(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホップ酸混合物の製造方法であって、
テトラヒドロ‐α‐酸のラセミ化合物を（１Ｓ，２Ｒ）‐（‐）‐シス‐１‐アミノ‐２‐インダノ‐ルと接触させて、沈殿物として又は溶液中のホップ酸錯体を形成することを含み、そして、
前記ホップ酸錯体が、（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸の鏡像体過剰率を有する、製造方法。
【請求項２】
前記製造方法が、前記（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸を、（＋）‐トランス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、それらの混合物からなる群から選択されるホップ酸に異性化することをさらに含む、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
前記（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸を、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、それらの混合物からなる群から選択されるホップ酸に異性化すると共に還元することをさらに含む、請求項１に記載の製造方法。
【請求項４】
前記（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸を、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、それらの混合物からなる群から選択されるホップ酸に還元することをさらに含む、請求項２に記載の製造方法。
【請求項５】
前記ホップ酸錯体を処理して、５０％よりも大きい（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸の鏡像体過剰率を有する固体を製造することを更に含む、請求項１に記載の製造方法。
【請求項６】
前記ホップ酸錯体を処理して、８０％よりも大きい（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸の鏡像体過剰率を有する固体を製造することを更に含む、請求項１に記載の製造方法。
【請求項７】
前記テトラヒドロ‐α‐酸のラセミ化合物が、β‐酸を水素化してデソキシ‐α‐酸を製造し、かつ、前記水素化したデソキシ‐α‐酸を酸化して前記テトラヒドロ‐α‐酸の前記ラセミ化合物を製造することによって、製造される、請求項１に記載の製造方法。
【請求項８】
前記β‐酸が、コルプロンであり、そして、前記デソキシ‐α‐酸が、テトラヒドロデソキシコフムロンである、請求項７に記載の製造方法。
【請求項９】
前記テトラヒドロ‐α‐酸が、テトラヒドロフムロン、テトラヒドロコフムロン、及び、テトラヒドロアドフムロンから選択される、請求項１に記載の製造方法。
【請求項１０】
ホップ酸混合物の製造方法であって、
テトラヒドロイソ‐α‐酸のラセミ化合物を（１Ｓ，２Ｒ）‐（‐）‐シス‐１‐アミノ‐２‐インダノ‐ルと接触させて、沈殿物としてまたは溶液中のホップ酸錯体を形成することを含み、そして、
前記ホップ酸錯体が、（＋）‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸の鏡像体過剰率を有する、製造方法。
【請求項１１】
前記（＋）‐テトラヒドロイソ‐α‐酸を、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、これらの混合物からなる群から選択されるホップ酸に還元することを更に含む、請求項１０に記載の製造方法。
【請求項１２】
前記ホップ酸錯体を処理して、（＋）‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸の鏡像体過剰率が８０％を越える固体を製造することを更に含む、請求項１０に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、米国出願第61/347,201（出願日：２０１０年５月２１日）に基づく優先権の利益を享受する。
【０００２】
本発明は、ビールのような麦芽飲料（malt beverage）及び健康サプリメント用の成分に対して、向上された風味、発泡、及び、抗菌作用を提供する新規のホップ酸（hop acid）化合物に関する。特に、本発明は、ホップ酸混合物の製造方法であって、テトラヒドロ‐α‐酸のラセミ化合物をキラルアミンと接触させて、沈殿物として又は溶液中のホップ酸錯体を形成することを含み、そして、そのホップ酸錯体が、（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸の鏡像体過剰率を有する、製造方法に関する。その製造方法では、その（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸を、（＋）‐トランス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、それらの混合物からなる群から選択されるホップ酸に異性化することをさらに含む。本発明は、麦芽飲料の風味付与用の添加剤を提供する。その添加剤は、（＋）‐トランス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、これらの混合物からなる群から選択される苦味剤を含む。
【背景技術】
【０００３】
物質のキラル認識（chiral recognition）、即ち、その鏡像から分子構造を区別する能力は、生物学的活性の最も重要かつ広範な原則の一つである。臭気知覚（order perception）おける最初の分子イベント（first molecular event）は、匂い物質（odorant）と受容体との相互作用である。嗅覚受容体がタンパク質、すなわちキラル分子として同定されたので、この相互作用はまた、臭気（匂い）受容体（order receptor）が、臭気強度（odor strength）および/又は品質の違いをもたらす、キラル臭剤の２つのエナンチオマー形態と異なって反応すること、つまり、エナンチオ選択性であるべきである。矛盾した鏡像異性体の効果は味知覚の多くの例で、十分に確立されている。例えば、リモネンはオレンジやレモンの皮に存在して、それらの異なる臭気特徴を担う。その原因は、オレンジの場合、右旋性の（+）分子を含有する一方で、レモンは、左旋性の（‐）分子を含有することにある。(S）‐（＋）‐カルボン（carvone）は、キャラウェ‐様のにおいを有する分子であるが、その鏡像分子(R）‐（‐）‐カルボンは、スピ‐アミンの臭気を有する。リナロ‐ル（linalool）は、光学異性体がホッピ‐味の特性に大きな影響を持っているビールで主キ‐ホップの香味成分の一つである。（‐）‐リナロ‐ル（linalool）は、ウッディ（woody）、ラベンダ‐のような香りで知覚されるが、その鏡像分子である（＋）‐リナロ‐ルは、甘くて、柑橘類のような香りを有している。
【０００４】
テトラヒドロイソ‐α‐酸（テトラヒドロイソコフムロン（tetrahydroisocohumulone）、テトラヒドロフムロン（tetarahydrohumulone）、及び、テトラヒドロアドフムロン（tetrahydroadhumulone)の主な３つの類似体を含む） は、そのイソ‐α‐酸、p‐イソ‐α‐酸、及び、ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸の類似体よりも、醸造（ｂｒｅｗｉｎｇ）においてより多くの利点を示している。テトラヒドロイソ‐α‐酸は、最適の苦味強度に影響を及ぼし、より良い光安定性、及び風味（flavor）安定性を提供し、発泡性を向上し、そして、ビールにおけるその他のホップの苦味化合物よりも強い抗菌活性を示す。テトラヒドロイソ‐α‐酸は、α‐酸（コフムロン、ｎ‐フムロン、及び、アドフムロンの３つの主な類似体を含む。）又はβ‐酸（コルプロン、ｎ‐フムロン、及び、アドルプロンの３つの主な類似体を含む）から製造される。文献［See, P. Ting & H. Goldstein, J. Am. Soc. Brew. Chem. 54(2):103‐109, 1996)］参照。α‐酸（フムロン）から、 順次的な水素化（sequential hydrogenation）及び異性化反応又は逆異性化反応（reversed isomerazation）、及び、α‐酸の水素か反応が、図１に示すようにかかわる。ここで、フムロンについて、R = CH2CH(CH3)2であり、コフムロンについてR = CH(CH3)2であり、そして、アドフムロンについてR = CH(CH3)CH2CH3である。β酸（ルプロン）からは、図１に示すように、β酸の順次的な水素化分解／水素化反応、水素化デソキシ‐α‐酸の酸化反応、及び、その後のテトラヒドロ‐α‐酸異性化反応を含む複数の反応がかかわる。ここで、ｎ‐ルプロンについて、R = CH2CH(CH3) 2であり、コルプロンについてR = CH(CH3)2であり、そして、アドルプロンについて、R = CH(CH3)CH2CH3である。
【０００５】
両方の方法は、テトラヒドロイソ‐α‐酸の同じ分子であるが、その立体理性体から異なる分子を生じさせる。α‐酸から製造されたテトラヒドロイソ‐α‐酸体異性体は、α‐酸の天然構造（非対称分子）に基づいて、光学的に活性の化合物、鏡像異性体である。文献［D. De Keukeleire and M. Verzele, J. Inst. Brewing, 76:265, 1970］参照。しかし、β‐酸（非対称分子がない）から製造されたテトラヒドロイソ‐α‐酸は、光学活性のないラセミ混合物（一対の鏡像分子又は同等の反対エナンチオマーを有する）である。文献［Patrick L. Ting and Henry Goldstein, J. Am. Soc. Brew. Chem. 54(2):103‐109, 1996)］参照。
【０００６】
α‐酸又はβ‐酸のいずれかから製造されたテトラヒドロイソ‐α‐酸及びヘキサヒドロイソ‐α‐酸の立体化学の分子的認知（molecular perception）は非常に重要であるが、それは、ビールならびに栄養補給食品及び機能性食品におけるそれらの潜在的な風味、発泡性、抗菌効果に基づく。参考までに、米国特許題7,270,835号参照。しかし、立体化学及び生理学的特性（キラル認知）については未だ調べる必要があり、β‐酸から製造されたテトラヒドロイソ‐α‐酸については未だ報告されていない。
【０００７】
したがって、ビールのような麦芽飲料（malt beverage）において風味、発泡、及び、抗菌性を改善したテトラヒドロイソ‐α‐酸の対するニ‐ズは依然として存在していた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、ビールのような麦芽飲料及び健康サプリメント用の成分について、向上された風味、泡立ち、及び、抗菌作用をもたらす新規のホップ酸（hop acid）化合物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
一つの実施形態において、本発明は、ホップ酸混合物の製造方法を提供する。その製造方法は、テトラヒドロ‐α‐酸のラセミ化合物をキラルアミンと接触させて、沈殿物として又は溶液中のホップ酸錯体の沈殿物を形成することを含む。そのホップ酸錯体は、（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸の鏡像体過剰率（または、過剰量の鏡像体）（enantiomeric excess）を有する。前記製造方法は、前記（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸を、（＋）‐トランス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、それらの混合物からなる群から選択されるホップ酸に異性化することをさらに含んでも良い。前記製造方法は、前記（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸を、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、それらの混合物からなる群から選択されるホップ酸に異性化すると共に還元することをさらに含んでも良い。前記（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸を、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、それらの混合物からなる群から選択されるホップ酸に還元することをさらに含んでも良い。また、前記ホップ酸錯体（沈殿物）を処理して、５０％よりも大きい（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸の鏡像体過剰率を有する固体を製造することを更に含んでも良い。前記ホップ酸錯体（沈殿物）を処理して、８０％よりも大きい（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸の鏡像体過剰率を有する固体を製造することを更に含んでも良い。前記アミンが、（１Ｓ，２Ｒ）‐（‐）‐シス‐１‐アミノ‐２‐インダノ‐ルのようなキラルアミンであっても良い。前記テトラヒドロ‐α‐酸のラセミ化合物が、β‐酸を水素化してデソキシ‐α‐酸を製造し、かつ、前記水素化したデソキシ‐α‐酸を酸化及び異性化して前記テトラヒドロ‐α‐酸の前記ラセミ化合物を製造することによって、製造されても良い。前記β‐酸が、コルプロンであり、そして、前記デソキシ‐α‐酸が、テトラヒドロデソキシコフムロンであっても良い。前記テトラヒドロ‐α‐酸が、テトラヒドロフムロン、テトラヒドロコフムロン、及び、テトラヒドロアドフムロンから選択されても良い。
【００１０】
別の実施形態において、本発明は、ホップ酸混合物の製造方法であって、テトラヒドロ‐α‐酸のラセミ化合物をキラルカラムクロマトグラフィで分解して、（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸の鏡像体過剰率を分離することを含む製造方法を提供する。前記（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸を、（＋）‐トランス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、これらの混合物からなる群から選択されるホップ酸に異性化することを更に含んでも良い。前記（＋）‐トランス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸が、（＋）‐トランス‐テトラヒドロ‐イソ‐フムロン、（＋）‐トランス‐テトラヒドロ‐イソ‐コフムロン、及び、（＋）‐トランス‐テトラヒドロ‐イソ‐アドフムロンから選択され、そして、前記（‐）‐シス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸が、（‐）‐シス‐テトラヒドロ‐イソ‐フムロン、（‐）‐シス‐テトラヒドロ‐イソ‐コフムロン、及び、（‐）‐シス‐テトラヒドロ‐イソ‐アドフムロンから選択されても良い。前記（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸を、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸, （‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、これらの混合物からなる群から選択されるホップ酸に異性化することをさらに含んでも良い。前記（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸が、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐フムロン、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐コフムロン、及び、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐アドフムロンから選択され、そして、前記（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸が、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐フムロン、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐コフムロン、及び、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐アドフムロンから選択されても良い。前記（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸を、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、これらの混合物からなる群から選択されるホップ酸に還元することを更に含んでも良い。前記（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸が、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐フムロン、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐コフムロン、及び、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐アドフムロンから選択され、そして、前記（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸が、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐フムロン、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐コフムロン、及び、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐アドフムロンから選択されても良い。
【００１１】
別の実施形態において、本発明は、ホップ酸混合物の製造方法であって、テトラヒドロイソ‐α‐酸のラセミ化合物をキラルアミンと接触させて、沈殿物としてまたは溶液中のホップ酸錯体を形成することを含み、そして、前記ホップ酸錯体が、（＋）‐テトラヒドロイソ‐α‐酸の鏡像体過剰率を有する製造方法を提供する。前記（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸を、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、これらの混合物からなる群から選択されるホップ酸に還元することを更に含んでも良い。前記ホップ酸錯体を処理して、（＋）‐テトラヒドロイソ‐α‐酸の鏡像体過剰率が８０％を越える固体を製造することを更に含んでも良い。
【００１２】
別の実施形態において、本発明は、ホップ酸混合物の製造方法であって、テトラヒドロ‐α‐酸のラセミ化合物をキラルカラムクロマトグラフィで分解して、（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸の鏡像体過剰率を分離することを含む製造方法を提供する。前記（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸を、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、これらの混合物からなる群から選択されるホップ酸に還元することを更に含んでも良い。
【００１３】
別の実施形態において、本発明は、麦芽飲料の風味付与用添加剤（additive for flavoring a malt beverage）を提供する。その添加剤は、（＋）‐トランス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、これらの混合物からなる群から選択される苦味剤（bittering agent）を含む。前記苦味剤が、前記麦芽飲料において１〜１００ｐｐｍのレベルで存在しても良い。
【００１４】
別の実施形態において、本発明は、栄養及び機能性食品用の新規成分を提供する。この新規成分は、（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸、（＋）‐トランス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、これらの混合物からなる群から選択される苦味剤を含む。
【００１５】
別の実施形態において、本発明は、ホップ酸（hop acid）混合物の製造方法を提供する。その方法は、テトラヒドロイソ‐α‐酸のラセミ化合物をキラルアミンと接触させて、ホップ酸錯体が（＋）−テトラヒドロイソ‐α‐酸の鏡像体過剰率を有するように、沈殿物として、又は、溶液中のホップ酸錯体（hop acid complex）を形成することを含む。分解された（＋）−テトラヒドロイソ‐α‐酸の鏡像体過剰率は５０％より大きく、好ましくは、６０％より大きく、更に好ましくは、７０％より大きく、より好ましくは、８０％より大きく、最も好ましくは、９０％より大きい。分解された（resolved）テトラヒドロイソ‐α‐酸は、鏡像異性的に（enantiomerically）純粋である。分解された（＋）−テトラヒドロ‐α‐酸は、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、これらの混合物からなる群から選択されるホップ酸に還元され得る。
【００１６】
別の実施形態において、本発明は、ホップ酸混合物の製造方法を提供する。その方法は、テトラヒドロイソ‐α‐酸のラセミ化合物をキラルカラムクロマトグラフィで分解させて、（＋）−テトラヒドロイソ‐α‐酸の鏡像体過剰率を分離することを含む。分解された（＋）−テトラヒドロイソ‐α‐酸の鏡像体過剰率は５０％より大きく、好ましくは、６０％より大きく、更に好ましくは、７０％より大きく、より好ましくは、８０％より大きく、最も好ましくは、９０％より大きい。分解された（resolved）テトラヒドロイソ‐α‐酸は、鏡像異性的に（enantiomerically）純粋である。分解された（＋）−テトラヒドロ‐α‐酸は、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、これらの混合物からなる群から選択されるホップ酸に還元され得る。
【００１７】
別の実施形態において、本発明は、麦芽飲料（malt beverage）に風味を付与する添加剤を提供する。その添加剤は、（＋）‐トランス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、これらの混合物からなる群から選択される苦味剤（bittering agent）を含む。別の実施形態において、本発明は、麦芽飲料中その苦味剤が１ｐｐｍ〜１００ｐｐｍ存在する添加剤を含む麦芽飲料を提供する。
【００１８】
別の実施形態において、本発明は、健康サプリメント用有効成分を提供する。その有効成分は、（＋）‐テトラヒドロ‐α‐酸、（＋）‐トランス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸、及び、これらの混合物からなる群から選択されるホップ酸を含む。
【発明の効果】
【００１９】
本発明に記載した新規のホップ酸化合物を使用することによって、ビールのような麦芽飲料などにおける向上された風味、泡立ち、及び、抗菌作用を期待できる。
【００２０】
別の実施形態において、本発明は、本発明のこれら及びその他の特徴、利点は、以下の発明の詳細な説明、図面、特許請求の範囲に基づいてより良く理解できるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、α‐酸又はβ‐酸のいずれからテトラヒドロイソ‐α‐酸を製造するスキ‐ムを示す。
【図２】図２は、280 nm 及び1 .2 ml/分において75% CH3CN + 20％CH3OH/H20中１％酢酸２５％を備えた250x4.6mmβ‐サイクロボンドカラムによる（±）‐テトラヒドロコフムロンの分析的HPLC分解を示す。
【図３】図３は、（±）‐THCOの動力学的分解（dynamic resolution）のダイヤグラムである。
【図４】図４は、(±)、(+)、及び、（‐）‐THCOの円二色性（circular dichroism）のプロットを示す。
【図５Ａ】図５Ａは、（+）‐THCOのキラルHPLC分離を示す。
【図５Ｂ】図５Ｂは、（‐）‐THCOのキラルHPLC分離を示す。
【図５Ｃ】図５Ｃは、（+）対（‐）‐トランス‐THICOの２つのCDスペクトルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
一つの実施形態にかかる方法において、ラセミテトラヒドロ‐α‐酸混合物の動力学的分解（dynamic resolution）を行った。その分解のための適切な溶媒は、溶媒中の所定のジアステレオマー固体沈殿物の少なくとも一部とその対（pair）の他のメンバが溶液中に溶解されるように、選択され得る。非制限的な溶媒の例として、置換または未置換の脂肪族または脂環式炭化水素を含む。好ましい溶媒として、ヘキサン、サイクロヘキサン、及び、トルエンがある。動力学的分解の溶媒及び温度は、その分解にかけられる特定のホップ酸によって異なり得る。
【００２３】
所定のジアステレオマー固体の沈殿は、キラルアミンによって行うことができる。好ましいアミンは、一対のジアステレオマー固体の形成を可能にするものである（その一対のジアステレオマーの一方のメンバは、そのプロセスの溶媒系に少なくとも部分的に不溶性である）。好ましいアミンは、一対のジアステレオマーの形成を可能にするものである（その一対の一方のメンバは、反応条件下で優先的に沈殿する）。この沈殿は、結晶性または非結晶性であり得る。キラルアミンは、例えば、(1 S,2R）‐（＋）‐ シス‐1 −アミノ‐2‐インダノ‐ル（indanol）である。その他のキラルアミンも、ホップ酸の分解に有用であると考えられる。
【００２４】
反応から得たより溶解性の少ない（less soluble）ジアステレオマー塩は、例えば、ろ過、遠心分離、または、傾斜法によって単離することができる。例えば、反応混合物を室温にて冷却し、得られる沈殿物をろ過によって回収することができる。生成物を含有するろ過ケ‐キ（filter cake）は、脂肪族炭化水素（例えば、ヘキサン）のような洗浄用溶媒で洗浄され得る。いったん単離されると、沈殿されたジアステレオマー塩は、適切な強酸との反応によって、その錯体キラルアミンから解放され得る。非制限的な例として、硫酸、リン酸、及び、塩酸がある。ろ液中の溶液に存在するジアステレオマー化合物は、酸によって単離することができる。
【００２５】
本発明に基づくテトラヒドロ‐α‐酸またはテトラヒドロイソ‐α‐酸のラセミ化合物の動力学的分解によって、分解されたテトラヒドロ‐α‐酸またはテトラヒドロイソ‐α‐酸のいずれか一つの鏡像体過剰率５０％超、好ましくは、６０％超、より好ましくは、７０％超、さらに好ましくは８０％超、最も好ましくは、９０％超を達成する。分解されたテトラヒドロ‐α‐酸または（＋）‐テトラヒドロイソ‐α‐酸は、鏡像異性的に純粋であり得る。一つの形態において、分解されたテトラヒドロ‐α‐酸は、（＋）‐テトラヒドロコフムロン（tetrahydrocohumulone）である。
【００２６】
分解されたテトラヒドロ‐α‐酸は、選択的にカルシウムまたはマグネシウム塩のような触媒の存在下で、エタノ‐ル‐水混合物のような適切な溶媒において沸騰させることによって、テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸に異性化され得る。その他の異性化方法も採用することもできる。テトラヒドロイソ‐α‐酸化合物は、ビールのような麦芽飲料に添加されたときに、向上された風味、発泡（泡立ち）、及び抗菌性を提供することができる。一つの実施形態において、テトラヒドロ‐イソ‐α‐酸は、（＋）‐トランス‐テトラヒドロ‐イソ‐コフムロンまたは（‐）‐シス‐テトラヒドロ‐イソ‐コフムロンである。その分解されたテトラヒドロ‐α‐酸は、（＋）‐トランス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸及び（‐）‐シス‐ヘキサヒドロ‐イソ‐α‐酸に還元され得る。
【００２７】
様々な光学異性体は、異なる匂いの質（odor quality）及び／又は異なる匂い強度（odor intensity）を有するものと記載されていた。こうした考慮は、以下の実験（これらの実験の目的は、（+）‐テトラヒドロコフムロンの各鏡像異性体のグラム量を分解すると共に、苦味、発泡性（泡立ち）、及び、抗菌活性に対してそれらの異性化鏡像異性体を評価することである）を促した。以下の実施例は、説明の目的で記載したもので、それらに制限されるものではない。
【００２８】
［実施例］
（±）‐テトラヒドロコフムロン（ＴＨＣＯ）ならびに(+/‐)及び（＋）‐シス／ト  ランス‐テトラヒドロイソコフムロン（ＴＨＩＣＯ）
５μｍの250 x 4.6 mmのサイクロボンド（Cyclobond） I 2000 カラム(Advanced Separation Technologies Inc.社製)を使用した。（±）‐THCOを分解するために、25% A (CH3CN)及び75% B (1 % 酢酸+20%メタノ‐ル/H20)のアイソクラチック（isocratic）混合物を、流速（流量）1 .2 mL/分及び280 nmの検出での移動相として使用した。図２において、二つの鏡像異性体、 (‐)及び（＋）‐THCOをそれぞれ溶出した。（‐）‐THCOを水素化‐α‐酸標準（standard）によって同定した。（±）‐シス及び（±）‐トランス‐ＴＨＩＣＯ、35% A (CH3CN) 及び65% B (0.01 M クエン酸ナトリウム+20%メタノール/H20)のアイソクラチック混合物を流速（流量）1 .2 mL/分及び２５４ｎｍ検出において移動相として使用した。溶出は、図５Ａ〜５Ｃに示した（＋）‐シス‐THICO及び（‐）‐トランス‐THICO標準の保持時間（retention time）によって同定された、（‐）‐トランス、（＋）‐トランス、（‐）‐シス、及び、（＋）‐シス‐THICOの順であった。
【００２９】
テトラヒドロデオキシコフムロン（tetorahydrodesoxycohumulone）の製造
２５０ｍＬ中エタノ‐ル中５０ｇのへキサン‐結晶化コルプロン（colupulone）(0.125 モル) の溶液に、10 mLの濃硫酸及び５ｇの５％Pd/C触媒を加えた。オ‐トクレ‐ブ（autoclave）において１０ｐｓｉｇの水素ガス下でその混合物を攪拌して水素化した。３５〜５０℃で３０分後その水素化（hydrogenation）反応を終了させた。容器を窒素でパ‐ジし、その混合物をろ過して、次のステップにおいて直接に使えるテトラヒドロデソキシコフムロンの透明な黄色溶液を得た。
【００３０】
テトラヒドロデオキシコフムロンの過酢酸（peracetic acid）を使用した（±）‐テトラヒドロコフムロン（ＴＨＣＯ）への酸化
温度計、コンデンサ、及び、追加のじょうご付きの３つ口丸底フラスコで上記溶液に23.75 gの40%過酢酸(0.125 モル) をゆっくりと添加した。その添加後、反応を５０〜６０℃に１時間加熱して、放置して室温に冷却した。１００ｍｌの水道水を加えて、１時間攪拌した。真空下でエタノ‐ルを回収して、２００ｍｌのへキサンを加えて、水溶液にＴＨＣＯを溶解させた。相分離後、へキサン溶液を水道水で２回洗浄して、３５ｇのＴＨＣＯを得た。
【００３１】
（±）‐テトラヒドロコフムロン（ＴＨＣＯ）
1 1 gの（±）‐テトラヒドロコフムロン（ＴＨＣＯ）(0.031モル)、20 mLトルエン、及び、300 mLのサイクロヘキサンの溶液に、５０ｍｌのサイクロヘキサン中5.5 gの(1 S, 
2R）‐（‐）‐シス‐1 −アミノ‐2‐インダノール(Al) (0.037 モル) を加えた。その溶液を１５分間沸騰させ、放置して室温に冷却した。黄色固体を結晶化して、その溶液からろ過した。その黄色固体を１００ｍＬのへキサン、及び、１００ｍＬの２Ｎ  ＨＣｌと混合した。へキサン相を水で３回洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、真空下で溶液を除去して、4.65 gの（＋）‐THCO を得て、キラルＨＰＬＣ（β‐サイクロボンドカラム）によって９０％（ｅ．ｅ．）の鏡像体過剰率であることを確認した。１００ｍＬの２Ｎ  ＨＣｌでろ液を酸性化し、水で３回洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥させてから、その溶媒を真空下で回収（除去）して、８６％（e.e.）の（‐）‐THCO５．３ｇを得て、β‐サイクロボンドＨＰＬＣによって確認した。
【００３２】
(+)、(‐)、及び、（±）‐テトラヒドロコフムロン（THCO）のシス／トランス‐テトラヒドロコフムロンへの異性化
2.5 gのTHCO (7.1 mmoles)及び50 mLのエタノーる、0.3 gのNaOH及び43mgの硫酸マグネシウムと共に攪拌し、加熱した。異性化反応を２時間還流させ（refluxed）、放置して室温に冷却した。得られた溶液を、２Ｎ  ＨＣｌによって酸性化し、真空によってエタノ‐ルを回収した。得られたオイルを、５０mLのへキサンで抽出し、２相を分離した。へキサン相を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空によって溶媒を回収して、シス／トランス‐テトラヒドロイソコフムロン（ＴＨＩＣＯ）のラセミ化合物及び鏡像異性体を得た。
【００３３】
結論
(1 S, 2R）‐（‐）‐シス‐1 −アミノ‐2‐インダノールは、ラセミホップ酸の明確なキラル試薬である。これは、（±）‐テトラヒドロコフムロンと反応して、（‐）‐THCO 及び(1 S,2R）‐（‐）‐シス‐1 −アミノ‐2‐インダノールの溶液から（＋）‐テトラヒドロコフムロン(THCO)/(1 S, 2R）‐（‐）‐シス‐1 −アミノ‐2‐インダノールの結晶形を選択的に生成する。 それは、任意の使用のために数グラムの（±）‐テトラヒドロ‐α‐酸を容易にプロセスすることができる動力学的プロセスである。（＋）‐THCOは、（‐）‐シス/（＋）‐トランス‐テトラヒドロイソコフムロン（ＴＨＩＣＯ）の新規の苦味前駆体及びその誘導体である。一方で、そのカウンタ‐パ‐ト（counterpart）、（‐）‐THCOは、水素化した（‐）‐コフムロン（天然α‐酸)と同じである。３つのTHICO 分子は、我々の受容体によって鏡像選択的に（enantioselectively）区別されて、異なる匂い強度(odor intensities)及び匂い質（odor qualities）をもたらす。 その（＋）‐THCOからのＴＨＩＣＯＩＩは、最も苦味及び最も長いリンゲリング（lingering）を有し、そして、（±）‐THICO IIIは、（‐）‐THICOからのＴＨＩＣＯよりもよりマイルドでかつスム‐ズな苦味を有する。その発泡状況は、湯沸し（kettle boiling）の際に、ＬＴＰ（発泡たんぱく質）の損傷した構造（conformation）を有する各キラル異性体の鏡像選択的な効果によって更に複雑と成る。３つのTHICO I、II、及び、III分子は、ラクトバチラス・ブレビス（Lactobacillus brevis）及びペディオコッカス・ダムノサス（Pediococcus damnosus）に対する阻害細菌域（bacterial zone of inhibition; ＢＺＩ）及び最小阻害濃度（ＭＩＣ）テストを使用したときに、同じ抗菌的有効性を示す。これは、ＴＨＩＣＯ  Ｉ，  ＩＩ，  ＩＩＩと微生物間の鏡像選択的な抗菌的相互作用が起こらないことを明確に示す。
【００３４】
結果及びディスカッション
α‐酸又はβ‐酸から製造したテトラヒドロイソ‐α‐酸の立体化学の分子的認識（molecular perception）は、非常に重要だが、それは、ビールにおけるその潜在的な風味、発泡、抗菌的作用に基づく。文献［Verzele and De Keukeleire (D. De Keukeleire and M. Verzele, J. Inst. Brewing, 76:265, 1970; "Chemistry and analys‐イソf Hop and Beer Bitter Acids", M. Verzele and D. De Keukeleire, Elsevier, 1991 )］によって、Ｃ‐６に非対称中心を有するα‐酸の（‐）光学的回転（optical rotation）及びＲ‐構造（configuration）が確立され、その異性化誘導体、（＋）‐シス‐イソ‐α‐酸及び（‐）‐トランス‐イソ‐α‐酸の光学的特性が決定された。α‐酸又は異性化‐α‐酸のいずれかの水素化は、キラリティ‐（chirality）を保持し、言い換えれば、いかなる光学特性も変わらない。一方で、β‐酸から製造されたテトラヒドロイソ‐α‐酸は、（±）‐テトラヒドロ‐α‐酸のラセミ混合物の異性化からの２対の（＋／‐）‐シス／トランス‐及び（‐／＋）‐シス／トランス‐異性体で構成されたラセミ混合物である。β‐酸は、非対称又はアキラル化合物であるために、β‐酸の水素化分解／水素化は、平面的な分子、Ｃ２‐対称性（symmetry）を有するテトラヒドロデソキシ‐α‐酸を生じる。酸化ステップにおいて、Ｃ‐６にキラル中心が導入されて、図１に示すように、一対の（±）‐テトラヒドロ‐α‐酸が生成される。
【００３５】
液体クロマトグラフィによる分解
Ting及びGoldsteinは、（＋）‐シス‐ and （‐）‐トランス‐テトラヒドロイソ‐α‐酸としての水素化‐イソ‐α‐酸の光学的回転を確認した。文献［Patrick L. Ting and Henry Goldstein, J. Am. Soc. Brew. Chem. 54(2):103‐109, 1996)］参照。他方で、β‐酸製造からは、（±）‐シス‐ 及び（±）‐トランス‐テトラヒドロイソ‐α‐酸の光学回転値０が得られる。Ting及びGoldsteinは、半調剤（semi‐preparative）Ｃ‐１８カラムと分析的サイクロボンド（Cyclobond）ＨＰＬＣカラム（β‐視黒デキストリンは、５μシリカゲル、キラル相カラム上に結合されている）との組み合わせを使用して、（±）‐テトラヒドロ‐α‐酸を成功裏に分解して指定した。そのカラムを使用して、全（＋）‐テトラヒドロイソ‐α‐酸の大部分の（＋）及び（‐）‐鏡像異性体及びジアステレオマーを分解した。
【００３６】
ビールにおけるテトラヒドロイソ‐α‐酸の各鏡像異性体の特性を評価するために、物質１グラム（量）が必要である。ホップの苦味化合物（３つの主な類似体、及び２つのジアステレオ異性体及び２つの鏡像異性体を有する少なくとも１２化合物を含む）の錯体組成物（complex composition）のために、分解プロセスを簡易化する戦略は、コルプロン、β‐酸の一成分から出発して、（±）‐テトラヒドロコフムロンを生成することである。（±）‐テトラヒドロコフムロン(THCO)、苦味（剤）前駆体（bittering precursor）の分解は、その異性化（±）‐シス‐及び（±）‐トランス‐テトラヒドロイソコフムロン（ＴＨＩＣＯ）より複雑ではない。
【００３７】
分析的キラルＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィ）カラム（β‐サイクロボンド）を使用して、図２に示すように、分解された化合物を分析すると共に同定した。図２によれば、（±）‐THCOは、真性（‐）‐テトラヒドロ‐α‐酸によって同定され、かつ、（＋）‐THCOの前に溶出される（‐）‐ＴＨＣＯに良く分解される。キラル液体クロマトグラフィ（ＬＣ）が 鏡像異性体を分解する一般的な方法であるために、分析条件にシミュレ‐トされた２つのβ‐サイクロボンド10 x 2"及び20 x 2" カラムを使用して、ミリグラムからグラム量の（±）‐ＴＨＣＯのラセミ混合物を分離した。（±）‐THCOの分解は、良くなく、非効率的であった。
【００３８】
動力学的結晶化による分解
その代わりに、（‐）‐アルカロイド、(1 S, 2R）‐（‐）‐シス‐1 ‐アミノ‐2‐インダノール (Al)を使用して（±）‐THCOと反応させることは、動力学的分解技術（dynamic resolution technique）を構成する。文献［Chemical & Engineering News, September 9, 2002］参照。２つのジアステレオマー塩が形成された。図３に示すように、その一つである（＋）‐THCO/（‐）‐アルカロイドが結晶化され、もう一つの（‐）‐THCO/（‐）‐アルカロイドは、溶液中に存在していた。酸性化後、それは、非常に光学的に純粋な(+)及び（‐）‐THCOをそれぞれ再生し、様々なテストを行なうのに十分な量（１グラム以上）が生成された。キラルＨＰＬＣ及びＣＤ（Circular Dichroism；円二色性）によって、分解された（＋）及び（−）−ＴＨＣＯ対（±）−ＴＨＣＯの光学純度及び光学スペクトルを確認した（図４）。（‐）‐THCOの同定は、ＣＤスペクトル及びキラルＨＰＬＣの保持時間を、水素化‐α‐酸と比較することによって確認された。（＋）‐THCOは、水素化した天然のα‐酸である（−）‐ＴＨＣＯとは反対のＣＤスペクトルを有する新規の苦味前駆体（bittering precursor）である。（＋）‐THCOの異性化によって、２つの新規の（−）‐シス／（+）‐トランス‐テトラヒドロイソコフムロン（ＴＨＩＣＯ）が生じる一方で、（−）−ＴＨＣＯでは、水素化天然イソ‐α‐酸と同じ（＋）−シス／（‐）‐トランス‐ＴＨＩＣＯが生じた。図５Ａ〜５Ｃは、（+／−）及び（−／＋）‐シス‐及びトランス‐ＴＨＩＣＯのキラルＨＰＬＣ分離／分解を示し、（＋）−及び（−）−トランス‐ＴＨＩＣＯの２つのＣＤスペクトルを示す。（+／−）‐シス／トランス‐THICO(THICO I), （−／＋）‐シス／トランス‐THICO(THICO II)、及び、（±）‐シス／トランス‐ＴＨＩＣＯ(THICO III)の３つの分子及びその誘導体の苦味知覚（bitter perception）、発泡の質（foam quality）、及び、抗菌活性をそれぞれ調べた。
【００３９】
苦味知覚
５% v/vエタノール／H20水溶液を6 ppmのTHICO I, II,及びIIIでスパイクした（spike）。３つの分子の苦味の知覚を表１にまとめた。これは、苦味の強度がＩＩ＞ＩＩＩ＞Ｉであり、ＩＩＩの苦味知覚が、他の分子に比べてスムーズで、かつよりマイルドであることを示す。
【００４０】
【表１】
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【００４１】
２つのセットのホップ処理しない（unhopped）ラガー（lager）(A及びB)を、6 ppm及び13 ppmのTHICO I, II,及びIIIでそれぞれスパイクした。各ビールに存在するシス／トランス‐THICOのＣ−１８逆相ＨＰＬＣ分析結果を表２にまとめた。
【００４２】
【表２】
0005888705.tif 000003
【００４３】
知覚評価（sensory evaluation）から、ＴＨＩＣＯＩＩを備えたブールが最も強い初期苦味及び最も長く続くリンガリング（lingering）を有することがわかった。その他の２つのビールは、同様であったが、ＴＨＩＣＯＩは若干高い最初の苦味を有し、ＴＨＩＣＯＩＩＩビールにおける苦味はすぐに軽減された。セットＢにおいて、ＴＨＩＣＯＩＩビールは、増加され（後期苦味と記載する）かつ残存する強い初期苦味を有していた。その他の２つのビールは、軽度のリンがリング苦味（軽度の残存苦味）と共にゆっくりと減少する初期の強い苦味という面において同様であった。これは、匂い受容体（odor receptor）が、２つの鏡像異性体ＴＨＩＣＯＩ及びＴＨＩＣＯＩＩを区別し、その結果、苦味強度及び質における差異をもたらすことができることを示す。
【００４４】
発泡性（泡形成）
ビールの泡立ちの主な要因の一つに、オオムギからの脂質伝達たんぱく質（ＬＴＰ）とホップ苦味成分との相互作用がある。文献［L. Lusk, H. Goldstein, D. Ryder, J. Amer. Soc. Brew. Chem. 53(3):93‐103, 1995)］参照。テトラヒドロイソ‐α‐酸は、その大きな疎水性に基づいて、ＬＴＰと優先的に相互作用する。 文献［K. Takeshi and T. Shellhammer, J. Agric. Food Chem. , 2008, 56 (18), pp 8629‐ 8634］参照。セットＡのビールにおける３つの苦味分子のＮｉｂｅｍ及び半減発泡テスト（Nibem and half‐life foam test）では、有意な差は見られなかった。表３参照。 ＴＨＩＣＯの鏡像異性体とＬＴＰ間の鏡像体選択的な（enantioselective）効果の相違は、ビール泡形成において明確ではない。これは、長期間の湯沸し（long kettle boiling）後に損傷されると知られているＬＴＰの構造（conformation）の破壊に起因する可能性がある。文献［Sandra N. E. Van Nierop, David E. Evans, Barry C. Axcell, Ian C. Cantrell, and Marina Rautenbach, J. Agric. Food Chem., 2004, 52 (10), pp 3120‐3129; E. N. Clare Mill, Chunli Gao, Peter J. Wilde, Neil M. Rigby, Ramani Wijesinha‐ Bettonis, Victoria E. Johnson, Lorna J. Smith and Alan R. Mackie, Biochemistry, 2009, 48 (51 ), pp 1208‐12088］参照。
【００４５】
【表３】
0005888705.tif 000004
【００４６】
THICO I, II, III の抗菌活性並びに最小阻害濃度（ＭＩＣ）及び阻害細菌域（ＢＺＩ）
３つの分子の抗菌効果（活性）をラクトバチラス・ブレビス（Lactobacillus brevis）及びペディオコッカス・ダムノサス（Pediococcus damnosus）に対して、２つの方法（ＭＩＣ及びＢＺＩ）によってテストした。ＭＩＣは、Ｔｗｅｅｎ８０培養培地を有しない改質ＢＭＢにおいていかなる細菌も検出されない濃度に基づいて決定された。その結果を表４にまとめた。ＭＩＣは、ＴＨＩＣＯＩ及びＩＩの両方に対して１６ｐｐｍである。７０％エタノール／水中４０００ｐｐｍのＴＨＩＣＯＩ，ＩＩ，及びＩＩＩに浸したフィルタペーパーディスクによって製造したユニヴァーサルビールアガー（Universal Beer Agar；ＵＢＡ）における細菌阻害域の平均直径を表５にまとめた。２つの異なる微生物（クトバチラス・ブレビス及びペディオコッカス・ダムノサス）に対して、３つの分子の域直径（zone diameter）増加率は同じ程度であった。それは、全ての分子が同様の抗菌効果を有することを意味する。ＴＨＩＣＯＩ、ＩＩ，ＩＩＩと微生物間には鏡像体選択的な抗菌相互作用は見られなかった。
【００４７】
【表４】
0005888705.tif 000005
【００４８】
【表５】
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【００４９】
したがって、本発明において、ラセミ化合物、（±）‐テトラヒドロコフムロン（又はテトラヒドロ‐α‐酸) 及びその異性化テトラヒドロイソコフムロン（又はテトラヒドロイソ‐α‐酸)は、(1 S, 2R）‐（‐）‐1 ‐アミノ‐2‐インダノールとの動力学的結晶化によってグラム量が得られる。分解された（＋）‐テトラヒドロコフムロン(THCO)は、新規の苦味（剤）前駆体（bittering precursor）であるが、‐）‐THCOは、水素化（‐）‐コフムロン（天然の‐α‐酸)と同じである。両方の鏡像異性体は、同じ分子構造ではあるものの異なる光学回転（optical rotation）を有するものに異性化される。（＋）‐THCO は２つの新規の苦味（剤）ジアステレオマーである、（‐）‐シス‐及び（＋）‐トランス‐テトラヒドロ‐イソコフムロン（THICO II）に転換されるが、（‐）‐THCOは、水素化シス及びトランス‐イソコフムロン（天然のイソ‐α‐酸）と同じである（＋）‐シス‐及び（−）−トランス‐THICO (THICO I)に転換される。
【００５０】
知覚（sensory）は、３つの分子の苦味強度は、THICO II＞（±）‐THICO I II ＞THICO Iであることを示す。（±）‐THICO IIIの知覚はスムーズで、かつ、Ｉ，及びＩＩよりもマイルドである。泡状態（foam situation）において、３つの分子ビールの間に泡質（foam quality）の明らかな違いは見られなかった。言い換えれば、３つの分子と脂質伝達たんぱく質（ＬＴＰ）間の鏡像体選択的な効果の明確な相違は観察されなかった。それは、湯沸し（kettle boiling）の際のＬＴＰ構造の破壊に起因すると考えられた。
【００５１】
ＴＨＩＣＯＩ及びＴＨＩＣＯＩＩのＭＩＣは、ペディオコッカス・ダムノサスに対して１６ｐｐｍで、同様であった。２つの異なる微生物（クトバチラス・ブレビス及びペディオコッカス・ダムノサス）に対して、３つの分子の域直径（zone diameter）の増加率（速度）は同じ程度であった。それは、全ての分子が同様の抗菌効果を有するか、又は、ＴＨＩＣＯＩ、ＩＩ，ＩＩＩと微生物間には鏡像体選択的な抗菌作用はないことを示す。
【００５２】
いくつかの実施形態に基づいて本発明を詳細に説明したが、当業者は、本発明が前述した実施形態以外の形で実施できることを理解しているだろう。前述した実施形態は、あくまで説明のために提示されたものであり、限定的なものではない。したがって、本発明の範囲は、添付した特許請求の範囲によって定まる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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