(57)【要約】  銅を含有する酵母を、カルボン酸及びカルボン酸塩の少なくともいずれかを含む溶液に懸濁させ、得られた懸濁液の固体成分と液体成分とを分離する抽出工程を含むことを特徴とする銅高含有酵母抽出物の製造方法、及び銅高含有酵母抽出物、並びに、食品、及び野菜の緑色保持復元剤である。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
銅を含有する酵母を、カルボン酸及びカルボン酸塩の少なくともいずれかを含む溶液に懸濁させ、得られた懸濁液の固体成分と液体成分とを分離する抽出工程を含むことを特徴とする銅高含有酵母抽出物の製造方法。
【請求項２】
カルボン酸が、２価以上のカルボン酸であり、カルボン酸塩が、２価以上のカルボン酸塩である請求項１に記載の銅高含有酵母抽出物の製造方法。
【請求項３】
カルボン酸が、３価のカルボン酸であり、カルボン酸塩が、３価のカルボン酸塩である請求項１から２のいずれかに記載の銅高含有酵母抽出物の製造方法。
【請求項４】
懸濁液のｐＨが、２．０〜１０．０である請求項１から３のいずれかに記載の銅高含有酵母抽出物の製造方法。
【請求項５】
カルボン酸及びカルボン酸塩の総量が、酵母中の銅１モルに対して２モル以上である請求項１から４のいずれかに記載の銅高含有酵母抽出物の製造方法。
【請求項６】
抽出工程の前に、酵母を６０℃〜１２０℃の熱水に懸濁させ、得られた懸濁液の固体成分と液体成分とを分離する熱水処理工程を含む請求項１から５のいずれかに記載の銅高含有酵母抽出物の製造方法。
【請求項７】
酵母菌体由来の銅を０．２質量％以上含有する銅高含有酵母抽出物であって、銅高含有酵母抽出物１ｇを水１００ｍＬに溶解乃至分散させたときの濁度が、波長６６０ｎｍの吸光度（Ｏ．Ｄ．６６０）として、０．１以下であることを特徴とする銅高含有酵母抽出物。
【請求項８】
請求項１から６のいずれかに記載の製造方法により製造された請求項７に記載の銅高含有酵母抽出物。
【請求項９】
請求項７から８のいずれかに記載の銅高含有酵母抽出物を含むことを特徴とする食品。
【請求項１０】
請求項７から８のいずれかに記載の銅高含有酵母抽出物を含むことを特徴とする野菜の緑色保持復元剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然物由来の銅を高濃度に含有し、水への溶解性に優れ、銅欠乏による貧血、心臓疾患等を改善し得る流動食等の経口経管栄養組成物、食品素材等として好適な銅高含有酵母抽出物及びその製造方法、並びに、該銅高含有酵母抽出物を含む食品、及び野菜の緑色保持復元剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
銅は、近時の厚生労働省が発表したデータによると成人男性での１日の推定平均必要量としては約０．７ｍｇ（成人女性では約０．６ｍｇ）とされており、生体内で欠乏すると、貧血や心臓疾患等を引き起こす可能性がある（非特許文献１参照）。このため、銅を効率良く生体内に摂取乃至吸収することができ、銅欠乏による貧血、心臓疾患等を改善し得る流動食、飲料等の安全な食品素材の開発が必要である。
一方、酵母は古くから人類が食品素材として利用しており、例えば、ビール酵母が食物繊維、ビタミンあるいはミネラル分の供給源としても用いられてきた。特に菌体内に銅を取り込ませた酵母（銅含有酵母）又はその抽出物は、銅を補強した安全な食品素材として利用可能であると考えられる。
しかしながら、従来の銅含有酵母においては、酵母臭等の独特の臭い及び酵母味等の独特の味が十分に低減されていないため、食品としての用途においては十分満足いくものではなかった。また、従来の銅含有酵母は、水に可溶でないため、食品に添加した際ににごりや沈殿が生じ、特に清涼飲料水等としての用途には利用できないという問題があった。【０００３】
上記問題を解決するため、前記銅含有酵母から抽出された銅含有酵母抽出物とすることが考えられる。これまで、銅等のミネラル含有酵母からの抽出には、（１）熱水抽出法、（２）自己消化法、（３）酵素分解法などが用いられてきた（非特許文献２参照）。しかしながら、前記（１）〜（３）の方法には、ミネラルの回収率（銅抽出効率）が低いという問題があった。更に、前記（２）及び（３）の方法には、酵母抽出物に特有の酵母臭及びエキス味が残り、前記（３）の方法には、高コストであり、使用した酵素が抽出物中に残存するという問題があった。【０００４】
更に、銅等の金属の用途として、植物の緑色の発色を復元する用途が考えられるが、銅が特に緑色の発色を長期に亘り保持できることは知られていなかった。野菜の緑色の保持は、特に食品加工業において、食材及びその加工品の保存可能期間にかかわり、長期に亘る野菜の緑色保持が要求されている。しかしながら、これまでに食品に添加できる安全な金属含有素材は知られておらず、長期に亘る野菜の緑色保持は未だ達成されていない。【０００５】
このため、酵母臭等の独特の臭い及び酵母味等の独特の味が十分に低減された、安全な食品素材として好適な銅高含有酵母抽出物、及びその効率的な製造方法、並びに、該銅高含有酵母抽出物を用いた流動食、飲料等の食品、及び長期に亘る緑色保持効果を有する野菜の緑色保持復元剤の開発が望まれている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】「日本人の食事摂取基準  ２０１０年版」  厚生労働省「日本人の食事摂取基準」策定検討会報告書、第一出版株式会社、ｐ．２３１−ｐ．２３３、付録ＸＬＩＸ（２０１０年）
【非特許文献２】杉本  洋  「酵母エキス製造法の変遷（Ｉ）−国内の特許出願の傾向から−」  Ｎｅｗ  Ｆｏｏｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  １９９４，  Ｖｏｌ．３６，  Ｎｏ．１０，  ｐ．４１−４８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、このような要望に応え、現状を打破し、従来における前記諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、天然物由来の銅を高濃度に含有し、水への溶解性に優れ、食品等に添加した際に外観を損なわず、流動食、飲料等の経口経管栄養組成物、食品素材等として好適であり、しかも添加した食品の風味等を損なうことがない銅高含有酵母抽出物及びその製造方法、並びに、食品、及び長期に亘る緑色保持効果を有する野菜の緑色保持復元剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞  銅を含有する酵母を、カルボン酸及びカルボン酸塩の少なくともいずれかを含む溶液に懸濁させ、得られた懸濁液の固体成分と液体成分とを分離する抽出工程を含むことを特徴とする銅高含有酵母抽出物の製造方法である。
＜２＞  カルボン酸が、２価以上のカルボン酸であり、カルボン酸塩が、２価以上のカルボン酸塩である前記＜１＞に記載の銅高含有酵母抽出物の製造方法である。
＜３＞  カルボン酸が、３価のカルボン酸であり、カルボン酸塩が、３価のカルボン酸塩である前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の銅高含有酵母抽出物の製造方法である。
＜４＞  懸濁液のｐＨが、２．０〜１０．０である前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の銅高含有酵母抽出物の製造方法である。
＜５＞  カルボン酸及びカルボン酸塩の総量が、酵母中の銅１モルに対して２モル以上である前記＜１＞から＜４＞のいずれかに記載の銅高含有酵母抽出物の製造方法である。
＜６＞  抽出工程の前に、酵母を６０℃〜１２０℃の熱水に懸濁させ、得られた懸濁液の固体成分と液体成分とを分離する熱水処理工程を含む前記＜１＞から＜５＞のいずれかに記載の銅高含有酵母抽出物の製造方法である。
＜７＞  熱水処理工程において、熱水にリン酸塩を添加する前記＜６＞に記載の銅高含有酵母抽出物の製造方法である。
＜８＞  抽出工程における懸濁液の固体成分と液体成分との分離を濾過により行う前記＜１＞から＜７＞のいずれかに記載の亜鉛高含有酵母抽出物の製造方法である。
＜９＞  熱水処理工程における懸濁液の固体成分と液体成分との分離を濾過により行う前記＜６＞から＜８＞のいずれかに記載の亜鉛高含有酵母抽出物の製造方法である。【０００９】
＜１０＞  酵母菌体由来の銅を０．２質量％以上含有する銅高含有酵母抽出物であって、銅高含有酵母抽出物１ｇを水１００ｍＬに溶解乃至分散させたときの濁度が、波長６６０ｎｍの吸光度（Ｏ．Ｄ．６６０）として、０．１以下であることを特徴とする銅高含有酵母抽出物である。
＜１１＞  前記＜１＞から＜９＞のいずれかに記載の製造方法により製造された前記＜１０＞に記載の銅高含有酵母抽出物である。
＜１２＞  酵母が、食用酵母である前記＜１０＞から＜１１＞のいずれかに記載の銅高含有酵母抽出物である。
＜１３＞  食用酵母が、パン酵母、ビール酵母、ワイン酵母、清酒酵母及び味噌醤油酵母から選択される少なくとも１種である前記＜１２＞に記載の銅高含有酵母抽出物である。
＜１４＞  食用酵母が、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅである前記＜１２＞に記載の銅高含有酵母抽出物である。【００１０】
＜１５＞  食品に添加されて用いられる前記＜１０＞から＜１４＞のいずれかに記載の銅高含有酵母抽出物である。
＜１６＞  食品が流動食及び清涼飲料水のいずれかである前記＜１３＞に記載の銅高含有酵母抽出物である。
＜１７＞  前記＜１０＞から＜１６＞のいずれかに記載の銅高含有酵母抽出物を含むことを特徴とする食品である。
＜１８＞  前記＜１０＞から＜１４＞のいずれかに記載の銅高含有酵母抽出物を含むことを特徴とする野菜の緑色保持復元剤である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によると、従来における前記問題を解決することができ、天然物由来の銅を高濃度に含有し、水への溶解性に優れ、食品等に添加した際に外観を損なわず、流動食、飲料等の経口経管栄養組成物、食品素材等として好適であり、しかも添加した食品の風味等を損なうことがない銅高含有酵母抽出物及びその製造方法、並びに、食品、及び長期に亘る緑色保持効果を有する野菜の緑色保持復元剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、実施例１及び比較例１における純水、塩化ナトリウム、及び各カルボン酸塩による銅溶出率を示すグラフである。
【図２】図２は、実施例２における銅溶出率に対するカルボン酸乃至カルボン酸塩の効果を示すグラフである。
【図３】図３は、実施例３における銅溶出率に対する懸濁液のｐＨの影響を示すグラフである。
【図４】図４は、実施例４及び比較例２におけるカルボン酸緩衝液の濃度と銅溶出率との関係を示すグラフである。
【図５】図５は、実施例５における溶出時間と銅溶出率との関係を示すグラフである。
【図６Ａ】図６Ａは、実施例６−１、比較例３−１、及び比較例３−２における銅高含有酵母抽出物等の水への溶解性を示す写真の一例である。
【図６Ｂ】図６Ｂは、図６Ａの水溶液を３，０００ｒｐｍで５分間遠心した後の写真である。
【図６Ｃ】図６Ｃは、実施例６−２、比較例３−３、及び比較例３−４における銅高含有酵母抽出物等のリンゴ果汁溶液への溶解性を示す写真の一例である。
【図６Ｄ】図６Ｄは、図６Ｃのリンゴ果汁溶液を３，０００ｒｐｍで５分間遠心した後の写真である。
【図７Ａ】図７Ａは、実施例８−１の試験結果を示す写真である。
【図７Ｂ】図７Ｂは、実施例８−２の試験結果を示す写真である。
【図７Ｃ】図７Ｃは、実施例８−３の試験結果を示す写真である。
【図７Ｄ】図７Ｄは、実施例８−４の試験結果を示す写真である。
【図７Ｅ】図７Ｅは、実施例８−５の試験結果を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
（銅高含有酵母抽出物の製造方法）
本発明の銅高含有酵母抽出物の製造方法は、抽出工程を含み、更に必要に応じて、熱水処理工程、乾燥工程などのその他の工程を含む。
【００１４】
＜抽出工程＞
前記抽出工程は、銅を含有する酵母を、カルボン酸及びカルボン酸塩の少なくともいずれかを含む溶液に懸濁させ、得られた懸濁液の固体成分と液体成分とを分離する工程である。前記抽出工程により、銅を高含有する液体成分（抽出物）を得ることができる。
【００１５】
＜＜酵母＞＞
前記酵母は、菌体内に銅を含んでいる限り特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。前記酵母における銅含有量としては、銅高含有酵母抽出物を銅強化食品素材等として用いる場合には多いほど好ましいが、酵母における銅の取込みの限界、及び銅高含有酵母抽出物を効率的に製造する観点からは、乾燥菌体質量当たり０．０１質量％〜２質量％が好ましく、０．５質量％〜２質量％がより好ましい。
【００１６】
ここで、前記銅含有量とは、酵母菌体内における銅含有量を指し、例えば、水等で洗浄した菌体であっても、洗浄後においても銅含有量が高く維持されることが好ましい。このような酵母は、洗浄を行っても該銅は除去されず菌体内部に保持されたままであるので、菌体由来の銅であって安全性が高く、酵母特有の臭いや味を低減するための熱水処理（洗浄）を行った場合に、添加した食品の風味等を損なうことがなく、しかも前記銅を高濃度含有しているので、食品素材等として好適である。
なお、前記酵母における銅含有量は、公知の方法で測定することができ、例えば、原子吸光法により測定することができる。
【００１７】
前記銅を含有する酵母は、培養液に銅を添加して酵母を培養することにより、酵母菌体内に銅を取り込ませて作製してもよいし、市販品を用いてもよい。市販品としては、例えば、ミネラル酵母Ｃｕ１、イーストミネラル銅（以上、オリエンタル酵母工業株式会社製）などが挙げられる。培養液に添加する銅の量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、銅利用率（銅の菌体内取込率）と対糖収率（増殖率）とを良好なレベルで両立させることが好ましい。
なお、添加する銅の種類、培地の種類、培養条件などは、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００１８】
前記銅を含有する酵母は、更に、破砕されていてもよい。前記酵母が破砕物である場合でも、銅含有量が多いほど好ましく、破砕物を水等で洗浄した沈殿画分における乾燥菌体質量当たりの銅含有量が、破砕を行う前の菌体における乾燥菌体質量当たりの銅含有量の７０質量％以上が好ましく、８０質量％以上がより好ましく、９０質量％以上が特に好ましい。
【００１９】
なお、前記破砕の方法としては、特に制限はなく目的に応じて適宜選択することができ、例えば、物理的破砕処理であってもよいし、化学的破砕処理であってもよく、具体的には、０．５ｍｍ径のビーズをシリンダーに５０容量％充填したダイノミルを用いる方法などが好適に挙げられる。
【００２０】
また、前記銅を含有する酵母の態様としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、湿菌体の態様、粉末の態様などが挙げられる。
【００２１】
前記酵母は、銅以外に、更にその他のミネラル成分を含有していてもよく、該ミネラル成分としては、特に制限はなく目的に応じて適宜選択することができ、例えば、鉄、マグネシウム、マンガン、亜鉛等が挙げられる。これらのミネラル成分は、酵母中に、１種単独で含まれていてもよいし、２種以上含まれていてもよく、また、含まれている濃度としては、目的に応じて異なり一概に規定することはできないが、一般に高濃度であるのが好ましい。
【００２２】
前記酵母としては、その抽出物を食品素材等として用いる場合には、食用酵母であることが特に好ましい。
前記食用酵母としては、特に制限はなく、公知のものの中から選択することができ、例えば、パン酵母、ビール酵母、ワイン酵母、清酒酵母、味噌醤油酵母などが挙げられる。これらの中でも、パン酵母が特に好ましい。
【００２３】
前記食用酵母の菌株としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、トルロプシス（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）属、ミコトルラ（Ｍｙｃｏｔｏｒｕｌａ）属、トルラスポラ（Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ）属、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、ロードトルラ（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）属、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）属などが挙げられる。
【００２４】
前記食用酵母の菌株の具体例としては、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｕｖａｒｕｍ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｒｏｕｘｉｉ、Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ ｕｔｉｌｉｓ、Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ ｃａｎｄｉｄａ、Ｍｙｃｏｔｏｒｕｌａ ｊａｐｏｎｉｃａ、Ｍｙｃｏｔｏｒｕｌａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｓａｋｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ａｎｏｍａｌａ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｓｕａｖｅｏｌｅｎｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ ｆｉｂｌｉｇｅｒａ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｒｕｂｒａ、Ｐｉｃｈｉａ ｆａｒｉｎｏｓａなどが挙げられる。
これらの中でも、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓが好ましく、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅが特に好ましい。
【００２５】
＜＜カルボン酸及びカルボン酸塩＞＞
前記カルボン酸としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、１価のカルボン酸でも、２価以上の多価カルボン酸でもよいが、銅の抽出効率（銅溶出率）の観点から、２価以上のカルボン酸が好ましく、３価以上のカルボン酸がより好ましい。
【００２６】
前記１価のカルボン酸としては、例えば、蟻酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、エナント酸、カプリル酸、ピルビン酸、グルコン酸などが挙げられる。
前記２価のカルボン酸としては、例えば、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、フマル酸、マレイン酸、酒石酸、オキサロ酢酸、α−ケトグルタル酸などが挙げられる。
前記３価のカルボン酸としては、例えば、クエン酸、イソクエン酸、アコニット酸、オキサロコハク酸などが挙げられる。
これらの中でも、食品添加及び銅溶出率の観点から、クエン酸、コハク酸、酒石酸が好ましく、クエン酸がより好ましい。
これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００２７】
前記カルボン酸塩としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、１価のカルボン酸塩でも、２価以上の多価カルボン酸塩でもよいが、銅の抽出効率の観点から、２価以上のカルボン酸塩が好ましく、銅の抽出効率がよりよい点で、３価以上のカルボン酸塩がより好ましい。これらのカルボン酸塩としては、例えば、上記カルボン酸の具体例の塩などが挙げられる。これらの中でも、クエン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩が好ましく、クエン酸塩がより好ましい。
これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
前記塩の種類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属塩などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００２８】
前記カルボン酸及びカルボン酸塩は、どちらか一方を使用してもよいし、両者を使用してもよい。
【００２９】
前記カルボン酸又は前記カルボン酸塩の量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、カルボン酸及びカルボン酸塩の総量が、酵母中の銅１モルに対して２モル以上であることが好ましく、銅の抽出効率の観点から、１０モル以上であることがより好ましい。前記総量が、２モル未満であると、銅の溶出率が悪化することがある。
【００３０】
前記カルボン酸及び前記カルボン酸塩の少なくともいずれかを含む溶液（以下では「カルボン酸緩衝液」ともいう）に用いられる溶媒としては、特に制限はなく目的に応じて適宜選択することができるが、通常水であり、該水とアルコール等の有機溶媒との混合溶液であってもよい。
前記カルボン酸緩衝液の濃度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、銅の抽出効率の観点から、高いほど好ましく、２０ミリモル／Ｌ以上が好ましく、５０ミリモル／Ｌ以上がより好ましく、１５０ミリモル／Ｌ以上が更に好ましい。
【００３１】
前記カルボン酸緩衝液のｐＨとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１．５〜９が好ましく、銅の抽出効率の観点から、３．５〜８．５がより好ましい。なお、前記ｐＨは、前記カルボン酸及び前記カルボン酸塩の量比を変更することにより、調整することができる。
前記抽出工程における懸濁液のｐＨとしては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、２．０〜１０．０が好ましく、銅の抽出効率の観点から、４．０〜７．０がより好ましい。
【００３２】
前記抽出工程における抽出時間としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、銅溶出率の観点から、５時間以上が好ましく、１０時間以上がより好ましく、１５時間以上が更に好ましい。
【００３３】
前記抽出工程における懸濁液の温度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００３４】
前記抽出工程における銅溶出率（以下、「抽出率」と称することもある）としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、高いほど好ましく、２０％以上が好ましく、３０％以上がより好ましく、６０％以上が特に好ましい。
前記銅溶出率は、下記式により求めることができる。
銅溶出率（％）＝｛抽出物中の銅全量（質量）／抽出に用いた酵母に含まれる銅全量（質量）｝×１００
【００３５】
＜＜懸濁＞＞
前記酵母を前記カルボン酸及びカルボン酸塩の少なくともいずれかを含む溶液（カルボン酸緩衝液）に懸濁させる方法としては、特に制限はなく、公知の攪拌方法や振とう方法を用いることができる。
また、前記抽出工程において、前記懸濁液を更に振とうしてもよい。前記振とうの条件としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００３６】
＜＜固体成分と液体成分との分離＞＞
前記懸濁液の固体成分と液体成分とを分離する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、濾過による分離、遠心による分離などが挙げられる。
前記濾過の方法としては、特に制限はなく、公知の濾過装置を適宜選択して行うことができ、例えば、フィルタープレス、ラインフィルターなどを用いることができる。なお、これらは併用してもよい。
前記遠心分離の方法としては、特に制限はなく、公知の遠心装置を適宜選択して行うことができる。また、前記遠心の条件としても、特に制限はなく、前記懸濁液の量に応じて適宜選択することができ、例えば、前記懸濁液の量が５ｍＬの場合は、３，０００ｒｐｍで５分間という条件とすることが挙げられる。
【００３７】
前記カルボン酸緩衝液による抽出の痕跡として前記銅含有酵母抽出物中にカルボン酸が残るため、前記カルボン酸緩衝液による抽出が行われたか否かは、前記銅含有酵母抽出物中のカルボン酸を分析して判別することができる。前記分析の方法としては、特に制限はなく、例えば、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）によってクエン酸等のカルボン酸量を測定することにより行うことができる。
【００３８】
＜その他の工程＞
前記その他の工程としては、本発明の効果を損なわない限り特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、熱水処理工程、乾燥工程、濃縮工程、希釈工程などが挙げられる。これらの中でも、熱水処理工程を含むことが好ましい。
【００３９】
＜＜熱水処理工程＞＞
前記熱水処理工程は、前記抽出工程の前に、銅を含有する前記酵母を６０℃〜１２０℃の熱水に懸濁させ、得られた懸濁液の固体成分と液体成分とを分離する工程である。前記抽出工程の前に、前記熱水処理工程を行うことにより、酵母特有の臭い及び味（酵母臭、酵母味）を低減することができ、得られた銅高含有酵母抽出物は、食品等に添加した際に食品等の風味を損なわない点で好ましい。
また、熱水の温度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、高いほど酵母臭及び酵母味の低減効果が高く、８０℃〜１２０℃がより好ましく、９５℃〜１２０℃が更に好ましい。
なお、酵母を懸濁させる方法及び得られた懸濁液の固体成分と液体成分とを分離するする方法としては、特に制限はなく、前述した抽出工程と同様の方法が挙げられる。
【００４０】
前記熱水処理工程においては、酵母特有の臭い及び味を低減させるため、酵母臭や酵母味の抽出（除去）を促進する抽出促進剤を熱水に添加することが好ましい。前記抽出促進剤としては、次の抽出工程における銅の溶出率に悪影響を与えない限り特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、カルボン酸塩以外の塩が挙げられる。これらの中でも、酵母臭を抽出する効果が高く、熱水工程において銅が抽出され難い点で、リン酸塩が好ましい。
前記抽出促進剤の添加量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、乾燥酵母菌体質量当たり、５質量％〜５０質量％が好ましく、２０質量％〜５０質量％がより好ましい。
【００４１】
＜＜乾燥工程、濃縮工程、希釈工程＞＞
前記乾燥工程は、前記銅高含有酵母抽出物を乾燥させる工程である。
前記乾燥の方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、スプレードライヤーＬ−８（大川原化工機株式会社製）を用いて行うことができる。これにより、銅を高含有した酵母抽出固形物（粉体）を得ることができ、後述する種々の用途に用いることができる。なお、前記固形物とする際には、デキストリン等の賦形剤を適宜含有させてもよい。
前記濃縮工程は、前記銅高含有酵母抽出物を濃縮する工程であり、前記希釈工程は、前記銅高含有酵母抽出物を希釈する工程である。
前記濃縮及び希釈の方法としては、特に制限はなく、従来公知の方法を用いることができる。
【００４２】
（銅高含有酵母抽出物）
本発明の銅高含有酵母抽出物は、酵母菌体由来の銅を０．２質量％以上含有する銅高含有酵母抽出物であって、銅高含有酵母抽出物１ｇを水１００ｍＬに溶解乃至分散させたときの濁度が、波長６６０ｎｍにおける吸光度（Ｏ．Ｄ．６６０）として、０．１以下である。
前記銅高含有酵母抽出物の製造方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、前記本発明の銅高含有酵母抽出物の製造方法によって好適に製造することができる。即ち、銅を含有する酵母を、カルボン酸及びカルボン酸塩の少なくともいずれかを含む溶液で抽出して製造することが好ましい。
【００４３】
＜銅含有量＞
前記銅高含有酵母抽出物における銅含有量としては、銅高含有酵母抽出物を銅強化食品素材等として用いる観点から、多いほど好ましい。本発明において「銅高含有」とは、酵母菌体由来の銅を０．２質量％以上含有することをいい、０．５質量％以上含有することが好ましく、０．８質量％以上含有することがより好ましい。
このように銅を高濃度に含有することにより、流動食、飲料等の経口経管栄養組成物、食品素材等として好適に用いることができる。
なお、前記銅含有量は、公知の方法で測定することができ、例えば、原子吸光法、ＩＣＰ発光分光分析法などにより測定することができる。
【００４４】
＜濁度＞
本発明の銅高含有酵母抽出物は、水に対する溶解性が高いため、水溶液とした場合の透明度が高く、銅高含有酵母抽出物１ｇを水１００ｍＬに溶解乃至分散させたときの濁度が、波長６６０ｎｍにおける吸光度（Ｏ．Ｄ．６６０）として、０．１以下であり、０．０５以下が好ましく、０．０１以下がより好ましい。前記濁度が０．１を超えると、食品等に添加した際ににごりが生じ、変色することがあり、食品等の外観を損ねることがある。また、水に対する溶解性が十分でなく、沈殿することがあるため、特に清涼飲料水等、透明性が必要とされる食品としての用途に用いる際に問題が生じることがある。
【００４５】
ここで、前記銅高含有酵母抽出物の形態としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、前記抽出工程によって得られた液体（ろ液、上清等の抽出液）であってもよいし、粉末（パウダー）、粒子状、シート状等の固形物であってもよいし、ゲル状、スラリー状等の半固形物であってもよい。ただし、前記濁度を測定する際の「銅高含有酵母抽出物１ｇ」は、乾燥させた固形物であり、前記固形物の水分含有量が７質量％以下であるものを指す。前記乾燥の方法としては、特に制限はなく、上述の方法を用いることができ、その条件等は、特に制限はない。
なお、前記濁度は、分光光度計を使用して、波長６６０ｎｍにおける吸光度（Ｏ．Ｄ．６６０）を測定することができ、前記分光光度計としては、例えば、Ｕ−２０００型（株式会社日立製作所製）などが挙げられる。
【００４６】
＜用途＞
本発明の銅高含有酵母抽出物の用途としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、食品に添加されて用いられる食品素材、飼料、餌料等としての用途が好ましく、前記食品素材としての用途が特に好ましい。前記食品素材の中でも、本発明の銅高含有酵母抽出物が溶解性に優れる点で、流動食、清涼飲料水の用途が好ましい。その他の用途としては、食品発酵培地、野菜の緑色保持復元剤としての用途が好ましい。本発明の銅高含有酵母抽出物を用いることにより、銅高含有食品、銅高含有飼料、銅高含有餌料等が得られる。
【００４７】
前記銅高含有酵母抽出物の使用形態としては、特に制限はなく、用途に応じて適宜選択することができ、乾燥された粉末の状態（例えば、抽出物をスプレードライ等により乾燥したものなど）で使用してもよいし、溶媒に溶解された溶液の状態で使用してもよいし、半固形物の状態（例えば、ゲル状、クリーム状のものなど）で使用してもよい。なお、前記使用形態にするための銅高含有抽出物の調製方法としては、特に制限はなく、公知の装置等を用い公知の方法に従って行うことができる。
【００４８】
（食品）
本発明の食品は、本発明の銅高含有酵母抽出物を含み、更に必要に応じてその他の成分を含む。
ここで、前記食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品などの区分に制限されるものではなく、例えば、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品などを幅広く含むものを意味する。
前記食品の種類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、例えば、流動食、パン、ビスケット、クラッカー等の製菓、水産加工品、食肉加工品、麺類、味噌等の調味料、加工野菜製品、ジュース等の飲料、アイスクリーム等の氷菓、健康食品等が好ましく、流動食、飲料が特に好ましい。
【００４９】
前記食品中の前記銅高含有酵母抽出物の添加量としては、特に制限はなく、用途、目的等に応じて適宜選択することができる。
【００５０】
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、食品を製造するにあたって通常用いられる、補助的原料又は添加物などが挙げられる。
前記補助的原料又は添加物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤などが挙げられる。
前記その他の成分の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
【００５１】
（野菜の緑色保持復元剤）
本発明の野菜の緑色保持復元剤は、本発明の銅高含有酵母抽出物を含み、更に必要に応じてその他の成分を含む。
前記緑色保持復元剤の対象となる野菜としては、食用の緑色植物である限り特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、緑色野菜、茶葉、抹茶等の緑色植物の緑色を保持することができ、また、冷凍乃至冷蔵された緑色野菜、塩漬けされた緑色野菜、市販の漬物等の退色した緑色を復元することができる。
【００５２】
前記野菜の緑色保持復元剤中の前記銅高含有酵母抽出物の添加量としては、特に制限はなく、用途、目的等に応じて適宜選択することができる。
また、前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前述した食品における補助的原料又は添加物などが挙げられる。
【実施例】
【００５３】
以下、本発明の実施例等を説明するが、本発明はこれらの実施例等に何ら限定されるものではない。【００５４】
（実施例１及び比較例１：カルボン酸塩による銅の溶出）
乾物質量５ｇの銅高含有酵母粉末（ミネラル酵母Ｃｕ１、銅含有量：１１，２００質量ｐｐｍ、オリエンタル酵母工業株式会社製）に、表１に示す２００ミリモル／Ｌの各カルボン酸ナトリウム水溶液を５０ｍＬ加えて攪拌し、１００ｍＬにメスアップした。なお、前記各カルボン酸塩の量は、抽出される酵母中の銅１モルに対して、１１．４モルであった。対照としては、水又は２００ミリモル／Ｌの塩化ナトリウム（食塩）水溶液を用い、以下同様の試験を行った。ここで得られた各懸濁液のｐＨをｐＨメーターＭＰ２３０（ＭＥＴＴＬＥＲ  ＴＯＲＥＤＯ社製）で測定した。
前記懸濁液をスターラーによって攪拌しながら、５ｍＬを試験管に取り、沸騰水中で１０分間加熱した。この懸濁液を３，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清のみを試験管に採取し、酵母抽出物を得て、その質量を測定した。
前記銅の溶出率は、酵母抽出物中の銅含有量を、ＩＣＰ発光分光分析装置（Ｏｐｔｉｍａ２１００ＤＶ、パーキンエルマー社製）を用いてＩＣＰ発光分光分析法により測定し、抽出液へ溶出された銅の割合を計算した。結果を表１及び図１に示す。【００５５】
また、前記抽出物における乾燥粉末の銅含有量（質量％）は、以下のようにして測定した。即ち、銅抽出後の抽出液にデキストリンを添加し、固形物含量を１０質量％に調整後、スプレードライヤーＬ−８（大川原化工機株式会社製）を用いて乾燥させ、ＩＣＰ発光分光分析装置（Ｏｐｔｉｍａ２１００ＤＶ、パーキンエルマー社製）を用いてＩＣＰ発光分光分析法により銅を定量することにより行った。結果を表１に示す。【００５６】
【表１】
2013146465.tif 000003
【００５７】
表１及び図１の結果から、銅溶出率及び抽出物における銅含有量は、カルボン酸塩を用いることで銅溶出率が高くなり、銅を高含有した抽出物が得られることが分かった。また、その効果は、３価のカルボン酸塩であるクエン酸塩が最も高く、２価のカルボン酸塩であるコハク酸塩、酒石酸塩と続いた。【００５８】
（実施例２：カルボン酸乃至カルボン酸塩による銅溶出率）
４０質量％のクリームになるようミネラル酵母Ｃｕ１（オリエンタル酵母工業株式会社製）の粉末を３００ｍＬの水に懸濁した。得られたクリームを沸騰水中で１０分間加熱した後、洗浄し、沈殿を３００ｍＬにメスアップした。得られたクリーム１０ｍＬにクエン酸及びクエン酸三ナトリウムの少なくともいずれかを含む下記表２に記載の各水溶液（クエン酸緩衝液）１０ｍＬを添加して懸濁させた。なお、前記クエン酸緩衝液の濃度は、全ての液で２００ミリモル／Ｌであり、前記クエン酸緩衝液のｐＨは、クエン酸とクエン酸三ナトリウムとの量比を適宜変更することにより、調整した。
各クエン酸緩衝液に懸濁させてから２時間後、遠心分離を行い、得られた上清（酵母抽出物）について、実施例１と同様にして、銅溶出率を測定した。また、実施例１と同様にして、抽出物の乾燥粉末を得て抽出物における銅含有量を測定した。結果を下記表２及び図２に示す。【００５９】
【表２】
2013146465.tif 000004
【００６０】
表２及び図２から、抽出溶媒がカルボン酸のみを含む場合でも、カルボン酸塩のみを含む場合でも、また、カルボン酸とカルボン酸塩とを含む場合でも、高い割合で銅の溶出を行うことができた。【００６１】
（実施例３：銅溶出率に対するｐＨの影響）
実施例２において、下記表３に記載の各水溶液（クエン酸緩衝液；濃度は３００ミリモル／Ｌ）を用いた以外は、実施例２と同様にして懸濁液を調製した。なお、前記クエン酸緩衝液のｐＨは、クエン酸とクエン酸三ナトリウムとの量比を適宜変更することにより、調整した。
各クエン酸緩衝液に懸濁させてから２時間後、遠心分離を行い、得られた上清（酵母抽出物）について、実施例１と同様にして、銅溶出率及び抽出物における乾燥粉末質量当たりの銅含有量を測定した。結果を下記表３及び図３に示す。【００６２】
【表３】
2013146465.tif 000005
【００６３】
表３及び図３から、抽出に用いる溶媒（カルボン酸緩衝液）のｐＨが高いほど、銅溶出率は高くなる傾向が見られるものの、懸濁液のｐＨの広い範囲において、５０％以上の高い銅溶出率を示し、銅を高含有する酵母抽出物が得られることが分かった。【００６４】
（実施例４及び比較例２：酵母抽出物中に含まれる銅に対するカルボン酸のモル比と銅溶出率との関係）
原料としてミネラル酵母Ｃｕ１（オリエンタル酵母工業株式会社製）を用いてカルボン酸緩衝液濃度と銅の抽出効率との関係を試験した。抽出溶媒に含まれるカルボン酸塩として、クエン酸三ナトリウムを用い、下記表４に示した濃度のクエン酸三ナトリウム水溶液を用意した。
下記表４に示した濃度の各クエン酸三ナトリウム水溶液を用いた以外は、実施例２と同様にして、酵母抽出物を得て銅溶出率を測定し、実施例１と同様にして、抽出物の乾燥粉末を得て乾燥粉末質量当たりの銅含有量を測定した。結果を下記表４及び図４に示す。【００６５】
【表４】
2013146465.tif 000006
【００６６】
表４及び図４から、銅溶出率は、銅とカルボン酸及びその塩とのモル比に依存しており、カルボン酸及びカルボン酸塩の総量が、抽出される酵母中の銅１モルに対して２モル〜２５モルである場合に銅溶出率が高く、抽出物（乾燥粉末）中の銅含有量が高いことが分かった。【００６７】
（実施例５：銅溶出率に対する溶出時間の影響）
４０質量％のクリームになるようミネラル酵母Ｃｕ１（オリエンタル酵母工業株式会社製）の粉末を３００ｍＬの水に懸濁した。得られたクリームを沸騰水中で１０分間加熱した後、洗浄し、沈殿を３００ｍＬにメスアップした。得られたクリーム１０ｍＬに２００ミリモル／Ｌのクエン酸三ナトリウム水溶液１０ｍＬを添加して懸濁させた。
懸濁させてから遠心分離（サンプリング）するまでの時間（溶出時間）を１時間、２時間、１８時間、２１時間及び２４時間として、遠心分離を行い、得られた上清（酵母抽出物）について、実施例１と同様にして、銅溶出率を測定し、実施例１と同様にして、抽出物の乾燥粉末を得て抽出物における銅含有量を測定した。結果を下記表５及び図５に示す。【００６８】
【表５】
2013146465.tif 000007
【００６９】
表５及び図５から、溶出時間が長いほど、銅溶出率は高くなり、溶出時間が１５時間を超えると、７５％程度の銅溶出率が得られることが分かった。【００７０】
（実施例６及び比較例３：溶解性の評価）
実施例４−６で得られた銅高含有酵母抽出物の含有量が０．５質量％となるようにデキストリンと混合して銅高含有酵母抽出物の粉末を調製した。調製した銅高含有酵母抽出物の粉末１ｇを水又はリンゴ果汁（１０体積％リンゴ果汁入り飲料、アサヒ飲料株式会社製）で１００ｍＬにメスアップして、銅酵母抽出物の１％（質量／体積）溶液を作製した。前記溶液の濁度を分光光度計を使用して、波長６６０ｎｍにおける吸光度（Ｏ．Ｄ．６６０）を測定した。前記分光光度計としては、Ｕ−２０００型（株式会社日立製作所製）を用いた。更に前記溶液を３，０００ｒｐｍで５分間遠心した後の沈殿の有無を観察した。
また、対照として、従来品の銅高含有酵母抽出物（Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｃｏｐｐｅｒ  Ｙｅａｓｔ、Ｇｒｏｗ社製）、及び抽出を行っていないミネラル酵母Ｃｕ１（オリエンタル酵母工業株式会社製）も銅含量が同じになるようにして、溶液の濁度を測定し、沈殿の有無の評価を行った。結果を表６及び図６Ａ〜図６Ｄに示す。【００７１】
【表６】
2013146465.tif 000008
【００７２】
実施例６−１の水溶液の濁度は、比較例３−１の水溶液の濁度に比べ、有意に低い値を示した。また、図６Ａから、実施例６の水溶液は、目視でも比較例３−１の水溶液に比べ、有意に清澄性が高かった。更に、図６Ｂから、水溶液を３，０００ｒｐｍで５分間遠心したところ、実施例６−１では沈殿物が確認されず、清澄性の高い溶液だったのに対し、比較例３−１では沈殿物が確認された。
この結果は、水の代わりにリンゴ果汁を用いた実施例６−２、比較例３−２及び３−３でも同様であった。
したがって、本発明の銅高含有酵母抽出物は、従来品よりも溶解性が高いため、流動食や飲料等にも添加して使用することができ、また、濁りや変色が生じないため、特に透明度の高い清涼飲料等に添加して使用することもできることが分かった。【００７３】
（実施例７及び比較例４：臭いと味の評価）
実施例４−６で得られた銅高含有酵母抽出物の含有量が０．５質量％となるようにデキストリンと混合して調製した銅高含有酵母抽出物の粉末、該粉末の１％（質量／体積）水溶液、該粉末を１％（質量／体積）となるようにリンゴ果汁に溶解させた１％溶液、前記粉末を１％（質量／質量）となるように調整粉乳（チルミル、森永乳業株式会社製）１４ｇを水１００ｍＬに溶解又は懸濁させた水溶液に溶解させたもの（以下、「ミルク」と称する）、前記粉末を１％（質量／質量）となるように、栄養調整食品（メイバランス（ヨーグルト味）、株式会社明治製）に添加したもの（以下、「流動食」と称する）を用意した。【００７４】
＜評価方法＞
上記銅高含有酵母抽出物、１％水溶液、１％溶液（リンゴ果汁）、ミルク、及び流動食について、酵母或いは酵母抽出物に特有の臭い（酵母臭、エキス臭など）及び味（酵母味、エキス味など）を６人の評価者に評価してもらった。
評価は、銅高含有酵母抽出物における各評価項目の評価を３とした場合の各試料の評価を下記基準に従って６人の評価者の数値の平均をとった。なお、対照として、従来品（Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｃｏｐｐｅｒ  Ｙｅａｓｔ、Ｇｒｏｗ社製）及び抽出前の銅高含有酵母（ミネラル酵母Ｃｕ１（オリエンタル酵母工業株式会社製）を銅含有量が同じになるように添加したものも同様に評価した。結果を表７に示す。
−臭いの評価基準−
５：非常に強い
４：強い
３：同等
２：弱い
１：非常に弱い
−味の評価基準−
５：非常に濃い
４：濃い
３：同等
２：薄い
１：非常に薄い【００７５】
【表７】
2013146465.tif 000009
【００７６】
表７から、実施例７の銅高含有酵母抽出物は、粉末、１％水溶液及び１％溶液（リンゴ果汁）において、比較例４−１（従来品）よりも酵母臭やエキス臭等の臭いが有意に低いと評価された。また、ミルク及び流動食において酵母味及びエキス味ともに有意に低いと評価された。したがって、本発明の銅高含有酵母抽出物は、酵母或いは酵母抽出物に特有の臭い及び味が低減されており、添加した食品の風味を損なわないことが分かった。【００７７】
（実施例８−１：ピーマンの緑色保持復元効果の評価）
実施例４−６で得られた銅高含有酵母抽出物の含有量が０．５質量％となるようにデキストリンと混合して調製した銅高含有酵母抽出物の粉末を被験物質とした。
市販のピーマンをカットし、醸造酢（株式会社ミツカン製）を１体積％含む水溶液中に投入した後、６５℃〜７０℃で３０分間ボイルし、ピーマンの退色処理を行った。次いで、前記被験物質の濃度が２質量％となるように調製した浸漬液中に前記退色させたピーマンを移し、一晩（１６時間）浸漬させた。前記浸漬させたピーマンを取り出し、前記浸漬液を沸騰させた後、前記ピーマンを再度投入した。投入後１５分間ボイルした後、ザルで湯切りして流水で冷却した。
前記冷却したピーマンについて温度１０℃、光強度８００ルクスの条件で光照射試験を実施し、光照射開始時、光照射開始から５日目、及び光照射開始から１０日目のピーマンの緑色を観察した。それぞれの時点でのピーマンの状態を図７Ａに示し、色差計（コニカミノルタセンシング株式会社製  色彩色差計ＣＲ−４００）による測定結果を表８に示す。
なお、対照として、退色処理を行わず、かつ、被験物質を添加しなかった場合（以下、「無処理」と称することがある）、前記醸造酢による処理のみ（退色処理のみ）を行った場合（以下、「酢のみ」と称することがある）についても同様に試験を行った。なお、「酢のみ」の場合の観察は、光照射開始時、及び光照射開始から５日目に行った。【００７８】
【表８】
2013146465.tif 000010
なお、色差計の測定において、「Ｌ＊」は、値が大きいと明るく、小さいと暗い傾向を示す。「ａ＊」は、値が大きいと赤色を示し、小さいと緑色を示す。「ｂ＊」は、値が大きいと黄色を示し、小さいと青色を示す。【００７９】
図７Ａ及び表８の結果から、本発明の銅高含有酵母抽出物を用いた実施例８−１では、光照射開始から１０日目でもａ＊値はほとんど変化せず、即ち、緑色が退色しておらず、優れた緑色保持復元効果を有することが確認できた。一方、無処理の場合は、光照射開始から５日目で、ａ＊値が大きくなっていた。【００８０】
（実施例８−２：緑茶ペーストの緑色保持復元効果の評価）
実施例８−１において、光照射試験に供する試験体を以下のようにして調製された抹茶ペーストに変更した以外は、実施例８−１と同様にして、光照射試験を行った。結果を図７Ｂ、及び表９に示す。
＜抹茶ペーストの調製＞
市販の抹茶粉末（Ｓ−朝比奈４号、株式会社銘葉製）１０．４ｇ、被験物質０．８ｇ、クエン酸０．５ｇ及び水８８．３ｍＬを混合した後、１２１℃で６０分間加熱殺菌して抹茶ペーストを調製した。
なお、対照として、加熱殺菌処理を行わず、かつ、被験物質を添加しなかった場合（以下、「加熱なし」と称することがある）、加熱殺菌処理を行い、被験物質を添加しなかった場合（以下、「加熱あり」と称することがある）についても同様に試験を行った。【００８１】
【表９】
2013146465.tif 000011
【００８２】
図７Ｂ及び表９の結果から、本発明の銅高含有酵母抽出物を用いた実施例８−２では、光照射開始から１０日目でもａ＊値はほとんど変化せず、即ち、緑色が退色しておらず、優れた緑色保持復元効果を有することが確認できた。一方、加熱なしの場合は、光照射開始から５日目で、ａ＊値が大きくなっていた。【００８３】
（実施例８−３：ブロッコリーの緑色保持復元効果の評価）
実施例４−６で得られた銅高含有酵母抽出物の含有量が０．５質量％となるようにデキストリンと混合して調製したものを被験物質とした。
前記被験物質の濃度が４．０質量％となるように調製した浸漬液中に市販の冷凍ブロッコリー（ブロッコリー、ライフフーズ株式会社製）を投入し、４℃で一晩（１６時間）浸漬させた。前記浸漬させたブロッコリーを取り出し、前記浸漬液を沸騰させた後、前記ブロッコリーを再度投入した。投入後１５分間ボイルした後、ザルで湯切りして流水で冷却した。
前記冷却したブロッコリーについて温度１０℃、光強度８００ルクスの条件で光照射試験を実施し、光照射開始時、光照射開始から５日目、及び光照射開始から１０日目のブロッコリーの緑色を観察した。それぞれの時点でのピーマンの状態を図７Ｃに示し、色差計（コニカミノルタセンシング株式会社製  色彩色差計ＣＲ−４００）による測定結果を表１０に示す。
なお、対照として、被験物質を添加しなかった場合（以下、「無添加」と称することがある）についても同様に試験を行った。【００８４】
【表１０】
2013146465.tif 000012
【００８５】
図７Ｃ及び表１０の結果から、本発明の銅高含有酵母抽出物を用いた実施例８−３では、光照射開始から１０日目でもａ＊値はほとんど変化せず、即ち、緑色が退色しておらず、優れた緑色保持復元効果を有することが確認できた。一方、無添加の場合は、光照射開始から５日目で、ａ＊値が大きくなっていた。【００８６】
（実施例８−４：キヌサヤの緑色保持復元効果の評価）
実施例８−３において、冷凍ブロッコリーを冷凍キヌサヤ（きぬさや、株式会社交洋製）に変更し、浸漬液中の被験物質の含有量を５．０質量％に変更した以外は、実施例８−３と同様にして試験を行い、緑色の保持復元効果を評価した。結果を図７Ｄ、及び表１１に示す。【００８７】
【表１１】
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【００８８】
図７Ｄ及び表１１の結果から、本発明の銅高含有酵母抽出物を用いた実施例８−４では、光照射開始から１０日目でもａ＊値はほとんど変化せず、即ち、緑色が退色しておらず、優れた緑色保持復元効果を有することが確認できた。一方、無添加の場合は、光照射開始から５日目で、ａ＊値が大きくなっていた。【００８９】
（実施例８−５：インゲンの緑色保持復元効果の評価）
実施例８−３において、冷凍ブロッコリーを冷凍インゲン（いんげん、株式会社ニチレイフーズ製）に変更し、浸漬液中の被験物質の含有量を５．０質量％に変更した以外は、実施例８−３と同様にして、試験を行い、緑色の保持復元効果を評価した。結果を図７Ｅ、及び表１２に示す。【００９０】
【表１２】
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【００９１】
図７Ｅ及び表１２の結果から、本発明の銅高含有酵母抽出物を用いた実施例８−５では、光照射開始から１０日目でもａ＊値はほとんど変化せず、即ち、緑色が退色しておらず、優れた緑色保持復元効果を有することが確認できた。一方、無添加の場合は、光照射開始から５日目で、ａ＊値が大きくなっていた。【００９２】
実施例８−１から８−５の結果から、本発明の銅高含有酵母抽出物は、種々の緑色植物に対して緑色保持復元効果を奏することが分かった。
【産業上の利用可能性】
【００９３】
本発明の銅高含有酵母抽出物は、天然物由来の銅を高濃度に含有し、水への溶解性に優れ、しかも添加した食品の風味等を損なうことがないことから、流動食、飲料等の経口経管栄養組成物、食品素材、野菜の緑色保持復元剤等の各種食品添加剤、食品発酵培地などとして好適に用いることができる。
本発明の銅高含有酵母抽出物の製造方法においては、銅を含有する酵母からの銅溶出率が高く、銅高含有酵母抽出物を効率的に製造することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【国際調査報告】
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