(57)【要約】  動物由来成分を含有せずに、成虫メスの卵巣発達や産卵に寄与する飼料を提供するとともに、これを用いた安全なニクバエ類およびクロバエ類昆虫の飼育方法および孵化時期、幼虫期間、産卵時期が制御されたニクバエ類およびクロバエ類昆虫の飼育方法を提供する。  酵母類と穀類と植物性多糖類とを含み、有機酸を含まない本発明の飼料を用いると、成虫メスの卵巣発達や産卵に寄与する。すなわち、動物由来成分を用いない試料により、ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の成虫メスの卵巣発達や産卵を行うことができる。また、成虫の状態や産卵数などを事前に調整して、出荷調整をすることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵母類と穀類と植物性多糖類とを含み、
有機酸を含まない、
ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の卵巣発達期および産卵期用飼料。
【請求項２】
酵母類と穀類と植物性多糖類とを含み、有機酸を含まない飼料で、卵巣発達期および産卵期を飼育する、
ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の飼育方法。
【請求項３】
酵母類と穀類と植物性多糖類と全粉乳と有機酸とを含む飼料で、幼虫期を飼育し、
酵母類と穀類と植物性多糖類とを含み、有機酸を含まない飼料で、成虫期を飼育する、
ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の飼育方法。
【請求項４】
産卵された卵を低温処理して、孵化時期を制御する、ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の飼育方法。
【請求項５】
幼虫期に低温処理をして、幼虫期を延長する、ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の飼育方法。
【請求項６】
貧栄養飼料で卵巣発達期および／または産卵期の成虫メスを飼育して、産卵時期を制御する、ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の飼育方法。
【請求項７】
酵母類と穀類と植物性多糖類と全粉乳と有機酸とを含む飼料で、幼虫期を飼育し、
酵母類と穀類と植物性多糖類とを含み、有機酸を含まない飼料で、成虫期を飼育し、
さらに、（１）産卵された卵を低温処理して、孵化時期を制御する、（２）幼虫期に低温処理をして、幼虫期を延長する、（３）貧栄養飼料で卵巣発達期および／または産卵期を飼育して、産卵時期を制御する、の少なくとも一つの方法を行う、
ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の飼育方法。
【請求項８】
請求項２〜８のいずれかに記載のニクバエ類およびクロバエ類昆虫の飼育方法により飼育された、医療用昆虫。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医療用に供するニクバエ類およびクロバエ類昆虫用の培地、ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の飼育方法および医療用昆虫に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、難治性の創傷治療法としてマゴットセラピー（ウジ治療）が注目されている。マゴットセラピーは、ある種のハエの幼虫が、動物の組織細胞（腐敗組織）だけを摂取する性質を利用したものである。生きたハエの幼虫を所定期間、治療の困難な壊死性創傷部位に移植する。ハエの幼虫は、壊死した組織、膿、浸出液などを食すると共に、その刺激により傷の回復や白血球の活性化を行う。同時に、ウジの分泌する分泌液は、（１）創傷を洗い流し、（２）強い殺菌作用を有し、（３）また宿主の免疫系に作用し、創傷の治癒を促進する。【０００３】
一般に、マゴットセラピーに用いられるニクバエ類およびクロバエ類昆虫は、肉食あるいは肉食動物の糞食である。これは、これらの昆虫の幼虫の成長のためには、動物組織あるいは肉食動物の糞食が必要である。また、メスの成虫の卵巣発達や産卵のためにも、動物組織あるいは肉食動物の糞食が必要である。【０００４】
通常、ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の飼育には、牛、豚、鶏などの動物の肝臓や筋肉あるいはその抽出物が用いられている。しかし、これらの飼料で飼育したニクバエ類およびクロバエ類昆虫の幼虫をマゴットセラピーに用いる場合には、問題となる場合がある。牛海綿状脳症（ＢＳＥ）、トリインフルエンザ、あるいは他の動物組織に由来する動物原性疾患のリスクが排除できないからである。このため、動物組織あるいはその抽出物を含まない餌の開発が重要である。【０００５】
特に、飼料の一部に、牛、豚、鶏などの動物の肝臓や筋肉などを使用する場合に加熱をすると、メスの成虫の卵巣発達ができない。このため、飼料の殺菌が行えない。したがって、衛生的な医療用昆虫を提供できない可能性が高い。【０００６】
本発明者らは、ニクバエ類昆虫またはクロバエ類昆虫について長年にわたり研究を続けてきた結果、ヒロズキンバエ（Ｌｕｃｉｌｉａ  ｓｅｒｉｃａｔａ）を含むニクバエ類昆虫またはクロバエ類昆虫の幼虫を飼育するための動物組織あるいはその抽出物を含まない餌を開発している（例えば、非特許文献１参照）。
【非特許文献１】シンイチロウ  タチバナ  （Ｓｈｉｎ−Ｉｃｈｉｒｏ  Ｔａｃｈｉｂａｎａ）、他１名、「Ａｎ  ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  ｄｉｅｔ  ｆｏｒ  ｂｌｏｗ  ｆｌｙ  ｌａｒｖａｅ，  Ｌｕｃｉｌｉａ  ｓｅｒｉｃａｔａ（ＭＥＩＧＥＮ）  （Ｄｉｐｔｅｒａ：Ｃａｌｌｉｐｈｏｒｉｄａｅ）」、（Ａｐｐｌ．  Ｅｎｔｏｍｏｌ．  Ｚｏｏｌ．）、２００１、第３６巻、第４号、ｐ．５２１−５２３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
非特許文献１に記載の餌は、比較的安全とされる全粉乳を用いている。しかし、この餌は、幼虫の飼育にのみしか用いられない。すわなち、この餌は、成虫メスの卵巣発達や産卵に用いることはできない。また、動物組織を含有せずに、成虫メスの卵巣発達や産卵を誘導する餌は知られていない。【０００８】
さらに、成虫メスの卵巣発達や産卵を誘導する飼料が殺菌できるものであることが望まれる。【０００９】
また、安全な試料を用いて、ハエを飼育したとしても、以下のような問題がある。ニクバエ類昆虫またはクロバエ類昆虫は、一般に産卵から１２〜２４時間で幼虫に孵化する。幼虫は１週間後に蛹になる。蛹は１〜３週間以内に成虫になる。成虫は約１〜２ヶ月生存する。ニクバエ類昆虫またはクロバエ類昆虫の幼虫をマゴットセラピー用に提供する場合、幼虫の状態で出荷される。通常は、発注を受けた後、産卵させ、幼虫まで育成して配送する。このため、成虫の状態や産卵数などを調整する必要があり、発注から出荷までにある程度の時間がかかる。また、受注を見越して幼虫を生産した場合、受注がなければ生産した幼虫が無駄になる。【００１０】
すなわち、本発明は上記課題を解決し、動物由来成分を含有せずに、成虫メスの卵巣発達や産卵に寄与し、しかも殺菌できる飼料を提供することを目的とする。【００１１】
また、本発明は、上記試料を用いた安全なニクバエ類およびクロバエ類昆虫の飼育方法および孵化時期、幼虫期間、産卵時期が制御されたニクバエ類およびクロバエ類昆虫の飼育方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記課題を解決するために、本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、酵母類と穀類と植物性多糖類とを含み、有機酸を含まない飼料が、動物由来成分を用いず、成虫メスの卵巣発達や産卵に寄与することを見出し、本発明を完成した。【００１３】
また、酵母類と穀類と植物性多糖類と有機酸とを含む幼虫期用の飼料と、上記飼料とを組み合せれば、ニクバエ類およびクロバエ類昆虫を、全飼育期間を通じて安全な飼料で飼育することができる。【００１４】
また、産卵された卵を低温処理して、孵化時期を制御してもよい。幼虫期に低温処理をして、幼虫期を延長してもよい。貧栄養飼料で卵巣発達期および／または産卵期を飼育して、産卵時期を制御してもよい。
【発明の効果】
【００１５】
本発明のニクバエ類およびクロバエ類昆虫の卵巣発達期および産卵期用飼料は、酵母類と穀類と植物性多糖類とを含み、有機酸を含まない。すなわち、本発明の試料を用いると、動物組織および動物由来成分を用いずに、ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の成虫を飼育できる。また、構成成分は煮沸しても変性しないので、殺菌が可能である。この結果、安全な医療用昆虫を提供することができる。【００１６】
本発明では、低温処理により、孵化時期・幼虫期間を制御する。また、貧栄養飼料で卵巣発達期および／または産卵期を飼育して産卵時期を制御する。これにより、受注を見越しての幼虫の生産が可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下に本発明を詳細に説明する。【００１８】
［ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の卵巣発達期および産卵期用飼料］
ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の成虫メスは、卵巣を発達させ、産卵をするためには、動物組織（死体や内臓）あるいは排泄物（糞）などの動物性タンパク質を必要とする。このため、従来は、牛、豚、鶏などの動物の肝臓や筋肉などが用いられてきた。これらの代わりになるものとして、温血動物の血液や肝臓の抽出物を混合した人工飼料が開発されてきた。しかし、これらの人工飼料では、成虫メスは、卵巣を発達させ、産卵を誘導させることはできなかった。本発明者は、さらなる人工飼料の開発をするため、魚介類、鶏卵、カゼイン、ヒトの栄養補助食品などを用いて、成虫メスは、卵巣を発達させ、産卵をさせる人工培地の開発を試みた。しかし、これらを用いても、卵巣を発達させ、産卵をさせるという２つの機能を同時に有する動物性タンパク質を含む飼料は存在しなかった。【００１９】
一方、本発明者らが開発した、酵母類と穀類と植物性多糖類と有機酸とを含む人工飼料は、ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の幼虫は飼育できる。しかし、成虫メスの卵巣を発達させ、産卵をさせることはできなかった。有機酸（主としてプロピオン酸）は、飼料の防カビのために添加する。本発明者らは、プロピオン酸が成虫メスの卵巣の発達を阻害することを見出した。また、幼虫用の人工飼料に比べ、寒天添加量を減らした。これにより、飼料が軟らかくなり、産卵しやすくした。このようにして、本発明者らは、幼虫用の人工飼料から、有機酸を除去することで、成虫メスの卵巣を発達させ、産卵をさせることができることを見出したものである。すなわち、本発明のニクバエ類およびクロバエ類昆虫の卵巣発達期および産卵期用飼料は、酵母類と穀類と植物性多糖類とを含み、有機酸を含まない。この卵巣発達期および産卵期用飼料を用いれば、生の牛肝臓を用いるのと同等に成虫メスの卵巣を発達させ、産卵をさせることができる。したがって、この卵巣発達期および産卵期用飼料を用いて成虫期のニクバエ類およびクロバエ類昆虫を飼育すればよい。また、産卵された卵においても、生の牛肝臓を用いるのと同等の孵化成育率を得ることができる。【００２０】
前記酵母類は、酵母またはその抽出物であればよい。穀類は、小麦胚芽またはその抽出物であればよい。植物性多糖類は、植物・細菌由来の多糖類であればよく、例えば寒天などであればよい。これらの成分は、煮沸しても変性しないので、殺菌が可能である。【００２１】
本発明のニクバエ類およびクロバエ類昆虫の卵巣発達期および産卵期用飼料において、酵母類と穀類と植物性多糖類との配合量は、特に制限はないが、飼料の他成分の合計に対する植物性多糖類の配合量は、水（約１０００（質量比））を含めて５／１１５０（質量比）程度であればよい。飼料の他成分、すなわち酵母類と穀類との２成分の場合は、当量（質量）であればよい。また、実施例で説明するように、全粉乳を含んでもよい。この場合は、酵母類と穀類と全粉乳とを当量ずつ含めばよい。【００２２】
［ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の飼育方法］
本発明のニクバエ類およびクロバエ類昆虫の飼育方法では、幼虫期と、成虫期とを異なる飼料で飼育する。少なくとも、卵巣発達期および産卵期においては、上記本発明の飼料を用いて飼育する。幼虫期の飼料としては、特に制限はなく、公知の幼虫期用の飼育飼料を用いることができる。本発明者らが開発した、全粉乳と酵母類と穀類と植物性多糖類とプロピオン酸と（５０ｇ：５０ｇ：５０ｇ：１４ｇ：５ｍｌ）を含む飼料を用いるのが、好ましい。この試料を用いると、ウシ肝臓を用いて幼虫を飼育するのと同等のレベルで幼虫を飼育できる。また、全粉乳は、動物組織あるいはその抽出物ではないため、動物組織に由来する動物原性疾患のリスクがほとんど否定できる。【００２３】
［孵化時期の制御］
ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の卵は、通常２４時間以内に、温度２５℃では、通常１４時間で孵化する。本発明では、卵に産卵された卵に低温処理を施し、孵化時期を制御する。【００２４】
低温処理は、例えば以下のようにして行う。低温処理を行う卵は、産卵後１０〜１４時間、好ましくは１３〜１４時間経過した卵を用いる。一定時間経過した卵を用いるのは、卵が発育して低温に耐えうるようになるためには、産卵からある程度発育が進行する必要があるからである。また、産卵後１４時間を越えると、孵化が始まるためである。【００２５】
通常、マゴットセラピー用にニクバエ類およびクロバエ類昆虫を用いる場合には、産卵後卵を公知の方法により滅菌する。この操作により、無菌化した幼虫が得られる。この滅菌処理は、通常産卵から孵化前に行われる。低温処理をする場合は、滅菌処理をした後に行うのが望ましい。【００２６】
低温処理は、５〜７℃、好ましくは７℃で行う。また、低温処理の前に、９℃以下の温度で卵を低温順化させるとよい。低温順化を９℃より高い温度で行うと孵化をする可能性がある。具体的には、低温順化を１２時間前後行い、それから５〜７℃の低温下におく。【００２７】
この方法を用いると、産卵後６日後までは孵化を遅らせることができる。低温処理が長期になると孵化生育率が低下する。このため、死骸を取り除く作業が必要となり、作業効率が低下する。好ましい低温処理期間は、産卵後４日である。産卵後４日の低温処理期間であれば、孵化生育率を５０〜６０％にすることができる。【００２８】
［幼虫期の延長］
孵化した幼虫は、４〜８℃、好ましくは８℃前後に置くことで、幼虫期を延長することができる。幼虫を８℃前後に置くと、３．５日経過した後、９０％以上の生存率が得られる。【００２９】
［産卵時期の制御］
上記したようにニクバエ類およびクロバエ類昆虫のメス成虫は、本発明の飼料、あるいは動物組織などで飼育することで、卵巣が発達し、産卵をする。一方、砂糖と水のような貧栄養飼料を用いれば生存をすることはできる。したがって、成虫を貧栄養飼料で一定期間飼育すると、この間は卵巣が発達しない。その後、本発明の飼料、あるいは他の卵巣発達用飼料を与えることで、卵巣が発達し、産卵をさせることができる。または、成虫に本発明の飼料、あるいは他の卵巣発達用飼料を与えて卵巣を発達させた後、貧栄養飼料で飼育する。産卵を望む時期に、本発明の飼料、あるいは他の産卵用飼料を与えて産卵をさせることにより、産卵時期を制御することができる。【００３０】
本発明の孵化時期の制御方法、幼虫期の延長方法、産卵時期の制御方法は、本発明の飼育方法を用いて行うと、安全な医療用昆虫を安定して提供できるという効果を有する。しかし、本発明の孵化時期の制御方法、幼虫期の延長方法、産卵時期の制御方法を従来の飼料を用いた飼育に適用してもよい。
【実施例】
【００３１】
以下、実施例を用いて本発明を詳細に説明するが、本発明は実施例に限定されるものではない。【００３２】
（実施例１）
［ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の卵巣発達期および産卵期用飼料］
（使用昆虫）
以下の昆虫を使用して、実験を行った。
２００５年５月と２００６年５月に大阪市内で捕獲したヒロズキンバエ（Ｌｕｃｉｌｉａ  ｓｅｒｉｃａｔａ）を、明暗１６：８時間、２５±１℃で、ナイロン網でカバーしたプラスチック容器中で、水と、砂糖と、牛肝臓片とで飼育した。卵は、５００ｍｌのビーカー中のプラスチック袋に入れた下記表１に示す飼料１に移した。幼虫は、この飼料中で継続的に飼育した。その後、幼虫は、蛹殻形成用培地として乾燥した木材チップを入れた容器に移し、ナイロン網で覆った。全ての実験は、明暗１６：８時間、２５±１℃で、行った。【００３３】
（人工飼料）
表１に示す人工飼料を用いた。１リットルの水に、プロピオン酸以外の成分を加え、混合して、かき混ぜながら、約１０分間煮沸した。試料１は軽く冷却し、抗カビ剤としてプロピオン酸を加え、室温（約２０−２５℃）で、固化させた。飼料３と４は、寒天の量が少ないので、相分離を防ぐために、間欠的に攪拌しながら固化した。なお、全粉乳は森永乳業（株）製を、乾燥酵母はエビオス（アサヒビール薬品（株）製）を、小麦胚芽は日清製粉（株）製を、プロピオン酸は和光純薬工業（株）製を用いた。
【表１】
2009031333.tif 000002
【００３４】
（卵巣発達）
新しく発生した雌成虫のみを、砂糖と、水と、（上記表１に示す飼料のいずれか、あるいは牛肝臓）の飼料とを入れた容器中に移した。メスは、解剖し、Ｈａｒｌｏｗによる、ルリキンバエ（Ｐｒｏｔｏｐｈｏｒｍｉａ  ｔｅｒｒａｅｎｏｖａｅ）の基準に従って卵巣の発達を評価した（Ｈａｒｌｏｗ，  Ｐ．  Ｍ．  （１９５６）．、Ａ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｏｖａｒｉａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｔｏ  ａｄｕｌｔ  ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｌｏｗｆｌｙ  Ｐｒｏｔｏｐｈｏｒｍｉａ  ｔｅｒｒａｅ‐ｎｏｖａｅ  （Ｒ．Ｄ．）  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３３，７７７‐７９７．）。具体的には、卵黄の蓄積が観察されないステージＩ−ＩＩＩのものを“未発達”と評価し、卵黄の蓄積が観察できたステージＩＶとＶを“発達”と評価した。これに基づいて、各個体数における卵巣発達の経時的変化から卵巣発達率（％）を求めた。結果を表２に示す。
【表２】
2009031333.tif 000003
【００３５】
表２から、牛肝臓は、全ての飼料の中で、最も効果的に卵巣を発達させることがわかる。飼料２、３、４では、発達がやや遅れてはいるが、７日齢にはほとんどの雌の卵巣が成熟した。この結果から、本発明の飼料を用いると、卵巣発達を行えることがわかる。すなわち、本発明の飼料は、牛肝臓の代替ができることがわかる。【００３６】
飼料１と２とは、表１に示すように、プロピオン酸を含む（飼料１）か否（飼料２）かのみが相違する。以上から、プロピオン酸の存在が、卵巣の発達に大きな影響を与えることがわかった。【００３７】
また、飼料３と４とから、全粉乳を用いても、用いなくても、卵巣の発達の差はないことがわかる。【００３８】
（産卵）
羽化当日に約２０対の成虫を新しい容器（ポット）に移した。これらに４日間牛肝臓を与えて、卵巣の発達を誘発した。なお、ここで、卵巣発達のために牛肝臓を用いたのは、成虫の卵巣発達のステージを揃えるためである。これらの成虫に、飼料１、２、３のいずれか、あるいは牛肝臓を与えて、１０日間産卵の状態を追跡した。飼料は、毎日新しい物に替えた。結果を表３に示す。
【表３】
2009031333.tif 000004
【００３９】
牛肝臓を用いたものは、全てのポットで産卵が見られた（Ｎ＝３）。一方、飼料１では、全てのポットで産卵が抑制されていた（Ｎ＝４）。この結果から、プロピオン酸は、成虫の産卵を抑制することがわかる。【００４０】
飼料２と飼料３では、寒天濃度のみが異なる。飼料２を用いたものは、産卵が見られなかった（Ｎ＝６）。一方、飼料３を用いたものでは、全てのポットで産卵が確認された（Ｎ＝３）。寒天の濃度、すなわち飼料の硬さが産卵には重要であることがわかった。【００４１】
以上の結果から、本発明の飼料は、産卵に効果的であることがわかった。なお、人工飼料４も、産卵に有効であることは、以下の表４に示す実験から明らかである。【００４２】
（親世代・子世代に及ぼす影響の評価）
新たに羽化した成虫を交配し、１０対の成虫を新しい容器に移した。ハエは、砂糖と水、および上記表１に示す飼料３、４のいずれか、あるいは牛肝臓を用いて、３０日間飼育した。餌試料は毎日交換した。最初の産卵日、産卵した日数、孵化しない卵塊が見られた日数、生存する成虫を観察して記録した。産下された卵は毎日飼料１に移し、成長させた。なお、卵を飼料１で飼育するのは、幼虫の発達には飼料１が必要だからである。幼虫の数を計測した。新たに羽化した成虫の数も、毎日計測した。結果を表４に示す。
【表４】
2009031333.tif 000005
【００４３】
表４から、親世代では、牛肝臓に比べて、飼料３、４では、産卵開始日齢がかなり遅れることがわかる。一方、産卵が観察された日には飼料間で大きな差はなかった。また、孵化しない卵が観察される日数は、飼料４が、飼料３、牛肝臓に比べて多かった。しかし、３０日後の雌と雄との生存率は、ほぼ７０〜８０％で、飼料間に相違はなかった。以上の結果から、親の飼育に関しては、本発明の飼料は、牛肝臓と同等であることがわかる。【００４４】
表４から、３齢幼虫の数から見て、子孫の数には飼料間に差がないことがわかる。また、３齢幼虫から成虫までの生存率からみて、羽化率においても、飼料間に相違はないことがわかる。すなわち、人工飼料を用いた場合でも効率よく卵が得られ、その卵は健康であることが明らかになった。以上の結果から、本発明の試料を用いて成虫を飼育しても、子孫に悪影響を与えないことがわかる。【００４５】
［他の動物飼料の検討］
（使用昆虫）
以下の昆虫を使用して、実験を行った。
前記と同様の２００５年５月と２００６年５月に大阪市内で捕獲したヒロズキンバエ（Ｌｕｃｉｌｉａ  ｓｅｒｉｃａｔａ）を、明暗１６：８時間、２５±１℃で、ナイロン網でカバーしたプラスチック容器中で、水と、砂糖と、牛肝臓片とで飼育した。卵は、５００ｍｌのビーカー中のプラスチック袋に入れた下記表１に示す飼料１に移した。幼虫は、この飼料中で継続的に飼育した。その後、幼虫は、蛹殻形成用培地として乾燥した木材チップを入れた容器に移し、ナイロン網で覆った。全ての実験は、明暗１６：８時間、２５±１℃で、行った。【００４６】
（卵巣発達に及ぼす効果）
成虫は、水と、砂糖と、表５に示す各々の動物材料との飼料とを入れた容器中に移した。メスは、解剖し、Ｈａｒｌｏｗによる、ルリキンバエ（Ｐｒｏｔｏｐｈｏｒｍｉａ  ｔｅｒｒａｅｎｏｖａｅ）の基準に従って卵巣の発達を評価した。具体的には、卵黄の蓄積が観察されないステージＩ−ＩＩＩのものを“未発達”と評価し、卵黄の蓄積が観察できたステージＩＶとＶを“発達”と評価した。結果を表５に示す。なお、表５において解剖日齢が異なるのは、その飼料に基づく卵巣発達の良否により、解剖した日が異なることによる。早い日齢で解剖したものは、卵巣発達が良好な飼料である。
【表５】
2009031333.tif 000006
【００４７】
表５から、生の牛肝臓、生の鶏卵（全卵）、生の鶏卵（黄身）、ゆでた鶏卵（全卵）、ゆでた鶏卵（黄身）は、優れた卵巣発達を示していることがわかる。一方、加熱した牛肝臓、エビ、ゆでた鶏卵（白身）は、全く卵巣発達しなかった。【００４８】
（産卵に及ぼす効果）
羽化当日に約２０対の成虫を新しい容器に移した。これらに４日間牛肝臓を与えて、卵巣の発達を誘発した。なお、ここで、卵巣発達のために牛肝臓を用いたのは、成虫の卵巣発達のステージを揃えるためである。これらの成虫に、表５に示す各々の動物材料の飼料のいずれかを与えて、１０日間産卵の状態を追跡した。飼料は、毎日新しい物に替えた。結果を表６に示す。
【表６】
2009031333.tif 000007
【００４９】
表６から、生の牛肝臓、加熱した牛肝臓、エビ、マグロを用いた場合は、産卵をした。一方、鶏卵では、加熱の有無、全卵、黄身、白身いずれの場合も、産卵をしなかった。【００５０】
以上の結果から、生の牛肝臓以外の動物材料を用いた場合は、卵巣発達または産卵のいずれか一方のみはできるが、両方を行える材料がないことがわかる。したがって、本発明の飼料は、卵巣発達または産卵の両方を行えるので、優れていることがわかる。【００５１】
［卵の孵化時期の制御］
（株）ジャパンマゴットカンパニー内で飼育されているヒロズキンバエを用いて、以下の実験を行った。ヒロズキンバエに産卵タンパク質を投与し、２時間後に産卵した卵を実験に用いた。【００５２】
（滅菌後、７℃で所定日数低温保存）
産卵後１０〜１４時間以内の卵を用い、卵を滅菌してから７℃で所定日数低温保存し、保存後に孵化生育させ、孵化生育した幼虫の数を数えた。生育用容器に採取した卵数に対して孵化生育した幼虫の数から、孵化生育率（％）を求めた。結果を表７に示す。なお、Ａ−０は、低温処理をしなかったものを示す。
【表７】
2009031333.tif 000008
【００５３】
（産卵後７℃で所定日数低温保存、産卵一日後滅菌）
産卵後１０〜１４時間後の卵を滅菌せずに７℃で低温保存し、産卵一日後（保存２日目）に滅菌し、その後再び低温保存し、低温保存後に孵化生育させ、孵化生育した幼虫の数を数えた。生育用容器に採取した卵数に対して孵化生育した幼虫の数から、孵化生育率（％）を求めた。結果を表８に示す。
【表８】
2009031333.tif 000009
【００５４】
（産卵後７℃で所定日数低温保存、低温処理後滅菌）
産卵後１０〜１４時間後の卵を滅菌せずに７℃で所定日数低温保存し、保存後に滅菌し、その後孵化生育させ、孵化生育した幼虫の数を数えた。生育用容器に採取した卵数に対して孵化生育した幼虫の数から、孵化生育率（％）を求めた。結果を表９に示す。
【表９】
2009031333.tif 000010
【００５５】
（滅菌後、低温順化処理後、５℃で所定日数低温保存）
産卵後１０時間以内の卵と、１０〜１４時間以内の卵とを用い、卵を滅菌してから９℃で９時間低温順化処理を行った後、５℃で所定日数低温保存し、保存後に孵化生育させ、孵化生育した幼虫の数を数えた。生育用容器に採取した卵数に対して孵化生育した幼虫の数から、孵化生育率（％）を求めた。結果を表１０に示す。なお、Ａ１−０は、低温処理をしなかったものを示す。また、表中、孵化生育率において「＊」が付けられているものは、産卵後１０時間以内の卵のデータである。
【表１０】
2009031333.tif 000011
【００５６】
（低温順化処理後、５℃で所定日数低温保存、産卵一日後滅菌）
産卵後１０〜１４時間後の卵を滅菌せずに９℃で９時間低温順化処理を行った後５℃で低温保存し、産卵一日後（保存２日目）に滅菌し、その後再び低温保存し、低温保存後に孵化生育させ、孵化生育した幼虫の数を数えた。生育用容器に採取した卵数に対して孵化生育した幼虫の数から、孵化生育率（％）を求めた。結果を表１１に示す。
【表１１】
2009031333.tif 000012
【００５７】
（産卵後、低温順化処理した後、５℃で所定日数低温保存、低温処理後滅菌）
産卵後１０〜１４時間後の卵を滅菌せずに９℃で９時間低温順化処理を行った後５℃で所定日数低温保存し、保存後に滅菌し、その後孵化生育させ、孵化生育した幼虫の数を数えた。生育用容器に採取した卵数に対して孵化生育した幼虫の数から、孵化生育率（％）を求めた。結果を表１２に示す。また、表中、孵化生育率において「＊」が付けられているものは、産卵後１０時間以内の卵のデータである。
【表１２】
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【００５８】
（滅菌後、低温順化処理後、５℃で所定日数低温保存）
産卵後１３時間の卵を用い、卵を滅菌してから９℃で１２時間低温順化処理を行った後、５℃で所定日数低温保存し、保存後に孵化生育させ、孵化生育した幼虫の数を数えた。生育用容器に採取した卵数に対して孵化生育した幼虫の数から、孵化生育率（％）を求めた。結果を表１３に示す。
【表１３】
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【００５９】
（滅菌後、低温順化処理後、７℃で所定日数低温保存）
産卵後１３時間の卵を用い、卵を滅菌してから９℃で１２時間低温順化処理を行った後、７℃で所定日数低温保存し、保存後に孵化生育させ、孵化生育した幼虫の数を数えた。生育用容器に採取した卵数に対して孵化生育した幼虫の数から、孵化生育率（％）を求めた。結果を表１４に示す。
【表１４】
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【００６０】
以上から、産卵後の経過時間（例えば１３〜１４時間）、卵を滅菌する時期（例えば低温保存前）、低温保存温度（例えば７℃）、低温順化処理（例えば、９℃で１２時間）などの条件を選択することで、最長３日間（たとえば、Ａ３−３：孵化生育率６０〜８０％）、孵化を抑制し、卵を保存することができる。また、上記の条件を組み合せることで、さらに、卵の保存期間を延ばせる可能性がある。【００６１】
［幼虫期の延長］
（株）ジャパンマゴットカンパニー内で飼育されているヒロズキンバエを用いて、以下の実験を行った。孵化後３日目の通常の飼育条件においた無菌幼虫を２０匹ずつ採取し、それぞれを３個の無菌プラスチック容器に入れた。この無菌プラスチック容器を、４℃、８℃、２５℃の各温度におき、１２時間毎に生存している幼虫の個体数を数えた。実験は全ての幼虫が死滅するまで行った。同様の実験を３回繰り返した。結果を表１５〜１７に示す。
【表１５】
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【表１６】
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【表１７】
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【００６２】
表１５〜１７から、常温（２５℃）で保存した場合は、２４時間以上経過すると、生存率が急激に低下することがわかる。また、上記表１５〜１７のデータを平均すると、４℃、８℃いずれの場合も、４日目まで９０％以上（１８匹以上）、幼虫が生存することがわかる。また、いずれの場合でも、幼虫の生存率が９０％以上であるのは、８℃で３日半（８４時間）であった。
【産業上の利用可能性】
【００６３】
動物組織および動物由来成分を用いずに、ニクバエ類およびクロバエ類昆虫の成虫を飼育できる。また、孵化時期・幼虫期間を制御し、産卵時期を制御する。この結果、安全な医療用昆虫を安定して提供することができる
【国際調査報告】
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