(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
好酸球性炎症の診断アッセイ（ＥＩＤＡ）を使用して患者が好酸球性炎症陽性（ＥＩＰ）であるかを決定することを含む、喘息患者又は呼吸器疾患患者がＴＨ２経路阻害剤による治療に応答すると見込まれる可能性を試験するための方法において、患者がＥＩＰであると決定される場合に、患者がＴＨ２経路阻害剤による治療に応答する可能性があると同定する工程を含み、
前記ＥＩＤＡが、
（ａ）前記患者から得たサンプル中の総ペリオスチンの量を決定し；
（ｂ）工程（ａ）で決定された総ペリオスチンの量を参照量に対して比較し；及び
（ｃ）前記患者の総ペリオスチン量が参照量以上の場合に患者がＥＩＰであると決定される工程を含む、方法。
【請求項２】
好酸球性炎症の診断アッセイ（ＥＩＤＡ）を使用して患者が好酸球性炎症陽性（ＥＩＰ）であるかを決定することを含む、喘息患者又は呼吸器疾患患者の重度の増悪に罹患すると見込まれる可能性を試験するための方法において、患者がＥＩＰであると決定される場合に、患者が重度の増悪の増大に罹患する可能性があると同定する工程を含み、
前記ＥＩＤＡが、
（ａ）前記患者から得たサンプル中の総ペリオスチンの量を決定し；
（ｂ）工程（ａ）で決定された総ペリオスチンの量を参照量に対して比較し；及び
（ｃ）前記患者の総ペリオスチン量が参照量以上の場合に患者がＥＩＰであると決定される工程を含む、方法。
【請求項３】
好酸球性炎症の診断アッセイ（ＥＩＤＡ）を使用して患者が好酸球性炎症陰性（ＥＩＮ）であるかを決定することを含む、喘息患者又は呼吸器疾患患者がＴＨ２経路阻害剤による治療に応答する見込みが低い可能性を試験するための方法において、患者がＥＩＮであると決定される場合に、患者がＴＨ２経路阻害剤による治療に応答する可能性が低いと同定する工程を含み、
前記ＥＩＤＡが、
（ａ）前記患者から得たサンプル中の総ペリオスチンの量を決定し；
（ｂ）工程（ａ）で決定された総ペリオスチンの量を参照量に対して比較し；及び
（ｃ）前記患者の総ペリオスチン量が参照量未満である場合に患者がＥＩＮであると決定される工程を含む、方法。
【請求項４】
好酸球性炎症の診断アッセイ（ＥＩＤＡ）を使用して患者が好酸球性炎症陽性（ＥＩＰ）又は好酸球性炎症陰性（ＥＩＮ）であるかを決定することを含む、ＴＨ２経路阻害剤により治療されている喘息患者をモニタリングする方法において、
患者がＥＩＰであると決定される場合に、患者がＴＨ２経路阻害剤による治療に応答する見込みが高いと同定する工程、又は、患者がＥＩＮであると決定される場合に、患者がＴＨ２経路阻害剤による治療に応答する見込みが低いと同定する工程を含み、
前記ＥＩＤＡが、
（ａ）前記患者から得たサンプル中の総ペリオスチンの量を決定し；
（ｂ）工程（ａ）で決定された総ペリオスチンの量を参照量に対して比較し；及び
（ｃ）前記患者の総ペリオスチン量が参照量以上である場合に患者がＥＩＰであると決定され、又は前記患者の総ペリオスチン量が参照量未満の場合に患者がＥＩＮであると決定される工程を含む、方法。
【請求項５】
ＥＩＰの決定が、ＴＨ２経路阻害剤による治療を継続することを示し、ＥＩＮの決定はＴＨ２経路阻害剤による治療を中止することを示す、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
請求項１から４のいずれか一項に記載の方法であって、
前記参照量が、喘息患者群におけるペリオスチン値の中央値である方法。
【請求項７】
総ペリオスチンが血清ペリオスチンであり、該ペリオスチンがイムノアッセイを使用して測定される、請求項１から６の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
イムノアッセイがサンドイッチイムノアッセイである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
請求項７又は８に記載の方法であって、
前記イムノアッセイが、配列番号１の重鎖可変領域（ＶＨ）配列、及び、配列番号２の軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む抗ペリオスチン抗体の使用を含む、方法。
【請求項１０】
請求項７又は８に記載の方法であって、
前記イムノアッセイが、配列番号３の重鎖可変領域（ＶＨ）配列、及び、配列番号４の軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む抗ペリオスチン抗体の使用を含む、方法。
【請求項１１】
請求項７又は８に記載の方法であって、
前記イムノアッセイが、配列番号１の重鎖可変領域（ＶＨ）配列、及び、配列番号２の軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む抗ペリオスチン抗体、及び配列番号３の重鎖可変領域（ＶＨ）配列、及び、配列番号４の軽鎖可変領域（ＶＬ）配列を含む抗ペリオスチン抗体、の使用を含む、方法。
【請求項１２】
サンドイッチイムノアッセイがモノクローナル抗体（２５Ｄ４）でコートされたプレートを含む酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）であるか、又はＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）アナライザーにより実施される、請求項８〜１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
工程（ａ）においてモノクローナル抗体（２５Ｄ４）でコートされたプレートを含む酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用するときＥＩＰの参照量が２３ｎｇ／ｍｌ以上である、請求項１、２、及び４〜１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
工程（ａ）においてＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）アナライザーを使用するときＥＩＰの参照量が５０ｎｇ／ｍｌ以上である、請求項１、２、及び４〜１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
工程（ａ）においてモノクローナル抗体（２５Ｄ４）でコートされたプレートを含む酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用するときＥＩＮの参照量が２１ｎｇ／ｍｌ以下である、請求項１、３、及び４〜１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１６】
工程（ａ）においてＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）アナライザーを使用するときＥＩＮの参照量が４８ｎｇ／ｍｌ以下である、請求項１、３、及び４〜１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１７】
患者が中等度から重度の喘息に罹患している、請求項１から１６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１８】
喘息又は呼吸器疾患がコルチコステロイドで制御されない、請求項１から１６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１９】
コルチコステロイドが吸入コルチコステロイドである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
吸入コルチコステロイドが、キュバール（登録商標）、パルミコート（登録商標）、シンビコート（登録商標）、Ａｅｒｏｂｉｄ（登録商標）、フロベント（登録商標）、フルナーゼ（登録商標）、アドベア（登録商標）又はアズマコート（登録商標）である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
患者がまた第二コントローラーで治療されている、請求項１から１６の何れか一項に記載の方法。
【請求項２２】
第二コントローラーが長時間作用型気管支拡張薬（ＬＡＢＤ）である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ＬＡＢＤが、長時間作用型β２アゴニスト（ＬＡＢＡ）、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（ＬＴＲＡ）、長時間作用型ムスカリンアンタゴニスト（ＬＡＭＡ）、テオフィリン、または経口コルチコステロイド（ＯＣＳ）である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ＬＡＢＤが、シンビコート（登録商標）、アドベア（登録商標）、ブロバナ（登録商標）、フォラジル（登録商標）、ＰｅｒｆｏｒｏｍｉｓｔＴＭ、又はセレベント（登録商標）である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
ＴＨ２経路阻害剤が、標的ＩＴＫ，ＢＴＫ，ＩＬ−９（例えば、ＭＥＤＩ−５２８）、ＩＬ−５（例えば、メポリズマブ、ＣＡＳ番号１９６０７８−２９−２；レシリズマブ（ｒｅｓｉｌｉｚｕｍａｂ））、ＩＬ−１３（例えば、ＩＭＡ−０２６，ＩＭＡ−６３８（アンルキンズマブとも言う、ＩＮＮ Ｎｏ．９１０６４９−３２−０；ＱＡＸ−５７６；ＩＬ４／ＩＬ１３ トラップ），トラロキヌマブ（ＣＡＴ−３５４，ＣＡＳ 番号１０４４５１５−８８−９とも言う）；ＡＥＲ−００１，ＡＢＴ−３０８（ヒト化１３Ｃ５．５抗体とも言う），ＩＬ−４（例えば、ＡＥＲ−００１，ＩＬ４／ＩＬ１３ トラップ），ＯＸ４０Ｌ，ＴＳＬＰ，ＩＬ−２５，ＩＬ−３３及びＩｇＥ（例えば、ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）、ＱＧＥ−０３１；ＭＥＤＩ−４２１２）；及び受容体、例えば：ＩＬ−９受容体、ＩＬ−５受容体（例えば、ＭＥＤＩ−５６３（ベンラリズマブ，ＣＡＳ番号１０４４５１１−０１−４），ＩＬ−４受容体α（例えば、ＡＭＧ−３１７，ＡＩＲ−６４５），ＩＬ−１３受容体α１（例えば、Ｒ−１６７１）及びＩＬ−１３受容体α２，ＯＸ４０，ＴＳＬＰ−Ｒ，ＩＬ−７Ｒアルファ（ＴＳＬＰの共受容体），ＩＬ１７ＲＢ（ＩＬ−２５の受容体），ＳＴ２（ＩＬ−３３の受容体），ＣＣＲ３，ＣＣＲ４，ＣＲＴＨ２（例えば、ＡＭＧ−８５３，ＡＰ７６８，ＡＰ−７６１，ＭＬＮ６０９５，ＡＣＴ１２９９６８），ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩ，ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩＩ／ＣＤ２３（ＩｇＥの受容体），Ｆｌａｐ（例えば、ＧＳＫ２１９０９１５），Ｓｙｋキナーゼ（Ｒ−３４３，ＰＦ３５２６２９９）；ＣＣＲ４（ＡＭＧ−７６１），ＴＬＲ９（ＱＡＸ−９３５）を阻害し、又はＣＣＲ３，ＩＬ５，ＩＬ３，ＧＭ−ＣＳＦの多重サイトカイン阻害剤（例えば、ＴＰＩ ＡＳＭ８）である、請求項１から２１の何れか一項に記載の方法。
【請求項２６】
ＴＨ２経路阻害剤が抗ＩＬ１３／ＩＬ４経路阻害剤又は抗ＩｇＥ結合剤である、請求項１から２１の何れか一項に記載の方法。
【請求項２７】
ＴＨ２経路阻害剤が抗ＩＬ−１３抗体である、請求項１から２１の何れか一項に記載の方法。
【請求項２８】
抗ＩＬ−１３抗体が、配列番号９を含むＶＨと配列番号１０を含むＶＬを含む抗体であり、抗ＩＬ−１３抗体はＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６、又はレブリキズマブのアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
抗ＩＬ−１３抗体がＩＬ−４にも結合する二重特異性抗体である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
ＴＨ２経路阻害剤が抗ＩｇＥ抗体である、請求項１から２１の何れか一項に記載の方法。
【請求項３１】
抗ＩｇＥ抗体が、（ｉ）ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）抗体、（ｉｉ）可変重鎖が配列番号２４で可変軽鎖が配列番号２５である、可変重鎖と可変軽鎖を含む抗Ｍ１’抗体、又は（ｉｉｉ）可変重鎖が更に、ＨＶＲ−Ｈ１，ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、可変軽鎖が更に、ＨＶＲ−Ｌ１，ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む、可変重鎖と可変軽鎖を含む抗Ｍ１’抗体であり、そして：（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号２４の残基２６−３５［ＧＦＴＦＳＤＹＧＩＡ］であり；（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号２４の残基４９−６６［ＡＦＩＳＤＬＡＹＴＩＹＹＡＤＴＶＴＧ］であり；（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号２４の残基９７−１０６［ＡＲＤＮＷＤＡＭＤＹ］であり；（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号２５の残基２４−３９［ＲＳＳＱＳＬＶＨＮＮＡＮＴＹＬＨ］であり；（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号２５の残基５５−６１［ＫＶＳＮＲＦＳ］であり；（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号２５の残基９４−１０２［ＳＱＮＴＬＶＰＷＴ］である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
請求項１から３１の何れか一項に記載の方法における、喘息患者から得られた生物学的サンプル中の総ペリオスチンを検出するためのキットの使用。
【請求項３３】
喘息患者又は呼吸器疾患に罹患している患者から得た生物学的サンプル中の総ペリオスチンを測定するためのキットであり、該キットは（１）総ペリオスチン又はその一部をコードする第二の核酸分子にハイブリダイズする第一の核酸分子を含むか、又は（２）該キットは総ペリオスチンに結合する抗体を含む、請求項１から３１の何れか一項に記載の方法に使用するためのキット。
【請求項３４】
請求項３２に記載の使用を記述する少なくとも１つの情報を含むパッケージ挿入物を含む、請求項３３に記載のキット。
【請求項３５】
（１）患者から得た血清サンプル中の総ペリオスチンのレベル、及び任意で、ＴＡＲＣ及びＭＣＰ−４から選択される一以上のタンパク質について血清サンプル中のタンパク質の発現レベルを測定し；及び
（２）血清サンプル中の総ペリオスチンの発現レベル及び任意でＴＡＲＣ及びＭＣＰ−４から選択される一以上のタンパク質の発現レベルを測定するためのインストラクションを包含し、ここで前記タンパク質の何れか一、組み合わせ又は全ての発現レベルの上昇が喘息サブタイプの指標である、患者の喘息サブタイプを診断するためのキットであって、請求項１から３１の何れか一項に記載の方法に使用するためのキット。
【請求項３６】
キットが、喘息患者又は呼吸器疾患患者がＥＩＰ又はＥＩＮであるかを決定するためのパッケージ挿入物を更に含む、請求項３５に記載のキット。
【請求項３７】
キットが、喘息患者がＴＨ２経路阻害剤に応答する可能性があるかを決定するためのパッケージ挿入物を更に含む、請求項３６に記載のキット。
【請求項３８】
請求項３２に記載の使用を記述する情報を含むパッケージ挿入物を更に含む、請求項３６に記載のキット。
【請求項３９】
生物学的サンプルを保持する空の容器を更に含む、請求項３３から３７の何れか一項に記載のキット。
【請求項４０】
キットが総ペリオスチンのレベルを決定するためのイムノアッセイにおける使用のための２つの抗ペリオスチン抗体を含む、請求項３３から３７の何れか一項に記載のキット。
【請求項４１】
請求項３３から４０の何れか一項に記載のキットであって、前記抗体が配列番号１のＶＨ配列及び配列番号２のＶＬ配列を含む抗ペリオスチン抗体である、キット。
【請求項４２】
請求項３３から４０の何れか一項に記載のキットであって、前記抗体が配列番号１及び配列番号２の配列を含む抗ペリオスチン抗体である、キット。
【請求項４３】
請求項３３から４０の何れか一項に記載のキットであって、前記抗体が配列番号３のＶＨ配列及び配列番号４のＶＬ配列を含む抗ペリオスチン抗体である、キット。
【請求項４４】
請求項３３から４０の何れか一項に記載のキットであって、前記抗体が配列番号３及び配列番号４の配列を含む抗ペリオスチン抗体である、キット。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１０年１２月１６日に出願された米国仮出願第６１／４５９，７６０号、２０１１年３月１８日に出願された米国仮出願第６１／４６５４２５号、２０１１年５月１０日に出願された米国仮出願第６１／４８４６５０号、２０１１年８月２日に出願された米国仮出願第６１／５７４４８５号、及び２０１１年１１月８日に出願された米国仮出願第６１／５５７２９５号の優先権の利益を主張し、これら全ては、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂ経由でＡＳＣＩＩフォーマットで提出された配列表を含み、その全体が本明細書中で参照することにより援用される。前記ＡＳＣＩＩコピーは、２０１１年１１月１７日に作成され、Ｐ４５６９Ｒ１ＷＯ＿ＰＣＴＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔと命名され、７３，１１８バイトの大きさである。
【技術分野】
【０００３】
分野
喘息を含むがこれらに限定されないＴＨ２阻害に関連する疾患を診断および治療する方法が提供される。また提供されるのは、ＴＨ２経路阻害剤である特定の治療薬による治療のために患者を選択するか又は同定する方法である。
【背景技術】
【０００４】
背景
喘息は世界的に発生率が増加している複雑な病気である。他の発症のなかで、喘息患者の気道内における好酸球性炎症が報告されている。疾患の病態生理は、可変気道閉塞、気道炎症、粘液過分泌、及び上皮下線維症によって特徴付けられる。臨床的には、患者は咳、喘鳴、および息切れを示し得る。多くの患者が現在利用可能な治療法で十分に治療されているが、幾人かの喘息患者は、今日の治療法の使用にもかかわらず、持続的な疾患を持っている。
【０００５】
喘息を治療するため、過剰の薬物が売りに出されているか又は開発中である。喘息治療のための数多くの標的の一つは、ＩＬ−１３である。ＩＬ−１３は、活性化Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、好塩基球、好酸球、及び肥満細胞により産生される多面的ＴＨ２サイトカインであり、前臨床モデルにおいて喘息の病因に強く関係している。文献におけるＩＬ−１３、ＩＬ−４と喘息の間に多くの関連にもかかわらず、多くのＩＬ１３及び／又はＩＬ４アンタゴニスト療法はクリニックでは期待はずれの結果であった。現在では、ＩＬ−１３又はＩＬ−４アンタゴニスト療法は喘息における使用のために承認されていない。更に、中等度から重度の喘息にかかった患者は、良好な、代わりの治療選択肢が欠損し続けている。従って、喘息を治療するためのより良好な治療及び喘息患者を治療する方法を理解するための改良された方法を同定するための必要がある。
【０００６】
本明細書に引用される全ての参考文献は、特許出願および刊行物を含み、任意の目的のためにその全体が参考により援用される。
【発明の概要】
【０００７】
概要
本出願は、ＴＨ２経路を阻害するための治療薬とそれを使用するより良好な方法を提供する。本出願はまた、任意でＴＨ２経路阻害剤によって疾患を治療することに使用するために、疾患を診断するための良好な方法を提供する。
【０００８】
本明細書で提供される治療及び診断の方法は、喘息、好酸球性障害、呼吸器疾患、ＩＬ−１３媒介性疾患及び／又はＩｇＥ媒介性疾患、またはそれらの疾患に関連する症状に罹患した患者に適用することができる。喘息と診断されていない患者を含む喘息様の症状を患っている患者は、本明細書で提供される方法に従って治療することができる。
【０００９】
一実施態様によれば、本明細書に与えられる方法に従って治療された患者は、喘息、好酸球性疾患、呼吸器疾患、ＩＬ−１３媒介性疾患及び／又はＩｇＥ媒介性疾患、またはこれらの疾患に関連した症状に罹患し、かつ癌及び腫瘍を持っていない。別の実施態様によれば、本明細書に与えられる方法に従って治療された患者は、喘息、好酸球性疾患、呼吸器疾患、ＩＬ−１３媒介性疾患及び／又はＩｇＥ媒介性疾患、またはこれらの疾患に関連した症状に罹患しており、１２歳以上、１８歳以上、又は１９歳以上、又は１２〜１７歳の間、又は１８〜７５歳の間である。
【００１０】
一実施態様において、本発明によるＴＨ２経路阻害剤で治療された患者はまた、一つ、二つ、又は三つ以上の治療薬で治療されている。一実施態様において、患者は喘息患者である。一実施態様によれば、患者はＴＨ２経路阻害剤及び、一つ、二つ、又は三つ以上の治療薬で治療され、ここで、ＴＨ２阻害剤以外の少なくとも一の治療薬は、コルチコステロイド、ロイコトリエン拮抗薬、ＬＡＢＡ、コルチコステロイド／ＬＡＢＡの組み合わせ組成物、テオフィリン、クロモグリク酸ナトリウム、ネドクロミルナトリウム、オマリズマブ、ＬＡＭＡ、ＭＡＢＡ、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）阻害剤、または酵素ＰＤＥ−４阻害剤である。本発明の一態様によれば、ＴＨ２経路阻害剤は、ＥＩＰ状態と診断された喘息患者に対して投与され、ここでその診断はＥＩＰ状態を決定するためにＥＩＤアッセイ（単独で又は他のアッセイ併用で）の使用を含む。一つの更なる実施態様において、喘息患者は治療の前にコルチコステロイドで制御されない。別の実施態様において、喘息患者はまた、第二コントローラーで治療されている。一実施態様において、第二のコントローラーはコルチコステロイド、ＬＡＢＡ又はロイコトリエンアンタゴニストである。更なる実施態様において、喘息患者は中等度から重度の喘息に罹患している。従って、一実施態様において、ＴＨ２経路阻害剤で治療されるべき患者は、ＴＨ２経路阻害剤による治療前にコルチコステロイドで制御されない中等度から重度の喘息患者であり、その後ＴＨ２経路阻害剤と一つ、二つ、三つまたはそれ以上のコントローラーで治療される。一実施態様において、少なくとも一のコントローラーはコルチコステロイドである。更なる実施態様において、そのような患者はＴＨ２経路阻害剤、コルチコステロイド又は別のコントローラーで治療される。別の実施態様において、患者は軽度の喘息に罹患しているが、コルチコステロイドで治療されていない。治療薬は、ＴＨ２阻害剤と比較した場合、異なる治療サイクルを有していてもよく、その結果、患者の治療の一部としてのＴＨ２阻害剤に比べて異なる時間で投与することができる。従って、一実施態様によれば、この発明による治療の方法は、患者へＴＨ２経路阻害薬を投与し、および任意で、少なくとも一つ、二つまたは三つの追加の治療薬を投与する工程を含む。一実施態様において、ＴＨ２経路阻害剤は、別の治療薬とともに組成物中に存在する。別の実施態様において、ＴＨ２経路阻害剤は、別の治療薬とともに組成物中に存在しない。
【００１１】
別の実施態様によれば、本発明は、配列番号９を含むＶＨと配列番号１０を含むＶＬを含む抗ＩＬ１３抗体、又は、ＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ１３抗体を均一な（ｆｌａｔ）用量として投与することを含む、喘息を治療するための方法を含む。一実施態様において、配列番号９を含むＶＨ及び配列番号１０を含むＶＬを含む抗ＩＬ１３抗体が、１２５〜１０００ｍｇの均一用量として（即ち体重に依存せずに）、皮下注射により、または静脈内注射により、２週間ごと、３週間ごと、及び４週間ごとから選択される時間の頻度で投与される。一実施態様において、ＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列を持つ抗ＩＬ１３抗体が、１２５〜１０００ｍｇの均一用量として（即ち体重に依存せずに）、皮下注射により、または静脈内注射により、２週間ごと、３週間ごと、及び４週間ごとから選択される時間の頻度で投与される。一実施態様において、抗ＩＬ１３抗体はレブリキズマブであり、１２５〜１０００ｍｇの均一用量として（即ち体重に依存せずに）、皮下注射により、または静脈内注射により、２週間ごと、３週間ごと、及び４週間ごとから選択される時間の頻度で投与される。別の実施態様において、患者は、ＥＩＰ状態を決定するために、総ペリオスチンアッセイを用いてＥＩＰ状態と診断される。
【００１２】
別の実施態様によれば、配列番号９を含むＶＨ及び配列番号１０を含むＶＬを含む抗体が、喘息を治療するために、増悪速度を減少させるため又はＦＥＶ１を改善するために十分な治療的有効量で投与される。更に別の実施態様において、本発明は、配列番号９を含むＶＨと配列番号１０を含むＶＬを含む抗ＩＬ１３抗体、又は、ＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ１３抗体を、３７．５ｍｇの均一用量（即ち体重に依存せずに）、又は１２５ｍｇの均一用量、又は２５０ｍｇの均一用量として投与することを含む喘息を治療するための方法を含む。ある実施態様において、その期間は、６ヶ月、１年、２年、５年、１０年、１５年、２０年、又は患者の一生涯である。ある実施態様において、喘息は重度の喘息であり、患者は吸入ステロイドと第二コントローラー薬物で不十分に制御されるか又は制御されない。別の実施態様において、患者はＥＩＰを決定するために、総ペリオスチンアッセイを用いてＥＩＰ状態と診断され、患者は上述のように、抗ＩＬ１３抗体による治療のために選択される。別の実施態様において、本発明は、上述のように抗ＩＬ１３抗体で喘息患者を治療することを含み、ここで該患者は、ＥＩＰ状態を決定する総ペリオスチンアッセイを用いてＥＩＰ状態と以前に診断されている。一実施態様において、喘息患者は１８歳以上である。一実施態様において、喘息患者は１２から１７歳であり、抗ＩＬ１３抗体が２５０ｍｇの均一用量で又は１２５ｍｇの均一用量で投与される。一実施態様において、喘息患者は６から１１歳であり、抗ＩＬ１３抗体が１２５ｍｇの均一用量で又は６２．５ｍｇの均一用量で投与される。
【００１３】
本発明はペリオスチンアッセイを提供する。一実施態様において、ペリオスチンアッセイは総ペリオスチンアッセイである。別の実施態様において、総ペリオスチンアッセイは、患者から得た生物学的サンプル中の総ペリオスチンに結合させるため、この発明の一以上の抗ペリオスチン抗体の使用を含む。この発明の更に別の実施態様において、生物学的サンプルは全血から得た血清である。一実施態様において、生物学的サンプルは喘息患者から得られる。更なる実施態様において、喘息患者は中等度から重度の喘息患者である。更なる実施態様において、中等度から重度の喘息患者はコルチコステロイドで制御されないか、又は一つ、二つ、又は三つ以上のコントローラーにより治療されている。
【００１４】
本明細書に開示される抗ペリオスチンアッセイと抗体アッセイは、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、非特異性間質性肺炎（ＮＳＩＰ）、および癌など、ペリオスチンが上昇する他の疾患について使用することができる。
【００１５】
本発明は、患者が総ペリオスチンの上昇したレベルを発現する、患者の喘息又は呼吸器疾患の治療に使用のためのＴＨ２経路阻害剤である治療薬を提供する。一実施態様において、ＴＨ２経路の阻害のための標的は、ＩＬ−９、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−４、ＯＸ４０Ｌ、ＴＳＬＰ、ＩＬ−２５、ＩＬ−３３およびＩｇＥ；ＩＬ−９受容体、ＩＬ−５受容体、ＩＬ−４受容体α、ＩＬ−１３受容体α１及びＩＬ−１３受容体α２、ＯＸ４０、ＴＳＬＰ−Ｒ、ＩＬ−７Ｒα（ＴＳＬＰの共受容体）、ＩＬ１７ＲＢ（ＩＬ−２５の受容体）、ＳＴ２（ＩＬ−３３の受容体）、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＲＴＨ２、ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩ及びＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩＩ／ＣＤ２３（ＩｇＥ抗体に対する受容体）などの受容体から選択される。一実施態様において、本発明に記載の方法に従って治療されるべき患者は、軽度から重度の喘息、任意で中等度から重度の喘息に罹患しており、その喘息はコルチコステロイドで制御されない。更なる実施態様において、コルチコステロイドで制御されない中等度から重度の喘息患者における総ペリオスチンの血清レベルは、Ｅ４アッセイにおいて、２０ｎｇ／ｍｌ、２１ｎｇ／ｍｌ、２２ｎｇ／ｍｌ、２３ｎｇ／ｍｌ、２４ｎｇ／ｍｌまたは２５ｎｇ／ｍｌを超える。更に別の実施態様において、治療されるべき患者は、ＣＥＡ、ＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）及びＭＣＰ−４（ＣＣＬ１３）ｍＲＮＡ又はタンパク質の何れか一、組み合わせ又は全ての発現レベルが更に上昇している。更に別の実施態様において、治療されるべき患者は、本発明に記載されるようにペリオスチンのレベルが上昇していることに加え、２１ｐｐｂ又は３５ｐｐｂを超えるＦＥＮＯのレベルを有する。
【００１６】
本発明は、喘息又は呼吸器疾患を有する患者の治療のための医薬の調製においてＴＨ２誘導性喘息経路標的に結合する治療薬の使用を提供し、ここで該患者は総ペリオスチンの上昇したレベルを発現し、該標的はＩＬ−９、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−４、ＯＸ４０Ｌ、ＴＳＬＰ、ＩＬ−２５、ＩＬ−３３およびＩｇＥ；ＩＬ−９受容体、ＩＬ−５受容体、ＩＬ−４受容体α、ＩＬ−１３受容体α１及びＩＬ−１３受容体α２、ＯＸ４０、ＴＳＬＰ−Ｒ、ＩＬ−７Ｒα（ＴＳＬＰの共受容体）、ＩＬ１７ＲＢ（ＩＬ−２５の受容体）、ＳＴ２（ＩＬ−３３の受容体）、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＲＴＨ２、ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩ及びＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩＩ／ＣＤ２３（ＩｇＥ抗体に対する受容体）などの受容体である。一実施態様では、患者はＥＩＰである。一実施態様によれば、患者は、この発明によるアッセイを用いて、ＥＩＰを有すると決定された。更なる別の実施態様において、アッセイは総ペリオスチンアッセイである。別の実施態様において。アッセイは、患者から得られた生物学的サンプル中の総ペリオスチンのレベルを測定する。一実施態様において。アッセイは、患者から得られた血清サンプル中の総ペリオスチンタンパク質のレベルを測定する。
【００１７】
本発明は、患者の喘息のサブタイプを診断するためのキット又は製造品を包含し、
（１）患者から得た血清サンプル中の総ペリオスチンのレベル、及び任意で、ＴＡＲＣ及びＭＣＰ−４から選択される一以上のタンパク質についてタンパク質の発現レベルを測定し；及び
（２）血清サンプル中の総ペリオスチンの発現レベル及び任意でＴＡＲＣ及び／又はＭＣＰ−４タンパク質の発現レベルを測定するためのインストラクションを包含し、ここで前記タンパク質の何れか一、組み合わせ又は全ての発現の上昇が喘息サブタイプの指標であることを含む。
【００１８】
更に別の実施態様において、ＴＨ２経路阻害剤による治療に応答する可能性がある喘息患者又は呼吸器疾患患者を同定する方法が提供される。ある実施態様において、本方法は、好酸球性炎症の診断アッセイ（ＥＩＤＡ）を用いて、患者が好酸球性炎症陽性（ＥＩＰ）であるかを決定することを含み、ここでＥＩＰ状態は患者がＴＨ２経路阻害剤による治療に応答する可能性があることを示唆する。
【００１９】
別の実施態様において、重度の増悪に罹患する可能性がある喘息患者又は呼吸器疾患患者を同定する方法が提供される。ある実施態様において、本方法は、ＥＩＤＡを用いて、患者がＥＩＰであるかを決定することを含み、ここでＥＩＰ状態は患者が重度の増悪の増加に罹患する可能性があることを示唆する。
【００２０】
更に別の実施態様において、ＴＨ２経路阻害剤による治療に応答する可能性が高く無い喘息患者又は呼吸器疾患患者を同定する方法が提供される。ある実施態様において、本方法は、ＥＩＤＡを用いて、患者が好酸球性炎症陰性（ＥＩＮ）であるかを決定することを含み、ここでＥＩＮ状態は患者がＴＨ２経路阻害剤による治療に応答する可能性が高く無いことを示唆する。
【００２１】
別の実施態様において、ＴＨ２経路阻害剤により治療される喘息患者をモニタリングする方法が提供される。ある実施態様において、本方法は、ＥＩＤＡを用いて、患者がＥＩＰであるか又はＥＩＮであるかを決定することを含む。一実施態様において、本方法は、ＴＨ２経路阻害剤の治療レジメンを決定することを含む。一実施態様において、ＥＩＰの決定は、ＴＨ２経路阻害剤による治療を継続することを示し、ＥＩＮの決定はＴＨ２経路阻害剤による治療を中止することを示す。
【００２２】
ある実施態様において、上記の方法で使用されるＥＩＤＡは、（ａ）喘息患者から得たサンプル中の総ペリオスチンの量を決定し；（ｂ）工程（ａ）で決定された総ペリオスチンの量を参照量に対して比較し；（ｃ）前記患者を工程（ｂ）で得られた比較に基づいて応答者又は非応答者のカテゴリに層別化するある実施態様において、総ペリオスチンは血清ペリオスチンであり、そのペリオスチンはイムノアッセイを使用して測定される。ある実施態様において、イムノアッセイは、サンドイッチイムノアッセイである。ある実施態様において、サンドイッチイムノアッセイはＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）アナライザ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ）によって行われる。ある実施態様において、サンドイッチイムノアッセイは、Ｅ４アッセイである。一実施態様において、工程（ａ）においてＥ４アッセイを使用するときＥＩＰの参照量は２３ｎｇ／ｍｌより大きい。一実施態様において、工程（ａ）においてＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）アナライザを使用するときＥＩＰの参照量は５０ｎｇ／ｍｌ以上である。一実施態様において、工程（ａ）においてＥ４アッセイを使用するときＥＩＮの参照量は２１ｎｇ／ｍｌ以下である。一実施態様において、工程（ａ）においてＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）アナライザを使用するときＥＩＮの参照量は４８ｎｇ／ｍｌ以下である。
【００２３】
ある実施態様において、上述した方法に従う患者は中等度から重度の喘息に罹患している。ある実施態様において、喘息又は呼吸器疾患はコルチコステロイドで制御されない。ある実施態様において、コルチコステロイドは吸入コルチコステロイドである。ある実施態様において、吸入コルチコステロイドは、キュバール（登録商標）、パルミコート（登録商標）、シンビコート（登録商標）、Ａｅｒｏｂｉｄ（登録商標）、フロベント（登録商標）、フルナーゼ（登録商標）、アドベア（登録商標）又はアズマコート（登録商標）である。一実施態様において、患者はまた、第二コントローラーで治療されている。ある実施態様において、第二コントローラーは長時間作用型気管支拡張薬（ＬＡＢＤ）である。ある実施態様において、ＬＡＢＤは長時間作用型β２アゴニスト（ＬＡＢＡ）、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（ＬＴＲＡ）、長時間作用型ムスカリンアンタゴニスト（ＬＡＭＡ）、テオフィリン、または経口コルチコステロイド（ＯＣＳ）である。ある実施態様において、ＬＡＢＤはシンビコート（登録商標）、アドベア（登録商標）、ブロバナ（登録商標）、フォラジル（登録商標）、ＰｅｒｆｏｒｏｍｉｓｔＴＭ、又はセレベント（登録商標）である。
【００２４】
ある実施態様において、上記本方法によるＴＨ２経路阻害剤は、標的ＩＴＫ，ＢＴＫ，ＩＬ−９（例えば、ＭＥＤＩ−５２８）、ＩＬ−５（例えば、メポリズマブ、ＣＡＳ番号１９６０７８−２９−２；レシリズマブ（ｒｅｓｉｌｉｚｕｍａｂ））、ＩＬ−１３（例えば、ＩＭＡ−０２６，ＩＭＡ−６３８（アンルキンズマブとも言う、ＩＮＮ Ｎｏ．９１０６４９−３２−０；ＱＡＸ−５７６；ＩＬ４／ＩＬ１３ トラップ），トラロキヌマブ（ＣＡＴ−３５４，ＣＡＳ 番号１０４４５１５−８８−９とも言う）；ＡＥＲ−００１，ＡＢＴ−３０８（ヒト化１３Ｃ５．５抗体とも言う），ＩＬ−４（例えばＡＥＲ−００１，ＩＬ４／ＩＬ１３ トラップ），ＯＸ４０Ｌ，ＴＳＬＰ，ＩＬ−２５，ＩＬ−３３及びＩｇＥ（例えば、ＸＯＬＡＩＲ，ＱＧＥ−０３１；ＭＥＤＩ−４２１２）；及び受容体、例えば：ＩＬ−９受容体、ＩＬ−５受容体（例えば、ＭＥＤＩ−５６３（ベンラリズマブ，ＣＡＳ番号１０４４５１１−０１−４），ＩＬ−４受容体α（例えば、ＡＭＧ−３１７，ＡＩＲ−６４５），ＩＬ−１３受容体α１（例えばＲ−１６７１）及びＩＬ−１３受容体α２，ＯＸ４０，ＴＳＬＰ−Ｒ，ＩＬ−７Ｒアルファ（ＴＳＬＰの共受容体），ＩＬ１７ＲＢ（ＩＬ−２５の受容体），ＳＴ２（ＩＬ−３３の受容体），ＣＣＲ３，ＣＣＲ４，ＣＲＴＨ２（例えばＡＭＧ−８５３，ＡＰ７６８，ＡＰ−７６１，ＭＬＮ６０９５，ＡＣＴ１２９９６８），ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩ，ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩＩ／ＣＤ２３（ＩｇＥの受容体），Ｆｌａｐ（例えば、ＧＳＫ２１９０９１５），Ｓｙｋキナーゼ（Ｒ−３４３，ＰＦ３５２６２９９）；ＣＣＲ４（ＡＭＧ−７６１），ＴＬＲ９（ＱＡＸ−９３５）を阻害し、又はＣＣＲ３，ＩＬ５，ＩＬ３，ＧＭ−ＣＳＦの多重サイトカイン阻害剤（例えば、ＴＰＩ ＡＳＭ８）である。ある実施態様において、ＴＨ２経路阻害剤は抗ＩＬ１３／ＩＬ４経路阻害剤または抗ＩｇＥ結合剤である。ある実施態様において、ＴＨ２経路阻害剤は、抗抗ＩＬ−１３抗体である。ある実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号９を含むＶＨと配列番号１０を含むＶＬを含む抗体であり、抗ＩＬ−１３抗体はＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６、又はレブリキズマブのアミノ酸配列を有する。ある実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体はＩＬ−４にも結合する２重特異性抗体である。ある実施態様において、ＴＨ２経路阻害剤は、抗ＩｇＥ抗体である。ある実施態様において、抗ＩｇＥ抗体は、（ｉ）ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）抗体、（ｉｉ）可変重鎖が配列番号２４で可変軽鎖が配列番号２５である、可変重鎖と可変軽鎖を含む抗Ｍ１’抗体、又は（ｉｉｉ）可変重鎖が更に、ＨＶＲ−Ｈ１，ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、可変軽鎖が更に、ＨＶＲ−Ｌ１，ＨＶＲ，Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む、可変重鎖と可変軽鎖を含む抗Ｍ１’抗体であり、そして：（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号２４の残基２６−３５［ＧＦＴＦＳＤＹＧＩＡ］であり；（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号２４の残基４９−６６［ＡＦＩＳＤＬＡＹＴＩＹＹＡＤ���ＶＴＧ］であり；（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号２４の残基９７−１０６［ＡＲＤＮＷＤＡＭＤＹ］であり；（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号２５の残基２４−３９［ＲＳＳＱＳＬＶＨＮＮＡＮＴＹＬＨ］であり；（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号２５の残基５５−６１［ＫＶＳＮＲＦＳ］であり；（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号２５の残基９４−１０２［ＳＱＮＴＬＶＰＷＴ］である。
【００２５】
別の態様において、喘息患者を、ＴＨ２経路阻害剤による治療的処置に対する可能性のある応答者及び非応答者へと層別化／分類するために喘息患者から得られたサンプル中の総ペリオスチンを検出するためのキットを使用する。ある実施態様において、総ペリオスチンはＥＩＤＡを使用して検出され、そのＥＩＤＡは以下の工程を含む。（ａ）喘息患者から得たサンプル中の総ペリオスチンの量を決定し；（ｂ）工程（ａ）で決定された総ペリオスチンの量を参照量に対して比較し；（ｃ）前記患者を工程（ｂ）で得られた比較に基づいて応答者又は非応答者のカテゴリに層別化するある実施態様において、総ペリオスチンは血清ペリオスチンであり、そのペリオスチンはイムノアッセイを使用して測定される。ある実施態様において、イムノアッセイは、サンドイッチイムノアッセイである。ある実施態様において、サンドイッチイムノアッセイはＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）アナライザ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ）によって行われる。ある実施態様において、サンドイッチイムノアッセイは、Ｅ４アッセイである。一実施態様において、工程（ａ）においてＥ４アッセイを使用するときＥＩＰの参照量は２３ｎｇ／ｍｌより大きい。一実施態様において、工程（ａ）においてＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）アナライザを使用するときＥＩＰの参照量は５０ｎｇ／ｍｌ以上である。
【００２６】
ある実施態様において、上のパラグラフに記載される用途による患者は中等度から重度の喘息に罹患している。ある実施態様において、喘息又は呼吸器疾患はコルチコステロイドで制御されない。ある実施態様において、コルチコステロイドは吸入コルチコステロイドである。ある実施態様において、吸入コルチコステロイドは、キュバール（登録商標）、パルミコート（登録商標）、シンビコート（登録商標）、Ａｅｒｏｂｉｄ（登録商標）、フロベント（登録商標）、フルナーゼ（登録商標）、アドベア（登録商標）又はアズマコート（登録商標）である。一実施態様において、患者はまた、第二コントローラーで治療されている。ある実施態様において、第二コントローラーは長時間作用型気管支拡張薬（ＬＡＢＤ）である。ある実施態様において、ＬＡＢＤは長時間作用型β２アゴニスト（ＬＡＢＡ）、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（ＬＴＲＡ）、長時間作用型ムスカリンアンタゴニスト（ＬＡＭＡ）、テオフィリン、または経口コルチコステロイド（ＯＣＳ）である。ある実施態様において、ＬＡＢＤはシンビコート（登録商標）、アドベア（登録商標）、ブロバナ（登録商標）、フォラジル（登録商標）、ＰｅｒｆｏｒｏｍｉｓｔＴＭ、又はセレベント（登録商標）である。
【００２７】
ある実施態様において、上記用途によるＴＨ２経路阻害剤は、標的ＩＴＫ，ＢＴＫ，ＩＬ−９（例えば、ＭＥＤＩ−５２８）、ＩＬ−５（例えば、メポリズマブ、ＣＡＳ番号１９６０７８−２９−２；レシリズマブ（ｒｅｓｉｌｉｚｕｍａｂ））、ＩＬ−１３（例えば、ＩＭＡ−０２６，ＩＭＡ−６３８（アンルキンズマブとも言う、ＩＮＮ Ｎｏ．９１０６４９−３２−０；ＱＡＸ−５７６；ＩＬ４／ＩＬ１３ トラップ），トラロキヌマブ（ＣＡＴ−３５４，ＣＡＳ番号１０４４５１５−８８−９とも言う）；ＡＥＲ−００１，ＡＢＴ−３０８（ヒト化１３Ｃ５．５抗体とも言う），ＩＬ−４（例えばＡＥＲ−００１，ＩＬ４／ＩＬ１３ トラップ），ＯＸ４０Ｌ，ＴＳＬＰ，ＩＬ−２５，ＩＬ−３３及びＩｇＥ（例えば、ＸＯＬＡＩＲ，ＱＧＥ−０３１；ＭＥＤＩ−４２１２）；及び受容体、例えば：ＩＬ−９受容体、ＩＬ−５受容体（例えば、ＭＥＤＩ−５６３（ベンラリズマブ，ＣＡＳ番号１０４４５１１−０１−４），ＩＬ−４受容体α（例えば、ＡＭＧ−３１７，ＡＩＲ−６４５），ＩＬ−１３受容体α１（例えばＲ−１６７１）及びＩＬ−１３受容体α２，ＯＸ４０，ＴＳＬＰ−Ｒ，ＩＬ−７Ｒアルファ（ＴＳＬＰの共受容体），ＩＬ１７ＲＢ（ＩＬ−２５の受容体），ＳＴ２（ＩＬ−３３の受容体），ＣＣＲ３，ＣＣＲ４，ＣＲＴＨ２（例えばＡＭＧ−８５３，ＡＰ７６８，ＡＰ−７６１，ＭＬＮ６０９５，ＡＣＴ１２９９６８），ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩ，ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩＩ／ＣＤ２３（ＩｇＥの受容体），Ｆｌａｐ（例えば、ＧＳＫ２１９０９１５），Ｓｙｋキナーゼ（Ｒ−３４３，ＰＦ３５２６２９９）；ＣＣＲ４（ＡＭＧ−７６１），ＴＬＲ９（ＱＡＸ−９３５）を阻害し、又はＣＣＲ３，ＩＬ５，ＩＬ３，ＧＭ−ＣＳＦの多重サイトカイン阻害剤（例えば、ＴＰＩ ＡＳＭ８）である。ある実施態様において、ＴＨ２経路阻害剤は抗ＩＬ１３／ＩＬ４経路阻害剤または抗ＩｇＥ結合剤である。ある実施態様において、ＴＨ２経路阻害剤は、抗抗ＩＬ−１３抗体である。ある実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号９を含むＶＨと配列番号１０を含むＶＬを含む抗体であり、抗ＩＬ−１３抗体はＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６、又はレブリキズマブのアミノ酸配列を有する。ある実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体はＩＬ−４にも結合する２重特異性抗体である。ある実施態様において、ＴＨ２経路阻害剤は、抗ＩｇＥ抗体である。ある実施態様において、抗ＩｇＥ抗体は、（ｉ）ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）抗体、（ｉｉ）可変重鎖が配列番号２４で可変軽鎖が配列番号２５である、可変重鎖と可変軽鎖を含む抗Ｍ１’抗体、又は（ｉｉｉ）可変重鎖が更に、ＨＶＲ−Ｈ１，ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、可変軽鎖が更に、ＨＶＲ−Ｌ１，ＨＶＲ，Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む、可変重鎖と可変軽鎖を含む抗Ｍ１’抗体であり、そして：（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号２４の残基２６−３５［ＧＦＴＦＳＤＹＧＩＡ］であり；（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号２４の残基４９−６６［ＡＦＩＳＤＬＡＹＴＩＹＹＡＤＴ��ＴＧ］であり；（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号２４の残基９７−１０６［ＡＲＤＮＷＤＡＭＤＹ］であり；（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号２５の残基２４−３９［ＲＳＳＱＳＬＶＨＮＮＡＮＴＹＬＨ］であり；（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号２５の残基５５−６１［ＫＶＳＮＲＦＳ］であり；（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号２５の残基９４−１０２［ＳＱＮＴＬＶＰＷＴ］である。
【００２８】
更に別の態様において、喘息患者又は呼吸器疾患に罹患している患者から得た生物学的サンプル中の総ペリオスチンを測定するためのキットが提供され、該キットは第二の核酸分子にハイブリダイズする第一の核酸分子を含み、第二の核酸分子は総ペリオスチン又はその一部をコードし、又は該キットは総ペリオスチンに結合する抗体を含む。ある実施態様において、キットは上に提供される用途を説明する情報を含んだパッケージ挿入物を含む。
【００２９】
更に別の態様において、患者の喘息のサブタイプを診断するためのキットが提供され、該キットは：（１）患者から得られた血清サンプル中の総ペリオスチンのレベル及び任意でＴＡＲＣ及びＭＣＰ−４から選択される一以上の血清サンプル中のタンパク質発現レベルを測定し；及び（２）血清サンプル中の総ペリオスチンの発現レベル及び任意でＴＡＲＣ及び／又はＭＣＰ−４のレベルを測定するためのインストラクションを包含し、ここで前記タンパク質の何れか一、組み合わせ又は全ての発現の上昇が喘息サブタイプの指標である。ある実施態様において、キットは喘息患者又は呼吸器疾患患者がＥＩＰ又はＥＩＮであるかを決定するためのパッケージ挿入物を更に含む。ある実施態様において、キットは喘息患者がＴＨ２経路阻害剤に応答する可能性があるかを決定するためのパッケージ挿入物を更に含む。ある実施態様において、キットは上に提供される用途の何れかを説明する情報を含んだパッケージ挿入物を更に含む。ある実施態様において、キットは生物学的サンプルを保持する空の容器を更に含む。ある実施態様において、キットは総ペリオスチンのレベルを測定するためのイムノアッセイにおける使用のための２つの抗ペリオスチンを含む。
【００３０】
別の態様において、喘息又は呼吸器疾患を治療する方法は、ＨＶＲＨ１，ＨＶＲＨ２，ＨＶＲＨ３，ＨＶＲＬ１，ＨＶＲＬ２，及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列を有する抗ＩＬ−１３抗体を、喘息又は呼吸器疾患に罹患する患者に対して１２５−５００ｍｇの均一用量で２〜８週間毎に投与することを含む。ある実施態様において、患者は中等度から重度の喘息に罹患している。ある実施態様において、喘息又は呼吸器疾患はコルチコステロイドで制御されない。ある実施態様において、喘息又は呼吸器疾患は吸入コルチコステロイドで制御されない。ある実施態様において、喘息又は呼吸器疾患は、一日の全用量が少なくとも５００ｍｃｇのフルチカゾンプロピオン酸エステル（ＦＰ）で制御されない。ある実施態様において、コルチコステロイドは吸入コルチコステロイド、キュバール（登録商標）、パルミコート（登録商標）、シンビコート（登録商標）、Ａｅｒｏｂｉｄ（登録商標）、フロベント（登録商標）、フルナーゼ（登録商標）、アドベア（登録商標）又はアズマコート（登録商標）である。ある実施態様において、患者は、第二コントローラーで治療されている。ある実施態様において、患者は抗ＩＬ−１３抗体による治療期間において、コルチコステロイド、任意で吸入コルチコステロイドで継続的に治療されている。ある実施態様において、患者は抗ＩＬ−１３抗体による治療期間において、第二コントローラーで継続的に治療されている。ある実施態様において、第二コントローラーは長時間作用型気管支拡張薬である。ある実施態様において、長時間作用型気管支拡張薬はＬＡＢＡ、ＬＴＲＡ、ＬＡＭＡ、テオフィリン、またはＯＣＳである。ある実施態様において、患者はＥＩＰであると決定されている。ある実施態様において、上述のキットを使用して、患者はＥＩＰであると決定されている。ある実施態様において、上述の方法を使用して、患者はＥＩＰであると決定されている。ある実施態様において、患者は４週間ごとに１２５ｍｇ又は２５０ｍｇの均一用量を投与される。ある実施態様において、患者は１８歳以上であり、又は１２〜１７歳又は１２歳及びそれ以上であり、又は患者は６〜１１歳又は６歳及びそれ以上である。
【００３１】
ある実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体は皮下に投与される。ある実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体はプレフィルドシリンジまたは自動注入装置を使用して投与される。ある実施態様において、上の方法に従って治療されるべき喘息患者は１８歳以上であり、血清ペリオスチンを５０ｎｇ／ｍＬ以上有し、吸入コルチコステロイドと第二コントローラー薬物で制御されない。ある実施態様において、血清ペリオスチンはイムノアッセイを使用して測定され、そのイムノアッセイはＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ペリオスチンアッセイ及びＥ４アッセイから選択される。ある実施態様において、血清ペリオスチンは上述したキットを使用して測定される。ある実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体は配列番号９を含むＶＨ及び配列番号１０を含むＶＬを含む抗体である。ある実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体はレブリキズマブである。ある実施態様において、上述の方法に従って治療されるべき喘息患者は１２歳以上であり、吸入コルチコステロイドと第二コントローラー薬物で制御されない。
【００３２】
更に別の態様において、治療的有効量のレブリキズマブを患者に投与することを含む、喘息又は呼吸器疾患を治療する方法が提供される。ある実施態様において、治療は、レブリキズマブによる治療前と比較して、５％を超えるＦＥＶ１の相対的改善を生じる。ある実施態様において、ＦＥＶ１の相対的改善はレブリキズマブによる治療前と比較して、８％を超える。ある実施態様において、治療は重篤な増悪の減少をもたらす。
【００３３】
更に別の態様において、ＴＨ２経路阻害剤をＥＩＰと診断された患者に投与することを含む、喘息又は呼吸器疾患に罹患した患者を治療する方法が提供される。ある実施態様において、その方法は、総ペリオスチンアッセイを使用して患者をＥＩＰとして診断する工程を含む。ある実施態様において、その方法は、患者がＥＩＰであると決定される場合、ＴＨ２経路阻害剤で患者を再治療する工程を更に含む。ある実施態様において、患者からの血清が患者がＥＩＰであるかを決定するために使用される。
【００３４】
ある実施態様において、上の方法に従って決定されるＥＩＰ状態は、以下の工程を含むＥＩＤＡを使用する：（ａ）患者から得たサンプル中の総ペリオスチンの量を決定し；（ｂ）工程（ａ）で決定された総ペリオスチンの量を参照量に対して比較し；（ｃ）前記患者を工程（ｂ）で得られた比較に基づいて応答者又は非応答者のカテゴリに層別化するある実施態様において、総ペリオスチンは血清ペリオスチンであり、そのペリオスチンはイムノアッセイを使用して測定される。ある実施態様において、イムノアッセイは、サンドイッチイムノアッセイである。ある実施態様において、サンドイッチイムノアッセイはＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）アナライザ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ）によって行われる。ある実施態様において、サンドイッチイムノアッセイは、Ｅ４アッセイである。一実施態様において、工程（ａ）においてＥ４アッセイを使用するときＥＩＰの参照量は２３ｎｇ／ｍｌより大きい。一実施態様において、工程（ａ）においてＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）アナライザを使用するときＥＩＰの参照量は５０ｎｇ／ｍｌ以上である。
【００３５】
ある実施態様において、上述した方法に従う患者は中等度から重度の喘息に罹患している。ある実施態様において、喘息又は呼吸器疾患はコルチコステロイドで制御されない。ある実施態様において、コルチコステロイドは吸入コルチコステロイドである。ある実施態様において、吸入コルチコステロイドは、キュバール（登録商標）、パルミコート（登録商標）、シンビコート（登録商標）、Ａｅｒｏｂｉｄ（登録商標）、フロベント（登録商標）、フルナーゼ（登録商標）、アドベア（登録商標）又はアズマコート（登録商標）である。一実施態様において、患者はまた、第二コントローラーで治療されている。ある実施態様において、第二コントローラーは長時間作用型気管支拡張薬（ＬＡＢＤ）である。ある実施態様において、ＬＡＢＤは長時間作用型β２アゴニスト（ＬＡＢＡ）、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（ＬＴＲＡ）、長時間作用型ムスカリンアンタゴニスト（ＬＡＭＡ）、テオフィリン、または経口コルチコステロイド（ＯＣＳ）である。ある実施態様において、ＬＡＢＤはシンビコート（登録商標）、アドベア（登録商標）、ブロバナ（登録商標）、フォラジル（登録商標）、ＰｅｒｆｏｒｏｍｉｓｔＴＭ、又はセレベント（登録商標）である。
【００３６】
ある実施態様において、上の方法によるＴＨ２経路阻害剤は、標的ＩＴＫ，ＢＴＫ，ＩＬ−９（例えば、ＭＥＤＩ−５２８）、ＩＬ−５（例えば、メポリズマブ、ＣＡＳ番号１９６０７８−２９−２；レシリズマブ（ｒｅｓｉｌｉｚｕｍａｂ））、ＩＬ−１３（例えば、ＩＭＡ−０２６，ＩＭＡ−６３８（アンルキンズマブとも言う、ＩＮＮ Ｎｏ．９１０６４９−３２−０；ＱＡＸ−５７６；ＩＬ４／ＩＬ１３ トラップ），トラロキヌマブ（ＣＡＴ−３５４，ＣＡＳ 番号１０４４５１５−８８−９とも言う）；ＡＥＲ−００１，ＡＢＴ−３０８（ヒト化１３Ｃ５．５抗体とも言う），ＩＬ−４（例えばＡＥＲ−００１，ＩＬ４／ＩＬ１３ トラップ），ＯＸ４０Ｌ，ＴＳＬＰ，ＩＬ−２５，ＩＬ−３３及びＩｇＥ（例えば、ＸＯＬＡＩＲ，（登録商標）、ＱＧＥ−０３１；ＭＥＤＩ−４２１２）；及び受容体、例えば：ＩＬ−９受容体、ＩＬ−５受容体（例えば、ＭＥＤＩ−５６３（ベンラリズマブ，ＣＡＳ番号１０４４５１１−０１−４），ＩＬ−４受容体α（例えば、ＡＭＧ−３１７，ＡＩＲ−６４５），ＩＬ−１３受容体α１（例えばＲ−１６７１）及びＩＬ−１３受容体α２，ＯＸ４０，ＴＳＬＰ−Ｒ，ＩＬ−７Ｒアルファ（ＴＳＬＰの共受容体），ＩＬ１７ＲＢ（ＩＬ−２５の受容体），ＳＴ２（ＩＬ−３３の受容体），ＣＣＲ３，ＣＣＲ４，ＣＲＴＨ２（例えばＡＭＧ−８５３，ＡＰ７６８，ＡＰ−７６１，ＭＬＮ６０９５，ＡＣＴ１２９９６８），ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩ，ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩＩ／ＣＤ２３（ＩｇＥの受容体），Ｆｌａｐ（例えば、ＧＳＫ２１９０９１５），Ｓｙｋキナーゼ（Ｒ−３４３，ＰＦ３５２６２９９）；ＣＣＲ４（ＡＭＧ−７６１），ＴＬＲ９（ＱＡＸ−９３５）を阻害し、又はＣＣＲ３，ＩＬ５，ＩＬ３，ＧＭ−ＣＳＦの多重サイトカイン阻害剤（例えば、ＴＰＩ ＡＳＭ８）である。ある実施態様において、ＴＨ２経路阻害剤は抗ＩＬ１３／ＩＬ４経路阻害剤または抗ＩｇＥ結合剤である。ある実施態様において、ＴＨ２経路阻害剤は、抗抗ＩＬ−１３抗体である。ある実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号９を含むＶＨと配列番号１０を含むＶＬを含む抗体であり、抗ＩＬ−１３抗体はＨＶＲＨ１、ＨＶＲＨ２、ＨＶＲＨ３、ＨＶＲＬ１、ＨＶＲＬ２、及びＨＶＲＬ３を含み、各ＨＶＲが配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、及び配列番号１６、又はレブリキズマブのアミノ酸配列を有する。ある実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体はＩＬ−４にも結合する２重特異性抗体である。
【００３７】
ある実施態様において、ＴＨ２経路阻害剤は、抗ＩｇＥ抗体である。ある実施態様において、抗ＩｇＥ抗体は、（ｉ）ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）抗体、（ｉｉ）可変重鎖が配列番号２４で可変軽鎖が配列番号２５である、可変重鎖と可変軽鎖を含む抗Ｍ１’抗体、又は（ｉｉｉ）可変重鎖が更に、ＨＶＲ−Ｈ１，ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、可変軽鎖が更に、ＨＶＲ−Ｌ１，ＨＶＲ，Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む、可変重鎖と可変軽鎖を含む抗Ｍ１’抗体であり、そして：（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号２４の残基２６−３５［ＧＦＴＦＳＤＹＧＩＡ］であり；（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号２４の残基４９−６６［ＡＦＩＳＤＬＡＹＴＩＹＹＡＤＴＶＴＧ］であり；（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号２４の残基９７−１０６［ＡＲＤＮＷＤＡＭＤＹ］であり；（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号２５の残基２４−３９［ＲＳＳＱＳＬＶＨＮＮＡＮＴＹＬＨ］であり；（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号２５の残基５５−６１［ＫＶＳＮＲＦＳ］であり；（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号２５の残基９４−１０２［ＳＱＮＴＬＶＰＷＴ］である。
【００３８】
別の態様において、レブリキズマブによる喘息の治療に関連する患者における有害事象を評価するための方法が提供される。ある実施態様において、その方法は、増悪、市中感染性肺炎、アナフィラキシー、筋骨格痛、筋骨格系障害、結合組織痛または結合組織疾患であるである事象の数及び／又は重症度をモニタリングする工程を含む。ある実施態様において、筋骨格又は結合組織疾患は、関節痛、背中の痛み、四肢の痛み、筋肉痛、首の痛み、関節炎、骨の発達異常、滑液包炎、肋軟骨炎、外骨腫、腹部痛、筋骨格系胸痛、筋骨格痛、顎または腱の痛みである。
【００３９】
更に別の態様において、抗ペリオスチン抗体が提供される。ある実施態様において、抗ペリオスチン抗体は、配列番号１のＨＶＲ配列、及び配列番号２のＨＶＲ配列を含む。ある実施態様において、抗ペリオスチン抗体は、配列番号１及び配列番号２の抗ペリオスチン抗体を含む。ある実施態様において、抗ペリオスチン抗体は、配列番号３のＨＶＲ配列、及び配列番号４のＨＶＲ配列を含む。ある実施態様において、抗ペリオスチン抗体は、配列番号３及び配列番号４の抗ペリオスチン抗体を含む。ある実施態様において、上の抗ペリオスチン抗体の使用を含む総ペリオスチンアッセイが提供される。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】図１は、実施例１に記載のアレルゲン曝露試験の概略を提供する。
【図２】図２は、スクリーニング（Ａ）における曝露後及び１３週（Ｂ）でのＦＥＶ１のアレルゲン誘発性変化を示す。ＦＥＶ１は最初の９０分間１０分毎に測定され、次いでアレルゲン曝露後２〜８時間から毎時間測定された。エラーバーは平均値の標準誤差を示す。
【図３】図３はＩｇＥ，ＣＣＬ１３（ＭＣＰ−４），及びＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）の血清レベルを示す。（Ａ）プラセボ処置患者及び（Ｂ）レブリキズマブ処置患者において時間に対する前投与用量の％として表された血清のレベル線は個々の患者を表す：グループ中央値は示されていない。矢は第０週、４週、８週、及び１２週（第０日、２８日、５６日、及び８４日）での投薬を示していた。（Ｃ）個々の患者において第１３週での、ＩｇＥ、ＣＣＬ３及びＣＣＬ１７の、それらのマーカーのベースラインレベルに対する減少。
【図４】図４は、バイオマーカー高及びバイオマーカー低の患者サブグループにおける遅発型喘息反応（ＬＡＲ）のレブリキズマブ誘導性阻害を示す。データは、第１３週でのＬＡＲのＡＵＣ（曲線下面積）におけるプラセボ補正後の平均減少として表される（ｎ＝５から８のアクティブな患者／群）。
【図５】図５は、実施例２に記載の喘息治験の概略図を提供する。
【図６】図６は、実施例２の喘息治験に参加した患者のベースライン特性を提供する。
【図７】図７は、実施例２の喘息治験の結果を提供する。
【図８】図８は、全ての有効性評価可能な被験体について（Ａ）及び、ペリオスチンが高い被験体のみについて（Ｂ）、実施例２の喘息治験からのＦＥＶ１の結果を提供する。
【図９】図９は、実施例２の喘息治験からの増悪の減少率を提供する。
【図１０】図１０は、実施例２の喘息治験からのＦＥＮＯの変化の割合を提供する。
【図１１】図１１は、実施例２の喘息治験の安全性結果を提供する。
【図１２】図１２は、実施例３に記載の喘息治験の概略図を提供する。
【図１３】図１３は、実施例５に記載の喘息観察研究の概略図を提供する。
【図１４】図１４は、実施例５に記載されているようにＢＯＢＣＡＴコホート内の複数の来院に渡る血清ペリオスチンレベル間の被検体内相関を示す。（Ａ）来院１と来院２の間の相関；（Ｂ）来院１と来院３の間の相関；（Ｃ）来院２と来院３の間の相関；（Ｄ）来院１と全来院に渡る血清ペリオスチンレベルの平均値との間の相関；（Ｅ）来院２と全来院に渡る血清ペリオスチンレベルの平均値との間の相関；及び（Ｆ）来院３と全来院に渡る血清ペリオスチンレベルの平均値との間の相関。
【図１５】図１５は、実施例５に記載されているようにＦＥＮＯが気道好酸球性炎症（ＢＯＢＣＡＴコホート）に応じた高用量ＩＣＳは中等度から重度の制御されない喘息患者を区別することを示す。（Ａ）３％を超える喀痰好酸球を持つ喘息患者は、３％未満の喀痰好酸球を持つ喘息患者に比べて著しくＦＥＮＯが上昇していた（ウィルコクソンの順位和検定によりｐ＜０．００１）。（Ｂ）２２を超える好酸球／ｍｍ２全気管支組織を持つ喘息患者は、２２未満の好酸球／ｍｍ２全気管支組織である喘息患者と比べてＦＥＮＯの上昇傾向があった（ウィルコクソンの順位和検定によりｐ＝０．０７）。（Ｃ）複合気道好酸球スコア、０＝喀痰好酸球＜３％及び組織（「Ｂｘ」）好酸球＜２２／ｍｍ２；１＝喀痰好酸球＞３％又は組織好酸球＞２２／ｍｍ２（排他的）の何れか；２＝喀痰好酸球＞３％及び組織好酸球＞２２／ｍｍ２の両方が、複合気道好酸球スコアの増加を伴うＦＥＮＯのレベルが増加する強く好ましい傾向を示した（ロジスティック回帰により、ｐ＝０．００１）。血清ペリオスチンの状態は説明文にあるように示されている。（Ｄ）血清ペリオスチンとＦＥＮＯは両方とも喀痰又は組織好酸球の上昇を伴って大半の被験体で上昇したが、被験体のサブセットはペリオスチン又はＦＥＮＯのみが上昇した。喀痰及び組織の好酸球の上昇を欠いている大半の被験体は、低血清ペリオスチン及び低ＦＥＮＯを示した。（Ｅ）複合気道好酸球状態における、血清ペリオスチン、ＦＥＮＯ、血中好酸球、血清ＩｇＥの感受性及び特異性の受信者動作特性（ＲＯＣ）曲線解析。ＡＵＣ＝曲線下面積。
【図１６】図１６は、実施例３に記載される喘息治験で治療の失敗の無い患者の割合を提供する。
【図１７】図１７は、実施例３及び実施例５に記載される臨床試験から得られたサンプルについて、実施例４のアッセイ（Ｅ４アッセイ）又はＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ペリオスチンアッセイ（実施例７）に似たアッセイで測定される血清ペリオスチンレベル間の比較を示す。
【図１８】図１８は、実施例２に記載されるように、ペリオスチンが低い患者（Ａ）及びペリオスチンが高い患者（Ｂ）における血清ペリオスチンの薬物動力学を示す。
【図１９】図１９は、実施例２に記載されるように、プラセボ及びレブリキズマブ処置患者における時間に対するペリオスチンレベルの中央値の変化の割合を示す。
【図２０】図２０は、実施例６に記載されるように、実施例２（Ａ）に記載される第ＩＩ相試験と実施例３（Ｂ）に記載される第ＩＩ相試験における個々について、第１２週でのＦＥＶ１の変化の％と体重の間の関係を示す。
【図２１】図２１は、実施例６に記載されるように、様々なレベルを超えた定常状態のトラフ濃度を持つ患者の予測される割合を示す。
【図２２】図２２は、実施例６に記載されるように、実施例２の試験（Ａ）及び実施例３の試験（Ｂ）において、時間に対する血清ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）レベルへのレブリキズマブの作用を示す。
【図２３】図２３は、実施例６に記載されるように、第ＩＩＩ相の投与量、４週間毎に２５０ｍｇ、４週間毎に１２５ｍｇ、及び４週間毎に３７．５ｍｇの各々でのシミュレートした集団のＰＫプロファイルを示す。
【図１】詳細の説明  別に規定されない限り、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるように、使用される技術用語および科学用語は、本明細書と同じ意味を持つ。Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 2nd ed., J. Wiley & Sons (New York, N.Y. 1994)、及びMarch, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure 4th ed., John Wiley & Sons (New York, N.Y. 1992)は、当業者に本願において使用される多くの用語に対する一般的な指針を提供する。
【００４１】
所定の定義
本明細書を解釈する目的のために、以下の定義が適用され、適切な場合にはいつでも、単数形で使用される用語はまた複数を含み及びその逆もある。以下に記載した任意の定義が、参照により本明細書に組み込まれる任意の文書と競合する場合には、以下に記載した定義が統制する。
【００４２】
本明細書及び添付の特許請求の範囲に使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈から明らかでない限り、複数の指示対象を含む。従って、例えば、「タンパク質」又は「抗体」は、複数のタンパク質又は抗体をそれぞれ包含し；「細胞」への参照は細胞の混合物などを含める。
【００４３】
本明細書で使用される用語「総ペリオスチン（Ｔｏｔａｌ Ｐｅｒｉｏｓｔｉｎ）」は、ペリオスチンの少なくともアイソフォーム１、２、３、及び４を指す。ヒトペリオスチンアイソフォーム１、２、３、及び４はＮＣＢＩデータベースによる以下のアミノ酸配列：ＮＰ＿００６４６６．２（配列番号１９）；ＮＰ＿００１１２９４０６．１（配列番号２０），ＮＰ＿００１１２９４０７．１（配列番号２１）、及びＮＰ＿００１１２９４０８．１（配列番号２２）をそれぞれを含むとして当業者に知られている。加えて、申請者は、ペリオスチンの更なる形態を検出した。この新規アイソフォームは、「アイソフォーム５」と称され、部分的に配列決定されている。アイソフォーム５は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む。一実施態様において、ペリオスチンのアイソフォームはヒトペリオスチンである。更なる実施態様において、総ペリオスチンなる用語は、アイソフォーム１〜４に加えてヒトペリオスチンのアイソフォーム５を含む。他の実施態様において、総ペリオスチンは、全血清ペリオスチン又は全血漿ペリオスチンである（即ち、全血液から得られた血清サンプル又は全血液から得られた血漿サンプルのそれぞれからの総ペリオスチンで、全血液は患者から得られる）。
【００４４】
用語「総ペリオスチンアッセイ」は、生物学的サンプル中の総ペリオスチンのレベルを測定するアッセイを指す。一実施態様において、総ペリオスチンレベルは抗ペリオスチン抗体を使用して測定される。別の実施態様において、抗ペリオスチン抗体は本明細書に記載される抗ペリオスチン抗体である。別の実施例において、総ペリオスチンレベルは、ペリオスチンアイソフォーム１〜４をコードするｍＲＮＡに対してアンチセンスな一以上の核酸配列を用いて測定される。更に別の実施例において、総ペリオスチンアッセイは実施例４に記載されるアッセイである（「実施例４アッセイ」又は「Ｅ４アッセイ」）。一実施態様において、総ペリオスチンアッセイは、（１）生物学的サンプル中でペリオスチンに結合するための配列番号１及び配列番号２の配列を含む抗体（「２５Ｄ４」抗体）及び／又は配列番号３及び配列番号４の配列を含む抗体（「２３Ｂ９」抗体）、（２）生物学的サンプル中でペリオスチンに結合するための配列番号１及び配列番号２の可変領域配列を含む抗体及び／又は配列番号３及び配列番号４の可変領域配列を含む抗体、（３）生物学的サンプル中でペリオスチンに結合するための配列番号１及び配列番号２のＨＶＲ配列を含む抗体及び／又は配列番号３及び配列番号４のＨＶＲ配列を含む抗体、（４）配列番号１及び配列番号２のＨＶＲ配列に９５％以上同一であるＨＶＲを含む抗体及び／又は配列番号３及び配列番号４のＨＶＲ配列に９５％以上同一であるＨＶＲを含む抗体の使用を含む。
【００４５】
本明細書で使用される場合「好酸球性炎症の診断アッセイ」、「ＥＩＤＡ」と略は、体に好酸球性炎症又は体にＴＨ２経路炎症を有する患者を、患者から得られた生物学的サンプル中の好酸球性炎症マーカーのレベルを測定することにより診断するアッセイであり、そのマーカーは、ペリオスチンｍＲＮＡレベル又はペリオスチンタンパク質レベル、ｉＮＯＳ ｍＲＮＡレベル又はｉＮＯＳタンパク質レベル又はＦＥＮＯレベル又はＣＣＬ２６ ｍＲＮＡ又はＣＣＬ２６タンパク質レベル、セルピンＢ２ ｍＲＮＡレベル又はセルピンＢ２タンパク質レベル、セルピンＢ４ ｍＲＮＡレベル又はセルピンＢ４タンパク質レベル、ＣＳＴ１ ｍＲＮＡレベル又はＣＳＴ１タンパク質レベル、ＣＳＴ２ ｍＲＮＡレベル又はＣＳＴ２タンパク質レベル、ＣＳＴ４ ｍＲＮＡレベル又はＣＳＴ４タンパク質レベルからなる群から選択される。一実施態様において、総ペリオスチン血清又は血漿レベルが測定される。アッセイの高度に効果的な事例は、限定されないが、下の実施例４に記載される実施例（Ｅ４アッセイとも言う）、又は生物学的サンプル中の総ペリオスチンの血清レベル又は血漿レベルを測定する他のペリオスチンアッセイを含む。二つ以上のアッセイを、患者の好酸球性炎症の診断を行うために実施することができる。一実施態様において、ＥＩＤアッセイはＦＥＮＯアッセイと組み合わせた総ペリオスチンアッセイを含む。別の実施態様において、ＥＩＤアッセイは、次のマーカー：ＣＳＴ１，ＣＳＴ２，ＣＣＬ２６，ＣＬＣＡ１，ＰＲＲ４，ＰＲＢ４，ＳＥＲＰＩＮＢ２，ＣＥＡＣＡＭ５，ｉＮＯＳ，ＳＥＲＰＩＮＢ４，ＣＳＴ４及びＳＥＲＰＩＮＢ１０の何れか一又は組み合わせのレベルを測定するアッセイと組み合わせた総ペリオスチンアッセイ＋／−ＦＥＮＯレベルアッセイを包含する。
【００４６】
用語「ペリオスチン抗体」又は「抗ペリオスチン抗体」はペリオスチンのアイソフォームに結合する抗体を指す。一実施態様において、ペリオスチンはヒトペリオスチンである。一実施態様において、抗体は、配列番号１及び配列番号２を含み（「２５Ｄ４抗体」）又は配列番号３及び配列番号４を含む（「２３Ｂ９抗体」）。別の実施態様において、抗体は、配列番号１及び配列番号２の可変領域配列を含み又は配列番号３及び配列番号４の可変領域配列を含む。別の実施態様において、抗体は、配列番号１及び配列番号２のＨＶＲ配列を含み又は配列番号３及び配列番号４のＨＶＲ配列を含む。別の実施態様において、抗体は配列番号１及び配列番号２のＨＶＲ配列に９５％以上同一であるＨＶＲを含み、及び／又は抗体は配列番号３及び配列番号４のＨＶＲ配列に９５％以上同一であるＨＶＲ配列を含む。  
【００４７】
好酸球性炎症陽性（ＥＩＰ）患者又は状態とは、その患者由来の血清又は血漿サンプルが血清又は血漿の好酸球レベルについてそれぞれＥ４アッセイ（実施例４）を用いて試験される場合、２０ｎｇ／ｍｌ以上の全血清ペリオスチンレベル（好酸球陽性）を有しているであろう患者を指す。一実施態様において、ＥＩＰである患者の総ペリオスチンレベルは、血清又は血漿中で、２１ｎｇ／ｍｌ以上、２２ｎｇ／ｍｌ以上、２３ｎｇ／ｍｌ以上、２４ｎｇ／ｍｌ以上、２５ｎｇ／ｍｌ以上、２６ｎｇ／ｍｌ以上、２７ｎｇ／ｍｌ以上、２８ｎｇ／ｍｌ以上、２９ｎｇ／ｍｌ以上、３０ｎｇ／ｍｌ以上、３１ｎｇ／ｍｌ以上、３２ｎｇ／ｍｌ以上、３３ｎｇ／ｍｌ以上、３４ｎｇ／ｍｌ以上、３５ｎｇ／ｍｌ以上、３６ｎｇ／ｍｌ以上、３７ｎｇ／ｍｌ以上、３８ｎｇ／ｍｌ以上、３９ｎｇ／ｍｌ以上、４０ｎｇ／ｍｌ以上、４１ｎｇ／ｍｌ以上、４２ｎｇ／ｍｌ以上、４３ｎｇ／ｍｌ以上、４４ｎｇ／ｍｌ以上、４５ｎｇ／ｍｌ以上、４６ｎｇ／ｍｌ以上、４７ｎｇ／ｍｌ以上、４８ｎｇ／ｍｌ以上、４９ｎｇ／ｍｌ以上、５０ｎｇ／ｍｌ以上、５１ｎｇ／ｍｌ以上、５２ｎｇ／ｍｌ以上、５３ｎｇ／ｍｌ以上、５４ｎｇ／ｍｌ以上、５５ｎｇ／ｍｌ以上、５６ｎｇ／ｍｌ以上、５７ｎｇ／ｍｌ以上、５８ｎｇ／ｍｌ以上、５９ｎｇ／ｍｌ以上、６０ｎｇ／ｍｌ以上、６１ｎｇ／ｍｌ以上、６２ｎｇ／ｍｌ以上、６３ｎｇ／ｍｌ以上、６４ｎｇ／ｍｌ以上、６５ｎｇ／ｍｌ以上、６６ｎｇ／ｍｌ以上、６７ｎｇ／ｍｌ以上、６８ｎｇ／ｍｌ以上、６９ｎｇ／ｍｌ以上及び７０ｎｇ／ｍｌ以上からなる群から選択することができる。ＥＩＰ状態は患者の状態を表し、状態を決定するために用いられるアッセイのタイプには依存しないことを理解するべきである。従って、実施例７に示されるＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ペリオスチンアッセイなどの他のペリオスチンアッセイを含む他の好酸球性炎症の診断アッセイを、好酸球性炎症陽性状態を試験するために使用することができる又は使用するために開発することができる。
【００４８】
好酸球性炎症陰性（ＥＩＮ）患者又は状態とは、その患者由来の血清又は血漿サンプルが血清又は血漿の好酸球レベルについてそれぞれＥ４アッセイを用いて試験される場合、２０ｎｇ／ｍｌ未満の全血清ペリオスチンレベルを有しているであろう患者を指す。ＥＩＮ状態は患者の状態を表し、状態を決定するために用いられるアッセイのタイプには依存しないことを理解するべきである。従って、実施例７に示されるＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ペリオスチンアッセイなどの他のペリオスチンアッセイを含む他の好酸球性炎症の診断アッセイを、好酸球性炎症陰性状態を試験するために使用することができる又は使用するために開発することができる。
【００４９】
本明細書で使用される用語「生物学的サンプル」は、限定されないが、血液、血清、血漿、唾液、組織生検（例えば、肺サンプル）、及び鼻腔スワブまたは鼻ポリープを含む鼻サンプルを含む。
【００５０】
ＦＥＮＯアッセイは、ＦＥＮＯ（分別呼気一酸化窒素）を測定するアッセイを指す。そのレベルは、例えば、２００５年に米国胸部学会（ＡＴＳ）が発行したガイドラインに従っている、手持ち携帯装置のＮＩＯＸ ＭＩＮＯ（Ａｅｒｏｃｒｉｎｅ，Ｓｏｌｎａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して評価することができる。ＦＥＮＯは他の同様の方法、例えばＦｅＮＯ又はＦＥＮＯで留意され得、全てのその類似の異形が同じ意味を持つことが理解されるべきである。
【００５１】
本明細書に与えられる方法に従って試験される又は治療される患者の年齢は全年齢を含む。一実施態様において、年齢は１８＋歳である。別の実施態様において、年齢は１２＋歳である。更に別の実施態様において、年齢は２＋歳である。一実施態様において、年齢は１８〜７５歳、１２〜７５歳、又は２〜７５歳である。
【００５２】
喘息は、可変性と再発性の症状を特徴とする複雑な疾患で、根底にある炎症と関連し得るか又は関連し得ない、可逆性気道閉塞（例えば、気管支拡張による）及び気管支過感受性である。喘息の例としては、アスピリン感受性／悪化喘息、アトピー性喘息、重度の喘息、軽度の喘息、中等度から重度の喘息、コルチコステロイドナイーブ喘息、慢性喘息、コルチコステロイド抵抗性喘息、コルチコステロイド難治性喘息、新たに診断された未治療喘息、喫煙による喘息、コルチコステロイドで制御されない喘息、及びJ Allergy Clin Immunol (2010) 126(5):926-938に述べられるような他の喘息を含む。
【００５３】
好酸球性疾患とは、過剰の好酸球数に関連する障害であり、その非定型症状は、体内の局所的または全身的な好酸球のレベル又は活性に起因して現れる場合がある。過剰の好酸球数又は活性に関連する疾患は、限定されないが、喘息（アスピリン感受性の喘息を含む）、アトピー性喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎（季節性アレルギー性鼻炎を含む）、非アレルギー性鼻炎、喘息、重度の喘息、慢性好酸球性肺炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、セリアック病、チャーグ・ストラウス症候群（結節性動脈周囲炎プラスアトピー）、好酸球性筋痛症候群、好酸球増多症候群、突発性血管浮腫を含む浮腫反応、蠕虫感染症、ここでは好酸球は保護の役割を持ち得る、オンコセルカ皮膚炎、及び好酸球性食道炎、好酸球性胃炎、好酸球性胃腸炎、好酸球性腸炎及び好酸球性大腸炎を含むがこれらに限定されない、好酸球関連消化器疾患、鼻のミクロポリープ症及びポリープ、アスピリン不耐症、喘息及び閉塞性睡眠時無呼吸症候群が挙げられる。好酸球由来の分泌産物はまた、血管新生及び腫瘍における結合組織形成の促進、及び慢性喘息、クローン病、強皮症および心内膜心筋線維症などの状態で見られる線維化反応に関連している（Munitz A, Levi-Schaffer F. Allergy 2004; 59: 268-75, Adamko et al. Allergy 2005; 60: 13-22, Oldhoff, et al. Allergy 2005; 60: 693-6）。他の例としては、癌（例えば、神経膠芽腫（例えば多形神経膠芽腫）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、喘息、線維症、炎症性腸疾患、肺線維症（硬化症に対する二特発性肺線維症（ＩＰＦ）および肺線維症を含む）、ＣＯＰＤ、肝線維症を含む。
【００５４】
ＩＬ−１３媒介性疾患とは、過剰のＩＬ−１３レベル又は活性に関連する障害であり、その非定型症状は、体内の局所的及び／又は全身的なＩＬ−１３のレベル又は活性に起因して現れる場合がある。ＩＬ−１３媒介性疾患の例は、癌（例えば、非ホジキンリンパ腫、神経膠芽腫）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、喘息、線維症、炎症性腸疾患（例えば、クローン病）、肺の炎症性障害（例えば、ＩＰＦのような肺線維症）、ＣＯＰＤ、肝線維症を含む。
【００５５】
ＩＬ−４媒介性疾患とは、過剰のＩＬ−４レベル又は活性に関連する障害であり、その非定型症状は、体内の局所的及び／又は全身的なＩＬ−４のレベル又は活性に起因して現れる場合がある。ＩＬ−４媒介性疾患の例は、癌（例えば、非ホジキンリンパ腫、神経膠芽腫）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、喘息、線維症、炎症性腸疾患（例えば、クローン病）、肺の炎症性障害（例えば、ＩＰＦのような肺線維症）、ＣＯＰＤ、肝線維症を含む。
【００５６】
ＩＬ−５媒介性疾患とは、過剰のＩＬ−５レベル又は活性に関連する障害であり、その非定型症状は、体内の局所的及び／又は全身的なＩＬ−５のレベル又は活性に起因して現れる場合がある。ＩＬ−５媒介性疾患の例は、癌（例えば、非ホジキンリンパ腫、神経膠芽腫）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、喘息、線維症、炎症性腸疾患（例えば、クローン病）、肺の炎症性障害（例えば、ＩＰＦのような肺線維症）、ＣＯＰＤ、肝線維症を含む。
【００５７】
ＩＬ−９媒介性疾患とは、過剰のＩＬ−９レベル又は活性に関連する障害であり、その非定型症状は、体内の局所的及び／又は全身的なＩＬ−９のレベル又は活性に起因して現れる場合がある。ＩＬ−９媒介性疾患の例は、癌（例えば、非ホジキンリンパ腫、神経膠芽腫）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、喘息、線維症、炎症性腸疾患（例えば、クローン病）、肺の炎症性障害（例えば、ＩＰＦのような肺線維症）、ＣＯＰＤ、肝線維症を含む。
【００５８】
ＴＳＬＰ媒介性疾患とは、過剰のＴＳＬＰレベル又は活性に関連する障害であり、その非定型症状は、体内の局所的及び／又は全身的なＴＳＬＰのレベル又は活性に起因して現れる場合がある。ＴＳＬＰ媒介性疾患の例は、癌（例えば、非ホジキンリンパ腫、神経膠芽腫）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、喘息、線維症、炎症性腸疾患（例えば、クローン病）、肺の炎症性障害（例えば、ＩＰＦのような肺線維症）、ＣＯＰＤ、肝線維症を含む。
【００５９】
ＩｇＥ媒介性疾患とは、過剰のＩｇＥレベル又は活性に関連する障害であり、その非定型症状は、体内の局所的及び／又は全身的なＩｇＥのレベル又は活性に起因して現れる場合がある。そのような疾患は、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、線維症（例えば、ＩＰＦなどの肺線維症）を含む。
【００６０】
喘息様症状は、息切れ、咳（痰の産生及び／又は痰の質及び／又は咳周波数の変化）、喘鳴、胸部絞扼感、気管支収縮及び上記の症状のいずれか又はこれらの症状の組み合わせに起因する夜間覚醒からなる群から選択される症状が含まれる(Juniper et al (2000) Am. J. Respir. Crit. Care Med., 162(4), 1330-1334.)。
【００６１】
用語「呼吸器疾患」は、限定されないが、喘息（例えば、アレルギー性および非アレルギー性喘息（例えば、年少の子供たちの中で、例えば呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）による感染による））；気管支炎（例えば、慢性気管支炎）；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）（例えば、肺気腫（例えば、タバコ誘発性肺気腫）；気道炎症、好酸球増加症、線維症、過剰粘液産生、例えば、嚢胞性線維症、肺線維症、アレルギー性鼻炎を含む状態が含まれる。気道炎症、過度の気道分泌、及び気道閉塞によって特徴づけることができる疾患の例は、喘息、慢性気管支炎、気管支拡張症、及び嚢胞性線維症が挙げられる。
【００６２】
増悪（一般に喘息発作又は急性の喘息とも呼ばれる）は、息切れ、咳（痰の産生及び／又は痰の質及び／又は咳頻度の変化）、喘鳴、胸部絞扼感、上記の症状又はこれらの症状の組み合わせのいずれかに起因する夜間覚醒の新規または進行性の増加の症状の発現である。増悪はしばしば呼気の気流（ＰＥＦまたはＦＥＶ１）の低下によって特徴付けられる。しかし、ＰＥＦの変動性は、増悪からの回復に至るまで又はまたはその最中には増加するかもしれないが、増悪の最中には通常は増加しない。増悪の重症度は、軽度から生命を脅かす範囲に及び、症状および肺機能の両方に基づいて評価することができる。本明細書に記載されるように重度の喘息増悪は、喘息治療のために以下の入院加療、高コルチコステロイドの使用（例えば、一日のコルチコステロイドの総用量または５００マイクログラム以上のＦＰ又は等価物の一日の総用量を３日間又はそれ以上連続して４倍する）、又は経口／非経口のコルチコステロイドの使用の任意の一又は組み合わせをもたらす増悪を含む。
【００６３】
ＴＨ２経路阻害剤はＴＨ２経路を阻害する薬剤である。
【００６４】
ＴＨ２経路阻害剤の例は、ＩＴＫ，ＢＴＫ，ＩＬ−９（例えば、ＭＥＤＩ−５２８）、ＩＬ−５（例えば、メポリズマブ、ＣＡＳ番号１９６０７８−２９−２；レシリズマブ（ｒｅｓｉｌｉｚｕｍａｂ））、ＩＬ−１３（例えば、ＩＭＡ−０２６，ＩＭＡ−６３８（アンルキンズマブとも言う、ＩＮＮ Ｎｏ．９１０６４９−３２−０；ＱＡＸ−５７６；ＩＬ４／ＩＬ１３ トラップ），トラロキヌマブ（ＣＡＴ−３５４，ＣＡＳ番号１０４４５１５−８８−９とも言う）；ＡＥＲ−００１，ＡＢＴ−３０８（ヒト化１３Ｃ５．５抗体とも言う），ＩＬ−４（例えばＡＥＲ−００１，ＩＬ４／ＩＬ１３トラップ），ＯＸ４０Ｌ，ＴＳＬＰ，ＩＬ−２５，ＩＬ−３３及びＩｇＥ（例えば、ＸＯＬＡＩＲ、ＱＧＥ−０３１；ＭＥＤＩ−４２１２）；及び受容体、例えば：ＩＬ−９受容体、ＩＬ−５受容体（例えば、ＭＥＤＩ−５６３（ベンラリズマブ，ＣＡＳ番号１０４４５１１−０１−４），ＩＬ−４受容体α（例えば、ＡＭＧ−３１７，ＡＩＲ−６４５），ＩＬ−１３受容体α１（例えばＲ−１６７１）及びＩＬ−１３受容体α２，ＯＸ４０，ＴＳＬＰ−Ｒ，ＩＬ−７Ｒアルファ（ＴＳＬＰの共受容体），ＩＬ１７ＲＢ（ＩＬ−２５の受容体），ＳＴ２（ＩＬ−３３の受容体），ＣＣＲ３，ＣＣＲ４，ＣＲＴＨ２（例えばＡＭＧ−８５３，ＡＰ７６８，ＡＰ−７６１，ＭＬＮ６０９５，ＡＣＴ１２９９６８），ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩ，ＦｃｅｐｓｉｌｏｎＲＩＩ／ＣＤ２３（ＩｇＥの受容体），Ｆｌａｐ（例えば、ＧＳＫ２１９０９１５），Ｓｙｋキナーゼ（Ｒ−３４３，ＰＦ３５２６２９９）；ＣＣＲ４（ＡＭＧ−７６１），ＴＬＲ９（ＱＡＸ−９３５）及びＣＣＲ３，ＩＬ５，ＩＬ３，ＧＭ−ＣＳＦの多重サイトカイン阻害剤（例えば、ＴＰＩ ＡＳＭ８）からなる群から選択される標的の何れか一の活性の阻害剤を含む。上記標的の阻害剤の例は、例えば、国際公開第２００８／０８６３９５号；国際公開第２００６／０８５９３８号；米国特許第７，６１５，２１３号；米国特許第７，５０１，１２１号；国際公開第２００６／０８５９３８号；国際公開第２００７／０８０１７４号；米国特許第７，８０７，７８８号；国際公開第２００５００７６９９号；国際公開第２００７０３６７４５号；国際公開第２００９／００９７７５号；国際公開第２００７／０８２０６８号；国際公開第２０１０／０７３１１９号；国際公開第２００７／０４５４７７号；国際公開第２００８／１３４７２４号；米国特許第２００９／００４７２７７号；及び国際公開第２００８／１２７，２７１号）に開示されている。
【００６５】
本明細書に提供される治療薬は、例えば、ポリペプチド（例えば、抗体、イムノアドヘシン又はペプチボディ）、本明細書で同定された標的をコードする核酸分子に結合し得るタンパク質または核酸分子に結合し得るアプタマー又は小分子（すなわち、ｓｉＲＮＡを）など、本明細書上記に同定された標的に結合可能な薬剤を含む。
【００６６】
「抗ＩＬ１３／ＩＬ４経路阻害剤」は、ＩＬ−１３及び／又はＩＬ−４シグナル伝達を阻害する治療薬を指す。抗ＩＬ１３／ＩＬ４経路阻害剤は、ＩＬ１３及び／又はＩＬ４とその受容体との相互作用の阻害剤を含み、そのような阻害剤は、限定されないが、抗ＩＬ１３結合剤、抗ＩＬ４結合剤、抗ＩＬ３／ＩＬ４二重特異性結合剤、抗ＩＬ４受容体α結合剤、抗ＩＬ１３受容体α１結合剤及び抗ＩＬ１３受容体α２結合剤を含む。ＩＬ１３、ＩＬ４に結合できる単一ドメイン抗体（単一のドメイン結合ＩＬ１３と単一のドメイン結合ＩＬ４を持つ二重特異性抗体）、ＩＬ−１３Ｒアルファ１、ＩＬ−１３Ｒアルファ２またはＩＬ−４Ｒアルファが具体的に阻害剤として含まれる。複数の標的と結合することができる分子が含まれていることを理解すべきである。
【００６７】
「抗ＩＬ４結合剤」はヒトＩＬ４に結合する薬剤を指す。そのような結合剤は、小分子、アプタマー又はポリペプチドを含めることができる。そのようなポリペプチドは、限定されるものではないが、イムノアドヘシン、抗体、ペプチボディおよびペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含めることができる。一実施態様によれば、結合剤はヒトＩＬ−４配列に１ｕＭ〜１ｐＭの間の親和性で結合する。抗ＩＬ４結合剤の具体的な例は、可溶性ＩＬ４受容体α（例えばヒトＦｃ領域に融合したＩＬ４受容体の細胞外ドメイン）、抗ＩＬ４抗体、及び可溶性ＩＬ１３受容体α（例えばヒトＦｃ領域に融合したＩＬ１３受容体の細胞外ドメイン）を含めることができる。
【００６８】
「抗ＩＬ４受容体α結合剤」はヒトＩＬ４受容体αに結合する薬剤を指す。そのような結合剤は、小分子、アプタマー又はポリペプチドを含めることができる。そのようなポリペプチドは、限定されるものではないが、イムノアドヘシン、抗体、ペプチボディおよびペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含めることができる。一実施態様によれば、結合剤はヒトＩＬ−４受容体α配列に１ｕＭ〜１ｐＭの間の親和性で結合する。抗ＩＬ４受容体α結合剤の具体的な例は、抗ＩＬ４受容体α抗体を含めることができる。
【００６９】
「抗ＩＬ１３結合剤」はヒトＩＬ１３に結合する薬剤を指す。そのような結合剤は、小分子、アプタマー又はポリペプチドを含めることができる。そのようなポリペプチドは、限定されるものではないが、イムノアドヘシン、抗体、ペプチボディおよびペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含めることができる。一実施態様によれば、結合剤はヒトＩＬ−１３配列に１ｕＭ〜１ｐＭの間の親和性で結合する。抗ＩＬ１３結合剤の具体的な例は、抗ＩＬ１３抗体、ヒトＦｃに融合した可溶性ＩＬ１３受容体α２、ヒトＦｃに融合した可溶性ＩＬ４受容体α、ヒトＦｃに融合した可溶性ＩＬ１３受容体αを含めることができる。一実施態様において、抗ＩＬ１３抗体は、（１）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲＨ１、（２）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲＨ２，（３）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲＨ３、（４）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲＬ１、（５）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲＨ２、及び（６）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲＨ３を含む。別の実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。一実施態様によれば、抗体はＩｇＧ１抗体である。別の実施態様によれば、抗体はＩｇＧ４抗体である。一実施態様によれば、ＩｇＧ４抗体はその定常ドメインにＳ２２８Ｐ変異を含む。
【００７０】
「抗ＩＬ１３受容体α１結合剤」はヒトＩＬ１３受容体α１に特異的に結合する薬剤を指す。そのような結合剤は、小分子、アプタマー又はポリペプチドを含めることができる。そのようなポリペプチドは、限定されるものではないが、イムノアドヘシン、抗体、ペプチボディおよびペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含めることができる。一実施態様によれば、結合剤はヒトＩＬ−１３受容体α１配列に１ｕＭ〜１ｐＭの間の親和性で結合する。抗ＩＬ１３受容体α１結合剤の具体的な例は、抗ＩＬ１３受容体α１抗体を含めることができる。
【００７１】
「抗ＩＬ１３受容体α２結合剤」はヒトＩＬ１３受容体α２に特異的に結合する薬剤を指す。そのような結合剤は、小分子、アプタマー又はポリペプチドを含めることができる。そのようなポリペプチドは、限定されるものではないが、イムノアドヘシン、抗体、ペプチボディおよびペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含めることができる。一実施態様によれば、結合剤はヒトＩＬ−１３受容体α２配列に１ｕＭ〜１ｐＭの間の親和性で結合する。抗ＩＬ１３受容体α２結合剤の具体的な例は、抗ＩＬ１３受容体α２抗体を含めることができる。
【００７２】
「抗ＩｇＥ結合剤」はヒトＩｇＥに特異的に結合する薬剤を指す。そのような結合剤は、小分子、アプタマー又はポリペプチドを含めることができる。そのようなポリペプチドは、限定されるものではないが、イムノアドヘシン、抗体、ペプチボディおよびペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含めることができる。一実施態様によれば、抗ＩｇＥ抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬ配列及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＨ配列を含む。
【００７３】
「抗Ｍ１’結合剤」は、Ｂ細胞上で表面に発現されたＩｇＥの膜近傍のＭ１’領域に特異的に結合する薬剤を指す。そのような結合剤は、小分子、アプタマー又はポリペプチドを含めることができる。そのようなポリペプチドは、限定されるものではないが、イムノアドヘシン、抗体、ペプチボディおよびペプチドからなる群から選択されるポリペプチドを含めることができる。一実施態様によれば、抗ＩｇＥ抗体は国際公開第２００８／１１６１４９号に記載される抗体又はその変異体を含む。別の実施態様によれば、抗Ｍ１’抗体は可変重鎖と可変軽鎖を含み、ここで可変重鎖は配列番号２４で可変軽鎖は配列番号２５である。別の実施態様によれば、抗ＩｇＥ／Ｍ１’抗体は、可変重鎖及び可変軽鎖を含み、ここで可変重鎖はＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を更に含み、かつ可変軽鎖はＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ、Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を更に含み、かつ（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号２４の残基２６〜３５［ＧＦＴＦＳＤＹＧＩＡ］であり；（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号２４の残基４９〜６６［ＡＦＩＳＤＬＡＹＴＩＹＹＡＤＴＶＴＧ］であり；（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号２４の残基９７〜１０６［ＡＲＤＮＷＤＡＭＤＹ］であり；（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号２５の残基２４〜３９［ＲＳＳＱＳＬＶＨＮＮＡＮＴＹＬＨ］であり；（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号２５の残基５５〜６１［ＫＶＳＮＲＦＳ］であり；（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号２５の残基９４〜１０２［ＳＱＮＴＬＶＰＷＴ］である。
【００７４】
用語「小分子」は、５０ダルトンから２５００ダルトンの間の分子量を有する有機分子を指す。
【００７５】
用語「抗体」は最も広範な意味で使用され、具体的には例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ポリエピトープ特異性を有する抗体、単鎖抗体、多重特異性抗体および抗体の断片を網羅する。そのような抗体は、キメラ、ヒト化、ヒト及び合成である。このような抗体及びそれらの生成方法を以下でより詳細に説明する。
【００７６】
用語「制御されない」又は「制御できない」とは、疾患の症状を最小限に抑えるための治療レジメンが不十分であることを指す。本明細書で使用されるように、用語「制御されない」及び「十分に制御されない」とは交換可能に使用され同じ状態を指す。患者のコントロール状態は、患者の病歴、治療に対する応答性及び処方された現在の治療のレベルを含む多くの要因に基づいて、主治医によって決定することができる。例えば、医師は、７５％未満と予測されるＦＥＶ１又は自己最高値、過去２〜４週間におけるＳＡＢＡの必要の頻度（例えば、２回の投薬／週に等しいかそれ以上）、過去２〜４週間における夜間覚醒／症状（例えば、２夜／週に等しいかそれ未満）、過去２〜４週間における活動の制限、過去２〜４週間における昼間症状などの要因を考慮し得る。
【００７７】
用語「治療薬」は疾患を治療することに用いられる任意の薬剤を指す。
【００７８】
用語「コントローラー」又は「プリベンター（ｐｒｅｖｅｎｔｏｒ）」は、喘息の炎症を制御するために使用される任意の治療薬を指す。コントローラーの例は、コルチコステロイド、ロイコトリエン受容体アンタゴニストは、（例えば、モンテルカスト、ジレウトン、プランルカスト、ザフィルルカストロイコトリエンの合成又は活性を阻害する）、ＬＡＢＡ、コルチコステロイド／ＬＡＢＡの組合せ組成物、テオフィリン（アミノフィリンを含む）、クロモグリク酸ナトリウム、ネドクロミルナトリウム、オマリズマブ、ＬＡＭＡ、ＭＡＢＡ（例えば、二官能性ムスカリンアンタゴニスト−ベータ２アゴニスト）、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）阻害剤、及び酵素ＰＤＥ−４阻害剤（例えば、ロフルミラスト）を含む。「第二コントローラー」は典型的には第一コントローラーとは同一でないコントローラーを指す。
【００７９】
用語「コルチコステロイド節約（ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄ ｓｐａｒｉｎｇ）」又は「ＣＳ」は、他の治療薬の投与に起因する疾患の治療のためにコルチコステロイドを摂取している患者の疾患を治療するために使用されるコルチコステロイドの頻度及び／又は量の減少、又は消失を意味する。「ＣＳ節約剤」は、コルチコステロイドを摂取している患者においてＣＳを生じることが可能な治療薬を指す。
【００８０】
用語「コルチコステロイド」は、限定されないが、フルチカゾン（プロピオン酸フルチカゾン（ＦＰ）を含む）、ベクロメタゾン、ブデソニド、シクレソニド、モメタゾン、フルニソリド、ベタメタゾン及びトリアムシノロンを含む。「吸入コルチコステロイド」は吸入による送達に適しているコルチコステロイドを意味する。典型的は吸入コルチコステロイドは、フルチカゾン、プロピオン酸ベクロメタゾン、ブデノシド、フロ酸モメタゾン、シクレソニド、フルニソリド、トリアムシノロンアセトニド、及び現在利用可能又は将来利用可能になる他のコルチコステロイドが挙げられる。吸入することができかつ長時間作用型β２−アゴニストと併用されるコルチコステロイドの例は、限定されないが、ブデソニド／ホルモテロール及びフルチカゾン／サルメテロールが含まれる。
【００８１】
コルチコステロイド／ＬＡＢＡ併用薬の例は、フロ酸フルチカゾン／ビランテロールトリフェナターテ（ｖｉｌａｎｔｅｒｏｌ ｔｒｉｆｅｎａｔａｔｅ）及びインダカテロール／モメタゾンを含む。
【００８２】
用語「ＬＡＢＡ」は、長時間作用型β−２アゴニストを意味し、そのアゴニストは、例えば、サルメテロール、ホルモテロール、バンブテロール、アルブテロール、インダカテロール、ａｒｆｏｒｍｏｔｅｒｏｌ及びクレンブテロールが含まれる。
【００８３】
用語「ＬＡＭＡ」は長時間作用型ムスカリンアンタゴニストを意味し、そのアゴニストはチオトロピウムを含む。
【００８４】
ＬＡＢＡ／ＬＡＭＡの組み合わせの例は、限定されないが、オロダテロールチオトロピウム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ’ｓ）及びインダカテロールグリコピロニウム（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を含む。
【００８５】
用語「ＳＡＢＡ」は、短時間作用型β−２アゴニストを意味し、限定されないが、サルブタモール、レボサルブタモール、フェノテロール、テルブタリン、ピルブテロール、プロカテロール、ビトルテロール、リミテロール、カルブテロール、ツロブテロール及びレプロテロールを含む。
【００８６】
ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（時にはｌｅｕｋａｓｔと称する）（ＬＴＲＡ）は、ロイコトリエンを阻害する薬物である。ロイコトリエン阻害剤の例には、モンテルカスト、ジロートン、プランルカスト、及びザフィルルカストが含まれる。
【００８７】
用語「ＦＥＶ１」は、強制呼気の最初の一秒間に吐き出された空気の体積を指す。それは気道閉塞の尺度である。ＦＥＶ１の２０％減少（ＰＣ２０）を誘導するために必要とされるメサコリンの刺激的濃度は気道過敏性の尺度である。ＦＥＶ１は他の同様の方法、例えばＦＥＶ１で留意され得、全てのその類似の異形が同じ意味を持つことが理解されるべきである。
【００８８】
用語「ＦＥＶ１の相対的変化」＝（治療の第１２週でのＦＥＶ１−治療開始前のＦＥＶ１）をＦＥＶ１で割ったもの。
【００８９】
用語「軽度の喘息」は、一般的に１週間に２回未満の症状又は増悪、１ヶ月に２回未満の夜行性の症状を経験する患者を指し、増悪の間に無症候性である。軽度の、断続的な喘息は以下により必要に応じてしばしば治療される：吸入気管支拡張薬（短時間作用型吸入β２アゴニスト）；既知のトリガーの回避；毎年のインフルエンザワクチン接種；６〜１０年毎の肺炎球菌ワクチン接種；及び場合によっては同定されたトリガーへの暴露の前の吸入β２−アゴニスト、クロモリン、又はネドクロミル。患者が短時間作用型β２アゴニストの必要性が増加している（例えば、急性増悪のために１日に短時間作用型β２−アゴニストを３から４回以上使用する又は症状のため１月に一以上のキャニスターを使用する）場合、患者は治療に漸増が必要であり得る。
【００９０】
用語「中等度喘息」は、一般に、患者は週２回以上増悪を経験しかつその増悪が睡眠や活動に影響を与える；患者は１ヶ月２回以上喘息のため夜間に覚醒する；患者は短時間作用型吸入β２−アゴニストを毎日又は一日おきにを必要とする慢性的な喘息症状を持っている；患者のＰＥＦ又はＦＥＶ１の治療前ベースラインが６０から８０％と予測され、及びＰＥＦ変動が２０から３０％である喘息を指す。
【００９１】
用語「重度の喘息」は、一般に、患者がほぼ継続した症状、頻繁な増悪、喘息に起因する頻繁な夜間覚醒を有し、活動が制限され、ＰＥＦまたはＦＥＶ１ベースラインが６０％未満と予測され、かつＰＥＦ変動が２０から３０％である喘息を指す。
【００９２】
救助薬の例としては、アルブテロール、ベントリンなどが含まれる。
【００９３】
「耐性」とは、治療薬による治療後にほとんど又は全く有意な改善を示さない疾患を指す。例えば、喘息が制御されないままであるか又はＦＥＶ１が改善しないかを確定するために、高用量のＩＣＳ（例えば、一日のコルチコステロイドの総用量または５００マイクログラム以上のＦＰ（又は等価物）の一日の総用量を３日間又はそれ以上連続して４倍する）、又は全身のコルチコステロイドによる治療を要する喘息はしばしば重度の難治性喘息と考えられる。
【００９４】
本明細書に提供される治療薬は、非経口、皮下、腹腔内、肺内、及び鼻腔内を含む、任意の適切な手段により投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が含まれる。一実施態様では、治療薬は吸入される。別の実施態様によれば、投与は注射、例えば、静脈内又は皮下注射によって与えられる。更に別の実施態様によれば、治療薬は、注射器（例えば、充填済又は未充填）又はオートインジェクターを使用して投与される。
【００９５】
疾患の予防又は治療のために、治療薬の適量は、治療する疾患のタイプ、疾患の重症度及び過程、治療薬が予防を目的としてか治療を目的として投与されるのかどうか、以前の治療法、患者の病歴、及び薬剤への反応、及び主治医の判断により決定されるであろう。治療剤は、患者に対して、単回、又は一連の治療に渡って適切に投与される。治療薬組成物は良好な医療行為に合致した方法で処方され、投与され、投薬される。この観点において考慮すべき要因は、治療すべき特定の障害、治療すべき特定の哺乳類、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤送達部位、投与方法、投与日程及び医療従事者が知る他の要因を包含する。
【００９６】
レブリキズマブの投与、好酸球性疾患（喘息を含む）について及びＴＨ２療法を使用して他の疾患を治療するため：レブリキズマブは患者の体重の０．１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇを投与することができる。一実施態様において、患者に投与される投与量は患者の体重の０．１ｍｇ／ｋｇから２００ｍｇ／ｋｇの間である。別の実施態様において、用量は患者の体重の１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇである。
【００９７】
代替の実施態様において、レブリキズマブは均一用量として投与することができる。一実施態様において、レブリキズマブは１２５〜１０００ｍｇの均一用量として（すなわち、体重に依存せずに）、皮下注射によるか又は静脈内注射により、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、６週間毎、７週間毎、８週間毎、９週間毎、１０週間毎、１１週間毎、１２週間毎、１３週間毎、１４週間毎、１５週間毎、１６週間毎、１ヶ月毎、２ヶ月毎、３ヶ月毎、又は４ヶ月毎からなる群から選択される時間の頻度で投与される。別の実施態様において、患者が体重過多である場合、レブリキズマブは、例えば月あたり３回の頻度で１２５〜２５０ｍｇを投与することができる。一実施態様において、レブリキズマブは４週間ごとに１２５ｍｇ又は２５０ｍｇの均一用量として投与される。別の実施態様において、レブリキズマブは４０ｋｇを超える患者に対して４週間ごとに３７．５ｍｇ、１２５ｍｇ、２５０ｍｇ又は５００ｍｇの均一用量として投与される。
【００９８】
一実施態様において、患者は１８歳以上である。一実施態様において、喘息患者は１２から１７歳であり、レブリキズマブが２５０ｍｇの均一用量で又は１２５ｍｇの均一用量で投与される。一実施態様において、喘息患者は６から１１歳であり、レブリキズマブが１２５ｍｇの均一用量で投与される。
【００９９】
「患者の応答」又は「応答」（及びその文法的バリエーション）は、限定しないが、（１）減速及び完全な停止を含む疾患の進行のある程度の阻害；（２）疾患の発現及び／又は症状の数の減少；（３）病変サイズの縮小；（４）隣接末梢器官及び／又は組織への疾患細胞浸潤の阻害（即ち、減少、減速又は完全停止）；（５）疾患拡散の阻害（即ち減少、減速又は完全停止）；（６）疾病病変の退縮またはアブレーションを、必ずでは無いが、もたらし得る自己免疫応答の減少；（７）疾患に伴う１以上の症状のある程度の軽減；（８）治療後の無病を提示する期間の増加；及び又は（９）治療後の任意の時点での死亡率の減少を含む、患者に対する利益を示す任意のエンドポイントを使用して評価することができる。
【０１００】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を指す。本明細書で使用する場合、特に断らない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体及び抗原結合アーム）のメンバー間の１：１の相互作用を反映している本質的な結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般的に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載したものを含む、当技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例示であって典型的な実施態様は、以下で説明される。
【０１０１】
「親和性成熟」抗体とは、その改変を有していない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性に改良を生じせしめる、その一又は複数の超可変領域（ＨＶＲ）において一又は複数の改変を持つものである。
【０１０２】
用語「抗標的抗体」及び「標的に結合する抗体」は、抗体が、標的を標的とし、診断薬剤及び／又は治療的薬剤として有用であるように、十分な親和性で標的に結合することができる抗体を指す。一実施態様において、抗標的抗体の無関係な、非標的タンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又はビアコアアッセイによって測定される場合、抗体の標的への結合の約１０％未満である。ある実施態様において、標的へ結合する抗体は、解離定数（Ｋｄ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ未満、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）．ある実施態様において、抗標的抗体は、異なる種の間で保存されている標的のエピトープに結合する。
【０１０３】
用語「抗体」は最も広い意味で用いられ、様々な抗体構造を包含し、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含む。
【０１０４】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原を結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨは、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体、単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。
【０１０５】
参照抗体として「同一のエピトープに結合する抗体」とは、競合アッセイにおいて５０％以上、参照抗体のその抗原への結合をブロックする抗体、逆に競合アッセイにおいて５０％以上、その抗体のその抗原への結合をブロックするその参照抗体を指す。典型的な競合アッセイが、本明細書において提供される。
【０１０６】
本明細書における目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」とは、下記に定義されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークから得られる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含有するフレームワークである。ヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同一のアミノ酸配列を含んでもよく、又はそれはアミノ酸配列の変化を含み得る。幾つかの実施態様において、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。幾つかの実施態様において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、Ｖはヒト免疫グロブリンのフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列に、配列が同一である。
【０１０７】
用語「キメラ」抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の起源又は種から由来し、一方重鎖及び／又は軽鎖の残りが異なる起源又は種から由来する抗体を指す。
【０１０８】
抗体の「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体の５つの主要なクラスがあり：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ、及びこれらの幾つかは、更にサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩＧＡ１、及びＩｇＡ２に分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【０１０９】
本明細書で用いられる「細胞傷害性薬物」という用語は、細胞の機能を阻害又は阻止し及び／又は細胞死又は破壊を生ずる物質を指す。細胞傷害性薬物は、限定されないが、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体）：化学療法剤又は薬物（例えば、メトトレキセート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他の挿入剤）、成長阻害剤、酵素及びその断片、例えば核酸分解酵素など、抗生物質、小分子毒素などの毒素、又は細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒素（それらの断片及び／又はその変異体を含む）、及び以下に開示される様々な抗腫瘍剤又は抗癌剤を包含する。
【０１１０】
「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣＣ）、貪食、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション、及びＢ細胞の活性化を含む。
【０１１１】
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」とは、所望の治療的又予防的結果を達成するために必要な用量及び期間での、有効な量を指す。
【０１１２】
用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。その用語は、天然配列Ｆｃ領域と変異体Ｆｃ領域を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域はＣｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端まで伸長する。しかし、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は存在しているか、又は存在していない場合がある。本明細書に明記されていない限り、Ｆｃ領域又は定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載されるように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
【０１１３】
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に４つのＦＲのドメイン、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４で構成される。従って、ＨＶＲ及びＦＲ配列は一般にＶＨ（又はＶＬ）の以下の配列に現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
【０１１４】
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」及び「全抗体」は、本明細書中で互換的に使用され、天然型抗体構造と実質的に類似の構造を有するか、又は本明細書で定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【０１１５】
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養」は互換的に使用され、外因性の核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含める。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換された細胞」を含み、継代の数に関係なく、それに由来する一次形質転換細胞及び子孫が含まれる。子孫は親細胞と核酸含量が完全に同一ではないかもしれないが、突然変異が含まれる場合がある。最初に形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能又は生物活性を有する変異型子孫が本明細書において含まれる。
【０１１６】
「ヒト抗体」は、ヒト又はヒト細胞により産生されるか、又はヒト抗体のレパートリー又は他のヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト起源に由来する抗体のそれに対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
【０１１７】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的には、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。一般的には、配列のサブグループは、 Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第５版，NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991)，第１−３巻にあるサブグループである。一実施態様において、ＶＬについて、サブグループは上掲のＫａｂａｔらにあるサブグループカッパＩである。一実施態様において、ＶＨについて、サブグループは上掲のＫａｂａｔらにあるサブグループＩＩＩである。
【０１１８】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及びヒトＦＲ由来アミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。所定の実施態様において、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが、非ヒト抗体のものに対応し、全てまたは実質的にＦＲの全てが、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意で、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体の「ヒト化型」、例えば、非ヒト抗体は、ヒト化を遂げた抗体を指す。
【０１１９】
本明細書で使用される用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列が超可変であるか、及び／又は構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの各領域を指す。一般的に、天然型４鎖抗体は、ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）に３つ、及びＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に３つの６つのＨＶＲを含む。ＨＶＲは、一般的に超可変ループ由来及び／又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、典型的には最高の配列可変性であり、及び／又は抗原認識に関与している。本明細書で使用されるＨＶＲは、位置２４−３６（ＨＶＲＬ１について）、４６−５６（ＨＶＲＬ２について）、８９−９７（ＨＶＲＬ３について）、２６−３５Ｂ（ＨＶＲＨ１について）、４７−６５（ＨＶＲＨ２について）、及び９３−１０２（ＨＶＲＨ３について）の内に位置する残基の任意の番号を含む。
【０１２０】
「イムノコンジュゲート」は、１つ以上の異種分子にコンジュゲートした抗体であり、限定されないが、細胞傷害性薬物を含む。
【０１２１】
「個体」又は「被検体」は、哺乳動物である。哺乳動物は、限定されないが、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウマ）、霊長類（例えば、ヒト、サルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、げっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含む。ある実施態様において、個体又は被検体はヒトである。
【０１２２】
「単離された」抗体は、その自然環境の成分から分離されたものである。幾つかの実施態様において、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）により決定されるように、９５％以上または９９％の純度に精製される。抗体純度の評価法の総説としては、例えばFlatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)を参照のこと。
【０１２３】
「単離された」核酸は、その自然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、しかし、その核酸分子は、染色体外又はその自然の染色体上の位置とは異なる染色体位置に存在している。
【０１２４】
「抗標的抗体をコードする単離された核酸」は、抗体の重鎖及び軽鎖（又はその断片）をコードする一以上の核酸分子を指し、単一のベクター又は別個のベクター内のそのような核酸分子、及び宿主細胞の一以上の位置に存在するそのような核酸分子を含む。
【０１２５】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味し、すなわち、例えば、天然に生じる変異を含み、又はモノクローナル抗体製剤の製造時に発生し、一般的に少量で存在している変異体などの、可能性のある変異体抗体を除き、集団を構成する個々の抗体は同一であり、及び／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を一般的に含む、ポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。従って、修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、本明細書に与えられる方法に従って使用されるモノクローナル抗体は、限定されないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含む様々な技術によって作成され、モノクローナル抗体を作製するためのそのような方法及び他の例示的な方法は、本明細書に記載されている。
【０１２６】
「ネイキッド抗体」とは、異種の部分（例えば、細胞傷害性部分）又は放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は薬学的製剤中に存在してもよい。
【０１２７】
「天然型抗体」は、天然に生じる様々な構造をとる免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然型ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖と２つの同一の重鎖から成る約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端に、各重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端に、各軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、定常軽鎖（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）とラムダ（λ）と呼ばれる、２つのタイプのいずれかに割り当てることができる。
【０１２８】
用語「パッケージ挿入物」は、効能、用法、用量、投与、併用療法、禁忌についての情報、及び／又はそのような治療用製品の使用に関する警告を含む、治療用製品の商用パッケージに慣習的に含まれているインストラクションを指すために使用される。用語「パッケージ挿入物」はまた、意図される用途、試験の原理、試薬の調製及び取り扱い、検体の収集及び調製、アッセイのキャリブレーション及びアッセイ手順、アッセイの感度と特異性などの性能と精度のデータに関する情報を含む、治療用製品のコマーシャルパッケージに慣習的に含まれているインストラクションを指すためにも使用される。
【０１２９】
参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性のパーセント（％）」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入した後、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした、参照ポリペプチドのアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の完全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインするための適切なパラメータを決定することができる。しかし、ここでの目的のためには、％アミノ酸配列同一性の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用することによって生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムはジェネンテック社によって作製され、ソースコードは米国著作権庁、ワシントンＤ．Ｃ．，２０５５９に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２もまた、ジェネンテック社、サウスサンフランシスコ、カリフォルニアから公的に入手可能であり、又はそのソースコードからコンパイルすることができる。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸのＶ４．０Ｄを含む、ＵＮＩＸオペレーティングシステム上での使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され変動しない。
【０１３０】
アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ−２が用いられる状況では、与えられたアミノ酸配列Ａの、与えられたアミノ酸配列Ｂとの、又はそれに対する％アミノ酸配列同一性（或いは、与えられたアミノ酸配列Ｂと、又はそれに対して所定の％アミノ酸配列同一性を持つ又は含む与えられたアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
【０１３１】
分数Ｘ／Ｙの１００倍であって、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２により、ＡとＢのそのプログラムのアラインメントにおいて同一と一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。特に断らない限り、本明細書で使用されるすべての％アミノ酸配列同一性値が、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用し、直前の段落で説明したように得られる。
【０１３２】
用語「薬学的製剤」は、その中に有効で含有される活性成分の生物学的活性を許容するような形態であって、製剤を投与する被検体にとって許容できない毒性である他の成分を含まない調製物を指す。
【０１３３】
「薬学的に許容される担体」は、被検体に非毒性であり、有効成分以外の製剤処方中の成分を指す。薬学的に許容される担体は、限定されないが、緩衝剤、賦形剤、安定剤、又は保存剤を含む。
【０１３４】
特に断らない限り、本明細書で使用する用語「標的」は、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス、ラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物由来の任意の天然型分子を指す。その用語は、「完全長」、未処理の標的並びに細胞内でのプロセシングから生じた任意の形態の標的を含む。その用語はまた、天然に存在する標的の変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体を包含する。
【０１３５】
本明細書で用いられるように、「治療」（及び「治療する（ｔｒｅａｔ）」または「治療している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」など文法上の変形）は、治療されている個体の自然経過を変えようと試みる臨床的介入を指し、予防のために、または臨床病理の過程においてのいずれかで実行できる。治療の望ましい効果は、限定されないが、疾患の発症又は再発を予防すること、症状の緩和、疾患の直接的または間接的な病理学的帰結の縮小、転移を予防すること、疾患の進行の速度を遅らせること、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善を含む。幾つかの実施態様において、抗体は、疾患の発症を遅延させるか又は疾患の進行を遅くするために使用される。
【０１３６】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然型抗体の可変重鎖ドメイン及び軽鎖（それぞれＶＨおよびＶＬ）は、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む各ドメインを持ち、一般的に似たような構造を有する。（例えば、Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., ９１頁 (2007)を参照）。単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。更に、特定の抗原に結合する抗体は、相補的なＶＬ又はＶＨドメインのそれぞれのライブラリーをスクリーニングするために、抗原に特異的に結合する抗体由来のＶＨ又はＶＬドメインを用いて単離することができる。例えば、Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)を参照。
【０１３７】
本明細書で使用される、用語「ベクター」は、それがリンクされている別の核酸を伝播することができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、並びにそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。ある種のベクターは、それらが動作可能なようにリンクされている核酸の発現を指示することができる。このようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と言う。
【０１３８】
組成物及び方法
一態様において、本発明は、一部分が、新しい診断アッセイ及びより良好な治療の方法に基づいている。ある実施態様において、ペリオスチンに結合する抗体が提供される。本発明の抗体は、例えば、喘息及び他の疾患の診断又は治療のために有用である。
【０１３９】
典型的な抗体
抗ペリオスチン抗体
一態様において、本発明は、ペリオスチンに結合する単離された抗体を提供する。ある実施態様において、抗ペリオスチン抗体はヒトペリオスチンのアイソフォーム１〜４に良好な親和性で結合することができる。
【０１４０】
一実施態様において、抗体は、配列番号１及び配列番号２を含み（「２５Ｄ４抗体」）又は配列番号３及び配列番号４を含む（「２３Ｂ９抗体」）。別の実施態様において、抗体は、配列番号１及び配列番号２の可変領域配列を含み又は配列番号３及び配列番号４の可変領域配列を含む。別の実施態様において、抗体は、配列番号１及び配列番号２のＨＶＲ配列を含み又は配列番号３及び配列番号４のＨＶＲ配列を含む。別の実施態様において、抗体は配列番号１及び配列番号２のＨＶＲ配列に９５％以上同一であるＨＶＲを含み、及び／又は抗体は配列番号３及び配列番号４のＨＶＲ配列に９５％以上同一であるＨＶＲ配列を含む。
【０１４１】
上記実施態様の何れかにおいて、抗ペリオスチン抗体はヒト化することができる。一実施態様において、抗ペリオスチン抗体は、上記実施態様の何れかにおけるＨＶＲを含み、更に、アクセプターヒトフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークを含む。
【０１４２】
その他の態様において、抗ペリオスチン抗体は、配列番号１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある実施態様において、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ペリオスチン抗体はペリオスチンへ結合する能力を保持する。ある実施態様において、配列番号１において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。ある実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意で、抗ペリオスチン抗体は、配列番号１のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１４３】
その他の態様において、配列番号２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗ペリオスチン抗体が提供される。ある実施態様において、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ペリオスチン抗体はペリオスチンへ結合する能力を保持する。ある実施態様において、配列番号２において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。ある実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意で、抗ペリオスチン抗体は、配列番号２のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１４４】
その他の態様において、抗ペリオスチン抗体は、配列番号３のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある実施態様において、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ペリオスチン抗体はペリオスチンへ結合する能力を保持する。ある実施態様において、配列番号３において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。ある実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意で、抗ペリオスチン抗体は、配列番号３のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１４５】
その他の態様において、配列番号２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗ペリオスチン抗体が提供される。ある実施態様において、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ペリオスチン抗体はペリオスチンへ結合する能力を保持する。ある実施態様において、配列番号４において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。ある実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意で、抗ペリオスチン抗体は、配列番号４のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１４６】
その他の態様において、抗ペリオスチン抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様の何れかにあるＶＨ、及び上記に与えられた実施態様の何れかにあるＶＬを含む。
【０１４７】
更なる態様において、本発明は、本明細書に与えられた抗ペリオスチン抗体と同一エピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある実施態様において、配列番号１のＶＨ配列及び配列番号２のＶＬ配列を含む抗ペリオスチン抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。例えば、ある実施態様において、配列番号３のＶＨ配列及び配列番号４のＶＬ配列を含む抗ペリオスチン抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１４８】
本発明の更なる態様では、上記実施態様のいずれかに記載の抗ペリオスチン抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施態様において、抗ペリオスチン抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。その他の態様において、抗体は、全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１又はＩｇＧ４抗体、又は本明細書において定義された他の抗体クラス又はアイソタイプである。幾つかの実施態様において、抗体は、二重特異性抗体である。
【０１４９】
更なる態様にて、以下のセクション１−７で説明されるように、上記実施態様のいずれかに記載の抗ペリオスチン抗体は、単独または組み合わせで、任意の特徴を組み込むことができる：
【０１５０】
抗ＩＬ１３抗体
一態様において、本発明はヒトＩＬ−１３に結合する単離された抗体を提供する。
【０１５１】
一実施態様において、抗ＩＬ１３抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１５２】
別の実施態様において、抗体は、配列番号９及び配列番号１０の可変領域配列を含む。
【０１５３】
上記実施態様の何れかにおいて、抗ＩＬ−１３抗体はヒト化することができる。一実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体は、上記実施態様の何れかにおけるＨＶＲを含み、更に、アクセプターヒトフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークを含む。
【０１５４】
その他の態様において、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号９のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある実施態様において、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＩＬ−１３抗体はヒトＩＬ−１３へ結合する能力を保持する。ある実施態様において、配列番号９において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、変更、挿入及び／又は欠失している。ある実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意で、抗ＩＬ１３抗体は、配列番号９のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１５５】
その他の態様において、配列番号１０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗ペリオスチン抗体が提供される。ある実施態様において、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＩＬ−１３抗体はＩＬ−１３へ結合する能力を保持する。ある実施態様において、配列番号１０において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。ある実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意で、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号１０のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。
【０１５６】
更に別の実施態様において、抗ＩＬ−１３抗体は配列番号１０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％，又は１００％の配列同一性を有するＶＬ領域と配列番号９のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％，又は１００％の配列同一性を有するＶＨ領域を含む。更に更に別の実施態様において、抗ＩＬ１３抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１５７】
その他の態様において、抗ＩＬ−１３抗体が提供され、その抗体は、上記に与えられた実施態様の何れかにあるＶＨ、及び上記に与えられた実施態様の何れかにあるＶＬを含む。
【０１５８】
更なる態様において、本発明は、本明細書に与えられた抗ＩＬ−１３抗体と同一エピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある実施態様において、配列番号９のＶＨ配列及び配列番号１０のＶＬ配列を含む抗ＩＬ−１３抗体と同じエピトープに結合するか、又は該エピトープにより競合的に阻害されうる抗体が提供される。
【０１５９】
本発明の更なる態様では、上記実施態様のいずれかに記載の抗ＩＬ−１３抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体となり得る。一実施態様において、抗ＩＬ１３抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。その他の態様において、抗体は、全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１又はＩｇＧ４抗体、又は本明細書において定義された他の抗体クラス又はアイソタイプである。別の実施態様によれば、抗体は二重特異性抗体である。一実施態様において、二重特異性抗体は上述されるＨＶＲを含むか又はＶＨ及びＶＬ領域を含む。
【０１６０】
更なる態様にて、以下のセクション１−７で説明されるように、上記実施態様のいずれかに記載の抗ＩＬ−１３抗体は、単独または組み合わせで、任意の特徴を組み込むことができる：
【０１６１】
１．抗体親和性
ある実施態様において、本明細書において与えられる抗体は、解離定数（Ｋｄ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ未満、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）。
【０１６２】
一実施態様において、以下のアッセイにより説明されるように、Ｋｄは、目的の抗体のＦａｂ型とその抗原を用いて実施される放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）により測定される。非標識抗原の滴定系列の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原にてＦａｂを均衡化して、抗Ｆａｂ抗体コートプレートと結合した抗原を捕獲することにより、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性を測定する（例としてChen, et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999）を参照）。アッセイの条件を決めるために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を５μｇ／ｍｌの捕獲抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）を含む５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）にて一晩コートして、その後２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳにて室温（およそ２３℃）で２〜５時間、ブロックする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ ＃２６９６２０）に、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］抗原を段階希釈した所望のＦａｂと混合する（例えば、Presta等，(1997) Cancer Res. 57: 4593-4599の抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致する）。ついで目的のＦａｂを一晩インキュベートする；しかし、インキュベーションは平衡状態に達したことを確認するまでに長時間（例えばおよそ６５時間）かかるかもしれない。その後、混合物を捕獲プレートに移し、室温で（例えば１時間）インキュベートする。そして、溶液を取り除き、プレートを０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））を含むＰＢＳにて８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルの閃光物質（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０ ＴＭ；Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ ＴＭγ計測器（Ｐａｃｋａｒｄ）にて１０分間計測する。最大結合の２０％か又はそれ以下濃度のＦａｂを選択してそれぞれ競合結合測定に用いる。
【０１６３】
他の実施態様に従って、〜１０反応単位（ＲＵ）の固定した抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いる表面プラズモン共鳴アッセイを使用してＫｄを測定する。簡単に言うと、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５，ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、提供者の指示書に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシニミド（ＮＨＳ）で活性化した。抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（〜０．２μＭ）に希釈し、結合したタンパク質の反応単位（ＲＵ）がおよそ１０になるように５μｌ／分の流速で注入する。抗原の注入後、反応しない群をブロックするために１Ｍのエタノールアミンを注入する。動力学的な測定のために、Ｆａｂの２倍の段階希釈（０．７８ｎＭから５００ｎＭ）を、２５℃で、およそ２５μｌ／分の流速で０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０ＴＭ）界面活性剤（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳに注入する。会合センサーグラム及び解離センサーグラムを同時にフィットさせることによる単純一対一ラングミュア結合モデル（ｓｉｍｐｌｅ ｏｎｅ−ｔｏ−ｏｎｅ Ｌａｎｇｍｕｉｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｄｅｌ）（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン３．２）を用いて、会合速度（ｋｏｎ）と解離速度（ｋｏｆｆ）を算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出する。例えば、Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)を参照。上記の表面プラスモン共鳴アッセイによる結合速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を上回る場合、分光計、例えば、流動停止を備えた分光光度計（ｓｔｏｐ−ｆｌｏｗ ｅｑｕｉｐｐｅｄ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｍｅｔｅｒ）（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯＴＭ分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）で測定される、漸増濃度の抗原の存在下にて、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）、２５℃の、２０ｎＭの抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；放出＝３４０ｎｍ、帯域通過＝１６ｎｍ）における増加又は減少を測定する蛍光消光技術を用いて結合速度を測定することができる。
【０１６４】
２．抗体断片
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片は、限定されないが、Ｆａｂ，Ｆａｂ’，Ｆａｂ’−ＳＨ，Ｆ（ａｂ’）２，Ｆｖ，及びｓｃＦｖ断片、及び下記の他の断片を含む。所定の抗体断片の総説については、Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)を参照。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, 113巻, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), 頁269-315 (1994)を参照；また、国際公開第９３／１６１８５号；及び米国特許第５，５７１，８９４号及び第５，５８７，４５８号も参照。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつインビボ半減期を増加させたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の議論については、米国特許第５８６９０４６号を参照のこと。
【０１６５】
ダイアボディは２価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号；国際公開第１９９３／０１１６１号；Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003);及びHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)を参照。トリアボディ及びテトラボディもまた Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載されている。
【０１６６】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て又は一部、又は軽鎖可変ドメインの全て又は一部を含む抗体断片である。ある実施態様において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６ Ｂ１号を参照）。
【０１６７】
抗体断片は様々な技術で作成することができ、限定されないが、本明細書に記載するように、インタクトな抗体の分解、並びに組換え宿主細胞（例えば、大腸菌又はファージ）による生産を含む。
【０１６８】
３．キメラ及びヒト化抗体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体はキメラ抗体である。所定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))に記載されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサル等の非ヒト霊長類由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。更なる例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変更された「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【０１６９】
ある実施態様において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減するために、親の非ヒト抗体の特異性と親和性を保持したまま、ヒト化されている。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその一部）が、非ヒト抗体から由来し、ＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列に由来する、一以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、任意で、ヒト定常領域の少なくとも一部をも含む。幾つかの実施態様において、ヒト化抗体の幾つかのＦＲ残基は、抗体特異性又は親和性を回復もしくは改善するめに、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換されている。
【０１７０】
ヒト化抗体およびそれらの製造方法は、例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)に総説され、更に、 Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989）；米国特許第５，８２１，３３７号、７，５２７，７９１号、６，９８２，３２１号、及び７，０８７，４０９号；Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) （ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフティングを記述）；Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) （「リサーフェシング」を記述）； Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005)（「ＦＲシャッフリング」を記述）；及びOsbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 及びKlimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) （ＦＲのシャッフリングへの「誘導選択」アプローチを記述）に記載されている。
【０１７１】
ヒト化に用いられ得るヒトフレームワーク領域は、限定されないが、「ベストフィット」法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えば、Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993))；軽鎖または重鎖の可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域（例えば、Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；及びPresta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)を参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)を参照）；及びＦＲライブラリスクリーニング由来のフレームワーク領域（例えば、Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)及び Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)を参照）を含む。
【０１７２】
４．ヒト抗体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を用いて生産することができる。ヒト抗体は一般的にvan Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 及びLonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)に記載されている。
【０１７３】
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を持つ又はインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することにより調製することができる。このような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換するか、又は染色体外に存在するかもしくは動物の染色体にランダムに組み込まれている、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含む。このようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化される。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)を参照。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ技術を記載している、米国特許第６，０７５，１８１号及び６，１５０，５８４号；ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載している米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許第７，０４１，８７０号及び、ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号）を参照。このような動物で生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、更に改変される可能性がある。
【０１７４】
ヒト抗体は、ハイブリドーマベース法によって作成することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ細胞株が記載されている。（例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987);及びBoerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991）を参照）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体はまた、Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)に記載されている。更なる方法は、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している）及びNi, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006) （ヒト−ヒトハイブリドーマを記載している）に記載されたものを含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）もまた、Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 及びVollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)に記載される。
【０１７５】
ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成され得る。このような可変ドメイン配列は、次に所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術が、以下に説明される。
【０１７６】
５．ライブラリー由来の抗体
本発明の抗体は、所望の活性または活性（複数）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離することができる。例えば、様々な方法が、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてのライブラリーをスクリーニングするために、当該技術分野で知られている。そのような方法は、例えば、Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)に総説され、更に、例えば、McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 及びLee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)に概説されている。
【０１７７】
所定のファージディスプレイ法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーがポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により個別にクローニングされ、ファージライブラリーにランダムに再結合され、その後、Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、通常、抗体断片を、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、またはＦａｂ断片のいずれかとして提示する。免疫された起源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要性なしで免疫原に高親和性抗体を提供する。代わりに、Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)に記載されるように、ナイーブなレパートリーが、任意の免疫感作無しで、広範囲の非自己抗原及び自己抗原に対して、抗体の単一起源を提供するために、（例えば、ヒトから）クローン化することができる。最後に、ナイーブなライブラリはまた、Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)に記載されるように、非常に可変なＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再構成を達成するために、幹細胞由来の未転位Ｖ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用することにより合成することができる。ヒト抗体ファージライブラリーを記述する特許公報は、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、及び米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、２００５／０１１９４５５号、２００５／０２６６０００号、２００７／０１１７１２６号、２００７／０１６０５９８号、２００７／０２３７７６４号、２００７／０２９２９３６号及び２００９／０００２３６０を含む。
【０１７８】
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体または抗体断片は、本明細書でヒト抗体またはヒト抗体の断片とみなされる。
【０１７９】
６．多重特異性抗体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも二つの異なる部位に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある実施態様において、結合特異性の一つはＩＬ−１３に対してであり、他は、任意の他の抗原に対してである。ある実施態様において、二重特異性抗体は、ＩＬ−１３の２つの異なるエピトープに結合することができる。二重特異性抗体はまた細胞に対して細胞傷害性薬物を局在化させるために用いることができる。二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
【０１８０】
多重特異性抗体を作製するための技術は、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現（Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)）、国際公開第９３／０８８２９号、及びTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)を参照）及び「ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ」エンジニアリング（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照）を含む。多重特異抗体はまた、抗体のＦｃ−ヘテロ２量体分子を作成するための静電ステアリング効果を操作すること（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）、２つ以上の抗体又は断片を架橋すること（例えば米国特許第４，６７６，９８０号、及びBrennan et al., Science, 229: 81 (1985)を参照）、２重特異性抗体を生成するためにロイシンジッパーを使用すること（例えば、Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)を参照）、二重特異性抗体フラグメントを作製するため、「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)を参照）、単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを使用すること（例えば、Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)を参照）、及び、例えばTutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)に記載されているように、三重特異性抗体を調製することによって作成することができる。
「オクトパス抗体」を含む、３つ以上の機能性抗原結合部位を持つ改変抗体もまた本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６Ａ１号を参照）。
本明細書中の抗体又は断片はまた、ＩＬ−１３並びにその他の異なる抗原（例えば米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号参照）に結合する抗原結合部位を含む、「２重作用（Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」を含む。
【０１８１】
７．抗体変異体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望まれ得る。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することにより、またはペプチド合成によって調製することができる。このような改変は、例えば、抗体のアミノ酸配列内における、残基の欠失、及び／又は挿入及び／又は置換を含む。最終コンストラクトが所望の特性、例えば、抗原結合を有していることを条件として、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが、最終コンストラクトに到達させるために作成され得る。
【０１８２】
置換、挿入、および欠失変異体
ある実施態様において、一つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換突然変異の対象となる部位は、ＨＶＲとＦＲを含む。保存的置換は、表１の「保存的置換」の見出しの下に示されている。より実質的な変更が、表１の「典型的な置換」の見出しの下に与えられ、アミノ酸側鎖のクラスを参照して以下に更に説明される。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入することができ、その産物は、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の減少、又はＡＤＣＣ又はＣＤＣの改善についてスクリーニングされた。
0006005657.tif 000002
【０１８３】
アミノ酸は共通の側鎖特性に基づいてグループに分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン，Ｍｅｔ，Ａｌａ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ，Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ，Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ．
【０１８４】
非保存的置換は、これらの分類の一つのメンバーを他の分類に交換することを必要とするであろう。
【０１８５】
置換変異体の一つのタイプは、親抗体（例えば、ヒト化又はヒト抗体など）の一以上の高頻度可変領域残基の置換を含む。一般的には、更なる研究のために選択され得られた変異体は、親抗体と比較して、特定の生物学的特性の改変（例えば、改善）（例えば、親和性の増加、免疫原性を減少）を有し、及び／又は親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持しているであろう。典型的な置換変異体は、親和性成熟抗体であり、例えば、本明細書に記載されるファージディスプレイベースの親和性成熟技術を用いて、簡便に生成され得る。簡潔に言えば、一つ以上のＨＶＲ残基が変異し、変異体抗体は、ファージ上に表示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０１８６】
変更（例えば、置換）は、例えば抗体の親和性を向上させるために、ＨＶＲで行うことができる。このような変更は、ＨＶＲの「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程中に高頻度で変異を受けるコドンにコードされた残基で（例えばChowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008）を参照）、及び／又はＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）で行うことができ、得られた変異体ＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリから構築し選択し直すことによる親和性成熟が、例えばHoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)に記載されている。親和性成熟の幾つかの実施態様において、多様性が、種々の方法（例えば、変異性ＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指定突然変異誘発）のいずれかにより、成熟のために選択された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリーが作成される。次いで、ライブラリーは、所望の親和性を持つ抗体変異体を同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するするもう一つの方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４から６残基）がランダム化されたＨＶＲ指向のアプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えばアラニンスキャニング突然変異誘発、またはモデリングを用いて、特異的に同定され得る。ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３がしばしば標的にされる。
【０１８７】
所定の実施態様において、置換、挿入、または欠失は、そのような改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限りにおいて、一以上のＨＶＲ内で発生する可能性がある。例えば、実質的に結合親和性を低下させない保存的改変（例えば本明細書で与えられる保存的置換）をＨＶＲ内で行うことができる。このような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」又はＳＤＲの外側であってもよい。上記に与えられた変異体ＶＨ又はＶＬ配列の所定の実施態様において、各ＨＶＲは不変であるか、又はわずか１個、２個または３個のアミノ酸置換が含まれているかの何れかである。
【０１８８】
突然変異誘発のために標的とすることができる抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085により説明されるように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基またはグループ（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕなどの荷電残基）が同定され、抗原と抗体との相互作用が影響を受けるかどうかを判断するために、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）に置換される。更なる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入され得る。代わりに、又は更に、抗原抗体複合体の結晶構造が、抗体と抗原との接触点を同定する。そのような接触残基及び隣接残基が、置換の候補として標的とされるか又は排除され得る。変異体はそれらが所望の特性を含むかどうかを決定するためにスクリーニングされ得る。
【０１８９】
アミノ酸配列挿入は、一残基から百以上の残基を含有するポリペプチド長にわたるアミノ及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニン残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異体は、酵素に対する抗体のＮ末端またはＣ末端への融合（例えばＡＤＥＰＴの場合）、または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの融合を含む。
【０１９０】
グリコシル化変異体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は抗体がグリコシル化される程度を増加または減少するように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、一以上のグリコシル化部位が作成または削除されるようにアミノ酸配列を変えることによって簡便に達成することができる。
【０１９１】
抗体がＦｃ領域を含む場合には、それに付着する糖を変えることができる。哺乳動物細胞によって生成された天然型抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ−結合により一般的に付着した分岐鎖、二分岐オリゴ糖を含んでいる。例えばWright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、二分岐糖鎖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合した、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、シアル酸、並びにフコースを含み得る。幾つかの実施態様において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の改変は一定の改善された特性を有する抗体変異型を作成するために行われ得る。
【０１９２】
一実施態様において、抗体変異体は、Ｆｃ領域に（直接または間接的に）付着されたフコースを欠いた糖鎖構造を有して提供される。例えば、このような抗体のフコース量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％、または２０％から４０％であり得る。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されるＡｓｎ２９７に付着しているすべての糖構造の合計（例えば、コンプレックス、ハイブリッド及び高マンノース構造）に対して、Ａｓｎ２９７の糖鎖中のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）でおよそ２９７の位置に位置するアスパラギン残基を指し、しかし、Ａｓｎ２９７もまた位置２９７の上流または下流のおよそ±３アミノ酸に、すなわち抗体の軽微な配列変異に起因して、位置２９４と３００の間に配置され得る。このようなフコシル化変異体はＡＤＣＣ機能を改善させた可能性がある。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）を参照。「フコース非修飾」又は「フコース欠損」抗体変異体に関連する出版物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、国際公開第２０００／６１７３９号、国際公開第２００１／２９２４６号、米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号、米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号、米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号、米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号、米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号、米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号、国際公開第２００３／０８５１１９号、国際公開第２００３／０８４５７０号、国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第２００５／０３５７７８号、国際公開第２００５／０５３７４２号、国際公開第２００２／０３１１４０号、Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が含まれる。非フコシル化抗体を産生する能力を有する細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞(Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８ Ａ１号，Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及び国際公開第２００４／０５６３１２ Ａ１号，Ａｄａｍｓら、特に実施例１１）、及びノックアウト細胞株、アルファ−１、６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照）を含む。
【０１９３】
抗体変異体が、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている二分オリゴ糖とともに更に与えられる。このような抗体変異体はフコシル化を減少させ、及び／又はＡＤＣＣ機能を改善している可能性がある。そのような抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔｔら）；米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）；及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも１つのガラクトース残基を持つ抗体変異体も提供される。このような抗体変異体はＣＤＣ機能を改善させた可能性がある。このような抗体変異体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）；国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０１９４】
Ｆｃ領域変異体
ある実施態様において、１つまたは複数のアミノ酸改変を、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に導入することができ、それによってＦｃ領域変異体を生成する。Ｆｃ領域の変異体は、１つまたは複数のアミノ酸位置においてアミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域の配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含んでもよい。
【０１９５】
ある実施態様において、本発明は、インビボにおける抗体の半減期が重要であるが、ある種のエフェクター機能（例えば補体およびＡＤＣＣなど）が不要または有害である用途のための望ましい候補とならしめる、全てではないが一部のエフェクター機能を有する抗体変異体を意図している。インビトロ及び／又はインビボでの細胞毒性アッセイを、ＣＤＣ活性及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認するために行うことができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合を欠くが（それゆえ、おそらくＡＤＣＣ活性を欠く）、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確認するために行うことができる。ＡＤＣＣ、ＮＫ細胞を媒介する初代細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の４６４ページの表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照）及びHellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); 5,821,337 (Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987）を参照）に説明される。あるいは、非放射性アッセイ法を用いることができる（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ；及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、またはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656 (1998)に開示されるように、インビボで、例えば動物モデルにおいて評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイはまた、抗体が体Ｃ１ｑを結合することができないこと、したがって、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために行うことができる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003)；及びCragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照）。ＦｃＲｎ結合、及びインビボでのクリアランス／半減期の測定ではまた、当該分野で公知の方法を用いて行うことができる（例えば、Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照）。
【０１９６】
エフェクター機能が減少した抗体は、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、３２９の一つ以上の置換を有するものが含まれる（米国特許第６７３７０５６号）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７の２以上での置換を有するＦｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【０１９７】
ＦｃＲへの改善又は減少させた結合を持つ特定の抗体変異体が記載されている。（例（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、及びShields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照）。
【０１９８】
所定の実施態様において、抗体変異体はＡＤＣＣを改善する１つまたは複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、及び／又は３３４における置換（ＥＵの残基番号付け）を含む。
【０１９９】
幾つかの実施態様において、改変された（すなわち改善されたか減少した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を生じる、Ｆｃ領域における改変がなされ、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びIdusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)に説明される。
【０２００】
増加した半減期を持ち、胎仔への母性ＩｇＧの移送を担う、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体 (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 及びKim et al., J. Immunol. 24:249 (1994))が、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４Ａ１号（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する一つまたは複数の置換を有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃ変異体は、Ｆｃ領域の残基の１以上の置換を有するものが含まれる：２３８，２５６，２６５，２７２，２８６，３０３，３０５，３０７，３１１，３１２，３１７，３４０，３５６，３６０，３６２，３７６，３７８，３８０，３８２，４１３，４２４又は４３４、例えば、Ｆｃ領域の残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）。
【０２０１】
Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；及び、Ｆｃ領域の変異体の他の例に関しては国際公開第９４／２９３５１号も参照のこと。
【０２０２】
システイン改変抗体変異体
ある実施態様において、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン改変抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂｓ」を作成することが望まれ得る。特定の実施態様において、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位で起きる。それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は、それによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書中でさらに記載されるように、イムノコンジュゲーを作成するために、例えば薬物部分またはリンカー−薬剤部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートするために使用することができる。ある実施態様において、一以上の以下の残基がシステインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔの番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン改変抗体は、例えば、米国特許第７５２１５４１号に記載のように生成され得る。
【０２０３】
抗体誘導体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は、当技術分野で知られ、容易に入手されている追加の非タンパク質部分を含むように更に改変することができる。抗体の誘導体化に適した部分としては、限定されないが、水溶性ポリマーを含む。水溶性ポリマーの非限定的な例は、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキソラン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリアミノ酸（単独重合体又はランダム共重合体の何れか）及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコール単独重合体、プロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール及びこれらの混合物を包含する。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドはその水中での安定性のために製造上の利点を有し得る。ポリマーは何れかの分子量のものであってよく、そして分枝鎖又は未分枝鎖であってよい。抗体に結合するポリマーの数は変動してよく、そして、１つより多い重合体が結合する場合は、それらは同じか又は異なる分子であることができる。一般的に、誘導体化に使用するポリマーの数及び／又は種類は、限定されないが、向上させるべき抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が特定の条件下で治療に使用されるのか等を考慮しながら決定することができる。
【０２０４】
その他の実施態様において、放射線への曝露によって選択的に加熱されてもよい抗体と非タンパク質部分とのコンジュゲートが、提供される。一実施態様において、非タンパク質部分はカーボンナノチューブである（Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)）。放射線は、任意の波長であって良いが、限定されないものの、通常の細胞に害を与えないが、抗体−非タンパク質部分の近位細胞が死滅される温度に非タンパク質部分を加熱する波長が含まれる。
【０２０５】
組換え方法及び組成物
抗体は、例えば米国特許第４，８１６，５６７号で説明したように、組換えの方法および組成物を用いて製造することができる。一実施態様において、本明細書に記載される抗ペリオスチン抗体をコードする単離された核酸が提供される。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードし得る。更なる実施態様において、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施態様において、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。一実施態様において、宿主細胞は以下を含む（例えば、以下で形質転換される）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第一ベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第ニベクター。一実施態様において、宿主細胞は、真核生物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施態様において、抗ペリオスチン抗体を作る方法が提供され、その方法は、上記のように、抗体の発現に適した条件下で、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することを含み、および必要に応じて、宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から抗体を回収することを含む。
【０２０６】
抗ペリオスチン抗体の組換え生産のために、例えば上述したように、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニングおよび／または発現のために１つ以上のベクターに挿入される。このような核酸は、容易に単離され、従来の手順を用いて（例えば、抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定することができる。
【０２０７】
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現に適切な宿主細胞は、本明細書に記載の原核細胞又は真核細胞を含む。例えば、特に、グリコシル化およびＦｃエフェクター機能が必要ない場合には、抗体は、細菌で産生することができる。細菌における抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、第５，７８９，１９９号及び第５，８４０，５２３号を参照。（また、大腸菌における抗体の発現を説明している、Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), 頁245-254も参照。）発現の後、抗体は可溶性画分において細菌の細胞ペーストから単離され得、更に精製することができる。
【０２０８】
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母菌のような真核微生物は、菌類や酵母菌株を含む抗体をコードするベクターのための、適切なクローニング宿主又は発現宿主であり、そのグリコシル化経路が、「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の生成をもたらす。Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004)、及びLi et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)を参照。
【０２０９】
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物と脊椎動物）から派生している。無脊椎動物細胞の例としては、植物および昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス株が同定され、これらは特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と組み合わせて使用することができる。
【０２１０】
植物細胞培養を宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８号、第６４２０５４８号、第７１２５９７８号及び第６４１７４２９号（トランスジェニック植物における抗体産生に関するＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＴＭ技術を記載）を参照。
【０２１１】
脊椎動物細胞もまた宿主として用いることができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合されている哺乳動物細胞株は有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株（Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)に記載された２９３細胞又は２９３細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスのセルトリ細胞(Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されるＴＭ４細胞）、サル腎細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頚癌細胞（ＨｅＬａ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、例えばMather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)に記載されるＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、およびＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)）を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、及びＹ０、ＮＳ０およびＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株を含む。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞系の総説については、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), 頁255-268 (2003)を参照。
【０２１２】
アッセイ
本明細書で提供される抗ペリオスチン抗体は、同定され、当技術分野で公知の様々なアッセイによってその物理的／化学的性質及び／又は生物学的活性についてスクリーニングされ、または特徴づけることができる。
【０２１３】
結合アッセイとその他のアッセイ
一態様において、本発明の抗体は、例えばＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット法など公知の方法により、その抗原結合活性について試験される。
【０２１４】
その他の態様において、ＩＬ１３又はペリオスチンそれぞれへの結合について、ＩＬ−１３又はペリオスチンと競合する抗体を同定するために競合アッセイを用いることができる。ある実施態様において、このような競合する抗体は、レブリキズマブ又は本明細書に特定される別の抗ＩＬ１３抗体又は本明細書に特定される抗ペリオスチン抗体によって結合される同一のエピトープ（例えば、直鎖状又は立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な典型的な方法が、Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols," in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)に提供されている。
【０２１５】
典型的な競合アッセイにおいて、固定化ペリオスチンは、ペリオスチンに結合する第一の標識された抗体（例えば２５Ｄ４）、及びペリオスチンへ結合について第一の抗体と競合する能力について試験された未標識の第二の抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第二抗体はハイブリドーマ上清中に存在してもよい。コントロールとして、固定化ペリオスチンが、第二の未標識の抗体でなく、第一の標識された抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第一の抗体のペリオスチンへの結合を許容する条件下でインキュベートした後、過剰の未結合の抗体が除去され、固定化されたペリオスチンに結合した標識の量が測定される。もし、固定化ペリオスチンに結合した標識の量が、コントロールサンプルと比較して試験サンプル中で実質的に減少している場合、それは、第二抗体が、ペリオスチンへの結合に対して、第一の抗体と競合していることを示している。Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)を参照。
【０２１６】
活性のアッセイ
一態様において、アッセイは、生物学的活性を有するそれらの抗ＩＬ−１３抗体を同定するために与えられる。生物学的活性は、例えば、喘息の活動を含むことができる。インビボ及び／又はインビトロでこのような生物学的活性を有する抗体もまた提供される。
所定の実施態様において、本発明の抗体は、そのような生物学的活性について試験される。
【０２１７】
イムノコンジュゲート
本発明はまた、化学療法剤又は薬物、成長抑制剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、または動物起源の酵素活性毒素、又はそれらの断片）、又は放射性同位元素など、１つ以上の細胞傷害性薬物にコンジュゲートした本明細書中の抗ペリオスチン抗体を含むイムノコンジュゲートを提供する。
【０２１８】
一実施態様において、イムノコンジュゲートは、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、そこでは抗体は、限定されないが、メイタンシノイド（米国特許第５２０８０２０号、第５４１６０６４号及び欧州特許ＥＰ０ ４２５２３５ Ｂ１を参照）；モノメチルアウリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）（米国特許第５６３５４８３号及び５７８０５８８号及び７４９８２９８号を参照）などのアウリスタチン；ドラスタチン、カリケアマイシン又はその誘導体（米国特許第５７１２３７４号、５７１４５８６号、５７３９１１６号、５７６７２８５号、５７７０７０１号、５７７０７１０号、５７７３００１号、及び５８７７２９６号を参照；Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993)；及びLode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998))；ダウノマイシン又はドキソルビシンなどのアントラサイクリン(Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002)；及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照）；メトトレキサート、ビンデシン、ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセルなどのタキサン、トリコテセン、及びＣＣ１０６５を含む一つ以上の薬物とコンジュゲートしている。
【０２１９】
その他の実施態様において、イムノコンジュゲートは、酵素的に活性な毒素又はその断片にコンジュゲートした、本明細書に記載の抗体を含み、限定されないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、（緑膿菌からの）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、アルファ−サルシン、アレウリテス・フォーディ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、モモルディカ・チャランチア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）インヒビター、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｉｃｉｎａｌｉｓ）インヒビター、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）及びトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）が含まれる。
【０２２０】
その他の実施態様では、イムノコンジュゲートは、放射性コンジュゲートを形成するために放射性原子にコンジュゲートした本明細書に記載されるような抗体を含む。様々な放射性同位体が放射性コンジュゲートの生産のために入手可能である。例としては、ＡＴ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２およびＬｕの放射性同位体が含まれる。検出のためにコンジュゲートを使用するとき、それはシンチグラフィー試験のための放射性原子、例えばｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像化（磁気共鳴画像化ｍｒｉとしても知られている）のためのスピン標識、例えば再び、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含んでよい。
【０２２１】
抗体と細胞傷害性薬物のコンジュゲートは、様々な二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの２官能性誘導体（例えばジメチルアジピミデートＨＣｌ）、活性エステル（例えばジスクシンイミジルズベレート）、アルデヒド（例えばグルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えばビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビスジアゾニウム誘導体（例えばビス（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えばトルエン２，６−ジイソシアネート）及びビス活性フッ素化合物（例えば１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）など、を使って作成され得る。Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)に記載されるように、例えば、リシンイムノトキシンを調製することができる。カーボン−１４−標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体へのコンジュゲーションのためのキレート剤の例である国際公開第９４／１１０２６号を参照。リンカーは、細胞中に細胞毒性薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であり得る。例えば、酸に不安定なリンカー、ペプチダーゼ過敏性リンカー、光解離性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー(Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992)；米国特許第５，２０８，０２０号）が使用され得る。
【０２２２】
本明細書において、イムノコンジュゲート又はＡＤＣは、限定されないが、市販の（例えばＰｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａからの）、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＰＢ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ＳＶＳＢ（スクシンイミジル（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）を含むクロスリンカー試薬を用いて調製されるコンジュゲートを特に熟考する。
【０２２３】
診断及び検出のための方法および組成物
ある実施態様において、本明細書で提供される抗ペリオスチン抗体の何れかは、生物学的サンプル中のペリオスチンの存在を検出するのに有用である。本明細書で使用する「検出」という用語は、定量的または定性的検出を包含する。所定の実施態様において、生物学的サンプルは、血清、血漿、鼻腔スワブ及び痰などの細胞または組織を含む。
【０２２４】
一実施態様において、診断又は検出の方法に使用される抗ペリオスチン抗体が提供される。更なる態様において、生物学的サンプル中のペリオスチンの存在を検出する方法が提供される。ある実施態様において、本方法は、抗ペリオスチン抗体のペリオスチンへの結合を許容する条件下で、本明細書に記載のように抗ペリオスチン抗体と生物学的サンプルを接触させること、及び複合体が抗ペリオスチン抗体とペリオスチンとの間に形成されているかどうかを検出することを含む。そのような方法は、インビトロ又はインビボでの方法であり得る。一実施態様において、例えばペリオスチンが患者の選択のためのバイオマーカーであるなど、抗ペリオスチン抗体が、抗Ｉ３抗体又は他のＴＨ２経路阻害剤による治療に好適な被検体を選択するために使用される。
【０２２５】
本発明の抗体を用いて診断することができる典型的な疾患が本明細書に提供される。
ある実施態様において、標識された抗ペリオスチン抗体が提供される。標識は、限定されるものではないが、（例えば、蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、放射性標識など）直接検出される標識又は部分、並びに、例えば、酵素反応又は分子間相互作用を介して間接的に検出される酵素又はリガンドのような部分が含まれる。典型的な標識の例には、限定されないが、ラジオアイソトープ３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、フルオロフォア、例えば希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシェフェラーゼ、例えばホタルルシェフェラーゼ及び細菌ルシェフェラーゼ（米国特許第４７３７４５６号）、ルシェフェリン、２，３−ジヒドロフタルジネジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘテロサイクリックオキシダーゼ、例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ、色素前駆体、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はマイクロペルオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピンラベル、バクテリオファージラベル、安定な遊離ラジカルなどを酸化する過酸化水素を利用する酵素とカップリングさせたものなどが含まれる。
【０２２６】
薬学的製剤
本明細書に記載の抗ＩＬ−１３抗体又は他のＴＨ２経路阻害剤の薬学的製剤は、所望の程度の純度を有するその抗体又は分子と任意の薬学的に許容される担体(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed.: Williams and Wilkins PA, USA (1980))とを、凍結乾燥製剤または水性溶液の形態で混合することによって調製される。薬学的に許容される担体は、使用される投薬量および濃度でレシピエントに毒性でなく、そしてこれには、限定しないが、リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸のような緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジン；マンノサッカライド、ジサッカライド、およびグルコース、マンノースまたはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。本明細書における典型的な薬学的に許容される担体は、介在性薬物分散剤、例えば、水溶性の中性アクティブヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質を更に含む。所定の典型的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用法は、ｒＨｕＰＨ２０を含み、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び第２００６／０１０４９６８に開示されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つまたは複数の追加のグルコサミノグリカンと組み合わされる。
【０２２７】
典型的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性の抗体製剤は、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されているものが含まれ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。
【０２２８】
本明細書の製剤はまた、治療を受けている特定の徴候のために必要な一以上の活性成分、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を持つものが含まれる場合がある。例えば、ＴＨ２経路阻害剤とともにコントローラーを更に提供することが望まれ得る。このような活性成分は、意図した目的のために有効な量で組み合わされ適切に存在する。
【０２２９】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合法によって、例えばヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセルのそれぞれによって、コロイド薬物送達系（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフィア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロ・エマルジョンなどの調製されたマイクロカプセルに封入されてもよい。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示される。
【０２３０】
徐放性製剤が調製されてもよい。徐放性製剤の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、そのマトリックスが成形品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形をしている。
【０２３１】
インビボ投与に使用される製剤は、一般的に無菌である。無菌性は、例えば、滅菌濾過膜を通して濾過することにより、達成することができる。
【０２３２】
治療的方法及び組成物
好酸球性炎症は、アレルギー性および非アレルギー性の両方の様々な疾患に関連している(Gonlugur (2006) Immunol. Invest. 35(1):29-45）。炎症は怪我に対する生体組織の回復性応答である。炎症反応の特徴は、組織それ自体に産生される特定の化学物質に起因する損傷組織における白血球の蓄積である。好酸球白血球は、例えばアレルギー性疾患、蠕虫感染症および腫瘍性疾患など広範で多様に蓄積する(Kudlacz et al., (2002) Inflammation 26: 111-119)。好酸球、白血球、免疫系のコンポーネントは、粘膜表面の防御的な要素である。それらは、抗原だけでなく寄生虫、化学物質及び外傷にも応答する。
組織好酸球増加症は、湿疹、天疱瘡、急性蕁麻疹、及び中毒性表皮壊死並びにアトピー性皮膚炎などの皮膚疾患で生じる（［Rzany et al., 1996］）。好酸球はＩｇＥ介在アレルギー性皮膚反応における組織及び空の顆粒タンパク質に蓄積する（［Nielsen et al., 2001］）。肥満細胞と結合した好酸球が関節の炎症を引き起こす可能性がある（Miossec et al., 1997）。好酸球性炎症は時には関節外傷を伴う。滑膜液好酸球増加症は、関節リウマチ、寄生虫症、好酸球増加症候群、ライム病、アレルギー性のプロセス並びに関節血症などの疾患及び関節造影と関連付けることができる（［Atanes et al., 1996］）。好酸球性炎症は骨にも影響を与えることができる（［Yetiser et al., 2002］）。好酸球性筋疾患の例としては、好酸球性化膿性筋炎、好酸球性多発性筋炎、及び局所的好酸球性筋炎を含む（［Lakhanpal et al., 1988］）。骨格筋に影響を与える好酸球性炎症は、寄生虫感染症又は薬物又は過好酸球増加症の幾つかの全身疾患の特徴（例えば、特発性好酸球増多症候群及び好酸球増多筋痛症候群）と関連付けることができる。好酸球は自己免疫抗体によって認識されるエピトープに対する炎症応答に関与する（［Engineer et al., 2001］）結合組織の疾患は好中球性、好酸球性又はリンパ球性の血管の炎症へと導く可能性がある（［Chen et al., 1996］）。組織及び末梢血の好酸球増加症は、活動的なリウマチ性疾患で発生する可能性がある。結合組織病の一種である強直性脊椎炎における血清ＥＣＰレベルの上昇は、好酸球はまた根底に関与しているプロセスにも関与していることを示唆している（Feltelius et al., 1987）。ウェゲナー肉芽腫症は肺結節、胸水、末梢血好酸球増加症を滅多に呈することができない（［Krupsky et al., 1993］）。
【０２３３】
少なくとも４００／ｍｍ３の末梢血好酸球増加症は、全身性硬化症の症例の７％、限局性強皮症の症例の３１％、及び好酸球性筋膜炎の症例の６１％で生じる可能性がある（［Falanga and Medsger, 1987］）。強皮症は、マイスナーとアウエルバッハ神経叢に密接に似た炎症過程を生じ、胃腸系における好酸球白血球及び肥満細胞からなる。好酸球由来神経毒は、強皮症で起きるように胃腸運動機能障害の一因となり得る（［de Schryver Kecskemeti and Clouse, 1989］）。
【０２３４】
好酸球は、局所的（［Varga and Kahari, 1997］）または全身性で（［Bouros et al., 2002］）結合組織の増殖を伴い得る。それらは線維芽細胞におけるプロテオグリカン分解を阻害することにより、繊維化を誘発することができ（［Hernnas et al., 1992］）、そして線維芽細胞は、分泌するＧＭ−ＣＳＦにより好酸球の生存を媒介する（［Vancheri et al., 1989］）。好酸球は、鼻（［Bacherct et al., 2001］）、気管支（［Arguelles and Blanco, 1983］）、消化管ポリープの組織（［Assarian and Sundareson, 1985］）に見いだすことができる。同様に、好酸球は、炎症性偽腫瘍（筋線維芽細胞腫瘍）に局在することができる。好酸球は、多くの場合、眼窩部での炎症性偽腫瘍を伴い、その場合症状は血管性浮腫又はアレルギー性結膜炎を模倣する場合がある（［Li et al., 1992］）。
【０２３５】
好酸球性炎症は組織外傷で見出すことができる（例えば、手術又は怪我の結果）。好酸球性炎症はまた、心血管系疾患（例えば、好酸球性心筋炎、好酸球性冠状動脈炎、虚血性心疾患、急性心筋梗塞、心臓破裂）に関連付けることができる。壊死性炎症過程はまた、好酸球性炎症（多発性筋炎、冠状動脈解離、神経ベーチェット病の壊死性病変、認知症、脳梗塞）をも包含する。
【０２３６】
本明細書に与えられるのは、患者の総ペリオスチンレベルを測定することにより、ＴＨ２経路阻害剤による治療に対する応答が予想される（又は応答性であろう）好酸球性炎症（ＥＩＰ）患者を同定する方法である。
【０２３７】
また本明細書に与えられるのは、好酸球性炎症陽性患者へＴＨ２経路阻害剤を投与することを含む、喘息、好酸球性障害、ＩＬ−１３媒介障害、ＩＬ４媒介障害、ＩＬ９媒介障害、ＩＬ５媒介障害、ＩＬ３３媒介障害、ＩＬ２５媒介障害、ＴＳＬＰ媒介障害、ＩｇＥ媒介障害または喘息様症状を治療する方法であって、その患者は、患者の総血清ペリオスチンのレベルを測定することによってＥＩＰあると診断されている。
【０２３８】
ある実施態様において、レブリキズマブを好酸球性炎症陽性患者に投与することを含む、喘息、好酸球性障害、ＩＬ−１３媒介障害、ＩＬ４媒介障害、又はＩｇＥ媒介障害を治療する方法が与えられる。
【０２３９】
ある実施態様において、レブリキズマブの１２５〜５００ｍｇの均一用量を、疾患に罹患している患者に対して４週間毎に投与することを含む、喘息、好酸球性障害、ＩＬ−１３媒介障害、ＩＬ４媒介障害、又はＩｇＥ媒介障害を治療する方法が与えられる。
【０２４０】
また与えられるのは、喘息患者にレブリキズマブの治療的有効量を投与することを含む喘息（又は呼吸器疾患）を治療する方法が与えられ、その治療が５％を超えるＦＥＶ１の相対的変化をもたらす。別の実施態様において、ＦＥＶ１は６％、７％、８％、９％、又は１０％ＦＥＶ１より大きい。別の実施態様において、患者は総ペリオスチンアッセイを使用してＥＩＰとして診断されている。別の実施態様において、喘息患者は総血清ペリオスチンアッセイにより診断されている。
【０２４１】
ある実施態様において、喘息患者にレブリキズマブの治療的有効量を投与することを含む喘息（又は呼吸器疾患）を治療する方法であって、その治療が３５％を超える（他の実施態様においては３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％を超え、最大８５％；別の実施態様においては患者はＥＩＰと診断されている）増悪率の減少をもたらす方法が与えられる。
【０２４２】
ある実施態様において、喘息患者にレブリキズマブの治療的有効量を投与することを含む喘息（又は呼吸器疾患）を治療する方法が与えられ、その治療が夜間覚醒の減少をもたらす。一実施態様において、患者は患者における総血清ペリオスチンレベルを測定することにより診断される。別の実施態様において、患者の喘息はコルチコステロイドで制御されない。別の実施態様において、患者はＥＩＰと診断される。
【０２４３】
また与えられるのは、喘息患者にレブリキズマブの治療的有効量を投与することを含む喘息（又は呼吸器疾患）を治療する方法が与えられ、その治療が喘息コントロールに改善をもたらす。一実施態様において、患者は患者における総血清ペリオスチンレベルを測定することにより診断される。別の実施態様において、喘息はコルチコステロイド治療で制御されない。別の実施態様において、患者はＥＩＰと診断される。
【０２４４】
喘息患者にレブリキズマブの治療的有効量を投与することを含む喘息（又は呼吸器疾患）を治療する方法が与えられ、その治療が肺の炎症の減少をもたらす。一実施態様において、患者は患者における総血清ペリオスチンレベルを測定することにより診断される。別の実施態様において、喘息はコルチコステロイド治療で制御することができない。別の実施態様において、患者はＥＩＰと診断される。
【０２４５】
ある実施態様において、喘息患者にレブリキズマブの治療的有効量を投与することを含む、好酸球性障害に罹患しコルチコステロイドで治療されている患者の好酸球性障害を治療する方法であって、治療が疾患を治療するために用いらるコルチコステロイド治療の（量又は頻度）の減少又は消失をもたらす方法が与えられる。一実施態様において、患者は患者における総血清ペリオスチンレベルを測定することにより診断される。別の実施態様において、喘息の喘息はコルチコステロイドで制御することができない。別の実施態様において、患者は治療の前にＥＩＰと診断される。
【０２４６】
また与えられるのは、総ペリオスチンアッセイを使用して患者をＥＩＰとして診断すること、喘息患者にＴＨ２経路阻害剤の治療的有効量を投与し、患者のＥＩＰ状態を診断し、及びもし患者がＥＩＰである場合、患者をＴＨ２経路阻害剤で再治療することを含む、喘息（又は呼吸器疾患）に罹患した患者の治療の方法である。単独又はＦＥＮＯレベルとの併用、及び任意でＣＳＴ１，ＣＳＴ２，ＣＣＬ２６，ＣＬＣＡ１，ＰＲＲ４，ＰＲＢ４，ＳＥＲＰＩＮＢ２，ＣＥＡＣＡＭ５，ｉＮＯＳ，ＳＥＲＰＩＮＢ４，ＣＳＴ４，及びＳＥＲＰＩＮＢ１０から選択される別のバイオマーカーと併用した総ペリオスチンアッセイを使用して診断が成される。更に別の実施態様において、治療されるべき患者は、本発明に記載されるようにペリオスチンのレベルが上昇していることに加え、２１ｐｐｂを超えるＦＥＮＯのレベルを有する。更に別の実施態様において、治療されるべき患者は、本発明に記載されるようにペリオスチンのレベルが上昇していることに加え、３５ｐｐｂを超えるＦＥＮＯのレベルを有する。
【０２４７】
ある実施態様において、患者の総ペリオスチンレベルを測定し患者がＥＩＮであると決定する工程を含む好酸球性炎症陰性（ＥＩＮ）である患者を同定する方法が与えられる。
【０２４８】
本明細書に与えられる任意のＴＨ２経路阻害剤は本明細書に記載される、特に喘息の治療方法で使用され得る。一実施態様において、患者はコルチコステロイドで治療されており、本明細書に記載されるペリオスチンアッセイを使用してＴＨ２経路阻害剤に応答性であると診断されていおる。更なる実施態様において、喘息患者は中等度から重度の喘息に罹患している。別の実施態様において、患者は軽度の喘息に罹患しているが、コルチコステロイドで治療されていない。
【０２４９】
本発明の抗体（および任意の追加の治療剤）は、任意の適切な手段によって投与することができ、経口、肺内、および鼻腔内、及び局所治療が所望される場合、病巣内投与が含まれる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が含まれる。投薬は、その投与が短期間か又は長期であるかどうかに部分的に依存し、任意の適切な経路、例えば、静脈内または皮下注射などの注射により行うことができる。限定されないが、様々な時間点にわたる、単一または複数回投与、ボーラス投与、パルス注入を含む様々な投与スケジュールが本明細書で考えられている。
【０２５０】
本発明の抗体は良好な医療行為に合致した方法で処方され、投与され、投薬される。この観点において考慮すべき要因は、治療すべき特定の障害、治療すべき特定の哺乳類、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤送達部位、投与方法、投与日程及び医療従事者が知る他の要因を包含する。抗体は、必要ではないが任意で、問題となる障害の予防又は治療のために、現在使用中の一又は複数の薬剤ともに処方される。そのような他の薬剤の有効量は製剤中に存在する抗体の量、障害又は治療の種類及び上記した他の要因に依存する。これらは一般的には本明細書に記載されるのと同じ用量及び投与経路において、又は、本明細書に記載された用量の１％から９９％で、又は経験的に／臨床的に妥当であると決定された任意の用量及び任意の経路により使用される。
【０２５１】
疾患の予防又は治療のためには、本発明の抗体の適切な用量（単独で使用されるか、又は、一以上の更なる治療的薬剤との組み合わされる場合）は治療すべき疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体を予防又は治療目的のいずれにおいて投与するか、以前の治療、患者の臨床的履歴及び抗体に対する応答性、及び担当医の判断に依存する。抗体は、患者に対して、単回、又は一連の治療にわたって適切に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば一回以上の別個の投与によるか、連続注入によるかに関わらず、抗体約１μｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ）が患者への投与のための初期候補用量となり得る。１つの典型的な一日当たり用量は上記した要因に応じて約１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上の範囲である。数日間以上に渡る反復投与の場合には、状態に応じて、治療は疾患症状の望まれる抑制が起こるまで持続するであろう。１つの例示される抗体用量は約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。従って、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇの１つ以上の用量（又はこれらの何れかの組み合わせ）を患者に投与してよい。このような用量は断続的に、例えば毎週又は３週毎（例えば患者が抗体の約２から約２０投与量、又は例えば約６投与量を受けるように）投与してよい。しかしながら、他の投与計画は有用でありうる。この治療の進行は、従来技術及びアッセイにより容易にモニターされる。
【０２５２】
ある実施態様において、本発明の抗体は３７．５ｍｇの均一用量として（即ち体重に依存せず）、又は１２５ｍｇの均一用量、又は２５０ｍｇの均一用量として投与される。ある実施態様において。投与量は一定の期間４週間に１回皮下注射で投与される。ある実施態様において、その期間は、６ヶ月、１年、２年、５年、１０年、１５年、２０年、又は患者の一生涯である。ある実施態様において、喘息は重度の喘息であり、患者は吸入ステロイドと第二コントローラー薬物で不十分に制御されるか又は制御されない。別の実施態様において、患者はＥＩＰを決定するために、総ペリオスチンアッセイを用いてＥＩＰ状態と診断され、患者は上述のように、抗ＩＬ１３抗体による治療のために選択される。別の実施態様において、本発明は、上述のように抗ＩＬ１３抗体で喘息患者を治療することを含み、ここで該患者は、ＥＩＰ状態を決定する総ペリオスチンアッセイを用いてＥＩＰ状態と以前に診断されている。一実施態様において、喘息患者は１８歳以上である。一実施態様において、喘息患者は１２から１７歳であり、抗ＩＬ１３が２５０ｍｇの均一用量で又は１２５ｍｇの均一用量で投与される。一実施態様において、喘息患者は６から１１歳であり、抗ＩＬ１３抗体が１２５ｍｇの均一用量で投与される。
【０２５３】
上記の製剤または治療方法のいずれかが、抗標的抗体又は抗ペリオスチン抗体の代わりか又は抗体に加えて、本発明のイムノコンジュゲートを用いて行うことができることが理解される。
【０２５４】
製造品
本発明の他の実施態様において、上述した障害の治療、予防、及び／又は診断に有用な物質を含む製造品が提供される。製造品は、容器とラベルまたは容器上にあるまたは容器に付属するパッケージ挿入物を含む。好適な容器は、例としてボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ輸液バッグ等を含む。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な物質から形成されうる。容器は、疾患の治療、予防、及び／又は診断に有効である、それ自体か、又はその他の組成物と併用される化合物を収容し、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は皮下注射針による穴あきストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも一の活性剤は本発明の抗体である。ラベルまたはパッケージ挿入物は、組成物が特定の症状の治療のために使用されることを示している。更に、製造品は、（ａ）組成物が本発明の抗体を包含する組成物を含む第一の容器；および（ｂ）組成物が更なる細胞障害性又はその他の治療的薬剤を包含する組成物を含む第２の容器を含み得る。本発明の本実施態様における製造品は、組成物が特定の疾患を治療することに用いることができることを示すパッケージ挿入物をさらに含んでいてもよい。別法として、または加えて、製造品は、薬学的に許容されるバッファー、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化塩水、リンガー溶液およびデキストロース溶液を含む第二（または第三）の容器をさらに含んでもよい。これは、他のバッファー、希釈液、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的およびユーザーの立場から望まれる他の物質のさらに含んでもよい。
【０２５５】
上記の製造品のいずれかは、抗標的抗体又は抗ペリオスチン抗体の代わりか又はそれに加えて、本発明のイムノコンジュゲートを含み得ることが理解される。
【実施例】
【０２５６】
実施例１  アレルゲン曝露臨床研究
第ＩＩ相無作為化、二重盲検、プラセボ対照試験；５ｍｇ／ｋｇのレブリキズマブ：プラセボ（１：１の割合）１２週間、４週間ごとに皮下に。試験デザインの高レベルの概要が表２及び図１にある。主要エンドポイントは、１３週でのアレルゲン誘導性遅発型喘息反応（ＬＡＲ）であった。スクリーニング期間中及び第１３週に、患者はアレルゲン曝露を受け、その後１８〜２４時間後にメタコリン曝露を受けた。血清バイオマーカーもまたＩＬ１３経路阻害を実証しかつレブリキズマブからの恩恵が増加した患者を同定するために評価された。
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【０２５７】
試験に含まれた患者は、軽度の喘息で１８〜５５歳で（ａ）イエダニ、猫のフケ、又はブタクサに対してのスクリーニングで皮膚試験陽性（陰性コントロールに対して３ｍｍ以上）；（ｂ）１秒間の強制呼気容量が予測値の７０％以上；及び（ｃ）アレルゲン曝露後５〜３０分でＦＥＶ１の２０％以上の減少の早期喘息反応、及び曝露後２〜８時間でＦＥＶ１の１５％以上の減少の遅発型喘息反応（ＬＡＲ）を呈していた。
【０２５８】
２８人の患者が主要エンドポイントの分析に含まれた（ｎ＝１６人がプラセボ、１２人がレブリキズマブ）。第１３週で、レブリキズマブはＬＡＲを阻害した。レブリキズマブ治療患者でアレルゲン曝露後２〜８時間でのＦＥＶ１の平均ＡＵＣ（曲線下面積）（ＬＡＲ）は、プラセボに対して４８％減少し（２６．３％対５０．５％；９５％ＣＩ：−１９から９０％）、第１３週で早期反応（ＥＡＲ）に影響を及ぼさなかった。アレルゲン曝露後０〜２時間でのＦＥＶ１の平均ＡＵＣ及びＦＥＶ１の最大減少は、レブリキズマブ群とプラセボ群で似ていた（両方のパラメーターにおいて２７．５％対２６．４％；表５）。図２も参照。レブリキズマブ群とプラセボ群の間で、メサコリンに対する気道過敏性に有意な違いは観察されなかった。レブリキズマブ群におけるメサコリン倍加用量の算術平均はプラセボ群におけるそれより０．３３倍加用量高く（１．５８対１．２５，９５％ＣＩ−０．６４から１．３））、臨床的に意義のある阻害とは考えられなかった。
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【０２５９】
レブリキズマブ治療は、血清ＩｇＥ、ＭＣＰ−４／ＣＣＬ１３、及びＴＡＲＣ／ＣＣＬ１７のそれぞれにおいて２４％、２５％及び２６％のプラセボで補正された減少の平均値を有し、ＴＨ２炎症のマーカーで全身的作用を明らかに発揮した（Ｐ＜０．０１）。図３Ａ及び３Ｂを参照。治療後に、血清ペリオスチンレベルはわずかに減少した（５〜１０％）。治療後に、血清ＩＬ−１３レベルは大半が検出レベル未満（＜１５０ｐｇ／ｍｌ）であった。図３Ｃは、個々の患者において第１３週での、ＩｇＥ、ＣＣＬ３及びＣＣＬ１７の、それらのマーカーのベースラインレベルに対する減少を示す。一般に、ペリオスチン、ＹＫＬ−４０，ＣＥＡ、及び血中好酸球レベルはレブリキズマブ治療後に有意には変化しなかった（データ非表示）。
【０２６０】
末梢血好酸球、血清ＩｇＥ又は血清ペリオスチンの中央値を上回るベースラインレベルを持つ患者は、これらのバイオマーカーのレベルが中央値未満である患者よりも、ＬＡＲにおいてプラセボで補正されたレブリキズマブ依存性の大きな減少を示した。図４を参照。
【０２６１】
患者は、ベースラインでの炎症性バイオマーカー：血清ＩｇＥ、ＣＬＬ１３、ＣＣＬ１７、ＣＥＡ、ペリオスチン、ＹＫＬ−４０及び末梢血好酸球のレベルの中央値よりも高いか又は低いかに基づいて「バイオマーカー高」又は「バイオマーカー低」として分類された。図４に示されるように、血清ＩｇＥ、好酸球及びペリオスチンに対する結果は、ベースラインの血清ＩｇＥが（中央値に比べて）上昇したか又は末梢血好酸球が上昇した患者は、（例えばレブリキズマブによる）ＩＬ１３遮断に反応する可能性がより高かった。
【０２６２】
結論として、本研究は、後期ＡＵＣの平均において主要エンドポイント：４８％の減少（９０％ＣＩ［−１９％，９０％）］）を満たした。レブリキズマブはプラセボに比べて著しくＬＡＲを減少させた。安全なシグナルは安全性データに見られなかった。ＩＬ−１３の治療的遮断は、特に気道ＴＨ２炎症のマーカーが上昇した患者においてアレルギー性喘息の効果的な治療法であり得る。
【０２６３】
実施例２  喘息患者の臨床試験Ｉ
無作為化、二重盲検、プラセボ対照試験は、ＩＣＳによる長期治療の間制御が不十分なままか又は制御されないままである喘息を有する患者においてレブリキズマブの効果を評価するために実施された。患者は吸入コルチコステロイド（ＩＣＳ）及びＬＡＢＡをも含むことができる標準治療を続けた。この２群試験において、レブリキズマブ又はプラセボの何れかを６ヶ月間受けるために患者は無作為に割り当てられた。１４〜２０日の導入期間（ｒｕｎ−ｉｎ ｐｅｒｉｏｄ）の最中（来院１から来院３）、患者はＩＣＳの順守及び試験を通して日々のモニタリングに必要な装備を使用する彼らの能力を実証しなければならなかった。次いで患者は試験の適格性について評価され、ＩＬ−１３シグニチャーサロゲート状態（以下に更に記述）、ＬＡＢＡの使用、及び試験場所に基づく層別化により、無作為に試験薬（レブリキズマブ又はプラセボ）に割り当てられた（１：１）。最初のＳＣ投与は無作為化割り当ての２４時間以内に起きた（試験第１日、即ち無作為化割り当ての日、最初の試験薬の投与日に関わらず）。試験薬の投与は次の２０週間４週間に１回繰り返された（２４週間の治療期間である場合、合計６つの試験薬の投与のため）。レブリキズマブの有効性の測定が治療期間中評価された。
【０２６４】
試験薬は、次の時点：第１日及び第４週、８週、１２週、１６週及び２０週で皮下（ＳＣ）注射によって選択された患者に投与した。レブリキズマブの各用量は２５０ｍｇであった。各プラセボ用量はレブリキズマブを含まない２ｍＬの同一液体であった。皮下注射は腕、太もも、または腹部に投与された。この試験計画の模式図を図５に見ることができる。
【０２６５】
全て（約２００人）の患者が治療された後で主な解析が実行され、無作為化割り当て後（第１日）２４週間続いた。安全性は試験を通して評価した。試験薬の最後の投与後（第２０週）、患者は更に１２週間モニターされた；最終投与後の最初の４週間は（第２４週）治療期間の部分と見なされ、最終８週間は経過観察期間を構成した。８週間の経過観察期間は、治療期間の最後の４週間とともに、最後の投薬後に３〜４の半減期について患者のモニタリングを考慮した。従って、患者は一般に、合計約３４週間試験に参加した。図５を参照。有効性が評価可能な患者（ｎ＝１８０）は意思決定目的のために定義され、二つの理由から被験者を除外した。（１）鍵となる特徴の標的集団の部分でなく及び（２）治療効果を測定するためには信頼性のないベースラインＦＥＶ１。この試験に参加している患者のベースラインの特徴については図６を参照。
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【０２６６】
鍵となる包含基準は以下を含める：試験特異的肺機能検査（ＰＦＴ）マニュアル通り、来院１−３での肺活量測定を実行する能力；臨床的に有意な異常の証拠を持たない来院１の１２ヶ月以内の胸部Ｘ線検査；日記完了と来院１〜３の間のＰＥＦ測定の順守により測定される試験材料を完結する能力；以下の基準の全てに基づいて選択される制御されない喘息：
−喘息の診断＞１２か月
−来院１又は２での気管支拡張反応
−前気管支拡張剤  来院１及び３で予測されるＦＥＶ１≧４０％及び≦８０％
−ＩＣＳの使用  プロピオン酸フルチカゾンの１日の総用量が≧２００μｇ及び≦１０００μｇ
−来院３の喘息コントロールアンケート（ＡＣＱ）スコア≧１．５  ＩＣＳの順守にかかわらず。
【０２６７】
鍵となる除外基準は以下を含める：
医学的状態：
−来院１〜３から喘息の増悪、著しい気道閉塞、又は呼吸器感染。
−既知の悪性腫瘍又は潜在的な悪性腫瘍の現在の評価
−既知の免疫不全、限定しないがＨＩＶ感染を含む
−活動性の感染を含む、喘息以外の事前に存在している肺疾患
−制御されない臨床的に有意な医学的疾患
【０２６８】
曝露：
−人生の喫煙歴が１０パック年を超える現喫煙者又は以前の喫煙者
−禁止されている併用薬（ＩＣＳ以外のステロイド、ＳＡＢＡ以外の短時間作用型気管支拡張薬、免疫調節薬）
−妊娠中又は非常に効果的な避妊法を使用する意志なし
【０２６９】
肺それ自体でＩＬ−１３を測定する実際の困難を仮定すると、末梢血中の好酸球レベル及びＩｇＥレベルがサロゲート（ｓｕｒｒｏｇａｔｅ）測定として使用され、「ＩＬ−１３シグニチャーサロゲート（ｓｉｇｎａｔｕｒｅ ｓｕｒｒｏｇａｔｅ）」として示される。ＩＬ−１３シグニチャーサロゲート陽性患者は、ＩｇＥ＞１００ＩＵ／ｍＬ及び血中好酸球≧０．１４×１０×ｅ９細胞／Ｌを持つ患者として定義され、ＩＬ−１３シグニチャーサロゲート陰性患者は、総計ＩｇＥ≦１００ＩＵ／ｍＬ又は血中好酸球＜０．１４×１０×ｅ９細胞／Ｌを有する。ＩＬ−１３シグニチャーサロゲートの患者の状態を決定したＩｇＥ及び好酸球レベルの基準は喘息患者から確立され、気管支上皮におけるＩＬ−１３誘導性遺伝子発現（ＩＬ−１３シグニチャー）は末梢血のＩｇＥ及び好酸球と相関していた(Corren et al., N Engl J Med 365:1088-1098 [2011])。
【０２７０】
レブリキズマブの有効性は、肺機能（即ちＦＥＶ１，ピークフローの変動を含むピークフロー，選択されたセンターでのメタコリンへの応答、分画呼気一酸化窒素［ＦＥＮＯ］）を含む喘息の活動性の複数の測定及び疾患活動性又はコントロール（すなわち、患者の報告結果［ＰＲＯ］、救助薬の使用、増悪率）の測定を使用して評価された。（ＦＥＶ１の変化は、主要転帰であった。レブリキズマブでの治療後以下のマーカー：ＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７），ＭＣＰ−４（ＣＣＬ１３）及びＩｇＥが薬力学解析に用いられた。
【０２７１】
主要有効性評価項目
主要有効性評価項目は、ベースラインから第１２週までの気管支拡張薬前ＦＥＶ１（体積）の相対的変化であった。
【０２７２】
２次有効性評価項目
２次有効性評価項目は以下であった。ベースラインから第２４週までの気管支拡張薬前ＦＥＶ１（体積）の相対的変化；ＩＬ−１３シグニチャーサロゲート陽性状態の患者におけるベースラインから第１２週までの気管支拡張薬前ＦＥＶ１（体積）の相対的変化；ベースラインから第１２週までの喘息コントロールアンケート（ＡＣＱ）スコアの変化；ベースラインから第１２週までの喘息コントロールの日々の日記（ＡＣＤＤ）；ベースラインから第１２週までの朝の気管支拡張薬前のピークフローの変化；２４週間の治療期間中の喘息の増悪率；２４週間の治療期間中の重篤な喘息の増悪率；ベースラインから第１２週までの救助薬使用の変化（救助薬又は噴霧救助薬の一日あたりのパフの数で測定された）。
【０２７３】
探索的な測定：
以下の探索的な評価項目が評価された：ベースラインから第１２週までのＡＣＤＤにより測定される良好に制御された喘息である週あたりの日数の変化；ベースラインから第１２週までの喘息に起因する夜間覚醒の週あたりの頻度の変化；ベースラインから第１２週までのＦＥＮＯの変化。
【０２７４】
初期所見
不完全に制御された喘息を持つ患者に関する本研究にて、レブリキズマブ治療は、主要転帰の変数である気管支拡張薬前ＦＥＶ１における統計的に有意な改善と関係していた。治療の開始直後に生じたＦＥＶ１の改善は、ＩＬ−１３阻害は相対的に素早く気流の測定に影響を与えたことを示している。レブリキズマブ治療は、Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ペリオスチンアッセイを使用して、プロトコルに定められた重篤な増悪において統計的に有意な減少へと至らなかったが（以下に記載、解析に寄与する値が得られなかったため）、特にペリオスチンが高い患者において、重篤な増悪率の減少傾向が観察された。しかし、以下の記述されるようにＥ４アッセイを使用して、レブリキズマブ治療はプロトコルに定められた重篤な増悪の統計的に有意な減少へと導いた（ペリオスチンが高い群で８４％（９５％ＣＩ １４％，９７％，ｐ＝０．０３））。以下を参照。更に、ＦＥＮＯのサブグループ解析は、重篤な増悪において統計的に有意な減少を達成した（ｐ＝０．０４）。レブリキズマブ治療は、ＡＣＱ５の症状のみのバージョン（救助ＳＡＢＡの使用及びＦＥＶ１を除く）又は日々の日記による計測により測定されるように、喘息症状を改善しなかった。
【０２７５】
血清Ｔｈ２ケモカイン、ＣＣＬ１３及びＣＣＬ１７、及びＩｇＥは気道で測定される臨床的影響の基礎となる、レブリキズマブ媒介性の生物学的作用を支持する。血中の好酸球の数のわずかな増加は、好酸球を誘因するケモカインの阻害後の、血液から肺コンパートメントへの好酸球の移行の全体的な減少と一致する。レブリキズマブがＦＥＮＯを減少させるという知見はこの示唆と一致する。しかし、レブリキズマブは好酸球性炎症を修飾すること（それもまたＦＥＮＯに影響を与えると考えられている）によるよりも、ＩＬ−１３遮断を介した一酸化窒素合成酵素の発現を間接的に阻害することによりＦＥＮＯを減少させる可能性がある。
【０２７６】
この試験に対する患者の適格性の基準は、（来院前に少なくとも４時間ＳＡＢＡを使用せず、かつ少なくとも１２時間ＬＡＢＡを使用せずに）少なくとも１２％から４００μｇのアルブテロールの可逆性を必要とした。これは、肺機能に少なくとも１０％の全体的な相対的変化を期待するときに、患者が「動く余地」を有することを保証するためであった。この単純な臨床試験は、これらのデータを一般化する性能を、選択されていない、より一般的な喘息患者集団に制限する場合もある。実際、患者の不適格性は（スクリーニングに失敗した２６３人の患者のうち９２人での）この試験の失敗であった。
【０２７７】
この試験において、我々は、高血清ＩｇＥ及び高血中好酸球計数の組み合わせは、肺においてＩＬ−１３関連遺伝子の発現が増加した（ＩＬ−１３シグニチャーサロゲート又はＴｈ２が高い）患者を同定するためのサロゲートであるとする仮説を最初にたてた。データは治療の帰属に対してなお隠されているが、血清ペリオスチンレベルに基づく差別化を使用する統計解析計画を我々は書いた。以下により詳述されるように、このサブグループ解析は、ＦＥＶ１のより強固な増強及びＦＥＮＯのより大きな低下の両方で、並びに有意な相互作用試験で観察されたように、レブリキズマブ治療の有効性はペリオスチンが低い患者よりもペリオスチンが高い患者において増強されたことを示した。これらの知見は、事前に特定されたマーカーである血清ペリオスチンは、レブリキズマブ治療により応答し得る喘息患者を選択するために使用される可能性があることを示唆している。
【０２７８】
本試験に参加している患者のペースラインの特性を図６に示す。特に断りのない限り、数字は平均値（ＳＤ）を指す。ペリオスチンが高いとは下記に記載されるＥ４アッセイに従って２３ｎｇ／ｍｌを超えるペリオスチンのベースラインを持つ患者を指す。ペリオスチンが低いとは下記に記載されるＥ４アッセイに従って２３ｎｇ／ｍｌ未満のペリオスチンのベースラインを持つ患者を指す。
【０２７９】
治療された患者についての１２週間と２４週間でのＦＥＶ１の相対的変化（リットル）（９５％信頼区間）を図７に示す。ＩＬ−１３シグニチャー陽性患者に比べた場合、ペリオスチン陽性患者はＦＥＶ１の相対的により高い変化を経験していた。
【０２８０】
図７は、全参加者のベースラインから第１２週までのプラセボで補正されたＦＥＶ１の相対的変化は５．９％（９５％ＣＩ ０．９％，１０．９％，ｐ＝０．２）でペリオスチンが高いサブグループについては１０％（９５％ＣＩ ２．５％，１７．５％，ｐ＝０．０１））であったことを示す。全参加者のベースラインから第２４週までのプラセボで補正されたＦＥＶ１の相対的変化は４．８％（９５％ＣＩ ０．３％，９．３％，ｐ＝０．０４）でペリオスチンが高いサブグループについては６．１％（９５％ ＣＩ −１．４％，１３．６％，ｐ＝０．１１））。図８は、全ての有効性評価可能な被験体について（Ａ）及びペリオスチンが高い被験体のみについて（Ｂ）、治療期間（３２週間）を通してのＦＥＶ１の相対的変化を示す。治療の３２週でのレブリキズマブの有効性は、レブリキズマブが投与される頻度を減らすことが可能であり得ることを示唆することを弱めなかった。
【０２８１】
気道リモデリングにおける間接的サロゲート及び探索的転帰として、我々は気管支拡張薬後のＦＥＶ１におけるレブリキズマブ治療の効果も調べた。２０週での気管支拡張薬後のＦＥＶ１の変化は１００ｍｃｇのアルブテロールの４回の吸入後に測定された。試験薬の投与前のベースラインにて、気管支拡張薬後のＦＥＶ１の平均値は、プラセボ及びレブリキズマブ群のそれぞれにおいて、２．５０リットル（０．７１）及び２．５４リットル（０．７３）であった。これは両方の群において期待される７７．９％に相当する。気管支拡張薬後のＦＥＶ１における全体的なプラセボ補正後の変化は、４．９％であった（９５％ＣＩ ０．２％から９．６％；ｐ＝０．０４）。ペリオスチンが高い群では、レブリキズマブ治療は、２０週で気管支拡張薬後のＦＥＶ１を増加させた（８．５％；９５％ＣＩ １．１％から１６％；ｐ＝０．０３）。ペリオスチンが低い群では気管支拡張薬後のＦＥＶ１における改善の証拠は無かった（１．８％；９５％ＣＩ ４．１から７．７；ｐ＝０．５５）。加えて、レブリキズマブはペリオスチンが高い群で絶対的な気管支拡張薬後のＦＥＶ１を増加させた（１７０ｍｌｓ；９５％ＣＩ １０から３２０ｍｌ）。我々は、レブリキズマブは、Ｔｈ２気道炎症が増加した証拠を有し（ペリオスチンが高い）、制御されない喘息患者において気管支拡張薬後のＦＥＶ１を改善すると結論づけた。このデータに基づくと、レブリキズマブは喘息において気道リモデリングを低下させる可能性を有する場合がある。
【０２８２】
図９は、治療の２４週で観察された増悪率と重篤な増悪率を示す。増悪率はプラセボと比較してレブリキズマブで治療された全参加者で３７％減少し（９５％ＣＩ −２２％，６７％，ｐ＝０．１７）、ペリオスチンが高いサブグループで６１％減少した（９５％ＣＩ −６％，８６％，ｐ＝０．０７）。重篤な増悪率は全参加者で５１％減少し（９５％ＣＩ −３３％，８２％，ｐ＝０．１６）、ペリオスチンが高いサブグループで８４％減少した（９５％ＣＩ １４％，９７％，ｐ＝０．０３）。我々はまた、ＩＴＴ集団において、３２週、経過観察期間の終了点、レブリキズマブの最終投与後１２週で重篤な増悪の割合を調べた。表１０に示すように、３２週での全患者にわたる重篤な増悪率は、プラセボと比べてレブリキズマブで治療された患者で５０％著しく減少した（ｐ＝０．０３）。重篤な増悪はレブリキズマブで治療されたペリオスチンが高い患者で最低であった（０．１３）；しかしプラセボからの率の減少はサブ解析において統計的有意性に到達しなかった。レブリキズマブはＩＣＳにより不十分に制御された患者において重篤な増悪を減少させる有意な利点を有していたと結論する。重篤な増悪の最大の減少は治療前に高いペリオスチンレベルを持つ患者において見られた。事象をとらえるための観察時間は、このエンドポイントについての試験に力を与える点で重要である。２４週間に比べて３２週間の観察はおよそ２００人の被験者において少なくとも５０％の減少を検出するため必要とされ得る。
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【０２８３】
レブリキズマブはその主要エンドポイントを満たしており、重篤な増悪を減少させるに非常に効果的であった。データは、患者のペリオスチン状態は増悪事象及びそれほどではないにせよＦＥＶ１の予後徴候となることを示している。データはレブリキズマブ治療に対する応答を決定するためのペリオスチンレベルの予測値を支持する。例えば、Ｅ４アッセイを使用して、２０ｎｇ／ｍｌ未満の血清又は血漿ペリオスチンレベルを持つそれらの患者は、レブリキズマブから恩恵を得る可能性が小さいが、２０ｎｇ／ｍｌを超える血清又は血漿ペリオスチンレベルを持つそれらの患者は、レブリキズマブからより恩恵を得る可能性がある。更に、（Ｅ４アッセイで決定される場合）２３ｎｇ／ｍｌを超える血清又は血漿ペリオスチンレベルを持つそれらの患者は、レブリキズマブ治療から恩恵を得る更に大きな可能性を有する。
【０２８４】
患者の報告結果ＡＣＱ及びミニＡＱＬＱは治療群間で一致した相違を示さなかった。何回かの来院後に、ＡＣＤＤデータは、全てレブリキズマブ治療が好む、良好に制御された日、喘息症状、夜間覚醒、及び救助薬の使用において、治療群間の平均スコアに幾つかの相違を示した。ＡＣＤＤデータ（良好に制御された日、喘息症状、夜間覚醒、及び救助薬の使用）の全てのエンドポイントにおいて、全被験体に比べてペリオスチンが高い被験体において、より大きなプラセボ補正後の治療効果があった；しかし１２週では治療群間での相違は統計的に有意ではなかった。
【０２８５】
肺の機能：ベースラインからの肺機能の改善（ＰＥＦ）は、レブリキズマブで治療された全被験体でほとんどの時点で観察され、及びペリオスチンが高いレブリキズマブで治療された被験体において全時点で観察された。プラセボで処置された被験体は全時点でベースラインから減少した。
【０２８６】
肺の炎症：ＦＥＮＯはレブリキズマブで治療された被験体及びペリオスチンが高いサブセットの被験体の両方において試験期間中減少した（改善した）が、プラセボで処置された被験体はＦＥＮＯを増加させた（悪化させた）。１２週でのＦＥＮＯの変化のパーセントは、レブリキズマブで治療された被験体で−２０．１％（ｎ＝８３）、対するプラセボ処置被験体で１５％（ｎ＝８６）であった［ｐ＜０．０１］。１２週でのＦＥＮＯの変化のパーセントは、レブリキズマブで治療された被験体で−２４．２％、対するプラセボ処置被験体で１７．５％（ｎ＝４４）であった［ｐ＜０．０１］。１２週での治療群間の相違は統計的に有意であった。図１０を参照。事後解析において、高いベースラインのＦＥＮＯはまた、ＦＥＶ１を改善することにおける有効性と、プラセボと比較して重篤な増悪率が低いことと関連していた。しかし、ベースラインのＦＥＮＯは、ペリオスチンよりも、導入期間中に患者間のより大きなばらつきを示した（１９．８％対５．０％）ことに我々は気がづいた。
【０２８７】
我々はまた、ペリオスチンが低くかつＦＥＮＯが高い患者が、ペリオスチンが高い患者と同程度にレブリキズマブ治療から恩恵を受けるかどうかを決定するためにデータを調べた。我々は、ベースラインにて、ＦＥＮＯと血清ペリオスチンの間の中等度の相関を観察した（ｒｓ＝０．３１，Ｐ＜０．００１；Ｎ＝２１０マッチングデータを含む）。中央値カットオフを使用して、ペリオスチンとＦＥＮＯの状態は完全ではないが一般的に重複した（表１１）。表１１に示すデータにおいて、ペリオスチンカットオフは、下記に記載のＥ４アッセイを使用して２５ｎｇ／ｍＬで、ＦＥＮＯのカットオフは当該技術分野で既知の標準的方法を使用して測定される場合２１ｐｐｂであった。ペリオスチンとＦＥＮＯの複合状態に基づくＦＥＶ１の評価は、１２週でのレブリキズマブのプラセボで補正された効果は、ペリオスチンとＦＥＮＯの両方のレベルが高レベルの群で最高であった（表１２）。対照的に、ペリオスチンが低く／ＦＥＮＯが高い群における観察された治療効果はわずかであった（２．３％，Ｐ＝０．７３）。従って、ＦＥＮＯはレブリキズマブからの恩恵を受けるペリオスチンが低い患者のサブセットを同定するようには見えない。レブリキズマブ治療に対する応答についてのペリオスチンとＦＥＮＯの相対的予測値は更なる試験に値する。
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【０２８８】
レブリキズマブの薬物動態学的特性は、以前の研究で見られていたものと同様であった。被験者の体重はレブリキズマブの薬物動態に影響を与えた。
【０２８９】
幾つかのマーカーが、血清ペリオスチンレベルに加えて又は代替として、上記の治療上の利益の観点から予測値を提供する能力について評価した。それらのマーカーはＣＥＡ、ＩｇＥの、ＴＡＲＣ（ＣＣＬ１７）及びＭＣＰ−４（ＣＣＬ１３）を含んでいた。
【０２９０】
加えて、我々はペリオスチンが高い喘息患者の過剰な血清ペリオスチンは、ＩＬ−１３の作用によるという仮説を立てた。従って、我々は、制御されない喘息を持ち、プラセボ及びレブリキズマブで治療された患者の両方において、全身ペリオスチンレベルに対するＩＬ−１３の相対的な寄与を評価することを求めた。これらの実験のために、我々は実施例７に記載されているＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ペリオスチンアッセイを用いて血清ペリオスチンを測定した。図１８と１９に示されるように、ベースラインでペリオスチンが低い患者の大部分（＞９０％）が試験の両方の群で低いままであるが（図１８Ａ）、プラセボで処置されたペリオスチンが高い患者の７２％及びレブリキズマブで治療された４０％が１２週でペリオスチンが高いままである（図１８Ｂ）ことを見いだした。ＩＣＳにも関わらず制御されない喘息を持つ成人において、ペリオスチンが高い患者は、プラセボに比べてレブリキズマブによる治療で血清ペリオスチンのレベルに有意な減少を示すが、ペリオスチンが低い患者はレブリキズマブに対する応答に有意な減少を示さないと結論づけた。これらの知見は、制御されない喘息患者において、過剰の血清ペリオスチンは、ＩＬ−１３の活性によるものであり、ＩＬ−１３によるレブリキズマブの阻害は血清ペリオスチンレベルを減少させることを示唆している。
【０２９１】
レブリキズマブで治療された４人の患者は、重篤な有害事象（ＳＡＥ）（喘息増悪［ｎ＝２］、市中肺炎、及び車の事故に関連して外傷性気胸）を経験した。６人のプラセボ患者は、７つのＳＡＥ（喘息増悪［ｎ＝２］、頭痛、硬膜外後ろの脳脊髄液漏出、帯状疱疹、帯状疱疹、急性化膿性髄膜炎、及び鎮痛薬物中毒）を経験した。この試験の安全性の結果については、図１１を参照。
【０２９２】
有害事象（ＡＥ）の全体的な頻度は、重篤な有害事象の頻度（レブリキズマブ、３．８％；プラセボ、５．４％）と同様に、両治療群で類似していた（レブリキズマブ、７４．５％；プラセボ、７８．６％）。筋骨格系の事象はレブリキズマブでより一般的であった（レブリキズマブ、１３．２％；プラセボ、５．４％；Ｐ＝０．０４５）（表９）。１２人のプラセボ処置患者と１２人のレブリキズマブ治療患者を含む２５人の患者（１１．５％）は早期に試験を中止した。
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【０２９３】
実施例３  喘息患者の試験ＩＩ（用量範囲試験）
コルチコステロイドを吸入していない喘息患者における有効性、安全性及び耐容性の観点から、レブリキズマブの用量と応答との間の関係を評価するために、無作為化され、二重盲検の、プラセボで制御された、４つの群で用量範囲試験が行われた。この試験の模式的デザインについては、図１２を参照。選択された患者は少なくとも１５％の気管支拡張薬応答を有していた。気管支拡張薬前のＦＥＶ１≧６０％で、≦８５％が導入期間中に示される疾患の安定性について予測された。以前にＩＣＳで管理される試験のための選択された患者は、最初の試験の来院（来院１）の前の最小３０日間はＩＣＳを受けていることができなかった。試験では休薬期間は無かった；患者は試験に対して適格となる目的だけのためにコルチコステロイドを止めるべきではなかった。
【０２９４】
来院１での第１試験に関連した手順は約２週間の導入期間で開始した。導入期間の最中（来院１〜３）、喘息のコントロール（喘息コントロールアンケート［ＡＣＱ］スコアにより測定）及び肺機能を評価した。患者の喘息は、さらに皮膚プリックテストおよびＩｇＥおよび末梢血好酸球を含む関連バイオマーカーにより更に特徴付けられた。ＩｇＥおよび好酸球のレベルは、ＩＬ−１３シグニチャーサロゲートに基づいて患者を分類するために使用された。導入期間の最後に、レブリキズマブの３つの用量（５００ｍｇ，２５０ｍｇ又は１２５ｍｇ）の一もしくはプラセボをＳＣ投与により受けるために適格な患者が無作為に割り当てられた（１：１：１：１）。試験薬は、１２週間の治療期間中に４回投与した。試験薬の最終投与後、患者はさらに８週間の経過観察期間モニターした。従って、ほとんどの患者は来院１の後合計約２２週間試験に参加し、その間断続的にＰＫサンプルを得た。集中的なＰＫサンプリングは、試験中及び経過観察期間中に得られた追加のＰＫサンプル並びに最後の試験薬投与後１６週間の追加のＰＫのサンプルを用いて、７０人の被験体が集中的なＰＫサンプリングを完了するまで行われた。
【０２９５】
従って、集中的なＰＫサンプリング群の患者の試験への参加は、来院１の後に約２６週間続いた。安全性は試験を通して評価され、治療失敗についての事前に特定された閾値は、もし患者が臨床的に著しい増悪を有した場合に、患者が試験薬を止めて標準的治療を再開できるように定められた。
【０２９６】
初期所見
有効性：全てのレブリキズマブで治療された被検体におけるベースラインから１２週までのプラセボで補正されたＦＥＶ１の相対的変化は４．１％（９５％ＣＩ−０．４，８．６％；ｐ＝０．０７５）であった。１２週間の治療期間を通して、レブリキズマブで治療された全患者における治療の失敗の見積もられたリスクは、プラセボで処置された患者よりも７５％低かった（ＨＲ ０．２５，９５％ ＣＩ：０．１１，０．７８；ｐ＝０．００１）。これらの結果は、臨床的及び統計的に有意とみなした。用量応答の証拠はなかった（図１６参照）。
【０２９７】
安全性：レブリキズマブで治療及びプラセボで治療を受けた患者の間には、臨床的に重大な不均衡は注射部位反応（レブリキズマブ対プラセボは２３％対６％）を除いて無かった。
【０２９８】
実施例４  ペリオスチンアッセイ（Ｅ４アッセイ）
非常に敏感であるペリオスチン捕捉ＥＬＩＳＡアッセイ（感度１．８８ｎｇ／ｍｌ）を以下に説明する。抗体は、ｎＭの親和性でペリオスチンアイソフォーム１−４を認識する（配列番号：５−８））。
【０２９９】
８０ｕＬの精製モノクローナル抗体、２５Ｄ４（ハイブリドーマ又はＣＨＯ細胞株から発現されたコート抗体、配列番号１及び２）をリン酸緩衝生理食塩水で２ｕｇ／ｍｌの最終濃度まで希釈する。マイクロタイタープレートをウェルあたりコート抗体１００μＬで２〜８℃で一晩覆いコーティングする。プレートを４００μＬの洗浄バッファー（ＰＢＳ／０．０５％のＴｗｅｅｎ（ポリソルベート２０）により室温で洗浄バッファーのサイクルあたりウェル毎に３回洗浄する。ウェルあたりの２００μＬのブロッキングバッファーをプレートに添加する。覆われたプレートを室温で１．５時間振とうしながらインキュベートする。
【０３００】
ｒｈｕＰｅｒｉｏｓｔｉｎの標準曲線を用意する（ｒｈｕＰｅｒｉｏｓｔｉｎの標準ストック＝アッセイ希釈液（ＰＢＳ／０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）／０．０５％ポリソルベート２０／０．０５％ ＰｒｏＣｌｉｎ３００，ｐＨ７．４）中でのｒｈｕＰｅｒｉｏｓｔｉｎアイソフォーム１，Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ ＃３５４８−Ｆ２，５．２５ｎｇ／ｍｌ。標準曲線希釈液＝ＰＢＳ／０．５％ＢＳＡ／０．０５％ポリソルベート２０、０．０５％ＰｒｏＣｌｉｎ３００、ｐＨ７．４）。例えば
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【０３０１】
コントロールとサンプルを調製する。３つのコントロール：スパイクソースコントロール（Ｓｐｉｋｅ Ｓｏｕｒｃｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ）（ｒｈｕＰｅｒｉｏｓｔｉｎの完全長，アイソフォーム１，Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＃３５４８−Ｆ２），正常マトリックスコントロール（Ｎｏｒｍａｌ Ｍａｔｒｉｘ Ｃｏｎｔｒｏｌ）（正常ヒト血清プール，Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．），高マトリックスコントロール（Ｈｉｇｈ Ｍａｔｒｉｘ Ｃｏｎｔｒｏｌ）（正常ヒト血清プール＋１００ｎｇ／ｍｌ ｒｈｕＰｅｒｉｏｓｔｉｎスパイク）。
【０３０２】
例えば
１０μＬ コントロール（又はサンプル）血清 ＋ １．９９ｍＬサンプル／コントロール希釈液 ＝ １：２００
３００μＬ １：２００ 希釈 ＋ ３００ μＬ サンプル／コントロール 希釈液 ＝ １：４００
３００ μＬ １：４００ 希釈 ＋ ３００ μＬ サンプル／コントロール 希釈液 ＝ １：８００
３００ μＬ １：８００ 希釈 ＋ ３００ μＬ サンプル／コントロール 希釈液 ＝ １：１６００
各希釈は１回実行される。
【０３０３】
正常ヒト血清プールを使用して、マトリックスコントロールを構築する。正常コントロールとしてスパイクされていないプールされたヒト血清を使用する。上述のようにプールした血清に１００ｎｇ／ｍＬ ｒｈｕＰＯＳＴＮをスパイクすることにより高コントロールを生成する。プレート毎の各コントロールに対する４つの希釈の平均値、標準偏差（ＳＤ）、および分散の％係数（ＣＶ、パーセントで表す）を計算する。ＣＶは、複製の平均についての反復測定の分散の大きさを定量化している。％ＣＶ＝１００＊（標準偏差／平均）．プレート間の精度を決定するために、全てのプレートに渡るこれらの平均濃度を評価する。このコントロール表は、その後、各コントロールの平均濃度の±２０％まで許容分散を設定して、正常及び高コントロールの合格／不合格の基準を定めるために使用される。
【０３０４】
洗浄バッファー（ＰＢＳ／０．０５％ポリソルベート２０）のサイクルあたりウェルあたり４００μＬでプレートを３回洗浄する。希釈した標準液（ウェルを複製）、コントロール（すべての４つの希釈液）、およびサンプル（すべての４つの希釈液）をプレートに、ウェルあたり１００μＬ添加する。カバーされたプレートは室温で２時間振とうしながら、室温でインキュベートする。８０ｕＬの検出ＭＡｂストックＩ（ビオチン化マウス抗ヒトペリオスチン、モノクローナル抗体２３Ｂ９、アッセイ希釈液中で７．５ｕｇ／ｍｌ）をアッセイ希釈液＝５０ｎｇ／ｍＬで１２ｍＬに希釈する。洗浄バッファーのサイクルあたりウェルあたり４００μＬでプレートを４回洗浄する。希釈した検出モノクローナル抗体をプレートにウェルあたり１００μＬ添加する。覆われたプレートを室温で１時間振とうしながらインキュベートする。アッセイ希釈液中で１：８０に希釈された８０ｕＬのストレプトアビジンＨＲＰストックＩ（ＡＭＤＥＸストレプトアビジン−ＨＲＰ、ＧＥヘルスケア＃ＲＰＮ４４０１、約１ｍｇ／ｍｌ）をアッセイ希釈液＝１：１２ｋで１２ｍＬへ希釈する。洗浄バッファーのサイクルあたりウェルあたり４００μＬでプレートを４回洗浄する。希釈したストレプトアビジンＨＲＰををプレートにウェルあたり１００μＬ添加する。覆われたプレートを室温で４５分間振とうしながらインキュベートする。キルケガードベリー（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ａｎｄ Ｐｅｒｒｙ）（ＫＰＬ）２ステップＴＭＢ試薬を室温にする；混ぜない。洗浄バッファーのサイクルあたりウェルあたり４００μＬでプレートを４回洗浄する。ＫＰＬのＴＭＢ基質コンポーネントの等量を混ぜ、プレートに、ウェルあたり１００μＬ追加する。振とうしながら室温で２０分間プレートをインキュベートする。１Ｍリン酸をプレートにウェルあたり１００μＬ添加する。４５０ｎｍの読み取り波長と６５０ｎｍの参照波長を使用してプレートを読む。このアッセイまたは上記アッセイと同様のアッセイを、実施例３に記載の臨床試験に用いた。
【０３０５】
アイソフォーム１（総ペリオスチンではない）に対する抗体を用いたペリオスチンアッセイが、類似の抗体捕捉フォーマットを使用して別の喘息患者のサンプルで試験された。予備的な結果では、ペリオスチンのアイソフォーム１は総ペリオスチンとしてＴＨ２炎症に対するマーカーのようには堅牢でないことを示している。
【０３０６】
実施例５  喘息患者の観察研究
我々は以前、健常者及び喘息のボランティアにおいて研究目的のために実施された気管支鏡検査中に収集され、カリフォルニア大学サンフランシスコ校（ＵＣＳＦ）で気道組織バンクに保存されている生物学的サンプルの我々の研究に基づいて特定のバイオマーカーの知見を報告した。例えば、国際公開第２００９／１２４０９０号を参照。中等度から重度の喘息の大きなコホートにおけるこれらの知見を確かめて、複数の臨床期間にわたってそれらを一般化するために、高用量のＩＣＳ（＞１０００μｇ／日フルチカゾンＤＰＩ又は同等物）の制御されない中等度から重度の喘息患者（ＡＣＱ＞１．５０及びＦＥＶ１が４０−８０％の間）の多施設の３来院観察研究（「ＢＯＢＣＡＴ」）を誘発喀痰、気管支内生検、及び末梢血を集めて実施した。我々は５９の被験体から一致した血液及び気道のデータを得た（図１３の研究概要を参照）。試験の詳細は以下に提供される。
【０３０７】
ＢＯＢＣＡＴ（コルチコステロイド抵抗性喘息におけるバイオマーカーの探索的気管支鏡調査研究）は、米国、カナダ、英国で行われた多施設研究であり、約６０人の中等度から重度の喘息患者において一致した気道と血液サンプルを収集した。選択基準は、（４０−８０％の間に予測されるＦＥＶ１、並びに過去５年以内に短時間作用型の気管支拡張薬による気道閉塞の可逆性が＞１２％である証拠、又はメタコリン感受性（ＰＣ２０）が＜８ｍｇ／ｍｌにより確認され）（前年に少なくとも２回の増悪又は喘息コントロールアンケート（ＡＱＣ）（Juniper, E.F., et al., Respir Med 100, 616-621 (2006)におけるスコアが＞１．５０により定義されるように）制御されないが、一方長時間作用型βアゴニストを含むか又は含まない高用量のＩＣＳ（１日あたり＞１０００μｇのフルチカゾンまたは同等物）の安定的な投薬レジメン（＞６週間）を受けている中等度から重度の喘息の診断を必要とした。許容される併用薬はまた、ロイコトリエン受容体アンタゴニストと経口コルチコステロイドが含まれていた。ＢＯＢＣＡＴ試験スキームは、図１３に示されている。
ＦＥＮＯ、気管支鏡検査、ＢＡＬ、誘発喀痰、及び好酸球数のための免疫組織化学的検査を以前に既述されるように行った(Woodruff, P.G., et al., Am J Respir Crit Care Med 180, 388-395 (2009); Boushey, H.A., et al., N Engl J Med 352, 1519-1528 (2005); Brightling, C.E., et al., Thorax 58, 528-532 (2003); Lemiere, et al., J Allergy Clin Immunol 118, 1033-1039 (2006))。全ての研究プロトコルが関連する治験審査委員会によって承認され、インフォームドコンセントは、登録前に全ての被験体から得られた。患者の人口統計および肺機能データを以下の表５に要約する。
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【０３０８】
我々は、以前の試験に一致した予め指定されたカットオフ値として喀痰好酸球に対して３％(Green, R.H., et al., Lancet 360, 1715-1721 (2002); Haldar, P., et al., N Engl J Med 360, 973-984 (2009))及び全生検面積に対して２２好酸球／ｍｍ２(Miranda, C., A. et al., J Allergy Clin Immunol 113, 101-108 (2004); Silkoff, P.E., et al., J Allergy Clin Immunol 116, 1249-1255 (2005))を使用した。血清ペリオスチンレベルは、最大５週までに及ぶ３回の来院にわたり、個別の被検体内で非常に安定であった（データ非表示）。平均のペリオスチンレベルは、痰又は組織好酸球の測定によって定められるように「好酸球が低い」被験体に比べて「好酸球が高い」被検体で有意に高かった（データ非表示）。喀痰及び組織好酸球の何れでもないについて０、どちらかについて１又は両方について２の複合スコアにより層別される被検体は、好酸球のスコアの増加に伴い血清ペリオスチンが増加する非常に有意な傾向を示していた（データ非表示）。更に、全コホートにわたる非好酸球性喘息患者は上述されたＥ４アッセイを使用して血清ペリオスチンレベルが一貫して２５ｎｇ／ｍｌ未満であった。カットオフとして２５ｎｇ／ｍｌ血清ペリオスチンを使用して、ＢＯＢＣＡＴにおける「好酸球が低い」及び「好酸球が高い」被検体は、９３％の陽性予測値により効果的に区別された（表６）。組織の好中球数は組織の好酸球レベル及び血清ペリオスチンレベルと正に相関していた（データ非表示）。まとめると、これらのデータは血清ペリオスチンが、ステロイド治療にもかかわらず、中等度から重度の喘息患者における持続的な気道の好酸球増加症の全身バイオマーカーであることを示している。
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【０３０９】
血清ペリオスチンの喘息のバイオマーカーとしての分画呼気一酸化窒素（ＦＥＮＯ），末梢血好酸球、血清ＩｇＥ値、及び血清ＹＫＬ−４０との比較
近年、喘息の重症度および気道炎症の他の非侵襲的なバイオマーカーが記載されている。特に関心のある４つのマーカーは、分画呼気一酸化窒素（ＦＥＮＯ），炎症を起こした気管支粘膜における酵素のｉＮＯＳ（誘導型一酸化窒素合成酵素）の作用によって生成された呼気ガス(Pavord, I.D. et al., J Asthma 45, 523-531 (2008))；末梢血好酸球、血清ＩｇＥ値、及びＹＫＬ−４０、末梢血中で検出キチナーゼ様タンパク質(Chupp, G.L., et al., N Engl J Med 357, 2016-2027 (2007))である。我々は我々の喘息コホートにおけるこれらのバイオマーカーを測定し、気道好酸球増加症による値と他のバイオマーカーによる値を比較した。
【０３１０】
ＢＯＢＣＡＴにおいて、ＦＥＮＯ，ＩｇＥ、又は血中好酸球の何れもがＡＣＱ、ＦＥＶ１、年齢、性別、体格指数（ＢＭＩ）と有意には相関していなかった。ＢＯＢＣＡＴにおいて、ＦＥＮＯはより高いレベルでより変化したが、血清ペリオスチンレベルと同様に、ＦＥＮＯレベルは、一般に複数の来院にわたって一貫しており（データ非表示）、一方血清好酸球は遙かに多く変化した（来院１と３の間の血清ペリオスチンについてのｒ２＝０．６５に比べて、来院１と３の間の血中好酸球についてｒ２＝０．１８、非表示）。図１４Ａ〜Ｆに示すように、来院１、２、及び３での血清ペリオスチンレベルはお互いにかつＢＯＢＣＡＴにおける全来院にわたるペリオスチンレベルの平均値と非常に相関していた。
【０３１１】
表６に示されるように、喀痰と生検の好酸球の状態を層別すると、ＦＥＮＯレベルは、非好酸球性喘息患者に比べて好酸球性喘息患者で有意に高かった。しかし、ＦＥＮＯ及びペリオスチンの両方とも高度の特異性を有し、「好酸球が低い」患者に対して一貫して低い値を示しているが、ＦＥＮＯは組織好酸球増加症の少数の被検体を検出し、用いた各測定基準によれば、「好酸球が低い」被検体及び「好酸球が高い」被検体の間で大きな重複を示していた（図１５Ａ〜Ｄ）。我々は、年齢、性別、ＢＭＩ、血中好酸球、血清ＩｇＥ、ＦＥＮＯ、及び血清ペリオスチンを取り入れたロジスティック回帰モデルをフィットさせ（表７）、ペリオスチンが、複合気道好酸球状態の最も有意な単一の予測因子であることがわかった（Ｐ＝０．００７）。
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【０３１２】
前述したように３５ｐｐｂのカットオフ値を使用して(Dweik, R.A., et al., Am J Respir Crit Care Med 181, 1033-1041 (2010))、ＦＥＮＯは、２５ｎｇ／ｍｌのペリオスチンカットオフに匹敵する特異性であるがより低い感受性を持つ「好酸球が低い」喘息患者及び「好酸球が高い」喘息患者を区別した（表６）。末梢血好酸球は、「好酸球が高い」喘息患者で高い傾向を示したが、統計的有意性には到達しなかった（データ非表示）。継続的に各マーカーの相対的なパフォーマンスを評価するために、我々は、ＦＥＮＯ、血中好酸球、及び血清ＩｇＥ対複合気道好酸球の状態の受信者動作特性（ＲＯＣ）分析を行い、ペリオスチンはＦＥＮＯに対して好ましく機能したが（ＡＵＣＳはそれぞれ０．８４と０．７９）、血中好酸球と血清ＩｇＥは実質的にあまり良く機能しなかった（図１５Ｅ）。
【０３１３】
ＹＫＬ−４０は、任意のコホートにおいて、ペリオスチンと、又は気道又は末梢好酸球増加症の何れの測定とも有意な相関を示さなかった（データ非表示）。呼気と血中バイオマーカーレベルのこれらの調査結果と一致して、我々は、ペリオスチン及びＮＯＳ２（ｉＮＯＳをコードする遺伝子）の気管支上皮遺伝子発現レベルが、お互いに、かつＩＬ−１３及びＩＬ−５の気管支粘膜の発現レベルと有意に相関するが、ＣＨＩ３Ｌ１（ＹＫＬ−４０をコードする遺伝子）の発現は、ペリオスチン、ＩＬ−１３、又はＩＬ−５とも相関していないことを見いだした。まとめると、これらのデータは、喘息患者において重症度とステロイド治療の広範囲にわたって、末梢血ペリオスチンが、ＦＥＮＯ、血中好酸球、血清ＩｇＥ、又はＹＫＬ−４０よりも気道Ｔｈ２／好酸球性炎症のより信頼性の高い指標であることを示している。
0006005657.tif 000014
【０３１４】
議論
喘息は伝統的Ｔｈ２誘導性炎症によって媒介されるアレルギー性疾患とみなされているが（１）、病態生理学的な不均一性の新たな証拠がある（３−８）。軽度から中等度のステロイド治療を受けていない喘息患者においては、約半分の患者のみがその気道にＴＨ２炎症の証拠があることを最近示した。「Ｔｈ２が高い」被検体は、アレルギー、好酸球性気道炎症、気管支線維症のマーカーの上昇、及びＩＣＳに対する感受性により識別される。Ｔｈ２サイトカインのアンタゴニストとして、ＩＬ−４、ＩＬ−５及びＩＬ−１３が喘息治療薬として活発に開発中であり（３５−３７）、これらの標的とされた治療法から最も恩恵を受ける喘息患者を同定することが重要となるであろう。気管支鏡検査、誘発喀痰サンプリング、呼気ガス測定は、気道における炎症経路の直接的な特性評価を可能とするが、これらのモダリティは、時間がかかり、高価で、侵襲的であり得、及び／又はプライマリケアの環境で広く利用可能ではない。更に、アッセイ手順は、気道サンプルを解析するための比較的少数の装備されたセンターに横断して標準化されておらず、多施設臨床試験における実装を困難にしている。従って、標的とされた治療法に対して、気道にＴｈ２駆動型好酸球性炎症の根拠を持つ患者を選択するために、アクセス可能なアッセイプラットフォーム上で広く利用可能なＴｈ２駆動型好酸球性気道炎症の非侵襲的なバイオマーカーを開発することは有益である。このニーズに対応するために、我々はＴｈ２駆動型好酸球性気道炎症の臨床的に有用な周辺マーカーの発見と特徴付けを可能にするために、喘息気道サンプル中の遺伝子発現プロファイリングを使用している。
【０３１５】
ペリオスチンは、線維症に関連付けられている分泌マトリクス細胞のタンパク質であり、その発現は、培養気管支上皮細胞（２１、３８）及び気管支線維芽細胞（３９）における組換えＩＬ−４、ＩＬ−１３によって上方制御される。これは、喘息のマウスモデル（４０）、喘息のアカゲザルモデル（未発表データ）、及びヒト喘息患者のの気管支上皮細胞（２１）とその上皮下気管支層（３９）においてインビボで高レベルで発現される。ヒト喘息患者において、ペリオスチン発現レベルは、上皮下線維症の指標（２３）である網状基底膜の厚さに相関する。ペリオスチンはまた、アスピリン感受性喘息（４１、４２）に関連する鼻ポリープ、及び好酸球性食道炎患者の食道上皮内（４３）でＩＬ−１３依存的にで過剰発現され、したがって、Ｔｈ２駆動型疾患過程（４４）において好酸球の組織浸潤の役割を果たすことができる。ペリオスチン発現の上昇はまた、上皮由来の癌の一部の型で観察されており（４５−４９）、かつ可溶性ペリオスチンのレベルの上昇は、一部癌患者の血清中で報告されている（２４−２６、４５、４６）。喘息又はその他の条件でペリオスチンの局所的及び全身での発現はＩＬ−１３の直接または間接的な作用が原因であるかどうかはまだ不明であり、ＩＬ−１３の治療遮断の前後でペリオスチンの発現を比較することによる評価により最良に対処されると考えられる。
【０３１６】
ペリオスチンは、非喘息患者の末梢血中でかなりの全身濃度で検出されるが、ＩＣＳ治療を受けていない喘息患者のサブセットの末梢血中において上昇している。気管支上皮におけるその発現は、ＩＣＳ治療によって抑制され（１３、２１）、その全身レベルは、ＩＣＳを受けていない喘息患者に比較して相対的に良好に制御される中等度の喘息患者において、かなり不均一性があるものの一般的に低くなっている。ＩＣＳは主に気道内で局所的にその効果を発揮し、そして全身のペリオスチンレベルが（我々が以前、例えば国際特許出願公開第２００９／１２４０９０号に示したように）ＩＣＳの治療を受けた後、喘息患者では抑制されていることを考慮すると、全身ペリオスチンの実質的画分は喘息患者における気道に由来するので、全身ペリオスチンのレベルの１０〜２０％の違いは、気道炎症に関して臨床的に意味があると結論され得る。
【０３１７】
ＦＥＮＯは気道炎症に関連付けられており、様々な重症度の喘息患者におけるＩＣＳの応答性を予測している（１１、３４）。しかし、ＦＥＮＯレベルは重度のステロイド依存性喘息における気道好酸球増加症を信頼性良く反映しておらず、ＦＥＮＯに関して喀痰と粘膜好酸球定量化の間に矛盾がある（２９、５０）。喀痰好酸球数を抑制するためのＩＣＳ治療の用量設定は、重度の喘息増悪率を減少させるが（１２）、ＦＥＮＯレベルに対するＩＣＳ治療の用量設定は減少させない（５１）。血清ＹＫＬ−４０は、喘息性の気道炎症のマーカーとして説明されているが、しかし、そのレベルは、ＩｇＥの又は好酸球などのＴｈ２型炎症の指標と相関していなかった（３３）。従って、本研究で我々は、ＣＨＩ３Ｌ１でなくペリオスチンとＮＯＳ２の気管支上皮遺伝子発現が、気管支のＩＬ−１３及びＩＬ−５の発現と相関していることを見いだした（表８）。我々は、気管支又は全身の好酸球増加症と血清ペリオスチンレベル間に比較的強い正の相関を観察したが、好酸球増加症とＦＥＮＯ間の相関は弱く、我々は試験された喘息患者において血清ＹＫＬ−４０と好酸球性炎症との間の相関関係を観察することができなかった。喀痰及び血中好酸球数及びＦＥＮＯは、アレルゲン曝露、増悪、及びステロイド治療に応じて有意な一時的変動にさらされる（５０、５２、５３）。循環するペリオスチンの半減期は現在不明であるが、ペリオスチンが血中で比較的長い寿命である場合、全身ペリオスチンレベルは、長期間にわたって総気道Ｔｈ２型炎症の統合を反映し得ることが可能である。この可能性と一致して、我々は、最大５週間の経過にわたる３つの測定において血清ペリオスチンで比較的少ない被検体内の変動性を観察した。更なる研究が、血清ペリオスチン、気道好酸球増加症、ＦＥＮＯ、長時間にわたるＴｈ２型炎症の他のバイオマーカー候補における長期的な被検体内の変動性を比較する評価に向けられるべきである。
【０３１８】
対症療法（例えば、β−アゴニスト）で制御されない気管支喘息の標準治療は吸入コルチコステロイド（ＩＣＳ）である。気道のＩＬ−１３のレベルが上昇した軽度から中等度の喘息患者及び食道組織でＩＬ−１３のレベルが上昇した好酸球性食道炎の患者において（４３）、ＩＣＳ治療は、影響を受けた組織におけるＩＬ−１３のレベルとＩＬ−１３誘導性遺伝子を実質的に減らす。１週間のＩＣＳ治療後の喘息患者の気道上皮において及び培養された気管支上皮細胞において、我々は、コルチコステロイド治療は、Ｔｈ２シグニチャー遺伝子のＩＬ−１３誘導性発現レベルを実質的に減らすことを示した（１３，２１）。この下方制御は、ＩＬ−１３のレベルのＩＣＳ媒介性の減少、標的遺伝子発現のＩＣＳ媒介性の減少、又はその２つの組み合わせの結果である可能性がある。ＩＣＳの治療に難治性の重度喘息患者においては、軽度のＩＣＳナイーブ喘息患者で見られるものと類似の被験体の画分（約４０％）が、検出可能な喀痰ＩＬ−１３のレベルを有することが見いだされ、それは我々が記述した気管支上皮Ｔｈ２シグニチャーを持つ患者の割合に匹敵する（１３）。同様の観察が、ＩＬ−４およびＩＬ−５を発現するＢＡＬ中の細胞を持つステロイド難治性喘息患者における持続性、及び気管支生検および喀痰中の好酸球性炎症において報告されている。これらの観察は、Ｔｈ２駆動型好酸球性炎症は中等度の喘息患者におけるＩＣＳ治療により抑制されるものの、ステロイド治療で不完全に制御される重篤な喘息患者のサブセットにおいて再び出現することを示唆している。追加の合併症は、所定のＩＣＳ療法に対する不完全なアドヒアランスによってもたらされ、それは一部の重篤な喘息患者にいける制御不良の根底にある。したがって、更なる研究が、ＩＣＳ治療状況、ＩＣＳ用量、本質的なステロイド感受性、及びＩＣＳ治療へのアドヒアランスの関連で血液ペリオスチンレベルを評価することに向けられるべきである。
【０３１９】
現在、ＩＬ−１３及び、本明細書に記載されるものを含め、喘息患者においてＴｈ２炎症を駆動する関連因子（３５〜３７）を標的とする数多くの生物学的治療薬が臨床開発において存在する。これらの治療は関連する分子病理学を持つ患者へ標的とされ、そうでなければ重要な治療効果が過小評価されうることは重要である；抗ＩＬ５治療はこの点を強調する（１４，１５，５５）。我々の知見は、ステロイドナイーブの軽度から中等度の喘息患者の約半分が、その気道におけるＴｈ２経路の活性を示す場合があり、かつ中等度から重度の、ステロイド難治性喘息患者の類似の割合がこの経路の活性を示すことを示唆している。従って、本明細書に記載されるように、気道におけるＴｈ２駆動性炎症を有する可能性が高い喘息患者を特定するバイオマーカーは、これらの実験的標的治療に反応する可能性が最も高い患者の識別と選択に役立つ場合がある。
【０３２０】
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【０３２１】
実施例６  喘息患者試験ＩＩＩ（安全性、耐容性と有効性を評価するために）
本研究は、ＩＣＳ（５００−２０００μｇ／日のプロピオン酸フルチカゾン乾燥粉末吸入器［ＤＰＩ］または同等品）＋長時間作用型β刺激薬（ＬＡＢＡ）、ロイコトリエン受容体拮抗薬（ＬＴＲＡ）、長時間作用型ムスカリンアンタゴニスト（ＬＡＭＡ）又はテオフィリンなどの第２コントローラー薬物療法による日々の治療にもかかわらず制御されないままである重篤な喘息を持つ患者におけるレブリキズマブの無作為化、多施設、二重盲検、プラセボ対照、並行群間試験である。この試験はまた、血清ペリオスチンのベースラインレベル≧５０ｎｇ／ｍＬの診断値（Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）アッセイにより測定される）を評価する。ＩＣＳ及び第二のコントローラー薬物が含まれなければならない管理治療の標準を継続しつつ、患者を無作為に、レブリキズマブの３つの用量の何れか、又は５２週間のプラセボ対照期間のプラセボに割り当てる。
【０３２２】
スクリーニング期間とも呼ばれる２週間の導入期間中（来院１から来院３）、患者は現在の喘息治療の順守及び試験を通じての毎月の臨床来院のために必要な装備を使用する彼らの能力並びに標準治療薬物により与えられる喘息の制御の程度について評価される。喘息コントロールアンケート（ＡＣＱ）スコア≧１．５及び制御されない喘息の一以上の症状（夜間覚醒１回／週、症状＞２日／週、ＳＡＢＡの使用＞２日／週、及び／又は日常的な活動の妨害）を報告する患者は制御されないと考えられる。コントローラー薬物のアドヒランスによらず、来院１又は２及び来院３で症状が制御されないままである患者は参加する適格性がある。アドヒランスデータが不完全であるケースにおいて、及び来院３でＡＣＱ−５が＜１．５である患者に対して、治験責任医師のこの患者の経験が、今週は彼らの病気について非定型的であったことを示唆する場合、スクリーニング期間を１週間延長する場合がある。患者は、最高で更に２回まで選択された理由により再スクリーニングに適格となり得る。
【０３２３】
導入（スクリーニング）期間の最後に、適格患者は無作為に試験薬（プラセボ又はレブリキズマブを毎月３７．５ｍｇＳＣ、毎月１２５ｍｇＳＣ、又は４週間毎に２５０ｍｇＳＣ）に割り当てられる（１：１：１：１）。無作為化は、Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）アッセイを使用して測定されたベースラインの血清ペリオスチン（＜４２ｎｇ／ｍＬ，≧４２から＜５０ｎｇ／ｍＬ，≧５０から＜５８ｎｇ／ｍＬ，≧５８ｎｇ／ｍＬ）、最後の１２か月の喘息増悪の既往歴（０，１−２，≧３事象）、ベースラインの喘息薬物（ＩＣＳ用量≧プロピオン酸フルチカゾンＤＰＩ又は同等物の１０００μｇ／日＋ＬＡＢＡ［はい、いいえ］）、および地理的領域（米国／カナダ、ヨーロッパ、アジア、世界の残りの部分）によって階層化される。患者は彼らの標準治療の安定的投与量を続けると考えられ、それは５２週間の二重盲検試験治療を受けることに加えて、ＩＣＳ（プロピオン酸フルチカゾンＤＰＩ又は同等物の５００、２０００μｇ／日）及び第二コントローラー薬物を含まなければならない。
【０３２４】
試験治療の第１のＳＣ注射は無作為化と同じ日に起き（来院３［第１日］）、（合計１３の試験治療投与のために）投薬は５２週間のプラセボ対照期間にわたって４週間に１回反復されるであろう。安全性、有効性及び患者の報告結果（ＰＲＯ）の測定は５２週間のプラセボ対照期間を通じて評価されるであろう。主要有効性エンドポイントは喘息増悪率であり、５２週間のプラセボ対照期間を通じて評価されるであろう。
【０３２５】
５２週間のプラセボ対照期間を完了する患者（即ち、時期尚早に試験治療を中止していない患者）は、５２週間の積極的な治療延長へと続く。
【０３２６】
５２週間の積極的な治療延長試験へと続いた全ての患者は、４週間ごとに１２５ｍｇ又は２５０ｍｇの何れかの投与量で二重盲検でＳＣレブリキズマブを受けるであろう。５２週間のプラセボ対照期間中に１２５ｍｇ又は２５０ｍｇの何れかのレブリキズマブを受けることを割り当てられた患者は、割り当てられたレブリキズマブの用量のままであろう。５２週間のプラセボ対照期間中４週間ごとにプラセボ又はレブリキズマブの３７．５ｍｇのＳＣを受けることを割り当てられた患者は、ベースラインペリオスチンレベル及び前治療の割り当てにより層別化される無作為化により、５２週間の積極的な治療延長において４週間ごとにＳＣレブリキズマブを１２５ｍｇ又は２５０ｍｇの何れかに対して、１：１の比で無作為化されるであろう。
【０３２７】
５２週間の積極的治療延長の第７６週で、各患者は、最近の３回の来院（６８，７２及び７６週）からのデータを使用して、喘息コントロールについて評価されるであろう。喘息症状が連続する１２週間において制御されている患者（各評価でＡＣＱ ５ ≦０．７５）及び積極的治療延長の最初の半分以内で（５２〜７６週）増悪しなかった患者は、レブリキズマブ治療を中止し、経過観察期間に入る。経過観察の間、患者は試験薬の最後の投与後２４週間安全性について経過観察されるであろう。７６週で症候性のままの患者（ＡＣＱ−５ ＞ ０．７５）又は積極的治療延長の最初の半分の期間（５２〜７６週）に増悪事象を経験した患者は更に２８週間のレブリキズマブ治療を続けるであろう。安全性、有効性及びＰＲＯの測定は５２週間積極的治療延長を通じて評価されるであろう。
経過観察期間中に、全ての患者は、プロトコールでスケジュールされるとき又は試験治療からの早期中止の事象でいつでも生じ得る、試験治療の最終投与後２４週間（薬剤の＞５半減期）安全性について経過観察されるであろう。来院２３（７６週）を通して試験を完了し、良好に制御され、試験治療を中止した患者においては、来院２３が安全性の経過観察の来院１に置き換わるであろう。来院３０（１０４週）を通して全試験を完了した患者においては、来院３０が安全性の経過観察の来院１に置き換わるであろう。これらの場合の両方において、経過観察期間における次回の来院は１２週での安全性の経過観察の来院２であろう。他の全ての患者において、最初の経過観察の来院は、安全性の経過観察期間の４週での（試験治療の最後の投与後約４週）安全性経過観察の来院１であろう。
【０３２８】
試験における全参加は、来院３（第１日）での無作為化から、５２週間のプラセボ対照期間、５２週間の積極的治療延長及び安全性の経過観察期間を含み、１２４週間にも及ぶであろう。
【０３２９】
およそ１４００人の患者（ペリオスチンの群［ペリオスチンが高い≧５０ｎｇ／ｍＬ，ペリオスチンが低い＜５０ｎｇ／ｍＬ］）あたり、治療群［ＳＣレブリキズマブ ２５０ｍｇ，１２５ｍｇ，３７．５ｍｇ，又はプラセボ］あたり１７５患者）が世界的に約２５０箇所で試験に登録されるであろう。最小の６５０人の患者が、ペリオスチンが高い群（≧５０ｎｇの／ｍＬ）に登録されるであろう。ＤＰＩでのＩＣＳフルチカゾン≧１０００μｇ／日又は同等物＋ＬＡＢＡを受けている、最小の約４５０人の患者が登録されるであろう。
【０３３０】
鍵となる包含基準は以下を含める：スクリーニング前に≧１２ヶ月の喘息の診断；気管支拡張薬応答／可逆性：患者はスクリーニング期間中に短時間作用型βアンタゴニスト（例えば、アルブテロールまたはサルブタモール）の４回のパフに応答する≧１２％の気管支拡張薬応答を有さねばならない；来院２と来院３の両方で予測された気管支拡張薬前ＦＥＶ１が４０％〜８０％；スクリーニング前に≧６ヶ月の間、ＩＣＳ＞５００（例えば５００−２０００）μｇのプロピオン酸フルチカゾンＤＰＩ又は同等物（１日の総用量）を受けている；スクリーニング前の６ヶ月間に第二のコントローラー薬物（例えば所定の投与量の範囲内でのＬＡＢＡ，ＬＡＭＡ，ＬＴＲＡ，又はテオフィリン）を受けている；スクリーニング期間（即ち来院１［第１４日］又は来院２［第７日］）及び無作為化の時（来院３［第１日］）の両方で示される制御されない喘息、以下に定められるように：ＡＣＱ−５スコア≧１．５で、国立心肺血液研究所（National Heart, Lung, and Blood Institute）及び全国喘息教育・予防プログラムの専門家パネル報告書3（2007）（National Asthma Education and Prevention Program Expert Panel Report 3 (2007)）及び喘息のためのグローバル・イニシアティブ（2010）のガイドライン（the Global Initiative for Asthma (2010) guidelines）に基づく、制御されない喘息の以下の症状の少なくとも一：
症状＞２日／週
夜間の覚醒≧１回／週
救助薬としてのＳＡＢＡの使用＞２日／週
正常な日常の活動の干渉；
【０３３１】
他の肺疾患が無いことをを確認する、来院１の前１２ヶ月以内に得られた胸部Ｘ線写真又はコンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン又はスクリーニング期間中の胸部Ｘ線写真；スクリーニング期間中の７０％以上においてコントローラー薬物によるアドヒランスの実証（アドヒアランスは、ピークフローメータ装置に記録されているように、患者がスクリーニング期間中（来院１から来院３）の７０％以上の日を喘息治療コントローラー治療をを受けていると肯定的に応答するとして定義される）。
【０３３２】
鍵となる除外基準は以下を含める：生物学的製剤又はレブリキズマブ注射の任意の成分に対する既知の過敏症に対する重度のアレルギー反応又はアナフィラキシー反応の既往歴；来院１の前３ヶ月以内の毎日の又は隔日の経口コルチコステロイド維持療法として定義される経口コルチコステロイド維持療法；スクリーニング（来院１）前の４週間又は急性増悪事象を含む任意の理由により全身性の経口、静脈内投与（ＩＶ）又は筋肉内投与（ＩＭ）のコルチコステロイドを必要とするスクリーニング期間の何れかでの喘息の増悪；以下の何れかを必要とする感染の主な発症；
１．スクリーニング（来院１）の前４週間以内で２４時間以上の入院
２．スクリーニング（来院１）の４週間以内での静脈内投与（ＩＶ）抗生物質による治療
３．スクリーニング（来院１）の前２週間以内での経口投与抗生物質；
【０３３３】
来院１の前６ヶ月以内での活動性の寄生虫感染症；スクリーニング前の１２ヶ月以内での治療を要求する結核（結核を治療され、治療終了後１２ヶ月で再発していない患者は許容される）；限定されないがＨＩＶ感染を含む既知の免疫不全症；免疫調節療法の現在の使用；潜在的な悪性腫瘍について知られている現在の悪性腫瘍又は現在の評価；活動性Ｂ／Ｃ型肝炎または不安定な肝疾患の証拠；スクリーニング前の６ヶ月以内の活動性寄生虫感染；ＡＳＴ／ＡＬＴ上昇≧２．０正常の上限；嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、および／または喘息以外の他の臨床的に有意な肺疾患の既往歴；現在喫煙又は喫煙履歴＞１０パック年；スクリーニング前６ヶ月の期間での任意の時での生物学的療法；試験期間中に非常に効果的な避妊方法を使用することを望んでいないか又は妊娠中または授乳中である生殖能のある女性患者；他の不安定な医学的疾患；ボディマスインデックス＞３８ｋｇ／ｍ２、体重＜４０ｋｇ。
【０３３４】
第ＩＩＩ相試験の投薬の理論的根拠
集団ＰＫ解析法
成人患者のレブリキズマブのＰＫプロファイルを記述するために、予備的集団ＰＫモデルが開発された。上述した試験の３３３人のレブリキズマブ治療患者由来の総計４９１４の血清濃度−時間サンプルがモデルを開発するために使用された。各試験で観測された平均ＰＫプロファイルと過去のデータから予測されるプロファイルの間の良好な一致によって証明されるように、試験にわたって明らかな相違は観察されなかった。
【０３３５】
一次吸収と排泄動態による２コンパートメントモデルは、血清レブリキズマブの濃度−時間データを十分に説明した。構造モデルのパラメータは、クリアランス（ＣＬ）、中心コンパートメント（Ｖ１）の分布容積、末梢コンパートメント容積（Ｖ２）、インターコンパートメントクリアランス（Ｑ）、並びに皮下（ＳＣ）投与後の吸収の一次吸収率（Ｋａ）および生物学的利用能（Ｆ）が含まれている。すべてのパラメーターは、Ｖ２とＱ（母平均値に固定された）を除いて、対数正規分布であると仮定した。
【０３３６】
母平均ＣＬとＶＬは０．１８Ｌ／日及び３．７Ｌとそれぞれ見積もられた。母平均バイオアベイラビリティは７６％と推定された。ＰＫパラメーターの個人間変動は適度な１５％から２７％までの範囲であった。体重はＣＬとレブリキズマブの分布の体積の有意な共変量であることが見いだされ、体重の重さが高いクリアランス及び大きな分布体積と関連している。ＣＬにおけるおよそ１９％の個人間変動及びＶ１における１１％の個人間変動は体重により説明された。見積もられた集団ＰＫパラメーターが表１３に要約される。集団ＰＫ解析は、レブリキズマブのＰＫ特徴はＩｇＧモノクローナル抗体に典型的なそれと一致していることを示していた。
【０３３７】
ＰＫパラメーターにおけるペリオスチンの効果は、実施例２の試験及び実施例３の試験における中央値の上下のベースラインペリオスチンレベルを持つＰＫパラメーターの個々の事後推定値を比較することにより評価された。その違いは、ＣＬ（ｐ＝０．５４，０．１１），Ｖ１（ｐ＝０．８３，０．７９），及びＦ（ｐ＝０．７４，０．３７）についての両方の試験において有意であった（ｐ＞０．０５）。
0006005657.tif 000015
【０３３８】
均一投薬の理論的根拠
均一な投薬を上述した第ＩＩ相試験で使用した。レブリキズマブのＰＫプロファイルにおける体重の影響を考慮すると、体重が重い患者は一般的に薬物曝露が少なくなる。しかし、レブリキズマブで治療された個々の患者におけるベースラインから第１２週までのＦＥＶ１の比例した変化と体重との間には相関を見いだされず、曝露における体重の影響は有効性に影響を及ぼさなかったことを示唆している（図２０を参照）。更に、これらの試験由来のデータは試験された体重の範囲内で（５３〜１３５ｋｇ）均一投薬に対する安全上の懸念は無いことを示していた。
【０３３９】
レブリキズマブに対する曝露の全体的な変動性における均一投薬の影響を評価するために、集団ＰＫシミュレーションが、上述の第ＩＩ相試験に見られるものと似た分布を仮定して、均一投薬及びそれと同等の体重に基づいた（即ちｍｇ／ｋｇ）投薬レジメンを比較するために実施された。様々なレベル以上の定常状態のトラフ濃度による予測された患者の割合は、均一及び体重に基づく投薬レジメンの間で似ており（図２１）、体重に基づく投薬の明らかな利点は無いことを示唆している。その結果、個別化された体重に基づく投薬と比較して、投薬誤差のリスクと操作の複雑性（例えば薬物調製）を減少するその利点を考慮すると、均一投薬が第ＩＩＩ相試験において選択された。
【０３４０】
標的濃度の理論的根拠
第ＩＩＩ相試験を用いた曝露−応答解析が、第ＩＩＩ相試験の用量選択を知らせる標的のレブリキズマブ濃度を導き出すために行われた。上述された両方の第ＩＩ相試験において、レブリキズマブで治療された個々の患者において、ベースラインからのＦＥＶ１のプラセボ補正変化と、１２週での血清トラフ薬物濃度の間には明らかな相関が見られず（データ非表示）、ＦＥＶ１におけるレブリキズマブの作用は両方の試験でテストされた曝露の範囲では飽和していることを示唆している。更に、ＰＤバイオマーカー（ＦｅＮＯ，ＩｇＥ，ＣＣＬ１７，及びＣＣＬ１３）における変化と第ＩＩ相試験における血清トラフ薬物濃度の間の相関の評価は、両方の試験において治療期間中のこれらのＰＤ応答の飽和を示唆していた。結果はペリオスチンが高い群で似ていた。これらの結果を基にして、標的血清定常状態トラフ濃度が１０μｇ／ｍＬが、両方の知見において観察されたＣトラフ値，１２週範囲の下端を一括すると提案された（実施例２の試験において、５番目−９５番目パーセンタイル：９．６−５０μｇ／ｍＬ；実施例３の試験において９．４−７３μｇ／ｍＬ）．。更に、文献で入手できるデータに基づいた肺におけるＩＬ−１３のレベルとレブリキズマブの仮定された血清から肺への分配（１：５００）を考慮すると、１０μｇ／ｍＬの血清濃度が、喘息患者でＩＬ１３を中和するために肺において十分高い薬物レベルを維持することが期待される。従って、第ＩＩＩ相における有効用量は血清の定常状態トラフ濃度＞１０μｇ／ｍＬを維持するであろうことが予測される。
【０３４１】
第ＩＩＩ相における部分的有効用量を選択するために、効能が観察された実施例２と実施例３の両方において、観察されたＣトラフ値，１２週範囲との重複が無いことを確実にするために、５μｇ／ｍＬの低い標的定常状態トラフ濃度が提案された。加えて、両方の試験において、血清ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）レベルにいおけるレブリキズマブの効果は、薬物洗い出しの最中に（図２２：（Ａ）実施例２の試験、（Ｂ）実施例３の試験を参照）、血清レブリキズマブ濃度の平均値が＞５μｇ／ｍＬで、ベースライン側に戻った。血清ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）のレブリキズマブの効果は有効性とは相関しなかったが、このバイオマーカーの回復は、この濃度で所定の生物学的経路においてＩＬ−１３の準最適抑制を示唆している。従って、部分的有効用量は、血清の定常状態トラフ濃度＜５μｇ／ｍＬを維持すると提案される。
【０３４２】
提案された第ＩＩＩ相の投薬量の理論的根拠
上述のように実施例３における明らかな投薬応答の欠如を考慮すると（即ち、１２５ｍｇ、２５０ｍｇ、及び５００ｍｇの用量は等しく有効であるように見えた）、第ＩＩＩ相の投与量が、有効用量レベル及び部分的有効用量レベルの両方を含むことにより、レブリキズマブの用量応答を実証するために選択された。この目的を満たすために、第ＩＩＩ相プログラムのレブリキズマブの提案された用量は、４週間ごとに（ｑ４ｗｋ）皮下（ＳＣ）注射により与えられる２５０ミリグラム、１２５ミリグラム及び３７．５ｍｇを含む。図２３は、第ＩＩ相試験において見られるものと同様の体重分布を仮定して、これらの用量においてシミュレートされた集団ＰＫプロファイルを示す。
【０３４３】
４週間ごとの（ｑ４ｗｋ）２５０ｍｇの最高用量（１ｍＬのＳＣ注射を２回）が、第ＩＩＩ相における臨床的有効性を実証すると予測される。それは、第ＩＩ相の概念実証試験（実施例２）で試験され、喘息がＩＣＳ治療にも関わらず制御されない患者の重篤な喘息増悪率を減少させることに有効性を示したただ一つの投薬レジメンであり、その患者集団が治療のために意図された。実施例２の患者は、他のコントローラーを含むか又は含まないＩＣＳによる治療にもかかわらず、制御されない喘息を持っており、ＩＣＳ≧５００μｇ／日を受けている実施例２の患者の≧９０％がＬＡＢＡ薬物をも受けていた。この投薬レジメンにて、ほとんど全て（９９％）の患者は、集団ＰＫシミュレーションに基づいて、１０μｇ／ｍＬの標的Ｃトラフ、ＳＳを達成すると予想され（表１４参照）、それは最大の有効性が期待されることを意味する。従って、この用量が第ＩＩ相で見られる臨床効果を複製するために試験されるであるう。
0006005657.tif 000016
【０３４４】
４週間ごとに１２５ｍｇの中間の用量が、第ＩＩ相用量範囲試験において、４週間ごとの１２５ｍｇ及び２５０ｍｇで観察されたＦＥＶ１の改善の大きさの類似性に基づいて提案される（実施例３）。同じ用量−応答関係が増悪エンドポイントにおいて重度の喘息患者集団に当てはまると期待することは妥当であり、従って、１２５ｍｇの用量が第ＩＩＩ相における有効性を示すと予想される。この予想は、集団ＰＫシミュレーションにより更に支持され、それは患者の大部分（７８％）がこの投薬レジメンにより１０μｇ／ｍＬのＣトラフ、ＳＳを達成するであろうことを示している（表１４参照）。
【０３４５】
４週間ごとの３７．５ｍｇの用量（０．３ｍＬのＳＣ注射を１回）が、用量−応答関係を確立するために重要である、レブリキズマブの部分的有効用量又は臨床的非有効用量を実証するために提案される。この投薬レジメンには以下の考慮事項を考慮して選択される：
患者の大部分（７２％）で５μｇ／ｍＬ未満、患者のほとんど全て（９９％）で１０μｇ／ｍＬ未満のＣトラフ、ＳＳを維持する能力（表１４を参照）。
中間用量からの合理的な（３．３倍）の分離
差次的臨床応答を実証するために、中間用量と、レブリキズマブに対する血清曝露のシミュレートされた範囲における最小の重複（表１４参照）
投薬誤差の可能性を低減するのに便利な注射量（０．１ｍＬで複数）
【０３４６】
この第ＩＩＩ相試験の様々な評価項目は以下のとおりである。
【０３４７】
評価項目
以下のエンドポイントの各々はペリオスチンが高い患者と低い患者で別個に評価されるであろう。２５０ｍｇのレブリキズマブ群をプラセボ群と比較したときに、主要エンドポイントがペリオスチンが高い群では満たされている場合、試験は陽性と見なされる。
【０３４８】
主要有効性評価項目
主要有効性エンドポイントは、５２週間のプラセボ対照期間の喘息増悪率の評価項目ある。この試験において、喘息の増悪は、全身性コルチコステロイドによる治療や入院につながる新規の喘息症状または喘息症状の増加（例えばこれらの症状に起因する喘鳴、咳、呼吸困難又は胸の圧迫感又は夜間覚醒を含む）として定義される。ここで、全身性コルチコステロイドによる治療とは、経口（即ちＯＣＳ）又は非経口コルチコステロイドによる３日間以上の治療又は非経口（ＩＶ又はＩＭ）コルチコステロイドの一以上の投薬を伴う救急部の来院として定義される。
【０３４９】
２次有効性評価項目
５２週での２次有効性評価項目は以下の通りである：ベースラインから５２週までの気管支拡張薬前のＦＥＶ１の相対的な変化；５２週間の治療期間中の最初の喘息増悪までの時間；ベースラインから５２週までの一酸化窒素（ＦＥＮＯ）排泄分画の変化；ベースラインから５２週までの喘息生活の質のアンケート（ＡＱＬＱ）の標準化バージョンの全体スコアにより評価される、喘息特異的健康関連の生活の質の変化；ベースラインから５２週までの救助薬の使用の変化（救助薬又噴霧救急薬（即ちＳＡＢＡ）の１日あたりのパフの数により測定される）；５２週間のプラセボ対照期間中の緊急の喘息関連保健医療の利用（すなわち、入院、救急来院、および救急治療の来院）。
【０３５０】
探索的評価項目
探索的評価項目は以下を含むであろう：５２週間のプラセボ対照期間中プロコールに定められた喘息悪化を経験しない患者の割合；ベースラインから５２週までの朝の気管支拡張薬後のピークフロー値（Ｌ／分）の変化；ベースラインから５２週までの気管支拡張薬後のＦＥＶ１の変化；５２週間のプラセボ対照期間中、気管支拡張薬前のＦＥＶ１の１５０ｍＬの改善までの時間；４週から５２週にわたり平均したベースラインからの気管支拡張薬前のＦＥＶ１の相対的変化（リットル）；ベースラインから５２週までの努力肺活量の相対的変化；全身性コルチコステロイドによる治療を要するスクリーニング期間中（来院１〜３）、最高値の６０％未満のＦＥＶ１又はＰＥＦを生じる増悪として定義される肺機能の低下と関連している増悪率；ベースラインから５２週までの労働生産性と活動性の障害−喘息アンケート（ＷＰＡＩ−喘息）により評価される労働、学校及び活動性の障害の変化；ベースラインから５２週までの喘息コントロールアンケート−５（ＡＣＱ−５）スコアにおける変化；ベースラインから５２週までの喘息症状効用指数（ＡＳＵＩ）により測定される喘息症状の変化；ベースラインから５２週までのＥＱ−５Ｄにより評価される、健康効用（ｈｅａｌｔｈ ｕｔｉｌｉｔｉｅｓ）の変化；ベースラインから５２週までの治療効果のグローバル評価（ＧＥＴＥ）の変化。
【０３５１】
これらの探索的評価項目はまた５２週間の積極的治療延長及び２４週間の経過観察期間の最中に評価されうる。更なる探索的評価項目は、５２週間を超えてレブリキズマブに曝露された患者における有害事象の頻度と重篤度；５２週間の積極的治療延長又は２４週間の経過観察期間中のインターロイキン−１３（ＩＬ−１３）／喘息関連ＰＤバイオマーカーの変化；５２週間の積極的治療延長又は２４週間の経過観察期間中の血清レブリキズマブ濃度を含み得る。
【０３５２】
患者の報告結果
喘息の生活の質アンケート−標準化（ＡＱＬＱ（Ｓ））
ＡＱＬＱ（Ｓ）は患者の喘息固有の健康に関連した生活の質を評価するために使用されるであろう(Juniper 2005)。アンケートは、活動の制限、症状、感情機能、及び環境刺激を含む４つのドメインが含まれる。ＡＱＬＱ（Ｓ）はこの試験集団における使用のために検証されている。ＡＱＬＱ（Ｓ）は２週間のリコール仕様がある。ＡＱＬＱ（Ｓ）は全ての他の非ＰＲＯ評価に先立ち、かつその評価の期間に患者が疾患の状態の情報又は試験薬を受ける前に患者に対して施される。
【０３５３】
労働生産性と活動性の障害−喘息アンケート（ＷＰＡＩ−喘息）
職場、学校における及び活動性に関する障害を評価するために、ＷＰＡＩ−喘息アンケートが施される(Reilly et al. 1993, 1996)。アンケート項目は、ＷＰＡＩアレルギー特異的（ＷＰＡＩ−ＡＳ）アンケートから適合され、アレルギーの用語の全出現を喘息に置き換えている。ＷＰＡＩ−ＡＳは全ての他の非ＰＲＯ評価に先立ち、かつその評価の期間に患者が疾患の状態の情報又は試験薬を受ける前に患者に対して施される。
【０３５４】
ヨーロッパＱＯＬ５Ｄアンケート（ＥＱ−５Ｄ）
ＥＱ−５Ｄは、健康状態に関する単一指標を提供する一般的な優先に基づく健康関連の生活の質のアンケートである。ＥＱ−５Ｄは、患者による自己完成用に設計されている。Ｅｑ−５Ｄは全ての他の非ＰＲＯ評価に先立ち、かつその評価の期間に患者が疾患の状態の情報又は試験薬を受ける前に患者に対して施される。
【０３５５】
喘息症状効用指数（ＡＳＵＩ）
ＡＳＵＩ(Revicki 1998)は、咳、喘鳴、息切れ及び夜間覚醒を測定する喘息特有の症状アンケートである。ＡＳＵＩは全ての他の非ＰＲＯ評価に先立ち、かつその評価の期間に患者が疾患の状態の情報又は試験薬を受ける前に患者に対して施される。
【０３５６】
実施例７  Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ペリオスチンアッセイ
ペリオスチンの定量的検出は自動化ロシュｃｏｂａｓ ｅ６０１Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）アナライザ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ）で評価される。試験は、分析物のペリオスチンが、ペリオスチン上の２つの異なるエピトープに結合する２つのモノクローナル抗体の間に挟まれているサンドイッチ形式で行われる。一つの抗体がビオチン化され、ストレプトアビジンコート磁気ビーズへの免疫複合体の取り込みを可能にしている。第二抗体は、シグナル伝達部分としての錯化ルテニウムカチオンを有し、結合した免疫複合体の電圧依存化学発光検出を可能にする。
【０３５７】
詳しくは、試薬は以下のように用いれている。
−ビーズ（Ｍ）：ストレプトアビジンでコーティングされた磁性微粒子０．７２ｍｇ／ｍＬ；防腐剤。
−試薬１（Ｒ１）：抗ペリオスチン抗体〜ビオチン：
この精製されたマウスモノクローナル抗体は、実施例４に係るコーティング抗体２５Ｄ４に対応し、ビオチン化形式＞１．０ｍｇ／Ｌ；ＴＲＩＳ緩衝液＞１００ｍｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ７．０；保存剤で使用される。
−試薬２（Ｒ２）：抗ペリオスチン−抗体〜Ｒｕ（ｂｐｙ）：
この精製されたマウスモノクローナル抗ペリオスチン抗体は実施例４に係る検出抗体２３Ｂ９に対応し、（（トリス（２，２’−ビピリジル）ルテニウム（ＩＩ）錯体（Ｒｕ（ｂｐｙ））複合体で標識された）標識形態＞１．０ｍｇ／Ｌ；ＴＲＩＳ緩衝液＞１００ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ ７．０；保存剤で使用される。
【０３５８】
イムノアッセイは、２つのインキュベーションを用いて行われる。約９分間の第１のインキュベーションにおいて、２０μＬサンプル中のペリオスチンとビオチン化モノクローナル抗ペリオスチン抗体（Ｒ１）は複合体を形成する。更に９分間の第２のインキュベーションにおいて、ルテニル化モノクローナル抗ペリオスチン抗体（Ｒ２）とストレプトアビジンでコーティングされた微粒子（Ｍ）が、３員環サンドイッチ複合体が形成され、ビオチンとストレプトアビジンとの相互作用を介して固相（微粒子）に結合されるように、第１のインキュベーションのバイアルに加えられる。
【０３５９】
反応混合物が測定セル内に吸引され、ここで微小粒子が白金電極の表面に磁気的に捕捉される。非結合物質は洗い流され、細胞はトリプロピルアミンを含む試薬であるＰｒｏＣｅｌｌで流される。電極への電圧の印加は、次いで、光電子増倍管によって測定される化学発光放出を誘導する。
【０３６０】
結果は、試薬バーコードを介して提供されるマスターカーブと２点校正とによって生成される機器固有の検量線を介して決定される。キャリブレーター１は分析物無しであり、キャリブレーター２はバッファリングマトリックスに５０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトペリオスチンが含まれる。キャリブレーションを確認するために、約３０〜８０ｎｇの／ｍＬのペリオスチンを持つ２つのコントロールが採用されている。
【０３６１】
実施例８  Ｅ４アッセイとＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ペリオスチンアッセイの比較
ペリオスチンレベルは、Ｅ４アッセイ（実施例４）とＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ペリオスチンアッセイ（実施例７）に類似の方法を使用して、実施例２と実施例３の各々に記載される臨床試験からの患者の血清サンプルで測定された。両試験からのサンプルの結果は、ペリオスチンの値が重複することを示した。変動性と広がりがアッセイ間で比較可能であった。一般に、中央値で、Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）アッセイの結果は典型的には２倍又は２倍を超えて、Ｅ４アッセイの結果より高かった。図１７を参照、即ち、中央値はＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）アッセイに対して５０−５１ｎｇ／ｍｌでＥ４アッセイに対して中央値は２３ｎｇ／ｍｌであった。
【０３６２】
前述の発明は、理解を明確にする目的のために例示および実施例によってある程度詳細に説明してきたが、説明や例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。すべての特許および本明細書に引用される科学文献の開示は、参照によりその全体が援用される。
【０３６３】
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【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４Ａ−Ｂ】
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【図１４Ｃ−Ｄ】
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【図１４Ｅ−Ｆ】
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【図１５Ａ−Ｂ】
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【図１５Ｃ−Ｄ】
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【図１５Ｅ】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８Ａ−Ｂ】
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【図１９】
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【図２０Ａ−Ｂ】
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【図２１】
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【図２２Ａ−Ｂ】
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【図２３】
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【配列表】
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