(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体、抗体構築物、抗体のフラグメント、フラグメントの構築物もしくはそれらの混合物、ペプチド、アミノ酸、ステロイド性のもしくは非ステロイド性のホルモン、葉酸塩、エストロゲン、テストステロンまたはビオチンから選択される組織標的部位、オクタデンテートヒドロキシピリジノン含有リガンドおよびアルファ放出２２７−トリウム放射性核種のイオンを含む組織標的複合体であって、
前記オクタデンテートヒドロキシピリジノン含有リガンドが、式ＩＩＩまたはＩＶを有し、
【化１】
0005878483.tif 000023
式中、
ＲＮは、置換または非置換のヒドロカルビル基であり；
ＲＬは、リンカー部位であり、ＲＢは、骨格部位であり、Ｔは、テンプレート基であり、前記Ｔによって、４つのキレートヒドロキシピリジノン部位がお互いに結合する
複合体。
【請求項２】
前記アルファ放出トリウム放射性核種のイオンが、アルファ放出トリウム放射性核種の４＋イオンである請求項１に記載の複合体。
【請求項３】
増殖性または腫瘍性の病気を治療するための薬剤の製造における、抗体、抗体構築物、抗体のフラグメント、フラグメントの構築物またはそれらの混合物から選ばれる組織標的部位、オクタデンテートヒドロキシピリジノン含有リガンドおよびアルファ放出２２７−トリウム放射性核種のイオンを含む組織標的複合体の使用であって、
前記組織標的複合体が請求項１に記載の複合体である使用。
【請求項４】
前記病気がガン、肉腫、骨髄腫、白血病、リンパ腫または混合タイプのガンである請求項３に記載の使用。
【請求項５】
人間または人間でない動物の治療のための薬剤の製造における、抗体、抗体構築物、抗体のフラグメント、フラグメントの構築物もしくはそれらの混合物、ペプチド、アミノ酸、ステロイド性のもしくは非ステロイド性のホルモン、葉酸塩、エストロゲン、テストステロンまたはビオチンから選択される組織標的部位、オクタデンテートヒドロキシピリジノン含有リガンドおよびアルファ放出２２７−トリウム放射性核種のイオンを含む少なくとも１つの組織標的複合体の使用であって、
前記組織標的複合体が請求項１に記載の複合体である使用。
【請求項６】
増殖性または腫瘍性の病気の治療のための請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記増殖性または腫瘍性の病気が、ガン、肉腫、骨髄腫、白血病、リンパ腫または混合タイプのガンである請求項６に記載の使用。
【請求項８】
抗体、抗体構築物、抗体のフラグメント、フラグメントの構築物もしくはそれらの混合物、ペプチド、アミノ酸、ステロイド性のもしくは非ステロイド性のホルモン、葉酸塩、エストロゲン、テストステロンまたはビオチンから選択される組織標的部位、オクタデンテートヒドロキシピリジノン含有リガンドおよびアルファ放出２２７−トリウム放射性核種のイオンを含む組織標的複合体を少なくとも１つの薬剤のキャリアまたは賦形剤とともに合わせて含む薬剤であって、
前記組織標的複合体が請求項１に記載の複合体である薬剤。
【請求項９】
オクタデンテートヒドロキシピリジノンを含有リガンドに接合されたまたは接合可能な、抗体、抗体構築物、抗体のフラグメント、フラグメントの構築物もしくはそれらの混合物、ペプチド、アミノ酸、ステロイド性のもしくは非ステロイド性のホルモン、葉酸塩、エストロゲン、テストステロンまたはビオチンから選択される組織標的部位を含む請求項５〜７のいずれか１項に記載の使用に用いられるキット。
【請求項１０】
さらに、アルファ放出２２７−トリウム放射性核種を含む請求項９のキット。
【請求項１１】
増殖性または腫瘍性の病気を治療するために用いられる抗体、抗体構築物、抗体のフラグメント、フラグメントの構築物もしくはそれらの混合物、ペプチド、アミノ酸、ステロイド性のもしくは非ステロイド性のホルモン、葉酸塩、エストロゲン、テストステロンまたはビオチンから選択される組織標的部位、オクタデンテートヒドロキシピリジノン含有リガンドおよびアルファ放出２２７−トリウム放射性核種のイオンを含む組織標的複合体であって、
前記組織標的複合体が請求項１に記載の複合体である組織標的複合体。
【請求項１２】
前記病気がガン、肉腫、骨髄腫、白血病、リンパ腫または混合タイプのガンである請求項１１に記載の組織標的複合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トリウム同位体の複合体に関し、とくに特定のオクタデンテートリガンドを有するトリウム−２２７の複合体に関する。本発明はまた、病気の治療に関する、特に腫瘍性の病気に関し、そのような複合体を投与することを含む。
【背景技術】
【０００２】
特定の細胞の死滅させることは、哺乳類のさまざまな病気の有効な治療に基本となり得る。この典型的な例は、悪性の病気、たとえば肉腫およびガン種の治療における。しかしながら、特定の細胞のタイプの選択的除去は、他の病気、特に増殖性のおよび腫瘍性の病気、の治療においても重要な役割を果たす。
【０００３】
選択的な治療の最も普通の方法は、最近の外科、化学療法および外部ビーム照射である。標的化された放射性核種の治療法は、しかしながら、将来性があり、発展途上の領域であり、望ましくない細胞のタイプに高い細胞毒性の放射をする潜在力を有する。放射性医薬品の最も普通の形態は、最近ではベータ放出および／またはガンマ放出放射性核種を導入することにより、人間に用いることが許可されている。しかしながら、治療におけるアルファ放出放射性核種の使用にも関心がある。なぜなら、細胞を死滅させる滞在力が大きいからである。
【０００４】
生理学的な環境における典型的なアルファ放出器の放射範囲は、通常１００マイクロメータ未満であり、いくつかの細胞の直径にのみ等しい。このことは、これらの源をミクロ転移を含む腫瘍の治療に好適とする。なぜなら、もしそれらが好適に標的化されるのであれば、標的細胞を超えて通過する放射エネルギーはほとんどないことになる。こうして周りの健康な組織の損傷を小さくすることができる（Ｆｅｉｎｅｎｄｅｇｅｎら、Ｒａｄｉａｔ  Ｒｅｓ  １４８：１９５−２０１（１９９７）参照）。対照的に、ベータ粒子は、水中で１ｍｍ以上の範囲である（Ｗｉｌｂｕｒ，抗体免疫放射性  ４：８５−９６（１９９１）参照）。
【０００５】
アルファ粒子放射のエネルギーは、ベータ粒子、ガンマ線およびX線によるエネルギーに比較して高い。典型的には５−８ＭｅＶで、ベータ粒子のエネルギーの５〜１０倍であり、ガンマ線のエネルギーの２０倍以上である。こうして、非常に短い距離に渡って大量のエネルギーが堆積することが、α−放射に、ガンマ放射およびベータ放射に比較して、予期できないほど高い線エネルギー付与（ＬＥＴ）、高い生物学的効果比（ＲＢＥ），低い酸素増感比（ＯＥＲ）を与える（Ｈａｌｌ，「放射線医師のための放射線生物学」、５版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  ＰＡ，  ＵＳＡ，  ２０００参照）。このことは、アルファ放出放射線核種の細胞毒性の例外を説明し、そのような同位体の生物学的標的化および制御のレベルおよび受け入れがたい副作用を避けるために必要であるアルファ放出放射線核種の分布の研究に厳しい要求を強いる。
【０００６】
下記の表１は、今までのところ、治療の効果を有すると考えられるとして文献において広く提案されているアルファ放出体の物理学的崩壊特性を表す。
【０００７】
【表１】
0005878483.tif 000002
【０００８】
今までのところ、放射線免疫治療に関して、主な関心は、211Ａｔ、213Ｂｉおよび225Ａｃに注がれ、これらの３種の核種は臨床の免疫試験において研究されてきた。
【０００９】
いくつかの提案されている放射線核種は寿命が短い、たとえば半減期が１２時間未満である。そのような短い半減期は、これらの放射線核種に基づく放射性医薬品の商業的な製造および流通を困難としている。寿命の短い核種を投与することはまた放射線量の割合を増大させる、なぜなら標的部位に達成する前に体外に放出されるからである。
【００１０】
アルファ放出の反動エネルギーは、多くの場合親の放射線崩壊の位置から娘核種の放出を生じる。この反動エネルギーは、親を保持してよい化学的環境、たとえば親がキレート剤のようなリガンドにより複合化されたような環境から多くの娘核を取り出すのに十分なものである。このことは、娘が同じリガンドに化学的に適合する場合すなわち複合化されることさえも生じる。同様に、娘核種がガスである場合、特にラドンのような希ガスである場合、または化学的にリガンドと適合しない場合、この放出効果はさらに大きくなる。娘核種が数秒以上の半減期を有する場合、それらは血液系に拡散することができ、親を保持する複合体に抑制されることがない。これらの自由な放射活性娘は望ましくない全身の毒性を生じる。
【００１１】
223Ｒａ娘同位体が制御する状況でのトリウム−２２７（Ｔ1/2＝１８．７日）の使用が数年前に提案された（ＷＯ０１／６０４１７およびＷＯ０２／０５８５９参照）。これは、キャリアーシステムが用いられた状況におけるもので、その状況は娘核種が閉じられた環境によって保持されることを許容する。第１のケースにおいて、放射性核種はリポソーム内で処置され、リポソームの実質的な大きさ（反動距離に対して）は娘核種をリポソーム内に保持することを助ける。第２のケースにおいて、向骨性の放射性核種の複合体は、骨マトリクスへ組み入れるために用いられる、それゆえ娘核種の放出を制限する。これらは、潜在的に非常に有利な方法である、しかしながらリポソームの投与は、いくつかの状況では望ましくない、そして、娘同位体を保持することができるように放射性核種が石灰化したマトリクスに囲まれることができないたくさんの柔らかい組織の病気がある。
【００１２】
最も最近、227Ｔｈの崩壊によって放出される223Ｒａ娘核の毒性が、比較できる核の前もった試験から予想されるよりも、哺乳類の体でかなりの程度にまで耐えうる方法が確立された。上記で述べたトリウム−２２７のラジウム娘を保持する特定の方法なくしては、ラジウムの毒性に関し公然と得られる情報は、トリウム−２２７を治療的な薬剤として用いることは不可能であることを明らかにした。なぜならトリウム−２２７の崩壊から治療効果を得るのに必要な投与量は、非常に毒性があり、致死量となりうるラジウム娘の崩壊からの放射となる、すなわち治療的な開口はない。
【００１３】
ＷＯ０４／０９１６６８は、標的化されたトリウム−２２７の放射性核種の治療に効果的な量を対象（典型的には哺乳類）に受け入れることのできない骨髄毒性を生じるのに十分なラジウム−２２３の量を生じることなく投与することができるという治療的な処置の開口が確かに存在するという予期できない発見について述べている。このことは、それゆえ骨および柔らかい組織のサイトのいずれにもおけるすべてのタイプの病気の治療および予防に用いることができる。
【００１４】
上記発展によって、今やアルファ放出トリウム−２２７核を、223Ｒａを生じることによる致死の骨髄毒性を生じることなく内部放射性核治療に用いることが可能である。それにもかかわらず、治療の開口は狭いままであり、対象に対するアルファ放出放射性同位体を投与することが好ましい全てのケースにおいて、絶対的に必要であるとは言えない、この新しい治療の開口の有用な開発は、それゆえアルファ放出トリウム−２２７核が複合化されているかどうかおよび高い信頼性で標的化されるかどうかによって非常に高められるであろう。
【００１５】
放射性核種は常に崩壊するため、単離から対象に投与されるまでの間の材料を取り扱う時間が非常に重要である。アルファ放出トリウム核が、調製するためにすばやく便利な形態、好ましくはほとんどステップを必要としない、短いインキュベイション期間および／または標的とする実体の特性に不可逆的に影響を与えない温度で、複合化され、標的化され、および／または投与されるいるか否かということもまた、かなりの価値があるであろう。
【００１６】
本発明の発明者らは、標的部位に結合したオクタデンテートヒドロキシピリジノン（ＨＯＰＯ）タイプのリガンドで複合化された４＋トリウム−２２７イオンがトリウム−２２７イオンをめざましい程度で制御することを予想外に見出した。さらに、そのような複合体は、ここで述べる方法によって、相対的にすばやく容易に調製することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】国際公開第０１／６０４１７号
【特許文献２】国際公開第０２／０５８５９号
【特許文献３】国際公開第０４／０９１６６８号
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】Ｆｅｉｎｅｎｄｅｇｅｎら、Ｒａｄｉａｔ  Ｒｅｓ  １４８：１９５−２０１（１９９７）
【非特許文献２】Ｗｉｌｂｕｒ，抗体免疫放射性  ４：８５−９６（１９９１）
【非特許文献３】Ｈａｌｌ，「放射線医師のための放射線生物学」、５版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  ＰＡ，  ＵＳＡ，  ２０００
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明の一つの観点は、組織標的部位、オクタデンテートヒドロキシピリジノンリガンドおよびアルファ放出トリウム放射性核種のイオンを含む組織標的複合体を提供する。特に好ましい観点は、少なくとも１つの３，２−ヒドロキシピリジノン部位を含むオクタデンテートリガンドに共有結合し、そのようなリガンドは227Ｔｈのようなアルファ放出トリウム放射性核種の４＋イオンに複合化しているポリペプチド組織標的部位を含む組織標的複合体である。
【００２０】
本発明のさらなる観点は、増殖性または腫瘍性の病気、ここで述べる病気は何でも含むが、を治療するための薬剤の製造における、組織標的部位、オクタデンテートヒドロキシピリジノンリガンドおよびアルファ放出トリウム放射性核種のイオンを含む組織標的複合体（ここで述べるそのような複合体は何でも含む）の使用を提供する。
【００２１】
対応する観点において、本発明は、少なくとも１つの組織標的部位、オクタデンテートヒドロキシピリジノンリガンドおよびアルファ放出トリウム放射性核種のイオンを含む組織標的複合体（ここで述べるそのような複合体は何でも含む）の投与を含む人間および人間でない動物（特にそれを必要としているもの）の治療方法を提供する。そのような方法は、好ましくはここで述べる病気は何でも含む増殖性または腫瘍性の病気の治療である。
【００２２】
本発明のさらなる観点は、組織標的部位、オクタデンテートヒドロキシピリジノンリガンドおよびアルファ放出トリウム放射性核種のイオンを含む組織標的複合体（ここで述べるそのような複合体は何でも含む）を少なくとも１つの薬剤のキャリアまたは賦形剤とともに合わせて含む薬剤を提供することである。
【００２３】
もっとも天然に豊富に生じるトリウム同位体、すなわちトリウム−２３２（半減期１０10年であり、事実上放射性活性がない）、のトリウム複合体から区別するために、ここで定義するトリウム複合体およびその組成物は、天然に相対的に豊富なものよりも、アルファ放出トリウム放射性同位体（すなわち、少なくとも半減期が１０3年未満のトリウムの１つの同位体、たとえばトリウム−２２７）を多く含む、たとえば少なくとも２０％多い。このことは本発明の方法の定義に影響を与えることを必要としない、それは放射性トリウム、たとえばトリウム−２２７の治療的に効果のある量が明確に必要とされるからである、しかしながら、それはすべての観点から好ましい場合である。
【００２４】
本発明のさらなる観点は本発明に関する方法に用いられるキットを提供することである、前記キットは、オクタデンテートヒドロキシピリジノン含有リガンドに接合されたまたは接合可能な組織標的部位を含む。すべての結合部位およびリガンドは、好ましくはここで述べたものである、そのようなキットは任意におよび好ましくアルファ放出トリウム放射性核種、たとえば227Ｔｈを含む。
【００２５】
本発明はさらに添付の図面によって説明される。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、232Ｔｈ4+（ＨＮＯ3）および１ｍｇ／ｍｌのＤＭＳＯ中のＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ（理論比２：３）を室温で１５分反応させた後の反応混合物のクロマトグラムを示す。かなりの量の複合体232Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ（ｔR＝５．７４分；ｍ／ｚ１３２８．５）があり、および自由ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳリガンド（ｔR＝５．３６）の痕跡はなかった。
【図２】図２は、前記232Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ複合体（ｍ／ｚ１３２８．３９４９）の質量スペクトルを示す。
【図３】図３は、Ｆｅ3+（ＨＮＯ3）および１ｍｇ／ｍｌのＤＭＳＯ中のＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ（理論比２：３）を室温で１５分反応させた後の反応混合物のクロマトグラムを示す。かなりの量の複合体Ｆｅ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ（ｔR＝５．８１分；ｍ／ｚ１１５３．５）があり、および自由ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳリガンド（ｔR＝５．３６分）の痕跡はなかった。
【図４】図４は、前記Ｆｅ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ複合体（ｍ／ｚ１１５３．３００２）の質量スペクトルを示す。
【図５】図５は、Ｉｎ3+（ＨＣｌ）および１ｍｇ／ｍｌのＤＭＳＯ中のＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ（理論比２：３）を室温で１５分反応させた後の反応混合物のクロマトグラムを示す。かなりの量の複合体Ｉｎ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ（ｔR＝５．９５分；ｍ／ｚ１２１２．５）があり、および自由ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳリガンド（ｔR＝５．３６分）の痕跡はなかった。
【図６】図６は、前記Ｉｎ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ複合体（ｍ／ｚ１２１２．２６６６）の質量スペクトルを示す。
【図７】図７は、232Ｔｈ4+（ＨＮＯ3）および１ｍｇ／ｍｌのｐＨ５．５のアセテート緩衝液中のＡＬＧ１００５−３８を室温で１０分反応させた後の反応混合物（理論比１：３）のクロマトグラムを示す。かなりの量の複合体232Ｔｈ−ＡＬＧ１００５−３８（ｔR＝３．５６；ｍ／ｚ１１８４．５）があり、および自由ＡＬＧ１００５−３８リガンド（ｔR＝３．２０分）の残渣があった。
【図８】図８は、前記232Ｔｈ−ＡＬＧ１００５−３８複合体（ｍ／ｚ１１８４．４６６２）の質量スペクトルを示す。
【図９】図９は、Ｆｅ3+（ＨＮＯ3）および１ｍｇ／ｍｌのｐＨ５．５のアセテート緩衝液中のＡＬＧ１００５−３８を室温で１０分反応させた後の反応混合物（理論比１：３）のクロマトグラムを示す。かなりの量の複合体Ｆｅ−ＡＬＧ１００５−３８（ｔR＝３．７０；ｍ／ｚ１００９．５）があり、および自由ＡＬＧ１００５−３８リガンド（ｔR＝３．２２分）の残渣があった。
【図１０】図１０は、前記Ｆｅ−ＡＬＧ１００５−３８複合体（ｍ／ｚ１００９．３７２７）の質量スペクトルを示す。
【図１１】図１１は、Ｉｎ3+（ＨＣｌ）および１ｍｇ／ｍｌのｐＨ５．５のアセテート緩衝液中のＡＬＧ１００５−３８を室温で１０分反応させた後の反応混合物（理論比１：３）のクロマトグラムを示す。かなりの量の複合体Ｉｎ−ＡＬＧ１００５−３８（ｔR＝３．７２；ｍ／ｚ１０６８．５）があり、および自由ＡＬＧ１００５−３８リガンド（ｔR＝３．２１分）が痕跡量あった。
【図１２】図１２は、前記Ｉｎ−ＡＬＧ１００５−３８複合体（ｍ／ｚ１０６８．３４８５）の質量スペクトルを示す。
【図１３】図１３は、Ｇａ3+（ＨＣｌ）および１ｍｇ／ｍｌのｐＨ５．５のアセテート緩衝液中のＡＬＧ１００５−３８を室温で１０分反応させた反応混合物（理論比１：３）のクロマトグラムを示す。かなりの量の複合体Ｇａ−ＡＬＧ１００５−３８（ｔR＝３．６５；ｍ／ｚ１０２２．５）があり、および自由ＡＬＧ１００５−３８リガンド（ｔR＝３．２１）の残渣があった。
【図１４】図１４は、前記Ｇａ−ＡＬＧ１００５−３８複合体（ｍ／ｚ１０２２．３５７１）の質量スペクトルを示す。
【図１５】図１５は、232Ｔｈ4+（ＨＣｌ）および１ｍｇ／ｍｌのＢｂ−１−ＨＯＰＯ−１−ＤＥＢＮ（理論比２：３）を室温で１５分反応させた後の反応混合物のクロマトグラムを示す。かなりの量の複合体232Ｔｈ−Ｂｂ−１−ＨＯＰＯ−１−ＤＥＢＮ（ｔR＝３．５２）があった。質量クロマトグラムは、ｍ／ｚ  １２２２．５である、低い痕跡：ＵＶ３３０ｎｍ。
【図１６】図１６は、前記232Ｔｈ−Ｂｂ−１−ＨＯＰＯ−１−ＤＥＢＮ複合体（ｍ／ｚ１２２２．５）の質量スペクトルを示す。
【図１７】図１７は、227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂおよび自由227Ｔｈが０−７日でＳＫ−ＯＶ−３細胞ペレットに結合する計算量であって、補正された227Ｔｈ−放射能の崩壊によって表わす。
【図１８】図１８は、（１）正規の培地（対照）；（２）２０μｇ／ｍＬのｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ；（３）２０ｋＢｑ／ｍＬの227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（１０１６６Ｂｑ／μｇ）；および（４）２０ｋＢｑ／ｍＬの自由227Ｔｈで処理されたＳＫ−ＯＶ−３細胞の標準化された発光値を示す。
【図１９】図１９は、（１）正規の培地（対照）；（２）ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ；（３）自由227Ｔｈ；（４）227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（１０１６６Ｂｑ／μｇ）（Ｍｅａｎ±ＳＤ；ｎ＝３）で処理された１０００ＳＫ−ＯＶ−３細胞のクローン形成を示す。
【図２０】図２０は、（１）正規の培地（対照）；（２）ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ；（３）自由227Ｔｈ；（４）227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（１０１６６Ｂｑ／μｇ）で処理された３０００ＳＫ−ＯＶ−３細胞のクローン形成を示す。
【図２１】図２１は、４日と２４時間生体内分布をした後のＳＫ−ＯＶ−３異種移植片を有するＢａｌｂ／ｃヌードマウスの227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（２７００Ｂｑ／μｇ）の臓器分布を示す（Ｍｅａｎ±ＳＤ；ｎ＝５）。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明において、「組織標的」とは対象となる物質を示す（特にトリウム複合体に接合している形態のとき）、選択的にそれが存在する（たとえば、放射線崩壊をもたらすために）少なくとも１つの組織の部位に、自身の位置を特定する役割を果たすこと（そして特にどのような接合したトリウム複合体を特定すること）が望まれる。標識化した部位は、例えば、細胞表面のマーカー（たとえば、レセプター、輸送タンパク質、細胞接着分子）に結合し、病気の細胞または病気の細胞に近接した細胞上に存在してもよい。そのような細胞表面のマーカーは、健康な細胞の表面の上よりも病気の細胞の表面の上により大量に発現されるタンパク質または休眠の段階よりも成長もしくは複製の期間の細胞の表面の上により大量に発現されるタンパク質を含む。本発明のどのような態様においても、標的細胞、組織もしくはその結合物に近接して存在する構成は、治療のために標的において利用されてもよい。たとえば、標的細胞または組織の回りのマトリクスに存在するまたは放出される構成は、存在する場合には標的化に用いられてもよい、形成または濃縮は、前記領域を健康な組織から区別することを可能にする。この例はテネイシンのようなマトリクス抗原が挙げられる、それは脳腫瘍と関連するが、細胞の間のマトリクス中に発現する。そのようなマトリクス抗原は、ここで述べるような単一のまたは複合の標的部位によって、標的とされることができる。
【００２８】
前記組織標的部位は合計で２つ以上の成分を含んでいてもよく、トリウム複合体を所望の組織へ標的化する効果を有する。このことは、たとえば、１つの成分が初めに投与され、特定の組織、腫瘍または細胞型に結合し、次におよび／またはさらに成分（連結剤）を同時に好ましくは続いて投与することにより、ｉｎ  ｖｉｖｏで組織結合剤に結合する。前記結合剤は直接または間接的に複合α放射トリウムに接合され、こうして組織結合および連結剤は合わさって組織標的部分を形成する。適切な特定の結合ペアが組織結合および連結剤に相互の親和性を供給するのに適していることは周知である（たとえば、ビオチンとアビジンまたはストレプトアビジン）。
【００２９】
ここで述べる本発明の様々な態様は、病気の治療に関する、特に病気の組織の選択的標的化に関し、同様に複合体、接合、薬剤、処方、キットなどそのような方法に役に立つものに関する。すべての態様において、前記病気の組織は体の１つのサイトにおいて存在していてもよく（たとえば、局部的な固体の腫瘍の場合が挙げられる）、多くのサイトにおいて存在していてもよい（たとえば、いくつかの接合が関節炎の影響を受けている場合またはガン性の病気が広がったり転移した場合が挙げられる）。
【００３０】
標的化される病気の組織は、柔らかい組織のサイトにある可能性もあり、石灰化された組織のサイトのある可能性もあり、全てが柔らかい組織中のたくさんの組織、石灰化された組織中のたくさんの組織にある可能性もあり、少なくとも１つの柔らかい組織のサイトおよび／または少なくとも１つの石灰化された組織のサイトも含む可能性がある。前記標的化されたサイトおよび病気の根源のサイトは同じ可能性もあるが、その代わりに異なる可能性もある、１つ以上のサイトが含まれている場合、これは根源のサイトを含む場合があり、またはたくさんの二次的なサイトである場合がある。
【００３１】
「柔らかい組織」とは、ここでは「固い」石灰化したマトリクスを有さない組織を示す。特に、ここで用いられる柔らかい組織は、骨格的な組織でない組織であればなんでもよい。それに応じて、ここで用いられる「柔らかい組織の病気」とは、ここで用いられる柔らかい組織に起きる病気を示す。本発明は特にガンおよび「柔らかい組織の病気」の治療に適する、したがってどのような「柔らかい」（すなわち、非石灰化された）組織に生じた癌腫、肉腫、骨髄腫、白血病、リンパ腫および混合タイプのガン、同様にそのような組織のその他の非ガン性の病気に適する。ガン性の「柔らかい組織の病気」は、柔らかい組織に生じた固体の腫瘍、同様に転移したおよび微小転移した腫瘍を含む。実際、前記柔らかい組織の病気は、柔らかい組織の一次の固体の腫瘍および同じ患者の柔らかい組織の少なくとも１つの転移した腫瘍を含む、言い換えれば、「柔らかい組織の病気」は固体の腫瘍のみ、または骨格の病気の１次的な腫瘍を伴う転移のみからなってもよい。
【００３２】
近日の主要な発見は、特定のアルファー放射性トリウム同位体（たとえば227Ｔｈ）は治療的に効果があり、かつ耐えられない骨髄毒性を生じない量で投与されることが可能であることである。ここで、「許容される非骨髄毒性」は、最も重要に、投与されたトリウム−２２７の放射性同位体の崩壊により生じたラジウム−２２３の量は、通常対象者を直接致死とするのに十分でない量を示す。当業者には、しかしながら、そのような治療の副作用として許容可能な骨髄を損傷する量（および致死反応の可能性）は、対象者の治療を受ける病気のタイプ、治療計画の目的、およびに予後より著しくさまざまであることは明らかであろう。本発明の好ましい対象は人間であるが、その他の哺乳類、特に犬は、本発明を用いる恩恵を受けるであろうし、許容可能な骨髄を損傷するレベルもまた対象の種類を反映するであろう。前記許容可能な骨髄を損傷するレベルは、一般的に悪質でない病気よりも悪質な病気の治療のほうが高い。１つのよく知られている骨髄毒性の測定は、好中球の数を数えることであり、本発明において223Ｒａの許容可能な骨髄を損傷する量は、典型的に治療前に好中球フラクションの最も低いポイントを１０％以上のカウントすることにより制御された量である。好ましくは、223Ｒａの許容可能な骨髄を損傷しない量は、好中球のフラクションは、一番低い値で少なくても２０％、より好ましくは少なくとも３０％である。一番低い値の好中球のフラクションは、少なくとも４０％が最も好ましい。
【００３３】
それに加えて、放射性トリウム（たとえば227Ｔｈ）を含む化合物は、高い放射線の治療に用いられ、その治療では生じたラジウム（たとえば223Ｒａ）の骨髄毒性は、幹細胞サポートまたは同等の回復方法が含まれる場合、普通は耐えられない。そのような場合、好中球のカウントは、一番低い値で１０％以下まで減じてもよく、例外的に５％まで、必要であれば５％以下まで減じてよく、そうして適切な予防が行われ、次の幹細胞サポートが与えられる。そのような技術は周知である。
【００３４】
本発明において特に興味があるのが、トリウム−２２７である、トリウム−２２７は、背景が許容するように、ここでのすべてのトリウムに対して好ましい同位体である。トリウム−２２７は相対的に製造が容易で、中性子照射した226Ｒａから間接的に製造することができ、227Ｔｈの母核種、すなわち227Ａｃ（Ｔ1/2＝２２年）を含むものである。アクチニウム−２２７は前記226Ｒａターゲットから容易に分離することができ、227Ｔｈの発生器として用いられる、このプロセスは、必要であれば工業スケールとすることもできる、こうして多くの他のアルファ放出体にみられる供給問題は、分子を標的化した放射線治療の候補から除かれる可能性がある。トリウム−２２７はラジウム−２２３を経て崩壊する。この場合、前記最初の娘は、半減期が１１．４日である。純粋な227Ｔｈ源から、適度な量のラジウムのみが最初の２，３日の間に作られる。しかしながら、223Ｒａの滞在的な毒性は、227Ｔｈのものより高い、それはアルファ粒子の223Ｒａからの放出に、数分以内に短寿命の娘からの３つのさらなるアルファ粒子が続くからである（下記の表２参照、表２はトリウム−２２７の崩壊系列を提示した）。
【００３５】
【表２】
0005878483.tif 000003
【００３６】
滞在的に毒性のある崩壊生成物を生成することも部分的な理由として、トリウム−２２７（Ｔ1/2＝１８．７日）はアルファ粒子治療のために広く検討されてこなかった。
【００３７】
トリウム−２２７は、骨髄の耐えられないような状態を生ずるような多量のラジウム−２２３を生ずることなく、所望の治療効果を提供するのに十分な量を投与することもできる。標的の領域において娘同位体を保持すると、その崩壊によりさらなる治療効果が得られるため望ましい。しかしながら、受け入れがたい骨髄毒性を誘導することなく有用な治療効果を得るために、トリウムの崩壊生成物の制御を保つことは必要ない。
【００３８】
ガン細胞を殺す効果が主にトリウム−２２７から得られ、娘から得られないと仮定すると、この同位体の適した治療のための放射量は、他のアルファ放出体に比較して定められる。たとえば、アスタチン−２２１は、動物における治療効果のある放射量は典型的に２−１０ＭBｑ／ｋｇである。半減期とエネルギーを補正することによって、トリウム−２２７の対応する放射線量は少なくても体重の３６−２００ｋＢｑとなるであろう。これは227Ｔｈの量の下限を定めることになり、それは治療効果を予想して、役立つように投与されることができるであろう。この計算はアスタチンおよびトリウムの同等の保持を仮定したものである。明らかに、しかしながら前記トリウムの１８，７日の半減期は、この同位体が崩壊前により大きい放出をする結果になる傾向があるであろう。この計算された放射線量は、それゆえ、普通は最少の効果の量と考えられるべきである。十分に保持された227Ｔｈ（たとえば、体から放出されたものでない227Ｔｈ）の観点から表現された前記治療効果のある放射線量は、典型的には少なくとも１８または２５ｋＢｑ／ｋｇであり、好ましくは少なくとも３６ｋＢｑ／ｋｇであり、より好ましくは少なくとも７５ｋＢｑ／ｋｇである、たとえば１００ｋＢｑ／ｋｇ以上である。トリウムの量がより多い程、より治療効果が高いことが期待されるが、耐えられない副作用が生じるのであれば投与できない。同じように、もしトリウムが短い生物学的半減期（たとえば、なおトリウムを有している体から放射される前の半減期）を有する形態で投与されれば、治療の効果を得るためには、より多い量の放射性同位体が必要とされる、なぜなら、前記トリウムの多くの量が崩壊前に放出されるからである。しかしながら、ラジウム−２２３の対応する減少が生じる。投与されるトリウム−２２７の上記量は、同位体が十分に保持されるとき、より短い生物学的な半減期を伴う等量の放射線量に容易に関連付けられる。そのような計算は、周知であり、ＷＯ０４／０９１６６８（たとえば実施例１および２の文中）に開示されている。
【００３９】
もし放射線で標識化された化合物が娘核種を放出すれば、もし当てはまれば、どのような放射性の娘核種の宿命を知っておくことが重要である。227Ｔｈとともに主娘生成物は、226Ｒａであり、その向骨性のため、それは臨床の評価のもとにある。ラジウム−２２３は非常にすばやく血液を飛び越えて骨に濃縮されるか、または腸および腎臓のルートを経由して排出される（Ｌａｒｓｅｎ，Ｊ  ＮｕｃｌＭｅｄ  ４３（５  補足）：１６０P（２００２）参照）。ラジウム−２２３は、ｉｎ  ｖｉｖｏで227Ｔｈから放出され、それゆえ、健康な柔らかい組織にそれほど影響を与えない。Ｍｕｅｌｌｅｒ  ｉｎ  Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｂｉｏｌ．２０：２３３−２４３（１９７１）による227Ｔｈを溶解されたクエン酸塩とした分布の研究によれば、柔らかい組織中で227Ｔｈから生じた226Ｒａは、直ちに骨に再分布されるか、排出される。アルファ放出ラジウムの公知の毒性は、特に骨髄に対するものであり、トリウムの投与の問題点である。
【００４０】
実際、少なくとも２００ｋＢｑ／ｋｇの放射線量の223Ｒａが人間に投与することができ、耐えられることを最初に確立したのはＷＯ０４／０９１６６８である。これらのデータは、前記公報中に存在する。それゆえ、極めて予想できなかったことに、対象が深刻なまたは致死の骨髄毒性の受け入れがたい危険性をこうむることが予想されることなく、治療に効果のある量の227Ｔｈ（たとえば３６ｋＢｑ／ｋｇより大きい量）を哺乳類の動物に投与することができることが今や明らかになった。それにもかかわらず、この治療効果のある方法を最善に使用することは非常に重要であり、それゆえ、放射性のあるトリウムはすばやく効率的に複合体とすることおよび放射線量の可能な限り最大の割合が標的のサイトに届けられるように非常に高い親和性を有することが不可欠である。
【００４１】
227Ｔｈの薬剤から生じる223Ｒａの量は、放射性標識化された化合物の生物学的な半減期に依存する。理想的な状況は、すばやく腫瘍を取り込む複合体を用いることであり、腫瘍細胞に内面化すること、強く腫瘍を保持することおよび正常の組織中において短い生物学的半減期とすることを含む。生物学的半減期が理想よりも短い複合体は、しかしながら、223Ｒａを耐えうるレベルで維持する量である限りは有用である。ｉｎ  ｖｉｖｏで生じたラジウム−２２３の量は、投与されるトリウムの量およびトリウム複合体の生物学的保持時間の因子である。どのようなケースで生じたラジウム−２２３の量も、当業者であれば容易に計算できる。227Ｔｈの最大の投与可能な量は、ｉｎ  ｖｉｖｏで生じたラジウムの量により定められ、耐えることのできないレベルの副作用、特に骨髄毒性を生じる量未満でなければならない。その量は一般的に３００ｋＢｑ／ｋｇ未満であり、好ましくは２００ｋＢｑ／ｋｇ未満である、より好ましくは１７０ｋＢｑ／ｋｇ未満である（たとえば１３０ｋＢｑ／ｋｇ未満である）。最小の効果的な放射線量は、トリウムの細胞毒性、生じたアルファ照射に対する病気の組織の影響の受けやすさ、およびトリウムが標的複合体（この場合リガンドおよび標的の部位の組み合わせ）によって効果的に結合し、保持されおよび届けられる程度によって定められる。
【００４２】
本発明の方法において、トリウム複合体は望ましくはトリウム−２２７放射線量が１８〜４００ｋＢｑ／ｋｇ体重、好ましくは３６〜２００ｋＢｑ／ｋｇ（たとえば５０〜２００ｋＢｑ／ｋｇ）、より好ましくは７５〜１７０ｋＢｑ／ｋｇ、特には１００〜１３０ｋＢｑ／ｋｇにおいて投与される。それに応じて、１回の放射線量が、たとえば３０〜１５０Ｋｇ、好ましくは４０〜１００Ｋｇといった適切な体重によってこれらの範囲のどのような外延も含んでよい（たとえば放射線量あたり５４０ｋＢｑ〜４０００ｋＢｑ他）。前記トリウムの放射線量、複合化剤および投与経路は、ｉｎ  ｖｉｖｏで生じたラジウム−２２３の放射線量が、３００ｋＢｑ／ｋｇ未満であり、好ましくは２００ｋＢｑ／ｋｇ未満であり、より好ましくは１５０ｋＢｑ／ｋｇ未満であり、特に好ましくは１００ｋＢｑ／ｋｇ未満であることがさらに望ましい。さらにこのことは、示された体重のいずれにもよって拡大された範囲へ223Ｒａへの露出を提供する。上記放射線量のレベルは、好ましくは227Ｔｈの十分に保持された放射線量であり、しかしながら、いくらかの227Ｔｈが崩壊前に体から消えることを考慮した投与された放射線量であってもよい。
【００４３】
227Ｔｈ複合体の生物学的半減期は、物理学的半減期（たとえば７日未満、特に３日未満）に較べて短い場合は、等しく保持された放射線量を提供するために特により多くの放射線量を投与することが必要とされるかもしれない。こうして、たとえば、１５０ｋＢｑ／ｋｇの十分に保持された放射線量は、５日半減期の複合体を７１１ｋＢｑ／ｋｇの放射線量で投与したのに等しい。どのような適切に保持された放射線量に対して等しく投与された放射線量は、周知の方法を用いて複合体の生物学的クリアランス速度によって計算されてもよい。
【００４４】
１つの227Ｔｈの核の崩壊は１つの223Ｒａ原子を提供するため、227Ｔｈの保持および治療効果のある活性は、患者が受ける223Ｒａの放射線量に直接関連する。どのような状況で生じた223Ｒａの量も、周知の方法で計算される。
【００４５】
好ましい態様においては、本発明はそれゆえ、哺乳類（ここで述べた）の病気を治療するための方法を提供する。前記方法は組織標的部位を含む接合、オクタデンテートリガンド（特にここで述べたどのようなものも）、および放射性トリウム同位体（たとえばトリウム−２２７）の治療効果のある量を前記対象に投与することを含む。
【００４６】
この特性が有用である限り、明らかに対象を223Ｒａの娘の同位体に露出することを最小限にすることは望ましい。特にｉｎ  ｖｉｖｏで生じるラジウム−２２３の量は、典型的には４０ｋＢｑ／ｋｇを超える、たとえば６０ｋＢｑ／ｋｇを超える。いくつかのケースにおいて、ｉｎ  ｖｉｖｏで生じる223Ｒａは、８０ｋＢｑ／ｋｇを超える、たとえば１００または１１５ｋＢｑ／ｋｇを超える。
【００４７】
適切なキャリア溶媒中のトリウム−２２７で標識化した接合体は、静脈内、膣内（たとえば腹腔内）、皮下、口内または局所に、１回または分割した方法により投与されてもよい。好ましくは、標的の部位に接合した複合体は、非経口（たとえば経皮）経路によって、特に、静脈内または膣内の経路によって投与される。好ましくは、本発明の組成物は、非経口投与のため無菌の溶液として作られる。
【００４８】
本発明の方法および生成物におけるトリウム−２２７は、単独でまたは外科、体外照射療法、化学療法、その他の放射線核種、または組織温調節を含む他の治療法と組み合わせて用いてもよい。
【００４９】
これはさらに本発明の好ましい態様の方法、製剤／薬剤が、他の放射性物質または化学療法の物質のようなさらなる少なくとも１つの治療活性物質を含んでいてもよいことを示す。
【００５０】
１つの特に好ましい態様においては、対象は幹細胞治療および／または他の対症的な治療法を行って、ラジウム−２２３が誘発した骨髄毒性を減じる。
【００５１】
本発明によれば、227Ｔｈは、標的複合化薬剤によって複合化されてもよい。典型的な標的部位は１００ｇ／ｍｏｌから数百万ｇ／ｍｏｌ（特に１００ｇ／ｍｏｌから１００万ｇ／ｍｏｌ）の分子量を有し、好ましくは病気の関連したレセプターに直接的に親和性と有し、および／または投与前に病気を標的とした分子に結合する適切な前投与バインダー（たとえば、ビオチンまたはアビジン）を含む。適切な標的部位は、ポリ−およびオリゴ−ペプチド、プロテイン、ＤＮＡおよびＲＮＡフラグメント、アプタマーなどを含み、好ましくは、たとえばアビジン、ストレプトアビジン、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体（たとえば、ＩｇＧおよびＩｇＭタイプの抗体）といったプロテイン、またはプロテインの混合物、またはプロテインのフラグメントまたは構築物を含む。抗体、抗体構築物、抗体のフラグメント（たとえばＦＡＢフラグメントまたは少なくとも抗原結合した領域、フラグメントの構築物（たとえば単鎖抗体）またはそれらの混合物が特に好ましい。
【００５２】
本発明において用いるのに適しているものとしては、さらに、ペプチド、アミノ酸、ステロイド性のまたは非ステロイド性のホルモン、葉酸塩、エストロゲン、テストステロン、ビオチン、または他の典型的に１００００ｇ／ｍｏｌ以下の分子量を有する特異的な結合をする化合物を伴う複合化された227Ｔｈの治療的接合が挙げられる。
【００５３】
一般的に、オクタデンテートリガンドは、直接的にまたは間接的に（たとえばリンカー部位を経由して）、標的部位に接合している。このタイプの一般的構築物は、たとえば活性（治療上または診断上の活性）金属−複合体部位−任意のリンカー部位−標的部位が、放射性医薬品および標的化された造影剤の分野でよく知られている。しかしながら、トリウム４＋イオンの特定の使用に用いられるさまざまなリガンドの適性を評価する研究はほとんどない。この点で「造影剤の標的化された投与のハンドブック」Ｅｄ．Ｔｏｒｃｈｉｌｉｎ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９９５は参照される。
【００５４】
従来知られていたトリウムのキレーターはポリアミノポリアシッドキレーターを含む、それは鎖状、環状またな分枝状の骨格の窒素に酸基（カルボキシアルキル）を有するポリアザアルカン骨格を含む。そのようなキレーターはＤＯＴＡ誘導体、たとえばｐ−イソチオシアナートベンジル−１，４，７，１０−テトラアザシシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸（ｐ−ＳＣＮ−Ｂｚ−ＤＯＴＡ）およびＤＴＰＡ誘導体たとえばｐ−イソチオシアナートベンジル−ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ｐ−ＳＣＮ−Ｂｚ−ＤＴＰＡ）、最初は環状のキレーターであり後から鎖状のキレーターになるもの、が挙げられる。
【００５５】
１，４，７，１０−テトラアザシシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ酢酸の誘導体は、従来実証されてきた、しかしながら、標準的な方法はＤＯＴＡ誘導体を有するキレートトリウムに容易に用いることはできない。金属を有するＤＯＴＡ誘導体を加熱することは効果的にキレートを提供するが、多くの場合収率が低い。少なくてもリガンドの一部は、生成の過程で不可逆的に変性するという傾向がある。さらに、不可逆的な変性に相対的に高い影響を受ける性質により、全ての加熱過程が完了するまで通常標的部位の結合物を避けなければならない。このことはさらなる化学的なステップ（加えて全ての必要な検査および分離）を加えることになり、そのステップはアルファ放出トリウム同位体の崩壊半減期の間に行わなければならない。明らかにアルファ放出材料はこの方法である扱わないことが好ましく、必要性よりもより多くの無駄を生じる。さらに接合体を生成する全ての時間は、トリウムが準備期間に崩壊するので、トリウムの一部を無駄にする。
【００５６】
本発明のすべての観点においてアルファ放出トリウムおよびオクタデンテートリガンドの複合体が形成されること、または６０℃以上に加熱することなく（例えば５０℃以上に加熱することなく）、好ましくは３８℃以上に加熱することなく、最も好ましくは２５℃以上に加熱することなく形成されることが好ましい。
【００５７】
加えて好ましいのは標的部位およびオクタデンテートリガンドの接合がアルファ放出トリウム同位体（たとえば227Ｔｈ4+イオン）の付加よりも前に生成されることである。本発明の生成物は、こうして、オクタデンテートリガンドおよび組織標的部位の接合によるアルファ放出トリウム同位体（たとえば227Ｔｈ4+イオン）の複合化によって好ましく形成され、または形成されうる。
【００５８】
前記キレーターは、非ホスホン酸分子であってもよく、本発明の一態様では、227Ｔｈはどのようなホスホン酸または他の骨を標的とした基に付着しないし、そのような材料とともに投与されない。
【００５９】
標的化合物のタイプは、オクタデンテートキレーター（ここで述べたようにカップリング部位を含む）を経由してトリウム（たとえばトリウム−２２７）に結合していてもよい。標的部位は、公知の標的基から選ばれてもよく、モノクローナルまたはポリクローナル抗体、成長因子、ペプチド、ホルモンおよびホルモン類似体、葉酸および葉酸誘導体、ビオチン、アビジンおよびストレプトアビジンまたはその類似物を含む。他の可能なキャリアはＲＮＡ、ＤＮＡ、もしくはそのフラグメント、オリゴヌクレオチド、炭水化物、脂質またはそのようなグループをタンパク質とともに、またはタンパク質を伴わないで結合した化合物であってもよい。
【００６０】
組織標的部位は、一つの態様において、抗体または抗体のフラグメントに接合した向骨性物質、リポゾームおよび葉酸を含まなくてもよい。もしくは、そのような部位は含まれていてもよい。
【００６１】
本発明の前記トリウム（たとえばトリウム−２２７）で標識化した分子は、病気の関連したレセプターを標的化することにより、ガン性のまたは非ガン性の病気の治療に用いられてもよい。典型的には、そのような227Ｔｈの医学的使用は、ガン性のまたは非ガン性の病気の治療のために、抗体、抗体フラグメント、または抗体もしくは抗体のフラグメントの構築物へのキレーターによる227Ｔｈの結合に基づく放射線免疫治療によってもよい。本発明による方法および薬剤における227Ｔｈの使用は特に癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病を含むどのような形態のガン、特に肺、胸、前立腺、膀胱、腎臓、胃、すい臓、食道、脳、卵巣および子宮のガン、口頭ガン、大腸がん、黒色腫、複合骨髄腫およびホジキンリンパ腫を含む。
【００６２】
227Ｔｈを有する分子がｉｎ  ｖｉｖｏで短い生物学的な保持半減期を有する場合、放出される223Ｒａの量は減少させることができる、なぜなら放射性核種はたいてい227Ｔｈの多くの割合が崩壊して223Ｒａになる前に、排出されるからである。しかしながら、本発明によれば、227Ｔｈの量は、治療効果を保持するために増やされる必要がある。もし複合剤が、標的の細胞の内部へ227Ｔｈを運ぶように選択されるのであれば、腫瘍サイトにおける娘同位体の少なくとも部分的な保持により、さらに骨髄毒性を上昇させ、放射性娘の全身性独作用を減少させるであろう。これらいずれもの特徴は、227Ｔｈの治療方法を拡大し、本発明の好ましい態様となる。
【００６３】
本発明のさらなる態様において、軟らかい組織および骨格の病気を有する患者は、トリウムを投与することにより、227Ｔｈおよびｉｎ  ｖｉｖｏで生じた223Ｒａによって治療されてもよい。この特に有利な観点において、治療にさらなる治療的な成分は、骨格の病気を標的化することにより受容可能に非骨髄毒性量の223Ｒａから由来する。この治療方法において、227Ｔｈは典型的に柔らかい組織の初期のおよび／または転移性のガンを適切に標的化するのに利用される。そして227Ｔｈの崩壊から生じた223Ｒａは、同じ対象の関連する骨格の病気の治療に利用される。この骨格の病気は初期の柔らかい組織のガンから生じた骨格への転移であってもよい、または柔らかい組織の治療が転移性のガンを攻撃するためのものである初期の病気であってもよい。場合によっては、前記柔らかい組織および骨格の病気は関連していないかもしれない（たとえば、リウマチの柔らかい組織の病気を有する患者における骨格の病気のさらなる治療が挙げられる）。
【００６４】
すべての観点における本発明の主な観点は、オクタデンテートリガンドを用いること、とくにオクタデンテートヒドロキシピリジノン含有リガンドを用いることである。そのようなリガンドは典型的に以下の置換されたピリジン構造（Ｉ）の少なくとも１つのキレート基を含むであろう。
【００６５】
【化１】
0005878483.tif 000004
【００６６】
式中Ｒ1は、任意のＮ−置換基であり、なくてもよいし、ヒドロカルビル基、ＯＨ基、Ｏ−ヒドロカルビル基、ＳＨ基、およびＳ−ヒドロカルビル基から選ばれてもよい、前記ヒドロカルビル部位のいずれもまたはそれぞれは、独立に、短いヒドロカルビル基、たとえば、Ｃ１〜Ｃ８アルキル基、アルケニル基またはアルキニル基を含むＣ１〜Ｃ８のヒドロカルビル基から選ばれ、ＯＨまたはＯ−ヒドロカルビル基であってもよい。Ｒ1は、下記に示すようにリンカー部位もまた含んでいてよい、および／または下記に示すようにカップリング部位を含んでいてもよい。
【００６７】
式Ｉにおいて、置換基Ｒ2〜Ｒ6はそれぞれ独立にＨ、ＯＨ、＝Ｏ、短いヒドロカルビル（ここで述べたように）、リンカー部位（ここで述べたように）、および／またはカップリング部位（ここで述べたように）から選ばれてもよい。通常、Ｒ1〜Ｒ6の少なくとも１つは、ＯＨである。通常、Ｒ2〜Ｒ6の少なくとも１つは、＝Ｏである。通常、Ｒ1〜Ｒ6の少なくとも１つは、リンカー部位（ここで述べたように）である。残りのＲ1〜Ｒ6は、ここで述べた部位のいすれであってもよく、好ましくはＨである。リンカー部位またはさらなるリンカー、リンカー部位に付いているテンプレートまたはキレート基は、カップリング部位を含まず、Ｒ1〜Ｒ6の１つは、好ましくはカップリング部位（ここで述べたように）である。
【００６８】
好ましい態様において、Ｒ1〜Ｒ6の１つはＯＨであって、Ｒ2〜Ｒ6の１つは＝Ｏであって、ＯＨおよび＝Ｏ基は、環における隣接した原子である。こうして、好ましい態様において、ＯＨおよび＝Ｏは、（予想されたように、窒素から数えた）１，２；２，３；３，２；３，４；または４，３のそれぞれの原子上にあるであろう。オクタデンテートリガンドは、ＯＨおよび＝Ｏ基が３および２の位置に其々存在する少なくとも１つのキレート部位であることが、非常に好ましい。前記オクタデンテートリガンドは、２、３または４つのキレート基を有することが好ましく、２または４のキレート基を有することが非常に好ましい。
【００６９】
好適なキレート部位は周知の方法により形成することができる、その方法はＵＳ５，６２４，９０１（たとえば実施例１および２）およびＷＯ２００８／０６３７２１に記載されている（いずれも参考として組み込む）。
【００７０】
ここで用いられるように、「リンカー部位」（式ＩＩにおけるＲL）という用語は、オクタデンテートリガンドにおいて、少なくとも２つのキレート基を結合する化学物質を示すために用いられる、それは本発明のさまざまな点において主要の成分を形成する。典型的に、それぞれのキレート基（たとえば上記式Ｉおよび／または下記式ＩＩ）は、ビ−デンテートであり、そのため４つのキレート基である、その少なくとも１つは式Ｉである、典型的にリガンド中に存在する。そのようなキレート基はそのリンカー部位によって互いに結合しあう。こうして、リンカー部位（たとえば下記のＲL基）は、式Ｉおよび／またはＩＩの１を超えるキレート基の間に共有されます。前記リンカー部位は、オクタデンテートリガンドの複合化部位と標的部位との間の連結部位として働く。そのような場合、少なくとも１つのリンカー部位は、カップリング部位（ＲC）に結合する。適切なリンカー部位は、すべてのトポロジーの中のメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基および／またはヘキシル基を含むＣ１〜Ｃ１２アルキル基、アルケニル基、またはアルキニル基を含むＣ１〜Ｃ１２ヒドロカルビル基のような短いヒドロカルビル基を含む。
【００７１】
リンカー部位はまた、その他の適切な強固な化学結合であっても、または含んでいてもよい、たとえばエステル基、エーテル基、アミン基および／またはアミド基を含む。２つのキレート部位を結合する（１を超える経路がある場合は、もっとも短い経路を数える）原子の総数は通常限定される、キレート部位が複合体の形成のために適切な配置となるように。こうしてリンカー部位は、典型的にキレート部位の間に１５原子以下、好ましくは１〜１２原子、より好ましくは１〜１０原子となるように選択される。リンカー部位が２つのキレート部位に直接的に結合している場合、前記リンカーは長さで１〜１２原子、好ましくは２〜１０原子（たとえばエチル、プロピル、ｎ−ブチルなど）である。前記リンカーが中心のテンプレートに結合している場合（下記参照）、それぞれのリンカーはキレート部位を結合する２つの分離したリンカーを有し、より短い。１〜８原子の長さ、好ましくは１〜６原子の長さのリンカーが、この場合好ましい（メチル、エチルおよびプロピルが適している、同様にそれらが片方または両端にエステル、エーテルおよびアミド結合を有する基も適している）。
【００７２】
リンカー部位は、第１にオクタデンテートリガンドのさまざまなキレート基を互いに、または中心のテンプレートに結合させるように働くが、リンカー部位に加えて、前記オクタデンテートは好ましくは、さらに「カップリング部位」（ＲC）を含む。前記カップリング部位の機能は、オクタデンテートリガンドを標的部位に結合させることである。これは、共有結合または非共有結合のいずれによっても達成される（たとえば、ビオチン／アビジン（ストレプトアビジン）のような特異の結合によって達成される）。好ましくは、カップリング部位は、キレート基の一つに直接共有結合していることによるか、より典型的にはリンカー部位またはテンプレートに結合することによりキレート基に共有結合で結合している。２以上のカップリング部位が用いられるならば、それぞれは、たとえばどのようなテンプレート、リンカーまたはキレート基でも適切なサイトであればいずれにも結合することができる。
【００７３】
一つの態様において、カップリング部位は、下記の構造を有していてもよい。
【００７４】
【化２】
0005878483.tif 000005
【００７５】
式中、Ｒ7は結合部位であり、置換または非置換アルキル、置換または非置換ヘテロアルキル、置換または非置換ヘテロシクロアルキル、置換または非置換アリル、置換または非置換ヘテロアリルからなる群から選ばれ、Ｘは標的部位または反応性の官能基である。好ましい結合部位は、ここで好ましいリンカー部位として述べた全ての基を含む。好ましい標的部位は、ここで述べた全てのものを含み、好ましい反応性のＸ基は、標的部位と共有結合を形成可能などのような基も含み、たとえばＣＯＯＨ、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨＲおよびＣＯＨ基を含む、ここでＮＨＲのＲはＨまたはここで述べた短いヒドロカルビル基であればなんでもよい。標的部位への結合のための非常に好ましい基は、リジン残基のイプシロンアミンおよびシステイン残基のチオール基が挙げられる。好適な反応性のＸ基の例としては、制限されることなく、Ｎ−ヒドロキシスクシミジルエステル、イミドエステル、アクリルハライド、Ｎ−マレイミド、アルファ−ハロアセチルおよびイソチオシアネートが挙げられる、ここで、後ろから３つはチオールとの反応に好適である。
【００７６】
生じた結合されたオクタデンテートリガンドが安定な金属イオン複合体を形成することができるように、カップリング部位は好ましくは結合される。前記カップリング部位はこうして好ましくは、リンカー、テンプレートまたはキレート部位の複合化をさほど妨げないサイトにおいて結合する。そのようなサイトは、好ましくはリンカーまたはテンプレート上にあり、より好ましくは標的に結合した表面から離れた位置にある。
【００７７】
好ましいキレート基は、下記の式ＩＩで表わされる基を含む。
【００７８】
【化３】
0005878483.tif 000006
【００７９】
上記式ＩＩにおいて、＝Ｏ部位は、ピリジン環のどのような炭素に結合したものであってもよいケト基を表わし、−ＯＨは、ピリジン環のどのような原子に結合したものであってもよいヒドロキシ部位を表わし、−ＲLは、オクタデンテートリガンド全体を形成するために、ヒドロキシピリジノン部位を他の複合化部位に結合するリンカー部位を表わす。ここで述べるどのようなリンカー部位もＲLとして適切であり、短いヒドロカルビル基、たとえば全てのトポロジーのメチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基および／またはヘキシル基を含むたとえばＣ１〜Ｃ８アルキル基、アルケニル基、アルキニル基を含むＣ１〜Ｃ８ヒドロカルビル基、を含む。ＲLは、ピリジン環のどのような原子、たとえば炭素または窒素原子において式ＩＩの環に結合していてもよい。前記ＲL基は、同様に他のキレート部位、他のリンカー基および／または中心の原子または基、たとえば環または他のテンプレート（ここで述べたように）に直接結合していてもよい。リンカー、キレート基および任意のテンプレート部位は、適切なオクタデンテートリガンドを形成するために選択される。
【００８０】
１つの好ましい態様において、式ＩＩの前記−ＯＨおよび＝Ｏ部位は、ピリジン環の隣接する原子に存在する、たとえば１，２−；２，３−，３，２−；４，３−および３，４−ヒドロキシピリジノン誘導体がすべてにおいて非常に好適である。
【００８１】
ここで、前記ＯＨ基またはリンカー部位ＲLはピリジン環の窒素の上に存在する場合、ＲNは通常存在しない。しかしながら、存在する場合は、ＲNは、置換または非置換のヒドロカルビル基、特にここで述べた短いヒドロカルビル基を含むどのような好適な部位であってもよい。
【００８２】
１つの好適な態様においては、少なくとも１つの３，２−ヒドロキシピリジノン部位はオクタデンテートリガンド構造中に存在する。これは明らかに、ここで述べたさまざまな置換部位であればどのようなものによっても置換されていてもよい。
【００８３】
式ＩＩのそれぞれの部位は、２つの滞在的に複合化した酸素を有する、本発明の１つの好ましい態様は、オクタデンテートリガンドが少なくとも２、好ましくは少なくとも３そして最も好ましくは４の独立に選ばれた式Ｉの部位を有する。式ＩＩのそれぞれの部位は、独立した置換形式を有する、しかしながら、１つの好ましい態様においては、少なくとも１つの部位が３，２−ヒドロキシピリジノン部位である。前記リガンドは、２、３または４つの３，２−ヒドロキシピリジノン部位（適切に置換されたもの、ここで述べたように）を含んでいてもよい。
【００８４】
オクタデンテートリガンドの式ＩまたはＩＩのそれぞれの部位は、ここで述べたどのような適切なリンカー基のどのような適切なトポロジーによって、前記リガンドの残りに結合されていてもよい。たとえば、式Ｉの４つの基は鎖状のリガンドを形成することができるように、そのリンカー基によって骨格に結合されていてもよい。または「オリゴマー」タイプの構造を形成するためにリンカー基によって橋かけされていてもよく、それは鎖状であっても、環状であってもよい。その代わりに、式ＩまたはＩＩのリガンド部位は、「交差」または「星状」トポグラフィの態様で、それぞれがリンカー（たとえば「ＲL」部位）によって、中心の原子または基に結合されていてもよい。リンカー（ＲL）部位は、単独で、炭素−炭素結合を介して結合していてもよい、または互いに、キレート基に、骨格に、テンプレート基に、カップリング部位に、または他のリンカーに、適切な強い基の官能基、たとえばアミン、アミド、エステル、チオエーテルまたはジスルフィド結合によって結合していてもよい。
【００８５】
「星状の」配置は、下記式ＩＩＩに表わされる。
【００８６】
【化４】
0005878483.tif 000007
【００８７】
ここで、すべての置換基および位置は上述の通りであり、「Ｔ」は、さらに中心の原子またはテンプレート基、たとえば、炭素原子、ヒドロカルビル鎖（上記で述べたものはどのようなものでもよい）、脂肪族または芳香環（ヘテロ環を含む）または縮合環系である。もっとも基本的なテンプレートは、１炭素であろう、それはその結合基によってキレート部位のそれぞれに結合するであろう、長い鎖、たとえば、エチルまたはプロピルは、テンプレートのいずれの端にも結合して、２つのキレート部位とともに等しく存在することができる。明らかに、どのような適した強い結合、それは炭素−炭素結合、エステル、エーテル、アミン、アミド、エステル、チオエーテルまたはジスルフィド結合を含む、をテンプレートおよびリンカー部位を結合するために用いてもよい。
【００８８】
式ＩＩＩにおいて、ＲNおよびＲLは同じ基であり、そうしてキレート部位がテンプレートＴにピリジン環の窒素原子を介して結合することができる。これは下記のＩＩＩｂ型の構造を提供する：
【００８９】
【化５】
0005878483.tif 000008
【００９０】
明らかに、式ＩＩ，ＩＩＩ，ＩＩＩｂ，ＩＶおよびＩＶｂの構造において異なる方法では置換されてない（たとえば、リンカーまたはカップリング部位によって）、それらのピリジン環の位置は、適切な態様で、式ＩにおけるＲ１〜Ｒ５の置換基を有していてもよい。特に、小さいアルキル置換基、たとえばメチル基、エチル基またはプロピル基がどのような位置にあってもよい。
【００９１】
前記オクタデンテートリガンドは通常、さらに上記で述べた少なくとも１つのカップリング部位を含む。これは、ここで述べたどのような好適な構造であってもよく、末端が標的部位、特定のバインダー、またはそのような標的部位または特異的なバインダーに結合可能な特定のバインダーまたは官能基であってもよい。
【００９２】
カップリング部位は、前記リンカー、テンプレートまたはキレート部位のどのような好適な位置に結合していてもよい、たとえば式ＩＩＩ中で述べられたａ）、ｂ）および／またはｃ）の位置が挙げられる。カップリング部位の結合は、どのような強い結合によるものであってもよい、たとえば炭素−炭素結合、エステル、エーテル、アミン、アミド、チオエーテルまたはジスルフィド結合が挙げられる。同様に、標的部位にそのような結合を形成することが可能な基はカップリング部位の官能端に適し、その部位は標的部位に結合している時に、そのような基を終結させる。
【００９３】
代わりに、「骨格」タイプの構造は、式ＩＶで表わされる。
【００９４】
【化６】
0005878483.tif 000009
【００９５】
ここで、上記式で表わされる全ての置換基および位置は、上記の通りである、および「ＲB」はさらに骨格部位である、それは典型的に、ここで述べたいずれのリンカーに対しても同じ構造および機能であり、こうして、状況が許す限り、リンカー部位のどのような定義も骨格部位に適用される。好適な骨格部位は、キレート部位がそのリンカー基によって結合するための足場を形成する。通常、３または４つの骨格部位が必要とされる。典型的に、鎖状の骨格には３つであり、環状の骨格には４つである。特に好ましい骨格部位は、ヘテロ原子または官能部位を片端または両端に任意に有する短い炭化水素鎖（たとえば、ここで述べたもの）を含む。アミン基およびアミド基はこの観点から好適である。
【００９６】
前記カップリング基は、前記リンカー、骨格またはキレート部位のどのような好適な位置に結合していてもよい、たとえば式ＩＶ中で述べられたａ）、ｂ）および／またはｃ’）の位置が挙げられる。カップリング部位の結合は、どのような強い結合によるものであってもよい、たとえば炭素−炭素結合、エステル、エーテル、アミン、アミド、チオエーテルまたはジスルフィド結合が挙げられる。同様に、標的部位にそのような結合を形成することが可能な基はカップリング部位の官能基に適し、その部位は標的部位に結合している時に、そのような基を終結させる。
【００９７】
式ＩＩＩに関し、式ＩＶの構造において、ＲNおよびＲLは同じ基であって、そのためピリジン環の窒素原子を介してキレート部位が骨格ＲBに結合する。このことにより、下記タイプＩＶＢの構造となる。
【００９８】
【化７】
0005878483.tif 000010
【００９９】
「骨格」タイプのオクタデンテートリガンドであって、２つの１，２および３，２−ＨＯＰＯキレート部位を有し、骨格にアミドリンカー基で結合するものの例は、下記の式Ｖで表わされる。
【０１００】
【化８】
0005878483.tif 000011
【０１０１】
「テンプレート化された」オクタデンテートリガンドであって、エチルアミド基によって、エチルおよびプロピルジアミンに結合している４つの３，２−ＨＯＰＯキレート部位を有するものを、それぞれ下記式ＶＩおよびＶＩＩに示す。
【０１０２】
【化９】
0005878483.tif 000012
【０１０３】
上記式に表わされるように、３，２−ＨＯＰＯ部位の自由窒素は、メチル基および小さいヒドロカルビル基、たとえばメチルまたはエチルは、この位置が好ましい（式ＩのＲ1または式ＩＩのＲN）。
【０１０４】
「テンプレート化された」オクタデンテートリガンドであって、ＨＯＰＯ環における窒素によって、アミンシクランに結合している４つの３，２−ＨＯＰＯキレート部位を有するものを、下記式ＶＩＩＩに示す。
【０１０５】
【化１０】
0005878483.tif 000013
【０１０６】
上記で述べたように、オクタデンテートリガンドは典型的にリガンドの残りとどのような位置でも結合可能なカップリング部位を含む。カップリング基を終結させる官能部位を有する例示的化合物は、この態様によれば、下記構造ＩＸである。
【０１０７】
【化１１】
0005878483.tif 000014
【０１０８】
ここで参照した全ての文献は、参照として組み込む、その中には、Ｇｏｒｄｏｎ  ＡＥＶら、プルトニウムおよび他のアクチニドの封鎖薬の合理的設計．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２００３，１０３，４２０７−４２８２，ＰＣＴ特許出願ＷＯ２００８／０６３７２１  Ａ２およびＴ．Ｎ．Ｌａｍｂｅｒｔら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４３（２００２）７３７９−７３８３が含まれる。
【０１０９】
本発明は、以下の実施例において表わされるが、特に制限されることはない。実施例に例示された全ての化合物は本発明の好ましい態様である（好ましい中間体および前駆体を含む）そして、文脈に沿う限りどのような観点においても単独で、または組み合わせて用いられることができる。こうして、たとえば、実施例２の化合物２〜４のそれぞれおよびすべて、実施例３の化合物１０ならびに実施例４の化合物７が、さまざまなタイプの中で好ましい態様を形成する。
【実施例】
【０１１０】
以下、実施例に基づいて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【０１１１】
［実施例１］
＜純トリウム−２２７の単離＞
トリウム−２２７は、アクチニウム−２２７カウ（ｃｏｗ）から単離される。アクチニウム−２２７は、ラジウム−２２６の熱中性子照射をした後、続いてラジウム−２２７（ｔ１/２＝４２．２ｍ）のアクチニウム−２２７への放射線崩壊することにより製造される。トリウム−２２７は、アクチニウム−２２７の放射線崩壊混合物の８ＭのＨＮＯ3溶液をアニオン交換クロマトグラフィーを通過させると選択的に保持される。カラムは、内径が２ｍｍであり、長さが３０ｍｍであり、ＡＧ（登録商標）１−Ｘ８樹脂（２００−４００メッシュ、硝酸塩の形態）を７０ｍｇ含有するものを用いた。アクチニウム−２２７、ラジウム−２２３および娘はカラムから溶出された後、トリウム−２２７は、１２ＭのＨＣｌ溶液でカラムから抽出された。トリウム−２２７を含む抽出液は、エバポレートして乾燥され、残渣は０．０１Ｍ  ＨＣｌで再度けん濁された。
【０１１２】
［実施例２］
＜ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳの合成＞
【０１１３】
【化１２】
0005878483.tif 000015
【０１１４】
３−ベンゾイルオキシ−１−メチル−４−（２−チオキソチアゾリジン−１−イル）カルボニル−２（１Ｈ）−ピリジノン（Ｒａｙｍｏｎｄ，Ｋ．；  Ｘｕ，  Ｊ．，．ＵＳ５，６２４，９０１に従って合成した）（２．２２ｍｍｏｌ，０．８ｇ）、トリエチルアミン（０．３１ｍｌ，２．２２ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（５ｍｇ）を［５−アミノ−６−（（２−アミノ−エチル）−｛２−［ビス−（２−アミノ−エチル）−アミノ］−エチル｝−アミノ）−ヘキシル］−カルバミン酸−ｔ−ブチルエステル（ＢｏｃＬｙｓ−Ｈ（２，２）ａｍｉｎｅ）（Ｒａｙｍｏｎｄ，Ｋ．；  Ｃｏｒｎｅｉｌｌｉｅ，Ｔ．Ｍ．；Ｘｕ．Ｊ．ＷＯ２００８／０６３７２１に従って合成した）（０．２０４ｇ，０．５０５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（８０ｍｌ）溶液に加えた。前記混合物を室温で一晩攪拌し、それからエバポレートして乾燥した。残渣はジクロロメタンに溶解し、フラッシュシリカゲルカラムにかけ、ジクロロメタン中の２−８％メタノール勾配により溶出する。適切なフラクションを集め、エバポレートして乾燥し、ＡＬＧ−００１（１）（〜０．４ｇ）を薄いベージュ色の粘性油として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ，ｐｏｓ）：ｍ／ｚ  １３６９［Ｍ＋Ｈ］+，ｍ／ｚ  １３９１［Ｍ＋Ｎａ］+
ＡＬＧ−００１（１）（２８０ｍｇ，０．２０５ｍｍｏｌ）を氷冷した酢酸（２０ｍｌ）に溶解し、２０％  Ｐｄ（ＯＨ）2および炭触媒（６０ｍｇ）を加えた、そして、前記混合物を４０−４５ｐｓｉ、室温で一晩水素添加した。濾過後、ロータリーエバポレーションによりＡＬＧ−ＤＥＢＮ（２）（〜２６０ｍｇ，痕跡量の酢酸を含む）を赤色の粘性油として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ，ｐｏｓ）：ｍ／ｚ  １００７［Ｍ＋Ｈ］+，ｍ／ｚ  １０２９［Ｍ＋Ｎａ］+
ＡＬＧ−ＤＥＢＮ（２）（７０ｍｇ）を室温で２：１のＭｅＯＨ／ジクロロメタン（１５ｍｌ）に溶解した。それから精製された０．５ｇのＡｍｂｅｒｌｙｓｔ−１５樹脂を加え、前記混合物を穏やかに一晩攪拌した。前記樹脂はその後濾過により除去し、ヘキサン（１０ｍｌ）、テトラヒドロフラン（１０ｍｌ）およびメタノール（１０ｍｌ）で順に洗浄した。このアミンが結合した樹脂は、４Ｍのアンモニアメタノール溶液（２０ｍｌ）に移し、穏やかに５０分攪拌した。テトラヒドロフラン（１０ｍｌ）を加え、すべての脱保護生成物を溶解した。前記樹脂はそれから濾過により除かれ、前記溶液はエバポレートされ、ＡＬＧ−ＤＥＢＮ−ＤＥＢＯＣ（３）（３７ｍｇ）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ，ｐｏｓ）：ｍ／ｚ  ９０９［Ｍ＋Ｈ］+，ｍ／ｚ  ９３１［Ｍ＋Ｎａ］+
４０ｍｇのＡＬＧ−ＤＥＢＮ−ＤＥＢＯＣ（３）の６：１イソプロパノール−水（ｖ／ｖ，７ｍｌ）懸濁液を１，４−フェニレンジイソチオシアネート（４．１当量）のクロロホルム（２．５ｍｌ）溶液と反応させた。試料をＭＳ分析にかけるとき、反応物質は、室温で３０分攪拌されていた。予想された質量（１１００に相当するピークが観測された。真空下揮発性物質を除去した後、約９５ｍｇの明るい茶色の固体が単離された。明るい茶色の固体はアセトニトリルに懸濁し、前記混合物を１５分間還流下加熱した。前記混合物は室温まで冷却し、続いて茶色の固体として２６ｍｇのＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ（４）を濾過して単離した。
［実施例３］
＜対称な３，２−ＨＯＰＯ  含有キレート剤の合成＞
【０１１５】
【化１３】
0005878483.tif 000016
【０１１６】
水素化ナトリウム（ミネラルオイル中の６０％分散液，６０．１ｇ，１．５ｍｏｌ，５当量）をフラスコに入れ、テトラヒドロフラン（１Ｌ）を加えた。マロン酸ジメチル（１７２ｍｌ，１．５ｍｏｌ，５当量）を１．５時間かけて滴下した。反応混合物の温度は、＋１０℃以下に保った。反応混合物は、それからテトラヒドロフラン（４００ｍｌ）で希釈した。４−ニトロベンジルブロミド（６５．０ｇ，０．３ｍｏｌ，１当量）のテトラヒドロフラン（１７０ｍｌ）溶液を上記作成した混合物に激しく振りながら３０分をかけてゆっくりと加えた。３０分０℃で攪拌した後、前記反応混合物は、塩水（１Ｌの飽和食塩水）に注ぎ、室温で一晩攪拌して、白い沈殿物を得た、前記混合物は、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで希釈し、前記沈殿物を濾過して温エタノールに溶解した。前記エタノール混合物を濾過して、ろ液を濃縮して体積を少なくし、そこから２４．８ｇ（３１％）のジメチル（４−ニトロベンジル）プロパンジオネート（１）が白色の結晶状の固体として沈殿した。
ＬＣ純度：＞９０％（２５４ｎｍ）
ＭＳ（ＡＰＣｌ，ｐｏｓ）：ｍ／ｚ  ２８５．１［Ｍ＋ＮＨ4］+
化合物１（２４．８ｇ，９２．７ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２３０ｍＬ）に溶解し、ボラン−ジメチルスルフィド複合体（２８．５ｍｌ，３０１ｍｌ，３．３当量）に加えた。前記反応混合物を２４時間還流し、それから室温で一晩置いた。０℃でメタノール（２５０ｍｌ）を加え、塩水（６００ｍｌ）に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。前記合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4の上で乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣はメタノールと蒸発した。粗生成物は、フラッシュクロマトグラフィーで精製し、１４．５ｇ（７４％）の２−（４−ニトロベンジル）プロパン−１，３−ジオール（２）を黄色の油として得た。
ＬＣ純度：＞９２％（２５４ｎｍ）
化合物２（１０．０ｍｇ，４７．３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（１４．５ｍｌ，１０４ｍｍｏｌ，２当量）を加えた。前記反応混合物は、氷浴で冷やし、メタンスルホニルクロライド（８．０ｍｌ，１０４ｍｍｏｌ，２当量）を少しずつ加えた。最終混合物は、室温になるまで一晩置いた。それから、さらなるトリエチルアミン（１．５ｍｌ）およびメタンスルホニルクロライド（０．８ｍｌ）を加え、３０分攪拌した。それから前記反応混合物は、ジクロロメタンに溶解し、生成した沈殿物を濾過して除去した。前記ジクロロメタンのろ液は飽和ＮａＨＣＯ3水溶液、０．５ＭのＨＣｌ水溶液および塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4の上で乾燥させ、真空下で濃縮し、１４．５ｇ（８３％）の２−（４−ニトロベンジル）プロパン−１，３−ジイルジメタンスルフォネート（３）をオレンジ色の油として得た。化合物（３）は、さらに精製することなく次の段階で用いた。
ＬＣ純度：＞８７％（２５４ｎｍ）
ＭＳ（ＡＰＣｌｐｏｓ）：ｍ／ｚ  ３８５．３［Ｍ＋ＮＨ4］+
化合物３（１４．５ｇ，３９．５ｍｍｏｌ）は、メチルエチルケトン（１００ｍｌ）、ヨウ化ナトリウム（１６．０ｇ，１０７ｍｍｏｌ，２．７当量）を加え、前記混合物を９５℃で１時間加熱した。得られた白色の沈殿物は濾過して除去し、メチルエチルケトンで洗い、前記ろ液は真空下で濃縮した。前記粗生成物はメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルから砕いて、フラッシュクロマトグラフィーで精製して、１０．６ｇ（６３％）の１−［３−ヨード−２−（ヨードメチル）プロピル］−４−ニトロベンゼン（４）を黄色の固体として得た。
ＬＣ純度：＞９０％（２５４ｎｍ）
ＭＳ（ＡＰＣｌｐｏｓ）：ｍ／ｚ  ４３１．１［Ｍ＋Ｈ］+
ジエチレントリアミン（１０．８ｍｌ，１００ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４２ｍｌ，３００ｍｍｏｌ，３当量）をテトラヒドロフラン（５００ｍｌ）に溶解し、氷浴で冷やした。それからＢｏｃ−ＯＮ（４９．５ｇ，２００ｍｍｏｌ，２当量）をテトラヒドロフラン（１９０ｍｌ）で溶解した溶液を２．５時間かけて滴下した。前記反応混合物は、さらなる１時間０℃で攪拌し、その後室温になるまで一晩置いた。それから前記反応混合物は、真空下濃縮した。残渣はジクロロメタンに溶解し、１ＭのＮａＯＨ水溶液で洗った。前記有機層はＮａ2ＳＯ4の上で乾燥させ、真空下で濃縮した。粗生成物はフラッシュクロマトグラフィーで精製し、２０．０ｇ（６６％）のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（イミノジエタン−２，１−ジイル）ビスカーバメート（５）を黄色の粘性のある油として得た。
ＭＳ（ＡＰＣｌｐｏｓ）：ｍ／ｚ  ３０４．３［Ｍ＋Ｈ］+
化合物５（２６．０ｇ，８６ｍｍｏｌ，４当量）をドライトルエン（４０ｍｌ）に溶解し、Ｎ−エチルモルフォリン（５．４ｍｌ，４２ｍｍｏｌ，２当量）を加えた。化合物４（９．２ｇ，２１ｍｍｏｌ）をドライトルエン（３５ｍｌ）に溶解し、前記反応混合物に加えた。前記混合物は、圧力反応器で１０５℃で５日間保温した。それから、前記反応混合物は、室温に冷却し、酢酸エチルで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液で洗浄した。前記合わせた有機層を水と塩水で洗い、Ｎａ2ＳＯ4の上で乾燥させ、真空下で濃縮した。前記粗生成物はフラッシュクロマトグラフィーで精製し、１１．４ｇ（７０％）の化合物６を黄色の堅い泡として得た。
ＬＣ純度：＞９６％（２１０ｎｍ）
ＭＳ（ＡＰＣｌ，ｐｏｓ）ｍ／ｚ  ７８２．８，［Ｍ＋Ｈ］+；６８２．７［Ｍ＋Ｈ−Ｂｏｃ］+；５８２．６［Ｍ＋Ｈ−２Ｂｏｃ］+；３８２．１［Ｍ＋Ｈ−４Ｂｏｃ］+
化合物６（２．０ｇ，２．６ｍｍｏｌ）をジオキサン（１６ｍｌ）に溶解し、９ＭのＨＣＬのジオキサン（２２ｍｌ）溶液を加えた。前記反応混合物は、室温で一晩攪拌し、真空下で乾燥した状態まで濃縮し、１．９ｇの化合物７のＨＣＬ塩をベージュ色の固体として得た。
ＭＳ（ＡＰＣｌｐｏｓ）ｍ／ｚ  ３８２．５［Ｍ＋Ｈ］+
化合物７（１．９ｇ，２．６ｍｍｏｌ）をＤＭＰＵ（１，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２（１Ｈ）−ピリミジノン）（９．５ｍｌ）および３−（ベンゾイルオキシ）−１−メチル−４［（２−チオキソ−１，３−チアゾリジン−３−イル）カルボニル］ピリジン−２−（１Ｈ）−オン（３．７ｇ，１０．３ｍｍｏｌ，４当量）に加えた。それから、ＤＢＵ（２．３ｍｌ，１５．５ｍｍｏｌ，６当量）をＤＭＰＵ（４．７ｍｌ）に溶解した溶液をゆっくり４０分間で滴下した。一晩室温で攪拌を続けた。前記反応混合物はジクロロメタンで希釈して飽和ＮａＨＣＯ3水溶液で洗浄した。前記合わせた有機層を水と半飽和塩水で洗い、Ｎａ2ＳＯ4の上で乾燥させ、真空下で濃縮した。前記粗生成物はフラッシュクロマトグラフィーで精製して、４．０ｇの化合物８を黄色の油として得た。化合物８は更なる精製をすることなく次の段階で用いた。
ＭＳ（ＡＰＣｌ，ｐｏｓ）ｍ／ｚ  １３４７．７［Ｍ＋Ｈ］+
化合物８（４．０ｇ，２．６ｍｍｏｌ）を酢酸（２００ｍｌ）に溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）2（炭素上２０％  ｗ／ｗ，  ５０％湿潤）（８００ｍｇ，１０％  ｗ／ｗ）を加えた。前記反応混合物は、Ｐａｒｒ圧力反応器で３０ｂａｒの水素圧、室温で一晩攪拌した。前記反応混合物は、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通過させて濾過し、ろ液を真空下で濃縮した。粗生成物はフラッシュクロマトグラフィーで精製し、化合物９をベージュの泡状の固体として得た。
【０１１７】
化合物９（９９６ｍｇ）を酢酸（５．５ｍｌ）に溶解し、続いて６ＭのＨＣｌ水溶液および５％のＰｄ／Ｃ（９９ｍｇ，１０％  ｗ／ｗ）を加えた。前記反応混合物は、圧力反応器で８ｂａｒの水素圧で一晩攪拌し、それからＣｅｌｉｔｅ（登録商標）のパッドを通過させて濾過した。前記ろ液は真空下で濃縮し、トルエンおよびメタノールとともにエバポレートした。前記残渣はメタノールに溶解し、ジエチルエーテルを加えて沈殿させた。形成したベージュの沈殿物は濾過して除き、真空下で一晩乾燥し、７００ｍｇの化合物１０のＨＣＬ塩である、ＡＬＧ１００５−３８を得た。
ＭＳ（ＡＰＣｌ  ｐｏｓ）ｍ／ｚ  ９５６．７［Ｍ＋Ｈ］+
［実施例４］
＜別の対称な３，２−ＨＯＰＯ  含有キレート剤の合成＞
【０１１８】
【化１４】
0005878483.tif 000017
【０１１９】
無水Ｂｏｃ（２４．４ｇ，１１９ｍｍｏｌ）をイミダゾール（８．０ｇ，１１７ｍｍｏｌ）の５０ｍｌジクロロメタン溶液に少しずつ加えた。前記反応混合物を１時間かけて攪拌した。前記反応混合物を５０ｍｌの水で２回洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4の上で乾燥させ、濾過し真空下で濃縮した。前記残渣は、２５ｍｌのトルエンおよびトリス（２−アミノエチル）アミン（８．１９ｇ，５６ｍｍｏｌ）を加えた。前記反応混合物は、６０℃で２時間攪拌して、真空下で容量を減らした。前記残渣は１２５ｍｌのジクロロメタンに溶解し、水で洗い（５０ｍｌで４回）、Ｎａ2ＳＯ4の上で乾燥させ、濾過し真空下で濃縮した。ドライフラッシュクロマトグラフィー（１％のトリエチルアミンを加えた０〜１５％のメタノールのジクロロメタン溶液）をして、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（（（２−アミノエチル）アザンジイル）ビス（エタン−２，１−ジイル））ジカーバメート（１）（１３．５１ｇ，３９．０ｍｍｏｌ，７０％）を薄い色のない油として得た。
【０１２０】
分光データは、Ｆｒｕｌｌａｎｏらによって報告されたデータ（Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２００４，１０，５２０５−１７）に従う。
【０１２１】
Ｎ−Ｃｂｚ−β−アラニン（８．０４ｇ，３６ｍｍｏｌ）、４−（ジメチルアミノ）ピリジン（４．４０ｇ，３６ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ・ＨＣＬ（６．９０ｇ，３６ｍｍｏｌ）を２５ｍｌのテトラヒドロフランに溶解し、１０分間攪拌した後、化合物１（１０．４ｇ，３０ｍｍｏｌ）を７５ｍｌのテトラヒドロフランに溶解したものを加えた、前記反応混合物は、４時間攪拌し、真空下で容量を減らした。ドライフラッシュクロマトグラフィー（０〜４０％のテトラヒドロフランのジクロロメタン溶液）により精製し、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（（（２−（３−（Ｃｂｚ−アミノ）プロパンアミド）エチル）アザンジイル）ビス（エタン−２，１−ジイル））ジカーバメート（２）（１５．１１ｇ，２７．４ｍｍｏｌ，９１％）を非常に粘性の高いわずかに黄色の油とした得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：１．４３（ｓ，１８Ｈ），２．４２−２．５６（ｍ，８Ｈ），３．０４−３．１７（ｍ，４Ｈ），３．１９−３．３２（ｍ，２Ｈ），３．４１−３．５７（ｍ，２Ｈ），５．０８（ｓ，２Ｈ），５．２２（ｂｓ，２Ｈ），５．８３（ｂｓ，１Ｈ），７．２３（ｂｓ，１Ｈ），７．２６−７．４３（ｍ，５Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＬ，ｐｏｓ）ｍ／ｚ  ５７４．３［Ｍ＋Ｎａ］+
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（（（２−（３−（Ｃｂｚ−アミノ）プロパンアミド）エチル）アザンジイル）ビス（エタン−２，１−ジイル）ジカーバメート（１０．３０ｇ，１８．７ｍｍｏｌ）を１００ｍｌのメタノールに溶解し、アセチルクロライド（２５ｍｌ，０．３５ｍｏｌ）を滴下した。前記反応混合物は、室温で１時間攪拌した。前記反応混合物は、真空下でおおよそ１／３の体積にしてから、１００ｍｌのエーテルを加え、無色の固体を沈殿させた。前記固体は濾過し、エーテルで洗い、真空下で乾燥し、ベンジル（３−（（２−（ビス（２−アミノエチル）アミノ）エチル）アミノ）−３−オキソプロピル）カーバメートトリヒドロクロライド（３）（８．７０ｇ，１８．７ｍｍｏｌ，〜１００％）を無色の固体として得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：３．１９−３．２８（ｍ，２Ｈ），３．３８−３．６２（ｍ，１４Ｈ），５．１０（ｓ，２Ｈ），７．２９−７．３９（ｍ，５Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＬ，ｐｏｓ）ｍ／ｚ  ３５２．２［Ｍ＋Ｈ］+
化合物３（１０．５６ｇ，１１．４ｍｍｏｌ）の３２０ｍｌのテトラヒドロフランの懸濁液および３２０ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドにトリエチルアミン（６．７５ｍｌ，４８．４ｍｍｏｌ）を室温で加えた。Ｎ−ｂｏｃ−２−アミノアセトアルデヒド（１６．０ｇ，１００．５ｍｍｏｌ）およびトリアセトキシボロヒドリドナトリウム（３２．００ｇ，１５１ｍｍｏｌ）を加えた。前記反応混合物は、２０時間攪拌した。２００ｍｌの塩水および５００ｍｌのクロロホルムを加え、相を分離し、前記水層を１００ｍｌのクロロホルムで３回抽出した。前記合わせた有機層は１００ｍｌの食塩水で洗い、Ｎａ2ＳＯ4の上で乾燥させ、濾過し、真空下で体積を減らした。フラッシュクロマトグラフィー（０〜１０％のメタノールのジクロロメタン溶液）により、テトラ−ｔｅｒｔ−ブチル（（（（（２−３−Ｃｂｚ−アミノプロパンアミド）エチル）アザンジイル）ビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（アザントリイル）テトラキス（エタン−２，１−ジイル）テトラカーバメート（４）（３．４０ｇ，３．７ｍｍｏｌ，３２％）を黄色の固体とした得た。
ＭＳ（ＥＳＬ，ｐｏｓ）：ｍ／ｚ  ９４６．７［Ｍ＋Ｎａ］+
化合物４（３．４０ｇ，３．７ｍｍｏｌ）を６０ｍｌのメタノールに溶解し、アセチルクロライド（１２ｍｌ，０．１７ｍｏｌ）を滴下した。前記反応混合物を室温で１時間攪拌した。前記反応混合物を、真空下でおおよそ１０ｍｌの体積にしてから、５０ｍｌのアクリロニトリルを加え、沈殿させた。前記固体は濾過し、アクリロニトリルで洗い、真空下で乾燥し、ベンジル（３−（（２−（ビス（２−アミノエチル）アミノ）エチル）アミノ）−３−オキソプロピル）カーバメートヘプタヒドロクロライド（５）（２．８８ｇ，３．７ｍｍｏｌ，〜１００％）を無色の固体として得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：２．４４−２．６１（ｍ，２Ｈ），２．６８−３．００（ｍ，４Ｈ），３．０８−３．４０（ｍ，１６Ｈ），３．４４−３．５２（ｍ，４Ｈ），３．５４−３．７７（ｍ，６Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），７．３０−７．４７（ｍ，５Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＬ，ｐｏｓ）：ｍ／ｚ  ５２４．５［Ｍ＋Ｈ］+
トリエチルアミン（２．５２ｍｌ，１８．１ｍｍｏｌ）および４−（ジメチルアミノ）ピリジン（１２ｍｇ，触媒）を化合物５（０．８１ｇ，１．０４ｍｍｏｌ）および３−（ベンジルオキシ）−１−メチル−４−（２−チオキソチアゾリジン−３−カルボニル）ピリジン−２（１Ｈ）−オン（１．５０ｇ，４．１６ｍｍｏｌ）の１８０ｍｌのジクロロメタンの懸濁液に加えた。前記反応混合物は一晩攪拌し、真空下で体積を減らした。フラッシュクロマトグラフィー（０〜１０％のメタノールのジクロロメタン溶液）により、ベンジル（１−（３−ベンジルオキシ）−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−４−イル）−５−（２−（３−（ベンジルオキシ）−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−４−カルボキサミド）エチル）−８−（２−（ビス（２−（３−ベンジルオキシ）−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−４−カルボキシアミド）エチル）アミノ）エチル）−１，１２−ジオキソ−２，５，８，１１−テトラアザテトラデカン−１４−イル）カーバメート（６）（６７３ｍｇ，０．４５ｍｍｏｌ，４３％）を明るい茶色の固体として得た。
【０１２２】
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：２．１０−２．４０（ｍ，２０Ｈ），３．０２−３．２１（ｍ，１０Ｈ），３．３２−３．４６（ｍ，２Ｈ），３．５０（ｓ，１２Ｈ），４．９９（ｓ，２Ｈ），５．２５（ｓ，８Ｈ），５．９５（ｂｓ，１Ｈ），６．６２（ｄ，７．１７Ｈｚ，４Ｈ），７．０１（ｄ，７．１７Ｈｚ，４Ｈ），７．１５−７．４０（ｍ，２５Ｈ），７．８９（ｂｓ，４Ｈ），
13Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：１１．４８，３５．７１，３７．１８，３７．３５，３７．５０，３７．６６，４６．１８，５１．５５，５２．１５，５２．８２，５３．２８，６６．３４，７４．６４，７４．７５，７７．４３，１０４．６３，１２７．９０，１２７．９４，１２８．４０，１２８．６５，１２８．７５，１２８．９４，１３０．８１，１３２．３２，１３６．２７，１３６．７６，１４６．１９，１５６．４５，１５９．５１，１６３．３０，１７１．３１
ＭＳ（ＥＳＬ，ｐｏｓ）：ｍ／ｚ  ７６６．９［Ｍ＋２Ｎａ］2+
化合物６は、基本的に実施例２に記載されているように、溶解され、脱ベンジル化し、Ｂｂ−１−ＨＯＰＯ−１−ＤＥＢＮ（７）を得た。
［実施例５］
＜ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳとのキレート化実験＞
固体のＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ（実施例２の４）をＤＭＳＯ（バイオテックグレード溶媒９９．８％）に１ｍｇ／ｍｌとなるように溶かし、反応溶液を調製した。
【０１２３】
異なる金属とのキレート化反応は１ｍｇ／ｍｌの反応溶液を選択された金属溶液と混合し、リガンド対金属が３：２とすることにより行った。試験のための金属イオンは以下のようにして得た：232Ｔｈの２％ＨＮＯ3（パーキンエルマーピュアプラス）溶液、Ｆｅ3+の２％ＨＮＯ3（パーキンエルマーピュアプラス）溶液およびＩｎＣｌ3（無水粉末９９．９９９＋％，アルドリッチ）を０．０１ＭのＨＣｌに溶解した。前記試薬は室温で１５分反応させてから、５μｍの反応混合物をＬＣ−ＭＳに入れ分析した。
【０１２４】
結果物は、金属−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ錯体が232Ｔｈ4+、Ｆｅ3+およびＩｎ3+の金属に対して定量的に形成された。232Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ、Ｆｅ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳおよびＩｎ−−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ錯体のＬＣ−ＭＳクロマトグラムおよびスペクトルを図１−６に示す。
【０１２５】
前記ＬＣ−ＭＳの条件は以下の通りである：分離は１．７μｍ、２．１×５０ｍｍのＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８カラム、５０℃、０．０５％のギ酸水溶液を移動相Ａおよび０．０５％のギ酸のアクリルニトリル溶液を移動相Ｂとして用いた。前記傾斜組成および流量を表３に示す。
【０１２６】
【表３】
0005878483.tif 000018
【０１２７】
マススペクトル分析は、Ｘｅｖｏ−ＴｏＦ−１で、取得質量範囲は〜４９０−１９５０Ｄａ、質量ＥＳ+、３．０ｋＶキャピラリー、コーン電圧２０Ｖで１０００秒以上スキャンした。
［実施例６］
＜ＡＬＧ１００５８−３８とのキレート化実験＞
ＡＬＧ１００５−３８（実施例３の１０）をメタノール（ＬＣ−ＭＳグレード）に溶解して１０ｍｇ／ｍｌとして原液を調製した。前記１０ｍｇ／ｍｌ原液は、メタノールおよび０．５ＭのＮａＯＡｃ−緩衝液（ｐＨ５．５）で１：８：１の割合で希釈し、１ｍｇ／ｍｌのＡＬＧ１００５−３８反応溶液を得た。異なる金属とのキレート化反応は実施例５と同様に１ｍｇ／ｍｌの反応溶液を選択された金属溶液と混合し、さらにＧａＣｌ3（無水ビーズ  ９９．９９％、アルドリッチ）を０．０１Ｍ  Ｈｃｌに溶解したものを加え、リガンド対金属が３：１〜１：２とした。前記試薬は室温で１０分反応させた。最後に前記反応混合物は１０倍のギ酸（０．１％）で希釈してから、５μｍの反応混合物をＬＣ−ＭＳに入れ分析した。前記ＬＣ−ＭＳ分離および分析は、コーン電圧を３５Ｖとして以外は、実施例５で述べたように行った。
【０１２８】
結果物は、金属−ＡＬＧ１００５−３８錯体が232Ｔｈ4+、Ｆｅ3+、Ｉｎ3+およびＧａ3+の金属に対してかなりの量で形成された。232Ｔｈ−ＡＬＧ１００５−３８、Ｆｅ−ＡＬＧ１００５−３８、Ｉｎ−ＡＬＧ１００５−３８およびＧａ−ＡＬＧ１００５−３８錯体のＬＣ−ＭＳクロマトグラムおよびスペクトルを図７−１４に示す。
［実施例７］
＜Ｂｂ−１−ＨＯＰＯ−１−ＤＥＢＮとのキレート化実験＞
Ｂｂ−１−ＨＯＰＯ−１−ＤＥＢＮ（実施例４で製造したもの）をＤＭＳＯ（バイオテックグレード溶媒９９．８％）に溶解して１ｍｇ／ｍｌとして原液を調製した。キレート化実験は前記１ｍｇ／ｍｌの溶液を実施例５で述べた232Ｔｈ０．０１Ｍ  ＨＣｌ（パーキンエルマー）溶液と混合することにより行った。前記ＬＣ−ＭＳ分離および分析は、実施例６で述べたように行った。
【０１２９】
結果物は、予想された232Ｔｈ−Ｂｂ−１−ＨＯＰＯ−１−ＤＥＢＮ複合体がすばやく形成された、図１５および１６に示す。
［実施例８］
＜ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳのｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂへの接合、トリウム−２２７で接合の標識化を行い、標的の結合が保持されていることを確認した。＞
接合
ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂのモノクローナル抗体の薬剤グレード（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標），ロッシェ）を用いた。前記抗体は、０．９％のＮａＣｌに緩衝液交換をして６．３ｍｇ／ｍｌに濃縮した。ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳの原液はＤＭＳＯに溶解して１ｍｇ／ｍｌに調製した（純度は考慮しない）。ＤＭＳＯ原液は、キレーター対抗体のモル比が６．５：１以下に相当する抗体溶液に加えた。０．０７Ｍのホウ砂溶液を反応溶液に加え、ｐＨ９にし、一晩３７℃で培養した。得られた接合を精製し、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−４（３０ｋ  ＭＷＣＯ）遠心分離フィルターユニットで緩衝液交換をした。１ｍｇを１００μｌの０．９％のＮａＣｌに分注し、凍らせ、使用するまで−１８℃で保管した。
標識化
１００μｌの０．５ＭのＮａＯＡｃ−緩衝液（ｐH５．５）を１ｍｇのＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ接合の小瓶に加え標識化に適切なｐＨとした。この溶液を０．０１Ｍ  ＨＣｌ中の４．２−１６．４ＭＢｑの227Ｔｈのと混合し、そのｐＨをｐＨ紙で確認した。エッペンチューブキャップをアルミニウムホイルでくるみ、前記チューブを室温でサーモミキサー中に置き１５分穏やかにかき混ぜた。
【０１３０】
前記チューブは１０μｌの飽和ＤＴＰＡのＭＦ−Ｈ2Ｏに加えた後、さらに室温で５分間培養し、保持されている自由トリウム−２２７をとらえた。
ＰＢＳを用いて標識化されたＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ接合を希釈して、結果物をＮＡＰ−５カラムで精製した、そして自由放射性核種（トリウム−２２７および娘核種）およびＤＴＰＡ−トリウムキレートをの大多数はカラムに残されていた。
【０１３１】
前記カラムおよび希釈されたフラクションはＨＰＧｅ−検出器  ＧＥＭ（１５）で測定して、生成物の反応収率および特定の活性を測定した。前記生成物のフラクションは濾過され４℃で一晩保管した。
前記生成物フラクションの第２のＮＡＰ−５カラムによる精製を使用前に行った。
免疫反応性フラクションの測定
ＳＫ−ＯＶ−３細胞（ＡＴＣＣ）を標準状態で培養した。固定されたＳＫ−ＯＶ−３細胞は、調製され、使用前にフローサイトメトリーにより分析されてその表面にＨＥＲ２が存在することを確認した（データは開示しない）。正規の培地は、ＭｃＣｏｙの５Ａ培地（ＧＩＢＣＯ）に１０％ＦＢＳ（ＰＡＡ）および１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（ＢｉｏＣｈｒｏｍ）を加えて調製した。細胞の培養は、Ｔ２５（２５ｃｍ2）およびＴ７５（７５ｃｍ2）細胞フラスコを用いて、３７℃および５％ＣＯ2でＣＯ2培養器で行った。
【０１３２】
それぞれの実験は２回行った。固定したＳＫ−ＯＶ−３細胞はＰＢＳに懸濁し、エッペンチューブに移した（１００００，０００細胞／チューブ）。非接合ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標），原液から１０μｌ）を２つの参照チューブに加え、３７℃で３０分間、阻害反応を行った。同量の227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（ｃａ  ５００ｃｐｍ）をそれぞれのチューブに加えてから、３７℃で２５時間培養した。前記試料はＰＢＳで希釈してから、遠心分離して上澄みの半分を新しいエッペンチューブに移した。すべてのチューブは、ウィザードガンマカウンターで５分間測定し、トリウム−２２７の量を227Ｔｈ−プロトコルを適用して測定した。
【０１３３】
結合の％は、以下のように計算した：１００*［（Ｐ＋1/2Ｓ）−（1/2Ｓ）］［（Ｐ＋1/2Ｓ）＋（1/2Ｓ）］、ここでＰおよびＳは、それぞれ前記細胞ペレットおよび前記上澄み中で測定された活性を示す。前記計算は、全体の結合（％）を求めるために、非阻害試料に関して行い、非特異結合（％）を求めるために、阻害試料に関し行った。そしてＩＲＦは以下のように計算した：ＩＲＦ（％）＝全体の結合（％）−非特異結合（％）
この品質管理からの前記データは、表４にまとめ、227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂが標識細胞に結合していることを表わしている。
【０１３４】
【表４】
0005878483.tif 000019
【０１３５】
ｉ．  収率（％）は、反応混合物のＮＡＰ−５精製の後計算した。
ｉｉ．  回収（％）は、生成物フラクションの新たなＮＡＰ−５精製の後計算した。
ｉｉｉ．  特異活性（Ｂｑ／μｇ）は、生成物フラクション中に見つけられた227Ｔｈ（Ｂｑ）の量を反応混合物中に用いられたＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（μｇ）の量に基づいて割ったものを用いて計算した。
ｉｖ．  ＩＲＦは標準の手順に従って見積もった。
［実施例９］
＜トリウム−２２７で標識化されたＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂのｉｎ  ｖｉｔｒｏ安定性および有効性の研究＞
時間をかけた結合の評価
227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂのＳＫ−ＯＶ−３細胞への結合の安定性は、ＳＫ−ＯＶ−３細胞ペレットと関連づけられた227Ｔｈ−活性の量を７日を超えて測定して評価した。前記結果は自由227Ｔｈとともに培養したデータと比較した。
【０１３６】
実施例８で述べたように培養したＳＫ−ＯＶ−３細胞は最初に７００ｋＢｑの227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂまたは７００ｋＢｑの自由227Ｔｈで扱い、１時間培養した後（ＨＰＧｅ−検出器  ＧＥＭ（５０））細胞ペレット上に、それぞれ７７ｋＢｑ（１１％）および７ｋＢｑ（１％）227Ｔｈ−活性を生じた。前記ＳＫ−ＯＶ−３細胞上の227Ｔｈ−活性は、毎日ウィザードガンマカウンター（227Ｔｈ−プロトコル）で測定した。前記測定した放射能は、崩壊に対する補正をした。前記結果は図１７に示すように１時間後にペレットに残されたたった２０％の活性が、次の７日間で消滅した、それに対して、自由227Ｔｈで扱った細胞は加えられた活性の小さなフラクションにのみ結合し、その多くが（ｃａ９５％）続く２４時間の間に消失した。こうして、自由227ＴｈのＳＫ−ＯＶ−３細胞への特異結合はなく、一方で227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂは効果的に保持された。
細胞毒性の評価
腫瘍細胞の成長の効果を２つの相補的な分析で研究した。最初の実験で、細胞中のメタボリック活性はＡＴＰ分子に結合した発光試薬を用いて測定した。このようにして、発光シグナルの減少は、メタボリック活性の消失を示す。第２の実験で、形成された多くのコロニーの数が数えられた。
【０１３７】
発光は、毎日９日間測定した、そしてその結果227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂへの被爆からの結果をｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂおよび自由227Ｔｈのそれぞれへ被爆したＳＫ−ＯＶ−３細胞の発光に比較した。ＳＫ−ＯＶ−３細胞の正規の培地での成長は、参照として用いた。
０日目
正規の培地中の３５ｍｌの５０００００ＳＫ−ＯＶ−３細胞／ｍｌを４ Ｔ７５細胞フラスコに移した。これらの細胞フラスコは以下の試料溶液を調製するために用いた：（１）正規の培地、（２）２０μｇ／ｍｌのｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ、（３）２０ｋＢｑ／ｍｌの227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（１０１６６Ｂｑ／μｇ）、（４）２０ｋＢｑ／ｍｌの自由227Ｔｈ。前記フラスコは、ＣＯ2培養器で１時間培養した。前記上澄みを捨て、前記細胞を０．２５％のトリプシン−ＥＤＴＡ溶液でトリプシン処理し、正規の媒体で洗い遠心分離した。細胞ペレットは、新鮮な正規の媒体に懸濁し、ウィザードガンマカウンター（227Ｔｈ−プロトコル）で測定した。それぞれの培養溶液は、新しい７つのＴ２５細胞フラスコに分配し、ＣＯ2培養器で培養した。
１日目および２日目
４つの試料溶液のそれぞれの１つのフラスコからの前記上澄みは、捨てた。前記細胞ペレットは、０日目と同様に調製して、放射能はウィザードガンマカウンター（227Ｔｈ−プロトコル）およびＨＰＧｅ−検出器  ＧＥＭ（５０）で測定した。全ての試料は、正規の媒体で４倍に希釈し、それぞれの懸濁出来の５×１００μｌを５ｗｅｌｌのＶｉｅｗ  Ｐｌａｔｅ−９６に移した。５つのｗｅｌｌは１００μｍの正規の媒体（細胞を含まない）を加え、背景発光の測定をした。最後に、１００μＬのＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  試薬をそれぞれのｗｅｌｌに加え、前記溶液は溶解を誘導するためにオービタルシェーカーで混合した。前記発光シグナルは、室温で１０分間安定させた、それから発光は、ＬＵＭ−シングルプログラムを用いて、エンビジョンマルチプルプレートリーダーで３回測定した。
３日目
細胞は、１日目および２日目で述べたように調製して、ウィザードガンマカウンターおよびエンビジョンマルチプルプレートリーダーで測定した。それから、細胞の成長で濃くなっているため、それぞれの細胞の懸濁液を希釈した；３／４の細胞の懸濁液は新しいＴ７５細胞フラスコに移し、正規の媒体を加え、ＣＯ2培養器で一晩培養した。
４〜９日目のそれぞれ
４つのＴ７５細胞フラスコを０．２５％のトリプシン−ＥＤＴＡ溶液でトリプシン処理し、正規の媒体で洗浄し、遠心分離した。細胞ペレットは４倍の正規の媒体で希釈し、１００μｌを取り出し、上述のように測定した。それから３／４の細胞の懸濁液は正規の媒体で希釈し、新しいＴ７５細胞フラスコに移し、ＣＯ2培養器で一晩培養した。
【０１３８】
図１８は、227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（１０１６６Ｂｑ／μｇ）、ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂおよび自由227Ｔｈで処理したＳＫ−ＯＶ−３細胞の発光測定を示す、それは正規の媒体（参照）中で育てられたＳＫ−ＯＶ−３細胞について得られた発光値に標準化されたものである。前記227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂで処理したＳＫ−ＯＶ−３細胞の発光シグナルは、１日目〜９日目にかけて徐々に減少し、一方他の処理をしたものは、この期間の間ほぼ一定の発光シグナルと成長を示した。227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂで処理したＳＫ−ＯＶ−３細胞のメタボリック活性は、その期間の間減少し、９日目にはほとんど全ての細胞が死滅した、この結果は、227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂの重要な維持された細胞毒性を示す。
【０１３９】
一つの細胞を滞在的に細胞毒性の状況にさらした後のコロニーの成長を評価するために、クローン形成を行ったＳＫ−ＯＶ−３細胞は、異なる濃度の227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ、ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂまたは自由227Ｔｈ中で１時間培養し、続いてコロニーの成長を誘導するために１２日間培養した。
【０１４０】
細胞の調製は、上記のようにして行った。そして試料ごとに５ｍｌの正規の媒体中の１２０００細胞を、Ｔ２５フラスコに移動した。227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂおよび227Ｔｈの５、１０および２０ｋＢｑ／ｍｌならびにｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂの５、１０および２０μｇ／ｍｌ（最終濃度）のそれぞれについて、それぞれの試薬の３種の量の効果を調べた。１つの参照フラスコを調製した、全ての１０のＴ２５細胞フラスコは、ＣＯ2培養器で一時間培養した。前記上澄みは捨て、前記細胞は正規の媒体で洗浄し、０．２５％のトリプシン−ＥＤＴＡ溶液でトリプシン処理し、正規の媒体で洗浄し、遠心分離した。細胞ペレットは正規の媒体に懸濁し、１０の細胞の懸濁液のそれぞれを、６つの新しいＴ２５細胞フラスコに分けた、３つの細胞フラスコは１０００細胞であり３つの細胞フラスコは３０００細胞である、えられた６０のＴ２５細胞フラスコは、ＣＯ2培養器でコロニーが目に見える大きさになるまで培養した（ｃａ  ５０細胞／コロニー）。１２日間培養した後、前記媒体は除去した、細胞はＰＢＳを用いて洗い、エタノールで還流し、ＰＢＳ中の０．２５％トリパンブルーで染め、水道水で洗い、最後に４５℃で一晩乾燥させた。コロニーは手作業で数え、それぞれの培養におけるコロニーの平均数は、グラフに表した。
【０１４１】
図１９および２０に示された結果は、227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂを用いた１時間の培養は、効果的にＳＫ−ＯＶ−３細胞を殺すことを示している。自由227Ｔｈを用いた培養は、いくらかの細胞を殺す効果があったが、たくさんの数の細胞を用いた最初の細胞毒性分析では明らかでなかった。ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂを用いた培養は、細胞の成長に否定的な効果はなかった。
［実施例１０］
＜トリウム−２２７で標識化されたＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂのｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍標的＞
１００μｌ（１５ｋＢｑ）の細菌濾過した227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂをＳＫ−ＯＶ−３の異種移植片を有する１０匹のＢａｌb／ｃヌードマウスの尾の側面の血管に注入した。５匹のマウスは２４時間後に犠牲となり、残りの５匹は４日後に犠牲となった。そして実験対象のマウスの組織を切除して重量を測った。全ての試料および１０％  ＩＤ／ｇを含む３つの標準溶液は５分間ウィザードガンマカウンター（227Ｔｈ−プロトコル）で測定した。結果はグラム組織（％  ＩＤ／ｇ）当たりの注入量の％で表わした。
【０１４２】
前記結果は図２１に示すように、227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂは、特異的に腫瘍に結合する。取り込み値は、適度であるが、２４時間と４日の間にいくらか上昇している（８．７％  ＩＤ／ｇ〜１１．３％  ＩＤ／ｇ）、一方で血液中の濃度は１％ＩＤ／ｇあたりに減っている。
【０１４３】
頭骸骨および大腿骨における取り込み量もまた、いくらか２４時間および４日の間に上昇した、しかしながら、これらの値はほとんどの場合低く（２．８−３．２％、２４時間）、系中を循環する自由227Ｔｈはほとんどない、そして227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ複合体の安定性の高い度合いを示している。さらにこの結論をサポートするものとして、頭骸骨および大腿骨において測定される活性フラクションは223Ｒａの娘核種を取り込むことにより生じるという高い可能性がある。この223Ｒａのいくらかは、ウィザードガンマカウンターの227Ｔｈ−測定器のための窓の中に検出されることもある。こうして頭骸骨および大腿骨の計算された％  ＩＤ／ｇ−値は、これらの組織に蓄積した227Ｔｈ−ＡＬＧ−ＤＤ−ＮＣＳ−ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂの量を課題評価することもある。
［実施例１１］
＜キレート部位の合成＞
３−ベンジルオキシ−１−メチル−４−（２−チオキソチアゾリジン−１−イル）カルボニル−２（１Ｈ）−ピリジノン（構造Ａ）
ステップ１）−１−メチル−３−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−ピリジノン
３−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−ピリジノン（３４．４４ｇ，０．３１ｍｏｌ）およびヨードメタン（７５ｇ、０．５３ｍｏｌ）を８０ｍｌの蓋をしたテフロン（登録商標）の入れ物に入れた。そして、Ｐａｒｒ  ｂｏｍｂ中で４８−６０時間１５０℃で加熱した。冷却した前記ｂｏｍｂを開け、過剰なヨードメタンを静かに注いだ。得られた薄い黒みがかった油を亜硫酸ナトリウム（６４ｇ，０．５ｍｏｌ）と混合し、３００ｍｌの水に溶解し、薄い茶色の溶液を形成した、前記溶液は、ｐＨ７−８に中和し、不溶の不純物を濾過して除去した。前記ろ液はそれからメチレンクロライド（４×１００ｍｌ）。合わせた抽出物は、それから乾燥させ、フラッシュシリカゲルプラグ（６ｃｍ×８ｃｍ）をし、４％エタノールのメチレンクロライド溶液で希釈した。前記溶媒は、上記標題の化合物（２４．３ｇ，６２．６％）を無色の結晶として得た。
【０１４４】
ステップ２）−４−カルボキシル−１−メチル−３−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−ピリジノン
１−メチル−３−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−ピリジノン（１）（６．２５ｇ，５０ｍｍｏｌ）を無水炭酸カリウム（３６ｇ，０．２６ｍｏｌ）と混合し、真空下で乾燥した、前記混合物は、それからＰａｒｒ  ｂｏｍｂ中で二酸化炭素ガス（８５０ｐｓｉ）下で１７５−１８５℃で３日間加熱した。前記冷却したｂｏｍｂを開け、結果物の薄い黄色の固体を氷で冷やした水に溶解し、６Ｎ  のＨＣｌで酸性にし、ベージュの結晶性の生成物を得た。
【０１４５】
ステップ３）−３−ベンジルオキシ−４−カルボキシ−１−メチル−２（１Ｈ）−ピリジノン
４−カルボキシル−１−メチル−３−ヒドロキシ−２（１Ｈ）−ピリジノン（６．８ｇ，０．０４ｍｏｌ）をベンジルクロライド（１２．１ｇ，０．０８８ｍｏｌ）および無水ジメチル−ホルムアミド（ＤＭＦ）（１２０ｍｌ）中の無水炭酸カリウム（１３．８ｇ，０．１ｍｏｌ）と混合した。前記混合物は、暗闇で、窒素の存在下、７５−８０℃で１６時間加熱した。前記混合物は、濾過し、溶媒をエバポレートして暗い色の油を得た。前記油は、シリカゲルプラグ（６ｃｍ×８ｃｍ）にかけ、４％メタノールのメチレンクロライド溶液で希釈し、３−ベンジルオキシ−４−ベンジルオキシカルボニル−１−メチル−２（１Ｈ）−ピリジノンを薄い黄色の、粘度の高い油として得た。これをメタノール（５０ｍｌ）および６ＭのＮａＯＨ溶液（１０ｍｌ）に採り、前記混合物を室温で４時間攪拌し、エバポレートして乾燥させた。前記残渣は水（１００ｍｌ）に溶解し、６Ｍ  ＨＣｌ溶液で酸性にしてｐＨ２とし、上記標題の化合物（９．３ｇ，８８．７％）を白色の結晶として得た。
【０１４６】
ステップ４）−３−ベンジルオキシ−１−メチル−４−（２−チオキソチアゾリジン−１−イル）カルボニル−２（１Ｈ）−ピリジノン
３−ベンジルオキシ−４−カルボキシ−１−メチル−２（１Ｈ）−ピリジノン（１．０５ｇ，４ｍｍｏｌ），２−メルカプトチアゾリン（０．５０ｇ，４．２ｍｍｏｌ）および触媒量の４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）のドライジクロロメタン（５０ｍｌ）溶液に、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（０．８６ｇ，４．２ｍｍｏｌ）を加えた。４時間攪拌後、ジシクロヘキシルウレア（ＤＣＵ）の固体を濾過により除去した。黄色のろ液をロータリーエバポレートして黄色の固体を得た。イソプロパノールメチレンクロライドからの再結晶により、標題の化合物（構造Ａ，１．１６ｇ，８０．４％）を明るい黄色の結晶板として得た。
【０１４７】
【化１５】
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【０１４８】
［実施例１２］
＜式ＶＩＩＩで表わされる３，２−ＨＯＰＯ前駆体の生成＞
環状塩（構造５）の生成は、下記式にしたがって行った。
【０１４９】
【化１６】
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【０１５０】
アクリルニトリルを還流させながら、フッ化セシウム（１０ｍｏｌ％）により、２，３−ジヒドロキシピリジン（２，３−ＤＨＰ）をエチルアクリレートとマイケル付加反応させ、対応するエステル２を良好な収率で得た。続く２のＯ−ベンジル化は標準の状態（Ｋ2ＣＯ3／アクリロニトリル／還流）で行い、続けてエステル部位の還元（ＢＨ3・ＴＨＦ、室温）を行い、クロマトグラフィーを行って、アルコール３を９０％の収率で得た。アルコール３をトリエチルアミンの存在下、ジクロロメタン中のメタンスルホン酸無水物で処理し、中間体であるメシラート４（〜１０−１５％）を伴う目的とする環状塩５（８５−９０％）を直接形成したことを1Ｈ  ＮＭＲ分析で確認した。環状塩５への完全な変換は、室温でのクロロホルム中のメシル化からの粗生成物の攪拌によって達成される。温エチルアセテートで粉砕した後、前記塩５は、薄く白い固体として９２％の収率で高い純度で得られた。
［実施例１３］
＜式ＶＩＩＩで表わされる化合物の生成＞
塩５（０．２ｇ）をアクリロニトリル（３ｍｌ）中トリエチルアミンの存在下１．２当量のシクレン（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン）に加え、窒素下６０℃で２日間加熱した。前記反応はその後ジクロロメタン（５０ｍｌ）で希釈し飽和ＮａＨＣＯ3（５０ｍｌ）で洗った。前記水層はもう一度ジクロロメタン（２５ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層は硫酸ナトリウムで乾燥させ、前記溶媒は真空下除去し、過剰なＮ−メチルベンジルアミンは真空蒸留で除去し、ＶＩＩIを得た。
［実施例１４］
＜式ＩＸで表わされる化合物の生成＞
３−ベンジルオキシ−１−メチル−４−（２−チオキソチアゾリジン−１−イル）カルボニル−２（１Ｈ）−ピリジノンのメチレンクロライド溶液に対応する官能化されたＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−アミノエチル）エチレンジアミン（構造Ｂ、Ｚは保護基を表わす）を加えた。４時間攪拌後、前記混合物は濾過され、乾燥された。
【０１５１】
【化１７】
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【０１５２】
前記適切なベンジル−保護前駆体生成物をメチレンクロライド中のプロパノールを用いて、フラッシュシリカカラムで反応混合物から単離した。前記構造ＩＸの最終生成物は、酸による水酸基の脱保護により得られる。
［実施例１５］
構造ＶＩＩＩは、当業者にとって標準の方法で標的の分子と接合させる。例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルは、タンパク質やペプチドへ標準の状態で接合させることで生成され、得られた接合されたプロテインはゲル濾過により単離される。
［実施例１６］
トリウム−２２７による接合されたタンパク質の標識化
適切な緩衝液、例えば０．５ＭのＮａＯＡｃ−緩衝液（ｐＨ５．５）中に接合されたタンパク質（オクタデンテートリガンドを結合部位によって付けている）の溶液１０ｍｇ／ｍｌを作る、そして精製されたトリウム−２２７で２５℃で１時間標識化し、続いてゲル濾過カラムで精製した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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