(57)【要約】  【課題】  本発明は、腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤を提供する。また、本発明は、エリスロポエチン産生促進剤を提供する。  【解決手段】  本発明は、ＡＬＡ類を含む腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤を提供する。また、本発明は、ＡＬＡ類を含むエリスロポエチン産生促進剤を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
エリスロポエチン産生促進剤であって、
下記式（Ｉ）で示される化合物
【化１】
2013054755.tif 000007
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）
又はその塩
を含むエリスロポエチン産生促進剤。
【請求項２】
エリスロポエチンの産生を促進する方法であって、
治療上有効量の、下記式（Ｉ）で示される化合物
【化２】
2013054755.tif 000008
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）
又はその塩
を対象に投与する
ことを特徴とするエリスロポエチンの産生を促進する方法。
【請求項３】
エリスロポエチンの産生の低下に起因する貧血の治療剤及び／又は予防剤であって、
下記式（Ｉ）で示される化合物
【化３】
2013054755.tif 000009
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）
又はその塩
を含むエリスロポエチンの産生の低下に起因する貧血の治療剤及び／又は予防剤。
【請求項４】
請求項３に記載の貧血の治療剤及び／又は予防剤であって、
Ｒ１が、水素原子、炭素数１〜８のアルカノイル基、及び、炭素数７〜１４のアロイル基からなる群から選択され、
Ｒ２が、水素原子、直鎖又は分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数３〜８のシクロアルキル基、炭素数６〜１４のアリール基、及び、炭素数７〜１５のアラルキル基からなる群から選択される
ことを特徴とする治療剤及び／又は予防剤。
【請求項５】
請求項３又は４に記載の貧血の治療剤及び／又は予防剤であって、
前記治療剤及び／又は予防剤が、さらに一種又は二種以上の金属含有化合物を含有することを特徴とする治療剤及び／又は予防剤。
【請求項６】
請求項５に記載の貧血の治療剤及び／又は予防剤であって、
前記金属含有化合物が、鉄、マグネシウム、及び、亜鉛からなる群から選択される金属を含有する化合物である
ことを特徴とする治療剤及び／又は予防剤。
【請求項７】
請求項５に記載の貧血の治療剤及び／又は予防剤であって、
前記金属化合物が、鉄を含有する化合物である
ことを特徴とする治療剤及び／又は予防剤。
【請求項８】
請求項３に記載の貧血の治療剤及び／又は予防剤であって、
前記エリスロポエチンの産生の低下が、炎症性サイトカイン又は尿毒症毒素により引き起こされるものである
ことを特徴とする治療剤及び／又は予防剤。
【請求項９】
請求項３〜８のいずれか１項に記載の貧血の治療剤及び／又は予防剤であって、
前記貧血が、腎性貧血である
ことを特徴とする治療剤及び／又は予防剤。
【請求項１０】
請求項９に記載の腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤であって、
前記化合物又はその塩が、エリスロポエチンの産生を促進することにより、前記腎性貧血が治療及び／又は予防される
ことを特徴とする治療剤及び／又は予防剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エリスロポエチン産生促進剤に関する。より詳しくは、本発明は、ＡＬＡ類を含む、エリスロポエチン産生促進剤に関する。
本発明は、また、エリスロポエチン産生能低下に起因する貧血、典型的には腎性貧血に対する治療剤及び／又は予防剤に関する。より詳しくは、本発明は、ＡＬＡ類を含む、貧血の治療剤及び／又は予防剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
腎臓は、エリスロポエチンを産生する主な器官であり、エリスロポエチンは主として腎臓の尿細管間質細胞において産生される。【０００３】
エリスロポエチンは、アミノ酸１６５個からなるホルモンの一つである。エリスロポエチンは、造血組織において赤血球前駆細胞上の受容体に結合し、赤血球前駆細胞の増殖と分化を促進する。このようにして、エリスロポエチンは、赤血球の産生を調節する。【０００４】
平常時においては、血液中の酸素分圧によりエリスロポエチンの産生が調整されており、これにより赤血球の産生も調整されている。そして、貧血になると、腎臓は造血に向かわせるためにエリスロポエチンの産生を増大させ、結果として血液中のエリスロポエチンは上昇する。【０００５】
しかしながら、腎臓の障害等により、腎臓におけるエリスロポエチンの産生が低下すると、貧血であるにもかかわらず、血液中のエリスロポエチンが上昇せず、赤血球の産生が抑制される病態を招いてしまう。このような病態が腎性貧血である。すなわち、腎性貧血とは、腎臓の障害等によって、腎臓におけるエリスロポエチン（ＥＰＯ）の産生が低下することに主に起因して生じる貧血である。腎臓病のうちでも、特に慢性腎臓病の場合は、腎機能の低下が徐々に進行するため必ずしも腎性貧血を引き起こさない。しかし、腎臓病のうちでも、腎不全など急性腎疾患の場合は、高い確率で腎性貧血を起こすことが知られている。また、腎臓病の発症とは全く無関係なエリスロポエチン産生の低下により発症する貧血も多数見られる。このように、腎疾患、特に慢性腎臓病と、腎性貧血を含めたエリスロポエチン低下に起因する貧血とは、同じ発症メカニズムではない。【０００６】
腎性貧血の症状の特徴としては、例えば、息切れ、動悸、めまい、食欲不振、疲労感が挙げられる。【０００７】
なお、腎不全が進行した患者においては、尿毒症を併発することが知られている。尿毒症は、腎機能の低下により、血液中に尿素等の老廃物が残存してしまう病態である。尿毒症患者は様々な症状を発症するが、腎性貧血の症状もその内の一つである。【０００８】
このような腎性貧血を治療する方法として、ＥＳＡ（赤血球造血刺激因子製剤）が開発され、実用化されている。ＥＳＡの例としては、（１）エリスロポエチン、（２）エリスロポエチンの誘導体、（３）その他のエリスロポエチンレセプターを刺激する化合物、などが挙げられる。【０００９】
なお、日本における腎性貧血の治療方針は、以下のガイドライン（非特許文献１）に基づき行われる。
１）腎性貧血の診断が確定し、投与基準を満たす場合にはＥＳＡ（赤血球造血刺激因子製剤）療法を開始すべきである（積極的推奨）。
２)造血に必要な鉄剤の投与を併用すべきである（積極的推奨）。
３）維持血液透析（ｈｅｍｏｄｉａｌｙｓｉｓ：ＨＤ）患者では、透析液の清浄化に努め、十分な透析を行う（積極的推奨）。
４）栄養障害や炎症を伴う患者に対しては、これらに対する積極的な治療を行うべきである（積極的推奨）。【００１０】
上記ガイドラインが示すように、日本国においては、腎性貧血治療剤の第一選択薬としてはＥＳＡが推奨されている。
しかしながら、腎性貧血患者の一部は、ＥＳＡ療法に対して抵抗性を示すことが知られている。ＥＳＡ療法に対する低い反応性を生じるメカニズムについては、いまだ不明な点が多い。このようなＥＳＡ療法に対する低い反応性の原因の一つとして、ＴＮＦ−αやＩＬ−６などの炎症性サイトカイン血中濃度の増加が積極的な原因であると考えられている。炎症性サイトカインとは、生体内における様々な炎症症状を引き起こす原因因子である。また、炎症性サイトカインは、赤血球寿命を短縮することが知られている。また、炎症性サイトカインは、エリスロポエチン産生細胞によるエリスロポエチンの産生を低下させることが知られている。したがって、炎症性サイトカインは、貧血を引き起こす原因物質として考えられる。【００１１】
また、ＥＳＡ療法は、その副作用として、血栓症や心筋梗塞等を生じるリスクを有している。最近では、悪性腫瘍の予後不良も報告されている。【００１２】
また、ＥＳＡ療法は上述のとおり、対症療法でしかなく、エリスロポエチン産生細胞によるエリスロポエチンの産生の低下を回復させるといった作用を有するものではなかった。【００１３】
さらに、ＥＳＡは、通常、経口投与することが困難なものであり、服薬遵守（コンプライアンス）の観点からも問題があった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】慢性腎臓病患者における腎性貧血治療のガイドライン
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明は、細胞のエリスロポエチン産生促進剤を提供するものであって、ＥＳＡ（赤血球造血刺激因子製剤）等の対症療法的な薬剤とは別の新しいアプローチにより、貧血、特に腎性貧血を治療及び／又は予防する方法を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者らは、鋭意検討の結果、驚くべきことに、ＡＬＡ類が、エリスロポエチン産生細胞によるエリスロポエチンの産生が低下するのを抑制することを見い出した。【００１７】
このことは、ＡＬＡ類が、エリスロポエチン産生低下に起因する貧血の根本的な治療及び予防に有効であることを示すものである。
上述のように、腎性貧血は、典型的な、エリスロポエチンの産生の低下に起因する貧血、すなわち、腎臓内のエリスロポエチン産生細胞によるエリスロポエチンの産生が低下することにより生じる病態である。よって、以下、エリスロポエチンの産生の低下に起因する貧血を代表する貧血として、「腎性貧血」について述べるが、本発明の対象とする貧血は、腎性貧血に限定されるものではない。
本発明は、腎性貧血のより根本的な原因に対する治療を可能とするものである。【００１８】
より具体的には、本発明者らは、鋭意検討の結果、驚くべきことに、ＡＬＡ類が、炎症性サイトカイン又は尿毒症毒素によって引き起こされる、エリスロポエチン産生細胞によるエリスロポエチンの産生の低下を抑制することを見い出した。【００１９】
貧血とＡＬＡとの関係については、子豚の貧血防止に関してＡＬＡが有効であることが知られている（日本特許第４７５４７３１号公報参照）。子豚の貧血は、急速な生育に造血が追いつかないために起こり、造血に必要な化合物の一つとしてＡＬＡの添加が有効であることが報告されている。これは、ＡＬＡが生体内の内在物質であり、ＡＬＡがヘムに変換され、ヘモグロビンを増強することを作用機構とするものである。しかし、これは、ＡＬＡ類がエリスロポエチン産生細胞によるエリスロポエチンの産生の低下を抑制するという本発明のメカニズムとは全く関連がない。【００２０】
また、本発明者らは、すでに出願済みであるが未公開の出願において開示するように以下の知見を得ている。なお、それらのいくつかについては、本出願の優先権の基礎出願としている。
すなわち、本発明者らは、ＡＬＡ類にがん性貧血の改善効果を見出している。しかし、これはがん特異的な溶血反応の抑制であると考えられている。また、本発明者らは、ＡＬＡ類に慢性腎臓病の改善・予防効果を見出している。しかし、これは、腎臓の濾過能力を直接的に改善するものであり、エリスロポエチン産生細胞によるエリスロポエチンの産生の低下を抑制するという本発明のメカニズムとは全く関係がない。また、本発明者らは、ＡＬＡ類に敗血症の治療・予防効果を見出している。しかし、これは、炎症性サイトカインの産生自体を抑制する効果に基づくものであり、エリスロポエチン産生細胞によるエリスロポエチンの産生の低下を抑制するという本発明のメカニズムとは全く関係がない。【００２１】
このように、エリスロポエチン産生細胞によるエリスロポエチンの産生の低下を抑制するという本発明の特徴は、従来の先行技術や発明者らによる先行出願である未公開出願からは想像することができない。もっとも、ＡＬＡ類がなぜエリスロポエチン産生能の改善に有効なのかについての厳密な機序の解明は今後の課題である。【００２２】
すなわち、本発明は、
エリスロポエチン産生促進剤であって、
下記式（Ｉ）で示される化合物
【化１】
2013054755.tif 000002
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）
又はその塩
を含むエリスロポエチン産生促進剤に関する。【００２３】
本発明はまた、エリスロポエチンの産生を促進する方法であって、
治療上有効量の、下記式（Ｉ）で示される化合物
【化２】
2013054755.tif 000003
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）
又はその塩
を対象に投与する
ことを特徴とするエリスロポエチンの産生を促進する方法に関する。【００２４】
本発明はまた、エリスロポエチンの産生の低下に起因する貧血の治療剤及び／又は予防剤であって、
下記式（Ｉ）で示される化合物
【化３】
2013054755.tif 000004
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。）
又はその塩
を含むエリスロポエチンの産生の低下に起因する貧血の治療剤及び／又は予防剤に関する。【００２５】
ここで、エリスロポエチンの産生の低下は、炎症性サイトカイン又は尿毒症毒素により引き起こされるものであり得る。【００２６】
各上記式（Ｉ）において、
Ｒ１は、水素原子、炭素数１〜８のアルカノイル基、及び、炭素数７〜１４のアロイル基からなる群から選択されることができ、また、
Ｒ２は、水素原子、直鎖又は分岐状の炭素数１〜８のアルキル基、炭素数３〜８のシクロアルキル基、炭素数６〜１４のアリール基、及び、炭素数７〜１５のアラルキル基からなる群から選択されることができる。【００２７】
本発明のエリスロポエチンの産生の低下に起因する貧血の治療剤及び／又は予防剤は、さらに一種又は二種以上の金属含有化合物を含有することができる。前記金属含有化合物が、鉄、マグネシウム、及び、亜鉛からなる群から選択される金属を含有する化合物であり得る。【００２８】
本発明のエリスロポエチンの産生の低下に起因する貧血の治療剤及び／又は予防剤において、当該貧血は、腎性貧血であり得る。
【発明の効果】
【００２９】
本発明のエリスロポエチン産生促進剤の使用により、エリスロポエチン産生細胞によるエリスロポエチンの産生を促進させることができる。その結果、エリスロポエチンの産生の低下に起因する貧血、典型的には腎性貧血の根本的な治療及び予防に有効である。
すなわち、本発明は、腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤を提供する。
なお、本発明において、治療とは、腎性貧血を完全に完治することのみならず、腎性貧血の症状を改善することをも含む。予防についても、同様に、腎性貧血の症状を完全に生じさせないことのみならず、本発明の予防剤を投与しなければ生じるであろう腎性貧血の症状をより穏やかなものとすることを含む。【００３０】
本発明の、エリスロポエチン産生促進剤を使用することにより、エリスロポエチン産生細胞によるエリスロポエチンの産生の低下を抑制することができ、貧血、とりわけ腎性貧血を治療及び／又は予防することができる。
このように、本発明は、ＥＳＡ（赤血球造血刺激因子製剤）等の対症療法的な薬剤とは別の新しいアプローチにより、腎性貧血を治療及び／又は予防する方法を提供するものである。
さらに、本発明の腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤は、ＥＳＡ療法の代わりに、またはＥＳＡ療法と併用して使用することでき、そうすることにより、ＥＳＡ療法単独の場合による副作用を低減させることができる。【００３１】
また、本発明は、エリスロポエチン産生促進剤を提供する。
本発明のエリスロポエチン産生促進剤の使用により、エリスロポエチン産生細胞によるエリスロポエチンの産生を促進させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】図１は、エリスロポエチンを産生する肝癌細胞（ＨＥＰ３Ｂ細胞）を６つの異なる条件で２４時間培養した後の培養上清中に含まれるエリスロポエチン濃度の測定結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
本発明において、腎性貧血とは、腎臓の障害等によって、腎臓におけるエリスロポエチンの産生が低下することに主に起因して生じる貧血である。ここで、腎臓におけるエリスロポエチンの産生の低下には、炎症性サイトカインや尿毒症毒素により引き起こされるものも含まれる。ここで尿毒症毒素には、インドキシル硫酸等が含まれる。
【００３４】
本発明の腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤としては、ＡＬＡ類を含む腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤であれば特に制限されない。
【００３５】
また、本発明のエリスロポエチン産生促進剤としては、ＡＬＡ類を含むエリスロポエチン産生促進剤であれば特に制限されない。
【００３６】
本明細書において、ＡＬＡ類とは、ＡＬＡ若しくはその誘導体又はそれらの塩をいう。
本明細書において、ＡＬＡは、５−アミノレブリン酸を意味する。ＡＬＡは、δ−アミノレブリン酸ともいい、アミノ酸の１種である。
【００３７】
ＡＬＡ誘導体としては、下記式（Ｉ）で表される化合物を例示することができる。式（Ｉ）において、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す。なお、式（Ｉ）において、ＡＬＡは、Ｒ１及びＲ２が水素原子の場合に相当する。
【化４】
2013054755.tif 000005
【００３８】
ＡＬＡ類は、生体内で式（Ｉ）のＡＬＡ又はその誘導体の状態で有効成分として作用すればよく、生体内の酵素で分解されるプロドラッグ（前駆体）として投与することもできる。
【００３９】
式（Ｉ）のＲ１におけるアシル基としては、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イソバレリル、ピバロイル、ヘキサノイル、オクタノイル、ベンジルカルボニル基等の直鎖又は分岐状の炭素数１〜８のアルカノイル基や、ベンゾイル、１−ナフトイル、２−ナフトイル基等の炭素数７〜１４のアロイル基を挙げることができる。
【００４０】
式（Ｉ）のＲ２におけるアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル基等の直鎖又は分岐状の炭素数１〜８のアルキル基を挙げることができる。
【００４１】
式（Ｉ）のＲ２におけるシクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロドデシル、１−シクロヘキセニル基等の飽和、又は一部不飽和結合が存在してもよい、炭素数３〜８のシクロアルキル基を挙げることができる。
【００４２】
式（Ｉ）のＲ２におけるアリール基としては、フェニル、ナフチル、アントリル、フェナントリル基等の炭素数６〜１４のアリール基を挙げることができる。
【００４３】
式（Ｉ）のＲ２におけるアラルキル基としては、アリール部分は上記アリール基と同じ例示ができ、アルキル部分は上記アルキル基と同じ例示ができ、具体的には、ベンジル、フェネチル、フェニルプロピル、フェニルブチル、ベンズヒドリル、トリチル、ナフチルメチル、ナフチルエチル基等の炭素数７〜１５のアラルキル基を挙げることができる。
【００４４】
好ましいＡＬＡ誘導体としては、Ｒ１が、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル基等である化合物が挙げられる。また、好ましいＡＬＡ誘導体としては、上記Ｒ２が、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル基等である化合物が挙げられる。また、好ましいＡＬＡ誘導体としては、上記Ｒ１とＲ２の組合せが、（ホルミルとメチル）、（アセチルとメチル）、（プロピオニルとメチル）、（ブチリルとメチル）、（ホルミルとエチル）、（アセチルとエチル）、（プロピオニルとエチル）、（ブチリルとエチル）の各組合せである化合物が挙げられる。
【００４５】
ＡＬＡ類のうち、ＡＬＡ又はその誘導体の塩としては、薬理学的に許容される酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩等を挙げることができる。酸付加塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、リン酸塩、硝酸塩、硫酸塩等の各無機酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、トルエンスルホン酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、グリコール酸塩、メタンスルホン酸塩、酪酸塩、吉草酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩等の各有機酸付加塩を例示することができる。金属塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等の各アルカリ金属塩、マグネシウム、カルシウム塩等の各アルカリ土類金属塩、アルミニウム、亜鉛等の各金属塩を例示することができる。アンモニウム塩としては、アンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩等のアルキルアンモニウム塩等を例示することができる。有機アミン塩としては、トリエチルアミン塩、ピペリジン塩、モルホリン塩、トルイジン塩等の各塩を例示することができる。なお、これらの塩は使用時において溶液としても用いることができる。
【００４６】
以上のＡＬＡ類のうち、もっとも望ましいものは、ＡＬＡ、及び、ＡＬＡメチルエステル、ＡＬＡエチルエステル、ＡＬＡプロピルエステル、ＡＬＡブチルエステル、ＡＬＡペンチルエステル等の各種エステル類、並びに、これらの塩酸塩、リン酸塩、硫酸塩である。とりわけ、ＡＬＡ塩酸塩、ＡＬＡリン酸塩を特に好適なものとして例示することができる。
【００４７】
上記ＡＬＡ類は、例えば、化学合成、微生物による生産、酵素による生産など公知の方法によって製造することができる。また、上記ＡＬＡ類は、水和物又は溶媒和物を形成していてもよく、またＡＬＡ類を単独で又は２種以上を適宜組み合わせて用いることもできる。
【００４８】
本発明のエリスロポエチン産生促進剤や本発明の腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤は、過剰症を生じない範囲で、さらに金属含有化合物を含有するものが好ましく、かかる金属含有化合物としては、本発明の効果に害を及ぼさない限り金属化合物を有利に用いることができる。本発明における金属含有化合物の金属部分としては、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、バナジウム、コバルト、銅、クロム、モリブデンを挙げることができるが、鉄、マグネシウム、亜鉛が好ましく、中でも鉄を好適に例示することができる。
【００４９】
鉄化合物としては、クエン酸第一鉄、クエン酸第一鉄ナトリウム、クエン酸鉄ナトリウム、クエン酸鉄アンモニウム、ピロリン酸第二鉄、ヘム鉄、デキストラン鉄、乳酸鉄、グルコン酸第一鉄、ジエチレントリアミン五酢酸鉄ナトリウム、ジエチレントリアミン五酢酸鉄アンモニウム、エチレンジアミン四酢酸鉄ナトリウム、エチレンジアミン五酢酸鉄アンモニウム、トリエチレンテトラアミン鉄、ジカルボキシメチルグルタミン酸鉄ナトリウム、ジカルボキシメチルグルタミン酸鉄アンモニウム、ラクトフェリン鉄、トランスフェリン鉄、塩化第二鉄、三二酸化鉄、鉄クロロフィリンナトリウム、フェリチン鉄、フマル酸第一鉄、ピロリン酸第一鉄、含糖酸化鉄、酢酸鉄、シュウ酸鉄、コハク酸第一鉄、コハク酸クエン酸鉄ナトリウム、硫酸鉄、硫化グリシン鉄等を挙げることができ、中でもクエン酸第一鉄やクエン酸第一鉄ナトリウムが好ましい。
【００５０】
亜鉛化合物としては、塩化亜鉛、酸化亜鉛、硝酸亜鉛、炭酸亜鉛、硫酸亜鉛、ジエチレントリアミン五酢酸亜鉛ジアンモニウム、エチレンジアミン四酢酸亜鉛ジナトリウム、亜鉛プロトポルフィリン、亜鉛含有酵母を挙げることができる。
【００５１】
上記金属含有化合物は、それぞれ１種類又は２種類以上を用いることができ、金属含有化合物の投与量としては、ＡＬＡ類の投与量に対してモル比で、０．０１〜１０倍量、好ましくは０．１〜５倍量、より好ましくは、０．２〜２倍量を挙げることができる。
【００５２】
本発明のエリスロポエチン産生促進剤や本発明の腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤に含有されるＡＬＡ類と金属含有化合物は、ＡＬＡ類と金属含有化合物とを含む組成物としても、それぞれ単独でも投与することできるが、それぞれ単独で投与される場合でも同時に投与することが好ましい。しかし、厳密に、同時でなくともＡＬＡ類と金属含有化合物との投与が相加的効果あるいは相乗的効果を奏することができるように、両者間で相当の間隔をおかずに行われるものであってもよい。
【００５３】
本発明のエリスロポエチン産生促進剤や本発明の腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤の投与経路としては、舌下投与も含む経口投与、あるいは吸入投与、点滴を含む静脈内投与、パップ剤等による経皮投与、座薬、又は経鼻胃管、経鼻腸管、胃ろうチューブ若しくは腸ろうチューブを用いる強制的経腸栄養法による投与等の非経口投与などを挙げることができるが経口投与が一般的である。
【００５４】
ここで、投与の対象は、典型的にはヒトであるが、愛玩動物、実験動物、家畜など非ヒト動物である場合も含む。
【００５５】
本発明のエリスロポエチン産生促進剤や本発明の腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤の剤型としては、上記経路投与に応じて適宜決定することができるが、注射剤、点滴剤、錠剤、カプセル剤、細粒剤、散剤、液剤、シロップ等に溶解した水剤、パップ剤、座薬剤等を挙げることができる。
【００５６】
本発明のエリスロポエチン産生促進剤や本発明の腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤を調製するために、必要に応じて、薬理学的に許容し得る担体、賦形剤、希釈剤、添加剤、崩壊剤、結合剤、被覆剤、潤滑剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、可溶化剤、溶剤、ゲル化剤、栄養剤等を添加することができ、具体的には、水、生理食塩水、動物性脂肪及び油、植物油、乳糖、デンプン、ゼラチン、結晶性セルロース、ガム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコール、グリセリンを例示することができる。なお、本発明の腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤や本発明のエリスロポエチン産生促進剤を水溶液として調製する場合には、ＡＬＡ類の分解を防ぐため、水溶液がアルカリ性とならないように留意する必要があり、アルカリ性となってしまう場合は、酸素を除去することによって分解を防ぐこともできる。
【００５７】
本発明のエリスロポエチン産生促進剤や本発明の腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤の量・頻度・期間としては、腎性貧血患者の年齢、体重、症状等により異なるが、好ましい投与量の例としては、ＡＬＡ・リン酸塩換算で、成人一人当たり、１ｍｇ〜３０００ｍｇ／日、好ましくは、２ｍｇ〜１０００ｍｇ／日、より好ましくは３ｍｇ〜７００ｍｇ／日を挙げることができる。その他のＡＬＡ類を用いる場合にも、モル換算をすることにより、好ましい投与量を計算することができる。もっとも、上記、好ましい投与量の範囲は、例示であって、限定するものではない。
【００５８】
投与頻度としては、一日一回〜複数回の投与又は点滴等による連続的投与を例示することができる。投与期間は、血液中のＨｂ（ヘモグロビン）値やエリスロポエチン濃度等の腎性貧血を診断可能な指標に基づいて当該技術分野の薬理学者や臨床医が既知の方法により決定することもできる。
【００５９】
本発明のエリスロポエチン産生促進剤を、腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤として用いる場合には、他の既存の腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤と組み合わせて使用することもできる。既存の腎性貧血の治療剤及び／又は予防剤の例としては、ＥＳＡ療法において使用されるＥＳＡ（赤血球造血刺激因子製剤）などを挙げることができる。そのようなＥＳＡ（赤血球造血刺激因子製剤）の非限定的な例としては、エポエチンα（商標）、エポエチンβ（商標）、ダルベポエチンα（商標）等の組換えヒトエリスロポエチン製剤（ｒＨｕエリスロポエチン）を挙げることができる。これらの薬剤とＡＬＡの腎性貧血治療剤及び／又は予防剤に関するメカニズムはそれぞれ根本的に異なると考えられるため、相加的な、また、場合によっては、相乗的な効果が期待できる。
【００６０】
本明細書において用いられる用語は、特に定義されたものを除き、特定の実施態様を説明するために用いられるのであり、発明を限定する意図ではない。
【００６１】
また、本明細書において用いられる「含む」との用語は、文脈上明らかに異なる理解をすべき場合を除き、記述された事項（部材、ステップ、要素、数字など）が存在することを意図するものであり、それ以外の事項（部材、ステップ、要素、数字など）が存在することを排除しない。
【００６２】
異なる定義が無い限り、ここに用いられるすべての用語（技術用語及び科学用語を含む。）は、本発明が属する技術の当業者によって広く理解されるのと同じ意味を有する。ここに用いられる用語は、異なる定義が明示されていない限り、本明細書及び関連技術分野における意味と整合的な意味を有するものとして解釈されるべきであり、理想化され、又は、過度に形式的な意味において解釈されるべきではない。
【００６３】
以下において、本発明を、実施例を参照してより詳細に説明する。しかしながら、本発明はいろいろな態様により具現化することができ、ここに記載される実施例に限定されるものとして解釈されてはならない。
【実施例】
【００６４】
<実施例１：エリスロポエチン産生能が低下した細胞に対するＡＬＡ類投与後のエリスロポエチン産生能の改善効果の測定>
エリスロポエチン産生細胞を低酸素下で培養し、エリスロポエチンを人為的に産生させた状態で、炎症性サイトカイン、または、尿毒症の毒素を添加することによりエリスロポエチン産生細胞のエリスロポエチン産生能を低下させた。【００６５】
炎症性サイトカインとしては、ＴＮＦ−αを用いた。また、尿毒症毒素としては、インドキシル硫酸を用いた。インドキシル硫酸は、尿毒症毒素の原因物質と考えられており、また、尿毒症関連マーカーのうち最もよく用いられているものでもある。また、インドキシル硫酸は、体内においては、トリプトファン由来のインドールが肝臓で硫酸化されて合成される物質である。このように、炎症性サイトカイン、または、尿毒症毒素の添加によって、エリスロポエチンの産生が低下した状態は、腎性貧血を模した状態である。そして、本発明者らは、かかる状態において、ＡＬＡ類が投与されることにより、エリスロポエチンの産生の低下が抑制されることを見い出した。【００６６】
本実施例においては、培養条件の異なるＩ〜ＶＩ群のエリスロポエチンを産生する肝癌細胞であるＨＥＰ３Ｂ細胞（ＡＴＣＣ社）を使用した。まず、６群全てに共通する培養ステップとして、１２穴プレートの各１ウェルあたり約３０万個のＨＥＰ３Ｂ細胞を培養した。培養条件としては、１０％ＦＣＳ／ＰＣ−ＳＭを添加したＲＰＭＩ１６４０培地を用い、３７℃、２０％酸素条件下で培養した。培養２４時間後、以下のＩ〜ＶＩの培養条件に分け、さらに２４時間培養した。なお、以下で、ＴＮＦ−αとしては、ｈｕｍａｎ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＴＮＦ−ａ（ｒｈＴＮＦ−ａ；  Ｒｏｃｈｅ）を用いた。【００６７】
【表１】
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【００６８】
上記Ｉ〜ＶＩの培養条件下にて２４時間培養後、培養上清を分離し、「Ｈｕｍａｎ  Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ」（Ｂｅｎｄｅｒ  ＭｅｄＳｙｓｔｅｍｓ社）を用いて培養上清中に含まれるエリスロポエチンの濃度を測定した。【００６９】
本実施例の結果を図１に示す。なお、本図におけるエリスロポエチン濃度の単位は、（ｍｌＵ／ｍｌ）である。【００７０】
ＴＮＦ−αを添加した区（ＩＩＩ）では、これを投与しなかった区（Ｉ）と比較して、エリスロポエチンの濃度の減少が認められた。また、インドキシル硫酸を添加した区（Ｖ）では、これを投与しなかった区（Ｉ）と比較して、エリスロポエチンの濃度の減少が認められた。【００７１】
そして、ＴＮＦ−αと同時にアミノレブリン酸塩酸塩添加した区（ＩＶ）では、ＴＮＦ−αを添加した区（ＩＩＩ）と比較して、有意に高いエリスロポエチンの濃度の値を示した。すなわち、ＡＬＡが投与されることにより、エリスロポエチンの産生の低下が有意に抑制されることがわかる。【００７２】
また、インドキシル硫酸と同時にアミノレブリン酸塩酸塩添加した区（ＶＩ）では、インドキシル硫酸を添加した区（Ｖ）と比較して、有意に高いエリスロポエチンの濃度の値を示した。すなわち、ＡＬＡが投与されることにより、エリスロポエチンの産生の低下が有意に抑制されることがわかる。 
【図１】
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【国際調査報告】
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