(57)【要約】  本発明は、血小板が関与する一次止血の段階や血液凝固因子が関与する凝固血栓形成の段階における血液凝固反応を阻害することにより、遊離した血栓を確実に捕獲し、かつ、その使用可能時間を延長することを可能にする遊離血栓捕獲器具を提供することを目的としている。本発明は、抗トロンビン能を有する化合物が表面に固定化された遊離血栓捕獲器具、及び、この遊離血栓捕獲器具で生体内における血液中の遊離血栓を捕獲することを含む遊離血栓の捕獲方法を提供する。
2012176841.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗トロンビン能を有する化合物が表面に固定化されている、遊離血栓捕獲器具。
【請求項２】
抗トロンビン能を有する化合物と、高分子化合物との結合物が表面に固定化されている、請求項１記載の遊離血栓捕獲器具。
【請求項３】
前記高分子化合物は、エチレングリコール、酢酸ビニル、ビニルピロリドン、プロピレングリコール、ビニルアルコール及びシロキサンからなる群から選択される少なくとも１種のモノマーに由来する単位から構成される、請求項２記載の遊離血栓捕獲器具。
【請求項４】
前記高分子化合物は、ポリエーテル変性シリコーン、酢酸ビニル−ビニルピロリドン共重合体及び部分ケン化ポリビニルアルコールからなる群より選択される１種以上の化合物である、請求項２又は３記載の遊離血栓捕獲器具。
【請求項５】
前記高分子化合物が、アミノ−ポリエーテル変性シリコーンである請求項４記載の遊離血栓捕獲器具。
【請求項６】
前記抗トロンビン能を有する化合物は、下記の一般式（Ｉ）で示される化合物である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の遊離血栓捕獲器具。
【化１】
2012176841.tif 000011
［式中、Ｒ１は、（２Ｒ，４Ｒ）−４−アルキル−２−カルボキシピペリジノ基を表し、Ｒ２は、フェニル基又は縮合多環式化合物残基を表し、該縮合多環式化合物残基は、低級アルキル基若しくは低級アルコキシ基又は低級アルキル基で置換されたアミノ基で置換されていてもよい。］
【請求項７】
一般式（Ｉ）の化合物は、（２Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−１−（（２Ｓ）−２−｛［（３ＲＳ）−３−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−８−イル］スルホニル｝アミノ−５−グアニジノペンタノイル）ピペリジン−２−カルボン酸である、請求項６記載の遊離血栓捕獲器具。
【請求項８】
袋状のフィルター部を備え、該フィルター部が前記抗トロンビン能を有する化合物と前記高分子化合物との結合物によりコーティングされている、請求項１〜７のいずれか一項記載の遊離血栓捕獲器具。
【請求項９】
リング状部と、該リング状部を貫通する芯材部と、前記リング状部に開口端部を取着するとともに前記芯材部の先端側の一部に閉止端部を取着してなる袋状のフィルター部と、前記芯材部と前記リング状部との間に配設される支持線材部と、を備える、請求項８記載の遊離血栓捕獲器具。
【請求項１０】
前記フィルター部の素材は、ポリエステル、ポリアルキル（メタ）アクリレート、ポリウレタン、ポリ塩化ビニル及びポリカーボネートからなる群から選択される１種以上の化合物である、請求項８又は９記載の遊離血栓捕獲器具。
【請求項１１】
前記フィルター部の素材は、ポリエチレンテレフタレートである、請求項１０記載の遊離血栓捕獲器具。
【請求項１２】
前記フィルター部は、前記抗トロンビン能を有する化合物と前記高分子化合物との結合物によりコーティングされた後に放射線照射されている、請求項８〜１１のいずれか１項に記載の遊離血栓捕獲器具。
【請求項１３】
遊離血栓捕獲に用いられる請求項１〜１２のいずれか１項に記載の器具。
【請求項１４】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の器具で、生体内における血液中の遊離血栓を捕獲することを含む、遊離血栓の捕獲方法。
【請求項１５】
前記器具はカテーテル内に保持され、該カテーテルが血管に挿入される請求項１４記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、遊離血栓捕獲器具に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、大動脈疾患の治療には、動脈血管切開部より人体内に導入したカテーテルを通じて人工血管やステント等の各種デバイスを病変部に挿入・留置するといった、経皮的処置が採用されている。しかし、このような経皮的処置においては、脆くなった病変部の血管内壁から血栓が遊離して末梢側の細い血管を塞ぎ、その先の組織が壊死する危険性がある。さらには、特に頭部に延びる頸動脈に血栓が詰まれば、生命に関わる事態を生じかねない。【０００３】
このような危険性を回避するために、人工血管等の各種デバイスを留置すべき病変部よりも末梢側に経過的に留置して、血管から遊離した血栓を捕獲するための遊離血栓捕獲器具が開発されてきている（特許文献１）。遊離血栓捕獲器具は、遊離した血栓を捕獲するために、メッシュ素材等からなるフィルター部を備えている。【０００４】
血栓の形成に関与する血液凝固反応は、様々な血液凝固因子が関与する極めて複雑な反応であり、血小板が関与する一次止血の段階と、トロンビンのような血液凝固因子が関与してフィブリンを安定強化する凝固血栓形成の段階とが、特に重要であると考えられている。なお、血小板が関与する一次止血の段階と血液凝固因子が関与する凝固血栓形成の段階における双方の血液凝固反応を阻害できる具体的な化合物は開発されていない。【０００５】
血液凝固反応は、怪我等による出血を止血に導くために不可欠なものであるが、一方で、人工血管等の各種デバイスを用いた経皮的処置において血液と各種デバイス等との接触により血液凝固反応が進行した場合には、形成された血塊や凝固血栓によって血流が妨害される危険性もある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特許第４０７３８６９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、遊離血栓捕獲器具のフィルター部は遊離した血栓を確実に捕獲すべく、できる限り小さな孔を設けなければならないことから、血流が妨害されて滞留し、血液凝固反応が促進されてさらなる血流の妨害が生じるという悪循環に陥っているのが現状であった。このような背景から、たとえ患者の血液に抗凝固薬を持続的に投与したとしても、従来の遊離血栓捕獲器具の使用可能時間は極めて限られたものであった。抗凝固薬の一つであるヘパリンが表面にコーティングされた遊離血栓捕獲器具（Ｓｐｉｄｅｒ  ＦＸ；ｅｖ３社）も存在するが、これであっても使用可能時間は１時間以内である。このため、人工血管等の各種デバイスを用いる経皮的処置は短時間に完了される必要があり、経皮的処置を施す医師の負担が極めて大きいことから、遊離血栓捕獲器具の使用可能時間を延長するための、全く新規な手法が切望されていた。【０００８】
そこで本発明は、血小板が関与する一次止血の段階や血液凝固因子が関与する凝固血栓形成の段階における血液凝固反応を阻害することにより、遊離した血栓を確実に捕獲し、かつ、その使用可能時間を延長することを可能にする遊離血栓捕獲器具を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは上記課題を解決するため鋭意検討した結果、抗トロンビン能を有する化合物が表面に固定化された遊離血栓捕獲器具が、顕著な抗血液凝固作用を示し、かつ、抗トロンビン能を有する化合物が遊離血栓捕獲器具の表面に対し強固に固定化されていることを見出した。【００１０】
すなわち、本発明は、抗トロンビン能を有する化合物が表面に固定化された遊離血栓捕獲器具を提供する。また、本発明は、遊離血栓捕獲に用いられる上記本発明の器具を提供する。さらに本発明は、上記本発明の器具で、生体内における血液中の遊離血栓を捕獲することを含む、遊離血栓の捕獲方法を提供する。【００１１】
上記の抗トロンビン能を有する化合物は、高分子化合物、好ましくは、エチレングリコール、酢酸ビニル、ビニルピロリドン、プロピレングリコール、ビニルアルコール及びシロキサンからなる群から選択される少なくとも１種のモノマーに由来する単位から主として構成される高分子化合物と結合した結合物として、遊離血栓捕獲器具の表面に固定化されていることが好ましい。すなわち、本発明の遊離血栓捕獲器具は、上記の抗トロンビン能を有する化合物と、高分子化合物、好ましくは、エチレングリコール、酢酸ビニル、ビニルピロリドン、プロピレングリコール、ビニルアルコール及びシロキサンからなる群から選択される少なくとも１種のモノマーに由来する単位から主として構成される化合物とが結合した結合物が表面に固定化された、遊離血栓捕獲器具であることが好ましい。【００１２】
上記の抗トロンビン能を有する化合物は、下記の一般式（Ｉ）で示される化合物であることが好ましい。【００１３】
【化１】
2012176841.tif 000003
［式中、Ｒ１は、（２Ｒ，４Ｒ）−４−アルキル−２−カルボキシピペリジノ基を表し、Ｒ２は、フェニル基又は縮合多環式化合物残基を表し、該縮合多環式化合物残基は、低級アルキル基若しくは低級アルコキシ基又は低級アルキル基で置換されたアミノ基で置換されていてもよい。］【００１４】
上記の高分子化合物は、ポリエーテル変性シリコーン、酢酸ビニル−ビニルピロリドン共重合体及び部分ケン化ポリビニルアルコールから成る群より選ばれる少なくとも１種であることが好ましく、特にアミノ−ポリエーテル変性シリコーンが好ましい。【００１５】
上記の一般式（Ｉ）で示される化合物は、（２Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−１−（（２Ｓ）−２−｛［（３ＲＳ）−３−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−８−イル］スルホニル｝アミノ−５−グアニジノペンタノイル）ピペリジン−２−カルボン酸であることが好ましい。【００１６】
上記の遊離血栓捕獲器具は、袋状のフィルター部を備えることが好ましく、リング状部と、該リング状部を貫通する芯材部と、該リング状部に開口端部を取着するとともに上記芯材部の先端側の一部に閉止端部を取着してなる袋状のフィルター部と、上記芯材部と上記リング状部との間に配設される支持線材部と、を備えることがより好ましい。【００１７】
上記フィルター部の素材としては、ポリエステル、ポリアルキル（メタ）アクリレート、ポリウレタン、ポリ塩化ビニル及びポリカーボネートから成る群から選ばれる少なくとも１種であることが好ましく、ポリエチレンテレフタレートが特に好ましい。
【発明の効果】
【００１８】
本発明によれば、血小板が関与する一次止血の段階や血液凝固因子が関与する凝固血栓形成の段階における血液凝固反応を顕著に阻害する化合物がその表面に抗血液凝固活性を保持した状態で強固に固定化された遊離血栓捕獲器具を提供できる。また、本発明の遊離血栓捕獲器具によれば、遊離した血栓を確実に捕獲し、かつ、その使用可能時間を大幅に延長することが可能となり、人工血管等の各種デバイスを用いる経皮的処置を施す医師の負担を軽減できる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】作製したポリエチレンテレフタレート製メッシュに付着した血小板の相対比率を示す図である。
【図２】本発明における遊離血栓捕獲器具の一実施形態における、拡開状態を示す概略図である。
【図３】本発明における遊離血栓捕獲器具の一実施形態における、折り曲げ過程を示す概略図である。
【図４】本発明における遊離血栓捕獲器具の一実施形態における、折り曲げ状態を示す概略図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本明細書で使用する用語は、特に断りがない限り、下記の定義のとおりである。
【００２１】
「遊離血栓捕獲器具」とは、フィルターデバイスとも呼ばれる医療用具であって、遊離した血栓を捕獲するための、メッシュ素材等からなるフィルター部を備えるものをいう。
【００２２】
遊離血栓捕獲器具が備えるフィルター部としては、例えば、多数の孔が設けられたシートを袋状に形成したもの、又は、メッシュ状若しくはネット上に繊維を編みこんだシートを袋状に形成したものが挙げられる。
【００２３】
フィルター部の素材としては、例えば、ポリエチレンテレフタレート（以下、「ＰＥＴ」）のようなポリエステル、ポリテトラフルオロエチレン、セルロース、セルロースアセテート、ポリカーボネート、ポリスルホン（以下、「ＰＳｆ」）、ポリエーテルスルホン、ポリメタクリル酸メチル（以下、「ＰＭＭＡ」）等のポリアルキル（メタ）アクリレート（アルキル部分は好ましくは炭素数１〜４の低級アルキル基、特に好ましくはメチル）、ポリアミド、ポリフッ化ビニリデン、ポリ塩化ビニル、ポリアクリロニトリル、ポリウレタン、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリメチルペンテン又はポリイミドといった高分子材料が挙げられる。これらのうち、ポリエステル、ポリアルキル（メタ）アクリレート、ポリウレタン、ポリ塩化ビニル及びポリカーボネート、ポリテトラフルオロエチレンが好ましく、とりわけ、柔軟性や生体内安定性が高いことからポリエステル、特にＰＥＴが好ましい。これらの素材は単独で用いることもできるし、２種以上を組み合わせて用いることもできる。
【００２４】
フィルター部が、上記の高分子材料を素材とする有機繊維からなる場合には、フィルター部がより細く、またより折畳み易くなるよう、その繊維径は４０μｍ以下であることが好ましく、３５μｍ以下であることがより好ましく、３０μｍ以下であることがさらに好ましい。繊維径の下限は特に限定されないが、強度の観点から、繊維径は、通常、２０μｍ以上である。
【００２５】
フィルター部を構成する有機繊維は、モノフィラメント及びマルチフィラメントのいずれであっても構わないが、より平滑であって血液凝固反応を活性化しづらいことから、モノフィラメントであることが好ましい。
【００２６】
また、フィルター部の素材としては、耐久性や形状保持性が高いことから、ステンレス又はニッケル−チタン合金等の金属を用いても構わない。金属をフィルター部の素材として用いた場合には、金属に吸着もしくは結合可能なカップリング剤などを用いるか、金属の表面に上記の高分子材料を被覆する等の措置によって、血液凝固反応を顕著に阻害する、上記の結合物を強固に固定化することが可能である。
【００２７】
遊離血栓捕獲器具のより具体的な構成としては、例えば、一本の柔軟性のあるワイヤをループ状に曲げてその両端部を束ねて搬送用ワイヤに固定するとともに、このリング状のワイヤに袋状のフィルター部の開口端部を取り付けた構成や、複数の柔軟性のあるワイヤを紡錘状にしてそれらの両端部を搬送用ワイヤ上の長手方向二カ所に固定し、各ワイヤの長手方向中間部に袋状のフィルター部の開口端部を取着するとともに先端部に袋状部の閉じた先端部を取着した構成、又は、図２〜図４に示すような、折り曲げ自在な弾性復元力を有する柔軟な線材からなる略円形状をなすリング状部１２と、このリング状部１２を貫通する可撓変形可能な線状の芯材部１１と、リング状部１２に開口端部の全周を取着するとともに芯材部１１の先端側の一部に閉止端部を取着してなる多孔性かつ袋状部のフィルター部１３と、フィルター部１３の閉止端部よりも基端側の芯材部１１上の一部とリング状部１２との間に配設される可撓変形可能な線状の部材からなる複数の支持線材部１４と、を備え、リング状部１２が、芯材部１１の先端側を向く複数の山と基端側を向く複数の谷とが交互に生じかつ山同士及び谷同士が近接した形状に折り曲げられた折り曲げ状態から当該リング状部自体の弾性復元力により略円形状の拡開状態となり、かつ、拡開状態にあるリング状部１２を、支持線材部１４に芯材部１１へ集束させる方向の外力を加えることにより生じる支持線材部１１の張力によって上記折り曲げ状態とするように構成（特許文献１；以下、当該構成を有する遊離血栓捕獲器具１を、「フィルターデバイスＡ」という）が挙げられる。
【００２８】
フィルターデバイスＡのような構成であれば、拡開したリング状部１２が支持線材部１４に支持されてその中心軸方向を血流方向とほぼ合致させることが容易であるため、簡素な構造であっても遊離した血栓をより末梢側に逃すことなくフィルター部１３内に安定かつ確実に捕獲することができる。また、リング状部１２が血管内壁に当接すると、その弾性により血管の収縮に追従して適度に撓むため、遊離した血栓を末梢側に逃すことなくフィルター部１３内に安定かつ確実に捕獲することができる。さらには、リング状部１２に直接外力を加えるか、あるいは支持線材部１４を緊張させたまま外力により芯材部１１に近付けると、リング状部１２が開口部を窄めて小さく折り曲げられるため、その折り曲げた状態でフィルターデバイスＡをカテーテル等に挿入して血管内の所定箇所へ好適に送出することができる一方で、フィルター部１３に血栓を捕獲した状態でリング状部１２を折り曲げて開口端部を窄め血栓を漏らすことなくフィルターデバイスＡごと回収することができる。
【００２９】
フィルターデバイスＡの芯材部１１としては、例えば、弾性復元力に優れるステンレス又はニッケルチタン合金製の細くしなやかなワイヤが挙げられる。この場合、複数のワイヤを一体的に接いだ構成のものであっても構わないが、１本のワイヤから構成したものが好ましい。
【００３０】
フィルターデバイスＡのリング状部１２としては、例えば、上記芯材部１１と同様の素材からなるワイヤを、直径４〜１２ｍｍ程度の円形リング状に形成したものが挙げられる。
【００３１】
フィルターデバイスＡのフィルター部１３としては、例えば、柔軟で張りのある三角形の多孔性シートを円錐形の袋状に形成してなるものが挙げられる。フィルター部１３に設けられる孔の大きさは、７０〜２００μｍであることが好ましいが、血液凝固反応を抑制しながら遊離血栓を捕獲する精度を高めるため、孔の大きさは均一であることがより好ましい。より具体的には、孔の大きさが平均値±２０％の範囲に揃えられていることが好ましい。
【００３２】
フィルター部の単位面積当たりに設けられた孔の面積の割合である開孔率は、血流の妨害を緩和するため、３０％以上が好ましく、４０％以上がより好ましく、５０％以上がさらに好ましい。開孔率は、当然１００％未満であるが、強度の観点から、開孔率は通常９０％以下である。
【００３３】
フィルターデバイスＡの支持線材部１４としては、例えば、芯材部１１と同一素材若しくは他の素材からなる金属性ワイヤ又は高分子材料製の糸若しくはワイヤ等の、強度を有し外力の作用でテンションが掛かる適宜の素材の線材が挙げられる。
【００３４】
「抗トロンビン能を有する化合物」とは、トロンビンとの結合親和性が高い化合物を意味する。
【００３５】
上記の抗トロンビン能を有する化合物としては、グアニジノ構造を有する化合物を有する化合物である上記した「一般式（Ｉ）で示される化合物」［式中、Ｒ１は、（２Ｒ，４Ｒ）−４−アルキル−２−カルボキシピペリジノ基を表し（アルキルは好ましくは低級アルキル）、Ｒ２は、フェニル基又は縮合多環式化合物残基を表し、該縮合多環式化合物残基は、低級アルキル基若しくは低級アルコキシ基又は低級アルキル基で置換されたアミノ基で置換されていてもよい。低級アルキルは炭素数１〜４のアルキル）が好ましく、（２Ｒ，４Ｒ）−４−メチル−１−（（２Ｓ）−２−｛［（３ＲＳ）−３−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−８−イル］スルホニル｝アミノ−５−グアニジノペンタノイル）ピペリジン−２−カルボン酸（以下、「アルガトロバン」）がより好ましい。アルガトロバンは、１９７８年に合成されたアルギニン誘導体の選択的抗トロンビン能を有する医薬化合物である。アルガトロバンは、抗血栓薬として市販されているので、市販品を利用することができる。ここで「抗トロンビン能を有する」とは、トロンビンとの結合親和性が高いことを意味するが、化合物の抗トロンビン能を評価する指標としては、例えば、被検溶液の吸光度値に基づきＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋ  ｐｌｏｔから算出される、阻害定数（以下、「Ｋｉ」）が挙げられる。Ｋｉは小さいほど、トロンビンとの結合親和性が高く、抗トロンビン能が高いことを示す。Ｋｉは、好ましくは１０μＭ以下、さらに好ましくは１μＭ以下であり、よりさらに好ましくは５００ｎＭ以下である。抗トロンビン能を有する化合物は、単独で用いることもできるし、２種以上を組み合わせて用いることもできる。
【００３６】
上記の抗トロンビン能を有する化合物は、高分子化合物、好ましくはエチレングリコール、酢酸ビニル、ビニルピロリドン、プロピレングリコール、ビニルアルコール及びシロキサンからなる群から選択される少なくとも１種のモノマーに由来する単位から主として構成される高分子化合物と結合した結合物として、遊離血栓捕獲器具の表面に固定化されていることが好ましい。ここで上記の抗トロンビン能を有する化合物と上記の高分子化合物とが結合した「結合物」は、その水溶液を調製する場合には、親水性であることが好ましい。また、「主として構成される」とは、高分子化合物を構成する全構成単位（繰り返し単位）の９０モル％以上、好ましくは９５モル％以上、さらに好ましくは９８モル％以上が、上記した単位により構成されていることを意味し、１０モル％以下、好ましくは５モル％以下、さらに好ましくは２モル％以下の含有量で本発明の効果に悪影響を与えない、上記以外の他の単位を含んでいてもよいことを意味する。さらに好ましくは、エチレングリコール、酢酸ビニル、ビニルピロリドン、プロピレングリコール、ビニルアルコール及びシロキサンからなる群から選択されるモノマーの共重合体であり、特にこれらのモノマーから選択される少なくとも２種のモノマーの共重合体である。高分子化合物の分子量は、特に限定されないが、通常、重量平均分子量で５，０００〜２，０００，０００程度、好ましくは１０，０００〜１，５００，０００程度である。
【００３７】
「親水性」とは、化合物が水溶性であるか、又は非水溶性であっても静電相互作用や水素結合により水分子と相互作用することを意味する。
【００３８】
上記の抗トロンビン能を有する化合物と結合して、上記の結合物を構成することが好ましい高分子化合物、とりわけ、「エチレングリコール、酢酸ビニル、ビニルピロリドン、プロピレングリコール、ビニルアルコール及びシロキサンからなる群から選択されるモノマーの共重合体」（以下、「抗血小板付着共重合体」）としては、例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリエーテルとポリシロキサンとからなる高分子化合物又はこれら高分子化合物のモノマーと、他のモノマーとの共重合体若しくはグラフト体が挙げられるが、親水性の高いポリエーテルとポリシロキサンからなる高分子化合物、部分ケン化ポリビニルアルコール又はビニルピロリドンと酢酸ビニルとの共重合体が好ましい。これらは、市販もされているので、市販品を用いることもできる。下記実施例で用いている各種市販品は、本発明で使用可能な高分子化合物の例である。また、これらは単独で用いることもできるし、２種以上を組み合わせて用いることもできる。
【００３９】
「ポリエーテルとポリシロキサンとからなる高分子化合物」としては、例えば、ポリエーテルとポリシロキサンとの共重合体、ポリマーコンプレックス又はポリマーブレンド物が挙げられる。ポリエーテルとポリシロキサンとの共重合体は、ポリエーテルユニットとポリシロキサンユニットとからなり、それらの共重合形態はランダム共重合体、ブロック共重合体又はグラフト共重合体のいずれであっても構わないが、中でも親水性の高いポリエーテル変性シリコーンが好ましい。
【００４０】
「ポリエーテル」とは、例えば、ポリエチレンオキサイド又はポリプロピレンオキサイド由来の構造が挙げられる。ここで、「ポリエーテル」とは、一般式（II）で示される構造（Ｒ３は、炭素数６以下のアルキル基を表す）をいい、ポリエーテルの一例である「ポリプロピレングリコール由来の構造」とは、一般式（III）で示される構造をいう。
【００４１】
【化２】
2012176841.tif 000004
【００４２】
【化３】
2012176841.tif 000005
【００４３】
「ポリエーテル変性シリコーン」とは、シリコーン鎖の側鎖にポリエーテルユニットが結合しているシリコーンをいうが、さらにアミノ変性やカルボキシ変性がされたポリエーテル変性シリコーンであっても構わない。アミノ変性やカルボキシ変性により付与されるアミノ基やカルボキシル基は、抗トロンビン能を有する化合物との共有結合に供することもできる。例えば、下記実施例で使用しているアミノ変性ポリエーテル変性シリコーン（Ｘ−２２−３９３９Ａ；信越化学社）は、市販されている親水性ポリエーテル変性シリコーンの好ましい１例である。
【００４４】
抗血小板付着共重合体が部分ケン化ポリビニルアルコールである場合、そのケン化度は、取扱い容易性又は親水性を好適なものとする観点から５０〜１００ｍｏｌ％未満であることが好ましく、７４〜９９．９ｍｏｌ％であることがより好ましく、７８〜９５ｍｏｌ％であることがさらに好ましい。ここで、「ケン化度」とは、式１で算出される数値をいう。
【００４５】
ケン化度  ＝  ｍ／（ｎ＋ｍ）×１００  ・・・・・・式１
ｍ  ：  ポリビニルアルコール中の、一般式（IV）で表される構造の数
ｎ  ：  ポリビニルアルコール中の、一般式（Ｖ）で表される構造の数
【００４６】
【化４】
2012176841.tif 000006
【００４７】
【化５】
2012176841.tif 000007
【００４８】
抗血小板付着共重合体がビニルピロリドンと酢酸ビニルとの共重合体である場合、取扱い容易性又は親水性を好適なものとする観点から、ビニルピロリドンユニットが５０ユニットモル％以上であることが好ましく、６０ユニットモル％以上であることがより好ましい。一方、遊離血栓捕獲器具に対する固定化量を好適なものとする観点から、ビニルピロリドンユニットは１００ユニットモル％未満が好ましい。なお、ビニルピロリドンと酢酸ビニルとの共重合体においてビニルピロリドンユニットが占める割合（ユニットモル％）は、共重合体を１Ｈ−ＮＭＲ測定（溶媒：ＣＤＣｌ３）することで算出できる。
【００４９】
抗トロンビン能を有する化合物と、上記高分子化合物との結合は、共有結合によることが抗トロンビン能を有する化合物の脱漏を防止する上で好ましい。この共有結合は、抗トロンビン能を有する化合物が有する遊離のアミノ基、カルボキシル基又は水酸基等の官能基と、高分子化合物が有するこれらの官能基との間でアミド結合やエステル結合を形成するカップリング反応を行うことにより容易に形成することができる。これらのカップリング反応は、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）等の周知の市販のカップリング剤を用いた常法により行うことができ、下記実施例にも具体的に記載されている。共有結合により抗トロンビン能を有する化合物を結合する場合、共有結合後でも抗トロンビン能が発揮される必要がある。共有結合後でも抗トロンビン能が発揮されるか否かは、共有結合後の結合物の抗トロンビン能を上記した方法で測定することにより調べることができる。抗トロンビン能を有する化合物が、上記した一般式（Ｉ）で表わされる化合物である場合、該化合物は、一般式（Ｉ）の左端に遊離のアミノ基を有し、Ｒ１中に遊離のカルボキシル基を有する。これらのアミノ基又はカルボキシル基は、下記実施例に記載の通り、これらを介して高分子化合物と結合した場合でも抗トロンビン能が引き続き発揮されることが確認されている。高分子化合物が、ポリエーテル変性シリコーンである場合には、アミノ変性又はカルボキシル変性したポリエーテル変性シリコーンを用い、これらのアミノ基又はカルボキシル基と、一般式（Ｉ）の化合物の遊離のカルボキシル基又はアミノ基との間でアミド結合又はエステル結合を形成することが可能である（下記実施例）。また、高分子化合物が、酢酸ビニル−ポリビニルピロリドン共重合体である場合には、酢酸ビニル単位中のカルボキシル基と、一般式（Ｉ）の化合物のアミノ基との間でアミド結合を形成することが可能である（下記実施例）。さらに、高分子化合物が、部分ケン化ポリビニルアルコールである場合には、一般式（Ｉ）の化合物のカルボキシル基と、ビニルアルコール単位中の水酸基との間でエステル結合を形成することが可能である（下記実施例）。
【００５０】
遊離血栓捕獲器具のフィルター部の表面における抗血小板付着共重合体の吸着量は、０．１ｐｇ／ｍｍ２以上が好ましく、１ｐｇ／ｍｍ２以上がより好ましく、１０ｐｇ／ｍｍ２以上がさらに好ましい。吸着量の上限値は特に限定されないが、吸着量は、通常１０ｎｇ／ｍｍ２以下である。
【００５１】
上記の吸着量は、以下の方法により測定される。まず、未処理のセンサーチップ（Ｓｅｎｓｏｒ  Ｃｈｉｐ  Ａｕ；ＧＥヘルスケア）を表面プラズモン共鳴装置（以下、「ＳＰＲ」）（ＢＩＡＣＯＲＥ３０００；ＧＥヘルスケア）で前処理（２５℃の蒸留水、流速２０μｌ／ｍｉｎ、１０分間）し、そのシグナル値（ＲＵ：ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｕｎｉｔ）を測定する。
【００５２】
遊離血栓捕獲器具のフィルター部の素材、すなわち被固定化素材を溶媒に溶解し、０．５重量％被固定化素材溶液を調製する。この被固定化素材溶液を、スピンコーターに取り付けた前処理済みのセンサーチップの金膜部分の中心へ１滴滴下し、室温下、直ちに３０００ｒｐｍで１分間回転させてセンサーチップに被固定化素材を被覆する。
【００５３】
センサーチップ上に液滴がないことを確認後、ＳＰＲでセンサーチップを蒸留水洗浄（２５℃、流速２０μｌ／ｍｉｎ、１０分間）してから、さらに０．０２５重量％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００溶液で３回洗浄（２５℃、流速２０μｌ／ｍｉｎ、１分間）し、洗浄終了から１０分後のシグナル値を測定する。
【００５４】
上記のようにして得たセンサーチップの内、スピンコート前後のシグナル値の差が３０００〜８０００の範囲にあるものを選別し、蒸留水で洗浄（２５℃、流速２０μｌ／ｍｉｎ、１０分間）してから、さらに０．０２５重量％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００溶液（２５℃、流速２０μｌ／ｍｉｎ、１分間）で３回洗浄する。
【００５５】
洗浄終了から１０分後に、遊離血栓捕獲器具に固定化する高分子化合物溶液（濃度：１００μｇ／ｍｌ）を注入（２５℃、流速２０μｌ／ｍｉｎ、１分間）し、蒸留水で洗浄（２５℃、流速２０μｌ／ｍｉｎ、３分間）する。注入開始直前のシグナル値（以下、「シグナル値Ａ」）と、注入終了から３分後のシグナル値（以下、「シグナル値Ｂ」）の差を求め、１ＲＵ＝１ｐｇ／ｍｍ２として換算する。
【００５６】
続けて蒸留水で洗浄（２５℃、流速２０μｌ／ｍｉｎ、２分間）をし、さらに０．０２５重量％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００溶液で３回洗浄（２５℃、流速２０μｌ／ｍｉｎ、１分間）をしてから、再び固定化する高分子化合物水溶液（濃度：１００μｇ／ｍｌ）を注入（２５℃、流速２０μｌ／ｍｉｎ、１分間）する。以降、同様の作業を繰り返し、計５回のシグナル差（シグナル値Ａとシグナル値Ｂの差）を求め、その平均値を、遊離血栓捕獲器具に対する抗血小板付着共重合体の吸着量とする。
【００５７】
上記の結合物を遊離血栓捕獲器具の表面へ固定化する方法としては、例えば、遊離血栓捕獲器具に上記の結合物を有効成分とする溶液（表面処理剤）を接触させておき、そこへ放射線を照射する方法、有機溶媒に溶解した上記の結合物を遊離血栓捕獲器具に塗布又は噴霧して乾燥させる方法が挙げられる。なお、照射する放射線の種類としては、電子線又はγ線が好ましい。器具の表面に接触させる高分子化合物溶液の濃度は抗トロンビン能を指標に決定する。抗トロンビン能の指標例としてアルガトロバン相当濃度が挙げられ、遊離血栓捕獲器具の表面に接触させる結合物溶液のアルガトロバン相当濃度は１０〜２００，０００重量ｐｐｍ程度、さらに好ましくは、５０〜１００，０００重量ｐｐｍ程度、よりさらに好ましくは、１，０００〜１００，０００重量ｐｐｍ程度である。また、上記の結合物は、遊離血栓捕獲器具の少なくともフィルター部に固定化することが好ましい。
本発明の遊離血栓捕獲器具は、使用時には生体の血管内に留置される。好ましくは、カテーテル内に保持され、該カテーテルが血管に挿入されることにより血管内に留置される。
【実施例】
【００５８】
以下、実施例を挙げて本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【００５９】
（実施例１：アミノ−ポリエーテル変性シリコーンとアルガトロバンとの結合）
アルガトロバン５ｍｍｏｌをナスフラスコに採り、脱水ジメチルホルムアミド（以下、「脱水ＤＭＦ」）を１０ｍＬ添加して溶解した後、ナスフラスコを氷冷しながら４Ｎ塩酸／１，４−ジオキサン（東洋化成株式会社）を１０ｍＬ滴下し、１時間撹拌した。次に、ロータリーエバポレーターで溶媒を留去し、さらに真空乾燥機中で一晩乾燥したものに脱水ＤＭＦを２５ｍＬ添加し、アルガトロバン塩酸塩／脱水ＤＭＦ溶液とした。【００６０】
表１に示す分量で二口フラスコにアルガトロバン塩酸塩／脱水ＤＭＦ溶液を採り、氷冷下で撹拌しながら、ジシクロヘキシルカルボジイミド（以下、「ＤＣＣ」）／脱水ＤＭＦ溶液及び４−ヒドロキシベンゾトリアゾール（以下、「ＨＯＢｔ」）／脱水ＤＭＦ溶液をそれぞれ添加し、さらにアミノ変性ポリエーテル変性シリコーン（Ｘ−２２−３９３９Ａ；信越化学社）を添加して室温で３日間反応させた。次に、反応液を透析チューブ（スペクトラポアＲＣ  ポア６  ＭＷＣＯ＝１０００）に入れ、反応液の１０倍体積量超の蒸留水中で適宜蒸留水を交換しながら３日間透析した。透析後の反応液を濾過し、濾液の溶媒をロータリーエバポレーターで留去してから真空乾燥機中で一晩乾燥させ、結合物（以下、「実施例１結合物」）を得た。【００６１】
（実施例１結合物の抗トロンビン能の測定）
測定には、ＥＣＡ−Ｔキット（ＨａｅｍｏＳｙｓ社）を使用した。実施例１結合物１００μＬに蒸留水９００μＬを添加し、実施例１結合物水溶液を調製した。実施例１結合物水溶液を３０μＬ採取し、ＥＣＡ  ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ  ｂｕｆｆｅｒ  １００μＬ及びＥＣＡ−Ｔ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ２５μＬを混合して３７℃で６０秒間インキュベートしてから装置（ＣＯＡＴＲＯＮ  Ｍ１（ｃｏｄｅ  ８０  ８００  ０００）；Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ社）にセットし、さらにＥＣＡ  ｅｃａｒｉｎ  ｒｅａｇｅｎｔ  ５０μＬを添加して測定を行った。【００６２】
エタノール／塩酸（体積比率４／１）混合溶媒を用いて任意の濃度に調製したアルガトロバン溶液２０μＬをヒト血漿８０μＬに混合したもの、又は、ブランクの蒸留水２０μＬをヒト血漿８０μＬに混合したものを、上記の実施例１結合物水溶液に代えてＥＣＡ−Ｔキットを用いてそれぞれ測定し、それらの結果から検量線を作成した。検量線に基づき算出した実施例１結合物水溶液のアルガトロバン相当濃度１４９４．３重量ｐｐｍを、実施例１結合物水溶液の抗トロンビン能を示す値とした。【００６３】
（実施例２〜１３）
アルガトロバン塩酸塩に対するＤＣＣ、ＨＯＢｔ及びポリエーテル変性シリコーン（Ｘ−２２−３９３９Ａ）のモル比並びにポリエーテル変性シリコーンに対する脱水ＤＭＦの体積比率を変更した点を除き、実施例１と同一の方法で実施例２〜１３化合物をそれぞれ得て、それらの抗トロンビン能を測定した。アルガトロバン塩酸塩に対する、ＤＣＣ、ＨＯＢｔ及びポリエーテル変性シリコーン（Ｘ−２２−３９３９Ａ）のモル比及び実施例２〜１３化合物それぞれの抗トロンビン能の測定結果を、表１に示す。【００６４】
【表１】
2012176841.tif 000008
【００６５】
なお、ポリエーテル変性シリコーン（Ｘ−２２−３９３９Ａ）についても同様に抗トロンビン能を測定したが、その値はブランクの蒸留水と変わらないものであり、ポリエーテル変性シリコーン自体は抗トロンビン能を有しないことが確認できた。【００６６】
（実施例１結合物のトロンビン阻害定数の測定）
ウシトロンビン液（伊藤ライフサイエンス）１００００Ｕを生理食塩水１ｍＬに溶解し、ウシトロンビン水溶液を調製した。【００６７】
Ｓ−２２３８ストック液（積水メディカル）２５ｍｇを蒸留水４０ｍＬに溶解し、Ｓ−２２３８ストック水溶液を調製した。【００６８】
希釈緩衝液（０．０５Ｍ  Ｔｒｉｓ，  ０．１Ｍ  ＮａＣｌ，１ｍｇ／ｍＬ  牛血清アルブミン（ＢＳＡ），ｐＨ  ７．４）を用いて、ウシトロンビン水溶液、Ｓ−２２３８ストック水溶液及び上記の実施例１結合物水溶液をそれぞれ希釈した。【００６９】
９６穴プレートに、Ｓ−２２３８ストック水溶液の希釈液１００μＬ及び実施例１結合物水溶液の希釈液５０μＬを分注し、シールをしてから３７℃に設定した恒温乾燥機で３０分間加温した。次に、３７℃で３０分間加温したウシトロンビン水溶液の希釈液をさらに５０μＬ分注し、直ちにマイクロプレートリーダ（測定波長４０５ｎｍ、参照波長５９５ｎｍ）でその吸光度を測定した。【００７０】
１回目の吸光度測定が終了した後、直ちに２回目の吸光度測定を行った。３回目以降の吸光度測定は、ウシトロンビン水溶液の希釈液の分注から４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０分後にそれぞれ行った。得られた各吸光度の値から、ＫｉをＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋ  ｐｌｏｔにより算出した。実施例１結合物のＫｉは、１１．２ｎＭであった。【００７１】
なお、ポリエーテル変性シリコーン（Ｘ−２２−３９３９Ａ）についても同様にＫｉを算出したが、抗トロンビン能を有しないポリエーテル変性シリコーンのＫｉは、やはりブランクと同じ値となった。【００７２】
さらに、アルガトロバンについても同様にＫｉを算出したところ、Ｋｉは３９．１ｎＭであり、実施例１結合物のＫｉと比較した場合、３倍以上の数値となった。【００７３】
これらの結果から、上記の結合物は、トロンビンとの結合親和性が極めて高く、遊離血栓捕獲器具に対し、抗トロンビン能を有することで知られるアルガトロバンを上回る顕著な抗トロンビン能を付与可能であることは明白である。【００７４】
（実施例１４：酢酸ビニル−ビニルピロリドン共重合体とアルガトロバンとの結合）
スクリュー瓶に、テトラヒドロフラン１４．９ｇ、酢酸ビニル１１．５ｇ、Ｎ−ビニルピロリドン１０．８ｇ、２−アミノエタンチオール０．０２８ｇ及びアゾビスイソブチロニトリル０．０１６ｇを採り、密閉してから超音波を１０分間照射した。スクリュー瓶を一旦開封してアルゴンガスを１０分間バブリングし、再び密閉後、撹拌しながら６０℃の湯浴に１時間、さらに７０℃の湯浴に６時間、スクリュー瓶を浸して、酢酸ビニルとビニルピロリドンとを共重合反応させた。この反応液にメタノール８０ｍＬを加えたものを、約５倍量のエーテル中に添加し、上澄みを除去した。新たにエーテルを加え、上澄みを除去するという洗浄作業を３回繰り返してから減圧乾燥をして、酢酸ビニル−ビニルピロリドン共重合体を得た。得られた酢酸ビニル−ビニルピロリドン共重合体を１Ｈ−ＮＭＲ測定（溶媒：ＣＤＣｌ３）したところ、ビニルピロリドンユニットは６０．６ユニットモル％であった。【００７５】
得られた酢酸ビニル−ビニルピロリドン共重合体３．５８ｇを、脱水ＤＭＦ２０ｍＬに溶解して、酢酸ビニル−ビニルピロリドン共重合体／脱水ＤＭＦ溶液を調製した。二口フラスコに、調製した酢酸ビニル−ビニルピロリドン共重合体／脱水ＤＭＦ溶液の全量及びアルガトロバン塩酸塩／脱水ＤＭＦ溶液（０．４９Ｍ）０．５ｍＬを採り、氷冷下で撹拌しながら、ＤＣＣ／脱水ＤＭＦ溶液（１．０４Ｍ）０．５ｍＬ及びＨＯＢｔ／脱水ＤＭＦ溶液（１．０２Ｍ）０．５ｍＬをそれぞれ添加し、窒素雰囲気下、室温で３日間反応させた。次に、反応液を透析チューブ（スペクトラポアＲＣ  ポア６  ＭＷＣＯ＝１０００）に入れ、反応液の１０倍体積量超の蒸留水中で適宜蒸留水を交換しながら３日間透析した。透析後の反応液を濾過し、濾液の溶媒をロータリーエバポレーターで留去してから真空乾燥機中で一晩乾燥させ、結合物（以下、「実施例１４結合物」）を得た。【００７６】
（実施例１４結合物の抗トロンビン能の測定）
実施例１結合物の抗トロンビン能の測定と同様の方法で、実施例１４結合物／メタノール溶液（濃度２０重量％）を測定し、算出した実施例１４結合物／メタノール溶液のアルガトロバン相当濃度１０４．１ｐｐｍを、実施例１４結合物／メタノール溶液の抗トロンビン能を示す値とした。【００７７】
（ＰＥＴ製メッシュへの実施例１結合物の固定化）【００７８】
Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ（同仁化学）及び塩化ナトリウムを最終濃度がそれぞれ０．２５Ｍ及び０．５Ｍとなるように超純水に溶解し、そこへ６Ｎ塩酸を滴下してｐＨ５に調整して、５倍濃度のＢｉｓ−Ｔｒｉｓ緩衝液を調製した。【００７９】
ＰＥＴ製メッシュ（繊維径：２７μｍ、メッシュサイズ：１００μｍ）を６ｃｍ角に成形した。また、アルガトロバン相当濃度５００００重量ｐｐｍの実施例１結合物、プロピレングリコール、５倍濃度のＢｉｓ−Ｔｒｉｓ緩衝液及び蒸留水を体積比率８／５０／２０／２２で混合し、処理液を得た。【００８０】
ポリプロピレン製遠沈管に、成形したＰＥＴ製メッシュを筒状に丸めて挿入し、５ｍＬの処理液を添加してから、４０℃の温浴中で超音波を１時間照射した後、さらに吸収線量２５ｋＧｙのγ線を３時間照射した。【００８１】
γ線照射後、遠沈管内の処理液を除去してから、１５ｍＬの０．０２５重量％ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル水溶液を添加し、１０分間振盪してＰＥＴ製メッシュを洗浄した。その後、遠沈管内の水溶液を除去してから、新たに１５ｍＬの０．０２５重量％ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル水溶液を添加し、さらに１０分間振盪するという洗浄操作を、３回繰り返した。続いて、それぞれ１５ｍＬの蒸留水及び生理食塩水を用いて、同様の洗浄操作を１０回ずつ繰り返し、実施例１結合物が固定化されたＰＥＴ製メッシュ（以下、「ＰＥＴ製メッシュＬ」）を作製した。【００８２】
上記の処理液に代えて、表２に示す体積比率で調製した処理液をそれぞれ用いた以外は、ＰＥＴ製メッシュＬの作製と同様の操作を行い、ＰＥＴ製メッシュＭ〜Ｐをそれぞれ作製した。【００８３】
【表２】
2012176841.tif 000009
【００８４】
上記の処理液に代えて、蒸留水を用いた以外は、ＰＥＴ製メッシュＬの作製と同様の操作を行い、ＰＥＴ製メッシュＱを作製した。【００８５】
（実施例１結合物の溶出量の測定）
６ｍｍ角に成形したＰＥＴ製メッシュＬを、ポリスチレンラウンドチューブ（Ｃｏｄｅ：３５２０５４；ＢＥＣＴＯＮ  ＤＩＣＫＩＮＳＯＮ社）に入れ、５ｍＬのヒト血漿を添加してから、４時間振盪した。振盪後のヒト血漿中の実施例１結合物濃度は、測定に用いたＥＣＡ−Ｔキットの検出限界以下であり、ＰＥＴ製メッシュＬからの実施例１結合物の溶出は確認されなかった。この結果は、上記の結合物は、遊離血栓捕獲器具に対し、強固な固定化が可能であることを示すものである。【００８６】
（抗血小板付着共重合体の固定化量評価）
上記の結合物を構成する、抗血小板付着共重合体の一つであるビニルピロリドン及び酢酸ビニルの共重合体（以下、「ＶＡ系共重合体」）として、ＰＶＰ（Ｋ−９０）、ＶＡ７３、ＶＡ６４、ＶＡ５５、ＶＡ３７（いずれもＢＡＳＦ社）を準備した。同じく、抗血小板付着共重合体の一つである部分ケン化ポリビニルアルコールとして、ＰＶＡ２１７、ＰＶＡ４１７、ＰＶＡ２０５ｃ（いずれもクラレ）を準備した。さらに、ポリエーテル変性シリコーンとしてＦ１１４、Ｆ２４４、Ｆ３０３、Ｆ３０３１、Ｆ３４８、Ｆ３５０ｓ、Ｆ５０２、Ｆ５０６、Ｘ−２２−３９３９Ａ（いずれも信越シリコーン社）を準備した。なお、準備したＶＡ系共重合体、部分ケン化ポリビニルアルコール及びポリエーテル変性シリコーンは、いずれも蒸留水で希釈して１００００重量ｐｐｍの水溶液を調製した。【００８７】
一方、比較対象として、上記の結合物を構成する、抗血小板付着共重合体には包含されない高分子化合物として、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ６０００、ＰＥＧ２００００（いずれもナカライテスク）及びＰＥＧメチルエーテル（ＰＥＧ−ｅｍ）、ＰＥＧジメチルエーテル（ＰＥＧ−ｄｍ）（いずれもシグマアルドリッチ）を準備した。なお、準備した高分子化合物は、いずれも蒸留水で希釈して１００００重量ｐｐｍの水溶液を調製した。【００８８】
アルガトロバンと上記したＶＡ系共重合体又はポリエーテル変性シリコーンとの結合、アルガトロバンと部分ケン化ポリビニルアルコールとの結合及びアルガトロバンとＰＥＧ２０００、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ６０００、ＰＥＧ２００００（いずれもナカライテスク）、ＰＥＧメチルエーテル（ＰＥＧ−ｅｍ）又はＰＥＧジメチルエーテル（ＰＥＧ−ｄｍ）との結合は、いずれも実施例１４又は実施例１と同様にして行った。【００８９】
抗血小板付着共重合体を固定化する被固定化素材の０．５重量％溶液として、ＰＭＭＡ（重量平均分子量９３０００；シグマアルドリッチ）／トルエン溶液、ポリウレタン／ジメチルアセトアミド溶液、ＰＳｆ（ソルベー社製ユーデル（登録商標）Ｐ−３５００）／ジメチルアセトアミド溶液、ポリ塩化ビニル（重量平均分子量８００００；シグマアルドリッチ）／テトラヒドロフラン溶液、ポリスチレン（Ｗａｋｏ）／クロロホルム溶液及びポリカーボネート（重量平均分子量２００００；帝人）／クロロホルム溶液をそれぞれ調製した。【００９０】
それぞれの被固定化素材に対する、種々の抗血小板付着共重合体の吸着量を測定した。結果を表３に示す。【００９１】
【表３】
2012176841.tif 000010
【００９２】
表３の結果から、上記の結合物を構成する、抗血小板付着共重合体は、ポリエーテル変性シリコーン（Ｘ−２２−３９３９Ａ）に限られるものではなく、遊離血栓捕獲器具に対し、強固な固定化が可能であることは明白である。【００９３】
（血小板付着数の評価）
１ｃｍ角に成形したＰＥＴ製メッシュＬを２４ウェルプレートの任意のウェルに入れ、１ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水（以下、「ＰＢＳ（−）」）を添加してから、３７℃で３０分インキュベートした。【００９４】
３．２重量％クエン酸ナトリウム水溶液及びボランティアヒト血液を体積比率１／９で混合してから、２０℃、１０００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、多血小板血漿（以下、「ＰＲＰ」）を調製した。ＰＲＰ中の血小板数を、多項目自動血球分析装置ＸＴ−１８００ｉ（シスメックス株式会社）を用いて予め測定しておいた。【００９５】
インキュベート後のＰＥＴ製メッシュＬを空のウェルへ移し、調製したＰＲＰを１ｍＬ添加してから、３７℃で２時間、さらにインキュベートした。このＰＥＴ製メッシュＬをピンセットでつかみ、１ｍＬのＰＢＳ（−）を入れた別のウェルに入れ、緩やかに洗浄する作業を３回繰り返した。洗浄に用いたＰＢＳ（−）は、全て一つの空のウェルに回収した。【００９６】
回収したＰＢＳ（−）に、１ｍＬの１％重量ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル／ＰＢＳ（−）を添加してから、３７℃で１５分インキュベートした。【００９７】
空のウェルにインキュベート後の溶液を２００μＬ採取し、ＰＢＳ（−）を２００μＬ添加した。ここへ４００μＬのＳｏｌｕｔｉｏｎＣ（ＬＤＨ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（タカラバイオ株式会社製）のＳｏｌｕｔｉｏｎＡと、ＳｏｌｕｔｉｏｎＢとを体積比率１／４５で混合したもの）を調製後直ちに添加してアルミホイルを被せ、室温で３０分静置してから、２００μＬの１Ｎ−ＨＣｌを添加（終濃度：０．２Ｎ）して反応を停止した。【００９８】
反応停止後の反応液について、分光光度計で波長４９０ｎｍの吸光度を測定した。【００９９】
ＰＥＴ製メッシュＭ〜Ｑについても上記と同様の操作を行い、反応停止後の反応液について、波長４９０ｎｍの吸光度を測定した。【０１００】
ＰＲＰを、１／１０、１／２０、１／５０、１／１００、１／５００及び１／１０００の濃度になるようにＰＢＳ（−）でそれぞれ希釈した。希釈後のＰＲＰ溶液は、２４ウェルプレートの空のウェルに２００μＬずつ採取し、１％ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル／ＰＢＳ（−）を２００μＬずつ添加してから、３７℃で１５分インキュベートした。インキュベート後の溶液は、空のウェルに２００μＬずつ採取し、それぞれのウェルに４００μＬのＳｏｌｕｔｉｏｎＣを調製後直ちに添加してアルミホイルを被せ、室温で３０分静置してから、２００μＬの１Ｎ−ＨＣｌを添加（終濃度：０．２Ｎ）した。これら反応液について、分光光度計で波長４９０ｎｍの吸光度をそれぞれ測定し、検量線を作成した。【０１０１】
作成した検量線及びＰＥＴ製メッシュＬ〜Ｑの処理で得られた各反応液の波長４９０ｎｍの吸光度から、各反応液中の血小板数をそれぞれ算出した。ＰＥＴ製メッシュＱの処理で得られた反応液中の血小板数を１００％とした場合の、他の反応液中の血小板数の割合（以下、「相対比率」）を、図１に示す。【０１０２】
図１の結果から、上記の結合物が、遊離血栓捕獲器具に対し、顕著な抗血小板付着能を付与可能であることは明白である。【０１０３】
（全血凝固時間の測定）
ボランティアから採取した血液と、クエン酸とを体積比率９／１で混合し、クエン酸加血を調製した。【０１０４】
キュベット（ＮＯＮ−ＡＣＴＩＶＡＴＥＤ  ＣＬＯＴＴＩＮＧ  ＴＥＳＴ  ＫＩＴ）に生理食塩水１８μＬ採り、これにカルチコール１４．８μＬを加え、さらにクエン酸加血３４２μＬを加えてから、ソノクロット血液凝固／血小板機能分析装置（アイ・エム・アイ株式会社）で測定し、得られたＡＣＴ  ＯＮＳＥＴ値を全血凝固時間とした。ボランティアから採取した血液の全血凝固時間は、５４５秒であった。【０１０５】
生理食塩水に代えて、２、１０、２０μＭのアルガトロバン溶液（溶媒はメタノール／塩酸（体積比率４／１））をそれぞれ用いて同様の測定をしたところ、全血凝固時間はそれぞれ５３１、７４６、８４９秒であった。【０１０６】
生理食塩水に代えて、０．３、１．３、２．５μＭの実施例１結合物水溶液をそれぞれ用いて同様の測定をしたところ、全血凝固時間はそれぞれ５２７、６９３、７３０秒であった。【０１０７】
（遊離血栓捕獲器具の作製）
ニチノール製ワイヤを多重に輪状に曲げ回し、直径６ｍｍの円形リングであるリング状部１２を作製した。１００μｍの目を有するポリエステル製のメッシュシートを、高さが１５ｍｍである円錐状の袋状に形成し、フィルター部１３を作製した。この場合においては、円錐の底面が開口端部１３ａに、頂点が閉止端部１３ｂに、それぞれ相当することになる。【０１０８】
芯材部１１（操作部材１５を含む）にはステンレス製のワイヤを用いた。その一方の先端側に緩やかに部分円弧形状に湾曲させた柔軟なワイヤからなるガイド部１１ｂを形成した。【０１０９】
芯材部１１をリング状部１２に貫通させてから、芯材部１１の先端のガイド部の基端側の位置でフィルター部１３の閉止端部１３ｂを芯材部１１に取着した。さらに、フィルター部１３の開口端部１３ａを、リング状部１２に取着した。ポリアリレート製等の合成樹脂製又は複合繊維からなる糸を４本用意し、それぞれを支持線材部１４とした。芯材部１１のリング１２より基端側寄りの位置を支持部１４ａとし、リング状部１２の円周を約４等分した等分点をそれぞれ支持部１４ｂとして、図２に示すように、支持部１４ａ及び支持部１４ｂに４本の支持線材部１４をそれぞれ接着等で固定して、フィルターデバイスＡを完成した。なお、リング状部１２には、図２に示すようにその円周上の各１４ｂの中間点に、分割点１２１、分割点１２２、分割点１２３及び分割点１２４をそれぞれ設定し、対向する一対の分割点分割点１２１及び分割点１２３が芯材部の基端１５ａ側に向けて外力により折り曲げられた際に谷形の底となり、他の一対の分割点分割点１２２及び分割点１２４が芯材部の先端側に向けて外力により折り曲げられた際に山形の頂となるように、すなわち折り曲げ後にリング状部１２全体として波形をなすように、予め折り曲げ癖を付与しておいた。【０１１０】
フィルターデバイスＡは、図２に示す拡開状態から、外力の作用によって図３に示すように支持線材部１４が芯材部１１に向かって集束されると、各１４ｂは心材部に向かって収束されて、対向配置される二対の分割点１２１及び分割点１２３並びに分割点１２２及び分割点１２４がそれぞれ谷型の底と山型の頂点となり、リング状部１２が徐々に折り曲げられるとともに、フィルター部１３が折り畳まれ、さらに図４に示すように、それら対をなす分割点同士が当接する程度までリング状部１２が折り曲げられて折り曲げ状態となる。この折り曲げ状態では、フィルター部１３の開口部１３ａはほとんど完全に閉じられていることになる。【０１１１】
（遊離血栓捕獲器具への実施例１結合物の固定化）
アルガトロバン相当濃度５００００重量ｐｐｍの実施例１結合物、プロピレングリコール、５倍濃度のＢｉｓ−Ｔｒｉｓ緩衝液及び蒸留水を体積比率８／５０／２０／２２で混合し、処理液を得た。【０１１２】
適当な大きさの容器に処理液を２ｍＬ入れ、作製したフィルターデバイスＡのフィルター部を完全に浸漬してから、４０℃の温浴中で超音波を１時間照射した後、さらに吸収線量５ｋＧｙのγ線を３時間照射した。【０１１３】
γ線照射後、１５ｍＬの０．０２５重量％ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル水溶液を入れたポリプロピレン製遠沈管へフィルターデバイスＡを移し、先端から１０ｃｍの部位まで水溶液に浸漬してから、１０分間静置した。その後、遠沈管内の水溶液を除去してから、新たに１５ｍＬの０．０２５重量％ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル水溶液を添加し、１０分間静置するという洗浄操作を、４回繰り返した。続いて、それぞれ１５ｍＬの蒸留水及び生理食塩水を用いて、同様の洗浄操作を１０回ずつ繰り返し、さらに減圧乾燥及びＥＯＧ滅菌を行って、実施例１結合物が固定化されたフィルターデバイスＡ（以下、「遊離血栓捕獲器具Ｘ」）を作製した。【０１１４】
対照実験として、別途作製したフィルターデバイスＡに対しＥＯＧ滅菌のみを行い、実施例１結合物が固定化されていないフィルターデバイスＡ（以下、「遊離血栓捕獲器具Ｙ」）を準備した。【０１１５】
（ｉｎ  ｖｉｖｏ留置試験）
遊離血栓捕獲器具Ｘを３Ｆｒの細さまで収縮させてから、カテーテル内に収容した。イヌ（ハイブリッドビーグル）の全血凝固時間（以下、「ＡＣＴ」）を測定し、１５００ｕｎｉｔのヘパリン注射液を投与した。ヘパリン注射液投与後に再度ＡＣＴを測定し、ＡＣＴが２００〜３００ｓの範囲にあることを確認した。【０１１６】
上記のイヌに７Ｆｒのシースカテーテルを挿入し、さらに６Ｆｒのガイドカテーテルを挿入してから、造影剤を投与して、遊離血栓捕獲器具Ｘを留置する血管を決定しカテーテル内に収容した遊離血栓捕獲器具Ｘをイヌの頸動脈（血管径約６ｍｍ）へ送達した。目的部位に送達した遊離血栓捕獲器具Ｘのフィルター部を開き、遊離血栓捕獲器具Ｘの留置を開始した。留置開始後、造影剤を投与して、遊離血栓捕獲器具Ｘのフィルター部を血液が通過しているか否かを確認した。なお、ヘパリン等の抗凝固薬は一切投与しなかった。【０１１７】
イヌのＡＣＴは、ヘパリン注射液投与から約２時間で平常時の値に戻った。しかしながら試験の結果、留置した遊離血栓捕獲器具Ｘによる血流の妨害は観察されず、血液は留置開始から５時間以上安定して遊離血栓捕獲器具Ｘを通過可能であった。【０１１８】
遊離血栓捕獲器具Ｘに代えて遊離血栓捕獲器具Ｃを用いた以外は、上記と同様の操作を行って、遊離血栓捕獲器具Ｙのフィルター部を血液が通過しているか否かを確認した。試験の結果、遊離血栓捕獲器具Ｙによる血流の妨害が観察され、留置開始から１５分後に遊離血栓捕獲器具Ｙのフィルター部が閉塞した。回収した遊離血栓捕獲器具Ｙのフィルター部分では、血栓及び膜状付着物の形成が確認された。【０１１９】
遊離血栓捕獲器具Ｘに代えて遊離血栓捕獲器具Ｙを用い、かつ、試験中にヘパリンを持続投与した以外は、上記と同様の操作を行って、遊離血栓捕獲器具Ｙのフィルター部を血液が通過しているか否かを確認した。試験の結果、ヘパリンを持続投与したにも関わらず遊離血栓捕獲器具Ｙによる血流の妨害が観察され、留置開始から３０分後に遊離血栓捕獲器具Ｙのフィルター部が閉塞した。回収した遊離血栓捕獲器具Ｙのフィルター部分では、血栓及び膜状付着物の形成が確認された。【０１２０】
（実施例１５）
アルガトロバン４４．８ｍｍｏｌをナスフラスコに採り、Ａｒ気流下で脱水ジメチルホルムアミド（以下、「脱水ＤＭＦ」）を５０ｍＬ添加して溶解した後、ナスフラスコを氷冷した。４Ｎ塩酸／１，４−ジオキサン（東洋化成株式会社）を５０ｍＬ滴下し、室温で１時間撹拌した。次に、ロータリーエバポレーターで溶媒を留去し、脱水トルエン（Ｗａｋｏ）で共沸処理した。さらに真空乾燥機中で一晩乾燥し、得られた化合物に脱水ＤＭＦを添加し、アルガトロバン塩酸塩／脱水ＤＭＦ溶液（１．０Ｍ）とした。【０１２１】
三口フラスコにアルガトロバン塩酸塩／脱水ＤＭＦ溶液４６ｍｌを添加し、氷冷下で撹拌しながら、ＨＯＢｔを５７．８ｍｍｏｌ、脱水ＤＭＦを２０ｍｌ添加した。溶解後、ＤＣＣを５１．０ｍｍｏｌ添加した。予め４０℃で５時間減圧乾燥させたアミノ−ポリエーテル変性シリコーン（Ｘ−２２−３９３９Ａ；信越化学社）１９０ｇに脱水ＤＭＦを７６０ｇ添加し、撹拌した。アルガトロバン塩酸塩、ＤＣＣ、ＨＯＢｔが溶解した脱水ＤＭＦ溶液をアミノ−ポリエーテル変性シリコーン／脱水ＤＭＦ溶液に氷冷下で添加した。脱気、Ａｒ置換を５回繰り返した後、室温で３日間撹拌し反応させた。反応液を透析チューブ（スペクトラポアＲＣ  ポア６  ＭＷＣＯ＝１５，０００）に入れ、反応液の１００倍体積量超の蒸留水中で適宜蒸留水を交換しながら７日間透析した。透析後の反応液を濾過し、濾液の溶媒をロータリーエバポレーターで留去してから真空乾燥機中で一晩乾燥させ、結合物（以下、「実施例１５結合物」）を得た。【０１２２】
（実施例１５結合物の抗トロンビン能の測定）
測定には、ＥＣＡ−Ｔキット（ＨａｅｍｏＳｙｓ社）を使用した。実施例１５結合物１０ｍｇに蒸留水１ｍｌを添加し、実施例１５結合物水溶液を調製した。実施例１５結合物水溶液を３０μＬ採取し、ＥＣＡ  ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ  ｂｕｆｆｅｒ  １００μＬ及びＥＣＡ−Ｔ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ２５μＬを混合して３７℃で６０秒間インキュベートしてから装置（ＣＯＡＴＲＯＮ  Ｍ１（ｃｏｄｅ  ８０  ８００  ０００）；Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ社）にセットし、さらにＥＣＡ  ｅｃａｒｉｎ  ｒｅａｇｅｎｔ  ５０μＬを添加して測定を行った。【０１２３】
エタノール／塩酸（体積比率４／１）混合溶媒を用いて任意の濃度に調製したアルガトロバン溶液２０μＬをヒト血漿８０μＬに混合したもの、又は、ブランクの蒸留水２０μＬをヒト血漿８０μＬに混合したものを、上記の実施例１５結合物水溶液に代えてＥＣＡ−Ｔキットを用いてそれぞれ測定し、それらの結果から検量線を作成した。検量線に基づき算出した実施例１５結合物水溶液のアルガトロバン相当濃度２．６重量ｐｐｍを、実施例１５結合物水溶液の抗トロンビン能を示す値とした。【０１２４】
（遊離血栓捕獲器具への実施例１５結合物の固定化）
アルガトロバン相当濃度３４４重量ｐｐｍの実施例１５結合物、プロピレングリコール、５倍濃度のＢｉｓ−Ｔｒｉｓ緩衝液及び蒸留水を体積比率１０／５０／２０／２０で混合し、処理液を得た。【０１２５】
適当な大きさの容器に処理液を２ｍＬ入れ、作製したフィルターデバイスＢのフィルター部を完全に浸漬してから、４０℃の温浴中で超音波を１時間照射した後、さらに吸収線量５ｋＧｙのγ線を３時間照射した。【０１２６】
γ線照射後、１５ｍＬの０．０２５重量％ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル水溶液を入れたポリプロピレン製遠沈管へフィルターデバイスＢを移し、先端から１０ｃｍの部位まで水溶液に浸漬してから、１０分間静置した。その後、遠沈管内の水溶液を除去してから、新たに１５ｍＬの０．０２５重量％ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル水溶液を添加し、１０分間静置するという洗浄操作を、４回繰り返した。続いて、それぞれ１５ｍＬの蒸留水及び生理食塩水を用いて、同様の洗浄操作を１０回ずつ繰り返した。さらに蒸留水１５ｍｌに３０分間浸漬した後、減圧乾燥及びＥＯＧ滅菌を行って、実施例１５結合物が固定化されたフィルターデバイスＢ（以下、「遊離血栓捕獲器具Ｚ」）を作製した。【０１２７】
（ｉｎ  ｖｉｖｏ留置試験）
遊離血栓捕獲器具Ｘを３Ｆｒの細さまで収縮させてから、カテーテル内に収容した。イヌ（ハイブリッドビーグル）の全血凝固時間（以下、「ＡＣＴ」）を測定し、ヘパリン注射液を投与した。ヘパリン注射液投与後に再度ＡＣＴを測定し、ＡＣＴが３００ｓ以上にあることを確認した。【０１２８】
上記のイヌに７Ｆｒのシースカテーテルを挿入し、さらに６Ｆｒのガイドカテーテルを挿入してから、造影剤を投与して、遊離血栓捕獲器具Ｘを留置する血管を決定しカテーテル内に収容した遊離血栓捕獲器具Ｚをイヌの頸動脈（血管径約６ｍｍ）へ送達した。目的部位に送達した遊離血栓捕獲器具Ｚのフィルター部を開き、遊離血栓捕獲器具Ｚの留置を開始した。留置開始後、造影剤を投与して、遊離血栓捕獲器具Ｘのフィルター部を血液が通過しているか否かを確認した。試験中、適宜ヘパリン等の抗凝固薬を投与し、ＡＣＴが３００ｓ以上を持続するよう調節した。【０１２９】
試験の結果、留置した遊離血栓捕獲器具Ｚによる血流の妨害は観察されず、血液は留置開始から５時間以上、遊離血栓捕獲器具Ｚを通過可能であった。【０１３０】
これらの結果から、上記の結合物が、遊離血栓捕獲器具に対し、顕著な抗血液凝固作用を付与可能であることは明白である。
【産業上の利用可能性】
【０１３１】
本発明は医療分野において、優れた抗血液凝固作用を有する遊離血栓捕獲器具として用いることができる。
【符号の説明】
【０１３２】
１  遊離血栓捕獲器具
１１  芯材部
１２  リング状部
１３  フィルター部
１４  支持線材部
【図１】
2012176841.tif 000012
【図２】
2012176841.tif 000013
【図３】
2012176841.tif 000014
【図４】
2012176841.tif 000015
【国際調査報告】
2012176841.tif 000016
2012176841.tif 000017
2012176841.tif 000018
2012176841.tif 000019
2012176841.tif 000020
2012176841.tif 000021