(57)【要約】有効成分として、（ａ）下記Ｉ又はＩＩで表されるブロック共重合体とシスプラチンからなる配位化合物：2009096245.tif 000007（上記式ＩおよびＩＩにおいて、Ｒ１、Ａ、Ｒ２、Ｒ３、ｍ、ｎは明細書に定義のとおりである）；及び（ｂ）塩酸ゲムシタビン；  を含んでなる、医薬組成物又は組合せ剤。
2009096245.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分として、
（ａ）下記Ｉ又はＩＩで表されるブロック共重合体とシスプラチンからなる配位化合物：
2009096245.tif 000006
（上記式ＩおよびＩＩにおいて、Ｒ１は、独立して、水素原子又は、官能基又は置換基により置換されていてもよいアルキル基を示し、Ａは、独立して、ＮＨ、ＣＯ、Ｒ５（ＣＨ２）ｐＲ６または直接結合を示し、ここでＲ５はＯ、ＯＣＯ、ＯＣＯＮＨ、ＮＨＣＯ、ＮＨＣＯＯ、ＮＨＣＯＮＨ、ＣＯＮＨまたはＣＯＯであり、Ｒ６はＮＨまたはＣＯであり、そしてｐは１〜６の整数であり；Ｒ２は、独立して、水素原子、アルカリ金属、アルキル基またはアラルキル基を示し、Ｒ３は、独立して、水素原子、水酸基または疎水性残基を示し、ｍは、独立して、４０〜４５０の整数を示し、そしてｎは、独立して、２０〜８０の整数を示す）；及び
（ｂ）塩酸ゲムシタビン；
を含んでなる、医薬組成物又は組合せ剤。
【請求項２】
前記ブロック共重合体が、式Ｉであり、Ｒ２が水素原子またはアルカリ金属である、請求項１に記載の医薬組成物又は組合せ剤。
【請求項３】
肺がん、前立腺がん、すい臓がん、大腸がん及び乳がんからなる群より選択されるがんの治療用である、請求項１に記載の医薬組成物又は組合せ剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組合せ剤からなる癌の治療用キットであって、
（ｉ）Ｉ又はＩＩで表されるブロック共重合体とシスプラチンからなる配位化合物の少なくとも一つ；
（ｉｉ）塩酸ゲムシタビン；及び
（ｉｉｉ）癌の種類に応じて同時または連続して投与される様に（一定の間隔をおいて順次患者に投与される様に）指示する投与スケジュール指示書；
を含んでなる、癌の治療用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ブロック共重合体とシスプラチンからなる配位化合物と塩酸ゲムシタビンとを含んでなる、又は組合せてなる、がん治療用の医薬組成物又は組合せ剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、がんは最大の死亡原因である。しかし、外科的手術、放射線療法など多岐にわたる治療法の研究にもかかわらずがんは克服されておらず、現在も多くの研究が多額の費用と時間をかけて行なわれている。
その中で化学療法は大きな柱の一つであり、多くの抗がん剤が研究・開発されている。例えば、がんの化学療法剤として、アルキル化剤、白金製剤、代謝拮抗剤、植物アルカロイドなど種々の抗がん剤が知られている。
塩酸ゲムシタビン［ジェムザール（登録商標）］は、代謝拮抗剤に属するフッ化ピリミジン系の抗がん剤であり、細胞内で代謝されて活性型のヌクレオチドである二リン酸化物及び三リン酸化物となり、これらがＤＮＡ合成を直接的及び間接的に阻害することにより殺細胞作用を示すことが知られている。塩酸ゲムシタビンは、日本において、すい臓癌、非小細胞肺がん、胆道がんへの適応、諸外国においては、乳がん、膀胱がん、卵巣がん及び子宮頸がんへの適応も承認されている。
他方、近年、投与する薬物を生体内の薬物が作用すべき特異的部位へ、時間と量を制御して送達し、効果の増強や副作用の低減を達成するための技術、ドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）が盛んに研究されている。ＤＤＳの具体的な手段としては、リポソーム、エマルジョン、またはナノパーティクルなどを薬物運搬体として利用する方法、高分子合成ポリマーミセルなどの高分子運搬体に薬物を包含させる方法、あるいは合成高分子や天然多糖類に薬物を共有結合させる方法等が用いられている。
それらのうち、ＷＯ０２／２６２４１Ａ１には、ポリ（エチレングリコール）−ポリ（グルタミン酸）からなるブロック共重合体のカルボキシアニオンにシスプラチンが配位結合した配位化合物が開示されている。該配位化合物は、水性媒体中で高分子ミセルを形成し、動物実験において、シスプラチンに由来する腎毒性を低減できることが報告されており［Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  １９  ９３（６）６７８−８７（２００５）］、現在臨床試験の段階にある。
しかし、種々の抗がん剤の研究開発にもかかわらず、依然としてがんは克服されておらず、抗がん剤の単剤による治療では、その正常細胞への強い毒性のために投与量の限界があり、一部の癌を除いては、奏功率および副作用の観点から、必ずしも十分であるとはいえない。従って、種々の抗がん剤を組合せた併用療法が盛んに試みられている。例えば、Ａ．Ｍ．Ｂｅｒｇｍａｎ  ｅｔ．ａｌ，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２（１９９６）５２１−５３０）には、塩酸ゲムシタビンとシスプラチンの併用効果が報告されている。
【発明の開示】
【０００３】
本発明は、現在の化学療法の問題点である副作用を軽減し、より高い奏功率を発揮させる為になされたものである。
従って、本発明は、以下の態様を含む。
［１］有効成分として、
（ａ）下記Ｉ又はＩＩで表されるブロック共重合体とシスプラチンからなる配位化合物：
2009096245.tif 000003
（上記式ＩおよびＩＩにおいて、Ｒ１は、独立して、水素原子又は、官能基又は置換基により置換されていてもよいアルキル基を示し、Ａは、独立して、ＮＨ、ＣＯ、Ｒ５（ＣＨ２）ｐＲ６または直接結合を示し、ここでＲ５はＯ、ＯＣＯ、ＯＣＯＮＨ、ＮＨＣＯ、ＮＨＣＯＯ、ＮＨＣＯＮＨ、ＣＯＮＨまたはＣＯＯであり、Ｒ６はＮＨまたはＣＯであり、そしてｐは１〜６の整数であり；Ｒ２は、独立して、水素原子、アルカリ金属、アルキル基またはアラルキル基を示し、Ｒ３は、独立して、水素原子、水酸基または疎水性残基を示し、ｍは、独立して、４０〜４５０の整数を示し、そしてｎは、独立して、２０〜８０の整数を示す）；及び
（ｂ）塩酸ゲムシタビン；
を含んでなる、医薬組成物又は組合せ剤。
［２］前記ブロック共重合体が、式Ｉであり、Ｒ２が水素原子またはアルカリ金属である、［１］に記載の医薬組成物又は組合せ剤。
［３］肺がん、前立腺がん、すい臓がん、大腸がん及び乳がんからなる群より選択されるがんの治療用である、［１］に記載の医薬組成物又は組合せ剤。
［４］上記［１］〜［３］に記載の医薬組合せ剤からなる癌の治療用キットであって、
（ｉ）Ｉ又はＩＩで表されるブロック共重合体とシスプラチンからなる配位化合物の少なくとも一つ；
（ｉｉ）塩酸ゲムシタビン；及び
（ｉｉｉ）癌の種類に応じて同時または連続して投与される様に（一定の間隔をおいて順次患者に投与される様に）指示する投与スケジュール指示書；
を含んでなる、癌の治療用キット。
驚くべきことに、本願発明の式Ｉ又はＩＩで表されるブロック共重合体とシスプラチンからなる配位化合物と塩酸ゲムシタビンを含んでなる医薬組成物又は組合せ剤とすることで、シスプラチンと塩酸ゲムシタビンを含んでなる医薬組成物又は組合せ剤よりもはるかに高い相乗効果と安全性を確保できることを見出した。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
図１はヒト前立腺癌ＰＣ−３細胞に対するＣＤＤＰと塩酸ゲムシタビンの組合せによるインビトロ増殖抑制効果を示すグラフである（３ウェルの平均値±ＳＤ）。図中、○はＣＤＤＰ単独の濃度変化による細胞の増殖を示し、黒ひし形、黒正三角、黒正方形及び黒丸は、それぞれ、ＣＤＤＰ濃度を０．２μｇ／ｍＬ、０．６μｇ／ｍＬ、１．９μｇ／ｍＬ及び５．６μｇ／ｍＬの濃度で固定し、塩酸ゲムシタビンの濃度を変化させた場合の細胞の増殖を表し、△は塩酸ゲムシタビン単独の濃度変化による細胞の増殖を示す。縦軸は細胞増殖率、横軸は塩酸ゲムシタビン濃度を表す。但し、ＣＤＤＰ単独時（○）の場合は、ＣＤＤＰ濃度を表す。
図２はヒト前立腺癌ＰＣ−３細胞に対するＣＤＤＰと塩酸ゲムシタビンの組合せによるＧＩ５０の関係を示すグラフである。縦軸は塩酸ゲムシタビン濃度、横軸はＣＤＤＰ濃度を表す。
図３はＣＤＤＰ耐性ヒト肺癌ＭＯＲ／ＣＰＲ細胞に対するＣＤＤＰと塩酸ゲムシタビンの組合せによるインビトロ増殖抑制効果を示すグラフである（３ウェルの平均値±ＳＤ）。図中、○はＣＤＤＰ単独の濃度変化による細胞の増殖を示し、黒ひし形、黒正三角、黒正方形及び黒丸は、それぞれ、ＣＤＤＰ濃度を０．２μｇ／ｍＬ、０．６μｇ／ｍＬ、１．９μｇ／ｍＬ及び５．６μｇ／ｍＬの濃度で固定し、塩酸ゲムシタビンの濃度を変化させた場合の細胞の増殖を表し、△は塩酸ゲムシタビン単独の濃度変化による細胞の増殖を示す。縦軸は細胞増殖率、横軸は塩酸ゲムシタビン濃度を表す。但し、ＣＤＤＰ単独時（○）の場合は、ＣＤＤＰ濃度を表す。
図４はＣＤＤＰ耐性ヒト肺癌ＭＯＲ／ＣＰＲ細胞に対するＣＤＤＰと塩酸ゲムシタビンの組合せによるＧＩ５０の関係を示すグラフである。縦軸は塩酸ゲムシタビン濃度、横軸はＣＤＤＰ濃度を表す。
図５はＣＤＤＰ耐性ヒト肺癌ＭＯＲ／ＣＰＲ細胞に対するＣＤＤＰ配位化合物と塩酸ゲムシタビンの組合せによるインビトロ増殖抑制効果示すグラフである（３ウェルの平均値±ＳＤ）。○はＣＤＤＰ配位化合物単独の濃度変化による細胞の増殖を示し、黒ひし形、黒正三角、黒正方形及び黒丸は、それぞれ、ＣＤＤＰ配位化合物濃度を３．１μｇ／ｍＬ、９．３μｇ／ｍＬ、２７．８μｇ／ｍＬ及び８３．３μｇ／ｍＬの濃度で固定し、塩酸ゲムシタビンの濃度を変化させた場合の細胞の増殖を表し、△は塩酸ゲムシタビン単独の濃度変化による細胞の増殖を示す。縦軸は細胞増殖率、横軸は塩酸ゲムシタビン濃度を表す。但し、ＣＤＤＰ配位化合物単独時（○）の場合は、ＣＤＤＰ換算濃度を表す。
図６はＣＤＤＰ耐性ヒト肺癌ＭＯＲ／ＣＰＲ細胞に対するＣＤＤＰ配位化合物またはＣＤＤＰと塩酸ゲムシタビンの組合せによるＧＩ５０の関係を示すグラフである。縦軸は塩酸ゲムシタビン濃度、横軸は、ＣＤＤＰ配位化合物またはＣＤＤＰの濃度を示し、黒丸はＣＤＤＰ配位化合物を示し、黒正方形はＣＤＤＰを示す。
図７はヒト前立腺癌ＰＣ−３移植ヌードマウスにおけるシスプラチン配位化合物と塩酸ゲムシタビンの併用の腫瘍縮小効果を示すグラフである（平均値±ＳＥ）。＊は、コントロール（未投与）、黒正方形、黒ひし形及び黒丸は、それぞれ、塩酸ゲムシタビン３３ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ及び７５ｍｇ／ｋｇ  とＣＤＤＰ配位化合物５ｍｇ／ｋｇでの併用を示し、◇は、ＣＤＤＰ配位化合物５ｍｇ／ｋｇでの単独投与を示し、○はＣＤＤＰ３．３ｍｇ／ｋｇでの単独投与を示し、黒正三角はＣＤＤＰ３．３ｍｇ／ｋｇと塩酸ゲムシタビン５０ｍｇ／ｋｇでの併用を示し、△と□はそれぞれ、塩酸ゲムシタビン５０ｍｇ／ｋｇ及び７５ｍｇ／ｋｇでの単独投与を示す。縦軸は投与開始日の腫瘍体積を１００％とした時の相対比率、横軸は投与開始日以降の日数を表す。
図８はヒト前立腺癌ＰＣ−３移植ヌードマウスにおけるシスプラチン配位化合物と塩酸ゲムシタビンの併用の体重変化を示すグラフである（平均値±ＳＥ）。それぞれのシンボルは、図７と同様である。縦軸は投与開始日の体重を１００％とした時の相対比率、横軸は投与開始日以降の日数を表す。
図９はシスプラチン耐性肺癌ＭＯＲ／ＣＰＲ移植ヌードマウスにおけるシスプラチン配位化合物と塩酸ゲムシタビンの併用の腫瘍縮小効果を示すグラフである（平均値±ＳＥ）。○は、コントロール（未投与）を示し、黒ひし形は、ＣＤＤＰ配位化合物５ｍｇ／ｋｇでの単独投与を示し、黒正方形は、塩酸ゲムシタビン７５ｍｇ／ｋｇとＣＤＤＰ配位化合物５ｍｇ／ｋｇでの併用を示し、黒正三角はＣＤＤＰ３．３ｍｇ／ｋｇでの単独投与を示し、黒丸は、ＣＤＤＰ３．３ｍｇ／ｋｇ及び塩酸ゲムシタビン７５ｍｇ／ｋｇでの併用を示し（但し、４回目の投与は行っていない）、□は、塩酸ゲムシタビン７５ｍｇ／ｋｇでの単独投与を示す。縦軸は投与開始日の腫瘍体積を１００％とした時の相対比率、横軸は投与開始日以降の日数を表す。
図１０はシスプラチン耐性肺癌ＭＯＲ／ＣＰＲ移植ヌードマウスにおけるシスプラチン配位化合物と塩酸ゲムシタビンの併用の体重変化を示すグラフである（平均値±ＳＥ）。それぞれのシンボルは図９と同様である。縦軸は投与開始日の体重を１００％とした時の相対比率、横軸は投与開始日以降の日数を表す。
図１１はヒトすい臓癌ＢｘＰＣ−３細胞に対するＣＤＤＰ配位化合物と塩酸ゲムシタビンの組合せによるインビトロ増殖抑制効果示すグラフである（３ウェルの平均値±ＳＤ）。○はＣＤＤＰ配位化合物単独の濃度変化による細胞の増殖を示し、黒丸、黒正三角、黒正方形及び黒星は、それぞれ、ＣＤＤＰ配位化合物濃度（ＣＤＤＰ換算）を０．１１μｇ／ｍＬ、０．３４μｇ／ｍＬ、１．０μｇ／ｍＬ及び３．１μｇ／ｍＬの濃度で固定し、塩酸ゲムシタビンの濃度を変化させた場合の細胞の増殖を表し、△は塩酸ゲムシタビン単独の濃度変化による細胞の増殖を示す。縦軸は細胞増殖率、横軸は塩酸ゲムシタビン濃度を表す。但し、ＣＤＤＰ配位化合物単独時（○）の場合は、ＣＤＤＰ換算濃度を表す。
図１２はすい臓癌ＢｘＰＣ−３細胞に対するＣＤＤＰ配位化合物と塩酸ゲムシタビンの組合せによるＧＩ５０の関係を示すグラフである。縦軸は塩酸ゲムシタビン濃度、横軸は、ＣＤＤＰ配位化合物の濃度（ＣＤＤＰ換算）を示す。
図１３はヒト乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞に対するＣＤＤＰ配位化合物と塩酸ゲムシタビンの組合せによるインビトロ増殖抑制効果示すグラフである（３ウェルの平均値±ＳＤ）。○はＣＤＤＰ配位化合物単独の濃度変化による細胞の増殖を示し、黒丸、黒正三角、黒正方形及び黒星は、それぞれ、ＣＤＤＰ配位化合物濃度（ＣＤＤＰ換算）を１．０μｇ／ｍＬ、３．１μｇ／ｍＬ、９．３μｇ／ｍＬ及び２８μｇ／ｍＬの濃度で固定し、塩酸ゲムシタビンの濃度を変化させた場合の細胞の増殖を表し、△は塩酸ゲムシタビン単独の濃度変化による細胞の増殖を示す。縦軸は細胞増殖率、横軸は塩酸ゲムシタビン濃度を表す。但し、ＣＤＤＰ配位化合物単独時（○）の場合は、ＣＤＤＰ換算濃度を表す。
図１４はヒト乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞に対するＣＤＤＰ配位化合物と塩酸ゲムシタビンの組合せによるＧＩ５０の関係を示すグラフである。縦軸は塩酸ゲムシタビン濃度、横軸は、ＣＤＤＰ配位化合物の濃度（ＣＤＤＰ換算）を示す。
図１５はヒト大腸癌ＬＳ１７４Ｔ細胞に対するＣＤＤＰ配位化合物と塩酸ゲムシタビンの組合せによるインビトロ増殖抑制効果示すグラフである（３ウェルの平均値±ＳＤ）。○はＣＤＤＰ配位化合物単独の濃度変化による細胞の増殖を示し、黒丸、黒正三角、黒正方形及び黒星は、それぞれ、ＣＤＤＰ配位化合物濃度（ＣＤＤＰ換算）を０．１１μｇ／ｍＬ、０．３４μｇ／ｍＬ、１．０μｇ／ｍＬ及び３．１μｇ／ｍＬの濃度で固定し、塩酸ゲムシタビンの濃度を変化させた場合の細胞の増殖を表し、△は塩酸ゲムシタビン単独の濃度変化による細胞の増殖を示す。縦軸は細胞増殖率、横軸は塩酸ゲムシタビン濃度を表す。但し、ＣＤＤＰ配位化合物単独時（○）の場合は、ＣＤＤＰ換算濃度を表す。
図１６はヒト大腸癌ＬＳ１７４Ｔ細胞に対するＣＤＤＰ配位化合物と塩酸ゲムシタビンの組合せによるＧＩ５０の関係を示すグラフである。縦軸は塩酸ゲムシタビン濃度、横軸は、ＣＤＤＰ配位化合物の濃度（ＣＤＤＰ換算）を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
本発明において、式Ｉ又はＩＩで表されるブロック共重合体は、式Ｉであることが好ましい。式Ｉ又はＩＩのＲ１にいう、アルキル基とは、Ｃ１−６のアルキル基を意味し、官能基又は置換基としては、保護されていてもよいヒドロキシル基、カルボキシル基、アルデヒド基、アミノ基、メルカプト基、マレイミド基などが挙げられる。Ａは、ブロック共重合体の合成方法により変化するため特に限定されるものではないが、式Ｉの場合、Ｒ５（ＣＨ２）ｐＲ６であり、Ｒ５はＯであり、Ｒ６はＮＨであり、そしてｐは１〜６の整数であることが好ましく、式ＩＩの場合、ＣＯ又は直接結合であることが好ましい。Ｒ２は、いずれの式の場合も水素原子またはアルカリ金属であることが好ましく、特にアルカリ金属のうちでもＮａであることが好ましい。Ｒ３は、式Ｉの場合には、水素原子またはＣ８−１６アルキルカルボニル、フェニルアセチル、ジフェニルアセチル及びピレンスルホニルであり、他方、式ＩＩの場合は水酸基または、Ｃ８−１６アルキル、ベンジル、ベンズヒドリル、アダマンチル及びコレステリルからなる群より選択される疎水性残基を示し、特に式Ｉの場合は、水素原子が好ましく、式ＩＩの場合は水酸基が好ましい。ｍは、独立して、４０〜４５０の整数を示し、好ましくは６０〜４１０の整数が好ましく、特に１１０〜３４０の整数が好ましい。そしてｎは、独立して、２０〜８０の整数を示し、特に３０〜５０の整数であることが好ましい。
上記ブロック共重合体の合成方法は所望のブロック共重合体が得られる限り特に限定されないが、例えば、ＭｅＯ−ＰＥＧ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨ２を開始剤として、脱水の有機溶媒中で、Ｎ−カルボキシ−γ−ベンジル−Ｌ−グルタミン酸無水物（ＢＬＧ−ＮＣＡ）を所望の重合度（重合度はアミノ酸ユニット数、即ち、式ＩおよびＩＩにおけるｎで示される）となるように添加して反応させ、アルカリ加水分解によりベンジル基を除去することにより得ることができる。
本発明における組合せ剤とは、（ａ）式Ｉ又はＩＩで表されるブロック共重合体とシスプラチンからなる配位化合物からなる成分および（ｂ）塩酸ゲムシタビンを含んでなる成分の組合せのことであり、前記成分（ａ）と前記成分（ｂ）を同時に、または時間を変えて（または連続的に）投与することを意味する。
本発明には前記成分（ａ）と前記成分（ｂ）を同時に、または時間を変えて（または連続的に）患者に投与することからなる、がんの治療方法が含まれる。尚、この場合、前記成分（ａ）と前記成分（ｂ）の投与の順番は、がんの種類により適宜選択される。更に、本発明には、がん治療用の本発明の医薬組成物または、医薬組合せ剤を製造するための前記成分（ａ）と前記成分（ｂ）の使用、前記成分（ａ）と前記成分（ｂ）を含んでなる治療用キット及び当該キットを製造するための前記成分（ａ）と前記成分（ｂ）の使用も含まれる。
前記本発明の医薬組成物は、前記成分（ａ）と前記成分（ｂ）を含有している一つの医薬組成物であって、前記成分（ａ）と前記成分（ｂ）はこれらの有効成分そのものを用いて医薬組成物としてもよいし、前記成分（ａ）を有効成分として含有する製剤および前記成分（ｂ）を有効成分として含有する製剤を用いて医薬組成物としてもよい。また、前記成分（ａ）と前記成分（ｂ）の一方の成分そのものを用いて、そして、他方を予め製剤化したものを用いて医薬組成物としてもよい。本発明の医薬組成物の製剤としては、液剤、凍結乾燥製剤などが挙げられ、特に凍結乾燥製剤が好ましい。
また、本発明の医薬組合せ剤において、通常それぞれ別々に予め製剤化したもの即ち、前記成分（ａ）を有効成分として含有する製剤及び前記成分（ｂ）を有効成分として含有する製剤を同時に、または時間を変えて（または連続的に）投与する。
本発明の医薬組成物、医薬組合せ剤の何れにおいても製剤化のために一般に用いられる希釈剤、賦形剤、等張剤、ｐＨ調整剤などを用いることができる。
本発明の医薬組成物または医薬組合せ剤の投与ルートとしては、静脈内注射が好ましい。
本発明の医薬組成物または組合せ剤の投与量は、用法、患者の年齢、性別、患者の状態およびその他の条件により適宜選択される。限定されるものではないが、医薬組成物（混剤）の場合、１回の投与に使用される製剤中に含まれる、成分（ａ）のシスプラチン配位化合物の量は、シスプラチン換算で、患者の体表面積１平方メートル当り、約１〜４００ｍｇ程度とするのがよく、好ましくは、１０〜３００ｍｇ程度とするのがよい。一方、成分（ｂ）である塩酸ゲムシタビンは、患者の体表面積１平方メートル当り約５０〜１３００ｍｇ程度、好ましくは、２００〜１０００ｍｇ程度とするのがよい。
また、組合せ剤の場合、成分（ａ）のシスプラチン配位化合物の量は、シスプラチン換算で、患者の体表面積１平方メートル当り、約１０〜４００ｍｇ程度とするのがよく、好ましくは、３０〜３００ｍｇ程度とするのがよい。一方、成分（ｂ）である塩酸ゲムシタビンは、患者の体表面積１平方メートル当り約１００〜１３００ｍｇ程度、好ましくは、４００〜１０００ｍｇ程度とするのがよい。
医薬組成物（混剤）の場合、限定されるものではないが、３日に一回〜８週間に一回程度の投与が好ましい。
組合せ剤の投与は、同時投与の場合、成分（ａ）のシスプラチン配位化合物と成分（ｂ）である塩酸ゲムシタビンが時間を置かずに又は混合されて投与される。時間を変えて（連続的に）投与する場合、成分（ａ）または成分（ｂ）の何れかを投与し、１日〜２週間後にもう一方の成分を投与すること（即ち、交互に投与すること）を１サイクルとしてこれを繰り返すことができる。また、成分（ａ）または成分（ｂ）の何れかの投与を３日〜２週の間隔で２回〜５回繰り返した後、もう一方の成分を投与し、これを１サイクルとして繰り返し行うことができる。この際、もう一方の成分も３日〜２週の間隔で２回〜５回繰り返し行うことを１サイクルとしてもよい。尚、いずれの場合も、１サイクルの間隔は３日〜５週間空けることができ、患者の状況をみて、休薬期間を設けることができる。
【実施例】
【０００６】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
比較例１
ヒト前立腺癌ＰＣ−３細胞に対するインビトロ細胞増殖抑制効果：
シスプラチン（以下、ＣＤＤＰと略記することがある）は、ＣＤＤＰ注射液［ランダ（登録商標）注、日本化薬（株）］（ＣＤＤＰ濃度：０．５ｍｇ／ｍＬ）を用いた。塩酸ゲムシタビン［ジェムザール（登録商標）］は日本イーライリリー（株）から購入した。ヒト前立腺癌ＰＣ−３細胞は（財）ヒューマンサイエンス振興財団研究資源バンクから購入した。
ＣＤＤＰ、塩酸ゲムシタビン及び両者の組合せの細胞増殖抑制活性に関し、ＰＣ−３細胞を用い、ＷＳＴ法に従い、以下のように評価した。９６ウェルプレート上、１ウェルあたり約５０００個の細胞を播き、ＲＰＭＩ１６４０（ＧｉｂｃｏＴＭ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）＋１０％ＦＢＳ（Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ、ＢｉｏＷｅｓｔ）培地を添加し、計９０μＬとした。続いて、培地で順に３倍希釈した薬物（１０μＬ、ただし、組合せの場合に限り２０μＬ）を添加し、必要に応じて培地１０μＬを加えることで液量を１１０μＬに補正した後、５％ＣＯ２下、３７℃にて７２時間培養した。その後、ＷＳＴ  Ｒｅａｇｅｎｔ（同仁化学研究所）を添加（１０μＬ）し、５％ＣＯ２下、３７℃にて約７２時間培養を続けた。各ウェルの４５０ｎｍにおける吸光度（Ａｂｓ４５０）を測定し、下式に基づき細胞増殖率（％  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ）を計算した。
2009096245.tif 000004
ＣＤＤＰと塩酸ゲムシタビンの組合せによる効果を調べる際、ＣＤＤＰ濃度を４種設定し、その設定した一定ＣＤＤＰ濃度の下、塩酸ゲムシタビン濃度を変化させた時の塩酸ゲムシタビン濃度−細胞増殖率曲線を図１に示した。ＣＤＤＰ  ０．２μｇ／ｍＬ存在下では非存在下と近似した結果が得られたが、同じ塩酸ゲムシタビン濃度で比較する時、ＣＤＤＰが０．６μｇ／ｍＬ以上共存するときは、ＣＤＤＰ濃度の増加に伴い、細胞増殖率が低下した。図１中のそれぞれの塩酸ゲムシタビン濃度−増殖率曲線におけるＧＩ５０（細胞の５０％増殖阻害濃度）を求め、図２にプロットした。単剤でのＧＩ５０（ｘ軸切片、ｙ軸切片に対応）を結んだ直線よりも原点に近い領域に点が存在するので、ＣＤＤＰと塩酸ゲムシタビンの相乗効果が示唆された。
比較例２
ＣＤＤＰ耐性ヒト肺癌ＭＯＲ／ＣＰＲ細胞に対するインビトロ細胞増殖抑制効果：
ＭＯＲ／ＣＰＲ細胞は大日本住友製薬（株）を通じて、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）から入手した。ＣＤＤＰ、塩酸ゲムシタビン及び両者の組合せの細胞増殖抑制活性は、細胞をＭＯＲ／ＣＰＲ細胞に変えた以外は、比較例１と同様に評価した。
ＣＤＤＰと塩酸ゲムシタビンの組合せ効果を調べるため、ＣＤＤＰ濃度を４種設定し、その設定した一定ＣＤＤＰ濃度の下、塩酸ゲムシタビン濃度を変化させた時の塩酸ゲムシタビン濃度−細胞増殖率曲線を図３に示した。同じ塩酸ゲムシタビン濃度で比較する時、共存するＣＤＤＰ濃度の増加に伴い、細胞増殖率が低下した。図３中のそれぞれの塩酸ゲムシタビン濃度−増殖率曲線におけるＧＩ５０を求め、図４にプロットした。但し、塩酸ゲムシタビン単剤でのＧＩ５０を約１０μｇ／ｍＬと見積もった。図４から、ＭＯＲ／ＣＰＲ細胞に対してもＣＤＤＰと塩酸ゲムシタビンが相乗的に作用することが示唆された。
実施例１：
シスプラチン配位化合物の調製：
シスプラチン配位化合物の調製に使用したブロック共重合体は、下記の構造であり、Ｒ１はメチル基、ｍは平均値として２７２の整数、Ａは−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−、ｎは平均値として４０の整数、Ｒ３は水素原子、Ｒ２は全てがＮａであるものを用いた。
2009096245.tif 000005
上記ブロック共重合体を用いて、ＷＯ０２／２６２４１号公報に記載の方法に準じてシスプラチン配位化合物を調製した。
実施例２
ＣＤＤＰ耐性ヒト肺癌ＭＯＲ／ＣＰＲ細胞に対するインビトロ細胞増殖抑制効果：
実施例１で得られたシスプラチン配位化合物を、ＣＤＤＰ換算で、２．５ｍｇ／ｍＬとなるように、終濃度が５％のマンニトール溶液として調製した。塩酸ゲムシタビン及び両者の組合せの細胞増殖抑制活性をＭＯＲ／ＣＰＲ細胞を用い、比較例１と同様の方法で評価した。尚、シスプラチン配位化合物の濃度または投与量は、全てＣＤＤＰ換算の濃度または投与量として記載している。
シスプラチン配位化合物と塩酸ゲムシタビンの組合せ効果を調べるため、シスプラチン配位化合物濃度を４種設定し、その設定した一定のシスプラチン配位化合物の濃度の下、塩酸ゲムシタビン濃度を変化させた時の塩酸ゲムシタビン濃度−細胞増殖率曲線を図５に示した。同じ塩酸ゲムシタビン濃度で比較する時、共存するシスプラチン配位化合物の濃度の増加に伴い、細胞増殖率が低下した。図５中のそれぞれの塩酸ゲムシタビン濃度−増殖率曲線におけるＧＩ５０を求め、図６にプロットした。但し、塩酸ゲムシタビン単剤でのＧＩ５０を約１０μｇ／ｍＬと見積もった。図６から、ＭＯＲ／ＣＰＲ細胞に対して、シスプラチン配位化合物と塩酸ゲムシタビンの組合せは相乗的に作用することが示唆された。
実施例３
ヒト前立腺癌ＰＣ−３細胞を用いた薬効試験：
ＰＣ−３細胞をＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ培地を用い、５％ＣＯ２下、３７℃にて培養し、移植に必要とする細胞数になるまで増殖させた後、ＰＣ−３細胞を生理食塩水５０μＬに懸濁し、雄性ヌードマウス［Ｂａｌｂ  ｎｕ／ｎｕ、５週齢、日本チャールス・リバー（株）］１匹当たり２×１０６個の細胞を背部皮下に接種した。その後１４日間ヌードマウスを飼育し、腫瘍体積が３８±１．３ｍｍ３（Ａｖｅｒａｇｅ±ＳＥ）になったところで薬剤の投与を開始した。投与スケジュールは４日おきに計３回の尾静脈内投与とし、以下の９群（ｎ＝７）で腫瘍体積および体重の経時変化を測定した。
（１）コントロール（無処理）、（２）シスプラチン配位化合物  ５ｍｇ／ｋｇ（ＭＴＤの２／３）＋塩酸ゲムシタビン  ３３ｍｇ／ｋｇ、（３）シスプラチン配位化合物  ５ｍｇ／ｋｇ＋塩酸ゲムシタビン  ５０ｍｇ／ｋｇ、（４）シスプラチン配位化合物  ５ｍｇ／ｋｇ＋塩酸ゲムシタビン  ７５ｍｇ／ｋｇ、（５）シスプラチン配位化合物  ５ｍｇ／ｋｇ、（６）ＣＤＤＰ  ３．３ｍｇ／ｋｇ（ＭＴＤの２／３）、（７）ＣＤＤＰ  ３．３ｍｇ／ｋｇ＋塩酸ゲムシタビン  ５０ｍｇ／ｋｇ、（８）塩酸ゲムシタビン  ５０ｍｇ／ｋｇ、（９）塩酸ゲムシタビン  ７５ｍｇ／ｋｇ（但し、シスプラチン配位化合物の投与量はＣＤＤＰ換算量）。
腫瘍体積は電子ノギス［（株）ミツトヨ］で腫瘍の長径（ａ  ｍｍ）と短径（ｂ  ｍｍ）を測定し、下式に基づき、計算した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝ａ×ｂ２／２
シスプラチン配位化合物の投与量を５ｍｇ／ｋｇ（ＭＴＤの２／３）に固定し、塩酸ゲムシタビンの併用量を３３、５０（ＭＴＤの１／２）、７５ｍｇ／ｋｇと変化させた。検体投与開始後の腫瘍体積の時間推移を図７に、体重変化を図８に示した。シスプラチン配位化合物の単独投与と比較すると、塩酸ゲムシタビンの併用量の増加に伴い、腫瘍増殖抑制効果が強くなった。すなわち、抗腫瘍効果はＴ／Ｃ値で０．４−０．５（ＮＣ−６００４単独）から、塩酸ゲムシタビンの併用量３３、５０、７５ｍｇ／ｋｇの時、Ｔ／Ｃ値はおよそ０．２−０．３、０．１−０．２、０．１以下でそれぞれ推移した。同様に、ＭＴＤの２／３の投与量の時、ＣＤＤＰ単独（３．３ｍｇ／ｋｇ）では０．５−０．６のＴ／Ｃ値で腫瘍体積が推移し、塩酸ゲムシタビン５０ｍｇ／ｋｇ併用時、Ｔ／Ｃ値はおよそ０．２−０．３に低下した。一方、塩酸ゲムシタビン単独では０．３−０．５程度のＴ／Ｃ値であった。以上の結果から、シスプラチン配位化合物又はＣＤＤＰと塩酸ゲムシタビンとの併用により、腫瘍増殖抑制効果が増強し、その増強の程度はシスプラチン配位化合物との併用の方が強い傾向が認められた。
一方、副作用の指標である体重減少に関しても、塩酸ゲムシタビン５０ｍｇ／ｋｇの併用時、シスプラチン配位化合物との併用群で、最大７．０％であった。一方、ＣＤＤＰと塩酸ゲムシタビンとの併用時は最大で１４．１％の体重減少が観察された。
実施例４
シスプラチン耐性ヒト肺癌ＭＯＲ／ＣＰＲ細胞を用いた薬効試験：
ＭＯＲ／ＣＰＲ細胞をＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳ培地を用い、５％ＣＯ２下、３７℃にて培養し、移植に必要とする細胞数になるまで増殖させた。但し、ＣＤＤＰ耐性を維持するため、継代２回につき１回の割合で、最終ＣＤＤＰ濃度が１μｇ／ｍＬになるよう、ＣＤＤＰを培地に添加した。雄性ヌードマウス（Ｂａｌｂ  ｎｕ／ｎｕ）１匹当たり２×１０６個の細胞を生理食塩水５０μＬに懸濁し、背部皮下に接種した。その後９日間ヌードマウスを飼育し、腫瘍体積が８７±３．３ｍｍ３（Ａｖｅｒａｇｅ±ＳＥ）になったところで薬剤の投与を開始した。投与スケジュールは４日毎に計４回の尾静脈内投与とし、以下の６群（ｎ＝７）で腫瘍体積および体重を週３回測定した。腫瘍体積は実施例３と同様の方法で測定及び計算した。
（１）コントロール（無処理）、（２）シスプラチン配位化合物  ５ｍｇ／ｋｇ（ＭＴＤの２／３）、（３）シスプラチン配位化合物  ５ｍｇ／ｋｇ＋塩酸ゲムシタビン  ７５ｍｇ／ｋｇ（ＭＴＤの３／４）、（４）ＣＤＤＰ  ３．３ｍｇ／ｋｇ（ＭＴＤの２／３）、（５）ＣＤＤＰ  ３．３ｍｇ／ｋｇ＋塩酸ゲムシタビン  ７５ｍｇ／ｋｇ、（６）塩酸ゲムシタビン  ７５ｍｇ／ｋｇ（但し、シスプラチン配位化合物の投与量はＣＤＤＰ換算量）
シスプラチン配位化合物の投与量を５ｍｇ／ｋｇ（ＭＴＤの２／３）に、塩酸ゲムシタビンの併用量を７５ｍｇ／ｋｇ（ＭＴＤの３／４）に固定して、他の組合せ及び単剤と比較した。検体投与開始後の腫瘍体積の時間推移を図９に、体重変化を図１０に示した。図９から、シスプラチン配位化合物と塩酸ゲムシタビンの組合せが、Ｔ／Ｃ値０．１−０．２前後で推移し、他の組合せや単剤よりも優れた腫瘍増殖抑制効果を有することが明らかとなった。ＣＤＤＰと塩酸ゲムシタビンの組合せもＴ／Ｃ値０．３前後で有効であったものの、図１０に示すように、３回目の投与後、最大約２２％の体重減少が観察されたため、４回目の投与は中止し、計３回の投与で以降の評価を続行した。この組合せ以外の投与群に関しては、いずれの群でも体重減少は１０％未満であった。以上の結果から、腫瘍増殖抑制効果と副作用の両面から、シスプラチン配位化合物と塩酸ゲムシタビンの組合せはシスプラチン耐性ヒト肺癌ＭＯＲ／ＣＰＲに対し、ＣＤＤＰと塩酸ゲムシタビンの組合せよりも優れていることが分かった。
実施例５
ヒトすい臓癌ＢｘＰＣ−３細胞に対するインビトロ細胞増殖抑制効果：
ＢｘＰＣ−３細胞は大日本住友製薬（株）を通じて、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）から入手した。実施例１で得られたシスプラチン配位化合物、塩酸ゲムシタビン及び両者の組合せの細胞増殖抑制活性を細胞をＢｘＰＣ−３細胞に変え、比較例１と同様の方法で評価した。尚、前述の通り、シスプラチン配位化合物の濃度は、全てＣＤＤＰ換算の濃度として記載している。
シスプラチン配位化合物と塩酸ゲムシタビンの組合せ効果を調べるため、シスプラチン配位化合物濃度を４種設定し、設定した一定濃度の下、塩酸ゲムシタビン濃度を変化させた時の塩酸ゲムシタビン濃度−細胞増殖率曲線を図１１に示した。同じ塩酸ゲムシタビン濃度で比較する時、共存するシスプラチン配位化合物濃度の増加に伴い、細胞増殖率が低下した。図１１中のそれぞれの塩酸ゲムシタビン濃度−増殖率曲線におけるＧＩ５０を求め、図１２にプロットした。図１２から、ＢｘＰＣ−３細胞に対してもシスプラチン配位化合物と塩酸ゲムシタビンが相乗的に作用することが示唆された。
実施例６
ヒト乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞に対するインビトロ細胞増殖抑制効果：
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞は大日本住友製薬（株）を通じて、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）から入手した。実施例１で得られたシスプラチン配位化合物、塩酸ゲムシタビン及び両者の組合せの細胞増殖抑制活性を細胞をＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞に変え、比較例１と同様の方法で評価した。尚、前述の通り、シスプラチン配位化合物の濃度は、全てＣＤＤＰ換算の濃度として記載している。
シスプラチン配位化合物と塩酸ゲムシタビンの組合せ効果を調べるため、シスプラチン配位化合物濃度を４種設定し、設定した一定濃度の下、塩酸ゲムシタビン濃度を変化させた時の塩酸ゲムシタビン濃度−細胞増殖率曲線を図１３に示した。同じ塩酸ゲムシタビン濃度で比較する時、共存するシスプラチン配位化合物濃度の増加に伴い、細胞増殖率が低下した。図１３中のそれぞれの塩酸ゲムシタビン濃度−増殖率曲線におけるＧＩ５０を求め、図１４にプロットした。図１４から、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞に対してもシスプラチン配位化合物と塩酸ゲムシタビンが相乗的に作用することが示唆された。
実施例７
ヒト大腸癌ＬＳ１７４Ｔ細胞に対するインビトロ細胞増殖抑制効果：
ＬＳ１７４Ｔ細胞は大日本住友製薬（株）を通じて、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）から入手した。実施例１で得られたシスプラチン配位化合物、塩酸ゲムシタビン及び両者の組合せの細胞増殖抑制活性を細胞をＬＳ１７４Ｔ細胞に変え、比較例１と同様の方法で評価した。尚、前述の通り、シスプラチン配位化合物の濃度は、全てＣＤＤＰ換算の濃度として記載している。
シスプラチン配位化合物と塩酸ゲムシタビンの組合せ効果を調べるため、シスプラチン配位化合物濃度を４種設定し、設定した一定濃度の下、塩酸ゲムシタビン濃度を変化させた時の塩酸ゲムシタビン濃度−細胞増殖率曲線を図１５に示した。同じ塩酸ゲムシタビン濃度で比較する時、共存するシスプラチン配位化合物濃度の増加に伴い、細胞増殖率が低下した。図１５中のそれぞれの塩酸ゲムシタビン濃度−増殖率曲線におけるＧＩ５０を求め、図１６にプロットした。図１６から、ＬＳ１７４Ｔ細胞に対してもシスプラチン配位化合物と塩酸ゲムシタビンが相乗的に作用することが示唆された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【国際調査報告】
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