(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式ＩＩ
【化１】
0005902293.tif 000248
の化合物または医薬として許容される該化合物の塩
（式中、Ｈａｌは、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、または−Ｂｒであり、
ｘは、０から５の範囲の整数であり、
各Ｒ１は、独立して、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、−Ｂｒ、−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ３）、または−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨであり、
ｙは、０から５の範囲の整数であり、
各Ｒ２は、独立して、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ３）、または−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ６アルキル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＯＨ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−フェニル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−Ｃ２−Ｃ６アルケニル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｒ５、
【化２】
0005902293.tif 000249
であり、
Ｒ４は、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＮＨ（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＯＨ）、−ＮＨ（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＣＮ）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２）、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、
【化３】
0005902293.tif 000250
0005902293.tif 000251
であり、
ａは、０から１０の範囲の整数であり、
ｂは、０から８の範囲の整数であり、
ｃは、０から６の範囲の整数であり、ならびに
Ｒ５は、
【化４】
0005902293.tif 000252
である。）。
【請求項２】
式ＩＩＩ
【化５】
0005902293.tif 000253
の化合物または医薬として許容される該化合物の塩
（式中、Ｈａｌは、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、または−Ｂｒであり、
ｘは、０から５の範囲の整数であり、
各Ｒ１は、独立して、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、−Ｂｒ、−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ３）、または−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ６アルキル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＯＨ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−フェニル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−Ｃ２−Ｃ６アルケニル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｒ５、
【化６】
0005902293.tif 000254
であり、
Ｒ４は、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＮＨ（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＯＨ）、−ＮＨ（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＣＮ）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２）、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、
【化７】
0005902293.tif 000255
0005902293.tif 000256
であり、
ａは、０から１０の範囲の整数であり、
ｂは、０から８の範囲の整数であり、
ｃは、０から６の範囲の整数であり、
Ｒ５は、
【化８】
0005902293.tif 000257
であり、
各Ｒ６およびＲ７は、独立して、−Ｈまたは−Ｉであり、但し、Ｒ６およびＲ７のうちの少なくとも１つは−Ｉであり、ならびに
Ｒ３が−Ｃ１−Ｃ３アルキルである場合、Ｒ７は−Ｈである。）。
【請求項３】
構造
【化９】
0005902293.tif 000258
0005902293.tif 000259
0005902293.tif 000260
0005902293.tif 000261
0005902293.tif 000262
0005902293.tif 000263
0005902293.tif 000264
を有する、請求項１に記載の化合物または医薬として許容される該化合物の塩。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩および医薬として許容される担体またはビヒクルを含む組成物。
【請求項５】
請求項２に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩および医薬として許容される担体またはビヒクルを含む組成物。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩を含む、網膜変性疾患を治療するための組成物。
【請求項７】
請求項２に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩を含む、網膜変性疾患を治療するための組成物。
【請求項８】
請求項１に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩を含む、アッシャー症候群に伴う聴覚損失を治療するための組成物。
【請求項９】
請求項２に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩を含む、アッシャー症候群に伴う聴覚損失を治療するための組成物。
【請求項１０】
構造
【化１０】
0005902293.tif 000265
を有する化合物または該化合物の塩。
【請求項１１】
請求項１０に記載の化合物または該化合物の塩に結合することが可能なタンパク質を特定するための方法であって、
ａ．前記タンパク質を前記化合物または該化合物の塩に結合させるために効果的な条件下で、ＨＥＫ２９３−クラリン−１  Ｎ４８Ｋ−ＨＡ  Ｄ９細胞を前記化合物または該化合物の塩と接触させること、
ｂ．前記細胞を細胞可溶化物に変換すること、
ｃ．前記細胞可溶化物をストレプトアビジンコーティングしたビーズに塗布すること、
ｄ．前記ビーズを洗浄すること、
ｅ．前記ビーズから、結合したタンパク質を溶離させること、および
ｆ．前記溶離したタンパク質の質量を測定すること
を含む方法。
【請求項１２】
タンパク質および請求項１０に記載の化合物または該化合物の塩の複合物。
【請求項１３】
式ＩＶ
【化１１】
0005902293.tif 000266
（式中、Ｒ８は−Ｃ１−Ｃ３アルキルである。）
の化合物または医薬として許容される該化合物の塩。
【請求項１４】
構造
【化１２】
0005902293.tif 000267
を有する請求項１３に記載の化合物または医薬として許容される該化合物の塩。
【請求項１５】
構造：
【化１３】
0005902293.tif 000268
を有する、請求項２に記載の化合物または医薬として許容される該化合物の塩。
【請求項１６】
網膜変性疾患を治療するための医薬の製造における、請求項１に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩の使用。
【請求項１７】
網膜変性疾患を治療するための医薬の製造における、請求項２に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩の使用。
【請求項１８】
アッシャー症候群に伴う聴覚損失を治療するための医薬の製造における、請求項１に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩の使用。
【請求項１９】
アッシャー症候群に伴う聴覚損失を治療するための医薬の製造における、請求項２に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩の使用。
【請求項２０】
ａが０から５の範囲の整数であり、ｂが０から４の範囲の整数である、請求項１または２に記載の化合物または医薬として許容される該化合物の塩。
【請求項２１】
構造
【化１４】
0005902293.tif 000269
を有する化合物または医薬として許容される該化合物の塩。
【請求項２２】
請求項２１に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩および医薬として許容される担体またはビヒクルを含む組成物。
【請求項２３】
請求項２１に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩を含む、網膜変性疾患を治療するための組成物。
【請求項２４】
請求項２１に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩を含む、アッシャー症候群に伴う聴覚損失を治療するための組成物。
【請求項２５】
網膜変性疾患を治療するための医薬の製造における、請求項２１に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩の使用。
【請求項２６】
アッシャー症候群に伴う聴覚損失を治療するための医薬の製造における、請求項２１に記載の化合物または該化合物の医薬として許容される塩の使用。
【請求項２７】
アッシャー症候群が、アッシャーＩ症候群、アッシャーＩＩ症候群またはアッシャーＩＩＩ症候群である、請求項８、９または２４に記載の組成物。
【請求項２８】
アッシャー症候群が、アッシャーＩ症候群、アッシャーＩＩ症候群またはアッシャーＩＩＩ症候群である、請求項１８、１９または２６に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
アッシャー症候群は、稀な遺伝的障害であり、難聴および失明の主要な原因であって、１０個の遺伝子のうちのいずれか１個における変異に関連している。この症候群に対する他の名称として、Ｈａｌｌｇｒｅｎ症候群、Ｕｓｈｅｒ−Ｈａｌｌｇｒｅｎ症候群、ＲＰ−Ｄｙｓａｃｕｓｉｓ症候群およびＤｙｓｔｒｏｐｈｉａ  Ｒｅｔｉｎａｅ  Ｄｙｓａｃｕｓｉｓ症候群が挙げられる。
【０００２】
アッシャー症候群は、難聴および徐々の失明を特徴とする。聴覚損失が内耳障害を伴うのに対し、視覚損失は、網膜色素変性症（ＲＰ）、網膜細胞変性を伴う。普通、網膜の桿体細胞が最初に影響を受け、初期の夜盲症をもたらし、徐々に周辺視野が損失していく。網膜黄斑の錐体細胞の初期変性を含む場合もあり、中心明瞭度の損失をもたらす。患者の中心視覚（ｆｏｖｃａｌ  ｖｉｓｉｏｎ）がなくなる場合もあり、これは、中心および周辺の視覚はそのままの状態であるが、無視界のリングがこれを分断する「ドーナツ型の視覚」をもたらす。
【０００３】
アッシャー症候群は、Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩと表示されている３つの臨床サブタイプを有する。アッシャーＩの対象は、生まれつき重度の難聴があり、１０年以内に視覚を失い始め、平衡性に問題を示し始める。彼らは、前庭に異常があるため、小児として歩行を習得するのが遅い。アッシャーＩＩの対象は、聴覚損失はあまりなく、肉体的平衡異常はなく、思春期において視覚を失い始める。彼らの聴力の大半は、熟年まで維持することができる。アッシャーＩＩＩの対象は、徐々に聴力および視力を失い、肉体的平衡異常に苦しむ可能性がある。
【０００４】
アッシャー症候群は、症状が不定であり；重症度の程度は、サブタイプときっちりリンクしていない。例えば、アッシャーＩＩＩの対象は、小児期においては無症候性であるが、成人早期から成人中期までに重度の聴覚損失および視覚損失を生じることがある。５０才以前の大幅な視力障害はアッシャーＩＩＩの対象に共通している。他方では、アッシャーＩの対象は、生まれつき難聴ではあるが、良好な中心視を老齢期まで維持し得る。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の要旨）
本発明は、式Ｉ
【０００６】
【化１】
0005902293.tif 000002
（式中、Ｒは、フルオロ、クロロ、ヨード、メチル、メトキシ、シアノ、トリフルオロメチル、または（ＣＯ）ＮＨ（ＣＨ３）である。）
の化合物および医薬として許容される該化合物の塩を提供する。
【０００７】
本発明は、式ＩＩ
【０００８】
【化２】
0005902293.tif 000003
の化合物および医薬として許容される該化合物の塩を提供する
（式中、Ｈａｌは、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、または−Ｂｒであり、
ｘは、０から５の範囲の整数であり、
各Ｒ１は、独立して、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、−Ｂｒ、−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ３）、または−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨであり、
ｙは、０から５の範囲の整数であり、
各Ｒ２は、独立して、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ３）、または−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ６アルキル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＯＨ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−フェニル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−Ｃ２−Ｃ６アルケニル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｒ５、
【０００９】
【化３】
0005902293.tif 000004
であり、
Ｒ４は、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＮＨ（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＯＨ）、−ＮＨ（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２）、Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＣＮ）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２）、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、
【００１０】
【化４】
0005902293.tif 000005
0005902293.tif 000006
であり、
ａは、０から１０の範囲の整数であり、
ｂは、０から８の範囲の整数であり、
ｃは、０から６の範囲の整数であり、
Ｒ５は、
【００１１】
【化５】
0005902293.tif 000007
である。）。
【００１２】
本発明は、式ＩＩＩ
【００１３】
【化６】
0005902293.tif 000008
の化合物および医薬として許容される該化合物の塩を追加的に提供する
（式中、Ｈａｌは、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、または−Ｂｒであり、
ｘは、０から５の範囲の整数であり、
各Ｒ１は、独立して、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、−Ｂｒ、−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ３）、または−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ６アルキル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＯＨ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−フェニル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−Ｃ２−Ｃ６アルケニル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｒ５、
【００１４】
【化７】
0005902293.tif 000009
であり、
Ｒ４は、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＮＨ（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＯＨ）、−ＮＨ（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２）、Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＣＮ）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２）、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、
【００１５】
【化８】
0005902293.tif 000010
0005902293.tif 000011
であり、
ａは、０から１０の範囲の整数であり、
ｂは、０から８の範囲の整数であり、
ｃは、０から６の範囲の整数であり、
Ｒ５は、
【００１６】
【化９】
0005902293.tif 000012
であり、
各Ｒ６およびＲ７は、独立して、−Ｈまたは−Ｉであり、Ｒ６およびＲ７のうちの少なくとも１つは−Ｉであり、
Ｒ３が−Ｃ１−Ｃ３アルキルである場合、Ｒ７は−Ｈである。）。
【００１７】
本発明は、以下の構造
【００１８】
【化１０】
0005902293.tif 000013
0005902293.tif 000014
0005902293.tif 000015
0005902293.tif 000016
0005902293.tif 000017
0005902293.tif 000018
0005902293.tif 000019
を有する化合物および医薬として許容される該化合物の塩をさらに提供する。
【００１９】
化合物１−２、４−３５、３７−３９、４２、４５および４７−９７は、式ＩＩの例示的化合物である。化合物３は、式ＩＩＩの例示的化合物である。
【００２０】
式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの化合物ならびに上記化合物１−３５、３７−３９、４２、４
５および４７−９７、または医薬として許容される該化合物の塩（「ピラゾロピリダジン化
合物」）のそれぞれは、アッシャー症候群に伴う網膜変性疾患または聴覚損失を治療するのに有用である。
【００２１】
本発明は、有効量のピラゾロピリダジン化合物および医薬として許容される担体またはビヒクルを含む組成物をさらに提供する。組成物は、アッシャー症候群に伴う網膜変性疾患または聴覚損失を治療するのに有用である。
【００２２】
本発明は、網膜変性疾患を治療するための方法であって、有効量のピラゾロピリダジン化合物を、治療を必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００２３】
本発明は、アッシャー症候群に伴う聴覚損失を治療するための方法であって、有効量のピラゾロピリダジン化合物を、治療を必要とする対象に投与することを含む方法をさらに提供する。
【００２４】
本発明は、式ＩＶ
【００２５】
【化１１】
0005902293.tif 000020
の化合物および該化合物の塩
（式中、Ｒ８は−Ｃ１−Ｃ３アルキルである。）
をさらに提供する。
【００２６】
本発明は、構造
【００２７】
【化１２】
0005902293.tif 000021
を有する式ＩＶの例示的化合物である化合物４３および該化合物の塩をさらに提供する。
【００２８】
式ＩＶの化合物および該化合物の塩は、ピラゾロピリダジン化合物を合成するための中間体として有用である。
【００２９】
本発明は、構造
【００３０】
【化１３】
0005902293.tif 000022
を有する化合物４４および該化合物の塩をさらに提供する。
【００３１】
化合物４４は、そのビスフェニルピラゾロピリダジン部分と結合するタンパク質を特定するためのプローブとして有用である。
【００３２】
本発明は、構造
【００３３】
【化１４】
0005902293.tif 000023
を有する化合物４６および医薬として許容される該化合物の塩をさらに提供する。
【００３４】
化合物４６または医薬として許容される該化合物の塩はまた、アッシャー症候群に伴う網膜変性疾患または聴覚損失を治療することにも有用である。
【００３５】
本発明は、有効量の化合物４６、または医薬として許容される該化合物の塩および医薬として許容される担体またはビヒクルを含む組成物をさらに提供する。この組成物は、アッシャー症候群に伴う網膜変性疾患または聴覚損失を治療するのに有用である。
【００３６】
本発明は、網膜変性疾患を治療するための方法であって、有効量の化合物４６または医薬として許容される該化合物の塩を、治療を必要とする対象に投与することを含む方法をさらに提供する。
【００３７】
本発明は、アッシャー症候群に伴う聴覚損失を治療するための方法であって、有効量の化合物４６または医薬として許容される該化合物の塩を、治療を必要とする対象に投与することを含む方法をさらに提供する。
【００３８】
以下のそれぞれは、「本発明の化合物」である：ピラゾロピリダジン化合物、化合物１−３５、３７−３９もしくは４２−９７または該化合物の塩、および式Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩの構造を有する化合物または該化合物の塩。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】細胞中におけるＮ４８Ｋ  クラリン−１の発現密度を示す画像である。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
本発明は、本発明の化合物、本発明の化合物を含む組成物、およびアッシャー症候群に伴う網膜変性疾患または聴覚損失を治療するための方法であって、ピラゾロピリダジン化合物もしくは化合物４６または医薬として許容される該化合物の塩を投与することを含む方法を提供する。
【００４１】
本発明の化合物
「アルキル」という用語は、直鎖または分枝の飽和した炭化水素基を指す。例示的アルキル基として、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２および−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３基が挙げられる。
【００４２】
「アルキレン」という用語は、別の原子または基に結合したアルキル基を指す。例示的アルキレン基として、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−Ｃ（ＣＨ３）２−、−ＣＨ（ＣＨ３）、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２−、−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２−、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２−、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−および−Ｃ（ＣＨ３）２Ｃ（ＣＨ３）２−基が挙げられる。
【００４３】
「アルケニル」という用語は、１つ以上の二重結合を有する直鎖または分枝の炭化水素基を指す。例示的アルケニル基として−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、ｃｉｓ−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３、ｔｒａｎｓ−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、ｃｉｓ−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３、ｔｒａｎｓ−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３、ｃｉｓ−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ３、ｔｒａｎｓ−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、ｃｉｓ−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、ｔｒａｎｓ−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、ｃｉｓ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ３、ｔｒａｎｓ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ２ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、ｃｉｓ−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、ｔｒａｎｓ−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、ｃｉｓ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ３、ｔｒａｎｓ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２および−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２基が挙げられる。
【００４４】
「約」という単語が数値の直前に置かれている場合には、この値のプラスまたはマイナス１０％の範囲を意味し、例えば、「約１００ｍｇ」は９０ｍｇ−１１０ｍｇを意味し、「約３００ｍｇ」は２７０ｍｇ−３３０ｍｇを意味する。
【００４５】
略語：
ＡＰＣＩ  大気圧化学イオン化
ＤＡＰＩ  ４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール
ＤＩＰＥＡ  ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＥＭ  Ｄｕｌｂｅｃｃｏ変法イーグル培地
ＤＭＦ  ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ  ジメチルスルホキシド
ＥＤＡＣ  １−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＥＳＩ  エレクトロスプレーイオン化
ＥＳＩ−ＴＯＦ  エレクトロスプレーイオン化−飛行時間
ＨＡＴＵ  ２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＰＯ  ２−ヒドロキシピリジン−Ｎ−オキシド
ＨＰＬＣ  高速液体クロマトグラフィー
ＬＣＭＳ  液体クロマトグラフィー−質量分析法
ＬＤＡ  リチウムジイソプロピルアミド
ｍ／ｚ  質量電荷比
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  マトリックス支援レーザー脱離イオン化法−飛行時間
ＭＳ  質量分析法
ＰＢＳ  リン酸緩衝食塩水
Ｒｔ  保持時間
ＳＤＳ  ドデシル硫酸ナトリウム
ＴＨＦ  テトラヒドロフラン
【００４６】
式Ｉの化合物
一実施形態において、ピラゾロピリダジン化合物は、式Ｉ
【００４７】
【化１５】
0005902293.tif 000024
の化合物または医薬として許容される該化合物の塩である
（式中、Ｒは、フルオロ、クロロ、ヨード、メチル、メトキシ、シアノ、トリフルオロメチル、または−（ＣＯ）ＮＨ（ＣＨ３）である。）。一実施形態において、式ＩのＲは、ピラゾロピリダジノ環系に対してパラ位にある。一実施形態において、式ＩのＲは、ピラゾロピリダジノ環系に対してメタ位にある。一実施形態において、式ＩのＲは、ピラゾロピリダジノ環系に対してオルト位にある。
【００４８】
式ＩＩの化合物
本発明はまた、式ＩＩ
【００４９】
【化１６】
0005902293.tif 000025
の化合物および医薬として許容される該化合物の塩を提供する
（式中、Ｈａｌは、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、または−Ｂｒであり、
ｘは、０から５の範囲の整数であり、
各Ｒ１は、独立して、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、−Ｂｒ、−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ３）、または−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨであり、
ｙは、０から５の範囲の整数であり、
各Ｒ２は、独立して、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ３）、または−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ６アルキル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＯＨ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−フェニル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−Ｃ２−Ｃ６アルケニル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｒ５、
【００５０】
【化１７】
0005902293.tif 000026
であり、
Ｒ４は、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＮＨ（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＯＨ）、−ＮＨ（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２）、Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＣＮ）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２）、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、
【００５１】
【化１８】
0005902293.tif 000027
0005902293.tif 000028
であり、
ａは、０から１０の範囲の整数であり、
ｂは、０から８の範囲の整数であり、
ｃは、０から６の範囲の整数であり、
Ｒ５は、
【００５２】
【化１９】
0005902293.tif 000029
である。）。
【００５３】
特定の実施形態において、Ｈａｌは−Ｃｌである。さらに別の実施形態において、ｘおよびｙは０である。
【００５４】
特定の実施形態において、ｘおよびｙは０であり、ｘは０で、ｙは１であり、ｘは１で、ｙは２であり、ｘは１で、ｙは０であり、ｘは１で、ｙは１であり、ｘは１で、ｙは２であり、ｘは２で、ｙは０であり、ｘは２で、ｙは１であり、またはｘは２で、ｙは２である。
【００５５】
特定の実施形態において、Ｈａｌは−Ｃｌであり、ｘおよびｙは０であり、ｘは０で、ｙは１であり、ｘは１で、ｙは２であり、ｘは１で、ｙは０であり、ｘは１で、ｙは１であり、ｘは１で、ｙは２であり、ｘは２で、ｙは０であり、ｘは２で、ｙは１であり、またはｘは２で、ｙは２である。
【００５６】
特定の実施形態において、ｘは１であり、Ｒ１は、ピラゾロピリダジノ環系に対してオルト位にある。特定の実施形態において、ｘは１であり、Ｒ１は、ピラゾロピリダジノ環系に対してパラ位にある。さらなる実施形態において、ｘは１であり、Ｒ１はピラゾロピリダジノ環系に対してメタ位にある。
【００５７】
特定の実施形態において、ｙは１であり、Ｒ２は、ピラゾロピリダジノ環系に対してオルト位にある。特定の実施形態において、ｙは１であり、Ｒ２は、ピラゾロピリダジノ環系に対してパラ位にある。さらなる実施形態において、ｙは１であり、Ｒ２はピラゾロピリダジノ環系に対してメタ位にある。
【００５８】
特定の実施形態において、ｘは２であり、Ｒ１は、ピラゾロピリダジノ環系に対してオルトおよびメタ位にある。特定の実施形態において、ｘは２であり、Ｒ１は、ピラゾロピリダジノ環系に対してオルトおよびパラ位にある。さらなる実施形態において、ｘは２であり、Ｒ１は、ピラゾロピリダジノ環系に対してパラおよびメタ位にある。
【００５９】
特定の実施形態において、ｙは２であり、Ｒ２は、ピラゾロピリダジノ環系に対してオルトおよびメタ位にある。特定の実施形態において、ｙは２であり、Ｒ２は、ピラゾロピリダジノ環系に対してオルトおよびパラ位にある。さらなる実施形態において、ｙは２であり、Ｒ２は、ピラゾロピリダジノ環系に対してパラおよびメタ位にある。
【００６０】
さらに他の実施形態において、Ｒ１はクロロである。特定の実施形態において、Ｒ１はフルオロである。特定の実施形態において、Ｒ１はヨードである。他の実施形態において、Ｒ１は−Ｂｒである。さらなる実施形態において、Ｒ１は−ＯＣＨ３である。他の実施形態において、Ｒ１は−ＣＨ３である。さらに他の実施形態において、Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３である。特定の実施形態において、Ｒ１は−ＣＦ３である。さらなる実施形態において、Ｒ１は−ＣＮである。追加的実施形態において、Ｒ１は−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨである。
【００６１】
さらに他の実施形態において、ｘは１または２であり、Ｒ１は−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、−Ｂｒ、−ＯＣＨ３、−ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＮまたは−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨである。
【００６２】
さらに他の実施形態において、Ｈａｌは、−Ｃｌであり、ｘは１または２であり、Ｒ１は、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、−Ｂｒ、−ＯＣＨ３、−ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＮまたは−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨである。
【００６３】
さらに他の実施形態において、Ｒ２は−Ｃｌである。特定の実施形態において、Ｒ２は−Ｆである。他の実施形態において、Ｒ２は−Ｂｒである。さらなる実施形態において、Ｒ２は−ＯＣＨ３である。他の実施形態において、Ｒ２は−ＣＨ３である。さらに他の実施形態において、Ｒ２は−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３である。特定の実施形態において、Ｒ２は−ＣＦ３である。さらなる実施形態において、Ｒ２は−ＣＮである。追加的実施形態において、Ｒ２は−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨである。
【００６４】
さらに他の実施形態において、ｙは１または２であり、Ｒ２は−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−ＯＣＨ３、−ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＮまたは−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨである。
【００６５】
さらに他の実施形態において、Ｈａｌは−Ｃｌであり、ｙは１または２であり、Ｒ２は−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−ＯＣＨ３、−ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＮまたは−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨである。
【００６６】
特定の実施形態において、Ｒ３は−Ｈである。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ３である。さらなる実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ３である。さらなる実施形態において、Ｒ３は−ＣＨＣＨ２である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨである。特定の実施形態において、Ｒ３は−（ＣＨ２）２Ｃ６Ｈ５である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＨである。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２）である。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（（ＣＨ２）３Ｎ（ＣＨ３）２）である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＮである。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（（ＣＨ２）２ＯＨ）である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（（ＣＨ２）２ＯＣＨ３）である。さらなる実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨである。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３である。さらなる実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３である。さらなる実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨである。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＯＨである。
【００６７】
さらなる実施形態において、Ｒ３はＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００６８】
【化２０】
0005902293.tif 000030
である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００６９】
【化２１】
0005902293.tif 000031
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００７０】
【化２２】
0005902293.tif 000032
である。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００７１】
【化２３】
0005902293.tif 000033
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００７２】
【化２４】
0005902293.tif 000034
である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００７３】
【化２５】
0005902293.tif 000035
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００７４】
【化２６】
0005902293.tif 000036
である。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００７５】
【化２７】
0005902293.tif 000037
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００７６】
【化２８】
0005902293.tif 000038
である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００７７】
【化２９】
0005902293.tif 000039
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００７８】
【化３０】
0005902293.tif 000040
である。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００７９】
【化３１】
0005902293.tif 000041
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００８０】
【化３２】
0005902293.tif 000042
である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００８１】
【化３３】
0005902293.tif 000043
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００８２】
【化３４】
0005902293.tif 000044
である。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００８３】
【化３５】
0005902293.tif 000045
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００８４】
【化３６】
0005902293.tif 000046
である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００８５】
【化３７】
0005902293.tif 000047
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００８６】
【化３８】
0005902293.tif 000048
である。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００８７】
【化３９】
0005902293.tif 000049
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００８８】
【化４０】
0005902293.tif 000050
である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００８９】
【化４１】
0005902293.tif 000051
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００９０】
【化４２】
0005902293.tif 000052
である。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００９１】
【化４３】
0005902293.tif 000053
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００９２】
【化４４】
0005902293.tif 000054
である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００９３】
【化４５】
0005902293.tif 000055
である。さらなる本発明の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００９４】
【化４６】
0005902293.tif 000056
である。特定の本発明の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００９５】
【化４７】
0005902293.tif 000057
である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００９６】
【化４８】
0005902293.tif 000058
である。さらなる実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００９７】
【化４９】
0005902293.tif 000059
である。さらなる実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【００９８】
【化５０】
0005902293.tif 000060
である。
【００９９】
特定の実施形態において、Ｒ３は−（ＣＨ２）２Ｒ５であり、Ｒ５は、
【０１００】
【化５１】
0005902293.tif 000061
である。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−（ＣＨ２）２Ｒ５であり、Ｒ５は、
【０１０１】
【化５２】
0005902293.tif 000062
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−（ＣＨ２）２Ｒ５であり、Ｒ５は、
【０１０２】
【化５３】
0005902293.tif 000063
である。本発明の他の実施形態において、Ｒ３は−（ＣＨ２）２Ｒ５であり、Ｒ５は、
【０１０３】
【化５４】
0005902293.tif 000064
である。
【０１０４】
一部の実施形態において、ａは０から５の範囲の整数である。一部の実施形態において、ｂは０から４の範囲の整数である。一部の実施形態において、ｃは、０から６の範囲の整数である。
【０１０５】
式ＩＩＩの化合物
本発明はさらに、式ＩＩＩ
【０１０６】
【化５５】
0005902293.tif 000065
の化合物および医薬として許容される該化合物の塩を提供する
（式中、Ｈａｌは、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、または−Ｂｒであり、
ｘは、０から５の範囲の整数であり、
各Ｒ１は、独立して、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｉ、−Ｂｒ、−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１−Ｃ３アルキル、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ３）、または−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、−Ｈ、−Ｃ１−Ｃ６アルキル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＯＨ、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−フェニル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｏ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−Ｃ２−Ｃ６アルケニル、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｃ（Ｏ）Ｒ４、−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｒ５、
【０１０７】
【化５６】
0005902293.tif 000066
であり、
Ｒ４は、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＮＨ（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＯＨ）、−ＮＨ（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２）、Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−ＣＮ）、−Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２）、−ＮＨ（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、
【０１０８】
【化５７】
0005902293.tif 000067
0005902293.tif 000068
であり、
ａは、０から１０の範囲の整数であり、
ｂは、０から８の範囲の整数であり、
ｃは、０から６の範囲の整数であり、
Ｒ５は、
【０１０９】
【化５８】
0005902293.tif 000069
であり、
各Ｒ６およびＲ７は、独立して、−Ｈまたは−Ｉであり、Ｒ６およびＲ７のうちの少なくとも１つは−Ｉであり、
Ｒ３が−Ｃ１−Ｃ３アルキルである場合、Ｒ７は−Ｈである。）。
【０１１０】
特定の実施形態において、ピラゾロピリダジノ環系に対してオルト位にある１つのＲ６はヨードであり、残りのＲ６およびＲ７基は水素である。他の実施形態において、ピラゾロピリダジノ環系に対してパラ位にある１つのＲ６はヨードであり、残りのＲ６およびＲ７基は水素である。さらなる実施形態において、ピラゾロピリダジノ環系に対してオルト位にある１つのＲ６およびピラゾロピリダジノ環系に対してパラ位にある１つのＲ６はヨードであり、残りのＲ６およびＲ７基は水素である。さらなる実施形態において、ピラゾロピリダジノ環系に対してオルト位にある２つのＲ６基およびピラゾロピリダジノ環系に対してパラ位にある１つのＲ６はヨードであり、残りのＲ６およびＲ７基は水素である。さらなる実施形態において、ピラゾロピリダジノ環系に対してパラ位にある２つのＲ６基およびピラゾロピリダジノ環系に対してオルト位にある１つのＲ６はヨードであり、残りのＲ６およびＲ７は水素である。特定の実施形態において、すべてのＲ６基はヨードであり、Ｒ７は水素である。さらなる実施形態において、Ｒ７はヨードであり、Ｒ６基は水素である。
【０１１１】
ある特定の実施形態において、ピラゾロピリダジノ環系に対してパラ位にある１つのＲ６はヨードであり、Ｒ３は−ＣＨ３である。
【０１１２】
特定の実施形態において、Ｈａｌは−Ｃｌである。さらに別の実施形態において、ｘは０である。別の実施形態において、ｘは１である。特定の実施形態において、ｘは２である。
【０１１３】
特定の実施形態において、ｘは１であり、Ｒ１は、ピラゾロピリダジノ環系に対してオルト位にある。特定の実施形態において、ｘは１であり、Ｒ１は、ピラゾロピリダジノ環系に対してパラ位にある。さらなる実施形態において、ｘは１であり、Ｒ１はピラゾロピリダジノ環系に対してメタ位にある。
【０１１４】
特定の実施形態において、ｘは２であり、Ｒ１は、ピラゾロピリダジノ環系に対してオルトおよびメタ位にある。特定の実施形態において、ｘは２であり、Ｒ１は、ピラゾロピリダジノ環系に対してオルトおよびパラ位にある。さらなる実施形態において、ｘは２であり、Ｒ１は、ピラゾロピリダジノ環系に対してパラおよびメタ位にある。
【０１１５】
さらに他の実施形態において、Ｒ１は−Ｃｌである。特定の実施形態において、Ｒ１は−Ｆである。特定の実施形態において、Ｒ１は−Ｉである。さらなる実施形態において、Ｒ１は−ＯＣＨ３である。他の実施形態において、Ｒ１は−ＣＨ３である。さらに他の実施形態において、Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３である。特定の実施形態において、Ｒ１は−ＣＦ３である。さらなる実施形態において、Ｒ１は−ＣＮである。追加的実施形態において、Ｒ１は−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨである。
【０１１６】
さらに他の実施形態において、ｘは１または２であり、Ｒ１は−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＣＨ３、−ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＮまたは−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨである。
【０１１７】
さらに他の実施形態において、Ｈａｌは、−Ｃｌであり、ｘは１または２であり、Ｒ１は、−Ｃｌ、−Ｆ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＣＨ３、−ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＣＮまたは−Ｃ≡ＣＣＨ２ＯＨである。
【０１１８】
特定の実施形態において、Ｒ３は−Ｈである。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ３である。さらなる実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ３である。なおさらなる実施形態において、Ｒ３は−ＣＨＣＨ２である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨである。特定の実施形態において、Ｒ３は−（ＣＨ２）２Ｃ６Ｈ５である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＨである。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２）である。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（（ＣＨ２）３Ｎ（ＣＨ３）２）である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＮである。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮＨ２である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（（ＣＨ２）２ＯＨ）である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）（（ＣＨ２）２ＯＣＨ３）である。なおさらなる実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＯＨである。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３である。さらなる実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３である。なおさらなる実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨである。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＯＨである。
【０１１９】
さらなる実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１２０】
【化５９】
0005902293.tif 000070
である。  他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１２１】
【化６０】
0005902293.tif 000071
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１２２】
【化６１】
0005902293.tif 000072
である。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１２３】
【化６２】
0005902293.tif 000073
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１２４】
【化６３】
0005902293.tif 000074
である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１２５】
【化６４】
0005902293.tif 000075
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１２６】
【化６５】
0005902293.tif 000076
である。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１２７】
【化６６】
0005902293.tif 000077
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１２８】
【化６７】
0005902293.tif 000078
である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１２９】
【化６８】
0005902293.tif 000079
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１３０】
【化６９】
0005902293.tif 000080
である。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１３１】
【化７０】
0005902293.tif 000081
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１３２】
【化７１】
0005902293.tif 000082
である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１３３】
【化７２】
0005902293.tif 000083
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１３４】
【化７３】
0005902293.tif 000084
である。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１３５】
【化７４】
0005902293.tif 000085
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１３６】
【化７５】
0005902293.tif 000086
である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１３７】
【化７６】
0005902293.tif 000087
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１３８】
【化７７】
0005902293.tif 000088
である。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１３９】
【化７８】
0005902293.tif 000089
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１４０】
【化７９】
0005902293.tif 000090
である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１４１】
【化８０】
0005902293.tif 000091
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１４２】
【化８１】
0005902293.tif 000092
である。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１４３】
【化８２】
0005902293.tif 000093
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１４４】
【化８３】
0005902293.tif 000094
である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１４５】
【化８４】
0005902293.tif 000095
である。さらなる本発明の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１４６】
【化８５】
0005902293.tif 000096
である。特定の本発明の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１４７】
【化８６】
0005902293.tif 000097
である。他の実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１４８】
【化８７】
0005902293.tif 000098
である。さらなる実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１４９】
【化８８】
0005902293.tif 000099
である。さらなる実施形態において、Ｒ３は−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ４であり、Ｒ４は、
【０１５０】
【化８９】
0005902293.tif 000100
である。
【０１５１】
特定の実施形態において、Ｒ３は−（ＣＨ２）２Ｒ５であり、Ｒ５は、
【０１５２】
【化９０】
0005902293.tif 000101
である。さらに他の実施形態において、Ｒ３は−（ＣＨ２）２Ｒ５であり、Ｒ５は、
【０１５３】
【化９１】
0005902293.tif 000102
である。特定の実施形態において、Ｒ３は−（ＣＨ２）２Ｒ５であり、Ｒ５は、
【０１５４】
【化９２】
0005902293.tif 000103
である。本発明の他の実施形態において、Ｒ３は−（ＣＨ２）２Ｒ５であり、Ｒ５は、
【０１５５】
【化９３】
0005902293.tif 000104
である。
【０１５６】
一部の実施形態において、ａは０から５の範囲の整数である。一部の実施形態において、ｂは０から４の範囲の整数である。一部の実施形態において、ｃは、０から６の範囲の整数である。
【０１５７】
例示的なピラゾロピリダジン化合物
特定のピラゾロピリダジン化合物の非限定的例として、
【０１５８】
【化９４】
0005902293.tif 000105
0005902293.tif 000106
0005902293.tif 000107
0005902293.tif 000108
0005902293.tif 000109
0005902293.tif 000110
0005902293.tif 000111
ならびに医薬として許容される該化合物の塩が挙げられる。
【０１５９】
式ＩＶの化合物
本発明はさらに、式ＩＶ
【０１６０】
【化９５】
0005902293.tif 000112
（式中、Ｒ８は−Ｃ１−Ｃ３アルキルである。）
の化合物および該化合物の塩を提供する。
【０１６１】
本発明の特定の実施形態において、Ｒ８は−ＣＨ３であり、本発明のさらなる実施形態において、Ｒ８は−ＣＨ２ＣＨ３である。本発明の他の実施形態において、Ｒ８は−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である。本発明の他の実施形態において、Ｒ８は−ＣＨ（ＣＨ３）２である。
【０１６２】
本発明は、構造
【０１６３】
【化９６】
0005902293.tif 000113
を有する化合物４３および該化合物の塩をさらに提供する。このような塩は、化合物４３と無機酸または有機酸との反応生成物である。一実施形態において塩は、医薬として許容される塩である。
【０１６４】
式ＩＶの化合物、化合物４３および該化合物の塩は、ピラゾロピリダジン化合物のための合成のための中間体として有用である。
【０１６５】
本発明は、構造
【０１６６】
【化９７】
0005902293.tif 000114
を有する化合物４４および該化合物の塩をさらに提供する。このような塩は、化合物４４と無機酸または有機酸との反応生成物である。一実施形態において、塩は医薬として許容される塩である。
【０１６７】
化合物４４は、そのビスフェニルピラゾロピリダジン部分に結合するタンパク質を特定するためのプローブとして有用である。
【０１６８】
本発明は、構造
【０１６９】
【化９８】
0005902293.tif 000115
を有する化合物４６および医薬として許容される該化合物の塩をさらに提供する。
【０１７０】
本明細書中に開示されている化合物のいくつか、例えば、化合物４４、６３、７２、７４、８３、８８および８９には、ボールド体または斜線くさび形が描写されており、これは絶対立体化学配置を示している。
【０１７１】
何ら特定のメカニズムに制約されるものではないが、ピラゾロピリダジン化合物のビスフェニルピラゾロピリダジン部分は、アッシャーＩＩＩ症候群において変異した遺伝子によりコードされているタンパク質である、クラリンＩの活性およびトラフィッキングの回復に関与していると考えられている（Ａｄａｔｏら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅｔ．２００２年６月；１０巻（６号）：３３９−５０頁）。
【０１７２】
クラリンＩと相互作用することができ、したがって化合物４４のビスフェニルピラゾロピリダジン部分に結合することができるタンパク質またはこのドメインとして、これらに限定されないが、表１に列挙したタンパク質が挙げられる、（Ｔｉａｎら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００９年７月  １０；２８４巻（２８号）：１８９８０−９３頁）：
【０１７３】
【表１】
0005902293.tif 000116
0005902293.tif 000117
【０１７４】
本発明の化合物は、塩の形態であってよい。一部の実施形態において、塩は医薬として許容される塩である。医薬として許容される塩として、例えば、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩を形成する酸は、有機酸または無機酸であってよい。塩基付加塩を形成する塩基は、有機塩基または無機塩基であってよい。一部の実施形態において、医薬として許容される塩は金属塩である。一部の実施形態において、医薬として許容される塩はアンモニウム塩である。
【０１７５】
酸付加塩は、遊離塩基形態の本発明の化合物への酸の添加から生じ得る。一部の実施形態において、酸は有機である。一部の実施形態において、酸は無機である。適切な酸の非限定的例として、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、亜硝酸、硫酸、亜硫酸、リン酸、ニコチン酸、イソニコチン酸、乳酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、酒石酸、アスコルビン酸、ゲンチジン酸、グルコン酸、グルクロン酸、サッカリン酸、ギ酸、安息香酸、グルタミン酸、パントテン酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、フマル酸、コハク酸、クエン酸、シュウ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、メチルマレイン酸、グリコール酸、リンゴ酸、ケイヒ酸、マンデル酸、２−フェノキシ安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、エンボン酸、フェニル酢酸、Ｎ−シクロヘキシルスルファミン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、エタン−１，２−二スルホン酸、４−メチルベンゼンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１，５−二スルホン酸、２−ホスホグリセリン酸、３−ホスホグリセリン酸、グルコース−６−リン酸およびアミノ酸が挙げられる。
【０１７６】
適切な酸付加塩の非限定的例として、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、亜硝酸塩、硫酸塩、スルファイト塩、リン酸塩、リン酸水素塩、二水素リン酸塩、炭酸塩、炭酸水素塩、ニコチン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、４−アミノサリチル酸塩、酒石酸塩、アスコルビン酸塩、ゲンチシン酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、サッカル酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、パントテン酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、メチルマレイン酸塩、グリコール酸塩、リンゴ酸塩、ケイヒ酸塩、マンデル酸塩、２−フェノキシ安息香酸塩、２−アセトキシ安息香酸塩、エンボン酸塩、フェニル酢酸塩、Ｎ−シクロヘキシルスルファミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、エタン−１，２−ジスルホン酸塩、４−メチルベンゼンスルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸塩、２−ホスホグリセリン酸塩、３−ホスホグリセリン酸塩、グルコース−６−リン酸塩およびアミノ酸塩が挙げられる。
【０１７７】
金属塩は、カルボキシル基を有する本発明の化合物への無機塩基の添加から生じ得る。無機塩基は、塩基性対イオンと対になった金属カチオンからなり、例えば、水酸化物、炭酸塩、炭酸水素塩、またはリン酸塩などである。金属は、アルカリ金属、アルカリ土類金属、遷移金属、または主族金属であってよい。適切な金属の非限定的例として、リチウム、ナトリウム、カリウム、セシウム、セリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、カルシウム、ストロンチウム、コバルト、チタン、アルミニウム、銅、カドミウムおよび亜鉛が挙げられる。
【０１７８】
適切な金属塩の非限定的例として、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、セシウム塩、セリウム塩、マグネシウム塩、マンガン塩、鉄塩、カルシウム塩、ストロンチウム塩、コバルト塩、チタン塩、アルミニウム塩、銅塩、カドミウム塩および亜鉛塩が挙げられる。
【０１７９】
アンモニウム塩は、カルボキシル基を有する本発明の化合物へのアンモニアまたは有機アミンの添加から生じ得る。適切な有機アミンの非限定的例として、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、モルホリン、Ｎ−メチルモルホリン、ピペリジン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ジベンジルアミン、ピペラジン、ピリジン、ピラゾール（ｐｙｒｒａｚｏｌｅ）、イミダゾール、ピラジン、ピピラジン（ｐｉｐｙｒａｚｉｎｅ）、エチレンジアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、プロカイン、クロロプロカイン、コリン、ジシクロヘキシルアミンおよびＮ−メチルグルカミンが挙げられる。
【０１８０】
適切なアンモニウム塩の非限定的例として、トリエチルアンモニウム塩、ジイソプロピルアンモニウム塩、エタノールアンモニウム塩、ジエタノールアンモニウム塩、トリエタノールアンモニウム塩、モルホリニウム塩、Ｎ−メチルモルホリニウム塩、ピペリジニウム塩、Ｎ−メチルピペリジニウム塩、Ｎ−エチルピペリジニウム塩、ジベンジルアンモニウム塩、ピペラジニウム塩、ピリジニウム塩、ピラゾリウム（ｐｙｒｒａｚｏｌｉｕｍ）塩、イミダゾリウム塩、ピラジニウム塩、エチレンジアンモニウム塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアンモニウム塩、プロカイン塩、クロロプロカイン塩、コリン塩、ジシクロヘキシルアンモニウム塩およびＮ−メチルグルカミン塩が挙げられる。
【０１８１】
ピラゾロピリダジン化合物を作製するための方法
ピラゾロピリダジン化合物を合成するのに有用な合成スキーム（ｓｃｈｅｍａ）の非限定的例として、以下が挙げられる。
【０１８２】
【化９９】
0005902293.tif 000118
【０１８３】
スキーム１は、１−Ｎ−メチル基を有し、Ｒ’およびＲ”が、独立して、非置換または置換フェニル基である、ピラゾロピリダジン化合物の調製を全般的に記載している。例えば、２−シアノカルボニル化合物（式中、Ｒ’は、非置換または置換フェニルである。）をＮ−メチルヒドラジンと縮合することによって、３−置換−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンを得る。ピリジンなどの塩基の存在下で５−アミノ基を、例えば無水酢酸を用いてアシル化することによって、５−アミド化合物を得る。エタノール（ＥｔＯＨ）などの溶媒中、ヨウ素およびヨウ素酸の混合物を用いて５−アミド化合物をヨウ素化することによって、Ｎ−（３−置換−４−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミドを得る。アセトアミドと、Ｒ”置換末端アルキン（ヨウ化銅（Ｉ）の存在下、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）などの溶媒中、トリエチルアミンなどの塩基を用いて、パラジウム（ＩＩ）ビストリフェニルホスフィンジクロリドなどのパラジウム錯体により触媒したもの）とのパラジウム媒介クロスカップリング、例えばＳｏｎａｇａｓｈｉｒａクロスカップリングなどにより、二置換アルキン（式中、Ｒ”は、非置換または置換フェニルである。）を得る。エタノールなどの溶媒中、水酸化ナトリウムなどの塩基を用いた、アルキンアセトアミドのけん化により、第一級アミンを得る。濃塩酸中での亜硝酸ナトリウムを用いた第一級アミンのジアゾ化により、ジアゾ中間体を得て、このジアゾ中間体を環化することによって、１−Ｎ−メチル基を有し、Ｒ’およびＲ”が独立して、非置換または置換フェニル基であるピラゾロピリダジン化合物を得る。
【０１８４】
【化１００】
0005902293.tif 000119
【０１８５】
スキーム２は、Ｒ３基を有し、Ｒ’が非置換または置換フェニル基であるピラゾロピリダジン化合物の調製を全般的に記載している。Ｒ’およびＲ３は、同一でありまたは異なることができる。例えば、４，６−ジクロロ−３−フェニルピリダジンを、リチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）などの塩基を用いて、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）などの溶媒中で脱プロトン化し、生成した５−リチオ種を、非置換または置換ベンズアルデヒドと縮合することによって、第二級アルコールを得る。二酸化マンガンなどの酸化剤を用いて、トルエンなどの溶媒中でアルコールをケトンに酸化する。エタノールなどの溶媒中、ケトンをＲ３置換ヒドラジンと縮合することによって、中間体ヒドラゾンを得て、この中間体ヒドラゾンを環化することによって、１−Ｎ−Ｒ３基を有し、Ｒ３が式ＩＩおよびＩＩＩにおける場合のように定義され、Ｒ’が非置換または置換フェニル基であるピラゾロピリダジン化合物を得る。
【０１８６】
【化１０１】
0005902293.tif 000120
【０１８７】
スキーム３は、１−Ｎ−メチル基を有し、Ｒ’がシアノ基、アルキン、アルケンまたはアリール基である、ピラゾロピリダジン化合物の調製を全般的に記載している。例えば、場合によって、亜鉛または銅塩などの非パラジウム遷移金属塩の存在下で、場合によってパラジウム錯体などの適切な触媒の存在下で、場合によって、トリフェニルホスフィンまたは有機アミン塩基などの添加剤の存在下で、１−メチル−３−ヨードフェニル−４−クロロ−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジンを、シアニド塩、末端アルキン、ハロゲン化アルケニル、またはハロゲン化アリールなどの適切なカップリングパートナーとカップリングすることによって、１−Ｎ−メチル基を有し、Ｒ’が、シアノ基、アルキン、アルケンまたはアリール基である、ピラゾロピリダジン化合物を得る。生成物中のＲ’の位置、すなわち、オルト、メタまたはパラは、出発物質におけるヨード基の位置と同じである。
【０１８８】
治療的使用
本発明の化合物は、治療を必要とする対象に、網膜変性疾患の治療のために投与することができる。網膜変性疾患の非限定的例として以下が挙げられる：網膜色素変性症、レーバー先天性黒内障、症候性網膜変性症、湿性および乾性加齢黄斑変性を含めた加齢黄斑変性、ならびにアッシャー症候群。一部の実施形態において、アッシャー症候群はアッシャー症候群のサブタイプである。一部の実施形態において、サブタイプはアッシャーＩである。一部の実施形態において、サブタイプはアッシャーＩＩである。一部の実施形態において、サブタイプはアッシャーＩＩＩである。
【０１８９】
本発明のさらなる実施形態において、本発明の化合物は、治療を必要とする対象に、アッシャー症候群に伴う聴覚損失の治療のために投与することができる。一部の実施形態において、アッシャー症候群はアッシャー症候群のサブタイプである。一部の実施形態において、サブタイプはアッシャーＩである。一部の実施形態において、サブタイプはアッシャーＩＩである。一部の実施形態において、サブタイプはアッシャーＩＩＩである。
【０１９０】
「対象」とは、哺乳動物、例えば、ヒト、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、または非ヒト霊長類、例えば、サル、チンパンジー、ヒヒまたは赤毛猿などである。一実施形態において、対象はヒトである。
【０１９１】
本発明の化合物は、医薬として許容される担体またはビヒクルを含む組成物の成分として、対象に投与することができる。適切な医薬としての担体またはビヒクルの非限定的例として、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール、緩衝水およびリン酸緩衝生理食塩水が挙げられる。これらの組成物は、例えば、ドロップ剤、液剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤および持続放出性製剤として投与することができる。一部の実施形態において、組成物は、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアガム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水シロップ、メチルセルロース、ヒドロキシ安息香酸メチルおよびヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウムならびに鉱油を含む。組成物は、滑沢剤、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、保存料、甘味料または着香料をさらに含むことができる。
【０１９２】
組成物は、有効量の本発明の化合物を含むことができる。本発明の化合物の「有効量」とは、対象におけるアッシャー症候群に伴う網膜変性疾患または聴覚損失を治療するのに効果的な量である。組成物は、有効量の本発明の化合物を含む単位剤形中に製剤化することができる。一部の実施形態において、組成物は、例えば、約１ｎｇから約１，０００ｍｇの本発明の化合物を含む。一部の実施形態において、組成物は、約１００ｍｇから約１，０００ｍｇの本発明の化合物を含む。一部の実施形態において、組成物は、約１００ｍｇから約５００ｍｇの本発明の化合物を含む。一部の実施形態において、組成物は、約２００ｍｇから約３００ｍｇの本発明の化合物を含む。
【０１９３】
本発明の化合物の用量は、対象の症状、年齢および体重、アッシャー症候群に伴う網膜変性疾患または聴覚損失の性質および重症度、投与経路、ならびに組成物の形態に応じて異なる可能性がある。本明細書中に記載されている組成物は、単回投与または分割投与で投与することができる。一部の実施形態において、本発明の化合物の用量は、対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｎｇから約１０ｇ、１ｋｇ当たり約１ｎｇから約０．１ｇ、または１ｋｇ当たり約１００ｎｇから約１０ｍｇの範囲である。
【０１９４】
投与は、例えば、局所的、耳内、眼内、非経口、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、頭蓋内、眼窩内、側脳室内、嚢内、脊髄内、嚢内、腹腔内、鼻腔内、エアゾール、坐剤、または経口であってよい。経口使用のための製剤は、無毒性の、医薬として許容される賦形剤との混合物中に本発明の化合物を含有する錠剤を含む。これらの賦形剤は、例えば、不活性希釈剤または充填剤（例えば、スクロースおよびソルビトール）、滑沢剤、摺滑剤および抗接着剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、水素化植物性油脂、またはタルク）であってよい。眼に使用するための製剤は、点眼剤の形態であってよい。
【０１９５】
本発明の化合物またはこの組成物は、非経口、皮下、皮内、筋肉内、または静脈内投与などのために、例えば等張緩衝液、水性緩衝液、または生理食塩緩衝液中で再構成するための凍結乾燥された形態で提供することができる。本発明の組成物はまた、経口、耳内、経鼻、または舌下投与に対して有用な液体製剤、例えば、懸濁剤、シロップ剤またはエリキシル剤などの形態とすることもできる。本発明の組成物はまた、経口投与に対して適切な形態、例えば、カプセル剤、錠剤、丸剤およびチュアブル固形製剤などの形態であってもよい。本発明の組成物はまた、液体、粘性液体、ペースト剤、または散剤として、皮膚投与のためのクリーム剤として調製することもできる。本発明の組成物はまた、エアゾール化成分有り無しで、肺投与のための散剤として調製することもできる。
【０１９６】
組成物は、経口、耳内、鼻腔内、舌下、十二指腸内、皮下、口腔、結腸内、直腸、経膣、粘膜、肺、経皮、皮内、非経口、静脈内、筋肉内および眼用の剤形であってよく、血液脳障壁を横断することができる。
【０１９７】
本発明の組成物は、当技術分野で公知の様々な手段で投与することができる。例えば本発明の組成物は、経口投与することができ、錠剤、カプセル剤、粒剤、散剤またはシロップ剤として製剤化することができる。代わりに、本発明の組成物は、注射（例えば、静脈内、筋肉内または皮下）、点滴調製物または坐剤として非経口的に投与することができる。眼科用途のために、本発明の組成物は、点眼剤または眼軟膏として製剤化することができる。耳用組成物は点耳薬、軟膏剤、クリーム剤、液体、ゲル、または内部もしくは表面のいずれからの耳への適用のための軟膏として製剤化することができる。これらの製剤は、従来の手段で調製することができ、組成物は、任意の従来の添加剤、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、可溶化剤、懸濁助剤、乳化剤、またはコーティング剤などと混合することができる。
【０１９８】
本発明の組成物は、湿潤剤、乳化剤および滑沢剤、着色剤、剥離剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および芳香剤、保存剤ならびに抗酸化剤を含むことができる。
【０１９９】
組成物は、例えば、経口、耳内、眼内、経鼻、局所的（口腔および舌下を含む。）、直腸、経膣、エアゾールおよび／または非経口投与に対して適切となり得る。組成物は、単位剤形で提供することができ、当技術分野で公知の任意の方法により調製することができる。
【０２００】
経口投与に対して適切な製剤は、カプセル剤、カシェ剤、丸剤、錠剤、ロゼンジ剤、散剤、粒剤の形態で、または水性もしくは非水性液体中の液剤もしくは懸濁剤として、または水中油型もしくは油中水型の液体乳剤として、またはエリキシル剤もしくはシロップ剤として、またはパステル剤として（不活性塩基、例えばゼラチンなどおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアを使用）の形態であってよい。本発明の組成物はまた、ボーラス、舐剤、またはペースト剤として投与することもできる。
【０２０１】
医薬として許容される担体またはビヒクルのさらなる例として、以下が挙げられる：（１）充填剤または増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールなどおよび／またはケイ酸；（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシアなど；（３）保湿剤、例えば、グリセロールなど；（４）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、バレイショまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のシリケートおよび炭酸ナトリウムなど；（５）溶解遅延剤、例えばパラフィンなど；（６）吸収促進剤、例えば、第四級アンモニウム化合物など；（７）湿潤剤、例えば、アセチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロールなど；（８）吸収剤、例えば、カオリンおよびベントナイト粘土など；（９）滑沢剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびこれらの混合物など；（１０）着色剤；ならびに（１１）緩衝剤。類似の組成物を、軟質または硬質のゼラチン充填カプセル剤の充填剤として利用することができる。
【０２０２】
経口投与のための液体剤形として、医薬として許容される乳剤、マイクロエマルジョン、ゲル剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が挙げられる。液体剤形は、当技術分野で共通して使用されている不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸ジエチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールなど、油、例えば、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油など、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、ソルビタンの脂肪酸エステルおよびこれらの混合物を含有することができる。
【０２０３】
懸濁剤形は、懸濁させた、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガント、ならびにこれらの混合物を含有することができる。
【０２０４】
対象組成物の経皮的投与のための剤形として、ドロップ剤、散剤、スプレー剤、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、液剤およびパッチが挙げられる。軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤およびゲル剤は、賦形剤、例えば、動物および植物脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルクおよび酸化亜鉛、またはこれらの混合物を含有することができる。
【０２０５】
散剤およびスプレー剤は、賦形剤、例えば、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、ポリアミド散剤、またはこれらの混合物などを含有することができる。スプレー剤は、従来通りの噴射剤、例えば、クロロフルオロ炭化水素などおよび揮発性非置換炭化水素、例えば、ブタンおよびプロパンなどをさらに含有してもよい。
【０２０６】
組成物は、固形粒子のエアゾール剤で投与することができる。非水系（例えば、フルオロカーボン噴射剤）懸濁剤も使用し得る。音波ネブライザーは、分解を引き起こしかねない剪断への曝露を最小限に抑えるので、使用することができる。
【０２０７】
水性エアゾール剤は、本発明の化合物の水溶液または懸濁液を、任意の従来の医薬として許容される担体またはビヒクル、例えば非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ、またはポリエチレングリコール）；タンパク質、例えば、血清アルブミンなど；ソルビタンエステル；脂肪酸；レシチン；アミノ酸；緩衝剤；塩；糖；または糖アルコールなどを用いて製剤化することによって作製することができる。
【０２０８】
非経口投与に対して適切な組成物は、本発明の化合物および１種以上の医薬として許容される無菌性、等張性、水性または非水性の溶液、分散液、懸濁液、もしくは乳濁液、または使用直前に無菌注射液剤または分散液へと再構成することができる無菌の粉末を含み、この組成物は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、または対象の血液との等張性を製剤に付与する溶質および懸濁化剤もしくは粘稠化剤を含有することができる。
【０２０９】
特定の実施形態を参照して本発明について記載してきたが、他の実施形態は、明細書を考慮すれば当業者には明らかとなる。本発明は、以下の実施例の参照によりさらに定義される。材料および方法の両方に対する多くの修正が、本発明の範囲から逸脱することなく実施され得ることは、当業者には明らかである。
【実施例】
【０２１０】
実施例１：４−クロロ−３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物３７）
【０２１１】
【化１０２】
0005902293.tif 000121
【０２１２】
ステップ１：３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン
【０２１３】
【化１０３】
0005902293.tif 000122
【０２１４】
２−クロロベンゾイルアセトニトリル（５４０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）およびメチルヒドラジン（１５８μｌ、３ｍｍｏｌ）のメタノール（３ｍＬ）中混合物を、電子レンジで、１２０℃で１時間加熱した。この反応混合物を真空中で濃縮することによって、３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンを固体（６１７ｍｇ）として得た。これを、その後のステップでこのまま使用した。
ステップ２：Ｎ−（３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミド
【０２１５】
【化１０４】
0005902293.tif 000123
【０２１６】
３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（６１７ｍｇ、３ｍｍｏｌ）のピリジン（６ｍＬ）中溶液に、無水酢酸（４２５μｌ、４．５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で１６時間撹拌した。この混合物を真空中で濃縮した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から１００％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製し、Ｎ−（３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミドを固体（５２６ｍｇ）として得た。
ステップ３：Ｎ−（３−（２−クロロフェニル）−４−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミド
【０２１７】
【化１０５】
0005902293.tif 000124
【０２１８】
Ｎ−（３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミド（５２６ｍｇ、２．１２ｍｍｏｌ）のエタノール（１６ｍＬ）中溶液に、ヨウ素酸（９３ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）およびヨウ素（２９４ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を５０℃で１８時間撹拌した。この反応混合物を真空中で濃縮し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、２Ｎ  Ｎａ２ＳＯ３溶液で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させることによって、Ｎ−（３−（２−クロロフェニル）−４−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミドを、薄オレンジ色の固体（７５６ｍｇ）として得た。これを、その後のステップでこのまま使用した。
ステップ４：Ｎ−（３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミド
【０２１９】
【化１０６】
0005902293.tif 000125
【０２２０】
フェニルアセチレン（１５７μｌ、１．４３ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（３．３ｍＬ）のＤＭＦ（１．２ｍＬ）中脱気溶液に、Ｎ−（３−（２−クロロフェニル）−４−ヨード−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミド（４１３ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（４２ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）およびＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（７７ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物をＮ２でフラッシュし、次いで８５℃に３時間加熱した。この反応混合物を真空中で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から１００％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製することによって、Ｎ−（３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミドを固体（１８１ｍｇ）として得た。
ステップ５：３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン
【０２２１】
【化１０７】
0005902293.tif 000126
【０２２２】
Ｎ−（３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミド（１７０ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）のエタノール（１ｍＬ）および２５％ＮａＯＨ（１．４ｍＬ）中溶液を８５℃に３０時間加熱した。この反応混合物を酢酸エチルおよび水の間に分配した。水相を酢酸エチルで洗浄し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させることによって、３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンを固体（１３６ｍｇ）として得た。これを、その後のステップでこのまま使用した。
ステップ６：４−クロロ−３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物３７）
【０２２３】
【化１０８】
0005902293.tif 000127
【０２２４】
３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（１３６ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）の濃縮ＨＣｌ（３．７ｍＬ）中冷却撹拌懸濁液（冷却槽−１５℃）に、亜硝酸ナトリウム（３４ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の水（０．３ｍＬ）中溶液を加えた。５分後、冷却槽を除去し、この反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応物を再び冷却し（０℃）、ＮａＨＣＯ３飽和溶液に注入した。酢酸エチルを加え、飽和ＮａＨＣＯ３でｐＨを７−８に調節した。水相を酢酸エチルで抽出し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。粗製材料をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から４％酢酸エチル／ＣＨ２Ｃｌ２）で精製して、化合物３７を固体（４７ｍｇ）として得た。
【０２２５】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ４．７２分；ｍ／ｚ  ３５５［Ｍ＋Ｈ］９７．９６％純度。
【０２２６】
実施例２：４−クロロ−３−（３−メトキシフェニル）−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物１７）
【０２２７】
【化１０９】
0005902293.tif 000128
【０２２８】
ステップ１における２−クロロベンゾイルアセトニトリルの代わりに３−メトキシベンゾイルアセトニトリルを使用して、実施例１（化合物３７）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物１７を合成した。
【０２２９】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ４．６分；ｍ／ｚ  ３５１［Ｍ＋Ｈ］９６．２３％純度。
【０２３０】
実施例３：４−クロロ−３−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物２７）
【０２３１】
【化１１０】
0005902293.tif 000129
【０２３２】
ステップ１における２−クロロベンゾイルアセトニトリルの代わりに４−メトキシベンゾイルアセトニトリルを使用して、実施例１（化合物３７）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物２７を合成した。
【０２３３】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ）Ｒｔ  ３．９７分；ｍ／ｚ  ３５１［Ｍ＋Ｈ］９６．７７％純度。
【０２３４】
実施例４：４−クロロ−３−（３−クロロフェニル）−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物１３）
【０２３５】
【化１１１】
0005902293.tif 000130
【０２３６】
ステップ１における２−クロロベンゾイルアセトニトリルの代わりに３−クロロベンゾイルアセトニトリルを使用して、実施例１（化合物３７）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物１３を合成した。
【０２３７】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＩ＿Ｂｉｃａｒｂ）Ｒｔ  ４．１６分；ｍ／ｚ  ３５５［Ｍ＋Ｈ］９８．３８％純度。
【０２３８】
実施例５：４−クロロ−３−（３−メトキシフェニル）−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物１５）
【０２３９】
【化１１２】
0005902293.tif 000131
【０２４０】
ステップ１における２−クロロベンゾイルアセトニトリルの代わりに３−メトキシベンゾイルアセトニトリルを使用し、ステップ４におけるフェニルアセチレンの代わりに４−メトキシフェニルアセチレンを使用して、実施例１（化合物３７）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物１５を合成した。
【０２４１】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ）Ｒｔ  ４．３分；ｍ／ｚ  ３８１［Ｍ＋Ｈ］９５．３％純度。
【０２４２】
実施例６：４−クロロ−３，５−ビス（４−フルオロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物３３）
【０２４３】
【化１１３】
0005902293.tif 000132
【０２４４】
ステップ１における２−クロロベンゾイルアセトニトリルの代わりに４−フルオロベンゾイルアセトニトリルを使用して、実施例１（化合物３７）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物３３を合成した。わずかに修正された手順として、ステップ１の残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配３０から１００％ＥｔＯＡｃ／イソヘキサン）で精製した。ステップ３の残渣をＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液で洗浄した。ステップ３の生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から１００％酢酸エチル／ＣＨ２Ｃｌ２）で精製した。ステップ４におけるフェニルアセチレンの代わりに４−フルオロフェニルアセチレンを使用した。ＥｔＯＡｃ、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液の代わりにＣＨ２Ｃｌ２、水およびＫ２ＣＯ３を用いてステップ４の反応混合物にワークアップを行った。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配１０から１００％ＥｔＯＡｃ／イソヘキサン）で精製することによって、化合物３３を得た。
【０２４５】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ４．１８分；ｍ／ｚ  ３５７［Ｍ＋Ｈ］９９．６３％純度。
【０２４６】
実施例７：４−クロロ−１−メチル−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物３９）
【０２４７】
【化１１４】
0005902293.tif 000133
【０２４８】
ステップ２から出発し、３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンの代わりに１−メチル−３−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンを使用して、実施例１（化合物３７）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物３９を合成した。
【０２４９】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ）Ｒｔ  ４．３９分；ｍ／ｚ  ３２１［Ｍ＋Ｈ］９５．８７％純度。
【０２５０】
実施例８：４−クロロ−３−（４−クロロフェニル）−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物２６）
【０２５１】
【化１１５】
0005902293.tif 000134
【０２５２】
ステップ２から出発し、３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンの代わりに３−（４−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンを使用して、実施例１（化合物３７）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物２６を合成した。
【０２５３】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ４．９１分；ｍ／ｚ  ３５５［Ｍ＋Ｈ］９９．３６％純度。
【０２５４】
実施例９：４−クロロ−５−（４−フルオロフェニル）−１−メチル−３−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物４）
【０２５５】
【化１１６】
0005902293.tif 000135
【０２５６】
ステップ２から出発し、３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンの代わりに１−メチル−３−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンを使用し、ステップ４におけるフェニルアセチレンの代わりに４−フルオロフェニルアセチレンを使用して、実施例１（化合物３７）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物４を合成した。
【０２５７】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １１．１５分；ｍ／ｚ  ３３９［Ｍ＋Ｈ］９７．８６％純度。
【０２５８】
実施例１０：４−クロロ−５−（４−メトキシフェニル）−１−メチル−３−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物８）
【０２５９】
【化１１７】
0005902293.tif 000136
【０２６０】
ステップ２から出発し、３−（４−フルオロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンの代わりに１−メチル−３−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンを使用して、実施例６（化合物３３）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物８を合成した。
【０２６１】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿ギ酸＿ＡＳＣＥＮＴＩＳ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １０．６１分；ｍ／ｚ  ３５１［Ｍ＋Ｈ］９８．０７％純度。
【０２６２】
実施例１１：４−クロロ−３−（４−フルオロフェニル）−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物１４）
【０２６３】
【化１１８】
0005902293.tif 000137
【０２６４】
ステップ２から出発し、３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンの代わりに３−（４−フルオロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンを使用して、実施例１（化合物３７）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物１４を合成した。
【０２６５】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＩ＿Ｂｉｃａｒｂ）Ｒｔ  ３．８８分；ｍ／ｚ  ３３９［Ｍ＋Ｈ］９８．１７％純度。
【０２６６】
実施例１２：４−クロロ−５−（３−フルオロフェニル）−１−メチル−３−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物１０）
【０２６７】
【化１１９】
0005902293.tif 000138
【０２６８】
ステップ２から出発し、３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンの代わりに１−メチル−３−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンを使用し、ステップ４におけるフェニルアセチレンの代わりに３−フルオロフェニルアセチレンを使用して、実施例１（化合物３７）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物１０を合成した。
【０２６９】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ４．１８分；ｍ／ｚ  ３３９［Ｍ＋Ｈ］９６．５％純度。
【０２７０】
実施例１３：４−クロロ−１−メチル−３−フェニル−５−ｐ−トリル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物１１）
【０２７１】
【化１２０】
0005902293.tif 000139
【０２７２】
ステップ２から出発し、３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンの代わりに１−メチル−３−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンを使用し、ステップ４におけるフェニルアセチレンの代わりに４−トリルアセチレンを使用して、実施例１（化合物３７）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物１１を合成した。
【０２７３】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＩ＿Ｂｉｃａｒｂ）Ｒｔ  ４．０７分；ｍ／ｚ  ３３５［Ｍ＋Ｈ］９８．５４％純度。
【０２７４】
実施例１４：４−クロロ−１−メチル−３−フェニル−５−ｍ−トリル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物１６）
【０２７５】
【化１２１】
0005902293.tif 000140
【０２７６】
ステップ２から出発し、３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンの代わりに１−メチル−３−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンを使用し、ステップ４におけるフェニルアセチレンの代わりに３−トリルアセチレンを使用して、実施例１（化合物３７）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物１６を合成した。
【０２７７】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＩ＿Ｂｉｃａｒｂ）Ｒｔ  ４．０７分；ｍ／ｚ  ３３５［Ｍ＋Ｈ］９８．３６％純度。
【０２７８】
実施例１５：４−クロロ−１−メチル−３−フェニル−５−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物２９）
【０２７９】
【化１２２】
0005902293.tif 000141
【０２８０】
ステップ２から出発し、３−（２−クロロフェニル）−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンの代わりに１−メチル−３−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンを使用し、ステップ４におけるフェニルアセチレンの代わりに３−（トリフルオロメチル）−フェニルアセチレンを使用して、実施例１（化合物３７）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物２９を合成した。
【０２８１】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿ギ酸＿ＡＳＣＥＮＴＩＳ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １３．１１分；ｍ／ｚ  ３８９［Ｍ＋Ｈ］８６．５８％純度。
【０２８２】
実施例１６：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−Ｎ−メチルアセトアミド（化合物５）
【０２８３】
【化１２３】
0005902293.tif 000142
【０２８４】
２−クロロベンゾイルアセトニトリルおよびエチルヒドラジノアセテート塩酸塩の代わりにベンゾイルアセトニトリルを使用し、ステップ１におけるメチルヒドラジンの代わりに１．５当量のトリエチルアミンを使用して、実施例１（化合物３７）において概要が述べられている類似の手順に従い合成した、２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸から化合物５を合成した。２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（７３ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）中懸濁液に、２−ヒドロキシピリジン−Ｎ−オキシド（ＨＯＰＯ）（２２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、メチルアミン塩酸塩（１４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＡＣ）（５０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（９０μｌ、０．２ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（０．５ｍＬ）を加えた。この反応混合物を室温で９０分間撹拌し、次いで真空中で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣで精製して、化合物５をオフホワイト色の固体（６ｍｇ）として得た。
【０２８５】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １０．０２分；ｍ／ｚ  ３７８［Ｍ＋Ｈ］
９４．６１％純度。
【０２８６】
実施例１７：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（４−メチルピペラジン−１−イル）エタノン（化合物１）
【０２８７】
【化１２４】
0005902293.tif 000143
【０２８８】
最終ステップにおけるメチルアミン塩酸塩の代わりにＮ−メチルピペラジンを使用して、実施例１６（化合物５）において概要が述べられている類似の手順に従い、２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸から化合物１を合成した。最終ステップにおける残渣を分取ＨＰＬＣで精製し、続いてカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から５％トリエチルアミン／アセトン）で精製して、化合物１をオフホワイト色の固体（６ｍｇ）として得た。
【０２８９】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １０．１２分；ｍ／ｚ  ４４７［Ｍ＋Ｈ］９６．８％純度。
【０２９０】
実施例１８：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）アセトアミド（化合物２）
【０２９１】
【化１２５】
0005902293.tif 000144
【０２９２】
最終ステップにおけるＮ−メチルピペラジンの代わりにＮ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミンを使用して、実施例１７（化合物１）において概要が述べられている類似の手順に従い、２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸から化合物２を合成した。
【０２９３】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿ギ酸＿ＡＳＣＥＮＴＩＳ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  ７．６８分；ｍ／ｚ  ４３５［Ｍ＋Ｈ］９５．５１％純度。
【０２９４】
実施例１９：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（４−イソプロピルピペラジン−１−イル）エタノン（化合物３８）
【０２９５】
【化１２６】
0005902293.tif 000145
【０２９６】
最終ステップにおけるＮ−メチルピペラジンの代わりにＮ−イソプロピルピペラジンを使用して、実施例１７（化合物１）において概要が述べられている類似の手順に従い、２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸から化合物３８を合成した。
【０２９７】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿ギ酸＿ＡＳＣＥＮＴＩＳ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １２．５４分；ｍ／ｚ  ４７５［Ｍ＋Ｈ］９５．８２％純度。
【０２９８】
実施例２０：４−（４−クロロ−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−３−イル）−Ｎ−メチルベンズアミド（化合物２５）
【０２９９】
【化１２７】
0005902293.tif 000146
【０３００】
ステップ１における２−クロロベンゾイルアセトニトリルの代わりにメチル４−（シアノアセチル）安息香酸塩を使用して、実施例１（化合物３７）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物２５を合成した。実施例１６（化合物５）において概要が述べられている類似の手順に従い、ステップ５で得た４−（５−アミノ−１−メチル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）安息香酸を４−（５−アミノ−１−メチル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−Ｎ−メチルベンズアミドに変換した。実施例５のステップ５において概要が述べられている類似の手順に従い、４−（５−アミノ−１−メチル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−Ｎ−メチルベンズアミドを化合物２５に変換した。
【０３０１】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ３．１分；ｍ／ｚ  ３７８［Ｍ＋Ｈ］９９．８９％純度。
【０３０２】
実施例２１：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−Ｎ−（３−（７−ニトロベンゾ［ｃ］［１，２，５］オキサジアゾール−４−イルアミノ）プロピル）アセトアミド（化合物６）
【０３０３】
【化１２８】
0005902293.tif 000147
【０３０４】
最終ステップにおけるメチルアミン塩酸塩の代わりにＮ１−（７−ニトロベンゾ［ｃ］［１，２，５］オキサジアゾール−４−イル）プロパン−１，３−ジアミンを使用して、実施例１６（化合物５）において概要が述べられている類似の手順に従い、２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸から化合物６を合成した。
【０３０５】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＩ＿Ｂｉｃａｒｂ）Ｒｔ  ３．５９分；ｍ／ｚ  ５８４［Ｍ＋Ｈ］９７．７４％純度。
【０３０６】
実施例２２：４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物９）
【０３０７】
【化１２９】
0005902293.tif 000148
【０３０８】
ステップ１：（３，５−ジクロロ−６−フェニルピリダジン−４−イル）（フェニル）メタノール
【０３０９】
【化１３０】
0005902293.tif 000149
【０３１０】
ＬＤＡ（ＴＨＦ中２Ｍ、２．４ｍＬ、４．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８ｍＬ）中溶液に、−７８℃で、３−フェニル−４，６−ジクロロピリダジン（７００ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍＬ）中溶液を滴加した。−７８℃で３０分後、ベンズアルデヒド（４００ｍｇ、３．７５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温まで終夜温めておいた。この反応混合物を酢酸エチルおよび水の間に分配した。水相を酢酸エチルで抽出し、有機相を合わせ、水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配１０から２０％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製して、３，５−ジクロロ−６−フェニルピリダジン−４−イル）（フェニル）メタノールを黄色の固体（２００ｍｇ）として得た。
ステップ２：（３，５−ジクロロ−６−フェニルピリダジン−４−イル）（フェニル）メタノン
【０３１１】
【化１３１】
0005902293.tif 000150
【０３１２】
（３，５−ジクロロ−６−フェニルピリダジン−４−イル）（フェニル）メタノール（２００ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、二酸化マンガン（７００ｍｇ、８ｍｍｏｌ）の乾燥トルエン（２０ｍＬ）中混合物を、Ｄｅａｎ  Ｓｔａｒｋ条件下１１５℃で３時間加熱した。この反応混合物を冷却し、濾過し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した。濾液を真空中で濃縮した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配１０から２０％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製して、（３，５−ジクロロ−６−フェニルピリダジン−４−イル）（フェニル）メタノンを固体（１５０ｍｇ）として得た。
ステップ３：４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物９）
【０３１３】
【化１３２】
0005902293.tif 000151
【０３１４】
（３，５−ジクロロ−６−フェニルピリダジン−４−イル）（フェニル）メタノン（１５０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）およびヒドラジン水和物（２７ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）のエタノール（０．５ｍＬ）中混合物を封管内で、４０℃で１時間撹拌した。この反応混合物を冷却し、濾過し、残渣をジエチルエーテルで洗浄した。濾液を真空中で濃縮した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から２０％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製して、化合物９を白色の固体（１２ｍｇ）として得た。
【０３１５】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ４．１６分；ｍ／ｚ  ３０７［Ｍ＋Ｈ］９５．８％純度。
【０３１６】
実施例２３：
４−クロロ−３−（４−ヨードフェニル）−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物４３）
【０３１７】
【化１３３】
0005902293.tif 000152
【０３１８】
ステップ１におけるベンズアルデヒドの代わりに４−ヨードベンズアルデヒドを使用し、ステップ３におけるヒドラジン水和物の代わりにメチルヒドラジンを使用して、実施例２２（化合物９）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物４３を合成した。わずかに修正した手順として、封管内でステップ３を６０℃で４時間実施した。その後に、この混合物を冷却し、濾過し、残渣を冷たいエタノールで洗浄した。濾過した残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配５から１０％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製して、化合物４３をオフホワイト色の固体として得た。
【０３１９】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １２．６３分；ｍ／ｚ  ４４７［Ｍ＋Ｈ］
９７．４％純度。
【０３２０】
実施例２４：４−クロロ−１−メチル−５−フェニル−３−ｍ−トリル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物１９）
【０３２１】
【化１３４】
0005902293.tif 000153
【０３２２】
ステップ１におけるベンズアルデヒドの代わりに３−メチルベンズアルデヒドを使用し、ステップ３におけるヒドラジン水和物の代わりにメチルヒドラジンを使用して、実施例２２（化合物９）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物１９を合成した。わずかに修正した手順として、封管内でステップ３を６０℃で１６時間実施した。その後に、この反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２および水の間に分配した。相分離カートリッジを使用して有機相を分離し、真空中で濃縮した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配５から２０％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製して、化合物１９を固体として得た。
【０３２３】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １１．４７分；ｍ／ｚ  ３３５［Ｍ＋Ｈ］９７．１８％純度。
【０３２４】
実施例２５：４−クロロ−１−メチル−５−フェニル−３−ｏ−トリル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物２０）
【０３２５】
【化１３５】
0005902293.tif 000154
【０３２６】
ステップ１におけるベンズアルデヒドの代わりに２−メチルベンズアルデヒドを使用し、ステップ３におけるヒドラジン水和物の代わりにメチルヒドラジンを使用して、実施例２２（化合物９）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物２０を合成した。
【０３２７】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ４．２分；ｍ／ｚ  ３３５［Ｍ＋Ｈ］９８．４８％純度。
【０３２８】
実施例２６：４−クロロ−１−メチル−５−フェニル−３−ｐ−トリル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物２１）
【０３２９】
【化１３６】
0005902293.tif 000155
【０３３０】
ステップ１における３−メチルベンズアルデヒドの代わりに４−メチルベンズアルデヒドを使用して、実施例２４（化合物１９）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物２１を合成した。わずかに修正した手順として、封管内でステップ３を７０℃で１６時間実施した。
【０３３１】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １１．４４分；ｍ／ｚ  ３３５［Ｍ＋Ｈ］９７．１３％純度。
【０３３２】
実施例２７：４−クロロ−３−（２−フルオロフェニル）−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物２２）
【０３３３】
【化１３７】
0005902293.tif 000156
【０３３４】
ステップ１における３−メチルベンズアルデヒドの代わりに２−フルオロベンズアルデヒドを使用して、実施例２４（化合物１９）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物２２を合成した。
【０３３５】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ４．０４分；ｍ／ｚ  ３３９［Ｍ＋Ｈ］９６．３６％純度。
【０３３６】
実施例２８：４−クロロ−３−（３−フルオロフェニル）−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物３２）
【０３３７】
【化１３８】
0005902293.tif 000157
【０３３８】
ステップ１における３−メチルベンズアルデヒドの代わりに３−フルオロベンズアルデヒドを使用して、実施例２４（化合物１９）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物３２を合成した。
【０３３９】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿ギ酸＿ＡＳＣＥＮＴＩＳ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １２．７９分；ｍ／ｚ  ３３９［Ｍ＋Ｈ］９８．５８％純度。
【０３４０】
実施例２９：４−クロロ−１−メチル−５−フェニル−３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物２３）
【０３４１】
【化１３９】
0005902293.tif 000158
【０３４２】
ステップ１における３−メチルベンズアルデヒドの代わりに４−トリフルオロメチルベンズアルデヒドを使用して、実施例２４（化合物１９）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物２３を合成した。わずかに修正した手順として、ステップ２において、この反応混合物を濾過し、濾液の蒸発に続いて、ジエチルエーテル中で固体残渣を粉砕することによって、（３，５−ジクロロ−６−フェニルピリダジン−４−イル）（４−（トリフルオロメチル）フェニル）メタノンの精製を行った。
【０３４３】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ）Ｒｔ  ４．６８分；ｍ／ｚ  ３８９［Ｍ＋Ｈ］９８．９６％純度。
【０３４４】
実施例３０：４−クロロ−３−（３−ヨードフェニル）−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物３）
【０３４５】
【化１４０】
0005902293.tif 000159
【０３４６】
ステップ１における２−メチルベンズアルデヒドの代わりに３−ヨードベンズアルデヒドを使用して、実施例２５（化合物２０）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物３を合成した。わずかに修正した手順として、ステップ３の粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配８０から１００％ＣＨ２Ｃｌ２／イソヘキサンから２％ジエチルエーテル／ＣＨ２Ｃｌ２）で精製して、化合物３を固体として得た。
【０３４７】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ５．０３分；ｍ／ｚ  ４４７［Ｍ＋Ｈ］９９．１３％純度。
【０３４８】
実施例３１：４−クロロ−１−エチル−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物１８）
【０３４９】
【化１４１】
0005902293.tif 000160
【０３５０】
ステップ３におけるヒドラジン水和物の代わりにエチルヒドラジンを使用して、実施例２２（化合物９）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物１８を合成した。わずかに修正した手順として、封管内でステップ３を９０℃で１６時間実施した。その後に、この反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２および水の間に分配した。相分離カートリッジを使用して有機相を分離し、真空中で濃縮した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製し、化合物１８を固体として得た。
【０３５１】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １１．５２分；ｍ／ｚ  ３３５［Ｍ＋Ｈ］９４．７％純度。
【０３５２】
実施例３２：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エタノール（化合物７）
【０３５３】
【化１４２】
0005902293.tif 000161
【０３５４】
ステップ３におけるエチルヒドラジンの代わりに２−ヒドロキシエチルヒドラジンを使用して、実施例３１（化合物１８）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物７を合成した。わずかに修正した手順として、電子レンジでステップ３を９０℃で３０分間実施した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配１０から５０％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製して、化合物７を固体として得た。
【０３５５】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １０．２９分；ｍ／ｚ  ３５１［Ｍ＋Ｈ］９５．５９％純度。
【０３５６】
実施例３３：１−ベンジル−４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物３１）
【０３５７】
【化１４３】
0005902293.tif 000162
【０３５８】
ステップ３におけるエチルヒドラジンの代わりにベンジルヒドラジンジヒドロクロリドを使用して、実施例３１（化合物１８）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物３１を合成した。わずかに修正した手順としてステップ３を５０℃で１６時間実施した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配５から１０％酢酸エチル／イソヘキサン）、続いて分取ＨＰＬＣで精製し、化合物３１を固体として得た。
【０３５９】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿ギ酸＿ＡＳＣＥＮＴＩＳ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １１．０４分；ｍ／ｚ  ３９７［Ｍ＋Ｈ］９８．７１％純度。
【０３６０】
実施例３４：４−（２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エチル）モルホリン（化合物２８）
【０３６１】
【化１４４】
0005902293.tif 000163
【０３６２】
ステップ３におけるエチルヒドラジンの代わりに４−（２−ヒドラジニルエチル）モルホリンを使用して、実施例３１（化合物１８）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物２８を合成した。わずかに修正した手順としてステップ３を６０℃で１６時間実施した。この反応混合物を真空中で濃縮し、粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配５０から１００％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製し、続いて分取ＨＰＬＣで精製し、化合物２８を固体として得た。
【０３６３】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ２．８５分；ｍ／ｚ  ４２０［Ｍ＋Ｈ］９７．４１％純度。
【０３６４】
実施例３５：４−（４−クロロ−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−３−イル）ベンゾニトリル（化合物２４）
【０３６５】
【化１４５】
0005902293.tif 000164
【０３６６】
電子レンジで、４−クロロ−３−（４−ヨードフェニル）−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物４３、実施例２３）（７０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）、Ｚｎ（ＣＮ）２（１８ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（１８ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中脱気混合物を１００℃で４０分間加熱した。この反応混合物を酢酸エチルおよび水の間に分配した。有機相を水およびブラインで洗浄し、相分離カートリッジを使用して乾燥し、真空中で濃縮した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１０から２０％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製して、化合物２４を固体（３０ｍｇ）として得た。
【０３６７】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ  ＥＳＣＩ  ギ酸）Ｒｔ  ４．４分；ｍ／ｚ  ３４６［Ｍ＋Ｈ］９６．２４％純度。
【０３６８】
実施例３６：３−（４−クロロ−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−３−イル）ベンゾニトリル（化合物３４）
【０３６９】
【化１４６】
0005902293.tif 000165
【０３７０】
出発物質として、４−クロロ−３−（４−ヨードフェニル）−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物４３、実施例２３）の代わりに、４−クロロ−３−（３−ヨードフェニル）−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物３、実施例３０）を使用して、実施例３５（化合物２４）において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物３４を合成した。
【０３７１】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ４．３６分；ｍ／ｚ  ３４６［Ｍ＋Ｈ］９９．１３％純度。
【０３７２】
実施例３７：３−（３−（４−クロロ−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−３−イル）フェニル）プロパ−２−イン−１−オール（化合物３０）
【０３７３】
【化１４７】
0005902293.tif 000166
【０３７４】
封管内で、４−クロロ−３−（３−ヨードフェニル）−１−メチル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物７、実施例３２）（８０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、プロパルギルアルコール（４１ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（８７μｌ、０．６３ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（３．５ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（５ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（２０ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１．５ｍＬ）中混合物を１００℃で４時間加熱した。この反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２および水の間に分配した。有機相を分離し、相分離カートリッジを使用して乾燥し、次いで真空中で濃縮した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２０から３０％の酢酸エチル／イソヘキサン）で精製して、化合物３０を固体（２６ｍｇ）として得た。
【０３７５】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿ギ酸＿ＡＳＣＥＮＴＩＳ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  ９．６７分；ｍ／ｚ  ３７５［Ｍ＋Ｈ］８６．０９％純度。
【０３７６】
実施例３８：Ｎ−（３−（２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）アセトアミド）プロピル）−５−（（４Ｓ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド（化合物４４）
【０３７７】
【化１４８】
0005902293.tif 000167
【０３７８】
Ｎ−（３−アミノプロピル）−５−（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）−２−オキソヘキサヒドロ−１Ｈ−チエノ［３，４−ｄ］イミダゾール−４−イル）ペンタンアミド（Ｎ−（３−アミノプロピル）ビオチンアミドトリフルオロアセテートとしても公知、Ｓｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈまたはＪ＆Ｋ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌｔｄから市販）（０．２２ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１．１ｍＬ）中溶液に、ＤＩＰＥＡ（５７μＬ、０．３３ｍｍｏｌ）、２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（８０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、Ｓｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈまたはＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍから市販）（１２５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を逐次的に加えた。この反応混合物を室温で２時間撹拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、水性ＮａＨＣＯ３および４％水性ＬｉＣｌで洗浄した。次いで有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、真空下で蒸発させた。残渣を分取ＨＰＬＣで精製して、化合物４４をベージュ色の固体（３４ｍｇ）として得た。
【０３７９】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  ９．２６分；ｍ／ｚ  ６４７［Ｍ＋Ｈ］９０．１５％純度。
【０３８０】
実施例３９：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（ピロリジン−１−イル）エタノン（化合物４５）
【０３８１】
【化１４９】
0005902293.tif 000168
【０３８２】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（５１０ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（９ｍＬ）中懸濁液に、ピロリジン（１７４μＬ、２．１ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（３６６μＬ、２．１ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（７９８ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で９０分間撹拌し、次いでＣＨ２Ｃｌ２で希釈した。有機相を水性ＮａＨＣＯ３で洗浄し、相分離器に通し、真空中で濃縮した。生成した残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から７０％酢酸エチル／イソヘキサン）を使用して精製し、続いて第２のクロマトグラフィー精製（シリカゲル、勾配０から２５％ジクロロメタン／エーテル）を行い、化合物４５を固体（１６５ｍｇ）として得た。
【０３８３】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ４．２７分；ｍ／ｚ  ４１８［Ｍ＋Ｈ］９９．９２％純度。
【０３８４】
実施例４０：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（化合物４７）
【０３８５】
【化１５０】
0005902293.tif 000169
【０３８６】
２−（５−アミノ−３−フェニル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）酢酸ナトリウム（２ｇ、６．０ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（１０ｍＬ）および濃縮ＨＣｌ（５０ｍＬ）中懸濁液を−１５℃で冷却してから、水（５ｍＬ）中亜硝酸ナトリウム（０．６２ｇ、８．０ｍｍｏｌ）を滴加した。この溶液を室温まで温めておき、さらに１８時間撹拌したまま放置した。ｐＨが塩基になるまでこの反応混合物を、Ｎａ２ＣＯ３水溶液を用いて、１０℃で慎重にクエンチし、次いでＥｔＯＡｃで抽出し、水、次いでブラインで逆洗し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配２から１０％ジエチルエーテル／ＣＨ２Ｃｌ２）を使用して生成した残渣を精製し、化合物４７を黄色の発泡体（５８０ｍｇ）として得た。
【０３８７】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ３．７３分；ｍ／ｚ  ３６５［Ｍ＋Ｈ］９４．８２％純度。
【０３８８】
実施例４１：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−モルホリノエタノン（化合物４８）
【０３８９】
【化１５１】
0005902293.tif 000170
【０３９０】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（６０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中懸濁液に、モルホリン（１７ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ．ＨＣｌ）（３８ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で１８時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル）を使用して生成した残渣を精製して、化合物４８を固体（２０ｍｇ）として得た。
【０３９１】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ３．６７分；ｍ／ｚ  ４３４［Ｍ＋Ｈ］９５．１７％純度。
【０３９２】
実施例４２：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−Ｎ−（シアノメチル）−Ｎ−メチルアセトアミド（化合物４９）
【０３９３】
【化１５２】
0005902293.tif 000171
【０３９４】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（６０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中懸濁液に、Ｎ−メチルアミノアセトニトリル（１４ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）および１，１’−カルボニルジイミダゾール塩酸塩（ＣＤＩ．ＨＣｌ）（３８ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で２時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配１／１酢酸エチル／イソヘキサン）を使用して生成した残渣を精製して、化合物４９を固体（３０ｍｇ）として得た。
【０３９５】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ４．１７分；ｍ／ｚ  ４１７［Ｍ＋Ｈ］９４．８２％純度。
【０３９６】
実施例４３：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−Ｎ−（２−モルホリノエチル）アセトアミド（化合物５０）
【０３９７】
【化１５３】
0005902293.tif 000172
【０３９８】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（６０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中懸濁液に、４−（２−アミノエチル）モルホリン（３２ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ．ＨＣｌ）（３８ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で１８時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配１０％ＭｅＯＨ／酢酸エチル）を使用して生成した残渣を精製して、化合物５０を固体（１０ｍｇ）として得た。
【０３９９】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ３．６４分；ｍ／ｚ  ４７７［Ｍ＋Ｈ］９５．２８％純度。
【０４００】
実施例４４：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−Ｎ−メチル−Ｎ−（１−メチルピペリジン−４−イル）アセトアミド（化合物５１）
【０４０１】
【化１５４】
0005902293.tif 000173
【０４０２】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（６０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中懸濁液に、１−メチル−４−（メチルアミノ）ピペリジン（２３ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（６３μＬ、０．３６ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（７５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で１時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配１０−２０％ＭｅＯＨ／酢酸エチル中１％Ｅｔ３Ｎ）を使用して、生成した残渣を精製して、化合物５１を固体（２ｍｇ）として得た。
【０４０３】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿ギ酸＿ＡＳＣＥＮＴＩＳ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  ７．７９分；ｍ／ｚ  ４７５［Ｍ＋Ｈ］９４．５３％純度。
【０４０４】
実施例４５：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（４−（メチルスルホニル）ピペラジン−１−イル）エタノン（化合物５２）
【０４０５】
【化１５５】
0005902293.tif 000174
【０４０６】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（５６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中懸濁液に、１−（メチルスルホニル）ピペラジン（２８ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（５９μＬ、０．３４ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（７０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で１８時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配２０−４０％酢酸エチル／イソヘキサン）を使用して、生成した残渣を精製し、続いて第２のクロマトグラフィー精製（シリカゲル、勾配１０％エーテル／ＣＨ２Ｃｌ２）を行い、化合物５２を固体（１１ｍｇ）として得た。
【０４０７】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １０．３５分；ｍ／ｚ  ５１１［Ｍ＋Ｈ］９２．４７％純度。
【０４０８】
実施例４６：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）−Ｎ−メチルアセトアミド（化合物５３）
【０４０９】
【化１５６】
0005902293.tif 000175
【０４１０】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（５６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）中懸濁液に、Ｎ１，Ｎ１，Ｎ２−トリメチルエタン−１，２−ジアミン（１７ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（５９μＬ、０．３４ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（７０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で１８時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。生成した残渣を分取ＨＰＬＣで精製し、化合物５３を固体（１１ｍｇ）として得た。
【０４１１】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ）Ｒｔ  ３．３５分；ｍｚ  ４４９［Ｍ＋Ｈ］９５．５６％純度。
【０４１２】
実施例４７：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１，１−ジオキシド−４−チオモルホリノエタノン（化合物５４）
【０４１３】
【化１５７】
0005902293.tif 000176
【０４１４】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中懸濁液に、チオモルホリン１，１−ジオキシド（４０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１０５μＬ、０．６０ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（１２５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で１８時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。生成した残渣を分取ＨＰＬＣで精製し、続いて第２のクロマトグラフィー精製（シリカゲル、勾配１／１酢酸エチル／イソヘキサン）を行い、化合物５４を固体（３３ｍｇ）として得た。
【０４１５】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ギ酸＿ＡＣＥ  ３  Ｃ１８  ＡＲ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １１．５４分；ｍ／ｚ  ４８２［Ｍ＋Ｈ］９０．６１％純度。
【０４１６】
実施例４８：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（４−ヒドロキシピペリジン−１−イル）エタノン（化合物５５）
【０４１７】
【化１５８】
0005902293.tif 000177
【０４１８】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中懸濁液に、ピペリジン−４−オール（３０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１０５μＬ、０．６０ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（１２５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で１８時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。生成した残渣を分取ＨＰＬＣで精製し、続いて第２のクロマトグラフィー精製（シリカゲル、勾配１／１酢酸エチル／イソヘキサン）を行い、化合物５５を固体（１０ｍｇ）として得た。
【０４１９】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  ９．８３分；ｍ／ｚ  ４４８［Ｍ＋Ｈ］９５．９６％純度。
【０４２０】
実施例４９：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（４−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピペラジン−１−イル）エタノン（化合物５６）
【０４２１】
【化１５９】
0005902293.tif 000178
【０４２２】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中懸濁液に、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピペラジン（５０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１０５μＬ、０．６０ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（１２５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で１８時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。生成した残渣を分取ＨＰＬＣで精製し、化合物５６を固体（４１ｍｇ）として得た。
【０４２３】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １０．９３分；ｍ／ｚ  ５１５［Ｍ＋Ｈ］９３．６２％純度。
【０４２４】
実施例５０：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−Ｎ−（ピリジン−３−イルメチル）アセトアミド（化合物５７）
【０４２５】
【化１６０】
0005902293.tif 000179
【０４２６】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中懸濁液に、ピリジン−３−イルメタンアミン（３３ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１０５μＬ、０．６０ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（１２５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で１８時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。生成した残渣を分取ＨＰＬＣで精製し、化合物５７を固体（３７ｍｇ）として得た。
【０４２７】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ３．２４分；ｍ／ｚ  ４５５［Ｍ＋Ｈ］９９．５０％純度。
【０４２８】
実施例５１：１−（２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）アセトイル）ピペリジン−３−カルボニトリル（化合物５８）
【０４２９】
【化１６１】
0005902293.tif 000180
【０４３０】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中懸濁液に、ピペリジン−３−カルボニトリル（３３ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１０５μＬ、０．６０ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（１２５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で１８時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。生成した残渣を分取ＨＰＬＣで精製し、続いて第２のクロマトグラフィー精製（シリカゲル、勾配１／１酢酸エチル／イソヘキサン）を行い、化合物５８を固体（２８ｍｇ）として得た。
【０４３１】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ギ酸＿ＡＣＥ  ３  Ｃ１８  ＡＲ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １２．０４分；ｍ／ｚ  ４５７［Ｍ＋Ｈ］９７．９３％純度。
【０４３２】
実施例５２：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（４−（ジメチルアミノ）ピペリジン−１−イル）エタノン（化合物５９）
【０４３３】
【化１６２】
0005902293.tif 000181
【０４３４】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中懸濁液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルピペリジン−４−アミン（４０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１０５μＬ、０．６０ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（１２５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で１８時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。生成した残渣を分取ＨＰＬＣで精製し、化合物５９を固体（１０ｍｇ）として得た。
【０４３５】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿ギ酸＿ＡＳＣＥＮＴＩＳ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  ７．９９分；ｍ／ｚ  ４７５［Ｍ＋Ｈ］９１．１４％純度。
【０４３６】
実施例５３：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−Ｎ−（１−メチルピペリジン−４−イル）アセトアミド（化合物６０）
【０４３７】
【化１６３】
0005902293.tif 000182
【０４３８】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中懸濁液に、１−メチルピペリジン−４−アミン（３５ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１０５μＬ、０．６０ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（１２５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で１８時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。生成した残渣を分取ＨＰＬＣで精製し、化合物６０を固体（２２ｍｇ）として得た。
【０４３９】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿ギ酸＿ＡＳＣＥＮＴＩＳ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  ７．９０分；ｍ／ｚ  ４６１［Ｍ＋Ｈ］９４．７７％純度。
【０４４０】
実施例５４：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−Ｎ−（１−メチルシクロブチル）アセトアミド（化合物６１）
【０４４１】
【化１６４】
0005902293.tif 000183
【０４４２】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中懸濁液に、１−メチル−シクロブチルアミン塩酸塩（３７ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１５０μＬ、０．６０ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（１２５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で２時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。クロマトグラフィー精製（シリカゲル、勾配１０−２０％酢酸エチル／イソヘキサン）で、生成した残渣を精製し、化合物６１を固体（２２ｍｇ）として得た。
【０４４３】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １０．９６分；ｍ／ｚ  ４３２［Ｍ＋Ｈ］９６．７３％純度。
【０４４４】
実施例５５：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（３，３−ジフルオロピロリジン−１−イル−）エタノン（化合物６２）
【０４４５】
【化１６５】
0005902293.tif 000184
【０４４６】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中懸濁液に、３，３−ジフルオロピロリジン塩酸塩（４３ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１５０μＬ、０．６０ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（１２５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で２時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。生成した残渣をクロマトグラフィー精製（シリカゲル、勾配１０−２０％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製し、化合物６２を固体（１８ｍｇ）として得た。
【０４４７】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  １０．７２分；ｍ／ｚ  ４５４［Ｍ＋Ｈ］９３．０８％純度。
【０４４８】
実施例５６：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（（１Ｒ，４Ｒ）−５−メチル−２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル）エタノン（化合物６３）
【０４４９】
【化１６６】
0005902293.tif 000185
【０４５０】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中懸濁液に、（１Ｒ，４Ｒ）−２−メチル−２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（２６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１０５μＬ、０．６０ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（１２５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で１８時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃで希釈した。有機相を水およびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、真空中で濃縮した。生成した残渣を分取ＨＰＬＣで精製し、化合物６３を固体（１１ｍｇ）として得た。
【０４５１】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿ギ酸＿ＡＳＣＥＮＴＩＳ＿ＨＰＬＣ）Ｒｔ  ７．８２分；ｍ／ｚ  ４５９［Ｍ＋Ｈ］９４．３９％純度。
【０４５２】
実施例５７：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）アセトアミド（化合物６４）
【０４５３】
【化１６７】
0005902293.tif 000186
【０４５４】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１６０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（６ｍＬ）中溶液に、塩化オキサリル（５５μｌ、０．６６ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で１時間撹拌した。この反応混合物を真空中で濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（６ｍＬ）中に溶解し、アンモニアのメタノール中溶液（７Ｎ）を滴加した（１２５μｌ、０．８ｍｍｏｌ）。この反応混合物を１時間撹拌し、次いで真空中で濃縮した。生成した残渣を分取ＨＰＬＣで精製して、化合物６４を固体（３２ｍｇ）として得た。
【０４５５】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  ３．６２分；ｍ／ｚ  ３６４［Ｍ＋Ｈ］９９．１％純度。
【０４５６】
実施例５８：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（４−メチル−１，４−ジアゼパン−１−イル）エタノン（化合物６５）
【０４５７】
【化１６８】
0005902293.tif 000187
【０４５８】
ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１２０μＬ、０．６７ｍｍｏｌ）および１−メチル−１，４−ジアゼパン（３４ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）中溶液を、２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）（６０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）および２−ヒドロキシピリジン−Ｎ−オキシド（ＨＯＰＯ）（３０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。得た溶液を室温で１８時間撹拌した。クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から５％トリエチルアミン／アセトン）を使用し、続いて分取ＨＰＬＣを使用してこの反応物を精製し、化合物６５を白色の固体（２５ｍｇ）として得た。
【０４５９】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ２．７３分；ｍ／ｚ  ４６１［Ｍ＋Ｈ］９９．８６％純度。
【０４６０】
実施例５９：１−（４−アセトイルピペラジン−１−イル）−２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エタノン（化合物６６）
【０４６１】
【化１６９】
0005902293.tif 000188
【０４６２】
ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１２０μＬ、０．６７ｍｍｏｌ）および１−アセチルピペラジン（３８ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）中溶液を、２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）（６０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）および２−ヒドロキシピリジン−Ｎ−オキシド（ＨＯＰＯ）（３０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。得た溶液を室温で１８時間撹拌し、次いで１−アセチルピペラジン（１０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）およびＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）（３０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を加えた。さらに３．５時間後、クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から５％トリエチルアミン／アセトン）を使用し、続いて分取ＨＰＬＣを使用してこの反応物を精製し、化合物６６を白色の固体（３２．２ｍｇ）として得た。
【０４６３】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ３．６７分；ｍ／ｚ  ４７５［Ｍ＋Ｈ］９９．５８％純度。
【０４６４】
実施例６０：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（３−（ジメチルアミノ）ピロリジン−１−イル）エタノン（化合物６７）
【０４６５】
【化１７０】
0005902293.tif 000189
【０４６６】
ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（１２０μＬ、０．６７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルピロリジン（３４ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）中溶液を、２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）（６０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）および２−ヒドロキシピリジン−Ｎ−オキシド（ＨＯＰＯ）（３０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。得た溶液を室温で１８時間撹拌し、次いでＮ，Ｎ−ジメチルピロリジン（１０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）およびＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）（３０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を加えた。さらに３．５時間後、クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から５％トリエチルアミン／アセトン）を使用し、続いて分取ＨＰＬＣを使用してこの反応物を精製し、化合物６７を白色の固体（２７．３ｍｇ）として得た。
【０４６７】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ２．７３分；ｍ／ｚ  ４６１［Ｍ＋Ｈ］９９．５４％純度。
【０４６８】
実施例６１：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−Ｎ−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）アセトアミド（化合物６８）
【０４６９】
【化１７１】
0005902293.tif 000190
【０４７０】
１−メチル１，４−ジアゼパンの代わりに３−ジメチルアミノプロピルアミンを使用して、実施例５８において概要が述べられている類似の手順に従い、実施例６１を合成した。化合物６８を無色の固体（１６ｍｇ）として得た。
【０４７１】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ２．６８分；ｍ／ｚ  ４４９［Ｍ＋Ｈ］９７．９％純度。
【０４７２】
実施例６２：４−（２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）アセトイル）ピペラジン−２−オン（化合物６９）
【０４７３】
【化１７２】
0005902293.tif 000191
【０４７４】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１１１ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）中懸濁液に、２−オキソピペラジン（３３ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（８０μＬ、０．４５ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（１３０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で２時間撹拌し、次いでＣＨ２Ｃｌ２で希釈した。有機相を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配２０から１００％酢酸エチル／イソヘキサン、次いで０から１００％酢酸エチル／アセトン）を使用し、続いて分取ＨＰＬＣを使用して、生成した残渣を精製し、化合物６９を茶色の固体（６９．７ｍｇ）として得た。
【０４７５】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ）Ｒｔ  ３．５２分；ｍ／ｚ  ４４７［Ｍ＋Ｈ］９８．１７％純度。
【０４７６】
実施例６３：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（３−ヒドロキシピロリジン−１−イル）エタノン（化合物７０）
【０４７７】
【化１７３】
0005902293.tif 000192
【０４７８】
２−オキソピペラジンの代わりに３−ヒドロキシピロリジンを使用して、実施例６２において概要が述べられている類似の手順に従い、実施例６３を合成した。化合物７０を白色の固体（４６ｍｇ）として得た。
【０４７９】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  ３．７３分；ｍ／ｚ  ４３４［Ｍ＋Ｈ］９９．７９％純度。
【０４８０】
実施例６４：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アセトアミド（化合物７１）
【０４８１】
【化１７４】
0005902293.tif 000193
【０４８２】
２−オキソピペラジンの代わりにエタノールアミンを使用して、実施例６２において概要が述べられている類似の手順に従い、実施例６４を合成した。化合物７１を白色の固体（１３ｍｇ）として得た。
【０４８３】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  ３．５０分；ｍ／ｚ  ４０８［Ｍ＋Ｈ］９９．７８％純度。
【０４８４】
実施例６５：（Ｓ）−２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）アセトアミド（化合物７２）
【０４８５】
【化１７５】
0005902293.tif 000194
【０４８６】
２−オキソピペラジンの代わりに（Ｓ）−１−アミノ−２−プロパノールを使用して、実施例６２において概要が述べられている類似の手順に従い、実施例６５を合成した。化合物７２を白色の固体（２９ｍｇ）として得た。
【０４８７】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  ３．５８分；ｍ／ｚ  ４２２［Ｍ＋Ｈ］９８．１２％純度。
【０４８８】
実施例６６：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−Ｎ−（２−メトキシエチル）アセトアミド（化合物７３）
【０４８９】
【化１７６】
0005902293.tif 000195
【０４９０】
２−オキソピペラジンの代わりにメトキシエチルアミンを使用して、実施例６２において概要が述べられている類似の手順に従い、実施例６６を合成した。化合物７３を白色の固体（２５．７ｍｇ）として得た。
【０４９１】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  ４．０５分；ｍ／ｚ  ４２２［Ｍ＋Ｈ］９９．６５％純度。
【０４９２】
実施例６７：（Ｒ）−２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）アセトアミド（化合物７４）
【０４９３】
【化１７７】
0005902293.tif 000196
【０４９４】
２−オキソピペラジンの代わりに（Ｒ）−１−アミノ−２−プロパノールを使用して、実施例６２において概要が述べられている類似の手順に従い、実施例６７を合成した。化合物７４を白色の固体（３７ｍｇ）として得た。
【０４９５】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  ３．１４分；ｍ／ｚ  ４２２［Ｍ＋Ｈ］９９．７％純度。
【０４９６】
実施例６８：２−（４−クロロ−３−（４−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−モルホリノエタノン（化合物７５）
【０４９７】
【化１７８】
0005902293.tif 000197
【０４９８】
ステップ１：エチル２−（５−アミノ−３−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテート
【０４９９】
【化１７９】
0005902293.tif 000198
【０５００】
４−フルオロベンゾイルアセトニトリル（５ｇ、３０．７ｍｍｏｌ）およびエチルヒドラジノアセテート塩酸塩（４．７４ｇ、３０．７ｍｍｏｌ）のエタノール（５０ｍＬ）中混合物を２時間加熱還流した。この反応混合物を真空中で濃縮した。粗製の反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２および濃縮アンモニア水の間に分配した。水相をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させることによって、エチル２−（５−アミノ−３−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテートを固体（７．４ｇ）として得た。これを、その後のステップでこのまま使用した。
ステップ２：エチル２−（５−アセトアミド−３−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテート
【０５０１】
【化１８０】
0005902293.tif 000199
【０５０２】
エチル２−（５−アミノ−３−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテート（６．９１ｇ、２６．３ｍｍｏｌ）のピリジン（６２ｍＬ）中溶液に、無水酢酸（３ｍｌ、３１．５ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を室温で１６時間撹拌した。エタノールを加え、この混合物を真空中で濃縮した。粗残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配１０から１００％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製して、エチル２−（５−アセトアミド−３−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテートを固体（７．６ｇ）として得た。
ステップ３：エチル２−（５−アセトアミド−３−（４−フルオロフェニル）−４−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテート
【０５０３】
【化１８１】
0005902293.tif 000200
【０５０４】
エチル２−（５−アセトアミド−３−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテート（１．１ｇ、３．７ｍｍｏｌ）のエタノール（３３ｍＬ）中溶液に、ヨウ素酸（１７０ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）およびヨウ素（４８０ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）を加えた。この反応物を６０℃で９０分間撹拌した。この反応混合物を真空中で濃縮し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２中で溶解し、２Ｎ  Ｎａ２ＳＯ３溶液で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させることによって、エチル２−（５−アセトアミド−３−（４−フルオロフェニル）−４−ヨード−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテートを白色の固体（１．６３ｇ）として得た。これを、その後のステップでこのまま使用した。
ステップ４：エチル２−（５−アセトアミド−３−（４−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテート
【０５０５】
【化１８２】
0005902293.tif 000201
【０５０６】
フェニルアセチレン（２９０ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１１ｍＬ）のＤＭＦ（４ｍＬ）中脱気溶液を、Ｎ２雰囲気下、エチル２−（５−アセトアミド−３−（４−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテート（１．０ｇ、２．３ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（９０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）およびＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（１６０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）に加えた。次いで反応物を８５℃に５時間加熱した。この反応混合物を真空中で濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配１０から１００％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製して、エチル２−（５−アセトアミド−３−（４−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテートを黄褐色の固体（６２０ｍｇ）として得た。
ステップ５：２−（５−アミノ−３−（４−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）酢酸
【０５０７】
【化１８３】
0005902293.tif 000202
【０５０８】
エチル２−（５−アセトアミド−３−（４−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテート（６２０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）のエタノール（７ｍＬ）および２５％ＮａＯＨ（７ｍＬ）中溶液を８３℃に１６時間加熱した。生成した固体を濾過し、エタノールおよび水で洗浄し、次いで真空中で乾燥することによって、２−（５−アミノ−３−（４−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）酢酸を固体（５２１ｍｇ）として得た。これを、その後のステップでこのまま使用した。
ステップ６：２−（４−クロロ−３−（４−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸
【０５０９】
【化１８４】
0005902293.tif 000203
【０５１０】
亜硝酸ナトリウム（３２０ｍｇ、４．６５ｍｍｏｌ）の濃縮ＨＣｌ（５ｍＬ）中冷却撹拌懸濁液（冷却槽−５℃）に、２−（５−アミノ−３−（４−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）酢酸（５２１ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）を加えた。さらに５ｍｌの濃縮ＨＣｌを加え、冷却槽を除去し、この反応混合物を室温で３．５時間撹拌した。水およびＣＨ２Ｃｌ２をこの反応混合物に加えた。水相をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させることによって、２−（４−クロロ−３−（４−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸を固体（４１９ｍｇ）として得た。これを、その後のステップでこのまま使用した。
ステップ７：２−（４−クロロ−３−（４−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−モルホリノエタノン
【０５１１】
【化１８５】
0005902293.tif 000204
【０５１２】
２−（４−クロロ−３−（４−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）中懸濁液に、モルホリン（３４ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（２００μＬ、１．２ｍｍｏｌ）および２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（１８０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を加えた。得た溶液を室温で７５分間撹拌してから、クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配２０から１００％酢酸エチル／イソヘキサン）を使用し、続いて分取ＨＰＬＣを使用して精製し、化合物７５を透明ガラス固体（１１．５ｍｇ）として得た。
【０５１３】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  ４．１２分；ｍ／ｚ  ４５２［Ｍ＋Ｈ］９９．３２％純度。
【０５１４】
実施例６９：２−（４−クロロ−３−（３−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−モルホリノエタノン（化合物７６）
【０５１５】
【化１８６】
0005902293.tif 000205
【０５１６】
ステップ１における４−フルオロベンゾイルアセトニトリルの代わりに３−フルオロベンゾイルアセトニトリルを使用して、実施例６８（化合物７５）において概要が述べられている類似の手順に従い、実施例６９（化合物７６）を合成した。化合物７６を黄色の固体（４．８ｍｇ）として得た。
【０５１７】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ＿ＣＨ３ＣＮ）Ｒｔ  １０．３９分；ｍ／ｚ  ４５２［Ｍ＋Ｈ］９５．０１％純度。
【０５１８】
実施例７０：２−（４−クロロ−３−（４−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エタノール（化合物７７）
【０５１９】
【化１８７】
0005902293.tif 000206
【０５２０】
エチル２−（５−アセトアミド−３−（４−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテート（実施例６８、ステップ４）から出発して化合物７７を合成した：
ステップ１：Ｎ−（３−（４−フルオロフェニル）−１−（２−ヒドロキシエチル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミド
【０５２１】
【化１８８】
0005902293.tif 000207
【０５２２】
エチル２−（５−アセトアミド−３−（４−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテート（１ｇ、２．５ｍｍｏｌ）のエタノール（４０ｍＬ）およびメタノール（１０ｍｌ）中溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（４６６ｍｇ、１２．３ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を室温で１６時間撹拌した。この反応混合物を真空中で濃縮し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、ＮＨ４Ｃｌ希釈溶液で洗浄した。水性をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。粗生成物をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｌ）中に懸濁させ、加熱還流し、冷却させ、生成物を濾過し、真空中で乾燥させることによって、Ｎ−（３−（４−フルオロフェニル）−１−（２−ヒドロキシエチル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミドを白色の固体（６５９ｍｇ）として得た。これを、その後のステップでこのまま使用した。
ステップ２：２−（５−アミノ−３−（４−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エタノール
【０５２３】
【化１８９】
0005902293.tif 000208
【０５２４】
Ｎ−（３−（４−フルオロフェニル）−１−（２−ヒドロキシエチル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミド（３８２ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）のエタノール（４ｍＬ）および２５％ＮａＯＨ（６ｍＬ）中溶液を８３℃に１６時間加熱した。この反応混合物を酢酸エチルおよび水の間に分配した。水相を酢酸エチルで２回洗浄し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させ、クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から１０％メタノール／ＣＨ２Ｃｌ２）を使用する精製により、２−（５−アミノ−３−（４−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エタノールを固体（１２２ｍｇ）として得た。これを、その後のステップでこのまま使用した。
ステップ３：２−（４−クロロ−３−（４−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エタノール
【０５２５】
【化１９０】
0005902293.tif 000209
【０５２６】
亜硝酸ナトリウム（１２０ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）の濃縮ＨＣｌ（３．６ｍＬ）中冷却撹拌懸濁液（冷却槽−１０℃）に、２−（５−アミノ−３−（４−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エタノール（１８３ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を加え、周辺温度に９０分間にわたりこの反応混合物を温めておいた。水およびＣＨ２Ｃｌ２をこの反応混合物に加えた。水相をＣＨ２Ｃｌ２（×４）で抽出し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配２０から１００％酢酸エチル／イソヘキサン）を使用し、続いて分取ＨＰＬＣを使用して、粗製材料を精製し、化合物７７を白色の固体（６．５ｍｇ）として得た。
【０５２７】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  ４．０７分；ｍ／ｚ  ３６９［Ｍ＋Ｈ］９９．７６％純度。
【０５２８】
実施例７１：４−（２−（４−クロロ−３−（４−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エチル）モルホリン（化合物７８）
【０５２９】
【化１９１】
0005902293.tif 000210
【０５３０】
Ｎ−（３−（４−フルオロフェニル）−１−（２−ヒドロキシエチル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミド（実施例７０ステップ１）（化合物７７）から出発して実施例７１（化合物７８）を合成した。
ステップ１：Ｎ−（３−（４−フルオロフェニル）−１−（２−モルホリノエチル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミド
【０５３１】
【化１９２】
0005902293.tif 000211
【０５３２】
Ｎ−（３−（４−フルオロフェニル）−１−（２−ヒドロキシエチル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミド（２６９ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（９ｍＬ）およびトリエチルアミン（１５５μｌ、１．１１ｍｍｏｌ）中懸濁液に、メタンスルホニルクロリド（６５μｌ、０．８１ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を室温で１６時間撹拌した。この反応混合物を氷／水上に注入し、有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。粗生成物をＴＨＦ（１０ｍｌ）中に溶解し、モルホリン（３２０μｌ、３．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を５５℃に２４時間加熱してから、溶媒を真空中で蒸発させた。粗製物をＣＨ２Ｃｌ２および水性の希釈ＮａＨＣＯ３の間に分配し、有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から１０％メタノール／ＣＨ２Ｃｌ２）を使用する精製によって、Ｎ−（３−（４−フルオロフェニル）−１−（２−モルホリノエチル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミドを白色の固体（１４１ｍｇ）として得た。これを、その後のステップでこのまま使用した。
ステップ２：３−（４−フルオロフェニル）−１−（２−モルホリノエチル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン
【０５３３】
【化１９３】
0005902293.tif 000212
【０５３４】
Ｎ−（３−（４−フルオロフェニル）−１−（２−モルホリノエチル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミド（１４１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）のエタノール（１．５ｍＬ）および２５％ＮａＯＨ（１．５ｍＬ）中溶液を８３℃に１６時間加熱した。この反応混合物を酢酸エチルおよび水の間に分配した。水相を酢酸エチルで洗浄し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させることによって、３−（４−フルオロフェニル）−１−（２−モルホリノエチル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミンを固体（１２９ｍｇ）として得た。これを、その後のステップでこのまま使用した。
ステップ３：３−（４−フルオロフェニル）−１−（２−モルホリノエチル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−４−オール
【０５３５】
【化１９４】
0005902293.tif 000213
【０５３６】
亜硝酸ナトリウム（８２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）の濃縮ＨＣｌ（２．６ｍＬ）中冷却撹拌懸濁液（冷却槽−１０℃）に、３−（４−フルオロフェニル）−１−（２−モルホリノエチル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−アミン（１２９ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）のトリフルオロ酢酸（０．５ｍｌ）中溶液を加え、この反応混合物を２時間にわたり周辺温度に温めておいた。水およびＣＨ２Ｃｌ２を加えた。水相をＣＨ２Ｃｌ２（×３）で抽出し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。粗製材料を分取ＨＰＬＣで精製することによって、３−（４−フルオロフェニル）−１−（２−モルホリノエチル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−４−オールを固体（２７．８ｍｇ）として得た。これを、その後のステップでこのまま使用した。
ステップ４：４−（２−（４−クロロ−３−（４−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エチル）モルホリン（化合物７８）
【０５３７】
【化１９５】
0005902293.tif 000214
【０５３８】
３−（４−フルオロフェニル）−１−（２−モルホリノエチル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−４−オール（２７．８ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を、ＰＯＣｌ３（０．５ｍｌ）中で８０℃に２．７５時間加熱した。溶媒を真空中で除去し、粗製物を分取ＨＰＬＣで精製することによって、化合物７８をオレンジ色の固体（１０．７ｍｇ）として得た。
【０５３９】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  ２．８７分；ｍ／ｚ  ４３８［Ｍ＋Ｈ］９９．７３％純度。
【０５４０】
実施例７２：２−（４−クロロ−３−（３−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（ピロリジン−１−イル）エタノン（化合物７９）
【０５４１】
【化１９６】
0005902293.tif 000215
【０５４２】
ステップ１における４−フルオロベンゾイルアセトニトリルの代わりに３−フルオロベンゾイルアセトニトリルを使用し、ステップ７におけるモルホリンの代わりにピロリジンを使用して、実施例６８（化合物７５）において概要が述べられている類似の手順に従い、実施例７２（化合物７９）を合成した。化合物７９を黄色の固体（１３．１ｍｇ）として得た。
【０５４３】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ＿ＣＨ３ＣＮ）Ｒｔ  １０．６８分；ｍ／ｚ  ４３６［Ｍ＋Ｈ］９６．６％純度。
【０５４４】
実施例７３：２−（４−クロロ−３−（４−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（ピロリジン−１−イル）エタノン（化合物８０）
【０５４５】
【化１９７】
0005902293.tif 000216
【０５４６】
ステップ７におけるモルホリンの代わりにピロリジンを使用して、実施例６８において概要が述べられている類似の手順に従い、実施例７３（化合物８０）を合成した。化合物８０を黄色の固体（１３．１ｍｇ）として得た。
【０５４７】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ＿ＣＨ３ＣＮ）Ｒｔ  １０．６６分；ｍ／ｚ  ４３６［Ｍ＋Ｈ］９５．６％純度。
【０５４８】
実施例７４：４−クロロ−１−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エチル）−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物８１）
【０５４９】
【化１９８】
0005902293.tif 000217
【０５５０】
ステップ１におけるモルホリンの代わりにＮ−メチルピペラジンを使用して、実施例７１において概要が述べられている類似の手順に従い、実施例７４を合成した。化合物８１を黄色の固体（６．０ｍｇ）として得た。
【０５５１】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿ギ酸＿ＡＳＣＥ＋ＮＴＩＳ＿ＨＰＬＣ＿ＣＨ３ＣＮ）Ｒｔ  ８．０１分；ｍ／ｚ  ４３３［Ｍ＋Ｈ］９８．４％純度。
【０５５２】
実施例７５：４−クロロ−３，５−ジフェニル−１−ビニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物８２）
【０５５３】
【化１９９】
0005902293.tif 000218
【０５５４】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エタノール（実施例３２）から出発して、化合物８２を合成した。
ステップ１：４−クロロ−１−（２−ヨードエチル）−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン
【０５５５】
【化２００】
0005902293.tif 000219
【０５５６】
トリフェニルホスフィン（１６０ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）、イミダゾール（４２ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）およびヨウ素（１６０ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を、２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エタノール（１８１ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（６ｍｌ）中溶液に加えた。周辺温度で１時間撹拌後、この反応物を濾過し、溶媒を真空中で除去した。クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配１０から６０％酢酸エチル／イソヘキサン）を使用する精製により、４−クロロ−１−（２−ヨードエチル）−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジンを透明な油（２０２ｍｇ）として得た。これを、その後のステップでこのまま使用した。
ステップ２：４−クロロ−３，５−ジフェニル−１−ビニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物８２）
【０５５７】
【化２０１】
0005902293.tif 000220
【０５５８】
４−クロロ−１−（２−ヨードエチル）−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（５３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１．５ｍｌ）中溶液を、トリメチルエチレンジアミン（９７ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）に加え、この混合物を周辺温度で３日間撹拌した。溶媒を真空中で除去し、粗製物をクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配５から１００％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製することによって、化合物８２を黄色の固体（１２ｍｇ）として得た。
【０５５９】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ＿ＣＨ３ＣＮ）Ｒｔ  １１．６３分；ｍ／ｚ  ３３３［Ｍ＋Ｈ］９５．１６％純度。
【０５６０】
実施例７６：（Ｒ）−１−（２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エチル）ピロリジン−３−オール（化合物８３）
【０５６１】
【化２０２】
0005902293.tif 000221
【０５６２】
（Ｒ）−３−ピロリジノール（１６６ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１．５ｍｌ）中溶液を、４−クロロ−１−（２−ヨードエチル）−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（実施例７４ステップ１）（１１３ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）に加え、この反応物を周囲条件で２４時間撹拌した。生成した残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配２０から１００％酢酸エチル／イソヘキサン、次いで勾配０から１００％酢酸エチル／アセトン））を使用して精製し、続いて分取ＨＰＬＣで精製することによって、化合物８３をオレンジ色の固体（１７ｍｇ）として得た。
【０５６３】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ＿ＣＨ３ＣＮ）Ｒｔ  １０．３２分；ｍ／ｚ  ４２０［Ｍ＋Ｈ］９７．０６％純度。
【０５６４】
実施例７７：４−（２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エチル）−１−メチルピペラジン−２−オン（化合物８４）
【０５６５】
【化２０３】
0005902293.tif 000222
【０５６６】
４−クロロ−１−（２−ヨードエチル）−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（実施例７４ステップ１（化合物８１））（１００ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）中溶液を、ＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍｌ）中のピペラジノン塩酸塩（１６０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（２２０μｌ、１２．６ｍｍｏｌ）に加え、この反応物を周囲条件で２日間撹拌した。さらにピペラジノン塩酸塩（１６０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（２２０μｌ、１２．６ｍｍｏｌ）を加え、この反応物をさらに２４時間撹拌した。生成した残渣を、クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配２０から１００％酢酸エチル／イソヘキサン、次いで勾配０から１００％酢酸エチル／アセトン）を使用して精製し、続いて分取ＨＰＬＣで精製することによって、化合物８４を黄色のガラス固体（１７ｍｇ）として得た。
【０５６７】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ＿ＣＨ３ＣＮ）Ｒｔ  １０．２１分；ｍ／ｚ  ４４７［Ｍ＋Ｈ］９７．７６％純度。
【０５６８】
実施例７８：１−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−２−メチルプロパン−２−オール（化合物８５）
【０５６９】
【化２０４】
0005902293.tif 000223
【０５７０】
ステップ１：Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−フェニル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミド
【０５７１】
【化２０５】
0005902293.tif 000224
【０５７２】
エチル２−（５−アセトアミド−３−フェニル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテート（１．０ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、２６ｍＬ）中溶液に、メチルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中３Ｍ溶液、３ｍＬ、９ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。得た溶液を室温で３．５時間撹拌し、次いで引き続き酢酸エチルで希釈し、１Ｍ塩酸の添加によってクエンチした。水相を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から７５％酢酸エチル／イソヘキサン）を使用して生成した残渣を精製し、Ｎ−（１−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−フェニル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミドを固体（５２９ｍｇ）として得た。
ステップ２：１−（５−アミノ−３−フェニル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メチルプロパン−２−オール
【０５７３】
【化２０６】
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【０５７４】
ステップ５におけるＮ−（１−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル）−３−フェニル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−５−イル）アセトアミドを使用して、実施例１において概要が述べられている類似の手順に従い、１−（５−アミノ−３−フェニル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メチルプロパン−２−オールを合成した。
ステップ３：１−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−２−メチルプロパン−２−オール
【０５７５】
【化２０７】
0005902293.tif 000226
【０５７６】
冷却濃縮ＨＣｌ（９ｍＬ）（冷却槽−１５℃）に、亜硝酸ナトリウム（１２１ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）を一度に加え、この懸濁液を１０分間撹拌したままおき、この後で１−（５−アミノ−３−フェニル−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−２−メチルプロパン−２−オール（２９０ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）を加えた。５分後、冷却槽を除去し、この反応混合物を室温で３時間撹拌した。この反応物を再び冷却（０℃）し、ＤＣＭを加え、続いて水を加えた。水相をＤＣＭで抽出し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。粗製材料をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から５０％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製して、１−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−２−メチルプロパン−２−オールをオレンジ色の油（５６ｍｇ）として得た。得た物質を分取ＨＰＬＣでさらに精製することによって、３４ｍｇの化合物８５を固体として得た。
【０５７７】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  ４．４９分；ｍ／ｚ  ３７９［Ｍ＋Ｈ］９９．７１％純度。
【０５７８】
実施例７９：メチル２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）アセテート（化合物８６）
【０５７９】
【化２０８】
0005902293.tif 000227
【０５８０】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（５２８ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）の塩化チオニル（１０ｍＬ）中懸濁液を７０℃で１時間加熱した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を無水ＣＨ２Ｃｌ２中に溶解した。無水メタノール（６５μＬ、１．６ｍｍｏｌ）を０℃で加え、この反応混合物を終夜ゆっくりと室温に到達させた。減圧下での溶媒の除去後、粗混合物をシリカゲルカラムに直接充填し、酢酸エチル／イソヘキサンの混合物（勾配０から４０％）を使用して生成物を溶出した。得た材料の半分を分取ＨＰＬＣでさらに精製して、１３．４ｍｇの化合物８６を生成した。
【０５８１】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  １０．９分；ｍ／ｚ  ３７９［Ｍ＋Ｈ］９４．６６％純度。
【０５８２】
実施例８０：１−（アゼチジン−１−イル）−２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エタノン（化合物８７）
【０５８３】
【化２０９】
0005902293.tif 000228
【０５８４】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸を使用して、実施例３９において概要が述べられている類似の手順に従い、１−（アゼチジン−１−イル）−２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エタノンを合成した。クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から７０％酢酸エチル／イソヘキサン）、続いて分取ＨＰＬＣ精製により１７ｍｇの化合物８７を生成した。
【０５８５】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）Ｒｔ  １０．３４分；ｍ／ｚ  ４０４［Ｍ＋Ｈ］９７．３７％純度。
【０５８６】
実施例８１：（Ｓ）−２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（３−フルオロピロリジン−１−イル）エタノン（化合物８８）
【０５８７】
【化２１０】
0005902293.tif 000229
【０５８８】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）酢酸（１７０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）の塩化チオニル（４．７ｍＬ）中溶液を６０℃で１．５時間加熱した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を無水ＣＨ２Ｃｌ２（４．７ｍＬ）中に溶解した。この反応混合物を２本の管に分割し、（Ｓ）−フルオロピロリジン塩酸塩（１２５ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（７２μＬ、０．５２ｍｍｏｌ）をこれらのうちの１本に加えた。この反応混合物を室温で終夜撹拌し、次いで減圧下で濃縮した。クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から２５％ジエチルエーテル／ＣＨ２Ｃｌ２）を使用して生成した残渣を精製することによって、１５ｍｇの化合物８８を生成した。
【０５８９】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  ４．０分；ｍ／ｚ  ４３６［Ｍ＋Ｈ］９６．１５％純度。
【０５９０】
実施例８２：（Ｒ）−２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（３−フルオロピロリジン−１−イル）エタノン（化合物８９）
【０５９１】
【化２１１】
0005902293.tif 000230
【０５９２】
実施例８１において概要が述べられている類似の手順に従い、（Ｒ）−２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（３−フルオロピロリジン−１−イル）エタノンを合成し、クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から２５％ジエチルエーテル／ＣＨ２Ｃｌ２）で精製することによって、１７ｍｇの化合物８９を生成した。
【０５９３】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  ３．９７分；ｍ／ｚ  ４３６［Ｍ＋Ｈ］９６．０９％純度。
【０５９４】
実施例８３：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）エタノン（化合物９０）
【０５９５】
【化２１２】
0005902293.tif 000231
【０５９６】
実施例８１において概要が述べられている類似の手順に従い、２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）−１−（３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イル）エタノンを合成し、分取ＨＰＬＣで精製して、２９ｍｇの化合物９０を白色の固体として得た。
【０５９７】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  ３．７１分；ｍ／ｚ  ４４０［Ｍ＋Ｈ］９８．９２％純度。
【０５９８】
実施例８４：１−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）プロパン−２−オール（化合物９１）
【０５９９】
【化２１３】
0005902293.tif 000232
【０６００】
ステップ１：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）アセトアルデヒド
【０６０１】
【化２１４】
0005902293.tif 000233
【０６０２】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エタノール（３００ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５．７ｍＬ）中溶液に、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（ＤＭＰ、４３７ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を室温で加えた。この混合物を室温で３５分間撹拌し、次いで固体を濾別し、濾液を水性ＮａＨＣＯ３およびＮａ２Ｓ２Ｏ３と共に１時間撹拌した。水相をＣＨ２Ｃｌ２で再抽出し、合わせた有機層を相分離器に通し、減圧下で濃縮した。粗製アルデヒド２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）アセトアルデヒド（３８４ｍｇ）を、以下のステップにおいてそのまま使用した。
ステップ２：１−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）プロパン−２−オール（化合物９１）
【０６０３】
【化２１５】
0005902293.tif 000234
【０６０４】
２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）アセトアルデヒド（１２８ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２．９ｍＬ）中溶液を、メチルマグネシウムクロリド溶液（２．９ｍＬのＴＨＦ中で希釈した２９０μＬの３Ｍ溶液）に０℃で３０分にわたり滴加した。粗混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２および２Ｍ塩酸の間に分配した。水相をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、合わせた有機層を相分離器に通し、減圧下で濃縮した。もう８０ｍｇの開始２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）アセトアルデヒドを用いてこの反応を繰り返し、合わせた粗混合物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配５０から１００％酢酸エチル／イソヘキサン）で精製した。追加的な分取ＨＰＬＣ精製が、７．２ｍｇの化合物９１を生成した。
【０６０５】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  １０．５７分；ｍ／ｚ  ３６５［Ｍ＋Ｈ］９６．２％純度。
【０６０６】
実施例８５：１−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）プロパン−２−オール（化合物９２）
【０６０７】
【化２１６】
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【０６０８】
ステップ１：４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン
【０６０９】
【化２１７】
0005902293.tif 000236
【０６１０】
４−クロロ−３，５−ジフェニル−１−ビニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）のアセトン（５ｍＬ）中溶液に、過マンガン酸カリウムの２％水溶液（７１ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ、３．５ｍＬ水）を一度に加えた。この混合物を室温で２時間撹拌し、次いでもう１部分の過マンガン酸カリウム（１２ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）を加え、撹拌を１５分間継続した。この固体を濾別し、濾液を水およびＣＨ２Ｃｌ２の間に分配した。水相をＣＨ２Ｃｌ２で再抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、減圧下で濃縮した。粗製４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（６４ｍｇ）を、以下のステップにおいてそのまま使用した。
ステップ２：１−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）プロパン−２−オール（化合物９２）
【０６１１】
【化２１８】
0005902293.tif 000237
【０６１２】
４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（４５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１．５ｍＬ）中溶液を、引き続き炭酸セシウム（６４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）および２−メトキシエチルブロミド（３１．３ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）で処理した。電子レンジで粗混合物を１３０℃で３０分間加熱し、次いで濾別した。減圧下で濾液を蒸発除去し、分取ＨＰＬＣで精製して、２７ｍｇの化合物９２を生成した。
【０６１３】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  １１．１６分；ｍ／ｚ  ３６５［Ｍ＋Ｈ］９７．３３％純度。
【０６１４】
実施例８６：４−クロロ−１−（オキセタン−３−イル）−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物９３）
【０６１５】
【化２１９】
0005902293.tif 000238
【０６１６】
４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のジオキサン（０．５ｍＬ）中溶液をオキセタン−３−オール（２４ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（８４ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）およびアゾジカルボン酸ジエチル（ＤＥＡＤ、５６ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）で処理し、電子レンジで、８５℃で３０分間加熱した。粗混合物を減圧下で蒸発除去し、分取ＨＰＬＣで精製し、その後にカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から１５％ジエチルエーテル／ＣＨ２Ｃｌ２）で精製することによって、２３ｍｇの化合物９３を白色の固体として得た。
【０６１７】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  １０．９５分；ｍ／ｚ  ３６３［Ｍ＋Ｈ］９８．１２％純度。
【０６１８】
実施例８７：２−（４−クロロ−３−（３−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エタノール（化合物９４）
【０６１９】
【化２２０】
0005902293.tif 000239
【０６２０】
エチル２−（５−アセトアミド−３−（３−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテートから出発して化合物９４を合成した。ステップ１における４−フルオロベンゾイルアセトニトリルの代わりに３−フルオロベンゾイルアセトニトリルを使用して、実施例６８において概要が述べられている類似の手順に従い、（ステップ１から４）、エチル２−（５−アセトアミド−３−（３−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテートを合成した。
ステップ１：２−（５−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エタノール
【０６２１】
【化２２１】
0005902293.tif 000240
【０６２２】
エチル２−（５−アセトアミド−３−（３−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）アセテート（３．２５ｇ、８．０２ｍｍｏｌ）のエタノール（９０ｍＬ）中溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（６１０ｍｇ、１６．０４ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を室温で３６時間撹拌した。追加の水素化ホウ素ナトリウム（３０５ｍｇ、８．０２ｍｍｏｌ）を加え、この反応物を室温で３６時間撹拌した。２５％ＮａＯＨ（０．９ｍＬ）を加え、この反応混合物を８０℃で３．５時間撹拌した。この反応混合物を酢酸エチルおよび水の間に分配した。水相を酢酸エチルで２回洗浄し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。粗製材料をジエチルエーテル（３０ｍＬ）中に懸濁させ、生成物を濾過し、真空中で乾燥することによって、２−（５−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エタノールを白色の固体（２．２ｇ）として得た。これを、その後のステップでこのまま使用した。
ステップ２：２−（４−クロロ−３−（３−フルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エタノール
【０６２３】
【化２２２】
0005902293.tif 000241
【０６２４】
亜硝酸ナトリウム（５５５ｍｇ、８．０４ｍｍｏｌ）を、濃縮ＨＣｌ（１１．７ｍＬ）の冷却撹拌溶液（冷却槽−１０℃）に少しずつ加えた。１５分後、２−（５−アミノ−３−（３−フルオロフェニル）−４−（フェニルエチニル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）エタノール（８６０ｍｇ、２．６８ｍｍｏｌ）を少しずつ加え、この反応混合物を９０分間にわたり室温まで温めておいた。水およびＣＨ２Ｃｌ２をこの反応混合物に加えた。水相をＣＨ２Ｃｌ２（×４）で抽出し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。粗製材料をクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配０から５０％酢酸エチル／イソヘキサン）を使用して精製し、続いて分取ＨＰＬＣで精製し、化合物９４を白色の固体（４０ｍｇ）として得た。
【０６２５】
ＬＣＭＳ（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ＿ＣＨ３ＣＮ）Ｒｔ  １０．３９分；ｍ／ｚ  ３６９［Ｍ＋Ｈ］９６．２６％純度。
【０６２６】
実施例８８：２−（４−クロロ−３−（３，５−ジフルオロフェニル）−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）エタノール（化合物９５）
【０６２７】
【化２２３】
0005902293.tif 000242
【０６２８】
ステップ１における４−フルオロベンゾイルアセトニトリルの代わりに３−（３，５−ジフルオロフェニル）−３−オキソプロパンニトリルを使用して、実施例７０において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物９５を合成した。
３−（３，５−ジフルオロフェニル）−３−オキソプロパンニトリルの合成
【０６２９】
【化２２４】
0005902293.tif 000243
【０６３０】
ジイソプロピルアミン（１０．６ｍＬ、７６ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、溶液を−２０℃に冷却した。内部温度が０℃未満に保たれるような速度で、ｎ−ブチルリチウムの溶液（ヘキサン中２．５Ｎ、３０．５ｍＬ、７６ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。５分間撹拌後、溶液を−２０℃に冷却し、−４０℃未満の温度が保たれるような速度で、アセトニトリル（２．３７ｍＬ、４５．３ｍｍｏｌ）およびエチル３，５−ジフルオロベンゾエート（６．２３ｇ、３６．２ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１８ｍＬ）中溶液に加えた。さらなる１０ｍＬの乾燥ＴＨＦを使用することによって、残りのリチウムジイソプロピルアミドを反応物に移した。この反応物を２時間にわたり周囲条件に温めてから、塩化アンモニウム飽和水溶液でクエンチした。この反応物を酢酸エチルで抽出し（×２）、抽出物を廃棄した。水性を２Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を２Ｎ  ＨＣｌおよびブラインで洗浄してから、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。クロマトグラフィー（シリカゲル、勾配５から１００％酢酸エチル／イソヘキサン）を使用する精製により、３−（３，５−ジフルオロフェニル）−３−オキソプロパンニトリルを黄色の固体（２．８２ｇ）として得た。
【０６３１】
ステップ１における４−フルオロベンゾイルアセトニトリルの代わりに３−（３，５−ジフルオロフェニル）−３−オキソプロパンニトリルを使用して、実施例７０において概要が述べられている類似の手順に従い、化合物９５を合成した。化合物９５を黄褐色の固体（３０．６ｍｇ）として得た。
【０６３２】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ギ酸＿ＡＣＥ３  Ｃ１８  ＡＲ＿ＨＰＬＣ＿ＣＨ３ＣＮ）Ｒｔ  １１．８９分；ｍ／ｚ  ３８７［Ｍ＋Ｈ］９５．８５％純度。
【０６３３】
実施例８９：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）プロパン−１−オール（化合物９６）
【０６３４】
【化２２５】
0005902293.tif 000244
【０６３５】
ステップ１：エチル２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）プロパノエート
【０６３６】
【化２２６】
0005902293.tif 000245
【０６３７】
ステップ２における２−メトキシエチルブロミドの代わりにエチル２−ブロモプロピオネートを使用して、実施例８５において概要が述べられている類似の手順に従い、エチル２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）プロパノエートを合成した。
ステップ２：２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）プロパン−１−オール（化合物９６）
【０６３８】
【化２２７】
0005902293.tif 000246
【０６３９】
エチル２−（４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン−１−イル）プロパノエート（７２ｍｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．５ｍＬ）中冷却撹拌溶液（０℃）に、水素化ジイソブチルアルミニウムのシクロヘキサン（１ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）中１．１Ｍ溶液を滴加した。１５分後、塩化アンモニウム飽和溶液およびＣＨ２Ｃｌ２を０℃でこの反応混合物に加えた。水相をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、有機相を合わせ、ＭｇＳＯ４で脱水し、濾過し、蒸発させた。分取ＨＰＬＣを使用する精製によって、化合物９６をオフホワイト色の固体（２８ｍｇ）として得た。
【０６４０】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  ４．３２分；ｍ／ｚ  ３６５［Ｍ＋Ｈ］９９．３０％純度。
【０６４１】
実施例９０：４−クロロ−３，５−ジフェニル−１−（テトラヒドロフラン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（化合物９７）
【０６４２】
【化２２８】
0005902293.tif 000247
【０６４３】
オキセタン−３−オールの代わりに３−ヒドロキシテトラヒドロフラン（２８ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を使用して、実施例８６において概要が述べられている類似の手順に従い、４−クロロ−３，５−ジフェニル−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｃ］ピリダジン（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）から化合物９７を合成した。分取ＨＰＬＣを使用し、続いてクロマトグラフィー（シリカゲル、勾配ＣＨ２Ｃｌ２）を使用して化合物９７を精製し、化合物９７をオフホワイト色の固体（２１ｍｇ）として得た。
【０６４４】
ＬＣＭＳ（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸＿ＭｅＣＮ）Ｒｔ  ４．６４分；ｍ／ｚ  ３７７［Ｍ＋Ｈ］９９．４２％純度。
【０６４５】
実施例９１：液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＣ−ＭＳ）
本発明のピラゾロピリジジン（ｐｙｒａｚｏｌｏｐｙｒｉｄｉｚｉｎｅ）化合物に対するＬＣ−ＭＳ条件
（ａ）標準的酸性ＬＣ−ＭＳ条件：（１０ｃｍ＿ＥＳＩ＿ギ酸または１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿ギ酸）
０．１％（Ｖ／Ｖ）ギ酸を有するアセトニトリル（遠ＵＶ等級）：０．１％ギ酸勾配を有する水（ＰｕｒｅＬａｂ  Ｏｐｔｉｏｎユニットによる高純度）を使用するＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ５μｍ  Ｃ１８（２）、１００×４．６ｍｍ（プラスガードカートリッジ）カラムを使用した。流速は２ｍＬ／分であった。Ｗａｔｅｒｓダイオードアレイ検出器（開始範囲２１０ｎｍ、終了範囲４００ｎｍ、範囲間隔４ｎｍ）を使用してＵＶ検出を行った。質量検出を単一の四重極（ｑｕａｄｒａｐｏｌｅ）ＬＣ−ＭＳ装置を介して実施した。イオン化は、化合物の種類に応じて、ＥＳＩまたはＡＰＣＩのいずれかである。使用した勾配は、０．００分の時点での水性溶媒９５％から、３．５０分の時点での水性溶媒５％までとした。次いでこのパーセンテージをさらに２分間保持した。
（ｂ）標準的塩基性ＬＣ−ＭＳ条件：（１０ｃｍ＿ＥＳＣＩ＿Ｂｉｃａｒｂ＿または１０ｃｍ＿ＥＳＩ＿Ｂｉｃａｒｂ）：
アセトニトリル（遠ＵＶ等級）：１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム（アンモニウム水素炭酸塩）勾配を有する水（ＰｕｒｅＬａｂ  Ｏｐｔｉｏｎユニットによる高純度）を使用するＷａｔｅｒｓ  Ｘｔｅｒｒａ  ＭＳ  ５μｍ  ＣＩ８、１００×４．６ｍｍ（プラスガードカートリッジ）を使用した。流速は２ｍＬ／分であった。Ｗａｔｅｒｓダイオードアレイ検出器（開始範囲２１０ｎｍ、終了範囲４００ｎｍ、範囲間隔４ｎｍ）を使用してＵＶ検出を実施した。質量検出は、単一の四重極（ｑｕａｄｒａｐｏｌｅ）ＬＣ−ＭＳ装置を介して実施した。イオン化は、化合物の種類に応じてＥＳＩまたはＡＰＣＩのいずれかである。使用された勾配は、０．００分の時点での水性溶媒９５％から４．０分の時点での水性溶媒５％までとした。次いでこのパーセンテージをさらに１．５分間保持した。
（ｃ）標準的酸性ＨＰＬＣ条件：（１５ｃｍ＿ギ酸＿ＡＳＣＥＮＴＩＳ＿ＨＰＬＣ）
０．１％（Ｖ／Ｖ）ギ酸を有するアセトニトリル（遠ＵＶ等級）：０．１％ギ酸勾配を有する水（ＰｕｒｅＬａｂ  Ｏｐｔｉｏｎユニットによる高純度）を使用するＳｕｐｅｌｃｏ  Ａｓｃｅｎｔｉｓ（登録商標）Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｃ１８またはＨｉｃｈｒｏｍ  Ｈａｌｏ  Ｃ１８、２．７μｍ  Ｃ１８、１５０×４．６ｍｍカラムを使用した。流速は１ｍＬ／分であった。Ａｇｉｌｅｎｔダイオードアレイ検出器（３００ｎｍ、帯域幅２００ｎｍ；ｒｅｆ．４５０ｎｍ、帯域幅１００ｎｍ）を使用してＵＶ検出を行った。使用した勾配は、０．００分の時点での水性溶媒９６％から、９．００分の時点での水性溶媒０％までとした。次いでこのパーセンテージをさらに４．５分間保持した。
（ｄ）標準的塩基性ＨＰＬＣ条件：（１５ｃｍ＿Ｂｉｃａｒｂ＿ＧｅｍｉｎｉＮＸ＿ＨＰＬＣ）
アセトニトリル（遠ＵＶ等級）：１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム勾配を有する水（ＰｕｒｅＬａｂ  Ｏｐｔｉｏｎユニットによる高純度）を使用する、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｇｅｍｉｎｉ  ＮＸ、３μｍ  Ｃ１８、１５０×４．６ｍｍカラムを使用した。流速は１ｍＬ／分であった。Ａｇｉｌｅｎｔダイオードアレイ検出器（３００ｎｍ、帯域幅２００ｎｍ；ｒｅｆ．４５０ｎｍ、帯域幅１００ｎｍ）を使用してＵＶ検出を行った。使用した勾配は、０．００分の時点での水性溶媒９５．５％から、９．００分の時点での水性溶媒０％までとした。次いでこのパーセンテージをさらに４．５分間保持した。
（ｅ）標準的酸性ＨＰＬＣ条件：（１０ｃｍ＿ギ酸＿ＡＣＥ３  Ｃ１８  ＡＲ＿ＨＰＬＣ＿ＣＨ３ＣＮ）
０．１％（Ｖ／Ｖ）ギ酸を有するアセトニトリル（遠ＵＶ等級）：０．１％ギ酸勾配を有する水（ＰｕｒｅＬａｂ  Ｏｐｔｉｏｎユニットによる高純度）を使用する、Ｈｉｃｈｒｏｍ  ＡＣＥ３  Ｃ１８−ＡＲ  ミックスモード１００×４．６ｍｍカラムを使用した。流速は１ｍＬ／分であった。Ａｇｉｌｅｎｔダイオードアレイ検出器（３００ｎｍ、帯域幅２００ｎｍ；ｒｅｆ．４５０ｎｍ、帯域幅１００ｎｍ）を使用してＵＶ検出を行った。使用した勾配は、０．００分から３．００分の時点での水性溶媒９８％から、１２．００分の時点での水性溶媒１００％のまでとした。次いでこのパーセンテージをさらに２．４分間保持した。
【０６４６】
実施例９２：Ｎ４８Ｋクラリン−１の発現を回復する本発明の化合物の活性を示すアッセイ法
クラリン−１は、アッシャーＩＩＩ症候群において変異した遺伝子によりコードされているタンパク質である（Ａｄａｔｏら、２００２年）。北アメリカにおいて、最も広がっているクラリン−１の変異はＮ４８Ｋであり、このＮ４８Ｋは、グリコシル化の損失およびトラフィッキングの欠陥を引き起こすことが報告されている（Ｔｉａｎら、２００９年）。その結果、Ｎ４８Ｋタンパク質は原形質膜に到達せず、プロテアソームにより分解される。したがって、Ｎ４８Ｋクラリン−１の細胞表面へのトラフィッキングを修復することによって、アッシャーＩＩＩ症候群への介入手段が得られると考えられている。
【０６４７】
Ｎ４８Ｋクラリン−１の発現を回復する本発明の化合物の有用性を実証するための有用な細胞モデルは、ＨＥＫ２９３−クラリン−１Ｎ４８Ｋ−ＨＡ  Ｄ９細胞株である（Ｔｉａｎら、２００９）。典型的な実験において、これらの細胞は、コラーゲンコーティングされた９６ウェルプレートに、１ウェル当たり細胞２０，０００個の細胞密度で、１０％ウシ胎児血清を含有するＤｕｌｂｅｃｃｏ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）内、加湿したインキュベーター内で、３７℃、５％ＣＯ２で播種する。終夜のインキュベーション後、１０％ウシ胎児血清を含有するＤＭＥＭ培地内、加湿したインキュベーター内で、３７℃、５％ＣＯ２で、２４時間インキュベーションするために化合物を加える。ネガティブコントロールとして、ＤＭＳＯを最終濃度０．２５％で使用する。化合物は通常、３回重複した方式で試験する。化合物を用いた２４時間のインキュベーション後、１０％緩衝ホルマリンの添加により細胞をウェルに固定して、最終濃度である４％ホルマリンを達成する。室温で２０分間の固定後、トリトンＸ−１００（０．０２リン酸塩、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１％トリトンＸ−１００）を含有するリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）でウェルを３回洗浄する。
【０６４８】
トリトンＸ−１００を含有するＰＢＳ中、１：１０００の希釈で、ＨＡタグ（ＨＡ．１１クローン１６Ｂ１２モノクローナル抗体、Ｃｏｖａｎｃｅ＃ＭＭＳ−１０１Ｐ）に対する抗体を用いて、ＨＡ−タグ付のＮ４８Ｋクラリン−１を検出する。９０分間のインキュベーション後、ウェルを、トリトンＸ−１００を含有するＰＢＳで３回洗浄し、トリトンＸ−１００を含有するＰＢＳ中、１：２５０の希釈で、二次抗体（ヤギ抗−マウスＩｇＧ−Ｃｙ３（１．５ｍｇ／ｍｌ）、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩＲ  Ｅｕｒｏｐｅ  ＃１１５１６５００３）をこのウェルに４５分間加える。その後にトリトンＸ−１００を含有するＰＢＳでウェルを３回洗浄し、１：１０，０００の希釈でＤＡＰＩ（４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール）を添加することによって、核に対する最終染色を実施する。染色された細胞の画像化を、例えばＩｎＣｅｌｌ  １０００  Ｈｉｇｈ  Ｃｏｎｔｅｎｔ  Ｉｍａｇｅｒ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上で実施し、Ｎ４８Ｋクラリン−１に対してＣｙ３チャネル、核に対してＤＡＰＩチャネルを読み出す。画像を分析し、特定のアルゴリズムを使用して定量する。このアルゴリズムはＤＡＰＩシグナルの追加的核分裂に基づいて各細胞に対するＨＡ−クラリン−１染色を測定する（図１）。このアルゴリズムは、細胞１個当たりの強度を測定し、したがって細胞数における変動にあまり影響されないことから好ましい。１つのウェル当たり、約２，０００個の細胞を測定することによって、測定細胞の平均密度を得る。
【０６４９】
実施例９３：例示的本発明の化合物に対するＩＣ５０データ
本発明の例示的ピラゾロピリミジン化合物の活性に対するＩＣ５０値を実施例９２のアッセイ法に従い得た。化合物１−３５、３７−３９、４２、４４、４５および４７−９７に対するＩＣ５０値は、１０マイクロモル以下である。化合物１−９、１０、１１、１３−３４、３７−３９、４４、４５、４７−９７に対するＩＣ５０値はすべて５マイクロモル以下である。化合物１、２、４−９、１３、１４、１７、１９、２８、３２、３８、３９、４５、４８−６１、６３−７４、７６、７７、７９、８１、８３、８５−９７に対するＩＣ５０値はすべて１マイクロモル以下である。
【０６５０】
実施例９４：化合物４４のピラゾロピリミジン部分に結合する１種以上のタンパク質を特定するためのアッセイ法
化合物４４は、ピラゾロピリミジン部分およびビオチン基を含み、ピラゾロピリミジン部分に結合するタンパク質を特定するためのプローブとして有用である。タンパク質は、以下の通り特定される：ＨＥＫ２９３−クラリン−１  Ｎ４８Ｋ−ＨＡ  Ｄ９細胞は、コラーゲンコーティングされた９６−ウェルプレートに、１ウェル当たり細胞２０，０００個の細胞密度で、１０％ウシ胎児血清を含有するＤｕｌｂｅｃｃｏ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）内、加湿したインキュベーター内で、３７℃、５％ＣＯ２で播種する。終夜のインキュベーション後、２４時間インキュベーションするために、化合物４４を１０マイクロモル以下の濃度で各ウェルに加える。インキュベーションは、場合によって３回重複して実施する。化合物４４を用いた２４時間のインキュベーション後、細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄し、細胞可溶化物に変換する。次いで、化合物４４に結合したタンパク質を分離し、当技術分野で公知の任意の適切な方法を使用して特定する。例えば、細胞可溶化物をストレプトアビジンコーティングしたビーズに塗布し、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などの洗浄剤を含有する緩衝液でビーズを洗浄することによって、任意の非特異的結合タンパク質を除去する。次いで、例えば、８Ｍグアニジン・ＨＣｌ、ｐＨ１．５を使用して、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（−ポリアクリルアミドゲル電気泳動）緩衝液中でビーズを沸騰させることによって、またはビーズのトリプシン消化により結合したタンパク質をビーズから溶離する。次いで放出されたペプチドの質量を、質量分析器、例えば、マトリックス支援レーザー脱離イオン化法−飛行時間（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）またはエレクトロスプレーイオン化−飛行時間（ＥＳＩ−ＴＯＦ）などを用いて測定することができる。次いでこれらの質量を、公知のタンパク質配列を含有するデータベースのものと比較することによって、タンパク質を特定する。化合物４４に結合しているペプチドフラグメントもまた特定される。これは、ペプチドフラグメントの分子量が化合物４４の分子量によって増加するからである。
【０６５１】
本出願に開示されている各参考文献は、その全体が参照により本明細書により組み込まれる。
【図１】
0005902293.tif 000270