(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を含んでなる、Ｍ２マクロファージ活性化プールの減少および／またはＭ１マクロファージプールを増加させるための組成物であって、前記ヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体が、（ａ）配列番号２４を有する重鎖と、（ｂ）配列番号２８を有する軽鎖とを含んでなる、組成物。
【請求項２】
癌、喘息、アレルギーおよび進行性線維性疾患からなる群から選択される疾患の治療に用いられる、請求項１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に、とも呼ばれるマクロファージの活性化（マクロファージ分極とも呼ばれる）を調節する化合物を投与することによるＭ１型（マクロファージＭ１分極）免疫応答の誘導に関する。本発明は、マクロファージの活性化／分極を調節するためのＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の使用に関する。本発明はまた、マクロファージのｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ分極を評価することにより、患者におけるＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の投与有効性を評価する方法に関する。本発明はさらに、処置後コンパニオン診断および被処置対象に対するＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の効果を評価するためのアッセイに関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症の際、循環単球が炎症部位に動員され、そこで循環単球は特定のサイトカインおよび増殖因子の存在によって指示されたマクロファージ表現型を採る。成熟マクロファージは、Ｍ１分極「古典的活性化」マクロファージとＭ２分極または「代替的活性化」マクロファージの２つの集団に分けられる。マクロファージは重要な腫瘍浸潤細胞であり、腫瘍の成長および転移に中心的な役割を果たす。ほとんどの固形腫瘍では、マクロファージの存在は腫瘍の成長および転移に有利である。最近の研究は、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）がＭ２表現型を示すことを示している。これらの腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）は、インターロイキンＩＬ−１０およびトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）βを産生して全般的な抗腫瘍免疫応答を抑制する。同時に、ＴＡＭは血管形成促進因子の分泌により腫瘍の新血管新生を促進し、浸潤の微小環境を規定して腫瘍の転移および播種を助長する。これらの理由で、Ｍ２  ＴＡＭの選択的枯渇は、抗癌療法の新規なアプローチと考えられてきた(Sica et al., 2006, European Journal of Cancer, 42,717-727)。
【０００３】
マクロファージは、分極様式で腫瘍に対する免疫応答に関与する。Ｍ１分化はＧＭ−ＣＳＦにより惹起され、さらにインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、細菌リポ多糖（ＬＰＳ）、または腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）により刺激され、シグナル伝達兼転写活性化因子(signal transducer and activator of transcription)（ＳＴＡＴ）、活性化Ｂ細胞の核因子κ軽鎖エンハンサー(kappa-light-chain-enhancer of activated B cells)（ＮＦκＢ）、およびマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ(mitogen-activated protein kinases)（ＭＡＰＫ）を含むいくつかのシグナル伝達経路によって媒介されるこれらの事象は、反応性酸素種および酸化窒素（ＮＯ）などの物質の産生を促進し、抗原提示能を高めＩＬ１２などのサイトカインの産生を介してＴｈ１免疫を誘導することによって、次に続く炎症性免疫応答を促進する。これに対して、Ｍ２マクロファージの活性化とは、ＩＬ４／ＩＬ１３により刺激されるマクロファージ、ＩＬ１０により誘導されるマクロファージおよび免疫複合体により惹起されるマクロファージを含むＭ１の活性化以外の方法で活性化されるマクロファージを表すために用いられる。Ｍ１とＭ２の活性化の間の多くの分子的違いの中でも、ＩＬ１２とＩＬ１０産生の比率がＭ１およびＭ２マクロファージを区別するために重要である。注目すべきは、ＴＡＭは、Ｍ２マクロファージの多くの特性を有している。
【０００４】
ＴＡＭは、ＩＬ−１２ｌｏｗＩＬ−１０ｈｉｇｈ表現型だけでなく調節機能に関連するＦｃＲを介した高い食作用能も特徴とするＭ２プロフィールを示す(Schmieder et al. 2012, Semin Cancer Biol., 22, 289-297)。ヘモグロビンスカベンジャー受容体（ＣＤ１６３）が、ＴＡＭにより発現されるＭ２分極マクロファージのマーカーとして同定されている(Ambarus et al. 2012, 375,196-206)。ＴＡＭは、ＣＳＦ−１およびＣＣＬ−２（ＭＣＰ−１）により動員される、腫瘍微小環境において最も豊富な免疫抑制細胞集団を表し得る(Sica et al. 2006, Eur J Cancer., 42, 717-727)。
【０００５】
同様に、代替的に活性化されるＭ２マクロファージもいくつかの病理に関連づけられており、その最も主なものがアレルギーおよび喘息である(Duffield, 2003, Clin. Sci. 104, 27; Gordon, 2003, Nat. Rev. Immunol., 3, 23; Dagupta and Keegan, J. Innate Immun., 2012, 4, 478)。
【発明の概要】
【０００６】
本発明者らは今般、ある特定のモノクローナル抗体がＭ２マクロファージをＭ１マクロファージに切り換える（すなわち、Ｍ２マクロファージではなくＭ１の分化を誘導する）ことができることを示した。本発明者らは、前記モノクローナル抗体が表在性ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）をダウンレギュレートすること、ＭＣＰ−１（マクロファージ走化性タンパク質１、ＣＣＬ−２とも呼ばれる）、ＩＬ−６、ＭＭＰ９および／またはＩＬ−１０産生をダウンレギュレートすること、およびＩＬ−１２、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−αの産生を促進することができることを示した。本発明者らはさらに、前記モノクローナル抗体がヒト単球からのＣＤ１６３＋Ｍ２型マクロファージの分化を阻害すること、およびＭ１／Ｍ２マクロファージ比を高めることを示した。
【０００７】
（発明の開示）
本発明は、広義には、マクロファージの活性化を調節することによる免疫調節の方法に関する。
【０００８】
本明細書全体を通して用いられる用語「１つ(a and an)」は、文脈がそうではないことを明示しない限り、「少なくとも１つ」、「少なくとも第一」、「１以上」または「複数」の記載成分または工程を意味するという意味で用いられる。例えば、用語「１つの細胞」は、その混合物を含め、複数の細胞を含む。
【０００９】
用語「および／または」は、本明細書で用いられる場合にはいつも、「および」、「または」または「前記用語で結ばれた要素の総ての組合せもしくは他のいずれかの組合せ」の意味を含む。
【００１０】
用語「約」または「およそ」は、本明細書で用いる場合、所与の値または範囲の２０％以内、好ましくは１０％以内、より好ましくは５％以内を意味する。用語「約ｘ」はさらにｘの値を含む。
【００１１】
本明細書で用いる場合、「含んでなる(comprising and comprise)」は、パーツキット、製品、組成物および方法が記載の成分または段階を含むが、他のものを排除しないことを示すことを意図する。例えば、「ｘおよびｙを含んでなる組成物」は、ｘおよびｙを含む任意の組成物を包含し、何であれ他の成分がその組成物中に存在してよい。同様に、「ｘの工程を含んでなる方法」は、ｘがその方法において唯一の工程である場合であれ、複数の工程のうちの１つに過ぎない場合であれ、ｘが実施される任意の方法を包含し、他の工程がどれだけあってもよく、また、それらの他の工程と比較してｘがどれだけ簡単であっても複雑であってもよい。
【００１２】
製品、組成物および方法を定義するために用いる場合、「から本質的になる」とは、何らかの本質的意義のある他の成分または工程を排除することを意味するものとする。よって、列挙された成分から本質的になる組成物は、微量な混入物および薬学上許容される担体を排除するものではない。「からなる」は、微量要素とは言えない他の成分または工程を排除することを意味するものとする。
【００１３】
第一の実施形態によれば、本発明は、望ましくないＭ２マクロファージ分極に関連する病態に罹患している患者においてＭ２マクロファージの活性化を調節することによる免疫調節法に関し、前記方法は、前記患者に有効量のＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を投与する工程を含んでなる。本発明はより具体的には、前記患者がＣＳＦ−１Ｒ活性に関連する病態にさらに罹患している場合の前記免疫調節法に関する。
【００１４】
特定の一実施形態によれば、本発明は、特に、望ましくないＭ２マクロファージ分極に関連する病態に罹患している患者において、Ｍ２マクロファージ分極を調節するためのヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の使用に関する。特定の一実施形態によれば、前記患者は、ＣＳＦ−１Ｒ活性に関連する病態にさらに罹患している。
【００１５】
本出願は「マクロファージの分極／活性化の調節」に関する。この用語は、本発明の調節抗体がＭ２マクロファージ活性化プールの減少および／またはＭ１マクロファージプールの増加、好ましくはＭ２マクロファージ活性化プールの減少とＭ１マクロファージプールの増加をもたらすことを意味する。よって、Ｍ１／Ｍ２比が大きくなる。本明細書に開示されるように、これはＭ１およびＭ２マクロファージに関連がある因子のレベルの変化によって示すことができる。このような因子の例としては、ＣＤ６４またはＣＤ１６３などの膜マーカー、ＩＬ６、ＩＬ１０またはＩＬ１２などのサイトカイン、インターフェロン、ＭＣＰ−１、ＭＭＰ９などが挙げられる。この患者において「マクロファージの活性化を調節する」とは、例えば、本発明のＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を患者に投与した後にＩＬ１２／ＩＬ１０比、ＭＣＰ−１もしくはＩＬ−６レベル、またはＣＤ１６３−／ＣＤ１６３＋マクロファージ比の増加を測定することにより認識することができる。
【００１６】
別の実施形態によれば、本発明は、望ましくないＭ２分極に関連する病態に罹患している患者においてＭ１マクロファージプールを増加させる方法に関し、前記方法は、前記患者に有効量のＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を投与する工程を含んでなる。本発明はより具体的には、前記患者がＣＳＦ−１Ｒ活性に関連する病態にさらに罹患している場合の前記免疫調節法に関する。
【００１７】
特定の実施形態によれば、望ましくないＭ２分極に関連する病態に罹患している患者においてＭ１マクロファージプールを増加させる前記方法は、さらにマクロファージＭ２プールを減少させる。
【００１８】
「患者」は脊椎動物、例えば哺乳類、例えばヒトを意味する。哺乳類には、限定されるものではないが、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、およびブタが含まれる。本発明によれば、「患者」は望ましくないＭ２活性化に関連する病態に罹患しており、特定の実施形態によれば、ＣＳＦ−１Ｒ活性に関連する病態にさらに罹患している。
【００１９】
本発明はまた、より具体的には、患者、特に、望ましくないＭ２分極に関連する病態および／またはＣＳＦ−１Ｒ活性に関連する病態に罹患している患者において、マクロファージ腫瘍誘発(pro-tumoral)機能（すなわち、腫瘍形成性）を低減し、かつ／またはマクロファージ腫瘍抑制活性を増強するための一方法に関し、前記方法は、前記患者に有効量のＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を投与する工程を含んでなる。
【００２０】
特定の実施形態によれば、本発明の方法は、腫瘍浸潤、転移、腫瘍細胞増殖、腫瘍成長、腫瘍生存、新血管新生、自然免疫または獲得免疫の抑制、および細胞外マトリックスのリモデリングからなる群から選択される少なくとも１つのマクロファージ腫瘍誘発機能を抑制する。
【００２１】
よって、本発明に関して「マクロファージの活性化／分極を調節する」は、腫瘍浸潤、転移、腫瘍細胞増殖、腫瘍成長、腫瘍生存、新血管新生、獲得または自然免疫の抑制、および細胞外マトリックスのリモデリングからなる群から選択される少なくとも１つのマクロファージ腫瘍誘発機能（すなわち、腫瘍形成性）を低減することをさらに意味することができる。
【００２２】
特定の実施形態によれば、本発明の方法は、マクロファージ、特に、ヒトマクロファージによるマクロファージＭＣＰ−１、ＭＭＰ−９およびＩＬ−６の産生を阻害する。
【００２３】
特定の実施形態によれば、本発明の方法は、表在性ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）の発現をマクロファージ、特に、ヒトマクロファージ上でダウンレギュレートする。
【００２４】
特定の実施形態によれば、本発明の方法は、マクロファージ、特に、ヒトマクロファージによるＩＬ−１２（より詳しくは、ＩＬ−１２  Ｐ７０型）の産生を促進し、かつ／またはＩＬ−１２／ＩＬ−１０比をアップレギュレートする。
【００２５】
特定の実施形態によれば、本発明の方法は、分泌因子の手段によりマクロファージの活性化状態を調節する。
【００２６】
特定の実施形態によれば、本発明の方法は、患者、特に、望ましくないＭ２マクロファージ分極に関連する病態に罹患している患者において下記：
（ｉ）腫瘍へのＴＡＭ動員；
（ｉｉ）少なくとも１つのマクロファージ腫瘍誘発機能；
（ｉｉｉ）腫瘍血管新生；
（ｉｖ）腫瘍浸潤および転移；
（ｖ）腫瘍成長；
（ｖｉ）腫瘍細胞増殖
のうち少なくとも１つを低減する。特定の実施形態によれば、前記患者は、ＣＳＦ−１Ｒ活性に関連する病態にさらに罹患している。
【００２７】
本発明はまた、患者、特に、望ましくないＭ２マクロファージ分極に関連する病態に罹患している患者、またはＣＳＦ−１Ｒ活性に関連する病態に罹患している患者において、マクロファージをＭ１型（マクロファージＭ１分極）免疫応答に向かわせ、かつ／またはＭ２型（マクロファージＭ２分極）免疫応答を回避させる方法に関し、前記方法は、前記患者に有効量のＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を投与する工程を含んでなる。
【００２８】
本発明はさらに、患者、特に、望ましくないＭ２マクロファージ分極に関連する病態に罹患している患者またはＣＳＦ−１Ｒ活性に関連する病態に罹患している患者において、マクロファージをＴｈ１免疫応答に向かわせ、またはＴｈ２免疫応答を回避させる方法に関し、前記方法は、前記患者に有効量のＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を投与する工程を含んでなる。
【００２９】
本発明はまた、マクロファージ分極を調節するためのＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の使用に関する。本発明はまた、マクロファージをＭ１型（マクロファージＭ１分極）免疫応答に向かわせるための、ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の使用に関する。本発明はまた、マクロファージにＴｈ１型免疫応答を刺激させるためのＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の使用に関する。本発明はまた、マクロファージをＭ１型（マクロファージＭ１分極）免疫応答に向かわせ、かつ／またはマクロファージにＴｈ１型免疫応答を刺激させるために、マクロファージの活性化を調節するためのＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を含んでなる、医薬組成物などの組成物の使用に関する。
【００３０】
本明細書で用いる場合、用語「と結合できる」とは、ヘテロなタンパク質集団およびその他の生物製剤の存在下で標的タンパク質の存在の決定因となる結合反応を意味する。従って、示されたアッセイ条件下で、本発明による抗体はＣＳＦ−１Ｒの少なくとも一部と優先的に結合し、かつ、好ましくは、試験サンプル中に存在する他の成分と有意には結合しない。本発明による抗体とＣＳＦ−１Ｒ標的の間の特異的結合とは、結合親和性が少なくとも１０３Ｍ−１、好ましくは１０５Ｍ−１、１０６Ｍ−１、１０７Ｍ−１、１０８Ｍ−１、１０９Ｍ−１または１０１０Ｍ−１であることを意味する。
【００３１】
本明細書で用いる場合、用語「ＣＳＦ−１Ｒ」はヒトＣＳＦ１受容体を意味する。
【００３２】
本明細書で用いる場合、「抗体」または「Ａｂ」は最も広い意味で用いられる。従って、「抗体」または「Ａｂ」は、従来のハイブリドーマ技術、組換え技術により産生されたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）などの天然または人工のもの、および／またはそれらの機能的フラグメントであり得る。本発明の抗体は好ましくはモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。
【００３３】
本明細書で用いる場合、用語「可変領域」は、結合認識特異性のための決定基を含有する軽鎖（ＶＬ）または重鎖（ＶＨ）の可変領域、またはドメインを意味する。可変ドメインは抗原認識に関与し、抗原結合部位を形成する。重鎖および軽鎖両方の可変領域は、４つのフレームワークサブ領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４）を含んでなるセグメントに分けられ、Ｋａｂａｔのデータベースに定義される超可変配列の３つのストレッチ、すなわち、相補性決定領域（ＣＤＲ）が挿入され、ＣＤＲ１はＦＲ１とＦＲ２の間に位置し、ＣＤＲ２はＦＲ２とＦＲ３の間に位置し、ＣＤＲ３はＦＲ３とＦＲ４の間に位置する。特定のサブ領域をＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３またはＦＲ４として指定せずに、他のものによって示されるフレームワーク領域は、単一の天然免疫グロブリン鎖の可変領域内で組み合わせられたＦＲを表す。本明細書で用いる場合、単数のＦＲは、フレームワーク領域を構成する４つのサブ領域のうちの１つを表し、複数のＦＲは４つのサブ領域のうちの２以上を表す。抗体のフレームワーク領域は、成分である軽鎖と重鎖を合わせたフレームワーク領域であり、ＣＤＲの位置を特定し、アラインするのに役立つ。ＣＤＲは、抗原のエピトープに結合特異性および親和性を付与する抗体の結合部位の形成を主として担う。抗原結合領域を提供するＨ鎖またはＬ鎖の可変領域内には、特異性の異なる抗体間での極度の可変性のために「超可変」と呼ばれる、より短い配列がある。このような超可変領域は「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」領域とも呼ばれる。これらのＣＤＲ領域は、特定の抗原決定基構造に対する抗体の基本的特異性を説明する。総ての抗体の可変重鎖および軽鎖はそれぞれ３つのＣＤＲ領域を有し、個々の軽（Ｌ）鎖および重（Ｈ）鎖に関して、それぞれ他とは不連続である（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３と呼ばれる）。
【００３４】
「共投与する」とは、互いに共に、一緒に、協調的に投与することを意味し、２以上の薬剤の同時または逐次投与を含む。
【００３５】
「有効量」とは一般に、例えば、マクロファージの活性化の調節などを含め、炎症の望ましくない作用を改善するために有効な、所望の局所的または全身的効果をもたらす量を意味する。例えば、有効量は、有益なまたは所望の臨床結果を実現するために十分な量である。有効量は、単回投与で総てを一度に提供することもできるし、または数回の投与で有効量となる分割量で提供することもできる。有効量と考えられる量の正確な決定は、それらの大きさ、齢、損傷、および／または処置される疾患もしくは損傷、ならびにその損傷が起こってからもしくはその疾患が発症してからの時間を含む、各対象に独自の因子に基づき得る。当業者ならば、所与の対象に対する有効量を当技術分野で慣例のこれらの考慮事項に基づいて決定することができる。本明細書で用いる場合、「有効用量」は「有効量」と同義である。
【００３６】
別の実施形態によれば、本発明は、患者、特に、望ましくないＭ２活性化に関連する病態に罹患している患者、特定の実施形態によれば、ＣＳＦ−１Ｒ活性に関連する病態にさらに罹患している患者において、腫瘍浸潤、転移、腫瘍成長、腫瘍生存、新血管新生、自然免疫または獲得免疫の抑制およびマトリックスリモデリング（すなわち、腫瘍形成性）および／またはマクロファージ腫瘍抑制活性の増強からなる群から選択される少なくとも１つのマクロファージ腫瘍誘発機能を低減するための、ヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の使用に関する。
【００３７】
別の実施形態によれば、本発明は、マクロファージ、特に、ヒトマクロファージによるＭＣＰ−１、ＭＭＰ−９およびＩＬ−６産生を阻害するための、ヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の使用に関する。
【００３８】
別の実施形態によれば、本発明は、マクロファージ、特に、ヒトマクロファージ上での表在性ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）および／またはＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）の発現をダウンレギュレートするための、ヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の使用に関する。
【００３９】
別の実施形態によれば、本発明は、マクロファージ、特に、ヒトマクロファージによるＩＬ−１２（より詳しくは、ＩＬ−１２  Ｐ７０型）の産生を促進し、かつ／またはＩＬ−１２／ＩＬ−１０比をアップレギュレートするための、ヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の使用に関する。
【００４０】
別の実施形態によれば、本発明は、分泌因子の手段によりマクロファージの活性化状態を調節するための、ヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の使用に関する。
【００４１】
別の実施形態によれば、本発明は、患者、特に、望ましくないＭ２マクロファージ分極に関連する病態に罹患している患者、特定の実施形態によれば、ＣＳＦ−１Ｒ活性に関連する病態にさらに罹患している患者において、ＴＡＭ動員および／または腫瘍血管新生を低減するための、ヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の使用に関する。
【００４２】
本発明はまた、より具体的には、患者、特に、望ましくないＭ２マクロファージ分極に関連する病態に罹患している患者、特定の実施形態によれば、ＣＳＦ−１Ｒ活性に関連する病態にさらに罹患している患者において、ＴＡＭ動員および／または腫瘍浸潤および転移を低減するための、ヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の使用に関する。
【００４３】
本発明はまた、より具体的には、患者、特に、望ましくないＭ２マクロファージ分極に関連する病態に罹患している患者、特定の実施形態によれば、ＣＳＦ−１Ｒ活性に関連する病態にさらに罹患している患者において、ＴＡＭ動員および／または腫瘍成長を低減するための、ヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の使用に関する。
【００４４】
別の実施形態によれば、本発明は、患者、特に、望ましくないＭ２マクロファージ分極に関連する病態に罹患している患者、特定の実施形態によれば、ＣＳＦ−１Ｒ活性に関連する病態にさらに罹患している患者において、マクロファージをＭ１型（マクロファージＭ１分極）免疫応答に向かわせ、かつ／またはＭ２型（マクロファージＭ２分極）免疫応答を回避させるための、ヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の使用に関する。
【００４５】
別の実施形態によれば、本発明は、患者、特に、望ましくないＭ２マクロファージ分極に関連する病態に罹患している患者、特定の実施形態によれば、ＣＳＦ−１Ｒ活性に関連する病態にさらに罹患している患者において、マクロファージをＴｈ１免疫応答に向かわせ、かつ／またはＴｈ２免疫応答を回避させるための、ヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の使用に関する。
【００４６】
好ましい実施形態によれば、前記ヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、配列番号２３のアミノ酸２０〜４１番の間（すなわち、ヒトドメインＤ１のＮ末端部分）に位置する少なくとも１つのエピトープと結合する抗体である。好ましい実施形態では、本発明による抗体は、配列番号２３のアミノ酸２０〜３９番の間（すなわち、ヒトドメインＤ１のＮ末端部分）、配列番号２３のアミノ酸Ａｓｎ７２、Ｓｅｒ９４−Ａｌａ９５−Ａｌａ９６、Ｌｙｓ１０２、Ａｓｐ１３１−Ｐｒｏ１３２−Ｖａｌ１３３およびＴｒｐ１５９に位置する１つのエピトープと結合する。
【００４７】
別の実施形態では、本発明による抗体は、配列番号２３のアミノ酸２０〜４１番の間（すなわち、ヒトドメインＤ１のＮ末端部分）に位置する１つのエピトープと結合し、かつ、配列番号２３のアミノ酸４２〜９０番の間、および／またはアミノ酸９１〜１０４番の間、および／またはアミノ酸１０５〜１９９番の間、および／またはアミノ酸２００〜２９８番の間に位置するいずれのエピトープとも結合しない。好ましい実施形態によれば、本発明の抗体は、配列番号２３のアミノ酸２０〜４１番の間（すなわち、ヒトドメインＤ１のＮ末端部分）に位置する最小エピトープ、好ましくは配列番号２３のアミノ酸２０〜３９番の間のエピトープを認識することができる。
【００４８】
好ましい実施形態では、前記ヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ＣＳＦ−１Ｒ受容体との結合に関してＩＬ−３４リガンドと競合しない抗体である。用語「ＩＬ−３４リガンドと競合しない」とは、本明細書で用いる場合、ＩＬ３４リガンドのその受容体ＣＳＦ−１Ｒへの結合を阻害しないことを意味する。
【００４９】
好ましい実施形態では、前記ヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ＣＳＦ−１Ｒ受容体との結合に関してＣＳＦ−１リガンドと部分的に競合する抗体である。用語「ＣＳＦ−１リガンドと部分的に競合する」とは、本明細書で用いる場合、ＣＳＦ−１リガンドのその受容体ＣＳＦ−１Ｒへの結合の阻害が１００％未満、好ましくは５０％未満、いっそうより好ましくは２０％未満、有利には１０％未満であることを意味する。この部分的阻害剤は、リガンドの結合を減少させるだけであって、完全に排除するものではなく、この阻害は部分的阻害と呼ばれる。好ましい実施形態では、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ＣＳＦ１のその受容体ＣＳＦ−１Ｒへの結合を部分的に妨げることができる抗体であり、前記結合を完全に阻害することはできない。より詳しくは、本発明による抗体は、ＣＳＦ−１のＣＳＦ−１Ｒへの結合をおよそ５〜１０％低下させることができる。
【００５０】
一実施形態によれば、前記ヒトＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、
（ｉ）配列番号１の４５番で始まり５４番で終わる配列、配列番号１の６６番で始まり８７番で終わる配列、もしくは配列番号１の１１７番で始まり１２６番で終わる配列のうちの少なくとも５個の連続するアミノ酸を含んでなる、少なくとも１つのＣＤＲ；または
（ｉｉ）配列番号２の４４番で始まり５６番で終わる配列、配列番号２の６６番で始まり７６番で終わる配列、もしくは配列番号２の１０９番で始まり１１７番で終わる配列のうちの少なくとも５個の連続するアミノ酸を含んでなる、少なくとも１つのＣＤＲ
を含んでなる抗体である。
【００５１】
好ましい実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、
・配列番号１の４５番で始まり５４番で終わる配列、
・配列番号１の６６番で始まり８７番で終わる配列、
・配列番号１の１１７番で始まり１２６番で終わる配列、
・配列番号２の４４番で始まり５６番で終わる配列、
・配列番号２の６６番で始まり７６番で終わる配列、または
・配列番号２の１０９番で始まり１１７番で終わる配列
のうちの少なくとも５個の連続するアミノ酸を含んでなる抗体である。
【００５２】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、
・配列番号１の４５番で始まり５４番で終わる配列、
・配列番号１の６６番で始まり８７番で終わる配列、
・配列番号１の１１７番で始まり１２６番で終わる配列、
・配列番号２の４４番で始まり５６番で終わる配列、
・配列番号２の６６番で始まり７６番で終わる配列、および
・配列番号２の１０９番で始まり１１７番で終わる配列
で示されるＣＤＲの群から互いに独立に選択される少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる抗体である。
【００５３】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、
・配列番号１の４５番で始まり５４番で終わる配列、
・配列番号１の６６番で始まり８７番で終わる配列、
・配列番号１の１１７番で始まり１２６番で終わる配列、
・配列番号２の４４番で始まり５６番で終わる配列、
・配列番号２の６６番で始まり７６番で終わる配列、および
・配列番号２の１０９番で始まり１１７番で終わる配列
で示されるＣＤＲを含んでなる抗体である。
【００５４】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、配列番号５、６、７、８、９または１０のいずれか１つで示されるアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる抗体である。
【００５５】
好ましい実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、配列番号５、６、７、８、９または１０で示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲを含んでなる抗体である。
【００５６】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、（ｉ）配列番号１１、１２もしくは１３のいずれか１つで示されるアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲ；または（ｉｉ）配列番号１４、１５もしくは１６のいずれか１つで示されるアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる抗体である。
【００５７】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、配列番号１１、１２、１３、１４、１５または１６で示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲを含んでなる抗体である。
【００５８】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、（ｉ）配列番号１７、１８もしくは１９のいずれか１つで示されるアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲ；または（ｉｉ）配列番号２０、２１もしくは２２のいずれか１つで示されるアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる抗体である。
【００５９】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、配列番号１７、１８、１９、２０、２１または２２のいずれか１つで示されるアミノ酸配列を含んでなる少なくとも１つのＣＤＲを含んでなる抗体である。
【００６０】
好ましい一実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、配列番号１７、１８、１９、２０、２１または２２で示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲを含んでなる抗体である。
【００６１】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、可変領域を含んでなり、前記可変領域が配列番号５、６および７で示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体である。
【００６２】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、可変領域を含んでなり、前記可変領域が配列番号８、９、および１０で示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体である。
【００６３】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、可変領域を含んでなり、前記可変領域が配列番号１１、１２、および１３に示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体である。
【００６４】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、可変領域を含んでなり、前記可変領域が配列番号１４、１５、および１６で示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体である。
【００６５】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、可変領域を含んでなり、前記可変領域が配列番号１７、１８、および１９で示される．３つのＣＤＲを含んでなる、抗体である。
【００６６】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、可変領域を含んでなり、前記可変領域が配列番号２０、２１、および２２で示される３つのＣＤＲを含んでなる、抗体である。
【００６７】
好ましい一実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、可変領域を含んでなり、前記可変領域が配列番号３で示されるアミノ酸配列を含んでなる、抗体である。
【００６８】
より好ましい実施形態では、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、可変領域を含んでなり、前記可変領域が配列番号３で示される、抗体である。
【００６９】
別の好ましい実施形態では、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合する抗体であり、前記可変領域は配列番号４で示されるアミノ酸配列を含んでなる。
【００７０】
別のより好ましい実施形態では、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、可変領域を含んでなり、前記可変領域が配列番号４で示される、抗体である。
【００７１】
好ましい実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、
・配列番号５、６、および７で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域と、
・配列番号８、９、および１０で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域
とを含んでなる抗体である。
【００７２】
好ましい実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、
・配列番号１１、１２、および１３で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域と、
・配列番号１４、１５、および１６で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域
とを含んでなる抗体である。
【００７３】
好ましい実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、
・配列番号１７、１８、および１９で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域と、
・配列番号２０、２１、および２２で示される３つのＣＤＲを含んでなる可変領域
とを含んでなる抗体である。
【００７４】
好ましい実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、
・配列番号３で示される可変領域と、
・配列番号４で示される可変領域
とを含んでなる抗体である。
【００７５】
好ましい実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、
（ｉ）
・配列番号１の４５番で始まり５４番で終わる配列で示されるＣＤＲ、
・配列番号１の６６番で始まり８７番で終わる配列で示されるＣＤＲ、および
・配列番号１の１１７番で始まり１２６番で終わる配列で示されるＣＤＲ
を含んでなる重鎖可変領域と
（ｉｉ）
・配列番号２の４４番で始まり５６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、
・配列番号２の６６番で始まり７６番で終わる配列で示されるＣＤＲ、および
・配列番号２の１０９番で始まり１１７番で終わる配列で示されるＣＤＲ
とを含んでなる軽鎖可変領域
を含んでなる抗体である。
【００７６】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、（ｉ）配列番号５、６、および７で示される３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号８、９、および１０で示される３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域とを含んでなる抗体である。
【００７７】
別の実施形態によれば、本発明の抗体は、ＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、（ｉ）配列番号１１、１２、および１３で示される３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号１４、１５、および１６で示される３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域とを含んでなる。
【００７８】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、（ｉ）配列番号１７、１８、および１９で示される３つのＣＤＲを含んでなる重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号２０、２１、および２２で示される３つのＣＤＲを含んでなる軽鎖可変領域とを含んでなる抗体である。
【００７９】
好ましい一実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、かつ、（ｉ）配列番号３で示される重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号４で示される軽鎖可変領域とを含んでなる抗体である。
【００８０】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ａ）下式：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（式中、
ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域であり；
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域であり；
ここで、
ＣＤＲ１は、配列番号１の４５番で始まり５４番で終わる配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸を有し；
ＣＤＲ２は、配列番号１の６６番で始まり８７番で終わる配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸を有し；かつ
ＣＤＲ３は、配列番号１の１１７番で始まり１２６番で終わる配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸を有する）
により定義される第一の可変領域と、
（ｂ）下式：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（式中、
ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域であり；
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域であり；
ここで、
ＣＤＲ１は、配列番号２の４４番で始まり５６番で終わる配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸を有し；
ＣＤＲ２は、配列番号２の６６番で始まり７６番で終わる配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸を有し；かつ
ＣＤＲ３は、配列番号２の１０９番で始まり１１７番で終わる配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸を有する）
により定義される第二の可変領域
とを含んでなる抗体である。
【００８１】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
（ａ）下式：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（式中、
ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域であり；
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域であり；
ここで、
ＣＤＲ１は、配列番号５、１１および１７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し；
ＣＤＲ２は、配列番号６、１２および１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し；かつ
ＣＤＲ３は、配列番号７、１３および１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する）
により定義される第一の可変領域と、
（ｂ）下式：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（式中、
ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域であり；
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域であり；
ここで、
ＣＤＲ１は、配列番号８、１４および２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し；
ＣＤＲ２は、配列番号９、１５および２１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有し；かつ
ＣＤＲ３は、配列番号１０、１６および２２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する）
により定義される第二の可変領域
とを含んでなる抗体である。
【００８２】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、下記の（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）のいずれか１つを含んでなる抗体である：
（ｉ）
（ａ）下式：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（式中、
ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域であり；
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域であり；
ここで、
ＣＤＲ１は、配列番号５で示され；
ＣＤＲ２は、配列番号６で示され；かつ
ＣＤＲ３は、配列番号７で示される）
により定義される第一の可変領域と、
（ｂ）下式：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（式中、
ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域であり；
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域であり；
ここで、
ＣＤＲ１は、配列番号８で示され；
ＣＤＲ２は、配列番号９で示され；かつ
ＣＤＲ３は、配列番号１０で示される）
により定義される第二の可変領域、または
（ｉｉ）
（ａ）下式：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（式中、
ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域であり；
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域であり；
ここで、
ＣＤＲ１は、配列番号１１で示され；
ＣＤＲ２は、配列番号１２で示され；かつ
ＣＤＲ３は、配列番号１３で示される）
により定義される第一の可変領域と、
（ｂ）下式：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（式中、
ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域であり；
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域であり；
ここで、
ＣＤＲ１は、配列番号１４で示され；
ＣＤＲ２は、配列番号１５で示され；かつ
ＣＤＲ３は、配列番号１６で示される）
により定義される第二の可変領域、または
（ｉｉｉ）
（ａ）下式：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（式中、
ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域であり；
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域であり；
ここで、
ＣＤＲ１は、配列番号１７で示され；
ＣＤＲ２は、配列番号１８で示され；かつ
ＣＤＲ３は、配列番号１９で示される）
により定義される第一の可変領域と、
（ｂ）下式：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４
（式中、
ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４はそれぞれフレームワーク領域であり；
ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３はそれぞれ相補性決定領域であり；
ここで、
ＣＤＲ１は、配列番号２０で示され；
ＣＤＲ２は、配列番号２１で示され；かつ
ＣＤＲ３は、配列番号２２で示される）
により定義される第二の可変領域。
【００８３】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
・配列番号３のアミノ酸配列を含んでなる第一の可変領域と、
・配列番号４のアミノ酸配列を含んでなる第二の可変領域
とを含んでなる抗体である。
【００８４】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
・配列番号１のアミノ酸配列を含んでなる第一の可変領域と、
・配列番号２のアミノ酸配列を含んでなる第二の可変領域
とを含んでなる抗体である。
【００８５】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
・配列番号２４および配列番号２５からなる群から選択される重鎖と、
・配列番号２６、配列番号２７および配列番号２８からなる群から選択される軽鎖
とを含んでなる抗体である。
【００８６】
別の実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、
・配列番号２９および配列番号３０からなる群から選択される第一の可変領域と、
・配列番号３１、配列番号３２および配列番号３３からなる群から選択される第二の可変領域
とを含んでなる抗体である。
【００８７】
好ましい一実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、（ａ）配列番号２４からなる重鎖と、（ｂ）配列番号２６からなる軽鎖とを含んでなる抗体である。
【００８８】
別の好ましい実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、（ａ）配列番号２５からなる重鎖と、（ｂ）配列番号２７からなる軽鎖とを含んでなる抗体である。
【００８９】
有利な一実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、（ａ）配列番号２４からなる重鎖と、（ｂ）配列番号２８からなる軽鎖とを含んでなる抗体である。前記モノクローナル抗体の例は、モノクローナル抗体Ｈ２７Ｋ１５である。
【００９０】
好ましい一実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、（ａ）配列番号２９からなる第一の可変領域と、（ｂ）配列番号３１からなる第二の可変領域とを含んでなる抗体である。
【００９１】
別の好ましい実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、（ａ）配列番号３０からなる第一の可変領域と、（ｂ）配列番号３２からなる第二の可変領域とを含んでなる抗体である。
【００９２】
有利な一実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体は、ヒトＣＳＦ−１Ｒと特異的に結合し、（ａ）配列番号２９からなる第一の可変領域と、（ｂ）配列番号３３からなる第二の可変領域とを含んでなる抗体である。前記モノクローナル抗体の例は、モノクローナル抗体Ｈ２７Ｋ１５である。
【００９３】
本発明による抗体、より具体的には、ヒト抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭまたはＩｇＥなどの種々のアイソタイプのものであってよい。好ましい実施形態では、本発明による抗体、より具体的には、ヒト抗体は、ＩｇＧである。
【００９４】
本発明による抗体は、グリコシル化されていてもされていなくてもよい。
【００９５】
本明細書で用いる場合、用語「グリコシル化」は、抗体と共有結合している炭水化物単位の存在を意味する。
【００９６】
本発明の方法は、望ましくないＭ２の活性化に関連した、およびＣＳＦ−１Ｒに関連した病態の処置に有用である。本発明の方法は、炎症を含む、およびＣＳＦ−１Ｒに関連した疾患の処置に有用である。
【００９７】
本発明による、望ましくないＭ２マクロファージ分極に関連する病態に罹患している患者は、癌、特に転移性癌、進行性線維性疾患（例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、肝線維症または全身性硬化症(Wynn and Barron, 2010, Semin. Liver Dis., 30, 245)）、アレルギーおよび喘息、アテローム性動脈硬化症およびアルツハイマー病(Altzheimer’s disease)を呈する。
【００９８】
別の実施形態によれば、本発明は、癌に罹患している患者において、マクロファージをＭ１型（マクロファージＭ１分極）駆動性免疫応答に向かわせ、かつ、Ｍ２型（マクロファージＭ２分極）駆動性免疫応答を回避させる方法に関する。
【００９９】
別の実施形態によれば、本発明は、進行性線維性疾患に罹患している患者において、マクロファージをＭ１型（マクロファージＭ１分極）免疫応答に向かわせ、かつ、Ｍ２型（マクロファージＭ２分極）駆動性免疫応答を回避させる方法に関する。
【０１００】
別の実施形態によれば、本発明は、アレルギーに罹患している患者において、マクロファージをＭ１型（マクロファージＭ１分極）駆動性免疫応答に向かわせ、かつ、Ｍ２型（マクロファージＭ２分極）駆動性免疫応答を回避させる方法に関する。
【０１０１】
別の実施形態によれば、本発明は、喘息に罹患している患者において、マクロファージをＭ１型（マクロファージＭ１分極）免疫応答に向かわせ、かつ、Ｍ２型（マクロファージＭ２分極）免疫応答を回避させる方法に関する。
【０１０２】
本明細書で用いる場合、用語「癌」は、限定されるものではないが、腺癌、腺房細胞腺癌、副腎皮質細胞癌、肺胞細胞癌、未分化癌、類基底細胞癌、基底細胞癌、細気管支癌、気管支原生癌、レナルアジノールカルシノーマ(renaladinol carcinoma)、胚性癌腫、アノメトロイドカルシノーマ(anometroid carcinoma)、フィブロラモラー(fibrolamolar)肝細胞癌、濾胞癌、巨細胞癌、肝細胞癌、表皮内癌、上皮内癌、軟膜癌(leptomanigio carcinoma)、髄様癌、黒色癌、髄膜癌(menigual carcinoma)、中腎後腎癌(mesometonephric carcinoma)、燕麦細胞癌、扁平上皮(squamal)細胞癌、汗腺癌、移行上皮癌、管状細胞癌、エナメル上皮肉腫(amelioblastic sarcoma)、血管結石肉腫、ブドウ状肉腫、子宮内膜間質肉腫(endometrial stroma sarcoma)、ユーイング肉腫、線維束状肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫(granulositic sarcoma)、免疫芽球性肉腫、房骨性骨原性肉腫(juxaccordial osteogenic sarcoma)、コピセスサルコーマ(coppices sarcoma)、白血球性肉腫（白血病）、リンパ性肉腫（リンパ肉腫）、髄様肉腫、骨髄性肉腫（顆粒球性肉腫）、オースチオゲンシサルコーマ(austiogenci sarcoma)、骨膜肉腫、細網肉腫（組織球性リンパ腫）、円形細胞肉腫、紡錘細胞肉腫、滑膜肉腫、毛細管拡張性聴原性肉腫、バーキットリンパ腫、ＮＰＤＬ、ＮＭＬ、ＮＨおよびびまん性リンパ腫を意味する。好ましい実施形態によれば、本発明による方法は骨への転移性癌の処置に関し、前記転移性癌は乳癌、肺癌、腎臓癌、多発性骨髄腫、甲状腺癌、前立腺癌、腺癌、血液細胞悪性腫瘍（白血病およびリンパ腫を含む）；頭頸部癌；食道癌、胃癌、結腸癌、腸管癌、結腸直腸癌、直腸癌、膵臓癌、肝臓癌、胆管癌または胆嚢癌を含む消化管癌；卵巣癌、子宮内膜癌、膣癌、および子宮頸癌を含む女性生殖道の悪性腫瘍；膀胱癌；神経芽腫を含む脳癌；肉腫、骨肉腫；および悪性黒色腫または扁平上皮細胞癌を含む皮膚癌を意味する。
【０１０３】
本発明はさらに、癌治療薬による化学療法処置を受けている癌患者の処置を改善する方法に関し、前記方法は、前記患者の、上記に開示された方法との併用処置を含んでなる。
【０１０４】
本発明はさらに、癌治療ワクチンによる免疫療法処置を受けている癌患者の処置を改善する方法に関し、前記方法は、前記患者の、上記に開示された方法との併用処置を含んでなる。好ましい実施形態によれば、前記癌治療ワクチンは、ウイルスに基づく治療ワクチンである。より好ましくは、前記ウイルスに基づく治療ワクチンは、ＭＶＡに基づく治療ワクチンである。いっそうより好ましくは、前記ＭＶＡに基づく治療ワクチンは、ヒトパピローマウイルス１６（ＨＰＶ１６）Ｅ６およびＥ７癌タンパク質およびヒトインターロイキン−２（例えば、ＴＧ４００１製品）を運搬および発現するか、またはＭｕｃ１抗原およびヒトインターロイキン−２（例えば、ＴＧ４０１０製品）を発現する。
【０１０５】
本発明はさらに、患者にＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を投与した後の、前記処置の有効性を評価するため、および／または前記処置の臨床転帰を評価するための処置後モニタリングアッセイも含む。
【０１０６】
モニタリングアッセイとしては、限定されるものではないが、活性化マクロファージＭ１またはＭ２分極マクロファージにより発現および／または分泌される循環因子のアッセイが含まれる。
【０１０７】
マクロファージＭ２型活性化状態において発現される因子としては、限定されるものではないが、ＩＬ−１０、ＩＬ−６およびＭＣＰ−１が含まれる。マクロファージＭ１型活性化状態において発現される因子も、例えば、ＩＬ−１２レベル、より詳しくは、ＩＬ−１２  Ｐ７０型のレベルを測定することによってアッセイすることができる。患者においてマクロファージをＭ１型（マクロファージＭ１分極駆動性免疫応答に向かわせ、かつ、Ｍ２型（マクロファージＭ２分極駆動性免疫応答を回避させることは、患者に本発明のＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を投与した後にＩＬ１２／ＩＬ１０比の増加を測定することによって認識することができる。
【０１０８】
これらの試験は、患者の血清、血液、組織などから得ることができる。
【０１０９】
本発明はさらに、患者にＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を投与した後の、マクロファージの活性化をモニタリングし、かつ、適正な投与計画を設定および／または維持するための処置後モニタリングアッセイも含む。
【０１１０】
この場合、組織におけるマクロファージＭ１および／またはＭ２の存在を、直接的または活性化されたマクロファージにより発現および／または分泌される因子の手段によってアッセイすることによりベースラインレベルを得、次に、処置の過程でＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を投与した後に、組織（腫瘍または正常組織）におけるＭ２マクロファージに対するＭ１の存在を１回以上モニタリングすることができる。その後、Ｍ２型マクロファージ応答からＭ１型マクロファージ応答への偏向をもたらす処置の最適用量を決定することができる。
【０１１１】
本発明は、ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の患者への投与を含む処置の有効性を、所望の免疫応答と相関する実質的に信頼性のあるサインとなることが同定されている生物学的マーカー（バイオマーカー）を用いて評価するための材料および方法を提供する。バイオマーカーは、患者から得られる生体サンプル中に存在する。処置の臨床転帰を、その開始から間もなくに予測することができることで、医師および患者は有効でない療法を確認し、別の療法の実施しないかするかを含めて、処置コースに関して十分な情報に基づいた決定を行うことができる。
【０１１２】
本発明は、患者に対する、ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を含む処置の有効性を評価するためのｅｘ−ｖｉｖｏ法を提供する。
【０１１３】
本発明によれば、用語「評価する」は、ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の患者への投与を含む処置を「モニタリング、改変または調整すること」と理解されるべきである。
【０１１４】
特定の態様において、本方法は、免疫療法処置後の患者におけるインターフェロンγのレベルに基づいてＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の有効性を評価することを含む。
【０１１５】
モニタリングアッセイとしては、限定されるものではないが、Ｍ１および／またはＭ２型の活性化マクロファージにより発現および／または分泌された循環因子のアッセイが含まれる。
【０１１６】
マクロファージＭ２型活性化状態において発現される因子としては、限定されるものではないが、ＩＬ−６、ＭＭＰ９およびＭＣＰ−１が含まれる。マクロファージＭ１型活性化状態において発現される因子もまた、例えば、ＩＬ−１２レベル、より詳しくは、ＩＬ−１２  Ｐ７０型レベル、またはＩＬ−１２／ＩＬ−１０比を測定することにより、アッセイすることができる。
【０１１７】
特定の態様において、本方法は、患者にＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を投与した後に、患者のインターロイキン−６、インターロイキン−１２、ＭＭＰ９および／またはＭＣＰ−１レベルを測定すること；ならびにインターロイキン−６、インターロイキン−１２、ＭＭＰ９および／またはＭＣＰ−１レベルに基づく処置の有効性を評価することを含む。
【０１１８】
特定の態様において、本方法は、患者にＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を投与してから数週間後に少なくとも１回、患者のインターロイキン−６、インターロイキン−１２、ＭＭＰ９および／またはＭＣＰ−１レベルを測定すること；ならびにインターロイキン−６、インターロイキン−１２、ＭＭＰ９および／またはＭＣＰ−１レベルに基づく免疫療法処置の有効性を評価することを含む。
【０１１９】
特定の態様において、本方法は、ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を投与する前の患者のインターロイキン−６、インターロイキン−１２、ＭＭＰ９および／またはＭＣＰ−１レベルを測定することをさらに含み得る。好ましい実施形態によれば、前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の投与前に測定された患者のインターロイキン−６、インターロイキン−１２、ＭＭＰ９および／またはＭＣＰ−１レベルの値は、本発明による「カットオフ値」である。
【０１２０】
ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体およびインターロイキン−６、インターロイキン−１２、ＭＭＰ９および／またはＭＣＰ−１測定の投与間の時間は、１日〜約４８週間またはそれを超える時間（例えば、約１日〜約１週間、約１週間〜約２週間、約２週間〜約４週間、約４週間〜約８週間、約８週間〜約１２週間、約１２週間〜約１６週間、約１６週間〜約２４週間、約２４週間〜約４８週間、またはそれを超える時間）であり得る。本発明の好ましい実施形態では、前記時間間隔は約５週間である。同様に、第二の測定の後に同様の時間間隔でさらなる測定（すなわち、第三、第四、第五などの測定など）を行ってもよい。
【０１２１】
関連の態様において、本方法は、患者にＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を投与した後に、患者においてインターロイキン−６、インターロイキン−１２、ＭＭＰ９および／またはＭＣＰ−１レベルを決定すること；前記レベルをカットオフ値と比較すること；ならびに免疫療法処置の有効性を「カットオフ値」に比較したインターロイキン−６、インターロイキン−１２、ＭＭＰ９および／またはＭＣＰ−１のレベルに基づいて評価することを含む。
【０１２２】
特定の実施形態によれば、本発明は、ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の患者への投与を含む処置の有効性を評価する方法であって、
（ｉ）  １以上の用量の前記ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を前記対象に投与すること；
（ｉｉ）前記投与の少なくとも１回の後に前記対象の身体のインターロイキン−６、インターロイキン−１２、ＭＭＰ９および／またはＭＣＰ−１レベルを測定すること
を含んでなる方法に関する。
【０１２３】
本発明の別の実施形態によれば、本発明の方法は、ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の投与前に患者の身体のインターロイキン−６、インターロイキン−１２、ＭＭＰ９および／またはＭＣＰ−１レベルを測定することからなる初期工程をさらに含んでなる。
【０１２４】
本発明によれば、インターロイキン−６、インターロイキン−１２、ＭＭＰ９および／またはＭＣＰ−１のレベルは、患者から得られた生体サンプルで測定される。生体サンプルとしては、限定されるものではないが、血液、血清、組織、および生体起源の他の液体サンプル、生検検体などの固体組織サンプルが含まれる。好ましい実施形態では、生体サンプルは血液、血漿または血清であり、この場合、患者からサンプルを得るのは、比較的簡単で非侵襲的な手順である。血液または血清を得る方法は周知であり、本発明の一部ではない。
【０１２５】
さらに、インスタントバイオマーカーを含め、ポリペプチドを検出および定量するための多くの方法は公知である。このような方法としては、限定されるものではないが、抗体に基づく方法、より具体的には、モノクローナル抗体に基づく方法が含まれる。バイオマーカーを検出および定量する特定の方法は本発明には重要でない。例えば、本発明の材料および方法は、Ｌｕｍｉｎｅｘ技術(Luminex Corporation, Austin, Tex.)または酵素標識イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ、多くのＥＬＩＳＡキットが例えば、ＣｌｉｎｉＳｃｉｅｎｃｅ、Ｄｉａｃｌｏｎｅ、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅにより市販されている）とともに使用可能である。
【０１２６】
本発明の一実施形態によれば、インターロイキン−６、インターロイキン−１２、ＭＭＰ９および／またはＭＣＰ−１のレベルは、抗体を使用することにより決定される。
【０１２７】
本発明の特定の一実施形態によれば、１または複数の前記抗体は、インターロイキン−６、インターロイキン−１２、ＭＭＰ９またはＭＣＰ−１に特異的である。
【０１２８】
本発明の特定の一実施形態によれば、前記抗体はモノクローナル抗体である。
【０１２９】
本発明の特定の一実施形態によれば、前記抗体は、例えば、蛍光、放射性標識、酵素、ビオチン、または前記抗体で標識された細胞を検出可能とするように設計された他の任意の方法によりタグ付けされる。これらの技術は広く知られ、当技術分野で公知である。
【０１３０】
本発明の免疫療法処置は、ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の投与後に患者で測定されたインターロイキン−６、ＭＭＰ９および／またはＭＣＰ−１レベルがそれぞれ前記投与前に患者で測定されたインターロイキン−６および／またはＭＣＰ−１レベル（すなわち、カットオフ値）より低い場合に有効であるとみなされる。
【０１３１】
あるいは、本発明の免疫療法処置は、ＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体の投与後に患者で測定されたインターロイキン−１２のレベルが、前記投与前に患者で測定されたインターロイキン−１２のレベル（すなわち、カットオフ値）を上回る場合に、有効であるとみなされる。
【０１３２】
本発明はさらに、患者にＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を投与した後の、マクロファージの活性化をモニタリングし、かつ、適正な投与計画を設定および／または維持するための処置後モニタリングアッセイも含む。
【０１３３】
この場合、循環中のマクロファージＭ１および／またはＭ２の存在を、直接的に、または活性化されたマクロファージにより発現および／または分泌される因子の手段によってアッセイすることによりベースラインレベルを得、次に、処置の過程でＣＳＦ−１Ｒと結合できる抗体を投与した後に、循環中の前記マクロファージの存在を１回以上モニタリングすることができる。
【０１３４】
その後、Ｍ２型マクロファージ応答からＭ１型マクロファージ応答への偏向をもたらす処置の最適用量を決定することができる。
【０１３５】
本発明の方法は、炎症を含み、かつ、ＣＳＦ−１Ｒに関連する疾患の処置に有用である。
【図面の簡単な説明】
【０１３６】
【図１】Ｈ２７Ｋ１５は分化するマクロファージに対して細胞傷害性がないが、他の抗ＣＤ１１５  ｍＡｂは著しい細胞死を誘導する。抗ＣＤ１１５  ｍＡｂもしくはＦ（ａｂ’）２の存在下もしくは不在下でのＧＭ−ＣＳＦおよびＣＳＦ−１とともに、またはＧＷ２５８０とともに単球を６日間培養した後に細胞を計数した。対照は、リツキシマブまたはリツキシマブＦ（ａｂ’）２で処理した、または化合物を付加しなかった培養物であった。各培養条件で得られた５つの顕微鏡視野中の細胞数の平均値±標準偏差が示される。
【図２】モノクローナル抗体Ｈ２７Ｋ１５の存在下で分化したヒトマクロファージにおけるＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）発現の阻害  ３人の異なる血液ドナーからの単球をＧＭ−ＣＳＦおよびＣＳＦ−１とともに６日間培養した後に得られたマクロファージを、ＩＣ／ＦＣによりＣＤ６４の表面発現に関して分析した。上のパネル：モノクローナル抗体Ｈ２７Ｋ１５（左、太線）もしくはＧＷ２５８０（右、太線）またはそれらの個々の陰性対照リツキシマブ（左、細線）で処理した、または処理無し（右、細線）の、ドナー１由来培養物におけるＣＤ６４染色。下のパネル：１０、１または０．１μｇ／ｍｌ＊の試験化合物で処理したマクロファージ培養物の蛍光強度中央値を対応する陰性対照と比較した：Ｈ２７Ｋ１５とリツキシマブ、Ｈ２７Ｋ１５由来のＦ（ａｂ’）２とリツキシマブ由来のＦ（ａｂ’）２、ｍＡｂ２−４Ａ５または９−４Ｄ２とラットＩｇＧ１、ＧＷ２５８０と処理なし。ＣＤ６４発現の低下率（％）を算出した：１００−［１００×試験化合物を用いた場合の蛍光強度中央値／対照を用いた場合の蛍光強度中央値］。３人の血液ドナーからのＣＤ６４発現の平均低下率（％）を示す。＊等モル濃度：６．６；０．６；および０．０６μｇ／ｍｌで使用したＦ（ａｂ’）２を除く。
【図３】Ｈ２７Ｋ１５によるＣＤ８６ｂｒｉｇｈｔＳＳＣｌｏｗマクロファージ集団の誘導  上のパネル：Ｈ２７Ｋ１５（左）または陰性対照リツキシマブ（右）の存在下で６日間分化させたドナー３由来のマクロファージのＣＤ８６染色（ｘ軸）および側方散乱（ＳＳＣ、ｙ軸）を示すドットプロット。ゲートは、Ｈ２７Ｋ１５により誘導されたＣＤ８６ｂｒｉｇｈｔＳＳＣｌｏｗ細胞集団に設定した。下のパネル：１０、１または０．１μｇ／ｍｌ＊の試験化合物を用いた場合のＣＤ８６ｂｒｉｇｈｔＳＳＣｌｏｗ細胞のパーセンテージを対応する陰性対照の場合と比較した：Ｈ２７Ｋ１５とリツキシマブ、Ｈ２７Ｋ１５由来のＦ（ａｂ’）２とリツキシマブ由来のＦ（ａｂ’）２、ＧＷ２５８０と処理無し。ＣＤ８６ｂｒｉｇｈｔＳＳＣｌｏｗ細胞集団の増加率（％）：１００×試験化合物を用いた場合のＣＤ８６ｂｒｉｇｈｔＳＳＣｌｏｗ細胞のパーセンテージ／対照を用いた場合のＣＤ８６ｂｒｉｇｈｔＳＳＣｌｏｗ細胞パーセンテージ。３人の血液ドナーからのＣＤ８６ｂｒｉｇｈｔＳＳＣｌｏｗ細胞集団における平均増加率（％）を示す。＊Ｆ（ａｂ’）２：６．６；０．６；および０．０６μｇ／ｍｌを除く。
【図４】Ｈ２７Ｋ１５はＩＬ−１２ｐ７０分泌を誘導し、マクロファージＩＬ−１２／ＩＬ−１０比を高める  ＩＬ−１２ｐ７０およびＩＬ−１０の力価を、ｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５（１μｇ／ｍｌ）、ＧＷ２５８０（１μＭ）もしくはそれらの個々の陰性対照リツキシマブの存在下で分化した６日目のマクロファージ、または処理無しの６日目のマクロファージからの培養上清中で測定した。左のパネル：３人の血液ドナーからのマクロファージ培養物におけるＩＬ−１２ｐ７０およびＩＬ−１０レベル（ｐｇ／ｍｌ）。右：各血液ドナーおよび各培養条件について、ＩＬ−１２ｐ７０（ｐｇ／ｍｌ）／ＩＬ−１０（ｐｇ／ｍｌ）比を算出した。ＩＬ−１２ｐ７０が検出できなかった（検出限界１１ｐｇ／ｍｌ未満）サンプルでは、そのレベルをＩＬ−１２ｐ７０／ＩＬ−１０比の算出のために任意に１ｐｇ／ｍｌとした。
【図５】Ｈ２７Ｋ１５はマクロファージによるＭＣＰ−１／ＣＣＬ２およびＩＬ−６分泌を阻害する  ＭＣＰ−１およびＩＬ−６の力価を、ｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５（１μｇ／ｍｌ）、ＧＷ２５８０（１μＭ）もしくはそれらの個々の陰性対照リツキシマブの存在下で分化した６日目のマクロファージ、または処理無しの６日目のマクロファージからの培養上清中で測定した。ＭＣＰ−１の低下率（％）（上のパネル）またはＩＬ−６産生の低下率（％）（下のパネル）は３人の血液ドナーで算出した：１００−［１００×試験化合物を用いた場合のサイトカイン濃度（ｐｇ／ｍｌ）／対照を用いた場合のサイトカイン濃度（ｐｇ／ｍｌ）］。
【図６】３人の異なる血液ドナーから単離した単球を、ＧＭ−ＣＳＦおよびＣＳＦ−１の存在下、ｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５、リツキシマブもしくはＧＷ２５８０を伴ってまたは伴わずに６日間分化させた。ＭＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５またはリツキシマブ（０．１、１または１０μｇ／ｍｌ）または両ｍＡｂ由来の等モル濃度のＦ（ａｂ）’２を前記培養物に加えた。ＭＭＰ−９の力価を６日目の培養上清にてＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）により測定した。
【図７】ＧＭ−ＣＳＦおよびＣＳＦ−１とともに６日間培養した後に得られた細胞を採取し、ヒトＩｇＧ  Ｆｃフラグメントを含有するＰＢＳとともに４℃にて２０分間インキュベートしてＦｃ受容体を飽和させた。次に、蛍光色素と結合したｍＡｂ（抗ＣＤ１４−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、抗ＣＤ１６３−ＰＥ、抗ＣＤ２０６−ＡＰＣ、抗ＣＤ１ａ−ＦＩＴＣ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を各サンプルとともに４℃で２０分間インキュベートした。ＦＡＣＳ  ＬＳＲ−ＩＩ（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）をＤＩＶＡソフトウエアとともに用いてＦＣＭ分析を行った。３人の異なる血液ドナーからのデータを示す。
【図８】２人の異なるドナーからの単球を、１μｇ／ｍｌの抗ＣＤ１１５  ｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ５または対照ＩｇＧ１リツキシマブの存在下または不在下でＧＭ−ＣＳＦおよびＣＳＦ−１とともに培養した。６日間の細胞分化の後にマクロファージ集団のＭ１（ＣＤ１４＋ＣＤ１６３−）型マクロファージとＭ２（ＣＤ１４＋ＣＤ１６３＋）型マクロファージの比を求めた。
【実施例】
【０１３７】
本試験を通して下記の市販のモノクローナル抗体を用いた：抗ヒトＣＤ１１５  ｍＡｂ  ２−４Ａ５−４（ラットＩｇＧ１．Κ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）、９−４Ｄ２（ラットＩｇＧ１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）およびアイソタイプ対照ラットＩｇＧ１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）。ｍＡｂ  １．２  ＳＭは、ＷＯ２００９／０２６３０３に公開されている配列１．２  ＳＭの抗ＣＤ１１５  ｍＡｂである。リツキシマブはＲｏｃｈｅから入手した。Ｆ（ａｂ’）２は、Ｔｒａｎｓｇｅｎｅ社にて、モノクローナル抗体のペプシン消化の後、ゲル濾過による精製により作製した。
【０１３８】
ヒトマクロファージ分化アッセイ：プロトコール
バフィーコートは、Ｅｔａｂｌｉｓｓｅｍｅｎｔ  Ｆｒａｎｃａｉｓ  ｄｕ  Ｓａｎｇ（ＥＦＳ、ストラスブール）により提供された。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、フィコール勾配での遠心分離により得た。ＣＤ１４抗体コーティングビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉｉ）を用いた免疫磁気細胞選別により単球を精製した。富化された単球懸濁液は９５％を超える純度であった。４８ウェルプレート（３×１０５細胞／ウェル）の、１０％熱失活ウシ胎児血清および１％三種抗生剤混合物（ペニシリン、ストレプトマイシン、ネオマイシン）を添加したＲＰＭＩ−Ｇｌｕｔａｍａｘ（商標）培地中で６日間、単球を分化させた。ＧＭ−ＣＳＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）を０日目〜３日目まで細胞培養培地中に加えた。Ｈ２７Ｋ１５、他の抗体または内部対照ＧＷ２５８０（ＬＣ  Ｌａｂｓ）を０日目に加えた。単離後３日目に、単球をＰＢＳで洗浄し、抗体またはＧＷ２５８０の存在下または不在下、ＣＳＦ−１（１０ｎｇ／ｍｌ）およびＧＭ−ＣＳＦ（２ｎｇ／ｍｌ）を添加した培地中でさらに培養した。６日目に、上清を回収し、−２０℃で保存した。細胞をプラスチックから解離させ、３反復のプールを、細胞サイズならびにＦｃγＲおよびＣＤ８６の発現に関してＩＣ／ＦＣ（免疫細胞化学／フローサイトメトリー）により分析した。サイトカインおよびケモカインをマルチプレックス（Ｂｉｏｐｌｅｘ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ）またはＥＬＩＳＡによりその培養上清にて定量した。
【０１３９】
マクロファージ培養のＩＣ／ＦＣ分析の場合、３反復のプールを１５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、１０％ヒトＡＢ血清を含有するＰＢＳとともに４℃で２０分間インキュベートしてＦｃ受容体を飽和させた。次に、蛍光色素結合ｍＡｂ抗ＣＤ６４−ＡＰＣおよび抗ＣＤ８６−ＡＩ７００、抗ＣＤ６４、抗ＣＤ８６、抗ＣＤ１６３および／または抗ＣＤ１４（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を各サンプルとともに４℃で２０分間インキュベートした。細胞をＰＢＳで洗浄し（５分、２０００ｒｐｍ、４℃）、Ｃｅｌｌ−Ｆｉｘ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、フランス）で固定した。フローサイトメトリー分析は、ＦＡＣＳ  ＬＳＲ−ＩＩ（ＢＤ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、取り込みにはＤＩＶＡソフトウエアとともに、分析にはＦｌｏｗ  Ｊｏソフトウエアとともに用いて行った。
【０１４０】
結果
抗ＣＤ１１５  ｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５はマクロファージに対して細胞傷害性はないが、それらの分化をＭ１型に偏向させる。
【０１４１】
ｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５がマクロファージ分化に影響を及ぼし得るかどうかを試験するために、精製したＣＤ１４＋単球を、それぞれＭ１型マクロファージおよびＭ２型マクロファージを誘導することが知られる(Akagawa K.S., 2002; Verreck F.A. et al., 2004)ＧＭ−ＣＳＦおよびＣＳＦ−１の存在下で７日間培養した。３種類の異なる用量のｍａｂ  Ｈ２７Ｋ１５またはアイソタイプ対照リツキシマブ（０．１；１または１０μｇ／ｍｌ）を、培養の開始時と３日後に再び、培養培地に加えた。Ｈ２７Ｋ１５またはリツキシマブから作製したＦ（ａｂ’）２を等モル濃度で並行して試験した。ｍＡｂ  １．２  ＳＭ（ＷＯ２００９／０２６３０３）から作製したＦ（ａｂ’）２を、Ｈ２７Ｋ１５またはリツキシマブに由来するＦ（ａｂ’）２と比較するために試験した。ヒトＣＤ１１５、２−４Ａ５に対する既知の遮断ｍＡｂ、または非遮断ｍＡｂ  ９−４Ｄ２(Sherr C.J. et al., 1989)をアッセイし、アイソタイプ対照ラットＩｇＧ１と比較した。もう１つの対照として、小分子ＣＤ１１５チロシンキナーゼ阻害剤ＧＷ２５８０を１μＭ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいてヒト単球のＣＳＦ−１依存性増殖およびネズミマクロファージの分化を阻害することが従前に示されている濃度(Conway J.G. et al., 2005; Paniagua R.T. et al., 2010)）で前記培養物のいくつかに加えた。
【０１４２】
６日目の培養物の顕微鏡観察では、血液ドナーとは独立に、非処理細胞と比較してＨ２７Ｋ１５、リツキシマブ、ｍＡｂ  ９−４Ｄ２、ＩｇＧ１、Ｈ２７Ｋ１５  Ｆ（ａｂ’）２またはリツキシマブＦ（ａｂ’）２で処理したウェル間で明らかな違いは示されなかった。ｍＡｂ  ＳＭ１．２  Ｆ（ａｂ’）２で処理したウェルでは、評価した３種類の用量（０．０６６、０．６６および６．６μｇ／ｍｌ）について総てのドナーで完全な細胞傷害性が見られた。ｍＡｂ  ２−４Ａ５で処理したウェルでは、試験した最も高い２用量（１および１０μｇ／ｍｌ）で総てのドナーについて完全な細胞傷害性が見られた。最低用量（０．１μｇ／ｍｌ）では、細胞傷害性は部分的に過ぎなかった。考え合わせると、これらの結果は、ｍＡｂ  ＳＭ１．２  Ｆ（ａｂ’）２およびｍＡｂ  ２−４Ａ５を除き、いずれの抗体についてもいかなる毒性も明らかにならなかった。１μＭの対照ＧＷ２５８０を用いた場合の細胞では、顕微鏡視野によっては、関連の細胞傷害性が細胞破片として見られ、総ての血液ドナー細胞密度の低下が見られた。細胞生存率は、プレートの各ウェルの５つの顕微鏡視野（ウェルの中心で１視野、ウェルの中心と端の間の中間距離で４視野）を計数することにより、６日目に分析した。上記の観察に基づき、部分的または完全な細胞傷害性を示す化合物（ｍＡｂ  ＳＭ１．２  Ｆ（ａｂ’）２、ｍＡｂ  ２−４Ａ５およびＧＷ２５８０）で処理したウェルについても計数を行った。図１は、各ウェルで計数した５視野の平均値±標準偏差を示す。一部の抗体は部分的または完全な細胞傷害性を示した。従って、ｍＡｂ  ＳＭ１．２から誘導されたＦ（ａｂ’）２は、総ての濃度で、その対照と比較して著しい細胞死を誘導し、ｍＡｂ  ２−４Ａ５もまたその対照と比較してマクロファージ数を劇的に減少させた。ＧＷ２５８０の存在下では、非処理培養物と比較して、６日目におよそ７０％のマクロファージ数が残存していた。
【０１４３】
６日目の培養物を活性化ＦｃγＲ  ＣＤ６４（ＦｃγＲＩ）および活性化マーカーＣＤ８６の表面発現に関してＩＣ／ＦＣにより分析した。図２に示されるように、ＣＤ６４の表面発現は、Ｈ２７Ｋ１５またはＧＷ２５８０で処理した際に劇的に減少した。Ｈ２７Ｋ１５は、試験した総ての用量でＣＤ６４発現をほぼ完全に阻害した。ラット抗ヒトＣＤ１１５  ｍＡｂ  ２−４Ａ５もまた表面ＣＤ６４発現を、用量依存的であったが低下させた。非ＣＤ１１５遮断ｍＡｂ  ９−４Ｄ２は、ＣＤ６４の発現レベルを改変しなかった。興味深いことに、Ｈ２７Ｋ１５由来のＦ（ａｂ’）２はまたＣＤ６４発現をダウンレギュレートしたが、完全なｍＡｂよりも効力は低く、１または１０μｇ／ｍｌで試験した場合のみであり、このことは、このＨ２７Ｋ１５の効果が部分的なＦｃ依存性であったことを示唆する。
【０１４４】
６日目のマクロファージで活性化マーカー／共刺激分子ＣＤ８６の発現を分析したところ、本発明者らは、ｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５またはＧＷ２５８０のいずれかで処理した培養物に、ＣＤ８６ｂｒｉｇｈｔＳＳＣｌｏｗ表現型を特徴とする細胞の部分集団が現れたことを見出した（図３）。この、高レベルのＣＤ８６を発現する球形細胞の集団の誘導は、Ｈ２７Ｋ１５由来Ｆ（ａｂ’）２では見られず、このことはこの現象におけるＨ２７Ｋ１５  Ｆｃ領域の役割を示唆する。この集団にゲートを設定したところ、ＣＤ８６ｂｒｉｇｈｔＳＳＣｌｏｗ細胞は主としてＣＤ６４ｌｏｗ〜ＣＤ６４陰性であることが示された（データ非掲載）。
【０１４５】
６日目の培養上清において、ＩＬ−１２ｐ７０およびＩＬ−１０力価を測定した。３人の供試ドナーからのマクロファージは、ヒトＩｇＧ１リツキシマブとともにまたは試薬を伴わずに培養した後にいずれの検出可能なＩＬ−１２ｐ７０も産生しなかった。ｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５の存在下での培養は、３人のうち２人の血液ドナーからのマクロファージによりＩＬ−１２ｐ７０分泌を誘導した。これに対し、ＧＷ２５８０による処理後では、ＩＬ−１２ｐ７０は検出できなかった（図４）。総てのドナーからの休止中のマクロファージにより産生されたＩＬ−１０は、ドナー１からのマクロファージではＨ２７Ｋ１５によりアップレギュレートされたが、ドナー２ではアップレギュレートされず、ドナー３では若干増強しただけであった。結果として、ＩＬ−１２ｐ７０／ＩＬ−１０比は、３人の供試血液ドナーでアップレギュレートされた（図４、右のパネル）。小分子ＧＷ２５８０もまたＩＬ−１２ｐ７０／ＩＬ−１０比を高めたが、これはむしろＩＬ−１０産生の阻害によるものであった。
【０１４６】
これらの結果は、ｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５でＣＤ１１５を分化中のマクロファージにターゲッティングすることで、ＣＤ６４／ＦｃγＲＩの発現が劇的にダウンレギュレートされるだけでなく、高レベルのＣＤ８６活性化マーカーを発現するＳＳＣｌｏｗ細胞の集団が誘導されることを示す。さらに、Ｈ２７Ｋ１５は、総てのドナーで、ＩＬ−１２ｐ７０産生を誘導し、Ｍ１型へのマクロファージ分極の指標となるＩＬ−１２ｐ７０／ＩＬ−１０比をアップレギュレートすることができる。
【０１４７】
注目すべきは、マクロファージをｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５またはＧＷ２５８０の存在下で分化させた場合、ケモカインＭＣＰ−１／ＣＣＬ２の産生がほぼ完全に抑制されることが判明した（図５、上のパネル）。Ｈ２７Ｋ１５によるＭＣＰ−１分泌の阻害は３人の供試ドナーにおいて効果的であり、７４％〜９９％の範囲であった。小分子ＧＷ２５８０は、ＭＣＰ−１産生の抑制においてＨ２７Ｋ１５と同等の効果であった。６日目のマクロファージ培養上清におけるＩＬ−６のレベルも、総てのドナーで、Ｈ２７Ｋ１５またはＧＷ２５８のいずれかにより低減された（図５、下のパネル）。ＩＬ−６産生の阻害は、ＧＷ２５８０の場合（７５〜９６％）よりもＨ２７Ｋ１５（２７％〜７０％）では大きいものではなかった。Ｈ２７Ｋ１５を介したマクロファージＭＣＰ−１およびＩＬ−６（この２つはＭ２マクロファージ分極に関与する可溶性因子である）産生の阻害(Roca H. et al., 2009)は、抗ＣＤ１１５  ｍＡｂがマクロファージをＭ１へ再分極させることを示すもう１つの証拠である。
【０１４８】
抗ＣＤ１１５  ｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５は、ＧＭ−ＣＳＦおよびＣＳＦ−１とともに培養された単球によるＭＭＰ−９産生を阻害する
腫瘍関連マクロファージは、細胞外マトリックスを分解することによる腫瘍細胞転移と腫瘍微小環境中へのＶＥＧＦ放出を誘導することによる新血管新生の両方を促進するＭＭＰ−９（マトリックス−メタロプロテアーゼ９）を産生することが知られている。マクロファージにより産生されるＭＭＰ−９は、腫瘍における血管新生スイッチの主要なレギュレーターである。
【０１４９】
３人の異なるドナーからのＣＤ１４＋単球を、それぞれＭ１型およびＭ２型へのマクロファージ分化を誘導することが知られているＧＭ−ＣＳＦおよびＣＳＦ−１の両方の存在下で分化させた。ＭＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５またはリツキシマブ（陰性対照として使用）を０．１、１または１０μｇ／ｍｌで培養物に加えた。両ｍＡｂ由来の等モル濃度のＦ（ａｂ）’２を並行してアッセイした。ＣＳＦ−１依存性のヒト単球の増殖およびネズミマクロファージの分化をｉｎ  ｖｉｔｒｏで阻害することが従前に知られているチロシンキナーゼ阻害剤ＧＷ２５８０を同じアッセイで試験した。６日間の培養の後、上清中のＭＭＰ−９濃度をＥＬＩＳＡにより測定した（図６）。３人の供試ドナーのうち２人において、培養物をｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５またはＧＷ２５８０で処理した場合にＭＭＰ−９産生の用量依存的低下が見られた。Ｈ２７Ｋ１５に由来するＦ（ａｂ）’２では、同じ２人のドナーにおいて阻害効果が見られた。従って、ｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５は、分化中のＭ２マクロファージによるＭＭＰ−９分泌を低下させることができる。
【０１５０】
マクロファージ培養におけるこれらの所見は、癌患者に投与したＨ２７Ｋ１５は腫瘍微小環境中のＭＭＰ−９濃度をダウンレギュレートし得ることを示唆する。
【０１５１】
ｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５はＣＤ１６３陽性Ｍ２型マクロファージの分化を阻害する
【０１５２】
ヘモグロビンスカベンジャー受容体（ＣＤ１６３）は、特に乳癌においてＴＡＭにより発現されるＭ２分極マクロファージのマーカーとして同定されている。ＧＭ−ＣＳＦおよびＣＳＦ−１とともに培養したヒト単球から誘導された６日目のマクロファージにおいて、フローサイトメトリーによりＣＤ１６３の表面発現を分析した。図７は、分化した培養物におけるＣＤ１６３陽性細胞のパーセンテージを示す。ｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５との培養は、３人の供試ドナーの総てでＣＤ１６３＋マクロファージ集団の分化を阻害した。１μｇ／ｍｌのＨ２７Ｋ１５の存在下で、ＣＤ１６３陽性細胞のパーセンテージは、リツキシマブで処理した対照培養物と比較して２．５分の１〜４分の１となった。ＧＷ２５８０も２／３人のドナーでだけ、同様の効果があった。Ｈ２７Ｋ１５由来のＦ（ａｂ）’２のＣＤ１６３発現に対する効果は弱いかまたは全く無く、抗ＣＤ１１５  ｍＡｂのＦｃ領域がその作用様式に関与したことを示す。
【０１５３】
表面ＣＤ１６３発現におけるこれらの変化により証明されるように、また、従前の結果と一致して、ｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５によるＣＤ１１５のテーゲッティングは、Ｍ２型マクロファージの分化を阻害する。
【０１５４】
ＭＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５は単球分化をＭ２マクロファージからＭ１マクロファージへ偏向させる
【０１５５】
ｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５またはリツキシマブの存在下または不在下で、ＧＭ−ＣＳＦおよびＣＳＦ−１とともに培養した単球から誘導された細胞において、Ｍ１マクロファージとＭ２マクロファージの比を分析した。２人の異なる血液ドナーからの細胞を６日間培養した後、Ｍ１（ＣＤ１４＋ＣＤ１６３−）マクロファージとＭ２（ＣＤ１４＋ＣＤ１６３＋）マクロファージをフローサイトメトリーにより定量した。図８は、各培養条件のＣＤ１４＋マクロファージ集団間で算出されたＭ１／Ｍ２マクロファージ比を示す。１μｇ／ｍｌのｍＡｂ  Ｈ２７Ｋ１５は、２人の供試ドナーからのマクロファージのＭ１／Ｍ２比を、同じ濃度の対照ＩｇＧ１リツキシマブまたは非処理培養物と比べて増加させた。
参照文献
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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