(57)【要約】シークワーシャー抽出物、好ましくはシークワーシャーの果実又は葉の水及び／又は有機溶媒抽出物、シークワーシャーの果実又は葉の超臨界抽出物、又は、シークワーシャーの果実又は葉の亜臨界抽出物であって、固形物換算で０．３質量％以上のポリメトキシフラボノイドを含有するシークワーシャー抽出物、例えば固形物換算で０．２質量％以上のノビレチン及び／又は０．１質量％以上のタンゲレチンを含むシークワーシャー抽出物、またはポリメトキシフラボノイド、例えばノビレチン、またはタンゲレチンを、筋萎縮抑制剤の有効成分とする。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
シークワーシャー抽出物を有効成分として含有する、筋萎縮抑制剤。
【請求項２】
前記シークワーシャー抽出物が、シークワーシャーの果実及び／又は葉の有機溶媒抽出物である、請求項１に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項３】
前記シークワーシャー抽出物が、シークワーシャーの果実及び／又は葉の超臨界抽出物又は亜臨界抽出物である、請求項１に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項４】
前記有機溶媒が、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、酢酸エチル、アセトン、ヘキサン、クロロホルム、ジエチルエーテル、及びこれらの有機溶媒の含水物からなる群より選ばれる、請求項２に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項５】
前記有機溶媒が、エタノール又は含水エタノールである、請求項４に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項６】
前記シークワーシャー抽出物が、固形物換算で０．３質量％以上のポリメトキシフラボノイドを含有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項７】
前記シークワーシャー抽出物が、固形物換算で０．２質量％以上のノビレチン及び／又は０．１質量％以上のタンゲレチンを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項８】
さらに、ポリメトキシフラボノイドを水可溶化する包接剤を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項９】
前記包接剤がシクロデキストリンであり、その含有量が、シークワーシャー抽出物の固形物とシクロデキストリンの合計量に対して０．１〜９５質量％である、請求項８に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項１０】
ポリメトキシフラボノイドを有効成分として含有する筋萎縮抑制剤。
【請求項１１】
前記ポリメトキシフラボノイドが、ノビレチン及び／又はタンゲレチンである、請求項１０に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の筋萎縮抑制剤を、ポリメトキシフラボノイドの含有量として固形物換算で０．３質量％以上含む飲食品。
【請求項１３】
請求項１１に記載の筋萎縮抑制剤を、ノビレチン含有量として固形物換算で０．２質量％以上含む飲食品。
【請求項１４】
請求項１１に記載の筋萎縮抑制剤を、タンゲレチン含有量として固形物換算で０．１質量％以上含む飲食品。
【請求項１５】
筋萎縮の抑制に用いられるシークワーシャー抽出物。
【請求項１６】
筋萎縮の抑制に用いられるポリメトキシフラボノイド。
【請求項１７】
シークワーシャー抽出物を哺乳動物に投与する、筋萎縮の抑制法。
【請求項１８】
ポリメトキシフラボノイドを哺乳動物に投与する、筋萎縮の抑制法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、筋萎縮抑制剤に関する。筋萎縮抑制剤は、医薬、及び食品、飼料として利用することができる。
【背景技術】
【０００２】
筋萎縮は、筋線維数の減少および筋線維の容積の減少により筋量が減少する状態をいい、通常は筋力低下を伴う。筋萎縮の予防又は改善には、適切な運動が有効であるが、病人や老人などでは運動による回復は困難である。したがって、筋萎縮の抑制又は改善に有効な医薬や食品の開発が期待されている。【０００３】
植物に含まれる成分を用いた筋萎縮の抑制に関する技術としては、ウコギ科人参（特許文献１）、α−グルコシル化ヘスペリジン（特許文献２）、又は、スチグマステロール（特許文献３）を有効成分として含有する筋萎縮抑制剤、及び、果実由来ポリフェノールを有効成分とする筋繊維タイプ移行抑制剤（特許文献４）が知られている。【０００４】
また、筋機能の向上又は低下の抑制に関する技術としては、カテキン類を有効成分とする筋機能低下抑制剤（特許文献５）、レスベラトロール及び／又はブドウ葉抽出物を有効成分とする持久力向上剤（特許文献６）、あるいは、ロズマリン酸又はカルノシン酸を有効成分として含有する抗筋萎縮性側索硬化症（ALS）剤（特許文献７）、又は、ローズマリー抽出物又はセージ抽出物（特許文献８）を有効成分として含有する抗ALS剤が知られている。【０００５】
植物由来の健康食品原料として、シークワーシャー抽出物が注目されている。シークワーシャー抽出物に含まれるノビレチンおよびタンゲレチン等のポリメトキシフラボノイドは、これまで種々の効能が見出されている。例えば、ノビレチンは、神経突起伸長作用（特許文献９）、抗高血圧、抗ガン作用（特許文献１０）、心疾患予防治療作用（特許文献１１）、及び、抗潰瘍作用（特許文献１２）等の作用を有することが報告されている。また、タンゲレチン及びノビレチン等のポリメトキシフラボノイドは血管新生抑制作用（特許文献１３）を有することが報告されている。さらに、シークワーシャー等の柑橘類に含まれるフラボノイドが、血圧上昇抑制作用を有すること（特許文献１４）が知られている。
また、前記の筋繊維タイプ移行抑制剤（特許文献４）は、具体的にはリンゴ等のバラ科植物の果実に含まれるプロシアニジンのようなポリフェノールを有効成分とするものである。【０００６】
しかし、前記のようなフラボノイドは果汁中にはほとんど含まれず、果皮に多く含まれていることから、単に果実を搾汁するだけでは、これらフラボノイドの含有量は少ない。【０００７】
ポリメトキシフラボノイドは、フェノール水酸基が複数メチル化された特殊な構造を持つフラボノイドの一種であり、主として柑橘類に含まれる。ノビレチン、またはタンゲレチンのようなポリメトキシフラボノイドは、摂取後、肝臓において代謝され、生成した代謝物で抗炎症作用が強化されることも報告されている。例えば、ノビレチンはラット肝の代謝により、メトキシ基が水酸基に置換され、4'-OH、7-OH、6-OH、3',4'-diOH、または6,7-diOHノビレチン等が代謝産物として生成される。また、タンゲレチンからは、4'-OH、3',4'-diOH、7,4'-diOH、または6,7-diOHタンゲレチン等が代謝産物として生成されることが報告されている（非特許文献１）。【０００８】
上記のように、筋萎縮抑制作用を有する植物由来成分がいくつか知られているが、シークワーシャー抽出物、又はノビレチンおよびタンゲレチン等のポリメトキシフラボノイドが筋萎縮抑制作用を有することは知られていない。【０００９】
一方、食品素材の評価のための筋萎縮モデルの作製方法としては、糖質コルチコイドを用いる方法や、後肢の固定、または非荷重による方法が知られている。糖質コルチコイドにより誘導された筋萎縮モデルを用いて、分岐鎖アミノ酸について筋線維径等に対する効果を評価したこと（非特許文献２）、及び、クレアチン(非特許文献３)、及びビタミンE（非特許文献４）について筋重量に対する効果を評価したことが報告されている。また、後肢の固定、または非荷重により作製した筋萎縮モデルを用いて、レスベラトロール（非特許文献５）、及び、魚油（非特許文献６）について筋重量に対する効果を評価したことが報告されている。【００１０】
しかしながら、これらのモデルを含めてシークワーシャー抽出物又はその成分について筋萎縮抑制作用を評価したとの報告はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特開２００８−１７９６２０号
【特許文献２】特開２００９−７３１３号
【特許文献３】特開２０１０−４７５２９号
【特許文献４】特開２００６−３２８０３１号
【特許文献５】特開２００８−１３４７３号
【特許文献６】特開２００７−１４５８０９号
【特許文献７】特開２００９−２５６２８２号
【特許文献８】特開２００９−２５６２８３号
【特許文献９】特許第４６３３８９７号
【特許文献１０】国際公開第ＷＯ２００６／４９２３４号
【特許文献１１】特開２０１１−３７７９８号
【特許文献１２】特開平６−７２８７０号
【特許文献１３】特開２００４−８３４１７号
【特許文献１４】特開２００１−２４０５３９号
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Koga, N. et al., Biol. Pharm. Bull. 30(12) 2317-2323 (2007)
【非特許文献２】Yamamoto, D. et al., Muscle & Nurve, 41:819-827, 2010
【非特許文献３】Menezes, L.G. et al., J. Appl. Physiol., 102:698-703, 2007
【非特許文献４】Ohtsuka, A. et al., J. Nutr. Sci. Vitaminol., 44,779-786, 1998
【非特許文献５】Jackson, J.R. et al., Am. J. Physiol. Integr. Comp. Physiol., 299:R1572-R1581, 2010
【非特許文献６】You, J.-S. et al., Appl. Physiol. Nutr. Metab., 35:310-318, 2010
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、安全に摂取できる筋萎縮抑制剤、及びそれを含む飲食品を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、上記の課題を解決すべく鋭意研究を行った結果、シークワーシャー抽出物、又はその成分に、優れた筋萎縮抑制作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。【００１５】
すなわち、本発明は、シークワーシャー抽出物を有効成分として含有する、筋萎縮抑制剤を提供する。
本発明の筋萎縮抑制剤は、前記シークワーシャー抽出物が、シークワーシャーの果実及び／又は葉の有機溶媒抽出物、シークワーシャーの果実及び／又は葉の超臨界抽出物、又はシークワーシャーの果実及び／又は葉の亜臨界抽出物であることを好ましい態様としている。
また、本発明の筋萎縮抑制剤は、前記有機溶媒が、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、酢酸エチル、アセトン、ヘキサン、クロロホルム、ジエチルエーテル、及びこれらの有機溶媒の含水物からなる群より選ばれることを好ましい態様としている。なかでも、エタノール又は含水エタノールを使用することが特に好ましい。
また、本発明の筋萎縮抑制剤は、前記シークワーシャー抽出物が、固形物換算で０．３質量％以上のポリメトキシフラボノイドを含有することを好ましい態様としている。
また、本発明の筋萎縮抑制剤は、前記シークワーシャー抽出物が、固形物換算で０．２質量％以上のノビレチン及び／又は０．１質量％以上のタンゲレチンを含むことを好ましい態様としている。【００１６】
また、本発明の筋萎縮抑制剤は、さらに、ポリメトキシフラボノイドを水可溶化する包接剤を含むことを好ましい態様としている。
本発明の筋萎縮抑制剤は、前記包接剤がシクロデキストリンであり、その含有量が、シークワーシャー抽出物の固形物とシクロデキストリンの合計量に対して０．１〜９５質量％であることを好ましい態様としている。【００１７】
また、本発明は、ポリメトキシフラボノイドを有効成分として含有する筋萎縮抑制剤を提供する。
本発明の筋萎縮抑制剤は、ポリメトキシフラボノイドがノビレチン、及び／又は、タンゲレチンであることを好ましい態様としている。【００１８】
本発明はさらに、前記シークワーシャー抽出物又はポリメトキシフラボノイドを含有する筋萎縮抑制剤を、ポリメトキシフラボノイドの含有量として固形物換算で０．３質量％以上含む飲食品を提供する。
また本発明は、ノビレチンを含有する筋萎縮抑制剤を、ノビレチン含有量として固形物換算で０．２質量％以上含む飲食品を提供する。
また、本発明は、タンゲレチンを含む筋萎縮抑制剤を、タンゲレチン含有量として固形物換算で０．１質量％以上含む飲食品を提供する。
本発明はさらに、筋萎縮の抑制に用いられるシークワーシャー抽出物又はポリメトキシフラボノイドを提供する。
本発明はまた、シークワーシャー抽出物又はポリメトキシフラボノイドを哺乳動物に投与する、筋萎縮の抑制法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】シークワーシャー抽出物投与による筋萎縮関連遺伝子の発現変動を示す図。  CTL: デキサメタゾン非投与群  DEX: デキサメタゾン投与群  SE: デキサメタゾン及びシークワーシャー抽出物投与群
【図２】ポリメトキシフラボノイド（PMF）、ノビレチン（NOB）、タンゲレチン（TAN）投与による筋萎縮関連遺伝子の発現変動を示す図。  CTL:デキサメタゾン非投与群  DEX: デキサメタゾン投与群  PMF: デキサメタゾン及びポリメトキシフラボノイド投与群  NOB: デキサメタゾン及びノビレチン投与群  TAN: デキサメタゾン及びタンゲレチン投与群
【図３】後肢固定ラットにおけるシークワーシャー抽出物投与によるヒラメ筋重量の減少抑制を示す図。  CTL:無処置群  FIX: 後肢固定群  SE: 後肢固定及びシークワーシャー抽出物投与群
【発明を実施するための形態】
【００２０】
次に、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施形態に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。
【００２１】
本発明の筋萎縮抑制剤は、シークワーシャー抽出物、またはポリメトキシフラボノイドを有効成分として含有する。ポリメトキシフラボノイドとしては、シークワーシャー又はその抽出物に含まれるポリメトキシフラボノイドが挙げられる。シークワーシャー又はその抽出物に含まれるポリメトキシフラボノイドは、主に下記式で表される構造を有し、具体的には、ノビレチン、タンゲレチン、５−デメチルノビレチン、８−デメトキシノビレチン（シネンセチン）、６−デメトキシタンゲレチン、６−デメトキシノビレチン、シトロミチン、5,6,7,8,4-ペンタメトキシフラバノン等が挙げられる。これらの中では、ノビレチン及びタンゲレチンが好ましい。下記化学式において、R、R1、R2、R3、及びR4は、各々ノビレチンでは、R=OMe、R1=OMe、R2=H、R3=Me、R4=OMeであり、タンゲレチンでは、R=OMe、R1=H、R2=H、R3=Me、R4=OMeである（ただし、Meはメチル基、OMeはメトキシ基、Hは水素を表す）。
ポリメトキシフラボノイドは、一種でもよく、任意の２種以上の混合物であってもよい。
【００２２】
【化１】
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【００２３】
ポリメトキシフラボノイドは、柑橘類、その他前記物質を含有する植物の果実、葉、根、茎等から抽出しても良く、化学合成により製造しても良い。なお、化学合成により得られるノビレチン、タンゲレチンとしては、市販の合成品等（例えば、東京化成工業社製）を使用することができる。
【００２４】
シークワーシャー抽出物は、例えば、シークワーシャーの果実及び／又は葉から、水及び／又は有機溶媒を用いて抽出することにより製造することができる。有機溶媒は含水物であってもよい。シークワーシャー（Citrus depressa）は、ミカン科の柑橘類の一種である。
【００２５】
前記果実及び／又は葉は、果実及び／葉の全体であってもよく、その一部であってもよい。例えば、果実は、果肉又は果皮であってもよい。さらに、果実及び／又は葉は、そのまま用いてもよく、破砕物であってもよい。また、果実及び／又は葉は、果実及び／又は葉、もしくはそれらの一部の搾汁残渣であってもよい。以下、これらの果実及び／又は葉、その一部、それらの破砕物、及び、それらの搾汁残渣を、「シークワーシャー果実及び／又は葉等」と記載することがある。
【００２６】
また、有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、酢酸エチル、アセトン、ヘキサン、クロロホルム、ジエチルエーテル、もしくはこれらの有機溶媒の含水物、又はこれらの有機溶媒及びその含水物のいずれかを組み合わせたもの等が挙げられるが、これらの中ではエタノールが好ましい。有機溶媒の含水率は、特に制限されないが、好ましくは０〜９０質量％、より好ましくは０〜４０質量％である。
【００２７】
有機溶媒抽出において、シークワーシャー果実及び／又は葉等に対する有機溶媒の量は、特に制限されないが、シークワーシャー果実及び／又は葉等：有機溶媒の比（重量比）は好ましくは１：１〜１：１００、より好ましくは１：１〜１：２０である。
【００２８】
抽出の方法は特に制限されないが、例えば、シークワーシャー果実及び／又は葉等に有機溶媒を加えて、好ましくは５分〜３時間撹拌抽出した後、濾過又遠心分離等の固液分離手段により液相を採取する方法が挙げられる。
【００２９】
また、抽出後、又は乾燥工程の前に、ポリメトキシフラボノイドを水可溶化する包接剤を添加することが好ましい。このような包接剤は、水可溶化性の向上、消化吸収性の向上、又は風味改善の効果が期待される。また、包接剤としては、シクロデキストリン等の包接化合物を用いることが好ましい。包接剤の量は、シクロデキストリンの場合は、得られるシークワーシャー抽出物の固形物とシクロデキストリンの合計量に対して好ましくは０．１〜９５質量％、より好ましくは１〜９０質量％である。
【００３０】
本発明のシークワーシャー抽出物は、超臨界抽出法によって製造することも可能である。具体的には、例えば、シークワーシャーの果実又は葉部分を冷凍後に破砕したもの、又はシークワーシャーの果実又は葉部分を凍結乾燥又は熱風乾燥して粉末状にしたものを、以下の（ａ）〜（ｄ）の条件に基づいて、超臨界抽出法によって製造することができる。
（ａ）抽出溶媒が二酸化炭素（炭酸ガス）であること、
（ｂ）抽出温度が２５〜１２０℃であること、
（ｃ）圧力が５．５〜６０ＭＰａであること、
（ｄ）抽出時間が５〜７０分であること。
【００３１】
なお、前記抽出流体としては、シークワーシャー果実又は葉の抽出効率を改善する観点からは、超臨界プロパン、超臨界エチレン、超臨界１，１，１，２−テトラフルオロエタンなどを使用することも可能であるが、飲食品としての安全性を向上させる観点からは、二酸化炭素（炭酸ガス）を使用することが好ましい。また、抽出温度としては、３１．１℃〜１２０℃の温度範囲で適宜選択することが可能であるが、抽出効率を改善し、かつポリメトキシフラボノイド、特にノビレチン及び／又はタンゲレチンの含有量を高めるためには、４０〜８０℃の範囲が好ましく、６０〜８０℃の範囲がさらに好ましい。また、圧力としては、５．５〜６０ＭＰａの範囲が好ましく、２０〜４０ＭＰａの範囲がさらに好ましい。また、本発明においては、抽出効率を改善する観点からは、エタノール、水等をエントレーナーとして使用しても良い。  抽出時間は、温度や圧力によって適宜設定すればよいが、好ましくは１０分〜５０分、さらに好ましくは２０分〜３０分の範囲が挙げられる。
抽出操作は、市販の装置を用いて行うことができる。
【００３２】
本発明のシークワーシャー抽出物は、亜臨界抽出法によって製造することも可能である。具体的には、例えば、シークワーシャーの果実又は葉部分を冷凍後に破砕したもの、又はシークワーシャーの果実又は葉部分を凍結乾燥又は熱風乾燥して粉末状にしたものを、以下の（ａ）〜（ｄ）の条件に基づいて、亜臨界抽出法によって製造することができる。
（ａ）抽出溶媒が水であること、
（ｂ）抽出温度が１４０〜２００℃であること、
（ｃ）圧力が３〜１５ＭＰａであること、
（ｄ）抽出時間が０分〜１０分であること。
なお、抽出時間０分とは、抽出開始から目的の抽出温度まで上げた直後に、冷却して温度を抽出開始温度に下げることを意味する。
【００３３】
亜臨界抽出法で用いる流体としては、例えば、水、二酸化炭素が挙げられるが、飲食品としての安全性を向上させる観点からは、水を使用することが好ましい。
抽出温度は、抽出流体として水を用いる場合は、１４０〜２００℃の温度範囲で適宜選択することが可能であるが、抽出効率を改善し、かつポリメトキシフラボノイド、特にノビレチン及び／又はタンゲレチンの含有量を高めるためには、１４０〜１８０℃の範囲が好ましい。また、圧力は、抽出流体として水を用いる場合は、３〜１５ＭＰａの範囲が好ましい。
抽出時間は、温度や圧力によって適宜設定すればよいが、好ましくは０分〜１０分、さらに好ましくは０分〜５分の範囲が挙げられる。
抽出操作は、市販の装置を用いて行うことができる。
【００３４】
上記のようにして、水、有機溶媒又は有機溶媒の含水物を用いた抽出法、又は超臨界抽出法もしくは亜臨界抽出法により得られる抽出物のノビレチン、及びタンゲレチンの収量は、シークワーシャー果実及び又は葉等の重量に対し、各々、通常約０．００１質量％から約３質量％、及び０．０００１質量％から２質量％である。
【００３５】
上記のようにして得られるシークワーシャー抽出物は、固形物換算で、好ましくは０．３質量％以上、より好ましくは０．６質量％以上、さらに好ましくは１質量％以上、さらに好ましくは３質量％以上、特に好ましくは１０質量％以上のポリメトキシフラボノイドを含有する。また、このようなシークワーシャー抽出物は、固形物換算で、好ましくは０．２質量％以上、より好ましくは０．４質量％以上、更に好ましくは２質量%以上、特に好ましくは５質量％以上のノビレチン、及び／又は、好ましくは０．１質量％以上、好ましくは０．２質量％以上、更に好ましくは１質量％以上、特に好ましくは２質量％以上のタンゲレチンを含む。「固形物換算で」とは、「固形物（固形分）の量として」と同義である。また、薬剤又は食品等が、シークワーシャー抽出物、ポリメトキシフラボノイド、ノビレチン、又はタンゲレチンを、「固形物換算で」Ｘ％以上含むとの文言は、薬剤又は食品の固形物に対するシークワーシャー抽出物中の固形物、ポリメトキシフラボノイド、ノビレチン、又はタンゲレチンの量がＸ％であることを意味する。
【００３６】
抽出物は、そのまま又は濃縮したものを使用してもよく、溶媒を一部又は完全に除去してもよい。なお、濃縮や溶媒の除去については、各種クロマトグラフィー法、蒸留、乾固、再結晶等の方法により実施することができる。特に、医薬品又は飲食品に含まれることが好ましくない有機溶媒、例えばメタノール、プロパノール、ブタノール、酢酸エチル、アセトン、ヘキサン、クロロホルム、ジエチルエーテル等は、除去することが好ましい。また、ポリメトキシフラボノイド、特にノビレチン及び／又はタンゲレチンの含有量が高くなるように、抽出物を分画してもよい。ノビレチン及び／又はタンゲレチン等のポリメトキシフラボノイドの含有量は、ＨＰＬＣ等により測定することができる。
【００３７】
上記のようなシークワーシャー抽出物、又はポリメトキシフラボノイドは、そのまま筋萎縮抑制剤（以下、「本発明の薬剤」とも記載する。）、または飲食品もしくは飼料の有効成分として利用することが可能である。シークワーシャー抽出物、又はポリメトキシフラボノイドは、溶液であってもよく、常法により凍結乾燥または噴霧乾燥して粉末として保存、使用することもできる。
【００３８】
本発明の薬剤は、一態様として、医薬又はその有効成分として利用することができる。本発明の薬剤は、シークワーシャー抽出物、又はポリメトキシフラボノイドをそのまま、若しくはこれらを製剤学的に許容される製剤担体と組み合わせて、経口的にヒトを含む哺乳動物に投与することができる。
【００３９】
本発明の薬剤の製剤形態は特に限定されず、錠剤（糖衣錠、腸溶性コーティング錠、バッカル錠を含む。）、散剤、カプセル剤（腸溶性カプセル、ソフトカプセルを含む。）、顆粒剤（コーティングしたものを含む。）、丸剤、トローチ剤、封入リポソーム剤、液剤、又はこれらの製剤学的に許容され得る徐放製剤等を例示することができる。製剤化にあたっては製剤成分として通常の経口薬剤に汎用される、担体、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、界面活性剤、溶剤等の添加剤を使用できる。また、本発明の効果を損わない限り、シークワーシャー抽出物、又はポリメトキシフラボノイドと、公知の、もしくは将来的に見出される筋萎縮抑制作用を有する薬剤、又は医薬組成物とを併用してもよい。併用する医薬組成物は、本発明の薬剤中に有効成分の一つとして含有させてもよいし、本発明の薬剤中には含有させずに別個の薬剤として組み合わせて商品化してもよい。
【００４０】
上記の製剤に用いる担体及び賦形剤としては、乳糖、ブドウ糖、白糖、マンニトール、馬鈴薯澱粉、トウモロコシ澱粉、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、結晶セルロース、カンゾウ末、ゲンチアナ末等を、結合剤としては例えば澱粉、ゼラチン、シロップ、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース等を、それぞれ例示することができる。
【００４１】
また、崩壊剤としては、澱粉、寒天、ゼラチン末、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、及びアルギン酸ナトリウム等を例示することができる。
【００４２】
更に、滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、水素添加植物油、及びマクロゴール等、着色剤としては医薬品に添加することが許容されている赤色２号、黄色４号、及び青色１号等を例示することができる。
【００４３】
錠剤及び顆粒剤は、必要に応じ白糖、ヒドロキシプロピルセルロース、精製セラック、ゼラチン、ソルビトール、グリセリン、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、フタル酸セルロースアセテート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メチルメタクリレート、及びメタアクリル酸重合体等により被膜することもできる。
【００４４】
本発明の一態様は、筋萎縮抑制用の医薬の製造における、シークワーシャー抽出物、又はポリメトキシフラボノイドの使用である。また、本発明の他の態様は、筋萎縮の抑制に用いられるシークワーシャー抽出物、又はポリメトキシフラボノイドである。また、本発明の他の態様は、シークワーシャー抽出物、又はポリメトキシフラボノイドを哺乳動物に投与する、筋萎縮の抑制法である。
【００４５】
本発明の薬剤中に含まれるシークワーシャー抽出物、又はポリメトキシフラボノイドの量は、特に限定されず適宜選択すればよいが、例えば、シークワーシャー抽出物を用いる場合は、シークワーシャー抽出物中の固形物の量として、好ましくは１質量％以上、より好ましくは１０質量％以上とするのがよい。あるいは、薬剤中に含まれるシークワーシャー抽出物の量は、ポリメトキシフラボノイド含有量として、好ましくは０．３質量％以上、より好ましくは０．６質量％以上、更に好ましくは３．０質量％以上、特に好ましくは１０質量％以上とするのがよい。シークワーシャー抽出物の含有量の上限は特に制限されないが、シークワーシャー抽出物中の固形物の量として、例えば９５質量％以下、９０質量％以下、又は５０質量％以下、あるいは、ポリメトキシフラボノイドの量として、例えば９５質量％以下、８０質量％以下、６０質量％以下、又は４０質量％以下であってよい。
【００４６】
また、ポリメトキシフラボノイドを用いる場合は、薬剤中に含まれるポリメトキシフラボノイドの量は、固形物換算で０．００１質量％以上、好ましくは０．１質量％以上、より好ましくは０．３質量％以上、更に好ましくは０．６質量％以上、更に好ましくは３．０質量％以上、特に好ましくは１０質量％以上とするのがよい。ポリメトキシフラボノイドの含有量の上限は特に制限されないが、例えば９５質量％以下、７０質量％以下、６０質量％以下、５０質量％以下、又は４０質量％以下であってよい。
また、ポリメトキシフラボノイドとしてノビレチンを用いる場合は、薬剤中に含まれるノビレチンの量は、固形物換算で０．０００７質量％以上、好ましくは０．０７質量％以上、より好ましくは０．２質量％以上、更に好ましくは０．４質量％以上、更に好ましくは２．０質量％、特に好ましくは５質量％以上とするのがよい。ノビレチンの含有量の上限は特に制限されないが、例えば９５質量％以下、７０質量％以下、５０質量％以下、３０質量％以下、又は１０質量％以下であってよい。
また、ポリメトキシフラボノイドとしてタンゲレチンを用いる場合は、薬剤中に含まれるタンゲレチンの量は、固形物換算で０．０００４質量％以上、好ましくは０．０４質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上、更に好ましくは０．２質量％以上、更に好ましくは１．０質量％以上、特に好ましくは２質量％以上とするのがよい。タンゲレチンの含有量の上限は特に制限されないが、例えば９５質量％以下、７０質量％以下、５０質量％以下、３０質量％以下、又は１０質量％以下であってよい。
ノビレチン、タンゲレチン、又は他のポリメトキシフラボノイド等、複数種のポリメトキシフラボノイドを用いる場合は、薬剤中の含有量は、上記範囲に応じて適宜設定すればよい。
【００４７】
本発明の薬剤は、筋萎縮、例えば加齢又は寝たきり、無運動、無重力飛行に起因する筋萎縮；怪我の治療等で行われる四肢の固定、又は術後の安静に起因する筋萎縮；ステロイド等の薬剤の副作用に起因する筋萎縮；麻痺、脊髄損傷、末梢神経の外傷、骨関節炎、慢性関節リウマチ、糖尿病、熱傷、ポリオ、ギラン−バレー症候群、筋ジストロフィー、先天性ミオトニア、AIDSやウィルス性肝炎などの炎症を伴う感染症、感染症に伴う敗血症、炎症性腸疾患、膠原病、腎不全、肝不全、心不全、癌、悪性腫瘍、悪液質、疾患の末期症状における食欲不振や異化亢進等による筋萎縮の予防及び治療；筋萎縮に起因する筋力低下；筋萎縮性側索硬化症、リハビリテーション時の日常生活動作（ADL：activities of daily living）回復に有用である。また、筋萎縮の予防、治療には、筋萎縮関連遺伝子（Atrogenes）、及び／又は筋成長の抑制に関与する遺伝子の発現を抑制することを含む。筋萎縮関連遺伝子としては、MuRF1（Nikawa, T. et al., The FASEB Journal express article 10.1096/fj.03-0419fje. Published online January 8, 2004）、Atrogin-1（Gomes, M.D. et al., PNAS, 98(25) 2001）が、筋成長の抑制に関与する遺伝子としてはMyostatin（growth/differentiation factor 8ととも呼ばれる）遺伝子が挙げられる。
【００４８】
本発明の薬剤の投与時期は特に限定されず、投与対象の状態に応じて適宜選択することが可能である。
本発明の薬剤の投与量は、投与対象の年齢、性別、状態、その他の条件等により適宜選択される。シークワーシャー抽出物中の固形物の量として、好ましくは１〜２５０ｍｇ／ｋｇ／日での範囲となる量を目安とするのが良い。
なお、シークワーシャー抽出物中の固形物に含まれるポリメトキシフラボノイド換算量として、好ましくは０．０３（ｍｇ／ｋｇ／日）以上、より好ましくは０．３（ｍｇ／ｋｇ／日）以上、更に好ましくは３（ｍｇ／ｋｇ／日）以上、特に好ましくは３０（ｍｇ／ｋｇ／日）以上となる量を目安として投与することがよい。この場合、上限は１５０（ｍｇ／ｋｇ／日）以下、好ましくは１２０（ｍｇ／ｋｇ／日）以下、より好ましくは９０（ｍｇ／ｋｇ／日）以下、特に好ましくは又は６０（ｍｇ／ｋｇ／日）以下とするのがよい。
【００４９】
また、本発明の薬剤の投与量は、ポリメトキシフラボノイドの量として、好ましくは０．０３（ｍｇ／ｋｇ／日）以上、より好ましくは０．３（ｍｇ／ｋｇ／日）以上、更に好ましくは３（ｍｇ／ｋｇ／日）以上、特に好ましくは３０（ｍｇ／ｋｇ／日）以上となる量を目安とするのが良い。投与量の上限は１５０（ｍｇ／ｋｇ／日）以下、好ましくは１２０（ｍｇ／ｋｇ／日）以下、より好ましくは９０（ｍｇ／ｋｇ／日）以下、特に好ましくは６０（ｍｇ／ｋｇ／日）以下とするのがよい。
またノビレチンの量としては、好ましくは０．０２（ｍｇ／ｋｇ／日）以上、より好ましくは０．２（ｍｇ／ｋｇ／日）以上、更に好ましくは２（ｍｇ／ｋｇ／日）以上、特に好ましくは２０（ｍｇ／ｋｇ／日）以上となる量を目安とするのが良い。投与量の上限は９０（ｍｇ／ｋｇ／日）以下、好ましくは７２（ｍｇ／ｋｇ／日）以下、より好ましくは５４（ｍｇ／ｋｇ／日）以下、特に好ましくは３６（ｍｇ／ｋｇ／日）以下とするのがよい。
またタンゲレチンの量としては、好ましくは０．０１（ｍｇ／ｋｇ／日）以上、より好ましくは０．１（ｍｇ／ｋｇ／日）以上、更に好ましくは１（ｍｇ／ｋｇ／日）以上、特に好ましくは１０（ｍｇ／ｋｇ／日）以上となる量を目安とするのが良い。投与量の上限は６０（ｍｇ／ｋｇ／日）以下、好ましくは４８（ｍｇ／ｋｇ／日）以下、より好ましくは３６（ｍｇ／ｋｇ／日）以下、特に好ましくは２４（ｍｇ／ｋｇ／日）以下とするのがよい。
また、投与期間が長い場合、例えば１ヶ月から数ヶ月、又はそれ以上の場合は、薬剤の投与量は上記範囲の１／１０〜１／１００程度でも効果が期待できる。
投与期間にかかわらず、薬剤は１日１回又は複数回に分けて投与することができる。
【００５０】
本発明の薬剤、又はその有効成分であるシークワーシャー抽出物、若しくはポリメトキシフラボノイドは、飲食品（飲料又は食品）に含有させることもできる。
【００５１】
また、シークワーシャー抽出物、若しくはポリメトキシフラボノイド、又は本発明の薬剤を有効成分として飲食品に含有させ、筋萎縮抑制剤の一態様として、筋萎縮抑制作用を有する飲食品として加工することも可能である。
【００５２】
飲食品としては、シークワーシャー抽出物、又はポリメトキシフラボノイドの効果を損なわず、経口摂取できるものであれば形態や性状は特に制限されず、シークワーシャー抽出物を含有させること以外は、通常飲食品に用いられる原料を用いて通常の方法によって製造することができる。
【００５３】
上記のような食品としては、液状、ペースト状、ゲル状固体、粉末等の形態を問わず、錠菓、流動食等のほか、例えば、パン、マカロニ、スパゲッティ、めん類、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等の小麦粉製品；即席めん、カップめん、レトルト・調理食品、調理缶詰め、電子レンジ食品、即席スープ・シチュー、即席みそ汁・吸い物、スープ缶詰め、フリーズ・ドライ食品、その他の即席食品等の即席食品類； 農産缶詰め、果実缶詰め、ジャム・マーマレード類、漬物、煮豆類、農産乾物類、シリアル（穀物加工品）等の農産加工品； 水産缶詰め、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品、水産珍味類、つくだ煮類等の水産加工品；畜産缶詰め・ペースト類、畜肉ハム・ソーセージ等の畜産加工品；加工乳、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料類、チーズ、アイスクリーム類、調製粉乳類、クリーム、その他の乳製品等の乳・乳製品；バター、マーガリン類、植物油等の油脂類；しょうゆ、みそ、ソース類、トマト加工調味料、みりん類、食酢類等の基礎調味料；調理ミックス、カレーの素類、たれ類、ドレッシング類、めんつゆ類、スパイス類、その他の複合調味料等の複合調味料・食品類；素材冷凍食品、半調理冷凍食品、調理済冷凍食品等の冷凍食品；キャラメル、キャンディー、チューインガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、米菓子、豆菓子、デザート菓子、ゼリー、その他の菓子などの菓子類；炭酸飲料、天然果汁、果汁飲料、果汁入り清涼飲料、果肉飲料、果粒入り果実飲料、野菜系飲料、豆乳、豆乳飲料、コーヒー飲料、お茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、スポーツ飲料、栄養飲料、アルコール飲料、その他の嗜好飲料等の嗜好飲料類、ベビーフード、ふりかけ、お茶潰けのり等のその他の市販食品等；育児用調製粉乳；経腸栄養食；機能性食品（特定保健用食品、栄養機能食品）等が挙げられる。
【００５４】
さらに、シークワーシャー抽出物、若しくはポリメトキシフラボノイド、又は本発明の薬剤を有効成分として飼料中に含有させ、筋萎縮抑制剤の一態様として、筋萎縮抑制作用を有する飼料として加工することも可能である。
【００５５】
飼料の形態としては特に制限されず、例えば、トウモロコシ、小麦、大麦、ライ麦、マイロ等の穀類；大豆油粕、ナタネ油粕、ヤシ油粕、アマニ油粕等の植物性油粕類；フスマ、麦糠、米糠、脱脂米糠等の糠類；コーングルテンミール、コーンジャムミール等の製造粕類；魚粉、脱脂粉乳、ホエイ、イエローグリース、タロー等の動物性飼料類；トルラ酵母、ビール酵母等の酵母類；第三リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の鉱物質飼料；油脂類；単体アミノ酸；糖類等を配合することにより製造できる。飼料の形態としては、例えば、ペットフード、家畜飼料、養魚飼料等が挙げられる。
【００５６】
本発明の飲食品（飼料を含む）中に含まれるシークワーシャー抽出物、又はポリメトキシフラボノイドの量は、特に限定されず適宜選択すればよいが、例えば、シークワーシャー抽出物を用いる場合は、シークワーシャー抽出物中の固形物の量として、好ましくは１質量％以上とするのがよい。あるいは、飲食品中に含まれるシークワーシャー抽出物の量は、ポリメトキシフラボノイド含有量として、０．３質量％以上、好ましくは０．６質量％以上、更に好ましくは３質量％以上、特に好ましくは１０質量％以上とするのが良い。シークワーシャー抽出物の含有量の上限は特に制限されないが、シークワーシャー抽出物中の固形物の量として、例えば９５質量％以下、５０質量％以下、３０質量％以下、２０質量％以下、又は１０質量％以下、あるいは、ポリメトキシフラボノイドの量として、例えば９５質量％以下、７０質量％以下、６０質量％以下、５０質量％以下、又は４０質量％以下であってよい。
【００５７】
また、ポリメトキシフラボノイドを用いる場合は、飲食品中に含まれるポリメトキシフラボノイドの量は、固形物換算で、好ましくは０．３質量％以上、より好ましくは０．６質量％以上、更に好ましくは３．０質量％以上、特に好ましくは１０質量％以上とするのが良い。ポリメトキシフラボノイドの含有量の上限は特に制限されないが、例えば９５質量％以下、７０質量％以下、６０質量％以下、５０質量％以下、又は４０質量％以下であってよい。
また、ノビレチンを用いる場合は、飲食品中に含まれるノビレチンの量は、固形物換算で、好ましくは０．２質量％以上、より好ましくは０．４質量％以上、更に好ましくは２．０質量％以上、特に好ましくは５質量％以上とするのが良い。ノビレチンの含有量の上限は特に制限されないが、例えば９５質量％以下、７０質量％以下、５０質量％以下、３０質量％以下、又は１０質量％以下であってよい。
また、タンゲレチンを用いる場合は、飲食品中に含まれるタンゲレチンの量は、固形物換算で、好ましくは０．１質量％以上、より好ましくは０．２質量％以上、更に好ましくは１．０質量％以上、特に好ましくは２質量％以上とするのが良い。タンゲレチンの含有量の上限は特に制限されないが、例えば９５質量％以下、７０質量％以下、５０質量％以下、３０質量％以下、又は１０質量％以下であってよい。
【００５８】
また、本発明の飲食品（飼料を含む）は、単回摂取あたり、シークワーシャー抽出物を、固形物換算で５ｍｇ以上、好ましくは１８ｍｇ以上、より好ましくは１８０ｍｇ以上含むことが望ましい。
また、本発明の飲食品（飼料を含む）は、単回摂取あたり、ポリメトキシフラボノイドを、固形物換算で１．８ｍｇ以上、好ましくは１８ｍｇ以上、より好ましくは１８０ｍｇ以上含むことが望ましい。
また、本発明の飲食品（飼料を含む）は、単回摂取あたり、ノビレチンを、固形物換算で１．２ｍｇ以上、好ましくは１２ｍｇ以上、より好ましくは１２０ｍｇ以上含むことが望ましい。
また、本発明の飲食品（飼料を含む）は、単回摂取あたり、タンゲレチンを、固形物換算で０．６ｍｇ以上、好ましくは６ｍｇ以上、より好ましくは６０ｍｇ以上含むことが望ましい。
【実施例】
【００５９】
以下に、実施例を用いて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。【００６０】
〔実施例１〕
ラットの糖質コルチコイド誘発筋萎縮モデルにおいて、シークワーシャー抽出物、ポリメトキシフラボノイド、ノビレチン、又はタンゲレチンによる筋萎縮の抑制効果を評価した。【００６１】
使用したシークワーシャー抽出物（市販品、アークレイ株式会社製）は、シークワーシャー果実の絞りかすから含水エタノールで抽出した抽出物に包接剤としてシクロデキストリンを添加したものであり、通常の仕様では以下の組成を有する。【００６２】
固形物                    ９２質量％以上
シクロデキストリン        ５０質量％
ポリメトキシフラボノイド  １０質量％以上【００６３】
下記実験に用いたシークワーシャー抽出物（シクロデキストリンを含む）中のノビレチン含有量は６．９〜８．５質量％、タンゲレチン含有量は３．４〜４．１質量％であった。
筋萎縮モデルの誘導に用いた糖質コルチコイドとしては、デキサメタゾンを用いた。【００６４】
雄性SDラット(15月齢)を１週間予備飼育し、３群(デキサメタゾン非投与群；CTL、デキサメタゾン投与群；DEX、デキサメタゾン及びシークワーシャー抽出物投与群；SE)に群分けした（DEX, CTL群n=6、SE群n=5）。【００６５】
その後、DEX群、CTL群のラットには、標準餌AIN-93M（日本クレア株式会社製）を、SE群にはAIN-93Mにシークワーシャー抽出物を１質量％の割合で添加した飼料を２週間給餌した。【００６６】
２週間の給餌後、DEX群、及びSE群には、デキサメタゾンを腹腔内に体重1kgあたり750μgを１日１回５日間投与し、筋萎縮を誘導した。CTL群には、生理食塩水を腹腔内に１日１回５日間投与した。【００６７】
デキサメタゾン投与開始から６日目にラットを解剖に供し、左後肢前脛骨筋を摘出し、筋湿重量を測定した。萎縮抑制効果は、各群の筋重量差により評価した。【００６８】
表１に示すように、デキサメタゾン投与群（DEX）の前脛骨筋重量は、デキサメタゾン非投与群（CTL）に対し約78.7％程度にまで有意に著しく減少しており、デキサメタゾン投与により筋肉が萎縮したことが確認された。また、シークワシャー抽出物を配合した飼料を摂取させたデキサメタゾン及びシークワーシャー抽出物投与群（SE）の筋重量はDEX群に対して有意に大きく（CTLに対して約92.3％、p<0.05；Dunnett検定によるDEX群に対する統計学的有意差）、シークワーシャー抽出物により筋肉の萎縮が抑制されたことが確認された。【００６９】
【表１】
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【００７０】
〔実施例２〕
上記実施例１で採取した前脛骨筋を使用して、筋萎縮に関与する遺伝子の発現量を評価した。【００７１】
前脛骨筋は、採取後直に液体窒素中で凍結させ、Trizol Reagent(Invitrogen社製)中でホモジナイザーを用いて粉砕した後、RNeasy mini kit（QIAGEN社製）を用いて、total RNA（全RNA）を抽出した。total RNAからHigh capacity cDNA Reverse kit（ABI社製）を用いてcDNAを合成した。合成したcDNAと、Atrogin-1、MuRF1、Myostatinの各遺伝子を増幅するためのプライマー(ABI社製)と、Taqman Fast Universal PCR Master Mix(ABI社製)とを混合し、リアルタイム−PCR法により試験サンプル中に存在する各遺伝子発現量を、DEX群を１として相対的に定量解析した。統計処理は、DEX群に対する各群の値について、Dunnett検定を用いて統計学的な有意差を検定した。【００７２】
筋萎縮時は、筋タンパク質合成の減少に加え、筋タンパク質分解の亢進が起こっていることが知られている。骨格筋の主要なタンパク質分解系には、ユビキチン−プロテアソーム系、カルパイン系、オートファジー系の３つが存在し、中でも、ユビキチン−プロテアソーム系が重要な働きを担っていると考えられている。タンパク質はユビキチンリガーゼにより標識され、ユビキチン化されたタンパク質はプロテアソームで分解される。ユビキチン−プロテオソーム経路を阻害することにより、筋萎縮時のタンパク質分解を抑制できると考えられる（Tawa, N.E. Jr., J. Clin. Invest. 1997, 100(1):197-203）。【００７３】
これまでに、筋萎縮時に遺伝子発現量が増加していることが明らかとなっている筋特異的ユビキチンリガーゼとしては、MuRF1（Nikawa, T. et al., The FASEB Journal express article 10.1096/fj.03-0419fje. Published online January 8, 2004）、Atrogin-1（Gomes, M.D. et al., PNAS, 98(25) 2001）が知られている。また、筋成長の抑制因子としてMyostatin（growth/differentiation factor 8とも呼ばれる）遺伝子が知られている（McPherron, A.C. et al., Nature, 387:83-90, 1997）。【００７４】
リアルタイムPCRにより各遺伝子の発現量を解析した結果を図１に示す。
DEX群の遺伝子発現量平均値を１．０とした時の、CTL群の遺伝子発現量は、Atrogin-1遺伝子では０．２６±０．０６、MuRF1遺伝子では０．１０±０．０２と、デキサメタゾンの投与により有意に増加していることが確認された。それに対し、SE群の遺伝子発現量は、Atrogin-1遺伝子では０．７３±０．１２（p<０．０１）、MuRF１遺伝子では０．５４±０．１５（p<０．０５）と、どちらもDEX群に対し有意に遺伝子発現量が低下しており、シークワーシャー抽出物の摂取により筋萎縮関連遺伝子発現が有意に抑制されることが確認された。【００７５】
〔実施例３〕
実施例１、２においては、シークワーシャー抽出物を飼料に１質量％混合し、給餌していたが、ポリメトキシフラボノイド、ノビレチン（東京化成工業社製）、タンゲレチン（東京化成工業社製）それぞれ単独での評価をするために、飼料への混合割合をポリメトキシフラボノイドは０．００１質量％（PMF群）、ノビレチンは０．０００７質量％（NOB群）、タンゲレチンは０．０００４質量％（TAN群）に設定し、２週間摂餌させた後、各群にデキサメタゾンを投与し、筋萎縮を誘導した。これらの群を、無処置群（CTL群）、デキサメタゾン投与群（DEX群）と比較、検討した。ポリメトキシフラボノイドは、ノビレチンとタンゲレチンを６．９：３．４の割合で混合した混合物を用いた。
動物種としては、８ヵ月齢のSDラットを使用し、実施例１、２と同じ試験系により評価した。デキサメタゾン投与開始から６日目にラットから左後肢前脛骨筋を採取した。【００７６】
採取した前脛骨筋より実施例２と同様に遺伝子発現量を評価した結果を図２に示す。DEX群の遺伝子発現量平均値を１．０とした時の、CTL群の遺伝子発現量は、Atrogin-1遺伝子では０．２５±０．１１、MuRF1遺伝子では０．１１±０．０４と、デキサメタゾンの投与により有意に増加していることが確認された。また、Myostatin遺伝子においても、０．８１±０．３９と発現量の増加が確認された。それに対し、PMF群においては、Myostatin遺伝子は、０．４０±０．０８と発現量の低下が見られた。NOB群においては、Atrogin-1遺伝子は０．８５±０．２９と発現量の低下が見られた。TAN群においても、MuRF1遺伝子は０．７７±０．３５と発現量の低下が見られた。【００７７】
試験に使用したラットの１日あたりの平均摂餌量は２０．１ｇであることから、PMF群のポリメトキシフラボノイド摂取量は、１日約０．２０ｍｇであった。更に、平均体重（５９２．７ｇ）から、体重あたりの１日摂取量を換算すると、０．３３９ｍｇ／体重１ｋｇとなる。また、NOB群のノビレチン摂取量は、１日約０．１４ｍｇであり、体重あたりの１日摂取量は、約０．２３７ｍｇ／体重１ｋｇであった。また、TAN群のタンゲレチン摂取量は、１日約０．０８ｍｇであり、体重あたりの１日摂取量は、約０．１３６ｍｇ／体重１ｋｇであった。これらデータから、各物質の効果が期待できる摂取量としては、ポリメトキシフラボノイドとしては、０．３ｍｇ／ｋｇ／日、ノビレチンとしては、０．２ｍｇ／ｋｇ／日、タンゲレチンとしては０．１ｍｇ／ｋｇ／日程度と考えられる。
また、本試験においては摂取期間が１９日間とごく短期間で評価していることを考慮すると、継続的に摂取することでより少ない量でも同様の効果が期待できる。【００７８】
〔実施例４〕
雄性SDラット(１８ヵ月齢)を１週間予備飼育し、３群(対照群；CTL、後肢固定群；FIX、後肢固定及びシークワーシャー抽出物投与群；SE)に群分けした(FIX群、CTL群n＝７、SE群n＝６)。【００７９】
その後、FIX群、CTL群のラットには、標準餌AIN-93Mを、SE群にはAIN-93Mにシークワーシャー抽出物を１質量％の割合で添加した飼料を２週間給餌した。
２週間の給餌後、FIX群、及びSE群には、１週間ギプスにより両後肢を固定することで、筋萎縮を誘導した。CTL群には、ギプスによる固定は行わなかった。
ギプスによる固定開始から８日目に解剖に供し、ヒラメ筋を採取、筋重量を測定した。
統計処理は、ＦＩＸ群に対する各群の値について、Dunnett検定を用いて統計学的な有意差を検定した。【００８０】
結果を図３に示す。ギプスによる後肢の固定により、体重、ヒラメ筋重量が共に減少した。ヒラメ筋の体重１ｋｇあたりの重量を評価すると、CTL群は０．３７±０．０３であるのに対し、FIX群では０．３３±０．０４と低下していたが、SE群は、０．３９±０．０７とFIX群に対し有意に増加し（ｐ＜０．０５）、CTL群と同等あるいはそれ以上まで増加していた。【００８１】
〔実施例５〕ゼリー食品
以下に記載の原料のうち、シクロデキストリンを用いて包接処理したノビレチン溶液を調製し、当該ノビレチン溶液と、以下に記載のその他の原料とを水に溶解して、ゼリー原料溶解液を調製した。当該溶解液を、常法に従い殺菌し、容器に溶解液１００ｇを充填して、以下の配合のゼリー食品(１個１００ｇ)を常法に従って製造した。得られたゼリー食品１個分のノビレチンの含有量は７０ｍｇである。本食品は、１日に２個を、長期間摂取することで、筋萎縮の抑制作用を示す結果が得られることが明らかとなった。【００８２】
デキストリン（松谷化学工業社製）                  ２５．０質量％
ホエイタンパク質（森永乳業社製）                  １２．５質量％
ゲル化剤（三栄源エフ・エフ・アイ社製）            ０．３質量％
クエン酸（三栄源エフ・エフ・アイ社製）            ０．２質量％
アスコルビン酸Ｎａ（DSMニュートリション社製）     ０．１質量％
ノビレチン（東京化成工業社製）                    ０．０７質量％
シクロデキストリン（三栄源エフ・エフ・アイ社製）  ０．０７質量％
香料（三栄源エフ・エフ・アイ社製）                ０．０２質量％
ビタミンＤ（三栄源エフ・エフ・アイ社製）          ５．０×１０-7質量％
水                                                ６１．７４質量％【００８３】
〔実施例６〕飲料
以下に記載の原料のうち、シクロデキストリンを用いて包接処理したタンゲレチン溶液を調製し、当該タンゲレチン溶液と、以下に記載のその他の原料とを水に溶解して、飲料原料溶解液を調製し、容器に充填して、以下の配合の飲料（１本５００ｍｌ）を常法に従って製造した。得られた飲料１本分のタンゲレチンの含有量は５５．５１ｍｇである。本食品は、１日に２本、長期間摂取することで、筋萎縮の抑制作用を示す結果が得られることが明らかとなった。【００８４】
デキストリン（松谷化学工業社製）                  ７．０質量％
タンパク質加水分解物（森永乳業社製）              ０．５質量％
クエン酸（三栄源エフ・エフ・アイ社製）            ０．２質量％
アスコルビン酸Ｎａ（DSMニュートリション社製）     ０．２質量％
香料（三栄源エフ・エフ・アイ社製）                ０．０２質量％
甘味料（三栄源エフ・エフ・アイ社製）              ０．０１質量％
タンゲレチン（東京化成工業社製）                  ０．００８質量％
シクロデキストリン（三栄源エフ・エフ・アイ社製）  ０．００８質量％
水                                                ９２．０５質量％【００８５】
〔実施例７〕錠菓
以下の配合の錠菓を常法により打錠して、１粒２５０ｍｇの錠菓を製造した。得られた錠菓１ｇ中のシークワーシャー抽出物含有量は、６０ｍｇであった。本原料に使用したシークワーシャー抽出物のポリメトキシフラボノイド含有量は１０％以上であることから、ポリメトキシフラボノイド含有量としては、錠菓１ｇあたり６ｍｇ程度であった。本食品を１日１６粒、長期間摂取することで、筋萎縮の抑制作用を示す結果が得られることが明らかとなった。【００８６】
粉あめ（昭和産業社製）                          ８６．０質量％
シークワーシャー抽出物（アークレイ社製）        ６．０質量％
クエン酸（三栄源エフ・エフ・アイ社製）          ４．０質量％
香料（三栄源エフ・エフ・アイ社製）              ２．０質量％
乳化剤（花王社製）                              ２．０質量％【００８７】
〔実施例８〕チュアブル錠
以下の配合のチュアブル錠を常法に従って製造して、１粒２５０ｍｇのチュアブル錠を製造した。得られたチュアブル錠１ｇ中のシークワーシャー抽出物含有量は、２００ｍｇであった。本原料に使用したシークワーシャー抽出物のポリメトキシフラボノイド含有量は１０％以上であることから、ポリメトキシフラボノイド含有量としては、チュアブル錠１ｇあたり２０ｍｇ程度であった。本食品を１日４粒、長期間摂取することで、筋萎縮の抑制作用を示す結果が得られることが明らかとなった。【００８８】
エリスリトール（三菱化学フーズ社製）            ６８．０質量％
シークワーシャー抽出物（アークレイ社製）        ２０．０質量％
クエン酸（三栄源エフ・エフ・アイ社製）          ７．０質量％
タルク（三栄源エフ・エフ・アイ社製）            ３．０質量％
香料（三栄源エフ・エフ・アイ社製）              ２．０質量％【００８９】
〔実施例９〕経腸栄養剤（濃厚流動食）
カゼイン、難消化性デキストリンを温湯にて溶解した後、デキストリン、ミネラル混合物、ビタミン混合物、シクロデキストリンで包接したノビレチンを混合し、乳化剤とともに大豆油を加え、均質化した。溶液は、常法に従い殺菌、充填し、以下の配合の経腸栄養剤を製造した。なお、下記のミネラル混合物、ビタミン混合物は表２に示した量を混合した。得られた経腸栄養剤１０００ｍｌあたりのノビレチン含有量は４６ｍｇである。本食品を１日１０００ｍｌ、長期間摂取することで、筋萎縮の抑制作用を示す結果が得られることが明らかとなった。【００９０】
デキストリン（松谷化学工業社製）                １５．０質量％
カゼインナトリウム（森永乳業社製）              ４．０質量％
大豆油（太陽油脂社製）                          ３．０質量％
難消化性デキストリン（松谷化学工業社製）        １．０質量％
ミネラル混合物                                  ０．３質量％
乳化剤（三栄源エフ・エフ・アイ社製）            ０．０５質量％
ビタミン混合物                                  ０．０２質量％
香料（三栄源エフ・エフ・アイ社製）              ０．０１質量％
ノビレチン（東京化成工業社製）                  ０．００４６質量％
シクロデキストリン（三栄源エフ・エフ・アイ社製) ０．００４６質量％
水                                              ７６．６１０８質量％【００９１】
【表２】
2013099982.tif 000005
【産業上の利用可能性】
【００９２】
本発明によれば、筋萎縮抑制剤が提供される。本発明の筋萎縮抑制剤は、医薬として利用することができる。また、本発明の筋萎縮抑制剤は、シークワーシャー中に含まれる成分を有効成分としているため、安全性が高く飲食品等にも用いることができる。
【図１】
2013099982.tif 000006
【図２】
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【図３】
2013099982.tif 000008
【手続補正書】
【提出日】平成27年2月2日(2015.2.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シークワーシャー抽出物を有効成分として含有する、以下１）〜４）のいずれかの筋萎縮又はそれに起因する筋力低下に用いるための筋萎縮抑制剤：
１）加齢、寝たきり、無運動、又は無重力飛行に起因する筋萎縮、
２）四肢の固定、又は術後の安静に起因する筋萎縮、
３）ステロイド剤の副作用に起因する筋萎縮、
４）骨関節炎、慢性関節リウマチ、糖尿病、熱傷、炎症を伴う感染症、感染症に伴う敗血症、炎症性腸疾患、膠原病、腎不全、肝不全、心不全、癌、悪性腫瘍、悪液質、疾患の末期症状における食欲不振、又は異化亢進に起因する筋萎縮。
【請求項２】
前記シークワーシャー抽出物が、シークワーシャーの果実及び／又は葉の有機溶媒抽出物である、請求項１に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項３】
前記シークワーシャー抽出物が、シークワーシャーの果実及び／又は葉の超臨界抽出物又は亜臨界抽出物である、請求項１に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項４】
前記有機溶媒が、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、酢酸エチル、アセトン、ヘキサン、クロロホルム、ジエチルエーテル、及びこれらの有機溶媒の含水物からなる群より選ばれる、請求項２に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項５】
前記有機溶媒が、エタノール又は含水エタノールである、請求項４に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項６】
前記シークワーシャー抽出物が、固形物換算で０．３質量％以上のポリメトキシフラボノイドを含有する、請求項１〜５のいずれか一項に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項７】
前記シークワーシャー抽出物が、固形物換算で０．２質量％以上のノビレチン及び／又は０．１質量％以上のタンゲレチンを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項８】
さらに、ポリメトキシフラボノイドを水可溶化する包接剤を含む、請求項１〜７のいず
れか一項に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項９】
前記包接剤がシクロデキストリンであり、その含有量が、シークワーシャー抽出物の固形物とシクロデキストリンの合計量に対して０．１〜９５質量％である、請求項８に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項１０】
ポリメトキシフラボノイドを有効成分として含有する、以下１）〜４）のいずれかの筋萎縮又はそれに起因する筋力低下に用いるための筋萎縮抑制剤：
１）加齢、寝たきり、無運動、又は無重力飛行に起因する筋萎縮、
２）四肢の固定、又は術後の安静に起因する筋萎縮、
３）ステロイド剤の副作用に起因する筋萎縮、
４）骨関節炎、慢性関節リウマチ、糖尿病、熱傷、炎症を伴う感染症、感染症に伴う敗血症、炎症性腸疾患、膠原病、腎不全、肝不全、心不全、癌、悪性腫瘍、悪液質、疾患の末期症状における食欲不振、又は異化亢進に起因する筋萎縮。
【請求項１１】
前記ポリメトキシフラボノイドが、ノビレチン及び／又はタンゲレチンである、請求項１０に記載の筋萎縮抑制剤。
【請求項１２】
シークワーシャー抽出物をヒトを除く哺乳動物に投与する、以下１）〜４）のいずれかの筋萎縮又はそれに起因する筋力低下の抑制法：
１）加齢、寝たきり、無運動、又は無重力飛行に起因する筋萎縮、
２）四肢の固定、又は術後の安静に起因する筋萎縮、
３）ステロイド剤の副作用に起因する筋萎縮、
４）骨関節炎、慢性関節リウマチ、糖尿病、熱傷、炎症を伴う感染症、感染症に伴う敗血症、炎症性腸疾患、膠原病、腎不全、肝不全、心不全、癌、悪性腫瘍、悪液質、疾患の末期症状における食欲不振、又は異化亢進に起因する筋萎縮。
【請求項１３】
ポリメトキシフラボノイドをヒトを除く哺乳動物に投与する、以下１）〜４）のいずれかの筋萎縮又はそれに起因する筋力低下の抑制法：
１）加齢、寝たきり、無運動、又は無重力飛行に起因する筋萎縮、
２）四肢の固定、又は術後の安静に起因する筋萎縮、
３）ステロイド剤の副作用に起因する筋萎縮、
４）骨関節炎、慢性関節リウマチ、糖尿病、熱傷、炎症を伴う感染症、感染症に伴う敗血症、炎症性腸疾患、膠原病、腎不全、肝不全、心不全、癌、悪性腫瘍、悪液質、疾患の末期症状における食欲不振、又は異化亢進に起因する筋萎縮。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
非特許文献１ : Koga, N. et al., Biol. Pharm. Bull. 30(12) 2317-2323 (2007)
非特許文献２ : Yamamoto, D. et al., Muscle & Nerve, 41:819-827, 2010
非特許文献３ : Menezes, L.G. et al., J. Appl. Physiol., 102:698-703, 2007
非特許文献４ : Ohtsuka, A. et al., J. Nutr. Sci. Vitaminol., 44,779-786, 1998
非特許文献５ : Jackson, J.R. et al., Am. J. Physiol. Integr. Comp. Physiol., 299:R1572-R1581, 2010
非特許文献６ : You, J.-S. et al., Appl. Physiol. Nutr. Metab., 35:310-318, 2010
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
すなわち、本発明は、シークワーシャー抽出物を有効成分として含有する、以下１）〜４）のいずれかの筋萎縮又はそれに起因する筋力低下に用いるための筋萎縮抑制剤を提供する。
１）加齢、寝たきり、無運動、又は無重力飛行に起因する筋萎縮、
２）四肢の固定、又は術後の安静に起因する筋萎縮、
３）ステロイド剤の副作用に起因する筋萎縮、
４）骨関節炎、慢性関節リウマチ、糖尿病、熱傷、炎症を伴う感染症、感染症に伴う敗血症、炎症性腸疾患、膠原病、腎不全、肝不全、心不全、癌、悪性腫瘍、悪液質、疾患の末期症状における食欲不振、又は異化亢進に起因する筋萎縮。
本発明の筋萎縮抑制剤は、前記シークワーシャー抽出物が、シークワーシャーの果実及び／又は葉の有機溶媒抽出物、シークワーシャーの果実及び／又は葉の超臨界抽出物、又はシークワーシャーの果実及び／又は葉の亜臨界抽出物であることを好ましい態様としている。
また、本発明の筋萎縮抑制剤は、前記有機溶媒が、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、酢酸エチル、アセトン、ヘキサン、クロロホルム、ジエチルエーテル、及びこれらの有機溶媒の含水物からなる群より選ばれることを好ましい態様としている。なかでも、エタノール又は含水エタノールを使用することが特に好ましい。
また、本発明の筋萎縮抑制剤は、前記シークワーシャー抽出物が、固形物換算で０．３質量％以上のポリメトキシフラボノイドを含有することを好ましい態様としている。
また、本発明の筋萎縮抑制剤は、前記シークワーシャー抽出物が、固形物換算で０．２質量％以上のノビレチン及び／又は０．１質量％以上のタンゲレチンを含むことを好ましい態様としている。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
また、本発明は、ポリメトキシフラボノイドを有効成分として含有する、以下１）〜４）のいずれかの筋萎縮又はそれに起因する筋力低下に用いるための筋萎縮抑制剤を提供する。
１）加齢、寝たきり、無運動、又は無重力飛行に起因する筋萎縮、
２）四肢の固定、又は術後の安静に起因する筋萎縮、
３）ステロイド剤の副作用に起因する筋萎縮、
４）骨関節炎、慢性関節リウマチ、糖尿病、熱傷、炎症を伴う感染症、感染症に伴う敗血症、炎症性腸疾患、膠原病、腎不全、肝不全、心不全、癌、悪性腫瘍、悪液質、疾患の末期症状における食欲不振、又は異化亢進に起因する筋萎縮。
本発明の筋萎縮抑制剤は、ポリメトキシフラボノイドがノビレチン、及び／又は、タンゲレチンであることを好ましい態様としている。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
本発明はさらに、筋萎縮の抑制に用いられるシークワーシャー抽出物又はポリメトキシフラボノイドを提供する。
本発明はまた、シークワーシャー抽出物又はポリメトキシフラボノイドをヒトを除く哺乳動物に投与する、以下１）〜４）のいずれかの筋萎縮又はそれに起因する筋力低下の抑制法を提供する。
１）加齢、寝たきり、無運動、又は無重力飛行に起因する筋萎縮、
２）四肢の固定、又は術後の安静に起因する筋萎縮、
３）ステロイド剤の副作用に起因する筋萎縮、
４）骨関節炎、慢性関節リウマチ、糖尿病、熱傷、炎症を伴う感染症、感染症に伴う敗血症、炎症性腸疾患、膠原病、腎不全、肝不全、心不全、癌、悪性腫瘍、悪液質、疾患の末期症状における食欲不振、又は異化亢進に起因する筋萎縮。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
上記のようなシークワーシャー抽出物、又はポリメトキシフラボノイドは、そのまま筋萎縮抑制剤（以下、「本発明の薬剤」とも記載する。）の有効成分として利用することが可能である。シークワーシャー抽出物、又はポリメトキシフラボノイドは、溶液であってもよく、常法により凍結乾燥または噴霧乾燥して粉末として保存、使用することもできる。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
本発明の有効成分であるシークワーシャー抽出物、若しくはポリメトキシフラボノイドは、飲食品（飲料又は食品）に含有させることもできる。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
また、シークワーシャー抽出物、又はポリメトキシフラボノイドを有効成分として飲食品に含有させ、筋萎縮抑制作用を有する飲食品として加工することも可能である。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
さらに、シークワーシャー抽出物、又はポリメトキシフラボノイドを有効成分として飼料中に含有させ、筋萎縮抑制作用を有する飼料として加工することも可能である。
【国際調査報告】
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2013099982.tif 000011
2013099982.tif 000012
2013099982.tif 000013
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