(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
エオタキシンレベルの増加を特徴とする疾患または病状のリスクのある、またはその症状を経験しているヒトにおいて、エオタキシンの健康なレベルを維持するため、またはエオタキシンレベルを健康なレベルに低減するための、薬剤、食品、または栄養補助剤を製造するための２５−ＯＨ  Ｄ３の使用であって、前記疾患または病状が、喘息、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎、鼻ポリープ、好酸球性食道炎、炎症性腸疾患、クローン病、食物アレルギーによる胃の症状、胃の寄生虫感染症、および胃食道逆流症からなる群から選択される、使用。
【請求項２】
ビタミンＤと併せての、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
薬物の製造における、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
食品または栄養補助剤の製造における、請求項１または２に記載の使用。
【請求項５】
前記疾患がアレルギー性疾患、炎症性疾患、非アレルギー性炎症および悪性疾患である、請求項１から４のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［技術分野］
本発明は、２５−ヒドロキシビタミンＤ３（カルシフェジオール）を用いた、ヒトにおけるエオタキシンのレベルの増加に付随する症状の治療／予防に関する。任意選択的に、ビタミンＤ３を２５−ヒドロキシビタミンＤ３と共に使用してもよい。
【０００２】
［背景技術］
ビタミンＤ（例えば、エルゴカルシフェロールおよびコレカルシフェロール）は、その生物活性によって定義される脂溶性化合物の群である。ビタミンＤの欠乏は、小児ではくる病、成人では骨軟化症の原因となる。しかし、一日当たりの推奨摂取量（つまり、５〜１５μｇまたは２００〜６００ＩＵのビタミンＤ）の１００倍を超える量を慢性的に数ヶ月間摂取した後に、毒性が生じ得る。ビタミンＤに関しては、「毒性の閾値は１日当たり５００〜６００ｍｃｇ／ｋｇ体重である。一般に、成人は、ＲＤＡの３倍を超える量を長期間消費すべきではない」（Ｇａｒｒｉｓｏｎ  ＆  Ｓｏｍｅｒ，Ｔｈｅ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ｐｇ．８２，１９９７年）。３７５ｎｍｏｌ／Ｌを超える２５−ヒドロキシビタミンＤの血中濃度で高カルシウム血症が起こり得る。さらに最近では、ビタミンＤの上限安全レベルが、少なくとも２５０μｇ／日（１０，０００ＩＵ）であると特定された（Ｈａｔｈｃｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ．Ｊ  Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．８５：６−１８，２００７年）。栄養補助食品などの摂取は、２５−ヒドロキシビタミンＤ約２００ｎｍｏｌ／Ｌの血中濃度を生じることが示されている。
【０００３】
ビタミンＤは、肝臓でヒドロキシル化されて２５−ヒドロキシビタミンＤ（カルシフェジオール；２５−ＯＨビタミンＤ；２５−ＯＨ  Ｄ）を生成し、次いで、それが腎臓および他の組織で別のヒドロキシル化を受けて、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ、ビタミンＤの活性ホルモン型を生成するプロホルモンである。１，２５−ジヒドロキシビタミンＤは、血液中に放出され、ビタミンＤ結合性タンパク質（ＤＢＰ）に結合し、標的組織へと輸送される。１，２５−ジヒドロキシビタミンＤとビタミンＤ受容体の結合によって、複合体が細胞核内で転写因子として作用することが可能となる。
【０００４】
ビタミンＤの欠乏は、骨吸収を促進し得る。循環器系、免疫系および筋肉系の機能も調節し得る。疫学的研究では、ビタミンＤ摂取と血圧もしくはグルコース代謝へのその作用との関連が判明している。ビタミンＤの活性は、副甲状腺ホルモンによる負のフィードバック制御下にある。
【０００５】
ビタミンＤと２５−ＯＨ  Ｄ３のどちらも、過去には薬剤として投与されていた。当然のことながら、ビタミンＤは広く入手可能であり；２５−ＯＨ  Ｄ３は、「ＣＡＬＤＥＲＯＬ」の商品名でＯｒｇａｎｏｎ  ＵＳＡによって米国で以前に販売されていたが、現在はＦＤＡの製造中止薬物のリストに載っている。それは、トウモロコシ油と２５−ＯＨ  Ｄ３を含有するゼラチンカプセルであった。
【０００６】
液状の２５−ＯＨ  Ｄ３が、オイル溶液で、「ＨＩＤＲＯＦＥＲＯＬ」の商品名でＦＡＥＳ  Ｆａｒｍａよりスペインで販売されていた。
【０００７】
ビタミンＤと２５−ＯＨ  Ｄ３の組み合わせは、動物飼料で使用されている。飼料に使用される２５−ＯＨ  Ｄ３は、「ＲＯＶＩＭＴＸ  ＨＹ−Ｄ」の商品名でＤＳＭから市販されている。Ｔｒｉｔｓｃｈら（米国特許第７，６３２，５１８号明細書）は、オイルに溶解された５〜５０％（重量／重量）の量の少なくとも２５−ＯＨ  Ｄ３、酸化防止剤、２５−ＯＨ  Ｄ３とオイルの液滴を封入する物質（ａｇｅｎｔ）、および栄養的添加剤（例えば、ビタミンＤ３）との飼料プレミックス組成物を開示している。そのプレミックスは、家禽、ブタ、イヌまたはネコの食餌に添加してもよい。この組成物は、酸化に対して２５−ＯＨ  Ｄ３を安定化する。
【０００８】
Ｓｉｍｏｅｓ−Ｎｕｎｅｓら（米国特許出願公開第２００５／００６４０１８号明細書）は、２５−ＯＨビタミンＤ３とビタミンＤ３の組み合わせを動物飼料に添加することを開示している。特に、約１０〜約１００μｇ／ｋｇの２５−ＯＨビタミンＤ３および約２００〜約４，０００ＩＵ／ｋｇのビタミンＤ３が、ブタ飼料に添加される。この添加によって、ブタの骨の強度が向上する。
【０００９】
Ｓｔａｒｋら（米国特許第５，６９５，７９４号明細書）は、２５−ＯＨビタミンＤ３とビタミンＤ３の組み合わせを家禽飼料に添加して、脛骨軟骨形成不全の作用を寛解させることを開示している。
【００１０】
Ｂｏｒｅｎｓｔｅｉｎら（米国特許第５，０４３，１７０号明細書）は、産卵鶏およびそれより年をとった雌鳥の卵の強度および脚の強度を高めるための、ビタミンＤ３と、１−α−ヒドロキシコレカルシフェロールまたは１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロールとの組み合わせを開示している。
【００１１】
Ｃｈｕｎｇら（国際公開第２００７／０５９９６０号パンフレット）は、ビタミンＤ３と２５−ヒドロキシビタミンＤ３のどちらも含有する食餌を与えられたソウス（ｓｏｗｓ）が、全身の健康状態、体格、一腹仔数および健康、ならびに他の生産パラメーターの向上を有したことを開示している。ヒト用２５−ＯＨ  Ｄ３食品サプリメントも開示されているが、一人当たり３００〜９００マイクログラムという非常に高い一日投与量に等しい、５〜１５マイクログラム／ｋｇ体重という投与量範囲は、きわめて高い。
【００１２】
我々の知る限りでは、先行技術において、エオタキシンレベルの増加に付随する症状を治療または予防するための、ヒト用薬物としての２５−ヒドロキシビタミンＤ３の使用は教示または提案されていない。
【００１３】
［発明の簡単な説明］
２５−ヒドロキシビタミンＤ３（カルシフェジオール）を栄養補助剤、食品、補助栄養食品または薬物として使用して、エオタキシン、好酸球の動員に関与するサイトカインのレベルを低減することが可能なことが判明している。栄養補助剤、食品、補助栄養食品または薬物は任意選択的に、ビタミンＤ３（コレカルシフェロール）をさらに含んでもよい。ヒトは、誕生から始まり、成人までの、１８歳〜８０歳、または８０歳以上の、小児および若年を含むあらゆる年齢であり得る。栄養補助剤、食品、補助栄養食品および薬剤組成物の形態および用量、ならびにこれらの形態を製造するプロセスも開示される。
【００１４】
本発明の一実施形態は、２５−ヒドロキシビタミンＤ３をヒトに投与するステップと、高いエオタキシンレベルに付随する症状の低減を観察または評価するステップを含む、エオタキシンレベルを低減する方法である。健常な人間において、血清中のエオタキシンレベルは、約３０ｐｇ／ｍｌで低い。ヒトが、エオタキシンレベルが高い症状を有する場合、次いで、エオタキシンのレベルは一般に増加し、つまり、５０ピコグラム／ｍｌを超え得る。個々においてエオタキシンレベルはかなりの差があるが、一般的に言えば、エオタキシンレベルの増加は、好酸球活性の増加に関係し、したがって、喘息、アレルギー、または以下に詳述される他の疾患などの症状に関連する。
【００１５】
２５−ＯＨ  Ｄ３を投与することによって、以前よりも低いレベルに、好ましくは、投与前に確認されたレベルよりも著しく低いレベルに、エオタキシンレベルを低減する、または維持することが可能となる。したがって、本発明は、エオタキシンのレベルを低減する、エオタキシンの低減されたレベルを維持する、かつ／または高いエオタキシンに関連する状態の症状を低減するのに有用な薬物を製造する方法に２５−ＯＨ  Ｄ３を使用することにも関する。本発明は、その必要がある個体のエオタキシンレベルを低減する方法であって、エオタキシンのベースラインレベルを確立するステップと、２５−ＯＨ  Ｄ３を投与するステップと、ベースラインに対するエオタキシンレベルの低減を確認するステップと、を含む方法にも関する。
【００１６】
その投与は、栄養補助剤、食品、補助栄養食品または薬物の形態をとり得る。任意選択的に、ビタミンＤ３が、２５−ヒドロキシビタミンＤ３と共に、または別に投与されてもよい。
【００１７】
本発明の他の実施形態は、エオタキシンレベルの増加に関連する症状を治療する方法であって、エオタキシン低減量の２５−ＯＨ  Ｄ３をかかる治療を必要とするヒトに投与するステップと、その症状／エオタキシンレベルの減少を確認または評価するステップと、を含む方法である。これは、エオタキシンの量をアッセイすることによって、または症状のレベルを観察することによって行うことができる。任意選択的にビタミンＤ３を投与してもよい。
【００１８】
更なる態様は、以下の明細書および特許請求の範囲、およびそれに対する概括から明らかであるだろう。
【００１９】
［本発明の詳細な説明］
明細書および特許請求の範囲全体を通して使用される、以下の定義が当てはまる：
「ビタミンＤ」とは、ビタミンＤ３（コレカルシフェロール）および／またはビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）を意味する。ヒトは、ビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）を生成することができないが、ビタミンＤの源としてそれを使用することができる。ビタミンＤ２は、様々な植物によって合成され、ビタミンＤの等価物としてサプリメントのビタミンＤにおいて使用されることが多い。
「ビタミンＤ代謝産物」とは、２５−ヒドロキシビタミンＤ３以外のビタミンＤの代謝産物を意味する。
「２５−ＯＨ  Ｄ３」とは、具体的に２５−ヒドロキシビタミンＤ３を意味する。
「２５−ＯＨ  Ｄ」とは、血漿中に見られる主要な循環形態であるビタミンＤ２またはビタミンＤ３のいずれかの２５−ヒドロキシル化代謝産物を意味する。
「予防」とは、疾患の回復、症状の重症度の低下、早期介入、および疾患を発病するまでの期間の延長を含むことを意味し、もはや患者が疾患にかからない、あるいは症状を経験しない状況に限定されることを意図するものではない。
【００２０】
エオタキシン（ＣＣＬ−１１、ＣＣＬ−２４、およびＣＣＬ−２６とも呼ばれる）は、ケモカインのＣＣファミリーに属する３種のタンパク質である。それらは、好酸球の選択的リクルーターであり、好酸球の凝集も誘発する。好酸球は、一部の侵入性微生物および蠕虫を殺すのに、特に腸において重要な有益な役割を果たす。最近の研究で、器官形成、組織修復、および免疫制御における役割も示唆されている。
【００２１】
しかしながら、循環および一部の組織における異常に高い量の好酸球は、アレルギー性疾患（喘息、鼻炎、およびアトピー性皮膚炎など）、他の炎症性疾患（炎症性腸疾患、好酸球性胃腸炎、および肺炎など）、非アレルギー性炎症（オゾン吸入または異物肉芽腫性反応によって誘発される疾患など）ならびに一部の悪性疾患（ホジキン病および種々の白血病など）などの多くの病状の特徴である。
【００２２】
驚くべきことに、２５−ＯＨ  Ｄ３を投与することによって、閉経後女性の血清中エオタキシンレベルが低下することが判明した。２５−ＯＨ  Ｄ３を投与された群は、ビタミンＤ３を投与された群と比較して統計学的に有意な低い量を有した。２５−ヒドロキシビタミンＤ３とビタミンＤ３の両方が、プラシーボと比較してエオタキシン量を低下させた。
【００２３】
したがって、２５−ＯＨ  Ｄ３の投与は、以下に詳述されるように、高レベルのエオタキシンに付随する疾患および症状の治療および予防に有益となるだろう。
【００２４】
［高レベルのエオタキシンに付随する疾患／症状］
［喘息］
参照により本明細書に組み込まれる、Ｐｅａｓｅ  ｅｔ  ａｌ，２００１  Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１（３）：２４８−２５３で説明されているように、喘息特有の特徴の１つは、気管支壁における好酸球の蓄積である。好酸球がその内容物（主要な塩基性タンパク質など）を放出した場合に、組織損傷および気管支の反応亢進、喘息の顕著な特徴が生じる。喘息と診断された個体は、エオタキシンレベルの増加を有し、急性喘息を経験している個体は、安定した喘息の個体よりも高いレベルを有することが報告されている。同様に、職業性喘息の個体もまた、高いエオタキシンレベルを有することが分かった。
【００２５】
マウスモデルにおいて、エオタキシン遺伝子の破壊によって、喘息モデルでの好酸球の動員が減少した。同様に、エオタキシン中和抗体の投与もまた、肺ｅｓｏｐｈｉｌｉｌａを減少することが判明した。
【００２６】
したがって、本発明の他の態様は、エオタキシン低減有効量の２５−ＯＨ  Ｄ３をかかる低減が必要なヒトに投与することによって、喘息の症状を減らす方法である。その結果得られる好酸球凝集の低減によって、喘息の症状の観察可能な減少が起こり、注目すべきことには、気管支狭窄が緩和されるだろう。本発明の他の態様は、喘息薬物を製造する方法における２５−ＯＨ  Ｄ３の使用である。
【００２７】
補助剤として、あるいは既知の喘息薬物および／または療法との併用療法において、２５−ＯＨ  Ｄ３を使用してもよい。
【００２８】
［アレルギー性鼻炎および副鼻腔炎］
エオタキシンは、アレルギー性鼻炎および副鼻腔炎を有する個体の鼻腔の上皮および炎症細胞に存在することが判明した（参照により本明細書に組み込まれる、Ｆｉｅｓｔ  ｅｔ  ａｌ  ２００６  Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１８：５３６−８を参照）。したがって、エオタキシンは、これらの症状を低減するための標的である。アトピー性喘息とは、花粉症およびアレルギー性皮膚炎などのアレルギー症状を意味する。エオタキシン発現の増加は、これらの症状においても観察されている。
【００２９】
したがって、本発明の他の態様は、エオタキシン低減有効量の２５−ＯＨ  Ｄ３をかかる低減が必要なヒトに投与することによって、アレルギー性鼻炎または副鼻腔炎の症状を低減する方法である。その結果得られる好酸球凝集の低減によって、腫れおよび炎症の減少を含む、鼻炎または副鼻腔炎の症状の観察可能な減少が起こるだろう。本発明の他の態様は、鼻炎または副鼻腔炎に適した薬物を製造する方法における２５−ＯＨ  Ｄ３の使用である。
【００３０】
補助剤として、あるいは既知の鼻炎もしくは副鼻腔炎薬物および／または療法との併用療法において、２５−ＯＨ  Ｄ３を使用してもよい。
【００３１】
したがって、本発明の他の態様は、エオタキシン低減有効量の２５−ＯＨ  Ｄ３をかかる低減が必要なヒトに投与することによって、花粉症またはアレルギー性皮膚炎の症状を低減する方法である。その結果得られる好酸球凝集の低減によって、腫れおよび炎症の減少を含む、花粉症またはアレルギー性皮膚炎の症状の観察可能な減少が起こるだろう。本発明の他の態様は、花粉症またはアレルギー性皮膚炎に適した薬物を製造する方法における２５−ＯＨ  Ｄ３の使用である。
【００３２】
補助剤として、あるいは既知の花粉症またはアレルギー性皮膚炎薬物および／または療法との併用療法において、２５−ＯＨ  Ｄ３を使用してもよい。
【００３３】
［鼻ポリープ］
鼻および鼻腔の慢性炎症性疾患は、鼻ポリープの形成を引き起こす場合があり、これは、エオタキシンのアップレギュレーションを伴う（参照により本明細書に組み込まれる、Ｒａｎｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ  ２０００  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｔｏｄａｙ  ６：２０−２７参照）。本発明に従って２５−ＯＨ  Ｄ３、および／またはビタミンＤ３を投与することによって、エオタキシンレベルが減少し、したがって鼻ポリープの形成および成長が改善、予防または治療される。補助剤として、あるいは鼻ポリープの既知の薬物および／または療法との併用療法において、２５−ＯＨ  Ｄ３を使用してもよい。
【００３４】
［胃障害］
通常、好酸球は食道粘膜には見られないが、一部の疾患状態では、好酸球がそこに蓄積し、炎症誘発作用を有する。腸における好酸球の存在およびエオタキシンの増加を伴ういくつかの胃障害がある。
【００３５】
［好酸球性食道炎］
通常、好酸球は食道粘膜には見られないが、好酸球性食道炎では、好酸球がそこに蓄積し、炎症誘発作用を有する。症状としては、嚥下障害、胸痛および食物圧入が挙げられる。子供においては、悪心および嘔吐、体重減少、貧血および成長障害が挙げられる。患者は、牛乳、卵、ダイズ、コムギ、ニワトリおよびナッツなどの高タンパク質食品に対する食物アレルギーを含む、アレルギーの病歴を有することが多い。食道粘膜の好酸球は、主要な塩基性タンパク質を放出し、それが平滑筋収縮を誘発し、喘息で観察される気管支収縮と機構的に類似していると考えられる。したがって、エオタキシンの量を低減することによって、好酸球性食道炎の症状が改善されると考えられる。
【００３６】
したがって、本発明の他の態様は、エオタキシン低減有効量の２５−ＯＨ  Ｄ３をかかる低減が必要なヒトに投与することによって、好酸球性食道炎の症状を低減する方法である。その結果得られる好酸球凝集の低減によって、平滑筋収縮、嚥下障害、胸痛、食物圧入、悪心、および嘔吐の減少を含む、好酸球性食道炎の症状に観察可能な減少が起こるだろう。本発明の他の態様は、好酸球性食道炎に適した薬物を製造する方法における２５−ＯＨＤ３の使用である。
【００３７】
補助剤として、あるいは既知の好酸球性食道炎薬物との併用療法において、２５−ＯＨ  Ｄ３を使用してもよい。
【００３８】
[炎症性腸疾患（ＩＢＳ）、クローン病、および潰瘍性大腸炎]
好酸球はＩＢＡの病因に関係している（参照により本明細書に組み込まれる、Ｗｅｄｅｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ  ２００８  Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ＆  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  ２２（３）：５３７−５４９参照）。急性炎症は、炎症部位での好酸球の増加に付随している。そのタンパク質（好酸球顆粒カチオン性タンパク質を含む）の放出によって組織の損傷が起こり得る。したがって、エオタキシンのレベルの低下によって、好酸球凝集が減少し、その結果、炎症などのＩＢＡの症状が減少すると考えられる。
【００３９】
したがって、本発明の他の態様は、エオタキシン低減有効量の２５−ＯＨ  Ｄ３をかかる低減が必要なヒトに投与することによって、過敏性大腸症候群の症状を低減する方法である。その結果得られる好酸球凝集の低減によって、炎症の減少を含む、ＩＢＡの症状の観察可能な減少が起こるだろう。本発明の他の態様は、ＩＢＡに適した薬物を製造する方法における２５−ＯＨ  Ｄ３の使用である。
【００４０】
補助剤として、あるいは既知のＩＢＡ療法との併用療法において、２５−ＯＨ  Ｄ３を使用してもよい。
【００４１】
クローン病および潰瘍性大腸炎は慢性炎症性疾患であるが、具体的な病原体は特定されていない。ＩＢＳと同様に、それらは好酸球レベルの増加を特徴とする。エオタキシン欠乏マウスでは、結腸の好酸球の量が減少し、野生型と比較して大腸炎が有意に減弱されることが示されている。
【００４２】
したがって、本発明の態様は、エオタキシン低減有効量の２５−ＯＨ  Ｄ３をかかる低減が必要なヒトに投与することによって、クローン病または潰瘍性大腸炎の症状を低減する方法である。その結果得られる好酸球凝集の低減によって、腫れおよび炎症の減少を含む、クローン病または潰瘍性大腸炎の症状の観察可能な減少が起こるだろう。本発明の他の態様は、クローン病または潰瘍性大腸炎に適した薬物を製造する方法における２５−ＯＨ  Ｄ３の使用である。
【００４３】
補助剤として、あるいは既知のクローン病または潰瘍性大腸炎療法との併用療法において、２５−ＯＨ  Ｄ３を使用してもよい。
【００４４】
[他の消化器症状]
参照により本明細書に組み込まれる、Ｈｏｇａｎ  ｅｔ  ａｌ  ２００４  Ａｌｉｍｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２０：１２３１−１２４０では、好酸球の低減が、食物アレルギー、寄生虫感染症、および胃食道逆流などの他の消化器症状において有益であろうことが提唱されている。
【００４５】
[用量]
食品用量：食品が販売される時点で適切なＲＤＡは、現在食品に組み込まれることが推奨されるビタミンＤ３＋２５−ＯＨ  Ｄ３の組み合わせの最大用量であり、ビタミンＤ３のＲＤＡは：
乳児（０〜１２ヶ月）に対して４００ＩＵ
思春期の子供（＋１歳）から成人（７０歳）に対して６００ＩＵ
成人（＋７１歳）に対して８００ＩＵ
妊婦または授乳中の女性に対して６００ＩＵ
上限は４０００ＩＵである。
【００４６】
２５−ＯＨ  Ｄ３のみの場合には、ＲＤＡは現在存在せず、一部の国と同様に、規定によって、ヒトの食品に添加することは許可されていない。しかしながら、それはビタミンＤ３の約３倍活性であると考えられている。したがって、食品用途については、食品に存在すべき最大用量は、ビタミンＤ３のＲＤＡよりも約３倍低い。ビタミンＤ３の用量は従来からＩＵで表されているのに対して、２５−ＯＨ  Ｄ３の用量はμｇで表されることに留意されたい。ビタミンＤ３  １ＩＵが４０μｇに等しいことから、その量は容易に変換される。
【００４７】
［薬剤、補助栄養食品、および栄養補助剤用量：］
毎日。２種類の有効成分が別々に、または単独で投与されるべきであり、本発明による組成物は、ビタミンＤまたは２５−ＯＨ  Ｄ３を約１〜約５０μｇ、好ましくは約５μｇ〜２５μｇの量で含有する。その代わりとして、ビタミンＤと２５−ＯＨ  Ｄ３の両方を有する１日１回の投与量は、各有効成分を約１〜約５０μｇ、好ましくは約５μｇおよび２５μｇの量で含有する。
【００４８】
ビタミンＤと２５−ＯＨ  Ｄ３の投与量比は、約５０：１〜約１：５０、さらに好ましくは約２５：１〜約１：２５、またさらに好ましくは約６：１〜約１：６であり得る。
【００４９】
１つのキット（または容器）に、複数の別個の投与量をパッケージしてもよい。例えば、両方の有効成分を別々に、３０もの別個の一日投与量で、キットは構成されてもよいし（つまり、６０もの別個の投与量）、または合わせてもよい（つまり、両方の有効成分を含有する３０もの投与量）。ヒトに用量を投与するための説明書がキットに含まれてもよい。
【００５０】
毎週。週１回の投与量は、ビタミンＤまたは２５−ＯＨＤ３を約７〜約３５０μｇ、好ましくは約３５〜１７５μｇの量で含有する。その代わりとして、週１回の投与量は、ビタミンＤおよび２５−ＯＨＤ３の両方をそれぞれ、約７〜約３５０μｇ、好ましくは約３５〜１７５μｇの量で含有し得る。ビタミンＤと２５−ＯＨＤ３の投与量比は、約５０：１〜約１：５０、さらに好ましくは約２５：１〜約１：２５、またさらに好ましくは約６：１〜約１：６であり得る。
【００５１】
毎月。月１回の投与量は、ビタミンＤまたは２５−ＯＨＤ３を３０〜約１５００μｇ、好ましくは約７５〜約５００μｇの量で含有する。その代わりとして、月１回の投与量は、ビタミンＤと２５−ＯＨＤ３の両方をそれぞれ、３０〜約１５００μｇ、好ましくは約７５〜約５００μｇの量で含有し得る。キットは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２の週単位または月単位の投与量で構成されてもよい。
【００５２】
ビタミンＤと２５−ＯＨＤ３の投与量比は、５０：１〜約１：５０、さらに好ましくは約２５：１〜約１：２５、またさらに好ましくは約６：１〜約１：６の範囲であるべきである。
【００５３】
ボーラス：一回のボーラス投与量は、ビタミンＤまたは２５−ＯＨ  Ｄ３を３０〜約７５００μｇの量で含有する。その代わりとして、一回のボーラス投与量は、ビタミンＤおよび２５−ＯＨ  Ｄ３の両方をそれぞれ、１００〜約７５００μｇ（好ましくは約７５〜約３７５０μｇ）の量で含有し得る。
【００５４】
ビタミンＤと２５−ＯＨＤ３の投与量比は、５０：１〜約１：５０、さらに好ましくは約２５：１〜約１：２５、またさらに好ましくは約６：１〜約１：６の範囲であるべきである。
【００５５】
ボーラス投与は、上述の日単位または週単位または月単位の投与計画に従う。
【００５６】
経口投与されたビタミンＤ３と比較して、経口投与された２５−ヒドロキシビタミンＤ３と、その結果得られるヒトにおける全身濃度との間の関係についてのデータが不足している。現在までのビタミンＤ３と２５−ヒドロキシビタミンＤ３のキネティクスの最も包括的な分析が、Ｂａｒｇｅｒ−Ｌｕｘら（Ｏｓｔｅｏｐｅｒｏｓｉｓ  ８：２２２−２３０，１９９８）によって行われた。健康な男性に８週間にわたって１２５０μｇ／日までのビタミンＤ３、４週間にわたって５０μｇ／日までの２５−ヒドロキシビタミンＤ３を投与した。ビタミンＤ３と血漿中２５−ヒドロキシビタミンＤ３との関係について、曲線（Ｃｕｒｖｉｌｉｎｅａｒ）キネティクスが実証され、これは、肝臓におけるヒドロキシラーゼ活性の飽和によるものであり得ることが示唆された。２５−ヒドロキシビタミンＤ３の投与が、曲線キネティクスを生じると報告されていなかった点から、これが支持された（Ｂａｒｇｅｒ−Ｌｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８年）。２５−ヒドロキシビタミンＤ３についてのデータは曲線キネティクスを示すが、非常に高い用量で圧倒されるホメオスタシスメカニズムの活性を表し得る、生理学的利益が生じると考えられるレベルを超えて、用量が増量された場合であることのみ明らかである。生理学的範囲内で、その関係は、線形であり、かつＢａｒｇｅｒ−Ｌｕｘらに匹敵すると思われる。これらのデータから、最大の健康利益を得るために、１日投与量１０〜６０μｇの２５−ヒドロキシビタミンＤが必要とされることが示されている。
【００５７】
経口投与噴霧乾燥２５−ヒドロキシビタミンＤ３、噴霧乾燥ビタミンＤ３、またはその両方の、ヒトにおける薬物動態学の研究を開始し、その生理学的相互作用を調べた。特に、その投与量反応曲線の形状（単に、達成された平均または最大濃度ではなく、設定時間の経過にわたる循環におけるビタミンＤ３と２５−ヒドロキシビタミンＤ３の濃度を示す）および定常状態キネティクスが対象であった。前者のポイントに関しては、曝露がビタミンＤおよび２５−ヒドロキシビタミンＤ３の両方に対する場合には、投与量反応曲線の形状の変化を調べることが重要である。後者のポイントに関しては、毎日サプリメントを摂取するコンプライアンスが低い群（高齢者など）に、これは好ましい投与計画であることから、投与が一日単位よりも少ない頻度である場合には、その定常状態キネティクスを調べることも必要である。
【００５８】
以下の非制限的な例は、本発明をより良く説明するために示される。
【００５９】
［実施例]
［実施例１］
［臨床試験］
［臨床試験］
［被験者］
インフォームド・コンセントを用いて、健康な閉経後の女性（５０〜７０歳）を募集し、以下の基準でスクリーニングした：血清２５−ヒドロキシビタミンＤ３  ２０〜５０ｎｍｏｌ／Ｌ、肥満度指数１８〜２７ｋｇ／ｍ２、血圧１４６／９５ｍｍＨｇ未満、血清カルシウム２．６ｎｍｏｌ／Ｌ未満、空腹時グルコース１００ｍｇ／ｄｌ未満、１週間に４回以上激しい運動をしない、高血圧症の治療なし、骨代謝に影響する高用量ビタミンＤまたはカルシウムサプリメントまたは薬物（ビスホスホネート、カルシトニン、エストロゲン受容体調節因子、ホルモン補充療法、副甲状腺ホルモン）の使用なし、研究中に「日当たりのよい」場所に足を運ばない。
【００６０】
被験者を７つの処理群（つまり、毎日、毎週、単一でのボーラス投与、併用でのボーラス投与）のうちの１つに無作為に割り当てる。各群は被験者５名を含む。被験者をスイスのチューリッヒで冬の間、４ヶ月間フォローした。
【００６１】
［計画］
目的は、ヒトに投与されたビタミンＤ３および２５−ヒドロキシビタミンＤ３の薬物動態特性を研究および比較することであった。等モル量の両方の物質を調べた。２５−ヒドロキシビタミンＤ３を２０μｇ／日（または、週単位でのそれに相当する量）、という投与計画に基づく。比較の目的のために、等モル量のビタミンＤ３または２５−ヒドロキシビタミンＤ３のいずれかを投与する必要があった。ビタミンＤ３の投与に関しては、背景のばらつきを乗り越え、参加者に効果的な投与をもたらすのに十分な投与量であると考えられた。
【００６２】
毎日：１２０回の投与
１．２５−ヒドロキシビタミンＤ３  ２０μｇ
２．ビタミンＤ３  ２０μｇ（８００ＩＵ）
毎週：１６回の投与
３．２５−ヒドロキシビタミンＤ３  １４０μｇ
４．ビタミンＤ３  １４０μｇ（５６００ＩＵ）
ボーラス：単一投与
５．２５−ヒドロキシビタミンＤ３  １４０μｇ
６．ビタミンＤ３  １４０μｇ（５６００ＩＵ）
ボーラス：併用投与
７．Ｄ３および２５（ＯＨ）Ｄ３  １４０μｇ（５６００ＩＵ）＋１４０μｇ
【００６３】
ボトルにパッケージされたハードゲルカプセルは、カプセル１個当たり２０μｇまたは１４０μｇのいずれかで、噴霧乾燥ビタミンＤ３または２５−ヒドロキシビタミンＤ３のいずれかを含有する。各投与量を朝食時に経口摂取した。研究期間は、「毎日」および「毎週」群では４ヶ月であった。「ボーラス」群に登録された被験者は、２回目の研究の来診で単一の投与量を経口摂取した。
【００６４】
この用量を摂取した後、様々な時点で被験者から試料を採取することによって、２５−ヒドロキシビタミンＤ３の血漿中濃度（例えば、ピークおよび定常状態）を決定した。スクリーニングの目的とベースライン値を確立するために、研究に参加する前に血液試料を採取し、臨床検査室で血清中のビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、カルシウム、クレアチニン、アルブミン、空腹時グルコースを測定した。研究１週目の月曜日に、血清ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、および１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３；血清マーカー（つまり、ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、カルシウム、クレアチニン、アルブミン、ＰＴＨ、ＧＯＴ、ＧＰＴ、ＡＬＰ、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬ、総コレステロール、ｂＡＬＰ、空腹時グルコース）；尿マーカー（つまり、カルシウム、クレアチニン、およびＤＰＤ）；の薬物動態を２４時間にわたって評価した。１週目の残りの日と２週目の月曜日の日単位試料を採取して、血清ビタミンＤ３および２５−ヒドロキシビタミンＤ３、血清マーカー（つまり、カルシウム、クレアチニン、アルブミン）、および尿マーカー（すなわち、カルシウム、クレアチニン）を評価した。３、５、７、９、１１、１３、１５週目の月曜日にも評価を続けた。１６週目の月曜日に、試料を採取して、血清ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、および１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３；血清マーカー（すなわち、ビタミンＤ３、２５−ヒドロキシビタミンＤ３、カルシウム、クレアチニン、アルブミン、ＰＴＨ、ＧＯＴ、ＧＰＴ、ＡＬＰ、トリグリセリド、ＨＤＬ、ＬＤＬ、総コレステロール、ｂＡＬＰ、空腹時グルコース）；および尿マーカー（つまり、カルシウム、クレアチニン、およびＤＰＤ）の薬物動態を評価した。
【００６５】
［結果］
２５−ヒドロキシビタミンＤ３は、エオタキシンの血漿レベルを選択的に低減する。
２５−ヒドロキシビタミンＤ３レベル２５ｎｇ／ｍｌ未満および平均年齢６１．５歳（ＳＤ±７．２）の健康な閉経後の女性２０名をこの研究に登録した。二重盲式で経口２５−ヒドロキシビタミンＤ３  ２０μｇまたはビタミンＤ３  ２０μｇのいずれかに、参加者をランダム化した。４ヶ月にわたり１４回の来診で、２５（ＯＨ）Ｄレベルおよび７つの炎症マーカー（エオタキシン、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＰ−１０、ＭＣＰ−１、ΜΙΡ−１β、ＲＡＮＴＥＳ）を測定した。ベースライン、年齢および肥満度指数に関して、すべての分析を調節した。２５−ヒドロキシビタミンＤ３群（示されていない）において、２５（ＯＨ）Ｄの平均レベルが１３．７ｎｇ／ｍｌから６９．５ｎｇ／ｍｌに増加した。ビタミンＤ３については、２５（ＯＨ）Ｄのレベルは、時間の経過にしたがって、ゆっくりと１３．５ｎｇ／ｍｌから３１．０ｎｇ／ｍｌに増加した。炎症マーカーのレベルをベースラインで、かつ経過観察期間の最後に決定した。マーカーの大部分に関して、ベースラインレベルは、健康な個体群内でかなり変動する（例えば、Ｃａｍｐｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ  ６２，ｐ．６６８−６７８，２００１年参照）。さらに、それらは感染期間中または健康状態悪化期間中に増加する。例えば、エオタキシンレベルは、喘息またはアレルギーの症状発現中に個体において有意に増加する（Ｃａｍｐｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．１４，ｐ．１２５５−１２６２，２００２年）。両方の種類のビタミンＤの補充は、７つの炎症マーカーのうち５つの低減に寄与したが、エオタキシンレベルのみが、介入段階の最後でビタミンＤ３（ｐ＝０．００３）と比較して、２５−ヒドロキシビタミンＤ３によって著しくさらに低減された。異なる炎症マーカーの相対的な変化は、用いられる分析方法の感度に左右されるため、絶対レベルよりもむしろ、健康へのポジティブな影響を反映すると考えるべきであることに留意されたい。この結果から、炎症マーカーのエオタキシンのレベルに対する２５−ヒドロキシビタミンＤ３の選択的効果が実証されている。
【００６６】
【表１】
0005982695.tif 000002