(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性成分として、配列番号７０２の軽鎖及び配列番号７０４の重鎖からなる抗ＩＬ−６抗体を含む、関節リウマチ（ＲＡ）の治療のための医薬組成物であって；
該医薬組成物が、８０（＋／−２０％）、１６０（＋／−２０％）、または３２０（＋／−２０％）ｍｇの用量の該抗ＩＬ−６抗体を、それを必要とする患者に対して運ぶ、治療レジメンにおいて静脈内にまたは皮下に投与され；
該抗ＩＬ−６抗体が、静脈内または皮下投与後、少なくとも４週間、患者のＲＡ症状の長期改善をもたらし；
さらに該抗ＩＬ−６抗体が多くても４週間毎に１回の頻度で投与される；
医薬組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の医薬組成物であって、
（ｉ）      皮下投与の用量は、少なくとも５０または１００ｍｇである；
（ｉｉ）    前記皮下投与の有効性は、前記抗体での処置を受けていない患者またはプラセボまたは対照皮下製剤を受けていた患者に対する、（１）ＤＡＳ−２８スコアの改善、（２）ＥＵＬＡＲスコアの改善、（３）ＬＤＡＳスコアの改善、（４）ＡＣＲスコアの改善、（５）血清中アルブミンレベルの上昇、（６）ＣＲＰレベルの減少のうちの少なくとも１つによって決定される；
（ｉｉｉ）  前記皮下投与が、前記抗体での処置を受けていない患者またはプラセボまたは対照皮下製剤を受けていた患者に対する、（１）ＤＡＳ−２８スコアの改善、（２）ＥＵＬＡＲスコアの改善、（３）ＬＤＡＳスコアの改善、（４）ＡＣＲスコアの改善、（５）血清中アルブミンレベルの上昇、（６）ＣＲＰレベルの減少のうちの少なくとも１つによって現れる疾病の改善をもたらす；
（ｉｖ）    前記皮下投与が、前記抗体での処置を受けていない患者またはプラセボまたは対照皮下製剤を受けていた患者に対する、（１）ＤＡＳ−２８スコアの改善、（２）ＥＵＬＡＲスコアの改善、（３）ＬＤＡＳスコアの改善、（４）ＡＣＲスコアの改善、（５）血清中アルブミンレベルの上昇、（６）ＣＲＰレベルの減少のうちの少なくとも１つによって現れる疾病の（少なくとも、抗体投与後４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、１４週間、または１６週間後に観察される）長期改善をもたらす；
（ｖ）      前記皮下投与または静脈内投与を受けている患者は、メトトレキサートを以前に投薬されていたか、または現在も投薬されている；
（ｖｉ）    前記組成物が８週又は２ヶ月毎に投与される；
（ｖｉｉ）  前記組成物が少なくとも２回投与され、第１の投与は１日目になされ、第２の投与は８週間目の間（０日目後８週間目）になされる； 
（ｖｉｉｉ）前記抗ＩＬ−６抗体の皮下投与または静脈内投与が、前記抗体での処置を受けていない患者またはプラセボまたは対照皮下製剤を受けていた患者に対する、（１）ＤＡＳ−２８スコアの改善、（２）ＥＵＬＡＲスコアの改善、（３）ＬＤＡＳスコアの改善、（４）ＡＣＲスコアの改善、（５）血清中アルブミンレベルの上昇、（６）ＣＲＰレベルの減少のうちの少なくとも１つをもたらす；又は
（ｉｘ）   前記組成物の皮下投与が、記抗体での処置を受けていない患者またはプラセボまたは対照皮下製剤を受けていた患者に対する、（１）ＤＡＳ−２８スコアの改善、（２）ＥＵＬＡＲスコアの改善、（３）ＬＤＡＳスコアの改善、（４）ＡＣＲスコアの改善、（５）血清中アルブミンレベルの上昇、（６）ＣＲＰレベルの減少のうちの少なくとも１つによって現れる疾病の（少なくとも、抗体投与後４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、１４週間、または１６週間後に観察される）長期改善をもたらす；
医薬組成物。
【請求項３】
さらにメトトレキサートを含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
ヒト関節リウマチ（ＲＡ）患者は、メトトレキサートを以前に投薬されていた、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ヒト関節リウマチ（ＲＡ）患者は、さらにメトトレキサートを以前に投薬されている、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
ヒト関節リウマチ（ＲＡ）患者は、メトトレキサートに対する応答が不十分であった、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
最頻投与で８週間に１回の頻度で投与される請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
最頻投与で１２週間に１回の頻度で投与される請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
最頻投与で１６週間に１回の頻度で投与される請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記抗ＩＬ−６抗体又はそのＩＬ−６抗原結合断片が、静脈内または皮下投与後、少なくとも８週間、患者のＲＡ症状の長期改善をもたらす、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記抗ＩＬ−６抗体又はそのＩＬ−６抗原結合断片が、静脈内または皮下投与後、少なくとも１２週間、患者のＲＡ症状の長期改善をもたらす、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記抗ＩＬ−６抗体又はそのＩＬ−６抗原結合断片が、静脈内または皮下投与後、少なくとも１６週間、患者のＲＡ症状の長期改善をもたらす、請求項１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１０年１１月４日に提出された米国仮特許出願第６１／４１０，１６９号；２０１０年６月２５日に提出された米国仮特許出願第６１／３５８，６１５号；２０１０年６月１７日に提出された米国仮特許出願第６１／３５５，８１９号；および２０１０年４月１９日に提出された米国仮特許出願第６１／３２５，５４７号の優先権を主張する。本出願はさらに、いずれも２００９年１１月２４日に出願された米国特許出願第１２／６２４，９６５号；第１２／６２４，８３０号；第１２／６２４，８１６号および第１２／６２４，７７８号の優先権を主張する。前述の仮特許出願および特許出願の配列情報も含めた各開示内容は、参照により全内容が本明細書に組み入れられる。
【０００２】
２００９年１１月２３日に作成された「６７８５８ｏ７０６００５．ｔｘｔ」というファイル名の３３２，０８１バイトのサイズを有する配列表は、参照により全内容が本明細書に組み入れられる。
【０００３】
（発明の分野）
本発明は、新規な抗ＩＬ−６抗体ならびに抗ＩＬ−６抗体を使用する新規な療法および治療プロトコル、抗ＩＬ−６抗体を含む医薬製剤に関する、上記で引用された特許出願に開示された出願者の先願発明の延長である。好ましい実施形態では、抗ＩＬ−６抗体は、ウサギまたはヒト形態を含むＡｂ１、ならびにその重鎖、軽鎖、フラグメント、変異体、およびＣＤＲ、あるいは、無傷のヒトＩＬ−６ポリペプチドフラグメント上のＡｂ１と同じ（１つまたは複数の）線状または立体構造エピトープに特異的に結合する抗体または抗体フラグメントである。本出願は、特に、本明細書においてＡｂ１と称する典型的なヒト化抗体およびその変異体の製剤および治療的使用に関する。好ましい実施形態では、抗ＩＬ−６抗体は、少なくとも約２５日間の生体内での半減期、生体内でのアルブミン上昇の効果を有し、Ｃ反応性タンパク質を低下させる生体内での効果を有し、通常の凝固プロファイルを回復する生体内での効果を有し、ＩＬ−６との結合親和性（Ｋｄ）が約５０ピコモル未満であり、および／またはＩＬ−６からの解離速度（Ｋｏｆｆ）が１０−４Ｓ−１以下である。
【０００４】
本発明はまた、抗体またはそのフラグメントまたは変異体を投与することによる、ＩＬ−６と関連する疾病または疾患のスクリーニング方法、およびＩＬ−６に関連する疾病または疾患を予防または治療する方法に関する。
【０００５】
一態様では、本発明は、その必要がある患者の生存率または生活の質を向上させる方法に関し、該方法は、患者に抗ＩＬ−６抗体（例えば、Ａｂ１またはそのフラグメントまたは変異体など）を投与し、それによって患者のＣ反応性タンパク質（「ＣＲＰ」）のレベルを低下させ、および／または患者のアルブミンレベルを上昇させることと、任意に、患者のＣＲＰおよび／またはアルブミンレベルを決定するべく患者をモニタリングすることとを含む。
【０００６】
別の態様では、本発明は、その必要がある患者のＣ反応性タンパク質レベルを下げる方法に関し、該方法は、患者にＡｂ１などのＩＬ−６アンタゴニストを投与し、それによって患者のＣＲＰレベルを低下させることと、ＣＲＰレベルを評価するために患者をモニタリングすることとを含む。別の態様では、本発明は、必要がある患者のアルブミンレベルを上げる方法に関し、該方法は、患者にＡｂ１などのＩＬ−６アンタゴニストを投与し、それによって患者の血清中アルブミンレベルを上昇させることと、アルブミンレベルを評価するために患者をモニタリングすることとを含む。
【０００７】
別の態様では、本発明は、必要がある患者（例えば、ＣＲＰレベルの上昇を示す患者）において悪液質、衰弱、疲労、および／または発熱を治療する方法に関し、該方法は、その患者に抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体を投与し、それによって、患者の悪液質、衰弱、疲労、および／または発熱を改善または正常な状態に回復させることと、任意で、悪液質、衰弱、疲労、および／または発熱を評価するべく患者をモニタリングすることとを含む。別の実施形態では、本発明はさらに、粘膜炎、例えば口腔または胃腸の粘膜炎の治療または予防のための本発明の抗ＩＬ−６抗体および抗体フラグメントの使用にも関する。口腔および胃腸の粘膜炎は、多くの型の放射線療法と化学療法の毒性である。それは健康、生活の質、治療に関連する経済面の結果に重大な影響を有する。それはまた、患者の最適な抗腫瘍治療を容認する能力を制限することにより、抗腫瘍治療の成功に間接的に悪影響を及ぼす。粘膜炎の複雑な病因はごく最近評価されており、上皮や粘膜下組織を構成する全種類の細胞や組織の動的な相互作用を反映している。治療誘発性の粘膜傷害につながる分子の事象の特定が、粘膜炎の予防と治療のための機序に基づいた介入の標的を提供した。
【背景技術】
【０００８】
歴史的に、粘膜炎は上皮傷害の結果としてのみ発生すると考えられていた。放射線や化学療法が基底上皮の急速に増殖する細胞を非特異的に標的化して組織の組織自体が更新する能力の消失を引き起こすという仮説が立てられていた。粘膜炎に伴う萎縮、薄層化、および粘膜上皮の潰瘍は、これらの事象の結果であると考えられていた。さらに、このプロセスは外傷や口腔微生物によって促進されると考えられていた。
【０００９】
放射線誘発性口腔粘膜炎は、ＤＮＡ鎖の切断が経口基底上皮細胞で発生する、「外部から内部への」プロセスとして一般的に認識された。化学療法誘発性口腔粘膜炎は、薬剤が粘膜の血液供給からこれらの細胞に浸透したときに、その結果生ずる基底細胞の損傷が主な原因であるとされてきた。唾液に含まれる化学療法剤の粘膜炎の誘導における役割も提案されているが、証明されていない。化学療法誘発性粘膜炎は、付随する骨髄抑制によってさらに悪化し得る。
【００１０】
放射線療法または化学療法誘発性粘膜炎は、基底上皮細胞と下層をなす組織における細胞に対する直接的損傷によって開始される。ＤＮＡ鎖の切断が細胞死や細胞損傷をもたらし得る。非ＤＮＡの損傷は様々なメカニズムを介して開始され、そのいくつかは活性酸素種の生成によって媒介される。放射線療法および化学療法は、内皮、線維芽細胞、および上皮におけるいくつかの傷害生成経路の効果的な活性化因子である。これらの細胞では、核内因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）およびＮｒｆ２などの転写因子の活性化が損傷応答を調節する遺伝子の上方調節につながる。免疫細胞（マクロファージ）は、さらなる組織の損傷を引き起こす、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）およびインターロイキン６などの炎症性サイトカインを生成する。これらのシグナル伝達分子はまた、放射線療法と化学療法の最初の効果を増幅する正のフィードバックループに関与している。例えば、ＴＮＦ−αは、粘膜におけるスフィンゴミエリナーゼとＮＦ−κＢの活性を賦活化し、より多くの細胞死をもたらす。加えて、上皮幹細胞への直接的および間接的な損傷により、再生能力が喪失する。その結果、上皮は薄層化を開始し患者が粘膜炎の初期症状に見舞われ始める。
【００１１】
粘膜炎は、頭頸部癌、多発性骨髄腫、結腸直腸癌など、さまざまな癌の化学療法や放射線治療中に観察されるが、粘膜炎によって引き起こされた問題のために、粘膜炎によってさらなる放射線療法や化学療法が不可能になることや、嚥下と消化中に粘膜炎によって引き起こされる不快感のため栄養摂取が妨げられることもある。
【００１２】
粘膜炎の最も一般的な症状には、口の充血、乾燥、または腫れや、発熱、飲食時の不快感、口やのどの開いた傷口の生成、腹部痙攣、および圧痛、直腸発赤または潰瘍などがある。基本的に粘膜炎は、口や消化管の粘膜の炎症を伴い、化学療法および放射線療法後の癌患者で頻繁に発生する。頬、歯ぐき、軟口蓋、中咽頭、舌の上部と側面、口の底部、ならびに食道と直腸領域が影響を受ける可能性がある。赤みおよび腫れとともに、患者は一般的に強い灼熱痛に見舞われる。
【００１３】
粘膜炎の可能性と重症度を増加させる要因はあるが、誰が影響を受けるかを予測する信頼できる方法は存在しない。粘膜炎は衰弱高齢患者でより一般的であるのみならず、健康状態の破綻の度合いが、しばしばより衰弱させるものとなる。粘膜炎の重症度は、患者の口腔衛生の管理が良くないか栄養状態が良くない場合、さらに重くなる傾向がある。粘膜への既存の感染症や炎症でもより深刻な粘膜炎がもたらされる可能性がある。
【００１４】
癌を治療するために使用される薬物の種類、およびそれが投与されるスケジュールが、粘膜炎の発症リスクに影響を与え得る。例えば、ドキソルビシンおよびメトトレキサートは、頻繁に粘膜炎を引き起こす。化学療法剤であるフルオロウラシルは、連続静脈内（ＩＶ）注入によって小さい用量で投与した場合、通常は粘膜に重度の影響を与えない。高用量が短時間（通常は５日間）に与えられているようにスケジュールが調節される場合、フルオロウラシルは、非常に重篤で苦痛を伴う、用量制限をもたらす粘膜炎を引き起こす可能性がある。高用量化学療法と骨髄移植を伴う治療を受けている患者は、粘膜炎を発症することが多い。
【００１５】
さらに粘膜炎は、口腔内に照射する、または５日間１日あたり１８０ｃＧｙを超える放射線量で照射する放射線療法で発症する傾向もある。併用療法は、複数の化学療法剤または口腔への化学療法および放射線療法のいずれも粘膜炎の発生率を高め得る。
【００１６】
現在、粘膜炎の真の治療法は存在せず、治療は予防と症状の管理を目的としている。粘膜炎は、通常は数週間の治療後に細胞が再生すると消散し、時折処置の中止が必要となるのみである。いくつかの事例では、薬物療法は、毒性の低い薬剤が与えられるように変更される。
【００１７】
粘膜炎のリスクがある患者は、柔らかい歯ブラシでの頻繁にブラッシングと、ワックスの付いていないデンタルフロスで慎重にデンタルフロス処置し、口腔衛生について細心の注意を払わなければならない。歯茎の出血が生じた場合、患者は歯ブラシを柔らかいトゥースエッテまたはガーゼにかえる必要がある。入れ歯も定期的に清掃する必要がある。患者は一日に数回頻繁に水を飲んで口をすすぎ、よく潤いを与える必要がある。口腔を完全に乾燥させ痛みを増すことがあり得ることから、アルコールや過酸化水素を含む洗口剤は避けるべきである。唇も湿った状態に保たれるべきである。口腔への物理的な刺激を避けるべきである。時間が許すならば、虫歯や義歯不適合などの歯科の問題を、癌治療を開始する前に歯医者で解消しておく必要がある。一般的に、患者は温和あるいは中程度の温度の食品を摂取するのが、より快適である。スパイシーな、酸味の強い、非常に熱い、または非常に冷たい食品は粘膜の刺激になり得る。タバコやアルコールも避けるべきである。
【００１８】
病院職員と患者自身が、粘膜炎の徴候や症状を探すために頻繁に口の中を検査する必要がある。粘膜炎の証拠（炎症、白や黄色の光沢のある粘膜から赤みのあるただれた痛みを伴う膜への変化）は、化学療法処置後４日目には早くも存在し得る。炭酸水素ナトリウム洗口は、有益であるという科学的証拠が存在しないにもかかわらず、口腔細菌叢の量を減らすため、および快適さを促進するために時折使用される。通常患者は、１カップの水に小さじ（ｔｓｐ）１／２の塩と１／２ｔｓｐのベーキングソーダを含む溶液で数時間ごとに口をすすぐ。
【００１９】
痛みの軽減が、多くの場合、粘膜炎の患者に必要とされる。いくつかの事例では、マーロックス、キシロカイン、および塩酸ジフェンヒドラミンの混合物で洗浄し、痛みを和らげる。しかし、キシロカインの麻酔効果で、味覚が変わってしまうことがある。さらに悪いことに、この処置は、身体の自然な咽頭反射を減らし、嚥下に問題を生じさせることもある。カオペクテイトおよび水酸化アルミニウムゲルなどのコーティング剤もまた、症状を和らげる助けとなり得る。ベンジダミンでの洗浄により、痛みを管理するだけでなく、粘膜炎の発症を予防することが見込まれることが示されている。より重度の痛みの場合は、コデイン配合の液体タイレノール、あるいは静脈内オピオイド薬が必要な場合もある。重度の疼痛を有する患者は摂食ができない場合があり、また、ＩＶ（静脈内）を通して栄養補給が必要な場合もある。
【００２０】
凍結療法と呼ばれる治療は、前述の５日間高用量のスケジュールで投与されるフルオロウラシルによる治療を受けている患者において効果が見込まれることが示されている。３０分間の薬物注入の間、患者が継続的に氷片を口腔内に含んで回し、血管を収縮させて、薬物の口腔粘膜に影響を与える能力を減少させる。
【００２１】
カモミールおよびアロプリノール洗口剤が、粘膜炎を管理するために過去に試されていたが、研究により無効であることが判明した。生物学的応答調節因子が、粘膜炎の管理におけるその可能な役割を決定するべく評価されているところである。局所抗菌トローチを使用する最近の研究では、同様の効果の見込みが示されているが、さらに多くの研究が必要である。
【００２２】
したがって、口腔粘膜炎および消化管粘膜炎両方の粘膜炎を治療および予防の改善された方法が、当分野では強く求められている。この状態は、化学療法や放射線による癌治療の有効性を損なうとともに、それが原因で起こる強度の疼痛と不快感のために癌患者の生活の質に悪影響を与えるからである。
【００２３】
文献（Ｒｏｓｓｉら，Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ３６：７７１−７７９（２００５））において、化学療法（デキサメタゾおよびとメルファラン）と自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）を受けており、加えて抗ＩＬ−６抗体（ＢＥ８）を投与されていた多発性骨髄腫の患者が、ＣＲＰレベルの低下および熱の低下とともに、粘膜炎の発症や重症度の低下を示したことが報告されている。特に、当該治療を受けた患者における粘膜炎は、抗ＩＬ−６抗体を受けていない患者と比較すると、モルヒネ注入を必要としない低い程度の毒性であった。また、下痢などの消化管粘膜炎の症状が減少し、栄養の経口摂取と日常生活がより良好なものとなったことによって証明されるように、生活の質が改善された。
【００２４】
本明細書で説明するように、本発明の抗ＩＬ−６抗体および抗体フラグメントは、治療中の患者のＣＲＰレベル、悪液質、発熱を効果的に低下させるとともに、血清中アルブミンレベルを上昇させ、凝固プロファイルを改善し、かつ血栓症の減少傾向をもたらす。これらの抗体は、多くの生物学的効果を引き起こす炎症性サイトカインであるＩＬ−６に対する阻害効果のために、これらの効果を生じさせる。さらに、これらの観察に基づいて、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、癌の治療中に発生し得る骨髄抑制または貧血を予防するために用いることができ、また骨髄または幹細胞移植を含む治療に有益であり得る。
【００２５】
さらに、本発明の抗体の抗炎症効果のため、抗体を用いなければ放射線療法と化学療法の間に発生する可能性がある骨髄抑制および貧血に対して有益な影響を及ぼし、さらに、本発明の抗体は、口腔粘膜炎や胃腸粘膜炎、特に化学療法や放射線療法の結果として発生する口腔粘膜炎や胃腸粘膜炎を治療または予防するために使用されることが見込まれる。
【００２６】
本発明のこの実施形態では、抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントは、例えば、患者が受けるべき、および／または上述のように粘膜炎の症状をすでに呈する患者が受けることができる、化学療法または放射線療法のために、口腔粘膜炎および消化管粘膜炎を発症する大きなリスクがある患者に対して、予防的に投与される。本発明の抗体は、その血液の細胞と炎症に及ぼす改善効果のために、正常な組織の発達を促進し、粘膜炎で発生する口腔および胃腸粘膜の組織の損傷を回復することになる。
【００２７】
粘膜炎は、特に、放射線治療や化学療法が粘膜に影響を与え得るいくつかの癌（例えば、頭頸部癌、食道癌、咽頭癌、肺癌、胃癌や結腸癌や膵臓癌などの消化器癌、ならびに多発性骨髄腫などの血液癌など）の放射線治療や化学療法時の関心事であるので、本発明は、特に、本発明による抗ＩＬ−６抗体を投与することによる、これらの状態で発生し得る粘膜炎の予防または治療を包含する。さらに、本発明はまた、化学療法または放射線療法および自己幹細胞または骨髄移植を受けている、多発性骨髄腫と白血病やリンパ腫などの患者における、粘膜炎の予防または治療を包含する。そのような患者では粘膜炎は重要な関心事であることが知られている。
【００２８】
別の実施形態において、本発明は、凝固亢進の状態にある患者における血栓症を予防または治療する方法に関し、該方法は、Ａｂ１またはフラグメントまたはその変異体などの抗ＩＬ−６抗体を患者に投与し、該患者の凝固プロファイルを改善または正常な状態に回復することを含み、選択に応じて、凝固プロファイルを評価するために患者をモニタリングすることを含む。
【００２９】
別の実施形態において、本発明は、Ａｂ１またはそのヒト化形態など本発明による抗ＩＬ−６抗体の、それを必要とする対象における関節リウマチの治療または予防のための使用にも関する。この用途では、本発明者は、Ａｂ１由来の好ましいヒト化抗体の皮下投与および静脈内投与のための、安全性、薬物動態、および薬理学を示す臨床試験結果のデータを提供する。Ａｂ１はＡＬＤ−５１８とも呼ばれ、このヒト化抗体は、配列番号１９および２０（下記参照）に含まれている可変重鎖および軽鎖配列を含む。この臨床データからさらに、この抗体が、ＡＬＤ−５１８を皮下投与または静脈内投与されてきた関節リウマチ患者の疾患活動性を改善することが向上させることが分かる。
配列番号１９：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＳＮＹＹＶＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＩＩＹＧＳＤＥＴＡＹＡＴＳＡＩＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＤＳＳＤＷＤＡＫＦＮＬ
配列番号２０：ＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＩＮＮＥＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＲＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＹＳＬＲＮＩＤＮＡ
【００３０】
この応用例は、抗ＩＬ−６抗体ＡＬＤ５１８が、単回皮下投与した場合の耐容性良好であったことを立証するデータを提供する。注射部位反応は通常は軽度であった。皮下投与したＡＬＤ５１８の生物学的利用能は、静脈内投与したＡＬＤ５１８の約６０％であり、半減期は約３０日であった。ＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）の急速かつ大幅な低下が評価の２４週間にわたって持続されたことが、観察された。
【００３１】
皮下投与されたＡＬＤ５１８の半減期（約３０日）は、以前に静脈内投与で観察された半減期と同程度である。さらに、皮下のＡＬＤ５１８は、血清中ＣＲＰの急激かつ大幅な低下をもたらし、ＣＲＰの低下は、試験の最初の１２週間の間に観察され、評価の２４週間にわたって持続した。これらの結果も、静脈内投与で観察されたものと同様である。全体として、これらの結果は、関節リウマチの治療だけでなく、本明細書に記載する他のＩＬ−６に関連する状態の予防または治療のためのＡＬＤ５１８の使用を裏付けている。これらの治療レジメンを、メトトレキサートや、本明細書に記載された関節リウマチ（ＲＡ）治療薬および当該技術分野において一般に知られている他のＲＡ治療薬と併用することができる。
【００３２】
別の態様において本発明は、ヒト化Ａｂ１抗体のような本発明による抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントの皮下投与または静脈内投与による関節リウマチの治療のための、特定の投薬レジメンおよび用量処方を提供する。
【００３３】
別の態様において、本発明は新規な医薬組成物および新規な併用療法でのその使用方法を提供し、該使用方法は、Ａｂ１またはそのフラグメントまたは変異体などの抗ＩＬ−６抗体と、少なくとも１種類の他の治療化合物（例えばスタチン、抗凝固剤、制吐剤、抗悪心剤、抗悪液質剤、化学療法剤、抗サイトカイン剤など）との投与を含む。
【００３４】
体重減少、疲労、筋力低下は、進行した癌を罹患する患者において非常に一般的な症状であり、癌が進行し続けるにつれ、これらの症状が悪化し得る。疲労感、体重減少、および筋力低下は、生活様式や人間関係を破壊し、患者が癌の治療を継続する意欲または能力をそぐことによって、進行した癌の患者の回復に著しい負の影響を及ぼし得る。疲労、体重減少、筋力低下に対処する公知の方法には、通常のフィットネスとエクササイズのルーチン、患者のエネルギーの保持方法、および貧血誘発性疲労や筋力低下に対処する処置などが含まれる。それにもかかわらず、癌患者の疲労、体重減少、筋力低下を改善する方法および／または治療の必要性が当技術分野に依然として存在している。
【００３５】
血栓症は、癌患者の死亡の重要な原因となっている（Ｂｉｃｋ，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ３４９：１０９−１１１（２００３））。例えば、重症で生命を脅かす血栓症は、肺癌患者の約６％で発生する（Ａｌｇｕｉｒｅら，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００４  Ｖｏｌ  ２２（Ｊｕｌｙ１５ｔｈ  補遺）Ｎｏ．１４Ｓ：８０８２）。癌患者は、しばしば凝固亢進を示し、凝固系が凝固傾向の上昇を示す（ＲｉｃｋｌｅｓおよびＥｄｗａｒｄｓ，Ｂｌｏｏｄ６２：１４−３１（１９８３））。凝固亢進のマーカーは少なくともいくつかの癌について不良な患者予後との相関する（Ｂｉｃｋ，Ｓｅｍｉｎ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈｅｍｏｓｔａｔ１８：３５３−３７２（１９９２）；Ｂｕｃｃｈｅｒｉら，Ｃａｎｃｅｒ９７：３０４４−３０５２（２００３）；Ｗｏｊｔｕｋｉｅｗｉｃｚ，Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏａｇｕｌ  Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ３：４２９−４３７（１９９２））。凝固亢進の原因には、癌そのものや癌の治療（例えば化学療法）が含まれる。凝固亢進により血栓性イベントのリスクが増加し、これは患者が寝たきりになったときにさらに悪化し得る。禁忌でない場合、抗凝固療法は、いくつかの癌で延命効果を挙げてきている（Ｌｅｂｅａｕら，Ｃａｎｃｅｒ７４：３８−４５（１９９４）；Ｃｈａｈｉｎｉａｎら，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ７：９９３−１００２（１９８９））。しかし、多くの癌患者は高い大出血リスクにされされているため、治療の選択肢は制限されていることが多く、血栓症のリスクを軽減するために予防的に投薬することができる抗凝固薬の投与も制限されている。つまり、癌患者の血栓症の予防のための利用可能な方法として満足できるものがないため、新しい治療法が必要である。このような治療は、がん患者の生存率を向上させ、生活の質の向上を促進するであろう。
【００３６】
血栓症はまた、慢性疾患または慢性の炎症の患者、手術の患者、寝たきりの個人、および整形外科患者などの他の患者群においても有害な事象および死亡の重要な原因となり得る。特に禁忌でない場合、予防の方法としては、ふくらはぎの圧縮および抗凝固剤（例えば、低分子量ヘパリン）などが挙げられる。これらの予防方法は、血栓症のリスクを低下させることはできる−しかし排除するものではない。これらの予防方法は必ずしも有効ではなく一部の患者には禁忌とされ、また抗凝固剤は大出血などの致死的副作用を引き起こす可能性があるため、これらの患者での血栓症を防止するための代替的な方法が必要である。そのような方法は、患者の予後を改善するものでなければならない。
【００３７】
インターロイキン−６（以下「ＩＬ−６」）（インターフェロン−β２、Ｂ細胞分化因子、Ｂ細胞刺激因子−２、肝細胞刺激因子、ハイブリドーマ増殖因子、および骨髄腫増殖因子としても知られている）は、急性炎症反応の調節、Ｂ細胞およびＴ細胞の分化、骨代謝、血小板産生、表皮増殖、月経、神経細胞分化、神経防護作用、老化、癌、およびアルツハイマー病で起こる炎症反応を含む特異的免疫反応の調節等の多数の生物過程に関与する、多機能サイトカインである。Ａ．Ｐａｐａｓｓｏｔｉｒｏｐｏｕｌｏｓら，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ，２２：８６３−８７１（２００１）参照。
【００３８】
ＩＬ−６は、信号変換糖タンパク質ｇｐ１３０およびＩＬ−６受容体（「ＩＬ−６Ｒ」）（ｇｐ８０としても知られている）の少なくとも１つのサブユニットから成る受容体複合体を通して、細胞反応を推進するサイトカイン群の一員である。ＩＬ−６Ｒはまた、可溶形態（「ｓＩＬ−６Ｒ」）で存在し得る。ＩＬ−６はＩＬ−６Ｒに結合し、次いで、信号変換受容体ｇｐ１３０を二量体化する。Ｊｏｎｅｓ，ＳＡ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１７５：３４６３−３４６８（２００５）を参照されたい。
【００３９】
ヒトにおいて、ＩＬ−６をコードする遺伝子は、５つのエクソンおよび４つのイントロンで編成され、７ｐ２１で７番染色体の短腕に位置する。ＩＬ−６ＲＮＡの翻訳および翻訳後過程は、その成熟形態で、１８４アミノ酸を伴って、２１から２８ｋＤａタンパク質の形成をもたらす。Ａ．Ｐａｐａｓｓｏｔｉｒｏｐｏｕｌｏｓら，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ａｇｉｎｇ，２２：８６３−８７１（２００１）を参照されたい。
【００４０】
本明細書でより詳細に説明するように、ＩＬ−６は、疲労、悪液質、自己免疫疾患、骨格系の疾病、癌、心臓病、肥満、糖尿病、喘息、アルツハイマー病、および多発性硬化症を含むが、それらに限定されない、多数の疾病および疾患の発症において役割を果たすと考えられている。認識されている広範な疾病および疾患におけるＩＬ−６の関与のため、ＩＬ−６に関連する疾病を防止または治療するために有用な組成物および方法、ならびにＩＬ−６に関連する疾病または疾患を有する患者を特定するためのスクリーニングの方法が、当技術分野において依然として必要とされている。特に好ましい抗ＩＬ−６組成物は、患者に投与される際、最小限の副作用を有するまたは副作用を最小限とするものである。ＩＬ−６に関連する疾病または疾患を軽減または阻害する組成物または方法は、それを必要とする患者に有益である。
【００４１】
ＩＬ−６の作用は、造血、血小板産生、破骨細胞形成、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）および血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）タンパク質の上昇をもたらす肝臓の急性期反応の誘発において作用するため、免疫反応に限定されない。これは、表皮角化細胞、腎メサンギウム細胞、骨髄腫および形質細胞腫細胞のための増殖因子として知られている（Ｇｒｏｓｓｍａｎら，１９８９  Ｐｒｏｔ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．，８６，（１６）６３６７−６３７１；Ｈｏｒｉｉら，１９８９、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４３，１２，３９４９−３９５５；Ｋａｗａｎｏら，１９８８、Ｎａｔｕｒｅ３３２、６１５９、８３−８５）。ＩＬ−６は、単球／マクロファージ、線維芽細胞、表皮角化細胞、血管内皮細胞、腎メサンギウム細胞、グリア細胞、コンドロイチン、ＴおよびＢ細胞、およびある種の腫瘍細胞を含む、広範囲の細胞型によって産生される（Ａｋｉｒａら，１９９０，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．，４，１１，２８６０−２８６７）。ＩＬ−６を構造的に産生する腫瘍細胞を除いて、正常細胞は、適切に刺激されない限りＩＬ−６を発現しない。
【００４２】
高ＩＬ−６レベルは、乳癌、白血病、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、リンパ腫、肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、および多発性骨髄腫を含む多くのタイプの癌で観察されている（例えば、Ｃｈｏｐｒａら，２００４、ＭＪＡＦＩ６０：４５−４９；Ｓｏｎｇｕｒら，２００４、Ｔｕｍｏｒｉ９０：１９６−２００；Ｂｌａｙら，１９９２、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５２：３３１７−３３２２；Ｎｉｋｉｔｅａｓら，２００５、Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．Ｇａｓｔｅｒｅｎｔｅｒｏｌ．１１：１６３９−１６４３；Ｈｅｉｋｋｉｌａら，２００８、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，４４：９３７−９４５で概説）。上述のように、ＩＬ−６は、少なくともいくつかのタイプの癌の増殖または生存を推進する役割を果たすことが知られている、または疑われている。さらに、これらの研究のいくつかは、ＩＬ−６レベルと患者予後との間の相関関係を示している。同時に、これらの結果は、ＩＬ−６の阻害が治療に有益になり得る可能性を示唆する。実際に、臨床研究（Ｔｒｉｋｈａら，２００３、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ９：４６５３−４６６５で概説）は、種々の抗ＩＬ−６抗体の投与によって、患者予後において、特に、ＩＬ−６が癌細胞増殖または生存を推進する直接的な役割を果たす癌において、いくらかの改善を示している。
【００４３】
上述のように、ＩＬ−６は、肝臓の急性期反応を刺激し、より多いＣＲＰの産生および高血清ＣＲＰレベルをもたらす。このため、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）は、ＩＬ−６活性の代理マーカーを成すことが報告されている。したがって、高いＩＬ−６の活性は、血清ＣＲＰの測定を通して検出することができる。逆に、例えば中和抗ＩＬ−６抗体の投与を通してのＩＬ−６活性の効果的な抑制は、血清ＣＲＰレベルの結果的減少によって検出することができる。
【００４４】
最近の臨床試験は、高ＣＲＰ（２．０ｍｇ／Ｌより大きい）を有する見かけ上健常者へのロスバスタチンの投与は、彼らのＣＲＰレベルを３７％減少し、心筋梗塞、脳梗塞、動脈血行再建、不安定狭心症のための入院、または心臓血管原因による死の発生率を大いに減少させたことを示している。Ｒｉｄｋｅｒら，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２００８  Ｎｏｖ  ９  ［Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ］。
【００４５】
いくつかの癌および他の疾病の発症におけるその直接的な役割に加えて、慢性高ＩＬ−６レベルは、患者の健康および生活の質に悪影響を及ぼすと見られる。例えば、高ＩＬ−６レベルは、悪液質および発熱、また低下した血清アルブミンに関連することが報告されている。Ｇａｕｌｄｉｅら，１９８７，ＰＮＡＳ８４：７２５１−７２５３、Ｈｅｉｎｒｉｃら，１９９０、２６５：６２１−６３６、Ｚａｍｉｒら，１９９３，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ４２：２０４−２０８、Ｚａｍｉｒら，１９９２，Ａｒｃｈ  Ｓｕｒｇ，１２７：１７０−１７４。これらの患者の血清アルブミンレベルは報告されていないが、中和抗体によるＩＬ−６の阻害は、癌患者の発熱および悪液質を改善すると報告されている。（Ｅｍｉｌｌｅら，１９９４、Ｂｌｏｏｄ、８４：２４７２−２４７９；Ｂｌａｙら，１９９２、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５２：３３１７−３３２２；Ｂａｔａｉｌｌｅら，１９９５、Ｂｌｏｏｄ，８６：６８５−６９１）。
【００４６】
多数の研究が、ＣＲＰは、その高レベルが不良転帰を予測する、癌患者における重要な予後因子であることを示している。例えば、Ｈｅｆｌｅｒら，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２００８  Ｆｅｂ  １；１４（３）：７１０−４；Ｎａｇａｏｋａら，Ｌｉｖｅｒ  Ｉｎｔ，２００７  Ｏｃｔ；２７（８）：１０９１−７；Ｈｅｉｋｋｉｌaら，Ｊ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ  Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ  Ｈｅａｌｔｈ，２００７  Ｓｅｐ；６１（９）：８２４−３３、Ｒｅｖｉｅｗ；Ｈａｒａら，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２００７  Ｊｕｌ−Ａｕｇ；２７（４Ｃ）：３００１−４；Ｐｏｌｔｅｒａｕｅｒら，Ｇｙｎｅｃｏｌ  Ｏｎｃｏｌ，２００７  Ｏｃｔ；１０７（１）：１１４−７，Ｅｐｕｂ  ２００７  Ｊｕｌ  ６；Ｔｉｎｇｓｔｅｄｔら，Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００７  Ｊｕｎ；４２（６）：７５４−９；Ｓｕｈら，Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｃａｒｅ  Ｃａｎｃｅｒ，２００７  Ｊｕｎ；１５（６）：６１３−２０，Ｅｐｕｂ  ２００７  Ｊａｎ  １８；Ｇｅｒｈａｒｄｔら，Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００６  Ｓｅｐ  １４；１２（３４）：５４９５−５００；ＭｃＡｒｄｌｅら，Ｕｒｏｌ  Ｉｎｔ，２００６；７７（２）：１２７−９；Ｇｕｉｌｌｅｍら，Ｄｉｓ  Ｅｓｏｐｈａｇｕｓ，２００５；１８（３）：１４６−５０；Ｂｒｏｗｎら，Ｃａｎｃｅｒ，２００５  Ｊａｎ  １５；１０３（２）：３７７−８２を参照されたい。低下した血清アルブミン（低アルブミン血症）はまた、癌を含む多くの重病における疾病率および死亡率の増加に関連する（例えば、Ｖｉｇａｎｏら，Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ，２０００  Ｍａｒ  ２７；１６０（６）：８６１−８；Ｈａｕｓｅｒら，Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｃａｒｅ  Ｃａｎｃｅｒ，２００６  Ｏｃｔ；１４（１０）：９９９−１０１１；Ｓｅｖｅら，Ｃａｎｃｅｒ，２００６  Ｄｅｃ  １；１０７（１１）：２６９８−７０５）。低アルブミン血症と不十分な患者予後との間の明らかな関連は、直接のアルブミン注入のみを通してアルブミンレベルを回復することにより、患者の生存を推進し得ることを示唆しているとみられるが、しかしながら、アルブミン注入のみでは、進行癌患者（Ｄｅｍｉｒｋａｚｉｋら，Ｐｒｏｃ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ２１：２００２（ａｂｓｔｒ２８９２））または他の重病の患者群（Ｗｉｌｋｅｓら，Ａｎｎ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ，２００１  Ａｕｇ  ７；１３５（３）：１４９−６４で概説された）の生存を改善していない。
【００４７】
グラスゴー予後スコア（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｃｏｒｅ、ＧＰＳ）は、アルブミン（３５ｍｇ／Ｌ未満＝１ポイント）およびＣＲＰ（１０ｍｇ／Ｌ超＝１ポイント）のレベルを組み合わせる、炎症に基づく予後スコアである（Ｆｏｒｒｅｓｔら．，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，２００４  Ｍａｙ  ４；９０（９）：１７０４−６）。２００４年のこの導入以来、グラスゴーの予後スコアは、胃食道癌、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、乳癌、卵巣癌、気管支癌、および転移性腎癌を含む多数の癌における死亡率の予測として、予後診断において価値を有することがすでに示されている（Ｆｏｒｒｅｓｔら，Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，２００４  Ｍａｙ  ４；９０（９）：１７０４−６；Ｓｈａｒｍａら，Ｃｌｉｎ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ，２００８  Ｓｅｐ；７（５）：３３１−７；Ｓｈａｒｍａら，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，２００８  Ｊａｎ；４４（２）：２５１−６；ＭｃＭｉｌｌａｎら，Ｎｕｔｒ  Ｃａｎｃｅｒ，２００１；４１（１−２）：６４−９；ＭｃＭｉｌｌａｎ、Ｐｒｏｃ  Ｎｕｔｒ  Ｓｏｃ，２００８  Ａｕｇ；６７（３）：２５７−６２；Ｒａｍｓｅｙら，Ｃａｎｃｅｒ、２００７  Ｊａｎ  １５；１０９（２）：２０５−１２）。
【００４８】
米国特許出願公開示第２００８−００８１０４１号（抗ＩＬ−６抗体を使用しての癌治療に関する）は、ＩＬ−６は疾患活性に関連するため、およびＣＲＰはＩＬ−６活性の代理マーカーなので、それらの抗ＩＬ−６抗体（ＣＮＴＯ３２８，Ｚａｋｉら，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，２００４  Ｓｅｐ  １０；１１１（４）：５９２−５）によるＩＬ−６の中和によるＣＲＰの継続的抑制は、生物活性を達成するために必要であると推測され得ることが開示される。同特許出願は、良性および悪性の前立腺疾患を有する患者におけるＩＬ−６とＣＲＰとの間の関係は、ＭｃＡｒｄｌｅによって以前に試験された（ＭｃＡｒｄｌｅら，２００４  Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ９１（１０）：１７５５−１７５７）ことを示している。ＭｃＡｒｄｌｅは、報告によれば、前立腺癌患者と比較して、良性疾患を有する患者のＩＬ−６およびＣＲＰの濃度の間で、著しい差異を見出さず、癌患者において、腫瘍悪性度の増加とともに、ＩＬ−６およびＣＲＰ濃度の両方で著しい増加があった。前立腺癌を有する８６人の被験者の血清ＣＲＰの中央値は、１．８ｍｇ／Ｌであった。それに基づいて、上記特許出願の発明者は、抗ＩＬ−６抗体（ＣＮＴＯ３２８）の６ｍｇ／ｋｇが２週間毎に投与される、提案される投与量およびスケジュールを仮定し、転移性ＨＲＰＣを伴う対象におけるＣＲＰの継続的抑制を達成し得ることを主張する。
【００４９】
ＩＬ−６シグナル伝達は、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、およびＪＡＫ３を含む細胞質チロシンキナーゼのＪａｋ−Ｔｙｋ群によって媒介される（Ｍｕｒｒａｙ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００７  Ｍａｒ  １；１７８（５）：２６２３−９で概説された）。Ｓｉｖａｓｈらは、口腔扁平癌細胞における、シクロペンテノンプロスタグランジン１５ｄ−ＰＧＪ２によるＩＬ−６−媒介ＪＡＫシグナル伝達破棄を報告する。Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（２００４）９１、１０７４−１０８０。これらの結果は、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、またはＪＡＫ３の阻害剤は、ＩＬ−６アンタゴニストとして採用され得ることを示唆する。
【００５０】
Ｕｌａｎｏｖａらは、非受容体タンパク質チロシンキナーゼＳｙｋ（ｓｉＲＮＡを使用して）の阻害は、上皮細胞によるＩＬ−６の産生を減少させたことを報告する。Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００５  Ｍａｒ；２８８（３）：Ｌ４９７−５０７。これらの結果は、Ｓｙｋの阻害剤はＩＬ−６アンタゴニストとして採用され得ることを示唆する。
【００５１】
Ｋｅｄａｒらは、サリドマイドでの治療は、腎細胞癌患者のかなりの割合において、ＣＲＰおよびＩＬ−６の血清レベルを正常または正常に近いレベルまで著しく減少したことを報告する。Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．２００４  Ｊｕｎ  １０；１１０（２）：２６０−５。これらの結果は、サリドマイド、および場合によってレナリドミド等のその誘導体は、有用なＩＬ−６アンタゴニストであり得ることを示唆する。
【００５２】
加えて、もう１つの開示された特許出願、米国特許出願公開第２００７−０２９２４２０号は、進行多発性骨髄腫の不応性患者を治療するための、抗ＩＬ−６（ｃＣＬＢ−８）抗体を使用しての第１相投与量増加研究（Ｎ＝１２）を教示し、この研究は、いくらかの患者が疾病安定を有したことを示したことを示す。その出願はまた、治療の中断後、Ｍタンパク質レベルの増加の促進があったことを報告し、治療の中止後、疾病の跳ね返りを示唆した。抗ＩＬ−６ｃＣＬＢ−８抗体は、自由循環ＩＬ−６を阻害した。
【００５３】
この出願はまた、この抗体試験は、毒性をもたらさず（大量の前治療を受けた２名の患者における一過性血小板減少症を除く）アレルギー反応も観察されず、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）は全ての患者において、検出レベルを下回って減少したことを示す。これらの抗体（ｃＣＬＢ−８抗体）は、１７．８日の循環半減期を有したと報告されており、ヒト抗キメラ抗体（ＨＡＣＡ）免疫反応は観察されなかった（ｖａｎ  Ｚａａｎｅｎら１９９８）。彼らは、ＣＮＴＯ３２８の投与は、血圧、脈拍数、体温、ヘモグロビン、肝機能、および腎機能において変化をもたらさなかったと主張する。大量の前治療を受けた２名の患者における一過性血小板減少症を除いて、毒性もアレルギー反応も観察されず、ヒト抗キメラ抗体（ＨＡＣＡ）免疫反応は観察されなかった。それらの研究での３名の患者は、治療中、感染症による合併症を発症したと報告されたが、しかしながら、感染合併症は末期多発性骨髄腫においてよく見られ、主な死亡原因と報告されているため、この発明者は、抗ＩＬ−６ｃＣＬＢ−８抗体との考えられる関係は可能性が少ないと結論付けている。彼らは、これらの結果に基づいて、この抗ＩＬ−６ｃＣＬＢ−８抗体は、多発性骨髄腫患者には安全であったと結論付けている。
【００５４】
本明細書に開示する特定の抗ＩＬ−６抗体は、本出願と譲受人を同じくし当該譲受人の共有に係る公開および未公開の特許出願、米国特許出願２００９／００２８７８４号、国際出願公開ＷＯ２００８／１４４７６３、２００９年２月２４日出願の米国特許出願第１２／３９１，７１７号（代理人整理番号６７８５８．７０２２０１）、および２００９年２月５日出願の米国特許出願第１２／３６６，５６７号（代理人整理番号６７８５８．７０２１０１）にも開示されている。
【００５５】
他の抗ＩＬ−６抗体は、米国特許第７，４８２，４３６号；同第７，２９１，７２１号；同第６，１２１，４２３号；米国特許出願第２００８／００７５７２６号；同第２００７／０１７８０９８号；同第２００７／０１５４４８１号；同第２００６／０２５７４０７号；および同第２００６／０１８８５０２号にも開示されている。
【００５６】
上記のように、ＩＬ−６レベルの上昇は、悪液質、衰弱、疲労、発熱の病因に関係付けられている。疲労と関連した疾病および疾患としては、全身疲労、ストレスに関連した疲労、運動誘発性疲労、癌に関連した疲労、炎症性疾患に関連した疲労、および慢性疲労症候群などが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｅｓｐｅｒ  ＤＨら，Ｔｈｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｃａｃｈｅｘｉａ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ，Ｎｕｔｒ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ．，２００５Ａｕｇ；２０（４）：３６９−７６；Ｖｇｏｎｔｚａｓ  ＡＮらＩＬ−６  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｃｉｒｃａｄｉａｎ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ，Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ，２００５；１２（３）：１３１−４０；Ｒｏｂｓｏｎ−Ａｎｓｌｅｙ，ＰＪら，Ａｃｕｔｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｉｍｐａｉｒｓ  ａｔｈｌｅｔｉｃ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ，ｔｒａｉｎｅｄ  ｍａｌｅ  ｒｕｎｎｅｒｓ，Ｃａｎ  Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２００４Ａｕｇ；２９（４）：４１１−８；Ｓｈｅｐｈａｒｄ  ＲＪ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｐｈｙｓｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ，ｗｉｔｈ  ｐａｒｔｉｃｕｌａｒ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｔｏ  ＩＬ−６：ｓｏｕｒｃｅｓ，ａｃｔｉｏｎｓ，ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００２；２２（３）：１６５−８２；  Ａｒｎｏｌｄ，ＭＣらＵｓｉｎｇ  ａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  ｔｏ  ｅｖａｌｕａｔｅ  ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｆａｔｉｇｕｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ，  Ｐｓｙｃｈｏｌ  Ｍｅｄ．，２００２Ａｕｇ；３２（６）：１０７５−８９；Ｋｕｒｚｒｏｃｋ  Ｒ．，Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｆａｔｉｇｕｅ，Ｃａｎｃｅｒ，２００１Ｓｅｐ１５；９２（６  Ｓｕｐｐｌ）：１６８４−８；Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏ  Ｎら，Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｃａｓｔｌｅｍａｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｂｌｏｏｄ，  ２０００  Ｊａｎ  １；９５（１）：５６−６１；Ｖｇｏｎｔｚａｓ  ＡＮら，Ｃｉｒｃａｄｉａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｑｕａｎｔｉｔｙ  ａｎｄ  ｄｅｐｔｈ  ｏｆ  ｓｌｅｅｐ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．，１９９９Ａｕｇ；８４（８）：２６０３−７；およびＳｐａｔｈ−Ｓｃｈｗａｌｂｅ  Ｅら，Ａｃｕｔｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｏｎ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ａｎｄ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｌｅｅｐ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｍｅｎ，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．，１９９８Ｍａｙ；８３（５）：１５７３−９を参照されたい。これらの文献のそれぞれは、参照により��の全内容が本明細書に組み入れられる。
【００５７】
悪液質と関連した疾病および疾患としては、癌関連の悪液質、心臓関連の悪液質、呼吸器関連の悪液質、腎機能関連の悪液質、年齢に関連した悪液質などが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｂａｒｔｏｎ，ＢＥ．，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｎｄ  ｎｅｗ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ，  ｈｙｐｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ａｎｄ  ｐａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ，２００５Ａｕｇ；９（４）：７３７−５２；Ｚａｋｉ  ＭＨら，ＣＮＴＯ  ３２８，ａ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ＩＬ−６，ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃａｃｈｅｘｉａ  ｉｎ  ｎｕｄｅ  ｍｉｃｅ，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，２００４Ｓｅｐ１０；１１１（４）：５９２−５；Ｔｒｉｋｈａ  Ｍら，Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ：ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒａｔｉｏｎａｌｅ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ，  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ２００３  Ｏｃｔ  １５；９（１３）：４６５３−６５；Ｌｅｌｌｉ  Ｇら，Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｏｒｅｘｉａ−ｃａｃｈｅｘｉａ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ａ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｒｅａｐｐｒａｉｓａｌ，Ｊ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，２００３Ｊｕｎ；１５（３）：２２０−５；Ａｒｇｉｌｅｓ  ＪＭら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｃａｃｈｅｘｉａ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ  Ｍｅｔａｂ  Ｃａｒｅ，２００３Ｊｕｌ；６（４）：４０１−６；Ｂａｒｔｏｎ  ＢＥ．，ＩＬ−６−ｌｉｋｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｃａｃｈｅｘｉａ：ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．，２００１；２３（１）：４１−５８；Ｙａｍａｓｈｉｔａ  ＪＩら，Ｍｅｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ  ａｃｅｔａｔｅ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｃａｃｈｅｘｉａ：ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ，２０００；７（２）：１３０−５；Ｙｅｈ  ＳＳら，Ｇｅｒｉａｔｒｉｃ  ｃａｃｈｅｘｉａ：ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ．，１９９９Ａｕｇ；７０（２）：１８３−９７；Ｓｔｒａｓｓｍａｎｎ  Ｇら，Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｃａｃｈｅｘｉａ  ｂｙ  ａｎｔｉ−ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．，１９９５  Ｊｕｎ；１（２）：１０７−１３；Ｆｕｊｉｔａ  Ｊら，Ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｍｕｓｃｌｅ  ａｔｒｏｐｈｙ  ｉｎ  ｃｏｌｏｎ−２６  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ−ｂｅａｒｉｎｇ  ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｙｓｏ��ｏｍａｌ  ａｎｄ  ＡＴＰ−ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ  ｐａｔｈｗａｙｓ，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，１９９６Ｎｏｖ２７；６８（５）：６３７−４３；Ｔｓｕｊｉｎａｋａ  Ｔら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｍｕｓｃｌｅ  ａｔｒｏｐｈｙ  ａｎｄ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．，１９９６Ｊａｎｌ；９７（ｌ）：２４４−９；Ｅｍｉｌｉｅ  Ｄら，Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ａｎｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａ：ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｏｎ  Ｂ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｙｍｐｔｏｍｓ，Ｂｌｏｏｄ，１９９４  Ｏｃｔ  １５；８４  （８）：２４７２−９；およびＳｔｒａｓｓｍａｎｎ  Ｇら，Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｃａｃｈｅｘｉａ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．，１９９２Ｍａｙ；８９（５）：１６８１−４を参照されたい。これらの文献のそれぞれは、参照によりその全内容が本明細書に組み入れられる。
【００５８】
別の悪液質関連疾患はまた、子どもの体重増加速度が期待よりも小さくなる、発達の遅れとしても知られている成長障害である。成長障害は、一般的には３パーセンタイル未満の体重、または短期間における２つの主要な成長パラメータのパーセンタイルランクの低下として定義されている。成長障害は、医療的要因と社会心理的な要因の複合要因から生じ、その理由は診断で見逃されることもある。最近の１つの研究では（合計３４人の患者を対象）、成長障害と診断された患者におけるＩＬ−６レベルの統計的に有意な上昇が報告されている。Ｓｈａｏｕｌら，Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｎｕｔｒ．，２００３Ｏｃｔ；３７（４）：４８７−９１を参照されたい。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００５９】
本発明は、ＩＬ−６に対する結合特異性を有する、特定の抗体、ヒト化またはキメラ型または一本鎖の抗体およびそのフラグメントおよび変異体、特に、特定のエピトープ特異性および／または機能特性を有する抗体、およびこれらの抗ＩＬ−６抗体および他の抗ＩＬ−６抗体を使用する新規な治療法に係る出願人の先願発明の延長である。本発明の１つの実施形態は、ＩＬ−６および／またはＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ複合体に結合することができる、特定のヒト化抗体ならびにそのフラグメントおよび変異体を含む。これらの抗体は、可溶性ＩＬ−６または細胞表面に発現するＩＬ−６に結合し得る。また、これらの抗体は、ＩＬ−６、ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ複合体、ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０複合体、および／またはＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０の多重体のうちの１つ以上の形成または生物学的作用を阻害し得る。本発明は、抗ＩＬ−６抗体、好ましくは、本明細書に記載されるそれらを使用しての新規な治療法および治療プロトコルに関する。具体的には、本発明は、それを必要とする患者、例えば処置の前にＤダイマーレベルおよび／またはＣＲＰレベルの上昇を示す患者における血栓症を治療または予防する方法であって、前記患者に対してＩＬ−６アンタゴニスト、（例えば、抗ＩＬ−６抗体（Ａｂ１など）またはその抗体フラグメントまたは変異体など）を投与することを含み、それによって前記患者の凝固プロファイルを改善または正常な状態に復元する、該方法に関する。いくつかの実施形態では、これらの方法はさらに、Ａｂ１などのＩＬ−６アンタゴニストの作用を助け（相乗効果を発揮し）、それによって血栓症をより効果的に予防または治療し得るスタチンなどの他の活性成分の投与を含み得る。
【００６０】
本発明はまた、それを必要とする患者、例えば処置の前にＤダイマーレベルおよび／またはＣＲＰレベルの上昇を示す患者の生存率または生活の質を向上させる方法であって、前記患者に対してＩＬ−６アンタゴニスト、（例えば、次のもの：抗ＩＬ−６抗体（Ａｂ１など）またはその抗体フラグメントまたは変異体など）を投与することを含み、それによって前記患者のＣ反応タンパク質（「ＣＲＰ」）レベルを低下および／または前記患者のアルブミンレベルを上昇させる、方法に関する。いくつかの実施形態では、これらの方法はさらに、Ａｂ１などのＩＬ−６アンタゴニストの作用を助け（相乗効果を発揮し）、それによって前記患者をより効果的に治療し得るスタチンなどの他の活性成分の投与を含み得る。
【００６１】
本発明の別の実施形態は、Ａｂ１（そのウサギおよびヒト化形態、ならびに、その重鎖、軽鎖、フラグメント、変異体、およびＣＤＲを含む）に関する。ヒト臨床試験データでは、Ａｂ１のヒト化型を投与した。
【００６２】
好ましい実施形態では、これは、本明細書に記載される抗体の投与によって達成され、本明細書に記載されるＶＨ、ＶＬ、およびＣＤＲポリペプチドの配列、または例示される抗ＩＬ−６抗体配列のＣＤＲおよびそれらをコードするポリヌクレオチドの１つ以上を含有するそのヒト化型またはキメラ型または一本鎖型を含む。好ましくは、これらの抗体は脱グリコシル化される。本発明のより具体的な実施形態では、これらの抗体は、ｇｐ１３０活性剤を阻止し、および／または５０ピコモル未満の結合親和性（Ｋｄｓ）および／または１０−４Ｓ−１未満または等しいＫｏｆｆ値を持つ。
【００６３】
本発明の別の実施形態では、これらの抗体およびヒト化変形は、ウサギ免疫細胞（Ｂリンパ球）から得られ、ヒト生殖細胞系配列に対するそれらの相同性（配列同一性）に基づいて選択され得る。これらの抗体は、最小限の配列修飾しか必要としないか、またはそれを必要としない可能性があり、それによって、ヒト化後に機能特性の保有を促進する。典型的な実施形態では、これらのヒト化抗体は、以下に示されるように、親（例えばウサギ）抗体のそれに対して、高度の相同性を示す（配列同一性の高レベルを持つ）ヒトフレームワークを含む。
【００６４】
本発明の別の実施形態では、主題抗体は、ＩＬ−６誘導Ｔ１１６５増殖アッセイ、ＩＬ−６刺激ＨｅｐＧ２ハプトグロビン産生アッセイ等の、機能アッセイにおけるそれらの活性に基づいて選択され得る。本発明のさらなる実施形態は、ＶＨ、ＶＬおよびＣＤＲポリペプチドもしくは変異体、または例えば、ウサギ免疫細胞およびそれをコードするポリヌクレオチドに由来するそのフラグメントを含む抗ＩＬ−６抗体からのフラグメント、ならびに新規抗体およびＩＬ−６および／またはＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ複合体またはＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０複合体および／またはその多重体を認識することができるポリペプチド組成物の形成において、これらの抗体フラグメントおよびそれらをコードするポリヌクレオチドの使用に関する。
【００６５】
本発明はまた、抗ＩＬ−６抗体およびそのヒト化型、キメラ型、または一本鎖型、および１つ以上の機能的または検出可能な成分に結合する、その他の結合フラグメントおよび変異形の複合体の投与を想定している。本発明はまた、該ヒト化抗ＩＬ−６または抗ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ複合体抗体およびその結合フラグメントおよび変異形を作製する方法を想定している。１つの実施形態では、結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、およびｓｃＦｖフラグメントを含むが、それらに限定されない。
【００６６】
本発明の実施形態は、ＩＬ−６またはその異常な発現に関連する疾病および疾患の診断、評価、および治療のための抗ＩＬ−６抗体の使用に関係する。本発明はまた、ＩＬ−６またはその異常な発現に関連する疾病および疾患の診断、評価、および治療のための抗ＩＬ−６抗体のフラグメントの使用を想定している。本発明の抗体、特に、ヒト化、キメラ、および一本鎖抗体の好適な使用は、癌に関連する疲労、および／または悪液質および関節リウマチの治療および予防である。
【００６７】
他の本発明の実施形態は、組換え宿主細胞、好ましくは、二倍体ピチア属および他の酵母菌株等の二倍体酵母における、抗ＩＬ−６抗体の産生に関する。
【００６８】
本発明の他の実施形態は、細胞、組織、または器官の移植を受ける対象（例えば、造血幹細胞移植（ＨＣＴ）、骨髄移植（ＢＭＴ）を受ける対象および他の細胞、組織、または器官の移植を受ける対象、特に、ＢＤＣＡＡ４＋形質細胞様樹状細胞を含み得る細胞、組織、または器官の移植を受ける対象）における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の発症、または白血病再発の予防または軽減のための、本発明による本発明による抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントを使用に関する。
【００６９】
より多くのＢＤＣＡＡ４＋形質細胞様樹状細胞（ならびにＢＤＣＡ１＋骨髄性樹状細胞）を含むＨＣＴ移植を受けた白血病の対象ほど、より高い白血病再発傾向と、より低い生存率を示すことが文献（Ｐｅｒｅｚ−Ｍａｒｔｉｎｅｚら，“Ｂｌｏｏｄ  ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ  ｓｕｐｐｒｅｓｓ  ＮＫ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｔｈｅ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｒｅｌａｐｓｅ  ａｆｔｅｒ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ”，Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｂｌｏｏｄ  ａｎｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｏｎｌｉｎｅ  ２５  Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２０１０）に報告されている。これらの移植対象は、通常、高用量の化学療法や放射線療法による損傷組織の結果として（移植が必要になる前の、癌などの疾患の治療の結果として）、内因性の病原体および宿主組織に由来する豊富な病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰＳ）を特徴とする炎症性環境を呈する。
【００７０】
特に著者らは、ＮＫ細胞は通常、ＤＣの成熟を誘導し次にＤＣがＮＫ細胞での活性化マーカーの発現を増加させるが、ＴＬＲリガンドを同種ＨＣＴにおいて微生物に関連する炎症性環境を模倣するために使用した場合、逆説的にＢＤＣＡＡ４＋形質細胞様樹状細胞とＢＤＣＡ１＋骨髄系樹状細胞の両方が、体外アッセイおよび生体内マウスモデルの両方においてＮＫ細胞の機能を抑制したことを説明している。彼らは、この現象が、これらの細胞をより多く含むＨＣＴを受けた患者が、白血病再発のリスクが高くなった理由を説明し得ることを理論化した。彼らはさらに、その詳細な機序の知見が、これらの樹状細胞は、ＩＬ−１０およびＩＬ−６を介するＮＫ細胞毒性細胞に対するこの抑制効果（これらのサイトカインとともにＮＫ細胞をインキュベートすると、ＮＫ細胞の細胞毒性作用に対する用量依存的な抑制効果がある）を引き出すことことを示唆していると述べている。
【００７１】
これらの知見および本発明による抗体の強力な体外および生体内でＩＬ−６産生を抑制する能力に基づき、本発明は、本発明による抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントを、移植される細胞、組織または器官が用いられる治療の補助として使用することにより、白血病再発または移植片対宿主病を予防する方法および組成物を提供する。最も具体的には、本発明は、骨髄移植、造血細胞移植、膵臓または肝臓移植、および他の細胞、組織および臓器の移植であって、前記移植は樹状細胞、特にＢＤＣＡＡ４＋形質細胞様樹状細胞および／またはＢＤＣＡ１＋骨髄系樹状細胞を含み得る、該移植を受けている患者におけるＧＶＨＤまたは白血病再発を低減または予防する方法を提供する。
【００７２】
本発明は特に、化学療法および／または放射線療法を既に受けたか現在も受けている対象のような、既に炎症性環境が発生しやすくなっている移植患者を治療するのに適する。基本的に、本発明の抗ＩＬ−６抗体および抗体フラグメントは、これらの移植レシピエントにおける既に高いＩＬ−６レベルを抑制し、それによってＮＫ細胞に対するそのような樹状細胞の望ましくない影響を軽減するべく作用する。ＮＫ細胞は、造血幹細胞移植において、および感染に対する主要な応答を誘導する樹状細胞とのクロストークにおいて重要な役割を果たしていることから、このことは臨床上有益である。また、ドナーＮＫ細胞は、生着を推進し、ＧＶＨＤを予防し、感染症を制御し、白血病再発のリスクを減らすことが実証されている。
【００７３】
したがって上記に基づいて、本発明は、細胞、組織または器官を移植された対象において、移植の生着を促進し、感染のリスクを制御または低減し、および／またはＧＶＨＤおよび／または白血病再発を軽減または予防する方法であって、本発明による抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントの少なくとも１種類を、移植前、移植と同時または移植後に投与することによる、該方法を提供する。好ましい実施形態では、これらの対象は、癌を罹患した個人、および／または既に治療レジメンを受けたか、または内因性の炎症性環境をもたらす基礎疾患を罹患している対象（例えば、移植前に化学療法や放射線療法を受けている対象など）を含む。
【００７４】
本発明の療法は一般的に、抗体を、移植が行われたときに循環するＩＬ−６抗体のレベルを低減するように、移植前（例えば、移植の約１ヶ月前、数週間前、または１週間前程度）に、または移植と同時に投与する。しかし、別形態では、本発明の抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントを、細胞、組織または臓器の移植と同時に、または移植の直後（例えば、好ましくは移植後の数時間または数日以内）に投与し得る。これらの部分が同時投与される場合、ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントを、移植された細胞、組織または臓器と組み合わせてもよく、あるいは別々の医薬組成物に含めて投与してもよい。
【００７５】
いくつかの事例、例えば造血幹細胞または骨髄の移植の場合、本発明による抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントを、移植前に細胞、組織または器官に接触させて、それらに含まれているすべての樹状細胞によるＩＬ−６の産生を移植前に抑制しておくことが望ましいこともある。
【００７６】
加えて、移植前にＩＬ−１０アンタゴニスト（例えば抗ＩＬ−１０抗体または抗体フラグメント）を対象に投与するか、ＩＬ−１０アンタゴニストで細胞、組織または器官を前処理することがさらに望ましいことがある。
【００７７】
したがって本発明は、移植される細胞、組織または器官と結合された本発明の抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントの少なくとも１種類を含み、さらに選択に応じてＩＬ−１０アンタゴニストを少なくとも１種類もさらに含む、組成物をさらに提供する。
【００７８】
また本発明は、細胞、組織または器官、特に樹状細胞を含む可能のあるものの移植を受けた対象における感染症のリスクを低減する方法であって、移植前、移植と同時、または移植後に、本発明による抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントの少なくとも１種類を、感染症のリスクを予防または低減させるのに十分な量だけ投与することによる、該方法を提供する。
【００７９】
また本発明は、細胞、組織または器官、特に樹状細胞を含む可能性のあるものの移植を受けた対象におけるＧＶＨＤのリスクを低減する方法であって、移植（例えばＨＣＴ、またはＢＭＴ）の前、移植と同時、または移植後に、本発明による抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントの少なくとも１種類を、ＧＶＨＤのリスクを予防または低減させるのに十分な量だけ投与することによる、該方法を提供する。いくつかの実施形態では、これらの対象が、化学療法および／または放射線療法を既に受けているか、またはそのような化学療法および／または放射線療法を現在受けている。
【００８０】
また本発明は、細胞、組織または器官、特に樹状細胞を含む可能性のあるものの移植を受けた対象における白血病再発のリスクを低減する方法であって、移植前、移植と同時、または移植後に、本発明による抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントの少なくとも１種類を、白血病再発のリスクを予防または低減させるのに十分な量だけ投与することによる、該方法を提供する。そのような白血病の例としては、慢性白血病、急性白血病が含まれ、例えば骨髄細胞から発生する疾患である慢性または急性の骨髄性白血病（慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）など）、血液骨髄中の芽球またはリンパ球と呼ばれる細胞から発生する慢性または急性のリンパ性白血病（慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）など）、有毛細胞白血病、大人に影響を与える非常にまれで悪性の白血病であるＴ細胞性前リンパ性白血病（Ｔ−ＰＬＬ）、Ｔ細胞かＮＫ細胞のいずれかが関与し得、有毛細胞白血病と同様もっぱらＢ細胞が関与し、まれな無痛性（非悪性の）白血病である大顆粒リンパ球性白血病などであり得る。
【００８１】
また本発明は、細胞、組織または器官、特に樹状細胞を含む可能性のあるものの移植を受けた対象におけるＧＶＨＤのリスクを低減する方法であって、移植前、移植と同時、または移植後に、本発明による抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントの少なくとも１種類を、ＧＶＨＤのリスクを予防または低減させるのに十分な量だけ投与することによる、該方法を提供する。
【００８２】
また本発明は、化学療法剤（好ましくはＥＧＦＲ阻害剤）および／または放射線療法と組み合わせた特定の癌の治療のための、本発明による抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントの使用であって、前記組み合わせが、それによってＩＬ−６抗体または抗ＩＬ−６抗体フラグメントが化学療法や放射線療法の作用に対する癌細胞を感受性を高めるようにする投与レジメンを用いて投与される、該使用に関する。これらの方法は特に、すべての癌の治療、特にＥＧＦＲ阻害剤が治療に有効であるような癌の治療を含む。そのような癌の非限定的な例としては、進行性または転移癌を含む非進行性の癌、例えば、転移性または非転移性の肺癌、乳癌、頭頸部癌（ＨＮＳＣＣ）、膵臓癌、咽頭癌、結腸直腸癌、肛門癌、多形性膠芽腫、上皮癌、腎細胞癌、急性または慢性骨髄性白血病、およびその他の白血病などが挙げられる。
【００８３】
本発明のこの実施形態に関して、ＩＬ−６の上方調節が、ＥＧＦＲ阻害剤などの化学療法剤に対するいくつかの癌の抵抗性に寄与していること、およびこの抵抗性には、癌の部位におけるＩＬ−６の増加が伴うことが文献で報告されている。例えば、Ｙａｏら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，ＰＮＡＳ  Ａｕｇｕｓｔ３１，２０１０  ｖｏｌ．１０７  Ｎｏ．３５  １５５３５−１５５４０には、ＩＬ−６が、エルロチニブ耐性肺癌細胞において高レベルで発現しており、癌細胞の生存のために必要とされていることが記載されている。
【００８４】
また、Ｏｔｅｒｏら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７７：６５９３−７（２００６）には、ＩＬ−６は、Ｂ細胞の放射線誘発アポトーシスに対する抵抗性の獲得に重要な役割を果たす可能性があることが記載されている。さらに、Ｓｒｉｕｒａｎｐｏｎｇら．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６３：２９４８−２９５６（２００３）には、頭頸部癌におけるＳＴＡＴ３のＥＧＦＲ非依存の構成的活性化では、ＩＬ−６／ｇｐ１３０シグナリングが関与し、かつこの活性化は、これらの癌細胞の増殖と生存可能性の両方をもたらし得ることが開示されている。さらに、Ｃｈｅｎら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．７６（４）：１２１４−１２２４（２０１０）には、放射線照射およびＥＧＦＲ阻害剤に対する咽頭癌の抵抗性におけるＩＬ−６シグナリングの重要性が報告されている。
【００８５】
さらに以前の研究、Ｇａｏら．（２００７）（Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＥＧＦＲ  ｋｉｎａｓｅ  ｄｏｍａｉｎ  ｍｅｄｉａｔｅ  ＳＴＡＴ３  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｖｉａ  ＩＬ−６  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｌｕｎｇ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ”，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １１７：３８４６−３８５６９）に加えて、この著者らは、変異型ＥＧＦＲを発現するＮＳＣＬＣ細胞は、その長期的な増殖と生存についてＩＬ−６軸に依存していることを示した。
【００８６】
より具体的には、Ｙａｏら（前掲）は、ｓｉＲＮＡによるＩＬ−６のレベルの低下ならびにＩＬ−６中和抗体またはＪＡＫ１／２阻害剤によるＩＬ−６軸の阻害は、ＩＬ−６を介するシグナル伝達を著しく減少させただけでなく、細胞の生存率にも影響を及ぼすことを示し、かつＩＬ−６が、ＥＧＦＲ阻害剤のエルロチニブに対する癌細胞の感受性を改変するための十分であったことを明らかにした。彼らは、変異ＥＧＦＲを発現する複数種のＮＳＣＬＣ細胞株（ＨＣＣ８２７、ＰＣ９、およびＨＣＣ４００６）の生存に対するＩＬ−６の効果を測定することによってこれを示した。彼らは、おそらく異なる遺伝的およびエピジェネティックな異常の蓄積の結果として、これらの細胞株が、細胞活性化ＥＧＦＲ変異を有するにもかかわらず、Ｈ１６５０の場合の５μＭからＨＣＣ８２７の場合の０．００１μＭまでの範囲のＩＣ５０を有する、異なるエルロチニブ感受性を示したことを見出した。これらの相違にもかかわらず、すべての場合に、培地中にＩＬ−６が存在することが、様々な細胞株のエルロチニブに対する感受性を低下させるのに十分であった。彼らはさらなる観察により、ＩＬ−６により処置は、細胞増殖率に実質的に影響を及ぼしておらず、それらのアポトーシス応答を低下させていること、およびＩＬ−６の効果は、ｇｐ１３０−ＳＴＡＴ３軸の活性化によってではなく、エルロチニブのバイオアベイラビリティの低下によって引き起こされたことを述べている。これらの結果に基づき、彼らは、ＴＧＦ−β軸のパラクリンまたは自己分泌刺激（およびＩＬ−６産生の増加）が、間葉様形態の獲得、運動性と浸潤能力の上昇、およびエルロチニブに対する抵抗性の増加を獲得するのに十分であるような腫瘍モデルを仮定した。
【００８７】
ほかにも、ＩＬ−６レベルの上昇がＥＧＦＲ阻害剤に対する腫瘍の抵抗性に影響を及ぼすことについての報告がある。例えば、Ｎｉｓｈｉｏｋａら，ｉｎ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ（２００９）２３：２３０４−２３０には、ＡＭＬ細胞株は、ＩＬ−６などの炎症性サイトカインの分泌異常から明らかとなった、スニチニブ、イマチニブなどの受容体チロシンキナーゼに対する薬剤耐性を獲得することについて記載しており、さらにＩＬ−６でこれらの細胞を処理するとこれらの癌細胞株に対する該化合物の効果を鈍らせたことを明らかにした。加えて彼らは、ＩＬ−６受容体に対するヒト化抗体、トシリズマブまたはＡＧ４９０は、ＪＡＫ２／ＳＴＡＴ５シグナリングをブロックし、スニチニブに対する細胞の感受性を回復したことを記載している。
【００８８】
したがって、本発明による抗ＩＬ−６抗体および抗体フラグメントの強力なＩＬ−６阻害特性に基づき、本発明は別の実施形態いおいて、化学療法剤および／または放射線を使用する治療レジメンであって、化学療法剤や放射線に対する抵抗性が腫瘍部位でのＩＬ−６産生の増加をもたらし得るが、その抵抗性が本発明による抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントと併用して化学療法剤および／または放射線を投与することによってブロックまたは阻害されるようになる、該治療レジメンに関する。特にそのような化学療法剤としては、ＥＧＦＲ阻害剤が挙げられる。癌は、腫瘍部位でのＩＬ−６レベルの上昇に基づいて、おそらく長期化学療法および／または放射線療法の結果として誘発された炎症反応の結果として、これらの薬剤に対して抵抗性をもち得ることが報告されているからである。
【００８９】
本発明による抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントを用いる治療レジメンで投与され得るＥＧＦＲ阻害剤の例としては、ＩｍＣｌｏｎｅから入手可能なセツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（商標））、ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂから入手可能なエルロチニブ（タルセバ）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａから入手可能なゲフィチニブ（イレッサ）、Ｇｌａｘｏから入手可能なラパチニブ（タイケルブ）、Ａｍｇｅｎから入手可能なパニツムマブ（ベクチボックス）、Ｐｆｉｚｅｒにより市販されているスニチニブまたはスーテント（Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−５−［（Ｚ）−（５−フルオロ−２−オキソ−１Ｈ−インドール−３−イリデン）メチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシアミド）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａにより市販されているゲフィチニブすなわちＮ−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−７−メトシキ−６−（３−モルフォリン−４−イルプロポキシ）キナゾリン−４−アミン、およびＧｅｎＭａｂにより臨床開発中のザルツムマブなどが挙げられるが、これらは例示にすぎない。
【００９０】
本発明のこの実施形態によれば、本発明による抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントは、化学療法剤（例えばＥＧＦＲ阻害剤）または放射線の投与前、投与と同時に、または投与後に投与される。好ましい実施形態では、該抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントを、個人の癌（例えばＡＭＬなどの白血病、咽頭癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）などの肺癌）が、例えば癌の周辺の炎症性環境がＩＬ−６レベルの上昇をもたらした結果、薬剤に対する抵抗性を生じている個人に投与する。加えて、放射線抵抗性腫瘍があって、該腫瘍の抵抗性も同様に、炎症性サイトカインの増加、特にＩＬ−６の増加に関連する炎症性腫瘍環境をもたらす場合に、本発明の抗ＩＬ−６抗体を用いて該放射線抵抗性腫瘍に対する放射線の効果を増強させることができる。
【００９１】
好ましい実施形態では、本発明は、本発明による抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントを、特にＩＬ−６レベルの上昇を伴う炎症性応答のために、処置対象の癌が薬剤に対する抵抗性をもつようになった、または薬剤に対する感受性が下がった患者に対して投与して、ＥＧＦＲ阻害剤の効果を増強する。本発明の抗体と組み合わせて用いられえる特定のＥＧＦＲ阻害剤は、上で特定されたものである。加えてＦＤＡで承認されたＥＧＦＲ阻害剤の例および適応および投薬レジメンを、下の表に記載する。
【００９２】
これらの薬物が、本発明の抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントと組み合わせて使用されるとき、同じ化学療法の投薬レジメンを使用できるが、（癌や腫瘍部位におけるＩＬ−６レベル（上昇すると癌を薬物の効果から「保護」する）に対する抗体の阻害効果のために）ＩＬ−６抗体による処置対象の癌細胞に対する増感効果に基づく、癌細胞に対するより大きな細胞毒性がもたらされることが予想される。
【表１】
0005934652.tif 000002
【００９３】
好ましい実施形態では、処置対象の癌は肺癌であり、例えば、扁平上皮癌、大細胞癌または腺癌などの非小肺癌か、または小細胞癌（燕麦細胞癌）または結合された小細胞癌などの小細胞肺癌である。特に好ましい実施形態では、処置対象の肺癌は扁平上皮癌を含み、処置対象の患者はエルロチニブまたはスニチニブを投薬されていた患者である。これらの患者には、１ラウンド以上の化学療法の後にこれらの薬剤に対する抵抗性を発生した腫瘍をもつ個体が含まれる。
【００９４】
しかし、上述のように、これらのＥＧＦＲ阻害剤薬が有効となる可能性があるいかなる癌、例えば進行性または非進行性、非転移性および転移性の、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、頭頸部癌、食道癌、肺癌、卵巣癌、子宮頚癌、腎臓癌、前立腺癌、精巣癌、脳腫瘍、およびその他の癌も想定されている。
【００９５】
本発明のこの実施形態では、本発明の抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントは、処置対象の腫瘍を薬物および／または放射線に対する感受性をより高めるのに有効な用量、例えば約２５〜５００ｍｇの範囲の用量、より典型的には約１２０、１６０、２４０、または３２０ｍｇの用量で投与される。抗体は、化学療法剤の投与前、投与と同時に、または投与後に（例えば、化学療法処置の約１ヶ月、数週間、または１週間前か後に）投与する。好ましくは、抗体は、癌の薬物や放射線に対する感受性を高めるために、化学療法または放射線療法の前に投与する。
【００９６】
薬物抵抗性癌細胞は、非抵抗性癌細胞と比較して浸潤能力や転移能力が高く、アポトーシスが少ないことが判明しているので、本発明はさらに、癌細胞の他の部位への浸潤または転移のリスクを低減するもの、および／または転移を潜在的に反転または防止させるものとなるはずである。また、本発明は、薬剤抵抗性癌細胞のアポトーシスを増加させるものとなるはずである。
【００９７】
いくつかの場合、例えばＥＧＦＲ阻害剤が抗体のような生物製剤でもある場合、抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントを同時投与することが可能となり得る。しかし、多くの場合、抗体と、生物製剤または小分子であり得るＥＧＦＲ阻害剤とは、たとえそれらの分子の投与が同時に効果を発揮するとしても、別々の組成物として投与される。本発明の別の実施形態は、癌と診断された患者の生存率または生活の質を改善する方法に関し、患者に抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体を投与し、それによって患者の血清Ｃ反応性タンパク質（「ＣＲＰ」）レベルが安定すること、および好ましくは減少すること、および患者の血清ＣＲＰレベルにおける減少を評価するために患者をモニタリングすることを含み、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、無傷ヒトＩＬ−６ポリペプチドまたはその抗体フラグメントまたは変異体上で、Ａｂ１を含む抗ＩＬ−６抗体ならびにそのキメラ型、ヒト化、一本鎖抗体および抗体フラグメント（以前に特定されている抗体のＣＤＲを１つ以上の含むもの）またはＩＬ−６に特異的に結合する同じ線状または立体構造エピトープに特異的に結合し得る、および／または同じ線状または立体構造エピトープへの結合に対して競合し得、抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントは、好ましくは脱グリコシル化される。
【００９８】
本発明の別の実施形態は、癌と診断された患者において、筋力を改善する方法に関し、患者に抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体を投与し、それによって患者の筋力は改善されること、および筋力を評価するために患者をモニタリングすることを含み、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、無傷ヒトＩＬ−６ポリペプチドまたはそのフラグメント上で、Ａｂ１を含む抗ＩＬ−６抗体ならびにＩＬ−６に特異的に結合するそのキメラ、ヒト化、一本鎖抗体およびフラグメント（以前に特定されている抗体のＣＤＲを１つ以上含むもの）と同じ線状または立体構造エピトープに特異的に結合し得る、および／または同じ線状または立体構造エピトープへの結合に対して競合し得、抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントは、好ましくは脱グリコシル化される。そのような方法では、好ましくは、患者の筋力は、握力試験によって測定して、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体投与の約４週間以内に、少なくとも約１５％改善され、より好ましくは、患者の筋力は、握力試験によって測定して、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体投与の約４週間以内に、少なくとも約２０％改善される。
【００９９】
本発明の別の実施形態は、改善を必要とする患者において、血清中アルブミンを増加させる方法に関し、患者に抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体を投与し、それによって患者の血清中アルブミンレベルが改善されること、および血清中アルブミンレベルを評価するために患者をモニタリングすることを含み、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、無傷ヒトＩＬ−６ポリペプチドまたはその、抗体フラグメントまたはその変異体上で、Ａｂ１を含む抗ＩＬ−６抗体、ならびにＩＬ−６ｄに特異的に結合するそのキメラ、ヒト化、一本鎖抗体、およびフラグメント（以前に特定されている抗体のＣＤＲを１つ以上含むもの）と同じ線状または立体構造エピトープに特異的に結合し得る、および／または同じ線状または立体構造エピトープへの結合に対して競合し得、抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントは、好ましくは脱グリコシル化される。好ましくは、これらの方法は、患者の生存率が改善される条件下、および／または、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体投与の約６週間以内に、血清中アルブミンレベルが約５〜１０ｇ／Ｌ、好ましくは７〜８ｇ／Ｌ増加する条件下で達成される。これらの患者は、制限なしに、関節リウマチ、癌、進行癌、肝疾患、腎疾患、炎症性腸疾患、セリアック病、外傷、熱傷、低血清中アルブミンに関連する他の疾病、またはそれらの任意の組み合わせと診断される患者を含む。
【０１００】
本発明の一実施形態では、患者が、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節症、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、天疱瘡、皮膚筋炎、多発性筋炎、リウマチ性多発性筋痛、巨細胞性動脈炎、血管炎、結節性多発性動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、川崎病、中枢神経（ＣＮＳ）限局性血管炎、チャーグ−ストラウス動脈炎、顕微鏡的多発性動脈炎、顕微鏡的多発性血管炎、ヘノッホ−シェーンライン紫斑病、本態性クリオグロブリン血症性血管炎、リウマチ性血管炎、クリオグロブリン血症、再発性多発性軟骨炎、ベーチェット病、高安動脈炎、虚血性心疾患、脳梗塞、多発性硬化症、敗血症、ウイルス感染（Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ＨＩＶ、サイトメガロウイルス、エプスタイン−バーウイルス、パルボＢ１９ウイルスなど）に続発する血管炎、バージャー病、癌、進行癌、変形性関節症、全身性硬化症、クレスト症候群、ライター症候群、骨パジェット病、シェーグラン症候群、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、家族性地中海熱、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性甲状腺疾患、悪性貧血、白斑、円形脱毛症、原発性胆汁性肝硬変症、自己免疫性慢性活動性肝炎、アルコール性肝硬変、ウイルス性肝炎（Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎を含む）、他の臓器特異的自己免疫疾患、熱傷、特発性肺線維症、慢性閉塞性肺疾患、アレルギー性喘息、他のアレルギー性状態、またはそれらの任意の組み合わせと診断されている患者であり得る。
【０１０１】
本発明のある実施形態では、患者は、処置の前にＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベルの上昇を示していた患者であり得る。
【０１０２】
本発明の別の実施形態は、改善を必要とする患者の生存率または生活の質を改善する方法に関し、患者にＡｂ１などのＩＬ−６アンタゴニストを投与すること、それによって患者の血清Ｃ反応性タンパク質（「ＣＲＰ」）レベルが減少すること、および患者の血清ＣＲＰレベルの減少を評価するために患者をモニタリングすることを含む。
【０１０３】
本発明の別の実施形態は、改善を必要とする患者の生存率または生活の質を改善する方法に関し、患者にＡｂ１などのＩＬ−６アンタゴニストを投与し、それによって患者の血清中アルブミンレベルが増加すること、および患者の血清中アルブミンレベルにおける増加を評価するために患者をモニタリングすることを含む。
【０１０４】
本発明の別の実施形態は、改善を必要とする患者の生存率または生活の質を改善する方法に関し、患者にＡｂ１などのＩＬ−６アンタゴニストを投与し、それによって患者の血清ＣＲＰレベルが減少すること、および患者の血清中アルブミンレベルが増加すること、ならびに患者の血清ＣＲＰレベルにおける減少および患者の血清中アルブミンレベルにおける増加を評価するために患者をモニタリングすることを含む。
【０１０５】
本発明の別の実施形態は、凝固亢進の状態にある患者の血栓症を予防または治療する方法に関し、該方法は、前記患者に対しＩＬ−６アンタゴニスト、例えば抗ＩＬ−６抗体（例えばＡｂ１）、およびそのキメラ、ヒト化、一本鎖抗体またはそのフラグメント（以前に特定されている抗体のＣＤＲを１つ以上含むもの）であって、ＩＬ−６に特異的に結合する、好ましくは脱グリコシル化されたものを投与することであって、それによって患者の凝固プロファイルが改善されるか、正常な状態に復元されることと、凝固プロファイルを評価するべく前記患者をモニタリングすることとを含む。好ましい典型的な実施形態において上述したように、抗ＩＬ−６抗体は、Ａｂ１のＣＤＲを含むヒト化抗体であって、より好ましくは、それぞれ配列番号６５７および配列番号７０９の可変重鎖および軽鎖、およびそれぞれ配列番号５８８および配列番号５８６の定常領域を含むものか、または１以上のアミノ酸がＩＬ−６結合親和性を実質的に損なうことなく置換または欠失によって改変されているその変異体を含む。
【０１０６】
ＩＬ−６アンタゴニストが抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体であるような方法では、好ましくは、この抗体は、Ａｂ１およびそのフラグメントまたは変異体を含む抗ＩＬ−６抗体として、無傷のヒトＩＬ−６ポリペプチドまたはそのフラグメント上の同じ線状または立体構造エピトープに特異的に結合し得る、および／または同じ線状または立体構造エピトープに対する結合について競合し得る。血栓症を予防または治療する本発明の方法では、患者の凝固プロファイルは、Ｄダイマー、第ＩＩ因子、第Ｖ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、Ｆ／フィブリン分解生成物、トロンビン・アンチトロンビンＩＩＩ複合体、フィブリノゲン、プラスミノーゲン、プロトロンビン、およびヴォン・ヴィレブランド因子のうちの１以上について対象の血清中レベルの測定によって評価され、好ましくは、抗ＩＬ−６抗体を投与する前に患者の血清中Ｄダイマーレベルを測定するステップと、患者の血清中Ｄダイマーレベルが上昇している場合に抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体を投与するステップとを含む方法によって評価される。加えて、Ｃ反応性タンパク質のレベルを処置の前の患者において評価することもでき、それが上昇している場合には、これを患者における血栓症のリスクが高いことのさらなる指標として使用することができる。
【０１０７】
本発明のある実施形態は、凝固亢進に関連する疾患または状態を罹患する患者を治療する方法に関連し、該方法は、該患者に対してＡｂ１などのＩＬ−６アンタゴニストを投与し、それによって該患者の凝固プロファイルを改善または正常状態に復元することと、凝固プロファイルを評価するべく該患者をモニタリングすることとを含む。
【０１０８】
本発明の実施形態では、患者は治療前に、高血清中Ｄダイマーレベルを有し得る。
【０１０９】
本発明の実施形態では、患者は治療前に、低血清中アルブミンレベルを有し得る。
【０１１０】
本発明の実施形態では、患者のグラスゴー予後スコア（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｃｏｒｅ、ＧＰＳ）が、治療の後に改善され得る。
【０１１１】
本発明のある実施形態では、前記患者は、処置前に血清中ＣＲＰレベルが上昇している患者であり得る。
【０１１２】
本発明のある実施形態では、前記方法は少なくとも１種類のスタチンの投与をさらに含み得る。
【０１１３】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニストは、ＩＬ−６、ＩＬ−６受容体アルファ、ｇｐ１３０、ｐ３８ＭＡＰキナーゼ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＳＹＫ、またはそれらの任意の組み合わせを標的とし得る。
【０１１４】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニストは、抗体、抗体フラグメント、ペプチド、グリコアルコイド、アンチセンス核酸、リボザイム、レチノイド、アベミール、小分子，またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。
【０１１５】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニストは、抗ＩＬ−６Ｒ、抗ｇｐ１３０、抗ｐ３８ＭＡＰキナーゼ、抗ＪＡＫ１、抗ＪＡＫ２、抗ＪＡＫ３、または抗ＳＹＫ抗体もしくは抗体フラグメントを含み得る。
【０１１６】
本発明の１つの実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニストは、サリドマイド、レナリドミド、またはそれらの任意の組み合わせを含む小分子を含み得る
【０１１７】
本発明の実施形態では、アンタゴニストは、抗ＩＬ−６抗体（例えばＡｂ１）またはその抗体フラグメントまたは変異体を含み得る。
【０１１８】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、無傷ヒトＩＬ−６ポリペプチドまたはそのフラグメント上で、Ａｂ１を含む抗ＩＬ−６抗体ならびにＩＬ−６に特異的に結合するそのキメラ、ヒト化、一本鎖抗体およびフラグメント（以前に特定されている抗体のＣＤＲを１つ以上含むもの）と同じ線状または立体構造エピトープに特異的に結合し得る、および／または同じ線状または立体構造エピトープへの結合に対して競合し得、抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントは、好ましくは脱グリコシル化される。
【０１１９】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体は、無傷ヒトＩＬ−６ポリペプチドまたはそのフラグメント上で、Ａｂ１と同じ線状または立体構造エピトープに結合し得る、および／または同じ線状または立体構造エピトープへの結合に対して競合し得る。
【０１２０】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、無傷ヒトＩＬ−６ポリペプチドまたはそのフレグメント上で、Ａｂ１を含む抗ＩＬ−６抗体もしくはＩＬ−６に特異的に結合するそのキメラ、ヒト化、一本鎖抗体およびフラグメント（以前に特定されている抗体のＣＤＲを１つ以上含むもの）と同じ線状または立体構造エピトープに特異的に結合し得、抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントは、好ましくは脱グリコシル化される。
【０１２１】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、無傷ヒトＩＬ−６ポリペプチドまたはそのフラグメント上で、Ａｂ１を含む抗体と同じ線状または立体構造エピトープに特異的に結合し得る。
【０１２２】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、無傷ＩＬ−６ポリペプチドまたはそのフラグメント上で、Ａｂ１によって特異的に結合される同じ線状または立体構造エピトープに特異的に結合し得、該エピトープは、天然ヒトＩＬ−６ポリペプチドの全長に及ぶ重複線状ペプチドフラグメントを使用するエピトープマッピングによって解明される時に、それぞれ、アミノ酸残基３７〜５１、アミノ酸残基７０〜８４、アミノ酸残基１６９〜１８３、アミノ酸残基３１〜４５、および／またはアミノ酸残基５８〜７２を含むものから選択されるＩＬ−６フラグメント中に含まれる１つ以上の残基を含む。
【０１２３】
本発明のある実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、各可変軽鎖および可変重鎖領域内それぞれに、Ａｂ１およびそのキメラ、ヒト化、一本鎖抗体またはそのフラグメント（以前に特定されている抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を１つ以上含むもの）であって、ＩＬ−６に特異的に結合する、好ましくは脱グリコシル化されたものを含む抗ＩＬ−６抗体に含まれるものと同一の少なくとも２つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る。特定の実施形態では、これらのＣＤＲを含む抗体は、本明細書に記載するヒト化方法に基づく適切なヒトのフレームワークを用いて構築されたものであり得る。
【０１２４】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、各可変軽鎖および可変重鎖領域内それぞれに、Ａｂ１中に含有されるものと同一の少なくとも２つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る。
【０１２５】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体中の全てのＣＤＲは、Ａｂ１を含む抗ＩＬ−６抗体もしくはＩＬ−６に特異的に結合するそのキメラ、ヒト化、一本鎖抗体およびフラグメント（以前に特定されている抗体のＣＤＲを１つ以上含むもの）中に含有されるＣＤＲと同一であり得、抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントは、好ましくは脱グリコシル化される。
【０１２６】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体中の全てのＣＤＲは、Ａｂ１に含有されるＣＤＲの１つ以上と同一であり得る。
【０１２７】
好適な典型的な実施形態では、抗ＩＬ−６抗体は、Ａｂ１中の全てのＣＤＲを含み得る。より好ましい実施形態では、抗ＩＬ−６抗体は、配列番号６５７および配列番号７０９（ヒト化Ａｂ１）の可変重鎖配列および可変軽鎖配列またはその変異体を含む。
【０１２８】
好ましい実施形態では、ヒト化抗ＩＬ−６抗体は、それぞれ、配列番号６５７の可変重鎖および配列番号７０９の可変軽鎖配列を含有し、好ましくは、それぞれ、配列番号５８８の重鎖および配列番号５８６の軽鎖定常領域、ならびにＩＬ−６結合および／または所望のエフェクター機能に実質的に影響を及ぼさない、１つ以上のアミノ酸置換または欠失を含有するそれらの変異体をさらに含む。本実施形態はまた、可変重鎖（配列番号７００）および可変軽鎖（配列番号７２３）配列および定常領域重鎖（配列番号５８９）および定常領域軽鎖（配列番号５８７）配列をコードする１つ以上の核酸を含む、あるいはそれから成るポリヌクレオチドも想定している。本実施形態は、それぞれ、配列番号６５７の可変重鎖および配列番号７０９に含有される可変軽鎖配列およびそれぞれ、配列番号５８８の重鎖および配列番号５８６に含有される軽鎖定常領域に対して、ＩＬ−６結合および／または所望のエフェクター機能に実質的に影響を及ぼさない、１つ以上のアミノ酸置換または欠失を含む変異体をコードする核酸をさらに想定している。
【０１２９】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は脱グリコシル化であり得る。
【０１３０】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、エフェクター機能、半減期、タンパク質分解，および／またはグリコシル化を変化させるために修飾されたＦｃ領域を含有し得る。好ましくは、Ｆｃ領域は、グリコシル化を排除するために修飾される。
【０１３１】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、ヒト、ヒト化、一本鎖、またはキメラ抗体であり得る。
【０１３２】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、ウサギ（親）抗ＩＬ−６抗体に由来するヒト化抗体であり得る。
【０１３３】
本発明の実施形態では、該抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体の可変軽鎖領域および可変重鎖領域内のフレームワーク領域（ＦＲ）は、それぞれ、修飾されない、または可変軽鎖または重鎖領域中の多くとも２または３つのヒトＦＲ残基を親ウサギ抗体の対応するＦＲ残基によって置換することによって修飾されたヒトＦＲであり得、ヒトＦＲは、ライブラリに含まれる他のヒト生殖細胞系列抗体配列と比較して、対応するウサギ可変重または軽鎖領域への高度の相同性に基づいて、ヒト生殖細胞系列抗体配列のライブラリから選択された、ヒト可変重および軽鎖抗体配列から得られたものであり得る。以下に詳細に開示されるように、好ましい実施形態では、抗体は、ヒト化される親抗体に対する、高度の相同性（一定の配列同一性）に基づいて選択されるＦＲを含む
【０１３４】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、多くとも約４週間毎に１回、約８週間毎に１回、約１２週間毎に１回、約１６週間毎に１回、約２０週間毎に１回、または約２４週間毎に１回の頻度で、患者に投与され得る。
【０１３５】
本発明のある実施形態では、患者の凝固プロファイルは、２回の連続抗ＩＬ−６抗体投与の間の全期間にわたって改善されたままであり得る。
【０１３６】
本発明の実施形態では、患者の血清ＣＲＰレベルは、２回の連続抗ＩＬ−６抗体投与の間の全期間にわたって、減少されたままであり得、および／または血清中アルブミンレベルは、上昇されたままであり得る。
【０１３７】
本発明のある実施形態では、患者の悪液質、衰弱、疲労、および／または発熱は、２回の連続抗ＩＬ−６抗体投与の間の全期間にわたって改善されたままであり得る。
【０１３８】
本発明の実施形態では、患者は、棘細胞腫、腺房細胞癌、聴神経腫、末端性黒子性黒色腫、先端汗腺腫、急性好酸球性白血病、急性リンパ性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性単球性白血病、成熟急性骨髄芽球性白血病、急性骨髄樹状細胞白血病、急性骨髄性白血病、急性前骨髄球性白血病、アダマンチノーマ、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺様歯原性腫瘍、副腎皮質癌、成人Ｔ細胞白血病、侵攻性ＮＫ細胞白血病、ＡＩＤＳ関連癌、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、胞状軟部肉腫、エナメル上皮線維腫、肛門癌、未分化大細胞リンパ腫、未分化甲状腺癌、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管筋脂肪腫、血管肉腫、虫垂癌、星状細胞腫、非定型奇形腫様横紋筋様腫瘍、基底細胞癌、基底細胞型癌腫、Ｂ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、ベリニ管癌、胆道癌、膀胱癌、芽細胞腫、骨肉腫、骨腫瘍、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、乳癌、ブレンナー腫瘍、気管支腫瘍、細気管支肺胞癌腫、褐色腫、バーキットリンパ腫、未知の原発部位の癌、カルチノイド腫瘍、癌腫、上皮内癌、陰茎癌、未知の原発部位の癌腫、癌肉腫、キャッスルマン病、中枢神経系胚芽腫、小脳星細胞腫、大脳星細胞腫、子宮頸癌、胆管癌、軟骨腫、軟骨肉腫、脊索腫、絨毛腫、脈絡叢乳頭腫、慢性リンパ球性白血病、慢性単球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、慢性好中球性白血病、透明細胞腫瘍、結腸癌、結腸直腸癌、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、デゴス病、隆起性皮膚線維肉腫、皮様嚢腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、胎生期癌、内胚葉洞腫瘍、子宮内膜癌、子宮内膜子宮癌、子宮内膜性腫瘍、腸疾患関連Ｔ細胞リンパ腫、上衣芽細胞腫、上衣細胞腫、類上皮肉腫、赤白血病、食道癌、鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング腫瘍ファミリー、ユーイング肉腫ファミリー、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、乳房外ページェット病、卵管癌、封入奇形、線維腫、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性甲状腺癌、胆嚢癌、胆嚢癌、神経節膠腫、神経節細胞腫、胃癌、胃リンパ腫、消化管癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、消化管間質腫瘍、胚細胞腫瘍、胚細胞腫、妊娠性絨毛癌、妊娠性絨毛腫瘍、骨巨細胞腫、多形性膠芽腫、神経膠腫、大脳膠腫症、グロムス腫瘍、グルカゴン産生腫瘍、性腺芽細胞腫、顆粒膜細胞腫、ヘアリー細胞白血病、ヘアリー細胞白血病、頭頸部癌、頭頸部癌、心臓癌、血管芽細胞腫、血管周囲細胞腫、血管肉腫、血液学的悪性腫瘍、肝細胞癌、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、遺伝性乳−卵巣癌症候群、ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、視床下部膠腫、炎症性乳癌、眼内黒色腫、島細胞癌、島細胞腫、若年性骨髄単球性白血病、カポジ肉腫、カポジ肉腫、腎臓癌、クラッキン腫瘍、クルッケンベルグ腫瘍、喉頭癌、喉頭癌、悪性黒子型黒色腫、白血病、白血病、口唇癌および口腔癌、脂肪肉腫、肺癌、黄体腫、リンパ管腫、リンパ管肉腫、リンパ上皮腫、リンパ性白血病、リンパ腫、マクログロブリン血症、悪性線維性組織球腫、悪性線維性組織球腫、骨悪性線維性組織球腫、悪性神経膠腫、悪性中皮腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、悪性横紋筋様腫瘍、悪性トリトン腫瘍、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、マスト細胞白血病、縦隔胚細胞腫瘍、縦隔腫瘍、甲状腺髄様癌、髄芽細胞腫、髄芽細胞腫、髄様上皮腫、黒色腫、黒色腫、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫、中皮腫、原発不明転移性扁平上皮性頸部癌、転移性尿路上皮癌、ミュラー管混合腫瘍、単球性白血病、口腔癌、粘液性腫瘍、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫、多発性骨髄腫、菌状息肉腫、菌状息肉腫、骨髄異形成疾患、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病、骨髄性肉腫、骨髄増殖性疾患、粘液腫、鼻腔癌、上咽頭癌、鼻咽腔癌、新生物、神経線維腫症、神経芽細胞腫、神経芽細胞腫、神経繊維腫、神経腫、結節型黒色腫、非ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非黒色腫皮膚癌、非小細胞肺癌、眼癌、乏突起星細胞腫、乏突起膠腫、好酸性顆粒細胞腫、視神経鞘髄膜腫，口腔癌，口腔癌，口腔咽頭癌、骨肉腫、骨肉腫、卵巣癌、卵巣癌、上皮性卵巣癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、乳房パジェット病、パンコースト腫瘍、膵臓癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、乳頭腫、傍神経節腫、副鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、血管周囲類上皮細胞腫瘍、咽頭癌、褐色細胞腫、中間分化型松果体実質腫瘍、松果体芽細胞腫、下垂体細胞腫、下垂体腺腫、下垂体部腫瘍、形質細胞腫、胸膜肺芽腫、多胚芽腫、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫、中枢神経系原発リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、原発性肝細胞癌、原発性肝臓癌、原発性腹膜癌、原始神経外胚葉腫瘍、前立腺癌、腹膜偽粘液腫、直腸癌、腎細胞癌、第１５染色体上のＮＵＴ遺伝子に関連する気道癌、網膜芽細胞腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、リヒタートランスフォーメーション、仙尾部奇形腫、唾液腺癌、肉腫、シュワン細胞腫、脂腺癌、二次腫瘍、精上皮腫、漿液腫、セルトリライディッヒ細胞腫瘍、性索間質腫瘍、セザリー症候群、印環細胞癌、皮膚癌、小青色円形細胞腫瘍、小細胞癌腫、小細胞肺癌、小細胞リンパ腫、小腸癌、軟部組織肉腫、ソマトスタチン産生腫瘍、煤煙性疣贅、脊髄腫瘍、脊髄腫瘍、脾性辺縁帯リンパ腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、表在拡大型黒色腫、テント上原始神経外胚葉腫瘍、表層上皮性間質性腫瘍、滑膜肉腫、Ｔ細胞急性リンパ性白血病、Ｔ細胞大型顆粒リンパ球性白血病、Ｔ細胞白血病、Ｔ細胞リンパ腫、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、奇形腫、末端リンパ腺癌、睾丸癌、莢膜細胞腫、咽喉癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺癌、腎盂および尿管の移行上皮癌、移行上皮癌、尿膜管癌、尿道癌、泌尿生殖器腫瘍、子宮肉腫、ブドウ膜黒色腫、膣癌、ヴァーナーモリソン症候群、疣状癌、視経路神経膠腫、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ワルチン腫瘍、ウィルムス腫瘍、またはそれらの任意の組み合わせから選択される癌と診断されている可能性がある。
【０１３９】
本発明の実施形態では、患者は、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、胆管癌、中皮腫、キャッスルマン疾病、腎細胞癌、またはそれらの任意の組み合わせから選択される癌と診断されている可能性がある。
【０１４０】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、配列番号３、１８、１９、６５２、６５６、６５７、６５８、６６１、６６４、６６５、７０４、もしくは７０８を含む重鎖ポリペプチド配列を含み得、配列番号２、２０、６４７、６５１、６６０、６６６、６９９、７０２、７０６、もしくは７０９またはその変異体を含むＶＬポリペプチド配列をさらに含み得、該ＶＨまたはＶＬポリペプチド中の１つ以上のフレームワーク残基（ＦＲ残基）は、別のアミノ酸残基と置換され、ヒトＩＬ−６に特異的に結合する抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体をもたらしているか、或いはそのなかのＣＤＲが前記配列に相同なヒトフレームワークに組み入れられているポリペプチドを含み得る。好ましくは、可変重鎖および軽配列は、配列番号６５７および配列番号７０９（ヒト化Ａｂ１）中のものを含む。
【０１４１】
本発明の実施形態では、１つ以上の該ＦＲ残基は、該ＶＨまたはＶＬポリペプチドに含有される相補性決定領域（ＣＤＲｓ）が得られる親ウサギ抗ＩＬ−６抗体において対応する部位で存在するアミノ酸と置換、または保存アミノ酸置換によって置換される。
【０１４２】
本発明の実施形態では、該抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体はヒト化され得る。
【０１４３】
本発明の実施形態では、該抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体はキメラ型であり得る。
【０１４４】
本発明の実施形態では、該抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、例えば、配列番号７０４の可変重鎖および７０２に含有される軽鎖定常領域を含むＦｃ領域等のヒトＦｃをさらに含み得る。
【０１４５】
本発明の実施形態では、前記ヒトＦｃは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５、ＩｇＧ６、ＩｇＧ７、ＩｇＧ８、ＩｇＧ９、ＩｇＧ１０、ＩｇＧ１１、ＩｇＧ１２、ＩｇＧ１３、ＩｇＧ１４、ＩｇＧ１５、ＩｇＧ１６、ＩｇＧ１７、ＩｇＧ１８、またはＩｇＧ１９から得られ得る。
【０１４６】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、配列番号３、１８、１９、６５２、６５６、６５７、６５８、６６１、６６４、６６５、７０４、７０８、２、２０、６４７、６５１、６６０、６６６、６９９、７０２、７０６、および７０９のポリペプチド配列の１つ以上に対して、少なくとも９０％の配列相同性を有するポリペプチドを含み得る。
【０１４７】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、少なくとも約２２日、少なくとも約２５日、または少なくとも約３０日の排出半減期を有し得る。
【０１４８】
本発明の実施形態では、Ａｂ１などのＩＬ−６アンタゴニストは、化学療法薬剤と同時投与され得る。本発明のある実施形態では、前記化学療法薬剤としては、以下に限定されないが、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、白金、タキソール、イリノテカン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、ロイコボリン、ステロイド、シクロホスファミド、メルファラン、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよび酒石酸ビノレルビン）、マスチン、チロシンキナーゼ阻害剤、放射線治療、性ホルモンアンタゴニスト、選択的アンドロゲン受容体モジュレーター、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、ＰＤＧＦアンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１アンタゴニスト、インターロイキン（例えばＩＬ−１２またはＩＬ−２）、ＩＬ−１２Ｒアンタゴニスト、毒素結合モノクローナル抗体、腫瘍抗原特異的モノクローナル抗体、Ｅｒｂｉｔｕｘ（商標）、Ａｖａｓｔｉｎ（商標）、ペルツズマブ抗ＣＤ２０抗体、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、オクレリズマブ、オファツムマブ、ＤＸＬ６２５、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、またはそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【０１４９】
本発明のある実施形態では、別の治療用化合物はスタチンであり得る。
【０１５０】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、検出可能ラベルまたは治療薬に、直接的にまたは間接的に付着され得る。
【０１５１】
本発明の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントは、Ａｂ１もしくはＡｂ１の全てのまたは大部分のＣＤＲを含むそのヒト化型、キメラ型、一本鎖型、またはそのフラグメントであり得る。
【０１５２】
本発明のある実施形態では、前記疾病または状態は、急性静脈血栓症、肺塞栓症、妊娠中の血栓症、出血性皮膚壊死、急性または慢性播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、手術からの血栓形成、長期安静、長期間の固定化、静脈血栓症、劇症髄膜炎菌血症、急性血栓性脳卒中、急性冠閉塞、急性末梢動脈閉塞症、巨大肺塞栓症、腋窩静脈血栓症、広範な腸骨大腿静脈血栓症、閉塞動脈カニューレ、閉塞静脈カニューレ、心筋症、肝静脈閉塞症、低血圧、心拍出量の減少、血管抵抗の低下、肺高血圧、肺コンプライアンスの低下、白血球減少、血小板減少症、ヘパリン起因性血小板減少症（ＨＩＴ）、血栓症を伴うヘパリン起因性血小板減少症（ＨＩＴＴ）、心房細動、人工心臓弁の移植、血栓症への遺伝的感受性、第Ｖ因子ライデン変異、プロトロンビン遺伝子突然変異、メチレンテトラヒドロ葉酸還元酵素（ＭＴＨＦＲ）多型、血小板受容体多型、外傷、骨折、熱傷、またはそれらの任意の組み合わせから選択されたものであり得る。
【０１５３】
本発明のある実施形態では、前記疾病または状態は、癌、関節リウマチ、ＡＩＤＳ、心臓病、脱水症、栄養失調、鉛暴露、マラリア、呼吸器疾患、老齢、甲状腺機能低下症、結核、下垂体機能低下症、神経衰弱症、高ナトリウム血症、低ナトリウム血症、腎疾患、脾臓疾患（ｓｐｌｅｎｉｃａ）、強直性脊椎炎、成長障害（発達の遅れ）、またはそれらの任意の組み合わせから選択されたものであり得る。
【０１５４】
本発明のある実施形態では、前記方法が、悪液質関連因子、虚弱関連因子、疲労関連因子、および／または発熱関連因子のアンタゴニストの投与を含み得る。悪液質関連因子、虚弱関連因子、疲労関連因子、および／または発熱関連因子は、腫瘍壊死因子α、インターロイキンγ、インターロイキン１α、インターロイキン１β、インターロイキン６、タンパク質分解誘導因子、白血病抑制因子、またはそれらの任意の組み合わせから選択されたものであり得る。
【０１５５】
本発明のある実施形態では、前記方法が、カナビス、ドロナビノール（マリノール（商標））、ナビロン（セサメット）、カンナビジオール、カンナビクロメン、テトラヒドロカンナビノール、サティベックス、酢酸メゲストロール、またはそれらの任意の組み合わせから選択された抗悪液質剤の投与を含み得る。
【０１５６】
本発明のある実施形態では、前記方法が、５−ＨＴ３受容体アンタゴニスト、アジュワイン、アリザプリド、抗コリン薬、抗ヒスタミン薬、アプレピタント、ベンゾジアゼピン、カンナビクロメン、カンナビジオール、カンナビノイド、カナビス、カソピタント、クロルプロマジン、シクリジン、デキサメタゾン、デキサメタゾン、ジメンヒドリナート（グラボル（商標））、ジフェンヒドラミン、ドラセトロン、ドンペリドン、ドーパミンアンタゴニスト、ドキシラミン、ドロナビノール（マリノール（商標））、ドロペリドール、エメトロール、ショウガ、グラニセトロン、ハロペリドール、ヒドロキシジン、ヒヨスチン、ロラゼパム、メクリジン、メトクロプラミド、ミダゾラム、ムシモール、ナビロン（セサメット）、ＮＫ１受容体アンタゴニスト、オンダンセトロン、パロノセトロン、ペパーミント、フェネルガン、プロクロルペラジン、プロマコット（Ｐｒｏｍａｃｏｔ）、プロメタジン、ペンタジン、プロポフォール、サティベックス、テトラヒドロカンナビノール、トリメトベンズアミド、トロピセトロン、ナンドロロン、スチルベストロール、サリドマイド、レナリドマイド、グレリンアゴニスト、ミオスタチンアンタゴニスト、抗ミオスタチン抗体、選択的アンドロゲン受容体モジュレーター、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、アンジオテンシンＡＩＩアンタゴニスト、β２アドレナリン受容体アゴニスト、β３アドレナリン受容体アゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせから選択された抗悪心薬または制吐薬の投与を含み得る。
【０１５７】
本発明のある実施形態では、前記方法が、５−ＨＴ３受容体アンタゴニスト、アジュワイン、アリザプリド、抗コリン薬、抗ヒスタミン薬、アプレピタント、ベンゾジアゼピン、カンナビクロメン、カンナビジオール、カンナビノイド、カナビス、カソピタント、クロルプロマジン、シクリジン、デキサメタゾン、デキサメタゾン、ジメンヒドリナート（グラボル（商標））、ジフェンヒドラミン、ドラセトロン、ドンペリドン、ドーパミンアンタゴニスト、ドキシラミン、ドロナビノール（マリノール（商標））、ドロペリドール、エメトロール、ショウガ、グラニセトロン、ハロペリドール、ヒドロキシジン、ヒヨスチン、ロラゼパム、メクリジン、メトクロプラミド、ミダゾラム、ムシモール、ナビロン（セサメット）、ＮＫ１受容体アンタゴニスト、オンダンセトロン、パロノセトロン、ペパーミント、フェネルガン、プロクロルペラジン、プロマコット（Ｐｒｏｍａｃｏｔ）、プロメタジン、ペンタジン、プロポフォール、サティベックス、テトラヒドロカンナビノール、トリメトベンズアミド、トロピセトロン、ナンドロロン、スチルベストロール、サリドマイド、レナリドマイド、グレリンアゴニスト、ミオスタチンアンタゴニスト、抗ミオスタチン抗体、選択的アンドロゲン受容体モジュレーター、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、アンジオテンシンＡＩＩアンタゴニスト、β２アドレナリン受容体アゴニスト、β３アドレナリン受容体アゴニスト、またはそれらの任意の組み合わせから選択された抗悪心薬または制吐薬の投与を含み得る。
【０１５８】
本発明のある実施形態では、患者の発熱が、患者の体温の測定によって評価され得る。
【０１５９】
本発明のある実施形態では、前記方法が、前記抗ＩＬ−６抗体の投与前に患者の体温を測定することと、患者の体温が約３８℃超である場合に、患者に抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体を投与することとを含み得る。
【０１６０】
本発明のある実施形態では、前記方法が、前記抗ＩＬ−６抗体の投与前の２４時間以内に患者の体温を測定することと、患者の体温測定が発熱の存在を示している場合に、患者に抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体を投与することとを含み得る。
【０１６１】
本発明のある実施形態では、前記方法が、前記抗ＩＬ−６抗体の投与前に患者の体重を測定するステップと、患者の体重が約３０日間以内に約５％以上減少していた場合、または患者の体重が約１７ｋｇ／ｍ２未満（男性患者）または約１４ｋｇ／ｍ２未満（女性患者）の場合に、患者に抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体を投与するステップとを含み得る。
【０１６２】
本発明のある実施形態では、前記方法が、前記抗ＩＬ−６抗体の投与前に患者の筋力を測定するステップと、患者の筋力が約３０日間以内に約２０％超減少していた場合に、患者に抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体を投与するステップとを含み得る。
【０１６３】
本発明のある実施形態では、前記方法が、悪液質、衰弱、疲労、および／または発熱の長期改善をもたらし得る。
【０１６４】
本発明のある実施形態では、前記患者の体重が、前記抗ＩＬ−６抗体の投与後の約４週間以内に約１ｋｇ増加され得る。
【０１６５】
本発明のある実施形態では、前記患者の悪液質は、前記抗ＩＬ−６抗体の投与後の約４週間以内に測定可能に改善され得る。
【０１６６】
本発明のある実施形態では、前記患者の悪液質は、前記患者の総体重、除脂肪体重、除脂肪ＢＭＩ、および／または四肢の除脂肪体重の測定によって評価され得る。
【０１６７】
本発明のある実施形態では、前記患者の体重の測定値は、前記患者の腫瘍および／または血管外液集合の推定重量を差し引いた（減算した）ものであり得る。
【０１６８】
本発明のある実施形態では、前記患者の悪液質は、前記抗ＩＬ−６抗体の投与後の約８週目に測定可能に改善されたままであり得る。
【０１６９】
本発明のある実施形態では、前記患者の衰弱は、前記抗ＩＬ−６抗体の投与後の約４週間以内に測定可能に改善され得る。
【０１７０】
本発明のある実施形態では、前記患者の衰弱は、握力試験によって測定され得る。
【０１７１】
本発明のある実施形態では、前記患者の握力は、約１５％または約２０％改善され得る。
【０１７２】
本発明のある実施形態では、前記患者の衰弱は、前記抗ＩＬ−６抗体の投与後の約８週目に測定可能に改善されたままであり得る。
【０１７３】
本発明のある実施形態では、前記患者の疲労は、前記抗ＩＬ−６抗体の投与後の約１週以内に測定可能に改善され得る。
【０１７４】
本発明のある実施形態では、前記患者の疲労は、ＦＡＣＩＴ−Ｆ  ＦＳ試験によって測定され得る。
【０１７５】
本発明のある実施形態では、前記患者のＦＡＣＩＴ−Ｆ  ＦＳスコアは、少なくとも約１０ポイント改善され得る。
【０１７６】
本発明のある実施形態では、前記患者の疲労は、前記抗ＩＬ−６抗体の投与後の約８週目に測定可能に改善されたままであり得る。
【０１７７】
本発明のある実施形態では、前記患者の発熱は、前記抗ＩＬ−６抗体の投与後の約１週以内に測定可能に改善され得る。
【０１７８】
本発明のある実施形態では、前記患者の発熱は、前記抗ＩＬ−６抗体の投与後の約８週目に測定可能に改善されたままであり得る。
【０１７９】
本発明のある実施形態では、前記患者の生活に質が改善され得る。
【０１８０】
本発明のある実施形態は、１種以上の抗凝固剤またはスタチンの投与を含み得る。
【０１８１】
本発明のある実施形態では、前記１種以上の抗凝固薬は、アブシキシマブ（レオプロ（商標））、アセノクマロール、アンチトロンビンＩＩＩ、アルガトロバン、アスピリン、ビバリルジン（Ａｎｇｉｏｍａｘ（商標））、クロピドグレル、ダビガトラン、ダビガトランエテキシレート（プラダキサ（商標）／  Ｐｒａｄａｘ（商標））、デシルジン（Ｒｅｖａｓｃ（商標）／Ｉｐｒｉｖａｓｋ（商標））、ジピリダモール、エプチフィバチド（Ｉｎｔｅｇｒｉｌｉｎ（商標））、フォンダパリヌクス、ヘパリン、ヒルジン、イドラパリナックス、レピルジン（レフルダン（商標））、低分子量ヘパリン、メラガトラン、フェニンジオン、フェンプロクモン、チクロピジン、チロフィバン（Ａｇｇｒａｓｔａｔ（商標））、ワルファリン、キシメラガトラン、キシメラガトラン（Ｅｘａｎｔａ（商標）／Ｅｘａｒｔａ（商標））、またはそれらの任意の組み合わせから選択されたものであり得る。
【０１８２】
本発明のある実施形態では、前記１種以上のスタチンは、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、またはそれらの任意の組み合わせから選択されたものであり得る。
【０１８３】
本発明のある実施形態では、前記患者の凝固プロファイルは、Ｄダイマー、第ＩＩ因子、第Ｖ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、Ｆ／フィブリン分解生成物、トロンビン・アンチトロンビンＩＩＩ複合体、フィブリノゲン、プラスミノーゲン、プロトロンビン、およびヴォン・ヴィレブランド因子のうちの１以上についての患者の血清中レベルの測定によって評価され得る。
【０１８４】
本発明のある実施形態では、前記患者の凝固プロファイルは、凝固能力の機能的測定によって評価され得る。
【０１８５】
本発明のある実施形態では、前記凝固能力の機能的測定は、プロトロンビン時間（ＰＴ）、プロトロンビン比（ＰＲ）、国際標準比（ＩＮＲ）、またはそれらの任意の組み合わせから選択されたものであり得る。
【０１８６】
本発明のある実施形態では、前記方法が、ＩＬ−６アンタゴニストの投与の前に、前記患者の国際標準比（ＩＮＲ）を測定するステップと、前記患者のＩＮＲが約０．９未満である場合に、前記患者にＩＬ−６アンタゴニストを投与するステップとをさらに含み得る。
【０１８７】
本発明のある実施形態では、本発明は、ＩＬ−６アンタゴニストの投与の前に、前記患者の国際標準比（ＩＮＲ）を測定するステップと、前記患者のＩＮＲが約０．５未満である場合に、前記患者にＩＬ−６アンタゴニストを投与するステップとをさらに含み得る。
【０１８８】
本発明のある実施形態では、前記患者のＩＮＲが、ＩＬ−６アンタゴニストの投与後の４週間以内に約０．９超に上げられ得る。
【０１８９】
本発明のある実施形態では、前記方法は、ＩＬ−６アンタゴニストの投与の前に、前記患者の血清中Ｄダイマーレベルを測定することと、前記患者の血清中Ｄダイマーレベルが標準基準範囲を超えている場合に、前記患者にＩＬ−６アンタゴニストを投与することとをさらに含み得る。
【０１９０】
本発明のある実施形態では、前記患者の血清中Ｄダイマーレベルは、ＩＬ−６アンタゴニストの投与後の４週間以内に標準基準範囲の上限未満まで下げられ得る。
【０１９１】
本発明のある実施形態では、前記方法は、前記患者の凝固プロファイルの長期改善をもたらし得る。
【０１９２】
本発明のある実施形態では、前記患者の凝固プロファイルが、ＩＬ−６アンタゴニストの投与後の約２週間以内に測定可能に改善され得る。
【０１９３】
本発明のある実施形態では、前記患者の凝固プロファイルが、ＩＬ−６アンタゴニストの投与後の約１２週目に測定可能に改善されたままであり得る。
【０１９４】
本発明のある実施形態では、前記患者の生存率が改善され得る。
【０１９５】
本発明のある実施形態では、前記ＩＬ−６アンタゴニストは、アンチセンス核酸であり得る。
【０１９６】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニストは、例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−６受容体アルファ、ｇｐ１３０、ｐ３８ＭＡＰキナーゼ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、またはＳＹＫをコードする配列の少なくとも約１０ヌクレオチドを含む、アンチセンス核酸であり得る。
【０１９７】
本発明の実施形態では、アンチセンス核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ペプチド核酸、ロックド核酸、モルフォリノ（ホスホロジアミダイトモルフォリノオリゴ）、グリセロール核酸、トレオース核酸、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。
【０１９８】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニストは、Ａｃｔｅｍｒａ（商標）（トシリズマブ）、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）、Ｚｅｎａｐａｘ（商標）（ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。
【０１９９】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニストは、少なくとも４０アミノ酸長であるフラグメントまたは全長ポリペプチド等の、ＩＬ−６のフラグメント、ＩＬ−６受容体アルファ、ｇｐ１３０、ｐ３８ＭＡＰキナーゼ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＳＹＫ、またはそれらの任意の組み合わせを含む配列を有するポリペプチドを含み得る。
【０２００】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニストは、可溶性ＩＬ−６、ＩＬ−６受容体アルファ、ｇｐ１３０、ｐ３８ＭＡＰキナーゼ、ＪＡＫ１、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３、ＳＹＫ、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。
【０２０１】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニストは、半減期増加部分と結合され得る。
【０２０２】
本発明の実施形態では、方法は、抗ＩＬ−６抗体の投与前に、血清ＣＲＰレベルを測定すること、および患者の血清ＣＲＰレベルが少なくとも約５ｍｇ／Ｌである場合に、抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体を投与することを含み得る。
【０２０３】
本発明の実施形態では、患者の血清ＣＲＰレベルは、ＩＬ−６アンタゴニストの投与の１週以内に、約５ｍｇ／Ｌ未満に減少し得る。
【０２０４】
本発明の実施形態では、患者の血清ＣＲＰレベルは、ＩＬ−６アンタゴニストの投与の１週以内に、１ｍｇ／Ｌを下回って減少し得る。
【０２０５】
本発明の実施形態では、治療は、患者の血清ＣＲＰレベルの長期減少をもたらし得る。
【０２０６】
本発明の実施形態では、患者の血清ＣＲＰレベルは、ＩＬ−６アンタゴニスト投与の約１週以内に、１０ｍｇ／Ｌを下回って減少し得る。
【０２０７】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニスト投与の１４日後、前記患者の血清ＣＲＰレベルは、１０ｍｇ／Ｌを下回ったままであり得る。
【０２０８】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニスト投与の２１日後、前記患者の血清ＣＲＰレベルは、１０ｍｇ／Ｌを下回ったままであり得る。
【０２０９】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニスト投与の２８日後、前記患者の血清ＣＲＰレベルは、１０ｍｇ／Ｌを下回ったままであり得る。
【０２１０】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニスト投与の３５日後、前記患者の血清ＣＲＰレベルは、１０ｍｇ／Ｌを下回ったままであり得る。
【０２１１】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニスト投与の４２日後、前記患者の血清ＣＲＰレベルは、１０ｍｇ／Ｌを下回ったままであり得る。
【０２１２】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニスト投与の４９日後、前記患者の血清ＣＲＰレベルは、１０ｍｇ／Ｌを下回ったままであり得る。
【０２１３】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニスト投与の５６日後、前記患者の血清ＣＲＰレベルは、１０ｍｇ／Ｌを下回ったままであり得る。
【０２１４】
本発明の実施形態では、患者の生存率が改善される。
【０２１５】
本発明の実施形態では、方法は、ＩＬ−６アンタゴニストの投与前に、患者の血清中アルブミンレベルを測定すること、および患者の血清中アルブミンレベルが約３５ｇ／Ｌ未満である場合に、Ａｂ１などの前記ＩＬ−６アンタゴニストを投与することをさらに含み得る。
【０２１６】
本発明の実施形態では、患者の血清中アルブミンレベルは、前記ＩＬ−６アンタゴニストの投与の約５週間以内に、約３５ｇ／Ｌを超えて増加され得る。
【０２１７】
本発明の実施形態では、治療は、前記患者の血清中アルブミンレベルの長期増加をもたらし得る。
【０２１８】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニスト投与の４２日後、前記患者の血清中アルブミンレベルは、３５ｇ／Ｌを超えたままであり得る。
【０２１９】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニスト投与の４９日後、前記患者の血清中アルブミンレベルは、３５ｇ／Ｌを超えたままであり得る。
【０２２０】
本発明の実施形態では、ＩＬ−６アンタゴニスト投与の５６日後、前記患者の血清中アルブミンレベルは、３５ｇ／Ｌを超えたままであり得る。
【０２２１】
本発明の実施形態では、患者の血清中アルブミンレベルは、前記ＩＬ−６アンタゴニスト投与の約５週間以内に、約５ｇ／Ｌ増加され得る。
【０２２２】
本発明の実施形態では、患者は、関節リウマチ、癌、進行癌、肝疾患、腎疾患、炎症性腸疾患、セリアック病、外傷、熱傷、他の疾病に関連する低血清中アルブミン、またはそれらの任意の組み合わせと診断されている可能性がある。
【０２２３】
本発明の実施形態では、方法は、制限なしに、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シムバスタチン、またはそれらの任意の組み合わせを含む、１つ以上のスタチンの投与をさらに含み得る。
【０２２４】
本発明の別の実施形態は、Ａｂ１などのＩＬ−６アンタゴニストと、抗凝固薬とを含む組成物に関する。本発明のある実施形態では、前記１種以上の抗凝固薬は、アブシキシマブ（レオプロ（商標））、アセノクマロール、アンチトロンビンＩＩＩ、アルガトロバン、アスピリン、ビバリルジン（Ａｎｇｉｏｍａｘ（商標））、クロピドグレル、ダビガトラン、ダビガトランエテキシレート（プラダキサ（商標）／Ｐｒａｄａｘ（商標））、デシルジン（Ｒｅｖａｓｃ（商標）／Ｉｐｒｉｖａｓｋ（商標））、ジピリダモール、エプチフィバチド（Ｉｎｔｅｇｒｉｌｉｎ（商標））、フォンダパリヌクス、ヘパリン、ヒルジン、イドラパリナックス、レピルジン（レフルダン（商標））、低分子量ヘパリン、メラガトラン、フェニンジオン、フェンプロクモン、チクロピジン、チロフィバン（Ａｇｇｒａｓｔａｔ（商標））、ワルファリン、キシメラガトラン、キシメラガトラン（Ｅｘａｎｔａ（商標）／Ｅｘａｒｔａ（商標））、またはそれらの任意の組み合わせから選択されたものであり得る。
【０２２５】
本発明の別の実施形態は、Ａｂ１などのＩＬ−６アンタゴニストと、化学療法薬剤とを含む組成物に関する。  本発明のある実施形態では、前記化学療法薬剤は、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、白金、タキソール、イリノテカン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、ロイコボリン、ステロイド、シクロホスファミド、メルファラン、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよび酒石酸ビノレルビン）、マスチン、チロシンキナーゼ阻害剤、放射線治療、性ホルモンアンタゴニスト、選択的アンドロゲン受容体モジュレーター、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、ＰＤＧＦアンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１アンタゴニスト、インターロイキン（例えばＩＬ−１２またはＩＬ−２）、ＩＬ−１２Ｒアンタゴニスト、毒素結合モノクローナル抗体、腫瘍抗原特異的モノクローナル抗体、Ｅｒｂｉｔｕｘ（商標）、Ａｖａｓｔｉｎ（商標）、ペルツズマブ抗ＣＤ２０抗体、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、オクレリズマブ、オファツムマブ、ＤＸＬ６２５、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、またはそれらの任意の組み合わせから選択されたものであり得る。
【図面の簡単な説明】
【０２２６】
【図１】種々の特異エピトープは、抗体選択プロトコルによって調製される抗ＩＬ−６抗体の集合によって認識されたことを示す。エピトープ可変性は、抗体−ＩＬ−６結合競合研究（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ）によって確認された。
【図２】ウサギ抗体可変軽鎖および可変重鎖配列と相同ヒト配列およびヒト化配列との間の、可変軽鎖および可変重鎖配列のアライメントを示す。フレームワーク領域はＦＲ１〜ＦＲ４として特定される。相補性決定領域は、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３として特定される。アミノ酸残基は、示されるように番号を付けられる。最初のウサギ配列は、可変軽鎖および可変重鎖配列に対して、それぞれ、ＲｂｔＶＬおよびＲｂｔＶＨと呼ばれる。フレームワーク１からフレームワーク３の最後までに及ぶ、最も類似するヒト生殖細胞系列抗体配列の３つが、ウサギ配列の下に整列比較される。ウサギ配列と最も類似すると見なされるヒト配列が、最初に示される。この例では、それらの最も類似の配列は、軽鎖ではＬ１２Ａおよび重鎖では３−６４−０４である。ヒトＣＤＲ３配列は示されない。最も近いヒトフレームワーク４配列が、ウサギフレームワーク４配列の下に整列比較される。縦線は、ウサギ残基が、同位置において、ヒト残基のうちの１つ以上と同一である残基を示す。太字の残基は、その位置におけるヒト残基が、同位置において、ウサギ残基と同一であることを示す。最後のヒト化配列は、可変軽鎖および可変重鎖配列に対して、それぞれ、ＶＬｈおよびＶＨｈと呼ばれる。下線を付した残基は、残基が、その位置においてウサギ残基と同一であるが、３つの整列比較されたヒト配列中でのその位置においてヒト残基とは異なることを示す。
【図３】典型的なＩＬ−６プロトコルについての、産生されたＩｇＧと抗原特異性との間の高い相関関係を示す。１１ウェルのうちの９ウェルは、抗原認識との特異的ＩｇＧ相関関係を示した。
【図４】１００μｇ／ｋｇ用量のヒトＩＬ−６の皮下注射の１時間後、異なる投与量で静脈内投与された抗体Ａｂ１に対する、α−２−マクログロブリン（Ａ２Ｍ）用量反応曲線を提供する。
【図５】対照群に対する抗体Ａｂ１進行群の生存データを提供する。
【図６】対照群に対する抗体Ａｂ１退行群の付加的な生存データを提供する。
【図７】３日に１回の１０ｍｇ／ｋｇの静脈内注入でのポリクローナルヒトＩｇＧ（２７０〜３２０ｍｇの腫瘍の大きさ）対３日に１回の１０ｍｇ／ｋｇの静脈内注入抗体Ａｂ１（２７０〜３２０ｍｇの腫瘍の大きさ）についての、生存データを提供する。
【図８】１０ｍｇ／ｋｇの点滴におけるポリクローナルヒトＩｇＧ（４００〜５２７ｍｇの腫瘍の大きさ）対３日に１回の１０ｍｇ／ｋｇの点滴における抗体Ａｂ１（４００〜５２７ｍｇの腫瘍の大きさ）に、生存データを提供する。
【図９】カニクイザルにおける抗体Ａｂ１の薬物動態プロファイルを提供する。抗体Ａｂ１の血漿中濃度は、抗原検出ＥＬＩＳＡを通じて定量化された。このタンパク質は、他の全長ヒト化抗体と一致している、１２日〜１７日間の半減期を示す。
【図１０Ａ】抗体Ａｂ４に対する結合データを提供する。
【図１０Ｂ】抗体Ａｂ３に対する結合データを提供する。
【図１０Ｃ】抗体Ａｂ８に対する結合データを提供する。
【図１０Ｄ】抗体Ａｂ２に対する結合データを提供する。
【図１０Ｅ】抗体Ａｂ１、Ａｂ６、およびＡｂ７に対する、結合データを提供する。
【図１１】図１０（Ａ〜Ｅ）の結合データを表形式で要約する。
【図１２】実施例１４のペプチドマッピング実験で使用される１５アミノ酸ペプチドの配列を示す。
【図１３】実施例１４で調製されるブロットの結果を示す。
【図１４】実施例１４で調製されるブロットの結果を示す。
【図１５】Ａ．種々の種のＩＬ−６に対する、Ａｂ１の親和性および結合反応速度を示す。Ｂ．Ｔ１１６５細胞増殖アッセイにおける、Ａｂ１によるＩＬ−６の阻害を示す。
【図１６】いくつかの用量群における、健常男性被験者へのＡｂ１の単回投与によって起こるＡｂ１の平均血漿濃度を示す。
【図１７】図１６で示される用量群についての、血漿Ａｂ１濃度時間曲線（ＡＵＣ）下の平均面積を示す。
【図１８】図１６で示される用量群に対する、平均最大血漿Ａｂ１濃度（Ｃｍａｘ）を示す。
【図１９】図１６で示される用量群のＡｂ１薬物動態測定を要約する。
【図２０】進行癌の患者へのＡｂ１の単回投与によって起こるＡｂ１の平均血漿濃度を示す。
【図２１】他の抗ＩＬ−６抗体と比較して、Ａｂ１の前例のない排出半減期を示す。
【図２２】進行癌の患者へのＡｂ１の投与後の増加ヘモグロビン濃度を示す。
【図２３】進行癌の患者へのＡｂ１の投与後の平均血漿液濃度を示す。
【図２４】進行癌の患者へのＡｂ１の投与後の平均好中球数を示す。
【図２５】健常者における、血清ＣＲＰレベルの抑制を示す。
【図２６Ａ】進行癌患者における、血清ＣＲＰレベルの抑制を示す。
【図２６Ｂ】進行癌患者における、血清ＣＲＰレベルの抑制を示す。
【図２７】マウス癌悪液質モデルにおける、Ａｂ１による体重減少の予防を示す。
【図２８】癌悪液質モデルにおける、典型的なＡｂ１処置されたマウスおよび対照マウスの外見を示す。
【図２９】Ａｂ１は、進行癌患者において、増量を推進することを示す。
【図３０】Ａｂ１は、進行癌患者において、疲労を減少することを示す。
【図３１】Ａｂ１は、進行癌患者において、握力を推進することを示す。
【図３２】Ａｂ１は、マウスにおいて、急性期タンパク質（血清アミロイドＡ）を抑制することを示す。
【図３３】Ａｂ１は、進行癌患者において、血漿アルブミン濃度を増加させることを示す。
【図３４Ａ】ウサギ抗体軽鎖および可変重鎖配列と相同ヒト配列およびヒト化配列との間のアライメントを示す。フレームワーク領域は、ＦＲ１−ＦＲ４として特定される。相補性決定領域は、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３として特定される。
【図３４Ｂ】ウサギ抗体軽鎖および可変重鎖配列と相同ヒト配列およびヒト化配列との間のアライメントを示す。フレームワーク領域は、ＦＲ１−ＦＲ４として特定される。相補性決定領域は、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３として特定される。
【図３５Ａ】ウサギ抗体軽鎖および可変重鎖配列と相同ヒト配列およびヒト化配列との間のアライメントを示す。フレームワーク領域は、ＦＲ１−ＦＲ４として特定される。相補性決定領域は、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３として特定される。
【図３５Ｂ】ウサギ抗体軽鎖および可変重鎖配列と相同ヒト配列およびヒト化配列との間のアライメントを示す。フレームワーク領域は、ＦＲ１−ＦＲ４として特定される。相補性決定領域は、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３として特定される。
【図３６Ａ】それぞれ、Ａｂ１の異なる型の軽鎖と可変重鎖配列との間のアライメントを示す。フレームワーク領域は、ＦＲ１〜ＦＲ４として特定されている。相補性決定領域は、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３として特定される。ＣＤＲ領域内の配列の違いが強調されている。
【図３６Ｂ】それぞれ、Ａｂ１の異なる型の軽鎖と可変重鎖配列との間のアライメントを示す。フレームワーク領域は、ＦＲ１〜ＦＲ４として特定されている。相補性決定領域は、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３として特定される。ＣＤＲ領域内の配列の違いが強調されている。
【図３７Ａ】それぞれ、Ａｂ１の異なる型の軽鎖と可変重鎖配列との間のアライメントを示す。フレームワーク領域は、ＦＲ１〜ＦＲ４として特定されている。相補性決定領域は、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３として特定される。ＣＤＲ領域内の配列の違いが強調されている。
【図３７Ｂ】それぞれ、Ａｂ１の異なる型の軽鎖と可変重鎖配列との間のアライメントを示す。フレームワーク領域は、ＦＲ１〜ＦＲ４として特定されている。相補性決定領域は、ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３として特定される。ＣＤＲ領域内の配列の違いが強調されている。
【図３８】Ａｂ１モノクローナル抗体の各投与濃度（プラセボ、８０ｍｇ、１６０ｍｇ、および３２０ｍｇ）に対する、平均ＣＲＰ値を示す。
【図３９】図３８に対応する各投与濃度群からのＣＲＰの中央値における変化を示す。
【図４０】種々の癌を有する患者における、１２週間、８０、１６０、または３２０ｍｇで投薬した後の、血清ＣＲＰレベルの減少を示す。
【図４１】関節リウマチの患者集団における、１２週間、８０、１６０、または３２０ｍｇで投薬した後の、血清ＣＲＰレベルの減少を示す。
【図４２】Ａｂ１は、８０、１６０、または３２０ｍｇでの１２週間の投与後、平均ヘモグロビンを増加させることを示す。
【図４３】図４２に示されるデータについての、基準ヘモグロビンからの平均変化を示す。
【図４４】Ａｂ１は、１１ｇ／Ｌを下回った基準ヘモグロビンを有する患者において、１６０および３２０ｍｇでの１２週間の投与後、平均ヘモグロビンを増加させることを示す。
【図４５】Ａｂ１は、８０、１６０、および３２０ｍｇでの１６週間の投与後、平均ヘモグロビンを増加させることを示す。
【図４６】Ａｂ１は、８０、１６０、および３２０ｍｇでの１２週間の投与後、平均アルブミン濃度を増加させることを示す。
【図４７】図４６に対応する各投与濃度群からの平均アルブミン濃度の基準からの変化を示す。
【図４８】Ａｂ１は、３５ｇ／Ｌを下回った基準アルブミンを有する患者において、１６０および３２０ｍｇでの１２週間の投与後、平均アルブミン濃度の持続的増加を提供することを示す。
【図４９】１２週間にわたるＡｂ１モノクローナル抗体の各投与濃度群（プラセボ、８０ｍｇ、１６０ｍｇ、および３２０ｍｇ）からの平均体重変化データを示す。
【図５０】図４９に対応する各投与濃度群からの体重の平均変化率（％）を示す。
【図５１】図４９に対応する投与濃度群についての平均除脂肪体重の変化を示す。
【図５２】８週間、８０、１６０、および３２０ｍｇで投与した後の、患者集団における、いくつかの投与濃度群についての平均Ｆａｃｉｔ−Ｆ  ＦＳサブスケールスコアの増加を示す。
【図５３】図５２に対応する基準Ｆａｃｉｔ−Ｆ  ＦＳサブスケールスコアからの変化を示す。
【図５４】Ａｂ１が、８０、１６０、および３２０ｍｇで投与後１６週目にＤダイマーレベルをプラセボに対して低下させることを示す。
【図５５】図５４に対応する各用量濃度群からのＤダイマー濃度についてのベースラインからの変化率（％）を示す。
【図５６】関節リウマチの患者の治療が、ＡＣＲマトリクスに基づいて、プラセボに対する有意な改善をもたらしたことを示す。
【図５７】８０、１６０、および３２０ｍｇでの投与１６週後に、プラセボに対してＡＣＲ２０を達成した患者を示す。
【図５８】８０、１６０、および３２０ｍｇでの投与１６週後に、プラセボに対してＡＣＲ５０を達成した患者を示す。
【図５９】８０、１６０、および３２０ｍｇでの投与１６週後に、プラセボに対してＡＣＲ７０を達成した患者を示す。
【図６０】プラセボ、および８０、１６０、ならびに３２０ｍｇの用量濃度群についてのベースラインからの変化を示す。
【図６１】プラセボ、および８０、１６０、ならびに３２０ｍｇの用量濃度群についてのＨＡＱ−ＤＩスコアの変化を示す。
【図６２】プラセボ、および８０、１６０、ならびに３２０ｍｇの用量濃度群についてのＤＡＳ２８スコアの変化を示す。
【図６３】プラセボ、および８０、１６０、ならびに３２０ｍｇの用量濃度群についてのＥＵＬＡＲの応答の良好または中等度を達成する患者のパーセンテージの変化を示す。
【図６４】関節リウマチの治療のためヒトＡｂ１の使用に関連する臨床試験の概略を示す。
【図６５】ヒト化Ａｂ１の皮下（ＳＣ）または静脈内（ｉｖ）投与後の間接リウマチ患者における血漿中ヒト化Ａｂ１濃度を示す。
【図６６】ヒト化Ａｂ１の皮下または静脈内投与後の血漿中ＣＲＰレベル濃度を示す。
【図６７−１】２４週にわたる、ヒト化Ａｂ１を投与された患者における有害事象を列挙した表を含む図である。
【図６７−２】２４週にわたる、ヒト化Ａｂ１を投与された患者における有害事象を列挙した表を含む図である。
【図６８】抗体投与後１２週にわたる、ヒト化Ａｂ１を投与された患者における注射部位反応を列挙した表を含む図である。
【図６９】抗体投与後１２週にわたる、ヒト化Ａｂ１および対照を皮下または静脈内投与された患者についての臨床検査の評価（ＡＬＴ、ＡＳＴ、ビリルビン、好中球数、および血小板数）を表にした図である。
【図７０】ヒト化Ａｂ１を皮下または静脈内投与後２４週にわたる、患者における血漿中薬物動態パラメータを表にした図である。
【図７１】５０または１００ｍｇの抗体投与後１２週にわたる、ＡＤ５１８の皮下および静脈内投与の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【０２２７】
［定義］
本発明は、示される特定の方法論、プロトコル、細胞株、動物種または属、および試薬は変更され得るので、それらには限定されないことを理解されたい。本明細書で使用される用語は、特定の実施形態のみを記述する目的のためであり、本発明の範囲を限定することを目的とせず、本発明の範囲は、添付の請求項によってのみ制限されることもまた理解されたい。
【０２２８】
用語「変異体」（Ａｂ１などの抗体について用いられる場合）は、一本鎖抗体、ダイマー、マルチマー、配列変異体、ドメイン置換変異体などを包含する。一本鎖抗体は、ＳＭＩＰ、サメの抗体、ナノ抗体（例えば、ラクダ科抗体）など。配列変異体は、配列のパーセント同一性（または類似性）（例えば９９％、９５％、９０％、８５％、８０％、７０％、６０％など）によって、または許容される保存または非保存の置換の数によって特定され得る。ドメイン置換変異体は、１つのタンパク質のあるドメインの、関連タンパク質の類似のドメインによる置換を含む。類似のドメインは、配列、構造（実際の構造または推定される構造）、または機能の類似性によって特定され得る。例えば、ドメイン置換変異体は、１以上のＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域の置換を含む。
【０２２９】
本明細書で使用される、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が別様に明確に示さない限り、複数指示対象を含む。したがって、例えば、「１つの細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」への言及は、複数のそのような細胞を含み、「そのタンパク質（ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）」への言及は、１つ以上のタンパク質および当業者等に知られているその均等物を含む。本明細書で使用される全ての技術的および科学用語は、別途明示しない限り、本発明が属する技術分野に精通するものに理解されものと同じ意味を有する。
【０２３０】
インターロイキン−６（ＩＬ−６）：本明細書で使用される、インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、ＧｅｎＢａｎｋ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＰ＿０００５９１：ＭＮＳＦＳＴＳＡＦＧＰＶＡＦＳＬＧＬＬＬＶＬＰＡＡＦＰＡＰＶＰＰＧＥＤＳＫＤＶＡＡＰＨＲＱＰＬＴＳＳＥＲＩＤＫＱＩＲＹＩＬＤＧＩＳＡＬＲＫＥＴＣＮＫＳＮＭＣＥＳＳＫＥＡＬＡＥＮＮＬＮＬＰＫＭＡＥＫＤＧＣＦＱＳＧＦＮＥＥＴＣＬＶＫＩＩＴＧＬＬＥＦＥＶＹＬＥＹＬＱＮＲＦＥＳＳＥＥＱＡＲＡＶＱＭＳＴＫＶＬＩＱＦＬＱＫＫＡＫＮＬＤＡＩＴＴＰＤＰＴＴＮＡＳＬＬＴＫＬＱＡＱＮＱＷＬＱＤＭＴＴＨＬＩＬＲＳＦＫＥＦＬＱＳＳＬＲＡＬＲＱＭ（配列番号１）として有用な下記の２１２アミノ酸配列のみならず、このＩＬ−６アミノ酸配列の任意のプレプロ、プロ、および成熟形態、ならびにこの配列の対立遺伝子多型を含む突然変異体および変異体も含む。
【０２３１】
ＩＬ−６アンタゴニスト：本明細書で使用される、「ＩＬ−６アンタゴニスト」という用語およびその文法上の変形は、ＩＬ−６シグナル伝達を防止する、阻害する、または減少させる任意の組成物を含む。概して、そのようなアンタゴニストは、ＩＬ−６、ＩＬ−６受容体アルファ、ｇｐ１３０，またはＩＬ−６シグナル変換に関わる分子のレベルまたは活性を減少させ得、または前述のものの間のレベルまたは活性複合体を減少させ得る（例えば、ＩＬ−６／ＩＬ−６受容体複合体の活性を減少する）。アンタゴニストは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはペプチド核酸、ロックド核酸、モルフォリノ（ホスホロジアミダイトモルフォリノオリゴ）、グリセロール核酸、またはトレオース核酸等の核酸アナログを含むアンチセンス核酸を含む。Ｈｅａｓｍａｎ，Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ．２００２  Ｍａｒ  １５；２４３（２）：２０９−１４、ＨａｎｎｏｎおよびＲｏｓｓｉ，Ｎａｔｕｒｅ．２００４  Ｓｅｐ  １６；４３１（７００６）：３７１−８、Ｐａｕｌら，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００２  Ｍａｙ；２０（５）：５０５−８、Ｚｈａｎｇら，Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．２００５  Ｍａｒ  ３０；１２７（１２）：４１７４−５、Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．２０００  Ｍａｙ  ９；９７（１０）：５６３３−８、Ｈａｎｖｅｙら，１９９２  Ｎｏｖ  ２７；２５８（５０８７）：１４８１−５、Ｂｒａａｓｃｈら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．２００２  Ａｐｒ  ９；４１（１４）：４５０３−１０、Ｓｃｈｏｎｉｎｇら，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０００  Ｎｏｖ  １７；２９０（５４９５）：１３４７−５１を参照されたい。加えて、ＩＬ−６アンタゴニストは、米国特許第６，５９９，８７５；６，１７２，０４２；６，８３８，４３３；６，８４１，５３３；５，２１０，０７５他のいずれかに示されるもの等のＩＬ−６シグナル伝達を阻止するペプチドを特に含む。また、本発明に記載のＩＬ−６アンタゴニストは、米国特許出願公開第２００７−００１０５２９号他に報告されるもの等のｐ３８ＭＡＰキナーゼ阻害剤を、サイトカイン産生、特にＩＬ−６産生におけるこのキナーゼの役割を考慮すると、含み得る。さらに、本発明に記載のＩＬ−６アンタゴニストは、米国特許出願公開第２００５−００９０４５３号で報告されるグリコアルカロイド化合物、ならびにそこで報告されるＩＬ−６アンタゴニストスクリーニングアッセイを使用して単離可能な他のＩＬ−６アンタゴニスト化合物を含む。他のＩＬ−６アンタゴニストは、抗ＩＬ−６抗体、抗ＩＬ−６受容体アルファ抗体抗、ｇｐ１３０抗体、および本明細書で開示される抗ＩＬ−６抗体、Ａｃｔｅｍｒａ（商標）（トシリズマブ）、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）、Ｚｅｎａｐａｘ（商標）（ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）を含む（がそれらに限定されない）抗ｐ３８ＭＡＰキナーゼ抗体等の抗体、またはそれらの任意の組み合わせを含む。他のＩＬ−６アンタゴニストは、未変性、突然変異体、または変異体配列であり得、任意で他の成分（半減期増加部分等、例えばＦｃドメイン）と結合され得る、ＩＬ−６、ＩＬ−６受容体アルファ、およびｇｐ１３０等のＩＬ−６シグナル伝達に関わる分子の部分またはフラグメントを含む。例えば、ＩＬ−６アンタゴニストは、可溶性ＩＬ−６受容体またはフラグメント、可溶性ＩＬ−６受容体：Ｆｃ融合タンパク質、ＩＬ−６の小分子阻害剤、抗ＩＬ−６受容体抗体または抗体フラグメントまたはその変異体、アンチセンス核酸他であり得る。他のＩＬ−６アンタゴニストは、Ｃ３２６等のａｖｅｍｉｒ（Ｓｉｌｖｅｒｍａｎら，Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５  Ｄｅｃ；２３（１２）：１５５６−６１）、および合成レチノイドＡＭ８０（タミバロテン）等の小分子（Ｔａｋｅｄａら，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ．２００６  Ｍａｙ；２６（５）：１１７７−８３）を含む。そのようなＩＬ−６アンタゴニストは、前述のポリペプチドまたはアンチセンス配列のいずれかをコードまたは発現させる核酸を対象に接触させることを含む、当技術分野で知られているいずれの手段によって投与され得る。
【０２３２】
血栓症：本明細書中で使用される場合、血栓症は血管の内側の血栓（血餅）を指す。この用語は、以下に限定しないが、深部静脈血栓症、門脈血栓症、頚静脈血栓症、腎静脈血栓症、脳卒中、心筋梗塞、バッド・キアリ症候群、パジェット・シュレッター病、および脳静脈洞血栓症などの、動脈および静脈血栓症を包含する。血栓症ならびに血栓症や凝固亢進の発症リスクに関連する疾病および状態としては、以下に限定しないが、急性静脈血栓症、肺塞栓症、妊娠中の血栓症、出血性皮膚壊死、急性または慢性播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、手術からの血栓形成、長期安静、長期間の固定化、部分的または完全な麻痺など運動を不可能にするか制限する状態、病的肥満、肺癌を含む肺疾患など酸素の摂取と吸収を妨げる疾病、ＣＯＰＤ、肺気腫、薬物関連線維症、嚢胞性線維症、静脈血栓症、劇症髄膜炎菌血症、急性血栓性脳卒中、急性冠閉塞、急性末梢動脈閉塞症、巨大肺塞栓症、腋窩静脈血栓症、広範な腸骨大腿静脈血栓症、閉塞動脈カニューレ、閉塞静脈カニューレ、心筋症、肝静脈閉塞症、低血圧、心拍出量の減少、血管抵抗の低下、肺高血圧、肺コンプライアンスの低下、白血球減少、および血小板減少症などが挙げられる。
【０２３３】
Ｄダイマー：本明細書中で使用される場合、Ｄダイマーは、酵素プラスミンによる血栓溶解時に生成されるフィブリン分解生成物を指す。Ｄダイマーに対して特異的に反応するモノクローナル抗体は容易に入手でき、例えばＤＤ−３Ｂ６／２２（Ｅｌｍｓら，１９８６，Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ．８５：３６０−４）などがある。Ｄダイマーレベルの臨床的測定は、例えば、赤血球凝集試験、ＥＬＩＳＡなどを用いて通常通りに行われる（Ｄｅｍｐｆｌｅ，Ｓｅｍｉｎ  Ｖａｓｃ  Ｍｅｄ，２００５  Ｎｏｖ；５（４）：３１５−２０で概説された）。Ｄダイマーレベルの測定は、測定方法や試験室によって異なるものでなり得る。にもかかわらず、例えば健常者からの測定値を取ることによって、特定の方法や試験室について「基準範囲」を容易に確立し得る。したがって、高いＤダイマーレベルとは、特定の方法や試験室についての基準範囲を超えたＤダイマーレベルを指すものと、当業者には理解される。
【０２３４】
凝固プロファイル：本明細書中で使用される場合、凝固プロファイルは、一般的に凝固系の機能を指す。凝固の組織因子（外因性）経路と接触活性化（内因性）経路の両方が、凝固プロファイルの構成要素である。通常の凝固プロファイルは、正常で健康な個人のような凝固機能、すなわち、出血を制御する能力と過剰な血液凝固の傾向（血栓傾向）との間のバランスを維持することを指す。異常な凝固プロファイルは、血液凝固傾向の減少または増加であり得る。特定の異常な凝固プロファイルの一つは凝固亢進であり、これは過剰な血栓形成のリスクが大幅に高くなり、その結果血栓症のリスクが高くなることを指す。凝固プロファイルは当分野で公知の様々な試験およびアッセイによって評価することができ、そのような試験およびアッセイとしては、例えば、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）試験；プロトロンビン時間（ＰＴ）試験（典型的な基準範囲１２〜１５秒）；そのようなプロトロンビン比（ＰＲ）と国際標準比（ＩＮＲ）（典型的な基準範囲０．８から１．２）などの、ＰＴ試験から派生した測定；フィブリノゲンの試験（例えばクラウス法（Ｃｌａｕｓｓ  Ａ，”Ｒａｐｉｄ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ  ［Ｇｅｒｍａｎ］，”Ａｃｔａ  Ｈａｅｍａｔｏｌ，１９５７，１７：２３７−４６）やＥｌｌｉｓ法（Ｅｌｌｉｓ  ＢＣおよびＳｔｒａｎｓｋｙ  Ａ，”Ａ  Ｑｕｉｃｋ  ａｎｄ  Ａｃｃｕｒａｔｅ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｉｂｒｉｎｏｇｅｎ  ｉｎ  Ｐｌａｓｍａ，”Ｊ  Ｌａｂ  Ｃｌｉｎ  Ｍｅｄ，１９６１，５８：４７７−８８）；活性化プロテインＣ抵抗性、プロテインＣ、プロテインＳ、抗トロンビンのアッセイ；抗リン脂質抗体のアッセイ（ループス性抗凝固因子と抗カルジオリピン抗体）；ホモシステインの増加；プラスミノーゲン、異常フィブリノゲン血症、ヘパリンコファクターＩＩ、または血小板凝集能亢進症のアッセイなどが挙げられる。凝固プロファイルを評価するために有用な他のアッセイとしては、Ｄダイマー、ファクターＩＩ、第Ｖ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、Ｆ  ／フィブリン分解産物、トロンビン  −  アンチトロンビンＩＩＩ複合体、血小板、フィブリノゲン、プラスミノーゲン、プロトロンビン、およびフォン・ヴィレブランド因子の血清中レベルなど、凝固の指標および／または凝固因子の測定が挙げられる。凝固プロファイルの悪化とは、測定値が異常になる、すなわちそれ以前よりも正常範囲から大きく外れるような通常の凝固傾向の悪化を反映している、凝固の指標（例えば上述のアッセイのいずれか）の測定可能な変化を指す。凝固プロファイルの改善とは、通常の凝固傾向の部分的または完全な回復を反映している、凝固の指標（例えば上述のアッセイのいずれか）の測定可能な変化、すなわち、抗ＩＬ−６抗体を投与などの治療的介入後に、治療的介入前に比べて測定値が正常範囲または正常範囲に近いものとなることを指す。
【０２３５】
疾病または状態：本明細書で使用される、「疾病または状態」は、患者が、特に高ＩＬ−６に関連する疾病または状態を有すると診断また疑われた疾病または状態を指す。疾病または状態は、それに対して制限なしに、薬物または治療（放射線治療等）の副作用、ならびに高ＩＬ−６を含む症状によって特徴付けられる特発性状態を含む。
【０２３６】
悪液質：本明細書で使用される、消耗性疾患としても知られている悪液質は、慢性炎症反応の状況における、進行性衰弱、衰弱、略健康障害、栄養失調症、体重の減少、筋肉量の減少、または骨格筋の加速減少によって特徴付けられる、いずれの疾病をも指す（Ｋｏｔｌｅｒ，Ａｎｎ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．２０００  Ｏｃｔ  １７；１３３（８）：６２２−３４で概説される）。悪液質が頻繁に観察される疾病および状態は、癌、関節リウマチ、エイズ、心臓病、脱水症、栄養失調症、鉛曝露、マラリア、呼吸器疾患、老齢、状腺機能低下症、結核、下垂体機能低下症、神経衰弱症、高ナトリウム血症、低ナトリウム血症、腎疾患、脾性悪液質、強直性脊椎炎、成長障害（ｆａｌｔｅｒｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ）および他の疾病、特に慢性病を含む。悪液質はまた、特発性（不確かな原因から起こる）であり得る。患者における重量評価は、増殖または液体貯留、例えば、腫瘍重量、血管外液体貯留等を除外すると考えられている。悪液質は、患者の全体重（増殖または液体貯留を除いて）、全除脂肪（無脂肪）体重、腕および脚の除脂肪体重（四肢の除脂肪体重、例えば、二重エネルギーＸ線吸収法または生体電気インピーダンス分光法を使用して測定される）、および／または除脂肪ボディマス指数（患者の除脂肪体重を身長の二乗で除す）の測定によって評価され得る。Ｋｏｔｌｅｒ，Ａｎｎ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．２０００  Ｏｃｔ  １７；１３３（８）：６２２−３４、Ｍａｒｃｏｒａら，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ）．２００６  Ｎｏｖ；４５（１１）：１３８５−８．２００６  Ｎｏｖ；４５（１１）：１３８５−８を参照されたい。
【０２３７】
衰弱：本明細書で使用される、衰弱は、典型的には筋力および／または耐久力の減少として現れる肉体的疲労を指す。衰弱は、中枢性（体の筋肉の大部分または全てに影響を及ぼす）または末梢性（一部の筋肉に影響を及ぼす）であり得る。衰弱は、患者の筋肉が最高および／または持続力出力のいくらかの測定における減少を有する「真の衰弱」、および患者が、客観的に測定される体力はほぼ同じままであり、患者によって客観的に測定または自己報告され得るが、作業実行のためにより大きな労力が必要とされると認知する「認知された衰弱」およびを含む。例えば、衰弱は、握力試験（筋肉を評価するために、医学的に認識された試験）を使用することによって、典型的には、ハンドグリップ動力計を採用することによって、客観的に測定され得る。
【０２３８】
疲労：本明細書で使用される、疲労は、精神的疲労（肉体的疲労については「衰弱」を参照）を指す。疲労は、眠気（傾眠）および／または低下した注意力を含む。疲労は、ＦＡＣＩＴ−Ｆ（慢性病治療−疲労の機能的評価）試験等の、当技術分野で知られている種々の試験を使用して測定され得る。例えば、Ｃｅｌｌａ，Ｄ．，Ｌａｉ，Ｊ．Ｓ．，Ｃｈａｎｇ，Ｃ．Ｈ．，Ｐｅｔｅｒｍａｎ，Ａ．，＆  Ｓｌａｖｉｎ，Ｍ．（２００２）を参照されたい。癌患者における疲労が、一般集団における疲労と比較された。Ｃａｎｃｅｒ，９４（２），５２８−５３８；Ｃｅｌｌａ，Ｄ．，Ｅｔｏｎ，Ｄ．Ｔ．，Ｌａｉ，Ｆ  Ｊ−Ｓ．，Ｐｅｔｅｒｍａｎ，Ａ．Ｈ  ＆  Ｍｅｒｋｅｌ，Ｄ．Ｅ．（２００２）．アンカーと分布の併用は、癌治療の機能的評価貧血および疲労スケールに基づいて、最小限の臨床的に重要な差異を得るための方法を基礎を形成した。Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｉｎ  ＆  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，２４（６）５４７−５６１。
【０２３９】
発熱：本明細書で使用される、「発熱」は、少なくとも摂氏１から２度高い体温設定点を指す。発熱はしばしば、冷覚、震え、個人の体が増加設定点に達することによって増加する心拍数および呼吸数として示される低体温の主観的感覚に関連する。医学分野においてよく理解されるように、正常な体温は、典型的には、活動レベルおよび時刻によって変化し、最高体温は午後および夕方に観察され、最低体温は睡眠周期の後期中に観察されて、体温測定は、口呼吸、食物または飲料の消費、喫煙、または周辺温度（測定の種類による）等の外的要因によって影響され得る。さらに、個人の正常な体温設定点は、最高で摂氏約０．５度まで変化し得、したがって、医療専門家は、発熱があるかを診断するために、これらの要因を考慮して個人の体温を解釈し得る。一般的に言えば、熱病は、典型的には、摂氏３８．０度を超える中核体温、摂氏３７．５度を超える口腔体温、または摂氏３７．２度を超える腋窩温によって診断される。
【０２４０】
改善される：本明細書で使用される、「改善される」、「改善」、および他の文法的変形は、治療からもたらされるいずれの有益な変化をも含む。有益な変化は、患者の状態が、治療が存在しなかった時よりも良好である、いずれかの状態である。「改善される」は、好ましくない状態の予防、状態が悪化する速度の減速、好ましくない状態の進行の遅延、および本質的に正常な状態への回復を含む。例えば、悪液質の改善は、全体重（例えば、腫瘍重量、血管外液体貯留等の、悪液質の評価中に通常は除外される体重を除外する）、除脂肪体重、および／または四肢の除脂肪体重等の、患者の体重におけるいずれの増加、ならびに体重の減少速度におけるいずれの遅延または減速、または患者が診断された疾病または状態に関連する体重の減少の予防または減速を含む。別の例では、衰弱の改善は、患者の体力におけるいずれの増加、ならびに体力の減少速度におけるいずれの遅延または減速、または患者が診断された疾病または状態に関連する体力の減少の予防または減速を含む。別の例では、疲労の改善は、患者の疲労におけるいずれの減少、ならびに疲労の増加速度におけるいずれの遅延または減速、または患者が診断された疾病または状態に関連する疲労の増加の予防または減速を含む。別の例では、発熱の改善は、患者の発熱におけるいずれの減少、ならびに発熱の増加速度におけるいずれの遅延または減速、または患者が診断された疾病または状態に関連する発熱の増加の予防または減速を含む。
【０２４１】
Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）：本明細書で使用される、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）は、ＧｅｎＢａｎｋ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＰ＿０００５５８：
【０２４２】
ＭＥＫＬＬＣＦＬＶＬＴＳＬＳＨＡＦＧＱＴＤＭＳＲＫＡＦＶＦＰＫＥＳＤＴＳＹＶＳＬＫＡＰＬＴＫＰＬＫＡＦＴＶＣＬＨＦＹＴＥＬＳＳＴＲＧＹＳＩＦＳＹＡＴＫＲＱＤＮＥＩＬＩＦＷＳＫＤＩＧＹＳＦＴＶＧＧＳＥＩＬＦＥＶＰＥＶＴＶＡＰＶＨＩＣＴＳＷＥＳＡＳＧＩＶＥＦＷＶＤＧＫＰＲＶＲＫＳＬＫＫＧＹＴＶＧＡＥＡＳＩＩＬＧＱＥＱＤＳＦＧＧＮＦＥＧＳＱＳＬＶＧＤＩＧＮＶＮＭＷＤＦＶＬＳＰＤＥＩＮＴＩＹＬＧＧＰＦＳＰＮＶＬＮＷＲＡＬＫＹＥＶＱＧＥＶＦＴＫＰＱＬＷＰ（配列番号７２６）として有用な以下の２２４アミノ酸配列のみならず、このＣＲＰアミノ酸配列の任意のプレプロ、プロ、および成熟形態、ならびにこの配列の対立遺伝子多型を含む突然変異体および変異体も含む。例えば、血清、肝臓、腫瘍、または体内の他の部位でのＣＲＰレベルは、ＥＬＩＳＡ、抗体試験条片、免疫比濁法、急速免疫拡散法、可視凝集反応、ウエスタンブロット法、ノーザンブロット法等の通常の方法および市販の試薬を使用することによって、容易に測定することができる。上述のように、本発明により、血栓症を罹患した、またはそれを発症するリスクを有する患者において、ＣＲＰレベルを追加的に測定し得る。
【０２４３】
インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）（ＩＬ−６受容体アルファ（ＩＬ−６ＲＡ）とも呼ばれる）：本明細書で使用される、「インターロイキン−６受容体」（「ＩＬ−６Ｒ」、また「ＩＬ−６受容体アルファ」または「ＩＬ−６ＲＡ」）は、Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔタンパク質受入番号Ｐ０８８８７：ＭＬＡＶＧＣＡＬＬＡＡＬＬＡＡＰＧＡＡＬＡＰＲＲＣＰＡＱＥＶＡＲＧＶＬＴＳＬＰＧＤＳＶＴＬＴＣＰＧＶＥＰＥＤＮＡＴＶＨＷＶＬＲＫＰＡＡＧＳＨＰＳＲＷＡＧＭＧＲＲＬＬＬＲＳＶＱＬＨＤＳＧＮＹＳＣＹＲＡＧＲＰＡＧＴＶＨＬＬＶＤＶＰＰＥＥＰＱＬＳＣＦＲＫＳＰＬＳＮＶＶＣＥＷＧＰＲＳＴＰＳＬＴＴＫＡＶＬＬＶＲＫＦＱＮＳＰＡＥＤＦＱＥＰＣＱＹＳＱＥＳＱＫＦＳＣＱＬＡＶＰＥＧＤＳＳＦＹＩＶＳＭＣＶＡＳＳＶＧＳＫＦＳＫＴＱＴＦＱＧＣＧＩＬＱＰＤＰＰＡＮＩＴＶＴＡＶＡＲＮＰＲＷＬＳＶＴＷＱＤＰＨＳＷＮＳＳＦＹＲＬＲＦＥＬＲＹＲＡＥＲＳＫＴＦＴＴＷＭＶＫＤＬＱＨＨＣＶＩＨＤＡＷＳＧＬＲＨＶＶＱＬＲＡＱＥＥＦＧＱＧＥＷＳＥＷＳＰＥＡＭＧＴＰＷＴＥＳＲＳＰＰＡＥＮＥＶＳＴＰＭＱＡＬＴＴＮＫＤＤＤＮＩＬＦＲＤＳＡＮＡＴＳＬＰＶＱＤＳＳＳＶＰＬＰＴＦＬＶＡＧＧＳＬＡＦＧＴＬＬＣＩＡＩＶＬＲＦＫＫＴＷＫＬＲＡＬＫＥＧＫＴＳＭＨＰＰＹＳＬＧＱＬＶＰＥＲＰＲＰＴＰＶＬＶＰＬＩＳＰＰＶＳＰＳＳＬＧＳＤＮＴＳＳＨＮＲＰＤＡＲＤＰＲＳＰＹＤＩＳＮＴＤＹＦＦＰＲ（配列番号７２７）として有用な以下の４６８アミノ酸配列のみならず、このアミノ酸配列の任意のプレプロ、プロ、および成熟形態、ならびにこの配列の対立遺伝子多型を含む突然変異体および変異体も含む。
【０２４４】
ｇｐ１３０：本明細書で使用される、ｇｐ１３０（インターロイキン−６受容体ヘータサブユニットとも呼ばれる）は、Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．Ｐ４０１８９：ＭＬＴＬＱＴＷＶＶＱＡＬＦＩＦＬＴＴＥＳＴＧＥＬＬＤＰＣＧＹＩＳＰＥＳＰＶＶＱＬＨＳＮＦＴＡＶＣＶＬＫＥＫＣＭＤＹＦＨＶＮＡＮＹＩＶＷＫＴＮＨＦＴＩＰＫＥＱＹＴＩＩＮＲＴＡＳＳＶＴＦＴＤＩＡＳＬＮＩＱＬＴＣＮＩＬＴＦＧＱＬＥＱＮＶＹＧＩＴＩＩＳＧＬＰＰＥＫＰＫＮＬＳＣＩＶＮＥＧＫＫＭＲＣＥＷＤＧＧＲＥＴＨＬＥＴＮＦＴＬＫＳＥＷＡＴＨＫＦＡＤＣＫＡＫＲＤＴＰＴＳＣＴＶＤＹＳＴＶＹＦＶＮＩＥＶＷＶＥＡＥＮＡＬＧＫＶＴＳＤＨＩＮＦＤＰＶＹＫＶＫＰＮＰＰＨＮＬＳＶＩＮＳＥＥＬＳＳＩＬＫＬＴＷＴＮＰＳＩＫＳＶＩＩＬＫＹＮＩＱＹＲＴＫＤＡＳＴＷＳＱＩＰＰＥＤＴＡＳＴＲＳＳＦＴＶＱＤＬＫＰＦＴＥＹＶＦＲＩＲＣＭＫＥＤＧＫＧＹＷＳＤＷＳＥＥＡＳＧＩＴＹＥＤＲＰＳＫＡＰＳＦＷＹＫＩＤＰＳＨＴＱＧＹＲＴＶＱＬＶＷＫＴＬＰＰＦＥＡＮＧＫＩＬＤＹＥＶＴＬＴＲＷＫＳＨＬＱＮＹＴＶＮＡＴＫＬＴＶＮＬＴＮＤＲＹＬＡＴＬＴＶＲＮＬＶＧＫＳＤＡＡＶＬＴＩＰＡＣＤＦＱＡＴＨＰＶＭＤＬＫＡＦＰＫＤＮＭＬＷＶＥＷＴＴＰＲＥＳＶＫＫＹＩＬＥＷＣＶＬＳＤＫＡＰＣＩＴＤＷＱＱＥＤＧＴＶＨＲＴＹＬＲＧＮＬＡＥＳＫＣＹＬＩＴＶＴＰＶＹＡＤＧＰＧＳＰＥＳＩＫＡＹＬＫＱＡＰＰＳＫＧＰＴＶＲＴＫＫＶＧＫＮＥＡＶＬＥＷＤＱＬＰＶＤＶＱＮＧＦＩＲＮＹＴＩＦＹＲＴＩＩＧＮＥＴＡＶＮＶＤＳＳＨＴＥＹＴＬＳＳＬＴＳＤＴＬＹＭＶＲＭＡＡＹＴＤＥＧＧＫＤＧＰＥＦＴＦＴＴＰＫＦＡＱＧＥＩＥＡＩＶＶＰＶＣＬＡＦＬＬＴＴＬＬＧＶＬＦＣＦＮＫＲＤＬＩＫＫＨＩＷＰＮＶＰＤＰＳＫＳＨＩＡＱＷＳＰＨＴＰＰＲＨＮＦＮＳＫＤＱＭＹＳＤＧＮＦＴＤＶＳＶＶＥＩＥＡＮＤＫＫＰＦＰＥＤＬＫＳＬＤＬＦＫＫＥＫＩＮＴＥＧＨＳＳＧＩＧＧＳＳＣＭＳＳＳＲＰＳＩＳＳＳＤＥＮＥＳＳＱＮＴＳＳＴＶＱＹＳＴＶＶＨＳＧＹＲＨＱＶＰＳＶＱＶＦＳＲＳＥＳＴＱＰＬＬＤＳＥＥＲＰＥＤＬＱＬＶＤＨＶＤＧＧＤＧＩＬＰＲＱＱＹＦＫＱＮＣＳＱＨＥＳＳＰＤＩＳＨＦＥＲＳＫＱＶＳＳＶＮＥＥＤＦＶＲＬＫＱＱＩＳＤＨＩＳＱＳＣＧＳＧＱＭＫＭＦＱＥＶＳＡＡＤＡＦＧＰＧＴＥＧＱＶＥＲＦＥＴＶＧＭＥＡＡＴＤＥＧＭＰＫＳＹＬＰＱＴＶＲＱＧＧＹＭＰＱ（配列番号７２８）として有用な以下の９１８前駆体アミノ酸配列のみならず、示される配列のアミノ酸２３から９１８によってコードされる成熟形態等の、このアミノ酸配列の任意のプレプロ、プロ、および成熟形態、ならびにこの配列の対立遺伝子多型を含む突然変異体および変異体も含む。
【０２４５】
グラスゴー予後スコア（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｃｏｒｅ（ＧＰＳ））：本明細書で使用される、グラスゴー予後スコア（Ｇｌａｓｇｏｗ  Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｃｏｒｅ（ＧＰＳ）は、３５ｍｇ／Ｌ未満の血清中アルブミンレベルで１ポイント、および１０ｍｇ／Ｌ以上のＣＲＰレベルで１ポイント与える、炎症に基づく予後スコアを指す。したがって、０のＧＰＳは、正常なアルブミンおよびＣＲＰを示し、１のＧＰＳは、減少アルブミンまたは高ＣＲＰを示し、２のＧＰＳは、減少アルブミンおよび高ＣＲＰの両方を示す。
【０２４６】
有効な量：本明細書で使用される、「有効な量」、「に有効な量」、「に有効なＸの量」等は、化合物が投与された時、治療を必要とする疾病の１つ以上の症状をある程度軽減もしくは低減する、または臨床的指標の開始または予防を必要とする疾病の症状を遅延させるのに有効である活性成分の量を指す。したがって、有効量は、（ｉ）疾病の進行速度を逆転させ、（ｉｉ）疾病のさらなる進行をある程度阻害し、および／または（ｉｉｉ）疾病に関連する１つ以上の症状をある程度軽減する（または、好ましくは排除する）等の効果を示す活性成分の量を指す。有効量は、治療を必要とする疾病のための、知られている生体内および体外モデルシステムに関与している化合物を実験することによって、経験的に決定され得る。「有効量」という語句が使用される文脈は、特定の所望の効果を示し得る。例えば、「凝固亢進状態を予防または治療するのに効果的な抗ＩＬ−６抗体の量」または同様の表現は、対象に投与されたとき、対象の凝固プロファイルに測定可能な改善をもたらすか、または対象のリスクである凝固プロファイルが悪化を、予防、鈍化、遅延、または阻止する抗ＩＬ−６抗体の量を指す。同様に、「血清ＣＲＰレベルを減少するのに有効な抗ＩＬ−６抗体の量」および同様の表現は、対象に投与された時に、血清ＣＲＰレベルにおける測定可能な減少を引き起こす、または対象にとって危険性のある血清ＣＲＰレベルにおける増加を防止する、遅くする、遅延させる、もしくは抑止するであろう抗ＩＬ−６抗体の量を指す。同様に、「血清中アルブミンレベルを増加するのに有効な抗ＩＬ−６抗体の量」および同様の表現は、対象に投与された時に、血清中アルブミンレベルおける測定可能な増加を引き起こす、または対象にとって危険性のある血清中アルブミンレベルにおける増加を防止する、遅くする、遅延させる、もしくは抑止するであろう抗ＩＬ−６抗体の量を指す。有効量は、個人の体重、性別、年齢、および病歴、ならびに患者の状態の重症度、疾病の種類、投与方法等によって変わるであろう。同様に、「虚弱のレベルを低減させるのに効果的な抗ＩＬ−６抗体の量」または類似の表現は、抗ＩＬ−６抗体の量であって、対象に投与されたとき、握力試験によって決定される虚弱のレベルの測定可能な低減をもたらす、該量を指す。同様に、「体重を増加させるのに効果的な抗ＩＬ−６抗体の量」または類似の表現は、対象に投与されたとき、患者の体重の測定可能な増加をもたらす抗ＩＬ−６抗体の量を指す。有効量は、例えば、滴定（有効量が見出されるまで増加量の投与）および／または以前の患者にとって有効であった量への参照によって、通常の実験を使用して容易に決定され得る。通常、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、患者の体重の約０．１ｍｇ／ｋｇと約２０ｍｇ／ｋｇとの間の範囲の用量で投与されるであろう。
【０２４７】
凝固プロファイルの長期改善：本明細書中で使用される「凝固プロファイルの長期改善」および類似した表現は、対象の凝固プロファイルの、初期凝固プロファイル（すなわち治療開始前の凝固プロファイル）と比較した測定可能な改善であって、治療（例えば、Ａｂ１などのＩＬ−６アンタゴニストの投与）開始後約一週間以内に検出可能であり、治療開始から長期間（例えば、少なくとも約１４日、少なくとも約２１日、少なくとも約２８日、少なくとも約３５日、少なくとも約４０日、少なくとも約５０日、少なくとも約６０日、少なくとも約７０日、少なくとも約１１週間、または少なくとも約１２週間）改善されたままである、該改善を指す。
【０２４８】
血清ＣＲＰの長期減少：本明細書で使用される、「血清ＣＲＰの長期減少」および同様の表現は、治療が開始されてから（例えば、抗ＩＬ−６抗体の投与）、約１週間以内に検出可能であり、治療が開始されてから、例えば、少なくとも約１４日、少なくとも約２１日、少なくとも約２８日、少なくとも約３５日、少なくとも約４０日、少なくとも約５０日、少なくとも約６０日、少なくとも約７０日、少なくとも約１１週間，または少なくとも約１２週間等の長期間、初期の血清ＣＲＰレベルを下回ったままである、初期の血清ＣＲＰレベル（すなわち、治療が開始される前の一時点における血清ＣＲＰレベル）に対する、血清ＣＲＰレベルにおける測定可能な減少を指す。
【０２４９】
血清中アルブミンの長期増加：本明細書で使用される、「血清中アルブミンの長期増加」および同様の表現は、治療が開始されてから（例えば、抗ＩＬ−６抗体の投与）、約１週間以内に検出可能であり、治療が開始されてから、例えば、少なくとも約１４日、少なくとも約２１日、少なくとも約２８日、少なくとも約３５日、少なくとも約４０日、少なくとも約５０日、少なくとも約６０日、少なくとも約７０日、少なくとも約１１週間，または少なくとも約１２週間等の長期間、初期の血清中アルブミンレベルを超えたままである、初期の血清中アルブミンレベル（すなわち、治療が開始される前の一時点における血清中アルブミンレベル）に対する、血清中アルブミンレベルにおける測定可能な減少を指す。
【０２５０】
悪液質の長期改善：本明細書で使用される、「悪液質の長期改善」は、約４週間以内に検出可能であり、治療が開始されてから、例えば、少なくとも約３５日、少なくとも約４０日、少なくとも約５０日、少なくとも約６０日、少なくとも約７０日、少なくとも約１１週間，または少なくとも約１２週間等の長期間、改善されたままである、初期レベル（すなわち、治療が開始される前の一時点におけるレベル）に対する、患者の体重、除脂肪体重、四肢の除脂肪体重，および／または除脂肪ボディマス指数における測定可能な改善を指す。
【０２５１】
衰弱の長期改善：本明細書で使用される、「衰弱の長期改善」は、約２週間以内に検出可能であり、治療が開始されてから、例えば、少なくとも約２１日、少なくとも約２８日、少なくとも約３５日、少なくとも約４０日、少なくとも約５０日、少なくとも約６０日、少なくとも約７０日、少なくとも約１１週間，または少なくとも約１２週間等の長期間、改善されたままである、初期レベル（例えば、治療が開始される前の一時点におけるレベル）に対する、筋力における測定可能な改善を指す。
【０２５２】
疲労の長期改善：本明細書で使用される、「疲労の長期改善」は、約１週間以内に検出可能であり、治療が開始されてから、例えば、少なくとも約１４日、少なくとも約２１日、少なくとも約２８日、少なくとも約３５日、少なくとも約４０日、少なくとも約５０日、少なくとも約６０日、少なくとも約７０日、少なくとも約１１週間，または少なくとも約１２週間等の長期間、改善されたままである、初期レベル（すなわち、治療が開始される前の一時点におけるレベル）に対する、疲労における測定可能な改善を指す。
【０２５３】
発熱の長期改善：本明細書で使用される、「発熱の長期改善」は、約１週間以内に検出可能であり、治療が開始されてから、例えば、少なくとも約１４日、少なくとも約２１日、少なくとも約２８日、少なくとも約３５日、少なくとも約４０日、少なくとも約５０日、少なくとも約６０日、少なくとも約７０日、少なくとも約１１週間，または少なくとも約１２週間等の長期間、改善されたままである、初期レベル（すなわち、治療が開始される前の一時点におけるレベル）に対する、熱病（例えば、最高体温または体温が上昇する時間）における測定可能な減少を指す。
【０２５４】
接合コンピテント酵母種：本発明では、培養物中で培養されることができる任意の二倍体または四倍体酵母を広範囲に含むことを目的とする。酵母のそのような種は、半数体、二倍体，または四倍体品種で生存し得る。所与の倍数性の細胞は、適切な状態下で、その品種における不定数の産生を増殖し得る。二倍体細胞はまた、半数体細胞を形成するために胞子形成し得る。順次接合は、二倍体株のさらなる接合または融合を介して四倍体株をもたらすことができる。本発明では、二倍体または倍数性酵母細胞は、接合またはスフェロプラスト融合によって好ましくは産生される。
【０２５５】
本発明の１つの実施形態では、接合コンピテント酵母は、Ａｒｘｉｏｚｙｍａ、Ａｓｃｏｂｏｔｒｙｏｚｙｍａ、Ｃｉｔｅｒｏｍｙｃｅｓ、Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ、Ｄｅｋｋｅｒａ、Ｅｒｅｍｏｔｈｅｃｉｕｍ、Ｉｓｓａｔｃｈｅｎｋｉａ、Ｋａｚａｃｈｓｔａｎｉａ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ、Ｋｏｄａｍａｅａ、Ｌｏｄｄｅｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐａｃｈｙｓｏｌｅｎ、Ｐｉｃｈｉａ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｓａｔｕｒｎｉｓｐｏｒａ、Ｔｅｔｒａｐｉｓｉｓｐｏｒａ、Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ、Ｗｉｌｌｉｏｐｓｉｓ、およびＺｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ族を含む、サッカロミセス科の一員である。本発明において潜在的に有用な酵母の他の種類は、Ｙａｒｒｏｗｉａ、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ、Ｃａｎｄｉｄａ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、Ｆｉｌｏｂａｓｉｕｍ、Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｅｌｌｌａ、Ｓｐｏｒｉｄｉｏｂｏｌｕｓ、Ｂｕｌｌｅｒａ、Ｌｅｕｃｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ、およびＦｉｌｏｂａｓｉｄｅｌｌａを含む。
【０２５６】
本発明の好ましい実施形態では、接合コンピテント酵母は、ピチア属の一員である。本発明のさらなる好ましい実施形態では、ピチア属の接合コンピテント酵母は、以下の種：ピチアパストリス、ピチアメタノリカ、およびハンセヌラポリモーファ（ピチアアンガスタ）の１つである。本発明の特に好ましい実施形態では、ピチア属の接合コンピテント酵母は、ピチアパストリス種である。
【０２５７】
半数体酵母細胞：その正常なゲノム（染色体）補体の各遺伝子の単一配列を有する細胞。
【０２５８】
倍数体酵母細胞：その正常なゲノム（染色体）補体の１つより多い配列を有する細胞。
【０２５９】
二倍体酵母細胞：典型的には、２つの半数体細胞の融合（接合）の過程によって形成される、その正常なゲノム補体の本質的に全遺伝子の２つの配列（対立遺伝子）を有する細胞。
【０２６０】
四倍体酵母細胞：典型的には、２つの半数体細胞の融合（接合）の過程によって形成される、その正常なゲノム補体の本質的に全遺伝子の４つの配列（対立遺伝子）を有する細胞。四倍体は、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上の異なる発現カセットを輸送し得る。このような四倍体は、栄養要求性二倍体を得るために、選択的接合ホモ接合性異体性ａ／ａおよびアルファ／アルファ二倍体によってＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ内に、および半数体の順次接合によってＰｉｃｈｉａに含まれる場合もある。例えば、［ｍｅｔ  ｈｉｓ］半数体は、二倍体［ｈｉｓ］を得るために［ａｄｅ  ｈｉｓ］半数体と接合され得、［ｍｅｔ  ａｒｇ］半数体は、二倍体［ａｒｇ］を得るために［ａｄｅ  ａｒｇ］半数体接合され得、次いで二倍体［ｈｉｓ］は、四倍体  原栄養体を得るために二倍体［ａｒｇ］と接合され得る。二倍体細胞の利益および使用への参照はまた、四倍体細胞に適用し得ることを当業者によって理解されるであろう。
【０２６１】
酵母接合：２つの半数体酵母細胞が自然に融合して、１つの二倍体酵母細胞を形成する過程。
【０２６２】
減数分裂：二倍体酵母細胞が還元分裂を経て、４つの半数体胞子生成物を形成する過程。各胞子は、次いで発芽し、植物性に細胞株を培養する半数体を形成する。
【０２６３】
選択可能なマーカー：選択可能なマーカーは、例えば、形質転換現象を介して等、その遺伝子を受け取る細胞上で、増殖表現型（物理的増殖特徴）を与える、遺伝子または遺伝子フラグメントである。選択可能なマーカーは、選択可能なマーカー遺伝子を受け取らない細胞は培養できない条件下で、その細胞が選択的増殖培地において生存し、および培養することを可能にする。選択可能なマーカー遺伝子は、通常、ｔｓ突然変異体が交差される、またはｔｓ突然変異体が形質転換される時に、細胞抵抗に抗生物質または他の薬物を与える遺伝子等の陽性選択可能なマーカー遺伝子、生合成遺伝子を有さない全ての細胞によって必要とされる特定の栄養素なしで、細胞に培地で培養する能力を与える生合成遺伝子等の陰性選択可能なマーカー遺伝子、または野生型遺伝子を有さない細胞によっては成長できないようにする突然変異生合成遺伝子等を含むいくつかの種類に分類される。適切なマーカーは、ＺＥＯ、Ｇ４１８、ＬＹＳ３、ＭＥＴ１、ＭＥＴ３ａ、ＡＤＥ１、ＡＤＥ３、ＵＲＡ３等を含むが、それらに限定されない。
【０２６４】
発現ベクター：これらのＤＮＡベクターは、標的宿主細胞内で、外来性タンパク質の発現のための操作を促進する要素を含有する。好都合には、形質転換のためのＤＮＡの配列および産生の操作は、まず、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ等、細菌宿主で実行され、ベクターは通常、複製の細菌起源および適切な細菌選択マーカーを含む、そのような操作を促進するための配列を含む。選択マーカーは、選択的培養基で培養される形質転換される宿主細胞の生存または増殖に必要なタンパク質をコードする。選択遺伝子を含有するベクターとともに形質転換されない宿主細胞は、培養基で生存しない。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質または他の毒素に対する耐性を与え、（ｂ）栄養要求性欠乏を補完し、（ｃ）複合培地から入手不可能な重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。酵母の形質転換のための典型的なベクターおよび方法は、例えば、Ｂｕｒｋｅ，Ｄ．，Ｄａｗｓｏｎ，Ｄ．，＆  Ｓｔｅａｒｎｓ，Ｔ．（２０００）．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  ｙｅａｓｔ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ：ａ  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｃｏｕｒｓｅ  ｍａｎｕａｌ．Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎ．Ｙ．：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓで示される。
【０２６５】
本発明の方法での使用のための発現ベクターは、形質転換された酵母菌株を識別するための選択可能な栄養要求性または薬物マーカーを含む、酵母特定の配列をさらに含む。薬物マーカーは、酵母宿主細胞内のベクターのコピー数を増幅するためにさらに使用され得る。
【０２６６】
目的の配列をコードするポリペプチドは、酵母細胞でポリペプチドの発現を提供する転写および翻訳調節配列に操作可能に連結される。これらのベクター成分は、エンハンサー要素、プロモーター、および転写終結配列の１つ以上を含み得るが、それらに限定されない。ポリペプチドの分泌のための配列はまた、例えば、シグナル配列等のポリペプチドの分泌のための配列も含まれ得る。複製の酵母起源は、発現ベクターがしばしば酵母ゲノム内に組み込まれる時に任意である。
【０２６７】
本発明の１つの実施形態では、目的のポリペプチドは、酵母二倍体細胞からのポリペプチドの最適分泌を提供する配列に、操作可能に連結される、または融合される。
【０２６８】
核酸は、別の核酸配列との機能的な関係内に配置される時に、「操作可能に連結される」。例えば、シグナル配列のＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合に、ポリペプチドのＤＮＡに操作可能に連結され、プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合に、コード配列に操作可能に連結される。一般に、「操作可能に連結される」は、連結されるＤＮＡ配列は隣接しており、分泌リーダーについては、隣接し、およびリーディングフレーム内に存在することを意味する。しかしながら、エンハンサーは隣接する必要はない。連結は、好都合な制限部位で、または当業者（ＧａｔｅｗａｙＲ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）によく知られているＰＣＲ／組換え方法を介して、核酸連結によって達成される。そのような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプタまたはリンカーが、従来の実践に従って使用される。
【０２６９】
プロモーターは、それらが操作可能に連結される特定の核酸配列の転写および翻訳を制御する構造遺伝子（通常約１００から１０００ｂｐ以内）の開始コドンに対して上流（５’）に位置される非翻訳配列である。そのようなプロモーターは、いくつかのクラス、すなわち誘導性、恒常的、および抑制可能なプロモーター（リプレッサーの不在に応じて、転写レベルを増加する）に分類される。誘導性プロモーターは、例えば、栄養素の存在もしくは不在または温度変化等、培養物中のある変化に応じて、それらの制御下で、ＤＮＡからの転写の増加レベルを開始し得る。
【０２７０】
酵母プロモーターフラグメントはまた、酵母ゲノム中の同一の部位への、発現ベクターの相同組換えおよび組込み部位の役割を果たし得、あるいは、選択可能なマーカーが相同組換え部位として使用される。Ｐｉｃｈｉａ形質転換は、Ｃｒｅｇｇら（１９８５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：３３７６−３３８５で示される。
【０２７１】
Ｐｉｃｈｉａからの適切なプロモーターの実施例は、ＡＯＸ１およびプロモーター（Ｃｒｅｇｇら（１９８９）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．９：１３１６−１３２３）、ＩＣＬ１  ｐｒｏｍｏｔｅｒ（Ｍｅｎｅｎｄｅｚら，（２００３）Ｙｅａｓｔ２０（１３）：１０９７−１０８）、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ  プロモーター（ＧＡＰ）（Ｗａｔｅｒｈａｍら（１９９７）Ｇｅｎｅ１８６（１）：３７−４４）、およびＦＬＤ１プロモーター（Ｓｈｅｎら（１９９８）Ｇｅｎｅ２１６（１）：９３−１０２）を含む。ＧＡＰプロモーターは強力な構成的プロモーターであり、ＡＯＸおよびＦＬＤ１プロモーターは誘導性である。
【０２７２】
他の酵母プロモーターは、ＡＤＨ１、アルコールデヒドロゲナーゼＩＩ、ＧＡＬ４、ＰＨＯ３、ＰＨＯ５、Ｐｙｋ、およびそれらに由来するキメラプロモーターを含む。加えて、非酵母プロモーターは、本発明では、哺乳類、昆虫、植物、爬虫類、両生類、ウイルス性、および鳥類プロモーター等が使用され得る。最も典型的には、プロモーターは、哺乳類プロモーター（発現遺伝子に対して潜在的に内在性である）を含み、または酵母系で効率的な転写を提供する酵母またはウイルス性プロモーターを含む。
【０２７３】
目的のポリペプチドは、直接的のみならず、例えば、成熟タンパク質またはポリペプチドのＮ終端で特異的切断部位を有するシグナル配列または他のポリペプチド等の異種ポリペプチドを伴う融合ポリペプチドとして、組換えで産生され得る。概して、シグナル配列は、ベクターの成分であり得、またはベクターに挿入される配列をコードするポリペプチドの一部であり得る。選択される異種シグナル配列は、好ましくは、宿主細胞内で入手可能な標準経路の１つを介して認識および処理されるものである。Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅアルファ係数プレプロシグナルは、ピチアパストリスからの種々の組換えタンパク質の分泌において、有効であると判明した。他の酵母シグナル配列は、アルファ接合因子シグナル配列、インベルターゼシグナル配列、および他の分泌酵母ポリペプチドに由来するシグナル配列を含む。加えて、これらのシグナルペプチド配列は、二倍体酵母発現系で改善された分泌を提供するために操作され得る。他の目的の分泌シグナルはまた、分泌タンパク質に対して異種であり得る、または分泌タンパク質のための未変性の配列であり得る、哺乳類シグナル配列を含む。シグナル配列は、プレペプチド配列を含み、場合によってはプロペプチド配列を含む。例えば、Ｋ２８プレプロ毒素配列、ＰＨＡ−Ｅ、ＦＡＣＥ、ヒトＭＣＰ−１、ヒト血清中アルブミンシグナル配列、ヒトＩｇ重鎖、ヒトＩｇ軽鎖等の、免疫グロブリン鎖状で発見されたシグナル配列を含む、多くのそのようなシグナル配列が、当技術分野で知られている。例えば、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏら  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  １１（２）７５（１９９８）、およびＫｏｂａｙａｓｈｉら  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｈｅｒｅｓｉｓ  ２（４）２５７（１９９８）を参照されたい。
【０２７４】
転写は、転写活性化因子配列をベクターに挿入することによって増加され得る。これらの活性化因子は、その転写を増加するためにプロモーター上で作用する、通常約１０から３００ｂｐのＤＮＡのシス作用エレメントである。イントロン内で、ならびにそのコード配列内で、転写ユニットに対して５’および３’であることが見出された転写エンハンサーは、比較的配向、位置に依存しない。エンハンサーは、コード配列に対して５’または３’の位置で発現ベクターにスプライスされ得るが、好ましくは、プロモーターから５’部位で位置される。
【０２７５】
真核宿主細胞内で使用される発現ベクターはまた、転写の終結のために、およびｍＲＮＡを安定化するために必要である配列を含有し得る。そのような配列は、核性もしくはウイルス性ＤＮＡまたはｃＤＮＡの非翻訳領域において、３’から翻訳終結コドンで通常使用可能である。これらの領域は、ｍＲＮＡの非翻訳部分で、ポリアデニル化されたフラグメントとして転写されたヌクレオチドセグメントを含有する。
【０２７６】
上記に掲載される成分の１つ以上を含有する適切なベクターの構築は、標準核酸連結技術またはＰＣＲ／組換え方法を採用する。単離されたプラスミドまたはＤＮＡフラグメントは、必要とされるプラスミドを産生するための所望の形態で、または組換え方法を介して、切断され、調整され、および再結紮される。構築されたプラスミド中の正確な配列を確認するための分析のために、宿主細胞を形質転換するために、結紮混合物が使用され、適切な場合、良好な形質転換体を、抗生物質抵抗（例えば、アンピシリンまたはＺｅｏｃｉｎ（商標）（フレオマイシン））によって選択する。形質転換体からのプラスミドは、調製され、制限エンドヌクレアーゼ消化によって分析され、および／または配列決定される。
【０２７７】
フラグメントの制限および結紮の別の方法として、ａｔｔ部位および組換え酵素に基づく組換え方法は、ＤＮＡ配列をベクターに挿入するために使用され得る。そのような方法は、例えば、Ｌａｎｄｙ（１９８９）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５８：９１３−９４９によって示され、当業者に知られている。そのような方法は、ラムダおよびＥ．ｃｏｌｉコードされた組換えタンパク質の混合によって媒介される分子間ＤＮＡ組換えを利用する。組換えは、相互作用ＤＮＡ分子上の特定付着（ａｔｔ）部位の間で生じる。ａｔｔ部位の説明には、Ｗｅｉｓｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｌａｎｄｙ  （１９８３）Ｓｉｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｇｅ  Ｌａｍｂｄａ、ｉｎ  Ｌａｍｂｄａ  ＩＩ、Ｗｅｉｓｂｅｒｇ、ｅｄ．（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ）、ｐｐ．２１１〜２５０を参照されたい。組換え部位を隣接するＤＮＡセグメントは、組換え後、ａｔｔ部位が、各親ベクターによって提供される配列から成るハイブリッド配列になるように転換される。組換えは、任意のトポロジーのＤＮＡ間で発生することができる。
【０２７８】
Ａｔｔ部位は、関心の配列を適切なベクター内に結紮することによって、特異的プライマーの使用を介して、ａｔｔＢ部位を含有するＰＣＲ生成物を産生することによって、ａｔｔ部位を含有する適切なベクターにクローン化されるｃＤＮＡライブラリを産生することによって等、目的の配列内に導入され得る。
【０２７９】
本明細書で使用される、フォールディングは、アミノ酸残基間の相互作用が構造を安定させるように作用する、ポリペプチドおよびタンパク質の三次元構造を指す。非共有相互作用が構造を決定する上で重要である一方、通常、目的のタンパク質は、２つのシステイン残基によって形成される、分子内および／または分子間共有ジスルフィド結合を有する。自然発生するタンパク質およびポリペプチドまたはその誘導体および変異体については、適切なフォールディングは、典型的には最適な生物活性をもたらす配置であり、好都合には、モニタリング、例えば、リガンド結合、酵素活性等の活性のためのアッセイによってモニタリングされることができる。
【０２８０】
場合によっては、所望の生成物が合成起源である場合の例では、生物活性に基づくアッセイは、あまり有意義ではないだろう。そのような分子の適切なフォールディングは、物理的性質、エネルギー的考察、モデリング研究、等に基づいて決定され得る。
【０２８１】
発現宿主は、フォールディングおよびジスルフィド結合形成を増強する、１つ以上の酵素、すなわち、フォルダース、シャペロニン等をコードする配列の導入によって、さらに修飾され得る。そのような配列は、当技術分野で知られているように、ベクター、マーカー等を使用して、酵母宿主細胞で、構造的にまたは誘導的に発現され得る。好ましくは、発現の所望のパターンに十分な転写調節要素を含む配列は、標的方法を介して、酵母ゲノム中に安定的に組み込まれる。
【０２８２】
例えば、真核性ＰＤＩは、タンパク質システイン酸化およびジスルフィド結合異性化の効率的な触媒であるばかりではなく、シャペロン活性も示す。ＰＤＩの共発現は、多重ジスルフィド結合を有する活性タンパク質の産生を促進することができる。さらに注目されるのは、ＢＩＰ（タンパク質に結合する免疫グロブリン重鎖）、サイクロフィリン等の発現である。本発明の１つの実施形態では、各半数体親株は、別々のフォールディング酵素を発現し、例えば、１つの株はＢＩＰを発現し得、他の株はＰＤＩまたはそれらの組み合わせを発現し得る。
【０２８３】
「所望のタンパク質」または「標的タンパク質」という用語は、互換的に使用され、本明細書に記載されるヒト化抗体またはその結合部分を通常指す。「抗体」という用語は、エピトープに適合し、および認識する特異形状を伴う分子構造を含有する任意のポリペプチド鎖を含むように意図し、１つ以上の非共有結合相互作用は、分子構造とエピトープとの間の複合体を安定させる。原型の抗体分子は免疫グロブリンであり、例えば、ヒト、齧歯類、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、他の哺乳類、ニワトリ、他の鳥類等の全ての供給源からの、全ての種類の免疫グロブリン、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ等は、「抗体」であると見なされる。本発明に記載の出発原料として有用な抗体を産生すための好適な供給源は、ウサギである。多数の抗体コード配列が説明されており、他の抗体コード配列は、当技術分野でよく知られている方法によってもたらされ得る。その例は、キメラ抗体、ヒト抗体および他の非ヒト哺乳類抗体、ヒト化抗体、ｓｃＦｖｓ等の一本鎖抗体、キャメルボディ、ナノボディ、ＩｇＮＡＲ（単一鎖抗体に由来するサメ）、小分子免疫製剤（ＳＭＩＰｓ）、およびＦａｂｓＦａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２等の抗体フラグメントを含む。Ｓｔｒｅｌｔｓｏｖ  ＶＡ，ら，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ａ  ｓｈａｒｋ  ＩｇＮＡＲ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎ  ａｎｄ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｏｆ  ａｎ  ｅａｒｌｙ−ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｉｓｏｔｙｐｅ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．２００５  Ｎｏｖ；１４（１１）：２９０１−９．Ｅｐｕｂ  ２００５  Ｓｅｐ  ３０、Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ  ＡＳ，ら，Ａ  ｎｅｗ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ｆａｍｉｌｙ  ｔｈａｔ  ｕｎｄｅｒｇｏｅｓ  ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ  ｓｏｍａｔｉｃ  ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓｈａｒｋｓ，Ｎａｔｕｒｅ．１９９５  Ｍａｒ  ９；３７４（６５１８）：１６８−７３、Ｎｕｔｔａｌｌ  ＳＤ，ら，Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｅｗ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｒｏｍ  ｗｏｂｂｅｇｏｎｇ  ｓｈａｒｋｓ，ａｎｄ  ｕｓｅ  ａｓ  ａ  ｓｃａｆｆｏｌｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｏｏｐ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１  Ａｕｇ；３８（４）：３１３−２６、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ  Ｃ，ら，Ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｄｅｖｏｉｄ  ｏｆ  ｌｉｇｈｔ  ｃｈａｉｎｓ，Ｎａｔｕｒｅ．１９９３  Ｊｕｎ  ３；３６３（６４２８）：４４６−８、Ｇｉｌｌ  ＤＳ，ら，Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｕｓｉｎｇ  ｎｏｖｅｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｃａｆｆｏｌｄｓ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００６  Ｄｅｃ；１７（６）：６５３−８．Ｅｐｕｂ  ２００６  Ｏｃｔ  １９を参照されたい。
【０２８４】
例えば、抗体または抗原結合フラグメントまたはその変異体は、遺伝子工学によって産生され得る。この技術では、他の方法と同様に、抗体産生細胞は、所望の抗原または免疫原に感作される。抗体産生細胞から単離されるメッセンジャーＲＮＡは、ＰＣＲ増幅を使用するｃＤＮＡを作るためのテンプレートとして使用される。各ベクターが初期の抗原特異性を保持する１つの重鎖遺伝子および１つの軽鎖遺伝子を含有するベクターのライブラリは、発現ベクターへの増幅免疫グロブリンｃＤＮＡの適切な部分の挿入によって産生される。組み合わせのライブラリは、重鎖遺伝子ライブラリと軽鎖遺伝子ライブラリを結合することによって作成される。これは、重鎖および軽鎖（抗体分子のＦａｂフラグメントまたは抗原結合フラグメントに類似する）を共発現するクローンのライブラリをもたらす。これらの遺伝子を持つベクターは、宿主細胞に共形質移入される。抗体遺伝子合成が形質移入宿主内で誘発される時に、活性抗体を産生するために自己組織化した重鎖および軽鎖タンパク質は、抗原または免疫原でのスクリーニングによって検出することができる。
【０２８５】
目的の抗体コード配列は、天然配列によってコードされるもの、ならびに遺伝子コードの縮重によって、開示される核酸と配列において同一ではない核酸、およびその変異体を含む。変異体ポリペプチドは、アミノ酸（ａａ）置換、付加、または欠失を含むことができる。アミノ酸置換は、グリコシル化部位を変化させるための、または作用に必要ではない１つ以上のシステイン残基の置換または欠失によるミスフォールディングを最小化するための等、不必要なアミノ酸を排除するための保存アミノ酸置換または置換であり得る。変異体は、タンパク質（例えば、機能的なドメイン、触媒アミノ酸残基等）の特定の領域の増強生物活性を保持または有するように設計することができる。変異体はまた、本明細書に開示されるポリペプチドのフラグメント、特に、機能的ドメインに対応する生物学的活性フラグメントおよび／またはフラグメントを含む。クローン化遺伝子の体外突然変異生成のための技術が知られている。また、主題発明に含まれるものは、タンパク質分解に対する抵抗を改善するために、または溶解特性を最適化するために、または治療薬としてより適切にするために、通常分子生物学的技術を使用して修飾されたポリペプチドである。
【０２８６】
キメラ抗体は、１つの種の抗体産生細胞から得られた可変軽鎖および重鎖領域（ＶＬおよびＶＨ）をもう１つの種からの定常軽鎖および重鎖領域と組み合わせることによる、組換え手段によって作成することができる。典型的には、キメラ抗体は、主にヒトドメインを有する抗体を生成するために、齧歯類またはウサギ可変領域およびヒト定常領域を利用する。そのようなキメラ抗体の産生は、当技術分野でよく知られており、標準手段（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれている、米国特許第５，６２４，６５９号で示されるような）によって達成され得る。本発明のキメラ抗体のヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５、ＩｇＧ６、ＩｇＧ７、ＩｇＧ８、ＩｇＧ９、ＩｇＧ１０、ＩｇＧ１１、ＩｇＧ１２、ＩｇＧ１３、ＩｇＧ１４、ＩｇＧ１５、ＩｇＧ１６、ＩｇＧ１７、ＩｇＧ１８、またはＩｇＧ１９定常領域から選択され得ることがさらに検討される。
【０２８７】
ヒト化抗体は、よりヒト様の免疫グロブリンドメインを含有するように操作され、動物由来の抗体の相補性決定領域のみを組み込む。これは、モノクローナル抗体の可変領域の超可変ループの配列を注意深く調べることによって、およびそれらをヒト抗体鎖の構造に適合することによって達成される。表面的には複雑であるが、過程は実際には容易である。例えば、参照により本明細書に完全に組み込まれる、米国特許第６，１８７，２８７号を参照されたい。好ましい実施形態では、ヒト化は、以下に詳細で開示されるように、達成され得る。このスキームは、ヒト化されている親抗体に高度の相同性を示すヒトＦＲ上で、ＣＤＲをグラフトする。
【０２８８】
全免疫グロブリン（またはそれらの組換え対応物）に加えて、エピトープ結合部位（例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または他のフラグメント）を含む免疫グロブリンフラグメントを合成することができる。「フラグメント」または最小限の免疫グロブリンは、組換え免疫グロブリン技術を利用することによって設計され得る。例えば、本発明で使用する「Ｆｖ」免疫グロブリンは、融合可変軽鎖領域および可変重鎖領域を合成することによって産生され得る。また、抗体の組み合わせとして、例えば、２つの別々のＦｖ特異性を含むディアボディ等にも着目する。本発明の別の実施形態では、ＳＭＩＰｓ（小分子免疫製剤）、キャメルボディ、ナノボディ、およびＩｇＮＡＲは、免疫グロブリンフラグメントに含まれる。
【０２８９】
免疫グロブリンおよびそのフラグメントは、例えば、化学的リンカー、蛍光色素、酵素、毒素、基質、生物発光物質、放射性物質、化学発光成分等の検出可能な成分、またはストレプトアビジン、アビジン、またはビオチン等の特定の結合成分等の効果または成分を加えるように、翻訳後に修飾され得、本発明の方法および組成物で利用され得る。付加的な効果または分子の実施例は、以下に提供される。
【０２９０】
「安定的に発現する、または長期間、所望の分泌される異種ポリペプチドを発現する、倍数性酵母」という用語は、少なくとも数日から１週間、より好ましくは少なくとも１ヶ月、さらにより好ましくは少なくとも１から６ヶ月、およびさらにより好ましくは１年以上、典型的には少なくとも１０〜２５ｍｇ／Ｌの閾値発現レベルで、好ましくは閾値発現レベルより大幅に高いレベルで、該ポリペプチドを分泌する酵母培養物を指す。
【０２９１】
「組換えポリペプチドの所望の量を分泌する倍数性酵母培養物」という用語は、異種ポリペプチドの少なくとも１０〜２５ｍｇ／Ｌ、より好ましくは少なくとも５０〜５００ｍｇ／Ｌ、および最も好ましくは５００〜１０００ｍｇ／Ｌまたはそれ以上、安定的にまたは長期間分泌する培養物を指す。
【０２９２】
遺伝子コードに従ってのポリヌクレオチド配列の翻訳が、ポリペプチド配列を産生する（すなわち、ポリヌクレオチド配列がポリペプチド配列を「コード」する）場合、ポリヌクレオチド配列はポリペプチド配列に「対応」し、２つの配列が同一のポリペプチド配列をコードする場合、１つのポリヌクレオチド配列は別のポリヌクレオチド配列に「対応」する。
【０２９３】
ＤＮＡ構築物の「異種」領域またはドメインは、より大きな分子と関連して本来見出されないより大きなＤＮＡ分子内で、ＤＮＡの識別可能なセグメントである。したがって、異種領域が哺乳類遺伝子をコードする時に、遺伝子は、供給源生物のゲノム中の哺乳類ゲノムＤＮＡと隣接しないＤＮＡによって通常隣接される。異種領域の別の例は、コード配列自体は、本来見出されない構築物である（例えば、ゲノムコード配列がイントロンを含有するｃＤＮＡ、または未変性遺伝子とは異なるコドンを有する合成配列）。対立遺伝子変異または自然に発生する突然変異現象は、本明細書に定義されるように、ＤＮＡの異種領域を引き起こさない。
【０２９４】
「コード配列」は、（遺伝子コードを考慮して）タンパク質またはペプチド配列に対応する、またはコードするコドンのインフレーム配列である。配列またはそれらの相補配列が同一のアミノ酸配列コードする場合、２つのコード配列は相互に対応する。適切な調節配列に関連するコード配列は、ポリペプチドに転写および翻訳され得る。ポリアデニル化シグナルおよび転写終結配列は、コード配列に対して通常３’で位置する。「プロモーター配列」は、細胞内のＲＮＡポリメラーゼに結合し、下流（３’方向）コード配列の転写を開始することのできるＤＮＡ調節領域である。プロモーター配列は、典型的には、コード配列の転写にに影響を及ぼす調節分子（例えば、転写要因）の結合のための付加的な部位を含有する。コード配列は、ＲＮＡポリメラーゼが細胞内のプロモーター配列に結合し、コード配列をｍＲＮＡに転写する時に、プロモーター配列の「支配下」であり、またはプロモーターに「動作可能に連結」され、次に、ｍＲＮＡは、コード配列によってコードされるタンパク質に翻訳される。
【０２９５】
ベクターは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはタンパク質等の異物を生物または宿主細胞に導入するために使用される。典型的なベクターは、組換えウイルス（ポリヌクレオチドのために）およびリポソームおよびリポソームまたは他の脂質凝集体（ポリペプチドおよび／またはポリヌクレオチド用）を含む。「ＤＮＡベクター」は、付着セグメントの複製をもたらすために、別のポリヌクレオチドセグメントが付着し得る、プラスミド、ファージ、またはコスミド等のレプリコンである。「発現ベクター」は、適切な宿主細胞によるポリペプチド合成を導く調節配列を含有するＤＮＡベクターである。これは、ＲＮＡポリメラーゼに結合し、ｍＲＮＡの転写を開始するプロモーター、ならびにｍＲＮＡのポリペプチドへの翻訳を指示するリボソーム結合部位および開始シグナルを通常意味する。適切な部位で、および正確なリーディングフレーム内での、ポリヌクレオチド配列の発現ベクターへの組入れ、次いで、ベクターによって適切な宿主細胞の形質転換は、該ポリヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドの産生を可能にする。それらの使用のための典型的な発現ベクターおよび技術は、以下の開示で示される。Ｏｌｄら，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ：Ａｎ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９；  Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２００１、Ｇｏｒｍａｎ，”Ｈｉｇｈ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｉｎｔｏ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ，”ｉｎ  ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅ  ＩＩ，Ｇｌｏｖｅｒ，Ｄ．  Ｍ．，Ｅｄ．，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，ｐｐ．１４３  １９０（１９８５）。
【０２９６】
例えば、リポソームまたは他の液体凝集物は、ホスファチジルコリン（レシチン）（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、リゾレシチン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、スフィンゴミエリン、カルジオリピン、ホスファチジン酸（ＰＡ）、脂肪酸、ガングリオシド、糖脂質、糖脂質、モノ、ジ、またはトリグリセリド、セラミド、セレブロシドおよびそれらの組み合わせ等の脂質、１，２−ジオレイルオキシ−３−（トリメチルアミノ）プロパン（ＤＯＴＡＰ）、Ｎ−コレステリルオキシカルバリル−３，７，１２−トリアザペンタデカン−１，１５−ジアミン（ＣＴＡＰ）、Ｎ−［１−（２，３、−ジテトラデシルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチル臭化アンモニウム（ＤＭＲＩＥ）、Ｎ−［１−（２，３，−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチル臭化アンモニウム（ＤＯＲＩＥ）、Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−塩化トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）、３ベータ［Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ−Ｃｈｏｉ）、およびジメチルジオクタデシルアンモニウム（ＤＤＡＢ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、コレステロール含有ＤＯＰＣ、およびそれらの組み合わせ等の陽イオン性脂質（または他のカチオン性両親媒性化合物）、および／またはポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、ポリメチルオキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリヒドロキシプロピルメタクリレート、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリアスパルトアミド、およびそれらの組み合わせ等の親水性ポリマーを含み得る。他の適切な陽イオン性脂質は、Ｍｉｌｌｅｒ、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．３７：１７６８  １７８５（１９９８）、およびＣｏｏｐｅｒら，Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．４（１）：１３７  １５１（１９９８）で示される。リポソームは、交差結合される、部分的に交差結合される、または交差結合を含まないことができる。交差結合リポソームは、交差結合成分、ならびに非交差結合成分を含むことができる。適切な陽イオンリポソームまたはサイトフェクチンは、市販であり、Ｓｉｐｋｉｎｓら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９９８，４（５）：（１９９８），６２３  ６２６で示されるように、またはＭｉｌｌｅｒ（前述）で示されるように、調製されることができる。典型的なリポソームは、重合可能な両性イオンまたは中性脂質、重合可能なインテグリン標的脂質、および核酸に結合するのに適切な重合可能な陽イオン液を含む。リポソームは、例えば、米国特許第７，２９７，７５９号で示されるように、効率増加を提供するペプチドを任意で含むことができ、さらなる典型的なリポソームおよび他の液体凝集物は、米国特許第７，���６６，２９８号で示される。
【０２９７】
ポリヌクレオチド配列の「増幅」は、特定の核酸配列の多重複製の体外産生である。増幅配列は、通常ＤＮＡの形態である。そのような増幅を実行するための種々の技術は、Ｖａｎ  Ｂｒｕｎｔ（１９９０，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．，８（４）：２９１−２９４）による総説で示される。ポリメラーゼ鎖反応またはＰＣＲは、核酸増幅の原型であり、本明細書でのＰＣＲの使用は、他の適切な増幅技術の例示であると見なされるべきである。
【０２９８】
脊椎動物における抗体の一般構造は、現在よく理解されている（Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９０：５（１９７１））。抗体は、分子量約２３，０００ダルトンの２つの同一軽ポリペプチド鎖（「軽鎖」）、および分子量５３，０００〜７０，０００の２つの同一重鎖（「重鎖」）から成る。４つの鎖は、軽鎖が「Ｙ」配置の口で始まる重鎖を一括する「Ｙ」配置で、ジスルフィド結合によって連結される。「Ｙ」配置の「分岐」部分は、Ｆａｂ領域と名付けられ、「Ｙ」配置の幹部は、Ｆｃ領域と名付けられる。アミノ酸配列の配向は、「Ｙ」配置の上部でのＮ−端末終端から、各鎖の下部でのＣ−端末終端の方向となる。Ｎ−端末終端は、それを誘発した抗原に対する特異性を有する可変領域を持ち、約１００アミノ酸長であるが、軽鎖と重鎖との間、および抗体間でわずかな違いがある。
【０２９９】
可変領域は、鎖の残りの長さに延在し、特定のクラス内で抗体（すなわち、それを誘発する抗原）の特異性とともに変化しない定常領域に対して各鎖で連結される。免疫グロブリン分子のクラスを決定する、定常領域の５つのよく知られた主要クラスがある（γ、μ、α、δ、およびε（ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはエプシロン）重鎖定常領域に対応する、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ）。定常領域またはクラスは、補体の活性（Ｋａｂａｔ、Ｅ．Ａ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｃｏｎｃｅｐｔｓ  ｉｎ  ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙおよびＩｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２ｎｄ  Ｅｄ．，ｐ．４１３−４３６，Ｈｏｌｔ，Ｒｉｎｅｈａｒｔ，Ｗｉｎｓｔｏｎ（１９７６））、および他の細胞反応（Ａｎｄｒｅｗｓ，Ｄ．Ｗ．，ら，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，ｐｐ１−１８，Ｗ．Ｂ．Ｓａｎｄｅｒｓ（１９８０）；Ｋｏｈｌ，Ｓ．ら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４８：１８７（１９８３））を含む抗体のその後のエフェクター機能を決定し、一方、可変領域は、それが反応する抗原を決定する。軽鎖は、κ（カッパ）またはλ（ラムダ）のどちらかに分類される。各重鎖クラスは、カッパまたはラムダ軽鎖のどちらかと対になることができる。軽鎖および重鎖は相互に共有結合され、２つの重鎖の「尾」部分は、免疫グロブリンがハイブリドーマまたはＢ細胞のどちらかによって産生される時に、共有ジスルフィド連鎖によって相互に結合される。
【０３００】
「可変領域」または「ＶＲ」という表現は、抗体を抗原に結合することに直接的に関与する、抗体中の軽鎖および重鎖の各対内のドメインを指す。各重鎖は、１つの末端で可変ドメイン（ＶＨ）を有し、いくつかの定常ドメインが続く。各軽鎖は、１つの末端で可変ドメイン（ＶＬ）およびその他の末端で定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列し、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列する。
【０３０１】
「相補性決定領域」、「超可変領域」、または「ＣＤＲ」という表現は、抗体の軽鎖または重鎖の可変領域で見出される１つ以上の超可変または相補性決定領域（ＣＤＲ）を指す（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．，（１９８７）参照）。これらの表現は、Ｋａｂａｔら．（“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｋａｂａｔ  Ｅ．，ら．，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９８３）によって定義される、超可変領域、または抗体の三次元構造における超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６  ９０１−９１７（１９８７））を含む。各鎖内のＣＤＲは、フレームワーク領域によって接近して維持され、他方の鎖からのＣＤＲとともに、抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲ内で、抗体抗原相互作用において、ＣＤＲによって使用される必須の接触残基を表す選択性決定領域（ＳＤＲ）として説明される選択アミノ酸が存在する（Ｋａｓｈｍｉｒｉ、Ｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，３６：２５−３４（２００５））。典型的な抗ＩＬ−６抗体のためのＣＤＲが本明細書で提供される。
【０３０２】
「フレームワーク領域」または「ＦＲ」という表現は、抗体の軽鎖および重鎖の可変領域内の１つ以上のフレームワーク領域を指す（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．，（１９８７）参照）。これらの表現は、抗体の軽鎖および重鎖の可変領域内で、ＣＤＲの間に挿入されるアミノ酸配列領域を含む。好ましい実施形態で述べられるように、ＦＲは、親抗体（例えば、ウサギ抗体）に対して高度の相同性を示すヒトＦＲを含む。
【０３０３】
［Ａｂ１  抗ＩＬ−６抗体およびその結合フラグメント］
本発明は、ＩＬ−６に対して結合特異性を有し、以下に示す配列を含む可変軽鎖配列を有する抗体を含む：
ＭＤＴＲＡＰＴＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＰＧＡＲＣＡＹＤＭＴＱＴＰＡＳＶＳＡＡＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＱＳＩＮＮＥＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＲＰＫＬＬＩＹＲＡＳＴＬＡＳＧＶＳＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＱＧＹＳＬＲＮＩＤＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮ（配列番号２）またはＡＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＩＮＮＥＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＲＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＹＳＬＲＮＩＤＮＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号７０９）、および図２ならびに図３４〜図３７に記載したもの、および表１に記載するものを含む、そのヒト化型および変異体。
【０３０４】
本発明はまた、ＩＬ−６に対して結合特異性を有し、以下に示す配列を含む可変重鎖配列を持つ抗体を含む：
ＭＥＴＧＬＲＷＬＬＬＶＡＶＬＫＧＶＱＣＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳＮＹＹＶＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩＩＹＧＳＤＥＴＡＹＡＴＷＡＩＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＦＣＡＲＤＤＳＳＤＷＤＡＫＦＮＬＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫ（配列番号３）またはＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＳＮＹＹＶＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＩＩＹＧＳＤＥＴＡＹＡＴＳＡＩＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＤＳＳＤＷＤＡＫＦＮＬＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６５７）、および図２ならびに図３４〜図３７に記載したもの、および表１に記載するものを含む、そのヒト化型および変異体。
【０３０５】
本発明はさらに、ＩＬ−６に特異的に結合し、可変重鎖配列を有する抗体を含み、ただし可変重鎖配列は、次の配列のようにＣＤＲ２のトリプトファン残基がセリンに変わっている配列番号３の改変型を含む：
ＭＥＴＧＬＲＷＬＬＬＶＡＶＬＫＧＶＱＣＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳＮＹＹＶＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩＩＹＧＳＤＥＴＡＹＡＴＳＡＩＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＦＣＡＲＤＤＳＳＤＷＤＡＫＦＮＬＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫ（配列番号６５８）、および図２ならびに図３４〜図３７に記載したもの、および表１に記載するものを含むそのヒト化型および変異体。
【０３０６】
本発明は、配列番号２の可変軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲまたは超可変領域）に対応する、配列番号４、配列番号５、および配列番号６の１つ以上のポリペプチド配列、および／または配列番号３または１９に含有されるそれらの可変重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲまたは超可変領域）に対応する、配列番号７、配列番号８または１２０、および配列番号９の１つ以上のポリペプチド配列、またはこれらのポリペプチド配列の組み合わせを含む抗体をさらに想定している。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体は、上で示したＣＤＲならびに可変重鎖および軽鎖配列の組み合わせを含む。
【０３０７】
他の実施形態では、本発明は、配列番号２のヒト化ＶＬ配列の可変軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲまたは超可変領域）に対応する、配列番号４、配列番号５、および配列番号６の１つ以上のポリペプチド配列、および／または配列番号３または１９の可変重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲまたは超可変領域）に対応する、配列番号７、配列番号８または１２０、および配列番号９の１つ以上のポリペプチド配列、またはそれらのポリペプチド配列の組み合わせを含む、例えばキメラ抗体等の他の抗体を想定している。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体は、上で示した可変重鎖および軽鎖配列のＣＤＲヒト化型の組み合わせを含む。
【０３０８】
本発明はまた、ＩＬ−６に対して結合特異性を有する抗体のフラグメントを想定している。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体フラグメントは、配列番号２、２０、６４７、６５１、６６０、６６６、６９９，７０２、７０６または７０９のポリペプチド配列のヒト化型を含む、またはあるいはそれから成る。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体フラグメントは、配列番号３、１８、１９、６５２、６５６、６５７、６５８、６６１、６６４、６６５、７０４または７０８のポリペプチド配列のヒト化型を含む、またはあるいはそれから成る。
【０３０９】
本発明のさらなる実施形態では、ＩＬ−６に対して結合特異性を有する抗体のフラグメントは、配列番号２または配列番号７０９の可変軽鎖配列相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する、配列番号５、および配列番号６の１つ以上のポリペプチド配列を含む、またはあるいはそれから成る。
【０３１０】
本発明のさらなる実施形態では、ＩＬ−６に対して結合特異性を有する抗体のフラグメントは、配列番号３および配列番号６５７または１９の可変重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲ、または超可変領域）に対応する、配列番号７、配列番号８または配列番号１２０、および配列番号９の１つ以上のポリペプチド配列を含む、またはあるいはそれから成る。
【０３１１】
本発明はまた、本明細書に記載される１つ以上の抗体フラグメントを含む抗体フラグメントを想定している。本発明の１つの実施形態では、ＩＬ−６に対して結合特異性を有する抗体のフラグメントは、以下の抗体フラグメントの全てを含む、１つ、２つ、３つ以上を含む、またはあるいはそれから成る：配列番号２または７０９の可変軽鎖領域、配列番号３の可変重鎖領域、配列番号２の可変軽鎖領域の相補性決定領域（配列番号４、配列番号５、および配列番号６）、ならびに配列番号３および配列番号６５７または１９の可変重鎖領域の相補性決定領域（配列番号７、配列番号８または配列番号１２０、および配列番号９）。
【０３１２】
本発明はまた、配列番号１８または配列番号１９の重鎖ポリペプチド配列のいずれかが、配列番号３または配列番号６５７と置換され、配列番号２０の軽鎖ポリペプチド配列が、配列番号２または配列番号７０９軽鎖ポリペプチド配列と置換され、および配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ配列が、配列番号８の重鎖ＣＤＲ配列と置換される、変異体を想定している。
【０３１３】
本発明の好ましい実施形態では、抗ＩＬ−６抗体は、配列番号２および配列番号３を有するＡｂ１、またはより詳しくは、配列番号６５７および配列番号７０９（それぞれ、配列番号７００および配列番号７２３の核酸配列によってコードされる）を含む抗体、または前項で説明する代替配列番号から成り、本明細書で説明する少なくとも１つの生物学的活性を有する抗体である。好ましい実施形態では、抗ＩＬ−６抗体は、図３４〜３７で示される、ヒト化配列を含む。
【０３１４】
本発明の抗ＩＬ−６抗体の配列は、表２で示される。Ａｂ１からＡｂ７の重鎖および軽鎖の典型的な配列変異体他の代替形態が示される。本発明の抗体は、保存置換、１つ以上のＣＤＲ配列および／またはＦＲ配列等の置換を含む、付加的な配列変異体を含む。
【０３１５】
典型的なＡｂ１実施形態は、軽鎖および／または重鎖の変異体を含む抗体を含む。Ａｂ１の軽鎖の典型的な変異体は、示される任意のＡｂ１軽鎖の配列（すなわち、任意の配列番号２、２０、６４７、６５１、６６０、６６６、６９９、７０２、７０６、または７０９）を含み、全体のＣＤＲ１配列が置換される、もしくはＣＤＲ１配列中の１つ以上の残基が、示す任意の他の軽鎖ＣＤＲ１配列（すなわち、任意の配列番号２３、３９、５５、７１、８７、１０３、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３８０、３９６、４１２、４２８、４４４、４６０、４７６、４９２、５０８、５２４、５４０、５５６、または５７２）の対応する位置の残基によって置換される、および／または全体のＣＤＲ２配列が置換される、もしくはＣＤＲ２配列中の１つ以上の残基が、示す任意の他の軽鎖ＣＤＲ２配列（すなわち、任意の配列番号２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２５、１４１、１５７、１７３、１８９、２０５、２２１、２３７、２５３、２６９、２８５、３０１、３１７、３３３、３４９、３６５、３８１、３９７、４１３、４２９、４４５、４６１、４７７、４９３、５０９、５２５、５４１、５５７、または５７３）の対応する位置の残基によって置換される、および／または全体のＣＤＲ３配列が置換される、もしくはＣＤＲ３配列中の１つ以上の残基が、示す任意の他の軽鎖ＣＤＲ３配列（すなわち、任意の配列番号２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３８２、３９８、４１４、４３０、４４６、４６２、４７８、４９４、５１０、５２６、５４２、５５８、または５７４）の対応する位置の残基によって置換される。
【０３１６】
Ａｂ１の重鎖の典型的な変異体は、示される任意のＡｂ１重鎖の配列（すなわち、任意の配列番号３、１８、１９、６５２、６５６、６５７、６５８、６６１、６６４、６６５、７０４、または７０８）を含み、全体のＣＤＲ１配列が置換される、もしくはＣＤＲ１配列中の１つ以上の残基が、示す任意の他の重鎖ＣＤＲ１配列中（すなわち、任意の配列番号２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２７、１４３、１５９、１７５、１９１、２０７、２２３、２３９、２５５、２７１、２８７、３０３、３１９、３３５、３５１、３６７、３８３、３９９、４１５、４３１、４４７、４６３、４７９、４９５、５１１、５２７、５４３、５５９、または５７５）の残基によって置換される、および／または全体のＣＤＲ２配列が置換される、もしくはＣＤＲ２配列中の１つ以上の残基が、表１で示すもの（すなわち、配列番号８、または１２０のいずれか）等のＡｂ１重鎖ＣＤＲ２の対応する位置の残基によって、または示す任意の他の重鎖ＣＤＲ２配列（すなわち、任意の配列番号２７、４３、５９、７５、９１、１０７、１２１、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３８４、４００、４１６、４３２、４４８、４６４、４８０、４９６、５１２、５２８、５４４、５６０、または５７６）によって置換される、および／または全体のＣＤＲ３配列が置換される、もしくはＣＤＲ３配列中の１つ以上の残基が、示す任意の他の重鎖ＣＤＲ３配列（すなわち、任意の配列番号２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２９、１４５、１６１、１７７、１９３、２０９、２２５、２４１、２５７、２７３、２８９、３０５、３２１、３３７、３５３、３６９、３８５、４０１、４１７、４３３、４４９、４６５、４８１、４９７、５１３、５２９、５４５、５６１、または５７７）の対応する位置の残基によって置換される。
【０３１７】
他の実施形態では、本発明は、配列番号２の可変軽鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲまたは超可変領域）に対応する、配列番号４、配列番号５、および配列番号６の１つ以上のポリペプチド配列、および／または配列番号３または配列番号１９の可変重鎖配列の相補性決定領域（ＣＤＲまたは超可変領域）に対応する、配列番号７（ＣＤＲ１）、配列番号８（ＣＤＲ２）、配列番号９（ＣＤＲ３）の１つ以上のポリペプチド配列、またはそれらのポリペプチド配列の組み合わせを含む、例えばキメラまたはヒト化抗体等の他の抗体を想定している。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体は、図２および３４〜３７で示されるもの、および表１で特定されるものを含む、上で示したＣＤＲもしくは可変重鎖および軽鎖配列の組み合わせを含む。
【０３１８】
別の実施形態では、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、以下の少なくとも１つを含む抗体である：配列番号１２または配列番号６９４の配列によってコードされるＣＤＲ１軽鎖、配列番号１３の配列によってコードされる軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１４または配列番号６９５の配列によってコードされる軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１５の配列によってコードされる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１６または配列番号６９６によってコードされる重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１７または配列番号６９７によってコードされる重鎖ＣＤＲ３。加えて、本発明はそのような核酸配列およびその変異体を含有する。
【０３１９】
別の実施形態では、本発明は、配列番号４（ＣＤＲ１）、配列番号５（ＣＤＲ２）、配列番号６（ＣＤＲ３）、配列番号７、配列番号１２０および配列番号９から選択される、該抗ＩＬ−６抗体のＣＤＲと対応するアミノ酸配列に関する。
【０３２０】
別の実施形態では、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、配列番号１０、６６２、６９８、７０１、７０５、７２０、７２１、７２２、または７２３の軽鎖核酸配列、および／または配列番号１１、６６３、７００、７０３、７０７、７２４、または７２５の重鎖核酸配列を含む。加えて、本発明は、任意の前述の核酸配列およびそれらの組み合わせによってコードされる、対応するポリペプチドに関する。
【０３２１】
本発明の具体的な実施形態では、抗ＩＬ−６抗体またはその部分は、配列番号１０、１２、１３、１４、６６２、６９４、６９５、６９８、７０１、７０５、７２０、７２１、７２２、７２３、１１、１５、１６、１７、６６３、６９６、６９７、７００、７０３、７０７、７２４、および７２５に含まれるそれらから選択される核酸配列によってコードされる。例えば、軽鎖中のＣＤＲ１は、配列番号１２または６９４によってコードされ得、軽鎖中のＣＤＲ２は、配列番号１３によってコードされ得、軽鎖中のＣＤＲ３は、配列番号１４または６９５によってコードされ得、重鎖中のＣＤＲ１は、配列番号１５によってコードされ得、重鎖中のＣＤＲ２は、配列番号１６または６９６によってコードされ得、重鎖中のＣＤＲ３は、配列番号１７または６９７によってコードされ得る。以下に述べるように、これらのＣＤＲを含有する抗体は、本明細書に開示されるヒト化方法に基づいて適切なヒトフレームワークを使用して、作成され得る。
【０３２２】
本発明の別の具体的な実施形態では、可変軽鎖は、配列番号１０、６６２、６９８、７０１、７０５、７２０、７２１、７２２、または７２３によってコードされ、および抗ＩＬ−６抗体の可変重鎖は、配列番号１１、６６３、７００、７０３、７０７、７２４、または７２５によってコードされる。
【０３２３】
より具体的な実施形態では、抗ＩＬ−６抗体の可変軽および重鎖は、それぞれ、配列番号１０および１１、または配列番号６９８および配列番号７００、または配列番号７０１および配列番号７０３、または配列番号７０５および配列番号７０７によってコードされる。
【０３２４】
別の具体的な実施形態では、本発明は、任意の前述の核酸配列およびそれらの組み合わせを含有する核酸構築物、ならびにこれらの核酸配列および構築物を含有する組換え細胞を含有し、これらの核酸配列または構築物は染色体であり得る、または宿主細胞ゲノム中に組み込まれ得る。
【０３２５】
別の具体的な実施形態では、本発明は、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号１２０、配列番号９で列挙される任意のＣＤＲまたはそれらの組み合わせを含有するポリペプチド、または配列番号２、２０、６４７、６５１、６６０、６６６、６９９、７０２、７０６、または７０９に含まれる任意の可変軽ポリペプチドを含むポリペプチド、および／または配列番号３、１８、１９、６５２、６５６、６５７、６５８、６６１、６６４、６６５、７０４、または７０８に含まれる可変重ポリペプチドを包含する。これらのポリペプチドは、任意で、他の免疫グロブリンポリペプチドまたは治療または検出可能な実体等のエフェクター成分直接的にまたは間接的に付着され得る。
【０３２６】
別の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体は、以下の少なくとも１つを含む抗体である：配列番号１０または配列番号６９８または配列番号７０１または配列番号７０５の配列によってコードされる可変軽鎖、および配列番号１１または配列番号７００または配列番号７０３または配列番号７０７の配列によってコードされる可変鎖。
【０３２７】
別の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ配列中で１つ以上の置換を含み、体外および／または体内投与後に、Ａｂ１の１つ以上の特性を有する、前述の配列の変異体である。
【０３２８】
これらの体外および体内の特性は、以下の実施例でより詳細に示され、ＩＬ−６および／またはそのペプチドへの結合に対してＡｂ１と競合すること、約５０ピコモル未満のＩＬ−６のために結合親和性（Ｋｄ）および／または１０−４Ｓ−１未満もしくはそれに等しいＩＬ−６からの解離速度（Ｋｏｆｆ）を有すること、健康なヒト被験者において少なくとも約２２日の体内半減期を有すること、低アルブミン血症を防止する、または治療する能力、高ＣＲＰを防止する、または治療する能力、凝固異常を防止する、または治療する能力、および／または血栓症の危険増加に関連する疾病または状態を有する個人において、血栓症の危険性を減少させる能力を含む。抗ＩＬ−６活性の付加的な非限定実施例は、例えば「抗ＩＬ−６  活性」の表題で本明細書で示される。
【０３２９】
他の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体は、Ａｂ１軽鎖および／または重鎖ＣＤＲ配列（表１参照）または体外および／もしくは体内投与後に、１つ以上のＡｂ１の特性を有するその変異体の１つ以上を含む。当業者は、例えば、ヒトまたは他の哺乳類フレームワーク配列を含み得る１つ以上の足場への連鎖によって、またはＳＭＩＰ、キャメルボディ、ナノボディ、ＩｇＮＡＲ、または他の免疫グロブリンもしくは他の改変抗体に由来するそれらの機能的なオルソログによって、抗原結合表面を形成するために、これらのＣＤＲ配列をどのように結合するかを理解するであろう。例えば、実施形態は、ヒトＩＬ−６に特異的に結合し得、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはそれ以上の以下のＣＤＲ配列またはその変異体を含む：
配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１に対して、少なくとも７２．７％（すなわち、１１アミノ酸中、８アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１少なくとも８１．８％（すなわち、１１アミノ酸中、９アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１に対して、少なくとも９０．９％（すなわち、１１アミノ酸中、１０アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１に対して、１００％（すなわち、１１アミノ酸中、１１アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号５の軽鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも８５．７％（すなわち、７アミノ酸中、６アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号５の軽鎖ＣＤＲ２に対して、１００％（すなわち、７アミノ酸中、７アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも５０％（すなわち、１２アミノ酸中、６アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも５８．３％（すなわち、１２アミノ酸中、７アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも６６．６％（すなわち、１２アミノ酸中、８アミノ酸）と同一性を有するポリペプチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも７５％（すなわち、１２アミノ酸中、９アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも８３．３％（すなわち、１２アミノ酸中、１０アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも９１．６％（すなわち、１２アミノ酸中、１１アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、１００％（すなわち、１２アミノ酸中、１２アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号７の重鎖ＣＤＲ１に対して、少なくとも８０％（すなわち、５アミノ酸中、４アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号７の重鎖ＣＤＲ１に対して、１００％（すなわち、５アミノ酸中、５アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも５０％（すなわち、１６アミノ酸中、８アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも５６．２％（すなわち、１６アミノ酸中、９アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも６２．５％（すなわち、１６アミノ酸中、１０アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも６８．７％（すなわち、１６アミノ酸中、１１アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも７５％（すなわち、１６アミノ酸中、１２アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも８１．２％（すなわち、１６アミノ酸中、１３アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも８７．５％（すなわち、１６アミノ酸中、１４アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも９３．７％（すなわち、１６アミノ酸中、１５アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、１００％（すなわち、１６アミノ酸中、１６アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも３３．３％（すなわち、１２アミノ酸中、４アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも４１．６％（すなわち、１２アミノ酸中、５アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも５０％（すなわち、１２アミノ酸中、６アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも５８．３％（すなわち、１２アミノ酸中、７アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも６６．６％（すなわち、１２アミノ酸中、８アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも７５％（すなわち、１２アミノ酸中、９アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも８３．３％（すなわち、１２アミノ酸中、１０アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも９１．６％（すなわち、１２アミノ酸中、１１アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、１００％（すなわち、１２アミノ酸中、１２アミノ酸）の同一性を有するポリペプチド、
配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１に対して、少なくとも９０．９％（すなわち、１１アミノ酸中、１０アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１に対して、１００％（すなわち、１１アミノ酸中、１１アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号５の軽鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも８５．７％（すなわち、７アミノ酸中、６アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号５の軽鎖ＣＤＲ２に対して、１００％（すなわち、７アミノ酸中、７アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも６６．６％（すなわち、１２アミノ酸中、８アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも７５％（すなわち、１２アミノ酸中、９アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも８３．３％（すなわち、１２アミノ酸中、１０アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも９１．６％（すなわち、１２アミノ酸中、１１アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、１００％（すなわち、１２アミノ酸中、１２アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号７の重鎖ＣＤＲ１に対して、少なくとも８０％（すなわち、５アミノ酸中、４アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号７の重鎖ＣＤＲ１に対して、１００％（すなわち、５アミノ酸中、５アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも５６．２％（すなわち、１６アミノ酸中、９アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも６２．５％（すなわち、１６アミノ酸中、１０アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも６８．７％（すなわち、１６アミノ酸中、１１アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも７５％（すなわち、１６アミノ酸中、１２アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも８１．２％（すなわち、１６アミノ酸中、１３アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも８７．５％（すなわち、１６アミノ酸中、１４アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも９３．７％（すなわち、１６アミノ酸中、１５アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、１００％（すなわち、１６アミノ酸中、１６アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも５０％（すなわち、１２アミノ酸中、６アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも５８．３％（すなわち、１２アミノ酸中、７アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも６６．６％（すなわち、１２アミノ酸中、８アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも７５％（すなわち、１２アミノ酸中、９アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも８３．３％（すなわち、１２アミノ酸中、１０アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも９１．６％（すなわち、１２アミノ酸中、１１アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、１００％（すなわち、１２アミノ酸中、１２アミノ酸）の類似性を有するポリペプチド。
【０３３０】
他の典型的な実施形態は、例えば、ヒトＩＬ−６に特異的に結合し、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはそれ以上の以下のＣＤＲまたはその変異体を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド等の任意の前述のものをコードする、１つ以上のポリヌクレオチド含む：
配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１に対して、少なくとも７２．７％（すなわち、１１アミノ酸中、８アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１に対して、少なくとも８１．８％（すなわち、１１アミノ酸中、９アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１に対して、少なくとも９０．９％（すなわち、１１アミノ酸中、１０アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１に対して、１００％（すなわち、１１アミノ酸中、１１アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号５の軽鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも８５．７％（すなわち、７アミノ酸中、６アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号５の軽鎖ＣＤＲ２に対して、１００％（すなわち、７アミノ酸中、７アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも５０％（すなわち、１２アミノ酸中、６アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも５８．３％（すなわち、１２アミノ酸中、７アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも６６．６％（すなわち、１２アミノ酸中、８アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも７５％（すなわち、１２アミノ酸中、９アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも８３．３％（すなわち、１２アミノ酸中、１０アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも９１．６％（すなわち、１２アミノ酸中、１１アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、１００％（すなわち、１２アミノ酸中、１２アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号７の重鎖ＣＤＲ１に対して、少なくとも８０％（すなわち、５アミノ酸中、４アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号７の重鎖ＣＤＲ１に対して、１００％（すなわち、５アミノ酸中、５アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも５０％（すなわち、１６アミノ酸中、８アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも５６．２％（すなわち、１６アミノ酸中、９アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、を少なくとも６２．５％（すなわち、１６アミノ酸中、１０アミノ酸）の同一性有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも６８．７％（すなわち、１６アミノ酸中、１１アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも７５％（すなわち、１６アミノ酸中、１２アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも８１．２％（すなわち、１６アミノ酸中、１３アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも８７．５％（すなわち、１６アミノ酸中、１４アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも９３．７％（すなわち、１６アミノ酸中、１５アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、１００％（すなわち、１６アミノ酸中、１６アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも３３．３％（すなわち、１２アミノ酸中、４アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも４１．６％（すなわち、１２アミノ酸中、５アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも５０％（すなわち、１２アミノ酸中、６アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも５８．３％（すなわち、１２アミノ酸中、７アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも６６．６％（すなわち、１２アミノ酸中、８アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも７５％（すなわち、１２アミノ酸中、９アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも８３．３％（すなわち、１２アミノ酸中、１０アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも９１．６％（すなわち、１２アミノ酸中、１１アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、１００％（すなわち、１２アミノ酸中、１２アミノ酸）の同一性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１に対して、少なくとも９０．９％（すなわち、１１アミノ酸中、１０アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１に対して、１００％（すなわち、１１アミノ酸中、１１アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号５の軽鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも８５．７％（すなわち、７アミノ酸中、６アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号５の軽鎖ＣＤＲ２に対して、１００％（すなわち、７アミノ酸中、７アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも６６．６％（すなわち、１２アミノ酸中、８アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも７５％（すなわち、１２アミノ酸中、９アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも８３．３％（すなわち、１２アミノ酸中、１０アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも９１．６％（すなわち、１２アミノ酸中、１１アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３に対して、１００％（すなわち、１２アミノ酸中、１２アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号７の重鎖ＣＤＲ１に対して、少なくとも８０％（すなわち、５アミノ酸中、４アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号７の重鎖ＣＤＲ１に対して、１００％（すなわち、５アミノ酸中、５アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも５６．２％（すなわち、１６アミノ酸中、９アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも６２．５％（すなわち、１６アミノ酸中、１０アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも６８．７％（すなわち、１６アミノ酸中、１１アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも７５％（すなわち、１６アミノ酸中、１２アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも８１．２％（すなわち、１６アミノ酸中、１３アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも８７．５％（すなわち、１６アミノ酸中、１４アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、少なくとも９３．７％（すなわち、１６アミノ酸中、１５アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号１２０の重鎖ＣＤＲ２に対して、１００％（すなわち、１６アミノ酸中、１６アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも５０％（すなわち、１２アミノ酸中、６アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも５８．３％（すなわち、１２アミノ酸中、７アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも６６．６％（すなわち、１２アミノ酸中、８アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも７５％（すなわち、１２アミノ酸中、９アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも８３．３％（すなわち、１２アミノ酸中、１０アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、少なくとも９１．６％（すなわち、１２アミノ酸中、１１アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
配列番号９の重鎖ＣＤＲ３に対して、１００％（すなわち、１２アミノ酸中、１２アミノ酸）の類似性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【表２−１】
0005934652.tif 000003
【表２−２】
0005934652.tif 000004
【表２−３】
0005934652.tif 000005
【表２−４】
0005934652.tif 000006
【０３３１】
参考として、表２に含まれるもの以外の配列識別子を、表３で要約する。
【表３】
0005934652.tif 000007
【０３３２】
そのような抗体フラグメントまたはその変異体は、以下の非限定形態の１つ以上で示され得る：Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、および一本鎖Ｆｖ抗体形態。好ましい実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−６抗体は、以下に示す配列を含むカッパ定常軽鎖配列をさらに含む：
ＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号５８６）。
【０３３３】
他の好ましい実施形態抗では、本明細書に記載されるＩＬ−６抗体は、以下に示す配列の１つを含むガンマ−１定常重鎖ポリペプチド配列をさらに含む：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５８８）、および
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号７１９）。
【０３３４】
本明細書に記載される抗体の実施形態は、ウサギＩｇリーダー、アルブミンプレペプチド、酵母接合因子プレプロ分泌リーダー配列（ピチアパストリスもしくは出芽酵母またはアルファ因子等）、またはヒトＨＡＳリーダー等のリーダー配列を含み得る。典型的なリーダー配列は、以下のように、図３６Ａおよび３７Ａで示されるポリペプチドのＮ終端でＦＲ１からオフセットして示される：配列番号：２および６６０（ＭＤ．．．）および配列番号：３および６６１（ＭＥ．．．）のウサギＩｇリーダー配列、ならびに配列番号：７０６および７０８の分泌を促進するアルブミンプレペプチド。改善された安定性または半減期等の所望の特性を与えるための、当技術分野で知られている他のリーダー配列も、被験者への投与前に任意で切断され得る重鎖および／または軽鎖上で、単独でまたは互いに組み合わせて使用され得る。例えば、ポリペプチドは、例えば、リーダー配列を切断する膜結合型シグナルペプチダーゼ等のプロテアーゼを発現する、または含む（または、発現する、もしくは含むために修飾される）細胞または無細胞発現システム内で、発現され得る。
【０３３５】
他の実施形態では、配列番号３、１８、１９、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１７、１１８、１２３、１３９、１５５、１７１、１８７、２０３、２１９、２３５、２５１、２６７、２８３、２９９、３１５、３３１、３４７、３６３、３７９、３９５、４１１、４２７、４４３、４５９、４７５、４９１、５０７、５２３、５３９、５５５、５７１、６５２、６５６、６５７、６５８、６６１、６６４、６６５、６６８、６７２、６７６、６８０、６８４、６８８、６９１、６９２、７０４、または７０８を含むＶＨポリペプチド配列、および配列番号２、２０、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１９、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、４５８、４７４、４９０、５０６、５２２、５３８、５５４、５７０、６４７、６５１、６６０、６６６、６６７、６７１、６７５、６７９、６８３、６８７、６９３、６９９、７０２、７０６、または７０９もしくはその変異体をさらに含むＶＬポリペプチド配列を含み、該ＶＨまたはＶＬポリペプチド中の１つ以上のフレームワーク残基（ＦＲ残基）またはＣＤＲ残基が、別のアミノ酸残基と置換され、ＩＬ−６に特異的に結合する抗ＩＬ−６抗体をもたらす、単離抗ＩＬ−６抗体を想定している。本発明は、これらの抗体のヒト化およびキメラ形態を想定しており、好ましくは、ＦＲが親抗体に対して高度の相同性を示すヒトＦＲを含む。キメラ抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＧ５、ＩｇＧ６、ＩｇＧ７、ＩｇＧ８、ＩｇＧ９、ＩｇＧ１０、ＩｇＧ１１、ＩｇＧ１２、ＩｇＧ１３、ＩｇＧ１４、ＩｇＧ１５、ＩｇＧ１６、ＩｇＧ１７、ＩｇＧ１８、またはＩｇＧ１９定常領域、具体的には、配列番号５８８および配列番号５８６に含有される可変重鎖および軽鎖定常領域に由来するＦｃを含み得る。
【０３３６】
本発明の１つの実施形態では、抗体またはＶＨもしくはＶＬポリペプチドは、本明細書で参照されるヒト化過程の開始前に、１つ以上のウサギＢ細胞集団から始まる、または選択される。
【０３３７】
本発明の別の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体およびそのフラグメントおよび変異体は、ヒトＩＬ−６タンパク質の霊長類相同体に対して結合特異性を有する。ヒトＩＬ−６タンパク質の霊長類相同体の非限定実施例は、カニクイザル（カニクイザルとしても知られている）および赤毛猿から得られたＩＬ−６である。本発明の別の実施形態では、抗ＩＬ−６抗体およびそのフラグメントおよび変異体は、ＩＬ−６ＲとのＩＬ−６の会合、および／またはＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０複合体の産生、および／またはＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０多重体の産生を阻害し、および／または前述の１つ以上の生物学的作用を拮抗する。
【０３３８】
前述のように、抗体およびそのフラグメントおよび変異体は、化学的リンカー、例えば蛍光色素、酵素、基質、生物発光物質、放射性物質、および化学発光成分等の出可能な成分、または例えばストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒素、細胞毒性薬、および放射性物質等の機能的な成分等のエフェクター成分を付加するよう、翻訳後に修飾され得る。
【０３３９】
検出可能な成分に関して、さらなる典型的な酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、ベータガラクトシダーゼ、および発光酵素を含むが、それらに限定されない。さらなる典型的な蛍光体は、ローダミン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ウンベリフェロン、ジクロロトリアジニルアミン、フィコエリトリン、および塩化ダンシルを含むが、それらに限定されない。さらなる典型的な化学発光成分は、ルミノールを含むが、それに限定されない。さらなる典型的な生物発光物質は、ルシフェリンおよびエクオリンを含むが、それらに限定されない。さらなる典型的な放射性物質は、ヨウ素１２５（１２５Ｉ）、炭素１４（１４Ｃ）、硫黄３５（３５Ｓ）、三重水素（３Ｈ）、およびリン３２（３２Ｐ）を含むが、それらに限定されない。
【０３４０】
機能的な成分に関して、典型的な細胞毒性薬は、メトトレキサート、アミノプテリン、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン；メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、マイトマイシンＣ、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、１−メチルニトロソ尿素、シクロソスファミド、メクロレタミン、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、シスジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチンおよびカルボプラチン（パラプラチン）等のアルキル化剤；ダウノルビシン（以前はウノマイシン）、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、デトルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、エピルビシン、ミトキサントロンおよびビサントレンを含むアントラサイクリン；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ブレオマイシン、カリケアマイシン、ミトラマイシン、およびアンスラマイシン（ＡＭＣ）を含む抗生物質；およびビンカアルカロイド、ビンクリスチン、およびビンブラスチン等の有糸分裂阻害剤を含むが、それらに限定されない。他の細胞毒性薬は、パクリタキセル（タキソール）、リシン、緑膿菌外毒素、ゲムシタビン、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、エトポシド、テノポシド、コルヒチン、ジヒドロキシアントラセンジオン、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、コルチコステロイド、ミトタン（Ｏ、Ｐ’−（ＤＤＤ））、インターフェロン、およびこれらの細胞毒性薬の混合を含む。
【０３４１】
さらなる細胞毒性薬は、カルボプラチン、シスプラチン、パクリタキセル、ゲムシタビン、カリケアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、アクチノマイシンＤ、シクロホスファミド、ビンクリスチン、ブレオマイシン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、白金、タキソール、イリノテカン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、ロイコボリン、ステロイド、シクロホスファミド、メルファラン、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよび酒石酸ビノレルビン）、マスチン、チロシンキナーゼ阻害剤、放射線治療、性ホルモンアンタゴニスト、選択的アンドロゲン受容体モジュレーター、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、ＰＤＧＦアンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１アンタゴニスト、インターロイキン（例えばＩＬ−１２またはＩＬ−２）、ＩＬ−１２Ｒアンタゴニスト、毒素結合モノクローナル抗体、腫瘍抗原特異的モノクローナル抗体、Ｅｒｂｉｔｕｘ（商標）、Ａｖａｓｔｉｎ（商標）、ペルツズマブ抗ＣＤ２０抗体、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、オクレリズマブ、オファツムマブ、ＤＸＬ６２５、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）等の化学療法剤、またはそれらの任意の組み合わせを含むが、それらに限定されない。リシン、ジフテリア毒素、およびシュードモナス毒素等の植物および細菌からの毒性酵素は、細胞型特異的殺傷試薬を産生するために、ヒト化抗体またはその結合フラグメントに結合され得る（Ｙｏｕｌｅ，ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：５４８３（１９８０）；Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ，ら．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４５３９（１９８０）；Ｋｒｏｌｉｃｋ，ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：５４１９（１９８０））。
【０３４２】
他の細胞毒性薬は、米国特許第６、６５３、１０４号のゴールデンバーグによって記述される、細胞傷害性リボヌクレアーゼを含む。本発明の実施形態はまた、アルファまたはベータ粒子を放射する放射性核種が、複合体形成剤の使用を伴って、または使用なしで、安定的に抗体またはその結合フラグメントに結合される、放射性免疫複合体に関する。そのような放射性核種は、リン３２（３２Ｐ）、スカンジウム４７（４７Ｓｃ）、銅６７（６７Ｃｕ）、ガリウム６７（６７Ｇａ）、イットリウム８８（８８Ｙ）、イットリウム９０（９０Ｙ）、ヨウ素１２５（１２５Ｉ）、ヨウ素１３１（１３１Ｉ）、サマリウム１５３（１５３Ｓｍ）、ルテチウム１７７（１７７Ｌｕ）、レニウム１８６（１８６Ｒｅ）、またはレニウム１８８（１８８Ｒｅ）等のベータ放射体、およびＡスタチン−２１１（２１１Ａｔ）、鉛２１２（２１２Ｐｂ）、ビスマス２１２（２１２Ｂｉ）または−２１３（２１３Ｂｉ）、またはアクチニウム２２５（２２５Ａｃ）等のアルファ放射体を含む。
【０３４３】
抗体またはその結合フラグメントを検出可能な部分等に結合するための、Ｈｕｎｔｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ  １４４：９４５（１９６２）；Ｄａｖｉｄら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １３：１０１４（１９７４）；Ｐａｉｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．４０：２１９（１９８１）；ならびにＮｙｇｒｅｎ，Ｊ．，Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．およびＣｙｔｏｃｈｅｍ．３０：４０７（１９８２）によって示されるそれらの方法等の方法は当技術分野で知られている。
【０３４４】
本明細書に記載される実施形態は、本明細書で示す、抗体、抗体フラグメント、ディアボディ、ＳＭＩＰ、キャメルボディ、ナノボディ、ＩｇＮＡＲ、ポリペプチド、可変領域、およびＣＤＲに実質的に類似する、変異体および同等物をさらに含む。これらは、例えば、保存置換変異体（すなわち、同様のアミノ酸による１つ以上のアミノ酸置換）を含有し得る。例えば、保存置換は、同一の一般クラス内で、１つの酸性アミノ酸と別の酸性アミノ酸、１つの塩基性アミノ酸と別の塩基性アミノ酸、または１つの中性アミノ酸によって別の中性アミノ酸等、別のアミノ酸とのアミノ酸置換を指す。保存アミノ酸置換によって何が意図されるかは、当技術分野でよく知られている。
【０３４５】
他の実施形態では、本発明は、本明細書で示す、抗体フラグメント、可変領域、およびＣＤＲの任意の１つ以上のポリペプチド配列に対して、少なくとも９０％またはより大きい配列相同性を有するポリペプチド配列を想定している。本発明は、本明細書で示す、抗体フラグメント、可変領域、およびＣＤＲの任意の１つ以上のポリペプチド配列に対して、より好ましくは、少なくとも９５％またはより大きい配列相同性、さらにより好ましくは、少なくとも９８％またはより大きい配列相同性、およびさらにより好ましくは、少なくとも９９％またはより大きい配列相同性を有するポリペプチド配列、ポリペプチド配列を想定している。核酸とアミノ酸配列との間の相同性を決定するための方法は、当業者によく知られている。
【０３４６】
他の実施形態では、本発明は、本明細書で示す、抗ＩＬ−６活性をさらに有する抗体フラグメント、可変領域、およびＣＤＲの上記で列挙されるポリペプチド相同体をさらに想定している。抗ＩＬ−６活性の非限定実施例は、例えば以下に「抗ＩＬ−６活性」の表題で、本明細書で示す。
【０３４７】
他の実施形態では、本発明は、任意の前述配列に結合する抗イディオタイプ抗体の産生および使用をさらに想定している。典型的な実施形態では、そのような抗イディオタイプ抗体は、抗ＩＬ−６抗体の効果を調節する、減少する、または中和するために、抗ＩＬ−６抗体を受けた対象に投与され得る。そのような抗イディオタイプ抗体はまた、抗ＩＬ−６抗体の存在によって特徴付けられる自己免疫疾患の治療に有用でもあり得る。そのような抗イディオタイプ抗体のさらなる典型的な使用は、例えば、被験者の血液または他の体液に存在する抗ＩＬ−６抗体のレベルをモニタリングするため等、本発明の抗ＩＬ−６抗体の検出のためである。
【０３４８】
本発明はまた、本明細書に記載される任意の他のポリヌクレオチド配列と置換される、本明細書に記載される任意のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列を含む抗ＩＬ−６抗体を想定している。例えば、制限なしに、本発明は、本明細書に記載される任意の可変軽鎖および可変重鎖配列の組み合わせを含む抗体を想定しており、本明細書に記載される任意のＣＤＲ配列の、本明細書に記載される任意の他のＣＤＲ配列への置換によって得られる抗体をさらに想定している。上述のように、好ましい抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体は、図３４または図３５に示すような可変重鎖および／または軽鎖配列（例えば、配列番号６５１、配列番号６５７、配列番号７０９、または１以上のＣＤＲまたはＦＲ残基がＩＬ−６に結合する抗体または他の望ましい機能の活性に悪影響を与えることなく改変されたその変異体）を含み得る。
【０３４９】
［抗ＩＬ−６抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド］
本発明は、ＩＬ−６に対して結合特異性を有する抗体のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに関する。本発明の１つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、以下の配列番号２の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む、またはあるいはそれから成る：
ＡＴＧＧＡＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＣＣＣＡＣＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧＧＧＧＣＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＴＧＣＣＡＧＡＴＧＴＧＣＣＴＡＴＧＡＴＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＡＣＡＡＴＧＡＡＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＴＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＧＣＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＧＴＣＴＧＡＧＧＡＡＴＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴ（配列番号１０）、または配列番号６６２、配列番号６９８、配列番号７０１、若しくは配列番号７０５のポリヌクレオチド配列。
【０３５０】
本発明は、本発明の別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、以下の配列番号３の可変重鎖ポリペプチド配列をコードするポリヌクレオチド配列を含む、またはあるいはそれから成る：
ＡＴＧＧＡＧＡＣＴＧＧＧＣＴＧＣＧＣＴＧＧＣＴＴＣＴＣＣＴＧＧＴＣＧＣＴＧＴＧＣＴＣＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＴＣＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＡＴＣＡＴＴＴＡＴＧＧＴＡＧＴＧＡＴＧＡＡＡＣＧＧＣＣＴＡＣＧＣＧＡＣＣＴＧＧＧＣＧＡＴＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＧＡＣＣＡＧＴＣＴＧＡＣＡＧＣＣＧＣＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＴＡＧＴＧＡＣＴＧＧＧＡＴＧＣＡＡＡＡＴＴＴＡＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧ（配列番号１１）、または配列番号６６３、配列番号７００、配列番号７０３、若しくは配列番号７０７のポリヌクレオチド配列。
【０３５１】
本発明のさらなる実施形態では、ＩＬ−６に対して結合特異性を有する抗体のフラグメントをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２の軽鎖可変配列の補性決定領域（ＣＤＲまたは超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する、配列番号１２または６９４、配列番号１３、および配列番号１４または６９５の１つ以上のポリヌクレオチド配列を含む、またはあるいはそれから成る。
【０３５２】
本発明のさらなる実施形態では、ＩＬ−６に対して結合特異性を有する抗体のフラグメントまたは変異体をコードするポリヌクレオチドは、配列番号３または配列番号６６１、配列番号６５７、若しくは図３４または図３５に記載された他の配列の重鎖可変配列の相補性決定領域（ＣＤＲまたは超可変領域）をコードするポリヌクレオチドに対応する、配列番号１５、配列番号１６または６９６、および配列番号１７または６９７の１つ以上のポリヌクレオチド配列を含む、またはあるいはそれから成る。
【０３５３】
本発明はまた、本明細書に記載される抗体フラグメントまたは変異体をコードするポリヌクレオチド配列の１つ以上を含むポリヌクレオチド配列を想定している。本発明の１つの実施形態では、ＩＬ−６に対して結合特異性を有する抗体のフラグメントまたは変異体をコードするポリヌクレオチドは、以下の抗体フラグメントをコードするポリヌクレオチド全てを含む、１つ、２つ、または３つ以上を含む、またはあるいはそれから成る：配列番号２の軽鎖可変領域をコードする配列番号１０のポリヌクレオチド、配列番号３の重鎖可変領域をコードする配列番号１１のポリヌクレオチド、配列番号２０の軽鎖ポリペプチドをコードする配列番号７２０のポリヌクレオチド；配列番号６４７の軽鎖ポリペプチドをコードする配列番号７２１のポリヌクレオチド；配列番号６６０の軽鎖ポリペプチドをコードする配列番号６６２のポリヌクレオチド；配列番号６６６の軽鎖ポリペプチドをコードする配列番号７２２のポリヌクレオチド；配列番号６９９の軽鎖ポリペプチドをコードする配列番号６９８のポリヌクレオチド；配列番号７０２の軽鎖ポリペプチドをコードする配列番号７０１のポリヌクレオチド；配列番号７０６の軽鎖ポリペプチドをコードする配列番号７０５のポリヌクレオチド；配列番号７０９の軽鎖ポリペプチドをコードする配列番号７２３のポリヌクレオチド；配列番号１９の軽鎖ポリペプチドをコードする配列番号７２４のポリヌクレオチド；配列番号６５２の軽鎖ポリペプチドをコードする配列番号７２５のポリヌクレオチド；配列番号６５７の軽鎖ポリペプチドをコードする配列番号７００のポリヌクレオチド；配列番号６６１の軽鎖ポリペプチドをコードする配列番号６６３のポリヌクレオチド；配列番号７０４の軽鎖ポリペプチドをコードする配列番号７０３のポリヌクレオチド；配列番号７０８の軽鎖ポリペプチドをコードする配列番号７０７のポリヌクレオチド；上述の軽鎖ポリペプチドの相補性決定領域をコードする配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号６９４、および配列番号６９５のポリヌクレオチド；および上述の重鎖ポリペプチドの相補性決定領域をコードする配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号６９６、および配列番号６９７のポリヌクレオチド、およびそれぞれ、配列番号６５７および配列番号７０９の変重鎖および軽鎖配列をコードするポリヌクレオチド、例えば、配列番号７００および配列番号７２３の核酸配列、ならびに、例えばコドン縮重に基づくフラグメントまたはその変異体等。可変重鎖および軽鎖配列をコードするこれらの核酸配列は、単独で、または組み合わせで発現され得、これらの配列は、好ましくは、例えば配列番号５８９および配列番号５８７の配列等、適切な可変定常配列に融合される。
【０３５４】
本発明の抗ＩＬ−６抗体をコードする典型的な配列は、上述の表１に特定されている。開示したポリヌクレオチド配列は、限定ではなく例示を意図するものと理解されたい。当業者であれば、所定のポリペプチドをコードするであろうポリヌクレオチド配列を容易に決定することができ、所定の発現系における発現に適したコード配列を、例えば与えられたポリヌクレオチド配列を適合させることにより、および／またはそれをデノボ作製することにより容易に作り出すことができ、かつ例えば米国特許出願第２００８−０１２０７３２号明細書に記載のように、または他の既知の方法を用いてコドン最適化された発現配列を容易に作り出すことができる。
【０３５５】
本発明の別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、以下の配列番号５８６のカッパ定常軽鎖配列をコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む：
ＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ（配列番号５８７）。
【０３５６】
本発明の別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、以下の配列番号５８８ガンマ−１定常重鎖ポリペプチド配列をコードするポリヌクレオチド配列をさらに含む：
ＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡ（配列番号５８９）。
【０３５７】
１つの実施形態では、本発明は、配列番号３、１８、１９、６５２、６５６、６５７、６５８、６６１、６６４、６６５、７０４、および７０８から選択される抗ＩＬ−６ＶＨ抗体アミノ酸配列をコードする、またはその変異体をコードするポリヌクレオチドを含む単離ポリヌクレオチドに関し、少なくとも１つのフレームワーク残基（ＦＲ残基）が、ウサギ抗ＩＬ−６抗体ＶＨポリペプチドまたは保存アミノ酸置換中の対応する位置で存在しているアミノ酸と置換されている。加えて、本発明は、ヒト化抗ＩＬ−６抗体またはヒト化抗体フラグメントまたはその変異体およびこれらをコードする核酸配列であって、図２または図３４乃至図３７または表１に含まれる配列示されたヒト化可変重鎖および／または軽鎖ポリペプチド、または１以上のフレームワークまたはＣＤＲ残基が改変されたものであり得るその変異体を含むものを包含する。好ましくは、改変が導入されている場合、その改変は、得られた抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体の結合親和性に悪影響を及ぼさないものである。
【０３５８】
他の実施形態では、本発明は、配列番号２、配列番号２０、配列番号６４７、配列番号６５１、配列番号６６０、配列番号６６６、配列番号６９９、配列番号７０２、配列番号７０６、および配列番号７０９から選択された、抗ＩＬ−６ＶＬ抗体アミノ酸配列をコードする、またはその変異体をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチドに関し、少なくとも１つのフレームワーク残基（ＦＲ残基）が、ウサギ抗ＩＬ−６抗体ＶＬポリペプチドまたは保存アミノ酸置換中の対応する位置で存在しているアミノ酸と置換されている。
【０３５９】
さらに別の実施形態では、本発明は、配列番号２および配列番号３、配列番号２および配列番号１８、配列番号２および配列番号１９、配列番号２０および配列番号３、配列番号２０および配列番号１８、または配列番号２０および配列番号１９に含有されるポリペプチドをコードする配列を含む、１つ以上の異種ポリヌクレオチドに関する。
【０３６０】
他の実施形態では、本発明は、抗ＩＬ−６抗体に由来する少なくとも１つのＣＤＲポリペプチドを含有するポリペプチドを発現する単離ポリヌクレオチドに関し、該発現されるポリペプチドが単独でＩＬ−６に特異的に結合するか、または抗ＩＬ−６抗体に由来する少なくとも１つのＣＤＲポリペプチドを含有するポリペプチドを発現する別のポリヌクレオチド配列と関連して発現される時に、ＩＬ−６に特異的に結合し、該少なくとも１つのＣＤＲは、配列番号３、１８、１９、７０４、７０８、２、２０、６４７、６５１、６６０、６６６、６９９、７０２、７０６、または７０９のＶＬまたはＶＨポリペプチドに含有されるそれらから選択される。
【０３６１】
該ポリヌクレオチドを含む宿主細胞およびベクターもまた想定されている。
【０３６２】
別の具体的な実施形態では、本発明は、任意の前述の核酸配列およびそれらの組み合わせを含有する核酸構築物、ならびに任意の前述の核酸配列およびそれらの組み合わせを含有するこれらの核酸配列および構築物を含有する組換え細胞を包含し、これらの核酸配列または構築物は、染色体外であり得る、または宿主細胞ゲノムに組み込まれ得る。
【０３６３】
本発明は、可変重鎖および軽鎖ポリペプチド配列をコードするポリヌクレオチド配列、ならびに本明細書で示す各相補性決定領域（ＣＤＲまたは超可変領域）を含むベクター、ならびに該配列を含む宿主細胞をさらに想定している。本発明の１つの実施形態では、宿主細胞は酵母細胞である。本発明の別の実施形態では、酵母宿主細胞はピチア属に属する。
【０３６４】
場合によっては、表４で要約されるように、得られるポリペプチド配列をコードする１つ以上の典型的なポリヌクレオチドが提供される。
【表４−１】
0005934652.tif 000008
【表４−２】
0005934652.tif 000009
【０３６５】
場合によっては、多重の配列識別子は、表４で要約されるように、同一のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列を指す。これらの配列識別子への参照は、別途文脈により示す場合を除いて、互換的であると理解されたい。
【表５】
0005934652.tif 000010
【０３６６】
ある典型的な実施形態は、中または高ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、表１で列挙される典型的なコード配列の１つを有するポリヌクレオチドにハイブリッド形成するポリヌクレオチドを含み、また中または高ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、表１で列挙される典型的なコード配列の１つを有するポリヌクレオチドと同一のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、または任意の前述のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを含む。
【０３６７】
「高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件」という語句は、典型的には核酸の複合混合物中で、プローブがその標的物質にハイブリッド形成するが、他の配列にはハイブリッド形成しない条件を指す。高ストリンジェンシー条件は配列依存性であり、異なる状況において異なる。より長い配列は、より高い温度で特異的にハイブリッド形成する。核酸のハイブリダイゼーションの広範なガイドは、Ｔｉｊｓｓｅｎ，Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ−−Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ｐｒｏｂｅｓ，“Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｓｔｒａｔｅｇｙ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ  ａｓｓａｙｓ”（１９９３）で見出される。通常、高ストリンジェンシー条件は、定義されるイオン強度ｐＨで特定の配列に対する、熱融点（Ｔｍ）よりも約５−１０℃低くなるよう選択される。Ｔｍは、標的に相補的であるプローブの５０％が、平衡状態で標的配列にハイブリッド形成する温度（定義されるイオン強度、ｐＨ、および核濃度下）である（Ｔｍにおいて標的配列が過度に存在すると、プローブの５０％は平衡状態で占有される）。高ストリンジェンシー条件は、塩濃度は約１．０Ｍナトリウムイオン未満、典型的には、ｐＨ７．０から８．３において約０．０１から１．０Ｍナトリウムイオン濃度（または他の塩）である条件であり、温度は、短いプローブ（例えば、１０から５０ヌクレオチド）では少なくとも約３０℃、および長いプローブ（例えば、５０ヌクレオチドより大きい）では少なくとも約６０℃である。高ストリンジェンシー条件はまた、ホルムアミド等の不安定薬剤の付加によって達成され得る。選択的または特定のハイブリダイゼーションについては、陽性シグナルは少なくともバックグラウンドの２倍であり、任意でバックグラウンドハイブリダイゼーションの１０倍のである。典型的な高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は、以下の通りであり得る：５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、および１％ＳＤＳ、４２℃でインキュベートする、または、５×ＳＳＣ、１％ＳＤＳ、０．２×ＳＳＣでの洗浄を伴って、６５℃でインキュベートする、および６５℃で０．１％ＳＤＳ。そのようなハイブリダイゼーションおよび洗浄ステップは、例えば、１分間、２分間、５分間、１０分間、１５分間、３０分間、６０分間、またはそれ以上で実行されることができる。
【０３６８】
高ストリンジェンシー条件下で相互にハイブリッド形成しない核酸は、それらがコードするポリペプチドが実質的に関連している場合、さらに実質的に関連している。これは例えば、核酸の複製が遺伝子コードによって許容される最大コドン縮重を使用して作られる時に発生する。このような場合において、核酸は、典型的には中ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下でハイブリッド形成する。典型的な「中ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件」は、４０％ホルムアミドの中のハイブリダイゼーション、１Ｍ  ＮａＣｌ、３７℃で１％ＳＤＳ、および４５℃で１×ＳＳＣ中での洗浄を含む。そのようなハイブリダイゼーションおよび洗浄ステップは、例えば、１分間、２分間、５分間、１０分間、１５分間、３０分間、６０分間、またはそれ以上で実行されることができる。陽性ハイブリダイゼーションは、少なくともバックグラウンドの２倍である。当業者は、代替ハイブリダイゼーションおよび洗浄条件が、同様のストリンジェンシーの条件を提供するために利用されることができることを容易に認識するであろう。
【０３６９】
［追加の本発明の典型的な実施形態］
他の実施形態では、本発明は、好ましくは脱グリコシル化された、ＩＬ−６に特異的に結合するＡｂ１およびキメラ、ヒト化、一本鎖抗体およびそのフラグメント（以前に特定されている抗体の１以上のＣＤＲを含むもの）を含む抗ＩＬ−６抗体として、無傷のヒトＩＬ−６ポリペプチドまたはそのフラグメント上の同じ線状または立体構造エピトープに特異的に結合する、１種以上の抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体を想定している。好ましい実施形態では、前記抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体は、好ましくは脱グリコシル化された、ＩＬ−６に特異的に結合するＡｂ１およびキメラ、ヒト化、一本鎖抗体およびそのフラグメント（以前に特定されている抗体の１以上のＣＤＲを含むもの）を含む抗ＩＬ−６抗体として、無傷のヒトＩＬ−６ポリペプチドまたはそのフラグメント上の同じ線状または立体構造エピトープに特異的に結合し、および／または同じ線状または立体構造エピトープに対する結合について競合する。
【０３７０】
本発明の他の実施形態では、Ａｂ１に特異的に結合される無傷のヒトＩＬ−６ポリペプチドまたはそのフラグメント上の同じ線状または立体構造エピトープに特異的に結合し得る前記抗ＩＬ−６抗体は、完全長の天然のヒトＩＬ−６ポリペプチドにわたる重複する直鎖ペプチドフラグメントを用いるエピトープマッピングによって確認されたＩＬ−６エピトープに結合し得る。本発明の一実施形態では、前記ＩＬ−６エピトープは、アミノ酸残基３７−５１、アミノ酸残基７０−８４、アミノ酸残基１６９−１８３、アミノ酸残基３１−４５、および／またはアミノ酸残基５８−７２を包含するそれぞれから選択されたＩＬ−６フラグメントに含められた１以上の残基を含む、あるいは該１以上の残基からなる。
【０３７１】
本発明は、本明細書に開示する抗体または抗体フラグメント、すなわち、以下に限定しないが、好ましくは脱グリコシル化された、ＩＬ−６に特異的に結合するＡｂ１およびキメラ、ヒト化、一本鎖抗体およびそのフラグメント（以前に特定されている抗体の１以上のＣＤＲを含むもの）を含む抗ＩＬ−６抗体として、同じＩＬ−６エピトープに結合する、および／またはＩＬ−６との結合について抗ＩＬ−６と競合する抗ＩＬ−６抗体にも関する。
【０３７２】
別の実施形態では、本発明はまた、単離された抗ＩＬ−６抗体またはその抗体フラグメントまたは変異体であって、配列番号３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２２、配列番号３８、配列番号５４、配列番号７０、配列番号８６、配列番号１０２、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１２３、配列番号１３９、配列番号１５５、配列番号１７１、配列番号１８７、配列番号２０３、配列番号２１９、配列番号２３５、配列番号２５１、配列番号２６７、配列番号２８３、配列番号２９９、配列番号３１５、配列番号３３１、配列番号３４７、配列番号３６３、配列番号３７９、配列番号３９５、配列番号４１１、配列番号４２７、配列番号４４３、配列番号４５９、配列番号４７５、配列番号４９１、配列番号５０７、配列番号５２３、配列番号５３９、配列番号５５５、配列番号５７１、配列番号６５２、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６６１、配列番号６６４、配列番号６６５、配列番号６６８、配列番号６７２、配列番号６７６、配列番号６８０、配列番号６８４、配列番号６８８、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号７０４、または配列番号７０８を含む、可変重鎖（ＶＨ）ポリペプチド配列に含められた１以上のＣＤＲ、および／または配列番号２、配列番号２０、配列番号２１、配列番号３７、配列番号５３、配列番号６９、配列番号８５、配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号１２２、配列番号１３８、配列番号１５４、配列番号１７０、配列番号１８６、配列番号２０２、配列番号２１８、配列番号２３４、配列番号２５０、配列番号２６６、配列番号２８２、配列番号２９８、配列番号３１４、配列番号３３０、配列番号３４６、配列番号３６２、配列番号３７８、配列番号３９４、配列番号４１０、配列番号４２６、配列番号４４２、配列番号４５８、配列番号４７４、配列番号４９０、配列番号５０６、配列番号５２２、配列番号５３８、配列番号５５４、配列番号５７０、配列番号６４７、配列番号６５１、配列番号６６０、配列番号６６６、配列番号６６７、配列番号６７１、配列番号６７５、配列番号６７９、配列番号６８３、配列番号６８７、配列番号６９３、配列番号６９９、配列番号７０２、配列番号７０６、または配列番号７０９からなる可変軽鎖（ＶＬ）ポリペプチド配列に含められた１以上のＣＤＲ、および本願の図３４乃至図３７に記載された抗体アライメントに示された前記ＶＨおよびＶＬ配列を含む。
【０３７３】
本発明の一実施形態では、上の２つの段落で記載された前記抗ＩＬ−６抗体は、好ましくは脱グリコシル化された、ＩＬ−６に特異的に結合するＡｂ１およびキメラ、ヒト化、一本鎖抗体およびそのフラグメント（以前に特定されている抗体の１以上のＣＤＲを含むもの）を含む抗ＩＬ−６抗体に含められたものと同一な可変軽鎖および可変重鎖領域のそれぞれにおける相補性決定領域（ＣＤＲ）を少なくとも２つ含む。
【０３７４】
好ましい実施形態では、上記の２つの段落で記載された前記抗ＩＬ−６抗体は、Ａｂ１に含められたものと同一な可変軽鎖および可変重鎖領域のそれぞれにおける相補性決定領域（ＣＤＲ）を少なくとも２つ含む。別の実施形態では、上記の２つの段落で記載された前記抗ＩＬ−６抗体の全ＣＤＲは、好ましくは脱グリコシル化された、ＩＬ−６に特異的に結合するＡｂ１およびキメラ、ヒト化、一本鎖抗体およびそのフラグメント（以前に特定されている抗体の１以上のＣＤＲを含むもの）を含む抗ＩＬ−６抗体に含められたＣＤＲである。本発明の好ましい実施形態では、上記の抗ＩＬ−６抗体の全ＣＤＲは、Ａｂ１、例えばそれぞれ配列番号６５７および配列番号７０９からなるＶＨおよびＶＬ配列からなる抗体に含められるＣＤＲと同一である。
【０３７５】
本発明はさらに、上記の抗ＩＬ−６抗体の１以上を脱グリコシル化されたものとすること；エフェクター機能、半減期は、タンパク質分解、および／またはグリコシル化を変えるべく改変されたＦｃ領域を含むものとすること；ヒト抗体、ヒト化抗体、一本鎖またはキメラ抗体とすること；および、ウサギ（親）抗ＩＬ−６抗体に由来するヒト化抗体とすることを想定している。ピチア属の脱グリコシル化した抗体の産生を提供する典型的な定常領域は、それぞれ配列番号５８９および配列番号５８７の核酸配列でコードされた配列番号５８８および配列番号５８６で構成される。
【０３７６】
本発明はさらに、抗ＩＬ−６抗体であって、前記抗体の可変軽鎖領域および可変重鎖領域における前記フレームワーク領域（ＦＲ）が、未改変ヒトＦＲまたは親ウサギ抗体のＦＲ領域に対応する可変軽鎖若しくは重鎖における最大２または３個のヒトＦＲの置換によって改変されたヒトＦＲであり、かつ前記ヒトＦＲが、ヒト生殖細胞抗体配列のライブラリから、該ライブラリに含まれる他のヒト生殖細胞抗体と比較した対応するウサギ可変重鎖または軽鎖領域との相同性の高さに基づいて選択されたヒト可変重鎖および軽鎖抗体配列に由来する、１種以上の抗ＩＬ−６抗体を想定している。
【０３７７】
本発明の一実施形態では、前記抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体が、ＩＬ−６を発現するヒト細胞、および／またはＩＬ−６を発現する細胞に関連する疾病を罹患した患者におけるヒト細胞上でまたは該ヒト細胞によって発現されるＩＬ−６を含む、生体内で循環する可溶性ＩＬ−６分子に特異的に結合し得る。
【０３７８】
別の実施形態では、該疾病は、全身疲労、運動誘発性疲労、癌に関連した疲労、炎症性疾患に関連した疲労、慢性疲労症候群、癌に関連した悪液質、心臓に関連した悪液質、呼吸に関連した悪液質、腎臓に関連した悪液質、加齢に関連した悪液質、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、全身型若年性特発性関節炎、乾癬、乾癬性関節症、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、リウマチ性多発性筋痛、巨細胞性動脈炎、自己免疫性血管炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、シェーグレン症候群、成人発症スティル病、関節リウマチ、全身型若年性特発性関節炎、変形性関節症、骨粗しょう症、パジェット骨病、変形性関節症、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、前立腺癌、白血病、腎細胞癌、多中心性キャッスルマン疾病、卵巣癌、癌化学療法における薬物耐性、癌化学療法毒性、虚血性心疾患、アテローム性動脈硬化症、肥満、糖尿病、喘息、多発性硬化症、アルツハイマー病、脳血管疾患、熱病、急性期反応、アレルギー、貧血、炎症貧血（慢性疾患に伴う貧血）、高血圧症、抑うつ症、慢性疾患に関連する抑うつ症、血栓症、血小板増加症、急性心不全、メタボリック症候群、流産、肥満、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、骨盤内炎症性疾患、再灌流傷害、移植片拒絶反応、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、サイトカインストーム、鳥インフルエンザ、Ｈ１Ｎ１インフルエンザ、ブタインフルエンザ、Ｈ５Ｎ１インフルエンザ、天然痘、汎発性インフルエンザ、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、敗血症、または全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）からなる群から選択されたものである。好ましい実施形態では、該疾病は、癌、炎症性疾患、ウイルス性疾患、または自己免疫疾患から選択されたものである。特に好ましい実施形態では、該疾病は、関節炎、悪液質、および消耗症候群である。
【０３７９】
本発明はさらに、標識または治療用薬剤に直接または間接に付加された抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体を想定している。
【０３８０】
本発明はまた、酵母やヒトの好ましいコドンを含むもの、あるいは該コドンからなるものを含む、上述の抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体の発現をもたらす１以上の核酸配列も想定している。本発明はまた、前記核酸配列を含むベクター（プラスミドまたは組換えウイルスベクターなど）も想定している。本発明はまた、哺乳動物、酵母、細菌、昆虫細胞を含む、上記の抗体の少なくとも１つを発現する宿主細胞または組換え宿主細胞を想定している。好ましい実施形態において、宿主細胞は酵母細胞である。さらに好ましい実施形態では、酵母細胞は二倍体酵母細胞である。より好ましい実施形態において、酵母細胞はピチア属酵母である。
【０３８１】
本発明は、ＩＬ−６を発現する細胞に関連する疾病または状態を罹患する患者に対して、抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体の少なくとも１種類を治療上有効な量投与するステップを含む、治療方法を包含する。治療対象となり得る疾病は、上記の非限定的なリストに記載されている。好ましい実施形態では、前記疾病は、癌、自己免疫疾患、または炎症性状態から選択されたものである。特に好ましい実施形態では、前記疾病は癌またはウイルス感染である。別の実施形態では、前記治療はさらに、他の治療薬剤の投与または、化学療法、放射線療法、サイトカイン投与、もしくは遺伝子治療から選択された他の治療レジメンを含む。
【０３８２】
本発明はさらに、ＩＬ−６を発現する細胞の存在を検出する生体内造影方法であって、抗ＩＬ−６抗体の少なくとも１種類を診断上有効な量を投与するステップを含む、該方法を想定している。ある実施形態では、前記投与がさらに、ＩＬ−６を発現する疾病部位における抗体の検出を容易にする放射性核種または蛍光体の投与を含む。本発明の別の実施形態では、生体内造影法を用いて、ＩＬ−６を発現する腫瘍または転移を検出するか、またはＩＬ−６発現細胞に関連する自己免疫疾患部位の存在を検出する。さらに別の実施形態では、前記生体内造影法の結果を、放射線治療、化学療法またはそれらの組み合わせを含む治療レジメンを含む適当な治療レジメンの設計を容易にするために用いる。
【０３８３】
［抗ＩＬ−６活性］
前項で述べたように、ＩＬ−６は、信号変換糖タンパク質ｇｐ１３０およびＩＬ−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）の少なくとも１つのサブユニットを含む受容体複合体を介して、細胞反応を推進するサイトカイン群の一員である。ＩＬ−６Ｒはまた、可溶型（ｓＩＬ−６Ｒ）で存在し得る。ＩＬ−６は、ＩＬ−６Ｒに結合し、ＩＬ−６Ｒは次いで信号変換受容体ｇｐ１３０を二量体化する。
【０３８４】
本発明の抗ＩＬ−６抗体、またはそのＩＬ−６結合フラグメントまたはその変異体は、抗ＩＬ−６活性を示すことによって有用であると考えられる。本発明の１つの非限定実施形態では、本発明の抗ＩＬ−６抗体またはそのＩＬ−６結合フラグメントまたはその変異体は、可溶性ＩＬ−６もしくは細胞表面で発現するＩＬ−６であり得るＩＬ−６に結合することによって抗ＩＬ−６活性を示し、および／またはＩＬ−６のＩＬ−６Ｒへの結合、および／またはｇｐ１３０信号変換糖タンパク質の活性化（二量化）、ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０多重体の形成、および任意の前述の生物学的作用を防止し得る、または阻害し得る。主題の抗ＩＬ−６抗体は、特定の抗体がどこでＩＬ−６に結合するか（すなわち、エピトープ）、および／またはそれがどのように前述のＩＬ−６複合体および／または多重体およびその生物学的作用の形成に影響を及ぼすかに基づく、異なるアンタゴニスト活性を有し得る。したがって、本発明に記載の異なる抗ＩＬ−６抗体は、例えば、関節リウマチ等の、かなりの可溶性ＩＬ−６の形成および蓄積を伴う状態を予防する、または治療するのにより適し得る一方、他の抗体は、ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０またはＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０多重体の防止が所望の治療結果である治療において好適である。これは、結合および他のアッセイにおいて決定することができる。
【０３８５】
本発明の抗ＩＬ−６抗体およびＩＬ−６に対して結合特異性を有するそのフラグメントまたは変異体の抗ＩＬ−６活性はまた、それらの結合の強度、またはそれらのＩＬ−６への親和性によって示され得る。これはまた、治療特性に影響を及ぼし得る。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗ＩＬ−６抗体およびＩＬ−６に対して結合特異性を有するそのフラグメントは、５ｘ１０−７、１０−７、５ｘ１０−８、１０−８、５ｘ１０−９、１０−９、５ｘ１０−１０、１０−１０、５ｘ１０−１１、１０−１１、５ｘ１０−１２、１０−１２、５ｘ１０−１３、１０−１３、５ｘ１０−１４、１０−１４、５ｘ１０−１５、または１０−１５以下の解離定数（ＫＤ）でＩＬ−６に結合する。好ましくは、抗ＩＬ−６抗体およびそのフラグメントおよびその変異体は、５ｘ１０−１０以下の解離定数でＩＬ−６に結合する。
【０３８６】
本発明の別の実施形態では、本発明の抗ＩＬ−６抗体およびＩＬ−６に対して結合特異性を有するそのフラグメントの抗ＩＬ−６活性は、１０−４Ｓ−１、５ｘ１０−５Ｓ−１、１０−５Ｓ−１、５ｘ１０−６Ｓ−１、１０−６Ｓ−１、５ｘ１０−７Ｓ−１、または１０−７Ｓ−１以下のオフ速度でＩＬ−６に結合する。本発明の一実施形態では、本発明の抗ＩＬ−６抗体およびＩＬ−６に対して結合特異性を有するそのフラグメントおよびその変異体は、直線状または立体構造エピトープに結合する。
【０３８７】
本発明のさらなるの実施形態では、本発明の抗ＩＬ−６抗体の抗ＩＬ−６活性およびＩＬ−６に対して結合特異性を有するそのフラグメントおよびその変異体は、ＩＬ−６に関連する疾病および疾患の症状を改善もしくは軽減する、または治療する、もしくは防止することによって、抗ＩＬ−６活性を示す。ＩＬ−６に関連する疾病および疾患の非限定実施例は、以下に示される。述べたように、癌に関連した疲労、悪液質、および関節リウマチは、主題の抗ＩＬ−６抗体の好適な適応症である。
【０３８８】
本発明の別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−６抗体、またはそのＩＬ−６結合フラグメントおよびその変異体は、ＩＬ−６Ｒまたはｇｐ−１３０信号変換グリコタンパク質への結合特異性を有さない。
【０３８９】
［Ｂ細胞のスクリーニングおよび単離］
１つの実施形態では、本発明は、少なくとも１つの抗原特異的細胞を単離するために使用され得る、抗原特異的Ｂ細胞のクローン集団を単離する方法を提供する。以下に示され例示されるように、これらの方法は、独立して、組み合わせで、経時的に、反復して、または周期的に使用されることができる、一連の培養および選択ステップを含有する。好ましくは、これらの方法は、少なくとも１つの抗原特異的細胞を単離するために使用され、所望の抗原またはそのような抗体に対応する核酸配列に特異的である、モノクローナル抗体を産生するために使用することができる。
【０３９０】
１つの実施形態では、本発明は、
ａ．少なくとも１つの抗原特異的Ｂ細胞を含む細胞集団を調製し、
ｂ．少なくとも１つの抗原特異的Ｂ細胞を含む濃縮された細胞集団を形成するために、例えば、クロマトグラフィーによって細胞集団を濃縮し、
ｃ．濃縮されたＢ細胞集団から単一Ｂ細胞を単離し、および
ｄ．単一Ｂ細胞が抗原に特異的である抗体を産生する、
各ステップを含む、方法を提供する。
【０３９１】
他の実施形態では、本発明は、単一抗体産生Ｂ細胞改善を単離する方法の改善を提供し、その改善には、免疫した、または抗原に自然曝露された宿主から得た濃縮Ｂ細胞集団濃縮を含み、そこでは、濃縮ステップがいかなる選択ステップにも先行し、少なくとも１つの培養ステップを含み、該抗原に特異的である単一モノクローナル抗体を産生するＢ細胞のクローン集団をもたらす。
【０３９２】
本出願を通して、「Ｂ細胞のクローン集団」は、所望の抗原に特異的である単一抗体のみを分泌するＢ細胞の集団を指す。すなわち、これらの細胞は、所望の抗原に特異的であるモノクローナルの１つの種類のみを産生する。
【０３９３】
本出願では、細胞集団を「濃縮する」ことは、例えば、所望の抗原に対して免疫される宿主に由来するＢ細胞含有単離細胞集団等の混合細胞集団に含有される、所望の細胞、典型的には抗原特異的細胞の頻度の増加を意味する。したがって、濃縮された細胞集団は、濃縮ステップの結果として、抗原特異的細胞の高頻度を有する細胞集団を含むが、この細胞集団は、異なる抗体を含有および産生し得る。
【０３９４】
「細胞集団」という一般用語は、複数の濃縮ステップが実行される時に細胞集団は前濃縮および後濃縮の両方であることができることに留意して、前濃縮および後濃縮細胞集団を含む。例えば１つの実施形態では、本発明は、
ａ．回収された細胞集団を得るために、細胞集団を免疫した宿主から回収し、
ｂ．回収された細胞集団から少なくとも１つの単一細胞懸濁液を作り、
ｃ．第１の濃縮された細胞集団を形成するために、少なくとも１つの単一細胞懸濁液を濃縮し、
ｄ．第２の濃縮された細胞集団を形成するために、第１の濃縮された細胞集団を濃縮し、
ｅ．第３の濃縮された細胞集団を形成するために、第２の濃縮された細胞集団を濃縮し、および
ｆ．第３の濃縮された細胞集団の抗原特異的細胞によって産生される抗体を選択する、各ステップを含む、方法を提供する。
【０３９５】
各細胞集団は、次のステップで直接的に使用され得、または後のステップのために、長期間もしくは短期間貯蔵のために、または後のステップのために、部分的もしくは全体的に凍結することができる。また、細胞集団からの細胞は、単一細胞懸濁液を産生するために、個々に懸濁されることができる。単一細胞懸濁液は、単一細胞懸濁液が前濃縮細胞集団として役立つように濃縮されることができる。次いで、１つ以上の抗原特異的単一細胞懸濁液はともに、濃縮された細胞集団を形成し、例えば、さらなる分析および／または抗体産生のために再び蒔かれる等、抗原特異的単一細胞懸濁液はともに分類されることができる。
【０３９６】
１つの実施形態では、本発明は、約５０％から約１００％またはその中の増分の抗原特異的細胞の頻度を有する、濃縮された細胞集団を産生するために、細胞集団を濃縮する方法を提供する。好ましくは、濃縮された細胞集団は、約５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９９％、または１００％より大きい、またはそれらに等しい抗原特異的細胞の頻度を有する。
【０３９７】
他の実施形態では、本発明は、抗原特異的細胞の頻度が、少なくとも約２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、またはその中の増分で増加される、細胞集団を濃縮する方法を提供する。
【０３９８】
本出願を通して、「増分」という用語は、例えば、最近の１０、１、０．１、０．０１等の異なる精度における数値を定義するために使用される。増分は、任意の測定可能な精度に四捨五入されることができ、増分は、範囲の両側上で同一の精度に四捨五入される必要はない。例えば、１から１００の範囲またはその中の増分は、２０から８０、５から５０、および０．４から９８等の範囲を含む。例えば１００未満の範囲等、範囲が開かれている場合、その中の増分は、１００と測定可能な限度との間の増分を意味する。例えば、１００未満またはその中の増分は、例えば温度等の特徴が０までに制限されることがない場合を除いて、０から１００またはその中の増分を意味する。
【０３９９】
抗原特異性は、任意の抗原に対して、測定することができる。抗原は、ペプチド、タンパク質またはそのフラグメント、炭水化物、有機および無機分子、動物細胞、細菌細胞、およびウイルスによって産生される受容体、酵素、生物学的経路のアゴニストおよびアンタゴニスト、ホルモン、およびサイトカインを含むが、それらに限定されない、抗体が結合することができる、任意の物質であることができる。典型的な抗原は、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１８、ＩＦＮ−α（アルファ）、ＩＦＮ−γ（ガンマ）、ＢＡＦＦ、ＣＸＣＬ１３、ＩＰ−１０、ＶＥＧＦ、ＥＰＯ、ＥＧＦ、ＨＲＧ、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、およびヘプシジンを含むが、それらに限定されない。好適な抗原は、ＩＬ−６、ＩＬ−１３、ＴＮＦ−α（アルファ）、ＶＥＧＦ−α（アルファ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、およびヘプシジンを含む。１つより多い濃縮ステップを利用する方法では、各濃縮ステップで使用される抗原は、相互で同一であることができる、または異なることができる。同一の抗原での複数の濃縮ステップは、抗原特異的細胞の多数および／または多様な集団を産生し得、異なる抗原での複数の濃縮ステップは、異なる抗原に対して交差特異性を有する濃縮された細胞集団を産生し得る。
【０４００】
濃縮細胞集団は、当技術分野で知られている、抗原特異的細胞を単離するための任意の細胞選択手段によって実行されることができる。例えば、細胞集団は、例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉビーズまたは電磁ビーズ技術等のクロマトグラフ技術によって濃縮されることができる。ビーズは、直接的または間接的に目的の抗原に付着させることができる。好ましい実施形態では、細胞集団を濃縮する方法は、少なくとも１つのクロマトグラフ濃縮ステップを含む。
【０４０１】
細胞集団はまた、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイまたはハロアッセイ等の当技術分野で知られている任意の抗原特異性アッセイ技術を実行することによって、濃縮することができる。ＥＬＩＳＡアッセイは、選択的抗原固定化（例えば、ストレプトアビジン、アビジン、またはニュートラアビジン被覆プレートによるビオチン化抗原検出）、非特異的抗原プレートコーディング、抗原増強戦略（例えば、選択的抗原検出、次いでヘテロマータンパク質抗原複合体を生産するための結合パートナー添加）を介することを含むが、それらに限定されない。抗原は、例えば、カラム等の固体マトリクスまたはサポートに直接的または間接的に付着されることができる。ハロアッセイは、Ｂ細胞を回収するために使用される宿主に特異的である、抗原負荷ビーズおよび標識抗宿主抗体の細胞との接触を含む。標識は、例えば、蛍光色素分子であることができる。１つの実施形態では、少なくとも１つのアッセイ濃縮ステップは、少なくとも１つの単一細胞懸濁液で実行される。他の実施形態では、細胞集団を濃縮する方法は、少なくとも１つのクロマトグラフ濃縮ステップおよび少なくとも１つのアッセイ濃縮ステップを含む。
【０４０２】
大きさまたは密度によって細胞集団を「濃縮する」方法は、当技術分野で知られている。例えば、米国特許第５，６２７，０５２号を参照されたい。これらのステップは、抗原特異性によって細胞集団を濃縮することに加えて、本方法で使用されることができる。
【０４０３】
本発明の細胞集団は、抗原を認識することのできる少なくとも１つの細胞を含有する。抗原認識細胞は、Ｂ細胞，血漿細胞，およびその子孫を含むが、それらに限定されない。１つの実施形態では、本発明は、抗原特異的Ｂ細胞の単一種類を含有するクローン細胞集団を提供し、すなわち、細胞集団は、所望の抗原に特異的である単一モノクローナル抗体を産生する。
【０４０４】
そのような実施形態では、Ｂ細胞クローン抗原特異的集団は、本明細書で提供される新規培養および選択プロトコルによって得られる抗原特異的な抗体分泌細胞から主に成ると考えられる。従って、本発明はまた、少なくとも１つの抗原特異的な抗体分泌細胞を含有する濃縮された細胞集団を得るための方法を提供する。１つの実施形態では、本発明は、約５０％から約１００％、もしくはその中の増分、または約６０％、７０％、８０％、９０％、もしくは１００％より大きい、またはそれらに等しい抗原特異的な抗体分泌細胞を含有する濃縮された細胞集団を提供する。
【０４０５】
１つの実施形態では、本発明は、例えば、特定のＢ細胞を細胞集団から選択する、および／または特定の細胞によって産生される抗体を選択する等、いかなる選択ステップよりも前に、宿主から得られる細胞集団を濃縮することによって単一Ｂ細胞を単離する方法を提供する。濃縮ステップは、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のステップとして実行されることができる。１つの実施形態では、単一Ｂ細胞が抗原特異性および／または所望の性質を有する抗体を分泌するかどうかを確認する前に、単一Ｂ細胞は濃縮された細胞集団から単離される。
【０４０６】
１つの実施形態では、細胞集団を濃縮する方法は、抗体産生および／または選択のための方法において使用される。したがって、本発明は、抗体を選択する前に細胞集団を濃縮することを含む方法を提供する。該方法は、少なくとも１つの抗原特異的細胞を含む細胞集団を調製し、少なくとも１つの抗原特異的細胞を単離することによって細胞集団を濃縮して、濃縮された細胞集団を形成し、および少なくとも１つの抗原特異的細胞から抗体産生を誘導するステップを含むことができる。好ましい実施形態では、濃縮された細胞集団は、１つより多い抗原特異的細胞を含有する。１つの実施形態では、濃縮された集団の各抗原特異的細胞は、それから細胞を産生する抗体を単離する前に、および／または該Ｂ細胞やそのような抗体に対応する核酸配列抗体を使用して抗体を産生する前に、クローン抗原特異的Ｂ細胞集団を産生する条件下で培養される。抗体が抗原特異的細胞が低頻度である細胞集団から産生される従前の技術とは異なり、本発明は、高頻度の抗原特異的細胞の中からの抗体選択を許容する。濃縮ステップが抗体選択前に使用されるので、抗体産生のために使用される細胞の大部分、好ましくは実質的に細胞の全ては、抗原特異的である。抗原特異性の増加した頻度を有する細胞の集団から抗体を産生することによって、抗体の量および種類が増加する。
【０４０７】
本発明の抗体選択方法では、抗体は、好ましくは、抗原特異的Ｂ細胞のクローン集団をもたらす濃縮ステップおよび培養ステップ後に、選択される。該方法は、１つ以上の単離抗原特異的細胞から、選択された抗体またはその部分を配列決定するステップをさらに含むことができる。当技術分野で知られている、配列決定のための任意の方法を、重鎖、軽鎖、可変領域、および／または相補性決定領域（ＣＤＲ）を配列決定することに用いることができる、および含むことができる。
【０４０８】
濃縮ステップに加えて、抗体選択のための方法はまた、抗原認識および／または抗体機能に関して、細胞集団をスクリーニングするステップの１つ以上を含むことができる。例えば、所望の抗体は、特定のエピトープまたは特定の構造の模倣に結合すること、アンタゴニストまたはアゴニスト活性、例えば、抗原とリガンドとの間の結合を阻害する等、活性を中和すること等の特定の構造的特徴を有し得る。１つの実施形態では、抗体機能スクリーンは、リガンド依存性である。抗体機能に関するスクリーニングは、組換え受容体タンパク質との抗原リガンドの自然な相互作用を再現する体外のタンパク質−タンパク質相互作用アッセイ、およびリガンド依存性であり、容易にモニタリングされる、細胞に基づいた反応（例えば、増殖反応）を含むが、それらに限定されない。１つの実施形態では、抗体選択のための方法は、抑制濃度（ＩＣ５０）を測定することによって、抗体機能に関して細胞集団をスクリーニングするステップを含む。１つの実施形態では、少なくとも１つの単離抗原特異的細胞は、約１００、５０、３０、２５、１０μｇ／ｍＬ未満、またはその中の増分のＩＣ５０を有する抗体を産生する。
【０４０９】
濃縮ステップに加えて、抗体選択のための方法はまた、抗体結合力に関して、細胞集団をスクリーニングするステップの１つ以上を含むことができる。抗体結合力は、当技術分野で知られている任意の方法（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標））によって測定することができる。１つの実施形態では、少なくとも１つの単離抗原特異的細胞は、例えば、約５ｘ１０−１０未満のＭ−１、好ましくは、約１×１０−１３から５×１０−１０、１×１０−１２から１×１０−１０、１×１０−１２から７．５×１０−１１、１×１０−１１から２×１０−１１、約１．５×１０−１１未満、またはその中の増分の解離定数（Ｋｄ）の高抗原親和性を有する抗体を産生する。本実施形態では、抗体は、親和性成熟であると言われる。好ましい実施形態では、抗体の親和性は、Ｐａｎｏｒｅｘ（登録商標）（エドレコロマブ）、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）、Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）（ゲンツズマブ）、Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）（アレムツズマブ）、Ｚｅｖａｌｉｎ（商標）（イブリツモマブ）、Ｅｒｂｉｔｕｘ（商標）（セツキシマブ）、Ａｖａｓｔｉｎ（商標）（ベバシズマブ）、Ｒａｐｔｉｖａ（商標）（エファリズマブ）、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）（インフリキシマブ）、Ｈｕｍｉｒａ（商標）（アダリムマブ）、およびＸｏｌａｉｒ（商標）（オマリズマブ）のいずれの１つの親和性に相当する、またはそれより高い。好ましくは、抗体の親和性は、Ｈｕｍｉｒａ（商標）の親和性に相当する、またはそれより高い。抗体の親和性はまた、知られている親和性成熟技術によって増加させることができる。１つの実施形態では、少なくとも１つの細胞集団が、抗体機能および抗体結合力のうちの少なくとも１つ、好ましくは両方に関してスクリーニングされる。
【０４１０】
濃縮ステップに加えて、抗体選択のための方法はまた、抗体配列相同性、特にヒト相同性に関して、細胞集団をスクリーニングするステップの１つ以上を含むことができる。１つの実施形態では、少なくとも１つの単離抗原特異的細胞は、ヒト抗体に対して、約５０％から約１００％、またはその中の増分の相同性、または約６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の相同性を有する抗体を産生する。抗体は、ヒト配列に対する相同性を増加させるために、ＣＤＲグラフティングまたは選択性決定残基グラフティング（ＳＤＲ）等の当技術分野で知られている技術によって、ヒト化することができる。
【０４１１】
他の実施形態では、本発明はまた、ＩＣ５０、Ｋｄ、および／または相同性に関して上述の任意の実施形態に記載の抗体そのものを提供する。
【０４１２】
本明細書で開示されるＢ細胞選択プロトコルは、抗体分泌Ｂ細胞および所望の標的抗原に特異的であるモノクローナル抗体を得るための他の方法に対して、多数の内在利点を有する。これらの利点は、以下を含むが、それらに限定されない。
【０４１３】
第１に、これらの選択手順が、ＩＬ−６またはＴＮＦ−α（アルファ）等の所望の抗原で使用される時に、方法は、実質的には抗体の網羅的補体、すなわち、抗原の種々の異なるエピトープに結合する抗体と思われるようなものを産生する能力のある抗原特異的Ｂ細胞を再現性よくもたらすことが見出された。理論によって縛られることなく、網羅的補体は、初期のＢ細胞回収前に実行される抗原濃縮ステップに起因すると仮定される。さらに、この利点は、これらの特性が特定の抗体のエピトープ特異性によって変化し得るので、異なる特性を有する抗体の単離および選択を可能にする。
【０４１４】
第２に、Ｂ細胞選択プロトコルは、比較的高い結合親和性、すなわち、ピコモルまたはよりよい抗原結合親和性で、通常所望の抗原に結合する単一モノクローナル抗体を分泌する、単一Ｂ細胞を含有するクローンＢ細胞培養、またはその子孫を再現性よく産生することが見出された。それに反して、従前の抗体選択方法は、比較的少数の高い親和性抗体を産生する傾向があり、したがって、治療可能性を伴う抗体を単離するために広範なスクリーニング手順を必要とする。理論によって縛られることなく、このプロトコルは、宿主の体内のＢ細胞免疫化（二次抗原刺激ステップ）、それに続く、回収したクローンＢ細胞の抗原標的に特異的である単一高親和性モノクローナル抗体を分泌する能力および傾向を増強し得る第２の体外のＢ細胞刺激の両方をもたらすことが仮定される。
【０４１５】
第３に、Ｂ細胞選択プロトコルは、（ＩＬ−６特異的Ｂ細胞を伴って本明細書に示されるように）所望の標的に対して、平均して高度選択的（抗原特異的）であるＩｇＧを産生する、濃縮されたＢ細胞を再現性よく産生することが観察された。これらの方法によって回収される抗原濃縮されたＢ細胞は、上述のように、エピトープ特異性の所望の全補体を産生することのできるＢ細胞を含有すると考えられる。
【０４１６】
第４に、Ｂ細胞選択プロトコルは、小さな抗原、すなわち、例えば５−５０アミノ酸長の１００アミノ酸またはそれ未満のペプチドで使用される時でさえ、ペプチドに単一高親和性抗体を分泌するクローンＢ細胞培養を再現性よく引き起こすことが観察された。これは通常かなり困難で、労働集約的で、小さなペプチドに高親和性抗体を産生することでさえ時々実行不可能であるため、これは非常な驚きである。したがって、本発明は、例えば、ウイルス性、細菌、または自己抗原ペプチド等の所望のペプチド標的に治療抗体を産生するために使用することができ、それによって、異なるペプチド標的、例えば異なるウイルス株に、非常に別個の結合特性を有するモノクローナル抗体の産生、またはモノクローナル抗体の混合物の産生を可能にする。この利点は、異なるＨＰＶ株に感染防御免疫を誘発するＨＰＶワクチン等の、所望の価数を有する治療または予防ワクチンの産生において特に有用であり得る。
【０４１７】
第５に、Ｂ細胞選択プロトコルは、特にウサギに由来するＢ細胞で使用される時に、内因性ヒト免疫グロブリンに非常に類似し（アミノ酸レベルで約９０％類似する）、非常にヒト免疫グロブリンに類似した長さを持つＣＤＲを含有し、したがって、潜在的免疫原性の懸念を排除するために、ごくわずかの配列修飾しか必要としない、または全く必要としない抗原特異的抗体配列を再現性よく産生する傾向がある。具体的には、好ましくは、組換え抗体は、抗原認識および全体のＣＤＲ３に必要な宿主（ウサギ）ＣＤＲ１およびＣＤＲ２残基を含有する。その結果、Ｂ細胞および抗体選択プロトコルに従って産生される回収された抗体配列の高抗原結合親和性は、ヒト化を伴っても無傷のまま、または実質的に無傷のままである。
【０４１８】
要約すると、これらの方法は、以前に知られているより効率的なプロトコルの使用によって、より異なる別個のエピトープに対してより高い結合親和性を示す抗体を産生するために使用することができる。
【０４１９】
具体的な実施形態では、本発明は、以下のステップを含む過程によって、所望の抗原に特異的である抗体を分泌し、親和性、結合活性、細胞溶解活性等の、少なくとも１つの所望の機能的性質を任意で持つ単一Ｂ細胞を同定するための方法であって、
ａ．抗原に対して宿主を免疫し、
ｂ．宿主からＢ細胞を回収し、
ｃ．抗原特異的細胞の頻度を増加させるために、回収されたＢ細胞を濃縮し、
ｄ．少なくとも１つの単一細胞懸濁液を作成し、
ｅ．培養ウェルごとに単一抗原特異的Ｂ細胞の生存に好適な条件下で、単一細胞懸濁液から亜集団を培養し、
ｆ．亜集団からＢ細胞を単離し、および
ｇ．単一Ｂ細胞が抗原に特異的である抗体を産生するかを決定する、各ステップを含む、該方法を提供する。
【０４２０】
典型的には、これらの方法は、所望の抗体をコードするポリペプチドおよび核酸配列を全体的または部分的に単離および配列決定する付加的なステップをさらに含む。これらの配列または修飾された形態またはその部分は、所望の抗原に組換え抗体を産生するために、所望の宿主細胞で発現されることができる。
【０４２１】
上述のように、Ｂ細胞のクローン集団は、所望の抗原に対して抗体を産生する抗体分泌Ｂ細胞を主に含むと考えられる。いくつかの抗原および異なるＢ細胞集団で得られた実験結果に基づいて、クローン産生されるＢ細胞および本発明に従って産生されるそれに由来する単離抗原特異的Ｂ細胞は、培養抗原特異的Ｂ細胞からモノクローナル抗体を得る他の方法と比較して、典型的には比較的高い親和性があり、さらにより大きなエピトープ可変性のモノクローナル抗体の選択を、効率的におよび再現性よく産生する能力のあるモノクローナル抗体を分泌するとも考えられる。典型的な実施形態では、そのようなＢ細胞選択方法で使用される免疫細胞の集団は、ウサギに由来する。しかしながら、非ヒトおよびヒト宿主を含む抗体を産生する他の宿主を、免疫Ｂ細胞の供給源として代わりに使用することができる。Ｂ細胞の供給源としてのウサギの使用は、該方法によって得られ得るモノクローナル抗体の多様性を増強し得ると考えられる。また、本発明に記載のウサギに由来する抗体配列は、ヒト抗体配列に対して、典型的には高度の配列同一性を有する配列を有し、それらはほとんど抗原性を持たないであろうという理由で、ヒト中での使用に好適となる。ヒト化の過程では、最終のヒト化抗体は、グラフティングで使用されるヒト標的配列に対して、それらの性質により劇的に異なる宿主ＣＤＲ残基の一部に通常制限される、非常に低い外来性／宿主残基量を含有する。これは、ヒト化抗体タンパク質における完全な活性の回復の可能性を増強する。
【０４２２】
本明細書に開示される濃縮ステップを使用する抗体選択の方法は、免疫宿主から免疫細胞含有細胞集団を得るステップを含む。免疫宿主から免疫細胞含有細胞集団を得る方法は、当技術分野で知られており、１つ以上の細胞集団を得るために、通常、宿主で免疫反応を誘発し、宿主から細胞を回収することを含む。反応は、所望の抗原に対して宿主を免疫することによって誘発することができる。あるいは、そのような免疫細胞の供給源として使用される宿主は、細菌またはウイルス等の特定の病原体に感染し、またはあるいは、個人が罹患している癌に対する特異的抗体反応を開始している個人等の所望の抗原に自然に曝露することができる。
【０４２３】
宿主動物は、当技術分野でよく知られており、モルモット、ウサギ、マウス、ラット、非ヒト霊長類、ヒト、ならびに他の哺乳類および齧歯類、ニワトリ、ウシ、ブタ、ヤギ、およびヒツジを含むが、それらに限定されない。好ましくは、宿主は哺乳動物であり、より好ましくは、ウサギ、マウス、ラット、またはヒトである。抗原曝露される時に、宿主は、抗原に対する自然免疫反応の一部として抗体を産生する。述べたように、免疫反応は、疾病の結果として自然に発生し得、または抗原による免疫化によって誘発することができる。免疫化は、完全または不完全フロイントアジュバント等の免疫反応を増強するための薬剤を伴う、または伴わない抗原の１回以上の注射によって等の、当技術分野で知られている任意の方法によって実行されることができる。他の実施形態では、本発明はまた、脾臓免疫を想定している。宿主動物体内に免疫する代替案として、方法は、体外で宿主細胞培養を免疫することを含むことができる。
【０４２４】
免疫反応のための時間を許した後（例えば、血清抗体検出によって測定されるように）、宿主動物細胞は、１つ以上の細胞集団を得るために回収される。好ましい実施形態では、回収された細胞集団は、抗体結合力および／または抗体機能に関してスクリーニングされる。回収された細胞集団は、好ましくは、脾臓、リンパ節、骨髄、および／または末梢血単核球（ＰＢＭＣｓ）の少なくとも１つからである。細胞は、１つより多い供給源から回収され、貯蔵することができる。ある種の供給源が、ある抗原に好適であり得る。例えば、脾臓、リンパ節、およびＰＢＭＣは、ＩＬ−６に好適であり、およびリンパ節は、ＴＮＦに好適である。細胞集団は、免疫後、約２０から約９０日またはその中の増分、好ましくは、約５０から約６０日に回収される。回収された細胞集団および／またはそれからの単一細胞懸濁液は、抗体選択のために、濃縮され、スクリーニングされ、培養することができる。回収された細胞集団内での抗原特異的細胞の頻度は、通常、約１％から約５％、またはその中の増分である。
【０４２５】
１つの実施形態では、回収された細胞集団からの単一細胞懸濁液が、好ましくは、Ｍｉｌｔｅｎｙｉビーズを使用することによって濃縮される。約１％から約５％の抗原特異的細胞の頻度を有する回収された細胞集団から、そのようにして、１００％に近づく抗原特異的細胞の頻度を有する、濃縮された細胞集団が得られる。
【０４２６】
濃縮ステップを使用する抗体選択の方法は、濃縮された細胞集団からの少なくとも１つの抗原特異的細胞から、抗体を産生するステップを含む。体外で抗体を産生する方法は、当技術分野でよく知られており、任意の適切な方法を用いることができる。１つの実施形態では、回収された細胞集団からの抗原特異的単一細胞懸濁液等の濃縮された細胞集団は、ウェルごとに、５０、１００、２５０、５００、または１細胞と１０００細胞との間の他の増分等の種々の細胞密度で蒔かれる。好ましくは、亜集団は、約１０，０００以上の抗原特異的抗体分泌細胞は含まず、より好ましくは、約５０〜１０，０００、約５０〜５，０００、約５０〜１，０００、約５０〜５００、約５０〜２５０の抗原特異的抗体分泌細胞、またはその中の増分を含む。次いで、これらの亜集団は、支持細胞層での適切な培地（例えば、活性化Ｔ細胞馴化培地、特に１〜５％の活性化ウサギＴ細胞馴化培地）、好ましくは、培養ウェルごとの単一増殖抗体分泌細胞の生存に好適な条件下で培養される。通常照射細胞物質、例えばＥＬ４Ｂ細胞から成る支持細胞層は、細胞集団の部分を構成しない。細胞は、例えば、約１日から約２週間、約１日から約１０日、少なくとも約３日、約３から約５日、約５日から約７日、少なくとも約７日、または他のその中の増分等、抗体産生に十分な時間をかけて、適切な培地で培養される。１つの実施形態では、１つより多い亜集団が同時に培養される。好ましくは、単一抗体産生細胞およびその子孫は各ウェルで生存し、その結果、抗原特異的Ｂ細胞のクローン集団を各ウェルで提供する。この段階において、クローン集団によって産生される免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）は、抗原特異性と高相関性がある。好ましい実施形態では、ＩｇＧｓは、約５０％よりも大きい、より好ましくは、７０％、８５％、９０％、９５％、９９％よりも大きい、またはその中の増分の抗原特異性との相関関係を示す。ＩＬ−６についての典型的な相関関係を示す図３を指す。相関関係は、ウェルごとに単一抗原特異的抗体生成物を樹立するような、制約条件下でＢ細胞培養を構成することによって示された。抗原特異的対一般的ＩｇＧ合成が比較された。３つの集団、すなわち抗原（ビオチン化および直接被覆）の単一形態を認識するＩｇＧ、固定化に無関係に検出可能なＩｇＧおよび抗原認識、およびＩｇＧ産生のみが観察された。ＩｇＧ産生は、抗原特異性と高相関性があった。
【０４２７】
抗体を含有する上清を、任意で回収することができ、それを上述のステップに従って、抗体選択のために濃縮し、スクリーニングし、および／または培養することができる。１つの実施形態では、上清は濃縮され（好ましくは、抗原特異性アッセイ、特にＥＬＩＳＡアッセイによって）、および／または抗体機能に関してスクリーニングされる。
【０４２８】
他の実施形態では、上述の上清が所望の分泌されるモノクローナル抗体の存在を検出するために任意でスクリーニングされる、濃縮、好ましくは、クローン化抗原特異的Ｂ細胞集団は、数個のＢ細胞、好ましくは単一Ｂ細胞の単離のために使用され、次いで、クローンＢ細胞集団中の単一抗体産生Ｂ細胞の存在を確認するために適切なアッセイで検査される。１つの実施形態では、約１から約２０細胞、好ましくは、約１５、１２、１０、５、または３細胞未満、またはその中の増分、最も好ましくは、単一細胞が、クローンＢ細胞集団から単離される。スクリーニングは、好ましくは抗原特異性アッセイによって、特にハロアッセイによって達成される。ハロアッセイは、全長タンパク質、またはそのフラグメントで実行することができる。抗体含有上清はまた、抗原結合親和性、抗原リガンド結合の受容体活性化作用または拮抗作用、特異的標的細胞型の増殖の誘発または阻害、標的細胞の溶解の誘発または阻害、および抗原を含む生物学的経路の誘発または阻害のうちの少なくとも１つに関してスクリーニングすることができる。
【０４２９】
特定された抗原特異的細胞は、所望のモノクローナル抗体をコードする対応する核酸配列を得るために使用することができる。（ＡｌｕＩ消化物は、単一モノクローナル抗体種類のみがウェルごとに産生されることを確認することができる。）上述のように、これらの配列は、ヒト薬物での使用に適するために、ヒト化等によって変異させることができる。
【０４３０】
上述のように、この過程で使用される濃縮Ｂ細胞集団はまた、上述のステップに従って、抗体選択のためにさらに濃縮し、スクリーニングし、および／または培養することができ、これは異なる順序で反復または実行することができる。好ましい実施形態では、濃縮、好ましくはクローン化抗原特異的細胞集団のうちの少なくとも１つの細胞が、抗体選択のために単離され、培養され、および使用される。
【０４３１】
したがって、１つの実施形態では、本発明は、
ａ．回収された細胞集団を得るために、免疫宿主から細胞集団を回収し、
ｂ．回収された細胞集団から少なくとも１つの単一細胞懸濁液を作成し、
ｃ．第１の濃縮された細胞集団を形成するために、少なくとも１つの単一細胞懸濁液を、好ましくはクロマトグラフィーによって濃縮し、
ｄ．好ましくはクローンであり、すなわち、抗原特異的Ｂ細胞の単一種類のみを含有する、第２の濃縮された細胞集団を形成するために、第１の濃縮された細胞集団を、好ましくはＥＬＩＳＡアッセイによって濃縮し、
ｅ．所望の抗原に特異的である抗体を産生する単一または少数のＢ細胞を含有する、第３の濃縮された細胞集団を形成するために、第２の濃縮された細胞集団を、好ましくはハロアッセイによって濃縮し、および
ｆ．抗原特異的細胞によって産生される抗体を選択し、第３の濃縮された細胞集団から単離される抗原特異的細胞によって産生される抗体を選択することを含む方法を提供する。
【０４３２】
該方法は、抗体結合力（親和性、結合活性）および／または抗体機能に関して回収された細胞集団をスクリーニングするステップのうちの１つ以上のステップをさらに含むことができる。適切なスクリーニングステップは、特定抗原特異的Ｂ細胞によって産生される抗体が、最小限の抗原結合親和性を持つ抗体を産生するか、抗体がリガンドに対して所望の抗原の結合を刺激する、または拮抗するか、抗体が特定の細胞型の増殖を誘発する、または阻害するか、抗体が標的細胞に対して細胞溶解反応を誘発する、または引き出すか、抗体が特定のエピトープに結合するか、および抗体が特定の生物学的経路または抗原を含む経路を調節する（阻害する、または刺激する）かを検出するアッセイ方法を含むが、それらに限定されない。
【０４３３】
同様に、該方法は、抗体結合力および／または抗体機能に関して、第２の濃縮された細胞集団をスクリーニングするステップのうちの１つ以上のステップを含むことができる。
【０４３４】
該方法は、選択された抗体のポリペプチド配列または対応する核酸配列を配列決定するステップをさらに含むことができる。該方法はまた、配列、そのフラグメント、または選択された抗体の遺伝的に修飾された変形を使用して、組換え抗体を産生するステップを含むことができる。所望の特性を保持するために抗体配列を変異させるための方法は、当業者によく知られており、ヒト化、キメラ化、一本鎖抗体の産生を含み、これらの変異方法は、所望のエフェクター機能、免疫原性、安定性、グリコシルの除去または付加等を持つ組換え抗体を産生することができる。組換え抗体は、ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＢＨＫ、ＨＥＫ−２９３等の哺乳類細胞、細菌細胞、酵母細胞、植物細胞、昆虫細胞、および両生類細胞を含むが、それらに限定されない、任意の適切な組換え細胞によって産生することができる。１つの実施形態では、抗体は、倍数性酵母細胞、すなわち二倍体酵母細胞、特にピチア属で発現される。
【０４３５】
１つの実施形態では、該方法は、
ａ．宿主抗体を産生するために、抗原に対して宿主を免疫し、
ｂ．抗原特異性および中和に関して、宿主抗体をスクリーニングし、
ｃ．宿主からＢ細胞を回収し、
ｄ．抗原特異的細胞の増加頻度を有する濃縮された細胞集団を作成するために、回収されたＢ細胞を濃縮し、
ｅ．少なくとも１つの培養ウェルでクローン集団を産生するために、単一Ｂ細胞の生存に好適な条件下で、濃縮された細胞集団から１つ以上の亜集団を培養し、
ｆ．クローン集団が抗原に特異的である抗体を産生するかを決定し、
ｇ．単一Ｂ細胞から単離し、および
ｈ．単一Ｂ細胞によって産生される抗体の核酸配列を配列決定することを含む。
【０４３６】
［抗体のヒト化方法］
本発明の別の実施形態では、抗体重鎖および軽鎖をヒト化するための方法が提供される。本実施形態では、重鎖および軽鎖のヒト化のために以下の方法に従う。
【０４３７】
軽鎖
１．  シグナルペプチド配列に従う第１のアミノ酸であるアミノ酸を特定する。これは、フレームワーク１の開始である。シグナルペプチドは、第１の開始メチオニンで開始し、典型的であるが必然的ではないが、ウサギ軽鎖タンパク質配列に対して２２アミノ酸長である。成熟ポリペプチドの開始はまた、Ｎ−端末タンパク質配列決定によって実験的に決定することができ、または、予測アルゴリズムを使用して予測することができる。これはまた、当事者によって古典的に定義されるように、フレームワーク１の開始である。
【０４３８】
例：図２中の「ＡＹＤＭ…」で始まるＲｂｔＶＬアミノ酸残基１
【０４３９】
２．  フレームワーク３の末端を特定する。これは、典型的にはフレームワーク１の開始に続く８６〜９０アミノ酸であり、典型的には２つのチロシン残基によって先行されるシステイン残基である。これは、当事者によって古典的に定義されるように、フレームワーク３の末端である。
【０４４０】
例：図２中の「ＴＹＹＣ」で終わるＲｂｔＶＬアミノ酸残基８８
【０４４１】
３．  上記で定義される、フレームワーク１の開始から始まり、フレームワーク３の末端までのポリペプチドのウサギ軽鎖配列を使用し、最類似ヒト抗体タンパク質配列の配列相同性検索を実行する。これは、典型的には、免疫原性の可能性を低減するために、抗体成熟前のヒト生殖細胞系列配列に反対する検索であろうが、しかしながら、任意のヒト配列を使用することができる。典型的には、ＢＬＡＳＴ等のプログラムを、最大相同性のための配列のデータベースを検索するために使用することができる。ヒト抗体配列のデータベースは、ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）等の種々の供給源から見出すことができる。
【０４４２】
例：図２中の１から８８で番号付けられた残基からのＲｂｔＶＬアミノ酸配列は、ヒト抗体生殖細胞系列データベースに対してＢＬＡＳＴを用いて検索される。結果の上位３つの固有配列が、Ｌ１２Ａ、Ｖ１、およびＶｘ０２として図２で示される。
【０４４３】
４．  通常、最大相同ヒト生殖細胞系列可変軽鎖配列が、次いで、ヒト化の基本として使用される。しかしながら、当業者は、配列ギャップおよびフレームワーク類似性を含む他の要因に基づいて、相同性アルゴリズムによって決定して最高相同性ではなかった別の配列を使用することを決定し得る。
【０４４４】
例：図２では、Ｌ１２Ａは、最も相同のヒト生殖細胞系列可変軽鎖配列であり、ＲｂｔＶＬのヒト化の基本として使用される。
【０４４５】
５．  軽鎖ヒト化のために使用されるヒト相同体のためのフレームワークおよびＣＤＲ配置（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ１＆ＣＤＲ２）を決定する。これは、当分野で示される、従来のレイアウトを使用する。ヒト相同体とともにウサギ可変軽鎖配列を整列比較し、一方、フレームワークおよびＣＤＲ領域のレイアウトを維持する。
【０４４６】
例：図２では、ＲｂｔＶＬ配列は、ヒト相同性配列Ｌ１２Ａと整列比較し、フレームワークおよびＣＤＲドメインが示される。
【０４４７】
６．  ヒト相同軽鎖配列ＣＤＲ１およびＣＤＲ２領域をウサギ配列からのＣＤＲ１およびＣＤＲ２配列で置換する。ウサギとヒトＣＤＲ配列との間で長さの差異がある場合、全体のウサギＣＤＲ配列およびそれらの長さを使用する。結果として生じるヒト化抗体の特異性、親和性、および／または免疫原性は、より小さいまたはより大きい配列交換が実行される場合、または特定の残基が変化する場合、不変であり得る可能性があるが、しかしながら、示されるように、交換はうまく使用されたが、他の変化が許容され得る可能性を除外しない。
【０４４８】
例：図２では、ヒト相同可変軽鎖Ｌ１２ＡのＣＤＲ１およびＣＤＲ２アミノ酸残基が、ＲｂｔＶＬウサギ抗体軽鎖配列からＣＤＲ１およびＣＤＲ２アミノ酸配列で置換される。ヒトＬ１２Ａフレームワーク１、２、および３は、不変である。結果として生じるヒト化配列は、１から８８で番号付けられた残基からのＶＬｈとして以下に示される。Ｌ１２Ａヒト配列と異なる残基のみ下線が引かれており、したがって、ウサギ由来のアミノ酸残基であることを指摘する。この例では、８８残基のうちの８残基のみがヒト配列と異なる。
【０４４９】
７．  新規ハイブリッド配列のフレームワーク３が、ステップ６で作成された後、ウサギ軽鎖抗体配列の全体のＣＤＲ３を付着する。ＣＤＲ３配列は、種々の長さであることができるが、典型的には、９から１５アミノ酸残基長である。ＣＤＲ３領域およびそれに続くフレームワーク４領域の開始は、当業者によって古典的におよび識別可能に定義される。典型的にはフレームワーク４の開始、したがって、ＣＤＲ３の末端の後で、配列「ＦＧＧＧ…」を含むが、いくつかの変動がこれらの残基中に存在し得る。
【０４５０】
例：図２では、ＲｂｔＶＬのＣＤＲ３（８９〜１００で番号付けられたアミノ酸残基）は、ＶＬｈとして示されるように、ヒト化配列中に、フレームワーク３の末端の後に付加される。
【０４５１】
８．  典型的には、可変軽鎖の最後の１１アミノ酸残基であり、上記のステップ７で示されるように開始し、典型的にはアミノ酸配列「…ＶＶＫＲ」で終了するウサギ軽鎖フレームワーク４は、通常、生殖細胞系列配列から最も近いヒト軽鎖フレームワーク４相同体と置換される。しばしば、このヒト軽鎖フレームワーク４は、配列「ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ」である。最大相同ではなく、またはさもなければ異なる他のヒト軽鎖フレームワーク４配列が、結果として生じるヒト化抗体の特異性、親和性、および／または免疫原性に影響を及ぼすことなく使用され得る可能性がある。このヒト軽鎖フレームワーク４配列は、可変軽鎖ヒト化配列の末端に、上記のステップ７からのＣＤＲ３配列の直後に付加される。これは、可変軽鎖ヒト化アミノ酸配列の末端となる。
【０４５２】
例：図２では、ＲｂｔＶＬウサギ軽鎖配列のフレームワーク４（ＦＲ４）が、相同ヒトＦＲ４配列の上に示される。ヒトＦＲ４配列は、ヒト化可変軽鎖配列（ＶＬｈ）に、上記のステップ７で付加されたＣＤ３領域の末端の直後に付加される。
【０４５３】
加えて、図３４および図３５は、本発明によるＡｂ１の可変重鎖および軽鎖領域からヒト化された、好ましいヒト化抗ＩＬ−６可変重鎖および軽鎖配列を示す。これらのヒト化重鎖および軽鎖領域領域は、配列番号６４７または６５１に、および配列番号６５２、６５６、６５７、または６５８に含まれるポリペプチドにそれぞれ含められている。配列番号６５７（ＣＤＲ２においてセリンの置換を含むもの）は、配列番号６５８に含まれている。軽鎖および重鎖の変異体を示すアライメントは、それぞれ図３６および図３７に示されており、ＣＤＲ領域内の配列の違いが強調表示されている。ＣＤＲ配列および典型的なコード配列の配列識別符号は、上記の表１に要約されている。
【０４５４】
重鎖
１．  シグナルペプチド配列に従う第１のアミノ酸であるアミノ酸を特定する。これは、フレームワーク１の開始である。シグナルペプチドは、第１の開始メチオニンで開始し、典型的には、ウサギ重鎖タンパク質配列については１９アミノ酸長である。典型的であるが必ずしもそうであるわけではないが、ウサギ重鎖シグナルペプチドの最後の３アミノ酸残基は「…ＶＱＣ」であり、次いで、フレームワーク１の開始が続く。成熟ポリペプチドの開始はまた、Ｎ−端末タンパク質配列決定によって実験的に決定され、または予測アルゴリズムを使用して予測することができる。これはまた、当事者によって古典的に定義されるように、フレームワーク１の開始である。
【０４５５】
例：図２中の「ＱＥＱＬ…」で始まるＲｂｔＶＨアミノ酸残基１
【０４５６】
２．  フレームワーク３の末端を特定する。これは典型的には、フレームワーク１の開始に続く９５〜１００アミノ酸であり、典型的には「…ＣＡＲ」の最終配列を有する（アラニンはバリンでもあることができるが）。これは、当事者によって古典的に定義されるように、フレームワーク３の末端である。
【０４５７】
例：図２中の「…ＦＣＶＲ」で終わるＲｂｔＶＨアミノ酸残基９８
【０４５８】
３．  上で定義される、フレームワーク１の開始から始まり、フレームワーク３の末端までのポリペプチドのウサギ重鎖配列を使用し、最も相同のヒト抗体タンパク質配列に対する配列相同性検索を実行する。これは、典型的には、免疫原性の可能性を低減するために、抗体成熟前のヒト生殖細胞系列配列のデータベースに対するものであるが、しかしながら、任意のヒト配列を使用することができる。典型的には、ＢＬＡＳＴ等のプログラムを、最大相同性のための配列のデータベースを検索するために使用することができる。ヒト抗体配列のデータベースは、ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）等の種々の供給源から見出されることができる。
【０４５９】
例：図２中の１から９８で番号付けられた残基からのＲｂｔＶＨアミノ酸配列が、ヒト抗体生殖細胞系列データベースに対してＢＬＡＳＴを用いて検索される。結果の上位３つの固有配列は、３−６４−０４、３−６６−０４、および３−５３−０２として、図２で示される。
【０４６０】
４．  通常、最大相同ヒト生殖細胞系列可変重鎖配列が、次いで、ヒト化の基本として使用される。しかしながら、当業者は、配列ギャップおよびフレームワーク類似性を含む他の要因に基づいて、相同性アルゴリズムによって決定して最高相同性ではなかった別の配列を使用することを決定し得る。
【０４６１】
例：図２の３−６４−０４は、最も相同のヒト生殖細胞系列可変重鎖配列であり、ＲｂｔＶＨのヒト化の基本として使用される。
【０４６２】
５．  重鎖ヒト化のために使用されるヒト相同体のためのフレームワークおよびＣＤＲ配置（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ１＆ＣＤＲ２）を決定する。これは、当分野で示される、従来のレイアウトを使用する。ヒト相同体とともにウサギ可変重鎖配列を整列比較し、一方、フレームワークおよびＣＤＲ領域のレイアウトを維持する。
【０４６３】
例：図２では、ＲｂｔＶＨ配列は、ヒト相同性配列３−６４−０４と整列比較し、フレームワークおよびＣＤＲドメインが示される。
【０４６４】
６．  ヒト相同重鎖配列ＣＤＲ１およびＣＤＲ２領域をウサギ配列からのＣＤＲ１およびＣＤＲ２配列で置換する。ウサギとヒトＣＤＲ配列との間で長さの差異がある場合、全体のウサギＣＤＲ配列およびそれらの長さを使用する。加えて、ヒト重鎖フレームワーク１領域の最後の３つのアミノ酸を、ウサギ重鎖フレームワーク１の最後の３つのアミノ酸で置換することが必要であり得る。典型的であるが常にではないが、ウサギ重鎖フレームワーク１では、これらの３つの残基は、セリン残基によって先行されるグリシン残基に続く。加えて、ヒト重鎖フレームワーク２領域の最後のアミノ酸を、ウサギ重鎖フレームワーク２の最後のアミノ酸で置換することが必要であり得る。典型的であるが必ずしもそうであるわけではないが、これは、ウサギ重鎖フレームワーク２のイソロイシン残基によって先行されるグリシン残基である。結果として生じるヒト化抗体の特異性、親和性、および／または免疫原性は、より小さいまたはより大きい配列交換が実行される場合、または特定の残基が変化する場合、不変であり得る可能性があるが、しかしながら、示されるように、交換はうまく使用されたが、他の変化が許容され得る可能性を除外しない。例えば、トリプトファンアミノ酸残基が、典型的には、ウサギ重鎖ＣＤＲ２領域末端の４残基前に出現するが、ヒト重鎖ＣＤＲ２においては、この残基は典型的にはセリン残基である。この位置でこのウサギトリプトファン残基をヒトセリン残基に変化することは、ヒト化抗体の特異性または親和性に最小の影響から無影響を及ぼすことが示されており、したがって、ヒト化配列において、ウサギ配列由来のアミノ酸残基の含有量をさらに最小化する。
【０４６５】
例：図２では、ヒト相同可変重鎖のＣＤＲ１およびＣＤＲ２アミノ酸残基が、ウサギ配列（位置番号６３）でトリプトファンであり、ヒト配列中の同位置でセリンであり、ヒトセリン残基として保持される、ボックスで囲まれた残基を除いて、ＲｂｔＶＨウサギ抗体軽鎖配列からＣＤＲ１およびＣＤＲ２アミノ酸配列で置換される。ＣＤＲ１およびＣＤＲ２の変化に加えて、フレームワーク１（位置２８〜３０）の最終の３つのアミノ酸、ならびにフレームワーク２（位置４９）の最終の残基は、ヒトの代わりにウサギアミノ酸残基として保持される。結果として生じるヒト化配列は、１から９８で番号付けられた残基からのＶＨｈとして下に示される。結果として生じるヒト化配列は、１から８８で番号付けられた残基からのＶＬｈとして以下に示される。３−６４−０４ヒト配列と異なる残基のみ下線が引かれており、したがって、ウサギ由来のアミノ酸残基であることを指摘する。この例では、９８残基のうちの１５残基のみがヒト配列と異なる。
【０４６６】
７．  新規ハイブリッド配列のフレームワーク３が、ステップ６で作成された後、ウサギ重鎖抗体配列の全体のＣＤＲ３を付着する。ＣＤＲ３配列は、種々の長さであることができるが、典型的には、５から１９アミノ酸残基長である。ＣＤＲ３領域およびそれに続くフレームワーク４領域の開始は、当業者によって古典的におよび識別可能に定義される。典型的にはフレームワーク４の開始、したがって、ＣＤＲ３の末端の後で、配列「ＷＧＸＧ・・・」（Ｘが通常ＱまたはＰである場合）を含むが、いくつかの変動がこれらの残基中に存在し得る。
【０４６７】
例：ＲｂｔＶＨのＣＤＲ３（９９〜１１０で番号付けられたアミノ酸残基）は、ＶＨｈとして示されるように、ヒト化配列中に、フレームワーク３の末端の後に付加される。
【０４６８】
８．  典型的には、可変重鎖の最終の１１アミノ酸残基であり、上記のステップ７で示されるように開始し、典型的にはアミノ酸配列「…ＴＶＳＳ」で終了するウサギ重鎖フレームワーク４は、通常、生殖細胞系列配列から最も近いヒト軽鎖フレームワーク４相同体と置換される。しばしば、このヒト重鎖フレームワーク４は、配列「ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ」である。最大相同ではなく、またはさもなければ異なる他のヒト重鎖フレームワーク４配列が、結果として生じるヒト化抗体の特異性、親和性、および／または免疫原性に影響を及ぼすことなく使用され得る可能性がある。このヒト重鎖フレームワーク４配列は、可変重鎖ヒト化配列の末端に、上記のステップ７からのＣＤＲ３配列の直後に付加される。これは、可変重鎖ヒト化アミノ酸配列の末端となる。
【０４６９】
例：図２では、ＲｂｔＶＨウサギ重鎖配列のフレームワーク４（ＦＲ４）が、相同ヒト重ＦＲ４配列の上に示される。ヒトＦＲ４配列は、ヒト化可変重鎖配列（ＶＨｈ）に、上記のステップ７で付加されたＣＤ３領域の末端の直後に付加される。
【０４７０】
［抗体およびそのフラグメントを製造する方法］
本発明はまた、抗体本明細書に記載される抗体またはそのフラグメントの製造に関する。本明細書に記載される抗体またはそのフラグメントに対応する組換えポリペプチドは、接合コンピテント酵母の倍数性、好ましくは、二倍体または四倍体株から分泌される。典型的な実施形態では、本発明は、倍数性酵母を含む培養を使用して、分泌型で長期間、すなわち、少なくとも数日から１週間、より好ましくは、少なくとも１ヶ月または数ヶ月、およびさらにより好ましくは、少なくとも６ヶ月から１年、またはそれ以上、これらの組換えポリペプチドを産生する方法に関する。これらの倍数性酵母培養物は、ポリペプチドの少なくとも１０〜２５ｍｇ／リットル、より好ましくは、少なくとも５０〜２５０ｍｇ／リットル、さらにより好ましくは、少なくとも５００〜１０００ｍｇ／リットル、および最も好ましくは、１リットル当たり１グラム、またはより多くの組換えポリペプチドを発現する。
【０４７１】
本発明の１つの実施形態では、遺伝的に特徴付けられる酵母半数体細胞の一対は、所望のヘテロ多量体タンパク質のサブユニットを含む発現ベクターで形質転換される。１つの半数体細胞は第１の発現ベクターを含み、第２の半数体細胞は第２の発現ベクターを含む。別の実施形態では、二倍体酵母細胞は、組換えポリペプチドのうちの１つ以上の発現および分泌を提供する、１つ以上の発現ベクターで形質転換される。さらに別の実施形態では、単一半数体細胞は、１つ以上のベクターで形質転換され得、融合または接合ストラテジーによって倍数性酵母を産生するために使用され得る。さらに別の実施形態では、二倍体酵母培養物は、所望のポリペプチドまたはポリペプチドの発現および分泌を提供する、１つ以上のベクターで形質転換され得る。これらのベクターは、例えば、相同組換えを介して、またはＣｒｅ／ＬｏｘまたはＦｌｐ／Ｆｒｔ等のリコンビナーゼを使用して、酵母細胞のゲノム内にランダムに組み込む線状プラスミドまたは他の線状ＤＮＡ生成物等のベクターを含み得る。任意で、付加的な発現ベクターが半数体または二倍体細胞に導入され得、または第１または第２の発現ベクターは、ヘテロ三量体、ヘテロ四量体等の合成のための付加的なコード配列を含み得る。同一でないポリペプチドの発現レベルは、個々に較正され、適切な選択、ベクターコピー番号、プロモーター強度、および／または誘発等を介して調整される。形質転換された半数体細胞は、遺伝的に交差される、または融合される。結果として生じる二倍体または四倍体株は、完全構築された生物学的に機能的なタンパク質、本明細書に記載されるヒト化抗体またはそのフラグメントを産生および分泌するために利用される。
【０４７２】
タンパク質産生のための二倍体または四倍体細胞の使用は、予想外の利益を提供する。細胞は、半数体細胞の増殖に有害である可能性があり、高細胞密度、最小培地における増殖、低温での増殖、選択圧の非存在下での安定増殖を含み得、時間とともに異種遺伝子配列完全性の維持および高レベル発現の維持を提供し得る条件下で、長時間、産生目的、すなわち、規模拡大のために培養されることができる。それによって束縛されることを望むことなく、本発明者は、これらの利益は、少なくとも一部分において、２つの別々の親半数体株からの二倍体株の作成から起こり得ると理論化する。このような半数体株は、多数の小さな独立栄養性変異を含むことができ、その変異は二倍体または四倍体で補完され、増殖を可能にし、高選択状態下で産生を増強する。
【０４７３】
形質転換接合コンピテント半数体酵母細胞は、所望のタンパク質のサブユニット対合を可能にする遺伝子法を提供する。半数体酵母菌株は、２つの各発現ベクターで形質転換され、第１のベクターは１つのポリペプチド鎖の合成に導き、第２のベクターは、第２の同一でないポリペプチド鎖の合成に導く。２つの半数体株は、最適化された標的タンパク質産生が得られる二倍体宿主を提供するために接合される。
【０４７４】
選択に応じて、付加的な同一でないコード配列が提供される。そのような配列は、付加的な発現ベクター上で、または第１もしくは第２の発現ベクター中で存在し得る。当技術分野で知られているように、多重コード配列は単一のプロモーターから独立して発現され得、またはシストロン（タンパク質コード領域）のＡＴＧ等の開始コドンに直接的内部リボソーム侵入を推進する要素である「内部リボソーム侵入部位」もしくは「ＩＲＥＳ」の封入を介して協調的に発現され得、その結果、遺伝子のキャップ非依存的翻訳に導く。酵母中で機能的なＩＲＥＳ要素は、Ｔｈｏｍｐｓｏｎら  （２００１）Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．９８：１２８６６−１２８６８によって説明される。
【０４７５】
本発明の１つの実施形態では、抗体配列は、ＩｇＡの増強された安定性を提供する分泌型Ｊ鎖との組み合わせで産生される（米国特許第５，９５９，１７７号および同第５，２０２，４２２号参照）。
【０４７６】
好ましい実施形態では、２つの半数体酵母菌株は、それぞれ栄養要求性であり、半数体細胞の増殖のために培地の補給を必要とする。栄養要求体の対は、二倍体生成物が半数体細胞に必要な補充なく培養するために、相補的である。多くのそのような遺伝子マーカーは、アミノ酸（例えば、ｍｅｔ、ｌｙｓ、ｈｉｓ、ａｒｇ等）、ヌクレオシド（例えば、ｕｒａ３、ａｄｅ１等）の要求等を含み、酵母では知られている。アミノ酸マーカーは、本発明の方法に好適であり得る。あるいは、所望のベクターを含有する二倍体細胞は、他の手段、例えば、緑色蛍光タンパク質、抗生物質抵抗遺伝子、種々の優性選択可能なマーカー等の他のマーカーの使用によって選択することができる。
【０４７７】
２つの形質転換半数体細胞は、遺伝的に交差され得、それらのハイブリッド栄養要求量および／または抗生物質耐性スペクトルによって選択されるこの接合イベントから起こる二倍体株であり得る。あるいは、２つの形質転換半数体株の集団は、スフェロプラストおよび融合され、二倍体子孫が再生成および選択される。いずれの方法によっても、二倍体株は、特定することができ、それらの親とは異なる培地で培養するそれらの能力に基づいて選択的に培養することができる。例えば、二倍体細胞は、抗生物質を含み得る最小培地中で培養され得る。二倍体合成戦略はいくつかの利点を有する。二倍体株は、組換えタンパク質の産生および／または分泌に影響し得る、基礎変異体に対するより広範な相補性を介して、異種タンパク質の増強されたレベルを産生する可能性を有する。さらに、いったん安定株が得られると、それらの株を選択するために使用される任意の抗生物質は、増殖培地で連続的に存在する必要は必ずしもない。
【０４７８】
上述のように、いくつかの実施形態では、半数体酵母は、該ベクターまたはベクターを含有する二倍体細胞を産生するために、単一または多重ベクターで形質転換され得、非形質転換細胞と接合または融合され得る。他の実施形態では、二倍体酵母細胞は、二倍体酵母細胞によって、所望の異種ポリペプチドの発現および分泌を提供する１つ以上のベクターで形質転換され得る。
【０４７９】
本発明の１つの実施形態では、２つの半数体株は、ポリペプチドのライブラリ、例えば、抗体重鎖または軽鎖のライブラリで形質転換される。ポリペプチドを合成する形質転換半数体細胞は、相補性半数体細胞と接合される。結果として生じる二倍体細胞は、機能的なタンパク質についてスクリーニングされる。二倍体細胞は、機能試験用のポリペプチドの多数の組合せを迅速に、簡便に、そして安価で集める手段を提供する。この技術は、ヘテロ二量体タンパク質生成物の産生に特に適用可能であり、そこでは最適化されたサブユニット合成レベルは、機能的タンパク質発現および分泌に重大な意味を持つ。
【０４８０】
本発明の別の実施形態では、２つのサブユニットの発現レベル比が、生成物産生を最大にするために制御される。ヘテロ二量体サブユニットタンパク質レベルが、最終の生成物産生に影響を及ぼすことが以前に示されている（Ｓｉｍｍｏｎｓ  ＬＣ，  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００２  Ｍａｙ  １；２６３（１−２）：１３３−４７）。調整は、発現ベクター上で示されるマーカーの選択によって、接合ステップの前に達成することができる。ベクターの複製数を安定して増加させることにより、発現レベルを増加させることができる。場合によっては、ポリペプチドのサブユニット間の平衡した比率に到達するように、一方の鎖のレベルを他方に対して増加させることが望ましい場合もある。例えば、Ｚｅｏｃｉｎ（商標）（フレオマイシン）耐性マーカー、Ｇ４１８耐性等の、抗生物質耐性マーカーはこの目的にとって有用であり、Ｚｅｏｃｉｎ（商標）（フレオマイシン）またはＧ４１８のより高いレベルに耐性を有する形質転換体のために選択することによって、株中に発現ベクターの多重組み込み配列を含有する株のための濃縮の手段を提供する。例えば、１：１、１：２等のサブユニット遺伝子の適切な比は、効率的なタンパク質産生に重要であり得る。同一のプロモーターが両方のサブユニットを転写するために使用される時でさえ、多くの他の要因は、発現されるタンパク質の最終レベルに寄与し、したがって、一方のコード遺伝子の複製数を他方に対して増加させることが有用であり得る。あるいは、単一複製ベクター株に対して、２ポリペプチドのより高いレベルを産生する二倍体株は、両者ともに発現ベクターの多重配列を有する２つの半数体株を接合することによって作成される。
【０４８１】
宿主細胞は、上述の発現ベクターで形質転換され、二倍体株を形成するために接合され、およびプロモーターを誘発し、形質転換体を選択し、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するのに適切なように変更された従来の栄養素培地中で培養される。酵母の増殖に適切な多くの最小培地が当技術分野で知られている。これらの培地のいずれもが、必要に応じて、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩等）、緩衝液（リン酸塩、ＨＥＰＥＳ等）、ヌクレオシド（アデノシンおよびチミジン等）、抗生物質、微量元素、およびブドウ糖、または同等のエネルギー供給源で補充され得る。任意の他の必要な補充はまた、当業者に知られているであろう適切な濃度で含まれ得る。温度、ｐＨ等の培養条件は、発現のために選択される宿主細胞とともに以前に使用されたものであり、当業者に明らかである。
【０４８２】
分泌タンパク質は、培養基から回収される。フェニルメチルスルホニルフッ化物（ＰＭＳＦ）等のプロテアーゼ阻害剤は、精製中、タンパク質分解を阻害するために有用であり得、抗生物質は、外来性汚染物質の増殖を防止するために含まれ得る。組成物は、当技術分野で知られている方法を使用して、濃縮され、濾過され、透析等され得る。
【０４８３】
本発明の二倍体細胞は、産生目的のために培養される。そのような産生目的は、望ましくは、培地、例えば、窒素供給源としてアンモニア、エネルギーおよび炭素供給源としてブドウ糖、リン酸塩、カルシウム等の供給源として塩を含む培地が事前形成されたアミノ酸および他の複合体生体分子を欠乏する最小培地中の増殖を含む。好ましくは、そのような産生培地は、抗生物質、アミノ酸、プリン、ピリミジン等の選択薬剤を欠く。二倍体細胞は、例えば、少なくとも約５０ｇ／Ｌ、より通常では少なくとも約１００ｇ／Ｌ、および少なくとも約３００、約４００、約５００ｇ／Ｌ、またはそれ以上であり得る高細胞密度に培養することができる。
【０４８４】
本発明の１つの実施形態では、産生目的のための本主題の細胞の増殖は低温で実施され、その温度は、対数期の間、静止期の間、またはその両方で低下させ得る。「低温」という用語は、少なくとも約１５℃，より通常では少なくとも約１７℃の温度を参照し、約２０℃であり得、および通常約２５℃以上ではなく、より通常では約２２℃以上ではない。本発明の別の実施形態では、低温は、通常約２８℃以上ではない。成長温度は、産生培養中の完全長の分泌タンパク質の産生に影響を及ぼし得、培養成長温度を減少させることは、無傷生成物産生を強く増強することができる。低下温度は、細胞プロテアーゼ分解の減少とともに、標的生成物を産生するために、宿主によって使用されるフォールディングおよび翻訳後過程経路を介する細胞内移動を補助するようである。
【０４８５】
本発明の方法は、分泌活性タンパク質、好ましくは哺乳類タンパク質の発現を提供する。１つの実施形態では、本明細書で使用される、分泌される「活性抗体」は、その同種抗原に正確に結合する、少なくとも２つの適切に対合した鎖の、正確に折り畳まれた多重体を指す。活性タンパク質の発現レベルは、通常は少なくとも約１０〜５０ｍｇ／リットル培養物、より通常は少なくとも約１００ｍｇ／リットル、好ましくは少なくとも約５００ｍｇ／リットルであり、１０００ｍｇ／リットルまたはそれ以上であり得る。
【０４８６】
本発明の方法は、産生中、宿主および異種コード配列の増加された安定性を提供することができる。安定性は、例えば、時間の発現の高レベルの維持によって証明され、発現の開始レベルは、約２０の倍増、５０の倍増、１００の倍増、またはそれ以上にわたって、２０％を超えて減少することはなく、通常１０％を超えることはなく、また約５％を超えて減少することがない可能性がある。
【０４８７】
株安定性はまた、異種遺伝子配列完全性の経時的な維持を提供し、活性コード配列の配列および必要な転写調節要素は、約２０回の倍増、５０回の倍増、１００回の倍増、またはそれ以上にわたって、二倍体細胞の少なくとも約９９％において、通常二倍体細胞の少なくとも約９９．９％において、および好ましくは、二倍体細胞の少なくとも約９９．９９％維持される。好ましくは、実質的に全ての二倍体細胞は、活性コード配列および必要な転写調節要素の配列を維持する。
【０４８８】
抗体を産生する他の方法が、当業者によく知られている。例えば、キメラ抗体を産生する方法が、現在当技術分野でよく知られている（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号のＣａｂｉｌｌｙら、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．ＵＳＡ，８１：８６５１−５５（１９８４）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｓ．ら，Ｎａｔｕｒｅ，３１４：２６８−２７０（１９８５）、Ｂｏｕｌｉａｎｎｅ，Ｇ．Ｌ．ら，Ｎａｔｕｒｅ，３１２：６４３−４６（１９８４）を参照されたく、それぞれの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４８９】
同様に、ヒト化抗体を産生する他の方法が、現在当技術分野でよく知られている（例えば、米国特許第５，５３０，１０１号、５，５８５，０８９号、５，６９３，７６２号、および６，１８０，３７０号のＱｕｅｅｎら、米国特許第５，２２５，５３９号および６，５４８，６４０号のＷｉｎｔｅｒ、米国特許第６，０５４，２９７号、６，４０７，２１３号、および６，６３９，０５５号のＣａｒｔｅｒら、米国特許第６，６３２，９２７号のＡｄａｉｒ；Ｊｏｎｅｓ，Ｐ．Ｔ．ら，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）、Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ，Ｌ．，ら，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，Ｍ，ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−３６（１９８８）を参照されたく、それぞれの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４９０】
ＩＬ−６結合特異性を有する本発明の抗体ポリペプチドはまた、当業者によく知られている従来の技術を作成し、使用することによって産生され得、発現ベクターは、オペロンおよび抗体重鎖をコードするＤＮＡ配列を含有し、ここで抗体特異性に必要とされるＣＤＲをコードするＤＮＡ配列は、非ヒト細胞源、好ましくはウサギＢ細胞源に由来し、一方、抗体鎖の残る部分をコードするＤＮＡ配列は、ヒト細胞源に由来する。
【０４９１】
第２の発現ベクターは、当業者によく知られている同一の従来の手段を使用して産生され、該発現ベクターは、オペロンおよび抗体軽鎖をコードするＤＮＡ配列コードを含有し、ここで抗体特異性に必要とされるＣＤＲをコードするＤＮＡ配列は、非ヒト細胞源、好ましくはウサギＢ細胞源に由来し、一方、抗体鎖の残る部分をコードするＤＮＡ配列は、ヒト細胞源に由来する。
【０４９２】
発現ベクターは、形質移入された宿主細胞を産生するために、当業者によく知られている従来の技術によって宿主細胞内に形質移入され、該形質移入された宿主細胞は、該抗体ポリペプチドを産生するために、当業者によく知られている従来の技術によって培養される。
【０４９３】
宿主細胞は、上述の２つの発現ベクターで共形質移入し得、第１の発現ベクターは、オペロンおよび軽鎖由来ポリペプチドをコードするＤＮＡを含有し、および第２のベクターは、オペロンおよび重鎖由来ポリペプチドをコードするＤＮＡを含有する。２つのベクターは、異なる選択可能なマーカーを含有するが、好ましくは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの同等の発現を実質的に達成する。あるいは、単一ベクターを使用することができ、そのベクターは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方をコードするＤＮＡを含む。重鎖および軽鎖のためのコード配列は、ｃＤＮＡを含み得る。
【０４９４】
抗体ポリペプチドを発現するために使用される宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉ等の細菌細胞または真核細胞のいずれかであり得る。本発明の特に好ましい実施形態では、形質細胞腫細胞またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株等の、この目的のために正しく定義された種類の哺乳類細胞が使用され得る。
【０４９５】
ベクターが作成され得る一般的な方法は、宿主細胞を産生するために必要とされる形質移入方法、および該宿主細胞から抗体ポリペプチドを産生するのに必要とされる培養方法は、全て従来の技術を含む。好ましくは、抗体を産生するために使用される細胞株は哺乳類細胞株であるが、Ｅ．ｃｏｌｉ由来の細菌株当為の細菌細胞株または酵母細胞株等の任意の他の適切な細胞株を、代わりに使用することができる。
【０４９６】
同様に、いったん産生されると、抗体ポリペプチドは、例えば、クロスフロー濾過、硫酸アンモニウム沈殿、親和性カラムクロマトグラフィー等の当技術分野の標準手順に従って精製することができる。
【０４９７】
［重鎖および軽鎖ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの典型的な態様］
この項では、重鎖および軽鎖ポリペプチド、およびそのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの典型的な態様について記載する。これらの典型的なポリヌクレオチドは、本明細書に開示するピチア属発現系における発現に適している。
【０４９８】
特定の実施形態では、本発明は、本明細書に記載するポリヌクレオチド、若しくは本明細書に記載するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、または前記ポリヌクレオチドと低いストリンジェンシーの条件、中等度のストリンジェンシーの条件、または高いストリンジェンシーの条件の下でハイブリダイズするポリヌクレオチド、好ましくは本明細書に記載する生物学的活性（限定しないが、例えばＩＬ−６ポリペプチドへの特異的結合など）の少なくとも１種類を有するポリペプチド（例えば免疫グロブリン重鎖および軽鎖、一本鎖抗体、抗体フラグメントなど）をコードするポリヌクレオチドと、少なくとも７０％の同一性（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性）を有するポリヌクレオチドを包含する。別の態様では、本発明は、このようなポリヌクレオチドおよび／またはそのようなポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを含む組成物を包含する。さらに別の態様では、本発明は、ＩＬ−６に関連した疾病または状態あるいはＡｂ１のようなＩＬ−６アンタゴニストで予防、治療、または改善し得る疾病または状態（悪液質、癌、疲労、関節炎など）の治療方法であって、そのようなポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドを投与するステップを含む、該方法を包含する。
【０４９９】
特定の実施形態では、重鎖ポリペプチドを、本明細書に記載するポリペプチド（本明細書に記載する重鎖および軽鎖ポリペプチドに含まれるものを含む）における重鎖および／または軽鎖のＣＤＲ配列の１以上と、図２および図３４乃至図３７または表１に示されたものを含み、本明細書に記載する重鎖および軽鎖ポリペプチドに含められた、本明細書に記載するフレームワーク領域ポリペプチドの１以上とを含むものとする。特定の好ましい実施形態では、重鎖ポリペプチドを、図２および図３４乃至図３７または表１に示された、または本明細書に記載する重鎖または軽鎖ポリペプチドに含められた、フレームワーク４領域の配列の１以上を含むものとする。
【０５００】
特定の実施形態では、軽鎖ポリペプチドを、本明細書に記載するポリペプチド（本明細書に記載する重鎖および軽鎖ポリペプチドに含まれるものを含む）における重鎖および／または軽鎖のＣＤＲ配列の１以上と、図２および図３４乃至図３７または表１に示されたものを含み、本明細書に記載する重鎖および軽鎖ポリペプチドに含められた、本明細書に記載するフレームワーク領域ポリペプチドの１以上とを含むものとする。特定の好ましい実施形態では、軽鎖ポリペプチドを、図２および図３４乃至図３７または表１に示された、または本明細書に記載する重鎖または軽鎖ポリペプチドに含められた、フレームワーク４領域の配列の１以上を含むものとする。
【０５０１】
本明細書に記載するいずれの実施形態においても、記載された特定の配列は、文脈上別の指定がない限り、相互に置換することができる。特定の配列どうしが互いに置換し得るという記載は、そのような置換がされた場合、限定ではなく例示として理解されるべきものであり、置換の例示に関する記載がないような置換であっても本発明の範囲に包含されるものと理解されるべきものである。例えば、１種以上のＡｂ１軽鎖ポリペプチド、例えば配列番号２、配列番号２０、配列番号６４７、配列番号６５１、配列番号６６０、配列番号６６６、配列番号６９９、配列番号７０２、配列番号７０６、または配列番号７０９が記載されている場合は常に、文脈上別の指定がない限り、他のＡｂ１軽鎖ポリペプチドが置換され得る。同様に、１種以上のＡｂ１重鎖ポリペプチド、例えば配列番号３、配列番号１８、配列番号１９、配列番号６５２、配列番号６５６、配列番号６５７、配列番号６５８、配列番号６６１、配列番号６６４、配列番号６６５、配列番号７０４、または配列番号７０８が記載されている場合は常に、文脈上別の指定がない限り、他のＡｂ１重鎖ポリペプチドが置換され得る。同様に、Ａｂ１軽鎖ポリヌクレオチドの１つ、例えば配列番号１０、配列番号６６２、配列番号６９８、配列番号７０１、または配列番号７０５が記載されている場合は常に、文脈上別の指定がない限り、他のＡｂ１軽鎖ポリヌクレオチドが置換され得る。同様に、Ａｂ１重鎖ポリヌクレオチドの１つ、例えば配列番号１１、配列番号６６３、配列番号７００、配列番号７０３、または配列番号７０７が記載されている場合は常に、文脈上別の指定がない限り、他のＡｂ１軽鎖ポリヌクレオチドが置換され得る。さらに、次に挙げる群のいずれかの記載は、その群の他のものによる置換も包含しているものと理解されたい：Ａｂ２軽鎖ポリヌクレオチド（配列番号２１および６６７）；Ａｂ２軽鎖ポリヌクレオチド（配列番号２９および配列番号６６９）；Ａｂ２重鎖ポリペプチド（配列番号２２および配列番号６６８）；Ａｂ２重鎖ポリヌクレオチド（配列番号３０および配列番号６７０）；Ａｂ３軽鎖ポリペプチド（配列番号３７および配列番号６７１）；Ａｂ３軽鎖ポリヌクレオチド（配列番号４５および配列番号６７３）；Ａｂ３重鎖ポリペプチド（配列番号３８および配列番号６７２）；Ａｂ３重鎖ポリヌクレオチド（配列番号４６および配列番号６７４）；Ａｂ４軽鎖ポリペプチド（配列番号５３および配列番号６７５）；Ａｂ４軽鎖ポリヌクレオチド（配列番号６１および配列番号６７７）；Ａｂ４重鎖ポリペプチド（配列番号５４および配列番号６７６）；Ａｂ４重鎖ポリヌクレオチド（配列番号６２および配列番号６７８）；Ａｂ５軽鎖ポリペプチド（配列番号６９および配列番号６７９）；Ａｂ５軽鎖ポリヌクレオチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ７７および配列番号６８１）；Ａｂ５重鎖ポリペプチド（配列番号７０および配列番号６８０）；Ａｂ５重鎖ポリヌクレオチド（配列番号７８および配列番号６８２）；Ａｂ６軽鎖ポリペプチド（配列番号８５および配列番号６８３）；Ａｂ６軽鎖ポリヌクレオチド（配列番号９３および配列番号６８５）；Ａｂ６重鎖ポリペプチド（配列番号８６および配列番号６８４）；Ａ��６重鎖ポリヌクレオチド（配列番号９４および配列番号６８６）；Ａｂ７軽鎖ポリペプチド（配列番号１０１、配列番号１１９、配列番号６８７、配列番号６９３）；Ａｂ７軽鎖ポリヌクレオチド（配列番号１０９、６８９）；Ａｂ７重鎖ポリペプチド（配列番号１０２、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号６８８、配列番号６９１、および配列番号６９２）；Ａｂ７重鎖ポリヌクレオチド（配列番号１１０、配列番号６９０）；Ａｂ１軽鎖ＣＤＲ１ポリヌクレオチド（配列番号１２および配列番号６９４）；Ａｂ１軽鎖ＣＤＲ３ポリヌクレオチド（配列番号１４および配列番号６９５）；Ａｂ１重鎖ＣＤＲ２ポリヌクレオチド（配列番号１６および配列番号６９６）；およびＡｂ１重鎖ＣＤＲ３ポリヌクレオチド（配列番号１７および配列番号６９７）。
【０５０２】
典型的なＡｂ１コードポリヌクレオチド配列は、以下に記載するものである。
【０５０３】
配列番号６６２：
ＡＴＧＧＡＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＣＣＣＡＣＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧＧＧＧＣＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＴＧＣＣＡＧＡＴＧＴＧＣＣＴＡＴＧＡＴＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＡＣＡＡＴＧＡＡＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＴＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＧＣＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＧＴＣＴＧＡＧＧＡＡＴＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴ
【０５０４】
配列番号６６３：
ＡＴＧＧＡＧＡＣＴＧＧＧＣＴＧＣＧＣＴＧＧＣＴＴＣＴＣＣＴＧＧＴＣＧＣＴＧＴＧＣＴＣＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＴＣＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＡＴＣＡＴＴＴＡＴＧＧＴＡＧＴＧＡＴＧＡＡＡＣＧＧＣＣＴＡＣＧＣＧＡＣＣＴＧＧＧＣＧＡＴＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＧＡＣＣＡＧＴＣＴＧＡＣＡＧＣＣＧＣＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＴＡＧＴＧＡＣＴＧＧＧＡＴＧＣＡＡＡＡＴＴＴＡＡＣＴＴＧ
【０５０５】
配列番号６９８：
ＧＣＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＡＣＡＡＴＧＡＧＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＧＴＣＴＧＡＧＧＡＡＣＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧ
【０５０６】
配列番号７００：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＣＡＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＡＧＴＧＡＴＧＡＡＡＣＣＧＣＣＴＡＣＧＣＴＡＣＣＴＣＣＧＣＴＡＴＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＴＡＧＴＧＡＣＴＧＧＧＡＴＧＣＡＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ
【０５０７】
配列番号７０１：
ＧＣＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＡＣＡＡＴＧＡＧＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＧＴＣＴＧＡＧＧＡＡＣＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
【０５０８】
配列番号７０３：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＣＡＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＡＧＴＧＡＴＧＡＡＡＣＣＧＣＣＴＡＣＧＣＴＡＣＣＴＣＣＧＣＴＡＴＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＴＡＧＴＧＡＣＴＧＧＧＡＴＧＣＡＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡ
【０５０９】
配列番号７０５：
ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＡＡＣＣＴＴＴＡＴＴＴＣＣＣＴＴＣＴＧＴＴＴＣＴＣＴＴＴＡＧＣＡＧＣＧＣＴＴＡＴＴＣＣＧＣＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＡＣＡＡＴＧＡＧＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＧＴＣＴＧＡＧＧＡＡＣＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
【０５１０】
配列番号７０７：
ＡＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＡＡＣＣＴＴＴＡＴＴＴＣＣＣＴＴＣＴＧＴＴＴＣＴＣＴＴＴＡＧＣＡＧＣＧＣＴＴＡＴＴＣＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＣＡＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＡＧＴＧＡＴＧＡＡＡＣＣＧＣＣＴＡＣＧＣＴＡＣＣＴＣＣＧＣＴＡＴＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＴＡＧＴＧＡＣＴＧＧＧＡＴＧＣＡＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＧＣＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡ
【０５１１】
配列番号７２０：
ＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＡＣＡＡＴＧＡＧＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＧＴＣＴＧＡＧＧＡＡＣＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴ
【０５１２】
配列番号７２１：
ＧＣＣＴＡＴＧＡＴＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＡＣＡＡＴＧＡＡＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＴＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＧＣＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＧＴＣＴＧＡＧＧＡＡＴＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴ
【０５１３】
配列番号７２２：
ＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＡＣＡＡＴＧＡＧＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＧＴＣＴＧＡＧＧＡＡＣＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
【０５１４】
配列番号７２３：
ＧＣＴＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＡＣＡＡＴＧＡＧＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＧＴＣＴＧＡＧＧＡＡＣＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴ
【０５１５】
配列番号７２４：
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＧＴＣＣＧＴＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＧＧＣＡＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＴＡＧＴＧＡＴＧＡＡＡＣＣＧＣＣＴＡＣＧＣＴＡＣＣＴＣＣＧＣＴＡＴＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＡＡＣＡＣＣＣＴＧＴＡＴＣＴＴＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＡＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＴＡＧＴＧＡＣＴＧＧＧＡＴＧＣＡＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＴＧ
【０５１６】
配列番号７２５：
ＣＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＡＴＣＡＴＴＴＡＴＧＧＴＡＧＴＧＡＴＧＡＡＡＣＧＧＣＣＴＡＣＧＣＧＡＣＣＴＧＧＧＣＧＡＴＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＧＡＣＣＡＧＴＣＴＧＡＣＡＧＣＣＧＣＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＴＡＧＴＧＡＣＴＧＧＧＡＴＧＣＡＡＡＡＴＴＴＡＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣ
【０５１７】
［スクリーニングアッセイ］
本発明はまた、疾病または疾患に関連するＩＬ−６の症状を示す患者において、ＩＬ−６に関連する疾病および疾患の特定を補助するために設計されるスクリーニングアッセイを含む。
【０５１８】
本発明の１つの実施形態では、本発明の抗ＩＬ−６抗体、またはそのＩＬ−６結合フラグメントまたは変異体は、ＩＬ−６に関連する疾病または疾患の症状を示す患者から得られる生体サンプル中で、ＩＬ−６の存在を検出するために使用される。ＩＬ−６の存在、または同等な生体サンプル中のＩＬ−６の疾病前の値と比較する時のその上昇値は、ＩＬ−６に関連する疾病または疾患を診断するのに有益であり得る。
【０５１９】
本発明の別の実施形態は、本明細書で特定されている疾病または疾患に関連するＩＬ−６の症状を示す患者において、ＩＬ−６に関連する疾病または疾患の診断を補助するための診断またはスクリーニングアッセイを提供し、翻訳後に修飾される抗ＩＬ−６抗体またはその結合フラグメントまたは変異体を使用して、患者からの生体サンプル中でＩＬ−６発現のレベルをアッセイすることを含む。抗ＩＬ−６抗体またはその結合フラグメントまたは変異体は、以前に開示で示すもの等の検出可能な部分を含むように、翻訳後に修飾され得る。
【０５２０】
生体サンプルのＩＬ−６レベルは、本明細書で示すように、修飾された抗ＩＬ−６抗体またはその結合フラグメントまたは変異体を使用して決定され、生体サンプル中のＩＬ−６のレベルをＩＬ−６の標準レベル、例えば、正常な生体サンプル中のレベル）に対して比較する。熟練した臨床医は、いくらかのばらつきが正常な生体サンプルの間で存在し得ることを理解し、結果を評価する時にそれを考慮に入れる。
【０５２１】
上記に列挙されるアッセイは、疾病または疾患をモニタリングするのに有用であり得、疾病または疾患に関連するＩＬ−６を有すると考えられる患者からの生体サンプル中で得られたＩＬ−６のレベルが、該患者のＩＬ−６レベルが、例えば、治療計画とともに患者が変化しているかを確認するために、同一患者からの以前の生体サンプル中のＩＬ−６のレベルと比較される。
【０５２２】
本発明はまた、診断組成物の診断上有効な量を投与することを含む、ＩＬ−６を発現する細胞の存在を検出する、生体内造影の方法に関する。該生体内造影は、例えば、ＩＬ−６を発現する腫瘍または転移、およびＩＬ−６を発現する炎症部位の検出および造影に有用であり、有効な癌または関節炎治療プロトコルの設計のための計画投与の一部として使用することができる。治療プロトコルは、例えば、放射線、化学療法、サイトカイン治療、遺伝子治療、および抗体治療のうちの１つ以上、ならびに抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体を含み得る。
【０５２３】
熟練した臨床医は、生体サンプルは、血清、プラズマ、尿、唾液、粘膜、胸水、滑液および髄液を含むが、それらに限定されないことを理解するであろう。
【０５２４】
［ＩＬ−６に関連する疾病および疾患の症状を改善もしくは軽減し、またはその疾病および疾患の症状を治療もしくは防止する方法］
本発明の実施形態では、本明細書に記載されるＡｂ１などのＩＬ−６アンタゴニストは、ＩＬ−６に関連する疾病および疾患の症状を改善もしくは軽減し、またはその疾病および疾患を治療もしくは防止するのに有用である。本明細書に記載されるＩＬ−６アンタゴニスト（Ａｂ１など）はまた、以下により詳しく説明される医薬組成物の形で、ＩＬ−６に関連する疾病および疾患の治療を必要とする患者に、治療上有効な量で投与することができる。
【０５２５】
本発明の１つの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−６アンタゴニスト（Ａｂ１など）は、高Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）に関連する疾病および疾患の症状を改善もしくは軽減し、またはその疾病および疾患を治療もしくは防止するのに有用である。このような疾病は、例えば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節症、強直性脊椎炎、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、天疱瘡、皮膚筋炎、多発性筋炎、リウマチ性多発性筋痛、巨細胞性動脈炎、血管炎、結節性多発性動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、川崎病、単離したＣＮＳ血管炎、チャーグ−ストラウス動脈炎、顕微鏡的多発性動脈炎、顕微鏡的多発性血管炎、ヘノッホ−シェーンライン紫斑病、本態性クリオグロブリン血症性血管炎、リウマチ性血管炎、クリオグロブリン血症、再発性多発性軟骨炎、ベーチェット病、高安動脈炎、虚血性心疾患、脳梗塞、多発性硬化症、敗血症、ウイルス感染に続発する血管炎（例えば、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ、サイトメガロウイルス、エプスタインバーウイルス、パルボＢ１９ウイルス等）、バージャー病、癌、進行癌、変形性関節症、全身性硬化症、クレスト症候群、ライター病、骨パジェット病、シェーグレン症候群、糖尿病タイプ１、糖尿病タイプ２、家族性地中海熱、自己免疫性血小板減少症、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性甲状腺疾患、悪性貧血、白斑、円形脱毛症、原発性胆汁性肝硬変症、自己免疫性慢性活動性肝炎、アルコール性肝硬変、ＢおよびＣ型肝炎を含むウイルス性肝炎、他の器官特異の自己免疫疾患、熱傷、特発性肺線維症、慢性閉塞性肺疾患、アレルギー喘息、他のアレルギー状態、またはそれらの任意の組み合わせの、慢性炎症を示す任意の疾病を含む。
【０５２６】
本発明の１つの実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−６アンタゴニスト、例えば抗ＩＬ−６抗体（例えばＡｂ１）、その変異体またはフラグメントなどは、例えば、関節リウマチ、癌、進行癌、肝疾患、腎疾患、炎症性腸疾患、セリアック病、外傷、熱傷、他の疾病に関連する低血清中アルブミン、またはそれらの任意の組み合わせの、低血清中アルブミンに関連する疾病および疾患の症状を改善もしくは軽減し、またはその疾病および疾患を治療もしくは防止するのに有用である。
【０５２７】
本発明の別の実施形態では、本明細書に記載されるＩＬ−６アンタゴニストは、別の活性薬剤との組み合わせで、患者に投与される。例えば、あるＩＬ−６アンタゴニスト（Ａｂ１など）は、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、白金、タキソール、イリノテカン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、ロイコボリン、ステロイド、シクロホスファミド、メルファラン、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシンおよび酒石酸ビノレルビン）、マスチン、チロシンキナーゼ阻害剤、放射線治療、性ホルモンアンタゴニスト、選択的アンドロゲン受容体モジュレーター、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、ＰＤＧＦアンタゴニスト、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１アンタゴニスト、インターロイキン（例えばＩＬ−１２またはＩＬ−２）、ＩＬ−１２Ｒアンタゴニスト、毒素結合モノクローナル抗体、腫瘍抗原特異的モノクローナル抗体、Ｅｒｂｉｔｕｘ（商標）、Ａｖａｓｔｉｎ（商標）、ペルツズマブ抗ＣＤ２０抗体、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、オクレリズマブ、オファツムマブ、ＤＸＬ６２５、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、またはそれらの任意の組み合わせ等の、１つ以上の化学療法薬剤とともに同時投与され得る。
【０５２８】
本発明の１つの実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体は、疲労に関連する疾病および疾患の症状を改善もしくは軽減し、またはその疾病および疾患を治療もしくは防止するのに有用である。疲労に関連する疾病および疾患は、全身疲労、運動誘発性疲労、癌に関連した疲労、線維筋痛、炎症性疾患に関連した疲労、および慢性疲労症候群を含むが、それらに限定されない。例えば、Ｅｓｐｅｒ  ＤＨ，ら，Ｔｈｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｃａｃｈｅｘｉａ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ，Ｎｕｔｒ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ．，２００５  Ａｕｇ；２０（４）：３６９−７６、Ｖｇｏｎｔｚａｓ  ＡＮ，ら，ＩＬ−６  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｃｉｒｃａｄｉａｎ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ，Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ，２００５；１２（３）：１３１−４０、Ｒｏｂｓｏｎ−Ａｎｓｌｅｙ，ＰＪ，ら，Ａｃｕｔｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｉｍｐａｉｒｓ  ａｔｈｌｅｔｉｃ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ，ｔｒａｉｎｅｄ  ｍａｌｅ  ｒｕｎｎｅｒｓ，Ｃａｎ  Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２００４  Ａｕｇ；２９（４）：４１１−８、Ｓｈｅｐｈａｒｄ  ＲＪ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｐｈｙｓｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ，ｗｉｔｈ  ｐａｒｔｉｃｕｌａｒ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｔｏ  ＩＬ−６：ｓｏｕｒｃｅｓ，ａｃｔｉｏｎｓ，ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００２；２２（３）：１６５−８２、Ａｒｎｏｌｄ，ＭＣ，ら，Ｕｓｉｎｇ  ａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｃｈａｌｌｅｎｇｅ  ｔｏ  ｅｖａｌｕａｔｅ  ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｆａｔｉｇｕｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｐｓｙｃｈｏｌ  Ｍｅｄ．，２００２  Ａｕｇ；３２（６）：１０７５−８９、Ｋｕｒｚｒｏｃｋ  Ｒ．，Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｆａｔｉｇｕｅ，Ｃａｎｃｅｒ，２００１  Ｓｅｐ  １５；９２（６  Ｓｕｐｐｌ）：１６８４−８、Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏ  Ｎ，ら，Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｃａｓｔｌｅｍａｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｌｏｏｄ，２０００  Ｊａｎ  １；９５（１）：５６−６１、Ｖｇｏｎｔｚａｓ  ＡＮ，ら，Ｃｉｒｃａｄｉａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｑｕａｎｔｉｔｙ  ａｎｄ  ｄｅｐｔｈ  ｏｆ  ｓｌｅｅｐ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．，１９９９  Ａｕｇ；８４（８）：２６０３−７、およびＳｐａｔｈ−Ｓｃｈｗａｌｂｅ  Ｅ，ら，Ａｃｕｔｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｏｎ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ａｎｄ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｌｅｅｐ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｍｅｎ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃ��ｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．，１９９８  Ｍａｙ；８３（５）：１５７３−９を参照されたく、それぞれの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０５２９】
本発明の好ましい実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体は、悪液質の症状を改善もしくは軽減し、または悪液質を治療もしくは防止するのに有用である。悪液質に関連する疾病および疾患は、癌に関連した悪液質、心臓に関連した悪液質、呼吸に関連した悪液質、腎臓に関連した悪液質、および加齢に関連した悪液質を含むが、それらに限定されない。例えば、Ｂａｒｔｏｎ，ＢＥ．，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｎｄ  ｎｅｗ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ，ｈｙｐｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ａｎｄ  ｐａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ，２００５  Ａｕｇ；９（４）：７３７−５２、Ｚａｋｉ  ＭＨ，ら，ＣＮＴＯ  ３２８，ａ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ＩＬ−６，ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃａｃｈｅｘｉａ  ｉｎ  ｎｕｄｅ  ｍｉｃｅ，  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，２００４  Ｓｅｐ  １０；１１１（４）：５９２−５、Ｔｒｉｋｈａ  Ｍ，ら，Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ：ａ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒａｔｉｏｎａｌｅ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，２００３  Ｏｃｔ  １５；９（１３）：４６５３−６５、Ｌｅｌｌｉ  Ｇ，ら，Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｏｒｅｘｉａ−ｃａｃｈｅｘｉａ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ａ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｒｅａｐｐｒａｉｓａｌ，Ｊ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，２００３  Ｊｕｎ；１５（３）：２２０−５；Ａｒｇｉｌｅｓ  ＪＭ，ら，  Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｃａｃｈｅｘｉａ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ  Ｍｅｔａｂ  Ｃａｒｅ，２００３  Ｊｕｌ；６（４）：４０１−６、Ｂａｒｔｏｎ  ＢＥ．，ＩＬ−６−ｌｉｋｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｃａｃｈｅｘｉａ：ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．，２００１；２３（１）：４１−５８、Ｙａｍａｓｈｉｔａ  ＪＩ，ら，Ｍｅｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ  ａｃｅｔａｔｅ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｃａｃｈｅｘｉａ：ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ，Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ，２０００；７（２）：１３０−５、Ｙｅｈ  ＳＳ，ら，Ｇｅｒｉａｔｒｉｃ  ｃａｃｈｅｘｉａ：ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｕｔｒ．，１９９９  Ａｕｇ；７０（２）：１８３−９７、Ｓｔｒａｓｓｍａｎｎ  Ｇ，ら，Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｃａｃｈｅｘｉａ  ｂｙ  ａｎｔｉ−ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｈｅｒａｐｙ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．，１９９５  Ｊｕｎ；１（２）：１０７−１３、Ｆｕｊｉｔａ  Ｊ，ら，Ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｍｕｓｃｌｅ  ａｔｒｏｐｈｙ  ｉｎ  ｃｏｌｏｎ−２６  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ−ｂｅａｒｉｎｇ  ｍｉｃｅ  ｗｉｔｈ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｙｓｏｓｏｍａｌ  ａｎｄ  ＡＴＰ−ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ  ｐａｔｈｗａｙｓ，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，１９９６  Ｎｏｖ  ２７；６８（５）：６３７−４３、Ｔｓｕｊｉｎａｋａ  Ｔ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｍｕｓｃｌｅ  ａｔｒｏｐｈｙ  ａｎｄ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．，１９９６  Ｊａｎ  ｌ；９７（ｌ）：２４４−９；Ｅｍｉｌｉｅ  Ｄ，ら，Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ａｎｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａ：ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｏｎ  Ｂ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｙｍｐｔｏｍｓ，Ｂｌｏｏｄ，１９９４  Ｏｃｔ  １５；８４（８）：２４７２−９、およびＳｔｒａｓｓｍａｎｎ  Ｇ，ら，Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｃａｃｈｅｘｉａ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．，１９９２  Ｍａｙ；８９（５）：１６８１−４を参照されたく、それぞれの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０５３０】
本発明の別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体は、自己免疫性疾病および疾患の症状を改善もしくは軽減し、または自己免疫性疾病および疾患を治療もしくは防止するのに有用である。自己免疫に関連する疾病および疾患は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、全身型若年性特発性関節炎、乾癬、乾癬性関節症、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、リウマチ性多発性筋痛、巨細胞性動脈炎、自己免疫性血管炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、シェーグレン症候群、成人発症スティル病を含むが、それらに限定されない。本発明の好ましい実施形態では、本明細書に記載されるヒト化抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体は、関節リウマチおよび全身型若年性特発性関節炎の症状を改善もしくは軽減し、または関節リウマチおよび全身型若年性特発性関節炎を治療もしくは防止するのに有用である。例えば、Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏ  Ｎ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｃａｓｔｌｅｍａｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，ａｎｄ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｉｎ  Ｊａｐａｎ，Ｃｌｉｎ  Ｒｅｖ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００５  Ｊｕｎ；２８（３）：２２１−３０、Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏ  Ｎ，ら，Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｗｉｔｈ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ：ａ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ，ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ，  ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌ，  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，  ２００４  Ｊｕｎ；５０（６）：１７６１−９、Ｃｈｏｙ  Ｅ．，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｓ  ａ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ．，２００３  Ｎｏｖ；６２  Ｓｕｐｐｌ  ２：ｉｉ６８−９、Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏ  Ｎ，ら，Ｔｏｘｉｃｉｔｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ  ｄｏｓｅ−ｆｉｎｄｉｎｇ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ＭＲＡ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｐｈａｓｅ  Ｉ／ＩＩ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ，Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，２００３  Ｊｕｌ；３０（７）：１４２６−３５、Ｍｉｈａｒａ  Ｍ，ら，Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｏｌｌａｇｅｎ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ｉｎ  ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍｏｎｋｅｙｓ，Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００１  Ｍａｒ；９８（３）：３１９−２６、Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏ  Ｎ，ら，Ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ａｎｎ  Ｒｈｅｕｍ  Ｄｉｓ．，２０００  Ｎｏｖ；５９  Ｓｕｐｐｌ  １：ｉ２１−７、Ｔａｃｋｅｙ  Ｅ，ら，Ｒａｔｉｏｎａｌｅ  ｆｏｒ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ，Ｌｕｐｕｓ，２００４；１３（５）：３３９−４３、Ｆｉｎｃｋ  ＢＫ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｕｐｕｓ  ｉｎ  ＮＺＢ／ＮＺＷ  Ｆｌ  ｍｉｃｅ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．，１９９４  Ａｕｇ；９４（２）：５８５−９１、Ｋｉｔａｎｉ  Ａ，ら，Ａｕｔｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＩＬ−６  ｏｎ  ｅｘｃｅｓｓｉｖｅ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ：ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＩＬ−６  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ＩＬ−６Ｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９２  Ａｐｒ；８８（１）：７５−８３、Ｓｔｕａｒｔ  ＲＡ，ら，Ｅｌｅｖａｔｅｄ  ｓｅｒｕｍ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｌｅｖｅｌｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｃｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  ｔｉｓｓｕｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，１９９５  Ｊａｎ−Ｆｅｂ；ｌ３（１）：１７−２２、Ｍｉｈａｒａ  Ｍ，ら，ＩＬ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｌｏｃｋａｇｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｈｅ  ｏｎｓｅｔ  ｏｆ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｋｉｄｎｅｙ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  ＮＺＢ／Ｗ  Ｆｌ  ｍｉｃｅ，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９８  Ｊｕｎ；１２（３）：３９７−４０２、Ｗｏｏ  Ｐ，ら，Ｏｐｅｎ  ｌａｂｅｌ  ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｓｉｎｇｌｅ，ａｓｃｅｎｄｉｎｇ  ｄｏｓｅｓ  ｏｆ  ＭＲＡ  ｉｎ  Ｃａｕｃａｓｉａｎ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ｗｉｔｈ  ｓｅｖｅｒｅ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｊｕｖｅｎｉｌｅ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ｐｒｏｏｆ  ｏｆ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ＩＬ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｉｎ  ｔｈｉｓ  ｔｙｐｅ  ｏｆ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  Ｔｈｅｒ．，２００５；７（６）：ＲＩ２８１−８．Ｅｐｕｂ  ２００５  Ｓｅｐ  １５、Ｙｏｋｏｔａ  Ｓ，ら，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｏｃｉｌｉｚｕｍａｂ  ｉｎ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ｗｉｔｈ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ−ｏｎｓｅｔ  ｊｕｖｅｎｉｌｅ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｃｌｉｎ  Ｒｅｖ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００５  Ｊｕｎ；２８（３）：２３１−８、Ｙｏｋｏｔａ  Ｓ，ら，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ｗｉｔｈ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ−ｏｎｓｅｔ  ｊｕｖｅｎｉｌｅ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，２００５  Ｍａｒ；５２（３）：８１８−２５、ｄｅ  Ｂｅｎｅｄｅｔｔｉ  Ｆ，ら，Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ａ  ｎｅｗ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｊｕｖｅｎｉｌｅ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ？，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，２００５  Ｍａｒ；５２（３）：６８７−９３、Ｄｅ  Ｂｅｎｅｄｅｔｔｉ  Ｆ，ら，Ｉｓ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｊｕｖｅｎｉｌｅ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｄｉｓｅａｓｅ？，Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，１９９８  Ｆｅｂ；２５（２）：２０３−７、Ｉｓｈｉｈａｒａ  Ｋ，ら，ＩＬ−６  ｉｎ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ．，２００２  Ａｕｇ−Ｏｃｔ；１３（４−５）：３５７−６８、Ｇｉｌｈａｒ  Ａ，ら，Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｏｎ  ｐｓｏｒｉａｔｉｃ  ｓｋｉｎ  ｇｒａｆｔｅｄ  ｏｎ  ｎｕｄｅ  ｍｉｃｅ：ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  （ＴＮＦ）  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６  Ｏｃｔ；１０６（１）：１３４−４２、Ｓｐａｄａｒｏ  Ａ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｎｄ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎ  ｐｓｏｒｉａｔｉｃ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，１９９６  Ｊｕｌ−Ａｕｇ；１４（４）：４１３−６、Ａｍｅｇｌｉｏ  Ｆ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｌｅｖｅｌｓ  ｄｅｃｒｅａｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｕｃｔｉｏｎ  ｂｌｉｓｔｅｒ  ｆｌｕｉｄｓ  ｏｆ  ｐｓｏｒｉａｔｉｃ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，１９９４；１８９（４）：３５９−６３、Ｗｅｎｄｌｉｎｇ  Ｄ，ら，Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＣＤ４  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ＩＬ−６  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  ａ  ｃａｓｅ  ｏｆ  ｓｅｖｅｒｅ  ｓｐｏｎｄｙｌａｒｔｈｒｏｐａｔｈｙ，Ｂｒ  Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，１９９６  Ｄｅｃ；３５（１２）：１３３０、Ｇｒａｔａｃｏｓ  Ｊ，ら，Ｓｅｒｕｍ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ（ＩＬ−６，  ＴＮＦ−ａｌｐｈａ，ＩＬ−１  ｂｅｔａ  ａｎｄ  ＩＦＮ−ｇａｍｍａ）  ｉｎ  ａｎｋｙｌｏｓｉｎｇ  ｓｐｏｎｄｙｌｉｔｉｓ：ａ  ｃｌｏｓｅ  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｓｅｒｕｍ  ＩＬ−６  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｓｅｖｅｒｉｔｙ，Ｂｒ  Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，１９９４  Ｏｃｔ；３３（１０）：９２７−３１、Ｉｔｏ  Ｈ．，Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｉ−ＩＬ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．，���００５  Ｍａｒ；４０  Ｓｕｐｐｌ  １６：３２−４、Ｉｔｏ  Ｈ，ら，Ａ  ｐｉｌｏｔ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ａ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  ａｃｔｉｖｅ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００４  Ａｐｒ；１２６（４）：９８９−９６；ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ  ９４７、Ｉｔｏ  Ｈ．，ＩＬ−６  ａｎｄ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ｉｎｆｌａｍｍ  Ａｌｌｅｒｇｙ，２００３  Ｊｕｎ；２（２）：１２５３０、Ｉｔｏ  Ｈ，ら，Ａｎｔｉ−ＩＬ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ａ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．，２００２  Ｎｏｖ；３７  Ｓｕｐｐｌ  １４：５６−６１、Ｉｔｏ  Ｈ．，Ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｃｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．，２００３；９（４）：２９５−３０５；Ｓａｌｖａｒａｎｉ  Ｃ，ら，Ａｃｕｔｅ−ｐｈａｓｅ  ｒｅａｃｔａｎｔｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ｒｅｌａｐｓｅ／ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ  ｉｎ  ｐｏｌｙｍｙａｌｇｉａ  ｒｈｅｕｍａｔｉｃａ：ａ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ  ｓｔｕｄｙ，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，２００５  Ｆｅｂ  １５；５３（１）：３３−８、Ｒｏｃｈｅ  ＮＥ，ら，Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｐｏｌｙｍｙａｌｇｉａ  ｒｈｅｕｍａｔｉｃａ  ａｎｄ  ｇｉａｎｔ  ｃｅｌｌ  ａｒｔｅｒｉｔｉｓ，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，１９９３  Ｓｅｐ；３６（９）：１２８６−９４、
Ｇｕｐｔａ  Ｍ，ら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｉｍｍｕｎｅ  ｇａｍｍａ−ｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｉｎ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｏｆ  ｎｏｒｍａｌ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｋａｗａｓａｋｉ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ２００１  Ｍａｙ；２１（３）：１９３−９、Ｎｏｒｉｓ  Ｍ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｎｄ  ＲＡＮＴＥＳ  ｉｎ  Ｔａｋａｙａｓｕ  ａｒｔｅｒｉｔｉｓ：ａ  ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｄｅｃｉｓｉｏｎｓ？，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１９９９  Ｊｕｌ  ６；１００（１）：５５−６０、Ｂｅｓｂａｓ  Ｎ，ら，Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  Ｈｅｎｏｃｈ  Ｓｃｈｏｎｌｅｉｎ  ｐｕｒｐｕｒａ，Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，１９９７；２６（６）：４５６−６０、Ｈｉｒｏｈａｔａ  Ｓ，ら，Ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｉｎ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  Ｎｅｕｒｏ−Ｂｅｈｃｅｔ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．，１９９７  Ｊａｎ；８２（１）：１２−７、Ｙａｍａｋａｗａ  Ｙ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６（ＩＬ−６）  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｂｅｈｃｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｃｉ．，１９９６  Ｍａｒ；１１（３）：１８９−９５、Ｋｉｍ  ＤＳ．，Ｓｅｒｕｍ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｉｎ  Ｋａｗａｓａｋｉ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｙｏｎｓｅｉ  Ｍｅｄ  Ｊ．，１９９２  Ｊｕｎ；３３（２）：１８３−８、Ｌａｎｇｅ，Ａ．，ら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ  ａｎｄ  ＶＣＡＭ−ｌ）  ａｎｄ  ｇｒａｆｔ−ｖｅｒｓｕｓ−ｈｏｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ａｒｃｈ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｈｅｒ  Ｅｘｐ．，１９９５，４３（２）：９９−１０５、Ｔａｎａｋａ，Ｊ．，ら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｌｅｕｋ．Ｌｙｍｐｈｏｍａ，１９９５  １６（５−６）：４１３−４１８、Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ，ＡＭ，ら，Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ａｒｃｈ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｈｅｒ  Ｅｘｐ．，２００２  ５０（６）：３７１−８、Ｚｅｉｓｅｒ，Ｒ，ら，Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ｇｒａｆｔ−ｖｅｒｓｕｓ−ｈｏｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｎｏｖｅｌ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ．，２００４  ８３（９）：５５１−６５、Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＡＭ，ら，Ｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｏｆ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓ，Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ．，２００４  １２７（５）：４７９−９０、およびＳｃｈｅｉｎｂｅｒｇ  ＭＡ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕ���ｉｎ  ６：ａ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｍａｒｋｅｒ  ｏｆ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  ｏｎｓｅｔ  Ｓｔｉｌｌ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，１９９６  Ｎｏｖ−Ｄｅｃ；１４（６）：６５３−５を参照されたく、それぞれの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０５３１】
本発明の別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体は、骨格系に関連する疾病および疾患の症状を改善もしくは軽減し、またはその疾病および疾患を治療もしくは防止するのに有用である。骨格系に関連する疾病および疾患は、変形性関節症、骨粗しょう症、およびパジェット骨病を含むが、それらに限定されない。本発明の好ましい実施形態では、本明細書に記載されるヒト化抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体は、変形性関節症の症状を改善もしくは軽減し、または変形性関節症を治療もしくは防止するのに有用である。例えば、Ｍａｌｅｍｕｄ  ＣＪ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＢｉｏＤｒｕｇｓ，２００４；１８（１）：２３−３５；Ｗｅｓｔａｃｏｔｔ  ＣＩ，ら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｏｒ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ｊｏｉｎｔ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ？，Ｓｅｍｉｎ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，１９９６  Ｆｅｂ；２５（４）：２５４−７２、Ｓｕｇｉｙａｍａ  Ｔ．，Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｎｄ  ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｅ２  ｉｎ  ｐａｒｔｉｃｕｌａｒ  ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ  ｏｆ  ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  ｗｏｍｅｎ  ｗｉｔｈ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｍｅｔａｂ．，２００１；１９（２）：８９−９６、Ａｂｒａｈａｍｓｅｎ  Ｂ，ら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｂｏｎｅ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ａ  ５−ｙｅａｒ  ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ  ｓｔｕｄｙ  −  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｓｅｒｕｍ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ：ｔｈｅ  Ｄａｎｉｓｈ  Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  Ｓｔｕｄｙ，Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｒｅｓ．，  ２０００  Ａｕｇ；１５（８）：１５４５−５４、Ｓｔｒａｕｂ  ＲＨ，ら，Ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｓｅｒｕｍ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｎｄ  ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ  ｉｎ  ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  ｗｏｍｅｎ：ａ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ  ｓｔｕｄｙ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．，２０００  Ｍａｒ；８５（３）：１３４０−４、Ｍａｎｏｌａｇａｓ  ＳＣ，Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＩＬ−６  ｔｙｐｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｂｏｎｅ，Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．，１９９８  Ｍａｙ  １；８４０：１９４−２０４、Ｅｒｓｈｌｅｒ  ＷＢ，ら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ，Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９７  Ｎｏｖ−Ｄｅｃ；２１（６）：４８７−９９、Ｊｉｌｋａ  ＲＬ，ら，Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｆ���ｅｒ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｌｏｓｓ：ｍｅｄｉａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９２  Ｊｕｌ  ３；２５７（５０６６）：８８−９１、Ｋａｌｌｅｎ  ＫＪ，ら，Ｎｅｗ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ＩＬ−６  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ：ｗｈｅｒｅ  ｄｏ  ｗｅ  ｓｔａｎｄ  ａｎｄ  ｗｈａｔ  ａｒｅ  ｔｈｅ  ｏｐｔｉｏｎｓ？，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ，１９９９  Ｓｅｐ；８（９）：１３２７−４９、Ｎｅａｌｅ  ＳＤ，ら，Ｔｈｅ  ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  ｓｅｒｕｍ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｏｎ  ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｐａｇｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，ＱＪＭ，２００２  Ａｐｒ；９５（４）：２３３−４０、Ｒｏｏｄｍａｎ  ＧＤ，Ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｉｎ  Ｐａｇｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ，Ｂｏｎｅ，１９９５  Ａｕｇ；１７（２  Ｓｕｐｐｌ）：５７Ｓ−６１Ｓ、Ｈｏｙｌａｎｄ  ＪＡ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６，ＩＬ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ａｎｄ  ＩＬ−６  ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｐａｇｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｒｅｓ．，１９９４  Ｊａｎ；９（１）：７５−８０、およびＲｏｏｄｍａｎ  ＧＤ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６．Ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｕｔｏｃｒｉｎｅ／ｐａｒａｃｒｉｎｅ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ｐａｇｅｔ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｏｆ  ｂｏｎｅ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．，１９９２  Ｊａｎ；８９（１）：４６−５２を参照されたく、それぞれの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０５３２】
本発明の別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体は、癌に関連する疾病および疾患の症状を改善もしくは軽減し、またはその疾病および疾患を治療もしくは防止するのに有用である。癌に関連する疾病および疾患は、棘細胞腫、腺房細胞癌、聴神経腫、末端性黒子性黒色腫、先端汗腺腫、急性好酸球性白血病、急性リンパ性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性単球性白血病、成熟急性骨髄芽球性白血病、急性骨髄樹状細胞白血病、急性骨髄性白血病、急性前骨髄球性白血病、アダマンチノーマ、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺様歯原性腫瘍、副腎皮質癌、成人Ｔ細胞白血病、侵攻性ＮＫ細胞白血病、エイズ関連癌、エイズ関連リンパ腫、胞状軟部肉腫、エナメル上皮線維腫、肛門癌、未分化大細胞リンパ腫、未分化甲状腺癌、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管筋脂肪腫、血管肉腫、虫垂癌、星状細胞腫、非定型奇形腫様横紋筋様腫瘍、基底細胞癌、基底細胞型癌腫、Ｂ細胞白血病、Ｂ細胞リンパ腫、ベリニ管癌、胆道癌、膀胱癌、芽細胞腫、骨肉腫、骨腫瘍、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、乳癌、ブレンナー腫瘍、気管支腫瘍、細気管支肺胞癌腫、褐色腫、バーキットリンパ腫、未知の原発部位の癌、カルチノイド腫瘍、癌腫、上皮内癌、陰茎癌、未知の原発部位の癌腫、癌肉腫、キャッスルマン病、中枢神経系胚芽腫、小脳星細胞腫、大脳星細胞腫、子宮頸癌、胆管癌、軟骨腫、軟骨肉腫、脊索腫、絨毛腫、脈絡叢乳頭腫、慢性リンパ球性白血病、慢性単球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、慢性好中球性白血病、透明細胞腫瘍、結腸癌、結腸直腸癌、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、デゴス病、隆起性皮膚線維肉腫、皮様嚢腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、胎生期癌、内胚葉洞腫瘍、子宮内膜癌、子宮内膜子宮癌、子宮内膜性腫瘍、腸疾患関連Ｔ細胞リンパ腫、上衣芽細胞腫、上衣細胞腫、類上皮肉腫、赤白血病、食道癌、鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング腫瘍ファミリー、ユーイング肉腫ファミリー、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、乳房外ページェット病、卵管癌、封入奇形、線維腫、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性甲状腺癌、胆嚢癌、胆嚢癌、神経節膠腫、神経節細胞腫、胃癌、胃リンパ腫、消化管癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、消化管間質腫瘍、胚細胞腫瘍、胚細胞腫、妊娠性絨毛癌、妊娠性絨毛腫瘍、骨巨細胞腫、多形性膠芽腫、神経膠腫、大脳膠腫症、グロムス腫瘍、グルカゴン産生腫瘍、性腺芽細胞腫、顆粒膜細胞腫、ヘアリー細胞白血病、ヘアリー細胞白血病、頭頸部癌、頭頸部癌、心臓癌、血管芽細胞腫、血管周囲細胞腫、血管肉腫、血液学的悪性腫瘍、肝細胞癌、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、遺伝性乳−卵巣癌症候群、ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、視床下部膠腫、炎症性乳癌、眼内黒色腫、島細胞癌、島細胞腫、若年性骨髄単球性白血病、カポジ肉腫、カポジ肉腫、腎臓癌、クラッキン腫瘍、クルッケンベルグ腫瘍、喉頭癌、喉頭癌、悪性黒子型黒色腫、白血病、白血病、口唇癌および口腔癌、脂肪肉腫、肺癌、黄体腫、リンパ管腫、リンパ管肉腫、リンパ上皮腫、リンパ性白血病、リンパ腫、マクログロブリン血症、悪性線維性組織球腫、悪性線維性組織球腫、骨悪性線維性組織球腫、悪性神経膠腫、悪性中皮腫、悪性末梢神経鞘腫瘍、悪性横紋筋様腫瘍、悪性トリトン腫瘍、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、マスト細胞白血病、縦隔胚細胞腫瘍、縦隔腫瘍、甲状腺髄様癌、髄芽細胞腫、髄芽細胞腫、髄様上皮腫、黒色腫、黒色腫、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫、中皮腫、原発不明転移性扁平上皮性頸部癌、転移性尿路上皮癌、ミュラー管混合腫瘍、単球性白血病、口腔癌、粘液性腫瘍、多中心性キャッスルマン病、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫、多発性骨髄腫、菌状息肉腫、菌状息肉腫、骨髄異形成疾患、骨髄異形成症候群、骨髄性白血病、骨髄性肉腫、骨髄増殖性疾患、粘液腫、鼻腔癌、上咽頭癌、鼻咽腔癌、新生物、神経線維腫症、神経芽細胞腫、神経芽細胞腫、神経繊維腫、神経腫、結節型黒色腫、非ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非黒色腫皮膚癌、非小細胞肺癌、眼癌、乏突起星細胞腫、乏突起膠腫、好酸性顆粒細胞腫、視神経鞘髄膜腫、口腔癌、口腔癌、口腔咽頭癌、骨肉腫、骨肉腫、卵巣癌、卵巣癌、上皮性卵巣癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、乳房パジェット病、パンコースト腫瘍、膵臓癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、乳頭腫、傍神経節腫、副鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、血管周囲類上皮細胞腫瘍、咽頭癌、褐色細胞腫、中間分化型松果体実質腫瘍、松果体芽細胞腫、下垂体細胞腫、下垂体腺腫、下垂体部腫瘍、形質細胞腫、胸膜肺芽腫、多胚芽腫、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫、中枢神経系原発リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、原発性肝細胞癌、原発性肝臓癌、原発性腹膜癌、原始神経外胚葉腫瘍、前立腺癌、腹膜偽粘液腫、直腸癌、腎細胞癌、第１５染色体上のＮＵＴ遺伝子に関連する気道癌、網膜芽細胞腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、リヒタートランスフォーメーション、仙尾部奇形腫、唾液腺癌、肉腫、シュワン細胞腫、脂腺癌、二次腫瘍、精上皮腫、漿液腫、セルトリライディッヒ細胞腫瘍、性索間質腫瘍、セザリー症候群、印環細胞癌、皮膚癌、小青色円形細胞腫瘍、小細胞癌腫、小細胞肺癌、小細胞リンパ腫、小腸癌、軟部組織肉腫、ソマトスタチン産生腫瘍、煤煙性疣贅、脊髄腫瘍、脊髄腫瘍、脾性辺縁帯リンパ腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、表在拡大型黒色腫、テント上原始神経外胚葉腫瘍、表層上皮性間質性腫瘍、滑膜肉腫、Ｔ細胞急性リンパ性白血病、Ｔ細胞大型顆粒リンパ球性白血病、Ｔ細胞白血病、Ｔ細胞リンパ腫、Ｔ細胞前リンパ球性白血病、奇形腫、末端リンパ腺癌、睾丸癌、莢膜細胞腫、咽喉癌、胸腺癌、胸腺腫、甲状腺癌、腎盂および尿管の移行上皮癌、移行上皮癌、尿膜管癌、尿道癌、泌尿生殖器腫瘍、子宮肉腫、ブドウ膜黒色腫、膣癌、ヴァーナーモリソン症候群、疣状癌、視経路神経膠腫、外陰癌、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ワルチン腫瘍、ウィルムス腫瘍、またはそれらの任意の組み合わせ、ならびに癌化学療法および癌化学療法毒性における薬物耐性を含むが、それらに限定されない。例えば、Ｈｉｒａｔａ  Ｔ，ら，Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｏｆ  ｆｒｅｓｈ  ａｎｄ  ｃｌｏｎｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，Ｌｅｕｋ  Ｒｅｓ．，２００３  Ａｐｒ；２７（４）：３４３−９、Ｂａｔａｉｌｌｅ  Ｒ，ら，Ｂｉｏｌｏｇｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ  Ｂｌｏｏｄ，１９９５  Ｊｕｌ  １５；８６（２）：６８５−９１、Ｇｏｔｏ  Ｈ，ら，Ｍｏｕｓｅ  ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｒｅｓｈ  ｈｕｍａｎ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，Ｊｐｎ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１９９４  Ｓｅｐ；８５（９）：９５８−６５、Ｋｌｅｉｎ  Ｂ，ら，Ｍｕｒｉｎｅ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ａ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｅｕｋｅｍｉａ，Ｂｌｏｏｄ，１９９１  Ｓｅｐ  １；７８（５）：１１９８−２０４、Ｍａｕｒａｙ  Ｓ，ら，Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＩＬ−６，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０００  Ｊｕｌ；３０（７）：２０６５−７３、Ｔｓｕｎｅｎａｒｉ  Ｔ，ら，Ｎｅｗ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ  ａｎｄ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｂｌｏｏｄ，１９９７  Ｓｅｐ  １５；９０（６）：２４３７−４４、Ｅｍｉｌｉｅ  Ｄ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｉｇｈ−ｇｒａｄｅ  Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｐｒｅｓｅｎｃｅ  ｏｆ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｉｍｍｕｎｏｂｌａｓｔｓ  ｉｎ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ａｎｄ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ−ｓｅｒｏｎｅｇａｔｉｖｅ  ｐａｔｉｅｎｔｓ，Ｂｌｏｏｄ，１９９２  Ｊｕｌ  １５；８０（２）：４９８−５０４、Ｅｍｉｌｉｅ  Ｄ，ら，Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ａｎｄ  ｌｙｍｐｈｏｍａ：ｅｆｆｅｃｔ  ｏｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｏｎ  Ｂ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｙｍｐｔｏｍｓ，Ｂｌｏｏｄ，１９９４  Ｏｃｔ  １５；８４（８）：２４７２−９、Ｓｍｉｔｈ  ＰＣ，ら，Ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ  ｉｎ  ｎｕｄｅ  ｍｉｃｅ，Ｐｒｏｓｔａｔｅ，２００１  Ｊｕｎ  １５；４８（１）：４７−５３、Ｓｍｉｔｈ  ＰＣ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｎｄ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ．，２００１  Ｍａｒ；１２（１）：３３−４０、Ｃｈｕｎｇ  ＴＤ，ら，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＩＬ−６  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ，Ｐｒｏｓｔａｔｅ，１９９９  Ｆｅｂ  １５；３８（３）：１９９−２０７、Ｏｋａｍｏｔｏ  Ｍ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｓ  ａ  ｐａｒａｃｒｉｎｅ  ａｎｄ  ａｕｔｏｃｒｉｎｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｓｔａｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１９９７  Ｊａｎ  １；５７（１）：１４１−６、Ｒｅｉｔｔｉｅ  ＪＥ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂ−ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ，Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，１９９６  Ｊｕｎ；２２（１−２）：８３−９０，ｆｏｌｌｏｗ  １８６，ｃｏｌｏｒ  ｐｌａｔｅ  ＶＩ、Ｓｕｇｉｙａｍａ  Ｈ，ら，Ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−６  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｌｅｕｋｅｍｉａ，Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，１９９６  Ｍａｒ；２１（１−２）：４９−５２、Ｂａｔａｉｌｌｅ  Ｒ，ら，Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６（ＩＬ−６）ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎ  ａ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ａｃｕｔｅ  ｍｏｎｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ，Ｍｅｄ  Ｏｎｃｏｌ  Ｔｕｍｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．，１９９３；１０（４）：１８５−８、Ｋｅｄａｒ  Ｉ，ら，Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｓｅｒｕｍ  Ｃ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ＩＬ−２  ｉｎ  ａ  ｆｒａｃｔｉｏ
ｎ  ｏｆ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｒｅｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｈｏ  ｆａｉｌｅｄ  ＩＬ−２−ｂａｓｅｄ  ｔｈｅｒａｐｙ，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，２００４  Ｊｕｎ  １０；１１０（２）：２６０−５、Ａｎｇｅｌｏ  ＬＳ，Ｔａｌｐａｚ  Ｍ，Ｋｕｒｚｒｏｃｋ  Ｒ，Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒｅｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐ５３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，２００２  Ｆｅｂ  １；６２（３）：９３２−４０、Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏ  Ｎ，Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｉｃ  Ｃａｓｔｌｅｍａｎ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｂｌｏｏｄ，２００５  Ｏｃｔ  １５；１０６（８）：２６２７−３２，Ｅｐｕｂ  ２００５  Ｊｕｌ  ５、Ｋａｔｓｕｍｅ  Ａ，ら，Ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６（ＩＬ−６）ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  Ｃａｓｔｌｅｍａｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｌｉｋｅ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｅｍｅｒｇｅｄ  ｉｎ  ＩＬ−６  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，２００２  Ｄｅｃ  ２１；２０（６）：３０４−１１、Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏ  Ｎ，ら，Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ  ｉｎ  Ｃａｓｔｌｅｍａｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｈｅｒａｐｙ，  Ｂｌｏｏｄ，２０００  Ｊａｎ  １；９５（１）：５６−６１、Ｓｃｒｅｐａｎｔｉ  Ｉ，Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＩＬ−６  ｇｅｎｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｉｃ  Ｃａｓｔｌｅｍａｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  Ｃ／ＥＢＰ  ｂｅｔａ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ  ｍｉｃｅ，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．，１９９６  Ｏｃｔ  １；１８４（４）：１５６１−６、Ｈｓｕ  ＳＭ，ら，Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｉｎ  Ｃａｓｔｌｅｍａｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｈｕｍ  Ｐａｔｈｏｌ．，１９９３  Ａｕｇ；２４（８）：８３３−９、Ｙｏｓｈｉｚａｋｉ  Ｋ，ら，Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６（ＩＬ  ６／ＢＳＦ−２）  ｉｎ  Ｃａｓｔｌｅｍａｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｂｌｏｏｄ，１９８９  Ｓｅｐ；７４（４）：１３６０−７、Ｎｉｌｓｓｏｎ  ＭＢ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６，ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ，ｉｓ  ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｐｒｏａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，２００５  Ｄｅｃ  １；６５（２３）：１０７９４−８００、Ｔｏｕｔｉｒａｉｓ  Ｏ，ら，Ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＴＧＦ−ｂｅｔａｌ，ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−８  ｂｙ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ａｓ  ａ  ｍａｊｏｒ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｅ  ｅｓｃａｐｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ，Ｅｕｒ  ��ｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗ．，２００３  Ｏｃｔ−Ｄｅｃ；１４（４）：２４６−５５、Ｏｂａｔａ  ＮＨ，ら，Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｏｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｃｅｌｌ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ，  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｖａｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１９９７  Ｊａｎ−Ｆｅｂ；１７（ｌＡ）：３３７−４２、Ｄｅｄｏｕｓｓｉｓ  ＧＶ，ら，Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｃｏｎｖｅｙｓ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｃｉｓ−ｄｉａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏｐｌａｔｉｎｕｍ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｋ５６２  ｈｕｍａｎ  ｌｅｕｋｅｍｉｃ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ，Ｅｘｐ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．，１９９９  Ｊｕｎ  １５；２４９（２）：２６９−７８、Ｂｏｒｓｅｌｌｉｎｏ  Ｎ，ら，Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  Ｇｐ１３０  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｃｈａｉｎ  ｂｙ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｎｄ  ｏｎｃｏｓｔａｔｉｎ  Ｍ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ＰＣ−３  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ  ａｎｄ  ｃｉｓｐｌａｔｉｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，Ｃａｎｃｅｒ，１９９９  Ｊａｎ  １；８５（１）：１３４−４４、Ｂｏｒｓｅｌｌｉｎｏ  Ｎ，ら，Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｉｓ  ａ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｃｉｓ−ｄｉａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏｐｌａｔｉｎｕｍ  ａｎｄ  ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１９９５  Ｏｃｔ  １５；５５（２０）：４６３３−９、Ｍｉｚｕｔａｎｉ  Ｙ，ら，Ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｒｅｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ｃｉｓ−ｄｉａｍｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｏｐｌａｔｉｎｕｍ（ＩＩ）ｂｙ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｏｒ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１９９５  Ｆｅｂ  １；５５（３）：５９０−６、Ｙｕｓｕｆ  ＲＺ，ら，Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ  ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ，Ｃｕｒｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ，２００３  Ｆｅｂ；３（１）：１−１９、Ｄｕａｎ  Ｚ，ら，Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＩＬ−６  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ＩＬ−８  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｏｆ  Ｕ−２０Ｓ  ｈｕｍａｎ  ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ  ｃｅｌｌｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，２００２  Ｍａｒ  ７；１７（５）：２３４−４２、Ｃｏｎｚｅ  Ｄ，ら，Ａｕｔｏｃｒｉｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｃａｕｓｅｓ  ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｂｒｅ���ｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，２００１  Ｄｅｃ  １５；６１（２４）：８８５１−８、Ｒｏｓｓｉ  ＪＦ，ら，Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｗｉｔｈ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ａｎｄ  １４０ｍｇ／ｍ２  ｏｆ  ｍｅｌｐｈａｌａｎ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ａ  ｐｉｌｏｔ  ｓｔｕｄｙ  ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｓｐｅｃｔｓ，Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，２００５  Ｎｏｖ；３６（９）：７７１−９、およびＴｏｎｉｎｉ  Ｇ，ら，Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ  ｍａｙ  ｉｎｄｕｃｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ−ｒｅｌｅａｓｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｉｎ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｒｅｇｕｌ  Ｈｏｍｅｏｓｔ  Ａｇｅｎｔｓ，２００２  Ａｐｒ−Ｊｕｎ；１６（２）：１０５−９を参照されたく、それぞれの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０５３３】
本発明の別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体は、虚血性心疾患、アテローム性動脈硬化症、肥満、糖尿病、喘息、多発性硬化症、アルツハイマー病、脳血管疾患、熱病、急性期反応、アレルギー、貧血、炎症貧血（慢性疾患に伴う貧血）、高血圧症、抑うつ症、慢性疾患に関連する抑うつ症、血栓症、血小板増加症、急性心不全、メタボリック症候群、流産、肥満、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、骨盤内炎症性疾患、再灌流傷害、および移植片拒絶反応の症状を改善もしくは軽減し、またはそれらを治療もしくは防止するのに有用である。例えば、Ｔｚｏｕｌａｋｉ  Ｉ，ら，Ｃ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ，ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６，ａｎｄ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ａｓ  ｐｒｅｄｉｃｔｏｒｓ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ：Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ  Ａｒｔｅｒｙ  Ｓｔｕｄｙ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００５  Ａｕｇ  １６；ｌ１２（７）：９７６−８３、Ｅｐｕｂ  ２００５  Ａｕｇ  ８、Ｒａｔｔａｚｚｉ  Ｍ，ら，Ｃ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｉｎ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｃｕｌｐｒｉｔｓ  ｏｒ  ｐａｓｓｉｖｅ  ｂｙｓｔａｎｄｅｒｓ？，Ｊ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．，２００３  Ｏｃｔ；２１（１０）：１７８７−８０３、Ｉｔｏ  Ｔ，ら，ＨＭＧ−ＣｏＡ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｒｅｄｕｃｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｄｒｕｇｓ  Ｔｈｅｒ．，２００２  Ｍａｒ；１６（２）：１２１−６、Ｓｔｅｎｖｉｎｋｅｌ  Ｐ，ら，Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ，ｍａｌｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，ａｎｄ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ＥＳＲＤ：ｗｈａｔ  ｉｓ  ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６？，Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ  Ｓｕｐｐｌ．，２００２  Ｍａｙ；（８０）：１０３−８、Ｙｕｄｋｉｎ  ＪＳ，ら，Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ｏｂｅｓｉｔｙ，ｓｔｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｉｓ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｔｈｅ  ｌｉｎｋ？，Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，２０００  Ｆｅｂ；１４８（２）：２０９−１４、Ｈｕｂｅｒ  ＳＡ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｅｘａｃｅｒｂａｔｅｓ  ｅａｒｌｙ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ．，１９９９  Ｏｃｔ；１９（１０）：２３６４−７、Ｋａｄｏ  Ｓ，ら，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｌｅｖｅｌｓ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６，ｉｔｓ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６／ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｔｙｐｅ  ２  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ，Ａｃｔａ  Ｄｉａｂｅｔｏｌ．，１９９９  Ｊｕｎ；３６（１−２）：６７−７２、Ｓｕｋｏｖｉｃｈ  Ｄ���，ら，Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｉｎ  ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ｏｆ  ｍａｌｅ  ＡｐｏＥ−ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ：ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  １７ｂｅｔａ−ｅｓｔｒａｄｉｏｌ，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ．，１９９８  Ｓｅｐｔ；８（９）：１４９８−５０５、Ｋｌｏｖｅｒ  ＰＪ，  ｔ  ａｌ，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ａｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｏｂｅｓｉｔｙ，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，２００５  Ａｕｇ；１４６（８）：３４１７−２７，Ｅｐｕｂ  ２００５  Ａｐｒ  ２１、Ｌｅｅ  ＹＨ，ら，Ｔｈｅ  ｅｖｏｌｖｉｎｇ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｏｂｅｓｉｔｙ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｃｕｒｒ  Ｄｉａｂ  Ｒｅｐ．，２００５  Ｆｅｂ；５（１）：７０−５、Ｄｉａｍａｎｔ  Ｍ，ら，Ｔｈｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ａｂｄｏｍｉｎａｌ  ｖｉｓｃｅｒａｌ  ｆａｔ  ａｎｄ  ｃａｒｏｔｉｄ  ｓｔｉｆｆｎｅｓｓ  ｉｓ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｉｎ  ｕｎｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ  ｔｙｐｅ  ２  ｄｉａｂｅｔｅｓ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．，２００５  Ｍａｒ；９０（３）：１４９５−５０１、Ｅｐｕｂ  ２００４  Ｄｅｃ  ２１、Ｂｒａｙ  ＧＡ，Ｍｅｄｉｃａｌ  ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｏｂｅｓｉｔｙ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．，２００４  Ｊｕｎ；８９（６）：２５８３  ９、Ｋｌｏｖｅｒ  ＰＪ，ら，Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｅｘｐｏｓｕｒｅ  ｔｏ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｃａｕｓｅｓ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎ  ｍｉｃｅ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００３  Ｎｏｖ；５２（１１）：２７８４−９、Ｙｕｄｋｉｎ  ＪＳ，ら，Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ｏｂｅｓｉｔｙ，ｓｔｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｉｓ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｔｈｅ  ｌｉｎｋ？，Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，２０００  Ｆｅｂ；１４８（２）：２０９−１４、Ｄｏｇａｎｃｉ  Ａ，ら，Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ＩＬ−６  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ｂｒｏｎｃｈｉａｌ  ａｓｔｈｍａ  ｉｎ  ｍｉｃｅ，Ｃｌｉｎ  Ｒｅｖ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００５  Ｊｕｎ；２８（３）：２５７−７０、Ｄｏｇａｎｃｉ  Ａ，ら，Ｔｈｅ  ＩＬ−６Ｒ  ａｌｐｈａ  ｃｈａｉｎ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｌｕｎｇ  ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ａｉｒｗａｙ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．，２００５  Ｆｅｂ；ｌ１５（２）：３１３  ２５，（Ｅｒｒａｔｕｍ  ｉｎ：Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．，２００５  Ｍａｙ；ｌ１５（５）：１３８８，Ｌｅｈｒ，Ｈａｎｓ  Ａ［ａｄｄｅｄ］）、Ｓｔｅｌｍａｓｉａｋ  Ｚ，ら，ＩＬ  ６  ａｎｄ  ｓＩＬ−６Ｒ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ  ｆｌｕｉｄ  ａｎｄ  ｓｅｒｕｍ  ｏｆ  ＭＳ  ｐａｔｉｅｎｔｓ，Ｍｅｄ  Ｓｃｉ  Ｍｏｎｉｔ．，２００１  Ｓｅｐ−Ｏｃｔ；７（５）：９１４−８、Ｔｉｌｇｎｅｒ  Ｊ，ら，Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｖｉａ  ｍａｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ＣＯＳ−７  ｃｅｌｌｓ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｍａｓｓｉｖｅ  ｇｌｉｏｓｉｓ，Ｇｌｉａ，２００１  Ｓｅｐ；３５（３）：２３４−４５、Ｂｒｕｎｅｌｌｏ  ＡＧ，ら，Ａｓｔｒｏｃｙｔｉｃ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  Ｓｏｌｕｂｌｅ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｄｏｕｂｌｅ−ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．，２０００  Ｎｏｖ；１５７（５）：１４８５−９３、Ｈａｍｐｅｌ  Ｈ，ら，  Ｐａｔｔｅｒｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｃｏｒｔｉｃａｌ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  ｒａｐｉｄ  ａｕｔｏｐｓｙ  ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｒａｉｎ，Ｅｕｒ  Ａｒｃｈ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２００５  Ａｕｇ；２５５（４）：２６９−７８，Ｅｐｕｂ  ２００４  Ｎｏｖ  ２６、Ｃａｃｑｕｅｖｅｌ  Ｍ，ら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ，２００４  Ａｕｇ；５（６）：５２９−３４、Ｑｕｉｎｔａｎｉｌｌａ  ＲＡ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６  ｉｎｄｕｃｅｓ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ−ｔｙｐｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔａｕ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｂｙ  ｄｅｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｃｄｋ５／ｐ３５  ｐａｔｈｗａｙ，Ｅｘｐ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓ．，２００４  Ａｐｒ  １５；２９５（１）：２４５−５７、Ｇａｄｉｅｎｔ  ＲＡ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６（ＩＬ−６）−−ａ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｗｉｔｈ  ｂｏｔｈ  ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ  ａｎｄ  ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ，Ｐｒｏｇ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．，１９９７  Ａｕｇ；５２（５）：３７９−９０、Ｈｕｌｌ  Ｍ，ら，Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｉｎ  ｃｏｒｔｉｃａｌ  ｐｌａｑｕｅｓ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｍａｙ  ｐｒｅｃｅｄｅ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｆｆｕｓｅ  ｉｎｔｏ  ｎｅｕｒｉｔｉｃ  ｐｌａｑｕｅｓ，Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．，１９９６  Ｊａｎ  １７；７７７：２０５−１２、Ｒａｌｌｉｄｉｓ  ＬＳ，ら，Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍａｒｋｅｒｓ  ａｎｄ  ｉｎ−ｈｏｓｐｉｔａｌ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｉｓｃｈａｅｍｉｃ  ｓｔｒｏｋｅ，Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，２００５  Ｄｅｃ  ３０、Ｅｍｓｌｅｙ  ＨＣ，ら，Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｎｄ  ａｃｕｔｅ  ｉｓｃｈａｅｍｉｃ  ｓｔｒｏｋｅ，Ａｃ���ａ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｓｃａｎｄ．，２００５  Ｏｃｔ；１１２（４）：２７３−４、Ｓｍｉｔｈ  ＣＪ，ら，Ｐｅａｋ  ｐｌａｓｍａ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｍａｒｋｅｒｓ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｆｉｒｓｔ  ｗｅｅｋ  ｏｆ  ｉｓｃｈａｅｍｉｃ  ｓｔｒｏｋｅ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅ  ｗｉｔｈ  ｂｒａｉｎ  ｉｎｆａｒｃｔ  ｖｏｌｕｍｅ，  ｓｔｒｏｋｅ  ｓｅｖｅｒｉｔｙ  ａｎｄ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｏｕｔｃｏｍｅ，ＢＭＣ  Ｎｅｕｒｏｌ．，２００４  Ｊａｎ  １５；４：２；Ｖｉｌａ  Ｎ，ら，Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  ｅａｒｌｙ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ｗｏｒｓｅｎｉｎｇ  ｉｎ  ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｓｔｒｏｋｅ，Ｓｔｒｏｋｅ，２０００  Ｏｃｔ；３１（１０）：２３２５−９、およびＴａｒｋｏｗｓｋｉ  Ｅ，ら，Ｅａｒｌｙ  ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｐｒｅｄｉｃｔｓ  ｔｈｅ  ｓｉｚｅ  ｏｆ  ｂｒａｉｎ  ｌｅｓｉｏｎ  ｉｎ  ｓｔｒｏｋｅ，Ｓｔｒｏｋｅ，１９９５  Ａｕｇ；２６（８）：１３９３−８を参照されたく、それぞれの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０５３４】
本発明の別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体は、サイトカインストームに関連する疾病および疾患の症状を改善もしくは軽減し、またはその疾病および疾患を治療もしくは防止するのに有用である。サイトカインストームに関連する疾病および疾患は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、鳥インフルエンザ、天然痘，  汎発性インフルエンザ、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、敗血症、および全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）を含むが、それらに限定されない。例えば、Ｃｅｃｉｌ，Ｒ．  Ｌ．，Ｇｏｌｄｍａｎ，Ｌ．，＆Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｊ．Ｃ．（２０００）。Ｃｅｃｉｌ  ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｗ．Ｂ．  Ｓａｕｎｄｅｒｓ、Ｆｅｒｒａｒａ  ＪＬ，ら．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｓｔｏｒｍ  ｏｆ  ｇｒａｆｔ−ｖｅｒｓｕｓ−ｈｏｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅ：ａ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｅｆｆｅｃｔｏｒ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．１９９３  Ｆｅｂ；２５（１  Ｐｔ  ２）：１２１６−７、Ｏｓｔｅｒｈｏｌｍ  ＭＴ，Ｐｒｅｐａｒｉｎｇ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｎｅｘｔ  Ｐａｎｄｅｍｉｃ，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２００５  Ｍａｙ  ５；３５２（１８）：１８３９−４２、Ｈｕａｎｇ  ＫＪ，ら．，Ａｎ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｓｔｏｒｍ  ｉｎ  ＳＡＲＳ  ｐａｔｉｅｎｔｓ，  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｖｉｒｏｌ．２００５  Ｆｅｂ；７５（２）：１８５−９４、およびＣｈｅｕｎｇ  ＣＹ，ら．，Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ  ｂｙ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａ  Ａ  （Ｈ５Ｎ１）  ｖｉｒｕｓｅｓ：ａ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｕｎｕｓｕａｌ  ｓｅｖｅｒｉｔｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｄｉｓｅａｓｅ？Ｌａｎｃｅｔ．２００２  Ｄｅｃ  ７；３６０（９３４８）：１８３１−７を参照されたい。
【０５３５】
本発明の別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−６抗体またはそのフラグメントまたは変異体は、覚醒補助として有用である。
【０５３６】
［投与］
本発明の１つの実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−６抗体またはそのＩＬ−６結合フラグメントまたはその変異体、ならびに該抗体フラグメントまたは変異体の組み合わせは、受容対象の体重１ｋｇあたり、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、または約４ｍｇ／ｋｇ等の、約０．１と２０ｍｇ／ｋｇとの間の濃度で、対象に投与される。本発明の好ましい実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−６抗体またはそのＩＬ−６結合フラグメントまたはその変異体、ならびに該抗体フラグメントまたは変異体の組み合わせは、受容対象の体重１ｋｇあたり、約０．４ｍｇ／ｋｇの濃度で、対象に投与される。本発明の好ましい実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−６抗体またはそのＩＬ−６結合フラグメントまたはその変異体、ならびに該抗体フラグメントまたは変異体の組み合わせは、１６週間またはそれ以下に１回、８週間またはそれ以下に１回、４週間またはそれ以下に１回等、２６週間またはそれ以下に１回の頻度で、受容対象に投与される。別の好ましいの実施形態では、本発明本明細書に記載される抗ＩＬ−６抗体またはそのＩＬ−６結合フラグメントまたはその変異体、ならびにそれらの組み合わせは、多くても約２週間毎に１回、多くても約４週間毎に１回、多くても約８週間毎に１回、多くても約１２週間毎に１回、多くても約１６週間毎に１回、多くても約２４週間毎に１回等、多くても約１週間毎に１回の頻度で、受容対象に投与される。
【０５３７】
有効量は、例えば、年齢、性別、妊娠の有無、ボディマス指数、除脂肪体重、状態、または組成物が与えられる条件、組成物の代謝または耐性に影響を与え得る受容対象の他の健康状態、受容対象のＩＬ−６レベル、および組成物に対する抵抗性（例えば、患者が組成物に対する抗体を発現することから生じる）等の対象の特質に依存し得ることが理解される。当業者であれば、例えば、本明細書の開示およびＧｏｏｄｍａｎ，Ｌ．Ｓ．，Ｇｉｌｍａｎ，Ａ．，Ｂｒｕｎｔｏｎ，Ｌ．Ｌ．，Ｌａｚｏ，Ｊ．Ｓ．，＆Ｐａｒｋｅｒ，Ｋ．Ｌ．（２００６）、Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｈｏｗｌａｎｄ，Ｒ．Ｄ．，Ｍｙｃｅｋ，Ｍ．Ｊ．，Ｈａｒｖｅｙ，Ｒ．Ａ．，Ｃｈａｍｐｅ，Ｐ．Ｃ．，＆Ｍｙｃｅｋ，Ｍ．Ｊ．（２００６）、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ’ｓ  ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ  ｒｅｖｉｅｗｓ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、およびＧｏｌａｎ，Ｄ．Ｅ．（２００８）、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：ｔｈｅ  ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｔｈｅｒａｐｙ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．，［ｅｔｃ．］：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ内の技術による手引きにより、日常の実験を通して、投与の有効量および頻度決定することができるであろう。
【０５３８】
本発明の別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−６抗体またはそのＩＬ−６結合フラグメントまたはその変異体、ならびに該抗体フラグメントまたは変異体の組み合わせは、製剤処方で被験者に投与される。
【０５３９】
「医薬組成物」は、哺乳動物への投与に適切である化学的または生物学的組成物を指す。そのような組成物は、頬内、表皮、硬膜外、吸入、動脈内、心臓内、脳室内、皮内、筋肉内、鼻腔内、眼内、腹腔内、脊髄内、鞘内、静脈内、経口、非経口、浣腸剤又は坐剤により直腸へ、皮下、真皮下、舌下、経皮、および経粘膜を含むが、それらに限定されない多数の経路の１つ以上を介した投与のために、特定的に製剤化され得る。加えて、投与は、注射剤、散剤、液剤、ゲル剤、滴剤の手段、または他の投与手段によって発生し得る。
【０５４０】
本発明の１つの実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−６抗体またはそのＩＬ−６結合フラグメントまたはその変異体、ならびに該抗体フラグメントまたは変異体の組み合わせは、任意で１つ以上の活性薬剤との組み合わせで投与され得る。このような活性薬剤は、鎮痛剤、解熱剤、抗炎症剤、抗生剤、抗ウイルス剤、および抗サイトカイン剤を含む。活性薬剤は、アゴニスト，アンタゴニスト，およびＴＮＦ−α（アルファ）、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１８、ＩＦＮ−α（アルファ）、ＩＦＮ−γ（ガンマ）、ＢＡＦＦ、ＣＸＣＬ１３、ＩＰ−１０、ＶＥＧＦ、ＥＰＯ、ＥＧＦ、ＨＲＧ、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、ヘプシジンのモジュレーターを含み、前述のいずれかに対して反応する抗体、および前述のいずれかの受容体に対して反応する抗体を含む。活性薬剤はまた、２−アリールプロピオン酸、アセクロフェナク、アセメタシン、アセチルサリチル酸（アスピリン）、アルクロフェナク、アルミノプロフェン、アモキシプリン、アンピロン、アリールアルカン酸、アザプロパゾン、ベノリレート／ベノリラート、ベノキサプロフェン、ブロムフェナク、カルプロフェン、セレコキシブ、コリンマグネシウムサリチル酸、クロフェゾン、ＣＯＸ−２阻害剤、デクスイブプロフェン、デクスケトプロフェン、ジクロフェナク、ジフルニサル、ドロキシカム、エテンザミド、エトドラク、エトリコキシブ、ファイスラミン、フェナム酸、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルフェナム酸、フルノキサプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、イブプロキサム、インドメタシン、インドプロフェン、ケブゾン、ケトプロフェン、ケトロラク、ロルノキシカム、ロキソプロフェン、ルミラコキシブ、サリチル酸マグネシウム、メクロフェナム酸、メフェナム酸、メロキシカム、メタミゾール、サリチル酸メチル、モフェブタゾン、ナブメトン、ナプロキセン、アリルアシルアミド、Ｎ−アリールアントラニル酸、オキサメタシン、オキサプロジン、オキシカム、オキシフェンブタゾン、パレコキシブ、フェナゾン、フェニルブタゾン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、ピルプロフェン、プロフェン、プログルメタシン、ピラゾリジン誘導体、ロフェコキシブ、サリチルサリチラート、サリチルアミド、サリチル酸、スルフィンピラゾン、スリンダク、スプロフェン、テノキシカム、チアプロフェン酸、トルフェナム酸、トルメチン、およびバルデコキシブを含む。抗生物質は、アミカシン、アミノグルコシド、アモキシシリン、アンピシリン、アンサマイシン、アルスフェナミン、アジスロマイシン、アズロシリン、アザクタム、バシトラシン、カルバセフェム、カルバペネム、カルベニシリン、セファクロル、セファドロキシル、セファレキシン、セファロシン、セファロチン、セファマンドール、セファゾリン、セフジニル、セフジトレン、セフェピム、セフィキシム、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフォキシチン、セフポドキシム、セフプロジル、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトビプロール、セフトリアキソン、セフロキシム、セファロスポリン、クロラムフェニコール、シラスタチン、シプロフロキサシン、クラリスロマイシン、クリンダマイシン、クロキサシリン、コリスチン、コトリモキサゾール、ダルフォプリスチン、デメクロサイクリン、ジクロキサシリン、ジリスロマイシン、ドリペネム、ドキシサイクリン、エノキサシン、エルタペネム、エリスロマイシン、エタンブトール、フルクロキサシリン、ホスホマイシン、フラゾリドン、フシジン酸、ガチフロキサシン、ゲルダナマイシン、ゲンタマイシン、グリコペプチド、ハービマイシン、イミペネム、イソニアジド、カナマイシン、レボフロキサシン、リンコマイシン、リネゾリド、ロメフロキサシン、ロラカルベフ、マクロライド、マフェナイド、メロペネム、メチシリン、メトロニダゾール、メズロシリン、ミノサイクリン、モノバクタム、モキシフロキサシン、ムピロシン、ナフシリン、ネオマイシン、ネチルマイシン、ニトロフラントイン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、オキサシリン、オキシテトラサイクリン、パロモマイシン、ペニシリン、ペニシリン、ピペラシリン、プラテンシマイシン、ポリミキシンＢ，ポリペプチド、プロントジル、ピラジナミド、キノロン、キヌプリスチン、リファンピシン、リファンピン、ロキシスロマイシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシン、スルファセタミド、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、スルホンアミド、タイコプラニン、テリスロマイシン、テトラサイクリン、テトラサイクリン、チカルシリン、チニダゾール、トブラマイシン、トリメトプリム、トリメトプリムスルファメトキサゾール、トロレアンドマイシン、トロバフロキサシン、およびバンコマイシンを含む。活性薬剤はまた、アルドステロン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、コルチコステロイド、コルチゾール、酢酸コルチゾン、酢酸デオキシコルチコステロン、デキサメタゾン、酢酸フルドロコルチゾン、グルココルチコイド、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ステロイド、およびトリアムシノロンを含む。抗ウイルス性剤は、アバカビル、アシクロビル、アシクロビル、アデフォビル、アマンタジン、アンプレナビル、抗レトロウイルス性固定用量配合剤、抗レトロウイルス性相乗的エンハンサー、アルビドル、アタザナビル、アトリプラ、ブリブジン、シドフォビル、コンビビル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エドクスジン、エファビレンツ、エムトリシタビン、エンフビルチド、エンテカビル、侵入阻害剤、ファムシクロビル、ホミビルセン、ホスアンプレナビル、フォスカルネット、フォスフォネット、融合阻害剤、ガンシクロビル、ガーダシル、イバシタビン、イドクスウリジン、イミキモド、イムノビル、インジナビル、イノシン、インテグラーゼ阻害剤、インターフェロン、インターフェロンタイプＩ、インターフェロンタイプＩＩ、インターフェロンタイプＩＩＩ、ラミブジン、ロピナビル、ロビリド、マラビロク、ＭＫ−０５１８、モロキシジン、ネルフィナビル、ネビラピン、ネクサバール、ヌクレオシドアナログ、オセルタミビル、ペンシクロビル、ペラミビル、プレコナリル、ポドフィロトキシン、プロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素阻害剤、リバビリン、リマンタジン、リトナビル、サクイナビル、スタブジン、テノホビル、テノホビルジソプロキシル、チプラナビル、トリフルリジン、トリジビル、トロマンタジン、ツルバダ、バラシクロビル、バルガンシクロビル、ビクリビロク、ビダラビン、ビラミジン、ザルシタビン、ザナミビル、およびジドブジンを含む。これらの活性薬剤の任意の適切な組み合わせもまた想定されている。
【０５４１】
「医薬品賦形剤」または「医薬的に許容可能な賦形剤」は担体であり、通常、その中で活性治療薬が製剤化される液体である。本発明の１つの実施形態では、活性治療薬は、本明細書に記載されるヒト化抗体、またはその１つ以上のフラグメントまたはその変異体である。賦形剤は化学的および／または生物学的安定性、ならびに放出特性を提供し得るが、通常、製剤にいずれの薬理学的活性も提供しない。典型的な製剤は、例えば、参照により組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ  Ｅｄ．，Ｇｒｅｎｎａｒｏ，Ａ．，Ｅｄ．，１９９５で見出すことができる。
【０５４２】
本明細書で使用される、「医薬的に許容される担体」または「賦形剤」は、生理学的適合性がある、ありとあらゆる溶剤、分散媒体、コーティング剤、抗菌および抗真菌薬、等張性および吸収遅延剤を含む。１つの実施形態では、担体は、非経口的投与に適している。あるいは担体は、静脈内、腹腔内、筋肉内、または舌下の投与に適し得る。医薬的に許容される担体は、医薬的に許容される担体には、無菌の水溶液剤または分散剤および無菌の注射可能な溶剤または分散剤の即時調製のための無菌散剤を含む。医薬活性物質へのこのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野でよく知られている。いずれの従来の媒体または薬剤も活性化合物と不適合であることを除いた限りにおいて、本発明の医薬組成物におけるその使用が想定されている。補充の活性化合物もまた、組成物に組み込むことができる。
【０５４３】
Ａｂ１を含む、癌の適応症のための本発明の抗体を静脈内投与するために使用され得る本発明の１つの実施形態では、投与製剤は、約１０．５ｍｇ／ｍＬの抗体、２５ｍＭのヒスチジン塩基、ｐＨ６にするために適量のリン酸、および２５０ｍＭのソルビトールを含む、またはあるいはから成る
【０５４４】
Ａｂ１を含む、癌の徴候のための本発明の抗体を静脈内投与するために使用され得る本発明の別の実施形態では、投与製剤は、約１０．５ｍｇ／ｍＬの抗体、１２．５ｍＭのヒスチジン塩基、１２．５ｍＭのヒスチジンＨＣｌ（または２５ｍＭのヒスチジン塩基およびｐＨ６にするために適量の塩酸）、２５０ｍＭのソルビトール、および０．０１５％（ｗ／ｗ）のポリソルベート８０を含む、またはあるいはから成る。
【０５４５】
本発明の別の実施形態では、本発明は、化学療法剤（好ましくはＥＧＦＲ阻害剤）および／または放射線との組み合わせた、特定の癌の治療のための本発明の抗ＩＬ−６抗体および抗体フラグメントの使用に関し、好ましくは、この組み合わせは、抗ＩＬ−６抗体または抗ＩＬ−６抗体フラグメントが、放射線または化学療法剤の作用に対する癌細胞の感受性を高めるような投薬レジメンを用いて投与される。好ましい実施形態において、これらの方法は、ヒト化Ａｂ１またはＡＬＤ５１８などの、本発明による抗ＩＬ−６抗体とＥＧＦＲ阻害剤とを用いた癌の治療を含むものとなる。この組み合わせを用いて治療され得る癌の非限定的な例としては、進行性および非進行性の、転移性の肺癌、乳癌、頭頸部癌（ＨＮＳＣＣ）、膵臓癌、結腸直腸癌、肛門癌、多形性膠芽腫、上皮癌、腎細胞癌、慢性骨髄性白血病、および他の白血病を含む。
【０５４６】
本発明による抗ＩＬ−６抗体または抗体フラグメントを用いる治療レジメンで投与され得るＥＧＦＲ阻害剤の例としては、ＩｍＣｌｏｎｅから入手可能なセツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（商標））、ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂから入手可能なエルロチニブ（タルセバ）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａから入手可能なゲフィチニブ（イレッサ）、Ｇｌａｘｏから入手可能なラパチニブ（タイケルブ）、Ａｍｇｅｎから入手可能なパニツムマブ（ベクチボックス）、Ｐｆｉｚｅｒにより市販されているスニチニブまたはスーテント（Ｎ−（２−ジエチルアミノエチル）−５−［（Ｚ）−（５−フルオロ−２−オキソ−１Ｈ−インドール−３−イリデン）メチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシアミド）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａにより市販されているゲフィチニブすなわちＮ−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−７−メトシキ−６−（３−モルフォリン−４−イルプロポキシ）キナゾリン−４−アミン、およびＧｅｎＭａｂにより臨床開発中のザルツムマブなどが挙げられるが、これらは例示にすぎない。
【０５４７】
化学療法剤と併用して投与される抗体の量は、約５〜１０００ｍｇの範囲であり得、より一般的には約２５〜５００ｍｇ、例えば５０、８０、１００、１５０、１６０、２００、２４０、２５０、３００、３２０、３５０、４００、４８０ｍｇの用量レジメンであり得る。抗体は、異なる手段、例えば静脈内投与または皮下投与により投与され得、ＥＧＦＲ阻害剤などの化学療法剤とともに（同一のまたは異なる投薬用組成物で）、または別々に投与され得る。
【０５４８】
好ましい実施形態では、処置対象の癌は肺癌であり、例えば、扁平上皮癌、大細胞癌または腺癌などの非小肺癌か、または小細胞癌（燕麦細胞癌）または結合された小細胞癌などの小細胞肺癌である。好ましい実施形態では、処置対象の肺癌は扁平上皮癌を含む。いくつかの形態では、これらの方法は、例えばエルロチニブ、スニチニブ、またはイマチニブなどの、ＥＧＦＲ阻害剤のような特定の化学療法剤に対して、おそらくはＥＧＦＲの変にの結果により抵抗性を示していた癌患者の治療のために用いられる。Ｙａｏら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡおよびＮｉｓｈｉｏｋａら，Ｌｅｕｋｅｍｉａ２３：２３０４−２３０８（２００９）に記載のように、いくつかの腫瘍や細胞株（白血病および肺癌など）の化学療法剤に対する抵抗性には、腫瘍を化学療法剤に対して抵抗性にし得るＩＬ−６の異常発現をもたらす炎症性応答を伴い得る。加えて、本発明の抗ＩＬ−６抗体およびフラグメントは、放射線治療前に、治療と同時に、または治療後に、本発明による抗ＩＬ−６抗体を投与することによって、放射線療法に対する抵抗性をもつようになった癌の治療に用いることができる。
【０５４９】
本発明の好ましい実施形態では、Ａｂ１を含む、関節リウマチの徴候のための本発明の抗体を静脈内投与するために使用され得る本発明の１つの実施形態では、投与製剤は、約５０または１００ｍｇ／ｍＬの抗体、約５ｍＭのヒスチジン塩基、最終ｐＨ６にするために約５ｍＭのヒスチジンＨＣｌ、２５０ｍＭのソルビトール、および０．０１５％（ｗ／ｗ）のポリソルベート８０を含む、またはあるいはから成る。Ａｂ１を含む、関節リウマチの適応症のための本発明の抗体を静脈内投与するために使用され得る本発明の別の実施形態では、投与製剤は、約２０または１００ｍｇ／ｍＬの抗体、約５ｍＭのヒスチジン塩基、最終ｐＨ６にするために約５ｍＭのヒスチジンＨＣｌ、２５０から２８０ｍＭのソルビトール（またはスクロースと組み合わせたソルビトール）、および０．０１５％（ｗ／ｗ）のポリソルベート８０、シッピングバイアル中に窒素ヘッドスペースを有する該製剤を含む、またはあるいはから成る。
【０５５０】
医薬組成物は、典型的には、製造および貯蔵の条件下で、無菌および安定でなくてはならない。本発明は、医薬組成物が凍結乾燥型で存在することを想定している。組成物は、溶剤、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高い薬物濃度に適した他の秩序構造として、製剤化することができる。担体は、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、およびそれらの適切な混合を含有する溶剤または分散媒体であることができる。本発明は、医薬組成物中で安定剤の包含をさらに想定している。
【０５５１】
多くの場合、組成物中に、例えば、糖類、マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウム等の多価アルコールの等張性薬剤を含むのが好ましいであろう。注射可能な組成物の長期吸収は、組成物中に、吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアレート塩およびゼラチンを含めることによってもたらすことができる。さらに、アルカリ性ポリペプチドは、例えば、持続放出ポリマーを含む組成物中の徐放製剤中で製剤化することができる。活性化合物は、移植片およびマイクロカプセル化運搬システムを含む、迅速放出から制御放出製剤等の化合物を保護するであろう担体とともに調製することができる。エチレン酢酸ビニール、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸およびポリ乳、ポリグリコールコポリマー（ＰＬＧ）等の生分解性、生体適合性ポリマーが使用することができる。そのような製剤の調製のための多くの方法が、当事者に知られている。
【０５５２】
列挙される実施形態のそれぞれのために、化合物は種々の剤形によって投与することができる。当業者に知られている任意の生物学的に許容可能な剤形およびそれらの組み合わせが想定されている。そのような剤形の例は、制限なく、再構成可能な散剤、エリキシル剤、液体、溶剤、懸濁液、乳剤、散剤、顆粒剤、粒子、微小粒子、分散性顆粒剤、カプセル、吸入剤、エアロゾル吸入剤、パッチ、粒子吸入剤、移植片、デポー移植片、注射剤（皮下、筋内、静脈内、および皮内を含む）、注入、およびそれらの組み合わせを含む。
【０５５３】
種々の例証された本発明の実施形態の上記説明は、網羅的であるように意図されておらず、または本発明を開示されたその通りの形態に限定するように意図されていない。本発明の具体的な実施形態および本発明のための実施例が、例証目的のために本明細書に記載されているが、種々の同等の修正は、当業者が認識するであろうように、本発明の範囲内で可能である。本発明の本明細書に提供される教示は、上述の実施例に加えて、他の目的に適用することができる。
【０５５４】
これらおよび他の変更を、上記の詳細説明を考慮に入れて、本発明に対して行うことができる。概して、以下の請求項では、使用される用語が、本発明を明細書および請求項で開示される具体的な実施形態に限定すると、解釈されるべきではない。したがって、本発明は本開示によって限定されず、その代わりに、本発明の範囲は以下の請求項によって完全に決定される。
【０５５５】
本発明は、前述の説明および実施例に具体的に示されるもの以外の方法で実行され得る。上記の教示を考慮に入れて、本発明の多数の修正および変更が、可能であり、したがって、それらは添付の請求項の範囲内である。
【０５５６】
抗原特異的Ｂ細胞のクローン集団を得るための方法に関連するある教示が、２００６年５月１９日に出願の米国仮特許出願第６０／８０１，４１２号に開示され、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０５５７】
ウサギ由来のモノクローナル抗体のヒト化および抗原結合親和性を維持するための好ましい配列修飾に関連するある教示が、２００８年５月２８日出願の代理人整理番号６７８５８．７０４００１の表題「新規ウサギ抗体ヒト化方法およびヒト化ウサギ抗体」に相当する、国際出願第１２／１２４，７２３号に開示され、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０５５８】
接合コンピテント酵母を用いた、抗体またはそのフラグメントを産生することに関連するある教示、および対応する方法が、２００６年５月８日出願の米国特許出願第１１／４２９，０５３号（米国特許出願公開第ＵＳ２００６／０２７００４５号）に開示され、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０５５９】
抗ＩＬ−６抗体、および接合コンピテント酵母を用いた、抗体またはそのフラグメントを産生するための方法に関連するある教示、および対応する方法が、２００７年５月２１日に出願の米国仮特許出願第６０／９２４，５５０号に開示され、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０５６０】
抗ＩＬ−６抗体、および特定の疾病および／または疾患に対処するためのこれらの抗体またはそのフラグメントを使用する方法に関連するある教示が、いずれも２００８年１１月２５日に出願の米国仮特許出願第６１／１１７，８３９号、同第６１／１１７，８６１号、および同第６１／１１７，８１１号に開示され、これらの開示は、それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０５６１】
ある抗ＩＬ−６抗体のポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、本特許出願に添付する配列表で開示され、該配列表の開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０５６２】
本明細書において引用される各文書（特許、特許出願、論文、要約、取扱説明書、本、または他の開示）の全開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０５６３】
以下の実施例は、本発明の作製方法および使用方法の完全な開示および説明を当業者に提供するために提示されるものであって、本発明として見なされるものの範囲を限定することを意図するものではない。使用される数字（例えば、量、温度、濃度等）に関して正確さを保証するために努力がなされたが、いくつかの実験誤差および偏差は、許容されるべきである。別途示されない限り、割合は、重量による割合であり、分子量は、平均分子量、温度は、摂氏度であり、圧力は、大気圧であるか、または近大気圧である。
【実施例】
【０５６４】
以下の実施例において、用語「Ａｂ１」とは、文脈上別の意味であることが示されている場合を除いて、配列番号７０２の軽鎖および配列番号７０４の重鎖を含む抗体を指す。
【０５６５】
［実施例１  濃縮された抗原特異的Ｂ細胞抗体培養物の産生］
従来の抗体宿主動物を免疫化して、目的の標的抗原への自然の免疫反応を利用することによって、抗体のパネルが得られる。典型的には、免疫化に使用する宿主は、ウサギであるか、または同様の成熟化過程を用いて抗体を産生して、匹敵する多様性、例えば、エピトープ多様性の抗体を産生する抗原特異的Ｂ細胞の集団をもたらす他の宿主である。初期の抗原免疫化は、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）を用いて実行することができ、後続の追加免疫は、不完全アジュバントで達成することができる。免疫化から約５０〜６０日後、好ましくは５５日目に、抗体力価を試験して、適切な力価を確証する場合、抗体選択（ＡＢＳ）過程を、開始する。ＡＢＳ開始の鍵となる２つの判定基準は、ポリクローナル血清における強力な抗原認識と機能修正活性である。
【０５６６】
陽性の抗体力価を確証した時点で、動物は、殺処分し、Ｂ細胞源を単離する。これらの供給源には、脾臓、リンパ節、骨髄、および末梢血単核球（ＰＢＭＣ）が含まれる。単一細胞懸濁液を生成し、この細胞懸濁液を洗浄して、それらを低温長期貯蔵に適合可能なものとする。次いで、この細胞を典型的には凍結させる。
【０５６７】
抗体同定過程を開始するために、凍結させた細胞懸濁液の小画分を解凍し、洗浄して、組織培養培地中に入れる。次いで、これらの懸濁液を、動物の免疫反応を発生させるために使用した抗原のビオチニル化形態と混合し、Ｍｉｌｔｅｎｙｉの電磁ビーズ細胞選択の方法を用いて、抗原特異的な細胞を回収する。ストレプトアビジンビーズを用いて、特異的な濃縮を実行する。濃縮された集団を回収して、特異的Ｂ細胞単離の次段階へ進める。
【０５６８】
［実施例２  クローンの抗原特異的Ｂ細胞含有培養物の産生］
次いで、実施例１に従って産生した濃縮Ｂ細胞は、９６ウェルマイクロタイタープレートにおいて、１ウェル当たりの様々な細胞密度でプレート培養する。通常、これは、１群当たり１０個のプレートを用いて、１ウェル当たり５０、１００、２５０、または５００個の細胞である。この培地に、４％の活性化ウサギＴ細胞条件付け培地を５０Ｋ凍結照射ＥＬ４Ｂフィーダー細胞とともに補充する。これらの培養物を５〜７日間静置して、その時点で、上清を含有する分泌された抗体を採取して、別のアッセイ設定において標的特性を評価する。残りの上清は無傷なままとして、プレートを−７０℃で凍結させる。これらの条件の下で、培養過程は、典型的には、抗原特異的Ｂ細胞のクローン集団を含む、混合した細胞集団を含有するウェルをもたらす、即ち、単一のウェルは、所望の抗原に特異的な単一のモノクローナル抗体のみを含有する。
【０５６９】
［実施例３  所望の特異性および／または機能特性のモノクローナル抗体についての抗体上清のスクリーニング］
実施例２に従って産生されたクローン抗原特異的Ｂ細胞集団を含有するウェルに由来する抗体含有上清を、最初に、ＥＬＩＳＡ法を用いて抗原認識をスクリーニングする。これには、選択的な抗原固定化（例えば、ストレプタビジンコート化プレートによるビオチニル化抗原の捕捉）、非特異的な抗原のプレートコーティング、またあるいは、抗原組立戦略を介すること（例えば、選択的な抗原捕捉に続いて、結合パートナーを付加し、ヘテロマーのタンパク質−抗原複合体を産生すること）が含まれる。次いで、抗原陽性のウェルの上清を、リガンドに厳密に依存する機能修飾アッセイにおいて、任意に、試験する。１つのかかる例は、抗原リガンドの組換え受容体タンパク質との天然の相互作用を再現する体外のタンパク質−タンパク質相互作用アッセイである。代替として、リガンド依存型であり、容易にモニタリングされる細胞ベースの応答（例えば、増殖応答）を利用する。有意な抗原認識および力価を示す上清を陽性ウェルとみなす。次いで、元の陽性ウェルに由来する細胞を抗体回収段階へ移す。
【０５７０】
［実施例４  所望の抗原特異性のある単一の抗体産生Ｂ細胞の回収］
単一の抗体配列を分泌する、抗原特異的Ｂ細胞のクローン集団（実施例２または３に従って産生された）を含有するウェルより細胞を単離する。次いで、この単離した細胞をアッセイして、単一の抗体分泌細胞を単離する。Ｄｙｎａｌストレプタビジンビーズを緩衝培地下にビオチニル化標的抗原でコートして、細胞の生存能力と適合する抗原含有マイクロビーズを調製する。次に、抗原負荷ビーズ、陽性ウェルからの抗体産生細胞、およびフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）標識化した抗宿主Ｈ＆ＬＩｇＧ抗体（注記したように、宿主は、いかなる哺乳動物の宿主（例、ウサギ、マウス、ラット等）であり得る）を３７℃で一緒にインキュベートする。次いで、この混合物を、各アリコートが平均して単一の抗体産生Ｂ細胞を有するように、スライドガラス上へアリコートで再ピペッティングする。次いで、蛍光顕微鏡により、抗原特異的な抗体分泌細胞を検出する。分泌された抗体は、結合した抗原により隣接ビーズ上へ局所的に濃縮されて、強力な蛍光シグナルに基づいた局在化情報を提供する。分泌細胞の隣に形成される抗体−抗原複合体のＦＩＴＣ検出により、抗体分泌細胞を同定する。次いで、この複合体の中心に見出される単一細胞を、マイクロマニピュレーターを用いて回収する。この細胞は、抗体配列の回収を始めるまで、−８０℃での保存のためにエッペンドルフＰＣＲ管において瞬間凍結させる。
【０５７１】
［実施例５  抗原特異的Ｂ細胞からの抗体配列の単離］
実施例４に従って産生された単一の単離Ｂ細胞、または実施例２に従って得られたクローンＢ細胞集団から単離される抗原特異的Ｂ細胞より、組み合わせたＲＴ−ＰＣＲベースの方法を用いて、抗体配列を回収する。プライマーを、ウサギ免疫グロブリン配列等の標的免疫グロブリン遺伝子（重鎖および軽鎖）の保存され、かつ定常的な領域においてアニールするように設計して、２工程のネストＰＣＲ回収工程を使用して抗体配列を得る。各ウェルからのアンプリコンを、回収とサイズ完全性について分析する。次いで、結果として生じるフラグメントをＡｌｕＩで消化して、配列クローン性のフィンガープリントを取る。同一の配列は、それらの電気泳動分析において、共通したフラグメンテーションパターンを示す。重要にも、細胞クローン性を証明するこの共通のフラグメンテーションパターンは、一般に、初めに１０００細胞／ウェルまでプレート培養したウェルにおいても観察される。次いで、元の重鎖および軽鎖アンプリコンフラグメントを、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＸｈｏＩまたはＨｉｎｄＩＩＩおよびＢｓｉｗＩで制限酵素消化して、クローニング用ＤＮＡのそれぞれの切片を調製する。次いで、結果として生じる消化物を発現ベクター中へライゲートして、プラスミドの増殖および産生用のために細菌へ形質転換させる。配列の特徴付けのためにコロニーを選択する。
【０５７２】
［実施例６  所望の抗原特異性および／または機能特性のモノクローナル抗体の組換え産生］
単一のモノクローナル抗体を含有する各ウェルについて正確な完全長の抗体配列を確立して、Ｑｉａｇｅｎ固相法の方法を用いてミニプレプＤＮＡを調製する。次いで、ＤＮＡを使用して哺乳動物細胞を形質移入して、組換え完全長抗体を産生する。抗原認識と機能特性について粗抗体産物を試験して、元の特徴がこの組換え抗体タンパク質に見出されることを確認する。適宜、大規模な一過性の哺乳動物トランスフェクションを完了して、タンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーにより抗体を精製する。標準法（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標））を用いてＫｄを評価するとともに、力価アッセイにおいてＩＣ５０を評価する。
【０５７３】
［実施例７  ヒトＩＬ−６に結合する抗体の調製］
本明細書に記載される抗体選択プロトコルを使用することによって、広範な抗体のパネルを産生することができる。この抗体は、ＩＬ−６に対する高親和性（１桁〜２桁のｐＭ  Ｋｄ）を有し、多重細胞ベースのスクリーニングシステム（Ｔ１１６５およびＨｅｐＧ２）において、ＩＬ−６の強力な拮抗作用を示す。さらに、抗体の回収は、ＩＬ−６誘導過程に関して拮抗作用の別々の様式を示す。
【０５７４】
免疫化戦略
ｈｕＩＬ−６（Ｒ＆Ｒ）でウサギを免疫化した。免疫化は、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）（Ｓｉｇｍａ）中の１００μｇの第１の皮下（ｓｃ）注射に続いて、各回５０μｇの２週間の間を空けた、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）（Ｓｉｇｍａ）中の２回の追加免疫から構成された。５５日目に動物を採血し、ＥＬＩＳＡ（抗原認識）およびＴ１１６５細胞株を用いた非放射性増殖アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）により、血清力価を決定した。
【０５７５】
抗体選択力価の評価
Ｉｍｍｕｌｏｎ４プレート（Ｔｈｅｒｍｏ）を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、Ｈｙｃｌｏｎ社）中の１μｇ／ｍＬのｈｕＩＬ−６（５０μＬ／ウェル）で、一晩４℃でコーティングすることにより、抗原認識を決定した。アッセイ当日に、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ錠剤、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）でプレートを３回洗浄した。ＰＢＳ中の０．５％の魚皮ゼラチン（ＦＳＧ、Ｓｉｇｍａ）の２００μＬ／ウェルを用いて、プレートを３７℃で３０分間ブロックした。ブロッキング溶液を除去し、プレートをブロットした。血清サンプル（採血後および採血前）は、初期希釈率１：１００で作製（すべての希釈液はＦＳＧ５０μＬ／ウェルで作製）し、続いて、プレートに渡って希釈率が１：１０になるようにした（カラム１２はバックグラウンド対照のために空にした）。プレートを３７℃で３０分間インキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した。１：５０００に希釈したヤギ抗ウサギＦＣ−ＨＲＰ（Ｐｉｅｒｃｅ）を全ウェルに添加し（５０μＬ／ウェル）、プレートを３７℃で３０分間インキュベートした。プレートを上述したように洗浄した。５０μＬ／ウェルのＴＭＢ−Ｓｔａｂｌｅ  ｓｔｏｐ（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）をプレートに添加し、通常３〜５分間発色させた。現像反応を５０μＬ／ウェルの０．５Ｍ  ＨＣｌで停止させた。プレートは４５０ｎｍで読み取った。光学密度（ＯＤ）対希釈率をＧｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｚｍソフトウェアを用いてプロットし、力価を決定した。
【０５７６】
機能力価の評価
サンプルの機能活性を、Ｔ１１６５増殖アッセイによって決定した。ＨＥＰＥＳ、ピルビン酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、Ｌ−グルタミン酸、高グルコース、ペニシリン／ストレプトマイシン、１０％の加熱不活性化ＦＢＳ（全てＨｙｃｌｏｎｅより調達）、２−メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ）、および１０ｎｇ／ｍＬのヒトＩＬ−６（Ｒ＆Ｄ）を添加した改変ＲＰＭＩ培地（Ｈｙｃｌｏｎｅ）中で、規定通りに、Ｔ１１６５細胞を維持した。アッセイ当日に、トリパンブルー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）によって細胞の生存率を決定し、細胞を２０，０００細胞／ウェルの一定密度で播種した。播種する前に、細胞を、（１３０００ｒｐｍ／５分で遠心分離機にかけて上清を廃棄することにより）ヒトＩＬ−６を含まない、上述の培地で２回洗浄した。最後の洗浄後、５０μＬ／ウェルに相当する体積で、洗浄に使用したのと同じ培地に、細胞を再懸濁した。細胞は室温で放置した。
【０５７７】
丸底の９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）に、血清サンプルを３０μＬ／ウェルで、１：１００から始めて、プレートに渡って（２〜１０列まで）希釈率が１：１０になるように添加し、これを５回繰り返した（Ｂ〜Ｆ行：ヒトＩＬ−６を含まない上述の培地で作製されて希釈）。１１列は、ＩＬ−６対照のために培地のみとした。３０μＬ／ウェルのヒトＩＬ−６を、最終ＥＣ５０（以前に決定した濃度）の４倍濃度で全ウェルに添加した（ヒトＩＬ−６は上述した培地中で希釈した）。ウェルを３７℃で１時間インキュベートして、抗体結合を発生させた。１時間後、丸底プレートに既定されたプレートマップフォーマットに従って、５０μＬ／ウェルの抗体−抗原（Ａｂ−Ａｇ）複合体を平底の９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）に移した。バックグラウンド対照のために、５０μＬ／ウェルの培地をＧ行の全ウェルに添加した（２〜１１列）。とっておいた５０μＬ／ウェルの細胞懸濁液を全ウェルに添加した（２〜１１列、Ｂ〜Ｇ行）。試験ウェルの蒸発を防ぐため、およびエッジ効果を最小限に抑えるために、１および１２列ならびにＡおよびＨ行に２００μＬ／ウェルの培地を添加した。プレートを３７℃、４％ＣＯ２で７２時間インキュベートした。７２時間後、２０μＬ／ウェルのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（Ｐｒｏｍｅｇａ）試薬を、製造者のプロトコルに従って全ての試験ウェルに添加し、プレートを３７℃で２時間インキュベートした。２時間後、プレートをオービタルシェーカー（ｏｒｂｉｔａｌ  ｓｈａｋｅｒ）で穏やかに混合して細胞を分散させ、試験ウェル内で均一化させた。プレートは４９０ｎｍの波長で読み取った。光学密度（ＯＤ）対希釈率をＧｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｚｍソフトウェアを用いてプロットし、機能力価を決定した。陽性アッセイ対照プレートを、ＭＡＢ２０６１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、開始濃度の１μｇ／ｍＬ（最終濃度）に続いて、プレートに渡って希釈率が１：３で、上述のように実行した。
【０５７８】
組織採取
許容できる力価が確立されてから、ウサギを殺処分した。脾臓、リンパ節、および全血を採取し、以下の通りに処理した。
【０５７９】
脾臓およびリンパ節を、組織を分離して、２０ｃｃシリンジのプランジャーを用いて７０μｍの滅菌ワイヤーメッシュ（Ｆｉｓｈｅｒ）を通過させることで、単一細胞懸濁液に処理した。ヒトＩＬ−６は含まないが低グルコースを含む、上述の改変ＲＰＭＩ培地で、細胞を収集した。遠心分離することで細胞を２回洗浄した。最後の洗浄後、トリパンブルーによって細胞密度を決定した。細胞を１５００ｒｐｍで１０分間遠心分離機にかけて、上清を廃棄した。ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）中の適量の１０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Ｓｉｇｍａ）に細胞を再懸濁して、１ｍＬ／バイアルで分注した。次いで、長期間貯蔵のために液体窒素（ＬＮ２）タンクに収納する前に、バイアルを−７０℃で２４時間保存した。
【０５８０】
ＦＢＳを含まない、等量の上記の低グルコース培地に全血を混合することにより、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離した。４５ｍＬの円錐管（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に入った、８ｍＬのＬｙｍｐｈｏｌｙｔｅ  Ｒａｂｂｉｔ（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ）の上に、３５ｍＬの全血混合液を注意深く載せ、室温で３０分間２５００ｒｐｍで、休まず遠心分離した。遠心分離した後、ガラス製パスツールピペット（ＶＷＲ）を用いてＰＢＭＣ層を慎重に除去し、無菌５０ｍＬバイアルに注いだ。室温で１０分間、１５００ｒｐｍで遠心分離することにより上記の改変培地で細胞を２回洗浄し、トリパンブルー染色によって細胞密度を決定した。最後の洗浄後、適量の１０％ＤＭＳＯ／ＦＢＳ培地に細胞を再懸濁させ、上記のように凍結させた。
【０５８１】
Ｂ細胞の培養
Ｂ細胞の培養を開始する当日に、ＰＢＭＣ、脾細胞、またはリンパ節のバイアルを使用するために解凍した。ＬＮ２タンクからバイアルを取り出し、解凍するまで３７℃の水浴中に入れた。１５ｍＬの円錐形の遠心分離管（Ｃｏｒｎｉｎｇ社）に、バイアルの内容物を移し、１０ｍＬの上記の改変ＲＰＭＩを徐々に管に添加した。細胞を１．５Ｋｒｐｍで５分間遠心分離して、上清を廃棄した。細胞を１０ｍＬの新しい培地に再懸濁した。トリパンブルーによって、細胞密度および生存率を決定した。細胞を再度洗浄し、１Ｅ０７細胞／８０μＬ培地で再懸濁した。ビオチン化ヒトＩＬ−６（ＢヒトＩＬ−６）を、３ｕｇ／ｍＬの最終濃度で細胞懸濁液に添加し、４℃で３０分間インキュベートした。非結合ＢヒトＩＬ−６は、１０ｍＬのリン酸緩衝フッ化物（ＰＢＦ）：Ｃａ／ＭｇフリーＰＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、２ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、０．５％ウシ血清中アルブミン（ＢＳＡ）（Ｓｉｇｍａ−ビオチンフリー）で２回洗浄して、除去した。２回目の洗浄後、１Ｅ０７細胞／８０μＬのＰＢＦで細胞を再懸濁した。２０μＬのＭＡＣＳ（登録商標）ストレプトアビジンビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｉ）／１０Ｅ７細胞を、細胞懸濁液に添加した。細胞を４℃で１５分間インキュベートした。２ｍＬのＰＢＦ／１０Ｅ７細胞で、細胞を１度洗浄した。洗浄後、細胞を１Ｅ０８細胞／５００μＬのＰＢＦで再懸濁し、別にとっておいた。ＭＡＣＳ（登録商標）ＭＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｉ）を、磁気スタンド（Ｍｉｌｔｅｎｉ）上で５００ｍＬのＰＢＦで事前にすすいだ。プレフィルタを通して細胞懸濁液をカラムにかけ、非結合画分を収集した。１．５ｍＬのＰＢＦ緩衝液で、カラムを洗浄した。磁気スタンドからカラムを除去し、きれいに滅菌した５ｍＬのポリプロピレンのファルコンチューブに移した。１ｍＬのＰＢＦ緩衝液をカラムの頂部に添加し、陽性の選択した細胞を収集した。陽性および陰性の細胞画分の収率および生存率は、トリパンブルー染色によって決定した。陽性選択により、平均１％の初期細胞濃度が得られた。
【０５８２】
培養物の播種レベルに関する情報を提供するために、試験的な細胞スクリーニングを確立した。３つの１０プレート群（合計３０プレート）を、５０、１００、および２００個の濃縮Ｂ細胞／ウェルで播種した。加えて、各ウェルは、最終体積２５０μｌ／ウェルの高グルコース改変ＲＰＭＩ培地中に、５０Ｋ個の細胞／ウェルの照射ＥＬ−４．Ｂ５細胞（５，０００ラド）および適切なレベルのＴ細胞上清（調製に依存して１〜５％の範囲）を含んでいた。培養物を、３７℃、４％ＣＯ２で５〜７日間インキュベートした。
【０５８３】
選択的抗体分泌Ｂ細胞の同定
５日目と７日目の間に、培養物を抗原認識および機能活性について検査した。
【０５８４】
抗原認識スクリーニング
使用したＥＬＩＳＡフォーマットは、抗体源としてＢ細胞培養物（ＢＣＣ）ウェル（全３０プレート）からの５０μＬの上清を用いたことを除いて上記の通りである。馴化培地を、抗原でコーティングしたプレートに移した。陽性ウェルを同定した後、上清を除去して９６ウェルのマスタープレートに移した。次いで、元の培養プレートは、４０μＬ／ウェルを除く全ての上清を除去して、６０μＬ／ウェルのＦＢＳ中の１６％  ＤＭＳＯに加えることにより、凍結した。凍結を遅らせるためにプレートをペーパータオルで包んでから−７０℃の温度下においた。
【０５８５】
機能活性スクリーニング
次いで、前述したように、Ｔ１１６５増殖アッセイにおいてマスタープレートを機能活性についてスクリーニングしたが、Ｂ行はバックグラウンド対照のために媒体のみ、Ｃ行は陽性増殖対照のために媒体＋ＩＬ−６、Ｄ〜Ｇ行および２〜１１列はＢＣＣからのウェル（５０μＬ／ウェル、単一点）であった。培地の行を除く全ウェルに、４０μＬのＩＬ−６をアッセイのために決定したＥＣ５０濃度の２．５倍で添加した。１時間インキュベートした後、Ａｂ／Ａｇ複合体を、組織培養物（ＴＣ）で処理した９６ウェル平底プレートに移した。ヒトＩＬ−６を含まない（２０，０００細胞／ウェルのＴ１１６５）改変ＲＰＭＩ培地中の２０μＬの細胞懸濁液を、全ウェルに添加した（１ウェル当たりの最終体積は１００μＬ）。バックグラウンドを差し引いて、観察されたＯＤ値を阻害率（％）に変換した。
【０５８６】
Ｂ細胞の回収
対象となるウェルを含むプレートを、−７０℃から取り出して、各ウェルの細胞を５〜２００μＬの培地／ウェルの洗浄で回収した。洗浄液を１．５ｍＬの滅菌した遠心分離管に入れ、２分間１５００ｒｐｍで遠心分離して細胞をペレット状にした。
【０５８７】
管を反転させて回転を繰り返し、上清を慎重に除去した。細胞を１００μＬ／管の培地に再懸濁した。１００μＬのビオチン化ＩＬ−６でコーティングしたストレプトアビジンＭ２８０ダイナビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と、培地中に１：１００で希釈した、１６μＬのヤギ抗ウサギＨ＆Ｌ  ＩｇＧ−ＦＩＴＣを細胞懸濁液に添加した。
【０５８８】
２０μＬの細胞／ビーズ／ＦＩＴＣ懸濁液を除去して、シグマコート（Ｓｉｇｍａ）で事前に処理したスライドガラス（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に、３５〜４０液滴／スライドで、５μＬの液滴を調製した。パラフィン油の不浸透性バリア（ＪＴ  Ｂａｋｅｒ）を、液滴を浸漬するために添加し、このスライドを３７℃、４％ＣＯ２で９０分間暗所でインキュベートした。
【０５８９】
抗体を産生する特異的Ｂ細胞は、抗体の分泌、ビーズに関連するビオチン化抗原の認識、およびそれに続く蛍光‐ＩｇＧ検出試薬を用いた検出により、それらの周囲を蛍光のリングによって同定することができる。対象となる細胞が同定されてから、蛍光リングの中心にある細胞を、マイクロマニピュレーター（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ）を用いて回収した。抗体を合成して運搬する単一の細胞を、２５０μＬの微量遠心管に移してドライアイス中に置いた。対象となる細胞を全て回収した後で、これらを長期間貯蔵のために−７０℃の温度下に置いた。
【０５９０】
［実施例８  酵母細胞発現］
抗体遺伝子：キメラのヒト化ウサギモノクローナル抗体の合成を導いた、遺伝子をクローン化し、構築した。
【０５９１】
発現ベクター：該ベクターは、以下の機能的な成分を含有する。１）細菌である大腸菌の細胞内のプラスミドベクターの複製を促進する、突然変異体ＣｏｌＥ１の複製起点、２）抗生物質Ｚｅｏｃｉｎ（商標）（フレオマイシン）への耐性を与え、大腸菌およびメタノール資化酵母の両方の形質転換に対して選択可能なマーカーとしての機能を果たす、細菌のＳｈ  ｂｌｅ遺伝子、３）グリセルアルデヒドデヒドロゲナーゼ遺伝子（ＧＡＰ遺伝子）プロモーターからなり、出芽酵母アルファ接合因子プレプロ分泌リーダー配列をコードする配列に融合し、続いて、メタノール資化酵母  アルコールオキシダーゼＩ遺伝子（ＡＯＸ１）からのピチアパストリス転写終結シグナルをコードする配列が続く、発現カセット。Ｚｅｏｃｉｎ（商標）（フレオマイシン）耐性マーカー遺伝子は、高レベルのＺｅｏｃｉｎ（商標）（フレオマイシン）に耐性を示す、形質転換体に対して選択することによって、株内にある発現ベクターの複数の統合された複製物を含有する株に対する濃縮する手段を提供する。
【０５９２】
ピチアパストリス：ピチアパストリス株  ｍｅｔ１、ｌｙｓ３、ｕｒａ３、およびａｄｅ１が、使用され得る。栄養要求性株のうちのいずれか２つの相補的セットは、２倍体株の構築および維持のために使用され得、これらの２つの株は、特に、２つの理由でこの方法に適している。第１に、それらは、それらの接合または融合の結果として、２倍体株よりも緩やかに増殖する。したがって、少数の半数体ａｄｅ１またはｕｒａ３細胞が、培養物に存在したままであるか、または減数分裂または他の機序によって生じる場合、２倍体株は、培養物中でそれらよりも多く増殖するはずである。
【０５９３】
第２は、それらの接合から生じる２倍体Ａｄｅ＋コロニーが、正常な白色またはクリーム色である一方、半数体ａｄｅ１変異体であるいずれの株の細胞も、明らかに異なるピンク色であるため、これらの株の有性状態を容易にモニタリングすることである。加えて、半数体ｕｒａ３変異体であるいかなる株も、薬物５−フルオロオロト酸（ＦＯＡ）に対して耐性を示し、ＦＯＡを伴う最小培地＋ウラシルのプレート上に培養物のサンプルをプレート培養することによって高感度に同定することができる。これらのプレート上で、ウラシル要求性ｕｒａ３変異体（恐らく、半数体）株のみが、増殖し、コロニーを形成することができる。したがって、ａｄｅ１およびｕｒａ３で標識した半数体の親株を用いて、結果として生じる抗体産生する２倍体株（半数体対２倍体）の有性状態を容易にモニタリングすることができる。
【０５９４】
方法
軽鎖および重鎖抗体遺伝子の転写用ｐＧＡＰＺ−アルファ発現ベクター群の作成。ヒト化軽鎖および重鎖フラグメントを、ＰＣＲによる過程を通してｐＧＡＰＺ発現ベクターにクローン化した。回収したヒト化構築物は、標準ＫＯＤポリメラーゼ（Ｎｏｖａｇｅｎ）キット条件下（（１）９４℃、２分、（２）９４℃、３０秒（３）５５℃、３０秒、（４）７２℃、ステップ２〜４を通して、３５回、３０秒サイクル、（５）７２℃、２分）で、増幅に供し、以下のプライマーを採用する：（１）軽鎖の順方向
0005934652.tif 000011
（ＡｆｅＩ部位は、一重線）。ＨＳＡシグナル配列の末端は、二重線、続いて、成熟可変軽鎖の配列（下線なし）、逆方向
0005934652.tif 000012
である。
【０５９５】
可変軽鎖逆方向プライマー。ＢｓｉＷＩ部位は、下線が引かれており、続いて、可変軽鎖の３’末端の逆相補配列である。制限酵素が、ＡｆｅＩおよびＢｓｉＷＩで消化すると、これにより、輸出のためのヒトκ軽鎖定常領域とインフレームのヒトＨＡＳリーダー配列を用いて、ｐＧＡＰＺベクターとインフレームでの挿入を可能にする。（２）同様の戦略が、重鎖に対して実行される。採用した順方向プライマーは、
0005934652.tif 000013
である。ＡｆｅＩ部位は、一重線である。ＨＳＡシグナル配列の末端は、二重線であり、続いて、成熟可変重鎖の配列（下線なし）である。逆方法重鎖プライマーは、
0005934652.tif 000014
である。ＸｈｏＩ部位は、下線が引かれており、続いて、可変重鎖の３’末端の逆相補配列である。これにより、匹敵する方向性クローニング（ｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌ  ｃｌｏｎｉｎｇ）戦略を用いて、ｐＧＡＰＺ内に以前挿入されたＩｇＧ−γ１  ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３領域とインフレームの重鎖のクローニングを可能にする。
【０５９６】
ピチアパストリスの半数体ａｄｅ１、ｕｒａ３、ｍｅｔ１、およびｌｙｓ３宿主株への発現ベクターの形質転換。半数体のピチアパストリス株の形質転換およびピチアパストリスの性周期の遺伝子操作に使用される全ての方法は、Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｄ．Ｒ．，およびＣｒｅｇｇ，Ｊ．Ｍ．，Ｅｄｓ．１９９８．Ｐｉｃｈｉａ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪに記載される通りである。
【０５９７】
形質転換する前に、それぞれの発現ベクターは、ピチアパストリスゲノムのＧＡＰプロモーター遺伝子座へのベクターの組込みを導くために、ＡｖｒＩＩでＧＡＰプロモーター配列内で線状化される。次いで、それぞれのベクターのサンプルを、個々に、エレクトロポレーションによってａｄｅ１、ｕｒａ３、ｍｅｔ１およびｌｙｓ３株をエレクトロポレーション用の培養物に形質転換し、良好な形質転換体は、この抗生物質に対するそれらの耐性によってＹＰＤ  Ｚｅｏｃｉｎ（商標）（フレオマイシン）プレート上に選択する。結果として生じるコロニーを、選択し、ＹＰＤ  Ｚｅｏｃｉｎ（商標）（フレオマイシン）プレート上に単一コロニーに対して画線培養し、次いで、適切な抗体遺伝子挿入のために各株から抽出したゲノムＤＮＡにつきＰＣＲアッセイ法によって該抗体遺伝子挿入の存在、および／または各株の抗体鎖を合成する能力についてはコロニーリフト法／免疫ブロット法によって試験を行う（Ｗｕｎｇら  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２１  ８０８−８１２（１９９６）。３種の重鎖構成物の１つを発現する半数体ａｄｅ１、ｍｅｔ１、およびｌｙｓ３株を、２倍体作成用に軽鎖遺伝子を発現する半数体ｕｒａ３株と共に回収する。重鎖遺伝子を発現する半数体を適切な軽鎖半数体ｕｒａ３と接合させて２倍体分泌タンパク質を産生する。
【０５９８】
単一抗体鎖を合成する半数体株の接合、および四量体機能的抗体を合成する２倍体誘導体の選択。ピチアパストリスの半数体株を接合するために、交雑させる各ａｄｅ１（またはｍｅｔ１またはｌｙｓ３）重鎖産生菌株を、富ＹＰＤプレートに横断的に画線をし、該ｕｒａ３軽鎖産生株は、２枚目のＹＰＤプレートで横断的に画線をした（１プレート当たり約１０線）。３０℃で１日または２日インキュベートした後、重鎖株を含有する１つのプレートおよびｕｒａ３軽鎖株を含有する１つのプレートから細胞を、レプリカ平板ブロック上の滅菌ベルベット布に斜交平行模様で移して、各重鎖株が各軽鎖株と混合する細胞の斑を含有するようにする。次いで、該交差‐画線レプリカプレートした細胞を、接合プレートに移し、２５℃でインキュベートして株間の接合の開始を刺激する。２日後、接合プレート上の細胞を、再びレプリカプレートしたブロック上の滅菌ベルベットに移し、次いで、最小培地プレートに移す。これらのプレートを、３０℃で３日間インキュベートし、原栄養２倍体株のコロニーの選択的増殖を可能にさせる。生じたコロニーを採取し、第２の最小培地プレート上に画線して単一コロニーを単離し、各２倍体株を精製する。次いで、結果として生じる２倍体細胞株を、抗体産生に関して検査する。
【０５９９】
推定上の２倍体株は、それらが２倍体で抗体産生用の両方の発現ベクターを含有することを示すための試験を行う。２倍性について、株のサンプルを接合プレート上に広げて減数分裂を行い、胞子を形成するように刺激する。半数体の胞子生成物を収集し、表現型につき試験を行う。結果として生じる胞子生成物の多くの割合が、一種または二種の栄養要求性である場合、原株は２倍体であったに違いないと結論付けることができる。２倍体株は、各々からゲノムＤＮＡを抽出し、このＤＮＡを各遺伝子に特異的なＰＣＲ反応において使用することによって両方の抗体遺伝子の存在について検査する。
【０６００】
単一抗体鎖を合成する半数体株の融合、および四量体機能的抗体を合成する２倍体誘導体の選択。上記の接合手順に代わるものとして、半数体ａｄｅ１およびｕｒａ３株を産生する単一鎖抗体の個々の培養物を、スフェロプラスト化し、それらの結果として生じるスフェロプラストを、ポリエチレングリコール／ＣａＣｌ２を用いて融合させる。次いで、融合した半数体株を、１Ｍソルビトールおよび最小培地を含有する寒天に埋め込み、２倍体株にそれらの細胞壁を再生させ、目に見えるコロニーに増殖させる。結果として生じるコロニーを、寒天から採取して、最小培地プレート上に画線し、該プレートを、３０℃で２日間インキュベートして２倍体細胞株の単一細胞を生じさせる。次いで、結果として生じる推定上の２倍体細胞株は、上記したように２倍性および抗体産生について検査する。
【０６０１】
抗体の精製およびアッセイ。上記の方法を用いた、ｍｅｔ１軽鎖およびｌｙｓ３重鎖の接合により、全長抗体の産生用の２倍体株を生じる。２倍体のピチアパストリス発現株の振とうフラスコまたは発酵槽培養からの培養培地を回収し、ＳＤＳ‐ＰＡＧＥ、およびヒトＩｇＧの重鎖や軽鎖、または具体的には、ＩｇＧの重鎖に対して向けられる抗体を用いた免疫ブロット法により、抗体タンパク質の存在について検査する。
【０６０２】
酵母を分泌する抗体を精製するために、抗体産生培養物から浄化した培地は、タンパク質Ａカラムを通過させ、２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０、結合緩衝液で洗浄した後、タンパク質Ａ結合タンパク質を０．１ＭグリシンＨＣｌ緩衝液、ｐＨ３．０を用いて溶出する。最も多くのタンパク質を含有する画分を、クマシーブルー染色したＳＤＳ‐ＰＡＧＥによって検査し、抗体タンパク質については免疫ブロッティング法で検査する。抗体は、ＩＬ−６認識に対して、上記のＥＬＩＳＡを用いて特徴付けられる。
【０６０３】
抗体活性についてのアッセイ。組み換え酵母由来ヒト化抗体は、上記のＩＬ−６誘導Ｔ１１６５細胞増殖アッセイおよびＩＬ−６刺激ＨｅｐＧ２ハプトグロビンアッセイを通して機能的活性について評価する。
【０６０４】
［実施例９  抗ＩＬ−６抗体Ａｂ１の静脈内投与による急性期応答の中和］
ヒトＩＬ−６は、ラットにおいて、急性期応答を誘発することができ、ラットにおいて刺激される主要の急性期タンパク質の１つは、α（アルファ）−２マクログロブリン（Ａ２Ｍ）である。研究は、抗体Ａｂ１の異なる投与量（０．０３、０．１、０．３、１、および３ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与してから１時間後に与えられた１００μｇのヒトＩＬ−６の単回皮下注射に対してＡ２Ｍ応答をなくすために必要とされる抗体Ａｂ１の投与量（ｎ＝１０匹のラット／用量レベル）、または対照としてポリクローナルヒトＩｇＧ１（ｎ＝１０匹のラット）を評価するために設計された。血漿を回収し、Ａ２Ｍを、市販のサンドイッチＥＬＩＳＡキット（ＩＣＬ  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗｂｅｒｇまたは、カタログ番号−Ｅ−２５Ａ２Ｍ）を介して定量化した。エンドポイントは、２４時間の時点（Ａｂ１後）でのＡ２Ｍの血漿濃度の差異であった。結果を図４に示す。
【０６０５】
抗体Ａｂ１のＩＤ５０は０．１ｍｇ／ｋｇであり、０．３ｍｇ／ｋｇで、Ａ２Ｍ応答を完全抑制した。これにより、ヒトＩＬ−６の生体内の中和が、抗体Ａｂ１によって達成することができることを確証する。
【０６０６】
［実施例１０  ＲＸＦ３９３悪液質モデル研究１］
序
ヒト腎細胞癌細胞株のＲＸＦ３９３は、無胸腺ヌードマウスに移植された場合、著しい体重減少を引き起こす。体重減少は、全ての動物の８０％で、移植から約１５日で始まり、移植から１８〜２０日後で、それらの全体重のうちの少なくとも３０％体重減少する。ＲＸＦ３９３は、ヒトＩＬ−６を分泌し、これらの動物において、ヒトＩＬ−６の血漿濃度は、約１０ｎｇ／ｍＬで非常に高い。ヒトＩＬ−６は、マウス可溶性ＩＬ−６受容体に結合し、マウスにおいてＩＬ−６応答を活性化することができる。ヒトＩＬ−６は、マウスで、ＩＬ−６応答の活性化において、マウスＩＬ−６よりも約１０倍低い。この研究の目的は、ヒト腎細胞癌細胞株のＲＸＦ３９３を移植した無胸腺ヌードマウスにおいて、生存率、体重、血清アミロイドＡタンパク質、血液学パラメータ、および腫瘍成長における、抗体Ａｂ１の効果を決定することである。
【０６０７】
方法
８０匹の、６週齢の雄の無胸腺ヌードマウスは、右腹部の皮下にＲＸＦ３９３腫瘍フラグメント（３０〜４０ｍｇ）を埋め込んだ。次いで、動物は、１０匹のマウスの８つの群に分割された。３つの群は、移植から１日目、８日目、１５日目、および２２日目に、週１回、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または３０ｍｇ／ｋｇのいずれかで、抗体Ａｂ１を静脈内投与した（進行群）。別の３つの群は、移植から８日目、１５日目、および２２日目に、週１回、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または３０ｍｇ／ｋｇのいずれかで、抗体Ａｂ１を静脈内投与した（退行群）。最後に、１つの対照群は、ポリクローナルヒトＩｇＧ  ３０ｍｇ／ｋｇを投与し、第２の対照群は、移植から１日目、８日目、１５日目、および２２日目に、週１回、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または３０ｍｇ／ｋｇのいずれかで、リン酸緩衝食塩水を投与した。
【０６０８】
動物は、２８日目に、または腫瘍が４，０００ｍｍ３に達するか、または動物が衰弱した場合（体重の＞３０％減少）安楽死させた。動物は、移植から１日目、６日目、次いで、９日目から２８日目まで、毎日体重を測った。平均体重パーセント（ＭＰＢＷ）は、研究中、体重減少をモニタリングするための一次パラメータとして使用した。それは以下の通りに計算した。（体重−腫瘍重量）／基準体重×１００。腫瘍重量は、移植から１日目、６日目、９日目、１２日目、１５日目、１８日目、２２日目、２５日目、および２８日目に測定した。血液は、麻酔下で、５日目および１３日目において各群において、５匹のマウスから採血し、安楽死した際（ほとんどの場合、２８日目）、各群において、全て１０匹のマウスで採血した。血液は、血液学および血清アミロイドＡタンパク質（ＳＡＡ）濃度について分析した。追加群の１０匹の非腫瘍担持６週齢の無胸腺ヌードマウスは、基準値としての役割を果たす血液学およびＳＡＡ濃度の見積もりのために血液サンプルのために採血した。
【０６０９】
結果−生存
２８日目の研究終結日前に、抗体Ａｂ１群のいずれにおいても、動物は安楽死させず、または死亡しなかった。２つの対照群において、１５匹の動物（ポリクローナルヒトＩｇＧ群において、７／９およびリン酸緩衝食塩水群において、８／１０）は、死亡が認められたか、または非常に衰弱していたため（体重＞３０％の減少）安楽死させた。両方の対照群において、平均生存時間は、２０日であった。
【０６１０】
２つの対照群に対する生存曲線および抗体Ａｂ１の進行（研究の１日目から投与）群を、図５に示す。
【０６１１】
２つの対照群に対する生存曲線および抗体Ａｂ１の退行（研究の８日目から投与）群を、図６に示す。
【０６１２】
ポリクローナルヒトＩｇＧ（ｐ＝０．００３８）およびリン酸緩衝食塩水（ｐ＝０．０００３）対照群の生存曲線と６つの抗体Ａｂ１群の生存曲線との間で統計的に有意な差異を示した。２つの対照群の間で統計的に有意な差異を示さなかった（ｐ＝０．９７）。
【０６１３】
結果−腫瘍の大きさ
生存マウスにおいて、腫瘍の大きさは、触診によって推定された。研究から初めの１５日間については、いずれの群におけるマウスにおいても死亡も認められず、または安楽死させなかったため、これらの日における群間の腫瘍の大きさは、サンプリングバイアスはなかった。１５日まで、抗体Ａｂ１進行群または退行群と対照群の間で腫瘍の大きさにおける差異は、観察されなかった。対照において、死亡率の発生した後（１５日目において）で、対照および処置群における生存マウス間の腫瘍の大きさの比較は、生存対照マウスの腫瘍の大きさは、偏りがあると推定されたため、着手されず、したがって、かかる比較の結果は、有意ではない。
【０６１４】
抗体Ａｂ１の投与は、腫瘍の大きさにおいて明らかな減少がなく、生存を推進したため、高血清ＩＬ−６は、腫瘍成長と無関係である機序を通して死亡率の一因となり得る。これらの観察は、抗体Ａｂ１が、腫瘍成長に直接影響を与えることなく、場合により、一般患者の健康を増進することによって、癌患者の生存率を推進することができることを支持している。
【０６１５】
結果−体重減少
平均体重パーセント（ＭＰＢＷ）（±標準誤差）対時間が、図２７に示される。対照と比較して、Ａｂ１を投与したマウスは、体重減少から保護された。１８日目において、対照マウスにおけるＭＰＢＷは、７５％であり、２５％の平均体重パーセント減少に相当する。対照的に、同日において、Ａｂ−１処置群におけるＭＰＢＷは、最小限の変化（９７％〜１０３％）であった。対照（ポリクローナルヒトＩｇＧまたはＰＢＳを受容）に対するＭＰＢＷ曲線と１０ｍｇ／ｋｇ用量群（ｐ＜０．０００１）または３ｍｇ／ｋｇおよび３０ｍｇ／ｋｇ用量群（ｐ＜０．０００５）との間で統計的に有意な差異を示した。２つの対照群の間で統計的に有意な差異を示さなかった。
【０６１６】
対照およびＡｂ１処置マウスの典型的な写真（図２８）は、研究の終了時で、Ａｂ１−処置マウスの正常な見かけと比較して、対照マウスの衰弱した状態を例示する（注  右腹部における外部から目に見える腫瘍部位）。
【０６１７】
これらの結果は、Ａｂ１が、ヒトにおいて、高ＩＬ−６によって生じる悪液質を防止するまたは治療するために有用であり得ることを示唆している。
【０６１８】
結果−血漿血清アミロイドＡ
２つの対照群ならびに抗体Ａｂ１進行（研究の１日後から投与）および退行（研究の８日目から投与）群における平均（±標準誤差）血漿血清アミロイドＡ濃度対時間を、表５およびグラフを使って図３２に示す。
【表６】
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【０６１９】
ＳＡＡは、ヒトＩＬ−６の刺激を介して上方調節され、この応答は、埋め込まれた腫瘍に由来するヒトＩＬ−６の血中濃度と直接的に相関する。代理マーカーは、活性ヒトＩＬ−６についての間接的な読み出しを提供する。したがって、上記の２つの処置群において、腫瘍由来のヒトＩＬ−６の中和のため、ＳＡＡの著しい減少がある。これにより、抗体Ａｂ１が生体内の有効性を示すことをさらに支持している。
【０６２０】
［実施例１１  ＲＸＦ３９３悪液質モデル研究２］
序
第２の研究は、抗体Ａｂ１による治療を後期（移植後１０および１３日目）で開始し、およびさらに長期処置段階（移植後４９日目まで）のＲＸＦ−３９３悪液質モデルにおいて実行した。抗体Ａｂ１による投与間隔は、７日から３日に短縮され、毎日の食物消費量も測定された。抗体Ａｂ１による投与を開始する時点での腫瘍の大きさを標準化することも試みられた。
【０６２１】
方法
８０匹の、６週齢の雄の無胸腺ヌードマウスは、右腹部の皮下にＲＸＦ３９３腫瘍フラグメント（３０〜４０ｍｇ）を埋め込んだ。腫瘍が、２７０〜３２０ｍｇの大きさに達した２０匹のマウスを選択し、２つの群に分割した。１つの群は、３日に１回の１０ｍｇ／ｋｇの抗体Ａｂ１の静脈内投与を受け、他の群は、その時点から（移植後１０日目）３日に１回の１０ｍｇ／ｋｇのポリクローナルヒトＩｇＧを受けた。それらの腫瘍の大きさが４００〜５２７ｍｇの大きさに達した際、別の２０匹のマウスを選択し、２つの群に分割した。１つの群は、３日に１回の１０ｍｇ／ｋｇの抗体Ａｂ１の静脈内投与を受け、他の群は、その時点から（移植後１３日目）３日に１回の１０ｍｇ／ｋｇのポリクローナルヒトＩｇＧを受けた。残りの４０匹のマウスは、研究においてこれ以上参加させず、４９日目に、または腫瘍が４，０００ｍｍ３に達するか、または動物が非常に衰弱した場合（体重＞３０％の減少）安楽死させた。
【０６２２】
動物は、移植後１日目から４９日目の３〜４日に１回、体重を測った。平均体重パーセント（ＭＰＢＷ）は、研究中、体重減少をモニタリングするための一次パラメータとして使用した。それは以下の通りに計算した。（（体重−腫瘍重量）／基準体重）×１００。腫瘍重量は、移植後５日目から４９日目の３〜４日に１回、測定した。２７０〜３２０ｍｇの腫瘍群において、１０日目から、および４００〜５２７ｍｇの腫瘍群において、１３日目から毎日の食物の消費量を測定した（各処置群ごとに２４時間で消費した重量（ｇ））。
【０６２３】
結果−生存
３日に１回の１０ｍｇ／ｋｇの静脈投与における抗体Ａｂ１（２７０〜３２０ｍｇの腫瘍の大きさ）および３日に１回の１０ｍｇ／ｋｇの静脈投与におけるポリクローナルヒトＩｇＧ（２７０〜３２０ｍｇの腫瘍の大きさ）の生存曲線を図７に示す。
【０６２４】
３日に１回の１０ｍｇ／ｋｇの静脈投与における抗体Ａｂ１（２７０〜３２０ｍｇの腫瘍の大きさ）の平均生存は、４６日であり、および３日に１回の１０ｍｇ／ｋｇの静脈投与におけるポリクローナルヒトＩｇＧ（２７０〜３２０ｍｇの腫瘍の大きさ）の平均生存は、３２．５日であった（ｐ＝０．００７１）。
【０６２５】
３日に１回の１０ｍｇ／ｋｇの静脈投与における抗体Ａｂ１（４００〜５２７ｍｇの腫瘍の大きさ）および３日に１回の１０ｍｇ／ｋｇの静脈投与におけるポリクローナルヒトＩｇＧ（４００〜５２７ｍｇの腫瘍の大きさ）の生存曲線を図８に示す。３日に１回の１０ｍｇ／ｋｇの静脈投与における抗体Ａｂ１（４００〜５２７ｍｇの腫瘍の大きさ）の平均生存は、４６．５日であり、３日に１回の１０ｍｇ／ｋｇの静脈投与におけるポリクローナルヒトＩｇＧ（４００〜５２７ｍｇの腫瘍の大きさ）の平均生存は、２７日であった（ｐ＝０．０４８１）。
【０６２６】
［実施例１２  非ヒト霊長類における、抗体Ａｂ１の複数回投与の薬物動態評価］
抗体Ａｂ１は、１匹の雄および１匹の雌のカニクイザルに、リン酸緩衝食塩水中の単回ボーラス注入にて投与した。血漿サンプルを、一定の時間間隔で取り出し、抗体Ａｂ１のレベルを、抗原捕捉ＥＬＩＳＡアッセイの使用を通して定量化した。ビオチン化ＩＬ−６（５０μｌの３μｇ／ｍＬ）を、ストレプトアビジンでコーティングした９６ウェルマイクロタイタープレート上に捕捉した。プレートを洗浄し、０．５％の魚皮ゼラチンを用いて、ブロックした。適切に希釈した血漿サンプルを添加し、室温で１時間インキュベートした。上清を除去し、抗ｈＦｃ−ＨＲＰ共役した第２の抗体を適用し、室温で放置した。
【０６２７】
次いで、プレートを吸引し、抗体の量を可視化するためにＴＭＢを添加した。次いで、特異的レベルを、標準曲線の使用を通して決定した。抗体Ａｂ１の第２の投与量を、同一の２匹のカニクイザルに、３５日目に投与し、同様のサンプリング計画を用いて実験を反復した。次いで、結果として生じる濃度を、図９に示されるように、時間に対してプロットする。
【０６２８】
このヒト化全長脱グリコシル化された抗体発現および精製されたピチアパストリスは、哺乳類発現タンパク質と類似の特徴を示す。加えて、この生成物の複数回投与は、この生成物プラットフォームが、免疫原性の増強を示す生成物を生成しないことを暗示する再生可能な半減期を示す。
【０６２９】
［実施例１３  抗体タンパク質のオクテット機序の特徴付け］
ＩＬ−６のシグナル伝達は、ＩＬ−６と、２つの受容体であるＩＬ−６Ｒ１（ＣＤ１２６）およびｇｐ１３０（ＩＬ−６  シグナル伝達物質）との相互作用に依存する。抗体作用機序を決定するために、機序研究が、Ｏｃｔｅｔ  ＱＫ装置（ＦｏｒｔｅＢｉｏ；Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ）を用いて、バイオレイヤー（ｂｉｏ−ｌａｙｅｒ）干渉分光法を用いて実行された。研究は、２つの異なる構成において実行された。第１の方向では、ビオチン化ＩＬ−６（製造業者のプロトコルに従って、Ｐｉｅｒｃｅ  ＥＺ−ｌｉｎｋ  ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＬＣ−ＬＣ−ビオチンの製品番号２１３３８を用いてビオチン化された、Ｒ＆Ｄシステム部品番号２０６−ＩＬ−００１ＭＧ／ＣＦ）を、最初に、ストレプトアビジンでコーティングされたバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ部品番号１８−５００６）に結合した。結合は、シグナルの増加としてモニタリングされる。
【０６３０】
次いで、センサーに結合されたＩＬ−６は、対象の抗体、あるいは希釈された溶液のみとともにインキュベートされた。次いで、センサーは、可溶性ＩＬ−６Ｒ１（Ｒ＆Ｄ  システム製品番号２２７−ＳＲ−０２５／ＣＦ）分子とともにインキュベートされた。ＩＬ−６Ｒ１分子が結合できない場合、抗体は、ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ１相互作用をブロックしたと見なされた。これらの複合体は、安定性の目的のためにＩＬ−６Ｒ１の存在下で、ｇｐ１３０（Ｒ＆Ｄシステム２２８−ＧＰ−０１０／ＣＦ）でインキュベートされた。ｇｐ１３０が結合しなかった場合、抗体が、ＩＬ−６とｇｐ１３０の相互作用をブロックしたと結論付けられた。
【０６３１】
第２の方向では、抗体は、抗ヒトＩｇＧ１  Ｆｃに特異的な試薬（ＦｏｒｔｅＢｉｏ部品番号１８−５００１）でコーティングされたバイオセンサーに結合された。ＩＬ−６は、固定化抗体に結合され、センサーは、ＩＬ−６Ｒ１とともにインキュベートされた。ＩＬ−６Ｒ１がＩＬ−６と相互作用しなかった場合、ＩＬ−６結合抗体が、ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ１の相互作用をブロックしたと結論付けられた。抗体／ＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ１が観察された状況では、複合体は、ＩＬ−６Ｒ１の存在下で、ｇｐ１３０とともにインキュベートされた。ｇｐ１３０が相互作用しなかった場合、抗体が、ＩＬ−６／ｇｐ１３０の相互作用をブロックしたと結論付けられた。全ての研究は、２００μＬ  最終容量、３０℃および１０００ｒｐｍで実行された。これらの研究について、全てのタンパク質は、ＦｏｒｔｅＢｉｏのサンプル希釈緩衝液（部位番号１８−５０２８）を用いて希釈された。
【０６３２】
結果を、図１０（Ａ〜Ｅ）および図１１に示す。
【０６３３】
［実施例１４  ペプチドマッピング］
ヒトＩＬ−６における、Ａｂ１によって認識されるエピトープを決定するために、抗体を、ウエスタンブロットベースのアッセイに用いた。この実施例において利用されたヒトＩＬ−６型は、１８３アミノ酸長の配列を有した（以下に示す）。この配列を包含する１５アミノ酸ペプチドを重複する５７員のライブラリは、商業的に合成され、ＰｅｐＳｐｏｔｓニトロセルロース膜（ＪＰＴ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｂｅｒｌｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）に共有結合された。重複１５アミノ酸ペプチドの配列を図１２に示され、配列番号５９０−６４６に対応する。製造業者の推奨に従ってブロットを調製し、プローブした。
【０６３４】
簡潔に言えば、ブロットは、メタノール中で前湿潤させ、ＰＢＳ中ですすぎ、ＰＢＳ／０．０５％  Ｔｗｅｅｎ（ブロッキング溶液）中の１０％  脱脂ミルク中で２時間以上の間、ブロックした。Ａｂ１抗体は、１ｍｇ／ｍＬの最終希釈で使用し、ＨＲＰ共役したマウス抗ヒト−カッパ第の抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  ＢｉｏＴｅｃｈ  ＃９２２０−０５）を１：５０００の希釈で使用した。抗体の希釈／インキュベーションは、ブロッキング溶液中で実行された。ブロットは、Ａｍｅｒｓｈａｍ  ＥＣＬ  ａｄｖａｎｃｅ試薬（ＧＥ＃  ＲＰＮ２１３５）を用いて現像し、化学発光  シグナルは、ＣＣＤカメラ（ＡｌｐｈａＩｎｎｏｔｅｃ）を用いて文書化した。ブロットの結果を図１３および図１４に示す。
【０６３５】
ペプチドライブラリを生成するために利用されたヒトＩＬ−６型の配列を以下に示す。
ＶＰＰＧＥＤＳＫＤＶＡＡＰＨＲＱＰＬＴＳＳＥＲＩＤＫＱＩＲＹＩＬＤＧＩＳＡＬＲＫＥＴＣＮＫＳＮＭＣＥＳＳＫＥＡＬＡＥＮＮＬＮＬＰＫＭＡＥＫＤＧＣＦＱＳＧＦＮＥＥＴＣＬＶＫＩＩＴＧＬＬＥＦＥＶＹＬＥＹＬＱＮＲＦＥＳＳＥＥＱＡＲＡＶＱＭＳＴＫＶＬＩＱＦＬＱＫＫＡＫＮＬＤＡＩＴＴＰＤＰＴＴＮＡＳＬＬＴＫＬＱＡＱＮＱＷＬＱＤＭＴＴＨＬＩＬＲＳＦＫＥＦＬＱＳＳＬＲＡＬＲＱＭ（配列番号１）
【０６３６】
［実施例１５  Ａｂ１はＩＬ−６に対して高親和性を有する］
表面プラズモン共鳴を、２５℃で、ラット、マウス、イヌ、ヒト、およびカニクイザルからのＩＬ−６へのＡｂ１についての会合速度（Ｋａ）、解離速度（Ｋｄ）、および解離定数（ＫＤ）を測定するために使用した（図１５Ａ）。ヒトＩＬ−６の解離定数は、４ｐＭであり、非常に高い親和性を示した。予想通りに、親和性は、通常、ヒトとの系統的距離とともに減少した。カニクイザル、ラット、およびマウスのＩＬ−６に対するＡｂ１の解離定数は、それぞれ、３１ｐＭ、１．４ｎＭ、および０．４ｎＭであった。イヌＩＬ−６に対するＡｂ１の親和性は、実験の定量化の限度を下回った。
【０６３７】
マウス、ラット、およびカニクイザルのＩＬ−６に対するＡｂ１の高親和性は、Ａｂ１が、これらの種のＩＬ−６を阻害するために使用され得ることを示唆している。この仮説は、細胞増殖アッセイを用いて、試験した。簡潔に言えば、各種のＩＬ−６を、Ｔ１１６５細胞の増殖を刺激するために使用し、Ａｂ１が、増殖の５０％（ＩＣ５０）を阻害することができる濃度を測定した。阻害は、測定した解離定数と一致した（図１５Ｂ）。これらの結果は、Ａｂ１が、これらの種の天然ＩＬ−６を阻害することができることを示し、Ａｂ１によるＩＬ−６阻害の体外のまたは生体内のモデリングにおけるこれらの生物の使用を示唆している。
【０６３８】
［実施例１６  健常なヒト志願者における抗体Ａｂ１の複数回投与の薬物動態評価］
抗体Ａｂ１は、健常なヒト志願者に、ヒスチジンおよびソルビトール中の単回ボーラス注入にて投与された。１ｍｇ、３ｍｇ、１０ｍｇ、３０ｍｇ、または１００ｍｇの用量を、５人〜６人の個人を含む投与群の、各個人に投与した。血漿サンプルを、最長１２週間、一定の時間間隔で取り出した。ヒト血漿は、ＥＤＴＡを含有する真空回収管に静脈穿刺を介して回収した。血漿は、以下の通りに、分離し、Ａｂ１に対して特異的なモノクローナル抗体を用いて、Ａｂ１の血中濃度を評価するために使用した。９６ウェルマイクロタイタープレートは、４℃で終夜１Ｘ  ＰＢＳ中でＡｂ１に対して特異的なモノクローナル抗体を用いて、終夜コーティングした。残りのステップは、室温で行われた。ウェルを、吸引し、続いて、１Ｘ  ＰＢＳ中の０．５％の魚皮ゼラチン（ＦＳＧ）（Ｓｉｇｍａ）を用いて、６０分間ブロックした。次いで、ヒト血漿サンプルを添加し、６０分間インキュベートし、吸引し、５０μＬの１μｇ／ｍＬ  ビオチン化ＩＬ−６を各ウェルに添加し、６０分間インキュベートした。ウェルを、吸引し、０．５％  ＦＳＧ／ＰＢＳ中に１：５，０００で希釈した、５０μＬのストレプトアビジン−ＨＲＰ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を添加し、４５分間インキュベートした。検出のためにＴＭＢを採用する標準方法を用いて、展開を行った。比較形式において調製された、標準曲線と比較して、レベルを決定した。
【０６３９】
各用量群についてのＡｂ１の平均血漿濃度対時間を、図１６に示す。平均ＡＵＣおよびＣｍａｘは、用量ととも直線的に増加した（それぞれ、図１７および図１８）。３０ｍｇおよびそれ以上の用量については、各用量群における、Ａｂ１の平均半減期は、約２５から３０日であった（図１９）。
【０６４０】
［実施例１７  進行癌に罹患している患者におけるＡｂ１の薬物動態］
抗体Ａｂ１は、進行癌に罹患している５人の個人に、リン酸緩衝食塩水中の単回ボーラス注入にて投与された。各個人は、８０ｍｇ（ｎ＝２）または１６０ｍｇ（ｎ＝３）の用量のＡｂ１を受けた。血漿サンプルを、週１回、採血し、実施例１６にあるように、抗体Ａｂ１のレベルを定量化した。
【０６４１】
時間の関数として、これらの個人におけるＡｂ１の平均血漿濃度を図２０に示す。Ａｂ１の平均半減期は、約３１日であった。
【０６４２】
［実施例１８  Ａｂ１の前例のない半減期］
概して、Ａｂ１の平均半減期は、ヒト（１０ｍｇおよびそれ以上の用量に対して）において、約３１日、およびカニクイザルにおいて、約１５〜２１日であった。ヒトおよびカニクイザルにおいて、Ａｂ１の半減期は、他の抗ＩＬ−６抗体の半減期と比較した場合、前例のないものであった（図２１）。上記のように、Ａｂ１は、ウサギ抗体のヒト化に由来し、脱グリコシル化された形態で、ピチアパストリスから産生される。これらの特徴は、ヒトにおいて、非常に低い免疫原性を有する抗体をもたらす。さらに、グリコシル化の欠如は、Ａｂ１がＦｃ受容体または補体と相互作用するのを防ぐ。理論によって限定されることを意図せずに、Ａｂ１の前例のない半減期は、ヒト化および／またはグリコシル化の欠如に少なくとも部分的に起因すると考えられる。抗原結合表面の特定の配列および／または構造はまた、Ａｂ１の半減期の一因となり得る。
【０６４３】
［実施例１９  進行癌に罹患している患者におけるヘモグロビン濃度、血漿液濃度、および好中球数へのＡｂ１の効果］
抗体Ａｂ１は、進行癌（ＮＳＣＬＣ、結腸直腸癌、胆管癌、または中皮腫）に罹患している８人の個人に、リン酸緩衝食塩水中の単回ボーラス注入にて投与された。各個人は、８０ｍｇ、１６０ｍｇ、または３２０ｍｇの用量のＡｂ１を受けた。血液サンプルを、注入直前および６週間の一定の時間間隔で取り出し、ヘモグロビン濃度、血漿液濃度、および好中球数を決定した。平均ヘモグロビン濃度はわずかに増加し、総コレステロールおよびトリグリセリド（図２３）も同様であったが、（図２２）、平均好中球数は、わずかに減少した（図２４）。
【０６４４】
これらの結果は、慢性疾患の個人への、Ａｂ１の投与の幾つかの有益な効果があることをさらに示す。ＩＬ−６が、慢性疾患に伴う貧血（癌に関連した貧血を含む）の原因である主要なサイトカインであるため、Ａｂ１によるＩＬ−６の中和は、これらの個人において、ヘモグロビン濃度を増加させる。同様に、ＩＬ−６は、主として、炎症において、好中球数を増加させるのに重要であるため、観察された好中球数のわずかな減少は、Ａｂ１が、ＩＬ−６を阻害することをさらに確認する。最後に、ＩＬ−６は、これらの患者において、拒食症、および悪液質を引き起こし、Ａｂ１によるＩＬ−６の中和は、食欲の回復、悪液質の好転をもたらす。血漿液濃度の増加は、患者の改善された栄養状態を反映する。総合すれば、これらの結果は、Ａｂ１が、これらの患者において、ＩＬ−６のこれらの悪影響を効果的に逆転することをさらに示す。
【０６４５】
［実施例２０  Ａｂ１は健常な志願者および進行癌に罹患している患者において血清ＣＲＰを抑制する］
序
血清ＣＲＰ濃度は、ある種の癌型に罹患している患者における、強力な予後指標として特定されている。例えば、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏらは、生存および疾病の再発に影響を及ぼす要因を特定するために、肝細胞癌に罹患している患者において、術前の血清ＣＲＰ濃度の単変量および多変量解析を実行した（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，Ｋ．，ら，Ｃａｎｃｅｒ，１０３（９）：１８５６−１８６４（２００５））。患者は、血清ＣＲＰレベル＞１．０ｍｇ／ｄＬを有する者（「ＣＲＰ陽性群」）および血清ＣＲＰレベル＜１．０ｍｇ／ｄＬを有する者（「ＣＲＰ陰性群」）の２つの群に分類された。著者は、「血清ＣＲＰレベルと腫瘍の大きさとの有意な相関関係」を特定した。同文献。さらに、著者は、「ＣＲＰ陽性群の全生存率および無再発生存率は、ＣＲＰ陰性群の生存率と比較して著しく低かった」ことを見出した。同文献。著者は、患者の術前のＣＲＰレベルは、肝細胞癌に罹患している患者において、独立した有意な予測指標、すなわち不良な予後および早期再発の指標であると結論づけた。
【０６４６】
同様の相関関係が、他の研究者によって特定されている。例えば、Ｋａｒａｋｉｅｗｉｃｚらは、血清ＣＲＰが、腎細胞癌特定の死亡率の、独立した、有益な指標であることを決定した（Ｋａｒａｋｉｅｗｉｃｚ，Ｐ．Ｉ．，ら，Ｃａｎｃｅｒ，１１０（６）：１２４１−１２４７（２００７））。したがって、当技術分野において、癌患者、特に進行癌に罹患する者において、血清Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）濃度を低下させる方法および／または治療の必要性が未だ存在する。
【０６４７】
方法
健常な志願者が、１００ｍｇ（５人の患者）、３０ｍｇ（５人の患者）、１０ｍｇ（６人の患者）、３ｍｇ（６人の患者）、または１ｍｇ（６人の患者）のいずれかのＡｂ１モノクローナル抗体の単回１時間の静脈内（ＩＶ）注入を受け、一方、別の１４人の健常な志願者は、プラセボの静脈内投与を受けた。比較上、進行型の結腸直腸癌に罹患している２人の患者が、８０ｍｇのＡｂ１モノクローナル抗体の単回１時間の静脈内（ＩＶ）注入を受けた。Ａｂ１モノクローナル抗体のさらなる用量は、この試験集団には投与されなかった。
【０６４８】
その投与量の投与前、およびそれ以降、投与後少なくとも少なくとも５週間、週ごとに患者を評価した。各評価時点で、患者を血清ＣＲＰ濃度のスクリーニングをした。
【０６４９】
結果
健常な志願者
上述のように、血清ＣＲＰレベルは、炎症のマーカーであり、したがって、基準ＣＲＰレベルは、典型的には、健常者において低い。低基準ＣＲＰレベルは、ＣＲＰレベルのさらなる減少を検出することを困難にし得る。それにもかかわらず、血清ＣＲＰ濃度の実質的減少が、対照と比較して、全ての濃度のＡｂ１モノクローナル抗体を受けた健常な志願者において検出可能であった（図２５）。血清ＣＲＰレベルの減少は、急速であり、抗体投与から１週間以内で生じ、少なくとも最終の測定を得るまで持続した（抗体投与から８または１２週間）。
【０６５０】
癌患者
高血清ＣＲＰレベルを有する５人の進行癌患者（結腸直腸癌、胆管癌、またはＮＳＣＬＣ）に、８０ｍｇまたは１６０ｍｇのＡｂ１を投与した。血清ＣＲＰレベルは、これらの患者において、大幅に減少した（図２６Ａ）。血清ＣＲＰレベルの減少は、急速であり、Ａｂ１投与から１週間以内で９０％の減少を生じ、長期にわたって、少なくとも最終の測定を得るまで持続した（最長１２週間）。２人の代表的な個人のＣＲＰレベルを図２６Ｂに示す。これらの個人において、ＣＲＰレベルは、１週間以内で、正常な参照範囲（５〜６ｍｇ／Ｌ未満）を下回るように低下した。したがって、進行癌患者へのＡｂ１の投与は、血清ＣＲＰレベルの急速かつ持続した抑制を生じ得る。
【０６５１】
［実施例２１  Ａｂ１は進行癌を有する患者の筋力を改善し、体重を改善し、疲労を減少させた］
序
体重減少および疲労（ならびに付随する筋力低下）は、進行した形態の癌を有する患者の非常に一般的な症状であり、癌が進行を続けるに従い、これらの症状は悪化する。疲労、体重減少、および筋力低下は、例えば、生活様式および人間関係を乱すこと、および患者の癌治療を継続する意欲または能力に影響を及ぼすことにより、進行した形態の癌を有する患者の回復に著しい悪影響を及ぼし得る。疲労、体重減少、および筋力低下に対処する知られている方法には、定期的な日常的健康維持および運動、患者のエネルギーを維持する方法、ならびに貧血によって誘発される疲労および筋力低下に対処する治療が含まれる。しかしながら、癌患者の疲労、体重減少、および筋力低下を改善する方法および／または治療の必要性が未だ存在する。
【０６５２】
方法
進行した形態の癌を有する４人の患者（結腸直腸癌（２）、ＮＳＣＬＣ（１）、胆管癌（１））が、８０ｍｇまたは１６０ｍｇのいずれかのＡｂ１モノクローナル抗体の、１時間の単回静脈内（ＩＶ）注入を受けた。Ａｂ１モノクローナル抗体のさらなる用量は、この試験集団には投与されなかった。
【０６５３】
その投与量の投与前、およびそれ以降、投与後少なくとも６週間、患者を評価した。各評価時点で、患者を以下についてスクリーニングした：  ａ．）体重の何らかの変化、ｂ．）疲労を評価するための医学的に認識されている試験である、Ｆａｃｉｔ−Ｆ疲労サブスケール質問表を使用して測定される、疲労（例えば、Ｃｅｌｌａ，  Ｄ．，  Ｌａｉ，  Ｊ．Ｓ．，  Ｃｈａｎｇ，  Ｃ．Ｈ．，  Ｐｅｔｅｒｍａｎ，  Ａ．，  ＆  Ｓｌａｖｉｎ，  Ｍ．（２００２）。Ｆａｔｉｇｕｅ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｗｉｔｈ  ｆａｔｉｇｕｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．  Ｃａｎｃｅｒ，  ９４（２），  ５２８−５３８；  Ｃｅｌｌａ，  Ｄ．，  Ｅｔｏｎ，  Ｄ．Ｔ．，  Ｌａｉ，Ｆ  Ｊ−Ｓ．，  Ｐｅｔｅｒｍａｎ，  Ａ．Ｈ  ＆  Ｍｅｒｋｅｌ，  Ｄ．Ｅ．  （２００２）．Ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ  ａｎｃｈｏｒ  ａｎｄ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｂａｓｅｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｔｏ  ｄｅｒｉｖｅ  ｍｉｎｉｍａｌ  ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ  ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｅｍｉａ  ａｎｄ  ｆａｔｉｇｕｅ  ｓｃａｌｅｓ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｉｎ  ＆  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，２４（６）５４７−５６１を参照のこと）、ならびに握力（典型的にはハンドグリップ動力計を採用する、筋力を評価するための医学的に認識される試験）。
【０６５４】
結果
体重変化
Ａｂ１モノクローナル抗体の両方の投与濃度（８０ｍｇおよび１６０ｍｇ）の平均データは、６週間にわたって患者１人につき体重約２キログラムの増加を示した（図２９）。
【０６５５】
疲労
Ａｂ１モノクローナル抗体の両方の投与濃度（８０ｍｇおよび１６０ｍｇ）の平均データは、６週間にわたって患者集団の間で、平均Ｆａｃｉｔ−Ｆ  ＦＳサブスケールスコアにおいて少なくとも約１０ポイントの増加を示した（図３０）。
【０６５６】
握力
Ａｂ１モノクローナル抗体の両方の投与濃度（８０ｍｇおよび１６０ｍｇ）の平均データは、６週間にわたって患者集団の間で、少なくとも約１０パーセントの平均握力の増加を示した（図３１）。
【０６５７】
［実施例２２  血栓症予防のためのＡｂ１］
以前の研究で、抗ＩＬ−６抗体の投与が血小板数の減少を引き起こし得ることが判明している。Ｅｍｉｌｉｅ，Ｄ．ら，Ｂｌｏｏｄ，８４（８）：２４７２−９（１９９４）；Ｂｌａｙら，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，７２（３）：４２４−３０（１９９７）。血小板数のさらなる減少は、出血などの合併症を引き起こす可能性があることから、これらの結果は、潜在的な危険性の指標とみなせるのは明らかである。しかし、本出願人はＩＬ−６を阻害することにより正常な凝固プロファイルを回復することを見出しており、これにより血栓症を予防できることを出願人は予測している。ＩＬ−６の阻害によって生ずる血小板数の減少は、可能性のある危険の兆候ではなく、むしろ有益な、正常な血液凝固の回復を反映している。
【０６５８】
正常な血液凝固が復元されるメカニズムは、ＩＬ−６と急性期反応との間の相互作用に起因すると考えられている。癌患者の例では、ＩＬ−６レベルの上昇に応じて、肝臓は急性期タンパク質を生成する。急性期タンパク質としては、例えば第ＩＩ因子、第Ｖ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、Ｆ／フィブリン分解生成物、トロンビン・アンチトロンビンＩＩＩ複合体、フィブリノゲン、プラスミノーゲン、プロトロンビン、およびヴォン・ヴィレブランド因子などの凝固因子が挙げられる。この凝固因子レベルの上昇は直接測定しても、あるいは凝固能の機能の測定から類推してもよい。ＩＬ−６のアンタゴニスト（例えばＡｂ１）は、急性期タンパク質、例えば血清アミロイドＡを抑制する（図３２および実施例１０参照）。本出願人は、急性期タンパク質の抑制は正常な凝固プロファイルを復元し、それによって血栓症を予防できると予測している。正常な血液凝固の復元は血小板数のわずかな低下を引き起こす可能性があるが、それにもかかわらず患者は通常の凝固能を保持しているので、出血リスクが高まることはない。このような治療は、有用性が大出血などの有害な副作用のリスクによって制限される、利用可能な抗凝固療法を大幅な改善を意味することとなる。
【０６５９】
本出願人は、阻害の方法とは無関係に、同じＩＬ−６阻害の有益な効果が得られることを意図している。ＩＬ−６を阻害するの適切な方法としては、抗ＩＬ−６抗体の投与、アンチセンス療法、可溶性ＩＬ−６受容体などを個々に行うこと、または併用することが挙げられる。
【０６６０】
［実施例２３  Ａｂ１は進行癌を有する患者における血漿アルブミン濃度を増加する］
血清中アルブミン濃度は、癌患者の生存および／または回復の成功を予測する指標であると認識されている。低アルブミン血症は、多数の形態の癌における患者の不良なパフォーマンスと強く相関する。例えば、１つの研究では、転移性膵臓腺癌のための全身化学療法を受け、３．５ｇ／ｄＬ未満の血清中アルブミンレベルを有する患者で、全身化学療法にうまく応答した者は一人もいなかった（Ｆｕｊｉｓｈｉｒｏ，Ｍ．，ら，  Ｈｅｐａｔｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，  ４７（３６）：１７４４−４６  （２０００））。著者は、「低アルブミン血症…を有する患者は…全身化学療法に対して不適当な候補者であり得、他の実験手法または対症療法で治療され得る」と結論付けている。同文献。
【０６６１】
同様に、ＳｅｎｉｏｒおよびＭａｒｏｎｉは、「低アルブミン血症が、末期腎疾患における死亡率の最も強力な予測指標であるという最近の認識は、適切なタンパク質摂取量を保証することがこの患者集団において極めて重要であることを強調している」と記載している（Ｊ．Ｒ．  Ｓｅｎｉｏｒ  および  Ｂ．Ｊ．  Ｍａｒｏｎｉ，Ａｍ．  Ｓｏｃ．  Ｎｕｔｒ．  Ｓｃｉ．，１２９：３１３Ｓ−３１４Ｓ（１９９９））。
【０６６２】
少なくとも１つの研究では、正常な血清中アルブミンレベル（＞３．５ｇ／ｄＬ）が達成されるまで、２０ｇの１日１回の静脈内アルブミン注入によって転移性癌を有する２７人の患者の低アルブミン血症を矯正する試みは、ほとんど成功しなかった。この著者は、「進行癌患者に対するアルブミン注入は、臨床的実践においては限られた価値しか有さない。ＰＳ４および低アルブミン血症を有する患者は予後不良となる」」と記している  （Ｄｅｍｉｒｋａｚｉｋ，  Ａ．，ら，  Ｐｒｏｃ．  Ａｍ．  Ｓｏｃ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．，  ２１：Ａｂｓｔｒ  ２８９２  （２００２））。
【０６６３】
したがって、当技術分野において、癌患者の血清中アルブミン濃度を改善し、癌患者、特に進行癌を有する者の低アルブミン血症状態に対処する、方法および／または治療の必要性が未だ存在する。
【０６６４】
方法
進行した形態の癌を有する４人の患者（結腸直腸癌（２）、ＮＳＣＬＣ（１）、胆管癌（１））が、８０ｍｇまたは１６０ｍｇのいずれかのＡｂ１モノクローナル抗体の、１時間の単回静脈内（ＩＶ）注入を受けた。Ａｂ１モノクローナル抗体のさらなる用量は、この試験集団には投与されなかった。
【０６６５】
その投与量の投与前、およびそれ以降、投与後少なくとも６週間、患者を評価した。各評価時点で、血漿アルブミン濃度について患者をスクリーニングした。
【０６６６】
結果
Ａｂ１モノクローナル抗体の両方の投与濃度（８０ｍｇおよび１６０ｍｇ）の平均データは、６週間にわたって患者１人につき約５ｇ／Ｌの血漿アルブミン濃度の増加を示した（図３３）。
【０６６７】
［実施例２４  Ａｂ１は進行癌を有する患者の血清ＣＲＰを抑制する］
血清ＣＲＰ濃度は、ある形態の癌を有する患者における強力な予後指標として特定されている。例えば、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏらは、生存および疾病の再発に影響を及ぼす要因を特定するために、肝細胞癌に罹患している患者において、術前の血清ＣＲＰ濃度の単変量および多変量解析を実行した（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，  Ｋ．，ら，Ｃａｎｃｅｒ，  １０３（９）：１８５６−１８６４  （２００５））。患者は、血清ＣＲＰレベル＞１．０ｍｇ／ｄＬを有する者（「ＣＲＰ陽性群」）および血清ＣＲＰレベル＜１．０ｍｇ／ｄＬを有する者（「ＣＲＰ陰性群」）の２つの群に分類された。著者は、「術前の血清ＣＲＰレベルと腫瘍の大きさとの間で有意な相関関係」を特定した。同文献。さらに、著者は、「ＣＲＰ陽性群の全生存率および無再発生存率は、ＣＲＰ陰性群の生存率と比較して著しく低かった」ことを見出した。同文献。著者は、患者の術前のＣＲＰレベルは、肝細胞癌に罹患している患者における、予後不良および早期再発の独立した、有意な予測指標であると結論付けている。
【０６６８】
同様の相関関係が、他の研究者によって特定されている。例えば、Ｋａｒａｋｉｅｗｉｃｚらは、血清ＣＲＰが、腎細胞癌特定の死亡率の、独立した、有益な予測指標であることを決定付けた（Ｋａｒａｋｉｅｗｉｃｚ，  Ｐ．Ｉ．，ら，Ｃａｎｃｅｒ，  １１０（６）：１２４１−１２４７  （２００７））。したがって、当技術分野において、癌患者、および特に進行癌を有するものの血清Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）濃度を減少させる方法および／または治療の必要性が未だ存在する。
【０６６９】
方法
非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する１２４人の患者を、４つの治療群に分けた。１つの群の患者は、８週間毎に２４週間にわたって、合計で３投与量の、プラセボ（ｎ＝３１）、８０ｍｇ（ｎ＝２９）、１６０ｍｇ（ｎ＝３２）、または３２０ｍｇ（ｎ＝３２）のＡｂ１モノクローナル抗体のいずれかを、１時間の静脈内（ＩＶ）注入で受けた。ＣＲＰ濃度は、ラテックス付着抗ＣＲＰ抗体を使用したＣ反応性タンパク質粒子増強免疫比濁アッセイ（すなわち、Ｒｏｃｈｅ  ＣＲＰ  Ｔｉｎａｑｕａｎｔ（登録商標））によって定量化した。手短に言えば、約１．０ｍＬの患者サンプル血清を収集し、プラスチック製収集チューブに保管した。サンプルを適切な緩衝液に入れ、ラテックス微粒子に結合された抗ＣＲＰ抗体をサンプルに添加し、反応を開始させた。これらの抗ＣＲＰ抗体は、結合したラテックス微粒子とともに、サンプル中の抗原と反応し、抗原／抗体複合体を形成する。凝集反応後、これを、Ｒｏｃｈｅ／Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｍｏｄｕｌａｒ  Ｐ分析器を使用して、比濁法によって測定した。
【０６７０】
その投与量の投与前、およびそれ以降、投与後２、４、８、および１２週目に患者を評価した。各評価時に、血清ＣＲＰ濃度について患者をスクリーニングした。
【０６７１】
結果
Ａｂ１モノクローナル抗体の各投与濃度（プラセボ、８０ｍｇ、１６０ｍｇ、および３２０ｍｇ）の平均データを、図３８にプロットする。Ａｂ１抗体の全ての投与レベルが、１２週間にわたってプラセボに対してＣＲＰ濃度の即時の低下を示した。ＣＲＰレベルは、投与後８週間で大きな進捗を示した。ＣＲＰレベルは、１２週目までに５ｍｇ／Ｌ未満に低下した。ＣＲＰの中央値は、プラセボと比較して、全ての投与濃度に対して迅速かつ持続的な減少を示した（図３９）。したがって、進行癌患者へのＡｂ１の投与は、迅速かつ持続的な血清ＣＲＰレベルの抑制を引き起こし得る。
【０６７２】
［実施例２５  Ａｂ１は進行癌を有する患者の血清ＣＲＰを抑制する］
血清ＣＲＰ濃度は、ある形態の癌を有する患者における強力な予後指標として特定されている。例えば、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏらは、生存および疾病の再発に影響を及ぼす要因を特定するために、肝細胞癌に罹患している患者において、術前の血清ＣＲＰ濃度の単変量および多変量解析を実行した（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，  Ｋ．，ら，Ｃａｎｃｅｒ，  １０３（９）：１８５６−１８６４  （２００５））。患者は、血清ＣＲＰレベル＞１．０ｍｇ／ｄＬを有する者（「ＣＲＰ陽性群」）および血清ＣＲＰレベル＜１．０ｍｇ／ｄＬを有する者（「ＣＲＰ陰性群」）の２つの群に分類された。著者は、「術前の血清ＣＲＰレベルと腫瘍の大きさとの間で有意な相関関係」を特定した。同文献。さらに、著者は、「ＣＲＰ陽性群の全生存率および無再発生存率は、ＣＲＰ陰性群の生存率と比較して著しく低かった」ことを見出した。同文献。著者は、患者の術前のＣＲＰレベルは、肝細胞癌に罹患している患者における、予後不良および早期再発の独立した、有意な予測指標であると結論付けている。
【０６７３】
同様の相関関係が、他の研究者によって特定されている。例えば、Ｋａｒａｋｉｅｗｉｃｚらは、血清ＣＲＰが、腎細胞癌特定の死亡率の、独立した、有益な予測指標であることを決定付けた（Ｋａｒａｋｉｅｗｉｃｚ，  Ｐ．Ｉ．，ら，Ｃａｎｃｅｒ，  １１０（６）：１２４１−１２４７  （２００７））。したがって、当技術分野において、癌患者、および特に進行癌を有するものの血清Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）濃度を減少させる方法および／または治療の必要性が未だ存在する。
【０６７４】
方法
種々の形態の進行癌を有する８人の患者（結腸直腸（３）、ＮＳＣＬＣ（１）、胆管癌（１）、および中皮腫（２））が、８０ｍｇ（２人の患者）、１６０ｍｇ（３人の患者）、または３２０ｍｇ（３人の患者）のうちのいずれかのＡｂ１モノクローナル抗体の、１時間の単回静脈内注入を受けた。Ａｂ１モノクローナル抗体のさらなる用量は、この試験集団には投与されなかった。
【０６７５】
その投与量の投与前、およびそれ以降、投与後少なくとも８週間、週１回ベースで患者を評価した。各評価時点で、血清ＣＲＰ濃度について患者をスクリーニングした。ＣＲＰ濃度は、ラテックス付着抗ＣＲＰ抗体を使用したＣ反応性タンパク質粒子増強免疫比濁アッセイ（すなわち、Ｒｏｃｈｅ  ＣＲＰ  Ｔｉｎａｑｕａｎｔ（登録商標））によって定量化した。手短に言えば、約１．０ｍＬの患者サンプル血清を収集し、プラスチック製収集チューブに保管した。サンプルを適切な緩衝液に入れ、ラテックス微粒子に結合された抗ＣＲＰ抗体をサンプルに添加し、反応を開始させた。これらの抗ＣＲＰ抗体は、結合したラテックス微粒子とともに、サンプル中の抗原と反応し、抗原／抗体複合体を形成する。凝集反応後、これを、Ｒｏｃｈｅ／Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｍｏｄｕｌａｒ  Ｐ分析器を使用して、比濁法によって測定した。
【０６７６】
結果
血清ＣＲＰレベルは、研究した全ての患者において、大幅に減少した（図４０）。血清ＣＲＰレベルの減少は迅速で、減少の約９０％がＡｂ１投与の１週間以内に発生し、長期の低下したレベルが、少なくとも最終の測定が行われるまで継続した（最大１２週間）。結腸直腸癌を有する１人の患者を除いて全ての場合において、ＣＲＰレベルが１週間以内に正常な参照範囲（５〜６ｍｇ／Ｌ未満）以下に低下した。結腸直腸癌患者は、本研究の４週目までに同様の正常なレベルを達成した。したがって、進行癌患者へのＡｂ１の投与は、迅速かつ持続的な血清ＣＲＰレベルの抑制を引き起こし得る。
【０６７７】
［実施例２６  Ａｂ１は関節リウマチを有する患者の血清ＣＲＰを抑制する］
血清ＣＲＰ濃度は、関節リウマチを有する患者における強力な予後指標として特定されている。高レベルのＣＲＰを有する関節リウマチに罹患する患者は、ほとんど普遍的に悪化を示した。Ａｍｏｓら，  １  Ｂｒ．  Ｍｅｄ．  Ｊ．  １９５−９７  （１９７７）。逆に、低いＣＲＰレベルを有する患者は、疾病の進行を示さず、低レベルのＣＲＰを持続することが、関節リウマチを効果的に治療するために必要であることを示唆している。同文献。金、Ｄ−ペニシラミン、クロロキン、またはダプソンの関節リウマチ治療体制の間のＣＲＰの追跡によって、ＣＲＰレベルが一貫して制御されると、最初の６ヶ月の治療後に放射線学的悪化が妨げられたことが示された。Ｄａｗｅｓら，２５  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ４４−４９（１９８６）。ＣＲＰ産生と放射線学的進行との間に、高度に有意な相関関係が特定されている。ｖａｎ  Ｌｅｅｕｗｅｎら，３２（Ｓｕｐｐ．  ３）Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ９−１３（１９９７）。別の研究は、活動性の関節リウマチを有する患者について、異常に上昇したＣＲＰの抑制は、機能的試験の測定基準の改善をもたらしたが、持続的なＣＲＰ上昇は、同一測定基準における悪化を伴ったことを明らかにした。Ｄｅｖｌｉｎら，  ２４  Ｊ．  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．  ９−１３  （１９９７）。ＣＲＰの再度の上昇なしには、さらなる悪化は観察されず、ＣＲＰの抑制を、関節リウマチ治療に対する有望な候補者として示している。同文献。したがって、当技術分野において、関節リウマチ患者の血清Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）濃度を減少させる方法および／または治療の必要性が未だ存在する。
【０６７８】
方法
活動性関節リウマチを有し、ＣＲＰ≧１０ｍｇ／Ｌである１２７人の患者を、４つの治療群に分けた。１つの群の患者は、１６週試験の開始時に一度、および８週目に再び、プラセボ（ｎ＝３３）、８０ｍｇ（ｎ＝３２）、１６０ｍｇ（ｎ＝３４）、または３２０ｍｇ（ｎ＝２８）のＡｂ１モノクローナル抗体のいずれかの、１時間の静脈内（ＩＶ）注入を受けた。ＣＲＰ濃度を、ラテックス付着抗ＣＲＰ抗体を使用したＣ反応性タンパク質粒子増強免疫比濁アッセイ（すなわち、Ｒｏｃｈｅ  ＣＲＰ  Ｔｉｎａｑｕａｎｔ（登録商標））によって定量化した。手短に言えば、約１．０ｍＬの患者サンプル血清を収集し、プラスチック製収集チューブに保管した。サンプルを適切な緩衝液に入れ、ラテックス微粒子に結合された抗ＣＲＰ抗体をサンプルに添加し、反応を開始させた。これらの抗ＣＲＰ抗体は、結合したラテックス微粒子とともに、サンプル中の抗原と反応し、抗原／抗体複合体を形成する。凝集反応後、これを、Ｒｏｃｈｅ／Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｍｏｄｕｌａｒ  Ｐ分析器を使用して、比濁法によって測定した。ＣＲＰ濃度についてのデータは、最初の４週間の間毎週、４〜１２週の間は２週間毎、そして１６週目の試験完結時に収集した。
【０６７９】
結果
血清ＣＲＰレベルは、研究した全ての患者において、大幅に減少した（図４１）。血清ＣＲＰレベルの減少は迅速で、Ａｂ１投与の１週間以内にプラセボに対してＣＲＰレベルが即時減少し、長期の低下したレベルが、少なくとも最終の測定が行われるまで継続した（最大１６週間）。全ての場合において、ＣＲＰレベルは１週間以内に、正常な参照範囲（５〜６ｍｇ／Ｌ未満）以下に低下した。したがって、関節リウマチ患者へのＡｂ１の投与は、血清ＣＲＰレベルの迅速かつ持続的な抑制を引き起こし得、有効な治療体制であることを示している。
【０６８０】
［実施例２７  Ａｂ１は進行癌を有する患者においてヘモグロビンを増加させる］
抗体Ａｂ１は、非小細胞肺癌を有する９３個人に、リン酸塩緩衝食塩水中のＡｂ１の８０ｍｇ、１６０ｍｇ、または３２０ｍｇで投薬された。プラセボ群は、非小細胞肺癌を有する３１個人に、リン酸塩緩衝食塩水のみで投薬された。血液サンプルを投薬前に（０週間）、ならびに、２週間、４週間、８週間、１２週間で取り出し、ヘモグロビン濃度を決定した。平均ヘモグロビン濃度は、抗体Ａｂ１を受けた患者で上昇し、一方、プラセボを受けた患者の平均ヘモグロビン濃度は、投薬前（０週間）の濃度と比較すると、１２週間後に上昇しなかった（図４２および４３）。
【０６８１】
研究集団の一部は、１１ｇ／Ｌを下回る基準ヘモグロビン濃度として定義される、ヘモグロビンの低レベルを対象とした研究を開始した。平均ヘモグロビン濃度は、１６０ｍｇおよび３２０ｍｇの投与量で、抗体Ａｂ１を受けた患者で、８週間後に１１ｇ／Ｌを超えて上昇し、一方、８０ｍｇの投与量で、抗体Ａｂ１を受けた患者の平均ヘモグロビン濃度またはプラセボは、８週間後に１１ｇ／Ｌを超えて上昇しなかった（図４４）。
【０６８２】
これらの結果は、慢性疾患個人へのＡｂ１の投与の有益な効果のいくつかをさらに示す。ＩＬ−６は、慢性疾患に伴う貧血（癌に関連した貧血を含む）の原因である主なサイトカインなので、Ａｂ１によるＩＬ−６の中和は、これらの個人においてヘモグロビン濃度を増加させる。
【０６８３】
［実施例２８  Ａｂ１は関節リウマチを有する患者においてヘモグロビンを増加させる］
ヘモグロビンレベルを、Ａｂ１抗体での治療中、関節リウマチを有する患者においてアッセイした。Ａｂ１抗体は、関節リウマチを有する９４個人に、リン酸塩緩衝食塩水中の８０ｍｇ、１６０ｍｇ、または３２０ｍｇで投薬した。関節リウマチを有する３３個人のプラセボ群は、リン酸塩緩衝食塩水のみで投薬した。血液サンプルを投薬前に（０週間）、ならびに、１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、１６週間で取り出し、ヘモグロビン濃度を決定した。平均ヘモグロビン濃度は、抗体Ａｂ１を受けた患者で上昇し、一方、プラセボを受けた患者の平均ヘモグロビン濃度は、投薬前（０週間）の濃度と比較すると、１６週間後にほとんど上昇しなかった（図４５）。
【０６８４】
これらの結果は、慢性疾患個人へのＡｂ１の投与の有益な効果のいくつかをさらに示す。ＩＬ−６は、慢性疾患に伴う貧血（癌に関連した貧血を含む）の原因である主なサイトカインなので、Ａｂ１によるＩＬ−６の中和は、ヘモグロビン濃度を増加させる。
【０６８５】
［実施例２９  Ａｂ１は進行癌を有する患者においてアルブミンを増加させる］
血清中アルブミン濃度は、癌患者の生存および／または回復成功の予測指標として認識されている。低アルブミン血症は、癌の多数の形態における患者の不良なパフォーマンスと強く相関する。例えば、１つの研究では、転移性膵臓腺癌のための全身化学療法を受け、３．５ｇ／ｄＬ未満の血清中アルブミンレベルを有する患者で、全身化学療法にうまく応答した者は一人もいなかった（Ｆｕｊｉｓｈｉｒｏ，Ｍ．，ら，Ｈｅｐａｔｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，４７（３６）：１７４４−４６（２０００））。著者は、「低アルブミン血症…を有する患者は…全身化学療法に対して不適当な候補者であり得、他の実験アプローチまたは対症療法で治療され得る」と結論付けている。同文献。
【０６８６】
同様に、ＳｅｎｉｏｒおよびＭａｒｏｎｉは、「低アルブミン血症が、末期の腎疾患の死亡率の最強の予測指標であるという最近の認識は、この患者集団において、十分なタンパク質摂取を保証する決定的な重要性を強調している」と述べている（Ｊ．Ｒ．ＳｅｎｉｏｒおよびＢ．Ｊ．Ｍａｒｏｎｉ，Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｕｔｒ．Ｓｃｉ．，１２９：３１３Ｓ−３１４Ｓ（１９９９））。
【０６８７】
少なくとも１つの研究では、血清中アルブミンレベル（＞３．５ｇ／ｄＬ）が達成されるまで、２０ｇの日々の静脈内アルブミン注入によって、転移性癌を有する２７患者の低アルブミン血症を矯正するよう試みたが、わずかな成功しか得られなかった。著者は、「進行癌患者へのアルブミン注入は、臨床診療において限定された価値しか有さない。ＰＳ４および低アルブミン血症を有する患者は、より不良な予後を有する」と記している（Ｄｅｍｉｒｋａｚｉｋ，Ａ．，ら，Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２１：Ａｂｓｔｒ２８９２（２００２））。
【０６８８】
したがって、当技術分野において、癌患者における血清中アルブミン濃度を改善し、癌患者、特に進行癌を有する患者の低アルブミン血症状態に対処する方法および／または治療の必要性が未だ存在する。
【０６８９】
方法
抗体Ａｂ１は、非小細胞肺癌を有する９３個人に、リン酸塩緩衝食塩水中のＡｂ１の８０ｍｇ、１６０ｍｇ、または３２０ｍｇで投薬した。各個人は、投与を受けた。非小細胞肺癌を有する３１個人のプラセボ群は、リン酸塩緩衝食塩水のみで投薬した。血液サンプルを、投薬前に（０週間）、ならびに、２週間、４週間、８週間、１２週間で取り出し、アルブミン濃度が決定された。
【０６９０】
結果
平均アルブミン濃度は、抗体Ａｂ１を受けた患者で上昇し、一方、プラセボを受けた患者の平均アルブミン濃度は、投薬前（０週間）の濃度と比較すると、１２週間後に上昇しなかった（図４６）。全ての投与濃度群のための基準アルブミン値からの変化を、図４７にプロットする。
【０６９１】
研究集団の一部は、３５ｇ／Ｌ以下またはそれに等しい基準アルブミン濃度として定義される、アルブミンの低レベルを対象とした研究を開始した。平均アルブミン濃度は、はじめに、プラセボ上の抗体Ａｂ１の全投与量で上昇したが、１６０ｍｇまたは３２０ｍｇを受けた患者のみ、研究の８週間にわたって、３５ｇ／Ｌを超えた、持続したアルブミンレベルを示した（図４８）。８０ｍｇ用量群は初期増加を示したが、第２週後に減退し、データが入手可能である８週間の間に、３５ｇ／Ｌを超えて上昇しなかった（同図）。
【０６９２】
［実施例３０  Ａｂ１は進行癌を有する患者において体重を改善し、疲労を軽減した］
体重減少および疲労は、進行型癌を有する患者の非常に一般的な症状であり、これらの症状は、癌が進行し続けるにつれて悪化し得る。疲労および体重減少は、例えば、生活習慣および人間関係を乱し、患者の癌治療を継続する意欲および能力に影響を及ぼすことによって、進行型癌を有する患者の回復で著しい悪影響を及ぼし得る。疲労および体重減少に取り組む知られている方法は、フィットネスおよび運動の規則的な日常課程、患者のエネルギーを保存する方法、および貧血によって誘発される疲労に取り組む治療を含む。それにもかかわらず、癌患者における疲労および体重減少を改善する方法および／または治療のために、当技術分野において必要性が未だ存在する。
【０６９３】
方法
非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する１２４患者を、４治療群に分けた。１つの群の患者は、プラセボ（ｎ＝３１）、Ａｂ１モノクローナル抗体８０ｍｇ（ｎ＝２９）、１６０ｍｇ（ｎ＝３２）、または３２０ｍｇ（ｎ＝３２）のいずれかの１時間の静脈内（ＩＶ）注入を、８週間に１回、２４週間を超えて計３回受けた。
【０６９４】
その投与量の投与前、およびそれ以降、投与後少なくとも１２週間の間患者を評価した。各診断時に、患者は、以下についてスクリーニングされた：ａ．）体重のいくらかの変化、およびｂ．）疲労を診断するために医学的に認識された試験である、Ｆａｃｉｔ−Ｆ疲労サブスケール質問表を使用して測定される疲労（例えば、Ｃｅｌｌａ，Ｄ．，Ｌａｉ，Ｊ．Ｓ．，Ｃｈａｎｇ，Ｃ．Ｈ．，Ｐｅｔｅｒｍａｎ，Ａ．，＆Ｓｌａｖｉｎ，Ｍ．（２００２）。Ｆａｔｉｇｕｅ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｗｉｔｈ  ｆａｔｉｇｕｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ，９４（２），５２８−５３８、Ｃｅｌｌａ，Ｄ．，Ｅｔｏｎ，Ｄ．Ｔ．，Ｌａｉ，Ｆ  Ｊ−Ｓ．，Ｐｅｔｅｒｍａｎ，Ａ．Ｈ＆Ｍｅｒｋｅｌ，Ｄ．Ｅ．（２００２）。Ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ  ａｎｃｈｏｒ  ａｎｄ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｂａｓｅｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｔｏ  ｄｅｒｉｖｅ  ｍｉｎｉｍａｌ  ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ  ｉｍｐｏｒｔａｎｔ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｅｍｉａ  ａｎｄ  ｆａｔｉｇｕｅ  ｓｃａｌｅｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｉｎ＆Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，２４（６）５４７−５６１を参照のこと）。
【０６９５】
結果
体重変化
１２週間にわたるＡｂ１  モノクローナル抗体の各投与濃度群（プラセボ、８０ｍｇ、１６０ｍｇ、および３２０ｍｇ）からの平均体重パーセント変化データを、図４９にプロットする。各投与濃度からの体重の平均変化率（％）を、図５０にプロットする。投与濃度群のための平均除脂肪体重データを、図５１にプロットする。
【０６９６】
疲労
Ａｂ１モノクローナル抗体の各投与濃度群（プラセボ、８０ｍｇ、１６０ｍｇ、および３２０ｍｇ）からの平均疲労は、８週間にわたって、患者集団におけるいくつかの投与濃度群の平均Ｆａｃｉｔ−Ｆ  ＦＳサブスケールスコアで増加を示した（図５２）。基準Ｆａｃｉｔ−Ｆサブスケールスコアからの変化を、図５３にプロットする。
【０６９７】
［実施例３１  Ａｂ１による進行癌の患者におけるＤダイマーレベルの低下］
Ｄダイマー濃度は患者の血栓症のリスクを予測する上で有用な診断ツールとして認識されている（Ａｄａｍら，１１３  Ｂｌｏｏｄ  ２８７８−８７  （２００９））。Ｄダイマーの陰性の患者は血栓症の確率が低い。例えば、Ｄダイマーの分析により、患者における下肢深部静脈血栓症の疑いを除外することができる（Ｗｅｌｌｓら，３４９  Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１２２７−３５（２００３））。Ｄダイマー陰性検査と組み合わせた臨床評価により、肺塞栓症の事例を効果的に０．５％まで下げることができる（Ｖａｎ  Ｂｅｌｌｅら，２９５ＪＡＭＡ１７２−７９（２００６）；Ｋｒｕｉｐら，１６２  Ａｒｃｈ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１６３１−３５（２００２）；Ｗｅｌｌｓら，１３５Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．９８−１０７（２００１））。
【０６９８】
Ｄダイマーの分析には、血液凝固異常症の治療進行状況の追跡の用途があり得る。
ある研究では、急性静脈血栓塞栓症のための抗凝固療法により、Ｄダイマー濃度が徐々に減少したことが示された（Ａｄａｍら，１１３Ｂｌｏｏｄ２８７８−８７（２００９）；Ｓｃｈｕｔｇｅｎｓら，１４４Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１００−０７（２００４））。
この発見により、Ｄダイマー濃度のモニタリングが治療反応性を評価するために使用できるという結論が導かれた（Ａｄａｍら，１１３  Ｂｌｏｏｄ  ２８８３）。
【０６９９】
癌患者の場合、癌が血栓症の有病率を増加させるため、Ｄダイマー解析に追加の意義が生じ得る（Ａｄａｍら，１１３  Ｂｌｏｏｄ  ２８７８−８７（２００９）。癌患者に対する１つの研究により、Ｄダイマー濃度が肺塞栓症の診断について高い陰性適中率と高い感度を持っていることが判明した（Ｋｉｎｇら，２４７  Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ  ８５４−６１（２００８））。深部静脈血栓症についても同様に、深部静脈血栓症の発症の確率が低い癌患者にＤダイマーの陰性試験を施すことで除外することができる。ただし、癌患者でこのような組み合わせがある可能性は低い（Ｌｅｅら，１２３  Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．１７７−８３（２００８））。癌患者では、Ｄダイマーの陰性試験の結果に関して高い閾値が必要となり得る（Ｒｉｇｈｉｎｉら，９５  Ｈａｅｍｏｓｔ．７１５−１９（２００６））。
【０７００】
したがって、当技術分野において、癌患者におけるＤダイマー濃度を改善し、癌患者、特に進行癌の患者における高濃度Ｄダイマー状態に対処する方法および／または血栓症の治療法に対する必要性が依然として存在する。
【０７０１】
方法
非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を罹患する１２４名の患者を４つの処置グループに分割した。一グループの患者は、プラセボ（ｎ＝３１）、８０ｍｇ（ｎ＝２９）、１６０ｍｇ（ｎ＝３２）、または３２０ｍｇ（ｎ＝３２）の量のＡｂ１モノクローナル抗体のうちのいずれかの１時間の静脈内（ＩＶ）注射を、２４週間にわたって８週間おきに全部で３回受けた。処置の最初の８週間のＤダイマー濃度に関するデータを収集した。Ｄダイマー濃度のデータ、Ｄ−ダイマー免疫比濁アッセイで定量した。簡単に説明すると、このアッセイは、測光により測定される微粒子懸濁液の濁度の変化に基づく測定法である。約１．５ｍＬの患者サンプルのクエン酸ナトリウム血漿をプラスチック製の採取チューブに回収し保存した。Ｄダイマーに特異的なモノクローナル抗体と共有結合によってコーティングされたラテックス微粒子の懸濁液を、そのＤダイマーレベルをアッセイする試験血漿と混合した。ラテックス微粒子の凝集を引き起こす抗原抗体反応が、反応培養液の濁度の増加を誘発した。濁度の増加は吸光度の増加に反映され、吸光度はＳＴＡＧＯ  ＳＴＡアナライザを測光法的に使用して測定した。吸光度の増加は、試験サンプル中に存在するＤダイマーレベルの関数であった。
【０７０２】
結果
Ａｂ１モノクローナル抗体の各用量濃度（プラセボ、８０ｍｇ、１６０ｍｇ、３２０ｍｇ）の平均データを図５４にプロットする。明瞭化のために、エラーバーはグラフから除かれている。Ｄダイマー濃度のベースラインからの変化率（％）が、図５５にプロットされている。すべての用量レベルのＡｂ１抗体は、８週間にわたってプラセボを超えるＤダイマー濃度の低下を示した。
【０７０３】
［実施例３２  進行性ＮＳＣＬＣの患者におけるＡｂ１の効果と安全性］
この試験の主な目的は、進行性ＮＳＣＬＣ患者でのＡＬＤ５１８またはヒト化Ａｂ１の有効性と安全性を判定することであった。
【０７０４】
方法
ＮＳＣＬＣ、ＥＣＯＧ０−３、直前３ヶ月での体重減少＞体重の５％、ヘモグロビン（Ｈｂ）＞７ｇ／ｄＬ、およびＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）＞１０ｍｇを示した１２４名の患者に投与した。患者を４グループのうちの１つに無作為に割り付けた（ｎ〜３０／グループ）。プラセボまたは８０ｍｇ、１６０ｍｇ、または３２０ｍｇのＡＬＤ５１８を８週間ごとに静脈内投与した。患者を２４週間追跡調査した。データには、血液学所見、臨床化学所見、ＣＲＰ、および有害事象（ＡＥ）が含まれた。
【０７０５】
結果
２９名の患者が研究処置と評価を完了し、３８名の患者は全検査を完了できず、５２名の患者は進行性の病気で死亡し、５名は有害事象のために撤退した。用量を規制する毒性（ＤＬＴ）または注射反応は存在しなかった。８４名の患者には重大な有害事象があり、うち１名にはＡＬＤ５１８の投与に関連する可能性があるとみなされた（直腸出血）。ヘモグロビン値（Ｈｂ）、ヘマトクリット値（Ｈｃｔ）、赤血球ヘモグロビン（ＭＣＨ）、アルブミンの平均（±標準偏差）値は以下の通りであった。
【表７】
0005934652.tif 000016
ALD518処置された患者の38/93、およびプラセボを与えられた患者の10/31は、投薬前Hb≦11g/dL。ALD518処置された患者の24名およびプラセボを与えられた患者の7名が試験4週目に残っていた。ALD518処置された患者の14/、およびプラセボを与えられた患者の0/7で、そのHb値が≦11g/dLから≧12g/dLに上昇した。
【０７０６】
結論
ＮＳＣＬＣの患者においてＡＬＤ５１８は、Ｈｂ、Ｈｃｔ、ＭＣＨ、およびアルブミンを上昇させ、ベースラインがＨｂが１１ｇ／ｄＬ以下のｐｔｓの５８％においてＨｂが１２ｇ／ｄＬ以上に上昇した。このことは、ＡＬＤ５１８は癌に関連した貧血を治療するための非赤血球刺激剤として投与できることをさらに示している。
【０７０７】
［実施例３３  Ａｂ１は関節リウマチ患者におけるＡＣＲ２０／５０／７０を達成した］
関節リウマチは、主に関節の滑膜を攻撃する慢性で全身性炎症疾患である。この病気は、痛みを伴い生活に支障を来たさせ得るほどの炎症を引き起こし、一般的に４０歳と５０歳の間に発症する。関節リウマチの薬物治療の有効性の解釈は、長年にわたって利用可能とされてきた無数の主観的および客観的評価ツールによって困難なものとされている。米国リウマチ学会議（ＡＣＲ）は、臨床試験での病気の改善の評価を容易にするための標準化された関節リウマチ評価セットを発表している。Ｆｅｌｓｏｎら，３６  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ７２９−４０（１９９３）。
【０７０８】
方法
活動性関節リウマチを罹患してＣＲＰが１０ｍｇ／Ｌ以上の１２７名の患者を４つの処置グループに分割した。一グループの患者は、プラセボ（ｎ＝３３）、８０ｍｇ（ｎ＝３２）、１６０ｍｇ（ｎ＝３４）、または３２０ｍｇ（ｎ＝２８）のの量のＡｂ１モノクローナル抗体のうちのいずれかの１時間の静脈内（ＩＶ）注射を、１６週間の試験期間の開始時と８週間後に受けた。ＣＲＰ濃度に関するデータは、最初の４週間は毎週、４週目〜１２週目の間には２週毎に、および１６週目に試験の結論を出すときに回収した。
【０７０９】
臨床試験中の患者の改善の割合を決定するにあたり、米国リウマチ学会の標準化されたプロトコルに基づく評価を採用し、この評価は、関節リウマチの評価の一般的な技術の訓練を受けた者が実施した。この評価は、圧痛関節数、腫脹関節数、患者による疼痛の評価、患者および医師による疾病の活動の全体的な評価、および赤血球沈降速度またはＣＲＰレベルいずれかの実験評価などの活動指標に基づいていた。同文献。患者の疼痛評価は、スタンフォード健康評価問診票を用いた機能障害指標（ＨＡＱ  ＤＩ）に基づくものであった。臨床試験中に関節リウマチの活動評価で２０％の増加を達成する患者は、ＡＣＲ２０達成に分類される。同様に、５０％および７０％の改善を達成する患者は、それぞれＡＣＲ５０とＡＣＲ７０として分類される。
【０７１０】
結果
関節リウマチを罹患している患者の有意な部分は、試験の過程の間にＡＣＲ２０以上を達成した（図５６）。患者は、試験の最初の４週間以内の系における急速な改善、ならびに１６週間の全期間を通しての継続的な着実な改善を示した（図５７、図５８、および図５９）。３２０ｍｇの用量レベルを受けてきた患者が示した最大の結果として、試験中に４３％がＡＣＲ７０を達成した（図５９）。
【０７１１】
ＡＣＲ評価の個々の成分の分析により、すべての成分の増加を示す（図６０）。ＨＡＱ  ＤＩスコアは評価の過程にプラセボを超える臨床的に意味のある変化を示した（図６１）。血清中ＣＲＰレベルが、調査したすべての患者で大きく減少した（図６１）。血清中ＣＲＰレベルの低下は急速なものであり、Ａｂ１投与後１週間以内にプラセボに対する相対ＣＲＰレベルは即時に低下し、長期的なレベルの低下は、少なくとも最終的な測定をされるまで（最大１６週間）継続した。すべての事例において、ＣＲＰは１週間以内に正常な基準範囲（５〜６  ｍｇ／Ｌ未満）で低下した。したがって、Ａｂ１の投与は、臨床評価中のＡＣＲスコアの有意な改善によって証明されるように、関節リウマチ患者の急速かつ持続的な改善をもたらすことができ、効果的な治療レジメンを提示する。
【０７１２】
［実施例３４  Ａｂ１は、関節リウマチ患者におけるＤＡＳ２８およびＥＵＬＡＲスコアを改善した］
序
関節リウマチは、主に関節の滑膜を攻撃する慢性の全身性炎症疾患である。この病気は、痛みを伴い生活に支障を来たさせ得るほどの炎症を引き起こし、一般的に４０歳と５０歳の間に発症する。関節リウマチの薬物治療の有効性の解釈は、長年にわたって利用可能とされてきた無数の主観的および客観的評価ツールによって困難なものとされている。米国リウマチ学会議（ＡＣＲ）は、臨床試験での病気の改善の評価を容易にするための標準化された関節リウマチ評価セットを発表している。Ｆｅｌｓｏｎら，３６  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ７２９−４０（１９９３）。
【０７１３】
関節リウマチに関連した炎症活性は、疾患活動性スコア（ＤＡＳ）、ＤＡＳ２８およびＥＵＬＡなどの有効な応答基準によって多数の変量を用いて測定される。ＤＡＳは、腫脹関節、圧痛関節、急性相反応、および一般的健康状態からの情報を組み合わせた関節リウマチの疾患活動性の臨床的指標である。Ｆｒａｎｓｅｎ，Ｊ．ら，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，２３（Ｓｕｐｐｌ．３９）：Ｓ９３−Ｓ９９（２００５）。同文献。欧州リウマチ学会議（ＥＵＬＡＲ）反応基準は、個々のＤＡＳの変化量および分類されたＤＡＳ値（高、中、低）を用いて患者を次の分類（良好、中等度、または非応答者）の１つに分類する。同文献。
【０７１４】
方法
活動性関節リウマチを罹患した１２７名の患者を４つの処置グループに分割した。一グループの患者は、プラセボ（ｎ＝３３）、８０ｍｇ（ｎ＝３２）、１６０ｍｇ（ｎ＝３４）、または３２０ｍｇ（ｎ＝２８）の量のＡｂ１モノクローナル抗体のうちのいずれかの１時間の静脈内（ＩＶ）注射を、１６週間の試験期間の開始時と８週間後に受けた。ＤＡＳ２８およびＥＵＬＡＲスコアに関するデータは、最初の４週間は毎週、４週目〜１２週目の間には２週毎に、および１６週目に試験の結論を出すときに回収した。臨床試験中の患者のそれぞれのスコア決定するにあたり、ＤＡＳ２８およびＥＵＬＡＲの標準化されたプロトコルに基づく評価を採用し、この評価は、関節リウマチの評価の一般的な技術の訓練を受けた者が実施した。
【０７１５】
結果
８０ｍｇ、１６０ｍｇ、または３２０ｍｇのＡｂ１モノクローナル抗体を受けていた患者は、図６２にベースラインＤＡＳ２８スコアからの平均変化として示されているように、１６週間の期間全体にわたってプラセボを受けていた患者に対してＤＡＳ２８スコアの改善を示した。さらに、８０ｍｇ、１６０ｍｇ、または３２０ｍｇのＡｂ１を受けていた患者の有意なパーセンテージが、１６週の期間にわたってプラセボを受けていた患者と比較して「良好」または「中等度」の分類を達成した（図６３）。
【０７１６】
したがって、Ａｂ１の投与は、プラセボ群の患者と比較して、関節リウマチにおけるＤＡＳ２８およびＥＵＬＡＲスコアの改善をもたらすことができる。
【０７１７】
［実施例３５  ヒト対象におけるＡｂ１の安全性、薬物動態（ＰＫ）、および薬力学（ＰＤ）］
本明細書に記載するように、配列番号１９および２０の可変重鎖および軽鎖配列を含むＡｂ１（ヒト化Ａｂ１すなわちＡＬＤ５１８）に由来するヒト化抗体を、関節リウマチ患者に投与した。この抗体は、ヒトにおける半減期（ｔ１／２）が約３０日であることが示されている、ヒト化、シアル酸除去（ａｓｉａｌａｔｅｄ）の、ＩＬ−６に対するＩｇＧ１モノクローナル抗体である。ＲＡ患者における研究では、この抗体（ヒト化Ａｂ１）の静脈内投与（ＩＶ）が、米国リウマチ学会議（ＡＣＲ）の迅速応答基準で１６週間の効果；完全かつ持続性のあるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の抑制；良好な忍容性；およびＩＬ−６遮断の生物学的効果と一致する安全性プロファイルを示した。このヒト化抗体は高い親和性をもってＩＬ−６に結合し、その相互作用を妨げてＩＬ−６Ｒを介したシグナル伝達を防止する。迅速かつ有意な治療に対する応答は、ＲＡ患者でのヒトＡｂ１の静脈内（ＩＶ）投与で実証されている。この実施例では、ヒト化Ａｂ１のＲＡ患者への皮下（ＳＣ）投与の安全性、薬物動態、および薬力学を調べる。
【０７１８】
この試験の目的は、健康な男性被験者でのこのヒト化抗体の単回の皮下注射の安全性、薬物動態（ＰＫ）と薬力学（ＰＤ）を評価することであった。
【０７１９】
方法
この第Ｉ相、二重盲検、プラセボ対照試験では、２７の被験者を２：１に無作為割付けし、以下のグループにヒト化Ａｂ１またはプラセボの単回投与を受けさせた：ヒト化Ａｂ１の５０ｍｇのＳＣ投与、ヒト化Ａｂ１の１００ｍｇのＳＣ投与、またはヒト化Ａｂ１の１００ｍｇのＩＶ投与（１グループあたりｎ＝６活性およびｎ＝３プラセボ）。主な目的は、１２週間にわたるＳＣ投与ヒト化Ａｂ１対プラセボの安全性を評価することであった。二次的な目的として、ヒト化Ａｂ１の血漿中濃度およびＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の血清濃度を評価した。評価は第１週は毎日行い、その後１０日目、２週目、４週目、６週目、８週目に行い、さらに１２週目まで月に一回行った。試験は１２週目に非盲検にされ、ヒト化Ａｂ１の被験者を２４週目までモニタリングした。
【０７２０】
試験のデザインおよび集団
試験は２７名の健康な男性被験者（１８歳〜６５歳）に行った。被験者はそれぞれ９被験者の３つの治療グループにおいて投与を受け、２：１に無作為化されてヒト化Ａｂ１またはプラセボを１日目に単回投与された（図６４）。各グループごとのヒト化Ａｂ１処置は次の通りであった：
ヒト化Ａｂ１の１００ｍｇの６０分間のＩＶ点滴
ヒトＡｂ１の５０ｍｇのＳＣ注射（１ｍＬ）
ヒトＡｂ１の１００ｍｇの注射（１ｍＬ）。
試験は１２週目に非盲検試験され、その後、プラセボ被験者は試験を中止し、ＢＭＳ−９４５４２９被験者は２４週目までモニタリングした。
【０７２１】
安全性および免疫原性の評価
この試験の主な目的は、１２週間にわたってプラセボと比較したヒト化Ａｂ１抗体の安全性を評価することであった。すべての被験者について１２週間にわたって安全性を評価した。試験は１２週目に非盲検にされ、ヒト化Ａｂ１の被験者を２４週目までモニタリングした。
【０７２２】
実験室内安全性試験を、すべての被験者に対して、スクリーニング時および１日目の投与前と、２日目および７日目、２週目、４週目、６週目、８週目、および１２週目の投与後に行い、ヒト化Ａｂ１に無作為化された被験者に対して、１６週目、２０週目、および２４週目の投与後に行った。抗ヒトＡｂ１抗体を酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）によって測定した。血液サンプルは、すべての被験者について、１日目（投与前）および１２週目の投与後に採取し、ヒト化Ａｂ１に無作為に割付けした被験者について、２４週目の投与後に採取した。
【０７２３】
薬物動態と薬力学の評価
血漿中ヒト化Ａｂ１および血清中ＣＲＰ濃度をＥＬＩＳＡによって評価した。すべての被験者について、サンプル採取を、スクリーニング時および１日目の投与前と、２日目および７日目、２週目、４週目、６週目、８週目、および１２週目の投与後に行った。ヒト化Ａｂ１に無作為化された被験者について、サンプル採取をさらに、１６週目、２０週目、および２４週目の投与後に行った。
【０７２４】
統計解析
ヒト化Ａｂ１またはプラセボの投与を受けたすべての被験者を、安全性解析に含めた。ヒト化Ａｂ１またはプラセボの投与を受けたすべての被験者を、ＰＤおよび免疫原性解析に含めた。ヒト化Ａｂ１の投与を受けたすべての被験者を、ＰＫ解析（ｎ＝１８）に含めた。プラセボ被験者のＰＫサンプルはすべて、以下の定量によって確認した。
【０７２５】
記述統計を、ベースラインの情報、安全データ、血漿ヒトＡｂ１パラメータ、および血清ＣＲＰ濃度について生成した。ウイルコクスン順位和検定を用いて、ヒト化Ａｂ１処置対プラセボでＣＲＰ濃度を比較した。
【０７２６】
結果
要約
２４週間にわたって、有害事象に起因する死亡または重篤な有害事象、および有害事象に起因する中止はなかった。ほぼすべての被験者（８９％）が有害事象を経験したが、ヒト化Ａｂ１のＳＣ５０ｍｇのグループにおける１つの重度の胃腸炎イベントを除き、軽度または中等度であった。注射部位反応は、ヒトＡｂ１のＳＣ被験者の５／１２、プラセボＳＣ被験者１／３、プラセボＩＶ被験者の１／３で発生した（ヒトＡｂ１のＩＶ被験者では報告されていない）。これらは、ヒトＡｂ１の１００ｍｇＳＣグループでの中等度の紅斑およびそう痒症の一例を除き軽度であった。正常下限を下回る直接ビリルビンおよび好中球数の増加は、プラセボよりもヒトＡｂ１を受けた被験者においてより一般的であり、すべてＣＴＣグレード１または２であった。ヒト化Ａｂ１の半減期はすべてのグループ間で類似していた（平均範囲：３０．７〜３３．６日）。ヒト化Ａｂ１の半減期の中央値ＴｍａｘはＩＶ投与（ほぼ点滴の終了）後よりＳＣ（約１週間）の後の方が長かった。ＳＣヒト化Ａｂ１のＰＫは、５０ｍｇおよび１００ｍｇの用量でのＡＵＣ及びＣｍａｘについて用量に比例していた。ヒト化Ａｂ１の５０ｍｇＳＣ、１００ｍｇＳＣ、および１００ｍｇＩＶグループのそれぞれに対するＡＵＣ０〜∞（日＊μｇ／ｍＬ）が２３７、４５２、および７６４であったことに基づき、ヒト化Ａｂ１の生物学的利用能は、ＳＣ対ＩＶグループについて約６０％であった。ヒト化Ａｂ１を受けた被験者は、血清ＣＲＰの急激かつ持続的な減少を経験した（図６６）。
【０７２７】
被験者の性質およびベースラインに関する情報
合計２７名の被験者が参加し、調査を完了した（ｎ＝１８ヒト化Ａｂ１、ｎ＝９プラセボ）。なんらかの理由で試験を中止した被験者はなかった。
【０７２８】
全被験者は男性であった。２３／２７の被験者は白人で、４／２７はアジア系だった。平均年齢は２９歳（範囲２０〜５９歳）でグループ間で類似していた。
平均身長および体重も各グループ間で同程度であったが、ＩＶプラセボ群はわずかに体重が軽かった。
【０７２９】
ヒト化Ａｂ１およびプラセボについての１２週目までの安全性および免疫原生
安全性の概要を図６７に示す。ＳＣヒト化Ａｂ１群について、合計１１／１２（９１％）の患者が、有害事象（ＡＥ）を経験した：
ＩＶヒト化Ａｂ１群について６／６（１００％）；
ＳＣプラセボ群について４／６（６６．６％）；および
ＩＶプラセボ群について３／３（１００％）。
【０７３０】
全群について
死亡または重篤な有害事象は報告されず、有害事象に起因するには中止もなかった。ほとんどの有害事象は軽度または中等度の強度であった。ＳＣヒト化Ａｂ１５０ｍｇの被験者の胃腸炎の一症例は重度とみられたが、重症ではなく、試験の投薬とは無関係であった。抗ヒト化Ａｂ１抗体は、この期間中のいずれの被験者にも検出されなかった。
【０７３１】
注射部位の反応
注射部位反応は、被験者の２６％（７／２７）で報告され、すべてが１２週目より前に発生した（図６８）。注射部位反応は、５／１２のＳＣヒト化Ａｂ１被験者と１／６のＳＣプラセボ被験者で発生した。ＩＶグループでは、０／６のヒト化Ａｂ１被験者と１／３プラセボ被験者が注射部位反応を経験した。すべての注射部位反応は、ヒトＡｂ１の１００ｍｇＳＣグループでの中等度の注射部位の紅斑およびそう痒症の一例を除き軽度であった。ヒト化Ａｂ１グループでは、いずれの群でも注射部位反応は１２週目の後に発生しなかった。注入部位反応は、ＩＶヒト化Ａｂ１を受けた６名の被験者では報告されず、ＩＶプラセボ被験者の１／３（注入部位の痒み）で報告された
【０７３２】
臨床検査の評価
図６９は、ヒト化Ａｂ１およびプラセボ群におけるアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、およびビリルビン値の増大を示す。すべてのＡＬＴおよびＡＳＴのレベルは有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）によるグレード１で、正常の上限値（ＵＬＮ）の３倍以上のレベルはみられなかった。総ビリルビンと直接ビリルビンのすべての増加は、ＣＴＣＡＥグレード１または２であり、薬物誘発性肝障害の基準を満たす被験者はいなかった。ただ一例の被験者（１００ｍｇのＳＣヒト化Ａｂ１グループ）のみが、２４週目で範囲外の総ビリルビン（２６μｍｏｌ／Ｌ、範囲０〜２４μｍｏｌ／Ｌ）を示した。
【０７３３】
好中球および血小板数の散発的な減少はまた、ヒト化Ａｂ１群とプラセボ群で観察された（図６９）。正常下限を下回る好中球数は、プラセボよりもヒトＡｂ１を受けた被験者においてより一般的であり、すべての減少はＣＴＣＡＥグレード１または２であった。ただ一例の被験者（５０ｍｇのＳＣヒト化Ａｂ１グループ）のみが、２４週目まで一貫して軽度の好中球減少症を示した（２４週目で１．６×１０９／Ｌ）。血小板数の減少はすべてＣＴＣＡＥグレード１（最低レベル１３４×１０９／Ｌ）であり、８週目を過ぎて、血小板数が低い被験者は存在しなかった。
【０７３４】
薬物動態
ヒト化Ａｂ１の５０ｍｇＳＣ、１００ｍｇＳＣ、および１００ｍｇＩＶグループのそれぞれに対する平均ＡＵＣ０〜∞に基づくヒト化Ａｂ１の生物学的利用能は、ＳＣ対ＩＶグループについて約６０％であった（図７０）。ヒト化Ａｂ１の半減期はすべてのグループにわたって同様であった（平均範囲：３０．７〜３３．６日）（図７０）。ＩＶの場合と比較してＳＣヒト化Ａｂ１のピーク血漿濃度（Ｃｍａｘ）は低下した（図６５）。ヒト化Ａｂ１の最大血漿濃度（Ｔｍａｘ）までの期間の中央値は、ＩＶヒト化Ａｂ１投与後（点滴終了約時）よりもＳＣヒト化Ａｂ１投与後（約一週目）の方が長かった。
【０７３５】
薬力学
ＣＲＰレベルは、用量や投与経路とは無関係に、ヒト化Ａｂ１投与を受けたすべての被験者で減少した。（図６６および図７１）４週目〜１２週目において、ＣＲＰはプラセボと比較してヒト化Ａｂ１を受けた被験者で有意に低かった（調整なし、ｐ値＜０．０５、図６６）。ヒト化Ａｂ１被験者では、ＣＲＰレベルが投与前のレベルの＜２０％に低下した：すなわち
１週目において被験者の７２％（１３／１８）；
１２週目において被験者の７３％（１１／１５）；および
２４週目において被験者の５６％（１０／１８）。
【０７３６】
結論
この第Ｉ相試験では、健康な男性被験者への単回ＳＣ投与の場合、抗ＩＬ−６抗体ヒト化Ａｂ１は、一般的に忍容性は良好であった。注射部位反応は一般に軽度であった。抗ヒト化Ａｂ１抗体は検出されなかった。肝酵素、好中球、および血小板数の変化は可逆的であった。ＳＣヒト化Ａｂ１の生物学的利用能は、ＩＶヒト化Ａｂ１で観察されたものの約６０％であった。ヒト化Ａｂ１の半減期は、投与経路とは無関係に約３０日であった。これらのデータは、ＩＶヒト化Ａｂ１を用いて以前に得られたデータと一致している。皮下ヒト化Ａｂ１は、血清中ＣＲＰの急激かつ大幅な低下をもたらした。試験の最初の１２週間に観察されたＣＲＰの低下は評価の２４週間にわたって持続した。これらの予備的データは、ＲＡ患者の治療のためにＳＣヒト化Ａｂ１の継続的な開発および評価を行うべきことを裏付けるものである。
【０７３７】
要約すると、この第Ｉ相試験では、単回ＳＣ投与した場合、抗ＩＬ−６抗体ヒト化Ａｂ１の忍容性は良好であり、注射部位反応は一般に軽度であった。ＳＣヒト化Ａｂ１の生物学的利用能はＩＶヒト化Ａｂ１の約６０％であり、半減期は約３０日であった。評価の２４週間にわたって継続したＣＲＰの迅速かつ大幅な低下が観察された。
【０７３８】
［実施例３６  ＤＡＳ２８で評価された疾病の活性に対するＡｂ１の影響］
上述のように、ＡＬＤ５１８＊は、約３０日の半減期を有し、配列番号１９および２０に含められたヒト化可変重鎖および軽鎖配列を含む、シアル酸除去（ａｓｉａｌａｔｅｄ）されたヒト化抗ＩＬ−６モノクローナル抗体である。これらのヒト化重鎖および軽鎖配列は、ヒトＩＬ−６に特異的に結合する親ウサギ抗体に由来し、前記本明細書に組み入れられた出願においてＡｂ１と称される。ＡＬＤ５１８は、高い親和性をもってＩＬ−６に結合して、可溶性の膜結合ＩＬ−６Ｒを介した相互作用およびシグナル伝達を阻止する。迅速かつ有意なＡＣＲの応答は、ＲＡ患者においてＡＬＤ５１８＊で実証されている。この実施例では、１６週間にわたるＤＡＳ２８で評価された疾病活性へのＡＬＤ５１８の影響を報告する。
【０７３９】
方法
活動性関節リウマチを罹患し、ＭＴＸに対する応答が不十分な患者を１：１：１；１に無作為化して、この１６週間の二重盲検でプラセボ対照の第ＩＩ相試験の間に、８０ｍｇ、１６０ｍｇ、または３２０ｍｇのＡＬＤ５１８＊またはプラセボを静脈内投与した。ＭＴＸの安定的投与を継続しながら、患者に、ＡＬＤ５１８のＩＶ点滴を２回（１日目と８週目）受けさせた。主な有効性のエンドポイントは、１２週目におけるＡＣＲ２０を達成した患者の割合であった。疾患活動性は、二次的なエンドポイントとしてＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）に基づく疾患活動性スコア（ＤＡＳ２８）によって評価した。ＤＡＳ２８で定義された寛解度（スコア＜２．６）、低疾患活動状態（ＬＤＡＳ、スコア≦３．２）、および良好なＥＵＬＡＲ反応（現ＤＡＳ２８≦３．２およびベースラインからの改善＞１．２）を達成した患者の割合を、修正包括解析集団（ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）について評価し、利用可能なデータ（観察値）のある患者について示した。ｐ値は、カイ二乗検定に基づくものである。
【０７４０】
結果
１２７名の無作為化され処置された患者のうちで１１６名が試験を完了した。ベースライン時では、平均年齢は５２．３歳で、ＲＡ期間は６．８年であった。４週目、１２週目、および１６週目におけるＬＤＡおよび寛解を達成した患者の割合は、すべてのＡＬＤ５１８＊投与群においてプラセボ群よりも大きかった。プラセボに対する差異は４週目の８０ｍｇのＡＬＤ５１８＊（ｐ＝０．０５６）以外のすべての評価について有意であった（ｐ＜０．０５）。同様に、ＥＵＬＡＲ反応は、４週目、１２週目、および１６週目においてすべてのＡＬＤ５１８＊投与群対プラセボ群について有意に良好であった（ｐ＜０．０１）。ＡＬＤ５１８＊用量が大きくなるほど応答が大きくなる傾向があった。
【表８】
0005934652.tif 000017
【０７４１】
重篤な有害事象は２名のＡＬＤ５１８患者で報告された（いずれも肝酵素の有意な増加を示し、処置を中止した）で報告された。全体的に、肝酵素の上昇＞２×ＵＬＮは、ＡＬＤ５１８＊群で１７％生じたのに対し、プラセボ処置した患者では０％であった。その頻度がもっとも高かったのは３２０ｍｇ用量群であった。総コレステロール値のわずかな増加もみられた（１６週目までの平均増加量は、ＡＬＤ５１８＊処置群において１．１ｍｍｏｌ／Ｌに対しプラセボ群で０．２ｍｍｏｌ／Ｌ）。９名のＡＬＤ５１８の患者は一時的なグレードＩＩの好中球減少症を、２名は一時的なグレードＩＩＩの好中球減少症を発症した。いずれの処置群においても重篤な感染症やその他の注入反応はみられず、免疫原性も認められなかった。
【０７４２】
結論
この第ＩＩ相試験では、新規なＩＬ−６阻害剤ＡＬＤ５１８が、ＲＡを罹患しＭＴＸに対する応答不十分な患者での評価において、１６週間にわたる持続的な疾患活動性の急激かつ大幅な改善をもたらした。ＡＬＤ５１８の忍容性は良好であり、ＩＬ−６遮断の生物学的効果と一致する安全性プロファイルを示した。
【０７４３】
［実施例３７  Ａｂ１の投与］
方法
活動性ＲＡ患者を、ＡＬＤ５１８の複数のＩＶ注射（８０、１６０または３２０ｍｇ）を比較する１６週間二重盲検プラセボ対照試験に無作為に割り付けた。患者は８週間ごとに点滴を受け、試験全体を通してＭＴＸを安定した用量で維持した。評価には、ＡＣＲ２０／５０／７０応答およびＤＡＳ２８が含まれていた。すべての患者の安全性を評価した。早期に中止した患者について、連続変数についてはＬＯＣＦ分析、およびカテゴリ変数のについては非応答者データ補完を用いた。
【０７４４】
結果
１３２名の患者が無作為化され、１２７名に投与がなされた。平均罹患期間は６．６年、平均ＤＡＳ２８スコアは６．２で、平均ＨＡＱ−ＤＩは１．７２であった。１１名の患者（３２０ｍｇの３名、１６０ｍｇの１名、８０ｍｇの３名、プラセボの４名）は、１６週間の試験を完了しなかった。うち４名は有害事象（８０ｍｇの２名および３２０ｍｇの２名）のため、特に２名は重篤な有害事象（ＳＡＥ）（８０ｍｇの１名および３２０ｍｇの１名）のために継続できなくなった。肝酵素（ＬＦＴ）の＞２×ＵＬＮの上昇は、ＡＬＤ５１８で１７％、対してプラセボ０％が観察された。総コレステロール値のわずかな増加（１６週目までの平均増加量は、ＡＬＤ５１８で１．１ｍｍｏｌ／Ｌに対し、プラセボで０．２ｍｍｏｌ／Ｌ）がみられた。ＡＬＤ５１８の９名の患者は、一時的なグレード３の好中球減少症を示し、２名の患者は一時的なグレード３の好中球減少症を示した。全治療群で重篤な感染症は報告されなかった。ＡＬＤ５１８の注射による注入反応または免疫原性はなく、忍容性は非常に良好であった。４週目および１６週目において、ＡＣＲ応答（非有効例群解析）およびＤＡＳスコアの改善は次の通りであった：
【表９】
0005934652.tif 000018
【０７４５】
結論
ＡＬＤ５１８すなわちヒト化Ａｂ１は、抗ＩＬ−６レセプターモノクローナル抗体とは異なりＩＬ−６に対する第１のｍＡｂであって、ＲＡの疾患活動性において、有意で迅速かつ持続的な改善を示す。活動性関節リウマチの患者に２回のＩＶ注射として与えられた８０〜３２０ｍｇの範囲の用量のＡＬＤ５１８に対する忍容性は良好で、患者のなかには、ＬＦＥおよび総コレステロールの上昇や一時的な好中球減少症が見られたものもいた。ＡＬＤ５１８の投与に関連する注射反応も、検出可能な免疫原性もなかった。
［配列表］
本明細書で参照される生物学的配列を、以下に提示する。
配列番号１
ＶＰＰＧＥＤＳＫＤＶＡＡＰＨＲＱＰＬＴＳＳＥＲＩＤＫＱＩＲＹＩＬＤＧＩＳＡＬＲＫＥＴＣＮＫＳＮＭＣＥＳＳＫＥＡＬＡＥＮＮＬＮＬＰＫＭＡＥＫＤＧＣＦＱＳＧＦＮＥＥＴＣＬＶＫＩＩＴＧＬＬＥＦＥＶＹＬＥＹＬＱＮＲＦＥＳＳＥＥＱＡＲＡＶＱＭＳＴＫＶＬＩＱＦＬＱＫＫＡＫＮＬＤＡＩＴＴＰＤＰＴＴＮＡＳＬＬＴＫＬＱＡＱＮＱＷＬＱＤＭＴＴＨＬＩＬＲＳＦＫＥＦＬＱＳＳＬＲＡＬＲＱＭ
配列番号２
ＭＤＴＲＡＰＴＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＰＧＡＲＣＡＹＤＭＴＱＴＰＡＳＶＳＡＡＶＧＧＴＶＴＩＫＣＱＡＳＱＳＩＮＮＥＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＲＰＫＬＬＩＹＲＡＳＴＬＡＳＧＶＳＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＱＧＹＳＬＲＮＩＤＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮ
配列番号３
ＭＥＴＧＬＲＷＬＬＬＶＡＶＬＫＧＶＱＣＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳＮＹＹＶＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩＩＹＧＳＤＥＴＡＹＡＴＷＡＩＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＡＡＤＴＡＴＹＦＣＡＲＤＤＳＳＤＷＤＡＫＦＮＬＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫ
配列番号４
ＱＡＳＱＳＩＮＮＥＬＳ
配列番号５
ＲＡＳＴＬＡＳ
配列番号６
ＱＱＧＹＳＬＲＮＩＤＮＡ
配列番号７
ＮＹＹＶＴ
配列番号８
ＩＩＹＧＳＤＥＴＡＹＡＴＷＡＩＧ
配列番号９
ＤＤＳＳＤＷＤＡＫＦＮＬ
配列番号１０
ＡＴＧＧＡＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＣＣＣＡＣＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧＧＧＧＣＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＴＧＣＣＡＧＡＴＧＴＧＣＣＴＡＴＧＡＴＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＧＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＡＣＡＡＴＧＡＡＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＧＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＴＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＧＣＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＧＴＣＴＧＡＧＧＡＡＴＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴ
配列番号１１
ＡＴＧＧＡＧＡＣＴＧＧＧＣＴＧＣＧＣＴＧＧＣＴＴＣＴＣＣＴＧＧＴＣＧＣＴＧＴＧＣＴＣＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＴＣＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＴＡＡＣＴＡＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＡＴＣＡＴＴＴＡＴＧＧＴＡＧＴＧＡＴＧＡＡＡＣＧＧＣＣＴＡＣＧＣＧＡＣＣＴＧＧＧＣＧＡＴＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＧＡＣＣＡＧＴＣＴＧＡＣＡＧＣＣＧＣＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＴＡＧＴＧＡＣＴＧＧＧＡＴＧＣＡＡＡＡＴＴＴＡＡＣＴＴＧＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧ
配列番号１２
ＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＡＣＡＡＴＧＡＡＴＴＡＴＣＣ
配列番号１３
ＡＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴ
配列番号１４
ＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＧＴＣＴＧＡＧＧＡＡＴＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴ
配列番号１５
ＡＡＣＴＡＣＴＡＣＧＴＧＡＣＣ
配列番号１６
ＡＴＣＡＴＴＴＡＴＧＧＴＡＧＴＧＡＴＧＡＡＡＣＧＧＣＣＴＡＣＧＣＧＡＣＣＴＧＧＧＣＧＡＴＡＧＧＣ
配列番号１７
ＧＡＴＧＡＴＡＧＴＡＧＴＧＡＣＴＧＧＧＡＴＧＣＡＡＡＡＴＴＴＡＡＣＴＴＧ
配列番号１８
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＳＮＹＹＶＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＩＩＹＧＳＤＥＴＡＹＡＴＷＡＩＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＤＳＳＤＷＤＡＫＦＮＬ
配列番号１９
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＳＬＳＮＹＹＶＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＩＩＹＧＳＤＥＴＡＹＡＴＳＡＩＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＤＳＳＤＷＤＡＫＦＮＬ
配列番号２０
ＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＳＩＮＮＥＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＲＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＤＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＹＳＬＲＮＩＤＮＡ
配列番号２１
ＭＤＴＲＡＰＴＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＰＧＡＲＣＡＹＤＭＴＱＴＰＡＳＶＥＶＡＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＡＳＥＴＩＹＳＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＱＡＳＤＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＡＧＴＥＹＴＬＴＩＳＧＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣＱＱＧＹＳＧＳＮＶＤＮＶＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫ
配列番号２２
ＭＥＴＧＬＲＷＬＬＬＶＡＶＬＫＧＶＱＣＱＥＱＬＫＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＮＤＨＡＭＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＦＩＮＳＧＧＳＡＲＹＡＳＷＡＥＧＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＶＲＧＧＡＶＷＳＩＨＳＦＤＰＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫ
配列番号２３
ＱＡＳＥＴＩＹＳＷＬＳ
配列番号２４
ＱＡＳＤＬＡＳ
配列番号２５
ＱＱＧＹＳＧＳＮＶＤＮＶ
配列番号２６
ＤＨＡＭＧ
配列番号２７
ＦＩＮＳＧＧＳＡＲＹＡＳＷＡＥＧ
配列番号２８
ＧＧＡＶＷＳＩＨＳＦＤＰ
配列番号２９
ＡＴＧＧＡＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＣＣＣＡＣＴＣＡＧＣＴＧＣＴＧＧＧＧＣＴＣＣＴＧＣＴＧＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＣＡＧＧＴＧＣＣＡＧＡＴＧＴＧＣＣＴＡＴＧＡＴＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＡＧＧＴＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＡＣＣＡＴＴＴＡＣＡＧＴＴＧＧＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＣＡＧＧＣＡＴＣＣＧＡＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＡＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＧＧＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＧＴＡＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＴＧＴＧＡＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＧＴＧＧＴＡＧＴＡＡＴＧＴＴＧＡＴＡＡＴＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧ
配列番号３０
ＡＴＧＧＡＧＡＣＴＧＧＧＣＴＧＣＧＣＴＧＧＣＴＴＣＴＣＣＴＧＧＴＣＧＣＴＧＴＧＣＴＣＡＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＧＴＣＡＧＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＴＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＡＴＧＡＣＣＡＴＧＣＡＡＴＧＧＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＴＴＣＡＴＴＡＡＴＡＧＴＧＧＴＧＧＴＡＧＣＧＣＡＣＧＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＡＧＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＧＡＣＣＡＧＴＣＴＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＴＣＡＧＡＧＧＧＧＧＴＧＣＴＧＴＴＴＧＧＡＧＴＡＴＴＣＡＴＡＧＴＴＴＴＧＡＴＣＣＣＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧ
配列番号３１
ＣＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＡＣＣＡＴＴＴＡＣＡＧＴＴＧＧＴＴＡＴＣＣ
配列番号３２
ＣＡＧＧＣＡＴＣＣＧＡＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴ
配列番号３３
ＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＧＴＧＧＴＡＧＴＡＡＴＧＴＴＧＡＴＡＡＴＧＴＴ
配列番号３４
ＧＡＣＣＡＴＧＣＡＡＴＧＧＧＣ
配列番号３５
ＴＴＣＡＴＴＡＡＴＡＧＴＧＧＴＧＧＴＡＧＣＧＣＡＣＧＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＡＧＡＡＧＧＣ
配列番号３６
ＧＧＧＧＧＴＧＣＴＧＴＴＴＧＧＡＧＴＡＴＴＣＡＴＡＧＴＴＴＴＧＡＴＣＣＣ
配列番号３７
ＭＤＴＲＡＰＴＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＰＧＡＴＦＡＡＶＬＴＱＴＰＳＰＶＳＡＡＶＧＧＴＶＳＩＳＣＱＡＳＱＳＶＹＤＮＮＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＧＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＶＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＴＤＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣＡＧＶＹＤＤＤＳＤＮＡＦＧＧＧＴＥＶＶＶＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦ
配列番号３８
ＭＥＴＧＬＲＷＬＬＬＶＡＶＬＫＧＶＱＣＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＳＶＹＹＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＦＩＴＭＳＤＮＩＮＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＳＲＧＷＧＴＭＧＲＬＤＬＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫ
配列番号３９
ＱＡＳＱＳＶＹＤＮＮＹＬＳ
配列番号４０
ＧＡＳＴＬＡＳ
配列番号４１
ＡＧＶＹＤＤＤＳＤＮＡ
配列番号４２
ＶＹＹＭＮ
配列番号４３
ＦＩＴＭＳＤＮＩＮＹＡＳＷＡＫＧ
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配列番号６９６
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配列番号７０４
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配列番号７０８
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配列番号７０９
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配列番号７１０
ＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧ
配列番号７１１
ＲＡＳＱＧＩＳＮＹＬＡ
配列番号７１２
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配列番号７１３
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配列番号７１４
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ＫＡＳＳＬＥＳ
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ＳＮＹＭＳ
配列番号７１７
ＶＩＹＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
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ＶＩＹＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ
配列番号７１９
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号７２０
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配列番号７２１
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配列番号７２２
ＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＡＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＡＣＡＡＴＧＡＧＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＴＧＣＡＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＣＡＧＧＧＴＴＡＴＡＧＴＣＴＧＡＧＧＡＡＣＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＡＣＧＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
配列番号７２３
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配列番号７２４
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配列番号７２５
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配列番号７２６
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配列番号７２８
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図６】
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【図８】
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【図７１】
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【配列表】
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