(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リゾホスファチジルイノシトール又はその塩を有効成分とする食後ＧＩＰ上昇抑制剤。
【請求項２】
リゾホスファチジルイノシトール又はその塩を有効成分とする食後の消化促進剤。
【請求項３】
リゾホスファチジルイノシトール又はその塩を有効成分とする胃もたれ改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＧＩＰ上昇抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＧＩＰ（ガストリックインヒビトリーポリペプチド又はグルコースディペンデントインスリノトロピックポリペプチド）は、グルカゴン・セクレチンファミリーに属する消化管ホルモンの１つである。ＧＩＰはＧＬＰ−１（グルカゴン様ペプチド１）と共にインクレチンと称され、脂質や糖質の摂食時に小腸に存在するＫ細胞より分泌されることが知られている。また、ＧＩＰは、胃酸分泌抑制作用や胃運動抑制作用を有することが知られている（非特許文献１〜３）。そのため、ＧＩＰの上昇抑制は、食後の消化促進や胃もたれの改善に有効であると考えられる。
【０００３】
これまでの研究によって、ＧＩＰの機能を阻害する物質として、３−ブロモ−５−メチル−２−フェニルピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−オール（ＢＭＰＰ）が知られ、食後ＧＩＰの分泌を抑制するものとして、グアガム等が知られている（特許文献１、非特許文献４〜９）。また、近年では、ＧＩＰ受容体アンタゴニストである（Ｐｒｏ３）ＧＩＰが知られている。しかし、これらの物質は、安全性や効果の面で十分とはいえない。
【０００４】
一方、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）は、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）にホスホリパーゼＡ2（ＰＬＡ2）を作用させることにより得られる物質であり、ＰＩと共に生体内で細胞の情報伝達機構、例えば、細胞内カルシウム上昇、カルシウム放出、ＰＬＡ2活性化、アデニル酸シクラーゼ活性化、ＰＫＣ活性化、細胞増殖、Ｋチャネル開放、インスリン放出等に関与している。
【０００５】
ＬＰＩの機能としては、脳機能改善、学習能力増強、記憶力増強、痴呆予防・治療（特許文献２）、インターフェロン産生増強（特許文献３）、ヒアルロン酸分泌誘導、再上皮細胞化促進、再中皮細胞化促進による創傷治療（特許文献４）、コラーゲン産生促進（特許文献５）、インスリン分泌促進（非特許文献１０）、ＴＲＰＶ２又はＴＲＰＶ８活性化（非特許文献１１、１２）、ＧＰＲ５５のリガンド（非特許文献１３）、ＲｈａＡ依存性カルシウムシグナル及び転写因子ＮＦＡＴ活性化の促進（非特許文献１４）ＫチャネルＴＲＥＫ−１活性化（非特許文献１５）が知られている。
【０００６】
しかしながら、ＬＰＩとＧＩＰ分泌との関係については何ら報告されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第０１／８７３４１号パンフレット
【特許文献２】特開平７−１７８５５号公報
【特許文献３】特開平５−３２００６９号公報
【特許文献４】特表２００８−５２１７８６号公報
【特許文献５】国際公開ＷＯ２００９／０２８２２０号パンフレット
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｂｒｏｗｎ  ＪＣら、Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  １９６９，４７：１１３−１１４
【非特許文献２】Ｆａｌｋｏ  ＪＭら、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．１９７５，４１：２６０−２６５
【非特許文献３】織田敏次ら、消化管  機能と病態、１９８１年、中外医学社、Ｐ２０５−２１６
【非特許文献４】Ｇａｔｅｎｂｙ  ＳＪら、Ｄｉａｂｅｔ  Ｍｅｄ．  １９９６，１３：３５８−３６４
【非特許文献５】Ｅｌｌｉｓ  ＰＲら、Ｂｒ  Ｊ  Ｎｕｔｒ．  １９９５，７４：５３９−５５６
【非特許文献６】Ｓｉｍｏｅｓ  Ｎｕｎｅｓ  Ｃら、Ｒｅｐｒｏｄ  Ｎｕｔｒ  Ｄｅｖ．  １９９２，３２：１１−２０
【非特許文献７】Ｍｏｒｇａｎ  ＬＭら、Ｂｒ  Ｊ  Ｎｕｔｒ．  １９９０，６４：１０３−１１０
【非特許文献８】Ｒｅｑｕｅｊｏ  Ｆら、Ｄｉａｂｅｔ  Ｍｅｄ．  １９９０，７：５１５−５２０
【非特許文献９】Ｍｏｒｇａｎ  ＬＭら、Ｂｒ  Ｊ  Ｎｕｔｒ．  １９８５，５３：４６７−４７５
【非特許文献１０】Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．  １９８６，  １３８（２）：７２０−７２７
【非特許文献１１】Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  −  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ２００９，  １７９３（３）：５２８−５３９
【非特許文献１２】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２００７，  ２７（１２）：３３４７−３３５５
【非特許文献１３】Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ    Ｒｅｓ  Ｃｏｍ．  ２００７，  ３６２（４）：９２８−９３４
【非特許文献１４】ＦＡＳＥＢ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ２００９，  ２３（１）：１８３−１９３
【非特許文献１５】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．  ２００３，  １９５（３）：１４７−１６４．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、医薬品、食品等に利用することのできるＧＩＰ上昇抑制剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、ＧＩＰの上昇をコントロールできる素材について検討したところ、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）がＧＩＰの上昇を抑制する作用を有することを見出した。
【００１１】
すなわち、本発明は、以下を提供する。
（１）リゾホスファチジルイノシトール又はその塩を有効成分とするＧＩＰ上昇抑制剤。
（２）リゾホスファチジルイノシトール又はその塩を有効成分とする食後の消化促進剤。
（３）リゾホスファチジルイノシトール又はその塩を有効成分とする胃もたれ改善剤。
【発明の効果】
【００１２】
本発明のＧＩＰ上昇抑制剤は、優れたＧＩＰ上昇抑制作用を有し、かつ安全性も高いので、医薬品、食品等の有効成分として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】ＬＰＩの糖摂取によるＧＩＰ上昇抑制作用を示す図である。＊：ｐ＜０．０５
【図２】ＬＰＩの糖及び脂質摂取によるＧＩＰ上昇抑制作用を示す図である。＊：ｐ＜０．０５
【図３】相対ＧＩＰ血中濃度−時間曲線下面積を示す図である。＊＊：ｐ＜０．０１
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明において「ＧＩＰ上昇抑制」とは、脂質及び糖質を含む食事、特に脂質を多く含む食事、そのなかでもトリアシルグリセロールを多く含む食事を摂取することにより、小腸に存在するＫ細胞から分泌されたＧＩＰの上昇を抑制することをいう。すなわち、「ＧＩＰ上昇抑制」とは、主として、食後に生じるＧＩＰ上昇を抑制することをいう。そして、本発明における「ＧＩＰ上昇抑制作用」は、Ｋ細胞からのＧＩＰ分泌を抑制することでＧＩＰ上昇を抑制するＧＩＰ分泌抑制作用、及び血中ＧＩＰ濃度を低下させることによりＧＩＰ上昇を抑制するＧＩＰ低下作用のいずれをも含む概念である。
【００１５】
本明細書において、「改善」とは、疾患、症状又は状態の好転、疾患、症状又は状態の悪化の防止又は遅延、あるいは疾患又は症状の進行の逆転、防止又は遅延をいう。
【００１６】
本明細書において、「非治療的」とは、医療行為、すなわち治療による人体への処理行為を含まない概念である。
【００１７】
本明細書において、リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）とは、下記式で表される化合物である。
【００１８】
【化１】
0006026723.tif 000002
【００１９】
上記式中、Ｒは炭素数１３−１９の飽和又は不飽和の直鎖炭化水素鎖を示す。Ｒは好ましくは炭素数１５の直鎖飽和炭化水素鎖であるか、炭素数１７の直鎖不飽和炭化水素鎖である。ＬＰＩを構成する脂肪酸は１種であっても、２種以上の混合物であっても良い。
【００２０】
本明細書において、ＬＰＩの塩としては、薬学的に許容される塩であれば特に制限されず、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属の塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属の塩、アンモニウム塩等が挙げられる。
【００２１】
ＬＰＩは、例えば、大豆、卵黄等に由来する天然リン脂質、又はそれらを加水分解、水素添加、エステル交換、溶剤分画、精製処理、酵素処理したリン脂質を原料として、ホスフォリパーゼＡ2を触媒としてリン脂質の２位の結合を分解する方法により得たものを使用することができる。また、リン脂質として、モノグリセリドやジグリセリドのリン酸化によって得られたリン酸エステル等のリン脂質を利用することもできる。
このようにして得られるＬＰＩ又はその塩は、医薬品上又は食品上許容し得る規格に適合し、本発明の効果を発揮するものであれば、粗精製物であってもよく、さらに公知の分離精製方法を適宜組み合わせてこれらの純度を高めてもよい。精製手段としては、有機溶剤沈殿、遠心分離、限界濾過膜、高速液体クロマトグラフやカラムクロマトグラフ等が挙げられる。
また、市販のＬＰＩ又はその塩を使用することもできる。
【００２２】
後記実施例に示すように、ＬＰＩ又はその塩は、ＧＩＰ上昇を有意に抑制する作用を有する。従って、ＬＰＩ又はその塩は、ＧＩＰ上昇抑制のために使用することができる。また、ＧＩＰの上昇抑制は、胃酸分泌の抑制及び胃運動の抑制を軽減させることから、ＬＰＩ又はその塩は、食後の消化促進や胃もたれ、胃酸分泌能の改善のために使用することができる。当該使用は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する検体における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。
また、ＬＰＩ又はその塩は、ＧＩＰ上昇抑制剤、ＧＩＰ上昇を抑制することに基づく食後の消化促進剤、胃もたれ改善剤、胃酸分泌能の改善剤等（以下、「ＧＩＰ上昇抑制剤等」）として使用することができ、さらにこれらの剤を製造するために使用することができる。このとき、当該ＧＩＰ上昇抑制剤等には、当該ＬＰＩ又はその塩を単独で、又はこれ以外に、必要に応じて適宜選択した担体等の、配合すべき後述の対象物において許容されるものを使用してもよい。なお、当該製剤は配合すべき対象物に応じて常法により製造することができる。
【００２３】
当該ＧＩＰ上昇抑制剤等は、ＧＩＰの上昇抑制や食後の消化促進、胃もたれ、胃酸分泌能の改善等の各効果を発揮する、ヒト若しくは動物用の医薬品、医薬部外品、食品、又は飼料の有効成分として配合して使用することができる。また、当該ＧＩＰ上昇抑制剤等は、食後の消化促進、胃もたれ、胃酸分泌能の改善をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した食品、機能性食品、病者用食品、特定保健用食品等に応用できる。
【００２４】
本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等を医薬品の有効成分として用いる場合、当該医薬品は任意の投与形態で投与され得る。投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、外用剤等による非経口投与が挙げられる。
このような種々の剤型の医薬製剤を調製するには、本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
【００２５】
これらの投与形態のうち、好ましい形態は経口投与であり、ＧＩＰ上昇抑制剤等を含む経口投与用製剤中のＬＰＩ又はその塩の含有量（ＬＰＩ換算）は、一般的に０．０１〜１００質量％、特に０．１〜５０質量％が好ましく、更に好ましくは１〜２０質量％とするのが好ましい。
【００２６】
本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等を食品の有効成分として用いる場合、その形態は、固形、半固形または液状であり得る。例としては、パン類、ケーキ類、麺類、菓子類、ゼリー類、冷凍食品、アイスクリーム類、乳製品、飲料などの各種食品の他、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）が挙げられる。
種々の形態の食品を調製するには、本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて用いることができる。当該食品中のＬＰＩ又はその塩の含有量（ＬＰＩ換算）は、一般的に０．００１〜３０質量％とするのが好ましく、０．０１〜１０質量％とするのがより好ましく、更に好ましくは０．１〜５質量％とするのが好ましい。
【００２７】
上記製剤の投与量又は摂取量は、対象者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、経口投与又は摂取の場合成人１人当たり、ＬＰＩ又はその塩の含有量（ＬＰＩ換算）として、１日あたり０．００１〜１０００ｍｇ/ｋｇ体重とすることが好ましく、より０．００５〜５００ｍｇ/ｋｇ体重、さらに０．０２〜２５０ｍｇ／ｋｇ体重、よりさらに０．０５〜２００ｍｇ/ｋｇ体重とするのが好ましい。
【００２８】
また、本発明のＧＩＰ上昇抑制剤等は、摂食・摂餌時或いは摂食・摂餌前に投与又は摂取するのが好ましく、特に摂食・摂餌前５分から３０分以内に投与又は摂取するのが好ましい。投与又は摂取対象者としては、空腹時血中ＧＩＰ値が３０ｐｇ／ｍＬ以上、または胃液分泌機能検査において、基礎分泌量が３０ｍＬ／時間以下のヒトが好ましい。
【実施例】
【００２９】
製造例１  ＬＰＩの調製
大豆レシチン（ＳＬＰ−ホワイト、辻製油より入手）３００ｇをクロロホルム２５００ｍＬに溶解した後、シリカゲル（シリカゲル６０、Ｍｅｒｃｋ社製）１ｋｇを加え、１時間攪拌混合した。次いでシリカゲルをろ別し、ろ液をシリカゲルカラムクロマト（シリカゲル６０  １ｋｇ使用、Ｍｅｒｃｋ社）により分離し、粗ホスファチジルイノシトール１８ｇを得た。これをクロロホルム３５０ｍＬ溶解した後、メタノール１７５ｍＬおよび生理食塩水１３０ｍＬを加え洗浄した。得られたクロロホルム溶液は、濃縮した後、さらにメタノール６００ｍＬにより洗浄し、精製ホスファチジルイノシトール１５ｇを得た。
得られた精製ホスファチジルイノシトール１５ｇに、ヘキサン２００ｍＬ、酢酸エチル１００ｍＬを加え溶解した後、２００ｍＭのＴＲＩＳ−塩酸緩衝液（ｐＨ８．５）１００ｍＬ、８０ｍＭ塩化カルシウム水溶液１００ｍＬ、及びホスホリパーゼＡ2（Ｌｅｃｉｔａｓｅ  １０Ｌ、ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ社製）２ｍＬを加え、４０℃、１５時間攪拌した。反応液を濃縮した後、クロロホルム８８０ｍＬ、メタノール４４０ｍＬ、１Ｎ塩酸８２．５ｍＬ、水４７．５ｍＬを加え、液々分配した。得られたメタノール水層を飽和重曹水で中和（ｐＨ７）し、減圧濃縮、凍結乾燥を行い、粗リゾホスファチジルイノシトール１５ｇを得た。これをさらにエタノール６００ｍＬで洗浄した後、減圧乾燥を行い、精製リゾホスファチジルイノシトールのナトリウム塩１０ｇを得た。
【００３０】
精製リゾホスファチジルイノシトールナトリウム塩の構成脂肪酸をガスクロマトグラフィーで分析した。
構成脂肪酸組成の分析は、基準油脂分析法（日本油化学会）３．２．３＿１９９６に従い実施した。すなわち、試料を０．５Ｍ水酸化カリウム−メタノール溶液により加水分解した後、三フッ化ホウ素−メタノール試薬でメチルエステル化し、生成する脂肪酸メチルエステルをガスクロマトグラフィーで分析した。
ガスクロマトグラフィー分析条件は次の通り。
カラム：ＤＢ−２３（Ｊ＆Ｗ）３０ｍ×０．２５ｍｍ×０．２５μｍ
Ｃａｒｒｉｅｒ  ｇａｓ：Ｈｅ、２．３０ｍＬ／ｍｉｎ
Ｉｎｊｅｃｔｏｒ：Ｓｐｌｉｔｌｅｓｓ、Ｔ＝２５０℃
Ｄｅｔｅｃｔｏｒ：ＦＩＤ、Ｔ＝２５０℃
Ｓａｍｐｌｅ：５μＬ
昇温プログラム
（１）５０℃にて１分保持、（２）２５℃／分で１２０℃まで昇温、（３）２℃／分で２５０℃まで昇温、（４）２５０℃で５分保持
分析の結果、精製リゾホスファチジルイノシトールナトリウム塩の脂肪酸組成は、パルミチン酸：６５．１％、オレイン酸：１１．７％、リノール酸：２３．２％（ＧＣａｒｅａ％）であった。
【００３１】
実施例１  リゾホスファチジルイノシトールのＧＩＰ上昇抑制作用（１）
（１）方法
製造例１で得た精製リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）ナトリウム塩を５％（ｗ／ｖ）グルコース溶液に濃度１％（ｗ／ｖ）となるように溶解し、試験サンプルとした。コントロールとしては、５％（ｗ／ｖ）グルコース溶液を用いた。
７週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（日本クレア）を標準粉末飼料ＣＥ−２（日本クレア）において１週間予備飼育した。飼育環境は室温を２２±２℃、湿度を５５±１０％とし、照明時間を７時から１９時とした。１７時間絶食した後、１群９匹として体重がほぼ同一になるように群分けした。イソフルラン麻酔下で試験サンプル（５％グルコース＋１％ＬＰＩ溶液）を、表１に示した割合になるようにゾンデにより経口投与した（ＬＰＩ群）。コントロール群には５％グルコースを投与した。投与10分後にイソフルラン麻酔下で門脈より採血し（ＥＤＴＡ処理微量採血管（テルモ製）にＤＰＰＶＩ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ及びアプロチニンを添加）、血中ＧＩＰを測定した。ＧＩＰは、ＥＬＩＳＡ法（ＲＡＴ／ＭＯＵＳＥ  ＧＩＰ（ＴＯＴＡＬ）  ＥＬＩＳＡ  ＫＩＴ、ＬＩＮＣＯ）により測定を行った。
【００３２】
（２）結果
結果を表１及び図１に示す。
各値は平均±標準偏差で示した。群間の統計学的有意差については、対照群に対するＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔを行なった（＊：ｐ＜０．０５）。
【００３３】
【表１】
0006026723.tif 000003
【００３４】
表１及び図１より、ＬＰＩを摂取したマウスではＧＩＰ分泌量が低く、ＬＰＩに糖摂取による血中ＧＩＰ濃度上昇に対する抑制効果が認められることが確認された。
【００３５】
実施例２  リゾホスファチジルイノシトールのＧＩＰ上昇抑制作用（２）
（１）方法
製造例１で得た精製リゾホスファチジルイノシトール（ＬＰＩ）ナトリウム塩を５％（ｗ／ｖ）グルコース＋５％（ｗ／ｖ）トリオレインエマルションに濃度０．５％（ｗ／ｖ）となるように溶解し、試験サンプルとした。コントロールとしては、５％（ｗ／ｖ）グルコース＋５％（ｗ／ｖ）トリオレインエマルションを用いた。
７週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（日本クレア）を標準粉末飼料ＣＥ−２（日本クレア）において１週間予備飼育した。飼育環境は室温を２２±２℃、湿度を５５±１０％とし、照明時間を７時から１９時とした。１７時間絶食した後、１群５匹として体重がほぼ同一になるように群分けした。イソフルラン麻酔下で試験サンプル（５％グルコース＋５％トリオレイン＋０．５％ＬＰＩエマルション）を、表２に示した割合になるようにゾンデにより経口投与した（ＬＰＩ群）。コントロール群には５％グルコース＋５％トリオレインエマルションを投与した。投与前、投与１０分、３０分、６０分後にイソフルラン麻酔下で眼窩より採血し（ヘパリン処理ヘマトクリット微量採血管、ＶＩＴＲＥＸ製）、血中ＧＩＰを測定した。ＧＩＰは、ＥＬＩＳＡ法（ＲＡＴ／ＭＯＵＳＥ  ＧＩＰ（ＴＯＴＡＬ）  ＥＬＩＳＡ  ＫＩＴ、ＬＩＮＣＯ）により測定を行った。
【００３６】
（３）結果
最大血中ＧＩＰ濃度である投与１０分後の血中ＧＩＰ濃度の結果を表２及び図２に示す。６０分までの相対ＧＩＰ血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ：ａｒｅａ  ｕｎｄｅｒ  ｔｈｅ  ｃｕｒｖｅ）の結果を表３及び図３に示す。
各値は平均±標準偏差で示した。群間の統計学的有意差については、対照群に対するＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ−ｔｅｓｔを行なった（＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１）。
【００３７】
【表２】
0006026723.tif 000004
【００３８】
【表３】
0006026723.tif 000005
【００３９】
表２、３及び図２、３の結果から、ＬＰＩを摂取したマウスではＧＩＰ分泌量が低く、ＬＰＩに糖及び脂質摂取による血中ＧＩＰ濃度上昇に対する抑制効果が認められることが確認された。
【図１】
0006026723.tif 000006
【図２】
0006026723.tif 000007
【図３】
0006026723.tif 000008