(57)【要約】  【課題】  本発明は，喘息，慢性閉塞性肺疾患又は肺線維症などの呼吸器系疾患の治療剤，気管支喘息，アトピー性皮膚炎又はアレルギー性鼻炎などのアレルギー性疾患の治療剤，新規なＩＬ−１３誘導性反応の阻害剤，及び新規なエオタキシンの産生阻害剤，新規なＩＬ−１３誘導性間質性肺病変の治療剤又は予防剤，新規な腫瘍治療剤を提供することを目的とする。また本発明は,ｓｉＲＮＡを有効成分とし，ＲＮＡ干渉を惹起する，ＩＬ−１７産生促進剤，Ｔｈ２分化阻害剤，及び喘息の治療剤を提供することを目的とする。  【解決手段】  上記課題は，ＳＯＣＳ１を有効成分として含有する呼吸器系疾患の治療剤などにより解決される。また，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを有効成分として含有する剤などにより解決される。  【選択図】  図４
2009122748.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有する呼吸器系疾患の治療剤。
【請求項２】
前記呼吸器系疾患が，喘息，慢性閉塞性肺疾患，又は炎症性肺疾患である請求項１に記載の治療剤。
【請求項３】
吸入剤，点鼻剤，又は塗布剤である請求項１又は請求項２に記載の治療剤。
【請求項４】
経口剤である請求項１又は請求項２に記載の治療剤。
【請求項５】
ＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有するアレルギー性疾患の治療剤。
【請求項６】
前記アレルギー性疾患が，気管支喘息，アトピー性皮膚炎，アレルギー性結膜炎，又はアレルギー性鼻炎である請求項５に記載の治療剤。
【請求項７】
ＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有するＩＬ−１３誘導性反応の阻害剤。
【請求項８】
エオタキシンの産生阻害剤である請求項７に記載の剤。
【請求項９】
ＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有するＩＬ−１３誘導性間質性肺病変の治療剤又は予防剤。
【請求項１０】
肺線維症の治療剤又は予防剤である請求項９に記載の剤。
【請求項１１】
ＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有する腫瘍治療剤。
【請求項１２】
配列番号２で示される塩基配列を有するペプチドを含有する呼吸器系疾患又はアレルギー性疾患の治療剤。
【請求項１３】
配列番号２で示される塩基配列を有するペプチドを含有するベクターを，発現ベクターとして含有する，請求項１２に記載の剤。
【請求項１４】
ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを有効成分とする，ＩＬ−１７産生促進剤。
【請求項１５】
前記ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡが，配列番号１１に記載のＲＮＡ及び配列番号１２に記載のＲＮＡのいずれか又は両方である，請求項１４に記載のＩＬ−１７産生促進剤。
【請求項１６】
ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを有効成分とする，Ｔｈ２分化阻害剤。
【請求項１７】
前記ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡが，配列番号１１に記載のＲＮＡ及び配列番号１２に記載のＲＮＡのいずれか又は両方である，請求項１６に記載のＴｈ２分化阻害剤。
【請求項１８】
ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを有効成分とする，喘息の治療剤。
【請求項１９】
前記ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡが，配列番号１１に記載のＲＮＡ及び配列番号１２に記載のＲＮＡのいずれか又は両方である，請求項１８に記載の喘息の治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は，ＩＬ−１３阻害剤又はＩＬ−１７産生促進剤を有効成分として含有する呼吸器系疾患，又はアレルギー性疾患の治療剤などに関する。
【背景技術】
【０００２】
気管支喘息は，好酸球浸潤をともなう慢性炎症，可逆性気道閉塞，非特異的刺激に対する気道過敏症（ＡＨＲ：ａｉｒｗａｙ  ｈｙｐｅｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ），杯状細胞の過形成／異形成，及び上皮下の線維症によって特徴づけられる（参考文献１，及び２）。気管支喘息は，世界中で臨床的に蔓延している重要な疾患である。気管支喘息の吸入抗原はよく理解されているものの，気管支喘息が発症する機構や，気管支喘息が持続する機構についてはほとんど知られていない。現在では気道炎症及び気道の構造変化が，気管支喘息の重要な特徴であると考えられている。【０００３】
最近の研究により，Ｔ細胞が喘息患者の気道に浸潤する主なリンパ細胞集団であること，及びインタ−ロイキン（ＩＬ）−４，ＩＬ−５，ＩＬ−９及びＩＬ−１３を含むサイトカイン産物（Ｔｈ２サイトカイン）が，喘息の病態生理を引き起こすために必須であることが示された。これらＴｈ２サイトカインは，細胞表面においてレセプターに結合し，ヤヌスキナ−ゼ（ＪＡＫ）／シグナル伝達性転写因子（ＳＴＡＴ）経路を含むシグナル伝達経路を活性化する（参考文献５）。【０００４】
サイトカインシグナリングのサプレッサー（ＳＯＣＳ）タンパク質ファミリーは，ＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路に対する負のフィードバック制御因子の一つであり，８つのメンバーが同定されている。同定されているメンバーは，サイトカイン誘導性ＳＨ２含有タンパク（ＣＩＳ）及びＳＯＣＳ１〜７である。これらは，ＳＨ２ドメイン及びＳＯＣＳボックスといわれるＣ末端保存領域が存在するという特徴がある（参考文献６及び７）。いくつかの報告により，ＳＯＣＳタンパクが免疫反応の制御に必須であることが示唆されている（参考文献８〜１０）。特にアレルギー性炎症では，これらはヘルパーＴ細胞分化に重要であると考えられる。ＳＯＣＳ５及びＳＯＣＳ３は，それぞれＴｈ１及びＴｈ２細胞において選択的に発現される（参考文献１１，及び１２）。Ｔ細胞におけるＳＯＣＳ３の過剰発現は，ＩＬ−１２レセプターβ２及びＴ−ｂｅｔのようなＩＬ−１２によって制御される遺伝子の活性化を抑制し，Ｔｈ１分化障害を引き起こす（参考文献１２）。ＳＯＣＳ３は，Ｔｈ３あるいはＴｈ１７の分化をも調節する（参考文献１３，及び１４）。一方，ＳＯＣＳ５過剰発現Ｔ細胞は，ＩＬ−４を介したＴｈ２発達の減少を示す（参考文献１５）。アレルギー反応におけるＴ細胞に対するこれらの効果に加え，ＳＯＣＳタンパク質は標的器官の局所的構造細胞において制御的機能を果たす可能性がある。しかしながら，Ｔｈ２反応におけるこれらの局所的機能及び分子機構の詳細は，解明されていない。【０００５】
Ｔｈ２サイトカインのうち，ＩＬ−１３は現在特に重要であると考えられている。ＩＬ−１３は，ビボ実験（ｉｎ  ｖｉｖｏ）により，アレルゲンにより誘導されるＡＨＲ，好酸球増加，粘液の過剰生産を惹起することが示された（参考文献１６，及び１７）。さらに，免疫性の無いマウスに対するリコンビナントＩＬ−１３の局所的投与は，喘息表現型を誘導する（参考文献１７，及び１８）。ＩＬ−１３シグナルは，複合体であることが明らかとなっている。ＩＬ−１３により引き起こされる組織及び分子反応は，ＳＴＡＴ６及びＥＲＫ１／２シグナリングに依存する（参考文献１９〜２２）。細胞表面ＩＬ−１３α２レセプターを介したＩＬ−１３シグナリングは，ＡＰ−１依存的にＴＧＦ−β１産生を誘導する（参考文献２３）。ＳＴＡＴ６は，ＩＬ−１３によって活性化される重要なシグナル伝達分子であり，アレルゲン誘導性実験的喘息の進行に必須である（参考文献１９，２４，及び２５）。また，ＪＡＫ／ＳＴＡＴを活性化することにより，ＳＯＣＳファミリーを誘導することが知られている（参考文献２６〜２８）。【０００６】
一方，アトピー性皮膚炎，アレルギー性鼻炎などのアレルギー性疾患に罹患した患者は増えている。よって，アレルギー性疾患の治療剤の開発が望まれる。さらに，ＩＬ−１３（インターロイキン−１３）は，気道のリモデリングの原因となり，また肺では気腫性病変や線維化病変を誘導する（Ｚｈｕ  Ｚ,  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ１９９９，１０３：  ７７９（非特許文献１））。慢性閉塞性肺疾患（Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ：ＣＯＰＤ）は，主に喫煙により発症する閉塞性肺疾患であり，罹患率が急増している。肺線維症は，肺胞の壁が厚くなり，呼吸不全状態に陥る疾患であり，未だ有効な治療法が存在しない。よって，慢性閉塞性肺疾患および肺線維症及びに関する治療剤の開発が望まれる。ＩＬ−１３（インターロイキン−１３）は，ＭＭＰ（マトリックス  メタロプロテアーゼ）などの蛋白分解酵素を誘導し，肺気腫喘息の病態形成を惹起する（Ｚｈｅｎｇ  Ｔ,  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ  ２０００，１０６(９)：１０８１（非特許文献２））とともに，肺の線維芽細胞を活性化し，ＩＬ−６やＭＣＰ１などの炎症性サイトカインを誘導することにより，肺線維症に関与していると考えられる（たとえば，Ｄｏｕｃｅｔ，Ｃ．ら：Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，Ｎｏ．１０１：ｐｐ．２１２９−２１３９，１９９８（非特許文献３））。【０００７】
特開２００１−２３１５５８号公報（特許文献１）には，ＩＬ−１３が喘息及びアレルギー疾患に関与することが開示されている。【０００８】
特表２００３−５１３６３７号公報（特許文献２）には，ＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＳＯＣＳ経路に基づくアッセイ系が開示されている。すなわち，同文献では，ＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＳＯＣＳ経路が細胞性ストレスを引き起こす化学物質に対して感受性が高いという知見に基づき，ＪＡＫ−ＳＴＡＴ−ＳＯＣＳ経路に基づくアッセイ系を用いて，細胞性ストレスを引き起こす化合物をモニターする方法が開示されている（同文献の段落［０００４］及び［０００５］）。また，同文献には，ＳＯＣＳ（Ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｓ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）の例として，ＳＯＣＳ１があげられている（同文献の段落［０００３］）。  【０００９】
特表２００７−５０７４３８号公報（特許文献３）には，具体的な実施例はないものの，ＳＯＣＳ１に対する特異的なＤＮＡｚｙｍｅ又はｓｉＲＮＡを用いた，慢性炎症性疾患又は自己免疫疾患に対する薬剤が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特開２００１−２３１５５８号公報
【特許文献２】特表２００３−５１３６３７号公報
【特許文献３】特表２００７−５０７４３８号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｚｈｕ  Ｚ,  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ１９９９，１０３：  ７７９
【非特許文献２】Ｚｈｅｎｇ  Ｔ,  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ  ２０００，１０６(９)：１０８１
【非特許文献３】Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，Ｎｏ．１０１：ｐｐ．２１２９−２１３９，１９９８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は，喘息，慢性閉塞性肺疾患又は炎症性肺疾患などの呼吸器系疾患の治療剤を提供することを目的とする。【００１３】
本発明は，気管支喘息，アトピー性皮膚炎，アレルギー性結膜炎又はアレルギー性鼻炎などのアレルギー性疾患の治療剤を提供することを目的とする。【００１４】
本発明は，新規なＩＬ−１３誘導性反応の阻害剤，及び新規なエオタキシンの産生阻害剤を提供することを目的とする。【００１５】
本発明は，新規なＩＬ−１３誘導性間質性肺病変の治療剤又は予防剤を提供することを目的とする。【００１６】
本発明は，新規な腫瘍治療剤を提供することを目的とする。【００１７】
本発明は，ｓｉＲＮＡを有効成分とし，ＲＮＡ干渉を惹起する，ＩＬ−１７産生促進剤，Ｔｈ２分化抑制剤，及び喘息の治療剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明は，基本的には，特に気道や皮膚などの局所臓器において，ＳＯＣＳ１の発現が低下すると，アレルギー疾患や炎症（炎症性肺炎など）が惹起され，一方，これらの構成細胞にＳＯＣＳ１を導入することで，病態を制御できるという知見や，ＳＯＣＳ１がＩＬ−１３の機能を阻害するという知見に基づくものである。【００１９】
本発明の第１の側面は，ＳＯＣＳ１，ＳＯＣＳ３などのＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有する呼吸器系疾患の治療剤に関する。後述する実施例により示されたとおり，ＳＯＣＳ１がＩＬ−１３の機能を阻害する。よって，本発明の第１の側面に係る治療剤は，ＳＯＣＳを有効成分として含有することで，ＩＬ−１３が関与する喘息，慢性閉塞性肺疾患，又は炎症性肺疾患などの，呼吸器系疾患に有効である。また，ＳＯＣＳ１を気道上皮などへ局所的に投与することで，呼吸器系疾患などを効果的に治療できる。よって，本発明の第１の側面の好ましい態様は，剤型が，吸入剤，点鼻剤，又は塗布剤である上記いずれかに記載の治療剤である。【００２０】
一方，本発明の剤はまた経口投与により全身に渡って治療を行うこともできる。よって，本発明の第１の側面に係る治療剤は，経口剤であってもよい。【００２１】
本発明の第２の側面は，ＳＯＣＳ１，ＳＯＣＳ３などのＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有するアレルギー性疾患の治療剤に関する。ＩＬ−１３は，アレルギー性疾患に関与することが知られており，後述する実施例により示されたとおり，ＳＯＣＳ１は，ＩＬ−１３を阻害する。よって，ＳＯＣＳ１などのＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有する治療剤は，アレルギー性疾患の治療に有効である。アレルギー性疾患として，気管支喘息，アトピー性皮膚炎，アレルギー性結膜炎又はアレルギー性鼻炎があげられる。【００２２】
本発明の第３の側面は，ＳＯＣＳ１，ＳＯＣＳ３などのＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有するＩＬ−１３誘導性反応の阻害剤に関する。ＳＯＣＳ１が，ＩＬ−１３を阻害することは，実施例により初めて実証されたものである。よって，本発明の剤によれば，ＩＬ−１３が関与する疾患の治療に有効である。【００２３】
本発明の第３の側面の好ましい態様は，ＳＯＣＳ１，ＳＯＣＳ３などのＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有するエオタキシンの産生阻害剤に関する。後述する実施例により実証されたとおり，ＳＯＣＳ１を用いることで，エオタキシンの産生を効果的に阻害できる。エオタキシンは，好酸球性炎症を惹起すると考えられるから，本発明の剤は，好酸球増多疾患の治療剤として有効である。これは，ＳＯＣＳ１がＩＬ−１３を阻害することによりもたらされる効果であると考えられる。【００２４】
本発明の第４の側面は，ＳＯＣＳ１，ＳＯＣＳ３などのＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有するＩＬ−１３誘導性間質性肺病変の治療剤又は予防剤に関する。具体的には，肺線維症の治療剤又は予防剤があげられる。ＳＯＣＳ１は，ＩＬ−１３誘導反応を阻害するので，ＳＯＣＳ１などのＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有する剤は，ＩＬ−１３誘導性間質性肺病変の治療剤又は予防剤などとして有効である。【００２５】
本発明の第５の側面は，ＳＯＣＳ１，ＳＯＣＳ３などのＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有する腫瘍治療剤に関する。ＩＬ−１３を阻害すると，抗腫瘍活性を呈することが報告されている(Ｋａｗａｋａｍｉ  Ｋ,  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ.  ２００６  Ａｐｒ  １５；６６(８)：４４３４−４２）。一方，実施例によりＳＯＣＳ１などのＳＯＣＳがＩＬ−１３の誘導反応を阻害することが示された。よって，ＳＯＣＳ１などのＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有する剤は，腫瘍治療剤として有効に機能するものと考えられる。【００２６】
本発明の第６の側面は，ＳＯＣＳ１をコードするＤＮＡ（配列番号２で示されるＤＮＡ）を含有する呼吸器系疾患又はアレルギー性疾患の治療剤に関する。先に説明したとおり，ＳＯＣＳ１は，呼吸器系疾患又はアレルギー性疾患の治療剤に有効であるから，ＳＯＣＳ１をコードするＤＮＡを含有する剤は，それらの疾患の治療に有効である。この態様の発明の好ましい態様は，前記ＳＯＣＳ１をコードするＤＮＡを，発現ベクターとして含有する，上記に記載の剤である。すなわち，ＳＯＣＳ１をコードするＤＮＡを，発現ベクターとして含有するので，たとえば，患部（気道，肺，皮膚など）において，特異的にＳＯＣＳ１を発現させることができ，局部治療などに有効に利用することができる。【００２７】
本発明は，上記した呼吸器系疾患の治療剤，アレルギー性疾患の治療剤，ＩＬ−１３誘導性反応の阻害剤，エオタキシンの産生阻害剤，ＩＬ−１３誘導性間質肺病変の治療剤・予防剤，又は腫瘍治療剤を製造するための，ＳＯＣＳ１の使用をも提供する。【００２８】
本発明は，対象であるヒト又は非ヒト哺乳動物に，有効量のＳＯＣＳ１を投与する工程を含む，呼吸器系疾患，アレルギー性疾患，ＩＬ−１３誘導性間質肺病変又は腫瘍の治療方法をも提供する。【００２９】
本発明の第７の側面は，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを有効成分とする，ＩＬ−１７産生促進剤に関する。後述する実施例により実証されたとおり，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡ（配列番号１１に記載のＲＮＡ及び配列番号１２に記載のＲＮＡのいずれか又は両方）をＴ細胞に導入すると，ＩＬ−１７の産生が増加した。これは，本実施例により始めて見出された結果である。よって，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを有効成分とする剤は，ＩＬ−１７産生促進剤として有効である。そして，後述する実施例によって示されたとおり，ＩＬ−１７の産生を促進することは，たとえば喘息の治療に有効であると考えられる。勿論，ＩＬ−１７は，好中球数増加などの機能があることが知られているので，上記のＩＬ−１７産生促進剤は，好中球数増加などを介して様々な疾患の治療又は予防に有効である。【００３０】
本発明の第８の側面は，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを有効成分とする，Ｔｈ２分化阻害剤に関する。後述する実施例により実証されたとおり，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡ（配列番号１１に記載のＲＮＡ及び配列番号１２に記載のＲＮＡのいずれか又は両方）をＴ細胞に導入すると，Ｔｈ２の分化が抑制された。これは，本実施例により始めて見出された結果である。よって，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを有効成分とする剤は，Ｔｈ２分化阻害剤として有効である。そして，後述する実施例によって示されたとおり，Ｔｈ２分化を阻害することは，たとえば喘息の治療に有効であると考えられる。【００３１】
本発明の第９の側面は，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを有効成分とする，喘息の治療剤に関する。後述する実施例により実証されたとおり，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡ（配列番号１１に記載のＲＮＡ及び配列番号１２に記載のＲＮＡ）をＴ細胞に導入すると，喘息反応を抑制した。これは，本実施例により初めて見出された結果である。よって，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを有効成分とする剤は，喘息の治療剤として有効である。【００３２】
本発明は，ＩＬ−１７産生促進剤，Ｔｈ２分化阻害剤，又は喘息の治療剤を製造するためのＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡの使用をも提供する。本発明は，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを用いた，ＩＬ−１７産生促進方法，Ｔｈ２分化阻害方法，又は喘息の治療方法をも提供する。
【発明の効果】
【００３３】
本発明によれば，喘息，慢性閉塞性肺疾患又は炎症性肺疾患などの呼吸器系疾患の治療剤を提供することができる。【００３４】
本発明によれば，気管支喘息，アトピー性皮膚炎，アレルギー性結膜炎，又はアレルギー性鼻炎などのアレルギー性疾患の治療剤を提供することができる。【００３５】
本発明によれば，新規なＩＬ−１３誘導性反応の阻害剤，及び新規なエオタキシンの産生阻害剤を提供することができる。【００３６】
本発明によれば，新規なＩＬ−１３誘導性間質性肺病変の治療剤又は予防剤を提供することができる。【００３７】
本発明によれば，新規な腫瘍治療剤を提供することができる。【００３８】
本発明によれば，ｓｉＲＮＡを有効成分とし，ＲＮＡ干渉を惹起する，ＩＬ−１７産生促進剤，Ｔｈ２分化抑制剤，及び喘息の治療剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】図１は，ＳＯＣＳ１発現に対するＩＬ−１３の効果を示す図である。図１（ａ）は，ウェスタンブロッティング結果を示す図面に替わる写真である。図１（ｂ）は，マウス肺中のＳＯＣＳ１ｍＲＮＡのリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ解析結果を示す図面に替わるグラフである。図１（ｃ）は，ＳＯＣＳ１発現に関するウェスタンブロッティング結果を示す図面に替わる写真である。
【図２】図２は，ＳＯＣＳ１欠損マウスとＩＬ−１３誘導性喘息との関係を示す図である。図２（ａ）は，好酸球数を示す。図２（ｂ）は，エオタキシン濃度を示す。図２（ｃ）は，吸入したアセチルコリンに対する気道収縮反応を気道内圧で表した図面に替わるグラフである。図２（ｄ）は，吸入したアセチルコリンに対する気道過敏性を誘発濃度２００（ＰＣ２００−ＡＣｈ）として表した図面に替わるグラフである。
【図３】図３は，ＳＯＣＳ１の調節はＳＴＡＴ６活性化及びＩＬ−１３処理後のエオタキシン発現を制御することを示す図である。図３（ａ）は，野生型とＳＯＣＳ１を調整した株のエタオキシン発現を示す図面に替わる写真である。図３（ｂ）は，ＳＯＣＳ１遺伝子を持つレトロウイルスベクターの影響を示す図面に替わるウエスタンブロッティングの写真である。  図３（ｃ）は，細胞上清中のエオタキシンレベルを示す図面に替わるグラフである。図３（ｄ）は，ＩＬ−１３レセプターに対するＳＯＣＳ１不活性化の影響を示す図面に替わる写真である。
【図４】図４は，ＳＯＣＳ１過剰発現による喘息表現型の抑制を示す。図４（ａ）は，リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されたＡＤ−ＬａｃＺあるいはＡｄ−ＳＯＣＳ１とＡｄ−ＣＲｅの感染から３日後におけるＢＡＬＢ／ｃマウス肺中のＳＯＣＳ１発現を示す図面に替わるグラフである。図４（ｂ）は，アデノウイルスによりＳＯＣＳ１遺伝子を形質転換されたＢＡＬＢ／ｃマウスに対しＩＬ−１３処理を行った後のＢＡＬ液中の好酸球数を示す図面に替わるグラフである。図４（ｃ）は，ＯＶＡ誘導性喘息におけるＳＯＣＳ１発現を示す図面に替わる写真（上段パネル）及びグラフ（下段パネル）である。図４（ｄ）は，ＯＶＡ曝露後のＳＯＣＳ１発現に対するＩＬ−１３阻害の効果を示す図面に替わるグラフである。ＢＡＬＢ／ｃマウスのグル−プを可溶性ＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃ（ｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃ）又はコントロールタンパク質で毎日処理した。処理はＯＶＡ曝露より一日前から開始した。ＯＶＡ曝露より３時間後ＲＮＡを単離し，ＳＯＣＳ１発現をＲＴ−ＰＣＲによって解析した。図４（ｅ）は，アセチルコリン依存の気管圧力の変化を示す図面に替わるグラフである。図４（ｆ）は，ＰＣ２００−ＡＣｈの算出結果を示す図面に替わるグラフである。図４（ｇ）は，好酸球数の計測結果を示す図面に替わるグラフである。
【図５】図５は，ＳＯＣＳ３＋／＋ＸＤＯ１１．１０およびＳＯＣＳ３＋／−ＸＤＯ１１．１０マウス由来のＣＤ４＋Ｔ細胞中のＴｈ２サイトカイン（ＩＬ−４，ＩＬ−５，ＩＬ−１３），ＩＦＮγ，ＴＧＦβ，及びＩＬ−１０をＥＬＩＳＡにより測定したものを示す。
【図６】図６（ａ）は，Ｔ細胞中のＳＯＣＳ３のダウンレギュレーションが，アセチルコリンを吸入した気道の反応に与える効果を測定した図面に替わるグラフである。図６（ｂ）は，各々のマウスについての誘発濃度２００（ＰＣ２００）を示す図面に替わるグラフである。図６（ｃ）は，Ｔ細胞中のＳＯＣＳ３のダウンレギュレーションが，レシピエントマウスのＢＡＬ液体中の好酸球に与える効果を測定した図面に替わるグラフである。
【図７】図７は，ＲＴ−ＰＣＲおよびリアルタイムＰＣＲにより分析されたＳＯＣＳ３−特異的ｓｉＲＮＡ処理がＣＤ４＋Ｔ細胞中のＳＯＣＳ３発現に与える影響を示す。図７（ａ）は，対照のｓｉＲＮＡ処理およびＳＯＣＳ３特異的ｓｉＲＮＡ処理の７２時間後のｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃのＣＤ４＋Ｔ細胞中のｍＳＯＣＳ３のＲＴ−ＰＣＲ分析を示す電気泳動写真である。図７（ｂ）は，対照のｓｉＲＮＡ処理およびＳＯＣＳ３−特異的ｓｉＲＮＡ処理の２４時間後，４８時間後，７２時間後のｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃのＣＤ４＋Ｔ細胞中のｍＳＯＣＳ３のリアルタイムＰＣＲ分析を示す図面に替わるグラフである。
【図８】図８は，ＳＯＣＳ３−特異的ｓｉＲＮＡ処理または対照のｓｉＲＮＡ処理を受けたＣＤ４＋Ｔ細胞の細胞培養上清中のＴｈ２サイトカイン（ＩＬ−４，ＩＬ−５，ＩＬ−１３），ＩＦＮγ，ＴＧＦβ，ＩＬ−１０およびＩＬ−１７をＥＬＩＳＡにより測定したものを示した図面にかわるグラフである。
【図９】図９（ａ）は，Ｔ細胞中のＳＯＣＳ３のダウンレギュレーションが，アセチルコリン吸入への気道反応性に与える効果をしめす図面に替わるグラフであるである。図９（ｂ）は，各々のマウスについての誘発濃度（ＰＣ２００）を示す図面に替わるグラフである。図９（ｃ）は，Ｔ細胞中のＳＯＣＳ３のダウンレギュレーションが，受け手マウスのＢＡＬ液体中の好酸球数に与える効果を示す図である。
【図１０】図１０は，アレルギー性気道炎症におけるｐａｎ−ＪＡＫ阻害剤投与の影響を示す図面に替わるグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
呼吸器系疾患の治療剤
本発明の第１の側面は，ＳＯＣＳ１，ＳＯＣＳ３などのＳＯＣＳを有効成分として含有する呼吸器系疾患の治療剤に関する。後述する実施例により示されたとおり，ＳＯＣＳ１（ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  １）は，ＩＬ−１３の機能を阻害する。よって，本発明の第１の側面に係る治療剤は，ＳＯＣＳ１を有効成分として含有することで，ＩＬ−１３が関与する喘息，慢性閉塞性肺疾患，又は炎症性肺疾患などの，呼吸器系疾患に有効である。
【００４１】
ＳＯＣＳ１は，後述する参考文献に記載されているとおり，本発明者らが発見した公知のタンパク質である。また，ＳＯＣＳ１をコードするＤＮＡの塩基配列は，ＮＣＢＩ  ＧｅｎＢａｎｋにおいてＩＤ.Ｕ８８３２６として紹介されている。そのサイトによれば，ＳＯＣＳ１は，Ｎａｔｕｒｅ  ３８７  (６６３６),  ９１７−９２１  (１９９７)に掲載されたことが記載されている。ＳＯＣＳ１は，上記のとおり公知のタンパク質であり，公知の方法によって単離することができ，精製することができる。具体的には，ＳＯＣＳ１のアミノ酸残基配列は，配列番号１で表され，ＳＯＣＳ１をコードするＤＮＡの塩基配列は，配列番号２で表される。
【００４２】
一方，本明細書において，ＳＯＣＳ１は，その作用機序を司るドメインが含まれていれば，それ以外のドメインに関する部分が含まれていなくてもよい。ＳＯＣＳ１の作用機序を司るドメインとして，配列番号１の５２番目〜６７番目のアミノ酸配列（キナーゼ抑制領域（ＫＩＲ））があげられる。また，ＳＯＣＳ１は，その作用機序を司るドメイン，又は全長のＳＯＣＳ１と９０％以上（好ましくは９５％以上より好ましくは９８％以上）の相同性を有するアミノ酸残基を含有する部分ペプチドを含むポリペプチド又はタンパク質、又はＮ末端の１２個のアミノ酸からなるキナーゼ抑制領域と相同性を有する部分ペプチド（例えば，配列番号１７）を含むポリペプチド又はタンパク質であってもよい。
【００４３】
上記したとおり，ＳＯＣＳファミリーはＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路を制御する因子である。その制御機構のとして，ＳＯＣＳタンパク質がリン酸化されたＪＡＫのリン酸化部位（配列番号１８の１００７番目のアミノ酸）に結合することが考えられている。よって，本発明のタンパク質又はペプチドとして，上記リン酸化されるＪＡＫのリン酸化結合部位に結合するペプチドを用いてもよい。具体的には，ＪＡＫの活性化ループ（Ａ−ｌｏｏｐ）を形成する配列番号１８の９９３〜１０１５番目のアミノ酸配列に結合するペプチドが好ましく，配列番号１８の１００１〜１０１３番目のアミノ酸配列に結合するペプチドがより好ましい。上記した配列番号１７のアミノ酸配列からなるペプチドは，配列番号１８の１００１〜１０１３番目のアミノ酸配列に結合する（Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．；２００４，ｖｏｌ１７２，７５１０−７５１８）。よって，本発明のペプチドとして，配列番号１７を含むアミノ酸配列からなるペプチドを好ましく用いることができる。
【００４４】
これらＳＯＣＳ１と実質的に同一のタンパク質を含めて，以下では，本発明のタンパク質ともよぶ。このようにＳＯＣＳ１に所定の改変を導入することや，ファーマコフォアを見出すことは，公知の方法に従って行えばよい。アミノ酸配列の相同性は，相同性計算アルゴリズムであるＮＣＢＩ  ＢＬＡＳＴを用い，以下の条件（期待値＝１０；ギャップを許す；マトリクス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；フィルタリング＝ＯＦＦ）にて計算することができる。なお，本明細書におけるＳＯＣＳ１と実質的に同一のタンパク質として，ＳＯＣＳ１と同様の作用を有するものがあげられる。
【００４５】
本明細書において「有効成分」とは，所定の治療効果を得るための主成分を意味する。たとえば，ＳＯＣＳ１が有効成分となるためには，薬剤においてＳＯＣＳ１が有効量含まれている必要がある。ここで「有効量」とは，所定の薬効を得るために必要な量を意味する。
【００４６】
本発明の第２の側面は，ＳＯＣＳ１，ＳＯＣＳ３などのＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有するアレルギー性疾患の治療剤に関する。ＩＬ−１３は，アレルギー性疾患に関与することが知られており，後述する実施例により示されたとおり，ＳＯＣＳ１は，ＩＬ−１３を阻害する。よって，ＳＯＣＳ１を有効成分として含有する治療剤は，アレルギー性疾患の治療に有効である。アレルギー性疾患として，気管支喘息，アトピー性皮膚炎，アレルギー性結膜炎又はアレルギー性鼻炎があげられる。
【００４７】
本発明の第３の側面は，ＳＯＣＳ１，ＳＯＣＳ３などのＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有するＩＬ−１３誘導性反応の阻害剤に関する。ＳＯＣＳ１が，ＩＬ−１３の活性を阻害することは，実施例により始めて実証されたものである。よって，本発明の剤によれば，ＩＬ−１３が関与する疾患の治療に有効である。
【００４８】
本発明の第３の側面の好ましい態様は，ＳＯＣＳ１，ＳＯＣＳ３などのＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有するエオタキシンの産生阻害剤に関する。後述する実施例により実証されたとおり，ＳＯＣＳ１を用いることで，エオタキシンの産生を効果的に阻害できる。エオタキシンは，好酸球増多を惹起すると考えられるから，本発明の剤は，好酸球増多疾患の治療剤として有効である。
【００４９】
本発明の第４の側面は，ＳＯＣＳ１，ＳＯＣＳ３などのＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有するＩＬ−１３誘導性間質性肺病変の治療剤又は予防剤に関する。具体的には，肺線維症，または慢性肺気腫（慢性閉塞性肺疾患，ＣＯＰＤ）の治療剤又は予防剤があげられる。ＳＯＣＳ１は，ＩＬ−１３誘導反応を阻害するので，ＳＯＣＳ１などのＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有する剤は，ＩＬ−１３誘導性間質性肺病変の治療剤又は予防剤などとして有効である。
【００５０】
本発明の第５の側面は，ＳＯＣＳ１，ＳＯＣＳ３などのＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有する腫瘍治療剤に関する。ＩＬ−１３を阻害すると，抗腫瘍活性を呈することが報告されている(Ｋａｗａｋａｍｉ  Ｋ,  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ.  ２００６  Ａｐｒ  １５；６６(８)：４４３４−４２）。一方，実施例によりＳＯＣＳ１などのＳＯＣＳがＩＬ−１３の誘導反応を阻害することが示された。よって，ＳＯＣＳ１などのＳＯＣＳタンパク質を有効成分として含有する剤は，腫瘍治療剤として有効に機能するものと考えられる。
【００５１】
本発明の第６の側面は，ＳＯＣＳ１をコードするＤＮＡを含有する呼吸器系疾患又はアレルギー性疾患の治療剤に関する。先に説明したとおり，ＳＯＣＳ１は，呼吸器系疾患又はアレルギー性疾患の治療に有効であるから，ＳＯＣＳ１をコードするＤＮＡを含有する剤は，それらの疾患の治療に有効である。この態様の発明の好ましい態様は，前記ＳＯＣＳ１をコードするＤＮＡを，発現ベクターとして含有する，上記に記載の剤である。すなわち，ＳＯＣＳ１をコードするＤＮＡを，発現ベクターとして含有するので，たとえば，患部（気道，肺，皮膚など）において，特異的にＳＯＣＳ１を発現させることができ，局部治療などに有効に利用することができる。
【００５２】
本発明は，上記した呼吸器系疾患の治療剤，アレルギー性疾患の治療剤，ＩＬ−１３誘導性反応の阻害剤，エオタキシンの産生阻害剤，ＩＬ−１３誘導性肺病変の治療剤・予防剤，又は腫瘍治療剤を製造するための，ＳＯＣＳ１の使用をも提供する。
【００５３】
本発明は，対象であるヒト又は非ヒト哺乳動物に，有効量のＳＯＣＳ１を投与する工程を含む，呼吸器系疾患，アレルギー性疾患，ＩＬ−１３誘導性肺病変又は腫瘍の治療方法をも提供する。なお，本発明は，対象であるヒト又は非ヒト哺乳動物に，ＳＯＣＳ１の発現を制御する発現ベクターを投与する工程を含む，呼吸器系疾患又はアレルギー性疾患の治療の治療方法をも提供する。本発明は，さらに，ＳＯＣＳやドミナントネガティブＳＯＣＳを導入することにより，Ｔ細胞反応を制御する，喘息などの呼吸器系疾患や，アトピー性皮膚炎などのアレルギー疾患の治療方法をも提供する。
【００５４】
本発明の薬剤の有効成分は，ＳＯＣＳ１,ＳＯＣＳ３などのＳＯＣＳタンパク質である。ＳＯＣＳタンパク質は，その薬学的に許容される塩であってもよい。具体的には塩酸，臭化水素酸，ヨウ化水素酸，硫酸，硝酸，リン酸等の無機酸，ギ酸，酢酸，プロピオン酸，シュウ酸，マロン酸，コハク酸，フマール酸，マイレン酸，乳酸，リンゴ酸，酒石酸，クエン酸，メタンスルホン酸，エタンスルホン酸，アスパラギン酸，グルタミン酸等の有機酸との酸付加塩，ナトリウム，カリウム，マグネシウム，カルシウム，アルミニウム等の無機塩基，メチルアミン，エチルアミン，エタノールアミン，リジン，オルニチン等の有機塩基との塩やアンモニウム塩等が挙げられる。特に好ましいものとしてカリウム塩が挙げられる。また，本発明の有効成分には，水和物，溶媒和物の全てが含まれる。
【００５５】
本発明のタンパク質，その部分ペプチド，またはそれらの塩は，公知のペプチドの合成法に従って，又は本発明のタンパク質を適当なペプチダーゼで切断することによって製造することができる。ペプチドの合成法としては，例えば，固相合成法又は液相合成法があげられる。本発明のタンパク質，又は部分ペプチドを構成し得る部分ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合させることで，目的とするタンパク質を精製できる。また，反応後は通常の精製法，例えば，溶媒抽出・蒸留・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー・再結晶などを組み合わせて本発明の部分ペプチドを精製単離することができる。上記方法で得られる部分ペプチドが遊離体である場合は，公知の方法あるいはそれに準じる方法によって適当な塩に変換することができるし，逆に塩で得られた場合は，公知の方法あるいはそれに準じる方法によって遊離体または他の塩に変換することができる。
【００５６】
本発明のタンパク質をコードするＤＮＡとしては，前述した本発明のタンパク質をコードする塩基配列を含有するものであればいかなるものであってもよい。本発明のタンパク質をコードするＤＮＡのクローニングの手段としては，本発明の本発明のタンパク質をコードするＤＮＡの一部分を含有する合成ＤＮＡプライマーを用いたＰＣＲ法によって増幅するか，または適当なベクターに組み込んだＤＮＡを本発明のタンパク質の一部あるいは全領域をコードするＤＮＡ断片もしくは合成ＤＮＡを用いて標識したものとのハイブリダイゼーションによって選別することができる。ハイブリダイゼーションの方法は，例えば，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ２ｎｄ（Ｊ.  Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ.  ,  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂ.  Ｐｒｅｓｓ,  1989）に記載の方法などに従って行なうことができる。また，市販のライブラリーを使用する場合，添付の使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。ＤＮＡの塩基配列の変換は，公知のキットを用いて公知の方法あるいはそれらに準じる方法に従って行なうことができる。
【００５７】
本発明のタンパク質の発現ベクターは，例えば，本発明のタンパク質をコードするＤＮＡから目的とするＤＮＡ断片を切り出し，そのＤＮＡ断片を適当な発現ベクター中のプロモーターの下流に連結することにより製造することができる。ベクターとしては，大腸菌由来のプラスミド（例，ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１２，ｐＵＣ１３），枯草菌由来のプラスミド（例，ｐＵＢ１１０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４），酵母由来プラスミド（例，ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５），λファージなどのバクテリオファージ，レトロウィルス，ワクシニアウィルス，バキュロウィルスなどの動物ウィルスなどの他，ｐＡ１−１１，ｐＸＴ１，ｐＲｃ／ＣＭＶ，ｐＲｃ／ＲＳＶ，ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどが用いられる。また，プロモーターとしては，遺伝子の発現に用いる宿主に対応して適切なプロモーターであればいかなるものでもよい。例えば，動物細胞を宿主として用いる場合は，ＳＲαプロモーター，ＳＶ４０プロモーター，ＬＴＲプロモーター，ＣＭＶプロモーター，ＨＳＶ-ＴＫプロモーターなどが挙げられる。
【００５８】
本発明における治療剤の有効成分はであるＳＯＣＳ１などのＳＯＣＳタンパク質は，ＳＯＣＳをコードする遺伝子を遺伝子治療の手法を用いて生体に導入することにより，治療効果を達成することができる。具体的には，生体内においてＳＯＣＳを発現する発現ベクターを遺伝子組み換えにより生体内に導入し，形質転換を行うものがあげられる。治療効果をもたらすタンパク質をコードする遺伝子を生体に導入し，発現させることによって，疾患を治療する手法は公知である。
【００５９】
あるいは，デコイ，ドミナントナガティブ，アンチセンス核酸，リボザイム，またはＲＮＡｉによって，ＩＬ−１３遺伝子の発現を抑制するポリヌクレオチドを，適当なプロモーター配列の下流に組込み，デコイ，ドミナントナガティブ，アンチセンスＲＮＡ，リボザイム，あるいはＲＮＡｉをもたらすＲＮＡの発現ベクターとして投与することができる。この発現ベクターを気管細胞，又はＴ細胞などに導入すれば，これらの遺伝子のデコイ，ドミナントナガティブ，アンチセンス核酸，リボザイム，またはＲＮＡｉによって当該遺伝子の発現を抑制するポリヌクレオチドを発現し，当該遺伝子の発現レベルの低下によって呼吸器関連疾患やアレルギー性疾患に対し，治療効果を達成できる。
【００６０】
デコイとは，転写因子が結合する染色体上のＤＮＡ配列を含む化合物であり，転写因子
が染色体上のＤＮＡに結合することを阻害する化合物をいう。代表的なデコイに用いられる化合物は，核酸及びその類縁体である。デコイは転写因子が結合するＤＮＡ配列，またはこれらの相補体を含むオリゴヌクレオチド，あるいはこれらの変異体により作製できる。
【００６１】
ドミナントネガティブとは，野生型に対して量的及び質的に優位に働いて，野生型の機能を阻害する変異体である。ドミナントネガティブは，野生型のアミノ酸の一部を欠損，置換，付加又は挿入することによりを作製できる。すなわち，ドミナントネガティブＳＯＣＳ１は，公知の方法に従って作成することができる。
【００６２】
アンチセンスＲＮＡとは，遺伝子のセンス配列に相補的な塩基配列を有するＲＮＡである。アンチセンスＲＮＡによって遺伝子発現を抑制するには，通常１５塩基以上，たとえば２０塩基以上，又は３０塩基以上の連続した塩基配列を有するＲＮＡが用いられる。たとえば開始コドンを含む領域にハイブリダイズすることができるアンチセンス核酸は，当該遺伝子の発現抑制効果が大きいとされている。
【００６３】
リボザイムは，塩基配列特異的にＲＮＡを切断する触媒作用を備えたＲＮＡである。リボザイムとして，ハンマーヘッド型やヘアピン型のリボザイムが知られている。いずれのリボザイムも，切断すべき領域に相補的な塩基配列部分と触媒活性の発現に必要な構造を保持するための塩基配列部分とで構成されている。切断すべき領域に相補的な塩基配列は任意とすることができる。
【００６４】
本発明の第７の側面は，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを有効成分とする，ＩＬ−１７産生促進剤に関する。後述する実施例により実証されたとおり，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡ（配列番号１１に記載のＲＮＡ及び配列番号１２に記載のＲＮＡのいずれか又は両方）をＴ細胞に導入すると，ＩＬ−１７の産生が増加する。よって，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを有効成分とする剤は，ＩＬ−１７産生促進剤として有効である。そして，後述する実施例によって示されたとおり，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを導入することで，喘息反応が抑制された。よって，ＩＬ−１７の産生を促進することが，たとえば喘息の治療に有効であると考えられる。勿論，ＩＬ−１７は，好中球数増加などの機能があることが知られている。よって，上記のＩＬ−１７産生促進剤は，好中球数増加などを介して様々な疾患の治療又は予防に有効である。
【００６５】
本発明の第８の側面は，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを有効成分とする，Ｔｈ２分化阻害剤に関する。後述する実施例により実証されたとおり，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡ（配列番号１１に記載のＲＮＡ及び配列番号１２に記載のＲＮＡのいずれか又は両方）をＴ細胞に導入すると，Ｔｈ２の分化が抑制された。よって，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを有効成分とする剤は，Ｔｈ２分化阻害剤として有効である。Ｔｈ２細胞は，Ｔｈ２サイトカイン（ＩＬ−４，ＩＬ−５，ＩＬ−１３など）を産出する。Ｔｈ２分化が阻害されることによって，Ｔｈ２サイトカインが産出されなくなるので，Ｔｈ２サイトカインが関与するアレルギー性疾患を予防、又は治療することができる。そして，後述する実施例によって示されたとおり，Ｔｈ２分化を阻害することは，たとえば喘息の治療に有効であると考えられる。
【００６６】
本発明の第９の側面は，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを有効成分とする，喘息の治療剤に関する。後述する実施例により実証されたとおり，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡ（配列番号１１に記載のＲＮＡ及び配列番号１２に記載のＲＮＡ）をＴ細胞に導入すると，喘息反応を抑制した。よって，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを有効成分とする剤は，喘息の治療剤として有効である。
【００６７】
本発明は，ＩＬ−１７産生促進剤，Ｔｈ２分化阻害剤，又は喘息の治療剤を製造するためのＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡの使用をも提供する。本発明は，ＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡを用いた，ＩＬ−１７産生促進方法，Ｔｈ２分化阻害方法，又は喘息の治療方法をも提供する。
【００６８】
本発明のＳＯＣＳ３のｓｉＲＮＡは，ＳＯＣＳ３の発現を特異的に抑制できるものであればよく，配列番号１１又は配列番号１２に記載の塩基配列に限定されるものではない。本発明で用いるｓｉＲＮＡとしては，塩基配列数が１５〜４０塩基があげられ、１７〜３０塩基が好ましく，１９〜２５塩基がより好ましい。塩基配列数が短すぎると，ＳＯＣＳ３以外の遺伝子発現を抑制しやすくなるため，１９〜２５塩基が望ましい。ｓｉＲＮＡの合成は，特に限定されず，公知の方法で行えばよい。具体的には，固相法，液相法などがあげられる。合成したｓｉＲＮＡは公知の方法で精製すればよく，例えば，逆相カラムクロマトグラフィー，ゲル濾過，ＨＰＬＣなどがあげられる。
【００６９】
ｓｉＲＮＡの感染は，特に限定されず，公知の方法で行えばよい。具体的には，電気穿孔法，リポフェクション法，リン酸カルシウム法，ＤＥＡＥ−デキストラン法，ウイルスベクター法，マイクロインジェクション法などで行うことができる。感染時のｓｉＲＮＡ量やｓｉＲＮＡの感染方法などの条件は，感染させる組織、又は細胞に応じて適宜調整すればよい。ｓｉＲＮＡは，一本鎖の状態（ｓｉｎｇｌｅ  ｓｔｒａｎｄ  ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ））で用いると分解されやすいので，相補鎖を有する二本鎖（ｄｏｕｂｌｅ  ｓｔｒａｎｄ  ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ））の状態で感染させるのが好ましい。ｄｓＲＮＡを作製する方法は，特に限定されず，相補的な２種類のｓｉＲＮＡを公知の方法でアニーリングさせればよい。ｓｉＲＮＡの感染の有無は，感染させた組織又は細胞の一部から，全ＲＮＡを公知の方法で抽出し，ＰＣＲ，リアルタイムＰＣＲ，ノーザンブロッティングなどの公知の方法で調べることができる。
【００７０】
本発明の薬剤は，経口または非経口投与に適した有機又は無機の担体，賦形剤，その他の添加剤を用いて，常法に従って，経口固形製剤，経口液状製剤，または，注射剤，経鼻剤，吸入剤等の非経口製剤として調製することができる。具体的な剤型として，吸入剤，点鼻剤，又は塗布剤があげられる。
【００７１】
吸入剤や経鼻剤等の経粘膜剤は，固体，液体，半固体状のものが用いられ，公知の方法に従って製造することができる。例えば，ラクトースや澱粉のような賦形剤や，更に，ｐＨ調整剤，防腐剤，界面活性剤，滑沢剤，安定剤や増粘剤等が適宜添加されていてもよい。投与は，適当な吸入又は吹送のためのデバイスを使用することができる。例えば，計量投与吸入デバイス等の公知デバイスや噴霧器を使用して，化合物を単独で又は処方された混合物の粉末として，若しくは医学的に許容しうる担体と組み合わせて溶液又は懸濁液として投与することができる。乾燥粉末吸入器等は，単回又は多数回の投与用のものであってもよく，乾燥粉末又は粉末含有カプセルを利用することができる。或いは，適当な駆出剤，例えばクロロフルオロアルカン，ヒドロフルオロアルカン又は二酸化炭素等の好適な気体を使用した加圧エアゾールスプレー等の形態であってもよい。
【００７２】
静注，筋注，皮下注などの注射剤としては，無菌の水性又は非水性の溶液剤，懸濁剤，乳濁剤を包含する。水性の溶液剤，懸濁剤の希釈剤としては，例えば注射用蒸留水及び生理食塩水が含まれる。非水溶性の溶液剤，懸濁剤の希釈剤としては，例えばプロピレングリコール，ポリエチレングリコール，オリーブ油のような植物油，エタノールのようなアルコール類，ポリソルベート８０等がある。このような組成物は，さらに防腐剤，湿潤剤，乳化剤，分散剤，安定化剤（例えばラクトース），溶解補助剤（例えば，グルタミン酸，アスパラギン酸）などの補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保管フィルターを通す濾過，殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。これらはまた無菌の固体組成物を製造し，使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
【００７３】
経口固形製剤としては，錠剤，散剤，細粒剤，顆粒剤，カプセル剤，丸剤，徐放剤等が用いられる。このような固形製剤においては，一つ又はそれ以上の活性物質が，少なくとも一つの不活性な希釈剤，例えば乳糖，マンニトール，ブドウ糖，微結晶セルロース，デンプン，コーンスターチ，ポリビニルピロリドン，メタケイ酸アルミン酸マグネシウムと混合される。組成物は常法に従って，不活性な希釈剤以外の添加剤，例えばヒドロキシプロピルセルロース，ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）のような結合剤；ステアリン酸マグネシウム，ポリエチレングリコール，スターチ，タルクのような潤滑剤；繊維素グリコール酸カルシウム，カルメロースカルシウムのような崩壊剤；ラクトースのような安定化剤；グルタミン酸又はアスパラギン酸のような溶解補助剤；ポリエチレングリコールのような可塑剤；酸化チタン，タルク，黄色酸化鉄のような着色剤；を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要によりショ糖，ゼラチン，寒天，ペクチン，ヒドロキシプロピルセルロース，ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどの糖衣又は胃溶性若しくは腸溶性物質のフィルムで被膜してもよい。
【００７４】
経口液状製剤は，製薬学的に許容される乳濁剤，溶液剤，懸濁剤，シロップ剤，エリキシル剤等を含み，一般的に用いられる不活性な希釈剤，例えば精製水，エタノールを含む。この組成物は不活性な希釈剤以外に湿潤剤，懸濁剤のような補助剤，甘味剤，風味剤，芳香剤，防腐剤を含有していてもよい。
【００７５】
本発明の有効成分の投与量は，投与ルート，疾患の症状，投与対象の年齢，性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定されるが，通常経口投与の場合成人１人当たり有効成分約０．１乃至５００ｍｇ／日，好ましくは１乃至２５０ｍｇ／日であり，これを１回〜２回に分けて投与される。
【００７６】
本発明の薬剤は，たとえば，喘息（気管支喘息など），慢性閉塞性肺疾患，肺線維症，又はアレルギー性鼻炎などの治療に用いられる他の薬剤と同時にまたは時間をおいて併用することができる。本発明の薬剤と併用することが可能である薬剤として，例えば，エピネフリン，塩酸エフェドリン，イソプレテレノール，塩酸トリメトキノール，硫酸サルブタモール，硫酸テルブタリン，塩酸ツロブテロール，フェノテロール，塩酸プロカテロール等のβ刺激薬，臭化イプラトロピウム，フルトロピウム，オキシトロピウム等の抗コリン薬，テオフィリン，コリンテオフィリン，アミノフィリン，ジプロフィリン，プロキシフィリン等のキサンチン誘導体，プロキシフィリン配合剤，ジプロフィリン配合剤，塩酸ドキサプラム等の末梢性呼吸刺激薬，ジメフェリン，アセタゾラミド，メドロキシプロゲステロン，サーファクテン，アルミトリン等の中枢性呼吸刺激薬，コルチゾン，プレドニゾン，プレドニゾロン，デキサメタゾン等の吸入ステロイド剤，リン酸コデイン，リン酸ベンプロペリン等の鎮咳薬，サポニン，塩酸ブロムヘキシン，カルボシステイン，塩酸アンブロキソール等の去痰薬，その他の生薬，漢方薬などが挙げられる。
【００７７】
以下，実施例を用いて本発明を具体的に説明する。本発明は，以下の実施例に限定されるものではなく，当業者に自明な範囲で，適宜調整することができ，そのようなものも本発明に含まれる。
【００７８】
製造例１  マウスの作出
Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドのＳＯＣＳ１−ＫＯマウス（ＳＯＣＳ１−／−）は，公知の方法（参考文献３２）により得た。Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドのＩＦＮγ−ＫＯマウス，及びＢＡＬＢ／ｃマウスを，ジャクソンラボラトリ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，  ＭＥ）より入手した。ＳＯＣＳ１／ＩＦＮγＤＫＯマウス（ＳＯＣＳ１−／−ＩＦＮ−γ−／−）を，ＳＯＣＳ１＋／−ＩＦＮ−γ−／−繁殖ペアから得た（参考文献５６）。ＷＴ（ＳＯＣＳ１＋／＋）及びＳＯＣＳ１−／−マウス胚繊維芽細胞（ＭＥＦｓ）を，ＳＯＣＳ１＋／−の雌雄を交配させて得られた胎児齢１５日胚を由来として標準的プロトコールにより得た（参考文献５７）。これらのマウスを用いたすべての実験を，九州大学動物倫理委員会のガイドラインに認可され，このガイドラインに従って行った。
【００７９】
アデノウイルスベクター及びアデノウイルスの投与
リコンビナントウイルス産生に用いた２９３細胞の毒性効果のため，Ｃｒｅ−ＬｏｘＰコンディショナル発現系を，アデノウイルスベクターを作製するために利用した。ＬａｃＺ（Ａｄ−ＬａｃＺ），ＳＯＣＳ１（Ａｄ−ＳＯＣＳ１），及びＣｒｅリコンビナーゼ（ＡＤ−Ｃｒｅ）を含むリコンビナントアデノウイルスベクターを，２９３細胞にて公知の方法（５８）にしたがって調整した。１×１０８ｐｆｕのＡｄ−ＳＯＣＳ１及びＡｄ−ＣＲｅを麻酔下で気管内に投与した後，ＲＴ−ＰＣＲによるＳＯＣＳ１発現量が，３−５日後をピ−クとして観察された。ＳＯＣＳ１のアデノウイルスにより発現させるため，マウスに最初のＩＬ−１３あるいはＯＶＡ処理の３日前に気管内へアデノウイルスベクター（１×１０８ｐｆｕ）投与した。
【００８０】
生体内でのＩＬ−１３処理
ＩＬ−１３投与を，公知の文献（参考文献１８）に従って行った。リコンビナントマウスＩＬ−１３溶液（０．５ｍｇ）あるいはビ−クル溶液を１，３，及び５日目に気管内へ注入した。ＢＡＬを，６日目であって，最後の投与の２４時間後に行い，ＢＡＬ細胞の差異を測定した。
【００８１】
感作及び曝露
８週齢ＢＡＬＢ／ｃマウスを２０μｇＯＶＡ（Ｇｒａｄｅ  Ｖ;Ｓｉｇｍａ）及び２．２５ｍｇ水酸化アルミニウム（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）の１日目及び１４日目における腹腔内投与により感作させた。２３日目において，アデノウイルスベクター（１×１０８ｐｆｕ）をマウス気管内へ注入した。２６−２８日目において，マウスを，生理食塩水または１％ＯＶＡを含むエアロゾルに，一日２０分間，公知の方法（参考文献１２）にしたがって曝露した。
【００８２】
ＩＬ−１３阻害実験において，実験動物に，２５日目から毎日，４００μｇの可溶性ＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃ融合あるいはコントロ−ル融合タンパク質を腹腔内投与した（参考文献１７）。また，マウスに２５日目から一日おきに１００μｇのＩＬ−１３アンタゴニスト（可溶性ＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃ融合タンパク質）あるいはコントロ−ル融合タンパク質の腹腔内投与した（参考文献５９）。
【００８３】
気道過敏性（ＡＨＲ）の測定
３０日目において，最後のエアロゾル曝露の３６時間後，マウスを麻酔し，頸部気管を切開しカニュ−レを挿入した。アセチルコリンエアロゾルについての気道反応性を測定するため，公知の方法（参考文献１８）にしたがって，マウスに対し人工換気下に，気道内圧を，差圧変換機を用いて測定し，継続的に記録した。アセチルコリン濃度を段階的に増加させ，超音波噴霧器を用いて吸入させた。デ−タは誘発性濃度２００（ＰＣ２００），気道内圧が基準値の２００％となる濃度として表され，ＰＣ２００は個々のマウスについて算出した。ＬｏｇＰＣ２００の値が低いほど，より気道反応性が亢進している（気道過敏性亢進状態である）ことを表す。
【００８４】
気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）
マウスに致死量のペントバルビタールを投与し，気管カニューレを通して肺を１．０ｍＬの０．９％生理食塩水で穏やかに洗浄した。総合及び分画のＢＡＬ細胞数計測を公知の方法（１８）にしたがって行った。サンプルを２０００ｒｐｍで１０分間遠心し，上清を−８０℃で保存した。
【００８５】
エオタキシン測定
ＢＡＬ液上清中及び培養細胞上清中のマウスエオタキシンを，ＥＬＩＳＡキット（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  Ｃａｍｅｒｉｌｌｏ，  ＣＡ）を用いて測定した。
【００８６】
ＳＯＣＳｍＲＮＡ発現の測定
全ＲＮＡを，チオシアン酸グアニジン・フェノール・クロロホルム法によって単離した。逆転写（ＲＴ）ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を１．０μｇの全ＲＮＡについて行った。オリゴ（ｄＴ）プライマーをＲＴに用い，ｃＤＮＡを，特異的プライマーを用いてＰＣＲによって増幅した。ＰＣＲには，下記のｍＳＯＣＳｓ特異的プライマー対を用いた。
【００８７】
ｍＳＯＣＳ１：
５´−ＣＴＣＧＡＧＴＡＧＧＡＴＧＧＴＡＧＣＡＣＧＣＡＡ−３´（配列番号３）及び
５´−ＣＡＴＣＴＴＣＡＣＧＣＴＧＡＧＣＧＣＧＡＡＧＡＡ−３´（配列番号４）；
ｍＳＯＣＳ２：
５´−ＧＡＣＣＡＧＣＴＧＴＣＴＧＧＧＡＣＧＴＧＴＴＧＡ−３´（配列番号５）及び
５´−ＧＡＧＡＧＡＧＡＡＡＴＡＣＴＴＡＴＡＣＣＴＧＧＡＡＴ−３´（配列番号６）；
ｍＳＯＣＳ３：
５´−ＴＧＣＧＣＣＡＴＧＧＴＣＡＣＣＣＡＣＡＧＣＡＡＧＴＴＴ−３´（配列番号７）及び
５´−ＧＣＴＣＣＴＴＡＡＡＧＴＧＧＡＧＣＡＴＣＡＴＡＣＴＧＡ−３´（配列番号８）であった。
β−アクチンのインターナルコントロールに用いられたプライマーは，それぞれ
５´−ＴＣＣＴＧＴＧＧＣＡＴＣＣＡＴＧＡＡＡＣＴ−３´（配列番号９）及び
５´−ＧＡＡＧＣＡＣＴＴＧＣＧＧＴＧＣＡＣＧＡＴ−３´（配列番号１０）であった。
【００８８】
ＰＣＲの具体的な条件は，公知の方法（参考文献１８）にしたがって行った。ｍＳＯＣＳ１，ｍＳＯＣＳ２，ｍＳＯＣＳ３それぞれ，熱変性（９５℃，３０秒）・アニーリング（６０℃，３０秒）・伸張反応（７２℃，３０秒）で行った。サイクル数は，それぞれ４２サイクル，３３サイクル，３８サイクルでおこなった。
【００８９】
ＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７５００（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用い，定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって，マウスＳＯＣＳ１（ＩＤ：Ｍｍ００７８２５５０＿ｓ１）を検出した。比較による閾値サイクル法及びインターナルコントロール（βアクチン，４３５２３４１Ｅ）を標的遺伝子の発現を規格化するために用いた。
【００９０】
ウェスタンブロッティング
免疫ブロット法は，抗リン酸化ＳＴＡＴ６（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）あるいは抗ＳＴＡＴ６（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，  ＣＡ）抗体を用いて，公知の方法（参考文献１２）に従って行った。
【００９１】
レトロウイルス産生及び感染
ＩＲＥＳ−ＧＦＰカセットを含むマウスＳＯＣＳ１あるいはコントロ−ルのｐＧＣＤＮｓａｍｌ／Ｅベクターを，２９３ＧＰＧパッケ−ジング細胞に，公知の方法（参考文献６０）に従って，トランスフェクトさせた。マウス胚繊維芽細胞（ＭＥＦ）にウィルス上清からレトロウイルスによって形質導入した。４８時間後，ＧＦＰ陽性の細胞を，ＦＡＣＳ  ＡＲｉａ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって分離し，実験に用いた。
【００９２】
統計的解析
値を，平均値±（プラスマイナス）標準誤差として表した。グル−プ内の差異は対応の無いｔ検定あるいは偏差解析とともにボンフェローニの事後解析を用いて解析した。ノンパラメトリックなデータは，マン・ホイットニーのＵ検定の後クラスカル・ワリス検定によって解析した。０．０５より小さいＰ値を有意とした。（実施例１〜４に適用）
【００９３】
細胞精製とヘルパーＴ細胞の誘導
Ｔｈ２細胞を作り出すために，ＤＯ１１．１０ＸＳＯＣＳ３＋／＋マウスとＤＯ１１．１０ＸＳＯＣＳ３＋／−マウスの脾細胞から磁気的細胞ソーティング（ＭＡＣＳ）によりＣＤ４＋Ｔ細胞を単離した。精製された細胞（５ｘ１０５細胞／ｍｌ）を，抗原提示細胞（ＡＰＣＳ）（４ｘ１０６細胞／ｍｌ）としてのｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃの照射された脾細胞，ｐＯＶＡ（３２３−３３９）（１μｇ／ｍｌ；ＢＡＣＨＥＭ），組み換えＩＬ−４（１００ｎｇ／ｍｌ；ＰＥＰＲＯ  ＴＥＣＨ，Ｉｎｃ．），アンチＩＬ−１２抗体（１０μｇ／ｍｌ；Ｒ＆Ｄシステムズ，Ｉｎｃ．）およびアンチＣＤ２８（１μｇ／ｍｌ；ＢＤファーミンゲンＩｎｃ．）の存在下で活性化した。これらの細胞を，１０％子牛胎児血清（シグマ），ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）およびストレプトマイシン（１００Ｕ／ｍｌ）を含むＲＰＭＩ１６４０（ＧＩＢＣＯ）中で培養し，維持した。細胞を増幅するため，３日目および５日目に，組み換えＩＬ−２（２ｎｇ／ｍｌ；ＰＥＰＲＯ  ＴＥＣＨ  Ｉｎｃ．）を投与した。これらの方法は以前に報告された方法に従って行った。
【００９４】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＣＤ４＋Ｔ細胞培養とサイトカイン測定
８日目に，ＤＯ１１．１０ＸＳＯＣＳ３＋／＋マウスとＤＯ１１．１０ＸＳＯＣＳ３＋／−マウスからＣＤ４＋Ｔ細胞を回収し，再刺激のために維持した。ＣＤ４＋Ｔ細胞（１Ｘ１０６細胞／ｍｌ）と新規に単離されたＡＰＣｓ（２Ｘ１０６細胞／ｍｌ）を，ｐＯＶＡ（３２３−３３９）（１μｇ／ｍｌ）とともに培養した。４８時間後，培養上清を回収し，Ｔｈ２株のサイトカインプロファイル，ＩＮＦγ，ＴＧＦβ，ＩＬ−１０およびＩＬ−１７を，ＥＬＩＳＡを用いて測定した。
【００９５】
適合移植と負荷
８日目にＤＯ１１．１０ＸＳＯＣＳ３＋／＋マウスとＤＯ１１．１０ＸＳＯＣＳ３＋／−マウスからＣＤ４＋Ｔ細胞を回収し，ｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃマウスの静脈に注入した。この細胞の適合移植後１から５日後に，マウスにエアロゾル化ＯＶＡ（５％）を施した。
【００９６】
ＳＯＣＳ３  ｓｉＲＮＡの感染
ｓｉＲＮＡを行うために，ＳＯＣＳ３（＃１６０２１９）とＦＡＭで標識されたネガティブコントロール（＃４６２０）のｓｉＲＮＡを，アプライドバイオシステムズから購入した。ＳＯＣＳ３ｓｉＲＮＡ（＃１６０２１９）の配列は以下のとおりである：  ＳＯＣＳ３，５’−ＣＣＵＡＣＧＣＡＵＣＣＡＧＵＧＵＧＡＧｔｔ−３’（配列番号１１）および  ５’―ＣＵＣＡＣＡＣＵＧＧＡＵＧＣＧＵＡＧＧｔｔ−３’（配列番号１２）。ＣＤ４＋Ｔ細胞をＤＯ１１．１０ＸＳＯＣＳ３＋／＋マウスから単離し，これらのｓｉＲＮＡを製造者の指示（アマクサヌクレオフェクターシステムＩＩおよび９６ウェルシャトルシステム）にしたがってＣＤ４＋Ｔ細胞に電気穿孔法により感染させた。精製後，ＣＤ４＋Ｔ細胞を３μｇのコントロールまたはＳＯＣＳ３ｓｉＲＮＡで感染した。電気穿孔法後，ＣＤ４＋Ｔ細胞をＴｈ２細胞に誘導し，前述のように適合移植のために用いた。
【００９７】
ＳＯＣＳ３ｍＲＮＡの発現を決定するために，ｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃの脾臓ＣＤ４＋Ｔ細胞を，電気穿孔法後，２４時間，４８時間，７２時間インキュベーションし，回収した。
【００９８】
ｍＲＮＡ発現の決定とリアルタイムＰＣＲ
ＳＯＣＳ３特異的ｓｉＲＮＡまたはネガティヴコントロールのｓｉＲＮＡを感染させたｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃからＣＤ４＋Ｔ細胞の全ＲＮＡを，グアニジニウムチオシアネートーフェノールークロロフォルム法により単離した。逆転写（ＲＴ）−ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を，１．０μｇの全ＲＮＡについて行った。オリゴ（ｄＴ）プライマーをＲＴのために用い，ｃＤＮＡを，特異的プライマーを用いてＰＣＲにより増幅した。ＰＣＲには，以下のプライマー対をそれぞれ使用した。：ｍβ―アクチン，５’−ＴＣＣＴＧＴＧＧＣＡＴＣＣＡＴＧＡＡＡＣＴ−３’（配列番号１３）および  ５’−ＧＡＡＧＣＡＣＴＴＧＣＧＧＴＧＣＡＣＧＡＴ−３’（配列番号１４）；ｍＳＯＣＳ３，  ５’−ＴＧＣＧＣＣＡＴＧＧＴＣＡＣＣＣＡＣＡＧＣＡＡＧＴＴＴ−３’（配列番号１５）および  ５’−ＧＣＴＣＣＴＴＡＡＡＧＴＧＧＡＧＣＡＴＣＡＴＡＣＴＧＡ−３’（配列番号１６）。増幅は，以前の報告に従って行った。
【００９９】
リアルタイムＰＣＲのプライマーは，アプライドバイオシステムズからｍＳＯＣＳ３（Ｍｍ００５４５９１３−ｓｌ）用に購入した。ＰＣＲはＡＢＩ７５００シークエンス検出システム（アプライドバイオシステムズ，フォスターシティ，ＣＡ）を用い，１２．５μｌのＴａｓｍａｎユニバーサルＰＣＲ混合物，１．２５μｌの２０Ｘアッセイーオンーデマンド遺伝子発現アッセイ混合液および１１．２５μｌのＲＮａｓｅフリーのＨ２Ｏに希釈したｃＤＮＡを含む２５μｌ反応混合液中で行った。試料は９５℃で１０分プレインキュベーション後，デネイチャーのために９５℃１５秒，アニーリング伸長のために６０℃１分で４０サイクルの増幅に供した。そしてＰＣＲサイクルの終了後，単一の産物の増幅を確認するために解離曲線を生成し，閾値サイクル回数（Ｃｔ値）を決定した。Ｃｔ値と標準曲線により絶対的定量（Ｑｔ値）を行った。
【０１００】
気道の反応性
１４日目，最後のエアロゾル負荷の２４時間後，アセチルコリンエアロゾルに対するＡＨＲを測定するために，最初にマウスに，ケタミンとペントバルビタールナトリウムの混合物によって腹腔内麻酔し，気管切開後に，カニューレを挿入した。マウスには，機械的人工呼吸を行った（１回換気量，０．３ｍｌ；頻度，１２０呼吸／分）。マウスには，筋弛緩薬を投与した。気道内圧を，圧力変換器を用いて測定し，連続的に記録した。超音波吸入器により，アセチルコリン吸入させ、濃度を段階的に増加させた（０．６から２０ｍｇ／ｍｌ）。データを，気道圧力がそのベースライン値の２００％の濃度である誘発濃度２００（ＰＣ２００）として表した。低いＰＣ２００値は高いＡＨＲを示す。
【０１０１】
気管支肺胞の洗浄（ＢＡＬ）とサイトカイン測定
ＡＨＲの測定後，肺を気管カニューレにより，１ｍｌの生理的食塩水を用いて１度洗浄した。全細胞の計数と分化細胞の計数を，前述のように行った。
【０１０２】
統計解析
平均値±ＳＥＭとして値を表現した。グループ間の違いは，独立ｔ検定またはポストーホックボンフェローリ分析とともに分散分析を用いて分析した。非母数のデータはＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定を用いて分析し，続いてマン・ホイットニーＵ−検定を行った。０．０５以下のＰ値を有為とみなした。（実施例５〜９に適用）
【実施例１】
【０１０３】
ＳＯＣＳ１発現に対するＩＬ−１３の効果
図１は，ＳＯＣＳ１発現に対するＩＬ−１３の効果を示す図である。図１（ａ）は，ＲＴ−ＰＣＲ結果を示す図面に替わる写真である。ケタミン及びキシラジン混合物の腹腔内投与による麻酔下で，免疫されていないＣ５７ＢＬ／６マウスの気管内にビ−クル（ＰＢＳ；コントロ−ル，Ｃ）又はＩＬ−１３溶液を０．１ｍｌ投与した。最後の投与より図に示した時間の後，肺の全ＲＮＡを単離した。発現したＳＯＣＳ１，ＳＯＣＳ２，及びＳＯＣＳ３を，ＲＴ−ＰＣＲによって増幅し，ゲルを写真撮影した。なお図１（ａ）では，βアクチンのＲＴ−ＰＣＲ産物を比較のため示した。デ−タは両方のグル−プのそれぞれの時点における標本数ｎの代表値（ｎ＝３）である。【０１０４】
図１（ｂ）は，マウス肺中のＳＯＣＳ１ｍＲＮＡのリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ解析結果を示す図面に替わるグラフである。図１（ｂ）では，３回の独立した実験の平均値を示した。【０１０５】
図１（ｃ）は，ＳＯＣＳ１発現に関するＲＴ−ＰＣＲ結果を示す図面に替わる写真である。図１（ｃ）では，マウス気管上皮細胞株（ＴＧＭＢＥ−０２−３細胞，上方パネル）又はマウス胚線維芽細胞（下方パネル）において発現したＳＯＣＳ１をゲル性ＲＴ−ＰＣＲによって増幅した。図１（ｃ）では，βアクチンに対するＲＴ−ＰＣＲ産物を比較のため示した。【０１０６】
ＳＯＣＳ発現に対するＩＬ−１３の効果
本発明者らは，後述する実施例におけるビボ実験（ｉｎ  ｖｉｖｏ）により，ＩＬ−１３がＳＯＣＳファミリー分子の発現を誘導することを見出した。すなわち，図１（ａ）及び図１（ｂ）に示されるように，免疫されていないマウスへＩＬ−１３を気管内投与すると，気道におけるＳＯＣＳ１発現が促進される。それに対し，ＳＯＣＳ２及びＳＯＣＳ３の発現はＩＬ−１３による影響を受けなかった。未処理の動物と比較して，媒体物（ＩＬ−１３）注入後のＳＯＣＳ遺伝子の発現に違いはなかった。【０１０７】
また，図１（ｃ）に示されるように，ＩＬ−１３は，ビトロ実験（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）により，ＴＧＭＢＥ−０２−３細胞（マウス気管上皮細胞株），及びマウス胚線維芽細胞（ＭＥＦ）におけるＳＯＣＳ１発現をも増加させた。ビボ実験（ｉｎ  ｖｉｖｏ）により，ＩＬ−１３が，肺でのＳＴＡＴ６を活性化することが明らかにされている（参考文献１７，１８，及び２４）。ＳＴＡＴ６結合における共通のエレメントは，マウスＳＯＣＳ１プロモーターに認められる（参考文献２９，３０）。これらのデ−タは，ＳＴＡＴ６に加え，内在性制御因子ＳＯＣＳ１の発現が，気道の局所構造細胞においてＩＬ−１３により活性化されることを示唆する。
【実施例２】
【０１０８】
ＳＯＣＳ阻害によるＩＬ−１３誘導性喘息の促進
本発明者らは，過剰発現したＳＯＣＳ１が，ＩＬ−１３により誘導される喘息の発症に重要な役割を果たすと仮定した。この仮定を検証するため，後述する実施例によりＩＬ−１３により誘導される反応を，ＳＯＣＳ１欠損マウスにおいて解析した。ＳＯＣＳ１欠損は，ＩＦＮ−γ過剰産生及びＴｈ１型自己免疫に対して過剰反応し，その結果，多臓器不全となる。この疾患の症状は，これらの動物とＩＦＮ−γＫＯバックグラウンドとを交配し，ＳＯＣＳ１／ＩＦＮ−γ二重欠損（ＤＫＯ）マウスを作製することにより，大きく回復する（参考文献３１，３２）。そのため，本発明者らは，ＩＬ−１３を野生型（ＷＴ）Ｃ５７ＢＬ／６，ＳＯＣＳ１＋／＋ＩＦＮ−γ−／−（ＩＦＮ−γＫＯ），及びＳＯＣＳ１−／−ＩＦＮ−γ−／−（ＳＯＣＳ１／ＩＦＮ−γ  ＤＫＯ）マウスの気管に注入した。【０１０９】
ＳＯＣＳ１欠損マウスにおけるＩＬ−１３誘導性喘息
図２は，ＳＯＣＳ１欠損マウスとＩＬ−１３誘導性喘息との関係を示す図である。図２（ａ）は，好酸球数を示す。図２（ｂ）は，エオタキシン濃度を示す。ＩＬ−１３を免疫されていないマウスの気管内に３回投与した。図２（ａ）及び図２（ｂ）の好酸球数及びエオタキシン濃度は，野生型（ＷＴ）Ｃ５７ＢＬ／６，ＩＦＮ−γ−／−（ＩＦＮγ−ＫＯ），及びＩＦＮ−γ−／−ＳＯＣＳ１−／−（ＩＦＮγ／ＳＯＣＳ１−ＤＫＯ）マウスにおいてＩＬ−１３最終投与から２４時間後のＢＡＬ液について測定したものである。【０１１０】
図２（ｃ）は，吸入したアセチルコリンに対する気道収縮反応を気道内圧の変化で表した図面に替わるグラフである。
図２（ｄ）は，吸入したアセチルコリンに対する気道過敏性を閾値濃度（ＰＣ２００−ＡＣｈ）として表した図面に替わるグラフである。標本数ｎ＝６である。*ｐ＜０．０５【０１１１】
図２（ａ）に示されるとおり，ＩＬ−１３を注入すると，免疫されていないＷＴマウスでは，ＢＡＬ液中の好酸球数が増加した。一方，ＷＴ及びＩＦＮ−γＫＯマウスにおいては，好酸球の数に差は見られなかった。ＩＬ−１３を注入した後のＳＯＣＳ１／ＩＦＮ−γＤＫＯマウスは，ＷＴマウスあるいはＩＦＮ−γＫＯマウスと比較して，リンパ球及び好中球の数には有意差が無いにもかかわらず（データは示さず），気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）中の好酸球の更なる増加を示した。未処理（ビークル）のＷＴ，未処理（ビークル）のＩＦＮ−γＫＯ，及び未処理（ビークル）のＳＯＣＳ１／ＩＦＮ−γＤＫＯマウスの間に好酸球数の差は見られなかった。【０１１２】
次に，本発明者らは，マウスのＢＡＬ液中のエオタキシンの値を測定した。図２（ｂ）に示されるように，ＩＬ−１３を注入することで，ＳＯＣＳ１／ＩＦＮ−γ  ＤＫＯマウスのエオタキシン濃度は，ＷＴマウスあるいはＩＦＮ−γ  ＫＯマウスよりも有意に増加し，一方ＳＯＣＳ１／ＩＦＮ−γ  ＤＫＯマウスの気道の好酸球増加を支持した。ＩＦＮ−γ  ＫＯマウスとＷＴマウス間ではＩＬ−１３注入後のＢＡＬ液中におけるエオタキシン濃度に差異はなかった。【０１１３】
マウス系統の間で，Ａ／Ｊマウスはアセチルコリンに対する気道収縮反応が過敏であり，一方，Ｃ５７ＢＬ／６マウスは，気道収縮反応が鈍いことがよく知られている（参考文献３３〜３５）。ＩＬ−１３を気管内注入しても，免疫されていないＣ５７ＢＬ／６ＷＴマウス及びＩＦＮ−γＫＯマウスにおいては，吸入したアセチルコリンに対する気道反応性は影響を受けない。しかしながら，未処理のＡ／Ｊマウスにおいては，気道過敏性亢進を誘導する（参考文献１７，１８，及び３６）。図２（ｃ）に示されるように，未処理（ビークル）のＣ５７ＢＬ／６バックグラウンドＳＯＣＳ１／ＩＦＮ−γ  ＤＫＯマウスは，未処理（ビークル）のＣ５７ＢＬ／６  ＷＴマウスと気道過敏性に差が見られないが，ＩＬ−１３処理後のＳＯＣＳ１／ＩＦＮ−γ  ＤＫＯマウスは気道過敏性が亢進し，図２（ｄ）に示されるように気道過敏性閾値であるＰＣ２００値の低下を示した。これらのデ−タはＩＬ−１３による誘導性喘息の特性が，ＳＯＣＳ１／ＩＦＮ−γ  ＤＫＯマウスにおいて促進されること，及びそれがＩＦＮ−γ欠損には起因しないことを示唆している。
【実施例３】
【０１１４】
ＩＬ−１３は，主にＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路，特にＳＴＡＴ６を介して細胞内シグナルを活性化する（参考文献１９，２１，２２，及び２４）。ＳＯＣＳ１の不活性化がＩＬ−１３反応を促進する分子機構を解明するため，本発明者らはＳＴＡＴ活性化を，マウス胚線維芽細胞（ＭＥＦ）を用いて解析した。【０１１５】
ＳＯＣＳ１の調節とエオタキシン発現
図３は，ＳＯＣＳ１を調節することで，ＩＬ−１３処理後のＳＴＡＴ６活性化及びエオタキシン発現を制御することを示す図である。図３（ａ）は，野生型とＳＯＣＳ１を欠損した株のＳＴＡＴ６活性化を示す図面に替わる写真である。図３（ａ）において，野生型（ＷＴ）Ｃ５７ＢＬ／６又はＳＯＣＳ１−／−（ＳＯＣＳ１−ＫＯ）マウス由来のマウス胚線維芽細胞（ＭＥＦｓ）を１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１３で図に示した期間刺激した。細胞抽出物について図に示した抗体でウエスタンブロッティングを行った。【０１１６】
図３（ｂ）は，ＳＯＣＳ１遺伝子を持つレトロウイルスベクターの影響を示す図面に替わるウエスタンブロッティングの写真である。図３（ｂ）では，ＷＴ  ＭＥＦｓをレトロウイルスベクター（コントロール−ＲＶ）あるいはＳＯＣＳ−１遺伝子を持つレトロウイルスベクター（ＳＯＣＳ１−ＲＶ）に感染させた。レトロウイルスに感染し，ＧＦＰを指標としたＳＯＣＳ１導入陽性の細胞を１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１３中で図に示した期間培養し，細胞抽出物をリン酸化ＳＴＡＴ６及び総ＳＴＡＴ６抗体でウエスタンブロッティングした。【０１１７】
図３（ｃ）は，細胞上清中のエオタキシンレベルを示す図面に替わるグラフである。図３（ｃ）では，ＷＴあるいはＳＯＣＳ１−ＫＯマウス由来の細胞（左），及びコントロ−ルＲＶあるいはＳＯＣＳ１−ＲＶ感染ＷＴ  ＭＥＦｓ（右）を１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１３存在下，あるいは非存在下で２４時間刺激した。細胞上清中のエオタキシンレベルをＥＬＩＳＡで測定した。【０１１８】
図３（ｄ）は，ＩＬ−１３レセプターに対するＳＯＣＳ１不活性化の影響を示す図面に替わる写真である。図３（ｄ）では，ＷＴあるいはＳＯＣＳ１−ＫＯマウス由来のＭＥＦから全ＲＮＡを単離した。ＩＬ−１３レセプター（ＩＬ−１３Ｒα１レセプター，ＩＬ−４レセプター，ＩＬ−１３レセプターのα２鎖）を，ＲＴ−ＰＣＲによって増幅し，ゲルを写真撮影した。なお図３（ｄ）では，βアクチンのＲＴ−ＰＣＲ産物を比較のため示した。【０１１９】
図３（ａ）及び図３（ｂ）に示されるように，ＳＯＣＳ１欠損ＭＥＦでは，コントロ−ルＷＴ  ＭＥＦと比較して，ＩＬ−１３によって誘導されるＳＴＡＴ６リン酸化が増大した。一方，ＷＴ  ＭＥＦにおいてＳＯＣＳ１を強制発現すると，ＩＬ−１３投与後のＳＴＡＴ６リン酸かは認められず，ＳＴＡＴ６活性化が減少した。【０１２０】
本発明者らは，ＭＥＦからのＩＬ−１３依存的エオタキシン産生に対するＳＯＣＳ１の効果を調べた。図３（ｃ）に示されるように，ＳＯＣＳ１欠損ＭＥＦからのエオタキシン産生は，コントロ−ルＭＥＦと比較して増加していた。一方，ＳＯＣＳ１を強制発現したＭＥＦからの産生は減少した。これらの結果から，ＳＯＣＳ１の不活性化により，増加したＳＴＡＴ６活性を通してＩＬ−１３反応を促進することがわかる。【０１２１】
ＩＬ−１３は，ＩＬ−１３Ｒα１レセプターに結合することによって，細胞にシグナルを伝達することが知られている。ＩＬ−１３結合後，このレセプターはＩＬ−４レセプター（ＩＬ−４Ｒα）とヘテロ二量体を形成する（参考文献３７）。ＩＬ−１３は，ＩＬ−１３レセプターのα２鎖（ＩＬ−１３Ｒα２）により高い結合親和性を示し，その結果，ＩＬ−１３Ｒα２がＡＰ−１を活性化し，デコイレセプターだけでなくＴＧＦ−βの分泌を誘導すると考えられる（参考文献２３）。ＳＯＣＳ１がＩＬ−１３レセプターの発現を調節するかを検証するため，本発明者らはＩＬ−１３レセプターのｍＲＮＡの発現をＳＯＣＳ１欠損及びコントロ−ルＭＥＦについて測定した。図３（ｄ）に示されるように，ＳＯＣＳ１は，可溶性ＩＬ−４Ｒ，膜ＩＬ−４Ｒ，ＩＬ−１３Ｒα１，及びＩＬ−１３Ｒα２の発現に影響しなかった。
【実施例４】
【０１２２】
ＳＯＣＳ１過剰発現による喘息表現型の抑制
図４は，ＳＯＣＳ１過剰発現による喘息表現型の抑制を示す。図４（ａ）は，リアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって測定されたＡｄ−ＬａｃＺあるいはＡｄ−ＳＯＣＳ１とＡｄ−Ｃｒｅの感染から３日後におけるＢＡＬＢ／ｃマウス肺中のＳＯＣＳ１発現を示す図面に替わるグラフである。【０１２３】
図４（ｂ）は，アデノウイルスによりＳＯＣＳ１遺伝子を気道で過剰発現されたＢＡＬＢ／ｃマウスに対しＩＬ−１３処理を行った後のＢＡＬ液中の好酸球数を示す図面に替わるグラフである。図４（ｂ）では，Ａｄ−ＬａｃＺあるいはＡｄ−ＳＯＣＳ１とＡｄ−Ｃｒｅを最初のＩＬ−１３処理の３日前にマウス気管内へと注入した。ＢＡＬ液は最後のＩＬ−１３処理から２４時間後に回収した。【０１２４】
図４（ｃ）は，ＯＶＡ誘導性喘息におけるＳＯＣＳ１発現を示す図面に替わるグラフである。図４（ｃ）では，全ＲＮＡを肺全体からＯＶＡ感作及び曝露より図に示した時間の後単離した。マウス肺中のＳＯＣＳ１ｍＲＮＡのリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ解析結果を示す図面に替わるグラフである。３回の独立した実験の平均値を示した。【０１２５】
図４（ｄ）は，ＯＶＡ曝露後のＳＯＣＳ１発現に対するＩＬ−１３阻害の効果を示す図面に替わるグラフである。ＢＡＬＢ／ｃマウスのグル−プを可溶性ＩＬ−１３Ｒα２−Fｃ（ｓＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃ）又はコントロールタンパク質（ＩｇＧ）で毎日処理した。処理はＯＶＡ曝露より一日前から開始した。ＯＶＡ曝露より３時間後ＲＮＡを単離し，ＳＯＣＳ１発現をリアルタイムＲＴ−ＰＣＲによって解析した。【０１２６】
図４（ｅ），図４（ｆ）および図４（ｇ）は，アレルゲン誘導性の喘息に対するＳＯＣＳ１遺伝子導入の効果を示す。図４（ｅ）は，アセチルコリンによる気道内圧の変化を示す図面に替わるグラフである。図４（ｆ）は，ＰＣ２００−ＡＣｈの算出結果を示す図面に替わるグラフである。図４（ｇ）は，好酸球数の計測結果を示す図面に替わるグラフである。ＯＶＡに感作されたマウスにＡＤ−ＬａｃＺあるいはＡｄ−ＳＯＣＳ１，さらにＡｄ−Ｃｒｅを最初のＯＶＡ曝露の３日前に気管内投与した。気道過敏性測定及び気管支肺胞洗浄を最終ＯＶＡ曝露から３６時間後に行った。気道過敏性を，図４（ｅ）に示されるアセチルコリンによる気道内圧の変化によって測定し，図４（ｆ）に示されるようにＰＣ２００−ＡＣｈを算出し，図４（ｇ）に示されるように好酸球数の計測をＢＡＬ液中で行った。標本数は６，*ｐ＜０．０５であった。【０１２７】
本発明者らは，マウス体内でのＩＬ−１３注入，又はアレルゲン感作及び曝露によって誘導される気管支喘息反応に対するＳＯＣＳ過剰発現の効果について検討した。図４（ａ）及び図４（ｂ）に示されるように，ＳＯＣＳ１は，マウス気道内でアデノウイルス発現ベクターを用いて過剰発現され，アデノウイルスによるＳＯＣＳ１の発現は免疫されていないＢＡＬＢ／ｃマウスにおいて，ＩＬ−１３誘導性の気道好酸球浸潤を阻害した。【０１２８】
本発明者らは，マウス気道中のＳＯＣＳ１発現を，卵白アルブミン（ＯＶＡ）誘導性喘息モデルを用いて解析した。図４（ｃ）に示されるように，全身的なＯＶＡ感作及びエアロゾル化したＯＶＡ曝露後，気道中のＳＯＣＳ１発現は増加し，最終ＯＶＡ曝露から３〜６時間後に最大値をとった。さらに本発明者らは，ＯＶＡ曝露により誘導されるＳＯＣＳ１発現を，ＩＬ−１３阻害剤が抑制するかについて実験を行った。図４（ｄ）に示されるように，アレルゲンを投与することにより誘導されるＳＯＣＳ１発現が，ＩＬ−１３阻害剤である可溶性ＩＬ−１３Ｒα２−Ｆｃを投与されたマウス肺においては減少した。このように，ＩＬ−１３は，喘息の気道においてＳＯＣＳ１誘導に寄与することがわかる。【０１２９】
ＯＶＡ感作及び曝露の結果，コントロ−ルマウスにおいてＢＡＬ液中の好酸球増加及び気道過敏性亢進が見られた。図４（ｅ），図４（ｆ）及び図４（ｇ）に示されるように，アデノウイルスによるＳＯＣＳ１過剰発現は，コントロ−ルアデノウイルス処理と比較して，著しくＯＶＡ曝露後の気道好酸球浸潤及び過敏症を抑制した。一方，リンパ球及び好中球の数に有意な差は見られなかった（データは示さず）。感作及び曝露の無い場合，ＳＯＣＳ１−アデノウイルス及びコントロ−ルアデノウイルス処理の間に，アセチルコリンに対する気道過敏性及びＢＡＬ液中の炎症細胞に実質的な差は無かった。【０１３０】
考察
上記の実施例により，ＩＬ−１３を局所投与することで，ＳＯＣＳタンパク質のうち選択的に気道中のＳＯＣＳ１発現を誘導し，ＳＯＣＳ１過剰発現がＩＬ−１３誘導性喘息反応を阻害することが示された。また，ＳＯＣＳ１はＩＬ−１３依存的ＳＴＡＴ６活性化及びエオタキシン発現を抑制することが示された。ＳＯＣＳ１欠損マウスでは，免疫されていない低応答性のＣ５７ＢＬ／６バックグラウンドのマウスにおいてさえも，ＩＬ−１３処理後の気道過敏性が見られる。実験的なＯＶＡによって誘導されるアレルギー性気道炎症モデルでは，アレルゲン曝露はＳＯＣＳ１の気道における上方制御を誘導し，ＳＯＣＳ１の局所的誘導が喘息反応を減弱させる。これらの発見はＴｈ２サイトカインによって気道中に誘導されるＳＯＣＳ１発現がアレルギー性喘息を負に制御すること示す。これは標的器官においてＳＯＣＳタンパク質がアレルギー性炎症を阻害することを初めて証明したものである。【０１３１】
ＳＯＣＳ１発現は多くの刺激によって誘導される（参考文献６，９，及び３８）。一方，ＳＯＣＳ１は，ＩＦＮ−γの重要な阻害因子であると考えられる（３１，３２）。ＩＬ−１３は，喘息及びその他のＴｈ２に支配される炎症性疾患に関連する，様々な炎症促進効果を持つ。これらの効果は，シグナル伝達タンパク質ＳＴＡＴ６によって媒介される。ＩＬ−１３誘導性喘息様の表現型に関連するいくつかのシグナル伝達経路として，アデノシン（参考文献３９，４０），アルギナ−ゼ（参考文献４１,４２），リポキシゲナ−ゼ産物（参考文献４３），塩素チャネル（参考文献３６），及び哺乳類酸性キチナ−ゼ（参考文献４４）等が報告されている。ＳＴＡＴ６に結合する共通エレメントが，マウスＳＯＣＳ１プロモーターに見られる（参考文献３０，４５，及び４６）。また，ＳＯＣＳ１は，ＩＬ−４及びＩＬ−１３誘導性のエオタキシン−３／ＣＣＬ２６遺伝子発現活性化をｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて阻害することが示された（参考文献４７）。これらの結果はＳＯＣＳ１が，ＩＬ−１３シグナリングを自己制御し，アレルギー性炎症における負のフィードバック機構を提供しているという本発明者らによるビボ実験を支持するものである。【０１３２】
気道上皮は，アレルゲンとの接触が起こる重要な部位である。この接触により引き起こされる相互作用が,炎症の発生あるいは永続化に寄与する触媒因子，及び喘息発症を亢進する因子の産生を引き起こす様々なシグナル伝達現象を惹起する（参考文献４８,４９）。ＩＬ−１３の上皮細胞に対する直接的作用の重要性は，ＡＨＲ誘発において示されている（参考文献２４）。リコンビナントアデノウイルスベクターを気管内投与することが，気道上皮を主に標的とすることは知られている（参考文献５０，５１）。これらの知見及び本実施例により，気道上皮細胞がＩＬ−１３及びアレルゲン刺激に応答するＳＯＣＳ１発現の原因であることを示唆している。【０１３３】
また，喘息患者の気道においてＩＬ−１３発現が上昇すること（参考文献５２，５３），及びＩＬ−１３コーディング領域の自然な差異がアレルギー感受性の重要な遺伝的決定因子であること（参考文献５４）が報告されていた。喘息の新規治療法の多くは，Ｔｈ２炎症の正のシグナルを阻害することを目的としている（参考文献５５）。本発明者らは，それらとは別の方法である，負の制御因子を促進する薬剤の開発を提案した。本実施例は，標的器官におけるＳＯＣＳ１の異常な活性が，促進されたＴｈ２サイトカイン反応を通じてアレルギー性疾患に寄与する可能性があることを示す。
【実施例５】
【０１３４】
Ｔｈ２の分化と喘息との関係を解明するために，卵白アルブミンペプチド（ｐＯＶＡ）−特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）形質転換マウス（ＤＯ１１．１０ＸＳＯＣＳ３＋／−）とＳＯＣＳ３遺伝子（ＤＯ１１．１０ＸＳＯＣＳ３＋／−）のヘテロ欠失を持つマウスを用いそれらの脾臓からＣＤ４＋Ｔ細胞を精製した。これらのマウスは，Ｋ.マーフィー（ワシントン大学）とＪ．Ｎ．イール（Ｓｔ.ジュード小児研究病院）の好意によりそれぞれ提供された。ＤＯ１１．１０ＸＳＯＣＳ３＋／−マウス由来の予め活性化されたＴ細胞中のＳＯＣＳ３タンパク質の発現は，ＤＯ１１．１０ＸＳＯＣＳ３＋／＋マウス由来のそれよりも３倍低かった。抗原提示細胞（ＡＰＣ）を単離するためにｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃマウスを用い，ＣＤ４＋Ｔ細胞の静脈注射を行った。【０１３５】
ｓｉＲＮＡ研究において，ｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃマウスを用いて，その脾臓からＣＤ４＋Ｔ細胞を単離し，ｓｉＲＮＡ感染によるＣＤ４＋Ｔ細胞の抑制効果の程度を分析した。ＣＤ４＋Ｔ細胞を精製するために，ＤＯ１１．１０ＸＳＯＣＳ３＋／＋マウスを用い，ＳＯＣＳ３−特異的なｓｉＲＮＡの喘息反応に関する効果を確認するためにこのＣＤ４＋Ｔ細胞を用いた。【０１３６】
図５に示すように，ＳＯＣＳ３＋／＋ＸＤＯ１１．１０およびＳＯＣＳ３＋／−ＸＤＯ１１．１０マウス由来のＣＤ４＋Ｔ細胞中のＴｈ２サイトカイン（ＩＬ−４，ＩＬ−５，ＩＬ−１３），ＩＦＮγ，ＴＧＦβ，及びＩＬ−１０をＥＬＩＳＡにより測定した。ＳＯＣＳ３＋／＋ＸＤＯ１１．１０およびＳＯＣＳ３＋／−ＸＤＯ１１．１０マウス由来のＣＤ４＋Ｔ細胞は，ｐＯＶＡとともに培養することで，Ｔｈ２細胞に分化させた。４８時間後，細胞培養上清を回収し，サイトカイン類をＥＩＬＳＡにより測定した。ＳＯＣＳ３＋／−ＸＤＯ１１.１０マウス由来のＩＬ−４とＩＬ−１３は，ＳＯＣＳ３＋／＋ＸＤＯ１１．１０マウスのそれに比べて顕著に減少していた。（ｎ＝４．ｐ＜０．０５）  ＩＬ−４及びＩＬ−１３は，Ｔｈ２細胞から産出されるサイトカインである。よって，ＳＯＣＳ３欠損によって，ＣＤ４＋Ｔ細胞からＴｈ２細胞への分化が阻害されることが示された。
【実施例６】
【０１３７】
図６（ａ）に示すように，Ｔ細胞中のＳＯＣＳ３のダウンレギュレーションが，アセチルコリンを吸入した気道の反応に与える効果を測定した。ＳＯＣＳ３＋／−ＤＯ  １１．１０間がＳＯＣＳ３＋／＋ＤＯ１１．１０から単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞を，Ｔｈ２細胞に分化し，ｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃマウスをレシピエントとして適合移植した。細胞の適合移植の１から５日後にレシピエントのＢＡＬＢ／ｃマウスを，エアロゾル化したＯＶＡ（５％）で曝露した。最後の抗原負荷の２４時間後，おのおののマウスの吸入アセチルコリンに対する気道反応性を調べた。図６（ｂ）に示すように，気道内圧がベースライン値の２００％の濃度である誘発濃度２００（ＰＣ２００）を算出した。低い対数ＰＣ２００値は，高いＡＨＲを表している。ＳＯＣＳ３＋／＋ＸＤＯ１１．１０由来のＣＤ４＋Ｔ細胞を移植したマウスのＰＣ２００はｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃマウスのそれに比べ顕著に減少した。ＳＯＣＳ３＋／―ＸＤＯ１１．１０由来のＣＤ４＋Ｔ細胞を移植したマウスのＰＣ２００は，ＳＯＣＳ３＋／＋ＸＤＯ１１．１０由来のそれに比べ顕著に増加した（ｎ＝４から１０で，ｐ＜０．０５）。図６（ｃ）に示すように，Ｔ細胞中のＳＯＣＳ３のダウンレギュレーションが，レシピエントマウスのＢＡＬ液中の好酸球に与える効果を測定した。ＳＯＣＳ３＋／＋ＸＤＯ１１．１０由来のＣＤ４＋Ｔ細胞を移植したマウスのＢＡＬ液体中の好酸球はｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃマウスのそれに比べ顕著に増加していた。ＳＯＣＳ３＋／―ＸＤＯ１１．１０由来のＣＤ４＋Ｔ細胞を移植したマウスのＢＡＬ液中の好酸球はＳＯＣＳ３＋／＋ＸＤＯ１１．１０由来のそれに比べ顕著に減少していた（ｎ＝４から１０．ｐ＜０．０５）。
【実施例７】
【０１３８】
図７は，ＲＴ−ＰＣＲおよびリアルタイムＰＣＲにより分析されたＳＯＣＳ３−特異的ｓｉＲＮＡ処理がＣＤ４＋Ｔ細胞中のＳＯＣＳ３発現に与える影響を示す。ｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃマウスからＣＤ４＋Ｔ細胞を単離し，電気穿孔法により対照のｓｉＲＮＡまたはＳＯＣＳ３−特異的ｓｉＲＮＡを感染させた後培養し、２４時間後，４８時間後，７２時間後に回収した。図７（ａ）は，対照のｓｉＲＮＡ処理およびＳＯＣＳ３特異的ｓｉＲＮＡ処理の７２時間後のｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃのＣＤ４＋Ｔ細胞中のｍＳＯＣＳ３のＲＴ−ＰＣＲ分析を示す。増幅されたＤＮＡは臭化エチジウムを含むアガロースゲル上で電気泳動により分離され，紫外線照射され，写真を撮影された。  図７（ｂ）は，対照のｓｉＲＮＡ処理およびＳＯＣＳ３−特異的ｓｉＲＮＡ処理の２４時間後，４８時間後，７２時間後のｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃのＣＤ４＋Ｔ細胞中のｍＳＯＣＳ３のリアルタイムＰＣＲ分析を示す図である。ＳＯＣＳ３発現に関するＳＯＣＳ３−特異的なｓｉＲＮＡ処理の抑制率は，対照のｓｉＲＮＡ処理の効果に比べて１１％，２８％および３５％であった。
【実施例８】
【０１３９】
図８は，ＳＯＣＳ３−特異的ｓｉＲＮＡ処理または対照のｓｉＲＮＡ処理を受けたＣＤ４＋Ｔ細胞の細胞培養上清中のＴｈ２サイトカイン（ＩＬ−４，ＩＬ−５，ＩＬ−１３），ＩＦＮγ，ＴＧＦβ，ＩＬ−１０およびＩＬ−１７をＥＬＩＳＡにより測定したものを示す。ＣＤ４＋Ｔ細胞をＳＯＣＳ３＋／＋ＸＤＯ１１．１０から単離し，ｐＯＶＡとともに培養することで，Ｔｈ２細胞へ分化させた。４８時間後，細胞培養上清が回収され，サイトカインをＥＬＩＳＡにより測定した。ＳＯＣＳ３−特異的ｓｉＲＮＡ処理を受けたＣＤ４＋Ｔ細胞の細胞培養上清由来のＩＬ−４，ＩＬ−５およびＩＬ−１３は対照のｓｉＲＮＡ処理を受けたそれに比べ顕著に減少していた。ＳＯＣＳ３−特異的ｓｉＲＮＡ処理を受けたＣＤ４＋Ｔ細胞の細胞培養上清由来のＩＬ−１７は対照のｓｉＲＮＡ処理を受けたそれに比べ顕著に増加していた。ｎ＝８．★ｐ＜０．０５。ＩＬ−４，ＩＬ−５およびＩＬ−１３は，Ｔｈ２細胞から産出されるサイトカインである。これらのサイトカインの減少は，ＣＤ４＋Ｔ細胞のＴｈ２細胞への分化が阻害されたことを示す。よって，ＳＯＣＳ３−特異的ｓｉＲＮＡ処理によって，Ｔｈ２細胞分化が阻害されたことが示された。
【実施例９】
【０１４０】
図９（ａ）は，Ｔ細胞中のＳＯＣＳ３のダウンレギュレーションが，吸入アセチルコリンに対する気道反応性に与える効果をしめす。ＣＤ４＋Ｔ細胞はＳＯＣＳ３＋／＋ＸＤＯ１１．１０から単離され，ＳＯＣＳ３ｓｉＲＮＡまたは対照のｓｉＲＮＡを電気穿孔法により感染させた。ＣＤ４＋Ｔ細胞はＴｈ２細胞に分化され，ｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃマウスを受け手として適合移植された。細胞の適合移植の１から５日後に，レシピエントＢＡＬＢ／ｃマウスはエアロゾル化したＯＶＡ（５％）による曝露を受けた。最後の抗原曝露の２４時間後，おのおののマウスの吸入アセチルコリンに対する気道反応性が測定された。図９（ｂ）に示すように，誘発濃度２００（ＰＣ２００），気道内圧がベースライン値の２００％である濃度，がおのおののマウスについて算出された。より低いＰＣ２００値はより高いＡＨＲを表す。対照のｓｉＲＮＡ処理を受けたＳＯＣＳ３＋／＋ＸＤＯ１１．１０由来のＣＤ４＋Ｔ細胞を移植されたマウスのＰＣ２００はｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃマウス由来のそれと比べて顕著に減少していた。ＳＯＣＳ３ｓｉＲＮＡ処理を受けたＳＯＣＳ３＋／＋ＸＤＯ１１．１０由来のＣＤ４＋Ｔ細胞を移植されたマウスのＰＣ２００は対照のｓｉＲＮＡ処理を受けたものと比べて顕著に増加していた。ｎ＝５から１１．★ｐ＜０．０５．図９（ｃ）は，Ｔ細胞中のＳＯＣＳ３のダウンレギュレーションが，レシピエントマウスのＢＡＬ液中の好酸球数に与える効果を示す図である。対照のｓｉＲＮＡ処理を受けたＳＯＣＳ３＋／＋ＸＤＯ１１．１０由来のＣＤ４＋Ｔ細胞を移植されたマウスのＢＡＬ液中の好酸球は，ｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃマウスのそれに比べて顕著に増加していた。ＳＯＣＳ３―特異的ｓｉＲＮＡ処理を受けたＳＯＣＳ３＋／＋ＸＤＯ１１．１０由来のＣＤ４＋Ｔ細胞を移植されたマウスのＢＡＬ液中の好酸球は，対照のｓｉＲＮＡ処理由来のものと比べて顕著に減少していた。ｎ＝５から１１．★ｐ＜０．０５【０１４１】
考察
ＳＯＣＳ３の発現抑制されたマウス（ＳＯＣＳ＋／−ｘＤＯ１１．１０）のＣＤ４＋Ｔ細胞では，Ｔｈ２分化の抑制が認められた。ＳＯＣＳ３−ｓｉＲＮＡのＣＤ４＋Ｔ細胞への導入により，コントロールｓｉＲＮＡと比較してＳＯＣＳ３  ｍＲＮＡ発現が約４０%抑制された。ＳＯＣＳ３−ｓｉＲＮＡを導入したＤＯ１１．１０ＣＤ４＋Ｔ細胞では，ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＴｈ２分化抑制とともにＩＬ−１７産生増加が認められたが，ＴＧＦβやＩＬ−１０産生の変化は認められなかった。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴｈ２分化させたＤＯ１１．１０ＣＤ４＋Ｔ細胞を，ｎａｉｖｅＢＡＬＢ／ｃマウスへ移入後ＯＶＡを曝露すると，喘息反応の抑制を認めた。Ｔ細胞へのＳＯＣＳ３−ｓｉＲＮＡを導入による喘息反応の抑制は，Ｔｈ２分化の抑制とともに，ＩＬ−１７発現上昇によるものと考えられた。
【実施例１０】
【０１４２】
アレルギー性気道炎症におけるｐａｎ−ＪＡＫ阻害剤投与の影響
ＯＶＡ誘導喘息のモデルマウスの気道炎症における，ｐａｎ−ＪＡＫ阻害剤（ＪＡＫi）であるピロドン６（メクル社製）の影響を調べた。ＪＡＫｉは，エアロゾル化したＯＶＡで曝露する前に，腹腔内に注射した。その結果を図１０に示した。【０１４３】
図１０は，アレルギー性気道炎症における，ｐａｎ−ＪＡＫ阻害剤投与の影響を示す図面に替わるグラフである。ＯＶＡ感作マウスは，２６〜２８日目に，ＯＶＡ摂取の１時間前に，ピリドン６（１０μｇ／体重，０．２％ＤＭＳＯに溶解），又はビークルのＤＭＳＯを腹腔内に注入された。ＢＡＬは最終ＯＶＡ投与後３０時間で行った。細胞計数は，ＢＡＬ液中で行った（ｎ＝６，＊Ｐ＜０．０５）。ＪＡＫｉ自体は，気道の好酸球増加に影響を与えなかったが，ビークル処理と比較して，ＪＡＫｉはＢＡＬ液中の好酸球増加を減少させた。これらの結果は，ＪＡＫｉが喘息の治療効果を有する可能性があることを示唆している。【０１４４】
参考文献
以下の参考文献は，引用文献として参照する事により，本明細書に取り込まれるものである。
1.  Bousquet,  J.,  Chanez,  P.,  Lacoste,  J.Y.,  Barneon,  G.,  Ghavanian,  N.,  Enander,  I.,  Venge,  P.,  Ahlstedt,  S.,  Simony−Lafontaine,  J.,  Godard,  P.,  et  al.  1990.  Eosinophilic  inflammation  in  asthma.  N  Engl  J  Med  323:1033−1039.  
2.  Roche,  W.R.,  Beasley,  R.,  Williams,  J.H.,  and  Holgate,  S.T.  1989.  Subepithelial  fibrosis  in  the  bronchi  of  asthmatics.  Lancet  1:520−524.  
3.  Cohn,  L.,  Elias,  J.A.,  and  Chupp,  G.L.  2004.  Asthma:  mechanisms  of  disease  persistence  and  progression.  Annu  Rev  Immunol  22:789−815.
4.  Wills−Karp,  M.  1999.  Immunologic  basis  of  antigen−induced  airway  hyperresponsiveness.  Annu  Rev  Immunol  17:255−281.
5.  Georas,  S.N.,  Guo,  J.,  De  Fanis,  U.,  and  Casolaro,  V.  2005.  T−helper  cell  type−2  regulation  in  allergic  disease.  Eur  Respir  J  26:1119−1137.
6.  Fujimoto,  M.,  and  Naka,  T.  2003.  Regulation  of  cytokine  signaling  by  ＳＯＣＳ  family  molecules.  Trends  Immunol  24:659−666.
7.  Krebs,  D.L.,  and  Hilton,  D.J.  2000.  ＳＯＣＳ:  physiological  suppressors  of  cytokine  signaling.  J  Cell  Sci  113  (  Pt  16):2813−2819.
8.  Ilangumaran,  S.,  Ramanathan,  S.,  and  Rottapel,  R.  2004.  Regulation  of  the  immune  system  by  ＳＯＣＳ  family  adaptor  proteins.  Semin  Immunol  16:351−365.
9.  Kubo,  M.,  Hanada,  T.,  and  Yoshimura,  A.  2003.  Suppressors  of  cytokine  signaling  and  immunity.  Nat  Immunol  4:1169−1176.
10.  Yoshimura,  A.,  Mori,  H.,  Ohishi,  M.,  Aki,  D.,  and  Hanada,  T.  2003.  Negative  regulation  of  cytokine  signaling  influences  inflammation.  Curr  Opin  Immunol  15:704−708.【０１４５】
11.  Egwuagu,  C.E.,  Yu,  C.R.,  Zhang,  M.,  Mahdi,  R.M.,  Kim,  S.J.,  and  Gery,  I.  2002.  Suppressors  of  cytokine  signaling  proteins  are  differentially  expressed  in  Th1  and  Th2  cells:  implications  for  Th  cell  lineage  commitment  and  maintenance.  J  Immunol  168:3181−3187.
12.  Seki,  Y.,  Inoue,  H.,  Nagata,  N.,  Hayashi,  K.,  Fukuyama,  S.,  Matsumoto,  K.,  Komine,  O.,  Hamano,  S.,  Himeno,  K.,  Inagaki−Ohara,  K.,  et  al.  2003.  ＳＯＣＳ３  regulates  onset  and  maintenance  of  T(H)2−mediated  allergic  responses.  Nat  Med  9:1047−1054.
13.  Chen,  Z.,  Laurence,  A.,  Kanno,  Y.,  Pacher−Zavisin,  M.,  Zhu,  B.M.,  Tato,  C.,  Yoshimura,  A.,  Hennighausen,  L.,  and  O'Shea,  J.J.  2006.  Selective  regulatory  function  of  ＳＯＣＳ３  in  the  formation  of  IL−17−secreting  T  cells.  Proc  Natl  Acad  Sci  U  S  A  103:8137−8142.
14.  Kinjyo,  I.,  Inoue,  H.,  Hamano,  S.,  Fukuyama,  S.,  Yoshimura,  T.,  Yamauchi,  M.,  Himeno,  K.,  Kobayashi,  T.,  and  Yoshimura,  A.  2006.  ＳＯＣＳ３  and  STAT3  regulate  TGF−beta  production  in  CD4  helper  T  cell  differentiation.  J  Exp  Med:in  press.
15.  Seki,  Y.,  Hayashi,  K.,  Matsumoto,  A.,  Seki,  N.,  Tsukada,  J.,  Ransom,  J.,  Naka,  T.,  Kishimoto,  T.,  Yoshimura,  A.,  and  Kubo,  M.  2002.  Expression  of  the  suppressor  of  cytokine  signaling−5  (ＳＯＣＳ5)  negatively  regulates  IL−4−dependent  STAT6  activation  and  Th2  differentiation.  Proc  Natl  Acad  Sci  U  S  A  99:13003−13008.
16.  Grunig,  G.,  Warnock,  M.,  Wakil,  A.E.,  Venkayya,  R.,  Brombacher,  F.,  Rennick,  D.M.,  Sheppard,  D.,  Mohrs,  M.,  Donaldson,  D.D.,  Locksley,  R.M.,  et  al.  1998.  Requirement  for  IL−13  independently  of  IL−4  in  experimental  asthma.  Science  282:2261−2263.
17.  Wills−Karp,  M.,  Luyimbazi,  J.,  Xu,  X.,  Schofield,  B.,  Neben,  T.Y.,  Karp,  C.L.,  and  Donaldson,  D.D.  1998.  Interleukin−13:  central  mediator  of  allergic  asthma.  Science  282:2258−2261.
18.  Kibe,  A.,  Inoue,  H.,  Fukuyama,  S.,  Machida,  K.,  Matsumoto,  K.,  Koto,  H.,  Ikegami,  T.,  Aizawa,  H.,  and  Hara,  N.  2003.  Differential  regulation  by  glucocorticoid  of  interleukin−13−induced  eosinophilia,  hyperresponsiveness,  and  goblet  cell  hyperplasia  in  mouse  airways.  Am  J  Respir  Crit  Care  Med  167:50−56.
19.  Kuperman,  D.,  Schofield,  B.,  Wills−Karp,  M.,  and  Grusby,  M.J.  1998.  Signal  transducer  and  activator  of  transcription  factor  6  (Stat6)−deficient  mice  are  protected  from  antigen−induced  airway  hyperresponsiveness  and  mucus  production.  J  Exp  Med  187:939−948.【０１４６】
20.  Lee,  P.J.,  Zhang,  X.,  Shan,  P.,  Ma,  B.,  Lee,  C.G.,  Homer,  R.J.,  Zhu,  Z.,  Rincon,  M.,  Mossman,  B.T.,  and  Elias,  J.A.  2006.  ERK1/2  mitogen−activated  protein  kinase  selectively  mediates  IL−13−induced  lung  inflammation  and  remodeling  in  vivo.  J  Clin  Invest  116:163−173.
21.  Mattes,  J.,  Yang,  M.,  Siqueira,  A.,  Clark,  K.,  MacKenzie,  J.,  McKenzie,  A.N.,  Webb,  D.C.,  Matthaei,  K.I.,  and  Foster,  P.S.  2001.  IL−13  induces  airways  hyperreactivity  independently  of  the  IL−4R  alpha  chain  in  the  allergic  lung.  J  Immunol  167:1683−1692.
22.  Yang,  M.,  Hogan,  S.P.,  Henry,  P.J.,  Matthaei,  K.I.,  McKenzie,  A.N.,  Young,  I.G.,  Rothenberg,  M.E.,  and  Foster,  P.S.  2001.  Interleukin−13  mediates  airways  hyperreactivity  through  the  IL−4  receptor−alpha  chain  and  STAT−6  independently  of  IL−5  and  eotaxin.  Am  J  Respir  Cell  Mol  Biol  25:522−530.
23.  Fichtner−Feigl,  S.,  Strober,  W.,  Kawakami,  K.,  Puri,  R.K.,  and  Kitani,  A.  2006.  IL−13  signaling  through  the  IL−13alpha2  receptor  is  involved  in  induction  of  TGF−beta1  production  and  fibrosis.  Nat  Med  12:99−106.  
24.  Kuperman,  D.A.,  Huang,  X.,  Koth,  L.L.,  Chang,  G.H.,  Dolganov,  G.M.,  Zhu,  Z.,  Elias,  J.A.,  Sheppard,  D.,  and  Erle,  D.J.  2002.  Direct  effects  of  interleukin−13  on  epithelial  cells  cause  airway  hyperreactivity  and  mucus  overproduction  in  asthma.  Nat  Med  8:885−889.
25.  Nelms,  K.,  Keegan,  A.D.,  Zamorano,  J.,  Ryan,  J.J.,  and  Paul,  W.E.  1999.  The  IL−4  receptor:  signaling  mechanisms  and  biologic  functions.  Annu  Rev  Immunol  17:701−738.
26.  O'Shea,  J.J.,  Gadina,  M.,  and  Schreiber,  R.D.  2002.  Cytokine  signaling  in  2002:  new  surprises  in  the  Jak/Stat  pathway.  Cell  109  Suppl:S121−131.
27.  Wormald,  S.,  and  Hilton,  D.J.  2004.  Inhibitors  of  cytokine  signal  transduction.  J  Biol  Chem  279:821−824.  
28.  Yasukawa,  H.,  Sasaki,  A.,  and  Yoshimura,  A.  2000.  Negative  regulation  of  cytokine  signaling  pathways.  Annu  Rev  Immunol  18:143−164.
29.  Naka,  T.,  Narazaki,  M.,  Hirata,  M.,  Matsumoto,  T.,  Minamoto,  S.,  Aono,  A.,  Nishimoto,  N.,  Kajita,  T.,  Taga,  T.,  Yoshizaki,  K.,  et  al.  1997.  Structure  and  function  of  a  new  STAT−induced  STAT  inhibitor.  Nature  387:924−929.
30.  Schluter,  G.,  Boinska,  D.,  and  Nieman−Seyde,  S.C.  2000.  Evidence  for  translational  repression  of  the  ＳＯＣＳ−1  major  open  reading  frame  by  an  upstream  open  reading  frame.  Biochem  Biophys  Res  Commun  268:255−261.【０１４７】
31.  Alexander,  W.S.,  Starr,  R.,  Fenner,  J.E.,  Scott,  C.L.,  Handman,  E.,  Sprigg,  N.S.,  Corbin,  J.E.,  Cornish,  A.L.,  Darwiche,  R.,  Owczarek,  C.M.,  et  al.  1999.  ＳＯＣＳ1  is  a  critical  inhibitor  of  interferon  gamma  signaling  and  prevents  the  potentially  fatal  neonatal  actions  of  this  cytokine.  Cell  98:597−608.
32.  Marine,  J.C.,  Topham,  D.J.,  McKay,  C.,  Wang,  D.,  Parganas,  E.,  Stravopodis,  D.,  Yoshimura,  A.,  and  Ihle,  J.N.  1999.  ＳＯＣＳ1  deficiency  causes  a  lymphocyte−dependent  perinatal  lethality.  Cell  98:609−616.
33.  De  Sanctis,  G.T.,  Merchant,  M.,  Beier,  D.R.,  Dredge,  R.D.,  Grobholz,  J.K.,  Martin,  T.R.,  Lander,  E.S.,  and  Drazen,  J.M.  1995.  Quantitative  locus  analysis  of  airway  hyperresponsiveness  in  A/J  and  C57BL/6J  mice.  Nat  Genet  11:150−154.
34.  Duguet,  A.,  Biyah,  K.,  Minshall,  E.,  Gomes,  R.,  Wang,  C.G.,  Taoudi−Benchekroun,  M.,  Bates,  J.H.,  and  Eidelman,  D.H.  2000.  Bronchial  responsiveness  among  inbred  mouse  strains.  Role  of  airway  smooth−muscle  shortening  velocity.  Am  J  Respir  Crit  Care  Med  161:839−848.
35.  Ewart,  S.L.,  Kuperman,  D.,  Schadt,  E.,  Tankersley,  C.,  Grupe,  A.,  Shubitowski,  D.M.,  Peltz,  G.,  and  Wills−Karp,  M.  2000.  Quantitative  trait  loci  controlling  allergen−induced  airway  hyperresponsiveness  in  inbred  mice.  Am  J  Respir  Cell  Mol  Biol  23:537−545.
36.  Nakano,  T.,  Inoue,  H.,  Fukuyama,  S.,  Matsumoto,  K.,  Matsumura,  M.,  Tsuda,  M.,  Matsumoto,  T.,  Aizawa,  H.,  and  Nakanishi,  Y.  2006.  Niflumic  Acid  Suppresses  Interleukin−13−induced  Asthma  Phenotypes.  Am  J  Respir  Crit  Care  Med  173:1216−1221.
37.  Kelly−Welch,  A.E.,  Hanson,  E.M.,  Boothby,  M.R.,  and  Keegan,  A.D.  2003.  Interleukin−4  and  interleukin−13  signaling  connections  maps.  Science  300:1527−1528.
38.  Alexander,  W.S.  2002.  Suppressors  of  cytokine  signalling  (ＳＯＣＳ)  in  the  immune  system.  Nat  Rev  Immunol  2:410−416.
39.  Blackburn,  M.R.,  Lee,  C.G.,  Young,  H.W.,  Zhu,  Z.,  Chunn,  J.L.,  Kang,  M.J.,  Banerjee,  S.K.,  and  Elias,  J.A.  2003.  Adenosine  mediates  IL−13−induced
inflammation  and  remodeling  in  the  lung  and  interacts  in  an  IL−13−adenosine  amplification  pathway.  J  Clin  Invest  112:332−344.
40.  Chunn,  J.L.,  Young,  H.W.,  Banerjee,  S.K.,  Colasurdo,  G.N.,  and  Blackburn,  M.R.  2001.  Adenosine−dependent  airway  inflammation  and  hyperresponsiveness  in  partially  adenosine  deaminase−deficient  mice.  J  Immunol  167:4676−4685.【０１４８】
41.  Hesse,  M.,  Modolell,  M.,  La  Flamme,  A.C.,  Schito,  M.,  Fuentes,  J.M.,  Cheever,  A.W.,  Pearce,  E.J.,  and  Wynn,  T.A.  2001.  Differential  regulation  of  nitric  oxide  synthase−2  and  arginase−1  by  type  1/type  2  cytokines  in  vivo:  granulomatous  pathology  is  shaped  by  the  pattern  of  L−arginine  metabolism.  J  Immunol  167:6533−6544.
42.  Zimmermann,  N.,  King,  N.E.,  Laporte,  J.,  Yang,  M.,  Mishra,  A.,  Pope,  S.M.,  Muntel,  E.E.,  Witte,  D.P.,  Pegg,  A.A.,  Foster,  P.S.,  et  al.  2003.  Dissection  of  experimental  asthma  with  DNA  microarray  analysis  identifies  arginase  in  asthma  pathogenesis.  J  Clin  Invest  111:1863−1874.
43.  Vargaftig,  B.B.,  and  Singer,  M.  2003.  Leukotrienes  mediate  murine  bronchopulmonary  hyperreactivity,  inflammation,  and  part  of  mucosal  metaplasia  and  tissue  injury  induced  by  recombinant  murine  interleukin−13.  Am  J  Respir  Cell  Mol  Biol  28:410−419.
44.  Zhu,  Z.,  Zheng,  T.,  Homer,  R.J.,  Kim,  Y.K.,  Chen,  N.Y.,  Cohn,  L.,  Hamid,  Q.,  and  Elias,  J.A.  2004.  Acidic  mammalian  chitinase  in  asthmatic  Th2  inflammation  and  IL−13  pathway  activation.  Science  304:1678−1682.
45.  Hebenstreit,  D.,  Luft,  P.,  Schmiedlechner,  A.,  Regl,  G.,  Frischauf,  A.M.,  Aberger,  F.,  Duschl,  A.,  and  Horejs−Hoeck,  J.  2003.  IL−4  and  IL−13  induce  ＳＯＣＳ−1  gene  expression  in  A549  cells  by  three  functional  STAT6−binding  motifs  located  upstream  of  the  transcription  initiation  site.  J  Immunol  171:5901−5907.
46.  Saito,  H.,  Morita,  Y.,  Fujimoto,  M.,  Narazaki,  M.,  Naka,  T.,  and  Kishimoto,  T.  2000.  IFN  regulatory  factor−1−mediated  transcriptional  activation  of  mouse  STAT−induced  STAT  inhibitor−1  gene  promoter  by  IFN−gamma.  J  Immunol  164:5833−5843.
47.  Hebenstreit,  D.,  Luft,  P.,  Schmiedlechner,  A.,  Duschl,  A.,  and  Horejs−Hoeck,  J.  2005.  ＳＯＣＳ−1  and  ＳＯＣＳ３  inhibit  IL−4  and  IL−13  induced  activation  of  Eotaxin−3/CCL26  gene  expression  in  HEK293  cells.  Mol  Immunol  42:295−303.
48.  Knight,  D.A.,  and  Holgate,  S.T.  2003.  The  airway  epithelium:  structural  and  functional  properties  in  health  and  disease.  Respirology  8:432−446.
49.  Polito,  A.J.,  and  Proud,  D.  1998.  Epithelia  cells  as  regulators  of  airway  inflammation.  J  Allergy  Clin  Immunol  102:714−718.
50.  El  Bakkouri,  K.,  Wullaert,  A.,  Haegman,  M.,  Heyninck,  K.,  and  Beyaert,  R.  2005.  Adenoviral  gene  transfer  of  the  NF−kappa  B  inhibitory  protein  ABIN−1  decreases  allergic  airway  inflammation  in  a  murine  asthma  model.  J  Biol  Chem  280:17938−17944.【０１４９】
51.  Sadikot,  R.T.,  Han,  W.,  Everhart,  M.B.,  Zoia,  O.,  Peebles,  R.S.,  Jansen,  E.D.,  Yull,  F.E.,  Christman,  J.W.,  and  Blackwell,  T.S.  2003.  Selective  I  kappa  B  kinase  expression  in  airway  epithelium  generates  neutrophilic  lung  inflammation.  J  Immunol  170:1091−1098.
52.  Huang,  S.K.,  Xiao,  H.Q.,  Kleine−Tebbe,  J.,  Paciotti,  G.,  Marsh,  D.G.,  Lichtenstein,  L.M.,  and  Liu,  M.C.  1995.  IL−13  expression  at  the  sites  of  allergen  challenge  in  patients  with  asthma.  J  Immunol  155:2688−2694.
53.  Humbert,  M.,  Durham,  S.R.,  Kimmitt,  P.,  Powell,  N.,  Assoufi,  B.,  Pfister,  R.,  Menz,  G.,  Kay,  A.B.,  and  Corrigan,  C.J.  1997.  Elevated  expression  of  messenger  ribonucleic  acid  encoding  IL−13  in  the  bronchial  mucosa  of  atopic  and  nonatopic  subjects  with  asthma.  J  Allergy  Clin  Immunol  99:657−665.
54.  Vladich,  F.D.,  Brazille,  S.M.,  Stern,  D.,  Peck,  M.L.,  Ghittoni,  R.,  and  Vercelli,  D.  2005.  IL−13  R130Q,  a  common  variant  associated  with  allergy  and  asthma,  enhances  effector  mechanisms  essential  for  human  allergic  inflammation.  J  Clin  Invest  115:747−754.
55.  Barnes,  P.J.  2004.  New  drugs  for  asthma.  Nat  Rev  Drug  Discov  3:831−844.  56.  Kinjyo,  I.,  Hanada,  T.,  Inagaki−Ohara,  K.,  Mori,  H.,  Aki,  D.,  Ohishi,  M.,  Yoshida,  H.,  Kubo,  M.,  and  Yoshimura,  A.  2002.  ＳＯＣＳ1/JAB  is  a  negative  regulator  of  LPS−induced  macrophage  activation.  Immunity  17:583−591.
57.  Taketomi,  T.,  Yoshiga,  D.,  Taniguchi,  K.,  Kobayashi,  T.,  Nonami,  A.,  Kato,  R.,  Sasaki,  M.,  Sasaki,  A.,  Ishibashi,  H.,  Moriyama,  M.,  et  al.  2005.  Loss  of  mammalian  Sprouty2  leads  to  enteric  neuronal  hyperplasia  and  esophageal  achalasia.  Nat  Neurosci  8:855−857.  
58.  Yasukawa,  H.,  Hoshijima,  M.,  Gu,  Y.,  Nakamura,  T.,  Pradervand,  S.,  Hanada,  T.,  Hanakawa,  Y.,  Yoshimura,  A.,  Ross,  J.,  Jr.,  and  Chien,  K.R.  2001.  Suppressor  of  cytokine  signaling−3  is  a  biomechanical  stress−inducible  gene  that  suppresses  gp130−mediated  cardiac  myocyte  hypertrophy  and  survival  pathways.  J  Clin  Invest  108:1459−1467.  
59.  Perkins,  C.,  Wills−Karp,  M.,  and  Finkelman,  F.D.  2006.  IL−4  induces  IL−13−independent  allergic  airway  inflammation.  J  Allergy  Clin  Immunol  118:410−419.
60.  Suzuki,  A.,  Obi,  K.,  Urabe,  T.,  Hayakawa,  H.,  Yamada,  M.,  Kaneko,  S.,  Onodera,  M.,  Mizuno,  Y.,  and  Mochizuki,  H.  2002.  Feasibility  of  ex  vivo  gene  therapy  for  neurological  disorders  using  the  new  retroviral  vector  GCDNsap  packaged  in  the  vesicular  stomatitis  virus  G  protein.  J  Neurochem  82:953−960.
【産業上の利用可能性】
【０１５０】
本発明は喘息治療薬など呼吸器系疾患の治療剤などとして，製薬産業において利用されうる。
【配列表フリーテキスト】
【０１５１】
配列番号１：ＳＯＣ１アミノ酸残基配列
配列番号２：ＳＯＣ１  ＤＮＡ塩基配列（ＧｅｎＢａｎｋ  ＩＤ．Ｕ８８３２６）
配列番号３：ｍＳＯＣＳ１用プライマー
配列番号４：ｍＳＯＣＳ１用プライマー
配列番号５：ｍＳＯＣＳ２用プライマー
配列番号６：ｍＳＯＣＳ２用プライマー
配列番号７：ｍＳＯＣＳ３用プライマー
配列番号８：ｍＳＯＣＳ３用プライマー
配列番号９：β−アクチン用プライマー
配列番号１０：β−アクチン用プライマー
配列番号１１：ＳＯＣＳ３  ｓｉＲＮＡ
配列番号１２：ＳＯＣＳ３  ｓｉＲＮＡ
配列番号１３：ｍβ−アクチン用プライマー
配列番号１４：ｍβ−アクチン用プライマー
配列番号１５：ｍＳＯＣＳ３用プライマー
配列番号１６：ｍＳＯＣＳ３用プライマー
配列番号１７：ＪＡＫ２チロシンキナーゼ阻害ペプチド
配列番号１８：ＪＡＫ２アミノ酸残基配列
【図１】
2009122748.tif 000003
【図２】
2009122748.tif 000004
【図３】
2009122748.tif 000005
【図４】
2009122748.tif 000006
【図５】
2009122748.tif 000007
【図６】
2009122748.tif 000008
【図７】
2009122748.tif 000009
【図８】
2009122748.tif 000010
【図９】
2009122748.tif 000011
【図１０】
2009122748.tif 000012
【配列表】
2009122748000001.app
【国際調査報告】
2009122748.tif 000013
2009122748.tif 000014
2009122748.tif 000015
2009122748.tif 000016
2009122748.tif 000017
2009122748.tif 000018
2009122748.tif 000019
2009122748.tif 000020