(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式(I)：
【化１】
0005960138.tif 000021
（式中、R1は酸素原子またはN-OHであり、
R2はメチル基であり、
あるいは、R1とR2はそれらが結合する炭素原子と一緒になって、
【化２】
0005960138.tif 000022
を形成し、
R3は水素原子またはメチル基である）
で表される化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項２】
以下：
リン酸  モノ-(2-アセチル-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、
リン酸  モノ-(2-アセチル-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、
リン酸  モノ-(2-アセチル-5-メチル-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、
リン酸  モノ-(2-アセチル-5-メチル-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、
リン酸  モノ-(2-{1-[(Z)-ヒドロキシイミノ]-エチル}-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、
リン酸  モノ-(2-{1-[(Z)-ヒドロキシイミノ]-エチル}-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、
リン酸  モノ-(2-{1-[(E)-ヒドロキシイミノ]-エチル}-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、
リン酸  モノ-(2-{1-[(E)-ヒドロキシイミノ]-エチル}-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、
リン酸  モノ-(2-イソキサゾール-3-イル-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、および、
リン酸  モノ-(2-イソキサゾール-3-イル-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル
からなる群より選択される化合物またはその薬学的に許容され得る塩。
【請求項３】
請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を有効成分として含有する医薬組成物。
【請求項４】
炎症性腸疾患、急性肺障害、虚血再灌流障害、自己免疫疾患、多発性硬化症もしくはアレルギー性疾患を予防または治療するため、あるいは、移植に対する拒絶反応を抑制するために用いられる、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
炎症性腸疾患が、潰瘍性大腸炎またはクローン病である請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
自己免疫疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、乾癬、抗リン脂質抗体症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、全身性皮膚硬化症、シェーグレン症候群、結節性多発動脈炎、顕微鏡的多発動脈炎、アレルギー性肉芽腫性血管炎、ウェゲナー肉芽腫症または混合性結合組織病である、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項７】
アレルギー性疾患が、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、花粉症、アレルギー性結膜炎、アレルギー性胃腸炎、気管支喘息、小児喘息、食物アレルギー、薬物アレルギーまたは蕁麻疹である請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項８】
炎症性腸疾患、急性肺障害、虚血再灌流障害、自己免疫疾患、多発性硬化症もしくはアレルギー性疾患を予防または治療するために用いられる医薬組成物を製造するため、あるいは、移植に対する拒絶反応を抑制するために用いられる医薬組成物を製造するための、請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容され得る塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スフィンゴシン-1-リン酸（以下、S1Pという場合がある。）リアーゼ阻害活性を有し、かつ、リンパ球数の減少効果を有する新規なリン酸エステル誘導体またはその薬学的に許容され得る塩、あるいはこれらを有効成分として含有する医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、免疫抑制剤としては、例えば、IL-2などのサイトカインの産生を抑制するシクロスポリン、タクロリムスなどが利用されている。そして、近年では、血中のリンパ球数の減少を誘導することにより、免疫系の活動を抑制する化合物について研究がなされている。例えば、フィンゴリモドは、in vitroでサイトカインの産生を抑制する作用を示さないが、生体内でリン酸化された後、S1P受容体アゴニストとして作用し、血中のリンパ球数の減少を誘導する。これにより、免疫系の活動を抑制する（例えば、非特許文献１参照）。【０００３】
S1P受容体アゴニストとは別のメカニズムで、血中のリンパ球数の減少を誘導する化合物として、2-アセチル-4-テトラヒドロキシブチルイミダゾール（THI）（例えば、特許文献１参照）が知られている。THIは、S1Pリアーゼを阻害することにより、血中のリンパ球数の減少を誘導する（例えば、非特許文献２、非特許文献３など参照）。【０００４】
このようなS1Pリアーゼ阻害剤として、THIの他、ポリオールを置換基として有するイミダゾール誘導体（例えば、特許文献２、特許文献３、非特許文献４、非特許文献５など参照）、ヘテロ環が直接結合したイミダゾール誘導体（例えば、特許文献４、特許文献５、非特許文献４、非特許文献５など参照）などが知られている。また、リンパ球数の減少を誘導する化合物として、ポリオールを置換基として有するチアゾール誘導体（例えば、特許文献６参照）などが知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第84/03441号パンフレット
【特許文献２】国際公開第07/100617号パンフレット
【特許文献３】国際公開第08/128045号パンフレット
【特許文献４】国際公開第08/109314号パンフレット
【特許文献５】米国特許出願公開第2009/0318516号明細書
【特許文献６】国際公開第97/46543号パンフレット
【特許文献７】国際公開第2011/102404号パンフレット
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Science, 296, 346-349(2002)
【非特許文献２】Science, 309, 1735-1739(2005)
【非特許文献３】Xenobiotica, 2010; 40(5): 350-356
【非特許文献４】J. Med. Chem. 2009,52, 3941-3953
【非特許文献５】J. Med. Chem. 2010,53, 8650-8662
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、上記特許文献１〜７および非特許文献１〜５にはいずれも、本発明の化合物は具体的に記載されていない。【０００８】
そこで、本発明は、S1Pリアーゼ阻害能を有し、かつ、リンパ球数の減少を誘導する新規な化合物またはその薬学的に許容され得る塩、および、それらを有効成分として含有する医薬組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、
（１）一般式(I)：【００１０】
【化１】
0005960138.tif 000002
【００１１】
（式中、R1は酸素原子またはN-OHであり、
R2はメチル基であり、
あるいは、R1とR2はそれらが結合する炭素原子と一緒になって、【００１２】
【化２】
0005960138.tif 000003
【００１３】
を形成し、
R3は水素原子またはメチル基である）
で表される化合物もしくはその同位体またはその薬学的に許容され得る塩；
（２）以下：
リン酸  モノ-(2-アセチル-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、
リン酸  モノ-(2-アセチル-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、
リン酸  モノ-(2-アセチル-5-メチル-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、
リン酸  モノ-(2-アセチル-5-メチル-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、
リン酸  モノ-(2-{1-[(Z)-ヒドロキシイミノ]-エチル}-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、
リン酸  モノ-(2-{1-[(Z)-ヒドロキシイミノ]-エチル}-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、
リン酸  モノ-(2-{1-[(E)-ヒドロキシイミノ]-エチル}-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、
リン酸  モノ-(2-{1-[(E)-ヒドロキシイミノ]-エチル}-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、
リン酸  モノ-(2-イソキサゾール-3-イル-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、および、
リン酸  モノ-(2-イソキサゾール-3-イル-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル
からなる群より選択される化合物もしくはその同位体またはその薬学的に許容され得る塩；
（３）前記（１）または（２）に記載の化合物もしくはその同位体またはその薬学的に許容され得る塩を有効成分として含有する医薬組成物；
（４）炎症性腸疾患、急性肺障害、虚血再灌流障害、自己免疫疾患、多発性硬化症もしくはアレルギー性疾患を予防または治療するため、あるいは、移植に対する拒絶反応を抑制するために用いられる、前記（３）に記載の医薬組成物；
（５）炎症性腸疾患が、潰瘍性大腸炎またはクローン病である前記（４）に記載の医薬組成物；
（６）自己免疫疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、乾癬、抗リン脂質抗体症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、全身性皮膚硬化症、シェーグレン症候群、結節性多発動脈炎、顕微鏡的多発動脈炎、アレルギー性肉芽腫性血管炎、ウェゲナー肉芽腫症または混合性結合組織病である、前記（４）に記載の医薬組成物；
（７）アレルギー性疾患が、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、花粉症、アレルギー性結膜炎、アレルギー性胃腸炎、気管支喘息、小児喘息、食物アレルギー、薬物アレルギーまたは蕁麻疹である前記（４）に記載の医薬組成物；
（８）炎症性腸疾患、急性肺障害、虚血再灌流障害、自己免疫疾患、多発性硬化症もしくはアレルギー性疾患を予防または治療するため、あるいは、移植に対する拒絶反応を抑制するための医薬組成物を製造するための、前記（１）または（２）に記載の化合物もしくはその同位体またはその薬学的に許容され得る塩の使用；
（９）前記（１）または（２）に記載の化合物もしくはその同位体またはその薬学的に許容され得る塩の治療有効量を、哺乳動物に投与することを含む、炎症性腸疾患、急性肺障害、虚血再灌流障害、自己免疫疾患、多発性硬化症もしくはアレルギー性疾患を予防または治療する、あるいは、移植に対する拒絶反応を抑制する方法；ならびに
（１０）哺乳動物がヒトである前記（９）に記載の方法；
を提供する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩は、優れたS1Pリアーゼ阻害能を有し、in vivoにおいて血中のリンパ球数を減少させるという効果を奏する。そして、本発明の医薬組成物は、哺乳動物、特にヒトにおける、炎症性腸疾患、急性肺障害、虚血再灌流障害、自己免疫疾患、多発性硬化症、アレルギー性疾患などを治療または予防することができ、移植に対する拒絶反応を抑制することができるという効果を奏する。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本明細書において、「薬学的に許容され得る塩」とは、本発明の化合物と酸または塩基とを反応させることにより形成される塩をいう。
【００１６】
塩としては、フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩などのハロゲン化水素酸塩；塩酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸塩、リン酸塩などの無機酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩などの低級アルカンスルホン酸塩；ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩などのアリールスルホン酸塩；酢酸塩、りんご酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩などの有機酸塩；ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩、鉄塩などの金属塩；アンモニウム塩などの無機塩；t-オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、N-メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、N,N'-ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、N-ベンジルフェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニウム塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩などの有機塩などのアミン塩；グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩などのアミノ酸塩などが挙げられる。
【００１７】
本発明の化合物は、例えば、大気中に放置したりすることにより、水分を吸収して吸着水が付き、水和物となる場合があり、そのような水和物も本発明の塩に包含される。
【００１８】
本発明の化合物は、イミダゾール環の互変異性体が存在する場合、各互変異性体およびそれらの任意の割合の混合物を全て含むものである。
【００１９】
本発明はまた、本発明の化合物を構成する原子の1以上が、その原子の同位体で置換された化合物を包含し得る。同位体には放射性同位体および安定同位体の2種類が存在し、同位体の例としては、例えば、水素の同位体（2Hおよび3H）、炭素の同位体（11C、13Cおよび14C）、窒素の同位体（13Nおよび15N）、酸素の同位体（15O、17Oおよび18O）、フッ素の同位体（18F）などが挙げられる。同位体で標識された化合物を含む組成物は、例えば、治療剤、予防剤、研究試薬、アッセイ試薬、診断剤、インビボ画像診断剤などとして有用である。同位体で標識された化合物もまた、本発明の化合物に包含され、同位体で標識された化合物の任意の割合の混合物もすべて本発明の化合物に包含される。そして、同位体で標識された本発明の化合物は、当該分野で公知の方法により、例えば、後述する本発明の製造方法における原料の代わりに同位体で標識された原料を用いることにより、製造できる。
【００２０】
本発明の化合物は、例えば、公知の化合物から、後述する参考例、実施例および製造例に従って、容易に製造できる。
【００２１】
上記方法で得られる本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩は、優れたS1Pリアーゼ阻害能を有し、かつ、リンパ球数を減少させるので、免疫系の活動を抑制することができる。従って、炎症性腸疾患（IBD）（例えば、潰瘍性大腸炎、クローン病など）、急性肺障害、虚血再灌流障害（例えば、心臓、脳、肝臓、腎臓、肺など）、自己免疫疾患（例えば、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、乾癬、抗リン脂質抗体症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、全身性皮膚硬化症、シェーグレン症候群、結節性多発動脈炎、顕微鏡的多発動脈炎、アレルギー性肉芽腫性血管炎、ウェゲナー肉芽腫症、混合性結合組織病など）、多発性硬化症（MS）、アレルギー性疾患（例えば、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎（花粉症を含む）、アレルギー性結膜炎、アレルギー性胃腸炎、気管支喘息、小児喘息、食物アレルギー、薬物アレルギー、蕁麻疹など）などを予防または治療するために、あるいは、移植に対する拒絶反応を抑制するための医薬組成物の有効成分として本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を用いることができる。
【００２２】
本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩を有効成分として含有する医薬組成物は、哺乳動物（例えば、ヒト、ウマ、ウシ、ブタなど、好ましくはヒト）に投与される場合には、全身的または局所的に、経口または非経口で投与され得る。
【００２３】
本発明の医薬組成物は、投与方法に応じて適切な形態を選択し、通常用いられている各種製剤の調製法によって調製できる。
【００２４】
経口用の医薬組成物の形態としては、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、水剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤などが挙げられる。かかる形態の医薬組成物の調製は、添加剤として通常用いられる賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、膨潤剤、膨潤補助剤、コーティング剤、可塑剤、安定剤、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、溶解補助剤、懸濁化剤、乳化剤、甘味剤、保存剤、緩衝剤、希釈剤、湿潤剤などを必要に応じて適宜選択し、常法に従って製造され得る。
【００２５】
非経口用の医薬組成物の形態としては、注射剤、軟膏剤、ゲル剤、クリーム剤、湿布剤、貼付剤、噴霧剤、吸入剤、スプレー剤、点眼剤、点鼻剤、座剤、吸入剤などが挙げられる。かかる形態の医薬組成物の調製は、添加剤として通常用いられる安定化剤、防腐剤、溶解補助剤、保湿剤、保存剤、抗酸化剤、着香剤、ゲル化剤、中和剤、溶解補助剤、緩衝剤、等張剤、界面活性剤、着色剤、緩衝化剤、増粘剤、湿潤剤、充填剤、吸収促進剤、懸濁化剤、結合剤などを必要に応じて適宜選択し、常法に従って製造され得る。
【００２６】
本発明の化合物またはその薬学的に許容され得る塩の投与量は、症状、年齢、体重などにより異なるが、経口投与の場合には、1日1〜数回、成人一人一回当たり、化合物換算量で1〜3000mg、好ましくは1〜1000mgであり、非経口投与の場合には、１日1〜数回、成人一人一回当たり、化合物換算量0.01〜1500mg、好ましくは0.1〜500mgである。
【００２７】
以下、参考例、実施例、製造例、製剤例および試験例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００２８】
（実施例１）リン酸  モノ-(2-アセチル-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステルおよびリン酸  モノ-(2-アセチル-3H-イミダゾール-5-イルメチル)エステル
（１）4-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール【００２９】
【化３】
0005960138.tif 000004
【００３０】
1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール-4-メタノール（100g、WO01/02145）をジクロロメタン（1L）に溶解し、撹拌下にトリエチルアミン（以下、TEAという場合がある。）（122mL）、4-(N,N-ジメチルアミノ)ピリジン（以下、DMAPという場合がある。）（5.35g）、次いでtert-ブチルジフェニルシリルクロリド（以下、TBDPSClという場合がある。）（149mL）を加えた。1日間撹拌後、反応混合液を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ウルトラパックE、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／へキサン＝25％→50％）で精製し、標記化合物（146g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: -0.01 (9H, s), 0.91 (2H, t, J = 8.7 Hz), 1.08 (9H, s), 3.48 (2H, t, J = 8.2 Hz), 4.75 (2H, s), 5.22 (2H, s), 6.93-6.96 (1H, m), 7.34-7.44 (6H, m), 7.50-7.52 (1H, m), 7.68-7.73 (4H, m).【００３１】
（２）1-[4-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール-2-イル]エタノン【００３２】
【化４】
0005960138.tif 000005
【００３３】
（１）で得られた化合物（30.0g）をテトラヒドロフラン（以下、THFという場合がある。）（500mL）に溶解し、アルゴン雰囲気下に撹拌しながら-78℃に冷却した。本溶液に、n-ブチルリチウム（2.66Mへキサン溶液、36.2mL）をシリンジを用いてゆっくり滴下し、同温にて30分撹拌した。次いで、N-メトキシ-N-メチルアセタミド（13.1mL）をシリンジを用いて加え、90分間撹拌を続けた。反応溶液に、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を終了させ、酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出液を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラシュカラム5L、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／へキサン＝5％→30％）で精製し、標記化合物（24.4g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: -0.01 (9H, s), 0.93 (2H, t, J = 7.8 Hz), 1.09 (9H, s), 2.61 (3H, s), 3.57 (2H, t, J = 8.2 Hz), 4.77 (2H, s), 5.73 (2H, s), 7.20 (1H, s), 7.34-7.45 (6H, m), 7.73-7.67 (4H, m).
MS (ESI) m/z: 509 [(M+H)+].【００３４】
（３）1-[4-ヒドロキシメチル-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール-2-イル]エタノン【００３５】
【化５】
0005960138.tif 000006
【００３６】
（２）で得られた化合物（24.4g）をTHF（200mL）に溶解し、撹拌下にテトラブチルアンモニウムフルオライド（以下、TBAFという場合がある。）（1.0M THF溶液、62.7mL）を加え、1時間撹拌を続けた。反応液を減圧下に濃縮して得られた残渣をアミノカラム（商品名：ハイフラシュカラム5L アミノ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／へキサン＝25％→100％）で精製し、標記化合物（14.1g）を得た。
1H-NMR (CD3OD) δ: -0.03 (9H, s), 0.90 (2H, t, J = 8.0 Hz), 2.58 (3H, s), 3.59 (2H, t, J = 8.0 Hz), 4.57 (2H, s), 5.73 (2H, s), 7.43 (1H, s).
MS (ESI) m/z: 271 [(M+H)+].【００３７】
（４）リン酸  2-アセチル-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール-4-イルメチル  エステル  ジ-tert-ブチル  エステル【００３８】
【化６】
0005960138.tif 000007
【００３９】
（３）で得られた化合物（2.00g）をジクロロメタン（10ml）とTHF（10ml）の混合溶媒に溶解し、氷冷撹拌下に1H-テトラゾール（1.04g）、次いでジイソプロピル亜ホスホルアミド酸  ジ-tert-ブチル  エステル（3.32ml）を加えた。同温で4時間撹拌後、30％過酸化水素水（1.46ml）を反応液に滴下し、徐々に室温に戻しながら撹拌を17時間続けた。反応液に飽和チオ硫酸ナトリウム水を加えて反応を終了させた後、酢酸エチルで抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラム5L、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム＝0％→10％）で精製し、標記化合物（3.42g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: -0.01 (6H, s), 0.90-0.96 (2H, m), 1.48-1.52 (18H, m), 2.65 (3H, s), 3.54-3.59 (2H, m), 5.00 (2H, d, J = 7.4 Hz), 5.74 (2H, s), 7.36 (1H, s).
MS (ESI) m/z: 463 [(M+H)+].【００４０】
（５）リン酸  モノ-(2-アセチル-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステルおよびリン酸  モノ-(2-アセチル-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル【００４１】
【化７】
0005960138.tif 000008
【００４２】
（４）で得られた化合物（3.42g）と4Nの塩酸／1,4-ジオキサン（10ml）を混合し、室温にて1日間撹拌した。反応混合物を濃縮後、得られた残渣を逆相分取HPLCで精製した後、凍結乾燥して標記化合物の混合物（0.335g）を得た。
1H-NMR (DMSO-D6) δ: 2.51 (3H, s), 4.82 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.37 (1H, s).
MS (ESI) m/z: 221 [(M+H)+].【００４３】
（実施例２）リン酸  モノ-(2-アセチル-5-メチル-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステルおよびリン酸  モノ-(2-アセチル-5-メチル-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル
（１）4-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-5-メチル-1H-イミダゾール、および、5-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-4-メチル-1H-イミダゾール【００４４】
【化８】
0005960138.tif 000009
【００４５】
(5-メチル-1H-イミダゾール-4-イル)メタノール  塩酸塩、および、(5-メチル-3H-イミダゾール-5-イル)メタノール  塩酸塩（5.00g）をジクロロメタン（100mL）に懸濁し、撹拌下にTEA（14.1mL）とTBDPSCl（13.1mL）を加え、3日間撹拌を続けた。反応液を水で希釈し、クロロホルムで抽出した。合わせた抽出液を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：カートリッジ40M、バイオタージ社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム=0％→5％）で精製し、標記化合物の混合物（7.77g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 1.05 (9H, s), 2.03 (3H, s), 4.68 (2H, s), 7.37-7.47 (7H, m), 7.66-7.68 (4H, m).【００４６】
（２）4-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-5-メチル-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール、および、5-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-4-メチル-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール【００４７】
【化９】
0005960138.tif 000010
【００４８】
（１）で得られた混合物（35.4g）をアセトニトリル（500mL）に溶解し、氷冷下に撹拌しながらTEA（37.8mL）、次いで2-トリメチルシリルエトキシメチル  クロリド（21.4mL）を加え、70℃で12時間撹拌した。反応混合物を室温まで放冷し、減圧下に溶媒を留去した。残渣を酢酸エチルで希釈した後、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下に溶媒を留去し、得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名:カートリッジ65i、バイオタージ社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／へキサン=15％→50％）で精製し、低極性成分として4-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-5-メチル-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール（17.9g）、高極性成分として5-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-4-メチル-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール（9.42g）を得た。【００４９】
低極性成分：4-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-5-メチル-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール
1H-NMR (CDCl3) δ: -0.02 (9H, s), 0.89 (2H, t, J = 8.2 Hz), 1.04 (9H, s), 2.10 (3H, s), 3.45 (2H, t, J = 8.2 Hz), 4.65 (2H, s), 5.14 (2H, s), 7.34-7.45 (3H, m), 7.75-7.70 (4H, m).
MS (ESI) m/z: 481 [M+H]+.【００５０】
高極性成分：5-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-4-メチル-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール
1H-NMR (CDCl3) δ: -0.03 (9H, s), 0.89 (2H, t, J = 8.0 Hz), 1.01 (9H, s), 1.92 (3H, s), 3.46 (2H, t, J = 8.3 Hz), 4.68 (2H, s), 5.38 (2H, s), 7.37-7.47 (3H, m), 7.66-7.68 (4H, m).
MS (ESI) m/z: 481 [M+H]+.【００５１】
（３）1-[4-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-5-メチル-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール-2-イル]エタノン【００５２】
【化１０】
0005960138.tif 000011
【００５３】
（２）で得られた4-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-5-メチル-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール（24.6g）を用いて、実施例１の工程（２）と同様に、標記化合物（11.7g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: -0.04 (9H, s), 0.85-0.94 (2H, m), 1.05 (9H, s), 2.18 (3H, s), 2.61 (3H, s), 3.50-3.56 (2H, m), 4.72 (2H, s), 5.75 (1H, s), 7.45-7.34 (6H, m), 7.72-7.68 (4H, m).
MS (ESI) m/z: 523 [M+H]+.【００５４】
（４）1-[4-ヒドロキシメチル-5-メチル-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール-2-イル]エタノン【００５５】
【化１１】
0005960138.tif 000012
【００５６】
（３）で得られた化合物（11.7g）を用いて、実施例１の工程（３）と同様に、標記化合物（5.41g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: -0.03 (9H, s), 0.86-0.92 (2H, m), 2.24 (1H, t, J = 5.5 Hz), 2.34 (3H, s),2.64 (3H, s), 3.52-3.57 (2H, m), 4.63 (2H, d, J = 6.0 Hz), 5.80 (2H, s).
MS (ESI) m/z: 285 [M+H]+.【００５７】
（５）リン酸  2-アセチル-5-メチル-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール-4-イルメチル  エステル  ジ-tert-ブチル  エステル【００５８】
【化１２】
0005960138.tif 000013
【００５９】
（４）で得られたで得られた化合物（5.00g）を用いて、実施例１の工程（４）と同様に、標記化合物（7.32g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: -0.03 (9H, s), 0.86-0.90 (2H, m), 1.43-1.53 (18H, m), 2.32-2.39 (3H, m),2.67-2.63 (3H, m), 3.51-3.57 (2H, m), 4.95-5.08 (2H, m), 5.79-5.91 (2H, m).
MS (ESI) m/z: 477 [(M+H)+].【００６０】
（６）リン酸  モノ-(2-アセチル-5-メチル-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステルおよびリン酸  モノ-(2-アセチル-5-メチル-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル【００６１】
【化１３】
0005960138.tif 000014
【００６２】
（５）で得られた化合物（3.42g）を用いて、実施例１の工程（５）と同様に、標記化合物の混合物（0.557g）を得た。
1H-NMR (DMSO-D6) δ: 2.20-2.25 (3H, m), 2.44-2.47 (3H, m), 4.77 (2H, d, J = 6.4 Hz).
MS (ESI) m/z: 235 [(M+H)+].【００６３】
（実施例３）リン酸  モノ-(2-{1-[(Z)-ヒドロキシイミノ]-エチル}-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、リン酸  モノ-(2-{1-[(Z)-ヒドロキシイミノ]-エチル}-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、リン酸  モノ-(2-{1-[(E)-ヒドロキシイミノ]-エチル}-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、および、リン酸  モノ-(2-{1-[(E)-ヒドロキシイミノ]-エチル}-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル【００６４】
【化１４】
0005960138.tif 000015
【００６５】
実施例１の工程（５）で得られた混合物（25.0mg）を水（2.00ml）に溶解し、室温にて塩化ヒドロキシルアンモニウム（7.89mg）および酢酸ナトリウム（18.6mg）を加え6時間攪拌した。不溶物をろ過にて除去し、母液を濃縮して得られた残渣を逆相分取HPLCで精製した後、凍結乾燥して標記化合物の混合物（3.70mg）を得た。
1H-NMR (DMSO-D6) δ: 2.17 (1H, s), 4.81 (2H, s), 7.19 (1H, s).
MS (ESI) m/z: 236 [(M+H)+].【００６６】
（実施例４）リン酸  モノ-(2-イソキサゾール-3-イル-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、および、リン酸  モノ-(2-イソキサゾール-3-イル-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル
（１）(E)-1-[4-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール-2-イル]エタノン  オキシムおよび(Z)-1-[4-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール-2-イル]エタノン  オキシム【００６７】
【化１５】
0005960138.tif 000016
【００６８】
実施例１の工程（２）で得られた化合物（5.00g）をメタノール（50ml）に溶解し、室温にて塩化ヒドロキシルアンモニウム（680mg）および酢酸ナトリウム（2.07g）を加えた後に、50℃にて加温し23時間攪拌した。反応液を室温まで冷却した後に、不溶物をろ過にて除去し、母液を濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラム3L、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝10％→70％）で精製し、標記化合物の混合物（4.29g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: -0.01 (9H, s), 0.92 (2H, t, J = 8.0 Hz), 1.08 (9H, s), 2.35 (3H, s), 3.53 (2H, t, J = 7.8 Hz), 4.76 (2H, s), 5.57 (2H, s), 7.02 (1H, s), 7.33-7.45 (6H, m), 7.68-7.73 (4H, m).
MS (ESI) m/z: 524 [(M+H)+].【００６９】
（２）3-[4-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール-2-イル]イソキサゾール【００７０】
【化１６】
0005960138.tif 000017
【００７１】
工程（１）で得られた化合物（16.9g）をTHF（300ml）に溶解し、窒素気流下に攪拌しながら-20℃に冷却した。本溶液にn-ブチルリチウム（2.66Mヘキサン溶液、60.7ml）を滴下し、同温にて30分攪拌した。次いでN,N-ジメチルホルムアミド（15.0ml）を加え、同温にて1時間攪拌した。反応液に同温にて飽和塩化アンモニウム水溶液を加え反応を終了させた。反応液を室温に戻した後に、酢酸エチルにて抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下に溶媒を留去し3-[4-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール-2-イル]-4,5-ジヒドロ-5-イソキサゾール-5-オールの粗生成物を得、引き続き次の工程に供した。【００７２】
前工程で得られた3-[4-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシメチル)-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール-2-イル]-4,5-ジヒドロ-5-イソキサゾール-5-オールの粗生成物をTHF（300ml）に溶解し、窒素気流下に攪拌しながら0℃に冷却した。本溶液に、ピリジン（10.4ml）およびトリフルオロ酢酸無水物（17.9ml）を加え30分間攪拌した。本反応液を室温に戻しながら30分間攪拌し、さらに、55℃に加温して18時間攪拌した。反応液を室温に戻した後に水に注ぎ、酢酸エチルにて抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下に溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：ハイフラッシュカラム3Ｌ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝10％→50％）で精製し、標記化合物（6.22g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: 0.00 (9H, s), 0.97 (2H, t, J = 8.5 Hz), 1.09 (9H, s), 1.26 (2H, t, J = 6.9 Hz), 3.63 (2H, t, J = 8.9 Hz), 4.89 (2H, s), 5.87 (2H, s), 7.35-7.48 (6H, m), 7.68-7.63 (4H, m), 8.61 (1H, s).
MS (ESI) m/z: 534 [(M+H)+].【００７３】
（３）[2-(イソキサゾール-3-イル)-1-(2-トリメチルシリルエトキシメチル)-1H-イミダゾール-4-イル]メタノール【００７４】
【化１７】
0005960138.tif 000018
【００７５】
工程（２）で得られた化合物（6.22g）をTHF（200ml）に溶解し、攪拌下にTBAF（1.0M THF溶液、11.6ml）を加え4時間攪拌した。反応液を減圧下に濃縮して得られた残渣をアミノカラム (商品名：ハイフラッシュカラム3Lアミノ、山善社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝50％→100％）で精製し、標記化合物（1.61g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: -0.05 (9H, s), 0.92 (2H, t, J = 8.3 Hz), 2.10 (1H, s), 3.58 (2H, t, J = 8.3 Hz), 4.68 (2H, d, J = 5.5 Hz), 5.80 (2H, s), 6.97 (1H, d, J = 1.8 Hz), 7.19 (1H, s), 8.45 (1H, d, J = 1.8 Hz).
MS (ESI) m/z: 296 [(M+H)+].【００７６】
（４）リン酸  ジ-tert-ブチル  エステル  [2-(イソキサゾール-3-イル)-1-(2-トリメチルシラニルエトキシメチル)-1H-イミダゾール-4-イル]メチル  エステル【００７７】
【化１８】
0005960138.tif 000019
【００７８】
工程（３）で得られた化合物（1.61g）および1H-テトラゾール（760mg）をTHF（20ml）に溶解し、攪拌しながらジ-tert-ブチル  N,N-ジイソプロピルホスホロアミダイト（2.45ml）を室温にて加え2時間攪拌した。この反応液を0℃に冷却後、30％過酸化水素水（0.250ml）を加え、徐々に室温に戻しながら14時間攪拌した。反応液に飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液を加え反応を停止させた後に、酢酸エチルにて抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下に溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルカラム（商品名：SNAP カートリッジ KP-Sil 100g、バイオタージ社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝10％→50％）で精製し、標記化合物（2.21g）を得た。
1H-NMR (CDCl3) δ: -0.05 (9H, s), 0.91 (2H, t, J = 7.6 Hz), 1.45-1.58 (18H, m), 3.53-3.60 (2H, m), 5.02 (2H, d, J = 7.8 Hz), 5.79 (2H, s), 6.94-6.95 (1H, m), 7.29 (1H, s), 8.44 (1H, t, J = 1.8 Hz).
MS (ESI) m/z: 488 [(M+H)+].【００７９】
（５）リン酸  モノ-(2-イソキサゾール-3-イル-1H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル、および、リン酸  モノ-(2-イソキサゾール-3-イル-3H-イミダゾール-4-イルメチル)エステル【００８０】
【化１９】
0005960138.tif 000020
【００８１】
工程（４）で得られた化合物（1.97g）を4N 塩酸／1,4-ジオキサン溶液（45ml）に溶解し、45℃に加温して6時間攪拌した。反応液を放冷後、減圧下に溶媒を留去した。得られた残渣を逆相分取HPLCで精製した後、凍結乾燥して標記化合物の混合物（348mg）を得た。
1H-NMR (DMSO-D6) δ: 3.34 (2H, br s), 4.82 (2H, d, J = 6.9 Hz), 6.93 and 6.97 (total 1H, each d, J = 1.4 and 2.3 Hz, respectively), 7.29 (1H, br s), 9.00 and 9.04 (total 1H, each d, J = 2.3 and 2.8 Hz respectively).
MS (ESI) m/z: 246 [(M+H)+].【００８２】
（製剤例）
実施例で得られた化合物5g、乳糖90g、トウモロコシデンプン34g、結晶セルロース20gおよびステアリン酸マグネシウム1gをブレンダーで混合した後、打錠機で打錠することによる、錠剤が得られる。【００８３】
（試験例１）ラットにおける末梢血中リンパ球数の変動
雄性LEW/Crjラット3または6週齢を、日本チャールス・リバー株式会社より購入した。1週間の馴化飼育を行って実験に使用した。一群3または5匹で実験に用いた。検体は必要量を秤量後、乳鉢・乳棒、またはホモジナイザーを用いて0.5％MC溶液に懸濁した。投与液は体重1kgあたり5mLとなるよう調製した。調製した溶液は胃ゾンデを用いて単回経口投与した。経口投与前および投与後1、3、7、8、24または48時間にジエチルエーテル麻酔下またはイソフルラン麻酔下で開腹し、下大静脈より2mL採血し、直ちに抗凝固剤（EDTA-2K）コートされた真空密封型採血管（ニプロ株式会社）に回収した。転倒混和後、測定まで室温条件下で取り扱った。リンパ球数の測定は自動血球計数装置（ADVIA120、シーメンスヘルスケア・ダイアグノスティック株式会社）を用いた。採血の際に、胸腺も摘出した。【００８４】
実施例１、２および４の化合物は、末梢血中のリンパ球数を減少させた。【００８５】
（試験例２）ラットにおけるS1Pリアーゼ阻害能
摘出した胸腺はホモジェナイズバッファー（50mM HEPES-NaOH（pH=7.4）、0.15M NaCl、10％Glycerol、1mM EDTA、1mM DTT、complete protease inhibitor cocktail（Roche, #4693132））存在下でジルコニアビーズを用いる方法、もしくは切り刻んだ後にPotter-Elvehjem型ホモジナイザーを用いる方法のいずれかにより破砕した。さらにソニケーターにて超音波処理した後に4℃、1000Gで3分間遠心し、上清を回収した。上清はタンパク量をBradford法にて定量した後、液体窒素で瞬間凍結した後に-80℃で保存した（胸腺抽出物）。【００８６】
S1Pリアーゼ活性を測定するためにホモジェナイズバッファーにて胸腺抽出物を希釈し、基質である[3H]dh S1P（3.4nM）を含む酵素反応液（0.1M K-Pi（pH=7.4）、25mM NaF、5mM Na3VO4、1mM EDTA、1mM DTT、0.1％Triton X-100、2μM cold dhS1P）中で37℃で1時間反応させた。氷上で1時間反応させたものを陰性対照とした。反応後に水酸化ナトリウムが終濃度0.1Mとなるように添加し、さらにCHCl3/MeOH（2:1）混合液を等量加え攪拌し、室温、8400Gで3分間遠心した後に水層部分を回収し、液体シンチレーションカウンターにて放射活性を測定した。【００８７】
実施例１および２の化合物は、胸腺中のS1Pリアーゼ活性を低下させた。【００８８】
（試験例３）マウスにおけるS1Pリアーゼ阻害能
雄性BALB/cマウス6週齢を、日本チャールス・リバー株式会社より購入する。1週間の馴化飼育を行い、7週齢となったマウスを実験に使用する。一群5匹で実験に用いる。検体は必要量を秤量後、乳鉢・乳棒を用いて0.5％MC溶液に懸濁する。投与液は体重1kgあたり10mLとなるよう調製する。調製した化合物溶液は胃ゾンデを用いて単回経口投与する。【００８９】
エチレンジアミン四酢酸二水素二カリウム（EDTA-2K、ナカライテスク株式会社）は5％となるように注射用水にて溶解する（5％EDTA-2K溶液）。経口投与前および投与後1、3、8、24、48時間にジエチルエーテル麻酔下で開腹し、予め5％EDTA-2K溶液を通したシリンジを用いて、下大静脈より0.5mL採血する。この際、胸腺も摘出する。得られた血液は測定まで室温条件下で取り扱う。リンパ球数の測定は自動血球計数装置（ADVIA120、シーメンスヘルスケア・ダイアグノスティック株式会社）を用いる。【００９０】
摘出した胸腺はホモジェナイズバッファー（50mM HEPES-NaOH（pH=7.4）、0.15M NaCl、10％Glycerol、1mM EDTA、1mM DTT、complete protease inhibitor cocktail（Roche, #4693132））存在下でジルコニアビーズを用いる方法、もしくは切り刻んだ後にPotter-Elvehjem型ホモジナイザーを用いる方法のいずれかにより破砕する。さらにソニケーターにて超音波処理した後に4℃、1000Gで3分間遠心し、上清を回収する。上清はタンパク量をBradford法にて定量した後、液体窒素で瞬間凍結した後に-80℃で保存する（胸腺抽出物）。【００９１】
S1Pリアーゼ活性を測定するためにホモジェナイズバッファーにて胸腺抽出物を希釈し、基質である[3H]dh S1P（3.4nM）を含む酵素反応液（0.1M K-Pi（pH=7.4）、25mM NaF、5mM Na3VO4、1mM EDTA、1mM DTT、0.1％Triton X-100、2μM cold dhS1P）中で37℃で1時間反応させる。氷上で1時間反応させたものを陰性対照とする。反応後に水酸化ナトリウムが終濃度0.1Mとなるように添加し、さらにCHCl3/MeOH（2:1）混合液を等量加え攪拌し、室温、8400Gで3分間遠心した後に水層部分を回収し、液体シンチレーションカウンターにて放射活性を測定する。【００９２】
（試験例４）病態モデルでの試験
実験的自己免疫性脳脊髄炎（Clin. Exp. Immunol., 120, 526-531 (2000)、J. Neuroimmunol., 129, 1-9 (2002)、Annu. Rev. Immunol., 10, 153-187 (1992)、Eur. J. Immunol., 25, 1951-1959 (1995)）、コラーゲン誘導性関節炎（Current Protocols in Immunology (1996) 15.5.1-15.5.24）、アスピリン喘息（Arthritis Rheum. 2010 Jan;62(1):82-92）、GPI誘導性関節炎（Arthritis Res Ther. 2008;10(3):R66. Epub 2008 Jun 5.）、抗体誘導性関節炎（J Immunol. 2003 Apr 15;170(8):4318-24.）、乾癬（J Immunol. 2009 May 1;182(9):5836-45.、J Clin Invest. 2008 Feb;118(2):597-607.、Nature 2007 445:648-651.）、炎症性腸疾患（Current Protocols in Immunology (2001) 15.19.1-15.19.14、ProcNatlAcadSci U S A. 2009 Mar 3;106(9):3300-5. Epub 2009 Feb 6.）、全身性エリテマトーデス（Current Protocols in Immunology (2002) 15.20.1-15.20.22）、急性肺障害（Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2010 Dec. 10 as doi: 10.1165/rcmb. 2010-0422OC）、心臓虚血再灌流障害（Am J Physiol Heart Circ Physiol (2011)May;300(5):H1753-61）などの病態モデルを用いて被検物質の評価を行う。
【産業上の利用可能性】
【００９３】
本発明によれば、炎症性腸疾患、急性肺障害、虚血再灌流障害、自己免疫疾患、多発性硬化症もしくはアレルギー性疾患を予防または治療するため、あるいは、移植に対する拒絶反応を抑制するための医薬組成物を提供することができる。