(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼血管疾患の治療に使用するための経口医薬組成物であって、血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ−Ｒ２）阻害剤またはその薬学的に許容される塩を含み、ここで、当該組成物が、連続的な投与は少なくとも５日間あけて行われる処方計画で使用され；そして前記ＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤が
５−[[４−[（２，３−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ]−２−ピリミジニル]アミノ]−２−メチルベンゾルスルホンアミド；
５−（（Ｓ）−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸[５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル]−アミド；
６−（６−アミノ−ピリミジン−４−イルオキシ）−ナフタレン−１−カルボン酸（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミド；
（−）−５−（（Ｓ）−７−アセチル−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸（５−シクロプロピル−イソキサゾール−３−イル）−アミド；
５−（５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸[５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル]−アミド；
１−（２−クロロ−４−（（６，７−ジメトキシキノリン−４−イル）オキシ）フェニル）−３−（５−メチルイソキサゾール−３−イル）ウレア；および
６−（６−ヒドロキシメチル−ピリミジン−４−イルオキシ）−ナフタレン−１−カルボン酸（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミド、
からなる群から選ばれるか、またはそれらの薬学的に許容される塩である、前記医薬組成物。
【請求項２】
前記ＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤が、
５−[[４−[（２，３−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ]−２−ピリミジニル]アミノ]−２−メチルベンゾルスルホンアミド；
５−（（Ｓ）−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸[５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル]−アミド；及び
１−（２−クロロ−４−（（６，７−ジメトキシキノリン−４−イル）オキシ）フェニル）−３−（５−メチルイソキサゾール−３−イル）ウレア
からなる群から選ばれるか、またはそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
眼血管疾患が加齢黄斑変性症、網膜静脈閉塞、糖尿病網膜症、黄斑浮腫または糖尿病性黄斑浮腫である請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
連続的な投与が６、７、８または９日間あけて行われる請求項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５】
連続的な投与が７日間あけて行われる請求項１〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
ＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤が５−（（Ｓ）−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸[５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル]−アミドまたはその薬学的に許容される塩である請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
ＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤が１−（２−クロロ−４−（（６，７−ジメトキシキノリン−４−イル）オキシ）フェニル）−３−（５−メチルイソキサゾール−３−イル）ウレアまたはその薬学的に許容される塩である請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８】
ＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤が５−[[４−[（２，３−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ]−２−ピリミジニル]アミノ]−２−メチルベンゾルスルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩である請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は眼疾患の処置における血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ−Ｒ２）阻害剤の使用に関する。より具体的には、本発明は眼血管疾患の処置において特定のＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤を間欠投与して用いることに関する。本明細書に記載されている特定の投与計画では、ＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤は５日ごとに一度、もしくはより低い頻度、５日〜２１日ごとに一度または６、７または８日ごとに一度の割合で投与される。
【背景技術】
【０００２】
ＶＥＧＦ−Ｒ２は特定の腫瘍学および眼科学的な適応症を含む種々の増殖性および血管新生疾患処置のための標的として認識されてきた。具体的にはソラフェニブ（Bayer、４−[４−[[４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル]カルバモイルアミノ]フェノキシ]−Ｎ−メチル−ピリジン−２−カルボキサミド）、パゾパニブ（Glaxo Smith−Kline、５−[[４−[（２，３−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ]−２−ピリミジニル]アミノ]−２−メチルベンゾルスルホンアミド）、およびチボザニブ（Aveo Pharmaceuticals、１−（２−クロロ−４−（（６，７−ジメトキシキノリン−４−イル）オキシ）フェニル）−３−（５−メチルイソキサゾール−３−イル）ウレア）が種々の腫瘍学的な適応症の処置について登録または臨床開発が進行している。
【０００３】
ソラフェニブは経口で３人の血管新生成人黄斑変性症（ＡＭＤ）の患者に単独またはベバシズマブの硝子体内投与と組み合わせて、連日または週に３回投与されてきたが、これは処置を受けた患者の数が少ないことおよび患者によっては疾患が治療なしで衰微し得ることから明確な効果は得られていない。参照：非特許文献１および非特許文献２
【０００４】
ＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤を眼疾患の処置に使用することは全身毒性の懸念および眼性血管疾患の処置に必要な投与期間が長いという課題を抱えていた。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】T．Diago，et．al．，Mayo Clin．Proc．2008；83*2）：231−234
【非特許文献２】M．Kernt，et．al．，Acta Ophthamologica，2008（86）456−458
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は間欠的な処方計画および該処方計画を用いた眼血管疾患の処置または予防方法を提供するものであり、処方計画では治療の必要な患者はＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤を５日間ごとに一度またはより低い頻度で投与される。好ましい処方計画はＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤が５〜２１日間ごとに一度、５〜１４日間ごとに一度、６〜１０日間ごとに一度、６、７または８日間ごとに一度または７日間ごとに一度投与される計画を含む。本発明の間欠的な処方計画は等用量のＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤を連日投与するのに匹敵する有効性をもたらし、また連日投与と比較して、全身の安全性に対する障害の軽減も提供する。より具体的には、本発明により提供される処方計画は、眼組織内でのＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤の連続した投与の間の期間におけるＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤の濃度維持および、患者の血漿からのＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤の急速な排出を示す。頻繁でない投与、血漿からの急速な排出および眼内への曝露が維持されることの組み合わせは実質的な有効性をもたらしながら、投与される薬の安全性を増大させる。
【０００７】
特定の局面では、本発明は治療有効量の血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ−Ｒ２）阻害剤を投与することで眼血管疾患を処置する治療方法であり、投与頻度は５日間ごとに一度またはそれより低い頻度、またはより好ましくは５〜２１日間に一度に投与される、方法を提供する。投与頻度が減少することにより化合物の全身への曝露は血漿濃度で計測されるように減少する一方、眼内濃度は上昇したまま維持される。
【０００８】
本明細書で提供される処置方法への使用に適した、特定の望ましいＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤は一週間に一度投与された場合に有効性を与えるＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤を含む。眼への曝露の上昇および急速な血漿排出をもたらすような化合物は本発明の方法での使用に適している。特定の局面では、本発明での使用に適した化合物はラットのレーザー誘発脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）モデルでのＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤のスクリーニングおよびプラシーボに対して少なくとも約４０％ＣＮＶのサイズを減少させる、それらの化合物の選択によって特定され得る。特に適した化合物はまたラットレーザー誘発ＣＮＶアッセイにおいて血漿から急速に排出される。急速な排出とは（１）投与４８時間後にＣｍａｘ１０％以下の血漿濃度であること、または（２）投与７２時間後に１０nM以下の血漿濃度であることのいずれかとして定義される。
【０００９】
一局面では、本発明は５〜２１日間ごとに一度、５〜１４日間ごとに一度、６〜１０日間ごとに一度、６、７または８日間ごとに一度、または７日間ごとに一度患者に投与するのに適した経口医薬の製造に用いるための、ＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。当該医薬は眼血管疾患、例えば加齢黄斑変性症、糖尿病網膜症、網膜静脈閉塞、および他の以下に開示する眼の適応症の処置に用いるのに適している。
【００１０】
本発明の医薬はまた黒色腫の処置に用いるのに適当であり得る。より具体的には、本発明の医薬は皮膚性、眼性または転移性の黒色腫の処置に用いられるのに適当であり得る。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１はラットＣＮＶモデルにおいて化合物２の連日経口投与に対するパーセント阻害をプロットしたものである。
【図２】図２は実施例１、２、および３のＣＮＶモデルでラットに異なった投与間隔で投与された２つの用量の化合物２の阻害の棒グラフである。
【図３】図３は０時間の時点で３０mg／kgの量を１回経口投与されたＢｒｏｗｎ Ｎｏｒｗａｙ（ＢＮ）ラットの血漿、網膜および後部眼杯における化合物１の濃度を時間でプロットしたものである。
【図４】図４は０時間の時点で１０mg／kgの量を１回経口投与されたＢＮラットの血漿、網膜および後部眼杯における化合物２の濃度を時間でプロットしたものである。
【図５】図５は０時間の時点で０．３mg／kgの量を１回経口投与されたＢＮラットの血漿、網膜および後部眼杯における化合物６の濃度を時間でプロットしたものである。
【図６】図６は０時間の時点で１０mg／kgの量を１回経口投与されたＢＮラットの血漿、網膜および後部眼杯における化合物９の濃度を時間でプロットしたものである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は連日よりも少ない処方計画のもとでＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤を患者に投与することで安全かつ効果的に眼血管疾患を処置するための特定の処方計画に関する。より具体的には、本発明は５日間ごとに一度またはより低い頻度、５〜２１日間ごとに一度、５〜１４日間ごとに一度、６〜１０日間ごとに一度、または６、７あるいは８日間ごとに一度ＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤が投与される処方計画に関する。驚くべきことに出願人は眼への曝露上昇の維持および全身の急速な排出を示す特定のＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤が、本明細書に示される、一週間に一度の処方計画を含む本発明の頻繁でない処方計画において使用するのに特に適していることを発見した。選択的に眼への曝露上昇の維持を示すＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤は治療法および、それを必要としている患者に高くない頻度で投与されるような医薬を可能にする。
【００１３】
第一の局面では、本発明は眼性血管疾患に苦しむまたは罹患しやすい患者を処置する方法であって、そのような処置を必要としている患者に血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ−Ｒ２）阻害剤またはその薬学的に許容される塩を複数の用量で投与することを含み、
（ａ）連続した投与は少なくとも５日間はあけて行われる；および
（ｂ）ＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤はレーザー誘発血管新生モデルにおいて上記（ａ）で示された投与頻度で等用量でラットに投与される場合、血管新生領域をプラシーボ対照に対して少なくとも約４０％減少させ、かつ投与７２時間後のラットにおいて約１０nM以下の血漿濃度を示す、
方法を提供する。
【００１４】
第二の局面において、本発明は眼性血管疾患に苦しむまたは罹患しやすい患者を処置する方法であって、そのような処置を必要としている患者に血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ−Ｒ２）阻害剤またはその薬学的に許容される塩を複数の用量で投与することを含み、
（ａ）連続した投与は少なくとも５日間はあけて投与される；および
（ｂ）ＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤は、レーザー誘発血管新生モデルにおいて上記（ａ）で示された投与頻度で等用量でラットに投与される場合、血管新生領域をプラシーボ対照に対して少なくとも約４０％減少させ、かつ投与から１〜５日間後の計測時に、ラットにおいて血漿への曝露の少なくとも５倍の後部眼杯への曝露を示す、
方法を提供する。
【００１５】
第三の局面において、本発明は眼性血管疾患に苦しむまたは罹患しやすい患者を処置する方法であって、そのような処置を必要としている患者に血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ−Ｒ２）阻害剤またはその薬学的に許容される塩を複数の用量で投与することを含み、連続した投与が少なくとも５日間あけて行われ、かつＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤が
５−[[４−[（２，３−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ]−２−ピリミジニル]アミノ]−２−メチルベンゾルスルホンアミド（パゾパニブ）、
５−（（Ｓ）−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸[５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル]−アミド；
６−（６−アミノ−ピリミジン−４−イルオキシ）−ナフタレン−１−カルボン酸（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミド；
（−）−５−（（Ｓ）−７−アセチル−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸（５−シクロプロピル−イソキサゾール−３−イル）−アミド；
５−（５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸[５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル]−アミド、１−（２−クロロ−４−（（６，７−ジメトキシキノリン−４−イル）オキシ）フェニル）−３−（５−メチルイソキサゾール−３−イル）ウレア（チボザニブ）；および６−（６−ヒドロキシメチル−ピリミジン−４−イルオキシ）−ナフタレン−１−カルボン酸（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミド、
またはその薬学的に許容される塩
からなる群から選択される、
方法を提供する。
【００１６】
第四の局面において、本発明は眼血管疾患の処置において使用される経口医薬の製造のための血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ−Ｒ２）阻害剤またはその薬学的に許容される塩の使用を提供し、該医薬は
（ａ）連続した投与は少なくとも５日間はあけて行われる；かつ
（ｂ）ＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤はレーザー誘発血管新生モデルにおいて上記（ａ）で示された投与頻度で等用量でラットに投与される場合、血管新生領域をプラシーボ対照に対して少なくとも約４０％減少させかつ投与後７２時間でラットにおいて約１０nM以下の血漿濃度を示す、
投与計画での使用に適する、使用を提供する。
【００１７】
第五の局面において、本発明は眼血管疾患の処置において使用される経口医薬の製造のための血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ−Ｒ２）阻害剤またはその薬学的に許容される塩の使用を提供し、該医薬は
（ａ）連続した投与は少なくとも５日間はあけて行われる；かつ
（ｂ）ＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤はレーザー誘発血管新生モデルにおいて上記（ａ）で示された投与頻度で等用量でラットに投与される場合、血管新生領域をプラシーボ対照に対して少なくとも約４０％減少させかつ投与から１〜５日間後の計測時に、ラットにおいて血漿への曝露の少なくとも５倍の後部眼杯への曝露を示す、
投与計画での使用に適する、使用を提供する。
【００１８】
第六の局面において、本発明は眼血管疾患の処置において使用される経口医薬の製造のための血管内皮細胞増殖因子受容体２（ＶＥＧＦ−Ｒ２）阻害剤またはその薬学的に許容される塩の使用であって、該医薬は連続した投与が少なくとも５日間はあけて行われる投与計画での使用に適当であり、ＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤は
５−[[４−[（２，３−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ]−２−ピリミジニル]アミノ]−２−メチルベンゾルスルホンアミド（パゾパニブ）、５−（（Ｓ）−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸[５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル]−アミド；
６−（６−アミノ−ピリミジン−４−イルオキシ）−ナフタレン−１−カルボン酸（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミド；
（−）−５−（（Ｓ）−７−アセチル−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸（５−シクロプロピル−イソキサゾール−３−イル）−アミド；
５−（５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸[５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル]−アミド、１−（２−クロロ−４−（（６，７−ジメトキシキノリン−４−イル）オキシ）フェニル）−３−（５−メチルイソキサゾール−３−イル）ウレア（チボザニブ）；および６−（６−ヒドロキシメチル−ピリミジン−４−イルオキシ）−ナフタレン−１−カルボン酸（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミド
またはその薬学的に許容される塩
からなる群から選択される、使用を提供する。
【００１９】
本発明の第一、第二、第三、第四、第五または第六の局面のいずれかの方法または使用において、眼血管疾患は加齢黄斑変性症、網膜静脈閉塞、糖尿病網膜症、黄斑浮腫、または糖尿病性黄斑浮腫である。
【００２０】
本発明の第一、第二、第三、第四、第五または第六の局面のいずれかの方法または使用において、連続した投与は６、７、８または９日間あけて行われる。特定の態様では、連続した投与は７日間あけて行われる。
【００２１】
本発明の第一、第二、第三、第四、第五または第六の局面のいずれかの方法または使用において、患者はヒトである。
【００２２】
本発明の方法における使用に適当であり得る特定の化合物はＷＯ２０１０／０６６６８４およびＷＯ２００６／０５９２３４において開示された化合物を含み、これらは各々言及することにより本明細書に包含される。一週間に一度の治療において有効な、出願‘６８４および‘２３４の特定の望ましい化合物はＷＯ２０１０／０６６６８４の実施例５４−Ｂ、５４−Ｑ、５７−Ｓ、１３５−Ａ、１３７−Ｎ、および１３７−Ｏの化合物およびＷＯ２００６／０５９２３４の実施例２６および５２の化合物を含む。本発明の一週間に一度の投与方法での使用に適当である、特定の他の化合物はパゾパニブ（ＷＯ２００７／０６４７５３）、チボザニブ（ＷＯ２００２／０８８１１０）を含む。特定の態様では、ＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤は５−（（Ｓ）−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸[５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル]−アミド（すなわち、ＷＯ２０１０／０６６６８４の実施例５４−Ｂ）、パゾパニブ、およびチボザニブ、またはその薬学的に許容される塩から選択される。
【００２３】
特定の態様において、ＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤は５−（（Ｓ）−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸[５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル]−アミドまたはその薬学的に許容される塩であり、またはＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤は１−（２−クロロ−４−（（６，７−ジメトキシキノリン−４−イル）オキシ）フェニル）−３−（５−メチルイソキサゾール−３−イル）ウレアまたはその薬学的に許容される塩であり、またはＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤は５−[[４−[（２，３−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ]−２−ピリミジニル]アミノ]−２−メチルベンゾルスルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩である。
【００２４】
５−（（Ｓ）−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸[５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル]−アミドおよび１−（２−クロロ−４−（（６，７−ジメトキシキノリン−４−イル）オキシ）フェニル）−３−（５−メチルイソキサゾール−３−イル）ウレアまたはその薬学的に許容される塩は特に本発明の方法および使用において用いるのに適当である。
【００２５】
周期が連日よりも少ない周期的なＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤の経口投与、例えば４日間ごとに一度、５日間ごとに一度、６日間ごとに一度の投与、週ごとの投与または隔週ごとの投与、は加齢黄斑変性症を含む眼血管疾患に対して効果を示すが、連日投与と比較して全身、例えば、血漿での化合物への曝露を軽減させる。理論に束縛されるものではないが、全身への曝露の減少はＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤の経口投与に関連する全身性の副作用を軽減させることが予期される。例えば６または７日間ごとに経口投与される化合物２は連日投与、２日間ごとに投与、または４日ごとに投与される化合物２と比較して向上した安全性プロファイルを有する。下記の実施例６〜９を参照のこと。
【００２６】
本発明はまたＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤を毎週投与することを含む、患者の眼血管疾患を処置または予防する方法であり、週ごとの用量は約０．１mg〜約８００mgの間、またはより好ましくは０．５〜５００mgの間である、方法を含む。好ましい週ごとの用量は、投与される具体的なＶＥＧＦ−Ｒ２阻害剤および患者の大きさに依存して変わりうる。特定の態様においては、週ごとで効果的なパゾパニブのヒトの用量は約５mg〜約８００mgの間、または好ましくは約３０mg〜約４００mgの間であり、およびチボザニブのヒトの週ごとの用量は約０．１mg〜約５mgの間、または好ましくは約０．５mg〜約２mgの間である。他の態様においては、５−（（Ｓ）−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸[５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル]−アミドまたは５−（５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸[５−（１−メチル−シクロプロピル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル]−アミドの有効な週ごとのヒトの用量は約３０mg〜約３００mgの間、または好ましくは約５０mg〜約２００mgの間である。他の態様においては、６−（６−アミノ−ピリミジン−４−イルオキシ）−ナフタレン−１−カルボン酸（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミド、５−（６−メチルアミノメチル−ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸（１−メチル−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−アミドまたは５−（６−メチルアミノメチル−ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸（５−シクロプロピル−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−アミドの有効な週ごとのヒトの用量は約５mg〜約１００mgの間である。他の態様においては、６−（６−ヒドロキシメチル−ピリミジン−４−イルオキシ）−ナフタレン−１−カルボン酸（３−トリフルオロメチル−フェニル）−アミドまたは５−（６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピロロ[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸（５−シクロプロピル−イソキサゾール−３−イル）−アミドの週ごとで有効なヒトの用量は約１mg〜約５０mgの間である。他の態様では、（−）−５−（（Ｓ）−７−アセチル−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロ−ピリド[３，４−ｄ]ピリミジン−４−イルオキシ）−インドール−１−カルボン酸（５−シクロプロピル−イソキサゾール−３−イル）−アミドの週ごとで有効なヒトの用量は約０．１mg〜約５mgの間である。
【００２７】
本明細書で使用する用語「眼血管疾患」は、異常または過剰な血管またはリンパ管に関連する脈絡膜、強膜、網膜または関連組織の眼疾患を意味することを意図している。本発明の方法によって処置または予防され得る特定の眼血管疾患は、血管新生および萎縮型加齢黄斑変性症、地図状萎縮、中心性漿液性網膜症、嚢胞様黄斑浮腫、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、光彩血管新生、未熟児の網膜症、中心または分枝網膜静脈閉塞、炎症性／感染性の網膜の血管新生／浮腫（例えば後部ブドウ膜炎、サルコイド、トキソプラズマ症、ヒストプラズマ症、フォークト−小柳−原田病、多巣性脈絡膜炎、慢性ブドウ膜炎、結核、梅毒症、点状および多巣性脈絡膜内層症）、網膜芽細胞腫、黒色腫、眼腫瘍、網膜剥離、近視性血管新生、網膜色素線条、イールズ病、コーツ病、ソースビー眼底変性症、虚血性網膜症（網膜動脈閉塞、高安病、頚動脈閉塞）、および脈絡膜破裂を含む。特定の態様においては、本発明の治療方法は、滲出型および萎縮型加齢黄斑変性症、糖尿病網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、網膜中心静脈閉塞および網膜分枝静脈閉塞の処置に適当である。
【００２８】
特定の局面では、本発明の処置方法はまた、黒色腫の処置または予防にも適当である。
【００２９】
本明細書で使用する用語「後部眼杯」は、網膜色素上皮、脈絡膜および強膜の複合体を意味する。
【００３０】
本明細書で使用する用語「等用量」は、患者または対象において同様に効果的な用量、例えばヒトにおいて同様に効果的な用量、と相関するラットにおける用量を意味する。例えば、ヒトの等用量はラットとヒトの間で体表面領域の概算または他の尺度となる要素に基づいて相関しうる。一つの限定されない例ではラットにおける１０mg／kgの経口投与用量は７０kgのヒトにおける１００mgの用量に相関すると推定される。ラットと対象種（すなわち、ヒト）の間の最終的な用量の相関は薬物動態学的性質、代謝、生物学的利用能など当該分野で既知のものを含む多くの生物学的性質に依存しうる。
【００３１】
本明細書で使用する用語「塩（複数も可）」は、本発明の化合物の酸付加または塩基付加塩を意味する。「塩」は具体的には「薬学的に許容される塩」を含む。用語「薬学的に許容される塩」はこの発明の化合物の生物学的有効性および特性を維持し、かつ典型的に生物学的または他の点で望ましくないものではない塩を意味する。多くの場合、本発明の化合物は、アミノおよび／またはカルボキシル基またはそれに似た基の存在によって酸および／または塩基塩を形成しうる。
【００３２】
薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸および有機酸、例えば酢酸、アスパラギン酸、安息香酸、ベシル酸、臭化物／臭化水素酸、重炭酸／炭酸、重硫酸／硫酸、カンファースルホン酸、塩化物／塩酸、クロルテオフィロナート、クエン酸、エタンジスルホン酸、フマル酸、グルセプト酸、グルコン酸、グルクロン酸、馬尿酸、ヨウ化水素酸／ヨウ化物、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリル硫酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、マンデル酸、メシル酸、メチル硫酸、ナフトエ酸、ナプシル酸、ニコチン酸、硝酸、オクタデカン酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸／リン酸水素／リン酸二水素、ポリガラクツロ酸、プロピオン酸、ステアリン酸、コハク酸、スルホサリチル酸、酒石酸、トシレートおよびトリフルオロ酢酸塩と形成されうる。
【００３３】
塩が由来しうる無機酸は、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などを含む。
【００３４】
塩が由来しうる有機酸は、例えば酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルホサリチル酸などを含む。
【００３５】
本明細書で使用される用語「薬学的に許容される担体」は、当業者に既知のように、溶媒、分散媒、コーティング、界面活性剤、抗酸化剤、防腐剤（例えば、抗菌剤、抗真菌剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩類、防腐剤、薬物安定化剤、結合剤、添加物、分解剤、滑剤、甘味剤、風味剤、色素などおよびそれらの組み合わせ剤のいずれかおよびすべてを含む。（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences、18th Ed、Mack Printing Company、1990、pp，1289−1329を参照のこと）。任意の従来の担体は、有効成分と適合しない限りをのぞき、治療または医薬組成物における使用が期待される。
【００３６】
用語、本発明の化合物の「治療有効量」は、対象の生物学的または医学的な応答、例えば酵素あるいは蛋白質活性の減少あるいは阻害、または症状の改善、適応症の軽減、疾患進行の減速あるいは遅延、または疾患の予防などを引き起こすであろう本発明の化合物の量を意味する。一つの限定されない態様においては、用語「治療有効量」は、対象に投与される場合に、（１）（ｉ）ＶＥＧＦ−Ｒ２を介する、または（ｉｉ）ＶＥＧＦ−Ｒ２活性に関連する、または（ｉｉｉ）（通常または異常な）ＶＥＧＦ−Ｒ２活性に特徴づけられる適応症、障害または疾患を少なくとも部分的に緩和、阻害、予防、および／または改善する；または（２）ＶＥＧＦ−Ｒ２活性を減少させるあるいは阻害する；または（３）ＶＥＧＦ−Ｒ２の発現を減少させるあるいは阻害するのに効果的な本発明の化合物の量を意味する。また別の限定されない態様では、用語「治療有効量」は細胞あるいは組織、または非細胞生物学的物質あるいは培地に投与される場合に、少なくとも部分的にＶＥＧＦ−Ｒ２活性を減少させるあるいは阻害する；または少なくとも部分的にＶＥＧＦ−Ｒ２の発現を減少させるあるいは阻害するのに効果的な本発明の化合物の量を意味する。ＶＥＧＦ−Ｒ２について上記の態様で示されたように、用語「治療有効量」の意味はまた同じ方法で他の任意の関連蛋白質／ペプチド／酵素、例えばＶＥＧＦ−Ｒ２または他のＶＥＧＦ−Ｒ２などにも適用される。
【００３７】
本明細書で使用する用語「対象」は動物を意味する。典型的には動物は哺乳動物である。対象はまた、例えば霊長類（例えばヒト、男性または女性）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚、鳥などを意味する。特定の態様では、対象は霊長類である。さらに他の態様においては、対象はヒトである。
【００３８】
本明細書で使用される用語「阻害する」、「阻害」または「阻害している」は、特定の適応症、症状、または障害または疾患の軽減あるいは抑制、または生物学的活性または過程のベースライン活性での有意な低下を意味する。
【００３９】
本明細書で使用される用語、任意の疾患または障害を「処置する」、「処置している」または「処置」は、一つの態様において、疾患または障害を改善する（すなわち、疾患またはその医学的な症状の少なくとも一つの進行を遅延あるいは停止または軽減させる）ことを意味する。他の態様においては「処置する」、「処置している」または「処置」は、患者に認識され得なくてよいものを含む身体的なパラメーターを少なくとも一つ緩和または改善することを意味する。さらにまた別の態様では、「処置する」、「処置している」または「処置」は、身体的に（例えば、認識できる症状の安定化）、生理学的に（例えば、身体的パラメーターの安定化）のいずれか、または両方で疾患または障害を調節することを意味する。さらに別の態様においては、「処置する」、「処置している」または「処置」は、疾患または障害の発症または発達または進行を予防あるいは遅らせることを意味する。
【００４０】
本明細書で使用される場合、対象が生物学的、医学的にまたは生活の質において処置から益を得うるならば、その対象はそのような処置を「必要」としている。
【００４１】
本明細書で、本発明の文脈（特に特許請求の範囲の文脈）で用いられる用語「単数表現」および類似語は本明細書内で特記しない限りまたは明らかに文脈に矛盾しない限り、単数形と複数形の両方を包含すると解釈されるべきである。
【００４２】
他の局面において本発明は、本発明の化合物および経口投与のための薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。加えて、本発明の医薬組成物は、（制限なくカプセル、錠剤、丸剤、顆粒、粉末または坐薬を含む）固体形で、または（制限なく溶液、懸濁液またはエマルジョンを含む）液体形で作り上げられ得る。医薬組成物は滅菌操作のような通常の薬学的な操作を受け得、および／または慣用の不活性希釈剤、滑剤、または緩衝剤、ならびにアジュバント、例えば防腐剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤および緩衝剤などを含みうる。
【００４３】
典型的に、医薬組成物は有効成分を
ａ）希釈剤、例えば、ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよび／またはグリシン；
ｂ）滑剤、例えば、シリカ、滑石、ステアリン酸、そのマグネシウムまたはカルシウム塩および／またはポリエチレングリコール；錠剤についてはまた
ｃ）結合剤、例えば、マグネシウムアルミニウムケイ酸塩、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよび／またはポリビニルピロリドン；望ましければ
ｄ）崩壊剤、例えば、デンプン類、寒天、アルギン酸またはそのナトリウム塩、または起沸性混合物；および／または
ｅ）吸収剤、着色剤、香味剤および甘味剤
とともに含む錠剤またはゼラチンカプセルである。
【００４４】
錠剤は、当該分野で既知の方法によりフィルムコーティングまたは腸溶性コーティングのいずれかをされうる。
【００４５】
経口投与に適当な組成物は錠剤、トローチ剤、水性あるいは油性懸濁液、分散性の粉末または顆粒、エマルジョン、硬あるいは軟カプセル、またはシロップまたはエリキシルの形態で有効量の本発明の化合物を含む。経口使用を意図した組成物は医薬組成物の製造について当該分野で既知の任意の方法によって調製され、かつかかる組成物は薬学的に洗練されてかつのみやすい製剤を提供するために甘味剤、風味剤、着色剤および防腐剤からなる群から選択された一つ以上の剤を含みうる。錠剤は有効成分を、錠剤の製造に適当な毒性を示さない薬学的に許容される添加物との混合で含んでいてよい。これらの添加物は、例えば不活性希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；造粒および崩壊剤、例えばコーンスターチまたはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンまたはアカシア；および滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクである。錠剤は胃腸管での分解および吸収を遅らせ、それ故により長期間にわたり活性を維持させるために、既存の技術によってコーティングされないもしくはコーティングされる。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルのような時間遅延物質が用いられ得る。経口使用のための製剤は有効成分が不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合される硬ゼラチンカプセル、または有効成分が水または油媒体、例えばピーナツ油、流動パラフィンまたはオリーブ油と混合される、軟ゼラチンカプセルとして示されうる。
【００４６】
本発明による化合物の活性は、以下のインビトロおよびインビボ手法により評価されうる。
【実施例】
【００４７】
以下は実施例のみを記述したものである。
【表１】
0005934229.tif 000002
【００４８】
実施例１：ラットレーザー誘発脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）モデル；連日投与
３月齢のＢＮラットはプラシーボもしくは表１の有効剤を以下の表２に示された投与濃度および製剤でレーザー処理に約１時間先だって投与された。ラットの眼は一滴のフェニレフリンおよびシクロペントレート（Altaire Pharmaceuticals inc．Aquebogue、NYおよびAkorn Inc．Lake Forest、IL）により散大されその後固定化された。それぞれの眼はOculight GLx ５３２nMレーザー（Iridex）を用いて４箇所、視神経から２−３乳頭径のレーザー熱傷処理がされた。各試験グループは１０匹のラット、２０個の眼および８０個のデータポイントを有した。レーザー光硬化は成功すると蒸気泡を誘発した。
【００４９】
レーザー障害の後、ラットはプラシーボまたは表１の化合物を表２に示された投与濃度および製剤で連日、１日目〜１１日目または１２日目まで投与された。眼を回収する直前に、２，０００kdのフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）デキストラン血管標識が静注された。組織は最後の投与が行われてから約２４時間後に回収された。
【００５０】
眼は４％パラホルムアルデヒドで固定され網膜色素上皮（ＲＰＥ）／脈絡膜／強膜複合体が切断されスライドガラスにのせられた。各ＣＮＶ病変の蛍光像がキャプチャーされ、病変領域はAxiovisionソフトウェア（バージョン４．５ Zeiss）を用いてマスキングをかけたデータで定量化された。グループ間の違いはニューマン−ケウルス事後分析（Prism v．4．02、GraphPad Software，Inc．La Jolla CAによる）を用いて、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）によって分析された。本実施例で有効性はプラシーボと比較した処置後のＣＮＶ領域の減少％を意味することを定義される。
【００５１】
図１は実施例１のラットモデルにおいて化合物２の連日投与のＥＤ５０／ＥＤ９０をプロットした図である。化合物２は連日投与により濃度依存的な阻害を示す。連日投与の処方計画では、化合物２のＥＤ５０は３．３mg／kgであり、ＥＤ９０は１３．０mg／kgであった。ＥＤ５０はＣＮＶ領域が溶媒処理された対照のＣＮＶ領域よりも５０％小さいことを意味し、およびＥＤ９０は同様に９０％小さいことを意味する。ｎは具体的な用量の化合物２について完了している個々のラットＣＮＶ試験の数を意味する。各グループは１０匹のラット、４個のレーザー熱傷／眼、および８０のデータポイント／グループからなっていた。アッセイの長さはレーザー後１１または１２日間にわたった（１mg／kg ｎ＝２、３mg／kg ｎ＝５、１０mg／kg ｎ＝７、３０mg／kg ｎ＝１）。
【表２】
0005934229.tif 000003
Ａ＝水中０．５％メチルセルロース、０．１％ｔｗｅｅｎ８０
Ｂ＝１０％エタノール ９０％ＰＥＧ４００
有効性は化合物で処理された動物における溶媒対照と比較したＣＮＶ領域の減少％として計測される。
【００５２】
実施例２：ラットレーザー誘発脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）モデル；２、４、６日ごとの投与
３月齢のＢＮラットはレーザー処理に約１時間先だってプラシーボまたは０．５％メチルセルロースおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ８０水溶液中の３あるいは１０mg／kgいずれかの化合物２の懸濁液を投与された。ラットの眼は１滴のフェニレフリンおよびシクロペントレート（Altaire Pharmaceuticals inc．Aquebogue、NYおよびAkorn Inc．Lake Forest、IL）で散大されその後固定化された。それぞれの眼はOculight GLx ５３２nMレーザー（Iridex）を用いて４箇所、視神経から２−３乳頭径のレーザー熱傷処理がされた。レーザー光硬化は成功すると蒸気泡を誘発した。各試験グループは１０匹のラット、２０の眼および８０のデータポイントを有した。
【００５３】
レーザー障害の後、ラットはプラシーボまたは３あるいは１０mg／kgの化合物２を２日間ごと、４日間ごとまたは６日間ごとに一度投与された。眼を回収する直前に、２，０００kdのフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）デキストラン血管標識が静注された。組織は最後の投与が行われてから約２４時間後に回収された。２日間ごとに投与した場合、試験はレーザー後１１日目で完了した。４日間ごとまたは６日間ごとに投与した場合、試験はレーザー後１３日目に完了した。
【００５４】
眼は４％パラホルムアルデヒドで固定され、ＲＰＥ／脈絡膜／強膜複合体が切断されスライドガラスにのせられた。各ＣＮＶ病変の蛍光像がキャプチャーされ、病変領域はAxiovisionソフトウェア（バージョン４．５ Zeiss）を用いてマスキングをかけたデータで定量化された。グループ間の違いはニューマン−ケウルス事後分析（Prism v． 4．02 GraphPad Software、Inc．La Jolla CAによる）を用いて一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）によって分析された。
【００５５】
本実施例で有効性はプラシーボと比較した処置後のＣＮＶ領域の減少％を意味することを定義される。
【００５６】
実施例３：ラットレーザー誘発脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）モデル；週ごとに投与
３月齢のＢＮラットはレーザー処理に約１時間先だってプラシーボまたは表１の有効剤を上記表２に示された投与濃度および製剤で投与された。ラットの眼は１滴のフェニレフリンおよびシクロペントレート（Altaire Pharmaceuticals inc．Aquebogue、NYおよびAkorn Inc．Lake Forest、IL）で散大されその後固定化された。それぞれの眼はOculight GLx ５３２nMレーザー（Iridex）を用いて４箇所、視神経から２−３乳頭径のレーザー熱傷処理がされた。各試験グループは１０匹のラット、２０の眼および８０のデータポイントを有した。レーザー光硬化は成功すると蒸気泡を誘発した。
【００５７】
レーザー障害の後、ラットは表２に示されたように製剤された表１の化合物またはプラシーボを６日目および１３日目に投与された。眼を回収する直前に、２，０００kdのフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）デキストラン血管標識が静注された。組織は最後の投与が行われてから約２４時間後に回収された。
【００５８】
眼は４％パラホルムアルデヒドで固定され、ＲＰＥ／脈絡膜／強膜複合体が切断されスライドガラス上に置かれた。各ＣＮＶ病変の蛍光像がキャプチャーされ、病変領域はAxiovisionソフトウェア（バージョン４．５ Zeiss）を用いてマスキングをかけたデータで定量化された。グループ間の違いはニューマン−ケウルス事後分析（Prism v．4．02、GraphPad Software、Inc．La Jolla CAによる）を用いて一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）によって分析された。本実施例で有効性はプラシーボと比較した処置後のＣＮＶ領域の減少％を意味することを定義される。
【００５９】
図２は実施例１、２、および３のＣＮＶモデルにおいて異なる投与間隔でラットに投与された、２つの用量の化合物２の阻害を棒グラフにしたものである。溶媒対照に対しｐ＜０．００１の統計学的信頼性がすべての１０mg／kgの投与計画および連日または２日ごとの３mg／kgの投与について観察された。４、６または７日間ごとの３mg／kgの投与では溶媒対照と比較して統計学的に有意な差は全くみられなかった。
【００６０】
２日間ごと、４日間ごと、６日間ごとに１０mg／kgで投与された化合物２は、実施例１および２のラットＣＮＶモデルにおける連日の投与と同等の有効性をもたらした。化合物２の週ごとの投与は１０mg／kg量の連日投与に比較してわずかに低い有効性を示した。
【００６１】
試験は化合物２の連日よりも少ない投与が有効性を示しうるかどうかを調べるために行われた。図２は実施例１、２および３のラットレーザーＣＮＶモデルにおける３mg／kgまたは１０mg／kgでの化合物２の投与について、有効性の結果をまとめた棒グラフである。化合物２はラットレーザーＣＮＶモデルにおいて連日または２、４、６および７日間ごとに３および１０mg／kg投与された。各試験で、最終投与は組織回収の２４時間前になされた。実施例１−３に示されたように試験の長さは１１〜１４日間にわたった。溶媒対照に対するｐ＜０．００１の統計学的信頼性はすべての１０mg／kgの投与計画および連日ならびに２日間ごとの３mg／kgの投与で観察された。４、６および７日ごとの３mg／kgの投与について、溶媒対照に対するｐ＞０．０５の統計学的信頼性が観察された。
【００６２】
実施例１および３で試験されたすべての化合物は週ごとに投与された場合、連日投与の場合と比べて幾らかの有効性を示す。化合物の連続的な投与と投与の間の期間が長くなると、化合物１、２、３および６が最も高いレベルの有効性を示す。化合物８、９および１０は週ごとの処方計画で投与された場合に最も低い有効性を示した。
【００６３】
実施例４：ラットレーザー誘発脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）モデル；一回投与
三月齢のＢＮラットはレーザー処理をされ、かつ最初にプラシーボまたは有効剤での処理は行われなかった。ラットの眼は１滴のフェニレフリンおよびシクロペントレート（Altaire Pharmaceuticals inc．Aquebogue、NYおよびAkorn Inc．Lake Forest、IL）で散大されその後固定化された。それぞれの眼はOculight GLx ５３２nMレーザー（Iridex）を用いて４箇所、視神経から２−３乳頭径のレーザー熱傷処理がなされた。各試験グループは１０匹のラット、２０の眼および８０のデータポイントを有した。レーザー光硬化は成功すると蒸気泡を誘発した。
【００６４】
レーザー障害後１３日目または２１日目のいずれかに、ラットはプラシーボまたは０．５％メチルセルロースおよび０．５％および０．１％Ｔｗｅｅｎ８０水溶液中での１０mg／kgの化合物２の懸濁液を投与された。眼を回収する直前に、２，０００kdのフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）デキストラン血管標識が静注された。組織は一回の投与が行われてから約２４時間後に回収された、すなわち試験はレーザー処理後から１４日目または２２目のいずれかに完了した。
【００６５】
眼は４％パラホルムアルデヒドで固定され、ＲＰＥ／脈絡膜／強膜複合体が切断されスライドガラスにのせられた。各ＣＮＶ病変の蛍光像がキャプチャーされ、病変領域はAxiovisionソフトウェア（バージョン４．５ Zeiss）を用いてマスキングをかけたデータで定量化された。グループ間の違いはニューマン−ケウルス事後分析（Prism v．4．02、GraphPad Software、Inc．La Jolla CAによる）を用いて一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）によって分析された。本実施例で有効性はプラシーボと比較した処置後のＣＮＶ領域の減少％を意味することを定義される。
【００６６】
化合物２またはプラシーボはレーザー後１３日目または２１日目のいずれかに一回経口投与された。ＣＮＶ領域は二つの実験で１４日目および２２日目に測定された。ＣＮＶはプラシーボを投与されたラットに比べてそれぞれ４９％（１３日目に一回投与）および４３％（２１日目に一回投与）阻害された（ｐ＜０．００１、溶媒対照に対する）。
【００６７】
実施例５：一回の経口投与後のＢＮラットにおける眼の薬物動態
三月齢のＢＮラットは表１の有効剤を以下の表３に示される投与濃度および製剤で経口投与された。眼組織および血漿は有効剤あたり２匹のラットから、投与後６、２４、４８、７２、９６、１２０および１４４時間の時点で回収された。回収された眼組織は網膜および後部眼杯であった。各タイムポイントで４つの個々の網膜、４つの個々の後部眼杯および２つの個々の血漿サンプルで薬剤レベルが測定された。
【００６８】
眼組織はホモジナイズされかつ血漿蛋白質は沈殿化され、薬剤濃度がＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより分析された。網膜、後部眼杯（ＰＥＣ）および血漿への化合物１、２、６および９の曝露は表４に曲線下面積（ＡＵＣ）として記載されている。
【表３】
0005934229.tif 000004
Ａ＝水中０．５％メチルセルロース、０．１％ｔｗｅｅｎ８０
Ｂ＝１０％エタノール ９０％ＰＥＧ４００
【００６９】
図４は後部眼杯、網膜および血漿における化合物２の濃度をプロットしたものである。化合物２は眼組織（例えば、網膜およびＰＥＣ）では７日間実質的に一定の濃度で維持されるが、血漿からは比較的急速に排除された。これら４つの化合物についての血漿に対する網膜への曝露の比は化合物２が最も高かった。化合物２の薬物動態学的プロファイルは眼組織で薬理学的有効性を少なくとも７日間維持するための遊離薬物を提供する。化合物２の血漿からの急速な除去はＶＥＧＦ−Ｒ２阻害に関連する望ましくない全身性の副作用を最小化することが期待される。理論に束縛されるものではないが、全身（例えば、血漿）への曝露を局所的な眼への曝露から分けることは化合物２の全身濃度を減少させることにより標的での全身性副作用のリスクを最小化させる一方で、眼血管疾患の処置において局所的な有効性の維持を提供すると考えられる。
【００７０】
図３は化合物１の後部眼杯、網膜および血漿での濃度をプロットしたものである。化合物１は後部眼杯組織における眼への曝露が少なくとも一週間維持されることを示す。しかしながら化合物１はまた、投与後一週間の期間を通じて血漿への曝露が増加していることも示す。
【００７１】
図５は後部眼杯、網膜および血漿での化合物６の濃度をプロットしたものである。化合物６は化合物２に最も近い眼性プロファイルを有する。しかし、化合物６は化合物２よりも低い血漿に対する網膜への曝露の比を示す。０．３mg／kgでは化合物６は週ごとの投与では連日投与に対して有効性を３９％失う。対照的に、化合物２は１０mg／kgでは週ごとの投与では連日投与に比べて１６％の有効性を失う。表２を参照のこと。
【００７２】
図６は後部眼杯、網膜および血漿における化合物９の濃度をプロットしたものである。化合物９の後部眼杯、網膜および血漿濃度は実質的に各サンプリングのタイムポイントにおいて類似している。理論に束縛されるものではないが、化合物９が一週間に一度の処方計画で投与される場合に有効性が欠如するのは、一週間の過程を通じて血漿および眼への曝露が類似していること、および眼への曝露が定常的に減少することによると考えられる。
【表４】
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【００７３】
実施例６−８ 化合物２を経口投与されたＢＮラットでの組織病理学的試験
化合物２または溶媒が０．５％メチルセルロースおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ８０中の懸濁液として３〜３０mg／kgの範囲の用量でＢＮラットに経口投与された。１つの処方計画では、３、１０および３０mg／kgの用量で１４日間連日与えられた。このグループの動物は最後のフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）デキストラン血管標識の静注を受けなかった。
【００７４】
その他の処方計画、すなわち、２、４または６日間ごとの投与では、ラットは実施例２に記載されたようにレーザー誘発ＣＮＶを受けた。限定剖検ならびにＣＮＶの解析が同じラット個体のそれぞれにおいて行われた。０日目（前述したようにレーザー処理の日）からはじまり１０mg／kgの化合物２が２日間ごとに１１日間、４日間ごとに１３日間、または６日間ごとに１３日間（表５にまとめられているように）投与された。溶媒は化合物２が投与されなかった日に投与された。試験の最後に、動物は安楽死の約１０分前にＰＢＳに溶解させた２，０００kdのＦＩＴＣ−デキストラン（１２．５mg／mL）５００μLの静注を受けた。ラットへの注入は記載されたようにＣＮＶの脈管構造領域の評価を可能にするために行われた。
【００７５】
限定剖検はこれらの各試験からグループあたり５〜６匹のラットについて行われた。腎臓、心臓、脳、胃腸管（胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、大腸、および直腸）、膵臓、および腸間膜リンパ節はすべての動物から回収された。組織は１０％緩衝ホルマリンで固定され常にスライドガラスへと処理された。すべての組織は顕微鏡によって調べられた。
【００７６】
【表５】
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数字は各グループのラットに与えられたmg／kgでの投与量を示す。「溶媒」はその日には溶媒が経口投与されたことを示す。「回収」はサンプルがラットから回収されたことを示す。上付き文字（a）は実施例６を意味し、上付き文字（b）は実施例７を意味し、および上付き文字（c）は実施例８を意味する。
【００７７】
実施例６ 化合物２を連日１４日間与えられたＢＮラットにおける組織病理学的発見
ＢＮラットは表５の日程（a）により３、１０または３０mg／kgの用量を１４日間連日投与された。試験項目関連性の変化は膵臓においては３mg／kg／日以上の用量であらわれ、かつ腎臓および脳の脈絡叢では１０mg／kg／日以上の用量であらわれた。腎臓では試験項目関連性の糸球体症が１０mg／kg／日以上の用量であらわれ、一方３０mg／kg／日の濃度では重症度の増大した尿細管好塩基球増加症および炎症性浸潤があらわれた。膵外分泌腺（腺房細胞および、場合によっては導管細胞）の単細胞壊死は３mg／kg／日以上の用量でおこった。脳では、脈絡叢間質のヒアリン化／浮腫および小動脈／細動脈に影響を及ぼす細胞残屑が１０mg／kg／日以上の用量であらわれた。さらなる膵臓の変化は１０mg／kg／日以上の用量における腺房細胞萎縮および酵素原顆粒の減少を含んだ。
【００７８】
実施例７ 化合物２を２日間おきに１１日間投与されたＢＮラットにおける組織病理学的発見
ＢＮラットは表５の日程（b）にしたがい１０mg／kg用量を連日１１日間投与された。２日おきの投与のグループにおいては試験項目関連性の変化は脈絡叢細動脈に関連する微小炎症性浸潤を含んだ。腎臓では微小から軽度の糸球体症があらわれた。さらに対照と比較して重症度の増大した尿細管好塩基球増加症がおこり、かつ炎症性細胞浸潤の頻度も増加した。膵臓では、膵臓腺房細胞および、場合によっては導管細胞の単細胞壊死が明らかだった。
【００７９】
実施例８ 化合物２を４日または６日間ごとに１３日間投与されたＢＮラットにおける組織病理学的発見
ＢＮラットは表５の日程（c）にしたがい１０mg／kgの用量で連日１３日間投与された。４日ごとの投与グループの試験では、試験項目関連性の変化は微小から軽度の糸球体症、微小な脈絡叢の変化（細胞残屑および／またはヒアリン化／浮腫）および／または膵外分泌腺の微小なアポトーシスを含んだ。さらに、４日間ごとの１０mg／kgのグループの一動物は散在性に周囲に分布する固有層の増大によって特徴づけられる、大腸の浮腫を有していた。４日間ごと、１０mg／kgのグループの他の一動物は試験項目によるものであると考えられる直腸の筋層における局所的な領域の出血および炎症を有した。
【００８０】
本試験条件下では、６日間ごとに１０mg／kgを投与された動物は何ら試験項目関連性の変化を持たなかった。
【００８１】
実施例９ 化合物２を週ごとに４週間投与されたＢＮラットにおける組織病理学的発見
化合物２または溶媒は０．５％メチルセルロースおよび０．１％Ｔｗｅｅｎ８０中の懸濁液として未処理のＢＮラットに３〜３０mg／kg／週の用量で経口投与された（１、８、１５、２２および２９日目での投与、ｎ＝５匹のラット／グループ、詳細は表６に概約）。
【表６】
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ｘは投与された日を示す
【００８２】
試験の最後に、対照および３０mg／kg投与量のグループから、完全剖検が行われ選択されたリストの組織および器官が分析された。すべての動物から肉眼的病変および潜在的標的組織（腎臓、脳、心臓および膵臓を含む）が調べられた。試験項目関連性の変化は顕微鏡的には全くあらわれていなかった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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