(57)【要約】  ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つ、並びに、ＰＤＥ４阻害薬を有効成分として併用する、ＮＡＳＨの予防／改善または治療薬で、ＮＡＳＨの安全で効果の高い予防／改善または治療薬およびその使用方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つ、並びに、ホスホジエステラーゼ４阻害薬を有効成分として併用する、非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善または治療薬。
【請求項２】
ホスホジエステラーゼ４阻害薬が、式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物を有効成分として併用する、請求項１記載の予防／改善または治療薬：
【化１】
2009154230.tif 000008
式（Ｉ）中、
Ｒ１は、
（１）カルボキシまたは保護カルボキシ；
（２）−ＣＯＮＲ５Ｒ６；
（３）ヒドロキシまたは低級アルコキシ；
（４）アミノ、シクロ（低級）アルキルアミノまたは低級アルコキシが任意に置換するモノ−もしくはジ（低級）アルキルアミノ；
（５）トリハロ（低級）アルキル；
（６）トリハロ（低級）アルキルスルホニルオキシまたはアリールスルホニルアミノ；
（７）置換または非置換低級アルキル；
（８）置換または非置換アリール；または
（９）置換または非置換へテロ環状基であり、
Ｒ２は、Ｒ７または−（Ａ１）ｐ−Ｘ−Ａ２−Ｒ７であり［ここで、ｐは０または１であり、Ａ１は、（Ｃ１〜Ｃ２）アルキレンまたは−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ａ２は、−（ＣＨ２）ｎ−（ここでのｎは１ないし６の整数）または−（ＣＨ＝ＣＨ）ｍ−（ここでのｍは１ないし３の整数）であり、Ｘは、単結合、−Ｏ−、−ＮＲ８−（Ｒ８は水素または低級アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲ９）−（Ｒ９は置換または非置換のＮ−含有へテロ環状基）またはヒドロキシ（Ｃ１〜Ｃ２）アルキレンであり、Ｒ７は、水素；置換または非置換アリール；置換または非置換へテロ環状基；カルボキシ、保護カルボキシまたはＣＯＮＲ１０Ｒ１１；アシルまたはハロカルボニル；シアノ；アミノ、保護アミノ、またはモノ−もしくはジ（低級）アルキルアミノ；ヒドロキシ、アリールオキシ、アシルオキシまたはヒドロキシもしくはアシルオキシが任意に置換する低級アルキル；低級アルキルチオ、低級アルキルスルフィニルまたは低級アルキルスルホニル；または−Ｏ−Ｒ１２である。］、
または、上記Ｒ１およびＲ２は、一緒になって低級アルキレンまたは低級アルケニレン基を形成し、該基はアミノまたはスルホニルが任意に中断しており、またベンゼン環と任意に縮合しており、また低級アルキル、ヒドロキシ、オキソおよび低級アルコキシからなる基が任意に置換している；
Ｒ３は、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換へテロ環状基であり、
Ｒ４は、水素、ハロゲン、シアノ、カルバモイル、アシル、チオシアナート、低級アルキルチオ、低級アルケニル、ヒドロキシル（低級）アルキル、トリハロ（低級）アルキルまたは低級アルキルである；
また、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１０およびＲ１１は、それぞれ独立して水素、低級アルキルスルホニル、へテロ環状基、またはヒドロキシ、アルコキシ、スルホ、カルボキシ、保護カルボキシもしくは−Ｒ１７が任意に置換する低級アルキル；あるいは、Ｒ５とＲ６またはＲ１０とＲ１１はそれらが結合する窒素原子と一緒になって、Ｎ−含有ヘテロ環状基であり、Ｒ１２およびＲ１７は、それぞれ独立して、ヒドロキシ基の除去により保護もしくは非保護糖から誘導される基である；
【化２】
2009154230.tif 000009
式（II）中、
Ｒ１は、
（１）ハロゲン、シクロ（低級）アルキル、低級アルコキシ、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、シクロ（低級）アルキルオキシ、アリールオキシ、ヒドロキシイミノ、低級アルキルにより必要に応じて置換されているカルバモイルオキシ、または置換もしくは非置換のヘテロシクリル（ここで、該低級アルコキシは、シクロ（低級）アルキル、置換もしくは非置換のアリール、または置換もしくは非置換のヘテロアリールにより必要に応じて置換されている。）、により必要に応じて置換されている低級アルキル；
（２）シアノ、または、ハロゲンを有していてもよいアリールにより必要に応じて置換されているカルバモイル、により必要に応じて置換されている低級アルケニル；
（３）シクロ（低級）アルキル；
（４）アシル；
（５）シアノ；
（６）置換もしくは非置換のアリール；または
（７）置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、Ｒ５または−（Ａ１）ｐ−Ｘ−Ａ２−Ｒ５であり［ここで、ｐは、０または１であり、Ａ１は、（Ｃ１〜Ｃ２）アルキレンまたは−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ａ２は、二価の複素環式基、または−（ＣＨ２）ｎ−（ｎは１ないし６の整数）もしくは−（ＣＨ＝ＣＨ）ｍ−（ｍは１ないし３の整数）であり、Ｘは、単結合、−ＣＨ２−または−Ｏ−であり、Ｒ５は、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、シアノ、アシル、カルボキシ、保護されたカルボキシ、ヒドロキシイミノ（低級）アルキル、または−ＣＯＮＲ６Ｒ７［ここでのＲ６は、水素または低級アルキルであり、Ｒ７は、水素または−（ＣＨ２）ｑ−Ｙ−Ｒ８（ここでのｑは、０、１、２または３であり、Ｙは、結合、−Ｏ−、または−ＣＨ（Ｒ９）−ＣＨ２−（ここでのＲ９は、低級アルキル、カルボキシまたは保護されたカルボキシである。）であり、Ｒ８は、低級アルキル；置換もしくは非置換のアリール；置換もしくは非置換のヘテロアリール；置換もしくは非置換のヘテロシクリル；または置換もしくは非置換のシクロ（低級）アルキルである。）であるか、または、Ｒ６及びＲ７は、これらが結合する窒素原子とともに、置換もしくは非置換のアザヘテロシクリル基を示す。］である。］、
Ｒ３は、
（１）置換もしくは非置換のアリール；
（２）置換もしくは非置換のヘテロアリール；
（３）置換もしくは非置換のヘテロシクリル；
（４）シクロ（低級）アルキル；または
（５）（ａ）シクロ（低級）アルキル、（ｂ）置換もしくは非置換のヘテロシクリル、（ｃ）置換もしくは非置換のアリール、または（ｄ）置換もしくは非置換のヘテロアリール、により必要に応じて置換されている低級アルキルであり、
Ｒ４は、低級アルキルである。
【請求項３】
ω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩およびエステルが、イコサペント酸、ドコサヘキサエン酸、α−リノレン酸、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物である請求項１または２に記載の予防／改善または治療薬。
【請求項４】
式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物が、６−｛４−［４−（アミノカルボニル）フェニル］−７−エチル−２−メチルピロロ［１，２−ｂ］ピリダジン−３−イル｝ヘキサン酸、４−（５−ブロモ−３−ピリジル）−１−エチル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−カルボニトリル、２Ｅ）−３−［１−エチル−４−（５−メチル−３−ピリジル）−６−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］アクリル酸、（２Ｅ）−３−［４−（５−ブロモ−３−ピリジル）−１−エチル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］アクリル酸、（２Ｅ）−３−［６−［（シクロヘキシルメトキシ）メチル］−１−エチル−４−（５−メチル−３−ピリジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］アクリル酸、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物である請求項１ないし３のいずれか1項に記載の予防／改善または治療薬。
【請求項５】
ω３多価不飽和脂肪酸、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物と、式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物との配合剤である請求項１ないし４のいずれか１項に記載の予防／改善または治療薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患、特に非アルコール性脂肪肝炎の予防／改善または治療薬およびその使用方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
ウイルス性肝疾患、自己免疫疾患性肝疾患、ヘマクロトーシスやWilson病等の代謝性肝疾患などを除外して、飲酒歴のない人に発生する単純脂肪肝から脂肪性肝炎、線維症、肝硬変までの肝障害を含む疾患群は、一括して非アルコール性脂肪性肝疾患（non-alcoholic fatty liver desease：以下、ＮＡＦＬＤと記す）と定義される。ＮＡＦＬＤは、さらに、肝生検（病理所見）により、一般に予後良好と考えられている単純性脂肪肝と、予後不良な非アルコール性脂肪肝炎（non-alcoholic steatohepatitis：以下、ＮＡＳＨと記す）とに分類され、ＮＡＳＨは、ＮＡＦＬＤの重症型と考えられている。肝生検によりＮＡＳＨと判定される炎症、脂肪化、線維化ないし肝硬変、肝がんの病態は、他因と同じであり、アルコール性肝障害、ウイルス性肝炎や薬剤性肝障害の否定できる肝炎の多くがＮＡＳＨの病態であろうと推定される（非特許文献１参照）。【０００３】
米国では、人口の２０％がＮＡＦＬＤ、３％がＮＡＳＨであるとされる。日本でも一般診療においても比較的頻繁に遭遇する疾患であり、検診受診者におけるＮＡＦＬＤの頻度は８％であり、ＮＡＳＨの頻度は少なくとも成人の０．５〜１％と推定される。日本では、ＢＭＩ≧２５の成人肥満者が、男性で１３００万人、女性で１０００万人いることから、国内のＮＡＦＬＤは５００〜６００万人、ＮＡＳＨは約３０〜５０万人と推定される。また、ＮＡＦＬＤでのメタボリックシンドローム（以下、ＭｅｔＳと記す）診断基準に基づく、脂質代謝異状の合併頻度は約５０％、高血圧の合併頻度は約３０％、高血糖の合併頻度は約３０％、ＭｅｔＳの合併頻度は約４０％であり（非特許文献１参照）、生活習慣病の増加に伴い、今後、ＮＡＳＨの症例数の増加ならびに低年層への拡大が予想される。さらに肝炎を経て一部は星状細胞活性化による肝硬変、あるいは肝がんへの進行が臨床的な問題である。【０００４】
日本肝臓学会の「ＮＡＳＨ・ＮＡＦＬＤの診察ガイド」（非特許文献１）には、種々の病態改善を目指したＮＡＳＨの治療方法が試みられ、その有効性が報告されているが、確立した治療法がないのが現状であることが記載されている。具体的には、ビグアナイド薬（メトホルミン）、ＰＰＡＲ−γアゴニストのチアゾリジン誘導体（ピオグリタゾン、ロシグリタゾン）などのインスリン抵抗性改善薬；ビタミン、ベタイン（コリン誘導体）、Ｎ−アセチルシステインなどの抗酸化剤；フィブラート系薬剤（ＰＰＡＲ−αアゴニスト）、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害薬（スタチン）、プロブコールなどの高脂血症治療薬；ウルソデオキシコール酸、ポリエンホスファチジルコリン（ＥＰＬ）などの肝庇護剤;ロサルタンなどのアンジオテンシンII受容体拮抗薬などが記載される。【０００５】
イコサペント酸（以下、ＥＰＡ）ないし魚油のＮＡＳＨ・ＮＡＦＬＤに対する投与の報告例がある。たとえば、ω３多価不飽和脂肪酸（以下、ＰＵＦＡｓと記す）、具体的にはＥＰＡエチル（以下、ＥＰＡ−Ｅと記す）とドコサヘキサエン酸エチル（以下、ＤＨＡ−Ｅと記す）との２種混合系によるＮＡＦＬＤ患者における肝炎の改善（非特許文献２参照）がある。また、Tanakaらの最新の報告では、高純度ＥＰＡ−Ｅを２７００ｍｇ／日、１２ヶ月間投与し、アスパルテートアミノトランスフェレース(以下、ＡＳＴと記す）、アラニンアミノトランスフェレース（以下、ＡＬＴと記す）酵素観察、炎症性サイトカイン、酸化ストレスマーカー評価ならびに投与観察期間後の肝生検により、ＮＡＳＨを改善することが示される（非特許文献３参照）。【０００６】
ホスホジエステラーゼ４（以下、ＰＤＥ４と記す）阻害薬は、細胞内の環状アデノシン一リン酸（以下、ｃＡＭＰと記す）を特異的に分解するＰＤＥ４を阻害することでｃＡＭＰ濃度を上昇させ、免疫細胞の炎症性サイトカインの産生誘導を抑制する。種々のＰＤＥ４阻害薬が気管支喘息、潰瘍性大腸炎、アレルギー性皮膚炎や認知症等の治療剤として開発されている。ＰＤＥ４にはＰＤＥ４Ａ〜Ｄの４種類のアイソザイムが知られている。ＰＤＥ４Ｂはリポポリサッカライド（以下、ＬＰＳと記す）により誘導される白血球、単球およびマクロファージの腫瘍壊死因子α（以下、ＴＮＦαと記す）産生に関与しており、ＰＤＥ４Ｂノックアウトマウス由来の白血球ではＬＰＳ誘発ＴＮＦαの産生が低下している。一方、ＰＤＥ４Ｄノックアウトマウス由来の白血球ではＬＰＳ誘発ＴＮＦαの産生は野生型マウスと差がないことが明らかになっている。また、ＰＤＥ４Ｄは中枢神経において嘔吐に関わる部位に多く発現しており、ＰＤＥ４Ｄノックアウトマウスでは嘔吐の指標となる行動抑制が認められており、ＰＤＥ４阻害薬の副作用として嘔吐や嘔吐感が懸念されている。従って、嘔吐や嘔吐感の副作用の少ない抗炎症薬として、ＰＤＥ４Ｂに特異性が高い阻害薬が望まれている（非特許文献４参照）。【０００７】
後述の式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグは、in vitroにおいてＰＤＥ４阻害活性およびＴＮＦα産生抑制活性を有することから、ＰＤＥ４またはＴＮＦαが介在するとされる多種類の疾患名が羅列記載され（慢性炎症性疾患（例えば、関節リウマチ、変形性関節症、気腫、慢性細気管支炎、アレルギー性鼻炎など）、骨粗鬆症、移植による拒絶反応、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好酸球増加症、線維性疾患（例えば、嚢胞性線維症、肺線維症、肝線維症、腎線維症など）、（ウイルス性アルコール性、薬物誘発）急性及び劇症肝炎、脂肪肝（アルコール性及び非アルコール性脂肪肝炎）、慢性（ウイルス性及び非ウイルス性）肝炎、肝硬変、自己免疫性肝炎、膵炎、腎炎、内毒素性ショック、特定の自己免疫性疾患［例えば、強直性脊椎炎、自己免疫性脳脊髄炎、自己免疫性血液障害（例えば、溶血性貧血、再生不良性貧血、赤芽球癆、特発性血小板減少症など）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性軟骨炎、強皮症、ヴェグナー肉芽腫症、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎（ウィルソン病など）、重症筋無力症、特発性スプルー、自己免疫性炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病など）、内分泌性眼障害、グレーヴズ病、サルコイドーシス、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、若年性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、ライター症候群、非感染ブドウ膜炎、自己免疫性角膜炎（例えば、乾性角結膜炎、春季カタルなど）、間質性肺線維症、乾癬性関節炎など］、ＰＤＥ４酵素と関係している皮膚障害（例えば、乾癬及び他の良性または悪性の増殖性皮膚疾患、アトピー性皮膚炎、及びじんま疹）、神経変性障害（例えば、パーキンソン病及びアルツハイマー病）、急性及び慢性多発性硬化症、ガン悪液質、ウイルス感染、ＡＩＤＳ悪液質、血栓症、うつ病）、これらの疾患に対し有効性があるのではないかとの推測が記載されている。しかしながら、実際のＮＡＳＨ患者あるいはＮＡＳＨモデル動物での有効性の証明や具体的な使用態様についての記載はされていない（特許文献１および２参照）。【０００８】
薬剤併用系としては、ＮＡＳＨなどの脂肪肝の治療に、フィブラートまたはチアゾリジン誘導体と、ω３ＰＵＦＡｓとの併用をする提案がある（特許文献３参照）。この併用系では、フィブラート併用系におけるＰＰＡＲ−αの過剰活性、チアゾリジン誘導体併用系における肝毒性および基礎試験においてＰＰＡＲ−γは脂肪肝を悪化させる問題点を有する。ＮＡＦＬＤ・ＮＡＳＨ治療目的におけるω３ＰＵＦＡｓと他の薬剤との併用は上記特許文献１以外に知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開第２００４／０６３１９７号パンフレット
【特許文献２】国際公開第２００６／００４１８８号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２００７／０８１７７３号パンフレット
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】日本肝臓学会編「ＮＡＳＨ・ＮＡＦＬＤの診察ガイド」文光堂出版、２００６年８月２２日
【非特許文献２】Aliment Pharmacol Ther.，２００６年４月１５日，２３（８）：１１４３−５１
【非特許文献３】J Clin Gastroenterol，２００８年.，４２（４）：４１３−４１８
【非特許文献４】日本薬理学雑誌（Folia Pharmacol. Jpn.）、２００５年、１２６（２）：１２１−１２７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、ＮＡＦＬＤ、特にＮＡＳＨの予防／改善・治療ならびにさらに重篤な肝硬変／肝癌への進行を抑制するための、安全性が高く、有効性に優れ、使いやすい、ＮＡＳＨの予防／改善または治療薬およびその使用方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、ω３ＰＵＦＡｓとＰＤＥ４阻害薬とを併用すると、それぞれの単独投与時には見られなかった安全性や格別に顕著な効果を見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明で提供するＮＡＦＬＤ・ＮＡＳＨの予防／改善または治療薬は、有効成分としてω３ＰＵＦＡｓとＰＤＥ４阻害薬、好ましくはＰＤＥ４特異性の高い阻害薬、さらに好ましくはＰＤＥ４Ｂ特異性の高い阻害薬、特に下記式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、下記式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物とを含む。本発明の態様例を以下に示す。
（１）ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つ、並びに、ＰＤＥ４阻害薬を有効成分として併用するＮＡＳＨの予防／改善または治療薬。
（２）ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルがＥＰＡ、ＤＨＡ、α−リノレン酸、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物である上記（１）に記載の予防／改善または治療薬。
（３）前記ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルとして、ＥＰＡ−Ｅおよび／またはＤＨＡ−Ｅを含有する上記（１）に記載の予防／改善または治療薬。
（４）前記ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルとして、ＥＰＡ−Ｅを含有する上記（１）に記載の予防／改善または治療薬。【００１３】
（５）ＰＤＥ４阻害薬が、下記式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、下記式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物である上記（１）に記載の予防／改善または治療薬。
【化１】
2009154230.tif 000002
【００１４】
式（Ｉ）中、
Ｒ１は、（１）カルボキシまたは保護カルボキシ；（２）−ＣＯＮＲ５Ｒ６；（３）ヒドロキシまたは低級アルコキシ；（４）アミノ、シクロ（低級）アルキルアミノまたは低級アルコキシが任意に置換するモノ−もしくはジ（低級）アルキルアミノ；（５）トリハロ（低級）アルキル；（６）トリハロ（低級）アルキルスルホニルオキシまたはアリールスルホニルアミノ；（７）置換または非置換低級アルキル；（８）置換または非置換アリール；または（９）置換または非置換へテロ環状基であり、
Ｒ２は、Ｒ７または−（Ａ１）ｐ−Ｘ−Ａ２−Ｒ７であり［ここで、ｐは０または１であり、Ａ１は、（Ｃ１〜Ｃ２）アルキレンまたは−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ａ２は、−（ＣＨ２）ｎ−（ここでのｎは１ないし６の整数）または−（ＣＨ＝ＣＨ）ｍ−（ここでのｍは１ないし３の整数）であり、Ｘは、単結合、−Ｏ−、−ＮＲ８−（Ｒ８は水素または低級アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝ＮＲ９）−（Ｒ９は置換または非置換のＮ−含有へテロ環状基）またはヒドロキシ（Ｃ１〜Ｃ２）アルキレンであり、Ｒ７は、水素；置換または非置換アリール；置換または非置換へテロ環状基；カルボキシ、保護カルボキシまたはＣＯＮＲ１０Ｒ１１；アシルまたはハロカルボニル；シアノ；アミノ、保護アミノ、またはモノ−もしくはジ（低級）アルキルアミノ；ヒドロキシ、アリールオキシ、アシルオキシまたはヒドロキシもしくはアシルオキシが任意に置換する低級アルキル；低級アルキルチオ、低級アルキルスルフィニルまたは低級アルキルスルホニル；または−Ｏ−Ｒ１２である。］、
または、上記Ｒ１およびＲ２は、一緒になって低級アルキレンまたは低級アルケニレン基を形成し、該基はアミノまたはスルホニルが任意に中断しており、またベンゼン環と任意に縮合しており、また低級アルキル、ヒドロキシ、オキソおよび低級アルコキシからなる基が任意に置換している。【００１５】
Ｒ３は、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換へテロ環状基であり、Ｒ４は、水素、ハロゲン、シアノ、カルバモイル、アシル、チオシアナート、低級アルキルチオ、低級アルケニル、ヒドロキシル（低級）アルキル、トリハロ（低級）アルキルまたは低級アルキルである。
また、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１０およびＲ１１は、それぞれ独立して水素、低級アルキルスルホニル、へテロ環状基、またはヒドロキシ、アルコキシ、スルホ、カルボキシ、保護カルボキシもしくは−Ｒ１７が任意に置換する低級アルキル；あるいは、Ｒ５とＲ６またはＲ１０とＲ１１はそれらが結合する窒素原子と一緒になって、Ｎ−含有ヘテロ環状基であり、Ｒ１２およびＲ１７は、それぞれ独立して、ヒドロキシ基の除去により保護もしくは非保護糖から誘導される基である。【００１６】
【化２】
2009154230.tif 000003
【００１７】
式（II）中、
Ｒ１は、（１）ハロゲン、シクロ（低級）アルキル、低級アルコキシ、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、シクロ（低級）アルキルオキシ、アリールオキシ、ヒドロキシイミノ、低級アルキルにより必要に応じて置換されているカルバモイルオキシ、または置換もしくは非置換のヘテロシクリル（ここで、該低級アルコキシは、シクロ（低級）アルキル、置換もしくは非置換のアリール、または置換もしくは非置換のヘテロアリールにより必要に応じて置換されている。）、により必要に応じて置換されている低級アルキル；（２）シアノ、または、ハロゲンを有していてもよいアリールにより必要に応じて置換されているカルバモイル、により必要に応じて置換されている低級アルケニル；（３）シクロ（低級）アルキル；（４）アシル；（５）シアノ；（６）置換もしくは非置換のアリール；または（７）置換もしくは非置換のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、Ｒ５または−（Ａ１）ｐ−Ｘ−Ａ２−Ｒ５であり［ここで、ｐは、０または１であり、Ａ１は、（Ｃ１〜Ｃ２）アルキレンまたは−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ａ２は、二価の複素環式基、または−（ＣＨ２）ｎ−（ｎは１ないし６の整数）もしくは−（ＣＨ＝ＣＨ）ｍ−（ｍは１ないし３の整数）であり、Ｘは、単結合、−ＣＨ２−または−Ｏ−であり、Ｒ５は、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシ、シアノ、アシル、カルボキシ、保護されたカルボキシ、ヒドロキシイミノ（低級）アルキル、または−ＣＯＮＲ６Ｒ７［ここでのＲ６は、水素または低級アルキルであり、Ｒ７は、水素または−（ＣＨ２）ｑ−Ｙ−Ｒ８（ここでのｑは、０、１、２または３であり、Ｙは、結合、−Ｏ−、または−ＣＨ（Ｒ９）−ＣＨ２−（ここでのＲ９は、低級アルキル、カルボキシまたは保護されたカルボキシである。）であり、Ｒ８は、低級アルキル；置換もしくは非置換のアリール；置換もしくは非置換のヘテロアリール；置換もしくは非置換のヘテロシクリル；または置換もしくは非置換のシクロ（低級）アルキルである。）であるか、または、Ｒ６及びＲ７は、これらが結合する窒素原子とともに、置換もしくは非置換のアザヘテロシクリル基を示す。］である。］、
Ｒ３は、（１）置換もしくは非置換のアリール；（２）置換もしくは非置換のヘテロアリール；（３）置換もしくは非置換のヘテロシクリル；（４）シクロ（低級）アルキル；または（５）（ａ）シクロ（低級）アルキル、（ｂ）置換もしくは非置換のヘテロシクリル、（ｃ）置換もしくは非置換のアリール、または（ｄ）置換もしくは非置換のヘテロアリール、により必要に応じて置換されている低級アルキルであり、
Ｒ４は、低級アルキルである。【００１８】
式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体および式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体に包含することを意図する化合物についての様々な定義、およびその適切な例及び例示、および好適な態様、例えば置換基、製薬学上許容しうるその塩、プロドラッグ、鏡像異性体またはジアステレオ異性体、溶媒和物、放射性標識誘導体、投与方法・量・経路、剤形、添加剤などの態様は、国際公開第２００４／０６３１９７号パンフレットあるいは国際公開第２００６／００４１８８号パンフレットの記載を参照することができる。式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグについての上記具体的態様は、国際公開第２００４／０６３１９７号パンフレットに記載された説明を引用することにより、本願明細書に記載されているものとし、また、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグについての上記具体的態様は、国際公開第２００６／００４１８８号パンフレットに記載された説明を引用することにより、本願明細書に記載されているものとし、各々についてここでの詳細な説明を省略する。【００１９】
（６）ＰＤＥ４阻害薬が、６−｛４−［４−（アミノカルボニル）フェニル］−７−エチル−２−メチルピロロ［１，２−ｂ］ピリダジン−３−イル｝ヘキサン酸（以下、化合物１と記す）、４−（５−ブロモ−３−ピリジル）−１−エチル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−カルボニトリル（以下、化合物２と記す）、（（２Ｅ）−３−［１−エチル−４−（５−メチル−３−ピリジル）−６−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］アクリル酸（以下、化合物３と記す）、２Ｅ）−３−［４−（５−ブロモ−３−ピリジル）−１−エチル−６−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］アクリル酸（以下、化合物４と記す）、（２Ｅ）−３−［６−［（シクロヘキシルメトキシ）メチル］−１−エチル−４−（５−メチル−３−ピリジル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−５−イル］アクリル酸（以下、化合物５と記す）、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物である上記（１）に記載の予防／改善または治療薬。【００２０】
（７）ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルがＥＰＡ−Ｅおよび／またはＤＨＡ−Ｅであり、かつ、ＰＤＥ４阻害薬が化合物１ないし５、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物である上記（１）に記載の予防／改善または治療薬。
（８）ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルがＥＰＡ−Ｅであり、かつ、ＰＤＥ４阻害薬が化合物１ないし３、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物である上記（１）に記載の予防／改善または治療薬。【００２１】
（９）ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つおよび式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物を併用した治療効果が併用の場合と同じ用量のω３ＰＵＦＡｓおよび式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体または製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物を単独で用いて得られる治療効果の和よりも大きい上記（１）ないし（８）のいずれかに記載の予防／改善または治療薬。【００２２】
（１０）ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物およびＰＤＥ４阻害薬から選ばれる少なくとも１つの化合物の配合剤である上記（１）ないし（９）のいずれかに記載の予防／改善または治療薬。
（１１）３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物を有効成分として含有する上記（１）ないし（９）のいずれかに記載の予防／改善または治療薬であって、ＰＤＥ４阻害薬を投与される患者のＮＡＳＨの予防／改善または治療薬。
（１２）ＰＤＥ４阻害薬から選ばれる少なくとも１つを有効成分として含有する上記（１）ないし（９）のいずれかに記載の予防／改善または治療薬であって、ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つを投与される患者のＮＡＳＨの予防／改善または治療薬。【００２３】
（１３）ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物を、ＰＤＥ４阻害薬を投与される患者に投与することで、ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つ、並びに、ＰＤＥ４阻害薬から選ばれる少なくとも１つを併用する上記（１）ないし（１１）のいずれかに記載の予防／改善または治療薬。
（１４）ＰＤＥ４阻害薬から選ばれる少なくとも１つを、ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物を投与される患者に投与することで、ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つ、並びに、ＰＤＥ４阻害薬から選ばれる少なくとも１つを併用する上記（１）ないし（１０）および（１２）のいずれかに記載の予防／改善または治療薬。【００２４】
（１５）ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物およびＰＤＥ４阻害薬から選ばれる少なくとも１つの別個の製剤からなるキットである上記（１）ないし（９）のいずれかに記載の予防／改善または治療薬。
（１６）有効成分として、肝庇護剤、血糖降下剤、高脂血症治療薬、降圧剤、抗酸化剤、抗炎症剤からなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物をさらに併用する上記（１）ないし（１５）のいずれかに記載の予防／改善または治療薬。【００２５】
（１７）ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つを投与する工程、およびＰＤＥ４阻害薬を投与する工程を含む、ＮＡＳＨを予防／改善または治療するための方法。
（１８）前記２つの投与工程を同時に行う上記（１７）に記載の方法。
（１９）前記２つの投与工程を別々の時期に行う上記（１７）に記載の方法。
（２０）画像検査（超音波、ＣＴ、ＭＲＩなど）、肝生検あるいは血漿中の繊維化マーカー（IV型コラーゲン、ヒアルロン酸、Tissue Inhibitor of Metalloproteinases-1（以下、ＴＩＭＰ−１と記す）等）により測定した肝繊維化の程度、血清ＡＳＴやＡＬＴ、ＡＳＴ／ＡＬＴ比、アディポネクチン、ＴＮＦα、インターロイキン（以下、ＩＬと記す）、高感度Ｃ反応性蛋白（以下、ＣＲＰと記す）、好中球数や血中酸化ストレスマーカー（フェリチン、チオレドキシン）からなる群から選ばれる少なくとも１つの値を測定してその値が正常範囲内になるまで、投与を継続する上記（１７）に記載の方法。【００２６】
（２１）ＰＤＥ４阻害薬が、式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物である上記（１７）ないし（２０）のいずれかに記載の方法。
（２２）ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つを投与する工程、および式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物を投与する工程を含む、式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物による副作用を軽減するための方法。
（２３）前記２つの投与工程を同時に行う上記（２２）に記載の方法。
（２４）前記２つの投与工程を別々の時期に行う上記（２２）に記載の方法。
（２５）嘔吐あるいは嘔吐感が現れた場合に、嘔吐あるいは嘔吐感が消失するまでＰＤＥ４阻害薬の投与量を減少させる、ＰＤＥ４阻害薬を休薬させる、およびω３ＰＵＦＡｓの投与量を増加させるからなる群から選ばれる少なくとも１つを行う上記（２２）に記載の予防／改善または治療するための方法。
（２６）ＰＤＥ４阻害薬が、式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物である上記（２２）ないし（２５）のいずれかに記載の方法。
【発明の効果】
【００２７】
ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つ、並びに、ＰＤＥ４阻害薬、好ましくはＰＤＥ４特異性の高い阻害薬、さらに好ましくはＰＤＥ４Ｂ特異性の高い阻害薬、特に式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物の併用により、安全で効果の高いＮＡＳＨの予防／改善または治療薬およびその使用方法を提供することができる。
具体的には、各々単独で使用した場合に比べて相乗的なＮＡＳＨの予防／改善または治療効果を示すことが期待される。特に、ＴＮＦα、ＩＬなどのアディポサイトカインや高感度ＣＲＰの改善、好中球数の減少、繊維化マーカー（IV型コラーゲン、ヒアルロン酸、ＴＩＭＰ−１等）や血中酸化ストレスマーカー（フェリチン、チオレドキシン）改善において相乗的なＮＡＳＨの予防／改善または治療効果を示すことが期待される。
ＰＤＥ４阻害薬の副作用として懸念される嘔吐や嘔吐感、食欲不振あるいは頭痛は、患者にとって耐え難い副作用であり、また、食欲不振による栄養不良を引き起こして病態改善に悪影響を及ぼすものである。本発明により嘔吐や嘔吐感の副作用発現が少ないことが期待されるＰＤＥ４Ｂ特異性の高い阻害薬を用いることができ、また、各々の薬剤、特にＰＤＥ４阻害薬の服薬量を低減することができ、嘔吐や嘔吐感、食欲不振あるいは頭痛などの副作用を軽減することができる。また、副作用のためにＰＤＥ４阻害薬投与を行えなかった患者や中断せざるを得なかった患者において治療を継続することができる。
また、配合剤やキット剤とすることで患者の服薬の負担を軽減し、服薬コンプライアンスを高めることで更に予防／改善または治療効果を高めることができる。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下に本発明を詳細に説明する。
本発明は、ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つ、並びに、ＰＤＥ４阻害薬、好ましくはＰＤＥ４特異性の高い阻害薬、さらに好ましくはＰＤＥ４Ｂ特異性の高い阻害薬、特に式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物を有効成分として併用する、ＮＡＳＨの予防／改善または治療薬およびその使用方法である。本発明の予防／改善または治療薬は、有効成分の、ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つ、並びに、ＰＤＥ４阻害薬、特に式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物を、組み合わせて用いる組み合わせ薬およびその使用方法である。
本発明において予防とは、疾患の発症を予防することのみでなく、発症時期を遅延させることおよび発症率を低下させることも含む。
本発明において改善とは、疾患の何らかのパラメーターを改善することのみでなく、患者の自覚症状や生活の質（Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  ｌｉｆｅ）を改善することを含む。また、本発明において治療とは、既に疾患を発症した患者に薬物を投与することのみでなく、疾患を発症するリスクの高い患者に薬物を投与する予防的治療も含む。
【００２９】
多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡｓ）は、分子内に複数の炭素−炭素二重結合を有する脂肪酸と定義され、二重結合の位置により、ω３、ω６などに分類される。ω３ＰＵＦＡｓとしては、α−リノレン酸、ＥＰＡ、ドコサヘキサエン酸（以下、ＤＨＡと記す）などが例示される。本発明で用いられる「ＰＵＦＡｓ」の語は、特に断らない限りは、多価不飽和脂肪酸だけでなく、その製薬上許容される塩、あるいはエステル、アミド、リン脂質、グリセリドなどの多価不飽和脂肪酸誘導体も含む意味で用いられる。
【００３０】
本発明で用いられるω３ＰＵＦＡｓは、合成品、半合成品または天然品のいずれでもよく、これらを含有する天然油の形態でもよい。ここで、天然品とは、ω３ＰＵＦＡｓを含有する天然油から公知の方法によって抽出されたもの、粗精製されたもの、あるいはそれらを更に高度に精製したものを意味する。半合成品は、微生物などにより産生された多価不飽和脂肪酸を含み、また該多価不飽和脂肪酸あるいは天然の多価不飽和脂肪酸にエステル化、エステル交換等の化学処理を施したものも含まれる。本発明では、ω３ＰＵＦＡｓとして、これらのうちの１種を単独で、あるいは２種以上を組み合わせて用いることができる。
【００３１】
本発明では、ω３ＰＵＦＡｓとして、具体的には、ＥＰＡ、ＤＨＡ、α−リノレン酸およびこれらの製薬学上許容しうる塩およびエステルが例示される。製薬学上許容しうる塩およびエステルは、ナトリウム塩、カリウム塩などの無機塩基、ベンジルアミン塩、ジエチルアミン塩などの有機塩基、アルギニン塩、リジン塩などの塩基性アミノ酸との塩およびエチルエステル等のアルキルエステルやモノ−、ジ−およびトリ−グリセリド等のエステルが例示される。好ましくはエチルエステルであり、特にＥＰＡ−Ｅおよび／またはＤＨＡ-Ｅが好ましい。
【００３２】
ω３ＰＵＦＡｓの純度は特に限定されないが、通常、本剤組成物の全脂肪酸中のω３ＰＵＦＡｓの含量として、好ましくは２５質量％以上、さらに好ましくは５０質量％以上、さらに好ましくは７０質量％以上、より好ましくは８５質量％以上であり、とりわけ好ましくは本剤組成物がω３ＰＵＦＡｓ以外の他の脂肪酸成分を実質的に含まない態様である。例えば、ＥＰＡ−ＥおよびＤＨＡ−Ｅを用いる場合、ＥＰＡ−Ｅ／ＤＨＡ−Ｅの組成比および全脂肪酸中のＥＰＡ−Ｅ＋ＤＨＡ−Ｅの含量比は特に問わないが、好ましい組成比として、ＥＰＡ−Ｅ／ＤＨＡ−Ｅは、０．８以上であることが好ましく、更に好ましくは、１．０以上、より好ましくは、１．２以上である。ＥＰＡ−Ｅ＋ＤＨＡ−Ｅは高純度のもの、例えば、全脂肪酸およびその誘導体中のＥＰＡ−Ｅ＋ＤＨＡ−Ｅ含量比が４０質量％以上のものが好ましく、５５質量％以上のものがさらに好ましく、８４質量％以上のものがさらに好ましく、９６．５質量％以上のものが更に好ましい。他の長鎖飽和脂肪酸含量は少ないことが好ましく、長鎖不飽和脂肪酸でもω６系、特にアラキドン酸含量は少ないことが望まれ、２質量％未満が好ましく、１質量％未満がさらに好ましい。
【００３３】
本発明の予防／改善または治療薬に用いられるＥＰＡ−Ｅおよび／またはＤＨＡ−Ｅは、魚油あるいは魚油の濃縮物に比べ、飽和脂肪酸やアラキドン酸等の心血管イベントに対して好ましくない不純物が少なく、栄養過多やビタミンＡ過剰摂取の問題もなく作用効果を発揮することが可能である。また、エステル体のため主にトリグリセリド体である魚油等に比べて酸化安定性が高く、通常の酸化防止剤添加により十分安定な組成物を得ることが可能である。
【００３４】
このＥＰＡ−Ｅは、日本において、閉塞性動脈硬化症（ＡＳＯ）および高脂血症治療薬として入手可能な高純度ＥＰＡ−Ｅ（９６．５質量％以上）含有軟カプセル剤（商品名エパデール：持田製薬社製）を用いることができる。また、ＥＰＡ−ＥとＤＨＡ−Ｅの混合物は、たとえば、米国で高ＴＧ血症治療薬として市販されているロバザ（Ｌｏｖａｚａ：グラクソ・スミス・クライン：ＥＰＡ−Ｅ約４６．５質量％、ＤＨＡ−Ｅ約３７．５質量％含有する軟カプセル剤）を使用することもできる。
ω３ＰＵＦＡｓとして、精製魚油も使用できる。また、ω３ＰＵＦＡｓのモノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドまたはこれらの組合せなども好ましい態様の一つである。例えばインクロメガ（lncromega）Ｆ２２５０、Ｆ２６２８、Ｅ２２５１、Ｆ２５７３、ＴＧ２１６２、ＴＧ２７７９、ＴＧ２９２８、ＴＧ３５２５およびＥ５０１５（クローダ・インターナショナル・ピーエルシー(Croda International PLC, Yorkshire, England)）、および ＥＰＡＸ６０００ＦＡ、ＥＰＡＸ５０００ＴＧ、ＥＰＡＸ４５１０ＴＧ、ＥＰＡＸ２０５０ＴＧ、ＥＰＡＸ７０１０ＥＥ、Ｋ８５ＴＧ、Ｋ８５ＥＥおよびＫ８０ＥＥ (プロノバ・バイオファーマ（Pronova Biopharma, Lysaker, Norway) ）などの種々のω３ＰＵＦＡｓ、その塩およびエステルを含有する製品が市販されており、これらを入手して使用することもできる。
【００３５】
本発明において、ＰＤＥ４阻害薬は、ＰＤＥ４阻害活性を有していれば良く、ＰＤＥ４特異的阻害活性を有していることが好ましい。また、ＰＤＥ４のアイソザイムの中で、ＰＤＥ４Ｂに特異性の高い阻害薬、特に、ＰＤＥ４Ｂ阻害活性強度／ＰＤＥ４Ｄ阻害活性強度の比率が大きなＰＤＥ４阻害薬が、嘔吐や嘔吐感の副作用発現を低減させるために好ましい。例えば、ＰＤＥ４Ｂに対する５０％阻害活性濃度／ＰＤＥ４Ｄに対する５０％阻害活性濃度の比率が1以下、好ましくは０．１以下、さらに好ましくは０．０５以下、より好ましくは０．０１以下である。
ＰＤＥ４阻害薬としては、式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、国際公開第２００６／００４１９１号パンフレットに式（Ｉ）として記載されたピロロピリダジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物、ドクソフィリン(Doxofylline、Instituto Biologico Chemioterapico)、ロフルミラスト（roflumilast、 Altana Pharma）、テトミラスト（tetomilast、大塚製薬）、シロミラスト（cilomilast）、デンブフィリン(Denbufylline)、ＡＷＤ１２−２８１、ＧＳＫ１２７１８３６およびＧＳＫ２５６０６６（GlaxoSmithklein ）、アプレミラスト（Apremilast, Celgene Corp）、オグレミラスト（Oglemilast, Glenmark Pharmaceuticals）、ピクラミラスト(Piclamilast Sanofi-Aventis)、リリミラスト(Lilimilast)およびダクサリプラム(daxalipram)（Bayer）、ＡＳＰ９８３１（アステラス製薬）、ＯＸ−９１４（Inflazyme Pharmaceuticals）、ＥＨＴ-０２０２(ExonHit Therapeutics)、ＨＴ−０７１２（Inflazyme Pharmaceuticals）、ＭＥＭ−１４１４（Memory Pharmaceuticals）、アロフィリン（arofyline, Almirall Lab）、ＡＮ−２７２８およびＡＮ−２８９８（Anacor Pharmaceuticals）、ＨＴ−０７１２およびＯＸ−９１４（Inflazyme Pharmaceuticals）、ＳｅｌＣＩＤｓ、ＣＣ−１０８８およびＣＣ１１０５０（Celgene Corp）、ＯＮＯ−６１２６およびＤＥ１０３（小野薬品工業）、ＧＰＤ１１１６（あすか製薬）、ＥＬＢ３５３（Elbion）、ＧＲＣ３８８６およびＧＲＣ４０３９（Glenmark Pharmaceuticals）、ＡＶＥ−８１１２（Sanofi-Aventis）、４ＡＺＡ−ＰＤＥ４（4AZA Bioscience）、ＣＲ−３４６５（Rottapharm SpA）、ロリプラム(Rolipram Schering AG）、ＵＣＢ−１０１３３３−３、ＣＤＰ−８４０、Ｌ−７９１９４３、Ｌ−８２６１４１およびＳＣＨ３５１５９１(UCB)、ＲＯ  ２０−１７２４およびＲＳ−２５３４４−０００(Roche)、ＫＦ１９５１４およびＫＷ４４９０（協和発酵）、ＰＬＸ−３６９、ＰＬＸ−３７７およびＰＬＸ−４５６(Plexikon Inc)、ＣＤ−１６０１３０（Curacyte AG）、ＧＰ−０２０３（Centre National de la Recherche Scientifique）、ＩＮＤＵＳ−８２０１０（Indus Biotech Pvt）、ＮＤ−１２５１およびＮＤ１５１０（Neuro3d SA）、ＲＢＸ−１００１７８７６（Ranbaxy Laboratories）およびＣＨＦ５４８０（Chiesi Farmaceutici）などが例示される。また、特にＰＤＥ４Ｂ阻害活性強度／ＰＤＥ４Ｄ阻害活性強度の比率が大きな阻害薬としては、Bioorg.Med.Chem.Lett.2009年,19：3174-3176に記載されているピリミジン誘導体である化合物１〜３５が例示される。
好ましくは、式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、国際公開第２００６／００４１９１号パンフレットに式（Ｉ）として記載されたピロロピリダジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物、ドクソフィリン、ロフルミラスト、テトミラスト、シロミラスト、ＧＳＫ２５６０６６、オグレミラスト、ピクラミラスト、リリミラスト、ＡＳＰ９８３１、ＯＸ−９１４、ＥＨＴ-０２０２、ＨＴ−０７１２、ＭＥＭ−１４１４、ＡＮ−２７２８、ＡＮ−２８９８、ＣＣ１１０５０、ＤＥ１０３、ＥＬＢ３５３、ＧＲＣ４０３９が例示され、さらに好ましくは、ＡＳＰ９８３１、式（Ｉ）で表されるピロロピリダジン誘導体、式（II）で表されるピラゾロピリジン誘導体、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物が例示される。より好ましくは、ＡＳＰ９８３１、化合物１ないし５、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物が例示され、最も好ましくは、化合物１ないし３、製薬学上許容しうるそれらの塩およびそれらのプロドラッグからなる群から選ばれる少なくとも１つの化合物が例示される。本発明において式（Ｉ）および式（II）で表される化合物とは、特に断らない限りは、上記のような塩またはプロドラッグも含む意味で用いられる。
【００３６】
式（Ｉ）あるいは式（II）で表される化合物は、公知の方法、例えば国際公開第２００４／０６３１９７号パンフレットあるいは国際公開第２００６／００４１８８号パンフレットに記載された方法により製造することができる。
【００３７】
上記のようなω３ＰＵＦＡｓおよびＰＤＥ４阻害薬併用の本発明薬剤において、好ましい態様は、ＥＰＡ−Ｅおよび／またはＤＨＡ−Ｅと式（Ｉ）あるいは式（II）で表される化合物との組合せである。
【００３８】
本発明において、有効成分の「併用」とは、有効成分を組合せて用いることであり、ω３ＰＵＦＡｓおよびＰＤＥ４阻害薬を共に含む配合剤として投与すること、および、ω３ＰＵＦＡｓとＰＤＥ４阻害薬とがそれぞれ別個の製剤として同時期にもしくは時間差をおいて別々に投与されることを含む。「別個の製剤として同時期にもしくは時間差をおいて別々に投与される」態様には、(1)ω３ＰＵＦＡｓを投与される患者に、ＰＤＥ４阻害薬を有効成分として含有する組成物を投与する態様、および、(2)ＰＤＥ４阻害薬を投与される患者に、ω３ＰＵＦＡｓ有効成分として含有する組成物を投与する態様が含まれる。また、「併用」とは必ずしも患者の体内、例えば血中において同時に存在する場合に限られないが、本発明において「併用」とは、いずれか一方の薬剤の作用・効果が患者の体内に発現している状態で他方の薬剤を投与する使用態様をいう。本発明の予防／改善または治療薬を用いてＮＡＦＬＤもしくはＮＡＳＨに関連する疾患の予防／改善または治療効果が得られるような使用態様である。好ましくは、患者の体内、例えば血中において同時に存在する使用態様が望ましく、また好ましくは、患者に対して、一方の薬剤を投与してから２４時間以内に他方の薬剤を投与する使用態様が好ましい。
【００３９】
本発明の予防／改善または治療薬における併用の形態は、特に限定されず、有効成分が組み合わされていればよい。このような薬剤の形態としては、例えば（１）有効成分を同時製剤化して得られる単一の製剤の投与、（２）有効成分を別々に製剤化して得られる２種類の製剤を組合せてキットとし、または組み合わせないで別々に用意し、同一投与経路での同時投与に使用する。（３）有効成分を別々に製剤化して得られる２種類の製剤を組合せてキットとし、または組み合わせないで別々に用意し、同一投与経路で時間差をおいて投与する。（４）有効成分を別々に製剤化して得られる２種類の製剤を組合せてキットとし、または組み合わせないで別々に用意し、異なる投与経路（同一患者の異なる部位から投与する）で同時に投与する。（５）有効成分を別々に製剤化して得られる２種類の製剤を組合せてキットとし、または組み合わせないで別々に用意し、異なる投与経路（同一患者の異なる部位から投与する）で時間差をおいて投与する。
【００４０】
これらの時間差をおいて投与する場合は、例えば、ω３ＰＵＦＡｓとＰＤＥ４阻害薬の順序での投与、または逆の順序での投与がある。同時に投与する場合、投与経路が同一であれば投与直前に両薬剤を混合してもよく、別々に投与しても良い、また種々の目的で計画的に投与時期をずらして用いることができる。具体的な例としては、一方の薬剤を投与し、その効果が発現し始める時期もしくは十分に発現している間に、他方の薬剤を投与して作用させる方法がある。また、一方の薬剤、特にＰＤＥ４阻害薬を徐放化して１日１回投与とし、他方の薬剤、特にω３ＰＵＦＡｓを１日複数回、例えば２ないし３回投与としてもよいし、同様に１日１回投与としてもよい。両薬ともに１日１回投与、さらには１日１回同時投与あるいは配合剤とすれば、患者の服薬の負担を軽減し、服薬コンプライアンスが向上して予防／改善・治療効果および副作用軽減効果も増すことが期待され、好ましい。また、例えば、両薬剤を投与し、その効果が発現し始める時期もしくは十分発現している時期に、一方の薬剤の投薬を中止する方法がある。薬剤の投薬を中止する場合には、段階的に薬剤の用量を減量してもよい。また、例えば、一方の薬剤の休薬期間に他方の薬剤を投与する方法が挙げられる。
【００４１】
本発明のＮＡＳＨの予防／改善または治療薬には、有効成分として少なくともω３ＰＵＦＡｓおよびＰＤＥ４阻害薬の１種ずつを併用した治療効果が得られる態様で使用すれば、その使用態様は制限されない。たとえば、ω３ＰＵＦＡｓおよびＰＤＥ４阻害薬のみを使用することを特徴とするもの、すなわち、ω３ＰＵＦＡｓと、ＰＤＥ４阻害薬とを組み合わせてなるＮＡＳＨの予防／改善または治療薬のほか、さらに他の有効成分を組み合わせて使用するＮＡＳＨの予防／改善または治療薬も含まれる。
【００４２】
望ましくは、ω３ＰＵＦＡｓおよびＰＤＥ４阻害薬を併用した治療効果が、併用の場合と同じ用量のω３ＰＵＦＡｓおよびＰＤＥ４阻害薬を個々に用いて得られる治療効果の和よりも大きな効果を得られる態様が好ましい。ここでの治療効果とは、ＮＡＦＬＤもしくはＮＡＳＨに関連する疾患の予防／改善または治療効果あるいは肝硬変や肝癌への進行抑制であれば、特に限定されないが、例えば、画像検査（超音波、ＣＴ、ＭＲＩなど）、肝生検あるいは血漿中の繊維化マーカー（IV型コラーゲン、ヒアルロン酸、ＴＩＭＰ−１等）により測定した肝繊維化の程度、血清ＡＳＴやＡＬＴ値の減少、ＡＳＴ／ＡＬＴ比の減少、アディポネクチンの増加、ＴＮＦαやＩＬの減少、高感度ＣＲＰの減少、好中球数の減少や血中酸化ストレスマーカー（フェリチン、チオレドキシン）の減少、ＨＯＭＡ−ＩＲ改善などが例示され、好ましくはＴＮＦα、ＩＬなどのアディポサイトカインや高感度ＣＲＰの改善、繊維化マーカー（IV型コラーゲン、ヒアルロン酸、ＴＩＭＰ−１等）や血中酸化ストレスマーカー（フェリチン、チオレドキシン）改善が例示される。その他のＮＡＦＬＤもしくはＮＡＳＨに関連する生化学的・病理学的あるいは病態パラメーターにより予防／改善または治療効果をモニタリングしてもよい。
【００４３】
本発明の予防／改善または治療薬に用いられるω３ＰＵＦＡｓおよびＰＤＥ４阻害薬の投与量および投与期間は対象となる作用を現すのに十分な量および期間とされるが、その剤形、投与方法、１日当たりの投与回数、症状の程度、体重、年齢等によって適宜増減することができる。
【００４４】
経口投与する場合は、例えばＥＰＡ−Ｅおよび／またはＤＨＡ−Ｅとして０．１〜１０ｇ／日、好ましくは０．３〜６ｇ／日、よりに好ましくは０．６〜４ｇ／日、さらに好ましくは０．９〜２．７ｇ／日を１ないし３回に分けて投与するが、必要に応じて全量を１回あるいは数回に分けて投与してもよい。また、ＰＤＥ４阻害薬の投与量に応じて減量することも可能である。投与時間は食中ないし食後が好ましく、食直後（３０分以内）投与が更に好ましい。上記投与量を経口投与する場合、投与期間は１年以上、好ましくは２年以上、より好ましくは３．５年以上、更に好ましくは５年以上であるが、ＮＡＳＨに関連する病態あるいは生化学的指標などが継続している間、ＮＡＳＨの発症および／または再発の危険度が高い状態が続いている間は投与を継続することが望ましい。また、例えば１日おきに投与する、１週間に２〜３日投与する態様や、場合により１日〜３ヵ月程度、好ましくは１週間〜１ヵ月程度の休薬期間を設けることもできる。
【００４５】
本発明の予防／改善または治療薬に用いられるＰＤＥ４阻害薬の投与量は、その薬剤単独での用法・用量の範囲内で使用されることが好ましいが、その種類、剤形、投与方法、１日当たりの投与回数は、症状の程度、体重、性別、年齢等によって適宜増減することができる。経口投与する場合は、例えば化合物１として０．００２〜２００ｍｇ／日、好ましくは０．０２〜２０ｍｇ／日、さらに好ましくは０．２〜２ｍｇ／日を、化合物２あるいは３として０．００１〜１００ｍｇ／日、好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／日、さらに好ましくは０．１〜１ｍｇ／日を、シロミラストとして０．１〜１００００ｍｇ／日、好ましくは１〜１０００ｍｇ／日、さらに好ましくは１０〜１００ｍｇ／日を、ロフルミラストとして０．００２〜２００ｍｇ／日、好ましくは０．０２〜２０ｍｇ／日、さらに好ましくは０．２〜２ｍｇ／日を、１回ないし２回に分けて投与するが、必要に応じて全量を数回に分けて投与してもよい。医師の指示によっては、投与開始日に、１日の推奨用量よりも低い用量を経口投与し、その後、維持量として、１日の最高投与量まで漸増して経口投与してもよい。また、ω３ＰＵＦＡｓの投与量に応じて減量することも可能である。嘔吐などの副作用軽減の観点で１日投与量をできるだけ減量することや、徐放剤化して１日１回投与にすることがより好ましい。上記投与量を経口投与する場合、投与期間は１年以上、好ましくは２年以上、より好ましくは３．５年以上、更に好ましくは５年以上であるが、ＮＡＳＨに関連する病態あるいは生化学的指標などが継続している間、ＮＡＳＨの発症および／または再発の危険度が高い状態が続いている間は投与を継続することが望ましい。また、例えば１日おきに投与する、１週間に２〜３日投与する態様や、場合により１日〜３ヵ月程度、好ましくは１週間〜１ヵ月程度の休薬期間を設けることもできる。
【００４６】
ω３ＰＵＦＡｓおよびＰＤＥ４阻害薬の併用による本発明では、ω３ＰＵＦＡｓおよび／またはＰＤＥ４阻害薬の用量を一般的に使用される通常の用量より低く設定することも可能である。例えば、個々の薬剤を単独で治療効果を得るには不十分な用量を用いることも可能である。これにより、薬剤、特にＰＤＥ４阻害薬による嘔吐などの副作用を軽減することができる利点を有する。
【００４７】
ω３ＰＵＦＡｓおよび／またはＰＤＥ４阻害薬単独の用量が、治療効果を得るには不十分な用量であって、ω３ＰＵＦＡｓおよびＰＤＥ４阻害薬を併用した治療効果が、併用の場合と同じ用量のω３ＰＵＦＡｓおよびＰＤＥ４阻害薬を個々に用いて得られる治療効果の和よりも大きな効果を得られるような使用態様も望ましい。
また、ω３ＰＵＦＡｓおよび／またはＰＤＥ４阻害薬単独の用量が、治療効果を得るには不十分な用量であって、ω３ＰＵＦＡｓおよびＰＤＥ４阻害薬を併用した際の副作用が、併用の場合と同じ用量のω３ＰＵＦＡｓおよびＰＤＥ４阻害薬を個々に用いて発現する副作用の和よりも小さいような使用態様も望ましい。
【００４８】
ω３ＰＵＦＡｓ単独の用量が、治療効果を得るには不十分な用量とは、患者の個々の状態や体型により変動し、限定されるものではないが、例えば、ＥＰＡ−Ｅおよび／またはＤＨＡ−Ｅの場合、１日あたりの投与量が、０．１ｇ以上２ｇ未満、好ましくは０．２ｇ以上１．８ｇ以下、さらに好ましくは０．３ｇ以上〜０．９ｇ以下、また好ましくは、０．３ｇ以上〜０．６ｇ以下である。
ＰＤＥ４阻害薬単独の用量が、治療効果を得るには不十分な用量とは、患者の個々の状態や体型により変動し、限定されるものではないが、例えば、化合物１の１日あたりの投与量が０．２ｍｇ未満であり、好ましくは０．００２ｍｇ以上０．１５ｍｇ以下、より好ましくは０．００５ｍｇ以上０．１ｍｇ以下、さらに好ましくは０．０１ｍｇ以上０．０５ｍｇ以下、化合物２あるいは３の１日あたりの投与量が０．１ｍｇ未満であり、好ましくは０．００１ｍｇ以上０．０８ｍｇ以下、より好ましくは０．００２ｍｇ以上０．０５ｍｇ以下、さらに好ましくは０．００５ｍｇ以上０．０２ｍｇ以下、シロミラストの１日あたりの投与量が１０ｍｇ未満であり、好ましくは０．１ｍｇ以上８ｍｇ以下、より好ましくは０．２ｍｇ以上５ｍｇ以下、さらに好ましくは０．５ｍｇ以上２ｍｇ以下、ロフルミラストの１日あたりの投与量が０．２ｍｇ未満であり、好ましくは０．００２ｍｇ以上０．１５ｍｇ以下、より好ましくは０．００５ｍｇ以上０．１ｍｇ以下、さらに好ましくは０．０１ｍｇ以上０．０５ｍｇ以下が例示される。
本発明の効果は、ＰＤＥ４阻害薬単独で抗炎症作用を示す用量より少ない低用量で現れることが期待される。
【００４９】
ω３ＰＵＦＡｓおよびＰＤＥ４阻害薬の投与量の比率は、特に限定されないが、好ましいω３ＰＵＦＡｓとＰＤＥ４阻害薬の投与量の比率は、ω３ＰＵＦＡｓ：化合物１＝２００〜９００００：１、好ましくは３００〜３００００：１、さらに好ましくは、５００〜１００００：１、最も好ましくは１０００〜６０００：１、ω３ＰＵＦＡｓ：化合物２あるいは３＝４００〜１８００００：１、好ましくは６００〜６００００：１、さらに好ましくは、１０００〜２００００：１、最も好ましくは２０００〜１２０００：１、ω３ＰＵＦＡｓ：シロミラスト＝４〜１８００：１、好ましくは６〜６００：１、さらに好ましくは、１０〜２００：１、最も好ましくは２０〜１２０：１、ω３ＰＵＦＡｓ：ロフルミラスト＝２００〜９００００：１、好ましくは３００〜３００００：１、さらに好ましくは、５００〜１００００：１、最も好ましくは１０００〜６０００：１、が例示され、ＰＤＥ４阻害薬による副作用軽減の観点ではＰＤＥ４阻害薬の量をさらに１／２〜１／１０量とすることもできる。配合剤とする場合にも、この比率で配合されることが望ましい。
【００５０】
ＰＤＥ４阻害薬およびω３ＰＵＦＡｓの１日投与量、投与回数あるいは投与比率は、肝繊維化の程度、血清ＡＳＴやＡＬＴの減少、ＡＳＴ／ＡＬＴ比の減少、アディポネクチンの増加、ＴＮＦαやＩＬの減少や好中球数の減少や血中酸化ストレスマーカーの減少、ＨＯＭＡ−ＩＲ改善などの検査値あるいは患者の嘔吐や嘔吐感の有無を確認しながら適宜増減できる。例えば、ＰＤＥ４阻害薬を単独で投与したときに血清ＡＬＴ値を測定し、この測定値を指標にして、その後、ＰＤＥ４阻害薬の投与量を減少してω３ＰＵＦＡｓの投与を開始し、本発明の治療効果を得ることもできる。本発明の予防／改善または治療薬を用いた場合の各種副作用発現は、本発明と同じ治療効果を得るためにＰＤＥ４阻害薬単独投与で必要とする用量で発現する副作用、例えば嘔吐や嘔吐感の発現頻度、を超えないことが望ましい。
【００５１】
本発明のＮＡＳＨの予防／改善または治療薬は、有効成分を化合物（精製の際に不可避的に含まれる他の成分を含む場合もある）をそのまま投与するか、或いは一般的に用いられる適当な担体または媒体、賦形剤、結合剤、滑沢剤、着色剤、香味剤、必要に応じて滅菌水や植物油、更には無害性有機溶媒あるいは無害性溶解補助剤（たとえばグリセリン、プロピレングリコール）、乳化剤、懸濁化剤（例えばツイーン８０、アラビアゴム溶液）、等張化剤、ｐＨ調整剤、安定化剤、無痛化剤、嬌味剤、着香剤、保存剤、抗酸化剤、緩衝剤、着色剤などの添加剤と適宜選択組み合わせて適当な医薬用製剤に調製することができる。添加剤として、たとえば乳糖、部分α化デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、マクロゴール、トコフェロール、硬化油、ショ糖脂肪酸エステル、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酸化チタン、タルク、ジメチルポリシロキサン、二酸化ケイ素、カルナウバロウなどを含有しうる。
【００５２】
特に、ω３ＰＵＦＡｓは高度に不飽和であるため、抗酸化剤たとえばブチレート化ヒドロキシトルエン、ブレチート化ヒドロキシアニソール、プロピルガレート、没食子酸、医薬として許容されうるキノンおよびα−トコフェロールから選ばれる少なくとも１種を抗酸化剤として有効量含有させることが望ましい。
【００５３】
製剤の剤形は、本発明の有効成分の併用形態によっても異なり、特に限定されないが、経口製剤としては、例えば、錠剤、フィルムコーティング錠、カプセル剤、マイクロカプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、経口用液体製剤、シロップ剤、ゼリー剤、吸入剤の形で、非経口製剤としては、例えば、軟膏、坐剤、注射剤（乳濁性、懸濁性、非水性）あるいは用時乳濁または懸濁して用いる固形注射剤、輸液製剤、経皮吸収剤などの外用剤で、経口および静脈内あるいは動脈内、吸入、直腸内、膣内あるいは外用を問わず患者に投与されるが、経口服用できる患者に対しては、簡便な経口製剤が望ましく、とりわけカプセルたとえば、軟質カプセルやマイクロカプセルに封入して、あるいは錠剤、フィルムコーティング錠での経口投与が好ましい。また、腸溶製剤や徐放化製剤として経口投与してもよく、透析患者や嚥下困難な患者などにはゼリー剤として経口投与することも好ましい。
【００５４】
本発明の予防／改善または治療薬は、両薬剤を別々に製剤して得られる２種類の製剤を組み合わせて使用する場合には、それぞれ公知の方法により製剤化する。また、本発明の予防／改善または治療薬は、ω３ＰＵＦＡｓとＰＤＥ４阻害薬とを有効成分とする配合剤とすることができる。
【００５５】
配合剤の有効成分として、第三の薬剤を含有することも可能である。第三の薬剤は特に限定されないが、本発明の効果を減弱しないことが好ましく、例えば、肝庇護剤、血糖降下剤、高脂血症治療薬、降圧剤、抗酸化剤、抗炎症剤などが例示される。
ここで肝庇護剤としては、例えば、ウルソデオキシコール酸やベタインが挙げられる。又、血糖降下剤としては、例えば、インスリンやインスリン誘導体、トルブタミド、グリクラジド、グリベンクラミド、グリメピリドのようなスルホニルウレア剤、ナテグリニド、レパグリニド、ミチグリニドのような速効型インスリン分泌促進剤、アカルボース、ボグリボース、ミグリトールのようなαグルコシダーゼ阻害剤、ピオグリタゾン、ロジグリタゾン、トログリタゾンのようなチアゾリジン類、メトホルミン、ブホルミンのようなビグアナイド系血糖効果薬等が挙げられる。又、高脂血症治療薬としては、例えば、プラバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、フルバスタチン、ピタバスタチン、ロスバスタチン、セリバスタチンのようなＨＭＧ-ＣｏＡ還元酵素阻害剤やシンフィブラート、クロフィブラート、クリノフィブラート、ベザフィブラート、フェノフィブラートのようなフィブラート系薬剤、あるいはオルリスタットのような脂肪分解酵素阻害剤、エゼチミブが挙げられる。又、降圧剤としては、例えば、カプトプリル、アラセプリル、イミダプリル、エナラプリル、シラザプリル、テモカプリル、デラプリル、リシノプリル、ベナゼプリルのようなアンジオテンシン変換酵素阻害剤、ロサルタン、バルサルタン、カンデサルタン、テルミサルタン、オルメサルタン、イルベサルタン、エプロサルタンのようなアンジオテンシン受容体拮抗剤、アリスキレンのようなレニン阻害剤、アムロジピン、ニフェジピン、ベニジピン、ニカルジピン、ニルバジピン、シルニジピン、アゼルニジピン、マニジピン、ニトレンジピン、パルニジピン、ニソルジピン、エホニジピン、フェロジピン、アラニジピン、ジルチアゼム、ベラパミル、ベプリジルのようなカルシウム拮抗剤等が挙げられる。又、抗酸化剤としては、例えば、ビタミンＣやビタミンＥ等のビタミン類、Ｎアセチルシステイン、プロブコールなどが挙げられる。又、抗炎症剤としては、例えば、ペントキシフィリン等のサイトカイン産生抑制剤、ロイコトリエン受容体拮抗剤、ロイコトリエン生合成阻害剤、アスピリンのようなＮＳＡＩＤｓ、ＣＯＸ−２選択的阻害剤、Ｍ２／Ｍ３拮抗剤、コルチコステロイド、ファルネシル酸プレドニゾロンなどのステロイド、Ｈｉ（ヒスタミン）受容体拮抗剤、サラゾスルファピリジン、メサラジンなどのアミノサリチル酸、等が挙げられる。又、免疫抑制剤としては、例えば、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、タクロリムスなどが挙げられる。又、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）用の抗ウイルス薬としては、例えば、インターフェロン、プロテアーゼ阻害剤、ヘリカーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤などが挙げられる。
【００５６】
配合剤の剤形は、特に限定されず、経口製剤としては、例えば、錠剤、フィルムコーティング錠、カプセル剤、マイクロカプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、経口用液体製剤、シロップ剤、ゼリー剤の形で、非経口製剤としては、例えば、注射剤、輸液製剤、経皮吸収剤などの外用剤で患者に投与される。例えば、徐放化した製剤、あるいは、２剤を時間差で放出する製剤なども含む。
本発明の配合剤は、有効成分に加え、薬学的に許容され得る賦形剤を含むことができる。適宜、公知の抗酸化剤、コーティング剤、ゲル化剤、嬌味剤、着香剤、保存剤、抗酸化剤、乳化剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、着色剤などを含有させてもよい。
【００５７】
本発明の配合剤は、常法に従って製剤化することが可能である。ω３ＰＵＦＡｓの粉末は、例えば、（Ａ）ＥＰＡ−Ｅ、（Ｂ）食物繊維、（Ｃ）デンプン加水分解物及び／または低糖化還元デンプン分解物、及び（Ｄ）水溶性抗酸化剤を含有する水中油型乳化液を、高真空下で乾燥させ、粉砕処理する（特開平１０−９９０４６）など公知の方法により得られる。得られたＥＰＡ−Ｅの粉体と、ＰＤＥ４阻害薬の粉体とを用いて、常法に従い、顆粒剤、細粒剤、散剤、錠剤、フィルムコーティング錠、チュアブル錠、徐放錠、口腔内崩壊錠（ＯＤ錠）などを得ることができる。チュアブル錠であれば、例えば、ＥＰＡ−Ｅをヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの水溶性高分子溶液中に乳化し、得られた乳化液を乳糖などの添加剤に噴霧して粉粒体を得（特開平８−１５７３６２）、ＰＤＥ４阻害薬の粉体と混合して打錠することなど公知の方法により得ることができる。徐放錠であれば、例えば（１）ＥＰＡ−ＥおよびＰＤＥ４阻害薬のいずれかを内層に、他方を外層に形成する、（２）各成分を含有する円盤状のマトリックスを２層に重ねる、（３）一成分を含有する粒状カプセルを他方の成分を含有するマトリックス中に埋め込む、（４）両剤を予め混合した後に何らかの徐放のための工夫が施される、などが挙げられる。各有効成分は放出速度を調整されていることが望ましく、両剤同時に放出されてもよいし、別々に時間差で放出されてもよい。口腔内崩壊錠であれば、例えば特開平８−３３３２４３など、口腔用フィルム製剤であれば、例えば特開２００５−２１１２４など、公知の方法に準じて製造することができる。ＰＤＥ４阻害薬の多くは単純にはω３ＰＵＦＡｓに溶解しないため、例えば、軟カプセル剤、液剤などにする場合には実施例に記載の工夫が必要である。本発明の配合剤は、このようにω３ＰＵＦＡｓとＰＤＥ４阻害薬とを１剤に配合するための工夫をしている製剤を含む。
【００５８】
本発明の配合剤は、有効成分の薬理作用を発現できるように、放出、吸収されることが望ましい。本発明の配合剤は、有効成分の放出性に優れる、有効成分の吸収性に優れる、有効成分の分散性に優れる、配合剤の保存安定性に優れる、患者の服用利便性、あるいはコンプライアンスに優れる製剤の少なくともいずれか１以上の効果を持つことが望ましい。
【００５９】
本発明の予防／改善または治療薬は、動物とりわけ哺乳動物のＮＡＦＬＤ、特にＮＡＳＨの予防／改善または治療、再発予防あるいは肝硬変や肝癌への進行抑制に有効である。哺乳動物とは、例えば、ヒトやウシ、ウマ、ブタなどの家畜動物やイヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウスなどの家庭用動物等があげられ、好ましくはヒトである。特に、ＴＮＦα、ＩＬなどのアディポサイトカインや高感度ＣＲＰ、好中球数、繊維化マーカー（IV型コラーゲン、ヒアルロン酸、ＴＩＭＰ−１等）や血中酸化ストレスマーカー（フェリチン、チオレドキシン）が増加しているＮＡＳＨ患者において相乗的なＮＡＳＨの予防／改善または治療効果を示すことが期待される。また、ＰＤＥ４阻害薬による嘔吐などの副作用を軽減することができ、また、これらの副作用のためにＰＤＥ４阻害薬投与を行えなかった患者や中断せざるを得なかった患者において治療を継続することができる。
また、配合剤やキット剤とすることで患者の服薬の負担を軽減し、服薬コンプライアンスを高めることで更に予防／改善または治療効果を高めることができる。
【実施例】
【００６０】
次に本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
（実験例１）
メチオニン・コリン欠乏食ラットにおける有効性
ＮＡＳＨ様の肝病変をきたすことが知られているメチオニン・コリン欠乏食（以下、ＭＣＤ食と記す)負荷ラットを用いてＥＰＡ−Ｅおよび／または化合物３の肝障害および線維化に対する薬理作用を確認する。
７週令の雄性ウイスターラットを通常食（Ｆ−１、船橋農場）あるいはＭＣＤ食（Dyets社）を２０週間自由摂取させて１２時間明暗周期、２３℃で飼育する。正常群（通常食負荷）、対照群（ＭＣＤ食負荷）、ＥＰＡ−Ｅ群（ＭＣＤ食負荷＋ＥＰＡ−Ｅ投与）、化合物３群（ＭＣＤ食負荷＋化合物３投与）および併用群（ＭＣＤ食負荷＋ＥＰＡ−Ｅ投与＋化合物３投与）の５群（各群２０匹）を設定する。飼育期間中、ＥＰＡ−Ｅ群にはＥＰＡ−Ｅを１０００ｍｇ／ｋｇ、化合物３群には化合物３を０．３ｍｇ／ｋｇおよび併用群にはＥＰＡ−Ｅ１０００ｍｇ／ｋｇおよび化合物３を０．３ｍｇ／ｋｇを５％アラビアゴム水溶液に懸濁して１日１回経口投与する。正常群および対照群には５％アラビアゴム水溶液を１日１回経口投与する。２０週間飼育後、採血して血漿中の生化学検査および肝臓の病理学的検査を行う。【００６１】
対照群は正常群に比べて、血漿中のＡＳＴ、ＡＬＴ、総ビリルビン、アルブミン、総蛋白質、コリンエステラーゼ、IV型コラーゲン、ヒアルロン酸、ＴＩＭＰ−１量が有意に増加し、また、肝臓のマッソントリクローム染色による線維化面積、ハイドロキシプロリン含量が有意に増加してＮＡＳＨ様肝病変を呈する。
ＥＰＡ−Ｅ群は対照群に比べて、血漿中のＡＳＴ、ＡＬＴ、総ビリルビン、アルブミン、総蛋白質、コリンエステラーゼ、IV型コラーゲン、ヒアルロン酸、ＴＩＭＰ−１量の増加および肝臓の線維化面積、ハイドロキシプロリン含量の増加を抑制する。
また、化合物３群もＥＰＡ−Ｅ群と同様の効果が認められる。上記パラメーターの増加抑制効果において、併用群はＥＰＡ−Ｅ群および化合物３群個々で得られる治療効果の和よりも大きい効果が認められる。よって本発明の予防／改善または治療薬はＮＡＳＨの予防／改善または治療等に有用である。【００６２】
（実験例２）
メチオニン・コリン欠乏食糖尿病モデルマウスにおける有効性
ＮＡＳＨ様の肝病変をきたすことが知られているメチオニン・コリン欠乏食（以下、ＭＣＤ食と記す)負荷食糖尿病モデルラットを用いてＥＰＡ−Ｅおよび／または化合物１の肝障害および線維化に対する薬理作用を確認する。
７週令の雄性ｄｂ／ｄｂマウス（日本チャールズ・リバー株式会社）を通常食（Ｆ−１、船橋農場）あるいはＭＣＤ食（Dyets社）を２週間自由摂取させて１２時間明暗周期、２３℃で飼育する。正常群（通常食負荷）、対照群（ＭＣＤ食負荷）、ＥＰＡ−Ｅ群（ＭＣＤ食負荷＋ＥＰＡ−Ｅ投与）、化合物１群（ＭＣＤ食負荷＋化合物１投与）および併用群（ＭＣＤ食負荷＋ＥＰＡ−Ｅ投与＋化合物１投与）の５群（各群２０匹）を設定する。飼育期間中、ＥＰＡ−Ｅ群にはＥＰＡ−Ｅを１０００ｍｇ／ｋｇ、化合物１群には化合物１を１ｍｇ／ｋｇおよび併用群にはＥＰＡ−Ｅ１０００ｍｇ／ｋｇおよび化合物１を１ｍｇ／ｋｇを５％アラビアゴム水溶液に懸濁して１日１回経口投与する。正常群および対照群には５％アラビアゴム水溶液を１日１回経口投与する。２週間飼育後、ＨＯＭＡ−ＩＲ測定および採血して血漿中の生化学検査を行う。【００６３】
対照群は正常群に比べて、ＨＯＭＡ−ＩＲの増悪、血漿中のＡＳＴ、ＡＬＴ、IV型コラーゲン、ヒアルロン酸、ＴＩＭＰ−１量が有意に増加する。
ＥＰＡ−Ｅ群は対照群に比べて、血漿中のＡＳＴ、ＡＬＴ量の増加を抑制し、IV型コラーゲン、ヒアルロン酸、ＴＩＭＰ−１量の増加を抑制する。
また、化合物１群もＥＰＡ−Ｅ群と同様の効果を示す。上記パラメーターの改善効果において、併用群はＥＰＡ−Ｅ群およびＰＤＥ４阻害薬群個々で得られる治療効果の和よりも大きい効果が認められる。よって本発明の予防／改善または治療薬はＮＡＳＨの予防／改善または治療等に有用である。【００６４】
（実験例３）
高脂肪高ショ糖食摂取ラットにおける有効性
４週齢の雄性ＳＤ系ラットを通常食（Ｆ−１、船橋農場）あるいは高脂肪高ショ糖食（ＴＤ８８１３７、Harlan Teklad社、以下、ＨＦ食と記す）を４週間自由摂取させて１２時間明暗周期、２３℃で飼育する。正常群（通常食負荷）、対照群（ＨＦ食負荷）、ＥＰＡ−Ｅ群（ＨＦ食負荷＋ＥＰＡ−Ｅ投与）、化合物２群（ＨＦ食負荷＋化合物２投与）および併用群（ＨＦ食負荷＋ＥＰＡ−Ｅ投与＋化合物２投与）の５群（各群１０匹）を設定する。飼育期間中、ＥＰＡ−Ｅ群にはＥＰＡ−Ｅを１０００ｍｇ／ｋｇ、化合物２群には化合物２を１ｍｇ／ｋｇおよび併用群にはＥＰＡ−Ｅ１０００ｍｇ／ｋｇおよび化合物２を１ｍｇ／ｋｇを５％アラビアゴム水溶液に懸濁して１日１回経口投与する。正常群および対照群には５％アラビアゴム水溶液を１日１回経口投与する。４週間飼育後、採血して好中球数測定および血漿中の生化学検査を行う。【００６５】
対照群は正常群に比べて、血漿中のＡＳＴ、ＡＬＴ量が有意に増加し、また、好中球数、ＴＮＦα、ＩＬ−６、高感度ＣＲＰが増加する。また、フェリチン、チオレドキシン、IV型コラーゲンが増加する。
ＥＰＡ−Ｅ群および化合物２群は対照群に比べて、血漿中のＡＳＴ、ＡＬＴ量の増加を抑制し、好中球数、ＴＮＦα、ＩＬ−６、高感度ＣＲＰ、フェリチン、チオレドキシン、IV型コラーゲンの増加を抑制する。
上記パラメーターの改善効果において、併用群はＥＰＡ−Ｅ群および化合物２群個々で得られる治療効果の和よりも大きい効果が認められる。よって本発明の予防／改善または治療薬はＮＡＳＨの予防／改善または治療等に有用である。【００６６】
（実験例４）
ＮＡＳＨと確定診断された患者を３群（各群２０名）に分けて、ＥＰＡ−Ｅ群にはエパデールＳ（登録商標）９００（ＥＰＡ−Ｅ９００ｍｇ含有）を１日２回、化合物３群には化合物３を０．２ｍｇ含有するカプセルを１日２回、併用群にはエパデールＳ（登録商標）９００および化合物３を０．２ｍｇ含有するカプセルをそれぞれ１日２回服用させる。化合物３は１日に１回０．２ｍｇ投与で開始し、投与開始後５週目以降は１日２回合計０．４ｍｇ服用まで、患者の状況に応じて投与量を適宜増減する。患者のクライテリア、モニタリング、組織検査、統計学的解析等はAm. J. Gastroenterol. 2001; 96: 2711-2717の方法に準じ、１年間の投与期間中経時的にＡＬＴ、ＡＳＴ等の血液生化学検査を行うと共に、投与終了後に肝生検を行い、組織学的評価を行う。【００６７】
いずれの群のＮＡＳＨ患者の血中ＡＬＴ、ＡＳＴ等の血液生化学パラメーターは治療前に比べ低下する。又肝組織の病理学的検査像は、投与前に比べ、Bruntの方法による脂肪蓄積のグレード、炎症グレード、線維化ステージの総合的評価で改善する。各々の指標は併用群において相乗的に改善される。また、併用群では化合物３群に比べて化合物３の投与量増加が少なく、嘔吐などの副作用発現が抑制される。よって本発明の予防／改善または治療薬はＮＡＳＨの予防／改善または治療に有用であり、かつ化合物３による嘔吐などの副作用軽減に有用である。【００６８】
常法に従い、化合物１ないし３およびＥＰＡ−Ｅの配合剤を製造する。
（製剤例１）軟カプセル剤
【表１】
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【００６９】
上記表１の組成の濃グリセリン、化合物１および精製水を加えて撹拌し、水酸化ナトリウムを用いてｐＨを７付近に調整する。この液にゼラチンおよびＤ−ソルビトールを添加し６０℃に加温・攪拌して溶解させる。この溶解液を減圧脱泡した後、精製水で粘度を調整して軟カプセル剤皮用液を得る。この軟カプセル剤皮用液と、ＥＰＡ−Ｅを用いて、１カプセルあたりＥＰＡ−Ｅとして３００ｍｇ、化合物１として５０μｇ含有する軟カプセルを得る。
同様にして、化合物１に換えて化合物２を３０μｇ、化合物３を２０μｇ、シロミラストを２．５ｍｇあるいはロフルミラストを５０μｇを用いて、軟カプセルを得る。【００７０】
（製剤例２）軟カプセル剤
【表２】
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【００７１】
上記表２のＢの組成の濃グリセリンに水を加え、さらに、ゼラチンおよびＤ−ソルビトールを添加し６０℃に加温・攪拌して溶解させる。この溶解液を減圧脱泡した後、精製水で粘度を調整して軟カプセル剤皮用液を得る。上記Ａの組成のＥＰＡ−Ｅに微粉砕した化合物３を混合して均一に分散し、軟カプセル内容液を得る。これらの軟カプセル剤皮用液および軟カプセル内容液を用いて、１カプセルあたりＥＰＡ−Ｅとして３００ｍｇ、化合物１として１００μｇを含有する軟カプセルを得る。
同様にして、化合物１に換えて化合物２を５０μｇ、化合物３を５０μｇ、シロミラストを５ｍｇあるいはロフルミラストを１００μｇを用いて、軟カプセルを得る。【００７２】
（製剤例３）液剤
【表３】
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【００７３】
上記表３のＢの組成の各成分に精製水を加えて溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨを７付近に調整する。この液にＡの各成分を加え、減圧下、高速で撹拌して得られる乳化液を、アルミラミネートフィルム製スティック包装に９ｇずつ分注し、包装内部を窒素置換して密封し、１包あたりＥＰＡ−Ｅとして１８００ｍｇ、化合物１として５００μｇを含有する液剤を得る。
同様にして、化合物１に換えて化合物２を２００μｇあるいは化合物３を１００μｇ用いて液剤を得る。【００７４】
（製剤例４）ゼリー剤
【表４】
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【００７５】
上記表４のＢの組成の各成分に精製水を加えて溶解し、水酸化ナトリウムでｐＨを７付近に調整する。この液に組成Ａの各成分を加え、減圧下、高速で撹拌して乳化液を得る。この乳化液を８５℃に加温し、組成Ｃの各成分を混合撹拌して均一分散した液を加え、均一に練合する。この調製液を、アルミラミネートフィルム製スティック包装に９ｇずつ分注し、包装内部を窒素置換して密封した後、冷却固化し、１包あたりＥＰＡ−Ｅとして１８００ｍｇ、化合物１として２００μｇを含有するゼリー剤を得る。
同様にして、化合物１に換えて化合物２を１００μｇあるいは化合物３を５０μｇ用いてゼリー剤を得る。
【産業上の利用可能性】
【００７６】
本発明の、ω３ＰＵＦＡｓ、その製薬学上許容しうる塩およびエステルからなる群から選ばれる少なくとも１つ、並びに、ＰＤＥ４阻害薬を有効成分として併用する、ＮＡＳＨの予防／改善または治療薬は、各々単独で使用した場合に比べて相乗的なＮＡＳＨの予防／改善または治療効果を示すことが期待される。特に、炎症の亢進している患者など、ＴＮＦα、ＩＬなどのアディポサイトカインや高感度ＣＲＰ、好中球数、繊維化マーカー（IV型コラーゲン、ヒアルロン酸、ＴＩＭＰ−１等）や血中酸化ストレスマーカー（フェリチン、チオレドキシン）が増加しているＮＡＳＨ患者において相乗的なＮＡＳＨの予防／改善または治療効果を示すことが期待される。炎症の亢進していないＮＡＳＨ患者においても、少量のＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害薬との併用により、顕著な病態改善が期待される。本発明により嘔吐や嘔吐感の副作用発現が少ないことが期待されるＰＤＥ４Ｂ特異性の高いＰＤＥ４阻害薬を用いることができ、また、各有効成分を単独で使用する場合の投与量を減少させることが可能であり、特にＰＤＥ４阻害薬による嘔吐などの副作用を軽減することができ、また、これらの副作用のためにＰＤＥ４阻害薬投与を行えなかった患者や中断せざるを得なかった患者において治療を継続することができる。
また、配合剤やキット剤とすることで患者の服薬の負担を軽減し、服薬コンプライアンスを高めることで更に予防／改善または治療効果を高めることができる。
【国際調査報告】
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