(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、ならびに、ドセタキセル、ビンクリスチン、およびトポテカンから選択される少なくとも１つの追加の治療薬の組み合わせを含む、癌治療剤であって、前記ＦＧＦＲ１  ＥＣＤが配列番号１〜４から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ前記組み合わせがマウス異種移植癌モデルにおいて腫瘍増殖の相乗的抑制をもたらす、前記癌治療剤。
【請求項２】
前記ＦＧＦＲ１  ＥＣＤが融合パートナーをさらに含む、請求項１に記載の癌治療剤。
【請求項３】
前記少なくとも１つの追加の治療薬がドセタキセルである、請求項１または２に記載の癌治療剤。
【請求項４】
前記少なくとも１つの追加の治療薬がビンクリスチンである、請求項１または２に記載の癌治療剤。
【請求項５】
前記少なくとも１つの追加の治療薬がトポテカンである、請求項１または２に記載の癌治療剤。
【請求項６】
ドセタキセル、ビンクリスチン、およびトポテカンから選択される少なくとも２つの追加の治療薬を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の癌治療剤。
【請求項７】
前記ＦＧＦＲ１  ＥＣＤが融合パートナーをさらに含み、該融合パートナーがＦｃである、請求項２〜６のいずれか１項に記載の癌治療剤。
【請求項８】
前記ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよびＦｃが、配列番号５および配列番号６から選択される配列を含む、請求項７に記載の癌治療剤。
【請求項９】
癌が小細胞肺癌であり、マウス異種移植モデルがＤＭＳ５３細胞を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の癌治療剤。
【請求項１０】
癌が非小細胞肺癌であり、マウス異種移植モデルがＨ１７０３細胞を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の癌治療剤。
【請求項１１】
（ｉ）線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）および／または（ｉｉ）線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）融合分子、ならびに（ｉｉｉ）ドセタキセル、ビンクリスチン、およびトポテカンから選択される少なくとも１つの追加の治療薬の組み合わせを含み、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子ならびに前記少なくとも１つの追加の治療薬を患者に投与するための使用説明書をさらに含む、癌治療のためのドーズパックであって、前記ＦＧＦＲ１  ＥＣＤが配列番号１〜４から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ前記組み合わせがマウス異種移植癌モデルにおいて腫瘍増殖の相乗的抑制をもたらす、前記ドーズパック。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１０年１１月１５日出願の米国特許仮出願第６１／４１３，９４０号、および２０１０年１２月９日出願の米国特許仮出願第６１／４２１，４６２号の優先権を主張する。これらの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景と概要
可溶型の線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）は、インビトロおよびインビボで腫瘍細胞増殖を抑制することが示された。例えば、米国特許第７，６７８，８９０号（特許文献1）を参照されたい。抗癌治療分子、例えば、可溶型のＦＧＦＲ１の、別の抗癌治療分子との組みあわせにより、それぞれの抗癌治療薬の効力に対する拮抗的、加算的、または相乗的効果をもたらすことができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】米国特許第７，６７８，８９０号
【発明の概要】
【０００４】
本発明者等は、非小細胞肺癌マウス異種移植モデルへのＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよびドセタキセルの投与が、相乗的抗腫瘍治療活性を示すことを見出した。さらに、本発明者等は、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ、ならびにパクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、およびベバシズマブ、から選択される少なくとも１つの追加の治療分子の投与が、特定のマウス異種移植モデルに対し、単独で投与されたそれぞれの分子に比べて、少なくとも加算的な活性を有することを見出した。
【０００５】
一部の実施形態では、線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、ならびに、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、ソラフェニブ、エトポシド、トポテカン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、ＶＥＧＦトラップ、抗ＶＥＧＦ抗体、およびベバシズマブ、から選択される少なくとも１つの追加の治療薬の対象への投与を含む癌を治療する方法が提供される。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がドセタキセルである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がペメトレキセドである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がシスプラチンである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がパクリタキセルである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬が５−ＦＵである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がトポテカンである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がビンクリスチンである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がＶＥＧＦアンタゴニスト、例えば、抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦトラップである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がベバシズマブである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がソラフェニブである。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、配列番号１〜４から選択される配列を含む。
【０００６】
一部の実施形態では、線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）融合分子、ならびに、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、ソラフェニブ、エトポシド、トポテカン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、ＶＥＧＦトラップ、抗ＶＥＧＦ抗体、およびベバシズマブ、から選択される少なくとも１つの追加の治療薬の対象への投与を含む癌を治療する方法が提供され、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび融合パートナーを含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がドセタキセルである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がペメトレキセドである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がシスプラチンである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がパクリタキセルである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬が５−ＦＵである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がビンクリスチンである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がトポテカンである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がＶＥＧＦアンタゴニスト、例えば、抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦトラップである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がベバシズマブである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬がソラフェニブである。
【０００７】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、ならびに、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、エトポシド、ソラフェニブ、エトポシド、トポテカン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、ＶＥＧＦトラップ、抗ＶＥＧＦ抗体、およびベバシズマブ、から選択される少なくとも２つの追加の治療薬を対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供され、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子はＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび融合パートナーを含む。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬の内の少なくとも１つがパクリタキセルである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬の内の少なくとも１つがシスプラチンである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬の内の少なくとも１つがカルボプラチンである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬の内の少なくとも１つがオキサリプラチンである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬の内の少なくとも１つが５−ＦＵである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬の内の少なくとも１つがドキソルビシンである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬の内の少なくとも１つがエトポシドである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬の内の少なくとも１つがトポテカンである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬の内の少なくとも１つがＶＥＧＦアンタゴニスト、例えば、抗ＶＥＧＦ抗体またはＶＥＧＦトラップである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬の内の少なくとも１つがベバシズマブである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬が、パクリタキセルおよびカルボプラチンである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬が、ドキソルビシンおよびパクリタキセルである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬が、シスプラチンおよびエトポシドである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬が、オキサリプラチンおよび５−ＦＵである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬が、５−ＦＵおよびロイコボリンである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬が、５−ＦＵおよびベバシズマブである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬が、パクリタキセルおよびベバシズマブである。一部の実施形態では、２つの追加の治療薬が、シスプラチンおよびエトポシドである。
【０００８】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、ならびに、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、エトポシド、ソラフェニブ、ＶＥＧＦアンタゴニスト、抗ＶＥＧＦ抗体、ＶＥＧＦトラップ、およびベバシズマブ、から選択される少なくとも３つの追加の治療薬を対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供され、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子はＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび融合パートナーを含む。一部の実施形態では、３つの追加の治療薬の内の少なくとも１つがオキサリプラチンである。一部の実施形態では、３つの追加の治療薬の内の少なくとも１つが５−ＦＵである。一部の実施形態では、３つの追加の治療薬の内の少なくとも１つがロイコボリンである。一部の実施形態では、３つの追加の治療薬の内の少なくとも１つがカルボプラチンである。一部の実施形態では、３つの追加の治療薬の内の少なくとも１つがパクリタキセルである。一部の実施形態では、３つの追加の治療薬の内の少なくとも１つがベバシズマブである。一部の実施形態では、３つの追加の治療薬がオキサリプラチン、５−ＦＵおよびロイコボリンである。一部の実施形態では、３つの追加の治療薬がベバシズマブ、５−ＦＵおよびロイコボリンである。一部の実施形態では、３つの追加の治療薬の内の少なくとも２つがシスプラチンおよびエトポシドである。
【０００９】
一部の実施形態では、本発明は、また、癌の治療のための、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子ならびにドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、ソラフェニブ、エトポシド、トポテカン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、ＶＥＧＦトラップ、抗ＶＥＧＦ抗体、およびベバシズマブ、から選択される少なくとも１つの追加の治療薬の組み合わせに関する。一部の実施形態では、さらに、本発明は、癌の治療のための、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子ならびにドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、エトポシド、ソラフェニブ、エトポシド、トポテカン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、ＶＥＧＦトラップ、抗ＶＥＧＦ抗体、およびベバシズマブ、から選択される少なくとも２つの追加の治療薬の組み合わせに関する。また、一部の実施形態では、本発明は、癌の治療のための、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子ならびにドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、エトポシド、ソラフェニブ、ＶＥＧＦアンタゴニスト、抗ＶＥＧＦ抗体、ＶＥＧＦトラップ、およびベバシズマブ、から選択される少なくとも３つの追加の治療薬の組み合わせに関する。
【００１０】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、少なくとも１つの、少なくとも２つの、または少なくとも３つの追加の治療薬から別々にパッケージ化される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、投与の前に、少なくとも１つの、少なくとも２つの、または少なくとも３つの追加の治療薬と混合されない。
【００１１】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびドセタキセルを対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供され、ここで、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃは、配列番号６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびドセタキセルを対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供され、ここで、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃは、配列番号６のアミノ酸配列から構成される。
【００１２】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、グリコシル化、および／または／シアル酸付加されている。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子のポリペプチド部分は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞中で発現している。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、配列番号１と配列番号３から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００１３】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子の内の少なくとも１つの用量、ならびに少なくとも１つの追加の治療薬の少なくとも１つの用量が同時に投与される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子の少なくとも１つの用量、ならびに少なくとも１つの追加の治療薬の少なくとも１つの用量が同時に投与される。
【００１４】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、配列番号１〜４から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの融合パートナーが、Ｆｃ、アルブミン、およびポリエチレングリコール、から選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの融合パートナーは、Ｆｃである。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号８〜１０から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、配列番号５および配列番号６から選択される配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの融合パートナーは、Ｆｃとポリエチレングリコールである。一部の実施形態では、少なくとも１つの融合パートナーは、ポリエチレングリコールである。一部の実施形態では、融合分子は、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび１つまたは複数の融合パートナーの間のリンカーを含む。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、シグナルペプチドを含む。一部の実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号７のアミノ酸配列を含む。
【００１５】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、約０．５ｍｇ／ｋｇ体重〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量、例えば、約８〜約１６ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量である。一部の実施形態では、治療有効量のＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、約８ｍｇ／ｋｇ体重の用量であり、一方、一部の実施形態では、治療有効量のＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、約１６ｍｇ／ｋｇ体重（または１．１１ｍＬ／ｍｇ＊ｃｍの消衰係数を使って計算して、それぞれ、約１０ｍｇ／ｋｇ体重または約２０ｍｇ／ｋｇ体重）の容量である。一部の実施形態では、治療有効量のＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、約２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量である。一部の実施形態では、投薬量は、週２回で、毎週で、隔週で、毎週〜隔週の間の頻度で、３週毎に、４週毎に、または毎月、投与できる。
【００１６】
また、一部の実施形態では、本発明は、ドーズパックに関する。一部の実施形態では：（ｉ）線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、（ｉｉ）線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）融合分子、ならびに（ｉｉｉ）ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、エトポシド、トポテカン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、抗ＶＥＧＦ抗体、ＶＥＧＦトラップ、ベバシズマブ、およびソラフェニブから選択される少なくとも１つの追加の治療薬、から選択される少なくとも１つの成分；ならびにＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子および少なくとも１つの追加の治療薬を患者に投与するための使用説明書を含むドーズパックが提供される。一部の実施形態では、ドーズパックと一緒に含まれる使用説明書は、治療有効量のＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子を投与するための使用説明書を含む。一部の実施形態では、治療有効量のＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、約０．５ｍｇ／ｋｇ体重〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量、例えば、約８〜約１６ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量である。一部の実施形態では、治療有効量のＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、約８ｍｇ／ｋｇ体重の用量である。一部の実施形態では、治療有効量のＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、約１６ｍｇ／ｋｇ体重の用量である。一部の実施形態では、治療有効量のＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、約２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量である。一部の実施形態では、投薬量を、週２回で、毎週で、隔週で、毎週〜隔週の間の頻度で、３週毎に、４週毎に、または毎月投与できる。
【００１７】
一部の実施形態では、ドーズパックは、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤを含み、また、追加のいずれの治療薬も含まず、例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、エトポシド、トポテカン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、抗ＶＥＧＦ抗体、ＶＥＧＦトラップ、ベバシズマブ、またはソラフェニブを含まない。一部の実施形態では、ドーズパックは、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子を含み、また、追加のいずれの治療薬も含まず、例えば、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、エトポシド、トポテカン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、抗ＶＥＧＦ抗体、ＶＥＧＦトラップ、ベバシズマブ、またはソラフェニブを含まない。一部の実施形態では、ドーズパックは、少なくとも１つの追加の治療薬を含むが、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子を含まない。一部の実施形態では、ドーズパックは：（ｉ）ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、および（ｉｉ）少なくとも１つの追加の治療薬、を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬は、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、エトポシド、トポテカン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、抗ＶＥＧＦ抗体、ＶＥＧＦトラップ、ベバシズマブ、またはソラフェニブである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬はドセタキセルである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬はペメトレキセドである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬はシスプラチンである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬はパクリタキセルである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬は５−ＦＵである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬はビンクリスチンである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬はベバシズマブである。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬はソラフェニブである。一部の実施形態では、ドーズパックは、少なくとも２つの追加の治療薬を含むが、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子を含まない。一部の実施形態では、少なくとも２つの追加の治療薬は、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、エトポシド、トポテカン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、抗ＶＥＧＦ抗体、ＶＥＧＦトラップ、ベバシズマブ、およびソラフェニブ、から選択される。
【００１８】
上記の一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子のＦＧＦＲ１  ＥＣＤ部分は、配列番号１〜４から選択される配列を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つの融合パートナーは、Ｆｃ、アルブミン、およびポリエチレングリコールから選択される。一部の実施形態では、少なくとも１つの融合パートナーはＦｃである。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号８〜１０から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、配列番号５および配列番号６から選択される配列を含む。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、配列番号５および配列番号６から選択される配列から構成される。一部の実施形態では、少なくとも１つの融合パートナーは、Ｆｃおよびポリエチレングリコールである。一部の実施形態では、少なくとも１つの融合パートナーは、ポリエチレングリコールである。
【００１９】
特定の実施形態では、癌は、前立腺癌、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、子宮内膜の癌、頭頸部癌、喉頭癌、肝癌、腎癌、神経膠芽細胞腫または膵臓癌である。特定の実施形態では、癌は肺癌である。特定の実施形態では、癌は腎癌である。特定の実施形態では、癌は結腸癌である。特定の実施形態では、癌は乳癌である。特定の実施形態では、癌は子宮内膜の癌である。特定の実施形態では、癌は前立腺癌である。
【００２０】
本明細書記載のいずれかの実施形態またはそれらの追加の治療薬のいずれかの組み合わせは、本明細書記載の発明の方法のいずれかまたは全てに適用できる。
[本発明1001]
線維芽細胞増殖因子受容体1（ＦＧＦＲ1）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、ならびに、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、5−フルオロウラシル（5−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、エトポシド、トポテカン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＶＥＧＦトラップ、抗ＶＥＧＦ抗体、およびベバシズマブ、から選択される少なくとも1つの追加の治療薬を対象に投与する工程を含む、癌の治療方法。
[本発明1002]
前記ＦＧＦＲ1  ＥＣＤが融合パートナーをさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記少なくとも1つの追加の治療薬がドセタキセルである、本発明1001または1002の方法。
[本発明1004]
前記少なくとも1つの追加の治療薬がパクリタキセルである、本発明1001または1002の方法。
[本発明1005]
前記少なくとも1つの追加の治療薬がシスプラチンである、本発明1001または1002の方法。
[本発明1006]
前記少なくとも1つの追加の治療薬がペメトレキセドである、本発明1001または1002の方法。
[本発明1007]
前記少なくとも1つの追加の治療薬がビンクリスチンである、本発明1001または1002の方法。
[本発明1008]
前記少なくとも1つの追加の治療薬が5−ＦＵである、本発明1001または1002の方法。
[本発明1009]
前記少なくとも1つの追加の治療薬がトポテカンである、本発明1001または1002の方法。
[本発明1010]
ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、5−フルオロウラシル（5−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、エトポシド、トポテカン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＶＥＧＦトラップ、抗ＶＥＧＦ抗体、およびベバシズマブ、から選択される少なくとも2つの追加の治療薬を前記対象に投与する工程を含む、本発明1001〜1009のいずれかの方法。
[本発明1011]
前記少なくとも2つの追加の治療薬の1つが、パクリタキセル、オキサリプラチン、5−ＦＵ、またはベバシズマブである、本発明1010の方法。
[本発明1012]
前記少なくとも2つの追加の治療薬がパクリタキセルおよびカルボプラチンである、本発明1010の方法。
[本発明1013]
前記少なくとも2つの追加の治療薬がオキサリプラチンおよび5−ＦＵである、本発明1010の方法。
[本発明1014]
前記少なくとも2つの追加の治療薬がドキソルビシンおよびパクリタキセルである、本発明1010の方法。
[本発明1015]
前記少なくとも2つの追加の治療薬が5−ＦＵおよびロイコボリンである、本発明1010の方法。
[本発明1016]
前記少なくとも2つの追加の治療薬がベバシズマブおよび5−ＦＵである、本発明1010の方法。
[本発明1017]
前記少なくとも2つの追加の治療薬がシスプラチンおよびエトポシドである、本発明1010の方法。
[本発明1018]
前記ＦＧＦＲ1  ＥＣＤが、配列番号1〜4から選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1001〜1017のいずれかの方法。
[本発明1019]
前記ＦＧＦＲ1  ＥＣＤが融合パートナーをさらに含み、該融合パートナーがＦｃである、本発明1002〜1018のいずれかの方法。
[本発明1020]
前記ＦＧＦＲ1  ＥＣＤおよびＦｃが、配列番号5および配列番号6から選択される配列を含む、本発明1019の方法。
[本発明1021]
（ｉ）線維芽細胞増殖因子受容体1（ＦＧＦＲ1）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、（ｉｉ）線維芽細胞増殖因子受容体1（ＦＧＦＲ1）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）融合分子、ならびに（ｉｉｉ）ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、5−フルオロウラシル（5−ＦＵ）、ロイコボリン、エトポシド、トポテカン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＶＥＧＦトラップ、抗ＶＥＧＦ抗体、およびペメトレキセドから選択される少なくとも1つの追加の治療薬、から選択される少なくとも1つの成分を含むドーズパックであって、ＦＧＦＲ1  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ1  ＥＣＤ融合分子ならびに前記少なくとも1つの追加の治療薬を患者に投与するための使用説明書をさらに含む、ドーズパック。
[本発明1022]
癌の治療における使用のための、線維芽細胞増殖因子受容体1（ＦＧＦＲ1）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）と、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、5−フルオロウラシル（5−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、エトポシド、トポテカン、およびベバシズマブ、から選択される少なくとも1つの追加の治療薬との組み合わせ。
[本発明1023]
癌の治療における使用のための、線維芽細胞増殖因子受容体1（ＦＧＦＲ1）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）と、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、5−フルオロウラシル（5−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、エトポシド、トポテカン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＶＥＧＦトラップ、抗ＶＥＧＦ抗体、およびベバシズマブから選択される少なくとも2つの追加の治療薬との組み合わせ。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】実施例１に記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独で、ドセタキセル単独で、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとドセタキセルを逐次で、およびＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとドセタキセルを同時に、投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図２Ａ】実施例２に記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、ペメトレキセド単独（６２．５ｍｇ／ｋｇ用量）、またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとペメトレキセド（６２．５ｍｇ／ｋｇ用量）を投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図２Ｂ】実施例２に記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、ペメトレキセド単独（６２．５ｍｇ／ｋｇ用量）、またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとペメトレキセド（６２．５ｍｇ／ｋｇ用量）を投与したマウスの平均体重を示す。
【図３Ａ】実施例２に記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、ペメトレキセド単独（１２５ｍｇ／ｋｇ用量）、またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとペメトレキセド（１２５ｍｇ／ｋｇ用量）を投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図３Ｂ】実施例２に記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、ペメトレキセド単独（１２５ｍｇ／ｋｇ用量）、またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとペメトレキセド（１２５ｍｇ／ｋｇ用量）を投与したマウスの平均体重を示す。
【図４Ａ】実施例２に記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、ペメトレキセド単独（２５０ｍｇ／ｋｇ用量）、またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとペメトレキセド（２５０ｍｇ／ｋｇ用量）を投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図４Ｂ】実施例２に記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、ペメトレキセド単独（２５０ｍｇ／ｋｇ用量）、またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとペメトレキセド（２５０ｍｇ／ｋｇ用量）を投与したマウスの平均体重を示す。
【図５】実施例３Ａに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、シスプラチン単独、またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとシスプラチンの組み合わせを投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図６】実施例３Ｂに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、パクリタキセル単独、またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとパクリタキセルの組み合わせを投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図７】実施例３Ｃに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、５−ＦＵ単独、またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃと５−ＦＵの組み合わせを投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図８Ａ】実施例３Ｄに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、ドセタキセル単独、またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとドセタキセルの組み合わせを、ドセタキセルの投与量３ｍｇ／ｋｇで投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図８Ｂ】実施例３Ｄに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、ドセタキセル単独、またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとドセタキセルの組み合わせを、ドセタキセルの投与量１０ｍｇ／ｋｇで投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図９Ａ】実施例３Ｅに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、ビンクリスチン単独、またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとビンクリスチンの組み合わせを、１日目から開始するビンクリスチンの投与量１ｍｇ／ｋｇで投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図９Ｂ】実施例３Ｅに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、ビンクリスチン単独、またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとビンクリスチンの組み合わせを、１９日目から開始するビンクリスチンの投与量１．５ｍｇ／ｋｇで投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図９Ｃ】実施例３Ｅに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、ビンクリスチン単独、またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとビンクリスチンの組み合わせを、１９日目から開始するビンクリスチンの投与量１．５ｍｇ／ｋｇで投与したマウスの平均体重を示す。
【図１０】実施例３Ｆに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、カルボプラチン単独、パクリタキセル単独、カルボプラチンとパクリタキセルの組み合わせ、ならびにＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、カルボプラチン、およびパクリタキセルの組み合わせを投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図１１Ａ】実施例４Ａに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、５−ＦＵ（１０ｍｇ／ｋｇ）とロイコボリン（１０ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせ、ならびにＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、５−ＦＵ（１０ｍｇ／ｋｇ）、およびロイコボリン（１０ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせを投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図１１Ｂ】実施例４Ａに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、５−ＦＵ（２０ｍｇ／ｋｇ）とロイコボリン（２０ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせ、ならびにＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、５−ＦＵ（２０ｍｇ／ｋｇ）、およびロイコボリン（２０ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせを投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図１１Ｃ】実施例４Ａに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、５−ＦＵ（３０ｍｇ／ｋｇ）とロイコボリン（３０ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせ、ならびにＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、５−ＦＵ（３０ｍｇ／ｋｇ）、およびロイコボリン（３０ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせを投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図１１Ｄ】実施例４Ａに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、ベバシズマブ単独、およびＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとベバシズマブの組み合わせを投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図１１Ｅ】実施例４Ａに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、ベバシズマブ、５−ＦＵ、およびロイコボリンの組み合わせ、ならびにＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、ベバシズマブ、５−ＦＵ、およびロイコボリンの組み合わせを投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図１２Ａ】実施例４Ｂに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、オキサリプラチン＋５−ＦＵおよびロイコボリン（ＬＶ）単独、ならびにＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびオキサリプラチン＋５−ＦＵ／ＬＶの組み合わせを、オキサリプラチンの投与量５ｍｇ／ｋｇで投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図１２Ｂ】実施例４Ｂに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、オキサリプラチン＋５−ＦＵおよびロイコボリン（ＬＶ）単独、ならびにＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびオキサリプラチン＋５−ＦＵ／ＬＶの組み合わせを、オキサリプラチンの投与量１０ｍｇ／ｋｇで投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図１２Ｃ】実施例４Ｂに記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、オキサリプラチン＋５−ＦＵおよびロイコボリン（ＬＶ）単独、ならびにＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびオキサリプラチン＋５−ＦＵ／ＬＶの組み合わせを、オキサリプラチンの投与量１５ｍｇ／ｋｇで投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図１３】実施例５に記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、ドキソルビシンとパクリタキセルの組み合わせ、ならびにＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、ドキソルビシン、およびパクリタキセルの組み合わせを投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【図１４】実施例６に記載のように、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独、キナーゼ挿入ドメイン受容体（Ｋｉｎａｓｅ  Ｉｎｓｅｒｔ  Ｄｏｍａｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）（ＫＤＲ）−ＥＣＤ融合分子単独、およびＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−ＦｃとＫＤＲ−ＥＣＤ融合分子の組み合わせを投与したマウスの平均腫瘍体積を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
発明の詳細な説明
本明細書で使われるセクション見出しは構成上の目的のみのためのものであり、記載内容を限定するものと解釈されるべきでない。
【００２３】
定義
別段の定めが無ければ、本発明に関連して使用される科学的、技術的用語は、当業者により、通常理解されている意味を有するものとする。さらに、文脈から別義が要求されない限り、単数用語は、複数を含み、複数用語は、単数を含むものとする。
【００２４】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、組織培養および形質転換（例えば、電気穿孔、リポフェクション）、酵素反応、ならびに精製技術に関連して使用される特定の技術は、当技術分野で既知である。多くのこのような技術および方法が、他にも記載され、例えば、特に、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．分子クローニング：実験マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）（２ｎｄ  ｅｄ．、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８９））に記載されている。さらに、化学合成、化学分析、製剤、処方、および送達、ならびに患者の治療に関する特定の技術も、また、当技術分野で既知である。
【００２５】
この出願では、別段の定めがなければ、「または（ｏｒ）」の使用は、「および／または（ａｎｄ／ｏｒ）」を意味する。複数の請求項に従属する従属請求項の文脈中で、「または」の使用は、選択肢においてのみ、２つ以上の前出の独立または従属請求項の参照を意味する。また、「要素」または「成分」等の用語は、特に別段の規定がなければ、１つのユニットおよび要素、ならびに２つ以上のサブユニットを含む成分を含む要素および成分の両方を包含する。
【００２６】
本明細書で使われる全ての数字は、近似値であり、測定誤差および有効数字の丸めを考慮に入れて変化してもよい。特定の測定量の前に置かれた「約」の使用は、試料の不純物、測定誤差、人的ミス、および統計的変動、ならびに有効数字の丸めによる変動を含む。
【００２７】
本開示において使用される下記の用語は、別段の定めがなければ、下記の意味を有すると解釈されるものとする：
【００２８】
用語「核酸分子」および「ポリヌクレオチド」は、同義に使用でき、ヌクレオチドのポリマーを指す。このようなヌクレオチドのポリマーには、天然および／または非天然ヌクレオチドを含んでもよく、また、限定されないが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、およびＰＮＡが含まれる。「核酸配列」は、核酸分子またはポリヌクレオチドを含むヌクレオチドの直鎖配列を指す。
【００２９】
用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、同義に使用され、アミノ酸残基のポリマーを意味し、また、最小長さに限定されない。このようなアミノ酸残基のポリマーは、天然または非天然アミノ酸残基を含んでもよく、また、限定されないが、ペプチド、オリゴペプチド、アミノ酸残基のダイマー、トリマー、およびマルチマーを含む。完全長タンパク質およびその断片の両方は、この定義に含まれる。この用語は、また、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化、等を含む。さらに、本発明の目的のためには、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持している限りにおいて、ネイティブ配列に対し改変、例えば、欠失、付加、および置換（通常、本来保存的である）を含むタンパク質を指す。これらの改変は、部位特異的変異誘発の場合のように計画的であっても、またはタンパク質を産生する宿主の変異またはＰＣＲ増幅によるエラーの場合のように偶発的であってもよい。ポリペプチドが、特定のアミノ酸配列「から構成される（ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｏｆ）」場合は、それは、なおも、翻訳後修飾、例えば、グリコシル化およびシアリル化を含んでもよい。
【００３０】
用語「ＦＧＦＲ１細胞外ドメイン」（「ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ」）は、完全長ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ断片、およびＦＧＦＲ１  ＥＣＤ変異体を含む。本明細書で使われる用語「ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ」は、細胞内および膜貫通ドメインを欠く、シグナルペプチドを有するまたは有しないＦＧＦＲ１ポリペプチドを意味する。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、配列番号１および２から選択されるアミノ酸配列を有するヒト完全長ＦＧＦＲ１  ＥＣＤである。本明細書で使われる用語「完全長ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ」は、細胞外ドメインの最後のアミノ酸までのＦＧＦＲ１  ＥＣＤを意味し、Ｎ末端シグナルペプチドを含んでも含まなくてもよい。本明細書で定められるように、完全長ＦＧＦＲ１  ＥＣＤの最後のアミノ酸は、位置３５３にある。従って、ヒト完全長ＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、配列番号２（成熟型）まで、または配列番号１（シグナルペプチドあり）まで対応するアミノ酸配列から構成できる。本明細書で使われる用語「ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ断片」は、完全長ＥＣＤのＮおよび／またはＣ末端から１つまたは複数の残基が欠失しているが、ＦＧＦ−２に結合する能力を保持しているＦＧＦＲ１  ＥＣＤを意味する。ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ断片は、Ｎ末端シグナルペプチドを含んでも、または含まなくてもよい。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ断片は、配列番号４（成熟型）または配列番号３（シグナルペプチドあり）に対応するアミノ酸配列を有するヒトＦＧＦＲ１  ＥＣＤ断片である。
【００３１】
本明細書で使われる用語「ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ変異体」は、アミノ酸付加、欠失、および置換を含み、ＦＧＦ−２に対する結合能力を保持しているＦＧＦＲ１  ＥＣＤを意味する。このような変異体は、親ＦＧＦＲ１  ＥＣＤに対し、少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、または９９％同一であってもよい。２つのポリペプチドの％同一性は、類似性測定用デフォルト設定のＢｅｓｔｆｉｔプログラムを使って、２つのポリペプチドのアミノ酸配列を比較することにより決定される類似度スコアにより測定可能である。Ｂｅｓｔｆｉｔは、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ  ２：４８２−４８９（１９８１）の局地的相同性アルゴリズムを使って、２つの配列間の類似性の最良セグメントを見つけ出す。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ変異体は、配列番号４の配列に対し少なくとも９５％同一である。
【００３２】
ＦＧＦＲ１  ＥＣＤポリペプチドの参照アミノ酸配列に対し少なくとも、例えば、９５％同一性のアミノ酸配列を有するポリペプチドは、ポリペプチド配列が、参照ポリペプチドの各１００アミノ酸当たり５つまでのアミノ酸変化を含むことができることを除いて、ポリペプチドのアミノ酸配列が参照配列に対し同一であるものである。換言すれば、参照アミノ酸配列に対し、少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るには、参照配列中のアミノ酸残基の５％までが、欠失しても、もしくは別のアミノ酸により置換されてもよく、または参照配列中の合計アミノ酸残基の５％までのアミノ酸が、参照配列中に挿入されてもよい。これらの参照配列の変化は、参照アミノ酸配列のＮ−またはＣ−末端位置で発生しても、または参照配列中のこれらの末端位置の間のどこかの、参照配列中の残基の間に個別に、または１つまたは複数の近接集団で、散らばって発生してもよい。
【００３３】
実際に、どの特定のポリペプチドが、配列表に記載された核酸配列によってコードされた例えば、アミノ酸配列またはポリペプチド配列に対し、少なくとも７０％、８０％、９０％、または９５％同一であるのかを、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム、等の既知のコンピュータプログラム、を使って、従来の方式で決定できる。本発明に従って、参照配列に対し、特定の配列が、例えば、９５％同一であるかどうかを決定するためにＢｅｓｔｆｉｔまたは他の配列整列プログラムを使う場合、当然ながら、同一性のパーセンテージが参照アミノ酸配列の全長にわたり計算され、参照配列中のアミノ酸残基の合計数の５％までの相同性のギャップが許容されるパラメータが設定される。
【００３４】
本明細書で使われる用語「ｈＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３５３」および「ｈＦＧＦＲ１．３５３」は、同義に使用され、配列番号１（シグナルペプチドあり）または配列番号２（シグナルペプチドなし；成熟型）に対応する完全長ヒトＦＧＦＲ１  ＥＣＤを意味する。
【００３５】
本明細書で使われる用語「ｈＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９」および「ｈＦＧＦＲ１．３３９」は、同義に使用され、配列番号３（シグナルペプチドあり）または配列番号４（シグナルペプチドなし；成熟型）に対応するヒトＦＧＦＲ１  ＥＣＤを意味する。
【００３６】
追加のｈＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、例えば、米国特許第７，６７８，８９０号に記載されている。この特許は、目的に応じて、参照によって本明細書にその全体が組み込まれる。
【００３７】
用語「ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子」は、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ、および１つまたは複数の「融合パートナー」を含む分子を意味する。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび融合パートナーは、共有結合される（「融合」）。融合パートナーも同様にポリペプチド（「融合パートナーポリペプチド」）の場合は、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび融合パートナーポリペプチドは、連続したアミノ酸配列の一部であってもよく、融合パートナーポリペプチドは、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤのＮ末端またはＣ末端のいずれに結合してもよい。このような場合には、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび融合パートナーポリペプチドは、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび融合パートナーポリペプチドの両方をコードするコード配列から単一ポリペプチドとして翻訳できる（「ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合タンパク質」）。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび融合パートナーは、例えば、ペプチド結合以外の化学結合、等の他の手段により共有結合される。ポリペプチドを他の分子に共有結合させる多くの既知の方法（例えば、融合パートナー）が使用できる。他の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび融合パートナーは、「リンカー」を介して融合でき、リンカーは、少なくとも１つのアミノ酸または化学成分から構成される。
【００３８】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤポリペプチドおよび融合パートナーは、非共有結合される。いくつかのこのような実施形態では、それらは、例えば、結合対を使って結合できる。代表的結合対には、限定されないが、ビオチンとアビジンまたはストレプトアビジン、抗体とその抗原、等が含まれる。
【００３９】
代表的融合パートナーには、限定されないが、免疫グロブリンＦｃドメイン、アルブミン、およびポリエチレングリコールが含まれる。いくつかの代表的Ｆｃドメインのアミノ酸配列を配列番号８〜１０に示す。一部の実施形態では、Ｆｃに融合されたＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、「ｈＦＧＦＲ１  ＥＣＤ−Ｆｃ」と呼ばれる。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１  Ｆｃ、ＩｇＧ２  Ｆｃ、ＩｇＧ３  Ｆｃ、およびＩｇＧ４  Ｆｃから選択される。
【００４０】
本明細書で使われる用語「ｈＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ」および「ｈＦＧＦＲ１．３３９−Ｆｃ」は、同義に使用され、配列番号６（シグナルペプチドなし、成熟型）および配列番号５（シグナルペプチドあり）から選択されるアミノ酸配列を意味する。ｈＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃで治療できる非制限的代表的癌には、限定されないが、次記が含まれる：非小細胞肺癌、結腸癌、乳癌、胃癌、頭頸部癌、前立腺癌、子宮内膜癌、肉腫、小細胞肺癌、卵巣癌、カポジ肉腫、ホジキン病、白血病、非ホジキンリンパ腫、神経芽細胞腫（脳癌）、横紋筋肉腫、ウイルムス腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、膀胱癌、精巣癌、リンパ腫、胚細胞性腫瘍、結腸と直腸の癌、消化管癌、甲状腺癌、多発性骨髄腫、膵臓癌、中皮腫、悪性胸膜中皮腫、血液／リンパ腺癌、悪性腹膜中皮腫、食道癌、腎細胞癌、多形神経膠芽腫、および肝癌。
【００４１】
用語「シグナルペプチド」は、ポリペプチドのＮ末端に配置され、哺乳動物細胞からポリペプチドの分泌を促進するアミノ酸残基配列を意味する。シグナルペプチドは、哺乳動物細胞からポリペプチドを搬出する際に切断され、成熟タンパク質を形成することができる。シグナルペプチドは、天然であっても、合成であってもよく、また、付加する相手タンパク質に対し異種であっても、相同であってもよい。代表的シグナルペプチドには、限定されないが、ＦＧＦＲ１シグナルペプチド、例えば、配列番号７のアミノ酸配列が含まれる。代表的シグナルペプチドには、また、異種のタンパク質由来のシグナルペプチドが含まれる。「シグナル配列」は、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を意味する。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、シグナルペプチドを欠く。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、少なくとも１つのシグナルペプチドを含み、これは、ネイティブＦＧＦＲ１シグナルペプチドでも、または異種のシグナルペプチドであってもよい。
【００４２】
用語「ベクター」は、宿主細胞中で増殖可能なクローン化ポリヌクレオチドまたは複数ポリヌクレオチドを含むように操作されうるポリヌクレオチドを記載するのに使用される。ベクターは、１つまたは複数の次記の配列を含んでもよい：複製起点、目的のポリペプチドの発現を調節する１つまたは複数の調節配列（例えば、プロモータおよび／またはエンハンサー、等）、および／または１つまたは複数の選択可能マーカー遺伝子（例えば、抗生物質耐性遺伝子および比色分析法で使うことができる遺伝子、例えば、β−ガラクトシダーゼ）。用語「発現ベクター」は、宿主細胞中の目的のポリペプチドを発現させるのに使用されるベクターを意味する。
【００４３】
「宿主細胞」は、ベクターまたは単離ポリヌクレオチドのレシピエントになる可能性のある、またはそれになっている細胞を意味する。宿主細胞は、原核細胞であっても、または真核細胞であってもよい。代表的真核細胞には、哺乳動物細胞、例えば、霊長類または非霊長類動物細胞；真菌細胞；植物細胞；および昆虫細胞が含まれる。代表的哺乳動物細胞には、限定されないが、２９３およびＣＨＯ細胞、ならびにそれらの誘導体、例えば、それぞれ、２９３−６ＥおよびＤＧ４４細胞が含まれる。
【００４４】
本明細書で使われる用語「単離される」は、通常、一緒に天然で見出される少なくとも一部の成分から分離されている分子を指す。例えば、それが産生された細胞の少なくとも一部の成分から分離されている場合、ポリペプチドは、「単離されている」と呼ばれる。ポリペプチドが、発現後細胞から分泌される場合は、それが産生された細胞からポリペプチド含有上清を物理的に分離することは、ポリペプチドの「単離」と見なされる。同様に、その中で、通常、天然に見出されるより大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合では、ゲノムＤＮＡまたはミトコンドリアのＤＮＡ）の一部ではない場合か、または少なくともそれが産生された細胞の成分の一部ではない、例えば、ＲＮＡポリヌクレオチドの場合、ポリヌクレオチドは、「単離されている」と呼ばれる。従って、宿主細胞中のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドが、その天然のベクター中に見つからない限り、「単離されている」と呼ぶことができる。
【００４５】
用語「抗腫瘍性組成物」は、少なくとも１つの活性治療薬、例えば、「抗癌剤」を含む癌の治療に有用な組成物を意味する。治療薬（抗癌剤）の例には、限定されないが、例えば、化学療法剤、増殖抑制剤、細胞傷害性薬剤、放射線療法に使われる薬剤、抗血管新生薬、アポトーシス性薬剤、抗チュブリン剤、および他の癌治療薬、例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ベバシズマブ、アバスチン（登録商標））、抗ＨＥＲ−２抗体（例えば、トラスツズマブ、ハーセプチン（登録商標））、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ、リツキサン（登録商標））、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ（タルセバ（登録商標））、血小板由来増殖因子阻害剤（例えば、グリベック（登録商標）（イマチニブメシレート））、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、サイトカイン；１つまたは複数の次記の標的ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡまたはＶＥＧＦ受容体、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２に結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）；ならびに他の生理活性および有機の化学薬剤、等が含まれる。これらの組み合わせもまた、本発明に含まれる。
【００４６】
「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化学化合物を指す。化学療法剤の例には、下記が含まれる：アルキル化剤、例えば、チオテパおよびシクロスホスファミド（シトキサン（登録商標））；スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、およびウレドーパ；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチロメラミンを含むエチレンイミンおよびメチルアメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシンおよびブラタシノン）；Δ９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、マリノール（登録商標））；βラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ハイカムチン（登録商標）を含む）、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、および９−アミノカンプトテシン）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼルシンおよびビセレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラティスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロランブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミン酸化物塩酸塩、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンｇａｍｍａ１ＩおよびカリケアマイシンｏｍｅｇａＩ１（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ  ｅｔ  ａｌ．、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．、３３：１８３−１８６（１９９４）を参照）；ＣＤＰ３２３、経口アルファ−４インテグリン阻害剤；ダイネマイシンＡを含むダイネマイシン；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン 、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノドキソルビシン、２−ピロリノドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤（ドキシル（登録商標））、リポソームドキソルビシンＴＬＣ Ｄ−９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣ等のマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；抗代謝物、例えば、メトトレキサート、ゲムシタビン（ジェムザール（登録商標））、ペメトレキセド（アリムタ（登録商標））；テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ゼローダ（登録商標））、エポチロン、および５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎物質、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充液、例えば、フォリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォルニチン；エリプチニウム酢酸塩；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；マイタンシノイド、例えば、マイタンシンおよびアンサマイトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２、２'、２'−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン類（特にＴ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、フィルデシン（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシッド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標））、およびドセタキセル（タキソテール（登録商標））；クロランブシル；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金薬剤、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン（例えば、エロキサチン（登録商標））、およびカルボプラチン；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、フィルデシン（登録商標））、およびビノレルビン（ナベルビン（登録商標））を含むｖｉｎｃａｓ（チューブリン重合の微小管形成を防ぐ）；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））を含むレチノイド、例えば、レチノイン酸；ビスホスホネート、例えば、クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ゾメタ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（アレディア（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロネート（アクトネル（登録商標））；トロキサシタビン（１、３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖性に関わるシグナル伝達経路の遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、および上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）；ワクチン剤、例えば、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチンおよび遺伝子治療ワクチン剤、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ロイベクチン（登録商標）ワクチン、およびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、アバレリックス（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ、ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）；Ｂａｙｅｒ）；ＳＵ−１１２４８（スニチニブ、スーテント（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；ペリホシン、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ベルケイド（登録商標））；ＣＣＩ−７７９；ティピファニブ（Ｒ１１５７７）；ソラフェニブ、ＡＢＴ５１０；Ｂｃｌ−２阻害剤、例えば、オブリメルセンナトリウム（ゲナセンス（登録商標））；ピクサントロン；ＥＧＦＲ阻害剤（下記定義参照）；チロシンキナーゼ阻害剤（下記定義参照）；セリン−トレオニンキナーゼ阻害剤、例えば、ラパマイシン（シロリムス、ラパミューン（登録商標））；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、ロナファーニブ（ＳＣＨ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲ（商標）））；および上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体；ならびにＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法略称）やＦＯＬＦＯＸ（オキサリプラチン（エロキサチン（商標））と５−ＦＵおよびロイコボリンとの組み合わせ療法の略称）のような上記の２つ以上の組み合わせ。
【００４７】
本明細書で定義される化学療法剤には、「抗ホルモン薬」または「内分泌治療薬」が含まれ、これらは、癌の増殖を促進できるホルモンの効果を、調節する、減らす、遮断する、または抑制する作用をする。これらはそれら自体ホルモンであってもよく、限定されないが、次記を含む：タモキシフェン（ノルバデックス（登録商標））、４−ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（フェアストン（登録商標））、イドキシフェン、ドロロキシフェン、ラロキシフェン（エビスタ（登録商標））、トリオキシフェン、ケオキシフェン、および選択的エストロゲン受容体調節薬（ＳＥＲＭ）、例えば、ＳＥＲＭ３を含む混合アゴニスト／アンタゴニストプロファイルを有する抗エストロゲン；アゴニスト特性のない純粋な抗エストロゲン、例えば、フルベストラント（ファスロデックス（登録商標））、およびＥＭ８００（このような薬剤は、エストロゲン受容体（ＥＲ）二量体化を遮断し、ＤＮＡ結合を阻害し、ＥＲ代謝回転を増加させ、および／またはＥＲレベルを抑制できる）；ステロイド性アロマターゼ阻害剤、例えば、ホルメスタンおよびエキセメスタン（アロマシン（登録商標））、ならびに非ステロイド性アロマターゼ阻害剤、例えば、アナストロゾール（アリミデックス（登録商標））、レトロゾール（フェマーラ（登録商標））およびアミノグルテチミド、ならびにボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、メゲストロール酢酸塩（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール、および４（５）−イミダゾール等の他のアロマターゼ阻害剤を含むアロマターゼ阻害剤；リュープロリド（リュープロン（登録商標）およびエリガード（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン、およびトリプトレリンを含む黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト；プロゲスチン、例えば、メゲストロール酢酸塩およびメドロキシプロゲステロン酢酸塩、エストロゲン、例えば、ジエチルスチルベストロールおよびプレマリン、およびアンドロゲン／レチノイド、例えば、フルオキシメステロン、全てのトランス型レチノイン酸およびフェンレチニドを含む性ステロイド；オナプリストン；抗プロゲステロン；エストロゲン受容体ダウンレギュレーター（ＥＲＤ）；抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミドおよびビカルタミド；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容可能な塩、酸または誘導体；ならびに上記の２つ以上の組み合わせ。
【００４８】
「血管新生因子または薬剤」は、血管発生を刺激する増殖因子、例えば、血管新生、内皮細胞増殖、血管の安定性、および／または脈管形成、等、を促進する増殖因子を意味する。例えば、血管新生因子には、限定されないが、例えば、次記が含まれる：ＶＥＧＦおよびＶＥＧＦファミリーのメンバー（ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−ＣおよびＶＥＧＦ−Ｄ）、ＰｌＧＦ、ＰＤＧＦファミリー、線維芽細胞増殖因子ファミリー（ＦＧＦ）、ＴＩＥリガンド（アンジオポエチン）、エフリン、デルタ様リガンド４（ＤＬＬ４）、ｄｅｌ−１、線維芽細胞増殖因子：酸性（ａＦＧＦ）および塩基性（ｂＦＧＦ）、フォリスタチン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）／分散因子（ＳＦ）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、レプチン、ミッドカイン、ニューロピリン、胎盤増殖因子、血小板由来内皮細胞増殖因子（ＰＤ−ＥＣＧＦ）、血小板由来増殖因子、特にＰＤＧＦ−ＢＢまたはＰＤＧＦＲ−ベータ、プレイオトロフィン（ＰＴＮ）、プログラニュリン、プロリフェリン、形質転換増殖因子−アルファ（ＴＧＦ−アルファ）、形質転換増殖因子−ベータ（ＴＧＦ−ベータ）、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−アルファ）、等。また、創傷治癒を加速する因子、例えば、成長ホルモン、インスリン様増殖因子−Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）、ＶＩＧＦ、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、ＣＴＧＦおよびそのファミリーメンバー、およびＴＧＦ−アルファおよびＴＧＦ−ベータ、も含まれる。例えば、Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ  ａｎｄ  Ｄ'Ａｍｏｒｅ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５３：２１７−３９；Ｓｔｒｅｉｔ  ａｎｄ  Ｄｅｔｍａｒ（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２２：３１７２−３１７９；Ｆｅｒｒａｒａ  ＆  Ａｌｉｔａｌｏ（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５（１２）：１３５９−１３６４；Ｔｏｎｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２２：６５４９−６５５６（例えば、表１の既知の血管新生因子のリスト）；および、Ｓａｔｏ（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．８：２００−２０６、を参照されたい。
【００４９】
「抗血管新生薬」または「血管新生阻害剤」は、血管新生、脈管形成、または望ましくない血管透過性を直接、間接的に阻害する、低分子量物質、ポリヌクレオチド（例えば、阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉまたはｓｉＲＮＡ）を含む）、ポリペプチド、単離タンパク質、組換えタンパク質、抗体、またはそれらのコンジュゲートもしくは融合タンパク質、を意味する。抗血管新生薬には、血管新生因子またはその受容体の血管新生活性に結合し、遮断する薬剤が含まれることは理解されよう。例えば、抗血管新生薬は、例えば、次記に示す上記で定義の血管新生薬剤に対する抗体または他のアンタゴニストである：ＶＥＧＦ−Ａに結合する融合タンパク質、例えば、ＺＡＬＴＲＡＰ（商標）（アフリベルセプト）、ＶＥＧＦ−Ａに対する抗体、例えば、アバスチン（登録商標）（ベバシズマブ）またはＶＥＧＦ−Ａ受容体（例えば、ＫＤＲ受容体またはＦｌｔ−１受容体）に対する抗体、抗ＰＤＧＦＲ阻害剤、例えば、グリベック（登録商標）（イマチニブメシレート）、ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達を遮断する小分子（例えば、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２８４、ＳＵ６６６８、スーテント（登録商標）／ＳＵ１１２４８（スニチニブリンゴ酸塩）、ＡＭＧ７０６、または例えば、国際公開第２００４／１１３３０４号に記載のもの）。また、抗血管新生薬には、ネイティブ血管新生阻害剤、例えば、アンジオスタチン、エンドスタチン、等が含まれる。例えば、Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ  ａｎｄ  Ｄ'Ａｍｏｒｅ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５３：２１７−３９；Ｓｔｒｅｉｔ  ａｎｄ  Ｄｅｔｍａｒ（２００３）癌遺伝子２２：３１７２−３１７９（例えば、表３の悪性黒色腫の抗血管新生療法剤のリスト）；Ｆｅｒｒａｒａ  ＆  Ａｌｉｔａｌｏ（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５（１２）：１３５９−１３６４；Ｔｏｎｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２２：６５４９−６５５６（例えば、表２の既知の抗血管新生因子リスト）；および、Ｓａｔｏ（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．ｄＯｎｃｏｌ．８：２００−２０６（例えば、表１の臨床試験で使われる抗血管新生薬のリスト）、を参照されたい。
【００５０】
「ドセタキセル」は、１、７β、１０β−トリヒドロキシ−９−オキソ−５β、２０−エポキシタキサ−１１−エン−２α、４、１３α−トリイル  ４−アセタート  ２−ベンゾアート  １３−｛（２Ｒ、３Ｓ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロパノアート｝を意味し、これは、一部の実施形態では、タキソテール（登録商標）のブランド名で販売されているケースもある。一部の実施形態では、ドセタキセルは、乳癌および非小細胞肺癌から選択される少なくとも１つの癌の治療に有効である。ドセタキセルで治療可能な非制限的代表的癌には、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝癌、腎癌、胃癌、頭頸部癌、および黒色腫、が含まれる。
【００５１】
「パクリタキセル」は、（２α、４α、５β、７β、１０β、１３α）−４、１０−ビス（アセチルオキシ）−１３−｛［（２Ｒ、３Ｓ）−３−（ベンゾイルアミノ）−２−ヒドロキシ−３−フェニルプロパノイル］オキシ｝−１、７−ジヒドロキシ−９−オキソ−５、２０−エポキシタキサ−１１−エン−２−イルベンゾアートを意味し、これは、一部の実施形態では、タキソール（登録商標）のブランド名で販売されているケースもある。パクリタキセルで治療可能な非制限的代表的癌には、乳癌、肺癌、およびカポジ肉腫、が含まれる。
【００５２】
「カルボプラチン」は、シス−ジアンミン（シクロブタン−１、１−ジカルボキシラート−Ｏ、Ｏ’）白金（ＩＩ）を意味し、これは、一部の実施形態では、パラプラチン（登録商標）のブランド名で販売されているケースもある。パクリタキセルで治療可能な非制限的代表的癌には、卵巣癌、非小細胞肺癌、精巣癌、胃癌、および膀胱癌、が含まれる。
【００５３】
「オキサリプラチン」は、［（１Ｒ、２Ｒ）−シクロヘキサン−１、２−ジアミン］（エタンジオアト−Ｏ、Ｏ’）白金（ＩＩ）を意味し、これは、一部の実施形態では、エロキサチン（登録商標）のブランド名で販売されているケースもある。オキサリプラチンで治療可能な非制限的代表的癌には、結腸直腸癌、胃癌、および卵巣癌、が含まれる。
【００５４】
「シスプラチン」は、（ＳＰ−４−２）−ジアンミンジクロリド白金、を指す。シスプラチンで治療可能な非制限的代表的癌には、肉腫、小細胞肺癌、卵巣癌、膀胱癌、精巣癌、リンパ腫、および胚細胞性腫瘍、が含まれる。
【００５５】
「ビンクリスチン」は、メチル（１Ｒ、９Ｒ、１０Ｓ、１１Ｒ、１２Ｒ、１９Ｒ）−１１−（アセチルオキシ）−１２−エチル−４−［（１３Ｓ、１５Ｓ、１７Ｓ）−１７−エチル−１７−ヒドロキシ−１３−（メトキシカルボニル）−１、１１−ジアザテトラシクロ［１３．３．１．０４、１２．０５、１］ノナデカ−４（１２）、５、７、９−テトラエン−１３−イル］−８−ホルミル−１０−ヒドロキシ−５−メトキシ−８、１６−ジアザペンタシクロ［１０．６．１．０１、９．０２、７．０１６、１９］ノナデカ−２、４、６、１３−テトラエン−１０−カルボキシラート、を意味し、これは、一部の実施形態では、Ｖｉｎｃａｓａｒ（登録商標）のブランド名で販売されているケースもある。ビンクリスチンで治療可能な非制限的代表的癌には、ホジキン病、白血病、非ホジキンリンパ腫、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、急性リンパ芽球性白血病、およびウイルムス腫瘍、が含まれる。
【００５６】
「ペメトレキセド」は、（Ｓ）−２−［４−［２−（４−アミノ−２−オキソ−３、５、７−トリアザビシクロ［４．３．０］ノナ−３、８、１０−トリエン−９−イル）エチル］ベンゾイル］アミノペンタン二酸、を意味し、これは、一部の実施形態では、アリムタ（登録商標）のブランド名で販売されているケースもある。ペメトレキセドで治療可能な非制限的代表的癌には、非小細胞肺癌、中皮腫、および食道癌、が含まれる。
【００５７】
「ドキソルビシン」は、（８Ｓ、１０Ｓ）−１０−（４−アミノ−５−ヒドロキシ−６−メチル−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）−６、８、１１−トリヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシアセチル）−１−メトキシ−７、８、９、１０−テトラヒドロテトラセン−５、１２−ジオン、を意味し、これは、一部の実施形態では、アドリアマイシン（登録商標）のブランド名で販売されているケースもある。ドキソルビシンで治療可能な非制限的代表的癌には、膀胱癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、胃癌、甲状腺癌、軟部肉腫、多発性骨髄腫、ホジキン病、白血病、非ホジキンリンパ腫、神経芽細胞腫、肉腫、およびウイルムス腫瘍、が含まれる。
【００５８】
「５−ＦＵ」および「５−フルオロウラシル」は、５−フルオロ−１Ｈ−ピリミジン−２、４−ジオン、を意味し、これは、一部の実施形態では、Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）のブランド名で販売されているケースもある。５−ＦＵで治療可能な非制限的代表的癌には、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、肝細胞腫、および卵巣癌、が含まれる。
【００５９】
「ロイコボリン」は、また、フォリン酸としても知られ、（Ｓ）−２−［４−［（２−アミノ−５−ホルミル−４−オキソ−５、６、７、８−テトラヒドロ−１Ｈ−プテリジン−６−イル）メチルアミノ］ベンゾイル］アミノペンタン二酸、を意味する。一部の実施形態では、ロイコボリンは、５−フルオロウラシルと一緒に投与される。
【００６０】
本明細書で使われる用語「ＶＥＧＦ」または「ＶＥＧＦ−Ａ」は、１６５−アミノ酸ヒト血管内皮細胞増殖因子ならびに関連する１２１−、１８９−、および２０６−アミノ酸ヒト血管内皮細胞増殖因子を意味し、これらは、Ｌｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１３０６、およびＨｏｕｃｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎ、５：１８０６、中で、天然対立遺伝子およびそのプロセッシング型と一緒に記載されている。用語「ＶＥＧＦ」は、また、非ヒト種、例えば、マウス、ラットまたは霊長類由来のＶＥＧＦを意味する。特定の種由来のＶＥＧＦは、ヒトＶＥＧＦをｈＶＥＧＦ、マウスＶＥＧＦをｍＶＥＧＦ、等の用語で示される場合もある。また、用語「ＶＥＧＦ」は、１６５アミノ酸ヒト血管内皮細胞増殖因子のアミノ酸８〜１０９または１〜１０９を含む切断型のポリペプチドの意味で使用される。いずれかのこのようなＶＥＧＦの型への参照は、本出願では、例えば、「ＶＥＧＦ（８−１０９）」、「ＶＥＧＦ（１−１０９）」、「ＶＥＧＦ−Ａ１０９」または「ＶＥＧＦ１６５」等の表現により特定できる。「切断型」ネイティブＶＥＧＦのアミノ酸の位置は、ネイティブＶＥＧＦ配列で示されるようにナンバリングされる。例えば、切断型ネイティブＶＥＧＦ中のアミノ酸位置１７（メチオニン）は、また、ネイティブＶＥＧＦ中の位置１７（メチオニン）である。切断型ネイティブＶＥＧＦは、ネイティブＶＥＧＦに相当する、ＫＤＲおよびＦｌｔ−１受容体に対する結合親和性を有する。
【００６１】
「ＶＥＧＦアンタゴニスト」は、限定されないが、１つまたは複数のＶＥＧＦ受容体に対する結合を含む、ＶＥＧＦの作用を中和、遮断、阻害、抑止、低減または妨害することができる分子を意味する。ＶＥＧＦアンタゴニストには、限定されないが、抗ＶＥＧＦ抗体およびその抗原結合断片、特異的にＶＥＧＦに結合して１つまたは複数の受容体に対する結合を封鎖する受容体分子および誘導体、抗ＶＥＧＦ受容体抗体、ＶＥＧＦ受容体アンタゴニスト、例えば、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼの小分子阻害剤、およびＶＥＧＦに結合するイムノアドヘシン、例えば、ＶＥＧＦトラップ（例えば、アフリベルセプト）、が含まれる。本明細書で使われる用語「ＶＥＧＦアンタゴニスト」には、特に、ＶＥＧＦに結合し、ＶＥＧＦ作用を中和、遮断、阻害、抑止、低減または妨害できる抗体、抗体断片、他の結合ポリペプチド、ペプチド、および非ペプチド小分子、等の分子が含まれる。従って、用語「ＶＥＧＦ作用」は、特に、ＶＥＧＦ媒介ＶＥＧＦ生物活性を含む。
【００６２】
本明細書で使われる用語「ＶＥＧＦトラップ」は、タンパク質、例えば、ＶＥＧＦに結合し、ＶＥＧＦ作用を中和、遮断、阻害、抑止、低減または妨害できる融合分子を意味する。ＶＥＧＦトラップの例は、アフリベルセプトである。
【００６３】
用語「抗ＶＥＧＦ抗体」または「ＶＥＧＦに結合する抗体」は、充分な親和性と特異性を持ち、ターゲティングＶＥＧＦにおける診断薬および／または治療薬として有用な、ＶＥＧＦに結合できる抗体を意味する。抗ＶＥＧＦ抗体は、ヌードマウス中の種々のヒト腫瘍細胞株の増殖を抑制し（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：８４１−８４４（１９９３）；Ｗａｒｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９５：１７８９−１７９７（１９９５）；Ｂｏｒｇｓｔｒoｍ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６：４０３２−４０３９（１９９６）；Ｍｅｌｎｙｋ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６：９２１−９２４（１９９６））、また、虚血性網膜障害モデルの眼内血管新生を抑制する。Ａｄａｍｉｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１１４：６６−７１（１９９６）。例えば、抗ＶＥＧＦ抗体は、ＶＥＧＦ活性が関与する疾患または状態のターゲティングおよび干渉における治療薬として使用できる。例えば、米国特許第６，５８２，９５９号、同６，７０３，０２０号；国際公開第９８／４５３３２号；同９６／３００４６号；同９４／１０２０２号、同２００５／０４４８５３号；欧州特許第０６６６８６８Ｂ１号；米国特許公開第２００３０２０６８９９号、同２００３０１９０３１７号、同２００３０２０３４０９号、同２００５０１１２１２６号、同２００５０１８６２０８号、および同２００５０１１２１２６号；Ｐｏｐｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８８：１４９−１６４（２００４）；および国際公開第２００５０１２３５９号、を参照されたい。選択された抗体は、通常、ＶＥＧＦに対する充分強力な結合親和性を有するであろう。例えば、抗体は、１００ｎＭ〜１ｐＭのＫｄ値でｈＶＥＧＦと結合できる。抗体親和性は、例えば、表面プラズモン共鳴法ベースアッセイ（例えば、国際出願第２００５／０１２３５９号に記載のＢＩＡｃｏｒｅアッセイ）；酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）；および競合アッセイ（例えば、ＲＩＡの）、により測定できる。抗体は、例えば、治療薬としての有効性を評価するために、他の生物活性アッセイに供してもよい。このようなアッセイは、当技術分野で既知であり、標的抗原および目的の抗体の用途に依存する。例には、ＨＵＶＥＣ抑制アッセイ；腫瘍細胞増殖抑制アッセイ（例えば、国際公開第８９／０６６９２号に記載のような）；抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体媒介細胞傷害（ＣＤＣ）アッセイ（米国特許第５、５００、３６２号）；およびアゴニスト活性または造血アッセイ（国際公開第９５／２７０６２号、参照）、が含まれる。抗ＶＥＧＦ抗体は、通常、他のＶＥＧＦ相同体、例えば、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−ＤまたはＶＥＧＦ−Ｅにも、他の増殖因子、例えば、ＰｌＧＦ、ＰＤＧＦまたはｂＦＧＦ、にも結合しない。
【００６４】
一実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ハイブリドーマＡＴＣＣＨＢ１０７０９により産生されたモノクローナル抗ＶＥＧＦ抗体Ａ４．６．１と同じエピトープ；限定されないが、「ベバシズマブ」（「ｒｈｕＭＡｂ  ＶＥＧＦ」または「アバスチン（登録商標）」としても知られる）として知られる抗体を含む、組換え型ヒト化抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体と結合するモノクローナル抗体を含む（Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９、参照）。アバスチン（登録商標）は、現在市販されている。ベバシズマブで治療できる非制限的代表的癌には、非小細胞肺癌、結腸直腸癌、乳癌、腎癌、卵巣癌、多形神経膠芽腫、小児科の骨肉腫、胃癌および膵臓癌、が含まれる。ベバシズマブは、その受容体に対するヒトＶＥＧＦの結合を遮断するマウス抗体Ａ．４．６．１由来の変異ヒトＩｇＧ１フレームワーク領域および抗原結合相補性決定領域を含む。ベバシズマブおよび他のヒト化抗ＶＥＧＦ抗体は、米国特許第６，８８４，８７９号、および同７，１６９，９０１号、にさらに記載されている。さらなる抗ＶＥＧＦ抗体は、国際公開第２００５／０１２３５９号および同２００９／０７３１６０号；米国特許第７，０６０，２６９号、同６，５８２，９５９号、同６，７０３，０２０号；同６，０５４，２９７号；ＷＯ９８／４５３３２号；同９６／３００４６号；同９４／１０２０２；ＥＰ０６６６８６８Ｂ１号；米国特許公開第２００６００９３６０号、同２００５０１８６２０８号、同２００３０２０６８９９号、同２００３０１９０３１７号、同２００３０２０３４０９号、および同２００５０１１２１２６号；ならびにＰｏｐｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８８：１４９−１６４（２００４）、に記載されている。
【００６５】
用語「対象」および「患者」は、本明細書では、同義に使用され、哺乳動物を指す。一部の実施形態では、対象または患者はヒトである。他の実施形態では、限定されないが、げっ歯類、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳類実験動物、哺乳類家畜、哺乳類スポーツアニマル、および哺乳類ペット、等の他の哺乳動物の治療の方法も提供される。
【００６６】
本明細書で使われる「癌」および「腫瘍」は、同義の用語で、動物の細胞またはいずれかの組織の異常成長または異常増殖を意味する。本明細書で使われる用語「癌」と「腫瘍」は、固形および血液／リンパ腺癌を包含し、また、悪性、前癌性、および良性の増殖、例えば、異形成症、を含む。癌の例には、限定されないが、細胞腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病が含まれる。さらに詳細なこのような癌の非制限的例には、扁平上皮癌、小細胞肺癌、下垂体癌、食道癌、星状細胞腫、軟部肉腫、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜の癌、肝細胞癌、消化管癌、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、腎癌、肝癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、脳癌、子宮内膜癌、精巣癌、胆管細胞癌、胆嚢癌、胃癌、黒色腫、および種々の型の頭頸部癌、が含まれる。
【００６７】
本明細書で使われる「治療」は、ヒトを含む哺乳動物の状態のための治療薬の何らかの投与または適用を含み、また、例えば、退縮を起こさせること、または損失、不足、もしくは不完全機能の回復もしくは修復；または非効率的プロセスの刺激による、状態または状態の進行の抑制、状態またはその進行の抑制または遅延化、その成長の停止、部分的または完全な状態の軽減、または状態の治癒、を含む。一部の実施形態では、「治療」は、治療される個体または細胞の自然経過を変えるための臨床的介入を意味し、予防のために、または臨床的病理学経過の間に行うことができる。望ましい治療効果には、疾患の発生または再発の防止、症状の軽減、いずれかの直接的、または疾患の間接的病理学的結果の縮減、転移の防止、疾患進行速度の減速化、疾患状態の改善もしくは緩和、および寛解または改善予後が含まれる。
【００６８】
分子または分子の組み合わせの「有効量」または「治療有効量」は、単独または他の治療薬と組み合わせて投与される場合、状態を治療するのに十分な量、および／または、少なくとも対象の一部分で、腫瘍細胞の増殖を抑制する量を意味する。特定の実施形態では、治療有効量は、投与時、および必要な時間の間、所望の治療または予防の結果を得るために有効な量を意味する。治療有効量の本発明のＦＧＦＲ１融合タンパク質は、例えば、それぞれの疾患状態、年齢、性別、および体重ならびに個体中でＦＧＦＲ１融合タンパク質の所望の応答を誘発する能力、等の因子に従って変化してもよい。治療有効量は、また、ＦＧＦＲ１融合タンパク質のいずれかの有毒なまたは有害な効果より、治療薬効が勝るような量である。癌の場合には、薬剤の有効量は、癌細胞の数を減らす；腫瘍の大きさを減らす；癌細胞の末梢器官への湿潤を抑制する（すなわち、ある程度遅らせ、典型的には停止させる）；腫瘍転移を抑制する（すなわち、ある程度遅らせ、典型的には停止させる）；ある程度、腫瘍増殖を抑制する；腫瘍の治療を可能とする、および／またはある程度１つまたは複数の障害関連症状を軽減することができる。増殖を防ぐ、および／または現存癌細胞を死滅させることができる範囲で、薬剤は、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性であってもよい。
【００６９】
「予防的有効量」は、投与時および必要な時間の間、所望の予防の結果を実現するのに有効な量を意味する。必ずではないが、典型的には、予防の用量は、疾患の早期段階の前に、またはその段階で対象に使用されるので、予防的有効量は、治療有効量よりも少なくなる。
【００７０】
用語「抑制（ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）」または「抑制（ｉｎｈｉｂｉｔ）」は、いずれかの表現型特性の減少もしくは停止、またはその特性の発生率、程度、もしくは可能性の減少もしくは停止を意味する。非制限的代表的抑制には、腫瘍増殖の抑制が含まれる。
【００７１】
本明細書における「同時（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ）」投薬は、２つの治療用分子の８時間以内の投与を意味する。一部の実施形態では、２つの治療用分子は、同じ時間に投与される。各治療用分子の少なくとも一部の用量が、１時間以内に投与される場合、２つの治療用分子は、同じ時間（すなわち、同時に）投与されると見なされる。少なくとも１つの用量が同時に投与される場合で、たとえ、１つまたは複数の他の用量が同時に投与されない場合でも、２つの治療用分子は、同時に投与されることになる。一部の実施形態では、同時投与には、１つまたは複数の他の治療用分子の投与の中断後に、１つまたは複数の治療用分子の投与が継続される場合の投与計画を含む。
【００７２】
１つまたは複数の追加の治療薬と「組み合わせた」投与は、同時（一斉投与を含む）および任意の順番の連続（すなわち、逐次）投与を含む。
【００７３】
「薬学的に許容可能なキャリア」は、対象に投与するための「医薬組成物」を一緒に構成する治療薬と共に使用される当技術分野で従来からある無毒な固体、半固体、または液体充填剤、希釈剤、封入材料、製剤補助剤、またはキャリアを意味する。薬学的に許容可能なキャリアは、採用された投薬量および濃度でレシピエントに対し非毒性であり、製剤の他の成分と共生できる。薬学的に許容可能なキャリアは、採用された製剤に対し適する。例えば、治療薬が経口で投与されることになる場合は、キャリアは、ゲルカプセルであってもよい。治療薬が、皮下に投与されることになる場合は、キャリアは、理想的には、皮膚に刺激性ではなく、注射部位反応を起こさない。
【００７４】
治療組成物および方法
ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子を他の治療薬と組み合わせて使用する癌の治療方法
本発明は、線維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）細胞外ドメイン（ＥＣＤ）またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子の１つまたは複数の追加の抗癌治療との組み合わせ、およびこのような組み合わせの癌治療での使用を特徴とする。追加の抗癌治療の例には、限定されないが、手術、放射線療法（ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）（放射線療法（ｒａｄｉｏ  ｔｈｅｒａｐｙ））、生物学的療法、免疫療法、および化学療法またはこれらの治療の組み合わせ、が含まれる。さらに、細胞傷害性薬剤、抗血管新生および抗増殖性薬剤がＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子を組み合わせて使用できる。いずれかの方法と使用の特定の態様では、本発明は、治療有効量のＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、および１つまたは複数の化学療法剤を、癌と診断された、または未治療の癌に苦しんでいる対象に投与することによる癌の治療を提供する。種々の化学療法剤が、本発明の治療方法および使用法と組み合わせて使用可能である。意図されている化学療法剤の非制限的な代表的リストは、本明細書の「定義」、および「発明の概要」のところで提供されている。別の態様では、本発明は、治療有効量のＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、および１つまたは複数の抗血管新生薬を、未治療の癌と診断された対象に投与することによる、癌の治療を提供する。別の態様では、本発明は、治療有効量のＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、および１つまたは複数のＶＥＧＦアンタゴニストを、未治療の癌と診断された対象に投与することによる、癌の治療を提供する。さらに別の態様では、本発明は、本発明は、治療有効量のＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、および１つまたは複数のＶＥＧＦアンタゴニストを１つまたは複数の化学療法剤と組み合わせて、未治療の癌と診断された対象に投与することによる、癌の治療を提供する。一部の実施形態では、１つまたは複数のＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体および／またはＶＥＧＦトラップである。
【００７５】
一例では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子を、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、ソラフェニブ、エトポシド、トポテカン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、抗ＶＥＧＦ抗体、ＶＥＧＦトラップ、およびベバシズマブから選択される少なくとも１つの追加の治療薬と組み合わせて、対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、およびドセタキセルを対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、およびペメトレキセドを対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、およびパクリタキセルを対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、およびシスプラチンを対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、およびビンクリスチンを対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、および５−ＦＵを対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、およびエトポシドを対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、およびトポテカンを対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、およびＶＥＧＦアンタゴニストを対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、および抗ＶＥＧＦ抗体を対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、およびＶＥＧＦトラップを対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、およびベバシズマブを対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子の少なくとも１つの用量ならびに少なくとも１つの追加の治療薬の少なくとも１つの用量が同時に投与される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子の少なくとも１つの用量ならびに少なくとも１つの追加の治療薬の少なくとも１つの用量がおなじ時間（すなわち、一斉に）に投与される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ���  ＥＣＤ融合分子の少なくとも１つの用量ならびに少なくとも２つの追加の治療薬の少なくとも１つの用量が、同時に、または一斉に投与される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子の少なくとも１つの用量ならびに少なくとも３つの追加の治療薬の少なくとも１つの用量が、同時に、または一斉に投与される。別の例では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃを、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、およびエトポシド、トポテカン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、抗ＶＥＧＦ抗体、ＶＥＧＦトラップ、ソラフェニブ、ならびにベバシズマブから選択される少なくとも１つの追加の治療薬と組み合わせて、対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびドセタキセルを対象に投与する工程を含む、癌の治療方法が提供される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの少なくとも１つの用量および少なくとも１つの追加の治療薬の少なくとも１つの用量が同時に投与される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの少なくとも１つの用量および少なくとも１つの追加の治療薬の少なくとも１つの用量が同じ時間に投与される。
【００７６】
ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）を含む医薬組成物は、特異的適応症に対し治療有効量で投与される。治療有効量は、通常、治療される対象の体重、対象の身体的または健康状態、治療される状態の広がりの大きさ、および／または治療される対象の年齢に依存する。一般的に、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）は、単回用量当たり約５０μｇ／ｋｇ体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で投与されるべきである。任意選択で、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）は、単回用量当たり約１００μｇ／ｋｇ体重〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の量で投与できる。さらなる任意選択では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）は、単回用量当たり約０．５ｍｇ／ｋｇ体重〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の量で投与できる。特定の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）は、約８ｍｇ／ｋｇ体重〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）は、約８ｍｇ／ｋｇ体重、約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約１１ｍｇ／ｋｇ体重、約１２ｍｇ／ｋｇ体重、約１３ｍｇ／ｋｇ体重、約１４ｍｇ／ｋｇ体重、約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約１６ｍｇ／ｋｇ体重、約１７ｍｇ／ｋｇ体重、約１８ｍｇ／ｋｇ体重、約１９ｍｇ／ｋｇ体重、または約２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、また、上記用量の１つからもう一つの用量までの範囲で投与できる。一部の実施形態では、投与量は、週２回で、毎週で、隔週で、毎週〜隔週の間の頻度で、３週毎に、４週毎に、または毎月、投与できる。
【００７７】
特定の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子の投与量は、使用される消衰係数（ＥＣ）に応じて、２つの方法で計算できる。消衰係数は、タンパク質のグリコシル化を考慮するかどうかに応じて異なる。一実施形態では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃのアミノ酸組成物に基づく消衰係数は、例えば、１．４２ｍＬ／ｍｇ＊ｃｍである。別の実施形態では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの炭水化物成分ならびにアミノ酸成分を考慮すると、消衰係数は、１．１１ｍＬ／ｍｇ＊ｃｍである。１．１１ｍＬ／ｍｇ＊ｃｍのＥＣを使ったＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ用量の計算は、表１に示すように、計算結果の用量を２８％増加させる。２つの消衰係数を使って計算した用量は異なるが、モル濃度、または実際の投与される薬剤量は、同じである。特に断りのない限り、本明細書で考察する用量は、それぞれ、グリコシル化を考慮しない消衰係数を使って計算される。ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃに関し、これらの投与量を、グリコシル化を考慮した消衰係数を使ったものとの比較を表１に示す。表１から解るように、１．４２ｍＬ／ｍｇ＊ｃｍのＥＣを使った約８ｍｇ／ｋｇ（例えば、７．８と８．０ｍｇ／ｋｇ）の投与量は、１．１１ｍＬ／ｍｇ＊ｃｍのＥＣで計算した場合の約１０ｍｇ／ｋｇ（例えば、１０．０と１０．２ｍｇ／ｋｇ）の投与量に相当する。１．４２ｍＬ／ｍｇ＊ｃｍのＥＣを使った約１６ｍｇ／ｋｇ（例えば、１５．６と１６．０ｍｇ／ｋｇ）の投与量は、１．１１ｍＬ／ｍｇ＊ｃｍのＥＣで計算した場合の約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、２０．０と２０．５ｍｇ／ｋｇ）の投与量に相当する。上記「定義」セクションで述べたように、本明細書で提供される測定された数字は、近似値であり、追加の丸められた有効数字を有する値を含む。例えば、８ｍｇ／ｋｇは、２つの有効桁数を有する値、例えば、７．６、７．８、８．０、８．２、８．４、および８．４５を包含する。これらの数値は、それぞれ、８に丸められる。同様に、１６ｍｇ／ｋｇ、等の数値は、１６に丸められる３桁の有効数字を持つ値、例えば、１５．６および１６．０を包含する。
【００７８】
（表１）ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−ＦＣ用量の変換
0005945277.tif 000002
a 用量：mg/kgで示す。
【００７９】
ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、および／または少なくとも１つの追加の治療薬を含む医薬組成物が、必要に応じ、対象に投与できる。 特定の実施形態では、有効量の治療用分子が、１回または複数回、対象に投与される。種々の実施形態では、有効量の治療用分子が、少なくとも２ヶ月に１回、少なくとも月１回、少なくとも月２回、週１回、週２回、または週３回、対象に投与される。種々の実施形態では、有効量の治療用分子が、少なくとも１週間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１年間、対象に投与される。
【００８０】
特定の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子および少なくとも１つの追加の治療薬の組み合わせ投与は、同時投与を含み、別々の製剤または単一の医薬製剤を使った一斉投与、ならびに任意の順番の連続投与が含まれる。任意選択で、両方の（または全ての）活性薬剤が一斉にそれらの生物活性を発揮する時間帯がある。ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）と組み合わせて投与される治療薬の治療有効量は、医師の、または獣医師の自由裁量であろう。投与量の投与と調整は、治療される状態の最大の治療成果を達成するように行われる。用量は、さらに、使われる治療薬のタイプ、治療される患者の特異性、疾患の経過、および治療計画の所望の攻撃性といった因子に依存するであろう。
【００８１】
特定の実施形態では、患者は、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）およびＶＥＧＦアンタゴニストの組み合わせで治療される。一部の実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、ＶＥＧＦトラップ（例えば、アフリベルセプト）である。一部の実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体である。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ抗体は、ベバシズマブである。ベバシズマブの１つの代表的投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲である。従って、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇまたは１５ｍｇ／ｋｇ（またはそれらのずれかの組み合わせ）の内の１つまたは複数の用量が患者に投与できる。このような用量は、断続的に、例えば、毎週、２週毎に、または３週毎に投与できる。
【００８２】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子（例えば、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ）は、別の治療薬、例えば、化学療法剤または抗血管新生薬と組み合わせて、推奨された、または処方された投与量および／または頻度で、治療薬を投与される。
【００８３】
投与経路およびキャリア
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、静脈内、および／または皮下に投与できる。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、別の経路、例えば、動脈内、非経口、鼻腔内、筋肉内、心臓内、心室内、気管内、頬側、直腸、腹腔内、皮内、局所的、経皮、もしくは鞘内経路により、または移植もしくは吸入による他の方法で投与できる。種々の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療薬が、種々の経路によりインビボで投与できる。この経路には、静脈内、動脈内、皮下、非経口、鼻腔内、筋肉内、心臓内、心室内、気管内、頬側、直腸の、腹腔内の、皮内、局所的、経皮、もしくは鞘内、または移植もしくは吸入による他の方法が含まれる。 各対象組成物は、単独または組み合わせて固体、半固形、液体、またはガス状形態の製剤に処方できる。これら製剤は、例えば、錠剤、カプセル剤、粉剤、粒剤、軟膏、溶液、坐剤、浣腸剤、注射剤、吸入剤、およびエアロゾル、である。
【００８４】
種々の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、および／または少なくとも１つの追加の治療薬を含む組成物は、当技術分野で既知の各種の薬学的に許容可能なキャリアを有する製剤として提供される（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：実際と比較を伴った薬学の科学と実践：ドラッグファクトプラス（Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ｗｉｔｈ  Ｆａｃｔｓ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：Ｄｒｕｇｆａｃｔｓ  Ｐｌｕｓ）、２０ｔｈ  ｅｄ．（２００３）；Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．、医薬品剤形および薬剤デリバリーシステム（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、７ｔｈｅｄ．、 Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）；Ｋｉｂｂｅ  ｅｔ  ａｌ．、医薬品賦形剤ハンドブック（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ）、３ｒｄｅｄ．、 Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ（２０００）を参照）。 ビークル、アジュバント、キャリア、および希釈剤等の、種々の薬学的に許容可能なキャリアが、通常、利用可能である。さらに、種々の薬学的に許容可能な補助物質、例えば、ｐＨ調整剤および緩衝剤、浸透圧調整剤、安定剤、湿潤剤、等が、一般的に利用可能である。特定の非制限的代表的キャリアには、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、水、グリセリン、エタノール、およびこれらの組み合わせが含まれる。一部の実施形態では、治療薬が、上記定義セクションで示したブランド名薬剤、またはジェネリック等価物として処方される。一部の実施形態では、ドセタキセルが、タキソテール（登録商標）（Ｓａｎｏｆｉ  Ａｖｅｎｔｉｓ）またはジェネリック等価物として処方される。
【００８５】
種々の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤｓ、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、および／または少なくとも１つの追加の治療薬を含む組成物が、水性または非水性溶媒、例えば、植物または他の油、合成脂肪族酸グリセリド、より高級脂肪酸のエステル、またはプロピレングリコール中での溶解、分散、または乳化により；および、所望に応じ、通常の添加物、例えば、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定化剤および防腐剤、と一緒に、注射剤用に処方できる。種々の実施形態では、組成物は、例えば、受容可能な加圧噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素、等、を使って、吸入用に処方できる。 種々の実施形態では、組成物は、また、例えば、生分解性または非生分解性高分子と一緒に、徐放マイクロカプセルとして処方できる。 非制限的代表的生分解性製剤には、ポリ乳酸グリコール酸ポリマーが含まれる。非制限的代表的非生分解性製剤には、ポリグリセリン脂肪酸エステルが含まれる。このような製剤を作製する特定の方法は、例えば、欧州特許第ＥＰ１１２５５８４Ａ１号に記載されている。
【００８６】
１つまたは複数の用量のＦＧＦＲ１  ＥＣＤ、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、および／または少なくとも１つの追加の治療薬をそれぞれ含み、１つまたは複数の容器を含む医薬品ドーズパックが提供される。一部の実施形態では、ドーズパックは、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子を含むが、次記のいずれの追加の治療薬も含まない：ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、エトポシド、トポテカン、ソラフェニブ、ＶＥＧＦアンタゴニスト、抗ＶＥＧＦ抗体、ＶＥＧＦトラップ、またはベバシズマブ。他の実施形態では、ドーズパックは、少なくとも１つの追加の治療薬を含むが、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子を含まない。他の実施形態では、ドーズパックは、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子および少なくとも１つの追加の治療薬を含み、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子が、少なくとも１つの追加の治療薬とは別々の容器に入れられている。他の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、少なくとも１つの追加の治療薬と同じ容器中にある。特定の実施形態では、２つ以上の追加の治療薬が提供され、２つ以上の治療薬は、別々の、または同じ容器内に入れられてもよい。特定の実施形態では、ユニット投与量が提供され、ユニット投与量は、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子を含む所定量の組成物、および／または１つまたは複数の追加の薬剤を有するか、または有しない少なくとも１つの追加の治療薬を含む。特定の実施形態では、このようなユニット投与量は、注射用単回使用薬剤充填済み注射器で提供される。種々の実施形態では、ユニット投与量中に含まれる組成物は、生理食塩水、ショ糖、等；緩衝液、例えば、リン酸塩、等を含んでもよく；および／または安定な、また、有効なｐＨ領域内で処方してもよい。 あるいは、特定の実施形態では、組成物は、適切な液体、例えば、無菌の水の添加により再構成できる凍結乾燥粉末として提供できる。 特定の実施形態では、組成物は、限定されないが、ショ糖およびアルギニンを含む、１つまたは複数のタンパク質凝集を抑制する物質を含む。特定の実施形態では、本発明の組成物は、ヘパリンおよび／またはプロテオグリカンを含む。一部の実施形態では、ドーズパックは、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤならびに／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子ならびに／またはドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、エトポシド、トポテカン、ソラフェニブ、ＶＥＧＦアンタゴニスト、抗ＶＥＧＦ抗体、ＶＥＧＦトラップ、およびベバシズマブ、から選択される少なくとも１つの追加の治療薬を含む。
【００８７】
一部の実施形態では、ドーズパックは、少なくとも１つの追加の治療薬と一緒に、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子を、患者に投与するための使用説明書をさらに含む。一部の実施形態では、使用説明書は、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子の内の少なくとも１つの用量が、少なくとも１つの追加の治療薬と同時に投与されなければならないことを示している。一部の実施形態では、使用説明書は、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子の内の少なくとも１つの用量が、少なくとも１つの追加の治療薬と同じ時間に投与しなければならないことを示している。
【００８８】
本明細書で使われる用語「使用説明書」には、限定されないが、ラベル、パッケージインサート、電子形式、例えば、コンピュータで判読可能な媒体（例えば、ディスケット、コンパクトディスク、またはＤＶＤ）で利用可能な使用説明書、遠方から、例えば、インターネット経由で、利用可能な使用説明書、等が含まれる。ドーズパックが使用説明書へのアクセス、使用説明書へのリンク（例えば、ユニフォームリソースロケータ、すなわち、ｕｒｌ）、または使用説明書のコピーを得るための他の手順（例えば、返信用はがきの返信、使用説明書を入手できる物理的住所、使用説明書を入手できるｅ−ｍａｉｌアドレス、使用説明書を入手するために連絡する電話番号、等）を提供する場合は、ドーズパックは、使用説明書を含むと考えられる。
【００８９】
ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよびＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子
非制限的代表的ＦＧＦＲ１  ＥＣＤには、完全長ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ断片、およびＦＧＦＲ１  ＥＣＤ変異体が含まれる。ＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、シグナルペプチドを含んでも、または含まなくてもよい。代表的ＦＧＦＲ１  ＥＣＤには、限定されないが、配列番号１、２、３、および４から選択されるアミノ酸配列を有するＦＧＦＲ１  ＥＣＤが含まれる。
【００９０】
非制限的代表的ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ断片には、アミノ酸３３９（成熟型の最初のアミノ酸から数えて；シグナルペプチド無しの場合）で末端となるヒトＦＧＦＲ１  ＥＣＤが含まれる。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ断片は、アミノ酸３３９〜アミノ酸３６０（成熟型の最初のアミノ酸から数えて；シグナルペプチド無しの場合）の間のアミノ酸で末端となる。代表的ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ断片には、限定されないが、配列番号３および４から選択されるアミノ酸配列を有するＦＧＦＲ１  ＥＣＤ断片が含まれる。
【００９１】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、配列番号１〜４から選択される配列を含む。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、配列番号１〜４から選択される配列から構成される。ＦＧＦＲ１  ＥＣＤが、配列番号１〜４から選択される配列から「構成される」場合、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、種々の翻訳後修飾、例えば、グリコシル化およびシアリル化を含んでも、含まなくてもよい。換言すれば、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤが特定のアミノ酸配列から構成される場合、近接のアミノ酸配列中に追加のアミノ酸を含まないが、アミノ酸側鎖、Ｎ末端アミノ基、および／またはＣ末端カルボキシ基に対する修飾を含んでもよい。
【００９２】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、シグナルペプチドを含む。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、シグナルペプチドを欠く。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子のＦＧＦＲ１  ＥＣＤ部分は、配列番号１〜４から選択される配列を含む。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子のＦＧＦＲ１  ＥＣＤ部分は、配列番号１〜４から選択される配列から構成される。ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子のＦＧＦＲ１  ＥＣＤ部分が配列番号１〜４から選択される配列から「構成される」場合、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子のＦＧＦＲ１  ＥＣＤ部分は、種々の翻訳後修飾、例えば、グリコシル化およびシアリル化を含んでも、含まなくてもよい。換言すれば、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子のＦＧＦＲ１  ＥＣＤ部分が特定のアミノ酸配列から構成される場合、ＦＧＦＲ１の近接のアミノ酸配列中に追加のアミノ酸を含まないが、アミノ酸側鎖、Ｎ末端アミノ基、および／またはＣ末端カルボキシ基に対し修飾を含んでもよい。さらに、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、融合分子に結合しているために、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤのＮおよび／またはＣ末端に追加のアミノ酸があってもよいが、これらのアミノ酸は、ＦＧＦＲ１配列由来であってはいけないが、例えば、リンカー配列、または融合パートナー配列由来であってもよい。
【００９３】
一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子の融合パートナー部分は、Ｆｃ、アルブミン、およびポリエチレングリコールから選択される。非制限的代表的融合パートナーは、本明細書で考察される。
【００９４】
本発明者等は、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子、ならびに、ドセタキセル、パクリタキセル、ビンクリスチン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ペメトレキセド、ソラフェニブ、エトポシド、トポテカン、血管上皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アゴニスト、ＶＥＧＦトラップ、抗ＶＥＧＦ抗体、およびベバシズマブから選択される少なくとも１つの追加の治療薬の投与が、癌の治療に有用であることを見出した。一部の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子がドセタキセルと一緒に投与される。
【００９５】
融合パートナーおよびコンジュゲート
本明細書で考察されるように、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、少なくとも１つの融合パートナーと組み合わせることができ、その結果、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子を生成する。これらの融合パートナーは、精製を促進でき、また、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、延長されたインビボ半減期を示すことができる。ＦＧＦＲ１  ＥＣＤの適切な融合パートナーには、例えば、次記が含まれる：水溶性ポリマー等のポリマー、免疫グロブリンの定常ドメイン；ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の一部または全部；フェチュインＡ；フェチュインＢ；ロイシンジッパードメイン；テトラネクチン三量体形成ドメイン；マンノース結合タンパク質（マンノース結合レクチンとしても知られる）、例えば、マンノース結合タンパク質１；および本明細書記載のＦｃ領域（米国特許第６，６８６，１７９号でさらに記載されている）。非制限的代表的ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、例えば、米国特許第７，６７８，８９０号に記載されている。
【００９６】
ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、ポリアミノ酸または分岐点アミノ酸をＦＧＦＲ１  ＥＣＤに結合させて調製できる。例えば、ポリアミノ酸は、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤの循環半減期を延長する役割をするキャリアタンパク質であってもよい（融合分子により達成される利点に加えて）。本発明の治療の目的のために、このようなポリアミノ酸は、理想的には、中和抗原応答または他の有害応答を生成させないか、または生成しないものであるべきである。このようなポリアミノ酸は、血清アルブミン（例えば、ＨＳＡ）、追加の抗体またはその一部、例えば、Ｆｃ領域、フェチュインＡ、フェチュインＢ、ロイシンジッパー核内転写因子赤血球誘導体−２（ＮＦＥ２）、神経網膜ロイシンジッパー、テトラネクチン、または他のポリアミノ酸、例えば、リシンから選択してもよい。本明細書記載のように、ポリアミノ酸の結合位置は、Ｎ末端もしくはＣ末端、またはその間の他の位置でもよく、また、化学リンカー成分を介して選択分子に結合されてもよい。
【００９７】
ポリマー
ポリマー、例えば、水溶性ポリマーは、生理的な環境で典型的に認められるような水性の環境中で、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子の沈殿を減らす融合パートナーとして有用となりうる。本発明で採用されるポリマーは、治療用産物または組成物の調製に対し薬学的に許容可能である。
【００９８】
適切で臨床的に受容可能な水溶性ポリマーには、限定されないが、以下が含まれる：ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド、エチレングリコール／プロピレングリコール共重合体、モノメトキシポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン、ポリ−１、３−ジオキソラン、ポリ−１、３、６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリ（β−アミノ酸）（ホモポリマーまたはランダム共重合体）、ポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー（ＰＰＧ）および他のポリアルキレンオキシド、ポリ酸化プロピレン／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（ＰＯＧ）（例えば、グリセリン）および他のポリオキシエチル化ポリオール、ポリオキシエチル化ソルビトール、またはポリオキシエチル化ブドウ糖、コラン酸または他の炭水化物ポリマー、フィコール、またはデキストランならびにこれらの混合物。
【００９９】
本明細書で使われるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、他のタンパク質の誘導体化に使用されている全ての形、例えば、モノ−（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−またはアリールオキシポリエチレングリコールを包含することが意図されている。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中での安定性の故に、製造における利点がある可能性がある。
【０１００】
本明細書で使われるポリマー、例えば、水溶性ポリマーは、どのような分子量であっても、また、分岐でも、非分岐でもよい。一部の実施形態では、ポリマーは、約２ｋＤａ〜約１００ｋＤａの平均分子量を有する（用語「約」は、ポリマーの調製中に、一部の分子が規定分子量よりも多く秤量され、一部が少なく秤量されうることを示す）。各ポリマーの平均分子量は、約５ｋＤａ〜約５０ｋＤａでも、または約１２ｋＤａ〜約２５ｋＤａであってもよい。一般的に、分子量が高いほど、または分岐部が多いほど、ポリマー：タンパク質比率が大きくなる。所望の治療のプロファイル；例えば、徐放持続期間；もしあれば、生物活性にあたえる効果；取扱の容易さ；抗原性の程度または欠如；および他の既知のポリマーのＦＧＦＲ１  ＥＣＤに与える効果に応じて、他の大きさの分子量も、使用可能である。
【０１０１】
本発明で採用されるポリマーは、典型的には、ポリペプチドの機能性または抗原性ドメインに与える効果を考慮して、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤに結合される。一般的に、タンパク質を活性化ポリマー分子と反応させるために使われるいずれかの適切な条件下で化学的誘導体化を行うことができる。ポリマーを活性成分に連結するのに使われる活性化基には、スルホン、マレイミド、スルフヒドリル、チオール、トリフラート、トレシラート、アジリジン、オキシラン、および５−ピリジルが含まれる。
【０１０２】
本発明のポリマーは、典型的には、アミノ酸または反応性チオール基のアルファ（α）またはイプシロン（ε）アミノ基の位置の異種のポリペプチドに結合するが、ポリマー基は、適切な反応条件下でポリマー基に結合するのに充分な反応性のタンパク質のいずれかの反応基に結合できることが意図されている。従って、ポリマーは、反応基、例えば、遊離アミノまたはカルボキシル基を介してＦＧＦＲ１  ＥＣＤに共有結合できる。遊離アミノ基を有するアミノ酸残基は、リジン残基およびＮ末端アミノ酸残基を含んでもよい。遊離カルボキシル基を有する残基には、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、およびＣ末端アミノ酸残基を含んでもよい。反応性チオール基を有する残基には、システイン残基が含まれる。
【０１０３】
ポリマー、例えば、水溶性ポリマーとコンジュゲートされる融合分子の調製方法は、一般的には、（ａ）ＦＧＦＲ１  ＥＣＤを、そのポリペプチドが１つまたは複数のポリマーに結合される条件下でポリマーと反応させ、（ｂ）反応産物を得ることを含む。各コンジュゲーション用の反応条件は、当技術分野で既知の、または後で開発されたいずれかの条件から選択してもよいが、被修飾タンパク質を不活化させる可能性がある反応条件、例えば、温度、溶剤、およびｐＨレベルへの暴露を避けるか、制限するように選択されるべきである。一般的に、反応の最適反応条件は、既知のパラメータおよび所望の結果に基づいて、ケースバイケースで決定されるであろう。例えば、ポリマー：ポリペプチドコンジュゲートの比率が大きければ大きいほど、コンジュゲートされた産物の割合が大きくなる。最適比率（過剰の未反応ポリペプチドまたはポリマーが存在しない反応効率の観点からの）は、例えば、所望の誘導体化の程度（例えば、モノ−、ジ−、トリ−、等）、選択ポリマーの分子量、ポリマーが分岐か非分岐かどうか、および使用反応条件、等の因子により決定できる。ポリマー（例えば、ＰＥＧ）のポリペプチドに対する比率は、通常、１：１〜１００：１の範囲であろう。１つまたは複数の精製コンジュゲートは、特に、透析、塩析、限外濾過、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、および電気泳動、等の、標準的精製技術を使って、各混合物から調製できる。
【０１０４】
Ｎ末端化学修飾されたＦＧＦＲ１  ＥＣＤが、特に要求される場合がある。ポリマーは、分子量、分岐、等、反応混合物中のポリマーのＦＧＦＲ１  ＥＣＤ分子に対する比率、行われる反応タイプ、および選択したＮ末端化学修飾ＦＧＦＲ１  ＥＣＤを取得する方法、により選択することができる。Ｎ末端化学修飾ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ調製物の取得方法（必要に応じ、この成分を他のモノ誘導体化成分からの分離）は、Ｎ末端化学修飾ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ材料の集団の化学修飾タンパク質分子集団からの精製によるものであってもよい。
【０１０５】
選択的Ｎ末端化学修飾は、特定のタンパク質中で誘導体化に利用可能な異なるタイプの１級アミノ基の異なる反応性（Ｎ末端に対するリシン）を利用する還元的アルキル化により実現できる。適切な反応条件下で、カルボニル基含有ポリマーを使った実質的なタンパク質のＮ末端での選択的誘導体化が実現される。例えば、タンパク質のＮ末端残基のリジン残基のε−アミノ基およびα−アミノ基の間のｐＫａ差異を利用することを可能とするｐＨで反応を行うことにより、ポリマーをタンパク質のＮ末端に選択的に結合させることができる。このような選択的誘導体化により、ポリマーのタンパク質への結合が制御され、ポリマーとのコンジュゲーションが、タンパク質のＮ末端で支配的に起こり、リシン側鎖アミノ基、等の他の反応基の顕著な修飾が起こらない。還元的アルキル化を使う場合、ポリマーは、上述のタイプでよく、また、タンパク質へのカップリングのために、単一の反応性アルデヒドを持たねばならない。単一の反応性アルデヒドを含むポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドも、使用可能である。
【０１０６】
一実施形態では、本発明は、化学的に誘導体化したＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、モノ−またはポリ−（例えば、２〜４）ＰＥＧ成分を含むように考慮している。ペグ化は、利用可能ないずれかのペグ化反応により行うことができる。ペグ化タンパク質産物を調製する方法は、一般的に、（ａ）ポリペプチド（例えば、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体）を、タンパク質が１つまたは複数のＰＥＧ基に結合する条件下でポリエチレングリコールと反応させ；さらに（ｂ）反応産物を取得すること、を含む。一般的に、最適反応条件は、既知のパラメータおよび所望の結果に基づいて、ケースバイケースで決定される。
【０１０７】
当技術分野で既知の多くのＰＥＧ付加方法がある。例えば、欧州特許第０４０１３８４号；Ｍａｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．、Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．、２０：１０２８−１０３５（１９９２）；Ｆｒａｎｃｉｓ、Ｆｏｃｕｓｏｎ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ、３（２）：４−１０（１９９２）；欧州特許第０１５４３１６号；欧州特許第０４０１３８４号；国際出願第９２／１６２２１号；国際出願第９５／３４３２６号；およびペグ化に関連する本明細書で引用された他の出版物、を参照されたい。
【０１０８】
ペグ化は、例えば、反応性ポリエチレングリコール分子とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して、行うことができる。従って、本発明によるタンパク質産物は、ＰＥＧ基がアシルまたはアルキル基を介して結合されているペグ化タンパク質を含む。このような産物は、モノペグ化またはポリペグ化（例えば、２〜６または２〜５ＰＥＧ基を含むもの）であってもよい。ＰＥＧ基は、通常、アミノ酸のα−またはε−アミノ基の位置でタンパク質に結合するが、また、ＰＥＧ基は、適切な反応条件下でＰＥＧ基に結合するのに充分に反応性であるタンパク質に結合しているいずれのアミノ基にも結合できることが意図されている。
【０１０９】
アシル化によるペグ化は、一般的に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の活性エステル誘導体を、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤと反応させることを含む。アシル化反応に対しては、選択ポリマーは、通常、単一の反応性エステル基を有する。いずれの既知のまたはその後に発見された反応性ペグ分子も、ペグ化反応を実行するのに使用できる。適切な活性化ＰＥＧエステルの一例は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）にエステル化したＰＥＧである。本明細書で使われるアシル化は、限定されないが、治療用タンパク質およびポリマー、例えば、ＰＥＧ：アミド、カルバマート、ウレタン、等の間の結合を含むことが意図されている。例えば、Ｃｈａｍｏｗ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．、５：１３３−１４０（１９９４）、を参照されたい。反応条件は、近年既知の、またはその後開発された条件のいずれかから選択してもよいが、被修飾ポリペプチドを不活性化する可能性のある温度、溶媒、およびｐＨ等の条件は避けるべきである。
【０１１０】
アシル化によるペグ化は、通常、ポリペグ化タンパク質を生じる。接続結合は、アミドであってもよい。得られた産物は、実質的に（例えば、＞９５％）モノ−、ジ−、またはトリペグ化のみであってもよい。しかし、より高度のペグ化の一部の種が、使用された特定の反応条件に応じた量で形成される可能性がある。所望なら、特に、透析、塩析、限外濾過、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、および電気泳動を含む標準的精製技術を使って、より高度に精製されたペグ化種を混合物（特に未反応種）から分離することができる。
【０１１１】
アルキル化によるペグ化は、通常、ＰＥＧの末端アルデヒド誘導体を、還元剤の存在下でポリペプチドと反応させることを含む。還元的アルキル化反応に対しては、選択ポリマーは、単一の反応性アルデヒド基を持たなくてはならない。代表的反応性ＰＥＧアルデヒドは、水に安定性のポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド、またはモノＣ１〜Ｃ１０アルコキシまたはそのアリールオキシ誘導体である。例えば、米国特許第５，２５２，７１４号を参照されたい。
【０１１２】
マーカー
さらに、本発明のＦＧＦＲ１  ＥＣＤは、マーカー配列、例えば、融合ポリペプチドの精製を促進するペプチド、に融合されてもよい。マーカーアミノ酸配列は、ヘキサヒスチジンペプチド、例えば、特に、ｐＱＥベクター（Ｑｉａｇｅｎ、Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ、Ｏｎｔａｒｉｏ、Ｃａｎａｄａ）で与えられるタグであってもよい。これらの多くは、市販されている。Ｇｅｎｔｚ  ｅｔ  ａｌ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６：８２１−８２４（１９８９）で記載のように、例えば、ヘキサヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製法を提供する。精製に有用な別のペプチドタグの赤血球凝集素（ＨＡ）タグは、インフルエンザＨＡタンパク質由来のエピトープに対応する。（Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｅｌｌ  ３７：７６７（１９８４））。これらの上記の融合体のいずれも、本明細書記載のＦＧＦＲ１  ＥＣＤを使って操作できる。
【０１１３】
オリゴマー化ドメイン融合パートナー
種々の実施形態では、限定されないが、オリゴマー化は、多価性、増加した結合強度、および異なるドメインの組み合わせ機能、等のいくつかの機能的利点を融合タンパク質に与える。従って、一部の実施形態では、融合パートナーは、オリゴマー化ドメイン、例えば、二量体化ドメインを含む。代表的オリゴマー化ドメインには、限定されないが、アルファヘリックスコイルドコイルドメインを含むコイルドコイルドメイン；コラーゲンドメイン；コラーゲン様ドメイン；および特定の免疫グロブリンドメイン、が含まれる。代表的コイルドコイルポリペプチド融合パートナーには、限定されないが、テトラネクチンコイルドコイルドメイン；軟骨オリゴマーのマトリックスタンパク質のコイルドコイルドメイン；アンジオポエチンコイルドコイルドメイン；およびロイシンジッパードメイン、が含まれる。代表的コラーゲンまたはコラーゲン様オリゴマー化ドメインには、限定されないが、コラーゲン中に見つかったもの、マンノース結合レクチン、肺界面活性剤タンパク質ＡおよびＤ、アディポネクチン、フィコリン、コングルチニン、マクロファージスカベンジャー受容体、およびエミリン（ｅｍｉｌｉｎ）が含まれる。
【０１１４】
抗体Ｆｃ免疫グロブリンドメイン融合パートナー
融合パートナーとして使用可能な多くのＦｃドメインが当技術分野で知られている。一部の実施形態では、融合パートナーは、Ｆｃ免疫グロブリンドメインである。Ｆｃ融合パートナーは、天然抗体に見出される野性型Ｆｃ、その変異体、またはその断片であってもよい。非制限的代表的Ｆｃ融合パートナーには、ヒトＩｇＧ、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のヒンジおよびＣＨ２およびＣＨ３定常ドメインを含むＦｃが含まれる。さらなる代表的Ｆｃ融合パートナーには、限定されないが、ヒトＩｇＡおよびＩｇＭが含まれる。一部の実施形態では、Ｆｃ融合パートナーは、例えば、ＩｇＧ１中にＣ２３７Ｓ変異を含む（例えば、配列番号８を参照）。一部の実施形態では、Ｆｃ融合パートナーは、米国特許第６，９００，２９２号に記載のように、Ｐ３３１Ｓ変異を含むヒトＩｇＧ２のヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインを含む。特定の代表的Ｆｃドメイン融合パートナーを、配列番号８〜１０に示す。
【０１１５】
アルブミン融合パートナーおよびアルブミン結合分子融合パートナー
一部の実施形態では、融合パートナーは、アルブミンである。代表的アルブミンには、限定されないが、血清半減期を延長できる、または融合相手のポリペプチドのバイオアベイラビリティを高めることができるヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）およびＨＳＡの断片が含まれる。一部の実施形態では、融合パートナーは、アルブミン結合分子、例えば、脂質またはアルブミンに結合する他の分子とコンジュゲートするアルブミンまたは分子に結合するペプチドである。一部の実施形態では、ＨＳＡ含有融合分子は、例えば、米国特許第６，６８６，１７９号に記載のように調製される。
【０１１６】
融合パートナーの典型的結合
融合パートナーは、共有結合でまたは非共有結合で、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤのＮ末端またはＣ末端に付加できる。また、結合は、例えば、アミノ酸側鎖（例えば、システイン、リシン、セリン、またはトレオニンの側鎖）を介して、Ｎ末端またはＣ末端以外のＦＧＦＲ１  ＥＣＤ内の位置でも起こりうる。
【０１１７】
共有結合、または非共有結合の実施形態では、リンカーは、融合パートナーとＦＧＦＲ１  ＥＣＤの間に挿入してもよい。このようなリンカーは、少なくとも１つのアミノ酸または化学成分から構成できる。融合パートナーをＦＧＦＲ１  ＥＣＤに共有結合させる代表的方法には、限定されないが、融合パートナーおよびＦＧＦＲ１  ＥＣＤを単一のアミノ酸配列として翻訳、および融合パートナーのＦＧＦＲ１  ＥＣＤへの化学付加が含まれる。融合パートナーおよびＦＧＦＲ１  ＥＣＤが単一のアミノ酸配列として翻訳される場合は、追加のアミノ酸は、融合パートナーおよびＦＧＦＲ１  ＥＣＤの間にリンカーとして含むことができる。一部の実施形態では、リンカーは、融合パートナーおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤの単一発現構築物へのクローニングを促進するために、それをコードするポリヌクレオチド配列に基づいて選択される（例えば、特定の制限酵素部位を含むポリヌクレオチドを、融合パートナーをコードするポリヌクレオチドおよびＦＧＦＲ１  ＥＣＤをコードするポリヌクレオチドの間に配置することができ、この場合、制限酵素部位を含むポリヌクレオチドが短いアミノ酸リンカー配列をコードする）。融合パートナーおよびＦＧＦＲ１  ＥＣＤが、化学的手段により、共有結合する場合、通常、カップリング反応の間に、種々の大きさのリンカーを含むことができる。
【０１１８】
融合パートナーをＦＧＦＲ１  ＥＣＤに非共有結合させる代表的方法には、限定されないが、結合対を介した付加が含まれる。代表的結合対には、限定されないが、ビオチンとアビジンまたはストレプトアビジン、抗体とその抗原、等が含まれる。
【０１１９】
同時翻訳と翻訳後修飾
本発明は、翻訳の間、または翻訳の後で、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質切断、または抗体分子もしくは他の細胞リガンドへの結合によって、異なった状態に修飾されているＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよびＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子の投与を包含する。多くの化学的修飾のいずれかは、既知の技術により行うことができる。これらの技術には、限定されないが、臭化シアン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテアーゼによる特異的化学切断；ＮＡＢＨ４；アセチル化；ホルミル化；酸化；還元；および／またはチュニカマイシンの存在下の代謝合成が含まれる。
【０１２０】
本発明に包含される追加の翻訳後修飾は、例えば、Ｎ結合型またはＯ結合型炭水化物鎖、Ｎ末端またはＣ末端終端の処理、化学成分のアミノ酸骨格への結合、Ｎ結合型またはＯ結合型炭水化物鎖の化学的修飾、および原核生物宿主細胞の発現の結果としてのＮ末端メチオニン残基の付加または欠失、を含む。ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよびＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子の種々の翻訳後修飾の非制限的考察については、例えば、米国特許第７，６７８，８９０号で見つけることができる。
【０１２１】
ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよびＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子の発現と産生
ベクター
ＦＧＦＲ１  ＥＣＤをコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。このようなベクターには、限定されないが、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、等が含まれる。
【０１２２】
一部の実施形態では、ＣＨＯまたはＣＨＯ由来細胞中でのポリペプチドの発現に対し最適化されているベクターが選択される。代表的なこのようなベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ  Ｄｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：８８０−８８９（２００４）、に記載されている。
【０１２３】
一部の実施形態では、ベクターは、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子の、ヒトを含む動物中のインビボ発現により選択される。一部のこのような実施形態では、ポリペプチドの発現は、組織特異的方式で機能するプロモータの制御下にある。例えば、肝臓特異的プロモータは、例えば、国際公開第２００６／０７６２８８号に記載されている。種々の発現ベクターの非制限的考察は、例えば、米国特許第７，６７８，８９０号中に見つけることができる。
【０１２４】
宿主細胞
種々の実施形態では、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、原核細胞、例えば、細菌細胞中で；または真核細胞、例えば、真菌細胞、植物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞中で、発現できる。このような発現は、例えば、当技術分野で既知の方法に従って行ってもよい。ポリペプチドの発現に使うことができる代表的真核細胞には、限定されないが、ＣＯＳ７細胞を含むＣＯＳ細胞；２９３−６Ｅ細胞を含む２９３細胞；ＣＨＯ−ＳおよびＤＧ４４細胞を含むＣＨＯ細胞；ならびにＮＳＯ細胞、が含まれる。一部の実施形態では、特定の真核生物宿主細胞は、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子に対し特定の所望の翻訳後修飾を行う能力に基づいて選択される。例えば、一部の実施形態では、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞中で産生される同じポリペプチドよりもより高いレベルのシアリル化を有するＦＧＦＲ１  ＥＣＤおよび／またはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子を産生する。
【０１２５】
核酸の所望の宿主細胞への導入は、いずれかの当技術分野で既知の方法により実現できる。これらの方法には、限定されないが、リン酸カルシウム形質移入、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介形質移入、カチオン性脂質媒介形質移入、電気穿孔、形質導入、感染、等、が含まれる。非制限的代表的方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．、 分子クローニング、実験マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）、３ｒｄ  ｅｄ． Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（２００１）、に記載されている。核酸は、当技術分野で既知の方法を使って、一時的にまたは長期的に所望の宿主細胞中へ形質移入できる。宿主細胞に関する非制限的考察および宿主細胞中へのポリペプチド導入の方法は、例えば、米国特許第７，６７８，８９０号で見つけることができる。
【０１２６】
一部の実施形態では、当技術分野で既知の方法により、ポリペプチドは、操作された、またはポリペプチドをコードする核酸分子を形質移入された動物中でインビボで産生出来る。
【０１２７】
ＦＧＦＲ１  ＥＣＤポリペプチドの精製
ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子は、当技術分野で既知の種々の方法で精製できる。このような方法には、限定されないが、アフィニティマトリックスまたは疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用が含まれる。適切な親和性リガンドには、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたは融合パートナーのいずれかのリガンドが含まれる。ＦＧＦＲ１に結合する抗体の場合の適切な親和性リガンドには、限定されないが、ＦＧＦＲ１それ自身およびその断片が含まれる。さらに、タンパク質Ａ、タンパク質Ｇ、タンパク質Ａ／Ｇ、または抗体アフィニティーカラムを使用して、Ｆｃ融合パートナーに結合させ、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子を精製することができる。また、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤに対する抗体を使って、ＦＧＦＲ１  ＥＣＤまたはＦＧＦＲ１  ＥＣＤ融合分子を精製することができる。疎水性インタラクティブクロマトグラフィー、例えば、ブチルまたはフェニルカラムは、また、一部のポリペプチドを精製するのに適する。多くのポリペプチド精製方法が当技術分野で既知である。種々のポリペプチド精製の方法に関する非制限的考察は、例えば、米国特許第７，６７８，８９０号で見つけることができる。
【実施例】
【０１２８】
以下で考察の実施例は、単に本発明の例示を意図し、何ら本発明を制限するものと考えるべきではない。実施例は、下記の実験が全てである、またはこれだけの実験しか行っていないことを示す意図はない。使用した数字（例えば、量、温度、等）に関しては、正確を期したが、いくらかの実験誤差およびバラツキは考慮されるべきである。別段の指示がなければ、部は、重量部であり、分子量は、重量平均分子量であり、温度は、℃であり、また圧力は、大気またはそれに近い圧力である。
【０１２９】
実施例１：Ｈ１７０３非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）異種移植モデルへのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびドセタキセルの投与
６週齢の雌ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から購入し、１週間順化させた後、調査を開始した。ヒト非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）細胞株Ｈ１７０３を腫瘍モデルとして使用し、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＲＬ−５８８９）から購入した。細胞を、ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋１％Ｌ−グルタミン中、５％ＣＯ２含有加湿雰囲気下、３７℃で３世代の継代培養を行った。培養細胞が８５〜９０％集密に達すると、細胞を採取し、５０％マトリゲルを含むＣａ２＋とＭｇ２＋不含の冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に２．５ｘ１０７細胞／ｍＬで再懸濁した。２．５ｘ１０６細胞／１００μｌ／マウスの量の細胞をマウスの右脇腹の上の皮下に移植した。腫瘍移植の１日後、マウスを体重に従って１０マウス／群で無作為化した。
【０１３０】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−ＦｃをＰＢＳで３ｍｇ／ｍｌの濃度に処方し、腹腔内（ｉ．ｐ．）に１５ｍｇ／ｋｇ（３００μｇ／１００μｌ／マウス）を週２回、４週間投与した。ドセタキセルをＴｏｒｏｎｔｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｎｏｒｔｈ  Ｙｏｒｋ、Ｏｎｔａｒｉｏ、Ｃａｎａｄａ；ｃａｔ．Ｎｏ．Ｄ４９４４２０）から購入し、５％Ｔｗｅｅｎ８０および５％ブドウ糖を含むＨ２Ｏで処方した。ドセタキセルを２５ｍｇ／ｋｇ（ヒトの約７５ｍｇ／ｍ２に等価）で、２回分用量を３週毎に１回、ｉ．ｐ．投与した。組み合わせ群では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびドセタキセルを、同時に、またはドセタキセルの１日前にＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの順番で、（または逆順も同様に）投与した。ヒトアルブミンをＧｒｉｆｏｌｓ  ＵＳＡ（Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＮＤＣ６１９５３−０００２−１）から購入し、ＰＢＳで、３ｍｇ／ｍＬに処方し、３００μｇ／１００μＬ／マウス（１５ｍｇ／ｋｇ）の量で陰性対照として使用した。各セットのマウスに対する投薬計画を表２に示す。
【０１３１】
（表２）投薬計画
0005945277.tif 000003
【０１３２】
調査の全期間を通し、週２回、マウスの腫瘍体積および体重をモニターした。腫瘍体積は、外側ノギスを使って測定して、最大縦径（長さ）と最大横径（幅）を求めた。次に、腫瘍体積を、下式を使って計算した：
腫瘍体積（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）／２
【０１３３】
３８日目に、アルブミン群の平均腫瘍体積が８５０ｍｍ３に到達すると、イソフルラン吸入および頚部脱臼によりマウスを安楽死させた。
【０１３４】
各セットのマウスに対する全調査期間中の平均腫瘍体積を図１に示す。この実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびドセタキセルの逐次投与が、どちらかの薬剤単独よりも大きく腫瘍増殖を抑制した。さらに、この実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとドセタキセルの同時投与が、腫瘍増殖抑制に関し、逐次投与よりも効果的であった。全調査期間にわたり、重量損失が観察されなかった（データは示さず）。
【０１３５】
３８日目の各群のマウスの腫瘍体積を一元配置分散分析とそれに続くテューキー検定により分析した。その分析の結果を表３に示す。
【０１３６】
（表３）３８日目の腫瘍体積分析
0005945277.tif 000004
【０１３７】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの単独投与は、３３％（ｐ＜０．０１）の腫瘍増殖抑制を生じ、また、ドセタキセルの単独投与は、７４％（ｐ＜０．００１）の腫瘍増殖抑制を生じた。最初にＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの投与を行う逐次投与は、８８％（ｐ＜０．００１）の腫瘍増殖抑制を生じ、最初にドセタキセルの投与を行う逐次投与は、９１％（ｐ＜０．００１）の腫瘍増殖抑制を生じた。最終的に、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとドセタキセルの同時投薬は、９６％（ｐ＜０．００１）の腫瘍増殖抑制を生じた。
【０１３８】
腫瘍体積分率分析を使って、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとドセタキセルの逐次および同時投与の組み合わせによる腫瘍増殖抑制の強化（加算的または相乗的）または低減（拮抗的）の程度を確認した。その分析の結果を表４に示す。
【０１３９】
（表４）３８日目の腫瘍体積分率ａの分析
0005945277.tif 000005
ａ腫瘍体積分率（ＦＴＶ）＝（平均腫瘍体積（ＴＶ）（治療））／（平均ＴＶ（対照））
ｂ予測＝（ＦＴＶ薬剤１）ｘ（ＦＴＶ薬剤２）
ｃ予測／実測の比率、＞２＝相乗的；〜１＝加算的；＜０．５＝拮抗的。
【０１４０】
これらの結果は、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとドセタキセルの同時投与は、腫瘍増殖の相乗的抑制をもたらし、一方、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとドセタキセルの逐次投与は、加算的抑制をもたらしたことを示す。
【０１４１】
実施例２：Ｈ５２０非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）異種移植モデルへのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとペメトレキセドの投与
６〜８週齢雌ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から購入し、１週間順化させた後、調査を開始した。りん状細胞肺癌細胞株ＮＣＩ−Ｈ５２０を腫瘍モデルとして使い、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＨＴＢ−１８２）から購入した。細胞を、ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋１％Ｌ−グルタミン中、５％ＣＯ２含有加湿雰囲気下、３７℃で３〜４世代の継代培養を行った。培養細胞が８５〜９０％集密に達すると、細胞を採取し、５０％マトリゲルを含むＣａ２＋とＭｇ２＋不含の冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に３．５ｘ１０７細胞／ｍＬで再懸濁した。細胞を３．５ｘ１０６細胞／１００μｌ／マウスでマウスの右脇腹の上の皮下に移植した。腫瘍移植の１日後、マウスを体重に従って１０マウス／群で無作為化した。全群に対する投薬を腫瘍移植１日後に開始した。
【０１４２】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−ＦｃをＰＢＳ中で３ｍｇ／ｍｌの濃度で処方し、腹腔内（ｉ．ｐ．）に１５ｍｇ／ｋｇ（３００μｇ／１００μｌ／マウス）を週２回、６週間投与した。ペメトレキセド二ナトリウムをＦｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＮＣ９５６４６９１）から購入し、ＵＳＰ生理食塩水中で、１２．５ｍｇ／ｍＬ、２５ｍｇ／ｍＬ、および５０ｍｇ／ｍＬの濃度に処方した。ペメトレキセドの３つの異なる投与量レベル：６２．６ｍｇ／ｋｇ（１．２５ｍｇ／１００μｌ／マウス）；１２５ｍｇ／ｋｇ（２．５ｍｇ／１００μｌ／マウス）；および２５０ｍｇ／ｋｇ（５ｍｇ／１００μｌ／マウス）を、第１週の５日間、毎日、および第２週の５日間、毎日、の計画で、ｉ．ｐ．投与した。組み合わせ群では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとペメトレキセドを、単一の薬剤の投与の場合と同じ計画で投与し、１、４、８、および１１日目に同時投与を行った。ヒトアルブミンをＧｒｉｆｏｌｓ  ＵＳＡ（Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＮＤＣ６１９５３−０００２−１）から購入、ＰＢＳ中で３ｍｇ／ｍＬの濃度で処方し、３００μｇ／１００μＬ／マウス（１５ｍｇ／ｋｇ）の量で陰性対照として使用した。マウス各群に対する投薬計画を表５に示す。
【０１４３】
（表５）投薬計画
0005945277.tif 000006
【０１４４】
調査の全期間を通し、週２回、マウスの腫瘍体積および体重をモニターした。腫瘍体積は、実施例１で記載の方法と式を使って測定および計算をした。
【０１４５】
調査の終了前に下記の徴候のいずれかが認められた場合に、動物を安楽死させた：体重損失≧初期体重の１５％；腫瘍表面積の腫瘍潰瘍化≧腫瘍表面積の３０％；マウスが瀕死；または個別腫瘍体積≧２０００ｍｍ３。マウスの安楽死はイソフルラン吸入および頚部脱臼により行った。
【０１４６】
ペメトレキセド低投与量群、ペメトレキセド中投与量群、およびペメトレキセド高投与量群に対する全調査期間中の平均腫瘍体積を、それぞれ図２Ａ、３Ａ、および４Ａに示す。図２Ｂ、３Ｂ、および４Ｂは、全調査期間中の各群のマウスの体重を示す。２５０ｍｇ／ｋｇペメトレキセドは、その用量の投与後の体重損失から考えると、マウスの最大耐容量に接近しているように思われる。図４Ｂを参照。
【０１４７】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃまたはペメトレキセドの単独の低または中用量での投与は、全調査期間中の腫瘍抑制をもたらした。ペメトレキセド単独の最高用量は、腫瘍増殖を抑制するようには見えなかった。ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとペメトレキセドの同時投薬は、腫瘍増殖のより大きな抑制を生じたが、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃと最高用量のペメトレキセドの組みあわせで認められた腫瘍抑制は、統計的に有意ではなかった。
【０１４８】
体重グラフは、ペメトレキセドの低および中用量に対しマウスの耐容性が良好であることを示す。ペメトレキセドの高用量では、マウスは初期に著しく体重を減らす。従って、最初の５日間の投薬後、投薬を中止した。このように、高用量群では、動物は、最初の５回用量のみを受け、第２の５回の用量は受けなかった。
【０１４９】
４９日目の各群のマウスの腫瘍体積を、一元配置分散分析とそれに続くテューキー検定により解析した。その分析の結果を表６に示す。
【０１５０】
（表６）４９日目の腫瘍体積の分析
0005945277.tif 000007
【０１５１】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独投与は、３１％（ｐ＞０．０５）の腫瘍増殖抑制、およびペメトレキセドの６２．５、１２５または２５０ｍｇ／ｋｇの単独投与は、それぞれ、４０、２４または１％（ｐ＞０．０５）の腫瘍増殖抑制をもたらした。ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ（１５ｍｇ／ｋｇ）とペメトレキセドの６２．５、１２５、または２５０ｍｇ／ｋｇの同時投薬は、それぞれ、６８％（ｐ＜０．０１）、５７％（ｐ＜０．０５）または４６％（ｐ＞０．０５）の腫瘍増殖抑制をもたらした。
【０１５２】
腫瘍体積分率の分析を行って、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとペメトレキセドの投与後の、腫瘍増殖抑制の強化（加算的または相乗的）または低減（拮抗的）の程度を評価した。その分析結果を表７に示す。
【０１５３】
（表７）４９日目の腫瘍体積分率ａの分析
0005945277.tif 000008
ａ腫瘍体積分率（ＦＴＶ）＝（平均腫瘍体積（ＴＶ）（治療））／（平均ＴＶ（対照））
ｂ予測＝（ＦＴＶ薬剤１）ｘ（ＦＴＶ薬剤２）
ｃ予測／実測の比率、＞２＝相乗的；〜１＝加算的；＜０．５＝拮抗的。
【０１５４】
これらの結果は、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとペメトレキセドの投与が、腫瘍増殖の加算的抑制をもたらすことを示している。
【０１５５】
実施例３：Ａ５４９非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）異種移植モデルへのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃと種々の化学療法剤との組み合わせ投与
６週齢雌ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から購入し、１週間順化させた後、調査を開始した。ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＣＬ−１８５）から購入したＡ５４９細胞を、ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋１％Ｌ−グルタミン中、５％ＣＯ２含有加湿雰囲気下、３７℃で３世代の継代培養を行った。培養細胞が８５〜９０％集密に達すると、細胞を採取し、５０％マトリゲルを含むＣａ２＋とＭｇ２＋不含の冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に５ｘ１０７細胞／ｍＬで再懸濁した。細胞を５ｘ１０６細胞／１００μｌ／マウスの量でマウスの右脇腹の上の皮下に移植した。腫瘍移植の１日後、マウスを体重に従って１０マウス／群に無作為化した。
【０１５６】
調査の全期間を通し、週２回、マウスの腫瘍体積および体重をモニターした。腫瘍体積は、実施例１で記載の方法と式を使って測定および計算をした。
【０１５７】
各調査の終了時点での各群のマウスの腫瘍体積を、一元配置分散分析とそれに続くテューキー検定により分析した。その後、腫瘍体積分率の分析を行って、腫瘍体積分率の分析を行って、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよび１つまたは複数の追加の化学療法分子の投与後に達成された、腫瘍増殖抑制の強化（加算的または相乗的）または低減（拮抗的）の程度を評価した。
【０１５８】
特定の調査の詳細、および各組み合わせに対する結果は、以下で考察する。
【０１５９】
Ａ．ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびシスプラチン
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−ＦｃをＵＳＰ０．９％塩化ナトリウム注射剤（Ｈｅｎｒｙ  Ｓｃｈｅｉｎ、Ｉｎｃ．、Ｍｅｌｖｉｌｌｅ、ＮＹ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１５３３８２６）中で４ｍｇ／ｍｌで処方し、２０ｍｇ／ｋｇ（４００μｇ／１００μｌ／マウス）を週２回、６週間腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。シスプラチンをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ；Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｐ４３９４）から購入し、０．９％生理食塩水中で処方し、３．５ｍｇ／ｋｇ（１７μｇ／１００μｌ／マウス）を週１回、６週間、ｉ．ｐ．投与した。生理食塩水を陰性対照として使い、１００μｌ／マウスを週２回、６週間、ｉ．ｐ．投与した。
【０１６０】
４２日目に、ビークル群の平均腫瘍体積が１３００ｍｍ３に到達すると、マウスをイソフルラン吸入と頚部の脱臼により安楽死させた。
【０１６１】
各セットのマウスに対する全調査期間中の平均腫瘍体積を図５に示す。この実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとシスプラチンの投与が、どちらかの薬剤単独よりも多く腫瘍増殖を抑制した。さらに、マウスは、全調査期間中体重減少を示さなかった（データは示さず）。
【０１６２】
４２日目の各群のマウスの腫瘍体積を、一元配置分散分析と、それに続くテューキー検定により分析した。分析の結果を表８に示す。
【０１６３】
（表８）４２日目の腫瘍体積分析
0005945277.tif 000009
【０１６４】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびシスプラチンの組み合わせが、抗腫瘍活性の強化（加算的または相乗的）または低減（拮抗的）をもたらすか否かを判定するために、実施例１に記載のように腫瘍体積分率の分析を行った。分析結果を表９に示す。
【０１６５】
（表９）４２日目の腫瘍体積分率ａの対照に比較した分析
0005945277.tif 000010
ａ腫瘍体積分率（ＦＴＶ）＝（平均腫瘍体積（ＴＶ）（治療））／（平均ＴＶ（対照））
ｂ予測＝（ＦＴＶ薬剤１）ｘ（ＦＴＶ薬剤２）
ｃ予測／実測の比率、＞２＝相乗的；〜１＝加算的；＜０．５＝拮抗的。
【０１６６】
これらの結果は、この実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとシスプラチンの組みあわせが、腫瘍増殖の加算的抑制をもたらしたことを示している。
【０１６７】
Ｂ．ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびパクリタキセル
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとパクリタキセルの組みあわせが、上述のＡ５４９ヒト非小細胞肺癌異種移植モデルで試験された。ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−ＦｃをＵＳＰ注射剤用０．９％生理食塩水中で３ｍｇ／ｍｌに処方した。パクリタキセルをＢｅｄｆｏｒｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＯＨ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１０７５０２９）から購入し、１８ｍｇ／ｋｇ用量用に、注射剤用５％デキストロース含有０．９％生理食塩水を使って３．６ｍｇ／ｍｌに処方した。ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃを、１５ｍｇ／ｋｇで、週２回、５週間、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。パクリタキセルを、１８ｍｇ／ｋｇで、８、１２、および１５日目にｉ．ｐ．投与した。
【０１６８】
ビークル対照群の平均腫瘍体積が〜５００ｍｍ３に達すると、マウスを、イソフルラン吸入と頚部の脱臼により安楽死させた。
【０１６９】
各セットのマウスに対する全調査期間中の平均腫瘍体積を図６に示す。この実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとパクリタキセルの組み合わせが、いずれかの薬剤単独よりも多く腫瘍増殖を抑制した。さらに、マウスは、全調査期間中、体重が減少しなかった（データは示さず）。
【０１７０】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびパクリタキセルの組み合わせが、加算的、相乗的または拮抗的活性をもたらすか否かを判定するために、実施例１に記載のように、３１日目と３８日目の腫瘍体積分率の分析を行った。分析結果を表１０に示す。
【０１７１】
（表１０）３１日目と３８日目の腫瘍体積分率ａの分析
0005945277.tif 000011
ａ腫瘍体積分率（ＦＴＶ）＝（平均腫瘍体積（ＴＶ）（治療））／（平均ＴＶ（対照））
ｂ予測＝（ＦＴＶ薬剤１）ｘ（ＦＴＶ薬剤２）
ｃ予測／実測の比率、＞２＝相乗的；〜１＝加算的；＜０．５＝拮抗的。
【０１７２】
これらの結果は、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとパクリタキセルの投与が加算的腫瘍増殖抑制をもたらすことを示している。
【０１７３】
Ｃ．ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよび５−ＦＵ
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃと５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）の組みあわせが、上述のＡ５４９ヒト非小細胞肺癌異種移植モデルで試験された。ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−ＦｃをＵＳＰ注射剤用０．９％生理食塩水中で３ｍｇ／ｍｌに処方した。５−ＦＵをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ；Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｆ６６２７）から購入し、最初に、ストック溶液として、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ；Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｄ８４１８−５０）中で５０ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解した。このストック溶液を、ＵＳＰ０．９％塩化ナトリウム注射剤で６．６ｍｇ／ｍｌ（３３ｍｇ／ｋｇ投薬用）にさらに希釈した。ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの１５ｍｇ／ｋｇを、週２回、４週間、腹腔内（ｉ．ｐ．）に投与した。５−ＦＵの３３ｍｇ／ｋｇを、週２回、３週間、ｉ．ｐ．投与した。
【０１７４】
３１日目に、マウスをイソフルラン吸入と頚部の脱臼により安楽死させた。
【０１７５】
各セットのマウスに対する全調査期間中の平均腫瘍体積を図７に示す。この実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃと５−ＦＵの組み合わせが、いずれかの薬剤単独よりも多く腫瘍増殖を抑制した。さらに、マウスは、全調査期間中、体重が減少しなかった（データは示さず）。
【０１７６】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよび５−ＦＵの組み合わせが、加算的、相乗的または拮抗的活性をもたらすか否かを判定するために、実施例１に記載のように、３１日目の腫瘍体積分率の分析を行った。分析結果を表１１に示す。
【０１７７】
（表１１）３１日目の腫瘍体積分率ａの分析
0005945277.tif 000012
ａ腫瘍体積分率（ＦＴＶ）＝（平均腫瘍体積（ＴＶ）（治療））／（平均ＴＶ（対照））
ｂ予測＝（ＦＴＶ薬剤１）ｘ（ＦＴＶ薬剤２）
ｃ予測／実測の比率、＞２＝相乗的；〜１＝加算的；＜０．５＝拮抗的。
【０１７８】
これらの結果は、この実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃと５−ＦＵの投与が相乗的腫瘍増殖抑制をもたらしたことを示している。本発明者等は、２０ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇの５−ＦＵを使った類似の実験が、相乗効果をもたらさなかったことに言及している（データは示さず）。
【０１７９】
Ｄ．ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびドセタキセル
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとドセタキセルの組みあわせが、上述のＡ５４９ヒト非小細胞肺癌異種移植モデルで試験された。ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−ＦｃをＰＢＳで３ｍｇ／ｍｌに処方し、１５ｍｇ／ｋｇ（３００μｇ／１００μｌ／マウス）を、週２回、４週間、腹腔内（ｉ．ｐ．）に投与した。ドセタキセルの３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇを、週２回、４週間、ｉ．ｐ．投与した。
【０１８０】
アルブミン対照群の平均腫瘍体積が１０００ｍｍ３に到達すると、その群のマウスを３２日目に、イソフルラン吸入および頚部の脱臼により安楽死させた。
【０１８１】
各セットのマウスに対する全調査期間中の平均腫瘍体積を図８Ａ（３ｍｇ／ｋｇドセタキセル）および８Ｂ（１０ｍｇ／ｋｇドセタキセル）に示す。この実験では、いずれのドセタキセルの投与量でも、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとドセタキセルの組み合わせが、いずれかの薬剤単独よりも多く腫瘍増殖を抑制した。さらに、いずれのドセタキセルの投与量でも、マウスは、全調査期間中、体重が減少しなかった（データは示さず）。
【０１８２】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびドセタキセルの組み合わせが、加算的、相乗的または拮抗的活性をもたらすか否かを判定するために、実施例１に記載のように、３２日目の腫瘍体積分率の分析を行った。分析結果を表１２に示す。
【０１８３】
（表１２）３２日目の腫瘍体積分率ａの分析
0005945277.tif 000013
ａ腫瘍体積分率（ＦＴＶ）＝（平均腫瘍体積（ＴＶ）（治療））／（平均ＴＶ（対照））
ｂ予測＝（ＦＴＶ薬剤１）ｘ（ＦＴＶ薬剤２）
ｃ予測／実測の比率、＞２＝相乗的；〜１＝加算的；＜０．５＝拮抗的。
【０１８４】
これらの結果は、この実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとドセタキセルの投与が加算的腫瘍増殖抑制をもたらしたことを示す。
【０１８５】
Ｅ．ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびビンクリスチン
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとビンクリスチンの組みあわせが、上述のＡ５４９ヒト非小細胞肺癌異種移植モデルで試験された。ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃを、ＵＳＰ注射剤用０．９％生理食塩水で、１５ｍｇ／ｋｇ（３００μｇ／２００μｌ／マウス）での投与用に１．５ｍｇ／ｍｌに処方し、または２０ｍｇ／ｋｇ（４００μｇ／２００μｌ／マウス）での投与用に２ｍｇ／ｍｌに処方した。ビンクリスチンをＦｌｕｋａ−Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ６３１０３、Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｖ８８７９）から入手し、それぞれ、１ｍｇ／ｋｇ（０．０２μｇ／１００μｌ／マウス）または１．５ｍｇ／ｋｇ（０．０３μｇ／２００μｌ／マウス）での投与用に、ＵＳＰ注射剤用０．９％生理食塩水で０．１ｍｇ／ｍｌまたは０．１５ｍｇ／ｍＬに処方した。
【０１８６】
最初の実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの１５ｍｇ／ｋｇを腹腔内（ｉ．ｐ．）に、１日目から開始して週２回、６週間、投与し、ビンクリスチンを、１ｍｇ／ｋｇで、８、１５、および２２日目に、ｉ．ｐ．投与した。第２の実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃを、２０ｍｇ／ｋｇで、１９日目から開始して週２回、７週間、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与し、ビンクリスチンを、１．５ｍｇ／ｋｇで、２７、３４、および４１日目に、ｉ．ｐ．投与した。
【０１８７】
最初の実験からのマウスを、腫瘍移植後４６日目に安楽死させた。第２の調査では、アルブミン対照群およびＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ群のマウスを腫瘍移植後７０日目に安楽死させ、一方、ビンクリスチン治療群のマウスは、腫瘍移植後７７日目に安楽死させた。全マウスは、イソフルラン吸入および頚部の脱臼により安楽死させた。
【０１８８】
各セットのマウスに対する全調査期間中の平均腫瘍体積を図９Ａ（１ｍｇ／ｋｇビンクリスチン；投薬を１日目に開始）および９Ｂ（１．５ｍｇ／ｋｇビンクリスチン；投薬を１９日目に開始）に示す。この実験では、どのビンクリスチン投与量でも、またどの投薬計画でも、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとビンクリスチンの組み合わせが、いずれの薬剤単独よりも多く腫瘍増殖を抑制した。さらに、低用量のビンクリスチンでは、マウスは、体重が減少しなかった（データを示さず）。高用量のビンクリスチンでは、マウスは、体重減少し、この高用量が、最大耐容用量に近いことを示している。図９Ｃ参照。
【０１８９】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびビンクリスチンの組み合わせが、加算的、相乗的または拮抗的活性をもたらすか否かを判定するために、最初の実験に対しては３９日目と４６日目の、第２の実験に対しては７０日目の腫瘍体積分率の分析を実施例１に記載のように行った。分析結果を表１３に示す。
【０１９０】
（表１３）腫瘍体積分率ａの分析
0005945277.tif 000014
ａ腫瘍体積分率（ＦＴＶ）＝（平均腫瘍体積（ＴＶ）（治療））／（平均ＴＶ（対照））
ｂ予測＝（ＦＴＶ薬剤１）ｘ（ＦＴＶ薬剤２）
ｃ予測／実測の比率、＞２＝相乗的；〜１＝加算的；＜０．５＝拮抗的。
【０１９１】
これらの結果は、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃとビンクリスチンの投与が、低用量のビンクリスチンでは加算的腫瘍増殖抑制を、および高用量のビンクリスチンでは相乗的腫瘍増殖抑制をもたらしたことを示している。
【０１９２】
Ｆ．ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、カルボプラチン、およびパクリタキセル
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、カルボプラチン、およびパクリタキセルの組みあわせを上述のＡ５４９ヒト非小細胞肺癌異種移植モデルで試験した。ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−ＦｃをＵＳＰ注射剤用０．９％生理食塩水で３ｍｇ／ｍｌ（１５ｍｇ／ｋｇでの投与用）に処方した。カルボプラチンを、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｕｉｓ、ＭＯ６３１０３、Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｃ２５３８）から入手し、２５ｍｇ／ｋｇ（５００μｇ／２００μＬ／マウス）投与用として、ＵＳＰ注射剤用０．９％生理食塩水で２．５ｍｇ／ｍＬに処方した。パクリタキセルを、ＬＣ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｏｂｕｒｎ、ＭＡ０１８０１；Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｐ−９６００）から入手し、５０．３％クレモホール（登録商標）と４９．７％脱水アルコールの溶液で、２０ｍｇ／ｍＬのストック溶液として処方した。ストック溶液を、３０ｍｇ／ｋｇ（６００μｇ／２００μＬ／マウス）での投与用として、ＵＳＰ注射剤用０．９％生理食塩水中の５％デキストロースで３ｍｇ／ｍＬにさらに希釈した。
【０１９３】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの１５ｍｇ／ｋｇを、７日目に開始して週２回、３週間、腹腔内（ｉ．ｐ．）に投与した。カルボプラチンの２５ｍｇ／ｋｇを、７日目に開始して週２回、３週間、ｉ．ｐ．投与した。パクリタキセルの３０ｍｇ／ｋｇを、８日目に開始して週２回、３週間、ｉ．ｐ．投与した。
【０１９４】
単一薬剤群のマウスを３４日目に、組み合わせ群のマウスを４１日目に安楽死させた。マウスの安楽死は、イソフルラン吸入および頚部の脱臼により行った。
【０１９５】
各セットのマウスに対する全調査期間中の平均腫瘍体積を図１０に示す。この実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、カルボプラチン、およびパクリタキセルの組み合わせが、いずれかの薬剤単独よりも多く腫瘍増殖を抑制し、また、カルボプラチンおよびパクリタキセルの組み合わせよりも多くの腫瘍増殖を抑制した。全調査期間中、体重減少は認められなかった（データは示さず）。
【０１９６】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、カルボプラチン、およびパクリタキセルの組み合わせが、加算的、相乗的または拮抗的活性をもたらすか否かを判定するために、実施例１に記載のように、２８日目の腫瘍体積分率の分析を行った。分析結果を表１４に示す。
【０１９７】
（表１４）腫瘍体積分率ａの分析
0005945277.tif 000015
ａ腫瘍体積分率（ＦＴＶ）＝（平均腫瘍体積（ＴＶ）（治療））／（平均ＴＶ（対照））
ｂ予測＝（ＦＴＶ薬剤１）ｘ（ＦＴＶ薬剤２）
ｃ予測／実測の比率、＞２＝相乗的；〜１＝加算的；＜０．５＝拮抗的。
【０１９８】
これらの結果は、この実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、カルボプラチン、およびパクリタキセルの投与が、加算的腫瘍増殖抑制をもたらしたことを示している。
【０１９９】
実施例４：Ｃｏｌｏ２０５結腸癌異種移植モデルへのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃと、種々の化学療法剤との組み合わせ投与
Ｃｏｌｏ２０５細胞をＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＣＬ−２２２）から購入し、ＲＰＭＩ１６４０培地、１０％ＦＢＳ、および１％Ｌ−グルタミン中、３７℃、５％ＣＯ２含有加湿雰囲気下で３世代の継代培養を行った。細胞を５０％／ｖＰＢＳおよび５０％／ｖマトリゲルの溶液中に、２５００万細胞／ｍｌの濃度で再懸濁した。再懸濁細胞を移植まで氷上で保持した。６週齢の雌ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から購入し、１週間順化させた後、調査を開始した。０日目に、２５０万細胞／１００μｌを２７Ｇ１／２針を使って各マウスの右脇腹上に移植した。腫瘍移植の一日後、体重に従って、マウスを無作為化した。
【０２００】
調査の全期間を通し、週２回、マウスの腫瘍体積および体重をモニターした。腫瘍体積は、実施例１で記載の方法と式を使って測定および計算をした。
【０２０１】
各調査の終了時点での各群のマウスの腫瘍体積を、一元配置分散分析とそれに続くテューキー検定により分析した。その後、腫瘍体積分率の分析を行って、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよび１つまたは複数の追加の化学療法分子の投与後に達成された、腫瘍増殖抑制の強化（加算的または相乗的）または低減（拮抗的）の程度を評価した。
【０２０２】
特定の調査の詳細、および各組み合わせに対する結果は、以下で考察する。
【０２０３】
Ａ．ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、５−ＦＵ、ロイコボリン、およびベバシズマブ
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃを０．９％塩化ナトリウムＵＳＰ注射剤（ＨｅｎｒｙＳｃｈｅｉｎ、Ｉｎｃ、Ｍｅｌｖｉｌｌｅ、ＮＹ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１５３３８２６）で２ｍｇ／ｍｌに処方し、スクリューキャップ微小遠心管に入れて−８０℃で貯蔵した。陰性対照試薬、ヒトアルブミンを、Ｇｒｉｆｏｌｓ  ＵＳＡ（Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＮＤＣ６１９５３−０００２−１）から購入し、ＰＢＳ中で、３ｍｇ／ｍｌに処方した。５−ＦＵをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ；Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｆ６６２７）から購入し、最初にジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ；Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｄ８４１８−５０）に５０ｍｇ／ｍｌの濃度でストック溶液として溶解した。このストック溶液を、０．９％塩化ナトリウムＵＳＰ注射剤を使って、２ｍｇ／ｍｌ（１０ｍｇ／ｋｇ投薬用）、４ｍｇ／ｍｌ（２０ｍｇ／ｋｇ投薬用）、および６ｍｇ／ｍｌ（３０ｍｇ／ｋｇ投薬用）にさらに希釈した。また、ロイコボリン（ＬＶ）をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｆ８２５９）から購入し、０．９％塩化ナトリウムＵＳＰ注射剤を使って、２ｍｇ／ｍｌ（１０ｍｇ／ｋｇ投薬用）、４ｍｇ／ｍｌ（２０ｍｇ／ｋｇ投薬用）、および６ｍｇ／ｍｌ（３０ｍｇ／ｋｇ投薬用）に処方した。ベバシズマブをＧｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ（Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１５７３４）から購入し、０．９％塩化ナトリウムＵＳＰ注射剤で０．２ｍｇ／ｍｌ（１ｍｇ／ｋｇ投薬用）に希釈した。
【０２０４】
第１の実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃを３種の異なる濃度の５−ＦＵ／ロイコボリンと組み合わせた。第２の実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃをベバシズマブもしくは５−ＦＵ／ロイコボリンのいずれか、または両方と組み合わせた。実験用の群分けおよび投薬計画を表１５に示す。二重線は、２つの実験由来の群を分けている。
【０２０５】
（表１５）投薬計画（腫瘍移植後１日目に投薬を開始）
0005945277.tif 000016
【０２０６】
群中の平均腫瘍体積が６００ｍｍ３近くの場合は、その群のマウスを、イソフルラン吸入および頚部の脱臼により安楽死させた。全調査期間中の各セットのマウスに対する平均腫瘍体積を図１１に示す。２０ｍｇ／ｋｇの５−ＦＵ／ロイコボリンおよび３０ｍｇ／ｋｇの５−ＦＵ／ロイコボリン投与で、マウスは、それぞれ、約３グラムおよび約４グラムの体重の減少を生じた（それぞれ、約１４％および１９％）（データは示さず）。残りの群では、どのようなマウスの体重減少も観察されなかった（データは示さず）。
【０２０７】
種々の治療の有効性の順を２つの方法で評価した：１）各群の単一の時点（日目）での平均腫瘍体積；および２）各群の平均腫瘍体積が５００ｍｍ３に到達する時間（図１１Ｅの点線を参照）。
【０２０８】
両方の方法によるこの実験の結果は、種々の治療群の抗腫瘍効果は、次の順であることを示した：ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、ベバシズマブ、および５−Ｆｕ／ロイコボリン＞ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびベバシズマブ＞ベバシズマブおよび５−Ｆｕ／ロイコボリン＝ベバシズマブ＞ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ＞ビークル。
【０２０９】
第２の実験のマウス各群の２４日目の平均腫瘍体積を一元配置分散分析とそれに続くテューキー検定により分析した。分析結果を表１６に示す。
【０２１０】
（表１６）２４日目の腫瘍体積分析
0005945277.tif 000017
【０２１１】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよび種々濃度の５−ＦＵ／ロイコボリン；ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびベバシズマブ；またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、ベバシズマブ、および５−Ｆｕ／ロイコボリンの投与が、加算的、相乗的または拮抗的活性をもたらすか否かを判定するために、実施例１に記載のように、腫瘍体積分率の分析を行った。分析結果を表１７に示す。
【０２１２】
（表１７）腫瘍体積分率ａの分析
0005945277.tif 000018
ａ腫瘍体積分率（ＦＴＶ）＝（平均腫瘍体積（ＴＶ）（治療））／（平均ＴＶ（対照））
ｂ予測＝（ＦＴＶ薬剤１）ｘ（ＦＴＶ薬剤２）
ｃ予測／実測の比率、＞２＝相乗的；〜１＝加算的；＜０．５＝拮抗的。
【０２１３】
これらの結果は、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよび種々濃度の５−ＦＵ／ロイコボリン；ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびベバシズマブ；またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、ベバシズマブ、および５−Ｆｕ／ロイコボリンの投与が加算的腫瘍増殖抑制をもたらしたことを示している。
【０２１４】
Ｂ．ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、５−ＦＵ、ロイコボリン、およびオキサリプラチン
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、５−ＦＵ、ロイコボリン、およびオキサリプラチンの組みあわせを、上述のＣｏｌｏ２０５ヒト結腸癌異種移植モデルで試験した。ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−ＦｃをＰＢＳで３ｍｇ／ｍｌ（１５ｍｇ／ｋｇ投与用）に処方した。５−ＦＵをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ；Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｆ６６２７）から購入し、最初にジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ；Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｄ８４１８−５０）に５０ｍｇ／ｍｌの濃度でストック溶液として溶解した。さらに、このストック溶液を、０．９％塩化ナトリウムＵＳＰ注射剤を使って、２ｍｇ／ｍｌ（１０ｍｇ／ｋｇ投薬用）に希釈した。また、ロイコボリンをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｃａｔ．Ｎｏ．Ｆ８２５９）から購入し、０．９％塩化ナトリウムＵＳＰ注射剤で２ｍｇ／ｍｌ（１０ｍｇ／ｋｇ投薬用）に処方した。オキサリプラチンをＬＣ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｏｂｕｒｎ、ＭＡ０１８０１；Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｏ−７１１１）から入手し、５％デキストロース注射剤（Ｂａｘｔｅｒ、Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、ＩＬ  ６００１５；Ｃａｔａｌｏｇ＃２Ｂ００８２）で、１ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、および３ｍｇ／ｍｌに処方した（５ｍｇ／ｋｇ（１００μｇ／１００μＬ／マウス）投与用、１０ｍｇ／ｋｇ（２００μｇ／１００μＬ／マウス）投与用、および１５ｍｇ／ｋｇ（３００μｇ／１００μｌ／マウス）投与用）。
【０２１５】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃの１５ｍｇ／ｋｇを、１日目から開始して週２回、４週間、腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。５−ＦＵおよびロイコボリンの１０ｍｇ／ｋｇを毎日、５日間、それぞれ、ｉ．ｐ．投与した。オキサリプラチンの５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または１５ｍｇ／ｋｇを、１回用量として１日目にｉ．ｐ．投与した。
【０２１６】
マウスを、２８日目に、イソフルラン吸入および頚部の脱臼により安楽死させた。
【０２１７】
各セットのマウスに対する全調査期間中の平均腫瘍体積を図１２に示す。この実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、５−ＦＵ、ロイコボリン、およびオキサリプラチンの組み合わせが、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独または５−ＦＵ、ロイコボリン、およびオキサリプラチンの組み合わせよりも多く腫瘍増殖を抑制した。最小限のマウスの体重減少が５ｍｇ／ｋｇオキサリプラチン（０．７８グラム、または体重の４％）で観察され；中等度の重量減少が１０ｍｇ／ｋｇ（２．６グラム、または体重の１３％）の用量で観察され；さらにより激しい重量減少（３．７グラム、または体重の１９％）が１５ｍｇ／ｋｇオキサリプラチンの週２回投与で観察された（データは示さず）。
【０２１８】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、５−ＦＵ、ロイコボリン、およびオキサリプラチンの組み合わせが、加算的、相乗的または拮抗的活性をもたらすか否かを判定するために、１７日目の腫瘍体積分率の分析を実施例１に記載のように行った。分析結果を表１８に示す。
【０２１９】
（表１８）１７日目の腫瘍体積分率ａの分析
0005945277.tif 000019
ａ腫瘍体積分率（ＦＴＶ）＝（平均腫瘍体積（ＴＶ）（治療））／（平均ＴＶ（対照））
ｂ予測＝（ＦＴＶ薬剤１）ｘ（ＦＴＶ薬剤２）
ｃ予測／実測の比率、＞２＝相乗的；〜１＝加算的；＜０．５＝拮抗的。
【０２２０】
これらの結果は、この実験で試験された、オキサリプラチンの各投与量で、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、５−ＦＵ、ロイコボリン、およびオキサリプラチンの投与が、加算的腫瘍増殖抑制をもたらしたことを示す。
【０２２１】
実施例５：ＪＩＭＴ−１乳癌異種移植モデルへのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、ドキソルビシン、およびパクリタキセルの投与
６週齢雌ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から購入し、１週間順化させた後、調査を開始した。ヒト乳癌細胞株ＪＩＭＴ−１を腫瘍モデルとして使用し、Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ（ＤＭＳＺ、Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＡＣＣ５８９）から購入した。細胞をＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ、１％Ｌ−グルタミン、および１％ペニシリン／ストレプトマイシン中、３７℃、５％ＣＯ２含有加湿雰囲気下で１０世代の継代培養を行った。培養細胞が８５〜９０％集密に到達すると、細胞を採取し、５０％マトリゲルを含むＣａ２＋およびＭｇ２＋不含の冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に５ｘ１０７細胞／ｍＬで再懸濁した。マウス右脇腹上の皮下に５ｘ１０６細胞／１００μｌ／マウスの量でその細胞を移植した。腫瘍移植１日後、マウスを体重に従って１０マウス／群に無作為化した。
【０２２２】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−ＦｃをＵＳＰ注射剤用０．９％生理食塩水を使って３ｍｇ／ｍｌに処方し、１５ｍｇ／ｋｇ（３００μｇ／１００μｌ／マウス）を、７日目に開始して週２回、５週間、腹腔内（ｉ．ｐ．）に投与した。ドキソルビシンをＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｕｉｓ、ＭＯ；Ｃａｔａｌｏｇ＃４４５８３）から入手し、０．５ｍｇ／ｋｇ（１０μｇ／２００μＬ／マウス）への７日目に開始して週１回、５週間投与用として、ＵＳＰ注射剤用０．９％生理食塩水で０．０５ｍｇ／ｍＬに処方した。パクリタキセルをＢｅｄｆｏｒｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＯＨ；Ｃａｔ．Ｎｏ．１０７５０２９）から入手し、５０．３％クレモホール（登録商標）および４９．７％脱水アルコールの溶液を使って処方した。ストック溶液を５％デキストロース／ＵＳＰ注射剤用０．９％生理食塩水を使って、１６．８％クレモホール（登録商標）、１６．６％脱水アルコール、３．３％デキストロース、０．６％ＵＳＰ注射剤用生理食塩水中の３ｍｇ／ｍＬパクリタキセルの最終濃度に希釈した。パクリタキセルの３０ｍｇ／ｋｇ（６０μｇ／２００μＬ／マウス）を、７日目に開始して週２回、５週間、投与した。
【０２２３】
調査の全期間を通し、週２回、マウスの腫瘍体積および体重をモニターした。腫瘍体積は、実施例１で記載の方法と式を使って測定および計算をした。
【０２２４】
４２日目にイソフルラン吸入および頚部の脱臼によりマウスを安楽死させた。
【０２２５】
各セットのマウスに対する全調査期間中の平均腫瘍体積を図１３に示す。この実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、ドキソルビシン、およびパクリタキセルの組み合わせがＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ単独またはＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃを含まないドキソルビシンおよびパクリタキセルの組み合わせよりも腫瘍増殖を多く抑制した。全調査期間中、重量減少は観察されなかった（データは示さず）。
【０２２６】
腫瘍体積分率の分析を行って、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、ドキソルビシン、およびパクリタキセルの組みあわせによる腫瘍増殖抑制の強化（加算的または相乗的）または低減（拮抗的）の程度を評価した。分析結果を表１９に示す。
【０２２７】
（表１９）２１日目の腫瘍体積分析
0005945277.tif 000020
ａ腫瘍体積分率（ＦＴＶ）＝（平均腫瘍体積（ＴＶ）（治療））／（平均ＴＶ（対照））
ｂ予測＝（ＦＴＶ薬剤１）ｘ（ＦＴＶ薬剤２）
ｃ予測／実測の比率、＞２＝相乗的；〜１＝加算的；＜０．５＝拮抗的。
【０２２８】
これらの結果は、この実験では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃ、ドキソルビシン、およびパクリタキセルの組み合わせが加算的腫瘍増殖抑制をもたらしたことを示している。
【０２２９】
実施例６：Ｈ５２０肺異種移植腫瘍細胞を有するマウスのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−ＦｃおよびＫＤＲＥＣＤ−Ｆｃによる治療は腫瘍抑制を示した。
８週齢のＳＣＩＤＣＢ１７マウスに、ビークル、キナーゼ挿入ドメイン受容体（ＫＤＲ）ｃＤＮＡ（Ｆｉｖｅ  Ｐｒｉｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ）（これは、ＶＥＧＦアンタゴニストおよびＶＥＧＦトラップとして機能するタンパク質を発現する）、ＦＧＦＲ１  ｃＤＮＡ（Ｆｉｖｅ  Ｐｒｉｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ）のいずれか、またはＫＤＲおよびＦＧＦＲ１の組み合わせを、水力学的尾静脈形質移入（ｈｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ  ｔａｉｌ  ｖｅｉｎ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）（ＴＶＴ）により、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  １６（１）：１２６−１３１（２００５）の記載に実質的に従って投与し、次に、４日後、５ｘ１０６Ｈ５２０肺異種移植腫瘍細胞を、１００μｌ全容積中のマトリゲルの１：１混合物中の細胞を使って、側腹部ｓ．ｃ．に接種した。ＫＤＲおよびＦＧＦＲ１  ｃＤＮＡ構築物は、それぞれ、ＩｇＧ１  Ｆｃドメインに融合したそれぞれの細胞外ドメインを含む。腫瘍体積測定は、約１０日間の間隔で行った。２９日目に、単一薬剤治療群の腫瘍体積は、ビークルに比べて減少した（マンホイットニー検定Ｐ＜０．０５）。２９日目に、組み合わせ群の腫瘍体積は、単一薬剤治療群に比べて減少した（マンホイットニー検定Ｐ＜０．００１）。
【０２３０】
実施例７：ＤＭＳ５３小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）異種移植モデルへのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびシスプラチン／エトポシドの投与
６週齢雌ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から購入し、１週間順化させた後、調査を開始した。ヒト小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）細胞株ＤＭＳ５３を腫瘍モデルとして用い、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＲＬ−２０６２）から購入した。細胞を、ＷａｙｍｏｕｔｈのＭＢ７５２／１培地＋１０％ＦＢＳ＋２ｍＭ  Ｌ−グルタミン中、３７℃、５％ＣＯ２含有加湿雰囲気下で３世代の継代培養を行った。培養細胞が８５〜９０％集密に達すると、細胞を採取し、５０％マトリゲルを含むＣａ２＋とＭｇ２＋不含の冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に５ｘ１０７細胞／ｍＬで再懸濁した。細胞を５ｘ１０６細胞／１００μｌ／マウスの量でマウスの右脇腹の上の皮下に移植した。腫瘍が１００〜１２５ｍｍ３の大きさに到達後、マウスを分類し、各群（ｎ＝１０）が凡そ同じ平均腫瘍体積を持つように無作為化し、下表２０に従って治療を開始した。
【０２３１】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−ＦｃをＰＢＳで３ｍｇ／ｍｌに処方し、１５ｍｇ／ｋｇ（３００μｇ／１００μｌ／マウス）を週２回、４週間、腹腔内（ｉ．ｐ．）に投与した。１ｍｇ／ｍｌの濃度で予備処方されたシスプラチンを、Ａｍａｔｈｅｏｎ、Ｉｎｃ．、Ｍｉａｍｉ、ＦＬ（ＣａｔＮｏ．５５３９−０１１２−５０）から購入した。０．４５ｍｌのシスプラチンストック溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を１．０５ｍｌの５％デキストロース溶液に加え、０．３ｍｇ／ｍｌの濃度の１．５ｍｌの希釈標準溶液とした。各マウスは、１００μｌの希釈標準溶液（０．３ｍｇ／ｍｌ）を受け、群に応じて７日または２１日毎に３ｍｇ／ｋｇの用量を与えられた。２０ｍｇ／ｍｌの濃度で予備処方されたエトポシドをＡｍａｔｈｅｏｎ、Ｉｎｃ（Ｃａｔ．Ｎｏ．５５３９−０２９１−０１）から購入した。０．１４０ｍｌのストック溶液（２０ｍｇ／ｍｌ）を、３．３６ｍｌの５％デキストロース溶液に加え、０．８ｍｇ／ｍｌの濃度の３．５ｍｌ希釈標準溶液とした。各マウスは、５０μｌの希釈標準溶液（０．８ｍｇ／ｍｌ）を受け、連続して３日間４ｍｇ／ｋｇの用量を与えられた。エトポシド投薬を、群に応じて、７または２１日毎に繰り返した。組み合わせ群では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびシスプラチン／エトポシドを同時に投与した。ヒトアルブミンをＧｒｉｆｏｌｓ  ＵＳＡ（Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＮＤＣ６１９５３−０００２−１）から購入し、希釈して０．９％塩化ナトリウムを含む作業保存溶液（３ｍｇ／ｍｌ）とし、３００μｇ／１００μｌ／マウス（１５ｍｇ／ｋｇ）用量の陰性対照として使用した。各セットのマウスに対する投薬計画を表２０に示す。
【０２３２】
（表２０）
0005945277.tif 000021
【０２３３】
実施例８：ＤＭＳ５３小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）異種移植モデルへのＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびトポテカンの投与
６週齢雌ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）から購入し、１週間順化させた後、調査を開始した。ヒト小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）細胞株ＤＭＳ５３を腫瘍モデルとして使用し、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＣＲＬ−２０６２）から購入した。細胞を、ＷａｙｍｏｕｔｈのＭＢ７５２／１培地＋１０％ＦＢＳ＋２ｍＭ  Ｌ−グルタミン中、３７℃、５％ＣＯ２含有加湿雰囲気下で３世代の継代培養を行った。培養細胞が８５〜９０％集密に達すると、細胞を採取し、５０％マトリゲルを含むＣａ２＋とＭｇ２＋不含の冷リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に５ｘ１０７細胞／ｍＬで再懸濁した。細胞を５ｘ１０６細胞／１００μｌ／マウスの量でマウスの右脇腹の上の皮下に移植した。腫瘍が１００〜１２５ｍｍ３の大きさに到達後、マウスを分類し、各群（ｎ＝１０）が凡そ同じ平均腫瘍体積を持つように無作為化し、下表２１に従って治療を開始した。
【０２３４】
ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−ＦｃをＰＢＳで３ｍｇ／ｍｌに処方し、１５ｍｇ／ｋｇ（３００μｇ／１００μｌ／マウス）を週２回、４週間、腹腔内（ｉ．ｐ．）に投与した。トポテカン粉末をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｉｎｃ．（ＣａｔＮｏ．Ｔ２７０５−５０ＭＧ）から購入し、５％デキストロース溶液を使って５ｍｇ／ｍｌのストック溶液を作った。５％デキストロース溶液を使って希釈も行った。０．６ｍｌのストック溶液（５ｍｇ／ｍｌ）を５．４ｍｌの５％デキストロース溶液に加え、０．５ｍｇ／ｍｌの濃度の６ｍｌ希釈標準溶液とした。各マウスは、１００μｌの希釈標準溶液（０．５ｍｇ／ｍｌ）を受け、２．５ｍｇ／ｋｇの用量を与えられた。トポテカン投薬を、群に応じて、７日または２１日毎に繰り返した。組み合わせ群では、ＦＧＦＲ１−ＥＣＤ．３３９−Ｆｃおよびトポテカンを同時投与した。ヒトアルブミンをＧｒｉｆｏｌｓ  ＵＳＡ（Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ、ＣＡ；Ｃａｔ．Ｎｏ．ＮＤＣ６１９５３−０００２−１）から購入し、希釈して、０．９％塩化ナトリウムを含む作業保存溶液（３ｍｇ／ｍｌ）とし、３００μｇ／１００μｌ／マウス（１５ｍｇ／ｋｇ）用量の陰性対照として使用した。各セットのマウスに対する投薬計画を表２１に示す。
【０２３５】
（表２１）
0005945277.tif 000022
【０２３６】
配列の表
表２２は、本明細書を考察した特定の配列を列挙している。別段の記載がなければ、ＦＧＦＲ１配列は、シグナルペプチドを含めないで示されている。
【０２３７】
（表２２）配列および説明
0005945277.tif 000023
0005945277.tif 000024
【図１】
0005945277.tif 000025
【図２Ａ】
0005945277.tif 000026
【図２Ｂ】
0005945277.tif 000027
【図３Ａ】
0005945277.tif 000028
【図３Ｂ】
0005945277.tif 000029
【図４Ａ】
0005945277.tif 000030
【図４Ｂ】
0005945277.tif 000031
【図５】
0005945277.tif 000032
【図６】
0005945277.tif 000033
【図７】
0005945277.tif 000034
【図８Ａ】
0005945277.tif 000035
【図８Ｂ】
0005945277.tif 000036
【図９Ａ】
0005945277.tif 000037
【図９Ｂ】
0005945277.tif 000038
【図９Ｃ】
0005945277.tif 000039
【図１０】
0005945277.tif 000040
【図１１Ａ】
0005945277.tif 000041
【図１１Ｂ】
0005945277.tif 000042
【図１１Ｃ】
0005945277.tif 000043
【図１１Ｄ】
0005945277.tif 000044
【図１１Ｅ】
0005945277.tif 000045
【図１２Ａ】
0005945277.tif 000046
【図１２Ｂ】
0005945277.tif 000047
【図１２Ｃ】
0005945277.tif 000048
【図１３】
0005945277.tif 000049
【図１４】
0005945277.tif 000050
【配列表】
0005945277000001.app