(57)【要約】  卵巣摘出後にエストロジェンを投与して発情状態を誘導したメスマウスの尿に含まれる成分から抽出した２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を使用する。この成分をメスマウスに付与すると、オスマウスが追尾する行動が増加する。鋤鼻器官を摘出したオスマウスは、追尾行動の増加が観察されないため、上記成分は、鋤鼻器官を介して交配を誘引するフェロモン様物質である。この成分は、交配誘引剤として有用に使用することができる。
2013051562.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を含有するマウスの交配誘引剤。
【請求項２】
２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を用いることを特徴とする、マウスの交配促進方法。
【請求項３】
２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を含む部材をネズミ類捕獲装置に配設することを特徴とする、ネズミ類の捕獲方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を含有するマウスの交配誘引剤、前記化合物をメスマウスに使用したマウスの交配促進方法およびネズミ類の捕獲方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
マウスやラットなどのネズミ類は、穀物を食い荒らし、ペストをはじめとする種々の伝染病を媒介する。また、近年では、ネズミ類による電気配線への噛み付きが停電や火事の原因ともなっている。このようなネズミによる害を防止するため、ネズミの駆除を目的とする齧歯動物用フードを用いた捕獲器が開発され、シーズニングオイルや海藻類を使用するものの他、米糠や米糠由来成分を配合した齧歯動物用誘引・喫食性向上剤が開発されている（特許文献１）。【０００３】
また、性誘引剤を使用して害虫駆除を駆除する方法も提案されている（特許文献２）。フェロモンは同種の動物どうしがコミュニケーションをとるために体外へ放出する化学物質の総称であり、異性を互いに引きよせるなど、繁殖行動の際に重要な役割を果たす。特許文献２では、ミカンヒメコナカイガラムシのフェロモンとして２，２−ジメチル−３−（１−メチルエテニル）シクロブタンメチル３−メチル−３−ブテネートを特定し、これを性誘引剤として使用することを提案している。なお、前記化合物は、ミカンヒメコナカイガラムシ未交尾雌成虫を接種したカボチャの雰囲気から抽出され、ミカンヒメコナカイガラムシ雄成虫に対する性誘引活性を指標として選択された化合物である。【０００４】
フェロモンは、種特異性が高い。マウスに関するフェロモンとして、性成熟後のオスのマウスの眼窩外涙腺から分泌されるＥＳＰ１（Ｅｘｏｃｒｉｎｅ  ｇｌａｎｄ−ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅ  １）と称されるペプチドが報告されている（非特許文献１）。マウスの性行動は、互いによる匂い嗅ぎ探索行動、そののちのオスによるアプローチ（乗駕行動）、それにひきつづくメスによるオスの受け入れ行動（ロードシス）、およびオスによるペニスの挿入（イントロミッション）の４つの段階に区分できる。マウスの嗅覚系は、主嗅覚系と鋤鼻系とから構成されフェロモンは鋤鼻系で認識されると考えられている。非特許文献１では、マウス鋤鼻器官に発現するＶ２Ｒｐ５がＥＳＰ１の受容体であることを見出している。そして、メスのＶ２Ｒｐ５ノックアウトマウスにＥＳＰ１を取り込ませたときにはロードシス、イントロミッションの亢進が観察されないことから、ＥＳＰ１がマウス鋤鼻器官に発現するＶ２Ｒｐ５という単一の受容体で認識され、メスに特異的な神経回路を介して視床下部領域を活性化し、メスのロードシス性行動を促進する効果をもたらすフェロモンであると結論している。【０００５】
また、オスマウスから抽出されたフェロモンとして、３，４−デヒドロ−エキソ−ブレビコミン（３，４−ｄｅｈｙｄｒｏ−ｅｘｏ−ｂｒｅｖｉｃｏｍｉｎ）や２−セカンダリーブチル−４，５−ジヒドロチアゾール（２−ｓｅｃ−ｂｕｔｙｌ−４，５−ｄｉｈｙｄｒｏｔｈｉａｚｏｌｅ）もある（非特許文献２）。これらは揮発性物質であり、鋤鼻器官のみに作用するか不明であるが、１×１０−１０Ｍという低い濃度で鋤鼻器官における電気応答を引き起こすとしている。【０００６】
さらに、メスマウスの尿由来フェロモンとして、１−ヨード−２−メチルウンデカンに関する報告もある（非特許文献３）。この化合物は、発情前期および発情期に出現して交配前行動に関与し、オスマウスの生殖活動を増強する化合物である。卵巣摘出されたマウスや前思春期のメスマウスには存在しないがエストロジェン治療によって再出現することが知られている。実施例では、スイス系マウスを用い、卵巣摘出されたメスマウス群と、卵巣摘出しかつエストロジェンを投与したメスマウス群、および前思春期のメスマウス群の尿成分を分析している。その結果、卵巣摘出しかつエストロジェンを投与したメスマウス群の尿からのみ抽出される成分を特定し、スニッフィング（Ｓｎｉｆｆｉｎｇ）、リッキング行動（Ｌｉｃｋｉｎｇ  ｂｅｈａｖｉｏｒ）、グルーミング（Ｇｒｏｏｍｉｎｇ）を観察し、効果の高い１−ヨード−２−メチルウンデカンをフェロモンと選別している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００８−１３７９２８号公報
【特許文献２】特許第４０１７１０７号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】はが紗智子・東原和成  「マウスの雄フェロモンＥＳＰ１の受容機構の解明ライフサイエンス新着レビュー」  ２０１０年９月１日（ｈｔｔｐ：／／ｆｉｒｓｔ．ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｄｂ．ｊｐ／ａｒｃｈｉｖｅｓ／５）
【非特許文献２】哺乳類におけるフェロモンと鋤鼻器官  阿部峻之他  日本生殖内分泌学会雑誌  ｐ５−８、１３巻（２００８）
【非特許文献３】Ｓ．  Ａｃｈｉｒａｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  「１−Ｉｏｄｏ−２  ｍｅｔｈｙｌｕｎｄｅｃａｎｅ  ［１Ｉ２ＭＵ］：  ａｎ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｕｒｉｎａｒｙ  ｓｅｘ  ｐｈｅｒｏｍｏｎｅ  ｏｆ  ｆｅｍａｌｅ  ｍｉｃｅ」  Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ  ｐ３４５−３５３、Ｖｏｌ  ７４（２０１０）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ネズミ類の駆除のためにネズミ捕獲装置が開発されているが、ネズミ類による被害は後を絶たない。これは、捕獲装置に仕掛けられているおとり食物の効果が弱いことが一因と考えられる。このようなおとり食物にフェロモンを混入すれば捕獲効率を向上させることができる。しかしながら、非特許文献１で開示するＥＳＰ１（Ｅｘｏｃｒｉｎｅ  ｇｌａｎｄ−ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅ  １）は、アミノ酸６５個からなるペプチドであり製造や入手が容易でない。しかも、上記フェロモンは不揮発性化合物であるため、直接の接触によって初めてネズミに認識される。このため、ネズミ捕獲装置内に仕掛ける給餌に混練しても、ネズミを捕獲する効果を期待することができない。【００１０】
これに対し、非特許文献２記載の３，４−デヒドロ−エキソ−ブレビコミンや２−セカンダリーブチル−４，５−ジヒドロチアゾールや非特許文献３記載の１−ヨード−２−メチルウンデカンは揮発性のフェロモンである。したがって、おとり食物に混練すれば成分が揮発するため、ネズミが直接接触しなくても、捕獲率を向上させうる。しかしながら、３，４−デヒドロ−エキソ−ブレビコミンや２−セカンダリーブチル−４，５−ジヒドロチアゾールは、オスマウスの攻撃行動を促進するため、捕獲後の処理が容易でない。また、１−ヨード−２−メチルウンデカンはハロゲン化アルキルであり、安全性が高くない。【００１１】
さらに、非特許文献３に記載される１−ヨード−２−メチルウンデカンは、オスマウスのメスマウスに対する追尾行動の増加は認められるが、乗駕行動を含む性行動の増加については認められておらず、性行動を誘発するフェロモンであるかどうかについては疑問の余地がある。従って、食物のフレーバー以外の方法でマウスやラットを呼び寄せることができ、安全性が高く、かつ安価かつ簡便に入手しうる薬剤の開発が望まれる。【００１２】
一方、マウスやラットは有用な実験動物として医学研究領域で多用される小動物である。例えば、マウスは、ノックアウトマウスなどの作出が可能であるため、様々な遺伝子疾患の仕組みの解明になくてはならない存在となっている。ネズミ類は、高い繁殖能力を有するが、研究に用いられるマウスの系統のなかには繁殖能力の弱い系統も存在する。よって、繁殖効率を増加しうる薬剤の開発が望まれる。【００１３】
上記現状に鑑みて、本発明は、新たなマウスの交配誘引剤を提供することを目的とする。【００１４】
また、このような交配誘引剤を使用したネズミ類の捕獲方法やマウスの交配促進方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、マウスのフェロモン様化合物について検索したところ、エストロジェンによって発情させたメスマウスが、尿中に２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートを分泌することを見いだした。これらの化合物をメスマウスに塗布するとオスマウスによる追尾行動が増加した。上記化合物は揮発性であるため、おとり食物などに混練してネズミ捕獲装置内に収納すればネズミを捕獲しうる。上記化合物は、オスマウスの鋤鼻器官を切除すると増加していた追尾行動量が減少するため、鋤鼻器官を介して行動や内分泌系を制御する交配誘引剤として作用する。【００１６】
すなわち、本発明は、２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を含有するマウスの交配誘引剤を提供するものである。【００１７】
また本発明は、２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を用いることを特徴とする、マウスの交配誘引方法を提供するものである。【００１８】
また本発明は、２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を含む部材をネズミ類捕獲装置に配設することを特徴とする、ネズミ類の捕獲方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、新規なマウスの交配誘引剤を提供することができる。
また、本発明によればメスマウスに前記交配誘引剤を塗布することでオスマウスの追尾行動を誘引できるため、マウスの交配機会を増加することができる。
本発明の交配誘引剤は、これを他の給餌と混練することでネズミ類の捕獲装置に使用するおとり食物として使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】実施例１の結果を示す図である。卵巣摘出手術後にエストラジオール１７βを投与したメスマウスの尿のＧＣ−ＭＳクロマトグラムと、非投与群のメスマウスの尿のＧＣ−ＭＳクロマトグラムである。
【図２】実施例２、比較例１の結果を示す図である。卵巣を摘出したメスマウスに、２−エチル−１−ヘキサノールの１／１０，０００溶液を塗布し（実施例２）、または脱臭水を塗布し（比較例１）、オスマウスの単飼ケージに導入した際の１５分間の雄マウスの追尾回数を示す。
【図３】実施例３の結果を示す図である。鋤鼻器官切除マウス群とシャムオペ群とを調製し、メスマウスへの追尾行動を観察した結果を示す。
【図４】実施例４、比較例２の結果を示す図である。２−エチルヘキサノールとウンデカンとの混合物を卵巣摘出した成熟メスマウスに塗布し、成熟オスマウスの行動を観察した結果を示す（実施例４）。蒸留水を塗布した比較例２も同様に観察した。
【図５】実施例５の結果を示す図である。２−エチルヘキサノールとウンデカンとの混合物をタオルに含浸して交配誘引剤含有タオルとし、成熟オスマウスの行動を観察した結果を示す（実施例５）。蒸留水を塗布した蒸留水含有タオルを対照として観察した。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明の第一は、２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を含有するマウスの交配誘引剤である。
卵巣は、性ホルモンであるエストロジェンとプロゲステロンとを分泌する組織である。後記する実施例に示すように、卵巣を摘出したメスマウス群と、卵巣摘出後にエストロジェンを投与したメスマウス群とからそれぞれの尿を採取して成分を比較すると、エストロジェン投与群に特異な成分として２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートとが見出された。上記化合物の希釈液をメスマウスに塗布してオスマウスの単飼ケージに投入すると、オスマウスによる追尾行為が増加することが判明した。マウスの嗅覚系は、主嗅覚系と鋤鼻系とからなり、フェロモンは鋤鼻系で認識されると考えられている。オスマウスの鋤鼻器官を摘出すると前記追尾行為が減少したので、上記化合物は、オスマウスの鋤鼻器官で認識されるフェロモンの１種と考えられる。
【００２２】
本発明の交配誘引剤は、前記２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を単独で使用してもよく、混合して使用してもよい。２，３−ブタンジオール  ジアセテート以外の化合物は市販されており、入手が容易である。本発明の特徴は、このような入手が容易な化合物がマウスのフェロモンであることを見出した点にある。これにより、当該化合物を交配誘引剤として広範囲に使用することができる。しかも、本発明の交配誘引剤を構成する上記化合物はいずれも揮発性成分であるため、オスマウスは本発明の交配誘引剤に直接アクセスすることなく、雰囲気を介して認識することができる。このため、本発明の交配誘引剤に直接接触する以外の用途にも、本発明の交配誘引剤を使用することができる。
【００２３】
本発明の交配誘引剤は、２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を含有する。メスマウスに直接塗布する場合には、上記化合物の１×１０−３〜１×１０−５倍、より好ましくは３×１０−３〜８×１０−４倍、特に好ましくは５×１０−３〜５×１０−４倍の希釈液を交配誘引剤として使用する。この範囲で十分にオスマウスに認識され、交配誘引効果を発揮しうるからである。希釈液は、上記化合物を水に溶解して調製することができる。その他、上記化合物の安定性を確保でき、かつ交配誘引剤としての効果を維持しうる種々の成分を配合し、乳剤、懸濁液、軟膏などに調製してもよい。たとえば、上記化合物を予め少量のエタノール、アセトン、ジメチルスルホキシド、ゴマ油などに溶解し、ついで水を添加して上記濃度の希釈液を調製することができる。水とともに乳化剤を添加すれば、乳剤を調製することもできる。
【００２４】
本発明の第二は、２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を用いることを特徴とする、マウスの交配促進方法である。マウスやラットは医学研究領域その他で多用される小動物であるが、系統のなかには繁殖能力の弱い系統も存在するため、交配を促進することで繁殖率を向上させることができる。なお、本発明において「２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を用いる」とは、塗布その他によってメスマウスに投与する態様の他、いずれかの方法でメスマウスに効果を及ぼす場合を含む。
【００２５】
前記したように、２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種は、エストロジェンによって偽発情状態を誘導されたメスマウスの尿に出現する成分であり、フェロモンの１種である。ここに、フェロモンは、リリーサーフェロモンとプライマーフェロモンとに大別される。リリーサーフェロモンとは、同種他個体に直接的な行動を引き起こすフェロモンと定義され、フェロモンの効果は短時間に起こりすぐ行動をひきおこすものである。また、プライマーフェロモンとは、同種他個体の生理過程に影響し、間接的に個体の発達や生殖機能などに効果を与えるフェロモンと定義され、効果は比較的長時間に持続し、影響はホルモンなどの変化により二次的なものとなる。本発明で使用する２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種は、これらをメスマウスに塗布するとオスマウスによる追尾行動が増加するため、少なくともリリーサーフェロモンとしての作用を有する。
【００２６】
一方、２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種は、エストロジェン投与によって尿中に排出された成分であり、エストロジェンは性周期に関連するホルモンである。このため、上記化合物は性周期に関連して排出される成分といえる。マウスにおけるプライマーフェロモンの作用としては、性周期の同調作用が知られている。複数のメスマウスを集団飼育する際に、ケージ内に上記化合物を導入してメスマウスの性周期を同調させて交配管理を行うことで繁殖力を増加させることができる。
【００２７】
本発明で使用する２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種は、それぞれ単独で使用してもよく併用してもよい。濃度は、用途によって適宜選択しうるが、一般には、上記化合物を１×１０−３〜１×１０−５倍、より好ましくは３×１０−３〜８×１０−４倍、特に好ましくは５×１０−３〜５×１０−４倍に希釈して使用する。希釈溶媒は、水でもよいがフェロモンとしての効果を損なわない他の溶媒その他を配合してもよい。上記濃度に希釈した場合の使用量は１〜１０００μｌ、好ましくは５〜５００μｌ、より好ましくは１０〜３００μｌである。
【００２８】
本発明において、マウスの交配促進のために用いる態様としては、２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を含む部材をケージのいずれかに載置したり、このようなケージのいずれかに上記化合物を塗布したり、または上記化合物を直接メスマウスに塗布する方法などがある。
【００２９】
ケージに上記化合物を含む部材を載置して複数のメスマウスを飼育すれば、上記化合物がケージ内の雰囲気に揮散してメスマウスの性周期を同調させることができる。その他、ケージ内に上記化合物を揮散することができれば、上記態様に限定されるものではない。したがって、いずれかのメスマウスに上記化合物を塗布した場合にも、他のメスマウスの性周期を同調させることができる。
【００３０】
また、オスマウスと上記化合物を塗布したメスマウスとをケージで飼育すると、オスマウスによる追尾行動が増加するため交配機会が増加する。本発明で使用する上記化合物は揮発性であるため、メスマウスに直接塗布せず、ケージに上記化合物を含む部材を載置したりケージ自体やケージ内の部材のいずれかに上記化合物を塗布することでオスマウスによる追尾行動が促進される。ただし、より効果的にはメスマウスに上記化合物を塗布する態様である。追尾行動の促進により交配機会が増加し、繁殖率を増加させることができる。
【００３１】
本発明の第三は、２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を含む部材をネズミ類捕獲装置に配設することを特徴とする、ネズミ類の捕獲方法である。「２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を含む部材」としては、ネズミ類をネズミ類捕獲装置に誘導するためのおとり食物であってもよく、その他、水、紙基材、布基材、パルプ基材、樹脂基材、無機基材、これらの複合基材、その他の媒体に、２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を含浸その他の方法で含ませた部材を広く使用することができる。
【００３２】
ネズミ類は、夜行性であるためコミュニケーションには、視覚情報より化学物質が重要な役割を果たしている。フェロモンは、このようなケミカルコミュニケーションに関与する物質のひとつである。ネズミ類捕獲装置にフェロモンを含む部材を配設すると、ネズミ類がこれを媒体としてケミカルコミュニケーションを行うため捕獲装置内に誘導される。前記２−エチルヘキサノールおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートをメスマウスに塗布するとオスマウスの追尾行動が誘発される。上記化合物を含む部材をネズミ類捕獲装置内に載置すると、前記部材から揮散するフェロモンに誘発されてオスマウスが前記部材を追尾し、ネズミ類捕獲装置内に誘導される。
【００３３】
ネズミ類捕獲装置としては、ネズミ類の侵入口があり、侵入したネズミ類が装置内に捕獲された状態で維持しうるものを広く使用することができる。たとえば、ネズミ類の侵入口から誘導されたネズミ類が底部の粘着層によって捕獲される態様のネズミ類捕獲装置の場合には、２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を含有させた粘着層を使用してもよい。
【００３４】
本来、ネズミ類捕獲装置は、ネズミ類を捕獲することが目的であり飼育を目的としていない。このため、本来、おとり食物などの給餌を配置する必要がない。本発明によれば、２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種を含む部材を使用することで、芋、チーズ、ソーセージなどの生の食品を使用する場合に発生する腐敗などの問題を回避することができる。
なお、本発明では、毒物などを使用しないため、フィールドにおいて、絶滅危惧種や希少動物とされているネズミ類の捕獲を行うこともできる。
【実施例】
【００３５】
次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は何ら本発明を制限するものではない。【００３６】
（実施例１）
マウスは、ＳＰＦ動物室で１４時間点灯、１０時間消灯の照明条件（０５００〜１９００時）、室温２３±３℃の環境下で飼育し、固型飼料（ラボＭＲストック、日本農産工業、神奈川）と水を自由に摂取させたものを各実施例及び比較例に使用した。
上記により飼育した１２〜１５週齢のＣ５７ＢＬ系メスマウスの８匹から卵巣を摘出した。前記卵巣摘出マウスの内４匹には、摘出手術直後からエストラジオール１７βを０．４ｍｇ／ｍｌでごま油に溶解した液を充填したシラスコンチューブ（内径０．２ｃｍ、全長１ｃｍ）を留置した。留置より１週間後、プロジェステロン０．４ｍｇを皮下投与し、その３０分後に３００μｌの尿を採取した（エストラジオール１７β投与群）。
一方、前記卵巣摘出マウスの内４匹には、摘出手術直後からごま油を充填したシラスコンチューブ（内径０．２ｃｍ、全長１ｃｍ）を留置した。留置より１週間後、３００μｌの尿を採取した（エストラジオール１７β非投与群）。
エストラジオール１７β投与群およびエストラジオール１７β非投与群から得られた尿を、それぞれ脱臭水１ｍｌ、ジクロロメタン１ｍｌ、酢酸エチル１００μｌとともによく撹拌し、有機溶媒層のみを抽出した。なお、脱臭水とは、精製したポーラスポリマー（ジーエルサイエンス株式会社製、商品名「Ｔｅｎａｘ  ＴＡ」）充填ガラスカラムに、超純水を通過させて作成したものである。ついで、前記有機溶媒層に硫酸ナトリウムを適量加えて十分に脱水した後、溶媒を窒素ガスにて１０μｌまで留去してＧＣ−ＭＳ用試料とした。なお、ＧＣ−ＭＳ分析は、下記条件にて行った。
エストラジオール１７β投与群とエストラジオール１７β非投与群のＧＣ−ＭＳのチャートを図１に示す。エストラジオール１７β投与群と非投与群との相違から、本発明では、エストラジオール１７β投与群の尿中に出現する化合物を選択し、２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートをメスマウスの新規フェロモンとして特定した。【００３７】
ＧＣ−ＭＳ分析条件
装置：株式会社島津製作所製  「ＧＣＭＳ−ＱＰ２０１０」
キャピラリーカラム：アジレントテクノロジー社製、「ＤＢ−ＷＡＸ」、カラム直径：０．２５ｍｍ、フィルム厚；０．２５μｍ、総長；６０ｍ
分析条件：カラム温度４０℃で５分間保持したのち、３℃／分の速度で２２０℃まで昇温【００３８】
（実施例２）
２−エチルヘキサノール（東京化成株式会社製）を脱臭水に１／１０，０００の濃度に溶解し、１２〜１５週齢、Ｃ５７ＢＬ系、卵巣摘出した成熟メスマウス４匹の膣口に綿棒にて３０〜１００μｌ塗布した。このメスマウスを１２〜１５週齢、Ｃ５７ＢＬ系の成熟オスマウス４匹の単飼ケージにそれぞれ導入し、その後のオスマウスの行動を１５分間観察した。オスマウスがメスマウスを追尾する行動は、１５分間に平均約１２回程度であった。結果を図２に示す。【００３９】
（比較例１）
２−エチルヘキサノール（東京化成株式会社製）を脱臭水に１／１０，０００の濃度に溶解したものに代えて脱臭水を３０〜１００μｌ塗布した以外は、実施例２と同様に操作し、オスマウスがメスマウスを追尾する行動を観察した。オスマウスがメスマウスを追尾する行動は、１５分間に平均６回であった。結果を図２に示す。実施例２と比較し、追尾行動は有意に低かった。２−エチルへキサノールをメスマウスに塗布することで、オスマウスの追尾行動が促進され、交配機会が増加し、繁殖率を増加させられる可能性が示唆された。【００４０】
（実施例３）
鋤鼻器官の影響を調べるため、オスマウスに鋤鼻器官切除術（ＶＭＯＸ）を行い、鋤鼻器官切除マウスとシャムオペマウスによるメスマウスへの追尾行動を比較観察した。
１２〜１５週齢、Ｃ５７ＢＬ系の成熟オスマウス４匹に下記に従い鋤鼻器官を摘出し、単飼ケージで飼育した（鋤鼻器官切除マウス群）。鋤鼻器官切除マウス群には、さらにドリルで鋤骨尾側端を切断して鋤骨を取り出した。その後、あいた腔にスポンゼルを詰めて傷口を閉じた。
一方、対照として１２〜１５週齢、Ｃ５７ＢＬ系の成熟オスマウス４匹にシャムオペを行い、単飼ケージで飼育した。シャムオペは、マウスを麻酔下に頭位を固定し、軟口蓋を小臼歯の生え始める辺りの奥側から門歯ギリギリまで正中切開し、時計ピンセットで口蓋の表皮を観音開きにして骨を露出した（シャムオペ群）。
２−エチルヘキサノール（東京化成株式会社製）を脱臭水に１／１０，０００の濃度に溶解し、１２〜１５週齢、Ｃ５７ＢＬ系、卵巣摘出後ごま油を留置した成熟メスマウス４匹の膣口に綿棒にて３０〜１００μｌ塗布した。このメスマウスを前記シャムオペ群および鋤鼻器官切除マウス群のマウスの単飼ケージにそれぞれ導入し、その後のオスマウスの行動を１５分間観察した。オスマウスがメスマウスを追尾する行動は、１５分間に鋤鼻器官切除マウス群では平均７回、シャムオペ群では１２回であった。結果を図３に示す。以上より、２−エチルヘキサノールが鋤鼻器系を介する性フェロモンの一種であることが示唆された。【００４１】
（実施例４）
２−エチルヘキサノール（シグマアルドリッチ社製）およびウンデカン（シグマアルドリッチ社製）をそれぞれ脱臭水に１／１０，０００の濃度に溶解し、１０週齢、Ｃ５７ＢＬ６−Ｊ系、卵巣摘出した成熟メスマウス６匹の膣口に綿棒にて３０〜１００μｌ塗布した。このメスマウスを１０週齢、Ｃ５７ＢＬ６−Ｊ系の成熟オスマウス６匹の単飼ケージにそれぞれ導入し、その後のオスマウスの行動を３０分間観察した。オスマウスのメスマウスに対する乗駕行動は平均約１２回であった。結果を図４に示す。【００４２】
（比較例２）
実施例４と異なる日に、実施例４で使用したメスマウス６匹の膣口に綿棒にて蒸留水を３０〜１００μｌ塗布した。このメスマウスを実施例４で使用したオスマウスの単飼ケージにそれぞれ導入し、その後のオスマウスの行動を１５分間観察した。オスマウスのメスマウスに対する乗駕行動は平均約７回であった。結果を図４に示す。
１−ヨード−２−メチルウンデカンはオスマウスのメスマウスに対する追尾行動の増加は生じるものの、乗駕行動を含む性行動の増加は観察されない。しかしながら、本発明で使用する２−エチルヘキサノールおよびウンデカンは、投与により乗駕行動を含む性行動の増加が認められ、１−ヨード−２−メチルウンデカンを凌駕する優れた作用を持つことが示唆された。【００４３】
（実施例５）
２−エチルヘキサノール（シグマアルドリッチ社製）およびウンデカン（シグマアルドリッチ社製）をそれぞれ脱臭水に１／１０，０００の濃度に溶解した交配誘引剤１０ｍｌをペーパータオルに染み込ませて交配誘引剤含有タオルを調製し、これを直径１．５ｍの円形容器の端に設置した。
一方、蒸留水１０ｍｌをペーパータオルに染み込ませて蒸留水含有タオルを調製し、これを前記円形容器の中心を基準に前記交配誘引剤含有タオルと対向する端に設置した。
１０週齢、Ｃ５７ＢＬ６−Ｊ系、成熟オスマウスをこのケージ内に導入し、このオスマウスの行動を１５分間観察した。実験は４匹のマウスについて１匹ずつ行った。
オスマウスが蒸留水含有タオルの匂いをかいだ回数が平均約１２回だったのに対し、交配誘引剤含有タオルの匂いをかいだ回数は平均約１６回と、有意に多かった。結果を図５に示す。
この結果から、２−エチルヘキサノールおよびウンデカンを用いてオープンフィールドにおけるネズミ類の捕獲効率の向上が示唆される。【００４４】
本発明は２０１１年１０月３日に出願された日本国特許出願２０１１−２１９１１１号に基づく。本明細書中に日本国特許出願２０１１−２１９１１１号の明細書、特許請求の範囲、図面全体を参照として取り込むものとする。
【産業上の利用可能性】
【００４５】
本発明によれば、簡便、安価かつ安全にマウスの交配を誘引することができる。このため、繁殖力の弱いマウスに対して交配確率を増加して繁殖力を向上させ、または農場や牧場などのネズミ類の被害の多い場所では、ネズミ類の捕獲効率を向上させることができる。
【図１】
2013051562.tif 000003
【図２】
2013051562.tif 000004
【図３】
2013051562.tif 000005
【図４】
2013051562.tif 000006
【図５】
2013051562.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】平成25年4月23日(2013.4.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２，３−ブタンジオール  ジアセテートを含有するマウスの交配誘引剤。
【請求項２】
２，３−ブタンジオール  ジアセテートを用いることを特徴とする、マウスの交配促進方法。
【請求項３】
２，３−ブタンジオール  ジアセテートを含む部材をネズミ類捕獲装置に配設することを特徴とする、ネズミ類の捕獲方法。
【請求項４】
２，３−ブタンジオール  ジアセテートと共に、２−エチルヘキサノールおよび／またはウンデカンを含有する、請求項１記載の交配誘引剤。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
技術分野
［０００１］
本発明は、２，３−ブタンジオール  ジアセテートを含有するマウスの交配誘引剤、前記化合物をメスマウスに使用したマウスの交配促進方法およびネズミ類の捕獲方法に関する。
背景技術
［０００２］
マウスやラットなどのネズミ類は、穀物を食い荒らし、ペストをはじめとする種々の伝染病を媒介する。また、近年では、ネズミ類による電気配線への噛み付きが停電や火事の原因ともなっている。このようなネズミによる害を防止するため、ネズミの駆除を目的とする齧歯動物用フードを用いた捕獲器が開発され、シーズニングオイルや海藻類を使用するものの他、米糠や米糠由来成分を配合した齧歯動物用誘引・喫食性向上剤が開発されている（特許文献１）。
［０００３］
また、性誘引剤を使用して害虫駆除を駆除する方法も提案されている（特許文献２）。フェロモンは同種の動物どうしがコミュニケーションをとるために体外へ放出する化学物質の総称であり、異性を互いに引きよせるなど、繁殖行動の際に重要な役割を果たす。特許文献２では、ミカンヒメコナカイガラムシのフェロモンとして２，２−ジメチル−３−（１−メチルエテニル）シクロブタンメチル３−メチル−３−ブテネートを特定し、これを性誘引剤として使用することを提案している。なお、前記化合物は、ミカンヒメコナカイガラムシ未交尾雌成虫を接種したカボチャの雰囲気から抽出され、ミカンヒメコナカイガラムシ雄成虫に対する性誘引活性を指標として選択された化合物である。
［０００４］
フェロモンは、種特異性が高い。マウスに関するフェロモンとして、性成
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
を目的とする。
［００１４］
また、このような交配誘引剤を使用したネズミ類の捕獲方法やマウスの交配促進方法を提供することを目的とする。
課題を解決するための手段
［００１５］
本発明者らは、マウスのフェロモン様化合物について検索したところ、エストロジェンによって発情させたメスマウスが、尿中に２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートを分泌することを見いだした。これらの化合物をメスマウスに塗布するとオスマウスによる追尾行動が増加した。上記化合物は揮発性であるため、おとり食物などに混練してネズミ捕獲装置内に収納すればネズミを捕獲しうる。上記化合物は、オスマウスの鋤鼻器官を切除すると増加していた追尾行動量が減少するため、鋤鼻器官を介して行動や内分泌系を制御する交配誘引剤として作用する。
［００１６］
すなわち、本発明は、２，３−ブタンジオール  ジアセテート単独、または、２，３−ブタンジオール  ジアセテートに更に２−エチルヘキサノールおよび／またはウンデカンを含有するマウスの交配誘引剤を提供するものである。
［００１７］
また本発明は、２，３−ブタンジオール  ジアセテートを用いることを特徴とする、マウスの交配促進方法を提供するものである。
［００１８］
また本発明は、２，３−ブタンジオール  ジアセテートを含む部材をネズミ類捕獲装置に配設することを特徴とする、ネズミ類の捕獲方法を提供するものである。
発明の効果
［００１９］
本発明によれば、新規なマウスの交配促進剤を提供することができる。
また、本発明によればメスマウスに前記交配促進剤を塗布することでオスマウスの追尾行動を誘引できるため、マウスの交配機会を増加することができる
本発明の交配促進剤は、これを他の給餌と混練することでネズミ類の捕獲
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
装置に使用するおとり食物として使用することができる。
図面の簡単な説明
［００２０］
［図１］実施例１の結果を示す図である。卵巣摘出手術後にエストラジオール１７βを投与したメスマウスの尿のＧＣ−ＭＳクロマトグラムと、非投与群のメスマウスの尿のＧＣ−ＭＳクロマトグラムである。
［図２］実施例２、比較例１の結果を示す図である。卵巣を摘出したメスマウスに、２−エチル−１−ヘキサノールの１／１０，０００溶液を塗布し（実施例２）、または脱臭水を塗布し（比較例１）、オスマウスの単飼ケージに導入した際の１５分間の雄マウスの追尾回数を示す。
［図３］実施例３の結果を示す図である。鋤鼻器官切除マウス群とシャムオペ群とを調製し、メスマウスへの追尾行動を観察した結果を示す。
［図４］実施例４、比較例２の結果を示す図である。２−エチルヘキサノールとウンデカンとの混合物を卵巣摘出した成熟メスマウスに塗布し、成熟オスマウスの行動を観察した結果を示す（実施例４）。蒸留水を塗布した比較例２も同様に観察した。
［図５］実施例５の結果を示す図である。２−エチルヘキサノールとウンデカンとの混合物をタオルに含浸して交配誘引剤含有タオルとし、成熟オスマウスの行動を観察した結果を示す（実施例５）。蒸留水を塗布した蒸留水含有タオルを対照として観察した。
発明を実施するための形態
［００２１］
本発明の第一は、２，３−ブタンジオール  ジアセテートを含有するマウスの交配誘引剤である。本発明の交配誘引剤は、更に２−エチルヘキサノールおよび／またはウンデカンを含有するものであってもよい。
卵巣は、性ホルモンであるエストロジェンとプロゲステロンとを分泌する組織である。後記する実施例に示すように、卵巣を摘出したメスマウス群と、卵巣摘出後にエストロジェンを投与したメスマウス群とからそれぞれの尿を採取して成分を比較すると、エストロジェン投与群に特異な成分として２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセ
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
テートとが見出された。上記化合物の希釈液をメスマウスに塗布してオスマウスの単飼ケージに投入すると、オスマウスによる追尾行為が増加することが判明した。マウスの嗅覚系は、主嗅覚系と鋤鼻系とからなり、フェロモンは鋤鼻系で認識されると考えられている。オスマウスの鋤鼻器官を摘出すると前記追尾行為が減少したので、上記化合物は、オスマウスの鋤鼻器官で認識されるフェロモンの１種と考えられる。
［００２２］
本発明の交配誘引剤は、２，３−ブタンジオール  ジアセテートを単独で使用してもよく、２−エチルヘキサノールやウンデカンを混合して使用してもよい。２，３−ブタンジオール  ジアセテート以外の化合物は市販されており、入手が容易である。本発明の特徴は、このような入手が容易な化合物がマウスのフェロモンであることを見出した点にある。これにより、当該化合物を交配誘引剤として広範囲に使用することができる。しかも、本発明の交配誘引剤を構成する上記化合物はいずれも揮発性成分であるため、オスマウスは本発明の交配誘引剤に直接アクセスすることなく、雰囲気を介して認識することができる。このため、本発明の交配誘引剤に直接接触する以外の用途にも、本発明の交配誘引剤を使用することができる。
［００２３］
メスマウスに直接塗布する場合には、上記化合物の１×１０−３〜１×１０−５倍、より好ましくは３×１０−３〜８×１０−４倍、特に好ましくは５×１０−３〜５×１０−４倍の希釈液を交配誘引剤として使用する。この範囲で十分にオスマウスに認識され、交配誘引効果を発揮しうるからである。希釈液は、上記化合物を水に溶解して調製することができる。その他、上記化合物の安定性を確保でき、かつ交配誘引剤としての効果を維持しうる種々の成分を配合し、乳剤、懸濁液、軟膏などに調製してもよい。たとえば、上記化合物を予め少量のエタノール、アセトン、ジメチルスルホキシド、ゴマ油などに溶解し、ついで水を添加して上記濃度の希釈液を調製することができる。水とともに乳化剤を添加すれば、乳剤を調製することもできる。
［００２４］
本発明の第二は、２，３−ブタンジオール  ジアセテートを用いることを特徴とする、マウスの交配促進方法である。マウスやラットは医学研究領域
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
その他で多用される小動物であるが、系統のなかには繁殖能力の弱い系統も存在するため、交配を促進することで繁殖率を向上させることができる。なお、本発明において「２，３−ブタンジオール  ジアセテートを用いる」とは、塗布その他によってメスマウスに投与する態様の他、いずれかの方法でメスマウスに効果を及ぼす場合を含む。
［００２５］
前記したように、２，３−ブタンジオール  ジアセテートは、エストロジェンによって偽発情状態を誘導されたメスマウスの尿に出現する成分であり、フェロモンの１種である。ここに、フェロモンは、リリーサーフェロモンとプライマーフェロモンとに大別される。リリーサーフェロモンとは、同種他個体に直接的な行動を引き起こすフェロモンと定義され、フェロモンの効果は短時間に起こりすぐ行動をひきおこすものである。また、プライマーフェロモンとは、同種他個体の生理過程に影響し、間接的に個体の発達や生殖機能などに効果を与えるフェロモンと定義され、効果は比較的長時間に持続し、影響はホルモンなどの変化により二次的なものとなる。本発明で使用する２，３−ブタンジオール  ジアセテートは、これらをメスマウスに塗布するとオスマウスによる追尾行動が増加するため、少なくともリリーサーフェロモンとしての作用を有する。
［００２６］
一方、２−エチルヘキサノール、ウンデカンおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートからなる群から選択される少なくとも１種は、エストロジェン投与によって尿中に排出された成分であり、エストロジェンは性周期に関連するホルモンである。このため、上記化合物は性周期に関連して排出される成分といえる。マウスにおけるプライマーフェロモンの作用としては、性周期の同調作用が知られている。複数のメスマウスを集団飼育する際に、ケージ内に上記化合物を導入してメスマウスの性周期を同調させて交配管理を行うことで繁殖力を増加させることができる。
［００２７］
交配促進方法に使用する濃度は、一般には、上記化合物を１×１０−３〜１×１０−５倍、より好ましくは３×１０−３〜８×１０−４倍、特に好ましくは５×１０−３〜５×１０−４倍に希釈して使用する。希釈溶媒は、水でもよいがフ
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
ェロモンとしての効果を損なわない他の溶媒その他を配合してもよい。上記濃度に希釈した場合の使用量は１〜１０００μｌ、好ましくは５〜５００μｌ、より好ましくは１０〜３００μｌである。
［００２８］
本発明において、マウスの交配促進のために用いる態様としては、２，３−ブタンジオール  ジアセテートを含む部材をケージのいずれかに載置したり、このようなケージのいずれかに上記化合物を塗布したり、または上記化合物を直接メスマウスに塗布する方法などがある。
［００２９］
ケージに上記化合物を含む部材を載置して複数のメスマウスを飼育すれば、上記化合物がケージ内の雰囲気に揮散してメスマウスの性周期を同調させることができる。その他、ケージ内に上記化合物を揮散することができれば、上記態様に限定されるものではない。したがって、いずれかのメスマウスに上記化合物を塗布した場合にも、他のメスマウスの性周期を同調させることができる。
［００３０］
また、オスマウスと上記化合物を塗布したメスマウスとをケージで飼育すると、オスマウスによる追尾行動が増加するため交配機会が増加する。本発明で使用する上記化合物は揮発性であるため、メスマウスに直接塗布せず、ケージに上記化合物を含む部材を載置したリケージ自体やケージ内の部材のいずれかに上記化合物を塗布することでオスマウスによる追尾行動が促進される。ただし、より効果的にはメスマウスに上記化合物を塗布する態様である。追尾行動の促進により交配機会が増加し、繁殖率を増加させることができる。
［００３１］
本発明の第三は、２，３−ブタンジオール  ジアセテートを含む部材をネズミ類捕獲装置に配設することを特徴とする、ネズミ類の捕獲方法である。「２，３−ブタンジオール  ジアセテートを含む部材」としては、ネズミ類をネズミ類捕獲装置に誘導するためのおとり食物であってもよく、その他、水、紙基材、布基材、パルプ基材、樹脂基材、無機基材、これらの複合基材、その他の媒体に、２，３−ブタンジオール  ジアセテートを含浸その他の方法で含ませた部材を広く使用することができる。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
［００３２］
ネズミ類は、夜行性であるためコミュニケーションには、視覚情報より化学物質が重要な役割を果たしている。フェロモンは、このようなケミカルコミュニケーションに関与する物質のひとつである。ネズミ類捕獲装置にフェロモンを含む部材を配設すると、ネズミ類がこれを媒体としてケミカルコミュニケーションを行うため捕獲装置内に誘導される。前記２−エチルヘキサノールおよび２，３−ブタンジオール  ジアセテートをメスマウスに塗布するとオスマウスの追尾行動が誘発される。上記化合物を含む部材をネズミ類捕獲装置内に載置すると、前記部材から揮散するフェロモンに誘発されてオスマウスが前記部材を追尾し、ネズミ類捕獲装置内に誘導される。
［００３３］
ネズミ類捕獲装置としては、ネズミ類の侵入口があり、侵入したネズミ類が装置内に捕獲された状態で維持しうるものを広く使用することができる。たとえば、ネズミ類の侵入口から誘導されたネズミ類が底部の粘着層によって捕獲される態様のネズミ類捕獲装置の場合には、２，３−ブタンジオールジアセテートを含有させた粘着層を使用してもよい。
［００３４］
本来、ネズミ類捕獲装置は、ネズミ類を捕獲することが目的であり飼育を目的としていない。このため、本来、おとり食物などの給餌を配置する必要がない。本発明によれば、２，３−ブタンジオール  ジアセテートを含む部材を使用することで、芋、チーズ、ソーセージなどの生の食品を使用する場合に発生する腐敗などの問題を回避することができる。
なお、本発明では、毒物などを使用しないため、フィールドにおいて、絶滅危惧種や希少動物とされているネズミ類の捕獲を行うこともできる。
実施例
［００３５］
次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は何ら本発明を制限するものではない。
［００３６］
（実施例１）
マウスは、ＳＰＦ動物室で１４時間点灯、１０時間消灯の照明条件（０５００〜１９００時）、室温２３±３℃の環境下で飼育し、固型飼料（ラボＭＲストック、日本農産工業、神奈川）と水を自由に摂取させたものを各実施
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
例及び比較例に使用した。
上記により飼育した１２〜１５週齢のＣ５７ＢＬ系メスマウスの８匹から卵巣を摘出した。前記卵巣摘出マウスの内４匹には、摘出手術直後からエストラジオール１７βを０．４ｍｇ／ｍｌでごま油に溶解した液を充填したシラスコンチューブ（内径０．２ｃｍ、全長１ｃｍ）を留置した。留置より１週間後、プロジェステロン０．４ｍｇを皮下投与し、その３０分後に３００μｌの尿を採取した（エストラジオール１７β投与群）。
一方、前記卵巣摘出マウスの内４匹には、摘出手術直後からごま油を充填したシラスコンチューブ（内径０．２ｃｍ、全長１ｃｍ）を留置した。留置より１週間後、３００μｌの尿を採取した（エストラジオール１７β非投与
【手続補正書】
【提出日】平成26年4月21日(2014.4.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図３】
2013051562.tif 000008
【国際調査報告】
2013051562.tif 000009
2013051562.tif 000010
2013051562.tif 000011
2013051562.tif 000012
2013051562.tif 000013