(57)【要約】【課題】アミロイドを標的とした画像診断プローブとして有効な化合物及び該化合物を配合したアルツハイマー病診断剤を得る。【解決手段】下記式（１）：【化１】2012176587.tif 000028（式中、Ｒ１は放射性ハロゲン置換基、A1、A2、A3及びA4のうち０〜２個がＮであり残りはCHである。）で表される化合物又はその塩、及び前記式（１）で表される化合物又はその塩を配合してなるアルツハイマー病診断剤。本化合物及び本アルツハイマー病診断剤は、投与後脳内に移行し、脳に沈着したアミロイドへの良好な集積性を示す。【選択図】なし
2012176587.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）：
【化１】
2012176587.tif 000025
（式中、Ｒ１は放射性ハロゲン置換基、A1、A2、A3及びA4のうち０〜２個がＮであり残りはCHである。）で表される化合物又はその塩。
【請求項２】
Ｒ１が、１８Ｆ、７６Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ及び１３１Ｉからなる群より選択される、請求項１記載の化合物又はその塩。
【請求項３】
［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−ピロール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−１，３，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、及び、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンからなる群より選択される、請求項２に記載の化合物又はその塩。
【請求項４】
下記式（２）：
【化２】
2012176587.tif 000026
（式中、Ｒ2は非放射性ハロゲン置換基、ニトロ基、アルキル鎖の炭素数が１〜４であるトリアルキルアンモニウム基、アルキル鎖の炭素数が１〜４であるトリアルキルスタニル置換基及びトリフェニルスタニル基からなる群より選ばれる基、A5、A6、A7及びA8のうち０〜２個がＮであり残りはCHである。）で表される化合物又はその塩。
【請求項５】
下記式（１）：
【化３】
2012176587.tif 000027
（式中、Ｒ１は放射性ハロゲン置換基、A1、A2、A3及びA4のうち０〜２個がＮであり残りはCHである。）で表される化合物又はその塩を配合してなる、アルツハイマー病診断剤。
【請求項６】
Ｒ１が、１８Ｆ、７６Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ及び１３１Ｉからなる群より選択される、請求項４記載のアルツハイマー病診断剤。
【請求項７】
［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−ピロール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−１，３，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、及び、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンからなる群より選択される化合物又はその塩を配合してなる、請求項６に記載のアルツハイマー病診断剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は頭部変性疾患の診断に用いる化合物に関する。より詳しくは、アルツハイマー病を初めとするアミロイドが蓄積する疾患の診断において、病巣部位におけるアミロイドの検出に有用な化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アミロイドと呼ばれる繊維状蛋白質が体内の種々の器官あるいは組織に沈着することにより発症する疾患は、アミロイドーシスと総称されている。アミロイドーシスに共通しているのはアミロイドと呼ばれるβシート構造に富んだ繊維状蛋白質が全身の諸臓器あるいは局所に沈着し、その臓器や組織における機能異常を生じる点である。【０００３】
アミロイドーシスの代表的疾患であるアルツハイマー病（以下、ＡＤという）は、認知症の原因となる疾患として知られている。この病気は、漸次進行性にアミロイドが脳に沈着して死に至る疾患であるため、他のアミロイドーシスと比較しても社会的関心の高い疾患であるといえる。近年、先進各国では社会の高齢化に伴いＡＤ患者数が急激に増加しており、社会的な問題となっている。【０００４】
病理組織学的見地によると、ＡＤは、老人斑（senile plaques）の出現、神経原繊維変化（neurofibrillary tangles）及び広範な神経脱落の３つの脳内病理所見によって特徴付けられる。老人斑はアミロイドを主要構成成分とする構造物であり、ＡＤ発症における最初期、すなわち臨床症状が出現する１０年以上前に出現する脳内の病理所見とされる。【０００５】
ＡＤの診断は、ＣＴ及びＭＲＩ等の画像診断を補助的に組み合わせた上で、種々の認知機能評価（例えば、長谷川式スケール、ADAS-JCog、MMSE等）を行うことにより実施されている。しかし、このような認知機能評価に基づく方法は、発症初期における診断感度が低く、さらに、各個人が生来有する認識機能により診断結果が影響を受けやすいという欠点がある。また、確定診断には疾患部の生検が不可欠であるため、患者の存命中にＡＤの確定診断を行うことは、現状では事実上不可能である（非特許文献１）。【０００６】
一方、老人斑を構成するアミロイドはアミロイドβ蛋白質（以下、Ａβという）の凝集体であることが報告されており、さらにＡβの凝集体がβシート構造をとることで神経細胞毒性を示すことが多くの研究より報告されている。これらの知見に基づき、Ａβの脳内への沈着が引き金となり、その下流の現象として神経原繊維変化の形成及び神経脱落が起こるとする、いわゆる「アミロイドカスケード仮説」が提唱されている（非特許文献２）。【０００７】
このような事実に基づき、近年、アミロイドに高い親和性を有する化合物をマーカーとして用い、ＡＤをインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で検出する試みがなされている。
このような脳内アミロイド画像診断用プローブの多くは、アミロイドに対する親和性が高く、かつ脳移行性の高い疎水性の低分子化合物を、種々の放射性核種、例えば１１Ｃ、１８Ｆ及び１２３Ｉ等で標識した化合物である。具体例として、６−ヨード−２−［４’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル］ベンゾチアゾール（以下、ＴＺＤＭという）や６−ヒドロキシ−２−［４’−（Ｎ−メチルアミノ）フェニル］ベンゾチアゾール（以下、６−ＯＨ−ＢＴＡ−１という）を始めとする種々のチオフラビン誘導体（特許文献１、非特許文献３）、（Ｅ）−４−メチルアミノ−４’―ヒドロキシスチルベン（以下、ＳＢ−１３という）や（Ｅ）−４−ジメチルアミノ−４’―ヨードスチルベン（以下、ｍ−Ｉ−ＳＢという）を初めとするスチルベン化合物（特許文献２、非特許文献４，非特許文献５）、６−ヨード−２−［４’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル］ベンゾオキサゾール（以下、ＩＢＯＸという），６−［２−（フルオロ）エトキシ］−２−［２−（２−ジメチルアミノチアゾール−５−イル）エテニル］ベンゾオキサゾールを初めとするベンゾオキサゾール誘導体（非特許文献６，非特許文献７）、２−（１−｛６−［（２−フルオロエチル）（メチル）アミノ］−２−ナフチル｝エチリデン）マロノニトリル（以下、ＦＤＤＮＰという）を初めとするＤＤＮＰ誘導体（特許文献４、非特許文献８）及び６−ヨード−２−［４’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（以下、ＩＭＰＹという）を初めとするイミダゾピリジン誘導体（特許文献３、非特許文献９）等を１１Ｃや放射性ハロゲンで標識した化合物、イミダゾピリジン−フェニルに炭素を介して窒素含有５員芳香族複素環式基を結合した化合物を放射性ハロゲン等で標識した化合物（特許文献５、特許文献６）が報告されている。さらに、これらの画像診断用プローブの一部については、ヒトイメージング研究が実施され、ＡＤ患者において健常例とは明らかに異なる脳への放射能集積を示すことが報告されている（非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２、非特許文献１３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特表２００４−５０６７２３号公報
【特許文献２】特表２００５−５０４０５５号公報
【特許文献３】特表２００５−５１２９４５号公報
【特許文献４】特表２００２−５２３３８３号公報
【特許文献５】国際公開第２００７／０６３９４６号パンフレット
【特許文献６】国際公開第２０１０／１２８５９５号パンフレット
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】J. A. Hardy & G. A. Higgins, “Alzheimer’s Disease: The Amyloid Cascade Hypohesis.”, Science, 1992, 256, p.184-185
【非特許文献２】G. McKhann et al., “Clinical diagnosis of Alzheimer’s disease: Report of the NINCDS-ADRDA Work Group under the auspices of Department of Health and Human Services Task Force on Alzheimer’s Disease.”, Neurology, 1984, 34, p.939-944
【非特許文献３】Z.-P. Zhuang et al., “Radioiodinated Styrylbenzenes and Thioflavins as Probes for Amyloid Aggregates.”, J. Med. Chem., 2001, 44, p.1905-1914
【非特許文献４】Masahiro Ono et al., “11C-labeled stilbene derivatives as Aβ-aggregate-specific PET imaging agents for Alzheimer’s disease.”, Nuclear Medicine and Biology, 2003, 30, p.565-571
【非特許文献５】H. F. Kung et al., “Novel Stilbenes as Probes for amyloid plaques .”, J. American Chemical Society, 2001, 123, p.12740-12741
【非特許文献６】Zhi-Ping Zhuang et al., “IBOX(2-(4’-dimethylaminophenyl)-6- iodobensoxazole): a ligand for imaging amyloid plaques in the brain.”, Nuclear Medicine and Biology, 2001, 28, p.887-894
【非特許文献７】Furumoto Y et al., “[11C]BF-227: A New 11C-Labeled 2-Ethenylbenzoxazole Derivative for Amyloid-β Plaques Imaging.”, European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging, 2005, 32, Sup.1, P759
【非特許文献８】Eric D. Agdeppa et al., “2-Dialkylamino-6-Acylmalononitrile Substituted Naphthalenes (DDNP Analogs): Novel Diagnostic and Therapeutic Tools in Alzheimer’s Disease.”, Molecular Imaging and Biology, 2003, 5, p.404-417
【非特許文献９】Zhi-Ping Zhuang et al., “Structure-Activity Relationship of Imidazo[1,2-a]pyridines as Ligands for Detectingβ-Amyloid Plaques in the Brain.”, J. Med. Chem, 2003, 46, p.237-243
【非特許文献１０】W. E. Klunk et al., “Imaging brain amyloid in Alzheumer’s disease with Pittsburgh Compound-B.”, Ann. Neurol., 2004, 55, p.306-319
【非特許文献１１】Nicolaas P. L. G. Verhoeff et al., “In-Vivo Imaging of Alzheimer Disease β-Amyloid With [11C]SB-13 PET.”, American Journal of Geriatric Psychiatry, 2004, 12, p.584-595
【非特許文献１２】Hiroyuki Arai et al., "[11C]-BF-227 AND PET to Visualize Amyloid in Alzheimer's Disease Patients", Alzheimer's & Dementia: The Journal of the Alzheimer's Association, 2006, 2, Sup.1, S312
【非特許文献１３】Christopher M. Clark et al., "Imaging Amyloid with I123 IMPY SPECT", Alzheimer's & Dementia: The Journal of the Alzheimer's Association, 2006, 2, Sup.1, S342
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
上記の様に、アミロイドを対象とした画像診断プローブとして、種々の化合物が開示され、臨床応用に向けて検討が進められている。しかし、臨床使用に耐え得る性能を有することが確認された化合物は、未だ存在していない。また、幅広い臨床応用を考えると、ＰＥＴ核種のみならず、ＳＰＥＣＴ核種にて標識した場合においても十分な診断性能を有する化合物が望まれる。【００１１】
本発明は上記事情に鑑みてなされたものであり、アミロイドを標的とした画像診断プローブとして有効な新規化合物及び該化合物を配合したアルツハイマー病診断剤を得ることを目的とした。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
発明者等は検討を重ねた結果、イミダゾピリジンピリジニル骨格におけるピリジニル基の２’位炭素に、５員の窒素含有複素環を、該窒素含有複素環の窒素原子を介して結合させた化合物を用いることによって、十分な診断性能を有するアルツハイマー病診断剤が得られることを見出し、本発明を完成した。【００１３】
本発明は、その一側面によると、下記式（１）：【００１４】
【化４】
2012176587.tif 000003
で表される化合物又はその塩、及び前記式（１）で表される化合物又はその塩を配合してなるアルツハイマー病診断剤を提供する。【００１５】
式（１）中、Ｒ１は放射性ハロゲン置換基である。Ｒ１としては種々の放射性ハロゲンを用いることができ、好ましくは１８Ｆ、７６Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ及び１３１Ｉからなる群より選択される放射性ハロゲンを用いることができ、より好ましくは１８Ｆ又は１２３Ｉを用いることができる。
A1、A2、A3及びA4は、これらのうち０〜２個がＮであり残りはCH であり、好ましくはこれらのうち1つ又は２つがＮであり残りはCHである。
従って、本発明の好ましい実施形態によれば、下記式（３）〜（９）：【００１６】
【化５】
2012176587.tif 000004
【００１７】
【化６】
2012176587.tif 000005
【００１８】
【化７】
2012176587.tif 000006
【００１９】
【化８】
2012176587.tif 000007
【００２０】
【化９】
2012176587.tif 000008
【００２１】
【化１０】
2012176587.tif 000009
【００２２】
【化１１】
2012176587.tif 000010
【００２３】
で表される化合物又はその塩、及び前記式（３）〜（９）で表される化合物又はその塩を配合してなるアルツハイマー病診断剤が提供される。【００２４】
本発明は、その別の一側面によると、下記式（２）：【００２５】
【化１２】
2012176587.tif 000011
【００２６】
で表される化合物又はその塩を提供する。【００２７】
式（２）中、Ｒ２は非放射性ハロゲン置換基、ニトロ基、アルキル鎖の炭素数が１〜４であるトリアルキルアンモニウム基、アルキル鎖の炭素数が１〜４であるトリアルキルスタニル置換基及びトリフェニルスタニル基からなる群より選ばれる基、A5、A6、A7及びA8のうち０〜２個がＮであり残りはCHである。【００２８】
式（２）で表される化合物は、上述した式（１）の化合物に対する標識前駆体として、好適に用いる事ができる。
非放射性ハロゲン置換基としては、放射性フッ素を用いた求核置換反応における標的となりうるハロゲン又は放射性ヨウ素との間の同位体交換反応の標的となりうるハロゲンを用いることができ、好ましくは塩素、ヨウ素又は臭素を用いることができる。トリアルキルスタニル置換基としては種々の置換基を用いることができ、トリメチルスタニル置換基及びトリブチルスタニル置換基を好ましく用いることができる。
従って、本発明の好ましい実施形態によれば、下記式（１０）〜（１６）で表される化合物が提供される。【００２９】
【化１３】
2012176587.tif 000012
【００３０】
【化１４】
2012176587.tif 000013
【００３１】
【化１５】
2012176587.tif 000014
【００３２】
【化１６】
2012176587.tif 000015
【００３３】
【化１７】
2012176587.tif 000016
【００３４】
【化１８】
2012176587.tif 000017
【００３５】
【化１９】
2012176587.tif 000018
【発明の効果】
【００３６】
本発明により、生体内における良好なアミロイド描出能を有する、新規なアミロイド親和性化合物及びアルツハイマー病診断剤を得ることが可能となった。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成スキーム
【図２】２−［２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成スキーム
【図３】２−［２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成スキーム
【図４】２−［２−（１H−１，２，４，−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成スキーム
【図５】２−［２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成スキーム
【図６】AD患者脳灰白質ホモジネート又はAD患者脳白質ホモジネートに結合した放射能量の割合（％）
【図７】［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを用いたAD患者脳切片のオートラジオグラフィー
【図８】［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを用いたAD患者脳切片のオートラジオグラフィー
【図９】［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを用いたAD患者脳切片のオートラジオグラフィー
【図１０】［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを用いたAD患者脳切片のオートラジオグラフィー
【図１１】［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを用いたAD患者脳切片のオートラジオグラフィー
【図１２】［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹを用いたAD患者脳切片のオートラジオグラフィー
【図１３】抗アミロイド抗体を用いたAD患者脳切片の免疫染色
【発明を実施するための最良の形態】
【００３８】
（放射性ハロゲン標識化合物の前駆体化合物の合成方法）
以下、２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを例にとり、本発明の一つの実施形態に係る、放射性ハロゲン標識化合物の前駆体化合物の合成方法を説明する。本化合物は、本発明に係る放射性ヨウ素標識化合物の前駆体化合物として、好適に用いられる化合物である。
なお、以下に記載した合成方法は、あくまでも好ましい合成法の例示であり、本発明に係る化合物の製法を限定する意図ではない。【００３９】
２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成スキームを、図１に示す。２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成にあたっては、まず、１H−１，２，３−トリアゾールを、５−アセチル−２−ブロモピリジンと反応させ、５−アセチル−２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジンを合成する（図１、step1）。この工程は、例えば、下記の要領にて行なうことができる。【００４０】
まず、５−アセチル−２−ブロモピリジンと１H−１，２，３，−トリアゾールをジメチルホルムアミドに溶解し，炭酸カリウムを添加する。この混合物を100℃にて２〜６時間攪拌後、反応液を水に注いでジクロロメタンで抽出し、ジクロロメタン層を濃縮してクロマトグラム精製を行なうことにより、５−アセチル−２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジンを得る（図１、step1）。炭酸カリウムの量は、反応中に発生する臭化水素酸を中和できる量であればよく、典型的には原料である５−アセチル−２−ブロモピリジンと等量以上用いればよい。また、１H−１，２，３−トリアゾールの量は、基質に対して過剰量であれば良く、典型的には５−アセチル−２−ブロモピリジンに対してモル比にして３．０倍程度用いればよい。【００４１】
次に、得られた５−アセチル−２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジンをジクロロメタン及びトリエチルアミンに溶解し、０℃程度まで冷却後、ブロモトリメチルシランを添加する。この反応液を室温で１０〜２４時間程度攪拌後、反応液を水に注いでジクロロメタンで抽出し、ジクロロメタン層を濃縮する。濃縮して得られた油状物質をよく乾燥し，テトラヒドロフランに溶解する。この混合物を０℃程度まで冷却後、N‐ブロモこはく酸イミドを添加し、室温で１０〜６０分程度攪拌する。反応終了後、溶媒を留去してクロマトグラム精製を行なうことにより、５−（２−ブロモアセチル）−２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジンを得る（図１、step2）。ブロモトリメチルシランの量は反応基質に対して等量以上用いればよく、典型的には５−アセチル−２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジンに対してモル比にして２．０倍程度用いればよい。また、トリエチルアミンの量は反応中に発生する臭化水素酸を中和できる量であればよく、典型的には臭化トリメチルシランに対して過剰量であればよい。N‐ブロモこはく酸イミドの量は反応基質に対して等量以上であればよいが、５−アセチル−２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジンとモル比にして１．０倍程度用いることが好ましい。【００４２】
得られた５−（２−ブロモアセチル）−２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジンを、公知の方法（例えば、文献Zhi-Ping Zhuang et al., J. Med. Chem, 2003, 46, p.237-243記載の方法）にて２−アミノ−５−ヨードピリジンと反応させて６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを得る（図１、step3）。【００４３】
そして、得られた６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを、公知の方法（たとえば、文献Zhi-Ping Zhuang et al., J. Med. Chem, 2003, 46, p.237-243記載の方法）にてビストリブチルスズと反応させ（図１、step4）、精製することにより、目的物である２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンが得られる。【００４４】
なお、イミダゾピリジン環における６位の置換基をトリブチルスタニル置換基以外のトリアルキルスタニル置換基とした化合物を得る場合は、図1のstep4でビストリブチルスズを用いる代わりに、目的に応じた種々のビストリアルキルスズを用いればよい。例えば、６位の置換基をトリメチルスタニル置換基とした化合物を合成する場合は、図1のstep4においてビストリメチルスズを用いて上記と同様の反応を行えばよい。また、イミダゾピリジン環における６位の置換基をニトロ基とした化合物は、図１のstep3で、2-アミノ-5-ヨードピリジンの代わりに2-アミノ-5-ニトロピリジンを用いて公知の方法にて反応させ、step4を省略する事によって得ることができる。【００４５】
本発明に係るその他の前駆体化合物についても、一般に入手可能な原料を用い、当業者に公知の反応を組み合わせることにより、合成する事ができる。例えば、上記式（２）でＡ５がＮでありＡ６、Ａ７及びＡ８が何れもＣＨである化合物は、図１のstep 1で、１H−１，２，３，−トリアゾールの代わりにピラゾールを用いることにより、上記図１の工程に準じて合成することができる。また、上記式（２）でＡ５、Ａ６、Ａ７及びＡ８が何れもＣＨである化合物は、図１のstep 1で、１H−１，２，３，−トリアゾールの代わりにピロールを用いることにより、上記図１の工程に準じて合成することができる。【００４６】
（放射性ハロゲン標識化合物の合成方法）
次に、放射性ヨード標識体化合物を例にとり、本発明の別の一側面に係る、放射性ハロゲン標識化合物の製造方法について説明する。【００４７】
放射性ヨード標識体化合物の合成は、上記の要領にて合成した標識前駆体化合物を不活性有機溶媒に溶解し、これに公知の方法にて得られた［１２３Ｉ］ヨウ化ナトリウム溶液等を加え、酸及び酸化剤を加えて反応させることによって行うことができる。標識前駆体化合物を溶解させる不活性有機溶媒としては標識前駆体及び［１２３Ｉ］ヨウ化ナトリウム等との間で反応性を有さない種々の溶媒を用いることができ、好ましくはアセトニトリルを用いることができる。【００４８】
酸は種々のものを用いることができ、好ましくは塩酸を用いることができる。
酸化剤は、反応液中のヨウ素を酸化させることができるものであれば特に限定する必要はなく、好ましくは過酸化水素又は過酢酸を用いることができる。酸化剤の添加量は、反応溶液中のヨウ素を酸化させるのに十分な量であれば良い。【００４９】
ヨウ素以外の放射性ハロゲン標識体は、合成目的に応じた標識前駆体を、目的に応じた放射性ハロゲンで標識することによって合成することができる。例えば、［１８F］−６−フルオロ−２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを合成する場合は、標識前駆体である６−ニトロ−２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを、相間移動触媒と炭酸カリウムの存在下で［１８Ｆ］フッ化物イオンと反応させれば良い。【００５０】
（本発明に係る診断剤の調製方法及び使用方法）
本発明に係る診断剤は、他の一般に知られている放射性診断剤と同様、本発明に係る放射性ハロゲン標識化合物を所望により適当なｐＨに調整された水又は生理食塩水、あるいはリンゲル液等に配合させた液として調製することができる。この場合における本化合物の濃度は、配合された本化合物の安定性が得られる濃度以下とする必要がある。本化合物の投与量は、投与された薬剤の分布を画像化するために十分な濃度であれば特に限定する必要はない。例えば、１２３Ｉ標識化合物及び１８Ｆ標識化合物の場合は、体重６０ｋｇの成人一人当り５０〜６００ＭＢｑ程度、静脈投与又は局所投与して使用することができる。投与された薬剤の分布は、公知の方法にて画像化することができ、例えば１２３Ｉ標識化合物の場合はＳＰＥＣＴ装置、１８Ｆ標識化合物の場合はＰＥＴ装置を用いて画像化することができる。【００５１】
以下、実施例、比較例及び参考例を記載して本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの内容に限定されるものではない。なお、下記実施例において、実験に供する各化合物の名称を、表１の様に定義した。【００５２】
【表１】
2012176587.tif 000019
【００５３】
（実施例１）２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成【００５４】
１H−１，２，３−トリアゾール２０７ｍｇ（３．００ｍｍｏｌ相当）をジメチルホルムアミド５ｍＬに溶解したのち、５−アセチル−２−ブロモピリジン２００ｍｇ（１．００ｍｍｏｌ相当）と炭酸カリウム４１４ｍｇ（３．００ｍｍｏｌ相当）を加え、１００℃で３時間加熱した。反応終了後、反応液を室温まで冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液と水を加え、ジクロロメタンで３回抽出を行った。合わせたジクロロメタン層を、水及び飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／酢酸エチル＝４／１）にて精製を行い５−アセチル−２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン５７．２ｍｇ（０．３０４ｍｍｏｌ相当）を得た（図１、step1）。【００５５】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ9.05 ( d, J = 2.3 Hz, 1H ), 8.65 ( d, J = 1.1 Hz, 1H), 8.46 ( dd, J = 8.7, 2.3 Hz, 1H), 8.34 ( d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.86 ( d, J = 1.1 Hz, 1H), 2.68 ( s, 3H)。【００５６】
５−アセチル−２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン５７．２ｍｇ（０．３０４ｍｍｏｌ相当）をジクロロメタン２．０mＬおよびトリエチルアミン１２７μＬに溶解したのち、氷冷下、ブロモトリメチルシラン７８．９μＬ（０．６０８ｍｍｏｌ相当）を滴下した。アルゴンガス雰囲気下、室温で一晩攪拌したのち、反応液に水を加えてジクロロメタンで３回抽出した。合わせたジクロロメタン層を水、飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去して得られた残渣をテトラヒドロフラン２．０mＬに溶解し、氷冷下、N-ブロモこはく酸イミド５４．１ｍｇ（０．３０４ｍｍｏｌ相当）を加え、室温で３０分間攪拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／酢酸エチル＝４／１）にて精製を行い、５−（２−ブロモアセチル）−２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン６６．４ｍｇ（０．２４９ｍｍｏｌ相当）を得た（図１、step2）。【００５７】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ9.12 ( d, J = 2.1 Hz, 1H ), 8.67 ( d, J = 1.1 Hz, 1H), 8.51 ( dd, J = 8.7, 2.3 Hz, 1H), 8.38 ( d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.87 ( d, J = 1.1 Hz, 1H), 4.44 ( s, 2H)。【００５８】
５−（２−ブロモアセチル）−２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン６６．４ｍｇ（０．２４９ｍｍｏｌ相当）と２−アミノ−５−ヨードピリジン５４．８ｍｇ（０．２４９ｍｍｏｌ相当）をアセトニトリル２．０ｍＬに溶解し１００℃の油浴にて１．５時間加熱還流した。反応終了後、反応液を室温まで冷却し、沈殿物をろ別したのち、アセトニトリルで洗浄し、減圧下乾燥させた。得られた粗結晶は、水２ｍＬ−メタノール２ｍＬ混液に懸濁させたのち、これに飽和炭酸水素ナトリウム溶液を約１ｍＬ加え、超音波洗浄器を用いて５分間振とうした。得られた混合物から、沈殿物をろ別して水でよく洗浄し、減圧下乾燥して、６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン４４．０ｍｇ（０．１１３ｍｍｏｌ相当）を得た（図１、step3）。【００５９】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重ジメチルスルホキシド、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ9.11 ( d, J = 2.3 Hz, 1H ), 8.91 ( brs, 1H), 8.82 ( d, J = 0.9 Hz, 1H), 8.57 ( dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 1H), 8.47 ( s, 1H), 8.16 ( d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.94 ( d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.45 ( brs, 2H)。【００６０】
６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン２０ｍｇ（０．０５１５ｍｍｏｌ相当）をジオキサン０．８ｍＬに溶解し、トリエチルアミン０．２ｍＬを加えた後、ビストリブチルスズ５１．５μＬ（０．１３０ｍｍｏｌ相当）とテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム６．０ｍｇ（触媒量）を加えた。反応混合物を１００℃で１６時間攪拌した後、溶媒を減圧下留去し、残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）にて精製を行った。得られた粗結晶をヘキサン−酢酸エチルを用いて再結晶を行い、２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン８．７ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ相当）を得た（図１、step4）。【００６１】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ9.05 ( d, J = 1.4 Hz, 1H ), 8.63 ( brs, 1H), 8.48 ( dd, J = 8.4, 2.1 Hz, 1H), 8.28 ( d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.03 ( t, J = 14.7 Hz, 1H), 7.94 ( s, 1H), 7.85 ( d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.63 ( d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.23 ( d, J = 8.7 Hz, 1H), 1.64-1.49 ( m, 6H), 1.36 ( tt, J = 7.3, 7.3 Hz, 6H), 1.21-1.07 ( m, 6H), 0.91 ( t, J = 7.3 Hz, 9H )。【００６２】
（実施例２）［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（化合物１）の合成【００６３】
実施例１にて合成した２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンのアセトニトリル溶液（濃度：１ｍｇ／ｍＬ）９０μＬに、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸  ８５μＬ、６４１ＭＢｑの［１２３Ｉ］ヨウ化ナトリウム６０μＬ、３０％（Ｗ／Ｖ）過酸化水素１０μＬを添加した。当該混合液を４０℃にて１０分間静置した後、下記の条件のＨＰＬＣに付して［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン画分を分取した。【００６４】
ＨＰＬＣ条件：
カラム：ＹＭＣ  ＰａｃｋＰｒｏ  Ｃ８（商品名、ＹＭＣ社製、サイズ：４．６×１５０ｍｍ）
移動相：０．１％トリフルオロ酢酸含有水／０．１％トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル＝８０／２０→０／１００（２０分）
流速：１．０  ｍＬ／分
検出器：紫外可視吸光光度計（検出波長：２６０ｎｍ）及び放射線検出器（ｒａｙｔｅｓｔ社 ＳＴＥＦＦＩ型）【００６５】
当該画分に水５ｍＬを添加した液をＳｅｐ−Ｐａｋ（登録商標） Ｃ１８カラム（商品名：Ｓｅｐ−Ｐａｋ（登録商標） Ｌｉｇｈｔ Ｃ１８ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ、Ｗａｔｅｒｓ社製、充填剤の充填量１３０ｍｇ）に通液し、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを当該カラムに吸着捕集した。このカラムを水１ｍＬで洗浄した後、ジエチルエーテル１ｍＬを通液して［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを溶出させた。得られた放射能量は合成直後において２３９ＭＢｑであった。また、下記の条件によるＴＬＣ分析を行ったところ、その放射化学的純度は９９．１％であった。【００６６】
ＴＬＣ分析条件：
ＴＬＣプレート：Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４（製品名、メルク社製）
展開相：酢酸エチル／メタノール／ジエチルアミン＝１００／４／１
検出器：Ｒｉｔａ  Ｓｔａｒ（製品名、ｒａｙｔｅｓｔ社製）【００６７】
（実施例３）２−［２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成【００６８】
１H−１，２，３−トリアゾール２０７ｍｇ（３．００ｍｍｏｌ相当）をジメチルホルムアミド５ｍＬに溶解したのち、５−アセチル−２−ブロモピリジン２００ｍｇ（１．００ｍｍｏｌ相当）と炭酸カリウム４１４ｍｇ（３．００ｍｍｏｌ相当）を加え、１００℃で３時間加熱した。反応終了後、反応液を室温まで冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液と水を加え、ジクロロメタンで３回抽出を行った。合わせたジクロロメタン層を、水及び飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／酢酸エチル＝４／１）にて精製を行い５−アセチル−２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン３１．９ｍｇ（０．１７０ｍｍｏｌ相当）を得た（図２、step1）。【００６９】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ9.13 ( d, J = 2.3 Hz, 1H ),, 8.45 ( dd, J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 8.21 ( d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.97 ( s, 2H), 2.69 ( s, 3H)。【００７０】
５−アセチル−２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン３１．９ｍｇ（０．１７０ｍｍｏｌ相当）をジクロロメタン１．０mＬおよびトリエチルアミン７１μＬに溶解したのち、氷冷下、ブロモトリメチルシラン４４．１μＬ（０．５１ｍｍｏｌ相当）を滴下した。アルゴンガス雰囲気下、室温で一晩攪拌したのち、反応液に水を加えてジクロロメタンで３回抽出した。合わせたジクロロメタン層を水、飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去して得られた残渣をテトラヒドロフラン１．０mＬに溶解し、氷冷下、N-ブロモこはく酸イミド３３．３ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ相当）を加え、室温で３０分間攪拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／酢酸エチル＝２／１）にて精製を行い、５−（２−ブロモアセチル）−２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン２０．２ｍｇ（０．０７６ｍｍｏｌ相当）を得た（図２、step2）。【００７１】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ9.18 ( d, J = 2.1 Hz, 1H ), 8.49 ( dd, J = 8.5, 2.1 Hz, 1H), 8.24 ( d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.98 ( s, 2H), 4.45 ( s, 2H)。【００７２】
５−（２−ブロモアセチル）−２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン２０．４ｍｇ（０．０７６４ｍｍｏｌ相当）と２−アミノ−５−ヨードピリジン１６．８ｍｇ（０．０７６４ｍｍｏｌ相当）をアセトニトリル２．０ｍＬに溶解し１００℃の油浴にて１．５時間加熱還流した。反応終了後、反応液を室温まで冷却し、沈殿物をろ別したのち、アセトニトリルで洗浄し、減圧下乾燥させた。得られた粗結晶は、水２ｍＬ−メタノール２ｍＬ混液に懸濁させたのち、これに飽和炭酸水素ナトリウム溶液を約１ｍＬ加え、超音波洗浄器を用いて１０分間振とうした。得られた混合物から、沈殿物をろ別して水でよく洗浄し、減圧下乾燥して、６−ヨード−２−［２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン１０．４ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ相当）を得た（図２、step3）。【００７３】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重ジメチルスルホキシド、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ9.13 ( d, J = 2.3 Hz, 1H ), 8.96 ( brs, 1H), 8.56 ( dd, J = 8.7, 2.3 Hz, 1H), 8.50 ( s, 1H), 8.17 ( s, 2H), 8.10 ( d, J =8.7 Hz, 1H), 7.48 (brs, 2H)。【００７４】
６−ヨード−２−［２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン７ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ相当）をジオキサン０．５ｍＬに溶解し、トリエチルアミン０．１ｍＬを加えた後、ビストリブチルスズ１８μＬ（０．０３６ｍｍｏｌ相当）とテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム２ｍｇ（触媒量）を加えた。反応混合物を１００℃で１６時間攪拌した後、溶媒を減圧下留去し、残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）にて精製を行った。得られた粗結晶をヘキサン−酢酸エチルを用いて再結晶を行い、２−［２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン２．３ｍｇ（０．００４ｍｍｏｌ相当）を得た（図２、step4）。【００７５】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ9.09 ( d, J = 2.1 Hz, 1H ), 8.52 ( dd, J = 8.6, 2.1 Hz, 1H), 8.16 ( d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.03 ( s, 1H), 7.97 ( s, 1H), 7.91 ( s, 2H), 7.632( d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.2 ( d, J = 8.9 Hz, 1H), 1.60-1.50 ( m, 6H), 1.36 ( tt, J = 7.3, 7.3 Hz, 6H), 1.20-1.06 ( m, 6H), 0.91 ( t, J = 7.1 Hz, 9H )。【００７６】
（実施例４）［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（化合物２）の合成【００７７】
実施例３にて合成した２−［２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンのアセトニトリル溶液（濃度：１ｍｇ／ｍＬ）４５μＬに、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸  ４２．５μＬ、３４１ＭＢｑの［１２３Ｉ］ヨウ化ナトリウム３０μＬ、３０％（Ｗ／Ｖ）過酸化水素５μＬを添加した。当該混合液を４０℃にて１０分間静置した後、下記の条件のＨＰＬＣに付して［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン画分を分取した。【００７８】
ＨＰＬＣ条件：
カラム：ＹＭＣ  ＰａｃｋＰｒｏ  Ｃ８（商品名、ＹＭＣ社製、サイズ：４．６×１５０ｍｍ）
移動相：０．１％トリフルオロ酢酸含有水／０．１％トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル＝８０／２０→０／１００（２０分）
流速：１．０  ｍＬ／分
検出器：紫外可視吸光光度計（検出波長：２６０ｎｍ）及び放射線検出器    （ｒａｙｔｅｓｔ社 ＳＴＥＦＦＩ型）【００７９】
当該画分に水５ｍＬを添加した液をＳｅｐ−Ｐａｋ（登録商標） Ｃ１８カラム（商品名：Ｓｅｐ−Ｐａｋ（登録商標） Ｌｉｇｈｔ Ｃ１８ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ、Ｗａｔｅｒｓ社製、充填剤の充填量１３０ｍｇ）に通液し、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを当該カラムに吸着捕集した。このカラムを水１ｍＬで洗浄した後、ジエチルエーテル１ｍＬを通液して［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（２H−１，２，３−トリアゾール−２−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを溶出させた。得られた放射能量は合成直後において９１．８ＭＢｑであった。また、下記の条件によるＴＬＣ分析を行ったところ、その放射化学的純度は９７．６％であった。【００８０】
ＴＬＣ分析条件：
ＴＬＣプレート：Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４（製品名、メルク社製）
展開相：酢酸エチル／メタノール／ジエチルアミン＝１００／４／１
検出器：Ｒｉｔａ  Ｓｔａｒ（製品名、ｒａｙｔｅｓｔ社製）【００８１】
（実施例５）２−［２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成【００８２】
イミダゾール２０４ｍｇ（３．００ｍｍｏｌ相当）をジメチルホルムアミド５ｍＬに溶解したのち、５−アセチル−２−ブロモピリジン２００ｍｇ（１．００ｍｍｏｌ相当）と炭酸カリウム４１４ｍｇ（３．００ｍｍｏｌ相当）を加え、１００℃で３時間加熱した。反応終了後、反応液を室温まで冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液と水を加え、ジクロロメタンで３回抽出を行った。合わせたジクロロメタン層を、水及び飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／酢酸エチル＝４／１）にて精製を行い５−アセチル−２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン８７ｍｇ（０．４６２ｍｍｏｌ相当）を得た（図３、step1）。【００８３】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ9.03 ( d, J = 2.3 Hz, 1H ), 8.43 ( brs, 1H), 8.38 ( dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 1H), 7.69 ( brs, 1H), 7.44 ( d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.23 ( brs, 1H), 2.66 ( s, 3H)。【００８４】
５−アセチル−２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン８７ｍｇ（０．４６２ｍｍｏｌ相当）をジクロロメタン３．０mＬおよびトリエチルアミン１９３μＬに溶解したのち、氷冷下、ブロモトリメチルシラン１２０μＬ（０．９２４ｍｍｏｌ相当）を滴下した。アルゴンガス雰囲気下、室温で一晩攪拌したのち、反応液に水を加えてジクロロメタンで３回抽出した。合わせたジクロロメタン層を水、飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去して得られた残渣をテトラヒドロフラン３．０mＬに溶解し、氷冷下、N-ブロモこはく酸イミド８２．２ｍｇ（０．４６２ｍｍｏｌ相当）を加え、室温で３０分間攪拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／酢酸エチル＝２／１）にて精製を行い、５−（２−ブロモアセチル）−２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン２４．３ｍｇ（０．０９１ｍｍｏｌ相当）の粗結晶を得た（図３、step2）。【００８５】
５−（２−ブロモアセチル）−２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジンの粗結晶２４．３ｍｇ（０．０８７６ｍｍｏｌ相当）と２−アミノ−５−ヨードピリジン１９．３ｍｇ（０．０８７６ｍｍｏｌ相当）をアセトニトリル２．０ｍＬに溶解し１００℃の油浴にて１．５時間加熱還流した。反応終了後、反応液を室温まで冷却し、沈殿物をろ別したのち、アセトニトリルで洗浄し、減圧下乾燥させた。得られた粗結晶は、水２ｍＬ−メタノール２ｍＬ混液に懸濁させたのち、これに飽和炭酸水素ナトリウム溶液を約１ｍＬ加え、超音波洗浄器を用いて１０分間振とうした。得られた混合物から、沈殿物をろ別して水でよく洗浄し、減圧下乾燥して、６−ヨード−２−［２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの粗結晶を得た．得られた粗結晶をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル／メタノール＝１０／１）にて精製を行い、６−ヨード−２−［２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン１７．７ｍｇ（０．０４６ｍｍｏｌ相当）を得た（図３、step3）。【００８６】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重ジメチルスルホキシド、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ9.05 ( d, J = 2.3 Hz, 1H ), 8.94 ( s, 1H), 8.55 ( s, 1H), 8.48 ( dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 1H), 8.46 ( s, 1H), 7.97 ( s, 1H), 7.89 ( d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.47 ( brs, 2H), 7.14 ( s, 1H)。【００８７】
６−ヨード−２−［２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン１０ｍｇ（０．０２９ｍｍｏｌ相当）をジオキサン０．５ｍＬに溶解し、トリエチルアミン０．１ｍＬを加えた後、ビストリブチルスズ２６μＬ（０．０５２ｍｍｏｌ相当）とテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム３ｍｇ（触媒量）を加えた。反応混合物を１００℃で１６時間攪拌した後、溶媒を減圧下留去し、残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）にて精製を行った。得られた粗結晶をヘキサン−酢酸エチルを用いて再結晶を行い、２−［２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン３．１ｍｇ（０．００６ｍｍｏｌ相当）を得た（図３、step4）。【００８８】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ8.99 ( d, J = 2.3 Hz, 1H ), 8.44 ( dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 1H), 8.40 ( brs, 1H), 8.02 ( brs, 1H), 7.91 ( s, 1H), 7.68 ( brs, 1H), 7.62 ( d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.44 ( d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.23 ( brs, 1H), 7.22 ( d, J = 7.8 Hz, 1H), 1.62-1.50 ( m, 6H), 1.36 ( tt, J = 7.3, 7.3 Hz, 6H), 1.20-1.08 ( m, 6H), 0.91 ( t, J = 7.3 Hz, 9H )。【００８９】
（実施例６）［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（化合物３）の合成【００９０】
実施例５にて合成した２−［２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンのアセトニトリル溶液（濃度：１ｍｇ／ｍＬ）４５μＬに、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸  ４２．５μＬ、４８５ＭＢｑの［１２３Ｉ］ヨウ化ナトリウム３０μＬ、３０％（Ｗ／Ｖ）過酸化水素５μＬを添加した。当該混合液を４０℃にて１０分間静置した後、下記の条件のＨＰＬＣに付して［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン画分を分取した。【００９１】
ＨＰＬＣ条件：
カラム：ＹＭＣ  ＰａｃｋＰｒｏ  Ｃ８（商品名、ＹＭＣ社製、サイズ：４．６×１５０ｍｍ）
移動相：０．１％トリフルオロ酢酸含有水／０．１％トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル＝９０／１０→０／１００（２５分）
流速：１．０  ｍＬ／分
検出器：紫外可視吸光光度計（検出波長：２６０ｎｍ）及び放射線検出器    （ｒａｙｔｅｓｔ社 ＳＴＥＦＦＩ型）【００９２】
当該画分に水５ｍＬを添加した液をＳｅｐ−Ｐａｋ（登録商標） Ｃ１８カラム（商品名：Ｓｅｐ−Ｐａｋ（登録商標） Ｌｉｇｈｔ Ｃ１８ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ、Ｗａｔｅｒｓ社製、充填剤の充填量１３０ｍｇ）に通液し、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを当該カラムに吸着捕集した。このカラムを水１ｍＬで洗浄した後、ジエチルエーテル１ｍＬを通液して［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−イミダゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを溶出させた。得られた放射能量は合成直後において４０．１ＭＢｑであった。また、下記の条件によるＴＬＣ分析を行ったところ、その放射化学的純度は９１．３％であった。【００９３】
ＴＬＣ分析条件：
ＴＬＣプレート：Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４（製品名、メルク社製）
展開相：酢酸エチル／メタノール／ジエチルアミン＝１００／４／１
検出器：Ｒｉｔａ  Ｓｔａｒ（製品名、ｒａｙｔｅｓｔ社製）【００９４】
（実施例７）２−［２−（１H−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成【００９５】
１H−１，２，４−トリアゾール６２２ｍｇ（９．００ｍｍｏｌ相当）をジメチルホルムアミド１０ｍＬに溶解したのち、５−アセチル−２−ブロモピリジン６００ｍｇ（３．００ｍｍｏｌ相当）と炭酸カリウム１．２４ｇ（９．００ｍｍｏｌ相当）を加え、１００℃で３時間加熱した。反応終了後、反応液を室温まで冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液と水を加え、ジクロロメタンで３回抽出を行った。合わせたジクロロメタン層を、水及び飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／酢酸エチル＝４／１）にて精製を行い５−アセチル−２−（１H−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン４８０ｍｇ（２．５５ｍｍｏｌ相当）を得た（図４、step1）。【００９６】
５−アセチル−２−（１H−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン４８０ｍｇ（２．５５ｍｍｏｌ相当）をジクロロメタン１０mＬおよびトリエチルアミン１．０７ｍＬに溶解したのち、氷冷下、ブロモトリメチルシラン６６２μＬ（５．１０ｍｍｏｌ相当）を滴下した。アルゴンガス雰囲気下、室温で一晩攪拌したのち、反応液に水を加えてジクロロメタンで３回抽出した。合わせたジクロロメタン層を水、飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去して得られた残渣をテトラヒドロフラン１０mＬに溶解し、氷冷下、N-ブロモこはく酸イミド４５４ｍｇ（２．５５ｍｍｏｌ相当）を加え、室温で３０分間攪拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／酢酸エチル＝２／１）にて精製を行い、５−（２−ブロモアセチル）−２−（１H−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン６５７ｍｇ（２．４６ｍｍｏｌ相当）を得た（図４、step2）。【００９７】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ9.27 ( brs, 1H), 9.07 ( d, J = 2.1 Hz, 1H ), 8.48 ( dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.06 ( d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.43 ( s, 2H)。【００９８】
５−（２−ブロモアセチル）−２−（１H−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン６５７ｍｇ（２．４６ｍｍｏｌ相当）と２−アミノ−５−ヨードピリジン５４１ｍｇ（２．４６ｍｍｏｌ相当）をアセトニトリル５．０ｍＬに溶解し１００℃の油浴にて１．５時間加熱還流した。反応終了後、反応液を室温まで冷却し、沈殿物をろ別したのち、アセトニトリルで洗浄し、減圧下乾燥させた。得られた粗結晶は、水２ｍＬ−メタノール２ｍＬ混液に懸濁させたのち、これに飽和炭酸水素ナトリウム溶液を約１ｍＬ加え、超音波洗浄器を用いて１０分間振とうした。得られた混合物から、沈殿物をろ別して水でよく洗浄し、減圧下乾燥して、６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン６７５ｍｇ（１．７４ｍｍｏｌ相当）を得た（図４、step3）。【００９９】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重ジメチルスルホキシド、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ9.38 ( brs, 1H), 9.10 ( d, J = 2.1 Hz, 1H ), 8.96 ( brs, 1H), 8.57 ( dd, J = 8.5, 2.1 Hz, 1H), 8.49 ( s, 1H), 8.31 ( s, 1H), 7.96 ( d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.49 ( brs, 2H)。【０１００】
６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン１００ｍｇ（０．２５８ｍｍｏｌ相当）をジオキサン５．０ｍＬに溶解し、トリエチルアミン０．５ｍＬを加えた後、ビストリブチルスズ２５８μＬ（０．５１６ｍｍｏｌ相当）とテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム２９．８ｍｇ（触媒量）を加えた。反応混合物を１００℃で１６時間攪拌した後、溶媒を減圧下留去し、残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）にて精製を行った。得られた粗結晶をヘキサン−酢酸エチルを用いて再結晶を行い、２−［２−（１H−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン４７ｍｇ（０．０８５ｍｍｏｌ相当）を得た（図４、step4）。【０１０１】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ9.21 ( s, 1H), 8.99 ( d, J = 2.1 Hz, 1H ), 8.48 ( dd, J = 8.4, 2.1 Hz, 1H), 8.12 ( s, 1H), 7.97 ( d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.02 ( t, J = 14.7 Hz, 1H), 7.93 ( s, 1H), 7.62 ( d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.22 ( d, J = 8.7 Hz, 1H), 1.65-1.49 ( m, 6H), 1.36 ( tt, J = 7.3, 7.3 Hz, 6H), 1.21-1.07 ( m, 6H), 0.91 ( t, J = 7.3 Hz, 9H )。【０１０２】
（実施例８）［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（化合物４）の合成【０１０３】
実施例７にて合成した２−［２−（１H−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンのアセトニトリル溶液（濃度：１ｍｇ／ｍＬ）９０μＬに、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸  ８５μＬ、１１２７ＭＢｑの［１２３Ｉ］ヨウ化ナトリウム６０μＬ、３０％（Ｗ／Ｖ）過酸化水素１０μＬを添加した。当該混合液を４０℃にて１０分間静置した後、下記の条件のＨＰＬＣに付して［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン画分を分取した。【０１０４】
ＨＰＬＣ条件：
カラム：ＹＭＣ  ＰａｃｋＰｒｏ  Ｃ８（商品名、ＹＭＣ社製、サイズ：４．６×１５０ｍｍ）
移動相：０．１％トリフルオロ酢酸含有水／０．１％トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル＝９０／１０→０／１００（２０分）
流速：１．０  ｍＬ／分
検出器：紫外可視吸光光度計（検出波長：２６０ｎｍ）及び放射線検出器（ｒａｙｔｅｓｔ社 ＳＴＥＦＦＩ型）【０１０５】
当該画分に水５ｍＬを添加した液をＳｅｐ−Ｐａｋ（登録商標） Ｃ１８カラム（商品名：Ｓｅｐ−Ｐａｋ（登録商標） Ｌｉｇｈｔ Ｃ１８ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ、Ｗａｔｅｒｓ社製、充填剤の充填量１３０ｍｇ）に通液し、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを当該カラムに吸着捕集した。このカラムを水１ｍＬで洗浄した後、ジエチルエーテル１ｍＬを通液して［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（１H−１，２，４−トリアゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを溶出させた。得られた放射能量は合成直後において５３６ＭＢｑであった。また、下記の条件によるＴＬＣ分析を行ったところ、その放射化学的純度は９５．５％であった。【０１０６】
ＴＬＣ分析条件：
ＴＬＣプレート：Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４（製品名、メルク社製）
展開相：酢酸エチル／メタノール／ジエチルアミン＝１００／４／１
検出器：Ｒｉｔａ  Ｓｔａｒ（製品名、ｒａｙｔｅｓｔ社製）【０１０７】
（参考例１）［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹの合成【０１０８】
アミロイド結合性の測定並びに脳集積性に関する検討における比較例に用いるため、下記の工程に従い、［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹを合成した。【０１０９】
文献（Zhi-Ping Zhuang et al., J. Med. Chem, 2003, 46, p.237-243）記載の方法に従い、２−［４’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを合成し、アセトニトリルに溶解した（濃度：１ｍｇ／ｍＬ）。当該溶液５０μＬに、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸  ５０μＬ、１０７５ＭＢｑの［１２３Ｉ］ヨウ化ナトリウム８０μＬ、１ｍｍｏｌ／Ｌ ヨウ化ナトリウム溶液 ２３μＬ、３０％（Ｗ／Ｖ）過酸化水素１５μＬを添加した。当該混合液を４０℃にて１０分間静置した後、実施例２と同様の条件によるＨＰＬＣに付して［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹ画分を分取した。【０１１０】
当該画分に水１０ｍＬを添加した液をＳｅｐ−Ｐａｋ Ｃ１８カラム（商品名：Ｓｅｐ−Ｐａｋ（登録商標） Ｌｉｇｈｔ Ｃ１８ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ、Ｗａｔｅｒｓ社製、充填剤の充填量１３０ｍｇ）に通液し、［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹを当該カラムに吸着捕集した。このカラムを水１ｍＬで洗浄した後、ジエチルエーテル１ｍＬを通液して［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹを溶出させた。得られた放射能量は合成直後において１７０ＭＢｑであった。また、実施例2と同様の条件にてＴＬＣ分析を行ったところ、その放射化学的純度は９８．５％であった。【０１１１】
（実施例９）オクタノール抽出法を用いた分配係数の測定【０１１２】
化合物の血液脳関門（以下、BBBとする）透過性の指標として一般に知られているオクタノール抽出法を用いた分配係数（以下、logPoctanolとする）を測定した。【０１１３】
（方法）
化合物１、化合物２、化合物３及び化合物４を、水飽和1-オクタノール溶液にてそれぞれ約１ＭＢｑ／ｍＬに調製し、試料溶液とした。各試料溶液を、それぞれ、３つのマイクロチューブに３０μＬずつ添加した。各試料溶液を添加した３つのマイクロチューブに対し、水飽和1-オクタノール及び1-オクタノール飽和水の両者をそれぞれ２００μＬ、４００μＬ、又は８００μＬとなるよう添加した（それぞれ、２００μＬ添加試料、４００μＬ添加試料、８００μＬ添加試料という）。各マイクロチューブを攪拌した後、5分間振とうした（２０〜２５±２℃，回転数２０回／分）。次いで、各マイクロチューブ内の混合液を遠心機（形式：T2-MC、BECKMAN社製）で遠心分離（２３℃、３０００ｇ×２０分）した後、オクタノール層及び水層をそれぞれ５０μＬ分取し、放射能をオートウェル・ガンマシステム（形式：ARC-7001，アロカ社製）にて計測した。得られたカウントを用い、下記数式（1）よりlogPoctanolを算出した。なお、logPoctanolの値は、２００μＬ添加試料、４００μＬ添加試料、８００μＬ添加試料のそれぞれについて算出された値の平均値とした。【０１１４】
【数１】
2012176587.tif 000020
【０１１５】
（結果）
結果を表２に示す。化合物１、化合物２、化合物３及び化合物４のlogPoctanolの値は、それぞれ２．１０、２．０５、１．９１及び２．２３であった。BBB透過性における化合物の最適なlogPoctanol値の範囲は１〜３であることが知られている（Douglas D. Dischino et al., J.Nucl.Med., (1983), 24, p.1030-1038）。以上の結果より、化合物１、化合物２、化合物３及び化合物４は、BBB透過性を有することが示唆された。【０１１６】
【表２】
2012176587.tif 000021
【０１１７】
（実施例１０）２−［２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンの合成【０１１８】
ピラゾール４０７．９ｍｇ（５．９９ｍｍｏｌ相当）をジメチルホルムアミド１０ｍＬに溶解したのち、５−アセチル−２−ブロモピリジン４００．０ｍｇ（１．９９ｍｍｏｌ相当）と炭酸カリウム８２７．９ｍｇ（５．９９ｍｍｏｌ相当）を加え、１００℃で５時間加熱した。反応終了後、反応液を室温まで冷却し、水を加え、ジクロロメタンで２回抽出を行った。合わせたジクロロメタン層を、水及び飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／酢酸エチル＝５０／１）にて精製を行い５−アセチル−２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン３０４．０ｍｇ（１．６２ｍｍｏｌ相当）を得た。（図５、step 1）【０１１９】
５−アセチル−２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン１００．０ｍｇ（０．５３ｍｍｏｌ相当）をジクロロメタン４mＬおよびトリエチルアミン２３０μＬに溶解したのち、氷冷下、ブロモトリメチルシラン１４０μＬ（１．０７ｍｍｏｌ相当）を滴下した。アルゴンガス雰囲気下、室温で一晩攪拌したのち、反応液を水、飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去して得られた残渣をテトラヒドロフラン４mＬに溶解し、N-ブロモこはく酸イミド９４．３ｍｇ（０．５３ｍｍｏｌ相当）を加え、室温で１時間攪拌した。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／酢酸エチル＝５０／１）にて精製を行い、５−（２−ブロモアセチル）−２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン１００．０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ相当）を得た。（図５、step 2）【０１２０】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ9.02 ( d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.63 ( d, J = 1.9 Hz, 1H), 8.38 ( dd, J = 8.7, 1.9 Hz, 1H), 8.10 ( d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.79 ( s, 1H), 6.52 ( t, J = 1.9 Hz, 1H), 4.41 ( s, 2H)。【０１２１】
５−（２−ブロモアセチル）−２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン１００．０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ相当）と２−アミノ−５−ヨードピリジン８３．６ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ相当）をアセトニトリル３．８ｍＬに溶解し１００℃の油浴にて４時間加熱還流した。反応終了後、反応液を室温まで冷却し、沈殿物をろ別したのち、アセトニトリルで洗浄し、減圧下乾燥させた。得られた粗結晶は、水５０ｍＬ−メタノール５０ｍＬ混液に懸濁させたのち、これに飽和炭酸水素ナトリウム溶液を約５０ｍＬ加え、超音波洗浄器を用いて１時間振とうした。得られた混合物から、沈殿物をろ別して水でよく洗浄し、減圧下乾燥して、２−［２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−ヨードイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン８０．２ｍｇ（０．２１ｍｍｏｌ相当）を得た。（図５、step 3）【０１２２】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重ジメチルスルホキシド、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ9.04 ( d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.97 ( s, 1H), 8.66 ( d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.50 ( dd, J = 8.3, 2.3 Hz, 1H), 8.46 ( s, 1H), 8.01 ( d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.86 - 7.85 ( m, 1H), 7.48 ( s, 2H), 6.61 - 6.60 ( m, 1H)。【０１２３】
２−［２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−ヨードイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン５０．０ｍｇ（０．１２９ｍｍｏｌ相当）をジオキサン２．０ｍＬに溶解し、トリエチルアミン０．５ｍＬを加えた後、ビストリブチルスズ１２９μＬ（０．２５８ｍｍｏｌ相当）とテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム１５．０ｍｇ（触媒量）を加えた。反応混合物を１００℃で２６時間攪拌した後、溶媒を減圧下留去し、残渣をフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）にて精製を行った。得られた粗結晶をヘキサン−酢酸エチルを用いて再結晶を行い、２−［２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン２５．１ｍｇ（０．０４６ｍｍｏｌ相当）を得た。（図５、step 4）【０１２４】
使用ＮＭＲ装置：ＪＮＭ−ＥＣＰ−５００（日本電子株式会社製）
１Ｈ−ＮＭＲ（溶媒：重クロロホルム、共鳴周波数：５００ＭＨｚ）：δ8.94 ( d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.66 ( d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.40 ( dd, J = 8.7, 2.3 Hz, 1H), 8.05 ( d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.01 ( s, 1H), 7.89 ( s, 1H), 7.75 ( s, 1H), 7.61 ( d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.20 ( d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.48 ( s, 1H), 1.59-1.53 ( m, 6H), 1.39-1.32 ( m, 6H), 1.14-1.09 ( m, 6H), 0.90 ( t, J = 7.4 Hz, 9H)。【０１２５】
（実施例１１）［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（化合物５）の合成【０１２６】
実施例１０にて合成した２−［２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］−６−トリブチルスタニルイミダゾ［１，２−ａ］ピリジンのアセトニトリル溶液（濃度：１ｍｇ／ｍＬ）９０μＬに、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸  １７０μＬ、４２６ＭＢｑの［１２３Ｉ］ヨウ化ナトリウム６０μＬ、３０％（Ｗ／Ｖ）過酸化水素１０μＬを添加した。当該混合液を４０℃にて１０分間静置した後、下記の条件のＨＰＬＣに付して［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン画分を分取した。 【０１２７】
ＨＰＬＣ条件：
カラム：ＹＭＣ  ＰａｃｋＰｒｏ  Ｃ８（商品名、ＹＭＣ社製、サイズ：４．６×１５０ｍｍ）
移動相：０．１％トリフルオロ酢酸含有水／０．１％トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル＝８０／２０→１０／９０（２０分）
流速：１．０  ｍＬ／分
検出器：紫外可視吸光光度計（検出波長：２６０ｎｍ）及び放射線検出器（ｒａｙｔｅｓｔ社 ＳＴＥＦＦＩ型）【０１２８】
当該画分に水１０ｍＬを添加した液をＳｅｐ−Ｐａｋ（登録商標） Ｃ１８カラム（商品名：Ｓｅｐ−Ｐａｋ（登録商標） Ｌｉｇｈｔ Ｃ１８ Ｃａｒｔｒｉｄｇｅｓ、Ｗａｔｅｒｓ社製、充填剤の充填量１３０ｍｇ）に通液し、［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを当該カラムに吸着捕集した。このカラムを水１ｍＬで洗浄した後、ジエチルエーテル１ｍＬを通液して［１２３Ｉ］−６−ヨード−２−［２−（ピラゾール−１−イル）ピリジン−５−イル］イミダゾ［１，２−ａ］ピリジンを溶出させた。得られた放射能量は合成直後において４９ＭＢｑであった。また、下記の条件によるＴＬＣ分析を行ったところ、その放射化学的純度は９７．８％であった。【０１２９】
ＴＬＣ分析条件：
ＴＬＣプレート：Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４（製品名、メルク社製）
展開相：酢酸エチル／メタノール／ジエチルアミン＝１００／４／１
検出器：Ｒｉｔａ  Ｓｔａｒ（製品名、ｒａｙｔｅｓｔ社製）【０１３０】
（実施例１２）アミロイド結合性の測定【０１３１】
化合物１、化合物３、化合物４、化合物５及び［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹのアミロイド凝集体に対する結合性を、以下のｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合試験により評価した。【０１３２】
Analytical Biological Services社（米国）より市販されているAD患者脳組織（Frontal lobe）より調製したAD患者脳灰白質ホモジネート及びAD患者脳白質ホモジネートを用いて実施した。なお、本実験に使用した脳組織に関しては、灰白質にアミロイドの沈着が認められ、かつ白質にアミロイドが存在しないことを、共通ドナー由来の薄切切片を用いた抗アミロイド抗体{ Anti-Human Amyloidβ（N）（82E1）Mouse IgG MoAb（株式会社免疫生物研究所）}による免疫染色により確認している。【０１３３】
（方法）
化合物１、化合物３、化合物４、化合物５及び［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹを放射能濃度５０MBｑ／ｍＬになるよう５０ｍｍｏｌ／ＬのL−システイン塩酸塩を含む生理食塩液を用いて調製した。調製した溶液を０．１% ウシ血清アルブミン（以下、BSAとする）含有５ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝生理食塩液を用いて反応溶液中における各被験物質の濃度が０．０５〜５．５ｐｍｏｌ／Ｌとなるよう希釈し、試料溶液とした。９６穴マイクロプレートの各ウェルに、０．１% BSA含有５ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝生理食塩液を１５０μＬ、調製した各試料溶液を５０μＬ添加したものを、各試料溶液ごとに２つずつ調製した。それぞれの試料溶液を添加した各２つのウェルのうち、一方にAD患者脳灰白質ホモジネートを、他の一方にAD患者脳白質ホモジネート（最終濃度１００μｇ protein／ｍL）をそれぞれ５０μＬ添加し反応を開始した。反応溶液を３時間振とうした後（２２℃、４００ｒｐｍ）、グラスファイバーフィルター（マルチスクリーンHTS FB、ミリポア社製）を用いて反応溶液をろ過した。ろ過後のフィルターを０．１% BSA含有５ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝生理食塩液で洗浄した後（２００μＬ×３回）、フィルター残存放射能をオートウェル・ガンマシステム（形式：ARC-7001、アロカ社製）にて測定した。得られたカウントから添加放射能量に対するAD患者脳灰白質ホモジネート又はAD患者脳白質ホモジネートへ結合した放射能量の割合（％）を算出した。なお、上記は３回繰り返し行った。【０１３４】
（結果）
結果を図６及び表３に示す。AD患者脳灰白質ホモジネートを加えた群では、AD患者脳白質ホモジネートを添加した群と比較して結合の割合（％）が総じて高い値を示した。したがって化合物１、化合物３、化合物４及び化合物５は、１２３Ｉ−ＩＭＰＹと同様、脳内に沈着するアミロイドに対し結合性を有することが示唆された。 【０１３５】
【表３】
2012176587.tif 000022
【０１３６】
（実施例１３）脳内移行性及びクリアランスの測定【０１３７】
化合物１、化合物２、化合物３、化合物４及び化合物５を用い、雄性のＷｉｓｔａｒ系ラット（８週齢）における脳への放射能集積を測定した。【０１３８】
（方法）
化合物１、化合物２、化合物４及び化合物５を５０ｍｍｏｌ／ＬのL−システイン塩酸塩を含む生理食塩液に溶解した液をそれぞれ調製し、試料溶液とした（放射能濃度はいずれも３７ＭＢｑ／ｍＬ）。化合物３を１０％エタノール及び５０ｍｍｏｌ／ＬのL−システイン塩酸塩を含む生理食塩液に溶解した液（放射能濃度３７ＭＢｑ／ｍＬ）を調製し、試料溶液とした。これらの試料溶液を、無麻酔下で尾静脈より雄性のＷｉｓｔａｒ系ラット（８週齢）に投与した（投与量：０．２ｍＬ、投与した放射能：７．４ＭＢｑ相当）。投与後２分及び６０分に無麻酔下で断頭し、血液及び脳を採取した。脳の質量を測定し、さらに脳の放射能をシングルチャネルアナライザー（検出器型番：ＳＰ−２０、応用光研工業株式会社製）を用いて計測した（以下、本実施例にてＡとする）。また、血液を含む残り全身の放射能量を同様に測定した（以下、本実施例にてＢとする）。これらの測定結果を用い、下記数式（２）より、各解剖時間点における、脳への単位質量当たりの放射能集積量（％ＩＤ／ｇ）を算出した。【０１３９】
別に、［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹを５０ｍｍｏｌ／ＬのL−システイン塩酸塩を含む生理食塩液に溶解した液（放射能濃度３７ＭＢｑ／ｍＬ）を調製し、上記と同様の操作を行って、各解剖時間点における、脳への単位質量当たりの放射能集積量（％ＩＤ／ｇ）を算出した。
なお、本実施例においては、各時間点において、それぞれ３匹の動物を用いて実験を行った。【０１４０】
【数２】
2012176587.tif 000023
【０１４１】
（結果）
結果を表４に示す。表４に示すように、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４及び化合物５は、投与後２分において、１２３Ｉ−ＩＭＰＹ同様、高い放射能集積が認められ、その後６０分にかけて速やかに消失する傾向を示していた。この結果より、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４及び化合物５は、１２３Ｉ−ＩＭＰＹと同様、高い脳移行性及び速やかな脳からのクリアランスを有することが示唆された。
【０１４２】
【表４】
2012176587.tif 000024
【０１４３】
（実施例１４）オートラジオグラフィーによるAD患者脳切片への化合物結合性確認【０１４４】
本発明に係る化合物がAD患者脳内のアミロイドを描出し得るかを評価するため、下記の実験を行った。【０１４５】
（方法）     
（1）Analytical Biological Services社（米国）より市販されているＡＤ患者脳組織を用いて、厚さ５μmのＡＤ患者脳切片を作製した。
（2）各被験物質ごとに用意した脳切片を、順に１５分間、５分間、５分間ずつ計３回PBSに浸漬し、次に１％ＢＳＡ含有ＰＢＳに３０分間浸漬することで親水化を行った。被験物質としては、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５及び［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹを含む１％ＢＳＡ含有ＰＢＳ（放射能濃度１０ｋＢｑ／ｍＬ）をそれぞれ調製して用いた。それぞれの被験物質に対し、上記親水化した脳切片をそれぞれ室温下で３０分間浸漬した。その後、順に１％ＢＳＡ含有ＰＢＳに５分間浸漬し、次いでＰＢＳに５分間浸漬し、さらにＰＢＳに５分間浸漬して脳切片の洗浄を行った。洗浄後の脳切片を十分に乾燥した後、イメージングプレート上で１６時間露光させ、バイオイメージングアナライザー（形式：BAS-2500、富士写真フィルム株式会社製）を用いてオートラジオグラム画像解析を行った（図７、図８、図９、図１０、図１１、図１２）。
（3）別に、上記と同様の要領にて親水化処理を行った隣接切片を用いて抗アミロイド抗体によるアミロイド沈着部位の免疫染色を行った。抗アミロイド抗体にAnti-Human Amyloidβ（N）（82E1）Mouse IgG MoAb（株式会社免疫生物研究所）を用い、二次抗体にはAnti-Mouse IgG（H+L）Goat IgG Fab’-HRP（株式会社免疫生物研究所）を用いた。二次抗体に結合しているHRPに対してDAB+（3、3'−ジアミノベンジジンテトラヒドロクロライド）・基質キット（Dako）を適用することで、アミロイド沈着部位を検出した（図１３）。【０１４６】
（結果）
化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、化合物５及び［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹを使用した溶液に浸漬させた切片におけるオートラジオグラムをそれぞれ図７、図８、図９、図１０、図１１及び図１２に示す。本実験に使用したAD患者脳凍結切片の灰白質部分には、免疫染色によってアミロイドの沈着が確認でき（図１３）、いずれのオートラジオグラム上でも、免疫染色によって確認したアミロイド沈着部位への化合物の結合が確認できた。以上の結果より、本発明に係る化合物１、化合物２、化合物３、化合物４及び化合物５は、［１２３Ｉ］−ＩＭＰＹと同様に脳内におけるアミロイド沈着部位を画像化し得ることが示された。
【産業上の利用可能性】
【０１４７】
本発明に係る化合物は、診断薬分野において利用することができる。
【図１】
2012176587.tif 000029
【図２】
2012176587.tif 000030
【図３】
2012176587.tif 000031
【図４】
2012176587.tif 000032
【図５】
2012176587.tif 000033
【図６】
2012176587.tif 000034
【図７】
2012176587.tif 000035
【図８】
2012176587.tif 000036
【図９】
2012176587.tif 000037
【図１０】
2012176587.tif 000038
【図１１】
2012176587.tif 000039
【図１２】
2012176587.tif 000040
【図１３】
2012176587.tif 000041
【国際調査報告】
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2012176587.tif 000043
2012176587.tif 000044
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