(57)【要約】皮膚老化やストレスの予防効果や改善効果を実感できる健康飲料を提供することを課題とし、既存のコンドロイチンとヒアルロン酸とビタミン類を含む飲料にグルタチオンを添加した飲料を摂取すると、若返りの指標とされているＤＨＥＡ−Ｓの血中濃度が有意に増加し、臭嗅受容体等の遺伝子の発現が促進され、皮膚の状態、総合感情障害、自律神経バランス、全身的な健康度が顕著に改善することを確認した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶性核タンパク質、オリゴＲＮＡ、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びグルタチオンを含むことを特徴とする健康飲料。
【請求項２】
ビタミン類が、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２から選ばれる１又は２種類以上のビタミンＢ群と、ビタミンＣとを含むことを特徴とする請求項１記載の健康飲料。
【請求項３】
グルタチオンとして、グルタチオン含有酵母抽出物を用いることを特徴とする請求項１又は２記載の健康飲料。
【請求項４】
グルタチオン含有酵母抽出物が、還元型グルタチオンよりも酸化型グルタチオンを多く含むことを特徴とする請求項３記載の健康飲料。
【請求項５】
グルタチオンとして、１０００ｍＬあたり６〜６０ｍｇを添加することを特徴とする請求項１〜４のいずれか記載の健康飲料。
【請求項６】
水溶性核タンパク質、オリゴＲＮＡ、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びグルタチオンを含むことを特徴とする血中デヒドロエピアンドロステロンサルフェート（ＤＨＥＡ−Ｓ）濃度を増加させるための組成物。
【請求項７】
水溶性核タンパク質、オリゴＲＮＡ、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びグルタチオンを含むことを特徴とする臭嗅受容体遺伝子の発現を促進するための組成物。
【請求項８】
水溶性核タンパク質、オリゴＲＮＡ、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びグルタチオンを含むことを特徴とするTNFRSF10C遺伝子又はTNFSF14遺伝子の発現を抑制するための組成物。
【請求項９】
水溶性核タンパク質、オリゴＲＮＡ、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びグルタチオンを含むことを特徴とする老化若しくはストレスを改善又は予防するための組成物。
【請求項１０】
ビタミン類が、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２から選ばれる１又は２種類以上のビタミンＢ群と、ビタミンＣとを含むことを特徴とする請求項６〜９のいずれか記載の組成物。
【請求項１１】
グルタチオンとして、グルタチオン含有酵母抽出物を用いることを特徴とする請求項６〜１０のいずれか記載の組成物。
【請求項１２】
グルタチオン含有酵母抽出物が、還元型グルタチオンよりも酸化型グルタチオンを多く含むことを特徴とする請求項１１記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水溶性核タンパク質、オリゴリボ核酸（オリゴＲＮＡ）、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びグルタチオンを含むことを特徴とする健康飲料の他、水溶性核タンパク質、オリゴＲＮＡ、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びグルタチオンを含むことを特徴とする、血中デヒドロエピアンドロステロンサルフェート（dehydroepiandrosterone sulfate：ＤＨＥＡ−Ｓ）濃度を増加させるための組成物や、臭嗅受容体遺伝子の発現を促進するための組成物や、老化若しくはストレスを改善又は予防するための組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
昨今の健康意識の高まりに伴い、また、来たるべき超高齢社会における疾病の予防のため、日常生活で不足しがちな特定の栄養成分を補完し、健康の維持・増進作用を目的とし、さらには、老化防止や若返りやストレス解消等における具体的な「生体調節機能」の向上に着目した飲食品やその成分の開発が進められている。例えば、水溶性核タンパク質、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類等を含む健康飲料が提案され（例えば、特許文献１参照）、既に本出願人により上市されている。【０００３】
例えば、グルタチオンは、大部分の生物の各組織に存在する生体内抗酸化物質であり、グルタチオンペルオキシダーゼとグルタチオンレダクターゼによって、還元型グルタチオンと酸化型グルタチオンの２種類がいわゆるレドックスサイクルによって調整され、抗酸化物質としての機能を維持していることが知られている（例えば、特許文献２参照）。【０００４】
かかるグルタチオンの有する機能を利用し、グルタチオンが抗酸化物質として、ストレス予防剤やストレス改善食品に用いられうることが報告されている（例えば、特許文献３及び特許文献４参照）。また、グルタチオンを含有する睡眠誘導剤やストレス性不眠症改善剤（例えば、特許文献５参照）や、飲料中にグルタチオン含量を０．０１〜１．０重量％含有せしめた飲料（例えば、特許文献６参照）や、全グルタチオン含量のうちの酸化型グルタチオン含量が少なくとも５０重量％以上であるグルタチオン含有飲料（例えば、特許文献７参照）等多種多様なグルタチオンを含む飲食品が提案されている。【０００５】
一方、若返りの指標として注目されているホルモン類の一つとして、ＤＨＥＡ−Ｓが知られている（例えば、非特許文献１参照）。ＤＨＥＡ−Ｓは、男性ホルモン合成における中間代謝産物であり、同じく中間代謝産物であるデヒドロエピアンドロステロン（dehydroepiandrosterone；ＤＨＥＡ）の硫酸抱合体であって、男女とも若年者から高齢者にかけて年齢が増すにつれ低下することが知られており、ＤＨＥＡに比べて血中濃度の半減期が長く、顕著な変動が認められないため（例えば、特許文献８参照）、老化の程度を示す客観的指標として用いることができるとされている。また、ストレスを受けている患者では、ＤＨＥＡ−Ｓが、減少することが確認されている（例えば、非特許文献２参照）。【０００６】
したがって、血中のＤＨＥＡ−Ｓを増加させれば若返りの効果が得られるようにも思われるが、平均年齢５９歳の１２人の男性に対して行われたＤＨＥＡの投与実験においては、内在性ＤＨＥＡ−Ｓのレベルは上昇したが、脂肪細胞、インスリン、ＬＤＬコレステロール、ＨＤＬコレステロール、テストステロン、エストラジオール等の指標においてなんらその臨床的効果は認められなかったことが報告されている（例えば、非特許文献３参照）。また、現時点では治療目的での閉経後の女性に対するＤＨＥＡの投与は薦められていない（例えば、非特許文献４参照）。【０００７】
血中ＤＨＥＡ−Ｓレベルを上昇させることを目的とする食品や医薬製剤として、田七人参を主原料とし、更に鬱金及び蛇胆を配合した若返り効果を有する顆粒状食品（例えば、特許文献９参照）が提案されている。しかし、これらの原料は入手が容易とはいえず、非常に高価である。また、内因性ＤＨＥＡ−Ｓを増加させるため、被験者より採取したリンパ球を固相化した抗ＣＤ３抗体及びインターロイキン２を含む培養液中で培養を行うことにより増殖活性化させた自己由来リンパ球を主成分とした、内因性ＤＨＥＡ−Ｓを増加させるための製剤（例えば、特許文献８参照）が提案されているが、作製方法が複雑であり、容易に利用できるものではない。【０００８】
他方、ヒトでは高齢になると嗅覚機能が低下することが知られているが、ＡｘｅｌとＢｕｃｋにより匂いの受容体について複雑な組合せのメカニズム解明がなされたことにより、嗅覚受容体（ＯＲ）の発現パターンの解析が進んでいる。例えば、マウスを対象としてin situハイブリダイゼーションにより９つの代表的なＯＲ遺伝子を検出したところ、これらの遺伝子の発現ピークは遺伝子によって異なっていたが、そのうち６つは加齢とともに発現が低下したことが報告されている（例えば、非特許文献５参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００３−３２５１４９号公報
【特許文献２】特開２００６−３４８０５２号公報
【特許文献３】特開２０１０−０３０９０１号公報
【特許文献４】特開平０８−２７５７５２号公報
【特許文献５】特開２００８−０５６６２８号公報
【特許文献６】特開平０６−０７８７１３号公報
【特許文献７】特開平０５−１４６２７９号公報
【特許文献８】特開２０１０−０７７１０６号公報
【特許文献９】特開２００５−２０４５０４号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Science 2002, Vol.297 no 5582 p.811
【非特許文献２】日本老年医学会誌３１巻２号８５−９４
【非特許文献３】The Aging Male, 2003, Vol.6,No.3, pages 151-156
【非特許文献４】Menopause Int 2007；13：75-78
【非特許文献５】Chem Senses, Vol.34, No.8, 695-703, 2009
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の課題は、老化やストレスの予防効果や改善効果を実感できる健康飲料等を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、様々な効果がうたわれている既存の健康飲料よりもすぐれた効能が客観的に把握できる飲料を開発するため、特に核内において作用する栄養成分を補強する観点から、新規の添加成分について検討を続けていたが、水溶性核タンパク質、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類等を含む既存の健康飲料に、あらたにグルタチオン含有酵母エキスを添加した改良飲料を被験者が摂取した場合、皮膚の状態、総合感情障害、自律神経バランス、全身的な健康度について、既存の健康飲料が有する効果とグルタチオンが有する効果との相加効果にとどまらず、相乗的な改善効果が被験者にもたらされることを見いだした。かかる相乗効果を裏付ける生化学的な根拠について検討を続けたところ、驚くべきことに、上記改良飲料を摂取すると、若返りの指標とされている被験者のＤＨＥＡ−Ｓの血中濃度が有意に増加することが確認されるとともにＬＤＬコレステロールが低下することが確認され、また、遺伝子レベルにおいて、臭嗅受容体遺伝子等の発現が促進されることが確認された。本発明はこれらの知見に基づき完成されるに至ったものである。【００１３】
すなわち、本発明は、［１］水溶性核タンパク質、オリゴＲＮＡ、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びグルタチオンを含むことを特徴とする健康飲料や、［２］ビタミン類が、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２から選ばれる１又は２種類以上のビタミンＢ群と、ビタミンＣとを含むことを特徴とする上記［１］記載の健康飲料や、［３］グルタチオンとして、グルタチオン含有酵母抽出物を用いることを特徴とする上記［１］又は［２］記載の健康飲料や、［４］グルタチオン含有酵母抽出物が、還元型グルタチオンよりも酸化型グルタチオンを多く含むことを特徴とする上記［３］記載の健康飲料や、［５］グルタチオンとして、１０００ｍＬあたり６〜６０ｍｇを添加することを特徴とする上記［１］〜［４］のいずれか記載の健康飲料に関する。【００１４】
また、本発明は、［６］水溶性核タンパク質、オリゴＲＮＡ、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びグルタチオンを含むことを特徴とする血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度を増加させるための組成物や、［７］水溶性核タンパク質、オリゴＲＮＡ、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びグルタチオンを含むことを特徴とする臭嗅受容体遺伝子の発現を促進するための組成物や、［８］水溶性核タンパク質、オリゴＲＮＡ、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びグルタチオンを含むことを特徴とするTNFRSF10C遺伝子又はTNFSF14遺伝子の発現を抑制するための組成物や、［９］水溶性核タンパク質、オリゴＲＮＡ、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びグルタチオンを含むことを特徴とする老化若しくはストレスを改善又は予防するための組成物や、［１０］ビタミン類が、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２から選ばれる１又は２種類以上のビタミンＢ群と、ビタミンＣとを含むことを特徴とする上記［６］〜［９］のいずれか記載の組成物や、［１１］グルタチオンとして、グルタチオン含有酵母抽出物を用いることを特徴とする上記［６］〜［１０］のいずれか記載の組成物や、［１２］グルタチオン含有酵母抽出物が、還元型グルタチオンよりも酸化型グルタチオンを多く含むことを特徴とする上記［１１］記載の組成物に関する。【００１５】
さらに本発明の他の態様としては、水溶性核タンパク質、オリゴＲＮＡ、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びグルタチオンを含む組成物を、対象に経口投与することを特徴とする血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度増強方法及び／又は臭嗅受容体遺伝子の発現促進方法や、水溶性核タンパク質、オリゴＲＮＡ、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びグルタチオンを含む組成物を、血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度増強剤及び／又は臭嗅受容体遺伝子の発現促進剤の調製のための使用を挙げることができる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の飲料や組成物を経口摂取することにより、対象において、皮膚状態の向上、自律神経バランスの向上、総合感情障害の改善、健康度の向上等の効果を実感することができ、老化防止・改善やストレス防止・改善がもたらされるとともに、ＤＨＥＡ−Ｓ血中濃度の増加、ＬＤＬコレステロールの低下、及び／又は臭嗅受容体遺伝子、さらには成長ホルモン遺伝子の発現促進などの効果を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】「ＶＩＳＩＡ」による、Ｂ群の被験者の顔の皮膚の状態を、しみ、毛穴、色ムラ、紫外線しみの項目について分析した一例を示す図である。（ａ）は、ｂ飲料を摂取する前の一被験者の顔の皮膚の状態を示し、（ｂ）は、同じ被験者がｂ飲料を５週間摂取した後の顔の皮膚の状態を示す。
【図２】「ＶＩＳＩＡ」による、Ａ、Ｂ、Ｃ各群の被験者について、ａ、ｂ、ｃのいずれか一つの飲料の摂取前と、５週間摂取後の顔の皮膚の改善について、毛穴の減少（改善）と色むら減少（改善）との相関関係を示す。
【図３】Ａ、Ｂ、Ｃ各群の被験者について、ａ、ｂ、ｃのいずれか一つの飲料を５週間摂取する前と後の、「きりつ名人」による自律神経バランスの項目における、各群の平均値の向上率を示す。
【図４】Ａ、Ｂ、Ｃ各群の被験者について、ａ、ｂ、ｃのいずれか一つの飲料を５週間摂取する前と後の、血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度の変動を示す。縦軸は、血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度（μｇ／ｄＬ）を示す。
【図５】Ａ、Ｂ、Ｃ各群の被験者の血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度の各飲料摂取前に対する摂取後のＤＨＥＡ−Ｓ濃度の平均増加率（％）を示す。
【図６】Ａ群、Ｂ群、Ｃ群の各被験者について、ａ、ｂ、ｃのいずれか一つの飲料の摂取前後で、有意に１．２倍以上発現変動がみとめられたプローブについて、各群においてどのようにプローブの発現変動が重複しているかについて、発現増加と発現減少のそれぞれについてベン図として示す。（ａ）は１．２倍を超えて増加、（ｂ）は１．２倍を超えて減少したプローブについて検討している。
【図７】Ｂ群において特異的な変動を示したプローブのうち、Gene Ontology（遺伝子オントロジー）のmolecular functionにおいて、「受容体活性“Receptor ctivity”」に属する遺伝子を抜き出してリスト化したものを示す。
【図８】Ｂ群において特異的な変動を示したプローブのうち、Gene Ontologyのmolecular functionにおいて、「受容体結合“Receptor binding”」に属する遺伝子を抜き出してリスト化したものを示す。
【図９】異なるパターンにより飲料を摂取した一卵性双子における肌弾力試験の比較解析の結果を示す。（ａ）は、ａ飲料を摂取後、休止期間をはさんでｂ飲料を摂取した姉のグラフを示す。（ｂ）は、ｂ飲料を摂取後、休止期間をはさんでａ飲料を摂取した妹のグラフを示す。
【図１０】異なるパターンにより飲料を摂取した一卵性双子における試験期間中のクレアチニンの増減を示す。
【図１１】異なるパターンにより飲料を摂取した一卵性双子における試験期間中の総コレステロールの増減を示す。
【図１２】異なるパターンにより飲料を摂取した一卵性双子における試験期間中のＬＤＬコレステロールの増減を示す。
【図１３】ａ飲料を摂取した一卵性双子における摂取前後のＡＭＳＡＴにおける数値の増減を示す。
【図１４】ｂ飲料を摂取した一卵性双子における摂取前後のＡＭＳＡＴにおける数値の増減を示す。
【図１５】双子の［姉］と［妹］及びＢ群の各被験者について、ｂ飲料の摂取前後で、有意に１．２倍以上発現増加がみとめられたプローブの数を、ベン図として示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の健康飲料は、水溶性核タンパク質、オリゴＲＮＡ、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びグルタチオンを含む飲料であれば特に制限されず、また、かかる飲料を製造する方法は特に制限されず、各成分を個別に添加・混合することもできるし、全部の成分を同時に添加・混合することもでき、また、２以上の成分の混合物同士を、別々に混合して製造することもできる。
【００１９】
上記健康飲料とは、明確な科学的、法的な定義があるものではないが、体質を改善し、健康状態を向上するとされている成分を含み、社会的な認識において他の飲料と区別される一群の飲料の呼称である。
【００２０】
一般にグルタチオンは、還元型グルタチオン（ＧＳＨ）と酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ）とに大別され、ＧＳＨは５−Ｌ−グルタミル−Ｌ−システイニルグリシンの構造を有するトリペプチドであり、ＧＳＳＧはＧＳＨ２分子がＳ−Ｓ結合により結合した化合物であり、両者とも生体内で生合成されているが、ＧＳＳＧは生体内では、グルタチオンレダクターゼによりＧＳＨに変換されるので、ＧＳＳＧを投与した場合でもＧＳＨと同様の作用が見込まれるとされている。
【００２１】
本発明におけるグルタチオンとしては、食用として利用できるグルタチオンであればいずれも利用することができ、例えばクリプテコディニウム・コニー（Crypthecodinium cohnii）等の海洋性微細藻類由来のグルタチオン(例えば、特開平９−２９２公報参照)や、過酸化物に耐性を有するサッカロミセス（Saccharomyces）属、ハンセニュラ（Hansenula）属、エンドミコープス属、サッカロミコーデス属、ネマトスポラ属、キャンディダ属、トルロプシス属、プレタノミセス属、ロドトルラ属に属する酵母由来のグルタチオンや、エッシェリヒア（Escherichia）属、アルカリゲネス（Alcaligenes）属又はプロテウス（Proteus）属などに属する微生物由来のグルタチオン(例えば、特開平８−７０８８４公報参照)などを挙げることができる。
【００２２】
グルタチオン含有酵母としては、具体的には、サッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、サッカロマイセス・ルーキシ（Saccharomyces rouxii）、サッカロマイセス・カールスバーゲンシス（Saccharomyces carlsbergensis）等のサッカロマイセス属の酵母、キャンディダ・ウチリス（トルラ酵母）（Candida utilis）、キャンディダ・トロピカリス（Candida tropicalis）、キャンディダ・リポリティカ（Candida lipolytica）、キャンディダ・フレーベリ（Candida flaveri）等のキャンディダ属に属する酵母などを例示することができる。
【００２３】
また、グルタチオンを高濃度で含むグルタチオン含有酵母（グルタチオン高含有酵母）の製法としては、３種のアミノ酸を添加する方法（例えば、特開昭５３−９４０８９公報参照）や、酵母の培養においてメチオニンとグルタミン酸を培地に添加することにより、酵母中のＳＡＭ含量及びグルタチオン含量をともに高める方法(例えば、特開２００９−０１７８４９公報参照)等の方法により培養された酵母などとして入手する方法の他、突然変異処理により、ＤＯＡ１遺伝子の少なくとも一部及びＭＥＴ３０遺伝子の少なくとも一部を、欠損又は変異させた酵母変異株（例えば、特開２０１０−０２９１４７公報参照）や、キャンディダ属に属し、ポリエン系抗生物質存在下で生育可能であり、ＧＳＳＧを多量に含有することのできる酵母変異株（特開２００３−２８４５４７公報参照）等の酵母変異株を用いる方法などを挙げることができる。酵母変異株を用いる場合には、ＧＳＳＧは水溶液中の安定性がＧＳＨよりも高い点で、ＧＳＳＧ産生量を増加させたＧＳＳＧ高含有変異酵母を用いることが好ましく、かかるＧＳＳＧ高含有酵母変異株としては、例えば、キャンディダ属に属し、ポリエン系抗生物質存在下で生育可能であり、ＧＳＳＧを多量に含有することのできる酵母変異株を好適に挙げることができ、具体的には、キャンディダ・ウチリス１４５３Ｂ５（ＦＥＲＭ Ｐ−１８７８９）やキャンディダ・ウチリス１４８３Ａ６（ＦＥＲＭ Ｐ−１８７９０）及びそれらの変異株（特開２００３−２８４５４７号公報参照）を好適に例示することができる。
【００２４】
上記グルタチオン含有酵母等の微生物は、飲食品への添加が容易なことからグルタチオン含有酵母等の微生物の抽出物（エキス）として添加することが好ましく、かかるグルタチオン含有酵母抽出物としては、グルタチオンを２質量％以上、好ましくは８質量％以上、より好ましくは１０質量％以上、さらに好ましくは１１質量％以上、なかでも１２質量％以上含有する酵母抽出物を例示することができる。
【００２５】
かかるグルタチオン含有酵母等の微生物の抽出物の製法としては、グルタチオン含有酵母等を自己消化、酵素処理又は加熱抽出（温水などの溶媒で抽出）後、その水溶性成分を分取する方法等公知の方法を挙げることができ、例えば、キャンディダ属に属し、ポリエン系抗生物質存在下で生育可能であり、酸化型グルタチオンを多量に含有することのできる酸化型グルタチオンを１０重量％以上含有した酵母エキスの製造方法（例えば、特開２００４−２８３１２５号公報参照）を挙げることができる。また、グルタチオン含有酵母抽出物として市販品を用いることができ、かかる市販品としては、Springer Hyp A(Bio Springer SA社製)、グルタイーストエキスＮ（協和発酵バイオ社製）等を例示することができる。
【００２６】
上記オリゴＲＮＡとしては、リボ核酸（ＲＮＡ）が低分子化処理をされることで得られた低分子ＲＮＡであれば特に制限されないが、具体的には、ビール酵母、トルラ酵母、乳酵母及びパン酵母等の周知の酵母から抽出・精製したＲＮＡを、分子量が１０００〜３０００である画分を２０〜５０％含有し、分子量が１０００以下である画分を、分子量１０００〜３０００の画分の量よりも多い量、例えば３０〜５０％含有する程度まで低分子化したＲＮＡを好適に挙げることができる。
【００２７】
上記オリゴＲＮＡの製法や入手方法としては、前記酵母より分離・抽出・精製したＲＮＡを酵素分解処理又は加水分解処理により低分子化する方法や、化学的若しくは酵素的に合成する方法や、市販品を購入する方法などの公知の方法を挙げることができるが、具体的には熱安定性を備えたヌクレアーゼを用いてＲＮＡの３'，５'−ホスホジエステル結合を加水分解によって処理することにより調製する方法（例えば、特開２００７−２３０２４参照）を好適に例示することができる。
【００２８】
また、上記オリゴＲＮＡ源として、前記グルタチオン高含有酵母を用いることができる。グルタチオン含量の高い酵母を用いることにより、オリゴＲＮＡと１％以上のグルタチオンを含有するグルタチオン含有オリゴＲＮＡ（マターナル（登録商標）ＲＮＡと呼ぶこともある）として供することができる。かかるマターナルＲＮＡを用いた場合には、前記グルタチオンを添加しなくとも、好適量グルタチオンを添加した場合と同等に扱うことができる。
【００２９】
上記水溶性核タンパク質としては、生物細胞の核中に含まれる核タンパク質を酵素処理等により低分子化した水溶性核タンパク質であれば特に制限されないが、紫外線照射や化学物質への暴露等の負荷が加えられた場合に、遺伝子の酸化損傷を有効に抑制できる効果が確認されている点で、魚類の白子からの核タンパク質をヌクレアーゼ及びプロテアーゼで処理して得られる分子量が１０００〜３０００の低分子化したオリゴヌクレオチド／ヌクレオシド及びオリゴペプチドを３０％以上含む水溶性核タンパク質（例えば、特許第３９７８７１６号参照）を好適に例示することができる。かかる水溶性核タンパク質として、スーパーヌクレゲンを挙げることができる。
【００３０】
上記ヒアルロン酸には、プロテオグリカンの一種であり、β−Ｄ−グルクロン酸の１位とβ−Ｄ−Ｎ−アセチル-グルコサミンの３位とが結合した二糖単位が連結した構造を基本構造とするヒアルロン酸及びその誘導体並びにそれらの塩であるヒアルロン酸類や、かかるヒアルロン酸類を、ヒアルロニダーゼ等を用いた酵素処理、又は加熱加圧処理して得られる低分子ヒアルロン酸又はヒアルロン酸分解物が含まれ、上記ヒアルロン酸誘導体としては、アセチル化されたヒアルロン酸（特開平８−５３５０１号公報参照）や、硫酸化されたヒアルロン酸（特開平１０−１９５１０７号公報参照）や、乳酸などの生体内有機酸で置換されたヒアルロン酸（特開平６−１６７０２号公報参照）や、架橋されたヒアルロン酸（特開平７−９７４０１号公報参照）などを挙げることができ、ヒアルロン酸及びその誘導体の塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩などの金属塩類、リジン塩、アルギニン塩、ヒスチジン塩等の塩基性アミノ酸塩、アンモニウム塩、トリエタノールアミン塩、ジイソプロパノールアミン塩を挙げることができる。
【００３１】
ヒアルロン酸類の製法や入手方法としては、鶏冠、哺乳類の臍帯、魚類、乳酸菌やストレプトコッカス属菌等の代謝物より分離・抽出する方法や、化学的若しくは酵素的に合成する方法や、市販品を購入する方法などの公知の方法を挙げることができる。ヒアルロン酸を含む溶液は通常高粘度であるため、添加される製品の種類や求められる粘度等に応じて、ヒアルロン酸を分解及び／又は精製した鶏冠抽出物、臍帯抽出物等の市販品が多数販売されており、例えば、ヒアルロン酸ＨＡ−Ｆ（キューピー株式会社製）、バイオヒアルロン酸ナトリウム（株式会社資生堂製）、ヒアルロン酸ＦＣＨ（紀文フードケミファ株式会社製）等を挙げることができる、ヒアルロン酸ＨＡ−Ｆ（キューピー株式会社製）を好適に例示することができる。
【００３２】
本発明におけるコンドロイチンには、グリコサミノグリカン（ムコ多糖）の一種であり、Ｄ-グルクロン酸（GlcA）とＮ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミン（GalNAc）の二糖が反復する糖鎖に、硫酸が結合した構造を基本構造とするコンドロイチン及びその誘導体並びにそれらの塩であるコンドロイチン類が含まれ、コンドロイチンとしては、コンドロイチン−４−硫酸（コンドロイチン硫酸Ａ）、デルマタン硫酸（コンドロイチン硫酸Ｂ）、コンドロイチン−６−硫酸（コンドロイチン硫酸Ｃ）、コンドロイチン硫酸Ｄ、コンドロイチン−４、６−硫酸（コンドロイチン硫酸Ｅ）を挙げることができ、コンドロイチン誘導体としては、コンドロイチンとグルコース、ガラクトース、マルトース、ラクトース等の還元糖との縮合物や、アリールエステル、リン酸エステル、硫酸エステル等の誘導体を挙げることができ、コンドロイチン及びその誘導体の塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、塩酸塩、硫酸塩、アンモニウム塩等の無機塩、乳酸塩、酢酸塩、トリエタノールアミン塩等の有機塩などを挙げることができる。
【００３３】
コンドロイチン類の製法や入手方法としては、サメ軟骨や、サメヒレ抽出物等のコンドロイチンを含有する天然物より分離・抽出する方法や、化学的若しくは酵素的に合成する方法や、市販品を購入する方法などの公知の方法を挙げることができるが、市販品としては「鮫軟骨抽出物（７０）」（株式会社中原社製）等のコンドロイチン含有ムコ多糖蛋白複合体を好適に例示することができる。
【００３４】
本発明におけるコラーゲンには、“−グリシン−アミノ酸−アミノ酸−”のペプチド断片を単位とする繰り返し構造を有する、皮膚組織、軟骨組織、骨組織、血管組織、臓器、腱等の組織において、細胞外マトリックスを構成する線維状のタンパク質、及びその加水分解物（コラーゲンペプチド）、並びにそれらの誘導体が含まれ、コラーゲン誘導体としては、コラーゲン及びその加水分解物の、アテロ化物、アシル化物、サクシニル化物を挙げることができる。一般的なコラーゲンの分子量は数万〜３０万程度であり通常不溶性であるため、水溶性のコラーゲン加水分解物（コラーゲンペプチド）を用いることが一般的である。
【００３５】
コラーゲンの加水分解物の製法や入手方法としては、例えば、ブタやウシ等の動物の真皮の洗浄や骨の破砕を行った後、アルカリ処理、中和、脱脂、ミネラル除去等、コラーゲンを含有する組織に応じた必要な前処理を行って抽出物を得た後、酵素等により抽出物を分解し、ろ過後殺菌し、噴霧乾燥後、粉末化する方法など、公知の方法を用いることができる他、別途市販品を用いることもできる。市販品としては、「エス・ワン・エス」（ピーエス社製）、魚類由来の各種コラーゲンペプチド（株式会社ラヴィジェ社製）、「Gelita Sol LDA」（Gelita AG社製）、「Solugel 5,000」（PB Gelatin社製）を挙げることができる。
【００３６】
本発明における亜鉛としては、食品に用いることができる態様で添加しうるものであれば特に制限されず、グルコン酸亜鉛、硫酸亜鉛、食用亜鉛酵母等の態様で投与することができるが、体内への吸収率がより高まるとされる食用亜鉛含有酵母として添加することが好ましく、亜鉛として２質量％、好ましくは３質量％、より好ましくは４質量％以上含有する酵母を用いることが望ましい。市販品としては、亜鉛イースト（ＧＲＯＷ社製）、ミネラル酵母−Ｚｎ(オリエンタル酵母社製)、亜鉛イースト（Bio Springer社製）等の食用酵母（亜鉛含有）を挙げることができ、中でも、亜鉛イースト（ＧＲＯＷ社製）を好適に挙げることができる。
【００３７】
本発明の健康飲料に含まれるビタミン類としては、上記本発明の効果を奏することのできるビタミン類若しくはその誘導体、又はそれらの塩であれば特に制限されず、例えば、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ６（ピリドキシン）、ビタミンＢ１２（コバラミン）等を挙げることができ、ビタミンＣの誘導体又はそれらの塩としては、アスコルビン酸カルシウム、アスコルビン酸ナトリウムを例示することができ、ビタミンＢ１の誘導体又はそれらの塩としては、塩酸チアミン、硝酸チアミン、硝酸ビスチアミン、チアミンジセチル硫酸エステル塩、塩酸フルスルチアミン、オクトチアミン、ベンフォチアミン等を例示することができ、ビタミンＢ２の誘導体又はそれらの塩としては、酪酸リボフラビン、リン酸リボフラビンナトリウムを例示することができ、ビタミンＢ６の誘導体又はそれらの塩としては、ピリドキシン塩酸塩、ピリドキサール（リン酸ピリドキサール）、ピリドキサミンを例示することができ、ビタミンＢ１２若しくはその誘導体又はそれらの塩としては、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミン、ヒドロキソコバラミン酢酸塩、ヒドロキソコバラミン塩酸塩、メチルコバラミン、アデノシルコバラミンを例示することができる。上記ビタミンは、２種類以上含まれることが好ましく、３種類以上含まれることがより好ましく、４種類以上含まれることがさらに好ましい。具体的な組合せとしては、ビタミンＣ及びビタミンＢ１、ビタミンＣ及びビタミンＢ２、ビタミンＣ及びビタミンＢ６、ビタミンＣ及びビタミンＢ１２、ビタミンＣ及びビタミンＢ１とＢ２、ビタミンＣ及びビタミンＢ１とＢ６、ビタミンＣ及びビタミンＢ１とＢ１２、ビタミンＣ及びビタミンＢ２とＢ６、ビタミンＣ及びビタミンＢ２とＢ１２、ビタミンＣ及びビタミンＢ６とＢ１２、ビタミンＣ及びビタミンＢ１とＢ２とＢ６、ビタミンＣ及びビタミンＢ１とＢ６とＢ１２、ビタミンＣ及びビタミンＢ１とＢ６とＢ１２、ビタミンＣ及びビタミンＢ２とＢ６とＢ１２、並びにビタミンＣ及びビタミンＢ１とＢ２とＢ６とＢ１２の組合せを例示することができる。
【００３８】
本発明の健康飲料における上記各成分の添加量としては、特に限定されないが、例えば、本発明の健康飲料１０００ｍＬあたり、グルタチオン６〜６０ｍｇ（グルタチオン含有微生物抽出物０．０５〜０．５ｇ）、オリゴＲＮＡ０．１〜５ｇ、水溶性核タンパク質０．５〜１０ｇ、亜鉛イースト０．１〜３ｇ、コラーゲン５０〜１５０ｇ、コンドロイチン０．０１〜０．５ｇ、ヒアルロン酸０．０１〜０．５ｇ、ビタミンＣ５〜２０ｇ、好ましくは、グルタチオン１２〜４２ｍｇ（グルタチオン含有微生物抽出物０．１〜０．３５ｇ）、オリゴＲＮＡ０．５〜２．０ｇ、水溶性核タンパク質２〜８ｇ、亜鉛イースト０．５〜１．５ｇ、コラーゲン７０〜１２０ｇ、コンドロイチン０．０５〜０．３ｇ、ヒアルロン酸０．０２〜０．１ｇ、ビタミンＣ９〜１５ｇ、より好ましくは、グルタチオン１８〜３６ｍｇ（グルタチオン含有微生物抽出物０．１５〜０．３０ｇ）、オリゴＲＮＡ１〜１．５ｇ、水溶性核タンパク質４〜６ｇ、亜鉛イースト０．９〜１．１ｇ、コラーゲン９０〜１００ｇ、コンドロイチン０．０８〜０．２５ｇ、ヒアルロン酸０．０４〜０．０７ｇ、ビタミンＣ１１〜１３ｇを例示することができる。
【００３９】
本発明の飲料は、上記の処方にて、１日３回、朝、昼、晩の食後に２０ｍＬずつ摂取すると５週間後には、本発明の効果が顕著に感じられる点から好ましいが、摂取量や頻度を適宜増減した場合でも、長期間飲用することで同様の効果を得ることができる。また、本発明の健康飲料の摂取量は、当該技術分野の薬理学者及び臨床医が既知の方法を使用して、又は本人の判断により主観的に決定することもできる。例えば、摂取者の血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度の増加を示すときまで、又は、総コレステロール値、ＬＤＬコレステロール値の低下を示す時まで、ストレスを感じる度合いが少なくなるまで等、摂取者の状況をみながら本発明の健康飲料の摂取量や頻度を適宜増加又は減少させることもできる。
【００４０】
本発明の飲料には、消費者の嗜好を考慮し、飲料の味覚の向上を図るために、糖、糖アルコール、甘味料等を配合することができ、糖（類）としては、ショ糖、果糖、ブドウ糖、乳糖、果糖ブドウ糖液糖を挙げることができ、糖アルコール（類）としては、キシリトール、ソルビトール、マルチトール、エリスリトール、マンニトールを挙げることができ、甘味料（類）としては、アセスルファムカリウム、スクラロース、ネオテーム、サッカリン、アスパルテーム、ステビアを挙げることができ、糖類、糖アルコール類、甘味料類は、それぞれ１種又は２種以上を添加することができる。また、動物性原料製品の臭いをマスキングし、又は飲料の香味の向上を図るためにフレーバー類を適宜添加することもできる。また、はちみつ等の食品を添加することもできる。
【００４１】
本発明の飲料には、飲み心地や保存性を考慮して、保存料や乳化剤を必要に応じてさらに配合することができ、保存料としては、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸等を挙げることができるが、安息香酸ナトリウムが好ましく、乳化剤としては、グリセリン脂肪酸エステル系乳化剤やショ糖脂肪酸エステル系乳化剤を例示することができ、保存料、乳化剤は、それぞれ１種又は２種以上を添加することができる。
【００４２】
本発明の飲料には、飲み心地をよくするために、また、嚥下能力の低い摂取者が容易に服用できるようにするために、さらにゲル化剤を配合することができ、ゲル化剤としては、ゼラチン、ペクチン、寒天、カラギーナン、ジェランガム、グルコマンナン、ローカストビーンガム等の公知のゲル化剤を例示することができ、これらのゲル化剤は、１種又は２種以上を添加することができる。
【００４３】
本発明の組成物としては、水溶性核タンパク質と、オリゴＲＮＡと、亜鉛と、コラーゲンと、コンドロイチンと、ヒアルロン酸と、ビタミン類と、グルタチオン含有酵母とを含む、血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度を高めるための組成物、臭嗅受容体遺伝子を発現促進するための組成物、老化若しくはストレスを改善や予防するための組成物を挙げることができる。また、医薬品とは異なって摂取後の副作用がない、又は極めて少ない老化若しくはストレスの改善及び／又は予防剤として用いることも可能である。さらに、本発明の組成物は、飲食品や飲食品素材に、血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度を高める作用や、臭嗅受容体遺伝子を発現促進する作用や、さらに成長ホルモン遺伝子を発現促進する作用を付与することができる老化若しくはストレスの改善及び／又は予防用飲食品添加剤として用いることができる。上記老化若しくはストレスの改善及び／又は予防剤や、ストレスの改善及び／又は予防用飲食品添加剤の剤型としては特に制限されず、適当な担体を用いて固形製剤や液体製剤とすることができる。本発明の組成物を飲食品に用いるためには、その有効量を飲食品の製造原料段階及び／又は製造した製品の段階で添加、混合することができる。
【００４４】
本発明の飲料や組成物を摂取したことによる効果としては、老化の改善・予防効果やストレスの改善・予防効果を挙げることができ、老化の改善・予防効果としては、皮膚老化の改善、血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度の上昇、血中ＬＤＬコレステロールの低下、臭嗅受容体遺伝子の発現促進及び／又は成長ホルモンの発現促進を挙げることができ、ストレスの改善・予防効果としては、よく眠れたと感じる気分等の主観的なもののほか、総合感情障害、自律神経のバランスや機能、及び／又は全身的な健康度における改善効果等、測定機器を用いて測ることができる客観的なものを挙げることができる。
【００４５】
上記皮膚老化としては、加齢による生理的老化であっても、紫外線の照射を受けることによる光老化であっても、皮膚の老化である限り特に制限されず、具体的には、観察できる毛穴、しみ、色むら、紫外線しみから選択される１種又は２種以上を例示することができる。皮膚の老化を予防・改善する効果としては、所定の期間の摂取後の被験者の観察できる毛穴の減少、しみの減少、色むらの減少、紫外線しみの減少や、総合的な評価における皮膚状態の向上を挙げることができ、かかる効果を確認する方法としては、被験者の撮影が短時間ですみ、解析したい部位を自由に設定でき、かつ、撮影ポジションのずれによる解析誤差や前後写真の色調の違いを調整することで２回目以降同じ部位で解析できる点で優れているとされる皮膚画像解析カウンセリングシステムであるＶＩＳＩＡ Ｃｏｍｐｌｅｘｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（以下「ＶＩＳＩＡ」ともいう）（Canfield社製）により解析する方法を例示することができる。なお、各測定項目において、点数化された数値が減少した場合に、及び／又は、総合的な評価において数値が増加した場合に、皮膚の老化が予防・改善したと評価することができる。また、スキングリップメーターＡＳ−ＧＰ１（朝日バイオメッド社製）を用い、肌弾力試験を行うことでも評価をすることができる。
【００４６】
上記総合感情障害における改善効果としては、所定の期間の摂取後の被験者の直近の持続的な気分を解析した場合の気分の向上を挙げることができ、かかる効果を確認する方法としては、McNairら（1971）によって開発され、６５の質問項目に答えることによって、６つの因子、すなわち、緊張−不安（Tension-Anxiety：T-A）、抑うつ−落ち込み（Depression-Dejection：D）、怒り−敵意（Anger-Hostility：A-H）、活気（Vigor：V）、疲労（Fatigue：F）、混乱（Confusion：C）から構成される一時的な感情又は気分の状態を測定することができる評価試験である「気分プロフィール試験：ＰＯＭＳ」（Profile of  Mood States）を用いて解析する方法を例示することができる。なお、摂取開始前の被験者の数値と摂取後の数値を比較して、「緊張−不安：T-A」、「抑うつ−落ち込み：D」、「怒り−敵意：A-H」、「疲労：F」、「混乱：C」は数値が有意に低下した場合に、「活気：V」は数値が有意に上昇した場合に、「総合感情障害」が改善したと評価することができる。
【００４７】
上記自律神経のバランスや機能における改善効果としては、所定の期間の摂取後の被験者の自律神経のバランスや機能の向上を挙げることができ、かかる効果を確認する方法としては、起立による体位変換ストレスにより自律神経機能を診断することができるとされる、自律神経反射リアルタイムモニタのソフトウェア「きりつ名人」（株式会社クロスウェル製）を用いて解析する方法を例示することができる。かかる方法は、起立によるストレスに対して自律神経がうまく対応できないときに起立性血圧低下を招くことがあるが、心身健康であれば起立時に習慣的に交感神経を高め、末梢の血管を収縮させ心拍数を上昇させて脳の血流を維持することができることから、座位安静時に自律神経のバランスを診断するとともに、能動的起立負荷により、瞬時心拍を採取して、周波数領域解析・時間領域解析を行い、かかる解析の組合せにより、交感神経と副交感神経の評価を行い、自律神経機能の評価をすることが可能となるとされる方法である。
【００４８】
上記全身的な健康度における改善効果としては、所定の期間の飲料摂取後の被験者の全身的な健康度の向上を挙げることができ、かかる効果を確認する方法としては、短時間で簡便に測定でき、被験者の健康度の把握や治療効果の確認などに適しており、再現性が高く正確な計測が可能であるとされる、ＡＭＳＡＴ（アムサット）−ＨＣ（Auto Mastic System for Analysis Therapy - Holistic Concept：全自動皮膚抵抗値測定システム）を用いて解析する方法を例示することができ、具体的には、額・両手・両足の計６極の電極から２２パターンの電流値を計測後、計測された値は、システムにおけるデータバンク情報と比較されアルゴリズムで計算されることでデータを得ることができる。波形解析を含めた特殊なアルゴリズムにより全身６７箇所について、測定結果理想値から逸脱度を最大±１００％で表示されることでデータを得ることができるとされる。なお、測定結果理想値から逸脱度が小さくなった場合に改善したと評価することができる。
【００４９】
上記血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度における効果としては、所定の期間の飲料摂取後の被験者の血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度の増加を挙げることができる。血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度の測定方法としては、ラジオイムノアッセイ法（ＲＩＡ）、チューブ固相法等を挙げることができる。なお、被験者の血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度が、摂取開始前の被験者の血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度と比較して有意に増加していた場合に、特定の健康飲料の摂取の効果があったと評価することができる。
【００５０】
上記血中ＬＤＬコレステロール濃度における効果としては、所定の期間の飲料摂取後の被験者の血中ＬＤＬコレステロール濃度の減少を挙げることができる。
【００５１】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。なお、以下の実験等において、被験者は試験開始前に試験内容及び方法などについて十分な説明を受け、文書による同意を得てから実施された。
【実施例１】
【００５２】
［二重盲検試験］
（試験飲料）
以下の３種類の試験飲料を用いて二重盲検試験を行った。ａ飲料、ｂ飲料、ｃ飲料の処方の概要を以下の表１に示す。【００５３】
【表１】
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【００５４】
ａ飲料は、従来品（核酸ドリンク：ナチュラルＤＮコラーゲン：フォーデイズ株式会社製）の処方に基づいて調製した。ｂ飲料は、従来品としてのａ飲料にグルタチオン高含有酵母抽出物を添加して調製した本発明の飲料である。オリゴＲＮＡ及びグルタチオン含有酵母を別々に混合した例を表１では示したが、同等の組成のマターナル（登録商標）ＲＮＡを用いて調製してもよい。ｃ飲料は、従来としてのａ飲料から、機能性成分であると考えられる原料及び乳化剤を除き、グルタチオンを添加した場合のみの効果を検討するための飲料であり、ａ飲料とｂ飲料の食感に近づけるため液状デキストリンを添加した。また、コラーゲンペプチドの代わりに液状デキストリンを添加した場合には、ａ飲料やｂ飲料に比べ甘味が増すため、甘味料（スクラロース）を除いたものである。また、ａ、ｂの各飲料には香料、保存料、乳化剤が添加され、ｃには香料、保存料が添加されている。【００５５】
（対象者）
被験者は、健常者の男性６０名(年齢５３．５±２．５歳、平均ＢＭＩ２２．３ｋｇ／ｍ２)であった。事前の健康診断により、非喫煙の被験者で、血糖値（グルコース、ＨｂＡ１Ｃ）、肝機能（ＧＯＴ、ＧＰＴ、γ−ＧＴＰ）、膵機能（アミラーゼ）、尿酸値、腎機能（クレアチニン）が正常であることを確認後、被験者を、ａ飲料（従来品）を摂取する被験者（Ａ群）と、ｂ飲料（本発明の飲料）を摂取する被験者（Ｂ群）と、ｃ飲料（従来品の有効成分を除きグルタチオン含有酵母を添加した飲料）を摂取する被験者（Ｃ群）との３群に、２０名ずつ無作為に分類し二重盲検試験を行った。被験者は、いずれの飲料を摂取しているかを知らされることなく、上記飲料のいずれかを２０ｍＬずつ、朝、昼、晩の一日３回５週間の試験期間中に摂取するよう指示された。なお、試験期間中は、他のサプリメント等の摂取は控えるように指示されたが、特に厳格な食事制限は行わず、通常通りの生活をおくるように指導された。【００５６】
途中で摂取を中止したＡ群の１名及びＣ群２名を除いた被験者５７名について、摂取開始５週間後に、皮膚の状態、ＰＯＭＳ（Profile of Mood State：感情プロフィール検査）、自律神経測定解析、ＡＭＳＡＴによる全体的な健康度のスクリーニング、血中成分検査、遺伝子解析などの試験を行った。得られたデータの統計的処理は、特段の定めがない場合、ｔ検定を用いて行った。また、ｔ検定で必要とされる仮定が満たされない場合には、ウィルコクスンの符号付順位検定を用いた。いずれの場合もＰ値が０．０５未満（*）、０．０１未満（**）、０．００１未満（***）、又は０．０００１未満（****）であれば統計学的に有意差ありとした。【００５７】
（皮膚の老化の予防・改善効果の検証）
本発明の飲料が皮膚の老化の予防・改善効果を有しているか否かを確認するために、各群の被験者につき、摂取開始前と摂取５週間後の顔の皮膚の状態を、皮膚画像解析カウンセリングシステムである「ＶＩＳＩＡ」を用いて、しみ、毛穴、色むら、紫外線しみ、ポルフィリン、しわの６項目について分析した。各項目と６項目の総合的な判定について、統計解析ソフトＪＭＰ８を使用し、ウィルコクスンの符号付順位検定により解析した。結果を以下の表２並びに図１（ａ）及び（ｂ）に示す。【００５８】
【表２】
2013054525.tif 000003
【００５９】
図１（ａ）は、ｂ飲料を摂取する前の被験者の顔の皮膚の状態を示し、図１（ｂ）は、同じ被験者について５週間ｂ飲料を摂取した後の顔の皮膚の状態を示す。各項目の右側の数字はしみ、毛穴、紫外線しみ、色ムラ量の数値であり、数字が減少するほど改善されたことを示す。図１（ａ）及び（ｂ）における各項目の写真から改善の状況が確認できた。また、表２よりも明らかな通り、Ｂ群の被験者においてのみ、Ａ群やＣ群と比較して毛穴の有意な減少がみられ、紫外線しみ、色むら、しみの各項目においてもＡ群やＣ群を摂取した群と比較して顕著に数値が減少（改善）していることが確認された。【００６０】
しわとポルフィリンの項目については、統計上３群のいずれにも有意差は認められなかったが、各項目について、改善した場合を１点、変化なしの場合を０点、悪化した場合を−１点で換算し、合計点について総合６項目の改善度として解析を行ったところ、ｂ飲料を飲んだ被験者群においては、顕著な改善効果（****↑）が得られたことが確認された。また、ｂ飲料を飲んだ被験者群にのみ毛穴が有意に減少したが、上記統計解析ソフトによる解析により、毛穴の減少（改善）と色むら減少（改善）との間には、非常に強い相関関係（ｐ＝０．００５３）があることが確認された（図２参照）。【００６１】
（ＰＯＭＳによる効果の検証）
本発明の飲料が総合感情障害における効果を有しているか否かを確認するために、各群の被験者は、摂取開始前と摂取５週間後に、ＰＯＭＳ日本版調査票に回答した。ウィルコクスンの符号付順位検定を用いた結果を以下の表３に示す。なお、Ｂ群の被験者において、一部の項目の未記入者がいたため、ｎ＝１９となっている項目がある。【００６２】
【表３】
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【００６３】
ｂ飲料を摂取したＢ群の被験者において、「A-H：怒り−敵意（Anger-Hostility）」（ｐ＜0.01）、及び F：疲労（Fatigue）（ｐ＜0.01）の項目において有意に数値の減少があり、全体として、良好な気分プロフィールになったことを確認した。個々の質問項目について検討すると、Ｂ群の被験者において、摂取前と摂取後を比較した場合、「3.心の中でふんがいする」、「7.がっかりしてやる気をなくす」、「21.いらいらする」、「44.だるい」、「49.不安だ」、「60.物事に確信がもてない」、「62.ひどくくたびれた」の項目において、スコアが有意に減少し、「43.他人にあたたかくできる」、「50.元気いっぱいだ」の項目において、スコアが有意に増加していることが確認され、ストレス改善や防止に効果があることが確認された。Ａ群やＣ群の被験者においては、Ｂ群の被験者ほどの改善効果が確認されなかった。なお、データには示していないが、Ａ群とＣ群の被験者においては、ＤＨＥＡ−Ｓの増加と「A-H：怒り−敵意」の項目における改善との間の相関関係がみられなかった。【００６４】
（自律神経機能・バランス試験）
本発明の飲料が自律神経機能やバランスにおいて改善効果を有しているかどうかを確認するために、各群の被験者につき、摂取開始前と摂取５週間後に、「きりつ名人」を用いて評価が行われた。「きりつ名人」の取扱説明書の指示に従い、心拍数の測定のため両手首にクリップを止め、胸に電極を貼り、血圧を測定するために腕にカフを巻き、パルスオキシメータを指に装着した。各被験者は、座位にて安静を３分間維持した後、音声ガイダンスにしたがって起立するよう指示された。起立後約３分３０秒測定が継続された。オシロメトリック法による血圧測定は、座位安静１分後から毎分６回測定され、自律神経は３０秒後から１拍ごとに解析された。ウィルコクスンの符号付順位検定の下側検定を行った結果、自律神経バランスの項目において、ｂ飲料を摂取した被験者において８７．４％の向上がみられ（図３参照）、ｂ飲料の摂取が、日常生活において衰えが問題となる自律神経機能やバランス感覚において、ａ飲料やｃ飲料との相加的効果を超える相乗的効果をもたらすことが確認された。【００６５】
(被験者の全身的な健康度の評価)
本発明の飲料が被験者の全身的な健康度において改善効果を有しているかどうかを確認するために、各群の被験者につき、摂取開始前と摂取５週間後に、ＡＭＳＡＴ（アムサット）−ＨＣ（Auto Mastic System for Analysis Therapy - Holistic Concept：全自動皮膚抵抗値測定システム）を用いて解析した。各被験者は額・両手・両足の計６極の電極をつなぎ、２２パターンの電流値が１７秒で計測された。計測された値は、システムにおけるデータバンク情報と比較され、波形解析を含めた特殊なアルゴリズムで全身の部位や脊髄、神経系にも振り分けられ全身７４箇所について、測定結果理想値から逸脱度を最大±１００％で表示されたが、甲状腺、直腸、感覚器、咽頭、大腿部、股関節、盲腸において、Ｂ群は、Ａ群やＣ群と比較して有利な効果が見られた。【００６６】
（血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度）
本発明の飲料が血液成分についていかなる作用を及ぼしているかを確認するために、血液検査を行った。ＲＩＡ法により血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度を測定したところ、ｂ飲料を摂取した被験者の血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度に変化がみられため、詳しく検討した。Ｂ群は、Ａ群、Ｃ群と比較してｂ飲料を摂取することでｔ検定により有意に血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度が増加していた（ｐ＝０．０００１）（図４参照）。なお、各被験者の血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度は５０代男性の正常範囲内である５３〜３４２μｇ／ｄＬであった。また、各群の被験者の血中ＤＨＥＡ−Ｓ濃度の各飲料摂取前に対する摂取後のＤＨＥＡ−Ｓ濃度の平均増加率（縦軸）を図５に示す。ｂ飲料の摂取が、ＤＨＥＡ−Ｓ濃度の増加を顕著にもたらすことが確認された。【００６７】
（遺伝子発現調査）
Ａ群、Ｂ群、Ｃ群の各被験者の血液試料を用い、統計解析による発現変動遺伝子（プローブ）の抽出を行った。マイクロアレイアッセイを使用して検出されたデータを用い、正規化済みの発現データを対象に有意差検定によるＰ値の算出と発現比に基づくカットオフを実施した。２群間の有意差検定は、マイクロアレイデータにおける２群間検定に用いられるＳＡＭ ｔ−ｔｅｓｔを使用した。飲料の摂取前後の比較の組合せにおいてそれぞれ算出されたＰ値が、０．０５未満となったプローブについて、２群間の対数発現比がｌｏｇ ｒａｔｉｏで０．２６３以上（発現比として、１．２倍以上）を示すプローブを有意な発現上昇プローブとし、２群間の対数発現比がｌｏｇ ｒａｔｉｏ で−０．２６３以下（発現比として、０．８３３３倍以下）を示すプローブを有意な発現低下プローブとしてカットオフ通過プローブとした。【００６８】
Ａ群、Ｂ群、Ｃ群の各被験者について、ａ、ｂ、ｃの各飲料の摂取前後で発現変動が１．２倍以上増加又は１．２倍以上減少がみとめられたプローブについて、被験者の属する群においてどのようにプローブの発現変動が重複しているかを、発現増加と減少のそれぞれについてベン図として表記した（図６（ａ）（ｂ）参照）。Ｂ群の被験者のみにおいて発現が増加していたプローブ数は２６９（図６（ａ）下線部）、Ｂ群の被験者のみにおいて発現が減少していたプローブ数は１９８（図６（ｂ）下線部）であった。【００６９】
上記Ｂ群において特異的に変動を示したプローブのうち、Gene Ontology（遺伝子オントロジー）のmolecular function（分子機能）において、「受容体活性“Receptor activity”」に属する遺伝子を抜き出してリスト化したものを図７に示す。遺伝子名に下線がひいてあるものが発現増加した受容体に関連するプローブであり、下線のひいてないものは発現減少した受容体に関連するプローブである。下線のひいてあるプローブのうち、MRGPRX3、OR14I1、OR1F1、OR1J1、OR4D11、OR4D9、OR4X1、OR51E2、OR5B21、OR5P3、及びOR8B4は、臭嗅受容体（olfactory receptor）タンパク質をコードする遺伝子であり、臭嗅受容体タンパク質について発現が促進されていることが確認された。臭嗅受容体に関する遺伝子が多数活性化されていたことは、上記ＡＭＳＡＴを用いた全身的な健康度の評価において、感覚器における数値において有利な効果がみられたこととも一致し、本発明の飲料を摂取することで、感覚器において老化を防止・改善する効果があることが確認された。一方、ＴＮＦ受容体であるTNFRSF10Cや、ＴＮＦリガンドであるTNFSF14が抑制されているが、TNFRSF10CやTNFSF14は、関節炎等の炎症性の疾病において、また、歯周病や心臓病患者において発現が増加することが知られており（Journal of Dental Research 89 (1),2010,29-33、Molecular Immunology 47,2010,666-670, European Journal of Heart Failure 10,2008,352-35等）本発明の飲料や組成物の摂取により、炎症性ストレスが抑制されるということが示された。【００７０】
上記Ｂ群において特異的に変動を示したプローブのうち、遺伝子オントロジーの分子機能において、「受容体結合“Receptor binding”」に属する遺伝子を抜き出してリスト化したものを図８に示す。遺伝子名に下線がひいてあるものが発現増加したリガンドに関連するプローブであり、下線のひいてないものは発現減少したリガンドに関連するプローブである。ＧＨ１成長ホルモン遺伝子について発現が促進されていることも確認された。したがって、本発明の飲料を摂取することで、老化防止・改善効果があることについて確認されたといえる。【００７１】
（まとめ）
ｂ飲料を摂取したＢ群の被験者において、皮膚の状態、総合感情障害、自律神経バランス、全身的な健康度における試験において、また、ＤＨＥＡ−Ｓの血中濃度、臭嗅受容体遺伝子発現等の生化学的指標において、ａ飲料の効果とｃ飲料の効果との相加効果にとどまらず、相乗的な改善効果が被験者にもたらされることが確認された。
【実施例２】
【００７２】
［一卵性双子（女性）の二重盲検クロスオーバー試験］
一卵性双子の女性２人［姉］（the first twin sister：FTS）と［妹］（the second twin sister：STS）（姉ＢＭＩ３４．９、妹ＢＭＩ３３．６）が被験者となり試験を行った。［姉］は、上記実施例１で使用したａ飲料を２０ｍＬずつ、朝、昼、晩の一日３回５週間摂取し、３１日の休止期間後、上記実施例１で使用したｂ飲料を２０ｍＬずつ、朝、昼、晩の一日３回５週間摂取するよう指示された。［妹］は、ｂ飲料を２０ｍＬずつ、朝、昼、晩の一日３回５週間摂取し、３１日間の休止期間後、ａ飲料を２０ｍＬずつ、朝、昼、晩の一日３回５週間摂取するよう指示された。前期５週間＋３１日の休止期間＋後期５週間の合計１０１日間を試験期間とした。【００７３】
（肌弾力性）
上記一卵性双子の［姉］と［妹］は、試験期間中に左と右の頬それぞれについてスキングリップメーターＡＳ−ＧＰ１（朝日バイオメッド社製）を用い、製造者作成の取扱い説明書に基づき、複数回の肌弾力試験を行った。その結果を図９（（ａ）及び（ｂ））に示す。［姉］はａ飲料を摂取している期間及びその後の３１日間の休止期間中には、肌弾力性の増加はみられなかったが、休止期間後にｂ飲料を摂取した後期５週間において左頬（実線）、右頬（点線）ともに肌弾力性が顕著に増加した（図９（ａ）参照）。［妹］は、ｂ飲料を摂取した前期５週間において肌弾力性が増加したが、３１日間の休止期間において弾力性は減少し、ａ飲料を摂取した５週間においてはほとんど変化がみられなかった（図９（ｂ）参照）。【００７４】
（クレアチニン濃度）
上記［姉］と［妹］は、試験期間中に血中クレアチニン濃度（ｍｇ／ｄＬ）を酵素法（クレアチナーゼ−サルコシンオキシダーゼ−ペルオキシダーゼ法）（三菱化学メディエンスにて委託測定）により複数回測定した。その結果を図１０に示す。［姉］は点線、［妹］は実線で示される。［姉］はａ飲料を摂取した前期５週間及びその後の３１日間の休止期間中には、血中クレアチニン濃度の減少はみられなかったが、休止期間後にｂ飲料を摂取した後期５週間において血中クレアチニン濃度が顕著に減少した（図１０点線→部分参照）。［妹］は、ｂ飲料を摂取した前期５週間において血中クレアチニン濃度が減少したが（図１０実線→部分参照）、３１日間の休止期間において増加し、ａ飲料を摂取した後期５週間においては変化がみられなかった（図１０実線参照）。慢性腎臓病や高血圧患者においてクレアチニンが高濃度であることが知られており（Annals of Internal Medicine,Vol. 141 No. 12,929-937 及びArch. Intern. Med. Vol 161,2001, 1207-1216）、本発明の飲料が、高血圧の改善や慢性腎臓病の改善に効果があることが示唆された。【００７５】
（総コレステロール濃度）
上記［姉］と［妹］は、試験期間中に血中総コレステロール濃度（ｍｇ／ｄＬ）を酵素法（三菱化学メディエンスにて委託測定）により複数回測定した。その結果を図１１に示す。［姉］はａ飲料を摂取している期間及びその後の３１日間の休止期間中には、血中総コレステロール濃度の減少はみられなかったが、休止期間後にｂ飲料を摂取した後期５週間において総コレステロール濃度が顕著に減少した（図１１点線→部分参照）。［妹］は、ｂ飲料を摂取した前期５週間において総コレステロール濃度が減少し（図１１実線→部分参照）、３１日間の休止期間においても増加せず、ａ飲料を摂取した後期５週間においても減少傾向がみられた。【００７６】
（ＬＤＬコレステロール濃度）
上記［姉］と［妹］は、試験期間中に血中ＬＤＬコレステロール濃度（ｍｇ／ｄＬ）を酵素法（三菱化学メディエンスにて委託測定）により複数回測定した。その結果を図１２に示す。［姉］はａ飲料を摂取している期間及びその後の３１日間の休止期間中には、血中ＬＤＬコレステロール濃度の減少はみられなかったが、休止期間後にｂ飲料を摂取した後期５週間においてＬＤＬコレステロール濃度が減少した（図１２点線→部分参照）。［妹］は、ｂ飲料を摂取した前期５週間においてＬＤＬコレステロール濃度が減少し（図１２実線→部分参照）、３１日間の休止期間においても増加しなかったが、ａ飲料を摂取した後期５週間においてはわずかに増加傾向がみられた。上記総コレステロール濃度の結果をあわせ、本発明の飲料は、いわゆるメタボリック症状に対して効果を有することが示唆された。【００７７】
（睡眠状況）
上記［妹］に睡眠状況について問診したところ、［妹］がｂ飲料を摂取した際に、［妹］のみが元々持っていた睡眠状況の問題が改善された。具体的には、夜間に咳が出たり、大きないびきをかいたりすることが少なくなったとの回答を得た。この問題は、一卵性双子でありながら妹に特異的であったが、ａ飲料を摂取した際には改善が認められなかった。【００７８】
（ＡＭＳＡＴによる検討）
本発明の飲料が被験者の全身的な健康度において改善効果を有しているかどうかを確認するために、上記［姉］と［妹］につき、摂取開始前と摂取５週間後に、ＡＭＳＡＴを用いて上記実施例１に記載されている手順と同様の手順にて解析した。ａ飲料を摂取した前と後に解析を行った場合、［姉］と［妹］いずれにおいても顕著な数値の変化は見られなかったが（図１３（ａ）及び（ｂ）参照）、ｂ飲料を摂取した前と期間後に解析を行った場合、［姉］と［妹］いずれにおいても７４の検査項目のほとんどにおいて摂取後に顕著な数値の減少を示し、理想状態とされる０に近い数字となった（図１４（ａ）及び（ｂ）参照）。このことは、ＡＭＳＡＴを用いた全身的な健康度の評価において、細胞間質の軟化が抑制され炎症性の改善効果がみられたことを示している。【００７９】
（遺伝子発現調査）
ｂ飲料を摂取した上記双子の［姉］と［妹］及び、実施例１においてｂ飲料を摂取したＢ群の被検者男性群の血液試料を用い、実施例１の遺伝子発現調査において行ったのと同様の手順で統計解析による発現変動遺伝子（プローブ）の抽出を行った。ｂ飲料の摂取前後で発現変動が１．２倍以上増加又は１．２倍以上減少がみとめられたプローブについて、被験者の属する群においてどのようにプローブの発現変動が重複しているかを、発現増加と減少のそれぞれについてベン図として表記した（図１５（ａ）（ｂ）参照）。双子の被験者と男性の被験者の両方において発現が増加していたプローブ数は９であった。有意に増加している９種類のプローブには（図１５（中央重なり部分）参照）、臭嗅受容体（olfactory receptor）タンパク質をコードする遺伝子OR14I１が含まれており、臭嗅受容体に関する遺伝子が活性化されていたことは、上記ＡＭＳＡＴを用いた全身的な健康度の評価において、感覚器における数値も含めて有利な効果がみられたこととも一致する。【００８０】
上記ｂ飲料を摂取した上記双子の［姉］と［妹］及び、実施例１においてｂ飲料を摂取したＢ群の被検者男性群について、Gene Ontology（遺伝子オントロジー）のmolecular function（分子機能）解析を行った。「代謝活性」に属する遺伝子のうち、発現が増加したプローブについて、特に重要と思われるペントースリン酸経路とＴＣＡ回路におけるパスウェイレベルでの発現変動解析を行った。結果を以下の表４に示す。【００８１】
【表４】
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【００８２】
ペントースリン酸経路（pentose phosphate fundamental pathway）は、グルコース代謝経路の一つであり、グルコースを代謝し、脂肪酸の生合成反応に必須の還元力であるＮＡＤＰＨの供給を主たる役割とする重要な経路である。上記表４から明らかなとおり、ペントースリン酸経路において、関連遺伝子の発現が上昇していることが確認され、ｂ飲料の摂取により、ペントースリン酸経路の活性に有利に働くことが確認された。【００８３】
ＴＣＡ回路は、糖、脂肪酸、アミノ酸等の代謝回路として重要な回路である。上記表４から明らかなとおり、ＴＣＡ回路において、関連遺伝子の発現が上昇していることが確認され、ｂ飲料の摂取により、エネルギー産生に有利に働くことが確認された。【００８４】
（まとめ）
肥満傾向にある双子のａ飲料とｂ飲料の摂取量は、体重１ｋｇあたり姉０．６３ｍＬ／ｋｇ／日、妹０．６８ｍＬ／ｋｇ／日であって、実施例１における男子の摂取量よりも少なくなっている。少ない摂取量であっても、５週間本発明のｂ飲料を摂取することで、血中クレアチニン濃度の減少、総コレステロールの減少、ＬＤＬコレステロールの減少、睡眠状況の改善等、老化やストレスの予防・改善効果がもたらされることが確認された。また、発現遺伝子解析においても、ｂ飲料の摂取は健康状態の向上に寄与することがわかった。ｂ飲料の摂取は、肥満傾向の体質で起こる炎症反応を抑制することで細胞のストレスを軽減し、基礎代謝を活発にすることで肥満傾向の改善に効果がある。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【手続補正書】
【提出日】平成25年4月22日(2013.4.22)
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
技術分野
［０００１］
本発明は、水溶性核タンパク質、オリゴリボ核酸（オリゴＲＮＡ）、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びシステインペプチドであるグルタチオンを含むことを特徴とする健康飲料の他、水溶性核タンパク質、オリゴＲＮＡ、亜鉛、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類、及びグルタチオンを含むことを特徴とする、血中デヒドロエピアンドロステロンサルフェート（ｄｅｈｙｄｒｏｅｐｉａｎｄｒｏｓｔｅｒｏｎｅｓｕｌｆａｔｅ：ＤＨＥＡ−Ｓ）濃度を増加させるための組成物や、臭嗅受容体遺伝子の発現を促進するための組成物や、老化若しくはストレスを改善又は予防するための組成物に関する。
背景技術
［０００２］
昨今の健康意識の高まりに伴い、また、来たるべき超高齢社会における疾病の予防のため、日常生活で不足しがちな特定の栄養成分を補完し、健康の維持・増進作用を目的とし、さらには、老化防止や若返りやストレス解消等における具体的な「生体調節機能」の向上に着目した飲食品やその成分の開発が進められている。例えば、水溶性核タンパク質、コラーゲン、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ビタミン類等を含む健康飲料が提案され（例えば、特許文献１参照）、既に本出願人により上市されている。
［０００３］
例えば、グルタチオンは、大部分の生物の各組織に存在する生体内抗酸化物質であり、グルタチオンペルオキシダーゼとグルタチオンレダクターゼによって、還元型グルタチオンと酸化型グルタチオンの２種類がいわゆるレドックスサイクルによって調整され、抗酸化物質としての機能を維持していることが知られている（例えば、特許文献２参照）。
［０００４］
かかるグルタチオンの有する機能を利用し、グルタチオンが抗酸化物質として、ストレス予防剤やストレス改善食品に用いられうることが報告されている（例えば、特許文献３及び特許文献４参照）。また、グルタチオンを含
【国際調査報告】
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