(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）式Ｉの化合物：
【化１】
0005989635.tif 000007
若しくはその製薬学的に許容できる塩、
および（ｉｉ）式ＩＩＩの化合物：
【化２】
0005989635.tif 000008
若しくはその製薬学的に許容できる塩
を有効成分として含んでなるＨＣＶ感染若しくはそれと関連する疾患の予防および／若しくは処置での使用のための組合せ製薬学的製品。
【請求項２】
式Ｉおよび式ＩＩＩの化合物が組合せ製薬学的組成物として処方される、請求項１に記載の組合せ製薬学的製品。
【請求項３】
式Ｉおよび式ＩＩＩの化合物が別個に処方される、請求項１に記載の組合せ製薬学的製品。
【請求項４】
リトナビル若しくはその製薬学的に許容できる塩をさらに含んでなる、請求項１ないし３のいずれか１つに記載の組合せ製薬学的製品。
【請求項５】
リトナビルが該組合せの有効成分の１種若しくはそれ以上と共処方される、請求項４に記載の組合せ製薬学的製品。
【請求項６】
リトナビルが別個の製剤として使用される、請求項４に記載の組合せ製薬学的製品。
【請求項７】
リバビリンおよびインターフェロンから選択されるさらなる１剤と組合せられる、請求項１ないし６のいずれかに記載の組合せ製薬学的製品。
【請求項８】
請求項１ないし６のいずれかに記載の組合せ製薬学的製品および製薬学的に許容できる担体を含んでなる製薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＨＣＶの大環状ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ阻害剤、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼを阻害する非ヌクレオシドおよびＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼを阻害するヌクレオシドの組合せに関する。
【背景技術】
【０００２】
ヘパシウイルス属のウイルスのフラビウイルス科の１メンバー、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は世界中の慢性肝疾患の第一位の原因である。診断薬および血液検査の開発が新たな感染の率をかなり低下させたとは言え、ＨＣＶはその慢性の性質および長期の肝損傷のその可能性により世界的な健康上の負担のままである。６種の主要なＨＣＶ遺伝子型（１−６）および複数のサブタイプ（文字により表される）が存在する。遺伝子型１ｂは欧州で優勢である一方、遺伝子型１ａは北米で優勢である。遺伝子型は、治療に対する潜在的応答およびこうした治療の必要とされる期間の決定において臨床上重要である。
【０００３】
ＨＣＶは主に血液接触により伝染される。最初の急性感染後に、感染個体の大多数は慢性肝炎を発症する。ＨＣＶが肝細胞中で優先的に複製するがしかし直接細胞壊死性でないためである。数十年にわたり、かなりの数の感染者が、線維症、肝硬変および肝細胞癌を発症し、慢性ＨＣＶ感染は肝移植の第一位の原因である。これおよび関与する患者の数が、ＨＣＶをかなりの医学研究の焦点にした。
【０００４】
ＨＣＶのゲノムの複製は多数の酵素により媒介され、ＨＣＶ  ＮＳ３／４Ａセリンプロテアーゼおよびその関連補助因子ＮＳ４Ａはそれらの１つである。この過程の別の不可欠の酵素はＮＳ５Ｂポリメラーゼである。ＮＳ３／４ＡセリンプロテアーゼおよびＮＳ５Ｂポリメラーゼの双方がウイルス複製に不可欠であると考えられており、そしてこれらの酵素の阻害剤はＨＣＶ処置の薬物候補と考えられる。
【０００５】
現在の標準治療は週１回のペグ化（ｐｅｇｙｌａｔｅｄ）インターフェロン−α（ＩＦＮ−α）および１日２回のリバビリンの併用療法よりなり、そして遺伝子型２若しくは３により感染した患者の約８０％、しかし遺伝子型１の患者のわずか４０ないし５０％を治癒することが可能である。遺伝子型１の患者における低い成功率は別にして、この処置は流感様症状、貧血およびうつを包含する広範な副作用もまた伴う。これゆえに、副作用、制限される有効性、乏しい認容性、耐性の出現ならびにコンプライアンス失敗のような、現在のＨＣＶ治療の欠点をとりわけ克服する、より安全かつより強力な薬物に対する必要性が存在する。
【０００６】
ＨＣＶポリメラーゼの高いエラー率は、高いウイルスターンオーバーと一緒になって、各患者内のＨＣＶゲノムの不均一な集団をもたらし、そして、これらのバリアントの頻度および適応度に依存して、ウイルス根絶の高い障壁を提供する。従って、今後の治療は、抗ウイルス効果を高めかつまた耐性発生の閾値を上げて究極的には持続性ウイルス陰性化（ＳＶＲ）率を改善するために、必要な場合はＩＦＮ−αおよびリバビリンを含む数種の抗ウイルス薬の組合せよりなることができることがありそうである。
【０００７】
ＨＣＶ  ＮＳ３／４Ａセリンプロテアーゼを阻害する多様な剤が記述されている。特許文献１は中央の置換プロリン部分もつ、また特許文献２は中央シクロペンチル部分をもつ、直鎖状および大環状ＮＳ３セリンプロテアーゼ阻害剤を開示する。これらのなかでも、大環状誘導体はそれらの効力および興味深い薬物動態プロファイルにより魅力的である。特許文献３は一連の大環状ＮＳ３セリンプロテアーゼ阻害剤を開示する。これらのうち、
（１Ｒ，４Ｒ，６Ｓ，７Ｚ，１５Ｒ，１７Ｒ）−Ｎ−［１７−［２−（４−イソプロピルチアゾール−２−イル）−７−メトキシ−８−メチル−キノリン−４−イルオキシ］−１３−メチル−２，１４−ジオキソ−３，１３−ジアザトリシクロ［１３．３．０．０４，６］オクタデス−７−エン−４−カルボニル］（シクロプロピル）スルホンアミドともまた称され得る、化合物（１Ｒ，４Ｒ，６Ｓ，１５Ｒ，１７Ｒ）−シス−Ｎ−［１７−［２−（４−イソプロピルチアゾール−２−イル）−７−メトキシ−８−メチル−キノリン−４−イルオキシ］−１３−メチル−２，１４−ジオキソ−３，１３−ジアザトリシクロ［１３．３．０．０４，６］オクタデス−７−エン−４−カルボニル］（シクロプロピル）スルホンアミド、すなわち下で描かれる化学構造をもつ式Ｉの化合物が、とりわけ興味深い。この化合物は、ＨＣＶに対し顕著な活性を示し、魅力的な薬物動態プロファイルを有しかつ十分に認容される。この化合物は特許文献３の実施例５に記述される合成手順により製造し得る。
【０００８】
ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼＮＳ５ＢはＲＮＡゲノムの複製に不可欠である。この酵素のヌクレオシドおよび非ヌクレオシド双方の阻害剤が既知である。
【０００９】
例えば、特許文献４は多数のヌクレオシド阻害剤を記述し、その１つが４−アミノ−１−（（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−５−アジド−４−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−３−メチル−テトラヒドロフラン−２−イル）−１Ｈ−ピリミジン−２−オン、すなわち下で描かれる化学構造をもつ式ＩＩの化合物である。この化合物は特許文献４の実施例１に記述される合成手順により製造し得る。
【００１０】
特許文献５は多数の非ヌクレオシド阻害剤を記述し、その１つが下で描かれる化学構造をもつ式ＩＩＩの化合物である。この化合物は特許文献５の実施例１に記述される合成手順により製造し得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】第ＷＯ  ０５／０７３１９５号明細書
【特許文献２】第ＷＯ  ０５／０７３２１６号明細書
【特許文献３】第ＷＯ  ２００７／０１４９２６号明細書
【特許文献４】第ＷＯ  ２００８／０４３７０４号明細書
【特許文献５】第ＷＯ２０１０／００３６５８号明細書
【発明の概要】
【００１２】
［発明の要約］
本発明は、式Ｉの化合物：
【００１３】
【化１】
0005989635.tif 000002
【００１４】
若しくはその製薬学的に許容できる塩、
式ＩＩの化合物：
【００１５】
【化２】
0005989635.tif 000003
【００１６】
若しくはその製薬学的に許容できる塩、
および式ＩＩＩの化合物：
【００１７】
【化３】
0005989635.tif 000004
【００１８】
若しくはその製薬学的に許容できる塩
を含んでなる組合せに関する。
【００１９】
これらの有効成分の組合せが抗ＨＣＶ活性を増大させかつ耐性コロニーの出現を抑制して、それにより各単一阻害剤単独と比較して耐性に対する遺伝的障壁を上げることが見出された。これらの有効成分の組合せが、低用量の式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの３種の直接抗ウイルス薬ででさえ、レプリコンＨＣＶ  ＲＮＡの排除を改良することもまた見出された。
【００２０】
［発明の詳細な記述］
式Ｉ、式ＩＩ若しくは式ＩＩＩの化合物は、製薬学的に許容できる塩の形態で若しくは遊離の（すなわち塩以外の）形態で使用しうる。塩の形態は遊離の形態を酸若しくは塩基で処理することにより得ることができる。製薬学的に許容できる酸および塩基付加塩が興味深く、これらは、式ＩおよびＩＩの化合物が形成することが可能である、治療上有効な非毒性の酸および塩基付加塩の形態を含んでなることを意味している。式ＩおよびＩＩの化合物の製薬学的に許容できる酸付加塩は、遊離の形態をこうした適切な酸で処理することにより便宜的に得ることができる。適切な酸は、例えば、臭化水素酸若しくはとりわけ塩酸のようなハロ水素酸；または硫酸、硝酸、リン酸および類似の酸のような無機酸；あるいは例えば酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸（すなわちヒドロキシブタン二酸）、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サイクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、パモ酸および類似の酸のような有機酸を含んでなる。式Ｉの化合物はまた、適切な有機若しくは無機塩基での処理により製薬学的に許容できる金属若しくはアミン付加塩の形態にも転化しうる。適切な塩基塩の形態は、例えば、アンモニウム塩、アルカリおよびアルカリ土類金属塩例えばリチウム、ナトリウム若しくはカリウム塩；またはマグネシウム若しくはカルシウム塩；有機塩基との塩、例えばベンザチン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、ヒドラバミン塩、および例えばアルギニン、リシンなどのようなアミノ酸との塩を含んでなる。付加塩の形態という用語は、式Ｉ若しくは式ＩＩの化合物ならびにそれらの塩が形成しうるいかなる溶媒和物もまた含んでなることを意味している。こうした溶媒和物は例えば水和物、アルコール和物例えばエタノラートなどである。遊離の（すなわち塩以外の）形態の式ＩＩの化合物、若しくは製薬学的に許容できる塩の形態の式Ｉの化合物が興味深い。
【００２１】
本発明の組合せ中の式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの有効成分の間のＥＣ５０比は変動しうる。本明細書で使用されるところの「ＥＣ５０比」という用語は、式ＩＩの化合物のＥＣ５０値および式ＩＩＩの化合物のＥＣ５０値に対する式Ｉの化合物のＥＣ５０値の比を指し、前記ＥＣ５０値はＨＣＶレプリコン試験で得られる。後者は具体的に下述される試験方法である。本試験において、式Ｉの平均ＥＣ５０値が８ｎＭであり、および式ＩＩの平均ＥＣ５０値が５μＭであり、ならびに第ＷＯ２０１０／００３６５８号明細書中の化合物ＩＩＩの報告されるＥＣ５０値は０．０７μＭであることが見出された。
【００２２】
上のＥＣ５０値に基づき、有効血漿濃度は、該ＥＣ５０値を、血漿タンパク質結合を表す係数および安全域を表す係数で乗算することにより決定し得る。後者の係数は約１０に設定し得る。タンパク質結合は、ヒト血清アルブミン、リポタンパク質、糖タンパク質、α、βおよびγグロブリンのような血液タンパク質に結合される量を測定することにより決定し得る。ウイルス学的有効用量ともまた称され得る有効血漿濃度は、有効な抗ウイルス活性を提供するのに必要とされる用量、すなわちウイルス量を効果的に低下させる用量を表す。ウイルス量は、それが約２桁若しくはそれ以上、好ましくはウイルスの検出限界より下に低下される場合に効果的に低下される。ウイルス学的有効用量から、投与されるべき用量（すなわち薬物の量）は、見かけの分布容積としてもまた知られる分布容積（ＶＤ）を用いて計算し得る。これは、経口若しくは非経口投与後の血漿と身体の残部の間の医薬品の分布を定量するのに使用される薬理学用語である。それは、観察される血液濃度を生じるように均一に分布されるために該量の薬物が必要とするであろう容積と定義され
る。ＶＤは、予め決められた量の有効成分を投与しかつ血漿濃度を測定する動物モデルで決定し得る。
【００２３】
毎日投与される本発明の組合せ中の式Ｉの化合物の量は、約１ｍｇから約２５００ｍｇまで、約５ｍｇないし約１０００ｍｇ、若しくは約１０ｍｇから約５００ｍｇまで、若しくは約２５ｍｇから約２５０ｍｇまで、若しくは約２５ｍｇから約２００ｍｇまで変動しうる。式Ｉの化合物の１日量の例は、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇおよび４００ｍｇである。毎日投与される式ＩＩの化合物の量は、約２５０ｍｇから約２０，０００ｍｇまで、若しくは約５００ｍｇから約１６，０００ｍｇまで、若しくは約１０００ｍｇから約１２，０００ｍｇまで、若しくは約３０００ｍｇから約１２，０００ｍｇまで、若しくは約３０００ｍｇから約６０００ｍｇまで変動しうる。式ＩＩの化合物の１日量の例は、３０００ｍｇ、４５００ｍｇ、６０００ｍｇ、１２，０００ｍｇである。毎日投与される式ＩＩＩの化合物の量は、約１０ｍｇから約２５００ｍｇまで、若しくは約２０ｍｇから約１０００ｍｇまで、若しくは約５０ｍｇから約７５０ｍｇまで、若しくは約１００ｍｇから約５００ｍｇまで、若しくは約１２５ｍｇから約２５０ｍｇまで変動しうる。式ＩＩＩの化合物の１日量の例は、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、５００ｍｇおよび１０００ｍｇである。これおよび以下の段落で挙げられる全部の量は遊離の形態（すなわち塩以外の形態）を指す。上の値は遊離の形態の同等物、すなわち遊離の形態が投与されるであろうかのような量を表す。塩が投与される場合、該量は、塩と遊離の形態の間の分子量比の関数で計算される必要がある。
【００２４】
上で挙げられた１日用量は、約７０ｋｇの平均体重について計算されており、そして、小児科の応用の場合、若しくは実質的にそれる（ｄｉｖｅｒｔｉｎｇ）体重を伴う患者で使用される場合に再計算されるべきである。
【００２５】
投薬量は、該日を通じて適切な間隔で投与される１、２、３若しくは４またはそれ以上の下位用量として提示されうる。使用される投薬量は、好ましくは、上で挙げられた式Ｉの化合物若しくは式ＩＩの化合物の１日量、またはその１／２、１／３若しくは１／４のようなその下位用量に対応する。剤形は、前の段落で挙げられた範囲若しくは量に等しい量の化合物Ｉ、化合物ＩＩ若しくは化合物ＩＩＩまたは全３種を一緒に含有することができ、例えば、ある剤形は、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇの化合物Ｉ、２５０ｍｇ、５００ｍｇ、１０００ｍｇ、１５００ｍｇ若しくは２０００ｍｇの化合物ＩＩ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、５００ｍｇ若しくは１０００ｍｇの化合物ＩＩＩを別個の製剤若しくは組合せ製剤に含有しうる。一態様において、式Ｉの化合物は１日１回（ｑ．ｄ．）、具体的には１日あたり１用量として投与され、および式ＩＩの化合物は１日１回若しくは２回（ｑ．ｄ．若しくはｂ．ｉ．ｄ．）、具体的には１日あたり１若しくは２用量として投与され、ならびに式ＩＩＩの化合物は１日１回若しくは２回（ｑ．ｄ．若しくはｂ．ｉ．ｄ．）、具体的には１日あたり１若しくは２用量として投与される。式Ｉおよび式ＩＩおよび式ＩＩＩの全３種の化合物を１日１回投与すべきである場合、これは、化合物Ｉを含む１つ、化合物ＩＩを含む他者、および化合物ＩＩＩを含む第三者の３種の別個の用量を投与することにより、若しくは化合物Ｉおよび化合物ＩＩおよび化合物ＩＩＩを含有する組合せた１用量を投与することにより達成し得る。
【００２６】
本発明の組合せは、毎日１回、２回、３、４若しくは所望の場合は複数回投与しうる。一態様において、該組合せは１日１回投与される。別の態様において、該組合せは１日２回若しくは１日あたり３回投与される。投薬量の投与は別個の剤形、すなわち化合物Ｉのみ若しくは化合物ＩＩのみ若しくは化合物ＩＩＩのみを含有する剤形によっても；または有効成分Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩを含有する組合せ剤形によってもよい。また、組合せ剤形および別個の剤形を使用することの混合を使用し得る。投与し得る剤形は下述され、経口剤形、具体的には錠剤若しくはカプセル剤が好ましい。
【００２７】
有効成分は、別個に若しくは組合せ製薬学的組成物としてのいずれかで製薬学的組成物に処方しうる。後者の場合は、治療上有効な量の式Ｉの化合物若しくはその製薬学的に許容できる塩、および式ＩＩの化合物若しくはその製薬学的に許容できる塩、および式ＩＩＩの化合物若しくはその製薬学的に許容できる塩（前述は本明細書に明記されるとおりである）ならびに製薬学的に許容できる担体を含んでなる製薬学的組成物が提供される。この文脈における治療上有効な量は、感染被験体若しくは感染する危険にさらされている被験体に対し予防的方法で作用する、またはそれらにおいてＨＣＶ感染を安定化若しくは低下させるのに十分な量である。治療上有効な量は、具体的には、毎日の投与について上で挙げられた量、若しくは複数の毎日の投与の場合はその下位用量の量に対応しうる。
【００２８】
さらなる一局面において、本発明は、製薬学的に許容できる担体を、治療上有効な量の式Ｉの化合物若しくはその製薬学的に許容できる塩、および治療上有効な量の式ＩＩの化合物若しくはその製薬学的に許容できる塩、および治療上有効な量の式ＩＩＩの化合物若しくはその製薬学的に許容できる塩と緊密に混合することを含んでなる、本明細書に明記されるところの製薬学的組成物の製造方法に関する。
【００２９】
本明細書で提供される組合せは、ＨＣＶ治療での同時、別個若しくは連続使用のための組合せ製剤としてもまた処方しうる。こうした場合には、式Ｉの化合物を他の製薬学的に許容できる賦形剤を含有する製薬学的組成物に処方し、および式ＩＩの化合物を他の製薬学的に許容できる賦形剤を含有する製薬学的組成物に別個に処方し、ならびに式ＩＩＩの化合物を他の製薬学的に許容できる賦形剤を含有する製薬学的組成物に別個に処方する。
【００３０】
便宜的には、これらの別個の製薬学的組成物は、同時、別個若しくは連続使用のためのキットの一部であり得る。
【００３１】
本発明の組合せの個々の成分は、同時に、若しくは治療の経過の間の異なる時点で別個に、または分割された若しくは単一の組合せの形態で付随して投与し得る。
【００３２】
従って、個別の若しくは組合せの式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの化合物は、投与の目的上適する多様な製薬学的組成物に処方しうる。これらにおいて、治療上有効な量の特定の化合物若しくは全３種の化合物を製薬学的に許容できる担体と組合せ、この担体は投与に望ましい製剤の形態に依存して多様な形態を取りうる。製薬学的組成物は、経口で、非経口で（皮下、筋肉内および静脈内を包含する）、直腸で、経皮で、舌下で若しくは鼻で投与されるべき医薬品として製造しうる。経口投与のための適する組成物は、散剤、顆粒剤、凝集物、錠剤、圧縮若しくはコーティング丸剤、糖衣錠、香剤（ｓａｃｈｅｔ）、硬若しくはゼラチンカプセル剤、シロップ剤および懸濁剤を包含する。非経口投与のための適する組成物は水性若しくは非水性溶液若しくは乳剤を包含する一方、直腸投与のためには、投与のための適する組成物は親水性若しくは疎水性ベヒクルを含む坐剤を包含する。局所投与のためには適する経皮送達系を使用し得、また、鼻送達のためには適するエアゾル送達系を使用し得る。
【００３３】
例えば、経口投与のための組成物の製造において、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤および溶液のような経口液体組成物の場合は例えば水、グリコール、油、アルコールなど；または固体の組成物の場合はデンプン、糖類、カオリン、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などのような固体担体のような、通常の製薬学的媒体のいずれも使用しうる。非経口組成物については、担体は通常少なくとも大部分で滅菌水を含むことができるとは言え、可溶化剤、乳化剤若しくはさらなる補助物質のような他の成分をそれに添加しうる。担体が食塩溶液、ブドウ糖溶液若しくは双方の混合物を含んでなる注入可能な溶液を製造しうる。注入可能な懸濁液もまた製造することができ、この場合は適切な液体担体、懸濁化剤な
どを使用しうる。再構成のための粉末のような、使用直前に液体形態の製剤に転化されることを意図している固体形態の製剤もまた包含される。経皮投与に適する組成物で、担体は、少ない比率の適する皮膚適合性の添加物と場合によっては組合せられる皮膚浸透増強剤および／若しくは湿潤剤を場合によっては含んでなる。式Ｉ若しくはＩＩの化合物またはそれらの組合せは、溶液、懸濁剤若しくは乾燥散剤のようなこの投与の型に適する製剤により経口吸入若しくはガス注入を介してもまた投与しうる。エアゾル剤若しくはスプレー剤の形態での投与のための適する製薬学的組成物は、例えば、エタノール若しくは水またはそれらの混合物のような製薬学的に許容できる液体担体中の式Ｉ若しくはＩＩの化合物または双方の懸濁剤である。必要とされる場合、該製剤は、界面活性剤、乳化剤および安定化剤ならびに噴射剤のような他の製薬学的補助物質もまた付加的に含有し得る。こうした製剤は、通例におよそ０．１から５０％まで、具体的にはおよそ０．３から３重量％までの濃度の有効成分を含有する。
【００３４】
該製薬学的組成物は、式Ｉ若しくは式ＩＩ若しくは式ＩＩＩ、または組合せた全３種の有効成分を、約０．１％ないし約５０％、若しくは約１％ないし約３０％、若しくは約３％ないし約２０％、若しくは約５％ないし約２０％の濃度で含有することができ、全部のパーセンテージは重量である。化合物式Ｉおよび式ＩＩおよび式ＩＩＩの全３種を含有する組成物中で、式Ｉの化合物は約０．１％ないし約５０％、若しくは約１％ないし約３０％、若しくは約３％ないし約２０％、若しくは約５％ないし約２０％の濃度で存在し；また、式ＩＩの化合物は約３％ないし約５０％、若しくは約５％ないし約５０％、若しくは約１０％ないし約５０％、若しくは約１０％ないし約５０％、若しくは約１０％ないし約３０％の濃度で存在し；式ＩＩＩの化合物は、約０．１％ないし約５０％、若しくは約１％ないし約３０％、若しくは約３％ないし約２０％、若しくは約５％ないし約２０％の濃度で存在する。
【００３５】
該製薬学的組成物は、投与の容易さおよび投薬量の均一性のため単位剤形で便宜的に提示されうる。例は、錠剤（割線付き若しくはコーティング錠を包含する）、カプセル剤、丸剤、坐剤、散剤包、カシェ剤、注入可能な溶液若しくは懸濁剤など、およびそれらの分離された倍数を包含する。錠剤若しくはカプセル剤のような経口投与のための固体剤形が興味深い。
【００３６】
単位投与形態の固体剤形はいずれの既知の包装に包装されてもよく、とりわけ錠剤およびカプセル剤にはブリスターパックが好ましい。式Ｉ、式ＩＩおよび式ＩＩＩの化合物が別個に処方される場合、それらは別個のブリスターに包装され得るが、しかし１個のブリスターは、化合物ＩＩの化合物ＩＩＩのと同様に化合物Ｉの単位投与形態、例えば化合物Ｉの単位を含む１列および化合物ＩＩを含む別のものならびに化合物ＩＩＩを含む別のものを含みうる。他の可能性が同様に可能でありうる。
【００３７】
本発明の組合せはＨＣＶ感染ならびにＨＣＶに関連する疾患を処置するのに使用しうる。ＨＣＶに関連する疾患は、進行性肝線維症、肝硬変に至る炎症および壊死、末期肝疾患ならびにＨＣＣ（肝細胞癌）を包含する。
【００３８】
式Ｉ若しくは式ＩＩ若しくは式ＩＩＩの化合物のＨＣＶに対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗ウイルス活性は、Ｋｒｉｅｇｅｒら（２００１）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ
７５：４６１４−４６２４（引用することにより本明細書に組み込まれる）に記述されるさらなる改変を含むＬｏｈｍａｎｎら（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：１１０−１１３に基づく細胞ＨＣＶレプリコン系で試験し得、これは実施例の節でさらに例示される。このモデルは、ＨＣＶの完全な感染モデルでない一方、現在利用可能な自律ＨＣＶ  ＲＮＡ複製の最も確実かつ効率的なモデルとして広く受け入れられている。ＨＣＶに対するｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗ウイルス活性は酵素試験によってもまた試験し得る。
【００３９】
本明細書に明記されるところの式Ｉ、式ＩＩの化合物および式ＩＩＩの化合物の組合せは、ＨＣＶに感染した温血動物、具体的にはヒトの処置で、およびＨＣＶ感染の予防に有用である。
【００４０】
本発明は、従って、ＨＣＶにより感染したか若しくはＨＣＶによる感染の危険にさらされている温血動物、具体的にはヒトの処置方法にさらに関し、前記方法は、本明細書に明記されるところの抗ＨＣＶ有効量の式Ｉ、式ＩＩの化合物および式ＩＩＩの化合物の組合せの投与を含んでなる。本発明は、同様に、抗ウイルス的有効量の本明細書に明記されるところの式Ｉ、式ＩＩの化合物、および式ＩＩ、式ＩＩＩの化合物の組合せを投与することを含んでなる、哺乳動物におけるＨＣＶ関連の状態の処置若しくはＨＣＶ関連の状態の予防方法を提供する。
【００４１】
本発明の組合せは医薬品として使用しうる。本発明はまた、ＨＣＶ感染若しくはＨＣＶ関連の状態の処置若しくは予防のための医薬品の製造のための本明細書に記述されるところの組合せの使用にも関する。
【００４２】
さらなる一局面において、本発明は、ＨＣＶ感染の処置での同時、別個若しくは連続使用のための組合せ製剤としての、式Ｉ、式ＩＩの化合物および式ＩＩＩの化合物ならびに場合によっては別の抗ＨＣＶ化合物を含有する生成物に関する。
【００４３】
本発明の組合せは順に１種若しくはそれ以上のさらなる抗ＨＣＶ化合物と組合せうる。ＩＦＮ−α（ペグ化若しくはそれ以外）および／またはリバビリンとの組合せが興味深い。
【００４４】
本発明の組合せと共投与しうる他の剤は、別個の製剤として投与しうるか、または、式Ｉ、式ＩＩ若しくは式ＩＩＩの有効成分の１種若しくはそれ以上と共処方しうる。
【００４５】
他の抗ＨＣＶ剤を含むものを包含する本発明の組合せは、生物学的利用率を改良する薬物代謝および／若しくは薬物動態に対する正の影響を有する剤、例えばリトナビル若しくはその製薬学的に許容できる塩ともまた組合せうる。該リトナビルは別個の製剤として使用しても、または本発明の組合せの有効成分の１種若しくはそれ以上と共処方してもよい。式Ｉの化合物若しくは式ＩＩの化合物若しくは式ＩＩの化合物の重量／リトナビルに対する重量比は、約１０：１から約１：１０まで、若しくは約６：１から約１：６まで、若しくは約１：１から約１０：１まで、若しくは約１：１から約６：１まで、若しくは約１：１から約４：１まで、若しくは約１：１から約３：１まで、若しくは約１：１から約２：１までの範囲にありうる。
【００４６】
本発明のなおさらなる一局面において、式（Ｉ）の化合物、式ＩＩＩの化合物、および式ＩＩの化合物のエステルプロドラッグの組合せが提供される。これらは、式ＩＩａ：
【００４７】
【化４】
0005989635.tif 000005
【００４８】
若しくはその製薬学的に許容できる塩［ここで、Ｒ１は水素でありかつＲ２はＣ１−１８アルキル−ＣＯ−であるか；若しくはＲ２は水素でありかつＲ１はＣ１−１８アルキル−ＣＯ−であるか；またはＲ１およびＲ２の双方がＣ１−１８アルキル−ＣＯ−であり；各Ｃ１−１８アルキルは独立に、１から１８個までの炭素原子を有する非分枝状若しくは分枝状飽和炭化水素基であり；ならびに、各Ｃ１−１８は具体的にはＣ１−６アルキルでありかつより具体的にはＣ３−４アルキルである］
により表され得る、第ＷＯ  ２００８／０４３７０４号明細書に記述される式ＩＩの化合物、具体的には４’および５’ヒドロキシエステルを含んでなる。こうしたエステルプロドラッグの例は、Ｒ１が水素でありかつＲ２がイソプロピルであるか；若しくはＲ２が水素でありかつＲ１がイソプロピル−ＣＯ−であるか；またはＲ１およびＲ２の双方がイソプロピル−ＣＯ−である式ＩＩａの化合物である。イソプロピル−ＣＯ−という用語はイソブチリルともまた称され得るイソ酪酸のエステルを指す。式ＩＩａのプロドラッグの製薬学的に許容できる塩は式ＩＩの化合物の塩について上述されたとおりである。
【００４９】
本局面において、式（ＩＩ）の化合物は、上述された組合せ、製剤、用途若しくは方法で同等量のエステルプロドラッグにより置換される。
【００５０】
本明細書で使用されるところの「約」という用語はその慣習的な意味するところを有する。特定の態様において、数値に関する場合、それは、数値±１０％、若しくは±５％、若しくは±２％、若しくは±１％、若しくは±０．５％、若しくは±０．１％を意味すると解釈されうる。他の態様において、正確な値をすなわち「約」という語を除外することにより意味している。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】抗ウイルス活性に対する（Ａ）化合物Ｉおよび化合物ＩＩ、（Ｂ）化合物Ｉおよび化合物ＩＩＩ、ならびに（Ｃ）化合物ＩＩおよび化合物ＩＩＩを組合せることの効果。それぞれの実験のＭａｃＳｙｎｅｒｇｙＴＭ  ＩＩソフトウェアにより生じられるところの９５％信頼区間（ＣＩ）での三次元相乗作用プロットを示す。
【図２】化合物Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ単独（Ａ）若しくは組合せ（ＢおよびＣ）の存在下の細胞コロニー形成。生存細胞コロニーの数を各細胞培養皿について右下角に示す。ＥＣ５０は５０％有効濃度を意味している。
【図３】化合物Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ単独ならびに組合せの存在下のレプリコン含有細胞からのＨＣＶ  ＲＮＡの排除。再結合期は灰色で陰を付けられ、またＲＴ−ＰＣＲカットオフを赤線として示す。生存レプリコン細胞コロニーの数を示す。ＨＣＶ、Ｃ型肝炎ウイルス；ＲＮＡ、リボ核酸；ＲＴ−ＰＣＲ、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応。
【実施例】
【００５２】
以下の実施例は本発明を具体的に説明することを意図しており、そしてそれをそれに制限することを意図していない。
【実施例１】
【００５３】
式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの化合物の活性
レプリコンアッセイ
式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの化合物を細胞アッセイにてＨＣＶ  ＲＮＡ複製の阻害における活性について検査した。該細胞アッセイは、多標的スクリーニング戦略においてＫｒｉｅｇｅｒら（２００１）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７５：４６１４−４６２４により記述された改変を伴うＬｏｈｍａｎｎら（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｖｏ
ｌ．２８５  ｐｐ．１１０−１１３により記述されるところの２シストロン性発現構築物に基づいた。本質的に、該方法は後に続くとおりであった。
【００５４】
該アッセイは、安定にトランスフェクトされた細胞株Ｈｕｈ−７  ｌｕｃ／ｎｅｏ（下でＨｕｈ−Ｌｕｃと称される）に基づいた。この細胞株は、レポーター部分（ＦｆＬ−ルシフェラーゼ）により先行される、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）からの配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）から翻訳された１ｂ型ＨＣＶの野生型ＮＳ３−ＮＳ５Ｂ領域、および選択可能なマーカー部分（ｎｅｏＲ、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ）を含んでなる２シストロン性発現構築物をコードするＲＮＡを持つ。該構築物は、１ｂ型ＨＣＶからの５’および３’ＮＴＲ（非翻訳領域）により境を接せられている。Ｇ４１８（ｎｅｏＲ）の存在下でのレプリコン細胞の連続培養はＨＣＶ  ＲＮＡの複製に依存する。とりわけルシフェラーゼをコードする、自律的にかつ高レベルまで複製する、ＨＣＶ  ＲＮＡを発現する安定にトランスフェクトされたレプリコン細胞を、抗ウイルス化合物をスクリーニングするのに使用する。
【００５５】
該レプリコン細胞を、多様な濃度で添加された試験および対照化合物の存在下で３８４ウェルプレートにプレーティングした。３日のインキュベーション後に、ＨＣＶ複製を（標準的ルシフェラーゼアッセイ基質および試薬ならびにＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＶｉｅｗＬｕｘＴｍ  ｕｌｔｒａＨＴＳマイクロプレートイーメジャーを使用して）ルシフェラーゼ活性をアッセイすることにより測定した。対照培養物中のレプリコン細胞はいかなる阻害剤の非存在下でも高いルシフェラーゼ発現を有する。化合物の阻害活性をＨｕｈ−Ｌｕｃ細胞で監視して各試験化合物の用量反応曲線を可能にした。ＥＣ５０値をその後計算し、この値は、検出されたルシフェラーゼ活性、若しくは、より具体的には、遺伝子的に結合されたＨＣＶレプリコンＲＮＡの複製する能力のレベルを５０％低下させるのに必要とされる化合物の量を表す。
【００５６】
抗ＨＣＶ活性に対する化合物Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩを組合せることの効果を図１および表１に示す。
【００５７】
【表１】
0005989635.tif 000006
【００５８】
ＭａｃＳｙｎｅｒｇｙＴＭ  ＩＩソフトウェアにより生じられるところの９５％信頼区間（ＣＩ）での相乗作用および拮抗作用量。＜２５、２５−５０、５０−１００および＞１００という相乗作用量は、それぞれ取るに足りない相乗作用、わずかな相乗作用、中程度の相乗作用および強い相乗作用を示す。示される結果は２回若しくはそれ以上の実験からの平均である。
【００５９】
化合物ＩＩＩ若しくは化合物ＩＩと組合せの化合物Ｉでの細胞の処理はそれぞれ相加的若しくは相乗的抗ＨＣＶ活性をもたらした。化合物ＩＩと組合せの化合物ＩＩＩでの処理は相加的抗ＨＣＶ活性をもたらした。
【００６０】
試験された組合せのいずれでも細胞傷害性は観察されなかった。
【実施例２】
【００６１】
コロニー形成。
コロニー形成を、式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの化合物の存在下でＨＣＶ遺伝子型１ｂレプリコン含有細胞を使用して測定した。Ｈｕｈ７−Ｌｕｃレプリコン細胞（２０，０００個）をＤＭＥＭおよび１０％ＦＣＳを含有する１０ｃｍ皿に播種し、そして１，０００μｇ／ｍＬ  Ｇ４１８の存在下で異なる濃度の単一阻害剤若しくは組合せた２種の阻害剤で処理した。細胞をインキュベートし、そして阻害剤および培地を週２回交換した。有意の細胞死が発生した（およそ２〜３週）場合に、残存するコロニーをニュートラルレッドで染色しかつ計数した。
【００６２】
化合物Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ単独ならびに組合せの存在下の細胞コロニー形成を図２に示す。
【００６３】
増大する濃度の各阻害剤単独はコロニー形成の用量依存性の減少をもたらしたが、しかし耐性レプリコンコロニー形成を完全には予防しなかった。化合物ＩＩＩ若しくは化合物ＩＩと組合せの化合物Ｉでの処理は耐性レプリコンコロニーの形成を予防した。化合物ＩＩと組合せの化合物ＩＩＩでの処理は、試験された最低濃度で耐性レプリコンコロニーの形成を予防した。
【実施例３】
【００６４】
レプリコン排除−再結合アッセイ
排除−再結合の間のＨＣＶレプリコンリボ核酸（ＲＮＡ）レベルを、ＨＣＶ遺伝子型１ｂレプリコン含有細胞を使用して評価した。Ｈｕｈ７−Ｌｕｃレプリコン細胞（３００，０００個）をＤＭＥＭおよび１０％ＦＣＳを含有する１０ｃｍ皿に播種し、そしてＧ４１８の非存在下（排除期）に１種若しくはそれ以上の阻害剤の存在下で培養した。細胞を必要とされるとおり（典型的には週２回）継代しそしてＨＣＶ  ＲＮＡを抽出した。１４日後に阻害剤を除去し、そして細胞を２５０μｇ／ｍＬ  Ｇ４１８の存在下（再結合期）で２１日間インキュベートした。ＨＣＶレプリコンＲＮＡおよび細胞ＲＰＬ１３Ａ転写物レベルを、リアルタイム定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＲＴ−ＰＣＲ）を使用して定量し、そしてＨＣＶレプリコンＲＮＡレベルをＲＰＬ１３Ａ転写物レベルに対し正規化した。実験の終了時に観察された細胞コロニーの数を計数した。
【００６５】
化合物Ｉ、ＩＩ若しくはＩＩＩ単独および組合せの存在（排除期）および非存在（再結合期）下のレプリコン含有細胞からのＨＣＶ  ＲＮＡの排除を図３に示す。
【００６６】
全３種の阻害剤は２週の排除期の間にレプリコンＨＣＶ  ＲＮＡレベルを低下させたが、しかし細胞からのレプリコンＨＣＶ  ＲＮＡの全排除に至らなかった。化合物ＩＩＩ若しくは化合物ＩＩと組合せの化合物Ｉでの処理は初期のＨＣＶ  ＲＮＡ低下を増大させたとは言え、数個のレプリコンコロニーが再結合期に観察され、数種の組合せについて不完全なレプリコンＨＣＶ  ＲＮＡ排除を示唆した。試験された最低濃度の全３種の阻害剤の組合せでの処理は、レプリコンＨＣＶ  ＲＮＡの顕著な減少および最も効率的なレプリコン排除をもたらした。
【図１】
0005989635.tif 000009
【図２】
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【図３】
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