特に好ましくは、水素、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ３アルキル基、または、必要に応じて置換された基-（ＣＨ２）ｎＣＯＯＸ（ここで、ｎは０から４であり、Ｘは水素またはＣ１−Ｃ３アルキルである）である、
ことを特徴とする、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記Ｒ２およびＲ３は一緒になって、必要に応じて少なくとも１つのヘテロ原子を有する６員環を形成する、請求項１〜３のいずれかの項に記載の方法。
【請求項７】
前記化合物は、以下の基本構造を有し：
【化１０６】
2009520739.tif 000054
ここで、置換基の選択に応じて環は不飽和であり得、そして対応する１または複数の二重結合を有し得、そして
−Ｒ１は、ヒドロキシ基または本発明によるオキソ（＝Ｏ）のいずれかであり；
Ｒ４およびＲ６は、それぞれ互いに独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル基または必要に応じて置換されたアリール基であるか、あるいは存在せず；好ましくは水素、必要に応じて置換された、分岐または分岐していないＣ１−Ｃ１０アルキル基であるか、あるいは必要に応じて置換されたＣ６−アリール基あるいはＣ１０アリール基であり；特に、水素または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ３アルキル基であり；
−Ｒ５は、水素、必要に応じて置換されたアルキル基またはアリール基、電子吸引置換基、官能基（たとえば、特に、ヒドロキシ基または本発明によるオキソ基（＝Ｏ））であるか、あるいはＲ５は存在せず；
−Ｒ１０およびＲ１３は、それぞれたがいに独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル基または必要に応じて置換されたアリール基であり、あるいはＲ１０および／またはＲ１３は、存在せず；好ましくは、水素、必要に応じて置換された分岐または分岐していないＣ１−Ｃ１０アルキル基であるか、あるいは必要に応じて置換されたＣ６−アリール基あるいはＣ１０アリール基であり；特に好ましくは、水素または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル基であるまたはＣ６−アリール基であるか；特に、水素または少なくとも１つのヒドロキシ基を伴うＣ１−Ｃ６アルキル基であり；
−Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル基またはアリール基、電子吸引置換基、官能基（例えば、特に、ヒドロキシ基、本発明に基づくオキソ基（＝Ｏ）、カルボキシ基、-CONH2またはオキシム（＝Ｎ−ＯＨ）であり、あるいは、Ｒ１１はＲ１２と一緒になって５員環または６員環であり、ここで該５員環または６員環は必要に応じてヘテロ原子および置換基を有することができる、
ことを特徴とする、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
（ｂ）の前記化合物が以下の置換基Ａを有する：
水素、必要に応じて置換されたアルキル基、必要に応じて置換されたアリール基または飽和もしくは不飽和の３〜１０員環でかつ１個のヘテロ原子（たとえば、窒素、酸素および／またはイオウ）を有する複素環であり、ここで、この複素環は、置換されていないか、またはひとつまたは複数がハロゲン、１〜４炭素原子のアルキル、シアノ、ニトロ、３〜６炭素原子のシクロアルキル、ヒドロキシ、１〜４炭素原子のアルコキシおよび／またはメルカプトであり、
好ましくは、水素、必要に応じて置換されるＣ１−Ｃ６のアルキル基、必要に応じて置換されたＣ６のアリール基、または５員環または６員環および１つの窒素、酸素および／もしくはイオウのようなヘテロ原子を有する飽和複素環であって、ここでこの複素環は、置換されていないかまたはハロゲン、１−４炭素原子を有するアルキル、シアノ、ニトロ、３−６炭素原子を有するシクロアルキル、ヒドロキシ、１−４個の炭素原子を有するアルコキシ、および／またはメルカプトでまたは複数が置換されており；
−特に、水素、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ３のアルキル基、または５員環または６員環および１つの窒素、酸素および／もしくはイオウのようなヘテロ原子を有する飽和複素環を有し、ここで、この複素環は置換されていない、
ことを特徴とする１〜７のいずれかの項に記載の方法。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかの項に記載の方法であって、以下の構造のジスルフィド架橋を形成する構造の形成に必要な化合物を有することを特徴とする、方法：
【化１０７】
2009520739.tif 000055
ここで、R1’, R2’, R3は、同じであるか異なっており、そして少なくとも１つのR1’, R2’, R3の基は、アルキル基である。
【請求項１０】
R1,R2およびR3は、同じかまたは異なっており、そして水素またはC1-C５のアルキル基であり、特にC1-C3アルキル基であり、さらに好ましくはメチル基である、請求項１〜９のいずれかの項に記載の方法。
【請求項１１】
前記化合物は、Ｎ−メチル−２−ピリドン、２，６−ジヒドロキシ−ピリジンヒドロクロリド、ウラシル−６−カルボン酸、２，４−ジヒドロキシ−６−メチルピリミジン、２，４−ジメチル−６−ヒドロキシピリミジン、２−イソプロピル−６−メチル−４−ピリミジノール、４，６−ジヒドロキシ−２−メチルピリミジン、４，６−ジヒドロキシピリミジン、１，２−ジヒドロ−３，６−ピリダジンジオン、７−ヒドロキシ−５−メチル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン、バルビツール酸、アロキサン一水和物およびビオルル酸、ウラシル、１−メチル−ウラシル、３−メチルキサンチン、テオブロミン、テオフィリン、カフェイン、イソカフェイン、キサンチン、テオフィリン−７−酢酸、テオフィリン−８−酪酸、３−イソブチル−１−メチルキサンチン、１，２，３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オン、（−）−リボフラビン、ルマジン、アロキサジン、ミノキシジルおよびアミネキシルからなる群より選択される、請求項１〜１０のいずれかの項に記載の方法。
【請求項１２】
アミノ酸含有物質、特にペプチドおよびタンパク質において、少なくとも分子内ジスルフィド架橋が形成され、ここで、前記反応は、水性媒体において行われることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれかの項に記載の方法。
【請求項１３】
２つのSH基を有するアミノ酸、好ましくはシステイン基の間に分子内ジスルフィド架橋が形成されることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれかの項に記載の方法。
【請求項１４】
前記反応混合物に対して、酸化剤、好ましくは酸化形態のグルタチオンが加えられることを特徴とする、請求項１〜１３のいずれかの項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ペプチドは、５アミノ酸と１００アミノ酸との間、５アミノ酸と５０アミノ酸との間、好ましくは１０アミノ酸と４０アミノ酸との間、さらに好ましくは１５アミノ酸と２５アミノ酸との間の長さを有する、請求項１〜１４のいずれかの項に記載の方法。
【請求項１６】
前記物質が、支持体に結合されて存在する、請求項１〜１５のいずれかの項に記載の方法。
【請求項１７】
前記物質が、官能基を介して前記支持体に結合される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１〜１２のいずれかの項に記載の複素環化合物の、ジスルフィド架橋の形成のための使用。
【請求項１９】
前記複素環化合物は、ペプチドおよび／またはタンパク質の環化のために使用され、ここで、該ペプチドは、好ましくは、５アミノ酸と２５０アミノ酸との間、５アミノ酸と１００アミノ酸との間、５アミノ酸と５０アミノ酸との間、好ましくは、１０アミノ酸と４０アミノ酸との間、さらに好ましくは１５アミノ酸と２５アミノ酸との間の長さを有する、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記物質は、サイトカイン模倣ペプチドの環化、特にＥＰＯ模倣またはＴＰＯ模倣ペプチドの環化のために使用される、請求項１８または１９に記載の使用。
【請求項２１】
少なくとも２つのＳＨ基を有するアミノ酸の間の分子内ジスルフィド架橋の形成のために、請求項１８〜２０のいずれかの項に記載の使用。
【請求項２２】
ジスルフィド架橋の形成のためのＳＨ基保有物質および製品の処理のための、請求項１８〜２１のいずれかの項に記載の使用。
【請求項２３】
毛髪および／または繊維、特にシステイン含有繊維の処理のための、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
ジスルフィド架橋の形成および／または加速のための請求項１〜１１の１項または複数項に記載の複素環化合物を含む組成物。
【請求項２５】
毛髪および／または繊維の処理のための、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
ダイナミックコンビナトリアルライブラリーの製造のための、分子間または分子内ジスルフィド架橋の形成における触媒のための、請求項１〜１１のいずれかの項に記載の複素環化合物の使用。
【請求項２７】
ジスルフィド架橋の形成の加速のための化粧剤であって、該化粧剤は複素環化合物を含み、該化合物は、少なくとも２つの窒素原子を有し、請求項１〜１２のいずれかの項に記載されたものである、化粧剤。
【請求項２８】
毛髪の処理の方法であって、該毛髪は、請求項２７に記載の化粧剤と接触され、そして必要に応じて水ですすがれる、方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
技術水準において、ジスルフィド架橋の形成方法は種々知られている。たとえば、酸化剤としてＫ３［Ｆｅ（ＣＮ）６］を加える分子内ジスルフィド架橋の形成によるペプチドの環化のための標準的な方法がある。これらの試薬は、高い収率で純粋な環化生成物を保障し、副反応が回避される。その上、酸素またはヨウ素の作用による環化も知られている。しかし、これらの方法は、遅すぎるかまたは所望されない副産物が多量に発生するという欠点を有している。別の知られたペプチドの環化方法は、酸化剤として固定したＥｌｌｍａｎｎ試薬（５，５’−ジチオ−ビス（２−ニトロ安息香酸）を使用することである。この方法は、たとえば直鎖ペプチドの完全な酸化を可能にし、試薬による汚染が回避された。この使用によって初めて架橋エトキシレート−アクリレート樹脂（ＣＬＥＡＲ）キャリアが開発された。これは、有機溶性混合物および水溶性混合物に適合性である。
【０００２】
さらなる技術水準において、たとえば、ペプチドの環化のような公知のジスルフィド架橋の形成方法としては、ＤＭＳＯを酸化剤として使用することがある。この方法は、最終的には直鎖ペプチドの完全な酸化をもたらす。しかし、この方法は、反応が非常に遅く進行し、ＤＭＳＯの過剰分をさらなる処理の前に取り除かねばならないという点において欠点を有しており、これが、この有機溶媒に関し難点である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
上記形態から、ジスルフィド架橋の形成のためのより多くの方法が、特に、分子内ジスルフィド架橋の形成によるペプチドの環化において意味のあるものであることがわかる。この方法は、収率、反応の困難性または純度における欠点が問題である。
【０００４】
したがって、本発明は、ジスルフィド架橋の形成のための別の方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記課題は、以下のジスルフィド架橋の形成の方法を提供することによって解決した：流体混合物における反応を行い、この方法において、この反応では少なくとも複素環の形成を包含し、該複素環において環のなかに少なくとも１つの窒素を有するものである。
【０００６】
したがって、請求項１は、ジスルフィド架橋の形成方法に関し、ここで、この方法は、その反応が、流体媒体において行われ、ここでこの媒体は、少なくとも１つのジスルフィド架橋の形成を必要とする化合物を含み、ここで、この化合物は、以下の群より選択されるものである。
【０００７】
（ａ）化合物であって、該化合物は、その構造において、少なくとも１つの窒素を有する飽和または不飽和の６員複素環を有し、ここで、この複素環は、その窒素原子に隣接する炭素原子において、少なくとも１つのヒドロキシ基または１つの本発明によるオキソ基（＝Ｏ）を有し、ここで、好ましくは、ヒドロキシ基の場合、この複素環は不飽和である、化合物。
【０００８】
（ｂ）以下の一般式の化合物
【０００９】
【化１】
2009520739.tif 000003
【００１０】
ここで、置換基Ａは、水素、必要に応じて置換されたアルキル基、必要に応じて置換されたアリール基または飽和もしくは不飽和の３〜１０員環でかつ１〜３個の窒素、酸素および／またはイオウのようなヘテロ原子を有する複素環であり、ここで、この複素環は、置換されていないか、または一つまたは複数がハロゲン、１〜４炭素原子のアルキル、シアノ、ニトロ、３〜６炭素原子のシクロアルキル、ヒドロキシ、１〜４炭素原子のアルコキシおよび／またはメルカプトである。
【００１１】
上記定義の化合物がジスルフィド架橋の形成を促進し、したがってその反応において、触媒として働きうることが予想外に見出された。したがって、種々のＳＨ基を保持する物質（たとえば、特にペプチド、タンパク質）におけるジスルフィド架橋の形成を促進するために、これらの化合物を反応混合物に加えることが有利である。
【００１２】
１つの実施形態によれば、別の形態による化合物は、以下の基本構造を有する：
【００１３】
【化２】
2009520739.tif 000004
【００１４】
ここで、複素環は、それぞれ独立して、置換基Ｒ１〜Ｒ６が選択され、飽和または不飽和であり、対応して１または複数の二重結合を有しうる。
−Ｖ、Ｗ，Ｘ、ＹおよびＺは、それぞれ、炭素原子または窒素原子のいずれかであり、ここで、この複素環は、合計して３を超えない、好ましくは２を超えない窒素を有する。
−Ｒ１は、ヒドロキシ基または本願発明によるオキソ基（＝Ｏ）のいずれかであり；
−Ｒ２およびＲ３は、それぞれ互いに独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル基もしくはアリール基、必要に応じて置換された−（ＣＨ２）ｎＣＯＯＸ（ここで、ｎは０〜１０であり、Ｘは水素、アルキルまたは電子吸引基、官能基（たとえば、特に、ヒドロキシ基、本発明の基づくオキソ基（＝Ｏ）、−ＣＯＮＨ２またはオキシム（＝Ｎ−ＯＨ）である）、あるいはＲ２はＲ３と一緒になって、５または６員環であり、この環は必要に応じてヘテロ原子を有しうるものであり、必要に応じてさらに置換基を有するか、あるいは、Ｒ２および／Ｒ３は存在せず；
−Ｒ４およびＲ５は、それぞれ互いに独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル基もしくはアリール基、電子吸引基、官能基（たとえば、特にヒドロキシ基、本発明によるオキソ基（＝Ｏ），カルボキシ基、−ＣＯＮＨ２またはオキシム（＝Ｎ−ＯＨ）であるか、あるいはＲ４はＲ５と一緒になって、５または６員環であり、この環は必要に応じてヘテロ原子を有しうるものであり、あるいはＲ５はＲ６と一緒になって、５または６員環であり、この環は必要に応じてヘテロ原子を有しうるものであり、必要に応じてさらに置換基を有するか、あるいは、Ｒ４および／Ｒ５は存在せず；
−Ｒ６は、水素または必要に応じて置換されたアルキル基もしくはアリール基であるか、あるいはＲ６はＲ５と一緒になって、５または６員環であり、この環は必要に応じてヘテロ原子を有しうるものであり、必要に応じてさらに置換基を有するか、Ｒ６は存在しない。
【００１５】
したがって、その環における結合位置において二重結合を有する窒素が存在するとき（たとえば、化合物２，６−ジヒドロ−ピリジン−ヒドロクロリド；ウラシル−６−カルボン酸，４，６−ジヒドロキシピリミジンを参照）、上記置換基R2〜R6が欠落しうる。
【００１６】
本発明の化合物の異なる実施形態の中心的な特徴は、６員の窒素含有複素環および隣接する炭素原子におけるヒドロキシまたは本発明によるオキソ基（＝O)の存在である。本発明における「オキソ基」とは、環の原子を有する各々の置換基が一緒になってオキソ基を形成し、環における二重結合に対して対応する酸素原子が結合されることを意味する。
【００１７】
【化３】
2009520739.tif 000005
【００１８】
このように、多数の試験がなされ、そのような官能基（ヒドロキシ基、オキソ基＝Ｏ）がない化合物（たとえば、アミノピラジン、２，４−ジアミノピリミジン，メラミン，ピラジンカルボン酸およびピラジンアミド）は、ジスルフィド架橋の形成を促進する通常能力がないことが示された。
【００１９】
置換基の定義から明らかなように、複素環において窒素原子のみが存在し、ジスルフィド結合の形成を促進することについて有利な作用を示す化合物が存在する。複素環において窒素原子のみおよび本発明によるオキソ基（＝Ｏ）を隣接する炭素原子に有する化合物の例は、化合物Ｎ−メチル−２−ピリドンがある。
【００２０】
【化４】
2009520739.tif 000006
【００２１】
複素環において窒素原子のみおよびヒドロキシ基を隣接する炭素原子に有する化合物のさらなる例は、化合物２，６−ジヒドロキシ−ピリジン−ヒドロクロリドがある。
【００２２】
【化５】
2009520739.tif 000007
【００２３】
各請求項に記載されるように、複素環がヒドロキシ基で占められる場合が好ましい。試験を行うことによって、少なくともひとつの二重結合が存在する場合、触媒作用について非常に意味のあることが示された。以下に束縛されることを所望するものではないが、このことは、この構造の化合物が互変異性化しうることに帰着するものと推察される。互変異性体は、構造異性体であって、ある基（たとえば、水素）の位置および二重結合の位置のみで区別することができるものをいう。ヒドロキシ基およびオキソ基（＝Ｏ）の場合、ケト−エノール互変異性体について言及される。芳香性を有する化合物（たとえば、２，６−ジヒドロ−ピリジンヒドロクロリドが互変異性化しうることが好ましいことが示された。このことは、特に、好ましくはケト形態に互変異性化しうるエノール形成の場合にそうである。したがって、所与の物質の互変異性体（異性体）の形成が本発明にしたがって包含される。
【００２４】
好ましくは、６員環の複素環は、２つの窒素を有し、ここで、この２つの窒素は識別可能に存在することができる。たとえば、この構造の活性化合物として、ウラシル−６−カルボン酸、２，４−ジヒドロキシ−６−メチル−ピリミジン、２，４−ジメチル−６−ヒドロキシピリミジン、２−イソプロピル−６−メチル−４−ピリミジノール、４，６−ジヒドロキシ−２−メチル−ピリミジン、４，６−ジヒドロキシピリミジン，１，２−ジヒドロ−３，６−ピリダジンジオンがある。
【００２５】
【化６】
2009520739.tif 000008
【００２６】
2009520739.tif 000009
【００２７】
2009520739.tif 000010
【００２８】
2009520739.tif 000011
【００２９】
2009520739.tif 000012
【００３０】
2009520739.tif 000013
【００３１】
2009520739.tif 000014
【００３２】
Ｒ５およびＲ６が一緒になって環を形成する化合物の例としては、７−ヒドロキシ−５−メチル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジンがある。
【００３３】
【化７】
2009520739.tif 000015
【００３４】
さらなる実施形態によれば、この化合物は、以下の構造を有する。
【００３５】
【化８】
2009520739.tif 000016
【００３６】
ここで、この複素環は、それぞれ独立して、置換基Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４およびＲ６が飽和または不飽和であり、そして対応して１または複数の二重結合を有することができ；ここで、
−Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル基またはアリール基、必要に応じて置換された基-(CH2)nCOOX（ここで、ｎは０から１０であり、Ｘは水素またはアルキルである）、電子吸引置換基、官能基（例えば、特に、ヒドロキシ基、本発明に基づくオキソ基（＝Ｏ），-CONH2またはオキシム（＝Ｎ−ＯＨ））であり、あるいはＲ２はＲ３と一緒になって５員環または６員環であり、ここでこれは必要に応じてヘテロ原子を有することができ、必要に応じてさらなる置換基を有するか、あるいは、Ｒ２および／またはＲ３は存在せず；
−Ｒ４は、水素または必要に応じて置換されるアルキル基またはアリール基あるいはＲ４は存在せず；
−Ｒ６は、水素または必要に応じて置換されるアルキル基またはアリール基あるいはＲ６は存在しない。
【００３７】
この実施形態の活性の例としては、たとえば、バルビツール酸、アロキサン−一水和物およびビオルル酸がある。
【００３８】
【化９】
2009520739.tif 000017
【００３９】
2009520739.tif 000018
【００４０】
2009520739.tif 000019
【００４１】
この実施形態のさらなる例は、以下の一般式のウラシル誘導体がある。
【００４２】
【化１０】
2009520739.tif 000020
【００４３】
ここで、Ｒ４およびＲ６は、互いに独立して、水素または必要に応じて置換されたアルキル基もしくはアリール基であり、好ましくは、水素または分岐したもしくは分岐していないＣ１−Ｃ１０アルキル基であり、特に好ましくは、Ｃ１−Ｃ４アルキル基もしくは水素である。
【００４４】
よりよい活性を有する例としては、ウラシルおよび１−メチル−ウラシルがある：
【００４５】
【化１１】
2009520739.tif 000021
【００４６】
2009520739.tif 000022
【００４７】
より広い実施形態によれば、ジスルフィド結合の形成を必要とする化合物は、プリン誘導体であって、その基本構造は以下の一般式で表される。
【００４８】
【化１２】
2009520739.tif 000023
【００４９】
ここで、５員環は不飽和であり、そして対応する二重結合が存在し、さらにここで、
−Ｒ４およびＲ６は、互いに独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル基もしくは必要に応じて置換されたアリール基であり、好ましくは、水素、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル基または必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール基であり；特に好ましくは、水素、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル基または必要に応じて置換されたＣ６アリール基であり；特に、水素または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ３アルキル基であり；
−Ｒ７，Ｒ８およびＲ９は、それぞれ互いに独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル基、必要に応じて置換されたアルキル基アリール基、必要に応じて置換された基-（ＣＨ２）ｎＣＯＯＸ（ここで、ｎは０から１０であり、Ｘは水素またはアルキルである）、または官能基であり；好ましくは、水素、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ１０アルキル基、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール基であり、必要に応じて置換された基-（ＣＨ２）ｎＣＯＯＸ（ここで、ｎは０から１０であり、Ｘは水素またはＣ１−Ｃ８アルキルである）であり；特に好ましくは、水素、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル基、または、必要に応じて置換された基-（ＣＨ２）ｎＣＯＯＸ（ここで、ｎは１から６であり、Ｘは水素またはＣ１−Ｃ６アルキルである）であり；特に好ましくは、水素、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ３アルキル基、または、必要に応じて置換された基-（ＣＨ２）ｎＣＯＯＸ（ここで、ｎは１から４であり、Ｘは水素またはＣ１−Ｃ３アルキルである）である。
【００５０】
示されるように、この環化合物は、プリン構造に基づくものでありうる。このプリン構造は、複素環ピリミジンおよびイミダゾールの両方に由来する縮合環系として理解されうる。系統的なＩＵＰＡＣ名は、７Ｈ−イミダゾール[４，５−ｄ]ピリミジンである。
【００５１】
この７Ｈ−プリンは、その異性体である９Ｈ−プリンとともに、互変異体性の等価物であり、ここで、本発明の文脈において、両方の互変異体の形態に基づく化合物が包含されるべきである。
【００５２】
【化１３】
2009520739.tif 000024
7Hプリン                  9Hプリン
ピリミジン環の置換基の選択に応じて、これは、より少ない二重結合を有しうる。
【００５３】
格別好ましい実施形態において、本発明は、少なくとも基Ｒ４，Ｒ６、Ｒ７およびＲ９がアルキル基であり、少なくとも１つ、好ましくは２つの基Ｒ４，Ｒ６，Ｒ７およびＲ９は水素またはＣ１−Ｃ３アルキル基、好ましくはメチルである。
【００５４】
プリンに基づくこれらの複素環化合物の具体的な例としては、３−メチルキサンチン、テオブロミン、テオフィリン、カフェイン、イソカフェイン、キサンチン、テオフィリン−７−アセテート、テオフィリン−８−ブチレートおよび３−イソブチル−１−メチルキサンチンがある。
【００５５】
【化１４Ａ】
2009520739.tif 000025
【００５６】
【化１４Ｂ】
2009520739.tif 000026
【００５７】
【化１４Ｃ】
2009520739.tif 000027
【００５８】
【化１４Ｄ】
2009520739.tif 000028
【００５９】
【化１４Ｅ】
2009520739.tif 000029
【００６０】
【化１４Ｆ】
2009520739.tif 000030
【００６１】
【化１４Ｇ】
2009520739.tif 000031
【００６２】
【化１４Ｈ】
2009520739.tif 000032
【００６３】
【化１４Ｉ】
2009520739.tif 000033
【００６４】
これらの選択された例が示すように、上記７Ｈプリン構造の代わりに９Ｈプリン構造を基本構造として持つ互変異体の化合物もまた同様に包含される。
【００６５】
更なる実施形態によれば、Ｒ２およびＲ３は、一緒になって、必要に応じて置換された６員環を形成し、この環は、必要に応じて少なくとも１つのヘテロ原子を有する。これらの実施形態において、好ましくは、基本複素環において芳香族が縮合されている化合物に関する。これは、好ましくは、２つのＣ原子からの架橋におけるものが好ましい。５環が縮合した例（たとえば、イミダゾール）がすでに例示された（プリン構造に基づく化合物）。縮合した環構造についてのさらなる例は、ピラジンおよびキノキサリンがある。
【００６６】
縮合した６環としてベンゾールを伴う化合物についての例は１，２，３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オンである。
【００６７】
【化１５】
2009520739.tif 000034
【００６８】
好ましい実施形態によれば、以下の構造の化合物が提示される：
【００６９】
【化１６】
2009520739.tif 000035
【００７０】
ここで、置換基の選択に応じて環は不飽和であり得、そして対応する１または複数の二重結合を有し得、そして
−Ｒ１は、ヒドロキシ基または本発明によるオキソ（＝Ｏ）のいずれかであり；
Ｒ４およびＲ６は、それぞれ互いに独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル基または必要に応じて置換されたアリール基であるか、あるいは存在せず；好ましくは水素、必要に応じて置換された、分岐または分岐していないＣ１−Ｃ１０アルキル基であるか、あるいは必要に応じて置換されたＣ６−アリール基あるいはＣ１０アリール基であり；特に好ましくは、水素または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル基あるいは必要に応じて置換されたＣ６−アリール基であり；特に、水素または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ３アルキル基であり；
−Ｒ５は、水素、必要に応じて置換されたアルキル基またはアリール基、電子吸引置換基、官能基（たとえば、特に、ヒドロキシ基または本発明によるオキソ基（＝Ｏ））であるか、あるいはＲ５は存在せず；
−Ｒ１０およびＲ１３は、それぞれたがいに独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル基または必要に応じて置換されたアリール基であり、あるいはＲ１０および／またはＲ１３は、存在せず；好ましくは、水素、必要に応じて置換された分岐または分岐していないＣ１−Ｃ１０アルキル基であるか、あるいは必要に応じて置換されたＣ６−アリール基あるいはＣ１０アリール基であり；特に好ましくは、水素または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル基であるまたはＣ６−アリール基であるか；特に、水素または少なくとも１つのヒドロキシ基を伴うＣ１−Ｃ６アルキル基であり；
−Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立して、水素、必要に応じて置換されたアルキル基またはアリール基、電子吸引置換基、官能基（例えば、特に、ヒドロキシ基、本発明に基づくオキソ基（＝Ｏ）、カルボキシ基、-CONH2またはオキシム（＝Ｎ−ＯＨ）であり、あるいは、Ｒ１１はＲ１２と一緒になって５員環または６員環であり、ここでこの５員環または６員環は必要に応じてヘテロ原子および置換基を有することができる。
【００７１】
この形式に入る化合物の格別の例は、たとえば、（−）−リボフラビン、ルマジンおよびアロキサジンがある。
【００７２】
【化１７】
2009520739.tif 000036
【００７３】
2009520739.tif 000037
【００７４】
2009520739.tif 000038
【００７５】
本発明の代替に基づく化合物は、環外にアミノ基を有しないことが、作用を示すことについて好ましい。したがって、好ましくは、本発明によって構成される化合物は、環外にアミノ基を有しない。
【００７６】
上記置換基Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、さらに互いに独立して水素、必要に応じて置換された分岐または分岐していないＣ１−Ｃ１０アルキル基であるか、あるいは必要に応じて置換されたＣ６−アリール基あるいはＣ１０アリール基であり；特に好ましくは、水素または必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ６アルキル基であるまたはＣ６−アリール基であるか；特に、水素またはＣ１−Ｃ３アルキル基、特にメチルであり得る。
【００７７】
Ｒ６は、好ましくは、水素またはアルキル基、Ｃ１−Ｃ８、好ましくはＣ１−Ｃ４の、特に好ましくは水素またはメチル基である。
【００７８】
本発明において複素環の置換基として利用可能に使用される電子吸引基または原子は（上記参照）、たとえば、置換基として対応する芳香族複素環の電子密度を低下させる電子吸引基または原子（これはまた、不活性化基としても知られる。）が用いられ得る。電子吸引基は、（−）−Ｍ−および／または（−）−ｌ−効果を有する。この共鳴効果（Ｍ効果、メソメリズム効果）は、一般に、その基が直接不飽和の複素環系に結合されているときにのみ作用する。これは、π電子について、空間において、溶媒−分子についてあるいは好ましくはある系のσ結合について作用する電界効果（ｌ−効果、誘導効果）と対峙して作用する。
【００７９】
電子吸引効果は、誘導（すなわち、（−）−ｌ−効果と称されているものを介する）および／またはメソメリズム（すなわち、いわゆる（−）−Ｍ−効果と称されているものを介する）のいずれかを達成することができる。（＋）−ｌ−効果および（−）−ｌ−効果ならびに（＋）−Ｍ−効果および（−）−Ｍ−効果を伴う置換基におけるこのクラスの芳香族置換基は、当業者に公知である。さらなる実施形態について、Ｂｅｙｅｒ／Ｗａｌｔｅｒ，  「Ｌｅｈｒｂｕｃｈ  ｄｅｒ  Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ  Ｃｈｅｍｉｅ」，  １９９８，  ２３．  ｕｅｂｅｒａｒｂｅｉｔｅｔｅ  ｕｎｄ  ａｋｔｕａｌｉｓｉｅｒｔｅ  Ａｕｆｌａｇｅ，５１５−５１８頁を参照されたい。この文献は、本明細書において、その開示を本発明において援用する。
【００８０】
（−）−Ｍ効果を有する基のいくつかの非限定的な例としては、−ＳＯ２−，−ＳＯ２Ｏ−，−ＯＯ−，−ＣＯＯ−，−ＣＯＮＨ−，−ＣＯＮＲ−，−ＳＯＲ−，−ＣＮ，−ＮＯ２，−ＣＨＯ，−ＣＯ−，−ＣＯＳＨ，−ＣＯＳ-，−ＳＯ３Ｈおよび本発明によるオキソ基（＝Ｏ）がある。本明細書から明らかであるが、電子吸引基」および「官能基」との概念は、異なる。対応する基は、適用可能な置換基についての例である。
【００８１】
さらなる実施形態によると、別の形態（ｂ）による化合物は、置換基Ａを有する。ここで、この置換基Ａは、
−水素、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ１０のアルキル基、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０のアリール基、または飽和もしくは不飽和の３−１０の環員および１つの窒素、酸素および／もしくはイオウのようなへテロ原子を有する複素環を有し、ここで、この複素環は置換されていないか、またはハロゲン、１〜４個の炭素原子を有するアルキル、シアノ、ニトロ、３〜６個の炭素原子を有するシクロアルキル、ヒドロキシ、１〜４個の炭素原子を有するアルコキシおよび／もしくはメルカプトで１または複数が置換されており；
−好ましくは、水素、必要に応じて置換されるＣ１−Ｃ６のアルキル基、必要に応じて置換されたＣ６のアリール基、または５員環または６員環および１つの窒素、酸素および／もしくはイオウのようなヘテロ原子を有する飽和複素環であって、ここでこの複素環は、置換されていないかまたはハロゲン、１−４炭素原子を有するアルキル、シアノ、ニトロ、３−６炭素原子を有するシクロアルキル、ヒドロキシ、１−４個の炭素原子を有するアルコキシ、および／またはメルカプトでまたは複数が置換されており；
−特に、水素、必要に応じて置換されたＣ１−Ｃ３のアルキル基、または５員環または６員環および１つの窒素、酸素および／もしくはイオウのようなヘテロ原子を有する飽和複素環を有し、ここで、この複素環は置換されていない；
これらのピリミジン誘導体の具体的な例は、以下の化合物がある：
【００８２】
【化１８】
2009520739.tif 000039
アミネキシル
2009520739.tif 000040
ミノキシジル
支持体物質にこの物質の結合を可能とするために、官能基は、本発明にしたがって、使用されるべき複素環化合物において有用である。したがって、さらにまた、本発明に従う格別の言及していない複素環化合物の誘導体もまた、使用されうる。
【００８３】
これまでに記載された複素環化合物は、純粋な形態および種々の可能な異性体（特に立体異性体、たとえば、Ｅ異性体、Ｚ異性体、スレオ異性体、エリスロ異性体）および光学異性体（たとえば、Ｒ異性体およびＳ異性体またはアトロプ異性体および互変異性体の混合物の形態として提供されうる。本願発明は、純粋な異性体およびその混合物を包含する。
【００８４】
上記に定義した置換基の技術に基づいて、複素環化合物は、酸または塩基の性質を示し、そして塩、好ましくは、分子内塩を形成しうる。式（I)の化合物は、ヒドロキシ、カルボキシまたは他の酸の性質を有する誘導基を保持し、これらの化合物は、塩基を用いて塩に変換されうる。適切な塩基は、たとえば、ヒドロキシド、カルボナート、アルカリおよびアルカリ土類の金属、とくにナトリウム、カリウム、マグネシウムおよびカルシウムの炭酸水素塩であり、さらに(C1-C4-)アルキル基を有するアンモニア、一級アミン、二級アミンおよび三級アミン、ならびに(C1-C4-)アルカノールのモノアルカノールアミン、ジアルカノールアミン、トリアルカノールアミンである。式（I)の化合物は、アミノ、アルキルアミノまたは他の塩基の性質の誘導基を有し、これらの化合物は、酸を用いて塩に変換されうる。適切な酸は、たとえば、塩酸、硫酸およびリン酸などの鉱酸、酢酸または酪酸などの有機酸、およびNaHSO4およびKHSO4などの酸塩である。このような入手可能な塩は、同様に適用可能である。
【００８５】
上記化合物のさらに好ましい基は、以下に議論される。
【００８６】
ジスルフィド結合の形成を本発明に従って促進することが確実にすることについての、複素環の化合物についての例は、さらに以下のように記載されうる。
【００８７】
【化１９】
2009520739.tif 000041
【００８８】
基R1’, R2’およびR3’は、同じであるかまたは異なり、少なくともこれらの基のひとつは、アルキル基である。とくに、二重結合が存在する互変異性体は、同様に、上記式に含まれることが理解される。したがって、対応する構造異性体もまた、この式に含まれる。この化合物は、上記されるように、とくに、アミノ酸含有物質、とくにペプチドおよびタンパク質におけるいジスルフィド架橋の形成の加速のために適切である。
【００８９】
R1’,R2’およびR3’のうち少なくとも１つの、好ましくは２つは、同じであっても異なっていてもよく、好ましくは、水素またはＣ１−Ｃ５アルキル基のいずれかである。特に１〜３個の炭素原子を有する短鎖アルキル基、特にメチル基が有利であることが示された。さらに、基の少なくとも１つは、官能基を有しうる。さらにまた、残りの位置において、複素環の５員環の基Ｒ４’（窒素に対する）およびＲ５’（窒素原子の間にある炭素に対する）に存在する（特に、互変異性体形態）ことが可能である。これらは、任意の形成可能な、好ましくは有機の基である。1つの実施形態によれば、これは、その物質の、たとえば、支持体に対する結合を可能にする官能基に関する。この形態は、以下により詳細に記載される。
【００９０】
本発明による方法で使用するために特に適切な物質には、すでに説明したように、カフェインに加えカフェイン類似物質（たとえば、テオブロミンおよびテオフィリン）がある。
【００９１】
驚くべきことに、特にペプチドおよびタンパク質、さらに特に５と100との間のアミノ酸長の、好ましくは１０と５０とのアミノ酸長の、特に好ましくは１５と４０との間のアミノ酸長のペプチドを水自身において、より高いペプチド濃度を、室温において、本発明の方法に従って、分子内のジスルフィド環化の形成がされることが示された。したがって、この方法は、分子内ジスルフィド架橋形成のために、特に適切であり、そしてさらに特に、ペプチドの環化のために適切である。さらに、ポリペプチドおよびタンパク質は、対応する方法によって環化される。さらにまた、ジスルフィド架橋が、別の構造上のSH基を有する物質において形成される。このジスルフィド架橋の形成は、特に環において、本発明の複素環化合物（たとえば、カフェイン、カフェイン類似物質（上記式を参照））を、いくつかのペプチドにおいて、近似の量で加えることによって達成される。しかし、これは、必須ではない。驚くべきことに、沖酸化剤を反応の加速のために加えることは行われていなかった（可能であるとはいえ）。なぜなら、上記特徴付けられる物質に存在する空気中の酸素がジスルフィド架橋の形成のために十分であるからである。
【００９２】
試験結果によって、さらに、本発明による方法において、反応速度が、反応の過程において加速されうることが示された。本発明による上記特徴付けられた物質の添加による正の影響は、特に驚くべきことである。なぜなら、ほとんどの場合、過去の技術水準においては、加えられる物質DMSOまたはヨウ素は、酸化剤としては取り扱われていなかったからである。本発明方法において、空気中の酸素が酸化のために十分であり、ここで、反応の速度は、本発明による複素環化合物の有利な方法での添加によって増大する。反応速度の増大はまた、自己触媒機構で、必要に応じて環の生成物を通じて加速される。
【００９３】
好ましくは、反応速度の増大にもかかわらず、かつ、それ自体高いペプチドの濃度の使用にもかかわらず、しばしば、まったくあるいはほとんどオリゴマー生成物が生じない。したがって、所望されない分子内ジスルフィド架橋の形成は、ペプチドの環化の場合に観察されない。しかし、設定されるペプチド濃度は、それぞれ使用されるペプチドに応じて変動し、したがって、それぞれのペプチドに応じて最適化されるべきである。
【００９４】
本発明による方法は、好ましい態様では、室温にて行われる。
【００９５】
この反応の明らかな自動触媒の過程は、非緩衝溶液および緩衝溶液（たとえば、リン酸緩衝液ｐＨ６−−９）において生じる。とはいうものの、反応速度は、ｐＨの値が下がると明らかに高くなりうることが示された。したがって、好ましくは、ｐＨの値は、ｐＨ≦７に設定すること、好ましくはｐＨの領域がおよそ４または５から６．５であること、特に好ましくはｐＨの値が６（５．５から６．５）であることが好ましい。
【００９６】
特に分子内ジスルフィド架橋の形成の加速のために反応混合物に加えられる物質に関する量は、それぞれの化合物およびジスルフィド架橋が形成されるべき物質に応じて変動する。原則として、少量の触媒量で十分である。好ましくは、使用される量は、少なくとも、およそ０．０００１ｍｇ／ｍｌであり、特に好ましくは，  ０．０００１ｍｇ／ｍｌから、０．００１ｍｇ／ｍｌからまたは０．０１ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌまでの範囲、０．００１ｍｇ／ｍｌからまたは０．０１から１５ｍｇ／ｍｌまで、０．００１ｍｇ／ｍｌからまたは０．０１ｍｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌまで、０．００１ｍｇ／ｍｌまたは０．０１から５ｍｇ／ｍｌまで、好ましくは、０．００１ｍｇ／ｍｌからまたは０．０１ｍｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍｌまで、そして、特に好ましくは、０．０３ｍｇ／ｍｌから０．５ｍｇ／ｍｌまでの範囲である。この量は、選択された物質（たとえば、カフェインまたはカフェイン類似物質）および使用されるペプチドまたはタンパク質に応じて変動し、したがって、各々最適化されるべきである。１５から２５アミノ酸の長さのペプチド（特に、ＥＰＯ模倣ペプチドの場合）にとって特に適切な濃度領域は、０．０５ｍｇ／ｍｌから０．３ｍｇ／ｍｌにある。しかし、この量は、ペプチドに応じて変動し、はるかにより高くありうる。したがって、この量は、好ましくは、それぞれのペプチド応じて最適化されるべきである。
【００９７】
反応の困難性は、その反応物がさらなる酸化剤と混合されるとさらに悪くなる。たとえば、酸化形態のグルタチオンが（ＧＳＳＧ）がある。
【００９８】
驚くべきことに、この環化は、高いペプチド濃度においても、所望されないオリゴマー化を伴うことなくまた実行されうることが示された。したがって、高いペプチド濃度は、本発明による方法において、多くのペプチドがこれまで問題がなかった。多くの場合、いくつかのペプチドにおいて、後に、本発明による方法は、環化を、高いペプチド濃度でよりよく実行させることが示された。ペプチドに応じて、適切なペプチド濃度は、およそ０．０５から０．１ｍｇ／ｍｌ、あるいは０．５から５ｍｇ／ｍｌであり、好ましくは０．７から１．５ｍｇ／ｍｌである。正確な濃度は、おのずから、各々のペプチドに応じて、その長さおよびそのアミノ酸組成に依拠し、そしてそれに応じて変動する。したがって、この数値は、限定的に解釈されるべきではない。ＥＰＯ模倣ペプチドについて、特に好ましくは、およそ０．７から１ｍｇ／ｍｌであることが示された。これらのペプチドは、特に、カフェインの添加によって効率よく環化される。
【００９９】
適切な方法は、ジスルフィド架橋が、ペプチドまたはタンパク質において、２つのシステインの間に形成される。本発明に従って、ジスルフィド架橋は、他の天然のおよび非天然のアミノ酸の間に、ジスルフィド架橋（−Ｓ−Ｓ−）の形成が適切であるこれらの対応する基が存在する限り結合されうる。チオリジン、ホモシステインおよび他のシステイン誘導体が、システインのほかに、適切なアミノ酸の例として挙げられる。ジスルフィドとの概念は、システイン架橋との概念と等価に考えるべきではなく、むしろ、何らかの天然のまたは非天然のＳＨ含有アミノ酸または他のＳＨ基を含む化合物との間の対応する−Ｓ−Ｓ−の結合が包含される。したがって、本発明に従う方法を用いて、ジスルフィド架橋はまた、他のＳＨ基含有化合物、特にポリマーにおいても形成される。本発明に従う方法を用いると、多数のジスルフィド架橋もまた形成されうることは自明である。
【０１００】
特に好ましくは、本発明のＥＰＯ模倣ペプチド（上記ＷＯ９６／４０４７９などをご参照）の環化のための方法に適用されうる。新規ＥＰＯ模倣ペプチドは、ＰＣＴ／ＥＰ２００５／０１２０７５（ＷＯ  ２００６／０５０９５９）  に記載されており、ここで公開された内容は、ペプチドが本明細書においてその内容がすべて本願明細書において参考として援用される。このＰＣＴ／ＥＰ２００５／０１２０７５  （ＷＯ  ２００６／０５０９５９）に記載されているように、これらの新規のＥＰＯ模倣ペプチドは、プロリンをＥＰＯ模倣コンセンサスモチーフの１０位に有しない（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，  １９９７が示した番号付けによる）。このプロリンは、しばしば、保存的アミノ酸ではないものに対し、特に塩基性アミノ酸（たとえば、リジン）に置換される。
【０１０１】
PCT/EP2005/012075(WO 2006/050959)に記載されたペプチドは、好ましくは、以下の構造を有する：
【０１０２】
［化２０］
Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４Ｘ１５
ここで、各々のアミノ酸は、天然または非天然のアミノ酸であり、そして、
Ｘ６  はＣ，  Ａ，  Ｅ，  α−アミノ−γ−ブロモ酪酸またはホモシステイン（Ｈｏｃ）であり；
Ｘ７はＲ，  Ｈ，  Ｌ，  ＷもしくはＹまたはＳであり；
Ｘ８はＭ，  Ｆ，  Ｉ，  ホモセリンメチルエーテル（Ｈｓｍ）またはノルイソロイシンであり；
Ｘ９はＧまたはＧの保存的置換物であり；
Ｘ１０はプロリンの非保存的置換物であるか、またはＸ９とＸ１０とがひとつのアミノ酸で置換され；
Ｘ１１は、任意のアミノ酸でありえ；
Ｘ１２はＴまたはＡであり；
Ｘ１３はＷ，  １−ｎａｌ，  ２−ｎａｌ，  Ａ  またはＦであり；
Ｘ１４はＤ，  Ｅ，  Ｉ，  Ｌ  またはＶであり；
Ｘ１５はＣ，  Ａ，  Ｋ，  α−アミノ−γ−ブロモ酪酸またはホモシステイン（Ｈｏｃ）であり、ここでＸ６またはＸ１５のいずれかがＨｏｘである。
【０１０３】
ＥＰＯ模倣ペプチドは、環の形態において特によい活性を示す。したがって、通常は、２つのペプチドモノマー（モノマーは、結合ドメインに対応する）は、１つのＥＰＯ模倣コンセンサスを用いてそれぞれ環化され、そして１つのダイマーへと結合される。なぜなら、ＥＰＯレセプターにおけるこの形態の結合は、もっとも効率よいからである。このＥＰＯ模倣モノマーは、平均して１０と２５との間のアミノ酸数を有する。好ましくは、これは、ＰＣＴ／ＥＰ２００５／０１２０７５  （ＷＯ  ２００６／０５０９５９）において記載されるように、別々のダイマー化工程となるのを回避するために連続したダイマー（二価のペプチド）として合成される。
【０１０４】
技術水準において、種々の、ＥＰＯ模倣またはＴＰＯ模倣ペプチドの環化のために分子内ジスルフィド架橋を形成させるための方法が知られている。公知の手法の核は、ＥＰＯ模倣コンセンサスにおけるシステイン残基（または対応する他のＳＨ基含有アミノ酸）の酸化である。代表的な酸化剤としては、これまでＤＭＳＯが使用されてきた。これは、しかし、はじめに示される欠点を有する。
【０１０５】
本発明に従う方法による環化は、技術水準において公知の方法に対して顕著な利点を有する。したがって、技術水準において公知の方法よりも、改良された開発および生成物のより高い純度が得られる。本発明に従う方法のより広い決定的な利点は、単純なHPLCによる反応生成物の本発明に従う環化試薬の単純な分離可能性である。さらなる改変によると、複素環化合物（たとえば、カフェイン）は、流体−流体抽出により分離される。たとえば、カフェインは、ペプチド水溶液についてジクロルメタンを用いた抽出を繰り返すことにより、分離される。より長いペプチドの環化において、サイズ交換クロマトグラフィー（サイズ排除クロマトグラフィー、SEC）を用いることも可能である。したがって、精製（Aufreinigung）が対応してより単純になる。
【０１０６】
ＳＨ基を有する物質およびペプチド、ならびに設定される反応条件に応じて、反応時間は、８時間未満にまで減らすことができる（たとえば、ｐＨ値を低下されることによる；さらなる酸化剤の選択）。通常は、反応時間は、≦24時間であり、好ましくは、２０時間未満であり、特に好ましくは15時間未満であり、さらに特に好ましくは、5時間と10時間との間である。
【０１０７】
言及したＥＰＯ模倣ペプチドに加えて、他のペプチドも成功裏に本発明に従う方法にもとづいて環化された。とくに、オキシトシンとは逆にアミドの代わりにＣ末端にカルボン酸を有するオキシトシン由来ペプチド
H-CYIQNCPLG-OH
もまた、分子内システイン架橋の形成を通じて同様に環化に成功した。
【０１０８】
言及されるように、分子内ジスルフィド架橋は、好ましくは、２つのアミノ酸の間に形成される。これは、天然にまたは非天然のものでありえ、いくつかの条件は、SH基の反応によるジスルフィド架橋の形成を容易にすることである。システインは、周知のジスルフィド架橋を形成するアミノ酸であり、これはまた、天然において、ジスルフィド架橋の形成のために、過剰に使用されている。ジスルフィド架橋は、天然において、特に、分子内および分子間のジスルフィド架橋を形成するために存在する。ジスルフィド架橋は、たとえば、タンパク質のいくつかのポリペプチド鎖（たとえば、インスリン）を、分子間ジスルフィド架橋の形態で作用し、そしてタンパク質の内部での分子内ジスルフィド架橋により、規則的にコンフォメーションの安定化に役立つ。
【０１０９】
羊毛および毛髪のケラチンは、たとえば、１０％をこえるシステインを含み、それがため、そこで、たくさんのジスルフィド架橋が存在する。これらのジスルフィド架橋は破壊され（たとえば、漂白、光、加熱などによる）、繊維の引っ張り強さがそがれる。したがって、本発明に従う方法はまた、繊維（天然の繊維および合成繊維）におけるジスルフィド架橋を形成するために用いられる。同様に、毛髪の処理についても、そのジスルフィド架橋は、構造の固定に大きな意味を持つ。本発明に従う方法はまた、毛髪においてジスルフィド架橋の形成のために用いられ、これにより、化粧用の用途が開かれる（たとえば、シャンプー、パーマの形成のための薬剤など）。したがって、本発明の方法は、たとえば、ジスルフィド架橋の終了のための薬剤として、パーマネント処理の過程において使用される。ここで、特に有利には、上記により詳細に特徴付けられる物質に加えて、ジスルフィド架橋形成の必要性のために、酸化剤を加える。反応速度は、これによって、顕著に上昇しうること、およびジスルフィド架橋が対応してより速く結合されることが示された。その結果、本発明に従う方法の毛髪における使用において、操作時間およびそれゆえ客の処置の時間が有利なことに短縮される。特に適切な酸化剤は、酸化グルタチオン（GSSG）である。これによって、時間による見積もりよりもより定量的にジスルフィド架橋の終了を改善することが実現され、より明確に実験の例において記載される。
【０１１０】
本発明は、これまで記載してきた環化化合物の化粧品調製物における使用にも関する。この化粧品調製物を用いると、たとえば、髪の毛におけるジスルフィド結合の形成が加速されうる。
【０１１１】
化粧用調製物は、これまで記載された複素環化合物のほかに、適切な溶剤および当該分野における処方において慣用される添加物を含みうる。これらを挙げると、たとえば、乳化剤および共乳化剤、界面活性剤（Tenside）、油体、保存剤、香料、化粧用成分および活性物質（たとえば、AHA酸、果物酸（Fruchtsauren）、セラミド、フィタントリオール、コラーゲン、ビタミンおよびプロビタミン（たとえば、ビタミンA、ビタミンE、ビタミンC、レチノール、ビサボロール、パンテノール）、天然の光保護剤、合成の光保護剤、天然物、混濁剤（Trｕｅbungsmittel）、微小色素（たとえば、酸化チタンまたは酸化亜鉛）、過剰油化剤（Ｕeberfettungsmittel）、真珠光沢剤（Perlglanzwachse）、コンシステンシー付与剤（Konsistenzgeber）、濃化剤（Verdicker）、可溶化剤、複合結合剤、脂肪、ろう、シリコン化合物、ヒドロトロープ、色素、安定化剤、ｐH値調整剤、反射剤、タンパク質、タンパク質加水分解物、卵白加水分解物、塩、ゲル形成剤、コンシステンシー付与剤（Konsistenzgeber）、シリコーン、湿潤保持剤、再脂肪化剤（Rｕｅckfetter ）、および他の慣用される添加物がある。さらなるものとして、それぞれ所望の特徴を有するポリマーを調整のために含むことができる。
【０１１２】
UV光線による悪影響から毛髪を保護するために、化粧用調製物中でも、UV光線保護剤が含有されうる。
【０１１３】
毛髪化粧用調製物としては、以下を挙げることができる：特に、毛髪化粧調製物におけるスタイリング剤および／またはコンディショナー剤（たとえば、ヘアトリートメント、ヘアフォーム、ヘアゲル、ヘアスプレー、ヘアローション、ヘアリンス、ヘアシャンプー、ヘアエマルジョン、パーマ剤（Egalisierungsmittelfｕｅr Dauerwellen）、毛染め剤、脱色剤、オイルローション（Festigerlotions）または類似の製品。使用される領域に応じて、毛髪化粧用調製物は、（エアゾール）スプレー、（エアゾール）フォーム、ゲル、ゲルスプレー、クリーム、ローション、ミルク、またはワックスとして適用されうる。
【０１１４】
好ましくは、髪の毛のための製品に関する薬剤であって、特に、毛髪洗浄剤およびリンスされるかまたはリンスされず、および洗髪、染色、脱色、パーマネントもしくは脱ウェーブ（Entkrauselung）を行う前または後での毛髪用製品に関する。
【０１１５】
したがって、本発明に従って、毛髪の処理のための方法が提供される。この方法は、毛髪を、少なくとも上記詳述した複素環化合物を含む化粧剤を接触させること、および必要に応じて水ですすぐことを特徴とする。複素環の化合物は、好ましくは、上記に列挙して例示した化合物および化合物クラスから選択される。
【０１１６】
さらに、この方法はまた、上記されるように、合成物質のジスルフィド架橋の形成のために用いられうる。この物質は、単に、対応するSH含有官能基を有するが、たとえば、アミノ酸から形成されるものではない（しかし、たとえば、有機ポリマーに由来しうる）。
【０１１７】
好ましくは更なる開発に従って、ジスルフィド架橋を必要とする物質の形成物の分離が相当に容易になる。この思想にしたがって、ジスルフィド架橋を必要とする物質が支持体にロードされる。この支持体は、たとえば、（親水性の）樹脂でありうる。物質がこの支持体に結合すると、その後、保持された物質が、たとえば、簡単な濾過によって分離することが可能である。したがって、有利には、上記方法において、ジスルフィド架橋の形成のために、カフェインおよびカフェイン類似物質（上記式を参照のこと）が使用されうる。この物質は、支持体に結合され、それにより分離が容易になる。
【０１１８】
支持体に対する物質の結合を可能にするために、その物質における官能基が補助となる。したがって、ジスルフィド架橋形成物質の誘導体もまた、使用されうる。
【０１１９】
適切なカフェイン誘導体の例としては以下がある：
テオフィリン−８−酪酸
【０１２０】
【化２１】
2009520739.tif 000042
【０１２１】
および
テオフィリン−７−酢酸
【０１２２】
【化２２】
2009520739.tif 000043
【０１２３】
両方の誘導体とも、ジスルフィド架橋の形成を必要とし、それゆえ、溶液におけるペプチドの環化を必要とする。これらの物質は、官能基を、適切な支持体に共有結合し、それによって、固定された試薬を得、これをジスルフィド架橋の終了を加速する状態に置く。反応後、この試薬は、容易に反応溶液からろ過して除去することができる。これらの化合物に基づいて、明らかにされるように、本発明にしたがって、複素環の残りの位置においてもまた、基R1’からR3’までとは独立して、ここでは８−（３−カルボキシプロピル）−１，３−ジメチルキサンチンの場合のように、たとえば、支持体物質への結合のために、R5’として、官能基を配置することができる。
【０１２４】
本発明は、さらに、上記した複素環化合物を、ジスルフィド架橋の形成、特に、分子内および分子間のジスルフィド架橋をペプチドおよびタンパク質においてk精製するために使用することに関する。
【０１２５】
本発明に従って使用される物質は、分子内ジスルフィド架橋の形成を通じた、特に、ペプチド、特にＥＰＯ模倣ペプチドの環化に適している。特に好ましい例としては、Ｎ−メチル−２−ピリドン、２，６−ジヒドロキシ−ピリジンヒドロクロリド、ウラシル−６−カルボン酸、２，４−ジヒドロキシ−６−メチルピリミジン、２，４−ジメチル−６−ヒドロキシピリミジン、２−イソプロピル−６−メチル−４−ピリミジノール、４，６−ジヒドロキシ−２−メチルピリミジン、４，６−ジヒドロキシピリミジン、１，２−ジヒドロ−３，６−ピリダジンジオン、７−ヒドロキシ−５−メチル［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリミジン、バルビツール酸、アロキサン一水和物およびビオルル酸、ウラシル、１−メチル−ウラシル、３−メチルキサンチン、テオブロミン、テオフィリン、カフェイン、イソカフェイン、キサンチン、テオフィリン−７−酢酸、テオフィリン−８−酪酸、３−イソブチル−１−メチルキサンチン、１，２，３−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）−オン、（−）−リボフラビン、ルマジン、アロキサジン、ミノキシジル（＝６−（１−ピペリジニル）−２，４−ピリミジンジアミン−３−オキシド）およびアミネキシル（＝２，４−ジアミノピリミジン−３−オキシド）が挙げられる。
【０１２６】
これらの物質は、本発明にしたがって、特に、ジスルフィド架橋の形成のために良好に使用される。特に好ましいのは以下のとおりである。
【０１２７】
N-メチル−２−ピリドン、バルビツール酸、アロキサン一水和物、ビオルル酸、４，６−ジヒドロキシピリミジン、ウラシル−６−カルボン酸、ミノキシジル、３−メチルキサンチン、テオブロミン、テオフィリン、３−イソブチル−１−メチルキサンチン、カフェイン、イソカフェイン、ルマジン、アロキサジン。
【０１２８】
そのようなジスルフィド結合は、SH含有基の間で形成される。特に、天然のアミノ酸および非天然のアミノ酸であって、遊離のSH基を有するものが適切なジスルフィド架橋形成物である。
【０１２９】
ジスルフィド架橋の形成を加速する能力に基づいて、上記式の物質は、たとえば、ジスルフィド架橋の形成を加速する目的での、SH基を含有する物質および材料の処理のために使用されることができる。したがって、これらの物質は、たとえば、毛髪または繊維（天然の繊維および合成繊維）の処理のために使用される。これは、特に、システイン含有繊維に関連する。本発明に従って使用される複素環化合物は、たとえば、流体の処方物（たとえば、リンスの形態またはシャンプーの形態、あるいは、毛髪の処理剤（たとえば、パーマ剤））として、使用されうる。したがって、対応する組成物は、同様に本発明に包含される。
【０１３０】
本発明によって特徴付けられる複素環化合物の触媒作用に基づいて、ジスルフィド架橋の形成は、これらの、たとえば、分子内または分子間のジスルフィド架橋の形成において、ダイナミックコンビナトリアルライブラリーを製造するための触媒として用いることができる。したがって、これは、合成または天然の分子あるいは改変した天然の分子の間のジスルフィド架橋の形成の作用をすることができる。したがって、これらは、活性物質のためにダイナミックコンビナトリアルライブラリーの製造において利用することができる。ダイナミックコンビナトリアルライブラリーにおいて、いくつかのユニットが、しばしば、ジスルフィド架橋を介して高分子をネットワーク化される（図１５を参照のこと）。このライブラリーについての詳細は、たとえば、“Dynamic combinatorial libraries of macrocyclic disulfides in water. S.Otto, R. L. E. Furlan and J. K. M. Sanders, J. Amer. Chem. Soc., 2000, 122,12063-12064“、"Selection andamplification of hosts from dynamic combinatorial li-braries of macrocyclicdisulfides. S. Otto, R. L. E. Furlan and J. K. M. Sanders, Science,2002, 297, 590-593”; “Drug discovery by dynamiccombinatorial libraries. Ramstrom, Lehn. Nat Rev Drug Discov. 2002“およびWO01/64605に記載されている。
【実施例】
【０１３１】
本発明に従う方法は、以下のいくつかの実施例に基づいて、より明確にされる。本発明に従う方法を用いた環化可能なペプチドの例として、EPO模倣ペプチドおよびオキシトシンを選択した。
[図１]
カフェイン（０．３ｍｇ／ｍｌ）の存在下での、水中で空気を伴った、室温での、以下の配列を有するＥＰＯ模倣ペプチドの
GGTYSCHFGKLTWVCKKQGG-Am(BB57)
（０．７ｍｇ／ｍｌ）の対応する環化生成物への環化の反応過程が示される。曲線が明らかに示すように、反応の過程における反応速度は増大し、この反応の自動触媒機構を進行させる。短縮形Ａｍは、一般にアミド化を意味する。
[図２]
図１に示すように（０．７ｍｇ／ｍｌ）、同じペプチドの、カフェイン不存在下でのその環化形態への環化が示される。明らかに認識可能なように、この反応速度は、顕著に減少した。
【０１３２】
ＥＰＯ模倣ペプチドの場合、カフェインの最適な濃度は、０．０７５ｍｇ／ｍｌ〜０．１５ｍｇ／ｍｌであった。総量は、１０時間近くまでもが定量的である。
[図３]
図１に示されるＥＰＯ模倣ペプチドの変換速度のカフェイン濃度に対する依存性を示す。示されるように、０．０３ｍｇ／ｍｌ〜０．３ｍｇ／ｍｌの濃度範囲において、非常によい結果が得られる。最適な値は、０．０６ｍｇ／ｍｌ〜それぞれ０．０７５ｍｇ／ｍｌおよび０．１５ｍｇ／ｍｌの範囲にある。
[図４]
環化速度のｐＨ値に対する依存性が示される。明らかに認識されるように、反応の自己触媒の過程は、pＨ値の変化が原因である。なぜなら、この効果はまた、示された緩衝溶液（リン酸緩衝液、pＨ６−９）中に見出されたからである。しかし、環化ペプチドの収率は、高いｐＨ値において低下したことが示された。さらに、驚くべきことに、反応は、溶液のｐＨ値が低くなるにしたがってより速くなることが示された。したがって、ｐＨ７よりもより低いｐＨ、より好ましくは、＜＝６．５が好ましい。
[図５]
穏やかな酸化剤であるグルタチオン（酸化形態）の反応の速度に対する効果が示される。ここでは、図１において示されたペプチドの変換（０．７ｍｇ／ｍｌ  Ｈ２Ｏ）が、０．１ｍｇ／ｍｌ（０．５当量）グルタチオン酸化形態（ＧＳＳＧ）およびカフェイン（０．３ｍｇ／ｍｌ）の存在下で生じた。５から６時間の間に、反応は、完了した。ペプチドの変換は、ＧＳＳＧのみを用いる（カフェインの不存在下）ではゆっくり起こったのみである。さらに、所望されない副産物が生じたことが示される（図６を参照のこと）。
[図６]
示されるのは、毎時間ごとの反応が示され、そして、使用されたEPO模倣ペプチドの０．５当量のGSSGを使用した変換が達成されたクロマトグラムである。
[図７]
本発明に従う方法が、技術水準に基づいて公知の方法と比較した形式で表での概観が示される。試験されたペプチドは、以下に示す配列を有する。
[化２１]
EMP1: Ac-GGTYSCHFGPLTWVCKPQGG-Am
APG1: Ac-GGTYSCHFGKLTWVCKKQGG-Am 
APG2: Ac-GGTYSCHFGKLT-Na1-VCKKQRG-Am
インビトロでの実験で、異なる方法で環化されたペプチドの比較可能な活性を示した。しかし、本発明に従う方法は、他の試験した環化方法との関係で、図７に示すように、よりよい収率および純度を示す。本発明の方法のさらなる利点は、使用される環化試薬が、簡単な方法で、HPLCによって分離されうることにある。
【０１３３】
本発明に従う方法によって環化されたEPO模倣ペプチドのさらなる実施例は、以下のとおりである。
[化２２]
Ac-C(tBu)-GGTYSCHFGKLT-Nal1-VCKKQRG-GGTYSCHFGKLT-Nal1-VCKKQRG-Am (APG3)
Ac-C(Mob)-GGTYSCHFGKLT-Nal1-VCKKQRG-GGTYSCHFGKLT-Nal1-VCKKQRG-Am (APG4)
Ac-C(tBu)-GGTYSCHFGKLTWVCKKQGG-GGTYSCHFGKLTWVCKKQGG-Am (APG5)
(Sama)-GGTYSCHFGKLT-Na1-VCKKQRG-GGTYSCHFGKLT-Na1-VCKKQRG-Am (APG6)
[図８]
示されるのは、二量体のＥＰＯ模倣ペプチドの環化である。二量体または多量体のペプチドの環化は、好ましくは、多くの工程において達成される。図８は、二価（二量の）ＥＰＯ模倣ペプチドの合成スキームを示す。これは、２工程で、２つの分子内ジスルフィド架橋の形成によって環化されている。この方法の後、最初のジスルフィド架橋は、本発明に従う方法に基づいて形成される。２つの分子内ジスルフィド架橋は、最適なヨウ素酸化の使用によって実施された。ペプチドをポリマーキャリアに結合させるために、さらなる部分的により広いシステイン基を分子に導入した。このシステインは、適切な保護基（ｔＢｕまたはＭｏｂ）で保護された。
【０１３４】
カフェインを用いる最初の本発明に従う環化は、好ましくは、ｐＨ６で行われ、第二の環化の間、示された例に基づいて、８０％の酢酸中で行われた。合成収率は、代表的には、６０％と９０％との間であった。
[図９]
ＥＰＯ模倣ペプチドのいくつかは、環化が非常に難しい。その一例は以下のペプチドである。
【化２３】
2009520739.tif 000044
Ｈａｒ＝ホモアルギニン
Ａａｄ＝２−アミノアジピン酸（ホモグルタミン酸）
Ｎａｌ：ナフチルアラニン
この配列において、環化試薬の濃度を高めることが有利であることが示された。したがって、環化は、１０ｍｇ／ｍｌのカフェインを用いて、２４時間以内に達成された。この結果は、図９に示される。その収率は、溶液中で、およそ２１時間後ですでに９０％を超えていた。
[図１０〜１２]
ＥＰＯ模倣ペプチドに加えて、オキシトシンから誘導された還元ペプチドを、カフェインまたはカフェイン類似物質（上記式を参照のこと）を用いて環化された。
【０１３５】
反応の実施の際、オキシトシン、還元型（ＯｙｘＲ）、生の生成物を水（すなわち、H2O/ACN/TFA)に溶かし、種々の濃度のカフェイン（および適宜GSSG）とともに空気中に放置した。反応物は、ＯｘｙＲおよび生成物オキシトシン（Ｏｘｙ）について含量を確認するためにＨＰＬＣで規則的な間隔で測定した。
【０１３６】
図１０〜１２までに示す表およびそれに添付されるグラフは、結果についてまとめた概観を示す。
【０１３７】
認識されるように、生成物の収率は、ペプチド濃度で補正される。少量のペプチドは、オキシトシンにおいてよりよい結果をもたらす。
【０１３８】
ＯｘｙＲの完全な変換にいたるまでの反応時間は、反応溶液中のカフェインの濃度によって補正した。０．５ｍｇ／ｍｌカフェインの濃度までは、カフェインがより多くなると、酸化の速度は速くなる。ペプチド濃度は、単に、反応の長さに少しの影響があるだけである。
【０１３９】
ＧＳＳＧは、速度にも収率にも影響がないようであった。
【０１４０】
ＨＰＬＣで精製したＯｘｙＲは、自発的に「正しく」速く環化する。しかし、反応速度は、カフェインを用いると、さらに明らかに短縮される。少量のＡＣＮ／ＴＦＡは、収率に少し効果があり、反応時間はいくらか長くなる。
[図１３および図１４]
示されるのは、ペプチドBB57の、物質ミノキシジルを用いた環化の結果である。
【化２４】
2009520739.tif 000045
【０１４１】
これに対して、０．７ｍｇ  ＢＢ５７および０．３ｍｇミノキシジル（６−（１−ピペリジニル）−２，４−ピリミジンジアミン３−オキシド、Ｍｉｎｏｘ）を１ｍｌの蒸留水中で溶解し、そして空気中で放置した。ＢＢ５７の酸化形態ＢＢ５７Ｃへの変換は、ＨＰＬＣ（２１６ｎｍでのＵＶ検出）によって観察した。結果を図１３に示す。
【０１４２】
図１３に示されるように、ミノキシジルの存在下での酸化は、およそ２９時間後の終了させた（カフェインを用いた比較測定においては、およそ２４時間であった）。したがって、ミノキシジルは、本発明に従うヘテロ環化化合物のさらなる因子として、同様に、ジスルフィド架橋の形成に対して正の作用を示す。ミノキシジル触媒反応の溶液中の収率は、９５％を超える。触媒で行った反応について、この反応において、ミノキシジルの濃度は、実用的には減少しなかったことが示された（ＢＢ５７に対する４．４当量のミノキシジルの場合減少≦２％、図１４を参照のこと。）
[図１５]
図１５は、網化高分子の生成のためのジスルフィド架橋のための可能な結合戦略を示す。このような構成単位は、しばしば、ダイナミックコンビナトリアルライブラリーとしての用途が見出される。
[図１６]
以前にパーマネント処理に関して還元された毛髪が、本発明に従う物質（ここでは、カフェイン）およびさらなる酸化剤（ここでは、酸化グルタチオンＧＳＳＧ）との組み合わせで、空気の不存在下で加速酸化を終了させることを実証するために、さらに試験を行った。したがって、本発明の方法に従って有利な方法において、化粧分野で、特に理髪業の分野において、毛髪の処置のために、使用される。
【０１４３】
試験は、以下のように行った。
【０１４４】
５−６ｍｇの毛髪を、４００μｌのアンモニウムチオグリコレート含有「Ｗｅｌｌローション」の１０％溶液（製品名「Poly Lock - starkeDauerwelle」Schwarzkopf &Henkel, Germany)を０．５時間、室温で処理した。この溶液を取り除き、毛髪をおよそ６倍それぞれ４００μｌのＨ２Ｏで洗浄した。このように処理した毛髪サンプルをそれぞれ、ａ）Ｈ２Ｏおよびｂ）１０ｍｇ／ｍｌカフェインの水溶液中で、３）水中の５ｍｇ／ｍｌ  ＧＳＳＧおよびｄ）１０ｍｇ／ｍｌおよび５ｍｇ／ｍｌＧＳＳＧを室温で３日間にわたり処理した。
【０１４５】
遊離のまだ残るチオール基を確認するために、毛髪を、Ｅｌｌｍａｎｓ試薬（５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）、ＤＴＮＢ）を用いて反応溶液から分離して、変換した。さらなる参照サンプルとして、処理していない毛髪およびそれ以外はさらなる処理を受けていない還元した毛髪を使用した。これに加え、毛髪サンプルは、それぞれ２００μｌの１００ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ８．０および１ｍＭ  ＥＤＴＡおよび３００μｌの１ｍＭ  ＤＴＮＢ溶液を同じＥＤＴＡ含有緩衝液に加えた。この溶液は、数分後、ＵＶ−Ｖｉｓスペクトルメーターで測定した。
【０１４６】
サンプルのＵＶ−Ｖｉｓスペクトルによると、アンモニウムチオールグリコレート含有「Ｗｅｌｌローション」を用いた毛髪の還元が成功であったことが示された（図２９を参照。曲線ｅおよびｆは、一度も処理していないおよび一度還元処理した毛髪を示す。）。これは、４１２ｎｍの帯域にて認知でき、これは、遊離のチオール基についての尺度すなわちサイズである。空気の存在下での、ａ）Ｈ２Ｏでの、ｂ）カフェイン含有溶液での、ｃ）ＧＳＳＧ含有溶液での処理は、それぞれ一部チオール基の参加が達成される。しかし、これまでに認知されているように、カフェインは、ジスルフィド架橋の終了に正の効果を有する。ｄ）カフェインおよび酸化剤ＧＳＳＧの組み合わせは、それでもなお、毛髪におけるチオール基のほぼ定量的な酸化を実現する。したがって、この試みは、本発明の方法で、毛髪に対しても、ジスルフィド架橋の終了が成功することができることが示される。
[図１７〜３９]
参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【０１４７】
これらの試験は、これまで示されたように実施される（上記を参照すべし。）。これら試験された物質および試験された量は、それぞれ与えられたとおりである。
【図面の簡単な説明】
【０１４８】
【図１】カフェイン（０．３ｍｇ／ｍｌ）の存在下での、水中で空気を伴った、室温での、以下の配列を有するＥＰＯ模倣ペプチドのGGTYSCHFGKLTWVCKKQGG-Am(BB57)（０．７ｍｇ／ｍｌ）の対応する環化生成物への環化の反応過程が示される。曲線が明らかに示すように、反応の過程における反応速度は増大し、この反応の自動触媒機構を進行させる。短縮形Ａｍは、一般にアミド化を意味する。
【図２】図１に示すように（０．７ｍｇ／ｍｌ）、同じペプチドの、カフェイン不存在下でのその環化形態への環化が示される。明らかに認識可能なように、この反応速度は、顕著に減少した。ＥＰＯ模倣ペプチドの場合、カフェインの最適な濃度は、０．０７５ｍｇ／ｍｌ〜０．１５ｍｇ／ｍｌであった。総量は、１０時間近くまでもが定量的である。
【図３】図１に示されるＥＰＯ模倣ペプチドの変換速度のカフェイン濃度に対する依存性を示す。示されるように、０．０３ｍｇ／ｍｌ〜０．３ｍｇ／ｍｌの濃度範囲において、非常によい結果が得られる。最適な値は、０．０６ｍｇ／ｍｌ〜それぞれ０．０７５ｍｇ／ｍｌおよび０．１５ｍｇ／ｍｌの範囲にある。
【図４】環化速度のｐＨ値に対する依存性が示される。明らかに認識されるように、反応の自己触媒の過程は、pＨ値の変化が原因である。なぜなら、この効果はまた、示された緩衝溶液（リン酸緩衝液、pＨ６−９）中に見出されたからである。しかし、環化ペプチドの収率は、高いｐＨ値において低下したことが示された。さらに、驚くべきことに、反応は、溶液のｐＨ値が低くなるにしたがってより速くなることが示された。したがって、ｐＨ７よりもより低いｐＨ、より好ましくは、＜＝６．５が好ましい。
【図５】穏やかな酸化剤であるグルタチオン（酸化形態）の反応の速度に対する効果が示される。ここでは、図１において示されたペプチドの変換（０．７ｍｇ／ｍｌ  Ｈ２Ｏ）が、０．１ｍｇ／ｍｌ（０．５当量）グルタチオン酸化形態（ＧＳＳＧ）およびカフェイン（０．３ｍｇ／ｍｌ）の存在下で生じた。５から６時間の間に、反応は、完了した。ペプチドの変換は、ＧＳＳＧのみを用いる（カフェインの不存在下）ではゆっくり起こったのみである。さらに、所望されない副産物が生じたことが示される（図６を参照のこと）。
【図６】示されるのは、毎時間ごとの反応が示され、そして、使用されたEPO模倣ペプチドの０．５当量のGSSGを使用した変換が達成されたクロマトグラムである。
【図７】本発明に従う方法が、技術水準に基づいて公知の方法と比較した形式で表での概観が示される。試験されたペプチドは、以下に示す配列を有する。
【０１４９】
［化２１Ａ］
EMP1: Ac-GGTYSCHFGPLTWVCKPQGG-Am
APG1: Ac-GGTYSCHFGKLTWVCKKQGG-Am 
APG2: Ac-GGTYSCHFGKLT-Na1-VCKKQRG-Am
インビトロでの実験で、異なる方法で環化されたペプチドの比較可能な活性を示した。しかし、本発明に従う方法は、他の試験した環化方法との関係で、図７に示すように、よりよい収率および純度を示す。本発明の方法のさらなる利点は、使用される環化試薬が、簡単な方法で、HPLCによって分離されうることにある。本発明に従う方法によって環化されたEPO模倣ペプチドのさらなる実施例は、以下のとおりである。
【０１５０】
［化２２Ａ］
Ac-C(tBu)-GGTYSCHFGKLT-Nal1-VCKKQRG-GGTYSCHFGKLT-Nal1-VCKKQRG-Am (APG3)
Ac-C(Mob)-GGTYSCHFGKLT-Nal1-VCKKQRG-GGTYSCHFGKLT-Nal1-VCKKQRG-Am (APG4)
Ac-C(tBu)-GGTYSCHFGKLTWVCKKQGG-GGTYSCHFGKLTWVCKKQGG-Am (APG5)
(Sama)-GGTYSCHFGKLT-Na1-VCKKQRG-GGTYSCHFGKLT-Na1-VCKKQRG-Am (APG6)
【図８】示されるのは、二量体のＥＰＯ模倣ペプチドの環化である。二量体または多量体のペプチドの環化は、好ましくは、多くの工程において達成される。図８は、二価（二量の）ＥＰＯ模倣ペプチドの合成スキームを示す。これは、２工程で、２つの分子内ジスルフィド架橋の形成によって環化されている。この方法の後、最初のジスルフィド架橋は、本発明に従う方法に基づいて形成される。２つの分子内ジスルフィド架橋は、最適なヨウ素酸化の使用によって実施された。ペプチドをポリマーキャリアに結合させるために、さらなる部分的により広いシステイン基を分子に導入した。このシステインは、適切な保護基（ｔＢｕまたはＭｏｂ）で保護された。カフェインを用いる最初の本発明に従う環化は、好ましくは、ｐＨ６で行われ、第二の環化の間、示された例に基づいて、８０％の酢酸中で行われた。合成収率は、代表的には、６０％と９０％との間であった。
【図９】ＥＰＯ模倣ペプチドのいくつかは、環化が非常に難しい。その一例は以下のペプチドである。
【化２３Ａ】
2009520739.tif 000046
Ｈａｒ＝ホモアルギニン
Ａａｄ＝２−アミノアジピン酸（ホモグルタミン酸）
Ｎａｌ：ナフチルアラニン
この配列において、環化試薬の濃度を高めることが有利であることが示された。したがって、環化は、１０ｍｇ／ｍｌのカフェインを用いて、２４時間以内に達成された。この結果は、図９に示される。その収率は、溶液中で、およそ２１時間後ですでに９０％を超えていた。
【図１０】ＥＰＯ模倣ペプチドに加えて、オキシトシンから誘導された還元ペプチドを、カフェインまたはカフェイン類似物質（上記式を参照のこと）を用いて環化された。反応の実施の際、オキシトシン、還元型（ＯｙｘＲ）、生の生成物を水（すなわち、H2O/ACN/TFA)に溶かし、種々の濃度のカフェイン（および適宜GSSG）とともに空気中に放置した。反応物は、ＯｘｙＲおよび生成物オキシトシン（Ｏｘｙ）について含量を確認するためにＨＰＬＣで規則的な間隔で測定した。図１０〜１２までに示す表およびそれに添付されるグラフは、結果についてまとめた概観を示す。認識されるように、生成物の収率は、ペプチド濃度で補正される。少量のペプチドは、オキシトシンにおいてよりよい結果をもたらす。ＯｘｙＲの完全な変換にいたるまでの反応時間は、反応溶液中のカフェインの濃度によって補正した。０．５ｍｇ／ｍｌカフェインの濃度までは、カフェインがより多くなると、酸化の速度は速くなる。ペプチド濃度は、単に、反応の長さに少しの影響があるだけである。ＧＳＳＧは、速度にも収率にも影響がないようであった。ＨＰＬＣで精製したＯｘｙＲは、自発的に「正しく」速く環化する。しかし、反応速度は、カフェインを用いると、さらに明らかに短縮される。少量のＡＣＮ／ＴＦＡは、収率に少し効果があり、反応時間はいくらか長くなる。
【図１１】ＥＰＯ模倣ペプチドに加えて、オキシトシンから誘導された還元ペプチドを、カフェインまたはカフェイン類似物質（上記式を参照のこと）を用いて環化された。反応の実施の際、オキシトシン、還元型（ＯｙｘＲ）、生の生成物を水（すなわち、H2O/ACN/TFA)に溶かし、種々の濃度のカフェイン（および適宜GSSG）とともに空気中に放置した。反応物は、ＯｘｙＲおよび生成物オキシトシン（Ｏｘｙ）について含量を確認するためにＨＰＬＣで規則的な間隔で測定した。図１０〜１２までに示す表およびそれに添付されるグラフは、結果についてまとめた概観を示す。認識されるように、生成物の収率は、ペプチド濃度で補正される。少量のペプチドは、オキシトシンにおいてよりよい結果をもたらす。ＯｘｙＲの完全な変換にいたるまでの反応時間は、反応溶液中のカフェインの濃度によって補正した。０．５ｍｇ／ｍｌカフェインの濃度までは、カフェインがより多くなると、酸化の速度は速くなる。ペプチド濃度は、単に、反応の長さに少しの影響があるだけである。ＧＳＳＧは、速度にも収率にも影響がないようであった。ＨＰＬＣで精製したＯｘｙＲは、自発的に「正しく」速く環化する。しかし、反応速度は、カフェインを用いると、さらに明らかに短縮される。少量のＡＣＮ／ＴＦＡは、収率に少し効果があり、反応時間はいくらか長くなる。
【図１２】ＥＰＯ模倣ペプチドに加えて、オキシトシンから誘導された還元ペプチドを、カフェインまたはカフェイン類似物質（上記式を参照のこと）を用いて環化された。反応の実施の際、オキシトシン、還元型（ＯｙｘＲ）、生の生成物を水（すなわち、H2O/ACN/TFA)に溶かし、種々の濃度のカフェイン（および適宜GSSG）とともに空気中に放置した。反応物は、ＯｘｙＲおよび生成物オキシトシン（Ｏｘｙ）について含量を確認するためにＨＰＬＣで規則的な間隔で測定した。図１０〜１２までに示す表およびそれに添付されるグラフは、結果についてまとめた概観を示す。認識されるように、生成物の収率は、ペプチド濃度で補正される。少量のペプチドは、オキシトシンにおいてよりよい結果をもたらす。ＯｘｙＲの完全な変換にいたるまでの反応時間は、反応溶液中のカフェインの濃度によって補正した。０．５ｍｇ／ｍｌカフェインの濃度までは、カフェインがより多くなると、酸化の速度は速くなる。ペプチド濃度は、単に、反応の長さに少しの影響があるだけである。ＧＳＳＧは、速度にも収率にも影響がないようであった。ＨＰＬＣで精製したＯｘｙＲは、自発的に「正しく」速く環化する。しかし、反応速度は、カフェインを用いると、さらに明らかに短縮される。少量のＡＣＮ／ＴＦＡは、収率に少し効果があり、反応時間はいくらか長くなる。
【図１３】示されるのは、ペプチドBB57の、物質ミノキシジルを用いた環化の結果である。
【化２４Ａ】
2009520739.tif 000047
これに対して、０．７ｍｇ  ＢＢ５７および０．３ｍｇミノキシジル（６−（１−ピペリジニル）−２，４−ピリミジンジアミン３−オキシド、Ｍｉｎｏｘ）を１ｍｌの蒸留水中で溶解し、そして空気中で放置した。ＢＢ５７の酸化形態ＢＢ５７Ｃへの変換は、ＨＰＬＣ（２１６ｎｍでのＵＶ検出）によって観察した。結果を図１３に示す。図１３に示されるように、ミノキシジルの存在下での酸化は、およそ２９時間後の終了させた（カフェインを用いた比較測定においては、およそ２４時間であった）。したがって、ミノキシジルは、本発明に従うヘテロ環化化合物のさらなる因子として、同様に、ジスルフィド架橋の形成に対して正の作用を示す。ミノキシジル触媒反応の溶液中の収率は、９５％を超える。触媒で行った反応について、この反応において、ミノキシジルの濃度は、実用的には減少しなかったことが示された（ＢＢ５７に対する４．４当量のミノキシジルの場合減少≦２％、図１４を参照のこと。）
【図１４】示されるのは、ペプチドBB57の、物質ミノキシジルを用いた環化の結果である。
【化２４Ｂ】
2009520739.tif 000048
これに対して、０．７ｍｇ  ＢＢ５７および０．３ｍｇミノキシジル（６−（１−ピペリジニル）−２，４−ピリミジンジアミン３−オキシド、Ｍｉｎｏｘ）を１ｍｌの蒸留水中で溶解し、そして空気中で放置した。ＢＢ５７の酸化形態ＢＢ５７Ｃへの変換は、ＨＰＬＣ（２１６ｎｍでのＵＶ検出）によって観察した。結果を図１３に示す。図１３に示されるように、ミノキシジルの存在下での酸化は、およそ２９時間後の終了させた（カフェインを用いた比較測定においては、およそ２４時間であった）。したがって、ミノキシジルは、本発明に従うヘテロ環化化合物のさらなる因子として、同様に、ジスルフィド架橋の形成に対して正の作用を示す。ミノキシジル触媒反応の溶液中の収率は、９５％を超える。触媒で行った反応について、この反応において、ミノキシジルの濃度は、実用的には減少しなかったことが示された（ＢＢ５７に対する４．４当量のミノキシジルの場合減少≦２％、図１４を参照のこと。）
【図１５】図１５は、網化高分子の生成のためのジスルフィド架橋のための可能な結合戦略を示す。このような構成単位は、しばしば、ダイナミックコンビナトリアルライブラリーとしての用途が見出される。
【図１６】以前にパーマネント処理に関して還元された毛髪が、本発明に従う物質（ここでは、カフェイン）およびさらなる酸化剤（ここでは、酸化グルタチオンＧＳＳＧ）との組み合わせで、空気の不存在下で加速酸化を終了させることを実証するために、さらに試験を行った。したがって、本発明の方法に従って有利な方法において、化粧分野で、特に理髪業の分野において、毛髪の処置のために、使用される。試験は、以下のように行った。５−６ｍｇの毛髪を、４００μｌのアンモニウムチオグリコレート含有「Ｗｅｌｌローション」の１０％溶液（製品名「Poly Lock - starkeDauerwelle」Schwarzkopf &Henkel, Germany)を０．５時間、室温で処理した。この溶液を取り除き、毛髪をおよそ６倍それぞれ４００μｌのＨ２Ｏで洗浄した。このように処理した毛髪サンプルをそれぞれ、ａ）Ｈ２Ｏおよびｂ）１０ｍｇ／ｍｌカフェインの水溶液中で、３）水中の５ｍｇ／ｍｌ  ＧＳＳＧおよびｄ）１０ｍｇ／ｍｌおよび５ｍｇ／ｍｌＧＳＳＧを室温で３日間にわたり処理した。遊離のまだ残るチオール基を確認するために、毛髪を、Ｅｌｌｍａｎｓ試薬（５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）、ＤＴＮＢ）を用いて反応溶液から分離して、変換した。さらなる参照サンプルとして、処理していない毛髪およびそれ以外はさらなる処理を受けていない還元した毛髪を使用した。これに加え、毛髪サンプルは、それぞれ２００μｌの１００ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ８．０および１ｍＭ  ＥＤＴＡおよび３００μｌの１ｍＭ  ＤＴＮＢ溶液を同じＥＤＴＡ含有緩衝液に加えた。この溶液は、数分後、ＵＶ−Ｖｉｓスペクトルメーターで測定した。サンプルのＵＶ−Ｖｉｓスペクトルによると、アンモニウムチオールグリコレート含有「Ｗｅｌｌローション」を用いた毛髪の還元が成功であったことが示された（図２９を参照。曲線ｅおよびｆは、一度も処理していないおよび一度還元処理した毛髪を示す。）。これは、４１２ｎｍの帯域にて認知でき、これは、遊離のチオール基についての尺度すなわちサイズである。空気の存在下での、ａ）Ｈ２Ｏでの、ｂ）カフェイン含有溶液での、ｃ）ＧＳＳＧ含有溶液での処理は、それぞれ一部チオール基の参加が達成される。しかし、これまでに認知されているように、カフェインは、ジスルフィド架橋の終了に正の効果を有する。ｄ）カフェインおよび酸化剤ＧＳＳＧの組み合わせは、それでもなお、毛髪におけるチオール基のほぼ定量的な酸化を実現する。したがって、この試みは、本発明の方法で、毛髪に対しても、ジスルフィド架橋の終了が成功することができることが示される。
【図１７】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図１８】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図１９】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図２０】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図２１】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図２２】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図２３】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図２４】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図２５】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図２６】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図２７】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図２８】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図２９】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図３０】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図３１】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図３２】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図３３】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図３４】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図３５】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図３６】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図３７】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図３８】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図３９】参照ペプチドＢＢ５７を種々の物質を用いて環化した結果を示す。ここでは、本発明にしたがって、ジスルフィド架橋の形成が促進されうる。
【図１】
2009520739.tif 000056
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2009520739.tif 000060
【図６】
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【図７】
2009520739.tif 000062
【図８】
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【図９】
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【図１０】
2009520739.tif 000065
【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
2009520739.tif 000077
【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
2009520739.tif 000080
【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
2009520739.tif 000083
【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【国際調査報告】
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