(57)【要約】  本発明の目的は、抗菌性繊維の製造の用いることができるポリペプチド含有ポリマーを提供することである。本発明の目的はまた、比較的容易な手段により抗菌性ポリペプチドを繊維へ固定化でき、繊維へのダメージが少ないが、繰り返しの使用によってもポリペプチドの固定が維持できる、ポリペプチドの繊維への固定化方法を提供することである。本発明により、抗菌性繊維の製造の用いることができる抗菌性ポリペプチド（カブトムシディフェンシン改変ポリペプチド）含有ポリマーが提供される。また、本発明の方法により、抗菌性ポリペプチドを繊維に容易に固定化できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）
【化１】
2013039190.tif 000095
（式中Ｒ1は、水素原子又はメチル基であり、Ｕ1は、単結合、Ｏ又はＮＨであり、Ｖは、単結合又はスペーサーであり、Ｗは、単結合或いはアミド基、チオエーテル基、チオエステル基、オキシム基、１，２，３−トリアゾール基、カルボニル基又はエステル基を有するリンカーであり、Peptideは、下記式で表されるアミノ酸配列：
−ＮＨ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯＮＨ2、又はＨ2Ｎ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯ−（式中、Ｘ１はＡｒｇ又はＡｌａであり、Ｘ２はＴｙｒ、Ａｒｇ又はＬｅｕであり、Ｘ３はＡｒｇ又はＡｌａであり、X４はＩｌｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌであり、Ｘ５はＧｌｙ又はＡｒｇであり、Ｘ６はＡｒｇ又はＬｙｓであり、Ｘ７はＡｒｇ又はＬｙｓである。ここで、Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2又はＬｙｓ−ＣＯＮＨ2は、Ａｒｇ又はＬｙｓのカルボキシル基がアミド化していることを示す。）より選ばれる抗菌活性を有するペプチドである。）
で表される反復単位を含む抗菌性ペプチド含有ポリマー。
【請求項２】
さらに、下記式（２）および（３）
【化２】
2013039190.tif 000096
（式中Ｒ2及びＲ3は、それぞれ独立に水素原子又はメチル基であり、Ｕ2は、単結合、Ｏ又はＮＨであり、Ｕ3は、Ｏ又はＮＨであり、Ｖは、単結合又はスペーサーであり、Ｗ1は、水素原子又は末端にハロゲンを付加してもよい上記リンカーＷの全部又は一部からなる基であり、Ｙは、単結合又は分子量１０〜３０００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のアルキレン鎖又はポリオキシアルキレン鎖である。）
で表される反復単位のうちの少なくとも一つを含む請求項１に記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。
【請求項３】
前記式（１）〜（３）において、−Ｗ−が、下記式：
【化３】
2013039190.tif 000097
（式中、ｔは、１〜７の自然数である。）のいずれかを有するリンカーであり、かつ、Ｙが、単結合又は分子量１０〜３０００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のアルキレン鎖又はポリエチレングリコール鎖である、請求項１または２に記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。
【請求項４】
前記式（１）の−Ｗ−Peptideが、以下に表される式：
【化４】
2013039190.tif 000098
（ここで、Peptideは前記と同じである。），
【化５】
2013039190.tif 000099
（ここで、Peptideは前記と同じであり、ｉは１〜１５の整数である。），
【化６】
2013039190.tif 000100
（ここで、Peptideは前記と同じであり、ｉは１〜７の整数である。），
【化７】
2013039190.tif 000101
（ここで、Peptideは前記と同じであり、ｉは、１〜７の整数であり、ｊは、１〜１５の整数である。），
【化８】
2013039190.tif 000102
（ここで、Peptideは前記と同じである。），
【化９】
2013039190.tif 000103
（ここで、Peptideは前記と同じであり、ｉは、１〜１５の整数である。），
【化１０】
2013039190.tif 000104
（ここで、Peptideは前記と同じであり、ｉは１〜８の整数であり、ｊは１〜８の整数である。），
【化１１】
2013039190.tif 000105
（ここで、Peptideは前記と同じであり、ｉは１〜７の整数であり、ｊは１〜７の整数である。），
【化１２】
2013039190.tif 000106
(ここで、Peptideは前記と同じである。），
【化１３】
2013039190.tif 000107
（ここで、Peptideは前記と同じであり、ｉは２〜７の整数である。），
【化１４】
2013039190.tif 000108
（ここで、Peptideは前記と同じであり、i は１〜７の整数であり、j は２〜７の整数である。），
【化１５】
2013039190.tif 000109
（ここで、Peptideは前記と同じであり、i は１〜１５の整数であり、j は１〜１０の整数である。），
【化１６】
2013039190.tif 000110
（ここで、Peptideは前記と同じであり、i は１〜８の整数であり、j は１〜７の整数である。），
【化１７】
2013039190.tif 000111
（ここで、Peptideは前記と同じであり、i は１〜７の整数であり、j は１〜７の整数である。），
【化１８】
2013039190.tif 000112
（ここで、Peptideは前記と同じであり、ｉは２〜７の整数である。），
【化１９】
2013039190.tif 000113
（ここで、Peptideは前記と同じであり、i は１〜１０の整数であり、j は１〜１５の整数である。），
【化２０】
2013039190.tif 000114
（ここで、Peptideは前記と同じであり、i は２〜７の整数である。），及び
【化２１】
2013039190.tif 000115
（ここで、Peptideは前記と同じであり、i は１〜１０の整数である。）
からなる群から選ばれ、かつ、
前記式（２）の−Ｗ1が、以下に表される式（３１）〜（３８）：
【化２２】
2013039190.tif 000116
（ここで、ｉは、１〜７の整数であり、ｊは１〜８の整数であり、ｋは１〜１５の整数であり、ｌは０〜８の整数であり、ｈは１〜５の整数であり、Ｘは、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩである）
からなる群から選ばれる、請求項２に記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。
【請求項５】
前記式（１）の−Ｗ−Peptideが、下記式：
【化２３】
2013039190.tif 000117
（ここで、Peptideは前記と同じである。）であり、前記式（２）のＷ1が、下記式：
【化２４】
2013039190.tif 000118
である請求項２に記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。
【請求項６】
前記スペーサーＶが、重量平均分子量が５０〜１０００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のポリエチレングリコール、又は分子量が１０〜５００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のアルキレン鎖、或いはそれらの組合せである、請求項１〜５のいずれかに記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。
【請求項７】
下記式（４）
【化２５】
2013039190.tif 000119
で表される反復単位、及び下記式（５）
【化２６】
2013039190.tif 000120
で表される反復単位を含む抗菌性ペプチド含有ポリマー。
【請求項８】
下記式（１）、（２）及び（３）
【化２７】
2013039190.tif 000121
で表される反復単位を含む抗菌性ペプチド含有ポリマーであって、
式（１）中、Ｕ1がＯで、−Ｖ−Ｗ−Peptideが、−ＰＥＧ−Ｓ−Ｃｙｓ−Peptide（ここで、ＰＥＧは、重量平均分子量が１０〜２０００のポリエチレングリコールである。）又は-ＣＨ2ＣＨＯＨＣＨ2−Ｓ-Ｃｙｓ-Peptide、又は、Ｕ1がＮＨで、−Ｖ−Ｗ−Peptideが、-Peptide、−（ＣＨ2）3−Ｓ−Ｃｙｓ−Peptide、−ＣＨ2−（Ｃ2Ｈ4Ｏ）3−Ｃ3Ｈ6−ＮＨ−ＣＯＣＨ2−Ｓ−Ｃｙｓ−Peptide、及び下記式：
【化２８】
2013039190.tif 000122
からなる群より選ばれ、かつ、
式（３）中、Ｕ3がＯで、−Ｙ−Ｈが、−（ＣＨ2）11−ＣＨ3、又は−ＰＥＧ−Ｒ3（ここで、ＰＥＧは、重量平均分子量が１０〜２０００のポリエチレングリコールであり、Ｒ3はＯＨ又はＣＨ3である。）、又はＵ3がＮＨで、−Ｙが単結合である、請求項２に記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。
【請求項９】
前記ポリマー中に、前記Peptide含有単位を１〜１００モル％の割合で含有する請求項１〜８のいずれかに記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。
【請求項１０】
前記ポリマー中に、前記Peptide含有単位を、０．４〜２０モル％の割合で含有する請求項９に記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。
【請求項１１】
前記ペプチドが、
−ＨＮ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、−ＮＨ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、−ＮＨ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、−ＨＮ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、−ＨＮ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、−ＮＨ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、−ＮＨ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、−ＨＮ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、Ｈ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ−、Ｈ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ−、Ｈ2Ｎ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ−、Ｈ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ−、Ｈ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ−、Ｈ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ−、Ｈ2Ｎ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ−、及びＨ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ−からなる群より選ばれるペプチドである請求項１〜１０のいずれかに記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれかに記載の抗菌性ペプチド含有ポリマーが繊維上にコーティングされた抗菌性繊維。
【請求項１３】
前記抗菌性ペプチド含有ポリマーが、ペプチド存在量で、布１ｃｍ2あたり０．００１μモル以上０．３μモル以下存在する、請求項１２に記載の抗菌性繊維。
【請求項１４】
医療用用途またはサニタリー用途における請求項１２または１３に記載の抗菌性繊維の使用。
【請求項１５】
請求項１〜１１のいずれかに記載の抗菌性ペプチド含有ポリマーを繊維上にコーティングすることにより、抗菌性ペプチドを繊維に固定化する方法。
【請求項１６】
請求項１〜１１のいずれかに記載の抗菌性ペプチド含有ポリマーを含有するポリマーエマルジョン。
【請求項１７】
下記式（９）
【化２９】
2013039190.tif 000123
（式中Ｒ1は、水素原子又はメチル基であり、Ｕ1は、Ｏ又はＮＨであり、Ｖは、単結合又はスペーサーであり、Ｗoは、ペプチド又は誘導体化したペプチドと反応する官能基である。）
で表される反復単位を含むポリマーに、下記式（１０）：
【化３０】
2013039190.tif 000124
（ここで、Peptideは、下記式で表されるアミノ酸配列：
−ＮＨ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯＮＨ2、又はＨ2Ｎ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯ−（式中、Ｘ１はＡｒｇ又はＡｌａであり、Ｘ２はＴｙｒ、Ａｒｇ又はＬｅｕであり、Ｘ３はＡｒｇ又はＡｌａであり、X４はＩｌｅ又はＬｅｕ又はＶａｌであり、Ｘ５はＧｌｙ又はＡｒｇであり、Ｘ６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり、Ｘ７は、Ａｒｇ又はＬｙｓである。ここで、Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2又はＬｙｓ−ＣＯＮＨ2は、Ａｒｇ又はＬｙｓのカルボキシル基がアミド化していることを示す。）より選ばれる抗菌活性を有するペプチドである。）より選ばれ、Ｚは、水素原子、水酸基、Ｃｙｓ又はＷoと反応しリンカーを形成する官能基を有する分子量５０〜５００の分子である。）
で表されるペプチド又はその誘導体を反応させることにより、抗菌性ペプチド含有ポリマーを作製する方法。
【請求項１８】
下記式（９）および（３）
【化３１】
2013039190.tif 000125
（式中Ｒ1及びＲ3は、それぞれ独立に水素原子又はメチル基であり、Ｕ1及びＵ3は、それぞれ独立にＯ又はＮＨであり、Ｖは、単結合又はスペーサーであり、Ｗoは、ペプチド又は誘導体化したペプチドと反応する官能基であり、Ｙは、単結合又は分子量１０〜３０００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のアルキレン鎖又はポリオキシアルキレン鎖である。）
で表される反復単位を含むポリマーに、下記式（１０）：
【化３２】
2013039190.tif 000126
（ここで、Peptideは、下記式で表されるアミノ酸配列：
−ＮＨ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯＮＨ2、又はＨ2Ｎ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯ−（式中、Ｘ１はＡｒｇ又はＡｌａであり、Ｘ２はＴｙｒ、Ａｒｇ又はＬｅｕであり、Ｘ３はＡｒｇ又はＡｌａであり、X４はＩｌｅ又はＬｅｕ又はＶａｌであり、Ｘ５はＧｌｙ又はＡｒｇであり、Ｘ６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり、Ｘ７は、Ａｒｇ又はＬｙｓである。ここで、Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2又はＬｙｓ−ＣＯＮＨ2は、Ａｒｇ又はＬｙｓのカルボキシル基がアミド化していることを示す。）より選ばれる抗菌活性を有するペプチドである。）より選ばれ、Ｚは、水素原子、水酸基、Ｃｙｓ又はＷｏと反応しリンカーを形成する官能基を有する分子量５０〜５００の分子である。）
で表されるペプチド又はその誘導体を反応させることにより、抗菌性ペプチド含有ポリマーを作製する方法。
【請求項１９】
前記式（９）で表される反復単位が下記式（６）
【化３３】
2013039190.tif 000127
（ここで、式中Ｒ2は、水素原子又はメチル基である。）
であり、かつ、前記ペプチドが、前記式（１０）においてＺがＣｙｓである、請求項１７又は１８に記載の方法。
【請求項２０】
以下の工程：
工程（１）：下記式（９）
【化３４】
2013039190.tif 000128
（式中Ｒ1は、水素原子又はメチル基であり、Ｕ1は、Ｏ又はＮＨであり、Ｖは、単結合又はスペーサーであり、Ｗoは、ペプチドまたは誘導体化したペプチドと反応する官能基である。）
で表される反復単位を含むポリマーを含む溶液を繊維にコーティングする工程、及び
工程（２）：下記式：
【化３５】
2013039190.tif 000129
（ここで、Peptideは、下記式で表されるアミノ酸配列：
−ＮＨ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯＮＨ2、又はＨ2Ｎ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯ−（式中、Ｘ１はＡｒｇ又はＡｌａであり、Ｘ２はＴｙｒ、Ａｒｇ又はＬｅｕであり、Ｘ３はＡｒｇ又はＡｌａであり、X４はＩｌｅ又はＬｅｕ又はＶａｌであり、Ｘ５はＧｌｙ又はＡｒｇであり、Ｘ６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり、Ｘ７は、Ａｒｇ又はＬｙｓである。ここで、Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2又はＬｙｓ−ＣＯＮＨ2は、Ａｒｇ又はＬｙｓのカルボキシル基がアミド化していることを示す。）より選ばれる抗菌活性を有するペプチドである。）より選ばれ、Ｚは、水素原子、水酸基、Ｃｙｓ又はＷoと反応しリンカーを形成する官能基を有する分子量５０〜５００の分子である。）
で表される抗菌性ペプチド又はその誘導体を含む溶液に、前記ポリマー溶液をコーティングした繊維を浸漬する工程、及び
工程（３）：１〜１０時間放置することによりポリマーにペプチドを結合させた後、該繊維を洗浄して未反応のペプチド又はその誘導体を除去するする工程、
からなる抗菌性繊維の製造方法。
【請求項２１】
以下の工程：
工程（１）：下記式（９）および（３）
【化３６】
2013039190.tif 000130
（式中Ｒ1及びＲ3は、それぞれ独立に水素原子又はメチル基であり、Ｕ1及びＵ3は、それぞれ独立にＯ又はＮＨであり、Ｖは、単結合又はスペーサーであり、Ｗoは、ペプチド又は誘導体化したペプチドと反応する官能基であり、Ｙは、単結合又は分子量１０〜３０００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のアルキレン鎖又はポリオキシアルキレン鎖である。）
で表される反復単位を含むポリマーを含む溶液を繊維にコーティングする工程、及び
工程（２）：下記式：
【化３７】
2013039190.tif 000131
（ここで、Peptideは、下記式で表されるアミノ酸配列：
−ＮＨ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯＮＨ2、又はＨ2Ｎ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯ−（式中、Ｘ１はＡｒｇ又はＡｌａであり、Ｘ２はＴｙｒ、Ａｒｇ又はＬｅｕであり、Ｘ３はＡｒｇ又はＡｌａであり、X４はＩｌｅ又はＬｅｕ又はＶａｌであり、Ｘ５はＧｌｙ又はＡｒｇであり、Ｘ６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり、Ｘ７は、Ａｒｇ又はＬｙｓである。ここで、Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2又はＬｙｓ−ＣＯＮＨ2は、Ａｒｇ又はＬｙｓのカルボキシル基がアミド化していることを示す。）より選ばれる抗菌活性を有するペプチドである。）より選ばれ、Ｚは、水素原子、水酸基、Ｃｙｓ又はＷoと反応しリンカーを形成する官能基を有する分子量５０〜５００の分子である。）
で表される抗菌性ペプチド又はその誘導体を含む溶液に、前記ポリマー溶液をコーティングした繊維を浸漬する工程、及び
工程（３）：１〜１０時間放置することによりポリマーにペプチドを結合させた後、該繊維を洗浄して未反応のペプチド又はその誘導体を除去するする工程、
からなる抗菌性繊維の製造方法。
【請求項２２】
前記式（９）で表される反復単位が下記式（６）
【化３８】
2013039190.tif 000132
（ここで、式中Ｒ2は、水素原子又はメチル基である。）
であり、かつ、前記ペプチドが、前記式１０においてＺがＣｙｓである、請求項２０又は２１に記載の抗菌性繊維の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なペプチド含有ポリマーに関する。本発明はまた、ペプチドを繊維に固定化する新規な方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年では、抗生物質に耐性を持った薬剤耐性菌が先進国を中心に蔓延しており、集団感染や院内感染を引き起こしている。特に、メチシリンに耐性を持つメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）による感染例は、国内で年間二万件以上報告されている。感染経路は、複雑であり特定は困難であるが病院内で使用するベッドシーツ、白衣なども感染リスク要因と考えられている。【０００３】
発明者らは、これらの問題を解決するため、石橋らにより発明されたカブトムシディフェンシン由来の改変ペプチド（非特許文献１）を固定化した抗菌繊維を開発した。綿にスペーサーと呼ばれる分子鎖を結合し、その末端のアミノ基を起点としてアミノ酸合成を行い、綿上で９残基の改変ペプチドを合成した。抗菌試験の結果、MRSAに強い抗菌活性が認められ、繰り返し使用しても活性を維持していることが明らかになった（特許文献１、非特許文献２）。しかしながら、この方法は、繊維の前処理など加工方法が煩雑であり、既存の繊維加工技術で実施することは困難である。また、アミノ酸の縮合反応、保護基の脱保護反応を全て綿上で行うため、繊維自体の機械的強度も低下するため、実用化するには新たな加工方法の開発が必要であった。【０００４】
また、水溶液中で陽性に荷電される抗菌ペプチドである、Lys１５個が連結した分岐型ペプチドのＮ末端に抗菌性ペプチドを連結した抗菌性マルチプルアンチゲンペプチドを樹脂系固着剤で繊維に固着した抗菌性繊維が報告されている（特許文献２）。しかしながら、樹脂系固着剤で固着したペプチドは、固着されることによって一部が活性を消失してしまう恐れがあり、必要以上の抗菌ペプチドを固着させることが必要である。また、樹脂系固着剤で固着できるペプチドも限られてしまう。【０００５】
そこで、繊維に固定されたペプチドの活性が使用において十分に維持され、かつ、繊維上でのアミノ酸の合成反応を伴わない、容易で簡便なペプチドの繊維への新たな固定化法が望まれていた。【０００６】
また、ホスホリルコリン基を有するユニット、疎水性基を有するユニット及びアルデヒド基又はマレイミド基を有するユニット、から構成される高分子化合物を表面に有することを特徴とする生理活性物質固定化基板が報告されている（特許文献３）。しかしながら、繊維へのペプチドの固定化ではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１０−１８４０２２号公報
【特許文献２】特開２０００−４５１８２号公報
【特許文献３】特開２０１０−１１７１８９号公報
【特許文献４】特許第３２７３３１４号公報号公報
【特許文献５】特開２０１０−１８４０２２号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】石橋ら、Eur. J. Biochem, 1999 Dec; 266(2):616-23
【非特許文献２】中村ら、Biomacromolecules, 2011, 12(5):1540-1545
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、抗菌性繊維の製造に用いることができる抗菌性ペプチド（抗菌性を有するカブトムシディフェンシン由来の改変ペプチド）含有ポリマーを提供することである。本発明の目的はまた、比較的容易な手段により、繊維へのダメージが少なく、繰り返しの使用によってもペプチドの固定が維持できる、ペプチド、特には抗菌性ペプチドを繊維へ固定化できる新たな固定化方法を提供することである。本発明の目的はまた、抗菌性ペプチドを有する抗菌性繊維を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、鋭意努力の結果、比較的容易な方法によりペプチドを繊維に固定でき、かつ繊維上でペプチドの活性も維持され、更には、繊維の洗浄を繰り返してもペプチドの活性が維持できることを見いだし、本発明を完成した。
本発明のペプチド含有ポリマーを用いれば、簡易な方法によりペプチドを繊維に固定化することができる。より具体的には、本発明のポリマーを用いることにより、繊維を煩雑な前処理することなく、また、繊維上でペプチド合成をすることなく、繊維にペプチドを固定化することができる。
本発明はまた、ペプチドを繊維に固定化する方法に関する。本発明の方法を用いることにより、簡便な方法で繊維にペプチドを固定化することができる。【００１１】
本発明の一つの態様においては、抗菌性ペプチド（抗菌性を有するカブトムシディフェンシン由来の改変ペプチド）を含有するポリマーが提供され、本発明のポリマーは、簡易な方法により繊維に固定化できる。
本発明の一つの態様においては、抗菌性を有するカブトムシディフェンシン由来の改変ペプチドをポリマー中のリンカー、例えばマレイミド基と結合させてペプチド含有ポリマーを調製し、それを繊維にコーティングすることにより抗菌ペプチドを繊維に固定化できる。【００１２】
本発明の別の態様においては、ペプチドとの結合性を有するリンカー、例えばマレイミド基を有するポリマーを繊維にコーティングした後、ペプチド、特には抗菌性を有するカブトムシディフェンシン由来の改変ペプチドを含む溶液に繊維を浸漬し、ペプチドを繊維に固定化することができる。
本発明の別の態様においては、上記のようにして提供された抗菌性を有するカブトムシディフェンシン由来の改変ペプチドが固定化された抗菌性繊維が提供できる。【００１３】
即ち、以下の発明が提供される。
（１）下記式（１）【００１４】
【化１】
2013039190.tif 000002
（式中Ｒ1は、水素原子又はメチル基であり、Ｕ1は、単結合、Ｏ又はＮＨであり、Ｖは、単結合又はスペーサーであり、Ｗは、単結合或いはアミド基、チオエーテル基、チオエステル基、オキシム基、１，２，３−トリアゾール基、カルボニル基又はエステル基を有するリンカーであり、Peptideは、下記式で表されるアミノ酸配列：
−ＮＨ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯＮＨ2、又はＨ2Ｎ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯ−（式中、Ｘ１はＡｒｇ又はＡｌａであり、Ｘ２はＴｙｒ、Ａｒｇ又はＬｅｕであり、Ｘ３はＡｒｇ又はＡｌａであり、X４はＩｌｅ、Ｌｅｕ又はＶａｌであり、Ｘ５はＧｌｙ又はＡｒｇであり、Ｘ６はＡｒｇ又はＬｙｓであり、Ｘ７はＡｒｇ又はＬｙｓである。ここで、Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2又はＬｙｓ−ＣＯＮＨ2は、Ａｒｇ又はＬｙｓのカルボキシル基がアミド化していることを示す。）より選ばれる抗菌活性を有するペプチドである。）
で表される反復単位を含む抗菌性ペプチド含有ポリマー。【００１５】
（２）さらに、下記式（２）および下記式（３）【００１６】
【化２】
2013039190.tif 000003
（式中Ｒ2及びＲ3は、それぞれ独立に水素原子又はメチル基であり、Ｕ2は、単結合、Ｏ又はＮＨであり、Ｕ3は、Ｏ又はＮＨであり、Ｖは、単結合又はスペーサーであり、Ｗ1は、水素原子又は末端にハロゲンを付加してもよい上記リンカーＷの全部又は一部からなる基であり、Ｙは、単結合又は分子量１０〜３０００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のアルキレン鎖又はポリオキシアルキレン鎖である。）
で表される反復単位のうちの少なくとも一つを含む上記（１）に記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。
（３）前記式（１）〜（３）において、−Ｗ−が、下記式：【００１７】
【化３】
2013039190.tif 000004
（式中、ｔは、１〜７の自然数である。）のいずれかを有するリンカーであり、かつ、Ｙが、単結合又は分子量１０〜３０００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のアルキレン鎖又はポリエチレングリコール鎖である、上記（１）または（２）に記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。
（４）前記式（１）の−Ｗ−Peptideが、以下に表される式（１１）〜（２７）：【００１８】
【化４】
2013039190.tif 000005
（ここで、Peptideは前記と同じである。），【００１９】
【化５】
2013039190.tif 000006
（ここで、Peptideは前記と同じであり、ｉは１〜１５の整数である。），【００２０】
【化６】
2013039190.tif 000007
（ここで、Peptideは前記と同じであり、ｉは１〜７の整数である。），【００２１】
【化７】
2013039190.tif 000008
（ここで、Peptideは前記と同じであり、ｉは、１〜７の整数であり、ｊは、１〜１５の整数である。），【００２２】
【化８】
2013039190.tif 000009
（ここで、Peptideは前記と同じである。），【００２３】
【化９】
2013039190.tif 000010
（ここで、Peptideは前記と同じであり、ｉは、１〜１５の整数である。），【００２４】
【化１０】
2013039190.tif 000011
（ここで、Peptideは前記と同じであり、ｉは１〜８の整数であり、ｊは１〜８の整数である。），【００２５】
【化１１】
2013039190.tif 000012
（ここで、Peptideは前記と同じであり、ｉは１〜７の整数であり、ｊは１〜７の整数である。），【００２６】
【化１２】
2013039190.tif 000013
(ここで、Peptideは前記と同じである。），【００２７】
【化１３】
2013039190.tif 000014
（ここで、Peptideは前記と同じであり、ｉは２〜７の整数である。），【００２８】
【化１４】
2013039190.tif 000015
（ここで、Peptideは前記と同じであり、i は１〜７の整数であり、j は２〜７の整数である。），【００２９】
【化１５】
2013039190.tif 000016
（ここで、Peptideは前記と同じであり、i は１〜１５の整数であり、j は１〜１０の整数である。），【００３０】
【化１６】
2013039190.tif 000017
（ここで、Peptideは前記と同じであり、i は１〜８の整数であり、j は１〜７の整数である。），【００３１】
【化１７】
2013039190.tif 000018
（ここで、Peptideは前記と同じであり、i は１〜７の整数であり、j は１〜７の整数である。），【００３２】
【化１８】
2013039190.tif 000019
（ここで、Peptideは前記と同じであり、ｉは２〜７の整数である。）【００３３】
【化１９】
2013039190.tif 000020
（ここで、Peptideは前記と同じであり、i は１〜１０の整数であり、j は１〜１５の整数である。）, 【００３４】
【化２０】
2013039190.tif 000021
（ここで、Peptideは前記と同じであり、i は２〜７の整数である。）、及び【００３５】
【化２１】
2013039190.tif 000022
（ここで、Peptideは前記と同じであり、i は１〜１０の整数である。）
からなる群から選ばれ、かつ、
前記式（２）の−Ｗ1が、下記式（３１）〜（３８）：【００３６】
【化２２】
2013039190.tif 000023
（ここで、ｉは、１〜７の整数であり、ｊは１〜８の整数であり、ｋは１〜１５の整数であり、ｌは０〜８の整数であり、ｈは１〜５の整数であり、Ｘは、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩである）
からなる群から選ばれる、前記（２）に記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。【００３７】
上記抗菌性ペプチド含有ポリマーにおいて、前記式（１）中の−Ｗ−Peptideと前記式（２）中の−Ｗ1の好ましい組み合わせは、以下に示される組み合わせである。
式（１１）−式（３１）；式（１２）−式（３１）；式（１３）−式（３２）；式（１４）−式（３２）；式（１５）−式（３３）；式（１６）−式（３３）；式（１７）−式（３４）；式（１８）−式（３５）；式（１９）−式（３３）；式（２０）−式（３１）；式（２１）−式（３２）；式（２２）−式（３６）；式（２３）−式（３７）；式（２４）−式（３８）；式（２５）−式（３９）；式（２６）−式（３９）；式（２７）−式（３３）；式（２８）−式（３３）。【００３８】
（５）前記式（１）の−Ｗ−Peptideが、下記式：【００３９】
【化２３】
2013039190.tif 000024
（ここで、Peptideは前記と同じである。）であり、前記式（２）のＷ1が、下記式：【００４０】
【化２４】
2013039190.tif 000025
である前記（２）に記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。【００４１】
（６）前記スペーサーＶが、重量平均分子量が５０〜１０００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のポリエチレングリコール、又は分子量が１０〜５００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のアルキレン鎖、或いはそれらの組合せである、前記（１）〜（５）のいずれかに記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。【００４２】
（７）下記式（４）【００４３】
【化２５】
2013039190.tif 000026
で表される反復単位、及び下記式（５）【００４４】
【化２６】
2013039190.tif 000027
で表される反復単位を含む抗菌性ペプチド含有ポリマー。【００４５】
（８）下記式（１）、（２）及び（３）【００４６】
【化２７】
2013039190.tif 000028
で表される反復単位を含む抗菌性ペプチド含有ポリマーであって、
式（１）中、Ｕ1がＯで、−Ｖ−Ｗ−Peptideが、−ＰＥＧ−Ｓ−Ｃｙｓ−Peptide（ここで、ＰＥＧは、重量平均分子量が１０〜２０００のポリエチレングリコールである。）又は-ＣＨ2ＣＨＯＨＣＨ2−Ｓ-Ｃｙｓ-Peptide、又は、Ｕ1がＮＨで、−Ｖ−Ｗ−Peptideが、-Peptide、−（ＣＨ2）3−Ｓ−Ｃｙｓ−Peptide、−ＣＨ2−（Ｃ2Ｈ4Ｏ）3−Ｃ3Ｈ6−ＮＨ−ＣＯＣＨ2−Ｓ−Ｃｙｓ−Peptide、及び下記式：【００４７】
【化２８】
2013039190.tif 000029
からなる群より選ばれ、かつ、
式（３）中、Ｕ3がＯで、−Ｙ−Ｈが、−（ＣＨ2）11−ＣＨ3、又は−ＰＥＧ−Ｒ3（ここで、ＰＥＧは、重量平均分子量が１０〜２０００のポリエチレングリコールであり、Ｒ3はＯＨ又はＣＨ3である。）、又はＵ3がＮＨで、−Ｙが単結合である、請求項２に記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。【００４８】
（９）前記ポリマー中に、前記Peptide含有単位を１〜１００モル％の割合で含有する前記（１）〜（８）のいずれかに記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。
（１０）前記ポリマー中に、前記Peptide含有単位を、０．４〜２０モル％（より好ましくは、０．４〜２モル％）の割合で含有する前記（９）に記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。【００４９】
（１１）前記ペプチドが、
−ＨＮ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、−ＮＨ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、−ＮＨ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、−ＨＮ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、−ＨＮ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、−ＮＨ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、−ＮＨ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、−ＨＮ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、Ｈ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ−、Ｈ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ−、Ｈ2Ｎ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ−、Ｈ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ−、Ｈ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ−、Ｈ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ−、Ｈ2Ｎ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ−、及びＨ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ−からなる群より選ばれるペプチドである前記（１）〜（１０）のいずれかに記載の抗菌性ペプチド含有ポリマー。【００５０】
（１２）前記（１）〜（１１）のいずれかに記載の抗菌性ペプチド含有ポリマーが繊維上にコーティングされた抗菌性繊維。
（１３）前記抗菌性ペプチド含有ポリマーが、ペプチド存在量で、布１ｃｍ2あたり０．００１μモル以上０．３μモル以下存在する、前記（１２）に記載の抗菌性繊維。
（１４）医療用用途またはサニタリー用途における前記（１１）または（１２）に記載の抗菌性繊維。
（１５）前記（１）〜（１１）のいずれかに記載の抗菌性ペプチド含有ポリマーを繊維上にコーティングすることにより、抗菌性ペプチドを繊維に固定化する方法。
（１６）前記（１）〜（１１）のいずれかに記載の抗菌性ペプチド含有ポリマーを含有するポリマーエマルジョン。【００５１】
（１７）下記式（９）【００５２】
【化２９】
2013039190.tif 000030
（式中Ｒ1は、水素原子又はメチル基であり、Ｕ1は、Ｏ又はＮＨであり、Ｖは、単結合又はスペーサーであり、Ｗoは、ペプチド又は誘導体化したペプチドと反応する官能基である。）
で表される反復単位を含むポリマーに、下記式（１０）：【００５３】
【化３０】
2013039190.tif 000031
（ここで、Peptideは、下記式で表されるアミノ酸配列：
−ＮＨ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯＮＨ2、又はＨ2Ｎ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯ−（式中、Ｘ１はＡｒｇ又はＡｌａであり、Ｘ２はＴｙｒ、Ａｒｇ又はＬｅｕであり、Ｘ３はＡｒｇ又はＡｌａであり、X４はＩｌｅ又はＬｅｕ又はＶａｌであり、Ｘ５はＧｌｙ又はＡｒｇであり、Ｘ６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり、Ｘ７は、Ａｒｇ又はＬｙｓである。ここで、Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2又はＬｙｓ−ＣＯＮＨ2は、Ａｒｇ又はＬｙｓのカルボキシル基がアミド化していることを示す。）より選ばれる抗菌活性を有するペプチドである。）より選ばれ、Ｚは、水素原子、水酸基、Ｃｙｓ又はＷoと反応しリンカーを形成する官能基（例えば、アジド基、スルフヒドリル基、ハロゲン基、アルキン基、カルボニル基、ヒドロキシルアミノ基）を有する分子量５０〜５００の分子である。）
で表されペプチド又はその誘導体を反応させることにより、抗菌性ペプチド含有ポリマーを作製する方法。【００５４】
（１８）下記式（９）および（３）【００５５】
【化３１】
2013039190.tif 000032
（式中Ｒ1及びＲ3は、それぞれ独立に水素原子又はメチル基であり、Ｕ1及びＵ3は、それぞれ独立にＯ又はＮＨであり、Ｖは、単結合又はスペーサーであり、Ｗoは、ペプチド又は誘導体化したペプチドと反応する官能基であり、Ｙは、単結合又は分子量１０〜３０００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のアルキレン鎖又はポリオキシアルキレン鎖である。）
で表される反復単位を含むポリマーに、下記式（１０）：【００５６】
【化３２】
2013039190.tif 000033
（ここで、Peptideは、下記式で表されるアミノ酸配列：
−ＮＨ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯＮＨ2、又はＨ2Ｎ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯ−（式中、Ｘ１はＡｒｇ又はＡｌａであり、Ｘ２はＴｙｒ、Ａｒｇ又はＬｅｕであり、Ｘ３はＡｒｇ又はＡｌａであり、X４はＩｌｅ又はＬｅｕ又はＶａｌであり、Ｘ５はＧｌｙ又はＡｒｇであり、Ｘ６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり、Ｘ７は、Ａｒｇ又はＬｙｓである。ここで、Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2又はＬｙｓ−ＣＯＮＨ2は、Ａｒｇ又はＬｙｓのカルボキシル基がアミド化していることを示す。）より選ばれる抗菌活性を有するペプチドである。）より選ばれ、Ｚは、水素原子、水酸基、Ｃｙｓ又はＷoと反応しリンカーを形成する官能基（例えば、アジド基、スルフヒドリル基、ハロゲン基、アルキン基、カルボニル基、ヒドロキシルアミノ基）を有する分子量５０〜５００の分子である。）
で表されペプチド又はその誘導体を反応させることにより、抗菌性ペプチド含有ポリマーを作製する方法。【００５７】
（１９）１前記式（９）で表される反復単位が下記式（６）【００５８】
【化３３】
2013039190.tif 000034
（ここで、式中Ｒ2は、水素原子又はメチル基である。）
であり、かつ、前記ペプチドが、前記式（１０）においてＺがＣｙｓである、前記（１７）又は（１８）に記載の方法。【００５９】
（２０）以下の工程：
工程（１）：下記式（９）【００６０】
【化３４】
2013039190.tif 000035
（式中Ｒ1は、水素原子又はメチル基であり、Ｕ1は、Ｏ又はＮＨであり、Ｖは、単結合又はスペーサーであり、Ｗoは、ペプチドまたは誘導体化したペプチドと反応する官能基である。）
で表される反復単位を含むポリマーを含む溶液を繊維にコーティングする工程、及び
工程（２）：下記式：【００６１】
【化３５】
2013039190.tif 000036
（ここで、Peptideは、下記式で表されるアミノ酸配列：
−ＮＨ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯＮＨ2、又はＨ2Ｎ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯ−（式中、Ｘ１はＡｒｇ又はＡｌａであり、Ｘ２はＴｙｒ、Ａｒｇ又はＬｅｕであり、Ｘ３はＡｒｇ又はＡｌａであり、X４はＩｌｅ又はＬｅｕ又はＶａｌであり、Ｘ５はＧｌｙ又はＡｒｇであり、Ｘ６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり、Ｘ７は、Ａｒｇ又はＬｙｓである。ここで、Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2又はＬｙｓ−ＣＯＮＨ2は、Ａｒｇ又はＬｙｓのカルボキシル基がアミド化していることを示す。）より選ばれる抗菌活性を有するペプチドである。）より選ばれ、Ｚは、水素原子、水酸基、Ｃｙｓ又はＷoと反応しリンカーを形成する官能基（例えば、アジド基、スルフヒドリル基、ハロゲン基、アルキン基、カルボニル基、ヒドロキシルアミノ基）を有する分子量５０〜５００の分子である。）
で表される抗菌性ペプチド又はその誘導体を含む溶液に、前記ポリマー溶液をコーティングした繊維を浸漬する工程、及び
工程（３）：１〜１０時間放置することによりポリマーにペプチドを結合させた後、該繊維を洗浄して未反応のペプチド又はその誘導体を除去するする工程、
からなる抗菌性繊維の製造方法。【００６２】
（２１）以下の工程：
工程（１）：下記式（９）および（３）【００６３】
【化３６】
2013039190.tif 000037
（式中Ｒ1及びＲ3は、それぞれ独立に水素原子又はメチル基であり、Ｕ1及びＵ3は、それぞれ独立にＯ又はＮＨであり、Ｖは、単結合又はスペーサーであり、Ｗoは、ペプチド又は誘導体化したペプチドと反応する官能基であり、Ｙは、単結合又は分子量１０〜３０００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のアルキレン鎖又はポリオキシアルキレン鎖である。）
で表される反復単位を含むポリマーを含む溶液を繊維にコーティングする工程、及び
工程（２）：下記式（１０）：【００６４】
【化３７】
2013039190.tif 000038
（ここで、Peptideは、下記式で表されるアミノ酸配列：
−ＮＨ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯＮＨ2、又はＨ2Ｎ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯ−（式中、Ｘ１はＡｒｇ又はＡｌａであり、Ｘ２はＴｙｒ、Ａｒｇ又はＬｅｕであり、Ｘ３はＡｒｇ又はＡｌａであり、X４はＩｌｅ又はＬｅｕ又はＶａｌであり、Ｘ５はＧｌｙ又はＡｒｇであり、Ｘ６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり、Ｘ７は、Ａｒｇ又はＬｙｓである。ここで、Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2又はＬｙｓ−ＣＯＮＨ2は、Ａｒｇ又はＬｙｓのカルボキシル基がアミド化していることを示す。）より選ばれる抗菌活性を有するペプチドである。）より選ばれ、Ｚは、水素原子、水酸基、Ｃｙｓ又はＷoと反応しリンカーを形成する官能基（例えば、アジド基、スルフヒドリル基、ハロゲン基、アルキン基、カルボニル基、ヒドロキシルアミノ基）を有する分子量５０〜５００の分子である。）
で表される抗菌性ペプチド又はその誘導体を含む溶液に、前記ポリマー溶液をコーティングした繊維を浸漬する工程、及び
工程（３）：１〜１０時間放置することによりポリマーにペプチドを結合させた後、該繊維を洗浄して未反応のペプチド又はその誘導体を除去するする工程、
からなる抗菌性繊維の製造方法。【００６５】
（２２）前記式（９）で表される反復単位が下記式（６）【００６６】
【化３８】
2013039190.tif 000039
（ここで、式中Ｒ2は、水素原子又はメチル基である。）
であり、かつ、前記ペプチドが、前記式（１０）においてＺがＣｙｓである、前記（２０）又は（２１）に記載の抗菌性繊維の製造方法。【００６７】
本発明の抗菌性ペプチド含有ポリマーは、以下のように表すこともできる。
下記式（１ａ）：【００６８】
【化３９】
2013039190.tif 000040
（式中ｎは自然数であり、ｍ１は０又は自然数であり、Ｒ1、R2、Ｕ1、Ｕ2、Ｖ、Ｗ、Ｗ1、Peptideは、前記と同じである）で表される抗菌性ペプチド含有ポリマー、又は、
下記式（２ａ）：【００６９】
【化４０】
2013039190.tif 000041
（式中ｎ及びｍ２は自然数であり、Ｒ1、R3、Ｕ1、Ｕ3、Ｖ、Ｗ、Ｙ、Peptideは、前記と同じである。）で表される抗菌性ペプチド含有ポリマー、又は、
下記式（３ａ）：【００７０】
【化４１】
2013039190.tif 000042
（式中ｎ、ｍ１及びｍ２は自然数であり、Ｒ1、R2、R3、Ｕ1、Ｕ2、Ｕ3、Ｖ、Ｗ、Ｗ1Ｙ、及びPeptideは、前記と同じである。）で表される抗菌性ペプチド含有ポリマー。【００７１】
本発明の抗菌性ペプチド含有ポリマーは、以下のように表すこともできる。
下記式（４ａ）：【００７２】
【化４２】
2013039190.tif 000043
（ここで、ｎは自然数であり、ｍ１は０又は自然数であり、Peptideは前記と同じである。）で表される抗菌性ペプチド含有ポリマー。【００７３】
本発明の抗菌性ペプチド含有ポリマーを作製する方法は、以下のように表すこともできる。
工程（１）；下記式（１ｂ）：【００７４】
【化４３】
2013039190.tif 000044
（式中、ｎは自然数であり、ｍ2は０又は自然数であり、Ｒ1、Ｒ3、Ｕ1、Ｕ3、Ｖ、Ｗo、Ｙは、上記と同じである。）
で表されるポリマーに、下記式（１０）：【００７５】
【化４４】
2013039190.tif 000045
（式中、Peptideは、上記と同じであり、Ｚは、水素原子、水酸基、Ｃｙｓ又はＷoと反応しリンカーを形成する官能基（例えば、アジド基、スルフヒドリル基、ハロゲン基、アルキン基、カルボニル基、ヒドロキシルアミノ基）を有する分子量５０〜５００の分子である。）
で表されるペプチド又はその誘導体を反応させることにより、抗菌性ペプチド含有ポリマーを作製する方法。【００７６】
本発明の抗菌性繊維を製造する方法は、以下のように表すこともできる。
下記式（１ｂ）：【００７７】
2013039190.tif 000046
（式中、ｎは自然数であり、ｍ2は０又は自然数であり、Ｒ1、Ｒ3、Ｕ1、Ｕ3、Ｖ、Ｗo、Ｙは、上記と同じである。）
で表されるポリマーを含む溶液を繊維にコーティングする工程、及び
工程（２）；下記式（１０）：【００７８】
【化４５】
2013039190.tif 000047
（ここで、Peptideは、上記と同じであり、Ｚは、水素原子、水酸基、Ｃｙｓ又はＷoと反応しリンカーを形成する官能基（例えば、アジド基、スルフヒドリル基、ハロゲン基、アルキン基、カルボニル基、ヒドロキシルアミノ基）を有する分子量５０〜５００の分子である。）
で表される抗菌性ペプチド又はその誘導体を含む溶液に、前記ポリマーをコーティングした繊維を浸漬する工程、及び
工程（３）；１〜１０時間放置することによりポリマーにペプチドを結合させた後、該繊維を洗浄して未反応のペプチド又はその誘導体を除去するする工程、
からなる抗菌性繊維の製造方法。
【発明の効果】
【００７９】
本発明の一つの態様に従って、抗菌性繊維の製造に用いることができる抗菌性ペプチド（カブトムシディフェンシン由来改変ペプチド）含有ポリマーが提供できる。
本発明の別の態様に従って、抗菌性ペプチド含有ポリマーを用いて、比較的容易な工程により、ペプチドがその活性を保持したまま固定化された繊維が提供できる。
本発明の他の一つの態様に従って、比較的容易なペプチドの固定化方法により、ペプチド、特には抗菌性ペプチドが固定化された繊維が提供できる。
このようにして提供される繊維は、ペプチドの活性を維持でき、特に、抗菌ペプチドを用いた場合は、提供される繊維は、抗菌活性を有し繰り返しの洗浄及び／又はオートクレーブによる滅菌処理を行っても抗菌活性を維持できる。
本発明の繊維はまた安全性に優れているので、医療用用途、例えば、医療用包帯、シート、衣類等にも用いることができる。
【発明を実施するための形態】
【００８０】
本明細書において、「Ａ〜Ｂ」と表記する場合は、Ａを含みＡ以上であり、かつＢを含みＢ以下であることを意味する。
本明細書において「繊維」とは、特に断りのない限り、糸または布地の原料としての繊維、その繊維から作られた糸、その糸から作られた布地あるいは繊維から作られた不織布のいずれも含む意味に用いられるが、「ポリマーを繊維にコーティングする」という場合は、糸または布地の原料としての繊維を意味する。一方、「ポリマーがコーティングされた繊維」という場合は、ポリマーがコーティングされた糸または布地の原料としての繊維、そのポリマーがコーティングされた繊維から作られた糸、その糸から作られた布地のいずれも含む。
本明細書において、ポリペプチド及びペプチドは、特に断りのない限りは同じ意味で用いられ、互いに変更可能である。
本明細書において、−Ｓ−Ｃｙｓ−Peptideと表記する場合は、Ｓはシステイン中のＳを意味する。
本明細書において、ペプチドを表記する場合は、例えば、Ｌｅｕは、ロイシン残基を意味する。
本明細書において、例えば、Ａ及びＢをポリマー内にランダムに有するポリマーを表す場合は、以下の何れの様式で表すこともできる。
下記式：
【００８１】
【化４６】
2013039190.tif 000048
及び下記式：
2013039190.tif 000049
の繰り返し単位を有するポリマー、又は
下記式：
【００８２】
【化４７】
2013039190.tif 000050
（ここで、ｎおよびｍは自然数である。）
で表されるポリマー。
【００８３】
本発明は、その一つの態様において、下記式で示される抗菌性ペプチド含有ポリマーを提供するものである。下記式（１ａ）：
【００８４】
【化４８】
2013039190.tif 000051
（式中Ｒ1及びR2は、それぞれ独立に水素原子又はメチル基であり、ｎは自然数であり、ｍ１は０又は自然数であり、Ｕ1及びＵ2は、それぞれ独立にＯ又はＮＨであり、Ｖは、単結合又はスペーサーであり、Ｗは、単結合或いは、アミド基、チオエーテル基、チオエステル基、オキシム基、１，２，３−トリアゾール基又はエステル基を有するリンカーであり、Ｗ1は、水素原子又は末端にハロゲンを付加してもよいリンカーＷの全部又は一部からなる基であり、Peptideは、下記式で表されるアミノ酸配列：−ＮＨ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯＮＨ2、又はＨ2Ｎ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯ−（式中、Ｘ１はＡｒｇ又はＡｌａであり、Ｘ２はＴｙｒ、Ａｒｇ又はＬｅｕであり、Ｘ３はＡｒｇ又はＡｌａであり、X４はＩｌｅ又はＬｅｕ又はＶａｌであり、Ｘ５はＧｌｙ又はＡｒｇであり、Ｘ６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり、Ｘ７は、Ａｒｇ又はＬｙｓである。ここで、Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2又はＬｙｓ−ＣＯＮＨ2は、Ａｒｇ又はＬｙｓのカルボキシル基がアミド化していることを示す。）より選ばれる抗菌活性を有するポリペプチドである。）で表される抗菌性ペプチド含有ポリマー、下記式（２ａ）：
【００８５】
【化４９】
2013039190.tif 000052
（式中Ｒ1及びR3は、それぞれ独立に水素原子又はメチル基であり、ｎは自然数であり、ｍ２は自然数であり、Ｕ1は、単結合、Ｏ又はＮＨであり、Ｕ3は、Ｏ又はＮＨであり、Ｖ、Ｗ、及びPeptideは、上記と同じであり、Ｙは、水素原子又は分子量１０〜３０００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のアルキレン鎖又はポリオキシアルキレン鎖である。）で表される抗菌性ペプチド含有ポリマー、又は下記式（３ａ）：
【００８６】
【化５０】
2013039190.tif 000053
（式中Ｒ1、Ｒ2及びR3は、それぞれ独立に水素原子又はメチル基であり、ｎ、ｍ１、及びｍ２は自然数であり、Ｕ1及びＵ2は、それぞれ独立に単結合、Ｏ又はＮＨであり、Ｕ3は、Ｏ又はＮＨでありＶ、Ｗ、Peptide、及びＹは、上記と同じである。）
で表される抗菌性ペプチド含有ポリマー。
【００８７】
本発明の抗菌性ペプチド含有ポリマーは、ホモポリマーであっても共重合体であっても良い。また、Peptideは、全てのモノマー単位に結合しても、一部のモノマー単位に結合しても良い。ポリマー中のPeptideが結合した単位（上記、R-C(CH2)-CO-U1-V-W-Peptideを意味し、本明細書では「Peptide含有単位」という。）の割合は、ポリマーを布にコーティング（塗布）した場合に目的の量のペプチドを塗布できる限り特に制限されず、０．１〜１００モル％であるが、好ましくは０．４〜２０モル％、より好ましくは０．４〜２モル％である。ポリマー中のペプチド含有単位の割合を調整することにより、生地へのポリマーの付与（コーティング）量を制御でき、目的の抗菌性を持った均質で好適な抗菌性繊維を容易に製造できる。ポリマー中のPeptideが結合していない単位（上記、R-C(CH2)-CO-U2-V-W1及び／又はR-C(CH2)-CO-U3-Yを意味し、本明細書では「Peptide非含有単位」という。）の割合を適宜選択することにより、適当な物性、例えば粘度や溶解性を得ることができる。特には、共重合体において、Peptide非含有単位（R-C(CH2)-CO-U3-Y）を適宜選択することにより、目的の物性をポリマーに与えることができる。
Ｙは、単結合又は分子量１０〜３０００、好ましくは１００〜２０００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のアルキレン鎖又はポリオキシアルキレン鎖である。Ｙの長さや種類を適宜選択することにより、ポリマーの物性を変更することができる。
【００８８】
上記Peptideを構成するペプチドは、下記式で示されるアミノ酸配列からなるカブトムシディフェンシン由来改変ペプチドから選ばれ、該ペプチドはそのＮ末端又はＣ末端のいずれもリンカーに結合できる。
Ｈ2Ｎ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯＮＨ2（式中、Ｘ１はＡｒｇ又はＡｌａであり、Ｘ２はＴｙｒ、Ａｒｇ又はＬｅｕであり、Ｘ３はＡｒｇ又はＡｌａであり、X４はＩｌｅ又はＬｅｕ又はＶａｌであり、Ｘ５はＧｌｙ又はＡｒｇであり、Ｘ６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり、Ｘ７は、Ａｒｇ又はＬｙｓである。ここで、Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2又はＬｙｓ−ＣＯＮＨ2は、Ａｒｇ又はＬｙｓのカルボキシル基がアミド化していることを示す。）。
【００８９】
特に好ましくは、上記ペプチドは、Ｈ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、Ｈ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、Ｈ2Ｎ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、Ｈ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2、Ｈ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ2、Ｈ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ2、Ｈ2Ｎ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯ2及びＨ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2かららなる群より選ばれ、特に好ましくは、Ｈ2Ｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2である。
【００９０】
本発明において抗菌性ペプチドとして用いることができるカブトムシディフェンシン由来の改変ペプチドは、例えば、特許第３２７３３１４号公報、特開２０１０−１８４０２２号公報、及び石橋ら、Eur. J. Biochem、1999 Dec; 266(2):616-23に記載されており、これらの文献は、引用することにより本明細書の一部である。
【００９１】
ペプチドの合成は、任意の慣用のペプチド合成法（固相合成、及び／又は液相合成）を用いて行うことができる。また、ポリマーとペプチドとをＣｙｓを介して結合する場合は、ペプチド合成において、合成ポリペプチドのＣ末端又はＮ末端にＣｙｓを導入することが可能であり、簡便である
【００９２】
上記式（１ａ）中のＷは、ペプチドを固定化するためのリンカーである。リンカーは、ペプチドのＮ末端又はＣ末端をスペーサー又は直接ポリマー鎖の側鎖末端に結合するためのものであり、ペプチドのＮ末端又はＣ末端に導入することも、またスペーサーのペプチド結合部位に導入することも可能である。リンカーとしては、例えば、チオエーテル基、チオエステル基、オキシム基、１，２，３−トリアゾール基又はエステル基を有する化合物又はそれらの基そのものあげることができ、好ましくは、アミド基、チオエーテル基を有する化合物又はそれらの基であるが、これらに限定されない。本明細書では、リンカー又はその一部が導入されたペプチド等、本発明の目的に合わせてペプチドが修飾されたものを、ペプチド誘導体と言う。
【００９３】
ペプチド末端又はスペーサー末端の一方にリンカーを導入する場合は、リンカーを導入しないペプチド末端又はスペーサー末端の官能基と反応性を有するリンカーを、リンカーが導入されるペプチド末端又はスペーサー末端に導入し、結合反応を行うことによりペプチドをスペーサーに結合できる。
ペプチド末端及びスペーサー末端の両者にリンカーを導入する場合は、一方にリンカーを構成する一部（リンカーパーツＷX）を導入し、他方にリンカーを構成する他の一部（リンカーパーツＷY）を導入し、両リンカーパーツを反応させることにより、ペプチドをスペーサーに結合できる。その結果、Ｗx及びＷyからリンカーＷが作られる。
上記においてスペーサーを用いない場合は、ポリマー鎖の側鎖末端にリンカー又はリンカーパーツを導入して、ポリマー鎖の側鎖末端に直接ペプチドを結合することもできる。
【００９４】
ペプチドのＮ末端のアミノ基又はＣ末端のカルボキシル基と反応性を有する官能基を結合に用いる場合は、リンカーはアミド基又はエステル基となる。リンカーとなる当該官能基をスペーサーの末端に導入することもできるが、それを末端に有するスペーサーを用いることもできる。
リンカー部位は、ペプチドのＮ末端又はＣ末端、或いはスペーサー末端のいずれかに導入してリンカーとしての機能を果たすことができるが、ペプチド末端及びスペーサー末端の両者に導入して、それぞれのリンカー部位が反応してリンカーとしての機能を果たすこともできる。例えば、ペプチド末端及びスペーサー末端のいずれかにチオールを導入し、他方にマレイミド基を導入して、チオールとマレイミド基の反応により、チオエーテル基を有するリンカーを介してペプチドをスペーサーに結合することもできる。
【００９５】
ペプチドのＮ末端がスペーサーに結合する場合は、Ｎ末端のアミノ基を、カルボキシル基、ハロゲン、アルデヒド基、又はイソシアネート基等の官能基を有するスペーサーと反応させてスペーサーに結合することができる。アミノ基とこれらの官能基との反応は、常法により行うことができるが、例えば、縮合反応、付加反応等をあげることができる。
ペプチドのＮ末端のスペーサーへの結合は、Ｎ末端にリンカー部位としてチオール基、例えば、システインやチオグリコール酸等を導入し、ＳＨ基と反応するマレイミド基、ハロゲン、チオエステル基、ブロモアセチル基等の官能基を有するスペーサーと反応させてスペーサーに結合することもできる。これにより、チオエーテル基を含むリンカーによりペプチドとスペーサーが結合される。ＳＨ基とこれらの官能基との反応は、常法により行うことができるが、例えば、マレイミド基との反応はマイケル付加反応により行うことができる。また、ハロゲンとの反応は求核置換反応により行うことができ、チオエステルとの反応は、エステル交換反応による。
【００９６】
また、ペプチドのＮ末端にリンカー部位としてアルキンを持つ、プロピオール酸、３−ブチン酸等を導入し、アルキンと反応するアジド基を有するスペーサーと反応させてスペーサーに結合することもできる。アルキンとアジド基との反応は、常法により行うことができるが、例えば、フイスゲン反応により行うことができる。
また、ペプチドのＮ末端にリンカー部位としてアルコキシアミノ基を持つ、３-オキシアミノプロピオン酸、４−オキシアミノ酪酸等を導入し、アルコキシアミノ基と反応するケトンを有するスペーサーと反応させてスペーサーに結合することもできる。アルコキシアミノ基とケトンとの反応は、常法により行うことができるが、例えば、オキシム化反応により行うことができる。
また、これらのリンカー部位はスペーサーとペプチドの部位を各々逆に導入し、結合させることも可能である。
【００９７】
ペプチドのＣ末端がスペーサーに結合する場合は、Ｃ末端のカルボキシル基を、アミノ基、水酸基等の官能基を有するスペーサーと反応させてスペーサーに結合することができる。カルボキシル基とこれらの官能基との反応は、常法により行うことができるが、例えば、縮合剤を用いた縮合反応をあげることができる。
ペプチドのＣ末端のスペーサーへの結合は、Ｃ末端にリンカー部位としてチオール基、例えば、システインや２−アミノ−１−エタンチオール等を導入し、ＳＨ基と反応するマレイミド基、ハロゲン、チオエステル基、アルデヒド基、ブロモアセチル基等の官能基を有するスペーサーと反応させてスペーサーに結合することもできる。ＳＨ基とこれらの官能基との反応は、上記のような常法により行うことができる。
【００９８】
上記式（１ａ）〜（３ａ）中のスペーサーは、ポリマーとペプチドを結合できるものであれば特に制限はないが、例えば、アルキレン鎖、ポリエチレングリコール鎖、糖鎖、ポリペプチド、又は構造内にそれらら２つ以上含むものをあげることができるが、好ましくは、アルキレン鎖又はポリエチレングリコール鎖を主成分とするものである。アルキレン鎖又はポリエチレングリコール鎖は、直鎖状、分岐状のいずれを用いることもでき、また、置換基を有していても良い。アルキレン鎖は、分子量が、好ましくは１０〜５００，より好ましくは２０〜２００である。ポリエチレングリコール鎖は、重量平均分子量が、好ましくは５０〜１０００，より好ましくは１００〜５００，更に好ましくは１００〜３００である。また、他の結合反応、例えば、ポリマーとスペーサー、スペーサーとリンカー、又はリンカーとペプチドの結合を阻害しない限り、官能基を有していても良い。
【００９９】
上記スペーサーのポリマーへの結合は、モノマー単位のカルボキシル基と反応性を有する官能基を末端に持つ化合物を用いて、ポリマーを合成した後にポリマーのカルボキシル基と反応させて導入することにより、又はモノマーの時点で導入した後に重合することにより達成できる。ポリマーのカルボキシル基とスペーサーの官能基の結合は、特に制限がないが、ポリマーのカルボキシル基と反応性を有する官能基としては、アミノ基又は水酸基が好ましい。ポリマーへ結合するスペーサーは、ポリマーとの結合に影響がない限り、ポリマーとの結合末端とは反対の末端に、ペプチドとの結合のためのリンカー部分（官能基）を持っていても良い。
【０１００】
好ましいスペーサーの具体例を以下にあげるが、これらに限定されるものではない。
スペーサーＡ：
【０１０１】
【化５１】
2013039190.tif 000054
スペーサーＢ：
【０１０２】
【化５２】
2013039190.tif 000055
スペーサーＣ：
【０１０３】
【化５３】
2013039190.tif 000056
（式中、Ｘは、Ｃｌ又はＢｒである。）
【０１０４】
以下、スペーサー側又はペプチド側に導入するリンカー（リンカーパーツ）及びその導入方法の具体例を示すが、これらに限定されない。
【０１０５】
１．スペーサー側リンカーパーツ
[Ls-A]：
【０１０６】
【化５４】
2013039190.tif 000057
リンカー導入法：スペーサー部の脱保護を行った後、スクシンイミジル型のリンカーを導入。
[Ls-B]
【０１０７】
【化５５】
2013039190.tif 000058
（式中、Ｘは、Ｃｌ又はＢｒある。）
リンカー導入法：モノマー時点で、スペーサー部の脱保護を行い、縮合により導入後、ポリマー化する。
[Ls-C]
【０１０８】
【化５６】
2013039190.tif 000059
リンカー導入法：モノマー時点で、スペーサー部の脱保護を行い、縮合により導入後、ポリマー化する。
【０１０９】
[Ls-D]
【０１１０】
【化５７】
2013039190.tif 000060
リンカー導入法：モノマー時点で、スペーサー部の脱保護を行い、ヒドロキシアミノ基Boc保護体を縮合により導入後、ポリマー化する。その後ヒドロキシアミノ基の脱保護をおこなう。
[Ls-E]
【０１１１】
【化５８】
2013039190.tif 000061
リンカー導入法：ポリマー時点で、スペーサー部の脱保護を行い、ＳＨ基Ｔｒｔ保護体を縮合により導入後、ＳＨ基の脱保護をおこなう。
[Ls-F]
【０１１２】
【化５９】
2013039190.tif 000062
リンカー導入法：ポリマー時点でスペーサー部の脱保護を行った後、縮合で導入。
【０１１３】
[Ls-G]
【０１１４】
【化６０】
2013039190.tif 000063
リンカー導入法：モノマー時点で、スペーサー部の脱保護を行い、縮合により導入後、ポリマー化する。
【０１１５】
２．ペプチド側リンカーパーツ
[Lp-A]
Cysteine：
リンカー導入法：ペプチド製造時に、ペプチドＮ末又はＣ末に導入。
[Lp-B]
【０１１６】
【化６１】
2013039190.tif 000064
リンカー導入法：ペプチドＮ末に導入できる。ＳＨ基保護カルボン酸を保護ペプチドに導入後脱保護する。
[Lp-C]
【０１１７】
【化６２】
2013039190.tif 000065
リンカー導入法：ペプチドＮ末端に導入できる。保護ペプチドに導入後脱保護する。
【０１１８】
[Lp-D]
【０１１９】
【化６３】
2013039190.tif 000066
リンカー導入法：ペプチドＮ末端に導入できる。保護ペプチドに導入後脱保護する。
[Lp-E]
【０１２０】
【化６４】
2013039190.tif 000067
リンカー導入法：ペプチドＮ末端に導入できる。保護ペプチドにスクシンイミジル型のリンカーを導入し脱保護する。
[Lp-Ｆ]
【０１２１】
【化６５】
2013039190.tif 000068
（式中、Ｘは、Ｃｌ又はＢｒある。）
リンカー導入法：ペプチドのＮ末端に導入できる。保護ペプチドに導入後脱保護する。
【０１２２】
[Lp-G]
【０１２３】
【化６６】
2013039190.tif 000069
リンカー導入法：ペプチドのＮ末端に導入できる。保護ペプチドに導入後脱保護する。
[Lp-H]
【０１２４】
【化６７】
2013039190.tif 000070
リンカー導入法：ペプチドのＮ末端に導入できる。ヒドロキシルアミノ基保護リンカーを保護ペプチドに導入後脱保護する。
[Lp-I]
【０１２５】
【化６８】
2013039190.tif 000071
ペプチドのＣ末端に、例えば、以下の反応により導入できる。
【０１２６】
【化６９】
2013039190.tif 000072
【０１２７】
スペーサーとそれぞれのリンカーパーツの組み合わせ、及びそれによって生成されるリンカー構造を以下の表１に示す。
【０１２８】
【表１】
2013039190.tif 000073
【０１２９】
本発明に使用するポリマーの合成方法は、特に限定されるものではない。また、ポリマーの合成においては、ポリマーを合成した後スペーサーを導入しても、また、スペーサーを有するモノマーを重合してポリマーを合成しても良い。また、ペプチドが結合するユニットとペプチドが結合しないユニットから構成されるポリマーは、それぞれのモノマーを共重合させ、その後ペプチドを結合するユニットにリンカーを介してペプチドを結合させる方法が好ましい。ペプチドを結合させるユニットのモノマー末端が一級アミンの場合、一級アミノ基を予め保護基にて保護したモノマーを、ペプチドが結合しないユニットであるスペーサーを有するモノマーとラジカル共重合した後、保護基を除去する方法が好ましい。その後、リンカーを介して、スペーサーとペプチドを結合することにより本発明の抗菌性ポリペプチド含有ポリマーを製造できる。
【０１３０】
ペプチドを結合しないユニットのモノマーの具体的な例としては、ポリ（エチレングリコール）メチルエーテル（メタ）アクリレート類、ポリ（エチレングリコール）（メタ）アクリレート類、（メタ）アクリル酸、ｎ−ブチル（メタ）アクリレート、iso−ブチル（メタ）アクリレート、sec−ブチル（メタ）アクリレート、t−ブチル（メタ）アクリレート、ｎ−ネオペンチル（メタ）アクリレート、iso−ネオペンチル（メタ）アクリレート、sec−ネオペンチル（メタ）アクリレート、ネオペンチル（メタ）アクリレート、ｎ−ヘキシル（メタ）アクリレート、iso−ヘキシル（メタ）アクリレート、ヘプチル（メタ）アクリレート、ｎ−オクチル（メタ）アクリレート、iso−オクチル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート、ｎ−ノニル（メタ）アクリレート、iso−ノニル（メタ）アクリレート、ｎ−デシル（メタ）アクリレート、iso−デシル（メタ）アクリレート、ｎ−ドデシル（メタ）アクリレート、iso−ドデシル（メタ）アクリレート、ｎ−トリデシル（メタ）アクリレート、iso−トリデシル（メタ）アクリレート、ｎ−テトラデシル（メタ）アクリレート、iso−テトラデシル（メタ）アクリレート、ｎ−ペンタデシル（メタ）アクリレート、iso−ペンタデシル（メタ）アクリレート、ｎ−ヘキサデシル（メタ）アクリレート、iso−ヘキサデシル（メタ）アクリレート、ｎ−オクタデシル（メタ）アクリレート、iso−オクタデシル（メタ）アクリレート、シクロヘキシル（メタ）アクリレート、イソボニル（メタ）アクリレート、（メタ）アクリルアミド、Ｎ−メチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−エチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−プロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−イソプロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ヒドロキシメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ビス（ヒドロキシメチル）（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）（メタ）アクリルアミドなどがあげることができる。
【０１３１】
一級アミノ基をあらかじめ保護基にて保護したモノマーは、特に構造を限定しないが、下記式（４６）（式中、Ｒ2は水素原子またはメチル基、Ｖはアルキレングリコール残基を含むスペーサー、Ｔは保護基を示す。）で表されるように、（メタ）アクリル基がアルキレングリコール残基を含むスペーサーＶを介した構造であることが好ましい。
【０１３２】
【化７０】
2013039190.tif 000074
【０１３３】
保護基Ｔとしてはアミノ基を保護基できるものであれば何ら制限されず、任意のものを用いることができるが、なかでもｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ基）やベンジロキシカルボニル基（Ｚ基、Ｃｂｚ基）、９−フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ基）などが好ましい。脱保護化は、トリフルオロ酢酸や塩酸、無水フッ化水素等を用いて、一般的な条件で行うことができる。
【０１３４】
具体的なモノマーの例としては、下記式（４７）で表されるものをあげることができる。
【０１３５】
【化７１】
2013039190.tif 000075
【０１３６】
本発明で用いるポリマーの合成溶媒としては、それぞれの単量体が溶解するものであればよく、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔ−ブチルアルコール、ｎ−ペンタノール等アルコール類、ベンゼン、トルエン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、シクロヘキサノン、N，N−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ブチル、メチルエチルケトン、メチルブチルケトン、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル等をあげることができる。これらの溶媒は、単独または２種以上の組み合わせで用いてもよい。
【０１３７】
重合開始剤としては通常のラジカル開始剤を用いることができ、例えば、２，２’−アゾビスイソブチルニトリル（以下「ＡＩＢＮ」という）、１，１’−アゾビス（シクロヘキサン−１ −カルボニトリル）等のアゾ化合物、過酸化ベンゾイル、過酸化ラウリル等の有機過酸化物等を挙げることができる。
また、本発明で用いるポリマーの重量平均分子量は、３，０００以上が好ましい。重量平均分子量を３，０００以上とすることにより、モノマーとの分離が容易になり、さらに繊維への固着力がより高まる。より好ましくは１０，０００以上である。
【０１３８】
ペプチドとの結合反応のために、（スペーサーを含む）ポリマーへリンカー部位（官能基）を導入することができる。官能基としては、特に制限はないが、例えば、ハロゲン、カルボキシル基、アルデヒド基、イソシアネート基、チオエステル基、ブロモアセチル基、マレイミド基、チオール基等をあげることができる。導入するリンカーは、結合するペプチドの末端の官能基に応じて適宜選択できる。結合先がアミノ基である場合は、ハロゲン、カルボキシル基、アルデヒド基又はイソシアネート基を導入するのが好ましい。結合先がカルボキシル基である場合は、アミノ基、水酸基が好ましい。結合先が、チオール基、例えば、システインのＳＨ基である場合は、ハロゲン、チオエステル基、アルデヒド基、ブロモアセチル基、又はマレイミド基が好ましい。特に、リンカー部位としてペプチド末端にシステイン残基を導入した場合は、スペーサーの末端にマレイミド基、ハロゲン基を導入することが好ましい。
【０１３９】
ペプチドのスペーサーへの結合反応は、特に限定されず、縮合反応、チオエーテル化反応、エステル化反応、Huisgen反応、マイケル付加反応、オキシム化反応などにより行うことができるが、好ましくは、ペプチドのＣ末端又はＮ末端にＣｙｓ基またはチオール基を導入し、ポリマー中のマレイミド基との間で、マレイミド−チオールのマイケル付加反応を用いて、または、ポリマー中のハロゲン基との間でチオエーテル化反応を用いて、行うことができる
【０１４０】
ペプチド含有ポリマーの作製は、例えば、ペプチドがＣ末端又はＮ末端にＣｙｓ基を有する場合は、マレイミドユニットを有するポリマーが溶解する溶媒でありかつ水と混ざり合う溶媒中で行うのが好ましい。例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール等アルコール類、テトラヒドロフラン、ジオキサン、N，N−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等にポリマーを溶解し、それにペプチドを、例えば、水、に溶解したペプチド溶液を加え反応させることにより行うことができる。
【０１４１】
以下、リンカー部位としてマレイミド基とチオール基（システイン）を用いた例をもとに説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
ポリマーへのマレイミド基の導入は、１分子内にアミノ基と反応できる官能基とマレイミド基を持つ化合物を用いて行うことができる。例えば、マレイミドプロピオン酸Ｎ-スクシンイミジル、Ｎ−（α−マレイミドアセトキシ）スクシンイミドエステル、Ｎ−（４−マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミド、Ｎ−（４−マレイミドブチリルオキシ）スルホスクシンイミドナトリウム塩、Ｎ−（６−マレイミドカプロイルオキシ）スクシンイミド、Ｎ−（８−マレイミドカプリルオキシ）スクシンイミド、Ｎ−（８−マレイミドカプリルオキシ）スルホスクシンイミドナトリウム塩、Ｎ−（１１−マレイミドウンデカノイルオキシ）スクシンイミド、Ｎ−（１１−マレイミドウンデカノイルオキシ）スルホスクシンイミドナトリウム塩などがあげることができる。これらの試薬は、単独または２種以上の組み合わせで用いても良い。
【０１４２】
本発明の抗菌性ペプチド含有ポリマーの一つの態様においては、下記式（４８）（式中、Ｒ1は水素原子又はメチル基であり、ｎは自然数であり、Ｖはスペーサーである。）で示されように、モノマー単位のマレイミドユニットに、ペプチドが、そのC末端又はＮ末端においてシステインを介して結合している。式中、−Ｓ−ＣｙｓのＳは、システイン残基中のＳを表す。
【０１４３】
【化７２】
2013039190.tif 000076
【０１４４】
本発明の抗菌性ペプチド含有ポリマーは、全てが上記モノマー単位であっても良いが、上記モノマー単位と下記式（４９）（Ｒ1は水素原子又はメチル基であり、ｎは自然数であり、Ｖはスペーサーである。）のモノマー単位の混合物であっても良い。
【０１４５】
【化７３】
2013039190.tif 000077
【０１４６】
本発明のポリマーにおいてはまた、上記式（４８）と下記式（５０）（ｎは自然数であり、Ｙは、単結合又は分子量１０〜３０００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のアルキレン鎖又はポリオキシアルキレン鎖、好ましくは、置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のアルキレン鎖又はポリエチレングリコールである。）の共重合体、又は上記式（４８）、上記式（４９）と下記式（５０）（ｎは自然数である）の共重合体とすることもできる。
【０１４７】
【化７４】
2013039190.tif 000078
【０１４８】
好ましいポリマーとして以下の式（５１）で表されるペプチド含有ポリマーをあげることができる。ここで、ｎ１は自然数、ｍ１は０又は自然数である。
【０１４９】
【化７５】
2013039190.tif 000079
【０１５０】
上記の例においては、ペプチドのポリマーへの結合は、マイケル付加反応を用いて、溶媒に溶解したポリマー溶液にペプチドを溶解したペプチド溶液を加えて反応させることにより行うことができる。また、マレイミドユニットに対するペプチドの割合は、目的に応じて適宜選択でき、例えば、全てのマレイミドユニットにペプチドを結合する場合は、マレイミドユニットとペプチドのモル比が１：１になるようにして結合反応を行う。
【０１５１】
本発明の別の態様において、本発明のペプチド含有ポリマーが繊維上に塗布された抗菌性繊維が提供される。本発明の抗菌性繊維は、ポリペプチドが繊維に固定化され、通常の使用においてはペプチドが容易に脱離することがなく、繰り返しの使用においても抗菌性が維持できる。
【０１５２】
本発明において繊維は、綿、麻、絹などの植物繊維、羊毛、獣毛、絹などの動物繊維、レーヨンなどの再生繊維、アセテートなどの半合成繊維、ポリエステル、ナイロン、アクリルなどの化学合成繊維、及びそれらの複合体などを意味するが、特にこれらに限定されるものではない。
また 繊維の形態としては、ステープル、フィラメント糸ならびにその加工糸などからなる織物、編物を言うが、さらには繊維ウエブ形態でも良い。繊維ウエブとは、不織布やティッシュペーパー、ウエットティッシュ、食品包装紙などの紙類などを言う。
【０１５３】
本発明の抗菌性繊維は、抗菌性が求められる種々の繊維製品、例えばサニタリー用品に対して用いることができる。本発明の抗菌性繊維はまた、安全性に優れているので、医療用用途や医療用用品、例えば、医療用包帯、シーツ、ガーゼおよび衣類等に用いることができる。
【０１５４】
本発明の方法において、ペプチド含有ポリマーは繊維上に固定されるが、本発明でいう繊維上とは、完全に繊維の表面上に存在する場合に加えて、ペプチド含有ポリマーの一部が繊維の中に入り込んでいる状態も含む意味である。目的のペプチド活性、例えば、ペプチドがカブトムシディフェンシン由来改変ペプチドの場合は、抗菌活性を呈するためには、ペプチド含有ポリマーの全て又は大部分が繊維表面上に存在することが好ましい。
【０１５５】
本発明においては、布にコーティングするポリマーは、布の重量に対して１０重量％以下が好ましく、より好ましくは５重量％以下である。この場合において、ペプチドは、布１ｃｍ2あたり０．００１μモル以上０．５μモル以下が好ましく、安全性および経済的な観点から１ｃｍ2あたり０．０３μモル以下が最も好ましい。
【０１５６】
本発明のペプチド含有ポリマーの繊維への固定は、繊維表面にペプチド含有ポリマーをコーティングすることにより行うことができ、例えば、撥水加工や帯電防止加工のような繊維加工技術を用いて行うことができる。言い換えれば、ポリマー化ペプチドの繊維への固定化は、例えば、静電的な相互作用による方法、架橋反応により化学的に結合させる方法等を用いて行うことができる。静電的な相互作用により固定化する方法はより簡便であり、一方、架橋反応により化学的に結合させる場合は、より強固な固定化となるという利点があり、目的に応じて任意に選択可能である。
【０１５７】
本発明の他の態様においては、本発明の抗菌性ペプチド含有ポリマーを含有するエマルジョンが提供される。
本発明においては、例えば、固定化されたペプチドを有する疎水性のポリマー（ペプチド含有ポリマー）を単独又は界面活性剤などを用いて乳化し、繊維の加工剤であるエマルジョンとすることができる。また、ポリマーエマルジョンは、従来公知の乳化重合法でも作製できる。例えば、モノマーを界面活性剤により水中に分散し、重合開始剤、キレート剤、酸素捕捉剤、分子量調整剤等が加えて乳化重合できる。使用する、界面活性剤、重合開始剤、キレート剤、酸素捕捉剤、分子量調整剤は従来公知のものを用いることができる。
【０１５８】
これにより、エマルジョン状態で、販売したりや流通させることも可能である。また、そのようにして調製したエマルジョンを繊維に塗布し、乾燥することにより、本発明のペプチドが固定化された繊維を容易に製造できる。また、水溶性のポリマーの場合は、水に溶解させた状態で販売したり流通させたりすることができ、加工時にブロックイソシアネートなどの架橋剤と混合し、布に固定化することが容易にできる。
【０１５９】
本発明の更に別の態様においては、以下の工程からなる、抗菌性ペプチドが固定化された抗菌性繊維の製造方法が提供される。
工程（１）；下記式（１ｂ）：
【０１６０】
【化７６】
2013039190.tif 000080
（式中Ｒ1及びＲ3は、それぞれ独立に水素原子又はメチル基であり、ｎは自然数であり、ｍ2は０又は自然数であり、Ｕ2及びＵ3は、それぞれ独立にＮＨ又はＯであり、Ｖは、単結合又はスペーサーであり、Ｗoは、ペプチド又は誘導体化したペプチドと反応する官能基であり、Ｙは、単結合又は分子量１０〜３０００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のアルキレン鎖又はポリオキシアルキレン鎖である。）で表されるポリマーを含む溶液を繊維にコーティングする工程、及び
工程（２）；下記式：
【０１６１】
【化７７】
2013039190.tif 000081
（ここで、Peptideは、下記式で表されるアミノ酸配列：
−ＮＨ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯＮＨ2、又はＨ2Ｎ−Ｘ１−Ｌｅｕ−Ｘ２−Ｌｅｕ−Ｘ３−X４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７−ＣＯ−（式中、Ｘ１はＡｒｇ又はＡｌａであり、Ｘ２はＴｙｒ、Ａｒｇ又はＬｅｕであり、Ｘ３はＡｒｇ又はＡｌａであり、X４はＩｌｅ又はＬｅｕ又はＶａｌであり、Ｘ５はＧｌｙ又はＡｒｇであり、Ｘ６は、Ａｒｇ又はＬｙｓであり、Ｘ７は、Ａｒｇ又はＬｙｓである。ここで、Ａｒｇ−ＣＯＮＨ2又はＬｙｓ−ＣＯＮＨ2は、Ａｒｇ又はＬｙｓのカルボキシル基がアミド化していることを示す。）より選ばれる抗菌活性を有するポリペプチドである。）より選ばれ、Ｚは、水素原子、水酸基、Ｃｙｓ又はＷoと反応しリンカーを形成する官能基（例えば、アジド基、スルフヒドリル基、ハロゲン基、アルキン基、カルボニル基、ヒドロキシルアミノ基）を有する分子量５０〜５００の分子である。）
で表され抗菌性ポリペプチド又はその誘導体を含む溶液中に、ポリマーを含む溶液をコーティングした繊維を浸漬する工程、及び
工程（３）；１〜１０時間放置することによりポリマーにポリペプチドを結合させた後、繊維を洗浄して未反応のペプチド又はペプチド誘導体を除去する工程、
からなる抗菌性繊維の製造方法。
【０１６２】
上記結合反応は、例えば１〜１０時間、好ましくは２〜１０時間、更に好ましくは３〜６時間反応させることにより行うことができる。また、結合反応に用いるペプチド溶液の濃度は、リンカーの種類や温度等の反応条件に応じて適宜選択可能であるが、例えば、０．１〜１００ｍM、好ましくは１〜１０ｍMである。
【０１６３】
本発明の方法において用いる繊維にコーティング（塗布）するポリマーは、本明細書中に記載したポリペプチドを結合する前のポリマーのいずれであってもよい。例えば、好ましいポリマーとして、以下式（６ａ）（式中、Ｒ1及びＲ3は、水素原子又はメチル基であり、ｎは自然数であり、ｍは０又は自然数であり、Ｕ1及びＵ3は、Ｏ又はＮＨであり、Ｙは、単結合又は分子量１０〜３０００の置換基を有してもよい直鎖又は分岐状のアルキレン鎖又はポリオキシアルキレン鎖である）で表されるポリマーをあげることができるが、これに限定されない。
【０１６４】
【化７８】
2013039190.tif 000082
【実施例】
【０１６５】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。【０１６６】
（実施例１）
ペプチドの合成
ペプチドＡ（RLYLRIGRR）、ペプチド１（CRLYLRIGRR）及びペプチド２（RLYLRIGRRC）を、常法に従い固相合成法により合成した。【０１６７】
（実施例２）
モノマー１の合成
滴下ロートを備えた二口フラスコ（100ml）に（３−｛２−[２−（３−アミノプロピル）−エトキシ]−エトキシ｝−プロピル）カルバミン酸−ｔ−ブチルエステル（1060mg、3.31mmol）とトリエチルアミン（401mg、3.97mmol）、テトラヒドロフラン（25mL）を加え、氷冷下で攪拌した。ここにメタクリル酸クロリド（913mg、3.97mmol）とテトラヒドロフラン（25mL）の混合溶液を滴下し、氷冷下で3時間攪拌した。その後、8時間室温で攪拌した。反応終了後、沈殿物を除去し、展開溶媒に酢酸エチルを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて目的物を単離した。Rf値＝0.39 （シリカゲル、酢酸エチル）  収率５９％。
1H-NMR; (CDCl3, 400MHz)δ：1.4-1.5 (9H, br, CH3), 1.7-1.8 (2H, m, NHCH2CH2), 1.8-1.9 (2H, m, NHCH2CH2), 2.05 (3H, s, OCCH3), 3.20-3.25 (2H, q, J=6.24, NHCH2), 3.42-3.47 (2H, q, J-5.56, NHCH2), 3.51-3.54 (2H, t, J=5.96, OCH2), 3.55-3.65 (12H, m, OCH2) 5.29 (1H, s, CH3CCH2), 5.71 (1H, s, CH3CCH2)【０１６８】
【化７９】
2013039190.tif 000083
【０１６９】
（実施例３）
ポリマー１の合成
窒素置換したシュレンク管（30mL）にモノマー１（900mg、2.32mmol）とAIBN（7.6mg、0.046mmol）とテトラヒドロフラン（1ml）を加え、還流攪拌した。反応終了後、ゲル浸透クロマトグラフィーにて低分子量物質を除去した。得られたポリマーをジクロロメタン（10ml）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（5ml）を加え、室温で8時間攪拌した。反応終了後、溶媒を減圧下で留去した。再びポリマーをジクロロメタン（10ml）に溶解させ、3-マレイミドプロピオン酸N-スクシンイミジル（122.4mg、0.46mmol）とトリエチルアミン（46.5mg、0.46mmol）を加え、室温で3時間攪拌した。反応終了後、ゲル浸透クロマトグラフィーにて精製し、下記のポリマー１を得た。
1H-NMR; (CDCl3, 400MHz)δ：0.8-1.0 (3H, br, CH3), 1.4-1.9 (8H, br, CH2 ), 2.4-2.6 (2H, br, COCH2), 3.1-3.4 (4H, br, NHCH2), 3.4-3.7 (12H, br, OCH2), 3.75-3.85 (2H, br, CONCH2) 6.7-6.8 (2H, br, COCH)
（水、DMF、クロロホルム、THFに可溶）【０１７０】
【化８０】
2013039190.tif 000084
【０１７１】
（実施例４）
ポリマー２（ペプチド含有ポリマー）の合成
実施例３で合成したポリマー１（15.8mg）をDMF（250μl）に溶解させた。ペプチド１（CRLYLRIGRR）（11.7mg、9.0mmol）を水1mlに溶解させ、これをポリマー１のDMF溶液と混合し、反応させた。ペプチドユニット：マレイミドユニット＝１：４【０１７２】
【化８１】
2013039190.tif 000085
【０１７３】
（実施例５）
ポリマー３（ペプチド含有ポリマー）の合成
反応させるペプチドにペプチド２（RLYLRIGRRC）を用いたこと以外は、ポリマー２と同様にして合成した。ペプチドユニット：マレイミドユニット＝１：４【０１７４】
【化８２】
2013039190.tif 000086
【０１７５】
（実施例６）
ポリマー４（ペプチド含有ポリマー）の合成
ポリマー１（3.5mg、マレイミドユニット8μmol）を水（1.0ml）に溶解させた。ペプチド2 (RLYLRIGRRC)（21mg, 16μmol）を水1mlに溶解させ、これをポリマー１水溶液と混合し、反応させた。これを透析チューブ（分画分子量8000）で、一晩透析し、過剰のペプチドを除去した。【０１７６】
【化８３】
2013039190.tif 000087
【０１７７】
（実施例７）
加工布１〜３の作製
ポリマー２DMF-水混合溶液を綿のJIS添付白布にコーティングし、減圧下で乾燥させ、加工布１〜３を作製した。
加工布１は、ペプチドの存在量が布１cm2あたり0.3μmol存在するように調整した。
加工布２は、ペプチドの存在量が布１cm2あたり0.1μmolになるように調整したこと以外は加工布１と同様にして作製した。
加工布３は、ペプチドの存在量が布１cm2あたり0.03μmolになるように調整したこと以外は加工布１と同様にして作製した。【０１７８】
（実施例８）
加工布４〜６の作製
コーティングするポリマーにポリマー３を用いたこと以外は、加工布１と同様にして作製した。ペプチドの存在量は、加工布４が布１cm2あたり0.3μmolであり、加工布５が布１cm2あたり0.1μmolであり、加工布６が布１cm2あたり0.03μmolであった。【０１７９】
（比較例１）
加工布７〜９の作製
コーティングするポリマーにポリマー１を用いたこと以外は、加工布１と同様にして作製した。マレイミドユニットの存在量は、加工布７が布１cm2あたり1.2μmolであり、加工布８が布１cm2あたり0.4μmolであり、加工布９が布１cm2あたり0.12μmolであった。【０１８０】
（実施例９）
加工布１０の作製
コーティングするポリマーにポリマー４を用いたこと以外は、加工布１と同様にして作製した。ペプチドの存在量は、１cm2あたり0.3μmolであった。【０１８１】
（実施例１０）
抗菌活性試験
上記の如くして作製した加工布１〜１０について、抗微生物活性試験を行った。加工布（1 cm×1 cm）および標準布をそれぞれ黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus NBRC 12732）を含む培養液（0.8% NB培地で一昼夜培養した菌液を、新たな培養液に１％容量で加え、37℃で3時間培養した後、波長600nmにおける吸光度が0.01となるように希釈した培養液200μl）中に入れ、37℃で１８時間培養した後、生菌数を測定し、18時間培養後の標準布の生菌数を18時間培養後の加工布の生菌数で除した対数値として示した。結果を表１に示す。抗菌試験を実施した後、布を40ml超純水でボルテックス洗浄（最大スピード１０秒間振とう×３回）及びオートクレーブによる滅菌操作（121℃、20分）を行い、同じ加工布を用いて抗菌試験を行った。更に、この洗浄−滅菌操作−抗菌試験を繰り返し行った。結果を以下の表２に示す。【０１８２】
【表２】
2013039190.tif 000088
【０１８３】
（実施例１１）
ポリマー５の合成
窒素置換したシュレンク管（30mL）にモノマー１（54mg、0.14mmol）とN−オクタデシルアクリルアミド（931mg、2.88mmol）とAIBN（7.6mg、0.046mmol）とクロロホルム（1ml）を加え、還流攪拌した。反応終了後、ゲル浸透クロマトグラフィーにて低分子量物質を除去した。得られたポリマーをジクロロメタン（10ml）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（5ml）を加え、室温で8時間攪拌した。反応終了後、溶媒を減圧下で留去した。再びポリマーをジクロロメタン（10ml）に溶解させ、3-マレイミドプロピオン酸N-スクシンイミジル（38mg、0.14mmol）とトリエチルアミン（14.1mg、0.14mmol）を加え、室温で3時間攪拌した。反応終了後、ゲル浸透クロマトグラフィーにて精製した。NMRの結果、マレイミドユニット：オクタデシルユニットの物質比は1:14であった。【０１８４】
【化８４】
2013039190.tif 000089
【０１８５】
1H-NMR; (CDCl3, 400MHz)δ：0.86-0.90 (42H, t, J=7.04, CH3), 1.26 (420H, br, CH2), 1.47 (10H, br, CH2), 1.76-2.70 (64H, br, CH2), 3.15 (30H, br, NHCH2), 3.42-3.82 (14H, br, OCH2, NCH2), 6.73 (2H, s, COCH)【０１８６】
（実施例１２）
加工布１１及び１２の作製
マレイミドユニットの物質量が布１cm2あたり0.03μmolになるようにして、実施例１１で作製したポリマー５を綿のJIS添付白布にコーティングし、減圧下で乾燥させた。この布を、マレイミドユニットと同モルのペプチド１（CRLYLRIGRR）を含む水溶液中（ペプチド濃度  3.6mM）に浸し、5時間放置した。その後、布をイオン交換水で洗浄し、未反応のペプチドを除去し、加工布１１を作製した。
マレイミドユニットに結合させるペプチドとしてペプチド２（RLYLRIGRRC）を用いたこと以外は、加工布１１と同様にして、加工布１２を作製した。【０１８７】
（比較例２）
加工布１３の作製
マレイミドユニットに結合させるものとして、マレイミドユニットと同モルのシステインを含む水溶液を用いたこと以外は、加工布１１と同様にして作製した。【０１８８】
（実施例１３）
実施例１０と同様にして、加工布１１〜１３の抗菌活性を測定した。結果を以下の表３に示す。【０１８９】
【表３】
2013039190.tif 000090
【０１９０】
上記の結果、ポリペプチド含有ポリマーを塗布してペプチドを結合した加工布１〜６及び１０では活性が認められたが、ペプチドを結合していない加工布７〜９は全く活性が認められなかった。加工布１〜３と４〜６を比較すると僅かにＮ末端結合型の方が強い抗菌活性を持つがことが分かった。
また、ポリマーを塗布した後ペプチドを反応させてペプチドを結合した加工布１１及び１２では活性が認められたが、ペプチドを結合していない加工布１３では活性が認められなかった。【０１９１】
（実施例１４）
Ｃｙｓリンカー付ペプチドの合成
Ｃｙｓリンカーが末端についたペプチド３（CRLLLRVGRR-NH2）を常法に従い固相合成法により合成した。【０１９２】
（実際例１５）
モノマー２の合成
3-ブロモプロピルアミン臭化水素酸塩(2.15g, 9.8mmol)をピリジン50mLに溶解させ、氷冷下で攪拌した。ここにメタクリル酸クロライド(1.54g, 14.7mmol)をTHF(30mL)に溶解させたものを滴下し、一晩攪拌した。反応終了後、ピリジンを乾固しない程度に留去し、水とクロロホルムで分離した。クロロホルム相を濃縮し、ゲル浸透クロマトグラフィーにて精製し、N-(3-ブロモプロピル)-2-メタクリルアミドを得た。収率３０％
1H-NMR; (CDCl3, 400MHz)δ：2.22 (3H, s, CH3), 2.22-2.30 (2H, quin, J=7.7, CH2), 3.86-3.90 (2H, t, J=8.0, CH2), 4.66-4.69 (2H, t, J=7.4, CH2), 5.91 (1H, s, CH3CCH2), 6.55 (1H, s, CH3CCH2)【０１９３】
【化８５】
2013039190.tif 000091
【０１９４】
（実施例１６）
モノマー３の合成
3-ブロモ-1-プロパノール(1.39g, 10mmol)を脱水したトルエン10mlに溶解させ、窒素雰囲気下で攪拌した。ここにメタクリル酸2-イソシアナトエチル(1.55g, 10mmol)を滴下し、60℃で一晩攪拌した。得られた副生成物をろ過で除去し、モノマー2を得た。
収率９５％
1H-NMR; (CDCl3, 400MHz)δ：1.95 (3H, s, CH3), 2.17 (2H, br, CH2), 3.45-3.54 (4H, br, BrCH2, NCH2), 4.20-4.25 (4H, br, OCH2), 5.60 (1H, s, CH3CCH2), 6.13 (1H, s, CH3CCH2)【０１９５】
【化８６】
2013039190.tif 000092
【０１９６】
（実施例１７）
ポリマー６の合成
N-(3-ブロモプロピル)-2-メタクリルアミド(モノマー２)(82mg, 0.4mmol)とポリ(エチレングリコール)メチルエーテルメタクリラートMn300(6.0g, 20mmol)をエタノール20mLに溶解させ、開始剤のAIBN(67mg, 0.4mmol)を添加した。容器内を窒素置換した後、6時間還流攪拌を行った。透析チューブ（分画分子量3500）で、48時間透析し、未反応のモノマーを除去し、ポリマー６を得た。バイルシュタイン反応で、ハロゲン由来の炎色反応が認められた。【０１９７】
ポリマー７の合成
モノマー３(305mg, 1.04mmol)とポリ(エチレングリコール)メチルエーテルメタクリラートMn300(15.6g, 52mmol)をエタノール50mLに溶解させ、開始剤のAIBN(174mg, 1.06mmol)を添加した。容器内を窒素置換した後、6時間還流攪拌を行った。透析チューブ（分画分子量3500）で、48時間透析し、未反応のモノマーを除去し、ポリマー７を得た。【０１９８】
（実施例１８）
ポリマー８（ペプチド含有ポリマー）の合成
ポリマー６(8928mg, Br換算0.587mmol)とCysリンカー付きペプチド３（CRLLLRVGRR）(1062mg,0.587mmol)をDMF58.7mlに溶解させ、ターシャリーブトキシカリウム(395.2mg,3.522mmol)を添加した。40℃で4時間30分加熱撹拌した。TLCで原料ペプチドが消失したことを確認した。DCM500mlで希釈し、析出した塩をセライトろ過し取り除いた。ろ液をエバポレータで濃縮し、真空乾燥し、ポリマー６にペプチド３が結合したポリマーであるポリマー８を得た。【０１９９】
ポリマー９（ペプチド含有ポリマー）の合成
ポリマー７(2.04g,Br換算0.13mmol)とCysリンカー付きペプチド３（CRLLLRVGRR）(235.4mg,0.13mmol)をDMF10mlに溶解させ、ターシャリーブトキシカリウム(87.5mg,0.78mmol)を添加した。40℃で7時間加熱撹拌した。TLCで原料ペプチドが消失したことを確認した。DCM50mlで希釈し、析出した塩をセライトろ過し取り除いた。ろ液をエバポレータで濃縮し、真空乾燥し、ポリマー７にペプチド３が結合したポリマーであるポリマー９を得た。【０２００】
（実施例１９）
ペプチド含有ポリマー加工剤Ａ及びＢの調整
実施例１８で作製したポリマー８(4.8g)に水を加え全量を121gとした。一晩攪拌し完全に分散させ、加工剤Ａを調整した。
加工剤Ａを蒸留水で10倍希釈し、加工剤Ｂを得た。
なお、ポリマー７(346mg)に水を加え全量を17.3gとし、一晩攪拌し完全に分散させ、加工剤Ｃ（ペプチド非含有ポリマー加工剤）を得た。これを参照実験用として用いた。【０２０１】
（実施例２０）
ペプチド含有ポリマー加工剤Ｄの調整
ポリマー９(2.08g)に水を加え全量を500gとした。一晩攪拌し完全に分散させ、加工剤Ｄを調整した。【０２０２】
（実施例２１）
加工布１４〜１６の作製
綿のJIS添付白布に対し、1.5〜2.0倍の質量の加工剤Ａを生地全体に浸透するように加え、マングルで余分な加工剤を除去し、室温で乾燥させ、加工布１４を作製した。ペプチドの存在量は、1cm2あたり0.03μmolであった。加工剤は生地に対して4％であった。ニンヒドリン反応では生地が紫色に呈色することを確認した。
綿のJIS添付白布に対し、1.5〜2.0倍の質量の加工剤Ｂを生地全体に浸透するように加え、マングルで余分な加工剤を除去し、室温で乾燥させ、加工布１５を作製した。ペプチドの存在量は、1cm2あたり0.006μmolであった。加工剤は生地に対して0.4％であった。
綿のJIS添付白布に対し、1.5〜2.0倍の質量の加工剤Ｃ（参照例）を生地全体に浸透するように加え、マングルで余分な加工剤を除去し、室温で乾燥させ、加工布１６（参照例）を作製した。加工剤は生地に対して6.8％であった。
加工布１７の作製
綿のJIS添付白布に対し、1.5〜2.0倍の質量の加工剤Ｄを生地全体に浸透するように加え、マングルで余分な加工剤を除去し、室温で乾燥させ、加工布１７を作製した。ペプチドの存在量は、1cm2あたり0.006μmolであった。加工剤は生地に対して0.8％であった。【０２０３】
（実施例２２）
抗菌性試験
実施例１０と同じ方法で加工布１７について試験した。その結果を以下の表４に示す。【０２０４】
【表４】
2013039190.tif 000093
（実施例２３）
抗菌活性試験
上記の如くして作製した加工布１４〜１６について、抗微生物活性試験を行った。JIS L 1902 の定量試験方法に準拠して行った。培養後の生菌数測定法には、混釈平板培養法（コロニー法）を用いた。また、耐久性評価のための繰り返し洗濯試験は、JIS L 0217の洗い方103に規定する方法（40℃で5分間洗い、30℃で2回すすぎ洗いを2分間行う。脱水後、直射日光の当たらない場所でスクリーン乾燥）で、10回、20回、50回の繰り返し試験を行った。洗濯時には、ポリオキシエチレンアルキルエーテルを洗剤として用いた。ただし、静菌活性値は、（18時間培養後の標準布の生菌数の常用対数値−試験菌接種直後の標準布の生菌数の常用対数値）−（18時間培養後の加工布の生菌数の常用対数値−試験菌接種直後の加工布の生菌数の常用対数値）として示した。結果を以下の表５に示す。【０２０５】
【表５】
2013039190.tif 000094
【０２０６】
（実施例２４）
抗菌性ペプチド含有ポリマーの安全性試験
実施例１８で作製した、ポリマー８を用いて、以下のそれぞれの項目について、安全性試験を行った。
１．急性経口毒性試験
ポリマー８を、供試動物のマウス雌雄各五頭に対して投与したが、二週間の試験期間中生存し、その間の生育にも異常は見られず、解剖をしても異常は認められなかった。
２．変異原生試験
ポリマー８を試料として用い、労働安全衛生法における変異原性試験に準拠して行った。試験菌株は、ネズミチフス菌がTA1535、TA100、TA1537、TA98、大腸菌はWP2uvrAを用いた。結果は陰性であった。また、この濃度で更に、5菌株に対して行った復帰突然変異試験でも変異原性は陰性であった。
３．皮膚刺激性試験
ポリマー８を含む加工剤Ａを用いて試験を行った。「ウサギにおける生体材料の一時皮膚過敏症試験に関する標準実施基準ASTM F719-81-1996」に準じた方法で行った。PII 値が2.00(弱刺激)未満であった。
４．皮膚感作性試験
ポリマー８を用い、「医療機器の生物学的安全性評価のための試験方法について」（厚生労働省、発翰番号事務連絡医療機器審査No.36）に準じ、モルモットを用いたマキシミゼーション法により実施した。感作率は０％であった。【０２０７】
以上の結果より、本発明の抗菌性ペプチド含有ポリマー及び抗菌性繊維は、安全であり、医療用途においても用いることができることが示された。【０２０８】
上記の記載は、本発明の目的及び対象を単に説明するものであり、添付の特許請求の範囲を限定するものではない。添付の特許請求の範囲から離れることなしに、記載された実施態様に対しての、種々の変更及び置換は、本明細書に記載された教示より当業者にとって明らかであり、それらは全て本発明の範囲である。
【配列表】
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【国際調査報告】
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