(57)【要約】  現代人のライフスタイルの中で疲労改善やその予防は重要な位置を占めている。多くの抗疲労組成物が上市されているが、明確に効果の期待できるものは未だ少ない。本発明は、抗疲労効果を明確に表す組成物を提供することを目的する、還元型補酵素Ｑ及びイミダゾールジペプチド類を含む抗疲労組成物である。本発明の抗疲労組成物を対象動物に投与する事によって、それぞれ単独では効果の認められない用量でも、相乗的に抗疲労効果を示す。本発明により、安全で効果の確実な抗疲労組成物を提供できる。さらに本発明は、酸化型補酵素Ｑをイミダゾールジペプチド類で還元することを特徴とする、簡便かつ安価な、還元型補酵素Ｑの製造方法、および、還元型補酵素Ｑを含有する組成物中に、イミダゾールジペプチド類を共存させる、還元型補酵素Ｑの安定化方法でもある。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）下記式（１）：
【化３】
2009136587.tif 000005
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑ、および
（ｂ）イミダゾールジペプチド類
を有効成分として含有する、抗疲労組成物。
【請求項２】
さらに、下記式（２）：
【化４】
2009136587.tif 000006
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される酸化型補酵素Ｑを含有する、請求項１記載の抗疲労組成物。
【請求項３】
補酵素Ｑが補酵素Ｑ１０（式中、ｎ＝１０）である、請求項１または２記載の抗疲労組成物。
【請求項４】
イミダゾールジペプチド類が、アンセリン、カルノシン、バレニンおよびそれらの塩からなる群より選択される１種以上である請求項１〜３いずれか１項記載の抗疲労組成物。
【請求項５】
医薬品である、請求項１〜４いずれか１項記載の抗疲労組成物。
【請求項６】
食品である、請求項１〜４いずれか１項記載の抗疲労組成物。
【請求項７】
さらに抗酸化剤を含む請求項１〜６いずれか１項記載の抗疲労組成物。
【請求項８】
抗酸化剤が、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体、プロブコール、リコペン、ビタミンＡ、カロテノイド類、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体、フラボノイド類、ポリフェノール類、グルタチオン、セレン、チオ硫酸ナトリウム、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体、ピクノジェノール、フラバンジェノール、ピロロキノリンキノン、ピロロキノリンキノン誘導体、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素、カタラーゼ、およびアスコルビン酸ペルオキシダーゼからなる群より選択される１種以上である、請求項７記載の抗疲労組成物。
【請求項９】
対象動物の疲労を処置する方法であって、請求項１〜８いずれか１項記載の抗疲労組成物の有効量を、該対象動物に投与することを含む方法。
【請求項１０】
対象動物が、ヒトである請求項９記載の方法。
【請求項１１】
抗疲労組成物の製造方法であって、
（ａ）下記式（１）：
【化５】
2009136587.tif 000007
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑ、および
（ｂ）イミダゾールジペプチド類
を混合すること、を含む方法。
【請求項１２】
下記式（２）：
【化６】
2009136587.tif 000008
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される酸化型補酵素Ｑをイミダゾールジペプチド類で還元することを特徴とする、下記式（１）：
【化７】
2009136587.tif 000009
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑの製造方法。
【請求項１３】
還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を含有する製剤の製造工程において前記還元反応を実施する、請求項１２記載の製造方法。
【請求項１４】
製剤中で前記還元反応を実施し、還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を含有する製剤を得ることを特徴とする、請求項１２記載の製造方法。
【請求項１５】
下記式（１）：
【化８】
2009136587.tif 000010
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑを含有する組成物中に、イミダゾールジペプチド類を共存させる、還元型補酵素Ｑの安定化方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、還元型補酵素Ｑおよびイミダゾールジペプチド類を含む抗疲労組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、数多くの疲労改善効果を示す物質が報告されてきた。イミダゾールジペプチド類もそのひとつであり、酸化型補酵素Ｑや還元型補酵素Ｑもまたそのひとつである。【０００３】
補酵素Ｑは、細菌から哺乳動物まで広く生体に分布する必須成分である。ヒトでは、補酵素Ｑの側鎖が繰り返し構造を１０個持つ、補酵素Ｑ１０が主成分であることが知られている。補酵素Ｑは、生体内の細胞中におけるミトコンドリアの電子伝達系構成成分として存在する生理学的成分であり、生体内において酸化と還元を繰り返すことで電子伝達系における伝達成分としての機能を担っている。補酵素Ｑは、生体内においては通常約４０〜９０％程度が還元型で存在することが知られている。【０００４】
補酵素Ｑは生体において、エネルギー生産、膜安定化および抗酸化活性を示すことが知られており、その有用性は広い。補酵素Ｑのうち、酸化型補酵素Ｑ（ユビキノンまたはユビデカレノン）は、鬱血性心不全薬として医薬用途に用いられているように、心臓に対して効果的に働くことが知られている。【０００５】
その効果としては、心筋での酸素利用効率の改善、心筋でのＡＴＰの産生賦活、心機能の改善などが報告されている。医薬用途以外では、ビタミン類と同様に、栄養剤、栄養補助剤としての効果が報告されている。【０００６】
また、ユビキノンと乾燥酵母粉末の混合物による組織代謝活性化組成物が報告されている（特許文献１）。更には、酸化型補酵素Ｑの合剤や、還元型補酵素Ｑについての、疲労に対する回復効果についても報告がある（特許文献２〜５）。【０００７】
イミダゾールジペプチド類としては、β−アラニンとヒスチジン類のジペプチドであるアンセリン、カルノシン、バレニンが代表的なものとして知られている。アンセリンは主にカツオやマグロ等の魚の筋肉組織に含まれるフィッシュペプチドアミノ酸であり、マグロなどの回遊魚が泳ぎ続けるための重要な成分と考えられている。カルノシンは、瞬発力のあるチーターや馬、猫、または持久力のある渡り鳥などの筋肉組織に多く含まれるという報告があり、また、バレニンは鯨肉に多く含まれ、半年もの間、絶食状態で大洋数千キロもの距離を泳ぎ続けられる鯨を支えている栄養分である。これらイミダゾールジペプチド類はいずれも、持久力や疲労回復・防止など「抗疲労機能」を持っていると考えられている。【０００８】
実際に、これらイミダゾールジペプチド類が抗疲労効果を有することが報告されている（特許文献６〜８）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開昭６２−５９２０８号公報
【特許文献２】特開平７−３３０５８４号公報
【特許文献３】特開平７−３３０５９３号公報
【特許文献４】特開平１０−２８７５６０号公報
【特許文献５】ＷＯ２００４／０６６９８８号公報
【特許文献６】特開２００２−１７３４４２号公報
【特許文献７】ＷＯ２００４／０３２６５２号公報
【特許文献８】特開２００６−２６５１６１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、低用量でも効果的で、安全な抗疲労組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
発明者らは、鋭意検討の結果、還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を組み合わせることにより、それぞれが単体では効果を示さない低用量であっても相乗的な抗疲労効果が発現することを見出し、さらにはイミダゾールジペプチド類に酸化型補酵素Ｑを還元して還元型補酵素Ｑを生成させる還元能力を有することも見出し、本発明を完成するに至った。【００１２】
即ち、本発明の第１は、
（ａ）下記式（１）：【００１３】
【化１】
2009136587.tif 000002
【００１４】
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される還元型補酵素Ｑ、および
（ｂ）イミダゾールジペプチド類
を有効成分として含有する、抗疲労組成物である。【００１５】
本発明の抗疲労組成物には、さらに、下記式（２）：【００１６】
【化２】
2009136587.tif 000003
【００１７】
（式中ｎは１〜１２の整数を表す）で表される酸化型補酵素Ｑを含有していてもよい。また、その好ましい態様としては、イミダゾールジペプチド類が、アンセリン、カルノシン、バレニンおよびそれらの塩からなる群より選択される１種以上である前記抗疲労組成物である。【００１８】
本発明の第２は、対象動物の疲労を処置する方法であって、前記抗疲労組成物の有効量を、該対象動物に投与することを含む方法である。【００１９】
本発明の第３は、前記式（２）で表される酸化型補酵素Ｑをイミダゾールジペプチド類で還元することを特徴とする、前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑの製造方法であり、その好ましい態様としては、還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を含有する製剤の製造工程において前記還元反応を実施する前記還元型補酵素Ｑの製造方法、または、製剤中で前記還元反応を実施し、還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を含有する製剤を得ることを特徴とする前記還元型補酵素Ｑの製造方法である。【００２０】
本発明の第４は、前記式（１）で表される還元型補酵素Ｑを含有する組成物中に、イミダゾールジペプチド類を共存させる、還元型補酵素Ｑの安定化方法である。
【発明の効果】
【００２１】
本発明によれば、還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を組み合わせて用いることにより、予想外に強い疲労改善効果を有する抗疲労組成物が得られる。特に、それぞれ単独では効果を示さない低用量の還元型補酵素Ｑおよびイミダゾールジペプチド類でも、両者を組み合わせて用いることで抗疲労効果を発現することが本発明で初めて確認された。本発明によれば、低用量でも効果の確実かつ安全な、抗疲労用組成物が提供できる。またさらに、本発明の製造方法及び安定化方法により、簡便かつ安価な、還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を含有する製剤の製造方法と、製剤中における還元型補酵素Ｑの安定化方法も提供される。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
まずは、本発明の抗疲労組成物（本発明の第１態様）および該抗疲労組成物の有効量を該対象動物に投与する対象動物の疲労を処置する方法（本発明の第２態様）について説明する。
【００２３】
本発明の抗疲労組成物は、（ａ）還元型補酵素Ｑ、および（ｂ）イミダゾールジペプチド類をその有効成分として含む組成物である。本発明でいう抗疲労組成物とは、投与対象の疲労、例えば、運動による肉体疲労、病中病後の肉体疲労、加齢による疲れ易さなどを改善あるいは予防できる組成物である。
【００２４】
本発明の抗疲労組成物においては、補酵素Ｑとして還元型補酵素Ｑを有効成分として含有するが、還元型補酵素Ｑとして、還元型補酵素Ｑと酸化型補酵素Ｑの混合物である補酵素Ｑを含有しても良い。還元型と酸化型の混合物である補酵素Ｑを使用する場合の還元型補酵素Ｑと酸化型補酵素Ｑの割合は特に制限はないが、本発明においては還元型補酵素Ｑが有効成分であることから、補酵素Ｑ全体に対する還元型補酵素Ｑの割合は高いほど好ましく、例えば、６０重量％以上であるのが好ましく、８０重量％以上であるのがより好ましく、９５重量％以上であるのがさらに好ましい。
【００２５】
本発明で使用出来る還元型補酵素Ｑおよび酸化型補酵素Ｑは、前記式（１）および（２）で表されるように、側鎖の繰り返し単位（式中ｎ）が１〜１２のものを使用することが出来る。ヒトをはじめイヌなどの多くの愛玩動物で十分な効果が得られる観点から、中でも側鎖繰り返し単位（式中ｎ）が１０のもの、すなわち還元型補酵素Ｑ１０あるいは酸化型補酵素Ｑ１０が特に好適に使用出来る。
【００２６】
補酵素Ｑ中の酸化型と還元型の割合は、通常、ＵＶ検出器を用いたＨＰＬＣシステムにより、試料中の酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑを定量し、その量比をもって算出する方法、または、ＨＰＬＣに電気化学的検出器を組み込んだシステムにより、酸化型補酵素Ｑと還元型補酵素Ｑの割合をピーク面積から算出する方法により求めることができる。電気化学的検出器を組み込んだシステムでは、酸化還元物質を特異的に測れることおよび感度が高いことから、生体あるいは試料に微量に存在する還元型の割合を測定する場合は、有用性が高い。具体的には、株式会社島津製作所製のＨＰＬＣ分析装置に株式会社資生堂製の電気化学的検出器を組み込み、後述する実施例での分析条件の他、以下のＨＰＬＣの条件でも測定できる：
カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ（ＯＤＳ−Ａ３０３）、検出波長：２７５ｎｍ、移動相：メタノール（８８％）、ヘキサン（１２％）、流速：１ｍｌ／ｍｉｎ。
【００２７】
酸化型補酵素Ｑは市販品として、または合成、発酵、天然物からの抽出等の従来公知の方法により容易に入手することが出来る。還元型補酵素Ｑを得る方法としては特に限定されず、例えば、合成、発酵、天然物からの抽出等の従来公知の方法により補酵素Ｑを得た後、クロマトグラフィーにより流出液中の還元型補酵素Ｑ区分を濃縮する方法などを採用することが出来る。この場合においては、必要に応じて上記補酵素Ｑに対し、水素化ほう素ナトリウム、亜ジチオン酸ナトリウム(ハイドロサルファイトナトリウム)、アスコルビン酸等の一般的な還元剤を添加し、常法により上記補酵素Ｑ中に含まれる酸化型補酵素Ｑを還元して還元型補酵素Ｑとした後にクロマトグラフィーによる濃縮を行っても良い。また、既存の高純度補酵素Ｑ（酸化型補酵素Ｑ）に上記還元剤を作用させる方法によっても得ることが出来るし、そのようにして製造された市販品を利用してもよい。あるいは、還元型補酵素Ｑを含有する菌体等を使用することも可能である。さらに、酸化型補酵素Ｑをビタミン類や還元剤などの還元力を持つ物質と共に製剤化することにより、製剤中で酸化型補酵素Ｑを還元型補酵素Ｑに還元することも可能である。さらには後述するように、製剤の製造工程においてあるいは製剤中で、酸化型補酵素Ｑをイミダゾールジペプチド類を用いて還元し、還元型補酵素Ｑとするのも好ましい態様のひとつである。
【００２８】
本発明の抗疲労組成物のもう一つの有効成分であるイミダゾールジペプチド類は、イミダゾール骨格を有するジペプチドであれば特に限定されないが、ヒスチジンまたはその誘導体と他のアミノ酸が結合した、いわゆるヒスチジン含有ジペプチド（ＨＣＤＰ）と呼ばれているものが好ましく使用できる。そのようなイミダゾールジペプチド類として、具体的には、アンセリン（β−アラニル−１−メチルヒスチジン）、カルノシン（β−アラニルヒスチジン）、バレニン（β−アラニル−３−メチルヒスチジン）、Ｎ−アセチル−Ｌ−カルノシンなどや、それらの塩などのイミダゾールジペプチド誘導体が挙げられる。
【００２９】
イミダゾールジペプチドの塩としては、塩酸、乳酸、酢酸、硫酸、リン酸、硝酸、プロピオン酸、クエン酸、アスコルビン酸、リンゴ酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、メタンスルホン酸、サリチル酸、シュウ酸、ステアリン酸、アジピン酸、グルコン酸、酒石酸などの酸の付加塩やナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩などのアルカリの付加塩が挙げられる。本発明においては、これらイミダゾールジペプチド類のなかでも、アンセリン、カルノシン、バレニンまたはそれらの塩酸塩、硝酸塩、酢酸塩が好ましく用いられる。
【００３０】
イミダゾールジペプチド類は、魚肉、鯨肉や、鶏肉等の畜肉等に含まれており、それらから水抽出、熱水抽出、アルコール抽出、超臨界抽出等の方法により抽出したエキスを精製することにより得ることができる。また、市販されている製品をそのまま用いることが可能である。あるいはイミダゾールジペプチド類を含有する上記魚肉類のエキスや酵母エキス、菌体乾燥物、健康食品、サプリメントを用いることも出来る。さらには化学的あるいは酵素的に合成されたものでもよい。
【００３１】
本発明の抗疲労組成物においては、還元型補酵素Ｑおよびイミダゾールジペプチド類の含有量は特に制限されず、その製品コンセプトなどにより適宜決定できる。
【００３２】
本発明の抗疲労組成物中の還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類の重量比は、限定されないが、十分な相乗効果が得られる観点から約１００：１〜約１：１００、好ましくは約１０：１〜約１：１０、より好ましくは約５：１〜約１：５、さらに好ましくは３：１〜１：３、もっとも好ましくは約１：１である。
【００３３】
組成物中のイミダゾールジペプチド類の含有量は一般的なアミノ酸分析計によって測定出来る。
【００３４】
本発明の抗疲労組成物の剤形としては特に限定されず、経口剤であってもよく、あるいは皮膚に直接塗布するものであってもよい。経口剤としては、例えば粉末剤であってもよく、結合剤を加えて顆粒剤としてもよく、賦形剤と混合して錠剤としてもよく、粉末剤あるいは顆粒剤をカプセルに充填してカプセル剤としてもよい。このとき、還元型補酵素Ｑはそのままでは酸化されやすいことから、酸化されにくいように、アラビアガム、シェラック、セルロール誘導体、ゼラチン、酵母細胞壁、乳酸／グリコール酸の共重合体などでコーティングした還元型補酵素Ｑのマイクロカプセルや安定化製剤を使用し、イミダゾールジペプチド類やそれを含有する天然物エキスなどと混合して、粉末剤や顆粒剤とすることもできる。また、還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を含有する錠剤を作製した後に該錠剤をシェラックや酵母細胞壁などでコーティングすることも出来る。
【００３５】
また、天然油、油状の高級脂肪酸、高級脂肪酸モノグリセライド、中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）、界面活性剤、テルペン類、テルペン類含有油脂またはこれらの混合物などを加え、油状のまま充填してソフトカプセル剤とすることもできる。この場合においては、ゼラチンを主体としたカプセルまたはその他の水溶性高分子物質を主体としたカプセル等を使用することもできる。また、このようなカプセルにはマイクロカプセルも含まれる。あるいは、液状にしてドリンク剤としてもよい。ドリンク剤とする場合には還元型補酵素Ｑや酸化型補酵素Ｑが脂溶性であることからそれらの水溶化製剤を原料として用いることも出来る。
【００３６】
本発明の抗疲労組成物には、更に、上記還元型補酵素Ｑおよびイミダゾールジペプチド類、必要に応じて添加または混合される酸化型補酵素Ｑの他に、薬剤学的に許容される他の担体（製剤素材）を、常法により適宜添加混合してもよい。このようなものとしては特に限定されず、例えば、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、酸化防止剤、着色剤、凝集防止剤、吸収促進剤、溶解補助剤、安定化剤などが挙げられる。
【００３７】
上記賦形剤としては特に限定されず、例えば、白糖、乳糖、ブドウ糖、コーンスターチ（トウモロコシ澱粉）、マンニトール、結晶セルロース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、などが挙げられる。上記崩壊剤としては特に限定されず、例えば、澱粉、寒天、クエン酸カルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、デキストリン、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、トラガント等が挙げられる。
【００３８】
上記滑沢剤としては特に限定されず、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油等が挙げられる。上記結合剤としては特に限定されず、例えば、エチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、トラガント、シェラック、ゼラチン、アラビアゴム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ソルビトール等が挙げられる。
【００３９】
上記酸化防止剤としては特に限定されず、例えば、アスコルビン酸、トコフェロール、ビタミンＡ、β−カロチン、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム、クエン酸などが挙げられる。
【００４０】
上記着色剤としては特に限定されず、例えば、医薬品に添加することが許可されているものなどを使用することができる。
【００４１】
上記凝集防止剤としては特に限定されず、例えばステアリン酸、タルク、軽質無水ケイ酸、含水二酸化ケイ酸などが挙げられる。
【００４２】
上記吸収促進剤としては特に限定されず、例えば高級アルコール類、高級脂肪酸類、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステルなどの界面活性剤などが挙げられる。
【００４３】
上記溶解補助剤としては特に限定されず、例えばフマル酸、コハク酸、りんご酸などの有機酸などが挙げられる。上記安定化剤としては特に限定されず、例えば安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エチルなどが挙げられる。
【００４４】
皮膚に直接塗布する場合は、剤型は、特に限定されるものではなく、例えば、適当な基剤中に上記薬物を溶解または混合分散させてクリーム状、ペースト状、ジェリー状、ゲル状、乳液状、液状の形状になされたもの(軟膏剤、リニメント剤、ローション剤、クリーム剤、スプレー剤など）、基剤中に上記薬物を溶解または混合分散させたものを支持体上に展延したもの（パップ剤など）、粘着剤中に上記薬物を溶解または混合分散させたものを支持体上に展延したもの（プラスター剤、テープ剤など）などが挙げられる。基材、粘着剤としては必要に応じて本発明の効果を損なわない範囲で、医薬品、化粧品などに通常用いられている基材が使用出来る。
【００４５】
本発明の抗疲労組成物には、抗酸化物質や抗酸化酵素などの抗酸化剤を含有する事が出来る。抗酸化物質としては特に限定はされないが、例えば、ビタミンＥ、ビタミンＥ誘導体（トコフェリルリン酸ナトリウム、トコフェロール酢酸エステル、コハク酸トコフェロールカルシウムなど）、ビタミンＣ、ビタミンＣ誘導体（アスコルビルリン酸ナトリウム、アスコルビン酸パルミテート、アスコルビン酸ステアレートなど）、プロブコール、リコペン、ビタミンＡ、カロテノイド類、ビタミンＢ、ビタミンＢ誘導体（フルスルチアミン塩酸塩、パンテノール、ビスベンチアミンなど）、フラボノイド類、ポリフェノール類、グルタチオン、ピロロキノリンキノン、ピロロキノリンキノンナトリウム塩などのピロロキノリンキノン誘導体、ピクノジェノール、フラバンジェノール、又はセレンなどが適している。抗酸化酵素としては、特に限定はされないが、例えば、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、グルタチオンペルオキシダーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、グルタチオン還元酵素、カタラーゼ、又はアスコルビン酸ペルオキシダーゼなどが適している。上記抗酸化剤（抗酸化酵素も含む）は単一で用いても良いし、二種以上を混合しても良い。
【００４６】
本発明の抗疲労組成物は、他の滋養強壮成分を共に含む事ができる。滋養強壮成分としては、特に限定はされないが、例えば、クレアチン、タウリン、ビタミンＢ１、ビタミンＢ誘導体、又はアミノ酸などが適している。上記は単一で用いても良いし、二種以上を混合しても良い。本発明の抗疲労組成物において、補酵素Ｑおよびイミダゾールジペプチド類とこれらの成分を混合する事により、相加的あるいは相乗的な効果が更に期待出来る。
【００４７】
本発明の抗疲労組成物は、栄養補助成分を共に含む事が出来る。栄養補助成分としては、特に限定はされないが、アミノ酸、金属イオン、糖類、蛋白質類、脂肪酸類、ビタミンなどが挙げられる。
【００４８】
本発明の抗疲労組成物を一般食品とする場合の形態は、特には限定されないが、食用油脂組成物、調理油類、スプレー油類、バター類、マーガリン類、ショートニング類、ホイップクリーム類、濃縮乳類、ホワイトナー類、ドレッシング類、ピックル液類、パン類、ケーキ類、パイ類、クッキー類、和菓子類、スナック菓子類、油菓子類、チョコレート及びチョコレート菓子類、米菓類、ルウ類、ソース類、たれ類、トッピング類、氷菓類、麺類、ベーカリーミックス類、フライ食品類、加工肉製品類、水産練り製品類、冷凍アントレ類、畜産冷凍食品、農産冷凍食品などの冷凍食品類、米飯類、ジャム類、チーズ、チーズフード、チーズ様食品、ガム類、キャンデイー類、発酵乳類、缶詰類、飲料類などが挙げられる。
【００４９】
本発明の抗疲労組成物は、皮膚に直接塗布することにより、筋肉疲労を改善することも出来る。この場合、抗炎症作用を示す物質を共に含有する事が出来る。抗炎症作用を示す物質とは、特に限定はされないが、ステロイド、サリチル酸およびその誘導体、アリール酢酸およびその誘導体、プロピオン酸およびその誘導体、フェナム酸およびその誘導体、ピラゾロンおよびその誘導体、オキシカムおよびその誘導体、および非酸性抗炎症剤からなる群より選択される少なくとも一種である。
【００５０】
ステロイドとしては、例えば、吉草酸酢酸プレドニソロン、アムシノニド、吉草酸ジフルコルトロン、吉草酸デキサメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール、酢酸ジフロラゾン、プロピオン酸デキサメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、ジフルプロドナート、フルオシノニド、ハルシノニド、プデソニド、酪酸プロピオン酸ヒドロコルチゾン、吉草酸ベタメタゾン、プロピオン酸ベクロメタゾン、フルオシノロナセトニド、トリアムシノロナセトニド、ピバル酸フルメタゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、酪酸クロベタゾン、プロピオン酸アルクロメタゾン、デキサメタゾン、酢酸メチルプレドニソロン、プレドニソロン、酢酸ヒドロコルチゾンが挙げられる。
【００５１】
サリチル酸誘導体としては、例えば、アスピリンおよびその誘導体、ジフルサニルが挙げられる。アリール酢酸誘導体としては、例えば、インドメタシン、ジクロフェナク、スリンダク、ナプメトン、プログルメタシン、インドメタシンファルネシル、エトドラクが挙げられる。プロピオン酸誘導体としては、例えば、イブプロフェン、ナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、チアプロフェン、プラノプロフェン、ロキソプロフェン、アルミノプロフェンなどが挙げられる。
【００５２】
フェナム酸誘導体としては、例えば、メフェナム酸、トルフェナム酸などが挙げられる。ピラゾロン誘導体としては、例えば、フェニルブタゾン、オキシフェンブタゾンなどが挙げられる。オキシカム誘導体としては、例えば、ピロキシカム、テノキシカム、アンピロキシカムなどが挙げられる。
【００５３】
非酸性抗炎症剤としては、例えば、エピリゾール、チアラミド、エモルファゾンなどが挙げられる。本発明の還元型補酵素Ｑを含有する抗疲労組成物とこれらの成分を混合する事により、相加的あるいは相乗的な抗疲労効果が期待できる。
【００５４】
本発明における抗疲労効果は、疲労を予防、処置、回復、改善、治療する効果を含む。本発明の抗疲労組成物の対象となる疲労は特に限定されず、病的疲労や生理的疲労のいずれであってもかまわないが、健常人が日常の生活で経験する生理的疲労や運動による肉体疲労または筋肉疲労、病中病後の肉体疲労、加齢による疲れ易さなどが好ましい具体例として挙げられる。本発明の抗疲労組成物の有効量を、動物対象に投与することによって、該動物対象の疲労を予防、処置、回復、改善、または治療し得る。対象となる動物としては限定されないが、ヒトやヒト以外の哺乳動物（例えば、犬、猫、馬、ウサギ、リス、ネズミなど）、鳥類などが挙げられる。好ましい投与対象はヒトである。また、本発明の抗疲労組成物は、疲労状態にある健常者や、病中病後、運動中やその後、高齢者などの疲れやすい対象のものに、好ましくは適用される。
【００５５】
「有効量」は、処置される対象への抗疲労効果を付与する化合物分の量を意味する。抗疲労効果は、客観的（すなわち、何らかの試験またはマーカーによって測定可能）または主観的（すなわち対象が効果を指摘するまたは感じる）に判断される。前記の化合物の用量レベルおよび、特異的組み合わせの投与の頻度は、それぞれの使用される化合物の能力、その化合物の代謝的安定性および作用の長さ、患者の年齢、体重、一般健康、性別、食餌、投与の様式および時間、排出の割合、薬物組み合わせ、処置すべき状態の重度、および患者が経験する治療に依存して変化する。
【００５６】
有効量の決定は当業者の通常の技術の範囲内であり、当業者は実験的または経験的に決定し得る。有効量の例としては、約０．０１ｍｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日の還元型補酵素Ｑおよび約０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日のイミダゾールジペプチド類、好ましくは約０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ体重／日の還元型補酵素Ｑおよび約０．０１〜５００ｍｇ／ｋｇ体重／日のイミダゾールジペプチド類、特に約０．１〜５００ｍｇ／ｋｇ体重／日の還元型補酵素Ｑおよび約０．１〜５００ｍｇ／ｋｇ体重／日のイミダゾールジペプチド類が挙げられる。なお、前記有効量は、単回または多回投与で投与し得、通常は、経口的に与えられるが、例えば非経腸または経腸投与もまた選択しうる。
【００５７】
本発明の組成物は、相乗性組成物であると考えることもまた可能である。ここにいう「相乗性組成物」の語は、還元型補酵素Ｑおよびイミダゾールジペプチド類の相互作用によって、それらを別々に適用した場合に観察される作用を基にして予想される活性、すなわち相加的活性よりも大きな活性が示される組成物を意味する。相乗性組成物の相乗性有効量の例としては、前記の有効量よりも少ない量が挙げられる。例えば、投与対象がヒトの場合、約０．０１ｍｇ〜３００ｍｇ／ｋｇ体重／日の還元型補酵素Ｑおよび約０．０１〜３００ｍｇ／ｋｇ体重／日のイミダゾールジペプチド類、好ましくは約０．０１〜２００ｍｇ／ｋｇ体重／日の還元型補酵素Ｑおよび約０．０１〜２００ｍｇ／ｋｇ体重／日のイミダゾールジペプチド類、より好ましくは約０．０５〜５０ｍｇ／ｋｇ体重／日の還元型補酵素Ｑおよび約０．０５〜５０ｍｇ／ｋｇ体重／日のイミダゾールジペプチド類、特に好ましくは約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重／日の還元型補酵素Ｑおよび約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重／日のイミダゾールジペプチド類が挙げられる。
【００５８】
本発明の組成物中に含まれる成分量の決定は当業者の通常の技術の範囲内であり、当業者は実験的または経験的に決定し得る。成分量としては、例えば、組成物中０．０１ｍｇ〜１０００ｍｇの還元型補酵素Ｑおよび組成物中約０．０１〜１０００ｍｇのイミダゾールジペプチド類、好ましくは組成物中約０．０１〜５００ｍｇの還元型補酵素Ｑおよび組成物中約０．０１〜５００ｍｇのイミダゾールジペプチド類、より好ましくは組成物中約０．１〜３００ｍｇの還元型補酵素Ｑおよび組成物中約０．１〜３００ｍｇのイミダゾールジペプチド類、特に好ましくは約１〜１００ｍｇの還元型補酵素Ｑおよび組成物中約１〜１００ｍｇのイミダゾールジペプチド類が挙げられる。
【００５９】
本発明は、また、相乗性有効量の第一の作用成分（還元型補酵素Ｑ）と第二の作用成分（イミダゾールジペプチド類）を、別個の単位、例えばカプセル、錠剤または丸薬に製剤化し、そして組み合わせた、組み合わせ剤を提供する。本発明はまた、該組み合わせ剤を、必要により同時的または逐次的に適用すべき旨の指示書とともに含む、またはその旨の表示を付した包装とともに含む、商業的製品を提供する。もちろん、還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を同じ製剤中に含有させて使用する形態やそのような商業的製品を排除するものではない。
【００６０】
本発明の抗疲労組成物は、既存の薬学的手法にしたがって、還元型補酵素Ｑを製造または入手し、イミダゾールジペプチド類と混合することを含む製造方法によっても製造し得る。また、還元型補酵素Ｑの代わりに酸化型補酵素Ｑを原料とし、製造工程のいずれかの時点、例えばイミダゾールジペプチド類との混合の前または後において、還元反応により酸化型補酵素Ｑを還元型補酵素Ｑに変換してもよい。あるいは後述する本発明の別の態様である製造方法によって、還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を含有する製剤の製造工程や製剤中で、イミダゾールジペプチド類による還元反応を実施し、還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を含有する製剤を得てもよい。
【００６１】
本発明の還元型補酵素Ｑおよびイミダゾールジペプチド類を含有する抗疲労組成物を作製する際の、還元型補酵素Ｑの含有量、製品形態、製品の保存方法および保存形態は、その抗疲労組成物の商品設計および用途などに応じて適宜決定される。
【００６２】
次に本発明の別の態様である、還元型補酵素Ｑの製造方法（本発明の第３態様）および安定化方法（本発明の第４態様）について説明する。
【００６３】
上述した還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を含有する抗疲労剤の検討において、驚くべきことに、イミダゾールジペプチド類に酸化型補酵素Ｑを還元して還元型補酵素Ｑを生成する還元能力と、還元型補酵素Ｑを酸化から防護して安定化させる抗酸化能力があることが判明した。すなわち、本発明においては、酸化型補酵素Ｑをイミダゾールジペプチド類で還元することによって還元型補酵素Ｑを製造することも出来る。該方法によれば、安価な酸化型補酵素Ｑを原料と出来るだけでなく、安全でかつサプリメント素材としても有用なイミダゾールジペプチド類を還元剤として使用できるため、還元後に残存するイミダゾールジペプチド類を除去する必要はなく、そのまま還元型補酵素Ｑと併用する成分として利用できる。すなわち、還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を含有する製剤の製造工程において、酸化型補酵素Ｑあるいは酸化型補酵素Ｑを含有する補酵素Ｑを原料とし、イミダゾールジペプチド類による還元反応を実施するのも本発明の好ましい態様である。さらには、酸化型補酵素Ｑあるいは酸化型補酵素Ｑを含有する補酵素Ｑと、イミダゾールジペプチド類を含有する製剤を調製し、製剤中で還元反応を実施し、還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を含有する製剤を得ることもできる。
【００６４】
本発明の還元型補酵素Ｑの製造方法における還元反応を実施する際には、反応の場を提供するために、酸化型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を含有する溶液あるいは乳化液の状態で実施するのが好ましい。その場合に使用できる溶媒としては特に限定されないが、例えば製剤化にそのまま使用できる、動植物由来の天然油脂やそれを分別、蒸留、水素添加、エステル交換などした加工油やＭＣＴなどの合成油、脂肪酸などの油脂類；脂肪酸の部分グリセリド、プロピレングルコール脂肪酸エステル、リン脂質、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシソルビタン脂肪酸エステル、ポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルなどの界面活性剤；リモネン、ピネン、メントール、シトロネラシール、オイゲノール、ｄｌ−カンフル、ゲラニオール、シトラール、シトロネロール、1,8-シネオール、リナロール、カルボン、ミルセン、p-サイメン、ビサボレン、カリオフィレン、ターピネン、チモール、カリオフィレン、アネトール、ユーカリプトールなどのテルペン類；オレンジ油、キャラウェー油、クローブ油、ユーカリ油、アニス油、ローズマリー油、レモン油、しそ油、セイジ油、カナンガ油、バジル油、ハッカ油、コリアンダー油などのテルペン類を含む油脂：水またはグリセリン等が好ましく使用できる。なかでもリモネンなどのテルペン類、テルペン類を含む油脂、プロピレングルコール脂肪酸エステルなどの界面活性剤、あるいは界面活性剤と油脂との混合系などの油相中で、または、界面活性剤と油脂と水との乳化系中で還元反応を実施するのが好ましい。
【００６５】
本発明の還元反応における酸化型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類の割合は特に限定されず、少なくとも原料である酸化型補酵素Ｑに対して理論水素当量以上のイミダゾールジペプチド類を使用すればよいが、還元反応を効率よく進め、さらには反応後残存するイミダゾールジペプチド類を組成物中の有効成分としても使用する場合には、酸化型補酵素Ｑに対してイミダゾールジペプチド類を大過剰に使用するのが好ましい。具体的には、使用する酸化型補酵素Ｑに対して、好ましくは０．５〜１０モル倍量の、より好ましくは１〜４モル倍量のイミダゾールジペプチド類が使用できる。また、イミダゾールジペプチド類としてアンセリン、カルノシン、バレニン、Ｎ−アセチル−Ｌ−カルノシンなどを使用する場合の酸化型補酵素Ｑとこれらイミダゾールジペプチド類の重量比としては、通常約４：１〜１：５０であり、約２：１〜１：２５であるのが好ましく、１：１〜１：１０であるのがより好ましい。
【００６６】
還元反応は製剤化前であれば、加熱条件下、撹拌などの強制流動下に実施することも出来る。この場合の温度条件は特に限定されないが、通常３０〜１５０℃、好ましくは４０〜１２０℃、より好ましくは５０〜１００℃で実施できる。反応時間は特に限定されないが通常４８時間以内、好ましくは２４時間以内、より好ましくは１６時間以内である。一方、製剤中で還元反応を行う場合には上記条件に限定されず、例えば酸化型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を含有する組成物を製剤化した後、室温または３０〜４０℃ぐらいの微加温条件下で数日間以上、好ましくは数週間以上保存することで還元反応を進行させ、簡便に還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を含有する製剤とすることも出来る。製剤中で還元反応を実施する場合の製剤形態は特に限定されないが、好ましくはソフトカプセルまたはドリンク剤である。
【００６７】
さらに、還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を含有する組成物中では、イミダゾールジペプチド類の抗酸化能力によって、他の抗酸化剤を使用しなくとも、還元型補酵素Ｑを酸化から防護して安定化させることが出来る。すなわち本発明は、還元型補酵素Ｑを含有する組成物中に、イミダゾールジペプチド類を共存させる、還元型補酵素Ｑの安定化方法でもある。その場合に使用される他の成分や組成物の形態、製剤への応用、各成分の割合や使用量などは特に限定されず、上記本発明の抗疲労組成物の説明で例示したものなどが挙げられる。
【００６８】
上記の通り、還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類を含有する組成物は相乗的な抗疲労効果を有するだけでなく、サプリメント素材として有用な還元型補酵素Ｑとイミダゾールジペプチド類の両方を有し、かつイミダゾールジペプチド類が、従来酸化されやすいという欠点を有していた還元型補酵素Ｑの安定化にも寄与するという点で、非常に優れた組み合わせの組成物である。
【実施例】
【００６９】
以下に実施例及び製剤例を挙げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例および製剤例のみに限定されるものではない。なお、製造例における還元型補酵素Ｑ１０／酸化型補酵素Ｑ１０の比率（重量比）、実施例２における反応後の還元型補酵素Ｑ１０及び酸化型補酵素Ｑ１０の検出は下記ＨＰＬＣ分析により求めた。【００７０】
（ＨＰＬＣ分析条件）
カラム；ＳＹＭＭＥＴＲＹ  Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ製）２５０ｍｍ（長さ）４．６ｍｍ（内径）、移動相；Ｃ２Ｈ５ＯＨ：ＣＨ３ＯＨ＝４：３（ｖ：ｖ）、検出波長；２１０ｎｍ、流速；１ｍｌ／ｍｉｎ、還元型補酵素Ｑ１０の保持時間；９．１ｍｉｎ、酸化型補酵素Ｑ１０の保持時間；１３．３ｍｉｎ。【００７１】
（製造例１）還元型補酵素Ｑ１０の製造
１０００ｇのエタノール中に、１００ｇの酸化型補酵素Ｑ１０（純度９９．４％）、６０ｇのＬ−アスコルビン酸を加え、７８℃にて攪拌し、還元反応を行った。３０時間後、５０℃まで冷却し、同温を保持しながらエタノール３３０ｇと水７０ｇを添加した。このエタノール溶液（還元型補酵素Ｑ１０を１００ｇを含む）を攪拌しながら、１０℃／時間の冷却速度で２℃まで冷却し、白色のスラリーを得た。得られたスラリーを減圧濾過し、湿結晶を冷エタノール、冷水、冷エタノールで順に洗浄（洗浄に用いた冷溶媒の温度は２℃）して、さらに湿結晶を減圧乾燥（２０〜４０℃、１〜３０ｍｍＨｇ）することにより、白色の乾燥結晶９７ｇ（還元型補酵素Ｑ１０／酸化型補酵素Ｑ１０＝９８／２（重量比））を得た。減圧乾燥を除く全ての操作は窒素雰囲気下で実施した。【００７２】
（製造例２）還元型補酵素Ｑ１０の製造
１００ｇの酸化型補酵素Ｑ１０を２５℃で１０００ｇのヘプタン溶液に溶解させた。攪拌しながら、還元剤として次亜硫酸ナトリウム（純度７５％以上）１００ｇに１０００ｍｌの水を加えて溶解させた水溶液を徐々に添加し、２５℃、ｐＨ４〜６で還元反応を行った。２時間後、反応液から水層を除去し、脱気した飽和食塩水１０００ｇでヘプタン層を６回水洗した。以上、すべての操作は窒素雰囲気下で実施した。このヘプタン層を減圧下にて溶媒置換し、５０℃の還元型補酵素Ｑ１０の７％（ｗ／ｗ）エタノール溶液を調製した（還元型補酵素Ｑ１０を１００ｇ含む）。このエタノール溶液に水５０ｇを添加し、攪拌しながら、１０℃／時間の冷却速度で２℃まで冷却して結晶を析出させた。全ての操作は窒素雰囲気下で実施した。得られたスラリーを減圧濾過し、湿結晶を冷エタノール、冷水、冷エタノールで順に洗浄（洗浄に用いた冷溶媒の温度は２℃）して、さらに、湿結晶を減圧乾燥（２０〜４０℃、１〜３０ｍｍＨｇ）することにより、白色の乾燥結晶９７ｇ（還元型補酵素Ｑ１０／酸化型補酵素Ｑ１０＝９８／２（重量比））を得た。【００７３】
（製剤例３）還元型補酵素Ｑ１０安定化製剤の製造
１４０ｇの蒸留水に、アラビアガム６０ｇ、Ｌ（＋）−アスコルビン酸６．０ｇを６０℃で溶解させ、水溶液を作成した。この水溶液を６０℃に保持し、ジグリセリンモノオレイン酸エステル（理研ビタミン株式会社製；ポエムＤＯ−１００Ｖ）４．０ｇ、上記製造例１で得られた還元型補酵素Ｑ１０結晶３０．０ｇを添加して分散させた後、ＴＫホモミキサーＭａｒｋＩＩ（プライミクス株式会社製）で乳化し、水中油型乳化組成物を得た。ここで得た水中油型乳化組成物７５ｇを、あらかじめ９０℃に加熱しておいた、ＭＣＴ（中鎖脂肪酸トリグリセリド）１４８ｇ及び酵素分解レシチン（デグサテクスチュラントシステムズジャパン株式会社製；エマルトップＨＬ５０ＩＰ）２ｇに添加し、攪拌した。攪拌を継続しながら、懸濁液の温度を１０５℃に調整することで、水中油型乳化組成物懸濁液滴からの水の除去を進行させた。その後、固液分離によりＭＣＴを含有する油相をろ別し、約５００ｇのエタノールで粒子に付着した油相を洗浄後、５０℃で乾燥して、還元型補酵素Ｑ１０がアラビアガムを主成分とするマトリックス中に分散している安定化製剤（製剤中の総補酵素Ｑ１０の含有量は２９．６重量％、還元型補酵素Ｑ１０／酸化型補酵素Ｑ１０＝９９．６／０．４（重量比））を得た。【００７４】
（実施例１）  若年ラットによるトレッドミル試験
ＳＤ系雄性ラット（７〜１０週齢、ｎ＝２０）を用いて還元型補酵素Ｑ１０単独、アンセリン単独、および還元型補酵素Ｑ１０とアンセリンの併用による抗疲労効果をトレッドミルにより評価した。即ち、トレッドミル装置（型式ＮＫ−７３−４、夏目製作所）を用いて、ラットを１０ｍ／ｍｉｎの速度で走行させ、３分毎に５ｍ／ｍｉｎずつ段階的に速度を上げていき、ラットが走行不能となるまでの時間（最大走行時間）を測定した。【００７５】
被験物質として、製造例２で得られた還元型補酵素Ｑ１０の０．５％カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ−Ｎａ）水溶液またはアンセリン（焼津水産化学工業株式会社製）の水溶液をそれぞれ作製し、還元型補酵素Ｑ１０は１００ｍｇ／ｋｇの投与量で、アンセリンも１００ｍｇ／ｋｇの投与量でそれぞれラットに経口投与した。ラットは４群に分け、溶媒対照投与群、還元型補酵素Ｑ１０単独投与群、アンセリン単独投与群、および還元型補酵素Ｑ１０とアンセリンの併用群とした。最大走行時間は、還元型補酵素Ｑ１０単独投与群は投与３時間後に測定し、アンセリン単独投与群は投与１時間後に測定した。併用群は最大走行時間測定の３時間前に還元型補酵素Ｑ１０を、１時間前にアンセリンを投与した。最大走行時間の延長時間は、事前に各個体毎にサンプルを投与しない場合の最大走行時間を測定し、サンプルを投与した場合との差を求めた。最大走行時間の延長時間値を表１に示す。【００７６】
【表１】
2009136587.tif 000004
【００７７】
上記の通り、対照群では溶媒投与前後の最大走行時間の差が−１３±４５秒で、最大走行時間がやや低下する傾向が認められた。還元型補酵素Ｑ１０またはアンセリンの単独投与群では、ラットの最大走行時間に投与前後での統計的に有意な延長は認められなかったが、還元型補酵素Ｑ１０及びアンセリンを投与した群では、ラットの最大走行時間は対照群に比較して有意に増加した。即ち、還元型補酵素Ｑ１０とアンセリンを組み合わせることにより、単独では明らかでなかった抗疲労効果が明確に表れ、これらの物質の組み合わせが相乗的な抗疲労作用を生み出すことが判った。【００７８】
（実施例２）
２０ｍｇの酸化型補酵素Ｑ１０と、２００ｍｇのアンセリン含有エキス（焼津水産株式会社製、商品名：マリンアクティブ１０、アンセリン含量１０重量％）を、リモネン１.５ｇに加え、窒素雰囲気下、１６時間８５℃で加熱した。反応液をＨＰＬＣで分析した結果、反応液中の酸化型補酵素Ｑ１０がなくなり、還元型補酵素Ｑ１０が生成していることが確認された。【００７９】
（製剤例１）
オリーブオイルを６０℃に加温し、同様に６０℃で溶融した補酵素Ｑ１０（還元型補酵素Ｑ１０：酸化型補酵素Ｑ１０＝９５：５）及びアンセリンを加えた。これにビタミンＥを少しずつ加えて均質とし、常法によりソフトカプセル化した。１カプセル中に補酵素Ｑ１０として２０ｍｇ（還元型補酵素Ｑ１０として１９ｍｇ）、アンセリンとして２０ｍｇを含有するソフトカプセル製剤を得た。【００８０】
補酵素Ｑ１０        ２０重量部
アンセリン        ２０重量部
ビタミンＥ        １５重量部
オリーブ油      ３５０重量部【００８１】
（製剤例２）
オリーブオイルを６０℃に加温し、同様に６０℃で溶融した補酵素Ｑ１０（還元型補酵素Ｑ１０：酸化型補酵素Ｑ１０＝９５：５）及びカルノシンを加えた。これにビタミンＥを少しずつ加えて均質とし、常法によりソフトカプセル化した。１カプセル中に補酵素Ｑ１０として２０ｍｇ（還元型補酵素Ｑ１０として１９ｍｇ）、カルノシンとして２０ｍｇを含有するソフトカプセル製剤を得た。【００８２】
補酵素Ｑ１０        ２０重量部
カルノシン        ２０重量部
ビタミンＥ        １５重量部
オリーブ油      ３５０重量部【００８３】
（製剤例３）
補酵素Ｑ１０（還元型補酵素Ｑ１０：酸化型補酵素Ｑ１０＝８５：１５）及びアンセリンをアセトンに加え、次いでこれを結晶セルロース（微粉末）に吸着させた後、乾燥した。これをコーンスターチと混合し、常法により散剤とした。【００８４】
補酵素Ｑ１０                      １０重量部
アンセリン                      １０重量部
結晶セルロース                  ４０重量部
コーンスターチ                  ５５重量部【００８５】
（製剤例４）
補酵素Ｑ１０（還元型補酵素Ｑ１０：酸化型補酵素Ｑ１０＝８５：１５）及びカルノシンをアセトンに加え、次いでこれを結晶セルロース（微粉末）に吸着させた後、乾燥した。これをコーンスターチと混合し、常法により散剤とした。【００８６】
補酵素Ｑ１０                      １０重量部
カルノシン                      １０重量部
結晶セルロース                  ４０重量部
コーンスターチ                  ５５重量部【００８７】
（製剤例５）
補酵素Ｑ１０（還元型補酵素Ｑ１０：酸化型補酵素Ｑ１０＝８５：１５）及びアンセリンをアセトンに加え、次いでこれを結晶セルロース（微粉末）に吸着させた後、乾燥した。これにコーンスターチ、乳糖、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸マグネシウムを混合し、次いでポリビニルピロリドンの水溶液を結合剤として加えて常法により顆粒化した。これに滑沢剤としてタルクを加えて混合した後、１錠に補酵素Ｑ１０を２０ｍｇ、アンセリンを２０ｍｇ含有する錠剤に打錠した。【００８８】
補酵素Ｑ１０                                ２０重量部
アンセリン                                ２０重量部
コーンスターチ                            ２５重量部
乳糖                                      １５重量部
カルボキシメチルセルロースカルシウム      １０重量部
結晶セルロース                            ４０重量部
ポリビニルピロリドン                        ５重量部
ステアリン酸マグネシウム                    ３重量部
タルク                                    １０重量部【００８９】
（製剤例６）
補酵素Ｑ１０（還元型補酵素Ｑ１０：酸化型補酵素Ｑ１０＝８５：１５）及びカルノシンをアセトンに加え、次いでこれを結晶セルロース（微粉末）に吸着させた後、乾燥した。これにコーンスターチ、乳糖、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸マグネシウムを混合し、次いでポリビニルピロリドンの水溶液を結合剤として加えて常法により顆粒化した。これに滑沢剤としてタルクを加えて混合した後、１錠に補酵素Ｑ１０を２０ｍｇ、カルノシンを２０ｍｇ含有する錠剤に打錠した。【００９０】
補酵素Ｑ１０                                ２０重量部
カルノシン                                ２０重量部
コーンスターチ                            ２５重量部
乳糖                                      １５重量部
カルボキシメチルセルロースカルシウム      １０重量部
結晶セルロース                            ４０重量部
ポリビニルピロリドン                        ５重量部
ステアリン酸マグネシウム                    ３重量部
タルク                                    １０重量部【００９１】
（製剤例７）
下記成分を常法により顆粒化した後、ゼラチン硬カプセルに充填した。１カプセル中に補酵素Ｑ１０を２０ｍｇ、アンセリンを２０ｍｇ含有するカプセル剤を得た。【００９２】
補酵素Ｑ１０                                    ２０重量部
（還元型補酵素Ｑ１０：酸化型補酵素Ｑ１０＝９５：５）
アンセリン                                       ２０重量部
結晶セルロース                                  ４０重量部
コーンスターチ                                  ２０重量部
乳糖                                            ６２重量部
ステアリン酸マグネシウム                          ２重量部
ポリビニルピロリドン                              ３重量部【００９３】
（製剤例８）
下記成分を常法により顆粒化した後、ゼラチン硬カプセルに充填した。１カプセル中に補酵素Ｑ１０を２０ｍｇ、カルノシンを２０ｍｇ含有するカプセル剤を得た。【００９４】
補酵素Ｑ１０                                    ２０重量部
（還元型補酵素Ｑ１０：酸化型補酵素Ｑ１０＝９５：５）
カルノシン                                       ２０重量部
結晶セルロース                                  ４０重量部
コーンスターチ                                  ２０重量部
乳糖                                            ６２重量部
ステアリン酸マグネシウム                          ２重量部
ポリビニルピロリドン                              ３重量部【００９５】
（製剤例９）
下記成分を常法により顆粒化した。【００９６】
アンセリン                                      ２０重量部
結晶セルロース                                  ４０重量部
コーンスターチ                                  ２０重量部
乳糖                                            ６２重量部
ステアリン酸マグネシウム                          ２重量部
ポリビニルピロリドン                              ３重量部
その後、製造例３で得られた還元型補酵素Ｑ１０安定化製剤６０重量部を上記顆粒と混合し、ゼラチン硬カプセルに充填して、カプセル剤を得た。
【国際調査報告】
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