(57)【要約】  以下の条件（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）を満たすレジスタントスターチ高含有澱粉を有効成分として含有する、腸内環境改善剤。（ａ）ＡＯＡＣ公定法２００２．０２のレジスタントスターチ測定法によるレジスタントスターチ含有量が６０％以上（ｂ）分子量ピークが６×１０3以上４×１０4以下（ｃ）分子量分散度が１．５以上６．０以下（ｄ）示差走査熱量測定による５０℃〜１３０℃における糊化エンタルピーが１０Ｊ／ｇ以下【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の条件（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）を満たすレジスタントスターチ高含有澱粉を有効成分として含有する、腸内環境改善剤。
（ａ）ＡＯＡＣ公定法２００２．０２のレジスタントスターチ測定法によるレジスタントスターチ含有量が６０％以上
（ｂ）分子量ピークが６×１０3以上４×１０4以下
（ｃ）分子量分散度が１．５以上６．０以下
（ｄ）示差走査熱量測定による５０℃〜１３０℃における糊化エンタルピーが１０Ｊ／ｇ以下
【請求項２】
前記レジスタントスターチ高含有澱粉が、アミロース含量が４０％以上であるアミロース高含有澱粉を原料とし、該原料を無機酸水溶液中で酸処理することにより得られる、請求項１に記載の腸内環境改善剤。
【請求項３】
当該腸内環境改善剤が、腸内のビフィドバクテリウム属に属する細菌を増加させる作用を有する、請求項１または２に記載の腸内環境改善剤。
【請求項４】
当該腸内環境改善剤が、脂質代謝改善作用を有する、請求項１乃至３いずれか一項に記載の腸内環境改善剤。
【請求項５】
前記脂質代謝改善作用が、血中の総コレステロール低下作用である、請求項４に記載の腸内環境改善剤。
【請求項６】
前記脂質代謝改善作用が、血中の中性脂肪低下作用である、請求項４に記載の腸内環境改善剤。
【請求項７】
前記脂質代謝改善作用が、下記式（Ｉ）に示される動脈硬化指数の低下作用である、請求項４に記載の腸内環境改善剤。
動脈硬化指数＝（（総コレステロール濃度（ｍｇ／ｄｌ））−（ＨＤＬコレステロール濃度（ｍｇ／ｄｌ）））／（ＨＤＬコレステロール濃度（ｍｇ／ｄｌ））  （Ｉ）
【請求項８】
不溶性食物繊維をさらに含む、請求項４乃至７いずれか一項に記載の腸内環境改善剤。
【請求項９】
前記不溶性食物繊維がセルロースまたはその誘導体である請求項８に記載の腸内環境改善剤。
【請求項１０】
前記不溶性食物繊維がセルロースである請求項９に記載の腸内環境改善剤。
【請求項１１】
請求項１乃至１０いずれか一項に記載の腸内環境改善剤を含む飲食品。
【請求項１２】
請求項１乃至１０いずれか一項に記載の腸内環境改善剤を含む飼料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腸内環境改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
澱粉は一般的に消化されやすいが、難消化性の画分も存在し、この画分はレジスタントスターチ（Resistant Starch：ＲＳ）と呼ばれている。【０００３】
非特許文献１には、レジスタントスターチとして、ハイアミロースコーンスターチまたは湿熱処理したハイアミロースコーンスターチを含む餌をブタに与えることにより、糞中のビフィドバクテリア数が増加することが記載されている。【０００４】
また、非特許文献２には、ブタの餌中にハイアミロースコーンスターチおよびプロバイオティック成分を配合することにより、糞中のビフィドバクテリア数が増加すると記載されている。【０００５】
また、非特許文献３では、ヒトにレジスタントスターチを摂取させ、菌の変化を調べている。小麦澱粉を含む餌を摂取した群を対照とした場合、ＲＳ４型である化学修飾した澱粉では、ビフィドバクテリア数の増加に有意差があることが記載されている。一方、ＲＳ２型であるハイアミロースコーンスターチでは、ビフィドバクテリア数に有意差は示されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１１−８４６７４号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Anthony R. Bird他３名,「Two high-amylose maize starches with different amounts of resistant starch vary in their effects on fermentation, tissue and digesta mass accretion, and bacterial populations in the large bowel of pigs」, British journal of Nutrition, 2007, 97, 134-144
【非特許文献２】Ian Brown他５名,「Fecal Numbers of Bifidobacteria Are Higher in Pigs Fed Bifidobacterium longum with a High Amylose Cornstarch Than with a Low Amylose Cornstarch」, The Journal of Nutrition 1997, 127, 1822-1827
【非特許文献３】Ines Martinez他４名,「Resistant Starches Types 2 and 4 Have Differential Effects on the Composition of the Fecal Microbiota in Human Subjects」，Plos one, 2010, 5（11）, e15046
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
以上のように、ビフィズス菌の増殖に関して、ＲＳが有効であるかどうかについては文献により報告内容が異なっており、明らかではなかった。【０００９】
本発明は、新規な腸内環境改善剤を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明によれば、以下の条件（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）を満たすレジスタントスターチ高含有澱粉を有効成分として含有する、腸内環境改善剤が提供される。
（ａ）ＡＯＡＣ公定法２００２．０２のレジスタントスターチ測定法によるレジスタントスターチ含有量が６０％以上
（ｂ）分子量ピークが６×１０3以上４×１０4以下
（ｃ）分子量分散度が１．５以上６．０以下
（ｄ）示差走査熱量測定による５０℃〜１３０℃における糊化エンタルピーが１０Ｊ／ｇ以下【００１１】
また、本発明によれば、前記本発明における腸内環境改善剤を含む脂質代謝改善剤が提供される。
また、本発明によれば、以下の条件（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）を満たすレジスタントスターチ高含有澱粉を有効成分として含有するとともに不溶性食物繊維を含有し、脂質代謝改善作用を有する腸内環境改善剤が提供される。
（ａ）ＡＯＡＣ公定法２００２．０２のレジスタントスターチ測定法によるレジスタントスターチ含有量が６０％以上
（ｂ）分子量ピークが６×１０3以上４×１０4以下
（ｃ）分子量分散度が１．５以上６．０以下
（ｄ）示差走査熱量測定による５０℃〜１３０℃における糊化エンタルピーが１０Ｊ／ｇ以下【００１２】
本発明においては、上記条件（ａ）から（ｄ）を満たすレジスタントスターチ高含有澱粉を有効成分として含有するため、優れた腸内環境改善効果を得ることができる。【００１３】
なお、これらの各構成の任意の組み合わせや、本発明の表現を方法、装置などの間で変換したものもまた本発明の態様として有効である。
たとえば、本発明によれば、前記本発明における腸内環境改善剤を含む医薬、飲食品または飼料が提供される。
また、本発明によれば、前記本発明における腸内環境改善剤の医薬、飲食品または飼料への使用が提供される。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、新規な腸内環境改善剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
上述した目的、およびその他の目的、特徴および利点は、以下に述べる好適な実施形態、およびそれに付随する以下の図面によってさらに明らかになる。【００１６】
【図１】実施例における盲腸内容物のｐＨの測定結果を示す図である。
【図２】実施例における盲腸内容物中の短鎖脂肪酸の測定結果を示す図である。
【図３】実施例における盲腸内容物菌叢解析結果を示す図である。
【図４】実施例における盲腸内容物菌叢解析結果を示す図である。
【図５】実施例における盲腸内容物菌叢解析結果を示す図である。
【図６】実施例における盲腸内容物菌叢解析結果を示す図である。
【図７】実施例における糞乾燥重量の測定結果を示す図である。
【図８】実施例における盲腸組織量の測定結果を示す図である。
【図９】実施例における血中中性脂肪の測定結果を示す図である。
【図１０】実施例における血中総コレステロールの測定結果を示す図である。
【図１１】実施例における試験期間中の総摂食量を示す図である。
【図１２】実施例における試験期間中の体重の推移を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明における腸内環境改善剤は、以下の条件（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）を満たすレジスタントスターチ高含有澱粉を有効成分として含有する。
（ａ）ＡＯＡＣ公定法２００２．０２のレジスタントスターチ測定法によるレジスタントスターチ含有量が６０％以上
（ｂ）分子量ピークが６×１０3以上４×１０4以下
（ｃ）分子量分散度が１．５以上６．０以下
（ｄ）示差走査熱量測定による５０℃〜１３０℃における糊化エンタルピーが１０Ｊ／ｇ以下
はじめに、上記レジスタントスターチ高含有澱粉について説明する。
【００１８】
本発明において用いられるレジスタントスターチ高含有澱粉は、上記条件（ａ）を満たし、レジスタントスターチ含量が今までの製造方法によって得られたものに比べて顕著に高い。
初期のレジスタントスターチ含量をより一層高める観点からは、本発明におけるレジスタントスターチ高含有澱粉のＡＯＡＣ公定法２００２．０２のレジスタントスターチ測定法によるレジスタントスターチ含有量は、好ましくは６５％以上、さらに好ましくは７０％以上である。なお、本発明におけるレジスタントスターチ高含有澱粉のレジスタントスターチ含有量の上限に特に制限はなく、１００％以下であり、たとえば９０％以下であってもよい。
ここで、レジスタントスターチ含有量は、試料乾燥重量当たりのレジスタントスターチ重量（ｗ/ｗ）として定義される。
【００１９】
また、上記条件（ｂ）および（ｃ）を満たすことにより、澱粉中のレジスタントスターチ含量を安定的に高めることができる。
【００２０】
このうち、上記条件（ｂ）は、レジスタントスターチ高含有澱粉の分子量範囲を規定する。
分子量ピークを６×１０3以上４×１０4以下とすることにより、レジスタントスターチ含量が６０％を上回る澱粉が安定的に得られる。
より安定的にレジスタントスターチ含有量の高い澱粉を得る観点からは、分子量ピークがたとえば６．５×１０3以上、好ましくは８×１０3以上であってもよい。また、さらに確実にレジスタントスターチ含有量の高い澱粉を得る観点からは、分子量ピークがたとえば３．６×１０4以下、好ましくは２．５×１０4以下、より好ましくは１．５×１０4以下であってもよい。
【００２１】
次に、上記条件（ｃ）は、分子量分散度を規定する。
条件（ｃ）における分子量分散度とは、数平均分子量Ｍｎに対する重量平均分子量Ｍｗの比Ｍｗ／Ｍｎをいう。上記条件（ｃ）を満たす構成とすることにより、レジスタントスターチ含量を安定的に高めることができる。また、分子量が低い画分または分子量が高い画分が過剰に多くなることを抑制することができるため、腸内環境改善剤が粉っぽくなりすぎたり食感が硬くなりすぎることを抑制できる。
分子量分散度の下限は、腸内環境改善剤を摂取する際の食感の好ましさの観点からは、１．５以上、好ましくは２．０以上、より好ましくは３．０以上とする。分子量分散度の低すぎる澱粉は、粉っぽさ等の点で食感が好ましくない場合があるため、分子量ピークにはある程度の幅があることが好ましい。
一方、分子量分散度の上限は、レジスタントスターチ含量をより一層安定的に高める観点からは、６．０以下、好ましくは５．５以下、さらに好ましくは５．０以下である。
よって、本発明における分子量分散度は、レジスタントスターチ割合と食感のバランスの観点からは、１．５以上６．０以下、好ましくは２．０以上５．５以下、より好ましくは３．０以上５．０以下である。
なお、澱粉の分子量は、たとえば、ゲル濾過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）（標準物質：プルラン換算）で測定することができる。
【００２２】
次に、条件（ｄ）について説明する。
本発明においては、条件（ｄ）を満たすため、元々のレジスタントスターチ含量が高いことに加えて、加熱処理をおこなった後もレジスタントスターチを高割合で含むことができる。
具体的には、２００℃、２０分間加熱後のレジスタントスターチ含有量が、たとえば６０％以上、好ましくは７０％以上とすることも可能となる。
【００２３】
ここで、糊化エンタルピーとは、澱粉が加熱され、糊になるために必要なエネルギーである。澱粉と水が共存下にて加熱されると、ある温度で澱粉は糊になる。この糊になるときにエネルギーを必要とするため、吸熱反応が起こる。示差走査熱量測定（Differential scanning calorimetry：ＤＳＣ）では、温度変化に伴う吸熱量がピークとして計測され、そのピーク面積が糊化エンタルピーとして計算される。糊化エンタルピーは糊化温度、分子量ピークおよび分子量分散度が近い澱粉同士において、耐熱性の指標として用いることができる。
【００２４】
このＤＳＣによる吸熱ピークの面積が小さいことが本発明におけるレジスタントスターチ高含有澱粉の一つの特徴であり、具体的には１０Ｊ／ｇ以下、好ましくは８Ｊ／ｇ以下、さらに好ましくは６Ｊ／ｇ以下である。こうすることにより、加熱処理後もレジスタントスターチ含量が高い腸内環境改善剤を安定的に得ることができる。なお、糊化エンタルピーの下限に特に制限はなく、たとえば１Ｊ／ｇ以上であってもよい。
【００２５】
本発明においては、以上の条件（ａ）から（ｄ）をすべて満たすレジスタントスターチ高含有澱粉を有効成分として含むため、腸内環境改善作用を有するレジスタントスターチを高い割合で含むとともに、加熱安定性に優れた腸内環境改善剤を得ることができる。
【００２６】
次に、上記レジスタントスターチ高含有澱粉の製造方法を説明する。本発明におけるレジスタントスターチ高含有澱粉は、たとえば、特許文献１に記載の方法に準じて製造することができる。
なお、本明細書において特に記述がない場合、各用語の定義は以下の通りである。また、本明細書において、レジスタントスターチをＲＳと記載する場合もある。
スラリー濃度：澱粉スラリー重量に対する澱粉乾重量の割合（ｗ／ｗ）。
酸規定度：澱粉由来の水分も含めた、反応液中の水に対する酸の規定度。ここで、水分とは、澱粉湿重量に対する水分の割合（ｗ／ｗ）である。
レジスタントスターチ含量：試料乾重量に対するレジスタントスターチの重量の割合（ｗ／ｗ）。
レジスタントスターチ高含有澱粉：レジスタントスターチ含量６０％以上の澱粉。
【００２７】
本発明において、上記レジスタントスターチ高含有澱粉は、たとえば、アミロース含量が４０％以上であるアミロース高含有澱粉を原料とし、該原料を無機酸水溶液中で酸処理することにより得られる。
【００２８】
原料として用いられるアミロース高含有澱粉の由来は、コーン、馬鈴薯、米、小麦、甘藷、タピオカなど問わないが、容易に入手できるという観点からは、ハイアミロースコーンスターチが好ましい。ハイアミロースコーンスターチは育種によりアミロース含量を高めたコーンスターチであり、アミロース含量は４０％以上のもの、７０％以上のものが現在入手可能である。レジスタントスターチ高含有澱粉に含まれるレジスタントスターチ量をさらに安定的に増加させる観点からは、澱粉中のアミロース含量がたとえば４０％以上であれば、いずれのスターチも使用できる。
【００２９】
酸処理においては、原料の澱粉と浄水を反応装置に投入する。あるいは浄水に無機酸をあらかじめ溶解させた酸水と原料を反応装置に投入する。酸処理をより安定的に行う観点からは、反応中の澱粉の全量が水相内に均質に分散した状態、またはスラリー化した状態にあることが望ましい。そのためには、酸処理を行う上での澱粉スラリーの濃度をたとえば５０重量％以下、好ましくは２０重量％以上４０重量％以下の範囲になるように調整する。スラリー濃度が高すぎると、スラリー粘度が上昇し、均一なスラリーの攪拌が難しくなる場合がある。
【００３０】
酸処理に用いられる酸として、具体的には塩酸、硫酸、硝酸などの無機酸が挙げられ、種類、純度など問わず利用できる。
【００３１】
酸処理反応は、得られる酸処理澱粉が上記条件（ａ）〜（ｄ）を満たすよう適当な温度、適当な酸濃度を選択しておこなわれる。本発明においては、たとえば酸処理時の無機酸濃度、反応温度および反応時間を特定の条件に設定する。以下、各条件について具体的に説明する。
【００３２】
まず、酸処理の時間は、上記条件（ａ）〜（ｄ）を満たすように設定されるが、反応中の変質をより確実に抑制する観点からは、酸処理に要する時間をたとえば３日以内、好ましくは２日以内とする。
【００３３】
また、酸処理における無機酸濃度および反応温度については、たとえば以下の式（１）を満たす条件とする。
（５．５４×（４．２０）（T-40)/10）(-0.879)≦Ｃ＜−０．００００１６×Ｔ3＋０．０００６８×Ｔ2−０．０２８×Ｔ＋４．３  （１）
（ただし、上記式（１）において、Ｔ：反応温度（℃）、Ｃ：無機酸水溶液中の無機酸の規定度（Ｎ）である。）
【００３４】
無機酸規定度および反応温度がいずれも高すぎると、レジスタントスターチ含量を充分高めることができない場合がある。一方、低すぎると、酸処理反応に時間がかかりすぎる場合がある。
上記式（１）を満たす条件とすることにより、レジスタントスターチ含量を効率よく安定的に高めることができる。
【００３５】
さらに、酸処理における反応時間は、反応温度および酸規定度の２つのファクターから以下の式（２）で一義的に決定することができる。
１３．０×Ｃ(-1.14)×（１／４．２）(T-40)/10≦ｔ≦１８０×Ｃ(-1.58)×（１／４．２）(T-40)/10  （２）
（ただし、上記式（２）において、Ｔ：反応温度（℃）、Ｃ：無機酸水溶液中の無機酸の規定度（Ｎ）、ｔ：反応時間（時間）である。）
【００３６】
上記式（２）は実験的に求められた式であり、酸規定度が２倍になると、レジスタントスターチ高含有澱粉が得られる最短時間が１／２．２倍、最長時間が１／３倍になり、反応温度が１０℃上昇すると最短時間、最長時間ともに１／４．２倍になるという関係に基づく式である。
【００３７】
レジスタントスターチ高含有澱粉の製造条件は、反応温度、酸規定度および反応時間の３つのファクターで表される。そして、式（２）に使用する反応温度および酸規定度の上限と下限は、前述の上記式（１）によって決定される。
【００３８】
アミロース含量が４０％以上であるアミロース高含有澱粉（ハイアミローススターチ）を原料とし、該原料を無機酸水溶液中において特定の条件で酸処理することにより、レジスタントスターチ含有量の高い澱粉を安定的に得られる。
さらに、アミロース含量が４０％以上である高アミロース含有澱粉を原料として酸処理を行い、その際の反応温度、酸規定度および反応時間についてそれぞれ特定の条件を設定することにより、レジスタントスターチ含量を飛躍的に上昇させることができる。また、高効率にハイアミローススターチのレジスタントスターチの絶対量を増やすことが可能となる。
【００３９】
こうして得られるレジスタントスターチ高含有澱粉は、レジスタントスターチの割合が高く、レジスタントスターチの加熱耐性に優れているとともに、腸内環境改善剤として有効である。
以下、腸内環境改善剤について、さらに具体的に説明する。
【００４０】
（第一の実施形態）
本実施形態における腸内環境改善剤は、前述した条件（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）を満たすレジスタントスターチ高含有澱粉を有効成分として含有してなる。
本実施形態における腸内環境改善剤は、腸内のビフィドバクテリウム属に属する細菌を増加させる作用を有する。
【００４１】
腸内環境改善剤中の上記レジスタントスターチ高含有澱粉の含有量に特に制限はなく、効率よく腸内のビフィドバクテリウム属に属する細菌を増加させる観点からは、たとえば５重量％以上、好ましくは１０重量％以上、さらに好ましくは１５重量％以上である。また、腸内環境改善剤中の上記レジスタントスターチ高含有澱粉の含有量に特に制限はなく１００重量％以下であり、剤型に応じて設定できる。
【００４２】
腸内環境改善剤の剤型に特に制限はなく、たとえば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤とすることができる。
【００４３】
また、腸内環境改善剤は、医薬品、医薬部外品、食品添加物、飲食品、飼料等としてそのまま用いることもできるし、これらに所定の割合で配合して用いることもできる。
腸内環境改善剤の配合量に特に制限はないが、飲食品または飼料に配合されるとき、ビフィドバクテリウム属に属する細菌を増加させる作用を効率よく発揮させる観点から、たとえば１重量％以上とすることができ、好ましくは３重量％以上、さらに好ましくは５重量％以上とする。また、飲食品または飼料の本来の食味や食感の劣化を抑制する観点からは、腸内環境改善剤の配合量をたとえば５０重量％以下、好ましくは３０重量％以下、さらに好ましくは２０重量％以下とする。
【００４４】
また、腸内環境改善剤の投与量は、たとえば腸内環境改善剤の有効成分の含量、患者の年齢、患者の病状や一般状態、投与方法等に応じて設定することができる。ビフィドバクテリウム属に属する細菌を増加させる作用をより確実に得る観点から、成人については、体重１ｋｇあたり、１日あたりの有効成分として、たとえば５０ｍｇ以上、好ましくは１００ｍｇ以上とすることができる。
また、腸内環境改善剤の投与量の上限に特に制限はないが、成人については、体重１ｋｇあたり、１日あたりの有効成分として、たとえば５ｇ以下とすることができる。
【００４５】
また、本実施形態における腸内環境改善剤により、たとえば、正常な摂食量または成長を維持しつつ、有機酸量の増加作用または腸内ｐＨの低下作用を得ることも可能となる。
【００４６】
さらに、本実施形態における腸内環境改善剤により、糞便重量の増加作用；腸組織重量の増加作用；ならびに、血中の総コレステロール低下作用、血中の中性脂肪低下作用、下記式（Ｉ）に示される動脈硬化指数の低下作用等の脂質代謝改善作用からなる群から選ばれる一または二以上の作用を得ることも可能となる。
動脈硬化指数＝（（総コレステロール濃度（ｍｇ／ｄｌ））−（ＨＤＬコレステロール濃度（ｍｇ／ｄｌ）））／（ＨＤＬコレステロール濃度（ｍｇ／ｄｌ））  （Ｉ）
【００４７】
（第二の実施形態）
本実施形態における腸内環境改善剤は、前述した条件（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）を満たすレジスタントスターチ高含有澱粉を有効成分として含有してなる。さらに具体的には、本実施形態における腸内環境改善剤は、上記条件（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）を満たすレジスタントスターチ高含有澱粉を有効成分として含有するとともに、上記レジスタントスターチ高含有澱粉以外の不溶性食物繊維を含有する。
【００４８】
本実施形態における腸内環境改善剤は、脂質代謝改善作用を有する。脂質代謝改善作用として、具体的には、血中の総コレステロール低下作用、血中の中性脂肪低下作用および下記式（Ｉ）に示される動脈硬化指数の低下作用からなる群から選択される一または二以上の作用が挙げられる。
動脈硬化指数＝（（総コレステロール濃度（ｍｇ／ｄｌ））−（ＨＤＬコレステロール濃度（ｍｇ／ｄｌ）））／（ＨＤＬコレステロール濃度（ｍｇ／ｄｌ））  （Ｉ）
【００４９】
また、本実施形態において、上記レジスタントスターチ高含有澱粉および不溶性食物繊維を組み合わせて用いることにより、これらの相乗効果によって脂質代謝改善作用を顕著に高めることができる。
【００５０】
食物繊維は不溶性食物繊維と水溶性食物繊維、難消化性オリゴ糖、および、レジスタントスターチに分類される。
【００５１】
不溶性食物繊維として、たとえば、セルロース、ヘミセルロース、リグニン、キトサン、キチン、およびカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなどのセルロース誘導体からなる群から選ばれる一種または二種以上が挙げられる。この中で、セルロースは植物および酵母の細胞壁を構成する主成分であり、利用しやすく、不溶性食物繊維の代表的な化合物である。不溶性食物繊維の由来は特に限定されず、植物由来のもの、動物由来のもの、菌類由来のもの等を用いることができる。
本実施形態では、不溶性食物繊維を一種または二種以上組み合わせて配合することも可能である。
【００５２】
腸内環境改善剤中の上記レジスタントスターチ高含有澱粉および不溶性食物繊維の含有量に特に制限はない。腸内環境改善剤中の上記レジスタントスターチ高含有澱粉の含有量は、効率よく脂質代謝を改善する観点からは、たとえば５重量％以上、好ましくは１０重量％以上、さらに好ましくは１５重量％以上である。また、腸内環境改善剤中の上記レジスタントスターチ高含有澱粉の含有量に特に制限はなく１００重量％以下であり、剤型に応じて設定できる。
【００５３】
また、本実施形態において、不溶性食物繊維の種類に特に制限はないが、入手の容易さの観点からは、たとえばセルロースおよびその誘導体から選ばれる一種以上または二種が挙げられ、好ましくはセルロースが用いられる。
腸内環境改善剤への不溶性食物繊維の配合量は、上記レジスタントスターチ高含有澱粉の効果が充分に得られる範囲で適宜設定してよく、たとえば５重量％以上とすることができる。
【００５４】
また、本実施形態において、上記レジスタントスターチ高含有澱粉および不溶性食物繊維を組み合わせて用いることにより、これらの相乗効果によって脂質代謝改善作用を顕著に高めることができる。
たとえば、腸内環境改善剤中の上記レジスタントスターチ高含有澱粉の配合量を５重量％以上９５重量％以下、不溶性食物繊維の配合量を５重量％以上９５重量％以下としてもよく、上記レジスタントスターチ高含有澱粉の配合量を１０重量％以上９０重量％以下、不溶性食物繊維の配合量を１０重量％以上９０重量％以下とすることが好ましい。
【００５５】
腸内環境改善剤の剤型に特に制限はなく、たとえば、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤から選ばれる剤型とすることができる。
【００５６】
また、腸内環境改善剤は、医薬品、医薬部外品、食品添加物、飲食品、飼料等としてそのまま用いることもできるし、これらに所定の割合で配合して用いることもできる。
腸内環境改善剤の配合量に特に制限はないが、飲食品または飼料に配合されるとき、脂質代謝改善作用を効率よく発揮させる観点から、たとえば１重量％以上とすることができ、好ましくは３重量％以上、さらに好ましくは５重量％以上とする。また、飲食品または飼料の本来の食味や食感の劣化を抑制する観点からは、腸内環境改善剤の配合量をたとえば５０重量％以下、好ましくは３０重量％以下、さらに好ましくは２０重量％以下とする。
また、上記レジスタントスターチ高含有澱粉と不溶性食物繊維との配合比は、たとえば５：９５〜９５：５、好ましくは２０：８０〜８０：２０、さらに好ましくは３０：７０〜７０：３０程度とする。
【００５７】
腸内環境改善剤の投与量は、たとえば腸内環境改善剤の有効成分の含量、患者の年齢、患者の病状や一般状態、投与方法等に応じて設定することができる。脂質代謝改善作用をより確実に得る観点から、成人については、体重１ｋｇあたり、１日あたりの有効成分として、たとえば５０ｍｇ以上、好ましくは１００ｍｇ以上とすることができる。
また、腸内環境改善剤の投与量の上限に特に制限はないが、成人については、体重１ｋｇあたり、１日あたりの有効成分として、たとえば５ｇ以下とすることができる。
【００５８】
また、本実施形態における腸内環境改善剤により、たとえば、正常な摂食量または成長を維持しつつ、有機酸量の増加作用または腸内ｐＨの低下作用を得ることも可能となる。
さらに、本実施形態における腸内環境改善剤により、糞便重量の増加作用、腸組織重量の増加作用等を得ることも可能となる。
【実施例】
【００５９】
以下に本発明の実施例を示すが、本発明の趣旨はこれらに限定されるものではない。
また、以下において、特に断りのない場合、「％」とは「重量％」である。【００６０】
（製造例）レジスタントスターチ高含有澱粉の製造
特許文献１に記載の方法に準じて、上記条件（ａ）〜（ｄ）を満たすレジスタントスターチ高含有澱粉を製造した。
具体的には、ハイアミロースコーンスターチＨＳ−７  ｃｌａｓｓＶＩＩ（Ｊ−オイルミルズ社製品、水分１５．０％、アミロース含量８０％）を用い、スラリー重量に対する澱粉乾重量が４０％（ｄｒｙ  ｓｔａｒｃｈ  ｗｅｉｇｈｔ／ｓｌｕｒｒｙ  ｗｅｉｇｈｔ）となるよう水を加えたスラリーを３２０ｇ調製した。そこに、懸濁しながら２．０６Ｎに調製した塩酸水溶液８０ｍＬを加え、５０℃に調整した。このとき、澱粉水分を含めた反応水当たりの塩酸の規定度は０．６１Ｎとなった。２４時間反応後、３％ＮａＯＨで中和し、水洗、脱水、乾燥し、酸処理ハイアミロースコーンスターチ（レジスタントスターチ高含有澱粉）を得た。なお、酸規定度とは最終的な反応液における澱粉水分を含めた反応水当たりの酸規定度を意味する。
得られたレジスタントスターチ高含有澱粉について、
レジスタントスターチ含量が７０．８％（ＡＯＡＣ公定法２００２．０２による測定法）、
分子量ピークが８，５００、
分子量分散度が４．２であり、
ＤＳＣによる糊化エンタルピーが４．０Ｊ/ｇ
であった。ここで、分子量分布および糊化エンタルピーの測定は、それぞれ以下の方法でおこなった。【００６１】
（分子量分布の測定）
分子量分布（分子量ピークおよび分子量分散度）の測定は、東ソー社製ＨＰＬＣユニット（ポンプＤＰ−８０２０、ＲＩ検出器ＲＳ−８０２１、脱気装置ＳＤ−８０２２）を使用した。分析条件は、以下の通りである。
カラム：ＴＳＫｇｅｌ  α−Ｍ（７．８ｍｍφ、３０ｃｍ）（東ソー社製）２本
流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
移動相：５ｍＭ  ＮａＮＯ3／ジメチルスルホキシド：水（９：１）
カラム温度：４０℃
分析量：０．２ｍＬ（試料濃度１．０ｍｇ／ｍＬ移動相）【００６２】
検出器のデータは専用のソフトウェア（マルチステーションＧＰＣ−８０２０  ｍｏｄｅｌＩＩデータ収集ｖｅｒｓｉｏｎ５．７０、東ソー社製）を用いて収集し、分子量ピーク、分子量分散度を計算した。検量線は分子量既知のプルラン（昭和電工社製、Ｓｈｏｄｅｘ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｐ−８２）を使用して作成した。【００６３】
（示差走査熱量測定（ＤＳＣ）による糊化エンタルピーの測定）
ＤＳＣの測定には、マックサイエンス社製ＤＳＣ３１００を使用した。試料１５ｍｇと蒸留水４５μＬを７０μＬ容量のアルミセル中に入れ、蓋をして密閉し、室温で３時間以上放置し、吸水させた。リファレンスにはブランクセルを用いた。昇温は、室温から１３０℃まで１０℃／ｍｉｎの速度でおこなった。得られたＤＳＣチャートの吸熱ピークの面積より測定される熱量である糊化エンタルピーを澱粉乾燥重量当たりの糊化熱（Ｊ／ｇ）として定義した。【００６４】
（実施例１、実施例２、参照例１および参照例２）
ラットを用いた投与試験をおこなった。実施例１では、製造例で得られたレジスタントスターチ高含有澱粉およびセルロースからなる腸内環境改善剤を含む飼料を投与した。また、実施例２では、製造例で得られたレジスタントスターチ高含有澱粉からなる腸内環境改善剤を含む飼料を投与した。
試験飼料、試験条件、試験方法および試験結果はそれぞれ以下の通りである。【００６５】
（試験飼料）
表１に示す配合で、高脂肪・高コレステロール・高ショ糖食の飼料を調製した。各例では以下の高脂肪・高コレステロール・高ショ糖食を用いた。
参照例１：スターチ食（コーンスターチ１０％）
参照例２：セルロース食（セルロース１０％）
実施例１：５％ＲＳ食（レジスタントスターチ高含有澱粉５％、セルロース５％）
実施例２：１０％ＲＳ食（レジスタントスターチ高含有澱粉１０％）【００６６】
【表１】
2013161359.tif 000002
【００６７】
表１で用いた成分は以下の通りである。
コーンスターチ：レギュラーコーンスターチＹ（株式会社Ｊ−オイルミルズ社製）
レジスタントスターチ高含有澱粉：製造例で得られたレジスタントスターチ高含有澱粉
セルロースパウダー：結晶セルロース（日本クレア株式会社製）【００６８】
（試験条件）
７週齢、オスのＷｉｓｔｅｒラット２８匹を５日間標準飼料にて順化飼育した後、体重および血液生化学に準じて群分けし（各群７匹）、各例の餌（表１）で５週間飼育した。
飼育期間中は体重を週１回、摂食量を週２回計測した。飼育期間終了前２４時間の糞を回収し、４時間絶食後、エーテル麻酔下で開腹し、下大静脈より採血をおこなった。その後、肝臓、盲腸および精巣周辺脂肪を回収して、盲腸内容物回収とｐＨ測定を行った。【００６９】
（試験方法）
（盲腸内容物ｐＨ）
盲腸内容物５０ｍｇを水１ｍＬに懸濁して、ｐＨメータにてｐＨを測定した。【００７０】
（盲腸内短鎖脂肪酸）
盲腸内容物０．５ｇに５倍量の９５％エタノールを加え、脂肪酸を抽出後、ＹＭＣ脂肪酸分析キット（株式会社ワイエムシー社製）を用いてラベル化して、以下の条件でＨＰＬＣ分析した。
分析カラム：ＹＭＣ−ｐａｃｋ  ＦＡ（２５０×６．０ｍｍ  ＩＤ）（株式会社ワイエムシー社製）
移動相：０．１Ｎ塩酸を用いてｐＨ４．５に合わせたアセトニトリル／メタノール／水（３０／１６／５４）
流速：１．２ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
検出：ＵＶ４００ｎｍの吸収【００７１】
（盲腸内容物菌叢解析）
各群からランダムに２検体を選び、盲腸内容物からＤＮＡ抽出キット(QUIAmp DNA stool Mini Kit, Qiagen社製)を用いてＤＮＡを抽出した。各菌の菌数はリアルタイムＰＣＲ装置ＬｉｎｅＧｅｎｅ（Ｂｉｏ  Ｆｌｕｘ社製）を用いて測定し、各菌の相対値はスターチ添加区の値を基に比較ｃｔ法で算出した。【００７２】
以下に各菌の測定条件を示す。
全菌数は、０．０４μｇのＤＮＡをテンプレートとし、センスプライマー（配列番号１：5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAGT-3'）とアンチセンスプライマー（配列番号２：5'-GTATTACCGCG-GCTGCTGGCAC-3'）を用いてＰＣＲを行った。反応は、２０μＬ中、１０μＬのSYBR(r) Premix Ex Taq(tm)（Perfect Real Time）（タカラバイオ社製）、０．４μＭの各プライマーを用いて以下のＰＣＲプログラム下で行った。１サイクル：９５℃，１０ｓｅｃ、４０サイクル：９５℃，２０ｓｅｃ、６１℃，３１ｓｅｃ、１サイクル（Dissociation）：９５℃，１５ｓｅｃ、６０℃，３０ｓｅｃ、９５℃，１５ｓｅｃ。全菌数は、スターチ添加区を１とした時の相対値として算出した。【００７３】
Clostridium-coccoides groupは、０．０２μｇのＤＮＡをテンプレートとし、センスプライマー（配列番号３：5'-AAATGACGGTACCTGACTAA-3'）とアンチセンスプライマー（配列番号４：5'-CTTTGAGTTTCATTCTTGCGAA-3'）を用いてＰＣＲを行った。反応は、２０μＬ中、１０μＬのSYBR(r) Premix Ex Taq(tm)（Perfect Real Time）（タカラバイオ社製）、０．４μＭの各プライマーを用いて以下のＰＣＲプログラム下で行った。１サイクル：９５℃，１０ｓｅｃ、４０サイクル：９４℃，２０ｓｅｃ、５８℃，２０ｓｅｃ、７２℃，３０ｓｅｃ、１サイクル（Dissociation）：９５℃，１５ｓｅｃ、６０℃，３０ｓｅｃ、９５℃，１５ｓｅｃ。Clostridium-coccoides groupの値は、スターチ添加区を１とした時の相対値として算出した。【００７４】
Bacteroides-Prevotella groupは、０．０２μｇのＤＮＡをテンプレートとし、センスプライマー（配列番号５：5'-GGTGTCGGCTTAAGTGCCAT-3'）とアンチセンスプライマー（配列番号６：5'-CGGA(C/T)GTAAGGGCCGTGC-3'）を用いてＰＣＲを行った。反応は、２０μＬ中、１０μＬのSYBR(r) Premix Ex Taq(tm)（Perfect Real Time）（タカラバイオ社製）、０．４μＭの各プライマーを用いて以下のＰＣＲプログラム下で行った。１サイクル：９５℃，１０ｓｅｃ、４０サイクル：９５℃，２０ｓｅｃ、５８℃，１０ｓｅｃ、７２℃，３０ｓｅｃ、１サイクル（Dissociation）：９５℃，１５ｓｅｃ、６０℃，３０ｓｅｃ、９５℃，１５ｓｅｃ。Bacteroides-Prevotella groupの値は、スターチ添加区を１とした時の相対値として算出した。【００７５】
Bifidobacteriumは、０．０１μｇのＤＮＡをテンプレートとし、センスプライマー（配列番号７： 5'-TCGCGTC(C/T)GGTGTGAAAG-3'）とアンチセンスプライマー（配列番号８： 5'-CCACATCCAGC(A/G)TCCAC-3'）を用いてＰＣＲを行った。反応は、２０μＬ中、１０μＬのSYBR(r) Premix Ex Taq(tm) （Perfect Real Time）（タカラバイオ社製）、０．４μＭの各プライマーを用いて以下のＰＣＲプログラム下で行った。１サイクル：９５℃，１０ｓｅｃ、４０サイクル：９５℃，２０ｓｅｃ、６２℃，２０ｓｅｃ、７２℃，３０ｓｅｃ、１サイクル（Dissociation）：９５℃，１５ｓｅｃ、６０℃，３０ｓｅｃ、９５℃，１５ｓｅｃ。Bifidobacteriumの値は、スターチ添加区を１とした時の相対値として算出した。【００７６】
（糞重量）
飼育期間終了前２４時間の糞を採取し、凍結乾燥後、得られた糞の乾燥重量を測定した。【００７７】
（盲腸組織量）
摘出した盲腸から盲腸内容物を取り出した。盲腸内部を洗浄後、組織重量を計測した。【００７８】
（血中脂質解析）
リポタンパク質解析システムＬｉｐｏＳＥＡＲＣＨ（スカイライトバイオテック社）にて分析した。【００７９】
（統計分析）
データの統計処理はStatView5.0を用いて行い、多重比較検定にはFisher's PLSDを用いた。【００８０】
（試験結果）
（盲腸内容物ｐＨ）
図１は、盲腸内容物のｐＨの測定結果を示す図である。図１より、盲腸内容物ｐＨは参照例１（スターチ添加区）および参照例２（セルロース添加区）に比べレジスタントスターチ高含有澱粉を添加した実施例１および２で著しく低い値を示し、参照例１および２と実施例１および２との間にそれぞれ有意な差が認められた。【００８１】
（盲腸内短鎖脂肪酸）
図２は、盲腸内容物中の有機脂肪酸（短鎖脂肪酸）の測定結果を示す図である。
図２より、盲腸内容物の短鎖脂肪酸は酢酸、酪酸およびコハク酸のいずれにおいても実施例２で著しく高い値を示した。【００８２】
（盲腸内容物菌叢解析）
図３〜図６は、盲腸内容物菌叢解析結果を示す図である。
図３より、盲腸内容物中の全菌数は、参照例１に比べて参照例２で著しく高い値を示し、実施例１および２においても高い値を示した。
図４より、盲腸内容物中のBifidobacteriumは、参照例２では参照例１に比べて約５６倍まで増加した。実施例１でさらに２７０倍、実施例２では６２０倍まで増加した。
図５より、盲腸内容物中のClostridium cocoides groupについては、各例の間で顕著な差は認められなかった。
図６より、盲腸内容物中のBacteroides-Prevotella groupについても、各例の間で顕著な差は認められなかった。【００８３】
（糞重量）
図７は、糞乾燥重量の測定結果を示す図である。図７より、一日あたりの糞重量は、参照例１に比べて参照例２ならびに実施例１および２で有意に高い値を示した。【００８４】
（盲腸組織量）
図８は、盲腸組織量の測定結果を示す図である。図８より、盲腸組織重量は参照例１に比べ実施例１および２で著しく高い値を示し、それぞれ有意な差が認められた。実施例１および２の盲腸組織重量は、参照例２に比べても有意に高い値を示した。【００８５】
（血中脂質解析）
図９は、血中中性脂肪の測定結果を示す図である。図９より、血中の中性脂肪濃度は、参照例１および２に比べ、実施例１および２で著しく低い値を示した。また、実施例１と参照例１の間に有意差が見られた。
図１０は、血中総コレステロールの測定結果を示す図である。図１０より、血中総コレステロール濃度については、参照例１と実施例１、参照例２と実施例１および実施例２との間に有意差が見られた。【００８６】
また、表２にコレステロールバランスの測定結果を示す。表２において、動脈硬化指数は前述の式（Ｉ）により算出した。表２より、実施例１および２のレジスタントスターチ高含有澱粉を摂取した群ではコレステロールバランスの改善もみられた。【００８７】
【表２】
2013161359.tif 000003
【００８８】
（総摂食量）
図１１は、試験期間中の総摂食量を示す図である。図１１より、飼育期間を通しての総摂食量は実施例２で最も高く、参照例１および実施例１との間に有意な差が認められた。飼育期間を通しての総摂取カロリーは実施例１で最も低く、参照例１および実施例２との間に有意な差が認められた。【００８９】
（体重）
図１２は、試験期間中の体重の推移を示す図である。飼育期間中、各ラットに異常は見られず順調に成長した。図１２より、体重は試験期間を通して実施例１で低くなる傾向が認められた。飼育１４日目においては、実施例１および参照例２と参照例１との間にそれぞれ有意な差が認められた。【００９０】
この出願は、２０１２年４月２６日に出願された日本特許出願特願２０１２−１００６５７を基礎とする優先権を主張し、その開示のすべてをここに取り込む。
【図１】
2013161359.tif 000004
【図２】
2013161359.tif 000005
【図３】
2013161359.tif 000006
【図４】
2013161359.tif 000007
【図５】
2013161359.tif 000008
【図６】
2013161359.tif 000009
【図７】
2013161359.tif 000010
【図８】
2013161359.tif 000011
【図９】
2013161359.tif 000012
【図１０】
2013161359.tif 000013
【図１１】
2013161359.tif 000014
【図１２】
2013161359.tif 000015
【配列表】
2013161359000001.app
【国際調査報告】
2013161359.tif 000016
2013161359.tif 000017
2013161359.tif 000018
2013161359.tif 000019