(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫応答を阻害する必要のある対象において、免疫応答を阻害するための組成物であって、（ａ）ＣＤ２００に結合し、かつ（ｂ）ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの相互作用を阻害する抗体またはその抗原結合性断片を含有し、前記組成物は、免疫抑制薬と組み合わせて前記対象に投与されるものであり、ここで、前記抗体またはその抗原結合性断片は、寄託番号ＥＣＡＣＣ  Ｎｏ．０３０６２５０２でＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ
ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓに寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の重鎖および軽鎖のＣＤＲ配列を含み、かつ、前記抗体またはその抗原結合性断片は、低減されたエフェクター機能を有するか、または、エフェクター機能をまったく有さず；ここで、前記免疫抑制薬は、インターロイキン−２の作用または産生を阻害する、組成物。
【請求項２】
前記免疫応答が体液性応答である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記免疫応答が抗体媒介応答である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、（ｘ）低減されたＡＤＣＣ活性、（ｙ）低減されたＣＤＣ活性、または（ｚ）低減されたＡＤＣＣ活性と低減されたＣＤＣ活性、を示す、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、（ｘ）ＡＤＣＣ活性を示さないか、（ｙ）ＣＤＣ活性を示さないか、または、（ｚ）ＡＤＣＣ活性もＣＤＣ活性も示さない、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記抗体が（ａ）アミノ酸２３６位におけるグルタミン酸置換、（ｂ）アミノ酸２９８位におけるグルタミン置換、および、（ｃ）アミノ酸３１９、３２１および３２３位におけるアラニン置換を含むＦｃ定常領域を有した場合に前記抗体が有するＡＤＣＣ活性またはＣＤＣ活性と同等またはそれより少ないＡＤＣＣ活性またはＣＤＣ活性を有する改変Ｆｃ定常領域を前記抗体が含み、ここで、各置換は、配列番号２８に示されるアミノ酸配列
に関するものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記免疫抑制薬がシクロスポリンＡまたはラパマイシンである、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、ヒト抗体またはその抗原結合性断片、ヒト化抗体またはその抗原結合性断片、霊長類化抗体またはその抗原結合性断片、キメラ抗体またはその抗原結合性断片、マウス抗体またはその抗原結合性断片、および脱免疫化抗体またはその抗原結合性断片からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記抗原結合性断片が、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、Ｆｖ、ドメイン抗体、およびＣＤ２００に対する特異的な結合を付与する抗ＣＤ２００免疫グロブリンの任意の断片からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記免疫抑制薬がカルシニュリン阻害剤である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記カルシニュリン阻害剤が、タクロリムスおよびシクロスポリンＡからなる群から選択される、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記免疫抑制薬が、シクロスポリンＡ、シロリムス（ラパマイシン）、およびタクロリムス（ＦＫ−５０６）からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記免疫抑制薬が、抗体のダクリズマブである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記対象がヒトである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記対象が、同種異系または同系ドナーからの細胞移植体、組織移植体または臓器移植体を受けたか、受けることになる請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記組成物と前記免疫抑制薬の投与が、移植片拒絶を防止し、または移植片生着を促進する、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物と前記薬が、前記移植体を受ける前に投与されることを特徴とする、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物が、ｉ）前記薬の前、ｉｉ）前記薬に引き続いて、またはｉｉｉ）前記薬と同時に投与されることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、前記移植体の拒絶反応エピソードの間に投与されるものであることを特徴とする、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２０】
前記移植片拒絶が、前記細胞移植体、組織移植体、または臓器移植体の急性または慢性の体液性拒絶である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２１】
前記対象が、造血細胞移植体もしくは骨髄移植体、膵島細胞の同種異系移植体、または心臓、腎臓−膵臓、腎臓、肝臓、肺、および膵臓からなる群から選択される固体臓器移植体のレシピエントである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物と前記免疫抑制薬の投与が、抗ドナー抗体の産生を減少させる、請求項１に
記載の組成物。
【請求項２３】
前記移植片拒絶が、細胞移植片、組織移植片または臓器移植片の移植片レシピエントにおける急性移植片拒絶である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２４】
前記移植片拒絶が、細胞移植片、組織移植片または臓器移植片の移植片レシピエントにおける慢性移植片拒絶である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２５】
前記組成物と前記免疫抑制薬の投与が、長期間の移植片生着を促進し、前記長期間の移植片生着が、
（ａ）移植後少なくとも６カ月；
（ｂ）移植後少なくとも１年；および
（ｃ）移植後少なくとも５年
からなる群から選択される、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２６】
前記組成物と前記免疫抑制薬の投与が、前記移植片の適応を促進する、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記対象が、細胞同系移植片、組織同系移植片または臓器同系移植片を受けたか、受けることになる、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２８】
前記対象が、細胞同種移植片、組織同種移植片または臓器同種移植片を受けたか、受けることになる、請求項１５に記載の組成物。
【請求項２９】
前記対象が、抗体媒介炎症疾患または自己免疫疾患を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３０】
前記自己免疫疾患が自己免疫性溶血性貧血である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記組成物が全身的に投与されるものであることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３２】
前記組成物が局所的に投与されるものであることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記免疫応答が一次応答である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３４】
前記免疫応答が二次応答である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３５】
対象に投与される免疫抑制薬の有効量を構成するものを低減するための組成物であって、（ａ）ＣＤ２００に結合し、かつ（ｂ）ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの相互作用を阻害する抗体またはその抗原結合性断片を含有し、ここで、前記組成物を伴わずに前記対象において免疫抑制を生じさせるために必要とされる前記薬の量と比較して、より少ない前記薬が前記対象において免疫抑制を生じさせるために必要とされ、ここで、前記抗体またはその抗原結合性断片は、寄託番号ＥＣＡＣＣ  Ｎｏ．０３０６２５０２でＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓに寄託されたハイブリドーマによって産生される抗体の重鎖および軽鎖のＣＤＲ配列を含み、かつ、前記抗体またはその抗原結合性断片は、低減されたエフェクター機能を有するか、または、エフェクター機能をまったく有さず；ここで、前記免疫抑制薬は、インターロイキン−２の作用または産生を阻害する、組成物。
【請求項３６】
前記対象が、同種移植片を受けたか、受けることになる、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記対象が、自己免疫疾患または抗体媒介炎症疾患を有する、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３８】
前記薬がシクロスポリンＡまたはラパマイシンである、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３９】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、（ｘ）低減されたＡＤＣＣ活性、（ｙ）低減されたＣＤＣ活性、または（ｚ）低減されたＡＤＣＣ活性と低減されたＣＤＣ活性、を示す、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４０】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、（ｘ）ＡＤＣＣ活性を示さないか、（ｙ）ＣＤＣ活性を示さないか、または、（ｚ）ＡＤＣＣ活性もＣＤＣ活性も示さない、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４１】
前記抗体が（ａ）アミノ酸２３６位におけるグルタミン酸置換、（ｂ）アミノ酸２９８位におけるグルタミン置換、および、（ｃ）アミノ酸３１９、３２１および３２３位におけるアラニン置換を含むＦｃ定常領域を有した場合に前記抗体が有するＡＤＣＣ活性またはＣＤＣ活性と同等またはそれより少ないＡＤＣＣ活性またはＣＤＣ活性を有する改変Ｆｃ定常領域を前記抗体が含み、ここで、各置換は、配列番号２８に示されるアミノ酸配列に関するものである、請求項３５に記載の組成物。
【請求項４２】
免疫応答を阻害する必要のある対象において、免疫応答を阻害するための組成物であって、（ａ）ＣＤ２００に結合し、かつ（ｂ）ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの相互作用を阻害する抗体を含有し、前記組成物は、免疫抑制薬と組み合わせて前記対象に投与されるものであり、ここで、前記抗体は、配列番号１５に示すアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１８に示すアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２００７年７月２５日に出願された米国仮特許出願第６０／９６２，０２２号の利益を主張し、この米国仮特許出願の開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（技術分野）
本開示は、ＯＸ−２／ＣＤ２００（本明細書ではＣＤ２００と呼ばれる）結合剤、および免疫応答の防止または阻害方法に関する。本明細書に記載される組成物および方法は、自己免疫障害を有する患者および移植片レシピエントを治療するのに使用することができる。移植片の寛容性を促進するための治療の方法には、移植体または移植片のレシピエントに、抗ＣＤ２００抗体などのＣＤ２００結合剤を投与し、それによって移植片生着を延長することが含まれる。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
免疫細胞は、感染因子などの外来侵入物を攻撃および排除するのを助長する。しかし、自己免疫障害、アレルギー、および組織移植体または臓器移植体の拒絶反応などの、ある特定の場合では、免疫系は、疾患の原因となる場合がある。ドナーからレシピエントへの移植片（例えば、細胞、組織、または臓器）の移植では、移植片に対するレシピエントの免疫反応は、疾患を引き起こす。それにもかかわらず、細胞、組織および臓器の移植は、非常に一般的であり、救命手順であることが多い。臓器移植は、慢性臓器不全を有する大部分の患者にとって好適な治療である。移植体の免疫拒絶（すなわち、移植片拒絶）を阻止するための治療が大きく改善されているにもかかわらず、急性および慢性の両方の拒絶反応を含むこの拒絶反応は、臓器移植の成功に対する１つの最も大きな障害であり続けている。腎臓移植体についての１年生着率は、例えば、平均で、死亡したドナーからの腎臓で８８．３％、生体ドナーから受け取った腎臓で９４．４％である。移植された腎臓についての対応する５年生着率は、６３．３％および７６．５％である（ＯＰＴＮ／ＳＲＴＲ
Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ、２００２年、Ｏｒｇａｎ  Ｐｒｏｃｕｒｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＯＰＴＮ）と共同して、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｇｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ（ＳＲＴＲ）によって作成された年報の第１章）。ｕｎｏｓ．ｏｒｇ／ｄａｔａ／ａｒ２００２／ａｒ０２＿ｃｈａｐｔｅｒ＿ｏｎｅ．ｈｔｍ．のワールドワイドウェブを参照されたい。肝臓移植体については、１年生着率は、死亡したドナーおよび生体ドナーからの肝臓について、それぞれ８０．２％および７６．５％である。肝臓移植片の対応する５年生着率は、６３．５％および７３．０％である（ＯＰＴＮ／ＳＲＴＲ  Ａｎｎｕａｌ
Ｒｅｐｏｒｔ、２００２年、Ｏｒｇａｎ  Ｐｒｏｃｕｒｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＯＰＴＮ）と共同して、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｒｅｇｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ（ＳＲＴＲ）によって作成された年報の第１章）。ｕｎｏｓ．ｏｒｇ／ｄａｔａ／ａｒ２００２／ａｒ０２＿ｃｈａｐｔｅｒ＿ｏｎｅ．ｈｔｍのワールドワイドウェブを参照されたい。免疫抑制薬、特にシクロスポリンＡ、およびより最近ではタクロリムスの使用により、臓器移植の成功率が劇的に改善された。これらの薬剤は、急性の拒絶反応を阻止することにおいて特に成功している。しかしながら、上記の数値が示すように、移植後の短期間、特に長期間生着率の両方を改善する必要性が依然として存在する。
【０００４】
多数の型の移植体が存在する。一個体から同じ個体に移植された移植片は、自己移植片または自家移植片と呼ばれる。２つの遺伝的に同一または同系の個体間で移植された移植片は、同系移植片と呼ばれる。同種の２つの遺伝的に異なる個体間で移植された移植片は、同種異系移植片または同種移植片と呼ばれ、異種の個体間で移植された移植片は、異種間の移植片または異種移植片と呼ばれる。
【０００５】
現在、４０，０００を超える腎臓、心臓、肺、肝臓および膵臓の移植が、毎年米国で実施されている（Ａｂｂａｓら、２０００年；  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（４版）、３６３〜３８３頁（Ｗ．Ｂ．  Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。他の可能な移植体として、それだけに限らないが、脈管組織、眼、角膜、水晶体、皮膚、骨髄、筋肉、結合組織、消化管組織、神経組織、骨、幹細胞、島、軟骨、肝実質細胞、および造血細胞が挙げられる。残念ながら、ドナーが存在するよりもはるかに多くの移植候補が存在する。この不足を克服するために、異種移植片の使用方法を学ぶための重要な取り組みが行われている。この分野で進展はしているが、現在のところ、大部分の移植片は同種移植片である。
【０００６】
したがって、移植において、ドナーの遺伝学的バックグラウンドは、レシピエントの遺伝学的バックグラウンドと異なることが多く（例えば、同種移植（ａｌｌｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ））、したがってドナーとレシピエントは、その組織適合抗原、すなわち、ヒトにおいてＨＬＡ系と呼ばれる、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）の抗原が異なる。したがって、レシピエントは、移植片を異物として認識し、様々な免疫応答は、移植片を拒絶および排除するように作用する。移植片拒絶は、移植片に対するレシピエントの免疫応答を指す。移植片拒絶において作用する免疫応答は、（１）移植後直ちに起こる強い拒絶反応である超急性拒絶反応；（２）移植後２〜３カ月以内に観察される急性拒絶反応（体液性拒絶反応の加速、およびデノボ急性体液性拒絶反応などの急性血管性拒絶反応も含められる）；および（３）移植後数カ月間観察される慢性拒絶反応に分類することができる。拒絶反応は通常、Ｔ細胞に媒介された抗体攻撃および／または体液性の抗体攻撃の結果であるが、追加の二次的要因、サイトカイン、およびマクロファージなどの他の免疫細胞を含む場合がある。レシピエントの免疫細胞が、同種移植片において外来と認識する分子は、同種抗原と呼ばれ、異種移植片におけるこれらの分子は、異種抗原と呼ばれる。同種抗原または異種抗原と反応するレシピエントのリンパ球または抗体は、それぞれ、アロ反応性または異種反応性であると記述される。
【０００７】
細胞性免疫（Ｔ細胞によって代表される免疫応答性細胞による）および液性免疫（抗体による）は、移植片拒絶において複雑に協調された様式で作用する（非特許文献１を参照されたい）。ドナー臓器からの抗原に対するＴ細胞応答は、急性拒絶反応を媒介すると一般に認められている。同種移植では、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞は、同種移植片および／または移植片内の白血球（すなわち、抗原提示細胞）上に発現されるドナーＭＨＣ分子を認識する。同種移植片が、クラスＩおよびクラスＩＩ部位の両方でレシピエントと異なる場合では、ＭＨＣ分子の認識は、ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞の両方を活性化をもたらす。同種のＭＨＣ抗原は、レシピエントのＣＤ４＋／Ｔヘルパー細胞を刺激するための１つのシグナルを提供するが、レシピエントのマクロファージは、第２のシグナルであるインターロイキン１（ＩＬ−１）を提供し、これはＴヘルパー細胞の活性化に必須である。活性化されたＴヘルパー細胞はＩＬ−２を産生し、これは、細胞傷害性Ｔ細胞およびリンホカイン活性化キラー細胞を増殖させ、ＩＬ−４およびＩＬ−６の放出をもたらす。さらに、ＩＬ−２は、インターフェロンγ、ならびに腫瘍壊死因子および他の炎症促進性サイトカインの放出を促進する。
【０００８】
ＡＰＣ（抗原提示細胞、例えば、樹状細胞）も、上述したように移植片拒絶に関与する。同種移植抗原および異種移植抗原は、移植片に浸潤することができるレシピエントＡＰＣによって処理され、間接的に提示され得る。ドナー抗原を提示するレシピエントＡＰＣは、循環によってリンパ節に輸送され、そこでこれらはＴ細胞を活性化する。ＡＰＣの活性は、リンパ球増殖およびドナー移植片への最終的なＴ細胞浸潤をもたらす。
【０００９】
移植片拒絶における別の免疫応答は、抗ドナー抗体（同種移植の場合における同種抗体など）の産生であり、これはＢ細胞によって媒介される。しかし、この応答は、Ｂ細胞増殖、分化、抗体の分泌を刺激するＣＤ４＋Ｔ細胞の活性を必要とする。内皮細胞上に発現されるＭＨＣ抗原への同種抗体の結合は、補体経路および凝固経路を伴う複雑な応答を活性化し、これは最終的に炎症および移植片傷害をもたらす。同種抗体は、抗体分子のＦｃ領域を介した抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）も媒介することができる。同種抗体および補体の活性は、超急性、急性体液性、および慢性の移植片の拒絶反応に重要となる場合があり、ドナーＨＬＡクラスＩまたはクラスＩＩ抗原に対する同種抗体は、様々な移植された臓器の慢性拒絶反応と関連づけられている。
【００１０】
移植片拒絶の結果として、移植片は最終的に壊死性になる。さらに、レシピエントは、重度の全身性の症状、例えば、発熱、白血球増多症および疲労などだけでなく、移植部位での腫張および圧痛も発症する。感染症などの重度の合併症も起こり得る。
【００１１】
免疫応答性細胞の機能を抑制する、限られた数の免疫抑制剤が、移植片拒絶を抑制するのに使用される。そのような免疫抑制剤として、シクロスポリン（ＣｓＡ）；タクロリムス（ＦＫ−５０６）；アザチオプリン（ＡＺ）；ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）；ミゾリビン（ＭＺ）；レフルノミド（ＬＥＦ）；副腎皮質ステロイド（副腎皮質ホルモン、コルチコステロイド、コルチコイドとしても知られる）、例えばプレドニゾロンおよびメチルプレドニゾロン；シロリムス（ラパマイシンとしても知られる）；デオキシスペルグアリン（ＤＳＧ）；およびＦＴＹ７２０（フィンゴリモドとも呼ばれ、化学名：２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール塩酸塩）が挙げられる。Ｔ細胞の活性化に必要な共刺激シグナルを伝達することに関与する分子（共刺激シグナル伝達分子）である、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ２８を遮断する薬剤も、免疫抑制剤として臨床的に開発中であり、そのような薬剤には、ＣＴＬＡ−４の可溶性領域およびこれをコードする遺伝子を使用するＣＴＬＡ−４薬が含まれる。
【００１２】
コルチコステロイドおよびサイトカインアンタゴニストなどの一般的な免疫抑制剤は、毒性および感染に対する抵抗性の低減を含めた望ましくない副作用を誘発する場合がある。したがって、自己免疫を治療し、移植片生着を促進することの、代替の、およびおそらくより特異的な方法が必要である。
【００１３】
免疫抑制を誘発し、移植片生着を促進すると考えられている１つの分子は、ＯＸ−２、すなわちＣＤ２００である。ＣＤ２００は、Ｂ細胞、いくつかのＴ細胞、樹状細胞、および他の細胞の表面上に発現され、免疫グロブリン遺伝子ファミリーの分子と高度の相同性を有する。ＣＤ２００は、免疫抑制に関わっており、例えば、ＣＤ２００発現細胞は、Ｔｈ１サイトカイン産生の刺激を阻害することができることが示された（非特許文献２）。さらに、可溶性ＣＤ２００は、マウスにおいて同種および異種移植片の生着を促進し、マウスにおいてヒツジ赤血球に対する抗体応答を減少させることが示された（非特許文献３）。さらに、ＣＤ２００−ノックアウトマウスは、野生型のマウスと比較して、ＡＰＣ活性化を下方制御する能力の減少を示し、中枢神経系における慢性の炎症、過剰炎症反応、およびある特定の実験的な自己免疫障害に対する感受性の増大をもたらす（非特許文献４）。ＣＤ２００の免疫抑制作用は、ＣＤ２００の、その受容体であるＣＤ２００Ｒへの結合の結果であると考えられており（非特許文献４；非特許文献５）、これは、単球／骨髄系列、およびＴリンパ球起源の細胞上に発現される。
【００１４】
ＣＤ２００は、免疫抑制作用を誘発することが示されているが、ＣＤ２００に対する抗体は、これらの免疫抑制作用を阻害することが示されている。例えば、抗ＣＤ２００抗体（抗−ＣＤ２００  Ｆ（ａｂ’）２断片を含めて）は、マウスにおいてラット島異種移植片の、ＣＤ２００Ｆｃによって誘発された生着の延長を無効にした（非特許文献６）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ｒｏｃｈａら、２００３年、Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  １９６巻：５１〜６４頁
【非特許文献２】Ｇｏｒｃｚｙｎｓｋｉら、１９９８年  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６５巻：１１０６〜１１１４頁
【非特許文献３】Ｇｏｒｃｚｙｎｓｋｉら  １９９９年  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６３巻：１６５４〜１６６０頁
【非特許文献４】Ｈｏｅｋら  ２０００年  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９０巻：１７６８〜１７７１頁
【非特許文献５】Ｇｏｒｃｚｙｎｓｋｉら  ２０００年  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６５巻：４８５４頁
【非特許文献６】Ｇｏｒｃｚｙｎｓｋｉら  ２００２年  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．  ７３巻：１９４８〜５３頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
上記に論じた公開された報告に反して、本開示は、抗ＣＤ２００抗体および抗ＣＤ２００抗体を含む組成物は、移植片生着を促進することを実証する。したがって本開示は、移植片拒絶を阻害し、移植片生着を促進するための新規な組成物および方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
概要
本開示は、抗ＣＤ２００抗体の投与により、移植された組織または臓器などの免疫チャレンジに対する免疫学的応答を阻害することができるという発見に関する。したがって、本開示の目的は、免疫学的応答を抑制、治療、または防止するための方法および医薬品を提供することであり、特定の実施形態では、免疫学的応答は、細胞、組織、または臓器の移植に伴う（例えば、移植片拒絶または移植片対宿主疾患）。また、免疫学的応答は、後の時間、例えば、移植された細胞、組織または臓器のレシピエントにおける拒絶反応エピソードの間に起こる場合がある。本開示の方法および薬剤は、医学および薬学の技法（例えば、低分子量化合物および抗体などの医薬品）を使用することによって、ＣＤ２００の生物学的機能を調節し、またはＣＤ２００を発現する細胞の活性を調節することができる。
【００１８】
ある特定の態様では、本開示は、ＣＤ２００に特異的に結合する作用剤に関する。ＣＤ２００結合剤として、それだけに限らないが、ポリペプチド、小分子、有機金属化合物、免疫調節剤、抗体、抗体の抗原結合性断片、プロドラッグ、および／またはペプチド模倣化合物が挙げられる。この作用剤は、ＣＤ２００のＣＤ２００受容体（ＣＤ２００Ｒ）との相互作用を阻害または低減しても、しなくてもよい。
【００１９】
ある特定の実施形態では、ＣＤ２００を特異的に結合する作用剤は、抗ＣＤ２００抗体である。本明細書で参照する場合、抗体として、それだけに限らないが、モノクローナルおよびポリクローナル抗体、操作された抗体（キメラ抗体、単鎖抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、脱免疫化抗体、および人工的に選択された抗体を含めて）、ならびに合成または半合成抗体が挙げられる。本開示の抗体には、抗体の他の変形および誘導体（例えば、単離された抗体もしくは組換え抗体、抗体コンジュゲート、または抗体誘導体）、ならびにマウス、ヒト、キメラ、ヒト化、霊長類化などの抗体も含まれる。本開示の抗体として、抗原結合性断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、他の一価および二価の断片、相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、単鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂΔＣ）、ダイアボディ、トリアボディ、ミニボディ、ナノボディ、ならびにＣＤ２００に特異的な結合を付与するのに十分な抗体の少なくとも一部を含むポリペプチドなど、ならびに前述の融合物および誘導体も挙げられる。ある特定の態様では、本開示は、キメラ、ヒト化、ヒトおよび脱免疫化抗ＣＤ２００抗体、ならびにこれらの抗原結合性断片に関する。さらなる実施形態では、本開示は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＡ、ＩｇＤ、および／またはＩｇＥフレームワークを含む抗体に関する。
【００２０】
特定の実施形態では、ＣＤ２００を特異的に結合する作用剤は、ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの相互作用を阻害する作用剤とすることができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの相互作用を阻害する作用剤は、抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片である。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、エフェクター機能を示す一方、他の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、低減されたエフェクター機能を示し、またはエフェクター機能をまったく示さない。他の実施形態では、作用剤は、可溶性ＣＤ２００Ｒまたは非アゴニスト性可溶性ＣＤ２００である。
【００２１】
したがって、ある特定の実施形態では、本開示は、免疫応答を阻害する必要のある対象における、免疫応答の阻害方法であって、対象に有効量のｉ）ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの相互作用を阻害する作用剤、およびｉｉ）免疫抑制または免疫調節の作用剤または薬物を投与するステップを含む方法に関する。ある特定の実施形態では、免疫応答は体液性応答である。さらなる実施形態では、免疫応答は抗体媒介応答である。いくつかの実施形態では、作用剤はエフェクター機能を示すことができる。あるいは、作用剤は、低減されたエフェクター機能を示すことができ、またはエフェクター機能をまったく示すことができない。特定の実施形態では、作用剤は、抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片である。他の実施形態では、作用剤は、可溶性ＣＤ２００Ｒまたは非アゴニスト性可溶性ＣＤ２００である。上記実施形態のいずれにおいても、免疫調節薬または免疫抑制薬は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞とＢ細胞の両方、または別の免疫細胞を標的とすることができる。特定の実施形態では、免疫抑制薬は、シクロスポリンＡまたはラパマイシンである。
【００２２】
ある特定の実施形態では、本開示は、体液性免疫応答を阻害する必要のある対象における、体液性免疫応答の阻害方法であって、対象に、有効量の抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含む方法を提供する。そのような実施形態では、抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト抗体または抗原結合性断片、ヒト化抗体または抗原結合性断片、霊長類化抗体または抗原結合性断片、キメラ抗体または抗原結合性断片、マウス抗体または抗原結合性断片、および脱免疫化抗体または抗原結合性断片からなる群から選択される。抗原結合性断片は、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、Ｆｖ、ドメイン抗体、およびＣＤ２００に特異的な結合を付与する抗ＣＤ２００免疫グロブリンの任意の断片からなる群からさらに選択することができる。上述の抗体または抗原結合性断片のいずれも、ポリマーまたはポリペプチドなどの分子に結合することができる。ポリマーは、いくつかの実施形態では、ポリ（エチレン）グリコール（ＰＥＧ）とすることができる。
【００２３】
体液性免疫応答の阻害として、例えば、以下の応答のうちの任意の１つまたは複数の阻害を挙げることができる：ａ）ＡＰＣによる抗原提示；ｂ）ヘルパー（ＣＤ４＋）Ｔ細胞の活性化；ｃ）ヘルパー（ＣＤ４＋）Ｔ細胞の増殖；ｄ）Ｂ細胞の分化；ｅ）Ｂ細胞の増殖；およびｆ）抗体のＢ細胞産生。ある特定の実施形態では、この方法は、Ｂ細胞抗体の産生の減少をもたらし、ここで抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＧ１、およびＩｇＧ２ａ免疫グロブリンから選択される。
【００２４】
ある特定の実施形態では、本開示は、体液性免疫応答を阻害する必要のある対象における、体液性免疫応答の阻害方法であって、対象に有効量の抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片を投与するステップを含み、対象に免疫調節剤または免疫抑制剤を投与するステップをさらに含む方法を提供する。免疫調節剤または免疫抑制剤は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞とＢ細胞の両方、または別の免疫細胞を標的とすることができる。ある特定の実施形態では、免疫調節剤または免疫抑制剤はカルシニュリン阻害剤である。さらなる実施形態では、カルシニュリン阻害剤は、タクロリムスおよびシクロスポリンＡから選択される。
【００２５】
他の実施形態では、抗ＣＤ２００抗体またはその断片と組み合わせて投与される免疫調節剤または免疫抑制剤は、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、シトキサン、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチル、６−メルカプトプリン、コルチコステロイド、非ステロイド性抗炎症薬、シロリムス（ラパマイシン）、およびタクロリムス（ＦＫ−５０６）からなる群から選択される。代替の実施形態では、免疫調節剤または免疫抑制剤は、ムロモナブ−ＣＤ３、アレムツズマブ、バシリキシマブ、ダクリズマブ、リツキシマブ、抗胸腺細胞グロブリン、およびＩＶＩｇからなる群から選択される抗体である。ある特定の実施形態では、免疫調節剤または免疫抑制剤は、補体経路の阻害剤ではない（例えば作用剤は、抗体（抗Ｃ５抗体など）または補体活性を阻害する分子ではない）。
【００２６】
本明細書に記載される方法のある特定の実施形態では、体液性の免疫抑制を必要とする対象は哺乳動物であり、さらなる実施形態では、対象はヒト対象である。特定の実施形態では、対象は移植を受けたか、受けることになる。
【００２７】
ある特定の実施形態では、本開示は、循環Ｂ細胞数を減少させる必要のある対象における、循環Ｂ細胞の減少方法であって、対象に、（ａ）抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片、および（ｂ）免疫調節剤または免疫抑制剤を投与するステップを含む方法に関する。追加の実施形態では、本開示は、活性化されたＣＤ２００陽性Ｔ細胞の数を減少させる必要のある対象における、活性化されたＣＤ２００陽性Ｔ細胞の数の減少方法であって、対象に、（ａ）抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片、および（ｂ）免疫調節剤または免疫抑制剤を投与するステップを含む方法に関する。さらに、いくつかの実施形態は、Ｂ細胞活性化を阻害する必要のある対象における、Ｂ細胞活性化の阻害方法であって、対象に、（ａ）抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片、および（ｂ）免疫調節剤または免疫抑制剤を投与するステップを含む方法に関する。例えば、抗ＣＤ２００抗体または抗原結合性断片および作用剤は、対象中の循環免疫グロブリンの量を減少させるのに十分な量で投与することができる。上記実施形態のいずれにおいても、対象は、霊長類またはヒト対象などの哺乳動物とすることができる。場合により、対象は、細胞、組織、または臓器移植を受けたか、受けることになる。
【００２８】
ある特定の態様では、本開示は、移植片拒絶を阻害する必要のある移植片レシピエントにおける、移植片拒絶の阻害方法であって、レシピエントに、治療有効量の（ａ）抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片、および（ｂ）免疫調節剤または免疫抑制剤を投与するステップを含む方法に関する。治療有効量は、組合せが、移植片拒絶を阻害することにおいて有効であるような、ａ）抗ＣＤ２００抗体、およびｂ）免疫調節剤または免疫抑制剤の組合せの量を指すことができる。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト抗体またはその抗原結合性断片、ヒト化抗体またはその抗原結合性断片、霊長類化抗体またはその抗原結合性断片、キメラ抗体またはその抗原結合性断片、マウス抗体またはその抗原結合性断片、および脱免疫化抗体またはその抗原結合性断片からなる群から選択される。抗原結合性断片は、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、Ｆｖ、ドメイン抗体、およびＣＤ２００に特異的な結合を付与する抗ＣＤ２００免疫グロブリンの任意の断片からなる群からさらに選択することができる。上述の抗体または抗原結合性断片のいずれも、ポリマーまたはポリペプチドなどの分子に結合することができる。ポリマーは、いくつかの実施形態では、ポリ（エチレン）グリコール（ＰＥＧ）とすることができる。
【００２９】
移植片拒絶を阻害する、ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片、および免疫調節剤または免疫抑制剤は、移植前に投与される。他の実施形態では、抗体および作用剤は、移植時に投与される。他の実施形態では、抗体および作用剤は、移植後に投与される。いくつかの実施形態では、移植片拒絶は、移植された細胞、組織、または臓器の急性の体液性拒絶反応である。他の実施形態では、移植片拒絶は、移植された細胞、組織、または臓器の慢性の体液性拒絶反応である。
【００３０】
本開示のある特定の実施形態では、移植片レシピエントは、造血細胞もしくは骨髄移植体、膵島細胞の同種移植体、または心臓移植体、腎臓−膵臓移植体、腎臓移植体、肝臓移植体、肺移植体、および膵臓移植体からなる群から選択される固体臓器移植体のレシピエントである。移植片の追加の例として、それだけに限らないが、同種移植された細胞、組織、または臓器、例えば脈管組織、眼、角膜、水晶体、皮膚、骨髄、筋肉、結合組織、消化管組織、神経組織、骨、幹細胞、軟骨、肝実質細胞、または造血細胞が挙げられる。
【００３１】
移植片拒絶を阻害する、いくつかの実施形態では、免疫調節剤または免疫抑制剤は、Ｔ細胞またはＢ細胞、またはＴ細胞とＢ細胞の両方を標的とする作用剤である。ある特定の実施形態では、作用剤は、補体経路を標的にせず、かつ／または補体媒介免疫応答を阻害しない。特定の実施形態では、免疫調節剤または免疫抑制剤は、カルシニュリン阻害剤である。さらなる実施形態では、カルシニュリン阻害剤は、タクロリムスおよびシクロスポリンＡから選択される。
【００３２】
移植片拒絶を阻害する、追加の実施形態では、免疫調節剤または免疫抑制剤は、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチル、６−メルカプトプリン、コルチコステロイド、非ステロイド性抗炎症薬、シロリムス（ラパマイシン）、およびタクロリムス（ＦＫ−５０６）からなる群から選択される。代替の実施形態では、免疫調節剤または免疫抑制剤は、ムロモナブ−ＣＤ３、アレムツズマブ、バシリキシマブ、ダクリズマブ、リツキシマブ、抗胸腺細胞グロブリン、およびＩＶＩｇからなる群から選択される抗体である。
【００３３】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２００抗体および免疫調節剤または免疫抑制剤を投与するステップを含む方法は、移植片レシピエントにおける体液性免疫応答の阻害をもたらす。例えば、ある特定の実施形態では、この方法は、抗ドナー抗体の産生の減少をもたらす。抗ドナー抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＧ１、およびＩｇＧ２ａ免疫グロブリンから選択することができる。いくつかの実施形態では、移植片レシピエントは、細胞、組織または臓器の同種または異種移植の急性の移植片拒絶を示し、または被る。他の実施形態では、移植片レシピエントは、細胞、組織または臓器の同種または異種移植の慢性の移植片拒絶を示し、または被る。
【００３４】
他の実施形態では、抗ＣＤ２００抗体および免疫調節剤または免疫抑制剤を投与するステップを含む方法は、移植片レシピエントにおける細胞性免疫応答の阻害をもたらす。例えば、ある特定の実施形態では、この方法は、レシピエントのリンパ組織中のＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の産生の減少をもたらす。いくつかの実施形態では、移植片レシピエントは、細胞、組織または臓器の同種または異種移植の急性の移植片拒絶を示し、または被る。他の実施形態では、移植片レシピエントは、細胞、組織または臓器の同種または異種移植の慢性の移植片拒絶を示し、または被る。
【００３５】
ある特定の態様では、本開示は、移植片拒絶を治療または防止する必要のある移植片レシピエントにおける、移植片拒絶の治療または防止方法であって、レシピエントに、治療有効量の（ａ）抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片、および（ｂ）免疫調節剤または免疫抑制剤を投与するステップを含む方法に関する。さらなる実施形態では、本開示は、移植片レシピエントにおける移植片生着の促進または延長方法であって、移植片レシピエントに、治療有効量の（ａ）抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片、および（ｂ）免疫調節剤または免疫抑制剤を投与するステップを含む方法に関する。抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト抗体またはその抗原結合性断片、ヒト化抗体またはその抗原結合性断片、霊長類化抗体またはその抗原結合性断片、キメラ抗体またはその抗原結合性断片、マウス抗体またはその抗原結合性断片、および脱免疫化抗体またはその抗原結合性断片の中から選択することができる。抗原結合性断片は、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、Ｆｖ、ドメイン抗体、およびＣＤ２００に特異的な結合を付与する抗ＣＤ２００免疫グロブリンの任意の断片の中からさらに選択することができる。
【００３６】
さらなる実施形態では、本開示の移植片生着の延長または促進方法は、対照レシピエントにおいて観察される移植片生着と比較して、レシピエントにおける移植片生着を、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、または少なくとも約５０％増大させる。対照レシピエントは、例えば、移植後治療を受けない、または移植後に単剤治療を受ける移植片レシピエントとすることができる。
【００３７】
ある特定の実施形態では、移植片生着の促進方法は、長期間の移植片生着を促進し、この長期間の移植片生着は、移植後少なくとも約６カ月、移植後少なくとも約１年；移植後少なくとも約５年；移植後少なくとも約７．５年；および移植後少なくとも約１０年の中から選択される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される療法は、移植片の適応を促進し、移植片は、レシピエントの残りの生存期間生存する。
【００３８】
本開示の実施形態のいずれにおいても、移植片レシピエントは、非ヒト霊長類移植片レシピエントなどの霊長類移植片レシピエントとすることができる。さらなる実施形態では、移植片レシピエントはヒト移植片レシピエントである。
【００３９】
本明細書に記載される実施形態のいずれにおいても、抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片は、対象または移植片レシピエントに全身的に投与することができる。あるいは、抗体またはその抗原結合性断片は、対象または移植片レシピエントに局所的に投与することができる。
【００４０】
抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片、および免疫調節剤または免疫抑制剤の組合せを含む実施形態では、抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片、および免疫調節剤または免疫抑制剤は順次投与される。他の実施形態では、抗体またはその断片、および作用剤は、同時に投与される。
【００４１】
本願は、任意の前述の態様および実施形態の組合せを企図する。本明細書に引用されたすべての参考文献および文書は、その全体が本明細書に組み込まれている。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
免疫応答を阻害する必要のある対象における、免疫応答の阻害方法であって、前記対象に、有効量のｉ）ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの相互作用を阻害する作用剤、およびｉｉ）免疫抑制薬または免疫調節薬を投与するステップを含む方法。
（項目２）
前記免疫応答が体液性応答である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記免疫応答が抗体媒介応答である、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記作用剤がエフェクター機能を有する、項目２に記載の方法。
（項目５）
前記作用剤がエフェクター機能をまったく有していない、項目２に記載の方法。
（項目６）
前記作用剤が抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片である、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記作用剤が、可溶性ＣＤ２００Ｒまたは非アゴニスト性可溶性ＣＤ２００である、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記免疫抑制薬がシクロスポリンＡまたはラパマイシンである、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片が、ヒト抗体またはその抗原結合性断片、ヒト化抗体またはその抗原結合性断片、霊長類化抗体またはその抗原結合性断片、キメラ抗体またはその抗原結合性断片、マウス抗体またはその抗原結合性断片、および脱免疫化抗体またはその抗原結合性断片からなる群から選択される、項目３に記載の方法。
（項目１０）
前記抗原結合性断片が、単鎖抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、Ｆｖ、ドメイン抗体、およびＣＤ２００に特異的な結合を付与する抗ＣＤ２００免疫グロブリンの任意の断片からなる群から選択される、項目３に記載の方法。
（項目１１）
前記免疫調節薬または前記免疫抑制薬がカルシニュリン阻害剤である、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記カルシニュリン阻害剤が、タクロリムスおよびシクロスポリンＡからなる群から選択される、項目１１に記載の方法。
（項目１３）
前記免疫調節薬または前記免疫抑制薬が、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチル、非ステロイド性抗炎症薬、シロリムス（ラパマイシン）、およびタクロリムス（ＦＫ−５０６）からなる群から選択される、項目１に記載の方法。
（項目１４）
前記免疫調節薬または前記免疫抑制薬が、ムロモナブ−ＣＤ３、アレムツズマブ、バシリキシマブ、ダクリズマブ、リツキシマブ、および抗胸腺細胞グロブリンからなる群から選択される抗体である、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記対象がヒトである、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記対象が、細胞移植体、組織移植体または臓器移植体を受けたか、受けることになる項目１５に記載の方法。
（項目１７）
移植片拒絶を防止し、または移植片生着を促進する、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記対象に、前記同種移植片を施す前に前記作用剤および前記薬を投与するステップを含む、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記作用剤が、ｉ）前記薬の前、ｉｉ）前記薬に引き続いて、またはｉｉｉ）前記薬と同時に投与される、項目１に記載の方法。
（項目２０）
前記同種移植片の拒絶反応エピソードの間に前記作用剤を投与するステップを含む、項目１６に記載の方法。
（項目２１）
前記移植片拒絶が、移植された細胞、組織、または臓器の急性または慢性の体液性拒絶反応である、項目１７に記載の方法。
（項目２２）
造血細胞移植体もしくは骨髄移植体、膵島細胞の同種移植体、または心臓、腎臓−膵臓、腎臓、肝臓、肺、および膵臓からなる群から選択される固体臓器移植体のレシピエントである、項目１６に記載の方法。
（項目２３）
抗ドナー抗体の産生の減少をもたらす、項目１に記載の方法。
（項目２４）
前記移植片拒絶が、細胞、組織または臓器の同種移植または異種移植を受けた移植片レシピエントにおける急性移植片拒絶である、項目１７に記載の方法。
（項目２５）
前記移植片拒絶が、細胞、組織または臓器の同種移植または異種移植を受けた移植片レシピエントにおける慢性移植片拒絶である、項目１７に記載の方法。
（項目２６）
長期間の移植片生着を促進し、前記長期間の移植片生着が、
（ａ）移植後少なくとも６カ月；
（ｂ）移植後少なくとも１年；および
（ｃ）移植後少なくとも５年
からなる群から選択される、項目１６に記載の方法。
（項目２７）
前記移植片の適応を促進する、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記対象が、抗体媒介炎症疾患または自己免疫疾患を有する、項目１に記載の方法。
（項目２９）
前記自己免疫疾患が自己免疫性溶血性貧血である、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記作用剤が全身的に投与される、項目１に記載の方法。
（項目３１）
前記作用剤が局所的に投与される、項目１に記載の方法。
（項目３２）
前記免疫応答が一次応答である、項目１に記載の方法。
（項目３３）
前記免疫応答が二次応答である、項目１に記載の方法。
（項目３４）
対象に投与される免疫抑制薬または免疫調節薬の有効量を構成するものを低減する方法であって、前記対象に、ｉ）前記免疫抑制薬または前記免疫調節薬、およびｉｉ）ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの相互作用を阻害する作用剤を投与するステップを含み、
前記作用剤を伴わずに前記薬を投与するステップと比較して、免疫抑制または免疫調節を生じさせるために、より少ない前記薬が必要である方法。
（項目３５）
前記対象が、同種移植片を受けたか、受けることになる、項目３４に記載の方法。
（項目３６）
前記対象が、自己免疫疾患または抗体媒介炎症疾患を有する、項目３４に記載の方法。
（項目３７）
前記薬がシクロスポリンＡまたはラパマイシンである、項目３４に記載の方法。
（項目３８）
拒絶反応エピソードの間の、同種移植片レシピエントにおける同種移植片の拒絶反応の阻害方法であって、前記同種移植片レシピエントに、ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの相互作用を阻害する、有効量の作用剤を投与するステップを含み、前記同種移植片の拒絶反応が阻害される方法。
（項目３９）
前記作用剤が抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片である、項目３８に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１Ａ】抗体ｃｈＣ２ａＢ７−ｈＧ１の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号１、２、３、４、５および６）。図１Ｃは、配列番号３（核酸配列）および配列番号１（アミノ酸配列）を示す。概略図に示すように、配列番号３は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図１Ｆは、配列番号６（核酸配列）および配列番号４（アミノ酸配列）を示す。配列番号５（図１Ｅに示す）は、配列番号４（図１Ｄに示す）をコードする。
【図１Ｂ】抗体ｃｈＣ２ａＢ７−ｈＧ１の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号１、２、３、４、５および６）。図１Ｃは、配列番号３（核酸配列）および配列番号１（アミノ酸配列）を示す。概略図に示すように、配列番号３は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図１Ｆは、配列番号６（核酸配列）および配列番号４（アミノ酸配列）を示す。配列番号５（図１Ｅに示す）は、配列番号４（図１Ｄに示す）をコードする。
【図１Ｃ】抗体ｃｈＣ２ａＢ７−ｈＧ１の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号１、２、３、４、５および６）。図１Ｃは、配列番号３（核酸配列）および配列番号１（アミノ酸配列）を示す。概略図に示すように、配列番号３は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図１Ｆは、配列番号６（核酸配列）および配列番号４（アミノ酸配列）を示す。配列番号５（図１Ｅに示す）は、配列番号４（図１Ｄに示す）をコードする。
【図１Ｄ】抗体ｃｈＣ２ａＢ７−ｈＧ１の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号１、２、３、４、５および６）。図１Ｃは、配列番号３（核酸配列）および配列番号１（アミノ酸配列）を示す。概略図に示すように、配列番号３は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図１Ｆは、配列番号６（核酸配列）および配列番号４（アミノ酸配列）を示す。配列番号５（図１Ｅに示す）は、配列番号４（図１Ｄに示す）をコードする。
【図１Ｅ】抗体ｃｈＣ２ａＢ７−ｈＧ１の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号１、２、３、４、５および６）。図１Ｃは、配列番号３（核酸配列）および配列番号１（アミノ酸配列）を示す。概略図に示すように、配列番号３は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図１Ｆは、配列番号６（核酸配列）および配列番号４（アミノ酸配列）を示す。配列番号５（図１Ｅに示す）は、配列番号４（図１Ｄに示す）をコードする。
【図１Ｆ】抗体ｃｈＣ２ａＢ７−ｈＧ１の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号１、２、３、４、５および６）。図１Ｃは、配列番号３（核酸配列）および配列番号１（アミノ酸配列）を示す。概略図に示すように、配列番号３は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図１Ｆは、配列番号６（核酸配列）および配列番号４（アミノ酸配列）を示す。配列番号５（図１Ｅに示す）は、配列番号４（図１Ｄに示す）をコードする。
【図２Ａ】抗体ｃｈＣ２ａＢ７−ｈＧ２Ｇ４の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３および１４）。図２Ｃは、配列番号１０（核酸配列）および配列番号９（アミノ酸配列）を示す。配列番号９は、配列番号７のアミノ酸１〜３３７に相当する。概略図に示すように、配列番号１０は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図２Ｆは、配列番号１４（核酸配列）および配列番号１３（アミノ酸配列）を示す。配列番号１２（図２Ｅに示す）は、配列番号１１（図２Ｄを示す）をコードする。
【図２Ｂ】抗体ｃｈＣ２ａＢ７−ｈＧ２Ｇ４の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３および１４）。図２Ｃは、配列番号１０（核酸配列）および配列番号９（アミノ酸配列）を示す。配列番号９は、配列番号７のアミノ酸１〜３３７に相当する。概略図に示すように、配列番号１０は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図２Ｆは、配列番号１４（核酸配列）および配列番号１３（アミノ酸配列）を示す。配列番号１２（図２Ｅに示す）は、配列番号１１（図２Ｄを示す）をコードする。
【図２Ｃ】抗体ｃｈＣ２ａＢ７−ｈＧ２Ｇ４の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３および１４）。図２Ｃは、配列番号１０（核酸配列）および配列番号９（アミノ酸配列）を示す。配列番号９は、配列番号７のアミノ酸１〜３３７に相当する。概略図に示すように、配列番号１０は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図２Ｆは、配列番号１４（核酸配列）および配列番号１３（アミノ酸配列）を示す。配列番号１２（図２Ｅに示す）は、配列番号１１（図２Ｄを示す）をコードする。
【図２Ｄ】抗体ｃｈＣ２ａＢ７−ｈＧ２Ｇ４の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３および１４）。図２Ｃは、配列番号１０（核酸配列）および配列番号９（アミノ酸配列）を示す。配列番号９は、配列番号７のアミノ酸１〜３３７に相当する。概略図に示すように、配列番号１０は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図２Ｆは、配列番号１４（核酸配列）および配列番号１３（アミノ酸配列）を示す。配列番号１２（図２Ｅに示す）は、配列番号１１（図２Ｄを示す）をコードする。
【図２Ｅ】抗体ｃｈＣ２ａＢ７−ｈＧ２Ｇ４の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３および１４）。図２Ｃは、配列番号１０（核酸配列）および配列番号９（アミノ酸配列）を示す。配列番号９は、配列番号７のアミノ酸１〜３３７に相当する。概略図に示すように、配列番号１０は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図２Ｆは、配列番号１４（核酸配列）および配列番号１３（アミノ酸配列）を示す。配列番号１２（図２Ｅに示す）は、配列番号１１（図２Ｄを示す）をコードする。
【図２Ｆ】抗体ｃｈＣ２ａＢ７−ｈＧ２Ｇ４の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号７、８、９、１０、１１、１２、１３および１４）。図２Ｃは、配列番号１０（核酸配列）および配列番号９（アミノ酸配列）を示す。配列番号９は、配列番号７のアミノ酸１〜３３７に相当する。概略図に示すように、配列番号１０は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図２Ｆは、配列番号１４（核酸配列）および配列番号１３（アミノ酸配列）を示す。配列番号１２（図２Ｅに示す）は、配列番号１１（図２Ｄを示す）をコードする。
【図３Ａ】抗体ｈＢ７Ｖ３Ｖ２−ｈＧ１の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号１５、１６、１７、１８、１９および２０）。図３Ｃは、配列番号１７（核酸配列）および配列番号１５（アミノ酸配列）を示す。図３Ｆは、配列番号２０（核酸配列）および配列番号１８（アミノ酸配列）を示す。配列番号１９（図３Ｅに示す）は、配列番号１８（図３Ｄに示す）をコードする。
【図３Ｂ】抗体ｈＢ７Ｖ３Ｖ２−ｈＧ１の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号１５、１６、１７、１８、１９および２０）。図３Ｃは、配列番号１７（核酸配列）および配列番号１５（アミノ酸配列）を示す。図３Ｆは、配列番号２０（核酸配列）および配列番号１８（アミノ酸配列）を示す。配列番号１９（図３Ｅに示す）は、配列番号１８（図３Ｄに示す）をコードする。
【図３Ｃ】抗体ｈＢ７Ｖ３Ｖ２−ｈＧ１の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号１５、１６、１７、１８、１９および２０）。図３Ｃは、配列番号１７（核酸配列）および配列番号１５（アミノ酸配列）を示す。図３Ｆは、配列番号２０（核酸配列）および配列番号１８（アミノ酸配列）を示す。配列番号１９（図３Ｅに示す）は、配列番号１８（図３Ｄに示す）をコードする。
【図３Ｄ】抗体ｈＢ７Ｖ３Ｖ２−ｈＧ１の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号１５、１６、１７、１８、１９および２０）。図３Ｃは、配列番号１７（核酸配列）および配列番号１５（アミノ酸配列）を示す。図３Ｆは、配列番号２０（核酸配列）および配列番号１８（アミノ酸配列）を示す。配列番号１９（図３Ｅに示す）は、配列番号１８（図３Ｄに示す）をコードする。
【図３Ｅ】抗体ｈＢ７Ｖ３Ｖ２−ｈＧ１の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号１５、１６、１７、１８、１９および２０）。図３Ｃは、配列番号１７（核酸配列）および配列番号１５（アミノ酸配列）を示す。図３Ｆは、配列番号２０（核酸配列）および配列番号１８（アミノ酸配列）を示す。配列番号１９（図３Ｅに示す）は、配列番号１８（図３Ｄに示す）をコードする。
【図３Ｆ】抗体ｈＢ７Ｖ３Ｖ２−ｈＧ１の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号１５、１６、１７、１８、１９および２０）。図３Ｃは、配列番号１７（核酸配列）および配列番号１５（アミノ酸配列）を示す。図３Ｆは、配列番号２０（核酸配列）および配列番号１８（アミノ酸配列）を示す。配列番号１９（図３Ｅに示す）は、配列番号１８（図３Ｄに示す）をコードする。
【図４Ａ】抗体ｈＢ７Ｖ３Ｖ２−ｈＧ２Ｇ４の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号２１、２２、２３、２４、２５および２６）。図４Ｃは、配列番号２３（核酸配列）および配列番号２１（アミノ酸配列）を示す。概略図に示すように、配列番号２３は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図４Ｆは、配列番号２６（核酸配列）および配列番号２４（アミノ酸配列）を示す。配列番号２５（図４Ｅに示す）は、配列番号２４（図４Ｄに示す）をコードする。
【図４Ｂ】抗体ｈＢ７Ｖ３Ｖ２−ｈＧ２Ｇ４の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号２１、２２、２３、２４、２５および２６）。図４Ｃは、配列番号２３（核酸配列）および配列番号２１（アミノ酸配列）を示す。概略図に示すように、配列番号２３は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図４Ｆは、配列番号２６（核酸配列）および配列番号２４（アミノ酸配列）を示す。配列番号２５（図４Ｅに示す）は、配列番号２４（図４Ｄに示す）をコードする。
【図４Ｃ】抗体ｈＢ７Ｖ３Ｖ２−ｈＧ２Ｇ４の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号２１、２２、２３、２４、２５および２６）。図４Ｃは、配列番号２３（核酸配列）および配列番号２１（アミノ酸配列）を示す。概略図に示すように、配列番号２３は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図４Ｆは、配列番号２６（核酸配列）および配列番号２４（アミノ酸配列）を示す。配列番号２５（図４Ｅに示す）は、配列番号２４（図４Ｄに示す）をコードする。
【図４Ｄ】抗体ｈＢ７Ｖ３Ｖ２−ｈＧ２Ｇ４の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号２１、２２、２３、２４、２５および２６）。図４Ｃは、配列番号２３（核酸配列）および配列番号２１（アミノ酸配列）を示す。概略図に示すように、配列番号２３は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図４Ｆは、配列番号２６（核酸配列）および配列番号２４（アミノ酸配列）を示す。配列番号２５（図４Ｅに示す）は、配列番号２４（図４Ｄに示す）をコードする。
【図４Ｅ】抗体ｈＢ７Ｖ３Ｖ２−ｈＧ２Ｇ４の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号２１、２２、２３、２４、２５および２６）。図４Ｃは、配列番号２３（核酸配列）および配列番号２１（アミノ酸配列）を示す。概略図に示すように、配列番号２３は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図４Ｆは、配列番号２６（核酸配列）および配列番号２４（アミノ酸配列）を示す。配列番号２５（図４Ｅに示す）は、配列番号２４（図４Ｄに示す）をコードする。
【図４Ｆ】抗体ｈＢ７Ｖ３Ｖ２−ｈＧ２Ｇ４の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列ならびにヌクレオチド配列を示す（配列番号２１、２２、２３、２４、２５および２６）。図４Ｃは、配列番号２３（核酸配列）および配列番号２１（アミノ酸配列）を示す。概略図に示すように、配列番号２３は連続しているが、イントロンを含む対応するヌクレオチド配列で示す。図４Ｆは、配列番号２６（核酸配列）および配列番号２４（アミノ酸配列）を示す。配列番号２５（図４Ｅに示す）は、配列番号２４（図４Ｄに示す）をコードする。
【図５】活性化Ｔ細胞上のＣＤ２００発現のフローサイトメトリー分析を示す。ＣＤ３＋ヒト細胞を、ｍＯＫＴ３を用いて活性化し、採集し、洗浄し、ヒトＣＤ２５、ＣＤ２００、ＣＤ５、ＣＤ４およびＣＤ８に特異的な、記載される蛍光色素コンジュゲート抗体での染色に供した。細胞を洗浄し、免疫蛍光について、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェアを用いるＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメータで分析した。ヒトＴ細胞の活性化は、ＣＤ２００発現の劇的な上方制御をもたらす。
【図６】活性化Ｔ細胞のＡＤＣＣにおける抗ＣＤ２００抗体の影響を示す。ＣＤ３＋ヒトＴ細胞を、１０μｇ／ｍＬの固定化（プレートを被覆する）ｍＯＫＴ３を用いて７２時間刺激した。活性化Ｔ細胞を、次いで、標的として用いるためにクロム化し、エフェクター細胞としての精製自己ＣＤ５６＋（ＮＫ）細胞とインキュベートした。細胞を、３７℃にて４時間、２５：１（Ａ）または１０：１（Ｂ）のエフェクター：標的細胞の比で、エフェクター機能を媒介できる（Ｖ３Ｖ２−Ｇ１）か、またはエフェクター機能を欠如するように操作された（Ｖ３Ｖ２−Ｇ２Ｇ４）ヒト化抗ＣＤ２００抗体の存否で同時インキュベーションした。データは、特異的溶解パーセントで表す。エフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体は、活性化Ｔ細胞標的のＡＤＣＣを効果的に媒介したが、エフェクター機能を有さない抗ＣＤ２００抗体は、ＡＤＣＣの媒介ができなかった。
【図７Ａ】Ｔ細胞の阻害物質（シクロスポリンＡ）と組み合わせて投与した抗ＣＤ２００抗体が、抗体生成の著しい低減または体液性免疫応答の阻害を、マウス心臓同種移植モデルにおいて導くことを示す。図７Ａは、種々の免疫調節処置の後の心臓同種移植片レシピエントにおける循環抗ドナーＩｇＧ抗体の相対的レベルを示す。図７Ｂは、種々の免疫調節処置の後の心臓同種移植片レシピエントにおける循環抗ドナーＩｇＭ抗体の相対的レベルを示す。ＭＦＩは、平均蛍光強度である。
【図７Ｂ】Ｔ細胞の阻害物質（シクロスポリンＡ）と組み合わせて投与した抗ＣＤ２００抗体が、抗体生成の著しい低減または体液性免疫応答の阻害を、マウス心臓同種移植モデルにおいて導くことを示す。図７Ａは、種々の免疫調節処置の後の心臓同種移植片レシピエントにおける循環抗ドナーＩｇＧ抗体の相対的レベルを示す。図７Ｂは、種々の免疫調節処置の後の心臓同種移植片レシピエントにおける循環抗ドナーＩｇＭ抗体の相対的レベルを示す。ＭＦＩは、平均蛍光強度である。
【図８】抗ＣＤ２００抗体およびシクロスポリンＡを含む種々の免疫調節処置の後のマウス心臓同種移植片レシピエントにおける脾臓ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルを示す。移植片レシピエントからの脾臓細胞を、フローサイトメトリーにより分析した。
【図９Ａ】抗ＣＤ２００抗体およびシクロスポリンＡでの処置の後のマウス心臓同種移植片レシピエントでのＣＤ３ＣＤ２００；ＣＤ３ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１９ＣＤ２００、ＣＤ１９ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１１ｃＣＤ２００およびＣＤ１１ｃＣＤ２００Ｒ陽性細胞のレベルを示す。
【図９Ｂ】抗ＣＤ２００抗体およびシクロスポリンＡでの処置の後のマウス心臓同種移植片レシピエントでのＣＤ３ＣＤ２００；ＣＤ３ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１９ＣＤ２００、ＣＤ１９ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１１ｃＣＤ２００およびＣＤ１１ｃＣＤ２００Ｒ陽性細胞のレベルを示す。
【図９Ｃ】抗ＣＤ２００抗体およびシクロスポリンＡでの処置の後のマウス心臓同種移植片レシピエントでのＣＤ３ＣＤ２００；ＣＤ３ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１９ＣＤ２００、ＣＤ１９ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１１ｃＣＤ２００およびＣＤ１１ｃＣＤ２００Ｒ陽性細胞のレベルを示す。
【図１０】ＯＸ９０ＮＥ（配列番号２７）およびＯＸ９０ｍＧ２ａ（配列番号２８）の重鎖の配列を示す。２つの分子間の４アミノ酸の違いを太字で強調する（アミノ酸残基２３６、３１９、３２１および３２３）。それぞれの可変部分は、アミノ酸残基１〜１１８を含む。それぞれの定常領域は、アミノ酸残基１１９〜４４８を含む。
【図１１】ＯＸ９０抗体が、それらがＣＤ２００Ｒ１受容体へのＣＤ２００の結合を遮断する点で遮断抗体であることを示す。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
（詳細な説明）
Ｉ．概要
Ａ．移植体または移植片の拒絶反応
超急性拒絶反応は、移植後数分から数時間以内に起こり、移植された組織抗原に対する、予め形成された抗体によるものである。これは、移植片脈管構造の出血および血栓性閉塞を特徴とする。抗体の内皮への結合は、補体を活性化し、抗体および補体は、移植片内皮のいくつかの変化を誘発し、これは血管内血栓症を促進し、血管閉塞に導き、移植された臓器の非可逆性虚血性障害をもたらす（Ａｂｂａｓら、２０００年  Ｃｅｌｌｕｌａｒ
ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（４版）、３６３〜３８３頁（Ｗ．Ｂ．  Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ））。超急性拒絶反応は、既存のＩｇＭ同種抗体、例えば、赤血球上に発現されるＡＢＯ血液型抗原に対する抗体によって媒介されることが多い。自然抗体によって媒介されるこの型の拒絶反応は、異種移植体の拒絶反応の主な理由である。自然ＩｇＭ抗体による超急性拒絶反応は、同種移植ではもはや重要な問題ではなく、これは、同種移植は、ドナーとレシピエントのＡＢＯ型をマッチさせるように通常選択されるためである。ＡＢＯマッチ同種移植片の超急性の拒絶反応は依然として起こる場合があり、外来のＭＨＣ分子などのタンパク質同種抗原、または血管内皮細胞上に発現されるあまり明確でない同種抗原に対するＩｇＧ抗体によって通常媒介される。そのようなＩｇＧ抗体は、例えば、輸血、以前の移植、または複数の妊娠を通じた同種抗原への以前の曝露の結果として生じる場合がある。
【００４４】
急性の拒絶反応は、Ｔ細胞、マクロファージ、および抗体によって媒介される、脈管および実質損傷のプロセスであり、これは通常、移植して第１週後に始まる（Ａｂｂａｓら、上記）。Ｔリンパ球は、血管内皮細胞および実質細胞上に存在するＭＨＣ分子を含めた同種抗原に応答することによって、急性拒絶反応において中心的な役割を果たす。活性化されたＴ細胞は、移植片細胞の直接溶解を引き起こし、あるいは炎症細胞を動員および活性化するサイトカインを産生し、これは、壊死を引き起こす。ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞はともに、急性拒絶反応の一因となり得る。移植片中の同種異系細胞の破壊は非常に特異的であり、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球死滅の特徴である。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、移植片中でサイトカインを分泌し、遅延型の過敏様反応を誘発することによって、急性移植片拒絶反応を媒介することにおいて重要となり得る。いくつかの証拠は、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、急性拒絶反応を媒介するのに十分であることを示す（Ａｂｂａｓら、上記）。抗体は、産生される抗体が血管壁に結合し、補体を活性化する場合、移植片レシピエントが、血管壁抗原に対する体液性免疫応答を開始した後に、急性拒絶反応を媒介する場合もある（Ａｂｂａｓら、上記）。
【００４５】
慢性拒絶反応は、長期にわたって起こる、正常な臓器構造の喪失を伴う線維症を特徴とする。慢性拒絶反応の病因は、急性拒絶反応の病因より、よく理解されていない。移植片動脈閉塞は、内膜平滑筋細胞の増殖の結果として起こり得る（Ａｂｂａｓら、上記）。このプロセスは、加速化アテローム硬化症または移植片アテローム硬化症と呼ばれ、移植して６カ月から１年以内に任意の血管新生した臓器移植体に発症する場合がある。
【００４６】
同種移植体は、Ｔ細胞の活性化によって部分的に拒絶される。移植体レシピエントは、同種移植片中の外来抗原のＣＤ４＋Ｔ細胞認識後に、拒絶応答を開始する。これらの抗原は、クラスＩおよびクラスＩＩの主要組織適合複合体（ＭＨＣ）分子の両方が存在するＭＨＣによってコードされる。ヒトにおいて、クラスＩ  ＭＨＣ分子は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、およびＨＬＡ−Ｃである。ヒトにおけるクラスＩＩ  ＭＨＣ分子は、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＱおよびＨＬＡ−ＤＰと呼ばれる。マウスにおいて、クラスＩ  ＭＨＣ分子は、Ｈ−２Ｋ、Ｈ−２ＤおよびＨ−２Ｌであり、クラスＩＩ  ＭＨＣ分子は、Ｉ−ＡおよびＩ−Ｅである。ＣＤ４＋Ｔ細胞が、処理された、または無傷の外来ＭＨＣ抗原を結合する場合、これらは活性化され、クローン増殖を起こす。活性化されたＴ細胞は、単球／マクロファージ、Ｂ細胞および細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を助長する。活性化された単球／マクロファージは、組織損傷をもたらす作用物質を放出し、Ｂ細胞は、補体媒介移植片破壊に導く同種抗体を産生し、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、アポトーシスおよび細胞溶解の誘発を介して、抗原特異的な様式で移植片細胞を死滅させる。
【００４７】
移植片拒絶反応における体液性免疫の重要性は、移植片レシピエントが移植前に抗ドナーＨＬＡ抗体を有し、抗体抑制の有効な治療レジメンの非存在下で移植片の急速な破壊をもたらす、超急性拒絶反応に限られていると最初に考えられていた。最近、液性免疫は、急性および慢性の両方の拒絶反応を媒介する重要な要因でもあることが明らかになった。例えば、臨床的な観察により、クラスＩまたはクラスＩＩ抗ＨＬＡ同種抗体（「抗ＭＨＣ同種抗体」とも呼ばれる）を発生させることができる患者における移植片生着は、そのような抗体を発生させることができない患者における移植片生着と比較して低減されたことが実証された。臨床的および実験的なデータも、他のドナー特異的な同種抗体および自己抗体は、拒絶反応の極めて重要なメディエーターであることを示す。同種移植片拒絶反応におけるドナー特異的抗体についての役割を支持する証拠の概説については、Ｒｉｆｌｅら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、２００５年  ７９巻：Ｓ１４〜Ｓ１８頁を参照されたい。
【００４８】
Ｂ．免疫抑制剤
移植が成功するためには、拒絶反応のいくつかの機序が克服されなければならない。したがって、多数の手法が、拒絶反応を防止または阻害することに利用される。移植片拒絶を阻害することは、攻撃の様々な機序を防止または阻害するために、例えば、Ｔ細胞攻撃の阻害、抗体応答の阻害、ならびにサイトカインおよび補体効果の阻害のために、多くの場合いくつかの型の免疫抑制剤の投与を必要とする場合がある。ドナーをレシピエントとマッチさせるためにドナーを事前にスクリーニングすることも、拒絶反応を防止することにおいて、特に超急性拒絶反応を防止することにおいて重要な要因である。移植前の抗ＨＬＡ抗体の免疫吸着は、超急性拒絶反応を低減することができる。移植前に、レシピエントまたは宿主に、抗Ｔ細胞試薬、例えば、モノクローナル抗体ＯＫＴ３、抗胸腺細胞グロブリン（ＡＴＧ）、シクロスポリンＡ、またはタクロリムス（ＦＫ５０６）を投与することができる。加えて、糖質コルチコイドおよび／またはアザチオプリン（または他のプリン類似体）を、移植前に宿主に投与することができる。移植片拒絶を防止または阻害するのを助長するのに使用される薬物として、それだけに限らないが、ＡＴＧまたはＡＬＧ、ＯＫＴ３、ダクリズマブ、バシリキシマブ、コルチコステロイド、１５−デオキシスペルグアリン、ＬＦ１５−０１９５、シクロスポリン、タクロリムス、アザチオプリンなどのプリン類似体、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチル、６−メルカプトプリン、ブレディニン、ブレキナル、レフルナミド、シクロホスファミド、シロリムス、抗−ＣＤ４モノクローナル抗体、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、リツキサン、抗−ＣＤ１５４モノクローナル抗体、抗−ＬＦＡ１モノクローナル抗体、抗−ＬＦＡ−３モノクローナル抗体、抗−ＣＤ２モノクローナル抗体、および抗−ＣＤ４５が挙げられる。
【００４９】
移植片拒絶を遅延させる（すなわち、移植片生着を延長する）のに利用される多数の薬物は、様々な様式で作用する。いくつかの免疫抑制薬の作用機序の概説については、Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ（２０００年）．  Ｅｘｐ．  Ｒｅｖ．  Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  ６月２１日、ｅｘｐｅｒｔｒｅｖｉｅｗｓ．ｏｒｇ／００００１７６９ｈ．ｈｔｍのワールドワイドウェブを参照されたい。
【００５０】
シクロスポリンＡは、移植片拒絶反応を阻害するために、最も広く使用される免疫抑制薬の１つである。これは、インターロイキン−２すなわちＩＬ−２の阻害剤である（これは、インターロイキン−２のｍＲＮＡ転写を防止する）。より直接的には、シクロスポリンは、Ｔ細胞受容体刺激で通常起こるカルシニュリン活性化を阻害する。カルシニュリンは、ＮＦＡＴ（活性化されたＴ細胞の核因子）を脱リン酸化し、それによってＮＦＡＴが核に入り、インターロイキン−２プロモーターに結合するのを可能にする。このプロセスを遮断することによって、シクロスポリンＡは、ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化、およびさもなければ次々と起こる、結果として生じる事象を阻害する。タクロリムスは、カルシニュリン阻害を介して、インターロイキン−２の産生を阻害することによって作用する別の免疫抑制剤である。
【００５１】
ラパマイシン（シロリムス）、ＳＤＺ  ＲＡＤ、およびインターロイキン−２受容体遮断薬は、インターロイキン−２の作用を阻害し、したがって上述した、次々と起こる事象を防止する薬物である。
【００５２】
プリンまたはピリミジン生合成の阻害剤も、移植片拒絶反応を阻害するのに使用される。これらの阻害剤は、ＤＮＡ合成を防止し、それによってＴ細胞増殖を含めた細胞分裂を阻害する。その結果は、新しいＴ細胞の形成を防止することによるＴ細胞活性の阻害である。プリン合成の阻害剤として、アザチオプリン、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）、およびミゾリビン（ブレディニン）が挙げられる。ピリミジン合成の阻害剤には、ブレキナルナトリウムおよびレフルノミドが含まれる。シクロホスファミドは、プリンおよびピリミジン合成の両方の阻害剤である。
【００５３】
Ｔ細胞活性化を阻害するためのさらに別の方法は、レシピエントをＴ細胞に対する抗体を用いて治療することである。ＯＫＴ３は、Ｔ細胞受容体の一部であるＣＤ３に対するマウスモノクローナル抗体である。この抗体は、Ｔ細胞受容体を通じてＴ細胞を最初に活性化し、次いで活性化されたＴ細胞のアポトーシスを誘発する。
【００５４】
同種移植拒絶反応を遅延させるための多数の他の薬物および方法が当業者に知られており、当業者によって使用されている。１つの手法は、例えば照射によってＴ細胞を枯渇させることである。Ｔ細胞の枯渇は、特に主要なＨＬＡの部分的なミスマッチが存在する場合、骨髄移植においてしばしば使用されている。ＣＤ４０リガンド−ＣＤ４０相互作用の阻害剤（遮断薬）および／またはＣＤ２８−Ｂ７相互作用の遮断薬のレシピエントへの投与も使用されている（米国特許第６，２８０，９５７号）。公開されたＰＣＴ特許出願ＷＯ０１／３７８６０は、Ｔｈ１免疫応答を阻害するための、抗ＣＤ３モノクローナル抗体およびＩＬ−５の投与を開示している。公開されたＰＣＴ特許出願ＷＯ００／２７４２１は、腫瘍壊死因子−αアンタゴニストを投与することによる、角膜移植片拒絶の予防または治療のための方法を教示している。Ｇｌｏｔｚら（２００２年  Ａｍ．  Ｊ．  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．  ２巻：７５８〜７６０頁）は、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）の投与が、抗ＨＬＡ抗体の力価の大きな、持続性の減少を誘発し、それによってＨＬＡ−ミスマッチ臓器の生着を可能にすることができることを示している。同様のプロトコールは、血漿交換（Ｔａｕｂｅら、１９８４年  Ｌａｎｃｅｔ  １巻：８２４〜８２８頁）、または免疫抑制剤と連結した免疫吸着技法（Ｈｉｅｓｓｅら、１９９２年  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  Ｄｉａｌ．  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．  ７巻：９４４〜９５１頁）、またはこれらの方法の組合せ（Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙら、２０００年  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ
７０巻：８８７〜８９５頁）を含んでいる。Ｃｈａｎｇｅｌｉａｎら（２００３年  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０２巻：８７５〜８７８頁）は、免疫抑制が、共通のγ鎖（γｃ）（インターロイキン−２、−４、−７、−９、−１５、−２１）を使用するサイトカイン受容体の適切なシグナル伝達に必要な酵素である、ヤヌスキナーゼ３（ＪＡＫ３）の経口阻害剤によって生じ、その結果は、Ｔ細胞活性化の阻害であるモデルを教示している。ＩＣＡＭ−１に対するアンチセンス核酸は、心臓同種移植片移植の研究において、単独、または白血球機能関連抗原１（ＬＦＡ−１）に特異的なモノクローナル抗体を組み合わせて使用されている（Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ、上記）。同様に、抗ＩＣＡＭ−１抗体は、心臓同種移植片を処置するために、抗ＬＦＡ−１抗体と組み合わせて使用されている（Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ、上記）。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ラットの心臓または腎臓同種移植モデルにおいて、シクロスポリンとともにさらに使用されており、移植片の生着を延長するための相乗効果をもたらしている（Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉ、上記）。慢性移植片拒絶は、分化、増殖、およびアポトーシスに関与するサイトカインであるＴＧＦ−βのアンタゴニストを投与することによって治療されている（米国特許出願公開第ＵＳ２００３／０１８０３０１号）。
【００５５】
Ｃ．ＣＤ２００および免疫抑制
免疫応答の抑制に関与すると考えられている別の機構は、分子ＣＤ２００を伴う。ＣＤ２００は、免疫系の細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および樹状細胞（Ｂａｒｃｌａｙら、２００２年  ＴＲＥＮＤＳ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２３巻：２８５〜２９０頁））、ならびにある特定の癌細胞を含めた様々な細胞型上で発現される、高度に保存されたＩ型膜貫通糖タンパク質である。このタンパク質は、骨髄細胞、およびＴ細胞の亜集団上でその受容体ＣＤ２００Ｒと相互作用する（Ｗｒｉｇｈｔら  ２００３年  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７１巻：３０３４〜３０４６頁、およびＷｒｉｇｈｔら、２０００年  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３巻：２３３〜２４２頁）。ＣＤ２００：ＣＤ２００Ｒ相互作用は、細胞に免疫調節シグナルを送達し、アポトーシス関連免疫寛容を含めた免疫抑制を誘発すると考えられている（Ｒｏｓｅｎｂｌｕｍら  ２００４年  Ｂｌｏｏｄ  １０３巻：２６９１〜２６９８頁）。
【００５６】
以前の研究、Ｇｏｒｃｚｙｎｓｋｉらによる特に多数の論文は、ＣＤ２００が免疫抑制性であることを示している。例えば、Ｇｏｒｃｚｙｎｓｋｉら（Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １０４巻：２５６〜２６４頁（２００２年））は、マウスのコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）モデルにおいて、可溶性ＣＤ２００（ＣＤ２００Ｆｃ）を用いた治療が、ＣＩＡを寛解させることを教示している。移植の状況において、Ｇｏｒｃｚｙｎｓｋｉら（Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３１巻：２３３１〜２３３７頁（２００１年））は、可溶性ＣＤ２００タンパク質は、同種移植片生着を促進する一方、抗ＣＤ２００抗体は、免疫抑制を防止し、同種移植片生着の時間短縮をもたらすことを報告している。
【００５７】
以前の報告と対照的に、本開示は、抗ＣＤ２００抗体の投与は、移植片生着を促進することを実証する。いずれの特定の（１つまたは複数の）作用機序によっても束縛されることを望まないが、移植片の生着の延長は、Ｔ細胞の死滅もしくは不活性化および／またはＢ細胞活性の阻害（例えば、移植片に対する体液性応答の阻害）に起因し得る。例えば、ＣＤ２００は、休止細胞上のより低いレベルの発現と比較して、活性化されたＴ細胞およびＢ細胞上に高度に発現される。したがって、抗ＣＤ２００抗体の投与は、抗体でコートされている、活性化されたＴ細胞およびＢ細胞をもたらすことができ、抗体介在細胞性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、および／またはアポトーシスなどの他のエフェクター機能に対して感受性にする。したがって、抗体投与の１つの可能な結果は、活性化された免疫細胞の死滅、および免疫応答の抑制である場合がある。しかし、以下に記載するように、この効果は、エフェクター機能を有する抗体だけでなく、エフェクター機能を欠いている抗体にも見られる。したがって、Ｂ細胞および／またはＴ細胞の死滅が関与する場合、エフェクター機能は、ストーリーの単に一部であることは明白である。以下に示すように、ＣＤ２００のＣＤ２００受容体（ＣＤ２００Ｒ）との相互作用を阻害することは、エフェクター機能を有する抗体を使用しても、エフェクター機能を有さない抗体を使用しても、免疫応答を抑制し、移植片生着を促進することができ、ならびに自己免疫疾患を寛解させるのに使用することができる。やはり、いずれの特定の作用機序にも束縛されることを望むことなく、ＣＤ２００のＣＤ２００Ｒへの結合の阻害は、重要な第１ステップであるように思われる。
【００５８】
したがって、抗ＣＤ２００抗体投与は、以下の機構の１つまたは複数を介して移植片生着を延長することができる：（ｉ）抗体産生の阻害（例えば、Ｂ細胞の死滅によるものなどの、Ｂ細胞の数の低減による）；（ｉｉ）例えば、Ｔ細胞の数の低減（例えば、Ｔ細胞死滅などによる）によるサイトカイン産生の変化（例えば、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１２の産生）；（ｉｉｉ）静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）効果の誘発（例えば、細胞表面から脱落する可溶性ＣＤ２００は、抗ＣＤ２００抗体に結合することによって複合体を形成することができる）；（ｉｖ）引き続いて免疫細胞のアネルギーをもたらす、抗原提示の干渉；（ｖ）免疫調節の誘発；ならびに／または（ｖｉ）免疫刺激性である、他の現在未知のＣＤ２００相互作用活性の阻害もしくは遮断。この後者の機構についての可能なシナリオのように、様々なＣＤ２００受容体が存在し（例えば、マウスにおいて５つの受容体が知られており、ヒトにおいて２つの受容体が知られている）、これらの様々な受容体は、様々なシグナル伝達機構を使用する（例えば、細胞質ドメインの伸長対ＤＡＰ１２などのアダプタータンパク質）（Ｗｒｉｇｈｔら  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００３年、１７１巻：３０３４〜３０４６頁）。したがって、様々なＣＤ２００Ｒによって媒介される様々なシグナル伝達経路は、免疫系において反対の作用を有し得る可能性がある。さらに、またはあるいは、ＣＤ２００の免疫抑制活性は、ＣＤ２００：ＣＤ２００Ｒ相互作用によって媒介されると考えられるが、抗ＣＤ２００受容体抗体は、ＣＤ２００受容体を架橋し、それによって受容体を活性化し、免疫抑制を誘発することができる。
【００５９】
ＩＩ．ＣＤ２００結合剤
本開示は、移植片拒絶反応を阻害または防止して、移植片生着を延長する組成物および方法に関する。ある特定の態様では、本開示は、ＣＤ２００結合剤に関する。本明細書で使用される場合、ＣＤ２００結合剤には、ＣＤ２００に特異的に結合できるいかなる作用物質も含まれる。ＣＤ２００結合剤の例には、それだけに限らないが、ポリペプチド、抗体、小分子およびペプチド模倣体が含まれる。ある特定の実施形態では、ＣＤ２００結合剤は、ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの相互作用を破壊する。他の実施形態では、ＣＤ２００結合剤は、ＣＤ２００発現細胞を枯渇または排除の標的とすることができる。
【００６０】
ある特定の態様では、ＣＤ２００結合剤はポリペプチドである。本開示で利用されるポリペプチドは、当業者に知られている様々な技法を用いて構築できる。一実施形態では、化学合成によって上記ポリペプチドを得る。他の実施形態では、上記ポリペプチドは、１つまたは複数の抗体の一断片またはいくつかの断片から構築される抗体である。さらなる実施形態では、上記ポリペプチドは、本明細書に記載の抗ＣＤ２００抗体である。
【００６１】
それゆえ、ある特定の実施形態では、ＣＤ２００結合剤は抗ＣＤ２００抗体である。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、ＣＤ２００に結合できる完全抗体または抗体断片を指す。これらには、モノクローナルおよびポリクローナル抗体、操作されている抗体（キメラ抗体、単鎖抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体および人工的に選択される抗体が含まれる）およびファージディスプレイまたは代替技法を用いて産生される合成または半合成抗体ならびに抗体の他の変形物または誘導体（例えば、単離抗体、組換え体抗体または合成抗体、抗体コンジュゲートまたは抗体誘導体、および抗原結合性断片）が含まれる。マウス、キメラ、ヒト、ヒト化および霊長類化抗体などの抗体も含まれる。抗原結合性断片には、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、他の一価および二価断片、相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、単鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂΔＣ）、ダイアボディ、トリアボディ、ミニボディ、ナノボディおよびＣＤ２００への特異的結合を付与するのに十分な、抗体の少なくとも一部を含有するポリペプチド、ならびにこれらの融合物および誘導体も含まれる。Ｆｄ断片は、ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなる抗体断片であり、Ｆｖ断片は、抗体の単一アームのＶＨドメインおよびＶＬドメインからなり、ｓｃＦｖ断片は、ペプチドリンカーで連結された重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む単鎖抗体であり、ｓｃＦａｂ断片は、ペプチドリンカーによって軽鎖に連結されたＦｄ断片（ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｄｉｆｆｉｃｕｌｔ）を含む単鎖抗体であり、ｓｃＦａｂΔＣ断片は、システインを含まないｓｃＦａｂ変種であり（例えば、Ｈｕｓｔら、ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、７：１４（２００７年）参照）、ｄＡｂ断片（単一ドメイン抗体）は、単一の可変ドメイン（例えばＶＨドメインまたはＶＬドメイン）を含む（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ、３４１巻、５４４〜５４６頁（１９８９年））。例えば、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２３巻、１１２６〜１１３６頁（２００５年）を参照。ＦｖおよびｓｃＦｖなどの小断片は、それらの小さなサイズおよびその結果である優れた組織分布により、診断および治療適用に有利な特性を有する。小断片のｉｎ  ｖｉｖｏ安定性およびｉｎ  ｖｉｖｏ半減期を改善するために、例えばポリ（エチレン）グリコールなどの分子に断片を結合させることができる（直接的または間接的に）。
【００６２】
本開示は、１つまたは複数のエフェクター細胞に結合する能力が増大または減少している変種または改変定常領域またはＦｃ領域を含有するような方法で操作または産生される抗体にも関し、そのような変種抗体には、それだけに限らないが、定常領域またはＦｃ領域が改変グリコシル化パターンを含有する抗体が含まれる。例えば、ＡＤＣＣおよびＣＤＣ等のエフェクター機能の調節において有用である場合がある。操作したまたは変異させた定常領域またはＦｃ領域を有するそのような抗体は、例えば、ＣＤ２００が正常組織内で発現している場合に有用である場合があり、これらの場合には、エフェクター機能をもたない変異させた抗ＣＤ２００抗体が、正常組織を損傷することなく、所望の治療応答を惹起することができる。
【００６３】
また、本開示は、本明細書に提供する重鎖および軽鎖を含む抗ＣＤ２００抗体にも関し、これらの重鎖および軽鎖は、本明細書に提供する重鎖および／または軽鎖に対して相同性または類似性を示す重鎖および軽鎖を含む。「相同性」または「同一性」または「類似性」は、２つのペプチド間または２つの核酸分子間の配列類似性を指す。相同性および同一性はそれぞれ、比較の目的で整列させることができる各配列中の位置を比較することによって決定することができる。比較配列中の同等な位置が、同一の塩基またはアミノ酸によって占められている場合には、これらの分子は、その位置においては同一であり、同等な部位が、同一または類似の（例えば、立体的性質および／または電子的性質が類似する）アミノ酸残基によって占められている場合には、これらの分子は、その位置においては相同（類似）であると呼ぶことができる。相同性／類似性または同一性のパーセントとしての表現は、比較配列と共有する位置における同一または類似のアミノ酸の数の関数を指す。「相同性」という用語によって、類似する機能またはモチーフを有する遺伝子またはタンパク質を同定するために使用する、配列類似性の数学的に基づいた比較を表す。本明細書で使用する場合、「同一性」は、２つ以上の配列を整列させて、配列の一致を最大化した、すなわち、ギャップおよび挿入を考慮した場合の、それらの配列中の対応する位置における同一のヌクレオチドまたはアミノ酸残基のパーセントを意味する。したがって、同一性を決定するための方法は、試験する配列間で最大の一致を得るように設計される（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｌｅｓｋ，  Ａ．
Ｍ．，  ｅｄ．、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８８年；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ、Ｓｍｉｔｈ，  Ｄ．  Ｗ．，  編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９３年；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，  Ｐａｒｔ  Ｉ、Ｇｒｉｆｆｉｎ，  Ａ．  Ｍ．，  ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，  Ｈ．  Ｇ．編、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、１９９４年；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，  Ｇ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７年；ならびにＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，  Ｍ．  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，  Ｊ．編、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１年；ならびにＣａｒｉｌｌｏ，  Ｈ．，  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，  Ｄ．、ＳＩＡＭ  Ｊ．  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．、４８巻：１０７３頁（１９８８年）、Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，  Ｊ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１２巻（１号）：３８７頁（１９８４年）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  Ｓ．  Ｆ．  ら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２１５巻：４０３〜４１０頁（１９９０年）およびＡｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．、２５巻：３３８９〜３４０２頁（１９９７年））、ならびにＢＬＡＳＴ  Ｘ（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  Ｓ．ら、ＮＣＢＩ  ＮＬＭ  ＮＩＨ
Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  ＭＤ  ２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，  Ｓ．ら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２１５巻：４０３〜４１０頁（１９９０年）を参照されたい）。「無関係」または「相同性を示さない」配列は、本開示の配列に対して、４０％未満の同一性を共有するが、好ましくは２５％未満の同一性を共有する。また、２つの配列を比較する場合、残基（アミノ酸もしくは核酸）の不在または余分な残基の存在によっても、同一性および相同性／類似性が減少する。
【００６４】
したがって、本開示は、リーダー配列を有さない、本明細書に記載する抗体に関する。したがって、本開示の抗体は、リーダー配列が存在しないかまたは異なるリーダー配列によって置換されているかのいずれかである重鎖および軽鎖を含むことができる。宿主細胞を使用して、本開示の抗体を産生させる場合には、したがって、適切なリーダー配列を、使用する特定の宿主細胞に従って選択することができる。
【００６５】
抗体は、当技術分野で周知の方法によって産生することができる。例えば、免疫原としてＣＤ２００陽性細胞、ＣＤ２００ポリペプチドまたはＣＤ２００ポリペプチドの断片を使用し、したがって、抗体産生細胞および同様にモノクローナル抗体を単離することができる動物内で免疫応答を起こして、モノクローナル抗ＣＤ２００抗体を生成することができる。そのような抗体の配列を決定することができ、当該抗体またはそれらの変異体を、組換え技法によって産生することができる。組換え技法を使用して、モノクローナル抗体の配列に基づいて、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体および完全ヒト抗体、ならびにＣＤ２００に結合することができるポリペプチドを産生することができる。
【００６６】
さらに、標的の特異性に基づいて抗体またはポリペプチドを単離するためのおとりとして、ＣＤ２００陽性細胞またはそれに由来するポリペプチドを使用して、組換えライブラリーに由来する抗体（「ファージ抗体」）を選択することもできる。非ヒト抗ＣＤ２００抗体およびキメラ抗ＣＤ２００抗体の産生および単離は、十分、当業者の技術範囲内である。
【００６７】
組換えＤＮＡ技術を使用して、非ヒト細胞内で産生させる抗体を改良する。したがって、診断または治療において適用するにあたっての抗体の免疫原性を減少させるために、キメラ抗体を構築することができる。さらに、ＣＤＲをグラフトし、かつ場合によりフレームワークを改変することにより、抗体をヒト化することによって、免疫原性を最小化することもできる。内容が参照により本明細書に組み込まれている米国特許第５，２２５，５３９号を参照されたい。
【００６８】
抗体は、動物血清から得ることができるか、またはモノクローナル抗体もしくはそれらの断片の場合には、細胞培養において産生することができる。組換えＤＮＡ技術を使用して、細菌または好ましくは哺乳動物細胞の培養における手順を含めた確立された手順に従って、抗体を産生することができる。好ましくは、選択された細胞培養の系が、抗体産物を分泌する。
【００６９】
別の実施形態では、本明細書に開示する抗体を産生するためのプロセスは、宿主、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたは哺乳動物細胞を培養するステップを含み、この宿主は、ハイブリッドベクターを用いて形質転換されている。ベクターは、１つまたは複数の発現カセットを含み、この発現カセットは、抗体タンパク質をコードする第２のＤＮＡ配列に適切な読み枠中で連結している、シグナルペプチドをコードする第１のＤＮＡ配列に動作可能に連結しているプロモーターを含有する。次いで、抗体タンパク質を収集し単離する。場合により、発現カセットは、ポリシストロニックな、例えば、バイシストロニックな、抗体タンパク質（複数）をコードするＤＮＡ配列（複数）であって、それぞれが個別に適切な読み枠中でシグナルペプチドに動作可能に連結しているＤＮＡ配列に動作可能に連結しているプロモーターを含んでよい。
【００７０】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、ハイブリドーマ細胞または哺乳動物宿主細胞の増殖を、適切な培地中で実施する。これらの培地は、通例の標準的な培地（例えば、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）またはＲＰＭＩ１６４０培地等）を含み、これらは場合により、哺乳動物血清（例えば、ウシ胎仔血清）または微量元素および増殖維持補充物質（例えば、正常マウス腹腔浸出細胞等のフィーダー細胞、脾臓細胞、骨髄マクロファージ、２−アミノエタノール、インスリン、トランスフェリン、低密度リポタンパク質、オレイン酸等）によって補充されている。細菌細胞または酵母細胞である宿主細胞の増殖も同様に、当技術分野で既知の適切な培地中で実施する。例えば、細菌の場合、適切な培地には、ＬＥ培地、ＮＺＣＹＭ培地、ＮＺＹＭ培地、ＮＺＭ培地、Ｔｅｒｒｉｆｉｃ  Ｂｒｏｔｈ培地、ＳＯＢ培地、ＳＯＣ培地、２×ＹＴ培地またはＭ９最少培地が含まれる。酵母の場合、適切な培地には、ＹＰＤ培地、ＹＥＰＤ培地、最少培地または完全最少ドロップアウト培地が含まれる。
【００７１】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける産生によって、比較的純粋な抗体の調製物が得られ、産生をスケールアップして、所望の抗体を大量にもたらすことができる。細菌細胞、酵母細胞、植物細胞または哺乳動物細胞の培養のための技法が当技術分野では知られており、これらには、（例えば、エアリフトリアクターまたは連続撹拌リアクター中での）均一懸濁培養、および（例えば、フォローファイバー中、マイクロカプセル中、アガロースマイクロビーズ上またはセラミックカートリッジ上に）固定化または捕捉されている細胞培養が含まれる。
【００７２】
また、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、多くの分量の所望の抗体を、哺乳動物細胞を増殖することによって得ることもできる。この目的では、所望の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を、組織適合性の哺乳動物に注射して、抗体産生腫瘍の増殖を引き起こす。場合により、注射前に、炭化水素、特にプリスタン（テトラメチルペンタデカン）等の鉱油を用いて動物を予備刺激する。１〜３週間後に、抗体を、それらの哺乳動物の体液から単離する。例えば、適切な骨髄腫細胞とＢａｌｂ／ｃマウスからの抗体産生脾臓細胞との融合によって得られたハイブリドーマ細胞、または所望の抗体を産生する、ハイブリドーマ細胞系Ｓｐ２／０に由来するトランスフェクトした細胞を、場合によりプリスタンを用いて前処置したＢａｌｂ／ｃマウスに腹腔内注射する。１〜２週間後に、動物から腹水を採取する。
【００７３】
前記およびその他の技法は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５年）Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５〜４９７頁；米国特許第４，３７６，１１０号；Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（１９８８年）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒに論じられており、それらの開示はすべてが参照により本明細書に組み込まれている。組換え抗体分子を調製するための技法は、上記の参照文献、およびまた、例えば、ＷＯ９７／０８３２０；米国特許第５，４２７，９０８号；米国特許第５，５０８，７１７号；Ｓｍｉｔｈ、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２５巻、１３１５〜１３１７頁；Ｐａｒｍｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ、１９８８年、Ｇｅｎｅ、７３巻、３０５〜３１８頁；Ｄｅ  Ｌａ  Ｃｒｕｚら、１９８８年、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２６３巻、４３１８〜４３２２頁；米国特許第５，４０３，４８４号；米国特許第５，２２３，４０９号；ＷＯ８８／０６６３０；ＷＯ９２／１５６７９；米国特許第５，７８０，２７９号；米国特許第５，５７１，６９８号；米国特許第６，０４０，１３６号；Ｄａｖｉｓら、１９９９年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．、１８巻（４号）：４２１〜５頁；Ｔａｙｌｏｒら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０巻（１９９２年）：６２８７〜６２９５頁；Ｔｏｍｉｚｕｋａ  ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＵＳＡ、９７巻（２号）（２０００年）：７２２〜７２７頁に記載されている。これらの参照文献のすべての内容が参照により本明細書に組み込まれている。
【００７４】
細胞培養上清を、所望の抗体について、ＣＤ２００陽性細胞の免疫蛍光染色によって、免疫ブロットによって、酵素免疫アッセイ、例えば、サンドイッチアッセイもしくはドットアッセイによって、またはラジオイムノアッセイによって、選択的にスクリーニングする。
【００７５】
抗体を単離するために、培養上清中または腹水中の免疫グロブリンを、例えば、硫酸アンモニウムを用いて沈殿させること、ポリエチレングリコール等の吸湿性材料に対して透析すること、選択膜を通してろ過すること等によって濃縮することができる。必要および／または所望により、通例のクロマトグラフィーの方法、例えば、ゲルろ過、イオン交換クロマトグラフィー、ＤＥＡＥ−セルロース上でのクロマトグラフィー、および／あるいは（免疫）親和性クロマトグラフィー、例えば、ＣＤ２００陽性細胞系に由来する１つもしくは複数の表面ポリペプチドを用いるまたはプロテインＡもしくはプロテインＧを用いる親和性クロマトグラフィーによって、抗体を精製する。
【００７６】
別の実施形態は、適切な哺乳動物内において、ＣＤ２００に対して作られた抗体を分泌する細菌の細胞系を調製するためのプロセスを提供する。例えば、ウサギを、ＣＤ２００陽性の組織もしくは細胞からプールした試料、またはＣＤ２００ポリペプチドもしくはその断片を用いて免疫化する。この免疫化したウサギから産生したファージディスプレイライブラリーを構築し、所望の抗体を当技術分野で周知の方法（例えば、参照により本明細書に組み込まれている種々の参照文献に開示されている方法等）に従って得る。
【００７７】
また、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞も開示する。好ましいハイブリドーマ細胞は、遺伝子的に安定しており、所望の特異性を示す本明細書に記載するモノクローナル抗体を分泌し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいては急速冷凍した培養物から解凍し、増殖することによって、またはｉｎ  ｖｉｖｏにおいては腹水として、拡大することができる。
【００７８】
別の実施形態では、ＣＤ２００に対するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞系を調製するためのプロセスを提供する。そのプロセスにおいては、適切な哺乳動物、例えば、Ｂａｌｂ／ｃマウスを、ＣＤ２００の１つまたは複数のポリペプチドまたは抗原性の断片を用いて、あるいはＣＤ２００陽性細胞に由来する１つもしくは複数のポリペプチドもしくは抗原性の断片、ＣＤ２００陽性細胞自体、または記載の精製ポリペプチドを含有する抗原性の担体を用いて免疫化する。免疫化した哺乳動物の抗体産生細胞を、培地中で短期間増殖させるか、または適切な骨髄腫細胞系の細胞と融合させる。融合体内に得られたハイブリッド細胞をクローニングし、所望の抗体を分泌する細胞のクローンを選択する。例えば、ＣＤ２００陽性の慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）細胞系を用いて免疫化したＢａｌｂ／ｃマウスの脾臓細胞を、骨髄腫細胞系ＰＡＩまたは骨髄腫細胞系Ｓｐ２／０−Ａｇ１４の細胞と融合させる。次いで、得られたハイブリッド細胞を、所望の抗体の分泌についてスクリーニングし、陽性ハイブリドーマ細胞をクローニングする。
【００７９】
好ましいのは、ＣＤ２００陽性細胞系の１０６〜１０７個の細胞を皮下および／または腹腔内に数回、例えば４〜６回、数カ月、例えば２〜４カ月にわたり注射することによって、Ｂａｌｂ／ｃマウスを免疫化することを特徴とするハイブリドーマ細胞系を調製するためのプロセスである。免疫化したマウスから、脾臓細胞を、最後の注射から２〜４日後に採取し、骨髄腫細胞系ＰＡＩの細胞と、融合促進剤、好ましくはポリエチレングリコールの存在下で融合させる。好ましくは、骨髄腫細胞を、約３０％〜約５０％の分子量約４０００のポリエチレングリコールを含有する溶液中で、３〜２０倍過剰の免疫化したマウスからの脾臓細胞と融合させる。融合後、以下に記載する適切な培地中で、正常な骨髄腫細胞が所望のハイブリドーマ細胞を上回って過成長するのを防止するために選択培地、例えば、ＨＡＴ培地を一定の時間をおいて補って、細胞を拡大する。
【００８０】
抗体およびそれらの断片は、「キメラ」であってよい。キメラ抗体およびそれらの抗原結合断片は、２つ以上の異なる種（例えば、マウスとヒト）からの部分を含む。キメラ抗体は、ヒトの定常ドメイン遺伝子セグメント中に、所望の特異性を示すマウスの可変領域をスプライスして産生することができる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号）。このようにして、非ヒト抗体を改変して、それらを、ヒトへの臨床適用のためにより適したものとなすことができる。
【００８１】
本開示のモノクローナル抗体はまた、非ヒト（例えば、マウス）抗体を「ヒト化した」形態を含む。ヒト化ｍＡｂまたはＣＤＲグラフトｍＡｂは、循環からマウス抗体ほどには迅速に一掃されず、典型的には有害な免疫反応を誘発しないことから、ヒトのための治療剤として特に有用である。一般に、ヒト化抗体は、非ヒトの供給源からその中に導入された１つまたは複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトのアミノ酸残基はしばしば、「移入」残基と呼ばれ、これらは典型的には、「移入」可変ドメインから採られたものである。ヒト化抗体を調製するための方法は一般に、当技術分野ではよく知られている。例えば、ヒト化を基本的には、Ｗｉｎｔｅｒらの方法（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６年）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２巻：３２３〜３２７頁（１９８８年）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９巻：１５３４〜１５３６頁（１９８８年））に従って、げっ歯類のＣＤＲまたはＣＤＲ配列で、ヒト抗体の対応する配列を置き換えることによって実施することができる。また、Ｓｔａｅｌｅｎｓら、２００６年、Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、４３巻：１２４３〜１２５７頁も参照されたい。特定の実施形態では、非ヒト（例えば、マウス）抗体をヒト化した形態は、レシピエント抗体の超可変（ＣＤＲ）領域の残基が、所望の特異性、親和性および結合能を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類等の非ヒト種（ドナー抗体）からの超可変領域の残基によって置換されているヒト抗体（レシピエント抗体）である。また、場合によっては、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域の残基も、対応する非ヒト残基によって置換する（いわゆる「逆突然変異」）。さらに、ファージディスプレイライブラリーを使用して、抗体配列内部の選ばれた位置においてアミノ酸を変化させることもできる。また、ヒト化抗体の特性は、ヒトのフレームワークの選び方によっても影響を受ける。さらに、例えば、親和性またはエフェクター機能等の抗体特性をさらに改善するために、ヒト化抗体およびキメラ化抗体を改変して、レシピエント抗体中にもドナー抗体中にも見い出されない残基を含ませることもできる。
【００８２】
また、完全ヒト抗体も、本開示において提供する。「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する（存在する場合には）可変領域と定常領域とを有する抗体を含む。ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発により、またはｉｎ  ｖｉｖｏにおける体細胞の突然変異により導入された突然変異）を含むことができる。しかし、「ヒト抗体」という用語は、マウス等の別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトのフレームワーク配列上にグラフトされている抗体（すなわち、ヒト化抗体）は含まない。完全ヒト抗体またはヒト抗体は、ヒト抗体遺伝子を有する（可変（ｖａｒｉａｂｌｅ）（Ｖ）エクソン、多様性（ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）（Ｄ）エクソン、連結（ｊｏｉｎｉｎｇ）（Ｊ）エクソンおよび定常（ｃｏｎｓｔａｎｔ）（Ｃ）エクソンを有する）トランスジェニックマウスから、またはヒト細胞から得ることができる。例えば、現在、免疫化して、内因性免疫グロブリンが産生されない状態で、ヒト抗体の完全なレパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を生産することが可能である（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９０巻：２５５１頁（１９９３年）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２巻：２５５〜２５８頁（１９９３年）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、７巻：３３頁（１９９３年）；およびＤｕｃｈｏｓａｌら、Ｎａｔｕｒｅ、３５５巻：２５８頁（１９９２年）を参照されたい。トランスジェニックマウス系統を操作して、再配列されていないヒト免疫グロブリン遺伝子からの遺伝子配列を含有させることができる。ヒト配列は、ヒト抗体の重鎖および軽鎖の両方をコードすることができ、マウス内で、正確に機能して、再配列されてヒトにおける抗体レパートリーに類似する広い抗体レパートリーをもたらすであろう。トランスジェニックマウスを、標的タンパク質（例えば、ＣＤ２００、その断片またはＣＤ２００を発現する細胞）を用いて免疫化して、多種多様な一連の特異的な抗体、およびそれらをコードするＲＮＡを生み出すことができる。次いで、そのような抗体の抗体鎖の構成成分をコードする核酸を、動物からディスプレイベクター内にクローニングすることができる。典型的には、重鎖配列および軽鎖配列をコードする核酸の別々の集団をクローニングし、次いで、それらの別々の集団を、ベクター内に挿入によって組み換え、したがって、ベクターの所与のコピーのいずれもが、重鎖と軽鎖とのランダムな組合せを受け取る。ベクターを含有するディスプレイパッケージの外側表面上に抗体鎖が集合し、提示され得るようにベクターを設計して、抗体鎖を発現させる。例えば、抗体鎖を、ファージの外側表面由来のファージのコートタンパク質との融合タンパク質として発現させることができる。その後、ディスプレイパッケージを、標的に結合する抗体のディスプレイについてスクリーニングすることができる。
【００８３】
さらに、ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーから得てもよい（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２７巻：３８１頁（１９９２年）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２２巻：５８１〜５９７頁（１９９１年）；Ｖａｕｇｈａｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、１４巻：３０９頁（１９９６年））。合成ヒト抗体のＶ領域のランダム化された組合せを使用する合成ファージライブラリーを生み出すことができる。抗原上で選択することによって、Ｖ領域がヒトに非常に似た性質を示す完全ヒト抗体を作製することができる。米国特許第６，７９４，１３２号、第６，６８０，２０９号、第４，６３４，６６６号、およびＯｓｔｂｅｒｇら（１９８３年）、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、２巻：３６１〜３６７頁を参照されたい。これらの内容が参照により組み込まれている。
【００８４】
また、ヒト抗体の生成については、Ｍｅｎｄｅｚら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、１５巻：１４６〜１５６頁（１９９７年）、Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．、１８８巻：４８３〜４９５頁（１９９８年）も参照されたい。これらの開示が参照により本明細書に組み込まれている。ヒト抗体は、米国特許第５，９３９，５９８号および第６，６７３，９８６号でもさらに論述および詳述されている。また、すべて１９９５年６月５日に出願の米国特許第６，１１４，５９８号、第６，０７５，１８１号および第６，１６２，９６３号も参照されたい。また、１９９６年１０月２日出願の米国特許第６，１５０，５８４号、ならびに米国特許第６，７１３，６１０号および第６，６５７，１０３号、さらに、米国特許出願第１０／４２１，０１１号（ＵＳ２００３−０２２９９０５Ａ１）、第１０／４５５，０１３号（ＵＳ２００４−００１０８１０Ａ１）、第１０／６２７，２５０号（ＵＳ２００４−００９３６２２Ａ１）、第１０／６５６，６２３号（ＵＳ２００６−００４０３６３Ａ１）、第１０／６５８，５２１号（ＵＳ２００５−００５４０５５Ａ１）、第１０／９１７，７０３号（ＵＳ２００５−００７６３９５Ａ１）および第１０／９７８，２９７号（ＵＳ２００５−０２８７６３０Ａ１）も参照されたい。１９９３年７月２３日出願のＰＣＴ／ＵＳ９３／０６９２６、１９９６年６月１２日授与の欧州特許第ＥＰ０４６３１５１Ｂ１号、１９９４年２月３日公開の国際特許出願第ＷＯ９４／０２６０２号、１９９６年１０月３１日公開の国際特許出願第ＷＯ９６／３４０９６号、および１９９８年６月１１日公開のＷＯ９８／２４８９３も参照されたい。上記に引用した特許、出願および参照文献のそれぞれの開示の全体が、参照により本明細書に組み込まれている。
【００８５】
代替のアプローチでは、ＧｅｎＰｈａｒｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．を含めたその他が、「ミニ遺伝子座」のアプローチを活用している。ミニ遺伝子座のアプローチでは、外来性のＩｇ遺伝子座を、当該Ｉｇ遺伝子座からの小片（個別の遺伝子）を含めることによって模倣する。したがって、１つまたは複数のＶＨ遺伝子、１つまたは複数のＤＨ遺伝子、１つまたは複数のＪＨ遺伝子、ミュー定常領域および第２の定常領域（好ましくは、ガンマ定常領域）を、コンストラクト内に形成して、動物内に挿入する。このアプローチは、Ｓｕｒａｎｉらに対する米国特許第５，５４５，８０７号、ならびにいずれもＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙに対する米国特許第５，５４５，８０６号、第５，６２５，８２５号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，６６１，０１６号、第５，７７０，４２９号、第５，７８９，６５０号および第５，８１４，３１８号、ＫｒｉｍｐｅｎｆｏｒｔおよびＢｅｒｎｓに対する米国特許第５，５９１，６６９号、Ｂｅｒｎｓらに対する米国特許第５，６１２，２０５号、第５，７２１，３６７号、第５，７８９，２１５号、ならびにＣｈｏｉおよびＤｕｎｎかつＧｅｎＰｈａｒｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌに対する米国特許第５，６４３，７６３号に記載されている。また、米国特許第５，５６９，８２５号、第５，８７７，３９７号、第６，３００，１２９号、第５，８７４，２９９号、第６，２５５，４５８号および第７，０４１，８７１号も参照されたい。それらの開示が参照により本明細書に組み込まれている。また、欧州特許第０５４６０７３Ｂ１号、国際特許出願第ＷＯ９２／０３９１８号、第ＷＯ９２／２２６４５号、第ＷＯ９２／２２６４７号、第ＷＯ９２／２２６７０号、第ＷＯ９３／１２２２７号、第ＷＯ９４／００５６９号、第ＷＯ９４／２５５８５号、第ＷＯ９６／１４４３６号、第ＷＯ９７／１３８５２号および第ＷＯ９８／２４８８４号も参照されたい。それらの開示の全体が参照により本明細書に組み込まれている。さらに、Ｔａｙｌｏｒら（１９９２年、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２０巻：６２８７頁）、Ｃｈｅｎら（１９９３年、Ｉｎｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、５巻：６４７頁）、Ｔｕａｉｌｌｏｎら（１９９３年、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ．、９０巻：３７２０〜４頁）、Ｃｈｏｉら（１９９３年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、４巻：１１７頁）、Ｌｏｎｂｅｒｇら（１９９４年、Ｎａｔｕｒｅ、３６８巻：８５６〜８５９頁）、Ｔａｙｌｏｒら（１９９４年、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、６巻：５７９〜５９１頁）、およびＴｕａｉｌｌｏｎら（１９９５年、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４巻：６４５３〜６５頁）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄら（１９９６年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４巻：８４５頁）、およびＴｕａｉｌｌｏｎら（２０００年、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１０巻：２９９８〜３００５頁）も参照されたい。それらの開示の全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【００８６】
特定の実施形態では、脱免疫化抗ＣＤ２００抗体またはそれらの抗原結合断片を提供する。脱免疫化抗体またはそれらの抗原結合断片を改変して、そうした抗体またはその抗原結合断片が所与の種に対して非免疫原性またはより低い免疫原性を示すようになすことができる。脱免疫化は、当業者に既知の多様な技法のいずれかを活用することにより抗体またはその抗原結合断片を改変することによって達成することができる（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ０４／１０８１５８号および第ＷＯ００／３４３１７号を参照されたい）。例えば、抗体またはその抗原結合断片のアミノ酸配列内部の潜在的なＴ細胞エピトープおよび／またはＢ細胞エピトープを同定し、抗体またはその抗原結合断片から、その潜在的なＴ細胞エピトープおよび／またはＢ細胞エピトープのうちの１つまたは複数を、例えば、組換え技法を使用して除去することによって、抗体またはその抗原結合断片を脱免疫化することができる。次いで、場合により、改変した抗体またはその抗原結合断片を、産生させ、試験して、１つまたは複数の所望の生物学的活性、例えば、結合親和性等は保持しているが、免疫原性は低下している抗体またはその抗原結合断片を同定することができる。潜在的なＴ細胞エピトープおよび／またはＢ細胞エピトープを同定するための方法は、当技術分野で既知の技法、例えば、計算的方法（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ０２／０６９２３２号を参照されたい）、ｉｎ  ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ  ｓｉｌｉｃｏにおける技法、および生物学的アッセイまたは物理学的方法（例えば、ペプチドの、ＭＨＣ分子に対する結合を決定すること、ペプチド：ＭＨＣ複合体の、抗体もしくはその抗原結合断片を受け取る種由来のＴ細胞受容体に対する結合を決定すること、抗体もしくはその抗原結合断片を受け取る種のＭＨＣ分子を有するトランスジェニック動物を使用して、タンパク質もしくはそのペプチド部分を試験すること、または抗体もしくはその抗原結合断片を受け取る種由来の免疫系細胞を用いて再構成したトランスジェニック動物を用いて試験すること等）等を使用して実施することができる。種々の実施形態では、本明細書に記載する脱免疫化抗ＣＤ２００抗体は、脱免疫化した抗原結合断片、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、モノクローナル抗体、マウス抗体、操作した抗体（例えば、キメラ抗体、単鎖抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体および人工的に選択された抗体等）、合成抗体、ならびに半合成抗体を含む。
【００８７】
さらなる実施形態では、ＣＤ２００またはＣＤ２００陽性細胞系に対して作られた抗体の重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインをコードする挿入部を含む組換えＤＮＡを産生する。ＤＮＡという用語は、コード一本鎖ＤＮＡ、前記コードＤＮＡとそれに対して相補的なＤＮＡとからなる二本鎖ＤＮＡ、またはこれら相補的（一本鎖）ＤＮＡ自体を含む。
【００８８】
さらに、ＣＤ２００またはＣＤ２００陽性細胞系に対して作られた抗体の重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインをコードするＤＮＡは、酵素的もしくは化学的に合成されたＤＮＡであって、重鎖可変ドメインおよび／もしくは軽鎖可変ドメインをコードする真正のＤＮＡ配列を有するＤＮＡであっても、またはその突然変異体であってもよい。真正のＤＮＡの突然変異体は、上記の抗体の重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインであって、１つもしくは複数のアミノ酸が、欠失している、挿入されている、または１つもしくは複数のその他のアミノ酸によって交換されているドメインをコードするＤＮＡである。好ましくは、ヒト化および発現の最適化の適用例においては、前記（１つまたは複数の）改変は、抗体の重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインのＣＤＲの外側にある。また、突然変異したＤＮＡという用語は、１つまたは複数のヌクレオチドがその他のヌクレオチドによって置換され、そうした新しいコドンが同一の（１つまたは複数の）アミノ酸をコードしているサイレント突然変異体も包含する。また、突然変異した配列という用語は、縮重配列も含む。縮重配列は、無制限の数のヌクレオチドが、その他のヌクレオチドによって置換されるが、最初にコードされたアミノ酸配列の変化には至らないという点における、遺伝暗号の意味の範囲内での縮重である。そのような縮重配列が、重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインの最適な発現を得るために有用である場合がある。これは、縮重配列の異なる制限部位および／または特定のコドンの頻度が、特定の宿主、具体的には、Ｅ．ｃｏｌｉによって好まれるからである。
【００８９】
突然変異体という用語は、真正のＤＮＡを当技術分野で既知の方法に従ってｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて変異誘発させることによって得られたＤＮＡの突然変異体を含むことを意図している。
【００９０】
完全な四量体の免疫グロブリン分子の集合、およびキメラ抗体の発現のために、重鎖および軽鎖の可変ドメインをコードする組換えＤＮＡ挿入部を、重鎖および軽鎖の定常ドメインをコードする対応するＤＮＡと融合させ、次いで、例えば、ハイブリッドベクター内への組込みの後に、適切な宿主細胞内に移入する。
【００９１】
ヒト定常ドメインＩｇＧ、例えば、γ１、γ２、γ３またはγ４、特定の実施形態ではγ１またはγ４に融合させた、ＣＤ２００またはＣＤ２００陽性細胞系に対して作られた抗体の重鎖可変ドメインをコードする挿入部を含む組換えＤＮＡを使用することができる。また、ヒト定常ドメインκまたはλ、好ましくはκに融合させた、本明細書に開示される細胞系に関する抗体の軽鎖マウス可変ドメインをコードする挿入部を含む組換えＤＮＡも提供する。
【００９２】
別の実施形態は、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインが、スペーサー基によって連結している組換えポリペプチドをコードし、場合により、宿主細胞内における抗体のプロセシングを促進するシグナル配列、ならびに／または抗体の精製を容易にするペプチドおよび／もしくは切断部位および／もしくはペプチドスペーサーおよび／もしくは作用剤をコードするＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡに関係する。作用剤をコードするＤＮＡは、診断または治療に適用するにあたって有用な作用剤をコードするＤＮＡであることを意図している。したがって、毒物、または酵素、特にプロドラッグの活性化を触媒することができる酵素である作用剤分子が特に示される。そのような作用剤をコードするＤＮＡは、天然に存在する酵素もしくは毒物をコードするＤＮＡまたはその突然変異体の配列を有し、当技術分野でよく知られている方法によって調製することができる。
【００９３】
したがって、本開示のモノクローナル抗体または抗原結合断片は、その他の作用剤、例えば、治療剤または検出可能な標識にコンジュゲートしていない裸の抗体または抗原結合断片であってよい。あるいは、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片は、例えば、細胞傷害性作用剤、小型分子、ホルモン、酵素、増殖因子、サイトカイン、リボザイム、ペプチド模倣物、化学物質、プロドラッグ、コード配列を含めた核酸分子（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉ、遺伝子標的コンストラクト等）、または検出可能な標識（例えば、ＮＭＲもしくはＸ線の造影剤、蛍光分子等）等の作用剤にコンジュゲートすることができる。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２００ポリペプチドまたは抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ、単鎖ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２）が、当該ポリペプチドまたは抗原結合断片の半減期を増加させる分子に連結している。前記抗ＣＤ２００のポリペプチドまたは抗原結合断片に連結することができる分子として、それだけに限らないが、アルブミンを含めた血清タンパク質、ポリペプチド、その他のタンパク質またはタンパク質のドメイン、およびＰＥＧが挙げられる。
【００９４】
いくつかの可能なベクター系が、クローニングした重鎖および軽鎖の遺伝子を哺乳動物細胞内で発現させるために利用可能である。１つのクラスのベクターは、所望の遺伝子配列の宿主細胞ゲノム中への組込みを利用する。安定に組み込まれたＤＮＡを有する細胞を、Ｅ．ｃｏｌｉのｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ，  Ｒ．  Ｃ．  ａｎｄ  Ｂｅｒｇ，  Ｐ．、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ＵＳＡ、７８巻：２０７２頁（１９８１年））またはＴｎ５ｎｅｏ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ，  Ｐ．  Ｊ．  ａｎｄ  Ｂｅｒｇ，  Ｐ．、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ａｐｐｌ．  Ｇｅｎｅｔ．、１巻：３２７頁（１９８２年））等の薬物耐性遺伝子を同時に導入することによって選択することができる。選択マーカー遺伝子は、発現させようとするＤＮＡ遺伝子配列に連結させるか、または同一細胞内に共形質移入によって導入するかのいずれかであってよい（Ｗｉｇｌｅｒ，  Ｍ．ら、Ｃｅｌｌ、１６巻：７７頁（１９７９年））。第２のクラスのベクターは、染色体外プラスミドに、自律的に複製する能力を付与するＤＮＡエレメントを活用する。これらのベクターは、ウシパピローマウイルス（Ｓａｒｖｅｒ，  Ｎ．ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ＵＳＡ、７９巻：７１４７頁（１９８２年））、ポリオーマウイルス（Ｄｅａｎｓ，  Ｒ．  Ｊ．  ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ＵＳＡ、８１巻：１２９２頁（１９８４年））またはＳＶ４０ウイルス（Ｌｕｓｋｙ，
Ｍ．  ａｎｄ  Ｂｏｔｃｈａｎ，  Ｍ．、Ｎａｔｕｒｅ、２９３巻：７９頁（１９８１年））等の動物ウイルスから得ることができる。
【００９５】
免疫グロブリンｃＤＮＡは、抗体タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡをあらわす配列のみで構成されていることから、遺伝子の転写およびＲＮＡのプロセシングを調節する追加の遺伝子発現エレメントが、免疫グロブリンｍＲＮＡの合成のためには必要である。これらのエレメントは、スプライスシグナル、誘導性プロモーターを含めた転写プロモーター、エンハンサーおよび終結シグナルを含むことができる。そのようなエレメントを組み込んでいるｃＤＮＡ発現ベクターには、Ｏｋａｙａｍａ，  Ｈ．  ａｎｄ  Ｂｅｒｇ，  Ｐ．、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、３巻：２８０頁（１９８３年）；Ｃｅｐｋｏ，
Ｃ．  Ｌ．ら、Ｃｅｌｌ、３７巻：１０５３頁（１９８４年）；およびＫａｕｆｍａｎ，  Ｒ．  Ｊ．、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  ＵＳＡ、８２巻：６８９頁（１９８５年）によって記載されているものが含まれる。
【００９６】
本開示の療法の実施形態では、二重特異性抗体を企図する。二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を示すモノクローナル抗体、好ましくは、ヒト抗体またはヒト化抗体である。この場合、結合特異性のうちの一方は、細胞（例えば、癌細胞または免疫細胞等）上のＣＤ２００抗原に対するものであり、他方は、任意のその他の抗原、好ましくは、細胞表面のタンパク質または受容体もしくは受容体サブユニットに対するものである。
【００９７】
二重特異性抗体を作製するための方法は、当業者の技術範囲内である。従来、二重特異性抗体の組換えによる産生は、免疫グロブリンの重鎖／軽鎖の２つの対の同時発現に基づいており、２つの重鎖が異なる特異性を示す（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ、３０５巻：５３７〜５３９頁（１９８３年））。所望の結合特異性を示す抗体の可変ドメイン（抗体と抗原とを組み合わせる部位）を、免疫グロブリンの定常ドメインの配列と融合させることができる。好ましくは、少なくともヒンジ領域、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域の部分を含む免疫グロブリンの重鎖定常ドメインと融合させる。免疫グロブリンの重鎖の融合体、および所望により免疫グロブリンの軽鎖をコードするＤＮＡを、別々の発現ベクター内に挿入し、適切な宿主生物体内に共形質移入する。二重特異性抗体を生成するための現在知られている例示的な方法のさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１２１巻：２１０頁（１９８６年）；ＷＯ９６／２７０１１；Ｂｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９巻：８１頁（１９８５年）；Ｓｈａｌａｂｙら、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．、１７５巻：２１７〜２２５頁（１９９２年）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８巻（５号）：１５４７〜１５５３頁（１９９２年）；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９０巻：６４４４〜６４４８頁（１９９３年）；Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２巻：５３６８頁（１９９４年）；およびＴｕｔｔら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７巻：６０頁（１９９１年）を参照されたい。また、二重特異性抗体は、架橋結合した抗体またはヘテロコンジュゲートした抗体も含む。ヘテロコンジュゲートした抗体は、任意の好都合な架橋結合の方法を使用して作製することができる。適切な架橋結合剤が、当技術分野ではよく知られており、いくつかの架橋結合の技法とともに、米国特許第４，６７６，９８０号に開示されている。
【００９８】
また、二重特異性抗体の断片を、組換え細胞培養物から作製し、そこから直接単離する種々の技法が記載されている。例えば、二重特異性抗体が、ロイシンジッパーを使用して産生されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８巻（５号）：１５４７〜１５５３頁（１９９２年）。Ｆｏｓタンパク質およびＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドを、２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に、遺伝子融合によって連結することができる。抗体のホモ二量体をヒンジ領域において還元して、モノマーを形成し、次いで、再度酸化して、抗体のヘテロ二量体を形成することができる。また、この方法を活用して、抗体のホモ二量体を産生することもできる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９０巻：６４４４〜６４４８頁（１９９３年）によって記載されている「ダイアボディ」の技術によって、二重特異性抗体の断片を作製するための代替機構が提供されている。この断片は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に、同一の鎖上の２つのドメイン間での対形成を可能にするには短過ぎるリンカーによって接続している重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。したがって、一方の断片のＶＨドメインおよびＶＬドメインが、もう一方の断片の相補的なＶＬドメインおよびＶＨドメインとの対形成を強いられ、それによって、２つの抗原結合部位が形成される。また、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）の二量体の使用による、二重特異性抗体の断片を作製するための別の戦略も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２巻：５３６８頁（１９９４年）を参照されたい。あるいは、Ｚａｐａｔａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．、８巻（１０号）：１０５７〜１０６２頁（１９９５年）の記載のように、抗体を「直鎖抗体」としてもよい。手短にいうと、これらの抗体は、一対の抗原結合領域を形成する、一対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。直鎖抗体は、二重特異性であっても、または単一特異性であってもよい。
【００９９】
ある特定の実施形態では、本開示は、抗ＣＤ２００抗体または抗原結合性断片が第２の分子に連結されている融合分子に関する。したがって、本開示は、抗ＣＤ２００抗体コンジュゲートを提供する。抗ＣＤ２００抗体コンジュゲートは、抗ＣＤ２００抗体の抗体または抗原結合部分と異種成分とを含む。上記異種成分は、ポリペプチド（ヒト血清アルブミンなど）、小分子、核酸、ポリマー（ＰＥＧなど、天然ポリマーおよび合成ポリマーが含まれる）、金属などであり得る。上記異種成分は、蛍光物質または発光剤など、検出可能成分または標識成分でも、細胞傷害性薬剤、抗生物質、放射性同位元素または放射性核種でもあり得る。したがって、本開示の抗体コンジュゲートまたは融合物分子は、例えば、小分子、ポリペプチド、ペプチド模倣体、ヘテロクリティックペプチド、化学療法薬、免疫調節剤、ターゲッティング成分または核酸コンストラクト（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉまたは遺伝子ターゲッティングコンストラクト）を含む。
【０１００】
抗ＣＤ２００抗体またはその断片の完全性または寿命の増大が望まれている特定の実施形態では、抗体またはその断片を、ｉｎ  ｖｉｖｏでの上記断片の半減期を増大させる分子に結合させてもよい。そのような分子には、ＰＥＧまたは他の合成ポリマー、例えば、ポリアルキレン、ポリアルケニレン、ポリオキシアルキレンなどのポリマーが含まれる。代わりに、ポリペプチド、タンパク質ドメイン、血清タンパク質またはアルブミンに断片を融合させるか、他の方法で連結させてもよい。上記抗原結合性断片は、例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ、単鎖断片もしくはｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２またはＦ（ａｂ’）３であり得る。
【０１０１】
ＩＩＩ．免疫応答を阻害する方法
Ａ．体液性免疫応答を阻害する方法
免疫系は、外来抗原に対する２つのタイプの抗原特異応答、すなわち細胞媒介性免疫および体液性免疫を起こすことができる。細胞媒介性免疫は、Ｔリンパ球によって媒介される免疫系のエフェクター機能を指し、体液性免疫は、Ｂリンパ球による抗原特異的抗体の産生を指す。体液性免疫は、活性化Ｂ細胞によって媒介され、活性化Ｂ細胞は、例えば、侵入した微生物（ウイルスまたは細菌など）の表面にある抗原に特異的な抗体を分泌する。抗体は、侵入した微生物に結合し、破壊の標的にする。
【０１０２】
ほとんどの抗原に対する体液性免疫の発生は、抗体を産生するＢ細胞すなわちＢリンパ球のみでなく、ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞すなわちＴｈリンパ球の関与も必要とする（Ｍｉｔｃｈｉｓｏｎ、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１巻、１８〜２５頁（１９７１年）；ＣｌａｍａｎおよびＣｈａｐｅｒｏｎ、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｒｅｖ．、１巻、９２〜１１９頁（１９６９年）；Ｋａｔｚら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、７０巻、２６２４〜２６２９頁（１９７３年）；Ｒｅｆｆら、Ｎａｔｕｒｅ、２２６巻、１２５７〜１２６０頁（１９７０年））。Ｔｈ細胞は、胸腺依存性抗原による刺激に応答して、ある特定のシグナルを供給する。Ｔｈ細胞によって放出される可溶性分子（例えばＩＬ−４およびＩＬ−５などのサイトカイン）は一部のＢリンパ球活性化を媒介するが、Ｂ細胞活性化は、Ｂ細胞とＴｈ細胞との間の接触依存性相互作用も必要とする（Ｈｉｒｏｈａｔａら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４０巻、３７３６〜３７４４頁（１９８８年）；Ｂａｒｔｌｅｔｔら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４３巻、１７４５〜１７６５頁（１９８９年）；Ｂｒｉａｎ、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８５巻、５６４〜５６８頁（１９８８年）；Ｈｏｄｇｋｉｎら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４５巻、２０２５〜２０３４頁（１９９０年）；およびＮｏｅｌｌｅら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４６巻、１１１８〜１１２４頁（１９９１年））。
【０１０３】
本開示は、抗ＣＤ２００抗体の投与がＢ細胞活性を阻害することを実証する。詳細には、本開示は、免疫刺激に続く循環免疫グロブリン（例えばＩｇＧおよびＩｇＭ）のレベルを、抗ＣＤ２００抗体が低減できることを示す。
【０１０４】
したがって、ある特定の実施形態では、本開示は、体液性免疫応答の防止または阻害を必要とする対象の体液性免疫応答を防止または阻害する方法および組成物であって、ＣＤ２００結合剤を投与するステップを含む方法に関する。ある特定の実施形態では、上記結合剤は、本明細書に記載の抗ＣＤ２００抗体またはその抗体結合性断片である。
【０１０５】
一部の実施形態では、抗ＣＤ２００抗体の投与は、Ｂ細胞を阻害するのに有効である。例えば、本開示の抗ＣＤ２００抗体は、循環Ｂ細胞および／または成熟した抗体分泌性Ｂ細胞をターゲッティングおよび／または阻害するのに有効であり得る。したがって、本開示の方法および組成物は、循環Ｂ細胞および循環免疫グロブリンを低減または枯渇させるのに有効であり得る。さらに他の実施形態では、抗ＣＤ２００抗体の投与は、循環ＩｇＧおよび／または循環ＩｇＭ免疫グロブリンのレベルの減少をもたらす。
【０１０６】
いかなる特定の作用機序にも限定されることを望まないが、本明細書のどこか他のところに記載の通り、抗ＣＤ２００抗体は、この抗体が結合するＢ細胞のＡＤＣＣ、ＣＤＣおよび／またはアポトーシスを媒介し得る。上記抗体は、マウス、キメラ、ヒト、ヒト化、霊長類化または脱免疫化抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片であり得る。場合により、上記抗体は、エフェクター機能の増大を誘発し得る。しかし、前述の通り、エフェクター機能は、ある役割を果たしている可能性があるが、所望の効果をもたらす唯一の手段ではない。
【０１０７】
体液性免疫応答の防止または阻害を必要とする対象は、ある特定の実施形態では、自己免疫障害を有する患者または移植体レシピエントであり得る。したがって、ある特定の実施形態では、本開示は、患者の移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）および移植片拒絶を治療および防止する免疫療法組成物および方法であって、上記組成物および方法がＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの間の相互作用を阻害する薬剤を含み、好ましくは前記薬剤が抗ＣＤ２００抗体である組成物および方法に関する。特定の実施形態では、上記自己免疫障害を有する患者または移植体レシピエントがヒトである。さらなる実施形態では、本開示は、移植体レシピエントにおける急性または慢性の体液性拒絶反応を治療または防止する方法に関する。
【０１０８】
ある特定の実施形態では、薬剤、例えば抗ＣＤ２００抗体を、上記薬剤（例えば抗ＣＤ２００抗体）の非存在下で可能であろうものより少ない用量の伝統的な治療薬と組み合わせて用いる。別の実施形態では、本開示の組成物および方法は、放射線療法、高用量免疫調節療法または脾臓摘出など、より骨の折れる形態の治療の必要性を取り除く。併用治療については、下記により詳細に論じる。それらには、例えば、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、シトキサン（Ｃｙｔｏｘａｎ）、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチル、非ステロイド性抗炎症剤、ラパマイシン、シロリムスおよびタクロリムスが含まれる。他の例には、例えば、ＯＫＴ３（商標）（ムロモナブＣＤ３）、ＣＡＭＰＡＴＨ（商標）−１Ｇ、ＣＡＭＰＡＴＨ（商標）−１Ｈ（アレムツズマブ）、ＣＡＭＰＡＴＨ（商標）−１Ｍ、ＳＩＭＵＬＥＣ（商標）（バシリキシマブ）、ＺＥＮＡＰＡＸ（商標）（ダクリズマブ）、ＲＩＴＵＸＡＮ（商標）（リツキシマブ）および抗胸腺細胞グロブリンなどの抗体が含まれる。
【０１０９】
抗ＣＤ２００を移植体レシピエントに投与して体液性免疫応答を阻害する実施形態では、移植の前または後に、単独で、または移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）および移植片拒絶を治療または防止するための１つまたは複数の治療薬またはレジメンと組み合わせて、抗ＣＤ２００抗体を移植体レシピエントに投与できる。例えば、同種異系移植片の移植の前または後に、移植体レシピエントから同種抗体を枯渇させるために、抗ＣＤ２００抗体を使用できる。ＧＶＨＤおよび移植片拒絶反応に対する予防として、移植前にｅｘ  ｖｉｖｏで、またはドナーで、移植片からＣＤ２００＋抗体産生細胞を免疫枯渇させるためにも、抗ＣＤ２００抗体を使用できる。
【０１１０】
体液性拒絶反応の予防または治療を必要とする移植体レシピエントは、当技術分野における知識および技術に従って同定できる。例えば、移植片拒絶に対する予防を必要とする移植体レシピエントは、移植前に、検出可能な循環抗ＨＬＡ同種抗体を有する患者または患者の集団として同定できる。別の例では、上記患者または患者の集団を、移植の前にパネル反応性同種抗体を有するものとして同定する。移植後の移植体レシピエントにおける検出可能な循環抗ＨＬＡ同種抗体の存在も、本開示に従った体液性拒絶反応の治療を必要とする患者または患者の集団を同定するのに用いることができる。移植体レシピエントが、体液性拒絶反応を発症する危険性を有するか、既に体液性拒絶反応を発症していることを示す他の臨床規準に従って、体液性拒絶反応の治療を必要とする患者または患者の集団を同定することもできる。例えば、循環抗ドナー同種抗体を特徴とする潜在性体液性応答など、体液性拒絶反応の初期段階にある患者または患者の集団として、体液性拒絶反応の治療を必要とする移植体レシピエントを同定できる。初期の体液性拒絶反応は、循環抗ドナー同種抗体およびＣ４ｄ沈着を特徴とするサイレント反応（ｓｉｌｅｎｔ  ｒｅａｃｔｉｏｎ）、または循環抗ドナー同種抗体、Ｃ４ｄ沈着および組織病態を特徴とする無症候性拒絶反応であり得る。さらに後の段階では、レシピエントは、当技術分野の知識および技術に従って特徴付けられる体液性拒絶反応の臨床徴候、例えば、循環抗ドナー同種抗体、Ｃ４ｄ沈着、組織病態および移植片機能障害を特徴とする臨床徴候を呈する患者または患者の集団として同定できる。
【０１１１】
本明細書に記載の抗ＣＤ２００抗体は、様々な種類の移植細胞、組織および臓器のレシピエントにおける体液性免疫応答を阻害または防止するのに使用できる。例えば、移植片は、レシピエントにとって自己、同種異系または異種であり得る。移植片は、それだけに限らないが、骨髄移植片、末梢血幹細胞移植片、皮膚移植片、動脈および静脈移植片、膵島細胞移植片、ならびに腎臓、肝臓、膵臓、甲状腺および心臓の移植体を含めた、細胞、組織または臓器移植片であり得る。一実施形態では、自己移植片は、骨髄移植片、動脈移植片、静脈移植片または皮膚移植片である。別の実施形態では、同種移植片は、骨髄移植片、角膜移植片、腎移植体、心臓移植体、肝移植体、肺移植体、膵移植体、膵島細胞移植体または腎膵を合わせた移植体である。別の実施形態では、移植片が異種移植片であり、ドナーがブタであることが好ましい。さらに、抗ＣＤ２００抗体は、単独で、または第２の薬剤と組み合わせて使用して、それだけに限らないが、人工関節、ステントまたはペースメーカ装置を含めた、非生物学的移植片またはインプラントに対する有害な免疫応答を抑制するのにも使用できる。
【０１１２】
したがって、本開示は、体液性免疫応答（それだけに限らないが、体液性移植片拒絶反応など）の阻害または防止を必要とする対象における体液性免疫応答（それだけに限らないが、体液性移植片拒絶反応など）を阻害または防止する方法であって、ＣＤ２００とＣＤ２００Ｒとの間の相互作用を阻害する薬剤（例えば抗ＣＤ２００抗体）を、単独で、または好ましくは他の１つまたは複数の治療薬と組み合わせて、対象に投与するステップを含む方法に関する。ある特定の実施形態では、循環Ｂ細胞の数を減少させるのに、かつ／または循環免疫グロブリン（例えばＩｇＧおよび／またはＩｇＭ）の量を減少させるのに十分な量で抗体を投与する。
【０１１３】
Ｂ．細胞性免疫応答を阻害する方法
細胞性免疫応答は、抗原提示細胞がＣＤ４＋Ｔヘルパー（Ｔｈ）リンパ球に抗原を提示すると開始され、その結果、Ｔ細胞活性化、エフェクターＴリンパ球（例えば細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞）の増殖および分化がもたらされる。抗原への曝露（感染または外来組織の移植の結果起こる曝露など）の後、ナイーブＴ細胞はＴｈ１細胞およびＴｈ２細胞に分化する。Ｔｈ１細胞は、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２を産生し、その両方が細胞媒介性免疫応答と関連している。Ｔｈ１細胞は、通常は外来組織移植片の拒絶反応に関与し、かつ多くの自己免疫疾患にも関与する免疫応答で役割を演じている。Ｔｈ２細胞は、ＩＬ−４などのサイトカインを産生し、通常はアレルギー、および喘息などのアレルギー性炎症反応に関与する応答など、抗体媒介免疫応答（すなわちＢ細胞媒介応答）と関連している。Ｔｈ２細胞は、移植片の拒絶反応にも寄与し得る。多くの状況で、例えば、細菌感染またはウイルス感染に対する身体の防御、癌細胞などの増殖の阻害において、細胞性免疫応答は望ましい。しかし、他の状況、例えば移植片レシピエントでは、そのようなエフェクターＴ細胞は望ましくない。
【０１１４】
免疫系が抗原によって活性化されるか、または抗原に対して寛容化されるかは、Ｔエフェクター細胞の活性化と、Ｔ調節細胞の活性化との間のバランスによる。Ｔ調節細胞は、免疫寛容の誘導および維持に関与する。これらの細胞は、低レベルのＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１２を産生するＴ細胞である。制御性Ｔ細胞は、エフェクターＴ細胞より低レベルではあるが、ＴＮＦα、ＴＧＦβ、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１０を産生する。ＴＧＦβは制御性Ｔ細胞によって産生される主なサイトカインであるが、このサイトカインは、Ｔｈ１細胞よりも、Ｔｈ２細胞よりも低レベル、例えば、Ｔｈ１細胞またはＴｈ２細胞におけるものより１桁少ないレベルで産生される。制御性Ｔ細胞は、細胞のＣＤ４＋ＣＤ２５＋集団内に見出すことができる（例えば、ＷａｌｄｍａｎｎおよびＣｏｂｂｏｌｄ、２００１年、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １４巻、３９９頁参照）。制御性Ｔ細胞は、活性化シグナルで（例えば、抗原および抗原提示細胞、またはＭＨＣのコンテクスト中にある抗原を模倣するシグナル、例えば抗ＣＤ３抗体＋抗ＣＤ２８抗体で）培養中に刺激されたＴｈ１細胞、Ｔｈ２細胞またはナイーブＴ細胞の増殖およびサイトカイン産生を活発に抑制する。
【０１１５】
本開示は、刺激の後、抗ＣＤ２００抗体処置が、活性化されたＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の数を減少させることを実証する。したがって、本開示は、細胞性免疫応答の防止または阻害を必要とする対象の細胞性免疫応答を防止または阻害する方法および組成物であって、ＣＤ２００結合剤を投与するステップを含む方法および組成物に関する。ある特定の実施形態では、結合剤は、本明細書に記載の抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片である。
【０１１６】
一部の実施形態では、抗ＣＤ２００抗体の投与は、Ｔ細胞の活性化および／または増殖を阻害するか、または活性化されたＴ細胞の数を低減するのに有効である。例えば、本開示の抗ＣＤ２００抗体は、Ｔｈ１および／またはＴｈ２細胞を含めた、活性化されたＣＤ２００発現Ｔ細胞をターゲッティングおよび／または阻害するのに有効であり得る。したがって、本開示の方法および組成物は、活性化されたＴ細胞、およびＴｈ２細胞によって他の方法で活性化されるであろうＢ細胞を低減または枯渇させるのに有効であり得る（上記の論述を参照）。したがって、Ｔ細胞の抗ＣＤ２００阻害は、活性化されたＢ細胞および／または循環免疫グロブリンの低減ももたらし得る。
【０１１７】
いかなる特定の作用機序に限定されることも望まないが、本明細書のどこか他のところに記載の通り、抗ＣＤ２００抗体は、この抗体が結合するＴ細胞のＡＤＣＣ、ＣＤＣおよび／またはアポトーシスを媒介し得る。上記抗体は、制御性Ｔ細胞の数または機能を増強し得る。上記抗体は、マウス、キメラ、ヒト、ヒト化、霊長類化または脱免疫化抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片であり得る。場合により、上記抗体は、エフェクター機能の増大を誘発し得る。
【０１１８】
細胞性免疫応答の防止または阻害を必要とする対象は、ある特定の実施形態では、自己免疫障害の患者または移植体レシピエントであり得る。したがって、ある特定の実施形態では、本開示は、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）および患者の移植片拒絶を治療または防止する免疫療法組成物および方法であって、抗ＣＤ２００抗体を含む組成物および方法に関する。特定の実施形態では、移植体レシピエントまたは自己免疫障害を有する患者がヒトである。さらなる実施形態では、本開示は、移植体レシピエントにおける急性または慢性のＴ細胞媒介拒絶反応を治療または防止する方法に関する。
【０１１９】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２００抗体の非存在下で可能であろうものより少ない用量の伝統的な治療薬と組み合わせて、抗ＣＤ２００抗体を用いる。別の実施形態では、本開示の組成物および方法は、放射線療法、高用量免疫調節療法（Ｔ細胞をターゲッティングする高用量の療法など）または脾臓摘出など、より骨の折れる形態の治療の必要性を取り除く。併用治療については、下記により詳細に論じる。それらには、例えば、アドリアマイシン、アザチオプリン、ブスルファン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、シトキサン（Ｃｙｔｏｘａｎ）、フルダラビン、５−フルオロウラシル、メトトレキセート、ミコフェノール酸モフェチル、非ステロイド性抗炎症剤、ラパマイシン、シロリムスおよびタクロリムスが含まれる。他の例には、例えば、ＯＫＴ３（ムロモナブＣＤ３）、ＣＡＭＰＡＴＨ−１Ｇ、ＣＡＭＰＡＴＨ−１Ｈ（アレムツズマブ）もしくはＣＡＭＰＡＴＨ−１Ｍ、ＳＩＭＵＬＥＣ（バシリキシマブ）、ＺＥＮＡＰＡＸ（ダクリズマブ）、ＲＩＴＵＸＡＮ（リツキシマブ）および抗胸腺細胞グロブリンなどの抗体が含まれる。
【０１２０】
したがって、抗ＣＤ２００を移植体レシピエントに投与して細胞性免疫応答またはＴ細胞媒介免疫応答を阻害する実施形態では、移植の前または後に、単独で、またはＧＶＨＤおよび移植片拒絶を治療または防止するための１つまたは複数の他の治療薬またはレジメンと組み合わせて、抗ＣＤ２００抗体を移植体レシピエントに投与できる。例えば、Ｔ細胞の活性化を遮断または阻害して、同種抗原提示を破壊するか、制御性Ｔ細胞を増殖させるのに、抗ＣＤ２００抗体を使用できる。
【０１２１】
Ｃ．ＣＤ２００を過剰発現する細胞を枯渇または排除する方法
本開示によれば、ＣＤ２００結合剤を含む治療薬を対象に投与することによって、対象における、ＣＤ２００を発現する細胞を枯渇させる方法が提供される。上述の通り、ＣＤ２００は、ある特定の免疫細胞で発現される。ＣＤ２００の異なる発現は、治療のために、活性化された免疫細胞（すなわちＣＤ２００陽性細胞）をターゲッティングする手段を提供する。例えば、自己免疫障害または移植片拒絶を治療する方法で枯渇させるために、ＣＤ２００陽性免疫細胞をターゲッティングすることができる。
【０１２２】
上記に論じた通り、ＣＤ２００は、骨髄細胞上のＣＤ２００Ｒとそれとの相互作用を介して、骨髄の活性および／または移動の阻害シグナルを送達することによって免疫抑制を調節する。例えば、ＣＤ２００ノックアウトマウスは、免疫原性刺激の後に、より活発な免疫応答を示し（Ｈｏｅｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０００年、２９０巻、１７６８〜１７７１頁）、ＣＤ２００発現細胞は、刺激された免疫細胞のサイトカインプロフィールの移行を誘導することによって、免疫抑制を誘発する。詳細には、ＣＤ２００陽性細胞は、混合細胞集団アッセイにおいてＴｈ１サイトカイン産生からＴｈ２サイトカイン産生への移行を誘導できる。ＣＤ２００陽性細胞は免疫応答を抑制できるが、それゆえ、ＣＤ２００陽性細胞は免疫細胞の攻撃を回避できる可能性がある。しかし、免疫細胞の膜上におけるＣＤ２００の発現は、治療においてこれらの細胞をターゲッティングするのに利用できる。例えば、抗ＣＤ２００抗体は、特異的にＣＤ２００陽性細胞をターゲッティングすることができ、かつＣＤ２００陽性細胞を免疫エフェクター細胞にターゲッティングすることができる。上記抗体は、ＣＤ２００：ＣＤ２００Ｒ相互作用を、場合により破壊し得る。したがって、この開示の実施形態は、枯渇させるために、ＣＤ２００陽性細胞をターゲッティングする方法であって、ＣＤ２００結合剤を投与するステップを含む方法に関する。
【０１２３】
一態様では、本開示は、マウス、キメラ、ヒト化またはヒト抗ＣＤ２００抗体またはその断片を、それを必要とする対象に投与することによって、ＣＤ２００陽性標的細胞のＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣを調節する方法に関する。本開示は、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣの増大を誘発する変種抗ＣＤ２００抗体、ならびにＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性の低減または不在を示す変種抗ＣＤ２００抗体に関する。
【０１２４】
ＩＶ．移植患者を治療する方法
本開示で利用されるＣＤ２００結合剤ならびにポリペプチドおよび／または抗体は、本明細書に記載の治療応用に明確に指示される。したがって、ＣＤ２００結合剤および抗ＣＤ２００抗体ならびにそれらの変種は、併用療法を含めた治療、疾患の診断および予後、ならびに疾患進行のモニタリングに使用できる。
【０１２５】
いかなる特定の（１つまたは複数の）機序によって束縛されることも望まないが、抗ＣＤ２００抗体、抗原結合性断片、ポリペプチドまたは他のＣＤ２００結合剤は、例えばそのような細胞に結合して、これらの細胞を免疫攻撃および細胞死滅の標的とすることによって、ＣＤ２００陽性細胞を排除することによって、移植片生着を促進し得る。例えば、抗ＣＤ２００抗体または他の結合剤は、抗体または結合剤が結合しているＣＤ２００陽性細胞に、エフェクター細胞または他のリガンド（例えば補体成分）を動員し、そのＣＤ２００陽性細胞をエフェクター媒介細胞死の標的とし得る。
【０１２６】
ある特定の態様では、本開示は、移植（例えば異種移植または同種移植）を受けたか、または受けることになる患者を治療する方法であって、ＣＤ２００結合剤を投与するステップを含む方法に関する。ある特定の実施形態では、結合剤は、抗ＣＤ２００抗体またはその抗体結合性断片である。加えて、上記抗体は、マウス、キメラ、ヒト化、ヒトまたは脱免疫化抗ＣＤ２００抗体であり得る。したがって、移植患者を治療する方法は、本開示に記載のＣＤ２００結合剤および抗体のうちの任意のものを含み得る。
【０１２７】
ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２００抗体またはＣＤ２００結合剤は、例えばＴ細胞、Ｂ細胞および樹状細胞などの免疫細胞を含めた、その表面にＣＤ２００を発現するいかなる型の細胞を枯渇させるのにも使用できる。一実施形態では、抗ＣＤ２００抗体は、例えば移植体拒絶反応に関連する免疫応答など、望ましくない免疫応答に関与する免疫細胞を標的とした破壊に有用であり得る。本明細書に提示の抗ＣＤ２００抗体で阻害または防止され得る例示的免疫応答には、例えば、炎症反応（例えば、抗ＣＤ２００抗体は、ＴＮＦ−αおよびＩＮＦ−γなどの炎症性サイトカインの産生を阻害し得る）、同種抗原および／または異種抗原に特異的な抗体の産生、ならびにＴ細胞媒介応答が含まれる。
【０１２８】
したがって、本明細書に記載の方法および組成物によれば、本開示は、同種移植患者を治療する方法に関する。移植臓器、組織または細胞の患者許容性を低減し得るであろうＣＤ２００陽性免疫細胞を減少させるか、または排除するために、移植または同種移植の手順の前または上記手順の後に、本開示の抗ＣＤ２００抗体または他のＣＤ２００結合剤を患者に投与できる。特定の実施形態では、増大したエフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体を移植患者に与える。
【０１２９】
拒絶反応を阻害するか、上述した広範な臓器、組織および細胞移植片の生着を促進させるために、本開示の抗ＣＤ２００抗体を使用できる。例えば骨髄移植の後の移植片対宿主疾患を阻害するのにも上記抗体を使用できる。
【０１３０】
移植片レシピエントがヒトである、ある特定の実施形態では、同種移植片がＭＨＣミスマッチであり得る。ある特定の実施形態では、ＭＨＣミスマッチ同種移植片がＨＬＡミスマッチ同種移植片である。さらなる実施形態では、レシピエントが、同種移植片にとってＡＢＯミスマッチである。
【０１３１】
ＣＤ２００結合剤または抗体を含む治療薬は、併用療法で患者に投与できる。したがって、移植片拒絶を治療または防止するため、または移植体の生着を強化または延長するために、ある特定の集団の免疫細胞を標的として死滅させるものを、併用療法の一部として投与できる。例えば、ＣＤ２００結合剤を含む第１の治療薬（例えば本明細書に記載の抗ＣＤ２００抗体）を受ける患者に、第２の治療薬も与えることができる。ＣＤ２００結合剤は、第２の治療薬と同時に投与できる。代替として、ＣＤ２００アンタゴニストは、第２の治療薬の前に投与することも、後に投与することもできる。第２の治療薬には、それだけに限らないが、ポリペプチド、小分子、化学物質、金属、有機金属化合物、無機化合物、核酸分子、オリゴヌクレオチド、アプタマー、スピーゲルマー（ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ）、アンチセンス核酸、ロックド核酸（ＬＮＡ）阻害剤、ペプチド核酸（ＰＮＡ）阻害剤、免疫調節剤、抗原結合性断片、プロドラッグおよびペプチド模倣化合物が含まれる。特定の実施形態では、第２の治療薬に、抗炎症剤、免疫抑制剤および／または抗感染症剤が含まれる。
【０１３２】
本開示の併用療法には、例えば、本明細書に記載のＣＤ２００結合剤（例えば抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片）と、ステロイド、抗マラリア薬、アスピリン、非ステロイド性抗炎症薬、免疫抑制剤または細胞傷害性薬物との同時投与または連続的な逐次投与が含まれる。それらには、コルチコステロイド（例えば、プレドニソン、デキサメサゾンおよびプレドニソロン）、メトトレキセート、メチルプレドニゾロン、マクロライド免疫抑制剤（例えば、シロリムスおよびタクロリムス）、有糸分裂阻害剤（例えば、アザチオプリン、シクロホスファミドおよびメトトレキセート）、Ｔリンパ球の活性を阻害する真菌代謝産物（例えば、シクロスポリン）、ミコフェノール酸モフェチル、酢酸グラチラマー、細胞傷害性薬剤およびＤＮＡ損傷剤（例えば、クロラムブシル）が含まれる。ある特定の実施形態では、免疫抑制剤は、ＯＫＴ３（ムロモナブＣＤ３）、アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｅｎｅ）、レフルナミド、ブレキナル、ＡＴＧ、ＡＬＧ、１５−デオキシスペルグアリン、ＬＦ１５−０１９５（Ｔｅｓｃｈら、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．、２００１年、６０巻（４号）、１３５４〜６５頁；Ｙａｎｇら、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ
Ｂｉｏｌ．、２００３年、７４巻、４３８〜４４７頁）、ＣＴＬＡ−４−Ｉｇ（ベラタセプト）、リツキサン（ｒｉｔｕｘａｎ）、ＩＶＩｇおよびブレディニン（Ｂｒｅｄｉｎｉｎ）の中から選択される。抗炎症剤には、それだけに限らないが、サリドマイド、ならびにレナリドマイド（レブリミド（Ｒｅｖｌｉｍｉｄ）、ＣＣ−５０１３）およびＣＣ−４０４７（アクチミド）などのその類似体が含まれる。同種移植患者または移植患者には、例えば、抗ＣＤ２００療法を、インターロイキン２受容体のα鎖に特異的に結合する、遺伝的に操作されたヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体であるダクリズマブ、および免疫細胞または他の細胞をターゲッティングする他の様々な抗体（例えば、抗Ｔ細胞抗体）を含めた抗体療法と併用できる。そのような併用療法は、免疫応答を阻害するのに有用であり得る。本開示は、１つまたは複数の薬剤に結合したＣＤ２００結合剤（例えば、本開示に記載の抗体およびその変種など）を含む、移植患者用の治療にも関する。
【０１３３】
ある特定の実施形態では、複数の免疫抑制剤を投与する。他の実施形態では、免疫調節治療法、例えば、血漿交換療法、脾臓摘出または免疫吸着を抗ＣＤ２００抗体と組み合わせて用いる。逆に、抗ＣＤ２００抗体を含む併用療法は、そのような治療の必要性を除去し得る。
【０１３４】
特定の実施形態では、細胞性免疫機能の阻害剤と併せて抗ＣＤ２００抗体を投与する。そのような阻害剤には、それだけに限らないが、シクロスポリンＡ、タクロリムス、ラパマイシン、抗Ｔ細胞抗体、ダクリズマブおよびムロモナブＣＤ３が含まれる。本開示で実証する通り、抗ＣＤ２００抗体と細胞性免疫機能の阻害剤との組合せは、対照の移植片レシピエント（例えば、治療を受けていないレシピエント、または細胞性免疫機能の阻害剤などの単剤療法を受けているレシピエント）で観察された生着に比べて、移植片の生着を増大させる。生着の増大には、例えば、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％または少なくとも約５０％の生着期間（例えば日数、月数または年数で測定される）の増大が含まれる。
【０１３５】
特定の実施形態では、抗ＣＤ２００抗体およびＴ細胞阻害剤を含む併用治療によって、同種移植片の長期生着がもたらされる。ヒトにおける長期生着には、例えば、少なくとも約５年、少なくとも約７．５年および少なくとも約１０年間の移植後生着が含まれる。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片およびＴ細胞活性の阻害剤を含む併用治療によって、移植片の適応がもたらされる。
【０１３６】
いかなる特定の（１つまたは複数の）機序によって束縛されることも望まないが、そのような組合せでは、細胞性免疫機能の阻害剤はＴ細胞応答を阻害し、サイトカインプロフィールを変える可能性があり、一方、抗ＣＤ２００抗体は抗体反応を阻害し、そしておそらくＴ細胞応答も阻害する。特定の実施形態では、抗ＣＤ２００抗体の投与は、他の方法で同じか、または同様なレベルの移植片生着を実現するのに必要な用量より低用量の細胞性免疫機能の阻害剤（例えば、シクロスポリンＡ）の成功裏な使用を可能にする。
【０１３７】
したがって、ある特定の態様では、本開示は、移植片拒絶への既存の免疫抑制剤（シクロスポリン、アザチオプリン、副腎皮質ステロイド、ＦＫ−５０６など）の抑制効果を、抗ＣＤ２００抗体およびそれらの抗原結合性断片など、ＣＤ２００結合剤を用いて強化する方法に関する。
【０１３８】
併用療法の性質に応じて、他の治療薬が投与されている間および／または後に、抗ＣＤ２００抗体の投与を継続することができる。上記抗体の投与は、単回用量または複数回用量で行える。一部の場合には、通常療法の少なくとも数日前に抗ＣＤ２００抗体の投与を開始する。他の場合には、通常療法の投与の直前または投与時に投与を開始する。一部の場合には、他の療法の後に、抗ＣＤ２００抗体を投与するであろう。または、他の療法と交替しながら、上記抗体を投与することができよう。
【０１３９】
ある特定の実施形態では、本開示の抗体は、様々な細胞傷害性化合物を送達するのに使用できる。いかなる細胞傷害性化合物も、本開示の抗体と融合させることができる。融合は、化学的にも、遺伝学的にも実現できる（例えば、単一の融合した分子としての発現を介して）。細胞傷害性化合物は、ポリペプチドまたは小分子などの生物製剤であり得る。当業者ならば理解するであろうが、小分子には、化学的融合が用いられ、一方、生物学的化合物には、化学的融合または遺伝的融合のいずれかを利用することができる。
【０１４０】
細胞傷害性化合物の非限定例には、治療薬、放射線を発する化合物、植物、真菌または細菌由来の分子、生物学的タンパク質およびそれらの混合物が含まれる。細胞傷害性薬物は、例えば、短距離高エネルギーαエミッターを含めた短距離放射線エミッターなど、細胞内に作用する細胞傷害性薬物であり得る。酵素的に活性な毒素およびそれらの断片としては、例えば、ジフテリア毒素Ａ断片、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、外毒素Ａ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデッシンＡ鎖、αサルシン、ある特定のＡｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ある特定のジアンチンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、Ｍｏｒｏｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、Ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトギリン、レストリクトシン、フェノマイシンおよびエノマイシンが例示される。イムノトキシンの酵素的に活性なポリペプチドを調製する手順は、参照により本明細書に組み込まれているＷＯ８５／０３５０８に記載されている。ある特定の細胞傷害性成分は、例えば、アドリアマイシン、クロラムブシル、ダウノマイシン、メトトレキセート、ネオカルチノスタチン（ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）およびプラチナに由来する。
【０１４１】
抗体を細胞傷害性薬剤と結合する手順は以前に記載されており、当業者の範囲内にある。
【０１４２】
本開示に従った別の実施形態では、治療処置の推移および／または有効性をモニターする方法を提供する。この方法は、免疫調節治療薬を投与するステップと、対象におけるＣＤ２００レベルを少なくとも２回測定して、治療薬の有効性を判定するステップと含む。例えば、ＣＤ２００の前治療レベルを確認することができ、上記治療薬を少なくとも１回投与した後に、ＣＤ２００のレベルを再度測定することができる。ＣＤ２００レベルの減少は、有効な治療を示している。開業医は、上記治療薬の投与量または頻度を増大させるかどうかのガイドとして、ＣＤ２００レベルの測定を用いることができる。ＣＤ２００レベルは、直接モニターすることもでき、代わりに、ＣＤ２００と関連する任意なマーカーをモニターすることもできることを理解するべきである。
【０１４３】
Ｖ．投与の様式および製剤
本開示の抗体（純粋な抗体であるか、標識された抗体であるか、毒素に融合した抗体であるかなどに関わらず）の抗体投与経路は、既知の方法、例えば、静脈内、腹腔内、脳内、筋肉内、皮下、眼内、関節内、鞘内、吸入もしくは病巣内経路によるか、または持続放出系による注射または注入に一致するものである。上記抗体は、注入によって、またはボーラス注射によって連続的に投与することが好ましい。上記抗体は、局所投与することも、全身投与することもできる。
【０１４４】
本開示の抗体は、薬学的に許容される担体との混合物中に調製できる。本出願の化合物を製剤化および投与するための技法は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  Ｅａｓｔｏｎ，  ＰＡ、最新版で見出すことができる。この治療組成物は、静脈内に、または鼻もしくは肺を通して投与することができ、液体または粉末エアロゾル（凍結乾燥物）として投与することが好ましい。所望により、上記組成物を非経口的投与または皮下投与することもできる。全身投与する場合、治療組成物は、無菌であり、実質的に無発熱物質であり、かつ適切なｐＨ、等張性および安定性を有する非経口的に許容できる溶液中にあるべきである。例えば、医薬調製物は、ヒト用治療薬としての投与に適するように、発熱物質を実質的に含まない。これら条件は当業者に知られている。
【０１４５】
これらの実施形態に記載の組成物および方法によれば、本開示は、抗ＣＤ２００抗体を含むいかなる医薬組成物にも関する。これには、キメラ、ヒト化、ヒトおよび脱免疫化抗ＣＤ２００抗体、ならびに単鎖抗体を含めた抗原結合性断片が含まれる。本明細書に記載の改変された（１つまたは複数の）エフェクター機能を有する、マウス、キメラ、ヒト化、ヒトおよび脱免疫化変種抗ＣＤ２００抗体ならびに抗原結合性断片も含まれる。本開示の医薬組成物は、Ｔ細胞機能の阻害剤など、１つまたは複数の免疫調節剤または免疫抑制剤をさらに含み得る。
【０１４６】
使用に適した医薬組成物には、本開示の抗体のうちの１つまたは複数を、それらの意図された目的を実現するのに有効な量で含有する組成物が含まれる。より詳細には、治療有効量は、疾患の症候を防止するか、軽減するか、もしくは改善させる、または治療される対象の生存を延長するか、または移植された器官、組織もしくは細胞の生存を延長させるのに有効な、抗体の量を意味する。治療有効量の決定は、とりわけ本明細書に提示する詳細な開示に照らして、十分に当業者の能力内にある。治療上有効な用量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ法およびｉｎ  ｖｉｖｏ法を用いて決定できる。
【０１４７】
ある特定の態様では、本開示は、疾患からの生存の延長または疾患の抑制を必要とする対象（例えば、移植片レシピエント）の疾患からの生存を延長するか、上記対象の疾患を抑制する薬物または薬物パッケージの製造における、ＣＤ２００結合剤および免疫調節剤または免疫抑制剤の使用を提供する。ある特定の実施形態では、上記薬物または薬物パッケージに複数の免疫抑制剤が含有される。ある特定の実施形態では、結合剤（例えば、抗ＣＤ２００抗体またはその断片）および免疫調節剤または免疫抑制剤が、それを必要とする対象への同時投与に適した製剤中にある。ある特定の実施形態では、結合剤（例えば、抗ＣＤ２００抗体またはその断片）および免疫調節剤または免疫抑制剤が、それを必要とする対象への逐次投与に適した製剤（一種または複数）中にある。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２００抗体またはその抗原結合性断片が、それを必要とする対象への連続投与に適した製剤中にある。ある特定の実施形態では、免疫調節剤または免疫抑制剤が、移植片レシピエントなど、それを必要とする対象への連続投与に適した製剤中にある。
【０１４８】
ある特定の実施形態では、ＣＤ２００結合剤が、抗体およびリオプロテクタント（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）を含む凍結乾燥製剤中の抗体である。ある特定の実施形態では、本開示の免疫調節剤または免疫抑制剤が、免疫抑制剤およびリオプロテクタントを含む凍結乾燥製剤中にある。ある特定の実施形態では、上記抗体および免疫抑制剤が、前記抗体、前記免疫抑制剤およびリオプロテクタントを含む同じ凍結乾燥製剤中にある。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２００抗体などのＣＤ２００結合剤が、カートリッジを含むシリンジを含む注射システムであって、上記カートリッジが、注射に適した製剤中の上記抗体を含有する注射システム内にある。ある特定の実施形態では、免疫調節剤または免疫抑制剤が、カートリッジを含むシリンジを含む注射システムであって、上記カートリッジが、注射に適した製剤中の上記免疫調節剤または免疫抑制剤を含有する注射システム内にある。ある特定の実施形態では、抗ＣＤ２００抗体および免疫調節剤または免疫抑制剤が、カートリッジを含むシリンジを含む注射システムであって、前記カートリッジが、注射に適した製剤中に上記抗体および上記免疫調節剤または免疫抑制剤を含有する注射システム内にある。上記抗体およびまたは免疫調節剤または免疫抑制剤は（１つまたは複数の）単位剤形であり得る。したがって、本開示は、体液性応答および細胞性応答を含めた免疫応答を阻害する方法と、移植片拒絶反応を阻害する方法、または移植細胞、組織もしくは臓器の生着を延長する方法とを提供する。詳細には、同種移植細胞、組織または臓器の生着を延長する方法を提供する。これらの方法は、１つまたは複数の免疫抑制剤および／または免疫抑制方法と場合により組み合わせた、抗ＣＤ２００抗体などのＣＤ２００結合剤の使用を対象とする。本開示は、１つまたは複数の薬物または薬物パッケージの製造における、１つまたは複数の免疫抑制剤を場合により含む抗ＣＤ２００抗体などのＣＤ２００結合剤の使用も提供する。そのような薬物または薬物パッケージは、自己免疫障害を有する患者または移植体レシピエントなどにおける、免疫応答を阻害するのに有用である。
【実施例】
【０１４９】
ＶＩ．例示
（実施例１）
抗体ｈＢ７Ｖ３Ｖ２によるＴ細胞の死滅
エフェクター機能を媒介する定常領域（例えばＩｇＧ１定常領域）を含有する抗ＣＤ２００抗体との活性化Ｔ細胞のインキュベーションがＴ細胞の死滅をもたらすかを評価するために、Ｔ細胞を活性化し、以下に記載するような死滅アッセイを組み立てた。
【０１５０】
Ａ．ＣＤ３＋Ｔ細胞単離
ヒト末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を、正常な健常志願者から、Ａｃｃｕｓｐｉｎ（商標）システムを用いる、ヘパリン処理した全血の密度勾配遠心分離により得た。１５ｍＬのＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ−１０７７（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ；ｃａｔ＃Ｈ８８８９）をそれぞれのＡｃｃｕｓｐｉｎチューブ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ；ｃａｔ＃Ａ２０５５）に加え、これを次いで、Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅがフリットを通過することが可能なように、１５００ｒｐｍにて２分間遠心分離した。３０ｍＬの全血をフリットの上に重層し、チューブを２０００ｒｐｍにて１５分間、室温にてブレーキなしで遠心分離した。ＰＢＬ界面の層を採取し、単核細胞を、２％熱失活胎児ウシ血清（ＦＢＳ）（Ａｔｌａｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｆｔ．Ｃｏｌｌｉｎｓ、ＣＯ；ｃａｔ＃Ｆ−０５００−Ｄ）含有ＰＢＳで２回、１０分間の１２００ｒｐｍでの遠心分離を用いて洗浄した。ＣＤ３＋Ｔ細胞を、製造業者の使用説明書に従ってＨＴＣＣ−５カラム（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）に通過させることにより単離した。溶出された細胞を洗浄し、計数して、５％熱失活単一ドナー血清、２ｍＭのＬ−グルタミン、１０ｍＭのＨｅｐｅｓおよびペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩ１６４０に再懸濁した。
【０１５１】
Ｂ．プレートに結合したｍＯＫＴ３を用いる活性化
１２ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ）のウェルを、ＰＢＳで希釈した１０μｇ／ｍＬのｍＯＫＴ３（Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ）との４℃での一晩のインキュベーションにより被覆した。残存抗体を除去し、プレートをＰＢＳで穏やかにすすいだ。上記のようにして単離した精製ＣＤ３＋Ｔ細胞を、プレートに、５％熱失活単一ドナー血清、２ｍＭのＬ−グルタミン、１０ｍＭのＨｅｐｅｓおよびペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩ１６４０中で２×１０６／ウェルの最終濃度にて加えた。細胞を、５％ＣＯ２を含む湿潤インキュベーター中で３７℃にて７２時間維持した。
【０１５２】
Ｃ．ｍＯＫＴ３活性化ＣＤ３＋標的細胞の５１クロム標識
培養期間の最後に、ｍＯＫＴ３活性化ＣＤ３＋細胞を採集し、洗浄し、１０７細胞／ｍＬにて、血清を含まないＲＰＭＩ１６４０中に再懸濁した。細胞を、１２５μＣｉの５１クロム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）／１０６細胞を３７℃にて２時間加えることによりクロム化した。標識細胞を採集し、５％熱失活単一ドナー血清を含有するＲＰＭＩ中で洗浄し、同じ培池中に２×１０５細胞／ｍＬの最終濃度で再懸濁した。
【０１５３】
Ｄ．自己ＮＫエフェクター細胞の調製
同じ個体からのヒト末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を、密度勾配遠心分離により上記のようにして得た。ＰＢＬ界面の層を採取し、単核細胞を、２％熱失活胎児ウシ血清（ＦＢＳ）（Ａｔｌａｓ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、Ｆｔ．Ｃｏｌｌｉｎｓ、ＣＯ；ｃａｔ＃Ｆ−０５００−Ｄ）含有ＰＢＳ中で２回、１０分間の１２００ｒｐｍでの遠心分離を用いて洗浄した。ＣＤ５６＋細胞を、製造業者の使用説明書に従う抗ＣＤ５６コンジュゲート磁気ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ、Ｃａｔ＃１２０−０００−３０７）でのポジティブ選択により単離した。溶出された細胞洗浄し、計数し、５％熱失活単一ドナー血清、２ｍＭのＬ−グルタミン、１０ｍＭのＨｅｐｅｓおよびペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩ１６４０に１．３×１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。細胞を、３ｍＬの同じ培池中に４×１０６細胞／ウェルの最終濃度にて、５％ＣＯ２を含む湿潤インキュベーター中で３７℃にて一晩インキュベートした。培養期間の最後に、細胞を採集し、洗浄し、計数し、２ｍＭのＬ−グルタミン、１０ｍＭのＨｅｐｅｓ、２×１０−５Ｍの２−メルカプトエタノールおよびペニシリン／ストレプトマイシンを含有する血清フリーＲＰＭＩ中に再懸濁した。
【０１５４】
Ｅ．ＡＤＣＣアッセイ
上記のようにして調製した５１Ｃｒ標識ｍＯＫＴ３活性化ＣＤ３＋標的細胞を、９６ウェルプレートのウェルに、５０μＬ中に１０４細胞／ウェルにて分配した。ＣＤ５６＋エフェクター細胞を採集し、洗浄し、計数し、２．５×１０６細胞／ｍＬ（エフェクター：標的細胞の比が２５：１について）または１０６細胞／ｍＬ（エフェクター：標的細胞の比が１０：１について）のいずれかにて再懸濁し、標的細胞を含有するウェルに分配した（１００μＬ／ウェル）。抗ＣＤ２００抗体（Ｖ３Ｖ２−Ｇ１またはＶ３Ｖ２−Ｇ２／Ｇ４）の１０倍希釈物を、１０、１、０．１および０．０１μｇ／ｍＬの最終濃度にて、エフェクターおよび標的に加えた。アッセイの対照は、次のものを含んだ：１）抗体の不在下でのエフェクターおよび標的（０Ａｂ）；２）エフェクターの不在下での標的細胞（自発溶解）および３）０．２％Ｔｗｅｅｎ−８０とインキュベートしたエフェクターおよび標的（最大放出）。すべての細胞培養条件は、３重で行った。細胞を、５％ＣＯ２を含む湿潤インキュベーター中で３７℃にて４時間インキュベートした。培養期間の最後に、プレートを遠心分離して細胞をペレットにし、１５０μＬの細胞上清をシンチレーションバイアルに移し、ガンマシンチレーションカウンター（Ｗａｌｌａｃ）で計測した。結果は、以下の式に従う特異的溶解パーセントとして表す：
【０１５５】
【化１】
0005926702.tif 000002
Ｆ．フローサイトメトリー
上記のようにして調製した１００μＬの細胞懸濁物（ｍＯＫＴ３活性化ＣＤ３＋細胞または精製ＣＤ５６＋ＮＫ細胞）を、９６ウェル丸底プレート（Ｆａｌｃｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ  ＮＪ；ｃａｔ＃３５３０７７）のウェルに分配した。細胞を、以下のフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）−、フィコエリスリン（ＰＥ）−、ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５−、またはアロフィコシアニン（ＡＰＣ）−コンジュゲート抗体（すべてＢｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡから）の記載される組合せとともに、４℃にて３０分間インキュベートした；抗ヒトＣＤ２５−ＦＩＴＣ（ｃａｔ＃５５５４３１）；抗ヒトＣＤ３−ＡＰＣ（ｃａｔ＃５５５３３５）；抗ヒトＣＤ２００−ＰＥ（ｃａｔ＃５５２４７５）；抗ヒトＣＤ８−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５（ｃａｔ＃３４１０５１）；抗ヒトＣＤ４−ＡＰＣ（ｃａｔ＃５５５３４９）；抗ヒトＣＤ５−ＡＰＣ（ｃａｔ＃５５５３５５）および抗ヒトＣＤ５６−ＡＰＣ（ｃａｔ＃３４１０２５）。それぞれの標識抗体についてのアイソタイプ対照も含めた。細胞を２回、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した後に（１８００ｒｐｍの遠心分離を３分間）、細胞を、３００μＬのＰＢＳ（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、Ｈｅｒｎｄｏｎ、ＶＡ；ｃａｔ＃２１−０３１−ＣＶ）に再懸濁し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ装置およびＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ
Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を用いるフローサイトメトリーにより分析した。
【０１５６】
図５に示すように、活性化Ｔ細胞は、その表面で高いＣＤ２００発現を示す。活性化Ｔ細胞は、ＮＫ細胞をエフェクター細胞として用いた場合に、ｈＢ７Ｖ３Ｖ２−Ｇ１の存在下では効果的に死滅するが、ｈＢ７Ｖ３Ｖ２−ｈＧ２Ｇ４の存在下では死滅しない（図６）。これらのデータは、エフェクター機能を有する抗ＣＤ２００抗体が、活性化Ｔ細胞を排除できることを実証する。このような抗体は、移植の状況において、または自己免疫疾患の処置のための治療に有用であり得る。
【０１５７】
制御性Ｔ細胞に加えて、形質細胞様樹状細胞は、ヒトの癌において負の免疫調節性の役割を演じることが示されている（Ｗｅｉ  Ｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００５年６月１５日；６５巻（１２号）：５０２０〜６頁）。形質細胞様樹状細胞を排除する療法と抗ＣＤ２００療法との組合せは、よって、有利であり得る。
【０１５８】
（実施例２）
抗ＣＤ２００ｍＡｂは、マウス心臓移植モデルにおいて急性同種移植片拒絶反応を防ぐ
シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）およびタクロリムスのようなカルシニュリン阻害剤は、狭い治療域を有することが知られている。治療用量であっても、これらの薬剤は、相当な腎毒性の危険性を有する（Ｓｅｒｏｎ，  Ｄ．およびＦ．  Ｍｏｒｅｓｏ．２００４年、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ  ３６巻：２５７Ｓ頁）。治療レベル以下のＣｓＡまたはタクロリムスのいずれかを用いる処置は、腎毒性の発生率は有意に低いが、同時に、著しい移植片拒絶反応を示す（Ｓｅｒｏｎ，  Ｄ．およびＦ．  Ｍｏｒｅｓｏ．２００４年、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ  ３６巻：２５７Ｓ頁；Ｄｕｎｎら、２００１年、Ｄｒｕｇｓ  ６１巻：１９５７頁；Ｓｃｏｔｔら、２００３年  Ｄｒｕｇｓ  ６３巻：１２４７頁）。現在の治療レジメンの限界および副作用は、ＣｓＡの必要性を低減し、低用量のＣｓＡとの相乗作用を有することにより、急性拒絶反応を防ぎ、移植片生着を延長する新規な薬剤を探索することに価値があることを示す。
【０１５９】
本研究では、Ｃ５７ＢＬ／６−ｔｏ−ＢＡＬＢ／ｃ完全ＭＨＣミスマッチマウス心臓移植モデルにおける移植片生着について調べた。それぞれの実験群は、５匹の動物からなった。処置は、以下のようにして与えた：
・抗ＣＤ２００ｍＡｂ：１００μｇ／マウス／日、第０〜１４日、ｉ．ｐ．
・ラパマイシン（Ｒａｐａ）：２ｍｇ／ｋｇ／日、第０〜１３日、経口
・シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）：
低用量／長期間処置：５ｍｇ／ｋｇ／日、第０日〜終点、ｓ．ｃ．
高用量／長期間処置：１５ｍｇ／ｋｇ／日、第０日〜終点、ｓ．ｃ．
高用量／短期間処置：１５ｍｇ／ｋｇ／日、第０〜２８日、ｓ．ｃ．
用いた抗ＣＤ２００ｍＡｂは、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓからハイブリドーマとして得たラット抗マウスＣＤ２００ｍＡｂである、ＯＸ９０に由来するキメラ抗体であるＯＸ９０ｍＧ２ａであった（ＥＣＡＣＣ  Ｎｏ．０３０６２５０２；Ｈｏｅｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９０巻：１７６８〜１７７１頁（２０００年）を参照されたい）。ラット抗体は、マウスＩｇＧ２ａ定常領域と融合されたラット重鎖可変領域と、マウスカッパ定常領域と融合されたラット軽鎖可変領域とを含むように遺伝子改変した。表１についてのデータを得るために用いた抗体は、表２の抗体を得た調製物とは異なる抗体調製物から得た。表２は、ＯＸ９０ＮＥと呼ばれる抗体を用いたデータもさらに含む。抗体ＯＸ９０ＮＥは、エフェクター機能が減少するように操作されたラット抗マウスＣＤ２００抗体である。これは、ＯＸ９０ｍＧ２ａ重鎖の４アミノ酸残基を変異させることにより達成した（軽鎖は同一である）。ＯＸ９０ｍＧ２ａおよびＯＸ９０ＮＥの配列を、図１０に示す。種々のＯＸ９０抗体は、図１１に示すように、遮断抗体である。高レベルのマウスＣＤ２００を発現するＡ２０系統の細胞を、２０μｇ／ｍＬの１２Ｂ４（対照）またはＯＸ９０変異体抗体と、４℃にて３０分間インキュベートした。細胞を洗浄し、１０μｇ／ｍＬのＲ−ＰＥコンジュゲートＣＤ２００Ｒ１−Ｆｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐｒｏｂｅｓ、カタログＺ２５１５５）と、４℃にて３０分間インキュベートした。結合は、フローサイトメトリーにより分析した。示すように、ＯＸ９０ｈＧ２Ｇ４、ＯＸ９０ＮＥおよびＯＸ９０ｍＧ２ａは、Ａ２０細胞上のＣＤ２００へのＲ−ＰＥ標識ＣＤ２００Ｒ１−Ｆｃの結合を効果的に遮断するが、対照抗体１２Ｂ４は結合を遮断しない。
【０１６０】
移植片組織学
剖検にて、心臓組織試料を、１０％緩衝化ホルムアルデヒドで固定し、パラフィンに包埋し、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色のために切片にした。顕微鏡用の切片を、盲検の様式で、病理学者による拒絶の重症度について調べた（Ｂ．Ｇ．）。移植片拒絶反応についての基準は、血管炎、血栓症、出血およびリンパ球浸潤の存在を含み、正常組織と比較して、０、変化なし；１、最小限の変化；２、軽度な変化；３、中等度の変化；または４、著しい変化として評点した。
【０１６１】
免疫組織化学
４マイクロメートルの切片を、Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ至適切断温度（Ｏ．Ｃ．Ｔ．）ゲル（Ｓｋｕｒａ  Ｆｉｎｅｔｅｋ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ）中に包埋された心臓凍結組織試料から切断し、ゼラチン被覆ガラス顕微鏡スライド上に載せ、Ｅｌｉｔｅ  Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ  ＡＢＣキット（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）を用いる標準的な間接的アビジン−ビオチン免疫ペルオキシダーゼ法により染色した。検体を、ビオチンコンジュゲートラット抗マウスＣＤ４ｍＡｂ（クローンＹＴＳ１９１．１．２、Ｃｅｄａｒｌａｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｌｔｄ．、Ｈｏｒｎｂｙ、Ｏｎｔａｒｉｏ、Ｃａｎａｄａ）およびビオチンコンジュゲートラット抗マウスＣＤ８ｍＡｂ（クローン５３−６．７、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）をそれぞれ用いて、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞の存在について評価した。移植片内単球／マクロファージ浸潤は、ビオチンコンジュゲートラット抗マウスＭａｃ−１ｍＡｂ（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ）を用いて検出した。マウスＩｇＧおよびＩｇＭ沈着は、移植片において、ビオチンコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧおよびヤギ抗マウスＩｇＭ（Ｃｅｄａｒｌａｎｅ）をそれぞれ用いて検出した。補体の沈着を同定するために、組織切片を、ポリクローナルヤギ抗マウスＣ３または抗マウスＣ５血清（Ｑｕｉｄｅｌ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）、ビオチン化ウサギ抗ヤギＩｇＧ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、およびＨＲＰコンジュゲートストレプトアビジン（Ｚｙｍｅｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ）と連続してインキュベートした。スライドを、抗体のインキュベーションステップ同士の間にリン酸緩衝化塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、光学顕微鏡の下で調べた。陰性対照は、一次抗体を省略することにより行った。抗体反応性は、処置群あたり５匹の動物からの組織試料を用いて、各切片の５つの強拡大視野で評価した。染色の強度は、以下に従って、０から４＋までで段階に分けた：０、陰性；１＋、不定；２＋、弱い；３＋、中等度および４＋、強い染色。
【０１６２】
【表１】
0005926702.tif 000003
【０１６３】
【表２】
0005926702.tif 000004
アイソタイプ対照（１２Ｂ４）群での心臓移植片は、迅速に拒絶された。さらに、アイソタイプ対照（１２Ｂ４）＋ＣｓＡ群とＣｓＡ単剤療法群との間で、生着時間の差は観察されなかった。表１および２のデータは、抗ＣＤ２００治療が、生着の延長において強い効果を有することを実証する。このことは、エフェクター機能を有する抗体と、エフェクター機能を欠如する抗体の両方で見られた。
【０１６４】
【表３】
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生着および移植片生着に加えて、循環抗ドナー抗体レベルおよび脾臓でのＴ細胞集団の数を、フローサイトメトリーにより測定した。高用量のＣｓＡと組み合わせた抗ＣＤ２００ｍＡｂは、長期間生着レシピエントにおいて抗ドナー抗体の生成を阻害する（図７Ａおよび７Ｂ）。さらに、高用量のＣｓＡと組み合わせた抗ＣＤ２００ｍＡｂは、長期間生着レシピエントにおいて脾臓ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞集団を著しく下方制御する（図８）。
【０１６５】
さらに、以下の細胞集団を、フローサイトメトリーにより測定した：ＣＤ３ＣＤ２００；ＣＤ３ＣＤ２００Ｒ；ＣＤ１９ＣＤ２００；ＣＤ１９ＣＤ２００Ｒ；ＣＤ１１ｃＣＤ２００；およびＣＤ１１ｃＣＤ２００Ｒ。これらの結果を図９Ａ〜Ｃに示す。
【０１６６】
ＩｇＧ、ＩｇＭ、Ｃ３およびＣ５ならびにその他の移植片内細胞マーカー（例えばＣＤ４、ＣＤ８およびＭａｃ−１）の移植片内沈着は、凍結移植片切片で測定した。結果を表４〜６に示す。
【０１６７】
【表４】
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【０１６８】
【表５】
0005926702.tif 000007
【０１６９】
【表６】
0005926702.tif 000008
上記のデータは、ＣｓＡと組み合わせた抗ＣＤ２００ｍＡｂが、マウス心臓移植モデルにおいて心臓同種移植片生着を著しく延長することを実証する。重要なことに、抗ＣＤ２００ｍＡｂは、長期間の同種移植片の受け入れの達成において、ＣｓＡの必要性を著しく低減する。
【０１７０】
（実施例３）
急性同種移植片拒絶反応の予防における抗ＣＤ２００ｍＡｂ、ＯＸ９０ＮＥ−ＡＧの効果
上記のＯＸ９０ＮＥ抗体は、エフェクター機能を欠如していると元来考えられていたが、後になって、ＯＸ９０ＮＥがいくらかのエフェクター機能を保持していることが見出されたので、エフェクター機能を欠如している別の抗体であるＯＸ９０ＮＥ−ＡＧを用いてさらなる実験を行った。ＯＸ９０ＮＥ−ＡＧ抗体は、ＯＸ９０ＮＥ抗体と似ているが、Ａｓｎ  ２９８残基をＧｌｎで置き換える１つのさらなる変異を含む。ＡＧとは、抗体がグリコシル化されていないことを示す（Ａｓｎ２９８はグリコシル化できるが、Ｇｌｎ２９８はグリコシル化できない）。得られた抗体はＡＤＣＣまたはＣＤＣを媒介できない。
【０１７１】
上記の実験と同様に、本研究では、Ｃ５７ＢＬ／６−ｔｏ−ＢＡＬＢ／ｃ完全ＭＨＣミスマッチマウス心臓移植モデルにおける移植片生着について調べた。それぞれの実験群は、５匹の動物からなった。処置は、以下のようにして与えた：
・ＯＸ９０ＮＥ−ＡＧ：１００μｇ／マウス／日、第０〜１４日、ｉ．ｐ．
・シクロスポリンＡ（ＣｓＡ）：１５ｍｇ／ｋｇ／日、第０日〜終点、ｓ．ｃ．
結果を、以下の表７に示す。
【０１７２】
【表７】
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本研究で用いた１０匹すべての動物は、同様に処置した。５匹のマウスを、表３〜６に示すようなさらなる分析を目的として第１６日後に屠殺した。他の５匹のマウスは第９０日には生存したままであり、第１００日に屠殺し、この時点で表３〜６で見られるのと同様の分析を、第１６日および第１００日で屠殺のマウスの両方の群に対して行う。
【０１７３】
本明細書に開示される実施形態に対して、種々の改変を行うことができることが理解される。例えば、当業者が認識するように、本明細書に記載される特定の配列は、ＯＸ−２／ＣＤ２００の結合に用いられるポリペプチド、抗体または抗体フラグメントの機能性に必ずしも悪影響を与えることなく、少し変更することができる。例えば、抗体配列内の単一または複数のアミノ酸の置換は、抗体または断片の機能性を破壊することなく、頻繁に行うことができる。よって、本明細書に記載される特定の抗体と７０％を超える同一性の程度を有するポリペプチドまたは抗体は、本開示の範囲内にあると理解されるべきである。特に有用な実施形態において、本明細書に記載される特定の抗体と約８０％より大きい同一性を有する抗体が企図される。別の有用な実施形態において、本明細書に記載される特定の抗体と約９０％より大きい同一性を有する抗体が企図される。よって、上記の記載は、限定すると解釈されるべきではなく、単に、好ましい実施形態の例示であると解釈されるべきである。当業者は、本開示の範囲および趣旨の中で他の改変を想定するだろう。
【０１７４】
参考文献
以下の文献は、本発明が属する技術分野をより詳細に記載するために、本明細書中に参考として援用される。以下の刊行物または上記で参考として援用されたものと、本開示との任意の不一致は、本発明が優先させるよう解決される。
【０１７５】
【数１】
0005926702.tif 000010
【０１７６】
【数２】
0005926702.tif 000011
【０１７７】
【数３】
0005926702.tif 000012
【図１Ａ】
0005926702.tif 000013
【図１Ｂ】
0005926702.tif 000014
【図１Ｃ】
0005926702.tif 000015
【図１Ｄ】
0005926702.tif 000016
【図１Ｅ】
0005926702.tif 000017
【図１Ｆ】
0005926702.tif 000018
【図２Ａ】
0005926702.tif 000019
【図２Ｂ】
0005926702.tif 000020
【図２Ｃ】
0005926702.tif 000021
【図２Ｄ】
0005926702.tif 000022
【図２Ｅ】
0005926702.tif 000023
【図２Ｆ】
0005926702.tif 000024
【図３Ａ】
0005926702.tif 000025
【図３Ｂ】
0005926702.tif 000026
【図３Ｃ】
0005926702.tif 000027
【図３Ｄ】
0005926702.tif 000028
【図３Ｅ】
0005926702.tif 000029
【図３Ｆ】
0005926702.tif 000030
【図４Ａ】
0005926702.tif 000031
【図４Ｂ】
0005926702.tif 000032
【図４Ｃ】
0005926702.tif 000033
【図４Ｄ】
0005926702.tif 000034
【図４Ｅ】
0005926702.tif 000035
【図４Ｆ】
0005926702.tif 000036
【図５】
0005926702.tif 000037
【図６】
0005926702.tif 000038
【図７Ａ】
0005926702.tif 000039
【図７Ｂ】
0005926702.tif 000040
【図８】
0005926702.tif 000041
【図９Ａ】
0005926702.tif 000042
【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０】
0005926702.tif 000045
【図１１】
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【配列表】
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