(57)【要約】  本発明は、下記工程（１）〜（２）を含む、結腸直腸癌患者におけるα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法の治療効果を予測する方法：  （１）当該患者から採取された生体試料に含まれるＫＲＡＳ遺伝子の変異の有無を検出する工程、及び  （２）上記工程（１）における確認の結果、ＫＲＡＳ遺伝子が変異している場合、当該患者に対する当該化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測する工程、を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記工程（１）〜（２）を含む、結腸直腸癌患者におけるα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法の治療効果を予測する方法：
（１）当該患者から採取された生体試料に含まれるＫＲＡＳ遺伝子の変異の有無を検出する工程、及び
（２）上記工程（１）における検出の結果、ＫＲＡＳ遺伝子が変異している場合、当該患者に対する当該化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測する工程。
【請求項２】
ＫＲＡＳ遺伝子の変異が、コドン１２及び／又は１３の変異である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
結腸直腸癌患者が、標準療法に不応又は不耐の結腸直腸癌患者である、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
請求項１〜３の方法によりα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測された結腸直腸癌患者を治療するためのα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤。
【請求項５】
請求項１〜３の方法によりα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測された結腸直腸癌患者に対し、α，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法を実施することを特徴とする、結腸直腸癌の治療方法。
【請求項６】
請求項１〜３の方法によりα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測された結腸直腸癌患者に当該化学療法を実施するための、α，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤の使用。
【請求項７】
ＫＲＡＳ遺伝子が変異している結腸直腸癌患者を治療するためのα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤。
【請求項８】
ＫＲＡＳ遺伝子が変異している結腸直腸癌患者に対して、α，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法を実施することを特徴とする、結腸直腸癌の治療方法。
【請求項９】
ＫＲＡＳ遺伝子が変異している結腸直腸癌患者を治療するための、α，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、α，α，α−トリフルオロチミジン（ＦＴＤ）と５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩（ＴＰＩ）をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤（以下、ＴＡＳ−１０２という）を使用する化学療法に対する治療効果を予測する方法、当該抗腫瘍剤を用いた化学療法に十分な治療効果を示す可能性が高いと予測された患者に投与するための抗腫瘍剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
結腸直腸癌患者に対する化学療法としては、フルオロピリミジン系抗腫瘍剤を含む化学療法（例えば、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）とロイコボリン（ＬＶ）の併用）をベースに、さらにイリノテカン又はオキサリプラチンを併用した多剤併用療法（ＦＯＬＦＩＲＩ、ＦＯＬＦＯＸ等）が標準療法として実施されており、一定の治療効果が得られている（非特許文献１）。【０００３】
しかしながら、これらの５−ＦＵ、イリノテカン、オキサリプラチンを含む標準療法に対して不応又は不耐となってしまった結腸直腸癌患者に対しては、生存期間を有意に延長できる抗腫瘍剤が非常に限られている。また、このような患者に対しては、上皮細胞増殖因子（ＥＧＦＲ）を標的としたキメラ抗体であるセツキシマブ、完全ヒトモノクローナル抗体であるパニツムマブが選択されることが多いが、これらの抗腫瘍剤は、ＫＲＡＳ遺伝子が変異している患者では効果が認められないことが報告されている（非特許文献２、３）。【０００４】
以上のとおり、結腸直腸癌患者に対する化学療法が精力的に開発されているが、その治療効果は満足できるものではなく、特にＫＲＡＳ遺伝子が変異している結腸直腸癌患者においては実質的に有効な化学療法が確立されていないのが現状である。また、化学療法が奏効するか否かは患者の遺伝的要因によるところが大きいため実際に抗腫瘍剤を投与してみなければわからないといった問題があった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】ＮＣＣＮ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  （ＮＣＣＮ  ＧｕｉｄｅｌｉｎｅｓTM）；Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ（Ｖｅｒｓｉｏｎ３．２０１１）、Ｒｅｃｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ（Ｖｅｒｓｉｏｎ４．２０１１）
【非特許文献２】Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ２００８；３５９（１７）：１７５７−６５．
【非特許文献３】Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．  ２００８；２６（１０）：１６２６−３４．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、結腸直腸癌患者に対して、顕著な延命効果を奏し、且つ副作用が少ない化学療法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、結腸直腸癌患者に対する化学療法について研究を重ねた結果、ＫＲＡＳ遺伝子が変異型の結腸直腸癌患者は、野生型の患者と比較して、ＴＡＳ−１０２がより奏効しやすく、ＫＲＡＳ遺伝子の変異の有無を指標とすることにより、ＴＡＳ−１０２を用いた化学療法が十分な治療効果を示すか否かが判断できることを見出し、本発明は完成に至った。【０００８】
すなわち本発明は、以下の方法及び抗腫瘍剤を提供するものである。
項１．
下記工程（１）〜（２）を含む、結腸直腸癌患者におけるα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法の治療効果を予測する方法：
（１）当該患者から採取された生体試料に含まれるＫＲＡＳ遺伝子の変異の有無を検出する工程、及び
（２）上記工程（１）における検出の結果、ＫＲＡＳ遺伝子が変異している場合、当該患者に対する当該化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測する工程。【０００９】
項２．
ＫＲＡＳ遺伝子の変異が、コドン１２及び／又は１３の変異である、項１記載の方法。【００１０】
項３．
結腸直腸癌患者が、標準療法に不応又は不耐の結腸直腸癌患者である、項１又は２記載の方法。【００１１】
項４．
項１〜３の方法によりα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測された結腸直腸癌患者を治療するためのα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤。【００１２】
項５．
項１〜３の方法によりα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測された結腸直腸癌患者に対し、α，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法を実施することを特徴とする、結腸直腸癌の治療方法。【００１３】
項６．
項１〜３の方法によりα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測された結腸直腸癌患者に当該化学療法を実施するための、α，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤の使用。【００１４】
項７．
ＫＲＡＳ遺伝子が変異している結腸直腸癌患者を治療するためのα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤。【００１５】
項８．
ＫＲＡＳ遺伝子が変異している結腸直腸癌患者に対して、α，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法を実施することを特徴とする、結腸直腸癌の治療方法。【００１６】
項９．
ＫＲＡＳ遺伝子が変異している結腸直腸癌患者を治療するための、α，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤の使用。
【発明の効果】
【００１７】
本発明の予測方法は、結腸直腸癌患者（特に、従来は、抗腫瘍剤に対する応答性が低く、生存期間を有意に延長させる抗腫瘍剤がほとんどなかった標準療法に不応又は不耐となった結腸直腸癌患者）に対して、より顕著な延命効果を示す化学療法を提供することができる。【００１８】
なお、ＴＡＳ−１０２が、結腸直腸癌を含む固形癌に対して治療効果を奏することは報告されているが（Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｖｅｓｔ．２００８；２６（８）：７９４−９．）、ＫＲＡＳ遺伝子が変異型の結腸直腸癌患者に対して、ＴＡＳ−１０２が特に優れた治療効果をもたらすことは知られていない。また、一般的に、ＫＲＡＳ遺伝子が変異型である結腸直腸癌患者は、野生型の結腸直腸癌患者と比べて生存期間が短いことが知られており、このような患者に対してＴＡＳ−１０２が顕著な延命効果を奏効することは予想外な効果である。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ＫＲＡＳ遺伝子野生型におけるカプランマイヤー法による生存曲線を示す。
【図２】ＫＲＡＳ遺伝子変異型におけるカプランマイヤー法による生存曲線を示す。
【図３】ＨＣＴ−１１６結腸直腸癌株を移植したヌードマウスにおける各投与群の相対腫瘍体積のグラフを示す。TAS-102: p.o., Day1-14(b.i.d)Cetuximab: i.p., Day 1, 5, 8, 12
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明の予測方法は、結腸直腸癌患者においてＴＡＳ−１０２を用いた化学療法が十分な治療効果を示すか否かを、当該患者のＫＲＡＳ遺伝子の変異の有無に基づき予測するものである。
【００２１】
本発明で指標であるＫＲＡＳ遺伝子のタンパク質は、細胞膜の内側に局在している分子量２１，０００のＧタンパク質の一種であり、ＥＧＦＲからのシグナルを核に伝達することにより、細胞増殖に関与していることが知られている。また、多くの癌種においてＫＲＡＳ遺伝子のコドン１２及び／又は１３に変異が生じることにより、ＥＧＦＲシグナルの伝達が恒常的に持続されてしまうことが報告されている。
【００２２】
本発明の対象となる患者は、結腸直腸癌患者である。本発明において「結腸直腸癌」とは結腸又は直腸から発生した悪性腫瘍を指し、原発性結腸直腸癌のほか、局所的に再発した結腸直腸癌や他の組織（例えば、肝臓）に転移した転移性結腸直腸癌も含まれる。なお、ここで結腸直腸癌患者には、結腸直腸癌の腫瘍組織を現に有する患者のみならず、結腸直腸癌の腫瘍組織の切除を受けた患者も含む。従って、本明細書において、化学療法の治療効果は、結腸直腸癌の縮小、増殖抑制、延命だけでなく、結腸直腸癌の腫瘍組織の切除後の再発の抑制を包含する。
【００２３】
また、本発明の対象となる結腸直腸癌患者の前治療歴は、ＴＡＳ−１０２が投与できる状態であれば、特に制限されないが、本発明の予測精度の点から、標準療法に不応又は不耐の結腸直腸癌患者であることが好ましい。本発明において標準療法とは、フルオロピリミジン系抗腫瘍剤を含む化学療法（例えば、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）とロイコボリン（ＬＶ）の併用）、及び当該化学療法にイリノテカン又はオキサリプラチンを併用した化学療法（ＦＯＬＦＩＲＩ、ＦＯＬＦＯＸ等）などをいう。ここで「標準療法に不応又は不耐」とは、標準療法を実施していたものの治療効果が認められなくなった場合（例えば、標準療法の実施中に増悪（ＰＤ）した症例、術後補助化学療法として標準療法を実施中若しくは終了後６ヶ月以内に再発した症例などを含む）及び病状の悪化や副作用等により標準的な投与量を投与することができなくなった場合などをいう。
【００２４】
本発明における「ＴＡＳ−１０２」とは、α，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤であり、経口投与により主に結腸直腸癌等の固形癌に抗腫瘍効果を奏することが知られている（国際公開ＷＯ９６／３０３４６号パンフレット）。
【００２５】
「α，α，α−トリフルオロチミジン」は、チミジンの５位のメチル基をトリフルオロメチル基に置換した公知の核酸誘導体であり、ＤＮＡ合成阻害作用による抗腫瘍効果を有することが知られている（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８４：３５９７−３５９８，１９６２；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，７：１−５，１９６４；Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３３：１５０８６−１５０９４，１９９４）。
【００２６】
「５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩」は、チミジンホスフォリラーゼ活性阻害作用を有する公知の化合物であり、抗腫瘍効果の増強作用（国際公開ＷＯ９６／３０３４６号パンフレット）、癌転移抑制作用（国際公開ＷＯ９８／１３０４５号パンフレット）、抗腫瘍剤の消化管障害の軽減作用（国際公開ＷＯ００／５６３３７号パンフレット）、抗ＨＩＶ作用（国際公開ＷＯ０１／３４１６２号パンフレット）、放射線治療の増強作用（国際公開ＷＯ２００８／００１５０２号パンフレット）、炎症性腸疾患の治療効果（国際公開ＷＯ２００９／０４７９０４号パンフレット）が知られている。
【００２７】
ＴＡＳ−１０２は、α，α，α−トリフルオロチミジン及び５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩を配合剤（複数の有効成分を含有する製剤）として一の剤型に製剤化したもの（１剤型形態）でも、上記有効成分を単剤として複数の剤型に製剤化したもの（多剤型形態）であってもよい。このうち、α，α，α−トリフルオロチミジン及び５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩は配合剤で用いることが好ましい。
【００２８】
抗腫瘍剤の投与形態に特に制限は無く、治療目的に応じて適宜選択でき、具体的には経口剤（錠剤、被覆錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤など）、注射剤、坐剤、貼付剤、軟膏剤等が例示できる。このうち、α，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩の配合剤は経口剤の形態が好ましい。各抗腫瘍剤は、それぞれの投与形態に応じ薬理学的に許容される担体を用いて、通常公知の方法により調製することができる。斯かる担体としては、通常の薬剤に汎用される各種のもの、例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、希釈剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、ｐＨ調整剤、緩衝剤、安定化剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を例示できる。
【００２９】
本発明における「α，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法」とは、少なくともＴＡＳ−１０２を投与する化学療法を意味し、ＴＡＳ−１０２を単独で用いた化学療法のみならず、ＴＡＳ−１０２と他の抗腫瘍剤を併用した化学療法をも含むものである。
【００３０】
当該化学療法の投与スケジュールは患者の年齢、性別、病期、転移の有無、前治療暦などの条件により適宜選択されるが、例えば、４週間のうち、初日から５日目及び８日目から１２日目にＴＡＳ−１０２をＦＴＤ（Trifluorothymidine）量として１日２〜４回２０〜８０ｍｇ／ｍ２（体表面積）／ｄａｙ、好適には１日２〜３回５０〜７０ｍｇ／ｍ２（体表面積）／ｄａｙ、より好適には１日２回７０ｍｇ／ｍ２（体表面積）／ｄａｙ投与するスケジュールを１コースとして、当該コースを繰り返す投与スケジュールが好ましい。
【００３１】
なお、当該化学療法は、当該化学療法の後に腫瘍の摘出を行う術前補助化学療法であっても、腫瘍の摘出の後に当該化学療法を行う術後補助化学療法であってもよい。
【００３２】
本発明において「治療効果」は、上述の通り、腫瘍縮小効果、再発抑制効果、延命効果などにより評価することができ、再発抑制効果は無再発生存期間の延長や再発率の改善の程度、延命効果は全生存期間や無増悪生存期間の中央値の延長の程度などにより表すことができる。「α，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す」とは、ＴＡＳ−１０２を投与することにより、非投与の場合と比較して、生存期間を顕著に延長させたり、再発を顕著に抑制させたりする程度の優れた治療効果をいう。
【００３３】
本発明の予測方法は、後述の（１）〜（２）の工程を含むものである。
【００３４】
工程（１）は、患者から採取された生体試料に含まれるＫＲＡＳ遺伝子の変異の有無を検出する工程である。
【００３５】
生体試料としては、癌患者から採取したものであり癌細胞を含む試料であれば特に限定されず、体液（血液、尿等）、組織、その抽出物及び採取した組織の培養物などが例示できる。また、生体試料の採取方法は、生体試料の種類に応じ適宜選択することができる。
【００３６】
本発明におけるＫＲＡＳ遺伝子の変異とは、コドン１２、１３及び６１の変異が例示でき、本発明の予測精度の観点から、コドン１２及び１３の変異が好ましい。具体的には、ＫＲＡＳ遺伝子のコドン１２の１番目又は２番目の塩基が点変異を起こすことによるコドン１２のグリシンがセリン、アスパラギン酸、バリン、システイン、アラニン又はアルギニンに変わる変異、ＫＲＡＳ遺伝子のコドン１３の２番目の塩基が点変異を起こすことによるコドン１３のグリシンがアスパラギン酸に変わる変異が挙げられる（Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １７（１４）：４９０１−４９１４，２０１１；Ｊ  Ｍｏｌ  Ｄｉａｇｎ．  １２（１）：４３−５０,２０１０）。
【００３７】
本発明におけるＫＲＡＳ遺伝子の変異の検出方法としては、上記の変異が検出できれば特に制限されず、公知の検出方法を使用することができる。このような検出方法としては、例えば、ダイレクトシークエンス法やリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法であるＳｃｏｒｐｉｏｎ−ＡＲＭＳ法（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  １７：８０４−８０７，１９９９）が挙げられ、検出感度の点からＳｃｏｒｐｉｏｎ−ＡＲＭＳ法が好ましい。また、ＴｈｅｒａＳｃｒｅｅｎ：ＫＲＡＳ（製造元：ＤｘＳ  社）等の市販の検出キットを用いることができる。
【００３８】
生体試料は、これらの測定方法に応じて、適切な処理をされることにより調製される。また、検出に用いられるプライマー又はプローブを含む試薬は、これらの測定方法に応じて、慣用される方法により調整することができる。
【００３９】
工程（２）は、上記工程（１）における検出の結果、ＫＲＡＳ遺伝子が変異している場合、当該患者に対するＴＡＳ−１０２を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測する工程である。
【実施例】
【００４０】
以下、本発明を実施例に基づきより詳細に説明するが、本発明がこれら実施例に限定されないことはいうまでもない。
【実施例１】
【００４１】
前治療歴が２レジメン以上で、５−ＦＵ、イリノテカン、オキサリプラチンを含む標準療法に不応又は不耐な進行再発結腸直腸癌患者（１６９例）をＴＡＳ−１０２投与群（１１２例）とプラセボ群（５７例）に群分けした。なお、両患者群のバックグラウンドに顕著な違いはなかった（男性比率（ＴＡＳ−１０２投与群、５７．１％；プラセボ群、４９．１％）、平均年齢（ＴＡＳ−１０２投与群、６３才；プラセボ群、６２才）、ＥＣＯＧ  ＰＳ  ０（ＴＡＳ−１０２投与群、６４．３％；プラセボ群、６１．４％）、前治療歴が３レジメン以上の比率（ＴＡＳ−１０２投与群、８４．８％；プラセボ群、７７．２％））。ＴＡＳ−１０２投与群に対しては、４週間のうち、初日から５日目及び８日目から１２日目にＴＡＳ−１０２をＦＴＤ量として１日２回７０ｍｇ／ｍ２（体表面積）／ｄａｙ投与するスケジュールを１コースとして、繰り返し行った。一方、プラセボ群に対してはＴＡＳ−１０２を含むあらゆる抗腫瘍剤を投与しなかった。【００４２】
全症例において全生存期間（Ｏｖｅｒａｌｌ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ：ＯＳ）を評価した。また、全症例中１４９例（ＴＡＳ−１０２投与群：９９例、プラセボ群：５０例）に対し病変組織を採取し、ＴｈｅｒａＳｃｒｅｅｎ：ＫＲＡＳ（製造元：ＤｘＳ  社）を用いてＳｃｏｒｐｉｏｎ−Ａｒｍｓ法によりＫＲＡＳ遺伝子のコドン１２及び１３の変異の有無を検出した。【００４３】
ＴＡＳ−１０２投与群及びプラセボ群において、全生存期間とＫＲＡＳ遺伝子の変異の関係を解析した。結果を表１に示す。また、ＫＲＡＳ変異型及び野生型におけるカプランマイヤー法による生存曲線を図１及び２に示す。【００４４】
【表１】
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【００４５】
ＫＲＡＳ遺伝子が変異型である患者のうち、ＴＡＳ−１０２投与群の全生存期間の中央値（１３．０ヶ月）は、プラセボ群（６．９ヶ月）のそれと比較して統計上有意に長く、ＴＡＳ−１０２が、ＫＲＡＳ遺伝子が変異型である患者に対して、これまでにない顕著に優れた延命効果をもたらすことが確認された（ＨＲ＝０．４４、[９５％ＣＩ: ０．２５−０．８０]、ｐ＝０．００６）。【００４６】
また、一般的に、ＫＲＡＳ遺伝子が変異型である患者は、野生型の患者と比べて生存期間が短いことが知られているが、ＴＡＳ−１０２は、ＫＲＡＳ遺伝子が野生型である患者よりも、変異型である患者に対して、より優れた延命効果を示しており（変異型：１３．０ヶ月、野生型：７．２ヶ月）、これは当業者にとって予想外の効果である。【００４７】
なお、ＫＲＡＳ遺伝子で層別化しない全症例を対象とした場合においても、ＴＡＳ−１０２投与群の全生存期間の中央値（９．０ヶ月）は、プラセボ群（６．６ヶ月）と比較して統計上有意に長く、ＴＡＳ−１０２が標準療法に不応又は不耐な進行再発結腸直腸癌患者に対して優れた延命効果をもたらすことが確認された（ＨＲ＝０．５６、[９５％ＣＩ: ０．３９−０．８１]、ｐ＝０．００１１）。
【実施例２】
【００４８】
次に、ＫＲＡＳ遺伝子が変異型の結腸直腸癌患者に対するＴＡＳ−１０２の有用性を検証すべく、ヒト結腸直腸癌株のヌードマウス皮下移植系でのｉｎ  ｖｉｖｏ効力試験を実施した。【００４９】
ＫＲＡＳ遺伝子が変異型であることが知られているヒト結腸直腸癌株ＨＣＴ−１１６を常法に則り移植したヌードマウスに対して、ＦＴＤ量として１５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙのＴＡＳ−１０２を１日２回１４日間連日経口投与した（ＴＡＳ−１０２投与群）。また、比較群として、５−ＦＵ、イリノテカン、オキサリプラチンを含む標準療法に対して不応又は不耐となってしまった結腸直腸癌患者に対して臨床上頻用されているセツキシマブを選択し、４０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙでＤａｙ  １、５、８、１２に腹腔内投与した（なお、当該投与量は、他癌腫で抗腫瘍効果が確認されている量である）。一方、コントロール群は投薬しなかった。各薬剤投与群の抗腫瘍効果の評価を行った。【００５０】
腫瘍の長径と短径をデジタルノギスにて週２回測定することにより腫瘍体積（ｔｕｍｏｒ  ｖｏｌｕｍｅ，ＴＶ）を算出し、同時に副作用の指標としての体重を計測した。各測定日の腫瘍体積から相対腫瘍体積（ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｔｕｍｏｒ  ｖｏｌｕｍｅ，ＲＴＶ）及び腫瘍増殖抑制率（ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｒａｔｅ，ＩＲ）を次式により算出した。
ＲＴＶｎ＝（ＴＶ  ｏｎ  Ｄａｙ  ｎ）／（ＴＶ  ｏｎ  Ｄａｙ  ０）  
ＩＲ(％)＝［１−(薬剤投与群の平均ＲＴＶｎ値)／(コントロール群の平均ＲＴＶｎ値)］×１００
結果を図３に示す。ＴＡＳ−１０２投与群の最終測定日（２９日目）における腫瘍増殖抑制率は５７．７％であり、統計上有意な抗腫瘍効果を示した。一方、セツキシマブ投与群の腫瘍増殖抑制率は１．７％であり、ほぼ抗腫瘍効果を示さなかった。また、全ての群において、強い体重減少は認められなかった。【００５１】
以上から、ＫＲＡＳ遺伝子の変異の有無に関わらず、結腸直腸癌患者においてＴＡＳ−１０２が臨床上有用であるが、特にＫＲＡＳ遺伝子が変異型の患者において非常に優れた治療効果をもたらすことが証明された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【手続補正書】
【提出日】平成26年6月10日(2014.6.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記工程（１）〜（２）を含む、結腸直腸癌患者におけるα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法の治療効果を予測する方法：
（１）当該患者から採取された生体試料に含まれるＫＲＡＳ遺伝子の変異の有無を検出する工程、及び
（２）上記工程（１）における検出の結果、ＫＲＡＳ遺伝子が変異している場合、当該患者に対する当該化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測する工程。
【請求項２】
下記工程（１）〜（２）を含む、結腸直腸癌患者におけるα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法の治療効果を検査する方法：
（１）当該患者から採取された生体試料に含まれるＫＲＡＳ遺伝子の変異の有無を検出する工程、及び
（２）上記工程（１）における検出の結果、ＫＲＡＳ遺伝子が変異している場合、当該患者に対する当該化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測する工程。
【請求項３】
下記工程（１）〜（２）を含む、α，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤が結腸直腸癌患者に対する治療効果を示すか否かを試験する方法：
（１）当該患者から採取された生体試料に含まれるＫＲＡＳ遺伝子の変異の有無を検出する工程、及び
（２）上記工程（１）で得られた検出の結果を、ＫＲＡＳ遺伝子が変異している場合、当該患者に対する当該化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いという基準と比較する工程。
【請求項４】
ＫＲＡＳ遺伝子の変異が、コドン１２及び／又は１３の変異である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
結腸直腸癌患者が、標準療法に不応又は不耐の結腸直腸癌患者である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
請求項１〜５の方法によりα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤を用いた化学療法が十分な治療効果を示す可能性が高いと予測された結腸直腸癌患者を治療するためのα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤。
【請求項７】
ＫＲＡＳ遺伝子が変異している結腸直腸癌患者を治療するためのα，α，α−トリフルオロチミジンと５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩をモル比１：０．５で含有する抗腫瘍剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
しかしながら、これらの５−ＦＵ、イリノテカン、オキサリプラチンを含む標準療法に対して不応又は不耐となってしまった結腸直腸癌患者に対しては、生存期間を有意に延長できる抗腫瘍剤が非常に限られている。また、このような患者に対しては、上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）を標的としたキメラ抗体であるセツキシマブ、完全ヒトモノクローナル抗体であるパニツムマブが選択されることが多いが、これらの抗腫瘍剤は、ＫＲＡＳ遺伝子が変異している患者では効果が認められないことが報告されている（非特許文献２、３）。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
「５−クロロ−６−（１−（２−イミノピロリジニル）メチル）ウラシル塩酸塩」は、チミジンホスフォリラーゼ活性阻害作用を有する公知の化合物であり、抗腫瘍効果の増強作用（国際公開ＷＯ９６／３０３４６号パンフレット）、癌転移抑制作用（国際公開ＷＯ９８／１３０４５号パンフレット）、抗腫瘍剤の消化管障害の軽減作用（国際公開ＷＯ００／５６３３７号パンフレット）、放射線治療の増強作用（国際公開ＷＯ２００８／００１５０２号パンフレット）、炎症性腸疾患の治療効果（国際公開ＷＯ２００９／０４７９０４号パンフレット）が知られている。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
当該化学療法の投与スケジュールは患者の年齢、性別、病期、転移の有無、前治療暦などの条件により適宜選択されるが、例えば、４週間のうち、初日から５日目及び８日目から１２日目にＴＡＳ−１０２をＦＴＤ（α,α,α-Trifluorothymidine）量として１日２〜４回２０〜８０ｍｇ／ｍ２（体表面積）／ｄａｙ、好適には１日２〜３回５０〜７０ｍｇ／ｍ２（体表面積）／ｄａｙ、より好適には１日２回７０ｍｇ／ｍ２（体表面積）／ｄａｙ投与するスケジュールを１コースとして、当該コースを繰り返す投与スケジュールが好ましい。
【国際調査報告】
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