(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液透析を受けている患者における慢性腎疾患に伴う骨ミネラル代謝異常（ＣＫＤ−ＭＢＤ）の処置において使用するための、Ａｃ−ｃ（Ｃ）ａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号３）を含む化合物を含む組成物であって、
血液透析が完了する約１５分前に始まり血液透析が完了した約３時間後に終わる期間内に該患者に静脈内投与され、該投与が、透析後少なくとも約６時間の期間にわたって血液透析前の血清リンレベルよりも低い血液透析後の血清リンレベルを維持するために有効である、組成物。
【請求項２】
血液透析の直後に始まり血液透析が完了した約３時間後に終わる期間内に投与される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記化合物が配列番号３の薬学的に許容される塩を含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記塩が塩酸塩である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物が、血液透析が完了する約１５分前に始まり血液透析の約１時間後に終わる期間内に投与される、請求項１および３から４までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物が透析の最後の返血手順の間に投与される、請求項１および３から４までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記患者がホスフェート結合剤で処置されている、請求項１から６までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記投与が、血液透析前の血清リンレベルよりも少なくとも約１０％低い血液透析後の血清リンレベルを透析と透析の間の期間にわたって維持するために有効である、請求項１から６までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
患者が二次性副甲状腺機能亢進症または原発性副甲状腺機能亢進症について処置されている、請求項１から６までのいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、高リン酸血症を有する血液透析患者を処置するための方法であって、カルシウム感知受容体（ＣａＳＲ）アゴニストを投与するステップを含む方法に関する。
【０００２】
配列表の参照
配列表は、２０１２年６月８日に作成され、「６３２００８０２１ＵＳ００．ｔｘｔ」（８７，７０２バイト）という名称のテキストファイル形式でＥＦＳを介して電子的に提示されており、その内容の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００３】
ホスフェート（リン）は、種々の生物学的プロセスおよび細胞プロセスにとって極めて重要である。ホスフェートは、カルシウムとともに、骨にミネラル強度をもたらす骨格系の主要な構成成分である。ホスフェートはまた、核酸ならびに細胞のエネルギー分子であるＡＴＰのリン酸結合の不可欠な構成成分である。ホスフェートは、骨、血清、および尿において緩衝物質として機能する。したがって、血液中のホスフェートの生理的レベルは、体内の種々の器官系によって慎重に制御される。
【０００４】
全身のホスフェートの大半（８５％）は、石灰化した細胞外マトリックスの一部として骨に存在する。毎日約３００ｍｇのホスフェートが骨組織に出入りする。骨へのホスフェートの付加の過剰な損失または不全により骨軟化症が導かれる。腎臓は、副甲状腺から分泌される副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）とともに、ホスフェートの排出を制御することによってホスフェート恒常性において重要な役割を果たし、その一方消化管およびホルモンのビタミンＤが、食事からのホスフェートの吸収を制御することによってホスフェート恒常性におけるさらに別の重要な役割を果たす。
【０００５】
腎臓により、摂取された食品から吸収された、または骨から遊離した過剰なリンを排出する主要な経路がもたらされる。したがって、慢性腎疾患（ＣＫＤ）患者では、腎機能が悪化するにつれ、血清リンの血中レベルの上昇により副甲状腺によるＰＴＨの分泌が直接刺激され、次いで、これにより、より多くのリンが骨から遊離することによって恒常性がさらに増悪する。不全になった腎臓はもはや過剰なリンの負荷量を適切に処理することができないので、ＣＫＤ患者は、ホスフェートの摂取を減らすように自身の食事を制御しなければならない。血清リンレベルの増加は、ステージ３およびステージ４のＣＫＤ疾患の進行の初期に始まり、腎機能が低下するにつれて次第に悪化する。ステージ５のＣＫＤ患者（末期腎疾患またはＥＳＲＤとも称される）は、通常、リンを含めた過剰な毒素および代謝産物を除去するために定期的な透析を受け、それでもさらに、血清リンを許容できるレベルまで低減させるやり方として、食事によるホスフェートを拘束し、それにより、全身吸収を妨げるためにホスフェート結合剤を用いた処置を必要とする。米国では、透析患者のおよそ９０％がホスフェート制御産物で処置されている。
【０００６】
血清リンの上昇は、副甲状腺機能亢進症、骨異栄養症（ｏｓｔｅｏｄｙｓｔｒｏｐｙ）などの骨疾患および軟組織石灰化の発生および進行に関連づけられており、また、血液透析患者における死亡リスクの増加に関連している（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３）。重度の高リン酸血症（血清ホスフェートレベル＞６．５ｍｇ／ｄＬ（＞２．１０ｍｍｏｌ／Ｌ））は、血液透析（ＨＤ）患者における全体的な死亡率および心血管系の死亡率の増加に直接関連しており（Ｐａｌｍｅｒら、２０１１年、ＪＡＭＡ、３０５巻：１１１９〜１１２７頁）、さらには、中程度の高リン酸血症（３．０〜５．０ｍｇ／ｄＬ）がこれらの患者における心血管系のリスクの増加に関連している。現在、臨床ガイドラインでは、ホスフェートレベルを正常範囲（３．０〜５．０ｍｇ／ｄＬ（０．９７〜１．６１ｍｍｏｌ／Ｌ））内に維持することが推奨されている。しかし、中程度〜重度の高リン酸血症（ホスフェート、５．０１〜６．５ｍｇ／ｄＬ（１．６２〜２．１０ｍｍｏｌ／Ｌ））でさえも、それがＨＤ患者における独立した死亡率の危険因子であり、ホスフェート結合剤療法単独では必ずしも血清リンレベルを十分に低下させることができないので、対処する必要がある。
【０００７】
高リン酸血症は、（ａ）カルシウムイオンのレベルを低減させること；（ｂ）１，２５（ＯＨ）２Ｄ３の産生に干渉すること；および（ｃ）ＰＴＨの分泌に直接影響を及ぼすことによって、二次性副甲状腺機能亢進症（ＳＨＰＴ）およびＰＴＨの血中レベルの上昇も導く。これらのプロセスにより、高ターンオーバーの骨疾患および他の有害な過剰なＰＴＨの影響も導かれる。
【０００８】
現行の臨床ガイドラインでは、ホスフェートレベルを正常範囲（３．０〜５．０ｍｇ／ｄＬ（０．９７〜１．６１ｍｍｏｌ／Ｌ））内に維持することが推奨されている。血清リンを制御することにより、血液透析患者の臨床転帰および生存が改善されることが一般に認められている。血清リンを低減させるための手法としては、透析、食事性リン制限および経口ホスフェート結合剤が挙げられる。
【０００９】
血清ホスフェートは透析の最初の１〜２時間で急速に低下し、次いでプラトーに到達し、その間血清ホスフェートは比較的一定のままである。透析後、血清リン濃度は最初の数時間で急速に上昇し、一般には、６〜８時間後に透析前の値に近い濃度に到達する（非特許文献４；非特許文献５）。この現象は、「ホスフェートリバウンド（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｂｏｕｎｄ）」と称されている。いくつかの場合には、ホスフェートリバウンドにより、最初に存在していたレベルよりも高いホスフェートレベルが生じる。
【００１０】
リンの制御は、多くの場合、透析患者においては不十分なままである。したがって、血液透析患者における高リン酸血症を処置するための方法の継続的な必要性がある。特に、ホスフェートリバウンドを低下させるための方法が望まれる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｂｌｏｃｋら、１９９８年、Ａｍ  Ｊ．  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓ、３１巻：６０７〜６１７頁
【非特許文献２】Ｂｌｏｃｋら、２０００年、Ａｍ  Ｊ．  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓ、３５巻：１２２６〜１２３７頁
【非特許文献３】Ｐａｌｍｅｒら、２０１１年、ＪＡＭＡ、３０５巻：１１１９〜１１２７頁
【非特許文献４】Ｈａａｓら、１９９１年、Ｎｅｐｈｒｏｌ  Ｄｉａｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、２巻：１０８〜１１３頁
【非特許文献５】Ｓｕｇｉｓａｋｉら、１９８３年  Ｔｒａｎｓ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ａｒｔｉｆ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｏｒｇａｎｓ、２９巻：３８〜４３頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
一態様では、血液透析患者における高リン酸血症を処置するための方法が提供される。
【００１３】
別の態様では、血液透析患者におけるホスフェートリバウンドを低下させるための方法が提供される。
【００１４】
別の態様では、処置方法は、透析（血液透析または腹膜透析）を受けている患者に、式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（式中、Ｘ１は、チオール含有基を含むサブユニットであり；Ｘ５は、カチオン性サブユニットであり；Ｘ６は、非カチオン性サブユニットであり；Ｘ７は、カチオン性サブユニットであり；Ｘ２、Ｘ３およびＸ４のうちの少なくとも２つは、独立に、カチオン性サブユニットである）を含む化合物を投与するステップを含む。上記化合物は、血液透析後約５分以内、１０分以内、１５分以内、２０分以内、３０分以内、４５分以内、１時間以内、２時間以内、３時間以内、４時間以内、または、血液透析セッションが完了する前約３時間以内、２時間以内、１時間以内、４５分以内、３０分以内、２０分以内、１５分以内、１０分以内、５分以内に投与し、該投与は、血液透析前の血清リンレベルよりも低い血液透析後の血清リンレベルを、透析が完了した後少なくとも約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、２４時間、４８時間、７２時間の期間にわたって、または次の血液透析セッションまでの時間、維持するために有効である。
【００１５】
一実施形態では、血液透析が完了する約１５分前に始まり血液透析が完了した約３時間後に終わる期間内に上記化合物を投与し、該投与するステップは、血液透析前の血清リンレベルよりも低い血液透析後の血清リンレベルを、透析が完了した後少なくとも約６時間の期間にわたって維持するために有効である。
【００１６】
一実施形態では、上記アゴニストはＡｃ−ｃ（Ｃ）ａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号３）である。
【００１７】
別の実施形態では、上記アゴニストは、配列番号３の薬学的塩（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｓａｌｔ）である。例示的な実施形態は、配列番号３の塩酸塩であるアゴニストである。
【００１８】
一実施形態では、上記アゴニストを透析後約１時間以内または透析後約３０分以内に投与する。好ましい実施形態では、上記アゴニストを透析の最後の返血手順の間に投与する。別の実施形態では、アゴニストを透析が完了する前５時間以内に、毎日、透析セッションが完了する少なくとも約１時間前に投与する。一実施形態では、透析は血液透析である。
【００１９】
別の実施形態では、上記アゴニストを透析の最後の返血手順の間に投与する。
【００２０】
他の実施形態では、患者は、末期腎疾患または慢性腎疾患と診断されており、本明細書に記載の通り処置を受けている。
【００２１】
他の実施形態では、患者は、本明細書に記載の通り処置される前に、かつ／または処置されているときに、ホスフェートと結合する薬物で処置されている。
【００２２】
さらに他の実施形態では、患者は、糖尿病に伴う慢性腎疾患を有する。さらに他の実施形態では、患者は、透析によって処置されている高血圧症に関連する慢性腎疾患を有し、本明細書に記載の通り処置を受けている。他の実施形態では、患者は、二次性副甲状腺機能亢進症または原発性副甲状腺機能亢進症について透析によって処置されており、本明細書に記載の通り処置を受けている。
【００２３】
さらに別の態様では、血液透析を受けている患者に、カルシウム感知受容体アゴニストを投与するステップを含む方法であって、上記アゴニストを血液透析が終了した後約５分以内、１０分以内、１５分以内、２０分以内、３０分以内、４５分以内、１時間以内、２時間以内、３時間以内、４時間以内、または血液透析が完了する前約３時間以内、２時間以内、１時間以内、４５分以内、３０分以内、２０分以内、１５分以内、１０分以内、５分以内に投与し、該投与するステップが、血液透析前の血清リンレベルよりも低い血液透析後の血清リンレベルを、少なくとも約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、２４時間、４８時間、７２時間の期間にわたって、または次の血液透析が開始されるまでの時間、維持するために有効である方法が提供される。好ましい実施形態では、上記アゴニストを透析の最後の返血手順の間に投与する。
【００２４】
この態様の一実施形態では、カルシウム感知受容体アゴニストは、式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（式中、Ｘ１は、チオール含有基を含むサブユニットであり；Ｘ５は、カチオン性サブユニットであり；Ｘ６は、非カチオン性サブユニットであり；Ｘ７は、カチオン性サブユニットであり；Ｘ２、Ｘ３およびＸ４のうちの少なくとも２つは、独立に、カチオン性サブユニットである）の化合物ではない。
【００２５】
一実施形態では、カルシウム感知受容体アゴニストは、カルシウム模倣薬である。他の実施形態では、カルシウム模倣薬はシナカルセト塩酸塩（Ｃ２２Ｈ２２Ｆ３Ｎ・ＨＣｌ）である。
【００２６】
さらに別の態様では、少なくとも定期的に血液透析を受ける患者における高リン酸血症を処置するための方法が提供される。上記方法は、上記患者に、有効量のカルシウム感知受容体（ＣａＳＲ）アゴニストを投与するステップであって、該アゴニストを血液透析が終了した後約１８時間以内に、または血液透析が完了する前約３時間以内に投与し、該投与するステップは血液透析前の血清リンレベルよりも低い血液透析後の血清リンレベルを少なくとも約６時間の期間にわたって維持するために有効である、ステップを含む。
【００２７】
一実施形態では、上記アゴニストを透析が完了する前３０分以内に投与する。
【００２８】
一実施形態では、上記アゴニストはシナカルセト塩酸塩である。別の実施形態では、上記アゴニストは、式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（式中、Ｘ１は、チオール含有基を含むサブユニットであり；Ｘ５は、カチオン性サブユニットであり；Ｘ６は、非カチオン性サブユニットであり；Ｘ７は、カチオン性サブユニットであり；Ｘ２、Ｘ３およびＸ４のうちの少なくとも２つは、独立に、カチオン性サブユニットである）の化合物である。
【００２９】
一実施形態では、上記アゴニストはＡｃ−ｃ（Ｃ）ａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号３）またはその塩である。
【００３０】
他の態様では、少なくとも定期的に血液透析を受けている患者における血清リン濃度を制御するための方法が提供される。上記方法は、上記患者に、有効量のカルシウム感知受容体（ＣａＳＲ）アゴニストを投与するステップであって、該アゴニストを血液透析が終了した後約５分以内、１０分以内、１５分以内、２０分以内、３０分以内、４５分以内、１時間以内、２時間以内、３時間以内、４時間以内、または、血液透析が完了する前約３時間以内、２時間以内、１時間以内、４５分以内、３０分以内、２０分以内、１５分以内、１０分以内、５分以内に投与する、ステップを含む。一実施形態では、上記投与は、血液透析前の血清リンレベルよりも低い血液透析後の血清リンレベルを、少なくとも約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、２４時間、４８時間、７２時間の期間にわたって、または次の血液透析セッションが開始されるまでの時間、維持するために有効である。好ましい実施形態では、上記アゴニストを透析の最後の返血手順の間に投与する。
【００３１】
シナカルセト塩酸塩を経口投与した後、およそ２〜６時間にＣｍａｘが実現される。したがって、別の実施形態では、上記方法は、上記患者に、有効量のシナカルセト塩酸塩を投与するステップであって、シナカルセト塩酸塩を血液透析が終了した後約５分以内、１０分以内、１５分以内、２０分以内、３０分以内、４５分以内、１時間以内、２時間以内、３時間以内、４時間以内、または、血液透析が完了する前約９時間以内、８時間以内、７時間以内、６時間以内、５時間以内、４時間以内、３時間以内、２時間以内、１時間以内、４５分以内、３０分以内、２０分以内、１５分以内、１０分以内、５分以内に投与する、ステップを含む。一実施形態では、上記投与は、血液透析前の血清リンレベルよりも低い血液透析後の血清リンレベルを、少なくとも約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、２４時間、４８時間、７２時間の期間にわたって、または次の血液透析セッションが開始されるまでの時間、維持するために有効である。
【００３２】
別の態様では、血液透析を受けている患者における副甲状腺機能亢進症を処置するための化合物を投与するための投薬レジメンが提供される。上記投薬レジメンは、上記患者に、カルシウム感知受容体アゴニストを投与するステップであって、該アゴニストを血液透析が終了した後約５分以内、１０分以内、１５分以内、２０分以内、３０分以内、４５分以内、１時間以内、２時間以内、３時間以内、４時間以内、または血液透析が完了する前約３時間以内、２時間以内、１時間以内、４５分以内、３０分以内、２０分以内、１５分以内、１０分以内、５分以内に投与する、ステップを含む。好ましい実施形態では、上記アゴニストを透析の最後の返血手順の間に投与する。上記レジメンは、血液透析前の血清リンレベルよりも低い血液透析後の血清リンレベルを少なくとも約６時間の期間にわたって維持するために有効である。
【００３３】
別の態様では、透析を受ける被験体における高リン酸血症を処置するための方法であって、該被験体を本明細書に記載のＣａＳＲアゴニスト化合物で処置する方法が提供される。この処置は、透析前の血清リンレベルよりも低い透析後の血清リンレベルを、透析セッション間の期間、すなわち、透析と透析の間の（ｉｎｔｅｒｄｉａｌｙｔｉｃ）期間の持続時間にわたってもたらすために有効である。一実施形態では、上記透析後の血清リンレベルは、透析と透析の間の期間の持続時間にわたって、透析前の血清リンレベルよりも少なくとも約１０％、１５％、２０％または２５％低い。上記ＣａＳＲアゴニスト化合物は本明細書に記載の処置の実施形態のいずれかに従って、例えば、透析セッションが完了する前または透析セッションの後約５分以内、１０分以内、１５分以内、２０分以内、３０分以内、４５分以内、１時間以内、２時間以内、３時間以内、または４時間以内に投与する。
【００３４】
本明細書に記載の態様のうちのいずれかの実施形態では、上記ＣａＳＲアゴニストは、配列ｃａｒｒｒａｒ（配列番号２）を含む化合物であってよい。他の実施形態では、上記ＣａＳＲアゴニストは、ペプチドｃａｒｒｒａｒ（配列番号２）で構成されるコンジュゲートであり、そのペプチドはそのＮ末端残基でＣｙｓ残基とコンジュゲートしている。好ましい実施形態では、コンジュゲートはＡｃ−ｃ（Ｃ）ａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号３）である。
本発明は、例えば、以下を提供する。
（項目１）
血液透析を受けている患者における慢性腎疾患に伴う骨ミネラル代謝異常（ＣＫＤ−ＭＢＤ）の処置において使用するための、式：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７
を含み、ここで、
Ｘ１は、チオール含有基を含むサブユニットであり；Ｘ５は、カチオン性サブユニットであり；Ｘ６は、非カチオン性サブユニットであり；Ｘ７は、カチオン性サブユニットであり；
Ｘ２、Ｘ３およびＸ４のうちの少なくとも２つは、独立に、カチオン性サブユニットである、
化合物を含む組成物であって、
血液透析が完了する約１５分前に始まり血液透析が完了した約３時間後に終わる期間内に投与され、該投与するステップが、透析後少なくとも約６時間の期間にわたって血液透析前の血清リンレベルよりも低い血液透析後の血清リンレベルを維持するために有効である、組成物。
（項目２）
前記化合物がＡｃ−ｃ（Ｃ）ａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号３）を含む、項目１に記載の組成物。
（項目３）
前記化合物が配列番号３の薬学的に許容される塩を含む、項目２に記載の組成物。
（項目４）
前記塩が塩酸塩である、項目３に記載の組成物。
（項目５）
前記化合物が、血液透析が完了する約１５分前に始まり血液透析の約１時間後に終わる期間内に投与される、項目１から４までのいずれか一項に記載の組成物。
（項目６）
前記化合物が透析の最後の返血手順の間に投与される、項目１から４までのいずれか一項に記載の組成物。
（項目７）
前記患者がホスフェート結合剤で処置されている、項目１から６までのいずれか一項に記載の組成物。
（項目８）
前記投与するステップが、血液透析前の血清リンレベルよりも少なくとも約１０％低い血液透析後の血清リンレベルを透析と透析の間の期間にわたって維持するために有効である、項目１から６までのいずれか一項に記載の組成物。
（項目９）
患者が二次性副甲状腺機能亢進症または原発性副甲状腺機能亢進症について処置されている、項目１から６までのいずれか一項に記載の組成物。
（項目１０）
血液透析を受けている患者のＣＫＤ−ＭＢＤを処置するための化合物を投与するための投薬レジメンであって、該レジメンは、該患者に、経口カルシウム感知受容体アゴニストを投与するステップを含み、該アゴニストを血液透析が完了する約６時間前に始まり血液透析が完了した約１時間後に終わる期間内に投与し、該投与するステップが、透析が完了した後少なくとも約６時間の期間にわたって、血液透析前の血清リンレベルよりも低い血液透析後の血清リンレベルを維持するために有効である、投薬レジメン。
（項目１１）
カルシウム模倣薬がシナカルセト塩酸塩（Ｃ２２Ｈ２２Ｆ３Ｎ・ＨＣｌ）である、項目１４に記載の投薬レジメン。
（項目１２）
前記患者がホスフェート結合剤で処置されている、項目１０または１１に記載の投薬レジメン。
（項目１３）
前記患者が二次性副甲状腺機能亢進症または原発性副甲状腺機能亢進症について処置されている、項目１０または１１に記載の投薬レジメン。
（項目１４）
前記投与するステップが、血液透析前の血清リンレベルよりも少なくとも約１０％低い血液透析後の血清リンレベルを、透析と透析の間の期間にわたって維持するために有効である、項目１０または１１に記載の投薬レジメン。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】図１は、透析の直後に配列番号３またはプラセボを静脈内注射によって投与した後の血清中のインタクトなＰＴＨのレベルのパーセント変化を示すグラフである。プラセボ、黒塗りの丸；５ｍｇの配列番号３、白抜きの丸；１０ｍｇの配列番号３、白抜きの逆三角形；２０ｍｇの配列番号３、黒塗りの逆三角形；４０ｍｇの配列番号３、黒塗りの四角；６０ｍｇの配列番号３、白抜きの四角。
【図２】図２は、透析後に配列番号３またはプラセボを注射によって投与した後、透析と透析の間隔（すなわち、血液透析の直後およびその後の次に被験体が血液透析を受けるまでの約７２時間）の間の血清リンレベルのパーセント変化を示すグラフである。プラセボ、黒塗りの丸；５ｍｇの配列番号３、白抜きの丸；１０ｍｇの配列番号３、白抜きの逆三角形；２０ｍｇの配列番号３、黒塗りの逆三角形；４０ｍｇの配列番号３、黒塗りの四角；６０ｍｇの配列番号３、白抜きの四角。
【図３】図３は、配列番号３を受けている５ｍｇ用量群、１０ｍｇ用量群および２０ｍｇ用量群についての血清リン（ｍｇ／ｄＬ）の平均差異（コホート内の活性対プラセボ）（フェーズ１ユニット（Ｐｈａｓｅ  １  Ｕｎｉｔ）から退院する際に測定した）を示すグラフである。
【００３６】
本主題は、本明細書に含まれる好ましい実施形態および実施例の以下の詳細な説明を参照することによってより容易に理解することができる。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
Ｉ．定義
本出願の範囲内では、別段の指定のない限り、本出願の用語の定義および技法の実例は、いくつかの周知の参考文献、例えば：Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｊ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９年）；Ｇｏｅｄｄｅｌ、Ｄ．編、Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８５巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ（１９９１年）；「Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」Ｄｅｕｔｓｈｃｅｒ、Ｍ．Ｐ．編、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ（１９８９年）；Ｉｎｎｉｓら、ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ（１９９０年）；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、Ｒ．Ｉ．、Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ：Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ、第２版、Ａｌａｎ  Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＮＹ（１９８７年）；Ｍｕｒｒａｙ、Ｅ．Ｊ．編、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、１０９〜１２８頁、Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．、Ｃｌｉｆｔｏｎ、ＮＪおよびＬｅｗｉｎ、Ｂ．、Ｇｅｎｅｓ  ＶＩ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９７年）などのいずれかにおいて見ることができる。
【００３８】
本明細書で使用される単数形「ａ（１つの）」、「ａｎ（１つの）」および「ｔｈｅ（その）」は、別段の指定のない限り、複数の参照対象を含む。例えば、「ａ（１つの）」モジュレーターペプチドは、１つ以上のモジュレーターペプチドを包含する。
【００３９】
本明細書で使用される、「アミノ酸」は、天然アミノ酸および非天然アミノ酸を指す。２０種の天然に存在するアミノ酸（Ｌ−異性体）は接頭辞「Ｌ−」を持つ（アキラルであるグリシン以外）３文字コード、また大文字の１文字コードで示される：アラニン（「Ｌ−Ａｌａ」または「Ａ」）、アルギニン（「Ｌ−Ａｒｇ」または「Ｒ」）、アスパラギン（「Ｌ−Ａｓｎ」または「Ｎ」）、アスパラギン酸（「Ｌ−Ａｓｐ」または「Ｄ」）、システイン（「Ｌ−Ｃｙｓ」または「Ｃ」）、グルタミン（「Ｌ−Ｇｌｎ」または「Ｑ」）、グルタミン酸（「Ｌ−Ｇｌｕ」または「Ｅ」）、グリシン（「Ｇｌｙ」または「Ｇ」）、ヒスチジン（「Ｌ−Ｈｉｓ」または「Ｈ」）、イソロイシン（「Ｌ−Ｉｌｅ」または「Ｉ」）、ロイシン（「Ｌ−Ｌｅｕ」または「Ｌ」）、リジン（「Ｌ−Ｌｙｓ」または「Ｋ」）、メチオニン（「Ｌ−Ｍｅｔ」または「Ｍ」）、フェニルアラニン（「Ｌ−Ｐｈｅ」または「Ｆ」）、プロリン（「Ｌ−Ｐｒｏ」または「Ｐ」）、セリン（「Ｌ−Ｓｅｒ」または「Ｓ」）、トレオニン（「Ｌ−Ｔｈｒ」または「Ｔ」）、トリプトファン（「Ｌ−Ｔｒｐ」または「Ｗ」）、チロシン（「Ｌ−Ｔｙｒ」または「Ｙ」）およびバリン（「Ｌ−Ｖａｌ」または「Ｖ」）。Ｌ−ノルロイシンおよびＬ−ノルバリンは、それぞれ（ＮＬｅｕ）および（ＮＶａｌ）と表すことができる。キラルである１９種の天然に存在するアミノ酸は、接頭辞「Ｄ−」を持つ３文字コードまたは小文字の１文字コードで示される対応するＤ−異性体を有する：アラニン（「Ｄ−Ａｌａ」または「ａ」）、アルギニン（「Ｄ−Ａｒｇ」または「ｒ」）、アスパラギン（「Ｄ−Ａｓｎ」または「ａ」）、アスパラギン酸（「Ｄ−Ａｓｐ」または「ｄ」）、システイン（「Ｄ−Ｃｙｓ」または「ｃ」）、グルタミン（「Ｄ−Ｇｌｎ」または「ｑ」）、グルタミン酸（「Ｄ−Ｇｌｕ」または「ｅ」）、ヒスチジン（「Ｄ−Ｈｉｓ」または「ｈ」）、イソロイシン（「Ｄ−Ｉｌｅ」または「ｉ」）、ロイシン（「Ｄ−Ｌｅｕ」または「ｌ」）、リジン（「Ｄ−Ｌｙｓ」または「ｋ」）、メチオニン（「Ｄ−Ｍｅｔ」または「ｍ」）、フェニルアラニン（「Ｄ−Ｐｈｅ」または「ｆ」）、プロリン（「Ｄ−Ｐｒｏ」または「ｐ」）、セリン（「Ｄ−Ｓｅｒ」または「ｓ」）、トレオニン（「Ｄ−Ｔｈｒ」または「ｔ」）、トリプトファン（「Ｄ−Ｔｒｐ」または「ｗ」）、チロシン（「Ｄ−Ｔｙｒ」または「ｙ」）およびバリン（「Ｄ−Ｖａｌ」または「ｖ」）。Ｄ−ノルロイシンおよびＤ−ノルバリンは、それぞれ（ｄＮＬｅｕ）および（ｄＮＶａｌ）と表すことができる。「アミノ酸残基」は、多くの場合、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質の単量体サブユニットに関して使用され、「アミノ酸」は、多くの場合、遊離分子に関して使用されるが、当技術分野におけるこれらの用語の使用は、重複および変動する。「アミノ酸」および「アミノ酸残基」という用語は互換的に使用され、文脈に応じてペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質の遊離分子または単量体サブユニットを指す場合がある。
【００４０】
「カチオン性アミノ酸」は、例えば側鎖、または「Ｒ基」が、生理的なｐＨでプロトンを受け取って正に荷電し得るアミン官能基または他の官能基、例えばグアニジン部分またはイミダゾール部分などを含有するアミノ酸残基の場合のように、生理的なｐＨ（７．４）で正味の正電荷を有するアミノ酸残基を意味する。カチオン性アミノ酸残基としては、アルギニン、リジン、ヒスチジン、２，３−ジアミノプロピオン酸（Ｄａｐ）、２，４−ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、オルニチン、およびホモアルギニンが挙げられる。
【００４１】
「カチオン性サブユニット」は、生理的なｐＨ（７．４）で正味の正電荷を有するサブユニットを意味する。
【００４２】
本明細書で使用される、「保存されたアミノ酸置換」は、選択されたポリペプチドまたはタンパク質の活性または三次構造物に顕著な変化をもたらさない置換である。そのような置換は、一般には、選択されたアミノ酸残基を同様の物理化学的性質を有する異なるアミノ酸残基と交換することを含む。アミノ酸およびアミノ酸残基を物理化学的性質によってグループ化することは、当業者に公知である。例えば、天然に存在するアミノ酸の中で、同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが当技術分野で定義されており、それらとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分枝側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。
【００４３】
本明細書で使用される、「化学的架橋」は、２つ以上の分子の共有結合を指す。
【００４４】
ペプチドまたはペプチド断片は、それが少なくとも１つの、親ペプチドまたは親ポリペプチドの５つのアミノ酸残基、より好ましくは８つのアミノ酸残基の連続した配列と同一または相同であるアミノ酸配列を有する場合に、親ペプチドまたは親ポリペプチドに「由来する」。
【００４５】
本明細書に記載の化合物は、薬学的に許容される塩の形態であってよい。薬学的に許容される塩としては、酸付加塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩（ｓｕｌｆｕｒａｔｅ）、硝酸塩、リン酸塩（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｔｅ）、酢酸塩、プロピオン酸塩、グリコール酸塩、ピルビン酸塩、シュウ酸塩、リンゴ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩（ｔａｒｔａｒａｔｅ）、クエン酸塩、安息香酸塩、桂皮酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ｐ−トルエン−スルホン酸塩、サリチル酸塩など、および塩基付加塩、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、リチウム、アルミニウム、亜鉛、アンモニウム、エチレンジアミン、アルギニン、ピペラジンなどが挙げられる。
【００４６】
本明細書で使用される、「副甲状腺機能亢進症」という用語は、別段の指定のない限り、原発性の、二次性の、および三次性の副甲状腺機能亢進症を指す。
【００４７】
本明細書で使用される、「単離された」または「精製された」ポリペプチドまたはその生物学的に活性な部分は、組換えＤＮＡ技法によって産生された場合は、細胞材料の一部を、または、化学的に合成された場合は、化学的前駆体もしくは他の化学物質を含まない。「細胞材料を実質的に含まない」という言葉は、ポリペプチドが、それが天然に生じた、または組換えによって産生された細胞の細胞構成成分の一部から分離されているポリペプチド調製物を包含する。ポリペプチドまたはその生物学的に活性な部分が組換えによって産生される場合、培地を実質的に含まない、すなわち、培地が、ポリペプチド調製物の体積の約２０％未満、より好ましくは約１０％未満、および最も好ましくは約５％未満に相当することも好ましい。「化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」という言葉は、ポリペプチドが、ポリペプチドの合成に関与する化学的前駆体または他の化学物質から分離されているポリペプチド調製物を包含する。一実施形態では、「化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」という言葉は、約３０％未満の（乾燥重量で）化学的前駆体または他の化学物質、好ましくは約２０％未満の化学的前駆体または他の化学物質、より好ましくは約１５％未満の化学的前駆体または他の化学物質、さらにより好ましくは約１０％未満の化学的前駆体または他の化学物質、および最も好ましくは約５％未満の化学的前駆体または他の化学物質を有するポリペプチド調製物を包含する。好ましい実施形態において、単離されたポリペプチド、またはその生物学的に活性な部分は、ドメインポリペプチドを得たのと同じ生物体由来の汚染ポリペプチドを欠いている。
【００４８】
「非カチオン性アミノ酸」は、例えば、側鎖、または「Ｒ基」が中性（中性極性および中性非極性）のアミノ酸残基および酸性のアミノ酸残基の場合のように、生理的なｐＨ（７．４）で電荷を有さない、または正味の負電荷を有するアミノ酸残基を意味する。非カチオン性アミノ酸としては、炭化水素アルキル部分または芳香族部分であるＲ基を持つ残基（例えば、バリン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン）；中性の、極性Ｒ基を持つ残基（アスパラギン、システイン、グルタミン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン）；または中性の、非極性Ｒ基を持つ残基（グリシン、メチオニン、プロリン、バリン、イソロイシン）が挙げられる。酸性のＲ基を持つ非カチオン性アミノ酸としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられる。
【００４９】
「ポリマー」は、共有結合によってつながった、２つ以上の同一のサブユニットまたは同一でないサブユニットの直鎖を指す。
【００５０】
本明細書で使用される、「ペプチド」および「ポリペプチド」は、そのサイズにかかわらず、ペプチド結合によって連結したアミノ酸残基の鎖でできている任意のポリマーを指す。「タンパク質」は、多くの場合、比較的大きなポリペプチドに関して使用され、および「ペプチド」は、多くの場合、小さなポリペプチドに関して使用されるが、当技術分野におけるこれらの用語の使用は、重複および変動する。したがって、簡単にするために、「ペプチド」という用語を本明細書で使用するが、ある場合には、当技術分野では同じポリマーを「ポリペプチド」と称することもある。別段の指定のない限り、ペプチドの配列は、アミノ末端からカルボキシル末端の順に示されている。
【００５１】
本明細書で使用される「チオール含有基」または「チオール含有部分」は、硫黄−水素結合（−ＳＨ）を含み、生理的条件下で別のチオールと反応してジスルフィド結合を形成することができる官能基を意味する。別のチオールとジスルフィド結合を形成することができるチオールは、本明細書では「反応性チオール」と称される。好ましい実施形態では、チオール含有基は化合物の主鎖から６原子未満離れている。より好ましい実施形態では、チオール含有基は構造物（−ＳＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−）−を有する。
【００５２】
本明細書で使用される、「被験体」は、ヒト被験体または動物被験体を指す。同様に、「患者」は、ヒト患者または動物患者を指す。
【００５３】
「サブユニット」は、２つ以上の他の単量体単位につながってポリマー化合物を形成している単量体単位を意味し、サブユニットはポリマー化合物の要素の最も短い繰り返しパターンである。例示的なサブユニットはアミノ酸であり、それが連結すると、ポリマー化合物、例えば当技術分野でペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質と称されるポリマー化合物が形成される。
【００５４】
本明細書で使用される、「治療有効量」は、所望の治療効果をもたらすために必要な量である。
【００５５】
別段の指定がない限り、本明細書で言及される全ての文書は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００５６】
ＩＩ．処置方法
一態様では、高リン酸血症の処置を必要とする被験体において高リン酸血症を処置するための方法が提供される。他の態様では、透析患者における血清リンレベルを調整する、制御する、および／または低下させる方法が提供される。他の態様では、少なくとも定期的な透析を受けている患者の処置を改善する方法が提供される。別の態様では、透析を受けている被験体におけるホスフェートリバウンドを低下させるためおよび／または減弱させるための方法が提供される。これらの態様および態様の複数の実施形態をここで記載する。
【００５７】
実施例１に記載の通り、本明細書に記載の処置方法の裏づけとして試験を行い、血液透析を受けている末期腎疾患（ＥＳＲＤ）の被験体を、カルシウム模倣剤で処置した。試験した患者は二次性副甲状腺機能亢進症（ＳＨＰＴ）と診断され、定期的な血液透析セッションが必要であった。本試験のために選択した例示的な作用剤は、下記の式の、配列番号３で識別される配列を有するカルシウム感知受容体アゴニスト化合物であった。上記化合物を、血液透析のすぐ後に、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇまたは６０ｍｇの用量で、上記患者を処置群に無作為に割り付けた後に、静脈内注射によって投与した。上記化合物で処置した後３日間にわたって、インタクトなＰＴＨおよびリンの血中濃度を評価した。結果が図１〜２に示されている。
【００５８】
図１に認められるように、透析後に配列番号３を注射した後、血液中のインタクトなＰＴＨのレベルが６０〜８０％急速に減少し、その後、次の４８時間にわたってベースラインまで用量依存的に戻る。関連して血清カルシウムがわずかに（１０〜１６％）減少する。図２に認められるように、透析によって減少した血清リンレベルは、最初の８時間にわたってプラトーまで急速に上昇し、次いで、残りの透析と透析の間隔の間にそれよりもゆっくりと増大した。プラセボ被験体（黒塗りの丸）では、平均の血清リンは投薬後の最初の約３６時間の間に急速に増大し、その後、退院のときには、リンレベルはベースラインレベルの８４％超のプラトーに至った。驚いたことに、リンのプラトーレベルへの戻りの速度は、配列番号３を投与することによって著しく改変された。約５ｍｇ超のアゴニスト化合物の用量（白抜きの丸）により、透析後の血清リンの上昇が顕著に減弱または減少した。退院のときに、２０〜６０ｍｇの配列番号３によって識別されるアゴニストを受けている被験体における血清リンのベースラインからの平均のパーセント増加は、２３％〜６０％にわたり、プラセボよりも少なくとも約２４パーセントポイント（ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ  ｐｏｎｔ）低かった。
【００５９】
このデータは、血液透析セッションの完了後、血清リン濃度は最初の数時間で急速に上昇することを示している。すなわち、血清リンは血液透析後にリバウンドし、透析が完了した後の最初の約１０時間以内に透析前の値に戻り、透析が完了してからおよそ１８時間後に透析後のベースラインレベルの約８０％超のプラトーに到達する。表１は、血液透析後間もない（２時間以内）が配列番号３またはプラセボを静脈内注射によって投与する前（「投薬前」）のＥＳＲＤ被験体におけるＰＴＨおよびリンについての平均ベースライン処置前値を示す。プラセボを受けているＥＳＲＤ被験体における血清リンレベルは、透析が完了した後の最初の３〜１０時間の間に最も急速に増大（リバウンド）する。理論に束縛されることを望むものではないが、透析後に血清リンが８０〜１００％リバウンドしたことは、細胞内空間および／もしくは骨からのホスフェートの動員、または、おそらく、透析によってホスフェートが除去されることに応答し、そしておそらく透析によってホスフェートが除去されることよって誘導される消化管からのホスフェートの吸収が刺激されることに起因する可能性があると考えられる。
【００６０】
【表１】
0005982473.tif 000002
透析処置と関連して上記患者にＣａＳＲアゴニストをある特定の期間内に投与する場合、リンのリバウンドを低下させることができることが見いだされた。図２に示されているように、ＣａＳＲアゴニスト（配列番号３）を５ｍｇ超の用量で静脈内投与することにより、透析後の血清リンレベルのリバウンドが劇的に減弱した。１０ｍｇ、２０ｍｇ、４０ｍｇまたは６０ｍｇの用量のＣａＳＲアゴニスト（例えば、配列番号３）を透析が完了する直前または透析直後に投与することにより、最初の３〜４時間でリンのわずかな増大のみが示され、透析後４〜１８時間で血清リンレベルの増大が劇的に減弱または鈍化し、したがって、続く透析後１８〜７２時間の期間の、透析後のベースラインレベルからのパーセント増大によって測定された血清リンの増大はわずか〜中程度であった。驚いたことに、これらのデータは、ＥＳＲＤ患者を、ＣａＳＲアゴニストまたはカルシウム模倣薬で処置すると、透析後の最初の１８時間に透析後の血清リン濃度のリバウンドが劇的に減弱または低下することを示している。これらのデータは、血清リンのリバウンドの大半が透析後の最初の８〜１０時間以内に起こることを示しており、また、予想外に、透析後の最初の８〜１０時間以内にＣａＳＲアゴニストをＥＳＲＤ患者に投与することによって血清リンのリバウンドの有意な減弱または鈍化をもたらすことができる域（ｗｉｎｄｏｗ）が存在することを示している。
【００６１】
したがって、第１の態様では、透析を受けている患者を、透析セッションが完了した後約５分以内、１０分以内、１５分以内、２０分以内、３０分以内、４５分以内、１時間以内、２時間以内、３時間以内、４時間以内、または透析セッションが完了する約３時間前、２時間前、１時間前、４５分前、３０分前、２０分前、１５分前、１０分前、５分前に、ＣａＳＲアゴニスト化合物で処置する。好ましい実施形態では、上記ＣａＳＲアゴニスト化合物を透析の最後の返血手順の間に投与する。当業者には理解される通り、透析とは血液透析または腹膜透析が意図されている。血液透析セッションは、一般には、３〜５時間の長さであり、「透析セッション」または「血液透析セッション」と称することは、本明細書では、持続時間ＴＤの透析手順に関し、ＴＤは、１時間以上、２時間以上、２．５時間以上、３時間以上、３．５時間以上、４時間以上、４．５時間以上、５時間以上、または、代替の実施形態では、１〜１０時間、もしくは２〜８時間、もしくは２〜６時間、もしくは３〜５時間であってよい。ＴＤは、第１の部分と第２の部分に分離することができ、該第１の部分は持続時間ＴＤの総計時間の第１の半分に対応し、該第２の部分は、持続時間ＴＤの総計時間の第２の半分に対応する。一実施形態では、持続時間ＴＤの透析セッションの第２の部分において上記透析患者に上記アゴニスト化合物を投与する。別の実施形態では、ＴＤを３つまたは４つの均等な部分に分離し（３分の１または４分の１）持続時間ＴＤの透析セッションの後半３分の１または持続時間ＴＤの透析セッションの最後の４分の１において、上記透析患者に上記アゴニスト化合物を投与する。例えば、ＴＤが３時間である透析セッションでは、一実施形態において、ＴＤが３つに分けられる場合、透析セッションの最後の１時間以内に上記アゴニストを投与する、または、ＴＤが４つに分けられる場合は透析セッションの最後の４５分以内に上記アゴニストを投与する。好ましい実施形態では、持続時間ＴＤの透析セッションが完了する３０分前、２０分前、１５分前、１０分前、５分前または１分前に上記アゴニストを投与する。
【００６２】
他の実施形態では、持続時間ＴＤの透析セッションが完了したらすぐに、または、持続時間ＴＤという時間を有する透析セッションが完了した後少なくとも１８時間以内、１５時間以内、１０時間以内、８時間以内、５時間以内、３時間以内、２時間以内、１時間以内、３０分以内、２０分以内、１０分以内、もしくは５分以内に、血液透析患者に上記アゴニストを投与する。一実施形態では、血液透析が完了した後、２時間以内、３時間以内、４時間以内、５時間以内、６時間以内、７時間以内、８時間以内、９時間以内、１０時間以内、１８時間以内、または２０時間以内に上記ＣａＳＲアゴニストを上記被験体に投与する。別の実施形態では、透析の３０〜６０分後、１〜２時間後、２〜３時間後、３〜５時間後、５〜８時間後、８〜１０時後間、１０〜１５時間後、１５〜１８時間後に上記化合物を上記被験体に投与する。
【００６３】
好ましい実施形態では、透析の最後にまたは透析後できるだけ早く上記ＣａＳＲアゴニストを投与する。いくつかの実施形態では、透析中、または透析が終わる前３時間以内、２時間以内、１時間以内、もしくは３０分以内に上記ＣａＳＲアゴニストを投与する。
【００６４】
図３に示されているように、ＣａＳＲアゴニスト（配列番号３）を１０ｍｇおよび２０ｍｇ以上の用量で静脈内投与することにより、透析後の血清リンレベルの増大またはリバウンドを劇的に減弱させることができ、これは、単回投与した後の０．５ｍｇ／ｄＬ〜１ｍｇ／ｄＬ以上の平均の血清ホスフェートの低下に変換することができる。これらの効果はＣａＳＲアゴニストを長期投薬することによりさらに増強することができ、ここで、上記処置を各透析セッションとともに施行し（それは一般には、血液透析とともに１週間当たり３回行う）、また、上記処置を、透析中または透析後すぐに徹底して施行することで、透析後の血清リンのリバウンドを減弱または鈍化させることが意図されている。
【００６５】
一実施形態では、上記患者の血清リンは、透析後の最初の１時間に１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満、または６０％未満増大する。別の実施形態では、上記患者の血清リンは、透析後の最初の２時間に１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満、または６０％未満増大する。一実施形態では、上記患者の血清リンは、透析後の最初の３時間に１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満、または６０％未満増大する。別の実施形態では、上記患者の血清リンは、透析後の最初の４時間に１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満、または６０％未満増大する。別の実施形態では、上記患者の血清リンは、透析後の最初の５時間に１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満、または６０％未満増大する。別の実施形態では、上記患者の血清リンは、透析後の最初の６時間に１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満、または６０％未満増大する。別の実施形態では、上記患者の血清リンは、透析後の最初の７時間に１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満、または６０％未満増大する。
【００６６】
一実施形態では、上記患者は血液透析を受けたまたは血液透析を受けているところであり、上記患者の血清リンは、上記ＣａＳＲアゴニストを投与した後の最初の３時間または６時間に１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満、または６０％未満増大する。別の実施形態では、上記患者は血液透析を受けたまたは血液透析を受けているところであり、上記患者の血清リンは、上記ＣａＳＲアゴニストを投与した後の最初の４時間または６時間に１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満、または６０％未満増大する。別の実施形態では、上記患者は血液透析を受けたまたは血液透析を受けているところであり、上記患者の血清リンは、上記ＣａＳＲアゴニストを投与した後の最初の５時間に１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満、または６０％未満増大する。別の実施形態では、上記患者は血液透析を受けたまたは血液透析を受けているところであり、上記患者の血清リンは、上記ＣａＳＲアゴニストを投与した後の最初の６時間に１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満、または６０％未満増大する。別の実施形態では、上記患者は血液透析を受けたまたは血液透析を受けているところであり、上記患者の血清リンは、上記ＣａＳＲアゴニストを投与した後の最初の７時間に１０％未満、２０％未満、３０％未満、４０％未満、５０％未満、または６０％未満増大する。
【００６７】
一実施形態では、上記患者に投与されるＣａＳＲアゴニストの用量は、約１０ｍｇ〜約２０ｍｇ、約１０ｍｇ〜約３０ｍｇ、約２０ｍｇ〜約３０ｍｇ、約２０ｍｇ〜約４０ｍｇ、約３０ｍｇ〜約５０ｍｇ、約４０ｍｇ〜約６０ｍｇ、または約５０ｍｇ〜約８０ｍｇである。別の実施形態では、上記患者に投与される上記ＣａＳＲアゴニストの用量は、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、または約８０ｍｇである。
【００６８】
一実施形態では、上記患者に投与されるＣａＳＲアゴニストの上記用量は、１０〜２０ｍｇ、１０〜３０ｍｇ、２０〜３０ｍｇ、２０〜４０ｍｇ、３０〜５０ｍｇ、または４０〜６０ｍｇである。別の実施形態では、上記血液透析患者に投与される上記ＣａＳＲアゴニストの上記用量は、１０ｍｇ未満、２０ｍｇ未満、３０ｍｇ未満、４０ｍｇ未満、５０ｍｇ未満、６０ｍｇ未満、７０ｍｇ未満、または８０ｍｇ未満である。
【００６９】
一実施形態では、上記患者はホスフェート結合剤で処置されている。しかし、別の実施形態では、上記患者はホスフェート結合剤で処置されていない。
【００７０】
一実施形態では、従来の血液透析処置単独では、上記患者の血清リンレベルを調節するためには不十分である。
【００７１】
一実施形態では、従来の血液透析処置とホスフェート結合剤の投与の組み合わせは、上記患者の血清リンレベルを調節するためには不十分である。
【００７２】
一実施形態では、従来の血液透析処置と食事制限の組み合わせは、上記患者の血清リンレベルを調節するためには不十分である。
【００７３】
一実施形態では、従来の血液透析処置と、ホスフェート結合剤および食事制限との組み合わせは、上記患者の血清リンレベルを調節するためには不十分である。
【００７４】
一実施形態では、上記患者は、ビタミンＤまたはビタミンＤ類似体も摂取している。
【００７５】
高リン酸血症の他の原因としては、未熟新生児においてリンリッチ牛乳によって生じる外因性のリン負荷または吸収の増大、静脈内リン補充物、白リンによる熱傷、ＰＯ３４を含有する浣腸または急性リン中毒が挙げられる。高リン酸血症は、腫瘍溶解症候群、横紋筋融解症、腸梗塞、悪性高熱、熱射病、酸塩基障害、有機酸アシドーシス、乳酸アシドーシス、ケトアシドーシス、呼吸性アシドーシス、または慢性呼吸性アルカローシスに起因する内在性の負荷の増大に起因する可能性がある。高リン酸血症は、腎不全、副甲状腺機能低下症、偽性副甲状腺機能低下症、ビタミンＤ中毒症、成長ホルモン、インスリン様増殖因子−１、グルココルチコイド退薬症状、Ｍｇ２＋欠乏症、腫瘍状石灰沈着症、ジホスホネート療法または低ホスファターゼ血症に起因する尿中排出の低下によって引き起こされる可能性がある。本明細書に開示されている投与方法は、上記の原因の任意の１つまたは複数に起因する高リン酸血症と診断された被験体を処置するために有用であり得ることが理解される。
【００７６】
本明細書に開示されている処置のための方法は、種々の患者集団を処置するために有用である。例えば、高リン酸血症を相伴う血液透析患者を処置するための、従来の血液透析処置単独では血清ホスフェートレベルを調節するためには不十分である患者を処置するための方法が提供される。代替の態様では、リン制限食を摂っている血液透析患者を処置するための方法が提供される。ホスフェート結合剤を投与されている血液透析患者および／またはビタミンＤを摂取しており、血清リンの増大を相伴なって経験している血液透析患者を処置するための方法も提供される。
【００７７】
本明細書に記載の任意の態様または実施形態では、上記ＣａＳＲアゴニストの任意の１つまたは複数を、本明細書に開示されている投与される化合物の範囲から個別に除外または除去することが意図されている。ある特定の実施形態では、配列番号１６２〜１８２の任意の１つまたは複数によって識別されるペプチドが、個々に、または任意の組み合わせで、特許請求された方法から排除される。
【００７８】
例えば、一態様では、例えば、ＳＨＰＴまたはＣＫＤまたはＥＳＲＤの透析患者を処置するための方法が提供され、該方法では、透析（好ましくは血液透析）が終了した後約１８時間以内、または透析（好ましくは血液透析）が終了した後約６時間以内、４時間以内、３時間以内、２時間以内、１時間以内、３０分以内、２０分以内、１０分以内、または９分以内、８分以内、７分以内、６分以内、５分以内、４分以内、３分以内、２分以内、または１分以内にＣａＳＲアゴニストを投与する。このように上記ＣａＳＲを投与することは、透析前の血清リンレベルよりも低い透析後の血清リンレベルを少なくとも６時間の期間にわたって、より好ましくは２４時間の期間にわたって、さらにより好ましくは３６時間、４８時間、６０時間または７２時間の期間にわたって維持するために有効である。一実施形態では、上記透析後の血清リンレベルは、透析セッションの間（透析と透析の間の期間とも称される）の持続時間にわたって上記患者の透析前の血清リンレベルよりも低いままである。この方法の一実施形態では、上記ＣａＳＲアゴニストは、式Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（式中、Ｘサブユニットは本明細書で定義されている通りである）の化合物ではない。
【００７９】
別の態様では、透析を受ける被験体における高リン酸血症を処置するための方法が提供され、該方法では、上記被験体を本明細書に記載のＣａＳＲアゴニスト化合物で処置する。上記処置は、透析前の血清リンレベルよりも低い透析後の血清リンレベルを、透析と透析の間の期間の持続時間にわたってもたらすために有効である。一実施形態では、上記透析後の血清リンレベルは、上記透析と透析の間の期間の持続時間にわたって透析前の血清リンレベルよりも少なくとも約１０％または２５％低い。本明細書に記載の処置の実施形態のいずれかに従って、例えば、透析セッションが完了する前または透析セッション後約２時間以内、４時間以内、６時間以内、１０時間以内、もしくは１８時間以内に上記ＣａＳＲアゴニスト化合物を投与する。
【００８０】
ＩＩＩ．カルシウム感知受容体アゴニスト化合物および組成物
本明細書に記載の方法は、被験体にＣａＳＲアゴニストを投与するステップを含む。そのようなアゴニストは、米国特許第６，０１１，０６８号および同第６，０３１，００３号および米国特許公開第２０１１／００２８３９４号および同第２００９／００２３６５２号（それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【００８１】
予想外に、ＣＫＤに罹患しており、透析を必要としている被験体にこれらの化合物を投与することにより、透析後の血清リンの蓄積が阻害されるまたは低下することが見いだされた。
【００８２】
一実施形態では、上記方法は、上記患者にＣａＳＲアゴニストを投与するステップを含む。一実施形態では、上記ＣａＳＲアゴニストはカルシウム模倣薬である。別の実施形態では、上記ＣａＳＲアゴニストはアロステリックアゴニストである。別の実施形態では、上記ＣａＳＲアゴニストはシナカルセト塩酸塩である。別の実施形態では、上記ＣａＳＲアゴニストは式：Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７（式中、Ｘ１は、チオール含有基を含むサブユニットであり；Ｘ５は、カチオン性サブユニットであり；Ｘ６は、非カチオン性サブユニットであり；Ｘ７は、カチオン性サブユニットであり；Ｘ２、Ｘ３およびＸ４のうちの少なくとも２つは、独立に、カチオン性サブユニットである）を含む化合物である。
【００８３】
一実施形態では、上記ＣａＳＲアゴニストは配列ｃａｒｒｒａｒ（配列番号２）を含む化合物である。別の実施形態では、上記ＣａＳＲアゴニストは、ペプチドｃａｒｒｒａｒ（配列番号２）で構成されるコンジュゲートであり、該ペプチドがそのＮ末端残基でＣｙｓ残基とコンジュゲートしている。好ましい実施形態では、上記コンジュゲートはＡｃ−ｃ（Ｃ）ａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号３）である。本発明は、配列番号３などのある特定の好ましい実施形態に関して記載されている場合があるが、本開示は、米国特許第６，０１１，０６８号および同第６，０３１，００３号および米国特許公開第２０１１／００２８３９４号および同第２００９／００２３６５２号（それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載の化合物およびコンジュゲートを含めた他のＣａＳＲアゴニストにも適用されることは当業者の理解の範囲内である。同様に、本発明は、血液透析などのある特定の好ましい実施形態に関して記載されている場合があるが、本開示は、腹膜透析などの他の透析の形態、および毎日の血液透析などの他の手法にも適用されることは当業者の理解の範囲内である。
【００８４】
一実施形態では、上記ＣａＳＲアゴニストを、上記ＣａＳＲアゴニスト化合物と薬学的に許容される賦形剤との組成物として投与する。いくつかの実施形態では、上記賦形剤はバッファまたは食塩水であり、したがって、上記患者に投与される際、上記組成物は溶液の形態である。一実施形態では、上記アゴニスト化合物は、本明細書に記載の方法に従って投与するための溶液または懸濁物に再構成される凍結乾燥させた産物として提供される。一実施形態では、上記凍結乾燥させた産物は、シナカルセト塩酸塩などのアゴニスト産物の塩の形態、または配列番号３の形態のペプチドの塩酸塩の形態である。
【００８５】
ペプチド化合物および構造と活性の関連性
いくつかの化合物を、血清リンの減少および高リン酸血症に対するそれらの効果を試験するために合成した。それらの化合物は、以下の表２に列挙されている。表１において、および本明細書全体を通して、大文字で提供される残基はＬ−アミノ酸であり、一方小文字はＤ−アミノ酸を示す。「Ａｃ」はアセチルキャップ形成基を示し、「ＮＨ２」はアミドキャップ形成基を示し、「Ａｃ−ｂＡｌａ」はアセチル化されたベータアラニンであり、「ＧＳＨ」は還元型グルタチオンを示し、「ＧＳ」は酸化型グルタチオンを示し、「ＰＥＧ」はポリエチレングリコールを指し、「ＰＥＧ２」および「ＰＥＧ５」は、それぞれ２ｋＤａおよび５ｋＤａのポリエチレングリコール部分を指し、「Ｍｐａ」はメルカプトプロピオン酸を指す。括弧でくくられた基は、基または部分が前のサブユニットまたはアミノ酸残基の側鎖に結合していることを示す。
【００８６】
【表２−１】
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【００８７】
【表２−２】
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【００８８】
【表２−３】
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【００８９】
【表２−４】
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【００９０】
【表２−５】
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【００９１】
【表２−６】
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【００９２】
【表２−７】
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【００９３】
【表２−８】
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【００９４】
【表２−９】
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＊括弧内に示されている太字のフォントはそれぞれのチオール含有コンジュゲート基を示す。ＧＳ＝酸化型グルタチオン；ｄＨｃｙ＝Ｄ−ホモシステイン；Ｍｐａ＝メルカプトプロピオン酸；ＰＥＧ＝ポリエチレングリコール。
【００９５】
これらの化合物は、（ｉ）Ａｃ−ｃｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号４）、（ｉｉ）Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号５）、（ｉｉｉ）Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）、および（ｉｖ）Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号７）を含む。前述の試験において、配列番号４、配列番号５、配列番号６および配列番号７として識別される化合物を、それぞれ３０分間ＩＶ注入することによって１Ｋ１Ｃモデル動物に投与し、血漿ＰＴＨレベルの低下（投薬前の（ベースライン）レベルに対するパーセントとして）に影響させた。３ｍｇ／ｋｇで投薬した４つの化合物の全てにより、血漿ＰＴＨの有意な降下がもたらされたが、ＰＴＨ低下についての効力および持続時間における差異により、正味の正電荷とＰＴＨを低減させる活性の間の関連性が示唆される。例えば、６つのカチオン性（アルギニン）サブユニットを持つ化合物Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）では、それぞれ４つのカチオン性（アルギニン）サブユニットおよび５つのカチオン性（アルギニン）サブユニットを含有する化合物Ａｃ−ｃｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号４）およびＡｃ−ｃｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号５）と比較して、有効性ならびに作用の持続時間が増加した。驚いたことに、６つのカチオン性（アルギニン）サブユニットを持つ化合物Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）では、７つのカチオン性（アルギニン）残基を持つ化合物Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号７）と比較して作用の持続時間が増加し、これは化合物の活性または効力がただ単に化合物のカチオン性電荷の増加に相関するのではないことが示唆されている。すなわち、７つのカチオン性サブユニット（アルギニン残基）を持つ化合物Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号７）により、それよりもカチオン性残基が少ない化合物と同様のＰＴＨの最初の降下がもたらされたが、投薬後２４時間を超えるとＡｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）およびＡｃ−ｃｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号５）よりも有効でなかった。これらの後者２つの化合物により、２４時間の時点で、それぞれ約４０％および６０％の平均のＰＴＨ低下がもたらされた。本試験における化合物は同じｍｇ／ｋｇ用量で投与されたが、分子量が異なるので、実際に投薬された各化合物のモル数は異なることに留意するべきである。したがって、Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）は、モル当たりベースでＡｃ−ｃｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号４）およびＡｃ−ｃｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号５）よりも有意に強力であった。
【００９６】
さらなる試験を行って化合物の構造と活性の関連性を探究した。化合物Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）を、サブユニットのＸ２位〜Ｘ７位のそれぞれにおいてアルギニン残基をアラニン残基と逐次的に交換することによって修飾した。上記化合物を、上記ヒトカルシウム感知受容体を発現しているＨＥＫ２９３細胞を使用して例示的な化合物の活性を測定するｉｎ  ｖｉｔｒｏヒトカルシウム感知受容体（ＣａＳＲ）アッセイにおいて特徴づけた。
【００９７】
正常なラットにおける単回のＩＶ投与後にｉｎ  ｖｉｖｏで測定したところ、パーセントＰＴＨが検出限界を下回るまで、または本質的にゼロにまで減少したことによって証明されるように、化合物Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）、Ａｃ−ｃａｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号８）およびＡｃ−ｃｒｒａｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号１０）が、かなり強力であった。Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）の２位、３位、４位または７位におけるカチオン性（アルギニン）残基を置換することにより、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの効力がおよそ２分の１損失した。化合物Ａｃ−ｃｒｒｒａｒｒ−ＮＨ２（配列番号１１）を生じる５位における置換により、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの効力が５分の１〜１０分の１低下したが、ｉｎ  ｖｉｖｏでのパーセントＰＴＨ  ＡＵＣの４５％の低下は、臨床療法のために十分に活性であり得る。驚いたことに、６位においてカチオン性アルギニン残基を無電荷の（アラニン）残基に置換することにより、実際に効力が改善された。データにより、異なる位置におけるカチオン性残基および無電荷の残基は、全てが同等なのではなく、化合物の構造が変化した結果として活性に変化があることが例示されている。
【００９８】
化合物の構造の変化に応じた活性の変化の影響をさらに評価するために、２つのカチオン性（アルギニン）残基を無電荷の（アラニン）残基と交換した、２重のアミノ酸置換を含有するＡｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）の別の系列の類似体を生成し、効力について試験した。予想外に、このことは、電荷の位置ならびに総カチオン性電荷もＰＴＨの低下に対する化合物の効力に影響を及ぼし得ることを示唆している。データは、ＰＴＨを低減させる活性のために、配列番号６のカチオン性残基は５位および７位には不可欠であるが、６位には必要ないことを示唆している。
【００９９】
さらなる構造と活性の関連性についての試験を、ヒトカルシウム感知受容体を発現するＨＥＫ２９３細胞におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞アッセイを使用して行った。ペプチドＡｃ−ｃａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号２６）およびＡｃ−ａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号２９）の、ヒトＣａＳＲを活性化する能力を、ＩＰ３の産生を反映するイノシトールモノホスフェート（ＩＰ１）の蓄積を測定することによって確認した。配列番号２９にＮ末端のＤ−システイン残基がないことにより、ＣａＳＲを活性化する化合物の能力が配列番号２６と比較して劇的に低下した。すなわち、ペプチドＡｃ−ｃａｒｒｒａｒ−ＮＨ（配列番号２６）およびＡｃ−ａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号２９）は、Ｎ末端のＤ−システインが存在するか、または存在しないかによってのみ異なるので、化合物の効力は、Ｎ末端のシステイン残基を排除することによって顕著に低下した。
【０１００】
化合物のＸ１サブユニットにおけるチオール含有基（例えば、化合物がＮ末端残基上のペプチドである特定の実施形態において）の寄与についても、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験において調査した。配列番号２６として識別されるペプチド（Ａｃ−ｃａｒｒｒａｒ−ＮＨ２）および配列番号２９として識別されるペプチド（Ａｃ−ａｒｒｒａｒ−ＮＨ２）の、ＰＴＨを低減させる活性を、ｉｎ  ｖｉｖｏで評価した。見られるように、０．５ｍｇ／ｋｇ用量のペプチドＡｃ−ｃａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号２６）により、投薬の４時間後までにＰＴＨの血中濃度が検出不可能なレベルまで減少した。対照的に、チオール含有基を持つＮ末端残基を欠くペプチド、Ａｃ−ａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号２９）では、実質的により高い用量（すなわち９ｍｇ／ｋｇ）においてさえもＰＴＨ濃度を低下させなかった。
【０１０１】
化合物のＸ１サブユニットにおけるチオール含有基の構造と活性の関連性を、異なるＸ１サブユニットを有する化合物を調製することによってさらに分析した。化合物を、正常なラットにおいて、ＰＴＨを低下させる活性についてｉｎ  ｖｉｖｏで試験した。データは、チオールを含有するＸ１サブユニットは変更してよいことを例示した。Ｎ末端残基内に以下を持つ化合物を試験した−Ｄ−システイン（ｃｙｓ）、Ｄ−ペニシラミン（ｄＰｅｎ）、ｄ−ホモシステイン（ｄＨｃｙ）およびメルカプトプロピオン酸（Ｍｐａ）。さらに、天然アミノ酸または非天然アミノ酸、例えばベータアラニンなどを、Ｎ末端のチオール含有残基とコンジュゲートすることができる。データは、カチオン性化合物、例えばＸ１サブユニット内に異なるチオール含有基を含有するＡｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）などにより、ｉｎ  ｖｉｖｏでＰＴＨを有効に低下させることを例示した。Ｎ末端システイン残基を、チオール基を含有しないメチオニンと置換した結果、ｉｎ  ｖｉｖｏでＰＴＨを低減させる活性が非常に乏しい化合物が生じた。
【０１０２】
上記に記載された試験に基づいて、サブユニットＸ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７の連続した配列からなる化合物であって、Ｘ１がチオール含有基を含むサブユニットである化合物は、副甲状腺ホルモンレベルを減少させる活性を有する。一実施形態では、Ｘ１サブユニットのチオール含有基は、チオール含有アミノ酸残基および有機チオール含有部分からなる群から選択される。別の実施形態では、チオール含有基は、生理的なｐＨおよび温度の下で別のチオール基と反応することができる。チオール含有残基がアミノ酸残基である特定の実施形態では、Ｘ１サブユニットは、システイン、グルタチオン、メルカプトプロピオン酸、ｎ−アセチル化されたシステインおよびペグ化システインのいずれか１つであってよい。チオール含有基が、チオール含有基を持つ有機低分子などの非アミノ酸残基サブユニットである実施形態では、Ｘ１サブユニットは、３−メルカプトプロピル残基もしくは３−メルカプトプロピオニル残基などのチオールアルキル部分またはチオアシル部分であってよい。一実施形態では、チオールはホモシステインではない。
【０１０３】
化合物の治療的活性に対する、化合物の各サブユニットの性質の影響をさらに評価するために、追加的な構造活性試験を行った。Ｄ−アミノ酸残基を置換したＬ−アミノ酸残基を有する一連の化合物を、ＰＴＨ低減性足場Ａｃ−ｃ（Ｃ）ａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号３）に基づいて調製した。化合物を被験体に投与し、投薬する前、ならびに投薬の１時間後、２時間後、３時間後、および４時間後に血漿ＰＴＨレベルを評価した。
【０１０４】
表１に示されている例示的な化合物を、ＡｃおよびＮＨ２の名称で示されるように、Ｎ末端およびＣ末端の両方において化学的に修飾することができる。全てのサブユニットがＤ−アミノ酸残基である７つのサブユニットの配列ｃａｒｒｒａｒ（配列番号３）を、一度に１つのサブユニットをＬ−アミノ酸で交換することによって修飾した。Ｘ１サブユニットは、括弧付きの名称（Ｃ）で示される、ジスルフィド結合によってＬ−Ｃｙｓ残基とコンジュゲートしたＤ−Ｃｙｓ残基（または配列番号３４のＬ−Ｃｙｓ残基）であった。前述の試験は、ＡｒｇおよびＡｌａのキラリティーが化合物の活性に影響を及ぼすことを示している。一実施形態では、少なくともＸ４として識別されるサブユニットおよびＸ７として識別されるサブユニットがＤ−アミノ酸残基サブユニットである、Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７の配列の化合物が意図されている。別の実施形態では、Ｘ４として識別されるサブユニット、Ｘ５として識別されるサブユニット、Ｘ６として識別されるサブユニットおよびＸ７として識別されるサブユニットが、Ｄ−アミノ酸残基サブユニットである。好ましい実施形態では、Ｘ３として識別されるサブユニット、Ｘ４として識別されるサブユニット、Ｘ５として識別されるサブユニット、Ｘ６として識別されるサブユニットおよびＸ７として識別されるサブユニットが、Ｄ−アミノ酸残基サブユニットである。最も好ましい実施形態では、Ｘ２として識別されるサブユニット、Ｘ３として識別されるサブユニット、Ｘ４として識別されるサブユニット、Ｘ５として識別されるサブユニット、Ｘ６として識別されるサブユニットおよびＸ７として識別されるサブユニットが、Ｄ−アミノ酸残基サブユニットである、ならびにサブユニットＸ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６およびＸ７の全てが、Ｄ−アミノ酸残基サブユニットである。
【０１０５】
他の試験では、全てＬ−アミノ酸を有するペプチドを全てＤ−アミノ酸で置換することにより、試験されたペプチドのｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性は低下しないことも見いだされた；実際に、全体がＤ−アミノ酸で構成されるペプチドはＣａＳＲの活性化に対する効力を増強すると思われる。特定の位置におけるカチオン性（アルギニン）残基のいくつかが、システイン残基と比較して、ＣａＳＲに対する活性への影響を最も少なくして無電荷の（アラニン）残基で置換することができることも示された。
【０１０６】
構造とＣａＳＲに対する活性との間の関連性をさらに特徴づけるために、異なる数（４〜８個）のアルギニン残基を持つ種々のカチオン性ペプチド（その全てがＮ末端システインを含有した）を、ＨＥＫ−２９３  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞アッセイを使用して試験した。カチオン性サブユニットの数と化合物の効力との間に直接相関が見られ、効力は、ＣａＳＲを活性化する能力によって証明される。カチオン性（例えばアルギニン）サブユニットの数を５つから４つに減らすことにより、効力が最もシフトし（＞１０倍）、このことは、これらの正味の電荷を有する化合物の間に活性の屈曲点があり得ること、サブユニットＸ５におけるカチオン性サブユニットが、活性のために好ましいことを示唆している。したがって、Ｘ５がカチオン性サブユニットである、Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｘ７の構造の化合物が考えられている。ある特定の実施形態では、Ｘ１は生理的条件下で別のチオール基と反応することができるチオール基を含むサブユニットである（「反応性チオール」は、ｐＨ７．４および体温の生理的条件下で別のチオールと反応するチオールを意味する（例えば、システインとシステイン））。
【０１０７】
予想外に、６つのカチオン性残基を持つＡｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）が、ｉｎ  ｖｉｖｏで評価した場合、８つのカチオン性残基を有するＡｃ−ｃｒｒｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号４１）よりも大きく長い活性を示した。これは、このｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞アッセイにおいて、ＣａＳＲを活性化することにおいて配列番号４１の方が強力であったという知見と対照的である。理論に束縛されることを望むものではないが、Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号４１は、その細胞浸透性特性によって細胞内に取り込まれ、したがってＣａＳＲの活性部分の近傍から除去されることが予想されるので、Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）のｉｎ  ｖｉｖｏにおける優れた性能は、Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）の薬物動態的性質が優れていることに由来し得ると考えられる。
【０１０８】
Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）の構造と活性の関連性をさらに探究するために、カチオン性（アルギニン）残基のいくつかを、無電荷の（アラニン）残基と交換した。Ｘ２位のサブユニットおよびＸ４位のサブユニットにおいてカチオン性（アルギニン）残基を交換することにより、ＣａＳＲの活性化におけるｉｎ  ｖｉｔｒｏでの効力が顕著に低下している化合物（配列番号１５）が生じることが見いだされた。対照的に、Ｘ２位のサブユニットおよびＸ６位のサブユニットにおいてカチオン性（アルギニン）残基を交換することにより、Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）で見られた効力の大半を保持する化合物（配列番号２６）が生じた。これらの結果により、化合物における荷電残基の位置が効力に寄与することが示唆され、一部の実施形態では、ペプチドの総正電荷の寄与よりもよりまさる場合がある。ある特定の位置におけるカチオン性（アルギニン）残基、例えばＸ５位のサブユニットも、効力に不均衡に寄与することは明らかである。
【０１０９】
ＣａＳＲの活性化に対するペプチドの効力を著しく増強するＮ末端システインが存在することが見いだされた。ＣａＳＲは、ホモ二量体受容体として機能する大きな細胞外ドメインを持つ７回膜貫通型Ｇタンパク質共役受容体である。細胞外ドメインには１８個のシステイン残基があり、そのいくつかは、多型分析または変異性分析によって、受容体の活性のために重要であることが示されている。特に注目すべきなのは、細胞外ドメインのループ２領域の１２９位および１３１位のシステインである。１２９位および１３１位のシステインは、受容体複合体の２つの単量体間に、密接な立体配置または妨げられた立体配置で分子間ジスルフィド架橋を形成すると考えられている。１２９位のシステインの変異により、ループ２領域の完全な欠失を含めたいくつもの他の変異でそうなるのと同様に、ＣａＳＲが活性化される。当該記載の化合物のＮ末端システイン残基によってもたらされる効力の増強は、ＣａＳＲの細胞外ドメイン内のシステイン残基の１つ以上の特異的な相互作用に起因する可能性がある。
【０１１０】
アミノ酸置換のキラリティーの、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＣａＳＲの活性に対する影響をさらに評価するために、さまざまな位置においてＬ−アミノ酸またはアキラルのアミノ酸（グリシン）の置換を含有するＡｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）の一連の類似体を生成し、ＣａＳＲに対する効力について試験した。試験した類似体としては、Ａｃ−ｃＧｒｒｒＧｒ−ＮＨ２（配列番号４２）、（ｉｉ）Ａｃ−ｃＡｒｒｒＡｒ−ＮＨ２（配列番号４３）、および（ｉｉｉ）Ａｃ−ＣａＲｒＲａＲ−ＮＨ２（配列番号４４）を含めた。前述の類似体の全てが、Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）よりも顕著に低い効力を有し、配列番号４４（３種の類似体のうち最も強力）については１０倍の差異から、配列番号４３（３種の類似体のうち最も強力でない）については２０００倍超の差異までにわたった。配列番号６の２位および６位のカチオン性Ｄ−アミノ酸残基（Ｄ−アルギニン残基）を無電荷のＤ−アミノ酸残基（Ｄ−アルギニン残基）と交換したＡｃ−ｃａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号２６）は、活性の変化がずっと少なかった（約３倍の差異）。したがって、驚いたことに、Ａｃ−ｃｒｒｒｒｒｒ−ＮＨ２（配列番号６）の全てのＤ−アミノ酸残基を２つ以上のＬ−アミノ酸残基で遮ることにより、効力が顕著に低下することが見いだされた。遮っている残基が無電荷のアキラルのアミノ酸残基（グリシン残基）である場合、それが無電荷のＬ−アミノ酸残基（Ｌ−アラニン残基）である場合と比較して効力が８０倍超減少したことも、驚くべきことであった。
【０１１１】
Ａｃ−ｃａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号２６）の２つの無電荷のＤ−アミノ酸残基（Ｄ−アラニン残基）をそれらのＬ−対応物と交換すること（配列番号４３）により、効力が６００倍超減少したが、一方、Ａｃ−ｃａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号２６）の２つの無電荷のＤ−アミノ酸残基（Ｄ−アラニン残基）を無電荷のアキラルのアミノ酸残基（グリシン残基）と交換すること（配列番号４２）による効力の低下は８倍未満であったこと；およびＡｃ−ｃａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号２６）の３つのカチオン性Ｄ−アミノ酸残基（Ｄ−アルギニン残基）をそれらのＬ−対応物と交換すること（配列番号４４）により、効力の差異は４倍未満であったことも驚くべきことであった。
【０１１２】
構造と活性の関連性についての別の試験において、上記ペプチドの効力に対する非カチオン性アミノ酸の寄与を、さまざまなＤ−アミノ酸残基もしくはグリシンを有する、または、上記ペプチドＡｃ−ｃａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号２６）および上記ペプチドＡｃ−ｃｒｒａｒａｒ−ＮＨ２（配列番号１５３）のさまざまな位置において置換された、立体障害型の非天然アミノ酸を有する一連のペプチドを調製することによって評価した。上記ペプチドを、正常なスプラーグドーリー（Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ）ラットに０．５ｍｇ／ｋｇの用量でＩＶボーラスとして投与した。食塩水の静脈内（ＩＶ）ボーラスを、対照として使用した。投薬する前、ならびに投薬の１時間後、２時間後、３時間後および４時間後に血漿ＰＴＨレベルを評価した。結果は、１）Ａｃ−ｃａｒｒｒａｒ−ＮＨ２ペプチド（配列番号２６）の６位にはアラニン、グリシンまたはセリンなどの小さなアミノ酸が好ましいこと、および２）上記Ａｃ−ｃａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号２６）の２位のアラニンは置換に対してはるかに許容性があり、疎水性の天然アミノ酸（例えばＤ−Ｖａｌ、Ｄ−Ｌｅｕ）、芳香族天然アミノ酸（例えばＤ−Ｐｈｅ）、または極性の天然アミノ酸（例えばＤ−Ｓｅｒ、Ｄ−Ｇｌｎ）、ならびに非天然の、かさのある疎水性アミノ酸（例えばｄＮｌｅ、ｄＮｖａ）で置換することができるが、酸性のアミノ酸では置換することができないこと、および３）Ａｃ−ｃｒｒａｒａｒ−ＮＨ２（配列番号２５）ペプチドの４位のアラニン残基も置換に対して非常に許容性があり、ほとんどの種類の天然アミノ酸（ならびに非天然の、かさのある疎水性アミノ酸（例えばｄＮｌｅ、ｄＮｖａ）に適応させることができるが、二次構造に影響を及ぼすアミノ酸、すなわち、グリシンまたはプロリンまたは酸性の側鎖を持つアミノ酸に対しては許容性がないことを示している。
【０１１３】
さまざまなペプチドおよびコンジュゲートの活性をヒトＣａＳＲに対するその効果について試験した。これらの試験は、ヒトＣａＳＲを発現するＨＥＫ２９３細胞におけるＩＰ１の産生を測定することによって行った。以下の表３に結果が表されている。
【０１１４】
【表３−１】
0005982473.tif 000012
【０１１５】
【表３−２】
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【０１１６】
【表３−３】
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本明細書に開示される化合物は、一般には１つ以上のチオール部分、好ましくは１つ以上の反応性チオール部分を含む。チオール基を有するサブユニットとしては、チオール基を有する非アミノ酸化合物およびチオール基を持つアミノ酸が挙げられる。チオール含有サブユニットのチオール基は、コンジュゲートした形態（例えば、コンジュゲート基へのジスルフィド結合によって）またはコンジュゲートしていない形態（すなわち、還元型チオールとして）であってよい。好ましい実施形態では、チオール基がコンジュゲートしていない形態またはコンジュゲートした形態のいずれかである場合、チオール含有基とジスルフィド結合を形成することができる。チオール含有残基は、アミノ末端、カルボキシ末端、またはどこか他の位置を含めた、ペプチド鎖に沿った任意の位置に位置してよい。好ましい実施形態では、チオール含有残基またはサブユニットは、アミノ末端に位置してよい。他の実施形態では、チオール含有残基またはサブユニットは、カルボキシ末端またはペプチド配列の内部に位置してよい。
【０１１７】
いくつかの代表的なチオール含有残基の例としては、限定することなく、システイン、メルカプトプロピオン酸、ホモシステイン、およびペニシラミンが挙げられる。チオール含有残基がキラル中心を含有する場合、その残基はＬ−立体配置またはＤ−立体配置で存在し得る。好ましい実施形態では、チオール含有残基は、システインである。
【０１１８】
一部の実施形態では、化合物のＸ１位のチオール含有サブユニットとチオール含有コンジュゲート基との間の架橋結合は、化合物の生物学的活性型を得るために、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてシステインなどの他のチオール含有コンジュゲート基で切断可能かつ／または交換可能であってよい（例えば、ジスルフィド結合を還元することによって）。このように、コンジュゲートは、化合物のプロドラッグとして機能し得る。コンジュゲート基は、当該記載の化合物の物理化学的性質、薬物動態的性質および／または薬力学的性質を改変するためにも使用することができる（例えば、薬物動態を増強するためにジスルフィド結合によって大きなペグ化部分とコンジュゲートさせる）。
【０１１９】
一部の実施形態では、化合物は、アミノ酸配列（Ｘａａ１）−（Ｘａａ２）−（Ｘａａ３）−（Ｘａａ４）−（Ｘａａ５）−（Ｘａａ６）−（Ｘａａ７）（配列番号１５５）で構成されるペプチドであり、ここで（Ｘａａ１）はチオール含有アミノ酸残基であり、（Ｘａａ２）は非カチオン性アミノ酸残基であり、（Ｘａａ３）は任意のアミノ酸残基であり、（Ｘａａ４）は任意のアミノ酸残基であり、（Ｘａａ５）はカチオン性アミノ酸残基であり、（Ｘａａ６）は非カチオン性残基であり、（Ｘａａ７）は任意のアミノ酸残基である。ペプチドは、Ｎ末端、Ｃ末端、またはその両方において修飾されていてよい。好ましい実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端およびＣ末端の両方において、それぞれアセチル化およびアミド化によって修飾される。
【０１２０】
一部の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列（Ｄ−Ｃｙｓ）−（Ｘａａ２）−（Ｘａａ３）−（Ｘａａ４）−（Ｘａａ５）−（Ｘａａ６）−（Ｘａａ７）（配列番号１５６）を含み、ここで（Ｘａａ２）は非カチオン性アミノ酸残基であり、（Ｘａａ３）は任意のアミノ酸残基であり、（Ｘａａ４）は任意のアミノ酸残基であり、（Ｘａａ５）はＤ−Ａｒｇ、Ｌ−Ａｒｇ、Ｄ−ＬｙｓおよびＬ−Ｌｙｓからなる群から選択され、（Ｘａａ６）は非カチオン性残基であり、（Ｘａａ７）は任意のアミノ酸残基である。ペプチドは、Ｎ末端キャップ、Ｃ末端キャップ、またはその両方を有してよい。好ましい実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端キャップおよびＣ末端キャップの両方を有する。
【０１２１】
一部の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列（Ｄ−Ｃｙｓ）−（Ｘａａ２）−（Ｘａａ３）−（Ｘａａ４）−（Ｘａａ５）−（Ｘａａ６）−（Ｘａａ７）（配列番号１５７）を含み、ここで（Ｘａａ２）、（Ｘａａ３）および（Ｘａａ４）は、独立して、任意のアミノ酸残基であり（しかし好ましい実施形態では、独立して、Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｄ−ＮｏｒＶａｌおよびＤ−ＮｏｒＬｅｕからなる群から選択される）、（Ｘａａ５）および（Ｘａａ７）は独立して、任意のカチオン性アミノ酸残基であり（しかし好ましい実施形態では、独立して、Ｄ−Ａｒｇ、Ｌ−Ａｒｇ、Ｄ−ＬｙｓおよびＬ−Ｌｙｓからなる群から選択される）、（Ｘａａ６）は非カチオン性アミノ酸残基である（好ましい実施形態では、Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ｖａｌ、Ｄ−Ｌｅｕ、Ｄ−ＮｏｒＶａｌおよびＤ−ＮｏｒＬｅｕからなる群から選択される）。ペプチドは、Ｎ末端キャップ、Ｃ末端キャップ、またはその両方を有してよい。好ましい実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端キャップおよびＣ末端キャップの両方を有する。
【０１２２】
一部の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列（Ｄ−Ｃｙｓ）−（Ｘａａ２）−（Ｘａａ３）−（Ｘａａ４）−（Ｘａａ５）−（Ｘａａ６）−（Ｘａａ７）（配列番号１５８）を含み、ここで（Ｘａａ２）は非カチオン性アミノ酸残基であり、（Ｘａａ３）は任意のアミノ酸残基であり、（Ｘａａ４）は任意のアミノ酸残基であり、（Ｘａａ５）はＤ−Ａｒｇ、Ｌ−Ａｒｇ、Ｄ−ＬｙｓおよびＬ−Ｌｙｓからなる群から選択され、（Ｘａａ６）は非カチオン性残基であり、（Ｘａａ７）は任意のアミノ酸残基である。ペプチドは、Ｎ末端キャップ、Ｃ末端キャップ、またはその両方を有してよい。好ましい実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端キャップおよびＣ末端キャップの両方を有する。
【０１２３】
一部の実施形態では、ペプチドは、アミノ酸配列（Ｄ−Ｃｙｓ）−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｘａａ３）−（Ｘａａ４）−（Ｄ−Ａｒｇ）−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｘａａ７）（配列番号１５９）を含み、ここで（Ｘａａ３）は任意のカチオン性アミノ酸残基であり、（Ｘａａ４）は任意のカチオン性アミノ酸残基であり、（Ｘａａ７）は任意のカチオン性アミノ酸残基である。ペプチドは、Ｎ末端キャップ、Ｃ末端キャップ、またはその両方を有してよい。好ましい実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端キャップおよびＣ末端キャップの両方を有する。
【０１２４】
一部の実施形態では、ペプチドはアミノ酸配列（Ｄ−Ｃｙｓ）−（Ｘａａ２）−（Ｘａａ３）−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｄ−Ａｒｇ）−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｘａａ７）（配列番号１６０）を含み、ここで（Ｘａａ２）、（Ｘａａ３）および（Ｘａａ７）は独立して、任意のカチオン性アミノ酸残基である。ペプチドは、Ｎ末端キャップ、Ｃ末端キャップ、またはその両方を有してよい。好ましい実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端キャップおよびＣ末端キャップの両方を有する。
【０１２５】
別の実施形態は、ペプチド結合によって連結したアミノ酸の配列を含むカルシウム模倣ペプチドであり、ここで配列は、５〜１０個のアミノ酸残基を含み、配列はアミノ末端、カルボキシ末端、少なくとも１つのチオール含有残基、および３〜９個の正に荷電した残基を含む。一実施形態では、少なくとも１つのチオール含有残基はシステイン残基である。別の態様では、システイン残基はペプチドのアミノ末端に配置されている。ある特定の実施形態では、システイン残基は、Ｌ−Ｃｙｓ残基、Ｄ−Ｃｙｓ残基、またはＬ−ホモＣｙｓ残基もしくはＤ−ホモＣｙｓ残基である。他の実施形態では、ペプチドのアミノ酸残基は、Ｄ−アミノ酸またはＬ−アミノ酸である。
【０１２６】
およそ７つのサブユニットを含むペプチド模倣分子であって、少なくとも１つのサブユニットが、チオール部分、好ましくは反応性チオール部分を含有し、他のサブユニットが複数の非カチオン性サブユニットであり、そして１〜４個の正に荷電したサブユニット由来であるペプチド模倣分子も、特許請求された化合物の範囲内に包含される。そのようなペプチド模倣分子は、サブユニットのうちの２つ以上の間の非ペプチド結合を含んでよい。上記の化合物のさまざまな特徴は、概ねペプチド模倣分子にあてはまる。例えば、上記の通り、分子を構築するために使用するサブユニットは、天然に存在するアミノ酸または非天然側鎖を持つ残基であってよく、モジュールの末端は、上記のようにキャップ形成されていてよい、またはキャップ形成されていなくてよい。同様に、分子のアミノ酸残基は、Ｌ−アミノ酸残基またはＤ−アミノ酸残基であってよい。同様に上記の通り、チオール含有残基は、上記のチオール含有部分のいずれかを持つ還元型または酸化型の形態であってよい。
【０１２７】
多くのペプチド模倣の枠組みおよびそれらを合成するための方法が、開発されてきた（Ｂａｂｉｎｅ、Ｒ．  Ｅ．；Ｂｅｎｄｅｒ、Ｓ．  Ｌ．、Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｖ．、９７巻：１３５９頁、１９９７年；Ｈａｎｅｓｓｉａｎ、Ｓ．ら．、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、５３巻：１２７８９頁、１９９７年；Ｆｌｅｔｃｈｅｒ、Ｍ．  Ｄ．；Ｃａｍｂｅｌｌ、Ｍ．  Ｃ．、Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｖ．、９８巻：７６３頁、１９９８年）；Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ；Ｋａｚｍｉｅｒｓｋｉ  Ｗ．Ｍ．編；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｓｅｒｉｅｓ、２３巻；Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．；Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．（１９９９年）。
【０１２８】
コンジュゲート
一部の実施形態では、化合物は、化合物のチオールとコンジュゲート基由来のチオールとの間のジスルフィド結合によって、チオール含有コンジュゲート基と化学的に架橋している。チオール含有コンジュゲート基は、システインなどの低分子、またはシステイン残基を含有するポリペプチドなどの高分子であってよい。適切なチオール含有コンジュゲート基の例としては、システイン、グルタチオン、チオアルキル、チオベンジルなどの部分、メルカプトプロピオン酸、Ｎ−アセチル化システイン、システアミド、Ｎ−アセチルシステアミド（Ｎ−ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅａｍｉｄｅ）、ホモシステイン、ペニシラミン、およびポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）修飾（「ペグ化」と称される）チオール、例えばペグ化システインなど、または化合物の複製物（すなわち、ジスルフィド結合によって連結されたホモ二量体を形成するための）が挙げられる。好ましい実施形態では、チオール含有コンジュゲート基は、システインである。他のシステインホモログも、単独で、または大きなコンジュゲート基に含まれるかのいずれかで、チオール含有コンジュゲート基として使用することが意図されている。同様に、システイン、ホモシステイン、およびシステアミド（ｃｙｓｔｅａｍｉｄｅ）の立体異性体は、チオール含有部分として使用するのに適している。コンジュゲート基を使用して、医薬製品の化学的安定性および、したがって貯蔵寿命を改善することができる。ある特定の実施形態では、チオール含有コンジュゲート基とペプチドは同一であり（すなわち、コンジュゲートは二量体である）、それは予想外にシステインなどの異種性のコンジュゲート基と比較して非常に良好な化学的安定性を示した。理論に束縛されることなく、おそらく、チオール含有コンジュゲート基とペプチドが同一である場合、任意の不均化（例えば、コンジュゲート基をスクランブルすること）により、元の二量体化合物が再構成される。対照的に、システインなどの異種性のコンジュゲート基を用いて化合物を不均化することにより、ペプチドのホモ二量体とシスチン（システイン−システインホモ二量体）と残りの親化合物の形成が導かれ得る。ペプチドのホモ二量体（すなわち、コンジュゲート基とペプチドが同一である）は、体循環内の還元型システインが高濃度なので、ｉｎ  ｖｉｖｏでシステインがコンジュゲートした形態のペプチドに変換されることになる。
【０１２９】
一部の実施形態では、本教示は、チオール含有コンジュゲート基とアミノ酸配列（Ｘａａ１）−（Ｘａａ２）−（Ｘａａ３）−（Ｘａａ４）−（Ｘａａ５）−（Ｘａａ６）−（Ｘａａ７）（配列番号１５５）を含むペプチドとのジスルフィドコンジュゲートであって、（Ｘａａ１）がチオール含有部分を持つアミノ酸残基であり、（Ｘａａ２）が非カチオン性アミノ酸残基であり、（Ｘａａ３）が任意のアミノ酸残基であり、（Ｘａａ４）が任意のアミノ酸残基であり、（Ｘａａ５）がカチオン性アミノ酸残基であり、（Ｘａａ６）が非カチオン性残基であり、（Ｘａａ７）が任意のアミノ酸残基であるコンジュゲートを含む。ペプチドは、Ｎ末端キャップ、Ｃ末端キャップ、またはその両方を有してよい。好ましい実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端キャップおよびＣ末端キャップの両方を有する。好ましい実施形態では、チオール含有コンジュゲート基は、Ｄ−Ｃｙｓ、Ｌ−Ｃｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓを含有するペプチド、およびＬ−Ｃｙｓを含有するペプチドからなる群から選択される。チオール含有コンジュゲート基がアミノ酸またはペプチドである場合、それはＮ末端キャップ、Ｃ末端キャップ、またはその両方を有してよい。好ましい実施形態では、チオール含有コンジュゲート基は、Ｎ末端キャップおよびＣ末端キャップの両方を有する。一部の実施形態では、チオール含有コンジュゲート基は、それ自体が、配列番号１５５のアミノ酸配列を含むペプチドである。一部の実施形態では、チオール含有コンジュゲート基とペプチドは同一である（すなわち、コンジュゲートは二量体である）。
【０１３０】
一部の実施形態では、本教示は、チオール含有コンジュゲート基とアミノ酸配列（Ｄ−Ｃｙｓ）−（Ｘａａ２）−（Ｘａａ３）−（Ｘａａ４）−（Ｘａａ５）−（Ｘａａ６）−（Ｘａａ７）（配列番号１５６）を含むペプチドとのコンジュゲートであって、（Ｘａａ２）が非カチオン性アミノ酸残基であり、（Ｘａａ３）が任意のアミノ酸残基であり、（Ｘａａ４）が任意のアミノ酸残基であり、（Ｘａａ５）がＤ−Ａｒｇ、Ｌ−Ａｒｇ、Ｄ−ＬｙｓおよびＬ−Ｌｙｓからなる群から選択され、（Ｘａａ６）が非カチオン性残基であり、（Ｘａａ７）が任意のアミノ酸残基であるコンジュゲートを含む。ペプチドは、Ｎ末端キャップ、Ｃ末端キャップ、またはその両方を有してよい。好ましい実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端キャップおよびＣ末端キャップの両方を有する。好ましい実施形態では、チオール含有コンジュゲート基は、Ｄ−Ｃｙｓ、Ｌ−Ｃｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓを含有するペプチド、およびＬ−Ｃｙｓを含有するペプチドからなる群から選択される。チオール含有コンジュゲート基がアミノ酸またはペプチドである場合、それはＮ末端キャップ、Ｃ末端キャップ、またはその両方を有してよい。好ましい実施形態では、チオール含有コンジュゲート基は、Ｎ末端キャップおよびＣ末端キャップの両方を有する。一部の実施形態では、チオール含有コンジュゲート基は、それ自体が、配列番号１５６のアミノ酸配列を含むペプチドである。一部の実施形態では、チオール含有コンジュゲート基とペプチドは同一である（すなわち、コンジュゲートは二量体である）。
【０１３１】
一部の実施形態では、本教示は、チオール含有コンジュゲート基とアミノ酸配列（Ｌ−Ｃｙｓ）−（Ｘａａ２）−（Ｘａａ３）−（Ｘａａ４）−（Ｘａａ５）−（Ｘａａ６）−（Ｘａａ７）（配列番号１８３）を含むペプチドとのコンジュゲートであって、（Ｘａａ２）は非カチオン性アミノ酸残基であり、（Ｘａａ３）が任意のアミノ酸残基であり、（Ｘａａ４）が任意のアミノ酸残基であり、（Ｘａａ５）がＤ−Ａｒｇ、Ｌ−Ａｒｇ、Ｄ−ＬｙｓおよびＬ−Ｌｙｓからなる群から選択され、（Ｘａａ６）が非カチオン性残基であり、（Ｘａａ７）が任意のアミノ酸残基であるコンジュゲートを含む。ペプチドは、Ｎ末端キャップ、Ｃ末端キャップ、またはその両方を有してよい。好ましい実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端キャップおよびＣ末端キャップの両方を有する。好ましい実施形態では、チオール含有コンジュゲート基は、Ｄ−Ｃｙｓ、Ｌ−Ｃｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓを含有するペプチド、およびＬ−Ｃｙｓを含有するペプチドからなる群から選択される。チオール含有コンジュゲート基がアミノ酸またはペプチドである場合、それはＮ末端キャップ、Ｃ末端キャップ、またはその両方を有してよい。好ましい実施形態では、チオール含有コンジュゲート基は、Ｎ末端キャップおよびＣ末端キャップの両方を有する。一部の実施形態では、チオール含有コンジュゲート基は、それ自体が、配列番号１８３のアミノ酸配列を含むペプチドである。一部の実施形態では、チオール含有コンジュゲート基とペプチドは同一である（すなわち、コンジュゲートは二量体である）。
【０１３２】
一部の実施形態では、本教示は、チオール含有コンジュゲート基とアミノ酸配列（Ｄ−Ｃｙｓ）−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｘａａ３）−（Ｘａａ４）−（Ｄ−Ａｒｇ）−（Ｄ−Ａｌａ）−（Ｘａａ７）（配列番号１６１）を含むペプチドとのコンジュゲートであって、（Ｘａａ３）が任意のアミノ酸残基であり、（Ｘａａ４）が任意のアミノ酸残基であり、（Ｘａａ７）が任意のアミノ酸残基であるコンジュゲートを含む。ペプチドは、Ｎ末端キャップ、Ｃ末端キャップ、またはその両方を有してよい。好ましい実施形態では、ペプチドは、Ｎ末端キャップおよびＣ末端キャップの両方を有する。好ましい実施形態では、チオール含有コンジュゲート基は、Ｄ−Ｃｙｓ、Ｌ−Ｃｙｓ、Ｄ−Ｃｙｓを含有するペプチド、およびＬ−Ｃｙｓを含有するペプチドからなる群から選択される。チオール含有コンジュゲート基がアミノ酸またはペプチドである場合、それはＮ末端キャップ、Ｃ末端キャップ、またはその両方を有してよい。好ましい実施形態では、チオール含有コンジュゲート基は、Ｎ末端キャップおよびＣ末端キャップの両方を有する。一部の実施形態では、チオール含有コンジュゲート基は、それ自体が、配列番号１６１のアミノ酸配列を含むペプチドである。一部の実施形態では、チオール含有コンジュゲート基とペプチドは同一である（すなわち、コンジュゲートは二量体である）。
【０１３３】
例示的な化合物
好ましい実施形態では、上記チオール含有コンジュゲート基はＮ末端キャップおよびＣ末端キャップの両方を有する。いくつかの実施形態では、上記チオール含有コンジュゲート基は、それ自体が配列番号１６１のアミノ酸配列を含むペプチドである。いくつかの実施形態では、上記チオール含有コンジュゲート基と上記ペプチドは同一である（すなわち、コンジュゲートは二量体である）。
【０１３４】
別の実施形態において、化合物は、コンジュゲートの形態であり、Ｘ１位のチオール含有サブユニットがジスルフィド結合によってＬ−Ｃｙｓ残基に連結している。これらの化合物は、以下の構造を有する：
【０１３５】
【化１】
0005982473.tif 000015
本明細書で使用される表示法では、Ｘ１サブユニットのチオール含有部分に連結している化合物は、括弧付きで識別され、これらの例示的なコンジュゲートでは、（Ｃ）で示される化合物Ｌ−ＣｙｓはＸ１サブユニットのチオール含有部分に連結している：Ａｃ−ｃ（Ｃ）ａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号３）およびＡｃ−ｃ（Ａｃ−Ｃ）ａｒｒｒａｒ−ＮＨ２（配列番号１４１）。
【０１３６】
当該記載の作用剤を医薬品としてヒトおよび動物に投与する場合、単独で、または例えば、０．１％〜９９％（より好ましくは、１０％〜３０％）の活性成分を薬学的に許容されるキャリアと組み合わせて含有する薬学的組成物として、与えることができる。他の実施形態では、薬学的組成物は、０．２〜２５％、好ましくは０．５〜５％または０．５〜２％の活性成分を含有してよい。これらの化合物は、療法のために、ヒトおよび他の動物に、例えば、経口、皮下注射、皮下デポ剤、静脈内注射、静脈内注入または皮下注入を含めた任意の適切な投与経路によって投与することができる。
【０１３７】
これらのアゴニストは、治療のために、ヒトおよび他の動物に任意の適切な投与経路によって投与することができる。
【０１３８】
上記の通り、上記使用方法は、単独で、または他の作用剤および／もしくは様式（ｍｏｄａｌｉｔｙ）と組み合わせて用いることができる。そのような他の作用剤および／または様式としては、これらだけに限定されないが、食事性ホスフェートの制限、透析、ホスフェート結合剤（例えば、水酸化アルミニウム、炭酸カルシウム、酢酸カルシウム、マグネシウム塩、塩酸セベラマー、炭酸ランタン、多核鉄剤）が挙げられる。
【０１３９】
組み合わせレジメンにおいて利用するための療法（治療剤および／または治療様式）の特定の組み合わせは、所望の治療法および／または手順と、実現される所望の治療効果との適合性を考慮にいれる。利用する療法により、同じ障害に対して所望の効果を実現することができる（例えば、発明の化合物は、同じ障害を処置するために使用される別の作用剤と同時に投与することができる）、または、異なる効果を実現することができる（例えば、任意の有害作用の制御）ことも理解されよう。本明細書で使用される、特定の疾患または状態を治療または予防するために通常投与される追加的な治療剤は、「処置されている疾患または状態に適している」ことが公知である。
【０１４０】
一実施形態では、記載されている化合物を、血液透析患者におけるリンのリバウンドを低下させるために十分な用量で投与する。別の実施形態では、透析が終了した後に上記用量を投与する。
【０１４１】
本明細書で定義した本発明の併用治療は、前記治療の個々の構成成分を同時に、逐次的に、または別々に投与することとして実現することができる。
【実施例】
【０１４２】
以下の実施例は、本明細書に記載の化合物および方法を例示するために提供され、本明細書に記載の化合物および方法を限定するために提供されるのではない。当業者は、本明細書に記載の主題の真の主旨および範囲から逸脱することなく、さまざまな改変を行うことができる。
【０１４３】
（実施例１）
ＳＨＰＴを有する血液透析中のＥＳＲＤ患者において最初の第１相無作為化二重盲検プラセボ対照単回投与用量漸増二期間クロスオーバー試験を行った。この試験は、一部、配列番号３を健康な男性のボランティアに静脈内（ＩＶ）投与することの安全性、耐容性、薬物動態および薬力学を評価するため、ならびにこのプロトコールのための用量選択を通知するために行った。この試験はＳＨＰＴを有する血液透析被験体における第１ｂ相試験であった。
【０１４４】
血液透析中の患者２８人に配列番号３またはプラセボを単回投与した。５ｍｇ、１０ｍｇまたは２０ｍｇの用量を受けているコホートは二期間クロスオーバー法で試験し、一方、４０ｍｇまたは６０ｍｇの用量を受けている被験体は、コホート当たり被験体８人を配列番号３またはプラセボに無作為に割り付けた。
【０１４５】
血液透析の直後に、被験体を、フェーズ１ユニットに入院させ、３日間観察した。ベースラインの実験室試験を血液透析の２時間後に実施した。透析後に配列番号３を注射した後、インタクトなＰＴＨのレベルが６０〜８０％急速に減少し、その後、次の４８時間にわたってベースラインに向けて用量依存的に戻る（図１）。関連して血清カルシウムがわずかに（１０〜１６％）減少する。
【０１４６】
透析によって減少した血清リンレベルは、最初の８時間にわたってプラトーまで急速に上昇し、次いで、残りの透析と透析の間隔の間により緩徐に増大した（図２）。プラセボ被験体では、平均の血清リンは投薬後の最初の約３６時間の間に急速に増大し、その後、退院のときには、リンレベルはベースラインレベルの８４％超のプラトーに至った（図２）。驚いたことに、リンのプラトーレベルへの戻りの速度は、配列番号３を投与することによって著しく改変された。５ｍｇ用量の効果は最小であったが、より高い用量により、血清リンの上昇が著しく減少した。退院のときに、２０〜６０ｍｇの配列番号３を受けている被験体における血清リンのベースラインからの平均のパーセント増大は、２３％〜６０％にわたり、プラセボよりも少なくとも約２４パーセントポイント低かった。
【０１４７】
（実施例２）
第２相試験を、二重盲検無作為化プラセボ対照反復投与用量漸増試験として完了した。この試験は、慢性腎疾患に伴う骨ミネラル代謝異常（ＣＫＤ−ＭＢＤ）を有する血液透析被験体におけるＳＨＰＴの処置における配列番号３の効果を調査するための４週間の経過観察相を伴う単一群、非盲検１２週間用量設定試験であった。この試験の主要な目的は、ＣＫＤ−ＭＢＤを有する血液透析被験体のＳＨＰＴの処置における、有効性期間中のｉＰＴＨのベースラインからのパーセント変化によって評価される、配列番号３を週に３回ＩＶ投与することの効果を評価することであった。さらに、副次的な目的は、血清ｃＣａ（補正カルシウム）およびリンのベースラインからの変化を評価することであった。
【０１４８】
配列番号３の出発用量は５ｍｇであった。配列番号３の用量を、１５０≦３００ｐｇ／ｍＬを標的とするように設定した。被験体を、第５週および第９週の間の配列番号３の用量の増加について評価した。被験体の最新のｃＣａが≧８．０ｍｇ／ｄＬであり、用量増加を妨げる進行中の有害事象がなければ、配列番号３の用量を以下の通り調整した：ｉＰＴＨ≦３００ｐｇ／ｍＬの場合、用量は変化させなかった；ｉＰＴＨ＞３００ｐｇ／ｍＬの場合、その用量を、第５週の間に５ｍｇ増加させた（すなわち、５ｍｇから１０ｍｇにした）、または第９週の間に５ｍｇ増加させた（すなわち、ｉＰＴＨ≧３００ｐｇ／ｍＬかつ≦４５０ｐｇ／ｍＬ）もしくは１０ｍｇ増加させた（ｉＰＴＨ＞４５０ｐｇ／ｍＬ）。
【０１４９】
被験体３２人（８７％）が１２週間の処置期間を完了した。被験体５人（１３／５％）は処置期間が終わる前に離脱した。１２週間の処置期間を完了した３２人の被験体のうち、３０人の被験体が非盲検の延長試験に入り、２人の被験体が４週間の経過観察期間を完了した。
【０１５０】
主要評価項目は、有効性評価期間の最後の時点でのｉＰＴＨのベースラインからのパーセント変化であった。ベースラインのｉＰＴＨレベルを、最初の投薬の３週間以内かつ配列番号３の最初の投薬の前に得られた３つのｉＰＴＨの結果の平均と定義した。上記有効性評価期間は配列番号３の最後の投薬の１４日前からその３日後までであった。副次的評価項目は、ｉＰＴＨがベースラインから≧３０％低下した被験体の割合および有効性評価期間中にｉＰＴＨが≧３００ｐｇ／ｍＬである被験体の割合を含んだ。さらに、ｃＣａおよびリンの平均の変化に対する配列番号３の効果を評価した。
【０１５１】
全体的に、平均のベースラインｉＰＴＨは８５３．４ｐｇ／ｍＬであった。配列番号３処置には、処置期間の最後に、５３％のｉＰＴＨのベースラインからの平均の低下が伴った（９５％信頼区間（−６０．８、−４６．３）。ｉＰＴＨサブグループ（ベースラインｉＰＴＨ≦７００ｐｇ／ｍＬまたは＞７００ｐｇ／ｍＬ）においても結果は同様であり、これにより、この応答がベースラインｉＰＴＨ値とは無関係であったことが示唆された。
【０１５２】
時間に対してプロットすると、配列番号３処置では、１２週間の処置期間にわたって透析前のｉＰＴＨの進行性の持続的な低下が示された。二次応答者分析では、被験体の８９％で≧３０％のｉＰＴＨの低下が実現され、この割合は、疾患が重度である（すなわち、ｉＰＴＨ＞７００ｐｇ／ｍＬ）被験体の中でほんのわずかだけ低かった。全体的に、処置期間の最後に被験体の５６％でｉＰＴＨ≦３００ｐｇ／ｍＬが実現された。血清カルシウムレベルを、４．０ｇ／ｄＬを下回るアルブミンレベルに対して、方程式：補正カルシウム（ｃＣａ）＝（測定されたＣａ、ｍｇ／ｄＬ）＋［４−（アルブミン、ｇ／ｄＬ）］＊０．８を用いて調整した。平均のベースラインｃＣａは１０．１ｍｇ／ｄＬであり、上記処置期間の最後に１５％低下した。血清ｃＣａのより著しい減少が、疾患が重度である被験体で観察された。
【０１５３】
リンの測定値を透析前にプロトコールで指定される評価日に得た。全体的に、平均のベースラインのリンは５．７ｍｇ／ｄＬであり、重度の高いベースラインｉＰＴＨサブグループではベースラインレベルがより高かった。上記有効性処置期間の最後に、血清リンのベースラインからの平均パーセント変化は−１０．５％であり、疾患の重度が高い被験体では低下がより大きかった（表３）。
【０１５４】
【表３Ａ】
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全体的に、ｉＰＴＨが低いサブグループにおける１つのリンの平均のパーセント変化の例外を伴って、予め指定した主要評価項目および副次的評価項目の分析の全てにおいて、両方のサブグループにわたってｉＰＴＨ、ｃＣａおよびリンの有意な低下が示された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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