(57)【要約】  癌細胞の増殖を効果的に抑制する。１〜１０μｍの粒径を有するβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を含む癌細胞抑制セラミックスを提供する。βリン酸三カルシウム多孔体顆粒は患部の癌細胞に取り込まれ、癌組織の増殖を抑制する作用がある。顆粒の大きさが１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を用いることで、癌細胞の増殖をより効果的に抑制することができる。
2013094722.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１〜１０μｍの粒径を有するβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を含む癌細胞抑制セラミックス。
【請求項２】
前記βリン酸三カルシウム多孔体顆粒は２０〜９０％の気孔率を有するβリン酸三カルシウム多孔体から生成されることを特徴とする請求項１に記載の癌細胞抑制セラミックス。
【請求項３】
粒径１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒と、
粒径１０〜１００μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒とを含む癌細胞抑制セラミックス。
【請求項４】
前記粒径１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒および前記粒径１０〜１００μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒が２０〜９０％の気孔率を有するβリン酸三カルシウム多孔体から生成されることを特徴とする請求項３に記載の癌細胞抑制セラミックス。
【請求項５】
１〜１０μｍの粒径を有するβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を含む癌細胞抑制セラミックスを、腫瘍組織を切除した部位やその周囲に塗布し治療する骨腫瘍の治療方法。
【請求項６】
骨腫瘍を治療するための癌細胞抑制セラミックスを製造するための粒径１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒の使用。
【請求項７】
メカノケミカル法によりβリン酸三カルシウム粉末を合成する合成工程と、
発泡剤を加えて該合成工程により合成された前記βリン酸三カルシウム粉末を焼結し、βリン酸三カルシウム多孔体を生成する焼結工程と、
該焼結工程により生成された前記βリン酸三カルシウム多孔体を粉砕し、空気分級法により粒径１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を分級する分級工程とを含む癌細胞抑制セラミックスの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌細胞抑制セラミックスおよびその製造方法、骨腫瘍の治療方法、粒径１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒の使用に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、癌細胞の転移や再発を抑制する癌細胞抑制剤が知られている（例えば、特許文献１参照。）。特許文献１には、βリン酸三カルシウム多孔体をフィルムで押圧して癌細胞の増殖、転移および再発を抑制する効果があると記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１０−１２６４３４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、特許文献１に記載の癌細胞抑制剤は、粒径が２５〜７５μｍのβリン酸三カルシウム多孔体を用いており、この粒径では癌細胞は貪食しづらいという問題があった。【０００５】
本発明は、癌細胞の増殖を効果的に抑制することができる癌細胞抑制セラミックスおよび癌細胞抑制セラミックスの製造方法、骨腫瘍の治療方法、粒径１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒の使用を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するために、本発明は以下の手段を提供する。
本発明の第１態様は、１〜１０μｍの粒径を有するβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を含む癌細胞抑制セラミックスである。【０００７】
発明者らは、研究の結果、顆粒の大きさが１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を用いると、癌細胞がその顆粒を取り込んで癌細胞の増殖を抑制することを見出した。本態様のβリン酸三カルシウム多孔体顆粒は、緻密性のβリン酸三カルシウムと比較して、表面積が大きく溶解性が高いため、癌細胞に取り込まれたあとに影響を与えやすい。したがって、本態様によれば、癌細胞の増殖を効果的に抑制することができる。【０００８】
上記態様においては、１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒は２０〜９０％の気孔率を有するβリン酸三カルシウム多孔体から生成されることを特徴としてもよい。
このように構成することで、βリン酸三カルシウム多孔体顆粒が溶解されやすく、癌細胞に取り込まれやすい。【０００９】
本発明の第２態様は、粒径１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒と、粒径１０〜１００μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒とを含む癌細胞抑制セラミックスである。【００１０】
発明者らは、研究の結果、粒径が１０〜１００μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒の周りにはマクロファージが集積することが分かった。本態様の癌細胞抑制セラミックスを骨腫瘍等の癌組織を切除した後の患部に宛がうように配置すれば、その患部に癌組織が万一残存していたとしても、粒径１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒によって腫瘍増殖を効果的に抑制することが期待できる。また、マクロファージは骨の再生に関わるため、粒径１０〜１００μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒によって、その患部にマクロファージが集積され、より効果的な骨再生を実現することが期待できる。【００１１】
上記態様においては、前記粒径１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒および前記粒径１０〜１００μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒が２０〜９０％の気孔率を有するβリン酸三カルシウム多孔体から生成されることを特徴としてもよい。
このように構成することで、１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒が溶解されやすく、癌細胞に取り込まれやすい。また、１０〜１００μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒も溶解されやすい。【００１２】
本発明の第３態様は、１〜１０μｍの粒径を有するβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を含む癌細胞抑制セラミックスを、腫瘍組織を切除した部位やその周囲に塗布し治療する骨腫瘍の治療方法である。【００１３】
本発明の第４態様は、骨腫瘍を治療するための癌細胞抑制セラミックスを製造するための粒径１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒の使用である。【００１４】
本発明の第５態様は、メカノケミカル法によりβリン酸三カルシウム粉末を合成する合成工程と、発泡剤を加えて該合成工程により合成された前記βリン酸三カルシウム粉末を焼結し、βリン酸三カルシウム多孔体を生成する焼結工程と、該焼結工程により生成された前記βリン酸三カルシウム多孔体を粉砕し、空気分級法により粒径１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を分級する分級工程とを含むβリン酸三カルシウム多孔体顆粒の製造方法を提供する。【００１５】
本態様によれば、分級工程により、焼結工程によって生成される粒子が比較的大きいブロック形状のβリン酸三カルシウム多孔体から分級されて、粒径１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒が製造される。したがって、用途に応じて用いられるβリン酸三カルシウム多孔体を製造する過程の延長として、粒径１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を製造することができる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、癌細胞の増殖を効果的に抑制することができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明の第１実施形態に係るβリン酸三カルシウム多孔体顆粒の製造方法を説明するフローチャートである。
【図２】図１の製造方法により製造される粒径が１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒の粒度分布を示す図である。
【図３】ＨＴ１０８０細胞のみを１日培養したときの顕微鏡写真を示す図である。
【図４】ＨＴ１０８０細胞を１日培養したｄｉｓｈにβＴＣＰ顆粒を添加したときの顕微鏡写真を示す図である。
【図５】ＨＴ１０８０細胞だけを５日間培養したときの顕微鏡写真を示す図である。
【図６】ＨＴ１０８０細胞にβＴＣＰ顆粒を添加して５日間培養したときの顕微鏡写真を示す図である。
【図７】βＴＣＰ顆粒を用いてＨＴ１０８０細胞を培養して３投下日後の透過電子顕微鏡写真を示す図である。
【図８】ＨＴ１０８０細胞のみを３日間培養した光学顕微鏡写真を示す図である。
【図９】ＨＴ１０８０細胞にβＴＣＰ顆粒を１ｍｇ/ｍｌ添加して３日間培養したときの光学顕微鏡写真を示す図である。
【図１０】ＨＴ１０８０細胞にβＴＣＰ顆粒を３ｍｇ/ｍｌ添加して３日間培養したときの光学顕微鏡写真を示す図である。
【図１１】図１の製造方法により製造される粒径が１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒および粒径が１０〜１００μｍのβリン酸三カルシウム多孔体の粒度分布を示す図である。
【図１２】ＳａＯＳ細胞にβＴＣＰ顆粒Ａを添加して培養する様子を示す図である。
【図１３】βＴＣＰ顆粒Ａ添加前のＳａＯＳ細胞の形態を写した顕微鏡写真を示す図である。
【図１４】βＴＣＰ顆粒Ａの添加量ごとのＳａＯＳ細胞の生細胞と死細胞を写した顕微鏡写真を示す図である。
【図１５】Ｋｒｕｓｋａｌ  ｗａｌｌｉｓ検定の結果を示すグラフである。
【図１６】ＭＴＴ  ａｓｓａｙの結果を示すグラフである。
【図１７】粒径が１０〜１００μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒の周りにマクロファージが集積した後、βリン酸三カルシウム多孔体顆粒が崩壊し、マクロファージが活性化したことを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
〔第１実施形態〕
＜癌細胞抑制セラミックス＞
本発明の第１実施形態に係る癌細胞抑制セラミックスおよびその製造方法について、図面を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る癌細胞抑制セラミックスは、粒径が１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒により構成されている。
【００１９】
＜製造方法＞
本実施形態に係る癌細胞抑制セラミックスの製造方法は、図１のフローチャートに示されるように、メカノケミカル法によりβリン酸三カルシウム粉末を合成する合成工程Ｓ１と、合成工程Ｓ１により合成されたβリン酸三カルシウム粉末に発泡剤を加えた上で焼結し、ブロック形状のβリン酸三カルシウム多孔体を生成する焼結工程Ｓ２と、焼結工程Ｓ２により生成されたβリン酸三カルシウム多孔体を粉砕し、空気分級法により粒径が１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を分級する分級工程Ｓ３とを含んでいる。
【００２０】
合成工程Ｓ１においては、メカノケミカル法により、例えば、回転式粉砕機であるジルコニア製のボールミルを用いてβリン酸三カルシウム材料を攪拌し、物質どうしの衝突エネルギーを利用してβリン酸三カルシウム粉末を合成するようになっている。
【００２１】
具体的には、まず、純度が９９．９％のリン酸水素カルシウム二水和物（ＣａＨＰＯ４・２Ｈ２Ｏ）と純度が９９．９９％の炭酸カルシウム（ＣａＣＯ３）とをＣａ／Ｐ原子比が１．５０になるように混合し、これに純水を加えて固形物濃度が１０重量％のスラリーを調整するようになっている。そして、このスラリーをジルコニア製ボールミルに入れて２４時間摩砕しながら反応させた後、その固形物を取り出してステンレス製バットに入れ、電気乾燥炉にて８０℃で乾燥させるようになっている。
【００２２】
焼結工程Ｓ２においては、まず、乾燥したβリン酸三カルシウム粉末を粉砕して、電気炉にて７５０℃で１時間仮焼するようになっている。次いで、仮焼した粉末（例えば、６０ｇ）に発泡剤、および、解膠剤としてポリアクリル酸アンモニウムエチレンノニルフェニルエーテル（例えば、１〜６ｍｌ。）を加えて攪拌発泡させ、スラリーを調整して成形用型に注入するようになっている。解膠剤としては、例えば中京油脂製セルナＤ−３０５を用いる。
【００２３】
そして、スラリーを型に入れた状態で２４時間、８０℃で乾燥させた後、１時間に１００℃で昇温させて１０５０℃で３０分焼結するようになっている。これにより、気孔率が２０〜９０％（好ましくは、７５％。）でβリン酸三カルシウム多孔体が生成される。本実施形態におけるβリン酸三カルシウム多孔体の気孔率は、旧知の方法で見かけの気孔率を求めた。
【００２４】
分級工程Ｓ３においては、例えば、日清エンジニアリング製ＴＣ−１５Ｎを用いて、１００μｍ以下のβリン酸三カルシウム多孔体を回転数２５００ｒｐｍ、風量２．０、供給速度１．０ｋｇ／ｈで分級し、１０μｍ以下のβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を取り出した。
【００２５】
＜粒度分布測定＞
本実施形態に係る製造方法により製造される粒径が１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒（癌細胞抑制セラミックス、以下、単に「βＴＣＰ顆粒Ａ」とする。図４参照。）の粒度分布を測定すると、例えば、図２に示すように、粒径３μｍに極大値を持つ分布が得られた。図２において、縦軸は頻度（％）および累積（％）を示し、横軸は粒径（μｍ）を示している。図１０において同様である。
【００２６】
βリン酸三カルシウム多孔体顆粒の粒度分布は、例えば、分散媒として蒸留水を用いるとともに分散剤としてトリトンＸ−１００を用い、超音波バス（１５０Ｗ）分散を１分間行った後に、マイクロトラックＨＲＡを用いてレーザ回折散乱法により測定するものとする。
【００２７】
このように構成された癌細胞抑制セラミックスおよびその製造方法の作用について、以下に説明する。
本実施形態に係る癌細胞抑制セラミックスを癌細胞３（図３等参照）に付着させると、粒径が１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を癌細胞が取り込み、癌細胞の増殖が抑制される。
【００２８】
シスプラチンのような抗癌剤とは異なり、βリン酸三カルシウム多孔体顆粒は生体親和性の高い材料のみによって構成されている。このβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を患者に投与した際には副作用もなく癌細胞を抑制することが期待でき、患者にかかる負担を軽減することが期待できるという利点がある。また、βリン酸三カルシウム多孔体顆粒はβリン酸三カルシウム多孔体を生成しているため、緻密性のβリン酸三カルシウムと比較して、表面積が大きく溶解性が高い。そのため、癌細胞に取り込まれたあとに影響を与えやすい。
【００２９】
＜確認実験＞
癌細胞に対するβＴＣＰ顆粒Ａ（癌細胞抑制セラミックス）の抑制効果を以下に示す。
図３に示すように、１０ｃｍのｄｉｓｈ（Ｎｕｎｃ）にＨＴ１０８０細胞（ヒト線維肉腫細胞：癌細胞）３を５ｋ／ｃｍ２（３００ｋ／ｄｉｓｈ）で播種して培養する（３７度、ＣＯ２５％）。図３は、ＨＴ１０８０細胞３のみを１日培養したときの顕微鏡写真（Ｘ２００）を示している。
【００３０】
翌日、ｍｅｄｉｕｍ（培地）にβＴＣＰ顆粒Ａを混ぜて３．０ｍｇ／ｍｌの濃度に調節し、図４に示すように、これをＨＴ１０８０細胞３のｄｉｓｈに１０ｍｌ／ｄｉｓｈ（３０ｍｇ／ｄｉｓｈ）添加する。ｍｅｄｉｕｍとしては、例えば、ＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ）／ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ）１０％／Ｐ．Ｓ．Ａが用いられる。図４は、ＨＴ１０８０細胞３を１日培養したｄｉｓｈにβＴＣＰ顆粒Ａを添加したときの顕微鏡写真（Ｘ２００）を示している。細胞質内にβＴＣＰ顆粒Ａが集積していることが認められる。
【００３１】
培養３日目でβＴＣＰ顆粒Ａは用量依存性を示し、ＨＴ１０８０細胞３の増殖能が低下していることが観察された。その後、培養を継続すると、図５に示すようにＨＴ１０８０細胞３だけを培養したものと比較して、図６に示すようにβＴＣＰ顆粒Ａを添加しものは、細胞増殖能が抑制された。図５，６はそれぞれ培養５日目の顕微鏡写真（×２００）を示している。
【００３２】
図７は、βＴＣＰ顆粒Ａを用いてＨＴ１０８０細胞３を培養して３投下日後の透過電子顕微鏡写真を示している。同図に示されるように、ＨＴ１０８０細胞３がβＴＣＰ顆粒Ａを取り込んでいることが分かる。さらに、培養時の細胞ＨＴ１０８０細胞３を光学顕微鏡で観察した結果、細胞増殖が抑制されて細胞形状が収縮していることが観察された。したがって、ＨＴ１０８０細胞３は、βＴＣＰ顆粒Ａを取り込むことにより増殖能が抑制されることが分かる。
【００３３】
次に、ＨＴ１０８０細胞３を培養したｄｉｓｈにβＴＣＰ顆粒Ａを１ｍｇ/ｍｌ添加したものと３ｍｇ/ｍｌ添加したものをそれぞれ用意し、これらを３日間培養すると、図８〜１０に示されるように、βＴＣＰ顆粒Ａの添加量が多いほど抑制効果があることが認められた。図８はＨＴ１０８０細胞３のみを３日間培養した光学顕微鏡写真を示し、図９はβＴＣＰ顆粒Ａを１ｍｇ/ｍｌ添加して３日間培養したときの光学顕微鏡写真を示し、図１０はβＴＣＰ顆粒Ａを３ｍｇ/ｍｌ添加して３日間培養したときの光学顕微鏡写真を示している。
【００３４】
以上説明したように、本実施形態に係る癌細胞抑制セラミックスによれば、粒径が１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒（βＴＣＰ顆粒Ａ）により構成することで、癌細胞の増殖を効果的に抑制することができる。また、多孔性のβリン酸三カルシウム多孔体顆粒が溶解されやすく、癌細胞に取り込まれやすい。本実施形態に係る製造方法によれば、このような粒径が１〜１０μのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を容易に製造することができる。
【００３５】
〔第２実施形態〕
以下、第１実施形態に係る癌細胞抑制セラミックスと構成を共通する箇所には、同一符合を付して説明を省略する。
＜癌細胞抑制セラミックス＞
本発明の第２実施形態に係る癌細胞抑制セラミックスについて説明する。
本実施形態に係る癌細胞抑制セラミックスは、粒径が１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒（βＴＣＰ顆粒Ａ）と、粒径が１０〜１００μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒とを含んでいる。
【００３６】
＜製造方法＞
分級工程Ｓ３においては、例えば、日清エンジニアリング製ＴＣ−１５Ｎを用いて、１００μｍ以下のβリン酸三カルシウム多孔体を回転数４０００ｒｐｍ、風量２．０ｍ３／ｍｉｎ、供給速度１．０ｋｇ／ｈで分級し、１０〜１００μｍのβリン酸三カルシウムを取り出した。次に、１０〜１００μｍのβＴＣＰを回転数２５００ｒｐｍ、風量２．０、供給速度１．０ｋｇ／ｈで分級し、１０μｍ以下のβリン酸三カルシウムを取り出した。
【００３７】
＜粒度分布測定＞
本実施形態に係る製造方法により製造される粒径が１〜１００μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒（癌細胞抑制セラミックス、以下、単に「βＴＣＰ顆粒Ｂ」とする。図示略。）の粒度分布を測定すると、例えば、図１１に示すように、１〜１０μｍの範囲の中で粒径３μｍに極大値を持つとともに、１０〜１００μｍの範囲の中で粒径４０μｍにもう１つの極大値を持つ分布が得られた。βＴＣＰ顆粒Ｂの粒度分布の測定方法は、第１実施形態のβＴＣＰ顆粒Ａの粒度分布の測定方法と同様である。
【００３８】
＜確認実験１＞
βＴＣＰ顆粒Ｂの確認実験は、第１実施形態のβＴＣＰ顆粒Ａの確認実験と同様である。ＨＴ１０８０細胞３を培養したｄｉｓｈにβＴＣＰ顆粒Ｂを１ｍｇ/ｍｌ添加したものと３ｍｇ/ｍｌ添加したものをそれぞれ用意し、これらを３日間培養すると、βＴＣＰ顆粒Ｂも癌細胞抑制性を示したが、βＴＣＰ顆粒Ａの方がβＴＣＰ顆粒Ｂよりも癌細胞抑制性が高かった。
【００３９】
＜確認実験２＞
次に、ヒト骨肉腫細胞に対する粒径が１〜１０μｍのβＴＣＰ顆粒Ａの抑制効果を以下に示す。
図１２に示すように、ヒト骨肉腫細胞（ＳａＯＳ−２、以下、「ＳａＯＳ細胞」という。）５を、各々５×１０２（ｃｅｌｌｓ／ｃｍ２）の密度で播種して培養した。ＳａＯＳ細胞５を３日培養したｄｉｓｈにβＴＣＰ顆粒Ａを添加していないものと、１（ｍｇ／ｍｌ）添加したものと、３（ｍｇ／ｍｌ）添加したものと、５（ｍｇ／ｍｌ）添加しものを用意した。培地は１週間に２回変化した。
【００４０】
図１３は、βＴＣＰ顆粒Ａ添加前のＳａＯＳ細胞５の形態を写した顕微鏡写真を示している。
ＳａＯＳ細胞５にβＴＣＰ顆粒Ａを添加して２日間培養した結果、図１４に示すように、βＴＣＰ顆粒Ａの容量依存性に生細胞が減少し、死細胞が増加した。図１４は、βＴＣＰ顆粒Ａを添加しなかったもの（０ｍｇ／ｍｌ）、１ｍｇ／ｍｌ添加したもの、３ｍｇ／ｍｌ添加したもの、５ｍｇ／ｍｌ添加したものごとのＳａＯＳ細胞５の生細胞を写した顕微鏡写真とＳａＯＳ細胞５の死細胞を写した顕微鏡写真である。
【００４１】
図１５に示すように、βＴＣＰ顆粒Ａを添加しなかった場合（０ｍｇ／ｍｌ）とβＴＣＰ顆粒Ａを５ｍｇ／ｍｌ添加した場合の２群で有意差が認められた（Ｐ＜０．０１、Ｋｒｕｓｋａｌ  ｗａｌｌｉｓ検定）。図１５において、縦軸は培養２日後の「死細胞数／（生細胞数＋死細胞数）」を示し、横軸はｍｅｄｉｕｍ（培地）中のβＴＣＰ顆粒Ａの濃度（ｍｇ／ｍｌ）を示している。
【００４２】
さらに、図１６に示すように、ＭＴＴ  ａｓｓａｙでも、βＴＣＰ顆粒Ａの投与群で細胞増殖の抑制が認められた。また、１ｍｇ／ｍｌのβＴＣＰ顆粒Ａ投与群よりも３ｍｇ／ｍｌや５ｍｇ／ｍｌのβＴＣＰ顆粒Ａ群で早期に増殖抑制効果が強い傾向が認められた。図１６において、縦軸は「生細胞数／（生細胞数＋死細胞数）」を示し、横軸は日数（ｄａｙｓ）を示している。
【００４３】
粒径が１０〜１００μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒の周りにはマクロファージを集積させることができる。図１７は、粒径が約１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒の周りにマクロファージが集積した後、βリン酸三カルシウム多孔体顆粒が崩壊し、マクロファージが活性化したことを示す。
【００４４】
図１７の中心部を占める半円状のものがマクロファージである。このマクロファージは、周囲に脚状の突起物が複数出ていることから、活性化していることが見てとれる。また、同図において矢印で示したものが崩壊したβリン酸三カルシウム多孔体顆粒である。
【００４５】
粒径が１０〜１００μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を患部に与えた際には、マクロファージが免疫細胞のＴ細胞を癌細胞に集め、癌細胞の増殖、転移および再発を抑制することが期待できる。本実施形態に係る癌細胞抑制セラミックスを骨腫瘍等の癌組織を切除した後の患部に宛がうように配置すれば、その患部に癌組織が万一残存していたとしても、腫瘍増殖を効果的に抑制することが期待できる。また、マクロファージは骨の再生に関わるため、粒径１０〜１００μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒によって、その患部にマクロファージを集積させて、より効果的な骨再生を実現することが期待できる。
【００４６】
実際に臨床場面で利用する場合には、腫瘍組織を切除した部位やその周囲に本発明の癌細胞抑制セラミックスを塗布することが考えられる。このようにすることで、癌細胞の転移および再発を抑制し、更に効果的に骨を再生することが期待できる。
また、癌細胞抑制セラミックスを自己血液、リンゲル液または生理食塩水等に混ぜて、腫瘍組織を切除した部分に補填することも考えられる。補填した後、骨量を十分に回復させるためには、吸収性の人工骨または自家骨、人工骨と自家骨の混合物を補填してもよい。
【符号の説明】
【００４７】
Ａ  βＴＣＰ顆粒（癌細胞抑制セラミックス）
３  ＨＴ１０８０細胞（癌細胞）
Ｓ１  合成工程
Ｓ２  焼結工程
Ｓ３  分級工程
【図１】
2013094722.tif 000003
【図２】
2013094722.tif 000004
【図３】
2013094722.tif 000005
【図４】
2013094722.tif 000006
【図５】
2013094722.tif 000007
【図６】
2013094722.tif 000008
【図７】
2013094722.tif 000009
【図８】
2013094722.tif 000010
【図９】
2013094722.tif 000011
【図１０】
2013094722.tif 000012
【図１１】
2013094722.tif 000013
【図１２】
2013094722.tif 000014
【図１３】
2013094722.tif 000015
【図１４】
2013094722.tif 000016
【図１５】
2013094722.tif 000017
【図１６】
2013094722.tif 000018
【図１７】
2013094722.tif 000019
【手続補正書】
【提出日】平成26年6月19日(2014.6.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
焼結工程Ｓ２においては、まず、乾燥したβリン酸三カルシウムの固形物を粉砕して、電気炉にて７５０℃で１時間仮焼するようになっている。次いで、仮焼した粉末（例えば、６０ｇ）に発泡剤、および、解膠剤としてポリアクリル酸アンモニウムエチレンノニルフェニルエーテル（例えば、１〜６ｍｌ。）を加えて攪拌発泡させ、スラリーを調整して成形用型に注入するようになっている。解膠剤としては、例えば中京油脂製セルナＤ−３０５を用いる。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
分級工程Ｓ３においては、例えば、日清エンジニアリング製ＴＣ−１５Ｎを用いて、１００μｍ以下のβリン酸三カルシウム多孔体を回転数２５００ｒｐｍ、風量２．０ｍ３／ｍｉｎ、供給速度１．０ｋｇ／ｈで分級し、１０μｍ以下のβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を取り出した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
＜粒度分布測定＞
本実施形態に係る製造方法により製造される粒径が１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒（癌細胞抑制セラミックス、以下、単に「βＴＣＰ顆粒Ａ」とする。図４参照。）の粒度分布を測定すると、例えば、図２に示すように、粒径３μｍに極大値を持つ分布が得られた。図２において、縦軸は頻度（％）および累積（％）を示し、横軸は粒径（μｍ）を示している。図１１において同様である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
以上説明したように、本実施形態に係る癌細胞抑制セラミックスによれば、粒径が１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒（βＴＣＰ顆粒Ａ）により構成することで、癌細胞の増殖を効果的に抑制することができる。また、多孔性のβリン酸三カルシウム多孔体顆粒が溶解されやすく、癌細胞に取り込まれやすい。本実施形態に係る製造方法によれば、このような粒径が１〜１０μｍのβリン酸三カルシウム多孔体顆粒を容易に製造することができる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
＜製造方法＞
分級工程Ｓ３においては、例えば、日清エンジニアリング製ＴＣ−１５Ｎを用いて、１００μｍ以下のβリン酸三カルシウム多孔体を回転数４０００ｒｐｍ、風量２．０ｍ３／ｍｉｎ、供給速度１．０ｋｇ／ｈで分級し、１０〜１００μｍのβリン酸三カルシウムを取り出した。次に、１０〜１００μｍのβＴＣＰを回転数２５００ｒｐｍ、風量２．０ｍ３／ｍｉｎ、供給速度１．０ｋｇ／ｈで分級し、１０μｍ以下のβリン酸三カルシウムを取り出した。
【国際調査報告】
2013094722.tif 000020
2013094722.tif 000021
2013094722.tif 000022
2013094722.tif 000023
2013094722.tif 000024
2013094722.tif 000025