(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルス、バクテリア、寄生生物に感染した細胞及び／又は腫瘍細胞に影響を及ぼす生物学的有効分子群（biologisch wirksame Molekule）であって、ウイルス、バクテリア、寄生生物に感染した細胞及び／又は腫瘍細胞（１）の少なくとも一種の特定の標的プロテアーゼ（２）に対する少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤（３）と、開裂部位としてペプチド結合（４）を有するペプチドにより不活化された少なくとも一種のペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡ（５）とから成り、開裂部位におけるペプチド結合（４）のタンパク質配列は、少なくとも一種の特定の標的プロテアーゼ（２）の開裂部位のタンパク質配列と同一か、及び／又はわずかに変化したタンパク質配列を有し、前記ペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡ（５）を活性化する目的で、少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤（３）が少なくとも一種の特定の標的プロテアーゼ（２）と結合しない、或いは完全に結合できないため少なくとも一種の特定の標的プロテアーゼ（２）又はその障害作用を完全には阻害できないときに、前記ペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡ（５）の開裂部位におけるペプチド結合（４）が前記少なくとも一種の特定の標的プロテアーゼ（２）によって開裂されるようにした、生物学的有効分子群。
【請求項２】
前記少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤（３）と前記少なくとも一種のペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡ（５）は、分子内で組み合わされており、互いに共有結合していることを特徴とする、請求項１に記載の生物学的有効分子群。
【請求項３】
前記少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤（３）と前記少なくとも一種のペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡ（５）は、互いに共有結合していないことを特徴とする、請求項１に記載の生物学的有効分子群。
【請求項４】
前記少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤（３）と前記少なくとも一種のペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡ（５）は、別個に投与されるものであることを特徴とする請求項３に記載の生物学的有効分子群。
【請求項５】
前記ペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡ又はＰＮＡ（５）は、更なる構造又は機能要素
との少なくとも一個の結合を有することを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の生物学的有効分子群。
【請求項６】
更なる構造又は機能要素は、受容体リガンドシステム、Ｔａｔタンパク質フランキング、アプタマー複合体の結合又はペグ化であることを特徴とする請求項５に記載の生物学的有効分子群。
【請求項７】
ウイルス、バクテリア、寄生生物に感染した細胞及び／又は腫瘍細胞に影響を及ぼすための方法（ヒトに対する医療行為を除く）であって、細胞に影響を及ぼすためにウイルス、バクテリア、寄生生物に感染した細胞及び／又は腫瘍細胞の少なくとも一種の特定の標的プロテアーゼ（２）を阻害するための少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤（３）と、前記少なくとも一種の特定の標的プロテアーゼ（２）の開裂部位のタンパク質配列と同一及び／又は該タンパク質配列から僅かに変化したタンパク質配列を有するペプチド結合（４）を開裂部位として有するペプチドにより不活化された少なくとも一種のペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡ（５）とを投与し、前記ペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡ（５）を活性化する目的で、少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤（３）が少なくとも一種の特定の標的プロテアーゼ（２）と結合しない、或いは完全に結合できないため少なくとも一種の特定の標的プロテアーゼ（２）又はその障害作用を完全には阻害できないときに、該ペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡ（５）の開裂部位におけるペプチド結合（４）が少なくとも一種の特定の標的プロテアーゼ（２）によって開裂されるようにした方法。
【請求項８】
前記少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤（３）と前記少なくとも一種のペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡ（５）を同時に投与することを特徴とする、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤（３）と前記少なくとも一種のペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡ（５）を別々に、及び必要に応じて時間をずらして投与することを特徴とする、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
前記少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤（３）と前記少なくとも一種のペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡ（５）を、トランスフェクション試薬（７）と共に投与することを特徴とする、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
トランスフェクション試薬（７）は、脂質、ポリエチレンイミン、デキストラン、ナノ粒子、又は、ポリマーであることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤（３）と前記少なくとも一種のペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡ（５）の投与と併せて、更なる作用物質を投与し、該作用物質はウイルス、バクテリア、寄生生物に感染した細胞及び／又は腫瘍細胞の細胞特性、ウイルスの複製、感染性、カプセル化若しくは放出性、又はバクテリア又は寄生生物の複製、感染性、物質代謝若しくは放出性に影響を及ぼすことを特徴とする、請求項７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルス、バクテリア、寄生生物に感染した細胞及び／又は腫瘍細胞に影響を及ぼす生物学的有効分子群（biologisch wirksame Molekule）、及び該分子群を適用するための方法に関する。本発明は一種以上の標的プロテアーゼを用い、たとえ標的プロテアーゼが突然変異した場合であっても、ウイルス、バクテリア、寄生生物に感染した細胞及び／又は腫瘍細胞の生理的機能に影響を及ぼすことができる。
【０００２】
本発明の生物学的有効分子群と、該分子群の適用は、例えば腫瘍の治療や、ウイルス感染、バクテリア感染又は寄生生物の感染の治療において、特に異常細胞の抑制と成長阻害に利用することができる。
【背景技術】
【０００３】
ウイルス感染症の抑制におけるプロテアーゼ阻害剤の使用は、既に開示されており、長年用いられている（欧州特許０６９１３４５Ａ３、米国特許５１９６４３８Ａ、同５５４１２０６Ａ、同５４１３９９９Ａ、同５４８４９２６Ａ、同５５８５３９７Ａ等）。
【０００４】
短い（１９〜２３ｂｐ）二本鎖ＲＮＡ分子（ｓｉＲＮＡ）又はＰＮＡ分子を、標的遺伝子ｍＲＮＡの配列セグメントに対して特異的な真核細胞内に導入することにより遺伝子発現を阻害することも既に開示されている（エルバシル・ＳＭら、「２１ヌクレオチドＲＮＡの二重螺旋は培養哺乳類細胞のＲＮＡ干渉を仲介する」、ネイチャー、２００１年５月２４日、４１１（６８３６）号、４９４〜８ページ、リュウ・Ｙら、「ペプチド核酸による細胞遺伝子発現の効率的、アイソフォーム選択的阻害」、バイオケミストリー、２００４年２月２４日、４３（７）号、１９２１〜７ページ、米国特許５８９８０３１Ａ、同７０５６７０４Ｂ２）。
【０００５】
このような分子を用いると、遺伝子の読取りやｍＲＮＡの産生は阻止されないが、ｓｉＲＮＡの場合には標的ｍＲＮＡを分解するという細胞固有の機構が誘発される。
【０００６】
最終的には、上述のように、他の遺伝子の発現を損ねることなく特定のタンパク質の生成が抑制される（転写後遺伝子サイレンシング）。
【０００７】
遺伝子の発現を抑制するために、ｓｉＲＮＡ分子とＰＮＡ分子を、特にトランスフェクション試薬とエレクトロポレーションを介して直接細胞内に導入できる（ツァン・Ｍら、「哺乳類細胞におけるＲＮＡ干渉によるダウンレギュレーション増強緑色蛍光タンパク質遺伝子発現」、ＲＮＡバイオロジー、２００４年５月、１（１）号、７４〜７ページ、ジルモア・ＩＲら、「ｓｉＲＮＡ仲介遺伝子サイレンシングのためのデリバリー戦略」、Ｅパブリケーション、２００４年５月２２日、カレント・ドラッグ・デリバリー、２００６年４月、３（２）号、１４７〜５ページ、米国特許６５０６５５９Ｂｌ）。
【０００８】
この場合の問題点は、ｓｉＲＮＡが比較的不安定なことであるが、これは化学修飾によって改善できる（米国特許６１０７０９４Ａ）。
【０００９】
生物学的有効分子群を適用する際に問題となるのは、特にｉｎ  ｖｉｖｏでの投与である。このような投与に対して、例えばｓｉＲＮＡ分子を安定化して分解を低減する方法が開発され（モリッシーら、「合成ｓｉＲＮＡの化学修飾」、ファーマシューティカル・ディスカバリー、２００５年５月１日）、トランスフェクション試薬、例えばｉｎ  ｖｉｖｏであっても細胞内にｓｉＲＮＡを導入可能なナノ粒子（ｉｎ  ｖｉｖｏ−ｊｅｔＰＥＩ(登録商標)）が開発された（ヴェルヌジュールら、「原発性及び転移性膵臓癌モデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏソマトスタチン受容体サブタイプ２遺伝子導入の抗腫瘍効果」、キャンサーリサーチ、６２号、２００２年、６１２４〜３１ページ、ウルバン・クライン・Ｂ、ウェルス・Ｓ、アブハルバイド・Ｓ、シズバイコ・Ｆ、アイグナー・Ａ、「ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）複合ｓｉＲＮＡのｉｎ  ｖｉｖｏにおける全身投与によるＲＮＡｉ仲介遺伝子標的化」、ジーンセラピー、１２（５）号、２００５年、４６１〜６ページ）。
【００１０】
更に、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける標的組織の細胞へのｓｉＲＮＡの導入を増進する方法も開発された（イケダら、「治療ｓｉＲＮＡのリガンド標的デリバリー」、ファーマシュティカルリサーチ、２３巻８号、２００６年８月）。
【００１１】
しかしながら生物学的活性物質のｉｎ  ｖｉｖｏでの投与においては、これら物質の全身作用に起因する問題がしばしば起こる。これら物質を選択的に標的細胞に導入する場合に十分な特異性は得られていない。このことは特に選択的に標的細胞内でのみ作用すべきｓｉＲＮＡ分子、ＰＮＡ分子及びＲＮＡ分子の場合に不都合となる。組織特異的又は細胞特異的に標識されたトランスフェクション試薬（例えば抗体／抗原標識ナノ粒子、ＴＡＴタンパク質フランキング等）を用いても、十分な細胞特異性は得られない。その結果、ミストランスフェクションが起こる。
【００１２】
このミストランスフェクションを補償するための機構として、ｓｉＲＮＡ分子、ＰＮＡ分子又はＲＮＡ分子の生物学的作用をペプチドを結合させて抑制し、これらペプチドを標的細胞に活性な酵素で分解することによりｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡを標的細胞中で活性化することが知られている（ＷＯ２００８／０９８５６９Ａ２）。
【００１３】
ウイルス、バクテリア又は寄生生物の感染性若しくは複製を阻害し、また、腫瘍の成長を阻害するためにプロテアーゼ阻害剤を適用することに関する一般的な問題は、これらのウイルス特異的、バクテリア特異的、寄生生物特異的又は腫瘍特異的酵素が、例えば突然変異によって非常に急速に僅かに変化し、そのために投与された阻害剤が作用しなくなることである。それによってウイルス、バクテリア、寄生生物又は腫瘍細胞は、阻害剤を投与されたにも拘わらず再び増殖できる。
【００１４】
ウイルス、バクテリア又は寄生生物に感染した細胞又は腫瘍細胞中で遺伝物質が急速に突然変異するため、ｓｉＲＮＡ分子、ＲＮＡ分子又はＰＮＡ分子を導入すること自体は、適切とも十分効果的とも考えられない。これは、ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡのｍＲＮＡ標的配列の改変も、導入された分子の意図された適用効果を阻害してしまうからである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】欧州特許０６９１３４５Ａ３
【特許文献２】米国特許５１９６４３８Ａ
【特許文献３】米国特許５５４１２０６Ａ
【特許文献４】米国５４１３９９９Ａ
【特許文献５】米国５４８４９２６Ａ
【特許文献６】米国５５８５３９７Ａ
【特許文献７】米国特許５８９８０３１Ａ
【特許文献８】米国特許７０５６７０４Ｂ２
【特許文献９】米国特許６５０６５５９Ｂｌ
【特許文献１０】米国特許６１０７０９４Ａ
【特許文献１１】ＷＯ２００８／０９８５６９Ａ２
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】エルバシル・ＳＭら、「２１ヌクレオチドＲＮＡの二重螺旋は培養哺乳類細胞のＲＮＡ干渉を仲介する」、ネイチャー、２００１年５月２４日、４１１（６８３６）号、４９４〜８ページ
【非特許文献２】リュウ・Ｙら、「ペプチド核酸による細胞遺伝子発現の効率的、アイソフォーム選択的阻害」、バイオケミストリー、２００４年２月２４日、４３（７）号、１９２１〜７ページ
【非特許文献３】ツァン・Ｍら、「哺乳類細胞におけるＲＮＡ干渉によるダウンレギュレーション増強緑色蛍光タンパク質遺伝子発現」、ＲＮＡバイオロジー、２００４年５月、１（１）号、７４〜７ページ
【非特許文献４】ジルモア・ＩＲら、「ｓｉＲＮＡ仲介遺伝子サイレンシングのためのデリバリー戦略」、Ｅパブリケーション、２００４年５月２２日、カレント・ドラッグ・デリバリー、２００６年４月、３（２）号、１４７〜５ページ
【非特許文献５】モリッシーら、「合成ｓｉＲＮＡの化学修飾」、ファーマシューティカル・ディスカバリー、２００５年５月１日）
【非特許文献６】ヴェルヌジュールら、「原発性及び転移性膵臓癌モデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏソマトスタチン受容体サブタイプ２遺伝子導入の抗腫瘍効果」、キャンサーリサーチ、６２号、２００２年、６１２４〜３１ページ
【非特許文献７】ウルバン・クライン・Ｂ、ウェルス・Ｓ、アブハルバイド・Ｓ、シズバイコ・Ｆ、アイグナー・Ａ、「ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）複合ｓｉＲＮＡのｉｎ  ｖｉｖｏにおける全身投与によるＲＮＡｉ仲介遺伝子標的化」、ジーンセラピー、１２（５）号、２００５年、４６１〜６ページ）
【非特許文献８】イケダら、「治療ｓｉＲＮＡのリガンド標的デリバリー」、ファーマシュティカルリサーチ、２３巻８号、２００６年８月
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明の課題は、ウイルス、バクテリア、寄生生物に感染した細胞及び腫瘍細胞に、たとえ突然変異や標的プロテアーゼが変化した場合でも、的確に効果的に影響を及ぼすことである。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明によれば、ウイルス、バクテリア、寄生生物に感染した細胞及び／又は腫瘍細胞に影響を及ぼすため、生物学的有効分子群を投与する。この生物学的有効分子群は、ウイルス、バクテリア、寄生生物に感染した細胞及び／又は腫瘍細胞の少なくとも一種の特定の標的プロテアーゼに対する少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤と、少なくとも一種のペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡとから成り、ペプチドにより不活性化されたｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡを活性化する目的でこれらのペプチド結合が、前記少なくとも一種の特定の標的プロテアーゼによって開裂される。
【００１９】
プロテアーゼ阻害剤は、細胞の生物学的活性又は腫瘍活性を阻害する目的で、ウイルス、バクテリア、寄生生物に感染した細胞又は腫瘍細胞の標的プロテアーゼと公知の方式で結合させる。投与されたプロテアーゼ阻害剤が、例えば標的プロテアーゼの僅かな突然変異の結果、標的プロテアーゼと結合せず、上述の作用を意図した通りに阻害できない（又は標的プロテアーゼの残留活性が存在する）場合には、前記標的プロテアーゼは、プロテアーゼ阻害剤と同時に又は僅かに時間をずらして投与されたペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡに作用する。これらのペプチド結合は、標的プロテアーゼによってペプチド結合が開裂されるよう標的プロテアーゼの開裂部位と同一か、及び／又は開裂部位から僅かに変化したタンパク質配列を有する。これらペプチド結合が開裂されることによってｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡの作用が活性化され、この作用が細胞の生理機能に働き、標的遺伝子の特異的発現が減少する。
【００２０】
このようにして、細胞の生存に重要な遺伝子の発現が阻止され、当該細胞は死滅することとなる。この場合、ＲＮＡ分子、ｓｉＲＮＡ分子又はＰＮＡ分子は活性化された後、標的プロテアーゼのｍＲＮＡと相互作用し、ｓｉＲＮＡの場合は特異的なエンドリボヌクレアーゼと共に「ＲＩＳＣ」（ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体）と呼ばれるＲＮＡタンパク質複合体を形成する。このＲＩＳＣ複合体は標的ｍＲＮＡと結合して、エンドヌクレアーゼが標的ｍＲＮＡを切断する。このようにして、公知の方式で遺伝子発現が阻止され、それによって標的タンパク質の発生が阻害される。活性化されたＰＮＡ分子を使用すれば、標的ｍＲＮＡと結合して翻訳が妨げられる。
【００２１】
このように、例えばウイルス感染の場合には投与されたプロテアーゼ阻害剤が特定の標的プロテアーゼと結合してこれを有効に阻害し、それによってウイルスの複製を妨げるか、或いは上述のように標的プロテアーゼが（たとえ僅かでも）変化したためにプロテアーゼ阻害剤が標的プロテアーゼと結合できない（又は結合できなくなった）場合（従って標的プロテアーゼが活性状態に留まるか、或いは再び活発になってウイルスの複製が可能となった場合）には、まさにこの（プロテアーゼ阻害剤によって阻害され得なかった）標的プロテアーゼが前記ペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡを活性化し、それによりウイルスに感染した細胞は死滅することになる。同じことは、プロテアーゼ阻害剤が標的プロテアーゼと結合しても標的プロテアーゼの作用を完全に阻止できず、ある程度の標的プロテアーゼの残留活性が残っていて、同様にウイルス複製が抑止できない場合にも該当する。
【００２２】
例としてＨＩＶの治療を挙げると、ＨＩウイルスの標的プロテアーゼが直接プロテアーゼ阻害剤によって直接阻害されて複製の低減に至る。或いは、経験によればその後プロテアーゼがプロテアーゼ阻害剤によって阻害されない、又は僅かしか阻害されないＨＩウイルス突然変異体が選択され、前記ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡから出発して相補的な作用機構が活性化される。
【００２３】
このようにして例えば細胞の生存に重要な遺伝子の発現が減少して、細胞自然死又は壊死のプロセスが誘起される。
【００２４】
本発明において使用できるプロテアーゼ阻害剤としては、公知の小分子、ペプチド、タンパク質、特に抗体及びこれらの化学修飾体が挙げられる。
【００２５】
少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤と少なくとも一種のペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡは、両者が共有結合した１個の共通の分子で同時に投与できることが有利である。
【００２６】
しかしながら、少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤と少なくとも一種のペプチド不活化ｓｉＲＮＡとを互いに共有結合していない別個の複合体として、同時に又は少し時間をずらして投与することも可能である。
【００２７】
本発明による生物学的有効分子群の投与は、１回又は複数回行なうことができる。後者の場合は、少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤と少なくとも一種のペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡを引き続き投与する際には、必要に応じて濃度及び／又は分子構造によりウイルス、バクテリア、寄生生物に感染した細胞及び／又は腫瘍細胞に及ぼす作用を変化させて用いることができる。
【００２８】
作用を阻害された標的プロテアーゼは適用形態に応じて、ウイルスプロテアーゼ又は寄生生物若しくはバクテリアのプロテアーゼであることができる。ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡ又はＰＮＡを阻害するためのペプチドは、天然又は改変のプロテアーゼの切断部位を開裂部位として有することを特徴とし、これがプロテアーゼによって認識され開裂される。特に前記切断部位はプロテアーゼの突然変異体によっても認識され切断される。
【００２９】
生物学的有効分子群を投与する際に、これと共にトランスフェクション試薬、特に脂質、ポリエチレンイミン、ナノ粒子、ポリマー、デキストランを投与することも有利である。
【００３０】
少なくとも一種のプロテアーゼ阻害剤と少なくとも一種のペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＰＮＡ又はＲＮＡの投与と併せて更なる作用物質を投与することもできる。この作用物質は、ウイルス、バクテリア、寄生生物に感染した細胞及び／又は腫瘍細胞の細胞特性、又はウイルスの複製、感染性、カプセル化若しくは放出性、バクテリア又は寄生生物の複製、感染性、物質代謝若しくは放出性にも影響を及ぼす。
【００３１】
ペプチド不活化ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡ又はＰＮＡは、特に受容体リガンドシステム、Ｔａｔタンパク質のフランキング、アプタマー複合体の結合及びペグ化を目的として、少なくとも一種の更なる構造体又は機能要素と結合することができる。
【００３２】
本発明は、ウイルス感染細胞、寄生生物感染細胞、バクテリア感染細胞及び腫瘍細胞の治療に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】プロテアーゼ阻害剤とペプチド不活化ｓｉＲＮＡとから成る生物学的有効分子群を細胞内に導入することにより、細胞に及ぼす代替的な影響を示す概略図。ａ）は阻害すべき特定の標的プロテアーゼと導入された生物学的有効分子群（プロテアーゼ阻害剤とペプチドにより不活化された不活性ｓｉＲＮＡ）を有する細胞、ｂ）はプロテアーゼ阻害剤による細胞への生理学的影響、ｃ）は活性化されたｓｉＲＮＡによる細胞への生理学的影響を示す。
【図２】プロテアーゼ阻害剤とペプチド不活化ｓｉＲＮＡが共有結合した生物学的有効分子群を示す。
【図３】プロテアーゼ阻害剤とペプチド不活化ｓｉＲＮＡが共有結合しておらず、複合体（例えばトランスフェクションシステム）として投与される生物学的有効分子群を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
以下、図面に示された実施例に基づいて本発明を詳細に説明する。
図１ａに、作用が阻害されるべき標的プロテアーゼ２を有するウイルスに感染した細胞１を示す。本発明によれば、ウイルス感染細胞１に、標的プロテアーゼ２に対する公知のプロテアーゼ阻害剤３、例えばＨＩＶ感染用のインビラーゼ、ノービル、ペントタール、アンプレナビル又はビラセプトと、ペプチド結合４により不活化された、やはり公知のペプチド不活化ｓｉＲＮＡ５とから成る生物学的有効分子群が投与される。ペプチド不活化ｓｉＲＮＡ５のペプチド結合４は、ｓｉＲＮＡ５を活性化するために標的プロテアーゼ２によって開裂させることができ、そのために開裂部位におけるペプチド結合４のタンパク質配列は標的プロテアーゼの配列と完全に同一であるか、或いは若干の改変を有する。
【００３５】
図ｌｂは、プロテアーゼ阻害剤３が標的プロテアーゼ２と結合してこれを有効に阻止する様子を示す。この場合、ペプチド不活化ｓｉＲＮＡ５のペプチド結合４は標的プロテアーゼ２によって開裂されず、その障害作用が阻害された標的プロテアーゼ２は阻害されたプロテアーゼ６に移行する。ペプチド不活化ｓｉＲＮＡ５は細胞１内で作用しない状態に留まる。
【００３６】
プロテアーゼ阻害剤３が標的プロテアーゼ２と結合しない場合、或いは完全に結合できないため標的プロテアーゼ２又はその障害作用を完全に阻害できない場合（例えば軽い突然変異によって）には、標的プロテアーゼ２は少なくともある程度の残留活性を保持しており、上述のペプチド不活化ｓｉＲＮＡ５のペプチド結合４を開裂させることができる。この場合、図ｌｃに示すように、プロテアーゼ阻害剤３ではなく、ペプチド不活化ｓｉＲＮＡ５が標的プロテアーゼ２と結合する。記号で略示するようなペプチド結合４の開裂によりｓｉＲＮＡが活性化され、例えば細胞１の生存に重要な遺伝子の発現が阻害されて細胞１は死滅する。
【００３７】
細胞１に生理学的に影響を及ぼすために細胞１内に導入される生物学的有効分子群は、特に両成分を共に投与する目的で、プロテアーゼ阻害剤３をペプチド結合４を有するペプチド不活化ｓｉＲＮＡ５と共有結合させることができる（図２参照）。この場合、結合はプロテアーゼ阻害剤３が標的プロテアーゼ２と結び付いてこれを阻害できるよう立体的に形成される。万一プロテアーゼ阻害剤の効力がないか、或いは阻害されない若しくは完全に阻害されない標的プロテアーゼの効力がある場合（図ｌｃ参照）には、ｓｉＲＮＡ５を活性化するために、上述のようにｓｉＲＮＡ５を不活化するペプチドがプロテアーゼ阻害剤３と共にｓｉＲＮＡ５から分離される。
【００３８】
生物学的有効分子群は、例えばポリエチレンイミン、デキストラン又はポリエチレングリコールから成る複合体７（図３参照）としても適用できる。この場合、そのような複合体は特にトランスフェクションシステム（明示せず）として細胞内に導入するか、及び／又はプロテアーゼ阻害剤３とペプチド不活化ｓｉＲＮＡ５を安定化する目的で用いられる。更に図３にはプロテアーゼ阻害剤３とペプチド不活化ｓｉＲＮＡ５が互いに共有結合していない状態を示す。共有結合がない場合、分子成分を別個に、必要に応じて時間をずらして投与することが可能となる。
【００３９】
しかしながら、生物学的有効分子群と上述の複合体７の組み合わせは、プロテアーゼ阻害剤３とペプチド不活化ｓｉＲＮＡ５が共有結合された状態でも使用することができる。
【符号の説明】
【００４０】
１  ウイルス感染細胞
２  障害作用を有する標的プロテアーゼ
３  プロテアーゼ阻害剤
４  ペプチド結合
５  ペプチド不活化不活性ｓｉＲＮＡ
６  阻害されたプロテアーゼ
７  複合体（例えばトランスフェクションシステム）
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図１ｃ】
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【図２】
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【図３】
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