(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
鼻腔から採取した鼻腔内検体を抽出液中に溶出する抽出工程を含む前処理工程と、
前記前処理工程で前処理された前記抽出液から、免疫学的測定法により、鼻腔内検体中のタウ蛋白およびアミロイドベータペプチド（以下、Ａβとする）の濃度を検出する検出工程と、
前記検出工程で得られた前記タウ蛋白の値の２乗と前記Ａβの値の２乗との和の平方根を演算する演算工程と、
前記演算工程で得られた演算値を、予め定めた閾値と比較する比較工程と、
前記比較工程で比較された結果を表示する表示工程と、からなる、アルツハイマー病の診断補助方法。
【請求項２】
前記前処理工程は、前記鼻腔内検体を含む前記抽出液を分画するろ過工程を含む、請求項１に記載のアルツハイマー病の診断補助方法。
【請求項３】
前記ろ過工程において、分画できるフィルターを用いる、請求項２に記載のアルツハイマー病の診断補助方法。
【請求項４】
前記鼻腔内検体は綿棒によって鼻腔内から採取されたものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のアルツハイマー病の診断補助方法。
【請求項５】
前記鼻腔内検体は定量採取器具によって鼻腔内から採取されたものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のアルツハイマー病の診断補助方法。
【請求項６】
前記抽出液は、前記鼻腔内検体中のタウ蛋白を検出するときは超純水であり、前記鼻腔内検体中のＡβを検出するときはギ酸である、請求項１〜５のいずれか１項に記載のアルツハイマー病の診断補助方法。
【請求項７】
免疫学的測定法により、鼻腔から採取した鼻腔内検体中のタウ蛋白およびＡβの濃度を検出する検出手段と、
前記検出手段で得られた前記タウ蛋白の値の２乗と前記Ａβの値の２乗との和の平方根を演算する演算手段と、
前記演算手段で得られた演算値を、予め定めた閾値と比較する比較手段と、
前記比較手段で比較された結果を表示する表示手段と、からなる、アルツハイマー病の診断システム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、検体を利用してアルツハイマー病（ＡＤ）を診断する際の診断方法に関する。より詳細には、ＡＤ患者やＡＤの可能性がある健常者から採取した検体を利用した体外での診断を実現する診断方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病は、初老期から老年期に起こる進行性の認知症を特徴とする疾患であり、現在、国内の患者数は１００万人以上と言われている。今後、人口の高齢化に伴いその数は確実に増加すると予想される。【０００３】
アルツハイマー病の臨床症状は、記憶障害、高次脳記憶障害（失語、失行、失認、構成失行）等である。その症状は他の認知症疾患でも共通して見られることが多く、臨床症状だけでアルツハイマー病を確定診断することは極めて困難である。【０００４】
アルツハイマー病はこれまで根本治療法がなかったが、１９９９年にワクチン療法がモデルマウスで成功して以来、根本治療法開発への期待が高まっている（非特許文献１を参照）。根本治療法を有効に活用する為には、早期にアルツハイマー病を診断する必要がある。【０００５】
一方、アルツハイマー病の特徴的な病理組織所見として老人斑と神経原線維変化がある。前者の主構成成分はβシート構造をとったアミロイドベータペプチド（以下、Ａβという）の凝集体であり、後者のそれは過剰にリン酸化されたタウ蛋白である。現在、アルツハイマー病においてはＡβが脳内に蓄積することが最初に起こる重大病理変化であるというアミロイド仮説が有力である（非特許文献２を参照）。さらに、臨床症状が発症するかなり前から脳内でＡβが蓄積すると共に、リン酸化されたタウ蛋白が増加する等の病理的組織変化が始まっていることが知られている。したがって、脳内のＡβまたはタウ蛋白をマーカーとして検出することがアルツハイマー病の早期診断方法の１つとなる。【０００６】
こうした考えをもとに、老人斑に結合する化合物を放射性物質やＭＲ信号を出す物質で標識した化合物に改変して体内に投与し、脳内の老人斑を画像化するアミロイドイメージング法の開発が進められている。【０００７】
このような検査は脳内の老人斑を直接可視化することを目的としているので、投与した化合物の生体への毒性が強いか弱いかは特に問題とならない。【０００８】
しかしながら一般臨床検査項目を採血によって同時測定することによって、例えば血液中の甲状腺ホルモンの測定などで認知機能障害の臨床指標とする場合もある。その場合には、前述した化合物の投与は測定者が被爆する可能性があり、好ましくないものとなる。【０００９】
そこで、静脈から採血した血液中から脳内のＡβの蓄積量を間接的に検出する方法や、患者の背骨を直接穿刺して脳脊髄液を取り出し、髄液中に含まれるタウ蛋白などを検出しアルツハイマー病の診断を行なう方法が提案されている（例えば、特許文献１を参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】特表平１０−５０９７９７号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｓｃｈｅｎｋ  Ｄ、Ｓｅｕｂｅｒｔ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４００：１７３−１７７，１９９９．
【非特許文献２】Ｈａｒｄｙ  ＪＡ，  Ｓｅｌｋｏｓｅ  ＤＦ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９７：３５３−３５６，２００２．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
従来例における課題は、侵襲性が高い穿刺針を用いた採取による感染の危険があるということであった。すなわち、採取する物質が髄液や血液であるので、体内へ毒性のある物質を投与することなく危険が少ないと予想されたが、所詮体内を循環する生体液を採取しようとするものであるので、針による侵襲で感染の危険が高いものになっていた。【００１３】
そこで本発明は、侵襲性を限りなく低くすることで感染の危険を低下させることができるアルツハイマー病の診断方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明のアルツハイマー病の診断方法は、鼻腔から採取した鼻腔内検体を前処理する前処理工程と、前記前処理工程で前処理された鼻腔内検体中のタウ蛋白および／またはアミロイドベータペプチド（以下、Ａβとする）を検出する検出工程と、前記検出工程で得られた前記タウ蛋白および／または前記Ａβの値を、予め定めた値と比較する比較工程と、前記比較工程で比較された結果を表示する表示工程と、からなる。
【発明の効果】
【００１５】
本発明のアルツハイマー病の診断方法によれば、鼻腔内検体を用いるため侵襲性を限りなく低くでき、感染の危険を低下させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】（ａ）本実施例１に係るＡＤおよびｎｏｎ  ＡＤの鼻腔内Ａβ濃度を示す図。（ｂ）本実施例１に係るＡＤおよびｎｏｎ  ＡＤの鼻腔内Ａβ濃度値
【図２】（ａ）本実施例１に係るＡＤおよびｎｏｎ  ＡＤの鼻腔内タウ蛋白濃度を示す図。（ｂ）本実施例に係るＡＤおよびｎｏｎ  ＡＤの鼻腔内タウ蛋白濃度値
【図３】本実施例１に係る各被験者の鼻腔内Ａβ濃度と鼻腔内タウ蛋白濃度をプロットした図
【図４】本実施例１に係るＡＤおよびｎｏｎ  ＡＤで得られた鼻腔内Ａβおよびタウ蛋白濃度を用いて得られたａの演算値を示す図
【図５】本実施例１に係るＡＤおよびｎｏｎ  ＡＤで得られた鼻腔内Ａβおよびタウ蛋白濃度を用いて得られたａの演算値に基づいてアルツハイマー病のレベルを６段階に分けた各レベルの人数とＲＯＣに必要な計算値の関係を示す図
【図６】本実施例１に係るＡＤおよびｎｏｎ  ＡＤで得られた鼻腔内Ａβおよびタウ蛋白濃度を用いて得られたａの演算値から得られたＲＯＣ曲線図
【図７】本実施例２に係るＡＤおよびｎｏｎ  ＡＤの鼻腔内Ａβ濃度を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
従来、鼻粘膜組織におけるＡβの局在は知られていたが、極めて濃度が低いので鼻腔内検体から検出できる可能性は無いと思われていた。また、タウ蛋白も、ＡＤの主要なバイオマーカとして知られているが、鼻粘膜組織では抗原抗体反応を利用した免疫組織学的検査以外では確認されておらず、ましてや鼻腔内検体から検出することを考える研究者はいなかった。
【００１８】
我々は、Ａβ４２の凝集性を分解する新しいアプローチを考え、従来、無謀と思われてきた、鼻腔内検体におけるＡβ４２とタウ蛋白の定量検出に成功した。これにより侵襲性を限りなく低くすることで感染の危険を低下させることができることを見出した。
【００１９】
本発明の実施形態におけるアルツハイマー病の診断方法は、鼻腔から採取した鼻腔内検体を前処理する前処理工程と、前記前処理工程で前処理された鼻腔内検体中のタウ蛋白および／またはアミロイドベータペプチド（以下、Ａβとする）を検出する検出工程と、前記検出工程で得られた前記タウ蛋白および／または前記Ａβの値を、予め定めた値と比較する比較工程と、前記比較工程で比較された結果を表示する表示工程と、からなる。
【００２０】
さらに、前処理工程は、採取器具に付着した前記鼻腔内検体を抽出液中に溶出する抽出工程と、溶出された前記鼻腔内検体を含む抽出液を分画するろ過工程と、ろ過した溶液を濃縮する濃縮工程を含むことができる。前記ろ過工程では、分画できるフィルターを用いることができる。当該フィルターとしては、１００ｋＤａ以上のタンパク質を排除し、ろ液には１００ｋＤａ以下の分子量のタンパク質のみを通過させるフィルターを好ましく使用することができる。濃縮工程は、後の検出工程によっては、ろ過した溶液を、中和等によって、検出に最適な条件の溶液に調整する最適化工程をさらに含んでもよい。
【００２１】
本発明では、Ａβを検出するにあたって、抽出工程においてギ酸を含む抽出液を用いた。それは次のような理由による。すなわち、Ａβが凝集や吸着されている可能性のある生体組織（例えば脳組織や粘膜等）を含んだ液体は、可溶性Ａβオリゴマー、または不溶性Ａβポリマー等の凝集Ａβを多く含んでいる。このため、例えば和光純薬株式会社より製造販売されているＡβモノマーを確実に定量測定できる測定キットを用いて直接ＥＬＩＳＡ測定を行うと、正確なＡβ量を測定することができなかった。
【００２２】
そこで、本発明者らは、標準物質から作製した凝集Ａβを用い、Ａβモノマーに分解する手段として、ギ酸を溶液へ添加する方法を試みた。
【００２３】
ギ酸は、一般的に、動物やヒトの組織に含まれるタンパク質、さらに組織中で凝集や吸着されているタンパク質を可溶化させ、組織から分離するために用いられている。しかし、本発明者らは、生体組織を含まない液体、即ち、既に液体中に分散している可溶性Ａβオリゴマーに対してギ酸を作用させると可溶性Ａβオリゴマーが解きほぐされ、Ａβモノマーとなることを見出した。可溶性ＡβオリゴマーがＡβモノマーとなるメカニズムについては不明であるが、おそらく、液体中では、可溶性Ａβオリゴマーの一部は、可逆的にＡβモノマーに極一部乖離しており、その中で、ギ酸がＡβモノマーの安定化に寄与しているものと推測される。
【００２４】
この実施例では、抽出工程においてＡβを分解する添加剤としてギ酸を用いたが、当該添加剤は、タンパク質を変性させる手段として使用している一般的な変性剤や可溶化剤のようなグアニジンや尿素などであってもよい。
【００２５】
次に検出工程について説明する。検出工程は、測定対象物質を抗原として、抗原抗体反応を利用した免疫測定を含む。当該免疫測定はＥＬＩＳＡ法であることが望ましい。これ以外に、測定対象物質であるタンパク質を直接的または間接的に検出できる方法であってもよい。このような例としては、ＭＳ（Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）や、ＭＳ／ＭＳまたは液体クロマトグラフィーなどが好適である。
【００２６】
比較工程では、直接的または間接的にタウ蛋白またはＡβの量を算出した後、当該量を予め定めた量と比較すればよい。例えば、吸光、蛍光、発光または電気化学的な検出などで得られた値を用いて目的のタウ蛋白またはＡβの標準濃度曲線から得られる検量線を作成し、これを予め定めた値とし、この検量線から逆回帰した値と、検出工程に基づき算出されたタウ蛋白またはＡβの値を比較する工程を比較工程としてもよい。ここで、比較するタウ蛋白の値およびＡβの値は、両者の比率を同程度にするために、タウ蛋白の量および／またはＡβの量の対数を、タウ蛋白の値およびＡβの値としてもよい。
【００２７】
表示工程は、数値、図および絵などを表示することを含む。当該工程は、算出された値と予め定めた値との乖離度や、算出された値が予め定めた値よりも増加したか減少したのかを判断するにあたって、人の理解を支援できる工程であることが好ましい。
【００２８】
検出工程の後、算出されたタウ蛋白の値の２乗と、算出されたＡβの値の２乗との和を演算する演算工程を行ってもよい。すなわち、この和のみを演算工程の出力（結果）としてもよいが、この和に他のパラメータを使った演算を施してもよいし、これらの値に平方根や乗数を演算したものを演算工程の出力としてもよい。これら演算工程の出力を比較工程での比較対象とすればよい。
【００２９】
なお、上述における各工程の全体的な実施態様としては、単一の診断システムの中に、鼻腔から採取した鼻腔内検体中のタウ蛋白およびＡβを検出する検出手段、前記検出手段で得られた前記タウ蛋白および前記Ａβの値を、それぞれ予め定めた値と比較する比較手段、前記比較手段で比較された結果を表示する表示手段が含まれており、前処理が行われた鼻腔内検体に対して、診断システム内の各手段により、前述した各工程が実行されて、診断を実現する態様が考えられる。また、前記診断システムは、前記検出手段で得られた前記タウ蛋白の値の２乗と前記Ａβの値の２乗との和の平方を演算する演算手段をさらに有していてもよく、これにより得られた演算値を、前記比較工程における前記タウ蛋白および前記Ａβの値として使用する。
【００３０】
以下に実施例を掲げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００３１】
ＮＩＮＣＤＳ−ＡＤＲＤＡ  Ｗｏｒｋ  Ｇｒｏｕｐのアルツハイマー病の臨床診断基準に基づきＰｒｏｂａｂｌｅ  ＡＤ（以下、ＡＤという）患者を判定した。
【００３２】
臨床診断基準によれば、Ｐｒｏｂａｂｌｅ  ＡＤ患者の分類では、認知症が臨床的診察、知能テスト（ミニメンタルステートなど）、神経心理学的テストの三つで確認される。その分類には、認知機能のうち二つ以上が障害されている患者、記銘と他の認知機能が進行性に悪化している患者、意識障害がない患者、および発症年齢が４０〜９０歳のあいだで、６５歳以上の患者、認知症の原因となる全身疾患やアルツハイマー病以外の脳疾患がない患者がある。
【００３３】
また、ＡＤ患者であると判断する所見としては、言語・運動行為・認知機能の障害（失語・失行・失認）の進行性悪化や日常生活動作の障害と行動パターンの変化がある。この他、類似疾患の家族歴がある（とくにアルツハイマー病と病理診断されている）場合もある。
【００３４】
さらに検査所見では、髄液が正常で脳波が正常あるいは非特異的変化（徐波増加など）、ＣＴ（ＭＲＩ）の経過追跡で脳萎縮が確認されている場合はＡＤ患者であることが支持される。
【００３５】
（実施例１）
本実施例では、ＡＤ被験者は６４歳から９２歳の１２名で平均８３．２歳であった。非ＡＤ被験者は２９歳から６５歳の９名で平均４１．３歳であった。これらのうちＡβとタウ蛋白の両方を測定した被験者については、ＡＤ被験者は６４歳から９２歳の１１名で平均８３．７歳、非ＡＤ被験者は３６歳から６４歳の４名で平均４０．８歳であった。
【００３６】
次にＡβの測定条件について述べる。本実施例では綿棒を用いて鼻粘膜組織を擦過し、鼻粘膜組織が付着した綿球を、超純水２７０μＬを予め添加したマイクロチューブに投入した。そして綿球の先から３．０ｃｍの位置で切断し、攪拌して綿棒に付着した鼻粘膜組織検体を溶出させた。
【００３７】
ここで綿棒は、侵襲性が低く、狭く細い範囲を擦過できることから、鼻腔内の検体を採取するのに適している。同様の目的を達成できるものであれば、綿棒に代えて、採取を目的としたスコップや容器などの採取器具を使用してもよい。例えば、鼻腔内に挿入でき侵襲性が綿棒と同等であるか鼻腔内を麻痺させた後に採取できる採取器具などである。また、定量の鼻孔内検体を鼻孔内から採取可能とする定量採取器具を使用することもできる。本実施例では、市販されているプラ軸綿棒（医療補助用綿棒ＨＵＢＹ−ＣＯＴＩＸ  ＥＭ３−５０Ｓ（（株）山洋製））を使用した。
【００３８】
タンパク質の溶解性はタンパク質を含む溶液のｐＨに応じて大きく異なるが、超純水は化学的にもｐＨに依存しないため、タウ蛋白を溶出することを目的とする時に使用する抽出液は超純水であることが望ましい。これは、一般的にタンパク質は疎水部分と親水部分を含むアミノ酸の集合体であり、ほとんど全てのタンパク質は電気的に偏りを持ち、溶液中では不安定に存在していることによる。超純水としては、吸光度（２１０〜４００ｎｍ）が０．０１以下、全有機炭素（ＴＯＣ）が４ｐｐｂ以下のものが好ましい。
【００３９】
次に、綿棒を引き上げて綿球を超純水から浮かした状態にし、蓋をすることでマイクロチューブに固定し、１４０００ｇで遠心することで綿球を脱水した。その後、マイクロチューブから綿棒を取り出し、マイクロチューブ内の溶液を２７Ｇニードル装着のシリンジで３０回吸込および吐出を繰り返し懸濁した。懸濁後の溶液のうち４０μＬをＤＮＡ、電解質、および総タンパクの測定に使用した。残りの溶液のうち２００μＬを試験管に移し、抽出液として１００％ギ酸を５００μＬ添加、攪拌し、７０℃に保たれた恒温層で１時間静置した。１時間後に恒温層から試験管を取り出し、溶液をフィルター（ＮＡＮＯＳＥＰ  １００Ｋ  ＯＭＥＧＡ（ＰＡＬＬ）：１００ｋＤａ以上のタンパク質を排除し、１００ｋＤａ以下の分子量のタンパク質のみを通過させるフィルター）で分画ろ過した。ろ液を試験管に移し、溶液量が２０μＬになるまで遠心エバポレーターで減圧濃縮した。濃縮した溶液を攪拌した後、１ｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ未調整）を４８０μＬ加え、５００μＬ溶液に調製した。尚、各溶液のｐＨを測定し中和の成否を記録用紙へ記録し、ｐＨ７．０〜８．６程度の範囲であることを確認した。これら溶液をＡβの測定用試料とする。
【００４０】
Ａβの測定は、Ａβを測定するＥＬＩＳＡの測定キットを用いて実施した（和光純薬社製、Ｈｕｍａｎ／Ｒａｔ  βＡｍｙｌｏｉｄ４２  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ  ｗａｋｏ、Ｈｉｇｈ−Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ；商品番号２９２−６４５０１）。測定に先立って、検量線を作製するための溶液を、Ａβ４２のスタンダード溶液を用いて、０．０５、０．１、０．２、０．２５、１、２、２．５、５、１０、または２０ｐＭに調製した。調製後は、検量線を作製するための溶液と測定用試料１ｍＬをそれぞれ、測定キットのマイクロタイタープレートに１００μＬ添加した。
【００４１】
その後、測定キットの使用説明に従い、測定を実施した。測定後は、検量線を用いて、各測定用試料に含まれるＡβ４２の濃度（Ａβの値）を算出した。
【００４２】
以上の測定結果を、図１に示す。図１によると、各測定用試料は、Ａβ４２が０．３９〜２．９９ｐＭの値を示した。以上のように、通常では測定出来なかった鼻粘膜組織中に含まれるＡβ量を測定することができた。さらに、ＡＤ被験者のＡβ量と非ＡＤ被験者のＡβ量のあいだには有意差が存在したことから、鼻粘膜組織中に含まれるＡβ量はアルツハイマー病の診断に有用な情報であることが示された。
【００４３】
次にタウ蛋白の測定条件について述べる。本実施例ではＡβ測定と同様の綿棒を用いて鼻粘膜組織を擦過し、鼻粘膜組織が付着した綿球を、超純水１５０μＬを予め添加したマイクロチューブに投入した。そして綿球の先から３．０ｃｍの位置で切断し、攪拌して綿棒に付着した鼻粘膜組織検体を溶出させた。
【００４４】
そして、綿棒を引き上げ、綿球を超純水から浮かした状態でマイクロチューブに固定した。遠心機にマイクロチューブ入れ、１分間常圧遠心して綿球を脱水した後、マイクロチューブから綿棒を取り出した。得られた溶液をタウ蛋白の測定用試料とする。
【００４５】
タウ蛋白の測定は、タウ蛋白を測定するＥＬＩＳＡの測定キットを用いて実施した（ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製、Ｔａｕ  （Ｔｏｔａｌ）  Ｈｕｍａｎ  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ；商品番号ＫＨＢ００４１）。測定に先立って、検量線を作製するための溶液を、タウ蛋白のスタンダード溶液を用いて、１５．６、３１．２、６２．５、１２５、２５０、５００、１０００、または２０００ｐｇ／ｍＬに調製した。調製後は、検量線を作製するための溶液と測定用試料１ｍＬをそれぞれ、測定キットのマイクロタイタープレートに１００μＬ添加した。
【００４６】
その後、測定キットの使用説明に従い、測定を実施した。測定後は、検量線を用いて、各測定用試料に含まれるタウ蛋白の濃度（タウ蛋白の値）を算出した。
【００４７】
以上の測定結果を、図２に示す。これによると、各測定用試料は、タウ蛋白が１６．４〜９２３．８ｐＭの値を示した。以上のように、通常では検出できることすら考えなかった鼻粘膜組織中に含まれるタウ蛋白量を初めて検出することに成功した。さらに、ＡＤ被験者のタウ蛋白量と非ＡＤ被験者のタウ蛋白量のあいだには有意差が存在したことから、鼻粘膜組織中に含まれるタウ蛋白量はアルツハイマー病の診断に有用な情報であることが示された。
【００４８】
上記測定で得られたタウ蛋白濃度を横軸、Ａβ濃度を軸として各被験者のデータをプロットしたものを図３に示す。このグラフから明らかなように、（Ａβ濃度）の２乗と（ｌｏｇ１０（タウ蛋白濃度））の２乗の和の平方根ａ、すなわち原点からの距離は、被験者の個別の値として示すことが出来る演算値である。
【００４９】
さらに、図４において、この原点からの距離を示す平方根ａに関して、Ａβ濃度とタウ蛋白濃度の両方を測定した各被験者、すなわちＡＤ被験者１１名、非ＡＤ被験者４名の演算値を具体的に示す。
【００５０】
次に、図４で得られたａの演算値に基づいて、アルツハイマー病のレベルを６段階に分けた各レベルの人数を図５に示す。より詳細には、図４で示した演算値を、６段階（０〜２、２〜４、４〜６、６〜８、８〜１０、１０以上）のレベルに分類し、ＡＤ被験者、非ＡＤ被験者のそれぞれにおいて、各レベルに該当する人数を図５の上段の表において示す。そして、図５の中段に、「１０以上」のレベルから順に、累積人数を示す。つまり、演算値が「１０以上」の人数はＡＤ被験者が３名、非ＡＤ被験者が０名、「８以上」の人数はＡＤ被験者が８名、非ＡＤ被験者が０名、「６以上」の人数はＡＤ被験者が１１名、非ＡＤ被験者が１名、「４以上」の人数はＡＤ被験者が１１名、非ＡＤ被験者が３名、「２以上」及び「０以上」の人数はＡＤ被験者が１１名、非ＡＤ被験者が４名である。そして、図５の下段に、中段の累積人数から算出された、ｔｐｆ値（ｔｒｕｅ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｆｒａｃｔｉｏｎ）、及び、ｆｐｆ値（ｆａｌｓｅ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｆｒａｃｔｉｏｎ）を示す。このｔｐｆ値とは、真陽性率であり、陽性（ＡＤ）と判断された被験者のうち、検査が正しく陽性と判断した被験者の割合を示す検査性能指標（値は０〜１）のことである。今回のｔｐｆ値の結果は、演算値が「１０以上」の被験者を陽性とした場合には０．２７（＝３／１１）、「８以上」の被験者を陽性とした場合には０．７３（＝８／１１）、「６以上」「４以上」「２以上」及び「０以上」の被験者を陽性とした場合には１．００である。またｆｐｆ値とは、偽陽性率であり、陰性（ｎｏｎＡＤ）と判断された被験者のうち、検査が誤って陽性と判断したものの割合を示す検査性能指標（値は０〜１）のことである。今回のｆｐｆ値の結果は、演算値が「１０以上」及び「８以上」を陽性とした場合には０．００、「６以上」を陽性とした場合には０．２５、「４以上」を陽性とした場合には０．７５、「２以上」及び「０以上」を陽性とした場合には１．００である。
【００５１】
さらに図６において、演算値が「１０以上」「８以上」「６以上」「４以上」「２以上」「０以上」の被験者をそれぞれ陽性であると判断した６種類の場合において、ｆｐｆ値及びｔｐｆ値を、それぞれ横軸と縦軸の値として示す。さらにそれらの６点を曲線で結ぶ。この曲線は、一般に特異度を示すＲＯＣ曲線と呼ばれる。このＲＯＣ曲線において、ｆｐｆ値が０でありｔｐｆ値が１である点から曲線までの距離が短い場合、つまり、ＲＯＣ曲線以下の面積が１に近い場合、その測定精度が高いことが知られている。反対に、この距離が長い場合、つまり、ＲＯＣ曲線以下の面積が１／２に近い場合（ＲＯＣ曲線が図６の点線で示されるような直線に近い場合）、その測定精度が低いことが知られている。図６に示したＲＯＣ曲線から、本実施例における測定結果は、極めてその精度が高いことが明らかである。
【００５２】
（実施例２）
次に、本実施例では、ＡＤ被験者５名（平均８５．６歳）、高齢の非ＡＤ被験者５名（平均７５．６歳）、若年の非ＡＤ被験者１５名（平均３３歳）を被験者として、さらに詳細に調査した結果について、図７を用いて説明する。
【００５３】
なお、他の測定の諸条件については、実施例１と重複するため説明を省略する。
【００５４】
図７に示される通り、若年の非ＡＤ被験者の結果は、他の被験者の結果に比べると低濃度の範囲内に集中している。ここで重要なことは、比較的近い年齢の高齢者であるＡＤ被験者と非ＡＤ被験者とを比較しても、比較的高濃度の被験者がＡＤ被験者に存在するため、有意差が存在することである。すなわち、鼻腔内Ａβ濃度を測定することが健常者とＡＤ羅患者との判別に有用であると考えられる。
【００５５】
これらの結果から従来不可能と考えられていた鼻腔内検体中のＡβ４２とタウ蛋白を検出し、Ａβ４２とタウ蛋白との関係から考案した指標を用いることで、健常者とＡＤ罹患者との判別が出来ることが判明した。これにより、侵襲性を限りなく低くすることで感染の危険を低下させたアルツハイマー病の診断に有用な情報を提供し得る。
【００５６】
また、鋭意研究結果として我々が新たに発見した鼻腔内タウ蛋白の濃度を用いて、アルツハイマー病に関する発症危険度などとして指標化することにより、脳脊髄液を採取することに比べて、非常に侵襲リスクの少ない診断方法を提供することができる。さらに、鼻腔は脳に近いことにより、鼻腔内のＡβ濃度、タウ蛋白濃度は脳内の各濃度を正確かつ迅速に反映し、診断方法としての有効性も向上する。
【産業上の利用可能性】
【００５７】
本発明は、アルツハイマー病の診断方法として有益である。なお、本願において、診断とは、医師が行なう専門的な医療行為を含むものではなく、本実施の形態で説明したような種々の器具を用いた前処理、検出、比較、表示等の各工程を実施することで、医師が行う医療行為を支援することである。
【図１】
0005850374.tif 000002
【図２】
0005850374.tif 000003
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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