(57)【要約】  本発明は、植物体中の重金属含量を低減する機能を有する細菌、該細菌を用いた植物体中の重金属含量を低減する方法、および該細菌を有効成分として含有する組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物体中の重金属含量を低減する機能を有する、オクロバクトラム属、アルカリゲネス属、ラルストニア属、バリオボラックス属、カプリアビダス属、ブルクホルデリア属、またはステノトロフォモナス属に属する細菌。
【請求項２】
重金属が、カドミウム、銅、鉛、クロム、ニッケル、およびヒ素からなる群から選択される、請求項１に記載の細菌。
【請求項３】
オクロバクトラム・アンスロピ、アルカリゲネス・キシロゾキシダンス、アルカリゲネス・フェーカリス、ラルストニア・マンニトリリティカ、ラルストニア・ピケティ、バリオボラックス・パラドクス、カプリアビダス・ネカター、ブルクホルデリア・セパシア、またはステノトロフォモナス・マルトフィリアである、請求項１または２に記載の細菌。
【請求項４】
オクロバクトラム・アンスロピＪＨＡ６０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５４９）、アルカリゲネス・キシロゾキシダンスＪＨＢ１４菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５０）、アルカリゲネス・フェーカリスＪＨＣ１０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５１）、ラルストニア・マンニトリリティカＪＨＧ２菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５２）、ラルストニア・マンニトリリティカＪＨＬ８菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５４）、ラルストニア・ピケティＪＨＰ３０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５５）、ラルストニア・ピケティＪＨＰ５５菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５７）、バリオボラックス・パラドクスＪＨＰ３１菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５６）、またはカプリアビダス・ネカターＪＨＪ６菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５３）である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の細菌。
【請求項５】
担体に固定化されている、請求項１〜４のいずれか１項に記載の細菌。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の少なくとも１つの細菌を、植物体の根部または根部周辺に使用することを特徴とする、植物体中の重金属含量を低減する方法。
【請求項７】
使用が、播種後から圃場への植付後の時期に少なくとも１回行われることを特徴とする、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
使用が、細菌を根部に直接添加、または細菌を根部周辺の土壌または水耕液に添加または混合することにより行われることを特徴とする、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
植物が、ナス科、イネ科、タデ科、マメ科、アブラナ科、ユリ科、キク科およびアカザ科からなる群から選択される、請求項６〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
請求項１〜５のいずれかに記載の細菌を有効成分として含有する、植物体中の重金属含量を低減するための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物体中の重金属含量を低減する細菌、該細菌を用いた植物体中の重金属含量を低減する方法、および該細菌を有効成分として含有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
鉱物や土壌などに天然に含まれる、カドミウム、鉛などの重金属は、鉱山開発などの人の活動によって環境中へ排出されてきた。【０００３】
例えば、カドミウムは、鉱山の坑内水や、製錬所の排水・排煙、また廃石などの堆積場からの排水などに含まれており、これらが現在の土壌汚染の主な原因となっている。また、カドミウムは、輸入および国内生産され、ニッケル・カドミウム電池、顔料、合金、以前は塩ビ安定剤などとして利用されており、過去に、工場や焼却場の排水および排煙として、河川や大気中に排出された事例もある。さらに、農耕地の土壌中のカドミウムは、カドミウムに汚染された河川水からの流入や雨水などの環境中から侵入することが知られている。【０００４】
厚生労働省は、食品を摂取した場合に、食品中のカドミウムの一部が体内に吸収・蓄積されることから、カドミウム濃度の高い食品を長年にわたり摂取すると、腎機能障害を引き起こす可能性があるとしている。また、日本ではカドミウムによる環境汚染により、イタイイタイ病が発生した事例がある。【０００５】
食品中のカドミウムの国際的な基準については、１９９８年からコーデックス委員会において検討が行われてきた。２００７年７月の委員会において精米で０．４ｍｇ／ｋｇ、小麦で０．２ｍｇ／ｋｇなどの国際基準値が示されている。【０００６】
作物中のカドミウム含量を低減させる手法には、客土、土壌改良資材の投入、カドミウム低吸収品種の利用、ファイトリメディエーションや洗浄による土壌浄化などがある。【０００７】
現行の土壌改良では、主に客土法が行われているが、本法では多大な費用が必要であるうえ、客土に必要な山土の採取が困難な状況にある。さらに、客土では大量の廃土処理が必要になる。また、作物の栽培に適するように土壌を改良する必要がある。客土厚が不十分な場合、汚染が再発する可能性もあり、物理的、コスト的に効率の良い技術が求められている。また、他の方法でも多大な費用と時間が必要である。【０００８】
微生物によるカドミウムの環境中からの除去は、低コストな方法として期待されている。金属陽イオンは、硫化物イオン、水酸化物イオンなどの陰イオンと結合して水に難溶解化合物となる。重金属イオンの硫化物、水酸化物、リン酸塩などは水に不溶または難溶である。それらの特性を利用して微生物を利用した環境水中からのカドミウムの除去が試みられている。硫化物を沈殿させる微生物としては、デスルフォビブリオ（Desulfovibrio）属などの硫酸還元菌が知られている。これらの微生物は有機物の多い湖沼、湿原や水田に分布していることが知られており、水稲での重金属低減の研究が行われている。しかし、これらの微生物は、水田で栽培されるイネで有効であるものの、酸化条件下での畑では、硫化物が硫酸物になって作物に吸収可能な形態となるため、利用することができない。【０００９】
エンドウマメでは、菌根菌というカビを用いて処理することにより、根中カドミウム濃度を低減したことが報告されている。菌根菌は特定の植物の根に感染し、植物の養分吸収、特にリン酸吸収を促進する働きがあることが知られている。しかし、高濃度のカドミウム土壌では低減効果がみられなかった(非特許文献１)。【００１０】
また、タバコでも、菌根菌（グロムス（Glomus）属）を用いてカドミウムの低減を試みた報告がある（非特許文献２）。ＡＭ菌根菌（内生菌根）３菌株において葉中カドミウム濃度の低減効果がみられた。但し、低減効果と菌根菌の定着性との関係に関連性がみられていない。また、ＡＭ菌根菌はカビの一種で人工的な培養が困難であり、大量培養に労力や時間がかかるという問題がある。さらに、菌根菌は、植物種に特異的な定着を示すものが多く、汎用性に劣る可能性がある。菌根菌の働きは土壌によって大きく異なることが知られ、リン酸が豊富な土壌、通気性が悪い土壌では働きが抑制されることが知られている。よって、土壌により低減効果は大きく振れる可能性がある。また、非特許文献２の実験は、温室でのみ行われ、かつ滅菌直後の土壌を使用している。減菌土壌を使用した場合、接種により添加した微生物が土壌中の優先種になることが想定される。一般的に植物を栽培する場合、土壌中には多種多様な微生物が存在し、接種微生物は栄養分の競合などにより減少する。よって実際に植物が栽培される圃場等の環境下での実験が重要となる。【００１１】
細菌は、従来から種々の土壌病害防除剤や植物病害防除剤に利用されている。【００１２】
例えば、オクロバクトラム・アンスロピＴＲＢ１９菌株は、ナス科植物の土壌病害防除剤の有効成分として用いられ、ナス科植物の根部、栽培地及び／又はその土壌に適用することにより、タバコ立枯病やナス科植物青枯病の防除効果を発揮する（特許文献１）。【００１３】
アルカリゲネス・フェーカリス（寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１５２２９）は、キュウリの植物病害防除剤の有効成分として用いられ、該微生物の培養物あるいは分離した菌体を、水で懸濁した後に植物に散布する方法や、うどんこ病のような茎葉部に発生する病害を対象に、茎葉に散布する方法で使用されている（引用文献２）。【００１４】
バリオボラックス属細菌ＣＧＦ４５２６株（寄託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−１９５６３）は、アブラナ科根こぶ病の防除剤の有効成分として用いられ、育苗時に該防除剤を培土に混合、かん注したり、圃場への定植前に浸漬する方法で使用されている（引用文献３）。また、バリオボラックス属細菌ＣＧＦ４５２６菌株と非病原性エルビニア・カロトボーラ・サブスピーシス・カロトボーラ細菌の組み合わせも、アブラナ科根こぶ病の防除剤として用いられ、育苗時（本畑移植前）に該防除剤を適用する方法で使用される（特許文献４）。
【特許文献１】特開平９−１９４３１４号公報
【特許文献２】特開平９−１０４６０６号公報
【特許文献３】特開２００５−１３７３３０号公報
【特許文献４】特開２００７−１９７４２１号公報
【非特許文献１】Journal of Experimental Botany, (2002), 53, p.1177-1185
【非特許文献２】Applied Soil Ecology, (2007), 35, p.502-510
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明は、植物体中の重金属含量を低減する機能を有する細菌、該細菌を用いた植物体中の重金属含量を低減する方法、および該細菌を有効成分として含有する組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、植物体中のカドミウムなどの重金属含量を低減する機能を有する細菌を単離することに成功し、本発明を完成した。【００１７】
本発明は、要約すると以下の通りである。【００１８】
〔１〕  植物体中の重金属含量を低減する機能を有する、オクロバクトラム属、アルカリゲネス属、ラルストニア属、バリオボラックス属、カプリアビダス属、ブルクホルデリア属、またはステノトロフォモナス属に属する細菌。【００１９】
〔２〕  重金属が、カドミウム、銅、鉛、クロム、ニッケル、およびヒ素からなる群から選択される、〔１〕に記載の細菌。【００２０】
〔３〕  オクロバクトラム・アンスロピ、アルカリゲネス・キシロゾキシダンス、アルカリゲネス・フェーカリス、ラルストニア・マンニトリリティカ、ラルストニア・ピケティ、バリオボラックス・パラドクス、カプリアビダス・ネカター、ブルクホルデリア・セパシア、またはステノトロフォモナス・マルトフィリアである、〔１〕または〔２〕に記載の細菌。【００２１】
〔４〕  オクロバクトラム・アンスロピＪＨＡ６０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５４９）、アルカリゲネス・キシロゾキシダンスＪＨＢ１４菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５０）、アルカリゲネス・フェーカリスＪＨＣ１０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５１）、ラルストニア・マンニトリリティカＪＨＧ２菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５２）、ラルストニア・マンニトリリティカＪＨＬ８菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５４）、ラルストニア・ピケティＪＨＰ３０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５５）、ラルストニア・ピケティＪＨＰ５５菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５７）、バリオボラックス・パラドクスＪＨＰ３１菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５６）、またはカプリアビダス・ネカターＪＨＪ６菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５３）である、〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の細菌。【００２２】
〔５〕  担体に固定化されている、〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載の細菌。【００２３】
〔６〕  〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の少なくとも１つの細菌を、植物体の根部または根部周辺に使用することを特徴とする、植物体中の重金属含量を低減する方法。【００２４】
〔７〕  使用が、播種後から圃場への植付後の時期に少なくとも１回行われることを特徴とする、〔６〕に記載の方法。【００２５】
〔８〕  使用が、細菌を根部に直接添加、または細菌を根部周辺の土壌または水耕液に添加または混合することにより行われることを特徴とする、〔６〕または〔７〕に記載の方法。【００２６】
〔９〕  植物が、ナス科、イネ科、タデ科、マメ科、アブラナ科、ユリ科、キク科およびアカザ科からなる群から選択される、〔６〕〜〔８〕のいずれかに記載の方法。【００２７】
〔１０〕  〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の細菌を有効成分として含有する、植物体中の重金属含量を低減するための組成物。【００２８】
本明細書において「植物体の根部」とは、植物体を栽培した場合に土壌中または水耕液中にあって水分や栄養分の吸収を行う部分である。【００２９】
本明細書において「受託番号」とは、独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ: National Institute of Technology and Evaluation）の特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ: NITE Patent Microorganisms Depositary、郵便番号２９２−０８１８  日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に本発明の細菌を寄託し受領されて付与された番号をいう（寄託日２００８年４月１０日）。
【発明の効果】
【００３０】
本発明の植物体中の重金属含量を低減する機能を有する細菌は、植物体中のカドミウムなどの重金属含量を低減することができ、重金属に対して耐性を有し得る。また、本発明は、タバコなどのナス科植物の他、イネ科、タデ科、マメ科、アブラナ科、アカザ科、ユリ科、キク科を含む、様々な植物に用いることができる。さらに、植物体の根部、または根部周辺の土壌もしくは水耕液に、本発明の細菌または組成物を施用する回数を増やすことにより、植物体中の重金属含量の低減効果を高めることができる。【００３１】
本発明の植物体中の重金属含量を低減する機能を有する細菌は、菌根菌（カビ）と比べて液体培養等による大量培養が容易である。また、定着性については、菌根菌は、土壌の成分や状態等により大きく影響を受けるが、細菌は、土壌の成分や状態等よりも植物根からの栄養分の供給により影響を受けると考えられ、かつ菌根菌と比べて植物種に対する特異性が低いことから、本発明の細菌は、植物への定着性および種々の植物に適用できる汎用性が高いと考えられる。本発明による植物体中の重金属含量の低減効果は、温室だけでなく、圃場でも確認されている。【００３２】
本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願2008-141201号の明細書および／または図面に記載される内容を包含する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
（１）本発明の細菌
本発明の細菌は、植物体中の重金属含量を低減する機能を有し、オクロバクトラム（Ochrobactrum）属、アルカリゲネス(Alcaligenes)属、ラルストニア(Ralstonia)属、バリオボラックス(Variovorax)属、カプリアビダス(Cupriavidus)属、ブルクホルデリア(Burkholderia)属、ステノトロフォモナス(Stenotrophomonas)属、シュードモナス(Pseudomonas)属、バチルス(Bacillus)属、フラボバクテリウム(Flavobacterium)属、またはスフィンゴモナス(Sphingomonas)属に属する。本発明の細菌として、具体的には、例えばオクロバクトラム・アンスロピ（Ochrobactrum anthropi）、アルカリゲネス・キシロゾキシダンス(Alcaligenes xylosoxidans)、アルカリゲネス・フェーカリス(Alcaligenes faecalis)、ラルストニア・マンニトリリティカ(Ralstonia mannitolilytica)、ラルストニア・ピケティ(Ralsonia pickettii)、バリオボラックス・パラドクス(Variovorax paradoxus)、カプリアビダス・ネカター(Cupriavidus necator)、ブルクホルデリア・セパシア(Burkholderia cepacia)、またはステノトロフォモナス・マルトフィリア(Stenotrophomonas maltophilia)などが挙げられる。特に、オクロバクトラム・アンスロピＪＨＡ６０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５４９）、アルカリゲネス・キシロゾキシダンスＪＨＢ１４菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５０）、アルカリゲネス・フェーカリスＪＨＣ１０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５１）、ラルストニア・マンニトリリティカＪＨＧ２菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５２）、ラルストニア・マンニトリリティカＪＨＬ８菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５４）、ラルストニア・ピケティＪＨＰ３０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５５）、ラルストニア・ピケティＪＨＰ５５菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５７）、バリオボラックス・パラドクスＪＨＰ３１菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５６）、カプリアビダス・ネカターＪＨＪ６菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５３）が好ましい。【００３４】
本発明の細菌は、担体に固定化された固定化細菌であってもよい。担体には、細菌の固定化に使用可能な公知の担体を含み、例えば、活性炭、珪藻土、ゼオライト、ピートモス、パーライト、ベントナイト、モンモリナイト、バーミュキュライト、アルミナ、ケイ酸塩、結晶性セルロース、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などが含まれる。担体に細菌を吸着することによって、固定化細菌を得ることができる。【００３５】
本明細書中で使用する「重金属」は、比重４〜５以上の金属元素を指す。【００３６】
本発明の細菌により低減可能な重金属として、特に限定されないが、例えば、カドミウム、銅、鉛、クロム、ニッケル、ヒ素、水銀、マンガン、コバルト、セレン、ビスマス、鉄などが挙げられる。重金属の好ましい例は、カドミウム、銅、鉛、クロム、ニッケル、およびヒ素である。【００３７】
本発明の細菌は、圃場などの一般的な土壌から分離され得る。例えば、土壌を除去した植物の根を緩衝液（例えば中性付近のトリス緩衝液など）に入れ、振とうして、根圏土壌の細菌分離用懸濁液を得る。該懸濁液を、カドミウムなどの重金属を添加した微生物用培地（例えばトリプチックソイ寒天培地など）に塗抹し、細菌を培養し、生育したコロニーを分離する。コロニーを重金属添加培地と無添加培地で培養して生育を比較し、重金属添加培地で生育が例えば同等〜僅かに劣る程度の重金属耐性細菌を選抜する。選抜した細菌を根に使用した植物と該細菌を使用していない植物を重金属添加土壌で生長させる。植物を回収し、植物体中の重金属濃度を例えばＩＣＰ−ＭＳ（高周波プラズマ質量分析装置）（島津製作所製、ICPM-8500）などで測定する。細菌を使用していない植物の重金属濃度と比較して細菌を使用した植物の重金属濃度が有意に低減していた場合、その細菌を、植物体の重金属含量を低減させる機能を有する細菌とする。また、該細菌は重金属に対して耐性を有する。「重金属に対して耐性」とは、細菌が重金属の存在下で増殖可能であることをいう。【００３８】
このようにして得られた細菌は、一般的な方法により増殖することができる。培養は、好気的条件で行うことが好ましく、無機塩（リン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、鉄塩、アンモニウム塩、その他微量金属塩など）、窒素源（アンモニア、硝酸塩、亜硝酸塩、アミノ酸など）、その他の栄養源（塩基類など）を含む無機栄養培地、有機栄養培地等に本発明の細菌を接種し、振とう培養法、通気攪拌培養法などにより行う。培養の温度条件は、培養する細菌の生育温度の範囲であればよいが、好ましくは２０〜４０℃、より好ましくは２５〜３０℃の範囲に設定することができる。培地のｐＨは、培養する細菌の生育ｐＨ領域であればよいが、好ましくはｐＨ６．０〜８．０、より好ましくはｐＨ６．５〜７．５の範囲に設定することができる。培養期間は特に限定されないが、好ましくは２４時間〜３日間である。【００３９】
（２）細菌の同定および菌学的性質
本発明の細菌を、形態学的性状、基本性状による菌学的性質、腸内細菌以外のグラム陰性桿菌同定キット（BioMe’rieux製、商品名：ＡＰＩ２０ＮＥ）による生理・生化学的性状、１６Ｓ  ｒＲＮＡの塩基配列の相同性検索等により同定した。本発明の細菌の菌学的性質を表１〜表７に示す。【００４０】
(i) ＪＨＡ６０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５４９）
【表１】
2009145074.tif 000002
【表２】
2009145074.tif 000003
【００４１】
上記諸性質から、ＪＨＡ６０菌株はオクロバクトラム・アンスロピ（Ochrobactrum anthropi）に属するものであると同定された。【００４２】
(ii)ＪＨＢ１４菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５０）
【表３】
2009145074.tif 000004
【表４】
2009145074.tif 000005
【００４３】
上記諸性質から、ＪＨＢ１４菌株はアルカリゲネス・キシロゾキシダンス（Alcaligenes xylosoxidans）に属するものであると同定された。【００４４】
(iii)ＪＨＣ１０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５１）
【表５】
2009145074.tif 000006
【表６】
2009145074.tif 000007
【００４５】
上記諸性質から、ＪＨＣ１０菌株はアルカリゲネス・フェーカリス（Alcaligenes faecalis）に属するものであると同定された。【００４６】
(iv)ＪＨＧ２菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５２）、(v)ＪＨＬ８菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５４）、(vi)ＪＨＰ３０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５５）、(vii)ＪＨＰ５５菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５７）、(viii)ＪＨＰ３１菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５６）、(ix)ＪＨＪ６菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５３）
上記(iv)〜(ix)の菌学的性質を表７に示す。
【表７】
2009145074.tif 000008
【００４７】
また、上記(iv)〜(ix)の塩基配列による同定を行った。(iv)〜(ix)の細菌のＤＮＡを抽出し、ＰＣＲ法により１６Ｓ  ｒＲＮＡ領域のＤＮＡ配列を解析し、公知の塩基配列データベースと相同性検索を行って近縁種との系統樹を作成した。表８に(iv)〜(ix)の相同性検索結果、表９に(iv)〜(ix)の同定結果および１６Ｓ  ｒＲＮＡ領域のＤＮＡ配列の配列番号（１〜６）を示す。これらの結果から、ＪＨＧ２菌株およびＪＨＬ８株はラルストニア・マンニトリリティカ(Ralstonia mannitolilytica)、ＪＨＰ３０菌株およびＪＨＰ５５菌株はラルストニア・ピケティ(Ralstonia pickettii)、ＪＨＰ３１菌株はバリオボラックス・パラドクス(Variovorax paradoxus)、ＪＨＪ６菌株はカプリアビダス・ネカター(Cupriavidus necator)に属するものであると同定された。
【表８】
2009145074.tif 000009
【表９】
2009145074.tif 000010
【００４８】
（３）植物体中の重金属含量を低減する方法
本発明の細菌を植物体の根部または根部周辺に自然状態とは相違する菌密度を達成するため一定量以上の細菌を使用することにより、結果として植物体中の重金属含量を低減することができる。細菌は、単一菌で用いてもよいし、複数の細菌を組合せて用いてもよいし、あるいは固定化細菌として用いてもよい。【００４９】
本発明の対象となる植物は、特に限定されないが、例えば、イネ科のイネ、オオムギ、コムギ、トウモロコシ、モロコシ、サトウキビ等、タデ科のソバ等、ナス科のタバコ、ナス、トマト、ピーマン、トウガラシ等、マメ科のダイズ、アズキ、ソラマメ、エンドウマメ等、アブラナ科のキャベツ、ハクサイ、カリフラワー、ブロッコリー、ダイコン、カブ、コマツナ、アブラナ、ミズナ、カラシナ、チンゲンサイ等、アカザ科のホウレンソウ、テンサイ、キク科のレタス、サラダ菜、ユリ科のネギ、ニラ等を挙げることができる。【００５０】
本発明の細菌の植物体根部または根部周辺への使用は、細菌を根部に直接添加するか、または細菌を根部周辺の土壌または水耕液等に添加または混合して行えばよい。土壌には、植物の栽培に使用される全ての土が含まれ、例えば、播種に使用される肥土、栽培に使用される土、肥料を含む土や培土等が含まれる。【００５１】
細菌の使用方法は、特に限定されないが、例えば、細菌懸濁液の植物体への潅水や潅注、植物体根部の該懸濁液への浸漬、植物の栽培に使用される土壌への混和および散布、水耕液（水耕栽培の場合）への混合などが挙げられる。好ましくは、植物体根部または根部周辺に処理した微生物が十分に浸透する潅水や潅注である。つまり、植物の根部に細菌を接触させる使用方法であればよい。【００５２】
細菌の使用時期は、植物の播種後〜栽培期間終了まで、特に限定されないが、好ましくは植物が重金属を吸収し体内に蓄積を開始する時期、つまり播種後から圃場への植付後の時期に少なくとも１回使用することが好ましい。使用回数は、１回に限るものではなく、必要に応じて植物の播種後から栽培期間中、数回又は連続的に実施してもよい。複数回実施することにより、より高い重金属低減効果が得られる。【００５３】
細菌の使用量は、個々の植物体に処理する場合、１株当たり１０６ｃｆｕ（コロニー形成単位）以上、好ましくは１０７ｃｆｕ以上、さらに好ましくは１０９ｃｆｕ以上である。細菌の使用量は、植物体の生育ステージによって多少異なり得る。【００５４】
細菌の使用形態は、細菌を土壌、水耕液などに使用するのに適していればよく、該細菌の培養物をそのまま使用してもよいが、次に挙げる担体などと共に使用して、該細菌を有効成分として含む組成物にしてもよい。液体担体としては、例えば水、緩衝液などが挙げられるが、特に限定されない。固体担体としては、活性炭、珪藻土、ゼオライト、ピートモス、パーライト、ベントナイト、モンモリナイト、バーミュキュライト、アルミナ、ケイ酸塩、結晶性セルロース、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などが挙げられるが、特に限定されない。担体は、１種類でもよいし、複数の担体を組合せて用いてもよい。これらの担体に細菌を懸濁、添加、混合して、さらに固着剤、分散剤、補助剤などを適宜加えて、粉剤、粒剤、水和剤、液剤、乳剤、懸濁液などにして使用することができる。【００５５】
また、組成物に、上記以外の成分を含有してもよい。具体的には、細菌が増殖するために有用な成分、例えば無機塩類、窒素源、その他栄養源、糖（グルコース、ショ糖等）、有機資材（牛肉エキス、酵母エキス等）などを含有してもよい。さらに、植物の生育に有用な成分、すなわち各種肥料などを含有してもよい。
【実施例】
【００５６】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明はこれらに限定されるものではない。【００５７】
〔実施例１〕  微生物の分離
カドミウム耐性微生物を、栃木県、岩手県、山形県、秋田県、沖縄県および青森県のタバコ圃場の土壌および栽培タバコの根圏土壌から分離した。【００５８】
土壌懸濁液は以下の方法で作製した。土壌を十分に振り落としたタバコ根を、ビーカーに入れた蒸留水中で軽く振り、土壌を除去した。水分を軽く除去した根を２００ｍｌの０．０１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．０）を含む５００ｍｌ容バッフル付三角フラスコに入れ、１５分間振とうした。さらに、取り出した根の水分を軽く除去し、別に準備した２００ｍｌの０．０１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ７．０）を含む５００ｍｌ容バッフル付三角フラスコに入れ、３０分間振とうし、得られた液を根圏土壌の分離用懸濁液とした。【００５９】
作製した分離用懸濁液を、カドミウム濃度０．５もしくは２．０ｍＭになるように添加した１０倍希釈トリプチックソイ寒天培地（Difco社製、Bacto Tryptic Soy Broth；即ち、Soybean-Casein Digest Mediumに寒天を濃度１．５％になるように添加したもの；以下、１／１０ＴＳ寒天培地と記す。）に塗抹した。塗抹後、寒天培地を３０℃で４〜７日間培養し、生育したコロニーを分離した。【００６０】
分離微生物のカドミウム耐性を以下の方法で確認した。１／１０ＴＳ寒天培地で２８℃、３日間培養した分離微生物の培養菌体を白金耳でかきとり、滅菌蒸留水に約１０１０ｃｆｕ／ｍｌの濃度になるように懸濁した。懸濁液の１μＬをカドミウム添加１／１０ＴＳ寒天培地（カドミウム濃度：０．５，２．０ｍＭ）に画線し、２８℃で１０日間培養した。カドミウム耐性の確認は、カドミウム添加培地とカドミウム無添加培地の生育を肉眼で比較することで行い、カドミウム無添加培地と比較して、同等〜僅かに劣る程度に生育した微生物を耐性菌とした。カドミウムへの耐性を確認した微生物は、１０％グリセリン液に懸濁後、使用するまで−８０℃で保存した。【００６１】
分離したカドミウム耐性微生物の菌数の結果を表１０に示す。タバコ圃場土壌およびタバコ根圏土壌から、カドミウム耐性菌を７２３菌株分離した。分離した７２３菌株はカドミウム濃度０．５もしくは２．０ｍＭに耐性である。
【表１０】
2009145074.tif 000011
【００６２】
〔実施例２〕  葉中カドミウム低減微生物の温室選抜Ｉ
接種源は以下の方法で作製した。保存微生物を１／１０ＴＳ寒天培地で２８℃、３日間培養することで前培養した。培養菌体を白金耳でかきとり、５０ｍｌのトリプチックソイ液体培地（Difco社製、Bacto Tryptic Soy Broth；即ち、Soybean-Casein Digest Medium；以下、ＴＳ液体培地と記す。）を含む１００ｍｌ容三角フラスコに接種後、２８℃で４８時間振とう培養した。その培養菌液を接種源とした。【００６３】
選抜用土壌は以下の方法で作製した。滅菌済の温室原野土（赤ボク土）と赤玉土（小粒）と黄色種用ＪＴ有機化成肥料を重量比 ９：１：０．１の割合で混合した。さらに、土壌に全カドミウム濃度が約２ｐｐｍになるように、土壌添加用カドミウム溶解液を添加した土壌を選抜用土壌とした。土壌添加用カドミウム溶解液は、０．０１％の硝酸に塩化カドミウム（ＣｄＣｌ２・２．５Ｈ２Ｏ、和光純薬工業製）を溶解して作製した。【００６４】
実験用のタバコは、品種つくば１号の本畑移植時期と同等の苗（８〜９葉期）を使用した。圃場への移植前日に、ビニールポット（３６×３６穴）で育苗したタバコ苗の株元に３株当たり、５０ｍｌの培養菌液（菌濃度：１０９〜１０１０ｃｆｕ／ｍｌ（１株当たりの菌使用量：１０１０〜１０１１ｃｆｕ））を潅注処理した。対照区として無菌のＴＳ液体培地を処理した苗を使用した。【００６５】
サンプリングは以下の方法で行った。選抜用土壌にタバコを移植し、２５℃で３週間栽培した。栽培終了後、２本のタバコ株各々から子葉を除き４〜６枚目の葉を採取した（合計６枚）。採取した葉を６０〜７０℃で乾燥後、粉砕し分析用試料とした。本実験は、微生物処理区は１試料を、対照区については４〜５試料を作製した。対照区については４〜５試料中のカドミウム濃度を平均し、１データとした。【００６６】
葉中のカドミウム濃度は、マイクロウェーブ試料分解装置で分解した試料中の濃度を高周波プラズマ質量分析装置で測定することで決定した。試料の分解は以下の方法で行った。粉砕試料０．１ｇをマイクロウェーブ用テフロン分解容器に秤量し、更に、５ｍｌの硝酸（和光純薬工業社製、超微量分析用、148-06935）および２ｍｌの過酸化水素水（和光純薬工業社製、原子吸光用、085-04056）を加えた。分解容器を密閉し、マイクロウェーブ分解装置（パーキンエルマージャパン社製、Multiwave 3000）で分解した。分解試料中のカドミウム濃度をＩＣＰ−ＭＳ（島津製作所社製、ICPM-8500）で測定した。微生物処理および対照タバコ葉中のカドミウム濃度を測定した。【００６７】
微生物処理によるカドミウム低減効果の温室選抜Ｉの評価は以下の方法で行った。対照区の葉中カドミウム濃度と微生物処理区の葉中カドミウム濃度を比較し、処理によって２０％以上低減している微生物を選抜した。【００６８】
温室選抜Ｉの結果を表１１に示す。分離したカドミウム耐性微生物の中から、微生物の株元潅注処理によって対照区の葉中カドミウム濃度と比較して２０％以上低減した微生物を１１４菌株選抜した。
【表１１】
2009145074.tif 000012
【００６９】
〔実施例３〕  葉中カドミウム低減微生物の温室選抜II
接種源の作製は、実施例２と同様にして行った。【００７０】
選抜用土壌の作製は、実施例２と同様にして行った。【００７１】
実験用のタバコの苗は、実施例２と同様のものを使用した。また、苗への微生物の潅注処理は、実施例２と同様にして行った。【００７２】
サンプリングは、微生物処理区および対照区で各々４〜５試料を作製した以外は、実施例２と同様にして行った。【００７３】
葉中のカドミウム濃度の分析は、実施例２と同様にして行った。【００７４】
微生物処理によるカドミウム低減効果の温室選抜IIの評価は以下の方法で行った。対照区の葉中カドミウム濃度と微生物処理区のカドミウム濃度を統計解析し、対照区の葉中カドミウム濃度と比較して有意に低減している微生物を選抜した。【００７５】
温室選抜IIの結果を表１２に示す。微生物の株元潅注処理によって、対照区の葉中カドミウム濃度と比較して有意に低減している微生物を選抜した。対照区の葉中カドミウム濃度と比較して３０％以上有意に低減した微生物が６菌株、２０％以上３０％未満低減した微生物が３菌株であった。
【表１２】
2009145074.tif 000013
【００７６】
〔実施例４〕  圃場での葉中カドミウム低減効果Ｉ
温室で葉中カドミウムの低減効果がみられた細菌について、圃場での低減効果を調査した。本実験には、下記の表１３に示す４菌株を供試した。【００７７】
接種源の作製は、２００ｍｌのＴＳ液体培地を含む５００ｍｌ容三角フラスコに接種した以外は、実施例２と同様の方法で行った。【００７８】
本実験にはタバコ品種のたいへいを供試した。圃場への移植前日に、ビニールポット（３６×３６穴）で育苗したタバコ苗の株元に３６株当たり、５００ｍｌの培養菌液（菌濃度：１０９〜１０１０ｃｆｕ／ｍｌ（１株当たりの菌使用量：１０１０〜１０１１ｃｆｕ））を潅注処理した。対照区として無菌のＴＳ液体培地を処理した苗を使用した。【００７９】
サンプリングは以下の方法で行った。サンプリングは植付６０日後に中葉着位の葉を採取した。３本のタバコ株各々から特定の着位の葉を３枚ずつ採取した（合計９枚）。採取した葉（全葉）を６０〜７０℃で乾燥後、粉砕し分析用試料とした。本実験は、微生物処理区および対照区とも４試料を作製した。【００８０】
葉中のカドミウム濃度の分析は、実施例２と同様にして行った。【００８１】
圃場試験の結果を表１３に示す。【００８２】
葉中のカドミウム含量は、対照区が最も高く、６．２８ｐｐｍであった。微生物を処理した葉中のカドミウム濃度は、ＪＨＡ６０、ＪＨＢ１４、ＪＨＧ２およびＪＨＪ６菌株で各々５．３３ｐｐｍ、５．２０ｐｐｍ、５．１２ｐｐｍおよび５．１９ｐｐｍと対照区と比較して低かった。対照区と比較して、ＪＨＡ６０菌株が１５．０％、ＪＨＢ１４菌株が１７．２％、ＪＨＧ２が１８．４％およびＪＨＪ６が１７．４％低減していた。
【表１３】
2009145074.tif 000014
【００８３】
以上の結果から、微生物処理によって、温室だけでなく圃場においても、タバコ葉中のカドミウム濃度が低減されることが示唆された。さらに、これらの微生物はタバコ葉中のカドミウム濃度を低減する能力をもつことが示唆された。【００８４】
〔実施例５〕  植物のカドミウム含量を低減させる微生物の同定
実施例３で選抜したカドミウム低減微生物の９株の同定を行った。同定は財団法人日本食品分析センター(Japan Food Research Laboratories)に依頼し、以下の同定試験を行った。【００８５】
(i)形態および性状による菌学的性質
形態観察及び基本性状試験で種々の菌学的性質を調べた。【００８６】
(ii)同定キットおよび追加試験による同定
腸内細菌以外のグラム陰性桿菌同定キット（BioMe’rieux社製、商品名：ＡＰＩ２０ＮＥ）を用いて同定した。必要に応じて、追加試験を実施した。【００８７】
(ii)１６Ｓ  ｒＲＮＡによる同定
細菌のＤＮＡを抽出し、ＰＣＲ法により１６Ｓ  ｒＲＮＡ領域のＤＮＡについてABI PRISM 310 Genetic Analyzer（Applied Biosystems）を用いて塩基配列を解析した。得られた配列を国際塩基配列データベース(DDBJ/EMBL/GenBank)に登録されている配列およびMicroSeq ID Analysis Software Version 2.0（Applied Biosystems）のデータベースと相同性検索を行い、近縁種との系統樹を近隣結合法（ＮＪ法）により作成した。【００８８】
細菌の菌学的性質および同定結果は、上記表１〜表９の通りである。【００８９】
〔実施例６〕  圃場での葉中カドミウム低減効果ＩＩ
温室でタバコの葉中のカドミウムの低減効果がみられた細菌について、圃場での低減効果を調査した。本実験には下記の表１４に示す９菌株を供試した。【００９０】
接種源の作製は、２００ｍｌのＴＳ液体培地を含む５００ｍｌ容三角フラスコに細菌を接種した以外は、実施例２と同様にして行った。【００９１】
本実験にはタバコ品種のたいへいを供試した。潅注処理は、実施例４と同様にして行った。処理した苗は、移植当日、水を潅水した後、圃場に移植した。【００９２】
サンプリングは以下の方法で行った。圃場移植７５日後に中葉着位の葉を採取した。３本のタバコ株各々から特定の中葉着位の葉を３枚ずつ採取した（合計９枚）。採取した葉から中骨を除去し、葉肉部（ラミナ）を採取し、６０〜７０℃で乾燥後、粉砕し、分析用試料とした。本実験では、微生物処理区および対照区とも４試料を作製した。【００９３】
葉中のカドミウム濃度の分析は、実施例２と同様にして行った。【００９４】
圃場試験の結果を表１４に示す。【００９５】
対照区の葉中カドミウム含量は、６.４４μg/gであった。圃場で供試した９菌株中４菌株が２０％以上、４菌株が１０〜２０％の低減効果を示した。
【表１４】
2009145074.tif 000015
【００９６】
〔実施例７〕  細菌による土壌の処理回数と低減効果
細菌による土壌の処理回数の低減効果への影響を調査した。本実験にはタバコ品種のバーレー種たいへいを供試した。本実験は圃場で行った。本実験には下記の表１５に示す５菌株を供試した。【００９７】
本実験は１回処理と２回処理で行った。１回処理区は、実施例６と同様に、圃場への移植前日に、細菌菌液（菌濃度：１０９〜１０１０ｃｆｕ／ｍｌ（１株当たりの菌使用量：１０１０〜１０１１ｃｆｕ））を潅注処理したタバコ苗を用いた。２回処理区は、１回処理に加えて本畑移植後３５日目に菌液（菌濃度：１０７〜１０８ｃｆｕ／ｍｌ（１株当たりの菌使用量：１０１０〜１０１１ｃｆｕ））の２００ｍｌを株元潅注処理した。【００９８】
サンプリングは圃場移植７０日後に中葉着位の葉を採取した。３本のタバコ株各々から特定の中葉着位の葉を３枚ずつ採取した（合計９枚）。採取した葉から中骨を除去し、葉肉部（ラミナ）を採取し、６０〜７０℃で乾燥後、粉砕し分析用試料とした。本実験は、１回処理区は４試料を、２回処理区は３試料を作製した。【００９９】
葉中のカドミウム濃度の分析は、実施例２と同様にして行った。【０１００】
圃場試験の結果を表１５に示す。【０１０１】
圃場の対照区での葉中カドミウム含量は６.１５μg/gであった。供試した全菌株で、細菌の１回処理よりも２回処理のほうが、低減率が高かった。
【表１５】
2009145074.tif 000016
【０１０２】
〔実施例８〕  土壌の種類と低減効果
土壌の種類の低減効果への影響を調査した。本実験にはタバコ品種のつくば１号を供試し、温室で行った。本実験にはＪＨＪ６、ＪＨＬ８およびＪＨＰ３１の３菌株を供試した。【０１０３】
接種源の作製は、実施例２と同様にして行った。【０１０４】
本実験には、火山灰土と砂土の２種類を供試した。火山灰土もしくは砂土に黄色種用ＪＴ有機化成肥料を重量比 １００：１の割合で混合した後、実施例２と同様に塩化カドミウム溶解液を添加した。【０１０５】
サンプリング、試料中のカドミウム濃度の分析は、実施例２と同様にして行った。本実験は、微生物処理区および対照区で各々４試料を作製した。【０１０６】
本実験の結果を表１６に示す。【０１０７】
供試したＪＨＪ６、ＪＨＬ８およびＪＨＰ３１を処理したタバコ葉中のカドミウム濃度は、対照区の葉中カドミウム濃度と比較して、火山灰土と砂土の両方で２０％以上低かった。
【表１６】
2009145074.tif 000017
【０１０８】
〔実施例９〕  細菌濃度とカドミウム低減効果
施用する細菌濃度の低減効果への影響を調査した。本実験にはタバコ品種のつくば１号を供試し、温室で行った。本実験にはＪＨＪ６、ＪＨＬ８およびＪＨＰ３１の３菌株を供試した。【０１０９】
接種源は、各菌株の１０９、１０８、１０７ｃｆｕ／ｍｌのオーダーに希釈した菌液を作製後、移植前日に苗の株元に潅注処理した。【０１１０】
サンプリング、試料中のカドミウム濃度の分析は、実施例２と同様にして行った。本実験では、各菌濃度の微生物処理区および対照区とも各々４試料を作製した。【０１１１】
本実験の結果を表１７に示す。【０１１２】
各細菌濃度を施用したＪＨＪ６、ＪＨＬ８およびＪＨＰ３１のタバコ葉中のカドミウム濃度は、対照区と比較して、１０％以上低かった。また、各菌株とも細菌濃度が高まるほど低減率が上昇する傾向がみられた。
【表１７】
2009145074.tif 000018
【０１１３】
〔実施例１０〕  トマトでのカドミウム低減効果
温室でトマトへのカドミウム低減効果を調査した。本実験は温室で行った。【０１１４】
接種源の作製は、実施例２と同様にして行った。本実験には、下記の表１８に示す７菌株を供試した。【０１１５】
トマトはミニトマトの品種プチエール(株式会社トーホク)を供試した。温室肥土に播種し、３０日間育苗した苗を、実施例２と同様にして作製したカドミウム添加土壌に移植した。【０１１６】
移植７０日後に、２本のトマト株各々から５〜７個の果実を採取し、合わせて１試料（果実：１２〜１４個）とし、凍結乾燥後、粉砕し分析用試料とした。本実験は、微生物処理区および対照区とも４試料を作製した。【０１１７】
試料中のカドミウム濃度の分析は、実施例２と同様にして行った。【０１１８】
本実験の結果を表１８に示す。【０１１９】
対照区のカドミウム濃度と比較して、供試した７菌株中６菌株が２０％以上の低減率を示した。
【表１８】
2009145074.tif 000019
【０１２０】
〔実施例１１〕  トウガラシでのカドミウム低減効果
温室でトウガラシへのカドミウム低減効果を調査した。本実験は温室で行った。本実験には下記の表１９に示す５菌株を供試した。【０１２１】
接種源の作製は、実施例２と同様にして行った。【０１２２】
トウガラシは品種鷹の爪を供試した。購入したトウガラシの苗を、実施例２と同様にして作製したカドミウム添加土壌に移植した。【０１２３】
移植８０日後に、トウガラシ株から１０〜１５個の果実を採取したものを１試料とし、凍結乾燥後、粉砕し分析用試料とした。本実験は、微生物処理区および対照区とも４試料を作製した。【０１２４】
試料中のカドミウム濃度の分析は、実施例２と同様にして行った。【０１２５】
本実験の結果を表１９に示す。【０１２６】
対照区のカドミウム濃度と比較して、供試した５菌株中３菌株が３０％以上、２菌株が２０〜３０％の低減率を示した。
【表１９】
2009145074.tif 000020
【０１２７】
〔実施例１２〕  ダイズでのカドミウム低減効果
温室でダイズへのカドミウム低減効果を調査した。本実験は温室で行った。【０１２８】
接種源の作製は、実施例２と同様にして行った。本実験には、下記の表２０に示す９菌株を供試した。【０１２９】
ダイズは品種早生枝豆（白鳥系）（株式会社トーホク）を供試した。ビニールポットに播種後、３０日間育苗した苗を、実施例２と同様にして作製したカドミウム添加土壌に移植した。【０１３０】
移植４５日後に、２本のダイズ株各々から５〜８莢を採取し、合わせて１試料とし、６０〜７０℃で乾燥後、莢からマメ（３０粒/試料）を取り出した。試料ごとに粉砕し分析用試料とした。本実験は、微生物処理区および対照区とも４試料を作製した。【０１３１】
試料中のカドミウム濃度の分析は実施例２と同様にして行った。【０１３２】
本実験の結果を表２０に示す。【０１３３】
対照区のカドミウム濃度と比較して、供試した９菌株中６菌株が３０％以上、２菌株が２０〜３０％、１菌株が１５〜２０％の低減率を示した。
【表２０】
2009145074.tif 000021
【０１３４】
〔実施例１３〕  コマツナでのカドミウム低減効果
温室でコマツナへのカドミウム低減効果を調査した。本実験は温室で行った。本実験には表２１に示す５菌株を供試した。【０１３５】
接種源の作製は、実施例２と同様にして行った。【０１３６】
コマツナは品種小松菜（株式会社サカタのタネ）を供試した。園芸用のプランター（長さ×幅×高さ：４０ｃｍ×１６．５ｃｍ×１６ｃｍ）に６ｋｇ（容量６Ｌ）のカドミウム添加土壌を詰め、コマツナの種子を播種した。播種後１５日目に菌液を２００ｍｌ施用した。【０１３７】
細菌施用３０日後に、コマツナの地上部を採取し、２本を１試料とし、６０〜７０℃で乾燥後、試料ごとに粉砕し分析用試料とした。本実験は、微生物処理区および対照区とも４試料を作製した。【０１３８】
試料中のカドミウム濃度の分析は実施例２と同様の方法で行った。【０１３９】
本実験の結果を表２１に示す。【０１４０】
対照区のカドミウム濃度と比較して、供試した５菌株中２菌株が２０％以上、２菌株が１０〜２０％の低減率を示した。
【表２１】
2009145074.tif 000022
【０１４１】
〔実施例１４〕  細菌処理のカドミウム以外の重金属への影響
本実験は圃場で行った。本実験には栽培品種のバーレー種たいへいを供試した。【０１４２】
接種源の作製は、実施例６と同様にして行った。潅注処理は実施例４と同様にして行った。サンプリングおよび試料の作製は、実施例６と同様にして行った。葉中の重金属の濃度の分析は、上記カドミウム濃度の分析と同様、実施例２に記載の方法で行った。【０１４３】
圃場試験のＪＨＪ６、ＪＨＬ８およびＪＨＰ３１の３菌株の結果を表２２に示す。【０１４４】
Ｃｕ（銅）：対照区の銅濃度と比較して、供試した３菌株が１０％以上の低減率を示した。【０１４５】
Ｐｂ（鉛）：対照区の鉛濃度と比較して、供試した３菌株中１菌株が２０％以上、２菌株が１０〜２０％の低減率を示した。【０１４６】
Ｃｒ（クロム）：対照区のクロム濃度と比較して、供試した３菌株中２菌株が２０％以上、１菌株が１０〜２０％の低減率を示した。【０１４７】
Ｎｉ（ニッケル）：対照区のニッケル濃度と比較して、供試した３菌株中２菌株が１０％以上の低減率を示した。【０１４８】
Ａｓ（ヒ素）：対照区のヒ素濃度と比較して、供試した３菌株中２菌株が２０％以上、１菌株が１０〜２０％の低減率を示した。
【表２２】
2009145074.tif 000023
【０１４９】
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
【配列表】
2009145074000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成22年1月22日(2010.1.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（削除）
【請求項２】
（削除）
【請求項３】
（削除）
【請求項４】
（削除）
【請求項５】
（削除）
【請求項６】
（削除）
【請求項７】
（削除）
【請求項８】
（削除）
【請求項９】
（削除）
【請求項１０】
（削除）
【請求項１１】
オクロバクトラム・アンスロピＪＨＡ６０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５４９）、アルカリゲネス・キシロゾキシダンスＪＨＢ１４菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５０）、アルカリゲネス・フェーカリスＪＨＣ１０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５１）、ラルストニア・マンニトリリティカＪＨＧ２菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５２）、ラルストニア・マンニトリリティカＪＨＬ８菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５４）、ラルストニア・ピケティＪＨＰ３０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５５）、ラルストニア・ピケティＪＨＰ５５菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５７）、バリオボラックス・パラドクスＪＨＰ３１菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５６）、またはカプリアビダス・ネカターＪＨＪ６菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５３）からなる群から選択される、ならびに、植物体中の重金属含量を低減する機能を有するかつ植物の根に定着性を有することを特徴とする細菌。
【請求項１２】
重金属が、カドミウム、銅、鉛、クロム、ニッケル、およびヒ素からなる群から選択される、請求項１１に記載の細菌。
【請求項１３】
担体に固定化されている、請求項１１または１２に記載の細菌。
【請求項１４】
請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の細菌を有効成分として含有する、植物体中の重金属含量を低減するための組成物。
【請求項１５】
請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の少なくとも１つの細菌を、植物体の根部または根部周辺に、播種後から圃場への植付後の時期に少なくとも１回使用することを特徴とする、植物体中の重金属含量を低減する方法。
【請求項１６】
使用が、細菌を根部に直接添加、または細菌を根部周辺の土壌または水耕液に添加または混合することにより行われることを特徴とする、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
植物が、ナス科、イネ科、タデ科、マメ科、アブラナ科、ユリ科、キク科およびアカザ科からなる群から選択される、請求項１５または１６に記載の方法。
【手続補正書】
【提出日】平成22年6月24日(2010.6.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
オクロバクトラム・アンスロピＪＨＡ６０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５４９）、アルカリゲネス・キシロゾキシダンスＪＨＢ１４菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５０）、アルカリゲネス・フェーカリスＪＨＣ１０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５１）、ラルストニア・マンニトリリティカＪＨＧ２菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５２）、ラルストニア・マンニトリリティカＪＨＬ８菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５４）、ラルストニア・ピケティＪＨＰ３０菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５５）、ラルストニア・ピケティＪＨＰ５５菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５７）、バリオボラックス・パラドクスＪＨＰ３１菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５６）、またはカプリアビダス・ネカターＪＨＪ６菌株（受託番号  ＮＩＴＥ  ＢＰ−５５３）からなる群から選択される、ならびに、植物体中の重金属含量を低減する機能を有するかつ植物の根に定着性を有することを特徴とする細菌。
【請求項２】
重金属が、カドミウム、銅、鉛、クロム、ニッケル、およびヒ素からなる群から選択される、請求項１に記載の細菌。
【請求項３】
担体に固定化されている、請求項１または２に記載の細菌。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の細菌を有効成分として含有する、植物体中の重金属含量を低減するための組成物。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の少なくとも１つの細菌を、植物体の根部または根部周辺に、播種後から圃場への植付後の時期に少なくとも１回使用することを特徴とする、植物体中の重金属含量を低減する方法。
【請求項６】
使用が、細菌を根部に直接添加、または細菌を根部周辺の土壌または水耕液に添加または混合することにより行われることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
植物が、ナス科、イネ科、タデ科、マメ科、アブラナ科、ユリ科、キク科およびアカザ科からなる群から選択される、請求項５または６に記載の方法。
【国際調査報告】
2009145074.tif 000024
2009145074.tif 000025
2009145074.tif 000026
2009145074.tif 000027
2009145074.tif 000028
2009145074.tif 000029