(57)【要約】本発明の目的の１つは、標的物質の検出感度または定量精度を向上させるために自己組織化膜に固定されるンパク質の量を増やすことである。本発明は、システイン、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニンおよびグリシンからなる５種類のアミノ酸から選択されるアミノ酸の１分子が、自己組織化膜とタンパク質の分子との間に挿入されることによって特徴付けられる。例えば、タンパク質を自己組織化膜上に固定する方法であって、以下の工程（ａ）〜（ｂ）をこの順に具備する、方法が提供される：１分子のアミノ酸および前記自己組織化膜を具備する基材を用意する工程（ａ）および前記基材上にタンパク質を供給し、前記１分子のアミノ酸のカルボキシル基と前記タンパク質のアミノ基との反応の結果として所定の化学式で表現されるペプチド結合を形成する工程（ｂ）。
2013008280.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質を自己組織化膜上に固定する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
１分子のアミノ酸および自己組織化膜を具備する基材を用意する工程（ａ）、
ここで、前記１分子のアミノ酸は、以下の化学式（Ｉ）により表されるペプチド結合により前記自己組織化膜に結合しており、
前記１分子のアミノ酸は、システイン、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニン、およびグリシンからなる５種類のアミノ酸から選択され、
【化１】
2013008280.tif 000018
（Ｒは前記１分子のアミノ酸の側鎖を示す）
前記基材上にタンパク質を供給し、前記１分子のアミノ酸のカルボキシル基と前記タンパク質のアミノ基との反応として以下の化学式（ＩＩ）よって表されるペプチド結合を形成する工程（ｂ）
【化２】
2013008280.tif 000019
（Ｒは前記１分子のアミノ酸の側鎖を示す）。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記工程（ａ）は、以下の工程（ａ１）および（ａ２）を具備する、方法：
自己組織化膜を表面に具備する基材を用意する工程（ａ１）、ここで、前記自己組織化膜は一端にカルボキシル基を有し、
前記１分子のアミノ酸を前記基材に供給し、前記化学式（Ｉ）により表される前記自己組織化膜の一端の前記カルボキシル基と前記１分子のアミノ酸のアミノ基との間の反応としてペプチド結合を形成する工程（ａ２）。
【請求項３】
請求項１に記載の方法であって、前記工程（ａ）および前記工程（ｂ）との間にさらに前記工程（ａｂ）を具備する、方法：
前記１分子のアミノ酸のカルボキシル基を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドおよび１−エチル３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩の混合液により活性化する工程（ａｂ）。
【請求項４】
請求項２に記載の方法であって、前記工程（ａ１）および前記工程（ａ２）との間にさらに前記工程（ａ１ａ）を具備する、方法：
前記自己組織化膜のカルボキシル基を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドおよび１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩混合液により活性化する工程（ａ１ｂ）。
【請求項５】
前記化学式（ＩＩ）が以下の化学式（ＩＩＩ）により表される、請求項１に記載の方法：
【化３】
2013008280.tif 000020
（Ｒは前記１分子のアミノ酸の側鎖を示す）。
【請求項６】
自己組織化膜、１分子のアミノ酸、およびタンパク質を備えたセンサであって、
前記自己組織化膜および前記タンパク質の間には前記１分子のアミノ酸が挟まれており、
前記タンパク質が、以下の化学式（ＩＩ）によって表される２つのペプチド結合により自己組織化膜に結合しており、
【化４】
2013008280.tif 000021
（Ｒは前記１分子のアミノ酸の側鎖を示す）
前記１分子のアミノ酸は、システイン、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニン、およびグリシンからなる５種類のアミノ酸から選択される、センサ。
【請求項７】
前記化学式（ＩＩ）が以下の化学式（ＩＩＩ）により表される、請求項６に記載のセンサ
【化５】
2013008280.tif 000022
（Ｒは前記１分子のアミノ酸の側鎖を示す）。
【請求項８】
センサを用いて試料に含まれる標的物質を検出または定量する方法であって、以下の工程（ａ）〜（ｃ）をこの順で具備する、方法：
自己組織化膜、１分子のアミノ酸、およびタンパク質を備えたセンサを用意する工程（ａ）、ここで
前記自己組織化膜および前記タンパク質の間には前記１分子のアミノ酸が挟まれており、
前記タンパク質が、以下の化学式（ＩＩ）によって表される２つのペプチド結合により自己組織化膜に結合しており、
【化６】
2013008280.tif 000023
（Ｒは前記１分子のアミノ酸の側鎖を示す）
前記１分子のアミノ酸は、システイン、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニン、およびグリシンからなる５種類のアミノ酸から選択され、
前記センサに前記試料を供給し、前記タンパク質に標的物質を結合させる工程（ｂ）、および
工程（ｂ）において結合した標的物質を検出するか、または工程（ｂ）において結合した標的物質の量から前記試料に含有される標的物質を定量する工程（ｃ）。
【請求項９】
請求項８の方法であって、前記化学式（ＩＩ）が以下の化学式（ＩＩＩ）により表される、方法：
【化７】
2013008280.tif 000024
（Ｒは前記１分子のアミノ酸の側鎖を示す）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はタンパク質を自己組織化膜上に固定する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
試料に含有される標的物質を検出または定量するために、バイオセンサが用いられる。いくつかのバイオセンサは、標的物質を検出または定量するために、標的物質と結合することができるタンパク質を具備する。具体的には、抗原を検出または定量するバイオセンサは、当該抗原に特異的に結合し得る抗体を具備する。同様に、ビオチンおよびグルコースを検出または定量するバイオセンサは、それぞれ、ストレプトアビジンおよびグルコースオキシダーゼを具備する。【０００３】
標的物質を含有する試料が、標的物質と結合することができるタンパク質を具備するバイオセンサに供給されると、標的物質はタンパク質に結合し、検出または定量される。【０００４】
特許文献１は、タンパク質を具備する従来のバイオセンサを開示している。この特許文献１は、特表２００２−５２０６１８号公報に対応する（特許文献１における、第２４頁第２３行から２６行まで、第２５頁第３行から第２０行まで、第２５頁第２７行から第２６頁第１３行、および第２６頁第１４行から第２２行まで、第２８頁第２１行から第２３行、または対応する公報の段落番号００８０、００８２、００８４、００８５、００９５、０１０９、０１１８、および０１１９を参照）。図２は、特許文献１の図７に開示されたバイオセンサを示す。【０００５】
特許文献１の図７に関する記述によれば、当該バイオセンサは、生体分子の活性をスクリーニングするために用いられる。当該バイオセンサは、単層７、親和性タグ８、アダプター分子９、およびタンパク質１０を具備している。単層７は、化学式Ｘ−Ｒ−Ｙによって表される自己組織化膜から構成される（特許文献１における、第２４頁第２３行から２６行まで、第２５頁第３行から第２０行まで、第２５頁第２７行から第２６頁第１３行、および第２６頁第１４行から第２２行までを参照。または、対応する公報の段落番号００８０、００８２、００８４、００８５を参照）。Ｘ、Ｒ、およびＹの一例は、それぞれ、ＨＳ−、アルカン、およびカルボキシル基である（特許文献１における、第２５頁第３行から第２０行まで、第２５頁第２７から第２６頁第１３行、および第２８頁第２１行から第２３行までを参照。または、対応する公報の段落００８４、００８５、および００９５）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第００／０４３８２号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
標的物質の検出感度または定量精度を向上させるためには、当該バイオセンサに固定されるタンパク質の量を増やすことが必要とされる。【０００８】
本発明者は、システイン、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニン、およびグリシンからなる群から選択される１分子のアミノ酸を自己組織化膜に結合させ、そしてタンパク質を固定することによって、単位面積あたりのタンパク質の固定量が著しく増加されるという知見を見いだした。本発明はこの知見を元に完成された。
【０００９】
本発明の目的は、自己組織化膜上に固定されるタンパク質の量を増加させる方法、及び当該方法に従って固定されたタンパク質を有するセンサを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
以下の項目１〜９に記載の方法またはセンサは、上記課題を解決する。
（１）  タンパク質を自己組織化膜上に固定する方法であって、以下の工程を具備する、方法：
１分子のアミノ酸および自己組織化膜を具備する基材を用意する工程（ａ）、
ここで、前記１分子のアミノ酸は、以下の化学式（Ｉ）により表されるペプチド結合により前記自己組織化膜に結合しており、
前記１分子のアミノ酸は、システイン、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニン、およびグリシンからなる５種類のアミノ酸から選択され、
【化１】
2013008280.tif 000003
（Ｒは前記１分子のアミノ酸の側鎖を示す）
前記基材上にタンパク質を供給し、前記１分子のアミノ酸のカルボキシル基と前記タンパク質のアミノ基との反応として以下の化学式（ＩＩ）よって表されるペプチド結合を形成する工程（ｂ）
【化２】
2013008280.tif 000004
（Ｒは前記１分子のアミノ酸の側鎖を示す）。
（２）  項目１に記載の方法であって、前記工程（ａ）は、以下の工程（ａ１）および（ａ２）を具備する、方法：
自己組織化膜を表面に具備する基材を用意する工程（ａ１）、ここで、前記自己組織化膜は一端にカルボキシル基を有し、
前記１分子のアミノ酸を前記基材に供給し、前記化学式（Ｉ）により表される前記自己組織化膜の一端の前記カルボキシル基と前記１分子のアミノ酸のアミノ基との間の反応としてペプチド結合を形成する工程（ａ２）。
（３）  項目１に記載の方法であって、前記工程（ａ）および前記工程（ｂ）との間にさらに前記工程（ａｂ）を具備する、方法：
前記１分子のアミノ酸のカルボキシル基を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドおよび１−エチル３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩の混合液により活性化する工程（ａｂ）。
（４）  項目２に記載の方法であって、前記工程（ａ１）および前記工程（ａ２）との間にさらに前記工程（ａ１ａ）を具備する、方法：
前記自己組織化膜のカルボキシル基を、N-Hydroxysuccinimideおよび1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)
carbodiimide hydrochloride混合液により活性化する工程（ａ１ｂ）。
（５）  前記化学式（ＩＩ）が以下の化学式（ＩＩＩ）により表される、項目１に記載の方法：
【化３】
2013008280.tif 000005
（Ｒは前記１分子のアミノ酸の側鎖を示す）。
（６）
自己組織化膜、１分子のアミノ酸、およびタンパク質を備えたセンサであって、
前記自己組織化膜および前記タンパク質の間には前記１分子のアミノ酸が挟まれており、
前記タンパク質が、以下の化学式（ＩＩ）によって表される２つのペプチド結合により自己組織化膜に結合しており、
【化４】
2013008280.tif 000006
（Ｒは前記１分子のアミノ酸の側鎖を示す）
前記１分子のアミノ酸は、システイン、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニン、およびグリシンからなる５種類のアミノ酸から選択される、センサ。
（７）  前記化学式（ＩＩ）が以下の化学式（ＩＩＩ）により表される、項目６に記載のセンサ
【化５】
2013008280.tif 000007
（Ｒは前記１分子のアミノ酸の側鎖を示す）。
（８）  センサを用いて試料に含まれる標的物質を検出または定量する方法であって、以下の工程（ａ）〜（ｃ）をこの順で具備する、方法：
自己組織化膜、１分子のアミノ酸、およびタンパク質を備えたセンサを用意する工程（ａ）、ここで
前記自己組織化膜および前記タンパク質の間には前記１分子のアミノ酸が挟まれており、
前記タンパク質が、以下の化学式（ＩＩ）によって表される２つのペプチド結合により自己組織化膜に結合しており、
【化６】
2013008280.tif 000008
（Ｒは前記１分子のアミノ酸の側鎖を示す）
前記１分子のアミノ酸は、システイン、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニン、およびグリシンからなる５種類のアミノ酸から選択され、
前記センサに前記試料を供給し、前記タンパク質に標的物質を結合させる工程（ｂ）、および
工程（ｂ）において結合した標的物質を検出するか、または工程（ｂ）において結合した標的物質の量から前記試料に含有される標的物質を定量する工程（ｃ）。
（９）  項目８の方法であって、前記化学式（ＩＩ）が以下の化学式（ＩＩＩ）により表される、方法：
【化７】
2013008280.tif 000009
（Ｒは前記１分子のアミノ酸の側鎖を示す）。
【発明の効果】
【００１１】
本発明は、単位面積あたりに固定されるタンパク質の量の著しい増加を達成する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、本発明による方法の概略図を示す。
【図２】図２は、特許文献１の図７である。
【図３】図３は、従来技術による方法の概略図を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
図１を参照しながら、本発明の実施の形態が、以下、説明される。
【００１４】
（実施の形態１）
図１は、タンパク質を自己組織化膜に固定するための本発明による方法を示す。
【００１５】
基材１は、好ましくは金基板である。金基板の一例は、表面に金を一様に有する基板である。具体的には、金基板は、ガラス、プラスチック、またはＳｉＯ2の表面にスパッタリング法により形成された金膜を有する基板であり得る。
【００１６】
まず、アルカンチオールを含有する溶液に基材１は浸漬される。好ましくは、浸漬前に基材１は洗浄される。当該アルカンチオールは、末端にカルボキシル基を有する。アルカンチオールは、６〜１８の範囲内の炭素数を有することが好ましい。このようにして、基材１上に自己組織化膜２が形成される。
【００１７】
アルカンチオールの好ましい濃度はおよそ１〜１０ｍＭである。アルカンチオールを溶解する限り、溶媒は限定されない。好ましい溶媒の一例は、エタノール、ジメチルスルホキシド（以下、「ＤＭＳＯ」と記される）、およびジオキサンである。好ましい浸漬時間はおよそ１２〜４８時間である。
【００１８】
次に、自己組織化膜２にアミノ酸３が供給される。自己組織化膜２の上端に位置するカルボキシル基(-COOH)はアミノ酸３のアミノ基(-NH2)と反応して、以下の化学式（Ｉ）によって表されるペプチド結合を形成する。
【００１９】
【化８】
2013008280.tif 000010
（ここで、Ｒは１分子のアミノ酸の側鎖を表す）
【００２０】
化学式（Ｉ）においては、１分子のアミノ酸３が自己組織化膜２と結合する。
【００２１】
アミノ酸３は、システイン、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニン、およびグリシンからなる５種類のアミノ酸から選択される。すなわち、化学式（Ｉ）において、Ｒはこれら５種類のアミノ酸の側鎖である。
【００２２】
自己組織化膜２にアミノ酸３が供給される際に、２種類以上のアミノ酸が同時に供給され得る。すなわち、自己組織化膜２にアミノ酸３を含有する溶液が供給される際に、当該溶液は２種類以上のアミノ酸３を含有し得る。後述するタンパク質のアミノ酸３への均一な結合を考慮すれば、当該溶液は１種類のみのアミノ酸を含有することが好ましい。
【００２３】
続いて、タンパク質４が供給される。タンパク質４のＮ末端のアミノ基が、アミノ酸３のカルボキシル基と反応する。タンパク質４に含まれるリジンのアミノ基も、アミノ酸３のカルボキシル基と反応する。このようにして、以下の化学式（ＩＩ）によって示される２つのペプチド結合が形成され、センサを得る。
【００２４】
【化９】
2013008280.tif 000011
（ここで、Ｒは１分子のアミノ酸の側鎖を表す）
【００２５】
１分子のタンパク質４は、N末端のアミノ基として１つのみ有する一方、１分子のタンパク質４は、アミノ基を有する多数のリジン基を有する。従って、ほとんど全ての化学式（ＩＩ）は、詳細には、以下の化学式（ＩＩＩ）によって表される。
【化１０】
2013008280.tif 000012
【００２６】
得られたセンサは、試料に含有される標的物質を検出または定量するために用いられる。
【００２７】
（実施例）
以下の実施例および比較例は、本発明をさらに詳細に説明する。
【００２８】
（比較例Ａ１）
図３に示されるように、金表面上に形成された自己組織化されたアルカンチオールの上端に位置するカルボキシル基に、直接、プロテインAがアミドカップリング反応により結合され、プロテインＡを固定した。手順及び結果が以下に記述される。プロテインＡは、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）の細胞壁成分の５％を構成するタンパク質であり、「ＳｐＡ」と略記されることは周知である。
【００２９】
[試料溶液の調製]
１０ｍＭの最終濃度を有する１６−メルカプトヘキサデカン酸（16-Mercaptohexadecanoic
acid）の試料溶液が調製された。溶媒はエタノールであった。
【００３０】
［自己組織化膜の形成］
基材１として、ガラス上に蒸着された金を有する金基板（ＧＥヘルスケア社製；ＢＲ−１００４−０５）が用いられた。当該基材１は、濃硫酸および３０％過酸化水素水を含有するピラニア溶液で１０分間洗浄した。さらに純水を用いて洗浄して乾燥した。当該ピラニア溶液に含有される濃硫酸の３０％過酸化水素水に対する体積比は３：１であった。
【００３１】
続いて、金基板は試料溶液中に１８時間浸漬され、金基板の表面に自己組織化膜を形成した。最後に、純水により基材１は洗浄され、乾燥された。
【００３２】
[タンパク質の固定］
自己組織化膜を形成する１６−メルカプトヘキサデカン酸の上端に位置するカルボキシル基にタンパク質としてプロテインAが結合され、プロテインＡが固定された。
【００３３】
具体的には、０．１Ｍ  Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ；N-Hydroxysuccinimide)および０．４Ｍ  １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ；1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride)の３５マイクロリットルの混合液により、１６−メルカプトヘキサデカン酸の上端に位置するカルボキシル基が活性化された。その後、３５マイクロリットルのプロテインA（４０マイクログラム／ｍｌ）が５マイクロリットル／分の流速で添加された。このようにして、１６−メルカプトヘキサデカン酸のカルボキシル基はプロテインＡのアミノ基にカップリングされた。
【００３４】
（実施例Ａ１）
自己組織化膜の形成とプロテインＡの固定との間に、１分子のアミノ酸としてグリシンが供給されたこと以外は、比較例Ａと同様に、実験が行なわれた。手順及び結果は以下に記述される。
【００３５】
[アミノ酸（グリシン）の固定化]
自己組織化膜２を形成する１６−メルカプトヘキサデカン酸（16-Mercaptohexadecanoic
acid）の上端に位置するカルボキシル基にグリシンが結合され、グリシンを固定した。
【００３６】
具体的には、比較例Ａ１と同様にカルボキシル基が活性化された後に、３５マイクロリットルの０．１Ｍグリシン（ｐH：８．９）が５マイクロリットル／分の流速で添加された。このようにして、１６−メルカプトヘキサデカン酸のカルボキシル基がグリシンのアミノ基にカップリングされた。
【００３７】
[タンパク質の固定]
続いて、グリシンのカルボキシル基にプロテインAが結合され、プロテインＡを固定した。具体的には、上記と同様にグリシンのカルボキシル基が活性化された後に、３５マイクロリットルのプロテインＡ（濃度：２５０マイクログラム／ｍｌ）が５マイクロリットル／分の流速で添加された。このようにして、グリシンのカルボキシル基は、プロテインＡの５’末端のアミノ基またはプロテインＡに含まれるリジンのアミノ基にカップリングされた。
【００３８】
［固定量の比較］
SPR装置Biacore3000（GEヘルスケア社製）を用いて、実施例Ａ１および比較例ＡにおけるプロテインAの固定量が測定された。
本明細書において用いられる用語「固定量」とは、単位面積あたりに固定されたタンパク質の量を意味する。
【００３９】
（比較例Ａ２〜Ａ１６）
グリシンに代え、セリン、アラニン、グルタミン酸、メチオニン、ロイシン、バリン、スレオニン、イソロイシン、チロシン、アスパラギン、トリプトファン、アスパラギン酸、アルギニン、プロリン、およびグルタミンが用いられ、実施例Ａ１の場合と同様に各固定量が測定された。
【００４０】
（実施例Ａ２〜Ａ５）
グリシンに代え、システイン、リジン、ヒスチジン、及びフェニルアラニンが用いられ、実施例Ａ１の場合と同様に各固定量が測定された。
【００４１】
表１は、実施例Ａ１〜Ａ５および比較例Ａ１〜Ａ１６によるプロテインＡの固定量を示す。
【００４２】
【表１】
2013008280.tif 000013
【００４３】
（実験例Ｂ１〜Ｂ５および比較例Ｂ１〜Ｂ１６）
プロテインＡに代えてストレプトアビジンを用いたこと以外は、実験例Ａ１〜Ａ５および比較例Ａ１〜Ａ１６と同様の実験が行われた。
【００４４】
表２は、実施例Ｂ１〜Ｂ５および比較例Ｂ１〜Ｂ１６によるストレプトアビジンの固定量を示す。
【００４５】
【表２】
2013008280.tif 000014
【００４６】
（実験例Ｃ１〜Ｃ５および比較例Ｃ１〜Ｃ１６）
プロテインＡに代えてグルコースオキシダーゼを用いたこと以外は、実験例Ａ１〜Ａ５および比較例Ａ１〜Ａ１６と同様の実験が行われた。使用したグルコースオキシダーゼは、Aspergillus niger由来のグルコースオキシダーゼである
【００４７】
表３は、実施例Ｃ１〜Ｃ５および比較例Ｃ１〜Ｃ１６によるストレプトアビジンの固定量を示す。
【００４８】
【表３】
2013008280.tif 000015
【００４９】
（実験例Ｄ１〜Ｄ５および比較例Ｄ１〜Ｄ１６）
プロテインＡに代えて抗体を用いたこと以外は、実験例Ａ１〜Ａ５および比較例Ａ１〜Ａ１６と同様の実験が行われた。ここで、抗体としては、マウス由来のモノクローナル抗体を使用した。
【００５０】
表４は、実施例Ｄ１〜Ｄ５および比較例Ｄ１〜Ｄ１６による抗体の固定量を示す。
【００５１】
【表４】
2013008280.tif 000016
【００５２】
（実験例Ｅ１〜Ｅ５および比較例Ｅ１〜Ｅ１６）
プロテインＡに代えてアルブミンを用いたこと以外は、実験例Ａ１〜Ａ５および比較例Ａ１〜Ａ１６と同様の実験が行われた。ここで、アルブミンとしては、ヒト血清由来のヒト血清アルブミンを使用した。
【００５３】
表５は、実施例Ｅ１〜Ｅ５および比較例Ｅ１〜Ｅ１６による抗体の固定量を示す。
【００５４】
【表５】
2013008280.tif 000017
【００５５】
当業者は以下のことを表１〜表５から理解するであろう。
システイン、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニンおよびグリシンからなる５種類のアミノ酸から選択される１分子のアミノ酸が自己組織化膜とタンパク質との間に挟まれる場合、他の１５種類のアミノ酸から選択される１分子のアミノ酸が用いられた場合または当該１分子のアミノ酸が用いられなかった場合と比較して、単位面積あたりのタンパク質の固定量が増加する。
【産業上の利用可能性】
【００５６】
本発明は、単位面積あたりに固定されるタンパク質の量を著しく増加させ得る。このことにより、バイオセンサの感度を向上させる。当該バイオセンサは、臨床現場において患者由来の生体試料に含有される標的物質の検出または定量を必要とする検査および診断に用いられ得る。【００５７】
本特許出願に先行する以下５件の特許出願とのダブルパテントを回避するために、クレームにおいて用いられる用語「タンパク質」からは、プロテインＡ、ストレプトアビジン、グルコースオキシダーゼ、抗体、およびアルブミンは除外され得る。
（１）  整理番号：P597039P0、出願番号：PCT/JP2011/000268
（２）  整理番号：P603636P0、出願番号：PCT/JP2011/001185
（３）  整理番号：P604426P0、出願番号：（未付与）、この出願は、２０１０年１０月１９日に日本国特許庁に出願された特願2010-234314に基づく優先権を主張する。
（４）  整理番号：（未付与）、出願番号：（未付与）、この出願は、２０１１年６月１０日に日本国特許庁に出願された特願2011-129893に基づく優先権を主張する。および
（５）  整理番号：（未付与）、出願番号：（未付与）、この出願は、２０１１年７月５日に日本国特許庁に出願された特願2011-148917に基づく優先権を主張する。
【符号の説明】
【００５８】
１：金基材
２：アルカンチオール
３：アミノ酸
４：タンパク質
【図１】
2013008280.tif 000025
【図２】
2013008280.tif 000026
【図３】
2013008280.tif 000027
【国際調査報告】
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