(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハウジングと、
液体を収容し、かつ前記ハウジング内に配置されるように寸法決めされる、容器であって、前記容器の少なくとも一部分が壊れやすく、前記容器は、前記容器が無損傷であり、前記液体が前記ハウジングの内部と流体連通していない、第１の状態と、前記容器が断裂して、前記液体が前記ハウジングの前記内部と流体連通する、第２の状態とを有する、容器と、
前記容器が前記第１の状態にあるとき、前記容器が中に配置される、前記ハウジング内の第１チャンバと、
前記容器が前記第１の状態にあるとき、前記容器及び前記液体が中に配置されない、前記ハウジング内の第２チャンバであって、前記第２チャンバは、前記容器が前記第１の状態にあるとき、前記液体と流体連通せず、前記容器が前記第２の状態にあるとき、前記液体と流体連通する、生物活性の発生源を含む、第２チャンバと、
前記ハウジング内で、前記第１チャンバと前記第２チャンバとの間に配置される基材であって、前記基材は、前記第１チャンバ及び前記第２チャンバと流体連通して配置され、前記基材は、前記基材が前記生物活性の発生源と直接接触しないように、更に配置される、基材と、
を含む、生物学的滅菌インジケーターであって、前記基材は、前記容器が前記第２の状態にあり、そして前記基材が指示試薬を含む液体と流体連通するときに、前記指示試薬を濃縮するように適合されている、生物学的滅菌インジケーター。
【請求項２】
前記第１チャンバと前記第２チャンバとの間に配置される壁部を更に含み、前記基材が、前記前記第１チャンバ内において前記壁部に隣接して配置される、請求項１に記載の生物学的滅菌インジケーター。
【請求項３】
ハウジング内に配置され、容器を無損傷で保持すること、及び容器を断裂させることの、少なくとも一方のために構成された、挿入部材を更に含み、前記基材が、前記挿入部材と前記壁部との間に配置される、請求項２に記載の生物学的滅菌インジケーター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、全般的には、滅菌インジケーターに関し、詳細には生物学的滅菌インジケーターに関する。
【背景技術】
【０００２】
様々な産業では（医療産業などに限らず、他の産業用途でも）、医療デバイス、医療器具、並びに他の使い捨て物品及び非使い捨て物品などの機器を滅菌するために使用される、プロセスの有効性を監視することが必要な場合がある。これらの状況では、滅菌は、全般的には、ウイルス及び芽胞などの構造を含めた、微生物などの生存可能な全ての生物活性の発生源を、完全に破壊するプロセスとして定義される。標準的な業務として、病院は、滅菌プロセスの致死性を検定するための物品のバッチを有する、無菌性インジケーターを含む。生物学的無菌性インジケーター及び化学的無菌性インジケーターの双方が使用されている。
【０００３】
生物学的無菌性インジケーターの標準的な１つのタイプは、他の汚染性生物よりも、特定の滅菌プロセスに対して何倍も強い耐性を示し得る、既知量の試験微生物、例えば、ゲオバチルス・ステアロサーモフィルス（旧バチルス・ステアロサーモフィルス）又はバチルス・アトロファエウス（旧バチルス・サブティリス）の芽胞を含む。インジケーターを滅菌プロセスに晒した後、生物活性の発生源（例えば、芽胞）を、栄養培地中でインキュベートすることにより、いずれかの発生源が滅菌プロセスを生き残ったか否かを判定することができ、発生源の代謝及び／又は増殖は、その滅菌プロセスが、生物活性の発生源の全てを破壊するためには不十分であったことを示すものである。
【０００４】
入手可能な化学的無菌性インジケーターは、滅菌プロセスの終了直後に、読み取ることができる。しかしながら、その結果は、滅菌プロセスの間に、特定の化学物質又は温度の存在などの、特定の条件が存在したこと、また潜在的には、その条件が特定の期間にわたって到達されたことを示すに過ぎない。反対に、実際に存在する全ての条件に対する、生物活性の発生源の反応が、滅菌を達成する際の、滅菌プロセスの有効性の程度に関する、より直接的かつ信頼性の高い試験である可能性がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示の一部の態様は、生物学的滅菌インジケーターを提供する。この生物学的滅菌インジケーターは、ハウジングと、液体を収容し、かつハウジング内に配置されるように寸法決めされる、容器とを含み得る。容器の少なくとも一部分は、壊れやすくすることができ、この容器は、容器が無損傷であり、液体がハウジングの内部と流体連通していない、第１の状態と、容器が断裂して、液体がハウジングの内部と流体連通する、第２の状態とを有し得る。この生物学的滅菌インジケーターは、容器が第１の状態にあるとき、その容器が中に配置される、ハウジング内の第１チャンバと、容器が第１の状態にあるとき、容器及び液体が中に配置されない、ハウジング内の第２チャンバとを、更に含み得る。第２チャンバは、容器が第１の状態にあるとき、液体と流体連通せず、容器が第２の状態にあるとき、液体と流体連通する、生物活性の発生源を含み得る。この生物学的滅菌インジケーターは、ハウジング内で、第１チャンバと第２チャンバとの間に配置される基材を更に含み得る。この基材は、第１チャンバ及び第２チャンバと流体連通して配置することができ、この基材は、基材が生物活性の発生源と直接接触しないように、更に配置することができる。
【０００６】
本開示の他の特徴及び態様は、「発明を実施するための形態」及び添付図面を熟考することによって、明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】生物学的滅菌インジケーターが、第１部分及び第２部分を含むハウジングを含む、本開示の一実施形態による、生物学的滅菌インジケーターの正面斜視図。
【図２】図１の生物学的滅菌インジケーターの背面斜視図。
【図３】図１及び図２の生物学的滅菌インジケーターの正面分解図。
【図４】生物学的滅菌インジケーターが、第１の状態で示され、生物学的滅菌インジケーターのハウジングの第２部分が、第１の位置で示される、図１の線４−４に沿った、図１〜３の生物学的滅菌インジケーターの側面断面図。
【図５】図１の線５−５に沿った、図１〜４の生物学的滅菌インジケーターの上面断面図。
【図６】生物学的滅菌インジケーターが、第２の状態で示され、生物学的滅菌インジケーターのハウジングの第２部分が、第２の位置で示される、図１〜５の生物学的滅菌インジケーターの側面断面図。
【図７】明瞭性のために諸部分が取り除かれた、図１〜６の生物学的滅菌インジケーターの上面断面図。
【図８】ブロモクレゾールパープルの水溶液の、ＵＶ−可視吸光度スペクトル、及び４−メチルウンベリフェロンの溶液の蛍光発光スペクトル。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本開示のいずれかの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、以下の説明に記載されるか、若しくは以下の図面に示される構成の詳細及び構成要素の配置に、その適用が限定されないことを理解されたい。本発明は、他の実施形態が可能であり、様々な方法で実践又は実行することが可能である。また、本明細書で使用する語法及び専門用語は、説明を目的とするものであり、限定するものとして見なすべきでないことを理解されたい。本明細書での、「含む」、「備える」、若しくは「有する」、及びこれらの変化形の使用は、その後に列記される項目及びそれらの均等物、並びに更なる項目を包含することを意味する。特に指定又は限定のない限り、用語「支持される」及び「結合される」、並びにこれらの変化形は、広範に使用され、直接的並びに間接的な支持及び結合の、双方を包含する。更には、「接続される」及び「結合される」とは、物理的又は機械的な接続若しくは結合に制約されるものではない。他の実施形態を利用することが可能であり、本開示の範囲から逸脱することなく、構造的又は論理的な変更を行うことができる点を理解されたい。更には、「前方」、「後方」、「上部」、「底部」などのような用語は、諸要素を、それらが互いに関連するものとして説明するためにのみ使用され、装置の特定の配向を記述すること、装置に必要とされるか若しくは求められる配向を指示又は示唆すること、あるいは本明細書で説明される発明が、使用時にどのように使用、装着、表示、又は配置されるかを指定することを決して意味するものではない。
【０００９】
本開示は、全般的には、滅菌インジケーターに関し、詳細には、生物学的滅菌インジケーターに関する。生物学的滅菌インジケーターはまた、「生物学的無菌性インジケーター」、又は単純に、「生物学的インジケーター」と称される場合もある。本開示の生物学的滅菌インジケーターの一部の実施形態は、内蔵型であり、滅菌プロセスの致死性を判定するために使用することができる。本開示は、全般的には、少なくとも以下のうちの１つ以上を可能にする生物学的滅菌インジケーターの構成に関する：滅菌の間、液体（例えば、水性混合物）を、１つ以上の生物活性の発生源から隔離して収容し、滅菌の後に、その液体と生物活性の発生源との組み合わせを可能にすること；１つ以上の生物活性の発生源が収容される、生物学的滅菌インジケーターの場所（例えば、閉鎖末端部）への、滅菌剤の移動を促進すること；液体を収容する壊れやすい容器（例えば、ガラスアンプルなどの、アンプル）を、滅菌の間、生物学的滅菌インジケーター内の、生物活性の発生源から隔離された場所に保持すること；生物学的滅菌インジケーターの作動の間に、壊れやすい容器から液体を解放すること（例えば、容器を断裂させることによって）；生物活性の発生源が収容される、生物学的滅菌インジケーター内の場所への、作動の間の液体の移動を制御及び／又は促進すること；実質的に一定の、滅菌剤通路を提供すること；断裂した容器の部分を、回収及び／又は保持すること（例えば、生物活性の発生源の近位への、断裂部分の移動を阻止するため）；生物学的滅菌インジケーターの発生源の場所又は検出領域から離れる方向での、生物活性の発生源及び／又はシグナル若しくは検出可能生成物の拡散を、最小限に抑えること（例えば、検出を増進するため）；並びに、生物学的滅菌インジケーター内部の流体の流れを、全般的に制御及び／又は促進すること（例えば、基材及び１つ以上の内部通気口を採用することによって）。
【００１０】
加圧蒸気、又は他の一般的な滅菌剤を使用して、医療環境内で使用される機器又は供給品を滅菌することができる。生物学的滅菌インジケーターなどの、小型の内蔵型インジケーターを使用して、滅菌プロセスの有効性を検証することができる。これらのインジケーターは、生物学的なものとすることができ、生物活性の発生源を収容することができる。
【００１１】
滅菌手順に続いて、生物活性の発生源（例えば、芽胞）に栄養を与えるために使用される、栄養培地は、滅菌手順の全体を通して存在させることができるが、所望されるまでは、生物活性の発生源によってアクセス可能とすることはできない。例えば、壊れやすいパウチ又は容器（例えば、ガラスアンプルなどのアンプル）は、生物活性の発生源から隔離して、培地を「搭載して」収容することができ、所望されるときに（例えば、滅菌プロセスの後に）、容器を断裂させて、生物活性の発生源と培地とを互いに流体連通させることができる。微生物の増殖を促進するための栄養素及び栄養培地は、当該技術分野において既知であり、例えば、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ（Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ）による出版の、Ｒｏｎａｌｄ  Ａｔｌａｓによる「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｄｉａ」に見出すことができる。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍａｔｎｅｒらの米国特許第５，０７３，４８８号では、本開示の生物学的滅菌インジケーター内で採用することができる、生物学的滅菌インジケーター内の細菌の芽胞の増殖及び検出のための栄養培地が説明されている。
【００１２】
一般的には、特定の滅菌プロセスに耐性を示す、生物活性の発生源（例えば、微生物）が、生物学的滅菌インジケーター内で使用されるために選択される。本開示の生物学的滅菌インジケーターは、１つ以上の既知の生物活性の発生源（例えば、微生物種）の生存可能存続期間、すなわち培養を含む。そのような生物活性の発生源は、微生物芽胞の形態とすることができる。生物学的滅菌インジケーター内の試験発生源は、滅菌サイクルの成功によって死滅するか、又は滅菌サイクルが何らかの理由で不十分である場合には生き残るかの、いずれかである。生物の栄養型ではなく、細菌の芽胞を使用する場合があるが、これは、少なくとも部分的には、栄養型の細菌が、滅菌プロセスによって比較的容易に死滅することが既知であるためである。芽胞はまた、優れた保管特性も有し得、数年にわたり、その休眠状態で維持することができる。結果として、一部の実施形態では、標準化された胞芽株の接種物の滅菌により、滅菌チャンバ内の全ての微生物の不活化が実施されていることの高い信頼度を提供することができる。
【００１３】
単なる例として、本開示は、生物学的滅菌インジケーター内で使用される、１つ以上の生物活性の発生源を、「芽胞」であるとして説明するが、しかしながら、生物学的滅菌インジケーターの具体的な実施形態で使用される発生源のタイプ（例えば、芽胞）は、想到される具体的な滅菌プロセスに対して高い耐性を示すことに関して選択されることを理解するべきである。したがって、本開示の種々の実施形態は、その具体的な実施形態が目的とする滅菌プロセスに応じて、種々の生物活性の発生源を使用することができる。用語「芽胞」が、簡略性のために、本開示の全体を通して使用されるが、微生物（例えば、細菌、真菌、ウイルスなど）、芽胞（例えば、細菌の芽胞、真菌の芽胞など）、酵素、酵素活性のための基質、ＡＴＰ、微生物代謝産物、又はこれらの組み合わせなどの、他の生物活性の発生源を、本開示の生物学的滅菌インジケーター内で、代わりに使用することができる点を理解するべきである。
【００１４】
語句「生物活性」は、全般的には、生体細胞に関連する、いずれかの特定の触媒プロセス、又はプロセス群を指す。生物活性の非限定的な例としては、分解酵素活性（例えば、炭水化物発酵経路）、同化酵素活性（例えば、核酸、アミノ酸、又はタンパク質の合成）、共役反応（例えば、代謝経路）、生体分子媒介レドックス反応（例えば、電子伝達系）、及び生物発光反応が挙げられる。「既定の」生物活性とは、本方法が、特定の生物学的プロセス（例えば、酵素反応）、又は生物学的プロセス群（例えば、生化学的経路）の検出に向けて進められることを意味する。特定の既定の生物活性を、特定のタイプの細胞（例えば、癌細胞又は微生物）、又は病理学的プロセスに関連付けることができる点が、当業者には理解されるであろう。
【００１５】
同様に、本開示で使用される、「芽胞キャリア」、「芽胞リザーバ」、「芽胞領域」、「芽胞増殖チャンバ」などのような、用語「芽胞」を含む語句は、単に簡略性のために使用されるが、そのような構成要素、要素、又は語句は、他の生物活性の発生源にも等しく適用され、芽胞のみを指すことを意図するものではない点を理解するべきである。例えば、上記の語句はまた、「発生源キャリア」、「発生源領域」、「発生源リザーバ」、「発生源増殖チャンバ」などと称することもできる。
【００１６】
芽胞と培地とを一体化させるプロセスは、生物学的滅菌インジケーターの「作動」と称することができる。すなわち用語「作動」及びその変化形は、生物学的滅菌インジケーターに関して使用される場合、全般的には、１つ以上の生物活性の発生源（例えば、芽胞）を、液体又は培地（例えば、対象の芽胞のための栄養培地）と流体連通させることを指すことができる。例えば、培地を収容する、生物学的滅菌インジケーター内部の壊れやすい容器が、少なくとも部分的に断裂、貫通、粉砕、亀裂などを被ることにより、その培地が生物活性の発生源と流体連通されている場合、この生物学的滅菌インジケーターは、「作動」されているとして説明することができる。換言すれば、生物学的滅菌インジケーターは、生物活性の発生源が、従前は生物活性の発生源から隔離して収容されていた培地に晒されている場合、作動されている。
【００１７】
一部の既存の滅菌インジケーター、具体的には、生物学的滅菌インジケーターは、単一のチャンバを内部に画定するハウジングを含み、その単一のチャンバの中に、様々な構成要素（生物学的滅菌インジケーター内の所望の場所（例えば、閉鎖末端部）内に、生物活性の発生源を配置するように適合される、発生源キャリア（例えば、芽胞ストリップ）、及び液体（例えば、栄養培地）を含む容器など）が配置される。しかしながら、本開示は、全般的には、ハウジング内部に形成される２つ以上のチャンバを有する、生物学的滅菌インジケーターを目的とすることにより、容器及び生物活性の発生源を、特に滅菌の間に、互いに隔離して、生物学的滅菌インジケーターの別個の領域内に収容することができる。本開示の生物学的滅菌インジケーターは、２つ以上のチャンバを含み、容器と生物活性の発生源との隔離を提供することができるが、本開示の生物学的滅菌インジケーターは、そのような構成要素間の隔離が、生物学的滅菌インジケーターの他の機能に悪影響を及ぼし得ないように設計されている。例えば、本開示の生物学的滅菌インジケーターはまた、（１）滅菌の間の、生物活性の発生源への滅菌剤の移動、及び／又は（２）所望されるとき（例えば、滅菌の後の生物学的滅菌インジケーターの作動の間）の、生物活性の発生源と接触させる液体の移動を促進することもできる。
【００１８】
一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーターを通過する流体の流れ、及び／又は生物学的滅菌インジケーター内部での流体の流れの促進は、１つ以上の内部通気口又は通気チャネルを採用することによって、提供することができる。そのような内部通気口は、生物学的滅菌インジケーター内部に形成される流体通路によって提供することができる。語句「通気口」、「内部通気口」、「通気チャネル」、又はその変化形は、全般的には、生物学的滅菌インジケーターの１つの領域（例えば、チャンバ、リザーバ、容積、部分など）内に存在する気体を、その領域内に別の流体（例えば、液体、気体、又はそれらの組み合わせ）が移動する際に、排出させることを可能にするように配置される、流体通路を指すことができる。具体的には、そのような語句は、全般的には、生物学的滅菌インジケーター内部の１つの領域が、生物学的滅菌インジケーター内部の別の領域へと通気されて（例えば、生物学的滅菌インジケーターが、環境から封止される場合）、生物学的滅菌インジケーターの所望の領域内への流体の移動を促進することを可能にする、内部流体通路を指す。更には、そのような生物学的滅菌インジケーター内部での通気により、生物学的滅菌インジケーターの、より大きい領域から、より小さい領域（例えば、閉鎖末端部）への流体の移動を、特に移動する流体の容積が、より小さい領域の容積よりも大きい場合に、促進することができる。一部の実施形態では、そのような内部の通気により、遠心分離、振盪、叩打などの、実質的な外力又はいずれの外力も使用しない場合であっても、生物学的滅菌インジケーターの内部の流体の流れ、又は生物学的滅菌インジケーターの全体を通過する流体の流れを促進することができる。
【００１９】
一部の実施形態では、本開示の生物学的滅菌インジケーターは、第１チャンバと第２チャンバとを流体結合するように配置される、第１流体通路、並びに第２チャンバを、生物学的滅菌インジケーター内部の別のチャンバ（例えば、第１チャンバ）と流体結合するように配置される、第２流体通路を含み得る。第１流体通路は、全般的には、第１チャンバから第２チャンバへ、滅菌剤（すなわち滅菌の間）及び／又は液体（すなわち作動の間）を移動させるために使用することができ、第２流体通路は、全般的には、気体が第２チャンバを抜け出ることを可能にして、第２チャンバ内への滅菌剤及び／又は液体の移動を促進するための、第２チャンバに関する通気口として、使用することができる。そのような実施形態では、第１チャンバを使用して、液体を収容する容器を収納することができ、第２チャンバを使用して、１つ以上の生物活性の発生源を収納することができる。
【００２０】
生物学的滅菌インジケーターを、滅菌サイクルに晒した後、滅菌積載物（例えば、滅菌が所望される品目、及び生物学的滅菌インジケーターを含めた）を、滅菌器から取り外すことができる。生物学的滅菌インジケーターを処理する際の、最初の工程のうちの１つは、生物学的滅菌インジケーターを作動させることを含み得る。一部の実施形態では、作動は、生物学的滅菌インジケーターを閉鎖することを含み得、この閉鎖は、生物学的滅菌インジケーターの一部分（例えば、キャップ）を、生物学的滅菌インジケーターの別の部分（例えば、管、基部、管状本体など）に対して移動させることを含み得る。一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーターの内部は、滅菌の間は、環境と流体連通したまま維持されるが、滅菌の後は、環境から遮断することができる。例えば、一部の実施形態では、滅菌の間、生物学的滅菌インジケーターのキャップを、生物学的滅菌インジケーターの内部と環境との間の流体連通を維持する第１の位置で、生物学的滅菌インジケーターの管に結合させることができる。滅菌の後、このキャップを、管に対して更に押し付けて（例えば、生物学的滅菌インジケーターの内部が、もはや環境と流体連通しない、第２の位置へ）、無菌性を維持し、かつ、芽胞の代謝活性及び／又は増殖（すなわち依然として生存可能である場合には）を支援するために使用される培地（例えば、液体）の蒸発率を低減させることができる。この培地は、滅菌の間は収容して、滅菌の後に、生物学的滅菌インジケーターの内部へと解放することができる。例えば、この培地は、滅菌の間は、壊れやすい容器内に芽胞から隔離して収容することができ、この壊れやすい容器は、滅菌の後、作動工程の間に、少なくとも部分的に断裂させて（例えば、生物学的滅菌インジケーターの管又は基部に対する、キャップの移動に応答して）、培地を芽胞と流体連通させ、芽胞の適切な栄養摂取を確実にすることができる。
【００２１】
本開示の一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーターの閉鎖（一部分を、別の部分に対して移動させ、内部を封止すること）は、培地を収容する壊れやすい容器の断裂を含むか、又は断裂を引き起こすため、生物学的滅菌インジケーターの閉鎖により、生物学的滅菌インジケーターの作動を引き起こすことができる。
【００２２】
本開示の生物学的滅菌インジケーターは、様々な滅菌プロセスと共に使用することができ、それらのプロセスとしては、蒸気（例えば、加圧蒸気）、乾性温熱、気体薬剤若しくは液体薬剤（例えば、エチレンオキシド、過酸化水素、過酢酸、オゾン、又はこれらの組み合わせ）、放射線、又はこれらの組み合わせに対する曝露が挙げられるが、それらに限定されない。少なくとも一部の滅菌プロセスでは、例えば、５０℃、１００℃、１２１℃、１３２℃、１３４℃などの高温が、プロセスに含まれるか、又は発生する場合がある。更には、例えば、１５ｐｓｉ（１×１０５Ｐａ）の高圧及び／又は真空が、発生する場合がある。
【００２３】
上述のように、具体的なシステム内で使用される生物活性の発生源は、使用される滅菌プロセスに従って選択される。例えば、蒸気滅菌プロセスに関しては、ゲオバチルス・ステアロサーモフィルス若しくはバチルス・ステアロサーモフィルス、又はこれらの芽胞を使用することができる。別の実施例では、エチレンオキシド滅菌プロセスに関しては、バチルス・アトロファエウス（旧バチルス・サブティリス）、又はその芽胞を使用することができる。一部の実施形態では、滅菌プロセスに耐性を示す芽胞としては、ゲオバチルス・ステアロサーモフィルス、バチルス・ステアロサーモフィルス、バチルス・サブティリス、バチルス・アトロファエウス、バチルス・メガテリウム、バチルス・コアギュランス、クロストリジウム・スポロゲネス、バチルス・プミルスのうちの少なくとも１つ、又はこれらの組み合わせを挙げることができるが、それらに限定されない。
【００２４】
本開示の生物学的滅菌インジケーター内での使用に関して好適とすることができる酵素及び基質は、米国特許第５，０７３，４８８号（Ｍａｔｎｅｒら）、同第５，４１８，１６７号（Ｍａｔｎｅｒら）、及び同第５，２２３，４０１号（Ｆｏｌｔｚら）で特定され、それらが開示する全てに関して、参照により本明細書に組み込まれる。
【００２５】
好適な酵素としては、加水分解酵素、並びに／あるいはバチルス・ステアロサーモフィルス及びバチルス・サブティリスなどの芽胞形成微生物由来の酵素を挙げることができる。本開示の生物学的滅菌インジケーター内で有用とすることができる、芽胞形成微生物由来の酵素としては、β−Ｄ−グルコシダーゼ、α−Ｄ−グルコシダーゼ、アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、ブチラートエステラーゼ、カプリレートエステラーゼリパーゼ、ミリステートリパーゼ、ロイシンアミノペプチダーゼ、バリンアミノペプチダーゼ、キモトリプシン、ホスホヒドロラーゼ、α−Ｄ−ガラクトシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、チロシンアミノペプチダーゼ、フェニルアラニンアミノペプチダーゼ、β−Ｄ−グルクロニダーゼ、α−Ｌ−アラビノフラノシダーゼ、Ｎ−アセチル−β−グルコサミノダーゼ、β−Ｄ−セロビオシダーゼ、アラニンアミノペプチダーゼ、プロリンアミノペプチダーゼ、及び脂肪酸エステラーゼを挙げることができる。
【００２６】
生物学的滅菌インジケーターの一部の実施形態は、酵素と反応して検出可能生成物を形成する、発色基質及び／又は蛍光発生基質を含み得る（参照により本明細書に組み込まれる、Ｍ．Ｒｏｔｈの、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ」（Ｖｏｌ．１７，Ｄ．Ｂｌｏｃｋ編，Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９６９，ｐ．８９）；Ｓ．Ｕｄｅｎｆｒｉｅｎｄの、「Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ａｓｓａｙ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ」（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９６２，ｐ．３１２）；並びにＤ．Ｊ．Ｒ．Ｌａｗｒｅｎｃｅの、「Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｉｓｔ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」（Ｖｏｌ．４，Ｓ．Ｐ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ及びＮ．Ｏ．Ｋａｐｌａｎ，編，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９５７，ｐ．１７４））。これらの基質は、それらが視覚的に検出可能なシグナル又は生成物を作り出す方式に基づいて、２つの群に分類することができる。第１群の基質は、酵素と反応して、それ自体が発色性又は蛍光性である酵素修飾生成物を形成する。第２群の基質は、色又は蛍光シグナルを発生することができる検出可能生成物を作り出すために、追加的化合物と更に反応しなければならない酵素修飾生成物を形成する。
【００２７】
結果として、語句「検出可能生成物」は、以下で説明される検出方法又はプロセスのうちのいずれかによって検出することができる、いずれかの分子、化合物、物質、基質など、又はそれらの組み合わせを指すことができる。例えば、そのような検出可能生成物は、生物活性の発生源の生存度の標示とすることができ、そのような生成物の検出により、一般的には、滅菌プロセスの失敗又は不十分性を示すことができる。
【００２８】
一部の実施形態では、活性酵素源は、（１）精製され、単離される、適切な微生物由来の酵素、（２）その酵素が常在するか、又は遺伝子工学によって付加される微生物、及び／又は（３）芽胞形成若しくは増殖の間に、その酵素が付加されていることにより、その酵素が取り込まれるか、又は関連付けられる微生物（例えば、芽胞形成の間に、芽胞に付加される酵素は、その芽胞の内部に取り込まれる）とすることができる。一部の実施形態では、酵素源として利用することができる微生物としては、芽胞若しくは栄養型のいずれかの状態の細菌又は真菌が挙げられる。一部の実施形態では、酵素源としては、バチルス、クロストリジウム、ニューロスポラ、カンジダ、又はそのような微生物種の組み合わせが挙げられる。
【００２９】
α−Ｄ−グルコシダーゼ酵素は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄ）より、「ＡＴＣＣ  ８００５」及び「ＡＴＣＣ  ７９５３」として市販されるものなどのバチルス・ステアロサーモフィルスの芽胞内に特定されている。β−Ｄ−グルコシダーゼ酵素は、Ｂ．サブティリス（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎより「ＡＴＣＣ  ９３７２」として市販）内に見出されている。
【００３０】
単離酵素が利用されるか、又は酵素源として使用される微生物が、天然汚染物質よりも滅菌条件に対して耐性を示さない場合には、滅菌条件を監視するために通常使用される別の微生物を、その酵素源と共に、滅菌サイクルに晒すことができる。そのような場合には、本開示の方法は、滅菌サイクル後に残存するいずれかの生存微生物を、水性栄養培地でインキュベートして、滅菌の有効性を確認する工程を含み得る。
【００３１】
全般的には、滅菌プロセスの有効性を監視することは、本開示の生物学的滅菌インジケーターを、滅菌器内に定置することを含み得る。一部の実施形態では、滅菌器は、滅菌チャンバを含み、この滅菌チャンバは、滅菌される複数個の物品を収容するようにサイズ決定することができ、チャンバから空気及び／若しくは他の気体を排気する手段、並びにチャンバに滅菌剤を添加するための手段を装備することができる。本開示の生物学的滅菌インジケーターは、最も滅菌が困難である、滅菌器の区域内（例えば、排出管の上方）に配置することができる。あるいは、本開示の生物学的滅菌インジケーターは、滅菌チャンバ内に生物学的滅菌インジケーターを配置する際に、滅菌される物品に隣接して（又は、概して近位に）配置することもできる。更には、生物学的滅菌インジケーターは、滅菌器内で使用することができるプロセスチャレンジデバイス内に配置することができる。
【００３２】
滅菌プロセスは、滅菌される物品及び生物学的滅菌インジケーターを、滅菌剤に晒すことを更に含み得る。一部の実施形態では、滅菌剤は、チャンバ内に存在する、あらゆる空気又は他の気体の少なくとも一部分を、チャンバから排気した後に、滅菌チャンバに添加することができる。あるいは、滅菌剤は、チャンバを排気することなく、チャンバに添加することもできる。一連の排気行程を使用することにより、滅菌剤を、チャンバ内部の全ての所望の区域に到達させ、生物学的滅菌インジケーターを含めた、滅菌される全ての所望の物品と接触させることを確実にすることができる。
【００３３】
全般的には、生物学的滅菌インジケーターを、滅菌サイクルに晒した後に、液体（例えば、増殖培地、固体増殖培地と混合することができる水など、又はそれらの組み合わせ）を、芽胞に導入することができる。上述のように、芽胞に液体を導入する工程は、「作動工程」と称することができる。芽胞が滅菌サイクルを生き残った場合には、液体は、その芽胞の代謝活性及び／又は増殖を促進することになり、そのような活性及び／又は増殖を調査することができる。増殖が観察される場合には、その滅菌サイクルは、一般に無効であると判断される。
【００３４】
図１〜７は、本開示の一実施形態による、生物学的滅菌インジケーター１００を示す。生物学的滅菌インジケーターの他の好適な実施形態は、同時係属のＰＣＴ国際公開第２０１１／０１１１８９号、表題「Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｕｓｉｎｇ  Ｓａｍｅ」；米国特許出願第６１／４０９，０４２号、表題「Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄ」；同第６１／４０８，９９７号、表題「Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄ」；及び同第６１／４０８，９８８号、表題「Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｕｓｉｎｇ  Ｓａｍｅ」で説明され、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００３５】
生物学的滅菌インジケーター１００は、ハウジング１０２を含み得、このハウジング１０２は、一体に結合されて、内蔵型の生物学的滅菌インジケーターを提供するように適合される、第１部分１０４及び第２部分１０６（例えば、キャップ）を含み得る。一部の実施形態では、第１部分１０４及び第２部分１０６は、同じ材料で形成することができ、一部の実施形態では、第１部分１０４及び第２部分１０６は、異なる材料で形成することができる。ハウジング１０２は、生物学的滅菌インジケーター１００のリザーバ１０３を画定することができ、このリザーバ１０３内に、他の構成要素を配置することができ、滅菌プロセスの間、滅菌剤を注ぎ込むことができる。
【００３６】
ハウジング１０２は、第１部分１０４の壁部１０８、及び／又は第２部分１０６の壁部１１０などの、少なくとも１つの液体不透過性の壁部によって、画定することができる。一部品の一体型ハウジング１０２もまた採用することができ、又は第１部分１０４及び第２部分１０６は、本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく、他の形状、寸法、若しくは相対的構造を取ることができる点を理解するべきである。ハウジング１０２（例えば、壁部１０８及び壁部１１０）に関して好適な材料としては、ガラス、金属（例えば、箔）、ポリマー（例えば、ポリカーボネート（ＰＣ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリフェニレン（ＰＰＥ）、ポリエチレン、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリエステル（例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ））、ポリメタクリル酸メチル（ＰＭＭＡ又はアクリル樹脂）、アクリロニトリルブタジエンスチレン（ＡＢＳ）、シクロオレフィンポリマー（ＣＯＰ）、シクロオレフィンコポリマー（ＣＯＣ）、ポリスルホン（ＰＳＵ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリエーテルイミド（ＰＥＩ）、ポリブチレンテレフタレート（ＰＢＴ））、セラミック、磁器、又はこれらの組み合わせを挙げることができるが、それらに限定されない。
【００３７】
一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、液体（例えば、水性混合物）１２２を収容し、かつ生物学的滅菌インジケーター１００の内部、例えば、ハウジング１０２の少なくとも一部分の内部（例えば、少なくとも、ハウジング１０２の第１部分１０４の内部）に受容されるように寸法決めされる、壊れやすい容器１２０を更に含み得る。壊れやすい容器１２０は、様々な材料で形成することができ、それらの材料としては、金属（例えば箔）、ポリマー（例えば、ハウジング１０２に関して上記に列挙されるポリマーのうちのいずれか）、ガラス（例えば、ガラスアンプル）、及びこれらの組み合わせのうちの１つ以上が挙げられるが、それらに限定されない。一部の実施形態では、容器１２０の一部分のみが壊れやすく、例えば、容器１２０は、壊れやすい部分又はカバー（例えば、壊れやすい障壁、フィルム、膜など）を含み得る。壊れやすい容器１２０は、容器１２０が無損傷であり、かつ液体１２２が中に収容される第１の状態、及び容器１２０の少なくとも一部分が断裂する第２の状態を有し得る容器１２０の第２の状態では、液体１２２は、例えば容器１２０が生物学的滅菌インジケーター１００内に配置される場合、生物学的滅菌インジケーター１００のリザーバ１０３と流体連通することができる。
【００３８】
例示の実施形態に示すように、容器１２０は、以下でより詳細に説明される、挿入部材１３０によって、生物学的滅菌インジケーター１００内部で定位置に保持し、かつ／又は断裂させることができる。
【００３９】
ハウジング１０２の第１部分１０４は、生物学的滅菌インジケーター１００の構成要素の大半を収容するように適合させることができ、「管」、「管状本体」、「基部」などと称することができる。ハウジング１０２は、ハウジング１０２の第１部分１０４及び第２部分１０６の一方若しくは双方によって画定することができる、リザーバ１０３を含み得る。生物学的滅菌インジケーター１００は、リザーバ１０３と流体連通して配置される、芽胞又は別の生物活性の発生源１１５（又は芽胞の所在部位）を更に含み得る。図１〜３に示すように、ハウジング１０２の第２部分１０６は、１つ以上の開口１０７を含み、ハウジング１０２の内部（例えば、リザーバ１０３）と環境との間の流体連通を提供することができる。例えば、１つ以上の開口１０７は、滅菌プロセスの間、芽胞１１５と環境との間の流体連通を提供することができ、生物学的滅菌インジケーター１００内への入口としての、かつ滅菌剤通路１６４（以下でより詳細に説明する）の入口としての役割を果たすことができる。一部の実施形態では、ハウジング１０２の第２部分１０６を、ハウジング１０２の第１部分１０４の第１（例えば、開放）末端部１０１に結合することができ、芽胞１１５を、ハウジング１０２の第１部分１０４の、第１末端部１０１とは反対側の第２（例えば、閉鎖）末端部１０５に配置することができる。
【００４０】
一部の実施形態では、障壁又はフィルター（例えば、無菌障壁、図示せず）を、滅菌剤通路１６４内に（例えば、開口１０７によって形成される入口に）配置して、汚染性若しくは異質の生物、物体、又は材料が、生物学的滅菌インジケーター１００に入り込むことを阻止することができる。そのような障壁は、気体透過性、微生物不透過性の材料を含み得、様々な結合手段によって、ハウジング１０２に結合することができ、それらの手段としては、接着剤、熱融着、超音波溶接などが挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、この障壁は、ハウジング１０２の第１部分１０４に結合される（例えば、スナップ嵌め係合、ねじ込み係合、圧入係合、又はこれらの組み合わせで）支持構造（第２部分１０６など）を介して、滅菌剤通路１６４に結合することができる。滅菌剤への曝露の間、滅菌剤は、この障壁を通過して、滅菌剤通路１６４に入り、芽胞１１５と接触することができる。
【００４１】
一部の実施形態では、例示の実施形態に示すように、ハウジング１０２は、内側壁部（又は部分的壁部）１１８、棚部、隔壁、フランジなどによって少なくとも部分的に隔離することができる下方部分１１４及び上方部分１１６を含み得、この内側壁部１１８内には、下方部分１１４と上方部分１１６との間の流体連通を提供する、開口部１１７を形成することができる。一部の実施形態では、ハウジング１０２の第１部分１０４の下方部分１１４（単純に「下方部分１１４」又は「ハウジング１０２の下方部分１１４」と称される場合もある）は、芽胞１１５又は芽胞の所在部位を収容するように適合させることができる。一部の実施形態では、下方部分１１４は、ハウジング１０２の「検出部分」又は「検出領域」と称することができるが、これは、下方部分１１４の少なくとも一部分を、芽胞の増殖の標示に関して検査することができるためである。更には、一部の実施形態では、ハウジング１０２の第１部分１０４の上方部分１１６（簡略性のために、「上方部分１１６」又は「ハウジング１０２の上方部分１１６」と称される場合もある）は、特に作動の前に、壊れやすい容器１２０の少なくとも一部分を収容するように適合させることができる。
【００４２】
一部の実施形態では、ハウジング１０２の上方部分１１６によって少なくとも部分的に画定される、リザーバ１０３の部分は、第１チャンバ（又はリザーバ、区画、領域、又は容積）１０９と称することができ、ハウジング１０２の下方部分１１４によって少なくとも部分的に画定される、リザーバ１０３の部分は、第２チャンバ（又はリザーバ、区画、領域、又は容積）１１１と称することができる。一部の実施形態では、第２チャンバ１１１は、「芽胞増殖チャンバ」又は「検出チャンバ」と称することができ、滅菌プロセスの有効性を判定するために、芽胞の生存度に関して検査される容積を含み得る。
【００４３】
第１チャンバ１０９及び第２チャンバ１１１は、滅菌剤及び液体１２２が、第１チャンバ１０９から（すなわち第１チャンバ１０９を通過して）第２チャンバ１１１に移動することを可能にするように、互いに流体連通して配置することができる。一部の実施形態では、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間の流体接続の程度（例えば、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１とを接続する、開口部１１７などの、開口部のサイズ）は、作動工程（すなわち液体１２２が容器１２０から解放されること）の後に、作動工程と同時に、及び／又は作動工程に応答して、増大させることができる。一部の実施形態では、第１チャンバ１０９（例えば、上方部分１１６内の）と第２チャンバ１１１（例えば、下方部分１１４内の）との間の流体連通（又は流体接続の度合）の制御は、挿入部材１３０の少なくとも一部分によって提供することができる。
【００４４】
容器１２０は、滅菌の間、及び容器１２０が第１の断裂していない状態にあるとき、第１チャンバ１０９内に配置して、保持することができる。芽胞１１５は、容器１２０が第１の状態にあるとき、第２チャンバ１１１内に環境と流体連通して収容することができる。第１チャンバ１０９及び第２チャンバ１１１は、容器１２０が、第２チャンバ１１１内に存在しないように、具体的には、容器１２０が、第１の断裂していない状態にあるときに、第２チャンバ１１１内に存在しないように構成することができる。滅菌剤は、滅菌の間に、第２チャンバ１１１内に移動することができ（例えば、第１チャンバ１０９を介して）、液体１２２は、作動の間に、容器１２０が断裂して、液体１２２がハウジング１０２の内部へと解放されると、第２チャンバ１１１内に移動することができる（例えば、第１チャンバ１０９から）。
【００４５】
結果として、容器１２０が第１の状態にあるとき、第１チャンバ１０９及び第２チャンバ１１１は、互いに、また環境と（例えば、滅菌の間）、流体連通することができる。例えば、第１チャンバ１０９及び第２チャンバ１１１は、１つ以上の開口１０７を介して、環境と流体連通することができる。一部の実施形態では、第１チャンバ１０９及び第２チャンバ１１１は、滅菌剤が生物学的滅菌インジケーター１００に入る際に、第１チャンバ１０９が、第２チャンバ１１１の上流に配置されるような方式で、環境と流体連通することができる。すなわち第１チャンバ１０９は、滅菌剤の入口（例えば、１つ以上の開口１０７）と第２チャンバ１１１との間に配置することができ、滅菌剤の入口は、第１チャンバ１０９の、第２チャンバ１１１とは反対の側に、配置することができる。
【００４６】
図４及び図６に示すように、一部の実施形態では、第１チャンバ１０９は、特に容器１２０が第１の状態にある場合、第１部分１０４及び第２部分１０６の一方若しくは双方によって画定することができる。更には、一部の実施形態では、第１チャンバ１０９は、ハウジング１０２の第１部分１０４の開放末端部１０１に隣接し、ハウジング１０２の第２部分１０６に隣接して配置され、かつ／又は第２部分１０６によって少なくとも部分的に画定される、第１末端部１１２を含み得る。第１チャンバ１０９は、第２チャンバ１１１に隣接し、かつ第２チャンバ１１１と流体連通して配置され、ハウジング１０２の閉鎖末端部１０５に向けて配置される、第２末端部１３を更に含み得る。第１チャンバ１０９の第１末端部１１２は、ハウジング１０２の第１部分１０４及び／又は第２部分１０６によって、画定することができる。
【００４７】
図４及び図６に更に示すように、一部の実施形態では、第２チャンバ１１１は、第１チャンバ１０９に隣接し、かつ第１チャンバ１０９と流体連通して配置され、ハウジング１０２の開放末端部１０１に向けて配置される、第１末端部１２４と、ハウジング１０２の閉鎖末端部１０５によって少なくとも部分的に画定されるか、閉鎖末端部１０５を含むか、又は閉鎖末端部１０５に隣接して配置される、第２末端部１２５とを含み得る。
【００４８】
換言すれば、図４及び図６に示すように、生物学的滅菌インジケーター１００は、長手方向ＤＬを含み得、一部の実施形態では、第１チャンバ１０９は、第２チャンバ１１１の長手方向上方に、配置することができる。
【００４９】
一部の実施形態では、第２チャンバ１１１は、生物学的滅菌インジケーター１００の閉鎖末端部１０５によって、少なくとも部分的に画定することができるか、閉鎖末端部１０５を含み得るか、又は閉鎖末端部１０５に隣接して配置することができる。更には、一部の実施形態では、第２チャンバ１１１は、第１チャンバ１０９、及び生物学的滅菌インジケーター１００が作動される際に解放される、容器１２０内の液体１２２の容積のうちの少なくとも一方よりも小さく（例えば、容積及び／又は断面積で）することができる。結果として、そのような実施形態では、第２チャンバ１１１は、第２チャンバ１１１内に存在する気体（例えば、空気）が、第２チャンバ１１１内への流体の移動を阻止する恐れがある、空気閉塞効果を呈し得る。一部の実施形態では、以下でより詳細に説明するように、第２チャンバ１１１が、生物学的滅菌インジケーター１００の別の部分に通気することを可能にする、流体通路により、第２チャンバ１１１内への流体の移動を促進することができる。
【００５０】
一部の実施形態では、壁部１１８（「分割壁」と称される場合もある）は、角度を付けるか、又は傾斜させて、例えば、ハウジング１０２の長手方向ＤＬに対して、非ゼロの角度かつ非直角の方向に（例えば、長手方向ＤＬが、ハウジング１０２の長さに沿って延びる場合）配置することができる。壁部１１８の、そのような角度付け又は傾斜により、滅菌の後に、容器１２０が破砕されて、液体１２２を解放した後の、上方部分１１６から下方部分１１４への、液体１２２の移動を促進することができる。
【００５１】
図１〜３に示すように、一部の実施形態では、壁部１１８は、ハウジング１０２の内法寸法の変化によって、少なくとも部分的に形成することができる。例えば、図示のように、壁部１１８は、第１チャンバ１０９内の第１の長手方向位置から、第２チャンバ１１１内の第２の長手方向位置への、断面積の減少によって形成することができる。更には、単なる例として、ハウジング１０２の内部断面形状を、第１チャンバ１０９から第２チャンバ１１１への移行部で、第１チャンバ１０９内の実質的に丸い形（例えば、周長の５０％未満を構成する、１つの平坦面を有する）から、第２チャンバ１１１内の実質的な平行六面体（例えば、実質的な正方形）へと、変化させることができる。
【００５２】
更には、一部の実施形態では、壁部１１８はまた、ハウジング１０２の外法寸法の変化によって、少なくとも部分的に形成することもできる。図１〜３に示すように、一部の実施形態では、ハウジング１０２は、壁部１１８と一致して角度付けされ（壁部１１８が角度付けされる場合には）、かつハウジング１０２の外側形状及び外法寸法の変化を含む、段差部（又は、棚部、張り出し部、移行部など）１２３を含む。しかしながら、一部の実施形態では、ハウジング１０２の内法寸法が変化して、第１チャンバ１０９とは異なる断面形状又は寸法を有する、第２チャンバ１１１を作り出す場合であっても、ハウジング１０２の外側形状及び外法寸法を変化させる必要はないこと、又は内側形状及び／又は内法寸法の変化と一致して変化させる必要はないことを理解するべきである。例えば、一部の実施形態では、段差部１２３は、長手方向ＤＬに対して、実質的に垂直に配向することができる。
【００５３】
一部の実施形態では、リザーバ１０３は、少なくとも約０．５ミリリットル（ｍＬ）の容積を有し、一部の実施形態では、少なくとも約１ｍＬ、一部の実施形態では、少なくとも約１．５ｍＬの容積を有する。一部の実施形態では、リザーバ１０３は、約５ｍＬ以下の容積を有し、一部の実施形態では、約３ｍＬ以下、一部の実施形態では、約２ｍＬ以下の容積を有する。
【００５４】
一部の実施形態では、壊れやすい容器１２０は、少なくとも約０．２５ｍＬの容積を有し、一部の実施形態では、少なくとも約０．５ｍＬ、一部の実施形態では、少なくとも約１ｍＬの容積を有する。一部の実施形態では、壊れやすい容器１２０は、約５ｍＬ以下の容積を有し、一部の実施形態では、約３ｍＬ以下、一部の実施形態では、約２ｍＬ以下の容積を有する。
【００５５】
一部の実施形態では、壊れやすい容器１２０内に収容される液体１２２の容積は、少なくとも約５０マイクロリットル、一部の実施形態では、少なくとも約７５マイクロリットル、一部の実施形態では、少なくとも約１００マイクロリットルである。一部の実施形態では、壊れやすい容器１２０内に収容される液体１２２の容積は、約５ｍＬ以下、一部の実施形態では、約３ｍＬ以下、一部の実施形態では、約２ｍＬ以下である。
【００５６】
一部の実施形態では、第１チャンバ１０９（すなわちハウジング１０２の第１部分１０４の上方部分１１６によって形成される）は、少なくとも約５００マイクロリットル（又は立方ミリメートル）の容積を有し、一部の実施形態では、少なくとも約１０００マイクロリットル、一部の実施形態では、少なくとも約２０００マイクロリットル、一部の実施形態では、少なくとも約２５００マイクロリットルの容積を有する。一部の実施形態では、第１チャンバ１０９は、約５０００マイクロリットル以下の容積を有し、一部の実施形態では、約４０００マイクロリットル以下、一部の実施形態では、約３０００マイクロリットル以下の容積を有する。一部の実施形態では、第１チャンバ１０９は、約２７９０マイクロリットル、又は２８００マイクロリットルの容積を有する。
【００５７】
一部の実施形態では、第２チャンバ１１１（すなわちハウジング１０２の第１部分１０４の下方部分１１４によって形成される）は、少なくとも約５マイクロリットルの容積を有し、一部の実施形態では、少なくとも約２０マイクロリットル、一部の実施形態では、少なくとも約３５マイクロリットルの容積を有する。一部の実施形態では、第２チャンバ１１１は、約２５０マイクロリットル以下の容積を有し、一部の実施形態では、約２００マイクロリットル以下、一部の実施形態では、約１７５マイクロリットル以下、一部の実施形態では、約１００マイクロリットル以下の容積を有する。一部の実施形態では、第２チャンバ１１１は、約２０８マイクロリットル、又は２１０マイクロリットルの容積を有する。
【００５８】
一部の実施形態では、第２チャンバ１１１の容積は、第１チャンバ１０９の容積の少なくとも約５％であり、一部の実施形態では、少なくとも約７％である。一部の実施形態では、第２チャンバ１１１の容積は、第１チャンバ１０９の容積の約２０％以下であり、一部の実施形態では、約１５％以下、一部の実施形態では、約１２％以下、一部の実施形態では、約１０％以下である。一部の実施形態では、第２チャンバ１１１の容積は、第１チャンバ１０９の容積の約７．５％である。
【００５９】
一部の実施形態では、第２チャンバ１１１の容積は、容器１２０内に収容される液体１２２の容積の約６０％以下であり、一部の実施形態では、約５０％以下、一部の実施形態では、約２５％以下である。一部の実施形態では、容器１２０内に収容される液体１２２の容積よりも実質的に少ない容積を有するように、第２チャンバ１１１を設計することにより、その追加的な液体容積が、意図せざる蒸発を補償し得ることを確実にすることができる。
【００６０】
一部の実施形態では、第１チャンバ１０９（すなわちハウジング１０２の第１部分１０４の上方部分１１６によって形成される）は、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間の移行部で、又は第２チャンバ１１１に隣接する位置で、少なくとも約２５ｍｍ２の断面積（又は、平均断面積）を有し、一部の実施形態では、少なくとも約３０ｍｍ２、一部の実施形態では、少なくとも約４０ｍｍ２の断面積を有する。一部の実施形態では、第１チャンバ１０９は、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間の移行部で、又は第２チャンバ１１１に隣接する位置で、約１００ｍｍ２以下の断面積を有し、一部の実施形態では、約７５ｍｍ２以下、一部の実施形態では、約５０ｍｍ２以下の断面積を有する。
【００６１】
一部の実施形態では、第２チャンバ１１１（すなわちハウジング１０２の第１部分１０４の下方部分１１４によって形成される）は、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間の移行部で、又は第１チャンバ１０９に隣接する位置で、少なくとも約５ｍｍ２の断面積を有し、一部の実施形態では、少なくとも約１０ｍｍ２、一部の実施形態では、少なくとも約１５ｍｍ２の断面積を有する。一部の実施形態では、第２チャンバ１１１は、約３０ｍｍ２以下の断面積（又は、平均断面積）を有し、一部の実施形態では、約２５ｍｍ２以下、一部の実施形態では、約ｍｍ２以下の断面積を有する。
【００６２】
一部の実施形態では、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間の移行部での、第２チャンバ１１１の断面積は、その移行部での第１チャンバ１０９の断面積の、約６０％以下、一部の実施形態では、約５０％以下、一部の実施形態では、約４０％以下、一部の実施形態では、約３０％以下とすることができる。
【００６３】
一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、基材１１９を更に含み得る。一部の実施形態では、図１〜４、及び図６に示すように、基材１１９は、壁部１１８に隣接して、具体的には、壁部１１８の上に安置されるように、配置することができる。基材１１９は、生物学的滅菌インジケーター１００の上方部分１１６（すなわち第１チャンバ１０９）と下方部分１１４（すなわち第２チャンバ１１１）との間に配置することができ、一部の実施形態では、第１チャンバ１０９及び第２チャンバ１１１を、少なくとも部分的に画定することができる。それゆえ、一部の実施形態では、基材１１９は、容器１２０と芽胞１１５との間に配置することができる。一部の実施形態では、基材１１９は、基材１１９が第２チャンバ１１１内に配置されないように、第１チャンバ１０９内に、すなわち壁部１１８の第１チャンバ側上に配置することができる。
【００６４】
更には、基材１１９は、第２チャンバ１１１から外への、検定シグナル（例えば、蛍光）の拡散を、最小限に抑えるように配置することができる。一部の実施形態では、基材１１９の材料構成に応じて、基材１１９はまた、生物学的滅菌インジケーター１００からのシグナルの正確な読み取りを阻害する恐れのある、染料、指示試薬、又は溶液からの他の材料（すなわち「阻害物質」）を吸収することもできる。一部の実施形態では、図１〜４、６、及び図７に示すように、基材１１９は、１つ以上の開口１２１を含み得、この開口１２１は、生物学的滅菌インジケーター１００の第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間の、流体の移動を制御する（すなわち数、サイズ、形状、及び／又は場所に応じて、促進並びに／あるいは制限する）ように構成することができ、具体的には、容器１２０が断裂される際、芽胞１１５への液体１２２の移動を促進することができる。単なる例として、図示のように、開口１２１を、基材１１９の中心の前方（又は「の前部」）に配置した場合、具体的な利益又は有利点が認められた。図１〜７に示す実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００又は内部構成要素の「前方」とは、全般的には、平坦面１２６に向かうものとして説明することができる。全般的には、生物学的滅菌インジケーター１００の「前方」は、読み取り装置によって検査される、生物学的滅菌インジケーター１００の部分を指すことができる。
【００６５】
更には、単なる例として、開口１２１は、円形又は丸い形であるとして示されるが、しかしながら、他の断面開口形状も可能であり、本開示の範囲内にある。更には、単なる例として、また図３に示すように、基材１１９は、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間の移行部で、第１チャンバの断面積を実質的に充填するように成形される。しかしながら、基材１１９の他の形状も可能であり、生物学的滅菌インジケーター１００の、ハウジング１０２、第１チャンバ１０９、第２チャンバ１１１、壁部１１８、又は別の部分に対応するように適合させることができる。
【００６６】
上述のように、第２チャンバ１１１は、検査される容積を含み得る。そのような容積を、芽胞の生存度に関して検定し、滅菌手順の致死性又は有効性を判定することができる。一部の実施形態では、この検査される容積は、第２チャンバ１１１の全て、又は一部分とすることができる。一部の実施形態では、基材１１９は、検査される容積の外側に配置することができ、このことにより、その容積内の、検定プロセスを妨害する恐れがある構造の数を、最小限に抑えることができる。例えば、一部の実施形態では、基材１１９が、芽胞１１５、芽胞キャリア１３５、及び芽胞リザーバ１３６のうちの少なくとも１つと直接接触しないように、基材１１９を配置することができる。一部の実施形態では、基材１１９が、検出システム（例えば、蛍光励起源及び発光検出器などの、光学検出システム）と、芽胞１１５、芽胞キャリア１３５、及び芽胞リザーバ１３６のうちの少なくとも１つとの間に位置しないように、基材１１９を配置することができる。基材１１９は、容器１２０が第１の状態及び／又は第２の状態にあるとき、特に、容器１２０が第２の状態にあるとき、上記の位置を有し得る。
【００６７】
一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００内での基材の位置は、芽胞の生存度に関する迅速な検出システム（例えば、蛍光検出）と、より緩徐な（例えば、一晩又は２４時間の）検出システム（例えば、芽胞の増殖に反応して色変化を呈し得る（例えば、２４時間で）ｐＨ指示薬）との相関関係に影響を及ぼし得る。例えば、一部の実施形態では、基材１１９は、以下の実施例１で示すように、様々な時点での蛍光の読み取り値と、２４時間後の増殖の結果との相関関係を改善することができる。具体的には、基材１１９が、本明細書で説明され、かつ図１、２、及び図４〜７に示すような、「第１」の位置にある場合、蛍光は、増殖との正確な相関関係を示し得る。実施例１に示すように、そのような相関関係は、他の基材の位置、及び基材を有さない生物学的滅菌インジケーターに勝る改善とすることができる。
【００６８】
更には、基材１１９は、容器１２０が第１の状態にあるとき、基材１１９が容器１２０と直接接触しないように、生物学的滅菌インジケーター１００内に配置することができる。例えば、一部の実施形態では、基材１１９は、第１チャンバ１０９内に（例えば、第１チャンバ１０９の底部末端部（例えば、第２末端部１１３）に隣接して）配置することができるが、そのような実施形態であっても、基材１１９が容器１２０に接触しないように、基材１１９を配置することができる。例えば、図１、２、及び図４〜６に示すように、一部の実施形態では、容器１２０が第１の状態にあるとき、挿入部材１３０を、容器１２０と基材１１９との間に配置することができ、それにより、挿入部材１３０が、容器１２０を第１の状態に保持する。挿入部材１３０、又はその一部分は、基材１１９に隣接して配置することができる。例えば、例示の実施形態に示すように、基材１１９は、挿入部材１３０と壁部１１８との間に（例えば、間に挟み込んで）配置することができる。それゆえ、一部の実施形態では、基材１１９は、挿入部材１３０と第２チャンバ１１１との間に配置することができる。一部の実施形態では、容器１２０が第２の状態にあるとき、容器１２０の断裂部分、すなわち破片が、基材１１９と接触する場合があるが、一部の実施形態では、容器１２０の断裂部分は、基材１１９と接触することがない。
【００６９】
上述のように、一部の実施形態では、基材１１９は、生物学的滅菌インジケーター１００内の、流体の流れを制御するか、若しくは流体の流れに影響を及ぼすように、具体的には、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間の流体の流れを制御するように、配置及び構成することができる。例えば、一部の実施形態では、基材１１９は、滅菌剤が第２チャンバ１１１に（及び芽胞１１５に）送達される速度を制御するように構成する（例えば、サイズ決定する、成形する、配向する、かつ／又は特定の材料で構築する）ことができ、それによって、芽胞１１５の「殺傷率」を制御することができる。例えば、滅菌剤の送達速度は、基材１１９が、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間に存在しない場合には、そうではない場合よりも小さくなる可能性がある。すなわち一部の実施形態では、基材１１９は、芽胞１１５を選択的に防護することによって、殺傷率を制御することができる。一部の実施形態では、基材１１９は、生物学的滅菌インジケーター１００内での、流体の流れを制御するための、具体的には、滅菌剤の送達を制御するための、「弁」としての役割を果たし得る。更には、一部の実施形態では、基材１１９は、例えば、芽胞１１５が滅菌プロセスを生き残った場合には、芽胞１１５によって生成される反応を、増進又は調節する特性を有し得る。
【００７０】
更には、一部の実施形態では、基材１１９は、検査される容積から外へと検出可能生成物が拡散する速度を制御するように構成する（例えば、サイズ決定する、成形する、配置する、配向する、かつ／又は特定の材料で構築する）ことができる。一部の実施形態では、検出可能生成物は、芽胞の生存度を示すシグナル（例えば、蛍光シグナル）を含み得、一部の実施形態では、検出可能生成物は、芽胞１１５自体とすることができる。検査される容積から外への、検出可能生成物の拡散を制御することは、液体１２２の容積が、第２チャンバ１１１の（又は検査される容積の）容積よりも大きい実施形態で、特に有用とすることができるが、これは容器１２０が、その第２の断裂した状態にあるとき、そのような実施形態での液体１２２（liquid 112）が、生物学的滅菌インジケーター１００内で、第２チャンバ１１１（又は検査される容積）よりも高いレベルまで、延在し得るためである。そのような実施形態では、検出可能生成物は、液体１２２の容積の全体にわたって（すなわち検査される容積の、外側の容積にまで）、自由に移動することができるが、ただし、基材１１９などの、そのような拡散を制御するための何らかの障壁又は手段が存在する場合は、その限りではない。例えば、一部の実施形態では、基材１１９を、検査される容積の直上の（すなわち液体１２２のレベルよりも低い）レベルに配置して、基材１１９の上方に位置する液体１２２の部分への、検出可能生成物の移動を阻止することができる。
【００７１】
一部の実施形態では、基材１１９は、滅菌剤及び／又は検出可能生成物に対する、物理的障壁若しくは遮断物を提供することによって、滅菌剤の送達速度（例えば、第２チャンバ１１１内への）及び／又は検出可能生成物の拡散速度（例えば、第２チャンバ１１１から外への）を制御することができる。そのような物理的障壁はまた、容器１２０が、第２の断裂した状態にあるとき、容器１２０の破砕部分を回収する機能も果たし、その破砕部分が、検出プロセス（例えば、光学検出プロセス）を遮断、屈折、反射、又は他の方法で妨害する恐れがある、検査される容積内への破砕部分の移動を阻止することができる。
【００７２】
更には、一部の実施形態では、液体１２２は、芽胞１１５と接触する前、又は接触した後に、正確な検定若しくは検出プロセスを妨害する恐れがある、１種以上の阻害物質又は他の構成成分を含み得る。一部の実施形態では、阻害物質の例としては、染料、指示試薬、芽胞の生存度の検出のために不可欠な反応（例えば、酵素反応）を阻害する恐れがある他の材料若しくは物質（例えば、塩類など）、検出プロセスを妨害する恐れがある他の材料若しくは物質のうちの少なくとも１つ、又はこれらの組み合わせを挙げることができる。そのような実施形態では、基材１１９は、液体１２２からの、又は少なくとも、検査される液体１２２の容積からの１種以上の阻害物質を、吸収及び／又は選択的に濃縮するように構成することができる。基材が指示試薬（又は、その生物学的誘導体）を受容及び濃縮することについての判定は、実施例３に示すように、指示試薬（又は、その生物学的誘導体）を含む水性媒質を、一定の期間、流体的に基材と接触させ、その指示試薬（又は、その生物学的誘導体）の存在に関して基材を分析することによって達成することができる。
【００７３】
例えば、一部の実施形態では、芽胞１１５と接触する前に、又は芽胞１１５との接触の結果として、２種以上の指示試薬が液体１２２中に存在し得る。そのような実施形態では、第１の指示試薬（例えば、蛍光検出に関して使用される）は、芽胞の生存度の検出のために不可欠とすることができるが、その一方で、第２の指示試薬（例えば、ｐＨ指示薬）が、実際に、第１の指示試薬の検出に干渉する場合がある。単なる例として、第２の指示試薬がｐＨ指示薬（例えば、以下で説明されるｐＨ指示薬のうちの１つ以上）である実施形態では、ｐＨ指示薬は、例えばそのｐＨ指示薬が、第１の指示試薬の蛍光のスペクトルバンドと類似する波長で、電磁放射線を放出する（例えば、ｐＨ指示薬が色の推移を呈する際に）実施形態では、第１の指示試薬の蛍光読み取りに抵触又は干渉する場合がある。そのような実施形態では、基材１１９は、液体１２２と接触して配置される際に、第２の指示試薬を吸収及び／又は選択的に濃縮して、液体１２２中の、又は少なくとも検査される液体１２２の容積中の、第２の指示試薬の濃度を低減するように構成する（例えば、適切な材料で形成する）ことができる。
【００７４】
数多くの、多様な起源の色覚性及び蛍光発生酵素基質が、既定の生物活性を検出するための方法で、使用可能であり、本開示による第１又は第２の指示試薬としての使用に関して好適である。これらの中には、様々な蛍光発生４−メチルウンベリフェリル誘導体（４−メチルウンベリフェロンに加水分解性）；例えば、それぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、英国特許第１，５４７，７４７号、及び欧州特許第０，０００，０６３号で開示されるような、７−アミド−４−メチル−クマリンの誘導体；ジアセチルフルオレセイン誘導体；及びフルオレスカミンがある。
【００７５】
例えば、第１の指示試薬は、第１の吸収スペクトルを有する試薬を含み得、それゆえ、その指示試薬は、電磁スペクトルの、紫外線波長及び／又は可視波長での光を吸収する。
【００７６】
一部の実施形態では、第１の指示試薬は、指示薬染料（例えば、ｐＨ指示薬染料、レドックス染料）とすることができる。いずれかの所定の生物活性を検出するために使用される、特定の指示薬染料は、例えば、検出される生物活性との適合性（例えば、好ましくは非阻害性）、溶解度、及び検出システム（例えば、視覚的及び／又は自動的）を含めた、当該技術分野において既知の評価基準に従って選択される。
【００７７】
指示薬染料は、生物活性の検出に好適なｐＨ指示薬染料とすることができる。指示薬染料は、例えば、ｐＨの範囲、生物活性との適合性、及び溶解度などの、当該技術分野において既知の評価基準に従って選択することができる。一部の実施形態では、塩形態のｐＨ指示薬を使用して、例えば、水性混合物中での、そのｐＨ指示薬の溶解度を増大させることができる。好適なｐＨ指示薬染料の非限定的な例としては、例えば、チモールブルー、トロペオリンＯＯ、メチルイエロー、メチルオレンジ、ブロモフェノールブルー、ブロモクレゾールグリーン、メチルレッド、ブロモチモールブルー、フェノールレッド、ニュートラルレッド、フェノールフタレイン、チモールフタレイン、アリザリンイエロー、トロペオリンＯ、ニトラミン、トリニトロ安息香酸、チモールブルー、ブロモフェノールブルー、テトラブロモフェノールブルー、ブロモクレゾールグリーン、ブロモクレゾールパープル、メチルレッド、ブロモチモールブルー、フェノールレッド、コンゴレッド、及びクレゾールレッドが挙げられる。
【００７８】
一部の実施形態では、指示薬染料は、生物活性の検出に好適な酸化還元指示薬（レドックス指示薬とも呼ばれる）とすることができる。酸化還元指示薬染料は、ｐＨ依存性、又はｐＨ非依存性とすることができる。酸化還元指示薬染料の非限定的な例としては、２，２’−ビピリジン（Ｒｕ錯体）、ニトロフェナントロリン（Ｆｅ錯体）、Ｎ−フェニルアントラニル酸、１，１０−フェナントロリン（Ｆｅ錯体）、Ｎ−エトキシクリソイジン、２，２’−ビピリジン（Ｆｅ錯体）、５，６−ジメチルフェナントロリン（Ｆｅ錯体）、ｏ−ジアニシジン、ジフェニルアミンスルホン酸ナトリウム、ジフェニルベンジジン、ジフェニルアミン、ビオロゲン、２，６−ジブロモフェノールインドフェノールナトリウム、２，６−ジクロロフェノールインドフェノールナトリウム、ｏ−クレゾールインドフェノールナトリウム、チオニン（ラウスバイオレットの異名）、メチレンブルー、インジゴテトラスルホン酸、インジゴトリスルホン酸、インジゴジスルホン酸、インジゴモノスルホン酸、フェノサフラニン、サフラニンＴ、及びニュートラルレッドが挙げられる。
【００７９】
一部の実施形態では、第１の指示試薬は、実施例３に示すように、スルホンフタレインｐＨ指示薬（例えば、ブロモクレゾールパープル）とすることができる。スルホンフタレインｐＨ指示薬（例えば、ブロモクレゾールパープル）は、水性混合物中に、１リットル当り約０．０３ｇの濃度で存在し得る。スルホンフタレインｐＨ指示薬は、基材（例えば、荷電ナイロン基材、例えば、ＧＥ  Ｏｓｍｏｎｉｃｓ  Ｌａｂｓｔｏｒｅ（Ｍｉｎｎｅｔｏｎｋａ，ＭＮ）より入手可能な、ＭＡＧＮＡＰＲＯＢＥ、０．４５マイクロメートル荷電ナイロン膜、品番ＮＰ０ＨＹ０００１０など）によって、受容及び濃縮することができる。この基材は、概して平面的なストリップ（例えば、約３ｍｍ×約１０ｍｍであるストリップ）として構成することができる。
【００８０】
第２の指示試薬は、例えば、第２の生物学的誘導体に変換させることができる。第２の生物学的誘導体は、第２の吸収スペクトルを有する試薬を含む。更には、第２の生物学的誘導体は、特徴的な第２の発光スペクトル（例えば、蛍光発光スペクトル）を有する。一部の実施形態では、第２の生物学的誘導体は、電磁エネルギースペクトルの紫外部での波長を含む、特徴的な第２の吸収スペクトルを有する。第２の生物学的誘導体の第２の発光スペクトルは、電磁エネルギースペクトルの可視部での波長を含み得る。
【００８１】
第２の指示試薬としての使用に関して好適な化合物は、蛍光発生化合物（例えば、蛍光発生酵素基質）を含む。蛍光発生酵素基質としては、４−メチルウンベリフェリル誘導体、７−アミド−４−メチルクマリン誘導体、及びジアセチルフルオレセイン誘導体が挙げられる。
【００８２】
好適な４−メチルウンベリフェリル誘導体としては、例えば、４−メチルウンベリフェリル−２−アセタミド−４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド；４−メチルウンベリフェリルアセテート；４−メチルウンベリフェリル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトサミニド；４−メチルウンベリフェリル−Ｎ−アセチル−α−Ｄ−グルコサミニド；４−メチルウンベリフェリル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニド；２’−（４−メチルウンベリフェリル）−α−Ｄ−Ｎ−アセチルノイラミン酸；４−メチルウンベリフェリルα−Ｌ−アラビノフラノシド；４−メチルウンベリフェリルα−Ｌ−アラビノシド；４−メチルウンベリフェリルブチラート；４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−セロビオシド；メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−Ｎ，Ｎ’ジアセチルキトビオシド；４−メチルウンベリフェリルエライジンサン塩；４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−フコシド；４−メチルウンベリフェリルα−Ｌ−フコシド；４−メチルウンベリフェリルβ−Ｌ−フコシド；４−メチルウンベリフェリルα−Ｄ−ガラクトシド；４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−ガラクトシド；４−メチルウンベリフェリルａ−Ｄ−グルコシド；４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−グルコシド；４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−グルクロニド；４−メチルウンベリフェリルｐ−グアニジノ安息香酸塩；４−メチルウンベリフェリルヘプタノエート；４−メチルウンベリフェリルα−Ｄ−マンノピラノシド；４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−マンノピラノシド；４−メチルウンベリフェリルオレエート；４−メチルウンベリフェリルパルミテート；４−メチルウンベリフェリルホスフェート；４−メチルウンベリフェリルプロピオネート；４−メチルウンベリフェリルステアレート；４−メチルウンベリフェリルサルフェート；４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”−トリアセチルキトトリオース；４−メチルウンベリフェリル２，３，５−トリ−ｏ−ベンゾイル−α−Ｌ−アラビノフラノシド；４−メチルウンベリフェリル−ｐ−トリメチルアンモニウムシンナメートクロリド；及び４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−キシロシドが挙げられる。
【００８３】
好適な７−アミド−４−メチルクマリン誘導体としては、例えば、Ｌ−アラニン−７−アミド−４−メチルクマリン；Ｌ−プロリン７−アミド−４−メチルクマリン；Ｌ−チロシン−７−アミド−４−メチルクマリン；Ｌ−ロイシン−７−アミド−４−メチルクマリン；Ｌ−フェニルアラニン−７−アミド−４−メチルクマリン；及び７−グルタミルフェニルアラニン−７−アミド−４−メチルクマリンが挙げられる。
【００８４】
好適な７−アミド−４−メチルクマリンのペプチド誘導体としては、例えば、Ｎ−ｔ−ＢＯＣ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ  ７−アミド−４−メチルクマリン；Ｎ−ｔ−ＢＯＣ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ  ７−アミド−４−メチルクマリン；Ｎ−ＣＢＺ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ  ７−アミド−４−メチルクマリン；Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ  ７−アミド−４−メチルクマリン；Ｎ−ｔ−ＢＯＣ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ  ７−アミド−４−メチルクマリン；及びＮ−グルタリル−Ｇｌｙ−Ａｒｇ  ７−アミド−４−メチルクマリンが挙げられる。
【００８５】
好適なジアセチルフルオレセイン誘導体としては、例えば、フルオレセインジアセテート、フルオレセインジ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシド）、及びフルオレセインジラウレートが挙げられる。
【００８６】
検出される生物活性が、例えばゲオバチルス・ステアロサーモフィルスからの、α−Ｄ−グルコシダーゼ、キモトリプシン、又は脂肪酸エステラーゼである場合には、好ましい蛍光発生酵素基質は、それぞれ、４−メチルウンベリフェリル−α−Ｄ−グルコシド、７−グルタミルフェニルアラニン−７−アミド４メチルクマリン、又は４−メチルウンベリフェリルヘプタノエートである。検出される生物活性が、例えばバチルス・サブティリス由来の、α−Ｌ−アラビノフラノシダーゼである場合には、好ましい蛍光発生酵素基質は、４−メチルウンベリフェリル−α−Ｌ−アラビノフラノシドである。検出される生物活性が、例えばバチルス・サブティリス由来の、β−Ｄ−グルコシダーゼである場合には、好ましい蛍光発生酵素基質は、４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−グルコシドである。
【００８７】
酵素を含む生物活性を検出するためには、オペレーターは、検出される酵素活性と、酵素と反応することにより、蛍光、色などのいずれかによって検出することができる生成物を作り出す、酵素基質とに関して、知識豊富であるべきである（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍ．Ｒｏｔｈの、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ」Ｖｏｌ．７，Ｄ．Ｇｌｏｃｋ編，Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９６９を参照）。利用される適切な酵素基質は、検出される生物活性に応じて決定される。
【００８８】
本開示の方法は、第１の吸収スペクトルを有する第１の指示試薬と、生物活性によって、第２の発光スペクトルを有する第２の生物学的誘導体に変換される、第２の指示試薬とを含み得、第１の吸収スペクトルは、第２の発光スペクトルと、少なくとも部分的に重なり合う。それゆえ、第１の指示試薬及び第２の生物学的誘導体の双方が、液体混合物中に存在する場合、第１の指示試薬は、第２の指示試薬によって放出される光の少なくとも一部分を吸収することにより、第２の生物学的誘導体を検出する能力を減少させる可能性がある。
【００８９】
本開示による、第１の指示試薬と第２の生物学的誘導体との関係性を、グラフによって示すことができる。図８は、例示的な第１の指示試薬である、ブロモクレゾールパープル（以降では、「ＢＣＰ」と呼ばれる）の吸光度スペクトルと、例示的な第２の指示試薬である、４−メチルウンベリフェリルβ−Ｄ−グルコシドの可能な生物学的誘導体、４−メチルウンベリフェロン（以降では、「４ＭＵ」と呼ばれる）の蛍光発光スペクトルとを示す。これらのスペクトルは、実施例７及び実施例８で説明されるように取得された。
【００９０】
ＢＣＰの吸光度スペクトルを示す線「Ａ」は、約６００ｎｍの可視範囲での吸光度極大を示し、４２５〜５５０ｎｍの波長での、ＢＣＰによる比較的小さい吸光度を有する。このデータは、約６００ｎｍの可視波長での吸光度ピーク、及び＜３３０ｎｍの紫外線波長での吸光度ピークを示す。４ＭＵの蛍光発光スペクトルを示す線「Ｂ」は、約４５０ｎｍで、発光極大を示し、３７５〜４２５ｎｍ及び４７５〜５２５ｎｍの範囲で、比較的小さい発光を有する。図８では、ＢＣＰの吸光度スペクトルが、４ＭＵの蛍光発光ピークの全体（４５０ｎｍを中心とする）と実質的に重なり合うことを認めることができる。
【００９１】
第１の指示試薬を含有する溶液による、いずれの特定波長の光の吸光量も、その溶液中の第１の指示試薬の濃度と、選択される波長での、その指示試薬のモル吸光係数とによって影響を受けることが、関連分野の当業者には理解されるであろう。第２の指示試薬の生物学的誘導体を含有する溶液による、いずれの特定波長の光の放出量も、その溶液中の第２の生物学的誘導体の濃度と、その生物学的誘導体の蛍光量子収率とによって影響を受けることもまた、当業者には理解されるであろう。それゆえ、液体混合物中の第１の指示試薬の濃度を、適切な基材と併せて選択して、ｉ）その基材が、液体混合物から、第１の指示薬基質を十分に除去することにより、第２の生物学的誘導体の、より敏感な検出を可能にし、ｉｉ）第１の指示試薬（又は、その生物学的誘導体）が、その基材材料上で、より容易に検出されることを可能にすることができる。
【００９２】
ブロモクレゾールパープルと４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−グルコシドとの組み合わせは、それぞれ、本開示による、好適な第１の指示試薬及び第２の指示試薬の実施例を表す。この組み合わせを使用して、例えば、炭水化物の酸最終生成物への発酵などの、第１の生物活性、及び−β−Ｄ−グルコシダーゼ酵素活性などの、第２の生物活性を検出することができる。これらの活性は、例えば、滅菌プロセスに生物学的滅菌インジケーターを晒した後の、生存芽胞の有無を示し得る。ブロモクレゾールパープルは、例えば、水性混合物中、約０．０３ｇ／Ｌの濃度で使用することができる。４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−グルコシドは、例えば、水性混合物中、約０．０５〜約０．５ｇ／Ｌ（例えば、約０．０５ｇ／Ｌ、約０．０６ｇ／Ｌ、約０．０７ｇ／Ｌ、約０．０８ｇ／Ｌ、約０．０９ｇ／Ｌ、約０．１ｇ／Ｌ、約０．１５ｇ／Ｌ、約０．２ｇ／Ｌ、約０．２５ｇ／Ｌ、約０．３ｇ／Ｌ、約０．３５ｇ／Ｌ、約０．４ｇ／Ｌ、約０．４５ｇ／Ｌ、約０．５ｇ／Ｌ）の濃度で使用することができる。
【００９３】
それゆえ、本開示によれば、第１の指示試薬は、通常であれば検出可能な量の、第２の指示試薬の生物学的誘導体の検出を、妨害する恐れがある。いずれの提案される第１の指示試薬と第２の指示試薬との間のスペクトル干渉も、当業者が、以下の簡単な実験を行なうことによって、実証することができる。
【００９４】
最初に、オペレーターは、提案される第２の指示試薬の、予期される生物学的誘導体の、比較的低濃度ではあるが、蛍光検出可能な水溶液を作製する。例えば、第２の指示試薬が、４−メチルウンベリフェリル化合物である場合には、予期される生物学的誘導体は４ＭＵである。この溶液は、例えば、１ミリリットル当り、約０．０５〜０．２マイクログラムの４ＭＵを含有し得る。次に、オペレーターは、有効量の、提案される第１の指示試薬を添加する。例えば、ＢＣＰが、提案される第１の指示試薬である場合には、ＢＣＰは、発酵性微生物の検出のための、微生物学的増殖培地中で使用される濃度（例えば、１ミリリットル当り０．０４ミリグラム）で、添加することができる。ＢＣＰを有する４ＭＵ溶液の蛍光と、ＢＣＰを有さない４ＭＵ溶液の蛍光とを比較することによって、第１の指示試薬（この実施例では、ＢＣＰ）が、第２の指示試薬の生物学的誘導体（この場合は４ＭＵ）の検出を妨害し得るか否かを判定することができる。次いで、オペレーターは、低減された量のＢＣＰを４ＭＵ溶液に添加することによって、比較的低い濃度の４ＭＵの検出が改善されるか否かを試験することができる。このタイプの実験は、第１の指示試薬と第２の指示試薬との任意の組み合わせを使用して、容易に行なうことができる。この手順の一実施例が、実施例９に示される。
【００９５】
更には、一部の実施形態では（例えば、壁部１１８が傾斜しており、基材１１９が、壁部１１８に隣接して配置される実施形態では）、基材１１９は、角度を付けるか、又は傾斜させて、例えば、ハウジング１０２の長手方向ＤＬに対して、非ゼロの角度かつ非直角の方向に配置することができる。基材１１９の、そのような角度付け又は傾斜により、滅菌の後に、容器１２０が破砕されて、液体１２２を解放した後の、第１チャンバ１０９から第２チャンバ１１１への、液体１２２の移動を促進することができる。
【００９６】
一部の実施形態では、基材１１９は、上記の機能のうちの１つ以上を達成するために、様々な材料で形成することができる。基材材料の例としては、綿、グラスウール、布、不織ポリプロピレン、不織レーヨン、不織ポリプロピレン／レーヨン配合物、不織ナイロン、不織ガラス繊維若しくは他の不織繊維、濾紙、微多孔性の疎水性及び親水性フィルム、ガラス繊維、連続気泡ポリマーフォーム、及び半透過性プラスチックフィルム（例えば、粒子充填フィルム、熱誘起相分離（ＴＩＰＳ）膜など）、並びにこれらの組み合わせを挙げることができるが、それらに限定されない。例えば、基材１１９を使用して、１種以上の指示試薬（例えば、ブロモクレゾールパープル（ＢＣＰ））を選択的に濃縮することができる実施形態では、基材１１９は、荷電ナイロン（ＧＥ  Ｗａｔｅｒ  ＆  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｔｒｅｖｏｓｅ，ＰＡ）より、商品名「ＭＡＧＮＡＰＲＯＢＥ」（例えば、０．４５マイクロメートルの孔径、３０ｃｍ×３ｍのロール、カタログ番号ＮＰ０ＨＹ０００１０、材料番号１２２６５６６）で入手可能な、リプローブ可能な荷電転写膜など）で形成することができる。
【００９７】
基材１１９を採用することができる方法及びシステムの実施例はまた、同時係属の米国特許出願第６１／４０８，８８７号、表題「Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ」、及び同第６１／４０８，９６６号、表題「Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ」に記載され、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００９８】
一部の実施形態では、挿入部材１３０、壁部１１８、及び／又は基材１１９若しくはその中の開口部のうちの１つ以上の、少なくとも一部分は、第１チャンバ１０９（例えば、上方部分１１６内の）と第２チャンバ１１１（例えば、下方部分１１４内の）との間の流体連通を提供することができ、かつ／あるいは、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間の流体連通を制御することができる（例えば、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間の流体接続の度合を制御することによって）。
【００９９】
生物学的滅菌インジケーター１００は、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１とを流体結合するように配置することができる、第１流体通路１６０を含み得、この第１流体通路１６０は、滅菌剤（例えば、滅菌の間の、容器１２０が、第１の断裂していない状態にあるとき）及び／又は液体１２２（例えば、滅菌の後の作動の間に、容器１２０が、第２の断裂した状態にあるとき）が、芽胞１１５に到達することを可能にすることができる。図示の実施形態では、第１流体通路１６０は、全般的には、以下のうちの１つ以上によって、画定することができる：（１）挿入部材１３０、例えば、以下で説明する開口１７７、挿入部材１３０内に形成される開口部、及び／又は挿入部材１３０（例えば、その前方部分）とハウジング１０２との間などの、挿入部材１３０の周囲のいずれかの開放空間を介して；（２）壁部１１８、例えば、壁部１１８によって画定される開口１１７；（３）基材１１９、例えば、その中に形成される開口１２１、又は基材１１９（例えば、その前方部分）とハウジング１０２との間などの、基材１１９の周囲のいずれかの開放空間；（４）ハウジング１０２、例えば、その中に形成される、いずれかの開口部又は空間；及びこれらの組み合わせ。結果として、第１流体通路１６０は、全般的には、図示の実施形態では、図４及び図７の矢印によって表される。
【０１００】
生物学的滅菌インジケーター１００は、第２チャンバ１１１を、第１チャンバ１０９などの、生物学的滅菌インジケーター１００の別のチャンバ若しくは別の部分と流体結合するように配置される、第２流体通路１６２を更に含み得る。第２流体通路１６２は、例えば、滅菌剤及び／又は液体１２２が、第２チャンバ１１１内に移動される際、第２チャンバ１１１内に従前に存在していた気体が排出されて、第２チャンバ１１１から抜け出ることを可能にするように、更に配置することができる。それゆえ、以下でより詳細に説明される、第２流体通路１６２は、生物学的滅菌インジケーター１００内の内部通気口としての役割を果たし得る。
【０１０１】
一部の実施形態では、基材１１９は、以下のうちの少なくとも１つを可能にし得る、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間の物理的障壁又は遮断物を提供することができる：滅菌剤が第２チャンバ１１１内に送達される際の、滅菌剤の送達速度／殺傷率の制御；第２チャンバ１１１から外への、芽胞１１５及び／又は検出可能生成物の拡散の制御；容器１２０が第２の断裂した状態にあるときの、第２チャンバ１１１への（及び芽胞１１５への）液体１２２の送達速度の制御；又はこれらの組み合わせ。
【０１０２】
一部の実施形態では、基材１１９は、作動の間（すなわち容器１２０が第２の状態にあるとき）、第２チャンバ１１１への液体１２２の送達に対する物理的障壁を提供することができるため、基材１１９内の開口１２１、及び／又は基材１１９の角度を制御することにより、所望の液体送達速度を生じさせることができる。更には、又は代替的には、第２流体通路１６２は、第２チャンバ１１１内に閉じ込められた、あらゆる気体又は空気に関する通気口を提供して、所望されるときの、基材１１９を通過するか又は基材１１９を越えて第２チャンバ１１１内へ入る、液体１２２の移動を促進することができる。
【０１０３】
更には、又は代替的には、ハウジング１０２を、所望されるときの、第２チャンバ１１１への液体１２２の移動を促進するように構成する（例えば、適切な材料で形成し、かつ／又は微細構造の溝、若しくは他の物理的な表面改変で構成する）ことができる。例えば、以下の実施例２に示すように、一部の基材材料は、第２チャンバ１１１内への液体１２２の移動を促進する際に、より有効とすることができ、このことは、実施例２で説明されるフリック試験を使用して、試験することができる。単なる例として、一部の実施形態では、荷電ナイロン（例えば、ＧＥ  Ｗａｔｅｒ  ＆  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓより入手可能な、上述のＭＡＧＮＡＰＲＯＢＥナイロンなど）で形成される基材１１９は、紙（ワットマン紙など、例えば、Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｃ．ＵＳＡ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）より入手可能な、グレード１Ｃｈｒセルロースクロマトグラフィー用ペーパー）で形成される基材１１９よりも、容器１２０が断裂した後、第２チャンバ１１１へ液体１２２を送達する際に、より有効とすることができる。具体的には、荷電ナイロンは、追加的支援を使用することなく（例えば、生物学的滅菌インジケーター１００の、下向きの振盪、すなわち「フリック」を必要とすることなく）、第２チャンバ１１１内へ液体１２２を移動させる際に、より有効とすることができる。
【０１０４】
一部の実施形態では、液体１２２は、生き残った芽胞の発芽を助長する発芽培地などの、芽胞のための栄養培地を含み得る。一部の実施形態では、液体１２２は、栄養素と組み合わせて栄養培地を形成することができる、水（又は、別の溶媒）を含み得る。好適な栄養素は、生き残った芽胞の発芽及び／又は増殖を助長するために必要な栄養素を含み得、リザーバ１０３内に、例えば、生物学的滅菌インジケーター１００の、芽胞１１５の近傍の領域内に、乾燥形態（例えば、ビーズ又は他のキャリア内に封入される、粉末形態、錠剤形態、カプレット形態、カプセル形態、フィルム若しくはコーティング、別の好適な形状又は構成、あるいはこれらの組み合わせ）で、提供することができる。
【０１０５】
栄養培地は、全般的には、芽胞が生存可能である場合には、芽胞の発芽及び初期増殖を誘導するように選択することができる。栄養培地は、１種以上の糖を含み得、それらの糖としては、グルコース、フルクトース、セロビオースなど、又はこれらの組み合わせが挙げられるが、それらに限定されない。栄養培地はまた、塩も含み得、それらの塩としては、塩化カリウム、塩化カルシウムなど、又はこれらの組み合わせが挙げられるが、それらに限定されない。一部の実施形態では、栄養素は、少なくとも１種のアミノ酸を更に含み得、それらのアミノ酸としては、メチオニン、フェニルアラニン、及びトリプトファンのうちの、少なくとも１つが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０６】
一部の実施形態では、栄養培地は、指示薬分子又は指示試薬、例えば、芽胞の発芽又は増殖に応答して変化する光学特性を有する、指示薬分子を含み得る。好適な指示薬分子又は指示試薬としては、ｐＨ指示薬分子（例えば、実施例に示すようなブロモクレゾールパープル（ＢＣＰ）、ブロモクレゾールグリーン（ＢＣＧ）、クロロフェノールレッド（ＣＰＲ）、ブロモチモールブルー（ＢＴＢ）、ブロモフェノールブルー、（ＢＰＢ）、他のスルホンフタレイン染料、メチルレッド、又はこれらの組み合わせ）、酵素基質（例えば、４−メチルウンベリフェリル−α−Ｄ−グルコシド）、ＤＮＡ結合色素、ＲＮＡ結合色素、他の好適な指示薬分子、又はこれらの組み合わせを挙げることができるが、それらに限定されない。一部の実施形態では、ブロモクレゾールパープルと４−メチルウンベリフェリル−α−Ｄ−グルコシドとの組み合わせは、共に使用することができる指示試薬のペアの、一実施例を表す。この組み合わせを使用して、例えば、炭水化物の酸最終生成物への発酵などの、第１の生物活性、及びα−Ｄ−グルコシダーゼ酵素活性などの、第２の生物活性を検出することができる。これらの活性は、例えば、滅菌プロセスに生物学的滅菌インジケーターを晒した後の、生存芽胞の有無を示し得る。ブロモクレゾールパープルは、例えば、水性混合物中、約０．０３ｇ／Ｌの濃度で使用することができる。４−メチルウンベリフェリル−α−Ｄ−グルコシドは、例えば、水性混合物中、例えば、約０．０５〜約０．５ｇ／Ｌ（例えば、約０．０５ｇ／Ｌ、約０．０６ｇ／Ｌ、約０．０７ｇ／Ｌ、約０．０８ｇ／Ｌ、約０．０９ｇ／Ｌ、約０．１ｇ／Ｌ、約０．１５ｇ／Ｌ、約０．２ｇ／Ｌ、約０．２５ｇ／Ｌ、約０．３ｇ／Ｌ、約０．３５ｇ／Ｌ、約０．４ｇ／Ｌ、約０．４５ｇ／Ｌ、約０．５ｇ／Ｌ）の濃度で使用することができる。
【０１０７】
図１〜７に示すように、生物学的滅菌インジケーター１００は、挿入部材１３０を更に含み得る。一部の実施形態では、挿入部材１３０は、容器１２０が、滅菌の間に、芽胞１１５から隔離された場所内に無損傷で保持されるように、容器１２０を保持又は支持するように適合させることができる。すなわち一部の実施形態では、挿入部材１３０は、特に、容器１２０が、作動工程（すなわち滅菌プロセスの後に実施することができる、液体１２２を、容器１２０から解放して、芽胞１１５に導入する工程）の間に破砕される前の、容器１２０のためのキャリア１３２（図３を参照）を含み得る（又はキャリア１３２として機能することができる）。一部の実施形態では、挿入部材１３０は、容器１２０が、ハウジング１０２内で、例えばハウジング１０２に対して長手方向に、少なくとも多少は移動することを可能にするように、更に適合させることができる。図示の実施形態の挿入部材１３０は、以下でより詳細に説明される。他の好適な挿入部材の実施例は、同時係属の米国特許出願第６１／２２６，９３７号（代理人整理番号６５５７８ＵＳ００２）で説明されている。
【０１０８】
一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、図１〜４、及び図６に示すように、芽胞キャリア１３５を更に含み得る。しかしながら、一部の実施形態では、芽胞１１５を収容するように適合された部分を含むように、挿入部材１３０を改変することができる。例えば、一部の実施形態では、挿入部材１３０及び芽胞キャリア１３５は、容器１２０を保持し、かつ最終的には、所望されるときに断裂させるように適合される、第１部分と、滅菌の間（すなわち断裂の前に）、芽胞１１５を、生物学的滅菌インジケーター１００の、容器１２０から隔離された領域内に収容するように適合される、第２部分とを含む、１つの挿入部材として、一体的に形成することができる。
【０１０９】
図１〜４及び図６に示すように、芽胞キャリア１３５は、芽胞１１５を、直接的に又は基材上に配置することができる、芽胞リザーバ１３６（凹部、ディボット、ウェル、陥凹などと称することもできる）を含み得る。液体１２２が容器１２０から解放される際に、液体１２２と混合されるように配置される、栄養培地を採用する実施形態では、その栄養培地は、芽胞リザーバ１３６の近傍、又は芽胞リザーバ１３６内に配置することができ、栄養培地は、容器１２０から水が解放される際に、その水と混合する（例えば、その水中に溶解する）ことができる。単なる例として、栄養培地が、乾燥形態で提供される実施形態では、この乾燥形態は、リザーバ１０３の内部に、芽胞リザーバ１３６の内部に、芽胞用の基材上に、又はこれらの組み合わせで存在することができる。一部の実施形態では、液体と乾燥栄養培地との組み合わせを、採用することができる。
【０１１０】
一部の実施形態では、芽胞リザーバ１３６は、少なくとも約１マイクロリットルの容積を有し、一部の実施形態では、少なくとも約５マイクロリットル、一部の実施形態では、少なくとも約１０マイクロリットルの容積を有する。一部の実施形態では、芽胞リザーバ１３６は、約２５０マイクロリットル以下の容積を有し、一部の実施形態では、約１７５マイクロリットル以下、一部の実施形態では、約１００マイクロリットル以下の容積を有する。
【０１１１】
図４及び図６に示すように、一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、ハウジング１０２の壁部１０８に結合させるか、若しくは一体的に形成することができる、リブ又は突出部１６５を更に含み得、このリブ又は突出部１６５は、芽胞キャリア１３５を、ハウジング１０２内の所望の場所内に、かつ／又は読み取り装置１２の検出システム（例えば、光学検出システム）に対して所望の角度若しくは配向で維持するように、配置することができる。
【０１１２】
図１〜４、及び図６に示すように、ハウジング１０２の第２部分１０６は、第１部分１０４に結合するように適合させることができる。例えば、図示のように、第２部分１０６は、ハウジング１０２の第１部分１０４の上方部分１１６（例えば、第１末端部１０１）に結合するように適合させることができる。一部の実施形態では、図１〜４に示すように、第２部分１０６は、ハウジング１０２の第１部分１０４の少なくとも一部分を受容するように寸法決めすることができる、キャップの形態とすることができる。
【０１１３】
図１、２、及び図４〜５に示すように、滅菌の間、及び作動の前には、第２部分１０６は、第１部分１０４に対して、第１の「非作動」位置１４８にあることが可能であり、容器１２０は、第１の無損傷状態にあることが可能である。図６に示すように、ハウジング１０２の第２部分１０６は、第１部分１０４に対して、第２の「作動」位置１５０（例えば、第２部分１０６が、完全に押し下げられる場所）へと移動させることができ、容器１２０は、第２の断裂した状態にあることが可能である。例えば、滅菌の後に、第２部分１０６を、第１の位置１４８から第２の位置１５０へと（すなわち十分な量）移動させて、容器１２０の断裂を引き起こし、容器１２０から液体１２２を解放して、液体１２２が、芽胞１１５と流体連通することを可能にすることによって、生物学的滅菌インジケーター１００を作動させることができる。生物学的滅菌インジケーター１００は、読み取り装置のウェル内に、生物学的滅菌インジケーター１００を配置する前に、ウェル内に生物学的滅菌インジケーター１００を配置した後に、又はウェル内に生物学的滅菌インジケーター１００を配置すると同時に、作動させることができる（すなわち生物学的滅菌インジケーター１００を、読み取り装置内の定位置へと滑り込ませることができ、第２部分１０６を、その第２の位置１５０に至るまで、例えば、ウェルの底部が、第２部分１０６を、その第２の位置１５０へと移動させるために十分な抵抗力を提供するまで、押し付け続けることができる）。第２の位置１５０は、第１の位置１４８よりも、生物学的滅菌インジケーター１００の第１部分１０４の閉鎖末端部１０５に近接させて位置決めすることができる。
【０１１４】
例示の実施形態に示すように、一部の実施形態では、ハウジング１０２の第１部分１０４は、段差部、張り出し部、又は平坦から丸い形への移行部１５２を含み得る。段差部１５２は、第２部分１０６が、その第１の位置１４８にあるとき、露出しているように示され、第２部分１０６が、その第２の位置１５０にあるとき、隠されているか、又は覆われているように示される。それゆえ、段差部１５２を探知することにより、第２部分１０６が、第１の位置１４８にある（すなわち生物学的滅菌インジケーター１００が非作動である）か、又は第２の位置１５０にあるか（すなわち生物学的滅菌インジケーター１００が作動している）を判定することができる。生物学的滅菌インジケーター１００のそのような機構を使用して、生物学的滅菌インジケーター１００の状態を判定し、例えば、生物学的滅菌インジケーター１００が作動しているか否かを確認することは、同時係属の米国特許出願第６１／４０９，０４２号で、より詳細に説明されている。段差部１５２の長手方向位置は、単なる例として示されるが、しかしながら、段差部１５２は、その代わりに、異なる長手方向位置に（例えば、生物学的滅菌インジケーター１００の閉鎖末端部１０５に、より近接させて）配置することができ、又は一部の実施形態では、丸い形の部分から平坦面への移行部は、段階的、テーパー形状、又は傾斜状とすることができる点を理解するべきである。
【０１１５】
ハウジング１０２の第１部分１０４と第２部分１０６との間に、様々な結合手段を採用することにより、第１部分１０４及び第２部分１０６が、互いに取り外し可能に結合されることを可能にすることができ、それらの結合手段としては、重力（例えば、１つの構成要素を、別の構成要素の上に、又はその接合部分に設置することができる）、ねじ山、圧入係合（「摩擦嵌め係合」又は「締まり嵌め係合」と称される場合もある）、スナップ嵌め係合、磁石、接着剤、熱封止、他の好適な取り外し可能結合手段、及びこれらの組み合わせが挙げられるが、それらに限定されない。一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、再び開放する必要はなく、第１部分１０４及び第２部分１０６を、互いに取り外し可能に結合させる必要はないが、むしろ、互いに恒久的に、又は半恒久的に結合させることができる。そのような恒久的又は半恒久的結合手段としては、接着剤、縫合、ステープル、ネジ、クギ、リベット、無頭釘、クリンプ、溶接（例えば、音波（例えば、超音波）溶接）、任意の熱接着技術（例えば、結合させる構成要素の一方若しくは双方に適用される、熱及び／又は圧力）、スナップ嵌め係合、圧入係合、熱封止、他の好適な恒久的若しくは半恒久的結合手段、及びこれらの組み合わせを挙げることができるが、それらに限定されない。恒久的又は半恒久的結合手段の一部はまた、取り外し可能であるように適合させることも、またその逆も可能であり、単なる例として、この方式で分類されることが、当業者には理解されるであろう。
【０１１６】
図４及び図６に示すように、第２部分１０６は、第１部分１０４に対する第１の長手方向位置１４８と、第１部分１０４に対する第２の長手方向位置１５０との間で、移動可能とすることができるが、しかしながら、生物学的滅菌インジケーター１００は、その代わりに、第１の位置１４８及び第２の位置１５０が、必ずしも、ハウジング１０２の第１部分１０４及び第２部分１０６の一方若しくは双方に対する、長手方向位置であるとは限らないような、異なる構成とすることが可能である点を理解するべきである。
【０１１７】
第２部分１０６は、第２部分１０６が第２の位置１５０へと移動され、液体１２２が容器１２０から開放された後（すなわち容器１２０が、第２の断裂した状態にあるとき）に、第１部分１０４の第１末端部１０１、具体的には、第１部分１０４の開放上方末端部１５７に接触して、生物学的滅菌インジケーター１００を閉鎖又は封止する（例えば、気密封止する）ように配置することができる、封止部１５６（例えば、突起部、突出部、フラップ、フランジ、ｏリングなど、又はこれらの組み合わせ）を更に含み得る。すなわち芽胞１１５は、容器１２０が第２の状態にあるとき、環境から封止することができる。封止部１５６は、様々な形態を取ることができ、図４及び図６では、例として、第２部分１０６の壁部１１０と共に、ハウジング１０２の第１部分１０４の上方末端部１５７を受容して、生物学的滅菌インジケーター１００を封止するように寸法決めされる、内側リング又は空洞部を形成するものとして示される。
【０１１８】
一部の実施形態では、封止部１５６及び上方末端部１５７の一方若しくは双方は、ハウジング１０２の第２部分１０６を、ハウジング１０２の第１部分１０４に結合するために、それぞれ、封止部１５６及び上方末端部１５７の他方に係合するように構成される構造（例えば、突出部）を更に含み得る。
【０１１９】
更には、一部の実施形態では、ハウジング１０２の第２部分１０６を、ハウジング１０２の第１部分１０４に結合して、作動の後に、生物学的滅菌インジケーター１００を環境から封止することができる。そのような封止は、液体１２２が容器１２０から解放された後の、液体１２２の汚染、蒸発、若しくは溢流を阻止することができ、かつ／又は生物学的滅菌インジケーター１００の内部の汚染を阻止することができる。
【０１２０】
封止部１５６は、種々の程度又はレベルの閉鎖に対応するための、生物学的滅菌インジケーター１００の長手方向ＤＬでの長さを有するように構成することができる。すなわち一部の実施形態では、ハウジング１０２の第２部分１０６の「第２の位置」１５０は、封止部１５６の少なくとも一部分が、ハウジング１０２の第１部分１０４の一部分（例えば、上方末端部１５７）に係合していることにより、生物学的滅菌インジケーター１００の内部が環境から封止される、いずれかの位置とすることができる。生物学的滅菌インジケーター１００及び生物学的滅菌インジケーターシステム１０は、第２部分１０６が第２の位置１５０に移動したことを、読み取り装置１２が検出した場合には、封止部１５６が係合していることを、ユーザーが知るように、対応して構成することができる。
【０１２１】
ここで、挿入部材１３０を、より詳細に説明する。
【０１２２】
図１、２、及び図４に示すように、滅菌の間、及び作動の前には、第２部分１０６は、第１部分１０４に対して、第１の位置１４８にあることが可能である。第１の位置１４８では、容器１２０は、下方部分１１４、第２チャンバ１１１、又は芽胞１１５から隔離された場所内に、無損傷で保持することができ、液体１２２を、容器１２０内部に収容することができる。
【０１２３】
図６に示すように、滅菌の後に、生物学的滅菌インジケーター１００を作動させて、容器１２０から液体１２２を解放し、第２チャンバ１１１へと、液体１２２を移動させることができる。すなわちハウジング１０２の第２部分１０６を、第１部分１０４に対して、第２の位置１５０に移動させることができる。第２部分１０６が、第１の位置１４８から第２の位置１５０に移動されると、ハウジング１０２の第２部分１０６の封止部１５６が、第１部分１０４の上方末端部１５７に係合して、生物学的滅菌インジケーター１００のリザーバ１０３を、環境から封止することができる。そのような実施形態では、第２部分１０６は、第２の位置１５０で、第１部分１０４に可逆的に係合することができ、一部の実施形態では、第２部分１０６は、第１部分１０４に不可逆的に係合することができる。しかしながら、第１部分１０４及び第２部分１０６に関する構造並びに結合手段は、図示の実施形態では、単なる例として示されるものであり、上述の結合手段のいずれもが、その代わりに、ハウジング１０２の第１部分１０４と第２部分１０６との間で採用することができる点を理解するべきである。
【０１２４】
挿入部材１３０は、容器１２０が、滅菌の間に、芽胞１１５から隔離された場所内に無損傷で保持されるように、容器１２０を保持又は支持するように適合させることができる。すなわち上述のように、一部の実施形態では、挿入部材１３０は、特に、容器１２０が、作動工程（すなわち典型的には滅菌プロセスの後に実施される、液体１２２を、容器１２０から解放して、芽胞１１５に導入する工程）の間に破砕される前の、容器１２０のためのキャリア１３２を含み得る（又はキャリア１３２として機能することができる）。
【０１２５】
更には、挿入部材１３０は、容器１２０とハウジング１０２との間、及び／又は容器１２０とハウジング１０２内の他のあらゆる構成要素若しくは構造（例えば、キャリア１３２などの、挿入部材１３０の少なくとも一部分など）との間に、少なくとも最小限の空隙部（例えば、最小限の断面積の空間）を維持する、ハウジング１０２内の位置に、容器１２０を保持して、例えば、生物学的滅菌インジケーター１００内に、実質的に一定の滅菌剤通路１６４を維持するように適合させることができる。一部の実施形態では、挿入部材１３０は、ハウジング１０２内の実質的に一定の場所内に、容器１２０を保持するように適合させることができる。
【０１２６】
一部の実施形態では、図３に示すように、ハウジング１０２の少なくとも一部分は、ハウジング１０２（例えば、壁部１０８及び／又はその内側表面）が、ハウジング１０２の長手方向ＤＬで概して先細になる、テーパー形状部分１４６を含み得る。結果として、ハウジング１０２内の断面積は、長手方向ＤＬ。
【０１２７】
に沿って、概して減少し得る。一部の場合には、容器１２０の周囲（例えば、容器１２０と周囲を取り囲む構造との間）に少なくとも最小限の空隙部を維持するための手段が提供されない場合、容器１２０が、滅菌剤通路１６４を閉塞又は遮断する方式で、ハウジング１０２内に（例えば、テーパー形状部分１４６内に）配置され得る可能性が、存在し得る。しかしながら、本開示の生物学的滅菌インジケーター１００は、このことが発生することを阻止するように設計される。例えば、図示の実施形態では、挿入部材１３０（具体的には、キャリア１３２）は、ハウジング１０２のテーパー形状部分１４６の外に、容器１２０を保持するように構成することができるため、作動の前の生物学的滅菌インジケーター１００がいずれの配向にあっても、少なくとも最小限の断面積が、容器１２０の周囲に維持される。例えば、図１〜５に示す実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００が、上下を逆転される場合であっても、容器１２０は、挿入部材１３０との接触から脱落する可能性はあるが、いずれの配向であっても、容器１２０は、生物学的滅菌インジケーター１００の作動まで、テーパー形状部分１４６又は芽胞１１５に、より近接して移動されることはない。更には、作動までは、容器１２０とハウジング１０２及び／又は挿入部材１３０との間の、少なくとも最小限の空隙部（具体的には、その空隙部の断面積）を維持して、例えば、実質的に一定の滅菌剤通路１６４を、容器１２０の周囲から、第１流体通路１６０を通じて、第２チャンバ１１１内へと提供することができる。
【０１２８】
一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００の構成要素の、相対的なサイズ設定及び配置は、作動の前に、容器１２０が、生物学的滅菌インジケーター１００内の実質的に一定の場所内に、無損傷で保持されるように構成することができる。そのような構成により、実質的に一定の滅菌剤通路１６４を提供することができ、作動の前に、生物学的滅菌インジケーター１００内で、容器１２０が移動することが、仮にあるとしても、実質的に不可能であるような位置に、容器１２０を維持することができる。
【０１２９】
一部の実施形態では、挿入部材１３０の少なくとも一部分は、容器１２０が、ハウジング１０２内で、例えば、容器１２０が無損傷である第１の（長手方向）位置と、容器１２０の少なくとも一部分が断裂される第２の（長手方向）位置との間で、ハウジング１０２に対して長手方向で移動することを可能にするように適合させることができる。単なる例として、挿入部材１３０は、作動の前に、容器１２０を保持及び支持するように適合され、かつ作動の間に、例えば、第２部分１０６が、ハウジング１０２の第１部分１０４に対して移動されるときに、容器１２０がハウジング１０２内で移動することを可能にするように適合される、１つ以上の突起部又はアーム１５８（容器１２０の周りで離間する２つの突起部１５８を、単なる例として示す）を含み得る。突起部１５８はまた、生物学的滅菌インジケーターが作動されるときに、容器１２０を所望の方式で断裂させるように適合させる（例えば、成形及び／又は配置する）こともできる。結果として、挿入部材１３０は、場合によって、作動の前に、容器１２０を保持するよう機能することができ、作動の間に、容器１２０を破砕するように機能することができる。結果として、挿入部材１３０、又はその一部分は、場合によって、「キャリア」（例えば、キャリア１３２）及び／又は「破砕装置」と称することができる。
【０１３０】
単なる例として、突起部１５８は、図１、及び図３〜７では、分割壁１１８に当接するように適合された基部又は支持部１２７に、結合されるものとして示される。例えば、基部１２７は、リザーバ１０３内に受容されるように寸法決めすることができ、かつ分割壁１１８の上に設置されるか、分割壁１１８に当接するか、又は他の方法で分割壁１１８と協働若しくは結合するように、寸法決めすることができる。生物学的滅菌インジケーター１００の内部構造との、そのような結合により、所望されるときに容器１２０を破砕するために必要な、抵抗及び力を提供することができる。しかしながら、一部の実施形態では、挿入部材１３０は基部１２７を含まず、突起部１５８は、ハウジング１０２の一部分に結合されるか、又はハウジング１０２の一部分を形成することができる。一部の実施形態では、挿入部材１３０は、ハウジング１０２と一体的に形成されるか、又はハウジング１０２によって提供される。
【０１３１】
図示のように、挿入部材１３０は、突起部１５８を連結し、かつハウジング１０２の内側表面及び／又は容器１２０の外側表面に対応するように成形される、側壁部１３１を更に含み得る。そのような側壁部１３１は、突起部１５８に支持及び剛性を提供して、容器１２０を、一貫した方式で確実に破砕することを援助することができる。側壁部１３１はまた、作動の間に、容器１２０がハウジング１０２内を移動する際、容器１２０を所望の方式で誘導して、例えば、突起部１５８に所望の方式で接触させ、容器１２０を確実に断裂させるように、成形及び寸法決めすることもできる。側壁部１３１、及び／又はハウジング１０２の壁部１０８（又はその内側表面）はまた、例えば、挿入部材１３０の外側表面と、ハウジング１０２の内側表面との間に、生物学的滅菌インジケーター１００の第２流体通路１６２の少なくとも一部分を画定するように、成形することもできる。例えば、一部の実施形態では、図１、２、５、及び図７に示すように、挿入部材１３０の側壁部１３１は、第２流体通路１６２の少なくとも一部分を形成するように構成される、チャネル（又は溝、陥凹など）１６９を含み得る。
【０１３２】
第２流体通路１６２は、生物学的滅菌インジケーター１００内部の「内部通気口」又は「通気チャネル」として機能することにより、気体（例えば、第２チャンバ１１１内に（例えば、生物学的滅菌インジケーター１００の閉鎖末端部１０５付近に）閉じ込められていた空気などの、排出される気体）が、生物学的滅菌インジケーター１００の第２チャンバ１１１から抜け出ることを可能にすることができる。一部の実施形態では、第２流体通路１６２は、作動の間に、第２チャンバ１１１内に存在する気体のための逃げ道、すなわち内部通気口を提供することにより、液体１２２が容器１２０から解放される際に、第１チャンバ１０９から第２チャンバ１１１内への液体１２２の移動を促進することができる。更には、又は代替として、一部の実施形態では、第２流体通路１６２は、滅菌の間に、第２チャンバ１１１内に存在する気体のための逃げ道、すなわち内部通気口を提供することにより、生物学的滅菌インジケーター１００の第２チャンバ１１１内への、及び芽胞１１５への、滅菌剤の移動を促進して、第２チャンバ１１１内への、より効率的な滅菌剤の浸入を可能にする。
【０１３３】
単なる例として、図２及び図７に示すように、第２流体通路１６２は、挿入部材１３０の一部分（例えば、チャネル１６９）、及びハウジング１０２の壁部１０８内（例えば、壁部１０８の内側表面内）に形成されるチャネル（又は溝、陥凹など）１６３の双方によって、少なくとも部分的に画定することができる。しかしながら、一部の実施形態では、第２流体通路１６２が、第２チャンバ１１１と、生物学的滅菌インジケーター１００の別の内部部分若しくは領域との間に、流体連通を提供するように、第２流体通路１６２を、完全にハウジング１０２で形成することができ、又は、生物学的滅菌インジケーター１００の他の構成要素の、様々な組み合わせで形成することができる点を理解するべきである。例えば、第２流体通路１６２は、ハウジング１０２及び挿入部材１３０の双方によって形成する必要はなく、これらの構成要素の一方、又は他の構成要素によって、形成することができる。更には、図２及び図７に示すように、第２流体通路１６２の少なくとも一部分を画定する、チャネル１６３は、チャネル１６３が、ハウジング１０２の内側及び外側上で可視であるように、ハウジング１０２の外側表面及び内側表面内に成形される。しかしながら、ハウジング１０２の外側表面は、そのような形状を含む必要はなく、むしろ、一部の実施形態では、ハウジング１０２の外側表面は、実質的に均一又は無変化のまま維持することができ、ハウジング１０２（例えば、ハウジング１０２の壁部１０８）の内側表面が、チャネル１６３を含み得る。
【０１３４】
更には、一部の実施形態では、挿入部材１３０又はハウジング１０２のいずれもが、それぞれ、チャネル１６９又はチャネル１６３を含むのではなく、むしろ、挿入部材１３０とハウジング１０２との間に、第２チャンバ１１１と流体連通する空間又は間隙が提供されるように、挿入部材１３０並びにハウジング１０２が成形及び寸法決めされ、そのような空間又は間隙が、第２流体通路１６２として機能する。
【０１３５】
図４及び図６に更に示すように、一部の実施形態では、第１流体通路１６０及び／又は第２流体通路１６２は、壁部１１８、基材１１９、挿入部材１３０、及びハウジング１０２のうちの１つ以上によって、少なくとも部分的に画定することができる。更には、第１流体通路１６０及び第２流体通路１６２の少なくとも一方は、芽胞キャリア１３５、又はその一部分によって、少なくとも部分的に画定することができる。
【０１３６】
一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、容器１２０が、第１の断裂していない状態にあるとき、以下の順序で配置構成される、以下の構成要素を含み得る：生物学的滅菌インジケーター１００のハウジング１０２の閉鎖末端部１０５、第２チャンバ１１１、基材１１９、挿入部材１３０、第１チャンバ１０９、容器１２０、ハウジング１０２（又はハウジング１０２の第２部分１０６）の開放末端部１０１。
【０１３７】
例示の実施形態に示すように、第２流体通路１６２は、第２チャンバ１１１が、第１チャンバ１０９などの、生物学的滅菌インジケーター１００の別の部分に通気することを可能にし得る。一部の実施形態では、特に、第２流体通路１６２が、第２チャンバ１１１を、第１チャンバ１０９へ戻して通気する実施形態では、第２流体通路１６２は、第１流体通路１６０が第２チャンバ１１１に入る位置よりも上方（例えば、垂直上方）に配置される位置で、第２チャンバ１１１から出ることができる。換言すれば、一部の実施形態では、第２流体通路１６２は、第２チャンバ１１１から、第１流体通路１６０が第２チャンバ１１１に入る位置（例えば、以下で説明する、第１のレベルＬ１又は第２のレベルＬ２）よりも上方にある、生物学的滅菌インジケーター１００内の位置（例えば、以下で説明する、第４のレベルＬ４）まで、延在することができる。更には、一部の実施形態では、第２流体通路１６２が第１チャンバ１０９に入る位置は、第１流体通路１６０が第２チャンバ１１１に入る位置よりも上方（例えば、垂直上方）に配置することができる。
【０１３８】
一部の実施形態では、第１流体通路１６０は、第２チャンバ１１１を、生物学的滅菌インジケーター１００の近位部分（例えば、第２チャンバ１１１に近接又は隣接して、例えば、第１のレベルＬ１及び／又は第２のレベルＬ２に配置される、第１チャンバ１０９の一部分）と流体結合するように配置することができ、第２流体通路１６２は、第２チャンバ１１１を、生物学的滅菌インジケーター１００の遠位部分（すなわち第２チャンバ１１１からより遠くに、例えば、以下で説明する第３のレベルＬ３、及び／又は第４のレベルＬ４に配置される、第１チャンバ１０９の一部分）と流体結合するように配置することができる。結果として、第２流体通路１６２が第１チャンバ１０９に入る位置は、第１流体通路１６０が第２チャンバ１１１に入る位置よりも、第２チャンバ１１１から遠くに配置することができる。
【０１３９】
より具体的には、また単なる例として、図４及び図６を参照すると、一部の実施形態では、流体は、挿入部材１３０、基材１１９、ハウジング１０２、及び／又は第２チャンバ１１１の前方に概して配置される、第１のレベル、高さ、若しくは位置（例えば、長手方向位置）Ｌ１、並びに基材１１９内の開口１２１のレベルに概ね配置される、第２のレベル、高さ、又は位置（例えば、長手方向位置）Ｌ２などの、様々な場所で、第２チャンバ１１１に入ることができる。上述のように、流体が第２チャンバ１１１内に移動することを可能にする、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間の様々な開口部及び空間を、第１流体通路１６０と総称することができる点を理解するべきである。図４に更に示すように、一部の実施形態では、気体（例えば、排出される気体）は、第２流体通路１６２を介して（すなわち流体が、第１流体通路１６０を介して第２チャンバ１１１内に移動する際に）、挿入部材１３０、基材１１９、ハウジング１０２、及び／又は第２チャンバ１１１の後方に概して配置される、第３のレベル、高さ、若しくは位置（例えば、長手方向位置）Ｌ３で、第２チャンバ１１１から抜け出ることができる。
【０１４０】
図４及び図６に示す、生物学的滅菌インジケーター１００の垂直的な直立配向では、第３のレベルＬ３は、第１のレベルＬ１及び第２のレベルＬ２の双方以上に位置する。更には、一部の実施形態では、第３のレベルＬ３は、生物学的滅菌インジケーター１００の動作中（例えば、読み取り装置のウェル内に設置されるとき、滅菌の間、及び／又は作動の間）、依然として、第１のレベルＬ１及び第２のレベルＬ２の双方以上に位置することができる。すなわち一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、動作中に傾斜させることができる（例えば、図４若しくは図６の左手側に向けて、図４若しくは図６の右手側に向けて、図４若しくは図６の奥へ、及び／又は図４若しくは図６の手前に）。
【０１４１】
第１のレベルＬ１、第２のレベルＬ２、及び第３のレベルＬ３は、単なる例として示されるが、しかしながら、第１流体通路１６０が第２チャンバ１１１に入る正確な場所、及び／又は第２流体通路１６２が第２チャンバ１１１から出る正確な場所は、図４及び図６に示すものとは異なるものにすることができる点を理解するべきである。
【０１４２】
図４及び図６に示すように、第２流体通路１６２は、挿入部材１３０のチャネル１６９及び／又はハウジング１０２のチャネル１６３によって、少なくとも部分的に画定され、これらは、全般的に、以下の論考では単純に「チャネル」と称され、図示の実施形態のチャネル１６９及び／又はチャネル１６３の、少なくとも一部分を指すように、解釈することができる図示の実施形態では、チャネルは、第２チャンバ１１１内の任意の地点、又は第３のレベルＬ３に位置しているとして説明することができる、入口と、第４のレベル、高さ、又は位置（例えば、長手方向位置）Ｌ４に概して配置される、出口とを有する。図４及び図６に示すように、例えば、生物学的滅菌インジケーター１００の動作中には、チャネルの出口位置（すなわち第４のレベルＬ４）は、第１流体通路１６０が第２チャンバ１１１と接続する位置（すなわち第１のレベルＬ１及び／又は第２のレベルＬ２）よりも上方に、概して配置される。
【０１４３】
換言すれば、第１流体通路１６０は、第１チャンバ１０９の第２（下方）末端部１１３を、第２チャンバ１１１の第１（上方）末端部１２４に、流体結合するように配置することができる。その一方で、第２流体通路１６２は、第２チャンバ１１１（例えば、第２チャンバ１１１の第１（上方）末端部１２４を、第１チャンバ１０９の上方部分（例えば、第１（上方）末端部１１２）に、流体結合するように配置することができる。
【０１４４】
更には、一部の実施形態では、第２流体通路１６２（又はチャネル）が第２チャンバ１１１と接続する位置又はレベルは、容器１２０が、その第２の断裂した状態にあるときに、液体１２２で最後に充填される、第２チャンバ１１１の部分に位置しているとして、説明することができる。
【０１４５】
一部の実施形態では、容器１２０が、第２の断裂した状態にあり、第２チャンバ１１１が、液体１２２で少なくとも部分的に充填される場合、液体１２２は、あるレベル、高さ、又は位置（例えば、長手方向位置）Ｌを有し得、第２流体通路１６２は、そのレベルＬよりも下方の位置と、レベルＬよりも上方の位置との間に延在し得る。結果として、容器１２０が第２の状態にあるとき、第２チャンバ１１１が、液体１２２で充填される際、第２チャンバ１１１は、第２流体通路１６２によって、継続的に通気することができる。
【０１４６】
一部の実施形態では、第１流体通路１６０は、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間の、主要又は一次的な流体連通路として機能することができ、第２流体通路１６２は、第２チャンバ１１１と第１チャンバ１０９との間の、補助的又は二次的な流体連通路としての役割を果たすことができる（例えば、第２流体通路１６２が、第１チャンバ１０９内に抜け出るものであって、生物学的滅菌インジケーター１００の別の部分に抜け出るものではない場合）。そのような実施形態では、第２流体通路１６２の総合的な空間、容積、及び／又は面積は、第１流体通路１６０のものよりも実質的に小さいものとすることができる。一部の実施形態では、第１流体通路１６０及び第２流体通路１６２の少なくとも一部分は、実質的に互いに離隔しているものとして、又は実質的に平行で交差しないものとして、説明することができる。一部の実施形態では、第１流体通路１６０及び第２流体通路１６２は、それぞれ、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間で、実質的に長手方向に（例えば、長手方向ＤＬに実質的に平行に）延在することができる。
【０１４７】
すなわち全般的には、（１）第１チャンバ１０９から第２チャンバ１１１への流体の移動の、少なくとも大半に対応するように構成される、第１流体通路１６０などの第１流体通路と、（２）第２チャンバ１１１からの気体を通気するように構成される、第２流体通路１６２などの第２流体通路とを含む、生物学的滅菌インジケーター１００は、１つのみの内部チャンバを含んでいたか、あるいは流体が第２チャンバ１１１に入る通路と同じ流体通路を介して、気体が第２チャンバ１１１から抜け出なければならないような、第１チャンバ１０９及び第２チャンバ１１１を接続する、１つのみの流体通路を含んでいた、生物学的滅菌インジケーター１００に勝る有利点を有する。
【０１４８】
例示の実施形態に示すように、第１流体通路１６０及び第２流体通路１６２を構成することによって、一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、第２チャンバ１１１内に、滅菌剤及び／又は液体１２２を移動させる試みの結果として生じる恐れがある、あらゆる空気閉塞効果を、少なくとも部分的に排除することができる。更には、一部の実施形態では、第２流体通路１６２は、生物学的滅菌インジケーター１００が作動して、液体１２２が、重力により第２チャンバ１１１内に移動することを可能にする一方で、生物学的滅菌インジケーター１００は、液体１２２を第２チャンバ１１１内に移動させるために、生物学的滅菌インジケーター１００の上下を逆転させるか、又は他の方法で再配向することを必要とせずに、同じ配向（例えば、図１、２、４、及び図６に示すような、実質的に垂直的な直立配向）で維持される。
【０１４９】
挿入部材１３０を引き続き参照すると、挿入部材１３０の突起部１５８は、比較的、剛性であり、固定されているものとして示される。すなわち一部の実施形態では、突起部１５８は、容器１２０がハウジング１０２内で移動する際に、容器１２０に対して、実質的に屈曲、歪曲、変形、又は他の方法で対処するように適合させることができない。むしろ、一部の実施形態では、図１〜４、及び図６に示すように、突起部１５８は、作動の前に、容器１２０を上に配置して無損傷で保持することができる、上方末端部１５９を有するように、それぞれ構成することができる。図１、２、及び図４に示すように、一部の実施形態では、突起部１５８は、例えば、楕円形又はカプセル形状の容器１２０が採用される場合、容器１２０を、その半曲末端部で断裂させるように配置することができる。
【０１５０】
突起部１５８に、キャリア１３２の少なくとも一部分を形成させることの潜在的な１つの有利点は、容器１２０が断裂する際に、容器１２０の底部を非拘束的にすることができるため、比較的容易かつ確実に、液体１２２を、容器１２０から解放して、芽胞１１５に向けて移動させることができる点である。
【０１５１】
そのような実施形態では、例えば、楕円形又はカプセル形状の容器１２０が採用される場合、挿入部材１３０を使用して、容器１２０の平坦面に実質的に垂直の方向で、容器１２０を断裂させることができる。そのような実施形態では、容器１２０を、その側面に沿って断裂させることは、容器１２０の下方末端部の周囲に、幾分の開放空間を維持することと共に達成されるため、容器１２０が断裂する際の、容器１２０から芽胞１１５の近位への液体１２２の移動を促進することができる。
【０１５２】
上述のように、突起部１５８は、例えばハウジング１０２の第２部分１０６が、ハウジング１０２の第１部分１０４に対して移動する（例えば、第１の位置１４８から第２の位置１５０へと）ことに応答して、容器１２０がハウジング１０２に対して移動する（例えば、長手方向ＤＬに沿って）際に、容器１２０を断裂させるように適合させることができる。
【０１５３】
一部の実施形態では、突起部１５８は、１つ以上の縁端部（例えば、テーパー形状の縁端部）若しくは尖端部を含むか、又は他の方法で、粉砕力を集中させるように構成して、突起部１５８に隣接する領域内での、容器１２０に対する圧力を増大させ、容器１２０を、より容易に、かつ１つ以上の所望の領域内で断裂させることを促進することができる。一部の実施形態では、そのような力の集中により、第２部分１０６を第１部分１０４に対して移動させて、容器１２０（又は、その一部分）を断裂させるために必要とされる、全体的な労力又は力を低減することができる。
【０１５４】
図１〜４、及び図６に示すように、突起部１５８は、挿入部材１３０の基部１２７と一体的に形成されるが、しかしながら、突起部１５８は、その代わりに、ハウジング１０２の壁部１０８と一体的に形成することができる点を理解するべきである。更には、一部の実施形態では、突起部１５８は、ハウジング１０２に結合することができ、あるいは突起部１５８及び基部１２７は、別個の挿入部材によって提供することができる。そのような実施形態では、突起部１５８は、それぞれ、別個の挿入部材とすることができ、又は複数の突起部１５８を、１つ以上の挿入部材によって提供することができる。更には、挿入部材１３０は、壁部１１８に当接して、芽胞１１５の近位（例えば、ハウジング１０２の下方部分１１４）内への、第１部分の挿入部材１３０の移動を阻止するように構成することができる。
【０１５５】
更には、一部の実施形態では、図１〜４、及び図６に示すように、突起部１５８は、長手方向ＤＬに沿って延在することができ、突起部１５８の長さ及び／又は厚さ（例えば、厚さは、長さに沿って変化し得る）を調整して、ハウジング１０２内の所望の位置、及び所望の方式での、容器１２０の断裂を制御することができる。突起部１５８の構成を、単なる例として、図１〜７に示す。
【０１５６】
全般的には、突起部１５８のそれぞれは、単なる例として、芽胞１１５に向けて、長手方向ＤＬに沿って厚さが増大する（例えば、容器１２０、又はハウジング１０２の中心に向けて、内側方向に）ものとして示される。そのような構成により、例えば、第２部分１０６が、第２の位置１５０に移動することに応答して、容器１２０が、芽胞１１５に向けて移動するにつれて、容器１２０に利用可能な断面積を減少させることができる。
【０１５７】
更には、生物学的滅菌インジケーター１００は、単なる例として、２つの突起部１５８、及び側壁部１３１を含むものとして図１〜７に示されるが、１つの突起部１５８、若しくは構造的に可能な限り多くの突起部１５８、及び他の構成を採用することができる点を理解するべきである。更には、突起部１５８は、ハウジング１０２の形状及び寸法、容器１２０の形状及び寸法、挿入部材１３０の形状及び寸法、並びに／あるいは容器１２０を断裂させるために所望される方式及び位置に応じて、所望されるように成形及び寸法決めすることができる。
【０１５８】
上述のように、一部の実施形態では、ハウジング１０２の少なくとも一部分は、テーパー形状とすることができる（例えば、図３のテーパー形状部分１４６を参照）。結果として、ハウジング１０２の断面積は、長手方向ＤＬに沿って、概して減少し得る。しかしながら、ハウジング１０２の内法寸法は、ハウジング１０２の外法寸法を変化させることなく、テーパー形状部分で、長手方向Ｄ１に沿って概して減少し得ることを理解するべきである。一部の実施形態では、ハウジング１０２の内側部分が、その長さに沿って先細となる場合であっても、ハウジング１０２の外法寸法は、その長さに沿って均一とすることができる。一部の実施形態では、１つ以上の突起部１５８のみが、長手方向ＤＬに沿って、厚さが変化し得る（すなわち容器１２０に向けて、例えば、半径方向で）ことにより、ハウジング１０２の寸法が変化しない場合であっても（例えば、ハウジング１０２が、内部又は外部のいずれにも、いずれのテーパー形状部分１４６を含まない場合であっても）、容器１２０が、作動の間にハウジング１０２内で移動するにつれて、容器１２０に利用可能な断面積は概して減少する。
【０１５９】
図１〜７に示すように、突起部１５８のそれぞれの、上方末端部１５９は、丸形、湾曲、又は弓状の表面を含み、この表面により、突起部１５８の上方末端部１５９の上方に、容器１２０が少なくとも部分的に設置される、第１の位置１４８から、突起部１５８の間（又はハウジング１０２の壁部１０８と１つ以上の突起部１５８との間）の、より小さい断面積の領域内に、容器１２０が少なくとも部分的に押し込められる位置への、容器１２０の移動を促進することができる。更には、丸形の上方末端部１５９は、容器１２０の時期尚早の破砕を阻止することができ、このことにより、生物学的滅菌インジケーター１００の時期尚早の作動（すなわち液体１２２の時期尚早の解放）を阻止することができる。
【０１６０】
一部の実施形態では、図３に示すように、挿入部材１３０は、容器１２０を、突起部１５８の上方に、かつ１つ以上の突起部１５８の、内側方向を向く表面の、いずれかの部分に隣接する領域から離れて保持することにより、生物学的滅菌インジケーター１００の偶発的又は時期尚早の作動を阻止することが可能になるように、サイズ決定及び成形することができる。そのような構成はまた、衝撃又は材料の膨張（例えば、滅菌プロセスの間の熱曝露による）による、不用意な破砕も阻止することができる。
【０１６１】
突起部１５８の上方末端部１５９によって、少なくとも部分的に形成することができる、キャリア１３２は、容器１２０の底部部分を保持するように構成することができ、突起部１５８は、容器１２０がハウジング１０２内に配置される際、容器１２０の底部付近の場所で、容器１２０を断裂させるように、配置することができる。そのような構成により、容器１２０が、その底部付近で破砕されることを可能にすることができ、容器１２０からの液体１２２の除去を促進することができ、このことにより、芽胞１１５への液体１２２の利用可能性を増進することができ、液体１２２を、芽胞１１５と（例えば、芽胞リザーバ１３６と）流体連通するように解放することの確実性を増進することができる。そのような構成は、単なる例として示されるが、しかしながら、突起部１５８は、任意の所望の方式で容器１２０を断裂させるように構成及び配置することができる点を理解するべきである。
【０１６２】
本開示の一部の実施形態は、比較的小さい力を使用する、壊れやすい容器１２０の最適かつ安全な破砕を提供する一方で、生物学的滅菌インジケーター１００の芽胞領域（例えば、ハウジング１０２の第２チャンバ１１１）への液体１２２の移動を増進し、かつ／又は生物学的滅菌インジケーター１００の芽胞領域内での、液体１２２の封じ込めを増進する。更には、本開示の一部の実施形態は、生物学的滅菌インジケーター１００の検出チャンバ（例えば、第２チャンバ１１１）などの、生物学的滅菌インジケーター１００の特定領域に、液体を推進するように動作する。
【０１６３】
図１〜７に示す実施形態では、挿入部材１３０は、容器１２０の周りで、かつ／又は側壁部１３１の周りで、ほぼ等しく離間する、２つの突起部１５８を含むものとして示される。しかしながら、一部の実施形態では、側壁部１３１は、側壁部１３１から半径方向内側に延在する、１つの中実の（例えば、実質的に環状、又は半環状の）突起部１５８を含み得る。更には、一部の実施形態では、側壁部１３１は、ハウジング１０２の内側表面の周囲で、図示されるものよりも更に延在し得る。しかしながら、図１〜７に示すもののような、より狭い（例えば、角度寸法で）１つ以上の突起部１５８を採用することにより、実質的に一定又は実質的に非閉塞の滅菌剤通路１６４を、容器１２０の周囲に提供することができる。
【０１６４】
挿入部材１３０が、１つ以上の突起部１５８を含む場合であれ、又は側壁部１３１を含む場合であれ、挿入部材１３０は、ハウジング１０２内の一定の場所内に、容器１２０を保持して、滅菌の間、実質的に一定の滅菌剤通路１６４を提供するように構成することができる。例えば、容器１２０が、作動の前に（例えば、滅菌の間に）、ハウジング１０２内で、移動又は回転する（例えば、半径方向及び／又は長手方向に）ことを可能にするのではなく、挿入部材１３０は、実質的に一定の位置に、容器１２０を保持することができ、このことにより、不用意な遮断の機会が殆ど又は全く伴わない、容器１２０の外側表面とハウジング１０２の内側表面との間の、滅菌剤の実質的に一定かつ比較的非閉塞の通路を可能にすることができる。
【０１６５】
例示の実施形態に示すように、挿入部材１３０は、実質的に水平に、又は生物学的滅菌インジケーターの長手方向ＤＬに対して垂直に配置される（例えば、挿入部材１３０が、生物学的滅菌インジケーター内に配置される場合）、１つ以上の突起部１６１を更に含み得る。突起部１６１は、「第２突起部」又は「水平突起部」と称することができ、その一方で、容器１２０を保持及び／又は破砕するために使用される突起部１５８は、「第１突起部」又は「垂直突起部」と称することができる。第２突起部１６１は、基部１２７のように下向きに角度付けされない。結果として、第２突起部１６１は、様々な目的に関して使用することができる。例えば、第２突起部１６１は、容器１２０を断裂させる力の下で、挿入部材１３０を安定させる（例えば、生物学的滅菌インジケーター１００のハウジング１０２内の所望の位置に、挿入部材１３０を保持することを援助する）ことができる。更には、第２突起部１６１は、容器１２０が断裂した後に、容器１２０の断裂部分を保持及び／又は回収することにより、芽胞の増殖、及び／又は芽胞の増殖の検出に悪影響を及ぼす恐れがある、生物学的滅菌インジケーター内の芽胞の近位への、そのような部分の移動を阻止するように、機能することができる。芽胞１１５に至る固体の移動を阻止しつつ、芽胞１１５に至る流体の移動を依然として可能にする、第２突起部１６１の他の形状及び構成を採用することができる。
【０１６６】
一部の実施形態では、挿入部材１３０（例えば、基部１２７）は、ハウジング１０２の第２チャンバ１１１（すなわち下方部分１１４）内への流体の移動（例えば、液体１２２の移動）を促進又は可能にすること；ハウジング１０２の第２チャンバ１１１内への、断裂した容器１２０の断片又は諸部分（例えば、固体）の移動を最小限に抑えること、すなわち断裂した容器１２０の諸部分を回収及び／又は保持すること；並びに／あるいは、ハウジング１０２の第２チャンバ１１１から外への、芽胞１１５及び／又はシグナルの拡散を最小限に抑えることのうちの、１つ以上に関して適合させることができる。例えば、一部の実施形態では、基部１２７は、格子又はフィルターとして機能するように構成することができる。一部の実施形態では、芽胞の増殖は、蛍光指示薬／分子（例えば、蛍光色素分子）又は他のマーカーによって判定される。一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００内での、作動の後の液体のレベルが、芽胞１１５の場所よりも上方である場合には、そのような分子若しくはマーカー、又は芽胞１１５自体が、芽胞リザーバ１３６から離れる方向に、若しくは芽胞リザーバ１３６から外へ、かつ潜在的には、ハウジング１０２の第２チャンバ１１１から外へ、移動又は拡散する恐れがある。結果として、生物学的滅菌インジケーター１００の諸部分（例えば、挿入部材１３０）は、生物学的滅菌インジケーター１００の第２チャンバ１１１から外への、様々な指示薬、分子、及び／又はマーカーの望ましくない拡散を阻止するように構成することができる。一部の実施形態では、上述のように、基材１１９もまた、そのような望ましくない拡散を阻止することができる。
【０１６７】
図１〜４に示す実施形態では、挿入部材１３０の基部１２７は、概してＵ字形又は馬蹄形であり、滅菌の間の芽胞１１５に向けた滅菌剤の移動、及び作動の間の芽胞１１５に向けた液体１２２の移動を促進する、中心開口１７７（図２を参照）を含む。基部１２７の馬蹄形は、ハウジング１０２の上方部分１１６（すなわち第１チャンバ１０９）と下方部分１１４（すなわち第２チャンバ１１１）との間の開口部を増大させることができるが、しかしながら、この形状は、単なる例として示すものであり、他の形状を採用することもできる。
【０１６８】
一部の実施形態では、挿入部材１３０は、下向きに延出する１つ以上の突起部１２７を含むものとして説明することができ、この突起部１２７は、壁部１１８、又は生物学的滅菌インジケーター１００の別の内部構造に当接するか、若しくは他の方法で結合して、挿入部材１３０のための基部若しくは支持部を提供し、作動の前のハウジング１０２に対する挿入部材１３０及び容器１２０の移動を阻止し、かつ／又は作動の間の容器１２０の破砕を援助するように適合される。結果として、一部の実施形態では、基部１２７は、その代わりに、「第３突起部」１２７と称することができる。
【０１６９】
例示の実施形態に示すように、一部の実施形態では、挿入部材１３０は、生物学的滅菌インジケーター１００の第１チャンバ１０９内に、完全に存在するように構成することができるため、挿入部材１３０が、検査又は検出プロセスを潜在的に妨害する可能性がある、第２チャンバ１１１内へと、延在することがない。更には、挿入部材１３０は、第２チャンバ１１１内への、生物学的滅菌インジケーター１００の他の部分（例えば、断裂した容器１２０）の移動を阻止するように構成することができる。
【０１７０】
図示の実施形態の挿入部材１３０は、中心の長手方向対称軸に関して、概して対称であることにより、２つの同一の第１突起部１５８、２つの同一の第２突起部１６１、及び２つの同一の第３突起部１２７が存在する。しかしながら、挿入部材１３０は、いずれの対称軸も含む必要はなく、第１突起部１５８は、互いに同じである必要はなく、第２突起部１６１は、互いに同じである必要はなく、第３突起部１２７は、互いに同じである必要はない。挿入部材１３０、並びに様々な突起部１５８、１６１、及び１２７は、滅菌剤通路１６４を制御して、例えば、生物学的滅菌インジケーター１００の殺傷／生存率を調整し、容器１２０の不用意な断裂を阻止し、ハウジング１０２内（housing 120）での容器１２０の移動を促進し、ハウジング１０２と接合若しくは係合し、かつ／又は容器１２０の破砕を制御するように、サイズ決定及び配置することができる。
【０１７１】
単なる例として、図示の挿入部材１３０は、少なくとも以下を含む一体型デバイスであるとして示される：作動の前に容器１２０を保持するための手段、作動の間に容器１２０を断裂させるための手段；ハウジング１０２内での容器１２０の移動を可能にするための手段；実質的に均一な滅菌剤通路１６４を提供するための手段、作動の後の断裂した容器１２０の諸部分を回収及び／又は保持する（又はハウジング１０２の第２チャンバ１１１内への、断裂した容器１２０の諸部分の移動を、少なくとも部分的に阻止する）ための手段；並びに／あるいは作動後の、ハウジング１０２の第２チャンバ１１１から第１チャンバ１０９への、芽胞１１５及び／又はシグナルの拡散を最小限に抑えるための手段。しかしながら、一部の実施形態では、挿入部材１３０は、単一の一体型デバイスの一部とすることができない、複数の部分を含み得、それらの部分のそれぞれを、上記の機能のうちの１つ以上を行なうように適合させることができる点を理解するべきである。
【０１７２】
挿入部材１３０が「挿入部材」と称される理由は、図示の実施形態では、上記の機能を実行するデバイスが、ハウジング１０２のリザーバ１０３（具体的には、第１チャンバ１０９）内に挿入することができるデバイスであるためである。しかしながら、挿入部材１３０は、その代わりに、ハウジング１０２自体、又は生物学的滅菌インジケーター１００の別の構成要素によって提供することができ、必ずしもハウジング１０２内に挿入される必要がないことを理解するべきである。用語「挿入部材」が、簡略性のために、本開示の全体を通して説明されるが、そのような用語は限定することを意図するものではないことを理解するべきであり、上記の機能のうちの１つ以上を実行する他の等価の構造を、挿入可能な挿入部材１３０の変わりに、又は挿入可能な挿入部材１３０と組み合わせて使用することができる点を理解するべきである。更には、図示の実施形態では、挿入部材１３０は、ハウジング１０２内に、具体的にはハウジング１０２の第１部分１０４（及び第１チャンバ１０９）内に挿入可能であり、かつ、そこから取り外し可能である。しかしながら、挿入部材１３０がハウジング１０２内に挿入可能な場合であっても、挿入部材１３０は、ハウジング１０２から取り外し可能である必要はなく、むしろ、挿入部材１３０を所望の場所内に配置した後は、ハウジング１０２からの挿入部材１３０の取り外しを阻止する方式で、ハウジング１０２に固定結合させることができる点を理解するべきである。
【０１７３】
一部の実施形態では、ハウジング１０２の少なくとも一部分、例えば、ハウジング１０２の下方部分１１４は、電磁放射線の波長、又は様々な波長に対して透過的（例えば、可視光線光学検出方法が採用される場合、可視光線に対して透過的）とすることができ、このことにより、芽胞の増殖の検出を促進することができる。すなわち一部の実施形態では、図３、４及び図６に示すように、ハウジング１０２の少なくとも一部分は、検出窓１６７を含むか、又は検出窓１６７を形成することができる。
【０１７４】
更には、一部の実施形態では、図３に示すように、ハウジング１０２の少なくとも一部分、例えば、下方部分１１４は、１つ以上の平面壁部１６８を含み得る。そのような平面壁部１６８により、芽胞の増殖の検出（例えば、光学検出）を促進することができる。更には、上記で示し、かつ説明されるように、ハウジング１０２の第１部分１０４の壁部１０８は、段差部１５２、段差部１２３、及びテーパー形状壁部、すなわち段差部１７０などの、１つ以上の段差状若しくはテーパー形状領域を含み得る。テーパー形状壁部１７０は、ハウジング１０２の下方部分、すなわち検出部分１１４の、全体的な厚さ及びサイズを低減するように機能し得ることにより、ハウジング１０２の外法寸法が、内法寸法に加えて低減される。生物学的滅菌インジケーター１００の下方部分１１４の、そのようなサイズ及び／又は厚さの低減により、検出を促進することができる。更には、段差部及び／又はテーパー形状壁部１２３、１５２、１７０などの、１つ以上の機構を有することは、生物学的滅菌インジケーター１００が、読み取り又は検出デバイスに、１つの配向のみで結合されることを可能にし得るため、生物学的滅菌インジケーター１００が、読み取り装置に対して「キー止め」され、このことにより、ユーザーのエラーを最小限に抑え、検出プロセスの確実性を増進することができる。一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００の１つ以上の部分を、読み取り装置に対してキー止めすることができる。
【０１７５】
本開示の生物学的滅菌インジケーターは、全般的には、滅菌の間、液体１２２及び芽胞１１５を、隔離させながらも比較的接近させて維持する（例えば、内蔵型の生物学的滅菌インジケーター１００の内部で）ことにより、滅菌プロセスに晒した後に、液体１２２と芽胞１１５とを容易に組み合わせることができる。液体１２２及び芽胞１１５は、検出プロセスの間、インキュベートすることができ（例えば、読み取り装置１２は、生物学的滅菌インジケーター１００をインキュベートすることができる）、又は生物学的滅菌インジケーター１００は、検出プロセスの前にインキュベートすることができる。一部の実施形態では、液体１２２を使用して芽胞をインキュベートする場合、室温よりも高いインキュベーション温度を使用することができる。例えば、一部の実施形態では、インキュベーション温度は、少なくとも約３７℃であり、一部の実施形態では、インキュベーション温度は、少なくとも約５０℃（例えば、５６℃）であり、一部の実施形態では、少なくとも約６０℃である。一部の実施形態では、インキュベーション温度は、約６０℃以下であり、一部の実施形態では、約５０℃以下、一部の実施形態では、約４０℃以下である。
【０１７６】
検出プロセスは、芽胞１１５からの（例えば、芽胞リザーバ１３６内部からの）、又は芽胞１１５の周囲を取り囲む液体１２２からの、検出可能な変化を検出するように適合させることができる。すなわち検出プロセスは、様々な特性を検出するように適合させることができ、それらの特性としては、電磁放射線（例えば、紫外バンド、可視バンド、及び／又は赤外バンドでの）、蛍光、発光、光散乱、電子的特性（例えば、コンダクタンス、インピーダンスなど、又はこれらの組み合わせ）、濁度、吸収度、ラマン分光光度、偏光度など、又はこれらの組み合わせが挙げられるが、それらに限定されない。そのような特性の検出は、蛍光計、分光光度計、比色計などのうちの１つ以上、又はこれらの組み合わせによって実施することができる。蛍光、可視光線などを測定する実施形態などの、一部の実施形態では、検出可能な変化は、特定波長で検出することによって測定される。
【０１７７】
芽胞及び／又は液体１２２は、芽胞の生存度の標示である生化学反応の結果として、上記の特性のうちの１つ以上を生じさせるように適合させる（例えば標識する）ことができる。結果として、検出可能な変化が存在しない（例えば、ベースライン又はバックグラウンドの読み取り値と比較して）ことは、有効な滅菌プロセスを意味し得るが、その一方で、検出可能な変化は、無効な滅菌プロセスを意味し得る。一部の実施形態では、検出可能な変化は、上記の特性のうちの１つ以上が変化する（例えば、蛍光の増大、濁度の減少など）際の速度を含み得る。
【０１７８】
一部の実施形態では、芽胞の生存度は、酵素活性を利用することによって、判定することができる。参照により本明細書に組み込まれる、Ｍａｔｎｅｒらの米国特許第５，０７３，４８８号、表題「Ｒａｐｉｄ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａ  Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｃｙｃｌｅ  ａｎｄ  Ｒａｐｉｄ  Ｒｅａｄ−ｏｕｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ」で説明されるように、特定のタイプの芽胞に関して、滅菌プロセスの有効性を判定するために利用することができる特に有用な特性を有する酵素を、特定することができる。そのような特性としては、（１）酵素が、１×１０６個の試験微生物の集団を、約６の対数で減少させる（すなわち試験微生物の増殖の欠如によって測定される、約０個の集団まで）ために十分な滅菌条件に供される場合に、その酵素に関する基質系との反応によって測定されるような、「バックグラウンド」と等しい残留活性を有すること、及び（２）酵素が、１×１０６個の試験微生物の集団を、少なくとも１の対数で、ただし６の対数未満で減少させるためにのみ十分な滅菌条件に供される場合に、その酵素基質系との反応によって測定されるような、「バックグラウンド」よりも高い酵素活性を有することを、挙げることができる。酵素基質系は、酵素によって反応が引き起こされ、検出可能な変化によって明白であるような、検出可能な酵素修飾生成物を生じさせる物質、あるいは物質の混合物を含み得る。
【０１７９】
一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、生物学的滅菌インジケーター１００が、例えば芽胞１１５付近に配置される１つのみの検出窓（例えば、図３の検出窓１６７）を含む、片面モードで検定することができる。しかしながら、一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、２つ以上の検出窓（例えば、ハウジング１０２の下方部分１１４の、双方の平行壁部１６８の、全て又は一部分によって形成される窓）を含み得ることにより、生物学的滅菌インジケーター１００は、２つ以上の検出窓を介して検定することができる。複数の検出窓を採用する実施形態では、検出窓を、左右に並べて（片面モードと同様に）配置することができ、又は検出窓を、互いに対して一定の角度（例えば、９０度、１８０度など）で配向することができる。
【０１８０】
全般的には、芽胞１１５は、リザーバ１０３と流体連通する、芽胞リザーバ１３６の内部に配置される。一部の実施形態では、芽胞リザーバ１３６は、リザーバ１０３の一部分（例えば、第２チャンバ１１１の一部分）を形成する。図４に示すように、リザーバ１０３は、滅菌の間、環境と流体連通して（例えば、開口１０７を介して）、滅菌プロセスの間、滅菌剤がリザーバ１０３に入り、芽胞１１５を滅菌することを可能にする。容器１２０は、滅菌の間、液体１２２を収容して、液体１２２が、滅菌の間に、芽胞１１５、リザーバ１０３、及び滅菌剤と流体連通することを阻止するように構成することができる。
【０１８１】
ここで、芽胞１１５及び／又は芽胞リザーバ１３６の様々な詳細をより詳細に説明する。
【０１８２】
一部の実施形態では、芽胞１１５は、ハウジング１０２の下方部分１１４内に直接配置することができ、又は芽胞１１５は、芽胞リザーバ１３６（例えば、芽胞キャリア１３５によって提供される）などの、芽胞リザーバ内に配置することもできる。芽胞１１５が、ハウジング１０２の下方部分１１４内に直接配置される場合であれ、又は芽胞リザーバ内に配置される場合であれ、芽胞１１５は、様々な方式で提供することができる。一部の実施形態では、芽胞１１５は、生物学的滅菌インジケーター１００内の所望の場所内に配置して、乾燥させることができる、芽胞懸濁液中に存在し得る。一部の実施形態では、芽胞１１５は、生物学的滅菌インジケーター１００内の所望の場所内に配置及び／又は固定することができる、基材（図示せず）上に提供することができる。一部の実施形態は、乾燥形態で提供される芽胞１１５と基材上に提供される芽胞１１５との組み合わせを含み得る。
【０１８３】
一部の実施形態では、この基材は、芽胞１１５を支持し、かつ／又は、芽胞１１５を所望の所在部位内に維持することに役立つように、配置することができる。そのような基材としては、様々な材料を挙げることができ、それらの材料としては、紙、ポリマー（例えば、ハウジング１０２に関して上記に列挙されるポリマーのうちのいずれか）、接着剤（例えば、アクリレート、天然若しくは合成ゴム、シリコーン、シリコーンポリ尿素、イソシアネート、エポキシ、又はこれらの組み合わせ）、織布、不織布、微多孔性材料（例えば、微多孔性ポリマー材料）、反射性材料（例えば、金属箔）、ガラス、磁器、セラミック、ゲル形成材料（例えば、グアーガム）、又はこれらの組み合わせが挙げられるが、それらに限定されない。更には、又は代替的には、そのような基材は、親水性コーティングを含むか、又は親水性コーティングに結合させて、液体１２２を芽胞１１５と緊密に接触させることを、促進することができる（例えば、採用される液体１２２が、水性である場合）。更には、又は代替的には、そのような親水性コーティングは、液体１２２と芽胞１１５とを流体結合するように配置される、いずれの流体通路にも適用することができる。一部の実施形態では、親水性コーティングに加えて、又は親水性コーティングの代わりに、液体１２２が、優先的に移動して芽胞１１５と接触するように、ハウジング１０２の他の部分（例えば、ハウジング１０２の下方部分１１４）及び／又は芽胞リザーバ１３６の他の部分に、疎水性コーティングを適用することができる。
【０１８４】
生物学的滅菌インジケーター１００の一部の実施形態は、芽胞キャリア１３５を含まない。むしろ、芽胞リザーバ１３６が、ハウジング１０２の下方部分１１４自体によって提供され、芽胞１１５は、下方部分１１４内に配置することができ、下方部分１１４の内側表面若しくは壁部に吸着させることができ、又はこれらの組み合わせとすることができる。一部の実施形態では、芽胞１１５は、ハウジング１０２の下方部分１１４内に配置される、基材上に提供することができる。
【０１８５】
一部の実施形態では、芽胞１１５は、１つの芽胞の所在部位内に、又は複数個の芽胞の所在部位内に配置することができ、それらの所在部位の全ては、リザーバ１０３内、ハウジング１０２の下方部分１１４内、及び／又は芽胞リザーバ１３６内のいずれかに配置することができる。一部の実施形態では、複数の芽胞の所在部位を有することにより、滅菌剤及び液体１２２に対する芽胞の曝露を最大化することができ、製造性を改善することができ（例えば、生物学的滅菌インジケーター１００内部の凹部内に、芽胞の所在部位のそれぞれを定置することによって、芽胞の定置を促進することができる）、検出特性を改善することができる（例えば、１つの大きい芽胞の所在部位の中央の芽胞は、それほど容易に検出することができないため）。複数個の芽胞の所在部位を採用する実施形態では、芽胞の各所在部位は、異なる既知数の芽胞を含み得、かつ／又は芽胞の各所在部位は、複数個の芽胞のタイプを試験することができるように、異なる芽胞を含み得る。複数のタイプの芽胞を採用することによって、生物学的滅菌インジケーター１００を、様々な滅菌プロセスに関して使用することができ、芽胞の特定の所在部位を、特定の滅菌プロセスに関して分析することができ、又は複数のタイプの芽胞を使用して、滅菌プロセスの有効性若しくは信頼性を、更に試験することができる。
【０１８６】
更には、一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、複数個の芽胞リザーバ１３６を含み得、各芽胞リザーバ１３６が、１つ以上の芽胞１１５の所在部位を含み得る。複数個の芽胞リザーバ１３６を採用する、一部の実施形態では、複数個の芽胞リザーバ１３６を、リザーバ１０３と流体連通して配置することができる。
【０１８７】
一部の実施形態では、芽胞１１５は、芽胞１１５及び／又は芽胞リザーバ１３６に密着するか、若しくは上から装着されるように適合される、カバー（図示せず）で覆うことができる。そのようなカバーは、製造、滅菌、及び／又は使用の間、生物学的滅菌インジケーター１００の所望の領域の範囲内に、芽胞を維持することに役立ち得る。このカバーは、採用される場合には、実質的に検出プロセスを妨げることがなく、かつ／又は対象の電磁放射線波長に対して少なくとも部分的に透過性である材料で、形成することができる。更には、カバーの材料構成に応じて、一部の実施形態では、このカバーにより、芽胞１１５に沿った液体１２２（例えば、栄養培地）のウィッキングを促進することができる。一部の実施形態では、このカバーはまた、毛管チャネル、親水性の微多孔性線維若しくは膜など、又はこれらの組み合わせなどの、芽胞リザーバ１３６内への（又は芽胞１１５への）流体の流れを促進するための機構も含み得る。更には、一部の実施形態では、このカバーは、シグナルを分離するか、又はシグナルを増強することができ、このことにより検出を促進することができる。そのようなカバーは、芽胞１１５が、芽胞リザーバ１３６内部に配置される場合であれ、又はハウジング１０２の下方部分１１４内に直接配置される場合であれ、採用することができる。更には、そのようなカバーは、複数個の芽胞の所在部位を採用する実施形態で、採用することができる。このカバーとしては、様々な材料を挙げることができ、それらの材料としては、紙、ポリマー（例えば、ハウジング１０２に関して上記に列挙されるポリマーのうちのいずれか）、接着剤（例えば、アクリレート、天然若しくは合成ゴム、シリコーン、シリコーンポリ尿素、イソシアネート、エポキシ、又はこれらの組み合わせ）、織布、不織布、微多孔性材料（例えば、微多孔性ポリマー材料）、ガラス、磁器、セラミック、ゲル形成材料（例えば、グアーガム）、又はこれらの組み合わせが挙げられるが、それらに限定されない。
【０１８８】
一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、反射性表面、白色表面、黒色表面、又は表面の光学特性を最適化するために好適な別の表面改変などの、改変された内側表面を更に含み得る。反射性表面（例えば、金属箔によって提供される）を配置することにより、検定又は検出デバイスから芽胞リザーバ１３６内へ送られるシグナルを反射し、かつ／あるいは芽胞リザーバ１３６内部で生成されるあらゆるシグナルを、検定デバイスに向けて反射して戻すことができる。結果として、この反射性表面は、生物学的滅菌インジケーター１００からのシグナルを改善する（例えば、その強度を改善する）ように機能することができる。そのような反射性表面は、ハウジング１０２の内側表面、ハウジング１０２の内側表面に結合される材料、芽胞リザーバ１３６の内側表面、芽胞リザーバ１３６の内側表面に結合される材料などによって提供することができ、又は反射性表面は、芽胞基材の一部分を形成するか、若しくは芽胞基材に結合することができ、あるいはこれらの組み合わせとすることができる。
【０１８９】
同様に、一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、検定デバイスから芽胞リザーバ１３６内へ送られる特定のシグナルを増大及び／又は減少させ、かつ／あるいは芽胞リザーバ１３６内部で生成される特定のシグナルを増大及び／又は減少させるように配置される、白色表面及び／又は黒色表面を更に含み得る。単なる例として、白色表面を使用して、シグナルを増強することができ、黒色表面を使用して、シグナル（例えば、ノイズ）を低減することができる。
【０１９０】
一部の実施形態では、芽胞１１５は、所望の表面上での芽胞１１５の固定化を助長するために、機能化表面上に配置することができる。例えば、そのような機能化表面は、ハウジング１０２の内側表面、芽胞リザーバ１３６の内側表面によって提供することができ、芽胞基材の一部分を形成するか、若しくは芽胞基材に結合することなどが可能であり、又はこれらの組み合わせとすることができる。
【０１９１】
一部の実施形態では、芽胞１１５は、微細構造表面又は微細複製表面（例えば、それらの全てが参照により本明細書に組み込まれる、ＨａｌｖｅｒｓｏｎらのＰＣＴ国際公開第２００７／０７０３１０号、Ｈａｎｓｃｈｅｎらの米国特許出願公開第２００３／０２３５６７７号、及びＧｒａｈａｍらのＰＣＴ国際公開第２００４／０００５６９号で開示されるもののような、微細構造表面など）上に配置される（例えば、コーティング又は別の適用方法によって適用される）。例えば、そのような微細構造表面は、ハウジング１０２の内側表面によって提供することができ、芽胞リザーバ１３６の内側表面によって提供することができ、芽胞基材の一部分を形成するか、若しくは芽胞基材に結合することなどが可能であり、又はこれらの組み合わせとすることができる。
【０１９２】
一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、液体１２２が容器１２０から解放される際に、芽胞１１５及び液体１２２と組み合わされるように配置される、ゲル形成材料を更に含み得る。例えば、このゲル形成材料は、芽胞１１５の近傍に（例えば、芽胞リザーバ１３６内に）、ハウジング１０２の下方部分１１４内に、配置することができ、芽胞基材の一部分を形成するか、若しくは芽胞基材に結合することなどが可能であり、又はこれらの組み合わせとすることができる。そのようなゲル形成材料は、液体１２２が芽胞と接触する際に、芽胞及び栄養素を含む、ゲル（例えば、ヒドロゲル）若しくはマトリクスを形成することができる。ゲル形成材料（例えば、グアーガム）は、水和するとゲルを形成する能力を有し、シグナル（例えば、蛍光）の局在化を援助することができ、芽胞１１５を定位置に固定することができ、芽胞１１５及び／又は芽胞リザーバ１３６からの信号の拡散を、最小限に抑えることを助けることができ、かつ／あるいは検出を増進することができるため、特に有用とすることができる。
【０１９３】
一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、吸収材料又はウィッキング材料を更に含み得る。例えば、ウィッキング材料は、芽胞１１５の近傍に（例えば、芽胞リザーバ１３６内に）配置することができ、芽胞基材の少なくとも一部分を形成するか、若しくは芽胞基材に結合することなどが可能であり、又はこれらの組み合わせとすることができる。そのようなウィッキング材料としては、液体１２２を芽胞と緊密に接触させることを促進することができる、多孔質のウィッキングパッド、浸漬パッドなど、又はこれらの組み合わせを挙げることができる。
【０１９４】
一部の実施形態では、壊れやすい容器１２０は、壊れやすい容器１２０の、所望の方式での断裂を促進するように構成することができる。例えば、一部の実施形態では、壊れやすい容器１２０の下方部分は、その下方部分が、壊れやすい容器１２０の別の部分よりも優先的に断裂するように、より薄く、かつ／又はより低い強度の材料で形成することができる。更には、一部の実施形態では、壊れやすい容器１２０は、壊れやすい容器１２０の、所望の方式での断裂を促進するように配置される、様々な機構を含み得、それらの機構としては、薄く、かつ／若しくは低い強度の区域、切り込み線、ミシン目など、又はこれらの組み合わせが挙げられるが、それらに限定されない。
【０１９５】
壊れやすい容器１２０は、液体１２２が壊れやすい容器１２０の内部に収容される、第１の閉鎖状態と、壊れやすい容器１２０が断裂して、液体１２２がリザーバ１０３及び／又は芽胞リザーバ１３６内に解放され、芽胞１１５と流体連通する、第２の開放状態とを有し得る。
【０１９６】
一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、手動で作動させることができる（例えば、第２部分１０６を、第２の位置１５０に移動させることができる）。一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、読み取り装置によって作動させることができる（例えば、生物学的滅菌インジケーター１００が、読み取り装置内に配置される際に）。一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、そのような読み取り装置とは無関係のデバイス（例えば、作動デバイス）を使用して、例えば、生物学的滅菌インジケーター１００を読み取り装置のウェル内に配置する前に、そのデバイス内に生物学的滅菌インジケーター１００を配置することによって作動させることができる。一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、読み取りデバイス、読み取りデバイスとは無関係のデバイス、及び手動による作動のうちの、２つ以上の組み合わせによって作動させることができる。
【０１９７】
生物学的滅菌インジケーター１００、及び読み取り装置などの別のデバイスの、一方若しくは双方は、壊れやすい容器１２０の時期尚早又は偶発的な断裂を阻止するように、更に構成することができる。例えば、一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００、作動デバイス、又は読み取り装置は、ハウジング１０２の第２部分１０６が第２の位置１５０へと移動することを、所望されるまで阻止するように配置される、ロック又はロッキング機構を含み得る。そのような実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００は、そのロックが移動するか、取り外されるか、又はロック解除されるまで、作動させることができない。更には、又は代替的には、一部の実施形態では、生物学的滅菌インジケーター１００、作動デバイス、及び／又は読み取り装置は、ハウジング１０２の第２部分１０６が、作動の後に、第２の位置１５０から第１の位置１４８へと移動して戻ることを阻止するように配置される、ロック又はロッキング機構を含み得る。
【０１９８】
一部の実施形態では、例示の実施形態に示すように、ハウジングの少なくとも一部分を、平坦にすることができ（例えば、平行壁部１６８）、芽胞リザーバ１３６に対して実質的に平面的とすることができ、また平行壁部１６８の一方若しくは双方、又はその一部分（例えば、検出窓１６７）は、その壁部１６８（又は検出窓１６７）の少なくとも１つの寸法が、芽胞リザーバ１３６及び／又は芽胞１１５の所在部位の、少なくとも１つの寸法に実質的に一致するように、サイズ決定することができる。換言すれば、壁部１６８又はその一部分（例えば、検出窓１６７）は、芽胞リザーバ１３６及び／又は芽胞１１５の所在部位の断面積と、実質的に同じサイズである断面積を含み得る。壁部１６８／検出窓１６７と、芽胞リザーバ１３６及び／又は芽胞１１５の所在部位との、そのようなサイズの一致により、検出又は検定プロセスの間に検出されるシグナルを最大化することができる。あるいは、又は更には、壁部１６８又は検出窓１６７は、リザーバ１０３と一致するようにサイズ決定することができる（例えば、少なくとも１つの寸法又は断面積を、一致するようにサイズ決定することができる）。検出区画間のそのようなサイズの一致により、芽胞の検定及び検出を改善することができる。
【０１９９】
図１〜７に示す生物学的滅菌インジケーター１００は、少なくとも、芽胞１１５が配置される生物学的滅菌インジケーター１００の部分が、比較的薄い（すなわち「ｚ方向寸法」が最小化される）ことにより、芽胞から壁部１６８（又は検出窓１６７）までの光路長が最小化され、かつ／又は液体１２２（又は栄養培地）中の妨害物質のいずれの影響も最小限に抑えられる。
【０２００】
使用時には、生物学的滅菌インジケーター１００は、滅菌プロセス用の滅菌バッチと共に、定置することができる。滅菌の間、滅菌剤は、リザーバ１０３（すなわち第１チャンバ１０９及び第２チャンバ１１１）、芽胞リザーバ１３６、及び芽胞１１５と、主に滅菌剤通路１６４を介して流体連通することにより、滅菌剤は、芽胞に到達して、滅菌済みの芽胞を作り出すことができる。上述のように、第１流体通路１６０と第２流体通路１６２との協働により、第２チャンバ１１１内への、具体的には生物学的滅菌インジケーター１００の閉鎖末端部１０５内への、滅菌剤の移動を促進することができる。更には、滅菌の間、壊れやすい容器１２０は閉鎖状態にあり、少なくとも部分的に、挿入部材１３０のキャリア１３２によって、無損傷で保持される。壊れやすい容器１２０が、閉鎖状態にあるとき、液体１２２は、滅菌剤から防護され、リザーバ１０３（具体的には、ハウジング１０２の下方部分１１４によって少なくとも部分的に形成される、第２チャンバ１１１（second reservoir 111））、芽胞リザーバ１３６、芽胞１１５、又は滅菌剤通路１３６とは流体連通しない。
【０２０１】
滅菌は、容器１２０が第１の状態にあるとき、第１流体通路１６０を介して、第１チャンバ１０９から第２チャンバ１１１へ滅菌剤を移動させることと、第１チャンバ１０９から第２チャンバ１１１への滅菌剤の移動に応答して、又は滅菌剤の移動を促進するために、第２流体通路１６２を介して、第２チャンバ１１１から外へ排出気体（例えば、閉じ込められた空気）を移動させることとを更に含み得る。
【０２０２】
滅菌に続いて、生物学的滅菌インジケーター１００を使用して、その滅菌プロセスの有効性を判定することができる。ハウジング１０２の第２部分１０６は、従前に第１の位置１４８にロックされている場合には、ロック解除して、第１の位置１４８（図３を参照）から第２の位置１５０（図４を参照）に移動させることにより、生物学的滅菌インジケーター１００の作動を引き起こすことができる。第２部分１０６のそのような移動により、壊れやすい容器１２０を、ハウジング１０２内で、例えば、長手方向ＤＬに沿って、突起部１５８の上方末端部１５９の上方の位置から、突起部１５８の内側の内部の位置まで移動させることができ、このことにより、壊れやすい容器１２０を断裂させることができる。壊れやすい容器１２０を断裂させることにより、壊れやすい容器１２０を、その閉鎖状態から、その開放状態へと変化させ、液体１２２を、リザーバ１０３内に解放して、芽胞リザーバ１３６及び芽胞１１５と流体連通させることができる。液体１２２は、芽胞のための栄養培地（例えば、発芽培地）を含み得るか、又は液体１２２は、乾燥形態（例えば、粉末又は錠剤の形態）の栄養培地に接触して、栄養培地を形成することができるため、滅菌済みの芽胞及び栄養培地を含む、混合物が形成される。次いで、この混合物を、検出若しくは検定プロセスの前に、又はそのプロセスの間、インキュベートすることができ、生物学的滅菌インジケーター１００を、芽胞の増殖の標示に関して検査することができる。
【０２０３】
作動は、容器１２０が第２の状態にあるとき、第１流体通路１６０を介して、第１チャンバ１０９から第２チャンバ１１１へ液体１２２を移動させることと、第１流体通路１６０を介した、第１チャンバ１０９から第２チャンバ１１１への液体１２２の移動に応答して、又は液体１２２の移動を促進するために、第２流体通路１６２を介して、第２チャンバ１１１から外へ排出気体（例えば、閉じ込められた空気）を移動させることとを更に含み得る。
【０２０４】
芽胞１１５の検出可能な変化を検出するために、液体１２２と芽胞１１５とが組み合わされた直後に、生物学的滅菌インジケーター１００を検定して、ベースラインの読み取り値を獲得することができる。その後は、このベースラインの読み取り値からの、あらゆる検出可能な変化を、検出することができる。生物学的滅菌インジケーター１００は、継続的若しくは断続的に、監視及び測定することができる。一部の実施形態では、インキュベーション工程の一部分又は全体は、検出可能な変化を測定する前に実施することができる。一部の実施形態では、インキュベーションは、ある１つの温度で（例えば、３７℃で、５０〜６０℃で、など）実施することができ、検出可能な変化の測定は、異なる温度で（例えば、室温で、２５℃、又は３７℃で）実施することができる。
【０２０５】
生物学的滅菌インジケーター１００の読み出し時間（すなわち滅菌プロセスの有効性を判定するための時間）は、一部の実施形態では、８時間未満とすることができ、一部の実施形態では、１時間未満、一部の実施形態では、３０分未満、一部の実施形態では、１５分未満、一部の実施形態では、５分未満、一部の実施形態では、１分未満とすることができる。
【０２０６】
実施形態
実施形態１は、
ハウジングと、
液体を収容し、かつハウジング内に配置されるように寸法決めされる、容器であって、この容器の少なくとも一部分は、壊れやすく、この容器は、容器が無損傷であり、液体がハウジングの内部と流体連通していない、第１の状態と、容器が断裂して、液体がハウジングの内部と流体連通する、第２の状態とを有する、容器と、
容器が第１の状態にあるとき、容器が中に配置される、ハウジング内の第１チャンバと、
容器が第１の状態にあるとき、容器及び液体が中に配置されない、ハウジング内の第２チャンバであって、この第２チャンバは、容器が第１の状態にあるとき、液体と流体連通せず、容器が第２の状態にあるとき、液体と流体連通する、生物活性の発生源を含む、第２チャンバと、
ハウジング内で、第１チャンバと第２チャンバとの間に配置される基材であって、この基材は、第１チャンバ及び第２チャンバと流体連通して配置され、この基材は、基材が生物活性の発生源と直接接触しないように、更に配置される、基材とを含む、生物学的滅菌インジケーターである。
【０２０７】
実施形態２は、容器が第１の状態にあるとき、又は容器が第２の状態にあるとき、基材が、生物活性の発生源と直接接触しない、実施形態１の生物学的滅菌インジケーターである。
【０２０８】
実施形態３は、容器が第１の状態にあるとき、基材が、容器と直接接触しない、実施形態１又は実施形態２の生物学的滅菌インジケーターである。
【０２０９】
実施形態４は、第２チャンバが、滅菌プロセスの致死性を判定するために検査される容積を含み、基材が、その検査される容積の外側に配置される、実施形態１〜３のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２１０】
実施形態５は、基材が、第２チャンバ内に配置されない、実施形態１〜４のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２１１】
実施形態６は、基材が、第１チャンバ内に配置される、実施形態１〜５のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２１２】
実施形態７は、基材が、第１チャンバ内に配置され、第２チャンバ内に配置されない、実施形態１〜６のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２１３】
実施形態８は、生物活性の発生源が、第２チャンバ内に配置される発生源キャリア内に収容され、基材が、その発生源キャリアと直接接触しない、実施形態１〜７のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２１４】
実施形態９は、基材が、生物学的滅菌インジケーターの長手方向に対して、非ゼロの角度かつ非直角の方向に配置される、実施形態１〜８のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２１５】
実施形態１０は、容器が第１の状態にあるとき、基材が、容器と生物活性の発生源との間に配置される、実施形態１〜９のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２１６】
実施形態１１は、基材が、第１チャンバ及び第２チャンバを、少なくとも部分的に画定する、実施形態１〜１０のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２１７】
実施形態１２は、容器が、第１の状態及び第２の状態にあるとき、第１チャンバ及び第２チャンバが流体連通する、実施形態１〜１１のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２１８】
実施形態１３は、基材が、第１チャンバと第２チャンバとの間の、流体の流れを制御するように配置される、実施形態１〜１２のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２１９】
実施形態１４は、基材が、容器が第２の状態にあるとき、第２チャンバから第１チャンバへの、検出可能生成物の拡散を制限するように配置される、実施形態１〜１３のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２２０】
実施形態１５は、基材が、容器が第１の状態にあるとき、生物活性の発生源への、滅菌剤の送達速度を制御するように配置される、実施形態１〜１４のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２２１】
実施形態１６は、基材が、その中に形成される開口を含み、第１チャンバと第２チャンバとの間の流体の流れを制御するように、その開口を寸法決めすることができる、実施形態１〜１５のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２２２】
実施形態１７は、基材が、容器が第２の状態にあり、基材が指示試薬を含む液体と流体連通するとき、その指示試薬を濃縮するように適合される、実施形態１〜１６のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２２３】
実施形態１８は、基材が、容器が第２の状態にあり、基材が第１の指示試薬及び第２の指示試薬を含む液体と流体連通するとき、第１の指示試薬を選択的に濃縮するように適合される、実施形態１〜１７のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２２４】
実施形態１９は、基材が、ナイロンを含む、実施形態１〜１８のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２２５】
実施形態２０は、基材が、荷電ナイロンを含む、実施形態１〜１９のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２２６】
実施形態２１は、第１チャンバ及び第２チャンバが、それぞれ、ある容積を有し、第２チャンバの容積が、第１チャンバの容積の２０％以下である、実施形態１〜２０のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２２７】
実施形態２２は、第１チャンバ及び第２チャンバが、それぞれ、ある容積を有し、第２チャンバの容積が、第１チャンバの容積の１０％以下である、実施形態１〜２１のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２２８】
実施形態２３は、第１チャンバ及び第２チャンバが、それぞれ、ある平均断面積を有し、第２チャンバの平均断面積が、第１チャンバの平均断面積の５０％以下である、実施形態１〜２２のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２２９】
実施形態２４は、第１チャンバ及び第２チャンバが、それぞれ、ある平均断面積を有し、第２チャンバの平均断面積が、第１チャンバの平均断面積の４０％以下である、実施形態１〜２３のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２３０】
実施形態２５は、第２チャンバが、ハウジングの閉鎖末端部によって、少なくとも部分的に画定される、実施形態１〜２４のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２３１】
実施形態２６は、容器が第１の状態にあるとき、第１チャンバが、ハウジング内の少なくとも１つの開口を介して、環境と流体連通し、その少なくとも１つの開口が、第２チャンバからは第１チャンバの反対側に位置する、第１チャンバの末端部に隣接して配置される、実施形態１〜２５のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２３２】
実施形態２７は、第１チャンバが、ハウジングの第１末端部に向けて配置される第１末端部、及びハウジングの第２末端部に向けて配置される第２末端部を含み、第２チャンバが、第１チャンバの第２末端部と流体連通する第１末端部、及びハウジングの第２末端部によって画定される第２末端部を含む、実施形態１〜２６のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２３３】
実施形態２８は、ハウジングが、開放末端部及び閉鎖末端部を含み、第１チャンバが、開放末端部に隣接して配置され、第２チャンバが、閉鎖末端部に隣接して配置される、実施形態１〜２７のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２３４】
実施形態２９は、ハウジングが、
第１部分と、
第１部分に結合するように適合される、第２部分とを含み、この第２部分が、第１部分に結合される場合、第１部分に対して、第１の位置と第２の位置との間で移動可能である、実施形態１〜２８のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２３５】
実施形態３０は、ハウジングの第２部分が第１の位置から第２の位置に移動することに応答して、容器が、第１の状態から第２の状態に変化する、実施形態２９の生物学的滅菌インジケーターである。
【０２３６】
実施形態３１は、ハウジングの第２部分が第２の位置にあるとき、ハウジングの内部が、環境から封止される、実施形態２９又は実施形態３０の生物学的滅菌インジケーターである。
【０２３７】
実施形態３２は、ハウジングの第２部分が第１の位置から第２の位置に移動することに応答して、液体が、第２チャンバ内に移動する、実施形態２９〜３１のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２３８】
実施形態３３は、ハウジングの第２部分が第１の位置にあるとき、生物活性の発生源が、環境と流体連通する、実施形態２９〜３２のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２３９】
実施形態３４は、ハウジングの第２部分が第２の位置にあるとき、生物活性の発生源が、環境と流体連通しない、実施形態２９〜３３のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２４０】
実施形態３５は、容器が、ガラスアンプルを含む、実施形態１〜３４のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２４１】
実施形態３６は、第１チャンバと第２チャンバとの間に配置される壁部を更に含む、実施形態１〜３５のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２４２】
実施形態３７は、基材が、この壁部に隣接して配置される、実施形態３６の生物学的滅菌インジケーターである。
【０２４３】
実施形態３８は、基材が第１チャンバ内に配置され、第２チャンバ内に配置されないように、基材が、壁部の第１チャンバ側上に配置される、実施形態３６又は実施形態３７の生物学的滅菌インジケーターである。
【０２４４】
実施形態３９は、壁部が、生物学的滅菌インジケーターの長手方向に対して、非ゼロの角度かつ非直角の方向に配置される、実施形態３６〜３８のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２４５】
実施形態４０は、ハウジング内に配置される挿入部材を更に含み、この挿入部材が、容器を無損傷で保持すること、及び容器を断裂させることの、少なくとも一方に関して構成される、実施形態１〜３９のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２４６】
実施形態４１は、基材が、挿入部材と第２チャンバとの間に配置される、実施形態４０の生物学的滅菌インジケーターである。
【０２４７】
実施形態４２は、容器が第１の状態にあるとき、挿入部材が、容器と基材との間に配置される、実施形態４０又は実施形態４１の生物学的滅菌インジケーターである。
【０２４８】
実施形態４３は、挿入部材が、基材に隣接して配置される、実施形態４０〜４２のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２４９】
実施形態４４は、挿入部材が、第１チャンバ内に配置される、実施形態４０〜４３のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２５０】
実施形態４５は、
第１チャンバと第２チャンバとを隔離するように配置される、壁部と、
ハウジング内に配置され、容器を無損傷で保持すること、及び容器を断裂させることの、少なくとも一方に関して構成される、挿入部材とを更に含み、
基材が、この挿入部材と壁部との間に配置される、実施形態１〜４４のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２５１】
実施形態４６は、
第１チャンバと第２チャンバとを流体結合するように配置される、第１流体通路であって、この第１流体通路は、容器が第１の状態にあるとき、滅菌剤が第１チャンバから第２チャンバ内に移動することを可能にし、容器が第２の状態にあるとき、液体が第１チャンバから第２チャンバ内に移動することを可能にするように配置される、第１流体通路と、
第２チャンバと生物学的滅菌インジケーターの別のチャンバとを流体結合するように配置される、第２流体通路であって、この第２流体通路は、滅菌剤又は液体が、第１チャンバから第２チャンバ内に移動する際に、排出される気体が、第１チャンバから第２チャンバに移動することを可能にするように配置される、第２流体通路とを更に含む、実施形態１〜４５のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２５２】
実施形態４７は、ハウジングが長手方向を含み、第１チャンバが第２チャンバの上方に配置され、第１流体通路及び第２流体通路が、実質的に、第１チャンバと第２チャンバとの間で長手方向に延在する、実施形態４６の生物学的滅菌インジケーターである。
【０２５３】
実施形態４８は、基材が、第１流体通路及び第２流体通路の少なくとも一方の、少なくとも一部分を画定する、実施形態４６又は実施形態４７の生物学的滅菌インジケーターである。
【０２５４】
実施形態４９は、第２流体通路の少なくとも一部分が、ハウジングの内側表面によって画定される、実施形態４６〜４８のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２５５】
実施形態５０は、第２流体通路が、第２チャンバと第１チャンバとを流体結合するように配置され、この第２流体通路は、排出される気体が、第２チャンバから第１チャンバに移動することを可能にするように配置される、実施形態４６〜４９のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２５６】
実施形態５１は、第１流体通路が、第２チャンバに第１の位置で入り、第２流体通路が、第１チャンバに第２の位置で入り、生物学的滅菌インジケーターの動作中、第２の位置が、第１の位置よりも上方に配置される、実施形態５０の生物学的滅菌インジケーターである。
【０２５７】
実施形態５２は、第１流体通路が、第２チャンバを、第１チャンバの近位部分と流体結合するように配置され、第２流体通路が、第２チャンバを、第１チャンバの遠位部分と流体結合するように配置される、実施形態５０又は実施形態５１の生物学的滅菌インジケーターである。
【０２５８】
実施形態５３は、容器が第２の状態にあるとき、第２チャンバが、少なくとも部分的に液体で充填され、この液体が、あるレベルを有し、第２流体通路が、その液体のレベルよりも下方の位置と、その液体のレベルよりも上方の位置との間に延在する、実施形態４６〜５２のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２５９】
実施形態５４は、第２流体通路が、第２チャンバから、生物学的滅菌インジケーター内の、第１流体通路が第２チャンバに入る位置よりも上方の位置まで延在する、チャネルによって、少なくとも部分的に画定される、実施形態４６〜５３のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２６０】
実施形態５５は、第２流体通路が、第２チャンバから、生物学的滅菌インジケーター内の、第１流体通路が第２チャンバに入る位置よりも上方の位置まで延在する、実施形態４６〜５４のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２６１】
実施形態５６は、第１流体通路が、第２チャンバに第１の位置で接続し、第２流体通路が、第２チャンバに第２の位置で接続し、生物学的滅菌インジケーターの動作中、第２の位置が、垂直方向で、第１の位置以上に位置する、実施形態４６〜５５のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２６２】
実施形態５７は、第２流体通路が、容器が第２の状態にあるときに液体で最後に充填される、第２チャンバのレベルで、第２チャンバに接続する、実施形態４６〜５６のいずれかの生物学的滅菌インジケーターである。
【０２６３】
以下の実施例は、本開示の説明を意図するものであって、限定することを意図するものではない。
【実施例】
【０２６４】
準備実施例−実施例での使用のために準備される生物学的滅菌インジケーター（ＢＩ）
本開示を例示するために、上記の説明に従って、かつ図１〜４に示すように、幾つかの生物学的滅菌インジケーター（ＢＩ）を準備した。実施例で使用されるＢＩの具体的な詳細を、以下に記載する。
【０２６５】
図１〜４に示すように、生物学的滅菌インジケーター１００は、ハウジング１０２を含み、このハウジング１０２は、一体に結合されて、内蔵型の生物学的滅菌インジケーターを提供する、第１部分１０４（例えば、中空管）及び第２部分１０６（例えば、キャップ）を含むものとした。このキャップは、長さ約２１ｍｍ×直径約１４ｍｍの全体寸法を有する、成形ポリプロピレンとした。第１部分１０４（中空管）は、長さ約５２ｍｍ及び頂部の直径約１２ｍｍの全体寸法を有し、図１〜３に示す形状を有する、成形ポリプロピレンとした。第１部分１０４（例えば、中空管）の全容積は、約３ｍＬとした。
【０２６６】
図１〜３に示すように、ハウジング１０２の第２部分（キャップ）１０６は、ハウジング１０２の内部（例えば、リザーバ１０３）と環境との間の流体連通を提供する、６つの開口又は開口部１０７を含むものとした。障壁としての役割を果たす濾紙材料（図１〜３には示さず）を、滅菌剤通路内に、開口１０７の上から配置し、片面感圧接着性紙ラベルで、定位置に保持した。この濾紙材料は、現在入手可能な、蒸気滅菌器用の３Ｍ  ＡＴＴＥＳＴ  １２９１  Ｒａｐｉｄ  Ｒｅａｄｏｕｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）より入手可能）のキャップ内に存在するものと、同じ材料とした。
【０２６７】
生物学的滅菌インジケーター１００は、液体増殖培地１２２を収容する、壊れやすい容器１２０を更に含むものとした。壊れやすい容器１２０は、ホウケイ酸ガラスで作製され、芽胞の増殖培地を収容するものとした。この培地は、ｐＨ指示薬ブロモクレゾールパープル、及び蛍光酵素基質４−メチルウンベリフェリル−α−Ｄ−グルコシドを含有する、修正されたトリプティックソイブロス（ＴＳＢ）からなるものとした。このアンプルは、長さ約４０ｍｍ×直径約４ｍｍであり、約５００μＬの培地液を保持するものとした。液体増殖培地１２２は、３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙより、蒸気滅菌器用の３Ｍ  ＡＴＴＥＳＴ  １２９１  Ｒａｐｉｄ  Ｒｅａｄｏｕｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒとして現在入手可能な製品内で使用されるものと、同じ培地とした。
【０２６８】
図１〜４に示すように、挿入部材１３０によって、液体培地容器１２０を、生物学的滅菌インジケーター１００内部で定位置に保持した。挿入部材（破砕装置とも呼ばれる）１３０は、容器１２０を定位置に保持することと、液体培地容器１２０を破砕するために第２部分１０６が押し下げられる、ＢＩの作動工程の間に実施される、容器１２０の制御された破砕を促進するように機能することとの双方に役立つものとした。挿入部材１３０は、長さ約２２ｍｍ×幅約９ｍｍの寸法を有する、成形ポリカーボネート構造とした。
【０２６９】
第２部分１０６は、作動の後に、第１部分１０４の第１末端部１０１と、第１部分１０４の開放上方末端部１５７で接触して、生物学的滅菌インジケーター１００を閉鎖又は封止する（例えば、気密封止する）ように配置される、封止突起部１５６を有するものとした。
【０２７０】
生物学的滅菌インジケーター１００は、第１部分１０４と流体連通して配置される、Ｇ．ステアロサーモフィルスの芽胞（ＡＴＣＣ  ７９５３）１１５を更に含むものとした。芽胞１１５は、ポリプロピレンの芽胞キャリア１３５（９ｍｍ×４ｍｍ）の、芽胞リザーバ１３６内に付着させた。芽胞１１５は、ポリプロピレンの表面上に直接付着させ、芽胞リザーバ１３６は、約１５μＬの容積を有するものとした。
【０２７１】
ハウジング１０２は、内側部分的壁部若しくは棚部１１８によって部分的に隔離される、下方部分１１４（第１チャンバ１０９を少なくとも部分的に画定する）及び上方部分１１６（第２チャンバ１１１を少なくとも部分的に画定する）を含むものとし、この内側壁部又は棚部１１８内には、第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間の流体連通を提供する、開口部１１７を形成した。第２チャンバ１１１は、芽胞１１５を収容するように適合させた。第１チャンバ１０９は、特に作動の前に、壊れやすい容器１２０を収容するように適合させた。壁部１１８は、図１〜４に示すように、ハウジング１０２の長手方向に対して、非ゼロの角度かつ非直角に、角度付けされるか、又は傾斜するものとした。
【０２７２】
「芽胞増殖チャンバ」又は「検出チャンバ」と称することもできる第２チャンバ１１１は、滅菌プロセスの有効性を判定するために、芽胞の生存度に関して検査される容積を含むものとした。
【０２７３】
液体培地容器１２０は、滅菌の間、及び容器１２０が断裂していないとき、第１チャンバ１０９内に配置して、保持した。芽胞１１５は、滅菌の間、第２チャンバ１１１内に、環境と流体連通させて収容した。滅菌の間に、第２チャンバ１１１内に、滅菌剤が移動した（例えば、第１チャンバ１０９を介して）。その後、液体培地１２２が、作動の間、容器１２０が断裂して、液体１２２がハウジング１０２の内部へと解放されると、第２チャンバ１１１内に移動した（例えば、第１チャンバ１０９から）。
【０２７４】
第１チャンバ１０９は、約２８００マイクロリットルの容積（全ての内部構成要素が存在しない状態で）を有するものとした。壁部１１８の直上の、第１チャンバ１０９の断面積は、約５０ｍｍ２とした。第２チャンバ１１１は、約２１０マイクロリットルの容積を有するものとした。壁部１１８の直下の、第２チャンバ１１１の断面積は、約２０ｍｍ２とした。
【０２７５】
生物学的滅菌インジケーター１００は、基材１１９を更に含むものとした。基材１１９は、サイズを約９ｍｍ×約８ｍｍとして、壁部１１８の上に安置されるように寸法決めした。基材１１９は、生物学的滅菌インジケーター１００の第１チャンバ１０９と第２チャンバ１１１との間に配置した。基材１１９は、貫通して形成される、直径約３．２ｍｍ（０．１２５インチ）の開口１２１を含み、この穴は、基材のほぼ中心に置かれるものとした。基材１１９は、挿入部材１３０と壁部１１８との間に配置した（例えば、間に挟み込んで）。基材１１９は、荷電ナイロンで形成し、具体的には、ＧＥ  Ｗａｔｅｒ  ＆  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｔｒｅｖｏｓｅ，ＰＡ）より、商品名「ＭＡＧＮＡＰＲＯＢＥ」（０．４５マイクロメートルの孔径、３０ｃｍ×３ｍのロール、カタログ番号ＮＰ０ＨＹ０００１０、材料番号１２２６５６６）で入手可能な、リプローブ可能な荷電転写膜とした。
【０２７６】
生物学的滅菌インジケーター１００は、第２チャンバ１１１を第１チャンバ１０９と流体結合するように配置される、図４に示すような通気機構１６２を有するものとした。また、図４に示すように、生物学的滅菌インジケーター１００は、ハウジング１０２の壁部１０８と一体的に形成される、リブ又は突出部１６５を有し、このリブ又は突出部１６５は、芽胞キャリア１３５を、ハウジング１０２内の所望の場所内に維持するように、配置されるものとした。
【０２７７】
ハウジング１０２は、ハウジング１０２内の断面積が、長手方向ＤＬに沿って、概して減少するように、先細のものとした（例えば、図３のテーパー形状部分１４６を参照）。
【０２７８】
実施例１−蛍光の読み取り値と２４時間後の増殖との相関関係
図１〜４に示し、かつ準備実施例で上述した設計の、生物学的インジケーター（ＢＩ）を、〜１×１０７  ＣＦＵのＧ．ステアロサーモフィルスＡＴＣＣ  ７９５３芽胞嚢を使用して構築した。荷電ナイロンの基材材料を、（１）図１〜４に示し、かつ上述した「第１」の場所若しくは位置に、又は（２）「第２」の場所若しくは位置に、すなわちハウジング１０２の第１チャンバ１０９内で、壊れやすい容器１２０の隣ではあるが、挿入部材１３０の上方に、定置した。基材が定置されない、更なるＢＩサンプルを準備した。液体増殖培地１２２は、蒸気滅菌器用の３Ｍ  ＡＴＴＥＳＴ  １２９１  Ｒａｐｉｄ  Ｒｅａｄｏｕｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒ（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）より入手可能）内で使用されるものと同じものとした。次いで、各ＢＩを、Ｈ＆Ｗ  Ｓｔｅａｍ  Ｒｅｓｉｓｔｏｍｅｔｅｒ（Ｈ＆Ｗ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＬＬＣ（Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）より入手可能）内の、２７０°Ｆ／１３２℃のＧｒａｖｉｔｙ  Ｓｔｅａｍで、１分、１分４５秒、２分、２分１５秒、２分３０秒、及び３分の、様々な長さの蒸気滅菌サイクルで処理した。滅菌に続いて、ＢＩを放冷して、２９０  ＡＵＴＯＲＥＡＤＥＲ読み取り装置（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙより入手可能）と類似の、４９０  ＡＵＴＯＲＥＡＤＥＲ読み取り装置（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）より入手可能）内で作動させた；４９０  ＡＵＴＯＲＥＡＤＥＲの具体的な機構は、同時係属の米国特許出願第６１／４０９０４２号（代理人整理番号６６１７５ＵＳ００２）及び同第６１／４０８９９７号（代理人整理番号６６１７６ＵＳ００２）で説明される。３６５／４６０ｎｍの励起／発光での、蛍光の読み取り値を、１分毎に６０分間取得した。蛍光が検出された場合には、「あり」として報告し、蛍光が検出されない場合には、「ＮＦ」（すなわち蛍光なし）として報告した。また、読み取り装置内での２４時間のインキュベーションの後に、ＢＩを取り出して、紫色から黄色への培地の色変化に基づいて、増殖に関して評価した。色変化が観察された場合には、「あり」として報告し、色変化が観察されない場合には、「なし」として報告した。
【０２７９】
以下の表１及び表２に示す結果は、全ての長さの滅菌サイクルに晒された全てのＢＩに関して、基材が第１の場所内に配置される場合の、蛍光の結果と２４時間の増殖の確認結果との間の良好な相関関係を示す。
【０２８０】
以下の表３及び表４に示す結果は、基材が培地の通路内ではなく、第２の場所内に存在した場合のＢＩに関して、特に２分３０秒及び３分のサイクル時間で、矛盾する結果が観察されたことを示す。
【０２８１】
以下の表５及び表６に示す結果は、基材が存在しなかった場合のＢＩに関して、特に２分１５秒、２分３０秒、及び３分のサイクル時間で、矛盾する結果が観察されたことを示す。
【０２８２】
【表１】
0005934231.tif 000002
【０２８３】
【表２】
0005934231.tif 000003
【０２８４】
【表３】
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【０２８５】
【表４】
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【０２８６】
【表５】
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【０２８７】
【表６】
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【０２８８】
実施例２−培地の流れのフリック試験
以下の４つのセットの生物学的インジケーター（ＢＩ）サンプルを準備した。
【０２８９】
実施例２Ａ）上記の準備実施例で説明されるように、ＢＩを準備した。
【０２９０】
実施例２Ｂ）上述のようにＢＩを準備したが、ただし、基材１１９内には、開口１２１が存在しないものとした。
【０２９１】
実施例２Ｃ）上述のようにＢＩを準備したが、ただし、基材としてワットマン紙＊を使用し（ナイロンの代わりに）、基材内には、３．２ｍｍの開口を含むものとした。＊（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｃ．ＵＳＡ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）製の、Ｗｈａｔｍａｎグレード１  Ｃｈｒセルロースクロマトグラフィー用ペーパー）
実施例２Ｄ）上述のようにＢＩを準備したが、ただし、基材としてワットマン紙＊を使用し、基材内には、開口が存在しないものとした。
【０２９２】
これらのフリック試験ＢＩを、管保持器内に定置して、キャップを押し下げることによりＢＩを作動させ、液体増殖培地１２２を収容する、壊れやすい容器１２０を粉砕した。液体増殖培地１２２の移動を、目視検査によって評価した。培地が、検出チャンバ１１１内に完全に移動しなかった場合には（気泡の存在によって証明される）、単一の下向きの振盪によって、ＢＩを「フリック」した。各フリックの後、再度、検出チャンバを目視検査した。全ての培地を検出チャンバに移動させ、全ての気泡を除去するために必要とされた、フリックの数を記録した。フリックの数が多いほど、検出チャンバ１１１への、液体増殖培地の流れが不十分であることを示す。結果を表７に示す。
【０２９３】
【表７】
0005934231.tif 000008
【０２９４】
実施例３−液体培地からのブロモクレゾ−ルパープル（ＢＣＰ）の基材吸着
水１リットル当り、１７グラムの細菌用ペプトン、０．１７グラムのＬ−アラニン、及び０．０３グラムのブロモクレゾ−ルパープルｐＨ指示薬染料からなる、芽胞増殖培地溶液を調製した。この栄養培地溶液のｐＨを、０．１Ｎの水酸化ナトリウムで、７．６に調節した。
【０２９５】
６０個のホウケイ酸ガラス管（１２ｍＬ、ＶＷＲ、カタログ＃５３２８３−８０２）のそれぞれに、１．０ｍＬの調製済み増殖培地を添加して、ライナーなしキャップクロージャー（ＶＷＲ、カタログ＃  ６６０１０−６８０）で蓋をした。
【０２９６】
２つの異なる基材材料を評価した：ＧＥ荷電ナイロン（ＧＥ  Ｏｓｍｏｎｉｃｓ  Ｌａｂｓｔｏｒｅ（Ｍｉｎｎｅｔｏｎｋａ，ＭＮ）より入手可能な、ＭＡＧＮＡＰＲＯＢＥ、０．４５マイクロメートル荷電ナイロン膜、品番ＮＰ０ＨＹ０００１０）、及び紙（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｃ．ＵＳＡ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）より入手可能な、Ｗｈａｔｍａｎグレード１  Ｃｈｒセルロースクロマトグラフィー用ペーパー）。
【０２９７】
２つの基材材料のそれぞれの、２０個のストリップを、４ｍｍ×１０ｍｍのサイズに切り出した。全てのストリップを、Ｐｒｏｐｐｅｒ  ＣＨＥＸ−ＡＬＬ  ＩＩ  Ｉｎｓｔａｎｔ  Ｓｅａｌｉｎｇ  Ｐｏｕｃｈ（Ｐｒｏｐｐｅｒ，Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｉｎｃ．（Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ  Ｃｉｔｙ，ＮＹ））内に定置して、ＡＭＳＣＯ滅菌器（Ｓｔｅｒｉｓ（Ｍｅｎｔｏｒ，ＯＨ））内で、１２１℃の蒸気液体サイクルで、３０分間、それらを滅菌することによって、予備滅菌した。
【０２９８】
これらの滅菌済みの基材ストリップを、パウチから無菌状態で取り出して、ガラス管に移動させ、２０個の管のそれぞれにつき５つのナイロン基材のストリップ、及び異なる２０個の管のそれぞれにつき５つの紙基材のストリップとした。
【０２９９】
３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙより入手可能な、Ｇ．ステアロサーモフィルスの芽胞（ＡＴＣＣ  ７９５３）を収容する、分解した蒸気滅菌器用３Ｍ  ＡＴＴＥＳＴ  １２９２  Ｒａｐｉｄ  Ｒｅａｄｏｕｔ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｉｃａｔｏｒから、芽胞ストリップを取得した。この芽胞ストリップを、それぞれ約６．４ｍｍ×６．４ｍｍの、４等分に切り出し、表８に従って、また以下で更に説明するように、ガラス管に添加した。１２９２  ＡＴＴＥＳＴの芽胞ストリップの１片（６．４ｍｍ×６．４ｍｍ）を、それぞれが５片のナイロン基材及び増殖培地を収容する、１０個のガラス管のそれぞれに添加した。芽胞ストリップの１片を、各管が５片のワットマン紙及び増殖培地を収容する、１０個のガラス管のそれぞれに添加した。芽胞ストリップの１片を、各管が増殖培地のみを収容し、基材を収容しない、１０個のガラス管のそれぞれに添加した。残りの３０個の管である、５片のナイロン基材を収容する１０個の管、５片の紙基材を収容する１０個の管、及び基材を収容しない１０個の管には、芽胞ストリップ片を添加しなかった。
【０３００】
【表８】
0005934231.tif 000009
【０３０１】
上記のサンプルのそれぞれのうちの、２つの管を、１分の時点で、以下の観察及び分析に関して選択した。管の中にある間のナイロン又は紙の基材材料の色と、周囲を取り囲む液体増殖培地の色とを、基材が培地よりも暗いか又は明るいかに関して比較した。増殖培地を収容するガラス管から取り出したときの、基材材料の色を、観察及び記録した。
【０３０２】
Ｘ−Ｒｉｔｅ  ５３０Ｐ濃度計（Ｘ−Ｒｉｔｅ（Ｇｒａｎｄ  Ｒａｐｉｄｓ  ＭＩ））を使用して、濃度測定読み取り値を取得する前に、ナイロン基材及び紙基材のストリップを管から取り出して、ＫＩＭＷＩＰＥ（Ｋｉｍｂｅｒｌｙ−Ｃｌａｒｋ）上に定置した。Ｘ−Ｒｉｔｅ  ５３０Ｐ濃度計に対する光学濃度設定は、「Ｖ」フィルターの結果を提供する「色」に設定した。基材のΔＥの結果に関して、選択されたＰａｎｔｏｎｅ  ２６６５Ｕ及びＰａｎｔｏｎｅ  １０２Ｕと「比較」するように、Ｘ−Ｒｉｔｅ濃度計を設定した。ＣＩＥ７６色差式を使用して、各ＰａｎｔｏｎｅでのΔＥを計算した。ΔＥの値は、Ｌ＊Ａ＊Ｂ色空間内での、測定された点から基準値のＰａｎｔｏｎｅの色までの距離である。より低いΔＥは、測定された色が、より基準値に近いことを示す。約２．５のΔＥの値は、人間の眼が色を識別するための、ほぼ最小の閾値である。使用する２つの基準値は、Ｐａｎｔｏｎｅ  ２６６５Ｕ（薄い紫色）、及びＰａｎｔｏｎｅ  １０２Ｕ（明るい黄色）とした。これらの２つの値は、「色相環」上で正反対に位置するものではないため、２６６５ＵでのΔＥの増大が、必ずしも１０２ＵでのΔＥの正確な減少を意味するものではないことに留意されたい。換言すれば、２６６５ＵでのΔＥは、「紫色」に対する変化を示すのみであり、その一方、１０２ＵでのΔＥは、「黄色」に対する変化を示すのみである。
【０３０３】
各管内の培地の色もまた、観察及び記録した。３重に、各管から２００μＬの量の培地を取り出して、９６ウェルプレート（透明な底部を有する、黒色の組織培養処理９６ウェルプレート、ＣＯＳＴＡＲ  ＣＬＳ−３６０３−４８ＥＡ）内に定置し、Ｇｅｎ  ５ソフトウェアでＳＹＮＥＲＧＹ  ４分光光度計を使用して、５９０ｎｍ及び４３０ｎｍでの光学濃度を測定した。光学濃度（ＯＤ）の測定値は、モノクロメーター（ＢｉｏＴｅｋ（Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ））を使用して取得した。
【０３０４】
残りの管を、５６℃でインキュベートした。３０分、１時間、４時間、及び２４時間のインキュベーションの、それぞれの時間で、各サンプルのうちの２つの管をインキュベーターから取り出して、目視観察し、かつ上述のように計器測定した。
【０３０５】
【表９】
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【０３０６】
全てのバイアル瓶内の培地は、４時間の読み取り後までは、紫色に維持された。芽胞を有さないサンプルは、２４時間後も紫色に維持された。芽胞を有する全てのサンプルは、ブロモクレゾールパープル（ＢＣＰ）ｐＨ指示薬染料が、紫色から黄色に変化することによって示される、培地のｐＨの減少をもたらす細胞の増殖により、２４時間までには、視覚的に黄色に変化した。
【０３０７】
それぞれの時間間隔で、培地から基材を取り出す前に、基材の色を、培地の色と比較した。基材の色と培地の色との、相対的差異を報告した。基材としてナイロン基材を使用した、全ての場合で、基材は、周囲の培地よりも暗い色合いを呈した。基材として紙を使用した、全ての場合で、基材は、周囲の培地よりも明るい色合いを呈した。これらの結果は、指示試薬を受容及び濃縮する点で、ナイロン基材が、紙基材よりも優れていることを示す。
【０３０８】
【表１０】
0005934231.tif 000011
【０３０９】
殆どの場合、「暗い」とは、基材が培地よりも視覚的に暗い紫色であることを意味したが、２４時間の、芽胞を有するナイロンは、例外として、より暗い黄色であった。殆どの場合、「明るい」とは、基材が培地よりも視覚的に明るい紫色であることを意味したが、２４時間の、芽胞を有する紙は、例外として、より明るい黄色であった。
【０３１０】
芽胞を有するサンプルに関しては、２４時間での、５９０ｎｍでの光学濃度（ＯＤ）測定値は、黄色の強度の差異を示すものではない。それゆえ、２４時間での、４３０ｎｍで取得されたＯＤ値のみを評価した。
【０３１１】
【表１１】
0005934231.tif 000012
【０３１２】
紙基材の存在下での、芽胞を有する培地サンプル、及び芽胞を有し、基材を有さない培地サンプル（対照）の、２４時間の４３０ｎｍでの読み取り値は、双方とも、表１１に示すように、それぞれ、０．８２７及び０．８３５の、同様のＯＤの値を有する。しかしながら、ナイロンの存在下での、芽胞を有する培地サンプルは、対照又は紙基材を有するサンプルよりも０．５ＯＤ単位小さい、わずか０．２７１のＯＤを有するものであった。このことは、ナイロンの存在下での培地の黄色の強度が、指示試薬を受容及び濃縮するナイロン基材により、低減されたことを示す。
【０３１３】
【表１２】
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【０３１４】
１分での、基材を有さない対照（芽胞あり及び芽胞なし）の吸光度を、培地に関する初期ベースラインＯＤ測定値と見なした。表１２は、１分の時点でさえ、ナイロンの存在下での、芽胞を有するサンプル培地の、５９０ｎｍでのＯＤ（１．１２４）が、芽胞を有する、紙の存在下でのサンプル培地のＯＤ（１．４０４）、又は芽胞を有する対照（１．４０２）よりも低いものであったことを示す。この差異は、培地の紫色の強度が、ＢＣＰ指示試薬を急速に受容及び濃縮するナイロン基材により、既に低減されたことを示す。２４時間での、ナイロンの存在下での、芽胞を有さないサンプル培地の、５９０ｎｍでのＯＤは、紙の存在下での培地のＯＤ（１．７０８）、又は芽胞を有さない対照サンプルのＯＤ、１．８１２よりも遙かに低い、１．１２２であった。
【０３１５】
【表１３】
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【０３１６】
【表１４】
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【０３１７】
【表１５】
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【０３１８】
【表１６】
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【０３１９】
表１３〜１６は、様々な長さの時間にわたって、培地（芽胞あり及び芽胞なし）に晒した後の、基材の濃度測定読み取り値を示す。各基材に関する、時間０の読み取り値は、基材サンプルを培地中に定置する前の、初期濃度測定読み取り値である。紫色である基材を評価する場合、Ｖフィルター及びΔＥ（Ｐａｎｔｏｎｅ  ２６６５Ｕ）が、最大の対比を示すものであった。ナイロン基材に関する、Ｖフィルターでの平均濃度測定読み取り値は、表１４に示すように、実験全体を通して上昇し、高いまま維持された（唯一の例外は、「芽胞あり」のサンプルに関して、基材が２４時間の時点で黄色であったときである）。対照的に、紙基材に関する濃度測定読み取り値は、それらの時点の全体にわたって、ほぼ一定のまま維持された。同様に、表１５に示す、ナイロン基材のΔＥ（Ｐａｎｔｏｎｅ  ２６６５Ｕ）の値は、実験全体を通して、概して減少した（唯一の例外は、「芽胞あり」のサンプルに関して、基材が２４時間の時点で黄色であったときである）。このことは、ナイロン基材が、ＢＣＰ指示試薬を受容及び濃縮していることを示すものであった。一方で、対照的に、紙基材に関するΔＥ（Ｐａｎｔｏｎｅ  ２６６５Ｕ）の値は、ほぼ一定のまま維持された。
【０３２０】
表１６は、２４時間の時点で、ナイロン基材に関するΔＥ（Ｐａｎｔｏｎｅ  １０２Ｕ）の値が、紙基材に関するＥ（Ｐａｎｔｏｎｅ  １０２Ｕ）の値よりも大幅に低いものであったことを示し、ナイロン基材が、紙基材よりもｐａｎｔｏｎｅ  １０２Ｕの色に近いもの（より明るい黄色）であったことを示す。
【０３２１】
実施例４−２回の２４時間のインキュベーション後の、液体培地からの、ナイロン基材のＢＣＰの吸着
実施例３で使用したものと同じ培地及び構成要素を、実施例４で使用した。４つのガラス管のそれぞれに、１．０ｍＬの調製済み増殖培地を添加した。１２９２  ＡＴＴＥＳＴの芽胞ストリップの１片を、約６．４ｍｍ×６．４ｍｍに切り出して、各ガラス管に添加した。これらの管を、インキュベーター内に、５６℃で２４時間定置して、Ｇ．ステアロサーモフィルス細胞の増殖を助長させた。２４時間のインキュベーションの後、ナイロン基材の５つ（５）のストリップ（それぞれ４ｍｍ×１０ｍｍに切り出す）を、２つの管に添加した。残りの他の２つの対照の管には、ナイロン基材材料は添加しないものとした。これらの管を、インキュベーター内に、５６℃で更に２４時間定置した。管に対する２回目の２４時間のインキュベーション期間の後（ナイロン基材の添加の２４時間後）、以下の分析を実行した：（１）各管から、２００μＬの培地の３つのアリコートを採取し、９６ウェルプレート内に定置して、それらの培地の４３０ｎｍでの光学濃度を、ＳＹＮＥＲＧＹ  ４分光光度計を再び使用して測定し；（２）ナイロン基材片を管から取り出し、ＫＩＭＷＩＰＥ上に定置して吸い取り乾燥させ、Ｘ−Ｒｉｔｅ  ５３０Ｐ濃度計で、基材ストリップの濃度測定読み取り値を取得した。
【０３２２】
【表１７】
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【０３２３】
表１７は、ナイロン基材を管に添加した２４時間後の培地の、基材を添加しなかった対照と比較した、４３０ｎｍでのＯＤの減少を示す。２つのサンプルの間のＯＤ測定値の差異は、サンプル培地中に存在する黄色の量の差異を示す。このことは、ナイロンの存在下での、培地の黄色の強度が、指示試薬を受容及び濃縮するナイロン基材により、低減されたことを示す。
【０３２４】
【表１８】
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【０３２５】
表１８は、既に２４時間インキュベートされていた、芽胞を有する培地の管に、添加された２４時間後の、ナイロン基材のΔＥ（１０２Ｕ）の値を示す。この値を、培地中に定置しなかったナイロン基材と比較した。２つのサンプルの間のΔＥ測定値の差異は、芽胞を有する（黄色の）培地に晒された基材の色が、培地に晒されなかった基材よりもｐａｎｔｏｎｅ  １０２Ｕ（明るい黄色）に近いことを示す。換言すれば、ナイロン基材は、２回の２４時間のインキュベーション及び増殖の期間後の、指示試薬の受容及び濃縮が、依然として可能であった。
【０３２６】
実施例５−様々な基材材料による、液体培地からのＢＣＰの吸着
水１リットル当り、１７グラムの細菌用ペプトンＣ、０．１７グラムのＬ−アラニン、及び０．０３グラムのブロモクレゾ−ルパープル（ＢＣＰ）ｐＨ指示薬染料からなる、芽胞増殖培地溶液を調製した。この栄養培地溶液のｐＨを、０．１Ｎの水酸化ナトリウムで、７．６に調節した。
【０３２７】
ホウケイ酸ガラス管（１２ｍＬ、ＶＷＲ、カタログ＃５３２８３−８０２）のそれぞれに、１．０ｍＬの調製済み増殖培地を添加して、ライナーなしキャップクロージャー（ＶＷＲ、カタログ＃  ６６０１０−６８０）で蓋をした。
【０３２８】
４つの異なる基材材料を評価した：（１）ＧＥ荷電ナイロン（ＧＥ  Ｏｓｍｏｎｉｃｓ  Ｌａｂｓｔｏｒｅ（Ｍｉｎｎｅｔｏｎｋａ，ＭＮ）より入手可能な、ＭＡＧＮＡＰＲＯＢＥ、０．４５マイクロメートル荷電ナイロン膜、品番ＮＰ０ＨＹ０００１０）；（２）第４級アミン基でプラスに荷電した、ＢＩＯ−ＲＡＤ高強度ナイロン膜（ＢＩＯ−ＲＡＤ  ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）より入手可能な、ＺＥＴＡ−ＰＲＯＢＥ  ＧＴ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ、カタログ＃１６２−０１９６）；（３）０．２μＭのニトロセルロース（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）より入手可能、カタログ＃  ＬＣ−２０００）、及び（４）０．２μＭの二フッ化ポリビニリデン（ＰＶＤＦ）膜（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）より入手可能、カタログ＃  ＬＣ−２００２）。基材材料のそれぞれの、幾つかのストリップを、各ガラス管に関する１つ（１）のストリップにとって十分な、４ｍｍ×１０ｍｍのサイズに切り出した。
【０３２９】
全てのストリップを、Ｐｒｏｐｐｅｒ  ＣＨＥＸ−ＡＬＬ  ＩＩ  Ｉｎｓｔａｎｔ  Ｓｅａｌｉｎｇ  Ｐｏｕｃｈ（Ｐｒｏｐｐｅｒ，Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｉｎｃ．（Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ  Ｃｉｔｙ，ＮＹ））内に定置して、ＡＭＳＣＯ滅菌器（Ｓｔｅｒｉｓ（Ｍｅｎｔｏｒ，ＯＨ））内で、蒸気液体サイクル（１２１℃での）で３０分間、それらを滅菌することによって、予備滅菌した。
【０３３０】
次いで、それらのストリップを、各管に無菌状態で移動させた。各基材の２つの管を、基材を収容しない２つの対照の管と共に評価した。
【０３３１】
以下の観察及び分析を、０時間、３０分、１時間、４時間、及び２４時間の時点で実行した：（１）各管内の基材材料の色を、同じ管の周囲の培地の色と比較して、基材が周囲の培地よりも暗いか、又は明るいかを判定し、（２）基材材料を管から取り出し、ＫＩＭＷＩＰＥ上に定置して吸い取り乾燥させ、次いで上述のように、Ｖフィルターで濃度測定読み取り値を取得し、（３）各管から２００μＬの培地を取り出して、９６ウェルプレート（透明な底部を有する、黒色の組織培養処理９６ウェルプレート、ＣＯＳＴＡＲ  ＣＬＳ−３６０３−４８ＥＡ）内へと、３重に移動させ、Ｇｅｎ  ５ソフトウェアでＳＹＮＥＲＧＹ  ４分光光度計を使用して、５９０ｎｍでの培地の光学濃度を測定した。光学濃度（ＯＤ）の測定値は、モノクロメーター（ＢｉｏＴｅｋ（Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，ＶＴ））を使用して取得した。
【０３３２】
残りの管を、５６℃でインキュベートした。３０分、１時間、４時間、及び２４時間のインキュベーションの、それぞれの時間で、各サンプルのうちの２つの管を、インキュベーターから取り出して、目視観察し、かつ上述のように計器測定した。
【０３３３】
【表１９】
0005934231.tif 000020
【０３３４】
それぞれの読み取りで、基材を培地から取り出す前に、培地の色を、基材の色と視覚的に比較した。基材の色と培地の色との差異を観察して、上記の表内に報告した。培地との接触の３０分後に、ナイロン基材材料は、双方とも培地よりも視覚的に暗いものとなり、実験全体を通して、より暗いまま維持された。
【０３３５】
【表２０】
0005934231.tif 000021
【０３３６】
上記の表は、様々な長さの時間にわたって培地に晒された後の、基材材料の濃度測定読み取り値を示す。各基材に関する、時間０の読み取り値は、培地中に定置されている基材の、３０秒以内の初期濃度測定読み取り値である。全ての場合で、ナイロン基材の濃度測定読み取り値は、３０分以内で上昇し、実験全体を通して高いまま維持された。
【０３３７】
【表２１】
0005934231.tif 000022
【０３３８】
表２１は、各基材材料を収容する管から、特定の時間で取り出された培地の、平均光学濃度（ＯＤ）読み取り値を示す。各時点で、いずれのナイロン基材の存在下にあった培地に関するＯＤも、ニトロセルロース又はＰＶＤＦのいずれかを含む培地に関するＯＤ読み取り値よりも、低いものであったことに注目するべきである。更には、ニトロセルロース又はＰＶＤＦは、ＯＤ読み取り値の変化を殆ど示すことなく、対照のＯＤの値に極めて類似している。
【０３３９】
実施例６−ナイロン基材による、液体培地からのメチルレッドの吸着
水１リットル当り、１７グラムの細菌用ペプトン、０．１７グラムのＬ−アラニン、及び０．０３グラムのメチルレッドｐＨ指示薬染料からなる、芽胞増殖培地溶液を調製した。この栄養培地溶液のｐＨを、０．１Ｎの塩酸で、４．２に調節した。
【０３４０】
ホウケイ酸ガラス管（１２ｍＬ、ＶＷＲ、カタログ＃５３２８３−８０２）のそれぞれに、１．０ｍＬの調製済み増殖培地を添加して、ライナーなしキャップクロージャー（ＶＷＲ、カタログ＃  ６６０１０−６８０）で蓋をした。
【０３４１】
２つの異なる基材材料を評価した：ＧＥ荷電ナイロン（ＧＥ  Ｏｓｍｏｎｉｃｓ  Ｌａｂｓｔｏｒｅ（Ｍｉｎｎｅｔｏｎｋａ，ＭＮ）より入手可能な、ＭＡＧＮＡＰＲＯＢＥ、０．４５マイクロメートル荷電ナイロン膜、品番ＮＰ０ＨＹ０００１０）；第４級アミン基でプラスに荷電した、ＢＩＯ−ＲＡＤ高強度ナイロン膜（ＢＩＯ−ＲＡＤ  ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）より入手可能な、ＺＥＴＡ−ＰＲＯＢＥ  ＧＴ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ、カタログ＃１６２−０１９６）。基材材料のそれぞれの、幾つかのストリップを、各ガラス管に関する１つ（１）のストリップにとって十分な、４ｍｍ×１０ｍｍのサイズに切り出した。
【０３４２】
全てのストリップを、Ｐｒｏｐｐｅｒ  ＣＨＥＸ−ＡＬＬ  ＩＩ  Ｉｎｓｔａｎｔ  Ｓｅａｌｉｎｇ  Ｐｏｕｃｈ（Ｐｒｏｐｐｅｒ，Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ  Ｉｎｃ．（Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ  Ｃｉｔｙ，ＮＹ））内に定置して、ＡＭＳＣＯ滅菌器（Ｓｔｅｒｉｓ（Ｍｅｎｔｏｒ，ＯＨ））内で、蒸気液体サイクル（１２１℃での）で３０分間、それらを滅菌することによって、予備滅菌した。
【０３４３】
次いで、それらのストリップを、各管に無菌状態で移動させた。
【０３４４】
以下の観察及び分析を、各基材の２つの管に関して、０時間、３０分、１時間、４時間、及び２４時間の時点で実行した：（１）基材材料を管から取り出し、ＫＩＭＷＩＰＥ上に定置して吸い取り乾燥させ、次いで上述のように、Ｖフィルターで濃度測定読み取り値を取得し、（２）各管内の基材材料の色を、同じ管の周囲の培地の色と比較して、基材が周囲の培地よりも暗いか、又は明るいかを判定した。
【０３４５】
残りの管を、５６℃でインキュベートした。３０分、１時間、４時間、及び２４時間のインキュベーションの、それぞれの時間で、各サンプルのうちの２つの管を、インキュベーターから取り出して、目視観察し、かつ上述のように計器測定した。
【０３４６】
【表２２】
0005934231.tif 000023
【０３４７】
表２２は、様々な長さの時間にわたって培地に晒された後の、ナイロン基材材料の濃度測定読み取り値を示す。各基材に関する、時間０の読み取り値は、培地中に定置されている基材の、３０秒以内の初期濃度測定読み取り値である。全ての場合で、ナイロン基材の濃度測定読み取り値は、３０分以内で上昇し、実験全体を通して高いまま維持された。
【０３４８】
【表２３】
0005934231.tif 000024
【０３４９】
それぞれの読み取りで、基材材料を培地から取り出す前に、培地の色を、基材の色と比較した。基材の色と培地の色との差異を、観察及び報告した。培地との接触の３０分後に、ナイロン基材材料は、双方とも培地よりも視覚的に暗いものとなり、実験全体を通して、より暗いまま維持された。
【０３５０】
実施例７−ブロモクレゾ−ルパープル（ＢＣＰ）の吸光度スペクトル
Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より得たブロモクレゾ−ルパープル（ＢＣＰ）（カタログ番号Ｂ−５８８０）を、ｐＨ  ７．３のリン酸緩衝生理食塩水中に、０．００４の濃度で溶解させた。この溶液を、石英キュベット内に定置し、ＴＥＣＡＮ  Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  Ｍ２００  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｔｅｃａｎ  ＵＳ（Ｄｕｒｈａｍ，ＮＣ））に提供される、１ｃｍキュベットアダプターを使用して、ＵＶ−可視吸光度スペクトルを走査した。この走査パラメーターを、表２４に提示する。
【０３５１】
結果を、図８に示されるグラフで示す。吸光度のピークは、約３００ｎｍ、約３８０ｎｍ、及び約６００ｎｍの波長で認めることができる。
【０３５２】
【表２４】
0005934231.tif 000025
【０３５３】
実施例８−；７−ヒドロキシ−４−メチルクマリン（４−メチルウンベリフェロン）の発光スペクトル
Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）より得た、４−メチルウンベリフェロン（４ＭＵ）、カタログ番号ｍ１３８１を、ｐＨ  ７．３のリン酸緩衝生理食塩水中に、０．００４ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解させた。この溶液を、石英キュベット内に定置し、ＴＥＣＡＮ  Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  Ｍ２００  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒに提供される、１ｃｍキュベットアダプターを使用して、発光スペクトルを記録した。この走査パラメーターを、表２５に提示する。
【０３５４】
結果を、図８に示されるグラフで示す。発光のピークは、約４５０ｎｍの波長で認めることができる。
【０３５５】
【表２５】
0005934231.tif 000026
【０３５６】
実施例９−４ＭＵの検出に対するＢＣＰの影響
実施例８で説明されるように調製した、４−メチルウンベリフェロン（４ＭＵ）の原液を、リン酸緩衝生理食塩水中に、表２６に示す濃度まで、段階希釈した。ブロモクレゾ−ルパープル（ＢＣＰ）の原液を、実施例７で説明されるように、リン酸緩衝生理食塩水中に調製した。このブロモクレゾ−ルパープル（０．０３ｍｇ／ｍＬの最終濃度）を、表２６に示す、４ＭＵのそれぞれの溶液と混合した。それぞれの溶液の各３部のアリコート（１００マイクロリットル／ウェル）を、９６ウェルプレート内に装填し、ＴＥＣＡＮ  Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  Ｍ２００  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒを使用して、各ウェル内での蛍光を測定した。励起波長は３５０ｎｍとし、検出は４２０ｎｍとした。相対蛍光単位（ＲＦＵ）として列挙される結果を、表２６に示す。このデータは、試験された４ＭＵのあらゆる濃度で、溶液中のブロモクレゾ−ルパープルの存在が、測定可能な蛍光の減少をもたらしたことを示す。
【０３５７】
【表２６】
0005934231.tif 000027
【０３５８】
この結果は、３部の複製の平均である。全ての値は、相対蛍光単位（ＲＦＵ）で報告される。
【０３５９】
実施例１０−ＢＣＰ及びメチルレッドでの、アクリジンオレンジ検出の阻害
１７グラムの細菌用ペプトン、０．１７グラムのＬ−アラニンからなる、芽胞増殖培地溶液を調製した。２００マイクロリットル（μＬ）の容積の、この増殖培地を、２つの９６ウェルプレート内の各ウェルに添加した。
【０３６０】
４．８ｇ／Ｌから開始して０．７５ｇ／Ｌまで希釈される、ｐＨ指示薬溶液の希釈系列を、メチルレッド（ＭＲ）及びブロモクレゾ−ルパープル（ＢＣＰ）の双方に関して作製した。１：５０から開始して１：８００まで希釈される、アクリジンオレンジの希釈系列を作製した。
【０３６１】
プレート＃１では、２０μＬの適切な希釈のＢＣＰを、プレートの各横列に添加し、２０μＬの適切な希釈のアクリジンオレンジ（ＡＯ）を、プレート＃１の各縦列に添加した。プレート＃２では、２０μＬの適切な希釈のメチルレッドを、プレートの各横列に添加し、２０μＬの適切な希釈のアクリジンオレンジ（ＡＯ）を、プレート＃２の各縦列に添加した。プレート＃１及びプレート＃２の設定に関しては、表２７を参照されたい。
【０３６２】
【表２７】
0005934231.tif 000028
【０３６３】
プレート＃１及びプレート＃２を、ＳＹＮＥＲＧＹ  ４分光光度計内に定置して、吸光度の読み取り値を、５９０ｎｍで取得した。更には、４３５ｎｍ／５３０ｎｍでの蛍光励起／発光の読み取り値もまた、収集した。
【０３６４】
【表２８】
0005934231.tif 000029
【０３６５】
【表２９】
0005934231.tif 000030
【０３６６】
全てのアクリジンオレンジの濃度に関して、溶液中のブロモクレゾ−ルパープルの量が減少するにつれて、アクリジンオレンジによって生成されるシグナルが増大した。換言すれば、ＢＣＰの存在は、アクリジンオレンジのシグナルを覆い隠すものであった。例えば、０．３ｇ／Ｌの初期ＢＣＰ濃度を有する横列に関しては、０のＢＣＰを有する横列と比較して、約２７〜３６％のアクリジンオレンジの蛍光シグナルが失われる。
【０３６７】
【表３０】
0005934231.tif 000031
【０３６８】
【表３１】
0005934231.tif 000032
【０３６９】
ＢＣＰと同様に、メチルレッドもまた、アクリジンオレンジの蛍光シグナルを覆い隠すものであった。メチルレッドの濃度が高いほど、検出されるアクリジンオレンジの蛍光シグナルは低下する。例えば、０．３ｇ／Ｌの初期メチルレッド濃度を有する横列に関しては、メチルレッドを有さない横列と比較して、約３〜２７％のアクリジンオレンジの蛍光シグナルが失われる。
【０３７０】
上述され、図に示される実施形態は、単なる例として提示されるものであり、本開示の概念及び原理に対する限定を意図するものではない。それゆえ、本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく、諸要素、並びにその構成及び配置の、様々な変更が可能であることが、当業者には理解されるであろう。本開示の様々な特徴及び態様を、以下の特許請求の範囲に記載する。
【図１】
0005934231.tif 000033
【図２】
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【図３】
0005934231.tif 000035
【図４】
0005934231.tif 000036
【図５】
0005934231.tif 000037
【図６】
0005934231.tif 000038
【図７】
0005934231.tif 000039
【図８】
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