(57)【要約】  本発明は、溶媒に対する分散性や皮膚に対する透過性に優れた、新しいピロロキノリンキノンジナトリウム結晶及びその効率的な製造方法を提供することを目的とする。本発明によれば、特定条件下で得られる結晶を凍結乾燥、常圧乾燥や減圧乾燥等の乾燥手段を用いて乾燥することによって得られる、新しいピロロキノリンキノンジナトリウム結晶およびその製造方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
水分含量が７重量％以下であるピロロキノリンキノンジナトリウム結晶。
【請求項２】
水分含量が４．６重量％以下である、請求項１に記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶。
【請求項３】
Ｃｕ Ｋα放射線を用いた粉末Ｘ線回折で１１．４±０．４，１３．５±０．４，１８．０±０．４，１８．７±０．４，２６．０±０．４，２８．５±０．４°に２θ角度のピークを示す、請求項１または２に記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶（結晶形１）。
【請求項４】
Ｃｕ Ｋα放射線を用いた粉末Ｘ線回折で８．７±０．４，１１．５±０．４，１２．０±０．４，１７．４±０．４，１８．７±０．４°に２θ角度のピークを示す、請求項１または２に記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶（結晶形２）。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶を含んでなる、医薬組成物。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶を含んでなる、化粧組成物。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか一項に記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶を含んでなる、機能性食品または栄養剤。
【請求項８】
請求項１〜４のいずれかに記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶を製造する方法であって、
前記ピロロキノリンキノンジナトリウム結晶の前駆体となる結晶（前駆体結晶）を得、次いで、前駆体結晶を乾燥させる工程を含んでなる、ピロロキノリンキノンジナトリウム結晶の製造方法。
【請求項９】
前記前駆体結晶が、ピロロキノリンキノンのナトリウム塩を溶解したエタノール又はイソプロパノール濃度１０〜９０％水溶液のｐＨを２〜５の範囲に調整することにより結晶化される、請求項８に記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶の製造方法。
【請求項１０】
前記前駆体結晶が、Ｃｕ Ｋα放射線を用いた粉末Ｘ線回折で９．１±０．４，１０．３±０．４，１３．８±０．４，１７．７±０．４，１８．３±０．４，２４．０±０．４，２７．４±０．４，３９．５±０．４°に２θ角度のピークを示すピロロキノリンキノンジナトリウム結晶である、請求項８または９に記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶の製造方法。
【請求項１１】
乾燥が、結晶を油中で加熱することにより行われる、請求項８〜１０のいずれか一項に記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の参照】
【０００１】
本願は、先行する日本国特許出願である特願２０１１−１３４２７９（出願日：２０１１年６月１６日）の優先権の利益を享受するものであり、その開示内容全体は引用することにより本明細書の一部とされる。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、ピロロキノリンキノンジナトリウム塩の結晶およびその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
ピロロキノリンキノン（以下、単に「ＰＱＱ」ということがある）は新しいビタミンの可能性があることが提案されている（例えば、非特許文献１）。ＰＱＱは、細菌に限らず、真核生物のカビ、酵母に存在し、補酵素として重要な働きを行っており、近年までに細胞の増殖促進作用、抗白内障作用、肝臓疾患予防治療作用、創傷治癒作用、抗アレルギ−作用、逆転写酵素阻害作用およびグリオキサラ−ゼＩ阻害作用−制癌作用など多くの生理活性が明らかにされている。そのため、ＰＱＱは、医薬品、食品、および化粧品分野で有用な物質として注目を集めている。例えば、医薬品分野では、ＰＱＱは、心臓（特許文献１）、皮膚（特許文献２）および神経（特許文献３）等の治療薬としてその応用が期待されている。また、食品分野では、ＰＱＱは、アンチエイジング効果を有するとして、化粧品分野では、美肌効果を有する物質として、その応用が期待されている。【０００４】
ＰＱＱは、有機化学的合成法および発酵法などにより製造することが可能であり、アルカリ金属塩、特にジナトリウム塩の結晶（以下、「ジナトリウム結晶」ということがある）として提供されることが多い。このＰＱＱジナトリウム結晶は、５水和物の結晶であり、単結晶解析により構造解析がなされている（非特許文献１）。ＰＱＱジナトリウム結晶の作製法としては、非特許文献１の作製法の他にも、溶液のｐＨを調整することにより結晶化させる方法（特許文献４）や、水溶性有機溶媒を使用する沈殿法を用いてＰＱＱジナトリウム結晶を水溶液から析出させる方法が報告されている（特許文献５）。しかし、いずれの場合も、得られた固体の結晶性は低いか、または食用に適さない溶剤を使用する方法である。しかも、得られた結晶の保存性は必ずしも高くない。【０００５】
ＰＱＱを医薬品や化粧品に応用する上では、高い結晶性を有し、不純物が少なく、溶媒に対する安定した溶解性または溶媒に対する高い分散性を有し、かつ、保存性が高いことが望まれる。また、食品や医薬品に応用する上では、人体に無害であることがさらに望まれる。皮膚用医薬品や化粧品に応用する上ではさらに、皮膚に対する高い透過性が望まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００５−５３０７８６号公報
【特許文献２】特開２０１１−２４６４４２号公報
【特許文献３】特開２００７−２６９７６９号公報
【特許文献４】国際公開第２０１１／００７６３３号
【特許文献５】特公平７−１１３０２４号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ishida, T. et al., “Molecular and crystal structure of PQQ (methoxatin), a novel coenzyme of quinoproteins: extensive stacking character and metal ion interaction”, Journal of American Chemical Society, 1998, Vol. 111, p. 6822-6828
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、溶媒に対する分散性や皮膚に対する透過性に優れ、医薬分野、化粧分野または食品分野で有用な新しいＰＱＱジナトリウム結晶及びその効率的な製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、ＰＱＱジナトリウム結晶を特定条件下で調製することにより、ＰＱＱジナトリウム結晶の新しい結晶形（結晶形１および結晶形２）が得られることを見出した。特に、本発明者らは、ＰＱＱジナトリウム結晶が食油中で熱安定性を有することを見出し、さらには、ＰＱＱジナトリウム結晶を食油中で加熱すると短時間で良好な結晶形１および結晶形２の結晶が得られることを見出した。本発明者らはまた、結晶形１および結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶は、油中での分散性が高く、また、皮膚への透過性が高いことを見出した。本発明は、このような知見に基づく発明である。【００１０】
すなわち、本発明によれば以下の発明が提供される。
〔１〕水分含量が７重量％以下であるピロロキノリンキノンジナトリウム結晶。
〔２〕水分含量が４．６重量％以下である、上記〔１〕に記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶。
〔３〕Ｃｕ Ｋα放射線を用いた粉末Ｘ線回折で１１．４±０．４，１３．５±０．４，１８．０±０．４，１８．７±０．４，２６．０±０．４，２８．５±０．４°に２θ角度のピークを示す、上記〔１〕または〔２〕に記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶（結晶形１）。
〔４〕Ｃｕ Ｋα放射線を用いた粉末Ｘ線回折で８．７±０．４，１１．５±０．４，１２．０±０．４，１７．４±０．４，１８．７±０．４°に２θ角度のピークを示す、上記〔１〕または〔２〕に記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶（結晶形２）。
〔５〕上記〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶を含んでなる、医薬組成物。
〔６〕上記〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶を含んでなる、化粧組成物。
〔７〕上記〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶を含んでなる、機能性食品または栄養剤。
〔８〕上記〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶を製造する方法であって、
前記ピロロキノリンキノンジナトリウム結晶の前駆体となる結晶（前駆体結晶）を得、次いで、前駆体結晶を乾燥させる工程を含んでなる、ピロロキノリンキノンジナトリウム結晶の製造方法。
〔９〕前記前駆体結晶が、ピロロキノリンキノンのナトリウム塩を溶解したエタノール又はイソプロパノール濃度１０〜９０％水溶液のｐＨを２〜５の範囲に調整することにより結晶化される、上記〔８〕に記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶の製造方法。
〔１０〕前記前駆体結晶が、Ｃｕ Ｋα放射線を用いた粉末Ｘ線回折で９．１±０．４，１０．３±０．４，１３．８±０．４，１７．７±０．４，１８．３±０．４，２４．０±０．４，２７．４±０．４，３９．５±０．４°に２θ角度のピークを示すピロロキノリンキノンジナトリウム結晶である、上記〔８〕または〔９〕に記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶の製造方法。
〔１１〕乾燥が、結晶を油中で加熱することにより行われる、上記〔８〕〜〔１０〕のいずれかに記載のピロロキノリンキノンジナトリウム結晶の製造方法。【００１１】
本発明のＰＱＱジナトリウム結晶は、高い純度を有するだけでなく、溶液中における分散性および皮膚への浸透性が向上しており、化粧品、医薬品または機能性食品の成分として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、ＰＱＱジナトリウム結晶（結晶形１）の粉末Ｘ線回折の結果を示す図である。
【図２】図２は、乾燥工程の温度を変化させた場合の粉末Ｘ線回折の結果を示す図である。
【図３】図３は、エタノール沈殿法で調製したＰＱＱジナトリウム結晶の粉末Ｘ線回折の結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明のＰＱＱジナトリウム結晶は、水分含量が低い結晶（以下、「低水分含量結晶」ということがある）である。具体的には、本発明のＰＱＱジナトリウム結晶は、水分含量が７％以下であるＰＱＱジナトリウム結晶である。結晶中の水分含量は、結晶の安定性の観点から４．６％以下がより好ましく、３％以下がさらに好ましい。本発明のＰＱＱジナトリウム結晶は、例えば、本明細書に記載される結晶形１または結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶であるが、本発明のＰＱＱジナトリウム結晶は、結晶形１、結晶形２、およびそれ以外の結晶形の結晶から選択される１以上の結晶の混合物であってもよく、本発明の結晶形１または結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶は、例えば、本発明のＰＱＱジナトリウム結晶の前駆体となる結晶（以下、単に「前駆体結晶」ということがある）と混合していても、使用上は特に問題がない。
【００１４】
本発明のＰＱＱジナトリウム結晶は、好ましくは、Ｃｕ Ｋα放射線を用いた粉末Ｘ線回折で、１１．４±０．４, １３．５±０．４, １８．０±０．４, １８．７±０．４, ２６．０±０．４, ２８．５±０．４°に２θ角度のピークを示すＰＱＱジナトリウム結晶（結晶形１）である。このピークは、モノクロメータが装着された一般的な粉末Ｘ線回折装置で観測することができる。測定データには測定誤差も含まれることから、本発明で規定する結晶形は、ピークの角度に関する合理的な同一性を有する結晶形である。
【００１５】
本発明のＰＱＱジナトリウム結晶は、好ましくは、Ｃｕ Ｋα放射線を用いた粉末Ｘ線回折で、８．７±０．４, １１．５±０．４, １２．０±０．４, １７．４±０．４, １８．７±０．４°に２θ角度のピークを示すＰＱＱジナトリウム結晶（結晶形２）である。なお、粉末Ｘ線回折測定において低水分含量結晶として通常の測定（常温）で観察できるのは結晶形1の結晶形態であり、結晶形２は通常の湿度環境では観察できず、１８０℃以上の高温状態の環境下または乾燥雰囲気下などで測定する必要がある。
【００１６】
本発明のＰＱＱジナトリウム結晶は、本発明のＰＱＱジナトリウム結晶の前駆体結晶を得てその前駆体結晶を乾燥させる工程を含んでなる方法により製造される。本発明において、ＰＱＱジナトリウム結晶の前駆体結晶とは、水分含有量が４．６％を超える、好ましくは７％を超えるＰＱＱジナトリウム結晶をいう。本発明において、ＰＱＱジナトリウム結晶の前駆体結晶の水分含有量は、好ましくは、１４％以下である。
【００１７】
本発明のＰＱＱジナトリウム結晶の原料としては、ＰＱＱナトリウム塩（すなわち、ＰＱＱモノナトリウム塩、ＰＱＱジナトリウム塩およびＰＱＱトリナトリウム塩）を使用することができ、好ましくは、ＰＱＱトリナトリウムを使用することができる。ＰＱＱナトリウム塩には、製造工程上含みうる不純物として食塩等が含まれていてもよく、この場合、不純物は、本発明の製造過程で適宜除去して、生成物の純度を上げることが可能である。ＰＱＱジナトリウム結晶の前駆体結晶は、エタノールまたはイソプロパノール濃度１０〜９０重量％の水溶液に、ＰＱＱナトリウム塩の固体が完全に溶解してしまわない条件（すなわち、ＰＱＱナトリウム塩が飽和する条件）でＰＱＱナトリウム塩（例えば、ＰＱＱナトリウム塩の固体）を添加し、次いで、酸を添加して、水溶液のｐＨを２〜５の範囲に調整することで結晶化させることができる。水溶液中のエタノールまたはイソプロパノール濃度は、好ましくは３５〜６５重量％の濃度である。また、ＰＱＱナトリウム塩が完全に溶解してしまわない条件（すなわち、ＰＱＱが飽和する条件）とは、使用するアルコール濃度によって範囲が変わるが、ＰＱＱナトリウム塩としてトリナトリウム塩を用いる場合、ＰＱＱトリナトリウム濃度が、０．５〜８００ｇ／Ｌ、より好ましくは０．５〜１００ｇ／Ｌ、さらに好ましくは５〜６０ｇ／Ｌである条件であり、アルコール濃度が高いと低いＰＱＱ濃度で使用できる。具体的には、水溶液が、５０％エタノール水溶液である場合には、使用できるＰＱＱトリナトリウム濃度は、１〜２００ｇ／Ｌである。また、水溶液のｐＨは、より好ましくは２．５〜３．５の範囲に調整することができる。
【００１８】
前駆体結晶は、水溶液のｐＨを所定の値にしてから０．１〜９６時間反応させることにより得ることができる。大きな結晶を得るためには、より好ましくは、反応時間は６〜７２時間とすることができる。また、反応温度は０〜９０℃、より好ましくは１０〜６０℃で行うことができる。結晶化の条件は、できる結晶の品質に対する攪拌の有無や強弱の影響を勘案して、自由に選択できる。
【００１９】
得られた前駆体結晶は、ろ過、遠心分離、デカンテーションで得ることができる。さらにこれをアルコール等で洗って前駆体結晶として提供することも可能であるが、こういった分離操作を行わずに、析出した結晶をそのままの状態で前駆体結晶として提供することも可能である。このようにして得られる前駆体結晶は、好ましくは、Ｃｕ Ｋα放射線を用いた粉末Ｘ線回折で、９．１±０．４、１０．３±０．４、１３．８±０．４、１７．７±０．４、１８．３±０．４、２４．０±０．４、２７．４±０．４、３９．５±０．４°に２θ角度のピークを示すＰＱＱジナトリウム結晶であり、好ましくは、結晶水として水分が１２．７％含まれている。
【００２０】
本発明の製造方法では、ＰＱＱジナトリウム結晶の前駆体結晶を結晶化させた後は、前駆体結晶を乾燥させる。これにより、本発明のＰＱＱジナトリウム結晶を得ることができる。具体的には、前駆体結晶の乾燥は、凍結乾燥、常圧乾燥や減圧乾燥により行うことができる。乾燥工程では、乾燥時間や乾燥温度などの乾燥条件を調整することにより、前駆体結晶から結晶形１または結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶への結晶形の変換が進み、本発明のＰＱＱジナトリウム結晶を得ることができる。乾燥温度は、方法によって異なるが、例えば、−８０〜２５０℃、好ましくは、−６０〜２５０℃とすることができる。乾燥温度の下限は、凍結乾燥する際の出発温度であり、上限はＰＱＱジナトリウムの分解が生じない温度である。例えば、乾燥温度は、凍結乾燥では、−８０〜０℃、好ましくは、−６０〜０℃とすることができ、常圧乾燥では、４０〜２５０℃とすることができ、減圧乾燥では、０〜２５０℃とすることができる。より具体的には、結晶形１のＰＱＱジナトリウム結晶を得るためには、減圧乾燥では、特に限定されないが、例えば、５０℃で２０時間以上、好ましくは、７０時間以上乾燥させることができ、常圧乾燥では、１２０℃以上１８０℃未満で３０分以上加熱することができる。また、結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶を得るためには、例えば、常圧乾燥では、１８０℃以上で３０分以上加熱することができる。なお、ＰＱＱジナトリウムの結晶形１は、大気圧下では１８０℃にて相転移し、結晶形２に変化する。従って、ＰＱＱジナトリウムの結晶形２は、まず結晶形１を作成し、その後結晶を相転移させることにより得ることもできる。また、乾燥工程は、結晶中の水分含量を指標として終了させることができる。例えば、本発明では、乾燥は、結晶の水分含量が７重量％以下、好ましくは４．６重量％以下、より好ましくは３％重量以下になることを指標として乾燥を終了させることができる。ＰＱＱジナトリウムの分解の程度は周りの環境によって変わり得るが、分解を少なくする観点では、乾燥は、窒素ガス雰囲気下で行う方が、通常の空気下で行うよりも好ましく、また、窒素ガス雰囲気下では、乾燥温度をあげやすく、乾燥時間を短縮させやすい。
【００２１】
本発明の製造方法のより好ましい態様では、前駆体結晶の乾燥は、前駆体を油中で加熱する（例えば、油で揚げる）方法により行うことができる。前駆体結晶を油中で加熱する場合、結晶形１または結晶形２への変換を進行させる観点から、加熱温度は常圧下では１２０〜２００℃が好ましい。油温は、結晶形１のＰＱＱジナトリウム結晶を得るためには、特に限定されないが、例えば、１２０℃以上１８０℃未満とすることができ、結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶を得るためには、それ以上の温度、すなわち、１８０〜２００℃とすることができる。加熱温度は、油が発火せず、かつＰＱＱジナトリウム結晶が分解しない限り、２００℃を超えても良い。また、加熱時間は３０分以上とすることが好ましい。油は、食用できるものであれば特に制限はなく、大豆油、中鎖脂肪酸油、コーン油、魚油、オリーブオイル、菜種油、米油、魚油、ヤシ油等の食用油を使用することができる。この工程により得られた油とＰＱＱジナトリウム結晶の混合物は、低水分含量のＰＱＱジナトリウム結晶のスラリーとして、例えば、ソフトカプセル用にそのまま使用してもよく、あるいは、ヘキサン等により油を除去してから使用してもよい。これまで、ＰＱＱは反応性が高いことで知られており、食用油中での熱安定性に関しては知られていなかったが、本発明によれば、ＰＱＱジナトリウム結晶は、高温安定性を有し、しかも、驚くべきことに、加熱により新しい結晶形１または結晶形２に変換される。前駆体結晶を油中で加熱する方法は、短時間で結晶形１または結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶を得ることができる点で有利である。
【００２２】
本発明の結晶形１および結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶は、食用油中での分散性が高く、また、皮膚への浸透性が高い。また、本発明の結晶形１および結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶は、低水分含量結晶であり、高い保存性を有し得る。本発明で得られるＰＱＱジナトリウム結晶はさらに、結晶であることから高純度であるという利点を有している。なお、結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶は、湿潤雰囲気下では比較的吸湿しやすい結晶であるため、乾燥雰囲気下で保存することが好ましい。
【００２３】
従って、本発明のＰＱＱジナトリウム結晶は、ヒト用または動物用として、食品、機能性食品、栄養剤、化粧品、医薬品または医薬部外品として好適に使用することができる。ここでいう機能性食品とは、健康食品、栄養補助食品、栄養機能食品、栄養保健食品、および特定保健用食品等、健康の維持あるいは食事にかわり栄養補給の目的で摂取する食品を意味している。食品、機能性食品、栄養剤、化粧品、医薬品または医薬部外品の具体的な形態としては、カプセル剤（例えば、ゼラチンカプセル、ソフトカプセル）、タブレット、チュアブル、錠剤、ドリンク剤等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。本発明の結晶形１および結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶は、水分含量が少ないため、錠剤成型や保存等に対して有利である。本発明の結晶形１および結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶はまた、上述のように、油脂中における分散性や、皮膚に対する浸透性に優れる。従って、本発明では、本発明のＰＱＱジナトリウム結晶を含んでなる、医薬組成物、化粧組成物、機能性食品および栄養剤が提供される。特に本発明の結晶は皮膚に対する浸透性に優れることから、本発明の医薬組成物は、経皮投与用の医薬組成物とすることができる。また、本発明の結晶は油脂中における分散性に優れることから、オイル分散系の製剤への処方に適している。従って、本発明の医薬組成物や化粧組成物は、好ましくは、乳剤や懸濁剤のような分散製剤の形態、軟膏剤やクリーム剤のような半固形製剤の形態あるいはソフトカプセルのような成形製剤の形態で提供されうる。
【００２４】
本発明のＰＱＱジナトリウム結晶を機能性食品として製品化する場合には、添加剤として、例えば、甘味料、着色料、保存料、増粘安定剤、酸化防止剤、発色剤、漂白剤、防菌防黴剤、ガムベース、苦味料、酵素、光沢剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料、香辛料抽出物等を用いることができる。また、本発明のＰＱＱジナトリウム結晶は、一般的には、通常の食品、例えば、味噌、醤油、インスタントみそ汁、ラーメン、焼きそば、カレー、コーンスープ、マーボードーフ、マーボーなす、パスタソース、プリン、ケーキ、パン等に加えることが可能である。また、本発明の医薬組成物は、本発明のＰＱＱジナトリウム結晶と少なくとも１以上の製剤用添加剤を含んでいてもよい。また、本発明の化粧組成物は、本発明のＰＱＱジナトリウム結晶と少なくとも１以上の化粧品添加剤を含んでいてもよい。製剤用添加剤や化粧品添加剤は、医薬組成物や化粧組成物の処方形態に従って、当業者であれば適宜選択することができる。
【実施例】
【００２５】
以下、参考例、実施例及び比較例によって本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの例にのみ限定されるものではない。【００２６】
粉末Ｘ線回折は、株式会社マックサイエンス製Ｍ１８ＸＣＥ装置または株式会社ＲＩＧＡＫＵ製ＲＩＮＴ２５００を使用し、
Ｘ線：Ｃｕ／管電圧４０ｋＶ／管電流１００ｍＡ
スキャンスピード：４．０００°／ｍｉｎ
サンプリング幅：０．０２０°
で行った。【００２７】
結晶の水分含量（重量％）の測定は、カールフィッシャー法により行った。【００２８】
参考例１：前駆体結晶
特許第２７５１１８３号公報の記載に従って、原料のＰＱＱトリナトリウムを培養法で得た。ＰＱＱ２０ｇを含む含水ＰＱＱトリナトリウム塩の固体６０ｇをエタノール濃度５０重量％の水溶液１Ｌに加え、飽和させた。このとき、固体は溶け切っていなかった。ここに室温下で塩酸を加え、ｐＨを３．５に調整した。塩酸の添加は、約２時間かけてゆっくり滴下して行った。塩酸添加後は、２日間攪拌し、その後、得られたエタノール水溶液を濾過して含水ＰＱＱジナトリウム結晶を収率９９ｍｏｌ％で得た。粉末Ｘ線回折を行ったところ、得られた結晶は、９．１±０．４，１０．３±０．４，１３．８±０．４，１７．７±０．４，１８．３±０．４，２４．０±０．４，２７．４±０．４，３９．５±０．４°に２θ角度のピークを示した。温度４０℃、相対湿度（ＲＨ）７５％の環境に得られた結晶を置き、水分含量を測定した結果、得られた結晶の水分含量は１２．７％であり、純度は８７．３％であった。【００２９】
実施例１：結晶形１
参考例１で得られた前駆体結晶を減圧乾燥器（アドバンテック社製、製品名：ＦＳ−４２０）に入れて、ダイヤフラム型真空ポンプ（A Gardner Denver Product社製DRYFAST ULTRA、製品番号：2032）で装置限界（２トル）まで減圧してから、５０℃で７７時間乾燥させた。【００３０】
粉末Ｘ線回折を行ったところ、得られた結晶は、１１．４±０．４，１３．５±０．４，１８．０±０．４，１８．７±０．４，２６．０±０．４，２８．５±０．４°に２θ角度のピークを示すＰＱＱジナトリウム結晶（結晶形１）であることが分かった（図１）。図１に示されるように、本実施例で得られたＰＱＱジナトリウム結晶は、含水量の多い前駆体結晶の結晶形とは異なる新たな結晶形（結晶形１）の結晶であった。水分含量を測定した結果、得られた結晶の水分含量は０．７％であり、結晶の水分含量が前駆体結晶と比べて大幅に低減していた。得られた結晶の純度は９９．３％であった。【００３１】
実施例２：結晶形１
参考例１で得られた前駆体結晶を減圧乾燥器（アドバンテック社製、製品番号：ＦＳ−４２０）に入れ、大気圧下１２０℃で１日乾燥させた。粉末Ｘ線回折を行ったところ、得られた結晶は、実施例１で得られた結晶形１と同一であることが分かった。水分含量を測定した結果、得られた結晶の水分含量は２．２％であり、純度は９７．８％であった。【００３２】
実施例３：結晶形１（油中、１５０℃で０．５時間）
参考例１で得られた前駆体結晶９．６ｇを日清オイリオ製食用油ＯＤＯ６５ｇに加えて、１５０℃で３０分間加熱した（揚げた）。粉末Ｘ線回折を行ったところ、得られた結晶は、実施例１で得られた結晶形と同一であることが分かった。加熱時間は実施例１や２と比較して短かったが、前駆体結晶を油中で加熱することにより、短時間で結晶形１が得られた。【００３３】
得られた結晶を高速液体クロマトグラフィーで分析した結果、結晶に含まれる不純物量は増えておらず、得られた結晶は９９％以上の純度を有していることが分かった。また、水分含量を測定した結果、得られた結晶の水分含量は１．９％であった。加熱時間は実施例１や２と比較して短かったが、得られた結晶の水分含量は、前駆体結晶より大きく低減しており、実施例１または２の結晶形の水分含量と同等であった。【００３４】
実施例４：水分含量７％の結晶混合物
参考例１で得られた前駆体結晶を減圧乾燥器に入れて、ダイヤフラム型真空ポンプ（A Gardner Denver Product社製DRYFAST ULTRA、製品番号：2032）で装置限界（２トル）まで減圧してから、５０℃で２２時間乾燥させた。【００３５】
粉末Ｘ線回折を行ったところ、得られた結晶は、１１．４±０．４，１３．５±０．４，１８．０±０．４，１８．７±０．４，２６．０±０．４，２８．５±０．４°に２θ角度のピークを示す結晶形１のＰＱＱジナトリウム結晶と、参考例１の前駆体結晶との混合物であることが分かった。水分含量を測定した結果、得られた結晶の水分含量は７％であり、純度は９３％であった。得られた結晶混合物は、その後、水分含量を減少させることで逐次的に結晶形１の結晶に変換することができた（例えば、同じ条件で７７時間乾燥させた実施例１を参照）。【００３６】
実施例５：加熱温度と得られる結晶形との関係
本実施例では、乾燥工程における加熱温度と得られる結晶形との関係を調べた。【００３７】
参考例１で得られた前駆体結晶を温度変化速度２０℃／ｍｉｎで加熱し、各設定温度に達してから１５分後に測定を開始した。粉末Ｘ線：５〜６０°，４°／ｍｉｎ【００３８】
各設定温度における結晶の結晶形を調べたところ、
３０℃では前駆体結晶と同様の結晶、
１２０℃では実施例４の水分含量７％の結晶混合物と同様の前駆体結晶と結晶形１が混合した結晶混合物、
１５０℃では結晶形１の結晶、
１８０℃では、８．７±０．４，１１．５±０．４，１２．０±０．４，１７．４±０．４，１８．７±０．４°に２θ角度のピークを示す新たな結晶形のＰＱＱジナトリウム結晶（結晶形２）となっていた。それぞれの温度で処理した結晶の粉末Ｘ線回折の結果を図２に示す。結晶形２の結晶の熱重量分析を行ったところ、結晶形２の結晶の水分含量はほぼ０％であることが明らかとなった。しかし、この結晶は不安定であり、３０℃にしばらく（例えば、半日以上）静置すると吸湿して前駆体結晶と同様の結晶形の結晶になっていた（図２）。【００３９】
比較例１：参考例１とは異なるＰＱＱジナトリウム結晶
参考例１の前駆体結晶を水に溶解し、エタノールを加えることで赤色のＰＱＱジナトリウム結晶を析出させた。水分含量を測定した結果、得られた結晶の水分含量は１４．５％であった。その後さらに、得られた結晶を実施例１と同様に減圧下で９６時間乾燥させ、粉末Ｘ線解析を行った。しかしながら、この方法により得られた結晶は、９．４，２２．４°に２θ角度のピークを示す結晶性の低い構造を有することが分かった（図３）。また、水分含量を測定した結果、得られた結晶の水分含量は９．６％であり、純度は９０．４％であった。【００４０】
実施例６：結晶形１および結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶の分散性試験
本実施例では、結晶形１および結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶と従来の結晶の食用油脂中での分散性を比較した。【００４１】
まず、結晶形１および結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶を以下のように調製した。結晶形１の結晶は、参考例１のＰＱＱジナトリウム塩の前駆体結晶３ｇをガラス製容器に加え、ダイヤフラム型真空ポンプ（A Gardner Denver Product社製DRYFAST ULTRA、製品番号：2032）で装置限界（２トル）まで減圧してから１５０℃で４時間減圧乾燥して暗茶色の固体として得た。乾燥後は、容器内を大気圧に戻し、すぐにガラス製容器のふたを閉めた。結晶形２の結晶は、参考例１のＰＱＱジナトリウム塩の前駆体結晶３ｇを２００ｍＬのナスフラスコに加え、窒素ガスを１００ｍＬ／ｍｉｎの流速で還流しながら２００℃で４時間加熱して、暗茶色の固体として得た。乾燥後は、窒素を還流しながらフラスコ内の温度を室温にまで下げた。本実施例では、対照として、参考例１のＰＱＱジナトリウム結晶（前駆体結晶）を用いた。【００４２】
得られた結晶（前駆体結晶、結晶形１および結晶形２）５ｍｇをそれぞれ、大豆油２００μＬに添加し、ポリプロピレン製容器に移して激しく混合した。その後、室温で静置し、大豆油中に浮遊している結晶のすべてが容器の底面に沈降するまでの時間を計測し、各結晶の分散性の指標とした。【００４３】
結果は表１に示される通りであった。
【表１】
2012173217.tif 000002
【００４４】
表１に示されるように、前駆体結晶は、０．５分ですべての結晶が容器の底面に沈降したが、結晶形１および結晶形２の結晶は、沈降するまでにそれぞれ３０分および４５分の時間を要した。このことから、結晶形１および結晶形２の結晶は、食用油脂中における分散性が、前駆体結晶よりも向上していることが示唆された。表１からは、結晶形１および結晶形２の結晶の食用油脂中における分散性は、前駆体結晶の５０倍以上も向上していることが示唆される。【００４５】
通常、ソフトカプセルの製造においては、有効成分は食用油脂と混合して製剤化される。本発明の低水分含量のＰＱＱジナトリウム結晶は、従来の結晶よりも分散性が高く、例えば、ソフトカプセル製剤の製造に適していると考えられる。【００４６】
実施例７：結晶形１および結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶の皮膚への浸透試験
本実施例では、実施例６で調製した結晶形１および結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶を用いて、皮膚に対する浸透性を比較した。【００４７】
実施例６で調製した結晶形１および結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶並びに参考例１の前駆体結晶のそれぞれを、Ｌ−アスコルビン酸の粉末（和光社製、特級）と１：４の重量比で混合して試験用組成物を作製し、浸透試験に用いた。対照としては、Ｌ−アスコルビン酸の粉末を用いた。【００４８】
浸透試験は、ブタの皮膚を用いて行った。ブタの皮膚を水道水で洗浄し、水分を完全に拭き取った。このブタの皮膚に試験用組成物を５ｍｇずつ接触させ、その後、テープで皮膚に固定した。８０分間後に、テープを剥がし、皮膚を水道水で洗浄して皮膚表面に付着した試験用組成物を除去した。ＰＱＱの結晶の皮膚に対する浸透性の高さは、皮膚の着色の程度により評価した。具体的には、本実施例では、処置後の皮膚の写真をコンピュータに取り込み、画像処理ソフト（製品名：ペイント（ウィンドウズＸＰ付属ソフト）、マイクロソフト社製）を用いて皮膚の明るさの変化を測定することにより評価した。この際、皮膚の明るさの変化は、下記式：
【数１】
2012173217.tif 000003
により算出した。【００４９】
結果は表２に示される通りであった。
【表２】
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【００５０】
表２に示されるように、結晶形１および結晶形２の結晶は、前駆体結晶と比べて、皮膚に対して高い浸透性を示した。このことから、結晶形１および結晶形２のＰＱＱジナトリウム結晶は、化粧品や経皮投与用の医薬品などへの使用により適していることが示唆された。【００５１】
処方例１：ゼラチンカプセル製剤
コエンザイムＱ１０（三菱瓦斯化学社製）８ｇ、大豆タンパク加水分解物（日清オイリオ社製）２ｇ、および実施例１のＰＱＱジナトリウム結晶（結晶形１）２ｇをポリ袋に入れ、良く振って混合して経口摂取用組成物を調製した。得られた組成物をゼラチンカプセルに１０ｍｇずつ封入し、ゼラチンカプセル製剤を得た。【００５２】
処方例２：オイル分散液のソフトカプセル製剤
サフラワーサラダ油（日清オイリオ社製）２７００ｇ、グリセリン脂肪酸エステル（理研ビタミン社製）３００ｇ、および蜜蝋（横浜油脂工業社製）３００ｇを合わせて７０℃で攪拌した後、実施例１のＰＱＱジナトリウム結晶（結晶形１）を加えてミキサーで混合した。得られた混合物をソフトカプセルに封入して、ソフトカプセル製剤を得た。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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2012173217.tif 000009
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