(57)【要約】  高純度に精製された植物性スクアレンを簡便に得ることができる新たな精製された植物性スクアレンの製造方法、及び高純度に精製された植物性スクアレンの提供。  濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂をヘキサン及び／又はヘプタン溶液としてシリカカラムに供給し、精製されたスクアレンを素通り画分として得るクロマトグラフィー工程を少なくとも含む、精製された植物性スクアレンの製造方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂をヘキサン及び／又はヘプタン溶液としてシリカカラムに供給し、精製されたスクアレンを素通り画分として得るクロマトグラフィー工程を少なくとも含む、精製された植物性スクアレンの製造方法。
【請求項２】
精製された植物性スクアレンのガスクロマトグラフィー内部標準法により測定される純度が少なくとも９３％である、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂が粗精製されたものであり、そのノルマルパラフィン含量が１質量％未満である、請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項４】
濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂が粗精製されたものであり、そのガスクロマトグラフィー内部標準法により測定される純度が少なくとも９０％である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５】
前記クロマトグラフィー工程における処理温度が−１０〜１５℃である、請求項１〜４に記載の製造方法。
【請求項６】
前記クロマトグラフィー工程から得られる素通り画分にアセトンを加えて均一溶液を得、その後更に水を加えて混合し、静置することにより二層分離せしめ、アセトン及び水を含む層を除去することによって該素通り画分に含まれる水溶性画分を除去する洗浄工程を更に含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項７】
前記洗浄工程を経て得られる精製された植物性スクアレンのガスクロマトグラフィー内部標準法により測定される純度が少なくとも９６％である、請求項６に記載の製造方法。
【請求項８】
少なくとも前記クロマトグラフィー工程を不活性気体雰囲気下において行う、請求項１〜７のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項９】
精製された植物性スクアレンが不純物１を含み、該精製された植物性スクアレンのガスクロマトグラムにおいて、不純物１のピークの保持時間ＲＴ１とスクアレンの主ピークの保持時間ＲＴＳとの比ＲＴ１／ＲＴｓが１. ０１〜１. ０７の範囲にあり、保持時間ＲＴ１の不純物１のピークの面積と全ピークの面積の比が０．０００５〜０．００２０である、請求項1〜８のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１０】
ガスクロマトフィー内部標準法により測定される純度が少なくとも９６％である、精製された植物性スクアレン。
【請求項１１】
以下の不純物１を含む、請求項１０に記載の精製された植物性スクアレン：該精製された植物性スクアレンのガスクロマトグラフィー分析において、不純物１のピークの保持時間ＲＴ１とスクアレンの主ピークの保持時間ＲＴＳとの比ＲＴ１／ＲＴｓが１.０１〜１.０７の範囲にあり、保持時間ＲＴ１の不純物１のピークの面積と、全ピークの面積の比が０．０００５〜０．００２０であり、かつ
ＧＣ／ＭＳ分析において、前記ガスクロマトグラフィー分析における保持時間ＲＴ１の不純物１のピークが、質量数３９２、２５３及び１９９のピークを与える。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高純度に精製された植物性スクアレンの製造方法及び高純度に精製された植物性スクアレンに関する。
【背景技術】
【０００２】
スクアレンは、テルペノイドに属する油脂であり、無色、無臭、無味の低揮発性の油状液体で、比較的軽い油性の感触を持ち、皮膚に対する浸透性、潤滑性に優れ、また非常に伸びが良く、かつ乳化しやすいなどの特徴を有することから、今日、各種化粧品、医薬品等の油性基剤として広く用いられている。【０００３】
従来使用されてきた天然スクアレンは主として、アイザメに代表される深海産鮫を出発原料とする動物性スクアレンであった。しかしながら、環境変化及び乱獲などの要因により深海産鮫の漁獲量が低下し、天然スクアレンの供給が困難になりつつある。【０００４】
そこで、動物性スクアレンに代わる新たな天然スクアレンとして、植物性スクアレンが注目されている。【０００５】
しかしながら、植物性スクアレンは主に植物の果実や種子から得られる植物性油脂に含まれるが、その含有量は高いものでも数千ｐｐｍ程度である。従って、目的とする植物性スクアレンを得るためには、植物性油脂中におけるスクアレンの含有量を高い倍率で高める濃縮処理が必要である。また、前記濃縮処理によって、植物性油脂中に含まれる、スクアレンと沸点等の物性が近似する他の少量／微量成分、例えばノルマルパラフィンあるいは種々の極性物質も濃縮されるため、目的とする植物性スクアレンの純度を高めるためには、これらのスクアレン以外の少量／微量成分をスクアレンから分離除去する精製処理も必要である。【０００６】
従来、スクアレンを含有する植物性油脂あるいはその水素化物から、スクアレンあるいはその水素化物であるスクアランを濃縮・精製して植物性スクアレンあるいは植物性スクアランを製造する方法が知られている（例えば特許文献１〜８を参照。）。しかし、これらの方法は工程が煩雑であること、また得られる植物性スクアレンあるいはスクアランの純度が十分に高いものではないことといった問題を依然として包含しており、当該分野においては高純度に精製された植物性スクアレンを簡便に製造することができる新たな方法、及びそのような方法により製造された高純度に精製された植物性スクアレンが切望されていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開平９−１７６０５７号公報
【特許文献２】特開平６−３０６３８７号公報
【特許文献３】特開平６−３０６３８８号公報
【特許文献４】特許第３４８４２２７号公報
【特許文献５】特表２００４−５０２６５７号公報
【特許文献６】特開２００８−１３４７７号公報
【特許文献７】特許第４６４２３４１号公報
【特許文献８】特許第４４２４９３９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
そこで、本発明は、高純度に精製された植物性スクアレンを簡便に得ることができる新たな精製された植物性スクアレンの製造方法、及び高純度に精製された植物性スクアレンを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂をシリカカラムを用いたクロマトグラフィーにより精製することによって、高純度に精製された植物性スクアレンを得ることができることを見い出し、本発明を完成するに至った。【００１０】
本発明は以下を包含する。【００１１】
［１］  濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂をヘキサン及び／又はヘプタン溶液としてシリカカラムに供給し、精製されたスクアレンを素通り画分として得るクロマトグラフィー工程を少なくとも含む、精製された植物性スクアレンの製造方法。【００１２】
［２］  精製された植物性スクアレンのガスクロマトグラフィー内部標準法により測定される純度が少なくとも９３％である、［１］の製造方法。【００１３】
［３］  濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂が粗精製されたものであり、そのノルマルパラフィン含量が１質量％未満である、［１］又は［２］の製造方法。【００１４】
［４］  濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂が粗精製されたものであり、そのガスクロマトグラフィー内部標準法により測定される純度が少なくとも９０％である、［１］〜［３］のいずれかの製造方法。【００１５】
［５］  前記クロマトグラフィー工程における処理温度が−１０〜１５℃である、［１］〜［４］のいずれかの製造方法。【００１６】
［６］  前記クロマトグラフィー工程から得られる素通り画分にアセトンを加えて均一溶液を得、その後更に水を加えて混合し、静置することにより二層分離せしめ、アセトン及び水を含む層を除去することによって該素通り画分に含まれる水溶性画分を除去する洗浄工程を更に含む、［１］〜［５］のいずれかの製造方法。【００１７】
［７］  前記洗浄工程を経て得られる精製された植物性スクアレンのガスクロマトグラフィー内部標準法により測定される純度が少なくとも９６％である、［６］の製造方法。【００１８】
［８］  少なくとも前記クロマトグラフィー工程を不活性気体雰囲気下において行う、［１］〜［７］のいずれかの製造方法。【００１９】
［９］  精製された植物性スクアレンが不純物１を含み、該精製された植物性スクアレンのガスクロマトグラムにおいて、不純物１のピークの保持時間ＲＴ１とスクアレンの主ピークの保持時間ＲＴＳとの比ＲＴ１／ＲＴｓが１. ０１〜１. ０７の範囲にあり、保持時間ＲＴ１の不純物１のピークの面積と全ピークの面積の比が０．０００５〜０．００２０である、［１］〜［８］のいずれかの製造方法。【００２０】
［１０］  ガスクロマトフィー内部標準法により測定される純度が少なくとも９６％である、精製された植物性スクアレン。【００２１】
［１１］  以下の不純物１を含む、［１０］の精製された植物性スクアレン：該精製された植物性スクアレンのガスクロマトグラフィー分析において、不純物１のピークの保持時間ＲＴ１とスクアレンの主ピークの保持時間ＲＴＳとの比ＲＴ１／ＲＴｓが１.０１〜１.０７の範囲にあり、保持時間ＲＴ１の不純物１のピークの面積と、全ピークの面積の比が０．０００５〜０．００２０であり、かつ
ＧＣ／ＭＳ分析において、前記ガスクロマトグラフィー分析における保持時間ＲＴ１の不純物１のピークが、質量数３９２、２５３及び１９９のピークを与える。【００２２】
本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願2011-126699号の明細書に記載される内容を包含する。
【発明の効果】
【００２３】
本発明によれば、高純度に精製された植物性スクアレンを簡便に得ることができる、精製された植物性スクアレンの製造方法、及び高純度に精製された植物性スクアレンが提供される。これにより、高純度の植物性スクアレンを工業的規模で製造し、供給することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】図１は、実施例にて得られたアセトン処理品（５）のガスクロマトグラムを示す。
【図２−１】図２−１は、オリーブスクアレン（薄膜遠心蒸留処理及び尿素処理を行なう前）のガスクロマトグラムを示す。
【図２−２】図２−２は、オリーブスクアレン（薄膜遠心蒸留処理及び尿素処理を行なう前）のガスクロマトグラムを示す。
【図３−１】図３−１は、市販の深海産鮫由来の精製されたスクアレンのガスクロマトグラムを示す。
【図３−２】図３−２は、市販の深海産鮫由来の精製されたスクアレンのガスクロマトグラムを示す。
【図４−１】図４−１は、実施例にて得られたアセトン処理品（５）のＧＣ分析の解析結果を示す。保持時間が４３．５６７分のピークが精製された植物性スクアレン中に含まれる「不純物１」に相当する。
【図４−２】図４−２は、不純物１のＧＣ／ＭＳ分析の解析結果を示す。質量数（ｍ／ｚ）３９２に分子イオンと推定されるピーク、ｍ／ｚ２５３、１９９、６９、及びその他のピークが見られる。
【図５−１】図５−１は、市販の深海産鮫由来の精製されたスクアレンのＧＣ分析の解析結果を示す。
【図５−２】図５−２は、市販の深海産鮫由来の精製されたスクアレンのＧＣ分析において、保持時間４２．１８１分のピークを与える不純物（コプロスタンに帰属）のＧＣ／ＭＳ分析の解析結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
以下、本発明を詳細に説明する。以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明をこの実施の形態にのみ限定する趣旨ではなく、本発明は、その要旨を逸脱しない限り、さまざまな形態で実施をすることができる。
【００２６】
本発明の第１の態様は、濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂をヘキサン及び／又はヘプタン溶液としてシリカカラムに供給し、精製されたスクアレンを素通り画分として得るクロマトグラフィー工程を少なくとも含む、精製された植物性スクアレンの製造方法に関する。
【００２７】
本発明の製造方法を用いれば、濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂から、高純度に精製された植物性スクアレンを簡便に得ることが可能である。
【００２８】
以下、本発明の精製された植物性スクアレンの製造方法について、好ましい実施形態に沿って詳細に説明する。
【００２９】
本実施形態の精製された植物性スクアレンの製造方法において使用される「濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂」は、出発原料であるスクアレンを含有する植物性油脂から得ることができる。スクアレンを含有する植物性油脂はスクアレンを含有する限りにおいて特に限定されないが、オリーブ油、トウモロコシ油、大豆油、ベニバナ油、米ぬか油、小麦胚芽油、パーム油等が例示される。これらの植物性油脂中のスクアレン含有量は、高いものでも数千ｐｐｍ程度である。本実施形態の製造方法に用いる濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂は、前記スクアレンを含有する植物性油脂を濃縮処理して得られる、スクアレン含有量が高められた植物性油脂である。
【００３０】
スクアレンを含有する植物性油脂を濃縮処理するに際しては、スクアレンだけではなく、物性（例えば沸点等）がスクアレンと近似した、植物性油脂中に含まれる他の少量／微量成分も同様に濃縮される場合がある。濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂がこれらの成分を多く含有する場合には、濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂中の当該成分の含有量を低減せしめるための粗精製処理を行なうことが好ましい。この粗精製処理はスクアレンの濃縮処理と別個に行なってもよいし、また、同一の工程で濃縮処理と粗精製処理とを行なってもよい。
【００３１】
スクアレンを含有する植物性油脂を濃縮処理、あるいは濃縮処理に加えて粗精製処理して濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂を得る方法としては限定されず、公知の方法を用いることができる。これらの方法としては、例えば単蒸留法、薄膜遠心蒸留法、薄膜多段遠心蒸留法、短工程蒸留法、更に植物性油脂中に含まれる脂肪酸グリセリドあるいは遊離脂肪酸をメチルエステルあるいはエチルエステルに転換した上で、前記蒸留を行う方法などを用いることができる。また、スクアレンを含有する植物性油脂から食用油等を製造する際に一般的に行なわれる脱酸脱臭処理からの留出物にはスクアレンが濃縮された形で含まれるため、この脱酸脱臭処理はスクアレンの濃縮処理あるいは濃縮及び粗精製処理と見なすこともでき、脱酸脱臭留出物は好ましい濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂として利用される。また、スクアレンを含有する植物性油脂のケン化処理において、スクアレンは非ケン化物画分に含まれるため、この非ケン化物画分を回収して、濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂として利用することもできる。
【００３２】
また、濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂を更に粗精製処理する際には、濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂に含まれる、植物性油脂由来の不純物、特にノルマルパラフィンや各種の極性物質を除去してその含有量を低減する。この場合の粗精製方法としては、例えば尿素又はチオ尿素処理を使用することができる（特開平９−１７６０５７号公報）。
【００３３】
すなわち、尿素又はチオ尿素処理は、植物性スクアレンを含有する植物性油脂を、尿素又はチオ尿素を含有する有機溶媒と混合し、４０〜１２０℃に加熱し、その後０〜３５℃に２〜１５時間かけてゆっくりと冷却し、冷却後、尿素又はチオ尿素の結晶及び前記有機溶媒を除去することにより、行うことができる。
【００３４】
前記尿素又はチオ尿素処理に用いる有機溶媒の例としては、炭素数２〜４程度の低級アルコールが挙げられる。このような低級アルコールとしては、例えば、イソプロパノール、エタノール（特に限定されない）が挙げられる。なお、目的とする精製された植物性スクアレンの用途が食品、医薬、化粧品などである場合には、製品への混入により安全性が懸念されるメタノールなどの溶媒の使用は好ましくない。尿素又はチオ尿素処理における有機溶媒の使用量は、植物性スクアレンを含有する植物性油脂の重量に対して０.２〜１００倍の使用が適当であり、特に０.３〜１０倍程度の使用が好ましい。
【００３５】
尿素又はチオ尿素としては、市販のＪＩＳ規格に適合している工業用尿素及び工業用チオ尿素が使用できる。その使用量は、原料重量に対して０.２〜２０倍、特に０.３〜５倍程度であるのが好ましい。
【００３６】
スクアレンの濃縮処理、粗精製処理は、濃縮処理及び粗精製処理を同時に行う場合を含め、上記方法のいずれか一つを用いてよいし、２つ以上を組み合わせて用いてもよい。
【００３７】
濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂は、前述の粗精製処理を行なった場合であっても、スクアレンの他に、植物性油脂由来のノルマルパラフィン、極性物質などの不純物を含む。本実施形態において使用する濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂におけるガスクロマトグラフィー内部標準法により測定される純度は、少なくとも９０％であることが好ましい。また、濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂は粗精製処理を施され、そのノルマルパラフィンの含有量が２質量％以下であることが好ましく、１質量％未満であることがより好ましく、０．９質量％未満であることが更により好ましい。なお、濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂が２質量％以上のノルマルパラフィンを含む場合、常温で流動性が悪くなり、更に含有量が大きくなると常温で固化し、原料としての使用が困難になるとの問題もある。
【００３８】
本実施形態の製造方法においては、濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂を親油性の有機溶媒に溶解し、得られる溶液をシリカカラムを用いたクロマトグラフィー工程に供する。シリカカラムを用いたクロマトグラフィー工程において、濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂中に含まれるスクアレン以外の不純物（特に極性物質）をシリカへの吸着により除去し、効率よくスクアレンを精製することができる。
【００３９】
ここで「親油性の有機溶媒」としては、各種親油性有機溶媒を用いることが可能であるが、目的生成物である精製された植物性スクアレンを各種化粧品や食品、医薬等に用いることを考慮すると、ヘキサン及び／又はヘプタンから選択することが好ましい。親油性の有機溶媒の使用量は、濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂の質量に対して０．２５〜３．００倍の使用が適当であり、特に濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂と同量程度の使用が好ましい。
【００４０】
前記クロマトグラフィー工程において使用する装置は、一般的なカラムクロマトグラフィーを行なうための装置を用いて行うことができ、カラムの平衡化や流速はカラムサイズや濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂の処理量等によって適宜設定することができる。
【００４１】
シリカカラムに充填するシリカとしては、極性不純物を吸着により除去できる限り特に限定されることはなく、破砕型のシリカや球状のシリカを用いることができる。具体的に例示するならば、富士シリシア化学社製シリカゲルＰＳＱ−１００Ｂ（商品名）やダイソー社製ダイソーゲル（商品名）（破砕型）、和光純薬工業社製ワコーゲル（商品名）（５０〜２００μｍの球状）などが挙げられる。
【００４２】
前記クロマトグラフィー工程により、濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂中のスクアレン以外の不純物、特に極性物質はシリカカラムに吸着される。よって、シリカカラムの素通り画分（通過液）を回収することによって高純度に精製された植物性スクアレンを得ることができる。すなわち、ガスクロマトグラフィー相対純度にして、９５％以上、好ましくは９６％以上、またガスクロマトグラフィー内部標準法により測定される純度にして、９３％以上、好ましくは９４％以上の純度を有する植物性スクアレンを得ることができる。
【００４３】
なお、精製された植物性スクアレン、あるいは濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂等におけるスクアレンの純度は、キャピラリーカラムを用いたガスクロマトグラフィー（以下、「ＧＣ」という場合もある。）により求めることができる。本明細書において、スクアレンの「ガスクロマトグラフィー相対純度」（以下、単に「相対純度」という場合もある。）とは、対象とするスクアレンを含むサンプルのＧＣにより検出される当該サンプル由来の全てのピークの面積に対するスクアレンに帰属されるピークの面積の百分率をいう。なおここで、スクアレンに帰属されるピークとは、スクアレンの異性体全てに帰属されるピークをいう。また、本明細書において、スクアレンの「ガスクロマトグラフィー内部標準法により測定される純度」（以下、単に「内部標準法純度」という場合もある。）とは、以下の方法で求められる純度をいう。まず、標準スクアレンとして、試薬のスクアレン（表示純度：９９．５％以上）に内部標準物質として試薬のドデカンを所定の質量比率にて添加し、更にこれをノルマルヘキサンにて所定の濃度に希釈してＧＣに供する。得られたクロマトグラムから標準スクアレンの相対純度ＲＰｓ及びスクアレン（全ての異性体を含む）に帰属されるピークの面積とドデカン由来のピークの面積との比Ａｓを算出する。一方、測定対象とするスクアレンを含むサンプルに対して前記と同一の質量比率でのドデカンの添加及びノルマルヘキサンによる希釈を行い、そのＧＣ分析を行う。得られたクロマトグラムから、スクアレンに帰属されるピークの面積とドデカン由来のピークの面積との比Ａを算出する。そして、当該サンプル中のスクアレンの内部標準法純度を下記式により算出する。
【００４４】
内部標準法純度＝ＲＰｓ×Ａ／Ａｓ（％）
より具体的なＧＣ分析法は以下の通りである。
【００４５】
１００ｍＬメスフラスコに精秤した２０ｍｇのドデカン及び５０ｍｇの標準スクアレン（表示純度９９．５％以上、和光純薬社製）をとり、ＨＰＬＣグレードのノルマルへキサンにてメスアップして標準スクアレン溶液を調製する。一方、１００ｍＬメスフラスコに精秤した２０ｍｇのドデカンと５０ｍｇのサンプルをとり、ＨＰＬＣグレードのノルマルへキサンにてメスアップしてサンプル溶液を調製する。
【００４６】
ガスクロマトグラフ装置は島津製作所社製ＧＣ―２０１０(ＯＣＩ仕様)、検出器はＦＩＤ、分析カラムはアジレント・テクノロジーズ社製Ｊ＆Ｗ Ｓｃｅｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＤＢ−５を用い、カラム平衡時間は０分、試料注入量は１μＬ、注入モードは全量注入、キャリアガスはＨｅ、制御モードは流量１５．０ｍＬ／ｍｉｎ、パージ線量は１．５ｍＬ／ｍｉｎ、全分析時間は３５分、検出器温度は２８０℃、メイクアップ流量は２０ｍＬ／ｍｉｎ、水素流量は４０ｍＬ／ｍｉｎ、空気流量は４００ｍＬ／ｍｉｎ、気化室の温度プログラム及びカラムオーブンの温度プログラムはそれぞれ表1及び表２の通りとする。得られるクロマトグラムにおけるピーク分離は、ベースラインからのスプリットにて行なう。
【表１】
2012169443.tif 000002
【表２】
2012169443.tif 000003
【００４７】
前記クロマトグラフィー工程においては、主として極性物質である不純物をシリカに吸着させて除去するが、ノルマルパラフィンに代表される非極性物質である不純物は、シリカへの吸着により除去することは困難である。シリカカラムによるクロマトグラフィー工程の素通り画分におけるノルマルパラフィンの含有量が所定の値よりも大きい場合には、素通り画分を含む溶液（クロマトグラフィー工程の通過液）を冷却してノルマルパラフィンを固体として析出させ、ろ過により固形分を除去する工程（冷却・分離工程）に供することにより、精製された植物性スクアレン中のノルマルパラフィン含有量を更に低減することができる。特に、素通り画分のＧＣ分析において、全ピーク面積に対するスクアレンに帰属されるピークよりも保持時間の短いピークの合計の面積の比が０．００５を超える場合、前記冷却・分離工程により前記ピーク面積比を０．００２以下とすることができる。前記冷却・分離工程における温度は−１０〜１５℃であることが好ましい。
【００４８】
また、前記クロマトグラフィー工程と前記冷却・分離工程とをひとつの工程にて行なうこともできる。すなわち、濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂を親油性有機溶媒に溶解した溶液を冷却する、及び／又は冷却下に前記溶液をシリカカラムを用いたクロマトグラフィー工程に供することにより、前記溶液中の極性不純物をシリカに吸着させて除去すると同時に、前記溶液中に固体として析出したノルマルパラフィンを、シリカカラムをろ材としてろ過することにより、除去することができる。この場合、冷却・分離工程を別個の工程として設ける必要がなく、工程の簡略化が可能となる。この場合の前記溶液の冷却温度及び／又はクロマトグラフィー工程の処理温度は−１０〜１５℃であることが好ましい。
【００４９】
次に、前記クロマトグラフィー工程（場合により前記冷却・分離工程を含む）により得られる通過液を、更に親水性の有機溶媒及び水で洗浄処理する洗浄工程に供することによって、得られる精製された植物性スクアレンの純度を更に向上させることが可能である。ここで「親水性の有機溶媒」には、各種親水性の有機溶媒が含まれるが、得られる精製された植物性スクアレンを各種化粧品、食品、医療用途等に用いることを考慮すると、アセトンが好ましい。
【００５０】
前記洗浄工程は以下の手順で行うことができる。前記クロマトグラフィー工程（場合により前記冷却・分離工程を含む）により得られた、精製された植物性スクアレン及び親油性溶媒を含む溶液からなる通過液に親水性の有機溶媒を加えて混合し、均一な溶液を得る。更にこの溶液に少量の水を加えて混合して静置することにより、親水性の有機溶媒及び水を含む混合物の層と、スクアレン及び親油性の有機溶媒を含む混合物の層とに二層分離せしめる。そして、スクアレン及び親油性の有機溶媒を含む混合物の層を分取し、該層中に含まれる画分を回収することにより、精製された植物性スクアレンを得ることができる。この洗浄工程において、前記通過液中に含まれる水溶性の不純物が親水性の有機溶媒及び水を含む混合物の層に移行してスクアレン及び親油性の有機溶媒を含む混合物から除去されるために、更に高純度に精製された植物性スクアレンを得ることができる。すなわち、相対純度にして、９７％以上、好ましくは９８％以上、また内部標準法純度にして、９５％以上、好ましくは９６％以上の純度を有する精製された植物性スクアレンを得ることができる。
【００５１】
前記洗浄工程において用いる親水性の有機溶媒の量は、前記クロマトグラフィー工程により得られる通過液の量の０．１倍量から３倍量、好ましくは０．１倍量から２倍量、より好ましくは０．５倍量から１倍量である。また、後から添加する少量の水の量は、用いる親水性の有機溶媒の量によって変化するが、親水性有機溶媒の量の０．０１倍量から０．５倍量、好ましくは０．１倍量から０．３倍量である。
【００５２】
前記クロマトグラフィー工程（場合により前記冷却・分離工程及び／又は前記洗浄工程を含む）から得られる通過液から、親油性の有機溶媒を除去することにより、精製された植物性スクアレンを得ることができる。前記溶媒の除去を行う方法は特に限定されず、水蒸気蒸留、減圧下での噴霧等の公知の方法を用いることができる。
【００５３】
なお、スクアレンは酸化されやすい性質を持っており、酸化されると特有の臭気を発するようになるため、前記クロマトグラフィー工程、冷却・分離工程、洗浄工程、原料である濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂を得るための濃縮処理、粗精製処理、更には、濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂あるいは精製された植物性スクアレンの貯留・移送等を含め、スクアレンが空気と接触する可能性のある工程、処理等は、窒素等の不活性気体雰囲気下で行うことが好ましい。
【００５４】
前記クロマトグラフィー工程又は洗浄工程を経て得られる精製された植物性スクアレンは少なくとも特定の不純物（以下、「不純物１」と記載）を含む。不純物１は、前記クロマトグラフィー工程又は洗浄工程を経て得られる精製された植物性スクアレンのガスクロマトグラムにおいて、不純物１の保持時間ＲＴ１とスクアレンの主ピークの保持時間ＲＴＳとの比ＲＴ１／ＲＴｓが１. ０１〜１. ０７の範囲にあり、不純物１のピークの面積と、全ピークの面積との比が０．０００５〜０．００２０であることが好ましい。前記の、ガスクロマトグラムにおける保持時間ＲＴ１のピークが帰属される不純物１の化学構造は特定されていないが、ＧＣ／ＭＳ分析及び液体クロマトグラフィーによる分取後のＮＭＲ分析等の結果から、テルペン様の構造をもつ物質と推定されている。
【００５５】
精製された植物性スクアレンのガスクロマトグラムにおいて、前記不純物１のピークの面積と全ピークの面積の比を０．００２０以下とすることで、医薬品や化粧品の基剤及び食品、中でも医薬品への利用においても使用が可能となる。一方、前記不純物１のピークの面積と全ピークの面積の比を０．０００５未満とすることは、本実施形態の製造方法においてシリカカラムとの接触時間を極端に長くする必要がある等、目的とする精製された植物性スクアレンを経済合理性をもって製造することが困難となる。
【００５６】
本実施形態の製造方法によれば、濃縮されたスクアレンを含有する植物性油脂より、植物性スクアレンを相対純度にして９８％以上、また内部標準法純度にして９６％以上の高純度で得ることができ、医薬品や化粧品の基剤及び食品として、様々な用途への応用することが可能な植物性スクアレンを製造することができる。
【００５７】
なお、本実施形態の製造方法により得られる精製された植物性スクアレンを定法に従って水素化処理することにより、精製された植物性スクアランを得ることができる。このようにして得られる精製された植物性スクアランは、本実施形態の製造方法により得られる精製された植物性スクアレンと同様に高い純度を有する。
【００５８】
本発明の第２の態様は、ガスクロマトフィー内部標準法により測定される純度が少なくとも９６％である、精製された植物性スクアレンに関する。
【００５９】
本発明の精製された植物性スクアレンについて、以下、好ましい実施形態に沿って説明する。
【００６０】
本実施形態の精製された植物性スクアレンは、前述の本発明の精製された植物性スクアレンの製造方法により製造することができる。
【００６１】
深海産鮫由来の動物性スクアレンについては、高純度のスクアレンが製造・供給されている。しかし、植物性スクアレンについては、出発原料であるスクアレンを含有する植物性油脂中のスクアレン含有量が極めて低く、また当該油脂中にスクアレンと物性が近似する不純物が多く含まれることから、これを高度に濃縮・精製して高純度の製品を得ることは困難であった。よって本実施形態の精製された植物性スクアレンは、従来知られていない高純度の植物性スクアレンである。
【００６２】
なお、本実施形態の精製された植物性スクアレンを、従来知られている精製された動物性スクアレンと対比すると、単に出発原料が異なるというだけではなく、その組成自体が異なる。すなわち、まず、精製された植物性スクアレンと精製された動物性スクアレンとでは、それぞれを構成するスクアレンの異性体の組成が互いに異なる。スクアレンには多数の異性体が存在するが、出発原料が植物性であるか動物性であるかによって、スクアレンを構成する異性体の組成が異なる。また、精製された植物性スクアレンと精製された動物性スクアレンとでは、これらに含まれる不純物の組成が異なる。精製された植物性スクアレン及び精製された動物性スクアレンにはそれぞれ微量の不純物が不可避的に含まれるが、これらの不純物の組成が、出発原料が植物性であるか動物性であるかによって異なるのである。このように、精製された植物性スクアレンは、その主成分の化学的組成及び不純物を含めた組成物としての化学的組成が、精製された動物性スクアレンのそれらとで異なる。
【００６３】
本実施形態の精製された植物性スクアレンは、少なくとも不純物１を含む。不純物１は、本実施形態の精製された植物性スクアレンのガスクロマトグラフィー分析において、不純物１の保持時間ＲＴ１とスクアレンの主ピークの保持時間ＲＴＳとの比ＲＴ１／ＲＴｓが１.０１〜１.０７の範囲にあり、不純物１のピークの面積と、全ピークの面積の比が０．０００５〜０．００２０であることにより特徴付けられる。また、ＧＣ／ＭＳ分析において、前記ガスクロマトグラフィー分析における保持時間ＲＴ１の不純物１のピークが、質量数３９２、２５３及び１９９のピークを与える。
【００６４】
前記本実施形態の精製された植物性スクアレン中に含まれる、ＧＣ分析及びＧＣ／ＭＳ分析により規定される前記不純物１は、前述のように、構造が特定されていないテルペン様の化合物である。そして、この不純物１は精製された動物性スクアレンには含まれていないことが確認されている。なお、精製された動物性スクアレンには、ＧＣ分析において前記不純物１と近接する保持時間比をもつピークを与える不純物が複数含まれるが、ＧＣ／ＭＳ分析の結果から、当該不純物はいずれも前記不純物１とは異なる物質であることが確認されている。すなわち、前記不純物１は、ＧＣ／ＭＳ分析において、質量数（ｍ／ｚ）３９２、２５３及び１９９に大きなピークを与えるが、精製された動物性スクアレン中の前記複数の不純物は、いずれもＧＣ／ＭＳ分析において前記３つの質量数のピークを共に与えることはない。
【００６５】
以上から、精製されたスクアレンが前記不純物１を含むことにより、当該精製されたスクアレンが植物性であることが判別される。
【００６６】
本実施形態の精製された植物性スクアレンのＧＣ分析における前記不純物１のピークの面積と全ピークの面積の比が０．００２０を超える場合には、特に医薬用途への利用が困難になる。一方、前記ピーク面積の比が０．０００５未満となるように精製を行うためには、例えばシリカカラムによるクロマトグラフィーにおいて、原料のシリカとの接触時間を極端に長くする等の必要があり、経済合理性をもって精製された植物性スクアレンの製造を行うことが困難となる。
【００６７】
本実施形態の精製された植物性スクアレンは、前記性状をもつことにより、従来の植物性スクアレンでは困難であった医薬品や化粧品の基剤及び食品、中でも医薬品への利用が可能である。
【実施例】
【００６８】
以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明の技術的範囲は以下の実施例に限定されるものではない。【００６９】
オリーブスクアレン（以下、「0LSQE」と記載）（入手元：SOS CORPORACION ALIMENTARIA, S.A.  マドリード、スペイン、内部標準法純度を８５％）を薄膜遠心蒸留処理及び尿素処理によって、内部標準法純度９０．９％にまで精製し、原料として用いた。なお、原料のノルマルパラフィン含有量は０．８５質量％であった。【００７０】
前記原料（57.7ｇ）を等量（57.7ｇ）のヘキサン（HPLCグレード：以下記載されるヘキサンについても同様）に溶解した後、シリカカラムであるSep-Pak VAX PS-2(登録商標)（Waters社製）にて不純物の吸着処理を行った。当該吸着処理に際しては、島津社製HPLC用ポンプAV-10を用いて、流速２mL/minにて処理した。なお、カラム処理は１５℃にて実施した。【００７１】
スクアレンが空気に触れる可能性のある部分に関しては、全て窒素ガスにて置換を行った。なお、原料及び精製されたスクアレン中のスクアレン純度の測定は前述のＧＣによる方法を用いて行った。【００７２】
原料のフィード終了後、カラムの下部から原料／ヘキサン溶液が流出しなくなるまで回収したもの（スクアレン量：32.5ｇ）を「シリカろ過品（１）」とした。【００７３】
シリカろ過品（１）の一部を取り出し、エバポレーターにて４０℃、２時間処理後、真空乾燥（４０℃）による３時間処理により溶媒の留去を行い、精製された植物性スクアレンの回収量及び純度を確認した。【００７４】
続いて、原料と等量（57.7ｇ）のヘキサンにて、カラム内に残った0LSQEを流出させたもの（スクアレン量：24.0ｇ）を「ヘキサン洗浄品（２）」とした。【００７５】
さらに、ヘキサン洗浄品（２）（スクアレン量：15.6ｇ）を、原料と等量のヘキサン（57.7ｇ）に溶解した後、上記手法と同様に、シリカカラムにて不純物の吸着処理を行った。ヘキサン洗浄品（２）の一部を取り出し、上記手法と同様に、回収量・純度を確認した。【００７６】
ヘキサン洗浄品（２）のフィード終了後、カラムの下部からヘキサン洗浄品（２）／ヘキサン溶液が出なくなるまで回収したもの（スクアレン量：6.3ｇ）を「シリカろ過品（３）」とした。シリカろ過品（３）の一部を取り出し、上記手法と同様に、回収量・純度を確認した。【００７７】
続いて、原料と等量（57.7ｇ）のヘキサンにて、カラム内に残った0LSQEを洗浄回収したもの（スクアレン量：7.8ｇ）を「ヘキサン洗浄品（４）」とした。ヘキサン洗浄品（４）の一部を取り出し、上記手法と同様に、回収量・純度を確認した。【００７８】
「シリカろ過品（１）」、「シリカろ過品（３）」と「ヘキサン洗浄品（４）」を混合して(200g)分液ロートに移し、全体量の０．２倍量である４０ｇのアセトンを添加し、窒素ガス置換の後、100回振とうを行った。振とう後８ｇの水を添加し再度１００回の振とうを行い、20分間静置すると、内容液がヘキサン層とアセトン／水層の二層に分離した。下層のアセトン／水層を除去した後、上層のヘキサン画分を回収したもの（スクアレン量：４５．７ｇ）を「アセトン処理品（５）」とした。アセトン処理品（５）の一部を取り出し、上記手法と同様に、回収量・純度を確認した。【００７９】
上記各ステップにおける純度（相対純度及び内部標準法純度）及びステップ回収率を表３に示す。
【表３】
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【００８０】
前記アセトン処理品（５）のＧＣ分析において、不純物１の保持時間ＲＴ１とスクアレン主ピークの保持時間ＲＴｓとの比（ＲＴ１／ＲＴｓ）が１．０１４である不純物１のピークの面積と、精製された植物性スクアレンの全ピークの面積の合計の比は０．０００６５であった。なお、図１に代表的なアセトン処理品（５）のＧＣクロマトグラムを示す。【００８１】
また、図２−１、２−２に、参考として、使用したオリーブスクアレン（薄膜遠心蒸留処理及び尿素処理を行なう前）のガスクロマトグラムを示す。【００８２】
更に図３−１、３−２に、参考として、市販の深海産鮫由来の精製されたスクアレンのガスクロマトグラムを示す。【００８３】
また、前記アセトン処理品（５）のＧＣ／ＭＳ分析を行った。その結果を図４に示す。なお、このＧＣ／ＭＳ分析におけるＧＣ分析のカラム温度プログラムは、前記ＧＣ分析の場合とは異なる。【００８４】
図４−１のＧＣクロマトグラムにおける保持時間が４３．５６７分のピークが精製された植物性スクアレン中に含まれる「不純物１」に相当する。そしてこの不純物１の質量スペクトルが図４−２に示される。該質量スペクトルには、質量数（ｍ／ｚ）３９２に分子イオンと推定されるピーク、ｍ／ｚ２５３、１９９、６９、及びその他のピークが見られる。【００８５】
更に比較のために、市販の深海産鮫由来の精製されたスクアレンのＧＣ分析を行った。その結果を図５−１に示す。【００８６】
図４−１に示す、精製された植物性スクアレンのＧＣクロマトグラムにおいて、主ピークの短保持時間側（保持時間４１．５０〜４１．７０分）にスクアレンの異性体のショルダーピークが観察される。一方、図５−１に示す、精製された動物性スクアレンのＧＣクロマトグラムにおいては、このスクアレンの異性体に帰属されるピークが殆ど観察されない。このことから、精製された植物性スクアレンと精製された動物性スクアレンとでは、主成分であるスクアレンの異性体組成に相違があることが判る。【００８７】
図５−１に示す、精製された動物性スクアレンのＧＣクロマトグラムには、精製された植物性スクアレンに含まれる不純物１に帰属されるピークと近似した保持時間比をもつ不純物のピークが主なもので５つ観察される。これらのピークについてのそれぞれの質量スペクトルは、いずれも精製された植物性スクアレンに含まれる不純物１の質量スペクトルとは異なり、ｍ／ｚ３９２、２５３及び１９９のピークを共に示すことはなく、いずれも前記不純物１とは異なる物質に帰属される。なお、精製された動物性スクアレンのＧＣクロマトグラムにおける各不純物のピークは、それぞれの質量スペクトルとライブラリーとの対比から、表４に記載のように帰属される。これらの中で、ＧＣクロマトグラムにおける保持時間４２．１８１分のピークを与える不純物（コプロスタンに帰属）の質量スペクトルを例として図５−２に示す。
【表４】
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【００８８】
以上の結果より明らかなとおり、上記の方法により、従来得られなかった高純度の精製された植物性スクアレンを得ることができた。また、得られた精製された植物性スクアレンは、精製された動物性スクアレンとは異なるスクアレンの異性体組成及び不純物組成を有することが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００８９】
本発明によれば、高純度に精製された植物性スクアレンを簡便に得ることができる精製された植物性スクアレンの製造方法、及び高純度に精製された植物性スクアレンが提供される。これにより、各種化粧品や医薬品、食品等の製造において大いに貢献することが期待される。【００９０】
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【国際調査報告】
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