(57)【要約】  本発明は、ｓＥＨ阻害活性を示す化合物を提供するとともに、ｓＥＨの阻害作用に基づき慢性腎臓病及び肺高血圧症に対する治療効果及び予防効果を発揮する医薬を提供することを目的としている。本発明は、下記の化学式に代表されるニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩を提供する。2013147161.tif 000025【選択図】なし
2013147161.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（Ｉ）で示される、ニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩。
【化１】
2013147161.tif 000024
［式中、Ｒ１は、水酸基、シアノ基、炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基、炭素数３〜６のシクロアルキル基若しくはシクロアルキルオキシ基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基、炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基（該アルキル基、アルキルオキシ基、シクロアルキル基、シクロアルキルオキシ基、アルキルオキシアルキル基及びシクロアルキルアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、−ＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ６又は−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６で置換されていてもよい）、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｎ（Ｒ６）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）Ｒ７又は環構成原子数５のヘテロアリール基を表し、
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基又は炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基（該アルキル基及びアルキルオキシアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基又はシアノ基で置換されていてもよい）を表すか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）ｌ−若しくは−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−を表すが、同時に水素原子を表すことはなく、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基、炭素数３〜６のシクロアルキル基若しくはシクロアルキルオキシ基（該アルキル基、アルキルオキシ基、シクロアルキル基及びシクロアルキルオキシ基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されていてもよい）又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２を表すが、同時にアルキルオキシ基を表すことはなく、
Ｒ６は、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表し、
Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数３〜６のシクロアルキル基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基又は炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基（該アルキル基、シクロアルキル基、アルキルオキシアルキル基及びシクロアルキルアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基又はシアノ基で置換されていてもよい）を表し、
ｌは、２〜５の整数を表し、
ｍ及びｎは、それぞれ独立して、１又は２を表す。］
【請求項２】
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子若しくは炭素数１〜６のアルキル基を表すか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）ｌ−を表すが、同時に水素原子を表すことはなく、
Ｒ４は、ベンゼン環上の２位の置換基を表し、
Ｒ５は、ベンゼン環上の４位の置換基を表す、請求項１記載のニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ１は、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７又は−Ｎ（Ｒ６）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７を表し、
Ｒ４は、ハロゲン原子又は炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基を表し、
Ｒ５は、ハロゲン原子、シアノ基又は炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基を表し、
Ｒ６は、水素原子を表す、請求項１又は２記載のニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項記載のニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、医薬。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか一項記載のニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、可溶性エポキシド加水分解酵素阻害剤。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれか一項記載のニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する、慢性腎臓病若しくは肺高血圧症の治療剤又は予防剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ニペコチン酸誘導体及びその医薬用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
腎臓病患者の増加に伴い、人工透析患者が世界中で増加し続けており、その数はこの３０年間で１０倍以上に達している。このような状況下、２００２年には、慢性腎臓病という新しい疾患の概念が提唱され、腎不全には至っていない腎機能低下状態から腎不全の末期に至るまでの広い範囲の腎疾患を慢性腎臓病と呼ぶようになった（非特許文献１）。腎機能が低下した程度の症状であっても、その所見が持続し、これが放置された場合には、血清クレアチニン（Ｓｅｒｕｍ  ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ；以下、ｓＣｒｅ）値や血清シスタチンＣ（Ｃｙｓｔａｔｉｎ  Ｃ；以下、Ｃｙｓ−Ｃ）値が高値を示す腎不全へと進行するリスクが高いことがわかってきたからである。【０００３】
慢性腎臓病の患者は、末期の腎不全にまで進行すると、人工透析や腎移植なしでは生存できなくなるため、患者のクオリティー・オブ・ライフは著しく低下する。この人工透析などが必要となる腎不全の原疾患としては、糸球体腎炎、糖尿病性腎症などがある。さらに、慢性腎臓病の患者は、心血管疾患を併発することも多く、この場合には死亡リスクが一段と高まる。このため、心血管疾患の併発を抑制するという観点からも大きな意味を持つとされている。【０００４】
しかし、現在、慢性腎臓病の有効な治療薬は存在しないため、例えば、慢性腎臓病の患者には、アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗剤やアンジオテンシン変換酵素阻害剤等のアンジオテンシン系の降圧剤が処方され、厳格な血圧管理を行うことで、慢性腎臓病の進展と心血管疾患の併発及び進展を食い止める治療がなされている（非特許文献２）。【０００５】
一方、肺高血圧症とは、肺動脈圧の上昇を認める病態の総称であり、運動耐容能を著しく低下させ、そのほとんどが進行性で予後も不良であることが知られている。健常人では、肺動脈圧は全身の血圧より低く維持されているが、肺高血圧症患者では、平均肺動脈圧が安静時で２５ｍｍＨｇ以上（運動時では、３０ｍｍＨｇ以上）となり、この状態が長時間持続することで右心室肥大や右心不全が誘発され、最悪の場合は死に至ることとなる。【０００６】
肺高血圧症発症の原因の一つとして、肺血管攣縮が関与すると考えられているため、肺高血圧症の治療には、プロスタサイクリン誘導体、エンドセリンレセプター拮抗剤及びホスホジエステラーゼ阻害剤等の短期肺血管拡張作用を示す薬剤が使用されている（非特許文献３）。【０００７】
近年、内皮細胞由来の過分極因子の一つであるエポキシエイコサトリエン酸（Ｅｐｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄｓ；以下、ＥＥＴｓ）が、血圧上昇抑制作用及び血管内皮保護作用を有しており、腎臓や肺の疾患において臓器保護作用を示すことが報告された（非特許文献４及び５）。ＥＥＴｓは、可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓｏｌｕｂｌｅ  ｅｐｏｘｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ；以下、ｓＥＨ）によってジヒドロキシエイコサトリエン酸（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄｓ；以下、ＤＨＥＴｓ）に代謝されて失活するが、可溶性エポキシド加水分解酵素阻害剤（以下、ｓＥＨ阻害剤）は、ＥＥＴｓの量を増加させ、血圧上昇抑制や血管内皮保護作用を発揮することが示されている（非特許文献６〜８及び特許文献１）。【０００８】
最近になって、ｓＥＨ阻害活性を有する化合物が報告され、慢性腎臓病及び肺高血圧症の治療に有用である旨の示唆がされている例もあるが（非特許文献８並びに特許文献１及び２）、ｓＥＨ阻害活性を有する化合物であっても、自然発症型高血圧（Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ  Ｒａｔ）モデルに対して治療効果を示さない例も報告されている（非特許文献９〜１１）。なお、これまでに報告されたｓＥＨ阻害活性を有する化合物には、ニペコチン酸ジアミド構造を有するものはない。【０００９】
一方、ニペコチン酸ジアミド構造を有する化合物としては、ニペコチン酸にヘテロアリールアミンが縮合したヘテロアリールアミド誘導体（特許文献３）、アミジン誘導体（特許文献４）及びヒドロキサム酸誘導体（特許文献５）が報告されているが、ｓＥＨ阻害活性との関係については開示も示唆もされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第２００７／１０６５２５号
【特許文献２】特開２０１１−１６７４２号公報
【特許文献３】国際公開ＷＯ２０１０／０９６３７１号
【特許文献４】国際公開ＷＯ２０００／０１７１５８号
【特許文献５】国際公開ＷＯ２００２／０２８８２９号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】ＮＫＦ−Ｋ／ＤＯＱＩ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ、２００１年、第３７巻（ｓｕｐｐｌ．  １）、ｐ．Ｓ１８２−Ｓ２３８
【非特許文献２】飯野靖彦ら、「ＣＫＤ診療ガイド２００９」、日本腎臓学会編、２００９年、ｐ５８−６８
【非特許文献３】佐藤徹、最新医学、２０１０年、第６５巻、第８号、ｐ．１６９８−１７０２
【非特許文献４】Ｌｅｅら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍａｎｔａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０１０年、第２４巻、Ｐ．３７７０−３７８１
【非特許文献５】Ｄｈａｎａｓｅｋａｒａｎら、ＡＪＰ−Ｈｅａｒｔ  ａｎｄ  Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、２００６年、第２９１巻、Ｈ５１７−Ｈ５３１
【非特許文献６】Ｓｐｅｃｔｏｒら、Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４年、第４３巻、ｐ．５５−９０
【非特許文献７】Ｌａｒｓｅｎら、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、２００６年、２８巻、第１号、ｐ．３２−３８
【非特許文献８】Ｉｍｉｇら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、２００９年、第２巻、ｐ．２１７−２２７
【非特許文献９】Ｓｈｅｎら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、２００９年、１９巻、ｐ．３３９８−３４０４
【非特許文献１０】Ｓｈｅｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００９年、５２巻、ｐ．５００９−５０１２
【非特許文献１１】Ｓｈｅｎら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、２００９年、１９巻、ｐ．５３１４−５３２０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
しかしながら、慢性腎臓病の治療において、アンジオテンシン系降圧剤による血圧管理のみでは慢性腎臓病の進行を阻止するには不十分であるだけでなく、咳等の副作用を伴うことが懸念されている。また、肺高血圧症については、その治療法及び予防法が確立されていないのが現状であり、現在、肺高血圧症の治療に処方される薬剤（プロスタサイクリン誘導体、エンドセリンレセプター拮抗剤及びホスホジエステラーゼ阻害剤等）は、頭痛、潮紅、肝毒性等の副作用を引き起こすことが懸念されている。【００１３】
さらに、慢性腎臓病及び肺高血圧症は、患者のクオリティー・オブ・ライフを著しく低下させるおそれがあり、死亡リスクのある重篤な疾患であるため、発症メカニズムに基づいて薬効が発揮される薬剤の早期創出が強く望まれている。その一方で、ｓＥＨ阻害活性を示す化合物であったとしても、高血圧に対して治療効果を示すとは限らないために（非特許文献１０〜１２）、慢性腎不全や肺高血圧症に対して、治療効果を示すｓＥＨ阻害剤を見出すことは容易ではないのも現状であった。【００１４】
しかし、ｓＥＨを強く阻害しその作用に基づき、腎機能低下や肺動脈圧上昇を抑制する化合物を見出すことができれば、ｓＥＨが発現増加していない正常組織には影響を及ぼさないことが予測できるため、懸念されている副作用が排除された安全性の高い医薬を創作できると考えるに至った。【００１５】
そこで本発明は、ｓＥＨ阻害活性を示す化合物を提供するとともに、ｓＥＨの阻害に基づき慢性腎臓病及び肺高血圧症に対する治療効果及び予防効果を発揮する医薬を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは上記課題を解決するため鋭意検討した結果、新規なニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩が、強いｓＥＨ阻害活性を示すこと、並びに、その作用に基づき慢性腎臓病及び肺高血圧症に対し優れた治療効果及び予防効果を発揮することを見出し、本発明を完成させた。【００１７】
すなわち、本発明は、以下の一般式（Ｉ）で示されるニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩を提供する。
【化１】
2013147161.tif 000003
［式中、Ｒ１は、水酸基、シアノ基、炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基、炭素数３〜６のシクロアルキル基若しくはシクロアルキルオキシ基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基、炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基（該アルキル基、アルキルオキシ基、シクロアルキル基、シクロアルキルオキシ基、アルキルオキシアルキル基及びシクロアルキルアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、−ＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ６又は−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６で置換されていてもよい）、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｎ（Ｒ６）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）Ｒ７又は環構成原子数５のヘテロアリール基を表し、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基又は炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基（該アルキル基及びアルキルオキシアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基又はシアノ基で置換されていてもよい）を表すか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）ｌ−若しくは−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−を表すが、同時に水素原子を表すことはなく、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基、炭素数３〜６のシクロアルキル基若しくはシクロアルキルオキシ基（該アルキル基、アルキルオキシ基、シクロアルキル基及びシクロアルキルオキシ基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されていてもよい）又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２を表すが、同時にアルキルオキシ基を表すことはなく、Ｒ６は、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数３〜６のシクロアルキル基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基又は炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基（該アルキル基、シクロアルキル基、アルキルオキシアルキル基及びシクロアルキルアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基又はシアノ基で置換されていてもよい）を表し、ｌは、２〜５の整数を表し、ｍ及びｎは、それぞれ独立して、１又は２を表す。］【００１８】
上記のニペコチン酸誘導体は、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、水素原子若しくは炭素数１〜６のアルキル基を表すか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）ｌ−を表すが、同時に水素原子を表すことはなく、Ｒ４が、ベンゼン環上の２位の置換基を表し、Ｒ５が、ベンゼン環上の４位の置換基を表すことが好ましい。【００１９】
この場合には、より強いｓＥＨ阻害活性が期待できる点で優れている。【００２０】
また、上記のニペコチン酸誘導体は、Ｒ１が、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７又は−Ｎ（Ｒ６）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７を表し、Ｒ４が、ハロゲン原子又は炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基を表し、Ｒ５が、ハロゲン原子、シアノ基又は炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基を表し、Ｒ６が、水素原子を表すことがより好ましく、Ｒ１が、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３を表し、Ｒ２及びＲ３が、一緒になって−（ＣＨ２）３−を表し、Ｒ４が、−ＯＣＦ３を表し、Ｒ５が、シアノ基を表すことが特に好ましい。【００２１】
この場合には、より強いｓＥＨ阻害活性が期待でき、加えて、薬物動態も優れていることから、慢性腎臓病及び肺高血圧症におけるより優れた治療効果が期待できる。【００２２】
また本発明は、上記のニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬を提供する。【００２３】
この医薬は、ｓＥＨ阻害剤であることが好ましく、慢性腎臓病若しくは肺高血圧症の治療剤又は予防剤であることがさらに好ましい。
【発明の効果】
【００２４】
本発明のニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩は、強いｓＥＨ阻害活性を示しており、その作用に基づき慢性腎臓病及び肺高血圧症に対して優れた治療効果又は予防効果を発揮することができるため、患者の症状に見合った副作用を軽減した処方が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】ラット抗糸球体基底膜抗血清（抗Ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ  Ｂａｓｅｍｅｎｔ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ；以下、抗ＧＢＭ抗血清）投与腎炎モデルにおけるｓＣｒｅ値に対する実施例化合物１の作用を示す図である。
【図２】ラット抗ＧＢＭ抗血清投与腎炎モデルにおける病変面積スコアの割合に対する実施例化合物１の作用を示す図である。
【図３】ラット抗ＧＢＭ抗血清投与腎炎モデルにおけるｓＣｒｅ値に対する実施例化合物２の作用を示す図である。
【図４】ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける右心室収縮期圧に対する実施例化合物１の作用を示す図である。
【図５】ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける右心室重量比に対する実施例化合物１の作用を示す図である。
【図６】ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける肺重量比に対する実施例化合物１の作用を示す図である。
【図７】ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける右心室重量比に対する実施例化合物１の作用を示す図である。
【図８】ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける右心室収縮期圧に対する実施例化合物２の作用を示す図である。
【図９】ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける右心室重量比に対する実施例化合物２の作用を示す図である。
【図１０】ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルにおける肺重量比に対する実施例化合物２の作用を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明のニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩は、以下の一般式（Ｉ）で示されることを特徴としている。
【化２】
2013147161.tif 000004
［式中、Ｒ１は、水酸基、シアノ基、炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基、炭素数３〜６のシクロアルキル基若しくはシクロアルキルオキシ基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基、炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基（該アルキル基、アルキルオキシ基、シクロアルキル基、シクロアルキルオキシ基、アルキルオキシアルキル基及びシクロアルキルアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、−ＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ６又は−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６で置換されていてもよい）、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｎ（Ｒ６）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ６）Ｒ７又は環構成原子数５のヘテロアリール基を表し、Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基又は炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基（該アルキル基及びアルキルオキシアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基又はシアノ基で置換されていてもよい）を表すか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）ｌ−若しくは−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−を表すが、同時に水素原子を表すことはなく、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基、炭素数３〜６のシクロアルキル基若しくはシクロアルキルオキシ基（該アルキル基、アルキルオキシ基、シクロアルキル基及びシクロアルキルオキシ基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子で置換されていてもよい）又は−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２を表すが、同時にアルキルオキシ基を表すことはなく、Ｒ６は、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表し、Ｒ７は、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数３〜６のシクロアルキル基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基又は炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基（該アルキル基、シクロアルキル基、アルキルオキシアルキル基及びシクロアルキルアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基又はシアノ基で置換されていてもよい）を表し、ｌは、２〜５の整数を表し、ｍ及びｎは、それぞれ独立して、１又は２を表す。］
【００２７】
「炭素数１〜６のアルキル基」とは、炭素原子を１〜６個有する直鎖状又は炭素原子を３〜６個有する分岐鎖状の飽和炭化水素基を意味し、例えば、メチル基、エチル基、１−プロピル基、２−プロピル基、１−ブチル基、２−ブチル基、２−メチル−２−プロピル基（ｔｅｒｔ−ブチル基）、２−メチル−１−プロピル基、２，２−ジメチル−１−プロピル基、１−ペンチル基、２−ペンチル基又は３−ペンチル基が挙げられる。
【００２８】
「炭素数１〜６のアルキルオキシ基」とは、上記の炭素数１〜６のアルキル基が酸素原子に結合した基を意味し、例えば、メトキシ基、エトキシ基、１−プロピルオキシ基、２−プロピルオキシ基、１−ブチルオキシ基又は２−ブチルオキシ基が挙げられる。
【００２９】
「炭素数３〜６のシクロアルキル基」とは、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基又はシクロヘキシル基を意味する。
【００３０】
「炭素数３〜６のシクロアルキルオキシ基」とは、シクロプロピルオキシ基、シクロブチルオキシ基、シクロペンチルオキシ基又はシクロヘキシルオキシ基を意味する。
【００３１】
「炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基」とは、炭素原子を２〜７個有し、アルキル基の１個の水素原子がアルキルオキシ基で置換された基を意味し、例えば、メトキシメチル基、メトキシエチル基、メトキシプロピル基、エトキシメチル基、プロポキシメチル基又はイソプロポキシメチル基が挙げられる。
【００３２】
「炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基」とは、炭素原子を４〜７個有し、アルキル基の１個の水素原子がシクロアルキル基で置換された基を意味し、例えば、シクロプロピルメチル基、シクロプロピルエチル基、シクロプロピルプロピル基、シクロブチルメチル基、シクロペンチルメチル基又はシクロヘキシルメチル基が挙げられる。
【００３３】
「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子を意味する。
【００３４】
「環構成原子数５のヘテロアリール基」とは、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子からなる群から選択される同一又は異なる原子を環構成原子として１〜４個含む、環構成原子数が５の複素芳香族基を意味し、例えば、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、トリアゾリル基、オキサゾリル基、イソキサゾリル基、フラニル基又はチアゾリル基が挙げられる。
【００３５】
上記のニペコチン酸誘導体は、一般式（Ｉ）において、Ｒ１は、−Ｎ（Ｒ６）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７又は−Ｎ（Ｒ６）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７であることが好ましく、アセチルアミジル、プロピオンアミジル基又はメタンスルホニルアミジル基であることがより好ましい。
【００３６】
Ｒ２及びＲ３は、それぞれ独立して、水素原子若しくは炭素数１〜６のアルキル基であるか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）ｌ−であることが好ましく、それぞれ独立して、水素原子若しくは炭素数１〜３のアルキル基（該アルキル基は、１個の水素原子が、水酸基で置換されていてもよい）であるか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）２−若しくは−（ＣＨ２）３−であることがより好ましく、それぞれ独立して、水素原子、メチル基若しくは２−ヒドロキシ−２−プロピル基であるか、又は、一緒になって−（ＣＨ２）２−若しくは−（ＣＨ２）３−であることがさらに好ましいが、同時に水素原子となることはない。
【００３７】
Ｒ４は、ベンゼン環上の２位の置換基であることが好ましい。また、Ｒ４は、ハロゲン原子又は炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基であることが好ましく、ハロゲン原子又はアルキルオキシ基であることがより好ましく、アルキルオキシ基であることがさらに好ましい。
【００３８】
Ｒ５は、ベンゼン環上の４位の置換基であることが好ましい。また、Ｒ５は、ハロゲン原子、シアノ基又は炭素数１〜６のアルキル基若しくは炭素数１〜６のアルキルオキシ基であることが好ましく、ハロゲン原子又はシアノ基であることがより好ましい。
【００３９】
Ｒ６は、水素原子であることが好ましく、Ｒ７は、メチル基又はエチル基であることが好ましい。
【００４０】
また、ｌは、２又は３であることが好ましく、ｍは、２であることが好ましく、ｎは、２であることが好ましい。
【００４１】
上記の一般式（Ｉ）で示されるニペコチン酸誘導体（以下、ニペコチン酸誘導体（Ｉ））は、少なくとも１個の不斉炭素原子を有しており、光学異性体やジアステレオマーが存在するものであるが、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）は単一異性体のみならず、ラセミ体及びジアステレオマー混合物も包含するものである。また、回転異性体が存在する場合、全ての回転異性体を包含する。
【００４２】
ニペコチン酸誘導体（Ｉ）の薬理学的に許容される塩としては、例えば、酸付加塩として塩酸塩、トリフルオロ酢酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩又はメタンスルホン酸塩が挙げられるが、塩酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩又はメタンスルホン酸塩が好ましい。
【００４３】
ニペコチン酸誘導体（Ｉ）の製造に使用する出発物質と試薬は、市販品をそのまま利用してもよいし、又は、公知の方法により合成しても構わない。
【００４４】
ニペコチン酸誘導体（Ｉ−ａ）は、例えば、以下のスキーム１に示すように、塩基及び縮合剤存在下、アミン誘導体（ＩＩ）とカルボン酸誘導体（ＩＩＩ）との縮合反応により製造できる。
（スキーム１）
【化３】
2013147161.tif 000005
[式中、Ｒ１’は、水酸基、シアノ基、炭素数１〜６のアルキル基若しくはアルキルオキシ基、炭素数３〜６のシクロアルキル基若しくはシクロアルキルオキシ基、炭素数２〜７のアルキルオキシアルキル基、炭素数４〜７のシクロアルキルアルキル基（該アルキル基、アルキルオキシ基、シクロアルキル基、シクロアルキルオキシ基、アルキルオキシアルキル基及びシクロアルキルアルキル基は、１〜３個の水素原子が、それぞれ独立して、ハロゲン原子、水酸基、シアノ基、−ＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）−Ｒ６又は−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ６で置換されていてもよい）を表す。Ｒ２〜Ｒ６は、上記定義に同じ。]
【００４５】
縮合反応に用いる縮合剤としては、例えば、シクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ‘−３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリスジメチルアミノホスホニウム塩（ＢＯＰ試薬）、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−ベンゾトリアゾリウム−３−オキシドヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）又はＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）テトラメチルウロニウム  ヘキサフルオロホスファート（以下、ＨＡＴＵ）が挙げられるが、ＨＡＴＵが好ましい。該縮合剤の当量は、１〜１０当量が好ましく、１〜３当量がより好ましい。
【００４６】
縮合反応に用いる溶媒としては、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（以下、ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（以下、ＴＨＦ）、ジクロロメタン、クロロホルム、ジエチルエーテル又はジメチルエーテルが挙げられるが、ＤＭＦ又はＴＨＦが好ましく、ＤＭＦがより好ましい。
【００４７】
縮合反応に用いる塩基としては、例えば、ジイソプロピルエチルアミン（以下、ＤＩＰＥＡ）、トリエチルアミン（以下、ＴＥＡ）、ピリジン若しくはＮ−メチルモルホリン等の有機塩基又は炭酸カリウム、炭酸ナトリウム若しくは炭酸水素ナトリウム等の有機酸塩が挙げられるが、ＤＩＰＥＡ又はＴＥＡが好ましい。該塩基の当量は、アミン誘導体（ＩＩ）に対して１〜１００当量が好ましく、１〜１０当量がより好ましい。
【００４８】
縮合反応に用いるカルボン酸誘導体（ＩＩＩ）の当量は、アミン誘導体（ＩＩ）に対して０．１〜１００当量が好ましく、０．１〜１０当量がより好ましく、０．８〜２当量がさらに好ましい。
【００４９】
縮合反応の反応温度は、−５０〜１００℃が好ましく、０〜５０℃がより好ましく、０〜３０℃がさらに好ましい。また、縮合反応の反応時間は、１分間〜４８時間が好ましく、１分間〜２４時間がより好ましく、１０分間〜２４時間がさらに好ましい。
【００５０】
縮合反応におけるアミン誘導体（ＩＩ）の反応開始時の濃度は、０．０１〜１００Ｍが好ましく、０．０１〜１０Ｍがより好ましく、０．１〜１０Ｍがさらに好ましい。
【００５１】
また、Ｒ１が、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７であるニペコチン酸誘導体（Ｉ−ｂ）は、例えば、以下のスキーム２に示すように、塩基存在下、アミン誘導体（ＩＶ）と酸クロリド誘導体（Ｖ）との縮合反応、又は、塩基及び縮合剤存在下、アミン誘導体（ＩＶ）とカルボン酸誘導体（ＶＩ）との縮合反応により製造できる。
（スキーム２）
【化４】
2013147161.tif 000006
[式中、Ｒ２〜Ｒ５及びＲ７は、上記定義に同じ。]
【００５２】
酸クロリド誘導体（Ｖ）との縮合反応に用いる溶媒としては、例えば、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、アセトニトリル、ＤＭＦ、ＴＨＦ、ジオキサン、ジエチルエーテル又は１，２−ジメトキシエタンが挙げられるが、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、アセトニトリル又はＴＨＦが好ましく、ジクロロメタン又は１，２−ジクロロエタンがより好ましい。
【００５３】
酸クロリド誘導体（Ｖ）との縮合反応に用いる酸クロリド（Ｖ）の当量は、アミン誘導体（ＩＶ）に対して０．１〜１０当量が好ましく、１〜３当量がより好ましく、１〜１．５当量がさらに好ましい。
【００５４】
酸クロリド誘導体（Ｖ）との縮合反応に用いる塩基としては、例えば、ＤＩＰＥＡ、ＴＥＡ、ピリジン又はＮ−メチルモルホリン等の有機塩基が挙げられるが、ＤＩＰＥＡ又はＴＥＡが好ましい。該塩基の当量は、アミン誘導体（ＩＶ）に対して１〜１００当量が好ましく、１〜１０当量がより好ましい。
【００５５】
酸クロリド誘導体（Ｖ）との縮合反応の反応温度は、−５０〜１００℃が好ましく、−２０〜６０℃がより好ましく、０〜４０℃がさらに好ましい。また、酸クロリド（Ｖ）との縮合反応の反応時間は、３０分間〜２４時間が好ましく、３０分間〜１２時間がより好ましく、３０分間〜８時間がさらに好ましい。
【００５６】
酸クロリド誘導体（Ｖ）との縮合反応におけるアミン誘導体（ＩＶ）の反応開始時の濃度は、０．０１〜１００Ｍが好ましく、０．０１〜１０Ｍがより好ましく、０．１〜１０Ｍがさらに好ましい。
【００５７】
一方、アミン誘導体（ＩＶ）とカルボン酸誘導体（ＶＩ）との縮合反応は、スキーム１と同様の条件により行うことができる。
【００５８】
Ｒ１が、−Ｎ（Ｈ）Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７であるニペコチン酸誘導体（Ｉ−ｃ）は、例えば、以下のスキーム３に示すように、塩基存在下、アミン誘導体（ＩＶ）とスルホン酸クロリド誘導体（ＶＩＩ）とのスルホンアミド化反応により製造できる。
（スキーム３）
【化５】
2013147161.tif 000007
[式中、Ｒ２〜Ｒ５及びＲ７は、上記定義に同じ。]
【００５９】
スルホンアミド化反応に用いる溶媒としては、例えば、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、アセトニトリル、ＤＭＦ、ＴＨＦ、ジオキサン、ジエチルエーテル又は１，２−ジメトキシエタンが挙げられるが、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、アセトニトリル又はＴＨＦが好ましく、ジクロロメタン又は１，２−ジクロロエタンがより好ましい。
【００６０】
スルホンアミド化反応に用いるスルホン酸クロリド誘導体（ＶＩＩ）の当量は、アミン誘導体（ＩＶ）に対して０．１〜１０当量が好ましく、１〜３当量がより好ましく、１〜１．５当量がさらに好ましい。
【００６１】
スルホンアミド化反応に用いる塩基としては、例えば、ＤＩＰＥＡ、ＴＥＡ、ピリジン又はＮ−メチルモルホリン等の有機塩基が挙げられるが、ＤＩＰＥＡ又はＴＥＡが好ましい。該塩基の当量は、アミン誘導体（ＩＶ）に対して１〜１００当量が好ましく、１〜１０当量がより好ましい。
【００６２】
スルホンアミド化反応の反応温度は、−５０〜５０℃が好ましく、−３０〜３０℃がより好ましく、−２０〜２０℃がさらに好ましい。また、スルホンアミド化反応の反応時間は、３０分間〜２４時間が好ましく、３０分間〜１２時間がより好ましく、３０分間〜８時間がさらに好ましい。
【００６３】
スルホンアミド化反応におけるアミン誘導体（ＩＶ）の反応開始時の濃度は、０．０１〜１００Ｍが好ましく、０．０１〜１０Ｍがより好ましく、０．１〜１０Ｍがさらに好ましい。
【００６４】
上記のスキーム２及び３における出発物質であるアミン誘導体（ＩＶ）は、例えば、以下のスキーム４に示すように、塩基存在下、アミン誘導体（ＩＩ）とカルボン酸誘導体（ＶＩＩＩ）との縮合反応後、保護基を除去する脱保護反応により製造できる。
（スキーム４）
【化６】
2013147161.tif 000008
[式中、Ｒ２〜Ｒ５は、上記定義に同じであり、Ｒ８は、保護基を表す。]
【００６５】
アミン誘導体（ＩＩ）とカルボン酸誘導体（ＶＩＩＩ）との縮合反応は、スキーム１と同様の条件により行うことができる。
【００６６】
縮合反応に続く脱保護反応は、例えば、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ第３版（Ｇｒｅｅｎら著、１９９９年、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）に記されている公知の方法により行うことができる。例えば、保護基が、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基である場合には、トリフルオロ酢酸などの強酸で処理することで保護基を除去することができる。
【００６７】
上記のスキーム４におけるカルボン酸誘導体（ＶＩＩＩ）は、市販品をそのまま利用してもよいし、又は、公知の方法により製造しても構わない。
【００６８】
上記のスキーム１及び４における出発物質であるアミン誘導体（ＩＩ）は、例えば、以下のスキーム５に示すように、塩基及び縮合剤存在下、ベンジルアミン誘導体（ＩＸ）とニペコチン酸誘導体（Ｘ）との縮合反応後、保護基を除去する脱保護反応により製造できる。
（スキーム５）
【化７】
2013147161.tif 000009
[式中、Ｒ４、Ｒ５及びＲ８は、上記定義に同じ。]
【００６９】
ベンジルアミン誘導体（ＩＸ）とニペコチン酸誘導体（Ｘ）との縮合反応は、スキーム１と同様の条件により行うことができる。
【００７０】
脱保護反応は、スキーム４記載の方法と同様の条件にて行うことができる。
【００７１】
スキーム５の縮合反応は、ニペコチン酸誘導体（Ｘ）を酸クロリドへ変換し、塩基存在下にて行うこともできる。
【００７２】
ニペコチン酸誘導体（Ｘ）を酸クロリドへ変換する試薬としては、オキサリルクロリド又は塩化チオニルが挙げられるが、オキサリルクロリドが好ましい。該試薬の当量は、ニペコチン酸誘導体（Ｘ）に対して１〜１０当量が好ましく、１〜１．５当量がより好ましい。
【００７３】
ニペコチン酸誘導体（Ｘ）を酸クロリドへ変換する際に用いる溶媒としては、ジクロロメタン、クロロホルム、ＴＨＦ、１，２−ジクロロエタン、アセトニトリル、１，４−ジオキサン又はＤＭＦが挙げられるが、ジクロロメタン、ＴＨＦ若しくはＤＭＦ、又は、これらの混合溶媒が好ましく、ジクロロメタンとＤＭＦとの混合溶媒又はＴＨＦとＤＭＦとの混合溶媒がより好ましい。混合溶媒の比率としては、例えば、ジクロロメタンとＤＭＦとの混合溶媒の場合、ジクロロメタン：ＤＭＦ＝１〜１０００：１が好ましく、１〜１００：１がより好ましい。
【００７４】
ニペコチン酸誘導体（Ｘ）を酸クロリドへ変換する際の反応温度は、−５０〜１００℃が好ましく、−３０〜３０℃が好ましく、−２０〜０℃がさらに好ましい。また、ニペコチン酸誘導体（Ｘ）を酸クロリドへ変換する際の反応時間は、３０分間〜２４時間が好ましく、３０分間〜１２時間がより好ましく、３０分間〜２時間がさらに好ましい。
【００７５】
ニペコチン酸誘導体（Ｘ）を酸クロリドへ変換する際の反応開始時のニペコチン酸誘導体（Ｘ）の濃度は、０．０１〜１００Ｍが好ましく、０．０１〜１０Ｍがより好ましく、０．１〜３Ｍがさらに好ましい。
【００７６】
以上のようにして得られる上記のニペコチン酸誘導体（Ｉ）、その薬理学的に許容される塩、又は、上記のニペコチン酸誘導体（Ｉ）の製造に用いる中間体、原料化合物若しくは試薬は、必要に応じて、抽出、蒸留、クロマトグラフィー又は再結晶等の方法で単離精製してもよい。
【００７７】
また、本発明の医薬は、上記のニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴としており、この医薬は、ｓＥＨ阻害剤であることが好ましく、慢性腎臓病若しくは肺高血圧症の治療剤又は予防剤であることがより好ましい。
【００７８】
「ｓＥＨ」は、可溶性エポキシド加水分解酵素（ｓｏｌｕｂｌｅ  ｅｐｏｘｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ）の略であり、エポキシドの加水分解を触媒し、それに対応するジオールに変換する代謝酵素である。ｓＥＨの最も知られた基質は、内皮細胞由来の過分極因子の一つであるＥＥＴｓであり、ｓＥＨは、ＥＥＴｓをＤＨＥＴｓに代謝して失活させる作用を有している。「ＥＥＴｓ」は、エポキシエイコサトリエン酸（Ｅｐｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄｓ）の略であり、「ＤＨＥＴｓ」は、ジヒドロキシエイコサトリエン酸（Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄｓ）の略である。ＥＥＴｓとして、例えば、１４，１５―エポキシエイコサトリエン酸（１４，１５―Ｅｐｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ；以下、１４，１５―ＥＥＴ）が挙げられる。ＤＨＥＴｓとして、例えば、１４，１５―ジヒドロキシエイコサトリエン酸（１４，１５―Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ；以下、１４，１５―ＤＨＥＴ）が挙げられる。
【００７９】
「ｓＥＨ阻害活性」とは、ｓＥＨの作用を阻害する活性を意味する。したがって、ｓＥＨ阻害活性とは、ｓＥＨの基質の一つであるＥＥＴｓの加水分解を触媒するというｓＥＨの酵素反応を阻害する活性を包含する。
【００８０】
「ｓＥＨ阻害剤」とは、ｓＥＨ阻害活性を示す化合物又は該化合物を有効成分として含有する組成物を意味する。
【００８１】
ｓＥＨ阻害活性は、例えば、ヒトｓＥＨと、その基質であるＥＥＴｓとをｓＥＨ阻害剤の存在下で反応させ、産生されるＤＨＥＴｓの量を、ｓＥＨ阻害剤非存在下におけるＤＨＥＴｓ産生量と比較することで測定できる。また、市販の測定キット（Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｅｐｏｘｉｄｅ  Ｈｙｄｒｏｌａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ；Ｃａｙｍａｎ社）を用いるか、公知文献（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００５年、第３４３巻、ｐ．６６−７５等）に記載の方法によっても、ｓＥＨ阻害剤のｓＥＨ阻害活性を測定できる。
【００８２】
また、ｓＥＨ阻害剤存在下及び非存在下で、ｓＥＨの基質としてラセミ性４−ニトロフェニル−トランス−２，３−エポキシ−３−フェニルプロピルカルボナートを用いて、４−ニトロフェノラート陰イオンの出現を測定するか、又は、ｓＥＨの基質としてシアノ（６−メトキシナフタレン−２−イル）メチル  ２−（３−フェニルオキシラン−２−イル）アセタートを用いて、６−メトキシ−２−ナフトアルデヒドの出現を測定することによっても、ｓＥＨ阻害剤のｓＥＨ阻害活性を測定できる。
【００８３】
本発明の医薬が、ＥＥＴｓからＤＨＥＴｓへの代謝を抑制すること又はＥＥＴｓの量を増加させることは、ＥＥＴｓ濃度、ＤＨＥＴｓ濃度又はＥＥＴｓ／ＤＨＥＴｓ比を測定することで確認できる。ＥＥＴｓ濃度、ＤＨＥＴｓ濃度及びＥＥＴｓ／ＤＨＥＴｓ比は、例えば、市販の測定キット（１４，１５―ＥＥＴ／ＤＨＥＴ  ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ；Ｄｅｔｒｏｉｔ  Ｒ＆Ｄ社）を用いて測定できる。
【００８４】
「慢性腎臓病」とは、米国腎臓病財団―腎臓病患者の予後改善機構（Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ−Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｏｕｔｃｏｍｅｓ  Ｑｕａｌｉｔｙ  Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ；Ｋ／ＤＯＱＩ）により定義された疾病を意味する。すなわち、（１）糸球体濾過量（Ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ  ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  ｒａｔｅ；以下、ＧＦＲ）の減少の有無に関わらず、腎臓の構造上又は機能上の異常により定義される腎臓の障害を３ヶ月間以上にわたり有する疾病、又は、（２）腎臓の損傷の有無に関わらず、ＧＦＲが３ヶ月間以上にわたり６０ｍＬ／分／１．７３ｍ２未満である疾病を意味する。
【００８５】
腎臓の障害は、血尿又は微量アルブミン尿を含む蛋白尿などの尿所見の異常、片腎又は多発性嚢胞腎などの腎臓の画像所見の異常、血液検査又は尿検査で検出される腎障害マーカーの異常、腎生検などの腎臓の病理組織学的診断による異常所見などによって認められる。
【００８６】
ＧＦＲは、腎機能の指標として推奨される。しかし、ＧＦＲを直接測定することは煩雑であり困難であるため、ｓＣｒｅ値をもとに年齢及び性別を加味して計算で求める換算ＧＦＲが用いられる。また最近では、腎機能の評価に、血清Ｃｙｓ−Ｃ値も測定される。また、腎機能の評価に、イヌリンクリアランス又はクレアチニンクリアランスも用いられる。
【００８７】
「糸球体腎炎」は、慢性腎臓病の一つであり、例えば、ＩｇＡ腎症、微小変化型ネフローゼ症候群、巣状分節性糸球体硬化症、膜性腎症、膜性増殖性糸球体腎炎又は半月体形成性腎炎が挙げられる。「糖尿病性腎症」もまた、慢性腎臓病の一つであり、高血糖による代謝異常により進行する病態であり、糖尿病性腎症では、微量アルブミン尿を含む尿蛋白などの尿所見の異常、高血圧又は高血糖が認められる。
【００８８】
「腎不全」は、腎機能が正常時の３０％を下回った状態又は症候を意味する。糸球体の機能が６０％以下まで低下した状態を腎不全と呼び、１０％未満まで進行すると透析治療が必要な末期の腎不全となる。腎不全には急性の腎不全と慢性の腎不全がある。慢性の腎不全は、慢性腎臓病の一つであり、慢性腎臓病の末期状態である末期腎臓病とされる。糸球体腎炎又は糖尿病性腎症などが進行すると、慢性の腎不全に至る。慢性の腎不全になると、その病態は原疾患に関わらず同じであり、最終共通経路（ｆｉｎａｌ  ｃｏｍｍｏｎ  ｐａｔｈｗａｙ）によって進行し、末期腎不全に至る。腎不全では、ｓＣｒｅ値の増加又は血清Ｃｙｓ−Ｃ値の増加が認められる。
【００８９】
「肺高血圧症」とは、血液を心臓から肺に送る肺動脈圧の上昇を認める病態のうち、安静臥位での平均肺動脈圧が２５ｍｍＨｇ以上の状態、又は、肺疾患、睡眠時無呼吸症候群及び肺胞低換気症候群では、平均肺動脈圧が安静時で２０ｍｍＨｇ以上（運動時では、３０ｍｍＨｇ以上）の状態を意味する（ダイジェスト版  肺高血圧症治療ガイドライン（２００６年改訂版）、Ｐ２−Ｐ３．）。肺高血圧症では、右心室収縮期圧上昇、右心室肥大、肺肥大、肺動脈肥厚、肺における細胞増殖又は心筋肥大が認められる。
【００９０】
ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩の慢性腎臓病に対する治療効果は、人為的に慢性腎臓病を誘発させた動物モデルを用いて評価することができる。そのような動物モデルとしては、例えば、マウスやラットを用いた抗ＧＢＭ抗血清投与腎炎モデル（Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｎａｌ、２００３年、第６４巻、ｐ．１２４１−１２５２、等）、５／６腎摘出による腎不全モデル（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ、２００２年、第１３巻、ｐ．２９０９−２９１５、等）又はストレプトゾトシン投与糖尿病性腎症モデル（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００７年、第１９巻、ｐ．５７１−５７９：Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、１９９８年、３２巻、ｐ．７７８−７８５等）が挙げられる。なお、腎臓の機能上の異常は、ｓＣｒｅ値、血清Ｃｙｓ−Ｃ値又は尿中アルブミン排泄量を測定することで確認できる。また、高血圧は全身収縮期圧を測定することで確認できる。高血糖は血漿中グルコース濃度を測定することで確認できる。
【００９１】
糸球体腎炎及び腎不全である慢性腎臓病の腎臓の病変部位におけるｓＥＨの発現は、腎臓組織を抗ｓＥＨ抗体を用いて免疫組織染色することで確認できる。糸球体腎炎及び腎不全である慢性腎臓病の腎臓の病理組織学的変化は、腎臓組織をヘマトキシリン・エオジン（Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ  ａｎｄ  ｅｏｓｉｎ；以下、ＨＥ）及び過ヨウ素酸シッフ（Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  ａｃｉｄ−Ｓｃｈｉｆｆ；以下、ＰＡＳ）染色することで確認できる。
【００９２】
また、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩の、肺高血圧症に対する治療効果は、人為的に肺高血圧症を誘発させた動物モデルを用いて評価することができる。そのような動物モデルとしては、例えば、ラットを用いたモノクロタリン投与肺高血圧症モデル（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２００９年、第１１１巻、ｐ．２３５−２４３）が挙げられる。なお、肺動脈圧の上昇は、右心室収縮期圧を測定することで確認できる。また、肺高血圧症に伴う右心室肥大及び肺肥大の病態は、それぞれ、右心室重量比（右心室重量／（中隔重量＋左心室重量））及び肺重量比（肺重量／体重）を測定することで確認できる。
【００９３】
肺高血圧症の肺の病変部位におけるｓＥＨの発現は、肺組織を抗ｓＥＨ抗体を用いて免疫組織染色することで確認できる。肺高血圧症の肺動脈肥厚は、肺組織をエラスチカ・ワンギーソン染色することで確認できる。肺高血圧症の肺における細胞増殖は、肺組織を抗増殖性細胞核抗原（Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｃｅｌｌ  ｎｕｃｌｅａｒ  ａｎｔｉｇｅｎ；以下、ＰＣＮＡ）抗体を用いて免疫染色することで確認できる。肺高血圧症の心筋肥大は、右心室をＨＥ染色することで確認できる。肺高血圧症における全身血圧は実施例に記載した方法で確認できる。これらを確認することにより、肺動脈性肺高血圧症、肺静脈閉塞性疾患、肺毛細血管腫症、左心疾患による肺高血圧症、肺疾患及び低酸素による肺高血圧症、慢性血栓塞栓症肺高血圧症並びに原因不明の複合式要因による肺高血圧症に対する治療効果を評価することができる。
【００９４】
ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩を、医薬として用いる場合は、そのまま、又は、適当な剤形の医薬組成物として、哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、イヌ、サル、ウシ、ヒツジ又はヒト）に対して、経口的又は非経口的（例えば、経皮投与、静脈投与、直腸内投与、吸入投与、点鼻投与又は点眼投与）に投与することができる。
【００９５】
哺乳動物への投与のための剤形としては、例えば、錠剤、散剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤、液剤、注射剤、乳剤、懸濁剤若しくは坐剤、又は公知の持続型製剤が挙げられる。これら剤形は、公知の方法によって製造でき、製剤分野において一般的に用いられる担体を含有するものである。そのような担体としては、例えば、固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、あるいは、液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤又は無痛化剤が挙げられる。また必要に応じて、等張化剤、緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤、吸着剤又は湿潤剤等の添加物を用いても構わない。
【００９６】
賦形剤としては、例えば、乳糖、Ｄ−マンニトール、澱粉、ショ糖、コーンスターチ、結晶セルロース又は軽質無水ケイ酸が挙げられる。
【００９７】
滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク又はコロイドシリカが挙げられる。
【００９８】
結合剤としては、例えば、結晶セルロース、Ｄ−マンニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、澱粉、ショ糖、ゼラチン、メチルセルロース又はカルボキシメチルセルロースナトリウムが挙げられる。
【００９９】
崩壊剤としては、例えば、澱粉、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム又はＬ−ヒドロキシプロピルセルロースが挙げられる。
【０１００】
溶剤としては、例えば、注射用水、アルコール、プロピレングリコール、マクロゴール、ゴマ油又はトウモロコシ油が挙げられる。
【０１０１】
溶解補助剤としては、例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ−マンニトール、安息香酸ベンジル、エタノール、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム又はクエン酸ナトリウムが挙げられる。
【０１０２】
懸濁化剤としては、例えば、ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム若しくはモノステアリン酸グリセリン等の界面活性剤又はポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース若しくはヒドロキシプロピルセルロース等の親水性高分子が挙げられる。
【０１０３】
無痛化剤としては、例えば、ベンジルアルコールが挙げられる。
【０１０４】
等張化剤としては、例えば、ブドウ糖、塩化ナトリウム、Ｄ−ソルビトール又はＤ−マンニトールが挙げられる。
【０１０５】
緩衝剤としては、例えば、リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩又はクエン酸塩等の緩衝液が挙げられる。
【０１０６】
防腐剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸又はソルビン酸が挙げられる。
【０１０７】
抗酸化剤としては、例えば、亜硫酸塩又はアスコルビン酸が挙げられる。
【０１０８】
上記の医薬は、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩を、０．００１〜９９重量％含有することが好ましく、０．０１〜９９重量％含有することがより好ましい。ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩の、有効投与量及び投与回数は、投与形態、患者の年齢、体重又は治療すべき症状の性質若しくは重篤度によっても異なるが、通常成人１日当り１〜１０００ｍｇを、好ましくは１〜３００ｍｇを、１回又は数回に分けて投与することができる。
【０１０９】
なお、上記の医薬は、単独で投与してもよいが、疾患の予防効果若しくは治療効果の補完又は増強、あるいは投与量の低減のために、他の薬剤と配合するか、他の薬剤と併用して使用することもできる。
【０１１０】
配合又は併用し得る他の薬剤（以下、併用薬剤）としては、例えば、糖尿病治療薬、糖尿病性合併症治療薬、高脂血症治療薬、降圧薬、抗肥満薬、利尿薬、化学療法薬、免疫療法薬、抗血栓薬又は悪液質改善薬が挙げられる。
【０１１１】
上記の医薬を併用薬剤と併用して使用する場合には、上記の医薬及び併用薬剤の投与時期は特に限定されず、これらを投与対象に対して同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与しても構わない。また、併用薬剤は低分子化合物であってもよいし、タンパク質、ポリペプチド若しくは抗体等の高分子又はワクチン等であっても構わない。併用薬剤の投与量は、臨床上用いられている投与量を基準として、適宜選択することができる。上記の医薬と併用薬剤との配合比は、投与対象、投与ルート、対象疾患、症状又は、上記の医薬と併用薬剤の組み合わせ等により適宜選択することができる。例えば、投与対象がヒトである場合には、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩に対し、併用薬剤を０．０１〜９９．９９の配合比で用いればよい。
【０１１２】
糖尿病治療薬としては、例えば、ウシ若しくはブタの膵臓から抽出された動物インスリン製剤、大腸菌若しくは酵母を用いて遺伝子工学的に合成したヒトインスリン製剤、インスリン亜鉛、プロタミンインスリン亜鉛、インスリンのフラグメント若しくは誘導体等のインスリン製剤、塩酸ピオグリタゾン、トログリタゾン、ロシグリタゾン若しくはそのマレイン酸塩等のインスリン抵抗性改善剤、ボグリボース、アカルボース、ミグリトール若しくはエミグリテート等のα−グルコシダーゼ阻害剤、フェンホルミン、メトホルミン若しくはブホルミン等のビグアナイド剤、トルブタミド、グリベンクラミド、グリクラジド、クロルプロパミド、トラザミド、アセトヘキサミド、グリクロピラミド、グリメピリド、グリピザイド、グリブゾール、レパグリニド、ナテグリニド、ミチグリニド若しくはそのカルシウム塩水和物等のインスリン分泌促進剤、プラムリンチド等のアミリンアゴニスト、バナジン酸等のホスホチロシンホスファターゼ阻害剤、シタグリプチン、ビルダグリプチン、アログリプチン等のＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、エクセナチド、リラグルチド等のＧＬＰ−１様作用物質、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、グルコース−６−ホスファターゼ阻害剤、グルカゴン拮抗剤又はＳＧＬＵＴ阻害剤が挙げられる。
【０１１３】
糖尿病性合併症治療薬としては、例えば、トルレスタット、エパルレスタット、ゼナレスタット、ゾポルレスタット、ミナルレスタット若しくはフィダレスタット等のアルドース還元酵素阻害剤、ＮＧＦ、ＮＴ−３若しくはＢＤＮＦ等の神経栄養因子、神経栄養因子産生・分泌促進剤、ＡＧＥ阻害剤、チオクト酸等の活性酸素消去剤又はチアプリド若しくはメキシレチン等の脳血管拡張剤が挙げられる。
【０１１４】
高脂血症治療薬としては、例えば、プラバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、アトルバスタチン、フルバスタチン、リパンチル、セリバスタチン若しくはイタバスタチン等のＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、ベザフィブラート、ベクロブラート、ビニフィブラート、シプロフィブラート、クリノフィブラート、クロフィブラート、クロフィブリン酸、エトフィブラート、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、ニコフィブラート、ピリフィブラート、ロニフィブラート、シムフィブラート若しくはテオフィブラート等のフィブラート系化合物、スクアレン合成酵素阻害剤、アバシマイブ若しくはエフルシマイブ等のＡＣＡＴ阻害剤、コレスチラミン等の陰イオン交換樹脂、プロブコール、ニコモール若しくはニセリトロール等のニコチン酸系薬剤又はイコサペント酸エチル、ソイステロール若しくはガンマオリザノール等の植物ステロールが挙げられる。
【０１１５】
降圧薬としては、例えば、カプトプリル、エナラプリル若しくはデラプリル等のアンジオテンシン変換酵素阻害剤、カンデサルタンシレキセチル、ロサルタン、エプロサルタン、バルサンタン、テルミサルタン、イルベサルタン若しくはタソサルタン等のアンジオテンシンＩＩ拮抗剤、マニジピン、ニフェジピン、ニカルジピン、アムロジピン若しくはエホニジピン等のカルシウム拮抗剤、レブクロマカリム等のカリウムチャンネル開口剤、クロニジン又はアリスキレンが挙げられる。
【０１１６】
抗肥満薬としては、例えば、デキスフェンフルラミン、フェンフルラミン、フェンテルミン、シブトラミン、アンフェプラモン、デキサンフェタミン、マジンドール、フェニルプロパノールアミン若しくはクロベンゾレックス等の中枢性抗肥満剤、オルリスタット等の膵リパーゼ阻害剤、レプチン若しくはＣＮＴＦ（毛様体神経栄養因子）等のペプチド性食欲抑制剤又はリンチトリプト等のコレシストキニンアゴニストが挙げられる。
【０１１７】
利尿薬としては、例えば、サリチル酸ナトリウムテオブロミン若しくはサリチル酸カルシウムテオブロミン等のキサンチン誘導体、エチアジド、シクロペンチアジド、トリクロルメチアジド、ヒドロクロロチアジド、ヒドロフルメチアジド、ベンチルヒドロクロロチアジド、ペンフルチジド、ポリチアジド若しくはメチクロチアジド等のチアジド系製剤、スピロノラクトン若しくはトリアムテレン等の抗アルドステロン製剤、アセタゾラミド等の炭酸脱水酵素阻害剤、クロルタリドン、メフルシド若しくはインダパミド等のクロルベンゼンスルホンアミド系製剤、アゾセミド、イソソルビド、エタクリン酸、ピレタニド、ブメタニド又はフロセミドが挙げられる。
【０１１８】
化学療法薬としては、例えば、サイクロフォスファミド若しくはイフォスファミド等のアルキル化剤、メソトレキセート若しくは５−フルオロウラシル等の代謝拮抗剤、マイトマイシン若しくはアドリアマイシン等の抗癌性抗生物質、ビンクリスチン、ビンデシン若しくはタキソール等の植物由来抗癌剤、シスプラチン、オキサロプラチン、カルボプラチン又はエトポキシド等が挙げられる。
【０１１９】
免疫療法薬としては、例えば、ムラミルジペプチド誘導体、ピシバニール、レンチナン、シゾフィラン、クレスチン、インターロイキン（ＩＬ）、顆粒球コロニー刺激因子又はエリスロポエチン等が挙げられる。
【０１２０】
抗血栓薬としては、例えば、ヘパリンナトリウム、ヘパリンカルシウム若しくはダルテパリンナトリウム等のヘパリン、ワルファリンカリウム等のワルファリン、アルガトロバン等の抗トロンビン剤、ウロキナーゼ、チソキナーゼ、アルテプラーゼ、ナテプラーゼ、モンテプラーゼ若しくはパミテプラーゼ等の血栓溶解剤、塩酸チクロピジン、シロスタゾール、イコサペント酸エチル若しくは塩酸サルポグレラート等の血小板凝集抑制剤が挙げられる。
【０１２１】
悪液質改善薬としては、例えば、メゲステロールアセテート等のプロゲステロン誘導体、デキサメサゾン等の糖質ステロイド、メトクロプラミド系薬剤、テトラヒドロカンナビノール系薬剤若しくはエイコサペンタエン酸等の脂肪代謝改善剤、成長ホルモン、ＩＧＦ−１又は悪液質を誘導する因子であるＴＮＦ−α、ＬＩＦ、ＩＬ−６若しくはオンコスタチンＭに対する抗体が挙げられる。
【実施例】
【０１２２】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製は、特に記述のない場合、「ＨＩ−ＦＬＡＳＨ」カラム（山善社）及びＰｕｒｉｆ−α２（昭光サイエンティフィックス社）を用いて行った。【０１２３】
（実施例１）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−プロピオンアミドシクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンズアルデヒドの合成：
−７８℃下、４−ブロモ−１−ヨード−２−（トリフルオロメトキシ）ベンゼン（２５ｇ、６８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．４０Ｌ）溶液に、ｎ−ブチルリチウムヘキサン溶液（１．６規定、８６ｍＬ、０．１４ｍｏｌ）を１．５時間かけて滴下した。−７８℃下で１時間撹拌した後、反応溶液に、ＤＭＦ（１１ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）を１０分間かけて滴下した。−７８℃下で２時間撹拌した後、反応溶液に、クエン酸水溶液（０．２５Ｍ、０．２５Ｌ、６３ｍｍｏｌ）を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンズアルデヒド（以下、参考例化合物１）を１６ｇ（８７％）得た。【０１２４】
〔ステップ２〕
（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）フェニル）メタノールの合成：
−１０℃下、参考例化合物１（１６ｇ、５９ｍｍｏｌ）のメタノール（０．２３Ｌ）溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（２．４ｇ、６３ｍｍｏｌ）を加えた。−１０℃下で１０分間撹拌した後、反応溶液に、アセトン（１０ｍＬ）、１規定塩酸（１０ｍＬ）を加えた。反応溶液を減圧濃縮し、得られた粗生成物に、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝５０：１→１：１）で精製し、（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）フェニル）メタノール（以下、参考例化合物２）を１５ｇ（９１％）得た。【０１２５】
〔ステップ３〕
４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル  メタンスルホナートの合成：
氷冷下、参考例化合物２（２．０ｇ、７．４ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１．２ｍＬ、８．９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液に、メタンスルホニルクロリド（０．９３ｇ、８．１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で３時間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル  メタンスルホナート（以下、参考例化合物３）を２．６ｇ（定量的）得た。【０１２６】
〔ステップ４〕
２−（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）イソインドリン−１，３−ジオンの合成：
氷冷下、参考例化合物３（２．６ｇ、７．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に、フタルイミドカリウム（２．１ｇ、１１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１４時間撹拌した後、反応溶液に、水を加えた。析出した固体をろ取し、水で洗浄し、乾燥し、２−（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）イソインドリン−１，３−ジオン（以下、参考例化合物４）を２．７ｇ（９１％）得た。【０１２７】
〔ステップ５〕
（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）フェニル）メタンアミンの合成：
室温下、参考例化合物４（２．６ｇ、６．５ｍｍｏｌ）のメタノール（４０ｍＬ）溶液に、ヒドラジン一水和物（０．９８ｇ、１９ｍｍｏｌ）を加えた。６０℃下で２時間撹拌した後、室温下で析出した固体をろ別した。ろ液を減圧濃縮し、得られた粗生成物を酢酸エチルに溶解させ、水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）フェニル）メタンアミン（以下、参考例化合物５）を１．５ｇ（８５％）得た。【０１２８】
〔ステップ６〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラートの合成：
室温下、参考例化合物５（０．５０ｇ、１．９ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−３−カルボン酸（０．４３ｇ、１．９ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．５３ｇ、４．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．７７ｇ、２．０ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１５時間撹拌した後、反応溶液に、酢酸エチルを加え、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝９：１→１：１）で精製し、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラート（以下、参考例化合物６）を０．８９ｇ（定量的）得た。【０１２９】
〔ステップ７〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラートの合成：
室温下、参考例化合物６（０．０５０ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）、シアン化亜鉛（０．０１２ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．０ｍＬ）溶液に、テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）（０．０３０ｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）を加えた。１５０℃下で３０分間撹拌した後、室温下で反応溶液に、水を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝２０：１→１：２）で精製し、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラート（以下、参考例化合物７）を０．０１７ｇ（３９％）得た。【０１３０】
〔ステップ８〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物７（６．９ｇ、１６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．１６Ｌ）溶液に、トリフルオロ酢酸（以下、ＴＦＡ）（３５ｍＬ、０．４５ｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をジクロロメタンに溶解させ、飽和炭酸ナトリウム水溶液で中和し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物８）を５．２ｇ（９８％）得た。【０１３１】
〔ステップ９〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボニル）シクロブチル）カルバマートの合成：
氷冷下、参考例化合物８（０．２０ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロブタンカルボン酸（０．１５ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．２４ｍＬ、１．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．７０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．２８ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で８６時間撹拌した後、反応溶液に、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学社製アミンシリカゲルＤＭ１０２０、溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝７：３→４：６）で精製し、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボニル）シクロブチル）カルバマート（以下、参考例化合物９）を０．２５ｇ（７８％）得た。【０１３２】
〔ステップ１０〕
（Ｒ）−１−（１−アミノシクロブタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物９（０．２５ｇ、０．４７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１．４ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（０．７０ｍＬ、９．１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で３時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をジクロロメタンに溶解させ、飽和炭酸ナトリウム水溶液で中和し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−１−（１−アミノシクロブタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物１０）を０．１８ｇ（９０％）得た。【０１３３】
〔ステップ１１〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−プロピオンアミドシクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物１０（７．６ｇ、１８ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（５．５ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５４ｍＬ）溶液に、プロピオニルクロリド（１．８ｇ、２０ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で１時間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９５：５）で精製し、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−プロピオンアミドシクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１）を６．２ｇ（７１％）得た。【０１３４】
（実施例２）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）カルバマートの合成：
氷冷下、参考例化合物８（３．５ｇ、１１ｍｍｏｌ）、２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−メチルプロパン酸（２．６ｇ、１３ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（４．１ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（４．９ｇ、１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学社製アミンシリカゲルＤＭ１０２０、溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝９：１→４：６）で精製し、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）カルバマート（以下、参考例化合物１１）を５．２ｇ（９５％）得た。【０１３５】
〔ステップ２〕
（Ｒ）−１−（２−アミノ−２−メチルプロパノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物１１（５．２ｇ、１０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．１０Ｌ）溶液に、ＴＦＡ（２５ｍＬ、０．３２ｍｏｌ）を加えた。室温下で１．５時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をジクロロメタンに溶解させ、飽和炭酸ナトリウム水溶液で中和し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−１−（２−アミノ−２−メチルプロパノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物１２）を３．４ｇ（８２％）得た。【０１３６】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物１２（２．３ｇ、５．６ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１．６ｍＬ、１１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液に、メタンスルホニルクロリド（０．９７ｇ、８．５ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で５分間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９５：５）で精製し、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２）を２．４ｇ（８７％）得た。【０１３７】
（実施例３）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（メチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボニル）シクロプロピル）カルバマートの合成：
氷冷下、参考例化合物８（０．６７ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロプロパンカルボン酸（０．４９ｇ、２．４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１．１ｍＬ、６．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５．０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（１．１ｇ、２．５ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学社製アミンシリカゲルＤＭ１０２０、溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝９：１→４：６）で精製し、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボニル）シクロプロピル）カルバマート（以下、参考例化合物１３）を０．９２ｇ（８８％）得た。【０１３８】
〔ステップ２〕
（Ｒ）−１−（１−アミノシクロプロパンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物１３（０．９２ｇ、１．８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（４．７ｍＬ、６１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１．５時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をジクロロメタンに溶解させ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で中和し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−１−（１−アミノシクロプロパンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物１４）を０．６３ｇ（８７％）得た。【０１３９】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（メチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物１４（０．６３ｇ、１．５ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１．１ｍＬ、７．７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５．０ｍＬ）溶液に、メタンスルホニルクロリド（０．２７ｇ、２．３ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で１．５時間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９５：５）で精製し、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（メチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３）を０．５６ｇ（７４％）得た。【０１４０】
（実施例４）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（トリフルオロメチル）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
１−（トリフルオロメチル）シクロプロパンカルボン酸（０．０５４ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（トリフルオロメチル）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物４）を０．０４４ｇ（５８％）得た。【０１４１】
（実施例５）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（メチルスルホンアミド）シクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物１０（０．０２０ｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を用いて実施例２〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（メチルスルホンアミド）シクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物５）を０．０１７ｇ（７１％）得た。【０１４２】
（実施例６）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−イソブチルアミドシクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
イソブチリルクロリド（０．００５５ｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−イソブチルアミドシクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物６）を０．０２２ｇ（９５％）得た。【０１４３】
（実施例７）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−ピバルアミドシクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
ピバロイルクロリド（０．００６３ｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−ピバルアミドシクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物７）を０．０１７ｇ（７２％）得た。【０１４４】
（実施例８）  （Ｒ）−１−（１−アセトアミドシクロペンタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボニル）シクロペンチル）カルバマートの合成：
１−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）シクロペンタンカルボン酸（０．０７８ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボニル）シクロペンチル）カルバマート（以下、参考例化合物１５）を０．１３ｇ（７７％）得た。【０１４５】
〔ステップ２〕
（Ｒ）−１−（１−アミノシクロペンタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物１５（０．１３ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１０〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−１−（１−アミノシクロペンタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物１６）を０．０５１ｇ（４９％）得た。【０１４６】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−１−（１−アセトアミドシクロペンタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物１６（０．０２０ｇ、０．０４６ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．０１９ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．２０ｍＬ）溶液に、無水酢酸（０．００７０ｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で１時間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９５：５）で精製し、（Ｒ）−１−（１−アセトアミドシクロペンタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物８）を０．０１４ｇ（６２％）得た。【０１４７】
（実施例９）  （Ｒ）−１−（１−アセトアミドシクロブタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物１０（０．０２０ｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を用いて実施例８〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−１−（１−アセトアミドシクロブタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物９）を０．０１３ｇ（６０％）得た。【０１４８】
（実施例１０）  （Ｒ）−Ｎ−（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンゾニトリルの合成：
氷冷下、２，２，２−トリフルオロエタノール（１．５ｇ、１５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液に、水素化ナトリウム（５５重量％、０．６７ｇ、１５ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で１０分間撹拌した後、室温下で３０分間撹拌した。氷冷下、反応溶液に、４−クロロ−２−フルオロベンゾニトリル（２．０ｇ、１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、氷冷下、反応溶液に、０．１規定塩酸を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝１０：０→３：１）で精製し、４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンゾニトリル（以下、参考例化合物１７）を２．６ｇ（８６％）得た。【０１４９】
〔ステップ２〕
（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル）メタンアミンの合成：
氷冷下、参考例化合物１７（２．５ｇ、１１ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（３０ｍＬ）溶液に、水素化アルミニウムリチウム（１．０ｇ、２７ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で４時間撹拌した後、氷冷下、反応溶液に、ＴＨＦ（２０ｍＬ）、水（１．０ｍＬ）、１規定水酸化ナトリウム水溶液（１．０ｍＬ）、水（３．０ｍＬ）を加えた。反応溶液をろ過後、ろ液を減圧濃縮し、（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル）メタンアミン（以下、参考例化合物１８）を２．４ｇ（９４％）得た。【０１５０】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラートの合成：
参考例化合物１８（２．４ｇ、１０ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ６〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラート（以下、参考例化合物１９）を４．５ｇ（定量的）得た。【０１５１】
〔ステップ４〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物１９（２．０ｇ、４．４ｍｍｏｌ）に、濃塩酸（１０ｍＬ、０．１２ｍｏｌ）を加えた。室温下で３時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えた。室温下で３０分間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物２０）を１．４ｇ（８７％）得た。【０１５２】
〔ステップ５〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−３−（（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）カルバマートの合成：
参考例化合物２０（０．６０ｇ、１．７ｍｍｏｌ）を用いて実施例２〔ステップ１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１−３−（（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−２−メチル−１−オキソプロパン−２−イル）カルバマート（以下、参考例化合物２１）を０．７７ｇ（８４％）得た。【０１５３】
〔ステップ６〕
（Ｒ）−１−（２−アミノ−２−メチルプロパノイル）−Ｎ−（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物２１（０．８３ｇ、１．５ｍｍｏｌ）に、ＴＦＡ（１０ｍＬ）を加えた。室温下で３時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）を加えた。室温下で３０分間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−１−（２−アミノ−２−メチルプロパノイル）−Ｎ−（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物２２）を０．６５ｇ（９６％）得た。【０１５４】
〔ステップ７〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物２２（０．０８０ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、ピリジン（０．０３０ｍＬ、０．３７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．０ｍＬ）溶液に、メタンスルホニルクロリド（０．０２３ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１０時間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を０．１規定塩酸、水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝１００：１→１０：１）で精製し、（Ｒ）−Ｎ−（４−クロロ−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１０）を０．０３０ｇ（３２％）得た。【０１５５】
（実施例１１）  （Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物８（０．２１ｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタン酸（０．２４ｇ、０．７２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．１４ｍＬ、０．７８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３．５ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．３０ｇ、０．７８ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝９：１→１：９）で精製し、粗生成物を０．３０ｇ得た。氷冷下、得られた粗生成物（０．３０ｇ）のＤＭＦ（２．０ｍＬ）溶液に、モルホリン（０．２０ｍＬ、２．３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で２．５時間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９０：１０）で精製し、（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物２３）を０．１８ｇ（２段階収率６５％）得た。【０１５６】
〔ステップ２〕
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物２３（０．０２０ｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を用いて実施例８〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１１）を０．０１８ｇ（８３％）得た。【０１５７】
（実施例１２）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−３−メチル−２−（メチルスルホンアミド）ブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物２３（０．０２０ｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）を用いて実施例２〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−３−メチル−２−（メチルスルホンアミド）ブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１２）を０．０２０ｇ（８３％）得た。【０１５８】
（実施例１３）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（エチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物１４（０．０５０ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．０４３ｍＬ、０．２４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３．０ｍＬ）溶液に、エタンスルホニルクロリド（０．０１７ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で３時間撹拌した後、ピリジン（０．３０ｍＬ、３．７ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で３時間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を０．１規定塩酸、水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝１００：１→１０：１）で精製し、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（エチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１３）を０．００８０ｇ（１３％）得た。【０１５９】
（実施例１４）  （Ｒ）−Ｎ−（４−カルバモイル−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、実施例化合物２（０．０２０ｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．００２８ｇ、０．０２０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．３８ｍＬ）溶液に、過酸化水素水（３０重量％、０．０２１ｍＬ）を加えた。室温下で１８時間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層をチオ硫酸ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→８５：１５）で精製し、（Ｒ）−Ｎ−（４−カルバモイル−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１４）を０．０１３ｇ（６３％）得た。【０１６０】
（実施例１５）  （Ｒ）−Ｎ−（４−カルバモイル−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
実施例化合物３（０．０２５ｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）を用いて実施例１４と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−カルバモイル−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（メチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１５）を０．０２０ｇ（７７％）得た。【０１６１】
（実施例１６）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
２−ヒドロキシ−２−メチルプロパン酸（０．１５ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−ヒドロキシ−２−メチルプロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１６）を０．１２ｇ（６２％）得た。【０１６２】
（実施例１７）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−ピバロイルピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物８（０．１５ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、ピバロイルクロリド（０．０６６ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−ピバロイルピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１７）を０．１９ｇ（定量的）得た。【０１６３】
（実施例１８）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
１−（メチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボン酸エチルの合成：
氷冷下、１−アミノシクロプロパンカルボン酸エチル塩酸塩（２．０ｇ、１２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（６．３ｍＬ、３６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３５ｍＬ）溶液に、メタンスルホニルクロリド（１．４ｇ、１２ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で３時間撹拌した後、反応溶液に、１規定塩酸を加え、酸性にした後、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１→１：２）で精製し、１−（メチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボン酸エチル（以下、参考例化合物２４）を２．３ｇ（６０％）得た。【０１６４】
〔ステップ２〕
１−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボン酸エチルの合成：
氷冷下、参考例化合物２４（２．０ｇ、９．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、水素化ナトリウム（５５重量％、０．５１ｇ、１２ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で１０分間撹拌した後、室温下で３０分間撹拌した。氷冷下、反応溶液に、ヨウ化メチル（０．７８ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１４時間撹拌した後、氷冷下、反応溶液に、０．１規定塩酸を加え、ヘキサン：酢酸エチル混合溶媒（ヘキサン：酢酸エチル＝１：２）で抽出した。有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１→１：１）で精製し、１−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボン酸エチル（以下、参考例化合物２５）を１．８ｇ（８４％）得た。【０１６５】
〔ステップ３〕
１−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボン酸の合成：
室温下で、参考例化合物２５（１．８ｇ、７．９ｍｍｏｌ）のメタノール（２０ｍＬ）溶液に、１規定水酸化ナトリウム水溶液（１２ｍＬ、１２ｍｍｏｌ）を加えた。５０℃下で３時間撹拌した後、室温下、反応溶液に、１規定塩酸を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、１−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボン酸（以下、参考例化合物２６）を０．８８ｇ（５８％）得た。【０１６６】
〔ステップ４〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物２６（０．１３ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１８）を０．１７ｇ（６０％）得た。【０１６７】
（実施例１９）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（３−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
室温下、３−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロパン酸メチル（１．０ｇ、７．６ｍｍｏｌ）のメタノール（７．５ｍＬ）溶液に、１規定水酸化ナトリウム水溶液（９．１ｍＬ）を加えた。室温下で４時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物に、１規定塩酸を加え、減圧濃縮した。氷冷下、得られた粗生成物（０．１０ｇ）、ＤＩＰＥＡ（０．３０ｍＬ、１．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．６ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．３５ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で１５分間撹拌した後、反応溶液に、参考例化合物８（０．２８ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で一晩撹拌した後、反応溶液に、水を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝８：２→酢酸エチルのみ）で精製し、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（３−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物１９）を０．２４ｇ（２段階収率６５％）得た。【０１６８】
（実施例２０）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、シクロヘキサノン（３．０ｇ、３１ｍｍｏｌ）、シアン化カリウム（２．２ｇ、３４ｍｍｏｌ）の水（５．６ｍＬ）溶液に、硫酸水溶液（４０重量％、５．６ｍＬ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物に、濃塩酸（６０ｍＬ）を加えた。８０℃下で１６時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮し、粗生成物を４．０ｇ得た。氷冷下、得られた粗生成物（０．１６ｇ）、参考例化合物８（０．１５ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．２４ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．４５ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で２時間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学社製アミンシリカゲルＤＭ１０２０、溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝７：３→４：６）で精製し、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２０）を０．０６１ｇ（２段階収率２９％）得た。【０１６９】
（実施例２１）  （Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミドブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸の合成：
氷冷下、（Ｒ）−２−アミノブタン酸（２．０ｇ、１９ｍｍｏｌ）、炭酸水素ナトリウム（１．６ｇ、１９ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン：水（１，４−ジオキサン：水＝３：１０、２６ｍＬ）混合溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナート（４．７ｇ、２１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１２０時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をクロロホルムに溶解させ、１規定塩酸を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸（以下、参考例化合物２７）を２．０ｇ（定量的）得た。【０１７０】
〔ステップ２〕
ｔｅｒｔ−ブチル  （（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−１−オキソブタン−２−イル）カルバマートの合成：
参考例化合物２７（０．２０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、ｔｅｒｔ−ブチル  （（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−１−オキソブタン−２−イル）カルバマート（以下、参考例化合物２８）を０．４７ｇ（定量的）得た。【０１７１】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物２８（０．４７ｇ、０．９１ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１０〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物２９）を０．３８ｇ（定量的）得た。【０１７２】
〔ステップ４〕
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミドブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物２９（０．０９１ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を用いて実施例８〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミドブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２１）を０．０８５ｇ（８５％）得た。【０１７３】
（実施例２２）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−（メチルスルホンアミド）ブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物２９（０．０９６ｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を用いて実施例２〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−（メチルスルホンアミド）ブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２２）を０．０９０ｇ（７９％）得た。【０１７４】
（実施例２３）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−シアノシクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
１−シアノシクロプロパンカルボン酸（０．０３４ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−シアノシクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２３）を０．０８１ｇ（６３％）得た。【０１７５】
（実施例２４）  （Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミドプロパノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノプロパノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
室温下、参考例化合物８（０．３５ｇ、１．１ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパン酸（０．３７ｇ、１．２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．５６ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．５３ｇ、１．４ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で３０分間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学社製アミンシリカゲルＤＭ１０２０、溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝９：１→１：９）で精製し、粗生成物を０．５３ｇ得た。室温下、得られた粗生成物（０．５３ｇ）のＤＭＦ（４．０ｍＬ）溶液に、モルホリン（０．３６ｍＬ、４．１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で６時間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学社製アミンシリカゲルＤＭ１０２０、溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９５：５）で精製し、（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノプロパノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物３０）を０．２９ｇ（２段階収率６７％）得た。【０１７６】
〔ステップ２〕
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミドプロパノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物３０（０．１０ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．１１ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１．０ｍＬ）溶液に、無水酢酸（０．０３２ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で５分間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９０：１０）で精製し、（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミドプロパノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２４）を０．１１ｇ（定量的）得た。【０１７７】
（実施例２５）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物３０（０．１０ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）を用いて実施例２〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−（メチルスルホンアミド）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２５）を０．０９９ｇ（８３％）得た。【０１７８】
（実施例２６）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−イソブチルアミドシクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物１４（０．０２０ｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）、イソブチリルクロリド（０．００６２ｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−イソブチルアミドシクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２６）を０．０１７ｇ（７１％）得た。【０１７９】
（実施例２７）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−ピバルアミドシクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物１４（０．０２０ｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）、ピバロイルクロリド（０．００６４ｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−ピバルアミドシクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２７）を０．０１８ｇ（７３％）得た。【０１８０】
（実施例２８）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（４−（メチルスルホンアミド）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
８−オキサ−１，３−ジアザスピロ［４．５］デカン−２，４−ジオンの合成：
室温下、ジヒドロ−２Ｈ−ピラン４（３Ｈ）−オン（２．０ｇ、２０ｍｍｏｌ）、炭酸アンモニウム（９．６ｇ、０．１０ｍｏｌ）、ＴＥＡ（２．８ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の水：メタノール（水：メタノール＝１：１、６０ｍＬ）混合溶液に、シアン化カリウム（３．９ｇ、６０ｍｍｏｌ）を加えた。加熱環流下で４８時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮し、溶媒を半分程度留去し、析出した固体をろ取し、水で洗浄後、乾燥し、８−オキサ−１，３−ジアザスピロ［４．５］デカン−２，４−ジオン（以下、参考例化合物３１）を１．４ｇ（４１％）得た。また、ろ液に、酸性になるまで濃塩酸を加え、析出した固体をろ取し、水で洗浄後、乾燥し、参考例化合物３１を０．８０ｇ（２４％）得た。【０１８１】
〔ステップ２〕
４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸の合成：
室温下、参考例化合物３１（２．２ｇ、１３ｍｍｏｌ）の水（３０ｍＬ）溶液に水酸化カルシウム（３．０ｇ、４１ｍｍｏｌ）を加えた。加熱環流下で４８時間撹拌した後、反応溶液をセライトろ過し、ろ物を熱湯で洗浄した。ろ液を減圧濃縮し、得られた粗生成物を水：１，４−ジオキサン：メタノール（水：１，４−ジオキサン：メタノール＝１０：１０：３、２３ｍＬ）混合溶液に溶解させた。室温下、反応溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナート（３．４ｇ、１６ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム（０．５０ｇ、１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１５時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物に、希塩酸（１５ｍＬ）を加え、クロロホルム：メタノール（クロロホルム：メタノール＝１０：１）混合溶液で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボン酸（以下、参考例化合物３２）を２．６ｇ（８２％）得た。【０１８２】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （４−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）カルバマートの合成：
参考例化合物３２（０．０８２ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （４−（３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボニル）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）カルバマート（以下、参考例化合物３３）を０．１０ｇ（６２％）得た。【０１８３】
〔ステップ４〕
（Ｒ）−１−（４−アミノテトラヒドロ−２Ｈ−ピランカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物３３（０．１０ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１０〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−１−（４−アミノテトラヒドロ−２Ｈ−ピランカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物３４）を０．０５０ｇ（５８％）得た。【０１８４】
〔ステップ５〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（４−（メチルスルホンアミド）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物３４（０．０４０ｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）を用いて実施例２〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（４−（メチルスルホンアミド）テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−カルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２８）を０．０２４ｇ（５．１％）得た。【０１８５】
（実施例２９）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（シクロプロパンカルボキサミド）シクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
シクロプロパンカルボニルクロリド（０．００５９ｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（シクロプロパンカルボキサミド）シクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物２９）を０．０１２ｇ（５２％）得た。【０１８６】
（実施例３０）  （Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−ヒドロキシプロパン酸メチルの合成：
氷冷下、（Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシプロパン酸メチル（３．０ｇ、１９ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（８．１ｍＬ、５８ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍＬ）溶液に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナート（４．６ｇ、２１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１４時間撹拌した後、反応溶液に、希塩酸を加えた。室温下で１時間環撹拌した後、反応溶液に、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝２０：１→２：１）で精製し、（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−ヒドロキシプロパン酸メチル（以下、参考例化合物３５）を４．１ｇ（９７％）得た。【０１８７】
〔ステップ２〕
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１，３−ジヒドロキシ−３−メチルブタン−２−イル）カルバメートの合成：
−７８℃下、参考例化合物３５（４．０ｇ、１８ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（０．１２Ｌ）溶液に、メチルマグネシウムブロミドジエチルエーテル溶液（３規定、３０ｍＬ、９１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液に、氷冷下、飽和塩化アンモニウム水溶液、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を０．１規定希塩酸、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１→３：１）で精製し、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル  （１，３−ジヒドロキシ−３−メチルブタン−２−イル）カルバメート（以下、参考例化合物３６）を２．８ｇ（８４％）得た。【０１８８】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−ヒドロキシ−３−メチルブタン酸の合成：
３５℃下、参考例化合物３６（２．８ｇ、１３ｍｍｏｌ）、２，２，６，６，−テトラメチルピペリジン  １−オキシル（０．４０ｇ、２．６ｍｍｏｌ）、標準中性リン酸緩衝液（４５ｍＬ）のアセトニトリル（５０ｍＬ）溶液に、次亜塩素酸ナトリウム（０．８ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）の水（５．０ｍＬ）溶液、亜塩素酸（２．４ｇ、２７ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）溶液を、同時に別々にゆっくり加えた。３５℃下で３時間撹拌した後、反応溶液に、酢酸（１．０ｍＬ）を加えた。３５℃下で３時間撹拌した後、反応溶液に、水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に溶解させ、酢酸エチルで洗浄した。水層に、３規定塩酸を加え、酸性にし、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−ヒドロキシ−３−メチルブタン酸（以下、参考例化合物３７）を２．５ｇ（８４％）得た。【０１８９】
〔ステップ４〕
ｔｅｒｔ−ブチル  （（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバマートの合成：
室温下、参考例化合物８（０．３０ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）、参考例化合物３７（０．２４ｇ、１．０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．３５ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．４２ｇ、１．１ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液に、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学社製アミンシリカゲルＤＭ１０２０、溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝７：３→４：６）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル  （（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバマート（以下、参考例化合物３８）を０．４４ｇ（８９％）得た。【０１９０】
〔ステップ５〕
（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物３８（０．４４ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（８．０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１．８ｍＬ、２３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で２時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をジクロロメタンに溶解させ、飽和炭酸ナトリウム水溶液で中和し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物３９）を０．２０ｇ（５８％）得た。【０１９１】
〔ステップ６〕
（（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物３９（０．０４０ｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．０３５ｍＬ、０．２０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．３０ｍＬ）溶液に、無水酢酸（０．０１０ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で１０分間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９５：５）で精製し、（（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３０）を０．０２９ｇ（６６％）得た。【０１９２】
（実施例３１）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−２−プロピオンアミドブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物３９（０．００８３ｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−２−プロピオンアミドブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３１）を０．００６５ｇ（７０％）得た。【０１９３】
（実施例３２）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−２−（メチルスルホンアミド）ブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物３９（０．０４０ｇ、０．０９０ｍｍｏｌ）を用いて実施例２〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−２−（メチルスルホンアミド）ブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３２）を０．０３８ｇ（８１％）得た。【０１９４】
（実施例３３）  （Ｒ）−１−（１−ブチルアミドシクロブタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
ブチリルクロリド（０．００６０ｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−１−（１−ブチルアミドシクロブタンカルボニル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３３）を０．０１８ｇ（７９％）得た。【０１９５】
（実施例３４）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（２−シクロプロピルアセトアミド）シクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物１０（０．０２１ｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）、２−シクロプロピル酢酸（０．００５９ｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（２−シクロプロピルアセトアミド）シクロブタンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３４）を０．００６５ｇ（２６％）得た。【０１９６】
（実施例３５）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（２−シクロプロピルアセトアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物１４（０．０２０ｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）、２−シクロプロピル酢酸（０．００５９ｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（１−（２−シクロプロピルアセトアミド）シクロプロパンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３５）を０．００８３ｇ（３５％）得た。【０１９７】
（実施例３６）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
２−メチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパン酸エチルの合成：
室温下、２−ブロモ−２−メチルプロパン酸エチル（１．０ｇ、５．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２５ｍＬ）溶液に、炭酸セシウム（５．０ｇ、１５ｍｍｏｌ）、１，２，４−トリアゾール−１−イドナトリウム（０．５８ｇ、６．２ｍｍｏｌ）を加えた。５０℃下で２４時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物に、水を加え、クロロホルムで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝７：３→４：６）で精製し、２−メチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパン酸エチル（以下、参考例化合物４０）を０．８４ｇ（８９％）得た。【０１９８】
〔ステップ２〕
２−メチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパン酸ナトリウムの合成：
氷冷下、参考例化合物４０（０．６５ｇ、３．６ｍｍｏｌ）のエタノール（１８ｍＬ）溶液に、１規定水酸化ナトリウム水溶液（３．９ｍＬ、３．９ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮し、２−メチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパン酸ナトリウム（以下、参考例化合物４１）を０．６７ｇ（定量的）得た。【０１９９】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物４１（０．０９０ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ６〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−３（以下、実施例化合物３６）を０．１２ｇ（５４％）得た。【０２００】
（実施例３７）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
２−メチル−２−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン酸エチルの合成：
１Ｈ−ピラゾール（０．４２ｇ、６．２ｍｍｏｌ）を用いて実施例３６〔ステップ１〕と同様の反応を行うことにより、２−メチル−２−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン酸エチル（以下、参考例化合物４２）を０．８１ｇ（８７％）得た。【０２０１】
〔ステップ２〕
２−メチル−２−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン酸ナトリウムの合成：
参考例化合物４２（０．８１ｇ、４．５ｍｍｏｌ）を用いて実施例３６〔ステップ２〕と同様の反応を行うことにより、２−メチル−２−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパン酸ナトリウム（以下、参考例化合物４３）を０．８０ｇ得た。【０２０２】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物４３（０．０９０ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（２−メチル−２−（１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３７）を０．１６ｇ（６８％）得た。【０２０３】
（実施例３８）  （Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−（１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２，４−ジクロロベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラートの合成：
２，４−ジクロロベンジルアミン（１．５ｇ、８．５ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ６〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（２，４−ジクロロベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラート（以下、参考例化合物４４）を２．６ｇ（定量的）得た。【０２０４】
〔ステップ２〕
（Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物４４（２．６ｇ、６．７ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ８〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物４５）を１．８ｇ（９５％）得た。【０２０５】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−（１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物４５（０．１０ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を用いて実施例２０と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−（１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボニル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３８）を０．０３０ｇ（２４％）得た。【０２０６】
（実施例３９）  （（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
ｔｅｒｔ−ブチル  （（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（２，４−ジクロロベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバマートの合成：
氷冷下、参考例化合物３７（０．０８９ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）、参考例化合物４５（０．１０ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．２０ｍＬ、１．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．７０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．１６ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液に、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝７：３→４：６）で精製し、ｔｅｒｔ−ブチル  （（Ｒ）−１−（（Ｒ）−３−（２，４−ジクロロベンジル）カルバモイル）ピペリジン−１−イル）−３−ヒドロキシ−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバマート（以下、参考例化合物４６）を０．１５ｇ（８２％）得た。【０２０７】
〔ステップ２〕
氷冷下、参考例化合物４６（０．７０ｇ、１．７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（１．０ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で２．５時間撹拌した後、反応溶液に、ＴＦＡ（１．０ｍＬ、１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液を減圧濃縮した。得られた粗生成物をジクロロメタンに溶解させ、飽和炭酸ナトリウム水溶液で中和し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物４７）を０．４７ｇ（８４％）得た。【０２０８】
〔ステップ３〕
（（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物４７（０．０２０ｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．０１４ｍＬ、０．０９９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．１５ｍＬ）溶液に、無水酢酸（０．００５６ｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）を加えた。氷冷下で１０分間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離液；クロロホルム：メタノール＝９９：１→９５：５）で精製し、（（Ｒ）−１−（（Ｒ）−２−アセトアミド−３−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物３９）を０．０２１ｇ（９６％）得た。【０２０９】
（実施例４０）  （Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−２−プロピオンアミドブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物４７（０．０２０ｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ１１〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−２−プロピオンアミドブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物４０）を０．０１８ｇ（７７％）得た。【０２１０】
（実施例４１）  （Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−２−（メチルスルホンアミド）ブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
参考例化合物４７（０．０２０ｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）を用いて実施例２〔ステップ３〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（２，４−ジクロロベンジル）−１−（（Ｒ）−３−ヒドロキシ−３−メチル−２−（メチルスルホンアミド）ブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物４１）を０．０２０ｇ（８５％）得た。【０２１１】
（実施例４２）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−ヒドロキシプロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成： 
（Ｒ）−２−ヒドロキシプロパン酸ナトリウム（０．０１９ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−ヒドロキシプロパノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物４２）を０．０４５ｇ（７４％）得た。【０２１２】
（実施例４３）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−ヒドロキシブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成： 
（Ｒ）−２−ヒドロキシブタン酸（０．０１７ｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−ヒドロキシブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物４３）を０．０５６ｇ（８９％）得た。【０２１３】
（実施例４４）  （Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成： 
（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−メチルブタン酸（０．０１８ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を用いて実施例１〔ステップ９〕と同様の反応を行うことにより、（Ｒ）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−１−（（Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−メチルブタノイル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、実施例化合物４４）を０．０４２ｇ（６４％）得た。【０２１４】
（比較例１）  （Ｒ）−１−（１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボニル）−Ｎ−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
〔ステップ１〕
（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラートの合成：
氷冷下、（Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−３−カルボン酸（２０ｇ、８７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１．０Ｌ）溶液に、ＤＭＦ（０．６８ｍＬ、８．７ｍｍｏｌ）、オキサリルクロリド（８．０ｍＬ、９２ｍｍｏｌ）を内温が５℃を超えないように加えた。氷冷下で３０分間撹拌した後、−２５℃下、反応溶液に、２−アミノ−５−（トリフルオロメチル）ピリジン（１５ｇ、９２ｍｍｏｌ）、ピリジン（１５ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（０．１０Ｌ）溶液を内温が−２０℃を超えないように加えた。氷冷下で３時間撹拌した後、反応溶液に、飽和塩化ナトリウム水溶液を内温が５℃を超えないように加え、ジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物に、ヘキサンを加えた。析出した固体をろ取し、ろ液を減圧濃縮した。同様の精製操作を２回繰り返した。得られた固体を合わせ、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル  ３−（（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）カルバモイル）ピペリジン−１−カルボキシラート（以下、参考例化合物４８）を２６ｇ（８０％）得た。【０２１５】
〔ステップ２〕
（Ｒ）−Ｎ−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物４８（１．５ｇ、４．０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）溶液に、ＴＦＡ（２．２ｍＬ、２８ｍｍｏｌ）を加えて、室温下撹拌した。２時間後、反応溶液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水を加えて、ジクロロメタンで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、（Ｒ）−Ｎ−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、参考例化合物４９）を０．９５ｇ（８７％）得た。【０２１６】
〔ステップ３〕
（Ｒ）−１−（１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボニル）−Ｎ−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
氷冷下、参考例化合物４９（０．１３ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボン酸（０．０７９ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．２４ｍＬ、１．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（０．２３ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１時間撹拌した後、反応溶液に、水、１規定塩酸を加え、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア化学社製アミンシリカゲルＤＭ１０２０、溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝９：１→３：７）で精製し、（Ｒ）−１−（１−ヒドロキシシクロヘキサンカルボニル）−Ｎ−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、比較例化合物１）を０．０５８ｇ（３２％）得た。【０２１７】
（比較例２）  （Ｒ）−１−（２−アセトアミドアセチル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミドの合成：
室温下、参考例化合物８（０．１０ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、Ｎ−アセチルグリシン（０．０３６ｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．１６ｍＬ、０．９２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液にＨＡＴＵ（０．１４ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を加えた。室温下で１４時間撹拌した後、氷冷下、反応溶液に、１規定希塩酸を加え、ヘキサン：酢酸エチル（ヘキサン：酢酸エチル＝１：２）混合溶媒で抽出した。有機層を水、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮した。得られた粗生成物をジエチルエーテル（１．０ｍＬ）に溶解させ、ヘキサン（４．０ｍＬ）を加えた。析出したゲル状物質をろ取し、（Ｒ）−１−（２−アセトアミドアセチル）−Ｎ−（４−シアノ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）ピペリジン−３−カルボキサミド（以下、比較例化合物２）を０．０４０ｇ（３１％）得た。【０２１８】
表１−１〜表１−６には、実施例化合物１〜４４の物性データを示し、表２には、比較例化合物１〜２の物性データを示し、表３−１〜表３−５には、参考例化合物１〜４９の物性データを示した。なお、表中のＮ．Ｄ．は「データなし」を表す。【０２１９】
１Ｈ−ＮＭＲデータにおいて、プロトン積分値が整数でないものは、回転異性体の存在などによるものである。【０２２０】
１Ｈ−ＮＭＲデータ中の溶媒名は、測定に使用した溶媒を示している。また、４００  ＭＨｚＮＭＲスペクトルは、ＪＮＭ−ＡＬ４００型核磁気共鳴装置（日本電子社）を用いて測定した。ケミカルシフトは、テトラメチルシランを基準としてδ（単位：ｐｐｍ）で表し、シグナルはそれぞれｓ（一重線）、ｄ（二重線）、ｔ（三重線）、ｑ（四重線）、ｍ（多重線）、ｂｒｓ（幅広）、ｄｄ（二重二重線）、ｄｔ（二重三重線）、ｄｄｄ（二重二重二重線）、ｄｑ（二重四重線）、ｔｄ（三重二重線）又はｔｔ（三重三重線）で表した。溶媒は全て市販のものを用いた。ＥＳＩ−ＭＳスペクトルは、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  １２００  Ｓｅｒｉｅｓ、Ｇ６１３０Ａ（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を用いて測定した。【０２２１】
【表１−１】
2013147161.tif 000010
【０２２２】
【表１−２】
2013147161.tif 000011
【０２２３】
【表１−３】
2013147161.tif 000012
【０２２４】
【表１−４】
2013147161.tif 000013
【０２２５】
【表１−５】
2013147161.tif 000014
【０２２６】
【表１−６】
2013147161.tif 000015
【０２２７】
【表２】
2013147161.tif 000016
【０２２８】
【表３−１】
2013147161.tif 000017
【０２２９】
【表３−２】
2013147161.tif 000018
【０２３０】
【表３−３】
2013147161.tif 000019
【０２３１】
【表３−４】
2013147161.tif 000020
【０２３２】
【表３−５】
2013147161.tif 000021
【０２３３】
（実施例４５）  Ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるｓＥＨ阻害活性の評価試験：
公知文献（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２００５年、第３４３巻、ｐ．６６−７５）記載の方法に基づき、ヒトｓＥＨを用いて、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩のｓＥＨ阻害活性を評価した。【０２３４】
リコンビナント・ヒトｓＥＨ（最終濃度０．０２６μg／ｍＬ；Ｃａｙｍａｎ社）を、被験化合物とともに、０．１ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡを含む２５ｍＭ  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．０）中にて室温で３０分間インキュベートした。その後、蛍光基質としてシアノ（６−メトキシナフタレン−２−イル）メチル  ２−（３−フェニルオキシラン−２−イル）アセタート（最終濃度６．２５μｍｏｌ／Ｌ；Ｃａｙｍａｎ社）を加え、さらに室温で２０分間インキュベートし、ＺｎＳＯ４（最終濃度０．２ｍｏｌ／Ｌ）を加え反応を停止させ、蛍光強度（Ｆｕｓｉｏｎα（パッカード社）；Ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ：３３０ｎｍ、Ｅｍｉｓｓｉｏｎ：４８５ｎｍ）を測定した。【０２３５】
ｓＥＨ非添加かつ被験化合物非添加の蛍光強度を０％ｓＥＨ酵素反応率とし、ｓＥＨ添加かつ被験化合物非添加の蛍光強度を１００％ｓＥＨ酵素反応率として、得られた蛍光強度から、各被験化合物の各ｓＥＨ酵素反応率を算出し、ＩＣ５０を求めた。その結果を表４に示す。【０２３６】
【表４】
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【０２３７】
その結果、実施例化合物１〜４４は、比較例化合物１及び２と比較して、ヒトｓＥＨの酵素反応に対して非常に強い阻害活性を示した。【０２３８】
したがって、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩が、ヒトｓＥＨの酵素反応に対して非常に強い阻害活性を示すことが明らかとなった。【０２３９】
（実施例４６）  ラット抗ＧＢＭ抗血清投与腎炎モデルでのｓＥＨ発現検討試験：
ラット抗ＧＢＭ抗血清投与腎炎モデル（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ、２００５年、第１０２巻、ｐ．７７３６−７７４１；Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２００２年、第４４９巻、ｐ．１６７−１７６）の腎臓を用い、ｓＥＨの糸球体腎炎及び腎不全である慢性腎臓病における発現を検討した。【０２４０】
ラット（Ｗｉｓｔａｒ−Ｋｙｏｔｏ系、雄性、９週齢；日本チャールス・リバー株式会社）の尾静脈内に、文献記載の方法（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ、２００５年、第１０２巻、ｐ．７７３６−７７４１；Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２００２年、第４４９巻、ｐ．１６７−１７６）にて作成したウサギのラット抗ＧＢＭ抗血清を投与して、糸球体腎炎を誘発させたラットを「腎炎誘発ラット」とした。一方で、抗ＧＢＭ抗血清を投与しないラットを、「正常ラット」とした。【０２４１】
抗ＧＢＭ抗血清投与の７週間後に、正常ラット及び腎炎誘発ラットを麻酔下で安楽死させた後、腎臓を摘出しホルマリン液に浸漬し保存した。ホルマリン液で固定した腎臓をパラフィンに包埋後、切片を作製し、抗ｓＥＨ抗体（ウサギ由来、Ｃａｙｍａｎ社）を用いて免疫染色組織標本を作製し、ｓＥＨ発現を検討した。【０２４２】
腎炎誘発ラットの腎臓では病変部位でｓＥＨの発現が認められた。一方、正常ラットの腎臓ではｓＥＨの発現はほとんど認められなかった。したがって、ｓＥＨの発現は、糸球体腎炎及び腎不全である慢性腎臓病の腎臓の病変部位で亢進することが示された。【０２４３】
（実施例４７）  ラット抗ＧＢＭ抗血清投与腎炎モデルでの薬効評価試験：
ラット抗ＧＢＭ抗血清投与腎炎モデル（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ、２００５年、第１０２巻、ｐ．７７３６−７７４１；Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２００２年、第４４９巻、ｐ．１６７−１７６）に実施例化合物１又は２を投与し、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩の糸球体腎炎及び腎不全である慢性腎臓病に対する治療効果を評価した。【０２４４】
１）実施例化合物１のラット抗ＧＢＭ抗血清投与腎炎モデルに対する効果：
ラット（Ｗｉｓｔａｒ−Ｋｙｏｔｏ系、雄性、８週齢；日本チャールス・リバー株式会社）の尾静脈内に、文献記載の方法（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ、２００５年、第１０２巻、ｐ．７７３６−７７４１；Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２００２年、第４４９巻、ｐ．１６７−１７６）にて作成したウサギの抗ＧＢＭ抗血清を投与して、腎炎を誘発させた群を「腎炎誘発群」とした。一方で、抗ＧＢＭ抗血清を投与しない群を、「正常群」とした。【０２４５】
抗ＧＢＭ抗血清投与の２週間後に、ラットの尾静脈又は頚静脈から採血し、ｓＣｒｅ値を測定した。ｓＣｒｅ値は酵素法を用いて測定した。また、抗ＧＢＭ抗血清投与の２週間後に、一部のラットを麻酔下で安楽死させた後、腎臓を摘出しホルマリン液に浸漬し保存した。ホルマリン液で固定した腎臓をパラフィンに包埋後、切片を作製し、病理組織標本（ＨＥ及びＰＡＳ染色）を作製し、病理組織学的検査を実施した。【０２４６】
腎炎誘発群における抗ＧＢＭ抗血清投与の２週間後のｓＣｒｅ値（平均値±標準誤差、ｎ＝１２）は０．４７±０．０１ｍｇ／ｄＬであった。正常群におけるｓＣｒｅ値（０．２７±０．０１ｍｇ／ｄＬ（平均値±標準誤差、ｎ＝３））に比べて、統計学的に有意に上昇していた（ｔ検定、ｐ＜０．０５）。また、腎炎誘発群における抗ＧＢＭ抗血清投与の２週間後の腎臓の病理組織学的検査では、軽度〜中等度の糸球体硬化、軽度の髄質外層の蛋白円柱、軽度の尿細管拡張、軽度の好塩基性尿細管及び軽度の間質の単核細胞浸潤がみられた（表５）。すなわち、腎炎誘発群では、抗ＧＢＭ抗血清投与の２週間後に糸球体腎炎及び腎不全の病態を呈していることが示された。【０２４７】
【表５】
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【０２４８】
糸球体腎炎及び腎不全の病態を呈した腎炎誘発群のラットに、抗ＧＢＭ抗血清投与の２週間後から実験終了時まで、実施例化合物１を０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁して、３ｍｇ／ｋｇの投与量で、１日１回経口投与した。この群を、「実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群」とした。また、比較対照として、腎炎誘発群のラットに、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した群を、「腎炎対照群」とした。なお、正常群にも０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した。また、抗ＧＢＭ抗血清投与の２及び３週間後に、上記と同じ方法で、ｓＣｒｅ値を測定した。また、抗ＧＢＭ抗血清投与の５週間後に、血清Ｃｙｓ−Ｃ値を測定した。血清Ｃｙｓ−Ｃ値は抗原抗体反応を用いて測定した。また、抗ＧＢＭ抗血清投与の５週間後に、ラットを麻酔下で安楽死させた後、腎臓を摘出しホルマリン液に浸漬し保存した。ホルマリン液で固定した腎臓をパラフィンに包埋後、切片を作製し、病理組織標本（ＨＥ及びＰＡＳ染色）を作製し、病理組織学的検査を実施した。【０２４９】
抗ＧＢＭ抗血清投与の２及び３週間後のｓＣｒｅ値の測定結果を、図１に示す。図の横軸は、抗ＧＢＭ抗血清投与後の週数を示し、縦軸はｓＣｒｅ値（平均値±標準誤差、ｎ＝６）を示す。図中の＊印は、腎炎対照群との比較で、統計学的に有意であることを示す（ｔ検定、ｐ＜０．０５）。また、抗ＧＢＭ抗血清投与の５週間後の腎臓の病理組織学的検査を行い、各個体３０〜４０個の糸球体の傷害領域を病変面積の割合（％）により４段階にスコア化（病変面積スコア；１＋：２５％未満、２＋：２５％以上５０％未満、３＋：５０％以上７５％未満、４＋：７５％以上）した結果を、図２に示す。各個体につき、ひとつの棒グラフで病変面積スコアの分布を示しており、図の縦軸は、各個体の病変面積スコアの割合を示す。【０２５０】
腎炎対照群における、抗ＧＢＭ抗血清投与の２及び３週間後のｓＣｒｅ値は、抗ＧＢＭ抗血清投与の２週間後から持続的に高値を示した。したがって、腎炎対照群は、慢性の糸球体腎炎及び腎不全の病態を呈していることが示された。【０２５１】
また、抗ＧＢＭ抗血清投与の３週間後の、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群におけるｓＣｒｅ値は、腎炎対照群におけるｓＣｒｅ値に比べて、統計学的に有意に低値を示した（図１）。したがって、実施例化合物１は、慢性の糸球体腎炎及び腎不全の病態に対して治療効果を有することが示された。また、実施例化合物１は、ｓＣｒｅ値増加を認める腎不全である慢性腎臓病の病態に対して治療効果を有することが示された。【０２５２】
腎炎対照群における、抗ＧＢＭ抗血清投与の５週間後の血清Ｃｙｓ−Ｃ値（平均値±標準誤差、ｎ＝５）は、０．９４±０．１４ｍｇ／Ｌであり、正常群における血清Ｃｙｓ−Ｃ値（０．２５±０．０２ｍｇ／Ｌ（平均値±標準誤差、ｎ＝３））に比べて、統計学的に有意に上昇していた（ｔ検定、ｐ＜０．０５）。一方、抗ＧＢＭ抗血清投与の５週間後の、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群における血清Ｃｙｓ−Ｃ値（平均値±標準誤差、ｎ＝６）は０．６３±０．０８ｍｇ／Ｌであり、腎炎対照群における血清Ｃｙｓ−Ｃ値に比べて、低値を示した。したがって、実施例化合物１は、慢性の糸球体腎炎及び腎不全の病態に対して治療効果を有することが示された。また、実施例化合物１は、血清Ｃｙｓ−Ｃ値増加を認める慢性腎臓病の病態に対して治療効果を有することが示された。【０２５３】
腎炎対照群における、抗ＧＢＭ抗血清投与の５週間後の腎臓の病理組織学的検査では、中等度〜重度の糸球体硬化、中等度〜重度の髄質外層の蛋白円柱、中等度の尿細管拡張、軽度〜中等度の好塩基性尿細管及び軽度の間質の単核細胞浸潤がみられた。一方、抗ＧＢＭ抗血清投与の５週間後の、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群における腎臓の病理組織学的検査では、これらの傷害性変化の程度及び頻度の減少がみられた（表５）。また、各個体の糸球体の傷害領域をスコア化した結果、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群では、糸球体傷害の抑制が示された（図２）。したがって、実施例化合物１は、慢性の糸球体腎炎及び腎不全の病態に対して治療効果を有することが示された。【０２５４】
２）実施例化合物２のラット抗ＧＢＭ抗血清投与腎炎モデルに対する効果：
ラット（Ｗｉｓｔａｒ−Ｋｙｏｔｏ系、雄性、１０週齢；日本チャールス・リバー株式会社）の尾静脈内に、抗ＧＢＭ抗血清を投与して、糸球体腎炎を誘発させた群を、「腎炎誘発群」とした。【０２５５】
抗ＧＢＭ抗血清投与の２及び５週間後に、実施例４７の１）と同じ方法で、ｓＣｒｅ値を測定した。【０２５６】
腎炎誘発群における抗ＧＢＭ抗血清投与の２週間後のｓＣｒｅ値（平均値±標準誤差、ｎ＝６）は０．４６±０．０１ｍｇ／ｄＬであった。本実施例と同様の方法で実験を行った場合、正常ラットのｓＣｒｅ値は、０．２５〜０．２８ｍｇ／ｄＬ（実施例４７の１）を参照）である。したがって、腎炎誘発群における抗ＧＢＭ抗血清投与の２週間後のｓＣｒｅ値は正常ラットのｓＣｒｅ値と比較して、顕著に上昇していた。すなわち、腎炎誘発群では、抗ＧＢＭ抗血清投与の２週間後に糸球体腎炎及び腎不全の病態を呈していることが示された。【０２５７】
糸球体腎炎及び腎不全の病態を呈した腎炎誘発群のラットに、抗ＧＢＭ抗血清投与の２週間後から実験終了時まで、実施例化合物２を０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁して、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で、１日１回経口投与したものを、「実施例化合物２（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群」とした。また、比較対照として、腎炎誘発群のラットに、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した群を、「腎炎対照群」とした。【０２５８】
抗ＧＢＭ抗血清投与の２及び５週間後のｓＣｒｅ値の測定結果を図３に示す。図の横軸は、抗ＧＢＭ抗血清投与後の週数を示し、縦軸はｓＣｒｅ値（平均値±標準誤差、ｎ＝３）を示す。【０２５９】
腎炎対照群における、抗ＧＢＭ抗血清投与の５週間後のｓＣｒｅ値は、抗ＧＢＭ抗血清投与の２週間後から持続的に高値を示した。したがって、腎炎対照群は、慢性の糸球体腎炎及び腎不全の病態を呈していることが示された。【０２６０】
また、抗ＧＢＭ抗血清投与の５週間後の、実施例化合物２（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群におけるｓＣｒｅ値は、腎炎対照群におけるｓＣｒｅ値に比べて、顕著に低値を示した（図３）。したがって、実施例化合物２は、慢性の糸球体腎炎及び腎不全の病態に対して治療効果を有することが示された。また、実施例化合物２は、ｓＣｒｅ値増加を認める慢性腎臓病の病態に対して治療効果を有することが示された。【０２６１】
（実施例４８）  ラット糖尿病性腎症モデルでの薬効評価試験：
ラット糖尿病性腎症モデル（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、２００７年、第１９巻、ｐ．５７１−５７９：Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、１９９８年、３２巻、ｐ．７７８−７８５）に実施例化合物１を投与し、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩の糖尿病性腎症である慢性腎臓病に対する治療効果を評価した。【０２６２】
ラット（Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ  Ｒａｔ、雄性、１２及び１３週齢：日本チャールス・リバー株式会社）の尾静脈内にストレプトゾトシン（Ｅｎｚｏｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ社）水溶液（４０ｍｇ／ｋｇ）を投与して、糖尿病性腎症を誘発させた群を「糖尿病性腎症誘発群」とした。一方で、注射用水を同様に投与した群を、「非処置群」とした。【０２６３】
ストレプトゾトシン投与６日後に代謝ケージを用いて室温で２４時間尿を回収した。回収した尿の尿中アルブミン濃度をＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。尿中アルブミン濃度及び尿重量から尿中アルブミン排泄量を算出した。【０２６４】
糖尿病性腎症誘発群におけるストレプトゾトシン投与の６日後の尿中アルブミン排泄量（平均値±標準誤差、ｎ＝３０）は１．３９±０．０５ｍｇ／ｄａｙであり、非処置群における注射用水投与の６日後の尿中アルブミン排泄量（０．８３±０．１０ｍｇ／ｄａｙ（平均値±標準誤差、ｎ＝６））に比べて、統計学的に有意に上昇していた（ｔ検定、ｐ＜０．０５）。すなわち、糖尿病性腎症誘発群では、ストレプトゾトシン投与の６日後に糖尿病性腎症の病態を呈していることが示された。【０２６５】
糖尿病性腎症の病態を呈した糖尿病性腎症誘発群のラットに、ストレプトゾトシン投与の８日後から２０日間、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）又は陽性対照化合物イミダプリル（２ｍｇ／ｋｇ）を１日１回経口投与した。実施例化合物１及びイミダプリルは、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁して用いた。実施例化合物１を１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群を「実施例化合物１投与群」とした。また、イミダプリルを２ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群を、「イミダプリル投与群」とした。一方で、比較対照として、糖尿病性腎症誘発群のラットに、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した群を、「糖尿病性腎症対照群」とした。なお、非処置群にも０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した。【０２６６】
ストレプトゾトシン投与２７日後の被験物質最終投与後に代謝ケージを用いて室温で２４時間尿を回収した。回収した尿の尿中アルブミン濃度をＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。尿中アルブミン濃度及び尿重量から尿中アルブミン排泄量を算出した。また、ストレプトゾトシン投与１８日後にｔａｉｌ−ｃｕｆｆ法を用いて全身収縮期圧を測定した。さらに、ストレプトゾトシン投与２９日後に、ラットの腹大動脈から採血し、血漿中グルコース濃度を測定した。血漿中グルコース濃度はＧｌｕ−ＤＨＵＶ法を用いて測定した。【０２６７】
糖尿病性腎症対照群におけるストレプトゾトシン投与２７日後の尿中アルブミン排泄量（平均値±標準誤差、ｎ＝６）は、８．１７±２．６６ｍｇ／ｄａｙであり、非処置群における注射用水投与の２７日後の尿中アルブミン排泄量（１．９１±０．２９ｍｇ／ｄａｙ（平均値±標準誤差、ｎ＝６））に比べて、顕著に上昇していた。糖尿病性腎症対照群におけるストレプトゾトシン投与２７日後の尿中アルブミン排泄量は、ストレプトゾトシン投与の６日後から持続的に高値を示した。したがって、糖尿病性腎症対照群は、慢性の糖尿病性腎症の病態を呈していることが示された。【０２６８】
また、ストレプトゾトシン投与２７日後の、実施例化合物１投与群及びイミダプリル投与群の尿中アルブミン排泄量（平均値±標準誤差、ｎ＝６）はそれぞれ５．４１±１．１３及び５．６６±０．９１ｍｇ／ｄａｙであり、糖尿病性腎症対照群における尿中アルブミン排泄量と比較して、低値を示した。したがって、実施例化合物１が、慢性の糖尿病性腎症の病態に対して治療効果を有することが示された。また、実施例化合物１は、尿中アルブミン排泄量の増加を認める糖尿病性腎症である慢性腎臓病の病態に対して治療効果を有することが示された。【０２６９】
糖尿病性腎症対照群におけるストレプトゾトシン投与１８日後の全身収縮期圧（平均値±標準誤差、ｎ＝６）は、２２３±３ｍｍＨｇであり、非処置群における注射用水投与の１８日後の全身収縮期圧（１７９±７ｍｍＨｇ（平均値±標準誤差、ｎ＝４））に比べて、統計学的に有意に高値を示し（ｔ検定、ｐ＜０．０５）た。したがって、糖尿病性腎症対照群は、高血圧の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物１投与群におけるストレプトゾトシン投与１８日後の全身収縮期圧（平均値±標準誤差、ｎ＝６）は１９９±６ｍｍＨｇであり、糖尿病性腎症対照群における全身収縮期圧と比較して、統計学的に有意に低値を示した（ｔ検定、ｐ＜０．０５）。したがって、実施例化合物１が、糖尿病性腎症の病態に対して治療効果を有することが示された。また、実施例１が高血圧を認める糖尿病性腎症の病態に対しても治療効果を有することが示された。【０２７０】
糖尿病性腎症対照群におけるストレプトゾトシン投与２９日後の血漿中グルコース濃度（平均値±標準誤差、ｎ＝６）は、６９０±３５ｍｇ／ｄＬであり、非処置群におけるストレプトゾトシン投与の２９日後の血漿中グルコース濃度（２１０±５ｍｇ／ｄＬ（平均値±標準誤差、ｎ＝６））に比べて、統計学的に有意に高値を示し（ｔ検定、ｐ＜０．０５）た。したがって、糖尿病性腎症対照群は、高血糖の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物１投与群におけるストレプトゾトシン投与２９日後の血漿中グルコース濃度（平均値±標準誤差、ｎ＝６）は７００４±３５ｍｇ／ｄＬであり、糖尿病性腎症対照群における血漿中グルコース濃度と比較して、差は認められなかった。したがって、実施例化合物１が、糖尿病性腎症の高血糖に対して作用しないことが示された。【０２７１】
実施例４６、実施例４７の１）及び２）並びに実施例４８の結果から、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩が、糸球体腎炎及び腎不全である慢性腎臓病の病態に対して治療効果を有することが示された。また、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩が、糖尿病性腎症である慢性腎臓病の病態に対して治療効果を有することが示された。【０２７２】
（実施例４９）  ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルでの薬効評価試験：
ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデル（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、２００９年、第１１１巻、ｐ．２３５−２４３）に、実施例化合物１又は２を投与し、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩の肺高血圧症に対する治療効果を評価した。【０２７３】
１）実施例化合物１のラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルの心肺機能及び右心室肥大、肺肥大、肺動脈肥厚、肺における細胞増殖及び心筋肥大に対する効果：
ラット（Ｗｉｓｔａｒ系、雄性、５週齢；日本エスエルシー株式会社）の背部皮下に、モノクロタリン（シグマ社）水溶液（６０ｍｇ／ｋｇ）を投与して、肺高血圧症を誘発させた群を、「肺高血圧症誘発群」とした。一方で、注射用水を同様に投与した群を、「正常群」とした。【０２７４】
肺高血圧症誘発群のラットに、モノクロタリン投与日から２４日間、実施例化合物１（３、１０及び３０ｍｇ／ｋｇ）又は陽性対照化合物タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）を１日１回経口投与した。実施例化合物１及びタダラフィルは、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁して用いた。実施例化合物１を、３、１０及び３０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群をそれぞれ、「実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群」、「実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群」及び「実施例化合物１（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群」とした。また、タダラフィルを１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群を、「タダラフィル投与群」とした。一方で、比較対照として、肺高血圧症誘発群のラットに、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した群を、「肺高血圧症対照群」とした。なお、正常群にも０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した。【０２７５】
被験化合物最終投与の翌日に、右心室収縮期圧、全身収縮期血圧及び心拍数を測定した。右心室収縮期圧及び全身収縮期血圧は、血圧測定用アンプ（日本光電工業株式会社）を用いて測定し、心拍数は、瞬時心拍計ユニット（日本光電工業株式会社）を用いて測定した。また、同日に、体重、肺湿重量、並びに、右心室、左心室及び中隔の湿重量を測定し、右心室重量比（右心室重量／（中隔重量＋左心室重量））及び肺重量比（肺重量／体重）を求めた。【０２７６】
また、肺は湿重量測定後にホルマリン液に浸漬し保存した。ホルマリン液で固定した肺をパラフィンに包埋後、切片を作製し、抗ｓＥＨ抗体を用いて免疫染色組織標本を作製し、ｓＥＨ発現を検討した。また、エラスチカ・ワンギーソン染色による病理組織標本を作製し、肺動脈肥厚を検討した。また、抗ＰＣＮＡ抗体を用いて免疫染色組織標本を作製し、細胞増殖を検討した。また、右心室は湿重量測定後にホルマリン液に浸漬し保存した。ホルマリン液で固定した右心室をパラフィンに包埋後、切片を作製し、ＨＥ染色による病理組織標本を作製し、心筋肥大を検討した。【０２７７】
さらに、摘出した肺を緩衝液中で破砕後、１４，１５―ＥＥＴ及び１４，１５―ＤＨＥＴを抽出した。抽出した１４，１５―ＥＥＴを加水分解し、１４，１５―ＤＨＥＴへと変換し、ＥＬＩＳＡ法を用いて１４，１５―ＤＨＥＴ濃度を測定した。加水分解反応の前後で増加した１４，１５―ＤＨＥＴ濃度を１４，１５―ＥＥＴ濃度とし、１４，１５―ＥＥＴ／１４，１５―ＤＨＥＴ比を求めた。【０２７８】
肺高血圧症におけるｓＥＨ発現を検討した結果、肺高血圧症誘発群の肺では、正常群の肺に比べて、病変部位でｓＥＨの発現が認められた。したがって、ｓＥＨの発現は、肺高血圧症の肺の病変部位で亢進することが示された。【０２７９】
被験化合物最終投与の翌日の右心室収縮期圧、右心室重量比及び肺重量比について、結果を図４〜６に示す。図の横軸は各群を示し、縦軸は各測定値（平均値±標準誤差、ｎ＝１０）を示す。図中の＊印は、肺高血圧症対照群との比較で統計学的に有意であることを示す（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）。【０２８０】
肺高血圧症対照群の右心室収縮期圧は、正常群の右心室収縮期圧と比較して、統計学的に有意に高値を示し（Ａｓｐｉｎ−Ｗｅｌｃｈのｔ検定、ｐ＜０．０５）、肺高血圧症の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群及び実施例化合物１（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室収縮期圧は、肺高血圧症対照群の右心室収縮期圧と比較して、統計学的に有意に低値を示した（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）（図４）。したがって、実施例化合物１が、肺動脈圧上昇を認める肺高血圧症の病態に対して治療効果を有することが示された。【０２８１】
肺高血圧症対照群の右心室重量比は、正常群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に高値を示し（Ａｓｐｉｎ−Ｗｅｌｃｈのｔ検定、ｐ＜０．０５）、右心室肥大の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群及び実施例化合物１（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室重量比は、肺高血圧症対照群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に低値を示した（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）（図５）。したがって、実施例化合物１が、右心室肥大を認める肺高血圧症の病態に対しても治療効果を有することが示された。【０２８２】
肺高血圧症対照群の肺重量比は、正常群の肺重量比と比較して、統計学的に有意に高値を示し（Ａｓｐｉｎ−Ｗｅｌｃｈのｔ検定、ｐ＜０．０５）、肺肥大の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の肺重量比は、肺高血圧症対照群の肺重量比と比較して、統計学的に有意に低値を示した（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）（図６）。したがって、実施例化合物１が、肺肥大を認める肺高血圧症の病態に対しても治療効果を有することが示された。【０２８３】
一方、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群及び実施例化合物１（３０ｍｇ／ｋｇ）投与群の、心拍数及び全身収縮期血圧については、肺高血圧症対照群の心拍数及び全身収縮期血圧と比較して、いずれも有意な差は認められなかった（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）。したがって、実施例化合物１が、肺高血圧症において心拍数及び全身血圧に作用しないことが示された。【０２８４】
肺高血圧症における肺動脈肥厚を検討した結果、肺高血圧症対照群の肺では、正常群の肺に比べて、肺動脈肥厚が認められた。一方、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群の肺では、肺高血圧症対照群の肺に比べて、肺動脈肥厚は認められなかった。したがって、実施例化合物１が、肺動脈肥厚を認める肺高血圧症の病態に対しても治療効果を有することが示された。【０２８５】
肺高血圧症における細胞増殖を検討した結果、肺高血圧症対照群の肺では、正常群の肺に比べて、細胞増殖が認められた。一方、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群の肺では、肺高血圧症対照群の肺に比べて、細胞増殖は認められなかった。したがって、実施例化合物１が、肺における細胞増殖を認める肺高血圧症の病態に対しても治療効果を有することが示された。【０２８６】
肺高血圧症における心筋肥大を検討した結果、肺高血圧症対照群の右心室では、正常群の右心室に比べて、心筋肥大が認められた。一方、実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室では、肺高血圧症対照群の右心室に比べて、心筋肥大は認められなかった。したがって、実施例化合物１が、心筋肥大を認める肺高血圧症の病態に対しても治療効果を有することが示された。【０２８７】
肺高血圧症における１４，１５−ＥＥＴ／１４，１５−ＤＨＥＴ比を検討した結果、肺高血圧症対照群の肺における１４，１５−ＥＥＴ／１４，１５−ＤＨＥＴ比は、正常群の肺における１４，１５−ＥＥＴ／１４，１５−ＤＨＥＴ比と比較して、低値を示した。したがって、肺高血圧症の肺では、１４，１５−ＥＥＴ／１４，１５−ＤＨＥＴ比が低下することが示された。一方、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の肺における１４，１５−ＥＥＴ／１４，１５−ＤＨＥＴ比は、肺高血圧症対照群の肺における１４，１５−ＥＥＴ／１４，１５−ＤＨＥＴ比と比較して、高値を示した。したがって、実施例化合物１が、肺高血圧症の肺における１４，１５−ＥＥＴ／１４，１５−ＤＨＥＴ比を増加させることが示された。【０２８８】
２）実施例化合物１のラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルの病態進行期からの投与による右心室肥大に対する効果：
ラット（Ｗｉｓｔａｒ系、雄性、５週齢；日本エスエルシー株式会社）の背部皮下に、モノクロタリン（シグマ社）水溶液（６０ｍｇ／ｋｇ）を投与して、肺高血圧症を誘発させた群を、「肺高血圧症誘発群」とした。一方で、注射用水を同様に投与した群を、「正常群」とした。【０２８９】
肺高血圧症誘発群のラットに、実施例化合物１（３及び１０ｍｇ／ｋｇ）又は陽性対照化合物タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）を１日１回経口投与した。実施例化合物１（３及び１０ｍｇ／ｋｇ）は、モノクロタリン投与日の１０日後から１８又は１９日間投与した。タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）は、モノクロタリン投与日から２８又は２９日間投与した。実施例化合物１及びタダラフィルは、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁して用いた。実施例化合物１を３及び１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群をそれぞれ、「実施例化合物１（３ｍｇ／ｋｇ）投与群」及び「実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群」とした。また、タダラフィルを１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群を、「タダラフィル投与群」とした。一方で、比較対照として、肺高血圧症誘発群のラットに、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した群を、「肺高血圧症対照群」とした。なお、正常群にも０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した。【０２９０】
被験化合物最終投与日に、ラットを麻酔下で腹大静脈より採血し、続けて安楽死させた後、心臓を摘出し、右心室、左心室及び中隔の湿重量を測定し、右心室重量比（右心室重量／（中隔重量＋左心室重量））を求めた。また、採取した血液中の１４，１５−ＤＨＥＴ濃度をＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。また、採取した血液に一定量の１４，１５−ＥＥＴを添加し３７℃で３０分間反応させ、産生された１４，１５−ＤＨＥＴ量をＥＬＩＳＡ法を用いて測定することで、血液中のｓＥＨ活性を求めた。【０２９１】
肺高血圧症対照群の血液中の１４，１５−ＤＨＥＴ濃度及びｓＥＨ活性は、正常群の血液中の１４，１５−ＤＨＥＴ濃度及びｓＥＨ活性に比べて高値を示した。したがって、肺高血圧症では、１４，１５−ＤＨＥＴ濃度が上昇すること及びｓＥＨ活性が亢進することが示された。【０２９２】
被験化合物最終投与日の右心室重量比について、結果を図７に示す。図の横軸は各群を示し、縦軸は右心室重量比（平均値±標準誤差、ｎ＝１０）を示す。図中の＊印は、肺高血圧症対照群との比較で統計学的に有意であることを示す（ｔ検定、ｐ＜０．０５）。【０２９３】
肺高血圧症対照群の右心室重量比は、正常群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に高値を示した（ｔ検定、ｐ＜０．０５）。したがって、肺高血圧症対照群は、右心室肥大の病態を呈していることが示された。一方、実施例化合物１（１０ｍｇ／ｋｇ）投与群の右心室重量比は、肺高血圧症対照群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に低値を示した（ｔ検定、ｐ＜０．０５）（図７）。したがって、実施例化合物１は、肺高血圧症の病態進行期から投与しても、右心室肥大を認める肺高血圧症の病態に対して治療効果を有することが示された。【０２９４】
３）実施例化合物１のラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルの全身血圧に対する作用：
モノクロタリン投与肺高血圧症モデルラットに、実施例化合物１を単回投与し、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩の投与直後からの全身血圧に対する作用を評価した。【０２９５】
ラット（ＳＤ系、雄性、１１週齢；日本チャールス・リバー株式会社）の背部皮下に、モノクロタリン（シグマ社）水溶液（６０ｍｇ／ｋｇ）を投与して、肺高血圧症を誘発させた。【０２９６】
モノクロタリン投与７日後に、肺高血圧症を誘発させたラットを麻酔し、股部及び背頸部を除毛し、イソジン液を用いて術野を消毒した。股部及び背頸部皮膚を切開後、ピンセットを用いて鈍性に股部の筋層を切開し、大腿動脈を■離露出した後、小切開しポリエチレンチューブを挿入留置した。モノクロタリン投与９日後に、大腿動脈に挿入したチューブに血圧トランスデューサーを接続し、血圧はＢｌｏｏｄ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ Ａｍｐｌｉｆｉｅｒにて増幅させ、心拍数は脈波形をトリガーとしＨｅａｒｔ Ｒａｔｅ Ｃｏｕｎｔｅｒを介し、いずれもＰｏｗｅｒ Ｌａｂシステムにて波形を得た。全身血圧及び心拍数が安定したことを確認した。全身血圧が安定したことを確認した後、実施例化合物１を１０ｍｇ／ｋｇの投与量で単回経口投与した。なお、実施例化合物１は、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁して用いた。実施例化合物１を投与した群を、「実施例化合物１投与群」とした。一方で、比較対照として、肺高血圧症を誘発させたラットに、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した群を、「肺高血圧症対照群」とした。実施例化合物１又は０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液の投与直後から投与１、２、３、４、５及び６時間後までの全身平均血圧を測定した。【０２９７】
その結果、実施例化合物１投与群の全身平均血圧は、肺高血圧症対照群の全身平均血圧と比較して、有意な差は認められなかった。したがって、実施例化合物１が、肺高血圧症において投与直後から全身血圧に作用しないことが示された。【０２９８】
４）実施例化合物２のラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルの心肺機能及び右心室肥大に対する効果：
被験化合物が異なる点を除いて、実施例４９の１）と同じ方法で、ラットモノクロタリン投与肺高血圧症モデルに対する実施例化合物２の効果を評価した。【０２９９】
実施例４９の１）と同じ方法で作製した、「肺高血圧症誘発群」のラットに、モノクロタリン投与日から２４日間、実施例化合物２（１０ｍｇ／ｋｇ）又は陽性対照化合物タダラフィル（１０ｍｇ／ｋｇ）を１日１回経口投与した。実施例化合物２及びタダラフィルは、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液に懸濁して用いた。実施例化合物２を、１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群を、「実施例化合物２投与群」とし、タダラフィルを１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与した群を、「タダラフィル投与群」とした。一方で、比較対照として、肺高血圧症誘発群のラットに、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を、同様に投与した群を、「肺高血圧症対照群」とした。なお、モノクロタリン投与していない「正常群」にも０．５％Ｔｗｅｅｎ８０含有０．５％メチルセルロース水溶液を同様に投与した。【０３００】
実施例４９の１）と同様に、被験化合物最終投与の翌日に、右心室収縮期圧、全身収縮期血圧及び心拍数を測定した。また、同日に、体重、肺湿重量、並びに、右心室、左心室及び中隔の湿重量を測定し、右心室重量比（右心室重量／（中隔重量＋左心室重量））及び肺重量比（肺重量／体重）を求めた。【０３０１】
その結果を図８〜１０に示す。図の横軸は各群を示し、縦軸は各測定値（平均値±標準誤差、ｎ＝１０）を示す。図中の＊印は、肺高血圧症対照群との比較で統計学的に有意であることを示す（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）。【０３０２】
肺高血圧症対照群の右心室収縮期圧は、正常群の右心室収縮期圧と比較して、統計学的に有意に高値を示し（Ａｓｐｉｎ−Ｗｅｌｃｈのｔ検定、ｐ＜０．０５）、肺高血圧症の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物２投与群の右心室収縮期圧は、肺高血圧症対照群の右心室収縮期圧と比較して、統計学的に有意に低値を示した（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）（図８）。したがって、実施例化合物２が、肺動脈圧上昇を認める肺高血圧症の病態に対して治療効果を有することが示された。【０３０３】
肺高血圧症対照群の右心室重量比は、正常群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に高値を示し（Ａｓｐｉｎ−Ｗｅｌｃｈのｔ検定、ｐ＜０．０５）、右心室肥大の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物２投与群の右心室重量比は、肺高血圧症対照群の右心室重量比と比較して、統計学的に有意に低値を示した（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）（図９）。したがって、実施例化合物２が、右心室肥大を認める肺高血圧症の病態に対しても治療効果を有することが示された。【０３０４】
肺高血圧症対照群の肺重量比は、正常群の肺重量比と比較して、統計学的に有意に高値を示し（Ａｓｐｉｎ−Ｗｅｌｃｈのｔ検定、ｐ＜０．０５）、肺肥大の病態を呈していることが示された。また、実施例化合物２投与群の肺重量比は、肺高血圧症対照群の肺重量比と比較して、低値を示した（図１０）。したがって、実施例化合物２が、肺肥大を認める肺高血圧症の病態に対しても治療効果を有することが示された。【０３０５】
一方、実施例化合物２投与群の、心拍数及び全身収縮期血圧については、肺高血圧症対照群の心拍数及び全身収縮期血圧と比較して、いずれも有意な差は認められなかった（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ検定、ｐ＜０．０５）。したがって、実施例化合物２が、肺高血圧症において心拍数及び全身血圧に作用しないことが示された。【０３０６】
実施例４９の１）、２）、３）及び４）の結果から、ニペコチン酸誘導体（Ｉ）又はその薬理学的に許容される塩が、肺高血圧症に対して治療効果を示すことが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【０３０７】
本発明のニペコチン酸誘導体又はその薬理学的に許容される塩は、強力なｓＥＨ阻害活性を示し、医薬の分野において慢性腎臓病及び肺高血圧症の治療剤又は予防剤として用いることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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