(57)【要約】放射線治療による抗癌作用を増強する。  放射線耐性に関与する遺伝子群を同定することに成功し、また、これら群のなかから特定の遺伝子に着目して、当該遺伝子産物の阻害剤を併用することにより、放射線治療効果の増強・副作用の軽減を可能にすることを見いだした。放射線治療効果増強剤は、線維芽細胞増殖因子レセプター３（ＦＧＦＲ３）阻害剤を有効成分とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
線維芽細胞増殖因子レセプター３（ＦＧＦＲ３）阻害剤を有効成分とする放射線治療効果増強剤。
【請求項２】
上記ＦＧＦＲ３阻害剤は、ＦＧＦＲ３の自己リン酸化を阻害する物質であることを特徴とする請求項１記載の放射線治療効果増強剤。
【請求項３】
上記ＦＧＦＲ３阻害剤は、Ｎ−２−［［４−（ジエチルアミノ）ブチル］アミノ−６−（３，５−ジメトキシフェニル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル］−Ｎ’−（１，１−ジメチルエチル）ウレアであること特徴とする請求項１記載の放射線治療効果増強剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＦＧＦＲ３遺伝子阻害剤の放射線照射併用による放射線の抗癌作用増強法および副作用軽減法に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌治療の一環として、Ｘ線やγ線といった放射線による電離作用を利用して悪性腫瘍を制御する放射線療法が知られている。放射線療法は、癌の局所に線量を集中し、かつ周囲正常組織への線量を少なくし、合併症なく癌を根治することを目的としている。根治的放射線療法だけでなく、緩和・対症療法としても放射線療法は有効である。いずれにしても上記の目的を達成するために、症例ごとに、照射野、照射法、線量分割法、併用療法などを含めた適切な放射線治療計画がたてられる。放射線治療計画をたてるにあたっては、患者の年齢、一般状態（ＰＳ）、原発巣、病期、病理組織型、病巣の進展範囲、リスク臓器の位置、根治的か対症・姑息的か、過去に行われた治療内容、合併症の有無などの点を考慮する。
放射線治療の副作用としては、射線冶療している期間における副作用（急性放射線障害）と放射線治療終了後しばらくしてから生じる副作用（晩発性放射線障害）がある。具体的には、症例毎にも異なるが、一般的な副作用（急性放射線障害）として倦怠感、皮膚の変化、及び食欲不振が挙げられる。また、一般的な副作用（晩発性放射線障害）としては、照射される範囲内に消化管が含まれる場合における消化管出血が挙げられる。
ところで、ＦＧＦＲファミリーは、結合性、組織での分布の点で分類されている。ＦＧＦＲタンパクは、細胞外領域にあり、３個の免疫グロブリン様ドメイン、細胞質チロシンキナーゼ、疎水性シグナルから構成されている。線維芽細胞増殖因子レセプター３（ＦＧＦＲ３）は、軟骨細胞の増殖および分化を抑制することが明らかとなっている。また、ＦＧＦＲ３の活性型変異は、低身長を示す軟骨形成不全症である軟骨無形成症や致死性骨異形成症を発症することが知られている。また、ＦＧＦＲ３変異に起因して頭蓋骨癒合症を示す症例も報告されている
また、ＦＧＦＲ３遺伝子については扁平上皮癌、膀胱がん及び肝細胞癌での発現上昇、また、多発性骨髄腫にて過剰発現させると、アポトーシス抑制及び増殖亢進の報告がある。
【発明の開示】
【０００３】
ところが、放射線治療の奏功とＦＧＦＲ３遺伝子の発現との相関関係、並びにＦＧＦＲ３阻害剤存在下における放射線治療への影響といったことは知られていない。そこで、本発明は、上述した実情に鑑み、放射線治療による抗癌作用を増強できる放射線治療効果増強剤併用放射線療法を提供することを目的とする。
上述した目的を達成するため、本発明者らが鋭意検討した結果、放射線耐性に関与する遺伝子群を同定することに成功し、また、これら群のなかから特定の遺伝子に着目して、当該遺伝子産物の阻害剤を併用することにより、放射線治療効果の増強・副作用の軽減を可能にすることを見いだし、本発明を完成するに至った。
本発明は以下を包含する。
（１）線維芽細胞増殖因子レセプター３（ＦＧＦＲ３）阻害剤を有効成分とする放射線治療効果増強剤。
（２）上記ＦＧＦＲ３阻害剤は、ＦＧＦＲ３の自己リン酸化を阻害する物質であることを特徴とする（１）記載の放射線治療効果増強剤。
（３）上記ＦＧＦＲ３阻害剤は、Ｎ−２−［［４−（ジエチルアミノ）ブチル］アミノ−６−（３，５−ジメトキシフェニル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル］−Ｎ’−（１，１−ジメチルエチル）ウレアであること特徴とする（１）記載の放射線治療効果増強剤。
また、本発明は、癌の治療方法を包含する。
すなわち、本発明に係る癌の治療方法は、放射線治療対象患者に対して、線維芽細胞増殖因子レセプター３（ＦＧＦＲ３）阻害剤を有効成分とする組成物を投与する工程を含む。
ここで、上記ＦＧＦＲ３阻害剤としては、ＦＧＦＲ３の自己リン酸化を阻害する物質を使用することが好ましく、特に、Ｎ−２−［［４−（ジエチルアミノ）ブチル］アミノ−６−（３，５−ジメトキシフェニル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル］−Ｎ’−（１，１−ジメチルエチル）ウレアを使用することがより好ましい。ＦＧＦＲ３阻害剤の投与方法及び投与経路としては、特に限定されない。また、上記患者に対する放射線治療は、ＦＧＦＲ３阻害剤の投与の前でもよいし、ＦＧＦＲ３阻害剤の投与と同時でも良いし、ＦＧＦＲ３阻害剤の投与の後でもよい。
本発明に係る癌の治療方法において、治療対象となる癌は特に限定されないが、例えば、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、胆嚢癌、腎臓癌、前立腺癌、乳癌、食道癌、肝臓癌、口腔癌、結腸癌、大腸癌、子宮癌、胆管癌、膵島細胞癌、副腎皮質癌、膀胱癌、精巣癌、睾丸腫瘍、甲状腺癌、皮膚癌、悪性カルチノイド腫瘍、悪性黒色腫、骨肉腫、軟部組織肉腫、神経芽細胞腫、ウィルムス腫瘍、網膜芽細胞腫、メラノーマ及びグリオーマ等を挙げることができる。
本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願２００８−０６６４４３号の明細書および／または図面に記載される内容を包含する。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
図１は、扁平上皮癌細胞株ＨＳＣ２、ＨＳＣ３、ＨＳＣ４、Ｃａ９−２２、ＯＫ９２及びＨＯ−１−ｕ−１の生存率とＸ線照射量との関係を示す特性図である。
図２は、放射線耐性株（ＨＳＣ２）において放射線感受性株（ＨＳＣ３）と比較して５倍以上の発現が観察された遺伝子群として１６７遺伝子についてパスウェイ解析を行った結果として得られた３つのネットワークを示す特性図である。
図３は、図２に示したネットワークを癌機能でさらに絞り込んだ結果として得られたネットワークを示す特性図である。
図４は、放射線照射量及び照射後経過時間とＦＧＦＲ３遺伝子の発現量との関係を示す特性図である。
図５は、ＦＧＦＲ３遺伝子に対するｓｉＲＮＡによるＦＧＦＲ３遺伝子の発現阻害を示す特性図（Ａ）及びタンパク質発現量を示す写真である。
図６は、ＦＧＦＲ３の阻害剤であるＰＤ１７３０７４を投与した時の、放射線耐性株におけるＸ線感受性増強効果を示す特性図である。
図７は、ＦＧＦＲ３の阻害剤であるＰＤ１７３０７４を投与した時の、放射線に対して中程度の耐性を示す細胞株におけるＸ線感受性増強効果を示す特性図である。
図８は、ＦＧＦＲ３の阻害剤であるＰＤ１７３０７４を投与した時の、放射線感受性株におけるＸ線感受性増強効果を示す特性図である。
図９は、マウス移植放射線耐性癌に対するＦＧＦＲ３阻害剤であるＰＤ１７３０７４の投与及びＸ線照射を併用した時の、腫瘍細胞の増殖抑制効果を示す特性図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
以下、本発明に係る放射線治療効果増強剤に関して詳細に説明する。本発明において放射線治療効果を増強させることができる放射線治療は、例えば、Ｘ線、ガンマ線、電子線、陽子線、ヘリウム線、炭素イオン線、ネオンイオン線、アルゴンイオン線、シリコンイオン線、負パイ中間子線、中性子線等の放射線を、患者における腫瘍に対し直接的に、又は分割的（例えば、１日に数分間、１〜２ヶ月間にわたって複数回）に照射する治療方法である。
また、放射線治療において、放射線の初期エネルギーは、患者等の腫瘍の大きさ、状態若しくは部位またはその周辺の状況等に応じて適宜選択することができるが、通常、約１００〜５００ＭｅＶ／ｎであり、好ましくは約２００〜３００ＭｅＶ／ｎであり、最も好ましくは約２９０ＭｅＶ／ｎである。また、患者等への放射線の照射量は、患者等の腫瘍の大きさ、状態若しくは部位またはその周辺の状況等に応じて適宜選択することができるが、通常、約０．１〜１００Ｇｙであり、好ましくは約１〜１０Ｇｙであり、最も好ましくは約５Ｇｙであり、また、患者等への放射線の照射割合は、通常、約０．０５〜５０Ｇｙ／分であり、好ましくは約０．５〜１０Ｇｙ／分であり、最も好ましくは約３Ｇｙ／分である。さらに、放射線が組織に対して与えるエネルギー（ｌｉｎｅａｒ  ｅｎｅｒｇｙ  ｔｒａｎｓｆｅｒ：ＬＥＴ）は、患者の腫瘍の大きさ、状態または部位等に応じて適宜選択することができるが、通常、約５０〜７０ｋｅＶ／μｍであり、好ましくは約５０〜６０ｋｅＶ／μｍであり、最も好ましくは約５０ｋｅＶ／μｍである。
放射線治療による治療対象の腫瘍としては、特に限定されないが、例えば、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、胃癌、胆嚢癌、腎臓癌、前立腺癌、乳癌、食道癌、肝臓癌、口腔癌、結腸癌、大腸癌、子宮癌、胆管癌、膵島細胞癌、副腎皮質癌、膀胱癌、精巣癌、睾丸腫瘍、甲状腺癌、皮膚癌、悪性カルチノイド腫瘍、悪性黒色腫、骨肉腫、軟部組織肉腫、神経芽細胞腫、ウィルムス腫瘍、網膜芽細胞腫、メラノーマまたはグリオーマ等が挙げられる。
本発明に係る放射線治療効果増強剤は、上述したような放射線治療における治療効果を増大することができる。したがって、本発明に係る放射線治療効果増強剤は、上述したような放射線治療における治療効果を増大できることから、放射線の線量を低減しても高い治療効果を期待できる。
本発明に係る放射線治療効果増強剤は、線維芽細胞増殖因子レセプター３（ＦＧＦＲ３）阻害剤を有効成分とするものである。これは、放射線耐性を示す患者群においては、放射線感受性を示す患者群と比較してＦＧＦＲ３遺伝子の発現亢進が認められ、ＦＧＦＲ３遺伝子産物であるＦＧＦＲ３の活性を阻害することによって放射線感受性を増強できるといった新規知見に基づいている。また、本発明は、放射線に対して中程度の耐性を示す患者、放射線に対して感受性を示す患者においても、ＦＧＦＲ３遺伝子産物であるＦＧＦＲ３の活性を阻害することによって放射線感受性を更に一層増強できるといった新規知見にも基づいている。
ＦＧＦＲ３Ｂ阻害剤とは、ＦＧＦＲ３のシグナル伝達を有意に阻害する物質である。本発明において、ＦＧＦＲ３Ｂ阻害剤としては、ＦＧＦＲ３Ｂのシグナル伝達を有意に低減させることができれば、特に限定されず如何なる物質を使用しても良い。また、本発明において、ＦＧＦＲ３阻害剤とは、ＦＧＦＲ３遺伝子の発現量を低下させる物質、ＦＧＦＲ３遺伝子のｍＲＮＡを阻害する物質、ＦＧＦＲ３遺伝子をタンパク質レベルで阻害する物質等を挙げることができる。また、ＦＧＦＲ３阻害剤としては、ＦＧＦＲ３阻害薬として現在、臨床的に使用されている公知の物質を使用することができる。
特に、本発明においてＦＧＦＲ３阻害剤としては、従来公知のＦＧＦＲ３阻害剤を使用することが好ましい。従来公知のＦＧＦＲ３阻害剤は、例えば、Ｎ−２−［［４−（ジエチルアミノ）ブチル］アミノ−６−（３，５−ジメトキシフェニル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル］−Ｎ’−（１，１−ジメチルエチル）ウレア、すなわちＰＤ１７３０７４を挙げることができる。ＰＤ１７３０７４のＩＣ５０は５ｎＭであり、ＦＧＦＲ３発現細胞でＧ０／Ｇ１期のセルサイクルを阻害し、ＦＧＦＲ３の自己リン酸化を阻害することが知られている。また、ＰＤ１７３０７４のＦＧＦＲ３に対する選択性は、ＶＥＧＦレセプターやＩＧＦ−１レセプター、ＭＡＰＫｓよりも１００倍程度高いことが知られている。
また、ＰＤ１７３０７４については、細胞透過性のピリドピリミジン化合物であることが知られている。ＰＤ１７３０７４は、ＦＧＦ及びＶＥＧＦ受容体に対して、強力かつ可逆的なＡＴＰ競合阻害剤として作用（ＦＧＦＲ１に対するＩＣ５０＝２１．５μＭ）することが知られている。また、ＰＤ１７３０７４は、非常に高い濃度でのみＰＤＧＦＲ及びｃ−Ｓｒｃを阻害し（それぞれ、ＩＣ５０＝１７．６μＭ及び１９．８μＭ）、ＥＧＦＲ、ＩｎｓＲ、ＭＥＫ及びｃＰＫＣに対しては５０μＭの高濃度でもほとんど影響しないことが知られている。さらに、ＰＤ１７３０７４は、ＮＩＨ３Ｔ３細胞においてｉｎ  ｖｉｔｒｏで内在性のＦＧＦＲ１（ＩＣ５０＜５μＭ）と過剰発現されたＶＥＧＦＲ２（ＩＣ５０＜２００μＭ）の自己リン酸化を阻害し、マウスｉｎ  ｖｉｖｏでＦＧＦおよびＶＥＧＦ誘導性の血管新生を阻害することが示されている。ＰＤ１７３０７４については、Ｋｏｚｉｃｚａｋ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．２００４．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２３，３５０１．Ｔｒｕｄｅｌ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．２００４．Ｂｌｏｏｄ  １０３，３５２１．Ｓｋａｐｅｒ，Ｓ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．２０００．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．７５，１５２０．Ｍｏｈａｍｍａｄｉ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．１９９８．ＥＭＢＯ  Ｊ．１７，５８９６．を参照することができる。
また、ＦＧＦＲ３Ｂ阻害剤としては、ＰＤ１７３０７４以外にもＣＨＩＲ２５８、ＳＵ５４０２、ＰＲＵ−００１、ＰＫＣ４１２といった従来公知の化合物を使用することができる。
また、ＦＧＦＲ３阻害剤としては、ＦＧＦＲ３遺伝子に対するｓｉＲＮＡ（ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ）、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、これらのＲＮＡを生成することができるすべてのベクターＤＮＡなどが含まれる。このような核酸は、ＦＧＦＲ３遺伝子の発現を阻害又は抑制することができる。
ＦＧＦＲ３阻害剤として使用するｓｉＲＮＡは、ＦＧＦＲ３遺伝子に対応するｍＲＮＡ（すなわち、該遺伝子によってコードされるｍＲＮＡ）又はその選択的スプライス型ｍＲＮＡに相補的な配列を含む小さな二本鎖ＲＮＡであり、ＲＮＡ−ヌクレアーゼ複合体（ＲＮＡ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ  ｃｏｍｐｌｅｘ又はＲＩＳＣ）の形成を介して該ｍＲＮＡ又はその選択的スプライス型ｍＲＮＡが選択的にプロセシングされる。
また、ｓｉＲＮＡは、その前駆体である二本鎖ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）から、細胞内ＲＮアーゼであるダイサー（Ｄｉｃｅｒ）によるプロセシングを介して誘導されてもよい。ｓｈＲＮＡは、ｓｉＲＮＡのセンス鎖配列とアンチセンス鎖配列との間にループを有する二本鎖ＲＮＡであり、好ましくはその３’末端に１〜６個、好ましくは２〜４個のポリＵからなるオーバーハングを含む。ｓｈＲＮＡは、ＲＮアーゼＩＩＩファミリーに属するダイサーによってｓｉＲＮＡにプロセシングされたのち、ｓｉＲＮＡが一本鎖化され、そのセンス鎖ＲＮＡがＲＮアーゼＨと複合体（ＲＩＳＣ）を形成し、これによってｓｉＲＮＡ配列に相補的な配列を持つ標的ｍＲＮＡが切断され、その結果、ＦＧＦＲ３遺伝子の発現が抑制される。
したがって、上記ｓｉＲＮＡ及びその前駆体ｓｈＲＮＡはいずれも、本発明におけるＦＧＦＲ３阻害剤として使用することができる。
本発明のｓｉＲＮＡを体内に導入するときには、ｓｉＲＮＡを患部に直接注入するか、又はｓｉＲＮＡの発現が可能なベクターを使用することが好ましい。或いは、ｓｉＲＮＡ又はベクターを、リポソーム、例えばリポフェクタミン、リポフェクチン、セルフェクチン及びその他の正電荷リポソーム（例えば、正電荷コレステロール）、又はマイクロカプセル、と複合体形成し、これを使用することもできる（例えば、中西守ら，蛋白質  核酸  酵素，４４巻１１号，４８〜５４頁，１９９９年；Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５９：４３２５−４３３３，１９９９；Ｗｕら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９，１９８７）。細胞膜が負電荷を帯びているため、正電荷リポソームが好ましく使用されるが、正電荷リポソーム−核酸複合体はエンドサイトーシスにより細胞内に取り込まれたのち核酸は細胞質又は核へ移行すると推定される。或いは、治療用核酸を粒径約５００ｎｍ以下のナノ粒子中に封入することもできる。ナノ粒子として、例えばＢ型肝炎ウイルスエンベロープＬ粒子から形成されるホローナノ粒子（ｈｏｌｌｏｗ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ）が例示され、核酸は、エレクトロポレーションによってこの粒子内に封入され、この場合、核酸封入粒子は肝臓に送達されうる（Ｔ．Ｙａｍａｄａら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ２１（８）：８８５−８９０，２００３）。核酸をリポソーム中に封入するときには、核酸を硫酸プロタミンで処理して凝縮を起こし核酸−タンパク質複合体としたのち、正電荷脂質又は高分子ミセル中に封入することもできる。
リポソーム−核酸複合体は、例えば逆相蒸発法（Ｆ．Ｓｚｏｋａら，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，６０１：５５９，１９８０）、ボルテックス振とう法、カルシウム融合−ＥＤＴＡキレート法（金田安史，実験医学２２巻１４号（増刊），１４７〜１５２頁，２００４年）などの公知の方法によって製造できる。
本発明で使用可能な核酸として、前記ｓｉＲＮＡ又はその前駆体をコードするＤＮＡ配列をプロモーターの調節下に含む発現ベクターが含まれる。発現ベクターの１つの例は、ヘアピン型ベクターである。このベクターは、前記センス鎖ＲＮＡ配列と前記アンチセンス鎖ＲＮＡ配列とが一本鎖ループ配列を介して共有結合されているヘアピン型ＲＮＡをコードするＤＮＡを含み、ここで該ＤＮＡは、細胞内で転写により該ヘアピン型ＲＮＡを形成し、ダイサーによりプロセシングされて前記ｓｉＲＮＡを形成するベクターである。ｓｉＲＮＡをコードするヘアピン型ＤＮＡの３’末端には、転写停止シグナル配列として、或いはオーバーハングのために、１〜６個、好ましくは１〜５個のＴからなるポリＴ配列、例えば４個又は５個のポリＴ配列が連結される。ベクターＤＮＡから転写されたｓｉＲＮＡ前駆体としてのショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）は、そのアンチセンス鎖の３’末端に２〜４個のＵからなるオーバーハングを有することが望ましく、オーバーハングの存在によって、センス鎖ＲＮＡ及びアンチセンス鎖ＲＮＡはヌクレアーゼによる分解に対して安定性を増すことができる。ヒトには内在性のダイサーが１つ存在し、これが長鎖ｄｓＲＮＡや前駆体マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）をそれぞれｓｉＲＮＡと成熟ｍｉＲＮＡに変換する役割をもつ。
プラスミドベクターは一般に、上記ｓｉＲＮＡをコードするＤＮＡ配列及びプロモーターの他に、薬剤耐性遺伝子（例えば、ネオマイシン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、ピューロマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子など）、転写停止配列、ユニーク制限部位もしくはマルチプルクローニングサイト、複製開始点などを含むことができる。
ウイルスベクターは、たとえばアデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター（白血病ウイルスベクターなど）、ヘルペスウイルスベクターなどを使用することができる。ウイルスベクターは、ヒトに使用する際に疾病を引き起こさないように例えば自己複製能を欠損したタイプのものが好ましい。たとえばアデノウイルスベクターの場合には、Ｅ１遺伝子及びＥ３遺伝子を欠失した自己複製能欠損型アデノウイルスベクター（例えばＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社のｐＡｄｅｎｏ−Ｘ）を使用することができる。ウイルスベクターの構築は、文献記載の方法を利用することができる（米国特許第５２５２４７９号、国際公開ＷＯ９４／１３７８８など）。
本発明のプラスミドベクターは、例えばリポフェクタミン、リポフェクチン、セルフェクチン、正電荷コレステロールなどの正電荷リポソームと複合体を形成しカプセル化された状態で患者の体内に導入することができる（中西守ら，上記；Ｗｕら，上記）。また、ウイルスベクターは患部に導入し細胞感染させることによって細胞内に遺伝子導入することができる（Ｌ．Ｚｅｎｄｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２００３），１００：７７７９７−７８０２；Ｈ．Ｘｉａら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．（２００２），２０：１００６−１０１０；Ｘ．Ｆ．Ｑｉｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２００３），１００：１８３−１８８；Ｇ．Ｍ．Ｂａｒｔｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．，Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２００２），９９：１４９４３−１４９４５；Ｊ．Ｄ．Ｈｏｍｍｅｌら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．（２００３），９：１５３９−１５４４）。特にアデノウイルスベクター又はアデノ随伴ウイルスベクターは種々の細胞種に非常に高い効率で遺伝子導入可能であることが確認されている。このベクターはまた、ゲノム中に組み込まれることがないため、その効果は一過性であり安全性も他のウイルスベクターと比べて高いと考えられる。
また、ＦＧＦＲ３阻害剤として使用するアンチセンス核酸は、ＦＧＦＲ３遺伝子に対応するｍＲＮＡの配列、又はその部分配列に相補的な配列を含むＲＮＡ又はＤＮＡのいずれかである。前記部分配列は、ＦＧＦＲ３遺伝子又はｍＲＮＡの配列において連続する約３０以上、５０以上、７０以上、１００以上、１５０以上、２００以上又は２５０以上から全長以下のヌクレオチドからなる配列を含むことができる。
アンチセンス核酸のヌクレオチドは、天然のヌクレオチドに加えて、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素又はヨウ素）、メチル、カルボキシメチル又はチオ基などの基を有する修飾ヌクレオチドを含むことができる。アンチセンス核酸は、周知のＤＮＡ／ＲＮＡ合成技術又はＤＮＡ組換え技術を用いて合成することができる。ＤＮＡ組換え技術によって合成する場合、ＦＧＦＲ３遺伝子の塩基配列を含むベクターＤＮＡを鋳型にして、増幅しようとする配列を挟み込むプライマーを用いてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行って標的配列を増幅し、必要に応じてベクター中にクローニングして、アンチセンスＤＮＡを生成することができる。或いは、このようにして得られた増幅標的配列を有するＤＮＡをベクターに挿入し、該ベクターを真核又は原核細胞に導入し、その転写系を利用してアンチセンスＲＮＡを得ることができる。
本発明のアンチセンス核酸は、それがＤＮＡであってもＲＮＡであっても、ＦＧＦＲ３遺伝子又は対応のｍＲＮＡに結合することによって、転写又は翻訳を阻害又は抑制することができる。本発明のアンチセンス核酸を患者に送達するために、アンチセンス核酸を、上述したように正電荷リポソームに封入してもよいし、或いはアンチセンス核酸を、例えば強力なｐｏｌ  ＩＩ又はｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターの調節下にあるようにベクター（上述のプラスミド又はウイルスベクター）に組み込んでもよい。
さらに、ＦＧＦＲ３阻害剤として使用するリボザイムは、触媒活性をもつＲＮＡであり、標的とするＦＧＦＲ３遺伝子に対応するｍＲＮＡを切断する活性を有している。この切断によってＦＧＦＲ３遺伝子の発現が阻害又は抑制される。リボザイムの切断可能な標的配列は、一般にはＮＵＸ（Ｎ＝Ａ，Ｇ，Ｃ，Ｕ；Ｘ＝Ａ，Ｃ，Ｕ）、例えばＧＵＣトリプレットを含む配列であることが知られている。リボザイムには、ハンマーヘッド型リボザイムが含まれる。ハンマーヘッド型リボザイムは、センサー部位を構成するヌクレオチド配列、センサー部位にＲＮＡが結合したときのみ安定にＭｇ２＋イオンを捕捉する空洞を形成しうる領域を含むヌクレオチド配列、及び標的ＲＮＡの切断部位周辺の配列に相補的である領域を含むヌクレオチド配列を含むことができる。
本発明のリボザイムを患者に送達するために、リボザイムをリポソーム（好ましくは、正電荷リポソーム）に封入する、アデノ随伴ウイルスなどのウイルスベクターに組み込むなどの方法によってドラッグデリバリー系を構築することができる。
リボザイムは、それが発現可能なようにベクターに組み込むことができる。リボザイムを発現するためのプロモーターには、ｐｏｌ  ＩＩ又はｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターが含まれる。好ましいプロモーターは、ｐｏｌ  ＩＩＩプロモーター、例えば哺乳動物由来のｔＲＮＡプロモーター、より好ましくはｔＲＮＡＶａｌプロモーターである。
さらにまた、ＦＧＦＲ３阻害剤として使用する抗体は、ＦＧＦＲ３遺伝子によってコードされるＦＧＦＲ３タンパク質又はその変異体のインビボ機能を阻害もしくは抑制する抗体又はその機能断片を意味する。ＦＧＦＲ３タンパク質に対する抗体としては、モノクローナル抗体、組換え産生抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、二重特異抗体及び合成抗体を挙げることができる。また、当該抗体の機能断片としては、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖなどが含まれる。
本発明での使用に適する好ましい抗体は、アナフィラキシーによる副作用を全く又はほとんど起こさないヒト抗体又はヒト化抗体、特にヒト又はヒト化モノクローナル抗体である。また、抗体のクラス、サブクラスは任意のタイプのものでよい。例えば、抗体のクラスとしてＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＥ，ＩｇＤ，ＩｇＡが含まれ、サブクラスとしてＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，ＩｇＧ４，ＩｇＡ１，ＩｇＡ２が含まれる。抗体はまた、ペグ化、アセチル化、グリコシル化、アミド化などによって誘導体化されていてもよい。
ヒト抗体は、例えばファージディスプレイライブラリー（ｐｈａｒｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｌｉｂｒａｒｙ）法（Ｔ．Ｃ．Ｔｈｏｍａｓら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３３：１３８９−１４０１，１９９６）又はヒト抗体産生マウスを用いる方法（Ｉ．Ｉｓｈｉｄａら，Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  ４：９１−１０２，２００２）によって製造できる。
ヒト抗体産生マウスは、例えば、ヒト人工染色体にヒト抗体産生遺伝子を含むヒト染色体断片を導入したのち、ミクロセル法を用いて例えばマウス胚性幹細胞ゲノムに人工染色体を組み込み、仮親マウスの子宮に移植し、キメラマウスを出産し、雌雄のキメラマウスの交配によって、ヒト抗体遺伝子を含み、したがってヒト抗体の産生が可能である、ホモ型の子孫マウスを作出するなどの方法によって作製することができる。このヒト抗体産生トランスジェニックマウスに、ＦＧＦＲ３タンパク質を抗原として免疫したのち、脾臓を摘出し、この脾臓細胞とマウスミエローマ細胞とを融合してハイブリドーマを形成し、目的のモノクローナル抗体を選抜することができる。
患者への抗体又はその断片の送達は、単独か又は例えばリポソーム（好ましくは、正電荷リポソーム）、マイクロカプセル又はナノ粒子中に抗体又はその断片を封入した形態で、通常は適当な担体（賦形剤又は希釈剤）と組み合わせて、非経口経路（例えば、静脈内投与又は局所投与）にて行うことができる。
以上のＦＧＦＲ３阻害剤は、放射線治療が必要と診断された患者に対して放射線治療と併用投与することによって、放射線治療による抗癌作用を大幅に増強することができる。したがって、従来、放射線治療の効果が低かった癌腫症例に対しても、放射線療法による抗癌効果が期待できる。また、ＦＧＦＲ３阻害剤は、放射線への耐性度を低下させることから、照射する放射線の線量を少なくしながらも従来と同等以上の治療効果を期待することが可能となる。よって、放射線療法に起因する副作用を軽減し、または全身状態等の理由から放射線治療の非適応症例にも応用が可能となり、当該患者にとって有効な治療法を提供することができる。
なお、ＦＧＦＲ３阻害剤は、放射線療法に先立って患者に投与されることが好ましい。ＦＧＦＲ３阻害剤は、あらゆる適切な経路で投与できる。好適な経路としては、経口、直腸内、鼻腔内、局所（口腔内および舌下を含む）、膣内、および非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、髄腔内および硬膜外を含む）が挙げられる。また、ＦＧＦＲ３阻害剤は、例えば、腫瘍が存在する組織に直接投与若しくは局所投与することもできるし、また静脈、動脈、皮下、筋肉内または腹腔内等に投与することもできる。また、核磁気共鳴撮像又はコンピューター断層撮影等の当該技術分野で利用できる任意の機器を使用して腫瘍を撮影して、例えば、定位注射により直接投与することもできる。
ここで、ＦＧＦＲ３阻害剤を投与することによって放射線治療の効果を増強するためには、ＦＧＦＲ３阻害剤投与量を１０〜１００ｍｇ／ｍ２（体表面積）とすることができ、好ましくは１０〜５０ｍｇ／ｍ２（体表面積）、より好ましくは２０〜５０ｍｇ／ｍ２（体表面積）とすることができる。
以下、実施例を用いて本発明を詳細に説明するが、本発明に係る技術的範囲は以下の実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【０００６】
＜放射線感受性細胞株と放射線耐性細胞株の選別＞
（放射線感受性試験）
放射線感受性の異なる細胞株を選別するために、扁平上皮癌細胞株ＨＳＣ２、ＨＳＣ３、ＨＳＣ４、Ｃａ９−２２、ＯＫ９２及びＨＯ−１−ｕ−１に対して、Ｘ線を２Ｇｙ、４Ｇｙ及び６Ｇｙ照射し、生存曲線を作成した。その結果、放射線耐性株としてＨＳＣ２を、また、放射線感受性株としてＨＳＣ３を選別した。（図１）
＜放射線感受性細胞株と放射線耐性細胞株における遺伝子発現状態の比較＞
（マイクロアレイ解析）
放射線耐性株及び放射線感受性株を用いたマイクロアレイ解析によって、耐性株において特異的に発現増強している遺伝子を同定した。マイクロアレイとして５４６７５種類のプローブが固定化されたＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  Ｕ１３３  Ｐｌｕｓ  ２．０を使用した。また、マイクロアレイ解析には、解析ソフトウェアとしてＧｅｎｅＣｈｉｐ  Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  １．１（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ社製）及びＧｅｎｅＳｐｒｉｎｇ  ６．１（Ｓｉｌｉｃｏｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ社製）を使用した。
その結果、放射線耐性株（ＨＳＣ２）において放射線感受性株（ＨＳＣ３）と比較して５倍以上の発現が観察された遺伝子群として１６７遺伝子を同定した。これらの遺伝子群は放射線耐性株において特異的に発現増強している遺伝子群であり、扁平上皮癌細胞における放射線耐性関連遺伝子と考えられた。
＜放射線耐性遺伝子の絞込み＞
（パスウェイ解析およびＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＲＴ−ＰＣＲ法による解析）
マイクロアレイ解析にて絞り込まれた放射線耐性に関連する遺伝子として同定された１６７個の遺伝子についてパスウェイ解析を行い、１６７個の遺伝子で如何なるネットワークが形成されるかを検討した。具体的に、パスウェイ解析には、ソフトウェアとしてＩｎｇｅｎｕｉｔｙ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（Ｉｎｇｅｎｕｉｔｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ社製）を使用した。その結果、１６７個の遺伝子のうち４０個の遺伝子が３つのネットワークを形成しており、これら３つのネットワークが更に大きな１つのネットワークを形成していることが判明した（図２）。一方、１６７遺伝子を機能的な観点から分類すると、癌に関する機能の遺伝子がもっとも有意に関係していることがわかり、癌機能に関するネットワークを形成すると、１６７個の遺伝子のうち２５個の遺伝子が癌機能に関するネットワークを形成しており、その２５遺伝子は先ほどのパスウェイ解析から得られた４０個の遺伝子の中にすべて含まれていた。つまり、この２５遺伝子は、扁平上皮癌細胞において放射線耐性に強く関連する遺伝子と考えられた（図３）。
これらマイクロアレイ解析、パスウェイ解析にて絞り込まれた２５遺伝子のうちから、遺伝子発現阻害剤の明らかな遺伝子としてＦＧＦＲ３遺伝子を選び出した。耐性株（ＨＳＣ２）と感受性株（ＨＳＣ３）におけるＦＧＦＲ３遺伝子のｍＲＮＡ発現状態を、Ｘ線照射線量と照射後経過時間に関して、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＲＴ−ＰＣＲ法により確認した（図４）。図４ＡにはＸ線照射線量とｍＲＮＡ発現量との関係を示し、図４ＢにはＸ線照射後経過時間とｍＲＮＡ発現量との関係を示した。図４Ａ及びＢに示したように、ＨＳＣ３株に比較してＨＳＣ２耐性株でＸ線照射条件下で常にＦＧＦＲ３遺伝子の発現上昇が確認できた。
＜ＦＧＦＲ３遺伝子の遺伝子学的機能解析＞
（ｓｉＲＮＡによるＦＧＦＲ３遺伝子発現の抑制）
ＦＧＦＲ３遺伝子が高発現している放射線耐性株ＨＳＣ２を用いて、ｓｉＲＮＡを導入してＸ線耐性の変動を検討した。導入試薬には、ＤｈａｍａＦＥＣＴ（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ社）を使用した。ＨＳＣ２にＦＧＦＲ３遺伝子のｓｉＲＮＡ（（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ社）を導入し、９６時間後に、２００個／４ｍｌ  ｍｅｄｉｕｍ／ｄｉｓｈ（０、２又は４Ｇｙ）、４００個／４ｍｌ  ｍｅｄｉｕｍ／ｄｉｓｈ（６Ｇｙ）、８００個／４ｍｌ  ｍｅｄｉｕｍ／ｄｉｓｈ（８Ｇｙ）の割合でそれぞれ３枚ずつの６ｃｍディッシュに細胞を移した。その２４時間後にＸ線を照射し、８〜１０日間インキュベートした後にｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｓｓａｙにて細胞の生存率を評価した。ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｓｓａｙは８〜１０日間インキュベート後の６ｃｍディッシュの細胞にクリスタルバイオレット溶液（メタノール２５％添加）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）にて細胞を染色固定した。各ディッシュの生存細胞コロニー（５０個以上の細胞からなるもの）数をカウントし、３枚のディッシュの細胞の、（平均生存細胞コロニー数）／（１ディッシュに撒いた細胞数）をｐｌａｔｉｎｇ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙとし、各線量照射後のｐｌａｔｉｎｇ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙを０Ｇｙのｐｌａｔｉｎｇ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙで割った値を生存率（Ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ  ｆｒａｃｔｉｏｎｓ）としグラフにプロットした。コントロールには無処理の細胞、ｓｉＲＮＡＡを含まない導入試薬のみを添加した細胞（Ｖｅｈｉｃｌｅ）、ｎｏｎ−ｔａｒｇｅｔ  ｓｉＲＮＡ（ｓｉＮＴ）を用いた。生存率をプロットした結果を図５Ａに示した。図５Ａに示すように、ＦＧＦＲ３遺伝子に対するｓｉＲＮＡを導入した細胞では、コントロール群に比較してＸ線への耐性が低下した。ＦＧＦＲ３遺伝子の発現を抑制することにより、Ｘ線に対する感受性が増加したと考えられた。また、タンパク発現状態をＷｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇで観察した結果を図５Ｂに示した。図５Ｂから判るように、ＦＧＦＲ３遺伝子に対するｓｉＲＮＡ導入細胞においてはＦＧＦＲ３遺伝子タンパクの発現が抑制されていることが確認できた。この結果ＦＧＦＲ３遺伝子は放射線耐性遺伝子と考えられた。
＜ＦＧＦＲ３遺伝子発現阻害剤による放射線増強効果−−ｉｎ  ｖｉｔｒｏ＞
（ＦＧＦＲ３阻害剤とＸ線併用による癌殺傷能力増強）
ＦＧＦＲ３の阻害剤であるＰＤ１７３０７４（ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ社）について、Ｘ線と併用することにより放射線耐性株ＨＳＣ２に対して併用作用を示すかｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて検討した。また、放射線感受性株ＨＳＣ３及び放射線に対して中程度の耐性を示すＣａ９−２２（図１参照）についても、ＰＤ１７３０７４とＸ線との併用効果を検討した。
阻害剤の溶媒として、ＤＭＳＯを使用し阻害剤を溶解した。実験ではｍｅｄｉｕｍ中のＤＭＳＯ濃度が、０．１％以下になるよう調整し、阻害剤を混合した。阻害剤の濃度は、５ｎＭ、１０ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭ又は１００ｎＭとした。
実験は、放射線耐性株ＨＳＣ２、ＨＳＣ３又はＣａ９−２２を６ｃｍディッシュに２００個／４ｍｌ  ｍｅｄｉｕｍ／ｄｉｓｈ（０、２又は４Ｇｙ）、４００個／４ｍｌ  ｍｅｄｉｕｍ／ｄｉｓｈ（６Ｇｙ）、８００個／４ｍｌ  ｍｅｄｉｕｍ／ｄｉｓｈ（８Ｇｙ）の割合でまき、翌日に阻害剤をそれぞれの濃度で添加したｍｅｄｉｕｍを混合した。その１〜２時間後にＸ線を照射し、８〜１０間培養したものをｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｓｓａｙで評価した。ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｓｓａｙは８〜１０日間インキュベート後の６ｃｍディッシュの細胞にクリスタルバイオレット溶液（メタノール２５％添加）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社）にて細胞を染色固定した。各ディッシュの生存細胞コロニー（５０個以上の細胞からなるもの）数をカウントし、３枚のディッシュの細胞の、（平均生存細胞コロニー数）／（１ディッシュに撒いた細胞数）をｐｌａｔｉｎｇ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙとし、各線量照射後のｐｌａｔｉｎｇ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙを０Ｇｙのｐｌａｔｉｎｇ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙで割った値を生存率（Ｃｌｏｎｏｇｅｎｉｃ  ｆｒａｃｔｉｏｎｓ）としグラフにプロットした。阻害剤は、０．１％以下のＤＭＳＯに溶解しているため、コントロールには０．１％のＤＭＳＯを添加したものと無処理のＨＳＣ２、ＨＳＣ３又はＣａ９−２２細胞を用いた。生存率をプロットした結果を図６〜８に示した。図６は放射線耐性株ＨＳＣ２について行った結果であり、図７は放射線に対して中程度の耐性を示すＣａ９−２２について行った結果であり、図８は放射線感受性株ＨＳＣ３について行った結果である。図６から判るように、ＦＧＦＲ３阻害剤を投与することによってＦＧＦＲ３の機能を阻害した場合には、放射線耐性株におけるＸ線に対する感受性が増加したと考えられた。また、図７に示したように、放射線に対して中程度の耐性を示す細胞株においてもＸ線に対する感受性が増加したと考えられた。さらに、図８に示したように、放射線感受性株においてもＸ線に対する感受性がより増加したと考えられた。
＜ＦＧＦＲ３遺伝子発現阻害剤による放射線増強効果−−ｉｎ  ｖｉｖｏ＞
ＦＧＦＲ３の阻害剤であるＰＤ１７３０７４（ｓｉｇｍａ−ａｌｄｒｉｃｈ社）について、Ｘ線と併用することにより放射線耐性株ＨＳＣ２に対して併用作用を示すかｉｎ  ｖｉｖｏにおいて検討した。動物実験に際しては、Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｏｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ（ＣＣＡＣ）の基準に準じて行った。マウスは全例♀で、４週齢で購入し６週齢より実験に供した。先ず、ＨＳＣ２株を５×１０６となるように調製し、２９Ｇ針（マイジェクター：ＴＥＲＵＭＯ）を用いてマウスの右太腿皮下に接種した。マウスを観察しながら飼育し、腫瘍径径が８〜９ｍｍになったところでＸ線照射及びＦＧＦＲ３阻害剤の投与を開始した。
ＦＧＦＲ３阻害剤は２５ｍｇ／ｋｇをマウス腹腔内に投与した。ＦＧＦＲ３阻害剤の投与から２時間後、Ｘ線（４Ｇｙ）照射を開始した。ＦＧＦＲ３阻害剤の投与とＸ線（４Ｇｙ）照射とを１日一回、５日間行った。また、何も処置していない群、ＦＧＦＲ３阻害剤の投与のみ行った群、Ｘ線（４Ｇｙ）照射のみ行った群を比較対象とした。
結果を図９に示す。図９において、“ｃｏｎｔｒｏｌ”は何も処置していない群（ｎ＝５）を示し、“ＰＤ１７３０７４”はＦＧＦＲ３阻害剤の投与のみ行った群（ｎ＝５）を示し、“４Ｇｙ”はＸ線（４Ｇｙ）照射のみ行った群（ｎ＝５）を示し、“ＰＤ１７３０７４＋４Ｇｙ”はＦＧＦＲ３阻害剤の投与とＸ線（４Ｇｙ）照射を併用した群（ｎ＝５）を示している。図９に示した結果から、ＦＧＦＲ３阻害剤の投与とＸ線（４Ｇｙ）照射を併用した場合、ＦＧＦＲ３阻害剤投与或いはＸ線（４Ｇｙ）照射を単独で行った場合と比較して、腫瘍細胞の増殖を有意に抑制できることが明らかとなった。特に、ＦＧＦＲ３阻害剤の投与とＸ線（４Ｇｙ）照射を併用した場合の腫瘍細胞の増殖抑制効果は、ＦＧＦＲ３阻害剤投与或いはＸ線（４Ｇｙ）照射を単独で行った場合における腫瘍細胞の増殖抑制効果から予測できない程に顕著であった。
＜結果のまとめ＞
最初に（マイクロアレイ解析）の結果から、シスプラチン耐性に関連する遺伝子として信頼性の高い１６７個の遺伝子を同定した。マイクロアレイ解析で絞り込んだ１６７個の遺伝子に対して（パスウェイ解析およびＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＲＴ−ＰＣＲ法による解析）の結果から、Ｘ線耐性に関連する遺伝子として更に信頼性の高い２５個の遺伝子を絞り込んだ。その２５個の遺伝子群に対して、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ＲＴ−ＰＣＲ法にてｍＲＮＡの発現確認を行い、耐性株で高発現しおり、阻害剤が存在するＦＧＦＲ３遺伝子を選び出した。
さらに、ＦＧＦＲ３遺伝子が高発現している耐性株ＨＳＣ２を用いて、（ｓｉＲＮＡによるＦＧＦＲ３遺伝子発現の抑制）を試みた。ｓｉＲＮＡを導入した耐性株では、コントロール群に比較してＸ線への耐性が低下した。ＦＧＦＲ３遺伝子の発現を抑制することにより、Ｘ線に対する感受性が増加したと考えられた。
また化学物質によるＦＧＦＲ３の機能抑制を確認した。ＦＧＦＲ３阻害剤とＸ線併用による耐性株への効果を確認するため、まずＦＧＦＲ３遺伝子の阻害剤であるＰＤ１７３０７４を使用し、耐性株ＨＳＣ２に対するＸ線との併用作用を検討した。その結果として、ＦＧＦＲ３阻害剤を投与することによってＸ線に対する感受性を向上させるといった効果が認められた。また、放射線耐性株ではないその他の扁平上皮癌細胞株についても、ＦＧＦＲ３阻害剤を投与することによってＸ線に対する感受性を向上させるといった効果が認められた。
さらに、ｉｎ  ｖｉｖｏの実験結果から、ＦＧＦＲ３阻害剤の投与とＸ線照射の併用による腫瘍細胞の増殖抑制が動物実験レベルで実証された。
これらの結果から、ＦＧＦＲ３遺伝子は重要なＸ線耐性遺伝子であることが明らかとなった。さらにＦＧＦＲ３阻害剤であるＰＤ１７３０７４とＸ線を併用することにより、Ｘ線の作用が増強されることが認められた。
【産業上の利用可能性】
【０００７】
本発明に係る放射線治療効果増強剤によれば、放射線療法による抗癌効果を増強することができる。したがって、本発明に係る放射線治療効果増強剤を使用することによって、例えば低い線量での放射線治療が可能となり、患者への負担を軽減した治療方法を提供することができる。また、本発明に係る放射線治療効果増強剤を使用することによって、例えば低い線量での放射線治療が可能となり、放射線療法による副作用を軽減することができる。さらに、放射線耐性を有する腫瘍に対する放射線治療効果を上げることにより、放射線治療耐性を克服した有効な治療効果を得ることができる。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
【図１】
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【図４】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図２】
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【図３】
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【図５】
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【国際調査報告】
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