(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物
【化１】
0005945592.tif 000083
（式中、
Ｒ１は
【化２】
0005945592.tif 000084
であり；
Ｒ２は水素、２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、またはベンジルであり、ここで、ベンジルは置換されていてもよく（置換基は、１〜２個のフッ素原子、１〜３個のフッ素原子で置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル、または−Ｃ１−Ｃ３アルコキシである）；
Ｒ３は水素、２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、またはベンジルであり、ここで、ベンジルは置換されていてもよく（置換基は、１〜２個のフッ素原子、１〜３個のフッ素原子で置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル、または−Ｃ１−Ｃ３アルコキシである）；
Ｒ４は水素、（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル、または２−アミノアセチルであり；
Ｒ５は置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである；
但し、Ｒ２および／またはＲ３が水素でない場合、Ｒ４は水素であり；
但し、硫黄原子が、Ｓ立体配置におけるビシクロ［３．１．０］ヘキサン環系に結合される場合、Ｒ５は水素であってもよい）
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｒ１が
【化３】
0005945592.tif 000085
であり；
Ｒ２が水素、２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、またはベンジルであり、ここで、ベンジルは置換されていてもよく（置換基は、１〜２個のフッ素原子、１〜３個のフッ素原子で置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル、または−Ｃ１−Ｃ３アルコキシである）；
Ｒ３が水素、２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、またはベンジルであり、ここで、ベンジルは置換されていてもよく（置換基は、１〜２個のフッ素原子、１〜３個のフッ素原子で置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル、または−Ｃ１−Ｃ３アルコキシである）；
Ｒ４が水素、（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル、または２−アミノアセチルであり；
Ｒ５が置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである；
但し、Ｒ２および／またはＲ３が水素でない場合、Ｒ４は水素である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
Ｒ２が水素、２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；
Ｒ３が水素、２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルである、請求項１または２に記載の化合物、あるいはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
Ｒ１が
【化４】
0005945592.tif 000086
である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５】
Ｒ２が水素である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６】
Ｒ３が水素である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項７】
Ｒ４が水素である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩を含む、双極性障害、統合失調症、および全般性不安障害からなる群から選択される精神疾患を治療する医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｍＧｌｕ２受容体アゴニスト化合物、特にそれらのプロドラッグ、およびそれらの塩ならびにそのような化合物、特にプロドラッグ、およびそれらの塩の医薬組成物および治療的使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｌ−グルタミン酸塩は中枢神経系における主要な興奮性神経伝達物質であり、興奮性アミノ酸と称される。代謝型グルタミン酸（ｍＧｌｕ）受容体は神経細胞の興奮性を調節するＧタンパク質共役受容体である。神経学的または精神学的障害の治療は、ｍＧｌｕ興奮性アミノ酸受容体の選択的活性化と関連付けられている。種々の研究により、統合失調症を治療するためのＩＩ群ｍＧｌｕ受容体（それはｍＧｌｕ２および／またはｍＧｌｕ３を含む）活性化が支持されている。より特には、最近のデータにより、ｍＧｌｕ２／３受容体アゴニストが抗精神病特性を有し、統合失調症を治療するための新規代替法を提供し得ることが実証されている。ｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３受容体ノックアウトマウスにおける研究により、ｍＧｌｕ２／３受容体アゴニストの抗精神病様活性がｍＧｌｕ２媒介性であることが示唆されている。また、研究により、ｍＧｌｕ２／３アゴニストが、抗不安、抗鬱、および神経防護特性を有することが実証されている。したがって、ｍＧｌｕ２受容体アゴニストは、躁鬱病、統合失調症、および全般性不安障害として知られている、双極性障害（躁鬱病障害としても知られている）などの精神疾患の治療に有用であり得る。
【０００３】
特許文献１は、代謝型グルタミン酸受容体のアンタゴニストまたはアゴニストであると主張されている特定の４−置換ビシクロ［３．１．０］ヘキサン化合物を開示している。特許文献２は、ｍＧｌｕ２受容体アゴニスト化合物のプロドラッグ形態であると主張されているビシクロ［３．１．０］ヘキサンおよびヘテロビシクロ［３．１．０］ヘキサン化合物を開示している。
【０００４】
過剰なグルタミン酸作動性傾向は中枢神経系の多くの疾患状態に関与しているが、このような病態生理学的状態を正すための効果的な薬剤は臨床診療を欠いている。特に、臨床応用は、適切な薬物様特性を有するｍＧｌｕ２アゴニストの欠如に起因して実現されていない。したがって、有効なｍＧｌｕ２アゴニストについての必要性が依然として存在する。また、効果的なｍＧｌｕ２アゴニストについての必要性も存在する。本発明は、有効および効果的なｍＧｌｕ２アゴニストである、臨床開発に適した高い生物学的利用能を提供する、特定のそれらのプロドラッグを含む、新規４−置換ビシクロ［３．１．０］ヘキサンを提供する。本発明のこのような新規化合物は、双極性障害、統合失調症、および全般性不安障害などの精神疾患の有効な効果的な治療についての必要性に対処し得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第９７１７９５２号
【特許文献２】国際公開第０３１０４２１７号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、以下の式の化合物：
【化１】
0005945592.tif 000002
（式中、Ｒ１は、
【化２】
0005945592.tif 000003
であり；
Ｒ２は水素、２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、またはベンジルであり、ここで、ベンジルは置換されていてもよく（置換基は、１〜２個のフッ素原子、１〜３個のフッ素原子で置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル、または−Ｃ１−Ｃ３アルコキシである）；Ｒ３は、水素、２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、またはベンジルであり、ここで、ベンジルは置換されていてもよく（置換基は、１〜２個のフッ素原子、１〜３個のフッ素原子で置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル、または−Ｃ１−Ｃ３アルコキシである）；Ｒ４は、水素、（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル、または２−アミノアセチルであり；Ｒ５は置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである；但し、Ｒ２および／またはＲ３が水素でない場合、Ｒ４は水素であり；但し、Ｒ４が水素でない場合、Ｒ２および／またはＲ３は水素であり；但し、硫黄原子がＳ立体配置におけるビシクロ［３．１．０］ヘキサン環系に結合される場合、Ｒ５は水素であってもよい）
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【０００７】
本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、双極性障害、統合失調症、および全般性不安障害からなる群から選択される精神疾患を治療する方法を提供する。
【０００８】
本発明はまた、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、疼痛を治療する方法を提供する。
【０００９】
本発明はまた、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を、それを必要とする患者に投与することを含む、薬物乱用を治療する方法を提供する。
【００１０】
本発明は、本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を提供する。本発明は、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に、本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態において、製剤はさらに、１種以上の他の治療剤を含む。
【００１１】
本発明は、療法に使用するため、特に精神疾患の治療のための本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。さらに、本発明は、精神疾患を治療するための医薬を製造するための本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明はまた、精神疾患の治療に使用するための本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１２】
本発明は、療法に使用するため、特に疼痛の治療のための本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。さらに、本発明は、疼痛を治療するための医薬を製造するための本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明はまた、疼痛の治療に使用するための本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１３】
本発明は、療法に使用するため、特に薬物乱用の治療のための本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。さらに、本発明は、薬物乱用を治療するための医薬を製造するための本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明はまた、薬物乱用の治療に使用するための本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１４】
さらに、本発明は、精神疾患の治療に適合した医薬製剤を提供する。さらに、本発明は、精神疾患が、双極性障害、統合失調症、および全般性不安障害からなる群から選択される、本明細書に記載される方法および使用の好ましい実施形態を提供する。
【００１５】
さらに、本発明は、疼痛の治療に適合される医薬製剤を提供する。なおさらに、本発明は、薬物乱用の治療に適合した医薬製剤を提供する。
【００１６】
上記の式および明細書全体にわたって使用される一般的な化学用語はそれらの通常の意味を有する。例えば、「−Ｃ１−Ｃ３アルキル」という用語は−Ｃ１−Ｃ３アルキル基であり、メチル、エチル、プロピル、およびイソ−プロピルを指す。「−Ｃ１−Ｃ３アルコキシ」という用語は酸素原子に結合した−Ｃ１−Ｃ３アルキル基であり、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、およびイソ−プロポキシを指す。
【００１７】
「窒素保護基」または「アミノ保護基」および「酸素保護基」または「カルボキシル保護基」という用語は、計画される反応条件に対して安定であり、再生アミンまたは酸と適合する試薬および反応条件により選択的に除去され得る部分を意味すると考慮される。そのような基は当業者に周知であり、文献に記載されている。例えば、Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第４版，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，（２００７）を参照のこと。
【００１８】
当業者は、例えば以下の（１）に示されているように、本発明の化合物が互変異性型で存在し得ることを理解するであろう。本明細書において本発明の化合物の特定の互変異性体の１つに対して言及する場合、互変異性型およびそれらの全ての混合物の両方を包含することは理解される。
【化３】
0005945592.tif 000004
【００１９】
当業者は、本発明の化合物が、少なくとも５個のキラル中心を含有するコアからなることを理解するであろう。
【化４】
0005945592.tif 000005
【００２０】
上記の（２）に例示したように、２〜５で標識した原子において絶対配置を有する化合物が本発明の好ましい化合物である。１で標識した原子において、破線の結合によって示したように環の平面位置に対して下方位置において硫黄原子がビシクロ［３．１．０］ヘキサン環系に結合される場合、Ｒ立体配置が定義される。反対に、中実のＶ字形の結合により示したように環の平面位置に対して上方位置において硫黄原子がビシクロ［３．１．０］ヘキサン環系に結合される場合、Ｓ立体配置が定義される。
【００２１】
さらに、当業者は、さらなるキラル中心が、特定の可変物を選択することによって本発明の化合物において生成され得ることを理解するであろう。このような発生において、本発明は、全ての個々の鏡像異性体またはジアステレオマー、ならびにラセミ体を含む前記化合物の鏡像異性体およびジアステレオマーの混合物を意図する。
【００２２】
当業者はまた、全てのキラル中心についてのカーン・インゴルド・プレローグ（Ｃａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ）（Ｒ）または（Ｓ）指定は、特定の化合物の置換パターンに応じて変化することを理解するであろう。単一の鏡像異性体またはジアステレオマーは、キラル試薬で開始して、または立体選択的もしくは立体特異的合成技術により調製され得る。あるいは、単一の鏡像異性体またはジアステレオマーは、本発明の化合物の合成における任意の簡便な点において標準的なキラルクロマトグラフまたは結晶化技術により混合物から単離されてもよい。本発明の化合物の単一の鏡像異性体およびジアステレオマーが本発明の好ましい実施形態である。
【００２３】
本発明の化合物は、例えば、複数の無機酸および有機酸と反応して、薬学的に許容可能な酸付加塩または塩基付加塩を形成できる。薬学的に許容可能な塩およびそれらを調製するための一般的な方法は当該技術分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ，（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００２）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」，Ｊｏｕｒａｎｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．６６，Ｎｏ．１，１９７７年１月を参照のこと。好ましい薬学的に許容可能な塩は塩酸と形成される塩である。
【００２４】
本発明の化合物の全てはｍＧｌｕ２のアゴニストとして有用であるが、特定のクラスの化合物が好ましい。以下の段落にそのような好ましいクラスを記載する：
Ｒ１は
【化５】
0005945592.tif 000006
であり；
Ｒ１は
【化６】
0005945592.tif 000007
であり；
Ｒ２は水素であり；
Ｒ２は２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；
Ｒ２は水素、２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；
Ｒ２は１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；
Ｒ３は水素であり；
Ｒ３は２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；
Ｒ３は１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；
Ｒ３は水素、２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；
Ｒ４は水素であり；
Ｒ４は（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル、または２−アミノアセチルであり；
Ｒ５は１〜３個のフッ素原子、−ＮＨ２、またはシクロプロピルで置換されていてもよいＣ１−Ｃ３アルキルである。
【００２５】
本発明の化合物は薬学的に許容可能な塩である。
【００２６】
本発明の化合物は塩酸塩である。
【００２７】
好ましい実施形態は、Ｒ１が
【化７】
0005945592.tif 000008
であり；Ｒ２が水素、２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、またはベンジルであり、ここで、ベンジルは置換されていてもよく（置換基は、１〜２個のフッ素原子、１〜３個のフッ素原子で置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル、または−Ｃ１−Ｃ３アルコキシである）；Ｒ３が水素、２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、またはベンジルであり、ここで、ベンジルは置換されていてもよく（置換基は、１〜２個のフッ素原子、１〜３個のフッ素原子で置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル、または−Ｃ１−Ｃ３アルコキシである）；Ｒ４が水素、（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル、または２−アミノアセチルであり；Ｒ５が置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである；但し、Ｒ２および／またはＲ３が水素でない場合、Ｒ４は水素であり；但し、Ｒ４が水素でない場合、Ｒ２および／またはＲ３は水素である、本発明の化合物、あるいはその薬学的に許容可能な塩に関する。
【００２８】
別の好ましい実施形態は、Ｒ１が
【化８】
0005945592.tif 000009
であり；Ｒ２が水素、２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；Ｒ３が水素、２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；Ｒ４が水素、（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル、または２−アミノアセチルであり；Ｒ５が置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである；但し、Ｒ２および／またはＲ３が水素でない場合、Ｒ４は水素であり；但し、Ｒ４が水素でない場合、Ｒ２および／またはＲ３が水素である、本発明の化合物、あるいはその薬学的に許容可能な塩に関する。
【００２９】
さらに好ましい実施形態は、Ｒ１が
【化９】
0005945592.tif 000010
であり；Ｒ２が水素、２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；Ｒ３が水素、２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；Ｒ４が水素、（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル、または２−アミノアセチルであり；Ｒ５が置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである；但し、Ｒ２および／またはＲ３が水素でない場合、Ｒ４は水素であり；但し、Ｒ４が水素でない場合、Ｒ２および／またはＲ３は水素であり；但し、硫黄原子がＳ立体配置におけるビシクロ［３．１．０］ヘキサン環系に結合される場合、Ｒ５は水素であってもよい、本発明の化合物、あるいはその薬学的に許容可能な塩に関する。
【００３０】
別の好ましい実施形態は、
Ｒ１が
【化１０】
0005945592.tif 000011
であり；Ｒ２が水素または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；Ｒ３が水素または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；Ｒ４が水素、（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル、または２−アミノアセチルであり；Ｒ５が置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである；但し、Ｒ２および／またはＲ３が水素でない場合、Ｒ４は水素であり；但し、Ｒ４が水素でない場合、Ｒ２および／またはＲ３が水素である、本発明の化合物、あるいはその薬学的に許容可能な塩に関する。
【００３１】
さらに好ましい実施形態は、Ｒ１が
【化１１】
0005945592.tif 000012
であり；Ｒ２が水素または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；Ｒ３が水素または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；Ｒ４が水素、（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル、または２−アミノアセチルであり；Ｒ５が置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである；但し、Ｒ２および／またはＲ３が水素でない場合、Ｒ４は水素であり；但し、Ｒ４が水素でない場合、Ｒ２および／またはＲ３は水素であり；但し、硫黄原子がＳ立体配置におけるビシクロ［３．１．０］ヘキサン環系に結合される場合、Ｒ５は水素であってもよい、本発明の化合物、あるいはその薬学的に許容可能な塩に関する。
【００３２】
好ましい実施形態は、Ｒ１が
【化１２】
0005945592.tif 000013
であり；Ｒ２が２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；Ｒ３が２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；Ｒ４が水素であり；Ｒ５が置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである、本発明の化合物、あるいはその薬学的に許容可能な塩に関する。
【００３３】
別の好ましい実施形態は、
Ｒ１が
【化１３】
0005945592.tif 000014
であり；Ｒ２が２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；Ｒ３が２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル、または１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、もしくは−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；Ｒ４が水素であり；Ｒ５が置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである；但し、硫黄原子が、Ｓ立体配置におけるビシクロ［３．１．０］ヘキサン環系に結合される場合、Ｒ５は水素であってもよい、本発明の化合物、あるいはその薬学的に許容可能な塩に関する。
【００３４】
さらに好ましい実施形態は、Ｒ１が
【化１４】
0005945592.tif 000015
であり；Ｒ２が１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、または−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；Ｒ３が１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、または−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；Ｒ４が水素であり；Ｒ５が置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである、本発明の化合物、あるいはその薬学的に許容可能な塩に関する。
【００３５】
さらに好ましい実施形態は、Ｒ１が
【化１５】
0005945592.tif 000016
であり；Ｒ２が１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、または−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；Ｒ３が１〜２個のフッ素原子、−ＣＦ３、または−ＯＣＨ３で置換されていてもよいベンジルであり；Ｒ４が水素であり；Ｒ５が置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである；但し、硫黄原子が、Ｓ立体配置におけるビシクロ［３．１．０］ヘキサン環系に結合される場合、Ｒ５は水素であってもよい、本発明の化合物、あるいはその薬学的に許容可能な塩に関する。
【００３６】
別のさらに好ましい実施形態は、Ｒ１が
【化１６】
0005945592.tif 000017
であり；Ｒ２が水素であり；Ｒ３が水素であり；Ｒ４が（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−ペンタノイル、または２−アミノアセチルであり；Ｒ５が置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである、本発明の化合物、あるいはその薬学的に許容可能な塩に関する。
【００３７】
追加のさらに好ましい実施形態は、Ｒ１が
【化１７】
0005945592.tif 000018
であり；Ｒ２が水素であり；Ｒ３が水素であり；Ｒ４が（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブタノイル、（２Ｓ）−２−アミノ−４−メチル−４−ペンタノイル、または２−アミノアセチルであり；Ｒ５が置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである；但し、硫黄原子がＳ立体配置におけるビシクロ［３．１．０］ヘキサン環系に結合される場合、Ｒ５は水素であってもよい、本発明の化合物、あるいはその薬学的に許容可能な塩に関する。
【００３８】
特に好ましい実施形態は、Ｒ１が
【化１８】
0005945592.tif 000019
であり；Ｒ２が水素であり；Ｒ３が水素であり；Ｒ４が水素であり；Ｒ５が置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである、本発明の化合物、あるいはその薬学的に許容可能な塩に関する。
【００３９】
特に好ましい実施形態は、Ｒ１が
【化１９】
0005945592.tif 000020
であり；Ｒ２が水素であり；Ｒ３が水素であり；Ｒ４が水素であり；Ｒ５が置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである；但し、硫黄原子がＳ立体配置におけるビシクロ［３．１．０］ヘキサン環系に結合される場合、Ｒ５は水素であってもよい、本発明の化合物、あるいはその薬学的に許容可能な塩に関する。
【００４０】
別の特に好ましい実施形態は、Ｒ１が
【化２０】
0005945592.tif 000021
であり；Ｒ２が水素であり；Ｒ３が水素であり、Ｒ４が水素であり；Ｒ５が置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである、本発明の化合物、あるいはその薬学的に許容可能な塩に関する。
【００４１】
別の特に好ましい実施形態は、Ｒ１が
【化２１】
0005945592.tif 000022
であり；Ｒ２が水素であり；Ｒ３が水素であり、Ｒ４が水素でありＲ５が置換されていてもよい−Ｃ１−Ｃ３アルキル（置換基は、１〜３個のフッ素原子）、−ＮＨ２、またはシクロプロピルである；但し、硫黄原子がＳ立体配置におけるビシクロ［３．１．０］ヘキサン環系に結合される場合、Ｒ５は水素であってもよい、本発明の化合物、あるいはその薬学的に許容可能な塩に関する。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
本発明の化合物、またはその塩は、当該技術分野において公知の様々な手順により調製され得、それらの一部は以下のスキーム、調製例および実施例に例示される。記載される経路の各々についての特定の合成工程は、本発明の化合物、またはその塩を調製するために、異なる方法で組み合わされてよく、または異なるスキームからの工程と合わされてもよい。以下のスキームにおける各工程の生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、粉砕、および結晶化を含む、従来の方法によって回収されてもよい。
【００４３】
特定の立体化学中心は指定されていないままであり、特定の置換基は、明確さの目的のために以下のスキームにおいて除外されており、スキームの教示を限定するものと決して解釈されるべきではない。さらに、個々の異性体、鏡像異性体、またはジアステレオマーは、キラルクロマトグラフィーなどの方法によって本発明の化合物の合成において任意の簡便な点で分離されてもよい。さらに、以下のスキームに記載される中間体は、カルボキシルおよびアミノ基についての複数の保護基を含有する。可変保護基は、特定の反応条件および実施される特定の変換に応じて各発生において同じであっても、異なっていてもよい。保護および脱保護条件は当業者に周知であり、文献に記載されている。例えば、Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，上記を参照のこと。
【００４４】
本明細書に使用される略語は、Ａｌｄｒｉｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．１７，Ｎｏ．１，１９８４に従って定義される。他の略語は以下のように定義される：「トシレート」はｐ−トルエンスルホニルであり；「メシレート」はメタンスルホニルであり；「ＤＩＰＥＡ」はジイソプロピルエチルアミンを指し；「ＤＩＣ」はジイソプロピルカルボジイミドを指し；「ＨＡＴＵ」は２−（１Ｈ−７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートメタンアミニウムを指し；「ＨＢＴＵ」はＯ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェートを指し；「ＨＯＡｔ」は１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾールを指し；「ＰｙＢＯＰ」はベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートを指し；「ＰｙＢｒｏｐ」はブロモ−トリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートを指し；「ＤＭＡＰ」は４−ジメチルアミノピリジンを指し；「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し；「ＳＣＸ」は強陽イオン交換であり；「Ｐｒｅｐ  Ｎｏ」は調製例番号であり；「Ｅｘ  Ｎｏ」は実施例番号である。
【００４５】
以下のスキームにおいて、他に示さない限り、全ての置換基は以前に定義した通りである。試薬および出発物質は一般に当業者に容易に利用可能である。他のものは、公知の構造的に同様の化合物の合成と類似した有機および複素環化学の標準的な技術ならびに任意の新規手順を含む以下の調製例および実施例に記載されている手順により作製され得る。
【００４６】
【化２２】
0005945592.tif 000023
スキームＩは式５の化合物の一般的合成を例示する。「ＰＧ１」はエステルなどのカルボキシル基のために開発された保護基である。「ＰＧ２」はカルバメートおよびアミドなどのアミノ基のために開発された保護基である。そのような保護基は周知であり、当該技術分野において理解されている。「ＬＧ」はトシレートまたはメシレートなどの脱離基である。したがって、「ＬＧ−ハロゲン化物」はパラ−トルエンスルホニルクロリドまたはメタンスルホニルクロリドなどの試薬である。
【００４７】
式１の化合物は、ジクロロメタンなどの適切な溶媒中のジメチルアミノピリジンまたはトリエチルアミンなどの適切な塩基の存在下で式２の化合物と反応して、式３の化合物が得られる。式５の化合物は、ジメチルホルムアミドなどの適切な溶媒中の炭酸カリウムまたは炭酸ナトリウムなどの適切な塩基の存在下で式３の化合物と式４の適切な化合物との反応、その後の、当該技術分野において周知で理解されている、保護基の除去を促進する条件から得られる。式５の化合物は、遊離塩基または塩酸塩などの適切な塩として単離され得る。
【００４８】
【化２３】
0005945592.tif 000024
スキームＩＩは式７の化合物の一般的合成を例示する。「ＰＧ１」および「ＰＧ２」は上記のスキーム１に定義されているものと同じである。
【００４９】
式１の化合物は、トルエンまたはテトラヒドロフランなどの適切な溶媒中でトリフェニルホスフィン（ｔｒｉｐｈｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｉｎｅ）およびＢｒ２と反応して、得られる式６のブロモ化合物が得られる。式７の化合物は、ジメチルホルムアミドなどの適切な溶媒中の炭酸カリウムなどの適切な塩基の存在下で、式６の化合物と式４の適切な化合物との反応、その後の、当該技術分野において周知で理解されている保護基の除去を促進する条件から得られる。式７の化合物は、遊離塩基または塩酸塩などの
適切な塩として単離され得る。
【００５０】
【化２４】
0005945592.tif 000025
スキームＩＩＩは式１１の化合物を生成するための一般的合成を例示している。「ＰＧ１」および「ＰＧ２」は上記のスキームＩに定義されているものと同じである。Ｒ４は水素ではない。
【００５１】
式８の化合物は適切な脱保護条件に供されて、「ＰＧ２」の除去がもたらされ、式９の化合物が得られる。このような条件は当該技術分野において周知であり、理解されている。式１１の化合物は、適切なカップリング条件下で式９の化合物と式１０の化合物との反応、その後の、当該技術分野において周知で理解されている保護基の除去を促進する条件から得られる。当業者は、カルボン酸およびアミドの反応から得られるアミド形成のための複数の方法および試薬が存在することを認識するであろう。例えば、適切なカップリング条件は、カップリング試薬およびＤＩＰＥＡまたはトリエチルアミンなどのアミン塩基の存在下で、適切な式９の化合物と適切な式１０の酸との反応を含む。カップリング試薬は、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＥＤＣＩなどのカルボジイミド、ならびにＨＯＢｔおよびＨＯＡｔなどの芳香族カップリング試薬を含む。さらに、ウロニウムまたはＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＰｙＢＯＰ、およびＰｙＢｒＯＰなどの非求核アニオンのホスホニウム塩が、多くの従来のカップリング試薬の代わりに使用されてもよい。ＤＭＡＰなどの添加剤が反応を向上させるために使用されてもよい。式１１の化合物は、遊離塩基または塩酸塩などの適切な塩として単離されてもよい。
【００５２】
【化２５】
0005945592.tif 000026
スキームＩＶは式１４の化合物を生成するための一般的合成を例示する。「ＰＧ１」および「ＰＧ２」は上記のスキームＩに記載されている通りである。
【００５３】
式１２の化合物は、式８の化合物を、酸のみの脱保護をもたらす適切な脱保護条件に供することによって得られる。そのような条件は当該技術分野において周知であり、理解されている。式１３の化合物は、適切な条件下でＲ２ＯＨを用いた生じる遊離カルボン酸部分のエステル化により得られる。Ｒ２＝Ｒ３であることに留意されたい。当業者は、遊離カルボン酸のエステル化をもたらす複数の方法および試薬が存在することを理解するであろう。例えば、アルコール成分などの過剰な試薬の１つが反応混合物に加えられてもよい。あるいは、生じる水が蒸留または脱水剤によって反応から除去されてもよい。最後に、得られる式１３の化合物はアミンの脱保護をもたらす適切な条件に供される。そのような条件は当該技術分野において周知であり、理解されている。式１４の化合物は、遊離塩基または塩酸塩などの適切な塩として単離され得る。
【００５４】
あるいは、Ｒ２およびＲ３が異なるジ−エステルが、式７の化合物などの適切な中間体の選択および段階的な保護および脱保護により達成され得る。このような条件は当該技術分野において周知であり、理解されている。
【００５５】
容易に理解されるように、式１の化合物は、本明細書に記載されているものと同様の方法および当該技術分野において周知で、確立されている手順によって即座に調製され得る。容易に理解されるように、本発明の化合物を調製する工程は、合成される特定の化合物、出発化合物、および置換部分の相対的不安定性に応じる。
【実施例】
【００５６】
調製例および実施例
以下の調製例および実施例はさらに本発明を例示する。
【００５７】
本発明の例示した化合物についての命名はＳＹＭＹＸ（登録商標）Ｄｒａｗ３．２またはＡＣＤ／Ｎａｍｅバージョン１２により提供する。
【００５８】
調製例１
Ｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（ｐ−トリルスルホニルオキシ）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化２６】
0005945592.tif 000027
窒素雰囲気下で２口丸底フラスコに、ジクロロメタン（２００ｍＬ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（２０．７ｇ、０．５ｍｏｌ、詳細な合成については国際公開第０３／１０４２１７／Ａ２号を参照のこと）、４−ジメチルアミノピリジン（１０．４ｇ、０．８５ｍｏｌ）、トリエチルアミン（６．９８ｍＬ、０．５ｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホニルクロリド（１０．６ｇ、０．５５ｍｏｌ）を入れ、その混合物を室温で一晩攪拌する。１Ｎの硫酸水素カリウム溶液（２００ｍＬ）、水（１００ｍＬ）を加え、有機層を抽出する。水（２００ｍＬ）、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発乾固する。テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）次いでヘプタン（９０ｍＬ）を加える。混合物を６０℃で加熱し、さらにヘプタン（２００ｍＬ）をゆっくり加える。混合物を室温に冷却する。固体を濾過し、減圧下で乾燥させて、白色固体（２４．６ｇ、８７％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５９０（Ｍ＋２３）。
【００５９】
調製例２
Ｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−４−ブロモ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化２７】
0005945592.tif 000028
新しいトルエン（６６０ｍＬ）にトリフェニルホスフィン（４１．９７ｇ、１５８．４ｍｍｏｌ）を溶解し、黄色が存続するまで臭素（８．１４ｍＬ、１５８．４ｍｍｏｌ）を加える。４５分の間、トルエン（１７６ｍＬ）および無水ピリジン（５２８ｍＬ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（３２．７５ｇ、７９．２ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加える。反応物を７５℃で一晩攪拌する。室温まで冷却し、酢酸エチルで希釈し、濾過し、濃縮乾固する。粗物質をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル中でスラリーにし、濾過して、固体を除去し、濾液を濃縮乾固する。粗物質を、ヘキサン：酢酸エチル（０：１００〜８０：２０）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（７５０ｇ）により精製して、白色固体（２９．５２ｇ、７８％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９８，５００（Ｍ＋２３）。
【００６０】
調製例３
Ｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化２８】
0005945592.tif 000029
ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−４−ブロモ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（２ｇ、４．２０ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール（５２５ｍｇ、５．０４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１．１６ｇ、８．４ｍｍｏｌ）を加える。混合物を８０℃にて一晩攪拌する。室温まで冷却し、酢酸エチルで希釈し、１０％クエン酸およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固する。ヘキサン：酢酸エチル（８０：２０〜０：１００）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（８０ｇシリカカラム）により精製して、標題化合物（１，６４ｇ、７８％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９７（Ｍ＋１）。
【００６１】
表１における以下の化合物を、実質的に調製例３の方法に従って調製例１または調製例２から調製する。
【００６２】
【表１−１】
0005945592.tif 000030
【表１−２】
0005945592.tif 000031
【００６３】
調製例１３
Ｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−［［５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］スルファニル］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化２９】
0005945592.tif 000032
ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（２Ｈ−トリアゾール−４−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１１．８ｍｇ、２０．７７ｍｍｏｌ）および１Ｈ−メルカプト−（トリフルオロメチル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール、ナトリウム塩（７．７ｇ、３８．５ｍｍｏｌ）の溶液を窒素でパージし、７０℃で一晩攪拌する。室温まで冷却し、水で希釈し、酢酸エチルで抽出する。有機層を水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮乾固する。イソヘキサン：酢酸エチル（９５：５〜６０：４０）で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１０．９ｇ、９３．５％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５８７（Ｍ＋２３）。
【００６４】
表２における以下の化合物を実質的に調製例１３の方法に従って調製する。
【００６５】
【表２】
0005945592.tif 000033
【００６６】
調製例１８
ジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩
【化３０】
0005945592.tif 000034
丸底フラスコに、ｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（３．７ｇ、７．４５ｍｍｏｌ）およびエタノール（５０ｍＬ）を入れる。塩化チオニル（２．７１ｍＬ、３７．２５ｍｍｏｌ）（４５℃まで発熱反応）をゆっくり加え、混合物を８０℃で一晩攪拌する。溶媒を真空下で除去して、白色固体（２．８ｇ、９９％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３４１（Ｍ＋１）。
【００６７】
表３における以下の化合物を実質的に調製例１８の方法に従って調製する。
【００６８】
【表３】
0005945592.tif 000035
【００６９】
調製例２１
ジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）アセチル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化３１】
0005945592.tif 000036
ジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩（０．８６９ｇ、２．３１ｍｍｏｌ）に、テトラヒドロフラン（１１．５ｍＬ）を加え、氷水浴で混合物を０〜５℃に冷却する。２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン（４０４．９ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）および（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）酢酸（０．４０４ｇ、２．３１ｍｍｏｌ）を加える。Ｎ−メチルモルホリン（０．５５ｍＬ、５．０７ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、２時間攪拌する。混合物を濾過し、白色固体をテトラヒドロフランで洗浄する。固体を捨て、溶液を濃縮乾固する。ＯＡＳＩＳ（登録商標）ＨＬＢカートリッジ（ＤＭＳＯ中に負荷し、炭酸アンモニウム緩衝溶液ｐＨ＝９／アセトニトリル勾配で溶出する）により精製する。所望の化合物は３：１（炭酸アンモニウム／アセトニトリル）で溶出する。溶媒を除去する。残渣をジクロロメタンに溶解し、水で洗浄する。水相を捨てる。硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、白色固体（４４０ｍｇ、３８％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４９８（Ｍ＋１），５２０（Ｍ＋２３）。
【００７０】
調製例２２
ジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（（Ｓ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−プロピオニルアミノ）−４−（４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化３２】
0005945592.tif 000037
ジクロロメタン（９ｍＬ）中にジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩（３５４ｍｇ、０．８９４ｍｍｏｌ）、（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン酸（２５７ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１０．９２ｍｇ、８９μｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（２１９ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（２０８ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）を合わせ、トリエチルアミン（３７３μＬ、２．６８ｍｍｏｌ）を加える。混合物を窒素雰囲気下で室温にて一晩攪拌する。１０％クエン酸溶液、飽和炭酸水素ナトリウム容器およびブラインで洗浄する。水層を捨て、珪藻土カートリッジで有機層を濾過し、真空下で溶媒を除去する。ジクロロメタン：メタノール（１〜１５％）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（４１２．５ｍｇ、９０．２％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５５２（Ｍ＋１），５３４（Ｍ＋２３）。
【００７１】
表４における以下の化合物を実質的に調製例２２の方法に従って調製する。
【００７２】
【表４】
0005945592.tif 000038
【００７３】
調製例２５
ジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［２−（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−プロピオニルアミノ］−４−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化３３】
0005945592.tif 000039
室温にて無水ジメチルホルムアミド（１２ｍＬ）中にジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩（６５７ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）、ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（７３０ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）および（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロパン酸（３６３ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）を合わせ、ジイソプロピルエチルアミン（３．０ｍＬ、１７．２０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を窒素雰囲気下で一晩室温にて攪拌する。反応混合物を酢酸エチル（６０ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（３０ｍＬ）で洗浄する。水相を酢酸エチルで抽出する。有機相を合わせ、水（３０ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で溶媒を除去する。イソヘキサン：酢酸エチル（９５：５〜１０：９０）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１１０ｇシリカカラム）により精製して、標題化合物（３２１ｍｇ、３８％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６０２（Ｍ＋２３）。
【００７４】
表５における以下の化合物を実質的に調製例２５の方法に従って調製する。
【００７５】
【表５】
0005945592.tif 000040
【００７６】
調製例３１
ジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化３４】
0005945592.tif 000041
１，４−ジオキサン（２７．０７ｍＬ、３１７．０２ｍｍｏｌ）中のジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩（２．０４ｇ、５．４１ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ｄｉｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（２．３９ｇ、１０．８３ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１．８９ｇ、１３．５３ｍｍｏｌ）を加える。１０分後、水（２７．０７ｍＬ、１．５０ｍｏｌ）を加え、室温にて２日間攪拌する。ジオキサンを除去し、酢酸エチルで希釈する。層を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。標題化合物を白色固体（１．９７ｇ、８３％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４１（Ｍ＋１）。
【００７７】
調製例３２
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）アセチル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化３５】
0005945592.tif 000042
テトラヒドロフラン（７ｍＬ）にジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）アセチル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（０．４２０ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を溶解し、次いで２．５Ｍの水酸化リチウム（６．７ｍＬ、１６．８８ｍｍｏｌ）を加える。混合物を室温にて３．５時間攪拌する。反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで洗浄する。有機層を捨てる。水相を１Ｎの塩酸でｐＨ＝２に調整し、酢酸エチルで抽出する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、白色固体（２５０ｍｇ、６６％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４４２（Ｍ＋１），４６４（Ｍ＋２３）。
【００７８】
表６における以下の化合物を実質的に調製例３２の方法に従って調製する。
【００７９】
【表６−１】
0005945592.tif 000043
【表６−２】
0005945592.tif 000044
【００８０】
調製例４２
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化３６】
0005945592.tif 000045
テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中のジエチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１．９ｇ、４．３１ｍｍｏｌ）に、２．５Ｍの水酸化リチウム水溶液（２０．７０ｍＬ、５１．７６ｍｍｏｌ）を加え、室温にて一晩攪拌する。テトラヒドロフランを蒸発させる。水で希釈し、酢酸エチルで洗浄する。有機層を捨てる。水相を５Ｍの塩酸でｐＨ＝２に調整し、酢酸エチルで抽出する。層を分離し、有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。標題化合物を白色固体（１．５８ｇ、９５％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８５（Ｍ＋１）。
【００８１】
調製例４３
（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化３７】
0005945592.tif 000046
２．５Ｍの水酸化ナトリウム（１５．５５ｍＬ、３８．８８ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（２４．３ｍＬ）およびエタノール（９．７２ｍＬ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（２．０ｇ、４．８６ｍｍｏｌ）の攪拌した溶液に加える。反応混合物を６０℃で加熱し、一晩攪拌を維持する。４時間加熱を継続し、次いで酢酸エチルで洗浄する。水相を氷浴中で冷却し、１Ｎの塩酸溶液でｐＨ＝２〜３に酸性化する。酢酸エチルで抽出し（３回）、有機物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、橙色の固体（１．４ｇ、９６％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２２（Ｍ＋２３）。
【００８２】
調製例４４
ジベンジル（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−オキソ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化３８】
0005945592.tif 000047
臭化ベンジル（８．６９ｍＬ、７２．９ｍｍｏｌ）を、乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（６０ｍＬ）中の（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（７．２７ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（１５．８３ｇ、４８．６ｍｍｏｌ）の攪拌した懸濁液に滴下して加える。得られた混合物を窒素下で一晩室温にて攪拌する。水でクエンチし、酢酸エチルで希釈する。水相を酢酸エチルで抽出し（３回）、有機層をブラインおよび水で洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗物質を薄茶色の油状物として得る。酢酸エチル：ヘキサン（２０：８０〜３０：７０）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、ゴム状の黄色い泡状物（９．１５ｇ、７８．５％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０２（Ｍ＋２３）。
【００８３】
調製例４５
ジベンジル（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化３９】
0005945592.tif 000048
−７８℃にて、ＴＨＦ（３０ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）中の１ＭのＬ−セレクトリド溶液を、テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中のビス［（フェニル）メチル］（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−オキソ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（９．１５ｇ、１９．０８ｍｍｏｌ）の攪拌した溶液に滴下して加える。得られた有機混合物を窒素下で１時間４５分攪拌する。−７８℃にて、飽和炭酸水素ナトリウム溶液でクエンチする。水および酢酸エチルで希釈する。層を分離し、有機相をブラインおよび水で洗浄する。硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮乾固して、淡黄色の油状物として粗物質を得る。合わせた物質を、酢酸エチル：ヘキサン（２０：８０〜５０：５０）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、単一の異性体（９．１９ｇ、１００％）として標題生成物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０４（Ｍ＋２３）。
【００８４】
調製例４６
ジベンジル（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（トルエン−４−スルホニルオキシ）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化４０】
0005945592.tif 000049
標題生成物を実質的に調製例１の方法に従って調製する（７５％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６５８（Ｍ＋２３）。
【００８５】
調製例４７
ジベンジル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化４１】
0005945592.tif 000050
１Ｈ−５−メルカプト−１，２，３−トリアゾール、ナトリウム塩二水和物（０．１７４ｇ、１．４２ｍｍｏｌ）を、無水ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）中の（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（トシルオキシ）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸ジベンジルエステル（０．６ｇ、０．９４３ｍｍｏｌ）の攪拌した溶液に加え、７０℃で一晩加熱する。反応混合物を酢酸エチル（６０ｍＬ）で希釈し、有機層をＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、イソヘキサン中の０〜６０％の酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇシリカカラム）により精製して、無色のゴム状物（０．４０５ｇ、７６％収率）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５８７（Ｍ＋２３）。
【００８６】
調製例４８
ビス−（４−メトキシ−ベンジル）−（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化４２】
0005945592.tif 000051
ジクロロメタン（９．６０ｍＬ）中の（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（３６９ｍｇ、０．９５９ｍｍｏｌ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（０．９８５ｇ、２．５９ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．９２０ｍＬ）の懸濁液を１５分間攪拌する。次いで、ベンゼンメタノール、４−メトキシ（０．３６５ｇ、２．５９ｍｍｏｌ）を加え、室温にて一晩攪拌する。溶媒を除去し、ジクロロメタン／メタノール勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１２ｇシリカゲルカートリッジ）により精製して、標題化合物（２４０ｍｇ、４０％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６２５（Ｍ＋１）。
【００８７】
表７における以下の化合物を実質的に調製例４８の方法に従って調製する。
【００８８】
【表７】
0005945592.tif 000052
【００８９】
調製例５０
ビス（２，２−ジメチルプロパノイルオキシメチル）（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化４３】
0005945592.tif 000053
炭酸水素ナトリウム（０．３９３ｇ、４．６８ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム（０．３５１ｇ、２．３４ｍｍｏｌ）およびプロパン酸、２，２−ジメチル−クロロメチルエステル（３５２．６０ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ）を、３ｍＬの乾燥ジメチルホルムアミド中の（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（０．３００ｇ、０．７８０ｍｍｏｌ）の溶液に加える。得られた不均一の混合物を１８時間攪拌する。真空下で溶媒を除去し、水を加え、酢酸エチルで抽出する。層を分離し、有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。粗生成物を、５０％ヘキサン：酢酸エチル混合物で溶出する５ｇのＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ＳＴＲＡＴＡ（商標）順相カートリッジで精製して、標題化合物（９６ｍｇ、２０％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６１３（Ｍ＋１）。
【００９０】
調製例５１
２−ｔｅｒｔ−ブチル−６−エチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩
【化４４】
0005945592.tif 000054
塩化アセチル（１．１２ｍＬ、１５．７１ｍｍｏｌ）を、エタノール（９．１４ｍＬ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−４，６−ジカルボキシレート（１．３ｇ、２．６２ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加える。混合物を密閉管中で５０℃にて２時間加熱する。溶媒を除去して、標題化合物（９５０ｍｇ、９０％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６９（Ｍ＋１）。
【００９１】
調製例５２
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−４−アミノ−６−エトキシカルボニル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−４−カルボン酸塩酸塩
【化４５】
0005945592.tif 000055
酢酸エチル（８ｍＬ）中の塩化水素ガスの飽和溶液に、２−ｔｅｒｔ−ブチル−６−エチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩（９４６ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ）を溶解し、室温にて２５時間攪拌する。溶媒を除去して、標題化合物（８３１ｍｇ、１０１％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３１３（Ｍ＋１）。
【００９２】
調製例５３
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−６−エトキシカルボニル−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−カルボン酸
【化４６】
0005945592.tif 000056
ｄｉｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（９３５．３９ｍｇ、４．２４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（８８８．５ｍｇ、６．３６ｍｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（１０．６１ｍＬ）中の（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−４−アミノ−６−エトキシカルボニル−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−４−カルボン酸塩酸塩（７４０ｍｇ、２．１２ｍｍｏｌ）の懸濁液に加える。混合物を室温で攪拌する。１０分後、水（１０．６１ｍＬ）を加え、室温にて２日間攪拌する。ジオキサンを除去し、酢酸エチルで希釈し、ｐＨを５ＭのＨＣｌで酸性に調整する。層を分離し、有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して、標題化合物（２７０ｍｇ、３１％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１３（Ｍ＋１）。
【００９３】
調製例５４
２−ベンジル−６−エチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化４７】
0005945592.tif 000057
ジクロロメタン（６．５５ｍＬ）中の（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−６−エトキシカルボニル−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−カルボン酸（２７０ｍｇ、０．６５４ｍｍｏｌ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（０．３７３ｇ、０．９８２ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．３４２ｍＬ、１．９６ｍｍｏｌ）の懸濁液を、室温にて１５分間攪拌し、ベンジルアルコール（０．１０１ｍＬ、０．９８２ｍｍｏｌ）を加える。室温にて一晩攪拌する。溶媒を除去し、最初に、ジクロロメタン／メタノール勾配（所望の化合物は６％のメタノールで溶出する）で溶出するシリカカラムクロマトグラフィー（４ｇシリカゲルカートリッジ）により精製し、次いで、３：１アセトニトリル／水で溶出するＷａｔｅｒｓ  ＯＡＳＩＳ（登録商標）ＨＬＢカートリッジにより精製する。標題化合物を白色固体（１００ｍｇ、３０％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５０３（Ｍ＋１）。
【００９４】
実施例１
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（２Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩
【化４８】
0005945592.tif 000058
二臭化亜鉛（０．８８ｇ、３．９１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（３０ｍＬ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（２Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１９４ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の攪拌した溶液に加える。５０℃にて一晩攪拌する。さらに二臭化亜鉛（０．４４ｇ、１．９５ｍｍｏｌ）を加え、出発物質が完全に消費されるまで５０℃で攪拌を継続する。溶媒を蒸発させ、所望の生成物のみが存在するまで、残渣を２Ｍの塩酸水溶液（５ｍＬ）中で５０℃にて攪拌する。反応混合物を冷却し、残渣を、陽イオン交換クロマトグラフィー（ＤＯＷＥＸ（登録商標）５０ＷＸ８−１００）により精製する。化合物を１〜２秒ごとに約１滴の滴下速度でカラムに流す。開始負荷容積を樹脂表面に滴下した後、水（５〜１０ｍＬ）でリンスし、３回繰り返す。流出物のｐＨをモニターし、適用が完了するまで水でのリンスを継続する（ｐＨサイクルを観察した：カラムからの溶出物は最初ｐＨ＝７で、次いでｐＨ＝１に下がり、ｐＨ＝７に戻る）。カラムを、水、水：テトラヒドロフラン（１：１）次いで水の各々の少なくとも１つのカラム容積で洗浄する。１０％ピリジン：水を用いて樹脂から生成物を移動する。さらなる生成物が検出されなくなるまで、１０％ピリジン：水での溶出を継続する。生成物を含有する画分を濃縮して、無色の固体を得る。固体を乾燥させる。２Ｍの塩酸に溶解し、蒸発させて、白色固体（９４ｍｇ、７５％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８５（Ｍ＋１）。
【００９５】
表８における以下の化合物を実質的に実施例１の方法に従って調製する。
【００９６】
【表８】
0005945592.tif 000059
【００９７】
実施例８
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（５−ジフルオロメチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩
【化４９】
0005945592.tif 000060
１，４−ジオキサン（１．６３ｍＬ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−［［５−（ジフルオロメチル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］スルファニル］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（０．３５６ｇ、６５１．３μｍｏｌ）を、塩化水素溶液（ジオキサン中に４Ｍ）に加える。攪拌しながら混合物を５０℃で加熱する。加熱開始後すぐに固体を溶液から沈殿させる。反応混合物を冷却し、減圧下で濃縮する。残渣を、４０ｍＬ／分の流速で６０分にわたってアセトニトリル勾配中の０〜２０％の塩酸（０．０１Ｍ水溶液）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇＳｉＯ２）により精製する。減圧下で濃縮して、油状物として粗物質を得る。同じ条件を使用して再精製する。減圧下で濃縮して、白色固体（０．１９６ｇ、９３％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３５（Ｍ＋１）。
【００９８】
表９における以下の化合物を実質的に実施例８の方法に従って調製する。
【００９９】
【表９】
0005945592.tif 000061
【０１００】
実施例１０
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化５０】
0005945592.tif 000062
１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）中の４Ｍの塩化水素を、１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１．６４ｇ、３．３０ｍｍｏｌ）の溶液に加え、混合物を５０℃で一晩振盪する。濃縮乾固する。陽イオン交換（ＤＯＷＥＸ（登録商標）Ｍａｒａｔｈｏｎ  Ｃ，ＮＡ＋形態強酸性）により精製する。残渣を最小量の水に溶解して、物質を可溶化し、樹脂上に負荷する。樹脂を２カラム体積の水、次いで２カラム体積の水：テトラヒドロフラン（１：１）および２カラム体積の水で連続して洗浄する。２カラム体積の水中の１０％ピリジンで所望の生成物を溶出して、白色固体として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８５（Ｍ＋１）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：４，２５（ｄ，Ｊ＝７，３Ｈｚ，１Ｈ），２，５３−２，３８（ｍ，３Ｈ），２，２３（ｄｄ，Ｊ＝８，１，１６，１Ｈｚ，１Ｈ），１，９５（ｔ，Ｊ＝３，３Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１０１】
表１０における以下の化合物を実質的に実施例１０の方法に従って調製する。
【０１０２】
【表１０】
0005945592.tif 000063
【０１０３】
実施例１３
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−［（５−メチル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）スルファニル］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化５１】
0005945592.tif 000064
ｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−［（５−メチル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）スルファニル］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（８５ｍｇ、０．１６６ｍｍｏｌ）、酢酸（１ｍＬ）および水（１ｍＬ）を溶解する。混合物を、６分間、ＢＩＯＴＡＧＥ（登録商標）Ｉｎｉｔｉａｔｏｒマイクロ波合成装置において約４０ワットにて１６０℃で加熱する。減圧下で反応混合物を濃縮する。水を加え、減圧下で２回除去して、過剰な酢酸を除去し、白色固体（４０ｍｇ、８８．６％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２９９（Ｍ＋１）。
【０１０４】
表１１における以下の化合物を実質的に実施例１３の方法に従って調製する。
【０１０５】
【表１１】
0005945592.tif 000065
【０１０６】
実施例１６
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［（２Ｓ）−２−アミノプロパノイル］アミノ−４−［［５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］チオ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩
【化５２】
0005945592.tif 000066
塩酸水溶液（２Ｍ、７ｍＬ）で（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［２−（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−プロピオニルアミノ］−４−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（３４０ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を処理し、室温にて一晩攪拌する。反応混合物を濃縮乾固し、残渣を陽イオン交換クロマトグラフィー（ＤＯＷＥＸ（登録商標）５０ＷＸ８−１００）により精製する。化合物を水に溶解し、ｐＨ＝２に調整する。化合物を１〜２秒毎に約１滴の滴下速度でカラムに流す。最初の負荷体積が樹脂表面に滴下した後、水（５〜１０ｍＬ）でリンスし、３回繰り返す。溶出物のｐＨをモニターし、適用が完了するまで水でのリンスを継続する（ｐＨサイクルを観測した：カラムからの溶出物は最初にｐＨ＝７次いでｐＨ＝１そしてｐＨ＝７に戻る）。カラムを、水、水：テトラヒドロフラン（１：１）次いで水の各々の少なくとも１つのカラム体積で洗浄する。１０％ピリジン：水で樹脂から生成物を移動させる。さらなる生成物が溶出しなくなるまで１０％ピリジン：水で溶出を継続する。生成物を含有する画分を濃縮して、無色の固体（２０４ｍｇ）を得る。固体を水に溶解し、２Ｍの塩酸（１．５ｅｑ）を加え、４８時間溶液を凍結乾燥して、白色固体（２２５ｍｇ、７５．４％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２４（Ｍ＋１）。
【０１０７】
表１２における以下の化合物を実質的に実施例１６の方法に従って調製する。
【０１０８】
【表１２】
0005945592.tif 000067
【０１０９】
実施例２２
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（−２−アミノアセチル）アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩
【化５３】
0005945592.tif 000068
酢酸エチル（７ｍＬ）中の塩化水素ガスの飽和溶液に（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［［−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）アセチル］アミノ］−４−（４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（２２０ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を溶解し、室温にて２時間攪拌する。溶媒を除去して白色固体（１８０ｍｇ、９８％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３４２（Ｍ＋１）。
【０１１０】
表１３における以下の化合物を実質的に実施例２２の方法に従って調製する。
【０１１１】
【表１３】
0005945592.tif 000069
【０１１２】
実施例２６
ジベンジル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩
【化５４】
0005945592.tif 000070
トリフルオロ酢酸（３ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１２ｍＬ）中の（１Ｒ，２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸ジベンジルエステル（０．４ｇ、０．７１ｍｍｏｌ）の溶液に加え、室温にて４．５時間攪拌する。減圧下で反応混合物を濃縮し、アセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解し、１０ｇのＳＣＸ−２カートリッジ（アセトニトリルで事前に調整した）上に負荷する。アセトニトリル（２０ｍＬ）でカートリッジを洗浄し、次いで９０：１０ｖ／ｖのアセトニトリル／水酸化アンモニウム（５×２０ｍＬ画分）の溶液で溶出する。生成物を含有する画分を蒸発させ、９０：１０：１のジクロロメタン／メタノール／水酸化アンモニウムで溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（１２ｇシリカカラム）により精製して、無色のガム状物として生成物遊離塩基を得る。ガム状物をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、塩酸（０．２５ｍＬのジエチルエーテル中の２Ｍ溶液；０．５ｍｍｏｌ）を加え、溶媒を蒸発させて、白色固体（０．２ｇ、５６．３％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）４６５（Ｍ＋１）。
【０１１３】
実施例２７
ジベンジル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化５５】
0005945592.tif 000071
密閉管中で、ｐ−トルエンスルホン酸（５ｅｑ）を、ベンジルアルコール（０．１５Ｍ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１．００ｇ、２．０１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に加える。反応混合物を攪拌しながら８０℃で４日間加熱する。反応混合物を室温で冷却する。ＳＣＸ−２カラム（１０ｇ）により再精製する。反応混合物をメタノールで予め調整したカラム上に負荷し、メタノール（×３）で洗浄して、過剰な対応するベンジル型アルコールを除去し、メタノール中の２Ｎのアンモニア溶液で溶出する。減圧下で溶媒を蒸発させて、油状物を得る。得られた油状物を酢酸エチルに溶解し、飽和炭酸ナトリウム溶液で洗浄して、反応において形成されるモノエステルを除去する。有機層を乾燥させ、濃縮して、油状物を得る。油状物を、ジクロロメタン／２Ｎのアンモニウム：メタノール（９８：２）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、固体として標題化合物を得る。（２７０ｍｇ、２８％）ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６５（Ｍ＋１）。
【０１１４】
表１４における以下の化合物は実質的に実施例２７の方法に従って調製する。
【０１１５】
【表１４】
0005945592.tif 000072
【０１１６】
実施例２９
ビス［［２−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩
【化５６】
0005945592.tif 000073
密閉管中で、ｐ−トルエンスルホン酸（３ｅｑ）を、２−トリフルオロメチルベンジルアルコール（３０ｅｑ）中のｄｉｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（５００ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に加える。反応混合物を攪拌しながら８８℃にて４時間加熱する。反応混合物を室温まで冷却する。反応混合物をメタノールで予め調整したＳＣＸ−２カラム（１０ｇ）上に負荷し、メタノール（×３）で洗浄し、過剰な対応するベンジル型アルコールを除去し、次いでメタノール中の２Ｎのアンモニア溶液で溶出する。溶媒を減圧下で蒸発させて、油状物を得る。油状物を酢酸エチルで処理して、モノエステルである固体沈殿物が生じる。固体を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して油状物を得る。油状物を、ジクロロメタン：メタノール（９５：５）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、油状物（４０ｍｇ、６％）として標題化合物を得る。
【０１１７】
酢酸エチル（１ｍＬ）中の塩化水素ガスの飽和溶液にビス［［２−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（０．０７ｍｍｏｌ）を溶解する。室温にて混合物を攪拌する（３０分）。減圧下で溶媒を除去し、得られた固体を５０℃にて一晩真空オーブン中で乾燥させる。（３０ｍｇ、６５％）ＭＳ（ｍ／ｚ）：６０１（Ｍ＋１）。
【０１１８】
表１５における以下の化合物を実質的に実施例２９の方法に従って調製する。
【０１１９】
【表１５】
0005945592.tif 000074
【０１２０】
実施例３５
ビス［（４−メトキシベンジル）（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化５７】
0005945592.tif 000075
ビス−（４−メトキシ−ベンジル）（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１０２ｍｇ、１６３．３μｍｏｌ）を、酢酸エチル（０．５ｍＬ）中の塩化水素ガスの飽和溶液に溶解し、室温にて１０分間攪拌する。溶媒を除去する。反応混合物をアセトニトリルで予め調整したＳＣＸカラム上に負荷し、アセトニトリル（×２）で洗浄し、次いでメタノール：アセトニトリル中の２Ｎのアンモニア溶液（２カラム体積）で溶出し、次いで減圧下で溶媒を蒸発させる。粗残渣を、ジクロロメタン／６％のメタノール中の２Ｎアンモニア溶液の勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィー（４ｇ）により精製して、標題化合物（３０ｍｇ、３７％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５２５（Ｍ＋１）。
【０１２１】
実施例３６
ビス［３−（トリフルオロメチル）ベンジル］（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩
【化５８】
0005945592.tif 000076
（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸ビス−（３−トリフルオロメチル−ベンジル）エステル（２００ｍｇ、２８５μｍｏｌ）を、酢酸エチル（２ｍＬ）中の塩化水素ガスの飽和溶液に溶解し、室温にて攪拌する。２時間後、所望の生成物への変換が完了する。したがって溶媒をｖａｑｕｏ中で除去する。固体を酢酸エチルで洗浄し、５０℃にて一晩ｖａｑｕｏ中で乾燥させて、標題化合物を得る、０．１７ｇ（９４％），％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６０１（Ｍ＋１）。
【０１２２】
実施例３７
ビス−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル）（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化５９】
0005945592.tif 000077
ビス（２，２−ジメチルプロパノイルオキシメチル）（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（９８ｍｇ、１５６μｍｏｌ）を、酢酸エチル（２ｍＬ）中の塩化水素ガスの飽和溶液に溶解し、室温にて２時間攪拌する。溶媒を除去する。白色固体を所望の化合物（６８ｍｇ、７９％）について得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９９（Ｍ＋１）。
【０１２３】
実施例３８
４−ベンジル−６−エチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩
【化６０】
0005945592.tif 000078
２−ベンジル−６−エチル（１Ｒ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（７８ｍｇ、１５５．２０μｍｏｌ）を、酢酸エチル（２ｍＬ）中の塩化水素ガスの飽和溶液に溶解し、室温にて２時間攪拌する。溶媒を除去する。標題化合物を白色固体（６０ｍｇ、９１％）として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０３（Ｍ＋１）。
【０１２４】
ｍＧｌｕ受容体は、神経細胞の興奮性を調節するＧタンパク質共役受容体である。調節不全のグルタミン酸神経伝達は統合失調症に関連しているが、全ての一般的に処方される抗精神病薬はドーパミン受容体に作用する。種々の研究により、統合失調症を治療するためのＩＩ型ｍＧｌｕ受容体（それはｍＧｌｕ２、ｍＧｌｕ３、または両方を含む）活性化が支持されている。特に、最近のデータにより、ｍＧｌｕ２／３受容体アゴニストが抗精神病効果を有し、統合失調症を治療するための新規代替法を提供できることが実証されている（Ｐａｔｉｌら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００７）１３（３），１１０２−１１０７）。遺伝子欠失マウスを使用した前臨床研究により、ｍＧｌｕ２／３アゴニストの抗精神病様活性が、主にｍＧｌｕ２受容体媒介性であることが示唆されている。さらなる前臨床効果モデルは、ｍＧｌｕ２／３受容体アゴニストの精神安定剤、抗鬱剤、および神経保護作用を示す。したがって、ｍＧｌｕ２アゴニストは、双極性障害、統合失調症、鬱病、および全般性不安障害などの精神疾患の治療に有用であり得る。
【０１２５】
ヒトｍＧｌｕ２アゴニストＦＬＩＰＲ（登録商標）アッセイ
Ｓｙｒｉａｎハムスター線維芽細胞由来で、ヒトｍＧｌｕ２受容体を安定に発現し、ラットグルタミン酸輸送体ＥＡＡＴ１（興奮性アミノ酸輸送体１）およびＧα１５サブユニットで共トランスフェクトされたＡＶ−１２細胞株をこれらの研究に使用する。Ｇα１５の発現により、Ｇｉ共役受容体がホスホリパーゼＣ経路を介してシグナル伝達を可能にし、蛍光カルシウム応答アッセイによって受容体活性化を測定する能力を生じる。細胞株を、５％の透析ウシ胎仔血清、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸］、１ｍＭのＬ−グルタミン、および５μｇ／ｍＬのブラストサイジンを補足した高グルコースおよびピリドキシン塩酸塩を有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養することによって維持する（全ての培地はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入する）。コンフルエントな培地を、酵素を含まない解離溶液（ＣｈｅｍｉｃｏｎＳ−００４−Ｂ）を使用して週２回継代する。細胞をアッセイの２４時間前に収集し、２５０（ｍＧｌｕ２）または１２５（ｍＧｌｕ３）μＭのＬ−グルタミン（新しく加えられる）のみを含有する培地入りの９６ウェル、黒壁ポリ−Ｄ−リジン−コーティングプレート（ＢＤ  ＢｉｏＣｏａｔ＃３５４６４０）中に、８５，０００個（ｍＧｌｕ２）または１１５，０００個（ｍＧｌｕ３）の細胞／ウェルにてＭａｔｒｉｘ  Ｗｅｌｌ−Ｍａｔｅ細胞播種器を使用して分配する。
【０１２６】
蛍光イメージングプレートリーダー（ＦＬＩＰＲ（登録商標），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して化合物を添加する前後に細胞内カルシウムレベルをモニターする。アッセイ緩衝液は、２０ｍＭのＨＥＰＥＳを補足したハンクス緩衝塩溶液（ＨＢＳＳ；Ｓｉｇｍａ）からなる。培地を除去し、細胞を、９０分間２５℃にて、アッセイ緩衝液中の８μＭのＦｌｕｏ−３ＡＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｆ−１２４１；５０μＬ／ウェル）と共にインキュベートする。色素溶液を除去し、新たなアッセイ緩衝液（５０μＬ／ウェル）と置き換える。アゴニストグルタミン酸塩（Ｆｉｓｈｅｒ  Ａ１２５−１００）について１１点濃度反応曲線（１０μＭで開始する３倍希釈）を生成する単一添加ＦＬＩＰＲ（登録商標）アッセイを各実験の前に実施して、典型的なＥＣ５０反応を確認する。ＰＲＩＳＭ（登録商標）ｖ４．０３（ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア）を使用して結果を分析する。本発明の例示した化合物を、２５μＭの最終濃度で開始する３倍希釈を使用して１０点濃度反応プロファイルを使用して単一添加ＦＬＩＰＲ（登録商標）アッセイにおいて試験する。本発明の例示した化合物を０．１ＮのＮａＯＨ中の１０ｍＭストックとして可溶化し、−２０℃で保存する。それらをアッセイ緩衝液中で３倍希釈系列により希釈する。最初の５秒の蛍光をＦＬＩＰＲ（登録商標）機器で読み取った後、本発明の化合物を細胞プレート（５０μＬ／ウェル）に加える。アゴニスト活性を検出するために、最初の３０秒間１秒毎に、次いで９０秒の全時間３秒毎にデータを収集する。最大反応はＥＣｍａｘ（１００μＭのグルタミン酸塩）により誘導されるものと定義する。グルタミン酸塩の非存在下で測定した基礎蛍光を補正した相対蛍光単位（ＲＦＵ）において最大−最小ピーク高さとして化合物効果を測定する。単一のプレートを使用して測定を実施する。アゴニスト効果を、最大グルタミン酸反応に対して化合物のみにより誘発される刺激のパーセントとして定量する。全てのデータは、４−パラメータロジスティック曲線フィッティングプログラム（ＡＣＴＩＶＩＴＹ  ＢＡＳＥ（登録商標）ｖ５．３．１．２２）を使用して相対ＥＣ５０値として計算する。
【０１２７】
本明細書に例示した化合物を実質的に上記のように試験し、ｈＭＧＬＵＲ２  ＦＬＩＰＲ（登録商標）アッセイにおいて０．５μＭ未満の相対ＥＣ５０値を示した。
【０１２８】
表１６における以下の例示した化合物を実質的に上記のように試験し、以下の活性を示した：
【０１２９】
【表１６】
0005945592.tif 000079
【０１３０】
これらのデータは、ｈｍＧｌｕ２ＦＬＩＰＲ（登録商標）アッセイにおいて機能的アゴニスト活性について表１６の化合物の活性をまとめ、化合物がｍＧｌｕ２アゴニストであることを実証する。
【０１３１】
ラットにおけるフェンシクリジン（ＰＣＰ）誘導性自発運動亢進（ｈｙｐｅｒｌｏｃｏｍｏｔｏｒ）活性の反転
ケタミンまたはフェンシクリジン（ＰＣＰ）などのＮＭＤＡ受容体アンタゴニストの投与は、統合失調症を有する患者において観察されるそれらの病状と同様であるヒトにおける精神異常様作用を生じる。ＮＭＤＡアンタゴニストの運動刺激作用を反転させる薬剤の能力は、多くの場合、精神病の動物モデルとして使用され、統合失調症および双極性障害についての医薬の臨床効果を検出することに対する十分な予測妥当性を示している。
【０１３２】
個々のオスのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）ラットを、寝具類として１ｃｍ深さの木質チップ、およびケージの上部に金属グリルを有する、４５×２５×２０ｃｍ寸法の透明なプラスチックのシューボックス（ｓｈｏｅ−ｂｏｘ）ケージに入れることによって運動活性をモニターする。運動モニター（Ｋｉｎｄｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）は、１５ｃｍの高さで第２のラック（飼育行動を測定するため）を有し、５ｃｍの高さで８×４の構成、（または１５×７パターンにおける２２の高密度群）で配置される１２光束の矩形ラックから構成される。シューボックスケージは、隔離した部屋において３フィートの高さのテーブルトップ上にラックを有する、これらのラックの内側に配置される。本発明の化合物は、フェンシクリジン（ＰＣＰ）の５ｍｇ／ｋｇチャレンジ投与の３０分前に、０．３〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内で（腹腔内経路（ｉ．ｐ．）、非プロドラッグにより）投与される。本発明の化合物は、一晩絶食させたラットにおいて、ＰＣＰの５ｍｇ／ｋｇチャレンジ投与の４時間前に、０．３〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲内で投与（経口経路、プロドラッグ）される。試験日に、ラットを試験ケージに入れ、ＰＣＰチャレンジの前に３０分間順応させ、ＰＣＰ投与の後、さらに６０分間、ラットをモニターする。
【０１３３】
データ解析およびＥＤ５０算出を、ＧｒａｐｈＰａｄ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）（ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ．ＵＳＡ）を用いて実施する。検出力解析により、１群あたり８〜１０匹のラットは、治療差（検出力＝０．８）を検出するために適切な統計的検出力を有することが必要とされると決定される。事後ダネット多重比較検定（ｐｏｓｔ−ｈｏｃ  Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｔｅｓｔ）を用いる一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を、合計６０分の運動活性で実施する。ＥＤ５０算出を、各用量について反転した変換データのパーセントで非線形回帰曲線フィッティングを用いて実施する。
【０１３４】
実施例１０の化合物およびその対応するプロドラッグ（実施例２５）は、上記のように実質的に実施したこのアッセイにおいて、０．９ｍｇ／ｋｇ（ｉ．ｐ．投与）および６．４ｍｇ／ｋｇ（経口投与）のそれぞれのＥＤ５０を生じると測定した。これらの結果は、活性親およびそのプロドラッグ形態が、統合失調症および双極性障害を罹患している患者における効果を予測するこの薬理学的モデルにおいて強力な効果を示すことを実証する。
【０１３５】
マウスにおけるフェンシクリジン（ＰＣＰ）誘発性自発運動亢進活性の反転
マウスにおけるフェンシクリジン（ＰＣＰ）誘導性自発運動亢進活性の反転についてのこのアッセイは、ラットの代わりにマウスを用いて、以下に示すように変更して、上記のラットにおけるフェンシクリジン（ＰＣＰ）誘導性自発運動亢進活性の反転のアッセイのように実質的に実施する。
【０１３６】
個々のオスのＩＣＲ（ＣＤ−１）、（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）マウスを、寝具類として０．５ｃｍ深さの木質チップ、およびケージの上部にプラスチックの蓋を有する、４５×２５×２０ｃｍ寸法の透明なプラスチックのシューボックスケージに入れることによって運動活性をモニターする。運動モニター（Ｋｉｎｄｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）は、２．５ｃｍの高さで８×４の構成、（または１５×７パターンにおける２２の高密度群）で配置される１２光束の矩形ラックから構成される。シューボックスケージは、隔離した部屋において３フィートの高さのテーブルトップ上にラックを有する、これらのラックの内側に配置される。本発明の化合物は、フェンシクリジン（ＰＣＰ）の７．５ｍｇ／ｋｇチャレンジ投与の３０分前に、より高い用量が使用され得るが、通常、０．３〜３０ｍｇ／ｋｇの範囲内で（腹腔内経路、非プロドラッグにより）投与される。試験日に、マウスを試験ケージに入れ、ＰＣＰチャレンジの前に４５分間順応させ、ＰＣＰ投与の後、さらに６０分間、マウスをモニターする。
【０１３７】
検出力解析により、１群あたり７〜８匹のマウスは、治療差（検出力＝０．８）を検出するために適切な統計的検出力を有することが必要とされると決定される。
【０１３８】
ｉ．ｐ．投与後、実施例１、２、３、および１１において用量反応実験を実施した。ＥＤ５０値は以下の通りであった：実施例１＝１８．４ｍｇ／ｋｇ；実施例２＝１４．４および１４．３（２回の独立した実験）；実施例３＝１７．１ｍｇ／ｋｇ；実施例１１＝１．２ｍｇ／ｋｇ。最後に、実施例８は、１０ｍｇ／ｋｇの単回投与後、ＰＣＰ誘発性自発運動亢進活性を５２％反転させた。これらの結果は、例示した本発明の範囲内の化合物が、統合失調症および双極性障害についての有用な医薬であることを実証する。
【０１３９】
ラットにおけるストレス誘発性異常高熱の減衰
異常高熱、中核体温の上昇は、ストレスに対する反応において、ヒトを含む、多くの哺乳動物において正確に実証されている一般的現象である。多くの不安障害において、異常高熱は病状の一部として生じ、疾患の症状とみなされる。動物におけるストレス誘発性異常高熱を減衰する化合物は、ヒトにおける不安障害を治療するのに有用であると考えられている。全般性不安障害は、このような化合物を用いて治療され得るこのような障害の一例である。ストレス誘発性異常高熱を分析するための従来の低侵襲性方法は、直腸体温計による、体温、およびストレス誘発性による体温の増加を測定することによる。２７５〜３５０ｇの体重のオスのＦｉｓｃｈｅｒ  Ｆ−３４４ラット（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ，ＵＳＡ）を試験する。全ての動物は、食物および自動化された水を自由に入手可能であるように個々に収容し、１２時間の明／暗サイクル（０６：００に点灯）で維持する。明期の間に実施する、実験の前に動物を約１２〜１８時間絶食させる。実験の１時間前に、１ｍＬ／ｋｇの用量体積で腹腔内（ｉ．ｐ．）投与経路によりラットに投与する。使用したビヒクルはｐＨ５〜７を達成するのに加えた十分なＮａＯＨを含む水であった。ｍＧｌｕＲ５アンタゴニストＭＴＥＰ（３−［（２−メチル−１，３−チアゾール−４−イル）エチニル］ピリジン）およびｍＧｌｕ２／３アゴニストＬＹ３１７２０６を品質コントロールとして使用し、それらが投与後すぐにこのモデルにおいて信頼できる効果を生じたならば、ラットをそれらのホームケージに戻し、実験者がライトを消し、部屋を出る。１時間の前処置時間の残りの間、投薬部屋は暗くする。
【０１４０】
前処置時間の後、明るく照らされた隣の部屋にラットを個々に連れていき、ベースライン体温を、鉱油で潤滑させた直腸プローブの挿入により測定する。ＰＨＹＳＩＴＥＭＰ  ＲＥＴ−２（登録商標）ラット直腸プローブ（Ｐｈｙｓｉｔｅｍｐ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．，Ｃｌｉｆｔｏｎ，ＮＪ，ＵＳＡ）を有するＰＨＹＳＩＴＥＭＰ  ＢＡＴ−１２（登録商標）マイクロプローブ体温計を用いて体温を評価する。直腸内にプローブを約２ｃｍ挿入して、中核体温を測定する（これはベースライン体温、Ｔ１（℃）である）。１０分後、２回目の体温測定を記録する（Ｔ２）。体温の相違（Ｔ２−Ｔ１）をストレス誘発性体温上昇反応と定義する。本発明の化合物が、ビヒクル反応と比べて、ストレス誘発性体温上昇反応の３５％減少を生じる用量をＴ３５用量と定義する。
【０１４１】
実施例１０の化合物は、上記のように実質的に実施したこのアッセイにおいて、１．７ｍｇ／ｋｇのＴ３５および１０ｍｇ／ｋｇにて７５％のストレス誘発性体温上昇の最大減少を有すると測定された。比較すると、ＭＴＥＰ（３ｍｇ／ｋｇ）およびＬＹ３１７２０６（２０ｍｇ／ｋｇ）はそれぞれ５３％および３２％、ストレス誘発性体温上昇を減少させた。これらの結果は、ｍＧｌｕ２アゴニスト活性が、ストレス誘発性不安のこのラットモデルにおいて抗不安様効果を生じ、前臨床（Ｉｍｒｅ（２００７）ＣＮＳ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｖ．１３：４４４−４６４）および臨床（Ｄｕｎａｙｅｖｉｃｈら，（２００８）Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍ．３３：１６０３−１６１０）研究におけるｍＧｌｕ２／３アゴニストの報告されている抗不安活性と一致することを実証する。これらの結果は、不安障害の治療に対するｍＧｌｕ２アゴニズムの潜在的な臨床的有用性を示唆している。
【０１４２】
囓歯動物における強制水泳試験
囓歯動物の強制水泳試験アッセイは十分に特徴付けられており、大鬱病性障害についての現在の医薬の抗鬱剤様活性を検出するための十分な予測妥当性を示す。このアッセイにおいて、目的とする抗鬱剤様活性を有する機構は、短時間の回避できない強制水泳事象において不動性を減少させる。
【０１４３】
強制水泳試験を、マウス（オスのＮＩＨ−Ｓｗｉｓｓマウス、２０〜２５ｇ、Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）で実施する。マウスを、６分間、２２〜２５℃の水を６ｃｍ満たした透明なプラスチックシリンダ（直径１０ｃｍ；高さ：２５ｃｍ）に入れる。６分の試験の最後の４分の間、不動時間を記録する。試験の６０分前に、腹腔内投与をした後、実施例２、３、８、１１、および１２の化合物を試験する。イミプラミンをこれらの研究についての陽性コントロールとして使用する。最小量のＮａＯＨ加えて、水ビヒクル中で化合物を製剤化する。不動に費やした時間（被験体の頭を水の上で維持するためだけの必要な動きと定義する）は依存する測定値であり、被験体の薬物治療に関して知らされていない観察者により記録される。データを、０．０５に設定したアルファレベルを用いて事後ダネット検定（ｐｏｓｔ−ｈｏｃ  Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ  ｔｅｓｔ）により解析する。ＥＤ６０値（ビヒクルコントロールに対して６０％の不動時間）を算出して、試験化合物の有効性を推定する。
【０１４４】
実施例２を２つの独立した実験で試験し、９．８および４．２ｍｇ／ｋｇのＥＤ６０値を生じた。実施例３はより有効であり、ＥＤ６０値は３ｍｇ／ｋｇの試験した最も低い用量未満であると推定した。実施例８についてのＥＤ６０は７．９５ｍｇ／ｋｇであった。実施例１１は０．８８ｍｇ／ｋｇのＥＤ６０を有したが、有効性は第２の研究で失い、より高い用量（３〜３０ｍｇ／ｋｇ）を評価した。実施例１２は３．３１ｍｇ／ｋｇのＥＤ６０を生じた。これらの結果は、本発明の範囲内の化合物が鬱病のための潜在的に有用な医薬であることを実証する。
【０１４５】
インビトロでのＰｅｐＴ１  ＧｌｙＳａｒ阻害スクリーニングおよびＩＣ５０測定
ＰｅｐＴ１アッセイを、腸管吸収輸送体ＰｅｐＴ１と相互作用するアミノ酸プロドラッグ化合物の能力を試験するために確立する。
【０１４６】
ヒトの癌細胞由来のＨｅＬａ細胞（アメリカンタイプカルチャーコレクション）を、５％ＣＯ２加湿雰囲気中で３７℃にて、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、０．１ｍＭ非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）、および１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを有する１００ユニット／ｍＬペニシリンを含有するハイクローン培地（Ｈｙｃｌｏｎｅ  Ｍｅｄｉｕｍ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，カタログ番号ＳＨ３０２４３）中で増殖させる。細胞株を４０継代まで使用し、次いで捨てる。１ｍｌバイアル中の凍結細胞を１〜２分間水浴中で解凍させ、３７℃にて５ｍＬの細胞培地に加える。Ｔフラスコの各々に、８．５ｍＬの新鮮な培地および１．５ｍＬの細胞ストックを与える。細胞を１週間の間に２回継代する。これは、１０ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水−エチレンジアミン四酢酸（ＰＢＳ−ＥＤＴＡ）でフラスコをリンスし、細胞を分離するために、２〜５分間、２ｍＬのトリプシンを加え、トリプシンのさらなる活性を阻害するために８ｍＬの新鮮な培地を加えることによって達成される。１：６細胞希釈を得るために、各々の新しいフラスコに、８．５ｍＬの新鮮な培地と１．５ｍＬの細胞ストックとの混合物を入れる。取込実験の準備まで、細胞を３７℃にてインキュベートする。
【０１４７】
Ｔフラスコ中の７０〜８０％コンフルエントな細胞をトランスフェクション処理の１日前に播種する。細胞ストックを有するフラスコをＰＢＳ−ＥＤＴＡおよびトリプシンで処理して、細胞を分離させ、この時点からトランスフェクション培地を使用する。トランスフェクション培地は、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）＋ＮＥＡＡからなる。各ウェルに、０．５ｍＬの細胞混合物を加え（１．３×１０５が所望の細胞濃度である）、細胞を３７℃にて一晩インキュベートする。このアッセイの２４時間前に、細胞をＰＥＰＴ１でトランスフェクトする。トランスフェクション混合物を、６００μＬの無血清トランスフェクション培地、１８μＬのＦｕＧｅｎｅ６（登録商標）（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、および１１μｇのＰｅｐＴ１  ＤＮＡを混合することによって調製する。トランスフェクション試薬−ＤＮＡ複合体を２０分間インキュベートし、２４μＬの試薬−ＤＮＡ複合体を各ウェルに加える。
【０１４８】
ＰＥＰＴ１媒介性［グリシル−１−２−１４Ｃ］グリシルサルコシン（ＧｌｙＳａｒ）取込活性の阻害を、既に公開されているように（Ｚｈａｎｇら，２００４．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｘｐｅｒ  Ｔｈｅｒ．３１０：４３７−４４５）、トランスフェクションの２４時間後、２４ウェルプレートで培養した細胞中で測定する。［１４Ｃ］Ｇｌｙ−Ｓａｒの取込を阻害する本発明の化合物の能力を測定するために、プロドラッグ化合物を、５μＭの［１４Ｃ］Ｇｌｙ−Ｓａｒ（Ｍｏｒａｖｅｋ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）および２０μＭの冷Ｇｌｙ−Ｓａｒの存在下でｐＨ６．０の取込培地中で５ｍＭにてＨｅＬａ細胞を一過性にトランスフェクトした８０〜９０％のコンフルエントなＰｅｐＴ１とインキュベートする。取込培地は、１４０ｍＭのＮａＣｌ、５．４ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＣａＣｌ２、０．８ｍＭのＭｇＳＯ４、５ｍＭのグルコース、２５ｍＭのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液（ＴＲＩＳ）からなる。次いで２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸を用いて溶液をｐＨ６．０にする。インキュベーション体積は５００μＬであり、室温にて３分間実施する。インキュベーション時間の終わりに取込を停止するために、取込培地を細胞単層から吸引し、５００μＬの氷冷ＰＢＳをウェルに加える。Ｃａ＋２およびＭｇ２＋を含まない５００μＬの室温ＰＢＳで細胞を３回洗浄する。次いで３００μＬの１％Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ１００Ｈ２Ｏ溶液で細胞を溶解させる。２００μＬのアリコートを除去し、液体シンチレーション計数により放射線を定量し、インキュベーションウェルの各々に存在する［１４Ｃ］Ｇｌｙ−Ｓａｒを測定する。阻害剤なしのコントロールを確立し、各プロドラッグの阻害パーセントをこのコントロールに対して算出する。ネガティブコントロール（グリシン）および２つのポジティブコントロール（セファドロキシルおよびセファレキシン）を各実験で並行して実施して、アッセイ系の実行可能性を決定する。セファレキシンと等しいか、またはそれより良いＧｌｙＳａｒ取込阻害を有するプロドラッグ化合物は許容可能とみなす。平均値±標準偏差は、グリシンについて１０．１±９．５％（ｎ＝１９）、セファドロキシルについて５３．２±１３．２％（ｎ＝１９）、およびセファレキシンについて３７．５±１４．７％（ｎ＝１８）である。
【０１４９】
ＰｅｐＴ  ＩＣ５０アッセイに関して、プロドラッグ化合物を、５μＭ［１４Ｃ］Ｇｌｙ−Ｓａｒおよび２０μＭ冷Ｇｌｙ−Ｓａｒの存在下で、種々の濃度（０．０６２５〜２５ｍＭ）でインキュベートする。インキュベーションおよびサンプリング処理は、上記のＰｅｐＴ１スクリーニングと全く同じである。［１４Ｃ］Ｇｌｙ−Ｓａｒ取込データをプロドラッグ化合物濃度の各々について評価し、ＩＣ５０値を算出する。
【０１５０】
以下の化合物を実質的に上記のように試験し、以下の活性を示した：
【０１５１】
【表１７】
0005945592.tif 000080
【０１５２】
これらの結果は、表１７の化合物が、ＰｅｐＴ１輸送体を介して経口吸収でき、セファドロキシルおよびセファレキシン（Ｚｈａｎｇら，２００４．ＪＰＥＴ３１０：４３７−４４５）と同じかまたはそれらより良いことを実証し、これにより、ＰｅｐＴ１輸送体を介するヒト経口吸収が予測される。
【０１５３】
インビトロでの腸プロドラッグ加水分解アッセイ
凍結したヒト十二指腸ホモジネート（１００ｍＭリン酸トリス緩衝液、ｐＨ７．４を用いる１：２の組織：緩衝液比）をＣｅｌｓｉｕｓ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ）から得、それはフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）およびＥＤＴＡの両方を含まなかった。
【０１５４】
ヒト十二指腸の各ロットを単一のドナーから得て、腸を小片にし、その部分を別個に凍結する。全ての元の組織採集を４℃にて実施し、即座に−７０℃にて凍結する。ヒト腸ホモジネートを解凍し、インキュベーションの直前に、１００ｍＭ  ＰＢＳ緩衝液、ｐＨ７．４中で０．５ｍｇ／ｍＬの最終タンパク質濃度に希釈する。
【０１５５】
インキュベーションを９６ウェルプレート中で実施し、全てのプロドラッグ化合物を各日に２連で実施する。ストックプロドラッグ化合物溶液を１ｍＭの濃度にて水中で調製する。２００μＬアリコートの０．５ｍｇ／ｍＬ腸ホモジネートおよび１９６μＬの１００ｍＭ  ＰＢＳ緩衝液を３７℃の水浴中の９６ウェルプレートに入れる。加水分解が化学的不安定性に起因していないことを確実にするために、プロドラッグ化合物もまた、腸ホモジネートを有さないＰＢＳ緩衝液とインキュベートする。９６ウェルピペッターを用いて、４μＬの１ｍＭプロドラッグ化合物溶液をホモジネートに移す。プロドラッグ化合物の添加直後（０時）および１時間のインキュベーション後、インキュベーション混合物の５０μＬサンプルを、自動使い捨て同時９６ウェルピペッターを用いて除去し、１００ｎｇ／ｍＬの内部標準物を含む２００μＬのメタノールクエンチ溶液に直接加える。次いでサンプルを１０℃で５分間、３５００ｒｐｍにて遠心分離する。上清（２００μＬ）を最終９６ウェルＰＣＲプレートに移し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる分析のために密閉する。
【０１５６】
インキュベーション混合物中の本発明の加水分解化合物の濃度を、アナリストバージョン１．４．２、ターボイオンスプレー（登録商標）、陽イオン化、および選択反応モニタリング（ＳＲＭ）を備えるＳｃｉｅｘ  ＡＰＩ４０００（商標）四重極質量分析計でＬＣ／ＭＳ／ＭＳ検出を用いて決定する。Ｗａｔｅｒｓ  ＡＴＬＡＮＴＩＳ（登録商標）Ｔ３（２０×２．１ｍｍ、５μＭ）ＨＰＬＣカラムを、１．０ｍＬ／分の流速および０．１％移動相Ａ〜９９％移動相Ａの移動相勾配を用いて周囲温度にて使用する。移動相Ａは１０００：５の水：ヘプタフルオロ酪酸であり、移動相Ｂは１：１のメタノール：氷酢酸である。
【０１５７】
腸インキュベーション混合物中の本発明の加水分解化合物の濃度を、１００ｍＭ  ＰＢＳ  ｐＨ７．４中で１０μＭにて開始する反復２倍希釈によって調製した標準曲線から決定し、その後、サンプルと同一のメタノール−内部標準溶液でクエンチする。平均および標準偏差を、ＭＩＣＲＯＳＯＦＴ（登録商標）Ｏｆｆｉｃｅ  ＥＸＣＥＬ（登録商標）２００７を用いて算出する。加水分解の量を、加えたプロドラッグ化合物濃度に対して形成した化合物のモルパーセントとして決定する。ポジティブコントロール、内部プロドラッグ化合物Ａから内部化合物薬物Ａの加水分解は、各バッチにおいて実施すると、平均７５．３％になる（ｎ＝２０）。次いで最後の値を内部化合物薬物Ａの形成に対して正規化する。
【０１５８】
以下の化合物を実質的に上記のように試験し、以下の活性を示した：
【０１５９】
【表１８】
0005945592.tif 000081
【０１６０】
これらの結果は、表１８の化合物がヒトの腸において加水分解され得ることを実証する。
【０１６１】
インビトロでのヒト肝臓Ｓ−９ホモジネート加水分解アッセイ
肝臓Ｓ９画分をＸｅｎｏｔｅｃｈ  ＬＬＣ（Ｌｅｎｅｘａ，ＭＯ）から得る。ロットは２人のドナー、１人は男性、１人は女性のプール由来のものである。肝臓Ｓ９画分を調製し、ＥＤＴＡを含まない４℃での５０ｍＭトリス、ｐＨ７．４、および１５０ｍＭ塩化カリウムからなる均一化緩衝液を用いて希釈する。プロドラッグ化合物を３７℃にて２時間、肝臓ホモジネート中でインキュベートし、その後、化合物の濃度をＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより決定する。クロピドグレルからクロピドグレルカルボン酸への加水分解をアッセイポジティブコントロールとして利用する。
【０１６２】
インキュベーションを９６ウェルフォーマット中で実施し、全てのプロドラッグ化合物を各日に２連で実施する。ストックプロドラッグ化合物溶液を１ｍＭの濃度にて水中で調製する。ヒト肝臓Ｓ９画分を、１００ｍＭ  ＰＢＳ緩衝液、ｐＨ７．４中で０．５ｍｇ／ｍｌの最終タンパク質濃度に希釈する。
【０１６３】
２００μＬアリコートの０．５ｍｇ／ｍｌヒト肝臓Ｓ−９ホモジネートおよび１９６μＬの１００ｍＭ  ＰＢＳ緩衝液を、３７℃の水浴中で９６ウェルプレートに入れる。９６ウェルピペッターを用いて、４μＬの１ｍＭプロドラッグ溶液をホモジネートに移す。加水分解が化学的不安定性に起因しないことを確実にするために、プロドラッグ化合物も肝臓Ｓ−９を含まないＰＢＳ緩衝液のみとインキュベートする。プロドラッグ化合物の添加直後（０時）、および１時間のインキュベーション後、インキュベーション混合物の５０μＬのサンプルを、自動使い捨て同時９６ウェルピペッターを用いて除去し、１００ｎｇ／ｍｌの内部標準物を含む２００μＬのメタノールクエンチ溶液に直接加える。次いでサンプルを１０℃にて５分間、３５００ｒｐｍで遠心分離する。上清（２００μＬ）を最後の９６ウェルＰＣＲプレートに移し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる解析のために密閉する。
【０１６４】
インキュベーションの間に形成した化合物のＬＣ／ＭＳ／ＭＳ定量化を、Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ４０００、アナリストバージョン１．４．２、ターボイオンスプレー（登録商標）、陽イオン化、および選択反応モニタリング（ＳＲＭ）で実施する。使用したＨＰＬＣカラムは、１．０ｍＬ／分の移動相流速を用いて周囲温度でＷａｔｅｒｓ  ＡＴＬＡＮＴＩＳ（登録商標）Ｔ３（２０×２．１ｍｍ、５μＭ）である。移動相Ａは１０００：５の水：ヘプタフルオロ酪酸であり、移動相Ｂは１：１のメタノール：氷酢酸である。移動相勾配は、９９．９／０．１の開始移動相比Ａ／Ｂおよび１／９９の最終を利用する。
【０１６５】
インキュベーション混合物中の加水分解化合物の濃度を、１００ｍＭ  ＰＢＳ  ｐＨ７．４中の１０μＭで開始する反復２倍希釈により調製し、その後、サンプルと同一のメタノール−内部標準溶液でクエンチした標準曲線から決定する。平均および標準偏差を、ＭＩＣＲＯＳＯＦＴ（登録商標）Ｏｆｆｉｃｅ  ＥＸＣＥＬ（登録商標）２００７を用いて算出する。最後の値を、加えたプロドラッグ化合物濃度に対して形成した化合物のモルパーセントとして示す。クロピドグレルからクロピドグレルカルボン酸への加水分解をポジティブコントロールとして使用し、平均すると７３．０％（ｎ＝２７）になる。
【０１６６】
以下の化合物を実質的に上記のように試験し、以下の活性を示した：
【０１６７】
【表１９】
0005945592.tif 000082
【０１６８】
これらの結果は、表１９の化合物がヒトの肝臓において加水分解され得ることを実証する。
【０１６９】
本発明の化合物は好ましくは、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤を使用して医薬組成物として製剤化され、種々の経路により投与される。好ましくは、このような組成物は経口または静脈内投与用である。このような医薬組成物およびそれらを調製するためのプロセスは当該技術分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら，ｅｄｓ．，２１ｓｔ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，２００５）を参照のこと。
【０１７０】
本発明の化合物は概して広い投薬範囲にわたって効果的である。例えば、１日当たりの投薬は通常、約０．３〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内である。一部の場合、上述の範囲の下限値未満の投薬レベルが十分以上であってもよく、一方、他の場合、さらに多くの用量が利用されてもよく、したがって、上記の投薬範囲は本発明の範囲を限定するものと決して解釈されるべきではない。実際に投与される化合物の量は、治療される病態、選択される投与経路、投与される実際の化合物（複数も含む）、個々の患者の年齢、体重、および反応、ならびに患者の症状の重症度を含む、関連する状況を考慮して医師により決定されることは理解されるであろう。