(57)【要約】  本発明は、担子菌の菌糸体を培養して得られる活性化糖類関連化合物を含む炎症性腸疾患患者用経腸栄養剤に関する。本発明の経腸栄養剤は、がん患者に対するＡＨＣＣの有利な効果に加えて、炎症性腸疾患の炎症を緩和する作用を示し、経口的に栄養を補給することが困難な潰瘍性大腸炎やクローン病に罹患した患者に対して、その炎症を抑制する作用が期待される経腸栄養剤である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
担子菌の菌糸体を培養して得られる活性化糖類関連化合物を含む炎症性腸疾患患者用経腸栄養剤。
【請求項２】
担子菌が、レンチニュラ・エドデス（Lentinulla edodes）、グリフォラ・フロンドサ（Grifola frondosa）、ガノデルマ・ルシダム（Ganoderma lucidum）、ガノデルマ・アパラナタム（Ganoderma applanatum）及びシゾフィラム・コミュネ（Schizophyllum commune）よりなる群から選ばれる１種または２種以上の担子菌である請求項１に記載の炎症性腸疾患患者用経腸栄養剤。
【請求項３】
活性化糖類関連化合物がＡＨＣＣ（登録商標）またはその多糖類画分である請求項１に記載の炎症性腸疾患患者用経腸栄養剤。
【請求項４】
インターロイキン１０及び／またはインターロイキン６の産生を促進させるための請求項１または２に記載の炎症性腸疾患患者用経腸栄養剤。
【請求項５】
さらに蛋白質及び／またはその分解物、脂質、糖質を含み、総カロリーが７０〜２００ｋｃａｌ／１００ｍｌである請求項１または２に記載の炎症性腸疾患患者用経腸栄養剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、担子菌の菌糸体を培養して得られる活性化糖類関連化合物を含み、炎症性腸疾患を患っている、あるいはそうした症状になり易い者に対して有益な経腸栄養剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
活性化糖類関連化合物（Active Hexose Correlated Compound）は、担子菌の菌糸体を大型タンクで長期間培養して抽出した、アセチル化α−グルカンその他の多糖類を含む組成物の総称である。活性化糖類関連化合物の代表例は、株式会社アミノアップ化学（http://www.aminoup.co.jp/index.shtml）より製造、販売され、Active Hexose Correlated Compoundの略称を登録商標とするＡＨＣＣである。【０００３】
活性化糖類関連化合物（以下、登録商標として使用されている略称を用いてＡＨＣＣと表す。）は、「免疫反応を主とする生体応答調節物質」（Biological Response Modifiers、ＢＲＭ）という、免疫活性機能を有する物質であり、がんを始めとする生活習慣病の改善に役立つとして、基礎研究や臨床試験が最も進んだ機能性多糖類の一つである。【０００４】
ＡＨＣＣを含む健康食品は、数多くの薬学的研究や医学的研究に加え、医師によって医学的・薬学的に臨床的な効果が確認されてきた食品である。特に、抗がん剤治療を受けている患者にＡＨＣＣを含む食品を摂取させることで、抗がん剤の副作用として知られている骨髄抑制（白血球、赤血球の減少）、下痢、嘔吐、食欲不振、脱毛などの副作用を軽減することができることから、ＡＨＣＣを含む食品は、がん患者のＱＯＬを高める健康食品として利用されてきた。【０００５】
しかしながら、がんの発生部位や手術前後のために経口による栄養物の摂取が困難な患者に対しては、ＡＨＣＣを効果的に摂取させることが難しい状況も発生している。【０００６】
諸事情から栄養物の経口摂取が困難な場合に用いられる栄養剤が、経腸栄養剤である。経腸栄養剤は、一般的に経口摂取による栄養摂取量の少なくなりがちな高齢者や幼児、経口摂取機能に障害を有する者、手術前後で食事制限を受けている者などに対して、直接胃や腸に栄養物を供給するために使用される栄養剤である。経腸栄養剤は、糖質、タンパク質、脂肪、ミネラル、ビタミン、水分などのヒトに必要な様々な栄養素を十分量、バランスよく配合されることが求められ、また接種しやすい乳化液状に調製される。【０００７】
最近では、経腸栄養剤に対して、栄養の補給のみならず、摂取者の体調を改善することのできる有効成分を積極的に加えた、機能性経腸栄養剤ともいうべき新たな経腸栄養剤のニーズが高まってきている。例えば特開２００６−５０９３５号公報（特許文献１）には、キチン加水分解物及び／またはキトサン加水分解物を含む、関節痛改善作用または褥創の発生防止及び治療効果を期待した経腸栄養剤が開示されている。また、特開２００７−２３０９９８号公報（特許文献２）には、キシロオリゴ糖分子中にウロン酸残基を有する酸性キシロオリゴ糖を含有することを特徴とする、腸管のＴＮＦ−α産生抑制に効果のある経口性抗炎症剤が開示されている。【０００８】
【特許文献１】特開２００６−５０９３５号公報
【特許文献２】特開２００７−２３０９９８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、経口的に栄養を補給することが困難な患者に対してもＡＨＣＣを供給することができる、新たな形態のＡＨＣＣ含有食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、経口的に栄養摂取が困難ながん患者向けのＡＨＣＣ含有経腸栄養剤の開発を検討中に、ＡＨＣＣまたはその多糖類画分を経腸的に投与することによって、様々な炎症性腸疾患の症状を緩和し得ると期待される炎症抑制効果を有することを見いだし、下記の各発明を完成した。【００１１】
（１）担子菌の菌糸体を培養して得られる活性化糖類関連化合物を含む炎症性腸疾患患者用経腸栄養剤。
（２）担子菌が、レンチニュラ・エドデス（Lentinulla edodes）、グリフォラ・フロンドサ（Grifola frondosa）、ガノデルマ・ルシダム（Ganoderma lucidum）、ガノデルマ・アパラナタム（Ganoderma applanatum）及びシゾフィラム・コミュネ（Schizophyllum commune）よりなる群から選ばれる１種または２種以上の担子菌である前記（１）に記載の炎症性腸疾患患者用経腸栄養剤。
（３）活性化糖類関連化合物がＡＨＣＣ（登録商標）またはその多糖類画分である前記（１）に記載の炎症性腸疾患患者用経腸栄養剤。
（４）インターロイキン１０及び／またはインターロイキン６の産生を促進させるための前記（１）または（２）に記載の炎症性腸疾患患者用経腸栄養剤。
（５）さらに蛋白質及び／またはその分解物、脂質、糖質を含み、総カロリーが７０〜２００ｋｃａｌ／１００ｍｌである前記（１）または（２）に記載の炎症性腸疾患患者用経腸栄養剤。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の経腸栄養剤は、がん患者に対するＡＨＣＣの有利な効果に加えて、炎症性腸疾患の炎症を緩和する作用を示し、潰瘍性大腸炎やクローン病に罹患した患者に対して、その炎症を抑制する作用が期待される経腸栄養剤である。特に、腸組織に直接投与されることによって、より効果的に炎症抑制作用が発揮される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明は、ＡＨＣＣまたはその多糖類画分を含む、炎症性腸疾患患者用経腸栄養剤を提供する。本発明の経腸栄養剤は、タンパク質などに代表される栄養素としてではなく、機能的付加成分としてＡＨＣＣまたはその多糖類画分を含むことにより、癌患者に対するＡＨＣＣまたはその多糖類画分の良好な作用のみならず、炎症性腸疾患患者に対してその炎症を緩和する効果を与えることのできる、経腸栄養剤である。【００１４】
ＡＨＣＣは、単なる担子菌からの抽出物ではなく、担子菌の菌糸体を液体タンク内で長期間、例えば４５〜６０日間培養し、酵素反応、滅菌、濃縮などの工程を経て製造される多糖類混合物である。その主要な成分はアセチル化α−グルカンと考えられているが、βグルカンその他も含まれる。【００１５】
ＡＨＣＣの製造に使用可能な担子菌は、例えば、レンチニュラ・エドデス（Lentinulla edodes、一般名シイタケ）、アガリクス・ビスポラス（Agaricus bisporus、一般名マッシュルーム）、グリフォラ・フロンドサ（Grifola frondosa、一般名マイタケ）、フォリオタ・ナメコ（Pholiota nameko、一般名ナメコ）、プリュロタス・オストレアタス（Pleurotus ostreatus、一般名ヒラタケ）、フラムリナ・ヴェラチペス（Flammulina velutipes、一般名エノキタケ）、ガノデルマ・ルシダム（Ganoderma lucidum、一般名マンネンタケ）、アウリカラリア・アウリカラ（Auricularia auricula、一般名キクラゲ）、ガノデルマ・アパラナタム（Ganoderma applanatum、一般名コフキサルノコシカケ）、コリオラス・ルシダム（Corioluslucidum、カワラタケ）、グリフォラ・アンベラッタ（Grifola umbellate、一般名チョレイマイタケ）、シゾフィラム・コミュネ（Schizophyllum commune、一般名スエヒロタケ）、ヴォルヴァリエラ・ヴォルヴァセアエ（Volvariella volvaceae、一般名フクロタケ）等が挙げられる。【００１６】
これらの担子菌は、単独で、または数種類組み合わせて用いることができる。これらの中でも、レンチニュラ・エドデス（Lentinulla edodes、一般名シイタケ）、グリフォラ・フロンドサ（Grifola frondosa、一般名マイタケ）、ガノデルマ・ルシダム（Ganoderma lucidum、一般名マンネンタケ）、ガノデルマ・アパラナタム（Ganoderma applanatum、一般名コフキサルノコシカケ）、シゾフィラム・コミュネ（Schizophyllum commune、一般名スエヒロタケ）の使用が好ましい。【００１７】
上に例示したような担子菌の培養は、植物組織原料を用いて行うことが好ましい。植物組織原料は、植物組織に由来するものであれば特に制限されず、おがくず等を用いることも可能であるが、草本類植物由来の材料、例えば、米ぬか、ふすま、バガス、とうもろこしの根茎、稲藁、麦藁、大豆かす等が好ましい。これらは単独で用いてもよく、また複数を適宜組み合わせて用いてもよい。また、担子菌により資化されやすいようにあらかじめ植物組織原料をセルラーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ、ペクチナーゼ、キチナーゼ等で処理し、それを熱水抽出したエキスを用いても良い。植物組織原料は担子菌の培養の状態に応じて培養初期から加えても良いし、培養後期に加えても良い。【００１８】
また、植物組織原料に、各種の炭素源あるいは窒素源を添加してもよい。炭素源の例としては、ブドウ糖、ショ類、マルトース、サッカロース、上白糖、黒糖、糖蜜、廃糖蜜、マルツエキス等が挙げられる。窒素源の例としては、肉エキス、ペプトン、グルテンミール、大豆粉、乾燥酵母、酵母エキス、硫酸アンモニウム、酒石酸アンモニウム塩、尿素等が挙げられる。その他、必要に応じて、ナトリウム塩、マグネシウム塩、マンガン塩、鉄塩、カルシウム塩、リン酸塩等の無機塩類や、イノシトール、ビタミンＢ１塩酸塩、Ｌ−アスパラギン、ビオチン等のビタミン類を添加してもよい。【００１９】
上記培地を用いた担子菌の培養は、通常の中温菌の培養条件に準じて、例えばｐＨ２〜６、１０〜４５℃、好ましくは１５〜３０℃の温度で行なえばよい。培養時間は、菌の量や植物組織原料の形態に応じて、通常は４〜２０日間程度とすればよいが、４０〜６０日間の長期間に亘って培養することによって、より優れたＡＨＣＣを製造することができる。【００２０】
培養後は、培養物にセルラーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ、ペクチナーゼ、キチナーゼ等の酵素を加え、至適温度条件にて２〜２０時間反応を行なって菌体を破砕し、その後、加熱処理して酵素反応を失活させ、該処理物から遠心分離等により菌糸体残渣を除去し、上澄画分を回収することで、目的とするＡＨＣＣを含む画分を回収することができる。【００２１】
本発明で使用されるＡＨＣＣは、上記に例示されるような菌体を選択して培養し、酵素処理したものであれば何れも利用可能であるが、ＡＨＣＣの品質はその製造条件によって大きく変化しやすく、高い品質を一定に保つには、上記の培養条件と回収精製の管理を厳格に行うことが必要である。現在、株式会社アミノアップ化学（http://www.aminoup.co.jp/index.shtml）は、医薬品の製造に準じた規格によって、高品質のＡＨＣＣを安定的かつ継続的に製造販売を行っている。本発明では、株式会社アミノアップ化学からＡＨＣＣ（登録商標）として市販されているものを使用することが好ましい。【００２２】
また本発明は、ＡＨＣＣの多糖類画分も、ＡＨＣＣと共にあるいはＡＨＣＣに代えて利用することができる。本発明における「ＡＨＣＣの多糖類画分」は、ＡＨＣＣに対して疎水性クロマトグラフィーを行ったときの水溶性画分、当該水溶性画分にエタノールを添加することで得られる沈殿画分、さらに当該沈殿画分を陽イオンクロマトグラフィー処理したときの非吸着画分などを含む、ＡＨＣＣに由来する多糖類を含む水溶性画分を意味する。【００２３】
本発明の経腸栄養剤におけるＡＨＣＣまたはその多糖類画分の配合量は、栄養剤全質量当たり５〜１０質量％の範囲で適宜設定すればよい。またその他の成分は、一般的な経腸栄養剤に用いられるものを任意に使用することができる。【００２４】
例えば、蛋白質としては、カゼインまたはカゼインナトリウム、カゼインカルシウム等のカゼイン塩、乳蛋白質、鶏卵蛋白質、魚蛋白質、肉蛋白質等の動物性蛋白質、大豆蛋白質等の植物性蛋白質及びそれらの分解物、アミノ酸等を挙げることができる。これらは１種のみを用いてもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。蛋白質の含有量は、経腸栄養剤質量当たり２．０〜１０．０質量％であることが好ましく、より好ましくは３．５〜６．０質量％である。【００２５】
脂質としては、例えば、大豆油、コーン油、菜種油、ヤシ油、サフラワー油、エゴマ油、シソ油、パーム油等の植物油、ラード、牛脂等の動物油、魚油、中鎖脂肪酸トリグリセリド及びその他の合成トリグリセリド、更にこれらの加工油脂を挙げることができる。これらは１種のみを用いてもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。特に、脂質の構成成分である脂肪酸は、飽和脂肪酸、単価不飽和脂肪酸、多価不飽和脂肪酸をバランスよく配合することが好ましい。また、脂質の含有量は、経腸栄養剤質量当たり１．０〜１０．０質量％であることが好ましく、より好ましくは２．０〜８．０質量％である。【００２６】
糖類としては、ブドウ糖、果糖等の単糖類、マルトース、乳糖等の二糖類、少糖類及び多糖類が挙げられる。なかでも、易消化吸収性及び適正な浸透圧の理由からマルトデキストリン、デキストリン、オリゴ糖等を使用することが好ましい。これらは１種のみを用いてもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。また、糖質の含有量は、経腸栄養剤質量当たり１０．０〜３０質量％であることが好ましく、より好ましくは１５．０〜２５．０質量％である。【００２７】
本発明の経腸栄養剤は、人体に必要な栄養を十分に補給するために、前記以外の成分の他に、例えばセルロース、ポリデキストロース、グアーガム酵素分解物、難消化性の多糖類等、食物繊維、ビタミン類、ミネラル類を配合することが好ましい。【００２８】
本発明の経腸栄養剤は、総カロリーが７０〜２００ｋｃａｌ／１００ｍｌ、より好ましくは１００〜１５０ｋｃａｌ／１００ｍｌであり、総カロリーが上記範囲となるように水の添加量を適宜調整する。【００２９】
本発明の経腸栄養剤の好ましい形態は、液剤、乳化液剤ないし軟ゼリーである。乳化液剤には、例えば大豆リン脂質、卵黄リン脂質、モノグリセリド、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、モノグリセリドのコハク酸モノグリセリドまたはクエン酸エステル等のモノグリセリド誘導体等の乳化剤を使用することが好ましい。乳化剤の含有量は、全経腸栄養剤質量当たり０．０５〜１．０質量％であることが好ましく、より好ましくは０．２〜０．７質量％である。【００３０】
本発明の経腸栄養剤は、常法にしたがって調製することができる。液剤は、配合成分を水に溶解すればよい。また乳化剤は、配合成分を水、好ましくは温水に溶解させ、油分と乳化剤を加え、ホモジナイザー等を用いて乳化させて調製することができる。調製された液剤や乳化剤はフィルター滅菌、あるいはパウチやソフトバッグに充填密封した後、加熱殺菌して製造することができる。【００３１】
ＡＨＣＣまたはその多糖類画分を含む本発明の経腸栄養剤には、炎症性腸疾患に対して炎症を緩和する効果を奏することが期待される。後の実施例に詳しく説明するように、ＡＨＣＣまたはその多糖類画分を経腸的に投与された哺乳動物において、抗炎症サイトカインであるインターロイキン１０（ＩＬ−１０）の産生誘導効果が確認された。【００３２】
またＡＨＣＣには、リポ多糖（Lipopolysaccharide、ＬＰＳ）刺激のない状態で炎症抑制に働くインターロイキン６（ＩＬ−６）の産生を誘導する効果も確認された。その一方で、ＡＨＣＣは、ＬＰＳ刺激等を受けたときに誘導される炎症活性化サイトカインであるインターロイキン６、インターロイキン２（ＩＬ−２）、ＴＮＦ−α、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）の産生を抑制する効果も有することが確認された。さらに、ＡＨＣＣは樹状細胞（ＤＣ）を作用点として抗炎症拡大作用も示すことが明らかにされた。【００３３】
これらの生理作用から、ＡＨＣＣまたはその多糖類画分を含む本発明の経腸栄養剤は、種々の炎症性腸疾患、例えばクローン病や潰瘍性大腸炎などの炎症を抑制する効果を奏するものと期待される。また、術後、創傷時などの病態における炎症性腸疾患患者に対する抗炎症改善作用としての経腸栄養剤としても有効である。【００３４】
以下、実施例を示して本発明を更に詳しく説明するが、本発明はかかる実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００３５】
実施例１：
ＡＨＣＣ（（株）アミノアップ化学）濃縮液８０ｍＬを、あらかじめ水で馴化させたポリスチレン型ゲルDIAION HP-20（Mitsubishi Chemical Corporation）を充填したカラム（５．０ｃｍ ｉ．ｄ．×２５ｃｍ）にチャージした。各１Ｌの水、メタノール、５０％アセトンで順次溶出させた。この水画分を減圧下濃縮後、凍結乾燥に付して黄白色の個体を得た（１８．１ｇ）。この画分に３５ｍＬの水を加えて溶解させた後、激しく撹拌しながら１８０ｍＬのエタノールを滴下した。遠心（３０００ｒｐｍ、１５ｍｉｎ）後、上清をデカントして除いた。沈殿に３５ｍＬの水を加えて同様の操作を行い、得られた沈殿に少量の水を加えて溶解させ、凍結乾燥に付して淡褐色の個体を得た（５．８７ｇ）。この画分に１００ｍＬの水を加えて溶解させ、陽イオン交換型ゲル、Dowex 50W X-8（The Dow Chemical Company）を充填したカラム（４．４ｃｍ ｉ．ｄ．×１７ｃｍ）にチャージした。各０．５０Ｌの水および３Ｍアンモニア水で順次溶出させた。この水画分を減圧下濃縮後、凍結乾燥に付して淡黄色固体（ＡＨＣＣの多糖類画分）を得た（４．９３ｇ）。【００３６】
実施例２：
６週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（雌、ｎ＝３０）に、ＡＨＣＣ（（株）アミノアップ化学）を、胃ゾンデを用いて１０日間継続して投与した（ＡＨＣＣの投与量は、２０ｍｇ／１ｍｌ／匹／日）。１０日目にＬＰＳを０．１ｍｇ／２ｍＬ／匹腹腔内投与してから２時間後に脾臓及び小腸パイエル板より樹状細胞を分離し、ＩＬ−１０の産生量を、Applied Biosystems 7500 Real Time PCR Systemを用いたリアルタイムＰＣＲ法により測定した。なお、コントロールとして、ＡＨＣＣを含まない他は実施例２と同一組成の経腸栄養剤を、上記と同様にして投与したマウス群を用意した。【００３７】
その結果、脾臓から分離した樹状細胞におけるＩＬ−１０の産生量は、コントロールに比べて６７．１％上昇していた。また、小腸パイエル板から分離した樹状細胞におけるＩＬ−１０の産生量は、コントロールに比べて２２．５％上昇していた（図１）。【００３８】
実施例３：
８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（雌、ｎ＝１０）に、ＡＨＣＣ（（株）アミノアップ化学）を、胃ゾンデを用いて１５日間継続して投与した（ＡＨＣＣの投与量は、２０ｍｇ／１ｍｌ／匹／日）。１０日目に１×１０８ＣＦＵ／０．２ｍＬ／匹のロドコッカス菌（Rhodococcus aurantiacus）を経静脈投与した。ロドコッカス菌は脾臓細胞と肝臓細胞を好んで集積する微生物として知られていることから、二つの臓器で感染状態を検討するため、投与から１日目及び３日目に脾臓及び肝臓を採取し、DuoSet ELISA Development System（Ｒ＆Ｄ社）を用いてＩＬ−６とＩＬ−１０の発現量を測定した。 【００３９】
その結果、脾臓細胞及び肝臓細胞において、ＩＬ−６（図２）、ＩＬ−１０（図３）の産生量がいずれも上昇していることが確認された。ロドコッカス菌による感染症においては、ＩＬ−１０とＩＬ−６がいずれも炎症抑制性サイトカインとして誘導されることが知られていることから、上記実験の結果は、炎症抑制性サイトカインであるＩＬ−１０とＩＬ−６の産生をＡＨＣＣが促進する、すなわちＡＨＣＣが炎症を抑制する作用を有することを示すものであるといえる。【００４０】
実施例４：
８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス（雌、ｎ＝１０）に、ＡＨＣＣ（（株）アミノアップ化学）またはその多糖類画分、対照としてβグルカンそれぞれを、胃ゾンデを用いて１５日間継続して投与した（ＡＨＣＣ、多糖類画分の投与量は、２０ｍｇ／１ｍｌ／匹／日）。１０日目にＬＰＳを０．１ｍｇ／２ｍＬ／匹腹腔内投与してから３日目に脾臓及び肝臓を採取した。【００４１】
脾臓及び肝臓から分離した樹状細胞より抽出した全ＲＮＡ１０００ｎｇを鋳型とし、AMV Reverse TranscriptaseXL（Takara社）とRandom 9merを用いてＲＴ−ＰＣＲを行った。さらにＲＴ−ＰＣＲによって得られたｃＤＮＡを鋳型とし、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、及びＴＮＦ−αの発現量を、それぞれに特異的な下記のプライマーセットを用いたリアルタイムＰＣＲ（9500 Real Time Pcr System、Applied Biosystems社）を行うことで測定した。【００４２】
ＩＬ−２：フォワード ５'−ＧＧＡＧＣＡＧＣＴＧＴＴＧＡＴＧＧＡＣＣＴＡＣ−３'
（配列番号１）
リバース ５'−ＡＡＴＣＣＡＧＡＡＣＡＴＧＣＣＧＣＡＧＡＧ−３'
（配列番号２）
ＩＬ−６：フォワード ５'−ＣＡＡＧＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＡＧＡＧＴＣ−３'
（配列番号３）
リバース ５'−ＧＧＴＴＴＧＣＣＧＡＧＴＡＧＡＴＣＴＣＡＡ−３'
（配列番号４）
ＩＬ−１０：フォワード ５'−ＡＧＣＣＴＴＡＴＣＧＧＡＡＡＴＧＡＴＣＣＡＧ−３'
（配列番号５）
リバース ５'−ＴＧＣＴＣＣＡＣＴＧＣＣＴＴＧＣＴＣＴＴＡ−３'
（配列番号６）
ＴＮＦ−α：フォワード ５'−ＡＧＡＡＧＡＧＧＣＡＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＡＧ−３'
（配列番号７）
リバース ５'−ＧＧＣＴＡＣＡＧＧＣＴＴＧＴＣＡＣＴＣＧＡＡ−３'
（配列番号８）【００４３】
ＧＡＰ−ＤＨをコントロールとし、縦軸にコピー数を、横軸にサイクル数を取り、サイクル数からコピー数を換算して、発現量を定量化した。また、全ＲＮＡ量の違いは、ＧＡＰ−ＤＨのコピー数で各対象のコピー数を割ることで補正した。【００４４】
その結果、ＡＨＣＣは、ＬＰＳ刺激によるＩＬ−２（図４）、ＩＬ−６（図５）、及びＴＮＦ−α（図６）の発現を強く抑制することが確認された。また、ＡＨＣＣとその多糖類画分は、ＩＬ−１０（図７）の産生を誘導する作用を有することが確認された。【００４５】
実施例５：
ロドコッカス菌を投与して５時間後に脾臓細胞及び肝臓細胞を採取して、ＩＬ−１２の発現量を、下記のプライマーセットを用いたリアルタイムＰＣＲ（9500 Real Time Pcr System、Applied Biosystems社）を行うことで測定した。【００４６】
ＩＬ−１２：フォワード ５'−ＣＣＡＧＡＧＡＣＡＴＧＧＡＧＴＣＡＴＡＧＧＣ−３'
（配列番号９）
リバース ５'−ＣＡＡＧＴＣＣＡＴＧＴＴＴＣＴＴＴＧＣＡＣＣ−３'
（配列番号１０）【００４７】
その結果、ＡＨＣＣは、ＬＰＳ刺激によるＩＬ−１２の発現を強く抑制することが確認された（図８）。【００４８】
実施例６：
正常マウスの骨髄及び脾臓から分離した樹状細胞をプラスチックシャーレに置き、ＬＰＳのみを最終濃度が５μｇ／ｍｌとなるように添加したとき、及びＬＰＳとＡＨＣＣ（最終濃度５ｍｇ／ｍｌ）もしくはβグルカン（最終濃度１ｍｇ／ｍｌ）とを添加したときの樹状細胞の外観観察を行った。その結果を表に示す。【００４９】
【表１】
2009116507.tif 000002
【００５０】
また、それら樹状細胞の成熟度についても、ＣＤ８６、ＣＤ４０及びＭＨＣクラス２分子の発現量を指標としたＦａｃｓ解析によって測定した。
その結果、ＡＨＣＣを添加することにより、ＬＰＳ添加による上記３種類のタンパク質の発現量が優位に抑制される、すなわち樹状細胞がＬＰＳの刺激を受けても成熟しないことが確認された（図９）。このことは、ＬＰＳ添加による炎症をＡＨＣＣが抑制することができることを意味する。【００５１】
参考例１：
デキストリン ７０ｇ、カゼインナトリウム８ｇ、ＡＨＣＣ（（株）アミノアップ化学）１２ｇ、ビタミン混合物と無機塩類いずれも少量を５０℃の湯に溶解させた後、コーン油９ｇ及び０．０２５ｇシュガーエステルを加え、乳化させて総量が１００ｍｌとなる経腸栄養剤を調製した。【００５２】
参考例２：
デキストリン１８ｇ、卵白加水分解物４ｇ、無機塩類混合物、ビタミン混合物、ＡＨＣＣ（（株）アミノアップ化学）４ｇを水に溶解し総量を１００ｍｌとしたのち、フィルター滅菌して、液状の経腸栄養剤を得た。この経腸栄養剤におけるＡＨＣＣの含有量は２０ｍｇ／ｍＬである。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】ＡＨＣＣを経腸投与されたマウス樹状細胞におけるＩＬ−１０の産生能の亢進を示すグラフである。
【図２】ＡＨＣＣを経腸投与されたマウスにおけるＩＬ−６の産生能の亢進を示すグラフである。
【図３】ＡＨＣＣを経腸投与されたマウスにおけるＩＬ−１０の産生能の亢進を示すグラフである。
【図４】マウスに対するＬＰＳ刺激によるＩＬ−２の産生を、ＡＨＣＣが抑制することを示すグラフである。
【図５】マウスに対するＬＰＳ刺激によるＩＬ−６の産生を、ＡＨＣＣが抑制することを示すグラフである。
【図６】マウスに対するＬＰＳ刺激によるＴＮＦ−αの産生を、ＡＨＣＣが抑制することを示すグラフである。
【図７】マウスに対するＬＰＳ刺激において、ＩＬ−１０の産生能の亢進を示すグラフである。
【図８】マウスに対するＬＰＳ刺激によるＩＬ−１２の産生を、ＡＨＣＣが抑制することを示すグラフである。
【図９】樹状細胞へのＬＰＳ刺激によるＣＤ８６、ＣＤ４０及びＭＨＣクラス２分子の発現誘導をＡＨＣＣが抑制することを示すグラフである。
【図１】
2009116507.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2009116507.tif 000009
【図８】
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【図９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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