(57)【要約】  ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドのセット、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレート、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドに対する抗体価の測定用キット、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドのがんの診断への使用およびＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドのがん患者の予後予測への使用を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＬＡクラスＩ分子に結合するする腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドのセット。
【請求項２】
腫瘍抗原由来のペプチドが、配列番号１−３１のアミノ酸配列で示されるペプチドから選択される異なる２種以上のペプチドから構成される、請求項１に記載のペプチドセット。
【請求項３】
腫瘍抗原由来のペプチドが、配列番号１−３１のアミノ酸配列で示されるペプチドから選択される、２８種以上３１種以下のペプチドから構成される請求項１または請求項２に記載のペプチドセット。
【請求項４】
ペプチドセットが
（ｉ）配列番号１−３１；
（ｉｉ）配列番号１−３０；
（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；
（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；
（ｖ）配列番号１−２９；
（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；
（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または
（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８
のそれぞれを構成する各アミノ酸配列からなるペプチドにより構成されるペプチドのセットである、請求項１から３のいずれかに記載のペプチドセット。
【請求項５】
請求項１から請求項４のいずれかに記載のペプチドが結合したビーズ。
【請求項６】
請求項１から請求項４のいずれかに記載のペプチドが、１個のビーズ当たり各１種ずつ結合したビーズのセット。
【請求項７】
請求項１から請求項４のいずれかに記載の各ペプチドがそれぞれ異なるｗｅｌｌに固相化されたＥＬＩＳＡプレート。
【請求項８】
請求項１から請求項４のいずれかに記載の各ペプチドが等モルずつ１つのｗｅｌｌに固相化されたＥＬＩＳＡプレート。
【請求項９】
請求項１から請求項４のいずれかに記載のペプチドのセットを含む、腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体の抗体価の測定用キット。
【請求項１０】
請求項５に記載のビーズ、請求項６に記載のビーズのセット、請求項７に記載のＥＬＩＳＡプレートまたは請求項８に記載のＥＬＩＳＡプレートを含む、腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体の抗体価の測定用キット。
【請求項１１】
ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドのセットを含む、がんの判定用またはがん患者の予後予測用キット。
【請求項１２】
配列番号１−３１のアミノ酸配列からなるペプチドから選択される２８乃至３１のペプチドにより構成されるペプチドのセットを含む、がんの判定用またはがん患者の予後予測用キット。
【請求項１３】
ペプチドセットが、
（ｉ）配列番号１−３１；
（ｉｉ）配列番号１−３０；
（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；
（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；
（ｖ）配列番号１−２９；
（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；
（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または
（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８
のそれぞれを構成する各アミノ酸配列からなるペプチドにより構成されるペプチドのセットである、請求項１１または請求項１２に記載のがんの判定用またはがん患者の予後予測用キット。
【請求項１４】
請求項５に記載のビーズ、請求項６に記載のビーズのセット、請求項７記載のＥＬＩＳＡプレートまたは請求項８に記載のＥＬＩＳＡプレートを含む、がんの判定用またはがん患者の予後予測用キット。
【請求項１５】
ヒトから採取した試料における、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体の抗体価の総和を測定することを含む、がんの判定方法またはがん患者の予後予測方法。
【請求項１６】
アミノ酸配列番号１−３１で示されるペプチド群から選択される２８乃至３１のペプチドから構成されるペプチドに結合する抗体の抗体価の総和を測定すること含む、請求項１５に記載のがんの判定方法またはがん患者の予後予測方法。
【請求項１７】
ヒトから採取した試料における、以下の配列番号：
（ｉ）配列番号１−３１；
（ｉｉ）配列番号１−３０；
（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；
（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；
（ｖ）配列番号１−２９；
（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；
（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または
（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８
のそれぞれを構成する各アミノ酸配列からなるペプチドに結合する抗体の抗体価の総和を測定すること含む、請求項１５または請求項１６に記載のがんの判定方法またはがん患者の予後予測方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドセット、腫瘍抗原由来のペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレート、腫瘍抗原由来のペプチドに対する抗体価の測定、腫瘍抗原由来のペプチドのがんの診断への使用および腫瘍抗原由来のペプチドのがん患者の予後予測への使用等に関する。
【背景技術】
【０００２】
悪性腫瘍は日本人の死亡原因の第１位を占め年間約３３万人が死亡している。世界では年間約６００万人ががんで死亡している。がん治療においては、外科的切除、抗がん剤および放射線療法などが行われている。しかしながらかかる療法には再発やＱＯＬの問題、さらにはこれらの治療法が受けられない進行がんである場合の選択肢が無い等の問題がある。がんに対する免疫療法（ワクチン療法）は長い間第４の治療法として待望されている。
がんペプチドワクチン療法における主要なエフェクターと考えられている特異的Ｔ細胞による細胞性免疫はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）拘束性であり、特定のＨＬＡ型を有する患者のみを対象としたワクチン開発が発明者らを含めた世界中で実施されてきた。
既にＨＬＡ−Ａ２４、−Ａ２、−Ａ２６およびＨＬＡ−Ａ３スーパータイプ（ＨＬＡ−Ａ３、−Ａ１１、−Ａ３１、−Ａ３３および−Ａ６８．１）のいずれかに結合し、それぞれのＨＬＡ拘束性にＣＴＬ誘導能を有する腫瘍抗原由来のペプチドが同定され、かかるペプチドががんペプチドワクチンとして有用であることが報告されている（非特許文献１−３）。これらの腫瘍抗原由来のペプチドはＨＬＡクラスＩに結合するペプチドである。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Yajima N et al., Clin Cancer Res. 2005 Aug 15;11(16):5900-11.
【非特許文献２】Mochizuki K et al., Int J Oncol. 2004 Jul;25(1):121-31.
【非特許文献３】Tsuda N et al., J Immunother. 2004 Jan-Feb;27(1):60-72.
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、一つの側面において、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドのセットを提供する。
本発明は、一つの側面において、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレートを提供する。
本発明は、一つの側面において、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドを含む、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体の抗体価の測定用キットを提供する。
本発明は、一つの側面において、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドを含む、がんの診断用キットを提供する。
本発明は、一つの側面において、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドを含む、がん患者の予後予測用キットを提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】血清中の３１ペプチドに対する抗体の量の健常人と白血病患者の比較を示す。
【図２】血清中の３１ペプチドに対する抗体の量の健常人と肝臓がん患者の比較を示す。
【図３】血清中の３１ペプチドに対する抗体の量の健常人と膵臓がん患者の比較を示す。
【図４】血清中の３１ペプチドに対する抗体の量の健常人と前立腺がん患者の比較を示す。
【図５】血清中の３１ペプチドに対する抗体の量の健常人とＨＣＶ患者の比較を示す。
【図６】血清中の３１ペプチドに対する抗体の量の健常人とインフルエンザ患者の比較を示す。
【図７】血清中の３１ペプチドに対する抗体の量の健常人とＩｇＡ腎症患者の比較を示す。
【図８】血清中の３１ペプチドに対する抗体の量の健常人とリウマチ患者の比較を示す。
【図９】肝臓がん患者群または白血病患者群の血清中の３１ペプチドに対する抗体価の中央値を閾値としたときの、抗体価が高い群または低い群と生存日数との関係を示す。
【図１０】健常人の血清中の３１ペプチドに対する抗体価の中央値を閾値としたときの、抗体価が高い群または低い群と肝臓がん患者または白血病患者の生存日数との関係を示す。
【図１１】肝臓がん患者群または白血病患者群の血清中の３０または２８ペプチドに対する抗体価の中央値を閾値としたときの、抗体価が高い群または低い群と生存日数との関係を示す。
【図１２】健常人の血清中の３０または２８ペプチドに対する抗体価の中央値を閾値としたときの、抗体価が高い群または低い群と肝臓がん患者または白血病患者の生存日数との関係を示す。
【図１３】健常人によるＩｇＭ抗体価（蛍光強度）の一元配置分析を示す
【図１４】健常人によるＩｇＧ抗体価（蛍光強度）の一元配置分析を示す。
【図１５】抗がん剤投与白血病患者における３１ペプチドに対するＩｇＧ４抗体の総和の中央値で２群に分けた場合の全生存期間を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
１．ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドのセット
本発明は、一つの側面において、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドのセットを提供する。
ＨＬＡクラスＩ分子は、例えば、ＨＬＡ−Ａ分子である。ＨＬＡ−Ａ分子は、例えば、ＨＬＡ−Ａ２４、  −Ａ２、−Ａ２６およびＨＬＡ−Ａ３スーパータイプ（ＨＬＡ−Ａ３、−Ａ１１、−Ａ３１、−Ａ３３および−Ａ６８．１）であり得る。
本明細書において、ペプチドのセットとは、ペプチドの集合であり得る。
一つの実施態様として、本発明が提供するペプチドのセットは、配列番号１−３１で示すペプチドから選択される２以上の異なるペプチドで構成される。例えば、本発明により提供されるペプチドセットは、配列番号１−３１で示されるアミノ酸配列からなるペプチドのうち少なくとも２８種のペプチドから構成されるペプチドセットである。本発明により提供されるペプチドセットの更なる例としては、（ｉ）配列番号１−３１で示されるアミノ酸配列からなる３１個のペプチドのセット、（ｉｉ）配列番号１−３０で示されるアミノ酸配列からなる３０個のペプチドのセット、（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１で示されるアミノ酸配列からなる３０個のペプチドのセット、（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１で示されるアミノ酸配列からなる３０個のペプチドのセット、（ｖ）配列番号１−２９で示されるアミノ酸配列からなる２９個のペプチドのセット、（ｖｉ）配列番号１−２８および３１で示されるアミノ酸配列からなる２９個のペプチドのセット、（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３０で示されるアミノ酸配列からなる２９個のペプチドのセット、（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８で示されるアミノ酸配列からなる２８個のペプチドのセットが挙げられる。
配列番号１−３１で示されるアミノ酸配列からなる３１個のペプチドは、それぞれ９から１０アミノ酸残基からなるペプチドであり、表１に示される。
【０００７】
【表１】
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【０００８】
このペプチドは、がん細胞に対してＨＬＡ拘束性の細胞傷害活性を誘導する腫瘍抗原由来のペプチドであり、がんワクチンとして人への投与実績を有している。
【０００９】
配列番号１は、サイクロフィリンＢ（ＣｙｐＢ）由来のペプチドであり、ｐｅｐｔｉｄｙｌ−ｐｒｏｌｙｌ  ｉｓｏｍｅｒａｓｅ活性による、タンパク質の高次構造形成に関与する自己抗原である。
ＣｙｐＢは各種のがん細胞（膀胱がん、子宮がん、胃がん、肺がん細胞株）において発現量には差があるものの、いずれの細胞でも広く発現が確認されている。
【００１０】
配列番号２は、ＥＧＦＲ（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）タンパク質由来のペプチドであり、当該タンパク質は、ＨＥＲ１、ＥｒｂＢ１とも呼ばれ、１２１０個のアミノ酸から構成され、上皮性細胞、肺がん細胞やアンドロジェン非依存性前立腺がんにおいて重要な役割を果たしており、特に、がん治療においては、標的分子と考えられている。ＥＧＦＲはさまざまな悪性腫瘍で過剰発現がみられ、膵臓がん、肺がん、前立腺がん、頭頸部がん、卵巣がん、胃がん、大腸がん、乳がん等で過剰発現がみられる。
【００１１】
配列番号３は、７４６アミノ酸で構成されるｚｅｓｔｅホモログ２のエンハンサー（Ｅｎｈａｎｃｅｒ  ｏｆ  ｚｅｓｔｅ  ｈｏｍｏｌｏｇ  ２；ＥＺＨ２）タンパク質由来のペプチドで、このタンパク質はｚｅｓｔｅのショウジョウバエエンハンサーに相同性があるポリコームグループタンパク質であり、遺伝子サイレンシングに関与している。この遺伝子サイレンシング機構が調節不全に陥るとがんになることが報告されており、ＥＺＨ２は転移性前立腺がんや脳腫瘍等で発現が確認されている。
【００１２】
配列番号４および５は、５８９アミノ酸から構成されるヘテロ核リボヌクレオタンパク質Ｌ：ｔｈｅ  ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌ（ＨＮＲＰＬ）タンパク質由来のペプチドであり、このタンパク質は、細胞質において機能的で翻訳可能になる前の過程であるプリメッセンジャーＲＮＡを処理するための基質を供給する分子で、ＲＮＡ結合タンパク質として細胞の増殖に関与すると考えられており、多くの組織およびがん細胞で発言が確認されている。
【００１３】
配列番号６〜１１および２９は、ｓｒｃチロシンキナーゼファミリーに属する５０９アミノ酸からなるＬｃｋタンパク質（ｐ５６ｌｃｋ）由来のペプチドであり、Ｔリンパ球の活性化シグナルに関与していることが知られている。このタンパク質は、末梢血リンパ球や活性化Ｔリンパ球に発現しているが、多種類のがん（大腸がん、食道がん、白血病細胞株、前立腺がん患者組織）、特に、転移性がんに発現が確認されている。
【００１４】
配列番号１２および３０は、１５２９個のアミノ酸から構成されるＭＲＰ３タンパク質に由来するペプチドであり、このタンパク質は、ＡＢＣトランスポーターを成すＭＲＰファミリーの１つである。当該タンパク質は、抗がん剤、特に白金製剤に対する抵抗性に関与すると考えられており、多種類のがん種に発現がみられる。
【００１５】
配列番号１３及び１４は、３４２個のアミノ酸からなる前立腺酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ）由来のペプチドであり、当該タンパク質は、オルトリン酸モノエステルをアルコールとオルトリン酸に変換するフォスファターゼで、前立腺関連抗原の１つである。このタンパク質は、正常前立腺、前立腺肥大、前立腺がんや一部の上皮性がんに発現している。
【００１６】
配列番号１５は、マイトジェン活性化蛋白質キナーゼ  キナーゼ  キナーゼ（ｐｐＭＡＰｋｋｋ）タンパク質のものと相同性を有する７７９アミノ酸で構成されるタンパク質由来のペプチドであり、ＭＡＰｋｋｋは細胞の増殖等に関与し、ＭＡＰｋｋをリン酸化することでＭＡＰｋの核内への移行を促すタンパク質で、ＭＡＰｋｋｋ自身は多くの正常組織並びにがん組織に発現が確認されている。
【００１７】
配列番号１６は、２６２個のアミノ酸からなる前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）由来のペプチドであり、当該タンパク質は、カリクレイン様プロテアーゼで、正常前立腺に発現する前立腺関連抗原の１つである。分泌型のＰＳＡは、前立腺における腫瘍マーカーとして一般的に利用されており、膠芽腫での発現頻度は低いものの、大腸がん細胞株における発現は５種類の大腸がん細胞株のうち４種類（Ｃｏｌｏ  ２０１、Ｃｏｌｏ  ２０５、ＳＷ  ４８０、ＳＷ６２０）で検出されている。
【００１８】
配列番号１７は、７５０個のアミノ酸からなる膜タンパク質である前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）由来のペプチドであり、当該タンパク質は、正常前立腺に発現する前立腺関連抗原で、前立腺がんに強発現している。また、ＰＳＭＡは腎臓がん、膀胱がん、及び大腸がん周辺の新生毛細血管の内皮細胞に発現していることが確認されている。
【００１９】
配列番号１８は、１７７個のアミノ酸から構成されるＰＴＨ−ｒＰ  （Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）タンパク質由来んペプチドであり、このタンパク質は、骨芽細胞に作用し、骨の形成や吸収に関わっている。このタンパク質は、前立腺がん、肺がん、乳がん、各種がん細胞株に高レベルに発現している。
【００２０】
配列番号１９及び２０は、扁平上皮がんから同定された９５８アミノ酸で構成される腫瘍抗原（ＳＡＲＴ２）タンパク質由来のペプチドであり、このタンパク質はデルマタン硫酸エピメラーゼとして機能していることが知られている。このタンパク質は正常細胞をはじめ、多くの組織で発現していることが確認されている。
【００２１】
配列番号２１〜２５は、９６３個のアミノ酸から構成されるＳＡＲＴ３タンパク質由来のペプチドであり、当該タンパク質はその機能はまだ解明されていないが、ｍＲＮＡ  ｓｐｌｉｃｉｎｇの調節に働いていることが示されており、大部分のがん細胞や組織の細胞質と核に存在している。
【００２２】
配列番号２６及び３１は、２７０アミノ酸から構成されるｔｈｅ  ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｅｎｚｙｍｅ  ｖａｒｉａｎｔ  Ｋｕａ  （ＵＢＥ２Ｖ）  に相同性を有するタンパク質由来のペプチドであり、ＵＢＥ２Ｖタンパク質の機能は解明されていないが、核内よりお細胞質に多く存在し、ユビキチンの重合の補助因子と考えられており、すい臓がんや脳腫瘍の細胞の他、正常組織のも発現することが確認されている。
【００２３】
配列番号２７及び２８は、５４９アミノ酸で構成されるｔｈｅ  Ｗｏｌｆ−Ｈｉｒｓｃｈｈｏｒｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ２  ｐｒｏｔｅｉｎ  （ＷＨＳＣ２）に相同性を有するタンパク質由来のペプチドであり、ＷＨＳＣ２タンパク質は、第４染色体短腕の部分欠損に起因する精神的・発育的障害によって特定される多発性奇形症候群であるＷＨＳの表現型（ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ）において、何らかの機能を有するとされている。ＷＨＳＣ２の発現は、脳腫瘍、大腸がん、膀胱がん、前立腺がん等の細胞株において、発現が確認されている。
【００２４】
本発明に用いるペプチドは、通常のペプチド合成により製造することができる。目的とするペプチドを化学的合成法で製造する場合には、通常のペプチド化学において慣用されている手法によって製造することができ、例えば、ペプチド合成機を使用して、固相合成法により合成することができる。このようにして得られた粗ペプチドは、タンパク質化学において通常使用されている精製方法、例えば、塩析法、限外ろ過法、逆相クロマトグラフィー法、イオン交換クロマトグラフィー法、アフィニティークロマトグラフィー法などによって精製することができる。
【００２５】
一方、ペプチドを遺伝子組換え技術で生産する場合には、目的のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ断片を適当な発現ベクターに組込み、この発現ベクターを用いて微生物や動物細胞を形質転換して、得られた形質転換体を培養することによって、所望の該ペプチドを得ることができる。使用できる発現ベクターとしては、当該技術分野において公知であるプラスミド、ウイルスベクターなどを用いることができる。ペプチドの発現および精製を容易にするために、ペプチドを融合タンパク質として発現させる手法も当該技術分野においてよく知られている。
【００２６】
発現ベクターを用いた宿主細胞の形質転換方法としては、慣用の方法、例えば、塩化カルシウム法、リン酸カルシウム共沈殿法、ＤＥＡＥデキストラン法、リポフェクチン法、エレクトロポレーション法などを使用することができる。得られたペプチドの精製は、培養した培地から回収した細胞抽出液もしくは培養上清から上記精製法により行うことができる。
【００２７】
本発明に用いるペプチドは、塩または溶媒和物であってもよく、Ｃ末端および／またはＮ末端がエステルまたはアミドに改変されていてもよい。
また、本発明に用いるペプチドは、タグが付加されたＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、配列番号１−３１で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）であってもよい。
本明細書においてタグとは、ポリペプチドの精製、検出等のためポリペプチドに付加される部分を意味し、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、ｍｙｃ、ＦＬＡＧタグなどが例示される。タグが付加されたポリペプチドは、例えば、ｐＥＴ３０ａ（Ｎｏｖａｇｅｎ社製）（Ｈｉｓタグ用）、ｐＧＥＸ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス株式会社製）（ＧＳＴタグ用）などの発現ベクターを用いて、適当な宿主細胞で発現させることで得られる。
【００２８】
また、本発明に用いるペプチドは、ペプチド合成の分野で通常使用される置換基や保護基またはペプチドを安定化させる置換基や保護基がＮ末端やＣ末端に結合したＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、配列番号１−３１で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）であってもよい。このような置換基や保護基の例としては、限定はされないが、アミド基、アセチル基、ベンジルオキシカルボニル基（Ｃｂｚ基またはＺ基）、Ｂｏｃ及びＦｍｏｃが挙げられる。
【００２９】
２．ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレート
本発明は、一つの側面において、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレートを提供する。
【００３０】
ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドは、上記「１．ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドのセット」において説明したとおりである。
【００３１】
よって、一つの実施態様として、本発明は、配列番号１−３１で示すペプチドから選択される２種以上の異なるペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレート、配列番号１−３１で示されるアミノ酸配列からなるペプチドのうち少なくとも２８種のペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレートを提供する。
また、一つの実施態様として、本発明は、
（ｉ）配列番号１−３１；
（ｉｉ）配列番号１−３０；
（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；
（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；
（ｖ）配列番号１−２９；
（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；
（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または
（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８
のそれぞれを構成する各アミノ酸配列からなるペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレートを提供する。
【００３２】
ビーズの場合、１つのビーズに複数の種類のペプチドがそれぞれ、本発明における測定に対して十分な量で結合した１種類のビーズであっても、１つのビーズに１つの種類のペプチドが結合したペプチドの種類により異なるビーズのセットであってもよい。
よって、一つの実施態様として、本発明は、
（ｉ）配列番号１−３１で示されるアミノ酸配列からなる３１種のペプチドがそれぞれ、本発明における測定に対して十分な量で結合した１つのビーズ；
（ｉｉ）配列番号１−３０、配列番号１−２９および３１、または配列番号１−２８、３０および３１で示されるアミノ酸配列からなる３０種のペプチドがそれぞれ本発明における測定に対して十分な量で結合した１つのビーズ；
（ｉｉｉ）配列番号１−２９、配列番号１−２８および３０、または配列番号１−２８および３１で示されるアミノ酸配列からなる２９種のペプチドがそれぞれ本発明における測定に対して十分な量で結合した１つのビーズ；および
（ｉｖ）配列番号１−２８で示されるアミノ酸配列からなる２８種のペプチドがそれぞれ同量で本発明における測定に対して十分な量で結合した１つのビーズを提供する。
本明細書において、本発明における測定に対して十分な量とは、本発明が提供する測定または検査を行うことができる量であれば限定はされず、例えば、試料中（例えば、ヒト血清、ヒト血漿）におけるＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、配列番号１−３１で示されるアミノ酸配列からなる３１種のペプチド）に結合する抗体の抗体価または量を測定できる量（例えば、該抗体量の１０倍、３０倍、１００倍、３００倍または１０００倍の量）であり得る。
また、一つの実施態様として、本発明は、
（ｉ）配列番号１−３１で示されるアミノ酸配列からなる３１種のペプチドの各１種が１つのビーズに結合した３１種類のビーズのセット；
（ｉｉ）配列番号１−３０、配列番号１−２９および３１、または配列番号１−２８、３０および３１で示されるアミノ酸配列からなる３０種のペプチドの各１種が１つのビーズに結合した３０種類のビーズのセット；
（ｉｉｉ）配列番号１−２９、配列番号１−２８および３０、または配列番号１−２８および３１で示されるアミノ酸配列からなる２９種のペプチドの各１種が１つのビーズに結合した２９種類のビーズのセット；および
（ｉｖ）配列番号１−２８で示されるアミノ酸配列からなる２８種のペプチドの各１種が１つのビーズに結合した２８種類のビーズのセットを提供する。
【００３３】
また、ＥＬＩＳＡプレートの場合、（ａ）１つのｗｅｌｌに複数の種類のペプチドが結合したＥＬＩＳＡプレートであっても、（ｂ）１つのｗｅｌｌに１つ種類のペプチドが結合したペプチドの種類により異なるｗｅｌｌを有するＥＬＩＳＡプレートであってもよい。上記（ａ）の場合、一つの実施態様において、１つのｗｅｌｌに複数の種類のペプチドが同量（例えば、同じモル数または同じ重量）で結合したＥＬＩＳＡプレートが提供される。また、上記（ｂ）の場合、一つの実施態様において、各ｗｅｌｌ間で、結合したペプチドが同量（例えば、同じモル数または同じ重量）であるＥＬＩＳＡプレートが提供される。
ペプチドは、ＥＬＩＳＡプレートに直接結合させてもよく、タンパク質やリンカーなどを介して間接的に結合させてもよい。
よって、一つの実施態様として、本発明は、
（ｉ）１つのｗｅｌｌに、配列番号１−３１で示されるアミノ酸配列からなる３１種のペプチドをそれぞれ本発明における測定に対して十分な量で含むＥＬＩＳＡプレート；
（ｉｉ）１つのｗｅｌｌに、配列番号１−３０、配列番号１−２９および３１、または配列番号１−２８、３０および３１で示されるアミノ酸配列からなる３０種のペプチドをそれぞれ本発明における測定に対して十分な量で含むＥＬＩＳＡプレート；
（ｉｉｉ）１つのｗｅｌｌに、配列番号１−２９、配列番号１−２８および３０、または配列番号１−２８および３１で示されるアミノ酸配列からなる２９種のペプチドをそれぞれ本発明における測定に対して十分な量で含むＥＬＩＳＡプレート；および
（ｉｖ）１つのｗｅｌｌに、配列番号１−２８で示されるアミノ酸配列からなる２８種のペプチドをそれぞれ本発明における測定に対して十分な量で含むＥＬＩＳＡプレートを提供する。
また、一つの実施態様として、本発明は、
（ｉ）１つのｗｅｌｌに配列番号１−３１で示されるアミノ酸配列からなる３１種のペプチドの各１種が結合した３１種類のｗｅｌｌを含むＥＬＩＳＡプレート；
（ｉｉ）１つのｗｅｌｌに配列番号１−３０、配列番号１−２９および３１、または配列番号１−２８、３０および３１で示されるアミノ酸配列からなる３０種のペプチドの各１種が結合した３０種類のｗｅｌｌを含むＥＬＩＳＡプレート；
（ｉｉｉ）１つのｗｅｌｌに配列番号１−２９、配列番号１−２８および３０、または配列番号１−２８および３１で示されるアミノ酸配列からなる２９種のペプチドの各１種が結合した２９種類のｗｅｌｌを含むＥＬＩＳＡプレート；および
（ｉｖ）１つのｗｅｌｌに配列番号１−２８で示されるアミノ酸配列からなる２８種のペプチドの各１種が結合した２８種類のｗｅｌｌを含むＥＬＩＳＡプレートを提供する。
【００３４】
ビーズは、ペプチドが結合できればよく、ポリスチレンビーズであっても、磁気ビーズであってもよい。ビーズの大きさも特に限定はされず、例えば、直径が５〜７μｍであってもよい。例えば、本発明で用いることができるビーズは、Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎが製造するｘＭＡＰ（登録商標）に使用可能なビーズであってもよい。
ＥＬＩＳＡプレートは、ペプチドが結合できればよく、例えば、ポリスチレン製のプレートであり得る。
本発明に用いるペプチドのビーズまたはＥＬＩＳＡプレートへの結合は、当業者が適宜実施できる。
【００３５】
３．ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに対する抗体の抗体価の測定用キット、およびがんの検査用またはがん患者の予後予測の検査用キット
本発明は、一つの側面において、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドを含む、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに対する抗体の抗体価の測定用キットを提供する。
また、一つの側面において、本発明は、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドを含む、がんの検査用またはがん患者の予後予測の検査用キットを提供する。
【００３６】
一つの実施態様として、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドは、それが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレートとしてキットに含まれていてもよい。ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドは、上記「１．ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドからなるペプチドのセット」において説明したとおりである。よって、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドは、配列番号１−３１で示すペプチドから選択される２種以上の異なるペプチド、配列番号１−３１で示されるアミノ酸配列からなるペプチドのうち少なくとも２８種のペプチドであり得、例えば、（ｉ）配列番号１−３１；
（ｉｉ）配列番号１−３０；
（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；
（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；
（ｖ）配列番号１−２９；
（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；
（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または
（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチドであり得る。
キットは、さらに、例えば、緩衝液、洗浄液（例えば、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ２０）を含んだＰＢＳ）、ブロッキング溶液（例えば、ＢＳＡ、牛乳由来タンパク質）、標識抗体（例えば、ＨＲＰ標識抗体、ｃｙ３で蛍光標識した抗体）、発色基質（例えば、ＴＭＢ（３，３'，５，５'−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｉｄｉｎｅ））、対照用の９または１０のランダムなアミノ酸残基からなるペプチドおよび／または当該ペプチドが結合したビーズを含んでもよい。標識抗体は、ヒトＩｇＧ（例えば、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３および／またはＩｇＧ４）および／またはヒトＩｇＭに特異的に結合する抗体（例えば、抗ヒトＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＧ１抗体、抗ヒトＩｇＧ２抗体、抗ヒトＩｇＧ３抗体、抗ヒトＩｇＧ４抗体、抗ヒトＩｇＭ抗体）であってもよい。
【００３７】
上記「２．ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレート」で説明したビーズまたはＥＬＩＳＡプレートを使用して、試料（例えば、ヒト血清、ヒト血漿等）中の腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１−３１；（ｉｉ）配列番号１−３０；（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１−２９；（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合する抗体の検出、量の測定、抗体価の測定をすることができる。抗体の検出、量の測定、抗体価の測定は、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドの種類毎の抗体の検出、量の測定、抗体価の測定であってもよく、種類は問わずＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドに対する全抗体の検出、抗体量の総和の測定、抗体価の総和の測定であってもよい。抗体価は蛍光強度を指標として測定してもよい。また、抗体価は、ヒト血中に抗体が存在しない対照用のペプチド（例えば、９または１０のランダムなアミノ酸残基からなるペプチド）を用いたときの蛍光強度を１として表してもよい。
ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体は、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭからなる群から選択される少なくとも１つの抗体であり得る。
【００３８】
血液中の抗ペプチド抗体は、当業界に知られるいずれの方法により測定してもよい。測定方法としては、例えばＥＬＩＳＡ法(Pedersen M.K. et al., J. Immunol. Methods. 2006 Apr 20;311(1-2):198-206. Epub 2006 Mar 6.)、ルミネックス法（Komatsu N. et al., Scand JCl in Lab Invest. 64, 535-546, 2004）、ＲＩＡ法(Maruta T. et al., Immunol Invest. 2006;35(2):137-48.)、免疫クロマト法が挙げられる。なかでも、アレイシステムによって多種抗原に対する抗体を一度に測定できるルミネックス法により測定することが好ましい。具体的には、本発明の薬剤を構成するペプチドをそれぞれ異なる蛍光色素を有するマイクロビーズ担体に固相化し、この固相化されたペプチドに対して結合する患者末梢血中の抗体を蛍光等によって検出・測定する。測定する抗ペプチド抗体のクラスはペプチドの種類にしたがい適宜決定されるが、通常ＩｇＧ（例えば、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）またはＩｇＭである。
【００３９】
したがって、本発明が提供する検査用試薬は、配列番号１〜３１のペプチドを含むＥＬＩＳＡやＬｕｍｉｎｅｘ法等によって、血液中の抗体が測定できるように調製された試薬であればよく、例えば、配列番号１〜３１のペプチドそのもの（例えば、乾燥粉末や適切な溶媒に溶解した溶液状）であってもよい。また、測定に用いやすいように３１種を個別の試薬とする試薬セットとしてもよく、３１種を混合して１つの試薬とした組成物であってもよい。さらに、ヒトの血液中の抗体を測定するために適した形態に調製した状態、たとえば、ＥＬＩＳＡ用のマイクロプレートやメンブレン等に固相化したプレートまたはメンブレンそのものや、マイクロビーズ上に固相化したビーズからなる試薬であってもよく、３１種と多種のペプチドに対する抗体を一度に測定可能なマイクロビーズへ固相化したビーズを試薬として用いることが好ましい。なお、固相化は、１つの支持担体、例えば１つのビーズまたは９６ｗｅｌｌの１ｗｅｌｌに対して３１種のペプチドを一度に固相化したものでもよく、１つのビーズまたは１ｗｅｌｌごとに１種類のペプチドを固相化したもののいずれでもよいが、ビーズの場合は１つのビーズごとに１種類のペプチドを固相化して調製された３１種のビーズを用いることが好ましい。
【００４０】
より具体的な調製として、例えば、典型的なＥＬＩＳＡ法を用いる場合には、以下のようにして測定を行うことができる。まず、抗原であるペプチドを９６ウェルなどの慣用のＥＬＩＳＡプレートに結合させ、非特異的吸着を防止するためにプレートを適宜ブロッキングする。次に被験者の血液から既知の方法で調製した血清または血漿を適宜希釈してプレートの各ウェルに加えて、所定時間反応する。プレートを洗浄して未結合成分を除去した後、ヒト抗体と結合しうる抗体（例えばウサギ抗ヒト抗体）を加える。ＩｇＧを検出することが望まれる場合には、γ鎖特異的抗ヒトＩｇＧを用いることができる。所定時間反応した後、プレートを洗浄し、検出可能なように標識した抗体（例えば抗ウサギＩｇＧ）を加える。標識は、酵素、蛍光色素、化学発光物質、ビオチン、放射線化合物等を用いて、当業者によく知られる方法により行うことができる。プレートを所定時間反応した後、適当な基質を加えて基質の減少もしくは生成物の増加を測定するか、または蛍光、発光、放射活性を測定することにより、標識を検出する。このようにして、被験者の血清における特定のペプチドに対する抗体の量を測定することができる。
【００４１】
一方、マイクロビーズを用いた方法としては、Ｌｕｍｉｎｅｘ社のｘＭＡＰ技術があげられる。これは、Ｌｕｍｉｎｅｘ社が開発した蛍光マイクロビーズアレイシステムによるフローメトリー測定法であり、ペプチドを結合させたマイクロビーズと血清とを接触させ、次に、蛍光標識二次抗体を結合させて、フローメトリーにより蛍光強度を測定する。
【００４２】
また、免疫クロマト法の場合は、試験紙上に抗原（または抗体）を線状に分布させた部分を作っておき、検体中の抗体と着色粒子で標識された抗原との複合体が試験紙上を移動する際に、抗原（または抗体）に集中的に捕捉されることで現れる色付きのラインをクロマトリーダー等で読み込みを行い数値化することで測定が可能である。
【００４３】
上記「２．ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドが結合したビーズまたはＥＬＩＳＡプレート」で説明したビーズまたはＥＬＩＳＡプレートを用いて、試料（例えば、ヒト血清、ヒト血漿等）中の腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１−３１；（ｉｉ）配列番号１−３０；（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１−２９；（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合する抗体の検出、量の測定、抗体価の測定をすることで、がんの診断またはがん患者の予後予測の判定に使用することができる。
【００４４】
がんの診断またはがん患者の予後予測は、患者の血中のＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１−３１；（ｉｉ）配列番号１−３０；（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１−２９；（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合する抗体の抗体価の総和を測定することにより、達成され得る。抗体価は蛍光強度を指標として測定してもよい。また、抗体価の代わりに、試料中の抗体量を定量してもよい。ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体は、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭからなる群から選択される少なくとも１つの抗体であり得る。
【００４５】
一つの実施態様において、予め多数（例えば、３０、１００、３００人）のがん患者（例えば、白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がん）および健常人の血中の配列番号１−２８または配列番号１−３１で示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＩｇＧ（例えば、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）またはＩｇＭの抗体価の総和を測定しておき、被験者の血中の配列番号１−３１で示されるアミノ酸配列からなるペプチドに結合するＩｇＧ（例えば、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）またはＩｇＭの抗体価の総和と比較することで、被験者ががん患者であるか否かの判定または被験者の予後が良いか否かの判定をすることができる。判定の際には、健常人またはがん患者群の中央値を閾値とし、被験者が当該閾値以上の値を示すかどうかでがん患者であるか否か、生命予後が長いかどうかを判定することができる。
【００４６】
例えば、白血病や肝臓がんにおいては、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１−３１；（ｉｉ）配列番号１−３０；（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１−２９；（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合するＩｇＧ１を測定することで健常人または各患者群の中央値を閾値とし、当該閾値以上の値を示す患者であるかどうかで生命予後が長いかどうかを予測することが可能であり、これによって、患者の治療方針を決定していく一助となりえる。
白血病においては、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１−３１；（ｉｉ）配列番号１−３０；（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１−２９；（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合するＩｇＧ４を測定することで健常人または患者群の中央値を閾値とし、当該閾値以上の値を示す患者であるかどうかで生命予後が長いかどうかを予測することが可能である。白血病の患者が抗がん剤（例えば、がん化学療法剤）を投与されているとき、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合するＩｇＧ４の抗体価が当該閾値より高い場合は、抗がん剤（例えば、がん化学療法剤）の治療が効果を奏していると判断できる。また、その場合は、生命予後が長いと判断できる。
がん化学療法剤は、例えば、分子標的薬（例えば、イマチニブ、リツキシマブ）、アルキル化剤（例えば、イホスファミド、シクロホスファミド）、代謝拮抗剤（例えば、テガフール、フルオロウラシル、メトトレキサート）、植物アルカロイド（例えば、イリノテカン、エトポシド、パクリタキセル、ビンブラスチン）、抗がん性抗生物質（例えば、アクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ）、プラチナ製剤（例えば、オキサリプラチン、カルボプラチン、シスプラチン）、または生物学的応答調節剤（例えば、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、インターロイキン２）であり得る。
【００４７】
また、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１−３１；（ｉｉ）配列番号１−３０；（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１−２９；（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に対するＩｇＭの抗体価を測定し、この測定値の総和を代表値として健常人群の基準値を設定し、基準の上限値より高い値かどうかを指標とすることで、がん（例えば、白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がん）を罹患しているか否かを判定する検査として用いることが可能である。上記基準値は、健常人群の９５％以上が含まれる抗体価の範囲の上限値とすることができる。
なお、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１−３１；（ｉｉ）配列番号１−３０；（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１−２９；（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合するＩｇＭはヒト年齢に依存して血中の抗体価が減少するので、比較する健常人群と被験者の年齢を合わせることにより、正確ながんの罹患の有無の判定をすることができる。あるいは、予め健常人について測定したＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合するＩｇＭの抗体価のデータに基づき、被験者と同じ年齢の健常人の９５％以上が含まれると予想される抗体価の範囲を算出し、その上限値を健常人群の基準値としてもよい。健常人群と被験者の年齢を合わせる場合、同じ年齢が好ましいが、年齢の差が、例えば、５歳未満、４歳未満、３歳未満または２歳未満であってもよい。
【００４８】
また、同様に、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合する全ＩｇＧの抗体価を測定した場合は白血病または肝臓がんの罹患の有無を判定することができ、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合するＩｇＧ１の抗体価を測定した場合は白血病または膵臓がんの罹患の有無を判定することができ、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合するＩｇＧ２の抗体価を測定した場合は白血病の罹患の有無を判定することができ、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合するＩｇＧ３を測定した場合は肝臓がんまたは膵臓がんの罹患の有無を判定することができ、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合するＩｇＧ４を測定した場合は肝臓がんまたは膵臓がんの罹患の有無を判定することができる（図１−４参照）。
【００４９】
一つの実施態様において、被験者が白血病に罹患しているか否かの判定は、被験者の血中の、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１−３１；（ｉｉ）配列番号１−３０；（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１−２９；（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合する全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＭからなる群から選択される少なくとも１つの抗体の抗体価を測定することにより行うことができる。
【００５０】
また、一つの実施態様において、被験者が肝臓がんに罹患しているか否かの判定は、被験者の血中の、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１−３１；（ｉｉ）配列番号１−３０；（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１−２９；（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合する全ＩｇＧ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭからなる群から選択される少なくとも１つの抗体の抗体価を測定することにより行うことができる。
【００５１】
また、一つの実施態様において、被験者が膵臓がんに罹患しているか否かの判定は、被験者の血中の、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチド（例えば、（ｉ）配列番号１−３１；（ｉｉ）配列番号１−３０；（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１−２９；（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８で示されるアミノ酸配列からなるペプチド）に結合するＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭからなる群から選択される少なくとも１つの抗体の抗体価を測定することにより行うことができる。
【００５２】
上記、白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんに罹患しているか否かの判定は、また、それらがんの鑑別診断にも利用できる。
例えば、健常人に比較し、被験者由来の試料（例えば、血清、血漿等）中の全ＩｇＧ、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２が有意に低く、ＩｇＭが健常人に比較し有意に高く、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４が健常人と比較し有意な差がなければ、被験者は白血病に罹患しているのであって肝臓がん、膵臓がんおよび前立腺がんに罹患していないと判定でき；被験者由来の試料（例えば、血清、血漿等）中の全ＩｇＧ、ＩｇＧ３およびＩｇＭが健常人に比較し有意に高く、ＩｇＧ４が健常人為比較し有意に低く、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２が健常人と比較し有意な差がなければ、被験者は肝臓がんに罹患しているのであって白血病、膵臓がんおよび前立腺がんに罹患していないと判定でき；被験者由来の試料（例えば、血清、血漿等）中のＩｇＧ１およびＩｇＧ３が健常人に比較し有意に低く、ＩｇＧ４およびＩｇＭが健常人為比較し有意に高く、全ＩｇＧおよびＩｇＧ２が健常人と比較し有意な差がなければ、被験者は膵臓がんに罹患しているのであって白血病、肝臓がんおよび前立腺がんに罹患していないと判定でき；被験者由来の試料（例えば、血清、血漿等）中のＩｇＭが健常人に比較し有意に高く、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４が健常人為比較し有意な差がなければ、被験者は前立腺がんに罹患しているのであって白血病、肝臓がんおよび膵臓がんに罹患していないと判定できる。
さらに、上記、白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんに罹患しているか否かの判定は、それらがんとＨＣＶ感染者、インフルエンザ感染者、ＩｇＡ腎症、リウマチ等の鑑別診断にも利用できる。
例えば、被験者由来の試料（例えば、血清、血漿等）中の全ＩｇＧ、ＩｇＧ３およびＩｇＭが健常人に比較し有意に高く、ＩｇＧ４が健常人為比較し有意に低く、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２が健常人と比較し有意な差がなければ、被験者が肝臓がんを発症していると判定でき、被験者由来の試料（例えば、血清、血漿等）中の全ＩｇＧ、およびＩｇＧ１が健常人に比較し有意に高く、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭが健常人と比較し有意な差がなければ、被験者はＨＣＶに感染しているものの、肝臓がんを発症していないと判定できる。
【００５３】
一つの実施態様において、本発明は、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドと試料（例えば、ヒト血清、ヒト血漿）を接触させることを含む、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体（例えば、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ）の抗体価の測定方法を提供する。当該抗体価の測定方法はｉｎ  ｖｉｔｒｏで実施することができる。
また、一つの実施態様において、本発明は、ＨＬＡクラスＩ分子に結合する腫瘍抗原由来のペプチドと試料（例えば、ヒト血清、ヒト血漿）を接触させること、ＨＬＡクラスＩに結合する腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体（例えば、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ）の抗体価の測定することを含む、がんの診断方法またはがん患者の予後予測の判定方法を提供する。当該がんの診断方法またはがん患者の予後予測の判定方法はｉｎ  ｖｉｔｒｏで実施することができる。
【００５４】
本発明が提供する実施態様の非限定的な例には、下記（１）〜（２９）が含まれる。
（１）以下の配列番号：
（ｉ）配列番号１−３１；（ｉｉ）配列番号１−３０；（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１−２９；（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８
のそれぞれを構成する各アミノ酸配列からなるペプチドにより構成されるペプチドのセット。
（２）（１）に記載のペプチドが結合したビーズ。
（３）（１）に記載のペプチドが、１個のビーズ当たり各１種ずつ結合したビーズのセット。
（４）（１）に記載の各ペプチドがそれぞれ異なるｗｅｌｌに結合したＥＬＩＳＡプレート。
（５）（１）に記載の各ペプチドが等モルずつ１つのｗｅｌｌに結合したＥＬＩＳＡプレート。
（６）腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体の抗体価の測定に使用する、（１）に記載のペプチドセット、（２）に記載のビーズ、（３）に記載のビーズのセット、または（４）または（５）に記載のＥＬＩＳＡプレート。
（７）がんの判定またはがん患者の予後予測に使用する、（６）に記載のペプチドセット、ビーズ、ビーズのセットまたはＥＬＩＳＡプレート。
（８）がんが、白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんからなる群から選択される少なくとも１つのがんである、（７）に記載のペプチドセット、ビーズ、ビーズのセットまたはＥＬＩＳＡプレート。
（９）（１）に記載のペプチドのセットを含む、腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体の抗体価の測定用組成物またはキット。
（１０）（２）に記載のビーズ、（３）に記載のビーズのセット、（４）に記載のＥＬＩＳＡプレートまたは（５）に記載のＥＬＩＳＡプレートを含む、腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体の抗体価の測定用キット。
（１１）抗体が、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭからなる群から選択される少なくとも１つの抗体である、（９）または（１０）に記載の組成物またはキット。
（１２）以下の配列番号：
（ｉ）配列番号１−３１；（ｉｉ）配列番号１−３０；（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１−２９；（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８
のそれぞれを構成する各アミノ酸配列からなるペプチドにより構成されるペプチドのセットを含む、がんの判定用またはがん患者の予後予測用組成物またはキット。
（１３）（２）に記載のビーズ、（３）に記載のビーズのセット、（４）に記載のＥＬＩＳＡプレートまたは（５）に記載のＥＬＩＳＡプレートを含む、がんの判定用またはがん患者の予後予測用キット。
（１４）がんが、白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんからなる群から選択される少なくとも１つのがんである、（１２）または（１３）に記載の組成物またはキット。
（１５）さらに抗ヒトＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＧ１抗体、抗ヒトＩｇＧ２抗体および抗ヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体を含む白血病の判定用である（１２）から（１４）のいずれかに記載のキット；さらに抗ヒトＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＧ３抗体、抗ヒトＩｇＧ４抗体および抗ヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体を含む肝臓がんの判定用である（１２）から（１４）のいずれかに記載のキット；さらに抗ヒトＩｇＧ１抗体、抗ヒトＩｇＧ３抗体、抗ヒトＩｇＧ４抗体および抗ヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体を含む膵臓がんの判定用である（１２）から（１４）のいずれかに記載のキット；さらに抗ヒトＩｇＭ抗体を含む前立腺がんの判定用である（１２）から（１４）のいずれかに記載のキット；さらに抗ヒトＩｇＧ抗体および抗ヒトＩｇＧ１抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体を含む白血病または肝臓がん患者の予後予測用である（１２）から（１４）のいずれかに記載のキット；または、さらに抗ヒトＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＧ１抗体、抗ヒトＩｇＧ３抗体、抗ヒトＩｇＧ４抗体および抗ヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体を含む肝臓がんとＨＣＶ感染の鑑別診断用である（１２）から（１４）のいずれかに記載のキット。
（１６）被験者から採取した試料における、以下の配列番号：
（ｉ）配列番号１−３１；（ｉｉ）配列番号１−３０；（ｉｉｉ）配列番号１−２９および３１；（ｉｖ）配列番号１−２８、３０および３１；（ｖ）配列番号１−２９；（ｖｉ）配列番号１−２８および３０；（ｖｉｉ）配列番号１−２８および３１；または（ｖｉｉｉ）配列番号１−２８
のそれぞれを構成する各アミノ酸配列からなるペプチドに結合する抗体の抗体価の総和を測定すること含む、がんの判定方法またはがん患者の予後予測方法。
（１７）がんが、白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんからなる群から選択される少なくとも１つのがんである、（１６）に記載の方法。
（１８）抗体が、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭからなる群から選択される少なくとも１つの抗体である、（１６）または（１７）に記載の方法。
（１９）被験者から採取した試料における抗体価の総和と健常人から採取した試料における抗体価の総和の中間値またはがん患者から採取した試料における抗体価の総和の中間値を比較することを更に含む、（１６）から（１８）のいずれかに記載の方法。
（２０）被験者から採取した試料における抗体価の総和と、被験者と同年齢の健常人から採取した試料における抗体価の総和の中間値または被験者と同年齢のがん患者から採取した試料における抗体価の総和の中間値を比較することを更に含む、（１６）から（１８）のいずれかに記載の方法。
（２１）被験者から採取した試料における抗体価の総和と健常人から採取した試料における抗体価の総和の基準値の上限値を比較することを更に含み、該基準値の上限値と下限値の間に９５％以上の健常人の抗体価の総和が含まれる、（１６）から（１８）のいずれかに記載の方法。
（２２）被験者から採取した試料における抗体価の総和と被検者と同年齢の健常人から採取した試料における抗体価の総和の基準値の上限値を比較することを更に含み、該基準値の上限値と下限値の間に９５％以上の被検者と同年齢の健常人の抗体価の総和が含まれる、（１６）から（１８）のいずれかに記載の方法。
（２３）試料は、血清または血漿である、（１６）から（２３）のいずれかに記載の方法。
（２４）ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで実施される、（１６）から（２３）のいずれかに記載の方法。
（２５）抗体が、ヒトＩｇＧ抗体、ヒトＩｇＧ１抗体、ヒトＩｇＧ２抗体およびヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体であり、白血病を判定する（１６）から（２４）のいずれかに記載の方法；抗体が、ヒトＩｇＧ抗体、ヒトＩｇＧ３抗体、ヒトＩｇＧ４抗体およびヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体であり、肝臓がんを判定する（１６）から（２４）のいずれかに記載の方法；抗体が、ヒトＩｇＧ１抗体、ヒトＩｇＧ３抗体、ヒトＩｇＧ４抗体およびヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体であり、膵臓がんを判定用する（１６）から（２４）のいずれかに記載の方法；抗体が、ヒトＩｇＭ抗体であり、前立腺がんを判定する（１６）から（２４）のいずれかに記載の方法；抗体が、ヒトＩｇＧ抗体およびヒトＩｇＧ１抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体であり、白血病または肝臓がん患者の予後を予測する（１６）から（２４）のいずれかに記載の方法；または、抗体が、ヒトＩｇＧ抗体、ヒトＩｇＧ１抗体、ヒトＩｇＧ３抗体、ヒトＩｇＧ４抗体およびヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体であり、肝臓がんとＨＣＶ感染を鑑別する（１６）から（２４）のいずれかに記載の方法。
（２６）（１）に記載のペプチドのセット、（５２）に記載のビーズ、（３）に記載のビーズのセット、（４）に記載のＥＬＩＳＡプレートまたは（５）に記載のＥＬＩＳＡプレートの、腫瘍抗原由来のペプチドに結合する抗体の抗体価の測定用キットの製造における使用。
（２７）（１）に記載のペプチドのセット、（２）に記載のビーズ、（３）に記載のビーズのセット、（４）に記載のＥＬＩＳＡプレートまたは（５）に記載のＥＬＩＳＡプレートの、がんの判定用キットまたはがん患者の予後予測用キットの製造における使用。
（２８）抗体が、全ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４およびＩｇＭからなる群から選択される少なくとも１つの抗体である、（２６）に記載の使用。
（２９）がんが、白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんからなる群から選択される少なくとも１つのがんである、（２７）に記載の使用。
【００５５】
以下、実施例により本発明をさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００５６】
実施例１：がん患者の血清における、配列番号１−３１を構成する各アミノ酸配列からなるペプチドに結合する抗体の測定
（１）ペプチドの調製
配列番号１〜３１で構成されるそれぞれのペプチドを固相合成法にて合成し、純度９０％以上に精製したペプチドを準備した。【００５７】
（２）被験者および血液試料の調製
１０代から９０代までの健常人７４名、インフルエンザ感染者２０名、ＨＣＶ感染者２２名、ＩｇＡ腎症患者２０名、リウマチ患者２０名、肝臓がん患者３９名、すい臓がん患者２０名、前立腺がん患者２０名、白血病患者２６名から常法に従い血清もしくは血漿（ヘパリン加血）を調製した。なお、これらの患者は配列番号１〜３１のいずれかのペプチドをワクチンとして投与した経歴のない被験者である。【００５８】
（３）ペプチド結合ビーズの調製
特に記載のないかぎり、３０℃で配列番号１〜３１のそれぞれで表されるペプチドを結合したビーズの調製を行った。まず、１．５ｍＬチューブにカルボキシビーズ（Ｌｕｍｉｎｅｘ社製）を１０００μＬで分注し、遠心して上清を除去したのちに、０．１Ｍ  ＭＥＳ（２−モルホリノエタンスルホン酸）緩衝液（ｐＨ７．０）を添加して洗浄し、当該緩衝液を除去した。次いで、３００μＬの０．１Ｍ  ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を加え、配列番号１〜３１ペプチドをジメチルスルホキシドに１０ｍｇ／ｍＬで溶解したペプチド溶液５０μＬと４５０μＬの０．１Ｍ  ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）を混合し、各４００μＬを上記の各チューブへ添加した。次いで、ＥＤＣ（Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩）（１０ｍｇ／ｍＬ／０．１Ｍ  ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０））を１０μＬずつ添加した。
暗所で２０時間・振とう反応させた。反応後、上清を除去し、１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）を各チューブに５００μＬずつ添加し、暗所で３０分間・振とう反応させた。次に、各チューブに入ったビーズを０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０／ＰＢＳで洗浄し、イムノブロックを入れて調製した保存用溶液で回収した。なお、ブランクビーズはペプチドを添加せずＤＭＳＯのみを用いて同様の操作を行って調製し、コントロールビーズとして、Ｃ−３５ペプチド（配列番号３２：ＹＬＬＰＲＲＧＰＲＬ）を用いて、同様の操作を行って調製した。
これらの３３種のビーズはそれぞれビーズ数が均等となるように混合した溶液を調製した。【００５９】
（４）抗ペプチド抗体測定
被験者から得た血清を１０％イムノブロックで１００倍に希釈した。フィルタープレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０／ＰＢＳで洗浄し、先に作成した配列番号１〜３１の各ペプチドをそれぞれ結合したビーズおよび陰性コントロールビーズの混合液を１．５μＬ／ウェルで添加した。ビーズを０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０／ＰＢＳで洗浄した後、希釈血清を１００μＬ／ウェルで加え、３０℃で１．５時間反応した。反応後、ビーズを０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０／ＰＢＳで洗浄し、各抗体クラスを検出するために一次抗体（ビオチン化ヤギ抗ヒトＩｇＧ（γ）抗体、抗ＩｇＭ抗体、抗ＩｇＧ１〜抗ＩｇＧ２抗体）を１００μｌ／ウェルで加え、室温で１時間反応した。ビーズを０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０／ＰＢＳで洗浄した後、ストレプトアビジン−Ｒ−フィコエリスリンコンジュゲート（ＳＡＰＥ）を１００μｌ／ウェルで加え、３０℃で３０分間反応した。次に、Ｌｕｍｉｎｅｘ蛍光フローメトリーシステムで蛍光強度を測定し、ビーズに結合した各クラスの抗体（ＩｇＭ、総ＩｇＧ、および各ＩｇＧ１〜４）における測定値（ＦＩＵ）をそれぞれ得た。【００６０】
（５）データ解析
各抗体のクラスについて、被験者ごと得られた３１種のペプチドのＦＩＵそれぞれからブランクビーズおよび測定コントロール（バッファーのみの測定値）の値を差し引いた配列番号１〜３１それぞれの値を合計して代表値とした。そして得られた代表値を用いて、インフルエンザ感染者群、ＨＣＶ感染者群、ＩｇＡ腎症患者群、リウマチ患者群、肝臓がん患者群、すい臓がん患者群、前立腺がん患者群、および白血病患者群に対してそれぞれ年齢調整を行った健常人群との間に有意な差があるかどうかをウイルコクソンの符号順位検定によって検討した
結果を表２および図１〜８に示す。【００６１】
【表２】
2012176879.tif 000003
表２および図１〜８の結果から、ＩｇＧ（ＩｇＧ１〜ＩｇＧ４）については白血病及び肝臓がん患者について有意差がみられた。ＩｇＧ１については、白血病、肝臓がんについて有意差がみられ、ＩｇＧ２については、白血病について有意差がみられ、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４については、肝臓がんおよび膵臓がんについて有意差がみられ、ＩｇＭについては、全てのがん患者、すなわち白血病、肝臓がん、膵臓がん、前立腺がんについて有意差がみられた。
以上から、本発明の３１種のペプチドからなる検査用試薬を用いてＩｇＧおよびＩｇＭを測定することで、健常人との有意差が見られることから、本検査用試薬によって、がんの罹患の有無等を検査しえることがわかった。【００６２】
実施例２：予後予測因子の検討
健常人との間でＩｇＧにおいて有意差がみられた白血病および肝臓がん患者について、ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４の各代表値が患者の生命予後と関連しているかどうかを患者群の中央値または健常人の中央値を閾値として２群に分けたカプランマイヤー曲線を作成し、ログランク検定により有意な差がみられるかどうかを検討した。結果を図９および１０に示す。
図９および１０の結果から、白血病については、白血病患者群の中央値を閾値とした場合、ＩｇＧ１において、閾値以上の患者において生命予後が長いという結果が得られたことから、白血病患者群の中央値をカットオフ値とすれば、白血病患者の生命予後を予測しえることがわかった。一方、肝臓がんについては、健常人群の中央値を閾値とした場合、閾値以上の患者において生命予後が長いという結果が得られたことから、健常人の中央値をカットオフ値とすれば、白血病患者の生命予後を予測しえることがわかったのにおいて、有意な差がみられたことから、これらをカットオフ値とすることで、患者の生命予後を判断する予後予測因子となり得ることが分かった。【００６３】
実施例３：がんの判定因子としての検討
ＩｇＭについて、肝臓がん、前立腺がん、すい臓がん、白血病患者群のそれぞれが、健常人群に対して有意な差がみられたため、抗ペプチドＩｇＭの測定合計値ががんの判定因子になるかどうかについて検討を行った。検討するに当たり、健常人群の年代別に検討を行ったところ、図１３および図１４に示す通り年代別の代表値の平均に差がみられ、一方、患者群の年齢は３５歳以上であったことから、健常人群の年齢も３５歳以上の被験者からなる群（４６名）とした。
次いで、健常人基準値を求めるため、当該群を用いて健常人群の基準値をパーセンタイル法で求めたところ、基準値（＞９５％範囲）は２９５２〜３９４１２（単位：ＦＩＵ）であった。
この基準値の上限値（３９４１２）以下を正常値（すなわち、がんの罹患が陰性）として設定し、基準値の上限値より高い値の場合、陽性とした場合の検出感度、偽陽性率、検査効率を以下の式１〜３によって求めた。結果を表３に示す。なお、式中のａは設定した基準値の上限値より高い値を示す被験者であって、患者であり陽性と判定される人数、ｂは基準値の上限値より高い値を示す被験者であって、健常人であるが陽性と判定される人数、ｃは基準値の上限以下であって患者であるが陰性と判定される人数、ｄは基準値の上限以下であって健常人であり陰性と判定される人数を示している。【００６４】
（式１）検査感度（％）  ＝  ａ／（ａ＋ｃ）×１００
（式２）偽陽性率（％）  ＝  ｂ／（ｂ＋ｃ）×１００
（式３）検査効率（％）  ＝  （ａ＋ｄ）／（ａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ）×１００【００６５】
【表３】
2012176879.tif 000004
表３の結果から、健常人の基準値の上限値以下をがんが陰性とするカットオフ値の設定をすれば、高い感度並びに低い偽陽性率でがんの罹患を検査しえることがわかった。すなわち、本発明が提供する３１種のペプチドを含む検査用試薬を用いてＩｇＭを測定して得た値は、がんの判定因子として用いることが可能であり、３１種のペプチドを含む検査用試薬はがんの罹患の検査に用いることが可能であることが分かった。特に、膵臓がん、前立腺がんの罹患において、感度及び特異性が高い検査が可能であった。【００６６】
実施例４：ペプチドセットに関する検討
以上のように、配列番号１〜３１からなる検査用試薬を用いることで患者の予後を予測することやがんの有無を判定しえることが分かったため、当該判定が可能となる最低限必要なペプチドセットについて検討を行った。
３５歳以上の健常人群４６名と肝臓がん、前立腺がん、すい臓がんおよび白血病のがん患者群１０９名についてそれぞれのペプチドごとにＩｇＧおよびＩｇＭの測定値の平均値を求めた。その結果、以下の表４に示す３つのペプチドは、ＩｇＧおよびＩｇＭのいずれにおいても、健常人群およびがん患者群において低い値を示すことが分かった。
【表４】
2012176879.tif 000005
そこで、これらのペプチドを除いたペプチドセットによって得られた測定値が健常人群と各がん患者群における予後予測因子またはがんの判定因子として用いることが可能かどうかを検討した。
結果を図１１および１２、表５に示す。
【表５】
2012176879.tif 000006
図１１および１２、表５の結果から、配列番号２９〜３１のいずれか１〜３種を除いてもＩｇＧにおける予後予測因子やＩｇＭにおけるがんの判定因子としての利用に影響を与えないことが分かった。
すなわち、配列番号１〜２８からなるペプチドセットでも本発明が提供する検査薬として用いることが可能であり、配列番号１〜２８と配列番号２９〜３１から選ばれる１〜３種からなるペプチドセットを用いることで予後予測やがんの判定が可能であることが分かった。【００６７】
実施例５：  ＩｇＧ４抗体価による抗がん剤投与白血病患者の予後解析
抗がん剤投与白血病患者における３１ペプチドに対するＩｇＧ４抗体の総和の中央値で２群に分けた場合の全生存期間をウイルコクソンで検定したところ抗体価が高い方が有意に予後良好であった（図１５参照）。
【図１】
2012176879.tif 000007
【図２】
2012176879.tif 000008
【図３】
2012176879.tif 000009
【図４】
2012176879.tif 000010
【図５】
2012176879.tif 000011
【図６】
2012176879.tif 000012
【図７】
2012176879.tif 000013
【図８】
2012176879.tif 000014
【図９】
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【図１０】
2012176879.tif 000016
【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成25年1月15日(2013.1.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（削除）
【請求項２】
（削除）
【請求項３】
（削除）
【請求項４】
（削除）
【請求項５】
（削除）
【請求項６】
（削除）
【請求項７】
（削除）
【請求項８】
（削除）
【請求項９】
（削除）
【請求項１０】
（削除）
【請求項１１】
（削除）
【請求項１２】
（削除）
【請求項１３】
（削除）
【請求項１４】
（削除）
【請求項１５】
ヒトから採取した試料における、配列番号１−３１の各アミノ酸配列で示されるペプチドに結合する抗体の抗体価の総和を測定することを含む、がん患者であるか否かの判定方法。
【請求項１６】
ヒトから採取した試料における、
（ｉ）配列番号１−３０；
（ｉｉ）配列番号１−２９および３１；
（ｉｉｉ）配列番号１−２８、３０および３１；または
（ｉｖ）配列番号１−２８
の各アミノ酸配列で示されるペプチドに結合する抗体の抗体価の総和を測定することを含む、がん患者であるか否かの判定方法。
【請求項１７】
ヒトから採取した試料における、配列番号１−３１の各アミノ酸配列で示されるペプチドに結合する抗体の抗体価の総和を測定することを含む、がん患者の予後予測方法。
【請求項１８】
ヒトから採取した試料における、
（ｉ）配列番号１−３０；
（ｉｉ）配列番号１−２９および３１；
（ｉｉｉ）配列番号１−２８、３０および３１；または
（ｉｖ）配列番号１−２８
の各アミノ酸配列で示されるペプチドに結合する抗体の抗体価の総和を測定することを含む、がん患者の予後予測方法。
【請求項１９】
がん患者から採取した試料において測定した該抗体価の総和と健常人から採取した試料において測定した該抗体価の総和とを比較することを含む、請求項１５または請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
がん患者から採取した試料において測定した該抗体価の総和と健常人から採取した試料において測定した該抗体価の総和とを比較することを含む、請求項１７または請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
抗体が、ヒトＩｇＭ抗体であり、がんが、白血病、肝臓がん、膵臓がんまたは前立腺がんである、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項２２】
抗体が、ヒトＩｇＭ抗体であり、がんが、白血病、肝臓がん、膵臓がんまたは前立腺がんである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
抗体が、ヒトＩｇＧ１抗体であり、がんが、白血病である、請求項１７、１８または２０に記載の方法。
【請求項２４】
抗体が、ヒトＩｇＧ１抗体であり、がんが、肝臓がんである、請求項１７、１８または２０に記載の方法。
【請求項２５】
配列番号１−３１の各アミノ酸配列で示されるペプチドからなるペプチドのセット。
【請求項２６】
以下の各アミノ酸配列：
（ｉ）配列番号１−３０；
（ｉｉ）配列番号１−２９および３１；
（ｉｉｉ）配列番号１−２８、３０および３１；または
（ｉｖ）配列番号１−２８
で示されるペプチドからなるペプチドのセット。
【請求項２７】
請求項２５または請求項２６に記載のペプチドが結合したビーズ。
【請求項２８】
請求項２５または請求項２６に記載の各ペプチドがそれぞれ異なるｗｅｌｌに固相化されたＥＬＩＳＡプレート。
【請求項２９】
請求項２５または請求項２６に記載のペプチドのセットを含む、白血病、肝臓がん、膵臓がんまたは前立腺がんに罹患しているか否かの判定用キット。
【請求項３０】
請求項２５または請求項２６に記載のペプチドのセットを含む、白血病または肝臓がん患者の予後予測用キット。
【請求項３１】
請求項２５に記載のペプチドのセット、および抗ヒトＩｇＭ抗体を含み、請求項２５に記載のペプチドセットを構成する各ペプチドに結合するヒトＩｇＭ抗体の抗体価の総和を求めることでがんに罹患しているか否かを判定する、白血病、肝臓がん、膵臓がんまたは前立腺がんに罹患しているか否かの判定用キット。
【請求項３２】
（ｉ）請求項２５に記載のペプチドのセット；および
（ｉｉ）抗ヒト全ＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＧ１抗体、抗ヒトＩｇＧ２抗体および抗ヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体を含み、
請求項２５に記載のペプチドセットを構成する各ペプチドに結合するヒト抗体の抗体価の総和を求めることでがんに罹患しているか否かを判定する、白血病に罹患しているか否かの判定用キット。
【請求項３３】
（ｉ）請求項２５に記載のペプチドのセット；および
（ｉｉ）抗ヒト全ＩｇＧ抗体、抗ヒトＩｇＧ３抗体、抗ヒトＩｇＧ４抗体および抗ヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体を含み、
請求項２５に記載のペプチドセットを構成する各ペプチドに結合するヒト抗体の抗体価の総和を求めることでがんに罹患しているか否かを判定する、肝臓がんに罹患しているか否かの判定用キット。
【請求項３４】
（ｉ）請求項２５に記載のペプチドのセット；および
（ｉｉ）抗ヒトＩｇＧ１抗体、抗ヒトＩｇＧ３抗体、抗ヒトＩｇＧ４抗体および抗ヒトＩｇＭ抗体からなる群から選択される少なくとも１つの抗体を含み、
請求項２５に記載のペプチドセットを構成する各ペプチドに結合するヒト抗体の抗体価の総和を求めることでがんに罹患しているか否かを判定する、膵臓がんに罹患しているか否かの判定用キット。
【請求項３５】
（ｉ）請求項２５に記載のペプチドのセット；および
（ｉｉ）抗ヒトＩｇＭ抗体を含み、
請求項２５に記載のペプチドセットを構成する各ペプチドに結合するヒト抗体の抗体価の総和を求めることでがんに罹患しているか否かを判定する、前立腺がんに罹患しているか否かの判定用キット。
【請求項３６】
請求項２５に記載のペプチドのセット、および抗ヒトＩｇＧ１抗体を含み、請求項２５に記載のペプチドセットを構成する各ペプチドに結合するヒトＩｇＧ１抗体の抗体価の総和を求めることでがん患者の予後を予測する、白血病または肝臓がん患者の予後予測用キット。
【国際調査報告】
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