(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象においてＲＮＡウイルスポリメラーゼを阻害するための組成物であって、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を含む組成物：
【化３】
0005902698.tif 000019
（式中、ＡはＮＨ２であり、ＢはＨである）。
【請求項２】
第２のＲＮＡウイルスポリメラーゼが阻害される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記第２のＲＮＡウイルスポリメラーゼが、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、フィロウイルス科、トガウイルス科、ピコルナウイルス科、およびコロナウイルス科のウイルスポリメラーゼからなる群から選択される、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記第２のＲＮＡウイルスポリメラーゼが、アデノウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、フニンウイルス、ピキンデウイルス、リフトバレー熱ウイルス、デング熱ウイルス、麻疹ウイルス、黄熱病ウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルウイルス、ＳＡＲＳ−ＣｏＶウイルスのポリメラーゼからなる群から選択される、請求項２または請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼが、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、フィロウイルス科、トガウイルス科、ピコルナウイルス科、およびコロナウイルス科のウイルスポリメラーゼからなる群から選択されるポリメラーゼである、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼが、アデノウイルス、ライノウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、天然痘ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタトロウイルス、タカリベウイルス、およびピキンデウイルスのポリメラーゼからなる群から選択される、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼが、アデノウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、フニンウイルス、麻疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、ピキンデウイルス、プンタトロウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ＳＡＲＳ−ＣｏＶウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルウイルスおよび黄熱病ウイルスのポリメラーゼからなる群から選択されるポリメラーゼである、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼが、エボラウイルス、黄熱病ウイルス、マールブルグウイルス、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスのポリメラーゼからなる群から選択されるポリメラーゼである、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼがエボラウイルスポリメラーゼである、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼが麻疹ウイルスポリメラーゼである、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼが黄熱病ウイルスポリメラーゼである、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼが、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスのポリメラーゼである、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼがマールブルグウイルスポリメラーゼである、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼが西ナイルウイルスポリメラーゼである、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼがデング熱ウイルスポリメラーゼである、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
前記対象が哺乳類である、請求項１〜１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
前記対象がヒトである、請求項１〜１６のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
追加の抗ウイルス剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１〜１７のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
前記追加の抗ウイルス剤が、ラニナミビル、オセルタミビル、ザナミビル、およびペラミビルからなる群から選択される、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記追加の抗ウイルス剤がペラミビルである、請求項１８または請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
投与が、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、および経口投与からなる群から選択される、請求項１〜２０のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
投与が静脈内投与である、請求項１〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２３】
投与が筋肉内投与である、請求項１〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
投与が経口投与である、請求項１〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
対象においてウイルス感染を治療するための組成物であって、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を含む組成物：
【化４】
0005902698.tif 000020
（式中、ＡはＮＨ２であり、ＢはＨである）。
【請求項２６】
前記ウイルス感染が、１つ以上のウイルスによる感染を含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記ウイルス感染が、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、フィロウイルス科、トガウイルス科、ピコルナウイルス科、およびコロナウイルス科からなる群から選択されるウイルスを含む、請求項２５〜２６のいずれかに記載の組成物。
【請求項２８】
前記ウイルス感染が、アデノウイルス、ライノウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、天然痘ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタトロウイルス、タカリベウイルス、およびピキンデウイルスからなる群から選択される、請求項２５〜２７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
前記ウイルス感染が、アデノウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、フニンウイルス、麻疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、ピキンデウイルス、プンタトロウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ＳＡＲＳ−ＣｏＶウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルウイルスおよび黄熱病ウイルスからなる群から選択される、請求項２５〜２８のいずれかに記載の組成物。
【請求項３０】
前記ウイルス感染が、エボラウイルス、黄熱病ウイルス、マールブルグウイルス、Ａ型インフルエンザウイルスおよびＢ型インフルエンザウイルスからなる群から選択される、請求項２５〜２９のいずれかに記載の組成物。
【請求項３１】
前記ウイルス感染がエボラウイルスである、請求項２５〜３０のいずれかに記載の組成物。
【請求項３２】
前記ウイルス感染が麻疹ウイルスである、請求項２５〜３０のいずれかに記載の組成物。
【請求項３３】
前記ウイルス感染が黄熱病ウイルスである、請求項２５〜３０のいずれかに記載の組成物。
【請求項３４】
前記ウイルス感染がマールブルグウイルスである、請求項２５〜３０のいずれかに記載の組成物。
【請求項３５】
前記ウイルス感染が、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスである、請求項２５〜３０のいずれかに記載の組成物。
【請求項３６】
前記ウイルス感染が西ナイルウイルスである、請求項２５〜２９のいずれかに記載の組成物。
【請求項３７】
前記ウイルス感染がデング熱ウイルスである、請求項２５〜２９のいずれかに記載の組成物。
【請求項３８】
追加の抗ウイルス剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項２５〜３７のいずれかに記載の組成物。
【請求項３９】
前記追加の抗ウイルス剤が、ラニナミビル、オセルタミビル、ザナミビル、およびペラミビルからなる群から選択される、請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
前記追加の抗ウイルス剤がペラミビルである、請求項３８または請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
投与が、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、および経口投与からなる群から選択される、請求項２５〜４０のいずれかに記載の組成物。
【請求項４２】
投与が静脈内投与である、請求項２５〜４１のいずれかに記載の組成物。
【請求項４３】
投与が筋肉内投与である、請求項２５〜４１のいずれかに記載の組成物。
【請求項４４】
投与が経口投与である、請求項２５〜４１のいずれかに記載の組成物。
【請求項４５】
対象においてウイルス感染を抑制するための組成物であって、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を含む組成物：
【化５】
0005902698.tif 000021
（式中、ＡはＮＨ２であり、ＢはＨである）。
【請求項４６】
前記ウイルス感染が、１つ以上のウイルスによる感染を含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
前記ウイルス感染が、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、フィロウイルス科、トガウイルス科、ピコルナウイルス科、およびコロナウイルス科からなる群から選択されるウイルスを含む、請求項４５〜４６のいずれかに記載の組成物。
【請求項４８】
前記ウイルス感染が、アデノウイルス、ライノウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、天然痘ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタトロウイルス、タカリベウイルス、およびピキンデウイルスからなる群から選択される、請求項４５〜４７のいずれかに記載の組成物。
【請求項４９】
前記ウイルス感染が、アデノウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、フニンウイルス、麻疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、ピキンデウイルス、プンタトロウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ＳＡＲＳ−ＣｏＶウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルウイルスおよび黄熱病ウイルスからなる群から選択される、請求項４５〜４８のいずれかに記載の組成物。
【請求項５０】
前記ウイルス感染が、エボラウイルス、黄熱病ウイルス、マールブルグウイルス、Ａ型インフルエンザウイルスおよびＢ型インフルエンザウイルスからなる群から選択される、請求項４５〜４９のいずれかに記載の組成物。
【請求項５１】
前記ウイルスがエボラウイルスである、請求項４５〜５０のいずれかに記載の組成物。
【請求項５２】
前記ウイルスが麻疹ウイルスである、請求項４５〜５０のいずれかに記載の組成物。
【請求項５３】
前記ウイルスが黄熱病ウイルスである、請求項４５〜５０のいずれかに記載の組成物。
【請求項５４】
前記ウイルスがマールブルグウイルスである、請求項４５〜５０のいずれかに記載の組成物。
【請求項５５】
前記ウイルス感染が、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスである、請求項４５〜５０のいずれかに記載の組成物。
【請求項５６】
前記ウイルスが西ナイルウイルスである、請求項４５〜４９のいずれかに記載の組成物。
【請求項５７】
前記ウイルスがデング熱ウイルスである、請求項４５〜４９のいずれかに記載の組成物。
【請求項５８】
追加の抗ウイルス剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項４５〜５７のいずれかに記載の組成物。
【請求項５９】
前記追加の抗ウイルス剤が、ラニナミビル、オセルタミビル、ザナミビル、およびペラミビルからなる群から選択される、請求項５８に記載の組成物。
【請求項６０】
前記追加の抗ウイルス剤がペラミビルである、請求項５８または請求項５９に記載の組成物。
【請求項６１】
投与が、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、および経口投与からなる群から選択される、請求項４５〜６０のいずれかに記載の組成物。
【請求項６２】
投与が静脈内投与である、請求項４５〜６１のいずれかに記載の組成物。
【請求項６３】
投与が筋肉内投与である、請求項４５〜６１のいずれかに記載の組成物。
【請求項６４】
投与が経口投与である、請求項４５〜６１のいずれかに記載の組成物。
【請求項６５】
対象においてウイルス感染を防止するための組成物であって、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を含む組成物：
【化６】
0005902698.tif 000022
（式中、ＡはＮＨ２であり、ＢはＨである）。
【請求項６６】
前記ウイルス感染が、１つ以上のウイルスによる感染を含む、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６７】
前記ウイルス感染が、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、フィロウイルス科、トガウイルス科、ピコルナウイルス科、およびコロナウイルス科からなる群から選択されるウイルスを含む、請求項６５〜６６のいずれかに記載の組成物。
【請求項６８】
前記ウイルス感染が、アデノウイルス、ライノウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、天然痘ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタトロウイルス、タカリベウイルス、およびピキンデウイルスからなる群から選択される１つ以上のウイルスによる感染を含む、請求項６５〜６７のいずれかに記載の組成物。
【請求項６９】
前記ウイルス感染が、アデノウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、フニンウイルス、麻疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、ピキンデウイルス、プンタトロウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ＳＡＲＳ−ＣｏＶウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルウイルスおよび黄熱病ウイルスからなる群から選択される、請求項６５〜６８のいずれかに記載の組成物。
【請求項７０】
前記ウイルス感染が、エボラウイルス、黄熱病ウイルス、マールブルグウイルス、Ａ型インフルエンザウイルスおよびＢ型インフルエンザウイルスからなる群から選択される、請求項６５〜６９のいずれかに記載の組成物。
【請求項７１】
前記ウイルスがエボラウイルスである、請求項６５〜７０のいずれかに記載の組成物。
【請求項７２】
前記ウイルスが麻疹ウイルスである、請求項６５〜７０のいずれかに記載の組成物。
【請求項７３】
前記ウイルスが黄熱病ウイルスである、請求項６５〜７０のいずれかに記載の組成物。
【請求項７４】
前記ウイルスがマールブルグウイルスである、請求項６５〜７０のいずれかに記載の組成物。
【請求項７５】
前記ウイルス感染が、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスである、請求項６５〜７０のいずれかに記載の組成物。
【請求項７６】
前記ウイルスが西ナイルウイルスである、請求項６５〜６９のいずれかに記載の組成物。
【請求項７７】
前記ウイルスがデング熱ウイルスである、請求項６５〜６９のいずれかに記載の組成物。
【請求項７８】
追加の抗ウイルス剤と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項６５〜７７のいずれかに記載の組成物。
【請求項７９】
前記追加の抗ウイルス剤が、ラニナミビル、オセルタミビル、ザナミビル、およびペラミビルからなる群から選択される、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８０】
前記追加の抗ウイルス剤がペラミビルである、請求項７８または請求項７９に記載の組成物。
【請求項８１】
投与が、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、および経口投与からなる群から選択される、請求項６５〜８０のいずれかに記載の組成物。
【請求項８２】
投与が静脈内投与である、請求項６５〜８１のいずれかに記載の組成物。
【請求項８３】
投与が筋肉内投与である、請求項６５〜８２のいずれかに記載の組成物。
【請求項８４】
投与が経口投与である、請求項６５〜８３のいずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１０年１０月１５日に出願された米国仮出願第６１／３９３，５２２号および２０１１年６月１日に出願された米国仮出願第６１／４９２，０５４号の優先権を主張するものであり、これらの両方は参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本明細書で引用する全ての特許、特許出願および参考文献の開示は、参照により、その全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
ウイルス性疾患は、グローバルパンデミックおよびインフルエンザなどの毎年の季節的流行に関与している。大流行は、増強された病原性によって特徴付けられ、突然発生し、その結果、深刻な死亡率をもたらし得る。重要なことには、ウイルス性疾患は、ヒトに限定されるものではない。例えば、インフルエンザは家畜類および鳥類にも影響を与え、これは、ヒトへの伝染のリスクの増加に加え、食糧供給に多大な影響を及ぼし得る。ウイルス感染に関連する代表的な病状には、例えば、インフルエンザ、天然痘、脳炎、西ナイル病、黄熱病、デング熱、肝炎、ヒト免疫不全、ポリオ、およびコクサッキーが含まれる。
【０００４】
Ａ型インフルエンザウイルスのゲノムは、３つのサブユニット（ＰＡ、ＰＢ１およびＰＢ２）のヘテロ三量体の複合体であるＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを有する。このＲＮＡポリメラーゼは、ウイルスＲＮＡの転写および複製を触媒する。ウイルスの転写および複製は、ＲＮＡポリメラーゼの活性に依存しているので、この酵素は、特に、薬物耐性ウイルスの最近の出現の結果として、新しい抗ウイルス化合物の開発の標的として注目が集まっている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、ウイルスの核酸ポリメラーゼの阻害のための方法および組成物、ならびに対象におけるウイルス感染の治療、抑制および／または防止に有用な方法および組成物を提供する。これらの方法は、治療有効量の式Ｉの化合物、その薬学的に許容される塩もしくは水和物、または式Ｉの化合物、その薬学的に許容される塩もしくは水和物、および薬学的に許容される担体を含む組成物を対象に投与することを含む。この組成物または方法は、場合によって、１つ以上の追加の抗ウイルス剤を含んでもよい。これらの方法および組成物は、１つ以上のウイルス型による感染から生じ得る、対象におけるウイルス感染の治療、抑制および／または防止に有用である。したがって、これらの方法および組成物は、広範囲の抗ウイルス性の治療、抑制および／または防止に有用である。
【０００６】
本発明は、部分的には、本出願の実施例のセクションでより詳しく説明する特定の発見に基づく。例えば、本発明は、部分的には、細胞内のウイルス力価のレベルが、式Ｉの化合物による治療の際に、顕著に低下したという発見に基づく。したがって、本発明は、体液または細胞内のウイルス力価を低下させる方法であって、前記液体または細胞と式Ｉの化合物とを接触させることを含む方法も提供する。本発明は、さらに、部分的に、いくつかのウイルスの細胞内のウイルス力価のレベルが、式Ｉの化合物による治療の際に、顕著に低下し、式Ｉの化合物が、様々なウイルス株に対する広範囲の抗ウイルス活性を示したという発見に基づく。したがって、本発明は、体液または細胞内のウイルスのいくつかのタイプ、サブタイプおよび／または株のウイルス力価を低下させる方法であって、前記液体または細胞と式Ｉの化合物とを接触させることで構成される方法も提供する。
【０００７】
いくつかの実施形態において、本発明は、ウイルスのＲＮＡポリメラーゼまたはＤＮＡポリメラーゼを阻害する方法であって、このポリメラーゼと阻害有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは水和物とを接触させることを含む方法を提供する。
【０００８】
いくつかの実施形態において、本方法はインビボで行われる。
【０００９】
いくつかの実施形態において、本発明は、ＲＮＡウイルス感染を患っている対象を治療する方法であって、治療有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を前記対象に投与することを含む方法を提供する。
【００１０】
いくつかの実施形態において、この体液は血液である。いくつかの実施形態において、この体液は血漿である。いくつかの実施形態において、この体液は血清である。
【００１１】
いくつかの実施形態において、この対象は哺乳類である。いくつかの実施形態において、この対象はヒトである。いくつかの実施形態において、この対象はトリである。いくつかの実施形態において、この対象はブタ（ｓｗｉｎｅ）またはブタ（ｐｉｇ）である。
本発明の好ましい実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
対象においてＲＮＡウイルスポリメラーゼを阻害する方法であって、治療有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を前記対象に投与することを含む方法：
【化３】
0005902698.tif 000002
（式中、ＡはＮＨ２またはＯＨであり、ＢはＨまたはＮＨ２である）。
（項目２）
第２のＲＮＡウイルスポリメラーゼが阻害される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記第２のＲＮＡウイルスポリメラーゼが、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、フィロウイルス科、トガウイルス科、ピコルナウイルス科、およびコロナウイルス科のウイルスポリメラーゼからなる群から選択される、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記第２のＲＮＡウイルスポリメラーゼが、アデノウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、フニンウイルス、ピキンデウイルス、リフトバレー熱ウイルス、デング熱ウイルス、麻疹ウイルス、黄熱病ウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルウイルス、ＳＡＲＳ−ＣｏＶウイルスのポリメラーゼからなる群から選択される、項目２または項目３に記載の方法。
（項目５）
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼが、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、フィロウイルス科、トガウイルス科、ピコルナウイルス科、およびコロナウイルス科のウイルスポリメラーゼからなる群から選択されるポリメラーゼである、項目１〜４のいずれかに記載の方法。
（項目６）
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼが、アデノウイルス、ライノウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、天然痘ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタトロウイルス、タカリベウイルス、およびピキンデウイルスのポリメラーゼからなる群から選択される、項目１〜５のいずれかに記載の方法。
（項目７）
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼが、アデノウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、フニンウイルス、麻疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、ピキンデウイルス、プンタトロウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ＳＡＲＳ−ＣｏＶウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルウイルスおよび黄熱病ウイルスのポリメラーゼからなる群から選択されるポリメラーゼである、項目１〜６のいずれかに記載の方法。
（項目８）
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼが、エボラウイルス、黄熱病ウイルス、マールブルグウイルス、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスのポリメラーゼからなる群から選択されるポリメラーゼである、項目１〜７のいずれかに記載の方法。
（項目９）
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼがエボラウイルスポリメラーゼである、項目１〜８のいずれかに記載の方法。
（項目１０）
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼが麻疹ウイルスポリメラーゼである、項目１〜８のいずれかに記載の方法。
（項目１１）
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼが黄熱病ウイルスポリメラーゼである、項目１〜８のいずれかに記載の方法。
（項目１２）
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼが、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスのポリメラーゼである、項目１〜８のいずれかに記載の方法。
（項目１３）
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼがマールブルグウイルスポリメラーゼである、項目１〜８のいずれかに記載の方法。
（項目１４）
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼが西ナイルウイルスポリメラーゼである、項目１〜７のいずれかに記載の方法。
（項目１５）
前記ＲＮＡウイルスポリメラーゼがデング熱ウイルスポリメラーゼである、項目１〜７のいずれかに記載の方法。
（項目１６）
式中、ＡがＮＨ２であり、ＢがＨである、項目１〜１５のいずれかに記載の方法。
（項目１７）
式中、ＡがＯＨであり、ＢがＮＨ２である、項目１〜１５のいずれかに記載の方法。
（項目１８）
前記対象が哺乳類である、項目１〜１７のいずれかに記載の方法。
（項目１９）
前記対象がヒトである、項目１〜１８のいずれかに記載の方法。
（項目２０）
さらに、追加の抗ウイルス剤の投与を含む、項目１〜１９のいずれかに記載の方法。
（項目２１）
前記追加の抗ウイルス剤が、ラニナミビル、オセルタミビル、ザナミビル、およびペラミビルからなる群から選択される、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記追加の抗ウイルス剤がペラミビルである、項目２０または項目２１に記載の方法。
（項目２３）
投与が、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、および経口投与からなる群から選択される、項目１〜２２のいずれかに記載の方法。
（項目２４）
投与が静脈内投与である、項目１〜２３のいずれかに記載の方法。
（項目２５）
投与が筋肉内投与である、項目１〜２３のいずれかに記載の方法。
（項目２６）
投与が経口投与である、項目１〜２３のいずれかに記載の方法。
（項目２７）
対象においてウイルス感染を治療する方法であって、治療有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を前記対象に投与することを含む方法：
【化４】
0005902698.tif 000003
（式中、ＡはＮＨ２またはＯＨであり、ＢはＨまたはＮＨ２である）。
（項目２８）
前記ウイルス感染が、１つ以上のウイルスによる感染を含む、項目２７に記載の方法。
（項目２９）
ＡがＮＨ２であり、ＢがＨである、項目２７または項目２８に記載の方法。
（項目３０）
ＡがＯＨであり、ＢがＮＨ２である、項目２７または項目２８に記載の方法。
（項目３１）
前記ウイルス感染が、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、フィロウイルス科、トガウイルス科、ピコルナウイルス科、およびコロナウイルス科からなる群から選択されるウイルスを含む、項目２７〜３０のいずれかに記載の方法。
（項目３２）
前記ウイルス感染が、アデノウイルス、ライノウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、天然痘ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタトロウイルス、タカリベウイルス、およびピキンデウイルスからなる群から選択される、項目２７〜３１のいずれかに記載の方法。
（項目３３）
前記ウイルス感染が、アデノウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、フニンウイルス、麻疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、ピキンデウイルス、プンタトロウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ＳＡＲＳ−ＣｏＶウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルウイルスおよび黄熱病ウイルスからなる群から選択される、項目２７〜３２のいずれかに記載の方法。
（項目３４）
前記ウイルス感染が、エボラウイルス、黄熱病ウイルス、マールブルグウイルス、Ａ型インフルエンザウイルスおよびＢ型インフルエンザウイルスからなる群から選択される、項目２７〜３３のいずれかに記載の方法。
（項目３５）
前記ウイルス感染がエボラウイルスである、項目２７〜３４のいずれかに記載の方法。
（項目３６）
前記ウイルス感染が麻疹ウイルスである、項目２７〜３４のいずれかに記載の方法。
（項目３７）
前記ウイルス感染が黄熱病ウイルスである、項目２７〜３４のいずれかに記載の方法。
（項目３８）
前記ウイルス感染がマールブルグウイルスである、項目２７〜３４のいずれかに記載の方法。
（項目３９）
前記ウイルス感染が、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスである、項目２７〜３４のいずれかに記載の方法。
（項目４０）
前記ウイルス感染が西ナイルウイルスである、項目２７〜３３のいずれかに記載の方法。
（項目４１）
前記ウイルス感染がデング熱ウイルスである、項目２７〜３３のいずれかに記載の方法。
（項目４２）
さらに、追加の抗ウイルス剤の投与を含む、項目２７〜４１のいずれかに記載の方法。
（項目４３）
前記追加の抗ウイルス剤が、ラニナミビル、オセルタミビル、ザナミビル、およびペラミビルからなる群から選択される、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記追加の抗ウイルス剤がペラミビルである、項目４２または項目４３に記載の方法。
（項目４５）
投与が、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、および経口投与からなる群から選択される、項目２７〜４４のいずれかに記載の方法。
（項目４６）
投与が静脈内投与である、項目２７〜４５のいずれかに記載の方法。
（項目４７）
投与が筋肉内投与である、項目２７〜４５のいずれかに記載の方法。
（項目４８）
投与が経口投与である、項目２７〜４５のいずれかに記載の方法。
（項目４９）
対象においてウイルス感染を抑制する方法であって、治療有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を前記対象に投与することを含む方法：
【化５】
0005902698.tif 000004
（式中、ＡはＮＨ２またはＯＨであり、ＢはＨまたはＮＨ２である）。
（項目５０）
前記ウイルス感染が、１つ以上のウイルスによる感染を含む、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
ＡがＮＨ２であり、ＢがＨである、項目４９または項目５０に記載の方法。
（項目５２）
ＡがＯＨであり、ＢがＮＨ２である、項目４９または項目５０に記載の方法。
（項目５３）
前記ウイルス感染が、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、フィロウイルス科、トガウイルス科、ピコルナウイルス科、およびコロナウイルス科からなる群から選択されるウイルスを含む、項目４９〜５２のいずれかに記載の方法。
（項目５４）
前記ウイルス感染が、アデノウイルス、ライノウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、天然痘ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタトロウイルス、タカリベウイルス、およびピキンデウイルスからなる群から選択される、項目４９〜５３のいずれかに記載の方法。
（項目５５）
前記ウイルス感染が、アデノウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、フニンウイルス、麻疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、ピキンデウイルス、プンタトロウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ＳＡＲＳ−ＣｏＶウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルウイルスおよび黄熱病ウイルスからなる群から選択される、項目４９〜５４のいずれかに記載の方法。
（項目５６）
前記ウイルス感染が、エボラウイルス、黄熱病ウイルス、マールブルグウイルス、Ａ型インフルエンザウイルスおよびＢ型インフルエンザウイルスからなる群から選択される、項目４９〜５５のいずれかに記載の方法。
（項目５７）
前記ウイルスがエボラウイルスである、項目４９〜５６のいずれかに記載の方法。
（項目５８）
前記ウイルスが麻疹ウイルスである、項目４９〜５６のいずれかに記載の方法。
（項目５９）
前記ウイルスが黄熱病ウイルスである、項目４９〜５６のいずれかに記載の方法。
（項目６０）
前記ウイルスがマールブルグウイルスである、項目４９〜５６のいずれかに記載の方法。
（項目６１）
前記ウイルス感染が、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスである、項目４９〜５６のいずれかに記載の方法。
（項目６２）
前記ウイルスが西ナイルウイルスである、項目４９〜５５のいずれかに記載の方法。
（項目６３）
前記ウイルスがデング熱ウイルスである、項目４９〜５５のいずれかに記載の方法。
（項目６４）
さらに、追加の抗ウイルス剤の投与を含む、項目４９〜６３のいずれかに記載の方法。
（項目６５）
前記追加の抗ウイルス剤が、ラニナミビル、オセルタミビル、ザナミビル、およびペラミビルからなる群から選択される、項目６４に記載の方法。
（項目６６）
前記追加の抗ウイルス剤がペラミビルである、項目６４または項目６５に記載の方法。
（項目６７）
投与が、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、および経口投与からなる群から選択される、項目４９〜６６のいずれかに記載の方法。
（項目６８）
投与が静脈内投与である、項目４９〜６７のいずれかに記載の方法。
（項目６９）
投与が筋肉内投与である、項目４９〜６７のいずれかに記載の方法。
（項目７０）
投与が経口投与である、項目４９〜６７のいずれかに記載の方法。
（項目７１）
対象においてウイルス感染を防止する方法であって、治療有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を前記対象に投与することを含む方法：
【化６】
0005902698.tif 000005
（式中、ＡはＮＨ２またはＯＨであり、ＢはＨまたはＮＨ２である）。
（項目７２）
前記ウイルス感染が、１つ以上のウイルスによる感染を含む、項目７１に記載の方法。
（項目７３）
ＡがＮＨ２であり、ＢがＨである、項目７１または項目７２に記載の方法。
（項目７４）
ＡがＯＨであり、ＢがＮＨ２である、項目７１または項目７２に記載の方法。
（項目７５）
前記ウイルス感染が、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、フィロウイルス科、トガウイルス科、ピコルナウイルス科、およびコロナウイルス科からなる群から選択されるウイルスを含む、項目７１〜７４のいずれかに記載の方法。
（項目７６）
前記ウイルス感染が、アデノウイルス、ライノウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、天然痘ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタトロウイルス、タカリベウイルス、およびピキンデウイルスからなる群から選択される１つ以上のウイルスによる感染を含む、項目７１〜７５のいずれかに記載の方法。
（項目７７）
前記ウイルス感染が、アデノウイルス、デング熱ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、フニンウイルス、麻疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、ピキンデウイルス、プンタトロウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ＳＡＲＳ−ＣｏＶウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルウイルスおよび黄熱病ウイルスからなる群から選択される、項目７１〜７６のいずれかに記載の方法。
（項目７８）
前記ウイルス感染が、エボラウイルス、黄熱病ウイルス、マールブルグウイルス、Ａ型インフルエンザウイルスおよびＢ型インフルエンザウイルスからなる群から選択される、項目７１〜７７のいずれかに記載の方法。
（項目７９）
前記ウイルスがエボラウイルスである、項目７１〜７８のいずれかに記載の方法。
（項目８０）
前記ウイルスが麻疹ウイルスである、項目７１〜７８のいずれかに記載の方法。
（項目８１）
前記ウイルスが黄熱病ウイルスである、項目７１〜７８のいずれかに記載の方法。
（項目８２）
前記ウイルスがマールブルグウイルスである、項目７１〜７８のいずれかに記載の方法。
（項目８３）
前記ウイルス感染が、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスである、項目７１〜７８のいずれかに記載の方法。
（項目８４）
前記ウイルスが西ナイルウイルスである、項目７１〜７７のいずれかに記載の方法。
（項目８５）
前記ウイルスがデング熱ウイルスである、項目７１〜７７のいずれかに記載の方法。
（項目８６）
さらに、追加の抗ウイルス剤の投与を含む、項目７１〜８５のいずれかに記載の方法。
（項目８７）
前記追加の抗ウイルス剤が、ラニナミビル、オセルタミビル、ザナミビル、およびペラミビルからなる群から選択される、項目８６に記載の方法。
（項目８８）
前記追加の抗ウイルス剤がペラミビルである、項目８６または項目８７に記載の方法。
（項目８９）
投与が、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、および経口投与からなる群から選択される、項目７１〜８８のいずれかに記載の方法。
（項目９０）
投与が静脈内投与である、項目７１〜８９のいずれかに記載の方法。
（項目９１）
投与が筋肉内投与である、項目７１〜９０のいずれかに記載の方法。
（項目９２）
投与が経口投与である、項目７１〜９１のいずれかに記載の方法。
【００１２】
本発明のこれらのおよび他の実施形態を、発明を実施するための形態、実施例、および特許請求の範囲を含む、以下の本出願のセクションでさらに説明する。
【００１３】
本発明のさらなる他の目的および利点は、単なる例示であって、制限的なものではないことが、本明細書の開示から当業者には明らかになるであろう。したがって、他の実施形態は、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、当業者によって認識されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ヒト肝細胞癌（Ｈｕｈ−７）細胞における化合物１のリン酸化を示すグラフである。
【図２】Ｈｕｈ−７細胞における３Ｈアデノシンのリン酸化を示すグラフである。
【図３】Ｈｕｈ−７細胞における３Ｈ化合物１のリン酸化を示すグラフである。
【図４】２４時間後のＨｕｈ−７細胞における３Ｈ化合物１および３Ｈアデノシンの全ＲＮＡおよびゲノムＤＮＡ取り込みを示すグラフである。
【図５】インビトロでの化合物１とペラミビル（ノイラミニダーゼ阻害剤）のインフルエンザに対する併用効果を示すグラフである。
【図６】Ｈ３Ｎ２ Ａ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／３／７５インフルエンザウイルスに感染したマウスの体重減少に対する化合物１（筋肉内）の効果を示すグラフである。
【図７】Ｈ３Ｎ２ Ａ／Ｖｉｃｔｏｒｉａ／３／７５インフルエンザウイルスに感染したマウスの体重減少に対する化合物１（経口）の効果を示すグラフである。
【図８】エボラウイルスに感染したマウスの生存率に対する化合物１（腹腔内、筋肉内および経口）の効果を示すグラフである。
【図９】エボラウイルスに感染したマウスの体重減少に対する化合物１（腹腔内、筋肉内および経口）の効果を示すグラフである。
【図１０】エボラウイルスに感染したマウスの生存率に対する化合物１（筋肉内および経口）の効果を示すグラフである。
【図１１】エボラウイルスに感染したマウスの体重減少に対する化合物１（筋肉内および経口）の効果を示すグラフである。
【図１２】黄熱病ウイルスに感染したハムスターの生存率に対する化合物１の効果を示すグラフである。
【図１３】黄熱病ウイルスに感染したハムスターの体重減少に対する化合物１の効果を示すグラフである。
【図１４】ラットで測定した時の、１０ｍｇ／ｋｇで投与した化合物１の経口の薬物動態曲線を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、ＲＮＡポリメラーゼおよびＤＮＡポリメラーゼなどのウイルスの核酸ポリメラーゼの阻害のための方法および組成物、ならびに対象におけるウイルス感染を治療するのに有用な方法および組成物を提供する。これらの方法は、治療有効量の式Ｉの化合物、その薬学的に許容される塩もしくは水和物、または式Ｉの化合物、その薬学的に許容される塩もしくは水和物、および薬学的に許容される担体を含む組成物を対象に投与することを含む。この組成物または方法は、場合によって、１つ以上の追加の抗ウイルス剤を含んでもよい。これらの方法および組成物は、１つ以上のウイルス型による感染から生じ得る、対象におけるウイルス感染を治療、抑制および／または防止するのに有用である。したがって、これらの方法および組成物は、広範囲の抗ウイルス性の治療、抑制および／または防止に有用である。
【００１６】
特に、本発明は、ウイルス感染に関連する疾患もしくは病状の治療法、抑制法および／または防止法であって、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物の投与を含む方法に関する。
【００１７】
式（Ｉ）の化合物は、以下のとおりである：
【化１】
0005902698.tif 000006
【００１８】
したがって、式（Ｉ）の化合物のいくつかの実施形態において、ＡはＮＨ２である。
【００１９】
式（Ｉ）の化合物のいくつかの実施形態において、ＢはＮＨ２である。
【００２０】
式（Ｉ）の化合物のいくつかの実施形態において、ＡはＯＨである。
【００２１】
式（Ｉ）の化合物のさらにいくつかの実施形態において、ＢはＨである。
【００２２】
式（Ｉ）の化合物のさらにいくつかの実施形態において、ＡはＮＨ２であり、ＢはＨである。
【００２３】
式（Ｉ）の化合物のさらにいくつかの実施形態において、ＡはＯＨであり、ＢはＮＨ２である。
【００２４】
式（Ｉ）の化合物のさらにいくつかの実施形態において、ＡはＮＨ２であり、ＢはＮＨ２である。
【００２５】
式（Ｉ）の化合物のさらにいくつかの実施形態において、ＡはＯＨであり、ＢはＨである。
【００２６】
本発明は、部分的には、本出願の実施例のセクションでより詳しく説明する特定の発見に基づく。例えば、本発明は、部分的には、細胞内のウイルス力価のレベルが、式Ｉの化合物による治療の際に、顕著に低下したという発見に基づく。したがって、いくつかの実施形態において、本発明は、体液または細胞中のウイルス力価を低下させる方法であって、前記液体または細胞と式Ｉの化合物とを接触させることで構成される方法を提供する。本発明は、さらに、部分的に、いくつかのウイルスの細胞内のウイルス力価のレベルが、式Ｉの化合物による治療の際に、顕著に低下し、したがって、式Ｉの化合物が、様々なウイルス株に対する広範囲の抗ウイルス活性を示したという発見に基づく。したがって、本発明は、体液または細胞中のウイルスのいくつかのタイプ、サブタイプおよび／または株のウイルス力価を低下させる方法であって、前記液体または細胞と式Ｉの化合物とを接触させることで構成される方法も提供する。
【００２７】
本発明の化合物を、塩、水和物、溶媒和物、または複合体などの異なる形態で調製し、本発明は、これらの化合物の全ての異型を包含する組成物および方法を含む。いくつかの実施形態において、これらの化合物を塩の水和物として調製する。
【００２８】
略語および定義
「ＰＮＰ」という略語は、プリンヌクレオシドホスホリラーゼを指す。
【００２９】
本明細書で使用する「本発明の化合物（複数可）」という用語は、式Ｉの化合物を意味し、その塩、互変異性型、水和物および／または溶媒和物を含んでもよい。式Ｉの化合物は、その塩の溶媒和物または水和物も含んでもよい。
【００３０】
本明細書で使用する「溶媒和物」という用語は、式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩を意味し、その中の適切な溶媒分子は、結晶格子に組み込まれている。適切な溶媒は、投与される用量で生理的に許容できる。適切な溶媒の例として、エタノールおよび水などが挙げられる。水が溶媒である場合、その分子は「水和物」と呼ばれる。
【００３１】
「医薬組成物」は、生理的に許容される担体および賦形剤などの他の化学成分と、本明細書に記載の化合物、その薬学的に許容される塩もしくは水和物のうちの１つ以上の混合物を指す。医薬組成物の目的は、生物への化合物の投与を促進することである。
【００３２】
「薬学的に許容される塩」という用語は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、リン酸、ギ酸、酢酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、酒石酸、グリコール酸、サリチル酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、マロン酸、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、ナフタレン−２−スルホン酸および他の酸類を含む無機酸類または有機酸類に由来する塩を含むことを意図する。薬学的に許容される塩形態は、塩を含む分子の比が１：１ではない形態も含んでもよい。例えば、この塩は、式（Ｉ）の化合物１分子あたり２個の塩酸分子などの１塩基分子あたり２個以上の無機酸分子または有機酸分子を含んでもよい。別の例として、この塩は、酒石酸１分子あたり式（Ｉ）の化合物２分子などの１塩基分子あたり１個未満の無機酸分子または有機酸分子を含んでもよい。塩は、溶媒和物または水和物として存在してもよい。
【００３３】
「酸」という用語は、全ての薬学的に許容される無機酸類または有機酸類を企図する。無機酸類には、臭化水素酸および塩酸などのハロゲン化水素酸、硫酸、リン酸ならびに硝酸などの鉱酸が含まれる。有機酸には、全ての薬学的に許容される脂肪族カルボン酸、脂環式カルボン酸および芳香族カルボン酸、ジカルボン酸、トリカルボン酸、ならびに脂肪酸が含まれる。好ましい酸類は、場合によって、ハロゲンまたはヒドロキシル基によって置換されていてもよい直鎖もしくは分枝状の、飽和もしくは不飽和のＣ１〜Ｃ２０脂肪族カルボン酸、またはＣ６〜Ｃ１２芳香族カルボン酸である。かかる酸の例として、炭酸、ギ酸、フマル酸、酢酸、プロピオン酸、イソプロピオン酸、吉草酸、ならびにグリコール酸および乳酸、クロロ酢酸、安息香酸、メタンスルホン酸、およびサリチル酸などのα−ヒドロキシ酸類が挙げられる。ジカルボン酸の例として、シュウ酸、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸およびマレイン酸が挙げられる。トリカルボン酸の例として、クエン酸が挙げられる。脂肪酸には、４〜２４個の炭素原子を有する、全ての薬学的に許容される飽和もしくは不飽和の脂肪族カルボン酸または全ての薬学的に許容される飽和もしくは不飽和の芳香族カルボン酸が含まれる。例として、酪酸、イソ酪酸、ｓｅｃ−酪酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、およびフェニルステリン酸（ｐｈｅｎｙｌｓｔｅｒｉｃａｃｉｄ）が挙げられる。他の酸類には、グルコン酸、グルコヘプトン酸およびラクトビオン酸が含まれる。
【００３４】
本明細書で使用する「約（ａｂｏｕｔ）」という用語は、おおよそ、大体、約（ａｒｏｕｎｄ）、またはそのあたり（ｉｎ ｔｈｅｒｅｇｉｏｎ ｏｆ）を意味するものとして本明細書で使用される。「約」という用語が数値範囲と併せて使用される場合、それは、示された数値の上下の境界を拡張することによって、その範囲を変更する。一般に、「約」という用語は、２０％を上回るかまたは下回る（より高いかまたはより低い）分散によって、規定値の上下の数値を変更するために本明細書で使用される。
【００３５】
本明細書で使用する「有効量」、「十分な量」または「治療有効量」は、臨床結果を含む有益な結果または所望の結果をもたらすのに十分な化合物の量である。このように、有効量は、例えば、ウイルス感染もしくはその１つ以上の徴候の重症度および／もしくは持続期間を低減するかまたは改善するのに十分であり、ウイルス感染の進展を防止するのに十分であり、ウイルス感染と関連する１つ以上の徴候の再発、発達、もしくは発症を防止するのに十分であり、ウイルスの複製もしくは増殖を防止するかまたは低下させるのに十分であり、ウイルス粒子の産生および／もしくは放出を防止するかまたは低下させるのに十分であり、別の療法の予防効果もしくは治療効果（複数可）を増強するか、またはそうでなければ改善するのに十分であり得る。有効量には、望ましくない副作用を避けるか、または実質的に減弱させる式Ｉの化合物の量も含まれる。
【００３６】
本明細書で使用し、かつ当技術分野で理解される「治療」は、臨床結果を含む有益な結果または所望の結果を得るためのアプローチである。有益な臨床結果または所望の臨床結果は、検出できようとできまいと、１つ以上の徴候もしくは病状の軽減または寛解、疾患の程度の減少、疾患の安定化した（すなわち、悪化しない）状態、疾患の蔓延の防止、疾患進行の遅延もしくは緩徐化、（部分的または全体的を問わず）病態の寛解もしくは緩和ならびに緩解を含み得るが、これらに限定されない。「治療」は、治療を受けない場合に期待される生存期間と比較して、生存期間の延長も意味し得る。
【００３７】
「担体」という用語は、化合物と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。かかる医薬担体の限定されない例として、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、およびゴマ油などの石油、動物、野菜もしくは合成起源のものを含む、水および油類などの液体が含まれる。これらの医薬担体は、生理食塩水、アラビアゴム、ゼラチン、デンプンのり、タルク、ケラチン、コロイド状シリカ、および尿素などでもあり得る。さらに、補助剤、安定化剤、増粘剤、滑剤および着色剤を用いてもよい。適切な医薬担体の他の例は、Ｅ.Ｗ.Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００３８】
本明細書で使用する「動物」、「対象」および「患者」という用語には、哺乳類、動物（例えば、ネコ、イヌ、ウマ、ブタなど）およびヒトを含むが、これらに限定されない動物界の全メンバーが含まれる。
【００３９】
説明
本発明は、ＤＮＡウイルスポリメラーゼおよび／またはＲＮＡウイルスポリメラーゼなどのウイルスの核酸ポリメラーゼの阻害のための方法および組成物、ならびに対象におけるウイルス感染の治療に有用な方法および組成物を提供する。これらの方法は、治療有効量の式Ｉの化合物、もしくはその薬学的に許容される塩、または式Ｉの化合物、その薬学的に許容される塩もしくは水和物、および薬学的に許容される担体を含む組成物を対象に投与することを含む。この組成物または方法は、場合によって、１つ以上の追加の抗ウイルス剤を含んでもよい。これらの方法および組成物は、ウイルスの１つ以上の科、属、サブタイプ、セロタイプ、または株による感染から生じ得る、対象におけるウイルス感染の治療、抑制および／または防止に有用である。
【００４０】
式Ｉの化合物は、一般に、イムシリンとして知られる９−デアザアデニン誘導体であり、その合成は、例えば、ＷＯ０３／８０６２０、ならびにＥｖａｎｓｅｔ ａｌ,Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ２０００,５６,３０５３およびＪ.Ｏｒｇ.Ｃｈｅｍ.２００１,６６（１７）,５７２３（これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。類似構造の合成は、例えば、米国特許第５，９８５，８４８号、同第６，０６６，７２２号、同第６，２２８，７４１号、ならびにＰＣＴ公開ＷＯ２００３／０８０６２０および２００８／０３０１１９（これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）で論じられている。イムシリン誘導体は、ＰＮＰ阻害剤として研究されている（Ｋｉｃｓｋａｅｔ ａｌ,Ｊ.Ｂｉｏｌ.Ｃｈｅｍ.２００２,２７７,３２１９−３２２５,およびＫｉｃｓｋａ ｅｔ ａｌ,Ｊ.Ｂｉｏｌ.Ｃｈｅｍ.２００２,２７７,３２２６−３２３１を参照されたい；これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかのイムシリン類は、５’−メチルチオアデノシンホスホリラーゼ（ＭＴＡＰ）阻害剤または５’−メチルチオアデノシンヌクレオシダーゼ（ＭＴＡＮ）阻害剤としても研究されている。かかるメカニズムは、癌および細菌感染症の治療に結び付けられている（ＷＯ０３／０８０６２０を参照されたい、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【００４１】
式Ｉの化合物は、互変異性を示し得る。したがって、本発明は、式Ｉの化合物の互変異性型およびそれらの混合物も包含する。いくつかの化合物は薬学的に許容される塩、溶媒和物、および／または水和物として存在し、それらのそれぞれも、本発明の実施形態の範囲内であることがさらに理解されるであろう。
【００４２】
いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物は、薬学的に許容される塩として存在する。いくつかの実施形態において、この塩形態の酸と式Ｉの化合物の比は約１：１である。いくつかの実施形態において、この塩形態の酸と式Ｉの化合物の比は約１：１を上回る。いくつかの実施形態において、この塩形態の酸と式Ｉの化合物の比は約２：１である。いくつかの実施形態において、この塩形態は水和物として存在する。
【００４３】
いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物は、水和物または溶媒和物として存在する。
【００４４】
したがって、本開示の化合物は、宿主または対象におけるウイルス感染を治療および／または防止するのに有用である。本発明の方法は、かかるウイルス感染によって引き起こされる、かつ／またはかかるウイルス感染に関連する病態もしくは病状の治療および／または防止に用いられてもよい。かかるウイルス感染の例として、アデノウイルス、ライノウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、天然痘ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、（ヒト、トリ、ブタを含む）インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタトロウイルス、タカリベウイルス、およびピキンデウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４５】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物を、ウイルスと関連するウイルス感染を治療するかまたは防止するのに用いる。いくつかの実施形態において、このウイルス感染は、ウイルスの１つ以上の型による感染を含む。いくつかの実施形態において、このウイルス感染は、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、フィロウイルス科、トガウイルス科、ピコルナウイルス科、およびコロナウイルス科からなる群から選択される１つ以上のウイルスによる感染を含む。いくつかの実施形態において、このウイルス感染は、アデノウイルス、ライノウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、天然痘ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、（ヒト、トリ、ブタを含む）インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタトロウイルス、タカリベウイルス、およびピキンデウイルスからなる群から選択される１つ以上のウイルスによる感染を含む。
【００４６】
いくつかの実施形態において、このウイルス感染は、アデノウイルス、デング熱ウイルス、（ヒト、トリ、ブタを含む）Ａ型インフルエンザウイルスおよびＢ型インフルエンザウイルス、フニンウイルス、麻疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、ピキンデウイルス、プンタトロウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルウイルスおよび黄熱病ウイルスからなる群から選択される１つ以上のウイルスによる感染を含む。
【００４７】
いくつかの実施形態において、このウイルスは、エボラウイルス、マールブルグウイルス、黄熱病ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスはエボラウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスはマールブルグウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスは黄熱病ウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスは、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスである。
【００４８】
いくつかの実施形態において、このウイルスは、西ナイルウイルスまたはデング熱ウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスは西ナイルウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスはデング熱ウイルスである。
【００４９】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物を、ウイルスの複製または伝染力を阻害するために用いる。いくつかの実施形態において、本発明の化合物を、ウイルスに感染した細胞の増殖を阻害するために用いる。前記ウイルスの例として、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、フィロウイルス科、トガウイルス科、ピコルナウイルス科、およびコロナウイルス科のウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。ウイルスの特定例として、アデノウイルス、ライノウイルス、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、天然痘ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、（ヒト、トリ、ブタを含む）インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタトロウイルス、タカリベウイルス、およびピキンデウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５０】
したがって、いくつかの実施形態において、このウイルスは、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、フィロウイルス科、トガウイルス科、ピコルナウイルス科、およびコロナウイルス科のウイルスからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、このウイルス感染は、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、天然痘ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、（ヒト、トリ、ブタを含む）インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタトロウイルス、タカリベウイルス、およびピキンデウイルスからなる群から選択されるウイルスを含む。
【００５１】
いくつかの実施形態において、このウイルス感染は、アデノウイルス、デング熱ウイルス、（ヒト、トリ、ブタを含む）Ａ型インフルエンザウイルスおよびＢ型インフルエンザウイルス、フニンウイルス、麻疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、ピキンデウイルス、プンタトロウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルウイルスおよび黄熱病ウイルスからなる群から選択されるウイルスを含む。
【００５２】
いくつかの実施形態において、このウイルスは、エボラウイルス、マールブルグウイルス、黄熱病ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスはエボラウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスはマールブルグウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスは黄熱病ウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスは、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスである。
【００５３】
いくつかの実施形態において、このウイルスは、西ナイルウイルスまたはデング熱ウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスは西ナイルウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスはデング熱ウイルスである。
【００５４】
いくつかの実施形態において、本発明は、対象のウイルスのＲＮＡポリメラーゼまたはＤＮＡポリメラーゼを阻害する方法であって、治療有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を前記対象に投与することを含む方法を提供する。
【００５５】
ボルティモア分類学によると、ＲＮＡポリメラーゼウイルスは、例えば、二本鎖ウイルス、一本鎖プラスセンスウイルス、および一本鎖マイナスセンスウイルスなどのグループに分類され得る。一本鎖プラスセンスウイルス科には、例えば、コロナウイルス科、ピコルナウイルス科、トガウイルス科、およびフラビウイルス科などが含まれる。一本鎖マイナスセンスウイルス科には、例えば、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、オルソミクソウイルス科、およびフラビウイルス科などが含まれる。これらのウイルス科のそれぞれは、属、種、およびセロタイプ（またはサブタイプ）にさらに分類され得る。ウイルスの分類学上の命名のための他の命名は、国際ウイルス分類委員会による分類ガイドラインで定められている。
【００５６】
いくつかの実施形態において、このＲＮＡポリメラーゼは二本鎖である。いくつかの実施形態において、このＲＮＡポリメラーゼは一本鎖である。いくつかの実施形態において、このＲＮＡポリメラーゼは一本鎖プラスセンスである。いくつかの実施形態において、このＲＮＡポリメラーゼは一本鎖マイナスセンスである。
【００５７】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、ウイルスならびに／またはウイルスの１つ以上の科、属、サブタイプ、株および／もしくはセロタイプに由来するＲＮＡポリメラーゼの広範囲の阻害を提供する。いくつかの実施形態において、これらの方法は、ウイルスの１つ以上の科、属、サブタイプ、株、またはセロタイプからの感染の広範囲の治療、抑制、または防止を提供する。いくつかの実施形態において、この広範囲には、ウイルスの３つ以上の科、属、サブタイプ、株、および／またはセロタイプを包含する。
【００５８】
いくつかの実施形態において、本発明は、１つ以上のウイルスの科、属、サブタイプ、セロタイプ、または株に由来するウイルスポリメラーゼの阻害法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、ウイルス感染が、１つ以上のウイルスの科、属、サブタイプ、セロタイプ、または株による感染の結果である、ウイルス感染を治療、抑制、および／または防止するための方法を提供する。
【００５９】
いくつかの実施形態において、このウイルスポリメラーゼまたはウイルスは、１つ以上のウイルス属に由来する。いくつかの実施形態において、このウイルスポリメラーゼまたはウイルスは、１つ以上のウイルス種に由来する。いくつかの実施形態において、このウイルスポリメラーゼまたはウイルスは、１つ以上のサブタイプまたはセロタイプから選択される。いくつかの実施形態において、このウイルスポリメラーゼまたはウイルスは、１つ以上の株から選択される。
【００６０】
いくつかの実施形態において、このＲＮＡウイルスポリメラーゼは、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、フィロウイルス科、トガウイルス科、ピコルナウイルス科、およびコロナウイルス科のポリメラーゼからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、このＲＮＡウイルスポリメラーゼは、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、およびコロナウイルス科のポリメラーゼからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、このＲＮＡウイルスポリメラーゼは、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、天然痘ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、（ヒト、トリ、ブタを含む）インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタトロウイルス、タカリベウイルス、およびピキンデウイルスのポリメラーゼからなる群から選択される。
【００６１】
いくつかの実施形態において、このＲＮＡウイルスポリメラーゼは、アデノウイルス、デング熱ウイルス、（ヒト、トリ、ブタを含む）Ａ型インフルエンザウイルスおよびＢ型インフルエンザウイルス、フニンウイルス、麻疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、ピキンデウイルス、プンタトロウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルウイルスおよび黄熱病ウイルスのポリメラーゼからなる群から選択される。
【００６２】
いくつかの実施形態において、このＲＮＡウイルスポリメラーゼは、エボラウイルス、マールブルグウイルス、黄熱病ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスのポリメラーゼである。いくつかの実施形態において、このＲＮＡウイルスポリメラーゼはエボラウイルスポリメラーゼである。いくつかの実施形態において、このＲＮＡウイルスポリメラーゼはマールブルグウイルスポリメラーゼである。いくつかの実施形態において、このＲＮＡウイルスポリメラーゼは黄熱病ウイルスポリメラーゼである。いくつかの実施形態において、このＲＮＡウイルスポリメラーゼは、Ａ型インフルエンザウイルスポリメラーゼまたはＢ型インフルエンザウイルスポリメラーゼである。いくつかの実施形態において、このウイルスポリメラーゼは、西ナイルウイルスまたはデング熱ウイルスのポリメラーゼである。いくつかの実施形態において、このウイルスポリメラーゼは西ナイルウイルスポリメラーゼである。いくつかの実施形態において、このウイルスポリメラーゼはデング熱ウイルスのポリメラーゼである。
【００６３】
いくつかの実施形態において、これらのウイルスは、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、フィロウイルス科、トガウイルス科、ピコルナウイルス科、およびコロナウイルス科からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、これらのウイルスは、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、天然痘ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、（ヒト、トリ、ブタを含む）インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタトロウイルス、タカリベウイルス、およびピキンデウイルスからなる群から選択される。
【００６４】
いくつかの実施形態において、これらのウイルスは、アデノウイルス、デング熱ウイルス、（ヒト、トリ、ブタを含む）Ａ型インフルエンザウイルスおよびＢ型インフルエンザウイルス、フニンウイルス、麻疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、ピキンデウイルス、プンタトロウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルウイルスおよび黄熱病ウイルスからなる群から選択される。
【００６５】
いくつかの実施形態において、このウイルスは、エボラウイルス、マールブルグウイルス、黄熱病ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスはエボラウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスはマールブルグウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスは黄熱病ウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスは、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスである。
【００６６】
いくつかの実施形態において、このウイルスは、西ナイルウイルスまたはデング熱ウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスは西ナイルウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスはデング熱ウイルスである。
【００６７】
Ａ型インフルエンザウイルスのゲノムは、ウイルスＲＮＡの転写および複製を触媒するＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを有する。このウイルスの転写および複製は、ＲＮＡポリメラーゼの活性に依存するので、この酵素は、薬物耐性ウイルスの最近の出現の結果として、新しい抗ウイルス化合物の開発の標的として注目が集まっている。ウイルスは、治療の際に、１種類の薬物に対して耐性を生じ得るので、その薬物の有効性を減少させ、対象は別の抗ウイルス薬で治療することを必要とする。したがって、広範囲のウイルス株に対して同時に有効性を示す薬物または治療が有用である。
【００６８】
さらに、本組成物または本方法は、式Ｉの化合物と組み合わせる、１つ以上の追加の抗ウイルス剤をさらに含んでもよい。かかる抗ウイルス剤の例として、シトベン（Ｃｙｔｏｖｅｎｅ）、ガンシクロビル、ホスホノギ酸三ナトリウム、リバビリン、インターフェロン、ｄ４Ｔ、ｄｄＩ、ＡＺＴ、アマンタジン、リマンタジン、および他の抗インフルエンザ薬；アシクロビル、および関連する薬剤、フォスカネット、ならびに他の抗ヘルペスウイルス剤が挙げられるが、これらに限定されない。ノイラミニザーゼ阻害剤の限定されない例として、ラニナミビル、オセルタミビル、ザナミビル、およびペラミビルが挙げられる。
【００６９】
インフルエンザポリメラーゼの阻害に関連する化合物は、例えば、米国特許第７，３８８，００２号、同第７，５６０，４３４号、（米国特許公開第２０１００１２９３１７号として公開された）米国特許出願第１２／４４０，６９７号、および（米国特許公開第２００９０２２７５２４号として公開された）同第１２／３９８，８６６号に記載されており、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。現在、Ｔ−７０５として知られる臨床試験中の１つのインフルエンザポリメラーゼ阻害剤（ファビピラビル；６−フルオロ−３−ヒドロキシ−２−ピラジンカルボキサミド）が存在する。Ｔ−７０５は、インビトロおよびインビボで、インフルエンザウイルスの複数株の感染に対して、強力で、広範囲の抗ウイルス活性を有する（Ｋｉｓｏｅｔ ａｌ,ＰＮＡＳ ２０１０,１０７,８８２−８８７；参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。Ｔ−７０５は、ほとんどの抗インフルエンザウイルス薬とは異なる作用メカニズムによって特徴付けられる。
【００７０】
抗ウイルス剤として用いられる化合物の別のクラスは、Ｍ２阻害剤である（Ｐｉｅｌａｋ,Ｒ.,Ｓｃｈｎｅｌｌ,Ｊ.,＆Ｃｈｏｕ,Ｊ.（２００９）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ,１０６（１８）,７３７９−７３８４を参照されたい（これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））。このクラスの代表的なメンバーには、アマンタジンおよびリマンタジンが含まれる。
【００７１】
したがって、いくつかの実施形態において、本発明の方法は、さらに、１つ以上の追加の抗ウイルス剤の投与を含む。
【００７２】
いくつかの実施形態において、追加の抗ウイルス剤は、シトベン、ガンシクロビル、ホスホノギ酸三ナトリウム、リバビリン、インターフェロン、ｄ４Ｔ、ｄｄＩ、ＡＺＴ、アマンタジン、リマンタジン、Ｔ−７０５および他の抗インフルエンザ薬；アシクロビル、および関連する薬剤、フォスカネット、ならびに他の抗ヘルペスウイルス剤からなる群から選択される。
【００７３】
いくつかの実施形態において、追加の抗ウイルス剤は、抗インフルエンザ薬である。いくつかの実施形態において、追加の抗ウイルス剤はノイラミニダーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態において、追加の抗ウイルス剤は、ラニナミビル、オセルタミビル、ザナミビル、およびペラミビルからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、追加の抗ウイルス剤はペラミビルである。いくつかの実施形態において、追加の抗ウイルス剤はラニナミビルである。いくつかの実施形態において、追加の抗ウイルス剤はオセルタミビルである。いくつかの実施形態において、追加の抗ウイルス剤はザナミビルである。
【００７４】
いくつかの実施形態において、追加の抗ウイルス剤はＭ２阻害剤である。いくつかの実施形態において、追加の抗ウイルス剤はアマンタジンおよびリマンタジンからなる群から選択される。
【００７５】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、２種類の追加の抗ウイルス剤の投与を含む。いくつかの実施形態において、この追加の抗ウイルス剤は、ノイラミニダーゼ阻害剤およびＭ２阻害剤である。いくつかの実施形態において、この追加の抗ウイルス剤は、１）ラニナミビル、オセルタミビル、ザナミビル、およびペラミビル；２）アマンタジンおよびリマンタジンからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、この追加の抗ウイルス剤は、ペラミビルおよびアマンタジンである。いくつかの実施形態において、この追加の抗ウイルス剤は、ペラミビルおよびリマンタジンである。
【００７６】
本発明は、ウイルスＲＮＡポリメラーゼまたはウイルスＤＮＡポリメラーゼを阻害する方法であって、阻害有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物とポリメラーゼとを接触させることを含む方法を提供する。
【００７７】
いくつかの実施形態において、本発明は、ウイルス感染を患っている対象を治療する方法であって、治療有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物を前記対象に投与することを含む方法を提供する。
【００７８】
いくつかの実施形態において、本発明は、対象においてウイルス感染を抑制する方法であって、治療有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは水和物をその対象に投与することを含む方法を提供する。
【００７９】
いくつかの実施形態において、本発明は、ＲＮＡウイルス感染を患っている対象を治療する方法であって、治療有効量の式Ｉの化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を前記対象に投与することを含む方法を提供する。
【００８０】
いくつかの実施形態において、このウイルス感染は、１つ以上のウイルスによる感染を含む。
【００８１】
いくつかの実施形態において、このウイルス感染は、オルソミクソウイルス科、パラミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フラビウイルス科、フィロウイルス科、トガウイルス科、ピコルナウイルス科、もしくはコロナウイルス科のウイルス、またはそれらの任意の組み合わせから選択される感染である。いくつかの実施形態において、これらのウイルス感染は、肝炎ウイルス、免疫不全ウイルス、ポリオウイルス、麻疹ウイルス、エボラウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、西ナイルウイルス、天然痘ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、（ヒト、トリ、ブタを含む）インフルエンザウイルス、ラッサ熱ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、フニンウイルス、マチュポウイルス、グアナリトウイルス、ハンタウイルス、リフトバレー熱ウイルス、ラクロスウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、クリミア・コンゴウイルス、マールブルグウイルス、日本脳炎ウイルス、キャサヌール森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、パラインフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、プンタトロウイルス、タカリベウイルス、およびピキンデウイルス、またはそれらの任意の組み合わせから選択される感染である。
【００８２】
いくつかの実施形態において、このウイルス感染は、アデノウイルス、デング熱ウイルス、（ヒト、トリ、ブタを含む）Ａ型インフルエンザウイルスおよびＢ型インフルエンザウイルス、フニンウイルス、麻疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、ピキンデウイルス、プンタトロウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ライノウイルス、リフトバレー熱ウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルス、タカリベウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西ナイルウイルスおよび黄熱病ウイルスからなる群から選択される１つ以上のウイルスによる感染を含む。
【００８３】
いくつかの実施形態において、このウイルスは、エボラウイルス、マールブルグウイルス、黄熱病ウイルス、Ａ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスはエボラウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスはマールブルグウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスは黄熱病ウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスはＡ型インフルエンザウイルスまたはＢ型インフルエンザウイルスである。
【００８４】
いくつかの実施形態において、このウイルスは、西ナイルウイルスまたはデング熱ウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスは西ナイルウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルスは、デング熱ウイルスである。
【００８５】
いくつかの実施形態において、このウイルス感染は、Ａ型インフルエンザウイルス、Ｂ型インフルエンザウイルス、ＰＩＶ、ＲＳＶ、フニンウイルス、ピキンデウイルス、リフトバレー熱ウイルス、デング熱ウイルス、麻疹ウイルス、黄熱病ウイルス、およびＳＡＲＳ−ＣｏＶ、またはそれらの任意の組み合わせから選択される感染である。いくつかの実施形態において、このウイルス感染は、Ａ型インフルエンザウイルスおよびＢ型インフルエンザウイルス、それらのサブタイプ、それらの株、またはそれらの任意の組み合わせから選択される感染である。いくつかの実施形態において、このウイルス感染は、エボラウイルス、マールブルグウイルス、または黄熱病ウイルスから選択される感染である。いくつかの実施形態において、このウイルス感染は、エボラウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルス感染はマールブルグウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルス感染は黄熱病ウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルス感染は、西ナイルウイルスまたはデング熱ウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルス感染は西ナイルウイルスである。いくつかの実施形態において、このウイルス感染はデング熱ウイルスである。
【００８６】
いくつかの実施形態において、ウイルス感染、ならびに／またはかかるウイルス感染によって引き起こされるか、またはそれに関連する病態および／もしくは病状の治療法における、式Ｉの化合物、その薬学的に許容される塩もしくは水和物で構成される医薬組成物および／または薬剤の使用を提供する。
【００８７】
いくつかの実施形態において、この治療法には、ｉ）かかる治療を必要としている対象を特定するステップ；ｉｉ）式Ｉの化合物、その薬学的に許容される塩もしくは水和物、または式Ｉの化合物、その薬学的に許容される塩もしくは水和物を含む組成物を提供するステップ；ならびにｉｉｉ）その対象におけるウイルス感染を治療するか、またはかかる治療を必要としている対象のウイルスＤＮＡポリメラーゼもしくはウイルスＲＮＡポリメラーゼの活性を阻害するために治療有効量で前記化合物もしくは組成物を投与するステップが含まれる。
【００８８】
いくつかの実施形態において、この治療効果は、ウイルスＤＮＡポリメラーゼもしくはウイルスＲＮＡポリメラーゼの阻害に起因する。いくつかの実施形態において、この治療効果は、１つ以上のウイルス科のウイルスポリメラーゼを阻害することに起因する。
【００８９】
いくつかの実施形態において、このウイルスポリメラーゼまたはウイルスは、１つ以上のウイルス属に由来する。いくつかの実施形態において、このウイルスポリメラーゼまたはウイルスは、１つ以上のウイルス種に由来する。いくつかの実施形態において、このウイルスポリメラーゼまたはウイルスは、１つ以上のサブタイプ、セロタイプ、または株から選択される。
【００９０】
いくつかの実施形態において、この方法は、インビボで行われる。
【００９１】
いくつかの実施形態において、この対象は哺乳類である。いくつかの実施形態において、この対象はヒトである。いくつかの実施形態において、この対象はトリである。いくつかの実施形態において、この対象はブタ（ｓｗｉｎｅ）またはブタ（ｐｉｇ）である。
【００９２】
いくつかの実施形態において、この体液は血液である。いくつかの実施形態において、この体液は血漿である。いくつかの実施形態において、この体液は血清である。
【００９３】
いくつかの実施形態において、この化合物もしくは組成物は、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、または経口投与される。
【００９４】
いくつかの実施形態において、この化合物もしくは組成物は静脈内投与される。
【００９５】
いくつかの実施形態において、この化合物もしくは組成物は腹腔内投与される。
【００９６】
いくつかの実施形態において、この化合物もしくは組成物は筋肉内投与される。
【００９７】
いくつかの実施形態において、この化合物もしくは組成物は経口投与される。
【００９８】
これらの方法は、治療有効量の式Ｉの化合物、その薬学的に許容される塩、または式Ｉの化合物、もしくはその薬学的に許容される塩および薬学的に許容される担体を含む治療有効量の組成物を対象に投与することを含む。これらの薬学的に許容される担体は、当業者に周知であり、例えば、アジュバント、希釈剤、賦形剤、フィラー、滑剤、およびビヒクルを含む。多くの場合、この薬学的に許容される担体は、活性化合物に対して化学的に不活性であり、使用条件下で無毒である。薬学的に許容される担体の例として、例えば、水または生理食塩水、ポリエチレングリコールなどのポリマー類、炭水化物類およびその誘導体、油類、脂肪酸類、またはアルコール類が挙げられ得る。いくつかの実施形態において、この担体は生理食塩水または水である。いくつかの実施形態において、この担体は生理食塩水である。いくつかの実施形態において、この担体は水である。
【００９９】
いくつかの実施形態において、ウイルス感染もしくは病態の防止または抑制の方法には、ｉ）かかる治療を必要としている対象を特定するステップ、ｉｉ）式Ｉの化合物、その薬学的に許容される塩もしくは水和物、または式Ｉの化合物、その薬学的に許容される塩もしくは水和物を含む組成物を提供するステップ；ならびにｉｉｉ）その対象におけるウイルス感染もしくは病態を防止または抑制するか、またはかかる治療を必要としている対象のウイルスＤＮＡポリメラーゼもしくはウイルスＲＮＡポリメラーゼの活性を阻害するために治療有効量で前記化合物もしくは組成物を投与するステップが含まれる。
【０１００】
本発明の化合物は、塩、水和物、溶媒和物、互変異性体または複合体などの異なる形態で調製され、本発明は、これらの化合物の全ての異型を包含する。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、本発明の方法は、式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩を含む。式Ｉの化合物は、薬学的に許容される塩、例えば、酸付加塩、およびその複合体として製剤化されてもよい。かかる塩の調製は、その生理的効果を妨げることなく、この薬剤の物理的特性を変えることによって薬理学的使用を促進することができる。物理的性質の有用な変更の例として、経粘膜投与を促進するために融点を下げること、ならびにより高濃度の薬物投与を促進するために溶解度を増加させることが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０２】
本発明の対象は、例えば、単離した細胞もしくは組織、または培養した細胞もしくは組織を含むインビトロ系およびインビボ系、非細胞インビトロアッセイ系ならびに動物（例えば、両生類、鳥類、魚類、哺乳類、有袋類、ヒト、例えば、ネコ、イヌ、サル、マウスもしくはラットなどの家畜；または例えば、ウシもしくはブタなどの商業用動物）である。
【０１０３】
本発明の化合物を、インビボ投与に適する生理学的に適合した形態で対象に投与するための医薬組成物に製剤化してもよい。別の態様によると、本発明は、薬学的に許容される希釈剤および／または担体と混合して、式Ｉの化合物を含む医薬組成物を提供する。この薬学的に許容される担体は、その組成物の他の成分に適合性があり、その受容者に有害ではないという意味で「許容され」ねばならない。本明細書で使用するこれらの薬学的に許容される担体は、医薬製剤の材料として使用され、鎮痛剤、緩衝剤、結合剤、崩壊剤、希釈剤、乳化剤、賦形剤、増量剤、流動促進剤、可溶化剤、安定剤、懸濁化剤、等張化剤、ビヒクルおよび増粘剤として組み込まれる様々な有機材料または無機材料から選択されてもよい。酸化防止剤、芳香剤、着色剤、風味改善剤、防腐剤、甘味剤などの医薬品添加物も加えてもよい。薬学的に許容される担体の例として、とりわけ、カルボキシメチルセルロース、結晶セルロース、グリセリン、アラビアゴム、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、メチルセルロース、散剤、生理食塩水、アルギン酸ナトリウム、ショ糖、デンプン、タルクおよび水が挙げられる。いくつかの実施形態において、「薬学的に許容される」という用語は、動物、より具体的には、ヒトにおける使用のために、米国連邦政府の規制当局もしくは州政府によって承認されているか、または米国薬局方もしくは他の一般的に認められた薬局方に記載されていることを意味する。
【０１０４】
例えば、洗剤などの界面活性剤は、製剤における使用にも適する。界面活性剤の特定例として、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、酢酸ビニルとビニルピロリドンの共重合体、ポリエチレングリコール、ベンジルアルコール、マンニトール、グリセリン、ソルビトールまたはソルビタンのポリオキシエチレンエステル；レシチンまたはカルボキシメチルセルロースナトリウム；またはメタクリル酸塩などのアクリル誘導体、ステアリン酸アルカリ塩、特に、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸カリウムまたはステアリン酸アンモニウムなどの陰イオン界面活性剤；ステアリン酸カルシウムまたはステアリン酸トリエタノールアミン；アルキル硫酸塩、特に、ラウリル硫酸ナトリウムおよびセチル硫酸ナトリウム；ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムまたはジオクチルスルホコハク酸ナトリウム；または脂肪酸類、特に、ココナッツ油由来の脂肪酸、式Ｎ＋Ｒ’Ｒ”Ｒ’”Ｒ””Ｙ−の水溶性第４級アンモニウム塩などの陽イオン界面活性剤（式中、Ｒラジカルは、同一のまたは異なる、場合によって、ヒドロキシル化された炭化水素ラジカルであり、Ｙ−は、ハロゲン化アニオン、硫酸アニオンおよびスルホン酸のアニオンなどの強酸のアニオンであり；臭化セチルトリメチルアンモニウムブロミドは、使用可能な陽イオン界面活性剤の１つである）、式Ｎ＋Ｒ’Ｒ”Ｒ’”のアミン塩（式中、Ｒラジカルは、同一のまたは異なる、場合によって、ヒドロキシル化された炭化水素ラジカルであり、オクタデシルアミン塩酸塩は使用可能な陽イオン界面活性剤の１つである）、場合によって、ソルビタンのポリオキシエチレン化エステル、特に、ポリソルベート８０、またはポリオキシエチレンアルキルエーテルなどの非イオン性界面活性剤；ステアリン酸ポリエチレングリコール、ヒマシ油のポリオキシエチレン化誘導体、ポリグリセロールエステル、ポリオキシエチレン化脂肪アルコール、ポリオキシエチレン化脂肪酸またはエチレンオキシドとプロピレンオキシドの共重合体、ベタインの置換ラウリル化合物などの両性界面活性剤が挙げられる。
【０１０５】
対象に投与する場合、式Ｉの化合物および薬学的に許容される担体は無菌であり得る。いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物を静脈内投与する場合、水が担体である。いくつかの実施形態において、式Ｉの化合物を静脈内投与する場合、担体は、生理食塩水である。水性デキストロースおよびグリセロール溶液も、特に、注射溶液用の液体担体として使用することができる。適切な医薬担体には、デンプン、グルコース、乳糖、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、ポリエチレングリコール３００、水、エタノール、およびポリソルベート２０などの賦形剤も含まれ得る。本組成物は、必要に応じて、少量の湿潤剤もしくは乳剤、またはｐＨ緩衝剤も含んでもよい。
【０１０６】
本発明の医薬製剤を、薬学分野で周知の方法によって調製する。例えば、式Ｉの化合物を、懸濁液または溶液として担体および／もしくは希釈剤と会合させる。場合によって、１つ以上の捕捉成分（例えば、緩衝剤、香味剤、および界面活性剤など）も加える。担体の選択は、化合物の溶解度および化学的性質、選択される投与経路ならびに標準的な薬務によって決定される。いくつかの実施形態において、この製剤は、式Ｉの化合物および水を含む。いくつかの実施形態において、この製剤は、式Ｉの化合物および生理食塩水を含む。
【０１０７】
さらに、本発明の化合物を、経口投与、舌下投与または口腔投与、非経口投与、経皮投与、吸入、鼻腔内投与、経膣投与、直腸投与、および筋肉内投与を含むが、これらに限定されない周知の手順によってヒトもしくは動物の対象に投与する。本発明の化合物を、非経口投与、筋膜上投与、嚢内投与、頭蓋内投与、皮内投与、髄腔内投与、筋肉内投与、眼窩内投与、腹腔内投与、脊髄内投与、胸骨内投与、血管内投与、静脈内投与、実質投与、皮下注射もしくは舌下注射、またはカテーテル経由で投与する。いくつかの実施形態において、この化合物を、筋肉内送達によって対象に投与する。いくつかの実施形態において、この化合物を、腹腔内送達によって対象に投与する。いくつかの実施形態において、この化合物を、静脈内送達によって対象に投与する。いくつかの実施形態において、この化合物を、経口投与する。
【０１０８】
経口投与の場合、本発明の化合物の製剤を、カプセル、錠剤、散剤、顆粒剤、または懸濁液または溶液として提示してもよい。カプセル製剤は、ゼラチン、ソフトゲルまたは固体であってもよい。錠剤およびカプセル製剤は、さらに、１つ以上のアジュバント、結合剤、希釈剤、崩壊剤、賦形剤、フィラー、または滑剤を含んでもよく、これらの各々は当技術分野で周知である。そのようなものの例として、乳糖またはショ糖などの炭水化物、無水リン酸水素カルシウム、コーンスターチ、マンニトール、キシリトール、セルロースまたはその誘導体、微結晶性セルロース、ゼラチン、ステアリン酸、二酸化ケイ素、タルク、デンプングリコール酸ナトリウム、アカシア、香味剤、防腐剤、緩衝剤、崩壊剤、および着色剤が挙げられる。経口投与される組成物は、薬学的に口当たりのよい製剤を提供するために、例えば、果糖、アスパルテームまたはサッカリンなどの甘味剤、ペパーミント、冬緑油、もしくはチェリーなどの香味剤、着色剤、および防腐剤などの１つ以上の任意の薬剤を含んでもよい。
【０１０９】
非経口投与（すなわち、消化管以外の経路を経る注射による投与）の場合、本発明の化合物は、対象の血液と等張である無菌水溶液と組み合わせてもよい。このような製剤を、水溶液を生成し、その後、前記溶液を無菌にさせるために、塩化ナトリウム、およびグリシンなどの生理学的に適合性のある物質を含み、生理的条件と適合する緩衝化ｐＨを有する水に固体の有効成分を溶解させることにより調製する。この製剤を、密封されたアンプルまたはバイアルなどの単位用量または複数回用量の容器で提示してもよい。この製剤を、筋膜上、嚢内、頭蓋内、皮内、鞘内、筋肉内、眼窩内、腹腔内、脊髄内、胸骨内、血管内、静脈内、実質内、皮下、もしくは舌下、またはカテーテル経由を含むが、これらに限定されない注射の任意のモードによって対象の身体に送達してもよい。
【０１１０】
非経口投与には、水性ベースおよび非水性ベースの溶液が含まれる。このようなものの例として、例えば、水、生理食塩水、糖水溶液または糖アルコール水溶液、（エチルアルコール、イソプロパノール、グリコールなどの）アルコール、エーテル類、油類、グリセリド類、脂肪酸類、および脂肪酸エステル類が挙げられる。いくつかの実施形態において、非経口投与用の水が用いられる。いくつかの実施形態において、非経口投与用の生理食塩水が用いられる。非経口注射用の油類には、動物性油類、植物性油類、合成油類または石油ベースの油類が含まれる。糖溶液の例として、ショ糖、乳糖、デキストロース、およびマンノースなどが挙げられる。油類の例として、鉱油、ワセリン、大豆、トウモロコシ、綿実、およびピーナッツなどが挙げられる。脂肪酸および脂肪酸エステルの例として、オレイン酸、ミリスチン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、およびそれらのエステル類が挙げられる。
【０１１１】
経皮投与の場合、本発明の化合物を、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、イソプロパノール、エタノール、オレイン酸、およびＮ−メチルピロリドンなどの皮膚浸透賦活薬と組み合わせ、これは、本発明の化合物の皮膚への浸透性を増強させ、これらの化合物が皮膚を通って血流に浸透することを可能にする。化合物／賦活薬の組成物も、ゲル形態でこの組成物を提供するために、さらに、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、エチレン／酢酸ビニル、およびポリビニルピロリドンなどの重合物質と組み合わせてもよく、これらは、パッチを提供するために、塩化メチレンなどの溶媒に溶解させ、所望の粘度になるまで蒸発させ、その後、下地材料に適用される。
【０１１２】
いくつかの実施形態において、この組成物は、錠剤、カプセル剤または単回用量バイアルなどの単位用量形態である。適切な単位用量、すなわち、治療有効量は、選択された化合物の投与が示されている病状のそれぞれに合わせて適切に計画された臨床試験の間に決定されてもよく、当然のことながら、所望の臨床エンドポイントに応じて変化する。
【０１１３】
本発明は、対象におけるウイルス性疾患などの疾患を治療し、防止するための製品も提供する。これらの製品は、式Ｉの化合物の医薬組成物を含み、必要に応じて、さらに、本明細書に記載の少なくとも１つの追加の抗ウイルス化合物を含む。これらの製品を、これらの医薬組成物が、治療および／または防止することができる様々な疾患についての指示と共に包装する。例えば、これらの製品は、特定の疾患を治療するかまたは防止することが可能である、本明細書に開示する化合物の単位用量、および、この単位容量が特定の疾患、例えば、ウイルス感染を治療するかまたは防止することが可能であるという指示を含む。
【０１１４】
本発明の方法によると、式Ｉの化合物を、対象、特に、対象の細胞内のウイルスレベルの低下を制限するかまたは防ぐのに有効な量で、対象に投与する。この量は、インビボで確立された滴定曲線の分析ならびに本明細書に開示する方法およびアッセイを含む、周知の手順に基づいて、当業者が容易に決定する。いくつかの実施形態において、対象のウイルス粒子のレベルの増加を制限するかまたは防ぐのに有効な、本発明の化合物の適切な量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１０００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であり、約３００ｎｇ／ｍＬ〜約１０００ｎｇ／ｍＬ以上の範囲の血漿中レベルを達成するのに十分な量である。いくつかの実施形態において、本発明の化合物の量は、約５ｍｇ／ｋｇ／日〜約１０００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。いくつかの実施形態において、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約５００ｍｇ／ｋｇ／日を投与する。いくつかの実施形態において、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約３００ｍｇ／ｋｇ／日を投与する。いくつかの実施形態において、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約２００ｍｇ／ｋｇ／日を投与する。いくつかの実施形態において、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日を投与する。いくつかの実施形態において、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日を投与する。いくつかの実施形態において、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／日〜約３０ｍｇ／ｋｇ／日を投与する。いくつかの実施形態において、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／日〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日を投与する。
【０１１５】
組成物中に用いられる正確な用量は、投与経路および感染または疾患の重症度によっても決まり、施術者の判断および各患者の状況によって決定されるべきである。しかし、式Ｉの化合物の筋肉内投与に適する、体重１ｋｇあたりの有効投与量範囲は、一般に、約０．５〜約１０００ｍｇである。特定の実施形態において、このｉ．ｍ．用量は、約５００〜約１０００ｍｇ／ｋｇ、約３００〜約５００ｍｇ／ｋｇ、約２００〜約３００ｍｇ／ｋｇ、約１００〜約２００ｍｇ／ｋｇ、約５０〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約１０〜約５０ｍｇ／ｋｇ、または約５〜約１０ｍｇ／ｋｇ（または体表面積１平方メートルあたりに示される等価線量）。あるいは、ｉ．ｖ．投与に適する用量範囲は、患者の体重または体表面積を調整することなく、約５〜約１０００ｍｇの用量を用いて得ることができる。あるいは、ｉ．ｐ．投与に適する用量範囲は、患者の体重または体表面積を調整することなく、約５〜約１０００ｍｇの用量を用いて得ることができる。経口組成物は、単独で、または別の治療剤と組み合わせて、１つ以上の式Ｉの化合物を約１０重量％〜約９５重量％含んでもよい。本発明のいくつかの実施形態において、体重１ｋｇあたりの化合物または体表面積１平方メートルあたりに示されるそれらの等価線量の経口投与、ｉ．ｐ．投与またはｉ．ｍ．投与に適する用量範囲は、一般に、約５〜約１０００ｍｇ、好ましくは、約５〜約５００ｍｇである。いくつかの実施形態において、経口用量、ｉ．ｐ．用量またはｉ．ｍ．用量は、約５〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約５０〜約８０ｍｇ／ｋｇ、約８０〜約１５０ｍｇ／ｋｇ、約１５０〜約２５０ｍｇ／ｋｇ、約２５０〜約３５０ｍｇ／ｋｇ、約３５０〜約４５０ｍｇ／ｋｇ、約４５０〜約５５０ｍｇ／ｋｇ、約５５０〜約７００ｍｇ／ｋｇ、約７００〜約１０００ｍｇ／ｋｇ（または体表面積１平方メートルあたりに示される等価線量）。いくつかの実施形態において、経口投与、ｉ．ｐ．投与またはｉ．ｍ．投与に適する用量範囲は、患者の体重または体表面積を調整することなく、約５〜約２０００ｍｇである。他の効果的な用量は、インビトロ系または動物モデル試験系から得られた用量反応曲線から推定することができる。かかる動物モデルおよび系は、当技術分野で周知である。
【０１１６】
特定の態様において、ウイルス感染という状況での化合物の「有効量」は、ウイルスのライフサイクルの以下の段階のうちの１つ以上を、少なくとも５％、好ましくは少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％減少させるのに十分な量である：ウイルス粒子の細胞へのドッキング、ウイルスの遺伝情報の細胞への導入、ウイルスタンパク質の発現、新しいウイルス粒子の産生、およびウイルス粒子の細胞からの放出。いくつかの実施形態において、ウイルス感染という状況での有効量の化合物は、ウイルスの複製、増殖、または拡散を、少なくとも５％、好ましくは、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％減少させる。いくつかの実施形態において、ウイルス感染という状況での有効量の化合物は、感染対象の生存率を、少なくとも５％、好ましくは、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％増加させる。
【０１１７】
当業者は、日常の実験以上のものを用いないで、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識するか、または確認することができるであろう。かかる等価物は、本発明の範囲内であることを意図する。
【０１１８】
本発明を、さらに、以下の非限定的な実施例によって説明する。
【０１１９】
実施例
実施例１：（２Ｓ、３Ｓ、４Ｒ、５Ｒ）−２−（４−アミノ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−５−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３,４−ジオール（ＨＣｌ塩としての化合物Ｉ（式Ｉ、式中、Ａ＝ＮＨ２およびＢ＝Ｈ））の合成
【０１２０】
【化２】
0005902698.tif 000007
【０１２１】
ステップ−１
水およびメタノール（１：１、２．４Ｌ）中の（Ｅｖａｎｓ,Ｇａｒｙ Ｂ.；Ｆｕｒｎｅａｕｘ,Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｈ．；Ｈｕｔｃｈｉｓｏｎ,ＴｒａｃｙＬ.；Ｋｅｚａｒ,Ｈｏｌｌｉｓ Ｓ.；Ｍｏｒｒｉｓ,Ｐｈｉｌｉｐ Ｅ.,Ｊｒ.；Ｓｃｈｒａｍｍ,Ｖｅｒｎ Ｌ.；Ｔｙｌｅｒ,Ｐｅｔｅｒ Ｃによって、Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００１）,６６（１７）,５７２３−５７３０（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に報告された手順に従って調製した）７−（（２Ｓ、３Ｓ、４Ｒ、５Ｒ）−３,４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−２−イル）−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（５Ｈ）−オン（１−１）（１１５ｇ、３９０ミリモル）溶液に、室温で、トリエチルアミン（１１３ｍＬ、１．１２モル）、続いて、（Ｂｏｃ）２Ｏ（２２７ｇ、１．０４モル）を加えた。この反応混合物を室温で一晩撹拌した。固体生成物を濾過により収集し、水で洗浄し、真空乾燥させ、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３，４−ジヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−５−（４−オキソ−４,５−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）ピロリジン−ｌ−カルボキシレート（１−２）（１００％）を白色固体として得た。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ）δ７．８５（ｓ,１Ｈ）,７．３５（ｓ,１Ｈ）,４．７３−４．５３（ｍ,１Ｈ）,４．２９（ｓ,１Ｈ）,４．０３（ｓ,１Ｈ）,３．９７（ｓ,１Ｈ）,３．７０−３．５３（ｍ,２Ｈ）,１．３６および１．０４（回転異性体についてｓ,３Ｈ,６Ｈ）。
【０１２２】
ステップ−２
ピリジン（１８４ミリモル、２．２６モル）中の（２Ｒ、３Ｒ、４Ｓ、５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３，４−ジヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−５−（４−オキソ−４、５−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（１−２）溶液に、室温で、ＤＭＡＰ（０．７９ｇ、６．４６ミリモル）および無水酢酸（１０７ｍＬ、１１３１ミリモル）を加えた。反応混合物を室温で一晩攪拌した。この反応混合物をクロロホルムで希釈し、水、水性ＨＣｌ、水、および飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を乾燥させ、濾過し、真空濃縮し、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−ｌ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（４−オキソ−４,５−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−３）（１５０ｇ）を得、これは、次のステップにそのまま使用するのに十分純粋であった。ＭＳ（ＥＳ＋）４９３．１（Ｍ＋１）,５１５．１（Ｍ＋Ｎａ）；（ＥＳ−）４９１．４（Ｍ−１）。
【０１２３】
ステップ−３
アセトニトリル（６６０ｍＬ）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（４−オキソ−４,５−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−３）（１５０ｇ、３００ミリモル）溶液に、室温で、塩化ベンジルトリエチルアンモニウム（１３７ｇ,６００ミリモル）、ジメチルアニリン（５７ｍＬ,４５０ミリモル）、続いて、ＰＯＣｌ３（１６４ｍＬ,１８００ミリモル）を加えた。反応混合物を、８０℃で１時間加熱した。この反応混合物を室温まで冷却し、真空下で濃縮乾固した。得られた残渣をクロロホルムに溶解し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、乾燥させ、濾過して、濃縮乾固した。（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−４）の残渣を、精製することなく、次のステップでそのまま使用した。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ）δ １２．５４（ｓ,１Ｈ）,８．６５（ｓ,１Ｈ）,７．９２（ｓ,１Ｈ）,５．８５（ｍ,１Ｈ）,５．４５（ｍ,１Ｈ）,５．１０（ｍ,１Ｈ）,４．４９（ｍ,２Ｈ）,４．０７（ｍ,１Ｈ）,２．０７−１．９９（ｍ,９Ｈ）,１．１９（２ｂｓ、９Ｈ、回転異性体）。
【０１２４】
ステップ−４
ＤＭＦ（５４０ｍＬ）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−４）（３００ミリモル）溶液に、アジ化ナトリウム（９７．５ｇ,１５００ミリモル）を加え、８０℃で一晩加熱した。反応混合物を真空濃縮し、得られた残渣をクロロホルムに溶解した。クロロホルム層を水で洗浄し、乾燥させ、濾過して、真空濃縮した。アセトン：ヘキサン＝１：２からの結晶化による精製により、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４−アジド−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−ｌ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−５）を得た。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ）δ １３．５６−１３．００（ｂｓ,１Ｈ）,９．８６（ｓ,１Ｈ）,７.９５（ｓ,１Ｈ）,５．７８（ｍ,１Ｈ）,５．４０（ｍ,１Ｈ）,５．２６−５.１４（ｍ,１Ｈ）,４．５４（ｍ,１Ｈ）,４．４２（ｍ,１Ｈ）,４．１６−４．０３（ｍ,１Ｈ）,２．０６（ｓ,３Ｈ）,２．０２（ｓ,６Ｈ）,１．１４（ｂｓ,９Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ＋）５４０．０（Ｍ＋１）；（ＥＳ−）５１５．９（Ｍ−１）。
【０１２５】
ステップ−５
メタノール（１Ｌ）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４−アジド−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−５）（３００ミリモル）溶液に、Ｐｄ（ＯＨ）２（３０ｇ）を加えた。反応混合物を一晩（１６０ｐｓｉ）で水素化し、濾過し、セライトに通して触媒を除去した。濾液を真空濃縮し、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４−アミノ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−６）（１１３ｇ）を得た。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ）δ １２．４７−１１．９２（ｍ,１Ｈ）,８.８４−８．０３（ｍ,３Ｈ）,７．９０−７．６８（ｍ,１Ｈ）,５．７０−５．５１（ｍ,１Ｈ）,５．３８（ｍ,１Ｈ）,５．１２（ｍ,１Ｈ）,４．４２（ｍ,２Ｈ）,４．１７−４．００（ｍ,１Ｈ）,２．０７（ｓ,３Ｈ）,２．０５（ｓ,３Ｈ）,２．００（ｓ,３Ｈ）,１．１４（ｓ,９Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ＋）４９２．１（Ｍ＋１）,（ＥＳ−）４９０．０（Ｍ−１）。
【０１２６】
ステップ−６
メタノール（５００ｍＬ）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４−アミノ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−６）（１１１ｇ、２２６ミリモル）の溶液に、室温で、ＮａＯＭｅ（メタノール中２５％ ｗ／ｗ,４．８８ｇ,２２．６ミリモル）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、真空濃縮して、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−アミノ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−３,４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート（１−７）を得た。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ）δ １１．４０−１０．７３（ｂｓ,１Ｈ）,８．０１（ｓ,１Ｈ）,７．３９（２ｓ,１Ｈ）,６．９０（ｓ,２Ｈ）,４．８３（ｍ,２Ｈ）,４．４５（ｍ,２Ｈ）,３．９６（ｓ,２Ｈ）,３．５８（ｍ,３Ｈ）,１．３１および０．９９（ｓ,３Ｈ,６Ｈ,回転異性体）；ＭＳ（ＥＳ＋）３６６．０（Ｍ＋１）,３８８．０（Ｍ＋Ｎａ）；（ＥＳ−）３６３．８（Ｍ−ｌ）。
【０１２７】
ステップ−７
水性ＨＣｌ（濃ＨＣｌ１６０ｍＬおよび水４００ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−アミノ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−３,４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート（１−７）溶液を室温で３０分間撹拌し、次いで、乾燥するまで真空濃縮した。得られた残渣を水に溶解し、活性炭で処理し、３０分間還流した。この熱い溶液をセライトに通して濾過し、真空濃縮して、半固体生成物を得、これを、水およびエタノールから再結晶させ、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（４−アミノ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−５−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３,４−ジオール（１）（５０ｇ,７つのステップの全収率：４２．６％）を白色結晶として得た。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ,Ｄ２Ｏ）δ ８．４１（ｓ,１Ｈ）,８．０２（ｓ,１Ｈ）,４．９９（ｄ,Ｊ＝９Ｈｚ,１Ｈ）,４．７８（ｍ,１Ｈ）,４．４５（ｄｄ,Ｊ＝３,１．５Ｈｚ,１Ｈ）,３．９７（ｍ,２Ｈ）,３．９０（ｍ,１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ＋）２６６．２（Ｍ＋１）,（ＥＳ−）２６４．０（Ｍ−１）；分析：Ｃ１１Ｈ１５Ｎ５Ｏ３・２ＨＣｌについての計算値：Ｃ,３９．０７；Ｈ,５．０７；Ｎ,２０．７１；Ｃｌ,２０．９７；実測値：Ｃ,３９．０９；Ｈ,５．１０；Ｎ,２０．４９；Ｃｌ,２０．８４。
【０１２８】
実施例２：（２Ｓ、３Ｓ、４Ｒ、５Ｒ）−２−（４−アミノ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−５−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３,４−ジオール（ＨＣｌ塩として化合物Ｉ（式Ｉ、式中、Ａ＝ＮＨ２およびＢ＝Ｈ））の大規模合成
【０１２９】
ステップ−１
水：メタノール混合物（１：１、１０．４Ｌ）中の（Ｅｖａｎｓ,Ｇａｒｙ Ｂ.；Ｆｕｒｎｅａｕｘ,ＲｉｃｈａｒｄＨ．；Ｈｕｔｃｈｉｓｏｎ,Ｔｒａｃｙ Ｌ.；Ｋｅｚａｒ,Ｈｏｌｌｉｓ Ｓ.；Ｍｏｒｒｉｓ,Ｐｈｉｌｉｐ Ｅ.,Ｊｒ.；Ｓｃｈｒａｍｍ,Ｖｅｒｎ Ｌ.；Ｔｙｌｅｒ,ＰｅｔｅｒＣによって、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００１）,６６（１７）,５７２３−５７３０に報告された手順に従って調製した）７−（（２Ｓ、３Ｓ、４Ｒ、５Ｒ）−３,４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−２−イル）−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４（５Ｈ）−オン（１−１）（５００．０ｇ、１．４７４モル、１当量）懸濁液に、室温で、トリエチルアミン（６２１ｍＬ、４．４２２モル、３．０当量）、続いて、（Ｂｏｃ）２Ｏ（９８７ｇ、４．５３モル、３．１当量）を加えた。この反応混合物は、（Ｂｏｃ）２Ｏ添加後に、２８℃〜３３℃の内部温度のわずかな増加により、透明溶液になった。この溶液は、１時間の撹拌後、いくらかの濁度を示し始めた。この溶液を室温で一晩撹拌した。固体生成物を濾過により収集し、水（５．０Ｌ）で洗浄し、５０℃の高真空で乾燥させ、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３，４−ジヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−５−（４−オキソ−４,５−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（１−２）（４８２ｇ、８９％）を得た。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ）δ １１．９２（ｓ,２Ｈ）,７．８１（ｓ,１Ｈ）,７．３２（ｄ,Ｊ＝２２．７Ｈｚ,１Ｈ）,５．７３−５．２０（ｍ,１Ｈ）,５．０５−４．９１（ｍ,１Ｈ）,４．８７−４．７６（ｍ,１Ｈ）,４．７４−４.４９（ｍ,１Ｈ）,４．３３−４．１７（ｍ,１Ｈ）,４．０９−３．８６（ｍ,２Ｈ）,３．６４−３．４８（ｍ,２Ｈ）,１．３９−１．００（ｍ,９Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ＋）７５５．１（２Ｍ＋Ｎａ）,（ＥＳ−）７３１．７（２Ｍ−１）；分析；Ｃ１６Ｈ２２Ｎ４Ｏ６の計算値：Ｃ,５２．４５；Ｈ,６．０５；Ｎ,１５．２９；実測値：Ｃ,５２．２４；Ｈ,６.０２；Ｎ,１５．０５。
【０１３０】
ステップ−２
ピリジン（７４０ｍＬ、９．２１モル、７当量）中の（２Ｒ、３Ｒ、４Ｓ、５Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３，４−ジヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−５−（４−オキソ−４、５−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート（１−２）（４８２ｇ、１．３２モル、１．０当量）の懸濁液に、室温で、ＤＭＡＰ（３．２２ｇ、２６．３２ミリモル、０．０２当量）および無水酢酸（４３５ｍＬ、４．６１ミリモル、３．５当量）を加えた。無水酢酸の添加の際に、内部温度が上昇を始めたので、氷水浴冷却を行った。この無水物の全添加の際、温度は６７℃まで上昇し、次いで、室温まで下げた。この反応物が２５℃に達した後、氷水浴を取り除いた。この懸濁液は透明溶液ではなかったが、より明るい懸濁液が観察された。この反応混合物を室温で１４時間攪拌し、透明ではない溶液を得た。作製したアリコートは、出発材料がないこと、およびＴＬＣ（９：１のクロロホルム：メタノール）による２つの主要なスポットを示し、ＭＳは、生成物（４９３．０,Ｍ＋１）およびテトラアセチル化生成物（Ｍ＋１＝５３５）について２つの主要なピークを示す。この反応混合物をクロロホルム３．０Ｌで希釈し、１０分間撹拌し、次いで、脱イオン水２．０Ｌを加えた。ワックス状の白色生成物が、水相有機相界面に形成された。分配を行った後に、この生成物は水相に残った。有機相を分離し、水２．０Ｌで再度洗浄した。合わせた水洗浄液を、クロロホルム１．０で逆抽出した。合わせた有機相を、２．０Ｎの水性ＨＣｌ（２×１．０Ｌ）、水（２×１．０Ｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（２×１．０Ｌ）およびブライン（２×１．０Ｌ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空下、５０〜５５℃の水浴で濃縮乾固した。蒸留物が見られず、濃厚なシロップ状の生成物が得られるまで、真空を高真空オイルポンプに切り替えた。この生成物を、高真空オイルポンプで１４時間放置し、残留ピリジンを最小限にした。（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（４−オキソ−４,５−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−３）の良好な白色固体に変わった固体泡および濃厚な残渣の組み合わせが得られた（７１５、１１０％収率）。この割合は、テトラアセチル化化合物の量を反映している。この生成物は、次のステップにそのまま用いるのに十分純粋であった。分析試料を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン中０〜１００％（９：１）酢酸エチル／メタノールで溶出する）を用いるこの混合物の生成により調製し、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（４−オキソ−４,５−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−３）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ）δ１２．１３（ｓ,１Ｈ,Ｄ２Ｏ交換可能）,１１．９８（ｓ,１Ｈ,Ｄ２Ｏ交換可能）,７．８２（ｓ,１Ｈ）,７．２９（ｓ,１Ｈ）,５．７６（ｓ,１Ｈ）,５．３７（ｔ,Ｊ＝��．５Ｈｚ,１Ｈ）,４．９９（ｓ,１Ｈ）,４．５５（ｄｄ,Ｊ＝１１．３,６．６Ｈｚ,１Ｈ）,４．３４（ｄ,Ｊ＝８．３Ｈｚ,１Ｈ）,４．０３（ｑ,Ｊ＝７．１Ｈｚ,１Ｈ）,２．０１（ｄ,Ｊ＝１２．６Ｈｚ,９Ｈ）,１．２３（ｄｄ,Ｊ＝３９.９,３２．８Ｈｚ,９Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ＋）４９３．０（Ｍ＋１）；（ＥＳ−）５２６．７（Ｍ＋Ｃｌ）；分析：Ｃ２２Ｈ２８Ｎ４Ｏ９の計算値：Ｃ,５３．６５；Ｈ,５．７３；Ｎ,１１．３８；実測値：Ｃ,５３．１８；Ｈ,５.８９；Ｎ,１１．１０。
【０１３１】
ステップ−３
アセトニトリル（２．７５Ｌ）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（４−オキソ−４,５−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−３）（６２２ｇ、１．２６モル、１．０当量）溶液に、室温で、塩化ベンジルトリエチルアンモニウム（５７５ｇ,２．５モル、２．０当量）、ジメチルアニリン（２４０ｍＬ,１．９モル、１．５当量）、続いて、ＰＯＣｌ３（７０６ｍＬ,７．５８モル、６．０当量）を加えた。透明な淡黄色溶液が得られた。この反応混合物を、８０℃までゆっくり加熱し、この温度で１０分間保持した。９：１のクロロホルム：メタノールでのＴＬＣは、この反応が９８％を超えて完了したことを示す。黒色の均一溶液を５０．０℃まで冷却し、真空濃縮して（７０〜７３℃の水浴）、ＰＯＣｌ３を除去した。蒸留物が見られなくなるまで、この残渣を、高真空オイルポンプ下に置いた。この残渣をクロロホルム３．０Ｌに溶解し、中性ｐＨが得られるまで、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で注意深く、すばやく洗浄した。有機層を分離し、水（２Ｌ）、ブライン（２Ｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過して、乾燥するまで真空濃縮した（５０〜５３℃の水浴）。（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−４）の黒色生成物を、精製することなく、次のステップでそのまま使用した。
【０１３２】
ステップ−４
ＤＭＦ（１．５Ｌ）中の（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−５−（４−クロロ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−４）（６２２ｇ、１．２６モル、１当量）溶液に、アジ化ナトリウム（４１１ｇ,６．３２モル、５当量）を加え、６０℃で１０分間撹拌しながら加熱し、反応が完了した。（９：１のクロロホルム：メタノールおよび１：１のヘキサン：酢酸エチルでのＴＬＣ）。この反応を２５℃まで冷却し、氷（２Ｌ）に入れ、クロロホルム（２×１Ｌ）で抽出した。合わせたクロロホルム層を水（２×２Ｌ）、ブライン（２Ｌ）で洗浄し、乾燥させ、濾過し、真空濃縮して（７０〜８０℃の水浴）、黒色スラッジを得た。このスラッジの精製を、カラムクロマトグラフィーにより行った（黒色スラッジ９８７ｇ、８×３０インチカラム、半分シリカゲル、ヘキサン：酢酸エチルの溶出プロファイル；９:１（４０．０Ｌ）;７:３（２０．０Ｌ）;６:４（２０．０Ｌ）;１：１（２０Ｌ）;４:６（２０．０Ｌ）および２:８（２０．０Ｌ））。適切な画分をプールし、真空濃縮して（５０．０℃の水浴）、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４−アジド−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−５）（２つのステップについて４０７．０５ｇ,６２．３％収率）を濃密な赤色の、はちみつ様の生成物として得た。分析試料を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１００％の酢酸エチル）によるこの混合物の精製により調製し、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４−アジド−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−５）をオレンジ色の固体として得た。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ）δ１３．０８（ｄ,Ｊ＝１５５．６Ｈｚ,１Ｈ,Ｄ２Ｏ交換可能）,９．８６（ｓ,１Ｈ）,７．６１（ｄ,Ｊ＝７６．８Ｈｚ,１Ｈ）,５．７８（ｔ,Ｊ＝４．５Ｈｚ,１Ｈ）,５．４１（ｔ,Ｊ＝４．３Ｈｚ,１Ｈ）,５．２１（ｓ,１Ｈ）,４．５５（ｄｄ,Ｊ＝１１．４,６．４Ｈｚ,１Ｈ）,４．４１（ｄｄ,Ｊ＝１１．４,３．９Ｈｚ,１Ｈ）,４.０７（ｄ,Ｊ＝１６．５Ｈｚ,１Ｈ）,２．０６（ｓ,３Ｈ）,２．０１（ｄ,Ｊ＝９．９Ｈｚ,６Ｈ）,１．２３（ｄｄ,Ｊ＝３９．８,３２．７Ｈｚ,９Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ＋）５１８．０（Ｍ＋１）,５４０（Ｍ＋２３）；（ＥＳ−）５１６．４（Ｍ−１）；分析：Ｃ２２Ｈ２７Ｎ７Ｏ８についての計算値：Ｃ,５１．０６；Ｈ,５．２６；Ｎ,１８．９５：実測値：Ｃ,５０．９７；Ｈ,５.３０；Ｎ,１８．６２。
【０１３３】
ステップ−５
（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４−アジド−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−５）を、以下のとおりに、３つの異なるバッチに分けた。
【０１３４】
バッチ１：２．０ＬのＰａｒｒ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｏｒに、テフロンインサート、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４−アジド−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−５）（１０８．０１ｇ、メタノール中３００ミリモル、８００ｍＬ）、Ｐｄ（ＯＨ）２（２１．６ｇ,２０％ｗ／ｗ）を加えた。
【０１３５】
バッチ２：２．０ＬのＰａｒｒ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｏｒに、テフロンインサート、（１−５）（１４０．７０ｇ、メタノール中２７１．９ミリモル、１．０Ｌ）、Ｐｄ（ＯＨ）２（２８．１４ｇ,２０％ ｗ／ｗ）を加えた。
【０１３６】
バッチ３：２．０ＬのＰａｒｒ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｏｒに、テフロンインサート、（１−５）（１４０．７０ｇ、メタノール中２７１．９ミリモル、１．０Ｌ）、Ｐｄ（ＯＨ）２（２８．１４ｇ,２０％ ｗ／ｗ）を加えた。
【０１３７】
この反応混合物を、１５〜１８時間、１５０ｐｓｉで水素化した。この反応混合物を濾過し、セライトに通して触媒を除去した。濾液を、一定重量まで真空濃縮し（６０〜７０℃の水浴）、暗い色の生成物（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４−アミノ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−６）（３２８．８ｇ、８９％）を得た。この生成物は、次のステップでそのまま使用するのに十分純粋であった。分析試料を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（クロロホルム中０〜１０％のメタノール）を用いるこの混合物の精製により調製した。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ）δ １１．０６（ｓ,１Ｈ）,８．１２（ｓ,１Ｈ）,７．４９（ｓ,１Ｈ）,６．９４（ｓ,２Ｈ）,５．８６（ｓ,１Ｈ）,５．４４（ｔ,Ｊ＝４．２Ｈｚ,１Ｈ）,５．０２（ｓ,１Ｈ）,４．５６（ｄｄ,Ｊ＝１１．３,６．９Ｈｚ,１Ｈ）,４．４０（ｄｄ,Ｊ＝１１．３,４．２Ｈｚ,１Ｈ）,４．１６−３．９８（ｍ,１Ｈ）,２．０９−１．９４（ｍ,９Ｈ）,１．４８−１．１４（ｍ,９Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ＋）４９２．１（Ｍ＋１）；（ＥＳ−）５２６．４（Ｍ＋Ｃｌ）；分析：Ｃ２２Ｈ２９Ｎ５Ｏ８・１．２５Ｈ２Ｏについての計算値：Ｃ,５１．４１；Ｈ，６．１８；Ｎ,１３．６２；実測値：Ｃ,５１．２４；Ｈ,５.９２；Ｎ,１３．３３。
【０１３８】
ステップ−６
バッチ１．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４−アミノ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−６）（８１．５ｇ、１６５．８ミリモル）に、室温で、無水メタノール（３７０ｍＬ）を加え、続いて、ＮａＯＭｅ（ナトリウムメトキシド、メタノール中２５重量％,４．４９ｇ,２０．７６ミリモル）を加えた。出発材料の全てが反応したことをＴＬＣ（クロロホルム：メタノール  ９：１）が示すまで、この反応混合物を室温で撹拌した。
【０１３９】
バッチ２．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４−アミノ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−ｌ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−６）（１１７．８ｇ、２３９．６ミリモル）に、室温で、無水メタノール（５３０ｍＬ）を加え、続いて、ＮａＯＭｅ（ナトリウムメトキシド、メタノール中２５重量％溶液,６．５８ｇ,３０．４５ミリモル）を加えた。出発材料の全てが反応したことをＴＬＣ（クロロホルム：メタノール  ９：１）が示すまで、この反応混合物を室温で撹拌した。
【０１４０】
バッチ３．（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ）−２−（アセトキシメチル）−５−（４−アミノ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−ｌ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−３,４−ジイルジアセテート（１−６）（１２９．５ｇ、２６３．５ミリモル）に、室温で、無水メタノール（５８４ｍＬ）を加え、続いて、ＮａＯＭｅ（ナトリウムメトキシド、メタノール中２５重量％溶液,６．９９ｇ,３２．３５ミリモル）を加えた。出発材料の全てが反応した（７〜８時間）ことをＴＬＣ（クロロホルム：メタノール  ９：１）が示すまで、この反応混合物を室温で撹拌した。
【０１４１】
上記の溶液を濃縮し（６５〜７５℃の水浴）、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−アミノ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−３,４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート（１−７）を得、これは、次のステップでそのまま使用するのに十分純粋であった。分析試料を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（クロロホルム中０〜１０％のメタノール）を用いるこの混合物の精製により調製した。１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ）δ １０．７７（ｓ,１Ｈ）,８．０１（ｓ,１Ｈ）,７．４０（ｓ,１Ｈ）,６．８２（ｓ,３Ｈ）,５．０４−４．９１（ｍ,１Ｈ）,４．８７−４．７４（ｍ,１Ｈ）,４．５６−４．３５（ｍ,２Ｈ）,４．０４−３．９０（ｍ,２Ｈ）,３．７２−３．６３（ｍ,１Ｈ）,３．５９−３．４１（ｍ,１Ｈ）,１．１５（２ｓ,９Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ＋）３６６．１（Ｍ＋１）；（ＥＳ−）４００．３（Ｍ＋Ｃｌ）；分岐：Ｃ１６Ｈ２３Ｎ５Ｏ５・０．２５Ｈ２Ｏ：Ｃ,５１．３３；Ｈ,６．４６；Ｎ,１８．７１；実測値：Ｃ,５１．０４；Ｈ,６．４３；Ｎ,１８．４８。
【０１４２】
ステップ−７
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−アミノ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−３,４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボキシレート（１−７）を、以下のとおりに３つのバッチで処理した。
【０１４３】
バッチ１．（１−７）を、水性ＨＣｌ（濃ＨＣｌの１１８ｍＬおよび水２９３ｍＬ）に溶解した。
【０１４４】
バッチ２．（１−７）を、水性ＨＣｌ（濃ＨＣｌの１６９ｍＬおよび水４２１ｍＬ）に溶解した。
【０１４５】
バッチ３．（１−７）を、水性ＨＣｌ（濃ＨＣｌの１８６ｍＬおよび水４６８ｍＬ）に溶解した。
【０１４６】
この反応混合物を、室温で３０分間撹拌し（ＣＯ２ガスの強力放出）、次いで、各バッチを、乾燥するまで真空濃縮した（８０〜９０℃）。バッチ２およびバッチ３をプールし、湿り気のある、透明な黄色生成物２２６ｇを得た。バッチ１を、暗い灰色がかった生成物９１．４を得た。以下のとおりに結晶化を行った。バッチ２およびバッチ３の湿り気のある生成物について：水２２６ｍＬをこの生成物に加え、次いで、結晶化が始まるまで、５０℃まで加熱し、この時点で、熱いエタノールをゆっくり加えた。この混合物を１０分間５０℃で保ち、次いで、強く撹拌しながら、２５℃に到達させ、濾過して、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−２−（４−アミノ−５Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−７−イル）−５−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−３,４−ジオール（１）（８８ｇ）の淡黄色粉末を得た。バッチ１を同じ方法で精製し、３３．０ｇの淡灰色の生成物を得た。５５℃の高真空で乾燥させた後、全収率は１２１．０ｇである。バッチ１およびバッチ２の再結晶からの母液を再処理し、淡黄色粉末生成物（１）１５．０ｇを得た。１ＨＮＭＲ （３００ＭＨｚ,ＤＭＳＯ）δ １４．６０（ｓ,１Ｈ）,１３．２５（ｓ,１Ｈ）,１０．２３（ｓ,１Ｈ）,９．１３（ｓ,２Ｈ）,８．８４（ｓ,１Ｈ）,８.６３（ｓ,１Ｈ）,８．１１（ｄ,Ｊ＝３．１Ｈｚ,１Ｈ）,５．５５（ｓ,２Ｈ）,４．７８（ｄ,Ｊ＝４．４Ｈｚ,１Ｈ）,４．４４（ｄｄ,Ｊ＝８．８,５.０Ｈｚ,１Ｈ）,４．１４−４．０２（ｍ,１Ｈ）,３．７３（ｄ,Ｊ＝５．１Ｈｚ,２Ｈ）,３．５２（ｓ,１Ｈ）；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ,Ｄ２Ｏ）δ ８．３３（ｓ,１Ｈ）,７．９４（ｓ,１Ｈ）,４．９０（ｄ,Ｊ＝８.９Ｈｚ,１Ｈ）,４．６５（ｓ,１Ｈ）,４．３７（ｄｄ,Ｊ＝４．８,３．４Ｈｚ,１Ｈ）,３．８９（ｓ,１Ｈ）,３．８８（ｓ,１Ｈ）,３．８１（ｄｄ,Ｊ＝８．１,４．５Ｈｚ,１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳ＋）２６６．３（Ｍ＋１）；旋光度−５２．６９；（Ｈ２０,Ｃ＝１．１５）；ＭＰ：２３８℃；分析:Ｃ１１Ｈ１５Ｎ５Ｏ３・２ＨＣｌ・０．２５Ｈ２Ｏについての計算値：Ｃ，３８．５５；Ｈ,５.１５；ＣＩ,２０．４４；Ｎ,２０．６９；実測値；Ｃ,３８．６７；Ｈ,５．０５；ＣＩ,２０．４５；Ｎ,２０．４２。
【０１４７】
実施例３：化合物１（式Ｉ、式中Ａ＝ＮＨ２およびＢ＝Ｈ）のリン酸化ならびにＤＮＡ／ＲＮＡ取り込み試験
ヒト肝細胞癌（Ｈｕｈ−７）細胞を、２４時間、３Ｈ−化合物１と共にインキュベートし、続いて、メタノール抽出、ならびにＳＡＸカラムおよび放射性検出器を用いるＨＰＬＣ分析を行った。図１は、Ｈｕｈ−７細胞内の化合物１のリン酸化を示し、細胞内の効率的なリン酸化を示す。
【０１４８】
図２〜図４は、化合物１がリン酸化されるが、哺乳類のＲＮＡまたはＤＮＡに取り込まれないことを示す（ＤＰは、二リン酸塩およびＴＰは三リン酸塩を示す）。図２は、Ｈｕｈ−７細胞のアデノシンのリン酸化を示す。図３は、Ｈｕｈ−７細胞内の化合物１のリン酸化を示す。図４は、Ｈｕｈ−７細胞における化合物１およびアデノシンの全ＲＮＡ取り込みおよび化合物１およびアデノシンのゲノムＤＮＡ取り込みを示す。
【０１４９】
実施例４：アフリカミドリザルの腎臓細胞における麻疹ウイルスの複製に対する、ウイルスＲＮＡポリメラーゼ阻害剤の効果（式Ｉ、式中、Ａ＝ＮＨ２およびＢ＝Ｈ：化合物１）
材料および方法：
Ｖｅｒｏ７６細胞（アフリカミドリザルの腎臓細胞）を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ、マナサス、バージニア州）から入手した。これらの細胞を、５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｈｙｃｌｏｎｅ社）を補った最少必須培地（０．１５％ＮａＨＣＯ３を含むＭＥＭ；Ｈｙｃｌｏｎｅ研究所、ローガン、ユタ州、米国）で日常的に継代した。化合物を評価する場合、血清を２．５％の最終濃度まで低下させ、ゲンタマイシンを、５０μｇ／ｍＬの最終濃度まで試験培地に加えた。麻疹ウイルス（ＭＶ）、株シカゴを、米国疾病対策センター（アトランタ、ジョージア州）から入手した。
【０１５０】
抗ウイルス試験の手順：
細胞変性効果阻害アッセイ（視覚アッセイ）
細胞を、９６ウェルの平底組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｇｌａｓｓ Ｗｏｒｋｓ社、コーニング、ニューヨーク州）に、０．２ｍＬ／ウェルの適切な細胞濃度で播種し、細胞単層を樹立させるために、３７℃で一晩インキュベートした。単層が樹立した時、増殖培地をデカントし、試験化合物の様々な希釈物を各ウェルに加えた（３ウェル／希釈物、０．１ｍＬ／ウェル）。化合物希釈媒体を、細胞およびウイルスの対照ウェルに加えた（０．１ｍＬ／ウェル）。試験培地で希釈したウイルスを、０．１ｍＬ／ウェルで、化合物試験ウェル（３ウェル／化合物の希釈物）およびウイルス対照ウェル（６ウェル）に加えた。ウイルス（ウイルスＭＯＩ＝０．００１）を、化合物添加の約５分後に加えた。ウイルスを含まない試験培地を、０．１ｍＬ／ウェルで、全ての毒性対照ウェル（２ウェル／各試験化合物の希釈物）および細胞対照ウェル（６ウェル）に加えた。ウイルス対照ウェルが、細胞毒性効果（ＣＰＥ）測定値（８０〜１００％細胞破壊）を有するまで、これらのプレートを、５％ＣＯ２、９５％空気雰囲気の加湿インキュベーター内で、３７℃でインキュベートした。これは、ウイルスに応じて、細胞へのウイルス暴露後４〜１１日目に達成された。次いで、ＣＰＥについて細胞を顕微鏡で調べ、これを、０（正常細胞）〜４（最大、１００％、ＣＰＥ）にスコア化した。毒性対照ウェル中の細胞を、細胞毒性に起因する形態学的変化について顕微鏡観察した。この細胞毒性（細胞破壊および／または形態変化）も、１００％毒性、８０％毒性、６０％毒性、４０％毒性、２０％毒性、および０（正常細胞）に分類した。５０％有効量（ＥＣ５０）および５０％細胞毒性用量（ＩＣ５０）を、それぞれ、ウイルスのＣＰＥデータおよび毒性制御データの回帰分析により計算した。試験した各化合物の選択指数（ＳＩ）を、以下の式を用いて計算した：
【０１５１】
【数１】
0005902698.tif 000008
【０１５２】
ＣＰＥ阻害のニュートラルレッド（ＮＲ）取り込みアッセイ
ＮＲレッドを、Ｓｍｅｅら（Ｊ.Ｖｉｒｏｌ.Ｍｅｔｈｏｄｓ ２００２,１０６：７１−７９；参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の発見に基づき、抗ウイルス薬を評価するための色素定量法として選択した。このアッセイを、上記の同じＣＰＥ阻害試験プレートで行い、目視観察によって観察された阻害活性および細胞毒性を検証した。ＮＲアッセイを、Ｂａｒｎａｒｄら（ＡｎｔｉｖｉｒａｌＣｈｅｍ.Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ.２００１,１２:２２０−２３１；参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）によって記載されたＣａｖｅｎａｕｇｈら（Ｉｎｖｅｓｔ.ＮｅｗＤｒｕｇｓ １９９０,８：３４７−３５４；参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の改良法を用いて行った。簡単に説明すると、ＣＰＥ阻害アッセイのＣＰＥについてスコア化されたプレートの各ウェルから培地を除去し、０．０３４％のＮＲを、そのプレートの各ウェルに加え、このプレートを暗所で、３７℃で２時間インキュベートした。次いで、ＮＲ溶液を、これらのウェルから除去した。すすぎ（プレートから脱落した細胞は、ニュートラルレッドの誤った低いアップを引き起こすこともある）、吸引乾固させた後、セーレンセンクエン酸緩衝液で緩衝化された無水エタノールを用いて、これらの細胞から残留色素を、暗所で、室温で３０分間抽出した。５４０ｎｍ／４０５ｎｍの吸光度を、マイクロプレートリーダー（ＯｐｓｙｓＭＲ（商標）、Ｄｙｎｅｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、シャンティリー、バージニア州、米国）を用いて読み取る。吸光度の値を、未処理の対照の割合として示し、ＥＣ５０値、ＣＣ５０値およびＳＩ値を、上記のとおりに計算した。
【０１５３】
ウイルス収量減少アッセイ（Ｖｉｒｕｓ Ｙｉｅｌｄ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ）
ウイルス収量減少アッセイを、本質的には以前に記載されたとおりに、培養細胞の５０％感染用量（ＣＣＩＤ５０）アッセイを用いて行った（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ.Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ.１９９２,３：１８３７−１８４２；参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。簡単に説明すると、各ウェルの上清を、Ｖｅｒｏ−７６細胞を含む９６ウェルプレートの三つ組ウェル中で連続希釈した。プレートを６日間インキュベートし、次いで、ウイルス誘導性ＣＰＥについて調べた。ウイルス収量力価を、ＲｅｅｄおよびＭｕｅｎｃｈ（Ａｍ.Ｊ.Ｈｙｇ.１９３８,２７：４９３−４９８；参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）のエンドポイント法によって定量化した。ウイルス収率を９０％阻害するか、またはウイルス力価を１ｌｏｇ１０減少させるのに必要な濃度を推定するために、ＥＣ９０値を、線形回帰を用いて計算した。
【０１５４】
結果および考察
麻疹ウイルスは、化合物１によって強力に阻害された（表１）。麻疹ウイルスに対するＥＣ５０値は、視覚アッセイおよびＮＲアッセイによって、それぞれ０．６μｇ／ｍＬおよび１．４μｇ／ｍＬであった。この化合物は、視覚アッセイまたはＮＲアッセイのいずれにおいても、いかなる細胞毒性も有していなかった（ＩＣ５０＞１００）。したがって、両方のアッセイによる選択指数は、化合物１が、麻疹ウイルス（ＭＶ）に対して高活性であることを示唆した。ＭＶに対する強力な阻害活性を、ＥＣ９０＝０．３６μｇ／ｍＬでのウイルス収量減少アッセイにより確認し、感染細胞内で産生されたウイルスが１ｌｏｇ１０降下したことを示した。
【０１５５】
結論
化合物１は、強力で、選択的な阻害活性を示した。ウイルス収量減少アッセイにより、化合物１は、ＭＶの強力な阻害剤でもあった（ＥＣ９０＝０．３７μｇ／ｍＬ）。したがって、化合物１は、多くのＲＮＡウイルスの強力な阻害剤であることが判明し、化合物１が、選択されたＲＮＡウイルスの広範囲の阻害剤として、インビトロ評価およびインビボ評価をさらに保証することを示唆する。
【０１５６】
実施例５：様々なＲＮＡウイルスの複製に対する、ウイルスＲＮＡポリメラーゼ阻害剤（式Ｉ、式中、Ａ＝ＮＨ２およびＢ＝Ｈ：化合物１）の効果
材料および方法
細胞およびウイルス
アフリカミドリザル腎臓細胞（ＭＡ−１０４）を、Ｗｈｉｔａｋｅｒ  ＭＡ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ社、ウォーカーズビル、ＭＤ、米国）から入手した。全てのＶｅｒａ細胞（アフリカミドリザル腎臓細胞、ヒト喉頭癌細胞（Ａ−５４９）およびメイディン・ダービー・イヌ腎臓細胞を、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ、マナサス、バージニア州）から入手した。Ａ−５４９細胞を、０．１５％のＮａＨＣＯ３および１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、Ｈｙｃｌｏｎｅ社）を補ったダルベッコ最小必須培地（ＤＭＥＭ）（ＨｙｃｌｏｎｅＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、ローガン、ユタ州、米国）で培養した。残りの細胞を、５％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、Ｈｙｃｌｏｎｅ社）を補った最小必須培地（０．１５％のＮａＨＣＯ３を含むＭＥＭ；ＨｙｃｌｏｎｅＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、ローガン、ユタ州、米国）で日常的に継代した。
【０１５７】
化合物を評価する場合、この血清を、２．５％の最終濃度まで減少させ、ゲンタマイシンを、５０μｇ／ｍＬの最終濃度まで試験培地に加える。インフルエンザアッセイのための試験培地は、血清を含まないＭＥＭ、０．１８％ＮａＨＣＯ３、２０μｇ／ｍＬのトリプシン、２．０μｇ／ｍＬのＥＤＴＡ、および５０μｇ／ｍＬのゲンタマイシンからなった。
【０１５８】
活発に増殖している細胞内における毒性の評価のために、細胞毒性を、いくつかの濃度の化合物に３日間暴露した後のＮＲ取り込みアッセイによって反映されるとおり、細胞の総数を決定することにより評価した。薬物の存在下または非存在下での７２時間目の細胞増殖を定量化するために、１×１０３ＭＤＣＫ細胞をプレートに播種し、（全ての細胞をプレートのウェルに接着させた）４時間後、ＭＥＭ中の選択濃度の薬物またはＭＥＭに暴露した。７２時間後、これらのプレートを、ＮＲアッセイについて上記のとおりに処理した。吸光度の値を、未処理の対照の割合として示し、ＣＣ５０値を回帰分析により計算した。
【０１５９】
デングウイルス２（ＤＶ−２）、株ニューギニアＣ、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）Ａ２、ライノウイルス２（ＲＶ−２）、株ＨＧＰ、タカリベ（ＴＣＶ）、株ＴＲＶＬ１１５７３、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥ）、および黄熱病ウイルス（ＹＦＶ）、株１７Ｄの全てを、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ；マナッサス、バージニア州）から入手した。インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス（ＭＶ）、株シカゴ、ＳＡＲＳコロナウイルス（ＳＡＲＳ−ＣｏＶ）、株ウルバニ、西ナイルウイルス（ＷＮＶ）、株９９６６２５と命名された原型ニューヨーク１９９９分離株の全てを、米国疾病対策センター（アトランタ、ジョージア州）から入手した。プンタトロウイルス（ＰＴＶ）、アダムス（Ａｄａｍｅｓ）株を、米国陸軍の感染症医学研究所、Ｆｔ.Ｄｅｒｒｉｃｋ（フレデリック、メリーランド州）のＤｏｍｉｎｉｑｕｅ Ｐｉｆａｔ博士から入手した。リフトバレー熱ウイルス（ＲＶＦＶ）ワクチン株、ＭＰ−１２、およびフニンウイルス（ＪＵＮＶ）ワクチン株、Ｃａｎｄｉｄ１は、Ｒｏｂｅｒｔ Ｔｅｓｈ博士（新興ウイルスおよびアルボウイルスのための世界リファレンスセンター、テキサス大学、医学部門、ガルベストン、テキサス州）から親切に提供された。ピキンデウイルス（ＰＩＣＶ）、株Ａｎ  ４７６３は、ＤａｖｉｄＧａｎｇｅｍｉ博士（クレムソン大学、クレムソン、サウスカロライナ州）によって提供された。パラインフルエンザウイルス３型（ＰＩＶ−３）、株１４７０２／５／９５は、ＪａｃｑｕｅｌｉｎＢｏｉｖｉｎ（Ｓｔ.Ｊｕｓｔｉｎ病院、モントリオール、カナダ）から入手した。アデノウイルス（ＡＶ−１）１型、株シカゴ／９５は、小児患者の気管洗浄液から単離し、Ｍ.Ｆ.Ｓｍａｒｏｎ（医学部、シカゴ大学、シカゴ、イリノイ州）によって提供された。
【０１６０】
抗ウイルス試験の手順：
細胞変性効果阻害アッセイ（視覚アッセイ）
細胞を、９６ウェルの平底組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｇｌａｓｓ Ｗｏｒｋｓ社、コーニング、ニューヨーク州）に、０．２ｍＬ／ウェルの適切な細胞濃度で播種し、細胞単層を樹立させるために、３７℃で一晩インキュベートした。単層が樹立した時、増殖培地をデカントし、試験化合物の様々な希釈物を各ウェルに加えた（３ウェル／希釈物、０．１ｍＬ／ウェル）。化合物希釈媒体を、細胞およびウイルスの対照ウェルに加えた（０．１ｍＬ／ウェル）。試験培地で希釈したウイルスを、０．１ｍＬ／ウェルで、化合物試験ウェル（３ウェル／化合物の希釈物）およびウイルス対照ウェル（６ウェル）に加えた。ウイルス（ウイルスＭＯＩ＝０．００１）を、化合物添加の約５分後に加えた。ウイルスを含まない試験培地を、０．１ｍＬ／ウェルで、全ての毒性対照ウェル（２ウェル／各試験化合物の希釈物）および細胞対照ウェル（６ウェル）に加えた。ウイルス対照ウェルが、適切な細胞毒性効果（ＣＰＥ）測定値（８０〜１００％の細胞破壊）を有するまで、これらのプレートを、５％ＣＯ２、９５％空気雰囲気の加湿インキュベーター内で、３７℃でインキュベートした。これは、ウイルスに応じて、細胞へのウイルス暴露後４〜１１日目に達成された。次いで、ＣＰＥについて細胞を顕微鏡で調べ、これを、０（正常細胞）〜４（最大、１００％、ＣＰＥ）にスコア化した。毒性対照ウェル中の細胞を、細胞毒性に起因する形態学的変化について顕微鏡観察した。この細胞毒性（細胞破壊および／または形態変化）も、１００％毒性、８０％細胞毒性、６０％細胞毒性、４０％細胞毒性、２０％細胞毒性、および０（正常細胞）に分類した。５０％有効量（ＥＣ５０）および５０％細胞毒性用量（ＩＣ５０）を、それぞれ、ウイルスのＣＰＥデータおよび毒性制御データの回帰分析により計算した。試験した各化合物の選択指数（ＳＩ）を、以下の式を用いて計算した：
【０１６１】
【数２】
0005902698.tif 000009
【０１６２】
ＣＰＥ阻害のニュートラルレッド（ＮＲ）取り込みアッセイおよび化合物の細胞毒性
ＮＲレッドを、Ｓｍｅｅら（上記）の発見に基づき、抗ウイルス薬を評価するための色素定量法として選択した。このアッセイを、上記の同じＣＰＥ阻害試験プレートで行い、目視観察によって観察された阻害活性および細胞毒性を検証した。ＮＲアッセイを、Ｂａｒｎａｒｄら（上記）によって記載されたＣａｖｅｎａｕｇｈら（上記）の改良法を用いて行った。簡単に説明すると、ＣＰＥ阻害アッセイによりＣＰＥについてスコア化されたプレートの各ウェルから培地を除去し、０．０３４％のＮＲを、そのプレートの各ウェルに加え、このプレートを暗所で、３７℃で２時間インキュベートした。次いで、ＮＲ溶液を、これらのウェルから除去した。すすぎ（プレートから脱落した細胞は、ニュートラルレッドの誤った低いアップを引き起こすこともある）、吸引乾固させた後、セーレンセンクエン酸緩衝液で緩衝化された無水エタノールを用いて、これらの細胞から残留色素を、暗所で、室温で３０分間抽出した。５４０ｎｍ／４０５ｎｍの吸光度を、マイクロプレートリーダー（ＯｐｓｙｓＭＲ（商標）、Ｄｙｎｅｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、シャンティリー、バージニア州、米国）を用いて読み取る。吸光度の値を、未処理の対照の割合として示し、ＥＣ５０値、ＣＣ５０値およびＳＩ値を、上記のとおりに計算した。
【０１６３】
【表１−１】
0005902698.tif 000010
【表１−２】
0005902698.tif 000011
【０１６４】
化合物１（ＳＩ＞１０）により著しく阻害されたと考えられる他のウイルスは、ＤＶ−２（ＥＣ５０＝１５,１３μｇ／ｍＬ）、ＪＵＮＶ（ＥＣ５０＝２９,１６μｇ／ｍＬ）、ＹＦＶ（ＥＣ５０＝８．３,８．３μｇ／ｍＬ）であった（表１）。以下のウイルスは、化合物１によりわずかに阻害された（１０＜ＳＩ＞３）：ＰＩＶ−３（ＥＣ５０＝７．１,１０μｇ／ｍＬ）、ＳＡＲＳ−ＣｏＶ（ＥＣ５０＝１４,１６μｇ／ｍＬ）、ＰＩＣＶ（ＥＣ５０＝６１,２８μｇ／ｍＬ）、およびＲＶＦＶ（ＥＣ５０＝７５,６４μｇ／ｍＬ）。化合物１を、インフルエンザウイルス株のサブセットに対して試験し（表２）、複数株に対して広範囲の抗インフルエンザ活性を示した。
【０１６５】
【表２】
0005902698.tif 000012
【０１６６】
結論
化合物１は、試験した全てのインフルエンザウイルスに対して強力な活性を示した。化合物１は、インフルエンザウイルス複製の強力な阻害剤であることが判明し、化合物１が、全てのインフルエンザウイルスを含む、選択したＲＮＡウイルスの広範囲の阻害剤として有効であることを示唆する。
【０１６７】
実施例６：化合物１のインビトロ抗ウイルス活性
化合物１の抗ウイルス活性を、いくつかのウイルスにおいて、抗ウイルス活性についてインビトロで評価した。ＥＣ５０値は、マールブルグ（フィロウイルス科）、フニンＣａｎｄｉｄ１（アレナウイルス科）、ピキンデ（アレナウイルス科）、チクングンヤ１８１／２５（トガウイルス科）およびワクシニアＮＹＣＢＨ（ポックスウイルス科）に対して、約１０μｇ／ｍＬ〜約３００μｇ／ｍＬを超える範囲であった。
【０１６８】
実施例７：ＭＤＣＫ細胞における化合物１とノイラミニダーゼ阻害剤の相乗的抗ウイルス活性
メイディン・ダービー・イヌ腎臓（ＭＤＣＫ）細胞に、インフルエンザウイルスＨ３Ｎ２（Ａ／ビクトリア／３／７５）ウイルスを感染させ、化合物１およびペラミビルの様々な組み合わせで７２時間処理した。細胞毒性効果を、ニュートラルレッド取り込みアッセイを用いて決定した。このデータを表３に示す。
【０１６９】
【表３】
0005902698.tif 000013
【０１７０】
実験データを、Ｍａｃ Ｓｙｎｅｒｇｙ ＩＩ（商標）ソフトウェアプログラム（Ｐｒｉｃｈａｒｄ ａｎｄ Ｓｈｉｐｍａｎ,１９９０；参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を用いて、３次元解析によって評価した。このソフトウェアは、個々の薬物の用量反応曲線から理論的な添加剤の相互作用を計算する。次いで、期待される相互作用よりも大きい（相乗効果）または小さい（拮抗作用）領域を明らかにするために、予測された添加剤の相互作用を表す添加剤表面の計算値を、表面の実験値から減算する。細胞培養試験におけるペラミビルと化合物１の組み合わせは、９２μＭ２ユニット％に等しい相乗効果体積で相乗的な抗ウイルス効果を示した（図５）。
【０１７１】
実施例８：インフルエンザウイルス感染モデルマウスにおける化合物１の筋肉内注射（ＩＭ）の有効性
６〜８週齢のＢａｌｂ／Ｃマウスを、Ｈ３Ｎ２ウイルス（Ａ／ビクトリア／３／７５）に順応させた。０、３０、１００、および３００ｍｇ／ｋｇ／ｄ  ｑｄの用量を、感染の１時間前から始め、５日間、筋肉内（ＩＭ）注射により与えた。Ｎ＝５０動物。全動物を、１６日間追跡調査した。エンドポイントには、致死率、死亡までの平均日数、および体重減少を含めた。これらの効果を、図６に示す。
【０１７２】
インフルエンザウイルス感染モデルマウスにおける化合物１（ＩＭ）の結果も、図４に示す。ＩＭ投与した化合物１は、インフルエンザウイルスを感染させたマウスの生存率および体重減少を改善する。
【０１７３】
【表４】
0005902698.tif 000014
【０１７４】
実施例９：インフルエンザ感染モデルマウスにおける化合物１の経口投与の有効性
６〜８週齢のＢａｌｂ／Ｃマウスを、Ｈ３Ｎ２ウイルス（Ａ／ビクトリア／３／７５）に順応させた。０、３０、１００、および３００ｍｇ／ｋｇ／ｄ  ｑｄおよび１００ｍｇ／ｋｇ／ｄｂｉｄの用量を、経口投与した。Ｎ＝６０動物。全動物を、１６日間追跡調査した。エンドポイントには、致死率、死亡までの平均日数、および体重減少を含めた。Ｈ３Ｎ２ Ａ／Ｖｉｃ／３／７５インフルエンザウイルスを感染させたマウスの体重減少に対する、経口投与した化合物１の効果を図７に示す。
【０１７５】
インフルエンザウイルス感染モデルマウスにおける化合物１の経口投与の結果も、図５に示す。経口投与した化合物１は、インフルエンザウイルスを感染させたマウスの生存率および体重減少を改善する。
【０１７６】
【表５】
0005902698.tif 000015
【０１７７】
実施例１０：マウスにおける薬物動態試験
雌のＢａｌｂ／ｃマウス（Ｎ＝３０）に、１００ｍｇ／ｋｇの化合物１を経口投与した。マウスを、ｔ＝０．１７、０．５、１．０、３，６、および２４時間（１時点あたりそれぞれ５匹）で、後眼窩洞（ｒｅｔｒｏｏｒｂｉｔａｌ ｓｉｎｕｓ）を通して出血させ、遠心分離し、血漿を−８０℃で保存した。血漿薬物濃度を、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析により測定した。
【０１７８】
経口投与後の化合物１のマウス血漿中レベルを表６に示す。
【０１７９】
【表６】
0005902698.tif 000016
【０１８０】
実施例１１：エボラウイルス感染マウスの予防試験
化合物１を、８〜１２週齢のＣ５７ＢＩ／６マウスに、ｉ.ｐ.投与、ｉ.ｍ.投与、および経口投与（３００ｍｇ／ｋｇ／日、ＢＩＤ）した（１群あたりＮ＝１０、４群−１群は生理食塩水および３群は薬物治療群）。感染４時間前から始まる治療の８日間。エボラウイルス（ザイール）負荷に順応させたマウスに、腹腔内投与した。死亡率および体重を、感染後１４日間監視した。
【０１８１】
マウスの生存率を図８に示す。生理食塩水で治療したエボラウイルス感染マウスは全て、８日目までに死亡した。化合物１を腹腔内投与または筋肉内投与した全てのマウスは、試験のエンドポイント（１４日目）で生存していた。化合物１を経口投与したマウスの８０％は、試験のエンドポイント（１４日目）で生存していた。
【０１８２】
マウスの体重変化を図９に示す。生理食塩水で治療したエボラウイルス感染マウスは、全体的に８日目までに体重減少を示した（全対照マウスは、８日目までに死亡した）。化合物１を腹腔内投与または筋肉内投与したマウスは、１２日目に、最初の体重の９５％を上回って維持していた。化合物１を経口投与したマウスは、１２日目に、最初の体重の８０％を上回って維持していた。全ての薬物治療マウスは、１２日後に体重が増加し続けた。
【０１８３】
実施例１２：エボラウイルス感染マウスの予防試験
化合物１を、８〜１２週齢のＣ５７ＢＩ／６マウスに、ｉ.ｍ.投与および経口投与した。試験対象を６群に分けた（１群あたりＮ＝１０）。群１は生理食塩水対照であり、群２は、１５０ｍｇ／ｋｇの化合物１を投与し（ＰＯ、ＢＩＤ）、群３は、２５０ｍｇ／ｋｇの化合物１を投与し（ＰＯ、ＢＩＤ）、群４は、１５０ｍｇ／ｋｇの化合物１を投与した（ＩＭ、ＢＩＤ）。群５は、生理食塩水で治療した非感染マウス（ＰＯ、ＢＩＤ）であり、群６は、２５０ｍｇ／ｋｇの化合物１で治療した（ＰＯ、ＢＩＤ）非感染マウスであった。治療は、感染前の４時間から始まる９日間であった。エボラウイルス（ザイール）負荷に順応させたマウスに、１０００ｐｆｕで腹腔内投与した。死亡率および体重を、感染後１４日間監視した。
【０１８４】
マウスの生存率を図１０に示す。生理食塩水で治療したエボラウイルス感染マウスは全て、８日目までに死亡した。化合物１を筋肉内投与した全てのマウスは、試験のエンドポイントで生存しており、このことは、化合物１のＩＭ投与量が完全に保護したことを示した。化合物１を経口投与したマウスの８０％以上が、試験のエンドポイントで生存していた。
【０１８５】
マウスの体重変化を図１１に示す。生理食塩水で治療したエボラウイルス感染マウスは、７日目までに、全体的な体重減少を示した（全対照マウスは、８日目までに死亡した）。化合物１を筋肉内投与したマウスは、１１日目に、非感染対照群に類似した体重増加を示した。化合物１を経口投与したマウスは、可逆的な体重減少を示し、１１日目に、最初の際重の１００％を上回って維持していた。
【０１８６】
実施例１３：黄熱病ウイルス（ＹＦＶ）時間窓（Ｔｉｍｅ Ｗｉｎｄｏｗ）ゴールデンハムスターの試験
黄熱病ウイルス（Ｊｉｍｅｎｅｚ株）を、メスのシリアンゴールデンハムスター（９９ｇ）に、ハムスター１匹あたり２０のＣＣＩＤ５０でＩＰ注射した（約６．２５×ＬＤ５０）。以下のとおりに群に分けた：１）化合物１を開始４時間前（−４ｈ）に投与した（Ｎ＝１５）；２）化合物１を開始１ｄｐｉ（感染後の日数）に投与した（Ｎ＝１０）；３）化合物１を開始２ｄｐｉに投与した（Ｎ＝１０）；４）化合物１を３ｄｐｉに投与した（Ｎ＝１０）；５）化合物１を４ｄｐｉに投与した（Ｎ＝１０）；６）リバビリンを開始４時間前に投与した（Ｎ＝１０）；７）生理食塩水ビヒクルを開始４時間前に投与した（Ｎ＝１６）；８）非感染ハムスターに化合物１を開始４時間前に投与した（Ｎ＝３）；９）非感染ハムスターに生理食塩水ビヒクルを開始４時間前に投与した（Ｎ＝３）；１０）非感染の、未治療の正常対照（Ｎ＝３）。治療用量は、７日間、１００ｍｇ／ｋｇＩＰ,ＢＩＤであった。試験のエンドポイントは、２１日目の死亡率、０日、３日、５日、および６日目に測定した体重、血清および肝臓のウイルス力価（４日目、−４ｈにおける化合物１、−４ｈにおけるビヒクル）、ならびに６日目のＡＬＴおよびＡＳＴであった。
【０１８７】
本試験は、プラセボと比較して、化合物１について、治療を遅くすると生存率が高まることを示した（図１２）。ＹＦＶを感染させ、ウイルス負荷後の様々な時間で始まる７日間、毎日２回、化合物１で治療したハムスターの生存率を示す（プラセボと比較、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊Ｐ＜０．１）。感染前から始まって、感染後、最高で３日間治療を遅らせた化合物１についての生存率は１００％であった。感染後最初の４日間の化合物１についての生存率は８０％であり、このことは、治療を遅らせた群において、プラセボを超える有意な改善を示した。対照的に、リバビリンは、感染前から始まって９０％の生存率をもたらし、ビヒクルは、感染前から始まって１２．５％の生存率をもたらした。ほとんどの死亡は、感染の１０日以内に起きた。感染後２１日目に、生存動物に、ＹＦＶを再負荷する。
【０１８８】
ハムスターの体重変化を図１３に示す。ＹＦＶを感染させ、感染前から感染後４日目までに化合物１で治療したハムスターは、プラセボを超える体重増加を示し、リバビリンを感染前に投与した。ＹＦＶを感染させ、ウイルス負荷前後の様々な時間から始めて７日間、毎日２回、化合物１で治療したハムスターの体重変化を示す。
【０１８９】
実施例１４：ラットにおける化合物１の経口バイオアベイラビリティ
化合物１を、１０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯでラットに投与した。６時間までのラットの血漿中の化合物１の濃度を測定した薬物動態曲線を図１４に示す。
【０１９０】
実施例１５：化合物１のマールブルグウイルス試験
マウスに順応させたＭＡＲＶ−Ｒａｖｎを１０００ｐｆｕで（腹腔内に）負荷した１０〜１２週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスに、化合物１をＩＭ投与した。この試験を１０群に分けた（１群あがりＮ＝１０）。投与計画、投与経路および用量を表７に示す。化合物１を、投与前に、０．９％生理食塩水に溶解し、感染後１４日間、健康状態および体重を監視した。
【０１９１】
【表７】
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【０１９２】
１２日目までの本試験における１０群の生存率を表８に示す。ビヒクル単独（０．９％生理食塩水）で治療したマウスの生存率は、７日目に６０％であり、８〜１２日目では３０％であった。化合物１は、全ての用量において、７日目に少なくとも９０％まで、８〜１２日目には少なくとも８０％まで生存率を増加させることを示した。
【０１９３】
【表８】
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【０１９４】
本発明を前述の例示的な実施形態に記載し、説明してきたが、本開示は例としてのみの目的でなされており、本発明の趣旨および範囲を逸脱することなく、以下の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の実施の全体において、多数の変更を行うことができることが理解される。開示した実施形態の特徴を、本発明の範囲および趣旨の範囲内において、様々な方法で組み合わせ、再編成することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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