(57)【要約】【課題】本発明は、簡便に摂取が可能かつ、天然由来で副作用が無く安全な非アルコール性脂肪性肝炎を治療・予防する医薬品を提供する。【解決手段】非アルコール性脂肪性肝炎、または肝臓の線維化を予防改善剤するために、アスタキサンチンまたはエステルを投与する。
2012157290.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非アルコール性脂肪性肝炎を予防・改善するために、アスタキサンチン又はそのエステルを投与する方法。
【請求項２】
肝臓の線維を予防・改善するために、アスタキサンチン又はそのエステルを投与する方法。
【請求項３】
アスタキサンチン又はそのエステルの１日当たり体重１ｋｇあたりの投与量がアスタキサンチン遊離体換算量で０．０１〜０．５ｍｇである請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
アスタキサンチン又はそのエステルが、ヘマトコッカス藻抽出物である請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
アスタキサンチン又はそのエステルに脂肪酸のグリセリドを配合する請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
非アルコール性脂肪性肝炎を予防・改善を目的とした医薬組成物を製造するためのアスタキサンチン又はそのエステルの使用。
【請求項７】
肝臓の線維を予防・改善を目的とした医薬組成物を製造するためのアスタキサンチン又はそのエステルの使用。
【請求項８】
アスタキサンチン又はそのエステルの１日当たり体重１ｋｇあたりの投与量がアスタキサンチン遊離体換算量で０．０１〜０．５ｍｇである請求項６又は７記載の使用。
【請求項９】
アスタキサンチン又はそのエステルが、ヘマトコッカス藻抽出物である請求項５〜８のいずれか１項記載の使用。
【請求項１０】
アスタキサンチン又はそのエステルに脂肪酸のグリセリドを配合する請求項５〜９のいずれか１項記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非アルコール性脂肪性肝炎及び肝臓線維化を予防改善する方法及び、それらのための医薬組成物の製造のためのアスタキサンチンの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、日本国では食生活の欧米化にともなう脂肪の摂取量が増加、社会変化にともなう運動量の低下やストレスの増加により、体内での脂肪の蓄積が問題となっている。蓄積された脂肪は、各組織に蓄積され様々な生活習慣病の原因となっている。主に２つの原因からなり、１つは内臓器官の脂肪細胞に蓄えられことである。肥大化した脂肪細胞は分泌するサイトカイン量が変化し糖尿病や動脈硬化の原因の一つとなっている。また脂肪細胞の脂肪保持量を超えるとその内臓器官が炎症を生じ、例えば肝臓の場合は脂肪性肝疾患などを生じる。【０００３】
これらの脂肪性肝疾患の中で、最近、飲酒歴がないにもかかわらず脂肪性肝疾患を発症する例が数多く見出され、問題になっている。これらの疾患には、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）がある。このうちＮＡＳＨは、肝臓の線維化を伴い、肝硬変及び肝細胞癌に移行する例があることから、極めて重要である。ＮＡＳＨの原因は正確には判明しておらず、明確に有効性が確認された治療薬は未だ存在しない。このようにＮＡＳＨは脂肪性肝疾患の中でも特殊であり、通常の脂肪性肝疾患に有効な医薬では改善しないことから、ＮＡＳＨの予防改善剤の開発が望まれている。最近になって、ピオグリタゾン及びビタミンＥがＮＡＳＨに対して有効である旨の報告がある（非特許文献１）。【０００４】
一方、アスタキサンチンは、エビ、カニ等の甲殻類、サケ、タイ等の魚類、緑藻ヘマトコッカス等の藻類、赤色酵母ファフィア等の酵母類等、天然、特に海洋産物に広く分布しており、赤色色素として用いられ、ビタミンＥの約１０００倍、β−カロテンの約４０倍の抗酸化作用を有し、また抗炎症効果があることが知られている（特許文献１）。近年、サプリメントとしてアスタキサンチンの使用が増加しつつある。また、アスタキサンチンのその他の効用としてストレスに起因する肝機能低下や肝臓中の過酸化脂質の減少効果（特許文献２）、アスタキサンチンの血中酸化脂質抑制による肝障害、肝硬変、肝炎などの治療・予防などが報告されている（特許文献３）。しかし、アスタキサンチンのＮＡＳＨに対する作用は全く知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平２−４９０９１号公報
【特許文献２】特開平９−１２４４７０号公報
【特許文献３】特開２００６−００８７１９号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１０；３６２：１６７５−１６８５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、副作用がなく、容易に摂取可能な非アルコール性脂肪性肝炎及び肝臓線維化を治療・予防するための医薬品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
そこで本発明者らは、上記の目的を達成するため鋭意検討した結果、アスタキサンチンを摂取することによって、優れた非アルコール性脂肪性肝炎及び肝臓の線維化の改善、予防効果が得られることを見出し、本発明を完成した。【０００９】
すなわち、本発明は、アスタキサンチン又はそのエステルを有効成分とする非アルコール性脂肪性肝炎の予防改善剤を提供するものである。
また、本発明は、アスタキサンチン又はそのエステルを有効成分とする肝臓の線維化の予防改善剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
アスタキサンチンを有効成分として医薬品の形で投与・摂取することによって、非アルコール性脂肪性肝炎及び肝臓の線維化を予防改善することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ＮＣ群マウスのスライスした肝臓をＨ＆Ｅ染色した光学顕微鏡２００倍倍率の写真である。
【図２】ＮＣ＋ＡＸ２０群マウスのスライスした肝臓をＨ＆Ｅ染色した光学顕微鏡２００倍倍率の写真である。
【図３】ＣＬ群マウスのスライスした肝臓をＨ＆Ｅ染色した光学顕微鏡２００倍倍率の写真である。
【図４】ＣＬ＋ＡＸ２０群マウスのスライスした肝臓をＨ＆Ｅ染色した光学顕微鏡２００倍倍率の写真である。
【図５】ＥＴ群マウスのスライスした肝臓をＨ＆Ｅ染色した光学顕微鏡２００倍倍率の写真である。
【図６】ＥＴ＋ＡＸ２０群マウスのスライスした肝臓をＨ＆Ｅ染色した光学顕微鏡２００倍倍率の写真である。
【図７】ＮＣ群マウスのスライスした肝臓の光学顕微鏡２００倍倍率の写真である。
【図８】ＮＣ＋ＡＸ２０群マウスのスライスした肝臓の光学顕微鏡２００倍倍率の写真である。
【図９】ＣＬ群マウスのスライスした肝臓の光学顕微鏡２００倍倍率の写真である。矢印の箇所が線維化している箇所を示す。
【図１０】ＣＬ＋ＡＸ２０群マウスのスライスした肝臓の光学顕微鏡２００倍倍率の写真である。矢印の箇所が線維化している箇所を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳ）及び肝臓の線維化の予防改善剤の有効成分は、アスタキサンチン又はそのエステルである。
すなわち、本発明においては、アスタキサンチンの遊離体、モノエステル体、ジエステル体の少なくとも一種を用いることができる。ジエステル体は２つの水酸基がエステル結合により保護されているため化学的及び物理的に遊離体やモノエステル体よりも安定性が高く、酸化分解されにくい。しかし、腸内で酵素により、又は生体中に取り込まれると生体内酵素により速やかにアスタキサンチンに加水分解され、効果を示すものと考えられている。消化管からの吸収性や水への分散が優れていることからアスタキサンチンフリー体よりもエステル体のほうが好ましい。
【００１３】
アスタキサンチンのモノエステルとしては、低級又は高級飽和脂肪酸、あるいは低級又は高級不飽和脂肪酸によりエステル化されたエステル類をあげることができる。前記低級又は高級飽和脂肪酸、あるいは低級又は高級不飽和脂肪酸の具体例としては、酢酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、ペンタデカン酸、パルミチン酸、パルミトオレイン酸、へプタデカン酸、エライジン酸、リシノール酸、ペトロセリン酸、バクセン酸、エレオステアリン酸、プニシン酸、リカン酸、パリナリン酸、ガドール酸、５−エイコセン酸、５−ドコセン酸、セトール酸、エルシン酸、５，１３−ドコサジエン酸、セラコール酸、デセン酸、ステリング酸、ドデセン酸、オレイン酸、ステアリン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸などをあげることができる。また、アスタキサンチンのジエステルとしては前記脂肪酸からなる群から選択される同一又は異種の脂肪酸によりエステル化されたジエステル類をあげることができる。
【００１４】
さらに、アスタキサンチンのモノエステルとしては、グリシン、アラニンなどのアミノ酸；酢酸、クエン酸などの一価又は多価カルボン酸；リン酸、硫酸などの無機酸；グリセロ糖脂肪酸、スフィンゴ糖脂肪酸などの糖脂肪酸；グリセロ脂肪酸などの脂肪酸；グリセロリン酸などによりエステル化されたモノエステル類をあげることができる。なお、考えられ得る場合は前記モノエステル類の塩も含む。脂肪酸の誘導体としては、上記脂肪酸のリン脂質型、アルコール型、エーテル型、ショ糖エステル型、ポリグリセリンエステル型が挙げられる。
【００１５】
アスタキサンチンのジエステルとしては、前記低級飽和脂肪酸、高級飽和脂肪酸、低級不飽和脂肪酸、高級不飽和脂肪酸、アミノ酸、一価又は多価カルボン酸、無機酸、糖脂肪酸、脂肪酸及びグリセロリン酸からなる群から選択される同一又は異種の酸によりエステル化されたジエステル類をあげることができる。なお、考えられ得る場合は前記ジエステル類の塩も含む。グリセロリン酸のジエステルとしては、グリセロリン酸の飽和脂肪酸エステル類、又は高級不飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸又は飽和脂肪酸から選択される脂肪酸類を含有するグリセロリン酸エステル類などをあげることができる。
【００１６】
アスタキサンチンとは、天然物由来のもの又は合成により得られるものを意味する。天然物由来のものとしては、例えば、緑藻ヘマトコッカスなどの微細藻類、赤色酵母ファフィアなどの酵母類、エビ、オキアミ、カニなどの甲殻類の甲殻、イカ、タコなどの頭足類の内臓、種々の魚介類の皮やヒレ、ナツザキフクジュソウなどのAdonis属植物の花弁、Paracoccus sp. N81106、Brevundimonas sp. SD212、Erythrobacter sp. PC6などのα−プロテオバクテリア類、Gordonia sp. KANMONKAZ-1129などの放線菌、Schizochytriuym sp. KH105などのラビリンチュラ類（特にヤブレツボカビ科）やアスタキサンチン産生遺伝子組み換え生物体などから得られるものをあげることができる。天然からの抽出物及び化学合成品は市販されており、入手は容易である。
【００１７】
アスタキサンチンは、３、３'−ジヒドロキシ−β、β−カロテン−４、４'−ジオンであり、立体異性体を有する。具体的には、（３Ｒ、３'Ｒ）−アスタキサンチン、（３Ｒ、３'Ｓ）−アスタキサンチン及び（３Ｓ、３'Ｓ）−アスタキサンチンの３種の立体異性体が知られているが、本発明にはそのいずれも用いることができる。
【００１８】
本発明において、アスタキサンチンの脂肪酸エステルは、天然物由来のもの又は合成により得られるもののいずれも用いることができるが、体内での吸収からアスタキサンチンエステルが各種の油脂に溶解した天然物由来が好ましい。天然物由来には、例えば、オキアミ抽出物、ファフィア酵母抽出物、ヘマトコッカス藻抽出物があるが、特に好ましいのはアスタキサンチンの安定性の良さとアスタキサンチンのエステルの種類によりヘマトコッカス藻抽出物である。これらの抽出物は、脂肪酸のクリセリドによく分散するため、アスタキサンチンの吸収性を高め、本発明の非アルコール性脂肪性肝炎の予防改善効果を促進するため脂肪酸のクリセリドに添加するのが好ましい。特に、中鎖脂肪酸のトリグリセリドが好ましい。
【００１９】
アスタキサンチンの脂肪酸エステルは突然変異原性が観察されず、安全性が高い化合物であることが知られて、食品添加物として広く用いられている（高橋二郎ほか：ヘマトコッカス藻アスタキサンチンの毒性試験―Ａｍｅｓ試験、マウス単回投与毒性試験、マウス９０日反復経口投与性毒性試験―、臨床医薬、２０：８６７−８８１、２００４）。
【００２０】
ヘマトコッカス藻は、ボルボックス目クラミドモナス科に属する緑藻類であり、通常は緑藻であるためクロロフィル含量が高く緑色であり、２本の鞭毛によって水中を遊泳しているが、栄養源欠乏や温度変化等の飢餓条件では休眠胞子を形成し、アスタキサンチン含量が高くなり赤い球形となる。本発明においては、いずれの状態でのヘマトコッカス藻も用いることができるが、アスタキサンチンを多く含有した休眠胞子となったヘマトコッカス藻を用いるのが好ましい。また、ヘマトコッカス属に属する緑藻類では、例えば、ヘマトコッカス・プルビイアリス（Haematococcus  pluvialis）が好ましい。
【００２１】
ヘマトコッカス緑藻類の培養方法としては、異種微生物の混入・繁殖がなく、その他の夾雑物の混入が少ない密閉型の培養方法が好ましく、例えば、一部解放型のドーム形状、円錐形状又は円筒形状の培養装置と装置内で移動自在のガス吐出装置を有する培養基を用いて培養する方法（国際公開第９９／５０３８４号公報）や、密閉型の培養装置に光源を入れ内部から光を照射して培養する方法、平板状の培養槽やチューブ型の培養層を用いる方法が適している。
【００２２】
ヘマトコッカス藻からアスタキサンチン又はそのエステルを含有する抽出物を得る方法としては、ヘマトコッカス藻を乾燥粉砕した後アセトンやアルコールなどの有機溶媒で抽出する方法、ヘマトコッカス藻を有機溶媒に懸濁させて粉砕し同時に抽出する方法、二酸化炭素などを用いる超臨界抽出する方法などで行うことができる。
【００２３】
超臨界抽出法は、常法によって行うことができ、例えば、広瀬（Ind Eng Chem Res、2006、45(10)、3652-3657、Extraction of Astaxanthin from Haematococcus pluvialis Using Supercritical CO2 and Ethanol as Entrainer）らの方法で行うことができる。
【００２４】
前記培養物又は前記甲殻類から有機溶媒を用いて抽出及び精製する方法については種々の方法が知られている。例えば、アスタキサンチン及びそのエステルは油溶性物質であることから、アスタキサンチンを含有する天然物からアセトン、アルコール、酢酸エチル、ベンゼン、クロロホルムなどの油溶性有機溶媒でアスタキサンチン含有成分を抽出することができる。また、二酸化炭素、プロパン及び水などを用い超臨界抽出を行うこともできる。抽出後、常法に従って溶媒を除去してモノエステル型のアスタキサンチンとジエステル型のアスタキサンチンの混合濃縮物を得ることができる。得られた濃縮物は、所望により分離カラムやリパーゼ分解によりさらに精製することができる。
【００２５】
前記のドーム型培養装置や密閉型の培養装置で培養したヘマトコッカス藻を乾燥させ、粉砕後にアセトンで抽出又は、アセトン中で粉砕と抽出を同時に行ったのち、アセトンを除去してアスタキサンチン抽出する製法が、又は超臨界抽出を行い、精製したものは、空気に触れることがないことからアスタキサンチンの酸化がほとんどなく、夾雑物が少なく、すなわち本発明の効果を阻害する物質が少なく、アスタキサンチンとトリグリセリドを純度良く多く含むことができ好適である。
【００２６】
アスタキサンチン又はそのエステルは、後記実施例に示すように、優れたＮＡＳＨ及び肝臓線維化の予防改善効果を有する。アスタキサンチン又はそのエステルのＮＡＳＨ予防改善効果及び肝臓線維化予防改善効果は、肝細胞の線維化や炎症に関する遺伝子の発現を抑制しており、単なる抗酸化作用や脂質の酸化防止作用からは予測できないものである。
従って、アスタキサンチン又はそのエステルは、非アルコール性脂肪性肝炎及び肝臓の線維化を予防改善するための医薬品（以下、「本品発明の医薬品」という）、並びに本発明の医薬品を飲食物（以下、「本品発明の飲食物」）に配合することができる。なお、本発明の医薬品及び飲食物は、ヒト及び動物に対して投与できる。
【００２７】
本発明の医薬品におけるアスタキサンチン又はそのエステルの含有量は、アスタキサンチン遊離体換算量で、成人では１日あたり体重１ｋｇ当たり、０．０００１〜１ｍｇ、好ましくは０．００１〜０．５ｍｇ、より好ましくは０．０１〜０．２ｍｇである。１日でこれらの摂取量が可能であるように、複数回に分けて摂取可能なよう分割する形態とすることができる。投与量は、投与される患者の年齢、体重、症状の程度、投与形態によって異なる。本発明の医薬品におけるアスタキサンチン又はその塩は、１日の摂取量によって適宜配合することができ０．００１〜９９重量％、好ましくは０．０１〜９０重量％の量で含有させることができる。
【００２８】
本発明の効果を補助するため、補助効果を有する物質を添加することができる。例えば、ビタミンＡ類；カロテノイド類（キサントフィル除く）；ビタミンＢ類；ビタミンＣ類；ビタミンＤ類、ビタミンＥ類；トコトリエノール類；グルタチオン及びこれらの誘導体並びにこれらの塩；リグナン、カテキン、アントシアニン、タンニン、ルチン、クロロゲン酸、エラグ酸、クルクミン、クマリンなどのポリフェノール類；リノール酸、α−又はγ−リノレイン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、イワシ酸、ドコサヘキサエン酸及びその誘導体並びにそれらの塩；コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、ケラチンから選ばれるタンパク質及びそれらの誘導体並びに加水分解物；アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンなどのアミノ酸及びこれらの誘導体及びその塩類並びにペプチド；グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、クエン酸、サリチル酸などのα−ヒドロキシ酸及びそれらの誘導体並びにそれらの塩；血清除蛋白、脾臓、胎盤、鶏冠、ローヤルゼリー、酵母、乳酸菌、ビフィズス菌、霊芝、ニンジン、センブリ、ローズマリー、オウバク、ニンニク、ヒノキチオール、セファランチン、アロエ、サルビア、アルニカ、カミツレ、シラカバ、オトギリソウ、ユーカリ、ムクロジ、センプクカ、ケイケットウ、サンペンズ、ソウハクヒ、トウキ、イブキトラノオ、クララ、サンザシ、シラユリ、ホップ、ノイバラ、ヨクイニン、ドクダミ、海藻、納豆、レモングラス、ハイビスカスなどの天然物並びにそれらの抽出物；アデノシン三リン酸、アデノシン二リン酸、アデノシン一リン酸などのアデニル酸誘導体；鉄、バナジウム、モリブデン、マンガン、銅、カリウム、マグネシウム、カルシウム、亜鉛、セレン、ヨウ素などのミネラル類；マンニトール、キシリトール、グルコサミンなどの単糖類；ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパラン硫酸、ヘパリン、ケラタン硫酸、グリコーゲン、キチン、キトサンなどの多糖類；デオキシリボ核酸、リボ核酸などの核酸類；その他のグリチルリチン酸、グアニン、ムチン、ユビキノン、α−リポ酸、オクタコサノール、アリシン、アリイン、ラズベリーケトン、カプシエイト、蜂蜜、ローヤルゼリー、カプサイシンなど、並びにそれらの混合物からなる群から１種又は２種以上選択することができる。これらの成分は、医薬品全量に対して一般には０.０１〜９０重量％、好ましくは０.１〜５０重量％配合され、一種以上組み合わせて用いることができる。
【００２９】
本発明のＮＡＳＨ及び肝臓線維化の予防改善剤は、医薬品や飲食物、化粧品、飼料に配合又はその形態をとることができる。本発明で、医薬品には、医薬品の他に医薬部外品なども含まれる。
【００３０】
本発明の医薬品は、一般製剤の製造に用いられる種々の添加剤を適当量含んでいてもよい。このような添加剤として、例えば賦形剤、結合剤、酸味料、発泡剤、人工甘味料、香料、滑沢剤、着色剤、安定化剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤などが挙げられる。賦形剤としては、例えばトウモロコシデンプン、馬鈴薯デンプン、コムギコデンプン、コメデンプン、部分アルファー化デンプン、アルファー化デンプン、有孔デンプン等のデンプン類、乳糖、ショ糖、ブドウ糖などの糖、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、ソルビトール、マルチトールなどの糖アルコール、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、ハイドロタルサイト、無水リン酸カルシウム、沈降炭酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、軽質無水ケイ酸などの無機化合物などがあげられる。結合剤としては、例えばヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アラビアゴム末、ゼラチン、プルランなどが挙げられる。崩壊剤としては、例えばデンプン、寒天、カルメロースカルシウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、結晶セルロース、Ｆ−ＭＥＬＴ（商標、富士化学工業（株）製）などがあげられる。酸味剤としては、例えばクエン酸、酒石酸、リンゴ酸、アスコルビン酸などがあげられる。発泡剤としては、例えば炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウムなどが挙げられる。甘味料としては、例えばサッカリンナトリウム、グリチルリチン二カリウム、アスパルテーム、ステビア、ソーマチンなどが挙げられる。香料としては、例えばレモン油、オレンジ油、メントールなどが挙げられる。滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、ショ糖脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール、タルク、ステアリン酸、フマル酸ステアリルナトリウムなどが挙げられる。着色剤としては、例えば食用黄色５号、食用赤色２号、食用青色２号などの食用色素、食用レーキ色素、三二酸化鉄などが挙げられる。安定化剤としては、エデト酸ナトリウム、トコフェロール、シクロデキストリン等が挙げられる。ｐＨ調整剤としては、クエン酸塩、リン酸塩、炭酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、酢酸塩、アミノ酸塩などが挙げられる。界面活性剤として、ポリソルベート８０、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ナトリウムカルボキシルメチルセルロース、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、アラビアガム、粉末トラガントなどがあげられる。アスタキサンチンやトコトリエノールの吸収や製剤化を良くするためには粉末状態にすることができる。
【００３１】
シロップ、ドリンク剤、懸濁液、点眼剤、注射剤などの液剤は、有効成分を必要に応じてｐＨ調製剤、緩衝剤、溶解剤、懸濁剤等、張化剤、安定化剤、防腐剤などの存在下、常法により製剤化することができる。懸濁剤としては、例えば、ポリソルベート８０、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ナトリウムカルボキシルメチルセルロース、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、アラビアガム、粉末トラガントなどを挙げることができる。溶解剤としては、例えば、ポリソルベート８０、水添ポリオキシエチレンヒマシ油、ニコチン酸アミド、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、マクロゴール、ヒマシ油脂肪酸エチルエステルなどを挙げることができる。安定化剤としては、例えば亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸ナトリウムなどを挙げることができる。防腐剤としては、例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル、ソルビン酸、フェノール、クレゾール、クロロクレゾールなどを挙げることができる。
【００３２】
皮膚外用剤の形態には、特に限定されず、例えば、乳液、クリーム、化粧水、パック、分散液、洗浄料、メーキャップ化粧料、頭皮・毛髪用品等の化粧品や、軟膏剤、クリーム剤、外用液剤等の医薬品などとすることができる。上記成分以外に、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる成分、例えば、美白剤、保湿剤、各種皮膚栄養成分、紫外線吸収剤、酸化防止剤、油性成分、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、色剤、水、防腐剤、香料等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００３３】
本発明の飲食物としては、サプリメント、保健機能食、特別用途食品、健康食品等の機能性食品、一般食品、飲料として用いることができ、摂取のしやすさや摂取量が決めやすいことから、サプリメント、保健機能食、特別用途食品等の機能性食品が好ましく、前述医薬品と同様の形態、錠剤、口腔内速崩壊錠、カプセル、顆粒、細粒などの固形投与形態、シロップ及び懸濁液のような液体投与形態で摂取することができる。上記医薬品用製剤で用いる成分のうち、食品で使用可能なものを選択でき、その他に乳蛋白質、大豆蛋白質、卵アルブミン蛋白質など、又は、これらの分解物である卵白オリゴペプチド、大豆加水分解物、アミノ酸単体の混合物を併用することもできる。また、ドリンク形態で提供する場合は、栄養バランス、摂取時の風味を良くするためにアミノ酸、ビタミン類、ミネラル類などの栄養的添加物、甘味料、香辛料、香料及び色素などを配合してもよい。本発明の飲食物の形態は、これらに限定されるものではない。
【００３４】
本発明において、機能性食品とは、国や公共団体が許可・指定している医薬品的な効能を有する食品であり、例えば、栄養機能食品や特定保健用食品などの保健機能食品、特別用途食品などである。なお、状況や時代により名称や規程が変化するが、本質的に同じであるものは本発明に含まれる。
【００３５】
一般食品、すなわち飲食物の形態例としては、マーガリン、バター、バターソース、チーズ、生クリーム、ショートニング、ラード、アイスクリーム、ヨーグルト、乳製品、ソース肉製品、魚製品、漬け物、納豆、煮豆、炒り豆、豆腐、麻婆豆腐、ミックスナッツ、フライドポテト、ポテトチップス、スナック菓子、かきもち、ポップコーン、ふりかけ、チューインガム、チョコレート、プリン、ゼリー、グミキャンディー、キャンディー、ドロップ、キャラメル、パン、カステラ、ケーキ、ドーナッツ、ビスケット、クッキー、クラッカー、焼き菓子、マカロニ、パスタ、ラーメン、蕎麦、うどん、サラダ油、インスタントスープ、ドレッシング、卵、マヨネーズ、みそなど、又は果汁飲料、清涼飲料、スポーツ飲料などの炭酸系飲料又は非炭酸系飲料など、茶、コーヒー、ココアなどの非アルコール又はリキュール、薬用酒などのアルコール飲料、栄養ドリンク、牛乳、豆乳などの一般食品への添加例を挙げることができる。
【００３６】
本発明の飲食物は、アスタキサンチンを一般食品の原料と共に配合し、常法に従って加工製造することにより製造される。アスタキサンチンの配合量は食品の形態などにより異なり特に限定されるものではないが、一般にはアスタキサンチンの使用量は当業者が飲食物の種類に応じて適宜選択でき、前述の量を配合することができる。
【００３７】
本発明の飲食物は飼料としてヒト以外への動物へ投与しても同様効果を得ることができる。動物としては、例えば、マウス、ハムスター、マウス、ウサギ、犬、猫、豚、牛（特に黒毛和牛）、馬、羊、猿、鶏、鴨、ガチョウなどを挙げることができる。
【００３８】
動物に投与する場合は、アスタキサンチン遊離体換算量で１日あたり、体重の１ｋｇあたり１日あたり体重１ｋｇ当たり、０．０００１〜１ｍｇ、好ましくは０．００１〜０．５ｍｇ、より好ましくは０．０１〜０．２ｍｇの摂取量が可能なように配合することができる。
【００３９】
本発明の飲食物の飼料形態としては、固形製剤、固形、ペレット状、粒状、ビスケット状、練り状などの形態及びドライフード、セミドライフード（例えば、水分含有量１０〜５０重量％程度の飼料）、又は缶詰などのウェットフード（例えば、水分含有量が５０〜８０重量％程度の飼料）等に特に制限されない。従来の飼料製造の過程において適当な工程でアスタキサンチン又はそのエステルを１種又は２種以上を飼料の材料に添加混合、又はアスタキサンチン又はそのエステルを１種又は２種以上の水溶液を飼料にふりかけて製造することができる。本発明の飼料は、市販の飼料にアスタキサンチン又はそのエステルを１種又は２種以上を添加混合し、又は振りかけても作ることができる。また、人用の栄養補助食品と同様に、摂取が容易である錠剤、舌下錠、丸剤、散剤、粉剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤及び軟カプセルなどの固形製剤で製造することができる。
【００４０】
配合可能な原料としては、飼料として使用し得るものなら特に制限はないが、飼料の原料としては、飼料の種類に応じて、慣用の成分、例えば、魚粉、魚肉、魚介類、フィッシュミール、畜肉、肉粉、肉骨粉、血粉、フェザーミール、蚕蛹油粕、脱脂粉乳、動物性油脂（牛油、豚油、骨油など）、鶏卵類、乳類などの動物性原料；ビール酵母、トルラ酵母などの微生物；トウモロコシ、マイロ、小麦、大麦、ライ麦、エン麦、小麦粉、玄米、アワ、大豆、キナコ、キャッサバなどの穀類；アルファー化デンプン、デンプンなどのデンプン類；大豆油粕、脱皮大豆油粕、ナタネ油粕、ラッカセイ油粕、ヤシ油粕、ヒマワリ油粕、アマニ油粕、ゴマ油粕、サフラワー油粕、パーム核油粕、カポック油粕などの油粕類；米ヌカ、大麦ヌカ、ふすまなどのヌカ類；グルンフィード、グルテンミール、澱粉粕、精蜜、醤油粕、ビール粕、ビートパルプ、バガス、豆腐粕、麦芽根、ミカン皮、蜜柑ジュース粕などの製造粕類；アルファルファミール、チモシー乾草、藁などの繊維素；賦形剤、結合剤、崩壊剤、食塩、砂糖などの糖類、ビタミン類、アミノ酸類、ミネラル類などの成分を一種又は二種以上配合して使用することができる。
【００４１】
固形製剤に配合可能な原料としては、前述の原料の他に、例えば、人の食品分野で一般的に用いられる担体と均一に混合して製造できる。具体的には、シュークロース、ソルビトール、フラクトース等の糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなどのグリコール類、ゴマ油、菜種油、オリーブ油、大豆油などの油類、ストロベリー・フレーバー、ペッパーミントなどのフレーバー類などを使用して製造できる。また、散剤、丸剤、カプセル、軟カプセル、錠剤の形態で、ラクトース、グリコース、シュークロース、乳糖、マニトール、コーンスターチ、二酸化ケイ素などの賦形剤、デンプン、アルギン酸ソーダなどの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン、カゼインなどの結合剤、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、サポニン、レシチンなどの乳化剤、グアーガム、アルギン酸、カラギーナン、寒天、ペクチン、アラビアガム、結晶セルロースなどの増粘剤、グリセリンなどの可塑剤を用いて製造できる。錠剤型としては錠剤及び軟カプセルは摂取が容易であるので好ましい。
【実施例】
【００４２】
本発明をさらに詳細に説明にするために以下に実施例をあげるが、本発明がこの実施例のみに限定されない。【００４３】
［実施例１］  非アルコール性脂肪性肝炎の動物モデル試験
非アルコール性脂肪性肝炎の動物モデルとして雄のＣ５７Ｂｌ／６Ｊマウス（チャールズリバー社製、８週齢）を用いた。
温度２５℃、湿度４０％で照明を１２時間の人工の明暗サイクルとした条件下で、標準的なマウス食と水道水の自由な摂取が可能なようにマウスを８週間飼育した。
通常食としてはＣＲＦ−１（チャールズリバー社製）を、非アルコール性脂肪肝炎誘導食としてはコレステロール含有ココアバター食（リサーチダイエット社製）を与えた。アルコール性脂肪性肝炎誘導食としては４％エタノールを与えた。アスタキサンチン（アスタキサンチンの脂肪酸エステル、ヘマトコッカス藻から抽出、中鎖脂肪酸グリセリドに溶解）は前述の餌に表１の量を含むように混合した餌を与えた。
試験開始後１６週間後に、マウスを１６時間絶食させたのち、血液、肝臓を採取し、後述の分析を行った。
試験中、マウスの体重は、ＮＣ群が４２５ｇから５３５ｇに、ＮＣ＋ＡＣ群が４２５ｇから５１０ｇに、ＣＬ群が４４５ｇから６０５ｇに、ＣＬ＋ＡＸ群が４２５ｇから５７５ｇに増加した。【００４４】
［表１］  試験群
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【００４５】
（肝臓の分析）
屠殺後のマウスの肝臓を取り出し、肝臓重量、肝臓の中性脂肪量を測定した。肝臓の中性脂肪量は、ＴＧ-Ｅテスト（和光社製）を用いて溶解した。肝臓重量を表２に、肝臓中性脂肪量を表３に示す。
取り出した肝臓を１０％ホルマリン溶液に漬けた後、パラフィン内で保存した。この肝臓を５ｍｍの厚さに切り、Ｈ＆Ｅ染色を行った。図１〜４に写真を、その写真の炎症発生により染色された部位を画像解析した結果を表４に示す。また、染色なしの肝細胞写真を図５〜８に示す。【００４６】
［表２］  肝臓重量
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【００４７】
［表３］  肝臓中性脂肪量
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【００４８】
［表４］  染色による炎症発生量
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【００４９】
（肝臓の遺伝子発現測定）
肝臓３０ｍｇを磨りつぶし、リアルタイムＰＣＲ７９００ＨＴ（アプライドバイオシステム社製）を用いて関連する遺伝子の発現を測定した。
結果を表５〜８に示す。【００５０】
［表５］  線維化に関する遺伝子の発現
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【００５１】
［表６］  脂肪肝に関する遺伝子の発現
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【００５２】
［表７］  炎症に関する遺伝子の発現
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【００５３】
［表８］  脂肪蓄積に関する遺伝子の発現
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【００５４】
これらの結果より、非アルコール性脂肪性肝炎のモデルである大量にコレステロールを摂取している場合、アスタキサンチンは容量依存的に肝脂肪の低下、脂肪性肝炎の低下が見られた。通常食のマウスではアスタキサンチン投与による肝脂肪の低下や脂肪性肝炎の低下は見られなかった。アルコール性脂肪性肝炎モデルのマウスではアスタキサンチン投与による肝脂肪の低下や脂肪性肝炎の低下はある程度の効果は確認できるものの、非アルコール性脂肪性肝炎のモデルよりもかなり小さいものであった。アスタキサンチンは非アルコール性脂肪性肝炎の改善に選択的な効果があると分かる。
アスタキサンチンは、コレステロール食の摂取時にのみに選択的に脂肪肝や脂肪性肝炎の改善効果があることがわかる。また通常では効果を有しないことから、副作用が無く、予防効果があることが分かる。
肝細胞の写真（図１〜６）と線維化に関する遺伝子発現（図７〜１０）から、アスタキサンチンの投与によって、肝脂肪の減少と肝臓の線維化が抑制されていることが分かる。【００５５】
実施例２（ヒトによる非アルコール性脂肪性肝炎の試験）
飲酒行わず営業職についており日頃からストレスを受けメタボリックシンドロームに該当する男性１名に８週間に渡って、１日当たり６ｍｇのアスタキサンチンを投与した。アスタキサンチンはアスタリールＡＣＴ（富士化学工業社製）を用いた。投与前と投与後の血中のγ−ＧＴＰ、ＧＯＴ、ＧＰＴの値を表９に示す。【００５６】
［表９］  血中のＧＯＴ、ＧＰＴ
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【００５７】
ＧＯＴ、ＧＰＴのそれぞれが優位に下がっていた。これらは肪肝の指標であり、アスタキサンチンが脂肪性肝炎を改善していることが分かる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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