(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
0005899241.tif 000032
により包含されるコンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物であって、ここで、
Ｒは、それぞれ３個〜５０個のヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基を有するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基であり、
Ｒ１は、Ｈ、ハロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され、
Ｒ２は、Ｈおよびメチルからなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、前記低級アルキルが、１個〜６個の炭素原子を含有するアルキル基であり、
Ｑは、リンカーであり、前記リンカーが、−Ｏ−であり、
ＰＯＬＹ１は、水溶性非ペプチドポリマーであり、
Ｘは、解放可能な結合を含むスペーサー部分であり、前記スペーサー部分が、
−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＣＨ２ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）２ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、
−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、および
−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒ４）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−
からなる群より選択され、
Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣ（Ｈ）（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群から選択され、かつ
ｑは、３〜５０の正の整数である、
コンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物。
【請求項２】
Ｒが、ポリオールの残基である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項３】
前記ポリオールが、グリセロール、ジグリセロール、トリグリセロール、ヘキサグリセロール、トリメチロールプロパン、ペンタエリスリトール、ジペンタエリスリトール、トリペンタエリスリトール、およびグリセロールのエトキシ化形態からなる群から選択される、請求項２に記載のコンジュゲート。
【請求項４】
前記ポリオールが、ペンタエリスリトールである、請求項３に記載のコンジュゲート。
【請求項５】
Ｒ１が、Ｈである、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項６】
Ｒ２が、Ｈである、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項７】
Ｒ３が、−ＮＨ２である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項８】
前記水溶性非ペプチドポリマーが、ポリ（エチレンオキシド）である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項９】
「ｑ」が、３〜１０の整数である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項１０】
「ｑ」が、４である、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項１１】
以下の構造：
【化２】
0005899241.tif 000033
を有する請求項１に記載のコンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物であって、ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ハロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され、
Ｒ２は、Ｈおよびメチルからなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、前記低級アルキルが、１個〜６個の炭素原子を含有するアルキル基であり、かつ
ｑは、３〜５０の正の整数である、
コンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物。
【請求項１２】
以下の構造：
【化３】
0005899241.tif 000034
を有する請求項１に記載のコンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物であって、ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ハロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され、
Ｒ２は、Ｈおよびメチルからなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、前記低級アルキルが、１個〜６個の炭素原子を含有するアルキル基であり、かつ
ｑは、３〜５０の正の整数である、
コンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物。
【請求項１３】
以下の構造：
【化４】
0005899241.tif 000035
を有する請求項１に記載のコンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物であって、ここで、
Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣ（Ｈ）（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群から選択され、
各ｎは、１０〜４００の正の整数である、
コンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物。
【請求項１４】
複数のコンジュゲートを含む組成物であって、前記組成物中の前記コンジュゲートの少なくとも８０％が、請求項１〜１３のいずれか一項により包含される構造を有する、組成物。
【請求項１５】
薬学的賦形剤をさらに含む、請求項１４に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１０年１２月２１日に出願された米国仮特許出願第６１／４２５，７２８号に対する米国特許法第１１９条（ｅ）に基づく優先権の利益を主張しており、当該仮特許出願の開示内容は、その全体が参照により本明細書に援用される。
技術分野
本開示は、概して、マルチアーム水溶性ポリマーにコンジュゲート化されたペメトレキセドベースの化合物のコンジュゲートに関する。ペメトレキセドベースの化合物とマルチアーム水溶性ポリマーとの間の結合は、解放可能であり、それにより、患者への当該コンジュゲートの投与に続くペメトレキセドベースの化合物の放出を可能にする。本発明は、（特に）創薬、薬物療法、生理学、有機化学および高分子化学の分野に関するものであり、かつ／またはそうした分野における用途を有する。
【背景技術】
【０００２】
長年にわたって、生物学的に活性な薬剤、特に低分子薬物の送達を改善するために、数多くの方法が提案されてきた。薬学的薬剤の処方および送達に関係する課題としては、薬学的薬剤の乏しい水溶性、毒性、低いバイオアベイラビリティ、不安定性、および急速なインビボ分解が挙げられ得る。多くのアプローチが、薬学的薬剤の送達を改善するために考案されてきたが、どれ一つとして欠点のないアプローチはない。例えば、これらの課題のうちの１つ以上を解決することまたは少なくとも改善することを目的とした一般的に使用されている薬物送達アプローチとしては、薬物の（例えば、リポソーム、ポリマーマトリックス、または単分子ミセルへの）封入、水溶性ポリマーへの共有結合（すなわち、コンジュゲート化）（例えば、ポリエチレングリコール（すなわち、ＰＥＧ）への共有結合（すなわち、ＰＥＧ化））、遺伝子標的化因子の使用などが挙げられる。
【０００３】
ＰＥＧ化は、水溶性に乏しい低分子治療薬のバイオアベイラビリティおよび処方容易性を改善するために使用されている。例えば、アルチリン酸（ａｒｔｉｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）に、その水溶性を改善するために、水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）が共有結合されている。特許文献１を参照されたい。同様に、トリアジンベースの化合物（例えば、トリメラモール）に、その水への溶解性を改善し、かつその化学安定性を向上させるために、ＰＥＧが共有結合されている。特許文献２を参照されたい。ビスインドリルマレイミドへのＰＥＧの共有結合が、当該化合物の低水溶性に起因する乏しいバイオアベイラビリティを改善するために使用されている。特許文献３を参照されたい。非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）のポリマーコンジュゲートおよびオピオイドアンタゴニストのポリマーコンジュゲートもまた調製されている。それぞれ、特許文献４および特許文献５を参照されたい。１個または２個のカンプトテシン分子が１個の直鎖状ポリエチレングリコールに共有結合している、カンプトテシンのプロドラッグもまた調製されている。特許文献６を参照されたい。（他にもあるが）４個の薬物分子が１個のマルチアームポリマーに共有結合しているイリノテカンのプロドラッグおよびドセタキセルのプロドラッグが、それぞれ、特許文献７および特許文献８に記載されている。
【０００４】
抗葉酸薬であるペメトレキセド（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ  ＩＮからＡＬＩＭＴＡ（登録商標）ブランドで二ナトリウム塩として入手可能）は、チミジル酸シンターゼ、ジヒドロ葉酸リダクターゼおよびグリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼの阻害を示す。局所的に進行したまたは転移性の非扁平非小細胞肺癌を患っている患者の処置について、およびシスプラチンと組み合わせた中皮腫を患っている患者の処置については承認されているのであるが、ペメトレキセドは、さらに他の癌を患っている患者の処置における使用についてもまた同様に検討されているところである。
【０００５】
ペメトレキセドの使用は（ほぼ全ての抗新生物薬と同様）欠点がないわけではない。例えば、ペメトレキセドの細胞毒性特性は、癌細胞および非癌細胞の両方に影響を及ぼす。特に、ペメトレキセドは、用量制限的な骨髄抑制毒性と共に、関連胃腸副作用（例えば、悪心、嘔吐および食欲不振）である。さらに、ペメトレキセドの半減期が３．５時間であり薬物の７０〜９０％が未変化で尿中に排泄されることを考えると、比較的頻繁な薬物投与が必要とされる。
【０００６】
これらの副作用の少なくとも一部に対処するために、さらなる化合物の使用が提案されている。例えば、中には、ペメトレキセドの毒性を低減するために葉酸とメチルマロン酸低下薬（例えば、ビタミンＢ１２）との使用を提案するものもあった。例えば、特許文献９を参照されたい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第６，４６１，６０３号明細書
【特許文献２】国際公開第０２／０４３７７２号
【特許文献３】国際公開第０３／０３７３８４号
【特許文献４】米国特許出願公開第２００７／００２５９５６号明細書
【特許文献５】米国特許出願公開第２００６／０１０５０４６号明細書
【特許文献６】米国特許第５，８８０，１３１号明細書
【特許文献７】米国特許第７，７４４，８６１号明細書
【特許文献８】国際公開第１０／０１９２３３号
【特許文献９】米国特許第７，７７２，２０９号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、以下（ｉ）ピーク−トラフ変動（ｐｅａｋ−ｔｏ−ｔｒｏｕｇｈ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ）を低減すること（用量制限毒性を低減する可能性がある）、（ｉｉ）有効性を依然として保持しながら腫瘍組織内に蓄積すること、および（ｉｉｉ）有効半減期を延長して、それによってより低頻度の投与をもたらすこと、のうちの１つ以上を達成するような具合にペメトレキセドを改変し得れば望ましいであろう。
【０００９】
本発明は、これらおよび／または他の必要性に対処しようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の１つ以上の実施形態において、コンジュゲートが提供され、当該コンジュゲートは、式：
【００１１】
【化１】
0005899241.tif 000002
【００１２】
により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有し、ここで、
Ｒは、３個〜約５０個のヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基を有するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基であり、
Ｒ１は、Ｈ、ハロ（例えば、クロロおよびフルオロ）、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され（好ましくは、Ｈであり）、
Ｒ２は、Ｈおよびメチルからなる群から選択され（好ましくは、Ｈであり）、
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、
Ｑは、リンカー（１つ以上の実施形態において、加水分解安定性リンカー）であり、
ＰＯＬＹ１は、水溶性非ペプチドポリマーであり、
Ｘは、解放可能な結合（例えば、加水分解可能な結合、酵素分解可能な結合など）を含むスペーサー部分であり、かつ
ｑは、３〜約５０（例えば、４）の正の整数である。
【００１３】
本発明の１つ以上の実施形態において、コンジュゲート含有組成物が提供され、当該コンジュゲート含有組成物は、４アームコンジュゲートを含み、ここで、当該組成物中の４アームコンジュゲートの少なくとも８０％は、式
【００１４】
【化２】
0005899241.tif 000003
【００１５】
により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有し、ここで、
Ｒは、３個〜約５０個のヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基を有するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基であり、
Ｒ１は、Ｈ、ハロ（例えば、クロロおよびフルオロ）、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され（好ましくは、Ｈであり）、
Ｒ２は、Ｈおよびメチルからなる群から選択され（好ましくは、Ｈであり）、
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、
Ｑは、リンカー（１つ以上の実施形態において、加水分解安定性リンカー）であり、
ＰＯＬＹ１は、水溶性非ペプチドポリマーであり、
Ｘは、解放可能な結合（例えば、加水分解可能な結合、酵素分解可能な結合など）を含むスペーサー部分であり、かつ
ｑは、３〜約５０（例えば、４）の正の整数である。
【００１６】
本発明の１つ以上の実施形態において、コンジュゲートが提供され、当該コンジュゲートは、式：
【００１７】
【化３】
0005899241.tif 000004
【００１８】
により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有し、ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ハロ（例えば、クロロおよびフルオロ）、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され（好ましくは、Ｈであり）、
Ｒ２は、Ｈおよびメチルからなる群から選択され（好ましくは、Ｈであり）、
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、
各ｎは、１０〜約４００の正の整数であり、かつ
ｑは、３〜約５０（例えば、４）の正の整数である。
【００１９】
本発明の１つ以上の実施形態において、コンジュゲートが提供され、当該コンジュゲートは、式：
【００２０】
【化４】
0005899241.tif 000005
【００２１】
により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有し、ここで、各ｎは、１０〜約４００の正の整数である。
【００２２】
本発明の１つ以上の実施形態において、コンジュゲートが提供され、当該コンジュゲートは、式：
【００２３】
【化５】
0005899241.tif 000006
【００２４】
により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有し、ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ハロ（例えば、クロロおよびフルオロ）、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され（好ましくは、Ｈであり）、
Ｒ２は、Ｈおよびメチルからなる群から選択され（好ましくは、Ｈであり）、
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、
各ｎは、１０〜約４００の正の整数であり、かつ
ｑは、３〜約５０（例えば、４）の正の整数である。
【００２５】
本発明の１つ以上の実施形態において、コンジュゲートが提供され、当該コンジュゲートは、以下の式：
【００２６】
【化６】
0005899241.tif 000007
【００２７】
により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有し、ここで、各ｎは、１０〜約４００の正の整数である。
【００２８】
本発明の１つ以上の実施形態において、コンジュゲートが提供され、当該コンジュゲートは、式：
【００２９】
【化７】
0005899241.tif 000008
【００３０】
により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有し、ここで、
Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣ（Ｈ）（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群から選択され、
各ｎは、１０〜約４００の正の整数である。
【００３１】
本発明の１つ以上の実施形態において、薬学的組成物が提供され、当該薬学的組成物は、本明細書に記載されるとおりのコンジュゲートおよび薬学的に許容できるキャリアを含む。
【００３２】
本発明の１つ以上の実施形態において、方法が提供され、当該方法は、本明細書に記載されるとおりのコンジュゲートを（好ましくは、薬学的に許容できる量のコンジュゲートを含有する薬学的組成物として）個体に投与することを含む。
【００３３】
本発明の１つ以上の実施形態において、方法が提供され、当該方法は、各個々のポリマーアームがその末端に求核剤を有している「ｑ」本のポリマーアームを有するマルチアーム水溶性非ペプチドポリマー構造を、以下の構造：
【００３４】
【化８】
0005899241.tif 000009
【００３５】
［ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ハロ（例えば、クロロおよびフルオロ）、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され（好ましくは、Ｈであり）、
Ｒ２は、Ｈおよびメチルからなる群から選択され（好ましくは、Ｈであり）、
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、
Ｒ５は、Ｈまたはカルボン酸に対する活性化基（例えば、Ｎ−スクシンイミジル）であり、かつ
ＰＧは、カルボン酸保護基である］
を有する化合物「ｑ」モル以上と接触させる工程を含み、当該方法は、その接触工程に続いて、カルボン酸保護基を脱保護する工程を必要に応じてさらに含む。
【００３６】
本発明のコンジュゲート、組成物、方法などのさらなる実施形態は、後に続く説明から明らかであろう。本発明のさらなる態様および利点は、特に付随の実施例および図面と合わせて考慮される場合の、以下の説明および特許請求の範囲において示されている。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する。
（項目１）
式：
【化１】
0005899241.tif 000010
により包含されるコンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物であって、ここで、
Ｒは、それぞれ３個〜約５０個のヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基を有するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基であり、
Ｒ１は、Ｈ、ハロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され、
Ｒ２は、Ｈおよびメチルからなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、
Ｑは、リンカーであり、
ＰＯＬＹ１は、水溶性非ペプチドポリマーであり、
Ｘは、解放可能な結合を含むスペーサー部分であり、かつ
ｑは、３〜約５０の正の整数である、
コンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物。
（項目２）
Ｒが、ポリオールの残基である、項目１に記載のコンジュゲート。
（項目３）
前記ポリオールが、グリセロール、ジグリセロール、トリグリセロール、ヘキサグリセロール、トリメチロールプロパン、ペンタエリスリトール、ジペンタエリスリトール、トリペンタエリスリトール、およびグリセロールのエトキシ化形態からなる群から選択される、項目２に記載のコンジュゲート。
（項目４）
前記ポリオールが、ペンタエリスリトールである、項目３に記載のコンジュゲート。
（項目５）
Ｒ１が、Ｈである、項目１に記載のコンジュゲート。
（項目６）
Ｒ２が、Ｈである、項目１に記載のコンジュゲート。
（項目７）
Ｒ３が、−ＮＨ２である、項目１に記載のコンジュゲート。
（項目８）
前記リンカーが、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−からなる群から選択される、項目１に記載のコンジュゲート。
（項目９）
前記リンカーが、−Ｏ−である、項目８に記載のコンジュゲート。
（項目１０）
前記水溶性非ペプチドポリマーが、ポリ（エチレンオキシド）である、項目１に記載のコンジュゲート。
（項目１１）
前記スペーサー部分が、−Ｙ−Ｚ−に相当する構造を有し、ここで、Ｙは、
−（ＣＲｘＲｙ）ａ−Ｋｗ−（ＣＲｘＲｙ）ｂ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｃ−（ＣＲｘＲｙ）ｄ−Ｋｚ−
であり、ここで、
各ＲｘおよびＲｙは、それぞれの存在において、独立して、Ｈ、または、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、および置換アリールからなる群から選択される有機ラジカルであり、
（ａ）は、ゼロまたは１〜１２の整数であり、
（ｂ）は、ゼロまたは１〜１２の整数であり、
（ｃ）は、ゼロまたは１〜２５の整数であり、
（ｄ）は、ゼロまたは１〜１２の整数であり、
Ｋｗは、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−からなる群から選択され、かつ
Ｋｚは、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−からなる群から選択され、かつ
Ｚは、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−および−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−から選択される、
項目１に記載のコンジュゲート。
（項目１２）
前記スペーサー部分が、−Ｙ−に相当する構造を有し、ここで、Ｙは、
−（ＣＲｘＲｙ）ａ−Ｋｗ−（ＣＲｘＲｙ）ｂ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｃ−（ＣＲｘＲｙ）ｄ−Ｋｚ−
であり、ここで、
各ＲｘおよびＲｙは、それぞれの存在において、独立して、Ｈ、または、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、および置換アリールからなる群から選択される有機ラジカルであり、
（ａ）は、ゼロまたは１〜１２の整数であり、
（ｂ）は、ゼロまたは１〜１２の整数であり、
（ｃ）は、ゼロまたは１〜２５の整数であり、
（ｄ）は、ゼロまたは１〜１２の整数であり、
Ｋｗは、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−からなる群から選択され、かつ
Ｋｚは、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−からなる群から選択される、
項目１に記載のコンジュゲート。
（項目１３）
前記スペーサー部分が、構造
Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｂ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｃ−（ＣＨ２）ｄ−Ｋｚ−
を有し、ここで、
（ｂ）は、１〜５の整数であり、
（ｃ）は、１〜５の整数であり、
（ｄ）は、１〜５の整数であり、かつ
Ｋｚは、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−からなる群から選択される、
項目１２に記載のコンジュゲート。
（項目１４）
「ｑ」が、３〜１０の整数である、項目１に記載のコンジュゲート。
（項目１５）
「ｑ」が、４である、項目１に記載のコンジュゲート。
（項目１６）
以下の構造：
【化２】
0005899241.tif 000011
を有する項目１に記載のコンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物であって、ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ハロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され、
Ｒ２は、Ｈおよびメチルからなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、かつ
ｑは、３〜約５０の正の整数である、
コンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物。
（項目１７）
以下の構造：
【化３】
0005899241.tif 000012
を有する項目１に記載のコンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物であって、ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ハロ、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され、
Ｒ２は、Ｈおよびメチルからなる群から選択され、
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、かつ
ｑは、３〜約５０の正の整数である、
コンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物。
（項目１８）
以下の構造：
【化４】
0005899241.tif 000013
を有する項目１に記載のコンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物であって、ここで、
Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２およびＣ（Ｈ）（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群から選択され、
各ｎは、１０〜約４００の正の整数である、
コンジュゲート、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物。
（項目１９）
複数のコンジュゲートを含む組成物であって、前記組成物中の前記コンジュゲートの少なくとも８０％が、項目１〜１８のいずれか一項により包含される構造を有する、組成物。
（項目２０）
薬学的賦形剤をさらに含む、項目１９に記載の組成物。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
次に、本発明の種々の態様を、以下により十分に説明する。しかしながら、そのような態様は、多くの異なる形で具現化され得、本明細書に示される実施形態に限定されるものと解釈されるべきではない。むしろ、本開示が十分かつ完全となり、当業者に本発明の範囲を十分に伝えられるように、これらの実施形態は提供される。
定義
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈がそうでないことを明確に要求しない限り、複数の指示対象を包含することに留意されなければならない。したがって、例えば「ポリマー」への言及は、単一のポリマーと２つ以上の同一または異なるポリマーの両方を包含し、「コンジュゲート」への言及は、単一のコンジュゲートと２つ以上の同一または異なるコンジュゲートの両方に言及し、「賦形剤」への言及は、単一の賦形剤と２つ以上の同一または異なる賦形剤の両方を包含する、などである。
【００３８】
本発明を説明する際および特許請求の範囲に記載する際に、以下の用語は下記に説明される定義に従って使用されることになる。
【００３９】
「官能基」は、有機合成の通常の条件下において、それが結合している実体と、典型的にはさらなる官能基を有する別の実体との間に共有結合を形成するために使用され得る基である。官能基は、概して、多重結合および／またはヘテロ原子を含む。本発明のポリマーにおける使用に好ましい官能基については、後述される。
【００４０】
用語「反応性の」とは、有機合成の従来の条件下において容易にまたは実用的な速度で反応する官能基をいう。これは、反応しないか、または反応するために強力な触媒または非実用的な反応条件を必要とする基（すなわち、「非反応性の」または「不活性な」基）と対照をなす。
【００４１】
反応混合物中の分子上に存在する官能基に関して「容易に反応しない」とは、反応混合物において所望の反応を生じさせるのに有効な条件下でその基はおおむね元のままの状態を保つということを示している。
【００４２】
カルボン酸の「活性化誘導体」とは、容易に、一般的には、誘導体化されてないカルボン酸よりもはるかに容易に、求核剤と反応するカルボン酸誘導体をいう。活性化カルボン酸としては、例えば、酸ハロゲン化物（例えば、酸塩化物）、無水物、カーボネート、およびエステルが挙げられる。そのようなエステルとしては、例えば、イミダゾリルエステル、およびベンゾトリアゾールエステル、およびイミドエステル（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル（ＮＨＳ）エステル）が挙げられる。活性化誘導体は、カルボン酸と、種々の試薬のうちの１つ（例えば、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）（好ましくは、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）もしくは１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡＴ）と組み合わせて使用される）；Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）；またはビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（ＢＯＰ−Ｃｌ））との反応により、インサイチューで形成され得る。
【００４３】
ある官能基の「化学的等価物」とは、その官能基と本質的に同じ種類の反応性を有する官能基である。例えば、ＳＮ２反応を受けるある官能基は、別のそのような官能基の官能性等価物と見なされる。
【００４４】
「保護基」は、ある特定の反応条件下における分子中の特定の化学反応性官能基の反応を防止または阻止する部分である。保護基は、保護されようとする化学反応性基の種類に加えて、使用される反応条件および分子中のさらなる反応性基または保護基の存在によっても異なるものである。保護され得る官能基としては、例として、カルボン酸基、アミノ基、ヒドロキシル基、チオール基、カルボニル基などが挙げられる。カルボン酸に対する代表的な保護基としては、エステル（例えば、ｐ−メトキシベンジルエステル）、アミドおよびヒドラジドが挙げられ；アミノ基に対する代表的な保護基としては、カルバメート（例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）およびアミドが挙げられ；ヒドロキシル基に対する代表的な保護基としては、エーテルおよびエステルが挙げられ；チオール基に対する代表的な保護基としては、チオエーテルおよびチオエステルが挙げられ；カルボニル基に対する代表的な保護基としては、アセタールおよびケタールが挙げられる、などである。そのような保護基は、当業者に周知であり、例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９、およびＰ．Ｊ．Ｋｏｃｉｅｎｓｋｉ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄ．，Ｔｈｉｅｍｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３、ならびにそれらにおいて引用されている文献に記載されている。
【００４５】
「保護された形態」の官能基とは、保護基を有する官能基をいう。本明細書で使用される場合、用語「官能基」またはそのあらゆる同義語は、その保護された形態を包含することが意図される。
【００４６】
「ＰＥＧ」または「ポリ（エチレングリコール）」は、本明細書で使用される場合、あらゆる水溶性ポリ（エチレンオキシド）を包含することが意図される。典型的に、本発明における使用のためのＰＥＧは、末端の酸素が例えば合成変換の間に置き換えられたか否か、または、例えば、隣接する官能基が何であるかによって、以下の２つの構造：「−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−」または「−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−１ＣＨ２ＣＨ２−」のうちの一方を含む。変数（ｎ）は、典型的には３〜約３０００の範囲にあり、末端基およびＰＥＧ全体の構造は、様々であり得る。ＰＥＧまたはＰＥＧセグメントを含むコンジュゲートが（ＰＯＬＹがＰＥＧ’’である場合の）式Ｉにおけるがごとくスペーサーまたはリンカーをさらに含む場合、スペーサー（Ｘ）およびリンカー（Ｑ）を構成する原子は、ＰＥＧセグメントに共有結合したときに（ｉ）酸素−酸素結合（−Ｏ−Ｏ−、過酸化物結合）または（ｉｉ）窒素−酸素結合（Ｎ−Ｏ、Ｏ−Ｎ）の形成をもたらさない。本発明における使用のためのＰＥＧには、より詳細に後述される様々な分子量、構造または形態を有するＰＥＧが含まれる。
【００４７】
本発明のポリマーの文脈における「水溶性（の）」、または「水溶性ポリマーセグメント」とは、室温で水に溶けるあらゆるセグメントまたはポリマーである。典型的に、水溶性ポリマーまたはセグメントは、濾過後の同じ溶液により透過される光の少なくとも約７５％、より好ましくは少なくとも約９５％を透過させる。重量ベースで、水溶性ポリマーまたはそのセグメントは、好ましくは水に対して少なくとも約３５（重量）％溶解し、より好ましくは水に対して少なくとも約５０（重量）％溶解し、なおさらに好ましくは水に対して約７０（重量）％溶解し、なおさらに好ましくは水に対して約８５（重量）％溶解するものである。しかしながら、水溶性ポリマーまたはセグメントが水に対して約９５（重量）％溶解するかまたは水に対して全て溶解することが、最も好ましい。
【００４８】
ポリマーに関して「天然に存在しない」とは、そのままの形では自然界には見出されないポリマーを意味する。しかしながら、天然に存在しないポリマーは、その全ポリマー構造が自然界に見出されない限りにおいて、天然に存在する１つ以上のサブユニットまたはサブユニットのセグメントを含有し得る。
【００４９】
水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）の文脈における「分子質量」とは、典型的にサイズ排除クロマトグラフィー、光散乱法、または水もしくは有機溶媒中での固有粘度測定により測定される、ポリマーの公称平均分子質量をいう。水溶性ポリマー（例えば、ＰＥＧ）の文脈における分子量は、数平均分子量または重量平均分子量のいずれかとして表され得る。別段の表示のない限り、本明細書における分子量への言及は全て、数平均分子量に言及するものである。数平均および重量平均の両分子量測定とも、ゲル透過クロマトグラフィー法を用いて測定され得る。分子量値を測定するための他の方法（例えば、数平均分子量を測定するための末端基分析の使用もしくは束一性（例えば、凝固点降下、沸点上昇、または浸透圧）の測定、または重量平均分子量を測定するための光散乱法、超遠心分離法もしくは粘度測定法の使用）もまた用いられ得る。本発明のポリマーは、典型的に、多分散であり（すなわち、ポリマーの数平均分子量および重量平均分子量は等しくない）、低い多分散性値（例えば、約１．２未満、約１．１５未満、約１．１０未満、約１．０５未満、約１．０３未満）を有する。本明細書で使用される場合、ある重量平均分子量または数平均分子量を有する単一の水溶性ポリマーへの言及がなされることがある。そのような言及は、その単一の水溶性ポリマーが、その述べられた分子量を有する水溶性ポリマーの組成物から得られたことを意味すると理解されるであろう。
【００５０】
本明細書において、用語「スペーサー部分」および「リンカー」は、相互に連結される部分、すなわちそのようなペメトレキセドと水溶性非ペプチドポリマーＰＯＬＹ１とを、連結するために使用される原子または原子団をいうために使用される。「スペーサー部分」および「リンカー」は、加水分解安定性であり得る、または解放可能な結合（例えば、生理的に加水分解可能な結合、酵素分解可能な結合、またはインビボで開裂する別の結合）を含み得る。
【００５１】
「加水分解可能な」結合とは、生理学条件下で水と反応する（すなわち、加水分解される）比較的弱い結合である。結合が水中で加水分解する傾向は、２つの中心原子を連結する結合の一般的種類だけでなく、これらの中心原子に結合している置換基にもよる。例示的な加水分解不安定性の結合としては、カルボキシレートエステル、ホスフェートエステル、無水物、アセタール、ケタール、アシルオキシアルキルエーテル、イミン、オルトエステル、ペプチドおよびオリゴヌクレオチドが挙げられる。
【００５２】
「酵素分解可能な結合」とは、１種以上の酵素による分解を受ける結合を意味する。当該結合は、分解をもたらすためには１種以上の酵素の作用を必要とする。
【００５３】
「加水分解安定性」連結または結合とは、水中で実質的に安定である、すなわち、長期間にわたってどんな測定可能な程度にも生理的条件下において加水分解を受けない化学結合、典型的には共有結合をいう。加水分解安定性結合の例としては、以下：炭素−炭素結合（例えば、脂肪族鎖中）、エーテル、アミド、ウレタンなどが挙げられるが、これらに限定されない。概して、加水分解安定性結合とは、生理的条件下において１日に約１〜２％未満の加水分解速度を示す結合である。代表的な化学結合の加水分解速度は、最も標準的な化学教本において見出され得る。
【００５４】
ポリマーの形態または全体構造に関して「マルチアーム型（の）」とは、３本以上のポリマー含有「アーム」が「コア」分子または構造に連結されたポリマーをいう。したがって、マルチアーム型ポリマーは、その構成およびコア構造により、３本のポリマーアーム、４本のポリマーアーム、５本のポリマーアーム、６本のポリマーアーム、７本のポリマーアーム、８本のポリマーアームまたはそれ以上を有し得る。高分岐ポリマーの１つの特定の種類は、樹状分岐ポリマーまたはデンドリマーであるが、これは、本発明において、マルチアーム型ポリマーとは異なる構造を有するものと見なされる。すなわち、本明細書で言及される場合のマルチアーム型ポリマーは、デンドリマーを明白に除外する。さらに、本明細書において提供されるとおりのマルチアーム型ポリマーは、非架橋コアを有する。
【００５５】
「デンドリマー」は、球状の、サイズ単分散のポリマーであり、当該ポリマーにおいては、全ての結合が、分岐点を各々が与える反復単位を伴って、規則的な分岐パターンで中央の中心部またはコアから半径方向に現れる。デンドリマーは、典型的に、ナノスケールの多段階製造プロセスを用いて形成される。各工程によって新たな「世代」が生じ、これは前の世代の２倍以上の複雑さを有している。デンドリマーは、特定の樹状分岐状態特性（例えば、コア封入）を示し、それにより、他の種類のポリマーとは一線を画すものとなっている。
【００５６】
「分岐点」とは、そこにおいてポリマーが線状構造から１つ以上のさらなるポリマーアームへと分かれるまたは分岐するところの、１個以上の原子を含む二股に分かれている点をいう。マルチアームポリマーは、デンドリマーをもたらす規則的な繰り返しに分岐がなっていない限りにおいて、１つの分岐点または複数の分岐点を有し得る。
【００５７】
「実質的に」または「本質的に」とは、ほぼ全面的にまたは完全にということ、例えば、何らかの所与の量の９５％以上を意味する。
【００５８】
「アルキル」とは、炭化水素鎖であって、典型的には約１〜２０原子長の範囲のものをいう。そのような炭化水素鎖は、好ましくは飽和したものであるが、必ずしも飽和したものではなく、かつ、典型的には直鎖が好ましいが、分岐状であっても直鎖であってもよい。例示的なアルキル基としては、メチル、エチル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、２−メチル−１−ブチル、３−ペンチル、３−メチル−３−ペンチルなどが挙げられる。本明細書で使用される場合、「アルキル」は、３個以上の炭素原子に言及する場合は、シクロアルキルを含む。
【００５９】
「低級アルキル」とは、１個〜６個の炭素原子を含有するアルキル基をいい、メチル、エチル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチルにより例示されるように、直鎖または分岐状であり得る。
【００６０】
「シクロアルキル」とは、架橋、縮合、またはスピロ環式化合物を含む飽和または不飽和の環式炭化水素鎖をいい、好ましくは３個〜約１２個の炭素原子、より好ましくは３個〜約８個の炭素原子からなる。
【００６１】
「非干渉性置換基」とは、分子中に存在する場合に、典型的に、その分子内に含有される他の官能基と非反応性の基である。
【００６２】
例えば「置換アルキル」にあるような、用語「置換（された）」とは、１個以上の非干渉性置換基（例えば、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル（例えば、シクロプロピル、シクロブチルなど）；ハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨード）；シアノ；アルコキシ、低級フェニル；置換フェニル；などであるが、これらに限定されない）で置換されている部分（例えば、アルキル基）をいう。フェニル環上の置換基について、当該置換基は、任意の配向（すなわち、オルト、メタ、またはパラ）であり得る。
【００６３】
「アルコキシ」とは、−Ｏ−Ｒ基をいい、ここで、Ｒは、アルキルまたは置換アルキル、好ましくはＣ１〜Ｃ２０アルキルであり（例えば、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシなど）、好ましくはＣ１〜Ｃ７である。
【００６４】
本明細書で使用される場合、「アルケニル」とは、少なくとも１個の二重結合を含有する、１〜１５原子長の分岐状または非分岐状の炭化水素基（例えば、エテニル（ビニル）、２−プロペン−１−イル（アリル）、イソプロペニル、３−ブテン−１−イルなど）をいう。
【００６５】
用語「アルキニル」とは、本明細書で使用される場合、少なくとも１個の三重結合を含有する、２〜１５原子長の分岐状または非分岐状の炭化水素基（エチニル、１−プロピニル、３−ブチン−１−イル、１−オクチン−１−イルなど）をいう。
【００６６】
「アリール」とは、各々５個または６個の核炭素原子からなる１個以上の芳香族環を意味する。アリールは、ナフチルにおけるがごとく縮合しているか、またはビフェニルにおけるがごとく縮合していないものであり得る、多重アリール環を包含する。アリール環はまた、１個以上の環式炭化水素環、ヘテロアリール環、または複素環式環と、縮合しているかまたは縮合していないものであり得る。本明細書で使用される場合、「アリール」は、ヘテロアリールを包含する。
【００６７】
「ヘテロアリール」は、１個〜４個のヘテロ原子、好ましくはＮ、ＯもしくはＳ、またはそれらの組み合わせを含有するアリール基である。ヘテロアリール環はまた、１個以上の環式炭化水素環、複素環式環、アリール環、またはヘテロアリール環と、縮合したものであり得る。
【００６８】
「複素環」または「複素環式」とは、不飽和または芳香族性を有しているかまたは有しておらず、かつ少なくとも１個の炭素でない環原子を有する、５個〜１２個の原子、好ましくは５個〜７個の原子からなる１個以上の環を意味する。好ましいヘテロ原子としては、硫黄、酸素、および窒素が挙げられる。
【００６９】
「置換ヘテロアリール」とは、１個以上の非干渉性基を置換基として有するヘテロアリールである。
【００７０】
「置換複素環」とは、非干渉性置換基から形成された１つ以上の側鎖を有する複素環である。
【００７１】
「求電子剤」とは、求核剤と反応することが可能な求電子中心、すなわち電子を求めている中心を有する、イオン、イオン性であり得る原子、または原子団をいう。
【００７２】
「求核剤」とは、求核中心、すなわち求電子中心を求めている中心を有し、かつ求電子剤と反応することが可能な、イオンまたはイオン性であり得る原子もしくは原子団をいう。
【００７３】
「活性薬剤」は、本明細書で使用される場合、インビボまたはインビトロで証明され得る、何らかの、しばしば有益な、薬理学的効果をもたらす、任意の薬剤、薬物、化合物などを包含する。本明細書で使用される場合、これらの用語はさらに、患者において局所的または全身的な効果を生じる任意の生理学的にまたは薬理学的に活性な物質を包含する。
【００７４】
「薬学的に許容できる賦形剤」または「薬学的に許容できるキャリア」とは、本発明の組成物中に含まれ得る、かつ患者に対して重大な毒物学的悪影響を与えない、賦形剤をいう。
【００７５】
「薬理学的有効量」、「生理学的有効量」および「治療有効量」は、血流中にまたは体内の標的組織もしくは部位中に所望のレベルの活性薬剤および／またはコンジュゲートをもたらすために必要とされる薬学的調製物中に存在する活性薬剤の量を意味するために、本明細書において相互交換可能に使用される。正確な量は、数多くの因子（例えば、個々の活性薬剤、薬学的調製物の成分および物理的特性、意図する患者集団、患者についての考慮事項など）によって決まり、本明細書において提供される情報および関連文献において入手可能な情報に基づき、当業者により容易に決定され得る。
【００７６】
本発明のポリマーの文脈における「多官能性（の）」とは、３個以上の官能基を有するポリマーを意味し、ここで、それらの官能基は、同じであっても異なってもよく、典型的にはポリマー末端上に存在する。本発明の多官能性ポリマーは、典型的に、約３個〜１００個の官能基、または３個〜５０個の官能基、または３個〜２５個の官能基、または３個〜１５個の官能基、または３個〜１０個の官能基を含有する（すなわち、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個または１０個の官能基を含有する）。典型的に、本発明のポリマーコンジュゲートを調製するために使用されるポリマー前駆体については、当該ポリマーは、加水分解可能なエステル結合を介して活性薬剤部分に連結するのに好適な官能基を各アームの末端に有する３本以上のポリマーアームを有している。典型的に、そのような官能基は同じものである。
【００７７】
本明細書に記載される塩基性または酸性の反応物は、その中性形態、荷電形態、および任意の対応する塩形態を含む。
【００７８】
「ポリオレフィンアルコール」とは、複数のペンダントヒドロキシル基がポリマー主鎖に結合している、オレフィンポリマー主鎖（例えば、ポリエチレン）を含むポリマーをいう。例示的なポリオレフィンアルコールは、ポリビニルアルコールである。
【００７９】
本明細書で使用される場合、「非ペプチド（の）」とは、ペプチド結合を実質的に含まないポリマー主鎖をいう。しかしながら、ポリマーは、反復モノマーサブユニットに沿って間隔をおいて少数のペプチド結合（例えば、モノマー単位約５０個当たり約１個以下のペプチド結合、など）を含み得る。
【００８０】
用語「被験体」、「個体」または「患者」は、本明細書において相互交換可能に使用され、脊椎動物、好ましくは哺乳動物をいう。哺乳動物としては、ネズミ科の動物、齧歯動物、類人猿、ヒト、家畜、競技用動物および愛玩動物が挙げられるが、これらに限定されない。当該被験体は、典型的に、本発明のポリマーの、必ずしもそうではないが典型的には本明細書に記載されるとおりのポリマー−活性薬剤コンジュゲートの形態のもの投与により、予防または処置され得る状態を患っているかまたはそのような状態に罹りやすい。
【００８１】
特定の状態の「処置」または特定の状態を「処置すること」とは、（１）そのような状態を予防すること、すなわち、その状態に曝され得るかもしくは罹患しやすくされ得るが、まだその状態を経験していないもしくは呈していない被験体において、その状態が発現しないようにする、またはより低い強度でもしくはより軽い程度に発症するようにすること；および（２）その状態を抑制すること、すなわち、進行を阻止することまたはその状態を逆転させることを包含する。
【００８２】
「必要に応じての」または「必要に応じて」とは、続いて記載される状況が起こることもあるが、起こらないこともあるということを意味しており、したがって、当該記載は、その状況が起こる場合と、それが起こらない場合とを包含する。
【００８３】
「残基」とは、（合成化学反応か後の化合物放出化学反応かを問わず）化学反応後に残留または存在する化合物の部分をいう。例えば、マルチアームポリマーを形成するために使用されるポリオールは、マルチアームポリマー中にそのポリオールの残基を存在させることになる。
【００８４】
「ポリオール」とは、３個以上のヒドロキシル基を含有するアルコールであり、ここで、この場合の接頭語「ポリ」は、高分子構造に関するものではなく、複数の特定の特徴に関するものである。同様に、ポリチオールは、３個以上のチオール（−ＳＨ）基を含有するチオールであり、ポリアミンは、３個以上のアミノ基を含有するアミンである。
【００８５】
先に示したように、本発明の１つ以上の実施形態は、式Ｉにより包含される構造を有するコンジュゲートに関する。本発明のコンジュゲートは、プロドラッグ（解放可能な結合を含むスペーサー部分の存在を考慮した場合）でもあるし、「マルチアーム型」でもある。したがって、個体への投与時に、プロドラッグは、インビボ開裂により、水溶性非ペプチドポリマーへの結合のない化合物をインビボで放出する。例えば、エステルのインビボ開裂は、エステラーゼの助けを借りてまたは借りずに起こり得る。さらなる例において、アミドのインビボ開裂は、例えばγ−グルタミルヒドロラーゼの助けを借りて起こり得る。コンジュゲートはマルチアーム型であるので、放出は複数回起こり、それにより、投与に続いて出発コンジュゲート１モルにつき数モルの放出化合物を送達する。
【００８６】
したがって、本発明の例示的なコンジュゲートは、式：
【００８７】
【化９】
0005899241.tif 000014
【００８８】
により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有し、ここで、
Ｒは、３個〜約５０個のヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基を有するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基であり、
Ｒ１は、Ｈ、ハロ（例えば、クロロおよびフルオロ）、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され（好ましくは、Ｈであり）、
Ｒ２は、Ｈおよびメチルからなる群から選択され（好ましくは、Ｈであり）、
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、
Ｑは、リンカー（１つ以上の実施形態において、加水分解安定性リンカー）であり、
ＰＯＬＹ１は、水溶性非ペプチドポリマーであり、
Ｘは、解放可能な結合（例えば、加水分解可能な結合、酵素分解可能な結合など）を含むスペーサー部分であり、かつ
ｑは、３〜約５０（例えば、４）の正の整数である。
【００８９】
本明細書に記載される複素環式環のオキソ形態は、対応するＲ３置換ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンの互変異性等価物であることが理解されよう。
【００９０】
上記の構造により企図されるように、コンジュゲートは、「ｑ」本のアーム、すなわち、３本〜約５０本のアームを有する。アームの例示的な数としては、３本、４本、５本、６本、７本、９本、および１０本が挙げられる。１つ以上の実施形態において、本発明のコンジュゲートは、マルチアーム型ポリマー試薬から調製され、そしてまた、このマルチアーム型ポリマー試薬は、マルチアームコア分子をベースとするマルチアームポリマーから調製される。
【００９１】
例えば、１つのアプローチにおいて、マルチアームポリマーは、マルチアームコア分子の各末端上にポリマーを効果的に「生長させる」ことによってマルチアームコア分子から調製され得る。非限定的な例として、エトキシ化反応によってポリオール（例えば、ペンタエリスリトール、ジグリセロールなど）上にポリマーアームを合成することが可能である。別の例示的なアプローチにおいて、マルチアームポリマーは、マルチアームコア分子の各末端上に水溶性非ペプチドポリマーを結合させることによってマルチアームコア分子から調製され得る。両アプローチの原理は、文献に記載されており、例えば米国特許第７，０２６，４４０号明細書に記載されている。しかしながら、コンジュゲートが本明細書において提供される構造のうちの１つ以上により包含されるものである限りにおいて、本発明は、採られる具体的なアプローチに関して限定されない。
ポリオール、ポリチオール、またはポリアミンの残基「Ｒ」
１つ以上の実施形態において、ポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基「Ｒ」は、有機ラジカル含有部分である。「Ｒ」が由来するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンは、約３個〜約１５０個の炭素原子（例えば、約３個〜約５０個（例えば、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、および１０個）の炭素原子）を有する。当該残基は、１個以上のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｓ、またはＮ）を含有し得る。さらに、当該残基は、線状であり得る。場合によっては、当該残基は、環状であり得る。
【００９２】
先に示したように、本明細書において提供されるマルチアーム型コンジュゲートのための分岐のベースを形成するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基「Ｒ」は、（水溶性非ペプチドポリマーを含有するマルチアーム構造に組み込まれる前の）対応するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンに由来するものである。１つ以上の実施形態において、対応するポリオール、ポリチオール、またはポリアミンは、それぞれ、ポリマー結合に利用可能な少なくとも３個のヒドロキシル基、チオール基、またはアミノ基を有する。好ましいポリオールは、３個以上のヒドロキシル基を含む分子である。好ましいポリチオールは、３個以上のチオール基を含む分子である。好ましいポリアミンは、３個以上のアミノ基を含む分子である。
【００９３】
１つ以上の実施形態において、ポリオール、ポリアミンまたはポリチオールは、典型的に、それぞれ、３個〜約２５個のヒドロキシル、またはアミノ基またはチオール基、例えば、それぞれ、３個〜約１０個（すなわち、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個）のヒドロキシル、アミノ基またはチオール基、好ましくは、それぞれ、３個〜約８個（すなわち、３個、４個、５個、６個、７個、または８個）のヒドロキシル、アミノ基またはチオール基を含有する。１つ以上の実施形態において、各ヒドロキシル基間、各チオール基間、または各アミノ基間の原子の数は、各ヒドロキシル基間、各チオール基間、または各アミノ基間において約１〜約２０（例えば、１〜約５）介在原子（例えば、炭素原子）長が典型的であるが、様々であり得る。介在コア原子および長さについては、−ＣＨ２−は１介在原子長を有すると見なされ、−ＣＨ２ＣＨ２−は２原子長を有すると見なされる、などである。
【００９４】
例示的なポリオールおよびポリアミン（それらについての対応する残基が本明細書において提供されるコンジュゲート中に存在し得る）は、それぞれ、（ラジカル）−（ＯＨ）ｑおよび（ラジカル）−（ＮＨ２）ｑの構造を有しており、ここで、（ラジカル）は有機含有ラジカル（ｏｒｇａｎｉｃ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｒａｄｉｃａｌ）に相当し、ｑは３〜約５０の正の整数である。式Ｉにおいて、変数「Ｑ」は、Ｒと合わせて考えられる場合、典型的に、本明細書に記載されるとおりのコア有機ラジカルの残基を表すことに留意されたい。すなわち、ポリオール、ポリチオールおよびポリマーアミンを特に名称で記述する場合、これらの分子は、水溶性ポリマー含有構造への組み込み前の形態のものが言及されている。したがって、例えば、Ｒがポリオールのペンタエリスリトール［Ｃ（ＣＨ２ＯＨ）４］の残基である式Ｉのコンジュゲートにおいては、残基「Ｒ」は炭素（すなわち、「Ｃ」）を含み、「Ｑ」と一緒になって「Ｃ（ＣＨ２Ｏ−）４」を表す。
【００９５】
例示的なポリオールとしては、１個〜１０個の炭素原子および３個〜１０個のヒドロキシル基を有する脂肪族ポリオールが挙げられ、例えば、トリヒドロキシアルカン、テトラヒドロキシアルカン、ポリヒドロキシアルキルエーテル、ポリヒドロキシアルキルポリエーテルなどが挙げられる。脂環式ポリオールとしては、直鎖状または閉環状の糖および糖アルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、キシリトール、クェブラキトール、トレイトール、アラビトール、エリスリトール、アドニトール、ズルシトール、ファコース（ｆａｃｏｓｅ）、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、ラムノース、ガラクトース、グルコース、フルクトース、ソルボース、マンノース、ピラノース、アルトロース、タロース、タギトース（ｔａｇｉｔｏｓｅ）、ピラノシド、スクロース、ラクトース、マルトースなどが挙げられる。脂肪族ポリオールのさらなる例としては、グルコース、リボース、マンノース、ガラクトース、および関連立体異性体の誘導体が挙げられる。芳香族ポリオール（例えば、１，１，１−トリス（４’−ヒドロキシフェニル）アルカン（例えば、１，１，１−トリス（４−ヒドロキシフェニル）エタン）、２，６−ビス（ヒドロキシアルキル）クレゾールなど）もまた使用され得る。使用され得る他のコアポリオールとしては、ポリヒドロキシクラウンエーテル、シクロデキストリン、デキストリンおよび他の炭水化物（例えば、単糖、オリゴ糖、および多糖、デンプンおよびアミラーゼ）が挙げられる。
【００９６】
例示的なポリオールとしては、グリセロール、トリメチロールプロパン、ペンタエリスリトール、ジペンタエリスリトール、トリペンタエリスリトールおよびグリセロールのエトキシ化形態が挙げられる。また、好ましいのは、還元糖（例えば、ソルビトール）およびグリセロールオリゴマー（例えば、ジグリセロール、トリグリセロール、ヘキサグリセロールなど）である。２１アームポリマーは、２１個の利用可能なヒドロキシル基を有するヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを用いて合成され得る。さらに、平均２４個のヒドロキシル基を有するポリグリセロールもまた、例示的なポリオールとして含まれる。
【００９７】
例示的なポリアミンとしては、脂肪族ポリアミン（例えば、ジエチレントリアミン、Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’−トリメチルジエチレントリアミン、ペンタメチルジエチレントリアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン、ペンタエチレンヘキサミン、ジプロピレントリアミン、トリプロピレンテトラミン、ビス−（３−アミノプロピル）−アミン、ビス−（３−アミノプロピル）−メチルアミン、およびＮ，Ｎ−ジメチル−ジプロピレン−トリアミンが挙げられる。本発明において使用され得る天然に存在するポリアミンとしては、プトレシン、スペルミジン、およびスペルミンが挙げられる。本発明における使用に好適な多数の適切なペンタミン、テトラミン、オリゴアミン、およびペンタミジンアナログが、参照により本明細書に援用されるＢａｃｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，４６（１）：５５−６１に記載されている。
【００９８】
以下に提供されるのは、ポリオールの残基に対応する例示的な構造である［各構造は対応するヒドロキシル基に由来する酸素原子（「Ｏ」）を用いて表されているが、各「Ｏ」は、硫黄（「Ｓ」）またはＮＨで置き換えられて、それぞれポリチオールまたはポリアミンの対応する残基を表し得る）。以下に示される残基は、式Ｉの化合物に関して「Ｒ」および「Ｑ」に対応するものと理解されることに留意されたい。いずれにせよ、以下に示される例示的な構造の任意のものに基づくコンジュゲートが、本発明の一部として包含される。
【００９９】
【化１０】
0005899241.tif 000015
【０１００】
ここで、ｍは、０〜４０［好ましくは０〜１０、例えば、０〜５（すなわち、０、１、２、３、４、５）］の正の整数である。
【０１０１】
上記のポリオール、ポリチオールおよびポリアミンに基づく（例えば、式Ｉにより包含されるコンジュゲートを調製するためのマルチアームポリマー試薬として使用される）水溶性の非ペプチド含有マルチアームポリマーおよび他のポリマーが、国際公開第２００７／０９８４６６号パンフレット、国際公開第２０１０／０１９２３３号パンフレットおよび米国特許第７，７４４，８６１号明細書に記載されている。これらの文献および他の文献に、そのようなマルチアームポリマーを調製するための方法が記載されている。さらに、いくつかのマルチアームポリマーは、例えばＣｒｅａｔｉｖｅ  ＰＥＧＷｏｒｋｓ（Ｗｉｎｓｔｏｎ  Ｓａｌｅｍ，ＮＣ  ＵＳＡ）、ＳｕｎＢｉｏ  ＰＥＧ−Ｓｈｏｐ（ＳｕｎＢｉｏ  ＵＳＡ，Ｏｒｉｎｄａ，ＣＡ）、ＪｅｎＫｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＵＳＡ（Ａｌｌｅｎ，ＴＸ）、およびＮＯＦ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｗｈｉｔｅ  Ｐｌａｉｎｓ，ＮＹ）から市販されている。
リンカー「Ｑ」
リンカーＱは、式Ｉに従うコンジュゲートにおいて、３個〜約５０個のヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基を有するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基「Ｒ」を、各水溶性非ペプチドポリマーＰＯＬＹ１に連結する役目をする。この点について、本発明は、使用される具体的なリンカーに関して限定されない。１つ以上の実施形態において、残基「Ｒ」と水溶性非ペプチドポリマーＰＯＬＹ１との間のリンカーは、加水分解安定性リンカーである。
【０１０２】
本発明の１つ以上の実施形態において、リンカーＱは、本発明のコンジュゲートを調製する際に使用されるマルチアームポリマーを形成するために用いられるアプローチに影響される。例えば、ヒドロキシル、チオールまたはアミンに対して反応性の官能基を有する水溶性非ペプチドポリマーをそれぞれポリオール、ポリチオールまたはポリアミンと反応させれば、リンカーＱは、そのポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの末端と水溶性非ペプチドポリマーＰＯＬＹ１の反復モノマーの最初の部分との間に形成される結合を具体化する１つ以上の原子を含み得る。この点に関する例示的な結合化学反応は、（結果として生じるリンカーと共に）文献に記載されており、例えばＷｏｎｇ（１９９１）“Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ”，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，ａｎｄ  Ｂｒｉｎｋｌｅｙ（１９９２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．３：２０１３に記載されている。
【０１０３】
式Ｉのコンジュゲートの１つ以上の実施形態において、Ｑは、少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、ＯまたはＳまたはＮＨ）を含有しており、ここで、ＱにおけるＲに近接する原子は、Ｒと合わせて考えられる場合、典型的に、ポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの有機ラジカル含有コアの残基である。概して、リンカーＱは、１個〜約１０個の原子（例えば、１個〜約５個の原子）を含有する。リンカーＱは、典型的に、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、または１０個からなる群から選択される数の原子を含有する。例示的なＱとしては、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−および−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−が挙げられる。
水溶性非ペプチドポリマーＰＯＬＹ１
本発明のコンジュゲートは、いくつかの水溶性非ペプチドポリマーを全体構造の一部として含む。コンジュゲートに関し、コンジュゲート中の各水溶性非ペプチドポリマー（例えば、式Ｉにより包含される化合物と連結したＰＯＬＹ１）は独立して選択されるのであるが、好ましくは、各水溶性非ペプチドポリマーは同じポリマー種である。すなわち、例えば、マルチアーム型コンジュゲート中の各ＰＯＬＹ１は同じである。
【０１０４】
非ペプチドでありかつ水溶性である様々な水溶性非ペプチドポリマーの任意のものが、マルチアームコンジュゲートにおいて使用され得、本発明は、この点について限定されない。水溶性非ペプチドポリマーの例としては、ポリ（アルキレングリコール）、エチレングリコールおよびプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカリド）、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン、ポリ（Ｎ−アクリロイルモルホリン）、米国特許第５，６２９，３８４号明細書に記載されているポリマー、ならびに、上記のうちの任意の１つ以上のもののコポリマー、ターポリマー、および混合物が挙げられる。
【０１０５】
水溶性非ペプチドポリマー（例えば、ＰＯＬＹ１）がＰＥＧである場合、その構造は、典型的に、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ここで、式Ｉにより包含されるコンジュゲートに関して、末端のエチレンは「Ｑ」に共有結合しており、末端の酸素は「Ｘ」に結合している）を含み、ここで、ｎは、約５〜約４００、好ましくは約１０〜約３５０、または約２０〜約３００の範囲にあり得る。
【０１０６】
水溶性非ペプチドポリマー（例えば、ＰＯＬＹ１）についての例示的な分子量としては、約２００、約２５０、約３００、約４００、約５００、約６００、約７００、約８００、約９００、約１，０００、約１，５００、約２，０００、約３，０００、約４，０００、約５，０００、約６，０００、約７，０００、約７，５００、約８，０００、約９，０００、約１０，０００、約１２，０００、約１５，０００、約１７，５００、約１８，０００、約１９，０００および約２０，０００ダルトンが挙げられる。マルチアーム型ポリマーの分子量に関しては、例示的な分子量としては、約８００、約１，０００、約１，２００、約１，６００、約２，０００、約２，４００、約２，８００、約３，２００、約３，６００、約４，０００、約５，０００、約６，０００、約８，０００、約１０，０００、約１２，０００、約１５，０００、約１６，０００、約２０，０００、約２４，０００、約２５，０００、約２８，０００、約３０，０００、約３２，０００、約３６，０００、約４０，０００、約４５，０００、約４８，０００、約５０，０００、約６０，０００、約８０，０００および約１００，０００ダルトンが挙げられる。マルチアーム型ポリマーについての分子量範囲に関しては、例示的な範囲としては、約８００〜約８０，０００ダルトン、約９００〜約７０，０００ダルトン、約１，０００〜約４０，０００ダルトン、５，０００〜約３０，０００ダルトン、および約２０，０００〜約８０，０００ダルトンが挙げられる。
スペーサー部分Ｘ
スペーサー部分Ｘは、水溶性非ペプチドポリマー（例えば、式Ｉに従うコンジュゲート中のＰＯＬＹ１）をペメトレキセドベースの化合物に連結する役目をする。加水分解可能な結合（概してエステル結合）が、スペーサー部分の一部として含まれる。この点について、連結部（ｌｉｎｋａｇｅ）全体がその連結部の一部として加水分解可能な結合を含む限りにおいて、本発明は、使用される具体的なリンカーに関して限定されない。
【０１０７】
スペーサー部分Ｘの一部として、スペーサー部分の部分は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｓ）−、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＣＨ２−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−［ＣＨ２］０−６−（ＯＣＨ２ＣＨ２）０−２−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）１−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、および−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）１−６−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−からなる群から選択される１つ以上の成分を含み得る。しかしながら、本開示において、ある一連の原子が水溶性ポリマーのすぐ隣にあり、その一連の原子が別のモノマーであるにすぎず、提案されるスペーサー部分がそのポリマー鎖の単なる延長部となるような場合は、その一連の原子はスペーサー部分ではない。
【０１０８】
本発明の１つ以上の実施形態において、スペーサー部分Ｘは、シクロアルキレン基（例えば、１，３−または１，４−シクロヘキシレン）を含み得る。
【０１０９】
本発明の１つ以上の実施形態において、スペーサー部分Ｘは、約１原子〜約５０原子、より好ましくは、約１原子〜約２５原子、さらにより好ましくは、約１原子〜約１０原子の原子長を有する。典型的に、スペーサー部分は、１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０からなる群から選択される原子長のものである。原子鎖長を考える場合、全距離に寄与する原子のみが考慮される。例えば、構造
【０１１０】
【化１１】
0005899241.tif 000016
【０１１１】
を有するスペーサーは、置換基はスペーサーの長さに寄与しないと見なされるので、１１原子の鎖長を有する。
【０１１２】
本発明の１つ以上の実施形態において、スペーサー部分Ｘは、スペーサー部分Ｙであり、必要に応じてさらに「Ｚ」に結合しており（すなわち、Ｙ−Ｚ）、後者の場合、Ｙは、加水分解により分解可能な連結部であるＺに共有結合しているスペーサー部分である。特定の実施形態において、Ｚ自体は、加水分解により分解可能な連結部を構成しないことがあり得るが、ＹまたはＹの少なくとも一部分と合わせて考えられる場合、加水分解により分解可能な連結部をなす。
【０１１３】
本発明の１つ以上の実施形態において、スペーサー部分Ｘが「Ｙ」を含む場合、Ｙは、構造：−（ＣＲｘＲｙ）ａ−Ｋｗ−（ＣＲｘＲｙ）ｂ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｃ−（ＣＲｘＲｙ）ｄ−Ｋｚ−を有し、ここで、各ＲｘおよびＲｙは、それぞれの存在において、独立して、Ｈ、または、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、および置換アリールからなる群から選択される有機ラジカルであり、ａは、０〜１２の範囲にあり（すなわち、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２であり得）、ｂは、０〜１２の範囲にあり（すなわち、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２であり得）、ＫｗおよびＫｚの各々は、独立して、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−から選択され、ｃは、０〜２５の範囲にあり、かつＺは、Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−および−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−から選択され、ｄは、０〜１２の範囲にある（すなわち、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２であり得る）。Ｋｗ、ＫｚおよびＺの特定の構造は、スペーサー部分Ｘの全体構造において以下の結合：−Ｏ−Ｏ−、ＮＨ−Ｏ−、−ＮＨ−ＮＨ−のいずれも生じることのないような具合にａ、ｂ、ｃ、およびｄの各々の値によって決まることになる。
【０１１４】
本発明の１つ以上の実施形態において、スペーサー部分ＸがＹ−Ｚである場合は、Ｙは、構造：−（ＣＲｘＲｙ）ａ−Ｋｗ−（ＣＲｘＲｙ）ｂ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｃ−（ＣＲｘＲｙ）ｄ−Ｋｚ−を有し、ここで、変数Ｒｘ、Ｒｙ、Ｋｗ、Ｋｚ、ａ、ｂ、ｃおよびｄは、前の段落で説明された値を有する。
【０１１５】
本発明の１つ以上の実施形態において、（前２段落の各々に示したとおりの）ＲｘおよびＲｙは、それぞれの存在において、独立して、Ｈまたは低級アルキルである。本発明の１つ以上の実施形態において、ＲｘおよびＲｙは、それぞれの存在において、Ｈである。さらに別の実施形態において、「ａ」は、０〜５の範囲にある、すなわち、０、１、２、３、４、または５から選択される。さらに別の実施形態において、ｂは、０〜５の範囲にある、すなわち、０、１、２、３、４、または５から選択される。さらに別の実施形態において、ｃは、０〜１０の範囲にある。さらに別の実施形態において、「ｄ」は、０〜５の範囲にある、すなわち、０、１、２、３、４、または５から選択される。さらに別の実施形態において、Ｋｗは、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨである。
【０１１６】
１つ以上の実施形態において、スペーサー部分Ｘはまた、１つ以上のアミノ酸残基を含み得る。そのような実施形態において、例示的なアミノ酸残基は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、グリシン、トレオニン、セリン、システイン、メチオニン、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、プロリン、および天然に存在しないアミノ酸からなる群から選択されるアミノ酸由来の残基である。
ペメトレキセドベースの化合物
本明細書に記載されるマルチアームポリマーコンジュゲートは、以下の構造：
【０１１７】
【化１２】
0005899241.tif 000017
【０１１８】
を有するペメトレキセドベースの化合物の残基を含み、ここで、
Ｒ１は、Ｈ、ハロ（例えば、クロロおよびフルオロ）、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され（好ましくは、Ｈであり）、
Ｒ２は、Ｈおよびメチルからなる群から選択され（好ましくは、Ｈであり）、かつ
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択される。
【０１１９】
ペメトレキセドベースの化合物の特定の例示的な形態（それらの合成を含む）は、米国特許第５，３４４，９３２号明細書に記載されている。式ＩＩのペメトレキセドベースの化合物の他の形態は、米国特許第５，３４４，９３２号明細書および他の文献に鑑みて、本明細書において提供される開示内容に照らして当業者により調製され得る。
本発明のコンジュゲートの調製方法
本発明のコンジュゲートは、有機化学の従来の合成アプローチを用いて調製され得、本発明は、コンジュゲートが作製される方法に関して限定されない。
【０１２０】
本発明のコンジュゲートを調製するための１つのアプローチにおいて、マルチアームポリマー試薬（これは商業的に利用可能な供給源、例えば、Ｃｒｅａｔｉｖｅ  ＰＥＧＷｏｒｋｓ、ＳｕｎＢｉｏ  ＰＥＧ−Ｓｈｏｐ、ＪｅｎＫｅｍ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＵＳＡ、およびＮＯＦ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから得られ得るか、または文献において提供されている説明に従い調製され得る）が、コンジュゲーション条件下において、過剰量（典型的には、少なくとも、試薬のポリマーアーム数「ｑ」のモル過剰）のペメトレキセドベースの化合物と接触させられる。コンジュゲーション条件は、当該試薬の反応性基とタキソイドベースの化合物の官能基との間の共有結合を可能にする温度、ｐＨ、時間、溶媒などの条件である。反応性基を有する所与のポリマー試薬とタキソイドベースの化合物の対応する官能基との間の例示的なコンジュゲーション条件は、本明細書において提供される開示内容に鑑みて、当業者には分かるであろう。例えばＰｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ（１９９７）を参照されたい。
【０１２１】
コンジュゲーション条件を伴う使用に適したマルチアーム型ポリマー試薬は、典型的に、炭酸Ｎ−スクシンイミジル（例えば、米国特許第５，２８１，６９８号明細書、同第５，４６８，４７８号明細書を参照されたい）、アミン（例えば、Ｂｕｃｋｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍａｋｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８２：１３７９（１９８１）、Ｚａｌｉｐｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｐｏｌｙｍ．Ｊ．１９：１１７７（１９８３）を参照されたい）、ヒドラジド（例えば、Ａｎｄｒｅｓｚ  ｅｔ  ａｌ．Ｍａｋｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．１７９：３０１（１９７８）を参照されたい）、プロピオン酸スクシンイミジルおよびブタン酸スクシンイミジル（例えば、Ｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ１７０−１８１，Ｈａｒｒｉｓ  ＆  Ｚａｌｉｐｓｋｙ  Ｅｄｓ．，ＡＣＳ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ，１９９７を参照されたい；米国特許第５，６７２，６６２号明細書もまた参照されたい）、コハク酸スクシンイミジル（例えば、Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．７：１７５（１９８４）およびＪｏｐｐｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｋｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８０：１３８１（１９７９）を参照されたい）、スクシンイミジルエステル（例えば、米国特許第４，６７０，４１７号明細書を参照されたい）、炭酸ベンゾトリアゾール（例えば、米国特許第５，６５０，２３４号明細書を参照されたい）、グリシジルエーテル（例えば、Ｐｉｔｈａ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．９４：１１（１９７９）、Ｅｌｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３：３５４（１９９１）を参照されたい）、オキシカルボニルイミダゾール（例えば、Ｂｅａｕｃｈａｍｐ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３１：２５（１９８３）、Ｔｏｎｄｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  １：２５１（１９８５）を参照されたい）、炭酸ｐ−ニトロフェニル（例えば、Ｖｅｒｏｎｅｓｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１１：１４１（１９８５）；およびＳａｒｔｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２７：４５（１９９１）を参照されたい）、アルデヒド（例えば、Ｈａｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｐｏｌｙｍ．Ｓｃｉ．Ｃｈｅｍ．Ｅｄ．２２：３４１（１９８４）、米国特許第５，８２４，７８４号明細書、米国特許第５，２５２，７１４号明細書を参照されたい）、マレイミド（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８：３４３（１９９０）、Ｒｏｍａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ２：２９（１９８４））、およびＫｏｇａｎ，Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｃｏｍｍ．２２：２４１７（１９９２）を参照されたい）、オルトピリジル−ジスルフィド（例えば、Ｗｏｇｈｉｒｅｎ，ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．４：３１４（１９９３）を参照されたい）、アクリロール（例えば、Ｓａｗｈｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍａｃ���ｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２６：５８１（１９９３）を参照されたい）、ビニルスルホン（例えば、米国特許第５，９００，４６１号明細書を参照されたい）からなる群から選択される反応性基を有するものである。これらの文献に示されているように、ポリマー試薬の所与の反応性基についての例示的なコンジュゲーション条件（温度、ｐＨ、時間および溶媒の条件を含む）は開示されている。
【０１２２】
１つ以上の実施形態において、本明細書に記載されるペメトレキセドベースの化合物は、１個以上の保護されたカルボン酸基を含み得る。コンジュゲートの調製に関して、１つのアプローチにおいて、保護基は、ペメトレキセドベースの化合物をポリマー試薬とコンジュゲートさせた後に除去され得る。
【０１２３】
最初のコンジュゲーションに続いて、式Ｉのコンジュゲートを含有する組成物は精製され得る。精製および単離の方法は、沈殿、それに続く濾過および乾燥、ならびにクロマトグラフィーを含む。好適なクロマトグラフィー法としては、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、およびフラッシュクロマトグラフィーが挙げられる。
コンジュゲートの塩
コンジュゲートは、その塩基形態で使用され得る。さらに、コンジュゲートは、コンジュゲートの薬学的に許容できる塩に相当する形態で使用され得、本明細書における本発明のコンジュゲートへの言及はいずれも、薬学的に許容できる塩を包含することが意図される。使用される場合、本明細書に記載されるとおりの化合物の塩は、薬理学的にも薬学的にも受容可能であるべきであるが、遊離活性化合物またはその薬学的に許容できる塩を調製するために、薬学的に受容可能でない塩が好都合に使用され得、本発明の範囲から除外されない。そのような薬理学的かつ薬学的に許容できる塩は、文献に詳述されている標準的な方法を用いて、有機酸または無機酸との当該化合物の反応によって調製され得る。有用な塩の例としては、以下の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリサイクル酸（ｓａｌｉｃｙｃｌｉｃ）、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸およびベンゼンスルホン酸などから調製された塩が挙げられるが、これらに限定されない。また、薬学的に許容できる塩は、アルカリ金属塩またはアルカリ土類塩（例えば、カルボン酸基のナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩）としても調製され得る。
本発明のコンジュゲートの組成物
特定の場合において、不完全な変換、１００％未満の収率、および化学合成の間に日常的に直面する他の不可避の厄介な問題に起因して、４アームコンジュゲートの例示的な組成物は、組成物中の４アームコンジュゲートの少なくとも８０％が、式
【０１２４】
【化１３】
0005899241.tif 000018
【０１２５】
により包含される構造、ならびにその薬学的に許容できる塩および溶媒和物を有する組成物であり、ここで、
Ｒは、３個〜約５０個のヒドロキシル基、チオール基またはアミノ基を有するポリオール、ポリチオールまたはポリアミンの残基であり、
Ｒ１は、Ｈ、ハロ（例えば、クロロおよびフルオロ）、メチル、メトキシおよびトリフルオロメチルからなる群から選択され（好ましくは、Ｈであり）、
Ｒ２は、Ｈおよびメチルからなる群から選択され（好ましくは、Ｈであり）、
Ｒ３は、Ｈ、低級アルキルおよびアミノからなる群から選択され、
Ｑは、リンカー（１つ以上の実施形態において、加水分解安定性リンカー）であり、
ＰＯＬＹ１は、水溶性非ペプチドポリマーであり、
Ｘは、解放可能な結合（例えば、加水分解可能な結合、酵素分解可能な結合など）を含むスペーサー部分であり、かつ
ｑは、３〜約５０（例えば、４）の正の整数である。
本発明のコンジュゲートの薬学的組成物
本発明は、１種以上の本発明のマルチアーム型ポリマーコンジュゲートまたはその薬学的に許容できる塩を、１種以上の薬学的に許容できるキャリア、および必要に応じて任意の他の治療成分、安定剤などと共に含む、獣医学およびヒト医学用途の両方のための薬学的組成物を提供する。当該キャリアは、処方物の他の成分と適合性がありかつそのレシピエントに過度に有害でないという意味において、薬学的に許容できるものでなければならない。本発明の組成物はまた、高分子賦形剤／添加剤またはキャリア、例えば、ポリビニルピロリドン、誘導体化セルロース（例えば、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース）、Ｆｉｃｏｌｌ（高分子糖）、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）、デキストレート（ｄｅｘｔｒａｔｅ）（例えば、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンおよびスルホブチルエーテル−β−シクロデキストリンなどのシクロデキストリン）、ポリエチレングリコール、およびペクチンも含み得る。当該組成物はさらに、希釈剤、緩衝剤、結合剤、崩壊剤、増粘剤、滑沢剤、保存剤（酸化防止剤を含む）、着香料、味マスキング剤、無機塩（例えば、塩化ナトリウム）、抗微生物剤（例えば、塩化ベンザルコニウム）、甘味料、帯電防止剤、界面活性剤（例えば、「ＴＷＥＥＮ  ２０」および「ＴＷＥＥＮ  ８０」などのポリソルベート、およびＢＡＳＦから入手可能なＦ６８およびＦ８８などのプルロニック）、ソルビタンエステル、脂質（例えば、リン脂質（例えば、レシチンおよび他のホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン）、脂肪酸および脂肪酸エステル、ステロイド（例えば、コレステロール））、およびキレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ、亜鉛および他のそのような好適なカチオン）を含み得る。本発明に従う組成物における使用に好適な他の薬学的賦形剤および／または添加剤は、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，”１９ｔｈｅｄ．，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，（１９９５）、および“Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，”５２ｎｄｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，ＮＪ（１９９８）、および“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，”Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄ．，Ｅｄ．Ａ．Ｈ．Ｋｉｂｂｅ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ，２０００に記載されている。
【０１２６】
当該コンジュゲートは、経口投与、直腸投与、局所投与、経鼻投与、眼投与、または非経口投与（腹腔内、静脈内、皮下、または筋肉内注射を含む）に好適なものをはじめとする組成物として処方され得る。当該組成物は、単位剤形で好都合に提供され得、薬学の技術分野において周知の方法の任意のものによって調製され得る。概して、当該組成物は、活性化合物を液体キャリアと会合させて溶液または懸濁液を形成することによって調製されるか、または代替的に、当該コンジュゲートを固形の（必要に応じて、粒状の）生成物を形成するのに好適な処方物成分と会合させ、次いで、保証されるならば、その生成物を所望の送達形態に成形することによって調製される。固形処方物は、粒状である場合、典型的に、約１ナノメートル〜約５００ミクロンの範囲の大きさを有する粒子を含む。概して、静脈内投与が意図される固形処方物については、粒子は、典型的に、直径約１ｎｍ〜約１０ミクロンの範囲にある。特に好ましいのは、注射前に水性ビヒクルで再構成される無菌凍結乾燥組成物である。
【０１２７】
処方物中のマルチアーム型ポリマーコンジュゲートの量は、使用される特定の活性薬剤、その活性、コンジュゲートの分子量、および他の因子（例えば、剤形、標的患者集団、および他の考慮すべき事柄）によって様々であり、一般的に、当業者により容易に決定されるものである。実際には、これは、個々のコンジュゲート、その活性、処置されるべき状態の重症度、患者、処方物の安定性などによって決まる。組成物は、概して、約１重量％〜約９９重量％のうちのいずれかのコンジュゲート、典型的には約２重量％〜約９５重量％のコンジュゲート、より典型的には約５重量％〜８５重量％のコンジュゲートを含有し、組成物に含有される賦形剤／添加剤の相対量にも依存するものである。より具体的には、当該組成物は、典型的に、以下の百分率のうちの１つ、すなわち、少なくとも約２重量％、５重量％、１０重量％、２０重量％、３０重量％、４０重量％、５０重量％、６０重量％、またはそれ以上の、コンジュゲートを含有する。
【０１２８】
経口投与に好適な本発明の組成物は、各々が所定の量のコンジュゲートを粉末もしくは顆粒として含有する不連続単位（例えば、カプセル剤、カシェ剤、錠剤、ロゼンジなど）；または水性液もしくは非水性液体中の懸濁剤（例えば、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤、頓服水剤など）として提供され得る。
【０１２９】
非経口投与に好適な処方物は、レシピエントの血液と等張となるように処方され得る、プロドラッグコンジュゲートの無菌水性調製物を好都合に含む。
【０１３０】
経鼻スプレー処方物は、マルチアーム型ポリマーコンジュゲートの精製された水溶液を、保存剤および等張剤と共に含む。そのような処方物は、好ましくは、鼻粘膜と適合するｐＨおよび等張状態に調整される。
【０１３１】
直腸投与用処方物は、好適なキャリア（例えば、カカオ脂または水素化脂肪もしくは水素化脂肪カルボン酸）と共に坐剤として提供され得る。
【０１３２】
眼用処方物は、ｐＨおよび等張因子が好ましくは眼のものと一致するように調整されること以外は、経鼻スプレーと同様の方法により調製される。
【０１３３】
局所用処方物は、１種以上の媒体（例えば、鉱油、石油、多価アルコールまたは局所用処方物用に使用される他の基剤）に溶解または懸濁させたマルチアーム型ポリマーコンジュゲートを含む。上で述べたような他の副成分の添加が望ましいことがあり得る。
【０１３４】
エアゾール剤としての例えば吸入による投与に好適な薬学的処方物もまた提供される。これらの処方物は、所望のマルチアーム型ポリマーコンジュゲートまたはその塩の溶液または懸濁液を含む。所望の処方物は、小さなチャンバーに入れられ、霧状にされ得る。噴霧化は、圧縮空気によりまたは超音波エネルギーにより成し遂げられて、当該コンジュゲートまたはその塩を含む複数の液滴または固体粒子を形成し得る。
使用方法
本明細書において提供されるマルチアーム型ポリマーコンジュゲートは、本明細書に記載されるコンジュゲートの投与に応答する任意の状態（例えば癌）を処置または予防するために使用され得る。
【０１３５】
本発明のマルチアームポリマーコンジュゲートは、抗癌剤、すなわち、１種以上の腫瘍の増殖を低減し得る薬剤として特に有用である。例示的な癌の種類としては、乳癌、卵巣癌、結腸癌、結腸直腸癌、前立腺癌、胃癌、悪性黒色腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、甲状腺癌、腎癌、胆管癌、脳癌、頭頸部癌、リンパ腫、白血病、横紋筋肉腫、および神経芽腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３６】
投与方法は、本明細書において提供されるようなマルチアームポリマーコンジュゲートを含有する組成物または処方物の治療有効量を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む。任意の特定のマルチアームポリマーコンジュゲートの治療有効投与量は、コンジュゲートごと、患者ごとに異なり、患者の状態、使用される個々の活性薬剤の活性、送達経路、および処置されようとする状態などの因子によって決まる。
【０１３７】
処置方法はまた、本明細書に記載されるとおりのマルチアームポリマーコンジュゲートを含む組成物または処方物の治療有効量を、第２の抗癌剤（例えば、５−フルオロウラシル、ロイコボリン、アバスチン、セツキシマブ、パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、ゼローダ、アブラキサン（ａｂｒａｘａｎｅ）、シス−プラチン、カルボプラチンおよびゲムシタビンなど）と共に投与することを含む。
【０１３８】
本発明のマルチアームポリマーコンジュゲートは、１日１回または数回、好ましくは１日１回以下で投与され得る。例示的な投与スケジュールとしては、週１回、２週間に１回、または３週間に１回が挙げられる。維持量である場合は、投与は、３週間に１回よりもさらに少ない頻度（例えば、月１回）で行われ得る。処置の期間は、２〜３週間にわたり１日１回であり得、数ヶ月間またはさらには数年間にわたり継続し得る。一日用量は、個々の投与単位もしくは数個のより小さい投与単位の形態の単回用量によるか、または、細分した投薬量の特定の間隔をおいての複数回の投与により、投与され得る。
【０１３９】
本発明をその好ましい特定の実施形態に関して説明してきたが、上述の説明および後に続く実施例は、本発明の例示であり、本発明の範囲の限定ではないことが意図されることが理解されるべきである。本発明の範囲内の他の態様、利点および改変は、本発明の属する技術分野の当業者には明らかであろう。
【０１４０】
本明細書において参照される全ての論文、書物、特許、特許文献および他の文献は、その全体が参照により援用される。本明細書の教示と参照により援用される技術との間に矛盾がある場合は、本明細書における教示の意味が優先するものとする。
【実施例】
【０１４１】
実験
本発明の実施は、別段の表示のない限り、当該技術分野の技術の範囲内にある有機合成などの従来の技術を使用する。そのような技術は、文献に十分に記載されている。試薬および材料は、そうでないことが明確に述べられていない限り、市販されているものである。例えば、Ｍ．Ｂ．Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，６ｔｈ  Ｅｄ．（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，２００７）、上記、およびＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ  ＩＩ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  １−７，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄ．：Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ  １９９５−２００３（Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｓｅｒｉｅｓ），Ｅｄｓ．Ｋａｔｒｉｔｓｋｙ，Ａ．Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅを参照されたい。
【０１４２】
以下の実施例において、使用される数値（例えば、量、温度など）に関して精度を確保するための努力がなされたが、いくらかの実験誤差および偏差が考慮されるべきである。別段の表示のない限り、温度は摂氏度であり、圧力は海面大気圧または海面大気圧付近である。
【０１４３】
以下の実施例は、本発明の特定の態様および利点を例示するものであるが、本発明は、決して下記の特定の実施形態に限定されるものとは見なされない。
実施例１
４分岐ＰＥＧ−γ−アミド−ペメトレキセドコンジュゲートの調製
４分岐ＰＥＧ−γ−アミド−ペメトレキセドコンジュゲートを合成した。使用した合成アプローチは、「パートＡ」、「パートＢ」、「パートＣ」および「パートＤ」の４つのパートに分割され得る。
パートＡ−４分岐ＰＥＧの調製
４−分岐ＰＥＧ−γ−アミド−ペメトレキセドコンジュゲートの合成において使用される４分岐ＰＥＧを、以下に示される一般図式に従って調製した。
【０１４４】
【化１４】
0005899241.tif 000019
【０１４５】
Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（化合物２）の合成：氷浴中の０℃の２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（約１２０ｇ、０．８１ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液に、激しく撹拌しながら、二炭酸ジ−ｔ−ブチル（約６０ｇ、０．２７ｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液を添加した。この反応混合物を、０℃にて３時間撹拌した。溶媒のエバポレーション後、残渣を水に溶解させ、その溶液を１．０Ｎ  Ｈ２ＳＯ４でｐＨ＝２に調整した。この溶液を、ＣＨ２Ｃｌ２で２回洗浄し、次いでｐＨを固体ＮａＯＨで１０に調整し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせたＣＨ２Ｃｌ２相を、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。エバポレーション後、化合物２を、透明液体として得た（約３５ｇ、０．１４ｍｏｌ、収率約５２％）。生成物を、プロトンＮＭＲによって確認した。
【０１４６】
４分岐ＰＥＧ１０ｋ−ＢＴＣ（化合物１ａ）の合成：共沸蒸留した４分岐ＰＥＧ１０ｋ−ＯＨ（約３０ｇ、３．０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液に、ピリジン（約３．９ｍＬ、４８ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温にて１５分間撹拌した後、ジ−ベンゾトリアゾール−カーボネート（ｄｉＢＴＣ）（約１１．８ｇ、２４ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、この反応混合物を、室温にて一晩（１８時間）撹拌した。プロトンＮＭＲにより、反応が完結したことが示された。溶媒のエバポレーション後、残渣を約３０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた。この生成物ＣＨ２Ｃｌ２溶液を、激しく撹拌しながらイソプロパノール（ＩＰＡ）に添加した。沈殿物を、吸引濾過により回収し、ＩＰＡで洗浄し、真空中で乾燥させた。４分岐ＰＥＧ１０ｋ−ＢＴＣ（化合物１ａ）を、白色固体として得た（約３０．５ｇ、２．９ｍｍｏｌ、収率約９７％）。
【０１４７】
４分岐ＰＥＧ２０ｋ−ＢＴＣ（化合物１ｂ）の合成：共沸蒸留した４分岐ＰＥＧ２０ｋ−ＯＨ（約３０ｇ、１．５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液に、ピリジン（約２．０ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温にて１５分間撹拌した後、ジ−ベンゾトリアゾール−カーボネート（ｄｉＢＴＣ）（約６．０ｇ、１２ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、この反応混合物を、室温にて一晩（１８時間）撹拌した。プロトンＮＭＲにより、反応が完結したことが示された。溶媒のエバポレーション後、残渣を約３０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた。この生成物ＣＨ２Ｃｌ２溶液を、激しく撹拌しながらイソプロパノール（ＩＰＡ）に添加した。沈殿物を、吸引濾過により回収し、ＩＰＡで洗浄し、真空中で乾燥させた。４分岐ＰＥＧ２０ｋ−ＢＴＣ（化合物１ｂ）を、白色固体として得た（約２９．５ｇ、１．４ｍｍｏｌ、収率約９６％）。
【０１４８】
４分岐ＰＥＧ３０ｋ−ＢＴＣ（化合物１ｃ）の合成：共沸蒸留した４分岐ＰＥＧ３０ｋ−ＯＨ（約３０ｇ、１．０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液に、ピリジン（約１．６ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温にて１５分間撹拌した後、ジ−ベンゾトリアゾール−カーボネート（ｄｉＢＴＣ）（約５．４ｇ、１２ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、この反応混合物を、室温にて撹拌した（１７時間）。プロトンＮＭＲにより、反応が完結したことが示された。溶媒のエバポレーション後、残渣を約３０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた。この生成物ＣＨ２Ｃｌ２溶液を、激しく撹拌しながらイソプロパノール（ＩＰＡ）に添加した。沈殿物を、吸引濾過により回収し、ＩＰＡで洗浄し、真空中で乾燥させた。４分岐ＰＥＧ３０ｋ−ＢＴＣ（化合物１ｃ）を、白色固体として得た（約２６．８ｇ、０．８８ｍｍｏｌ、収率約８８％）。
【０１４９】
４分岐ＰＥＧ４０ｋ−ＢＴＣ（化合物１ｄ）の合成：共沸蒸留した４分岐ＰＥＧ４０ｋ−ＯＨ（約３０ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液に、ピリジン（約１．５ｍＬ、１８ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を室温にて１５分間撹拌した後、ジ−ベンゾトリアゾール−カーボネート（ｄｉＢＴＣ）（約５．４ｇ、１２ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、この反応混合物を、室温にて一晩（２０時間）撹拌した。プロトンＮＭＲにより、反応が完結したことが示された。溶媒のエバポレーション後、残渣を約３０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解させた。この生成物ＣＨ２Ｃｌ２溶液を、激しく撹拌しながらイソプロパノール（ＩＰＡ）に添加した。沈殿物を、吸引濾過により回収し、ＩＰＡで洗浄し、真空中で乾燥させた。４分岐ＰＥＧ４０ｋ−ＢＴＣ（化合物１ｄ）を、白色固体として得た（約３０．０ｇ、０．７４ｍｍｏｌ、収率約９３％）。
【０１５０】
４分岐ＰＥＧ１０ｋ−ＮＨＢｏｃ（化合物３ａ）の合成：Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（化合物２）（約６．０５ｇ、２４．４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液に、トリエチルアミン（ＴＥＡ）（約６．８ｍＬ、４８．９ｍｍｏｌ）および４分岐ＰＥＧ１０ｋ−ＢＴＣ（化合物１ａ）（約３０．５ｇ、２．９ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液をＮ２下で室温にて２時間撹拌し、プロトンＮＭＲにより、反応が完結したことが示された。溶媒をエバポレートし、残渣をＩＰＡ中で沈殿させて、４分岐ＰＥＧ１０ｋ−ＮＨＢｏｃ（化合物３ａ）を白色固体として得た（約３０．５ｇ、２．８ｍｍｏｌ、収率約９６％）。
【０１５１】
４分岐ＰＥＧ２０ｋ−ＮＨＢｏｃ（化合物３ｂ）の合成：Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（化合物２）（約３．０ｇ、１２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液に、トリエチルアミン（ＴＥＡ）（約３．４ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）および４分岐ＰＥＧ２０ｋ−ＢＴＣ（化合物１ｂ）（約２９．５ｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液をＮ２下で室温にて２時間撹拌し、プロトンＮＭＲにより、反応が完結したことが示された。溶媒をエバポレートし、残渣をＩＰＡ中で沈殿させて、４分岐ＰＥＧ２０ｋ−ＮＨＢｏｃ（化合物３ｂ）を白色固体として得た（約３０．６ｇ、１．４０ｍｍｏｌ、収率約９５％）。
【０１５２】
４分岐ＰＥＧ３０ｋ−ＮＨＢｏｃ（化合物３ｃ）の合成：Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（化合物２）（約１．７５ｇ、７．１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液に、トリエチルアミン（ＴＥＡ）（約２．０ｍＬ、１４．４ｍｍｏｌ）および４分岐ＰＥＧ３０ｋ−ＢＴＣ（化合物１ｃ）（約２６．５ｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液をＮ２下で室温にて２時間撹拌し、プロトンＮＭＲにより、反応が完結したことが示された。溶媒をエバポレートし、残渣をＩＰＡ中で沈殿させて、４分岐ＰＥＧ３０ｋ−ＮＨＢｏｃ（化合物３ｃ）を白色固体として得た（約２６．０ｇ、０．８４ｍｍｏｌ、収率約９６％）。
【０１５３】
４分岐ＰＥＧ４０ｋ−ＮＨＢｏｃ（化合物３ｄ）の合成：Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（化合物２）（約１．９ｇ、７．７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液に、トリエチルアミン（ＴＥＡ）（約２．１ｍＬ、１５．１ｍｍｏｌ）および４分岐ＰＥＧ４０ｋ−ＢＴＣ（化合物１ｄ）（約３０．０ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液をＮ２下で室温にて２時間撹拌し、プロトンＮＭＲにより、反応が完結したことが示された。溶媒をエバポレートし、残渣をＩＰＡ中で沈殿させて、４分岐ＰＥＧ４０ｋ−ＮＨＢｏｃ（化合物３ｄ）を白色固体として得た（約３０．０ｇ、０．７３ｍｍｏｌ、収率約９９％）。
【０１５４】
４分岐ＰＥＧ１０ｋ−ＮＨ２（化合物４ａ）の合成：４分岐ＰＥＧ１０ｋ−ＮＨＢｏｃ（化合物３ａ）（約３０．５ｇ、２．８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（約２００ｍＬ）溶液に、１００ｍＬのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を添加した。この反応溶液をＮ２下で室温にて２時間撹拌し、プロトンＮＭＲにより、反応が完結したことが示された。溶媒をエバポレートし、残渣を真空下で一晩乾燥させた。残渣を約４００ｍＬの水に溶解させ、約５０ｇのＮａＣｌを添加した。この水溶液を、１．０Ｎ  ＮａＯＨでｐＨ＝１１に調整し、ＣＨ２Ｃｌ２で３回抽出した。合わせたＣＨ２Ｃｌ２相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、エバポレートし、Ｅｔ２Ｏから沈殿させて、４分岐ＰＥＧ１０ｋ−ＮＨ２（化合物４ａ）を白色固体として得た（約２８．１ｇ、２．６５ｍｍｏｌ、収率約９５％）。プロトンＮＭＲにより、生成物の構造が確認され、アミン置換が約９２％であることが示された。
【０１５５】
４分岐ＰＥＧ２０ｋ−ＮＨ２（化合物４ｂ）の合成：４分岐ＰＥＧ２０ｋ−ＮＨＢｏｃ（化合物３ａ）（約２９．５ｇ、１．４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（約２００ｍＬ）溶液に、１００ｍＬのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を添加した。この反応溶液をＮ２下で室温にて２時間撹拌し、プロトンＮＭＲにより、反応が完結したことが示された。溶媒をエバポレートし、残渣を真空下で一晩乾燥させた。残渣を約４００ｍＬの水に溶解させ、約５０ｇのＮａＣｌを添加した。この水溶液を、１．０Ｎ  ＮａＯＨでｐＨ＝１１に調整し、ＣＨ２Ｃｌ２で３回抽出した。合わせたＣＨ２Ｃｌ２相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、エバポレートし、Ｅｔ２Ｏから沈殿させて、４分岐ＰＥＧ２０ｋ−ＮＨ２（化合物４ｂ）を白色固体として得た（約２８．０ｇ、１．３６ｍｍｏｌ、収率約９７％）。プロトンＮＭＲにより、生成物の構造が確認され、アミン置換が約９２％であることが示された。
【０１５６】
４分岐ＰＥＧ３０ｋ−ＮＨ２（化合物４ｃ）の合成：４分岐ＰＥＧ３０ｋ−ＮＨＢｏｃ（化合物３ｃ）（約２６．０ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（約１５０ｍＬ）溶液に、１５０ｍＬのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を添加した。この反応溶液をＮ２下で室温にて２時間撹拌し、プロトンＮＭＲにより、反応が完結したことが示された。溶媒をエバポレートし、残渣を真空下で一晩乾燥させた。残渣を約３００ｍＬの水に溶解させ、約３０ｇのＮａＣｌを添加した。この水溶液を、２．０Ｎ  ＮａＯＨでｐＨ＝１１に調整し、ＣＨ２Ｃｌ２で３回抽出した。合わせたＣＨ２Ｃｌ２相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、エバポレートし、Ｅｔ２Ｏから沈殿させて、４分岐ＰＥＧ３０ｋ−ＮＨ２（化合物４ｃ）を白色固体として得た（約２３．６ｇ、７．７ｍｍｏｌ、収率約９２％）。プロトンＮＭＲにより、生成物の構造が確認され、アミン置換が約９２％であることが示された。
【０１５７】
４分岐ＰＥＧ４０ｋ−ＮＨ２（化合物４ｄ）の合成：４分岐ＰＥＧ４０ｋ−ＮＨＢｏｃ（化合物３ｄ）（約３０．０ｇ、０，７３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（約１５０ｍＬ）溶液に、１５０ｍＬのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を添加した。この反応溶液をＮ２下で室温にて２時間撹拌し、プロトンＮＭＲにより、反応が完結したことが示された。溶媒をエバポレートし、残渣を真空下で一晩乾燥させた。残渣を約３００ｍＬの水に溶解させ、約３０ｇのＮａＣｌを添加した。この水溶液を、２．０Ｎ  ＮａＯＨでｐＨ＝１１に調整し、ＣＨ２Ｃｌ２で３回抽出した。合わせたＣＨ２Ｃｌ２相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、エバポレートし、Ｅｔ２Ｏから沈殿させて、４分岐ＰＥＧ４０ｋ−ＮＨ２（化合物４ｄ）を白色固体として得た（約２８．０ｇ、０．６９ｍｍｏｌ、収率約９４％）。プロトンＮＭＲにより、生成物の構造が確認され、アミン置換が約９４％であることが示された。
パートＢ−ペメトレキセド前駆体の調製
コンジュゲートの合成において使用されるペメトレキセド前駆体を、以下に示される一般図式に従って調製した。
【０１５８】
【化１５】
0005899241.tif 000020
【０１５９】
４−（４−ヒドロキシ−１−ブチニル）安息香酸メチルエステル（化合物６）の合成：４−ブロモ安息香酸メチル（化合物５）（約５．０ｇ、２３．３ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（約５０ｍＬ）溶液に、塩化パラジウム（約２５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（約７３ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（約５３ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、ジエチルアミン（約５．６ｇ、７６．９ｍｍｏｌ）および３−ブチン−１−オール（約２．１ｇ、３０．３ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を油浴中で５０℃にて４時間加熱した。室温まで冷却した後、この溶液を濾過した。濾液を、２Ｎ  ＮａＨＳＯ４溶液で洗浄し、次いでＮａＣｌで洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４およびシリカゲルを酢酸エチル溶液中に添加し、このスラリーを、１５分間撹拌し、次いで濾過した。濾液を約２０ｍＬまで濃縮し、次いで、約１００ｍＬのヘキサンを添加し、反応を約１時間にわたり０〜５℃で維持した。冷却の間にその溶液から白色固体が沈殿し、これを濾過により回収し、冷ヘキサンで洗浄し、真空中で乾燥させた。１Ｈ  ＮＭＲにより、その淡黄色の固体が純粋な化合物６（約４．０ｇ、単離収率約８４％）であることが示された。
【０１６０】
４−（４−ヒドロキシブチル）安息香酸メチルエステル（化合物７）の合成：化合物６（約２．５ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液を、ＴＬＣにより示されるように反応が完結するまでＨ−Ｃｕｂｅ水素化器の１０％Ｐｄ／Ｃカートリッジを通して循環させた（Ｈ２圧：５０バール；温度：３０℃；流量：１．０ｍＬ／分）。溶媒の除去後、無色の液体を得た（約２．５ｇ、１２．０ｍｍｏｌ、単離収率約９８％）。プロトンＮＭＲにより、所望の生成物（化合物７）が、何らの不純物もなしに調製されたことが示された。
【０１６１】
４−（４−ブチルアルデヒド）安息香酸メチルエステル（化合物８）の合成：化合物７（約１．５ｇ、７．２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液に、酢酸ナトリウム（約５９０ｍｇ、７．２ｍｍｏｌ）およびクロロクロム酸ピリジン（ＰＣＣ）（約２．３ｇ、１０．８ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、室温にて５時間撹拌した。ＴＬＣにより、ほぼ全ての出発物質が消費されたことが示された。次いで、生成物を、Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュクロマトグラフィーにより、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶離剤として用いて透明液体として単離した（約１．０ｇ、４．８ｍｍｏｌ、単離収率約６７％）。プロトンＮＭＲにより、それが純粋なアルデヒド生成物（化合物８）であることが確認された。
【０１６２】
４−（３−ブロモ−４−ブチルアルデヒド）安息香酸メチルエステル（化合物９）の合成：新しく調製したアルデヒド生成物（化合物８）（約１．０ｇ、４．８ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液に、５，５−ジブロモバルビツル酸（ｄｉｂｒｏｍｏｂａｒｂｉｔｕｒｉｃ  ａｃｄ）（ＤＢＢＡ）（約８２８ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ）および酢酸中３０％臭化水素酸の約０．０５ｍＬを添加した。この溶液を、室温にて一晩（１６時間）撹拌した。この反応混合物を濾過した。ＣＨ２Ｃｌ２濾液を、１Ｎチオ硫酸ナトリウム、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ＮａＣｌ溶液および水のそれぞれで洗浄した。プロトンＮＭＲにより、所望の生成物（化合物９）が得られたことが示された。生成物ＣＨ２Ｃｌ２溶液にアセトニトリルを添加し、次いで、ＣＨ２Ｃｌ２を減圧下で除去した。結果として生じたアセトニトリル中の化合物９の溶液を、さらなる精製および単離なしで次の工程の反応に使用した。
【０１６３】
４−［２−（２−アミノ−４，７−ジヒドロ−４−オキソ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］安息香酸メチルエステル（化合物１１）の合成：上で調製した化合物９のアセトニトリル溶液に、水、２，４−ジアミノ−６−ヒドロキシピリミジン（化合物１０）（約４８４ｍｇ、３．８４ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（約６３０ｍｇ、７．７ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、水浴中で４０℃にて３時間加熱した。沈殿物を、遠心分離により回収し、１：１のアセトニトリル／水で洗浄し、真空中で乾燥させた。プロトンＮＭＲにより、それが極めて純粋な化合物１１であることが確認された。
【０１６４】
４−［２−（２−アミノ−４，７−ジヒドロ−４−オキソ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）エチル］安息香酸（化合物１２）の合成：前の工程からの化合物１１を、１Ｎ  ＮａＯＨ溶液（約１５ｍＬ）に添加した。この反応混合物を、水浴中で４０℃にて１．５時間加熱した。この懸濁液は、徐々に、透明な橙色の溶液となった。次いで、エタノール（約２５ｍＬ）をその反応混合物に添加し、この混合物を室温まで冷却した。この溶液のｐＨを、撹拌しながら４Ｎ  ＨＣｌで４．４に調整すると、その溶液から、白色固体が直ちに沈殿した。沈殿物を、遠心分離により回収し、１：１のエタノール／水で洗浄し、真空中で乾燥させた。化合物１２を、淡紫色固体として得た（約６７０ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ、化合物８に基づく３工程の全単離収率約４７％）。プロトンＮＭＲにより、生成物の構造が確認された。
パートＣ−グルタミル試薬の調製
コンジュゲートの合成において使用されるグルタミル試薬を、以下に示される一般図式に従って調製した。
【０１６５】
【化１６】
0005899241.tif 000021
【０１６６】
Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−α−［２−（トリメチルシリル）エチオキシ（ｅｔｈｙｏｘｙ）］−γ−ベンジル−Ｌ−グルタメート１４の合成：Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−γ−ベンジル−Ｌ−グルタミン酸（化合物１３）（約５．０ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）およびカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）（約２．６４ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２溶液を室温にて１時間撹拌した後、２−（トリメチルシリル）エタノール（約１．９３ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）を添加し、この反応混合物を室温にて一晩（２０時間）さらに撹拌した。次いで、この反応溶液を、ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製により、所望の化合物１４を無色の液体として得た（約６．２ｇ、１４．２ｍｍｏｌ、単離収率約９６％）。プロトンＮＭＲにより、生成物の構造が確認された。
【０１６７】
Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−α−［２−（トリメチルシリル）エチオキシ］−Ｌ−グルタミン酸（化合物１５）の合成：化合物１４（約６．２ｇ、１４．２ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（約０．５ｇ）のエタノール溶液中に、Ｈ−Ｃｕｂｅにより生成された水素ガスを、室温にて一晩（２０時間）通気した。ＴＬＣにより、反応が完結したことが示された。Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ）による精製により所望の生成物が得られ、透明な液体が得られた（約４．８ｇ、１３．８ｍｍｏｌ、単離収率約９７％）。プロトンＮＭＲにより、それが純粋な化合物１５であることが示された。
【０１６８】
α−［２−（トリメチルシリル）エチオキシ］−Ｌ−グルタミン酸（化合物１６）の合成：化合物１５（約３．０ｇ、８．６５ｍｍｏｌ）の水／ジオキサン（１：３）溶液に、ｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ２Ｏ（約２．４７ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）を添加し、この溶液を油浴中で３時間加熱した。室温まで冷却した後、Ｄｏｗｅｘ  １×８（ＨＣＯ３−形、約１２ｇ）を添加し、懸濁液を室温にてさらに３０分間撹拌した。その樹脂を濾過により除去し、残った濾液をエバポレートして白色固体を得た。Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ）による精製により、所望の生成物（化合物１６）を白色固体として得た（約１．２３ｇ、４．９８ｍｍｏｌ、単離収率約５８％）。プロトンＮＭＲにより、生成物の構造が確認された。
パートＤ−コンジュゲートの最終調製
コンジュゲートの最終調製は、以下に示される一般図式に従った（ここで、この最終調製は、パートＡ、パートＢおよびパートＣから調製された化合物を使用する）。
【０１６９】
【化１７】
0005899241.tif 000022
【０１７０】
【化１８】
0005899241.tif 000023
【０１７１】
Ｎ−［４−［２−（２−アミノ−４，７−ジヒドロ−４−オキソ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］−ピリミジン−５−イル）エチル］ベンゾイル］−α−［２−（トリメチルシリル）エチオキシ］−Ｌ−グルタミン酸（化合物１７）の合成：ＤＭＦ中の化合物１２（約８８０ｍｇ、２．９４ｍｍｏｌ）の懸濁液に、Ｎ−メチルモルホリン（約８９２ｍｇ、８．８２ｍｍｏｌ）および２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（ＣＤＭＴ）（約５１６ｍｇ、２．９４ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温にて１時間撹拌し、次いで、Ｎ−［２−（トリメチルシリル）エチオキシ］−Ｌ−グルタミン酸（化合物１６）（約７２６ｍｇ、２．９４ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、ＨＰＬＣによる分析により反応が完結したことが示されるまで、室温にてさらに３時間撹拌した。次いで、ＣＨ２Ｃｌ２（約３００ｍＬ）および１Ｍ酢酸（約３００ｍＬ）をその反応混合物に添加し、結果として生じた混合物を１５分間撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２相を、Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＯＨ／１Ｍ  ＨＯＡｃ（２：１：１）およびＨ２Ｏ／ＣＨ３ＯＨ（２：１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去して粗生成物を得た。Ｂｉｏｔａｇｅフラッシュクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２、０．１％ＨＯＡｃ／ＣＨ３ＯＨ）による精製により、所望の生成物（化合物１７）を得た（約１．０ｇ、１．８９ｍｍｏｌ、単離収率約６４％）。プロトンＮＭＲにより、生成物の構造が確認された。
【０１７２】
４分岐ＰＥＧ１０ｋ−γ−アミド−ペメトレキセドコンジュゲート（化合物２０ａ）の合成：α−［２−（トリメチルシリル）エチオキシ］−ペメトレキセド（化合物１７）（約２７６ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（約９０ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ・ＨＣｌ）（約４９８ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、ＨＰＬＣにより反応が完結したことが示されるまで室温にて一晩（１７時間）撹拌して、化合物１８を得た。次いで化合物４ａ（約１．０１ｇ、０．０８７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ）（約５２５ｍｇ、５．２ｍｍｏｌ）をその反応混合物に添加し、結果として生じた混合物を、ＵＶ（ペメトレキセド）およびＥＬＳＤ（ＰＥＧ）吸収の両方により示されるようにＨＰＬＣ分析により所望のＰＥＧ−ペメトレキセドコンジュゲートが形成されたことが示されるまで、室温にてさらに３時間撹拌した。この反応溶液を、激しく撹拌しながらＩＰＡ／ＥＴ２Ｏの１：２混合物に注入すると、ＰＥＧ−ペメトレキセドコンジュゲート（化合物１９ａ）が沈殿した。その沈殿物を吸引濾過により回収し、真空中で乾燥させた。粗生成物（化合物１９ａ）をＤＭＳＯに溶解させ、ＴＨＦ中のテトラブチルアンモニウムフルオリド溶液（ＴＢＡＦ）の約５．２ｍＬを添加した。この混合物を、室温にて一晩（１７時間）撹拌した。プロトンＮＭＲにより、反応が完結したことが示された。最終コンジュゲートである４分岐ＰＥＧ１０ｋ−γ−アミド−ペメトレキセド（化合物２０ａ）を、ＩＰＡ／Ｅｔ２Ｏの１：２混合物から２回沈殿させ、吸引濾過により回収し、真空中で乾燥させた（約０．８２ｇ、０．０６４ｍｍｏｌ、収率約７３％）。ＨＰＬＣによりコンジュゲートの純度が＞９８％であることが示され、遊離ペメトレキセドは検出されなかった。プロトンＮＭＲにより、コンジュゲートの構造が確認された。ペメトレキセド置換は約７５％であった、または積分から推定されるペメトレキセド充填量は約９．５ｗ／ｗ％であった。
【０１７３】
４分岐ＰＥＧ２０ｋ−γ−アミド−ペメトレキセドコンジュゲート（化合物２０ｂ）の合成：α−［２−（トリメチルシリル）エチオキシ］−ペメトレキセド（化合物１７）（約２７０ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（約８８ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ・ＨＣｌ）（約３２０ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、ＨＰＬＣにより反応が完結したことが示されるまで室温にて４．５時間撹拌して、化合物１８を得た。次いで化合物４ｂ（約１．９４ｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（約２９３ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ）（約３０９ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）をその反応混合物に添加し、結果として生じた混合物を室温にて一晩（１７時間）撹拌した。ＵＶ（ペメトレキセド）およびＥＬＳＤ（ＰＥＧ）吸収の両方により示されるように、ＨＰＬＣ分析により、ＰＥＧ−ペメトレキセドコンジュゲートが形成されたことが示された。この反応溶液を、激しく撹拌しながらＩＰＡ／ＥＴ２Ｏの１：１混合物に注入すると、ＰＥＧ−ペメトレキセドコンジュゲート（化合物１９ｂ）が沈殿した。その沈殿物を吸引濾過により回収し、真空中で乾燥させた。次いで、粗生成物（化合物１９ｂ）をＤＭＳＯに溶解させ、ＴＨＦ中のテトラブチルアンモニウムフルオリド溶液（ＴＢＡＦ）の約３．０ｍＬを添加した。この混合物を、室温にて一晩（１８時間）撹拌した。プロトンＮＭＲにより、全ての２−（トリメチルシリル）エチオキシ基が除去されたことが示された。最終コンジュゲートである４分岐ＰＥＧ２０ｋ−γ−アミド−ペメトレキセド（化合物２０ｂ）を、ＩＰＡ／Ｅｔ２Ｏの１：１混合物から２回沈殿させ、吸引濾過により回収し、真空中で乾燥させた（約１．７ｇ、０．０７２ｍｍｏｌ、収率約８５％）。ＨＰＬＣによりコンジュゲートの純度が＞９８％であることが示され、遊離ペメトレキセドは検出されなかった。プロトンＮＭＲにより、コンジュゲートの構造が確認された。ペメトレキセド置換は約５５％であった、または積分から推定されるペメトレキセド充填量は約４．０ｗ／ｗ％であった。
【０１７４】
４分岐ＰＥＧ３０ｋ−γ−アミド−ペメトレキセドコンジュゲート（化合物２０ｃ）の合成：α−［２−（トリメチルシリル）エチオキシ］−ペメトレキセド（化合物１７）（約２８０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（約９２ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ・ＨＣｌ）（約５００ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、ＨＰＬＣにより反応が完結したことが示されるまで室温にて一晩（１７時間）撹拌して、化合物化合物１８を得た。次いで化合物４ｃ（約２．７９ｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ）（約５２５ｍｇ、５．２ｍｍｏｌ）をその反応混合物に添加し、結果として生じた混合物を室温にてさらに１６時間撹拌した。ＵＶ（ペメトレキセド）およびＥＬＳＤ（ＰＥＧ）吸収の両方により示されるように、ＨＰＬＣ分析により、ＰＥＧ−ペメトレキセドコンジュゲートが形成されたことが示された。この反応溶液を、激しく撹拌しながらＩＰＡ／ＥＴ２Ｏの１：１混合物に注入すると、ＰＥＧ−ペメトレキセドコンジュゲート（化合物１９ｃ）が沈殿した。その沈殿物を吸引濾過により回収し、真空中で乾燥させた。粗生成物（化合物１９ｃ）をＤＭＳＯに溶解させ、ＴＨＦ中のテトラブチルアンモニウムフルオリド溶液（ＴＢＡＦ）の約５．０ｍＬを添加した。この混合物を、室温にて一晩（１８時間）撹拌した。プロトンＮＭＲにより、脱保護が完結したことが示された。最終コンジュゲートである４分岐ＰＥＧ３０ｋ−γ−アミド−ペメトレキセド（化合物２０ｃ）を、ＩＰＡ／Ｅｔ２Ｏの１：１混合物から２回沈殿させ、濾過により回収し、真空中で乾燥させた（約２．５ｇ、０．０７６ｍｍｏｌ、収率約８６％）。ＨＰＬＣによりコンジュゲートの純度が＞９８％であることが示され、遊離ペメトレキセドは検出されなかった。プロトンＮＭＲにより、コンジュゲートの構造が確認された。ペメトレキセド置換は約７０％であった、または積分から推定されるペメトレキセド充填量は約３．７ｗ／ｗ％であった。
【０１７５】
４分岐ＰＥＧ４０ｋ−γ−アミド−ペメトレキセドコンジュゲート（化合物２０ｄ）の合成：α−［２−（トリメチルシリル）エチオキシ］−ペメトレキセド（化合物１７）（約２８０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（約９２ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）およびＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ・ＨＣｌ）（約５００ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、ＨＰＬＣ分析により反応が完結したことが示されるまで室温にて一晩（１７時間）撹拌して、化合物１８を得た。次いで化合物４ｄ（約３．８６ｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ）（約５３０ｍｇ、５．３ｍｍｏｌ）をその反応混合物に添加し、結果として生じた混合物を室温にてさらに２０時間撹拌した。ＵＶ（ペメトレキセド）およびＥＬＳＤ（ＰＥＧ）吸収の両方により示されるように、ＨＰＬＣ分析により、ＰＥＧ−ペメトレキセドコンジュゲートが形成されたことが示された。この反応溶液を、強く撹拌しながらＩＰＡ／ＥＴ２Ｏの１：１混合物に注入すると、ＰＥＧ−ペメトレキセドコンジュゲート（化合物１９ｄ）が沈殿した。その沈殿物を吸引濾過により回収し、真空中で乾燥させた。粗生成物（化合物１９ｄ）をＤＭＳＯに溶解させ、ＴＨＦ中のテトラブチルアンモニウムフルオリド溶液（ＴＢＡＦ）の約５．０ｍＬを添加した。この混合物を、室温にて一晩（２１時間）撹拌した。プロトンＮＭＲにより、脱保護が完結したことが示された。最終コンジュゲートである４分岐ＰＥＧ４０ｋ−γ−アミド−ペメトレキセド（化合物２０ｄ）を、ＩＰＡ／Ｅｔ２Ｏの１：１混合物から２回沈殿させ、濾過により回収し、真空中で乾燥させた（約３．６ｇ、０．０８０ｍｍｏｌ、収率約９１％）。ＨＰＬＣによりコンジュゲートの純度が＞９８％であることが示され、遊離ペメトレキセドは検出されなかった。プロトンＮＭＲにより、コンジュゲートの構造が確認された。ペメトレキセド置換は約７５％であった、または積分から推定されるペメトレキセド充填量は約２．７ｗ／ｗ％であった。
実施例２
４分岐ＰＥＧ−γ−エステル−ペメトレキセドコンジュゲートの調製
４−アームＰＥＧ−γ−エステル−ペメトレキセドコンジュゲート（４分岐ＰＥＧ−γ−エチル−エステル−ペメトレキセドコンジュゲートおよび４分岐ＰＥＧ−γ−イソプロピル−エステル−ペメトレキセドコンジュゲートを含む）を合成した。
【０１７６】
４分岐ＰＥＧ−γ−エチル−エステル−ペメトレキセドコンジュゲートの調製に関して、化合物１７を、実施例１に記載したとおりの「パートＢ」、「パートＣ」、および「パートＤ」の最初の反応に従って調製した。その後は、下記の合成アプローチに従った。
【０１７７】
【化１９】
0005899241.tif 000024
【０１７８】
Ｂｏｃ−２（２−アミノエトキシ）エタノールの合成。２−（２−アミノエトキシ）エタノール（約２．０ｇ、約１９．０２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（約６．２３ｇ、約２８．５ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（約３．８５ｇ、約３８．０ｍｍｏｌ）を添加し、この反応混合物を室温にて３時間撹拌した。全てのＤＣＭ溶媒を除去した後、生成物残渣をエタノールに溶解させ、約５ｍＬの１Ｎ  ＮａＯＨを添加し、その溶液を室温にて１８時間撹拌した。その後、全ての溶媒を除去し、残渣をＤＣＭで３回抽出した。次いで、抽出残渣を、ＤＣＭ相と合わせ、ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。ＤＣＭ相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、全ての溶媒を除去すると、無色の液体が得られた（約１．６ｇ、７．８０ｍｍｏｌ、単離収率約４１％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）により、それが純粋なＢｏｃ−２（２−アミノエトキシ）エタノールであることが示された。
【０１７９】
γ−Ｂｏｃ−２−（２−アミノエトキシ）エタノール−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２１）の合成。化合物１７（約５００ｍｇ、約０．９５ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−２−（２−アミノエトキシ）エタノール（約２９２ｍｇ、約１．４１ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（約１３９ｍｇ、約１．１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦに溶解させ、次いでＤＣＣ（約７８２ｍｇ、約３．７９ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温にて２０時間撹拌し、ＨＰＬＣ分析により、ほぼ全ての出発物質が反応したことが示された。濾過してＤＣＵを除去し、次いでＢｉｏｔａｇｅ（ＤＣＭ／メタノール）により精製した結果、淡黄色の液体が得られた（約５６０ｍｇ、約０．７８３ｍｍｏｌ、単離収率約８３％）。ＨＰＬＣおよびＮＭＲの両方により、化合物２１の存在が確認された。
【０１８０】
γ−２−（２−アミノエトキシ）エタノール−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２２）の合成。γ−Ｂｏｃ−２−（２−アミノエトキシ）エタノール−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２１）（約３６０ｍｇ、約０．５０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液に、約１．５ｍＬのＴＦＡを添加した。この反応混合物を、室温にて５時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析により、反応が完結したことが示された。生成物を、ＢｉｏｔａｇｅによりＤＣＭおよびメタノールを溶離剤として用いて精製した。後処理後、白色固体が得られ（約２８５ｍｇ、約０．４６ｍｍｏｌ、単離収率約９２％）、ＨＰＬＣおよびＮＭＲの両方により、それが純粋なγ−２−（２−アミノエトキシ）エタノール−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２２）であることが確認された。
【０１８１】
【化２０】
0005899241.tif 000025
【０１８２】
４分岐ＰＥＧ−１０ｋ−γ−エチル−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２３ａ）の合成。共沸蒸留した４分岐ＰＥＧ−１０ｋ−ＣＭ（約５１２ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）をＤＣＭに溶解させ、γ−２−（２−アミノエトキシ）エタノール−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２２、約１５０ｍｇ、約０．２４ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（約７４ｍｇ、約０．７３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（約３５ｍｇ、約０．２６ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（１１４ｍｇ、約０．７３ｍｍｏｌ）をその反応溶液中に添加した。この反応混合物を室温にて１８時間撹拌し、ＨＰＬＣ分析により、反応が完結したことが示された。生成物を、１：１のＩＰＡ／Ｅｔ２Ｏの混合物中で２回沈殿させ、遠心分離により単離した。真空による一晩の乾燥後、白色固体を得た（約４８０ｍｇ、回収率約９４％）。ＨＰＬＣにより、それが低分子不純物の全くない純粋な化合物２３ａコンジュゲートであることが示された。
【０１８３】
４分岐ＰＥＧ−２０ｋ−γ−エチル−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２３ｂ）の合成。共沸蒸留した４分岐ＰＥＧ−２０ｋ−ＣＭ（約１．０２ｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）をＤＣＭに溶解させ、γ−２−（２−アミノエトキシ）エタノール−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２２、約１５０ｍｇ、約０．２４ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（約１２３ｍｇ、約１．２２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（約３５ｍｇ、約０．２６ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（約１９０ｍｇ、約１．２２ｍｍｏｌ）をその反応溶液中に添加した。この反応混合物を室温にて１８時間撹拌し、ＨＰＬＣ分析により、反応が完結したことが示された。生成物を、１：１のＩＰＡ／Ｅｔ２Ｏの混合物中で２回沈殿させ、遠心分離により単離した。真空による一晩の乾燥後、化合物２３ｂを白色固体として得た（約１．０２ｇ、回収率約１００％）。
【０１８４】
４分岐ＰＥＧ−４０ｋ−γ−エチル−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２３ｃ）の合成。共沸蒸留した４分岐ＰＥＧ−４０ｋ−ＣＭ（約２．０５ｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）をＤＣＭに溶解させ、γ−２−（２−アミノエトキシ）エタノール−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２２、約１５０ｍｇ、約０．２４ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（約１２３ｍｇ、約１．２２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（約３５ｍｇ、約０．２６ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（約１９０ｍｇ、約１．２２ｍｍｏｌ）をその反応溶液中に添加した。この反応混合物を室温にて２２時間撹拌し、ＨＰＬＣ分析により、反応が完結したことが示された。生成物を、１：１のＩＰＡ／Ｅｔ２Ｏの混合物中で２回沈殿させ、遠心分離により単離した。真空による一晩の乾燥後、化合物２３ｃを白色固体として得た（約２．０５ｇ、回収率約１００％）。
【０１８５】
【化２１】
0005899241.tif 000026
【０１８６】
４分岐ＰＥＧ−１０ｋ−γ−エチル−エステル−ペメトレキセド（化合物２４ａ）の合成。４分岐ＰＥＧ−１０ｋ−γ−エチル−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２３ａ、約５００ｍｇ）のＤＭＦ溶液に、約１．５ｍＬの１．０Ｍ  ＴＢＡＦ  ＴＨＦ溶液を添加した。この反応混合物を、室温にて７時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析により、反応が完結したことが示された。生成物を、１：１のＩＰＡ／Ｅｔ２Ｏの混合物から３回沈殿させ、遠心分離により単離した。白色固体が得られた（約５００ｍｇ）。ＨＰＬＣおよびＮＭＲにより、それが４分岐ＰＥＧ−１０ｋ−γ−エチル−エステル−ペメトレキセド（化合物２４ａ）であることが確認され、薬物置換は約８７％であった。
【０１８７】
４分岐ＰＥＧ−２０ｋ−γ−エチル−エステル−ペメトレキセド（化合物２４ｂ）の合成。４分岐ＰＥＧ−２０ｋ−γ−エチル−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２３ｂ、約１．０２ｇ）のＤＭＦ溶液に、約１．５ｍＬの１．０Ｍ  ＴＢＡＦ  ＴＨＦ溶液を添加した。この反応混合物を、室温にて２４時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析により、反応が完結したことが示された。生成物をまずＤＣＭに溶解させ、０．１Ｎ  ＨＣｌ／ＮａＣｌ水溶液で洗浄して、過剰のＴＢＡＦを除去したのであるが、乳濁液が形成され、これによりいくらかの生成物の減少が生じた。次いで、生成物を、１：１のＩＰＡ／Ｅｔ２Ｏの混合物から３回沈殿させ、遠心分離により単離した。白色固体が得られた（約４９１ｍｇ、単離収率約４９％）。ＨＰＬＣおよびＮＭＲにより、それが４分岐ＰＥＧ−２０ｋ−γ−エチル−エステル−ペメトレキセド（化合物２４ｂ）であることが確認され、薬物置換は約５７％であった。
【０１８８】
４分岐ＰＥＧ−４０ｋ−γ−エチル−エステル−ペメトレキセド（化合物２４ｃ）の合成。４分岐ＰＥＧ−４０ｋ−γ−エチル−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２３ｃ、約２．０５ｇ）のＤＭＦ溶液に、約２．０ｍＬの１．０Ｍ  ＴＢＡＦ  ＴＨＦ溶液を添加した。この反応混合物を、室温にて２３時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析により、反応が完結したことが示された。生成物をまずＤＣＭに溶解させ、０．１Ｎ  ＨＣｌ／ＮａＣｌ水溶液で２回洗浄して、過剰のＴＢＡＦを除去したのであるが、乳濁液が形成され、これによりいくらかの生成物の減少が生じた。次いで、生成物を、１：１のＩＰＡ／Ｅｔ２Ｏの混合物から３回沈殿させ、遠心分離により単離した。白色固体が得られた（約１．２ｇ、単離収率約６０％）。ＨＰＬＣおよびＮＭＲにより、それが４分岐ＰＥＧ−４０ｋ−γ−エチル−エステル−ペメトレキセド（化合物２４ｃ）であることが確認され、薬物置換は約３６％であった。
【０１８９】
４分岐ＰＥＧ−γ−イソプロピル−エステル−ペメトレキセドコンジュゲートの調製に関して、化合物１７を、実施例１に記載したとおりの「パートＢ」、「パートＣ」、および「パートＤ」の最初の反応に従って調製した。その後は、下記の合成アプローチおよび加水分解に従った。
【０１９０】
【化２２】
0005899241.tif 000027
【０１９１】
Ｂｏｃ−アミノ−２−プロパノールの合成。アミノ−２−プロパノール（約５．０ｇ、約６６．６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（約１４．６ｇ、約６６．６ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。この反応混合物を、室温にて１８時間撹拌した。このＤＣＭ溶液を、ＮａＣｌ溶液で３回洗浄した。ＤＣＭ相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、全ての溶媒を除去した。Ｂｏｃ−アミノ−２−プロパノールを、無色の液体として得た（約１１．１ｇ、６３．３ｍｍｏｌ、単離収率約９５％）。
【０１９２】
γ−Ｂｏｃ−アミノ−２−プロパノール−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２５）の合成。α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物１７、約２５０ｍｇ、約０．４７ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−アミノ−２−プロパノール（約１２５ｍｇ、約０．７１ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（約７０ｍｇ、約０．５７ｍｍｏｌ）をＤＭＦに溶解させ、次いでＤＣＣ（約４８９ｍｇ、約２．３７ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温にて２４時間撹拌し、ＨＰＬＣ分析により、ほぼ全ての出発物質が消費されたことが示された。濾過してＤＣＵを除去し、Ｂｉｏｔａｇｅ（ＤＣＭ／メタノール）により精製した後、白色固体を得た（約２５０ｍｇ、約０．３７ｍｍｏｌ、単離収率約７７％）。ＬＣ−ＭＳ（計算値：６８４；実測値：６８４）により、それがγ−Ｂｏｃ−アミノ−２−プロパノール−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２５）であることが確認された。
【０１９３】
γ−アミノ−２−プロパノール−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２６）の合成。γ−Ｂｏｃ−アミノ−２−プロパノール−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２５、約２５０ｍｇ、約０．３７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液に、ＴＦＡ（約１．０ｍＬ）を添加した。この反応混合物を室温にて２０時間撹拌し、ＨＰＬＣ分析により、反応が完結したことが示された。生成物を、ＢｉｏｔａｇｅによりＤＣＭおよびメタノールを溶離剤として用いて精製した。後処理後、白色固体が得られ（約１４０ｍｇ、約０．２４ｍｍｏｌ、単離収率約６６％）、ＨＰＬＣにより、それが純粋なγ−アミノ−２−プロパノール−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２３）であることが確認された。
【０１９４】
４分岐ＰＥＧ−２０ｋ−γ−イソプロパニル−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２７）の合成。共沸蒸留した４分岐ＰＥＧ−２０ｋ−ＣＭ（約１．０ｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）をＤＣＭに溶解させ、γ−アミノ−２−プロパノール−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（２３、約１４０ｍｇ、約０．２４ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（約１２１ｍｇ、約１．１２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（約３４ｍｇ、約０．２５ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（１８６ｍｇ、約１．１２ｍｍｏｌ）をその反応溶液中に添加した。この反応混合物を室温にて４８時間撹拌し、ＨＰＬＣ分析により、反応がほぼ完結したことが示された。生成物を、１：１のＩＰＡ／Ｅｔ２Ｏの混合物中で２回沈殿させ、遠心分離により単離した。真空による一晩の乾燥後、白色固体を得た（約１．０ｇ、回収率約１００％）。ＨＰＬＣにより、それが低分子不純物の全くない化合物２７であることが示された。
【０１９５】
４分岐ＰＥＧ−２０ｋ−γ−イソプロピル−エステル−ペメトレキセド（化合物２８）の合成。４分岐ＰＥＧ−２０ｋ−γ−イソプロピル−エステル−α−ＴＭＳＥ−ペメトレキセド（化合物２７、約１．０ｇ）のＤＭＦ溶液に、約１．５ｍＬの１．０Ｍ  ＴＢＡＦ  ＴＨＦ溶液を添加した。この反応混合物を、室温にて１８時間撹拌し、ＨＰＬＣ分析により、反応が完結したことが示された。生成物を、１：１のＩＰＡ／Ｅｔ２Ｏの混合物から３回沈殿させ、遠心分離により単離した。白色固体が得られた（約６７７ｍｇ、回収率約６７％）。ＨＰＬＣおよびＮＭＲにより、それが４分岐ＰＥＧ−２０ｋ−γ−イソプロピル−エステル−ペメトレキセド（化合物２８）であることが確認され、薬物置換は約３２％であった。
ＰＢＳ緩衝液中の４分岐ＰＥＧ−γ−エステル−ペメトレキセドコンジュゲートの加水分解研究
約５ｍｇの各関心のあるコンジュゲートを、約１０ｍＬのｐＨ７．４のＰＢＳ緩衝液に溶解させた。各溶液を１０個のＨＰＬＣバイアルに入れ、３７℃でインキュベートした。ＨＰＬＣを用いて、コンジュゲートおよび放出されたペメトレキセドの両方を分析した。各試験コンジュゲートの半減期（ｔ１／２）を、表１に示す。
【０１９６】
【表１】
0005899241.tif 000028
【０１９７】
実施例３
低葉酸食における複数回用量の最大耐用量
本研究の目的は、低葉酸食を与えられた雌ＳＣＩＤマウスにおける、ペメトレキセド（ＰＭＸ）、化合物２０ａ（実施例１から）、化合物２０ｂ（実施例１から）、化合物２０ｃ（実施例１から）、および化合物２０ｄ（実施例１から）についての最大耐用量を決定することであった。化合物は全て、１日１回、１０日間続けて、静脈内投与した。
【０１９８】
ＰＭＸ、化合物２０ａ、化合物２０ｂ、化合物２０ｃおよび化合物２０ｄの間の「用量当量」を与える計算を行った。その「用量当量」を、投与される「実際の用量」と共に、表２に示す。本実施例における投薬量は全て、「用量当量」に換算して表し、賦形剤、塩および水和状態について調整を行った。
【０１９９】
ペメトレキセド（ＰＭＸ）（ＭＷ  ４７１．３８３／ＦＷ  ５９７．４８８、３８．３％親）を、微細な凍結乾燥された白色粉末としてＭｃＫｅｓｓｏｎから入手した。これを、乾燥剤を充填した密封ジャー中で、光から保護された状態で、室温で保管した。投与溶液は、０．９％ＮａＣｌに乾燥化合物を溶解させ、数秒（約３０秒）間ボルテックスすることにより、各処置日に新しく調製した。結果として生じた最高用量は、７．１１のｐＨを有する透明かつ無色の溶液であった。その最高用量原液を０．９％生理的食塩水で直接希釈することによって、より低い投薬量レベルを調製した。
【０２００】
化合物２０ａ（ＭＷ  １２９０６、９．５％親）は、微細な淡褐色の粉末であった。これを、光から保護された状態で、−２０℃で保管した。投与溶液は、０．９％ＮａＣｌに乾燥化合物を溶解させ、数秒（約３０秒）間ボルテックスすることにより、各処置日に新しく調製した。結果として生じた最高用量は、６．４９のｐＨを有する、色は黄色の透明な溶液であった。その最高用量原液を０．９％生理的食塩水で直接希釈することによって、より低い投薬量レベルを調製した。
【０２０１】
化合物２０ｂ（ＭＷ  ２３５８０、４％親）は、塊状の淡褐色の粉末であった。これを、光から保護された状態で、−２０℃で保管した。投与溶液は、０．９％ＮａＣｌに乾燥化合物を溶解させ、数秒（約３０秒）間ボルテックスすることにより、各処置日に新しく調製した。結果として生じた最高用量は、５．７４のｐＨを有する、色は黄色の透明な溶液であった。その最高用量原液を０．９％生理的食塩水で直接希釈することによって、より低い投薬量レベルを調製した。
【０２０２】
化合物２０ｃ（ＭＷ  ３２６９７、３．７％親）は、塊状の淡褐色の粉末であった。これを、光から保護された状態で、−２０℃で保管した。投与溶液は、０．９％ＮａＣｌに乾燥化合物を溶解させ、数秒（約３０秒）間ボルテックスすることにより、各処置日に新しく調製した。結果として生じた最高用量は、６．０９のｐＨを有する、色は黄色の透明な溶液であった。その最高用量原液を０．９％生理的食塩水で直接希釈することによって、より低い投薬量レベルを調製した。
【０２０３】
化合物２０ｄ（ＭＷ  ４５０２３、２．７％親）は、塊状の淡褐色の粉末であった。これを、光から保護された状態で、−２０℃で保管した。投与溶液は、０．９％ＮａＣｌに乾燥化合物を溶解させ、数秒（約３０秒）間ボルテックスすることにより、各処置日に新しく調製した。結果として生じた最高用量は、５．０２のｐＨを有する、色は黄色の透明な溶液であった。その最高用量原液を０．９％生理的食塩水で直接希釈することによって、より低い投薬量レベルを調製した。
【０２０４】
【表２】
0005899241.tif 000029
【０２０５】
雌ＳＣＩＤマウス（ＨｓｄＩｃｒ：Ｈａ（ＩＣＲ）−Ｐｒｋｄｃ−ｓｃｉｄ）を、Ｈａｒｌａｎから入手した。それらは、実験の１日目において７週齢であった。群１および群２のマウスに、放射線照射されたＲｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ５０５３（ＬａｂＤｉｅｔ（商標））を与えた。群３〜１９のマウスには、投薬の１４日前から投薬完了の１４日後まで、１％スクシニルスファチアゾール（ｓｕｃｃｉｎｙｌｓｕｆａｔｈｉａｚｏｌ）を補充した放射線照射された葉酸欠乏Ｐｕｒｉｎａ  ＴｅｓｔＤｉｅｔを与え、投薬完了の１４日後の時点で、この研究を終了し、次いで、マウスを安楽死させた。全ての群が、飲料水を自由に与えられた。１時間に１００回の完全空気交換で環境中にＨ．Ｅ．Ｐ．Ａ濾過空気を供給するクリーンルームにおいて固定ケージ（ｓｔａｔｉｃ  ｃａｇｅ）中にマウスを収容した。全ての処置、体重測定、および腫瘍測定を、この環境中で実施した。この環境を、７０°±２°Ｆの温度範囲および３０〜７０％の湿度範囲に制御した。全てのマウスを、少なくとも１日１回、臨床徴候について観察した。明らかな苦痛状態にあるかまたは瀕死の状態にあると認められたマウスは、安楽死させた。本研究は、ＡＡＡＬＡＣ認可施設で実施された。
【０２０６】
処置は、１日目に開始した。全てのマウスは、治療の開始時において、≧１９．４ｇの体重があった。最初の処置時の平均群体重は、よく一致していた（群平均の範囲２１．０〜２３．７ｇ）。群３〜１９のマウスには、投薬前の１４日間および全実験を通して、１％スクシニルスファチアゾール（ｓｕｃｃｉｎｙｌｓｕｆａｔｈｉａｚｏｌ）を含んだ放射線照射された葉酸欠乏Ｐｕｒｉｎａ  ＴｅｓｔＤｉｅｔを与えた。全てのマウスに、処置日における各個の体重に応じて投薬した（０．２ｍｌ／２０ｇ）。
【０２０７】
全てのマウスを、少なくとも１日に１回、臨床徴候について観察した。マウスの体重を、処置の各日に、次いで少なくとも週に３回計量した。各個の体重を、週に３回記録した。２０％を超える処置関連の体重減少は、一般的に、許容できないほど毒性があると見なされる。本報告において、投薬量レベルは、処置関連の体重減少（処置の間および処置から２週間後）が＜２０％であれば、許容されると記述される。死亡または安楽死の際に、全てのマウスを剖検して、可能性のある死因および毒性の標的となる恐れのある臓器に関する、総合的な評価を得た。
【０２０８】
ペメトレキセド−普通食；ＰＭＸでの処置は、５００ｍｇ／ｋｇおよび２５０ｍｇ／ｋｇで毒性であり、３０％を超える最大処置関連体重減少をもたらした。致死率は、５００ｍｇ／ｋｇの投薬量レベルで１００％（５／５）であった。通常の食餌を与えられたマウスにおけるＰＭＸの最大耐用量は、＜２５０ｍｇ／ｋｇであった。
【０２０９】
ペメトレキセド−低葉酸食；ＰＭＸでの処置は、６０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇおよび３．７５ｍｇ／ｋｇで毒性であり、３８〜３１％の最大処置関連体重減少をもたらした。体重の最下点は、１０〜１２日目に生じた。６０ｍｇ／ｋｇおよび１５ｍｇ／ｋｇでのＰＭＸでの処置は、１００％（５／５）および４０％（２／５）の処置関連の死亡を生じた。これらの群において観察された一般的な臨床徴候は、粗毛および下痢であった。一般的な剖検所見は、空気で膨満した胃、蒼白な肝臓、および壊死した腸であった。１ｍｇ／ｋｇでのＰＭＸでの処置は許容され、１２．８％の最大処置関連体重減少をもたらし、処置関連の死亡をもたらさなかった。体重の最下点は、１２日目に生じた。この群において観察された一般的な臨床徴候は粗毛であったが、剖検においては何ら重要なものは認められなかった。葉酸欠乏食を与えられたマウスにおけるＰＭＸの最大耐用量は、１ｍｇ／ｋｇであった。
【０２１０】
化合物２０ａ−低葉酸食；１５ｍｇ／ｋｇでの化合物２０ａでの処置は毒性であり、４０％（２／５）の処置関連死の発生率および１４．９％の平均最大処置関連体重減少を生じた。体重の最下点は、８日目に生じた。減少した体重は、およそ１０日で回復した。３．７５ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇでの化合物２０ａでの処置は許容され、およそ３．０％の最大処置関連体重減少を生じた。粗毛が、一般的な臨床徴候であった。１ｍｇ／ｋｇ用量群において、５日目に１匹が死亡した。剖検において、この動物は、蒼白な肝臓および膨張した腸を有していた。この研究は最終処置の１４日後に終了し、残りの動物の剖検を行った。剖検所見には、膨張した腸および空気が充満した胃が含まれた。両投薬量レベルにおける体重減少データに基づくと、１ｍｇ／ｋｇ群における死亡が本当に処置関連であったのか明らかでない。葉酸欠乏食を与えられたマウスにおける化合物２０ａの最大耐用量は、約３．７５ｍｇ／ｋｇであった。
【０２１１】
化合物２０ｂ−低葉酸食；化合物２０ｂでの処置は、１５ｍｇ／ｋｇ、３．７５ｍｇ／ｋｇ、および１ｍｇ／ｋｇで十分に許容され、処置関連の死亡を生じなかった。最大処置関連体重減少は、用量依存的であり、１６．９％〜１．８％の範囲にあった。体重の最下点は、１５ｍｇ／ｋｇ用量群については１２日目に生じ、３．７５ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇの用量群については５日目に生じた。粗毛が、一般的な臨床徴候であった。剖検においては、何ら重要なものは認められなかった。葉酸欠乏食を与えられたマウスにおける化合物２０ｂの最大耐用量は、体重減少に基づき約１５ｍｇ／ｋｇであった。
【０２１２】
化合物２０ｃ−低葉酸食；化合物２０ｃでの処置は、１５ｍｇ／ｋｇで毒性であり、１８．８％の最大処置関連体重減少および２０％（１／５）の処置関連死の発生率を生じた。体重の最下点は１０日目に生じ、減少した体重は研究終了前には回復しなかった。死んでいるのが発見されたマウスの剖検において、壊死した腸が認められた。化合物２０ｃでの処置は、３．７５ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇで許容され、それぞれ、１．４％および４．８％の最大処置関連体重減少を生じた。体重の最下点は、３．７５ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇの投薬量レベル群について、それぞれ、５日目および１０日目に生じた。減少した体重は、それぞれ、２．２日および５．５日で回復した。粗毛が、一般的な臨床徴候であった。剖検時には、重要な所見は何もなかった。葉酸欠乏食を与えられたマウスにおける化合物２０ｃの最大耐用量は、１５〜３．７５ｍｇ／ｋｇの間であった。
【０２１３】
化合物２０ｄ−低葉酸食；化合物２０ｄでの処置は、１５ｍｇ／ｋｇで毒性であり、２８．８％の処置関連体重減少および４０％（２／５）の処置関連死の発生率を生じた。体重の最下点は１５日目に生じ、減少した体重は研究終了前には回復しなかった。粗毛が、一般的な臨床徴候であった。剖検においては、何ら重要なものは発見されなかった。化合物２０ｄでの処置は、３．７５ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇで許容され、処置関連の死亡をもたらさず、それぞれ、４．５％および０．９％の処置関連体重減少をもたらした。体重の最下点は両群について５日目に生じ、減少した体重は、それぞれ、１１．３日および０．８日で回復した。粗毛が、一般的な臨床徴候であった。剖検においては、何ら重要なものは発見されなかった。葉酸欠乏食を与えられたマウスにおける化合物２０ｄの最大耐用量は、約３．７５ｍｇ／ｋｇであった。
【０２１４】
そのデータをまとめた表を、表３として示す。
【０２１５】
【表３】
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【０２１６】
実施例４
単回用量の最大耐用量の研究およびインビボ異種移植研究
予備異種移植研究における１０日間の毎日の投薬の（恐らくは反復投薬の作用のせいで）効力が高すぎたので、比較異種移植研究のためのより良い投与スケジュールを得るために、単回用量の最大耐用量の研究を、実施例３に示された研究と同様の方法を用いて行った。この最大耐用量研究においては、ペメトレキセド、４分岐ＰＥＧ２０Ｋ−γ−アミドペメトレキセド（化合物２０ｂ）、４分岐ＰＥＧ３０Ｋ−γ−アミドペメトレキセド（化合物２０ｃ）、４分岐ＰＥＧ４０Ｋ−γ−アミドペメトレキセド（化合物２０ｄ）、４分岐ＰＥＧ−２０ｋ−エチル−エステル−ペメトレキセド（化合物２４ｂ）、４分岐ＰＥＧ−４０ｋ−エチル−エステル−ペメトレキセド（化合物２４ｃ）および４分岐ＰＥＧ−２０ｋ−イソプロピル−エステル−ペメトレキセド（化合物２８）のそれぞれの単回用量のみを、静脈内投与した。本研究の結果を、表４に示す。
【０２１７】
【表４】
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【０２１８】
この単回用量の最大耐用量の研究からのデータを用いて、ペメトレキセド、４分岐ＰＥＧ２０Ｋ−γ−アミドペメトレキセド（化合物２０ｂ）、４分岐ＰＥＧ２３Ｋ−γ−アミドペメトレキセド（化合物２０ｃ）、４分岐ＰＥＧ４０Ｋ−γ−アミドペメトレキセド（化合物２０ｄ）、４分岐ＰＥＧ−２０ｋ−エチル−エステル−ペメトレキセド（化合物２４ｂ）、４分岐ＰＥＧ−４０ｋ−エチル−エステル−ペメトレキセド（化合物２４ｃ）および４分岐ＰＥＧ−２０ｋ−イソプロピル−エステル−ペメトレキセド（化合物２８）を用いた異種移植研究を、雌の無胸腺ｎｕ／ｎｕマウスにおいて行った。手短に言えば、実験作業については、以前に処置されていない８〜１２週齢マウス群に、生理的食塩水中で調製され、最大２０ｍＬ／ｋｇの投与量を可能にするのに適切な濃度に希釈された試験物を、静脈内投与した。関心のある各化合物を、最大耐用量の８０％で１回と最大耐用量（単回用量の最大耐用量の研究により求められた最大耐用量）の５０％で１回との２回試験した。
【０２１９】
マウスを臨床徴候について毎日観察し、体重を、（週末日を除いて）毎日、次いで研究の終わりまで週２回（ｂｉｗｅｅｋｌｙ）記録した。平均体重減少が２０％を超えたかまたは＞１０％の動物が死亡した群については、いずれも投与を終了した。瀕死の動物は、安楽死させた。本研究の２６日目現在（ここで、研究設計は６０日までの研究を見込んでいる）、ペメトレキセドと、４分岐ＰＥＧ２０Ｋ−γ−アミドペメトレキセド（化合物２０ｂ）、４分岐ＰＥＧ３０Ｋ−γ−アミドペメトレキセド（化合物２０ｃ）、４分岐ＰＥＧ４０Ｋ−γ−アミドペメトレキセド（化合物２０ｄ）、４分岐ＰＥＧ−２０ｋ−エチル−エステル−ペメトレキセド（化合物２４ｂ）、４分岐ＰＥＧ−４０ｋ−エチル−エステル−ペメトレキセド（化合物２４ｃ）および４分岐ＰＥＧ−２０ｋ−イソプロピル−エステル−ペメトレキセド（化合物２８）との両方についての腫瘍体積は、同様の、かつ生理的食塩水コントロールよりも有意に小さい、腫瘍体積を示していた。さらに、「アミド型」［すなわち、４分岐ＰＥＧ２０Ｋ−γ−アミドペメトレキセド（化合物２０ｂ）、４分岐ＰＥＧ３０Ｋ−γ−アミドペメトレキセド（化合物２０ｃ）、４分岐ＰＥＧ４０Ｋ−γ−アミドペメトレキセド（化合物２０ｄ）］での処置は、全ての試験物の中で最小の腫瘍体積をもたらした。これらの結果に基づいて、本研究は続くであろう。
【０２２０】
本明細書に示される発明を、特定の例示の実施形態に関して説明してきた。しかしながら、上述の説明は、例示の実施形態に本発明を限定することが意図されるものではなく、上述の明細書において記載されるとおりの本発明の精神および範囲の内で変更が行われ得ることを、当業者は認識すべきである。