(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
レボイソバレリルスピラマイシンＩであるレボイソバレリルスピラマイシン化合物であって、
前記レボイソバレリルスピラマイシンＩの化学構造式は式（Ｉ）の示すとおり、溶剤としてクロロホルムを用い、温度２５℃、濃度０．０２ｇ／ｍｌの条件で測定した場合、比旋光度は［α］Ｄ＝−４９°〜−６２°とし、融点は１１６〜１２２℃とし；
前記レボイソバレリルスピラマイシンＩは結晶体化合物であり、Ｃｕ−Ｋα放射線を用いて測定されたＸ−放射線粉末回折は、２θ＝７．６°、８．０°、１０．０°、１１．４°、１６．４°、１７．０°、１７．５°、１７．９°、１９．５°、２２．７°、２３．７°及び２４．４°に特徴的なピークを有することを特徴とする、レボイソバレリルスピラマイシン化合物。
【化１】
0005945868.tif 000022
【請求項２】
前記レボイソバレリルスピラマイシンＩの融点は１１８〜１２０℃であることを特徴とする、請求項１に記載されたレボイソバレリルスピラマイシン化合物。
【請求項３】
請求項１に記載されたレボイソバレリルスピラマイシン化合物を含有する製剤であって、
レボイソバレリルスピラマイシンＩ、レボイソバレリルスピラマイシンＩの薬用塩、レボイソバレリルスピラマイシンＩと薬学的に許容される補助材料、又はレボイソバレリルスピラマイシンＩの薬用塩と薬学的に許容される補助材料を含有し、レボイソバレリルスピラマイシンＩの純度は９０重量％を上回ることを特徴とする製剤。
【請求項４】
レボイソバレリルスピラマイシンＩの含有量は１０〜１５００ｍｇとする単位分量を含むことを特徴とする、請求項３に記載された製剤。
【請求項５】
レボイソバレリルスピラマイシンＩの重量のパーセンテージは１０〜９５％とすることを特徴とする、請求項３に記載された製剤。
【請求項６】
レボイソバレリルスピラマイシンＩ及びクエン酸、アジピン酸、マレイン酸の少なくとも１つを用いて調製される注射用液体薬剤、注射用粉末薬剤又は凍結乾燥粉末薬剤を含むことを特徴とする、請求項３に記載された製剤。
【請求項７】
前記レボイソバレリルスピラマイシンＩの純度は９５重量％を上回ることを特徴とする、請求項３に記載された製剤。
【請求項８】
前記レボイソバレリルスピラマイシンＩの純度は９８重量％を上回ることを特徴とする、請求項３に記載された製剤。
【請求項９】
前記レボイソバレリルスピラマイシンＩの含有量は１００〜５００ｍｇとする単位分量を含むことを特徴とする、請求項４に記載された製剤。
【請求項１０】
レボイソバレリルスピラマイシンＩの重量のパーセンテージは７５〜９５％とすることを特徴とする、請求項５に記載された製剤。
【請求項１１】
請求項１に記載されたレボイソバレリルスピラマイシン化合物の調製方法であって、
レボイソバレリルスピラマイシンＩの結晶体化合物の調製方法は、固形のレボイソバレリルスピラマイシンＩを酢酸エチル、無水エタノール及び無水アセトンの混合溶剤に溶解させ、そして純水を加えながら撹拌し、純水を加えた後、５℃〜１５℃まで冷却し、冷却しながら撹拌を続け、レボイソバレリルスピラマイシンＩの結晶体化合物を得ることを含み、混合溶剤における酢酸エチル、無水エタノール及び無水アセトンの体積比は１：０．１〜１０：０．５〜１とすることを特徴とする、調製方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載されたレボイソバレリルスピラマイシン化合物の調製方法であって、
レボロキタマイシンの調製、レボイソバレリルスピラマイシンＩの純化を含み、前記レボロキタマイシンは、前記レボイソバレリルスピラマイシンＩの成分を含有する混合物であり、前記調整方法のうち、レボロキタマイシンの調製過程は４”−イソバレリルトランスフェラーゼ遺伝子を含有するスピラマイシンが生ずる細菌クローニング菌株ＷＳＪ−１９５を培養後、バイオ発酵を行い、発酵液について抽出を行うことを含み、
ｐＨ値６．０〜９．０の条件の下で発酵を行い、且つｐＨ値が時間が経つに伴って変化する曲線は３つの連続的な段階を呈し、第一段階は方程式ｙ１＝ｋ１ｘ１＋６．０を満足し、前記第一段階の方程式のうちｋ１およびｘ１は０．０２２７≦ｋ１≦０．１３６４、０＜ｘ１≦２２、第二段階は方程式ｙ２＝ｋ２ｘ２＋ｂ２を満足し、前記第二段階の方程式のうちｋ２、ｂ２およびｘ２は−０．０７３５≦ｋ２＜０、６．５＜ｂ２≦１０．６２、２２≦ｘ２≦５６、第三段階は方程式ｙ３＝ｋ３ｘ３＋ｂ３を満足し、前記第三段階の方程式のうちｋ３、ｂ３およびｘ３は０＜ｋ３≦０．００７８、６．０６≦ｂ３＜６．５、５６≦ｘ３≦１２０であり、
前記ｘ１、ｘ２、ｘ３は時間を表し、前記ｙ１、ｙ２、ｙ３はｐＨ値を表し、前記ｋ１、ｋ２、ｋ３、ｂ２、ｂ３は各発酵過程における定数を表し、
バイオ発酵液抽出のステップとして、発酵液を硫酸アルミニウムで処理しろ液を得、ろ液のｐＨを８．５〜９．０に調節し、そして酢酸ブチルを用いて抽出を行い、酢酸ブチル抽出液はそれぞれ無塩水及び１％ＮａＨ２ＰＯ４を用いて洗浄し、さらにｐＨ２．０〜２．５の水を用いて抽出を行い、水相抽出液を得、ｐＨを４．５〜５．５まで調節し、揮発によって残りの酢酸ブチルを除去し、水抽出液を得、ろ過を行い、ろ液のｐＨを８．５〜９．０に調節し、沈澱を行い、精製水を用いてすすぎ、湿品を得、乾燥させ、レボロキタマイシンを得ることを含み、
レボイソバレリルスピラマイシンＩの純化のステップとして、クロマト分離法でレボロキタマイシンのサンプルについて純化を行い、ＯＤＳクロマトグラフィカラム、アセトニトリル及び酢酸アンモニウム緩衝液を用いて勾配溶出およびレボイソバレリルスピラマイシンＩの成分ターゲットピークについての分離を行い、
レボイソバレリルスピラマイシンＩの抽出過程において、調製型高速液体クロマトグラフィー、ＵＶ検出によってレボイソバレリルスピラマイシンＩのＵＶスペクトルを記録し、レボイソバレリルスピラマイシンＩの保留時間４４．７５９分に従ってレボイソバレリルスピラマイシンＩのサンプルを収集することを含み、
流動相はアセトニトリルＡ及びｐＨ＝８．５、１５０ｍＭ酢酸アンモニア水溶液の混合溶剤であり、レボイソバレリルスピラマイシンＩの純化条件は、線形グラデーション：０〜６０分間ではＡは２５％〜６５％；６１〜９０分間ではＡは６５％〜９０％；
流速：２６０ｍＬ／分；
サンプル注入量：１０ｍＬ；
サンプル注入濃度：０．５ｇ／ｍＬ；
検出波長：２３１ｎｍ；
収集方式：ＵＶトリガ収集
であり、
レボイソバレリルスピラマイシンＩの抽出過程において、収集したレボイソバレリルスピラマイシンＩを、回転蒸発によってアセトニトリルを除去し、そして酢酸エチルを用いて抽出を行い、蒸発によって抽出液の中の酢酸エチルを除去し、ペースト状のサンプルを得、サンプルを石油エーテルによって再溶解し、さらに蒸発によって石油エーテルを除去し、レボイソバレリルスピラマイシンＩの白色の粉末状固形物を得ることを特徴とする、調製方法。
【請求項１３】
レボロキタマイシンの調製過程における培養過程として、４”−イソバレリルトランスフェラーゼ遺伝子を含有するスピラマイシンが生じる細菌クローニング菌株ＷＳＪ−１９５を、大豆粕粉２％、ブドウ糖１％、でんぷん３％、ＣａＣＯ３０．５％、ＮａＣｌ０．４％及び寒天２％を含有する斜面培養基において、ｐＨ６．５〜７．５、温度２８〜３８℃の条件の下で８〜１５日培養し、そして大豆粕粉１．５％、でんぷん３．０％、ＮａＣｌ０．４％、ＣａＣＯ３０．５％、魚ペプトン０．３％及びＫＨ２ＰＯ４０．０５％を含有する種培養基に接種し、ｐＨ６．５〜７．５、温度２５〜３０℃の条件の下で４０〜８０時間培養し、０．１〜２０％の接種量にてブドウ糖０．５％、でんぷん６．０％、酵母粉０．５％、魚粉２．０％、ＮＨ４ＮＯ３０．６％、ＮａＣｌ１．０％、ＣａＣＯ３０．５％、ＫＨ２ＰＯ４０．０５％、ＭｇＳＯ４０．１％、豆油０．５％及び消泡剤０．０２％を含有する発酵培養基に植え込み、２６〜３０℃の条件の下で７２〜１２０時間培養し、発酵液を得ることを特徴とする、請求項１１に記載された調製方法。
【請求項１４】
請求項１１に記載された調製方法であって、
混合溶剤における酢酸エチル、無水エタノール及び無水アセトンの体積比は１：２〜８：０．８〜１とすることを特徴とする、調製方法。
【請求項１５】
請求項１に記載されたレボイソバレリルスピラマイシ化合物或いは請求項３〜１０のいずれかに記載された製剤の感染症を治療及び／又は予防するための薬物の調製のための使用方法。
【請求項１６】
請求項１に記載されたレボイソバレリルスピラマイシン化合物又は請求項３〜１０のいずれかに記載された製剤の抗菌薬物調製のための使用方法であって、
菌は、肺炎連鎖球菌、Ａ群連鎖球菌、化膿連鎖球菌、腸球菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、カタル球菌、淋菌、インフルエンザ桿菌、大腸菌、毒素産生性大腸菌、病原性大腸菌、侵襲性大腸菌、緑膿菌、肺炎桿菌、プロテウスブルガリス、チフス菌、アシネトバクター属、シトロバクター属、セラチア菌、ソンネ赤痢菌、フレクスナー赤痢菌、カンジダアルビカンス、並びにレジオネラニューモフィラ、ゴールドマンレジオネラ菌、レジオネラボウズマニイ、レジオネラダモフィイ、レジオネラジョルダニス、レジオネラミクダーディなどのレジオネラ菌、及びバクテロイデスフラジリス、多形性菌、バクテロイデスブルガタス、バクテロイデスディスタソニス、バクテロイデスルミニコラ、ブルセラアサッカロリティカ、口腔ブルセラ、核酸桿菌、フソバクテリウムルッシイ、ビフィズス菌、乳酸桿菌、ペプトストレプトコッカス属、プロピオニバクテリウムアクネス、ウェルシュ菌、酵母様真菌などの嫌気性菌を含むことを特徴とする使用方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マクロライド系遺伝子工学的新規抗生物質、とりわけレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩ、その結晶体、その薬用製剤、調製方法及び抗感染症疾患薬
物での応用に関する。
【背景技術】
【０００２】
マクロライド系抗生物質は臨床的に重要な地位にあり、グラム陽性菌とマイコプラズマに
対し非常に良い活性を持ち、一部のグラム陰性菌に対しても働きがあり、また、ますます
流行する一部のトキソプラズマ、レジオネラ菌などコントロールしにくい病原体に対し、
優れた抗菌活性及び組織透過性を持ち、経口投与の場合、吸収が速く、不良反応が少なく
、肝、腎の機能に基本的に影響を与えず、さらに潜在的な免疫調節作用があり、９０年代
には、成人呼吸器感染症の治療においてβ−ラクタム系薬物の競争者になるだろうと考え
られていた。
【０００３】
キラリティー（Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ）は三次元オブジェクトの基本的な属性であり、自然
界の本質的な属性の１つである。タンパク質、多糖類、核酸、酵素など生命活動の重要な
基礎としての生体高分子はほとんどキラルなものであり、これらの高分子は動物体内で重
要な生理機能を持つ場合が多い。キラル薬物（ｃｈｉｒａｌ  ｄｒｕｇ）は薬物の分子構
造にキラル中心を導入後に得られる互いに実物と鏡像になる一対の鏡像異性体のことをい
う。これらの鏡像異性体は、物理的化学的性質が基本的に似ており、旋光性のみが異なり
、それぞれＲ−タイプ（右巻き）又はＳ−タイプ（左巻き）、ラセミと命名されている。
しかし、ここ２０年来、薬学研究の進展に伴い、薬物エナンチオマーの立体選択性（ｓｔ
ｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ）の違いにより各受容体との親和性が異なるため薬理作
用が大きく異なることが証明されている。人々はキラル薬物の中で活性の高いエナンチオ
マーを優性エナンチオマー（Ｅｕｔｏｍｅｒ）と呼び、活性の低い又は活性のないエナン
チオマーを劣性エナンチオマー（Ｄｉｓｔｏｍｅｒ）と呼んでいる。多くの場合、劣性エ
ナンチオマーは、効果がないばかりか、優性エナンチオマーの一部の効果を解消し、さら
に深刻な毒性副反応を生じ、効果の差異の複雑性を示す場合がある。単一エナンチオマー
の治療指数はそのラセミ体とかなりの違いがあることも明らかになってくる。たとえば、
周知のＤＬ−（＋−）シントマイシンの治療効果はＤ（−）クロラムフェンコルの半分し
かなく、プロプラノロール（ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ）Ｌ−異性体の薬物活性はＤ−異性
体より１００倍高く、（−）メタドンは強力な鎮痛剤だが、（＋）は効果がない。また、
毒性の方も差異があり、たとえば、サリドマイド（ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ）の２つのエ
ナンチオマーのマウスに対する鎮痛作用が類似するが、Ｓ（−）異性体及びその代謝物の
みが、胎児毒性及び催奇形性がある。ケタミンは、広く応用される特性のある麻酔鎮痛薬
だが、幻覚を引き起こすなどの副作用がある。研究によると、Ｓ（＋）体の作用はＲ（−
）体より３〜４倍強く、毒性副作用は明らかに後者に関連している。キラル薬物の効果の
大きな違いはキラル薬物の研究開発や分離分析の発展を促している。「キラリティー」技
術を利用することにより、人々は薬物に含まれる働きのない又は毒性副作用のある成分を
効果的に取り除き、単一の指向性構造を有する純粋なキラル薬物を生産することが可能に
なり、これにより、薬物の成分はより純粋になり、疾病治療時に効果がより早く現れ、治
療過程がより短くなる。したがって、キラル薬物の研究は目下国際的な新薬研究の新方向
の１つになっており、各国政府及び各大手医薬会社は多額の資金を投下し、キラル薬物製
剤、キラル原材料、キラル中間体などの分野で研究開発を展開し、世界のキラリティー制
薬市場の占有に取り組んでいる。また、キラリティー技術の継続的な改善とりわけ液体ク
ロマトグラフィーの迅速かつ広範囲にわたる応用に伴い、キラル薬物エナンチオマーの分離分析及び測定が促進された。単一エナンチオマーキラル薬物は広汎な応用が得られた。
【０００４】
レボロキタマイシンは遺伝子工学技術を利用して開発された新型スピラマイシンの誘導体であり、もともとはバイオテクノロジースピラマイシンと命名され、かつて、生技マイシン［特許番号：ＺＬ９７１０４４４０．６  ］という名称が使用されていた。「中国薬品通用名称命名原則」に基づき、中国国家薬典委員会による技術審査及び検討を経て、バイオテクノロジースピラマイシンの中国語通用名称はレボロキタマイシンに変更され、英文名称はＣａｒｒｉｍｙｃｉｎである。レボロキタマイシンの化学構造は４”−レボイソバレリルスピラマイシンを主成分とし、４”−レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩを含み、さらに約６種の４”−位のヒドロキシアシル化のスピラマイシンを含有するため、その化学名称は４”−アシル化スピラマイシンと総称されている。
【０００５】
レボロキタマイシンの主成分の化学構造は式（１）の示すとおり：
【０００６】
【化１】
0005945868.tif 000002
【０００７】
そのうち、レボイソバレリルスピラマイシン  Ｉの中のＲはＨから選択し、
レボイソバレリルスピラマイシン  ＩＩの中のＲはＣＯＣＨ３から選択し、
レボイソバレリルスピラマイシン  ＩＩＩの中のＲはＣＯＣＨ２ＣＨ３から選択する。
【０００８】
レボロキタマイシンは１６員環マクロライド系抗生物質であり、その作用方法として、細菌リボソームとの結合によりそのタンパク質の合成を抑制する。
【０００９】
薬物動態学の研究結果によると、レボロキタマイシンに含まれる活性を有する有効な成分は主にレボイソバレリルスピラマイシン  Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩである。レボロキタマイシンは動物体内に入ってから、間もなくスピラマイシンに代謝され、親薬物レボイソバレリルスピラマイシン  Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩと活性代謝物スピラマイシン  Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ  のＡＵＣ０−ｔ合計で計算し、その経口絶対的バイオアベイラビリティは平均して９１．６％である。文献の報道によると、スピラマイシンの経口絶対的バイオアベイラビリティは３０〜４０％（Ｆｒｙｄｍａｎ  ＡＭ  ｅｔ  ａｌ  Ｊ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．１９８８，２２（ｓｕｐｐｌ  Ｂ）：９３−１０３）である。このことから、レボイソバレリルスピラマイシンの構造は明らかに活性成分スピラマイシンのバイオアベイラビリティを改善していることが明らかである。１回薬を飲むことでレボロキタマイシンの解消が比較的に遅く、Ｔ１／２は２３〜２７時間の間にある。
【００１０】
体外試験の結果によると、レボロキタマイシンはグラム陽性菌とりわけ一部の耐薬菌（β−ラクタム耐性黄色ブドウ球菌、エリスロマイシン耐性黄色ブドウ球菌など）に対し効果があり、同種類の薬と明らかな交差耐薬性がない。同時に、レボロキタマイシンはマイコプラズマ、クラミジアに対し優れた抗菌活性を持ち、一部のグラム陰性菌に対しても抗菌活性を持ち、また、トキソプラズマ、レジオネラ菌などに対して、良好な抗菌活性及び組織透過性を持ち、さらに潜在的な免疫調節作用がある。その動物体内抗菌活性は明らかに体外より優れている（ＺＬ２００３１０１２２４２０．９）。臨床研究によると、毎日、レボロキタマイシン錠剤２００ｍｇ〜４００ｍｇを５〜７日服用すれば、化膿連鎖球菌に起因する急性細菌性咽頭炎、急性化膿性扁桃炎、感受性菌に起因する細菌性副鼻腔炎、急性気管支炎、肺炎連鎖球菌、インフルエンザ菌及び肺炎マイコプラズマに起因する軽度の肺炎、マイコプラズマ、クラミジアに起因する非淋菌性尿道炎、感受性菌に起因する皮膚軟部組織感染症、歯周炎、中耳炎などの感染症を治療することができる。総有効率は９２．６８％である。
【００１１】
レボロキタマイシンは経口服用で安全かつ効き目のある抗生物質であることは臨床研究によっ
て証明されている。しかし、レボロキタマイシン自身は発酵によって製造される製品で多成分
薬物であるため、成分のさらなる分離及び抽出は非常に困難なことである。現在実行され
ている高速液体クロマトグラフィー法では、レボロキタマイシンサンプルの中の様々なアシル
化スピラマイシンを分離することができ、たとえば、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩと（イソ）ブチリルスピラマイシンＩＩＩ、（イソ）ブチリルスピラマイシンＩＩとプロピオニルスピラマイシンＩＩＩ、プロピオニルスピラマイシンＩＩＩとその前の小さな成分、プロピオニルスピラマイシンＩＩとアセチルスピラマイシンＩＩＩの分離度は中国薬典で規定されている１．５以上に達しており、アセチルスピラマイシンＩＩＩとその前の小さな成分の分離度は１．２である。
【００１２】
本発明の発明者は大量の研究を行った結果、培養発酵条件の調整及び改善により、意外に
１種のレボロキタマイシンが得られた。該レボロキタマイシンはより優れた抗感染活性を
有する。
【００１３】
現在では、高速液体クロマトグラフィー法を用いてレボロキタマイシンの９つのアシル化スピ
ラマイシン成分を測定し、そのうち、レボイソバレリルスピラマイシン（Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ）の合計含量は６０％以上とし、アシル化スピラマイシンの合計含量は８０％以上とする。発酵によって生じる多成分抗生物質に関しては、なかなか化学薬品の注射剤に対する品質管理標準を満足できないが、臨床重症患者や経口投薬に適しない患者に対して、注射投薬は速やかに効果が見られることから、レボイソバレリルスピラマイシンの単一成分製剤の開発は非常に深遠な意義を持つ。本発明では、レボロキタマイシンに対するさらなる研究によりレボイソバレリルスピラマイシン  Ｉの単一成分を得られ、その純度は９８重量％に達することができる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明の一番目の目的は、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、レボイソバレリルスピラ
マイシンＩＩ、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩを提供することにある。
【００１５】
本発明の二番目の目的は、それぞれレボイソバレリルスピラマイシンＩ、レボイソバレリ
ルスピラマイシンＩＩ、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩを含有する１種の製剤を
提供することにある。
【００１６】
本発明の三番目の目的は、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、レボイソバレリルスピラ
マイシンＩＩ、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの調製方法を提供することにある。
【００１７】
本発明の四番目の目的は、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、レボイソバレリルスピラ
マイシンＩＩ、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの応用を提供することにある。
【００１８】
本発明の五番目の目的は、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、レボイソバレリルスピラ
マイシンＩＩ、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの結晶体ならびにそれぞれ該結晶
体を含有する製剤を提供することにある。
【００１９】
本発明の目的を実現するために、本発明では以下の技術案を採用する。
【００２０】
本発明はレボイソバレリルスピラマイシンＩ化合物に関する。上記レボイソバレリルスピ
ラマイシンＩの化学構造式は式（Ｉ）の示すとおりである。
【００２１】
【化２】
0005945868.tif 000003
【００２２】
その比旋光度は［α］Ｄ  ＝  −４９°〜−６２°とし、好ましくは−５１°〜−６０°
、より好ましくは−６０°〜−６２°、より好ましくは−５１°〜−５８°、より好まし
くは−５３°〜−５８°、より好ましくは−５５°〜−５８°、より好ましくは−５５°
〜−５７°、より好ましくは−５８°〜−６０°、より好ましくは−５１°〜−５５°、
より好ましくは−５３°〜−５５°、より好ましくは−４９°〜−５１°（Ｃ＝０．０２
ｇ／ｍｌ、ＣＨＣｌ３、２５℃、λ＝５８９．３ｎｍ）とし、融点は１１６〜１２２とし
、好ましくは１１８〜１２０℃とする。
【００２３】
本発明はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ化合物に関する。上記レボイソバレリルス
ピラマイシンＩＩの化学構造式は式（ＩＩ）の示すとおりである。
【００２４】
【化３】
0005945868.tif 000004
【００２５】
その比旋光度は［α］Ｄ＝−５５°〜−６１°とし、好ましくは−５７°〜−５９°（Ｃ
＝０．０２ｇ／ｍｌ、ＣＨＣｌ３、２５℃、λ＝５８９．３ｎｍ）とし、融点は１２０℃
〜１２８℃とし、好ましくは１２３℃〜１２５℃とする。
【００２６】
本発明はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ化合物に関する。上記レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの化学構造式は式（ＩＩＩ）の示すとおりである。
【００２７】
【化４】
0005945868.tif 000005
【００２８】
その比旋光度は［α］Ｄ  ＝  （−）−４９°〜−５１°（Ｃ＝０．０２ｇ／ｍｌ、ＣＨＣｌ３、２５℃、λ＝５８９．３ｎｍ）とし、融点は１１６℃〜１１８℃とする。
【００２９】
本発明は、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、レボイソバレリルスピラマイシンＩの薬用塩、レボイソバレリルスピラマイシンＩと薬学的に許容される補助材料、又はレボイソバレリルスピラマイシンＩの薬用塩と薬学的に許容される補助材料を含み、上記レボイソバレリルスピラマイシンＩの純度は９０重量％を上回り、好ましくは９５重量％を上回り、より好ましくは９８重量％を上回ることを特徴とする、１種のレボイソバレリルスピラマイシンＩの製剤に関する。
【００３０】
本発明は、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩの薬用塩、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩと薬学的に許容される補助材料、又はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩの薬用塩と薬学的に許容される補助材料を含み、上記レボイソバレリルスピラマイシンＩＩの純度、９０重量％を上回り、好ましくは９５重量％を上回り、より好ましくは９８重量％を上回ることを特徴とする、１種のレボイソバレリルスピラマイシンＩＩの製剤に関する。
【００３１】
本発明は、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの薬用塩、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩと薬学的に許容される補助材料、又はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの薬用塩と薬学的に許容される補助材料を含み、上記レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの純度は９０重量％を上回り、好ましくは９５重量％を上回り、より好ましくは９８重量％を上回ることを特徴とする、１種のレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの製剤に関する。
【００３２】
本発明の一番目の好ましい方案では、本発明の製剤は液体製剤、固形製剤、半固形製剤又は気体製剤であり、上記の液体製剤は注射剤、輸液剤、溶液剤、合剤、シロップ剤、チンキ剤、ペプタイザー、芳香水剤、グリセリン剤、コロイド溶液剤、粘質物、懸濁液又は乳濁液から選択し、上記の固形製剤は注射用パウダー、注射用凍結乾燥パウダー、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、丸剤、丹剤又はフィルム剤から選択し、上記の半固形製剤は軟膏剤、硬膏剤、坐剤、エキス剤、ゲル剤から選択し、上記の気体製剤はエーロゾル剤又はスプレー剤、好ましくは注射用液体薬剤、注射用粉末薬剤、凍結乾燥粉末薬剤から選択する。
【００３３】
本発明の二番目の好ましい方案では、本発明の製剤に含まれるレボイソバレリルスピラマイシンＩの単位用量は１０〜１５００ｍｇとし、好ましくは５０〜１０００ｍｇ、より好ましくは１００〜５００ｍｇとし、本発明の製剤に含まれるレボイソバレリルスピラマイシンＩＩの単位用量は１０〜１５００ｍｇとし、好ましくは５０〜１０００ｍｇ、より好ましくは１００〜５００ｍｇとし、本発明の製剤に含まれるレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの単位用量は１０〜１５００ｍｇとし、好ましくは５０〜１０００ｍｇ、より好ましくは１００〜５００ｍｇとする。
【００３４】
本発明の三番目の好ましい方案では、レボイソバレリルスピラマイシンＩの製剤の中での重量パーセンテージは１０〜９５％とし、好ましくは５０〜９５％、より好ましくは７５〜９５％とし、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩの製剤の中での重量パーセンテージは１０〜９５％とし、好ましくは５０〜９５％、より好ましくは７５〜９５％とし、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの製剤の中での重量パーセンテージは１０〜９５％とし、好ましくは５０〜９５％、より好ましくは７５〜９５％とする。
【００３５】
本発明はまた、それぞれレボイソバレリルスピラマイシンＩ、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ又はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩを含有する製剤に関する。
【００３６】
上記の製剤はレボイソバレリルスピラマイシンＩ及びクエン酸、アジピン酸、マレイン酸の中の少なくとも１種の調製される注射用液体薬剤、注射用粉末薬剤又は凍結乾燥粉末薬剤を含み、上記の製剤はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ及びクエン酸、アジピン酸、マレイン酸の中の少なくとも１種の調製される注射用液体薬剤、注射用粉末薬剤又は凍結乾燥粉末薬剤を含み、上記の製剤はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ及びクエン酸、アジピン酸、マレイン酸の中の少なくとも１種の調製される注射用液体薬剤、注射用粉末薬剤又は凍結乾燥粉末薬剤を含む。
【００３７】
そのうち、レボイソバレリルスピラマイシンＩとクエン酸とのモル比は１：０．８〜１．
２であり、レボイソバレリルスピラマイシンＩとアジピン酸とのモル比は１：０．８〜１
．２であり、レボイソバレリルスピラマイシンＩとマレイン酸とのモル比は１：０．８〜
１．２であり、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩとクエン酸とのモル比は１：０．８
〜１．２であり、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩとアジピン酸とのモル比は１：０
．８〜１．２であり、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩとマレイン酸とのモル比は１
：０．８〜１．２であり、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩとクエン酸とのモル比
は１：０．８〜１．２であり、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩとアジピン酸との
モル比は１：０．８〜１．２であり、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩとマレイン
酸とのモル比は１：０．８〜１．２である。
【００３８】
本発明はまた、レボロキタマイシンの調製、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又
はＩＩＩの純化を含むレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩの調製方法に
関する。
【００３９】
そのうち、レボロキタマイシンの調製過程は、４”−イソバレリルトランスフェラーゼ遺
伝子を含有するスピラマイシンが生じる細菌クローニング株ＷＳＰ−１９５を培養後、バ
イオ発酵を行い、そして発酵液について抽出を行い、ｐＨ値６．０〜９．０、好ましくは
６．０〜８．０、より好ましくは６．０〜７．５の条件の下で発酵を行うことを含み、ま
た、ｐＨ値が、時間が経つに伴って変化する曲線は３つの連続的な段階を呈し、第一段階
は方程式ｙ１＝ｋ１ｘ１＋６．０を満足し、そのうち０．０２２７≦ｋ１≦０．１３６４
、０＜ｘ１≦２２、第二段階は方程式ｙ２＝ｋ２ｘ２＋  ｂ２を満足し、そのうち−０．
０７３５≦ｋ２＜０、６．５＜ｂ２≦１０．６２、２２≦ｘ２≦５６、第三段階は方程式
ｙ３＝ｋ３ｘ３＋  ｂ３を満足し、そのうち０＜ｋ３≦０．００７８、６．０６≦ｂ３＜
６．５、５６≦ｘ３≦１２０とする。本発明では、培養発酵条件の調整と改善、とりわけ
ｐＨ調節剤による発酵中のｐＨ値に対する厳格なコントロールにより、発酵中にｐＨ値が
時間が経つに伴って変化する曲線は３つの連続的な段階を呈し、各段階はそれぞれ所定の
方程式を満足するようにし、これにより光学活性を有するレボロキタマイシンを得る。さ
らに、それぞれ分離を行うことにより、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、レボイソバ
レリルスピラマイシンＩＩ、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩを得る。
【００４０】
好ましくは、本発明におけるバイオ発酵の条件は次のとおりとする。４”−イソバレリル
トランスフェラーゼ遺伝子を含有するスピラマイシンが生じる細菌クローニング株ＷＳＪ
−１９５を、大豆粕粉２％、ブドウ糖１％、でんぷん３％、ＣａＣＯ３  ０．５％、Ｎａ
Ｃｌ  ０．４％及び寒天２％を含有する斜面培養基において、ｐＨ６．５〜７．５、温度
２８〜３８℃の条件の下で８〜１５日培養し、そして大豆粕粉１．５％、でんぷん  ３．
０％、ＮａＣｌ  ０．４％、ＣａＣＯ３  ０．５％、魚ペプトン０．３％及びＫＨ２ＰＯ
４  ０．０５％を含有する種培養基に接種し、ｐＨ６．５〜７．５、２５〜３０℃の条件
の下で４０〜８０時間培養し、そして０．１〜２０％の接種量でブドウ糖  ０．５％、で
んぷん６．０％、酵母粉０．５％、魚粉２．０％、ＮＨ４ＮＯ３  ０．６％、ＮａＣｌ  
１．０％、ＣａＣＯ３  ０．５％、ＫＨ２ＰＯ４  ０．０５％、ＭｇＳＯ４  ０．１％、
豆油０．５％及び消泡剤０．０２％を含有する発酵培養基に植え込み、ｐＨ６．５〜７．
５、２６〜３０℃の条件の下で７２〜１２０時間培養し、発酵液を得る。
【００４１】
上記のｐＨ調節剤は塩酸、酢酸、アンモニア水、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムの中
から少なくとも１つを選択する。
【００４２】
好ましくは、本発明におけるバイオ発酵液の抽出ステップは次のとおりとする。得られた
発酵液を硫酸アルミニウムで処理しろ液を得、ｐＨを８．５〜９．０に調節し、酢酸ブチ
ルを用いて抽出を行い、酢酸ブチル抽出液は無塩水及び１％ＮａＨ２ＰＯ４でそれぞれ洗
浄し、さらにｐＨ２．０〜２．５の水を用いて抽出を行い、水相抽出液を得、ｐＨを４．
５〜５．５に調節し、揮発によって残りの酢酸ブチルを除去し水抽出液を得、ろ過し、ろ
液のｐＨを８．５〜９．０に調節し、沈澱させ、精製水ですすぎ、湿品を得、乾燥させ、
レボロキタマイシンを得る。
【００４３】
そのうち、塩酸、酢酸、クエン酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸水素ナトリ
ウム、炭酸ナトリウムの中から少なくとも１つを選択しｐＨ値を調節する。
【００４４】
そのうち、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩの純化のステップとして、クロマト分離法を用いてレボロキタマイシンサンプルを純化させ、ＯＤＳカラム、アセトニトリル及び酢酸アンモニウム緩衝液を用いて勾配溶出を行い、レボイソバレリルスピラマイシンＩの成分ターゲットピーク、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩの成分ターゲットピーク、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの成分ターゲットピークについて分離を行う。  好ましくは、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩの純化中において、調製型高速液体クロマトグラフィー、ＵＶ検出によって分離のＵＶスペクトルを記録し、レボイソバレリルスピラマイシンＩの保留時間４４．７５９分によってサンプルを収集し、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩの保留時間４３．３４分によってサンプルを収集し、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの保留時間４８．００９分によってサンプルを収集する。
【００４５】
さらに好ましくは、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩの純化中におい
て、収集されたレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩを、それぞれ回転蒸
発によってアセトニトリルを除去し、そして酢酸エチルを用いて抽出を行い、蒸発によっ
て抽出液の中の酢酸エチルを除去し、ペースト状サンプルを得、石油エーテル再溶解によ
って得られたサンプルを用い、蒸発によって石油エーテルを除去し、それぞれレボイソバ
レリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩ白色粉末状固形物を得る。
【００４６】
そのうち、上記の流動相はアセトニトリルＡとｐＨ＝８．５、１５０ｍＭ酢酸アンモニア
水溶液の混合溶剤である。
【００４７】
上記レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩの純化の具体的な条件は、０〜
６０分間、Ａは２５％〜６５％、６１〜９０分間、Ａは６５％〜９０％という線形グラデ
ーションを用いる。
【００４８】
流速：２６０  ｍＬ／分  
サンプル注入量：１０ｍＬ
サンプル注入濃度：０．５ｇ／ｍＬ
検出波長：２３１ｎｍ
収集方式：ＵＶトリガ収集
本発明はまた、レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物に関する。該レボイソバ
レリルスピラマイシンＩ結晶体化合物を、Ｃｕ−Ｋα放射線を用いて測定し得られるＸ−
放射線粉末回折は、２θが７．６°、８．０°、１０．０°、１１．４°、１６．４°、
１７．０°、１７．５°、１７．９°、１９．５°、２２．７°、２３．７°及び２４．
４°であるときに特徴的なピークがある。そのＸ−放射線粉末回折のスペクトルは、付図
５の示すとおりである。
【００４９】
上記レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物の調製方法として、まずレボイソバ
レリルスピラマイシンＩ化合物の固形物を無水エタノール、無水エタノール及び無水アセ
トンの混合溶剤に溶解させ、そして純水を加えながら撹拌し、純水を加えた後、温度を５
℃〜１５℃まで下げながら撹拌を続け、レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物
を得る。
【００５０】
そのうち、上記レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物の調製方法の第一の好ま
しい技術案は、加える純水の体積は酢酸エチル、無水エタノール及び無水アセトンの体積
の和の２〜９倍とし、好ましくは２．５〜７．５倍とし、純水を加える速度は４〜１０ｍ
ｌ／分とし、好ましくは６〜８ｍｌ／分とする。
【００５１】
上記レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物の調製方法の第二の好ましい技術案
は、使用する混合溶剤における酢酸エチル、無水エタノール及び無水アセトンの体積比は
１：０．１〜１０：０．５〜１とし、好ましくは１：２〜８：０．８〜１とする。
【００５２】
上記レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物の調製方法の第三の好ましい技術案
は、加えた純水の撹拌速度は３０〜６０回転／分とし、好ましくは４５〜６０回転／分と
し、純水を加えた後の撹拌速度は１０〜３０回転／分とし、好ましくは１０〜２０回転／
分とする。
【００５３】
上記レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物の調製方法の第四の好ましい技術案
は、純水を加えた後の温度を下げる速度は１〜３℃／時とし、好ましくは１〜１．５℃／
時とする。
【００５４】
本発明はまた、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩの結晶体化合物に関する。該レボイ
ソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物を、Ｃｕ−Ｋα放射線を用いて測定し得られ
るＸ−放射線粉末回折は、２θが１０．０°、１１．６°、１６．４°、１７．３°、１
９．１°、２１．２°、２２．１°、２２．７°、２６．４°、２６．９°、２７．５°及び３１．５  °であるときに特徴的なピークがある。そのＸ−放射線粉末回折のスペクトルは、付図６の示すとおりである。
【００５５】
上記レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の調製方法として、まずレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ化合物の固形物を無水エタノール、無水アセトン及び無水エタノールの混合溶剤に溶解させ、そして純水を加えながら撹拌し、純水を加えた後、温度を５℃〜１５℃まで下げながら撹拌を続け、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物を得る。
【００５６】
そのうち、上記レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の調製方法の第一の好
ましい技術案は、加える純水の体積は無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトン
の体積の和の２〜９倍とし、好ましくは２．５〜７．５倍とし、純水を加える速度は４〜
１０ｍｌ／分とし、好ましくは６〜８ｍｌ／分とする。
【００５７】
上記レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の調製方法の第二の好ましい技術案は、使用する混合溶剤における無水メタノール、無水アセトン及び無水エタノールの体積比は１：０．１〜１０：０．５〜１とし、好ましくは１：２〜８：０．８〜１とする。
【００５８】
上記レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の調製方法の第三の好ましい技術案は、加えた純水の撹拌速度は３０〜６０回転／分とし、好ましくは４５〜６０回転／分とし、純水を加えた後の撹拌速度は１０〜３０回転／分とし、好ましくは１０〜２０回転／分とする。
【００５９】
上記レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の調製方法の第四の好ましい技術案は、純水を加えた後の温度を下げる速度は１〜３℃／時とし、好ましくは１〜１．５℃／時とする。
【００６０】
本発明はまた、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの結晶体化合物に関する。該レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物を、Ｃｕ−Ｋα放射線を用いて測定し得られるＸ−放射線粉末回折は、２θが８．０°、１０．０°、１１．２°、１１．７°、
１６．４°、１９．１°、１９．６°、２０．０°、２１．４°、２２．９°、２３．６
°及び２９．４°であるときに特徴的なピークがある。そのＸ−放射線粉末回折のスペク
トルは、付図７の示すとおりである。
【００６１】
上記レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の調製方法として、まずレボイ
ソバレリルスピラマイシンＩＩＩ化合物の固形物を無水メタノール、無水エタノール及び
無水アセトンの混合溶剤に溶解させ、そして純水を加えながら撹拌し、純水を加えた後、
温度を５℃〜１５℃まで下げながら撹拌を続け、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ
結晶体化合物を得る。
【００６２】
そのうち、上記レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の調製方法の第一の
好ましい技術案は、加える純水の体積は無水メタノール、無水エタノール及び無水アセト
ンの体積の和の２〜９倍とし、好ましくは２．５〜７．５倍とし、純水を加える速度は４〜１０ｍｌ／分とし、好ましくは６〜８ｍｌ／分とする。
【００６３】
上記レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の調製方法の第二の好ましい技
術案は、使用する混合溶剤における無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの
体積比は１：０．１〜１０：０．５〜１とし、好ましくは１：２〜８：０．８〜１とする。
【００６４】
上記レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の調製方法の第三の好ましい技
術案は、加えた純水の撹拌速度は３０〜６０回転／分とし、好ましくは４５〜６０回転／
分とし、純水を加えた後の撹拌速度は１０〜３０回転／分とし、好ましくは１０〜２０回
転／分とする。
【００６５】
上記レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の調製方法の第四の好ましい技
術案は、純水を加えた後の温度を下げる速度は１〜３℃／時とし、好ましくは１〜１．５℃／時とする。
【００６６】
各晶型の単位格子中の分子は空間での配置、構造、配列が異なるため、その溶解性がかなりの違いがあり、これにより製剤の動物体内での溶出速度が異なり、製剤の動物体内での吸収、分布、排泄及び代謝に直接影響を与え、結果として、そのバイオアベイラビリティが異なることにより、臨床上の効果が違ってくる。本発明では、調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体又はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体を、それぞれレボイソバレリルスピラマイシンＩ、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ又はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの効果と比較した結果、本発明で調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体の効果はレボイソバレリルスピラマイシンＩより優れ、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体の効果はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩより優れ、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体の効果はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩより優れることが明らかになった。
【００６７】
本発明はまた、レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物の製剤に関する。上記の
製剤はレボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物、レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物の薬用塩、レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物と薬学的に許容される補助材料、又はレボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物の薬用塩と薬学的に許容される補助材料を含み、上記レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物の純度は９９重量％を上回る。
【００６８】
本発明はまた、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の製剤に関する。上記
の製剤はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の薬用塩、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物と薬学的に許容される補助材料、又はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の薬用塩と薬学的に許容される補助材料を含み、上記レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の純度は９９重量％を上回る。
【００６９】
本発明はまた、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の製剤に関する。上記の製剤はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の薬用塩、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物と薬学的に許容される補助材料、又はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の薬用塩と薬学的に許容される補助材料を含み、上記レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の純度は９９重量％を上回る。
【００７０】
本発明はまた、イソアミルスピラマイシンＩ又はその結晶体及びその製剤の調製治療と／
又は抗感染症疾患予防薬物での応用、イソアミルスピラマイシンＩＩ又はその結晶体及び
その製剤の調製治療と／又は抗感染症疾患予防薬物での応用、イソアミルスピラマイシン
ＩＩＩ又はその結晶体及びその製剤の調製治療と／又は抗感染症疾患予防薬物での応用に
関する。上記の感染症はグラム陽性菌、黄色ブドウ球菌、肺炎連鎖球菌、肺炎マイコプラ
ズマ、肺炎クラミジア、マイコプラズマウレアリチクム、クラミジアトラコマチス、化膿
連鎖球菌、カタル球菌、淋菌、インフルエンザ桿菌、レジオネラ菌又は嫌気性菌による感
染に起因する疾病である。
【００７１】
本発明はまた、イソアミルスピラマイシンＩ又はその結晶体及びその製剤の抗菌薬物調製での応用、イソアミルスピラマイシンＩＩ又はその結晶体及びその製剤の抗菌薬物調製での応用、イソアミルスピラマイシンＩＩＩ又はその結晶体及びその製剤の抗菌薬物調製での応用に関する。上記の菌は、肺炎連鎖球菌、Ａ群連鎖球菌、化膿連鎖球菌、腸球菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、カタル球菌、淋菌、インフルエンザ桿菌、大腸菌、毒素産生性大腸菌、病原性大腸菌、侵襲性大腸菌、緑膿菌、肺炎桿菌、プロテウスブルガリス、チフス菌、アシネトバクター属、シトロバクター属、セラチア菌、ソンネ赤痢菌、フレクスナー赤痢菌、カンジダアルビカンス、並びにレジオネラニューモフィラ、ゴールドマンレジオネラ菌、レジオネラボウズマニイ、レジオネラダモフィイ、レジオネラジョルダニス、レジオネラミクダーディなどのレジオネラ菌、及びバクテロイデスフラジリス、多形性菌、バクテロイデスブルガタス、バクテロイデスディスタソニス、バクテロイデスルミニコラ、ブルセラアサッカロリティカ、口腔ブルセラ、核酸桿菌、フソバクテリウムルッシイ、ビフィズス菌、乳酸桿菌、ペプトストレプトコッカス属、プロピオニバクテリウムアクネス、ウェルシュ菌、酵母様真菌などの嫌気性菌がある。
【００７２】
次に本発明についてさらに詳しく説明する。
【００７３】
本発明は１種のレボイソバレリルスピラマイシンＩに関する。本発明では、培養発酵条件の調整と改善により、厳格に溶液のｐＨ値をコントロールし、レボイソバレリルスピラマイシンＩを得られた。
【００７４】
本発明は１種のレボイソバレリルスピラマイシンＩＩに関する。本発明では、培養発酵条件の調整と改善により、厳格に溶液のｐＨ値をコントロールし、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩを得られた。
【００７５】
本発明は１種のレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩに関する。本発明では、培養発酵条件の調整と改善により、厳格に溶液のｐＨ値をコントロールし、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩを得られた。
【００７６】
本発明におけるレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ及びＩＩＩは比較的に良い抗菌活性を有し、抗生物質類薬物に注射に用いられる新品種を増加させ、既存の抗生物質の耐薬性という技術課題のために新しいソリューションを提供する。
【００７７】
そのうち、本発明におけるレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ及びＩＩＩの比旋度の測定方法として、本品をとって正確に秤量し、クロロホルムを加えて溶解させ、１ｍｌごとに約２０ｍｇ含む溶液に希釈し、ナトリウムスペクトルのＤ線（５８９．３ｎｍ）を用いて旋光度を測定し、測定長さは１ｄｍとし、測定温度は２５℃とし、目盛り０．０００１°までのテスト済みの旋光計を使用する。
【００７８】
本発明におけるレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩの融点の測定方法として、乾燥したレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩを適量とって融点測定用毛細管の中に入れ、融点を測定し、測定を３回繰り返し、平均値をとる。
【００７９】
本発明はまた、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩを含有する製剤に関する。その構成はレボイソバレリルスピラマイシンＩと薬学的に許容されるキャリアと／又は補助材料であり、そのうち、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ及びＩＩＩの純度は９０重量％を上回り、好ましくは９５重量％を上回り、より好ましくは９８重量％を上回る。
【００８０】
本発明においてレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩ或いはその結晶体を含有する製剤は、好ましくは注射用液体薬剤、注射用粉末薬剤、凍結乾燥粉末薬剤とする。本発明において単一成分を含有するレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩ製剤を注射用液体薬剤又は粉末薬剤に作ることにより、本発明におけるレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩ製剤をより速やかに人体に吸収されるようにし、抗感染の効果を実現する。
【００８１】
本発明においてレボイソバレリルスピラマイシンＩを含有する製剤は、レボイソバレリルスピラマイシンＩ  １０〜１５００ｍｇ、好ましくは５０〜１０００ｍｇ、より好ましくは１００〜５００ｍｇという単位用量を含む。
【００８２】
本発明においてレボイソバレリルスピラマイシンＩＩを含有する製剤は、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ  １０〜１５００ｍｇ、好ましくは５０〜１０００ｍｇ、より好ましくは１００〜５００ｍｇという単位用量を含む。
【００８３】
本発明においてレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩを含有する製剤は、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ  １０〜１５００ｍｇ、好ましくは５０〜１０００ｍｇ、より好ましくは１００〜５００ｍｇという単位用量を含む。
【００８４】
本発明においてレボイソバレリルスピラマイシンＩ化合物結晶体を含有する製剤は、レボイソバレリルスピラマイシンＩ  結晶体１０〜１５００ｍｇ、好ましくは５０〜１０００ｍｇ、より好ましくは１００〜５００ｍｇという単位用量を含む。
【００８５】
本発明においてレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ化合物結晶体を含有する製剤は、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体１０〜１５００ｍｇ、好ましくは５０〜１０００ｍｇ、より好ましくは１００〜５００ｍｇという単位用量を含む。
【００８６】
本発明においてレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ化合物結晶体を含有する製剤は、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体１０〜１５００ｍｇ、好ましくは５０〜１０００ｍｇ、より好ましくは１００〜５００ｍｇという単位用量を含む。
【００８７】
本発明においてレボイソバレリルスピラマイシンＩを含有する製剤の中で、レボイソバレリルスピラマイシンＩの重量パーセンテージは１０〜９０％、好ましくは５０〜９０％、より好ましくは７５〜９０％とする。
【００８８】
本発明においてレボイソバレリルスピラマイシンＩＩを含有する製剤の中で、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩの重量パーセンテージは１０〜９０％、好ましくは５０〜９０％、より好ましくは７５〜９０％とする。
【００８９】
本発明においてレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩを含有する製剤の中で、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの重量パーセンテージは１０〜９０％、好ましくは５０〜９０％、より好ましくは７５〜９０％とする。
【００９０】
本発明においてレボイソバレリルスピラマイシンＩ化合物結晶体を含有する製剤の中で、レボイソバレリルスピラマイシンＩ化合物結晶体の重量パーセンテージは１０〜９０％、好ましくは５０〜９０％、より好ましくは７５〜９０％とする。
【００９１】
本発明においてレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ化合物結晶体を含有する製剤の中で、レボイソバレリルスピラマイシン  ＩＩ化合物結晶体の重量パーセンテージは１０〜９０％、好ましくは５０〜９０％、より好ましくは７５〜９０％とする。
【００９２】
本発明においてレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ化合物結晶体を含有する製剤の中で、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ化合物結晶体の重量パーセンテージは１０〜９０％、好ましくは５０〜９０％、より好ましくは７５〜９０％とする。
【００９３】
本発明における経口製剤は、接着剤、充填剤、希釈剤、圧錠剤、潤滑剤、崩壊剤、着色剤
、調味剤、湿潤剤などよく用いられる賦形剤を含有することができ、必要な場合には、錠
剤をコーディングしても良い。そのうち、適する充填剤は、繊維素、マンニトール、乳糖
及びその他類似の充填剤がある。適する崩壊剤は、ヒドロキシ酢酸デンプンナトリウムな
どでんぷん、ポリビニルピロリドン及びでんぷん誘導体がある。適する潤滑剤はステアリ
ン酸マグネシウムなどがある。適する薬物から許容される湿潤剤はドデシル硫酸ナトリウ
ムなどがある。
【００９４】
本発明における固形経口製剤は、混合、充填、圧錠などよく用いられる方法によって調製
することが可能である。
【００９５】
本発明における経口液体製剤の形式については、水性又は油性懸濁液、溶液、乳濁液、シ
ロップ剤、エリキシル剤などがあり、使用前に水やその他適したキャリアで配合する乾燥
製品にすることも可能である。この種の液体製剤は、懸濁剤、乳化剤、非水性キャリア、
防腐剤など通常の添加剤を含有することができる。懸濁剤はソルビトール、シロップ、メ
チルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース
、ステアリン酸アルミニウムゲル又は水素化食用脂などがあり、乳化剤はレシチン、ソル
ビタンモノオレイン酸エステル又はアラビアゴムなどがあり、非水性キャリア（食用油を
含む）はアーモンドオイル、分留ヤシ油、グリセリンエステルなどの油性エステル、プロ
ピレングリコール又はエタノールなどがあり、防腐剤はメチルパラベン、プロピルパラベ
ン、ソルビン酸などがあり、必要な場合には、通常の香味剤又は着色剤を含有することが
できる。
【００９６】
本発明における注射剤は、よく用いられる全ての薬用キャリアと／又は賦形剤、安定剤、
抗酸化剤、錯化剤を含有できるほか、薬用の防腐剤や緩衝剤、局所麻酔剤なども含有でき
る。その調製方法については、よく用いられる方法で調製する。
【００９７】
本発明における製剤に用いられる薬学的に許容されるキャリアは、マンニトール、ソルビ
トール、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、塩酸シ
ステイン、チオグリコール酸、メチオニン、ビタミンＣ、ＥＤＴＡ二ナトリウム、ＥＤＴ
Ａカルシウムナトリウム、一価アルカリ金属の炭酸塩、酢酸塩、リン酸塩又はその水溶液
、塩酸、酢酸、硫酸、リン酸、アミノ酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、乳酸ナトリウ
ム、キシリトール、マルトース、ブドウ糖、果糖、デキストラン、グリシン、でんぷん、
ショ糖、乳糖、マンニトール、シリコン誘導体、繊維素及びその誘導体、アルギン酸塩、
ゼラチン、ポリビニルピロリドン、グリセリン、ツイーン−８０、寒天、炭酸カルシウム
、重炭酸カルシウム、表面活性剤、ポリエチレングリコール、シクロデキストリン、β−
シクロデキストリン、リン脂質材料、カオリン、タルクパウダー、ステアリン酸カルシウ
ム、ステアリン酸マグネシウムなどから選択する。
【００９８】
本発明における製剤は、使用の際に患者の実態に応じて用法用量を決定し、経口又は注射
により、日に１〜３回、１回ごとに１〜２０剤投薬することができる。
【００９９】
本発明の有益な効果は次のとおり：
（１）本発明におけるレボイソバレリルスピラマイシンＩ、レボイソバレリルスピラマイ
シンＩＩ、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩは優れた抗菌性能を持つ。現代の薬理
学の研究によれば、薬物エナンチオマーは立体選択性が異なるため、各受容体との親和性
が異なり、薬理作用に大きな違いが生じるので、本発明におけるレボイソバレリルスピラ
マイシンＩ、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ、レボイソバレリルスピラマイシンＩ
ＩＩは強い薬理活性を有する。
【０１００】
（２）各晶型の単位格子中の分子は空間での配置、構造、配列が異なるため、その溶解性
がかなりの違いがあり、これにより製剤の動物体内での溶出速度が異なり、製剤の動物体
内での吸収、分布、排泄及び代謝に直接影響を与え、結果として、そのバイオアベイラビ
リティが異なることにより、臨床上の効果が違ってくる。本発明では、調製したレボイソ
バレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩ結晶体をレボイソバレリルスピラマイシンＩ
、ＩＩ又はＩＩＩの効果と比較した結果、本発明で調製したレボイソバレリルスピラマイ
シンＩ、ＩＩ又はＩＩＩ結晶体の効果はレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩ
ＩＩより優れることが明らかになった。
【０１０１】
（３）本発明においてレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩの単一成分を
含有する注射剤、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩ結晶体の単一成分
を含有する注射剤は、臨床重症患者又は経口投薬に適しない患者向けに、速く効果が見ら
れかつ受け入れやすい投薬剤形の可能性を提供する。
【０１０２】
（４）本発明においてレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩの単一成分を
含有する製剤、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ又はＩＩＩ結晶体の単一成分を
含有する製剤は、製造工程が安定し、品質標準が管理しやすく、大規模な産業化生産に適
する。
【図面の簡単な説明】
【０１０３】
【図１】本発明の実施例１においてレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ及びＩ
ＩＩのＵＶトリガ収集によって得られたクロマトグラフである。
【図２】本発明の実施例１の発酵過程においてｐＨ値が時間が経つに伴って変化する
曲線図である。
【図３】本発明の実施例２の発酵過程においてｐＨ値が時間が経つに伴って変化する
曲線図である。
【図４】本発明の実施例３の発酵過程においてｐＨ値が時間が経つに伴って変化する
曲線図である。
【図５】本発明におけるレボイソバレリルスピラマイシンＩのＸ−放射線粉末回折ス
ペクトルである。
【図６】本発明におけるレボイソバレリルスピラマイシンＩＩのＸ−放射線粉末回折
スペクトルである。
【図７】本発明におけるレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩのＸ−放射線粉末回
折スペクトルである。
【０１０４】
次の具体的な実施方法は本発明の説明解釈にのみ用いるものであり、本発明の内容を制限
するものではない。
【発明を実施するための形態】
【０１０５】
実施例１  レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ及びＩＩＩの分離調製
（１）バイオ発酵：４”−イソバレリルトランスフェラーゼ遺伝子を含有するスピラマイシンが生じる細菌クローニング株ＷＳＪ−１９５を、大豆粕粉２％、ブドウ糖１％、でんぷん３％、ＣａＣＯ３  ０．５％、ＮａＣｌ  ０．４％及び寒天２％を含有する斜面培養基において、ｐＨ６．５〜７．５、温度２８〜３８℃の条件の下で８〜１５日培養し、そして大豆粕粉１．５％、でんぷん  ３．０％、ＮａＣｌ  ０．４％、ＣａＣＯ３  ０．５％、魚ペプトン０．３％及びＫＨ２ＰＯ４  ０．０５％を含有する種培養基に接種し、ｐＨ６．５〜７．５、２５〜３０℃の条件の下で４０〜８０時間培養し、そして０．１〜２０％の接種量でブドウ糖  ０．５％、でんぷん  ６．０％、酵母粉０．５％、魚粉２．０％、ＮＨ４ＮＯ３  ０．６％、ＮａＣｌ  １．０％、ＣａＣＯ３  ０．５％、ＫＨ２ＰＯ４  ０．０５％、ＭｇＳＯ４  ０．１％、豆油０．５％及び消泡剤０．０２％を含有する発酵培養基に植え込み，ｐＨ６．５〜７．５、２６〜３０℃の条件の下で７２〜１２０時間培養し、発酵液を得る。
【０１０６】
そのうち、培養発酵条件の調整と改善により、厳格に溶液のｐＨ値をコントロールし、ｐＨ値６．０〜９．０の条件の下で発酵を行い、発酵時間は１２０ｈとし、且つ時間が経つに伴って変化するｐＨ値の曲線は３つの連続的な段階を呈し、第一段階は方程式ｙ１＝０．１３６４ｘ１＋６．０を満足し、そのうち０＜ｘ１≦２２、第二段階は方程式ｙ２＝−０．０７３５ｘ２＋１０．６４を満足し、そのうち２２≦ｘ２≦５６、第三段階は方程式ｙ３＝０．００７８ｘ３＋６．０６を満足し、そのうち５６≦ｘ３≦１２０、曲線の変化は図２の示すとおりであり、発酵液を得る。
【０１０７】
（２）バイオ発酵液の抽出：ステップ（１）で得られた発酵液を、硫酸アルミニウムを用いて処理し、ろ液を得、ｐＨを８．５まで調節し、酢酸ブチルを用いて抽出を行い、酢酸ブチル抽出液を、無塩水及び１％ＮａＨ２ＰＯ４を用いてそれぞれ洗浄し、さらにｐＨ２．０の水を用いて抽出を行い、水相抽出液を得、ｐＨを４．５まで調節し、揮発によって残りの酢酸ブチルを除去し、水抽出液を得、ろ過を行い、ろ液のｐＨを８．５まで調節し、沈澱させ、精製水を用いてすすぎ、湿品を得、乾燥させ、レボロキタマイシンを得る。
【０１０８】
（３）レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩの純化：調製型高速液体クロマトグラフィーを用いて最初の分離によって得られたサンプルについて純化を行い、ＯＤＳ調製カラムを用い、アセトニトリルと酢酸アンモニウム緩衝液で勾配溶出を行い、ＵＶ検出によって分離のＵＶスペクトルを記録し、レボイソバレリルスピラマイシンＩの成分ターゲットピーク、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩの成分ターゲットピーク、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの成分ターゲットピークを収集する。
【０１０９】
カラム：ＯＤＳ調製カラム
流動相：アセトニトリル（Ａ）、１００ｍＭ酢酸アンモニア水溶液（Ｂ）
グラデーション条件：  ０〜６０分間、Ａは２５％〜６５％、６１〜９０分間、Ａは６５％〜９０％という線形グラデーションを用いる。
【０１１０】
流速：２６０  ｍＬ／分
サンプル注入量：１０ｍＬ
サンプル注入濃度：０．５ｇ／ｍＬ
検出波長：２３１ｎｍ
収集方式：ＵＶトリガ収集
レボイソバレリルスピラマイシンＩの保留時間ＲＴ  ４４．７５９分によってレボイソバレリルスピラマイシンＩのサンプルを収集し、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩの保留時間４３．３４分によってレボイソバレリルスピラマイシンＩＩのサンプルを収集し、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの保留時間４８．００９分によってレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩのサンプルを収集する。
【０１１１】
それぞれ回転蒸発によってアセトニトリルを除去し、そして１倍の量の酢酸エチルを用いて抽出を行い、回転蒸発によって抽出液の中の酢酸エチルを除去し、ペースト状サンプルを得、石油エーテル再溶解によって得られたサンプルを用い、さらに回転蒸発によって石油エーテルを除去し、それぞれレボイソバレリルスピラマイシンＩの白色の粉末状固形物、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩの白色の粉末状固形物、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの白色の粉末状固形物を得る。
【０１１２】
実施例２：レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ及びＩＩＩの分離調製
（１）バイオ発酵：４”−イソバレリルトランスフェラーゼ遺伝子を含有するスピラマイシンが生じる細菌クローニング株ＷＳＪ−１９５を、大豆粕粉２％、ブドウ糖１％、でんぷん３％、ＣａＣＯ３  ０．５％、ＮａＣｌ  ０．４％及び寒天２％を含有する斜面培養基において、ｐＨ７．２、温度３２℃の条件の下で１２日培養し、そして大豆粕粉１．５％、でんぷん  ３．０％、ＮａＣｌ  ０．４％、ＣａＣＯ３  ０．５％、魚ペプトン０．３％及びＫＨ２ＰＯ４  ０．０５％を含有する種培養基に接種し、ｐＨ７．２、２７℃の条件の下で７０時間培養し、１２％の接種量でブドウ糖  ０．５％、でんぷん  ６．０％、酵母粉０．５％、魚粉２．０％、ＮＨ４ＮＯ３  ０．６％、ＮａＣｌ  １．０％、ＣａＣＯ３  ０．５％、ＫＨ２ＰＯ４  ０．０５％、ＭｇＳＯ４  ０．１％、豆油０．５％及び消泡剤０．０２％を含有する発酵培養基に植え込み、ｐＨ６．０〜９．０、２６℃の条件の下で１００時間培養し、発酵液を得、ｐＨ値６．０〜８．０の条件の下で１１０ｈ発酵を行い、時間が経つに伴って変化するｐＨ値の曲線は３つの連続的な段階を呈し、第一段階は方程式ｙ１＝０．０９０９ｘ１＋６．４を満足し、そのうち０＜ｘ１＜２２、第二段階は方程式ｙ２＝−０．０４４１ｘ２＋７．８を満足し、そのうち２２＜ｘ２＜５６、第三段階は方程式ｙ３＝０．００７８ｘ３＋６．０６を満足し、そのうち５６≦ｘ３≦１１０、曲線変化は図３の示すとおりであり、発酵液を得る。具体的なコントロール曲線は付図３を参照。
【０１１３】
（２）バイオ発酵液の抽出：ステップ（１）で得られた発酵液を、硫酸アルミニウムを用いて処理し、ろ液を得、ｐＨを８．６まで調節し、酢酸ブチルを用いて抽出を行い、酢酸ブチル抽出液を、無塩水及び１％ＮａＨ２ＰＯ４を用いて洗浄し、さらにｐＨ２．３の水を用いて抽出を行い、水相抽出液を得、ｐＨを５．０まで調節し、揮発によって残りの酢酸ブチルを除去し、水抽出液を得、ろ過を行い、ろ液のｐＨを８．６まで調節し、沈澱させ、精製水を用いてすすぎ、湿品を得、乾燥させ、レボロキタマイシンを得る。
【０１１４】
（３）レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩの純化：調製型高速液体クロマトグラフィーを用いて最初の分離によって得られたサンプルについて純化を行い、ＯＤＳ調製カラムを用い、アセトニトリル及び酢酸アンモニウム緩衝液で勾配溶出を行い、ＵＶ検出によって分離のＵＶスペクトルを記録し、レボイソバレリルスピラマイシンＩの成分ターゲットピーク、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩの成分ターゲットピーク、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの成分ターゲットピークを収集する。
【０１１５】
カラム：ＯＤＳ調製カラム
流動相：アセトニトリル（Ａ）、１００ｍＭ酢酸アンモニア水溶液（Ｂ）
グラデーションの条件：０〜６０分間、Ａは２５％〜６５％、６１〜９０分間、Ａは６５％〜９０％という線形グラデーションを用いる。
【０１１６】
流速：２６０  ｍＬ／分
サンプル注入量：１０ｍＬ
サンプル注入濃度：０．５ｇ／ｍＬ
検出波長：２３１ｎｍ
収集方式：ＵＶトリガ収集
レボイソバレリルスピラマイシンＩの保留時間ＲＴ  ４４．７５９分によってレボイソバレリルスピラマイシンＩのサンプルを収集し、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩの保留時間４３．３４分によってレボイソバレリルスピラマイシンＩＩのサンプルを収集し、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの保留時間４８．００９分によってレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩのサンプルを収集する。
【０１１７】
それぞれ回転蒸発によってアセトニトリルを除去し、そして１倍の量の酢酸エチルを用いて抽出を行い、回転蒸発によって抽出液の中の酢酸エチルを除去し、ペースト状サンプルを得、石油エーテル再溶解によって得られたサンプルを用い、さらに回転蒸発によって石油エーテルを除去し、それぞれレボイソバレリルスピラマイシンＩの白色の粉末状固形物、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩの白色の粉末状固形物、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの白色の粉末状固形物を得る。
【０１１８】
実施例３    レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩの分離調製
（１）培養発酵：４”−イソバレリルトランスフェラーゼ遺伝子を含有するスピラマイシンが生じる細菌クローニング株ＷＳＪ−１９５を、斜面培養基において培養後、種培養基に接種し、培養後、発酵培養基に接種し、ブドウ糖及びクエン酸によって発酵過程をコントロールし、ｐＨ値６．０〜７．５の条件の下で１１５ｈ発酵を行い、ｐＨ値が時間が経つに伴って変化する曲線は３つの連続的な段階を呈し、第一段階は方程式ｙ１＝０．０６８２ｘ１＋６．０を満足し、そのうち０＜ｘ１＜２２、第二段階は方程式ｙ２＝−０．０２９４ｘ２＋８．１４７を満足し、そのうち２２＜ｘ２＜５６、第三段階は方程式ｙ３＝０．００７８ｘ３＋６．０６を満足し、そのうち５６＜ｘ３＜１１５、変化曲線は図４の示すとおりであり、発酵液を得る。
【０１１９】
（２）バイオ発酵液の抽出：ステップ（１）で得られた発酵液を、硫酸アルミニウムを用いて処理し、ろ液を得、ｐＨを８．６まで調節し、酢酸ブチルを用いて抽出を行い、酢酸ブチル抽出液を、無塩水及び１％ＮａＨ２ＰＯ４を用いて洗浄し、さらにｐＨ２．３の水を用いて抽出を行い、水相抽出液を得、ｐＨを５．０まで調節し、揮発によって残りの酢酸ブチルを除去し、水抽出液を得、ろ過を行い、ろ液のｐＨを８．６まで調節し、沈澱させ、精製水を用いてすすぎ、湿品を得、乾燥させ、レボロキタマイシンを得る。
【０１２０】
（３）レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩの純化：調製型高速液体クロマトグラフィーを用いて最初の分離によって得られたサンプルについて純化を行い、ＯＤＳ調製カラムを用い、アセトニトリル及び酢酸アンモニウム緩衝液で勾配溶出を行い、ＵＶ検出によって分離のＵＶスペクトルを記録し、レボイソバレリルスピラマイシンＩの成分ターゲットピーク、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩの成分ターゲットピーク、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの成分ターゲットピークを収集する。
【０１２１】
カラム：ＯＤＳ調製カラム
流動相：アセトニトリル（Ａ）、１００ｍＭ酢酸アンモニア水溶液（Ｂ）
グラデーションの条件：０〜６０分間、Ａは２５％〜６５％、６１〜９０分間、Ａは６５％〜９０％という線形グラデーションを用いる。
【０１２２】
流速：２６０  ｍＬ／分
サンプル注入量：１０ｍＬ
サンプル注入濃度：０．５ｇ／ｍＬ
検出波長：２３１ｎｍ
収集方式：ＵＶトリガ収集
レボイソバレリルスピラマイシンＩの保留時間ＲＴ  ４４．７５９分によってレボイソバレリルスピラマイシンＩのサンプルを収集し、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩの保留時間４３．３４分によってレボイソバレリルスピラマイシンＩＩのサンプルを収集し、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの保留時間４８．００９分によってレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩのサンプルを収集する。
【０１２３】
それぞれ回転蒸発によってアセトニトリルを除去し、そして１倍の量の酢酸エチルを用いて抽出を行い、回転蒸発によって抽出液の中の酢酸エチルを除去し、ペースト状サンプルを得、石油エーテル再溶解によって得られたサンプルを用い、さらに回転蒸発によって石油エーテルを除去し、それぞれレボイソバレリルスピラマイシンＩの白色の粉末状固形物、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩの白色の粉末状固形物、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの白色の粉末状固形物を得る。
【０１２４】
実施例４  レボイソバレリルスピラマイシンＩ注射用液体薬剤の調製
（１）  レボイソバレリルスピラマイシンＩ  １００ｍｇを等しいモル数のアジピン酸と均一に混合させ、１〜５ｍｌの蒸留水の中に溶解させ、ｐＨ４．６〜５．６の淡黄色の透明な溶液を得る。
【０１２５】
（２）  ステップ（１）において配合した溶液の中に溶液体積０．１％の活性炭を加え、ろ過を行う。
【０１２６】
（３）  無菌の条件下で充填、殺菌、検査、包装を行う。
【０１２７】
実施例５    レボイソバレリルスピラマイシンＩ注射用液体薬剤の調製
（１）  レボイソバレリルスピラマイシンＩ  １００ｍｇを等しいモル数のクエン酸と均一に混合させ、１〜５ｍｌの蒸留水の中に溶解させ、ｐＨ４．６〜５．６の淡黄色の透明な溶液を得る。
【０１２８】
（２）  ステップ（１）において配合した溶液の中に溶液体積０．１％の活性炭を加え、ろ過を行う。
【０１２９】
（３）  無菌の条件下で充填、殺菌、検査、包装を行う。
【０１３０】
実施例６  レボイソバレリルスピラマイシンＩ注射用液体薬剤の調製
（１）  レボイソバレリルスピラマイシンＩ  １００ｍｇを等しいモル数のマレイン酸と均一に混合させ、１〜５ｍｌの蒸留水の中に溶解させ、ｐＨ４．６〜５．６の淡黄色の透明な溶液を得る。
【０１３１】
（２）  ステップ（１）において配合した溶液の中に溶液体積０．１％の活性炭を加え、
ろ過を行う。
【０１３２】
（３）  無菌の条件下で充填、殺菌、検査、包装を行う。
【０１３３】
実施例７    レボイソバレリルスピラマイシンＩ注射用粉末薬剤の調製
（１）  レボイソバレリルスピラマイシンＩ  １００ｍｇを等しいモル数のクエン酸と均一に混合させ、１〜５ｍｌの蒸留水の中に溶解させ、ｐＨ４．６〜５．６の淡黄色の透明な溶液を得る。
【０１３４】
（２）  ステップ（１）において配合した溶液の中に溶液体積０．１％の活性炭を加え、ろ過を行う。
【０１３５】
（３）  凍結乾燥プロッパントとしてマンニトール３０〜１５０ｍｇを加え、低温にて９ｈ急速冷凍の後、冷凍乾燥を行い、淡黄色のふっくらとした塊状物を得、無菌の条件下で蓋を付け、検査、包装を行う。
【０１３６】
実施例８  レボイソバレリルスピラマイシンＩ注射用粉末薬剤の調製
（１）  レボイソバレリルスピラマイシンＩ  １００ｍｇを等しいモル数のマレイン酸と均一に混合させ、１〜５ｍｌの蒸留水の中に溶解させ、ｐＨ４．６〜５．６の淡黄色の透明な溶液を得る。
【０１３７】
（２）  ステップ（１）において配合した溶液の中に溶液体積０．１％の活性炭を加え、ろ過を行う。
【０１３８】
（３）  凍結乾燥プロッパントとしてマンニトール３０〜１５０ｍｇを加え、低温にて９ｈ急速冷凍の後、冷凍乾燥を行い、淡黄色のふっくらとした塊状物を得、無菌の条件下で蓋を付け、検査、包装を行う。
【０１３９】
実施例９  レボイソバレリルスピラマイシンＩ  注射用粉末薬剤の調製
（１）  レボイソバレリルスピラマイシンＩ  １００ｍｇを等しいモル数のクエン酸と均一に混合させ、１〜５ｍｌの蒸留水の中に溶解させ、ｐＨ４．６〜５．６の淡黄色の透明な溶液を得る。
【０１４０】
（２）  ステップ（１）において配合した溶液の中に溶液体積０．１％の活性炭を加え、ろ過を行う。
【０１４１】
（３）  凍結乾燥プロッパントとしてマンニトール３０〜１５０ｍｇを加え、低温にて９ｈ急速冷凍の後、冷凍乾燥を行い、淡黄色のふっくらとした塊状物を得、無菌の条件下で蓋を付け、検査、包装を行う。
【０１４２】
実施例１０  レボイソバレリルスピラマイシンＩ錠剤（１０００枚にて計算）
処方：レボイソバレリルスピラマイシンＩ                              １００ｇ
低置換度ヒドロキシプロピルセルロース（５％）        ９．２５ｇ
カルボキシメチルデンプンナトリウム（３％）          ５．５５ｇ
ステアリン酸マグネシウム（１％）                    １．８５ｇ
でんぷん                    総重量−他の原材料と補助材料の重量
総重量                                                １８５ｇ
調製方法：でんぷんを適量とり、濃度を１５％まで希釈し、ペースト状になるまで加熱し、接着剤を作る。主要材料レボロキタマイシン、補助材料でんぷん、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウムを、それぞれ１００メッシュの篩に通し、処方量にて所要の主要材料と補助材料をとり、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、でんぷん、低置換度ヒドロキシプロピルセルロースを十分かつ均一に混合後、でんぷん濃度１５％のでんぷん糊を用いて柔らかい素材を作り、１４メッシュの篩を用いて粒を作り、５０−６０℃にて乾燥させ、水分を３−５％にし、１４メッシュの篩を用いて粒を整え、カルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウムを加えて混合し、顆粒の含量を測定し、顆粒の含量に基づいて錠の重さを計算し、圧錠を行い（Φ９ｍｍ凹部の浅いパンチ）、錠の重さの違いを測定し、検査合格後に包装を行う。
【０１４３】
実施例１１    レボイソバレリルスピラマイシンＩカプセル剤（１０００粒にて計算）
処方：レボイソバレリルスピラマイシンＩ原末  １００ｇ
でんぷん（薬用）  １０８−レボイソバレリルスピラマイシンＩ原末の重量
薬用３号カプセル                                          １００粒
流動パラフィン                                            ５ｍｌ
調製方法：主要材料レボイソバレリルスピラマイシンＩ、補助材料薬用でんぷんを、所定の配合量にてそれぞれとり、混合器具に入れ、、１．５〜２時間十分混合後；サンプルをとり含量を測定して得られるデータは理論データとほぼ一致するものとし（カプセル１粒に入れる薬物の重量は約０．１０５ｇ）、検査合格後の薬用３号カプセル及び混合後の原料を、全自動カプセル機の操作基準に従ってそれぞれローダーに入れ、充填を行い、充填後のカプセルについて差異検査を行い（±１０％以内、＜０．３ｇ）、溶出度は要求を満たすものとし、検査合格後のカプセルを研磨機に入れ、流動パラフィンを加え、研磨を１５−２０分間行った後、取り出して完成品包装箱の検査を行う。
【０１４４】
実施例１２  レボイソバレリルスピラマイシンＩ糖衣錠（１０００枚にて計算）
処方：実施例１０と同じ。
【０１４５】
調製方法：実施例１１の方法に従って作業を進め、検査合格後の錠芯を糖衣鍋に入れ、配合済みのシロップ（濃度６５〜７０％）をゆっくりと糖衣鍋に入れ、そして温度を４０℃前後に上げ、タルクパウダーを適量加え、２５−３０分間のブラスト乾燥を何度か行って、パウダーコート層が平らになった後、糖衣層のコーティングを１５〜２０分間行い、糖衣層が平らになった後、所要色調のコーティング層のコーティングを行い、着色剤を調製完了後、シロップに入れて均一に撹拌し、そして鍋の中に入れ、１回に約１５〜２０分間でそれぞれ数回撹拌する。
【０１４６】
実施例１３  レボイソバレリルスピラマイシンＩシロップ（１０００袋にて計算）
処方：レボイソバレリルスピラマイシンＩ原末          １２５ｇ
クエン酸（０．５％）                              １．５ｇ
ショ糖                        総重量−他の原材料と補助材料
総重量                                            約５０ｇ
色素（クルクミン）                              約０．１ｇ
調製方法：レボイソバレリルスピラマイシンＩ原末、クエン酸、ショ糖を、それぞれ高速ジェットミルを用いて、顆粒８５％は３００メッシュを、１５％は１８０メッシュを通る程度まで粉砕し、そして粉砕後のパウダーを、処方量にてとった後、１〜１．５時間十分混合させ、含量を測定し、充填量を計算し（理論充填量は１袋５００ｍｇ）、そして混合物を袋詰め機に入れ、アルミ箔を据え付け、充填機の操作基準に従って充填を行い、充填量の差は±５％以内とし、充填完了後、検査し合格になったら外包装を行う。
【０１４７】
実施例１４    レボイソバレリルスピラマイシンＩ腸溶錠（１０００枚にて計算）
処方：実施例１０参照。
【０１４８】
調製方法：錠芯の調製は実施例５に従って行い、合格の錠芯を糖衣鍋に入れ、濃度６０〜７０％のシロップとタルクパウダーを用いてサブコート層のコーティングを３層行い、そして隔離層のコーティングを行い、１０％のゼインアルコール溶液を加え、回転法にて１０〜１５分間乾燥させ、さらにフタル酸ジエチル、アセトン、酢酸フタル酸セルロース、アルコール溶液すなわち腸溶液を鍋の中に加え、回転法にて１０〜１５分間、２〜３回乾燥させる。検査合格後、実施例１３に従って糖衣コーティングを行う。
【０１４９】
実施例１５  レボイソバレリルスピラマイシンＩ胃溶錠（１０００枚にて計算）
処方：実施例１０参照。
【０１５０】
調製方法：錠芯の調製は実施例１１に従って行い、合格の錠芯をコーティング機に入れ、そして標準を満たすコーティング粉（脂溶性と水溶性を含む）を、要求に従ってコーティング液に配合し、さらにコーティング液をコロイドミルに入れ、粉砕ろ過する。錠芯を入れたコーティング鍋を予熱し、回転速度を５〜１０回転／分にし、温度を４５〜６０℃にし、エアゾールノズル（＞３００メッシュ）を用いてコーティング穴液を鍋の中に噴き入れ、２５〜３５分間乾燥させ、均一なコーティングになるまで繰り返し８−１２回行い、そして乾燥させ、検査合格後に包装する。
【０１５１】
実施例１６    レボイソバレリルスピラマイシンＩ顆粒剤（１０００袋にて計算）
処方：レボイソバレリルスピラマイシンＩ原末            １２５ｇ
糖粉                                          ２０００ｇ
糊精                                            ９００ｇ
５％ＰＶＰ−Ｋ３０                                適量
調製方法：レボイソバレリルスピラマイシンＩ  原末、糖粉、糊精を１２０メッシュの篩に通し、処方量にてレボイソバレリルスピラマイシンＩ、糖粉、糊精をとり、均一に混合し、混合後のものを、５％ＰＶＰ−Ｋ３０ゴム液を用いて柔らかい素材を作り、揺り動かす方法によって顆粒剤を作り、７０℃にて乾燥させ、粒を整え、検査合格後に包装する。
【０１５２】
実施例１７  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ注射用液体薬剤の調製
（１）  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ  １００ｍｇを等しいモル数のアジピン酸と均一に混合させ、１〜５ｍｌの蒸留水に溶解させ、ｐＨ４．６〜５．６の淡黄色の透明な溶液を得る。
【０１５３】
（２）  ステップ（１）において配合した溶液に溶液体積０．１％の活性炭を加え、ろ過を行う。
【０１５４】
（３）  無菌の条件下で充填、殺菌、検査、包装を行う。
【０１５５】
実施例１８    レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ注射用液体薬剤の調製
（１）  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ  １００ｍｇを等しいモル数のクエン酸と均一に混合させ、１〜５ｍｌの蒸留水の中に溶解させ、ｐＨ４．６〜５．６の淡黄色の透明な溶液を得る。
【０１５６】
（２）  ステップ（１）において配合した溶液に溶液体積０．１％の活性炭を加え、ろ過を行う。
【０１５７】
（３）  無菌の条件下で充填、殺菌、検査、包装を行う。
【０１５８】
実施例１９    レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ注射用粉末薬剤の調製
（１）  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ  １００ｍｇを等しいモル数のクエン酸と均一に混合させ、１〜５ｍｌの蒸留水の中に溶解させ、ｐＨ４．６〜５．６の淡黄色の透明な溶液を得る。
【０１５９】
（２）  ステップ（１）において配合した溶液に溶液体積０．１％の活性炭を加え、ろ過を行う。
【０１６０】
（３）  凍結乾燥プロッパントとしてマンニトール３０〜１５０ｍｇを加え、低温にて９ｈ急速冷凍の後、冷凍乾燥を行い、淡黄色のふっくらとした塊状物を得、無菌の条件下で蓋を付け、検査、包装を行う。
【０１６１】
実施例２０  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ錠剤（１０００錠にて計算）
処方：レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ                        １００ｇ
低置換度ヒドロキシプロピルセルロース（５％）                ９．２５ｇ
カルボキシメチルデンプンナトリウム（３％）                  ５．５５ｇ
ステアリン酸マグネシウム（１％）                            １．８５ｇ
でんぷん                              総重量−他の原材料と補助材料の重量
総重量                                                        １８５ｇ
調製方法：でんぷんを適量とり、濃度を１５％まで希釈し、ペースト状になるまで加熱し、接着剤を作る。主要材料レボロキタマイシン、補助材料でんぷん、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウムを、それぞれ１００メッシュの篩に通し、処方量にて所要の主要材料と補助材料をとり、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ、でんぷん、低置換度ヒドロキシプロピルセルロースを十分かつ均一に混合後、でんぷん濃度１５％のでんぷん糊を用いて柔らかい素材を作り、１４メッシュの篩を用いて粒を作り、５０−６０℃にて乾燥させ、水分を３−５％にし、１４メッシュの篩を用いて粒を整え、カルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウムを加えて混合し、顆粒の含量を測定し、顆粒の含量に基づいて錠の重さを計算し、圧錠を行い（Φ９ｍｍ凹部の浅いパンチ）、錠の重さの違いを測定し、検査合格後に包装する。
【０１６２】
実施例２１    レボイソバレリルスピラマイシンＩＩカプセル剤（１０００粒にて計算）
処方：レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ原末            １００ｇ
でんぷん（薬用）  １０８ｇ−レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ原末の重量
薬用３号カプセル                                  １００粒
流動パラフィン                                    ５ｍｌ
調製方法：主要材料レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ、補助材料薬用でんぷんを、所定の配合量にてそれぞれとり、混合器具に入れて，１．５〜２時間十分混合後、；サンプルをとり含量を測定して得られるデータは理論データとほぼ一致するものとし（カプセル１粒に入れる重量は約０．１０５ｇ）、検査合格後の薬用３号カプセル及び混合後の原料を、全自動カプセル機の操作基準に従ってそれぞれローダーに入れ、充填を行い、充填後のカプセルについて差異検査を行い（±１０％以内、＜０．３ｇ）、溶出度は要求を満たすものとし、検査合格後のカプセルを研磨機に入れ、流動パラフィンを加え、研磨を１５−２０分間行った後、取り出して完成品包装箱の検査を行う。
【０１６３】
実施例２２  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ注射用液体薬剤の調製
（１）  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ  １００ｍｇを等しいモル数のマレイン酸と均一に混合させ、１〜５ｍｌの蒸留水の中に溶解させ、ｐＨ４．６〜５．６の淡黄色の透明な溶液を得る。
【０１６４】
（２）  ステップ（１）において配合した溶液の中に溶液体積０．１％の活性炭を加え、ろ過を行う。
【０１６５】
（３）  無菌の条件下で充填、殺菌、検査、包装を行う。
【０１６６】
実施例２３  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ注射用粉末薬剤の調製
（１）  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ  １００ｍｇを等しいモル数のマレイン酸と均一に混合させ、１〜５ｍｌの蒸留水の中に溶解させ、ｐＨ４．６〜５．６の淡黄色の透明な溶液を得る。
【０１６７】
（２）  ステップ（１）において配合した溶液の中に溶液体積０．１％の活性炭を加え、ろ過を行う。
【０１６８】
（３）  凍結乾燥プロッパントとしてマンニトール３０〜１５０ｍｇを加え、低温にて９ｈ急速冷凍の後、冷凍乾燥を行い、淡黄色のふっくらとした塊状物を得、無菌の条件下で蓋を付け、検査、包装を行う。
【０１６９】
実施例２４    レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩカプセル剤（１０００粒にて計算）
処方：レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ原末            １００ｇ
でんぷん（薬用）      １０８ｇ−レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ原末の重量
薬用３号カプセル                                    １００粒
流動パラフィン                                      ５ｍｌ
調製方法：主要材料レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ、補助材料薬用でんぷんを、所定の配合量にてそれぞれとり、混合器具に入れ、１．５〜２時間十分混合後；サンプルをとり含量を測定して得られるデータは理論データとほぼ一致するものとし（カプセル１粒に入れる薬物の重量は約０．１０５ｇ）、検査合格後の薬用３号カプセル及び混合後の原料を、全自動カプセル機の操作基準に従ってそれぞれローダーに入れ、充填を行い、充填後のカプセルについて差異検査を行い（±１０％以内、＜０．３ｇ）、溶出度は要求を満たすものとし、検査合格後のカプセルを研磨機に入れ、流動パラフィンを加え、研磨を１５−２０分間行った後、取り出して完成品包装箱の検査を行う。
【０１７０】
実施例２５  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ  シロップ（１０００袋にて計算）
処方：レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ原末      １２５ｇ
クエン酸（０．５％）                    １．５ｇ
ショ糖                      総重量−他の原材料と補助材料
総重量                                  約５０ｇ
色素（クルクミン）                      約０．１ｇ
調製方法：レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ原末、クエン酸、ショ糖を、それぞれ高速ジェットミルを用いて、顆粒８５％は３００メッシュを、１５％は１８０メッシュを通る程度まで粉砕し、そして粉砕後のパウダーを、処方量にてとった後、１〜１．５時間十分混合させ、含量を測定し、充填量を計算し（理論充填量は１袋５００ｍｇ）、そして混合物を袋詰め機に入れ、アルミ箔を据え付け、充填機の操作基準に従って充填を行い、充填量の差は±５％以内とし、充填完了後、検査し合格になったら外包装を行う。
【０１７１】
実施例２６    レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ顆粒剤（１０００袋にて計算）
処方：レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ原末            １２５ｇ
糖粉                                                    ２０００ｇ
糊精                                                      ９００ｇ
５％ＰＶＰ−Ｋ３０                                            適量
調製方法：レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ原末、糖粉、糊精を１２０メッシュの篩に通し、処方量にてレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ、糖粉、糊精をとり、均一に混合し、混合後のものを、５％ＰＶＰ−Ｋ３０ゴム液を用いて柔らかい素材を作り、揺り動かす方法によって顆粒剤を作り、７０℃にて乾燥させ、粒を整え、検査合格後に包装する。
【０１７２】
実施例２７
実施例１において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩの白色の粉末状固形物をさらに調製し、結晶体にする。
【０１７３】
レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物の調製方法：
1.  実施例１において得られたレボイソバレリルスピラマイシンＩ化合物の固形物を酢酸エチル、無水エタノール及び無水アセトンの混合溶剤に溶解させ、使用する混合溶剤における酢酸エチル、無水エタノール及び無水アセトンの体積比は１：１０：１とする。
2.  
【０１７４】
3.  純水を加えながら撹拌し、加える純水の体積は酢酸エチル、無水エタノール及び無水アセトンの体積の和の２．５倍とし、純水を加える速度は４ｍｌ／分とし、加えた純水の撹拌速度は３０回転／分とする。
4.  
【０１７５】
5.  純水を加えた後、温度を５℃まで下げ、温度を下げる速度は１℃／時とし、温度を下げると同時に撹拌を続け、撹拌速度は１０回転／分とし、レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物を得る。
【０１７６】
調製によって得られるレボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物を、Ｃｕ−Ｋα放射線を用いて測定し得られるＸ−放射線粉末回折は、２θが７．６°、８．０°、１０．０°、１１．４°、１６．４°、１７．０°、１７．５°、１７．９°、１９．５°、２２．７°、２３．７°及び２４．４°であるときに特徴的なピークがある。そのＸ−放射線粉末回折のスペクトルは、図５の示すとおりである。
【０１７７】
実施例２８
実施例１において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩの白色の粉末状固形物をさらに調製し、結晶体にする。
【０１７８】
レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物の調製方法：
１．レボイソバレリルスピラマイシンＩ化合物の固形物を酢酸エチル、無水エタノール及び無水アセトンの混合溶剤に溶解させ、使用する混合溶剤における酢酸エチル、無水エタノール及び無水アセトンの体積比は１：  １０：１とする。
【０１７９】
２．純水を加えながら撹拌し、加える純水の体積は酢酸エチル、無水エタノール及び無水アセトンの体積の和の９倍とし、純水を加える速度は１０ｍｌ／分とし、加えた純水の撹拌速度は６０回転／分とする。
【０１８０】
３．純水を加えた後、温度を１５℃まで下げ、温度を下げる速度は３℃／時とし、温度を下げると同時に撹拌を続け、撹拌速度は１０回転／分とし、レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物を得る。
【０１８１】
該レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物を、Ｃｕ−Ｋα放射線を用いて測定し得られるＸ−放射線粉末回折のスペクトルは、図５に似ている。
【０１８２】
実施例２９レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物の注射用液体薬剤の調製
実施例２７において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物をとり、注射用液体薬剤を調製する。調製方法は前述と同じとする。
【０１８３】
実施例３０レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物の注射用粉末薬剤の調製
実施例２８において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物をとり、注射用粉末薬剤を調製する。調製方法は前述と同じとする。
【０１８４】
実施例３１レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物錠剤の調製
実施例２７において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物をとり、錠剤を調製する。調製方法は前述と同じとする。
【０１８５】
実施例３２
実施例１において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩの白色の粉末状固形物をさらに調製し、結晶体にする。
【０１８６】
レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の調製方法：
１．実施例１において得られたレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ化合物の固形物を無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの混合溶剤に溶解させ、使用する混合溶剤における無水メタノール、無水アセトン及び無水エタノールの体積比は１：  １０：  １とする。
【０１８７】
２．純水を加えながら撹拌し、加える純水の体積は無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの体積の和の２．５倍とし、純水を加える速度は４ｍｌ／分とし、加えた純水の撹拌速度は３０回転／分とする。
【０１８８】
３．純水を加えた後、温度を５℃まで下げ、温度を下げる速度は１℃／時とし、温度を下げると同時に撹拌を続け、撹拌速度は１０回転／分とし、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物を得る。
【０１８９】
調製によって得られるレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物を、Ｃｕ−Ｋα放射線を用いて測定し得られるＸ−放射線粉末回折は、２θが１０．０°、１１．６°、１６．４°、１７．３°、１９．１°、２１．２°、２２．１°、２２．７°、２６．４°、２６．９°、２７．５°及び３１．５°であるときに特徴的なピークがある。そのＸ−放射線粉末回折のスペクトルは、付図６の示すとおりである。
【０１９０】
実施例３３
実施例１において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩの白色の粉末状固形物をさらに調製し、結晶体にする。
【０１９１】
レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の調製方法：
１．レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ化合物の固形物を無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの混合溶剤に溶解させ、使用する混合溶剤における無水メタノール、無水アセトン及び無水エタノールの体積比は１：１０：０．８とする。
【０１９２】
２．  純水を加えながら撹拌し、加える純水の体積は無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの体積の和の９倍とし、純水を加える速度は１０ｍｌ／分とし、加えた純水の撹拌速度は６０回転／分とする。
【０１９３】
３．純水を加えた後、温度を１５℃まで下げ、温度を下げる速度は３℃／時とし、温度を下げると同時に撹拌を続け、撹拌速度は１０回転／分とし、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物を得る。
【０１９４】
該レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物を、Ｃｕ−Ｋα放射線を用いて測定し得られるＸ−放射線粉末回折のスペクトルは、付図６に似ている。
【０１９５】
実施例３４
実施例２において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩの白色の粉末状固形物をさらに調製し、結晶体にする。
【０１９６】
１．レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の調製方法：
レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ化合物の固形物を無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの混合溶剤に溶解させ、使用する混合溶剤における無水メタノール、無水アセトン及び無水エタノールの体積比は１：５：１とする。
【０１９７】
２．純水を加えながら撹拌し、加える純水の体積は無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの体積の和の７．５倍とし、純水を加える速度は６ｍｌ／分とし、加えた純水の撹拌速度は４０回転／分とする。
【０１９８】
３．純水を加えた後、温度を１０℃まで下げ、温度を下げる速度は２℃／時とし、温度を下げると同時に撹拌を続け、撹拌速度は１５回転／分とし、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物を得る。
【０１９９】
該レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物を、Ｃｕ−Ｋα放射線を用いて測定し得られるＸ−放射線粉末回折のスペクトルは、付図６に似ている。
【０２００】
実施例３５
実施例３において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩの白色の粉末状固形物をさらに調製し、結晶体にする。
【０２０１】
レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の調製方法：
１．レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ化合物の固形物を無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの混合溶剤に溶解させ、使用する混合溶剤における無水メタノール、無水アセトン及び無水エタノールの体積比は１：３：１とする。
【０２０２】
２．純水を加えながら撹拌し、加える純水の体積は無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの体積の和の７．５倍とし、純水を加える速度は８ｍｌ／分とし、加えた純水の撹拌速度は４５回転／分とする。
【０２０３】
３．純水を加えた後、温度を１２℃まで下げ、温度を下げる速度は２．５℃／時とし、温度を下げると同時に撹拌を続け、撹拌速度は２０回転／分とし、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物を得る。
【０２０４】
該レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物を、Ｃｕ−Ｋα放射線を用いて測定し得られるＸ−放射線粉末回折のスペクトルは、付図６に似ている。
【０２０５】
実施例３６
実施例３において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩの白色の粉末状固形物をさらに調製し、結晶体にする。
【０２０６】
レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の調製方法：
１．レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ化合物の固形物を無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの混合溶剤に溶解させ、使用する混合溶剤における無水メタノール、無水アセトン及び無水エタノールの体積比は１：６：０．８とする。
【０２０７】
２．純水を加えながら撹拌し、加える純水の体積は無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの体積の和の５倍とし、純水を加える速度は７ｍｌ／分とし、加えた純水の撹拌速度は６０回転／分とする。
【０２０８】
３．純水を加えた後、温度を１２℃まで下げ、温度を下げる速度は１．２℃／時とし、温度を下げると同時に撹拌を続け、撹拌速度は１５回転／分とし、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物を得る。
【０２０９】
該レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物を、Ｃｕ−Ｋα放射線を用いて測定し得られるＸ−放射線粉末回折のスペクトルは、付図５に似ている。
【０２１０】
実施例３７  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の注射用液体薬剤の調製実施例３４において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物をとり、注射用液体薬剤を調製する。調製方法は前述と同じとする。
【０２１１】
実施例３８  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の注射用液体薬剤の調製実施例３３において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物をとり、注射用液体薬剤を調製する。調製方法は前述と同じとする。
【０２１２】
実施例３９  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の注射用粉末薬剤の調製実施例３６において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物をとり、注射用粉末薬剤を調製する。調製方法は前述と同じとする。
【０２１３】
実施例４０  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の注射用粉末薬剤の調製実施例３５において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物をとり、注射用粉末薬剤を調製する。調製方法は前述と同じとする。
【０２１４】
実施例４１  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の錠剤の調製
実施例３６において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物をとり錠剤を調製する。調製方法は前述と同じとする。
【０２１５】
実施例４２  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物のカプセル剤の調製
実施例３２において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物をとり、カプセル剤を調製する。調製方法は前述と同じとする。
【０２１６】
実施例４３  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の顆粒剤の調製
実施例３３において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物をとり、顆粒剤を調製する。調製方法は前述と同じとする。
【０２１７】
実施例４４
実施例１において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの白色の粉末状固形物をさらに調製し、結晶体にする。
【０２１８】
レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の調製方法：
１．実施例１において得られたレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ化合物の固形物を無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの混合溶剤に溶解させ、使用する混合溶剤における無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの体積比は１：  １０：  １とする。
【０２１９】
２．純水を加えながら撹拌し、加える純水の体積は無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの体積の和の２．５倍とし、純水を加える速度は４ｍｌ／分とし、加えた純水の撹拌速度は３０回転／分とする。
【０２２０】
３．純水を加えた後、温度を５℃まで下げ、温度を下げる速度は１℃／時とし、温度を下げると同時に撹拌を続け、撹拌速度は１０回転／分とし、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物を得る。
【０２２１】
調製によって得られたレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物を、Ｃｕ−Ｋα放射線を用いて測定し得られるＸ−放射線粉末回折は、２θが８．０°、１０．０°、１１．２°、１１．７°、１６．４°、１９．１°、１９．６°、２０．０°、２１．４°、２２．９°、２３．６°及び２９．４°であるときに特徴的なピークがある。そのＸ−放射線粉末回折のスペクトルは、付図７の示すとおりである。
【０２２２】
実施例４５
実施例２において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの白色の粉末状固形物をさらに調製し、結晶体にする。
【０２２３】
レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の調製方法：
１．レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ化合物の固形物を無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの混合溶剤に溶解させ、使用する混合溶剤における無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの体積比は１：  １０：１とする。
【０２２４】
２．純水を加えながら撹拌し、加える純水の体積は無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの体積の和の９倍とし、純水を加える速度は１０ｍｌ／分とし、加えた純水の撹拌速度は６０回転／分とする。
【０２２５】
３．純水を加えた後、温度を１５℃まで下げ、温度を下げる速度は３℃／時とし、温度を下げると同時に撹拌を続け、撹拌速度は１０回転／分とし、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物を得る。
【０２２６】
該レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物を、Ｃｕ−Ｋα放射線を用いて測定し得られるＸ−放射線粉末回折のスペクトルは、付図７に似ている。
【０２２７】
実施例４６
実施例２において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの白色の粉末状固形物をさらに調製し、結晶体にする。
【０２２８】
レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の調製方法：
１．レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ化合物の固形物を無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの混合溶剤に溶解させ、使用する混合溶剤における無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの体積比は１：５：０．８とする。
【０２２９】
２．純水を加えながら撹拌し、加える純水の体積は無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの体積の和の７．５倍とし、純水を加える速度は６ｍｌ／分とし、加えた純水の撹拌速度は４０回転／分とする。
【０２３０】
３．純水を加えた後、温度を１０℃まで下げ、温度を下げる速度は２℃／時とし、温度を下げると同時に撹拌を続け、撹拌速度は１５回転／分とし、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物を得る。
【０２３１】
該レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物を、Ｃｕ−Ｋα放射線を用いて測定し得られるＸ−放射線粉末回折のスペクトルは、付図７に似ている。
【０２３２】
実施例４７
実施例３において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩの白色の粉末状固形物をさらに調製し、結晶体にする。
【０２３３】
レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の調製方法：
1.  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ化合物の固形物を無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの混合溶剤に溶解させ、使用する混合溶剤における無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの体積比は１：２：１とする。
2.  
【０２３４】
3.  純水を加えながら撹拌し、加える純水の体積は無水メタノール、無水エタノール及び無水アセトンの体積の和の７．５倍とし、純水を加える速度は８ｍｌ／分とし、加えた純水の撹拌速度は４５回転／分とする。
4.  
【０２３５】
5.  純水を加えた後、温度を１２℃まで下げ、温度を下げる速度は２．５℃／時とし、温度を下げると同時に撹拌を続け、撹拌速度は２０回転／分とし、レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物を得る。
【０２３６】
該レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物を、Ｃｕ−Ｋα放射線を用いて測定し得られるＸ−放射線粉末回折のスペクトルは、付図７に似ている。
【０２３７】
実施例４８    レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の注射用液体薬剤の調製
実施例４４において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物をとり、注射用液体薬剤を調製する。調製方法は前述と同じとする。
【０２３８】
実施例４９    レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の注射用粉末薬剤の調製
実施例４５において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物をとり、注射用粉末薬剤を調製する。調製方法は前述と同じとする。
【０２３９】
実施例５０  レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の錠剤の調製
実施例４６において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物をとり、錠剤を調製する。調製方法は前述と同じとする。
【０２４０】
実施例５１    レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物のカプセル剤の調製実施例４７において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物をとり、カプセル剤を調製する。調製方法は前述と同じとする。
【０２４１】
実験例１  レボイソバレリルスピラマイシン  Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩの急性毒性試験
一、試験方法：
マウス、ラットに経口投薬する（実施例１において得られたレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩ）。
【０２４２】
試験前にマウスとラットを２日間観察し、異常がなければ、試験を進める。  試験前にマウスとラットに一晩絶食させる。上記の結果により、試験薬をそれぞれマウスとラットに対し４０００ｍｇ／ｋｇ経口投入し、マウスとラットは死亡することはなかった。本試験では、４０００ｍｇ／ｋｇにてそれぞれマウスとラットに対し経口投薬し、マウスは１００ｍｇ／ｍｌとし、胃の容量は０．６−０．８ｍｌ／匹とし、ラットは１７３ｍｇ／ｍｌとし、胃の容量は０．８〜１．０ｍｌ／５０ｇとした。投薬後、毒性反応及び死亡数について１週間観察した。
【０２４３】
二、試験結果は表１及び表２を参照のこと。なお、以降「レボイソバレリルスピラマイシン」を「レボイソ」と略することもある。
【０２４４】
表１．  マウスへの経口投薬の急性毒性（ＬＤ５０）
【０２４５】
【表１】
0005945868.tif 000006
【０２４６】
表２．  ラットへの経口投薬の急性毒性（ＬＤ５０）
【０２４７】
【表２】
0005945868.tif 000007
【０２４８】
本発明における他の実施例において調製したレボイソバレリルスピラマイシン  Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ又はレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩの製剤についても、同様な試験を実施し、同じような結果を得られた。
【０２４９】
実験例２  レボイソバレリルスピラマイシンＩ及びその結晶体の動物体内効果
試験方法：感染菌液の調製：−８０℃の冷蔵庫で保存された試験菌液を取り出して室温に１ｈ程度置き、そして肺炎連鎖球菌、化膿連鎖球菌、腸球菌の菌液を０．１ｍｌ吸い取り、それぞれ２ｍｌ  ＭＨの汁（１０％の不活化ウマ血清を加える）に接種し、黄色ブドウ球菌も、上記の方法で０．１ｍｌの菌液を２ｍｌ  ＭＨの汁に接種し、３７℃のインキュベーターに置き、１８ｈ培養し、原菌液にし、５％の胃ムチンを用いて原菌液を希釈し、動物感染時の１００％の致死菌数を感染菌液とした。
【０２５０】
レボロキタマイシンの臨床投薬は経口投薬としたので、レボロキタマイシンの試験では、投薬ルートを強制経口投与にした。レボイソバレリルスピラマイシンＩ（実施例１調製）、レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体（実施例２７調製）は筋肉内投与にした。
【０２５１】
マウスの腹腔に０．５ｍｌの致死菌を注射後、マウスは、明らかに活動が減少する、静かに寝る、毛がふっくらするなどの症状が現れた。感染後、それぞれ０．５〜６ｈにて各マウスに対し０．２ｍｌ強制経口投与を１回実施し、不良反応は一切なかった。７日間のマウス死亡数を観察し、Ｂｌｉｓｓプログラムを用いて、それぞれ感染後のマウスに対する各薬の半数保護量（ＥＤ５０）を計算し、保護効果を各薬物と比較した。
【０２５２】
動物体内試験の結果：
表３：マウス腹腔の６株連鎖球菌感染に対する５種の抗生物質の効果比較
【０２５３】
【表３】
0005945868.tif 000008
0005945868.tif 000009
【０２５５】
【表４】
0005945868.tif 000010
【０２５６】
動物体内試験の結果：
マウスの１２株細菌感染に対するレボイソバレリルスピラマイシンＩの効果については、表３、表４を参照のこと。優れた保護効果を示している。マウスの１２株細菌感染に対するレボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体化合物については、より優れた保護効果を示している。
【０２５７】
本発明における他の実施例において調製したレボイソバレリルスピラマイシン  Ｉ、レボイソバレリルスピラマイシンＩ結晶体又はレボイソバレリルスピラマイシン  Ｉ又はその結晶体を含有する製剤についても同様な試験を実施し、似たような結果が得られた。
【０２５８】
実験例３：レボイソバレリルスピラマイシンＩＩ及びその結晶体化合物の動物体内効果
実施例１において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ及び実施例３６において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物を用いて試験を実施した。試験方法は実験例２と同じである。
【０２５９】
動物体内試験の結果は表５及び表６を参照のこと。
【０２６０】
表５：マウス腹腔の６株連鎖球菌感染に対する５種の抗生物質の効果比較
【０２６１】
【表５】
0005945868.tif 000011
0005945868.tif 000012
【０２６３】
【表６】
0005945868.tif 000013
【０２６５】
本発明の他の実施例において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物又はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩ結晶体化合物の製剤についても同様な試験を実施し、似たような結果が得られた。
【０２６６】
実験例４  ：レボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ及びその結晶体化合物の動物体内効果実施例１において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ及び実施例４５において調製したレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物を用いて試験を実施し、試験方法は実験例２と同じである。
【０２６７】
動物体内試験の結果は表７及び表８を参照のこと。
【０２６８】
表７：マウス腹腔の６株連鎖球菌感染に対する５種の抗生物質の効果比較
【０２６９】
【表７】
0005945868.tif 000014
0005945868.tif 000015
【０２７０】
【０２７１】
表８：マウス腹腔の腸球菌と黄色ブドウ球菌感染に対する５種の抗生物質の効果比較
【０２７２】
【表８】
0005945868.tif 000016
0005945868.tif 000017
【０２７４】
本発明における他の実施例において調製したレボイソバレリルスピラマイシン  ＩＩＩ結
晶体化合物又はレボイソバレリルスピラマイシンＩＩＩ結晶体化合物の製剤についても同
様な試験を実施し、似たような結果を得られた。
【０２７５】
実験例５  動物体外効果の実験：
一、  臨床分離菌の測定：
試験方法：２倍平板希釈法：所定量の溶融寒天培養基を、系列薬物濃度を含む平板内に入れ、薬液と均一に混合し（連鎖球菌と腸球菌の場合、５％のヒツジ脱繊維血液を加えて血液培養基にし、インフルエンザ桿菌の場合、７％加え、淋菌用淋菌培養基の場合、７％のヒツジ脱繊維血液を加えてチョコレート培養基にする）、凝固後、新鮮な培養菌液を１０６ＣＦＵ／ｍＬに希釈し、抗菌デタミナーを用いて抗菌薬物を含む平板寒天に接種し、３７℃にて１８ｈ培養する。淋菌を５％のＣＯ２インキュベーターに入れて２４ｈインキュベートし、レジオネラ菌を５％のＣＯ２インキュベーターに入れて４８ｈ培養し、嫌気性菌を嫌気箱に入れて３７℃にて４８ｈ嫌気培養する。抗菌薬が細菌増殖を阻止する最低濃度すなわち最低阻止濃度（ＭＩＣ）を観察し、さらに薬物のＭＩＣ５０とＭＩＣ９０を計算し、対照対象の薬と比較する。
【０２７６】
注）ＭＩＣ５０とは５０％の細菌増殖を阻止するための最低阻止濃度のことをいう
ＭＩＣ９０とは９０％の細菌増殖を阻止するための最低阻止濃度のことをいう。
【０２７７】
試験の結果は表９を参照のこと。
【０２７８】
表９  ：  レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩと他の抗生物質の臨床分離菌の感受性分布の比較
【０２７９】
【表９】
0005945868.tif 000018
0005945868.tif 000019
0005945868.tif 000020
【０２８１】
２．接種待ちの菌種を１００００〜２００００  ｉｆｕ（封入体形成単位）／ｍｌに希釈し、０．１ｍｌ／ウェルにて接種する。クラミジアトラコマチス血清型Ｂ／ＴＷ−５／ＯＴ、Ｄ／ＵＷ−３／ＣｘをＭｃＣｏｙ細胞培養プレートに接種し、肺炎クラミジアＣＷＬ−０２９をＨＥｐ−２細胞培養プレートに接種する。まず９６ウェル培養プレート内の細胞培養液を吸い取り、そして０．１ｍｌ／ウェルにて接種を行う。そのうち、Ａ１１〜Ｄ１１の４つのウェル、Ｃ１２とＤ１２の２つのウェルは菌種を接種しない。
【０２８２】
３．菌種接種完了後、Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ社のＪ−６ＭＣ遠心機を用いて９６ウェル細胞培養プレートについて遠心処理を行い、遠心力  ×１５００ｇ、遠心温度３５℃、遠心時間６０分間とする。
【０２８３】
４．遠心処理完了後、接種したクラミジアトラコマチス又は肺炎クラミジアを吸い取り、それぞれ０．１ｍｌ／ウェルにて系列希釈の４種の抗生物質薬物に加える。
【０２８４】
５．３７℃、５％のＣＯ２にて培養し、クラミジアトラコマチス感受性試験プレートは４８時間培養し、肺炎クラミジア感受性試験プレートは７２時間培養する。培養完了後、抗生物質薬物溶液を吸い取り、ＰＢＳ（０．０１Ｍ、  ｐＨ  ７．４）を２回洗浄し、１００％のメタノール、室温にて１５分間固定する。
【０２８５】
６．間接免疫蛍光染色の鑑定：トラコーマ及び肺炎クラミジア感受性試験プレートには、それぞれ純化された抗クラミジアトラコマチスモノクローナル抗体（Ｎ５４クローニング）及び肺炎クラミジアモノクローナル抗体（Ｐ３３クローニング）を５０μｌ／ウェルにて加え、３７℃のウェットボックス内で３０分間インキュベートし、そしてウォッシャーを用いて４回洗浄し、さらに５０μｌ／ウェルにてウサギ抗マウス蛍光抗体（Ｓｉｇｍａ社）を加え、同様な方法及び条件でインキュベート洗浄を行う。１００μｌ／ウェルにて封入グリセリンを加え、Ｎｉｋｏｎ倒立蛍光顕微鏡（Ｄｉａｐｈｏｔ−２００）の下で結果を観察する。
【０２８６】
７．ＭＩＣの定義：９６ウェル試験プレートにおけるクラミジアトラコマチス又は肺炎クラミジア封入体の増殖が完全に阻止されるウェル（全てのウェルで蛍光染色の封入体が見られていない）の最小抗生物質希釈濃度。
【０２８７】
表１０：トラコーマ及び肺炎クラミジアの体外作用に対する５種のマクロライド系抗生物質の最小阻止濃度の比較（ＭＩＣ）
【０２８８】
【表１０】
0005945868.tif 000021
【０２８９】
１、トラコーマ血清型Ｂ／ＴＷ−５／ＯＴに対し、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩはレボロキタマイシン、エリスロマイシン、アジスロマイシンに優れ、アセチルスピラマイシン（ＭＩＣは４μｇ／ｍｌ）は比較的に効果が悪い。
【０２９０】
２、トラコーマ血清型Ｄ／ＵＷ−３／Ｃｘに対し、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩ及びレボロキタマイシン、アジスロマイシンは、体外作用が類似し、ＭＩＣが０．２５μｇ／ｍｌであり、感受性を持ち、エリスロマイシン（０．５μｇ／ｍｌ）はその次で、アセチルスピラマイシン（ＭＩＣは２μｇ／ｍｌ）は比較的に効果が悪い。
【０２９１】
３、肺炎クラミジアＣＷＬ−０２９に対し、レボイソＩＩとエリスロマイシンは、体外作用が最も感受性を持ち、ＭＩＣ≦０．０１６μｇ／ｍｌ、アジスロマイシン及びレボロキタマイシン、レボイソＩ、レボイソＩＩＩは比較的に感受性を持ち、アセチルスピラマイシン（ＭＩＣは０．５μｇ／ｍｌ）は比較的に効果が悪い。
【０２９２】
４、全体的に見て、レボイソバレリルスピラマイシンのクラミジアに対する効果は他の試験薬物より優れている。
【０２９３】
三、体外抗マイコプラズマウレアリチクムと肺炎マイコプラズマ
１．試験方法：無菌の１２ウェル細胞培養プレートの各ウェルにＵ−ＰＰＬＯ  ０．８ｍｌを加える（菌液対照ウェルは０．９ｍｌ加え、培養基対照ウェルは１．０ｍｌ加える）。
【０２９４】
２．各実験ウェルに１０４ＣＣＵ／ｍｌのＵｕ菌液を０．１ｍｌ加え、ウェルの中の最終的な菌量は１０３ＣＣＵ／ｍｌである（培養基対照ウェルは菌液を加えない）。
【０２９５】
３．３組（１００μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ抗生物質原液）に分けて２倍降順濃度グラデーションにて無菌Ｔｉｐを用いて各実験ウェルに実験用抗生物質１００μｌ、５０μｌ、２５μｌ、１２．５μｌを加える（菌液対照ウェル、培養基対照ウェルは抗生物質を加えない。同時に、抗生物質対照ウェルを設ける）。
【０２９６】
４．上記各ウェルを均一に混合し、培養プレートの口をテープで封じ、３７℃のインキュベーターに入れて培養する。
【０２９７】
５．実験後の１７−２４ｈにＵｕの増殖状況を観察記録する。Ｕｕ菌液対照ウェルが陽性増殖を示すとき、Ｕｕの増殖を阻止できる最低抗生物質濃度は該薬剤の最低ＭＩＣであり、実験完了時のＭＩＣは最終的なＭＩＣ（２４ｈ）である。
【０２９８】
抗マイコプラズマウレアリチクムと肺炎マイコプラズマ菌株についてＭＩＣ測定を４回行い、結果は次のとおり：
レボイソＩのＭＩＣ値は０．０２５〜０．１２５μｇ／ｍｌである。
【０２９９】
レボイソＩＩのＭＩＣ値は０．０２５〜０．１２５μｇ／ｍｌである。
【０３００】
レボイソＩＩＩのＭＩＣ値は０．０２５〜０．１２５μｇ／ｍｌである。
【０３０１】
レボロキタマイシンは０．０２５〜０．１２５μｇ／ｍｌである。
【０３０２】
アセチルスピラマイシンは０．５μｇ／ｍｌである。
【０３０３】
エリスロマイシンは５μｇ／ｍｌである。
【０３０４】
アジスロマイシンは０．０２５〜０．１２５μｇ／ｍｌである。
【０３０５】
上記の結果によれば、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、レボロキタマイシンは優れた抗Ｕｕ作用があり、アジスロマイシンの作用に似ており、アセチルスピラマイシンより優れ、エリスロマイシンのこの組の薬剤の中で抗Ｕｕ作用が最も悪い。
【０３０６】
本発明における他の実施例において調製したレボイソバレリルスピラマイシン  Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ又はレボイソバレリルスピラマイシン  Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩの製剤についても同様な試験を実施し、似たような結果が得られた。
【０３０７】
実験例４    レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩの臨床試験
レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩ  （実施例１調製）、アジスロマイシンを用いて急性細菌性咽頭炎、化膿性扁桃炎、急性気管気管支炎、軽度の肺炎など感受性菌に起因する成人急性呼吸器感染症を治療する際の効果及び安全性。
【０３０８】
多中心、ランダム、双盲、ダブルダミー対照によって試験を実施する。５病院において統一した臨床試験案を用いて同時に進める。
一、  
【０３０９】
二、  被験者の入選基準
１、年齢１８〜６５歳の成人男女患者
２、急性細菌性咽頭炎、急性化膿性扁桃炎、急性気管気管支炎、軽度の肺炎、急性副鼻腔炎など感受性菌に起因する急性呼吸器感染症
３、入選前に同意書に署名しなければならない。
【０３１０】
４、全ての被験者は研究期間及び投薬後に少なくとも３ヶ月避妊を実施する。
【０３１１】
二、被験者排除基準
１、肝臓腎臓機能不全の者（血液Ｃｒ＞１．５ｍｇ／ｄｌ  ＡＬＴ＞正常な上限）
２、妊娠中や授乳中の女性
３、胃腸障害によって経口投薬が不可能な者
４、本試験を行う前１週間内に抗菌薬を服用した者
５、長期間にわたって節度なく酒を飲む者
統計学専門家が試験の結果について統計した結果、次の臨床効果（ＦＡＳ）が得られた。
【０３１２】
レボイソＩ、レボイソＩＩ、レボイソＩＩＩ、アジスロマイシンの効果はそれぞれ９２．３０％、９２．３０％、９２．３０％、８９．６１％となる。
【０３１３】
細菌除去率は次のとおり：
レボイソＩ、レボイソＩＩ、レボイソＩＩＩ、アジスロマイシンの細菌除去率はそれぞれ９７．５６％、９７．５６％、９７．５６％、９２．８６％となる。
【０３１４】
不良反応は次のとおり：
レボイソＩ、レボイソＩＩ、レボイソＩＩＩ、アジスロマイシンの不良反応はそれぞれ２．５％、２．５％、２．５％、７．６％となる。
【０３１５】
臨床試験により、レボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩは安全かつ有効な抗感染症新薬であることが明らかになった。
【０３１６】
本発明における他の実施例において調製したレボイソバレリルスピラマイシン  Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ又はレボイソバレリルスピラマイシンＩ、ＩＩ、ＩＩＩの製剤についても同様な試験を実施し、似たような結果が得られた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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