(57)【要約】  担子菌類を、固体培地又は液体培地で菌糸体から子実体に、育成して、均一な品質で効率良く、簡便に培養できる菌類培養方法を提供する。  菌類培養方法は、金属、合成樹脂、天然樹脂、及び／又は紙で、メッシュ、織布、不織布、多孔質シートから選ばれる補強体１５を形成し、担子菌類菌糸体用培地１４を付してから、それのおもて面側に担子菌類２０の菌糸体をそれの培養液１７の塗工又は噴霧により接種し、菌糸体育成培養シート１を形成した後、前記菌糸体を育成する菌糸体増殖工程［Ｉ］と、前記おもて面側で育成した前記菌糸体に、担子菌類子実体用培地２４を付して、子実体育成培養シート２を形成した後、前記菌糸体から子実体へ育成する子実体増殖工程［II］とを、有する。
2013161939.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
金属、合成樹脂、天然樹脂、及び／又は紙で、メッシュ、織布、不織布、多孔質シートから選ばれる補強体を形成し、担子菌類菌糸体用培地を付してから、それのおもて面側に担子菌類の菌糸体をそれの培養液の塗工又は噴霧により接種し、菌糸体育成固体培養シートを形成した後、前記菌糸体を育成する菌糸体増殖工程と、
前記おもて面側で育成した前記菌糸体に、担子菌類子実体用培地を付して、子実体育成培養シートを形成した後、前記菌糸体から子実体へ育成する子実体増殖工程とを、
有することを特徴とする菌類培養方法。
【請求項２】
前記担子菌類菌糸体用培地と前記担子菌類子実体用培地とがそれぞれ、液体培地又は固体培地であることを特徴とする請求項１に記載の菌類培養方法。
【請求項３】
前記菌糸体増殖工程中、前記液体培地からなる前記担子菌類菌糸体用培地を、前記補強体に担持し、前記子実体増殖工程中、前記液体培地からなる前記担子菌類子実体用培地を前記補強体に前記おもて面側で担持し、若しくは前記固体培地からなる前記担子菌類子実体用培地を前記補強体にうら面側で担持し、又は、
前記菌糸体増殖工程中、前記固体培地からなる前記担子菌類菌糸体用培地を、前記補強体に前記おもて面側で担持し、前記子実体増殖工程中、前記液体培地からなる前記担子菌類子実体用培地を前記担子菌類菌糸体用培地に担持し若しくは前記固体培地からなる前記担子菌類子実体用培地を前記補強体にうら面側で担持し、又は、
前記菌糸体増殖工程中、前記固体培地からなる前記担子菌類菌糸体用培地を、前記補強体に前記おもて面側で担持し、前記子実体増殖工程中、前記担子菌類菌糸体用培地から前記菌糸体と共に前記補強体を剥離した前記補強体にうら面側で固体培地からなる前記担子菌類子実体用培地を、担持することを特徴とする請求項２に記載の菌類培養方法。
【請求項４】
前記菌糸体増殖工程中、菌糸体用フィルム上の層状の前記固体培地からなる前記担子菌類菌糸体用培地に、前記補強体を搭載して圧着し一体化してから、前記担子菌類の菌糸体の培養液を噴霧し、前記菌糸体育成培養シートを形成し、
前記子実体増殖工程中、前記おもて面側で育成した前記菌糸体と共に前記補強体を、前記担子菌類菌糸体用培地及び菌糸体用フィルムから剥離した後、子実体用フィルム上の層状の前記固体培地からなる担子菌類子実体用培地を前記補強体にそのうら面側で圧着させて、前記子実体育成培養シートを形成することを特徴とする請求項３に記載の菌類培養方法。
【請求項５】
前記菌糸体育成培養シートを、ロール状に巻き取って前記菌糸体を育成し、及び／又は前記子実体育成培養シートを、ロール状に巻き取って前記子実体を育成することを特徴とする請求項１〜４の何れかに記載の菌類培養方法。
【請求項６】
前記担子菌類が、ヒダナシタケ目の菌類であることを特徴とする請求項１〜５の何れかに記載の菌類培養方法。
【請求項７】
前記ハラタケ綱の菌類が、アンズタケ科、シロソウメンタケ科、ホウキタケ科、ハナビラタケ科、サンゴハリタケ科、サルノコシカケ科、タバコウロコタケ科、イドタケ科、ウロコタケ科、カンゾウタケ科、ニクハリタケ科、エゾハリタケ科、イボタケ科、ニンギョウタケモドキ科、コウヤクタケ科、マンネンタケ科、又はミヤマトンビマイ科の菌類であることを特徴とする請求項６に記載の菌類培養方法。
【請求項８】
前記菌糸体及び／又は前記子実体に、物理的刺激、電気的刺激、光学的刺激、化学的刺激、及び生物的刺激から選ばれる少なくとも何れかの処理を施すことを特徴とする請求項１〜７の何れかに記載の菌類培養方法。
【請求項９】
金属、合成樹脂、天然樹脂、及び／又は紙で形成された、メッシュ、織布、不織布、多孔質シートから選ばれ、そのおもて面で担子菌類の菌糸体を育成している補強体が、前記菌糸体から子実体へ育成している担子菌類子実体用培地を担持していることを特徴とする培養シート。
【請求項１０】
前記補強体は、液体培地又は固体培地からなり、前記菌糸体を育成した担子菌類菌糸体用培地が未担持補強体に担持され又は担持されてから剥離されており、液体培地又は固体培地からなる前記担子菌類子実体用培地が、前記補強体に担持されていることを特徴とする請求項９に記載の培養シート。
【請求項１１】
網目状、格子状、ギャザー状、凹凸波形状、及び／又はすのこ状の間隙によって通気性を有するスペーサが、前記補強体に付されていることを特徴とする請求項９〜１０の何れかに記載の培養シート。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、固体培地又は液体培地を担持する培養シートを用いて、担子菌類を菌糸体から子実体へシート上で層状に生育する菌類培養方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ベニクスノキタケ(牛樟芝)、マンネンタケ(霊芝)、トウチュウカソウ(冬虫夏草)、アガリクスなどの各種菌類が、生薬医薬品の薬効成分として、また化粧品や健康食品の有効成分として、用いられている。【０００３】
天然の担子菌類は、栄養源である植物の原木などの基物に背着し、菌糸体から、子実層托が平滑又は粗面で膜状の子実体を作って、育成する。それら天然の担子菌類の中でも特に需要の大きな台湾固有種のベニクスノキタケは、天然樹木の牛樟原木で専ら増殖するもので、生育が極めて遅く、基物となる牛樟の乱伐と相俟って、採取し難い希少な天然資源である。【０００４】
ベニクスノキタケは、その菌糸体に薬効成分は殆ど含まれておらず、非特許文献１に開示されているように、子実体に肝機能改善機能や抗腫瘍作用などの薬理作用を示すトリテルペノイドのような薬効成分が、多数種、高濃度で含まれている。ベニクスノキタケは、天然からの採取量が少ないため、液体培養や固体培養で人工的に生産することが検討されている。しかし液体培養は、培養速度が天然での育成よりも幾分速い程度であり、多量の培養液を用いなければならない。たとえ大容量タンクを用いてもそのスケールの割に生産量が少なくて生産効率が悪く、工業的製造に向かない。一方、従来の固体培養は、寒天培地容器を多数並べ、無菌室で培養しなければならず面倒なうえ、寒天培地容器毎の生育速度・薬効成分含量の格差が大きく、容積が限られた無菌室に寒天培地容器を然程並べられないので工業的製造に向かない。【０００５】
椎茸などの食用きのこは、ベニクスノキタケよりも遥かに栽培し易く、菌類を培地で培養し原木に移植して栽培される。特許文献１に、椎茸などの菌類を固体培養するために用いられるもので、合成繊維で形成され編目状の細孔を全体的に有し、プレス成形で上端部分が厚く底部分が薄い複数の凹部を有する菌類培養用成形シートが、開示されている。このような菌類培養用成形シートは、菌類を原木に移植するために培養するものであるから、菌糸体から膜状の子実体になるベニクスノキタケなどの担子菌類を原木に移植せずに固体培養するのに用いることができない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】エビデンス−ベースド コンプレメンタリー アンド アルタネーティブ メディスン(Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine)、Volume 2011、ID 212641
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特許第３１３９８３７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は前記の課題を解決するためになされたもので、担子菌類を、固体培地又は液体培地で菌糸体から子実体に、育成して、均一な品質で効率良く、簡便に培養できる菌類培養方法、及びそれに用いられる培養シートを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前記の目的を達成するためになされた請求の範囲の請求項１に記載の菌類培養方法は、金属、合成樹脂、天然樹脂、及び／又は紙で、メッシュ、織布、不織布、多孔質シートから選ばれる補強体を形成し、担子菌類菌糸体用培地を付してから、それのおもて面側に担子菌類の菌糸体をそれの培養液の塗工又は噴霧により接種し、菌糸体育成培養シートを形成した後、前記菌糸体を育成する菌糸体増殖工程と、前記おもて面側で育成した前記菌糸体に、担子菌類子実体用培地を付して、子実体育成培養シートを形成した後、前記菌糸体から子実体へ育成する子実体増殖工程とを、有することを特徴とする。【００１０】
請求項２に記載の菌類培養方法は、請求項１に記載されたもので、前記担子菌類菌糸体用培地と前記担子菌類子実体用培地とがそれぞれ、液体培地又は固体培地であることを特徴とする。【００１１】
請求項３に記載の菌類培養方法は、請求項２に記載されたもので、前記菌糸体増殖工程中、前記液体培地からなる前記担子菌類菌糸体用培地を、前記補強体に担持し、前記子実体増殖工程中、前記液体培地からなる前記担子菌類子実体用培地を前記補強体に前記おもて面側で担持し、若しくは前記固体培地からなる前記担子菌類子実体用培地を前記補強体にうら面側で担持し、又は、
前記菌糸体増殖工程中、前記固体培地からなる前記担子菌類菌糸体用培地を、前記補強体に前記おもて面側で担持し、前記子実体増殖工程中、前記液体培地からなる前記担子菌類子実体用培地を前記担子菌類菌糸体用培地に担持し若しくは前記固体培地からなる前記担子菌類子実体用培地を前記補強体にうら面側で担持し、又は、
前記菌糸体増殖工程中、前記固体培地からなる前記担子菌類菌糸体用培地を、前記補強体に前記おもて面側で担持し、前記子実体増殖工程中、前記担子菌類菌糸体用培地から前記菌糸体と共に前記補強体を剥離した前記補強体にうら面側で、前記固体培地からなる前記担子菌類子実体用培地を、担持することを特徴とする。【００１２】
請求項４に記載の菌類培養方法は、請求項３に記載されたもので、前記菌糸体増殖工程中、菌糸体用フィルム上の層状の前記固体培地からなる前記担子菌類菌糸体用培地に、前記補強体を搭載して圧着し一体化してから、前記担子菌類の菌糸体の培養液を噴霧し、前記菌糸体育成培養シートを形成し、前記子実体増殖工程中、前記おもて面側で育成した前記菌糸体と共に前記補強体を、前記担子菌類菌糸体用培地及び菌糸体用フィルムから剥離した後、子実体用フィルム上の層状の前記固体培地からなる担子菌類子実体用培地を前記補強体にそのうら面側で圧着させて、前記子実体育成培養シートを形成することを特徴とする。【００１３】
請求項５に記載の菌類培養方法は、請求項１〜４の何れかに記載されたもので、前記菌糸体育成培養シートを、ロール状に巻き取って前記菌糸体を育成し、及び／又は前記子実体育成培養シートを、ロール状に巻き取って前記子実体を育成することを特徴とする。【００１４】
請求項６に記載の菌類培養方法は、請求項１〜５の何れかに記載されたもので、前記担子菌類が、ヒダナシタケ目の菌類であることを特徴とする。【００１５】
請求項７に記載の菌類培養方法は、請求項６に記載されたもので、前記ハラタケ綱の菌類が、アンズタケ科、シロソウメンタケ科、ホウキタケ科、ハナビラタケ科、サンゴハリタケ科、サルノコシカケ科、タバコウロコタケ科、イドタケ科、ウロコタケ科、カンゾウタケ科、ニクハリタケ科、エゾハリタケ科、イボタケ科、ニンギョウタケモドキ科、コウヤクタケ科、マンネンタケ科、又はミヤマトンビマイ科の菌類であることを特徴とする。【００１６】
請求項８に記載の菌類培養方法は、請求項１〜７の何れかに記載されたもので、前記菌糸体及び／又は前記子実体に、物理的刺激、電気的刺激、光学的刺激、化学的刺激、及び生物的刺激から選ばれる少なくとも何れかの処理を施すことを特徴とする。【００１７】
請求項９に記載の培養シートは、金属、合成樹脂、天然樹脂、及び／又は紙で形成された、メッシュ、織布、不織布、多孔質シートから選ばれ、そのおもて面で担子菌類の菌糸体を育成している補強体が、前記菌糸体から子実体へ育成している担子菌類子実体用培地を担持していることを特徴とする。【００１８】
請求項１０に記載の培養シートは、請求項９に記載されたもので、前記補強体は、液体培地又は固体培地からなり、前記菌糸体を育成した担子菌類菌糸体用培地が未担持補強体に担持され又は担持されてから剥離されており、液体培地又は固体培地からなる前記担子菌類子実体用培地が、前記補強体に担持されていることを特徴とする。【００１９】
請求項１１に記載の培養シートは、請求項９〜１０の何れかに記載されたもので、網目状、格子状、ギャザー状、凹凸波形状、及び／又はすのこ状の間隙によって通気性を有するスペーサが、前記補強体に付されていることを特徴とする。
【発明の効果】
【００２０】
本発明の培養シートを用いた菌類培養方法によれば、担子菌類を、固体培養シートで菌糸体から子実体に、短期間で育成することができる。固体培養シートを巻き取り定温で静置することにより、狭いスペースで、大量に培養できる。固体培養シートを用いるから、均一な品質で効率良く、簡便に培養できる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】本発明を適用する菌類培養方法を示す概要図である。
【図２】本発明を適用する別な菌類培養方法を示す概要図である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
以下、本発明を実施するための形態を詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらの形態に限定されるものではない。
【００２３】
本発明の菌類培養方法は、図１を参照しながら説明する。この菌類培養方法は、菌糸体育成固体培養シート１と子実体育成固体培養シート２とを用いて、以下の手順で行われる。
【００２４】
先ず、菌糸体増殖工程［Ｉ］が行われる。金属、合成樹脂、天然樹脂、紙で、メッシュ、織布、不織布、多孔質シートの凹凸又は孔によって培地の担持が可能な補強体１５を、形成し、巻き取っておく。非浸透性で樹脂製の菌糸体用フィルムロールから菌糸体用フィルム１１を引き出す。担子菌類菌糸体用培地塗布ノズル１２で担子菌類菌糸体用培地塗布液１３を、菌糸体用フィルム１１へおもて面側で、塗布し又は吹き付け、固体培地層である菌糸体育成寒天培地層になる層状の担子菌類菌糸体用培地１４を形成する。ロール状の補強体１５を、引き出して、担子菌類菌糸体用培地１４へ圧着して付すと、補強体１５と担子菌類菌糸体用培地１４とが、一体化する。補強体１５のおもて面で担子菌類菌糸体用培地１４に、菌糸体培養液噴霧ノズル１６から、液体培養された担子菌類の菌糸体培養噴霧液１７を噴霧すると、担子菌類２０が、担子菌類菌糸体用培地１４に、接種される。必要に応じて、さらにその上に、巻取り時の密着防止用の網状・格子状又はすのこ状のスペーサ（不図示）を付す。これにより、菌糸体育成固体培養シート１が、得られる。菌糸体育成固体培養シート１を、シート同士が密着し合わないように緩くロール状に巻き取り、静置する。その間、担子菌類２０は、担子菌類菌糸体用培地１４で、育成し、四方八方へ平面的に増殖し、担子菌類２０の菌糸体層を形成する。
【００２５】
次いで、子実体増殖工程［II］が行われる。菌糸体育成固体培養シート１から、担子菌類菌糸体用培地１４ごと菌糸体用フィルム１１を剥ぎ取る。すると補強体１５上におもて面側で、担子菌類２０の菌糸体層が残存する。非浸透性で樹脂製の子実体用フィルムロールから子実体用フィルム２１を引き出す。担子菌類子実体用培地ノズル２２で担子菌類子実体用培地塗布液２３を、子実体用フィルム２１へおもて面で、塗布し又は吹き付け、子実体育成寒天培地層になる層状の担子菌類子実体用培地２４を形成する。補強体１５を、そのうら面側で、子実体用フィルム２１上の担子菌類子実体用培地２４へ圧着して付すと、補強体１５と担子菌類子実体用培地２４とが一体化する。担子菌類２０の菌糸体層は、担子菌類子実体用培地２４と接触し、育成可能となり、増殖する。これにより、子実体育成固体培養シート２が得られる。子実体育成固体培養シート２を、シート同士が密着し合わないように緩くロール状に巻き取り、静置する。その間、担子菌類２０は、担子菌類子実体用培地２４で、菌糸体から子実体へ成長して育成し、四方八方へシート上で層状に増殖し、担子菌類２０の子実体層を形成する。
【００２６】
菌糸体育成固体培養シート１や子実体育成固体培養シート２は巻取り時にスペーサによって間隙が生じて密着が阻害され、湿度及び通気状態を維持できる。担子菌類２０の菌糸体層や子実体層は、スペーサの網目状、格子状、又はすのこ状間隙を避けて、増殖する。
【００２７】
菌糸体増殖工程［Ｉ］及び子実体増殖工程［II］中、何れも担子菌類菌糸体用培地及び担子菌類子実体用培地として、固体培地を用いた例を示したが、何れか一方を液体培地とし他方を固体培地としてもよく、何れも液体培地としてもよい。例えば、別な菌類培養方法として、図２を参照しながら説明すると、以下の手順で行われる。
【００２８】
先ず、前記と同様にして菌糸体増殖工程［Ｉ］を行うことによって、菌糸体育成固体培養シート１を調製し、巻き取って静置して、担子菌類２０を育成して増殖させ、担子菌類２０の菌糸体層を形成する（図１参照）。次いで、図２に示すように、子実体増殖工程［II］が行われる。菌糸体育成固体培養シート１のおもて面側の担子菌類菌糸体用培地１４に、担子菌類子実体用培地ノズル２２で担子菌類子実体用培地塗布液２３を、吹き付け、子実体育成液体培地層になる担子菌類子実体用培地２４を形成する。これにより、子実体育成固体培養シート２が得られる。子実体育成固体培養シート２を、シート同士が密着し合わないように緩くロール状に巻き取り、静置する。その間、担子菌類２０は、担子菌類子実体用培地２４で、菌糸体から子実体へ成長して育成し、平面的に増殖し、担子菌類２０の子実体層を形成する。
【００２９】
菌類培養方法は、担子菌類を培養するのに適している。担子菌類は、きのこ  新装版山渓フィールドブックス７（２００６年６月１０日、初版第１刷、山と渓谷社発行）の分類に拠って表わすと、菌界−担子菌亜門−真正担子菌綱−帽菌亜綱−ヒダナシタケ目であることが好ましい。ヒダナシタケ目は、例えばアンズタケ科、シロソウメンタケ科、ホウキタケ科、ハナビラタケ科、サンゴハリタケ科、サルノコシカケ科、タバコウロコタケ科、イドタケ科、ウロコタケ科、カンゾウタケ科、ニクハリタケ科、エゾハリタケ科、イボタケ科、ニンギョウタケモドキ科、コウヤクタケ科、マンネンタケ科、ミヤマトンビマイ科の菌類が挙げられる。より具体的には、アンズタケ（Cantharellus cibarius）、シロソウメンタケ（Clavaria vermicularis）、ホウキタケ(Ramaria botrytis)、ハナビラタケ（Sparassis crispa）、サンゴハリタケ(Hericium ramosun)、フサハリタケ(Creoloplus cirrbatus)、カノシタ（Hydnum repandum）、ブナハリタケ（Mycoleptodonoides aitcbisonii）、マイタケ（Grifola frondosa）、オオチリメンタケ（Trametes gibbosa）、ヒイロハリタケ（Phanerochaete chrysorbiza）、オリーブウロコタケ（Lopharia cinerascens）、カンゾウタケ（Fistulina hepatica）、イボラシャタケ（Tomentella crinalis）、カラスタケ（Polyzellus multiplex）、ニンギョウタケ（Albatrellus confluens）、アオロウジ（Albatrellus caeruleoporus）、ヌメリアイタケ（Albatrellus yasudai）、コウタケ（Sarcodon aspratus）、クロカワ（Boletopsis leucomelas）、センニンタケ（Albatrellus pascaprae）、チョレイマイタケ（Polyporus umbellatus）、マスタケ（Laetiporus sulphureus）、ヒイロタケ（Pycnoporus coccineus）、ヒメシロアミタケ(Antrodia albida)、ミヤマシロアミタケ（Antrodia beteromorpha）、ベニクスノキタケ（Antrodia camphorata）、Antrodia salmonea（和名なし）、クロサルノコシカケ（Melanoporia castanea）、アナタケ（Schizopora flavipora）、ツガノマンネンタケ（Ganoderma mastporum）、カバノアナタケ（Inonotus oblicuus）、カワタケ（Peniophora quercina）等が挙げられる。
【００３０】
担子菌類菌糸体用培地や担子菌類子実体用培地は、寒天培地のような固体培地であっても液体培地であってもよい。
【００３１】
固体培地は、例えば、培地１Ｌ中に、ポリアルギン酸塩、寒天等のハイドロゲル形成ポリマーを単独、或いは混合し、その３〜２０ｇ、ポテト抽出物の３〜５ｇ、グルコース、デキストロース、フルクトース、シュークロース、セロビオース、又はトレハロースの単独、又はそれらのうちの何れかの混合物のような糖類の１０ｇ〜３０ｇが含まれている。必要に応じて、ｐＨ調整剤、窒素源やミネラル源となる無機塩類、おがくず、ハト麦、オーツ麦や小麦、大麦、麹を始めとした動植物体やそれらの抽出物、二次代謝物などを適宜加えてもよい。
【００３２】
液体培地は、例えば、培地１Ｌ中に、酵母エキスと麦芽エキスとの各１０〜３０ｇ、デキストロース、デキストロース、フルクトース、シュークロース、セロビオース、トレハロースの単独、又はそれらのうちの何れかの混合物のような糖類の１０ｇ〜３０ｇが含まれている。必要に応じてｐＨ調整、窒素源やミネラル源となる無機塩類、動植物抽出物やおがくず、ハト麦、オーツ麦、小麦、大麦、麹を始めとした動植物体やそれらの抽出物、二次代謝物などを適宜加えてもよい。
【００３３】
子実体育成の際に子実体育成固体培養シート２に、それの形成時、又は形成から１箇月経過時までの間に、形成物理的刺激、電気的刺激、光学的刺激、生物的刺激、化学的刺激の少なくとも何れかの処理を、施してもよい。物理的刺激、電気的刺激、光学的刺激として、２０〜１００ｍＷにて、１０ナノ秒〜１００ミリ秒、好ましくは数十ナノ秒〜数十ミリ秒の間隔でのパルスレーザーの照射処理、２０〜９０ｋＶ好ましくは３０〜７０ｋＶで１００μＡ〜１ｍＡにて１００〜５００ミリ秒間隔で３０〜６０秒間のパルスプラズマ発生装置によるプラズマ処理、及び波長が５００〜８００ｎｍの光照射処理が、挙げられる。物理的刺激、電気的刺激、光学的刺激の中でも、物理的刺激や電気的刺激は、直接、子実体育成固体培養シート２の子実体へ向けて施さなくてもよい。例えば、図２に示すように、パルス電圧電極２５ａでパルス電圧２６ａを子実体育成固体培養シート２に向け生じさせ、及び／又はパルス電圧電極２５ｂでパルス電圧２６ｂを子実体育成固体培養シート２の上方でそれへ向けずに大気殺菌のために生じさせてもよい。一例として５０〜９０ｋＶ好ましくは７０〜９０ｋＶで１００μＡ〜１ｍＡにて１００〜５００ミリ秒間隔で１〜１０秒間のパルスプラズマ発生装置によるプラズマ処理を毎分１回照射し続ける。生物的刺激、化学的刺激として、乳酸菌、酵母、糀菌のような子実体生育阻害しない異種の菌類の熱処理物、又は子実体育成すべき同種の菌類の別ロットの生菌類や熱処理物を共存させたり、テルペン類やテルペン類を産生している樟や牛樟のおがくずを混入させたりする処理が、挙げられる。形成物理的刺激、電気的刺激、光学的刺激、生物的刺激、化学的刺激のような処理により、子実体の生成量・生成速度・生成密度が、大幅に向上し、例えば、パルス電圧処理やパルスレーザー照射処理で、生成量が、約２０〜５０％増量する。
【００３４】
補強体１５は、菌体培養用メッシュであり、例えば、目開きが５０〜１０００ミクロンで厚さが３０〜３００ミクロンであって、素材が金属（例えば、ステンレス）、合成樹脂（例えば、ナイロン、ポリエステル、ポリエチレン、ポリプロピレン、フッ素繊維、ポリ塩化ビニリデン、ポリビニルアルコール、エチレン−酢酸ビニル共重合体、ポリウレタン、ポリセルロースなど）のメッシュクロスや多孔質シート、天然繊維（例えば、絹、綿）の織布、紙、不織布が挙げられる。その幅は、例えば２００〜１１００ｍｍである。
【００３５】
菌糸体用フィルム１１や子実体用フィルム２１は、支持フィルムであり、ポリエステル、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニリデンで例示される耐熱性の樹脂で形成されている。その厚さは、例えば１０〜２００ミクロンであり、その幅は、例えば２００〜１１００ｍｍである。
【００３６】
菌類培養方法の際、必要に応じて、殺菌、担子菌類の発芽促進のため、パルス電圧処理、パルスレーザー照射処理、プラズマ処理、光照射処理のような前処理を、行ってもよい。
【００３７】
スペーサは、網目状、格子状、例えば１〜３ｃｍ間隔にひだ折りしたギャザー状、０．１〜３ｃｍ間隔で四方へ正弦波状・コーン状・釣鐘状・円錐台状の連続した凹凸を有する凹凸波形状、及び／又はすのこ状の間隙によって通気性を有していてもよい。この凹凸は、菌糸体育成固体培養シート１同士や子実体育成固体培養シート２同士を線接触・点接触させて、通気性を持たせるものである。
【００３８】
菌糸体育成固体培養シート１や子実体育成固体培養シート２は、延ばしたまま用いても、折り曲げ又は巻き取って用いてもよく、適当な大きさで裁断して用いてもよい。連続した長尺のシートをロール状に巻き取って使用すると、狭いスペースでの生産性の向上に資する。
【実施例】
【００３９】
本発明を適用する培養シートを用いた菌類培養方法により、ベニクスノキタケを培養した例を示す。なお、特に商品名・メーカーを記した試薬以外は、市販の試薬特級を用いた。【００４０】
（調製例）
（１）培地の調製
ジャガイモ２００ｇの皮を剥き、１ｃｍ角に切り、１Ｌの沸騰水中で２０分間茹で、ガーゼで濾したもの、グルコース２０ｇにイオン交換水を加え全量を１Ｌとし、１２１℃、２０分間オートクレーブ処理してポテトデキストロース培地（以下、ＰＤＢ培地という）を調製した。この時リン酸緩衝液にてｐＨを５〜７に調製した。
また、ジャガイモ２００ｇの皮を剥き、１ｃｍ角に切り、１Ｌの沸騰水中で２０分間茹で、ガーゼで濾したもの、グルコース２０ｇに寒天（日水製薬株式会社製）１５〜２０ｇを加えて攪拌し、イオン交換水を加え全量を１Ｌとしフラスコに移し、１２１℃で１５分間、オートクレーブ処理し、寒天培地（以下、ＰＤＡ培地という）を調製した。この時リン酸緩衝液にてｐＨを５〜７に調製した。
なお、得られた培地は無菌ドラフト内で（ｉ）固体培養の場合、直径９ｃｍのペトリ皿に、ＰＤＡ培地を１５〜２０ｍＬを加え冷却した。（ｉｉ）液体培養の場合、ＰＤＢ培地の入ったフラスコを常温に冷却したのち接種及び培養した。培養は、全てインキュベーター内で、２５℃の定温で行った。【００４１】
（２）ベニクスノキタケの野生種の固体継体培養
ガスバーナーの火炎により消毒したピンセットで、ベニクスノキタケの野生種の裏側の組織の２ｍｍ×３ｍｍ片を剥がし、ＰＤＡ培地に接種した。１０日後、直径約２．５ｃｍのコロニーとなった菌糸体を、５ｍｍ四方の角片として切り出し、新しいＰＤＡ培地に接種した。その後、約２１日ごとに、継体培養を実施し、本発明の菌類培養方法に供した。
なお、継体培養中、第１世代から第１０世代まで、育成速度に変化が認められなかった。ＤＮＡアナライザーを用いて第２世代菌糸体について、ＤＮＡ分析を行った結果、塩基配列が９６％（２６６／２７６）の相同性を示し、この菌糸体が、ベニクスノキタケであると同定された。【００４２】
（３）固体培地の最適化
（３−１）培地の選定
ＰＤＡ培地中、糖類であるグルコースと、それに代えてデキストロース、フルクトース、又はスクロースとをそれぞれ炭素源として０．５％、１．０％、１．５％、２．０％、及び３．０％添加した被検試料を、別々に調製し、継体培養したベニクスノキタケ株を３０日間培養した後、菌糸体のコロニーの直径を計測した。それぞれのコロニー直径は、グルコースとデキストロース又はフルクトースとを含む培地で１．０％以上の場合略同じく５０ｍｍΦ程度であり、スクロースを含む培地で濃度非依存的に２５ｍｍΦ程度であった。このことから、グルコース、デキストロース、フルクトース、とりわけ安価なグルコースが、ベニクスノキタケ菌糸体の培養に適していた。カンファーを５００ｐｐｍ混ぜ合わせたものはともに６０ｍｍΦとなり、これらは生育促進に適していた。【００４３】
（３−２）子実体育成の培地の選定
培地１Ｌ中に、酵母エキス、麦芽エキス、各１０ｇ、デキストロース２０ｇ、寒天１５ｇ、ハト麦破砕物１００ｇから成る培地に、継体培養したベニクスノキタケ株を、接種してから３ヶ月間培養した後、菌体の一部を顕微鏡で観察したところ、子実体形成を示すクランプ及び胞子の存在が、確認できた。また、得られた菌体を乾燥後、メタノールで抽出し高速液体クロマトグラフ法（ＨＰＬＣ）分析を行ったところ、子実体含有成分であるエルゴステロール類も検出された。これらのことから、菌糸体育成には、ＰＤＡ培地が適しており、子実体育成には、上記培地が適していることが分かった。【００４４】
（４）液体培地の最適化
（４−１）液体培養可能性検討
３００ｍＬのエレンマイヤーフラスコに、ＰＤＢ培地の２００ｍＬを加え、滅菌後、ベニクスノキタケを担持した５ｍｍΦのＰＤＡ培地を５個添加し、２５℃に保った恒温室で毎分１５０回転で振蘯下、７日間液体培養し、菌糸体を得た。【００４５】
（実施例１：平面状固体培養シートでの培養）
２５×３０ｃｍの大きさのバットに、２０×２５ｃｍの厚さ１００ミクロンの菌糸体用フィルム１１であるポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルムを敷いた。その上に凡そ１５×２０ｃｍとなるように、予め１２１℃で３０分間オートクレーブ処理し、６０℃以下に冷却した担子菌類菌糸体用培地１４であるＰＤＡ培地の約１５０ｇを流した後、１５×２０ｃｍの補強体１５であるＰＥＴメッシュを敷き、培地を調製した。この培地を室温に冷却した。予めＰＤＢ培地で液体培養し、ホモジナイザーで均質化したベニクスノキタケ培養液を、この培地に均一に塗付し、菌糸体育成固体培養シート１を得た。このバットを無菌の下２５℃で３０日間培養した。
得られた菌糸体付着メッシュを担子菌類２０ごと、上記実施例３の（３−２）に記載の培地上に移殖し、子実体育成固体培養シート２を得た。これを６０日間培養した。この時３０ｋＶで４００μＡにて１００ミリ秒間隔で３０秒間のパルスプラズマ発生装置によるプラズマ処理を培養開始から２４時間ごとに一日１回ずつ２日間施し、得られたメッシュ上の培養物は、顕微鏡下で、胞子及びクランプが観察され、また、得られた菌体を乾燥後、メタノールで抽出しＨＰＬＣ分析を行ったところ子実体含有成分であるエルゴステロール類も検出された。このことにより、子実体が生成されていると確認できた。【００４６】
（実施例２：ロール状固体培養シートでの培養）
実施例１において、ＰＥＴフィルム、ＰＥＴメッシュとして幅３００ｍｍのロール状ＰＥＴフィルムとし、各工程において直径１〜２ｍｍの多孔質塩化ビニル樹脂で出来た１ｃｍ角の網目状スペーサを層間にはさみながら巻き取ること以外は実施例１と同様にして、菌糸体育成固体培養シート１、子実体育成固体培養シート２を作製し、３０ｋＶで４００μＡにて１００ミリ秒間隔で３０秒間のパルスプラズマ発生装置によるプラズマ処理を培養開始から２４時間ごとに一日１ずつ回２日間施し、６０日後、メッシュ上の培養物は、顕微鏡下で、胞子及びクランプが観察され、また、得られた菌体を乾燥後、メタノールで抽出しＨＰＬＣ分析を行ったところ子実体含有成分であるエルゴステロール類も検出された。このことにより、子実体が生成されていると確認できた。
【産業上の利用可能性】
【００４７】
本発明の固体培養シートを用いた菌類培養方法は、平滑又は粗面で膜状の子実体を作って育成する担子菌類を、人工的に培養して、生薬として医薬品に用いられたり、健康食品の有効成分として用いられたりするのに、用いられる。
【符号の説明】
【００４８】
１は菌糸体育成固体培養シート、２は子実体育成固体培養シート、１１は菌糸体用フィルム、１２は担子菌類菌糸体用培地塗布ノズル、１３は担子菌類菌糸体用培地塗布液、１４は担子菌類菌糸体用培地、１５は補強体、１６は菌糸体培養液噴霧ノズル、１７は菌糸体培養液噴霧ノズル、２０は担子菌類、２１は子実体用フィルム、２２は担子菌類子実体用培地ノズル、２３は担子菌類子実体用培地塗布液、２４は担子菌類子実体用培地、２５ａ・２５ｂはパルス電圧電極、２６ａ・２６ｂはパルス電圧である。
【図１】
2013161939.tif 000003
【図２】
2013161939.tif 000004
【手続補正書】
【提出日】平成25年7月12日(2013.7.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
菌類培養方法は、担子菌類を培養するのに適している。担子菌類は、きのこ  新装版山渓フィールドブックス７（２００６年６月１０日、初版第１刷、山と渓谷社発行）の分類に拠って表わすと、菌界−担子菌亜門−真正担子菌綱−帽菌亜綱−ヒダナシタケ目であることが好ましい。ヒダナシタケ目は、例えばアンズタケ科、シロソウメンタケ科、ホウキタケ科、ハナビラタケ科、サンゴハリタケ科、サルノコシカケ科、タバコウロコタケ科、イドタケ科、ウロコタケ科、カンゾウタケ科、ニクハリタケ科、エゾハリタケ科、イボタケ科、ニンギョウタケモドキ科、コウヤクタケ科、マンネンタケ科、ミヤマトンビマイ科の菌類が挙げられる。より具体的には、アンズタケ（Cantharellus cibarius）、シロソウメンタケ（Clavaria vermicularis）、ホウキタケ(Ramaria botrytis)、ハナビラタケ（Sparassis crispa）、サンゴハリタケ(Hericium ramosum)、フサハリタケ(Creolophus cirrhatus)、カノシタ（Hydnum repandum）、ブナハリタケ（Mycoleptodonoides aitcbisonii）、マイタケ（Grifola frondosa）、オオチリメンタケ（Trametes gibbosa）、ヒイロハリタケ（Hydnophlebia chrysorhiza）、オリーブウロコタケ（Lopharia spadicea）、カンゾウタケ（Fistulina hepatica）、イボラシャタケ（Tomentella crinalis）、カラスタケ（Polyzellus multiplex）、ニンギョウタケ（Albatrellus confluens）、アオロウジ（Albatrellus caeruleoporus）、ヌメリアイタケ（Albatrellus yasudai）、コウタケ（Sarcodon aspratus）、クロカワ（Boletopsis leucomelas）、センニンタケ（Albatrellus pescaprae）、チョレイマイタケ（Polyporus umbellatus）、マスタケ（Laetiporus sulphureus）、ヒイロタケ（Pycnoporus coccineus）、ヒメシロアミタケ(Antrodia albida)、ミヤマシロアミタケ（Antrodia heteromorpha）、ベニクスノキタケ（Antrodia camphorata）、Antrodia salmonea（和名なし）、クロサルノコシカケ（Melanoporia castanea）、アナタケ（Schizopora flavipora）、ツガノマンネンタケ（Ganoderma valesiacum Boudier）、カバノアナタケ（Inonotus obliquus）、カワタケ（Peniophora quercina）等が挙げられる。
【国際調査報告】
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