(57)【要約】  クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物を含有してなり、血清レジスチン濃度を低下させるためのものである、経口投与剤としての血清レジスチン濃度低下剤。クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物を含有してなり、血清レジスチン濃度を低下させるためのものである、血清レジスチン濃度低下用飲食組成物。クロレラの細胞壁破砕物を経口投与適用することによる血清レジスチン濃度を低下させる方法。血清レジスチン濃度を低下させるためのクロレラの細胞壁破砕物の経口投与使用。【特許請求の範囲】
【請求項１】
クロレラの細胞壁破砕物を含有してなる血清レジスチン濃度低下剤。
【請求項２】
レジスチン遺伝子の発現を低下させるものである請求項１記載の血清レジスチン濃度低下剤。
【請求項３】
ＣＴＢＰ１遺伝子の発現を亢進させるものである請求項１又は２記載の血清レジスチン濃度低下剤。
【請求項４】
ＣＴＢＰ２遺伝子の発現を亢進させるものである請求項１又は２記載の血清レジスチン濃度低下剤。
【請求項５】
ＲＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の発現を亢進させるものである請求項１又は２記載の血清レジスチン濃度低下剤。
【請求項６】
上記クロレラがクロレラ・ピレノイドサである請求項１乃至５の何れか１項に記載の血清レジスチン濃度低下剤。
【請求項７】
経口投与剤である請求項１乃至６の何れか１項に記載の血清レジスチン濃度低下剤。
【請求項８】
クロレラの細胞壁破砕物を含有してなる血清レジスチン濃度低下用飲食組成物。
【請求項９】
レジスチン遺伝子の発現を低下させるものである請求項８記載の血清レジスチン濃度低下用飲食組成物。
【請求項１０】
ＣＴＢＰ１遺伝子の発現を亢進させるものである請求項８又は９記載の血清レジスチン濃度低下用飲食組成物。
【請求項１１】
ＣＴＢＰ２遺伝子の発現を亢進させるものである請求項８又は９記載の血清レジスチン濃度低下用飲食組成物。
【請求項１２】
ＲＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の発現を亢進させるものである請求項８又は９記載の血清レジスチン濃度低下用飲食組成物。
【請求項１３】
上記クロレラがクロレラ・ピレノイドサである請求項８乃至１２の何れか１項に記載の血清レジスチン濃度低下用飲食組成物。
【請求項１４】
クロレラの細胞壁破砕物を適用することによる血清レジスチン濃度を低下させる方法。
【請求項１５】
レジスチン遺伝子の発現を低下させるものである請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
ＣＴＢＰ１遺伝子の発現を亢進させるものである請求項１４又は１５記載の方法。
【請求項１７】
ＣＴＢＰ２遺伝子の発現を亢進させるものである請求項１４又は１５記載の方法。
【請求項１８】
ＲＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の発現を亢進させるものである請求項１４又は１５記載の方法。
【請求項１９】
上記クロレラがクロレラ・ピレノイドサである請求項１４乃至１８の何れか１項に記載の方法。
【請求項２０】
クロレラの細胞壁破砕物を経口投与により適用するものである請求項１４乃至２０の何れか１項に記載の方法。
【請求項２１】
血清レジスチン濃度を低下させるためのクロレラの細胞壁破砕物の使用。
【請求項２２】
レジスチン遺伝子の発現を低下させるものである請求項２１記載の使用。
【請求項２３】
ＣＴＢＰ１遺伝子の発現を亢進させるものである請求項２１又は２２記載の使用。
【請求項２４】
ＣＴＢＰ２遺伝子の発現を亢進させるものである請求項２１又は２２記載の使用。
【請求項２５】
ＲＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の発現を亢進させるものである請求項２１又は２２記載の使用。
【請求項２６】
上記クロレラがクロレラ・ピレノイドサである請求項２１乃至２５の何れか１項に記載の使用。
【請求項２７】
クロレラの細胞壁破砕物を経口投与するものである請求項２１乃至２６の何れか１項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血清レジスチン濃度を低下させるための血清レジスチン濃度低下剤及び血清レジスチン濃度低下用飲食組成物並びに血清レジスチン濃度を低下させる方法及び血清レジスチン濃度を低下させるための使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖代謝異常と血液中のレジスチン濃度は相関しており（Scand J ClinLab Invest. 2007;67(2):215-25. Associations of resistinwith inflammation and insulin resistance in patients with type 2 diabetes mellitus. MojiminiyiOA, AbdellaNA.、及び、Metabolism. 2007 May;56(5):693-8. Serum resistinlevel is associated with insulin sensitivity in Japanese patients with type 2 diabetes mellitus. Tokuyama Y, OsawaH, Ishizuka T, OnumaH, Matsui K, EgashiraT, Makino H, KanatsukaA.）、レジスチンは脂肪細胞に働いて脂肪細胞の炎症を誘導し、インスリン抵抗性を誘導するサイトカイン産生を増加させるものとされている（PLoSOne. 2006 Dec 20;1:e31. Human resistinis a systemic immune-derived proinflammatorycytokine targeting both leukocytes and adipocytes. NagaevI, BokarewaM, TarkowskiA, Smith U.）。【０００３】
そのため、安全で経口投与に適し、血液中のレジスチン濃度を有効に低下させることのできる血清レジスチン濃度低下剤及び血清レジスチン濃度低下用飲食組成物並びに血清レジスチン濃度を低下させる方法及び血清レジスチン濃度を低下させるための使用が要望されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Scand J ClinLab Invest. 2007;67(2):215-25. Associations of resistinwith inflammation and insulin resistance in patients with type 2 diabetes mellitus. MojiminiyiOA, AbdellaNA.
【非特許文献２】Metabolism. 2007 May;56(5):693-8. Serum resistinlevel is associated with insulin sensitivity in Japanese patients with type 2 diabetes mellitus. Tokuyama Y, OsawaH, Ishizuka T, OnumaH, Matsui K, EgashiraT, Makino H, KanatsukaA.
【非特許文献３】PLoSOne. 2006 Dec 20;1:e31. Human resistinis a systemic immune-derived proinflammatorycytokine targeting both leukocytes and adipocytes. NagaevI, BokarewaM, TarkowskiA, Smith U.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、上記のような点に鑑み行われたものであって、その目的とするところは、長期に亙って安全且つ簡便に投与し得る血清レジスチン濃度低下剤及び血清レジスチン濃度低下用飲食組成物並びに長期に亙って安全且つ簡便に行い得る血清レジスチン濃度を低下させる方法及び血清レジスチン濃度を低下させるための使用を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成する本発明の血清レジスチン濃度低下剤は、クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるものである。【０００７】
また本発明の血清レジスチン濃度低下用飲食組成物は、クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるものである。【０００８】
また本発明の方法は、クロレラの細胞壁破砕物を適用することによる血清レジスチン濃度を低下させる方法である。【０００９】
また本発明の使用は、血清レジスチン濃度を低下させるためのクロレラの細胞壁破砕物の使用である。【００１０】
本発明の血清レジスチン濃度低下剤又は血清レジスチン濃度低下用飲食組成物を適用することにより、或いは、本発明の血清レジスチン濃度を低下させる方法又はクロレラの細胞壁破砕物の使用により、血清レジスチン濃度を効果的に低下させ得る。【００１１】
本発明の血清レジスチン濃度低下剤はレジスチン遺伝子の発現を低下させるものとすることができる。【００１２】
また本発明の血清レジスチン濃度低下用飲食組成物は、レジスチン遺伝子の発現を低下させるものとすることができる。【００１３】
本発明の血清レジスチン濃度を低下させる方法は、レジスチン遺伝子の発現を低下させるものとすることができる。【００１４】
また本発明のクロレラの細胞壁破砕物の使用は、レジスチン遺伝子の発現を低下させるためのものとすることができる。【００１５】
上記本発明の血清レジスチン濃度低下剤は、ＣＴＢＰ１遺伝子の発現を亢進させるものとすることができる。【００１６】
また上記本発明の血清レジスチン濃度低下用飲食組成物は、ＣＴＢＰ１遺伝子の発現を亢進させるものとすることができる。【００１７】
本発明の血清レジスチン濃度を低下させる方法は、ＣＴＢＰ１遺伝子の発現を亢進させるものとすることができる。【００１８】
また本発明のクロレラの細胞壁破砕物の使用は、ＣＴＢＰ１遺伝子の発現を亢進させるものとすることができる。【００１９】
ＣＴＢＰ１遺伝子は、レジスチン遺伝子の発現を負に制御する。【００２０】
上記本発明の血清レジスチン濃度低下剤は、ＣＴＢＰ２遺伝子の発現を亢進させるものとすることができる。【００２１】
また上記本発明の血清レジスチン濃度低下用飲食組成物は、ＣＴＢＰ２遺伝子の発現を亢進させるものとすることができる。【００２２】
本発明の血清レジスチン濃度を低下させる方法は、ＣＴＢＰ２遺伝子の発現を亢進させるものとすることができる。【００２３】
また本発明のクロレラの細胞壁破砕物の使用は、ＣＴＢＰ２遺伝子の発現を亢進させるものとすることができる。【００２４】
ＣＴＢＰ２遺伝子は、レジスチン遺伝子の発現を負に制御する。【００２５】
上記本発明の血清レジスチン濃度低下剤は、ＲＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の発現を亢進させるものとすることができる。【００２６】
また上記本発明の血清レジスチン濃度低下用飲食組成物は、ＲＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の発現を亢進させるものとすることができる。【００２７】
本発明の血清レジスチン濃度を低下させる方法は、ＲＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の発現を亢進させるものとすることができる。【００２８】
また本発明のクロレラの細胞壁破砕物の使用は、ＲＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の発現を亢進させるものとすることができる。【００２９】
ＲＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子は、レジスチン遺伝子の発現を負に制御する。【００３０】
本発明の血清レジスチン濃度低下剤におけるクロレラは、クロレラ・ピレノイドサであるものとすることができる。【００３１】
また本発明の血清レジスチン濃度低下用飲食組成物におけるクロレラは、クロレラ・ピレノイドサであるものとすることができる。【００３２】
本発明の血清レジスチン濃度を低下させる方法におけるクロレラは、クロレラ・ピレノイドサであるものとすることができる。【００３３】
また本発明のクロレラの細胞壁破砕物の使用におけるクロレラは、クロレラ・ピレノイドサであるものとすることができる。【００３４】
本発明の血清レジスチン濃度低下剤は、経口投与剤であるものとすることができる。【００３５】
本発明の血清レジスチン濃度を低下させる方法においては、クロレラの細胞壁破砕物を経口投与により適用するものとすることができる。【００３６】
また本発明のクロレラの細胞壁破砕物の使用においては、クロレラの細胞壁破砕物を経口投与するものとすることができる。【００３７】
なお、本発明における"血清レジスチン濃度低下剤"は、"血清レジスチン濃度低下用の物質"と言い換えることができる。【００３８】
また、本発明の血清レジスチン濃度低下剤又は血清レジスチン濃度低下用飲食組成物を適用することによる血清レジスチン濃度を低下させる方法は、クロレラの細胞壁破砕物を適用することによる血清レジスチン濃度を低下させる方法と言い換えることができる。
【発明の効果】
【００３９】
本発明の血清レジスチン濃度低下剤及び血清レジスチン濃度低下用飲食組成物は、長期に亙って安全且つ簡便に投与し得、血清レジスチン濃度を効果的に低下させ得る。本発明の血清レジスチン濃度を低下させる方法及び血清レジスチン濃度を低下させるための使用は、長期に亙って安全且つ簡便に行い得、血清レジスチン濃度を効果的に低下させ得る。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】血清レジスチン濃度についての試験期間前（０ｗ）及び試験期間経過後（１２ｗ）の測定結果である。
【図２】レジスチンmRNAに対する２つのプローブA_33_P3350863及びA_23_P119222についての試験期間前（０ｗ）及び試験期間経過後（１２ｗ）の測定結果である。
【図３】レジスチン遺伝子の発現を負に制御する遺伝子であるＣＴＢＰ１遺伝子、ＣＴＢＰ２遺伝子及びＲＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の発現についての試験期間前（０ｗ）及び試験期間経過後（１２ｗ）の測定結果である。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
本発明におけるクロレラとは、クロレラ属(Chlorella) に属する単細胞緑藻類であって、例えば、Chlorella pyrenoidosa、Chlorella ellipsoidea 、Chlorella vulgaris 、Chlorella regularis 等を挙げることができる。本発明に最も適しているのは、クロレラ・ピレノイドサ（Chlorella pyrenoidosa）である。
【００４２】
本発明の血清レジスチン濃度低下剤及び血清レジスチン濃度低下用飲食組成物並びに血清レジスチン濃度を低下させる方法及び血清レジスチン濃度を低下させるための使用におけるクロレラの細胞壁破砕物は、例えば次のようにして得ることができる。すなわち、先ずクロレラ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ粉体・水懸濁液を１０℃以下に調整する。次にこの懸濁液を、下記のような連続湿式微粉砕機に送入し、破砕直後のスラリーが４０℃以下になるよう微粉砕する。次いで、このようにして得られたクロレラスラリーを、直ちに１０℃以下に冷却することにより、細胞壁が破砕されたクロレラを、品質劣化を生じさせることなく得ることができる。
【００４３】
上記連続湿式微粉砕機は、冷却外套を持つ密閉シリンダー中に多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入されたものである。そのグラスビーズ容量は密閉シリンダー容量の８０乃至８５％であり、グラスビーズを流入液体と混和・回転することにより、流入液体中の物質を摩砕するものである。
【００４４】
このようにして細胞壁が破砕されたクロレラは、そのまま用いることもできるが、例えば、真空乾燥後粉砕を行う等の適宜の処理を施した後に使用してもよい。
【００４５】
本発明の血清レジスチン濃度低下剤及び血清レジスチン濃度低下用飲食組成物並びに血清レジスチン濃度を低下させる方法及び血清レジスチン濃度を低下させるための使用におけるクロレラの細胞壁破砕物は、経口投与に適する。成人に対するクロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物（又はその他のクロレラの細胞壁破砕物）の投与量は、１日当り１乃至３５ｇ程度が適当である。但し、クロレラ・ピレノイドサ等のクロレラの細胞壁破砕物は人体に対する毒性を有しないため、これに限定されるものではない。
【００４６】
本発明の血清レジスチン濃度低下剤並びに血清レジスチン濃度を低下させる方法及び血清レジスチン濃度を低下させるための使用における経口投与の形態に特に限定はないが、例えば、粉末、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤とすることができる。
【００４７】
また種々の形態を形成する上で、各種賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、可塑剤等を適宜用いることができる。
【００４８】
賦形剤の例としては、糖類（乳糖，白糖，ブドウ糖，マンニトール），デンプン（バレイショ，コムギ，トウモロコシ），無機物（炭酸カルシウム，硫酸カルシウム，炭酸水素ナトリウム，塩化ナトリウム），結晶セルロース，植物末（カンゾウ末，ゲンチアナ末）等を挙げることができる。
【００４９】
結合剤の例としては、デンプンのり液，アラビアゴム，ゼラチン，アルギン酸ナトリウム，メチ／レセルロース（ＭＣ），エチルセルロース（ＥＣ），ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ），ポリビニルアルコール（ＰＶＡ），ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ），カルポキシメチルセルロース（ＣＭＣ）等を挙げることができる。
【００５０】
崩壊剤の例としては、デンプン，寒天，ゼラチン末，結晶セルロース，ＣＭＣ・Ｎａ，ＣＭＣ・Ｃａ，炭酸カルシウム，炭酸水素ナトリウム，アルギン酸ナトリウム等を挙げることができる。
【００５１】
滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム，タルク，水素添加植物油，マクロゴール，シリコーン油等を挙げることができる。
【００５２】
コーティング剤の例としては、糖衣（白糖，ＨＰＣ，セラック），膠衣（ゼラチン，グリセリン，ソルビトール），フイルムコーティング〔ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ），ＥＣ，ＨＰＣ，ＰＶＰ〕，腸溶性コーティング〔ヒドロキシプロビルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ），セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）〕等を挙げることができる。
【００５３】
着色剤の例としては、水溶性食用色素，レーキ色素）等を挙げることができる。矯味剤の例としては、乳糖，白糖，ブドウ糖，マンニトール）等を挙げることができる。矯臭剤の例としては、芳香性精油類），光線遮断剤（酸化チタン）等を挙げることができる。可塑剤の例としては、フタル酸エステル類，植物油，ポリエチレングリコール）等を挙げることができる。
【００５４】
本発明の血清レジスチン濃度低下用飲食組成物は、例えば栄養食品、栄養補助食品又は飲料用液体等を構成する飲食組成物中にクロレラの細胞壁破砕物を含有した形態とすることができ、本発明の効果を損なわない各種成分を含むものとすることができる。
【００５５】
このような血清レジスチン濃度低下剤及び血清レジスチン濃度低下用飲食組成物は、長期に亙って安全且つ簡便に投与し得、血清レジスチン濃度を効果的に低下させ得る。また、このような血清レジスチン濃度を低下させる方法及び血清レジスチン濃度を低下させるための使用は、長期に亙って安全且つ簡便に行い得、血清レジスチン濃度を効果的に低下させ得る。
【実施例】
【００５６】
クロレラ細胞壁破砕物の経口投与が、血清レジスチン濃度、レジスチン遺伝子の発現、及び、レジスチン遺伝子の発現を負に制御する遺伝子の発現に与える効果についての試験を行った。【００５７】
１．被験物質の製造【００５８】
被験物質である細胞壁を破砕したクロレラ・ピレノイドサ（Chlorella pyrenoidosa）の乾燥粉末（以下、単に「クロレラ」とも言う。）を、次のように製造した。【００５９】
冷却外套を持つ密閉シリンダー中にその密閉シリンダー容量の８０乃至８５％の容量の多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入されており、そのグラスビーズを流入液体と混和・回転することにより流入液体中の物質を摩砕する連続湿式微粉砕機（商品名：ダイノーミル［KD型］  WAB, Inc.製）に、１０℃以下に調整されたクロレラ・ピレノイドサ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ・ピレノイドサ粉体・水懸濁液を送入して、破砕直後のスラリーが４０℃以下になるよう微粉砕し、次いで、このようにして得られたクロレラ・ピレノイドサスラリーを、直ちに１０℃以下に冷却し、真空乾燥後、粉砕することにより、被験物質である細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサ乾燥粉末（株式会社サン・クロレラ製の細胞壁破砕クロレラ粉末）が得られた。【００６０】
２．試験方法【００６１】
被験者２８名（HbA1cが5.3％以上.6.1％未満の４２乃至４９歳の男性）に対し、１２週間（試験期間）にわたり、被験物質を毎朝食前及び毎夕食前にそれぞれ３．８３ｇ（１日当り７．６６ｇ）経口投与した。【００６２】
試験期間初日の被験物質経口投与前（０ｗ）と、試験期間経過翌日の朝食前（１２ｗ）に、それぞれ末梢血の採血を行い、血清レジスチン濃度、レジスチン遺伝子の発現、及び、レジスチン遺伝子の発現を負に制御する遺伝子の発現に関する測定に供する検体とした。なお、試験期間初日の前日２１時以降、初日の採血までは、水以外の摂取を禁止した。【００６３】
３．測定方法
(1) レジスチン濃度【００６４】
検体についてヒトレジスチンELISAキット（商品名：Human Resistin ELISA  BioVendor Laboratorni medicina a.s.社製）を用いてELISAによるレジスチンの検出を行い、マイクロプレートリーダーを使って主波長450nm、副波長630nmで各ウェルの吸光値を測定することによりレジスチン濃度を測定した。
(2) 遺伝子発現【００６５】
検体を収容したRNA単離用真空採血管（商品名：PAXgene Blood RNA Tube  BD社製）から、RNA抽出キット（商品名：PAXgene Blood miRNA Kit  QIAGEN社製) を用いてtotal RNAの抽出を行なった。【００６６】
抽出したtotal RNAについて、分光光度計（商品名：NanoDrop 1000  Thermo Scientific社製) により収量を測定し、分析機（商品名：Agilent 2100 Bioanalyzer  Agilent Technologies社製) により分解度を測定した。【００６７】
マイクロアレイ解析は、遺伝子発現マイクロアレイ（商品名：SurePrint G3 Human GE 8x60K Microarray  Agilent Technologies社製）を用いて行った。標識cRNAの作成は、total RNA 100ngから、遺伝子発現マイクロアレイラベル化キット（商品名：Low Input Quick Amp Labeling Kit  Agilent Technologies社製）を用いてその標準プロトコルに従って行なった。標識方法は１色法とし、Cyanine 3を用いた。【００６８】
マイクロアレイのスキャンは、マイクロアレイスキャナ（商品名：G2505C DNA microarray scanner  Agilent Technologies社製）により行い、数値化は、マイクロアレイ画像数値化ソフト（商品名：Feature Extraction Software ver.10.7.3.1  Agilent Technologies社製）を用いて行なった。【００６９】
４．結果【００７０】
試験期間前（０ｗ）と、試験期間経過後（１２ｗ）のそれぞれにおける血清レジスチン濃度、レジスチン遺伝子の発現、及び、レジスチン遺伝子の発現を負に制御する遺伝子の発現に関する測定結果は次の通りであった。
(1) 血清レジスチン濃度【００７１】
血清レジスチン濃度についての試験期間前（０ｗ）及び試験期間経過後（１２ｗ）の測定結果は図１に記載の通りであり、被験物質の経口投与による血清レジスチン濃度の有意な低下が認められた。血清レジスチン濃度の被験者の平均値は、試験期間前（０ｗ）において５．４７ｎｇ／ｍＬ、試験期間経過後（１２ｗ）において５．０２ｎｇ／ｍＬであった。
(2) レジスチン遺伝子の発現【００７２】
レジスチンmRNAに対する２つのプローブA_33_P3350863及びA_23_P119222の試験期間前（０ｗ）及び試験期間経過後（１２ｗ）の測定結果は図２に記載の通りであり、被験物質の経口投与によるレジスチン遺伝子の発現の有意な抑制が認められた。
(3) レジスチン遺伝子の発現を負に制御する遺伝子の発現【００７３】
レジスチン遺伝子の発現を負に制御する遺伝子であるＣＴＢＰ１遺伝子、ＣＴＢＰ２遺伝子及びＲＸＲ−ａｌｐｈａ遺伝子の発現についての試験期間前（０ｗ）及び試験期間経過後（１２ｗ）の測定結果は図３に記載の通りであり、被験物質の経口投与によるレジスチン遺伝子の発現を負に制御する前記各遺伝子の発現の有意な亢進が認められた。
【図１】
2013105617.tif 000002
【図２】
2013105617.tif 000003
【図３】
2013105617.tif 000004
【国際調査報告】
2013105617.tif 000005
2013105617.tif 000006
2013105617.tif 000007
2013105617.tif 000008
2013105617.tif 000009
2013105617.tif 000010