(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（ＩＩ）：
【化１】
0005989923.tif 000085
［式中：
Ａは、ＣＨ又はＮであり；
Ｒ１ａは、−Ｃ１−Ｃ２アルキル及び−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２アルキル）から選択され、ここにおいて、Ｒ１ａは、一つ又はそれより多いフルオロによって所望により置換されていてもよく；
Ｒ４ａは、１−置換−ピペリジン−４−イル、一つ又はそれより多いフルオロで所望により置換されていてもよいＣ３−Ｃ６シクロアルキル、及びテトラヒドロピラニルから選択され；そして
Ｒ１３は、水素、ハロ、フェニル、ピリジニル、及び−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）から選択される；］
の構造を有する化合物又は医薬的に受容可能なその塩。
【請求項２】
Ｒ１ａが、−ＯＣＨ３、−ＣＨ３、−ＯＣＨＦ２、及び−ＣＨ２ＣＨ３から選択される、
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記１置換−ピペリジン−４−イルが、１−ハロ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル−ピペリジン−４−イルである、請求項１又は２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ４ａが、４，４−ジフルオロシクロヘキシル、シクロプロピル、テトラヒドロピラン−４−イル、１−（ｔ−ブトキシカルボニル）−ピペリジン−４−イル、１−（イソブトキシカルボニル）−ピペリジン−４−イル、１−（イソプロポキシカルボニル）−ピペリジン−４−イル、１−（２−フルオロエチル）−ピペリジン−４−イル、１−（２，２−ジフルオロエチル）−ピペリジン−４−イル、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−ピペリジン−４−イル、１−（２−ヒドロキシイソブチル）−ピペリジン−４−イル、１−（ヒドロキシイソプロピルカルボニル）−ピペリジン−４−イル、１−（エトキシカルボニルメチル）−ピペリジン−４−イル、１−（イソプロピルカルボニル）−ピペリジン−４−イル、１−メチルピペリジン−４−イル、１−（メチルスルホニル）−ピペリジン−４−イル、１−（エチルスルホニル）−ピペリジン−４−イル、１−（イソプロピルスルホニル）−ピペリジン−４−イル、１−（フェニル）−ピペリジン−４−イル、１−（オキセタン−３−イル）ピペリジン−４−イル、１−（ピリジン−２−イル）−ピペリジン−４−イル、及び１−（ピリミジン−２−イル）−ピペリジン−４−イルから選択される、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１３が、水素、クロロ、フルオロ、−ＯＣＨ（ＣＨ３）２、フェニル、及びピリジン−２−イルから選択される、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
前記化合物が、Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１−（１−（１−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピペリジン−４−イル）エチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド、又は医薬的に受容可能なその塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
前記化合物が、Ｒ−Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１−（１−（１−（２，２，２−トリフルオロエチル）ピペリジン−４−イル）エチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド、又は医薬的に受容可能なその塩である、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
前記化合物が、１−（１−（１−（２，２−ジフルオロエチル）ピペリジン−４−イル）エチル）−Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド、又は医薬的に受容可能なその塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
前記化合物が、Ｒ−１−（１−（１−（２，２−ジフルオロエチル）ピペリジン−４−イル）エチル）−Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド、又は医薬的に受容可能なその塩である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
前記化合物が、１−（１−（１−エチルピペリジン−４−イル）エチル）−Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド、又は医薬的に受容可能なその塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
前記化合物が、Ｒ−１−（１−（１−エチルピペリジン−４−イル）エチル）−Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド、又は医薬的に受容可能なその塩である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１ないし１１のいずれか１項に記載の化合物、又は医薬的に受容可能なその塩；及び医薬的に受容可能な担体を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１ないし１１のいずれか１項に記載の化合物、又は医薬的に受容可能なその塩を含む医薬組成物であって、細胞増殖に関係する疾病又は疾患を治療するためのものである、前記医薬組成物。
【請求項１４】
前記疾病が癌である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記癌が、乳癌、前立腺癌、大腸癌、腎細胞腫、多形性神経膠芽細胞腫、膀胱癌、黒色腫、気管支癌、リンパ腫、及び肝臓癌から選択される、請求項１４に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【関連出願】
【０００１】
関連出願との相互参照
[0001]本出願は、２０１３年２月１１日に出願された国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０２５６３９号に対する優先権を主張するものである。国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０２５６３９号は、２０１２年２月１０日に出願された米国特許仮出願６１／５９７，６９５号、及び２０１２年７月０３日に出願された６１／６６７，８２１号に対する優先権を主張するものである。上述の出願の全ての内容は、参照により本明細書中に援用される。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、メチル基変更酵素の調節物質、組成物及びその使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
[0002]真核生物のクロマチンは、ヌクレオソームと呼ばれる巨大分子複合体から構成される。ヌクレオソームは、ヒストンタンパク質Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３及びＨ４のそれぞれの二つのサブユニットを有するタンパク質の八量体で包まれた、１４７個のＤＮＡの塩基対を有する。ヒストンタンパク質は、翻訳後修飾にかけられ、これは、今度は、クロマチンの構造及び遺伝子発現に影響する。ヒストン上で見いだされる翻訳後修飾の一つの型は、リシン及びアルギニン残基のメチル化である。ヒストンのメチル化は、真核生物中の遺伝子発現の制御において重要な役割を演じる。メチル化は、クロマチンの構造に影響し、そして転写の活性化及び抑制の両方に関連している（Ｚｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｒｅｉｎｂｅｒｇ，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１５：２３４３−２３６０，２００１）。ヒストンへのメチル基の接続及びそれからの除去を触媒する酵素は、遺伝子発現抑制、胚発生、細胞増殖、及び他の過程に関係する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｚｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｒｅｉｎｂｅｒｇ，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１５：２３４３−２３６０，２００１。
【発明の概要】
【０００５】
[0003]本開示は、多様な生物学的過程の制御におけるその役割を考慮すれば、メチル基調節酵素が、調節のための興味ある標的であるという認識を包含する。本発明の化合物、及び医薬的に受容可能なその組成物が、ヒストンメチラーゼ及びヒストンデメチラーゼを含むヒストンのメチル基調節酵素の活性を刺激する薬剤として有効であることが今や見出されている。このような化合物は、以下の一般式ＩＩ：
【０００６】
【化１】
0005989923.tif 000002
【０００７】
のもの又は医薬的に受容可能なその塩を有し、ここにおいて、それぞれの可変基は、本明細書中で定義されるとおりである。
[0004]本発明の化合物、及び医薬的に受容可能なその組成物は、メチル基調節酵素に関連する各種の疾病、疾患又は症状を治療するために有用である。このような疾病、疾患、又は症状は、本明細書中に記載されるものを含む。
【０００８】
[0005]本発明によって提供される化合物は、更に生物学的及び病理学的現象におけるメチル基調節酵素の研究；メチル基調節酵素によって仲介される細胞内シグナル伝達経路の研究及び新しいメチル基調節酵素の修飾物質の比較評価のためにも有用である。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】[0006]図１は、式ＩＩの例示的化合物である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
１．本発明の化合物の一般的説明
[0007]ある態様において、本発明は、以下の式ＩＩ：
【００１１】
【化２】
0005989923.tif 000003
【００１２】
［式中：
Ａは、ＣＨ又はＮであり；
Ｒ１ａは、−Ｃ１−Ｃ２アルキル及び−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ２アルキル）から選択され、ここにおいて、Ｒ１ａは、一つ又はそれより多いフルオロで所望により置換されていてもよく；
Ｒ４ａは、−（Ｃ１−Ｃ４アルキレン）−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ３アルキル）、１−置換−ピペリジン−４−イル、一つ又はそれより多いフルオロで所望により置換されていてもよいＣ３−Ｃ６シクロアルキル、及びテトラヒドロピラニルから選択され；そして
Ｒ１３は、水素、ハロ、フェニル、ピリジニル、及び−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４アルキル）から選択される；］
の化合物、又は医薬的に受容可能なその塩を提供する。
【００１３】
２．化合物及び定義
[0008]具体的な官能基及び化学的用語の定義は、更に詳細に以下に記載される。本発明の目的のために、化学元素は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄＰｈｙｓｉｃｓ，７５ｔｈ  ｅｄ．，の表紙裏のＣＡＳ版の元素の周期表によって確認され、そして具体的な官能基は、一般的にその中に記載された通りである。更に、有機化学の一般的な原理、並びに特異的官能性分子及び反応性は、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｅ，１９９９；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｍａｒｃｈ  Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１；Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９；Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ，Ｓｏｍｅ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，１９８７中に記載され；これらのそれぞれの全ての内容は、本明細書中に参考文献として援用される。
【００１４】
[0009]他に記述しない限り、本明細書中に描写される構造は、更に、構造の全ての異性体（例えば、鏡像異性体的、ジアステレオ異性体的、及び幾何異性体的（又は配座異性体的））の形態；例えば、それぞれの不斉中心におけるＲ及びＳ配置、Ｚ及びＥの二重結合異性体、並びにＺ及びＳ配座異性体を含むことを意味する。従って、本発明の化合物の単一の立体化学的異性体、並びに鏡像異性体的、ジアステレオ異性体的、及び幾何異性体的（又は配座異性体的））混合物は、本発明の範囲内である。他に記述しない限り、本発明の化合物の全ての互変異性体の形態は、本発明の範囲内である。更に、他に記述しない限り、本明細書中に描写される構造は、更に一つ又はそれより多い同位体的に富化された原子の存在においてのみ異なる化合物を含むことを意味する。例えば、ジューテリウム又はトリチウムによる水素の置換、或いは１３Ｃ−又は１４Ｃ−で富化された炭素による炭素の置換を含む本発明の構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。このような化合物は、例えば、分析用ツールとして、生物学的アッセイのプローブとして、又は本発明による治療剤として有用である。
【００１５】
[0010]特定の鏡像異性体が好ましい場合、これは、幾つかの態様において、対応する鏡像異性体を実質的に含まずに得ることができ、そしてこれは、更に“光学的に富化された”と呼ぶことができる。“光学的に富化された”は、本明細書中で使用する場合、化合物が、有意に大部分の一つの鏡像異性体で構成されていることを意味する。ある態様において、化合物は、少なくとも約９０重量％の好ましい鏡像異性体で構成される。他の態様において、化合物は、少なくとも約９５％、９８％、又は９９重量％の好ましい鏡像異性体で構成される。好ましい鏡像異性体は、キラル高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）並びにキラル塩の形成及び結晶化を含む当業者にとって既知のいずれもの方法によってラセミ混合物から単離するか、或いは不斉合成によって調製することができる。例えば、Ｊａｃｑｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ，Ｒａｃｅｍａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８１）；Ｗｉｌｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ３３：２７２５（１９７７）；Ｅｌｉｅｌ，Ｅ．Ｌ．Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，ＮＹ，１９６２）；Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．Ｈ．Ｔａｂｌｅｓ  ｏｆ  Ｒｅｓｏｌｖｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  ｐ．２６８（Ｅ．Ｌ．Ｅｌｉｅｌ，Ｅｄ．，Ｕｎｉｖ．ｏｆ  Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｏｔｒｅ  Ｄａｍｅ，ＩＮ  １９７２）を参照されたい。
【００１６】
[0011]化学構造のキラル中心における波型の結合（
【００１７】
【化３】
0005989923.tif 000004
【００１８】
）は、光学的に純粋であるが、しかしその旋光性が決定されていない本発明の化合物を指すために使用される。先に記述したように、本発明は、更にラセミ体の全ての可能な異性体の形態を含むが、キラル中心における直線の結合は、ラセミ混合物を示す。
【００１９】
[0012]用語“ハロ”及び“ハロゲン”は、本明細書中で使用する場合、フッ素（フルオロ、−Ｆ）、塩素（クロロ、−Ｃｌ）、臭素（ブロモ、−Ｂｒ）、及びヨウ素（ヨード、−Ｉ）から選択される原子を指す。
【００２０】
[0013]用語“アルキレン”は、二価のアルキル基を指す。“アルキレン鎖”は、ポリメチレン基、即ち、−（ＣＨ２）ｎ−であり、ここにおいて、ｎは、正の、好ましくは１か
ら６まで、１から４まで、１から３まで、１から２まで又は２から３までの整数である。置換されたアルキレン鎖は、一つ又はそれより多いメチレンの水素原子が、置換基で置換されたポリメチレン基である。適した置換基は、置換された脂肪族基のために以下に記載されるものを含む。
【００２１】
[0014]用語“アルキル”は、本明細書中で使用する場合、１ないし６個間の炭素原子を含有する脂肪族分子からの一個の水素原子の除去によって誘導された、一価の飽和の直鎖又は分枝鎖の炭化水素ラジカルを指す。幾つかの態様において、アルキルは、１−５個の炭素原子を含有する。もう一つの態様において、アルキルは、１−４個の炭素原子を含有する。なお他の態様において、アルキルは、１−３個の炭素原子を含有する。なおもう一つの態様において、アルキルは、１−２個の炭素原子を含有する。アルキルラジカルの例は、制約されるものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｓｅｃ−ペンチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、ｓｅｃ−ヘキシル、等を含む。
【００２２】
[0015]本明細書中に記載するように、本発明の化合物は、“所望により置換されていてもよい”分子を含有することができる。一般的に、用語“置換された”は、用語“所望に
より”によって先行されているか否かに関わらず、指摘された分子の一つ又はそれより多い水素が、適した置換基で置換されていることを意味する。他に示さない限り、“所望により置換されていてもよい”基は、基のそれぞれの置換可能な位置において適した置換基を有することができ、そしていずれもの所定の構造中の一つより多い位置が、規定された基から選択される一つより多い置換基で置換することができる場合、置換基は、それぞれの位置において同一であるか又は異なっているかのいずれかであることができる。本発明下で想定される置換基の組合せは、好ましくは安定な又は化学的に可能な化合物の形成をもたらすものである。用語“安定な”は、本明細書中で使用する場合、その製造、検出を、そしてある態様においてはその回収、精製を、可能にする条件にかけられ、そして本明細書中で開示される一つ又はそれより多い目的のために使用された場合、実質的に変化しない化合物を指す。
【００２３】
[0016]“所望により置換されていてもよい”基の置換可能な炭素原子に対する適した一価の置換基は、独立に、ハロゲン；−（ＣＨ２）０−４Ｒ○；−（ＣＨ２）０−４ＯＲ○；−Ｏ−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＲ○；−（ＣＨ２）０−４ＣＨ（ＯＲ○）２；−（ＣＨ２）０−４ＳＲ○；Ｒ○で置換されていることができる−（ＣＨ２）０−４Ｐｈ；Ｒ○で置換されていることができる−（ＣＨ２）０−４Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ；Ｒ○で置換されていることができる−ＣＨ＝ＣＨＰｈ；−ＮＯ２；−ＣＮ；−Ｎ３；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ○）２；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）Ｒ○；−Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｓ）Ｒ○；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）ＮＲ○２；−Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｓ）ＮＲ○２；−（ＣＨ２）０−４Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）ＯＲ○；−Ｎ（Ｒ○）Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）Ｒ○；−Ｎ（Ｒ○）Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）ＮＲ○２；−Ｎ（Ｒ○）Ｎ（Ｒ○）Ｃ（Ｏ）ＯＲ○；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）Ｒ○；−Ｃ（Ｓ）Ｒ○；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＲ○；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＳＲ○；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＯＳｉＲ○３；−（ＣＨ２）０−４ＯＣ（Ｏ）Ｒー；−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）０−４ＳＲ−；−ＳＣ（Ｓ）ＳＲ°；−（ＣＨ２）０−４ＳＣ（Ｏ）Ｒ○；−（ＣＨ２）０−４Ｃ（Ｏ）ＮＲ○２；−Ｃ（Ｓ）ＮＲ○２；−Ｃ（Ｓ）ＳＲ○；−ＳＣ（Ｓ）ＳＲ○；−（ＣＨ２）０−４ＯＣ（Ｏ）ＮＲ○２；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＲ○）Ｒ○；−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ○；−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ○；−Ｃ（ＮＯＲ○）Ｒ○；−（ＣＨ２）０−４ＳＳＲ○；−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）２Ｒ○；−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）２ＯＲ○；−（ＣＨ２）０−４ＯＳ（Ｏ）２Ｒ○；−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ○２；−（ＣＨ２）０−４Ｓ（Ｏ）Ｒ○；−Ｎ（Ｒ○）Ｓ（Ｏ）２ＮＲ○２；−Ｎ（Ｒ○）Ｓ（Ｏ）２Ｒ○；−Ｎ（ＯＲ○）Ｒ○；−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ○２；−Ｐ（Ｏ）２Ｒ○；−Ｐ（Ｏ）Ｒ○２；−ＯＰ（Ｏ）Ｒ○２；−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ○）２；−ＳｉＲ○３；−（Ｃ１−４直鎖又は分枝鎖アルキレン）Ｏ−Ｎ（Ｒ○）２；又は−（Ｃ１−４直鎖又は分枝鎖アルキレン）Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｎ（Ｒ○）２であり、ここにおいて、それぞれのＲ○は、以下に定義されるように置換することができ、そして独立に水素、Ｃ１−６脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈ、或いは窒素、酸素、又は硫黄から独立に選択される０−４個の異種原子を有する５−６員の飽和の、部分的に不飽和の、又はアリールの環であるか、或いは上記の定義にも関わらず、Ｒ○の二つの独立の存在は、その介在する原子（類）と一緒に選択されて、窒素、酸素、又は硫黄から独立に選択される０−４個の異種原子を有する、３−１２員の飽和の、部分的に不飽和の、又はアリールの単環又は二環式環を形成し、これらは、以下に定義されるように置換されていることができる。
【００２４】
[0017]“所望により置換されていてもよい”基の置換可能な窒素に対する適した置換基は、−Ｒ†、−ＮＲ†２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ†、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ†２、−Ｃ（Ｓ）ＮＲ†２、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ†２、又は−Ｎ（Ｒ†）Ｓ（Ｏ）２Ｒ†を含み；ここにおいて、それぞれのＲ†は、独立に水素、以下に定義されるように置換することができるＣ１−６脂肪族、非置換の−ＯＰｈ、或いは窒素、酸素、又は硫黄から独立に選択される０−４個の異種原子を有する、非置換の５−６員の飽和の、部分的に不飽和の、又は芳香族の環であるか、或いは上記の定義に関わらず、Ｒ†の二つの独立の存在はその介在する原子（類）と一緒に選択されて、窒素、酸素、又は硫黄から独立に選択される０−４個の異種原子を有する、非置換の３−１２員の飽和の、部分的に不飽和の、或いはアリールの単環又は二環式の環を形成する。
【００２５】
[0018] Ｒ†の脂肪族基に対する適した置換基は、独立にハロゲン、−Ｒ●、−（ハロＲ●）、−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ●２、又は−ＮＯ２であり、ここにおいて、それぞれのＲ●は、非置換であるか、又は“ハロ”によって先行された場合、一つ又はそれより多いハロゲンでのみ置換され、そして独立にＣ１−４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０−１Ｐｈであるか、或いは窒素、酸素、又は硫黄から独立に選択される０−４個の異種原子を有する、５−６員の飽和の、部分的に不飽和の、又はアリールの環である。
【００２６】
[0019]本明細書中で使用する場合、用語“阻害剤”は、測定可能な親和性を持つ酵素を使用して、標的のＳ−アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）に結合し及び／又はそれを阻害する化合物として定義される。ある態様において、阻害剤は、約５０μＭより小さい、約１μＭより小さい、約５００ｎＭより小さい、約１００ｎＭより小さい、又は約１０ｎＭより小さいＩＣ５０及び／又は結合定数を有する。
【００２７】
[0020]用語“測定可能な親和性”及び“測定可能な程度阻害する”は、本明細書中で使用する場合、提供された化合物又はその組成物、及び少なくとも一つのＳＡＭ依存性酵素を含んでなる試料、並びに前記化合物、又はその組成物の非存在における、少なくとも一つのＳＡＭ依存性酵素を含んでなる同等の試料間の、酵素を使用する、少なくとも一つのＳＡＭの活性の測定可能な変化を意味する。
【００２８】
３．例示的化合物の説明
[0021]式ＩＩの幾つかの態様において、Ｒ１ａは、−ＯＣＨ３、−ＣＨ３、−ＯＣＨＦ２、及び−ＣＨ２ＣＨ３から選択される。
【００２９】
[0022]式ＩＩの幾つかの態様において、Ｒ４ａは、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＯＣＨ３、４，４−ジフルオロシクロヘキシル、シクロプロピル、テトラヒドロピラン−４−イル、１−（ｔ−ブトキシカルボニル）−ピペリジン−４−イル、１−（イソブトキシカルボニル）−ピペリジン−４−イル、１−（イソプロポキシカルボニル）−ピペリジン−４−イル、１−（２−フルオロエチル）−ピペリジン−４−イル、１−（２，２−ジフルオロエチル）−ピペリジン−４−イル、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−ピペリジン−４−イル、１−（２−ヒドロキシイソブチル）−ピペリジン−４−イル、１−（ヒドロキシイソプロピルカルボニル）−ピペリジン−４−イル、１−（エトキシカルボニルメチル）−ピペリジン−４−イル、１−（イソプロピルカルボニル）−ピペリジン−４−イル、１−メチルピペリジン−４−イル、１−（メチルスルホニル）−ピペリジン−４−イル、１−（エチルスルホニル）−ピペリジン−４−イル、１−（イソプロピルスルホニル）−ピペリジン−４−イル、１−（フェニル）−ピペリジン−４−イル、１−（オキセタン−３−イル）ピペリジン−４−イル、１−（ピリジン−２−イル）−ピペリジン−４−イル、及び１−（ピリミジン−２−イル）−ピペリジン−４−イルから選択される。
【００３０】
[0023]式ＩＩの幾つかの態様において、Ｒ１３は、水素、クロロ、フルオロ、−ＯＣＨ（ＣＨ３）２、フェニル、及びピリジン−２−イルから選択される。
[0024]式ＩＩの例示的な化合物を、図１に記載する。幾つかの場合、一つ（又はそれより多い）波型の結合を有する図１の二つ（又はそれより多い）化合物は、正確に同一の構造を有するものである。波型の結合が、未決定の旋光性のキラル中心を表すために、このような化合物は、互いに別個の異なる光学異性体であると理解されるものである。図１は、これらの、同一の描写された構造を有するが、しかし異なった立体化学である二つ又はそれより多い化合物の組を示すために注記される。
【００３１】
４．使用、処方及び投与
医薬的に受容可能な組成物
[0025]もう一つの態様によれば、本発明は、本発明の化合物又は医薬的に受容可能なその誘導体及び医薬的に受容可能な担体、アジュバント、又はベヒクルを含んでなる組成物を提供する。本発明の組成物中の化合物の量は、生物学的試料又はヒトにおけるヒストンのメチル基調節酵素、又はその変異体を、測定可能な程度に調節するために有効であるようなものである。ある態様において、本発明の組成物中の化合物の量は、生物学的試料又はヒトにおけるヒストンのメチル基調節酵素、又はその変異体を測定可能な程度に調節するために有効であるようなものである。
【００３２】
[0026]ある態様において、本発明の組成物は、このような組成物を必要とする患者への投与のために処方される。幾つかの態様において、本発明の組成物は、患者への経口投与のために処方される。
【００３３】
[0027]用語“患者”は、本明細書中で使用する場合、動物、好ましくは哺乳動物、そして最も好ましくはヒトを意味する。
[0028]用語“医薬的に受容可能な担体、アジュバント、又はベヒクル”は、これがそれと共に処方される化合物の薬理学的活性を破壊しない非毒性の担体、アジュバント、又はベヒクルを指す。本発明の組成物中に使用することができる医薬的に受容可能な担体、アジュバント、又はベヒクルは、制約されるものではないが、イオン交換物質、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清蛋白質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩又は電解質、例えばプロタミン硫酸塩、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース基剤物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール及び羊毛脂を含む。
【００３４】
[0029]“医薬的に受容可能な誘導体”は、受容者への投与において、本発明の化合物或いはその阻害性的に活性な代謝産物又は残留物を、直接的に又は間接的にのいずれかで
提供することが可能である本発明の化合物のいずれもの非毒性の塩、エステル、エステル又は他の誘導体の塩を意味する。
【００３５】
[0030]本発明の組成物は、経口的、非経口的、吸入噴霧により、局所的、直腸的、鼻腔的、頬側的、膣的に又は移植されたリザバー経由で投与することができる。用語“非経口”は、本明細書中で使用する場合、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、くも膜下腔内、肝臓内、病巣内及び頭蓋内注射又は注入技術を含む。好ましくは、組成物は、経口的、腹腔内的又は静脈内的に投与される。本発明の組成物の滅菌注射用形態は、水性又は油性懸濁液であることができる。これらの懸濁液は、適した分散又は湿潤剤及び懸濁剤を使用して、当技術において既知の技術によって処方することができる。滅菌注射用製剤は、更に非毒性の非経口的に受容可能な希釈剤又は溶媒中の、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液のような滅菌注射用溶液又は懸濁液であることもできる。受容可能なベヒクル及び溶媒の中で、使用することができるものは、水、リンゲル溶液、及び等張の塩化ナトリウム溶液である。更に、滅菌固定油は、溶媒又は懸濁用媒体として好都合に使用される。
【００３６】
[0031]この目的のために、合成のモノ−又はジ−グリセリドを含む、いずれもの無菌の固定油を使用することができる。脂肪酸、例えば、オレイン酸及びそのグリセリド誘導体は、天然の医薬的に受容可能な油、例えばオリーブ油又はひまし油であるために、特にそのポリオキシエチル化変種は、注射剤の調製において有用である。これらの油溶液又は懸濁液は、更に長鎖アルコール希釈剤又は分散剤、例えば、乳剤及び懸濁剤を含む医薬的に受容可能な剤形の形成において普通に使用される、カルボキシメチルセルロース又は類似の分散剤を含有することができる。他の普通に使用される界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ、Ｓｐａｎ、及び医薬的に受容可能な固体、液体、又は他の剤形の製造において普通に使用される他の乳化剤或いは生体利用性向上剤も、更に処方の目的のために使用することができる。
【００３７】
[0032]本発明の医薬的に受容可能な組成物は、制約されるものではないが、カプセル、錠剤、水性懸濁液又は溶液を含むいずれもの経口的に受容可能な剤形で、経口的に投与
することができる。経口使用のための錠剤の場合、普通に使用される担体は、ラクトース及びコーンスターチを含む。潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムも、典型的には更に加えられる。カプセルの形態の経口投与のために、有用な希釈剤は、ラクトース及び乾燥コーンスターチを含む。経口使用のために水性懸濁液が要求される場合、活性成分は、乳化及び懸濁剤と混合される。所望する場合、若干の甘味、芳香又は着色剤も更に加えることができる。
【００３８】
[0033]別の方法として、本発明の医薬的に受容可能な組成物は、直腸投与のための座薬の形態で投与することができる。これらは、薬剤を、室温では固体であるが、しかし直腸温度では液体であり、そして従って直腸で融解して、薬物を放出するものである適した非刺激性の賦形剤と混合することによって調製することができる。このような物質は、ココアバター、蜜蝋及びポリエチレングリコールを含む。
【００３９】
[0034]本発明の医薬的に受容可能な組成物は、更に、特に治療の標的が、眼、皮膚、又は下部腸管の疾病を含む局所適用によって容易に接近可能である場所又は器官を含む場合、局所的に投与することができる。適した局所製剤は、それぞれのこれらの場所及び器官のために容易に調製される。
【００４０】
[0035]下部腸管のための局所適用は、直腸の座薬製剤（上記参照）で、又は適した浣腸製剤で行うことができる。局所的経皮貼布も、更に使用することができる。
[0036]局所適用のために、提供される医薬的に受容可能な組成物は、一つ又はそれより多い担体中に懸濁又は溶解された活性成分を含有する、適した軟膏中に処方することができる。本発明の化合物の局所投与のための担体は、制約されるものではないが、鉱油、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化用ワックス及び水を含む。別の方法として、提供される医薬的に受容可能な組成物は、一つ又はそれより多い医薬的に受容可能な担体中に懸濁又は溶解された活性成分を含有する適したローション又はクリーム中に処方することができる。適した担体は、制約されるものではないが、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール及び水を含む。
【００４１】
[0037]眼科使用のために、提供される医薬的に受容可能な組成物は、等張のｐＨ調節済み滅菌生理食塩水中のマイクロ化懸濁液として、又は好ましくは、保存剤、例えば塩化ベンザルコニウムを伴うか又は伴わないのいずれかの、等張のｐＨ調節済みの滅菌生理食塩水中の溶液として処方することができる。別の方法として、眼科使用のために、医薬的に受容可能な組成物は、軟膏、例えばワセリン中に処方することができる。
【００４２】
[0038]本発明の医薬的に受容可能な組成物は、更に、鼻腔用エアゾール又は吸入によって投与することもできる。このような組成物は、医薬製剤の技術において公知の技術によって調製され、そしてベンジルアルコール又は他の適した保存剤、生体利用性を向上するための吸収促進剤、フルオロカーボン、及び／又は他の慣用的な可溶化又は分散剤を使用して、生理食塩水中の溶液として調製することができる。
【００４３】
[0039]最も好ましくは、本発明の医薬的に受容可能な組成物は、経口投与のために処方される。このような製剤は、食物を伴い又は伴わずに投与することができる。幾つかの態様において、本発明の医薬的に受容可能な組成物は、食物を伴わずに投与される。他の態様において、本発明の医薬的に受容可能な組成物は、食物を伴って投与される。
【００４４】
[0040]単一の剤形の組成物を製造するために担体物質と混合することができる本発明の化合物の量は、治療される宿主及び投与の特定の様式によって変化するものである。好ましくは、提供される組成物は、０．０１−１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の間の投与量の阻害剤が、これらの組成物を受領する患者に投与することができるように処方されなければならない。
【００４５】
[0041]いずれもの特定の患者のための具体的な投与量及び治療計画が、使用される具体的な化合物の活性、年齢、体重、一般的健康状態、性別、食餌、投与時間、排出速度、薬物の組合せ、及び治療する医師の判断、並びに治療される特定の疾病の重篤度を含む各種の因子に依存するものであることは理解されるべきである。組成物中の本発明の化合物の量は、更に組成物中の特定の化合物にも依存するものである。
【００４６】
化合物及び医薬的に受容可能な組成物の使用
[0042]本明細書中に記載される化合物及び組成物は、一般的に、エピジェネティックの制御に関係する一つ又はそれより多い酵素の活性の調節のために有用である。
【００４７】
[0043]エピジェネティックは、根底にあるＤＮＡ配列の変化以外の機構によって起こされる遺伝子発現の遺伝的変化の研究である。エピジェネティックの制御において役割を演じる分子機構は、ＤＮＡメチル化及びクロマチン／ヒストン修飾を含む。ヒストンのメチル化は、特に、多くのエピジェネティック現象において重要である。
【００４８】
[0044]核ＤＮＡ及びヒストンタンパク質の組織化された構築物であるクロマチンは、転写、複製、ＤＮＡ損傷修復及び細胞周期による進行の制御を含む、多数の重要な核過程
のための基本である。多くの因子、例えば、クロマチン修飾酵素は、クロマチンの動的平衡を維持することにおいて重要な役割を演じていることが確認されている（Ｍａｒｇｕｅｒｏｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．１５：１６３−１７６）。
【００４９】
[0045]ヒストンは、クロマチンの主要なタンパク質成分である。これらは、その周りにＤＮＡが巻き付くスプールとして作用し、そしてこれらは、遺伝子制御において役割を演じている。二つのスーパークラス：コアヒストン（Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、及びＨ４）及びリンカーヒストン（Ｈ１及びＨ５）に組織された合計６個のヒストンのクラス（Ｈ１、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４，及びＨ５）が存在する。クロマチンの基本単位は、ヌクレオソームであり、これは、それぞれのコアヒストンＨ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、及びＨ４の二つのコピーからなるヒストンオクタマーの周りを包む約１４７個の塩基対のＤＮＡからなる（Ｌｕｇｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  ３８９：２５１−２６０）。
【００５０】
[0046]ヒストン、特にヒストンＨ３及びＨ４のアミノ末端、並びにヒストンＨ２Ａ、Ｈ２Ｂ及びＨ１のアミノ並びにカルボキシ末端の残基は、アセチル化、メチル化、リン酸化、リボシル化、ＳＵＭＯ化、ユビキチン化、シトルリン化、脱イミン化、及びビオチニル化を含む各種の翻訳後修飾に対して感受性である。ヒストンＨ２Ａ及びＨ３のコアも、更に修飾することができる。ヒストンの修飾は、多様な生物学的過程、例えば遺伝子制御、ＤＮＡ修復、及び染色体凝縮に不可欠である。
【００５１】
[0047]本開示は、ヒストンのメチル基調節酵素の活性を調節するための化合物及び組成物を提供する。ヒストンのメチル基調節酵素は、細胞及び発生過程の重要な調節物質である。ヒストンのメチル基調節酵素は、ヒストンメチルトランスフェラーゼ又はヒストンデメチラーゼのいずれかとして特徴づけることができる。ヒストンデメチラーゼ酵素は、メチル化された残基への結合を仲介するモジュールを有する。例えば、多重デメチラーゼは、Ｔｕｄｏｒドメイン（例えばＪＭＪＤ２Ｃ／ＧＡＳＣ１）又はＰＨＤドメイン（例えばＪＡＲＩＤ１Ｃ／ＳＭＣＸ，ＰＨＦ８）を含有する。
【００５２】
[0048]多くのヒストンメチルトランスフェラーゼのリシン特異性は、特徴づけられている。例えば、ＳＥＴ７／９、ＳＭＹＤ３、及びＭＬＬ１−５は、Ｈ３Ｋ４に対して特異的である。ＳＵＶ３９Ｈ１、ＤＩＭ−５、及びＧ９ａは、Ｈ３Ｋ９に対して特異的である。ＳＥＴ８は、Ｈ４Ｋ２０に対して特異的である。
【００５３】
[0049]ＤＯＴ１は、ヒストンメチラーゼを含有する非ＳＥＴドメインの例である。ＤＯＴ１は、リシン７９のＨ３をメチル化する。
[0050]ヒストンメチラーゼが転写活性、クロマチン構造、及び遺伝子発現抑制を制御することが示されたと同様に、デメチラーゼが、更にこれが遺伝子発現にも影響すること
が発見されている。ＬＳＤ１は、特徴づけられるべき最初のヒストンのリシンデメチラーゼであった。この酵素は、ＦＡＤ依存性アミンオキシダーゼに対する相同性を示し、そして神経細胞遺伝子の転写共役制御因子として作用する（Ｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １１９：９４１−９５３，２００４）。ＪＨＤＭ１（又はＫＤＭ２）、ＪＨＤＭ２（又はＫＤＭ３）、ＪＭＪＤ２（又はＫＤＭ４）、ＪＡＲＩＤ（又はＫＤＭ５）、ＪＭＪＤ３（又はＫＤＭ６）、及びＪＭＪＤ６ファミリー（Ｌａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２０（３）：３１６−３２５，２００８）を含む、別個のデメチラーゼファミリーを規定する、更なるデメチラーゼが発見されている。
【００５４】
[0051]デメチラーゼは、基質配列内の特異的なリシン残基に対して作用し、そして所定の残基上に存在するメチル化の程度間を識別する。例えば、ＬＳＤ１は、Ｈ３Ｋ４からモノ又はジメチル基を除去する。ＪＡＲＩＤ１Ａ−Ｄファミリーのメンバーは、Ｈ３Ｋ４からトリメチル基を除去する。ＵＴＸ及びＪＭＪＤ３は、ＥＺＨ２メチラーゼ活性の効果に対抗してＨ３Ｋ２７を脱メチルする。他のデメチラーゼの基質特異性は、特徴づけられている（Ｓｈｉ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．８：８２９−８３３，２００７を参照されたい）。
【００５５】
[0052]ヒストンメチラーゼの一つのクラスは、ドメイン、Ｓｕ（ｖａｒ）３−９、ｚｅｓｔｅのエンハンサー［Ｅ（Ｚ）］、及びトライソラクスを共有するタンパク質から命名されたＳＥＴドメインの存在によって特徴づけられる。ＳＥＴドメインは、約１３０個のアミノ酸を含む。ＳＥＴドメインを含有するメチラーゼファミリーは、ＳＵＶ３９Ｈ１、ＳＥＴ１、ＳＥＴ２、ＥＺＨ２、ＲＩＺ１、ＳＭＹＤ３、ＳＵＶ４−２０Ｈ１、ＳＥＴ７／９、及びＰＲ−ＳＥＴ７／ＳＥＴ８ファミリーを含む（Ｄｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ．６：２２７，２００５中で概説）。ファミリーのメンバーは、典型的にはＳＥＴドメインの近傍及びその中に類似の配列モチーフを含む。ヒトのゲノムは、５０個を超えるＳＥＴドメインを含有するヒストンタンパク質メチラーゼをコードし、これらのいずれもは、本明細書中に記載されるアッセイ中で使用することができる。        
【００５６】
[0053]ＥＺＨ２は、ヒトのＳＥＴドメインを含有するメチラーゼの例である。ＥＺＨ２は、ＥＥＤ（胚性外肺葉発生）及びＳＵＺ１２（ｚｅｓｔｅ１２ホモログの抑制因子）と結合して、ＰＲＣ２（ポリコーム群抑制複合体２）として知られる、リシン２７においてヒストンＨ３をトリメチル化する能力を有する複合体を形成する（Ｃａｏ  ａｎｄ  Ｚｈａｎｇ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  １５：５７−６７，２００４）。ＰＲＣ２複合体は、更にＲＢＡＰ４６及びＲＢＡＰ４８サブユニットを含むこともできる。
【００５７】
[0054]ＥＺＨ２の発癌性活性は、多くの研究によって示されている。細胞株の実験において、ＥＺＨ２の過剰発現は、細胞の浸潤、軟質寒天中の増殖、及び運動性を誘発し、一方、ＥＺＨ２のノックダウンは、細胞の増殖及び細胞の浸潤を阻害する（Ｋｌｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １００：１１６０６−１１６１１；Ｖａｒａｍｂａｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２），“Ｔｈｅ  ｐｏｌｙｃｏｍｂ  ｇｒｏｕｐ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＥＺＨ２  ｉｓ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ，”Ｎａｔｕｒｅ  ４１９，６２４−６２９）。ＥＺＨ２が、特にＥ−カドヘリン、ＤＡＢ２ＩＰ及びＲＵＮＸ３を含む幾つかの腫瘍抑制因子の発現を抑圧することが示されている。異種移植モデルにおいて、ＥＺＨ２ノックダウンは、腫瘍の成長及び転移を阻害する。最近になって、マウスモデルにおけるＥＺＨ２の下方調節が、前立腺癌の転移を遮断することが示されれている（Ｍｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎ  ｏｎｃｏｇｅｎｅ−ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｃａｓｃａｄｅ  ｄｒｉｖｅｓ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｂｙ  ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｌｙ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  Ｒａｓ  ａｎｄ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ−ｋａｐｐａＢ，”Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２０１０  Ｍａｒ；１６（３）：２８６−９４）。ＥＺＨ２の過剰発現は、ある種の癌、例えば乳癌の攻撃性に関係する（Ｋｌｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １００：１１６０６−１１６１１，２００３）。最近の研究は、更に、前立腺癌に特異的な発癌性融合遺伝子ＴＭＰＲＳＳ２−ＥＲＧが、ＥＺＨ２の直接的活性化による抑圧的エピジェネティックプログラムを誘発することを示唆する（Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ｎｅｔｗｏｒｋ  ｏｆ  Ａｎｄｒｏｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｐｏｌｙｃｏｍｂ，ａｎｄ  ＴＭＰＲＳＳ２−ＥＲＧ  Ｇｅｎｅ  Ｆｕｓｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，”Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．２０１０  Ｍａｙ  １８；１７（５）：４４３−４５４）。
【００５８】
[0055]幾つかの態様において、本発明の化合物は、エピジェネティック制御に関係する一つ又はそれより多い酵素の活性を調節する。幾つかの態様において、本発明の化合物は、ヒストンメチル基調節酵素、又はその変異体の活性を調節する。幾つかの態様において、本発明の化合物は、ＥＺＨ２活性を調節する。幾つかの態様において、本発明の化合物は、ＥＺＨ２の活性を下方制御又は抑制する。幾つかの態様において、本発明の化合物は、ＥＺＨ２活性のアンタゴニストである。
【００５９】
[0056]幾つかの態様において、本発明の化合物及び組成物は、ヒストンメチル基調節酵素に関係する疾病及び／又は疾患の治療において有用である。従って、幾つかの態様において、本発明は、ヒストンメチル基調節酵素に関係する疾病及び／又は疾患を調節する方法を提供する。幾つかの態様において、本発明は、式ＩＩの化合物又は組成物を投与する工程を含んでなる、ヒストンメチル基調節酵素に関係する疾病及び／又は疾患に罹った患者を治療する方法を提供する。
【００６０】
[0057]幾つかの態様において、本発明の化合物及び組成物は、ＥＺＨ２の過剰発現に関係する疾病及び／又は疾患の治療において有用である。幾つかの態様において、本発明は、式ＩＩの化合物又は組成物を投与する工程を含んでなる、ＥＺＨ２の過剰発現に関係する疾病及び／又は疾患に罹った患者を治療する方法を提供する。幾つかの態様において、上記の方法は、患者がＥＺＨ２を過剰発現しているか否かを決定する予備的な工程を更に含んでなる。
【００６１】
[0058]幾つかの態様において、本発明の化合物及び組成物は、細胞増殖に関係する疾病及び／又は疾患の治療において有用である。幾つかの態様において、本発明の化合物及
び組成物は、細胞周期又はＤＮＡ修復の誤制御に関係する疾病及び／又は疾患の治療において有用である。幾つかの態様において、本発明の化合物及び組成物は、癌の治療において有用である。癌の例示的な種類は、乳癌、前立腺癌、大腸癌、腎細胞癌、多形神経膠芽腫、膀胱癌、黒色腫、気管支癌、リンパ腫及び肝臓癌を含む。
【００６２】
[0059]ＥＺＨ２欠損、ミスセンス及びフレームシフト変異の研究は、ＥＺＨ２が、血液性疾患、例えば骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）及び骨髄悪性腫瘍の腫瘍抑制因子として機能することを示唆する（Ｅｒｎｓｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．２０１０  Ａｕｇ；４２（８）：７２２−６；Ｎｉｋｏｌｏｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．２０１０  Ａｕｇ；４２（８）：６６５−７）。従って、幾つかの態様において、本発明の化合物及び組成物は、ＥＺＨ２の変異体の形態の存在に関係する疾病及び／又は疾患の治療において有用である。幾つかの態様において、本発明の化合物及び組成物は、Ｙ６４１Ｎ  ＥＺＨ２の変異体の形態の存在に関係する疾病及び／又は疾患の治療において有用である。幾つかの態様において、ＥＺＨ２の変異体の形態の存在に関係する疾病及び／又は疾患は、ヒトＢ細胞リンパ腫である。幾つかの態様において、Ｙ６４１Ｎ  ＥＺＨ２の存在に関係する疾病及び／又は疾患は、濾胞性リンパ腫又は瀰漫性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。幾つかの態様において、本発明の化合物又は組成物は、血液性疾患、例えば骨髄異形成症候群、白血病、貧血及び血球減少症の治療において有用である。Ｓｎｅｅｒｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ  ｐｌｕｓ  ｍｕｔａｎｔ  ＥＺＨ２  ｄｒｉｖｅ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｈｙｐｅｒｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｙｓｉｎｅ  ２７  ｏｎ  ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３（Ｈ３Ｋ２７）ｉｎ  ｈｕｍａｎ  Ｂ−ｃｅｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ，”Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＰＮＡＳ  Ｅａｒｌｙ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ  ｏｎ  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １５，２０１０。
【００６３】
[0060]幾つかの態様において、本発明は、式Ｉの化合物又は組成物の投与の工程を含んでなる、患者のＥＺＨ２の活性を減少する方法を提供する。幾つかの態様において、本発明は、式ＩＩの化合物又は組成物の投与の工程を含んでなる、患者の野生型ＥＺＨ２の活性を減少する方法を提供する。幾つかの態様において、本発明は、式ＩＩの化合物又は組成物の投与の工程を含んでなる、患者のＥＺＨ２の変異体の形態の活性を減少する方法を提供する。幾つかの態様において、本発明は、式ＩＩの化合物又は組成物の投与の工程を含んでなる、患者のＥＺＨ２の変異体の形態の活性を減少する方法を提供し、ここにおいて、ＥＺＨ２の変異体の形態は、Ｙ６４１Ｎ  ＥＺＨ２である。幾つかの態様において、本発明は、式ＩＩの化合物又は組成物の投与の工程を含んでなる、ＥＺＨ２に関係する疾病及び／又は疾患に罹った患者を治療する方法を提供する。幾つかの態様において、本発明は、式ＩＩの化合物又は組成物の投与の工程を含んでなる、野生型ＥＺＨ２に関係する疾病及び／又は疾患に罹った患者を治療する方法を提供する。幾つかの態様において、本発明は、式ＩＩの化合物又は組成物の投与の工程を含んでなる、ＥＺＨ２の変異体の形態に関係する疾病及び／又は疾患に罹った患者を治療する方法を提供する。幾つかの態様において、本発明は、式ＩＩの化合物又は組成物の投与の工程を含んでなる、ＥＺＨ２の変異体の形態に関係する疾病及び／又は疾患に罹った患者を治療する方法を提供し、ここにおいて、ＥＺＨ２の変異体の形態は、Ｙ６４１Ｎ  ＥＺＨ２である。幾つかの態様において、上記の方法は、患者がＥＺＨ２の変異体の形態、例えばＹ６４１Ｎ  ＥＺＨ２を発現しているか否かを決定する予備的な工程を更に含んでなる。幾つかの態様において、本発明は、式ＩＩの化合物又は組成物の投与の工程を含んでなる、それを必要とする患者のＥＺＨ２の変異体の形態、例えばＹ６４１Ｎ  ＥＺＨ２の活性を減少する方法を提供する。幾つかの態様において、本発明は、式ＩＩの化合物又は組成物の投与の工程を含んでなる、ＥＺＨ２の変異体の形態に関係する疾病及び／又は疾患に罹った患者を治療する方法を提供する。幾つかの態様において、上記の方法は、患者がＥＺＨ２の変異体の形態、例えばＹ６４１Ｎ  ＥＺＨ２を発現しているか否かを決定する予備的な工程を更に含んでなる。幾つかの態様において、この決定は、患者が、ＥＺＨ２の変異体の形態を発現していないことが知られた患者と比較して、ヒストンＨ３のＬｙｓ−２７特異的なトリメチル化（Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３）の増加したレベルを有するか否かを決定することによって行われる。
【００６４】
均等物
[0061]以下の代表的な実施例は、本発明を例示することを援助することを意図し、そして本発明の範囲を制限することを意図せず、又はこれらは、そのように解釈されるべきではない。実際に、本明細書中に示され、そして記載されたものに加えて、本発明及びその多くの更なる態様の各種の改変は、以下の実施例及び本明細書中に引用される化学的及び特許的文献に対する言及を含む全ての本文書の内容から、当業者にとって明白となるものである。これらの引用された参考文献の内容は、最先端の技術を例示することを援助するために、本明細書中に参考文献として援用されることは、更に認識されるべきである。  [0062]本明細書中に記載される化合物の調製のために、逆相ＨＰＬＣが化合物を精製するために使用される場合、化合物は、酸付加塩として存在することができることは認識されるものである。幾つかの態様において、化合物は、ギ酸、或いはモノ−、ジ−、又はトリ−フルオロ酢酸塩として存在することができる。
【００６５】
[0063]本発明が、本明細書中に記載される個々の化合物を意図することは、更に認識されるものである。例示される個々の化合物が、塩、例えばトリフルオロ酢酸塩として単離及び／又は特徴付けされる場合、本発明は、塩の遊離塩基、並びに遊離塩基の他の医薬的に受容可能な塩を意図している。
【００６６】
[0064]以下の実施例は、重要な更なる情報、例証及び指針を含み、これは、本発明の実施のために、その各種の態様及びその均等物に適合することができる。
[0065]以下に例示される化合物、並びに合成スキーム中の更なる化合物／中間体を調製するための方法は、国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０２５６３９号中に見出すことができ、これの内容は、本明細書中に参照により援用される。
【実施例】
【００６７】
[0066]以下の実施例に描写するように、ある例示的態様において、化合物は、以下の一般的方法によって調製される。合成方法及びスキームが、本発明のある種の化合物の合成を描写するが、以下の方法及び当業者にとって既知の他の方法を、全ての化合物、並びにそれぞれのこれらの化合物のサブクラス及び化学種に、本明細書中に記載されるように適用することができることは認識されるものである。
【００６８】
[0067]他に注記しない限り、全ての溶媒、化学薬品、及び試薬は、商業的に入手し、そして精製せずに使用した。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、ＣＤＣｌ３、ｄ６−ＤＭＳＯ、ＣＤ３ＯＤ、又はｄ６−アセトン中で、２５℃で３００ＭＨｚのＯＸＦＯＲＤ（Ｖａｒｉａｎ）で、内部標準としてのＴＭＳに対して報告される化学シフト（δ、ｐｐｍ）により得た。ＨＰＬＣ−ＭＳクロマトグラム及びスペクトルは、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−ＭＳ−２０２０装置により得た。キラル分析及び精製は、Ｙｉｌｉｔｅ  Ｐ２７０により得た。
【００６９】
[0068]実施例１．化合物３２７及び３４６並びに関連する化合物及び中間体の合成。
この実施例の表題化合物及び他の関連する化合物を、以下の一般的スキームによって調製した。更に、示される場合、本発明のなお更に関連する化合物及びその中間体の合成のための、本スキームの改変も開示される。
【００７０】
【化４】
0005989923.tif 000005
【００７１】
工程１：（Ｓ，Ｅ）−４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル）イミノ）メチル）ピ
ペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：
【００７２】
【化５】
0005989923.tif 000006
【００７３】
磁気撹拌子を入れた丸底フラスコに、（Ｓ）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（２０．４６ｇ、１６９ｍｍｏｌ）、４−ホルミルピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３０ｍｇ、１４１ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（３００ｍＬ）、及びＴｉ（ＯＥｔ）４（５９．０ｍｌ、２８１ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で３時間撹拌してから、これを食塩水（８０ｍＬ）でクエンチした。溶液を３０分間撹拌してから、濾過した。フィルターケーキをＤＣＭで洗浄し、そして濾液を分液ロートに入れ、そして水で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして真空中で濃縮した。粗製の残渣は表題化合物（２９ｇ、９２ｍｍｏｌ、６５．１％収率）に固化した  ｍ／ｚ  ２１７。
【００７４】
[0069]以下の表に示す中間体は、適当な出発物質及び改変を使用して、工程１に概略記載した一般的方法によって調製した。
【００７５】
【表１】
0005989923.tif 000007
【００７６】
[0070]工程２：４−（（Ｓ）−１−（（Ｒ又はＳ）−１，１−ジメチルエチルスルフィンアミド）エチル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：
【００７７】
【化６】
0005989923.tif 000008
【００７８】
磁気撹拌子を入れた丸底フラスコに、（Ｓ，Ｅ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルスルフィ
ニルイミノ）メチル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３６．４ｇ、１１
５ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（４００ｍＬ）を加え、そして溶液を氷浴中で撹拌しながら０℃に
冷却した。この溶液に、ＭｅＭｇＢｒ（７７ｍｌ、２３０ｍｍｏｌ）（ジエチルエーテル
中の３Ｍ）を加え、そして反応物を室温に温まらせながら４時間撹拌した。反応を飽和Ｎ
Ｈ４Ｃｌ水溶液の添加により注意深くクエンチした。固体を１ＮのＨＣｌの添加によって
破壊した。層を分離し、そして水相をＤＣＭで抽出した。混合した有機相をＮａ２ＳＯ４
で乾燥し、濾過し、そして真空中で濃縮して、表題化合物（２９ｇ、＞９：１  ｄｒ）を
得て、これを次の工程で更なる精製を行わずに使用した。
【００７９】
[0071]以下の表に示す中間体は、適当な出発物質及び改変を使用して、工程２に概略
記載した一般的方法によって調製した。
【００８０】
【表２】
0005989923.tif 000009
【００８１】
[0072]工程３：（Ｒ又はＳ）−４−（１−アミノエチル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：
【００８２】
【化７】
0005989923.tif 000010
【００８３】
磁気撹拌子を入れた１Ｌの丸底フラスコに、粗製の４−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−１，１−ジメチルエチルスルフィンアミド）エチル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２９ｇ）をＭｅＯＨ（２００ｍＬ）中に取り込んでから、１，４−ジオキサン中のＨＣｌの４Ｎの溶液（２４．０６ｍｌ、９６ｍｍｏｌ）を添加した。次いで得られた溶液を１時間室温で撹拌した。次いでメタノールを真空中で除去して、粘性の油状物を得て、これを飽和のＮａＨＣＯ３水溶液（約５００ｍＬ）で処理し、そして酢酸エチル（２×５００ｍＬ）で抽出した。この有機相を混合し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして次いで溶媒を真空中で除去して、表題化合物（２２ｇ）を得て、これを更なる精製を行わずに使用した。
【００８４】
[0073]以下の表に示す中間体は、適当な出発物質を使用して、工程３に概略記載した一般的方法によって調製した。
【００８５】
【表３】
0005989923.tif 000011
【００８６】
[0074]工程４：２−（２−ブロモフェニル）−３−オキソブタン酸メチル：
【００８７】
【化８】
0005989923.tif 000012
【００８８】
丸底フラスコに、磁気撹拌子及び２−（２−ブロモフェニル）酢酸メチル（２５ｇ、１０９ｍｍｏｌ）及びＴＨＦ（５０ｍＬ）を入れた。この溶液を−７８℃に冷却してから、ＴＨＦ中のＬｉＨＭＤＳの１Ｍの溶液（２１８ｍｌ、２１８ｍｍｏｌ）を滴下により加えた。反応物を３０分間−７８℃で撹拌してから、ＴＨＦ：ＤＭＦ（１１２ｍＬのＴＨＦ、２４ｍＬのＤＭＦ）の混合物中に溶解した１−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）エタノン（１４．４２ｇ、１３１ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を１時間撹拌してから、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（約２５０ｍＬ）でクエンチし、そしてＥｔＯＡｃで希釈した。各層を分離し、そして水相をＥｔＯＡｃ（２×約２５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機抽出物を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして真空中で濃縮した。粗製の残渣をシリカゲルのクロマトグラフィーによって、酢酸エチル／ヘキサン（１０：１）の溶出剤を使用して精製して、２−（２−ブロモフェニル）−３−オキソブタン酸メチル（３２．５ｇ、１０２ｍｍｏｌ、９３％収率）を得た。
【００８９】
[0075]以下の表に示す中間体は、適当な出発物質を使用して、工程４に概略記載した一般的方法によって調製した。
【００９０】
【表４】
0005989923.tif 000013
【００９１】
[0076]工程５：（Ｒ又はＳ，Ｚ）−４−（１−（３−（２−ブロモフェニル）−４−メトキシ−４−オキソブタ−２−エン−２−イルアミノ）エチル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：
【００９２】
【化９】
0005989923.tif 000014
【００９３】
丸底フラスコに、（Ｒ又はＳ）−４−（１−アミノエチル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（９．３５ｇ、４０．９ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（７５ｍＬ）、及び２−（２−ブロモフェニル）−３−オキソブタン酸メチル（７．４０ｇ、２７．３ｍｍｏｌ）（工程４から）を加えた。この溶液にＡｃＯＨ（１．５６３ｍｌ、２７．３ｍｍｏｌ）を加え、そして反応物を一晩８５℃で加熱してから、室温に冷却し、そして濃縮した。粗製の残渣を、シリカゲルのクロマトグラフィー（３３０ｇ、１００％ヘキサンからヘキサン中の２５％ＥＡまで）によって精製して、表題化合物（６．４５ｇ、１３．４０ｍｍｏｌ、４９．１％収率）を得た。
【００９４】
[0077]以下の表に示す中間体は、適当な出発物質を使用して、工程５に概略記載した一般的方法によって調製した。
【００９５】
【表５】
0005989923.tif 000015
【００９６】
[0078]工程６：（Ｒ又はＳ）−１−（１−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イル）エチル）−２−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸メチル：
【００９７】
【化１０】
0005989923.tif 000016
【００９８】
２５０ｍＬの丸底フラスコに、磁気撹拌子、（Ｒ又はＳ，Ｚ）−４−（１−（３−（２−ブロモフェニル）−４−メトキシ−４−オキソブタ−２−エン−２−イルアミノ）エチル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．３３ｇ、６．９２ｍｍｏｌ）、ＲｕＰｈｏｓプレ触媒ＩＩ（メタンスルホナト（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジ−ｉ−プロポキシ−１，１’−ビフェニル）（２−アミノ−１，１’−ビフェニル−２−イル）パラジウム（ＩＩ））（０．４６３ｇ、０．５５３ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシル（２’，６’−ジイソプロポキシビフェニル−２−イル）ホスフィン（０．３８７ｇ、０．８３０ｍｍｏｌ）、無水の１，４−ジオキサン（２７．７ｍｌ、６．９２ｍｍｏｌ）、及びナトリウムメトキシド（０．５６１ｇ、１０．３８ｍｍｏｌ）を入れた。反応混合物を排気し、そして窒素で充填し、そして撹拌しながら１００℃で一晩加熱してから、室温まで冷却させた。反応物を酢酸エチル（約１００ｍｌ）で希釈し、そして混合物を珪藻土の床を通して濾過した。濾液をシリカゲル（約３０ｇ）に予備吸収させ、そしてシリカゲルのクロマトグラフィー（１２０ｇ）によって、酢酸エチル／ヘキサン（１：１）を溶出剤として使用して精製して、表題化合物（２．０１ｇ、４．７７ｍｍｏｌ、６８．９％収率）を得た。
【００９９】
[0079]以下の表に示す中間体は、適当な出発物質を使用して、工程６に概略記載した一般的方法によって調製した。
【０１００】
【表６】
0005989923.tif 000017
【０１０１】
[0080]工程７：（Ｒ又はＳ）−２−メチル−１−（１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸：
【０１０２】
【化１１】
0005989923.tif 000018
【０１０３】
１Ｌの丸底フラスコに、磁気撹拌子、（Ｒ又はＳ）−２−メチル−１−（１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸メチル（１１．６０ｇ、３８．５ｍｍｏｌ）、エタノール（９６ｍｌ、３８．５ｍｍｏｌ）、及び６ＮのＮａＯＨ水溶液（６４．１ｍｌ、３８５ｍｍｏｌ）を入れた。フラスコに環流凝縮器を設置し、そして還流で６時間加熱してから、室温まで冷却させた。揮発性物質を真空中で除去し、そして得られた混合物を１０％のＨＣｌ（約３００ｍＬ）に注いだ。沈殿物が形成し、これをブフナー漏斗を使用する真空濾過によって収集した。フィルターケーキを更なる部分の水（約２００ｍＬ）によって洗浄し、収集し、そして真空下で乾燥して、表題化合物（１０．８７ｇ、３５．９ｍｍｏｌ、９３％収率）を、オフホワイト色の固体として得た。
【０１０４】
[0081]以下の表に示す中間体は、適当な出発物質を使用して、工程７に概略記載した一般的方法によって調製した。
【０１０５】
【表７】
0005989923.tif 000019
【０１０６】
[0082]工程８：（Ｒ又はＳ）−４−（１−（３−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチルカルバモイル）−２−メチル−１Ｈ−インドール−１−イル）エチル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（化合物３２７）。
【０１０７】
【化１２】
0005989923.tif 000020
【０１０８】
２５０ｍＬの丸底フラスコに、磁気撹拌子、（Ｒ又はＳ）−１−（１−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イル）エチル）−２−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸（１．９５０ｇ、５．０５ｍｍｏｌ）、３−（アミノメチル）−４−メトキシ−６−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン塩酸塩（２．０６５ｇ、１０．０９ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２５．２ｍＬ、５．０５ｍｍｏｌ）、ヒューニッヒ塩基（３．５２ｍｌ、２０．１８ｍｍｏｌ）を入れた。反応混合物を０℃に冷却し、そしてＣＯＭＵ（２．１６ｇ、５．０５ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温まで一晩撹拌させた。反応混合物を水で希釈し、そしてＥｔＯＡｃで抽出した。混合した有機抽出物を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして真空中で濃縮して、粗製の物質を得て、これをシリカゲルのクロマトグラフィー（１２０ｇ）によって、溶出剤としてＭｅＯＨ／酢酸エチル（１：５）を使用して精製して、表題化合物（１．８６ｇ、３．２９ｍｍｏｌ、６５．３％収率）を得た。ＬＣＭＳ  ５３７（Ｍ＋１）＋ １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ＝１１．８３−１１．７１（ｍ，１Ｈ），７．８０（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｔｄ，Ｊ＝７．１，１４．４Ｈｚ，２Ｈ），６．２１（ｓ，１Ｈ），４．３２（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），４．１６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），４．０２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．７５（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），２．７０（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），２．５８（ｓ，３Ｈ），２．３７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），２．２１（ｓ，３Ｈ），１．９０（ｄ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，１Ｈ），１．５３（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），１．３５（ｓ，１０Ｈ），１．２１（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），０．８９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），０．６７（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１０９】
[0083]以下の表に示す化合物は、適当な出発物質を使用して、工程８に概略記載した一般的方法によって調製した。化合物の構造は、図１に示されている。
【０１１０】
【表８−１】
0005989923.tif 000021
【０１１１】
【表８−２】
0005989923.tif 000022
【０１１２】
【表８−３】
0005989923.tif 000023
【０１１３】
[0084]工程９：（Ｒ又はＳ）−Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１−（１−（ピペリジン−４−イル）エチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド塩酸塩（化合物３２６）。
【０１１４】
【化１３】
0005989923.tif 000024
【０１１５】
２５０ｍＬの丸底フラスコに、磁気撹拌子、（Ｒ又はＳ）−４−（１−（３−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチルカルバモイル）−２−メチル−１Ｈ−インドール−１−イル）エチル）ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（化合物３２７）（１．８５ｇ、３．４５ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（１３．７９ｍｌ、３．４５ｍｍｏｌ）、及びＨＣｌ（２．５９ｍｌ、１０．３４ｍｍｏｌ）（ジオキサン中の４Ｎ）を入れた。反応物を室温で６時間撹拌させてから、真空中で濃縮して、表題化合物（１．６５ｇ、３．１４ｍｍｏｌ、９１％収率）を得た。ＬＣＭＳ  ４３７（Ｍ＋１）＋。
【０１１６】
[0085]以下の表に示す化合物は、適当な出発物質を使用して、工程９に概略記載した一般的方法によって調製した。化合物の構造は、図１に示されている。
【０１１７】
【表９】
0005989923.tif 000025
【０１１８】
[0086]工程１０：（Ｒ又はＳ）−４−（１−（３−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチルカルバモイル）−２−メチル−１Ｈ−インドール−１−イル）エチル）ピペリジン−１−カルボン酸イソプロピル（化合物３４６）。
【０１１９】
【化１４】
0005989923.tif 000026
【０１２０】
２５０ｍＬの丸底フラスコに、磁気撹拌子、（Ｒ又はＳ）−Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１−（１−（ピペリジン−４−イル）エチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド塩酸塩（０．４６７ｇ、０．９８７ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２．４６８ｍｌ、０．９８７ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（２．４６８ｍｌ、０．９８７ｍｍｏｌ）、及びＮ−エチル−Ｎ−イソプロピルプロパン−２−アミン（０．６３８ｈ、４．９４ｍｍｏｌ）を入れた。反応物を０℃に冷却し、そしてカルボノクロリジン酸イソプロピル（０．１６０ｍｌ、１．０８６ｍｍｏｌ）をシリンジで滴下により加えた。反応物を室温まで２時間撹拌させ、そして次いで５ＮのＬｉＯＨで１時間処理して、いずれものアシル化されたピリドンを除去した。この物質を酢酸エチルで抽出し、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、そして濾過し、そして真空中で濃縮した。得られた物質を、シリカゲルのクロマトグラフィー（５０ｍｇ）によって、溶出剤として酢酸エチル／ＭｅＯＨ（５：１）を使用して精製して、純粋な表題化合物を、淡黄色の固体（０．３００ｇ、０．５４５ｍｍｏｌ、５５．２％収率）として得た。ＬＣＭＳ  ５２３（Ｍ＋１）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ  １１．５９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１３−７．０１（ｍ，２Ｈ），６．１５（ｓ，１Ｈ），４．７８−４．６７（ｍ，１Ｈ），４．３２（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），４．２３−４．１２（ｍ，１Ｈ），４．１２−４．０２（ｍ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８２−３．７４（ｍ，１Ｈ），２．７９−２．６６（ｍ，１Ｈ），２．５８（ｓ，３Ｈ），２．４６−２．３４（ｍ，２Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），１．９６−１．８８（ｍ，１Ｈ），１．５８−１．４６（ｍ，４Ｈ），１．１５（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，６Ｈ），０．９５−０．８９（ｍ，１Ｈ），０．７４−０．６５（ｍ，１Ｈ）。
【０１２１】
[0087]以下の表に示す化合物は、適当な出発物質を使用して、工程１０に概略記載した一般的方法によって調製した。化合物の構造は、図１に示されている。
【０１２２】
【表１０−１】
0005989923.tif 000027
【０１２３】
【表１０−２】
0005989923.tif 000028
【０１２４】
【表１０−３】
0005989923.tif 000029
【０１２５】
[0088]実施例２．（Ｒ又はＳ）−１−（１−（１−イソプロピルピペリジン−４−イル）エチル）−Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド（化合物３５８）の合成
【０１２６】
【化１５】
0005989923.tif 000030
【０１２７】
２５ｍＬのバイアルに、磁気撹拌子、（Ｒ又はＳ）−Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１−（１−（ピペリジン−４−イル）エチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド塩酸塩、ＴＨＦ（２．１１４ｍｌ、０．２１１ｍｍｏｌ）、プロパン−２−オン（０．０６１ｇ、１．０５７ｍｍｏｌ）、及び水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム（０．２２４ｇ、１．０５７ｍｍｏｌ）を入れた。反応物を室温で１２時間撹拌させた。反応物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液に逆クエンチし、酢酸エチルで抽出し、そして真空中で濃縮した。得られた物質を１０ｍＬのＭｅＯＨ中の７Ｎのアンモニアで処理し、そして真空中で濃縮して、物質を得て、これをシリカゲルのクロマトグラフィー（１０ｇ）によって、溶出剤としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ４ＯＨ（９０：１：０．１）を使用して精製して、３３ｍｇ（０．０６５ｍｍｏｌ、３１．０％収率）の表題化合物を、白色の固体として得た。ＬＣＭＳ  ４７９（Ｍ＋１）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ  １１．５９（ｓ．，１Ｈ），７．６４−７．８２（ｍ，２Ｈ），７．５９（ｄ，ＩＨ），６．９５−７．１７（ｍ，２Ｈ），６．１５（ｓ，１Ｈ），４．３２（ｄ，２Ｈ），４．０４−４．２４（ｍ，１Ｈ），３．８４（□，３Ｈ），２．７７−２．９３（□，２Ｈ），２．６８（□，１Ｈ），２．６０（□，３Ｈ），２．２０（□，３Ｈ），２．０８−２．１５（□，１Ｈ），１．９２（□，１Ｈ），１．８３（□ｐ，□，１Ｈ），１．５４（□，３Ｈ），１．２７−１．４３（□，２Ｈ），０．９１（□，６Ｈ）、０．７１−０．６７（□，２Ｈ）。
【０１２８】
[0089]以下の表に示す化合物は、適当な出発物質を使用して、この実施例中に概略記載した一般的方法によって調製した。化合物の構造は、図１に示されている。
【０１２９】
【表１１−１】
0005989923.tif 000031
【０１３０】
【表１１−２】
0005989923.tif 000032
【０１３１】
【表１１−３】
0005989923.tif 000033
【０１３２】
【表１１−４】
0005989923.tif 000034
【０１３３】
[0090]実施例３．（Ｒ又はＳ）−１−（１−（１−（２−フルオロエチル）ピペリジン−４−イル）エチル）−Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド（化合物３５６）の合成：
【０１３４】
【化１６】
0005989923.tif 000035
【０１３５】
２５ｍＬのバイアルに、磁気撹拌子、（Ｒ又はＳ）−Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１−（１−（ピペリジン−４−イル）エチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド塩酸塩（０．０６２ｇ、０．１３１ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（０．０７２ｇ、０．５２４ｍｍｏｌ）、ＭｅＣＮ（０．６５５ｍｌ、０．１３１ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（０．２６２ｍｌ、０．１３１ｍｍｏｌ）及び１−ブロモ−２−フルオロエタン（０．０２０ｍｌ、０．２６２ｍｍｏｌ）を入れた。反応物に蓋をし、そして８２℃で撹拌しながら４時間加熱した。反応物を室温まで冷却させ、濾過し、そして濾液をシリカゲル（１２ｇ）上に予備吸収させた。この物質をＳｉＯ２クロマトグラフィー（２５ｇ）によって、溶出剤としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ／Ｅｔ３Ｎ（８５：１５：０．５）を使用して精製して、表題化合物を、オフホワイト色の固体（３０ｍｇ、０．０５９ｍｍｏｌ、４５．１％収率）として得た。ＬＣＭＳ  ４８３（Ｍ＋１）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ  １１．５９（ｓ，１Ｈ），７．７５−７．６８（ｍ，２Ｈ），７．６０（ｄ，１Ｈ）７．０９−７．０３（ｍ，２Ｈ），６．１５（ｓ，１Ｈ）４．５３−４．５１（ｍ，１Ｈ），４．４２−４．３９（ｍ，１Ｈ），４．３２（ｄ，２Ｈ），４．２４−４．２（ｍ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），２．９８（ｂｒ．ｄ．，１Ｈ），２．７０−２．４９（ｍ，４Ｈ），２．６０（ｓ，３Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），２．０１（ｄｔ，１Ｈ），１．９２−１．９０（ｍ，１Ｈ），１．７５−１．７１（ｍ，１Ｈ），１．５４（ｄ，３Ｈ），１．３８−１．３６（ｍ，１Ｈ），１．０２−０．９８（ｍ，１Ｈ），０．７−０．６６（ｂｒ．ｄ．，１Ｈ）。
【０１３６】
[0091]以下の表に示す化合物は、適当な出発物質を使用して、この実施例中に概略記載した一般的方法によって調製した。化合物の構造は、図１に示されている。
【０１３７】
【表１２】
0005989923.tif 000036
【０１３８】
[0092]実施例４．（Ｒ又はＳ）−Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１−（１−（１−（ピリミジン−２−イル）ピペリジン−４−イル）エチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド（化合物３６１）の合成。
【０１３９】
【化１７】
0005989923.tif 000037
【０１４０】
再密閉可能なバイアルに、２−クロロピリミジン（１８５ｍｇ、１．６１１ｍｍｏｌ）、（Ｒ又はＳ）−Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１−（１−（ピペリジン−４−イル）エチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド塩酸塩（５０８ｍｇ、１．０７４ｍｍｏｌ）、及びＥｔＯＨ（８ｍＬ）を加えた。この溶液にＥｔ３Ｎ（４４９μｌ、３．２２ｍｍｏｌ）を加えた。バイアルを密封し、そして１００℃で一晩加熱した。溶液を室温まで冷却させ、そして真空中で濃縮した。粗製の残渣をシリカゲルのクロマトグラフィー（ヘキサン：（３：２のＤＣＭ：ＩＰＡ））によって精製して、表題化合物を、固体（３５７ｍｇ、０．６９４ｍｍｏｌ、６４．６％収率）として得た。ＬＣＭＳ  ５１５（Ｍ＋１）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ  １１．６０（ｓ，１Ｈ），８．３０（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，２Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．７３−７．６４（ｍ，２Ｈ），７．１４−７．０１（ｍ，２Ｈ），６．５５（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），６．１５（ｓ，１Ｈ），４．８４−４．７５（ｍ，１Ｈ），４．５７−４．４７（ｍ，１Ｈ），４．３３（ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，２Ｈ），４．２２−４．１１（ｍ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），２．９２−２．８１（ｍ，１Ｈ），２．６３−２．５２（ｍ，４Ｈ），２．２０（ｓ，３Ｈ），２．０５−１．９４（ｍ，１Ｈ），１．６１−１．４９（ｍ，４Ｈ），１．３４−１．２１（ｍ，１Ｈ），１．０４−０．９１（ｍ，１Ｈ），０．８３−０．７５（ｍ，１Ｈ）。
【０１４１】
[0093]以下の表に示す化合物は、適当な出発物質を使用して、この実施例中に概略記載した一般的方法によって調製した。化合物の構造は、図１に示されている。
【０１４２】
【表１３】
0005989923.tif 000038
【０１４３】
[0094]実施例５．（Ｒ又はＳ）−１−（１−（１−（２−ヒドロキシエチル）ピペリジン−４−イル）エチル）−Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド（化合物３４７）の合成。
【０１４４】
【化１８】
0005989923.tif 000039
【０１４５】
磁気撹拌子を入れた密封された試験管に、（Ｒ又はＳ）−Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１−（１−（ピペリジン−４−イル）エチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド塩酸塩（０．１ｇ、０．２２９ｍｍｏｌ）を加え、ＤＣＭ（３ｍＬ）を加え、そして反応物を０℃に冷却した。冷却した反応混合物にオキシランを加え、これは反応バイアル中で凝縮した（約１ｍＬ）。反応物を室温まで４時間かけて撹拌させ、そして次いで真空中で濃縮して、粗製の物質を得て、これをシリカゲルのクロマトグラフィー（１２ｇ）によって、溶出剤として酢酸エチル／ＭｅＯＨ（４；１）を使用して精製して、表題化合物を、白色の固体（５０ｍｇ）として得た。ＬＣＭＳ  ４８１（Ｍ＋１）＋；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，４００ＭＨｚ）δ）δ  １１．５８（ｓ，１Ｈ），７．７７−７．６５（ｍ，２Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１１−６．９９（ｍ，２Ｈ），６．１４（ｓ，１Ｈ），４．５４−４．４４（ｍ，１Ｈ），４．３１（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，３Ｈ），４．１３（ｄｄ，Ｊ＝７．１，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８３（ｓ，３Ｈ），３．４２（ｑ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．９３（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），２．７１−２．５６（ｍ，４Ｈ），２．３１（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），２．１９（ｓ，３Ｈ），２．０３−１．８３（ｍ，２Ｈ），１．６４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），１．５３（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），１．３２（ｄ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ，１Ｈ），１．０２（ｄ，Ｊ＝１０．３  Ｈｚ，１Ｈ），０．６５（ｄ，Ｊ＝１１．８Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１４６】
[0095]以下の表に示す化合物は、適当な出発物質を使用して、この実施例中に概略記載した一般的方法によって調製した。化合物の構造は、図１に示されている。
【０１４７】
【表１４】
0005989923.tif 000040
【０１４８】
[0096]実施例６．（Ｒ又はＳ）−Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−６−フェニル−１−（１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド（化合物３７４）の合成。
【０１４９】
【化１９】
0005989923.tif 000041
【０１５０】
２５ｍＬの反応管に、磁気撹拌子、フェニルボロン酸（７２．６ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４（１０３ｍｇ、０．４４７ｍｍｏｌ）、Ｘ−Ｐｈｏｓプレ触媒（クロロ（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピル−１，１’−ビフェニル）［２−（２−アミノエチル）フェニル］パラジウム（ＩＩ））（４．９２ｍｇ、５．９６μｍｏｌ）を入れ、そしてバイアルを密封した。バイアルを窒素で排気／充填（×３）してから、６−クロロ−２−メチル−１−（１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸メチル（化合物３１４）（１００ｍｇ、０．２９８ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１ｍＬ）中の溶液として加えた。次いでバイアルを、１００℃で一晩、撹拌しながら加熱した。次いでバイアルを室温まで冷却させ、そして反応物を真空中で濃縮した。粗製の残渣をＳｉＯ２クロマトグラフィー（１０ｇ）によって、酢酸エチル／ヘキサン（４：１）の溶出剤を使用して精製して、表題化合物を白色の固体（１０６ｍｇ、０．２８１ｍｍｏｌ、９４％収率）として得た。ＬＣＭＳ  ５１４（Ｍ＋１）＋；１Ｈ  ＮＭＲ  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ＝１１．５９（ｓ，１Ｈ），７．９８−７．８４（ｍ，２Ｈ），７．７５−７．６７（ｍ，３Ｈ），７．４７（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１  Ｈ），７．３５−７．２７（ｍ，１Ｈ），６．１５（ｓ，１Ｈ），４．３５（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），４．２５−４．１２（ｍ，１Ｈ），３．９３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），３．８６−３．７７（ｍ，３Ｈ），３．６７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），３．３９−３．３２（ｍ，１Ｈ），３．１０−３．００（ｍ，１Ｈ），２．６２（ｓ，３Ｈ），２．２１（ｓ，３Ｈ），１．８５（ｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），１．６３−１．４９（ｍ，４Ｈ），１．４５−１．３３（ｍ，１Ｈ），１．２０−０．９９（ｍ，１Ｈ），０．６６（ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０１５１】
[0097]実施例７．（Ｒ又はＳ）−２−（４−（１−（３−（（４−メトキシ−６−
メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチルカルバモイル）−２
−メチル−１Ｈ−インドール−１−イル）エチル）ピペリジン−１−イル）酢酸（化合物
３６４）の合成。
【０１５２】
【化２０】
0005989923.tif 000042
【０１５３】
磁気撹拌子を入れた丸底フラスコに、（Ｒ又はＳ）−２−（４−（１−（３−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチルカルバモイル）−２−メチル−１Ｈ−インドール−１−イル）エチル）ピペリジン−１−イル）酢酸エチル（化合物３６３）（６９ｍｇ、０．１３２ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１．５ｍＬ）、ＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）、及び水（０．７５ｍＬ）を加えた。この溶液に水酸化リチウム一水和物（５．５４ｍｇ、０．１３２ｍｍｏｌ）を加え、そして反応物を室温で１時間撹拌した。有機物を減圧下で除去し、そして得られた水溶液を逆相ＨＰＬＣ（水／ＭｅＣＮ）０→９５％によって精製して、表題化合物（６６ｍｇ、０．１０８ｍｍｏｌ、８２％収率）を得た。ＬＣＭＳ  ５１４（Ｍ＋１）＋ １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ＝１１．６７（ｓ，１Ｈ），９．６５（ｓ，１Ｈ），７．８４−７．６８（ｍ，２Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１４−７．０３（ｍ，２Ｈ），６．１８（ｓ，１Ｈ），４．３３（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，２Ｈ），４．２７−４．１５（ｍ，１Ｈ），４．０４（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．５７（ｓ，１Ｈ），３．３５−３．２３（ｍ，１Ｈ），３．１４−２．９９（ｍ，１Ｈ），２．８６−２．７４（ｍ，１Ｈ），２．６２（ｓ，３Ｈ），２．２１（ｓ，３Ｈ），２．１８−２．０８（ｍ，１Ｈ），１．７５（ｓ，１Ｈ），１．６０−１．４９（ｍ，４Ｈ），１．４６−１．３３（ｍ，１Ｈ），０．９２−０．８１（ｍ，１Ｈ）。
【０１５４】
[0098]実施例８．（Ｒ又はＳ）−２−メチル−６−（ピリジン−３−イル）−１−（１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸メチルの合成。
【０１５５】
この中間体を、本発明の他の化合物の合成のために、実施例１に記載した工程７の別の出発物質として使用した。
[0099]（Ｒ又はＳ）−２−メチル−１−（１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸メチル
【０１５６】
【化２１】
0005989923.tif 000043
【０１５７】
丸底フラスコに、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１０．０３ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（２１９ｍｇ、２．２３３ｍｍｏｌ）、４，４，４’，４’，５，５，５’，５’−オクタメチル−２，２’−ビ（１，３，２−ジオキサボロラン）（５６７ｍｇ、２．２３３ｍｍｏｌ）、及び２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（ＸＰｈｏｓ）（８５ｍｇ、０．１７９ｍｍｏｌ）を加え、そしてバイアルを密封した。この容器に、ジオキサン（３．４ｍＬ）中に溶解した（Ｒ又はＳ）−６−クロロ−２−メチル−１−（１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸メチル（工程６）（５００ｍｇ、１．４８９ｍｍｏｌ）を加え、そして反応物をＮ２で排気／充填（×３）してから、１００℃で一晩加熱した。次いで反応物を室温まで冷却させ、そしてＥｔＯＡｃで希釈した。反応物を珪藻土を通して濾過し、そして濾液を濃縮して、表題化合物を得て、これを更なる精製を行わずにその後の反応で使用した。ＬＣＭＳ  ４２８（Ｍ＋１）＋。
【０１５８】
[00100]（Ｒ又はＳ）−２−メチル−６−（ピリジン−３−イル）−１−（１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸メチル：
【０１５９】
【化２２】
0005989923.tif 000044
【０１６０】
再密封可能なバイアルに、Ｋ２ＣＯ３（２０６ｍｇ、１．４８８ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）−ＣＨ２Ｃｌ２付加体（６０．８ｍｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）を加え、そしてバイアルを密封した。このバイアルを、Ｎ２で排気／充填（×３）してから、１，４−ジオキサン（４ｍＬ）、３−ブロモピリジン（７１．７μｌ、０．７４４ｍｍｏｌ）、及び水（４００μＬ）中に溶解した（Ｒ又はＳ）−２−メチル−１−（１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）エチル）−６−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸メチル（３１８ｍｇ、０．７４４ｍｍｏｌ）を加えた。反応物をＮ２で排気／充填（×３）してから、１００℃に加熱した。溶液を室温に冷却し、そしてＥｔＯＡｃで希釈した。溶液を濾過し、そして真空中で濃縮した。粗製の残渣をシリカゲルのクロマトグラフィー（１０ｇ、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１））によって精製して、表題化合物（１０１ｍｇ、０．２６７ｍｍｏｌ、３５．９％収率）を得た。ＬＣＭＳ  ３７９（Ｍ＋１）＋。
【０１６１】
[00101]実施例９．他のカルボン酸アルキル中間体。
以下のカルボン酸アルキル中間体は、適当な出発物質及び反応物を使用して、実施例１の工程２に記載したものと類似の方法で合成した。
【０１６２】
【表１５】
0005989923.tif 000045
【０１６３】
[00102]実施例１０．カルボン酸中間体から製造される本発明の他の化合物。
以下の化合物は、適当な出発物質を使用して、実施例１の工程４に記載したものと類似の方法で合成した。化合物の構造は、図１に示されている。
【０１６４】
【表１６−１】
0005989923.tif 000046
【０１６５】
【表１６−２】
0005989923.tif 000047
【０１６６】
【表１６−３】
0005989923.tif 000048
【０１６７】
【表１６−４】
0005989923.tif 000049
【０１６８】
[00103]実施例１１．１−（１−（１，４−ジオキサン−２−イル）エチル）−２−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸メチルの合成。  表題化合物を、実施例１の
工程３の、別のカルボン酸アルキル出発物質として使用した。
【０１６９】
[00104]工程１：１−（１，４−ジオキサン−２−イル）エタノン：
【０１７０】
【化２３】
0005989923.tif 000050
【０１７１】
過酸化ベンゾイル（２０ｇ、１４１ｍｍｏｌ）の２００ｍＬの１，４−ジオキサン中の室温の窒素雰囲気下の溶液に、ビアセチル（２４．３ｇ、２８２ｍｍｏｌ）を加えた。添加後、混合物を還流まで加熱し、そして２４時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却した。ｐＨを２Ｎの水酸化ナトリウムを０℃以下で連続的に加えることによって概略９に調節し、２−メトキシ−２−メチルプロパン（１０ｍＬ×３）で抽出し、そして濃縮して、１−（１，４−ジオキサン−２−イル）エタノン（１３ｇ、３６％）を、黄色の油状物として得て、これを精製せずに次の工程で直接使用した。
【０１７２】
[00105]工程２：１−（１，４−ジオキサン−２−イル）エタンアミン：
【０１７３】
【化２４】
0005989923.tif 000051
【０１７４】
１−（１，４−ジオキサン−２−イル）エタノン（１２ｇ、９２．２ｍｍｏｌ）の１，２−ジクロロエタン（１００ｍＬ）中の溶液に、（４−メトキシフェニル）メタンアミン（２５ｇ、１８４．４ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を３時間撹拌させ、そして次いで水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム（３９ｇ、１８４．４ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で４８時間撹拌させた。反応混合物を水を加えることによってクエンチし、ジクロロメタン（１００ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機相を無水の硫酸ナトリウムで乾燥し、そして次いで濾過した。濾液を濃縮し、そしてシリカゲルのカラムクロマトグラフ（溶出：ジクロロメタン／メタノール１００：１→５０：１→２０：１）によって精製して、１−（１，４−ジオキサン−２−イル）−Ｎ−（４−メトキシベンジル）エタンアミン（１６．４ｇ、７１％）を、黄色の固体として得た。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）ｍ／ｚ：計算値２５１．１５、実測値２５１．９。１−（１，４−ジオキサン−２−イル）−Ｎ−（４−メトキシベンジル）エタンアミン（５ｇ、１９．９ｍｍｏｌ）の無水のメタノール（１００ｍＬ）中の溶液に、炭素上の１０％パラジウム（２４０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を加え、次いで水素（約０．２１ＭＰａ（３０ｐｓｉ））で置換し、混合物を一晩室温で撹拌させた。反応混合物を濾過し、そして濾液を濃縮して、表題化合物（２．５ｇ、９６％）を、褐色の固体として得た。
【０１７５】
[00106]以下の表に示すアミン中間体は、適当な出発物質及び改変を使用して、上記に概略記載した一般的方法によって調製した。
【０１７６】
【表１７】
0005989923.tif 000052
【０１７７】
[00107]工程３：（Ｅ）−３−（（１−（１，４−ジオキサン−２−イル）エチル）イミノ）−２−（２−ブロモフェニル）ブタン酸メチル：
【０１７８】
【化２５】
0005989923.tif 000053
【０１７９】
１−（１，４−ジオキサン−２−イル）エタンアミン（２．５ｇ、１９ｍｍｏｌ）のメタノール（１００ｍＬ）中の溶液に、２−（２−ブロモフェニル）−３−オキソブタン酸メチル（５．４ｇ、２０ｍｍｏｌ）及び酢酸（１．８ｇ、３０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応系を還流まで温め、そして一晩撹拌させた。反応混合物を濃縮し、そしてシリカゲルのカラムクロマトグラフ（溶出：ジクロロメタン／メタノール５０：１→２０：１→５：１）にかけることによって精製して、表題化合物（１ｇ、１４％）を、褐色の固体として得た。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）ｍ／ｚ：計算値３８３．０７、実測値３８４．９。
【０１８０】
[00108]以下の表に示すイミノ−ブロモ中間体は、適当な出発物質（例えば、この実施
例の工程２の表中に記載したアミンの一つ）及び改変を使用して、上記に概略記載した一般的方法によって調製した。
【０１８１】
【表１８−１】
0005989923.tif 000054
【０１８２】
【表１８−２】
0005989923.tif 000055
【０１８３】
[00109]工程４：１−（１−（１，４−ジオキサン−２−イル）エチル）−２−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸メチル：
【０１８４】
【化２６】
0005989923.tif 000056
【０１８５】
（Ｅ）−３−（（１−（１，４−ジオキサン−２−イル）エチル）イミノ）−２−（２−ブロモフェニル）ブタン酸メチル（４００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）のジオキサン（３ｍＬ）中の溶液に、クロロ［２−（ジシクロヘキシルホスフィノ）−３，６−ジメトキシ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル］［２−（２−アミノエチル）フェニル］Ｐｄ（ＩＩ）（１６０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジイソプロポキシビフェニル（９３ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及びナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１９２ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物をマイクロ波中で３０分間撹拌しながら１２０℃で加熱した。反応混合物を水を加えることによってクエンチし、そして酢酸エチル（２５ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機相を無水の硫酸ナトリウムで乾燥し、そして次いで濾過した。濾液を濃縮し、そしてシリカゲルのカラムクロマトグラフ（溶出：石油エーテル／酢酸エステル１０：１→５：１→２：１）によって精製して、表題化合物（２８２ｍｇ、８９％）を、黄色の固体として得た。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）ｍ／ｚ：計算値３０３．１５、実測値３０３．９。
【０１８６】
[00110]以下の表に示す化合物は、適当な出発物質（例えば、この実施例の工程３の表中に示したイミノ−ブロモ中間体の一つ）及び改変を使用して、上記に概略記載した一般的方法によって調製した。
【０１８７】
【表１９】
0005989923.tif 000057
【０１８８】
[00111]これらのカルボン酸アルキルは、更に本発明のある種の化合物の合成において、実施例１の工程３の出発物質として使用される。
[00112]実施例１２．化合物２２３及び２２４を得るための化合物２１９のキラル分離。  Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−
イル）メチル）−１−（１−メトキシプロパン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−インドール−３−カルボキシアミド（２００ｍｇ）（化合物２１９）を、超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）によるキラルクロマトグラフィー（Ａ：Ｃ２Ｈ５ＯＨ、Ｂ：ＮＨ３・Ｈ２Ｏ。Ａ：Ｂ＝５５：４５  ＡＤカラム）にかけて、分離した鏡像異性体２２３（ピーク１）及び２２４（ピーク２）（それぞれ６０ｍｇ）を得た。ＬＣＭＳ  ３９８（Ｍ＋１）＋ １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．６９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｍ，２Ｈ），６．２６（ｓ，１Ｈ），４．８０（ｍ，１Ｈ），４．５２（ｓ，２Ｈ），３．９９（ｍ，４Ｈ），３．７５（ｍ，１Ｈ），３．２０（ｓ，３Ｈ），２．６２（ｓ，３Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），１．５９（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。それぞれの鏡像異性体の旋光度は決定しなかった。
【０１８９】
[00113]以下の表に示す化合物は、上記に概略記載した一般的キラルクロマトグラフィーの方法によって調製した。分離した鏡像異性体の旋光度は決定しなかったが、しかし溶出ピーク（“ピーク１”又は“ピーク２”）は示されている。それぞれの化合物の構造は、図１に示されている。
【０１９０】
【表２０−１】
0005989923.tif 000058
【０１９１】
【表２０−２】
0005989923.tif 000059
【０１９２】
[00114]実施例１．１−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２−メ
チル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルの合成。
本発明のある種の化合物の合成における実施例３６の工程３の出発物質としての表題化
合物。
【０１９３】
[00115]２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：
【０１９４】
【化２７】
0005989923.tif 000060
【０１９５】
Ｎ−アセチル−Ｎ−（３−ブロモピリジン−２−イル）アセトアミド（１４．８１５ｇ、５７．６ｍｍｏｌ）を含有する５００ｍＬの丸底フラスコに、ヨウ化銅（Ｉ）（１．０９８ｇ、５．７６ｍｍｏｌ）、Ｌ−プロリン（１．３２７ｇ、１１．５３ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（２８．２ｇ、８６ｍｍｏｌ）を、次いでアセト酢酸ｔ−ブチル（１１．４７ｍｌ、６９．２ｍｍｏｌ）及びジオキサン（１００ｍＬ）を加えた。反応物をＮ２で３回排気／置換し、次いで隔壁及びＮ２入口を設置し、そして一晩７０℃で加熱した。無機の固体をセライト上の濾過によって除去し、そしてケーキを１００ｍＬのＥｔＯＡｃで洗浄した。この溶液を濃縮し、そして残渣を２５０ｍＬの食塩水及び２５０ｍＬのＥｔＯＡｃ間に分配した。水層を更にＥｔＯＡｃ（２×２５０ｍＬ）で抽出し、そして混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮し、そしてカラムクロマトグラフィー（ＣＣ）によって、溶出剤として１：１のＥｔＯＡｃ：ヘキサンを使用して精製して、（２．７ｇ、２０．２％）の２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た。ＬＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）ｍ／ｚ：計算値２３３．２８；実測値２３３．１。
【０１９６】
[00116]１−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：
【０１９７】
【化２８】
0005989923.tif 000061
【０１９８】
２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸エチルｔｅｒｔ−ブチル（１００ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）、２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−オール（１７６ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）、ＰＰｈ３（１９５ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ）の溶液を、乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中で０℃の窒素雰囲気下で撹拌した。この混合物にＤＩＡＤ（１５０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を５分の時間をかけて滴下により加え、そして反応物を室温で１６時間撹拌した。混合物を食塩水で洗浄し、乾燥し、そして濃縮して、粗製の生成物を得た。粗製の生成物を、シリカゲルのクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝５：１）によって精製して、１−（２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１５０ｍｇ、６０％）を得た。
【０１９９】
[00117]以下の表に示す化合物は、適当な出発物質及び改変を使用して、上記に概略記載した一般的方法によって調製した。
【０２００】
【表２１】
0005989923.tif 000062
【０２０１】
[00118]それぞれの上記のカルボン酸アルキルを、本発明のある種の化合物の合成における実施例１の工程３の出発物質として使用した。
[00119]実施例１３． 単離されたＮ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−１−（（２Ｒ又は２Ｓ，３Ｒ又は３Ｓ
）−３−メトキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボキシアミドのジアステレオ異性体（化合物２６１、２６６、２６７及び３０２）の合成。
【０２０２】
[00120]工程１：２−メチル−１−（３−オキソブタン−２−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：
【０２０３】
【化２９】
0005989923.tif 000063
【０２０４】
２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５．０ｇ、２１．５３ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（５０ｍＬ）中の溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（２１．０ｇ、６４．５８ｍｍｏｌ）、ヨウ化カリウム（３．５７ｇ、２１．５３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２７℃で３０分間撹拌した。次いで３−クロロブタン−２−オン（２．７５ｇ、２５．８３ｍｍｏｌ）を加え、そして混合物を７０℃で１２時間撹拌した。混合物を濾過し、そして濾液を濃縮した。残渣を、カラム（溶出：石油エーテル：酢酸エチル＝５０：１）によって精製して、２−メチル−１−（３−オキソブタン−２−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを、黄緑色の油状物（３．２３ｇ、収率５０％）として得た。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）ｍ／ｚ：計算値３０３．３７；実測値３０２．９．１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：ａ  ８．３２−８．３０（ｍ，１Ｈ），８．２５−８．２３（ｍ，１Ｈ），７．１７−７．１４（ｍ，１Ｈ），５．５０−５．４４（ｍ，１Ｈ），２．７１（ｓ，３Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），１．６５−１．６７（ｄ，３Ｈ），１．６４（ｓ，９Ｈ）。
【０２０５】
[00121]工程２：１−（３−ヒドロキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：
【０２０６】
【化３０】
0005989923.tif 000064
【０２０７】
２−メチル−１−（３−オキソブタン−２−イル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．１ｇ、１０．２５ｍｍｏｌ）のメタノール（３０ｍＬ）中の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（０．３０ｇ、８．２ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。３０分後、水素化ホウ素ナトリウム（０．３０ｇ、８．２ｍｍｏｌ）の更なるバッチを０℃で加えた。約２時間後、反応が完結した後、水（３０ｍｌ）を滴下により非常に注意深く加えて、反応をクエンチした。混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。抽出物（ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ）をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして真空下で濃縮して、１−（３−ヒドロキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを、黄色の固体（３．０ｇ、収率９６％）として得た。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）ｍ／ｚ：計算値３０５．３８；実測値３０４．９．１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：ａ  ８．３１−８．２９（ｍ，１Ｈ），８．１３−８．１２（ｍ，１Ｈ），７．１１−７．０７（ｍ，１Ｈ），４．４６−４．４３（ｍ，１Ｈ），４．１２（ｍ，１Ｈ），２．７３（ｓ，３Ｈ），１．５８（ｓ，９Ｈ），１．５１−１．４９（ｄ，３Ｈ），０．９２−０．９１（ｄ，３Ｈ）。
【０２０８】
[00122]工程３：１−（３−メトキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル：
【０２０９】
【化３１】
0005989923.tif 000065
【０２１０】
乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）に、ＮａＨ（鉱油中の６０％、２．３７ｇ、５９．１４ｍｍｏｌ）を加えた。次いで混合物を２７℃で２０分間撹拌し、次いで１−（３−ヒドロキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．０ｇ、９．８６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２７℃で１時間撹拌し、次いでＣＨ３Ｉ（１３．９９ｇ、９８．６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２７℃で１２時間撹拌し、そして次いで０℃に冷却した。飽和のＮＨ４Ｃｌを加え、そしてＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。抽出物（ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ）を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮して、１−（３−メトキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを、黄色の油状物（３．２ｇ、収率１００％）として得た。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）ｍ／ｚ：計算値３１９．４１；実測値３１８．９。
【０２１１】
[00123]工程４：１−（３−メトキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸：
【０２１２】
【化３２】
0005989923.tif 000066
【０２１３】
１−（３−メトキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．０ｇ、９．４２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中の事前に冷却された溶液に、トリフルオロ酢酸（２０ｍＬ）を滴下により加えた。溶液を２７℃で１．５時間撹拌した。溶媒を真空下の２７℃で除去した。残渣を精製せずに次の工程のために使用した。ＬＣＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）ｍ／ｚ：計算値２６３．３０；実測値２６２．９。
【０２１４】
[00124]工程５：Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−１−（３−メトキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボキシアミド：
【０２１５】
【化３３】
0005989923.tif 000067
【０２１６】
１−（３−メトキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボン酸（２．４ｇ、９．１５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍＬ）中の溶液に、ＴＥＡ（４．２ｇ、４１．５０ｍｍｏｌ）、３−（アミノメチル）−４−メトキシ−６−メチルピリジン−２（１Ｈ）−オン塩酸塩（２．１ｇ、１２．８１ｍｍｏｌ）を加えた。２７℃で１０分間撹拌した後、混合物を冷却し、そしてＨＡＴＵ（５．５６ｇ、１４．６４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２７℃で７２時間撹拌し、そして３０％の出発物質（Ｓ．Ｍ．）が残った。次いで混合物を８０℃で５時間加熱した。溶液を食塩水（１００ｍＬ）で希釈し、そしてＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ×３）で抽出した。抽出物（ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓ）を混合し、そしてＮａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を真空下で蒸発し、そして残渣を、フラッシュカラム（溶出剤：ジクロロメタン：メタノール＝９５：５）によって精製して、Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−１−（３−メトキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボキシアミド（３．６ｇ、収率９５％）を得た。
【０２１７】
[00125]工程６：Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−１−（３−メトキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボキシアミドの分離：異性体（化合物２６１、２６６、２６７、及び３０２）：
【０２１８】
【化３４】
0005989923.tif 000068
【０２１９】
工程５からの異性体の混合物、Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−１−（３−メトキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボキシアミドを、分離用ＨＰＬＣ（条件：カラム：ＳＨＩＭＡＤＺＵ  ＬＣ−８Ａ、２５０×５０ｍｍ×１０ｕｍ；移動相Ａ：０．２％のギ酸を伴う水；移動相Ｂ：ＭｅＣＮ；カラム温度：３０℃；勾配：Ａ中の１０〜５０％Ｂ）によって精製して、多量の異性体の対（混合された化合物２６１及び化合物２６６）（１．０ｇ、純度９８．８％）及び少量の異性体の対（混合された化合物２６７及び化合物３０２）（１８０ｍｇ、純度６３％）を得た。得られた異性体の対を、ＳＦＣ（条件：カラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ  ２５０×３０ｍｍ×５ｕｍ；移動相Ａ：超臨界ＣＯ２；移動相Ｂ：ＩＰＡ＋ＮＨ３・Ｈ２Ｏ；勾配：Ｂ／Ａ：７５：２５）によって個々に分離して、以下の個々の単独の化合物を得た。
【０２２０】
[00126]化合物２６１、Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−１−（（２Ｒ又は２Ｓ，３Ｒ又は３Ｓ）−３−メトキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボキシアミド（多量の異性体の対；ピーク１）：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ８．１７３−８．１５７（ｍ，１Ｈ），８．１４０−８．１１６（ｍ，１Ｈ），７．５８２−７．５５５（ｍ，１Ｈ），６．９６８−６．９３６（ｍ，１Ｈ），５．９２７（ｓ，１Ｈ），４．７０７−４．６０９（ｍ，２Ｈ），４．３４８（ｓ，１Ｈ），３．８９２（ｓ，３Ｈ），２．８６９（ｓ，３Ｈ），２．７８８（ｓ，３Ｈ），２．１７３（ｓ，３Ｈ），１．６４４−１．６２７（ｄ，３Ｈ），１．２６３−１．２４９（ｄ，３Ｈ）。
【０２２１】
[00127]化合物２６６、Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−１−（（２Ｒ又は２Ｓ，３Ｒ又は３Ｓ）−３−メトキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボキシアミド（多量の異性体の対；ピーク２）：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ８．１７９−８．１６３（ｍ，１Ｈ），８．１４３−８．１２０（ｍ，１Ｈ），７．５５８−７．５３１（ｍ，１Ｈ），６．９８６−６．９５４（ｍ，１Ｈ），５．９３１（ｓ，１Ｈ），４．７０２−４．６０５（ｍ，２Ｈ），３．８９７（ｓ，３Ｈ），２．８９２（ｓ，３Ｈ），２．７８９（ｓ，３Ｈ），２．１８９（ｓ，３Ｈ），１．６４７−１．６２９（ｄ，３Ｈ），１．２６７−１．２５２（ｄ，３Ｈ）。
【０２２２】
[00128]化合物２６７、Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−１−（（２Ｒ又は２Ｓ，３Ｒ又は３Ｓ）−３−メトキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボキシアミド（小量の異性体の対；ピーク１）：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ  ８．１７４−８．１６２（ｄ，１Ｈ），８．１１１−８．０９４（ｄ，１Ｈ），７．５５１−７．５２６（ｍ，１Ｈ），６．９９３−６．９６１（ｍ，１Ｈ），５．９３５（ｓ，１Ｈ），４．６８３−４．５７９（ｍ，２Ｈ），３．８８７（ｓ，３Ｈ），３．４４２（ｓ，３Ｈ），２．７５３（ｓ，３Ｈ），２．１９４（ｓ，３Ｈ），１．６９５−１．６７８（ｄ，３Ｈ），０．７８１−０．７６８（ｄ，３Ｈ）。
【０２２３】
[00129]化合物３０２、Ｎ−（（４−メトキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−１−（（２Ｒ又は２Ｓ，３Ｒ又は３Ｓ）−３−メトキシブタン−２−イル）−２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボキシアミド（小量の異性体の対；ピーク２）：１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＣＤＣｌ３）：δ  ８．１７７−８．１６６（ｄ，１Ｈ），８．１２２−８．１０４（ｄ，１Ｈ），７．５８７−７．５６２（ｍ，１Ｈ），６．９８４−６．９５２（ｍ，１Ｈ），５．９３３（ｓ，１Ｈ），４．６９８−４．５９１（ｍ，２Ｈ），４．４２６（ｓ，２Ｈ），３．９８３（ｓ，３Ｈ），３．４４８（ｓ，３Ｈ），２．７６４（ｓ，３Ｈ），２．１８０（ｓ，３Ｈ），１．７０１−１．６８４（ｄ，３Ｈ），０．７８６−０．７７２（ｄ，３Ｈ）。
【０２２４】
[00130]実施例１４． （±）−Ｎ−（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１−（１−フェニルエチル）−１Ｈ
−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−３−カルボキシアミドの合成
[00131]工程１：１−（３−メトキシフェニル）エタノール：
【０２２５】
【化３５】
0005989923.tif 000069
【０２２６】
３−アミノ−４−ピコリン（７ｇ、６４．８ｍｍｏｌ）の無水のＴＨＦ（２００ｍＬ）中の撹拌された溶液に、ｓｅｃ−ＢｕＬｉ（１５０ｍＬ、シクロヘキサン中の１．３Ｍ、１９４ｍｍｏｌ）を、−７８℃で２０分かけて滴下により加えた。溶液を室温に温め、そして３時間撹拌した。酢酸エチル（２．３ｇ、２５．９ｍｍｏｌ）を、−７８℃で反応物中に滴下により加え、そして混合物を同じ温度で２時間撹拌した。メタノール（５０ｍＬ）を、反応物に１０分かけて滴下により加えた。混合物を室温に温め、そして１時間撹拌した。半飽和のＮＨ４Ｃｌ（２５０ｍＬ）を加えた。混合物をＥＡで抽出した。混合した有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、そして濃縮して、粗製の生成物を得た。粗製の生成物を、シリカゲルのクロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝１０：１）によって精製して、２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン（２．５ｇ、７３．５％）を得た。
【０２２７】
[00132]工程２：２，２，２−トリクロロ−１−（２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−３−イル）エタノン：
【０２２８】
【化３６】
0005989923.tif 000070
【０２２９】
２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン（２．５ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）及び塩化アルミニウム（５ｇ、３７．８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）中の撹拌された溶液に、塩化トリクロロアセチル（４．１ｇ、２２．７ｍｍｏｌ）を反応物に室温で０．５時間かけて滴下により加えた。２時間撹拌した後、反応物を０℃に冷却し、そして水（１００ｍＬ）でクエンチした。得られた沈殿物を濾過によって単離して、２，２，２−トリクロロ−１−（２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−３−イル）エタノンを得て、これを、更なる精製を行わずに次の工程のために使用した。１００％の収率（５．２４ｇ）を仮定した。
【０２３０】
[00133]工程３：２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−３カルボン酸メチル：
【０２３１】
【化３７】
0005989923.tif 000071
【０２３２】
２，２，２−トリクロロ−１−（２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−３−イル）エタノン（５．２４ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）及びＫＯＨ（１．２ｇ、２０．９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中の混合物を、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を濃縮して、ＭｅＯＨを除去し、残渣をＥＡ及び水間に分配した。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、そして濃縮して、２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−３カルボン酸メチル（３ｇ、８３％）を得た。
【０２３３】
[00134]工程４：２−メチル−１−（１−フェニルエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−３−カルボン酸メチルメチル：
【０２３４】
【化３８】
0005989923.tif 000072
【０２３５】
２−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−３−カルボン酸メチル（５５０ｍｇ、２．８９ｍｍｏｌ）及び水素化ナトリウム（２００ｍｇ、４．３４ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３．０ｍＬ）中の混合物を、室温で０．５時間撹拌し、そして次いで（１−ブロモエチル）ベンゼン（５８９ｍｇ、３．１８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を飽和のＮＨ４Ｃｌ中に注ぎ、そして酢酸エチルで抽出した。有機層を混合し、そして濃縮して、残渣を得た。残渣を、クロマトグラフィー（石油エーテル／酢酸エチル＝５：１）によって精製して、２−メチル−１−（１−フェニルエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−３−カルボン酸メチル（８００ｍｇ、９４％）を得た。
【０２３６】
[00135]工程５：２−メチル−１−（１−フェニルエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−３カルボン酸：
【０２３７】
【化３９】
0005989923.tif 000073
【０２３８】
２−メチル−１−（１−フェニルエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−３−カルボン酸メチル（８００ｍｇ、２．７２ｍｍｏｌ）及びＫＯＨ（１．５ｇ、２７．２ｍｍｏｌ）の、（１５ｍＬ）及び水（５ｍＬ）中の混合物に、を２時間還流した。混合物を１０％のＨＣｌによってＰＨ２に調節し、そしてＥＡで抽出した。混合した有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、そして濃縮して、粗製の生成物を得た。粗製の生成物を、更なる精製を行わずに次の工程に使用した。１００％収率（７６０ｍｇ）。
【０２３９】
[00136]工程６：（±）−Ｎ−（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１−（１−フェニルエチル）−１Ｈ−ピロ
ロ［２，３−ｃ］ピリジン−３−カルボキシアミド（化合物２０３）：
【０２４０】
【化４０】
0005989923.tif 000074
【０２４１】
ＨＡＴＵ（４５６ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１ｇ、１０ｍｍｏｌ）及び３−（アミノメチル）−４，６−ジメチルピリジン−２（１Ｈ）−オン（１８２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えられた、無水のジクロロメタン（３０ｍＬ）中の、２−メチル−１−（１−フェニルエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−３カルボン酸（２８０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で１６時間撹拌した。反応混合物に水（１０ｍＬ）を加え、ジクロロメタン（３０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を混合し、そして濃縮して、残渣を得た。残渣をＭｅＣＮから再結晶化して、化合物Ｎ−（（４，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロピリジン−３−イル）メチル）−２−メチル−１−（１−フェニルエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｃ］ピリジン−３−カルボキシアミドを、オフホワイト色の固体（８０ｍｇ、２１．６％）として得た。ＬＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）ｍ／ｚ：計算値４１４．２１；実測値４１４．１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール−ｄ４）δ：８．８４（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４４−７．３７（ｍ，５Ｈ），６．０９（ｓ，１Ｈ），６．０１−５．９９（ｍ，１Ｈ），４．４９（ｓ，２Ｈ），２．７３（ｓ，３Ｈ），２．３８（ｓ，３Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）。
【０２４２】
[00137]以下の表に示す化合物は、適当な出発物質及び改変を使用して、この実施例中に概略記載した一般的方法によって調製した。構造は、図１に示されている。
【０２４３】
【表２２】
0005989923.tif 000075
【０２４４】
[00138]実施例１５． 本発明の他の化合物を合成するための一般的方法
[00139]一般的方法Ａ：インドールのアルキル化
【０２４５】
【化４１】
0005989923.tif 000076
【０２４６】
ＮＨインドールエステル（１当量）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．４Ｍの濃度にするための体積）中の冷却された（０℃）溶液に、水素化ナトリウム（６０重量／重量％、インドールに対して１．１当量）を加えた。得られた混合物を１５分間撹拌した。次いでＲＸ（２当量）を加え、そして反応物を室温まで温まらせた。反応物を周囲温度で１２時間維持した。反応混合物を飽和の塩化アンモニウム溶液（１００ｍＬ）中に撹拌しながら注いだ。混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ×２）で抽出し、そして混合した有機相を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮して、粗製の生成物を得て、これを、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、石油エーテル／酢酸エチル＝２０：１）によって精製して、所望のアルキル化されたインドールエステル生成物を得た。      
【０２４７】
[00140]一般的方法Ｂ：アルキル化されたインドールエステルの鹸化
【０２４８】
【化４２】
0005989923.tif 000077
【０２４９】
アルキル化されたインドールエステル（１当量）の、テトラヒドロフラン：メタノール：水（２．５：５：１、０．０５Ｍの濃度にするための体積）中の溶液に、水酸化リチウム（４当量）を加えた。得られた反応混合物を６０℃で４８時間撹拌した。混合物を真空中で濃縮した。次いで残渣を水（４０ｍＬ）で希釈し、そして１Ｎの塩酸でｐＨ＝４−５にゆっくりと酸性化した。混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮して、粗製のインドール酸を得て、これを更なる精製を行わずにその後の工程で使用した。
【０２５０】
[00141]一般的方法Ｃ：アミド結合の形成
【０２５１】
【化４３】
0005989923.tif 000078
【０２５２】
インドール酸（１当量）の、ジクロロメタン（０．０５Ｍの濃度にするための体積）中の溶液に、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（１．５当量）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１．５当量）及びトリエチルアミン（３当量）を加えた。得られた混合物を室温で３０分間撹拌した。次いでピリドンアミン（１．２容量）を加え、そして得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。水（５０ｍＬ）を混合物に加えた。混合物をジクロロメタン（１００ｍＬ×２）で抽出した。有機層を真空中で濃縮して、粗製の生成物を得て、これを、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン／メタノール＝２０：１）によって精製して、標的化合物を得た。
【０２５３】
[00142]一般的方法Ｄ：キラルクロマトグラフィー
キラル化合物の分離は、正常相ＨＰＬＣ又はＳＦＣ（超臨界二酸化炭素流体クロマトグラフィー）によって達成された。分離された化合物は、典型的には＞９５％鏡像体余剰であった。キラル中心の絶対配置は決定しなかった。
【０２５４】
[00143]一般的方法Ｌ：スルホニル化
【０２５５】
【化４４】
0005989923.tif 000079
【０２５６】
キラルアミン（１当量）のジクロロメタン（０．１Ｍの濃度にするための体積）中の溶液に、トリエチルアミン（４当量）を１８℃のＮ２下で加えた。反応物を０℃に冷却し、そして塩化メタンスルホニル（１．５当量）を加えた。反応物を０℃で１時間撹拌した。次いで混合物を真空中で濃縮し、そしてメタノール及び炭酸カリウムを加え、そして反応物を更に１時間撹拌した。混合物を濾過し、そして粗製の生成物を、分離用ＨＰＬＣによって精製した。
【０２５７】
[00144]以下の表は、本発明の化合物を記載し、そして上記の一般的方法のものは、これらの合成に使用された。これらの化合物の構造は、図１に記載される。
【０２５８】
【表２３】
0005989923.tif 000080
【０２５９】
[00145]実施例１６．ＥＺＨ２を使用する阻害剤のＩＣ５０の測定。
[00146]ＥＺＨ２アッセイ：  アッセイを、ｒＰＲＣ２を、ビオチニル化されたオリゴヌクレオソーム基質と一緒に、放射性標識された酵素補助因子Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（３ＨＳＡＭ）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）の存在中で混合し、そして３ＨＳＡＭからヒストンのリシンへの、酵素的に仲介されたトリチル化メチル基の移動をモニターすることにより行った。得られたトリチル化メチルヒストン産物の量を、先ず、ストレプトアビジン（ＳＡＶ）で被覆されたＦｌａｓｈＰｌａｔｅｓ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）中のビオチニル化されたオリゴヌクレオソームを捕獲すること、それに続く未反応の３ＨＳＡＭを除去するための洗浄工程、そして次いでＴｏｐＣｏｕｎｔ  ＮＸＴの３８４ウェルプレートシンチレーションカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）によって計数することによって測定した。ＥＺＨ２の最終アッセイ条件は、次のとおり：５０ｍＭのｐＨ８．５のトリス緩衝液、１ｍＭのＤＴＴ、６９μＭのＢｒｉｊ−３５デタージェント、５．０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ、０．２μＭの３ＨＳＡＭ、０．２μＭのビオチニル化オリゴヌクレオソーム、３．６μＭのＨ３Ｋ２７ｍｅ３ペプチド及び２ｎＭのＥＺＨ２であった。
【０２６０】
[00147]化合物のＩＣ５０の測定値は、次のように得られた：先ず化合物を、１０ｍＭの原液として、１００％のＤＭＳＯ中に溶解した。１０点の用量反応曲線を、３８４ウェルプレート（Ｅｃｈｏ；Ｌａｂｃｙｔｅ）の１０個のウェルに、各種の量の１０ｍＭの化合物溶液を分配することによって作成し、次いで、全てのウェルが同じ量のＤＭＳＯを有することを確実にするために、純粋なＤＭＳＯを使用して充填した。１２．５μＬの、アッセイ緩衝液中のＨＭＴ酵素、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３ペプチド及びオリゴヌクレオソーム基質を、アッセイプレートにＭｕｌｔｉｄｒｏｐ  Ｃｏｍｂｉ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用してアッセイプレートのそれぞれのウェルに加えた。化合物を、酵素と共に２０分間予備インキュベートし、続いて１２．５μＬのアッセイ緩衝液中の３ＨＳＡＭの添加によってメチルトランセフェラーゼ反応を開始した（最終体積＝２５μＬ）。化合物の最終濃度は、８０μＭの最大の初期設定濃度から、１０回の２倍希釈工程の最小の０．１６μＭまでの範囲であった。反応を６０分間行い、そしてウェル当たり２０μＬの、１．９６ｍＭのＳＡＨ、５０ｍＭのｐＨ８．５のトリス、２００ｍＭのＥＤＴＡでクエンチした。停止された反応物をＳＡＶで被覆されたＦｌａｓｆＰｌａｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）に移し、１２０分間インキュベートし、プレート洗浄液で洗浄し、そして次いでＴｏｐＣｏｕｎｔ  ＮＸＴで読取って（１．０分／ウェル）、反応中に形成されたメチルヒストン産物の量を測定した。メチルヒストン産物の量を、０％及び１００％阻害の対照ウェルで形成された産物の量と比較して、各種の濃度の個々の化合物の存在中の阻害の％の計算を可能にした。ＩＣ５０を、４パラメーターフィット非線形曲線当て嵌めソフトウェアパッケージ（ＸＬＦＩＴ、データベースパッケージ、ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅ（ＩＤＢＳ）の一部）を使用して計算し、ここで、四つのパラメーターは、ＩＣ５０、Ｈｉｌｌスロープ、移行前基線（０％ＩＮＨ）、及び移行後基線（１００％ＩＮＨ）であり；後者の二つのパラメーターは、初期設定によって、それぞれゼロ及び１００に固定された。
【０２６１】
[00148]Ｙ６４１Ｎ  ＥＺＨ２に対するアッセイを、再構成されたＨ３Ｋ２７Ｍｅ２オ
リゴヌクレオソームを基質として使用して上記のように行った。
[00149]表２は、ＥＺＨ２及びＹ６４１Ｎ  ＥＺＨ２活性阻害アッセイにおける本発明の選択された化合物の活性を示す。ＩＣ５０値は、次のように報告されている：“Ａ”は、１００ｎＭより小さいＩＣ５０値を示し；“Ｂ”は、１００ｎＭないし１μＭのＩＣ５０値を示し；“Ｃ”は、それぞれの酵素に対して１μＭより大きく、そして１０μＭより小さいＩＣ５０値を示し；“Ｄ”は、それぞれの酵素に対して１０μＭより大きいＩＣ５０値を示し；そして“＊（ＸμＭ）”は、試験された化合物の最高濃度（即ちＸμＭ）において阻害が観察されなかったことを示す。
【０２６２】
【表２４】
0005989923.tif 000081
【０２６３】
[00150]実施例１７．ＨＥＬＡ細胞アッセイにおける阻害剤に対するＥＣ５０の測定。
[00151]Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３  ＭＳＤ  Ｈｅｌａアッセイ。  トリプシン化されたＨｅＬａ細胞を計数し、そして１０％ＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｔ．＃１０５６９）中で５０００細胞／７５μＬに希釈した。７５μＬの細胞を、９６ウェルの平底プレートのそれぞれのウェルに入れ、そして３７℃で４時間インキュベートした。２５μＬの試験化合物（各種の濃度で）を細胞に加え、そしてインキュベーションを３７℃で９６時間継続した。次いで培地を除去し、そして細胞を氷冷のＰＢＳで１回洗浄した。４０μＬの、氷冷のＭＳＤ緩衝液ＡＴ（１０ｍＭのｐＨ７．９のＨＥＰＥＳ、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．２５Ｍのスクロース、ベンゾナーゼ（１：１００００）、１％のトリトンＸ−１００、新しい１×のプロテアーゼ阻害剤カクテル及び１ｍＭのフッ化４−（２−アミノエチル）ベンゼンスルホニル塩酸塩（ＡＥＢＳＦ）で補充）を、それぞれのウェルに加え、そしてプレートを３０分間氷の上に置いた。次いで１０μＬの５ＭのＮａＣｌをそれぞれのウェルに加え、そして氷上のインキュベーションを更に１５分間続けた。それぞれのウェル中の物質を、ピペットで上下して懸濁し、そして次いで新しい９６ウェルプレートに移した。空になったウェルを、新しい１×のプロテアーゼ阻害剤カクテル及び１ｍＭのＡＥＢＳＦ（“無塩無デタージェント緩衝液”）で補充された１５０ｕＬの氷冷の２０ｍＭのｐＨ７．５のトリス、１ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＥＧＴＡで洗浄し、そして新しいプレートのそれぞれのウェルに移した。次いで３００μＬの無塩無デタージェント緩衝液を溶解物のそれぞれのウェルに加え、そしてプレートを−８０℃で冷凍した。
【０２６４】
[00152]同じ日に、ＭＳＤ標準結合９６ウェルプレートの適当な数を、３０μＬ／ウェルの、ＰＢＳ中の１μｇ／ｍＬの濃度の全Ｈ３捕獲抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｃａｔ＃ＭＡＢ３４２２）で被覆した。抗体溶液を、先ずプレートの側面に穏やかに打付け、そして次いで１０００ｒｐｍで数分間プレートを振盪することによって均等に分布した。抗体で被覆したプレートを４℃で一晩保存した。
【０２６５】
[00153]翌日、溶解物を室温に解凍する。抗体で被覆されたＭＳＤプレートを、ＴＢＳ−Ｔ（トリス緩衝生理食塩水（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃ＢＰ２４７１−１）＋０．２％Ｔｗｅｅｎ−２０）で３回洗浄する。１５０μＬの、ＴＢＳ−Ｔ中の５％の遮断剤Ａを、それぞれのウェルに加える。ウェルを覆い、そして室温で１時間シェーカーで振盪する。遮断剤Ａの工程を２回繰り返す。遮断剤を除去した後、２５μＬの細胞溶解物をそれぞれの抗体で被覆したウェルに移す。プレートを２時間室温で振盪し、溶解物を除去し、そしてプレートを再びＴＢＳ−Ｔ中の遮断剤Ａで洗浄する。２５μＬの適当に新に調製した抗体混合物（一次及び二次抗体の両方を含む）を、それぞれのウェルに加え、そしてプレートを１時間室温で振盪する。使用された抗体混合物は、以下の表に示すものの一つ（又は両方）であった。
【０２６６】
【表２５】
0005989923.tif 000082
【０２６７】
両方のＨ３抗体は、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ（Ｃａｔ＃４４９９及び９７３３）から得た。ヤギ抗ウサギ抗体は、Ｍｅｓｏ−Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（Ｃａｔ＃Ｒ３２ＡＢ−１）から得た。
【０２６８】
[00154]次いで抗体混合物を除去し、そしてウェルを遮断剤Ａで洗浄した。次いで１５０μＬの新しく調製した１×のＭＳＤ読取り緩衝液（Ｍｅｓｏ−Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ；Ｃａｔ＃Ｒ９２７Ｃ−２）をそれぞれのウェルに加え、そしてプレートをＭＳＤ  Ｓｅｃｔｏｒ  ２４００プレートリーダーで読取った。
【０２６９】
[00155]データを、Ａｓｓａｙ  Ａｓｓｉｓｔａｎｔ（Ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓインハウス製品）及びＡｃｔｉｖｉｔｙ  Ｂａｓｅ（ＩＤＢＳ  Ｌｔｄ，Ｓｕｒｒｅｙ，ＵＫ）テンプレートを使用して解析した。データファイルを、Ａｓｓａｙ  Ａｓｓｉｓｔａｎｔにインポートし、そしてアッセイ条件を規定した。ユニークな解析ＩＤを与え、そしてデータファイルをＡｃｔｉｖｉｔｙ  Ｂａｓｅにエクスポートした。解析テンプレートをＡｃｔｉｖｉｔｙ  Ｂａｓｅに与えて、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３マークの用量依存性阻害及び細胞の生存率を、それぞれ測定した。ＤＭＳＯウェルの読取り値を、データを正規化するために使用した。得られた曲線を、Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂａｓｅソフトウェアＭｏｄｅｌ  ２０５（ＩＤＢＳ  Ｌｔｄ，Ｓｕｒｒｅｙ，ＵＫ）を使用して当て嵌めた。データを質に関して検査し、ＳＡＲｖｉｅｗ（ＩＤＢＳ  Ｌｔｄ，Ｓｕｒｒｅｙ，ＵＫ）を使用してエクセルフォームで確認及び統合した。
【０２７０】
[00156]Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３アルファＨｅｌａアッセイ（ＡｉｐｈａＬＩＳＡ）。  １０種の異なった用量の試験化合物（一連の３倍希釈）を、二重の３８４ウェルの組織培養処理プレート（Ｃａｔａｌｏｇ＃７８１０８０；Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ  Ｏｎｅ；Ｍｏｎｒｏｅ，Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａ）に入れた。培養液中で増殖したＨｅｌａ細胞を、トリプシン化し、そしてＣｏｕｎｔｅｓｓ（登録商標）細胞カウンター（Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｃ１０２８１；Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）を使用して計数した。細胞を、１０％のＤＭＥＭ（Ｃａｔａｌｏｇ＃１０５６９−０１０  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）中でｍＬ当たり６７，０００細胞に希釈し、そして１５μＬ（１，０００細胞）を、Ｂｉｏｔｅｋ  ＭｉｃｒｏＦｌｏＴＭ  Ｓｅｌｅｃｔ  Ｄｉｓｐｅｎｓｅｒ（ＢｉｏＴｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．Ｖｅｒｍｏｎｔ，ＵＳＡ）を使用して、３８４ウェルプレートのそれぞれのウェルに入れた。プレートを３７℃／５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした。二重のプレートの一つをＨｅＬａアッセイのために、そして他方を生存率のために処理した。
【０２７１】
[00157]ＡｌｐｈａＬＩＳＡのために処理したプレートに、ウェル当たり５μＬの細胞−ヒストン溶解緩衝液（×１）（Ｃａｔａｌｏｇ＃ＡＬ００９Ｆ１  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ；Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を加え、そしてプレートを室温で３０分間、低速のプレートシェーカー（Ｍｏｄｅｌ＃４６２５−Ｑ  Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）上でインキュベートした。次いでウェル当たり１０μＬのヒストン抽出緩衝液（ｃａｔａｌｏｇ＃ＡＬ００９Ｆ２；Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ；Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を加え、そしてプレートを、低速のプレートシェーカー上で更に２０分間室温でインキュベートした。次いでそれぞれのウェルに、ウェル当たり１０μＬの５×の抗Ｋ２７ｍｅ３受容体ビーズプラスビオチニル化抗ヒストンＨ３（Ｃ−ｔｅｒ）抗体（最終３ｎＭに希釈）（Ｃａｔａｌｏｇ＃ＡＬ１１８  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ；Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）の混合物を加えた。受容体ビーズ、そして次いで抗ヒストンＨ３の希釈は、１×のヒストン検出緩衝液（Ｃａｔａｌｏｇ＃ＡＬ００９Ｆ３  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ；Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）により、これは、与えられた１０×の原液から稀釈して製造された。プレートをアルミニウムプレートシーラーで密封し、そして２３℃で６０分間インキュベートした。本出願人等は、次いでストレプトアビジン供与体ビーズ（Ｃａｔａｌｏｇ＃６７６０００２  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ；Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）（１×のヒストン検出緩衝液中の最終の２０μｇ／ｍＬ）の１０μＬの５×の溶液を加え、プレートをアルミニウムプレートシーラーで密封し、そして２３℃で３０分間インキュベートした。次いでプレートを、ＥｎＶｉｓｉｏｎ−  Ａｌｐｈａ  Ｒｅａｄｅｒ（ｍｏｄｅｌ＃２１０４  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ；Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して読取った。
【０２７２】
[00158]細胞の生存率を、１５μＬのＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（Ｃａｔａｌｏｇ  ＃Ｇ７５７１  Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を培地と共に細胞を伴うそれぞれのウェルに加えることによって分析した。プレートを、室温で（ｆｏａｔ）１５−２０分間低速のプレートシェーカー上でインキュベートした。次いでプレートを、ＥｎＶｉｓｉｏｎ−Ａｌｐｈａ  Ｒｅａｄｅｒ（ｍｏｄｅｌ＃２１０４  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ；Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を使用して読取った。
【０２７３】
[00159]両方のアッセイからのデータを、Ａｓｓａｙ  Ａｓｓｉｓｔａｎｔ（Ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓインハウス製品）及びＡｃｔｉｖｉｔｙ  Ｂａｓｅ（ＩＤＢＳ  Ｌｔｄ，Ｓｕｒｒｅｙ，ＵＫ）テンプレートを使用して解析した。データファイルを、Ａｓｓａｙ  Ａｓｓｉｓｔａｎｔにインポートし、そしてアッセイ条件を規定した。ユニークな解析ＩＤを与え、そしてデータファイルをＡｃｔｉｖｉｔｙ  Ｂａｓｅにエクスポートした。解析テンプレートをＡｃｔｉｖｉｔｙ  Ｂａｓｅに与えて、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３マークの用量依存性阻害及び細胞の生存率を、それぞれ測定した。ＤＭＳＯウェルの読取り値を、データを正規化するために使用した。得られた曲線を、Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂａｓｅソフトウェアＭｏｄｅｌ  ２０５（ＩＤＢＳ  Ｌｔｄ，Ｓｕｒｒｅｙ，ＵＫ）を使用して当て嵌めた。データを質に関して検査し、ＳＡＲｖｉｅｗ（ＩＤＢＳ  Ｌｔｄ，Ｓｕｒｒｅｙ，ＵＫ）を使用してエクセルフォームで確認及び統合した。
【０２７４】
[00160]表３は、先に記載した二つの異なったＨｅＬａ細胞アッセイ中の本発明の選択された化合物の活性を示す。ＥＣ５０値は、次のように報告されている：“Ａ”は、４００ｎＭより小さいＥＣ５０値を示し；“Ｂ”は、４００ｎＭないし２μＭのＥＣ５０値を示し；“Ｃ”は、それぞれの酵素に対して２μＭより大きく、そして１０μＭより小さいＥＣ５０値を示し；“Ｄ”は、それぞれの酵素に対して１０μＭより大きいＥＣ５０値を示し；そして“＊（ＸμＭ）”は、試験された化合物の最高濃度（即ちＸμＭ）において阻害が観察されなかったことを示す。
【０２７５】
【表２６】
0005989923.tif 000083
【０２７６】
[00161]実施例１８．腫瘍増殖阻害の解析
メスのＣＢ−１７  ＳＣＩＤマウスにおけるＫａｒｐａｓ４２２ヒトリンパ腫の皮下異種移植モデルにおける化合物３６２及び３６５の抗腫瘍効力は、次のとおりであった。
【０２７７】
[00162]動物
種：Ｍｕｓ  Ｍｕｓｃｕｌｕｓ
株：ＣＢ−１７  ＳＣＩＤマウス
年齢：６−８週
性別：メス
体重：１８−２２ｇ
マウスの数：５０匹＋予備
マウスの供給者：Ｓｈａｎｇｈａｉ  ＳＬＡＣ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｏ．，ＬＴＤ。
【０２７８】
[00163]細胞培養
Ｋａｒｐａｓ４２２腫瘍細胞を、１０％の熱不活化胎仔ウシ血清で補充されたＲＰＭＩ１６４０培地中の懸濁培養物として、３７℃で、空気中の５％ＣＯ２の雰囲気下でｉｎ  ｖｉｔｒｏで維持した。腫瘍細胞を週２回、日常的に継代培養した。対数増殖期で増殖している細胞を回収し、そして腫瘍接種のために計数した。
【０２７９】
[00164]腫瘍接種
それぞれのマウスに、腫瘍の発生のために、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（１：１）を伴う０．２ｍｌのＰＢＳ中にＫａｒｐａｓ４２２腫瘍細胞（５×１０６）で、右脇腹に皮下的に接種した。平均の腫瘍の大きさが概略３００ｍｍ３に達した、腫瘍接種後２３日目を、治療開始後の０日目とした。それぞれの群は、１０匹の腫瘍を保持するマウスからなっていた。
【０２８０】
[00165]腫瘍の測定
腫瘍の大きさを、ノギスを使用して二つの寸法で毎週三回測定し、そして体積を、式：Ｖ＝０．５３６ａ×ｂ２を使用してｍｍ３で表示し、式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長径及び短径である。次いで、腫瘍の大きさをＴ／Ｃ値の計算のために使用した。Ｔ／Ｃ値（パーセント）は、抗腫瘍剤の有効性の表示である；Ｔ及びＣは、所定の日のそれぞれ処理及び対照群の平均体積である。ＴＧＩを、式：ＴＧＩ（％）＝［１−（Ｔｉ−Ｔ０）／（Ｖｉ−Ｖ０）］×１００を使用してそれぞれの群に対して計算した；Ｔｉは、所定の日の処理群の平均腫瘍体積であり、Ｔ０は、処理を開始した日の処理群の平均腫瘍体積であり、Ｖｉは、Ｔｉと同日のベヒクル対照群の平均腫瘍体積であり、そしてＶ０は、処理を開始した日のベヒクル群の平均腫瘍体積である。
【０２８１】
[00166]実験の終点及び試料収集
１）ＥＰＺ−６４３８群の血漿、腫瘍及び筋肉を、処理の開始後１６日目に、投与の６時間後に収集した。ベヒクル、ＣＰＩ−５２４３６９、ＣＰＩ−５２４４１６及びＣＰＩ−５９１７８０群の血漿、腫瘍及び筋肉を、処理の開始後２５日目に、投与の１時間後に収集した。２）全ての血液を、抗凝固剤としてのＥＤＴＡ−Ｋ２と共に、それぞれのマウスから採取した。血漿を二つの部分に分割した。最初の部分は、ＰＫ分析のためであり；第２の部分は、予備のために凍結した。３）腫瘍を三つの部分に分割した。最初の部分は、ＰＫのために急速凍結した；第二の部分はＰＤ分析のために急速凍結した；第三の部分は、予備のために凍結した。４）筋肉を二つの部分に分割した。最初の部分はＰＫのために急速凍結した；第二の部分は、予備のために凍結した。
【０２８２】
[00167]腫瘍増殖阻害の解析
【０２８３】
【表２７】
0005989923.tif 000084
【図１−１】
0005989923.tif 000086
【図１−２】
0005989923.tif 000087
【図１−３】
0005989923.tif 000088
【図１−４】
0005989923.tif 000089
【図１−５】
0005989923.tif 000090
【図１−６】
0005989923.tif 000091
【図１−７】
0005989923.tif 000092
【図１−８】
0005989923.tif 000093
【図１−９】
0005989923.tif 000094
【図１−１０】
0005989923.tif 000095
【図１−１１】
0005989923.tif 000096
【図１−１２】
0005989923.tif 000097
【図１−１３】
0005989923.tif 000098
【図１−１４】
0005989923.tif 000099
【図１−１５】
0005989923.tif 000100
【図１−１６】
0005989923.tif 000101
【図１−１７】
0005989923.tif 000102
【図１−１８】
0005989923.tif 000103
【図１−１９】
0005989923.tif 000104
【図１−２０】
0005989923.tif 000105
【図１−２１】
0005989923.tif 000106
【図１−２２】
0005989923.tif 000107
【図１−２３】
0005989923.tif 000108
【図１−２４】
0005989923.tif 000109
【図１−２５】
0005989923.tif 000110
【図１−２６】
0005989923.tif 000111
【図１−２７】
0005989923.tif 000112
【図１−２８】
0005989923.tif 000113
【図１−２９】
0005989923.tif 000114
【図１−３０】
0005989923.tif 000115
【図１−３１】
0005989923.tif 000116
【図１−３２】
0005989923.tif 000117
【図１−３３】
0005989923.tif 000118
【図１−３４】
0005989923.tif 000119
【図１−３５】
0005989923.tif 000120
【図１−３６】
0005989923.tif 000121
【図１−３７】
0005989923.tif 000122
【図１−３８】
0005989923.tif 000123
【図１−３９】
0005989923.tif 000124
【図１−４０】
0005989923.tif 000125
【図１−４１】
0005989923.tif 000126
【図１−４２】
0005989923.tif 000127
【図１−４３】
0005989923.tif 000128
【図１−４４】
0005989923.tif 000129
【図１−４５】
0005989923.tif 000130