(57)【要約】医薬の原体として実用化が可能な保存安定性が確保され、また取り扱いの容易な結晶形から成る化合物、6-[(3R)-3-アミノピペリジン-1-イル]-5-(2-クロロ-5-フルオロベンジル)-1,3-ジメチル-1H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4(3H,5H)-ジオン モノハイドロクロライド ヘミハイドレートを提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
6-[(3R)-3-アミノピペリジン-1-イル]-5-(2-クロロ-5-フルオロベンジル)-1,3-ジメチル-1H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4(3H,5H)-ジオン モノハイドロクロライド ヘミハイドレート。
【請求項２】
粉末Ｘ線回折において回折角（２θ）：  8.6±0.2°, 14.9±0.2°および15.4±0.2°  に主ピークを示す、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
粉末Ｘ線回折において回折角（２θ）：  4.3±0.2°, 8.6±0.2°, 12.9±0.2°, 14.9±0.2°, 15.4±0.2°, 17.1±0.2°, 18.7±0.2°, 23.0±0.2°, 25.2±0.2°,26.4±0.2°,30.3±0.2°および34.7±0.2°  に主ピークを示す、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物を有効成分として含有する医薬。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物を有効成分として含有するジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ阻害剤。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物を有効成分として含有する糖尿病治療剤。
【請求項７】
治療を必要とする患者に、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物の有効量を投与することからなる、糖尿病の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、6-[(3R)-3-アミノピペリジン-1-イル]-5-(2-クロロ-5-フルオロベンジル)-1,3-ジメチル-1H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4(3H,5H)-ジオン モノハイドロクロライド ヘミハイドレート（以下、必要に応じ化合物Ａと略称することがある）に関する。本発明化合物は、医薬の原体として実用化が可能な医薬として有用であり、より詳しくは、ジペプチジルペプチダーゼ-IV (DPP-IV)阻害剤として有効である。本発明は、更に本発明化合物を有効成分として含有する糖尿病治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
特許文献１には、式（Ｉ）で表される実施例６の化合物（以下、化合物Ｂという）が開示されている。【０００３】
【化１】
2009113423.tif 000002
【０００４】
化合物Ｂは優れたジペプチジルペプチダーゼ-IV（DPP-IV）阻害作用を有し、糖尿病治療薬としての有用性が期待できる。しかし、本化合物を医薬の原体として実用化するには保存安定性および取り扱いの面での改善が必要である。
【特許文献１】国際公開第２００６／０６８１６３号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、医薬の原体として実用化が可能な保存安定性が確保され、また取り扱いの容易な結晶形から成る化合物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
発明者らは、化合物Ｂについて鋭意検討を行った結果、化合物Ｂの0.5水和物である化合物Ａが優れた安定性を示す結晶として得られることを見出した。化合物Ａは、化合物Ｂと比較して、保存安定性および取り扱いの容易性が著しく改善されており、医薬として実用化する上で極めて有用であることを見出し、本発明を完成するに至った。【０００７】
すなわち本発明は：
〔１〕6-[(3R)-3-アミノピペリジン-1-イル]-5-(2-クロロ-5-フルオロベンジル)-1,3-ジメチル-1H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4(3H,5H)-ジオン モノハイドロクロライド ヘミハイドレート、
〔２〕粉末Ｘ線回折において回折角（２θ）：  8.6±0.2°, 14.9±0.2°および15.4±0.2°  に主ピークを示す、〔１〕記載の化合物、
〔３〕粉末Ｘ線回折において回折角（２θ）：  4.3±0.2°, 8.6±0.2°, 12.9±0.2°, 14.9±0.2°, 15.4±0.2°, 17.1±0.2°, 18.7±0.2°, 23.0±0.2°, 25.2±0.2°,26.4±0.2°,30.3±0.2°および34.7±0.2°  に主ピークを示す、〔１〕記載の化合物、
〔４〕〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の化合物を有効成分として含有する医薬、
〔５〕〔１〕〜〔３]のいずれかに記載の化合物を有効成分として含有するジペプチジルペプチダーゼ−ＩＶ阻害剤、
〔６〕〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の化合物を有効成分として含有する糖尿病治療剤、および
〔７〕治療を必要とする患者に、〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の化合物の有効量を投与することからなる、糖尿病の治療方法に関する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明化合物は、保存安定性および取り扱いの容易性に優れ、医薬として実用化する上で極めて有用である
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、実施例1の一塩酸塩0.5水和物（化合物Ａ）の結晶のX線回折パターンを示す。
【００１０】
【図２】図２は、実施例1の一塩酸塩0.5水和物（化合物Ａ）の結晶の特性DSC曲線を示す。
【００１１】
【図３】図３は、実施例1の一塩酸塩0.5水和物（化合物Ａ）の結晶の特性TGA曲線を示す。
【００１２】
【図４】図４は、実施例1の化合物（化合物Ａ）の吸湿性を示す。○は水分吸着条件下での重量変化を示す。▲は水分脱着条件下での重量変化を示す。
【００１３】
【図５】図５は、国際公開第２００６／０６８１６３号パンフレット実施例６の化合物（化合物Ｂ）の吸湿性を示す。○は水分吸着条件下での重量変化を示す。▲は水分脱着条件下での重量変化を示す。
【図６】図６は、実施例1の化合物（化合物Ａ）の単結晶Ｘ線構造解析を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下に、本発明をさらに詳細に説明する。【００１５】
化合物Ａは、次の式で表される化合物である。【００１６】
【化２】
2009113423.tif 000003
【００１７】
以下に、本発明化合物の製造法について、例を挙げて説明するが、本発明はもとよりこれに限定されるものではない。なお、本明細書において、記載の簡略化のために次の略号を使用することもある。Ｍｅ：メチル基、Ｅｔ：エチル基、tＢｕ：ｔert−ブチル基、Ｂｏｃ：tert-ブトキシカルボニル基【００１８】
本発明化合物は公知化合物から公知の合成方法を組み合わせることにより合成することができる。例えば、国際公開第２００６／０６８１６３号パンフレット記載の方法に準じて合成できる。その一例を以下に示す。【００１９】
【化３】
2009113423.tif 000004
【００２０】
１）工程１
化合物（１−３）は、化合物（１−１）と化合物（１−２）を、不活性溶媒中で反応させることにより製造することができる。不活性溶媒としては、例えば、トルエン、ベンゼン、もしくはキシレンなどの芳香族炭化水素系溶媒等が挙げられる。反応温度としては、通常、約２０℃〜約１００℃の範囲から選択することができる。【００２１】
２）工程２
化合物（１−５）は、化合物（１−３）と化合物（１−４）を、有機塩基存在下、不活性溶媒中、反応させることにより製造される。不活性溶媒としては、アセトニトリルもしくはプロピオニトリル等のニトリル系溶媒等が挙げられる。有機塩基としては、１，８-ジアザビシクロ[５．４．０]ウンデカ-７-エン（ＤＢＵ）、１，５-ジアザビシクロ[４．３．０]ノナ-５-エン、もしくは１，４-ジアザビシクロ[５．４．０]ウンデカ-７-エン等が挙げられる。反応温度としては、通常、約２０℃〜約１００℃の範囲から選択されるが、還流下に反応を行ってもよい。【００２２】
３）工程３
化合物（１−７）は、不活性溶媒中、塩基の存在下、化合物（１−５）と化合物（１−６）を反応させることにより製造することができる。塩基としては、例えば炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸セシウム、炭酸水素カリウムまたは炭酸水素ナトリウム等の炭酸アルカリ等が挙げられ、好適には、炭酸カリウム等が挙げられる。不活性溶媒としては、非プロトン性溶媒(Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシド等)、エーテル系溶媒(ジエチルエーテル、テトラヒドロフランまたは1,4-ジオキサン等)、ケトン(アセトン等)、またはこれらの混合溶媒等が挙げられ、好適には、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等が挙げられる。反応温度としては、通常、約１０℃〜約８０℃の範囲から選択される。【００２３】
４）工程４
化合物（１−８）は、不活性溶媒中、化合物（１−７）と塩基を反応させることにより製造することができる。塩基としては、リチウムアミドもしくはナトリウムアミド等のアルカリアミド、または水素化ナトリウムまたは水素化カリウム等の水素化アルカリ等が挙げられる。不活性溶媒としては、トルエン、ベンゼン、もしくはキシレン等の芳香族炭化水素系溶媒、ヘキサンもしくはヘプタン等の炭化水素系溶媒、tert-ブチルアルコール、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、エーテル系溶媒(ジエチルエーテル、テトラヒドロフランまたは1,4-ジオキサン等)、またはこれらの混合溶媒等が挙げられる。塩基としては、リチウムアミドが好ましい。溶媒としてはtert-ブチルアルコール、アセトニトリル、およびヘプタンの混合溶媒、またはtert-ブチルアルコール、アセトニトリル、ヘプタン、およびトルエンの混合溶媒が好ましい。反応温度としては、通常、約１０℃〜約１２０℃の範囲から選択することができる。【００２４】
５）工程５
化合物（１−９）は、不活性溶媒中、化合物（１−８）とシアン酸カリウムを反応させることにより製造される。不活性溶媒としては、水、酢酸もしくはプロピオン酸等の有機酸、またはトルエン、ベンゼン、もしくはキシレンなどの芳香族炭化水素系溶媒等が挙げられ、通常は水、酢酸およびトルエンの混合溶媒中で実施される。反応温度としては、通常、約２０℃〜約８０℃の範囲から選択される。【００２５】
６）工程６
化合物（１−１０）は、不活性溶媒中、化合物（１−９）と無機塩基を反応させることにより製造される。無機塩基としては、炭酸カリウム、炭酸セシウム、もしくは炭酸ナトリウム等が挙げられる。不活性溶媒としては、水、非プロトン性溶媒(Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシド等)等が挙げられ、通常は水およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの混合溶媒中で実施される。反応温度としては、通常、約２０℃〜約１００℃の範囲から選択される。【００２６】
７）工程７
化合物（１−１１）は、不活性溶媒中、無機塩基存在下、化合物（１−１０）とヨウ化メチルを反応させることにより製造される。無機塩基としては、炭酸カリウム、炭酸セシウム、もしくは炭酸ナトリウム等が挙げられる。不活性溶媒としては、非プロトン性溶媒(Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシド等)等が挙げられ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの使用が好ましい。反応温度としては、通常、約２０℃〜約５０℃の範囲から選択される。また、工程６における反応溶液にヨウ化メチルを加えて反応させることも可能である。【００２７】
８）工程８
化合物（１−１２）は、不活性溶媒中、化合物（１−１１）と無機酸を反応させることにより製造される。無機酸としては、塩酸または硫酸等が挙げられ、硫酸の使用が好ましい。不活性溶媒としては、エーテル系溶媒(ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、ジグリム、テトラヒドロフランまたは１，４-ジオキサン等)、またはこれらの混合溶媒等が挙げられ、テトラヒドロフランの使用が好ましい。反応温度としては、通常、約３０℃〜約１２０℃の範囲から選択される。反応終了後、有機溶媒１および水を反応溶液に加え分液する。水層に無機塩基、水、および有機溶媒２を加え分液する(操作１)。水層に有機溶媒２を再び加え分液する（操作２）。操作１および操作２で得られた有機層を減圧濃縮する。得られた残渣にアルコールを加え、約５０℃〜約１００℃の範囲で加熱する。水を滴下し、滴下終了後、約１０℃〜約４０℃の範囲まで冷却し、約−５℃〜約１０℃の範囲で攪拌する。生じた固体をろ過により取得し、水で洗浄後、減圧下乾燥する。無機塩基としては、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウム等が挙げられる。有機溶媒１としては、トルエン、ベンゼン、またはキシレン等の芳香族炭化水素系溶媒等が挙げられ、トルエンの使用が好ましい。有機溶媒２としては、テトラヒドロフランまたはメチルtert-ブチルエーテル等のエーテル系溶媒等が挙げられ、テトラヒドロフランの使用が好ましい。アルコールとしては、プロパノール、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、ヘプタノール、またはオクタノール等が挙げられ、イソプロパノールの使用が好ましい。【００２８】
９）工程９
化合物Ａは、化合物（１−１２）の水溶液に塩酸を加えることにより製造される。反応終了後、トルエンを反応溶液に加え、減圧濃縮する。減圧濃縮の操作は、複数回実施してもよい。得られた残渣に対し、含水アルコールを加え、約５０℃〜約１２０℃の範囲で加熱する。酢酸エチルを滴下し、滴下終了後、約１０℃〜約４０℃の範囲まで冷却し、約０℃〜約２０℃の範囲で攪拌する。生じた固体をろ過により取得し、酢酸エチルにて洗浄後、減圧乾燥する。含水アルコールのアルコールとしては、プロパノール、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、ヘプタノール、またはオクタノール等が挙げられ、イソプロパノールの使用が好ましい。含水アルコールにおける水の割合は、アルコールに対する容積比において、約５％〜約３０％の範囲であり、約１０％〜約２０％の範囲が好ましい。【００２９】
以上において使用した原料や試薬などは、特にことわらない限り、市販の化合物であるか、または公知の化合物から公知の方法を用いて製造することができる。例えば、化合物（１−２）は特許文献（特開2007-262040）の方法に準じて合成できる。【００３０】
また、本発明化合物はラセミ体として合成し、光学活性なリガンドを結合した充填剤を用いたカラムクロマトグラフィーにより分取することもできる。【００３１】
本発明化合物は、そのDPP-IVに対する阻害作用より様々な疾病の治療への応用が考えられる。本明細書に記載の化合物は、前糖尿病状態における食後高血糖の抑制、非インスリン依存性糖尿病の治療、関節炎や関節リウマチなど自己免疫性疾患の治療、腸管粘膜疾患の治療、成長促進、移植臓器片の拒絶反応抑制、肥満治療、摂食障害の治療、HIV感染の治療、癌転移の抑制、前立腺肥大症の治療、歯根膜炎の治療、および骨粗鬆症の治療に有用である。【００３２】
本発明化合物は、治療に使用する場合に、医薬組成物として、経口的または非経口的（例えば、静脈内、皮下、もしくは筋肉内注射、局所的、経直腸的、経皮的、または経鼻的）に投与することができる。経口投与のための組成物としては、例えば、錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤、散剤、液剤、懸濁剤などが挙げられ、非経口投与のための組成物としては、例えば、注射用水性剤、もしくは油性剤、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、エアロゾル剤、坐剤、貼付剤などが挙げられる。これらの製剤は、従来公知の技術を用いて調製され、製剤分野において通常使用される無毒性かつ不活性な担体もしくは賦形剤を含有することができる。【００３３】
用量は、個々の化合物により、また患者の疾患、年齢、体重、性別、症状、投与経路等により変化するが、通常は成人(体重50 kg)に対して、本発明化合物を、0.1〜1000 mg/日、好ましくは1〜300 mg/日を１日１回または２ないし３回に分けて投与する。また、数日〜数週に１回投与することもできる。【００３４】
本発明化合物は、その効果の増強を目的として、糖尿病治療剤、糖尿病性合併症治療剤、抗高脂血症剤、降圧剤、抗肥満剤、利尿剤などの薬剤（以下、併用薬剤と略記する）と組み合わせて用いることができる。本発明化合物および併用薬剤の投与時期は限定されず、これらを投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与してもよい。また、本発明化合物と併用薬剤の合剤としても良い。併用薬剤の投与量は、臨床上用いられている用量を基準として適宜選択することができる。また、本発明化合物と併用薬剤との配合比は、投与対象、投与ルート、対象疾患、症状、組み合わせなどにより適宜選択することができる。例えば投与対象がヒトである場合、本発明化合物１重量部に対し、併用薬剤を０．０１〜１００重量部用いればよい。【００３５】
なお、糖尿病治療剤としては、インスリン製剤（例、ウシ、ブタの膵臓から抽出された動物インスリン製剤；大腸菌、イーストを用い、遺伝子工学的に合成したヒトインスリン製剤など）、インスリン抵抗性改善剤（例、ピオグリタゾンまたはその塩酸塩、トログリタゾン、ロシグリタゾンまたはそのマレイン酸塩、ＧＩ−２６２５７０、ＪＴＴ−５０１，ＭＣＣ−５５５、ＹＭ−４４０、ＫＲＰ−２９７，ＣＳ−０１１等）、α−グルコシダーゼ阻害剤（例、ボグリボース、アカルボース、ミグリトール、エミグリテート等）、ビグアナイド剤（例、メトホルミン等）、インスリン分泌促進剤（例、トルブタミド、グリベンクラミド、グリクラジド、クロルプロパミド、トラザミド、アセトヘキサミド、グリクロピラミド、グリメピリド等のスルホニルウレア剤；レパグリニド、セナグリニド、ナテグリニド、ミチグリニド等）、ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１アナログ（エキセナタイド、リラグルタイド、ＳＵＮ−Ｅ７００１、ＡＶＥ０１０、ＢＩＭ−５１０７７、ＣＪＣ１１３１等）、プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤（例、バナジン酸等）、β３アゴニスト（例、ＧＷ−４２７３５３Ｂ、Ｎ−５９８４等）が挙げられる。【００３６】
糖尿病性合併症治療剤としては、アルドース還元酵素阻害剤（例、トルレスタット、エパルレスタット、ゼナレスタット、ゾポレスタット、ミナレスタット、フィダレスタット、ラニレスタット、ＳＫ−８６０、ＣＴ−１１２等）、神経栄養因子（例、ＮＧＦ、ＮＴ−３、ＢＤＮＦ等）、ＰＫＣ阻害剤（例、ＬＹ−３３３５３１等）、ＡＧＥ阻害剤（例、ＡＬＴ９４６、ピマゲジン、ピラトキサチン、Ｎ−フェナシルチアゾリウム  ブロマイド（ＡＬＴ７６６）等）、活性酸素消去薬（例、チオクト酸等）、脳血管拡張剤（例、チアプリド、メキシレチン等）が挙げられる。抗高脂血剤としては、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤（例、プラバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、アトルバスタチン、フルバスタチン、イタバスタチンまたはそれらのナトリウム塩等）、スクアレン合成酵素阻害剤、ＡＣＡＴ阻害剤等が挙げられる。降圧剤としては、アンジオテンシン変換酵素阻害剤（例、カプトプリル、エナラプリル、アラセプリル、デラプリル、リジノプリル、イミダプリル、ベナゼプリル、シラザプリル、テモカプリル、トランドラプリル等）、アンジオテンシンII拮抗剤（例、オルメサルタン、メドキソミル、カンデサルタン、シレキセチル、ロサルタン、エプロサルタン、バルサンタン、テルミサルタン、イルベサルタン、タソサルタン等）、カルシウム拮抗剤（例、塩酸ニカルジピン、塩酸マニジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、ニルバジピン、アムロジピン等）、レニン阻害剤（アリスキレン等）等が挙げられる。【００３７】
抗肥満剤としては、例えば中枢性抗肥満薬（例、フェンテルミン、シブトラミン、アンフェプラモン、デキサンフェタミン、マジンドール、ＳＲ−１４１７１６Ａ等）、膵リパーゼ阻害薬（例、オルリスタット等）、ペプチド性食欲抑制薬（例、レプチン、ＣＮＴＦ（毛様体神経栄養因子）等）、コレシストキニンアゴニスト（例、リンチトリプト、ＦＰＬ−１５８４９等）等が挙げられる。利尿剤としては、例えばキサンチン誘導体（例、サリチル酸ナトリウムテオブロミン、サリチル酸カルシウムテオブロミン等）、チアジド系製剤（例、エチアジド、シクロペンチアジド、トリクロルメチアジド、ヒドロクロロチアジド、ヒドロフルメチアジド、ベンチルヒドロクロロチアジド、ペンフルチジド、ポリチアジド、メチクロチアジド等）、抗アルドステロン製剤（例、スピロノラクトン、トリアムテレン等）、炭酸脱水酵素阻害剤（例、アセタゾラミド等）、クロルベンゼンスルホンアミド系製剤（例、クロルタリドン、メフルシド、インダパミド等）、アゾセミド、イソソルビド、エタクリン酸、ピレタニド、ブメタニド、フロセミド等が挙げられる。【００３８】
併用薬剤は、好ましくはＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１アナログ、α−グルコシダーゼ阻害剤、ビグアナイド剤、インスリン分泌促進剤、インスリン抵抗性改善剤などである。上記併用薬剤は、２種以上を適宜の割合で組み合せて用いてもよい。【００３９】
本発明化合物が、併用薬剤と組み合せて使用される場合には、これらの薬剤の使用量は、薬剤の副作用を考えて安全な範囲内で低減できる。特に、ビグアナイド剤は通常の投与量よりも低減できる。したがって、これらの薬剤により引き起こされるであろう副作用は安全に防止できる。それに加えて、糖尿病合併症剤、抗高脂血症剤、降圧剤などの投与量は低減でき、その結果これらの薬剤により引き起こされるであろう副作用は効果的に防止できる。【００４０】
実施例
以下に本発明を、参考例、実施例および試験例により、さらに具体的に説明するが、本発明はもとよりこれに限定されるものではない。尚、以下の参考例および実施例において示された化合物名は、必ずしもＩＵＰＡＣ命名法に従うものではない。なお、記載の簡略化のために略号を使用することもあるが、これらの略号は前記記載と同義である。
【実施例１】
【００４１】
参考例１
tert-ブチル  3-{(3R)-3-[(tert-ブトキシカルボニル)アミノ]-ピペリジン-1-イル}-2-シアノ-3-(メチルチオ)アクリレート【００４２】
【化４】
2009113423.tif 000005
【００４３】
tert-ブチル 2-シアノ-3,3-ビス(メチルチオ)アクリレート (3.63 kg)のトルエン (7.40 L)溶液に(3R)-3-[(tert-ブトキシカルボニル)アミノ]-3-メチルピペリジン (3.00 kg)のトルエン溶液 (7.40 L)を加えて30℃で攪拌した。5時間後、ヘプタン (38.47 L)を加えて50℃で昇温した後に室温まで戻した。その後、氷浴にて1時間攪拌した後に、析出した白色固体をろ過によって回収した。減圧乾燥を行い、表題の化合物 (5.00 kg)を白色固体として得た。【００４４】
MS (ESI+) 398(M++1, 80%)【００４５】
参考例２
tert-ブチル  3-[(2-クロロ-5-フルオロベンジル)アミノ]-3-{(3R)-3-[(tert-ブトキシカルボニル)アミノ]-ピペリジン-1-イル}-2-シアノアクリレート【００４６】
【化５】
2009113423.tif 000006
【００４７】
参考例１の化合物 (5.00 kg)をアセトニトリル (7.50 L)に溶かし、DBU (3.83 kg)、2-クロロ-5-フルオロベンジルアミン (2.41 kg)を加えて50℃で撹拌した。6時間後、トルエン (14.72 L)で希釈し、水洗した。得られた有機層を10%硫酸水素カリウム水溶液、10％水酸化ナトリウム水溶液、水で洗浄後、減圧濃縮することにより表題の化合物（9.00 kg）を黄色のアモルファスとして得た。【００４８】
MS (ESI+) 509(M++1, 50%)【００４９】
参考例３
tert-ブチル  3-[(2-クロロ-5-フルオロベンジル)(2-エトキシ-2-オキソエチル)アミノ]-3-{(3R)-3-[(tert-ブトキシカルボニル)アミノ]-ピペリジン-1-イル}-2-シアノアクリレート【００５０】
【化６】
2009113423.tif 000007
【００５１】
参考例２の化合物 (98.9 g)をN, N‐ジメチルホルムアミド (145 mL)に溶かし、炭酸カリウム (96.67 g)を加え室温で撹拌した。ブロモ酢酸エチル (46.72 g)を滴下した後に、40℃で１時間攪拌した。トルエンを加えセライトろ過後、得られた有機層を水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過後、減圧濃縮することにより表題の化合物（135.81 g）を暗赤色のアモルファスとして得た。【００５２】
MS (ESI+) 595(M++1, 40%)【００５３】
参考例４
4-tert-ブチル 2-エチル 3-アミノ-1-(2-クロロ-5-フルオロベンジル)-5-{(3R)-3-[(tert-ブトキシカルボニル)アミノ]-ピペリジン-1-イル}-1H-ピロール-2,4-ジカルボキシレート【００５４】
【化７】
2009113423.tif 000008
【００５５】
リチウムアミド (0.50 kg)にヘプタン (5.75 L)を加え、80℃でtert-ブチルアルコール (12.18 kg)とヘプタン (1.44 L)の混合溶液を滴下した。１時間後に30℃まで冷却し、アセトニトリル (18.71 L)を加えた。その混合物に、参考例３の化合物 (10.94 kg)のトルエン (16.94 L)溶液を加えて撹拌した。２時間後、溶媒を減圧留去し、トルエン (16.94 L)と水を加えた。濃塩酸で約pH 5.0に調製し、セライトろ過後、分液した。得られた有機層を減圧濃縮することにより表題の化合物（9.40 kg）を暗赤色の油状物質として得た。【００５６】
MS (ESI+) 595(M++1, 50%)【００５７】
参考例５
4-tert-ブチル 2-エチル 3-[(アミノカルボニル)アミノ]-1-(2-クロロ-5-フルオロベンジル)-5-{(3R)-3-[(tert-ブトキシカルボニル)アミノ]-ピペリジン-1-イル}-1H-ピロール-2,4-ジカルボキシレート【００５８】
【化８】
2009113423.tif 000009
【００５９】
参考例４の化合物 (9.40 kg)を酢酸 (27.80 L)およびトルエン (15.18 L)に溶かした混合物に対し、シアン酸カリウム (1.06 kg)を水 (2.00 kg)に溶かした溶液を40℃で滴下し、攪拌した。２時間後、室温まで戻し、トルエン (700 mL)で希釈し、水で３回洗浄した。水酸化ナトリウム水溶液でpH 7-8.5に調製し、食塩水で洗浄後、減圧濃縮することにより表題の化合物（14.48 kg）を暗赤色のアモルファスとして得た。【００６０】
MS (ESI+) 638(M++1, 80%)【００６１】
参考例６
tert-ブチル 5-(2-クロロ-5-フルオロベンジル)-6-{(3R)-3-[(tert-ブトキシカルボニル)アミノ]-ピペリジン-1-イル}-1,3-ジメチル-2,4-ジオキソ-2,3,4,5-テトラハイドロ-1H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-7-カルボキシレート【００６２】
【化９】
2009113423.tif 000010
参考例5 の化合物 (14.48 kg)をN, N‐ジメチルホルムアミド (19.28 L)に溶かし、炭酸カリウム (2.02 kg)、水 (0.19 kg)を加え50℃で攪拌した。５時間後、30℃まで冷却し炭酸カリウム (2.02 kg)を追加した。ヨウ化メチル (2.59 kg)を滴下、攪拌した。５時間後、室温まで戻した後にろ過を行い、トルエンで希釈し、水で洗浄、減圧濃縮した。得られた固体をイソプロパノール(50.58 L)中70℃まで昇温し、室温まで戻した。5℃で５時間攪拌した後に固体をろ過によって回収し、減圧乾燥することにより表題の化合物（3.835 kg）を白色固体として得た。【００６３】
MS (ESI+) 620(M++1, 50%)【００６４】
参考例７
6-[(3R)-3-アミノピペリジン-1-イル]-5-(2-クロロ-5-フルオロベンジル)-1,3-ジメチル-1H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4(3H,5H)-ジオン【００６５】
【化１０】
2009113423.tif 000011
【００６６】
テトラヒドロフラン (1.50 L)に濃硫酸 (1.26 kg)を滴下した。その混合物に参考例6 の化合物 (3.79 kg)のテトラヒドロフラン (25.64 L)溶液を70℃で滴下し、攪拌した。４時間後、室温まで戻しトルエン (25.01 kg)と水 (24.07 kg)を加えて分液した。水層にNaOH (1.17 kg)、水 (4.69 kg)とテトラヒドロフラン (11.37 kg)を加えて分液後、水層を再度テトラヒドロフランにより抽出した。得られた有機層を減圧濃縮し、残渣にイソプロパノール (9.53 kg)を加えて80℃まで昇温した。水 (36.79 kg)を加え、１時間攪拌した。室温まで戻し、0℃で１時間攪拌した。析出した固体をろ過により回収し、水で洗浄後、減圧乾燥することにより表題の化合物（2.12 kg）を白色の固体として得た。【００６７】
MS (ESI+) 420（M+1, 100%）. 【００６８】
実施例１
6-[(3R)-3-アミノピペリジン-1-イル]-5-(2-クロロ-5-フルオロベンジル)-1,3-ジメチル-1H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4(3H,5H)-ジオン ハイドロクロライド  ヘミハイドレート【００６９】
【化１１】
2009113423.tif 000012
【００７０】
6-[(3R)-3-アミノピペリジン-1-イル]-5-(2-クロロ-5-フルオロベンジル)-1,3-ジメチル-1H-ピロロ[3,2-d]ピリミジン-2,4(3H,5H)-ジオン (1.02 kg)と水 (7.80 kg)の混合物に、1N 塩酸 (2.67 kg)を滴下し、室温で攪拌した。１時間後、トルエンを加えて減圧濃縮を３回行った。得られた残渣に15%の水を含むイソプロパノール (4.49 kg)を加えて80℃まで加熱した。均一の溶液となった後に、酢酸エチル (16.64 kg)を滴下した。室温までゆっくりと戻した後に、氷浴中で１時間攪拌した。生じた固体をろ過によって回収し、酢酸エチルで洗浄後、減圧乾燥することにより掲題の化合物（721.8 g）を白色の結晶として得た。
1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.12 (brs, 3H), 7.53-7.56 (m, 1H), 7.13-7.18 (m, 1H), 6.10-6.15 (m, 2H), 5.39-5.50 (m, 2H), 3.39 (s, 3H), 3.22-3.27 (m, 2H), 3.13 (s, 3H), 2.82-2.88 (m, 2H), 2.66-2.71 (m, 1H), 1.83-1.92 (m, 1H), 1.71-1.78 (m, 1H),1.40-1.52 (m, 2H).
MS (ESI+) 420（M++1, 100%）.
mp 205〜208 ℃
元素分析値
実測値  C, 51.49; H, 5.39; N, 14.93; Cl, 15.19; F, 3.92
理論値  (C20H25Cl2FN5O2.5)  
C, 51.62; H, 5.41; N, 15.05; Cl, 15.24; F, 4.08【００７１】
実施例1の一塩酸塩0.5水和物（化合物Ａ）の結晶のX線粉末回折パターンは、フィリップス・アナリティカル社のエキスパート  プロ(X’ pert Pro) または同等の機器を使用した。X線源としてはCu Kα1を使用した。【００７２】
図１は、実施例1の一塩酸塩0.5水和物（化合物Ａ）の結晶のX線回折パターンを示すものである。なお、以下に記載した回折角２θ（°）における回折ピーク値は、測定機器により、もしくは測定条件等により多少の測定誤差を生じることがある。具体的には、測定誤差は±０．２、好ましくは±０．１の範囲内であってもよい。この0.5水和物（化合物Ａ）は、4.3°, 8.6°, 12.9°, 14.9°, 15.4°, 17.2°, 18.7°, 23.0°, 25.2°,26.4°,30.3°および34.7°の回折角[2θ(°)]に特徴的なピークを有した。このうちさらに特徴的なピークは、8.6°, 14.9°および15.4°である。【００７３】
図２は、実施例1の一塩酸塩0.5水和物（化合物Ａ）の結晶の特性DSC曲線を示すものである。ティー・エーインストルメント社のDSC Q1000または同等の機器を使用した。パンとしてアルミナム  ヘルメチックを用い、50.0 mL/minの窒素流を通して10℃-250℃の温度範囲で測定した。この0.5水和物（化合物Ａ）は150℃および200℃付近で特徴的な吸熱ピークを示した。【００７４】
図３は、実施例1の一塩酸塩0.5水和物（化合物Ａ）の結晶の特性TGA曲線を示すものである。ティー・エーインストルメント社のTGA Q500または同等の機器を使用した。パンとして白金を使用し、バランスガスに40.0 mL/minの窒素流、サンプルガスに60.0 mL/minの窒素流を用いて10℃-250℃の温度範囲で測定した。この0.5水和物（化合物Ａ）は100℃付近で約2.0％の重量損失を示した。【００７５】
試験例１  
本発明の方法で製造した実施例1の結晶一塩酸塩0.5水和物（化合物Ａ）および従来技術により製造した国際公開第２００６／０６８１６３号パンフレット実施例６の化合物（化合物Ｂ）の無晶系粉末について、室温でのそれぞれの吸湿性を測定した。その結果を図４および図５に示す。【００７６】
図４に示されるように実施例1の一塩酸塩0.5水和物（化合物Ａ）の結晶においては、湿度0-90%の間でその重量に変化は見られない。一方で、図５に示されるように従来技術によって製造された無晶系粉末（化合物Ｂ）については、湿度0-90%の間でその重量が-5.0-9.0%の間で変化している。【００７７】
試験例２
本発明の方法で製造した実施例1の一塩酸塩0.5水和物（化合物Ａ）の結晶および従来技術により製造した国際公開第２００６／０６８１６３号パンフレット実施例６の化合物（化合物Ｂ）の無晶系粉末について、それぞれについて1000Luxおよび4000Luxの光源下で2週間保存後の残存率を測定した。その結果を表１に示す。【００７８】
化合物の残存率（％）は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて測定した化合物の残存率面百値から求めた。なお、ＨＰＬＣ測定条件は次の通りである。【００７９】
カラム：CAPCELL PAK C18 UG120 (4.6 mm I.D.x250 mm)
移動相(A/B)：10 ｍＭりん酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ= 6.9）/ＣＨ3ＣＮ
移動相(Bの割合)：30%(0 min)→90%(45 min)
カラム温度：40℃
流速：1 mL/min
UV波長：254 nm【００８０】
【表１】
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【００８１】
表１に示すように、国際公開第2006/068163号における実施例６の化合物（化合物Ｂ）は、1000Luxおよび4000Luxの光源の何れにおいても、安定性が低く、含量低下が認められた。これに対して、本発明の実施例１の化合物（化合物Ａ）は、安定性が高く、1000Luxおよび4000Luxの何れの条件においても、極めて高い安定性が確認された。また、実施例１の化合物（化合物Ａ）は、淡黄色の化合物であるが、1000Luxおよび4000Luxの光源の何れにおいても、本安定性試験実施後、外観の変化はなく、また色の変化は認められなかった。一方、上記条件下において、国際公開第2006/068163号における実施例６の化合物（化合物Ｂ）は、明らかに黄色に変色した。【００８２】
試験例３  薬理試験
In vitro DPP-IV 阻害作用測定試験
種々の濃度で被験化合物を含む溶液を調製し、マイクロアッセイプレートに添加した。更にヒト組換えDPP IV（R&D system）を添加し、室温にて100から110分間プレインキュベートした後、基質（Glycyl-L-proline 4-methylcoumaryl-7-amide、ペプチド研究所；最終濃度40 μmol/L）を添加して酵素反応を開始した。蛍光プレートリーダーを用いて、基質の添加開始10分後から10分間、蛍光変化を経時的に測定し（励起波長380 nm／測定波長 460 nm）、酵素反応速度を求めた。得られた結果より、50%の阻害を示す化合物濃度をIC50値として算出した。【００８３】
【表２】
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【産業上の利用可能性】
【００８４】
本発明によってＤＰＰ−ＩＶ阻害活性を有し、安全性、毒性等で改善された化合物を提供することができる。
本発明化合物は、前糖尿病状態における食後高血糖の抑制、非インスリン依存性糖尿病の治療、関節炎や関節リウマチなど自己免疫性疾患の治療、腸管粘膜疾患の治療、成長促進、移植臓器片の拒絶反応抑制、肥満治療、摂食障害の治療、HIV感染の治療、癌転移の抑制、前立腺肥大症の治療、歯根膜炎の治療、および骨粗鬆症の治療に有用である。
【図１】
2009113423.tif 000015
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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