(57)【要約】  Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（ＳＡＭ）を含有する微生物菌体、又は微生物エキスを乾燥後、熟成処理を行うことにより、ＳＡＭの化学的分解、及び(ＳＳ)−ＳＡＭのエピメリ化の進行が顕著に低下した(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体または微生物エキスを得る。１重量％以上のＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体または微生物エキスを含む組成物とすることで、厳密な環境の制御を要さず、組成物中のＳＡＭを安定化する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
(ＳＳ)−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを産生する微生物を培養した後に、菌体を乾燥し、さらに熟成を行うことを特徴とする(ＳＳ)−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含有する微生物乾燥菌体の製造方法。
【請求項２】
(ＳＳ)−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを産生する微生物を培養した後に、菌体を破砕し、必要に応じて固形分を除去した微生物エキスを乾燥し、さらに熟成を行うことを特徴とする、(ＳＳ)−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含有する微生物エキスの製造方法。
【請求項３】
前記乾燥において、微生物菌体又は微生物エキス中の水分含量が１０％を超える間は、２０℃を超える温度環境下に２４時間以上晒されないことを特徴とする、請求項１又は２の製造方法。
【請求項４】
前記乾燥が、スプレードライ法または凍結乾燥法で行われる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５】
前記微生物の培養、乾燥、及び熟成の少なくとも１つの工程において、塩酸、硫酸、亜硫酸等の無機酸、リン酸、ピロリン酸、ポリリン酸、又はメタリン酸等のリン酸化合物及びそれらの塩、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸、グルコン酸、フマル酸、Ｌ−アスコルビン酸、ニコチン酸、パントテン酸、フィチン酸等の有機酸及びそれらの塩、グルコース、スクロース、フルクトース、ガラクトース、トレハロース、Ｄ−セロビオース、マンニトール、イノシトール、イヌリン、フルクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、セルロース、Ｎ−アセチルグルコサミン、ソルボース、グリコーゲン、ズルシット、ラクチトール、ガラクチトール、グルコノラクトン、アルギン酸、カラギーナン、デキストリン、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール等の糖及びその誘導体、グリシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−バリン、Ｌ−ロイシン、Ｄ−ロイシン、Ｌ−トレオニン、Ｌ−メチオニン、ＤＬ−メチオニン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−オルニチン、グルタチオン、ＤＬ−α−アミノ−ｎ−酪酸などのアミノ酸またはペプチド及びそれらの塩、塩化アンモニウム、塩化第二鉄、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、塩化アルミニウム、硫酸銅、硫酸第一鉄、硫酸マグネシウム、硫酸カルシウム、硫酸マンガン、硫酸ニッケル、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウム、硫酸アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アルミニウムアンモニウム、炭酸アンモニウム、炭酸ナトリウム等の金属塩又はアンモニア塩の少なくとも１種類の化合物を添加することを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項６】
請求項１、３〜５のいずれか１項に記載の方法で製造された、安定化された(ＳＳ)−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含有する微生物乾燥菌体。
【請求項７】
請求項２〜５のいずれか１項に記載の方法で製造された、安定化された(ＳＳ)−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含有する微生物エキス。
【請求項８】
請求項６記載の微生物乾燥菌体又は７記載の微生物エキスを含有し、経口投与される組成物。
【請求項９】
カプセル剤、錠剤、散剤、チュアブル錠、顆粒剤、丸剤、シロップ、又は飲料のいずれかの形態に加工された請求項８記載の組成物。
【請求項１０】
食品、栄養機能食品、特定保健用食品、栄養補助剤、栄養剤、飲料、動物薬、飼料、化粧品、医薬部外品、医薬品、治療薬または予防薬である請求項８又は９の組成物。
【請求項１１】
加工時の相対湿度が７０％ＲＨ以下である請求項８〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
請求項６記載の微生物乾燥菌体又は請求項７記載の微生物エキスを、ガラス製、プラスチック製及び／又は金属製の素材で包装・梱包することを特徴とする、(ＳＳ)−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含有する微生物乾燥菌体及び／又は微生物エキスの保存方法。
【請求項１３】
(ＳＳ)−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含有する微生物乾燥菌体及び／又は微生物エキスを経口投与することにより、血漿中の(ＳＳ)−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン濃度を向上させる方法。
【請求項１４】
(ＳＳ)−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンの分解及び／又はエピメリ化を抑制する方法であって、(ＳＳ)−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含有する微生物菌体又は微生物エキスに、金属塩及び／又はアンモニウム塩を添加し、共存させることを特徴とする方法。
【請求項１５】
金属塩及び／又はアンモニウム塩が、塩化アンモニウム、塩化第二鉄、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、塩化アルミニウム、硫酸銅、硫酸第一鉄、硫酸マグネシウム、硫酸カルシウム、硫酸マンガン、硫酸ニッケル、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウム、硫酸アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アルミニウムアンモニウム、炭酸アンモニウム、炭酸ナトリウムからなる群より選択される少なくとも１種の化合物であることを特徴とする請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記金属塩及び／又はアンモニウム塩の添加量が、(ＳＳ)−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンに対してモル比で０．１倍量以上２０倍量以下である請求項１４又は１５に記載の方法
【請求項１７】
前記微生物菌体又は微生物エキス中の(ＳＳ)−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンが遊離体の(ＳＳ)−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンである、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
１重量％以上のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含有する微生物乾燥菌体または微生物エキスを含む組成物を含むＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有製剤の製造方法。
【請求項１９】
相対湿度７０％ＲＨ以下で製剤することを特徴とする請求項１８記載の製造方法。
【請求項２０】
５０℃以下で製剤することを特徴とする請求項１８又は１９に記載の製造方法。
【請求項２１】
ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体及び微生物エキスを含む組成物を湿度２０％ＲＨ以上、温度２０℃以上にさらす時間を９６時間以下で製剤することを特徴とする請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項２２】
製剤に用いる微生物乾燥菌体または微生物エキス組成物の水分含量が１０％以下であることを特徴とする請求項１８〜２１のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項２３】
Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有製剤が、経口投与製剤であることを特徴とする請求項１８〜２２のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項２４】
経口投与製剤がカプセル剤、錠剤、散剤、チュアブル錠、顆粒剤、丸剤、シロップ、または飲料のいずれかの形態の製剤であることを特徴とする請求項２３に記載の製造方法。
【請求項２５】
経口投与製剤が食品、栄養機能食品、特定保健用食品、栄養補助剤、栄養剤、飲料、動物薬、飼料、化粧品、医薬部外品、医薬品、治療薬または予防薬であることを特徴とする請求項２３又は２４に記載の製造方法。
【請求項２６】
更にＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有製剤を、梱包又は包装することを特徴とする、請求項１８から２５に記載の製造方法。
【請求項２７】
梱包又は包装が、ビン、ボトル、ＰＴＰ包装、三方シール包装、四方シール包装、ピロー包装、ストリップ包装、成型包装及びスティック包装から選ばれる少なくとも１つである請求項２６に記載の製造方法。
【請求項２８】
相対湿度７０％ＲＨ以下に制御された気体、及びＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有製剤が梱包又は包装することを特徴とする請求項２６又は２７に記載の製造方法。
【請求項２９】
さらに防湿剤が梱包又は包装されていることを特徴とする請求項２６〜２８のいずれか１項に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は安定化された(ＳＳ)−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含有する微生物乾燥菌体又は微生物エキス、ならびにその製造方法に関する。また、本発明はＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含有する微生物乾燥菌体又は微生物エキスを含む組成物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（以下ＳＡＭと略する）は、生体組織に広く存在し、核酸、神経伝達物質、リン脂質、ホルモン、タンパク質などの合成・代謝におけるメチル基供与体、または、酵素活性化因子として数多くの生物反応に関与する物質である。また、ＳＡＭはアルコール性肝炎やその他の肝臓障害、鬱病、骨関節症、老人性痴呆症に対して有効であることが知られている（非特許文献１、２、特許文献１、２）。【０００３】
通常ＳＡＭは（ＳＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（以下（ＳＳ）−ＳＡＭと略する）、及び（ＲＳ）−Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（以下（ＲＳ）−ＳＡＭと略する）の２種類のジアステレオ異性体の混合物からなる。しかし、２種類のジアステレオ異性体のうち（ＳＳ）−ＳＡＭのみが酵素的なメチル基転移反応の活性を有しており、この（ＳＳ）−ＳＡＭが非酵素的にエピメリ化することにより不活性な（ＲＳ）−ＳＡＭが生成することが知られている（非特許文献３〜５）。【０００４】
ＳＡＭは化学的に極めて不安定な物質であり、常温においても急速に分解が進むことが知られている。このような特性により、保存や流通の過程において経時的にＳＡＭの総含量、及び活性型である（ＳＳ）−ＳＡＭの総ＳＡＭ含量に占める割合（ジアステレオマー比）が低下する。また、ＳＡＭを常温・通常の湿度環境下にて製剤化等の加工処理を行うと、加工処理を行う時間内のＳＡＭの分解を抑制できたとしても、以降の長期保存期間における安定性が大きく低下する。そのため、ＳＡＭを医薬品やサプリメントとして利用する場合における品質保証上あるいは製造上の大きな障害となっている。【０００５】
上記のような理由により、これまでにＳＡＭをリン酸、ポリリン酸、メタリン酸、塩酸、硫酸などの無機酸、ｐ−トルエンスルホン酸などの有機スルホン酸誘導体強酸、酢酸、乳酸、クエン酸、コハク酸などの有機酸などの酸との塩とすることにより、ＳＡＭを安定化する方法が提案されている。また、上記のようなＳＡＭ塩に対し、さらに硫酸マグネシウム、塩化カルシウムなどの無機塩、アスコルビン酸、マルトース、シクロデキストリン、アシル化タウリン誘導体などの有機化合物などを添加することによりＳＡＭの分解を抑制する方法が知られている（特許文献３〜１４、非特許文献６〜９）。【０００６】
同様の目的でＳＡＭを含有する微生物菌体、もしくは微生物エキスにクエン酸、コハク酸、コウジ酸、ＥＤＴＡ、リン酸化合物、トレハロースなどの化合物を添加する例も知られている。（特許文献１５、１６、非特許文献１０）
しかし、上記のような過去の報告においては、ＳＡＭの安定化の度合いを単に非活性型の（ＲＳ）−ＳＡＭを含めたＳＡＭ総含量で評価しており、ジアステレオマー比も加味した活性型である（ＳＳ）−ＳＡＭの純分含量では評価していない。【０００７】
さらに、上記のような方法によって製造されるＳＡＭの塩の安定性はＳＡＭを医薬品やサプリメントとして製造するには未だ不十分であり、製造する際には、厳密に制御された環境下で行う必要がある。【０００８】
また、欧米諸国などで医薬品、または機能性食品として実用化に至っているＳＡＭ製品として、ＳＡＭとｐ−トルエンスルホン酸及び硫酸の複合塩や、ＳＡＭと１，４−ブタンジスルホン酸の塩があるものの、これらの添加剤は例えば日本では食品添加物として認められているものではなく、ＳＡＭを食品やサプリメント用途としての使用する上で、より安全な安定化方法が求められている。【０００９】
上記のような問題点をすべて克服するような安定化技術の確立は依然極めて難しい技術課題であり、実用化に耐えうる安定性を付与できないために、安定性以外の各種検討（例えば、ＳＡＭを含有する各種製剤の吸収性、効果効能、更にはＳＡＭの多分野への利用など）が必ずしも充分に行われている状況ではない。【００１０】
また、ＳＡＭの工業的な製造に関しては化学合成方法、および微生物（例えば、サッカロマイセス属酵母など）を培養した後、抽出、精製する方法（特許文献１７，１８）が知られているが、活性型である（ＳＳ）−ＳＡＭのジアステレオマー比が高いＳＡＭを製造する方法としては後者のほうが適している。【００１１】
しかしながら、培養によって生成した(ＳＳ)−ＳＡＭの不安定性（分解ならびにエピメリ化）のために、微生物菌体や微生物エキス状態での保存が難しく、更なる加工に際して、菌体取得後に直ちに後続工程を実施し、製剤化などにつなげる必要がある。
【特許文献１】特開２００５−２６１３６１号
【特許文献２】米国公開特許２００３−１４４２４４号
【特許文献３】欧州特許１４１９１４号
【特許文献４】欧州特許１６２３２３号
【特許文献５】米国特許４０２８１８３号
【特許文献６】特開昭５１−１２５７１７号
【特許文献７】特開昭５６-９９７９６号
【特許文献８】特開昭５６−９２８９９号
【特許文献９】特開昭５７-１３４４９９号
【特許文献１０】特開昭５７−１５６５００号
【特許文献１１】特開昭６０−１８１０９５号
【特許文献１２】特開昭５９−１０８７９９号
【特許文献１３】特開昭６１−１８９２９３号
【特許文献１４】欧州特許３９５６５６号
【特許文献１５】特開２００５-２２９８１２号
【特許文献１６】特開２００７−１９７３４６号
【特許文献１７】特開昭５８−１４６２９１号
【特許文献１８】特開昭５８−１３８３９３号
【非特許文献１】Hepatology, 1990, 111, 65
【非特許文献２】J. Fam. Pract., 2002, 51, 425
【非特許文献３】J. Am. Chem. Soc., 1959, 81, 3975
【非特許文献４】J. Am. Chem. Soc., 1977, 99, 7292
【非特許文献５】Biochemistry, 1983, 22, 2828
【非特許文献６】J. Biol. Chem., 1957, 229, 1037
【非特許文献７】J. Bacteriol., 1975, 121, 267
【非特許文献８】Agric. Biol. Chem., 1984, 48, 2293
【非特許文献９】Research Disclosure, 1991, December, 927
【非特許文献１０】Biochemica et Biophysica Acta, 2002, 1573, 105
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明者らが検討した結果、安定化効果が報告されているものは多数あるものの、活性本体である（ＳＳ）−ＳＡＭ純分としての安定性は決して充分ではなく、過去の種々の安定化の試みにおいてそのほとんどが実用化に至っていない理由は、（ＳＳ）−ＳＡＭ純分としての安定性が不充分であったことによるものと確信した。本発明は食品やサプリメント用途などにも安全に使用できるＳＡＭの安定化方法、とりわけ、活性型である（ＳＳ）−ＳＡＭの安定化方法を提供することを課題とする。また、更なる加工にも好適に利用可能かつ、工業規模での生産性および経済性に優れた安定化された(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体または微生物エキス、ならびにその安定化方法を提供することを課題とする。【００１３】
また、ＳＡＭの分解を抑制し、工業規模での生産性および経済性に優れたＳＡＭまたはＳＡＭを含む組成物の加工方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、上記実状に鑑み(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物菌体や微生物エキスの食品やサプリメント用途等への安価利用に向け、微生物菌体や微生物エキス中に含有される(ＳＳ)−ＳＡＭの安定化の本質を徹底研究した。また、ＳＡＭの安定化方法について鋭意検討した。【００１５】
その結果、(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物菌体や微生物エキスに熟成処理を行うことにより(ＳＳ)−ＳＡＭの分解、およびエピメリ化を顕著に抑制、もしくは停止させることができ、添加剤を必要以上に用いることなく(ＳＳ)−ＳＡＭを安定化できることを見出した。【００１６】
また、複雑で高価な処理を行わずとも、特定の処理（乾燥）を行うことにより、動物実験において高い吸収性を示す微生物菌体を得ることができることも見出した。【００１７】
また、(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物菌体や微生物エキスに金属塩及び／又はアンモニウム塩を添加することにより、さらに(ＳＳ)−ＳＡＭの安定性を向上できることを見出した。【００１８】
また、ＳＡＭを１重量％以上含有する微生物乾燥菌体または微生物エキスを含む組成物を用いることで、加工時のみならず、加工後に長期保存した場合のＳＡＭの安定性の低下も抑制できることを新たに見出した。【００１９】
すなわち、本発明は、(ＳＳ)−ＳＡＭを産生する微生物を培養した後に、菌体を乾燥し、さらに熟成を行うことを特徴とする(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体の製造方法である。【００２０】
また本発明は、(ＳＳ)−ＳＡＭを産生する微生物を培養した後に、菌体を破砕し、必要に応じて固形分を除去した微生物エキスを乾燥し、さらに熟成を行うことを特徴とする、(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物エキスの製造方法である。【００２１】
また本発明は、上記方法で製造された安定化された(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体又は微生物エキスである。【００２２】
さらに本発明は、上記(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体又は微生物エキスを含有し、経口投与される組成物である。【００２３】
また本発明は、(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体又は微生物エキスを、ガラス製、プラスチック製及び／又は金属製の素材で包装・梱包することを特徴とする、(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体及び／又は微生物エキスの保存方法である。【００２４】
さらに本発明は、(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体及び／又は微生物エキスを経口投与することにより、血漿中の(ＳＳ)−ＳＡＭ濃度を向上させる方法である。【００２５】
さらに本発明は、(ＳＳ)−ＳＡＭの分解及び／又はエピメリ化を抑制する方法であって、(ＳＳ)−ＳＡＭ含有微生物菌体、又は、(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物エキスに金属塩及び／又はアンモニウム塩を添加し、共存させることを特徴とする方法である。【００２６】
さらに本発明は、１重量％以上のＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体または微生物エキスを含む組成物を含むＳＡＭ含有製剤の製造方法である。【００２７】
本発明の別の特徴は相対湿度７０％ＲＨ以下で製剤することを特徴とする上記の製造方法である。【００２８】
本発明の別の特徴は５０℃以下で製剤することを特徴とする上記の製造方法である。【００２９】
本発明の別の特徴はＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体及び微生物エキスを含む組成物を湿度２０％ＲＨ以上、温度２０℃以上にさらす時間を９６時間以下で製剤することを特徴とする上記の製造方法である。
【発明の効果】
【００３０】
本発明により、安定化された(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体または微生物エキス、およびその製造方法が提供される。この安定化された(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体または微生物エキスは、そのままあるいは更に加工して各種製剤（錠剤、チュアブル錠、カプセルなど）とすることにより、食品やサプリメント（健康食品、機能性食品）用途に好適に利用することができる。【００３１】
また、本発明では、極めて不安定なＳＡＭの分解を加工時のみならず加工後においても抑制するために、ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体または微生物エキスを含有する組成物を加工に用いる。これにより、厳密な周囲の環境制御を行わない簡便な方法で、ＳＡＭの分解を抑制したＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体または微生物エキスを含む組成物の製造及び加工方法の提供が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】実施例４の乾燥酵母菌体を経口投与した際の、ＳＡＭの血漿中濃度変化を示す図である。
【図２】実施例５の乾燥酵母菌体を経口投与した際の、ＳＡＭの血漿中濃度変化を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
以下、実施形態に基づいて本発明を詳細に説明する。本発明の範囲は、実施形態および実施例によって限定されるものではない。【００３４】
（微生物）
本発明で用いられる微生物はＳＡＭを生産するものであればいずれでもよいが、ＳＡＭを乾燥重量当たり１重量％以上含有する微生物であることが好ましい。また、ＳＡＭを乾燥重量当たり５重量％以上含有する微生物であることが好ましく、さらにＳＡＭを乾燥重量当たり１０重量％以上含有する微生物であることがより好ましい。また、食品やサプリメント用途に用いる観点から、食経験のある微生物であることが好ましい。【００３５】
本発明で用いられる微生物としては、特に限定されないが、例えばサッカロマイセス（Saccharomyces）属、キャンディダ（Candida）属、ピキア(Pichia)属、ムコアー(Mucor)属、リゾパス(Rhizopus)属、ブレビバクテリウム(Brevibacterium)属、コリネバクテリウム(Corynebacterium)属、エシェリヒア(Escherichia)属、ストレプトマイセス(Streptomyces)属等に属する微生物が挙げられ、サッカロマイセス属に属する微生物が好ましい。これら微生物のうちでも、食経験のあるものが好ましい。具体的な例としては、清酒酵母、パン酵母、ビール酵母、ワイン酵母等の微生物が挙げられる。さらに好ましくは、サッカロマイセス・セルビシエ（Saccharomycescerevisiae）  Ｋ−６株（清酒酵母協会６号）が挙げられる。サッカロマイセス・セルビシエ（Saccharomyces cerevisiae）  Ｋ−６株は独立行政法人製品評価技術基盤機構よりＮＢＲＣ２３４６株として入手可能である。なお、本発明に用いる微生物としては、上述した微生物の野生株であっても良いし、変異改良された変異株であってもよい。変異株は、ＵＶ照射や、Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）、エチルメタンスルフォネート（ＥＭＳ）等の薬剤による処理といった当業者に周知の方法で取得することができる。更に、遺伝子組換え等の方法を用いて、ＳＡＭを高生産するように作製された形質転換微生物を用いることもできる。【００３６】
（培養）
本発明で用いられるＳＡＭを含有する微生物菌体は、上記のような微生物を公知の方法に従って培養することにより得ることができる。例えば、Journal of Biological Chemistry, 1987年, 29, 1037 に記載されている Schlenk らの方法に従って、メチオニン、炭素源、窒素源、および無機塩類を含有する液体培地中にて培養することができる。これに、ビタミン、アミノ酸などの有機微量栄養素を添加すると、好ましい結果が得られる場合が多い。炭素源としては、グルコース、スクロースのような炭水化物、酢酸のような有機酸、エタノールのようなアルコール類等が適宜使用される。窒素源としては、アンモニウム塩、アンモニア水、アンモニアガス、尿素、酵母エキス、ペプトン、コーンスティープリカー等が用いられる。無機塩類としてはリン酸塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム塩、鉄塩、硫酸塩、塩化物塩等が用いられる。【００３７】
また、培養には後述するＳＡＭの化学的分解及び／又は（ＳＳ）−ＳＡＭのエピメリ化の抑制効果のある安定化剤を添加してもよい。【００３８】
培養は好気的条件、嫌気的条件のいずれでも実施可能であるが、微生物菌体を効率よく増殖させるためには好気的条件が望ましい。【００３９】
培養温度は微生物が増殖できる範囲であればよいが、１５℃から４０℃が好ましく、２５℃から３５℃の範囲がより好ましい。また、培養時のｐＨも微生物が増殖できる範囲であればよいが、ｐＨ３から８の範囲での培養が好ましく、ｐＨ５から７の範囲がより好ましい。また、回分式、連続式のいずれの培養方法でもよい。【００４０】
上記ｐＨを制御するために、酸、アルカリ問わず添加することができるが、酸としては、例えば塩酸、硫酸、リン酸等の無機酸類、酢酸、クエン酸等の有機酸類、アルカリとしては、例えば炭酸カリウム、炭酸ナトリウム等の炭酸塩、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム等のアルカリ金属水酸化物、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム等のアルカリ土類金属水酸化物、アンモニア等を挙げることができる。これらは単独または２種以上混合して使用しても良い。【００４１】
例えば、サッカロマイセス・セルビシエ（Saccharomyces cerevisiae）Ｋ−６株を用いてＳＡＭを生産する場合には、スクロース、酵母エキス、Ｌ−メチオニン、尿素、グリシン、リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム七水和物、ビオチン、塩化カルシウム二水和物、及び微量金属塩を含む培地に植菌し、スクロース又は／及びエタノール等の炭素源を流加しつつ、好気的に３０℃にて４日間培養することによりＳＡＭ含有菌体を得ることができる。【００４２】
（濃縮・洗浄・破砕）
培養により得られた微生物菌体は、必要に応じて遠心分離、ろ過などの方法により、濃縮、あるいは培地成分と分離・洗浄してもよい。【００４３】
ＳＡＭを含有する微生物エキスは、上述した方法により培養された微生物菌体を破砕し、必要に応じて不溶分を遠心分離、ろ過などの方法により除去することにより得ることができる。微生物菌体の破砕方法は特に限定されないが、例えば、高圧分散処理などの高圧破砕により破砕する方法、ビーズミルなどの機械的破砕により破砕する方法、エタノールや酢酸エチルなどの有機溶媒を添加することにより破砕する方法、酸またはアルカリを添加することにより破砕する方法、界面活性剤を添加することにより破砕する方法、凍結融解により破砕する方法、加熱処理により破砕する方法、タンパク質分解酵素、細胞壁溶解酵素などを用いて破砕する方法、酵母中の酵素を利用して自己消化により破砕する方法などが挙げられる。好ましくは高圧分散処理などの高圧破砕により破砕する方法、有機溶媒を添加することにより破砕する方法、酸またはアルカリを添加することにより破砕する方法、加熱処理により破砕する方法が挙げられる。言うまでもなく、これらの破砕方法を２つ以上組み合わせて用いることもできる。【００４４】
（乾燥・ｐＨ）
次いで、上述の方法により得られた微生物菌体、または微生物エキスを乾燥する。乾燥方法としては特に限定されないが、例えば噴霧乾燥、凍結乾燥、減圧乾燥、通気乾燥等を挙げることができる。また、これらの乾燥方法を２つ以上組み合わせて用いることもできる。【００４５】
噴霧乾燥としては、スプレードライ法が使用できる。【００４６】
減圧乾燥、通気乾燥における乾燥温度としては特に制限されないが、ＳＡＭの安定性を考慮すると６０℃以下が好ましい。下限は特に制限されない。【００４７】
微生物菌体、または微生物エキスの乾燥を行う前の微生物菌体懸濁液、または菌体エキス液のｐＨは７以下であることが好ましく、ｐＨ６以下がさらに好ましく、ｐＨ５以下が特に好ましい。【００４８】
上記ｐＨを制御するために、酸、アルカリ問わず添加することができる。酸としては、特に制限されないが、例えば塩酸、硫酸、リン酸等の無機酸類、酢酸、クエン酸等の有機酸類、アルカリとしては、特に制限されないが、例えば炭酸カリウム、炭酸ナトリウム等の炭酸塩、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム等のアルカリ金属水酸化物、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム等のアルカリ土類金属水酸化物、アンモニア等を挙げることができる。これらは単独または２種以上混合して使用しても良い。【００４９】
本発明の効果を最大限に発揮させるためには、乾燥において極力高温に曝さないのが好ましい。減圧乾燥・通気乾燥の場合は比較的長時間（例えば６時間以上）を要するため、３０℃以下で乾燥することが好ましく、２０℃以下がより好ましい。生産性並びに品質の観点からは、乾燥方法として、低い温度で実施できる凍結乾燥法や、比較的高温ながら高温環境に晒される時間が極めて短いスプレードライ法が好ましく、凍結乾燥法がより好ましい。【００５０】
また、微生物菌体及び／又は微生物エキスに含まれる水分含量を低減するために、上記乾燥操作の後に減圧、通気、加熱などの操作を施すことにより、さらに乾燥（仕上げ乾燥）を行うことができる。【００５１】
本発明の熟成効果及びＳＡＭ安定化効果を最大限に発揮させるためには、乾燥終了時の微生物菌体及び／又は微生物エキスに含まれる水分含量としては、少ないほど好ましく、通常１０％以下、好ましくは５％以下、より好ましくは３％以下、さらに好ましくは２％以下、特に好ましくは１％以下である。【００５２】
（熟成）
本発明の安定化された(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体及び／又は微生物エキスは、例えば、上述の方法により乾燥した(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物菌体及び／又は微生物エキスを熟成することにより、容易に製造することができる。【００５３】
上記熟成とは、乾燥後の(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体または微生物エキスを外部環境から遮断された特定の環境下に存在させることを言う。上記特定の環境下とは、所定の温度、及び所定の圧力条件下にて、固体及び／又は気体の物質のみが存在する（実質的に液体化する物質が存在しない）環境のことを言う。このような特定の環境下とは、例えば、以下のようにしてその環境を構築することができる。
１．装置内部を減圧させた後、減圧状態にて、外部環境から遮断する。
２．窒素ガス等の乾燥ガス（好ましくは、乾燥不活性ガス）を装置内部に導入し、装置内部が、該乾燥ガスにて置換された後に、外部環境から遮断する。
３．装置内部にシリカゲル等の乾燥剤を入れた後、外部環境から遮断する。【００５４】
言うまでもなく、上記操作は複数を併用してもよい。【００５５】
尚、ここでいう外部環境からの遮断とは、反応缶、乾燥機、デシケーター等の装置のバルブ操作等により、一旦形成された上記特定環境が少なくとも熟成に要する期間中保持されうる状態のことを言う。後述する包装・梱包形態とし、完全に密封することにより、外部環境から遮断される状態としても良い。【００５６】
上記熟成時の温度としては特に制限されないが、通常、６０℃以下、好ましくは５０℃以下、より好ましくは４０℃以下で実施でき、また、通常−８０℃以上、−６０℃以上、−４０℃以上、−２０℃以上、好ましくは０℃以上、より好ましくは１０℃以上で実施できる。【００５７】
上記熟成に要する時間は特に制限されないが、通常１時間以上、好ましくは２時間以上、より好ましくは５時間以上、特に好ましくは１０時間以上である。上限は特に制限されないが、熟成に要する時間が長いと生産性が低下するため、通常３０日以下、好ましくは１５日以下、より好ましくは７日以下、さらに好ましくは５日以下である。【００５８】
上記熟成時の相対湿度は、低いほど好ましく、通常３０％ＲＨ以下、好ましくは２０％ＲＨ以下、より好ましくは１５％ＲＨ以下、特に好ましくは１０％ＲＨ以下である。【００５９】
なお、本発明の効果を最大限に発揮させるためには、前段の乾燥工程終了から短時間のうちに熟成操作に供することが好ましく、乾燥完了から、通常２４時間以内、好ましくは１２時間以内、より好ましくは６時間以内に熟成に供するのが好ましい。言うまでもなく、乾燥と熟成を一連／一体の操作として行ってもよい。具体的には、乾燥に用いた装置をそのまま使用して、乾燥時から外部環境と遮断されている場合は遮断を維持し、あるいは、乾燥時には外部環境から遮断されていない場合には乾燥後に遮断することにより、乾燥に引き続き熟成を行うことができる。ただし、ＳＡＭの分解あるいはエピメリ化を最小化する観点からは、ＳＡＭを含有する微生物菌体あるいは微生物エキスが前述の水分含量レベルに乾燥される前には、高温下に長時間晒されることがないようにすべきである。例えば、２０℃以上の温度にさらされる時間は、通常２４時間以内であり、好ましくは１２時間以内、より好ましくは６時間以内である。ＳＡＭを含有する微生物菌体あるいは微生物エキスを常法により凍結乾燥し、引き続き、熟成する態様が特に好ましい。凍結乾燥に引き続く熟成は、乾燥時の温度と減圧度を引き続き維持してもよいし、減圧環境は維持して温度制御は停止（すなわち、室温まで徐々に上昇する）してもよいし、乾燥不活性ガスで装置内を常圧に戻して適温に維持してもよい。【００６０】
上記、熟成操作終了時の微生物乾燥菌体または微生物エキス中に含まれる(ＳＳ)−ＳＡＭ含量は、乾燥重量に対して３重量％以上であることが好ましく、より好ましくは５重量％以上、さらに好ましくは１０重量％以上、特に好ましくは１５重量％以上である。【００６１】
本発明の方法で得られたＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体あるいは微生物エキスにおいては、ことさらに添加剤を用いなくとも、（ＳＳ）−ＳＡＭが安定化される。【００６２】
（吸収性）
本発明により得られたＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体はＳＡＭの生体吸収性に優れ、ｐ−トルエンスルホン酸／硫酸塩と同等以上の生体吸収性を示す。本発明のＳＡＭ含有微生物乾燥菌体、又は、微生物エキスをＳＡＭ純分として１００ｍｇ／ｋｇ  ｂｏｄｙ  ｗｅｉｇｈｔとなるよう経口投与した場合、ＳＡＭの最高血漿中濃度を０．１μｇ／ｍｌ以上、好ましくは０．２μｇ／ｍｌ以上、より好ましくは０．３μｇ／ｍｌ以上、さらに好ましくは０．５μｇ／ｍｌ以上とすることができ、また、ＳＡＭ濃度曲線下面積（ＡＵＣ）を０．７（μｇ／ｍｌ）×ｈ以上、好ましくは１．０（μｇ／ｍｌ）×ｈ以上、より好ましくは２．０（μｇ／ｍｌ）×ｈ以上、さらに好ましくは３．０（μｇ／ｍｌ）×ｈ以上とすることができる。【００６３】
従って、本発明の微生物乾燥菌体又は微生物エキスを投与することにより、肝機能改善、鬱病、骨間接症、老人性痴呆症等のＳＡＭが有効に作用すると考えられるあらゆる症状／病態に対して高い効果を期待することができる。【００６４】
（安定化剤）
また、本発明における微生物乾燥菌体または微生物エキス中に含まれる ＳＡＭの安定性をさらに向上させるために、微生物の培養時、乾燥前、あるいは乾燥後の微生物菌体または微生物エキスにＳＡＭの化学的分解及び／又は(ＳＳ)−ＳＡＭのエピメリ化の抑制効果を有する安定化剤を添加することができる。【００６５】
上記安定化剤としては、ＳＡＭの化学的な分解及び／又は(ＳＳ)−ＳＡＭのエピメリ化を抑制する性質を有するものであれば特に限定されないが、本発明により得られたＳＡＭを含有する微生物菌体又は微生物エキスを食品、健康食品、機能性食品として、或いは、それらに配合して利用する場合の安全性という観点からは、食用素材であることが好ましい。【００６６】
安定化剤としては、例えば、塩酸、硫酸、亜硫酸、リン酸、ピロリン酸、ポリリン酸、又はメタリン酸などの等の無機酸類及びそれらの塩、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸、グルコン酸、フマル酸、Ｌ−アスコルビン酸、ニコチン酸、パントテン酸、フィチン酸、トシル酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機酸類及びそれらの塩、グルコース、スクロース、フルクトース、ガラクトース、トレハロース、Ｄ−セロビオース、マンニトール、イノシトール、イヌリン、フルクトオリゴ糖、イソマルトオリゴ糖、セルロース、Ｎ−アセチルグルコサミン、ソルボース、グリコーゲン、ズルシット、ラクチトール、ガラクチトール、グルコノラクトン、アルギン酸、カラギーナン、デキストリン、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール等の糖類及びその誘導体、グリシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−バリン、Ｌ−ロイシン、Ｄ−ロイシン、Ｌ−トレオニン、Ｌ−メチオニン、ＤＬ−メチオニン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−オルニチン、グルタチオン、ＤＬ−α−アミノ−ｎ−酪酸などのアミノ酸類またはペプチド類及びそれらの塩を挙げることができる。【００６７】
無機酸の塩としては、例えば、塩化アンモニウム、塩化第二鉄、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、塩化アルミニウム、アルミニウム硫酸銅、硫酸第一鉄、硫酸マグネシウム、硫酸カルシウム、硫酸マンガン、硫酸ニッケル、硫酸亜鉛、硫酸銅、硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウム、硫酸アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アルミニウムアンモニウム、炭酸アンモニウム、炭酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸マグネシウム、リン酸カルシウム、リン酸アンモニウム、ポリリン酸ナトリウム、ポリリン酸マグネシウム等の金属塩類又はアンモニウム塩類等を挙げることができる。【００６８】
また、好ましくは、リン酸、ピロリン酸、ポリリン酸、メタリン酸及びそれらの塩、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、グルコン酸、フマル酸、Ｌ−アスコルビン酸、Ｄ−セロビオース、マンニトール、イノシトール、イヌリン、フルクトオリゴ糖、グリシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−ロイシン、Ｄ−ロイシン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−オルニチン、塩化第二鉄、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、硫酸第一鉄、硫酸マグネシウム、硫酸カルシウム、硫酸ナトリウム、硫酸アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アルミニウムアンモニウムを挙げることができ、さらに好ましくは、リン酸、ピロリン酸、ポリリン酸、メタリン酸及びそれらの塩、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、塩化第二鉄、塩化マグネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マグネシウム、硫酸カルシウム、硫酸ナトリウムを挙げることができる。これらの安定化剤は単独で用いてもよいし、２種類以上の安定化剤を組み合わせて用いてもよい。【００６９】
従来、ＳＡＭと硫酸、塩酸、ｐ-トルエンスルホン酸等の酸からなる塩に関しては、硫酸マグネシウム等の金属塩をさらに添加することによりＳＡＭの安定性を向上できるとの知見はあったが、上記ＳＡＭの無機酸塩、有機酸塩、複合塩等とせずとも、金属塩又はアンモニウム塩を共存させることにより、(ＳＳ)−ＳＡＭの化学的分解及び／又はエピメリ化を抑制できるとの知見は、本発明者らが初めて見出したものである。これら金属塩又はアンモニウム塩を共存させることにより、硫酸、塩酸、ｐ-トルエンスルホン酸等の強酸を使用することなくＳＡＭを安定化させることが可能となり、食品やサプリメント（健康食品、機能性食品）用途としてより安全な形態でＳＡＭを利用することが可能となる。【００７０】
添加する金属塩又はアンモニウム塩としては、金属塩類の方が好ましく、二価のカチオンと酸から形成される金属塩がより好ましい。さらに好ましくはアルカリ土類金属のカチオンと酸から形成される金属塩であり、特に好ましくはマグネシウム、又はカルシウムと酸から形成される塩である。好ましい塩の具体例としては、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム、硫酸カルシウム、塩化カルシウムが挙げられ、特に好ましくは、硫酸マグネシウム、硫酸カルシウムである。【００７１】
これら安定化剤の使用量は特に制限されないが、通常、微生物菌体又は微生物エキスに含まれるＳＡＭに対してモル比で０．１倍量以上、好ましくは０．５倍量以上、より好ましくは等倍量以上、さらに好ましくは２倍量以上である。また、上限量についても特に制限されない。【００７２】
また、これら安定化剤として金属塩、無機酸塩、有機酸塩、アミノ酸塩等の塩類を用いる場合、塩を形成した化合物をそのまま添加してもよいし、あるいは、塩を形成する酸と塩基を別々に添加してもよい。この場合、塩を形成する酸としては、硫酸、塩酸、炭酸、リン酸、ポリリン酸等が挙げられる。また、塩基としてはアンモニア、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム、水酸化ナトリウム、水酸化アルミニウム等が挙げられる。この際、使用する酸や塩基は各々単独で用いてもよいし、２種類以上の酸と塩基を組み合わせてもよい。【００７３】
（ＳＡＭの分解、及び／又は(ＳＳ)−ＳＡＭのエピメリ化抑制の定義）
本発明におけるＳＡＭ及び／又は(ＳＳ)−ＳＡＭの安定化、ＳＡＭの分解及び／又は(ＳＳ)−ＳＡＭのエピメリ化の停止、又は抑制とは、分解については、ＳＡＭ及び／又は(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体及び／又は微生物エキスを４０℃、３日間で保存した場合のＳＡＭの残存率として普通８５％以上、好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、特に好ましくは９９％以上であることをいう。エピメリ化については、ジアステレオマー比の低下量が普通１０％ｄ．ｅ．以下、より好ましくは５％ｄ．ｅ．以下、さらに好ましくは３％ｄ．ｅ．以下、特に好ましくは１％ｄ．ｅ．以下であることをいう。言うまでもなく、分解及びエピメリ化の両方が停止／抑制されることがより好ましい。ＳＡＭの残存率とジアステレオマー比の低下量は、例えば、ＨＰＬＣ等で分析することにより測定することができる。【００７４】
（組成物）
本発明において、ＳＡＭ及び／又は(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体及び／又はエキスの流動性や吸湿性等の特性を改良するため、及び／又は、後述する医薬やその他食品、健康食品、化粧品等に加工または使用するために、必要に応じ、各種添加剤を用い、ＳＡＭ及び／又は(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体または微生物エキスを含有する組成物あるいは加工形態とすることができる。このような添加剤としては、特に制限されないが、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、色素、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、（組成物あるいは製剤の状態を安定化するための）安定化剤、香料、油脂、界面活性剤、脂肪酸、ＳＡＭ以外の成分、酸化防止剤等を挙げることができる。【００７５】
上記、賦形剤としては、特に制限されないが、例えば、スクロース、ラクトース、グルコース、デンプン、デキストリン、マンニトール、結晶セルロース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム等を挙げることができる。【００７６】
上記、崩壊剤としては、特に制限されないが、例えば、デンプン、寒天、クエン酸カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、デキストリン、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、トラガント、アルギン酸等を挙げることができる。【００７７】
上記、滑沢剤としては、特に制限されないが、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化油等を挙げることができる。【００７８】
上記、結合剤としては、特に制限されないが、例えば、エチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、トラガント、シェラック、ゼラチン、プルラン、アラビアゴム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ソルビトール等を挙げることができる。【００７９】
上記、色素としては、特に制限されないが、例えば酸化チタン、食用色素、ベンガラ色素、ベニバナ色素、カラメル色素、クチナシ色素、タール色素、クロロフィル等の色素を挙げることができる。【００８０】
上記、凝集防止剤としては、特に制限されないが、例えば、ステアリン酸、タルク、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ酸等を挙げることができる。【００８１】
上記、吸収促進剤としては、特に制限されないが、例えば、高級アルコール類等を挙げることができる。【００８２】
上記、溶解補助剤としては、特に制限されないが、例えば、フマル酸、コハク酸、リンゴ酸等の有機酸等を挙げることができる。【００８３】
上記、（組成物あるいは製剤の状態を安定化するための）安定化剤としては、特に制限されないが、例えば、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エチル、ミツロウ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース等を挙げることができる。尚、ここでいう、（組成物あるいは製剤の状態を安定化するための）安定化剤とは、組成物あるいは製剤の状態（例えば、流動性、粘度等）を安定化するために用いる添加剤のことであり、ＳＡＭの安定性（分解・エピメリ化等）を改善するために用いる安定化剤との異同に関わらず用いることができる。【００８４】
上記、香料としては特に制限されないが、オレンジ油、カプシカム油、からし油、ガーリック油、キャラウェー油、クローブ油、桂皮油、ココア抽出物、コーヒー豆抽出物、ジンジャー油、スペアミント油、セロリー種子油、タイム油、たまねぎ油、ナツメグ油、パセリ種子油、はっか油、バニラ抽出物、ファンネル油、ペニロイヤル油、ペパーミント油、ユーカリ油、レモン油、ローズ油、ローズマリー油、アーモンド油、アジョワン油、アニス油、アミリス油、アンゲリカルート油、アンブレット種子油、エストラゴン油、オリガナム油、オリス根油、オリバナム油、カシア油、カスカリラ油、カナンガ油、カモミール油、カラムス油、カルダモン油、キャロット種子油、キュベブ油、クミン油、グレープフルーツ油、桂葉油、ケード油、こしょう油、コスタス根油、コニャック油、コパイバア油、コリアンダー油、しそ油、じゃ香、ジュニパーベリー油、スターアニス油、セイジ油、セボリー油、ゼラニウム油、タンゼリン油、ディル油、とうか油、トルーバルサム油、バジル油、バーチ油、パチュリ油、パルマローザ油、ピメント油、プチグレイン油、ベイ葉油、ベルガモット油、ペルーバルサム油、ベンゾイン樹脂、ボアドローズ油、ホップ油、ボロニアアブソリュート、マージョラン油、マンダリン油、ミルトル油、ユズ香料、ライム油、ラベンジン油、ラベンダー油、ルー油、レモングラス油、レチオニン、ロベージ油、ローレルリーフ油、ワームウッド油等を挙げることができる。【００８５】
上記、油脂としては、天然油脂であってもよく、合成油脂や加工油脂であっても良い。より好ましくは、食用又は医薬用に許容されるものである。植物油脂としては、例えば、ヤシ油、パーム油、パーム核油、アマニ油、つばき油、玄米胚芽油、菜種油、米油、落花生油、コーン油、小麦胚芽油、大豆油、エゴマ油、綿実油、ヒマワリ油（ヒマワリ種子油）、カポック油、月見草油、シア脂、サル脂、カカオ脂、ゴマ油、サフラワー油、オリーブ油、アボガド油、けし油、ごぼう子油、ピーナッツ油等を挙げることができ、動物油脂としては、例えば、豚脂、乳脂、魚油、牛脂等を挙げることができ、さらに、これらを分別、水素添加、エステル交換等により加工した油脂（例えば硬化油）も挙げることができる。言うまでもなく、中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）も使用しうる。中鎖脂肪酸トリグリセリドとしては、特に制限されないが、例えば、脂肪酸の炭素数が各々６〜１２、好ましくは８〜１２のトリグリセリド等を挙げることができる。また、脂肪酸の部分トリグリセリドも使用できる。さらには、これら上記油脂の混合物を使用しても良い。【００８６】
上記油脂のうち、取り扱い易さ、臭気等の面から、植物油脂、合成油脂、加工油脂、中鎖脂肪酸トリグリセリドが好ましい。【００８７】
上記、界面活性剤としては、例えば、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、有機酸モノグリセリド、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、縮合リシノレイン酸グリセリド、サポニン、リン脂質等を挙げることができる。【００８８】
グリセリン脂肪酸エステルとしては、特に制限されず、モノグリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステルのいずれも使用できる。例えば、グリセリンの重合度が１〜１２、脂肪酸残基の炭素数が各々６〜２２のグリセリン脂肪酸エステル等を挙げることができる。また、グリセリン脂肪酸エステル中の脂肪酸残基は飽和、不飽和を問わず使用することができ、特に制限されない。グリセリン脂肪酸エステルの脂肪酸残基の数は、グリセリンの重合度等により異なるので特に制限されない。上限は、グリセリン骨格に存在するヒドロキシル基の数（すなわちグリセリンの重合度＋２）である。グリセリン脂肪酸エステルの脂肪酸残基としては、特に制限されないが、脂肪酸残基の炭素数が８〜２２のものが好ましく用いられ、炭素数８〜１８のものが特に好ましく用いられる。このような脂肪酸残基を構成する脂肪酸の種類としては、例えば、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ベヘン酸等を挙げることができる。尚、脂肪酸残基が２つ以上存在する場合、それぞれの脂肪酸残基は同一であっても良く、異なっていても良いが、入手の容易性等の観点からは同一であるものが好ましい。【００８９】
ショ糖脂肪酸エステルとしては特に制限されず、ショ糖脂肪酸エステルの脂肪酸残基としては、飽和、不飽和を問わず使用できるが、脂肪酸残基の炭素数が８〜２２のものが好ましく用いられ、炭素数が８〜１８のものが特に好ましく用いられる。このような脂肪酸残基を構成する脂肪酸の種類としては、例えば、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ベヘン酸等を挙げることができる。尚、脂肪酸残基が２つ以上存在する場合、それぞれの脂肪酸残基は同一であっても良く、異なっていても良いが、入手の容易性等の観点からは同一であるものが好ましい。【００９０】
有機酸モノグリセリドとしては、特に制限されないが、例えば、酢酸モノグリセリド、クエン酸モノグリセリド、乳酸モノグリセリド、コハク酸モノグリセリド、ジアセチル酒石酸モノグリセリド等の酒石酸モノグリセリド等を挙げる事ができる。ここで、有機酸モノグリセリドを構成する、脂肪酸残基は特に制限されない。このような脂肪酸残基を構成する脂肪酸の種類としては、例えば、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ベヘン酸等を挙げることができる。そのなかでも好ましくは、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸等である。【００９１】
ソルビタン脂肪酸エステルとしては特に制限されず、ソルビタン脂肪酸エステルの脂肪酸残基としては、飽和、不飽和を問わず使用できるが、脂肪酸残基の炭素数が８〜２２のものが好ましく用いられ、炭素数が８〜１８のものが特に好ましく用いられる。このような脂肪酸残基を構成する脂肪酸の種類としては、例えば、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ベヘン酸等を挙げることができる。特に好ましくは、オレイン酸である。尚、脂肪酸残基が２つ以上存在する場合、それぞれの脂肪酸残基は同一であっても良く、異なっていても良いが、入手の容易性等の観点からは同一であるものが好ましい。【００９２】
ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルとしては特に制限されず、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルの脂肪酸残基としては、飽和、不飽和を問わず使用できるが、脂肪酸残基の炭素数が８〜２２のものが好ましく用いられ、炭素数が８〜１８のものが特に好ましく用いられる。このような脂肪酸残基を構成する脂肪酸の種類としては、例えば、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ベヘン酸等を挙げることができる。特に好ましくはオレイン酸である。尚、脂肪酸残基が２つ以上存在する場合、それぞれの脂肪酸残基は同一であっても良く、異なっていても良いが、入手の容易性等の観点からは同一であるものが好ましい。【００９３】
プロピレングリコール脂肪酸エステルとしては、特に制限されず、モノエステル、ジエステルのいずれも好適に使用できる。プロピレングリコール脂肪酸エステルの脂肪酸残基は飽和、不飽和を問わず使用できるが、例えば、脂肪酸残基の炭素数が各々６〜２２、好ましくは８〜１８、より好ましくは８〜１２のものが用いられる。このような脂肪酸残基を構成する脂肪酸の種類としては、例えば、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ベヘン酸等を挙げることができる。特に好ましくはオレイン酸である。尚、ジエステルの場合、それぞれの脂肪酸残基は同一であっても良く、異なっていても良いが、入手の容易性等の観点からは同一であるものが好ましい。【００９４】
縮合リシノレイン酸ポリグリセリドとしては、グリセリンの重合度等にかかわらず使用でき、特に制限されないが、例えば、重合度２〜１０のものを挙げることができる。好ましくは、グリセリンの重合度が２以上、より好ましくは３以上、特に好ましくは４以上である。グリセリンの重合度の上限は特に制限されないが、普通１０以下、好ましくは８以下、より好ましくは６以下である。【００９５】
サポニンとしては、特に制限されないが、エンジュサポニン、キラヤサポニン、精製大豆サポニン、ユッカサポニン等を挙げることができる。【００９６】
リン脂質としては特に制限されないが、例えば、卵黄レシチン、大豆レシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、スフィンゴミエリン、ジセチルリン酸、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、ホスファチジルイノシトールアミン、カルジオリピン、セラミドホスホリルエタノールアミン、セラミドホスホリルグリセロール、及び、これらの混合物等を挙げることができる。言うまでもなく、これらのリン脂質に酵素分解等を施したリゾリン脂質（リゾレシチン）等も好適に使用できる。【００９７】
脂肪酸としては、特に制限されないが、例えば、カプロン酸、カプリル酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ベヘン酸等を挙げる事ができる。【００９８】
ＳＡＭ以外の有効成分としては、例えば、アミノ酸類、ビタミン類、ミネラル類、ポリフェノール類、有機酸類、糖類、ペプチド類、タンパク質、補酵素Ｑ１０（酸化型、還元型のいずれも含む）、カロチノイド等を挙げることができる。【００９９】
酸化防止剤としては、例えば、アスコルビン酸類、トコフェロール類、ビタミンＡ、β−カロチン、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、クエン酸類等を挙げることができる。尚、アスコルビン酸類やクエン酸類は、アスコルビン酸類やクエン酸類を含有したレモンやオレンジ、グレープフルーツ等の果汁濃縮物（エキス、パウダー等）をその代わりに使用しても良い。【０１００】
上記した物質は、複数の役割を担わせても良い。例えば、でんぷんに賦形剤と崩壊剤の役割を担わせても良いし、クエン酸に溶解補助剤、ＳＡＭ以外の成分、酸化防止剤の３つの役割を担わせても良い。【０１０１】
（梱包/包装）
本発明のＳＡＭ及び／又は(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体及び微生物エキス及びそれらを含む組成物、又はその加工物を保存する場合においては、ガラス製、プラスチック製および/または金属製の素材にて包装・梱包し、外部環境から遮断された環境とすることが好ましい。【０１０２】
ガラス製の素材としては、例えば、軟質ガラス、硬質ガラス等を挙げる事ができる。プラスチック製の素材としては、例えば、高密度ポリエチレン、中密度ポリエチレン、低密度ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリビニルアルコール、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ナイロン等を挙げることができる。言うまでもなく、上記プラスチック製の素材を積層したフィルム、アルミラミネート等のプラスチック製の素材にアルミ等の金属を積層したフィルム、プラスチック製の素材に、アルミナ、シリカ等を蒸着させたフィルム（アルミナ蒸着フィルムやシリカ蒸着フィルム）もプラスチック製の素材に含まれる。【０１０３】
金属製の素材としては、例えば、鉄、アルミニウム、亜鉛、ニッケル、コバルト、銅、すず、チタン、クロムあるいはこれらの合金（ステンレス、真鍮等）を挙げることができる。また、ガラスと金属を組み合わせたホーロー等の素材も使用できる。外部からのガス（気体）の流通を抑制するという観点からは、軟質ガラス、硬質ガラス、アルミラミネート、アルミナ蒸着フィルム、シリカ蒸着フィルム、金属製の素材等が特に好ましい。【０１０４】
上記した素材は、ボトル、袋、缶、ドラム、箱等に成型し、本発明の組成物を包装・梱包するのが好ましい。また、上記の素材を用いて、ＰＴＰ包装、三方シール包装、四方シール包装、ピロー包装、ストリップ包装、アルミ成型包装、スティック包装等とすることもできる。ポリエチレン等の比較的ガス流通性が高い素材を用いた場合には、２重以上の包装・梱包とするのが好ましく、このとき、アルミラミネートやアルミナ、シリカ等の蒸着フィルム、ガラス、金属等の比較的ガスバリア性、防湿性の高い素材を使用するのが特に好ましい。包装、梱包後には、必要に応じて、鋼鉄製のドラム、樹脂製のドラム、ファイバードラム、ダンボール等に入れて輸送、保管を行うことができる。【０１０５】
上記包装・梱包においては、上記包装、梱包時に乾燥剤や脱酸素剤を併用してもよく、特に防湿剤を併用するのが好ましい。防湿剤としては、シリカゲル、塩化カルシウム、合成ゼオライト等を挙げることができる。【０１０６】
尚、(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体及び微生物エキスを上記包装・梱包形態とした後に、上述した(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体及び微生物エキスの熟成を行っても良い。
(加工) 
本発明で得られたＳＡＭ及び／又は(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体または微生物エキスは、そのままあるいは加工して、食品、栄養機能食品、特定保健用食品、栄養補助剤、栄養剤、飲料、動物薬、飼料、化粧品、医薬部外品、医薬品、治療薬または予防薬等に使用できる。本発明の組成物の加工形態としては、マイクロカプセル、ハードカプセル、ソフトカプセル等のカプセル剤（好ましくはマイクロカプセル、ソフトカプセル）、錠剤、散剤、チュアブル錠、顆粒剤、丸剤、シロップ、飲料等の経口投与形態や、クリーム、坐薬、練り歯磨き等の形態に更に加工しても使用しうる。【０１０７】
本発明のＳＡＭ及び／又は(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体又は微生物エキスを、上記加工形態とする場合、上述したような添加剤（賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、色素、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤、香料、油脂、界面活性剤、脂肪酸、ＳＡＭ以外の成分、酸化防止剤等）を添加することができるし、望ましい物性を得るために、添加剤を添加することが好ましい。【０１０８】
好ましい加工形態は、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤、チュアブル錠、丸剤であり、特に好ましくは、錠剤、チュアブル錠、カプセル剤である。【０１０９】
カプセル剤とする場合、カプセル基材としては特に制限されず、牛骨、牛皮、豚皮、魚皮等を由来とするゼラチンをはじめとして、他の基材（例えば、食品添加物として使用しうるカラギーナン、アルギン酸等の海藻由来品、ローカストビーンガムやグアーガム等の植物種子由来品、アラビアガム等の植物分泌液由来品等の増粘安定剤やセルロース類を含む製造用剤）も使用しうる。【０１１０】
また、錠剤、チュアブル錠、顆粒剤、散剤等の製剤とした場合には、製剤中のＳＡＭ及び／又は(ＳＳ)−ＳＡＭの化学的分解及び／又はエピメリ化を抑制する為に、油溶性被覆媒体及び／又は水溶性被覆媒体、好ましくは食品に許容される油溶性被覆媒体及び／又は水溶性被覆媒体を用いて上記製剤をコーティングするのが好ましい。【０１１１】
上記、油溶性被覆媒体として、例えば脂肪酸の糖エステル、シェラック又はセルロース誘導体、脂肪酸類及びそのエステル誘導体、油脂類及びそのエステル誘導体等を挙げることができる。好ましくは、シェラック、セルロース誘導体であり、更に好ましくはシェラックである。【０１１２】
上記、水溶性被覆媒体としては、例えばゼラチン、糖、アラビアガム、脂肪酸の糖エステル、トラガント、ペクチン、プルラン、乾燥卵白、ミルク、カードラン、セルロース誘導体、カゼイン、カゼイン化合物、デンプン、ツェイン又は酵母細胞壁等を挙げることができる。好ましくは、ゼラチン、糖、アラビアガム、プルラン、セルロース誘導体、ツェイン、酵母細胞壁であり、より好ましくはゼラチン、糖、セルロース誘導体、酵母細胞壁であり、更に好ましくはゼラチン、酵母細胞壁であり、特に好ましくは酵母細胞壁である。【０１１３】
上記、糖としてはショ糖（精製白糖、白糖）、果糖、ブドウ糖、乳糖、トレハロース等の単糖類及び二糖類、エリスリトール、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、粉末還元麦芽糖水飴、還元乳糖等の糖アルコール類、デキストリン、マルトデキストリン等の多糖類等が挙げられる。【０１１４】
又、ここにいう食品に許容される被覆媒体は、上記製剤の被覆に当業界で使用される非毒性の任意の被覆媒体を意味する。そのような被覆媒体としては、特に限定されないが、ゼラチン、糖、アラビアガム、プルラン、セルロース誘導体、酵母細胞壁、シュラック等が挙げられる。【０１１５】
言うまでもなく、これら被覆媒体は２種以上の混合物としても使用でき、又、個別に２回以上の被覆することも妨げない。【０１１６】
例えば、上記製剤への防湿性、耐水性を高める為に、油溶性被覆媒体にて上記製剤をコーティング後、更に水溶性被覆媒体を用いてコーティングすることもできるし、水溶性被覆媒体にて上記製剤をコーティングした後、油溶性被覆媒体にてコーティングすることもできる。【０１１７】
上記のようなＳＡＭ及び／又は（ＳＳ）−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体又は微生物エキスを含有する組成物を調製する際、及び該組成物を例えばカプセル剤、錠剤、散剤などの所望の形態に加工する際の周囲の環境の相対湿度は、低いほど好ましく、通常７０％ＲＨ以下、好ましくは６０％ＲＨ以下、より好ましくは５０％ＲＨ以下、さらに好ましくは３０％、特に好ましくは２０％ＲＨ以下である。【０１１８】
また、上記組成物の調製及び加工に際し、周囲の環境の温度が高いとＳＡＭの分解を促進する。そのため、周囲の温度は通常５０℃以下、好ましくは４０℃以下、より好ましくは３５℃以下、さらに好ましくは２５℃以下、特に好ましくは２０℃以下にすべきである。下限については特に制限されない。【０１１９】
上記調製及び加工する際に、ＳＡＭ及び／又は（ＳＳ）−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体及び微生物エキスを含む組成物を湿度２０％ＲＨ以上、かつ温度２０℃以上にさらす時間は特に制限されないが、通常９６時間以下、好ましくは７２時間以下、より好ましくは４８時間以下、特に好ましくは２４時間以下である。なお、上記周囲の環境とは、例えばＳＡＭ及び／又は(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体及び微生物エキスを含む組成物などの調製又は加工において、操作を行う部屋の環境などの作業環境のことを示す。【０１２０】
また、上記のような組成物の調製、加工により、脂溶性、徐放性、高吸収性、ＳＡＭの更なる分解抑制などの機能を付与することもできる。【０１２１】
また、本発明のＳＡＭ及び／又は(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体又は微生物エキスや上記製剤は、一般のいわゆる食品に添加して使用しても良い。上記食品としては、例えば、牛乳、乳飲料、チーズ、調製粉乳、アイスクリーム、ヨーグルト等の乳製品、ジュース、乳酸飲料、茶、コーヒー等の飲料、チョコレート、クッキー、ビスケット、キャンディー、和菓子、米菓、ケーキ、パイ、プリン等の菓子類、パン、麺類等の小麦粉製品、雑炊、米飯等の米製品、しょうゆ、味噌、マヨネーズ、ドレッシング等の調味料等を挙げることができる。言うまでもなく、水産加工品、農産加工品、畜産加工品であっても良いし、他の食品形態として利用することも妨げない。【０１２２】
(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体又は微生物エキスの安定性の観点から、上記加工後においても、上述したような、外部環境から遮断された包装・梱包を行うのが、好ましい態様である。【０１２３】
本発明によれば、(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体や微生物エキスに熟成処理を行うことにより、(ＳＳ)−ＳＡＭの分解、およびエピメリ化を顕著に抑制、もしくは停止させ、添加剤を必要以上に用いることなく安定化された(ＳＳ)−ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体や微生物エキスを得ることができる。【０１２４】
本発明によれば、ＳＡＭを含有する微生物乾燥菌体や微生物エキスを含む組成物を、多大なコストや手間、あるいは特殊な設備を要することなく、特定の環境下にて調製又は加工することにより、ＳＡＭの分解を抑制することができる。
【実施例】
【０１２５】
以下に本発明の具体的な実施例を示す。しかし、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。【０１２６】
（参考例）ＳＡＭ及び／又は（ＳＳ）−ＳＡＭ含有微生物の培養
サッカロマイセス・セルビシエ（Saccharomyces cerevisiae）Ｋ−６株をスクロース１５０ｇ／Ｌ、エタノール１８ｇ／Ｌ、酵母エキス１０ｇ／Ｌ、Ｌ−メチオニン１０ｇ／Ｌ、尿素１８ｇ／Ｌ、グリシン２ｇ／Ｌ、リン酸二水素カリウム４ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム七水和物０．２ｇ／Ｌ、ビオチン２ｍｇ／Ｌ、塩化カルシウム二水和物０．２ｇ／Ｌ、硫酸亜鉛七水和物１０ｍｇ／Ｌ、硫酸第一鉄七水和物５ｍｇ／Ｌ、硫酸マンガン四水和物５ｍｇ／Ｌ、塩化コバルト六水和物０．２ｍｇ／Ｌ、硫酸銅五水和物０．１ｍｇ／Ｌ、ヨウ化カリウム０．１ｍｇ／Ｌからなる培地に植菌し、５Ｌジャー培養器内において３０℃にて通気撹拌して、４日間培養した。得られた培養液から酵母菌体を遠心分離により回収した。この酵母菌体に培養液と同量の脱イオン水を加えて懸濁後、遠心分離にて酵母菌体を回収する洗浄操作を２回行い、（ＳＳ）−ＳＡＭを含有する酵母菌体を得た。【０１２７】
得られた酵母菌体中の（ＳＳ）−ＳＡＭ含量は、酵母菌体の乾燥重量に対して１２重量％であった。なお、酵母菌体中に含まれる（ＳＳ）−ＳＡＭの含量及びジアステレオマー比は高速液体クロマトグラフィーを用いて、以下の要領にて分析した。【０１２８】
［ＨＰＬＣ分析条件］
カラム：Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ  ＯＤＳ−ＨＧ５（４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ、野村化学社製）、溶離液：６０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ２．５）、８ｍＭ１−デカンスルホン酸ナトリウム／メタノール＝５３／４７、流速：０．５ｍｌ／分、カラム温度：２５℃、測定波長：２５４ｎｍ。
（実施例１）(ＳＳ)−ＳＡＭ含有微生物乾燥菌体の調製
参考例で得られた酵母菌体を培養液の６分の１容量の脱イオン水に懸濁し、−８０℃にて凍結後、凍結乾燥した。得られた乾燥酵母菌体をシリカゲル存在下で、４０℃にて７日間熟成し、(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体を得た。【０１２９】
得られた(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体を４０℃にて保存し、経時的に(ＳＳ)−ＳＡＭの残存率とジアステレオマー比の低下量を測定した結果を表１に示す。【０１３０】
（比較例１）
凍結乾燥後の熟成操作を行わなかった以外は、実施例１と同様の方法にて(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体を得た。得られたＳＡＭ含有乾燥酵母菌体を４０℃にて保存し、経時的に(ＳＳ)−ＳＡＭの残存率とジアステレオマー比の低下量を測定し、実施例１と比較した結果を表１に示す。【０１３１】
【表１】
2009081833.tif 000002
【０１３２】
表１に示したように、熟成処理を施した乾燥酵母菌体中に含まれる(ＳＳ)−ＳＡＭは、未処理の乾燥酵母菌体中に含まれる(ＳＳ)−ＳＡＭに比べて、化学的分解、及びエピメリ化に対して非常に安定であった。【０１３３】
（実施例２）(ＳＳ)−ＳＡＭ含有微生物エキスの調製
参考例で得られた酵母菌体を培養液の６分の１容量の脱イオン水に懸濁し、圧力破砕（ＡＰＶ  ＨＯＭＯＧＥＮＩＺＥＲ  ＧＲＯＵＰ社製  ＨＯＭＯＧＥＮＩＺＥＲ  Ｒａｎｎｉｅ２０００型使用）にて菌体を破砕後（破砕条件：１００ＭＰａ、６パス）、３０％ＮａＯＨでｐＨを４に調整し、遠心分離（５６４０Ｇ、２０分）により不溶分を除去して、酵母菌体エキスを得た。得られた酵母菌体エキスに、デキストリンを乾燥重量の２０重量％添加し、−８０℃にて凍結後、凍結乾燥した。得られた乾燥酵母菌体エキスをシリカゲル存在下で、４０℃にて７日間熟成し、(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキスを得た。【０１３４】
得られた(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキスを４０℃にて保存し、経時的に（ＳＳ）−ＳＡＭの残存率とジアステレオマー比の低下量を測定した結果を表２に示す。【０１３５】
（比較例２）
凍結乾燥後の熟成操作を行わなかった以外は、実施例２と同様の方法にて(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキスを得た。得られた(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキスを４０℃にて保存し、経時的に(ＳＳ)−ＳＡＭの残存率とジアステレオマー比の低下量を測定し、実施例２と比較した結果を表２に示す。【０１３６】
【表２】
2009081833.tif 000003
【０１３７】
表２に示したように、熟成処理を施した乾燥酵母菌体エキス中に含まれる(ＳＳ)−ＳＡＭは、未処理の乾燥酵母菌体エキス中に含まれる(ＳＳ)−ＳＡＭに比べて、化学的分解、及びエピメリ化に対して非常に安定であった。【０１３８】
（実施例３）安定化剤
参考例で得られた酵母菌体を培養液の６分の１容量の脱イオン水に懸濁した。表３に示す化合物を乾燥重量に対して３０重量％分添加し、−８０℃にて凍結後、凍結乾燥し、ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体を得た。【０１３９】
得られたＳＡＭ含有乾燥酵母菌体を２５℃にて７日間保存し、ＳＡＭの残存率を測定した結果を表３に示す。【０１４０】
【表３】
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【０１４１】
（実施例４）(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体の生体吸収性
実施例１で得られた(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体を、ＳＡＭの濃度が２０ｇ／Ｌとなるよう蒸留水に懸濁し、ＳＤラット（雄、１７週齢）に５ｍｌ／ｋｇｂ．ｗ．の投与容量で経口投与した。また、比較対照例として、実施例１にて得られた酵母菌体、及びＳＡＭ／ｐ−トルエンスルホン酸／硫酸塩（商標名Ｇｕｍｂａｒａｌ）をＳＡＭが同濃度になるよう蒸留水に懸濁、又は溶解したものを同様に経口投与した。投与前、及び投与後１，２，３，５，８時間目に無麻酔下で抗凝固剤としてヘパリンを用いて頚静脈より血液を採取し、遠心分離により血漿成分を取得した。得られた血漿２００μＬに０．４ｇ／Ｌのトリクロロ酢酸水溶液４０μＬを添加、混合後、遠心分離した上清中のＳＡＭ濃度をＨＰＬＣにて分析した結果を図１、及び表４に示す。図１及び表４に示したように、(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体を経口投与した場合の生体吸収性は、乾燥処理を施していない酵母菌体に比べて顕著に高く、ＳＡＭ／ｐ−トルエンスルホン酸／硫酸塩を経口投与した場合と同程度であった。【０１４２】
【表４】
2009081833.tif 000005
【０１４３】
（実施例５）
参考例で得られた酵母菌体を培養液の２分の１容量の脱イオン水に懸濁し、入口温度１８５℃、出口温度８５℃にてスプレードライを行った。得られた乾燥酵母菌体をシリカゲル存在下で、４０℃にて７日間熟成し、(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体を得た。得られた(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体を、ＳＡＭの濃度が２０ｇ／Ｌとなるよう蒸留水に懸濁し、ＳＤラット（雄、１７週齢）に５ｍｌ／ｋｇｂ．ｗ．の投与容量で経口投与した。また、比較対照例として、実施例１にて得られた酵母菌体、及びＳＡＭ／ｐ−トルエンスルホン酸／硫酸塩（商標名Ｇｕｍｂａｒａｌ）をＳＡＭが同濃度になるよう蒸留水に懸濁、又は溶解したものを同様に経口投与した。投与前、及び投与後１，２，３，５，８時間目に無麻酔下で抗凝固剤としてヘパリンを用いて頚静脈より血液を採取し、遠心分離により血漿成分を取得した。得られた血漿２００μＬに０．４ｇ／Ｌのトリクロロ酢酸水溶液４０μＬを添加、混合後、遠心分離した上清中のＳＡＭ濃度をＨＰＬＣにて分析した結果を図２及び表５に示す。図２及び表５に示したように、(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体を経口投与した場合の生体吸収性は、乾燥処理を施していない酵母菌体に比べて顕著に高く、ＳＡＭ／ｐ−トルエンスルホン酸／硫酸塩を経口投与した場合と同程度であった。【０１４４】
【表５】
2009081833.tif 000006
【０１４５】
（実施例６）ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキスの安定性
参考例で得られた酵母菌体を培養液の６分の１容量の脱イオン水に懸濁し、圧力破砕（ＡＰＶ  ＨＯＭＯＧＥＮＩＺＥＲ  ＧＲＯＵＰ社製  ＨＯＭＯＧＥＮＩＺＥＲ  Ｒａｎｎｉｅ２０００型使用）（破砕条件：１００ＭＰａ、６パス）にて菌体を破砕後、３０％ＮａＯＨにてｐＨを４に調整し、遠心分離（５６４０Ｇ、２０分）により不溶分を除去して、酵母菌体エキスを得た。得られた酵母菌体エキスに、硫酸マグネシウムをＳＡＭの３倍モル量、デキストリンを乾燥酵母菌体エキスの２０重量％になるように添加し、−８０℃にて凍結後、凍結乾燥した。得られた乾燥酵母菌体エキスを各種相対湿度、２５℃の条件下にて保存し、経時的にＳＡＭの残存率とジアステレオマー比の低下量を測定した。結果を表６に示す。また、得られた乾燥酵母菌体エキスの水分含量は６％であった。なお、相対湿度の測定は、ＣＵＳＴＯＭ社製ＣＴＨ−２０１湿度計を用いて行った。【０１４６】
【表６】
2009081833.tif 000007
【０１４７】
表６では各種相対湿度条件下においた期間の乾燥酵母菌体エキス中に含まれるＳＡＭの安定性を示す。表６に示したように、乾燥酵母菌体エキス中に含まれるＳＡＭは、各種相対湿度条件下において、化学的分解に対して非常に安定であった。【０１４８】
（実施例７)
実施例６で各種相対湿度条件下にて保存した乾燥酵母菌体エキスを４０℃にて８日間、シリカゲルと共に保存し、乾燥酵母菌体エキスに含まれるＳＡＭの残存率を測定した結果を表７に示す。【０１４９】
【表７】
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【０１５０】
各種相対湿度条件下に保存していない乾燥酵母菌体エキスと各種相対湿度条件下に保存した乾燥酵母菌体エキスのＳＡＭ残存率には差がなく、化学的分解に対して非常に安定であった。【０１５１】
（実施例８）ＳＡＭ含有微生物エキスの安定性
実施例６で得られた乾燥酵母菌体エキスを相対湿度６０％ＲＨ、２５℃の条件下にて保存し、経時的にＳＡＭの残存率と測定した結果を表８に示す。【０１５２】
【表８】
2009081833.tif 000009
【０１５３】
表８に示したように、乾燥酵母菌体エキス中に含まれるＳＡＭは、相対湿度６０％ＲＨ条件下において、化学的分解に対して非常に安定であった。【０１５４】
（実施例９）
実施例８で各種相対湿度条件下にて保存した乾燥酵母菌体エキスを４０℃にて１４日間、シリカゲルと共に保存しＳＡＭの残存率を測定した結果を表９に示す。【０１５５】
【表９】
2009081833.tif 000010
【０１５６】
各種相対湿度条件下に保存していない乾燥酵母菌体エキスと各種相対湿度条件下に保存した乾燥酵母菌体エキスのＳＡＭ残存率にはほぼ差がなく、化学的分解に対して非常に安定であった。【０１５７】
（実施例１０）ＳＡＭ含有微生物乾燥菌体の調製
参考例で得られた酵母菌体を培養液の６分の１容量の脱イオン水に懸濁し、−８０℃にて凍結後、凍結乾燥し、ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体を得た。
以下の製剤例は全て相対湿度５０％ＲＨ以下、温度２５℃以下の条件下にて行った。なお、相対湿度の測定は、ＣＵＳＴＯＭ社製ＣＴＨ−２０１湿度計を用いて行った。【０１５８】
（製剤例１：ソフトカプセル）
菜種油、硬化油、蜜蝋、レシチンからなる混合物に、実施例２で得た(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス又は実施例６で得たＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキスを添加し、常法により、下記成分からなる(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス又はＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキスを含有するゼラチンのソフトカプセルを得た。【０１５９】
(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス
又はＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス              ３０．０重量％
菜種油                                          ５５．０重量％
硬化油                                            ７．０重量％
蜜蝋                                              ６．０重量％
レシチン                                          ２．０重量％
得られたソフトカプセルは、アルミラミネートを用いた三方シール包装とした。【０１６０】
（製剤例２：ソフトカプセル）
中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）、硬化油、蜜蝋、レシチンからなる混合物に、実施例２で得た(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス又は実施例６で得たＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキスを添加し、常法により、下記成分からなる(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス又はＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキスを含有するカラギーナン／デンプンのソフトカプセルを得た。【０１６１】
(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス
又はＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス                ２５．０重量％
中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）                ６０．０重量％
硬化油                                              ８．０重量％
蜜蝋                                                ５．０重量％  
レシチン                                            ２．０重量％
得られたソフトカプセルは、アルミラミネートを用いた三方シール包装とした。【０１６２】
（製剤例３：ハードカプセル）
実施例１で得た(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体又は実施例１０で得たＳＡＭ含有乾燥酵母菌体、乳糖、ステアリン酸マグネシウムを混合した。得られた混合末を篩にて整粒した後、常法により、下記成分からなる(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体又はＳＡＭ含有乾燥酵母菌体を含有するゼラチンのハードカプセルを得た。【０１６３】
(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体
又はＳＡＭ含有乾燥酵母菌体                        ６０．０重量％
乳糖                                                ３９．０重量％
ステアリン酸マグネシウム                              １．０重量％
得られたハードカプセルは、硬質ガラス性の瓶にて密栓し、瓶内部にはシリカゲルを同封した。【０１６４】
（製剤例４：チュアブル錠）
実施例１で得た(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体又は実施例１０で得たＳＡＭ含有乾燥酵母菌体、コーンスターチ、シュークロースを混合した後、さらに、ステアリン酸マグネシウムを加え、混合した。得られた混合末を篩にて整粒した後、得られた整粒末をロータリー打錠機にて打錠し、下記成分からなる(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体又はＳＡＭ含有乾燥酵母菌体を含有するチュアブル錠を得た。【０１６５】
(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体
又はＳＡＭ含有乾燥酵母菌体                        ５２．０重量％
コーンスターチ                                        ５．０重量％
シュークロース                                      ４２．０重量％
ステアリン酸マグネシウム                              １．０重量％
得られたチュアブル錠は、ＰＴＰ包装とし、この包装体をさらにアルミピロー包装とした。【０１６６】
（製剤例５：錠剤）
実施例２で得た(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス又は実施例６で得たＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス、結晶セルロース（アビセル）を混合した後、さらに、ステアリン酸マグネシウムを加え、混合した。得られた混合末を篩にて整粒した後、得られた整粒末をロータリー打錠機にて打錠し、下記成分からなる(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス又はＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキスを含有する錠剤を得た。【０１６７】
(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス
又はＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス                  ４９．０重量％
結晶セルロース（アビセル）                          ５０．０重量％
ステアリン酸マグネシウム                              １．０重量％
得られた錠剤は、硬質ガラス性の瓶にて密栓し、瓶内部にはシリカゲルを同封した。【０１６８】
（製剤例６：散剤）
実施例２で得た(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス又は実施例６で得たＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス、乳糖、コーンスターチを混合し、下記成分からなる(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス又はＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキスを含有する散剤を得た。【０１６９】
(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス
又はＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス                  ２０．０重量％
乳糖                                                ７０．０重量％
コーンスターチ                                      １０．０重量％
得られた散剤は、アルミナ蒸着フィルムを用いたスティック包装とした。【０１７０】
（製剤例７：コーティング錠）
製剤例４で得たチュアブル錠にシェラック−エタノール溶液（岐阜セラツク製）を噴霧した後、乾燥を行い、シェラックで被覆された(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体又はＳＡＭ含有乾燥酵母菌体を含有するチュアブル錠（コーティング錠）を製造した。得られたチュアブル錠は、硬質ガラス性の瓶にて密栓し、瓶内部にはシリカゲルを同封した。【０１７１】
（製剤例８：コーティング錠）
製剤例５で得た(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス又はＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキスを含有する錠剤に、精製水４５０ｇ、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（信越化学製、メトローズ９０ＳＨ−０４）５０ｇからなる溶液を噴霧、乾燥を行い、ヒドロキシプロピルメチルセルロースで被覆された(ＳＳ)−ＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキス又はＳＡＭ含有乾燥酵母菌体エキスを含有する錠剤（コーティング錠）を製造した。得られたチュアブル錠は、硬質ガラス性の瓶にて密栓し、瓶内部にはシリカゲルを同封した。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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