(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
獣毛を含む試料について前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する方法であって、
（ａ）前記試料から、変性剤として尿素を含む抽出液で抽出し、該抽出液をアセトニトリルの存在下でリジルエンドペプチターゼで処理することを含む前処理により分析サンプルを得る工程、
（ｂ）前記工程（ａ）で得た分析サンプルを、質量分析法を用いて分析し結果を得る工程、及び
（ｃ）前記工程（ｂ）で得た結果から、前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程、を含むことを特徴とする、獣毛の種類を特定及び／又は定量する方法であって、
（イ）  前記獣毛の種類が、ウシ科ヤギ属カシミヤ種、ウシ科ヤギ属アンゴラ種、ウシ科ウシ属ヤク種、ウシ科ヒツジ属ヒツジ種、ラクダ科ラクダ属、ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）、及びウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種成る群より選択される１以上の種であり、
（ロ）  前記工程（ｃ）が、前記工程（ｂ）で得た結果を、獣毛の種類を予め確認した参照獣毛の試料について、前記（ａ）及び（ｂ）の工程を同一条件で行った結果得られた参照データの少なくとも１つと比較し、獣毛種に特異的に検出される質量、及び／又は質量電荷比（ｍ／ｚとも表記する）、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程である、前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程において、前記参照データが、以下の質量及び質量電荷比から選択される１種以上の質量及び／又は質量電荷比である、前記方法。
（I）ウシ科ウシ属ヤク種について  
（１）ヤク種に特異的に検出される質量
１３６４．７０  ±０．０２％、１３８３．７２  ±０．０２％、
１４３１．６７  ±０．０２％、２４６９．２７  ±０．０２％、又は
２４９５．３０  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（II）ウシ科ヤギ属カシミヤ種について
（１）カシミヤ種に特異的に検出される質量、
２２１８．１９  ±０．０２％、３３７９．４８  ±０．０２％、又は
２３９１．９９  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（III）ウシ科ヒツジ属ヒツジ種について
（１）ヒツジ種に特異的に検出される質量、
２４７９．３０  ±０．０２％、４９７７．２４  ±０．０２％、
２３４０．０３  ±０．０２％、２３５８．０２  ±０．０２％、
１０５１．４１  ±０．０２％、１０３３．３９  ±０．０２％、
２０７４．１２  ±０．０２％、又は２１７４．００  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（IV）ラクダ科ラクダ属について
（１）ラクダ属に特異的に検出される質量、
２８８８．３５  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（V）ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）について
（１）アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）に特異的に検出される質量、
４５９９．３７  ±０．０２％、９０１．４７  ±０．０２％、又は
５３２．３２  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（VI）ウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種
（１）アンゴラウサギ種に特異的に検出される質量、
２３０３．０７±０．０２％、２５０２．１５±０．０２％、
２０５８．０２±０．０２％、又は１５５４．８１±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
【請求項２】
前記質量分析法に加えて、液体クロマトグラフィーが質量分析と組み合わせて用いられる（ＬＣ−ＭＳもしくはＵＰＬＣ−ＭＳとも表記する）請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記参照データがヤク種に特異的な質量電荷比であって、配列番号１で表されるアミノ酸配列を含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオンの質量電荷比であることを特徴とする、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
２種類の獣毛を含む試料について、その混用率を算出する方法であって、
（ａ）前記試料から、変性剤として尿素を含む抽出液で抽出し、該抽出液をアセトニトリルの存在下でリジルエンドペプチターゼで処理することを含む前処理により分析サンプルを得る工程、
（ｂ）前記工程（ａ）で得た分析サンプルを、質量分析法を用いて分析し結果を得る工程（ｃ）前記（ａ）及び（ｂ）の工程を同一条件で、２種の片方について、当該獣種の獣毛試料の全質量のイオンクロマトグラムから該獣種に特異的な質量電荷比のみを抽出して表示させたイオンクロマトグラムを作成し、このクロマトグラムをデータ処理し、当該獣毛種特異的質量電荷比のピーク面積を算出する工程、及び
（ｄ）ピーク面積から混用率を算出する工程、を含み、
前記獣種に特異的な質量電荷比が、以下の質量電荷比から選ばれる１以上の質量電荷比である、前記方法。
（I）ウシ科ウシ属ヤク種について
（１）ヤク種に特異的に検出される質量
１３６４．７０  ±０．０２％、１３８３．７２  ±０．０２％、
１４３１．６７  ±０．０２％、２４６９．２７  ±０．０２％、又は
２４９５．３０  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（II）ウシ科ヤギ属カシミヤ種について
（１）カシミヤ種に特異的に検出される質量、
２２１８．１９  ±０．０２％、３３７９．４８  ±０．０２％、又は
２３９１．９９  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（III）ウシ科ヒツジ属ヒツジ種について
（１）ヒツジ種に特異的に検出される質量、
２４７９．３０  ±０．０２％、４９７７．２４  ±０．０２％、
２３４０．０３  ±０．０２％、２３５８．０２  ±０．０２％、
１０５１．４１  ±０．０２％、１０３３．３９  ±０．０２％、
２０７４．１２  ±０．０２％、又は２１７４．００  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（IV）ラクダ科ラクダ属について
（１）ラクダ属に特異的に検出される質量、
２８８８．３５  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（V）ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）について
（１）アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）に特異的に検出される質量、
４５９９．３７  ±０．０２％、９０１．４７  ±０．０２％、又は
５３２．３２  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（VI）ウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種
（１）アンゴラウサギ種に特異的に検出される質量、
２３０３．０７±０．０２％、２５０２．１５±０．０２％、
２０５８．０２±０．０２％、又は１５５４．８１±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
【請求項５】
前記工程（ｄ）の前に、
（イ）２種共通の分子種由来の質量電荷比（ｍ／ｚ）についてのイオンクロマトグラムを作成し、各獣毛に共通する質量電荷比を選択し、該共通質量電荷比のピーク面積を求める工程、
（ロ）共通質量電荷比のピーク面積に対して獣種に特異的な質量電荷比のピーク面積を算出する工程、
を追加した、請求項４記載の方法。
【請求項６】
ヤク種、カシミヤ種、及びヒツジ種に共通な質量電荷比（ｍ／ｚ）が、以下に掲げる質量電荷比から選ばれる１以上の質量電荷比である、請求項５記載の方法。
（１）質量１０７０．５    ±０．０２％  から算出される分子イオンの質量電荷比
（２）質量１５５５．７６  ±０．０２％  から算出される分子イオンの質量電荷比
（３）質量１１６０．５８  ±０．０２％  から算出される分子イオンの質量電荷比
（４）質量  ６０２．３０  ±０．０２％  から算出される分子イオンの質量電荷比
【請求項７】
はじめに、獣毛の種類を予め確認した参照獣毛を人為的に混用した試料を用い、ピーク面積と混用率をグラフ化し、検量線を作成し、未知試料においてこの検量線を用いピーク面積から混用率を算出する、請求項４〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
１以上の種類の獣毛を含む試料について前記獣毛の種類を特定する方法、及び特定された獣毛の種類が２以上の場合には、その混用率を算出する方法であって、
（ａ）前記試料から、変性剤として尿素を含む抽出液で抽出し、該抽出液をアセトニトリルの存在下でリジルエンドペプチターゼで処理することを含む前処理により分析サンプルを得る工程、
（ｂ）前記工程（ａ）で得た分析サンプルを、質量分析法を用いて分析し結果を得る工程、
（ｃ）前記工程（ｂ）で得た結果から、前記獣毛の種類を特定する工程、
（ｄ）前記特定された獣毛の種類が2以上の場合には、同定されたそれぞれ獣種について、当該特定された獣特異的質量電荷比のピーク面積を算出する工程、
（ｅ）当該獣種が100％参照試料のピーク面積と比較し、当該獣種の混用率を算定する工程、を含み、
前記獣種に特異的な質量電荷比が、以下の質量電荷比から選ばれる１以上の質量電荷比である、前記獣毛の種類を特定する方法、及び混用率算出方法。
（I）ウシ科ウシ属ヤク種について
（１）ヤク種に特異的に検出される質量
１３６４．７０  ±０．０２％、１３８３．７２  ±０．０２％、
１４３１．６７  ±０．０２％、２４６９．２７  ±０．０２％、又は
２４９５．３０  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（II）ウシ科ヤギ属カシミヤ種について
（１）カシミヤ種に特異的に検出される質量、
２２１８．１９  ±０．０２％、３３７９．４８  ±０．０２％、又は
２３９１．９９  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（III）ウシ科ヒツジ属ヒツジ種について
（１）ヒツジ種に特異的に検出される質量、
２４７９．３０  ±０．０２％、４９７７．２４  ±０．０２％、
２３４０．０３  ±０．０２％、２３５８．０２  ±０．０２％、
１０５１．４１  ±０．０２％、１０３３．３９  ±０．０２％、
２０７４．１２  ±０．０２％、又は２１７４．００  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（IV）ラクダ科ラクダ属について
（１）ラクダ属に特異的に検出される質量、
２８８８．３５  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（V）ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）について
（１）アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）に特異的に検出される質量、
４５９９．３７  ±０．０２％、９０１．４７  ±０．０２％、又は
５３２．３２  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（VI）ウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種
（１）アンゴラウサギ種に特異的に検出される質量、
２３０３．０７±０．０２％、２５０２．１５±０．０２％、
２０５８．０２±０．０２％、又は１５５４．８１±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
【請求項９】
前記工程（ｅ）の前に、
（イ）混用種共通の分子種由来の質量電荷比（ｍ／ｚ）についてのイオンクロマトグラムを作成し、各獣毛に共通する質量電荷比を選択し、該共通質量電荷比のピーク面積を求める工程、
（ロ）共通質量電荷比のピーク面積に対して獣種に特異的な質量電荷比のピーク面積を算出する工程、
を追加した、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
ヤク種、カシミヤ種、及びヒツジ種に共通な質量電荷比（ｍ／ｚ）が、以下に掲げる質量電荷比から選ばれる１以上の質量電荷比である、請求項９記載の方法。
（１）質量１０７０．５    ±０．０２％  から算出される分子イオンの質量電荷比
（２）質量１５５５．７６  ±０．０２％  から算出される分子イオンの質量電荷比
（３）質量１１６０．５８  ±０．０２％  から算出される分子イオンの質量電荷比
（４）質量  ６０２．３０  ±０．０２％  から算出される分子イオンの質量電荷比
【請求項１１】
２以上の種類（以下Ｎ種と記載）の獣毛を含む試料において、（Ｎ-１）種類の獣毛種の混用率を算出し、１００％からの差によりＮ種の混用率を求める、請求項４〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
１以上の種類の獣毛と獣毛以外の繊維とを含む試料について、その獣毛に関する混用率を算出する方法であって、
前記試料から前処理により分析サンプルを得る工程（ａ）の前、又は、獣毛に関しての混用率算出の工程後に、JIS L1030により規定されている解じょ法や溶解法などによる獣毛以外の繊維と獣毛の混用割合を算出する工程を含む、請求項４〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、獣毛の種類を特定する方法に関する。詳しくは、獣毛を含む試料から抽出物を得、これを質量分析法を用いて前記獣毛の種類を特定及び、もしくは定量する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
獣毛製品の中でもカシミヤ繊維は、厳しい自然環境で飼育されたカシミヤヤギから採取されるため、特有の優れた性質を持ち、高値で取引されている。しかし、最近ではカシミヤ繊維中に他の動物繊維が混入される品質偽装が発生しており、問題となっている。
これら衣料品に係る表示に関して、繊維鑑別や繊維混用率の試験方法として、日本工業規格ＪＩＳ  Ｌ  １０３０（繊維製品の混用率試験方法）により、顕微鏡法を用いた試験方法が規定されている。顕微鏡法では、毛の外観を鑑別の手がかりとしており加工による繊維表面の表面変化やカシミヤに外観がよく似ていた場合、鑑定結果が左右される可能性がある。特に、ヤク毛はブラウンカシミヤと繊維の表面形状が酷似しており、カシミヤ１００％と表示されている製品中にヤク毛が混入、混用されていても顕微鏡法ではヤク毛混入を鑑定することが難しく、より確実かつ簡便にカシミヤ中へのヤク毛の混入を鑑定する方法が求められている。
加えて顕微鏡法には鑑別者の熟練度により鑑定のばらつきが発生する可能性もある。通常複数人の鑑別者により鑑定を行うことで信頼のおける鑑別を行っているが、顕微鏡法の補完技術やこれにかわる鑑定方法の開発は重要な課題であった。
顕微鏡法による鑑別技術の補完技術として、近年ＤＮＡによる鑑別法が報告されている。特にカシミヤ製品を含む繊維の同定に関しては、財団法人日本紡績検査協会から出願番号：特願２００３−２９７３３２（特許文献１：特開２００４−１２１２２９号公報）、財団法人日本化学繊維検査協会から出願番号：特願平１１−１５６１６（特許文献２：特開２０００−２１００８４号公報）、出願番号：特願平１１−１３５９９３（特許文献３：特開２０００−３２５０９８号公報）などの特許出願がなされており、出願番号：特願平１１−１５６１６については特許査定されている（特許文献４：特許第３５６６５７０号公報）。これらの方法は、細胞あたりの存在数の多いミトコンドリアＤＮＡ、例えば、チトクロムｂの配列を基に種特異的なＤＮＡプライマーを設計し、獣毛製品から抽出したＤＮＡを鋳型としてＰＣＲすることでＤＮＡを増幅し、その増幅ＤＮＡの分子量などを分析することで種を判定するものである。しかし本発明者らもＤＮＡによる鑑定法の開発をすすめていたが、ＰＣＲでは、増幅の有無が同定の判断基準となるところ、獣毛からは増幅がみられても毛製品によっては増幅できないことがある。毛根を含む梳き取られた毛繊維はＤＮＡ分析が比較的容易であるが、毛根を含まない刈り取られた毛繊維は、ＤＮＡ分析が困難であるが、工業的には毛根を含まない刈り取られた毛繊維が用いられることが殆どである。また、染料などの処理などのため、効率よくＤＮＡが抽出されないためと考えられる。また、ごくわずかなＤＮＡを増幅してみるため、偽陽性の危険性もあり、更に、実際上、定量にも難しいという問題がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００４−１２１２２９号公報
【特許文献２】特開２０００−２１００８４号公報
【特許文献３】特開２０００−３２５０９８号公報
【特許文献４】特許第３５６６５７０号公報
【発明の概要】
【０００４】
本発明では上記のような問題点を回避すべく、獣毛を含む試料について存在量の少ないＤＮＡではなく、獣毛の主たる成分であるタンパク質を直接分析して、前記獣毛の種類の特定および定量ができる方法を提供することを課題とする。
本発明は、日本工業規格ＪＩＳ  Ｌ  １０３０（繊維製品の混用率試験方法）に規定されている顕微鏡法による獣毛製品鑑別法の補完もしくはそれにかわる技術の開発を提供することを課題とする。
本願発明は、獣毛の主要なタンパク質成分であるケラチンなどのタンパク質成分について、獣毛サンプルを質量分析することで、分析結果として質量、質量電荷比（ｍ／ｚ）、前記質量電荷比についてのＬＣ溶出時間、及びマーカーとして有用な部分配列を特定して、これらを基に、獣毛の種類の特定及び定量、また混用率の算出を行う方法を提供する。
より具体的には、本願発明者らは、以上の課題を達成する、以下の発明を提供する。
Ａ．本願発明
［１］獣毛を含む試料について前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する方法であって、
（ａ）前記試料から前処理により分析サンプルを得る工程、
（ｂ）前記工程（ａ）で得た分析サンプルを、質量分析法を用いて分析し結果を得る工程、及び
（ｃ）前記工程（ｂ）で得た結果から、前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程、
を含むことを特徴とする、獣毛の種類を特定及び／又は定量する方法。
［２］前記質量分析法に加えて、液体クロマトグラフィーが質量分析と組み合わせて用いられる（ＬＣ−ＭＳもしくはＵＰＬＣ−ＭＳとも表記する）［１］記載の方法。
［３］前記獣毛の種類が、ウシ科ヤギ属カシミヤ種、ウシ科ヤギ属アンゴラ種、ウシ科ウシ属ヤク種、ウシ科ヒツジ属ヒツジ種、ラクダ科ラクダ属、ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）、及びウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種成る群より選択される１以上の種である、［１］及び［２］のいずれかに記載の方法。
［４］前記工程（ｃ）が、前記工程（ｂ）で得た結果を、獣毛の種類を予め確認した参照獣毛の試料について、前記（ａ）及び（ｂ）の工程を同一条件で行った結果得られた参照データの少なくとも１つと比較し、獣毛種に特異的に検出される質量、及び／又は質量電荷比（ｍ／ｚとも表記する）、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程であることを特徴とする、［１］〜［３］のいずれか１に記載の方法。
［５］前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程において、
前記参照データが、以下の質量及び質量電荷比から選択される１種以上の質量及び／又は質量電荷比である、［４］記載の方法。
（Ｉ）ヤク種について
（１）ヤク種に特異的に検出される質量：
５９４８．９０  ±０．０２％、又は２１３７．９２  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）又はその他のヤク種に特異的に検出される質量電荷比（ｍ／ｚ）：
９２５５．５  ±０．０２％、７３９２．６  ±０．０２％、
５９０８．７  ±０．０２％、５５４３．１  ±０．０２％、
５９４９．９０  ±０．０２％、１９８３．５２  ±０．０２％、
１４８７．６４  ±０．０２％、１１９１．５２  ±０．０２％、
２１３８．９２  ±０．０２％、又は１０６９．９８  ±０．０２％
（ＩＩ）カシミヤ種について、
（１）カシミヤ種に特異的に検出される質量：
８９７６．４５  ±０．０２％、７１０２．１８  ±０．０２％、又は
７０７４．１８  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）又は
その他のカシミヤ種に特異的に検出される質量電荷比（ｍ／ｚ）：
１０３８４．２  ±０．０２％、８９７６．９  ±０．０２％、
６６６２．２  ±０．０２％、６０９３．２  ±０．０２％、６００２．２  ±０．０２％、
８９７７．４５  ±０．０２％、２２４４．５０  ±０．０２％、
１７９５．７８  ±０．０２％、７１０３．１８  ±０．０２％、
１７７６．５４  ±０．０２％、１４２１．４４  ±０．０２％、
７０７５．１８  ±０．０２％、１７６９．５５  ±０．０２％、又は
１４１５．８３  ±０．０２％
（ＩＩＩ）ヒツジ種について
（１）ヒツジ種に特異的に検出される質量：１７５３８．８８  ±０．０２％、又は
１７５８４．２６  ±０．０２％
（２）上記質量に起因する分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）又はその他のヒツジ種に特異的に検出される質量電荷比（ｍ／ｚ）：１０３３９．６  ±０．０２％、８９５４．６  ±０．０２％、６６６５．７  ±０．０２％、６０３６．４  ±０．０２％、
１７５３９．８８  ±０．０２％、１９４９．８４  ±０．０２％、
１７５４．８２  ±０．０２％、１５９５．４７  ±０．０２％、
１７５８５．２６  ±０．０２％、１９５５．１０  ±０．０２％、
１７５９．４７  ±０．０２％、又は１５９９．５５  ±０．０２％
（ＩＶ）アンゴラ種（モヘヤとも表記する）について
（１）アンゴラ種に特異的に検出される質量：６３２９．５２  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（Ｖ）ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）について
（１）アルパカ種に特異的に検出される質量：
６３５８．６０  ±０．０２％、又は６３４２，７０  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（ＶＩ）ウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種（アンゴラとも表記する）
（１）アンゴラウサギ種に特異的に検出される質量：１０４２．４３  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
［６］前記試料から前処理により分析サンプルを得る工程（ａ）が、リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃとも表記する）を用いる工程を含む［１］〜［３］いずれか１に記載の方法。
［７］前記工程（ｃ）が、前記工程（ｂ）で得た結果を、獣毛の種類を予め確認した参照獣毛の試料について、前記工程（ａ）及び工程（ｂ）を同一条件で行った結果得られた参照データの少なくとも１つと比較し、獣毛種に特異的に検出される質量、及び／又は質量電荷比（ｍ／ｚとも表記する）、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程
であることを特徴とする、［６］に記載の方法。
［８］前記工程（ｃ）において、前記工程（ｂ）で得た結果を、データ処理により溶出時間と検出質量電荷比および検出強度を表したマップ表示とし、獣毛の種類を予め確認した参照獣毛の試料について、前記工程（ａ）及び工程（ｂ）を同一条件で行った結果得られた参照マップの少なくとも１つと比較し、その相関度をもって獣毛の種類を特定する工程
であることを特徴とする、［６］に記載の獣毛の種類の特定方法。
［９］前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程において、前記参照データが、以下の１種以上の質量又は質量電荷比である、［７］又は［８］記載の方法。
（Ｉ）ウシ科ウシ属ヤク種について
（１）ヤク種に特異的に検出される質量
１３６４．７０  ±０．０２％、１３８３．７２  ±０．０２％、
１４３１．６７  ±０．０２％、２４６９．２７  ±０．０２％、又は
２４９５．３０  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（ＩＩ）ウシ科ヤギ属カシミヤ種について
（１）カシミヤ種に特異的に検出される質量、
２２１８．１９  ±０．０２％、３３７９．４８  ±０．０２％、又は
２３９１．９９  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（ＩＩＩ）ウシ科ヒツジ属ヒツジ種について
（１）ヒツジ種に特異的に検出される質量、
２４７９．３０  ±０．０２％、４９７７．２４  ±０．０２％、
２３４０．０３  ±０．０２％、２３５８．０２  ±０．０２％、
１０５１．４１  ±０．０２％、１０３３．３９  ±０．０２％、
２０７４．１２  ±０．０２％、又は２１７４．００  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（ＩＶ）ラクダ科ラクダ属について
（１）ラクダ属に特異的に検出される質量、
２８８８．３５  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（Ｖ）ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）について
（１）アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）に特異的に検出される質量、
４５９９．３７  ±０．０２％、９０１．４７  ±０．０２％、又は
５３２．３２  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（ＶＩ）ウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種
（１）アンゴラウサギ種に特異的に検出される質量、
２３０３．０７±０．０２％、２５０２．１５±０．０２％、
２０５８．０２±０．０２％、又は１５５４．８１±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
［１０］前記参照データがヤク種に特異的な質量電荷比であって、配列番号１で表されるアミノ酸配列を含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオンの質量電荷比であることを特徴とする、［７］又は［９］記載の方法。
0005945590.tif 000002
［１１］前記参照データがヤク種特異的質量電荷比であって、配列番号２で表されるＤＮＡ配列を含む遺伝子から発現されるタンパク質による分子イオンの質量電荷比であることを特徴とする、［７］又は［９］記載の方法。
0005945590.tif 000003
［１２］前記参照データがカシミヤ種に特異的な質量電荷比であって、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオンの質量電荷比であることを特徴とする、［７］又は［９］記載の方法。
0005945590.tif 000004
［１３］前記参照データがヒツジ種特異的質量電荷比であって、配列番号４〜１３で表されるアミノ酸配列を１つ以上含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオンの質量電荷比であることを特徴とする、［７］又は［９］記載の方法。
0005945590.tif 000005
［１４］以下の（１）−（５）のいずれかのペプチド又は核酸獣毛マーカー。
（１）配列番号１で示されるヤク種獣毛に特異的なペプチドマーカー。
（２）配列番号３で示されるカシミヤ獣毛に特異的なペプチドマーカー。
（３）配列番号４〜９で示されるアミノ酸配列の２つ以上組み合わせを含むヒツジ獣毛に特異的なペプチドマーカー。
（４）配列番号１０〜１３で示されるアミノ酸配列の２つ以上組み合わせを含むヒツジ獣毛に特異的なペプチドマーカー。
（５）配列番号２で示されるヤク種獣毛に特異的な核酸マーカー。
［１５］２種類の獣毛を含む試料について、その混用率を算出する方法であって、
（ａ）前記試料から前処理により分析サンプルを得る工程、
（ｂ）前記工程（ａ）で得た分析サンプルを、質量分析法を用いて分析し結果を得る工程
（ｃ）前記（ａ）及び（ｂ）の工程を同一条件で、２種の片方について、当該獣種の獣毛試料の全質量のイオンクロマトグラムから該獣種に特異的な質量電荷比のみを抽出して表示させたイオンクロマトグラムを作成し、このクロマトグラムをデータ処理し、当該獣毛種特異的質量電荷比のピーク面積を算出する工程、及び
（ｄ）ピーク面積から混用率を算出する工程、を含む、
前記混用率算出方法。
［１６］前記工程（ｄ）の前に、
（イ）２種共通の分子種由来の質量電荷比（ｍ／ｚ）についてのイオンクロマトグラムを作成し、各獣毛に共通する質量電荷比を選択し、該共通質量電荷比のピーク面積を求める工程
（ロ）共通質量電荷比のピーク面積に対して獣種に特異的な質量電荷比のピーク面積を算出する工程、
を追加した［１５］記載の方法。
［１７］はじめに、獣毛の種類を予め確認した参照獣毛を人為的に混用した試料を用い、ピーク面積と混用率をグラフ化し、検量線を作成し、未知試料においてこの検量線を用いピーク面積から混用率を算出する［１５］又は［１６］記載の方法。
［１８］１以上の種類の獣毛を含む試料について前記獣毛の種類を特定し、獣毛の種類が２以上の場合には、その混用率を算出する方法であって、
（ａ）前記試料から前処理により分析サンプルを得る工程、
（ｂ）前記工程（ａ）で得た分析サンプルを、質量分析法を用いて分析し結果を得る工程
（ｃ）前記工程（ｂ）で得た結果から、前記獣毛の種類を特定する工程
（ｄ）前記特定された獣毛の種類が２以上の場合には、同定されたそれぞれ獣種について、当該特定された獣特異的質量電荷比のピーク面積を算出し、
（ｅ）当該獣種が１００％参照試料のピーク面積と比較し、当該獣種の混用率を算定する工程を含む前記混用率算出方法。
［１９］前記工程（ｅ）の前に、
（イ）混用種共通の分子種由来の質量電荷比（ｍ／ｚ）についてのイオンクロマトグラムを作成し、各獣毛に共通する質量電荷比を選択し、該共通質量電荷比のピーク面積を求める工程
（ロ）共通質量電荷比のピーク面積に対して獣種に特異的な質量電荷比のピーク面積を算出する工程、
を追加した［１８］記載の方法。
［２０］２以上の種類（以下Ｎ種と記載）の獣毛を含む試料において、（Ｎ−１）種類の獣毛種の混用率を算出し、１００％からの差によりＮ種の混用率を求める［１５］から［１９］記載の方法。
［２１］１以上の種類の獣毛と獣毛以外の繊維とを含む試料について、その獣毛に関する混用率を算出する方法であって、
前記試料から前処理により分析サンプルを得る工程（ａ）の前、又は、獣毛に関しての混用率算出の工程後に、ＪＩＳ  Ｌ１０３０により規定されている解じょ法や溶解法などによる獣毛以外の繊維と獣毛の混用割合を算出する工程を含む、［１５］から［２０］いずれか１に記載の方法。
［２２］前記獣種に特異的な質量電荷比が、以下の質量電荷比から選ばれる１以上の質量電荷比である、［１５］から［２１］のいずれか１に記載の方法。
（Ｉ）ヤク種について
（１）ヤク種に特異的に検出される質量：
５９４８．９０  ±０．０２％、又は２１３７．９２  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）又はその他のヤク種に特異的に検出される質量電荷比（ｍ／ｚ）：
９２５５．５  ±０．０２％、７３９２．６  ±０．０２％、５９０８．７  ±０．０２％、５５４３．１  ±０．０２％、５９４９．９０  ±０．０２％、
１９８３．５２  ±０．０２％、１４８７．６４  ±０．０２％、
１１９１．５２  ±０．０２％、２１３８．９２  ±０．０２％、又は
１０６９．９８  ±０．０２％
（ＩＩ）カシミヤ種について、
（１）カシミヤ種に特異的に検出される質量：
８９７６．４５  ±０．０２％、７１０２．１８  ±０．０２％、又は
７０７４．１８  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）又はその他のカシミヤ種に特異的に検出される質量電荷比（ｍ／ｚ）：
１０３８４．２  ±０．０２％、８９７６．９  ±０．０２％、６６６２．２  ±０．０２％、６０９３．２  ±０．０２％、６００２．２  ±０．０２％、８９７７．４５  ±０．０２％、２２４４．５０  ±０．０２％、１７９５．７８  ±０．０２％、
７１０３．１８  ±０．０２％、１７７６．５４  ±０．０２％、
１４２１．４４  ±０．０２％、７０７５．１８  ±０．０２％、
１７６９．５５  ±０．０２％、又は１４１５．８３  ±０．０２％
（ＩＩＩ）ヒツジ種について
（１）ヒツジ種に特異的に検出される質量：
１７５３８．８８  ±０．０２％、又は１７５８５．２６  ±０．０２％
上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）又はその他のヒツジ種に特異的に検出される質量電荷比（ｍ／ｚ）：
１０３３９．６  ±０．０２％、８９５４．６  ±０．０２％、６６６５．７  ±０．０２％、６０３６．４  ±０．０２％、１７５３９．８８  ±０．０２％、
１９４９．８４  ±０．０２％、１７５４．８２  ±０．０２％、
１５９５．４７  ±０．０２％、１７５８６．２６  ±０．０２％、
１９５５．１０  ±０．０２％、１７５９．４７  ±０．０２％、又は
１５９９．５５  ±０．０２％
（ＩＶ）アンゴラ種（モヘヤとも表記する）について
（１）アンゴラ種に特異的に検出される質量：６３２９．５２  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（Ｖ）ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）について
（１）アルパカ種に特異的に検出される質量：
６３５８．６０  ±０．０２％、又は６３４２，７０  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（ＶＩ）ウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種（アンゴラとも表記する）
（１）アンゴラウサギ種に特異的に検出される質量：
１０４２．４３  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
［２３］前記試料から前処理により分析サンプルを得る工程（ａ）が、リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃとも表記する）を用いる工程を含み、前記獣種に特異的な質量電荷比が、以下の質量電荷比から選ばれる１以上の質量電荷比である、［１５］から［２１］のいずれか１に記載の方法。
（Ｉ）ウシ科ウシ属ヤク種について
（１）ヤク種に特異的に検出される質量
１３６４．７０  ±０．０２％、１３８３．７２  ±０．０２％、
１４３１．６７  ±０．０２％、２４６９．２７  ±０．０２％、又は
２４９５．３０  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（ＩＩ）ウシ科ヤギ属カシミヤ種について
（１）カシミヤ種に特異的に検出される質量、
２２１８．１９  ±０．０２％、３３７９．４８  ±０．０２％、又は
２３９１．９９  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（ＩＩＩ）ウシ科ヒツジ属ヒツジ種について
（１）ヒツジ種に特異的に検出される質量、
２４７９．３０  ±０．０２％、４９７７．２４  ±０．０２％、
２３４０．０３  ±０．０２％、２３５８．０２  ±０．０２％、
１０５１．４１  ±０．０２％、１０３３．３９  ±０．０２％、
２０７４．１２  ±０．０２％、又は２１７４．００  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（ＩＶ）ラクダ科ラクダ属について
（１）ラクダ属に特異的に検出される質量、２８８８．３５  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（Ｖ）ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）について
（１）アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）に特異的に検出される質量、
４５９９．３７  ±０．０２％、９０１．４７  ±０．０２％、又は
５３２．３２  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（ＶＩ）ウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種
（１）アンゴラウサギ種に特異的に検出される質量、
２３０３．０７±０．０２％、２５０２．１５±０．０２％、２０５８．０２±０．０２％、又は１５５４．８１±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
［２４］前記試料から前処理により分析サンプルを得る工程（ａ）が、リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃとも表記する）を用いる工程を含み、ヤク種、カシミヤ種、及びヒツジ種に共通な質量電荷比が、以下の質量電荷比から選ばれる１以上の質量電荷比である、［１６］又は［１９］記載の方法。
（１）質量１０７０．５  ±０．０２％  から算出される分子イオンの質量電荷比
（２）質量１５５５．７６  ±０．０２％  から算出される分子イオンの質量電荷比
（３）質量１１６０．５８  ±０．０２％  から算出される分子イオンの質量電荷比
（４）質量  ６０２．３０  ±０．０２％  から算出される分子イオンの質量電荷比
［２５］試料中の獣毛を定量する方法であって、
（ａ）前記試料から前処理により分析サンプルを得る工程、及び
（ｂ）前記工程（ａ）で得た分析サンプルに、安定同位体を含む獣毛マーカーを加え、質量分析法を用いて分析し結果を得る工程
（ｃ）獣特異的質量電荷比のピーク面積および安定同位体を含む獣毛マーカーの質量電荷比のピーク面積を算出し、分析サンプルに加えた獣毛マーカーの濃度から、獣毛マーカーの質量電荷比のピーク面積を濃度もしくは量に換算し、
（ｄ）抽出液試料由来のピーク面積と比較することで抽出液試料に含まれる獣毛の定量を行う工程
を含む前記定量方法。
［２６］前記試料から前処理により分析サンプルを得る工程（ａ）が、リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃとも表記する）を用いる工程を含み、獣毛マーカーが、［１４］記載のいずれかである、［２５］記載の方法。
Ｂ．また本願発明は以下の発明も包含している。
［１］獣毛を含む試料について前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する方法であって、
（ａ）前記試料から前処理により分析サンプルを得る工程、及び
（ｂ）前記工程（ａ）で得た分析サンプルを、質量分析法を用いて分析し結果を得る工程
（ｃ）前記工程（ｂ）で得た結果から、前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程
を含むことを特徴とする、獣毛の種類を特定及び／又は定量する方法。
［２］前記質量分析法に加えて、液体クロマトグラフィーが質量分析の組み合わせ（ＬＣ−ＭＳもしくはＵＰＬＣ−ＭＳとも表記する）用いられる［１］記載の方法。
［３］前記試料から前処理により分析サンプルを得る工程が、リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃとも表記する）を用い工程を含む［１］又は［２］に記載の方法。
［４］前記方法において、前記工程（ｂ）で得た結果を、獣毛の種類を予め確認した参照獣毛の試料について、前記（ａ）及び（ｂ）の工程を同一条件で行った結果得られた参照データの少なくとも１つと比較し、獣毛種に特異的に検出される質量、及び／又は質量電荷比（ｍ／ｚとも表記する）、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程
を更に含むことを特徴とする、［１］乃至［３］のいずれか１つに記載の方法。
［５］前記獣毛の種類が、ウシ科ヤギ属カシミヤ種、ウシ科ヤギ属アンゴラ種、ウシ科ウシ属ヤク種、ウシ科ヒツジ属ヒツジ種、ラクダ科ラクダ属、ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）、及びウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種
成る群より選択される１以上の種である、［１］乃至［４］のいずれか１つに記載の方法。
［６］前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程において、
５９４８．９０  ±０．０２％、及び２１３７．９２  ±０．０２％
などのヤク種に特異的に検出される質量、及び／又は該当質量に起因する分子イオンの質量電荷比を含む  ｍ／ｚ＝９２５５．５  ±０．０２％、７３９２．６±０．０２％、５９０８．７  ±０．０２％、５５４３．１  ±０．０２％、５９４９．９０  ±０．０２％、１９８３．５２  ±０．０２％、１４８７．６４±０．０２％、１１９１．５２  ±０．０２％、２１３８．９２  ±０．０２％、及び１０６９．９８  ±０．０２％
などのヤク種に特異的に検出される質量電荷比（ｍ／ｚとも表記する）、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて前記獣毛の種類を特定及び／又は定量することを特徴とする、［１］又は［２］に記載の方法。
［７］前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程において、
８９７６．４５  ±０．０２％、７１０２．１８  ±０．０２％、及び７０７４．１８  ±０．０２％などのカシミヤ種に特異的に検出される質量、及び／又は該当質量に起因する分子イオンの質量電荷比を含む  ｍ／ｚ＝１０３８４．２  ±０．０２％、８９７６．９  ±０．０２％、６６６２．２  ±０．０２％、６０９３．２  ±０．０２％、６００２．２  ±０．０２％、８９７７．４５  ±０．０２％、２２４４．５０  ±０．０２％、１７９５．７８  ±０．０２％、７１０３．１８  ±０．０２％、１７７６．５４  ±０．０２％、１４２１．４４  ±０．０２％、７０７５．１８  ±０．０２％、１７６９．５５  ±０．０２％、及び１４１５．８３  ±０．０２％
などのカシミヤ種に特異的に検出される質量電荷比（ｍ／ｚとも表記する）、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて前記獣毛の種類を特定及び／又は定量することを特徴とする、［１］又は［２］に記載の方法。
［８］前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程において、
１７５３８．８８  ±０．０２％、及び１７５８４．２６  ±０．０２％
などのヒツジ種に特異的に検出される質量、及び／又は該当質量に起因する分子イオンの質量電荷比を含む  ｍ／ｚ＝１０３３９．６  ±０．０２％、８９５４．６  ±０．０２％、６６６５．７  ±０．０２％、６０３６．４  ±０．０２％、１７５３９．８８  ±０．０２％、１９４９．８４  ±０．０２％、１７５４．８２  ±０．０２％、１５９５．４７  ±０．０２％、１７５８５．２６  ±０．０２％、１９５５．１０  ±０．０２％、１７５９．４７  ±０．０２％、及び１５９９．５５  ±０．０２％
などのカシミヤ種に特異的に検出される質量電荷比（ｍ／ｚとも表記する）、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて前記獣毛の種類を特定及び／又は定量することを特徴とする、［１］又は［２］に記載の方法。
［９］前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程において、質量電荷比ｍ／ｚ＝１０５５．９２  ±０．０２％  などのアンゴラ種（モヘヤとも表記する）に特異的に検出される質量電荷比（ｍ／ｚとも表記する）、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて前記獣毛の種類を特定及び／又は定量することを特徴とする、［１］又は［２］に記載の方法。
［１０］前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程において、質量電荷比ｍ／ｚ＝１２７２．７２  ±０．０２％、、又は１２６９．５４  ±０．０２％などのアルパカ種に特異的に検出される質量電荷比（ｍ／ｚとも表記する）、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて前記獣毛の種類を特定及び／又は定量することを特徴とする、［１］又は［２］に記載の方法。
［１１］前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程において、質量電荷比ｍ／ｚ＝１０４３．４３  ±０．０２％
などのアンゴラウサギ種（アンゴラとも表記する）に特異的に検出される質量電荷比（ｍ／ｚとも表記する）、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて前記獣毛の種類を特定及び／又は定量することを特徴とする、［１］又は［２］に記載の方法。
［１２］前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程において、１３６４．７０  ±０．０２％、
１３８３．７２  ±０．０２％、１４３１．６７  ±０．０２％、２４６９．２７  ±０．０２％、及び２４９５．３０  ±０．０２％などのヤク種に特異的な質量（Ｍ）、もしくは特異的な質量を有する分子に起因する分子イオンの質量電荷比、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて前記獣毛の種類を特定及び／又は定量することを特徴とする、［３］記載の方法。
［１３］前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程において、
２２１８．１９  ±０．０２％、３３７９．４８  ±０．０２％、及び２３９１．９９  ±０．０２％、などのカシミヤ種に特異的な質量（Ｍ）、もしくは特異的な質量を有する分子に起因する分子イオンの質量電荷比、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて前記獣毛の種類を特定及び／又は定量することを特徴とする、［３］記載の方法。
［１４］前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程において、
２４７９．３０  ±０．０２％、４９７７．２４  ±０．０２％、２３４０．０３  ±０．０２％、２３５８．０２  ±０．０２％、１０５１．４１  ±０．０２％、１０３３．３９  ±０．０２％、２０７４．１２  ±０．０２％、及び２１７４．００  ±０．０２％、などのヒツジ種に特異的な質量（Ｍ）、もしくは特異的な質量を有する分子に起因する分子イオンの質量電荷比、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて前記獣毛の種類を特定及び／又は定量することを特徴とする、［３］記載の方法。
［１５］前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程において、ヤク種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝１３６５．７  ±０．０２％、６８３．３５  ±０．０２％、及び４５５．９０  ±０．０２％、のいずれか、もしくは２つ以上を含む質量電荷比の組合せ、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて前記獣毛の種類を特定及び／又は定量することを特徴とする、［３］記載の方法。
［１６］前記ヤク種に特異的な質量電荷比が、配列番号１で表されるアミノ酸配列を含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオンの質量電荷比であることを特徴とする、［１５］記載の方法。
0005945590.tif 000006
［１７］前記ヤク種特異的質量電価比が、配列番号２で表されるＤＮＡ配列を含む遺伝子から発現されるタンパク質による分子イオンの質量電荷比であることを特徴とする、［１５］記載の方法。
0005945590.tif 000007
［１８］前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程において、カシミヤ種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝２２１９．１９  ±０．０２％、１１１０．１０±０．０２％、７４０．４０  ±０．０２％、５５５．５５  ±０．０２％、及びのいずれか、もしくは２つ以上を含む質量電荷比の組合せ、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて前記獣毛の種類を特定及び／又は定量することを特徴とする、［３］記載の方法。
［１９］カシミヤ種に特異的な質量電荷比が、配列番号３で表されるアミノ酸配列を含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオンの質量電荷比であることを特徴とする、［１８］記載の方法。
0005945590.tif 000008
［２０］前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程において、ヒツジ種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝２４８０．３０  ±０．０２％、１２４０．６５  ±０．０２％、８２７．４３  ±０．０２％、６２０．８２  ±０．０２％、及び４９６．８６  ±０．０２％、のいずれか、もしくは２つ以上を含む質量電荷比の組合せ、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて前記獣毛の種類を特定及び／又は定量することを特徴とする、［３］記載の方法。
［２１］前記ヒツジ種特異的質量電荷比が、配列番号４〜９で表されるアミノ酸配列を２つ以上含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオンの質量電荷比であることを特徴とする、［２０］記載の方法。
0005945590.tif 000009
0005945590.tif 000010
［２２］前記獣毛の種類を特定及び／又は定量する工程において、ヒツジ種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝２０７５．１２  ±０．０２％、１０３８．０６  ±０．０２％、６９２．３７  ±０．０２％、５１９．５３  ±０．０２％、及び４１５．８２  ±０．０２％のいずれか、もしくは２つ以上を含む質量電荷比の組合せ、及び／又は該当質量電荷比の溶出時間に基づいて前記獣毛の種類を特定及び／又は定量することを特徴とする、［３］記載の方法。
［２３］前記ヒツジ種特異的質量電荷比が、配列番号１０〜１３で表されるアミノ酸配列を１つ以上含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオンの質量電荷比であることを特徴とする、［２２］記載の方法。
0005945590.tif 000011
本明細書は本願の優先権の基礎である日本国特許出願２０１２−０８９６６２号の明細書および／または図面に記載される内容を包含する。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
図１は、獣毛抽出物の質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ型質量分析装置）の結果を示す。なお、カシミヤ種はカシミヤ、ヤク種はヤク毛、ヒツジ種は羊毛と記載した。
図２−１は、各獣毛抽出物における、ヤク種特異的質量電荷比ｍ／ｚ＝１９８３．５２±０．０２％と１４８７．６４±０．０２％を積算したイオンクロマトグラムを示す。
図２−２は、各獣毛抽出物における、ヤク種特異的質量電荷比ｍ／ｚ＝１０６９．９８±０．０２％  のイオンクロマトグラムを示す。
図２−３は、各獣毛抽出物における、カシミヤ種特異的質量電荷比ｍ／ｚ＝１７９５．７８±０．０２％  のイオンクロマトグラムを示す。
図２−４は、各獣毛抽出物における、カシミヤ種特異的質量電荷比ｍ／ｚ＝１４２１．４４±０．０２％  のイオンクロマトグラムを示す。
図２−５は、各獣毛抽出物における、カシミヤ種特異的質量電荷比ｍ／ｚ＝１４１５．８３±０．０２％  のイオンクロマトグラムを示す。
図２−６は、各獣毛抽出物における、ヒツジ種特異的質量電荷比ｍ／ｚ＝１７５４．８２±０．０２％と１９４９．８４±０．０２％を積算したイオンクロマトグラムを示す。
図２−７は、各獣毛抽出物における、ヒツジ種特異的質量電荷比ｍ／ｚ＝１７５９．４７±０．０２％  のイオンクロマトグラムを示す。
図２−８は、各獣毛抽出物における、アンゴラ種（モヘヤ）特異的質量電荷比ｍ／ｚ＝１０５５．９２±０．０２％  のイオンクロマトグラムを示す。
図２−９は、各獣毛抽出物における、アルパカ種特異的質量電荷比ｍ／ｚ＝１２７２．７２±０．０２％  のイオンクロマトグラムを示す。
図２−１０は、各獣毛抽出物における、アルパカ種特異的質量電荷比ｍ／ｚ＝１２６９．５４±０．０２％  のイオンクロマトグラムを示す。
図２−１１は、各獣毛抽出物における、アンゴラウサギ種特異的質量電荷比  ｍ／ｚ＝１０４３．４３±０．０２％  のイオンクロマトグラムを示す。
図３−１は、質量電荷比ｍ／ｚ＝１３６５．７付近の拡大図を示す。
図３−２は、質量電荷比ｍ／ｚ＝２２８７付近の拡大図を示す。
図４ａは、染色処理等を施した獣毛から抽出後、酵素処理し質量分析１の結果を示す。
図４ｂは、染色処理等を施した獣毛から抽出後、酵素処理し質量分析２の結果を示す。
図５−１は、獣毛抽出物を酵素処理し質量分析（全質量クロマトグラム）の結果を示す。
図５−２は、上記図５−１におけるカシミヤ特異的質量のクロマトグラムの結果を示す。
図５−３は、上記図５−１におけるヤク特異的質量のクロマトグラムの結果を示す。
図５−４は、図５−１におけるヒツジ特異的質量のクロマトグラムの結果を示す。
図５−５は、獣毛（ヤク毛）抽出物を酵素処理し質量分析した結果のマップ表示を示す。横軸が溶出時間、縦軸が質量分布である。色が赤くなるに従いイオン強度が強くなる。
図５−６は、獣毛（カシミヤ）抽出物を酵素処理し質量分析した結果のマップ表示を示す。横軸が溶出時間、縦軸が質量分布である。色が赤くなるに従いイオン強度が強くなる。
図５−７は、獣毛（ヒツジ）抽出物を酵素処理し質量分析した結果のマップ表示を示す。横軸が溶出時間、縦軸が質量分布である。色が赤くなるに従いイオン強度が強くなる。
図６−１は、カシミヤ種原毛とヤク種原毛の各混用比率サンプルの全質量イオンクロマトグラムを示す。
図６−２は、上記図６−１におけるヤク種に特異的な質量電荷比ｍ／ｚ＝６８３．３５のイオンクロマトグラムを示す。また、ヤクの混入率２％以上で検出可能であることが分かる。
図６−３は、上記図６−２のヤク特異的質量ピーク面積と混用率の関係を示す。
図７−１は、染色処理等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−２は、染色処理等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−３は、染色処理等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−４は、染色処理等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−５は、染色処理等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−６は、染色処理等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−７は、染色処理等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−８は、染色処理等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−９は、染色処理等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−１０は、染色処理等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−１１は、染色処理等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−１２は、染色処理等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−１３は、撥水加工等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−１４は、撥水加工等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−１５は、撥水加工等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−１６は、撥水加工等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−１７は、撥水加工等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−１８は、撥水加工等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−１９は、柔軟加工等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−２０は、柔軟加工等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−２１は、柔軟加工等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−２２は、柔軟加工等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−２３は、柔軟加工等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図７−２４は、柔軟加工等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析した結果を示す。
図８−１は、製品抽出物を酵素処理し質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ型質量分析装置）した結果を示す。
図８−２は、製品抽出物を酵素処理し質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ型質量分析装置）した結果を示す。
図８−３は、製品抽出物を酵素処理し質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ型質量分析装置）した結果を示す。
図９−１は、製品抽出物を酵素処理し質量分析した結果を示す。
図９−２は、上記図９−１におけるカシミヤ特異的質量のクロマトグラムの結果を示す。
図９−３は、上記図９−１におけるヤク特異的質量のクロマトグラムの結果を示す。
図９−４は、上記図９−１におけるヒツジ特異的質量のクロマトグラムの結果を示す。
図１０−１は、ヤク種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝６８３．３５  の分析結果を示す。
図１０−２は、カシミヤ種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝７４０．４  の分析結果を示す。
図１０−３は、ヒツジ種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝６２０．８  の分析結果を示す。
図１０−４は、ヒツジ種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝６９２．４  の分析結果を示す。
図１１は、ヤク種特異的分子質量を利用したヤク種獣毛の定量の検討の結果を示す。
図１２−１は、カシミヤ製品とヤク製品の各混用率サンプルの全質量イオンクロマトグラムを示す。
図１２−２は、図１２−１におけるヤク種に特異的な質量電荷比ｍ／ｚ＝６８３．３５のイオンクロマトグラムを示す。
図１２−３は、カシミヤ製品とヒツジ製品（ウール）の各混用比率サンプルの全質量イオンクロマトグラムを示す。
図１２−４は、図１２−３におけるヒツジ種に特異的な質量電荷比ｍ／ｚ＝６２０．８２のイオンクロマトグラムを示す。
図１２−５は、図１２−２から得られるヤク種に特異的な質量電荷比ｍ／ｚ＝６８３．３５のピーク面積と各分析におけるヤク製品の重量％の関係を示す。
図１２−６は、図１２−４から得られるヒツジ種に特異的な質量電荷比ｍ／ｚ＝６２０．８２のピーク面積と各分析におけるヒツジ製品（ウール）の重量％の関係を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
１．はじめに
従来からのＤＮＡに基づいた分析法、例えば、獣毛製品から抽出したＤＮＡを鋳型としてＰＣＲすることでＤＮＡを増幅し、その増幅ＤＮＡの分子量などを分析することで種を判定する方法は、毛製品によって解析・鑑別できない場合があった。そこで、本願発明者らは、より確実な、種判別方法の提供を検討してきた。
本発明者らは、毛製品に微量含まれるＤＮＡを増幅し検出するのではなく、獣毛の構成分子であるタンパク質等を直接解析することによる解析・鑑別方法が開発できないか、種々の分析方法を検討してきた。
タンパク質の解析方法としては種々の方法が知られているが、どの配列のものも、再現性が高く簡便に分析できる方法として、本願発明者らは、質量分析法による分析を試みた。獣毛中のタンパク質を質量分析すると、獣種特異的なタンパク質の配列に応じた質量分析結果が得られることから、本発明者らは、この質量分析の結果を解析することにより、獣毛の種類を鑑別できる可能性を検討してきた。試行錯誤の結果、獣毛を含む製品など調製したサンプルを、必要に応じて前処理した後、質量分析することで、当該獣毛の種類、言い換えれば、当該獣毛を生やした獣の種類によって、特異的な質量ピークが見られることを見出した。
２．質量分析を利用する獣毛鑑別方法及び獣毛種定量する法
本願発明には、上記「課題を解決するための手段」に記載した方法を包含し、さらに、「獣毛などを含む製品から採取した獣毛含有試料を、必要に応じて、前処理をし、質量分析、又は液体クロマトグラフィー及び質量分析をすることで、獣毛に含まれるケラチン等タンパク質の部分配列について種特異的配列に相当する質量ピークを検出し、これにより、獣毛の種類を特定し、更に必要応じ、定量する方法」を包含する。
２−１．本件発明で特定が可能な獣毛種
本件発明により、いずれの哺乳類の獣毛も、その種類の決定及び定量は可能である。本願発明で言う獣毛とは、動物から採れる毛、つまり動物繊維のことを意味する。なお、本発明者らは、既に、ウシ科ヤギ属カシミヤ種、ウシ科ヤギ属アンゴラ種、ウシ科ウシ属ヤク種、ウシ科ヒツジ属ヒツジ種、ラクダ科ラクダ属、ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）、及びウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種について、その獣毛種の基準となる質量データを参照データできるように取得した。これらの獣毛については、特に以下に記載する参照データを利用して、確実に獣毛を同定できる。
２−１−１．獣毛を含む試料
獣毛を含む試料としては、獣毛が含まれておりさえすればいかなる試料でもよいが、天然から得られる、毛皮、獣毛自体はもちろん、獣毛を用いた製品も含む。獣毛を用いた製品としては、糸、糸状物、織物、編物、フェルト等を含む。これらの獣毛を用いた製品は、漂白、染色、仕上げ、防水処理、撥水加工、柔軟加工等その製造工程中において、各種薬品処理や加熱処理をされたものであっても良い。例えば、撥水加工としては、フッ素樹脂加工、シリコン樹脂加工、ワックス系、及びオクタエチレン尿素による加工があり、柔軟加工の薬剤としては、アミノ変性シリコーン系、高分子ワックス系が挙げられる。
２−２．前処理
ここで、前処理とは、洗浄、分析サンプルの抽出などの処理が挙げられる。分析サンプルの抽出のための抽出液としては、変性剤、及び還元剤を含む緩衝液を用いることができる。変性剤として尿素、又はグアニジン塩酸塩を用いることができ、更に、チオウレアを添加してもよい。還元剤としては、ＤＴＴ又はβメルカプトエタノールが挙げられる。緩衝液としては、通常の緩衝液であればはいずれでもよいが、たとえば、トリス緩衝液などが用いることができる。
前処理には、プロテアーゼ（タンパク分解酵素）による処理を含めることができる。プロテアーゼとしては、種々のものが使用できるが、好適には、エンドペプチダーゼ、例えば、リジルエンドペプチダーゼが挙げられる。プロテアーゼ処理により、試料中のタンパク質成分を断片化することができる。例えば、リジルエンドペプチダーゼはリジンの後ろで切るが、トリプシンはリジンとアルギニンの後ろの２カ所で切断して、断片化する。
２−３．質量分析
本願発明は、タンパク質を必要により部分的に切断してフラグメントとし、又は、フラグメントとすることなく、該タンパク質又はフラグメントをイオン化し、該タンパク質又はフラグメントを質量で分離し、質量ごとに検出することにより、獣毛種特異的な信号を検出し、該信号を指標として、獣毛種を区別できることを測定原理の基礎としている。
本願発明の方法で使用する質量分析器としては、例えば、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ  ＭＳ，及びＥＳＩ−Ｑ  ＭＳ，が挙げられ、分離検出手段を追加したタンデムマスとしてＭＡＬＤＩ−ＱＩＴ−ＴＯＦ  ＭＳ（四重極イオントラップの追加）、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＴＯＦ  ＭＳ（飛行時間型の追加）、ＥＳＩ−ＱｑＱ（四重極型の追加）及びＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ  ＭＳ（飛行時間型の追加）が挙げられる。
２−３−１．イオン化
質量分析におけるイオン化方法としては、電子イオン化（ｅｌｅｃｔｒｏｎ  ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ；ＥＩ）法、化学イオン化（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ；ＣＩ）法、高速原子衝撃（ｆａｓｔ  ａｔｏｍ  ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ；ＦＡＢ）法、エレクトロスプレーイオン化（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ；ＥＳＩ）法、大気圧化学イオン化（ａｔｍｏｓｐｈｅｒｉｃ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ；ＡＰＣＩ）法、マトリックス支援レーザー脱離イオン化（ｍａｔｒｉｘ−ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｌａｓｅｒ  ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ；ＭＡＬＤＩ）法などが既に知られているが、本願発明の方法には、イオン化手段としてはＭＡＬＤＩ，又はＥＳＩによることが望ましい。
２−３−２．分離検出手段
質量分析における質量検出装置も、例えば、磁場型質量分析装置（Ｓｅｃｔｏｒ  ＭＳ）、四重極型質量分析装置（Ｑ  ＭＳ）、イオントラップ型質量分析装置（ＩＴ  ＭＳ）、飛行時間型質量分析装置（ＴＯＦ  ＭＳ）、フーリエ変換イオンサイクロトロン型質量分析装置（ＦＴ−ＩＣＲ  ＭＳ）などが知られているが、本願方法においてはイオン化方法に合わせ、ＭＡＬＤＩの場合は飛行時間型質量分析装置（ＴＯＦ  ＭＳ）との組み合わせ、ＥＳＩの場合は四重極型質量分析装置（Ｑ  ＭＳ）との組み合わせが望ましい。
２−３−２−１．タンデムマス  ２つの分離検出法の組み合わせ
２つの分離検出法が組み合わさったタンデムマス装置を使用することもできる。タンデムマスでは、第１分離で特定の質量のみを衝突室に送り、衝突室でイオンを分解し、その分解物を第２分離装置へと送り特定質量の分解物の質量分布を測定する。タンデムマスでは、特定質量分子の構造に関する情報が得られる、ペプチドの場合はアミノ酸配列アミノ酸配列などの情報を得る事ができる。本願方法においては飛行時間型質量分析装置（ＴＯＦ  ＭＳ）、四重極型質量分析装置（Ｑ  ＭＳ）、イオントラップ型質量分析装置（ＩＴ  ＭＳ）などの組み合わせが望ましい。また、タンデムマスでも設定により１つの分離検出法による質量分析計と同じ情報を得られる事からタンデムマスの利用が望ましい。
２−３−３．質量分析と液体クロマトグラフィーの組み合わせ
質量分析を、液体クロマトグラフィーと組み合わせてより高度な分析をすることができる。組み合わせる液体クロマトグラフとしては高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）、及び超高速液体クロマトグラフ（ＵＬＰＣ）が挙げられる。
イオン化手段としてＭＡＬＤＩを用いる、ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦ  ＭＳ法では通常、混合物のままマトリックスと混ぜ結晶化の後、測定されている。しかしながら、混合物では、十分な分析情報が得られないことから、最近では、液体クロマトグラフィーと組み合わせて分析することがなされている。ただし、ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦ  ＭＳ法では分析サンプルをマトリックスと混ぜて結晶化させることから、液体クロマトグラフィーの流路と質量分析計の流路をつなげたｏｎ−ｌｉｎｅでは使えず、ｏｆｆ−ｌｉｎｅで使用する。
一方、ＥＳＩイオン化法は液体を噴霧、脱溶媒しイオン化させることから液体クロマトグラフィーの流路をつなげることが可能である。例えば、ＬＣ−ＭＳ（液体クロマトグラフ質量分析装置）、ＵＰＬＣ  ＭＳとして利用できる。そのため、ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦ型では抽出液を処理し、様々な分子の混合物を測定し質量情報のみで判定しているのに対し、ＵＰＬＣ  ＭＳでは、質量情報のほかに、その質量の溶出時間を組み合わせ、２つの情報を元に判断できる。
２−３−４．質量分析の結果
（１）ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦでは１価プロトン化分子がよく検出される。
例えば、Ｃ８９Ｈ１３６Ｎ２４Ｏ３４で示される分子について質量分析すると、単同位体質量ｍｏｎｏｉｓｏｔｏｐｉｃ  ｍａｓｓは２０８４．９６５１であっても、質量分析はイオン化分子をみているため、プロトンがついた（プロトンの質量分が加わった）２０８５．９７２３の質量を測定することとなる。なお質量分析計ではこのイオンの質量を電荷で割った値が検出される。この場合では（２０８４．９６＋プロトン１個分（約１Ｄａ））÷電荷（１）となる。炭素１２（Ｃ１２）や炭素１３（Ｃ１３）など同位体の存在により１Ｄａの差で分布し、Ｃ８９Ｈ１３６Ｎ２４Ｏ３４のように１つの分子でもいくつもの質量がみられる。
この分布が２価のイオンとなると（２０８４．９６＋プロトン２個分（約１ｘ２Ｄａ））÷電荷（２）で１０４３．４９で検出される。２で割っているので同位体１Ｄａの差が０．５Ｄａで検出される。逆にこの差が０．５Ｄａなので２価と判断できる。３価の場合は３で割るので約０．３Ｄａの差、４価の場合は０．２５Ｄａの差になる。
（２）ＭＡＬＤＩは１価のイオンが検出されやすいが、ＥＳＩは分子によって２価や３価など多価イオンが検出される場合が多くある。
なお、分子質量がわかればそれに起因する分子イオンの質量電荷比は計算により算出することができる。
例えばＨの質量を１として、分子質量１０００のプロトン化分子（ポジティブイオン）であれば
１価のプロトン化分子の質量電荷比は  １００１  （１０００＋１）／１＝１００１
２価のプロトン化分子の質量電荷比は    ５０１  （１０００＋２）／２＝  ５０１
３価のプロトン化分子の質量電荷比は    ３３４  （１０００＋３）／３＝  ３３４
４価のプロトン化分子の質量電荷比は    ２５１  （１０００＋４）／４＝  ２５１
５価のプロトン化分子の質量電荷比は    ２０１  （１０００＋５）／５＝  ２０１
・・    ・・
１０価のプロトン化分子の質量電荷比は    １０１  （１０００＋１０）／１０＝１０１
などと算出することができる。
（３）ＬＣ−ＭＳでは、溶出時間と質量検出、またフォトダイオードアレイ検出器などを質量検出の前に追加することより吸光度検出のデータが得られる。
溶出時間はカラムの種類、溶出条件のプログラムにより変わる。吸光度検出は特定波長のみでもよいし、スペクトルの積算でもよい。質量検出は通常は設定質量範囲の積算と、特定質量の抽出とが挙げられる。更に、種々の成分を含む組成物であればイオン化されやすい成分が検出されやすくなるが、ＬＣ−ＭＳの場合はある程度分画されるので、ＭＡＬＤＩで検出しにくかった成分が検出できる。
（４）タンデムマスでは、質量の差からアミノ酸配列へと置き換えることができ、特定質量分子の構成配列を解析することができる。具体的には、下記表１のアミノ酸の質量表を用いて、質量の差に該当するアミノ酸を割り当てることができるが、違うアミノ酸でも質量で同じに見えてしまう場合があるため、Ｉ（イソロイシン）ｏｒ  Ｌ（ロイシン）という表記のように、これ以上の同定ができないこともある。なお、前記表では、水分小さい質量が書いてあるのは、ペプチド結合を加味した表になっているためである。
【表１】
0005945590.tif 000012
0005945590.tif 000013
２−４．質量分析結果による獣毛の種類の特定方法
２−４−１．参照データの取得
まず種名が確認されている複数の動物種の獣毛参照試料について、上記２−２の前処理をし、上記２−３質量分析を、同じ質量分析装置を用いて、同じ測定条件（通常装置の設定値）で質量分析し、得られた検出データを動物種毎に集める。次に集められた検出データを種間で比較し、特定の種にだけ見られる検出データを種特異的な値とすることができる。
検出データとしては、検出質量、質量電荷比（ｍ／ｚとも表記される）、及び質量電荷比の溶出時間が挙げられ、上記により、種特異的な値としては、種特異的質量、種特異的質量電荷比（ｍ／ｚとも表記される）、種特異的質量電荷比の溶出時間が得られる。
なお、例えば、ＭＡＬＤＩとＥＳＩでは、イオン化方法が異なり、検出された質量電荷比が異なる場合がある。また、溶出時間は、同一条件で得られたものを比較する。
２−４−１−１  なお、本発明者らは、既に以下の種について、プロテアーゼ処理をしていない獣毛について、以下のとおりの参照データを質量分析の結果として得ている。
（１）ヤク種に特異的に検出される質量：  ５９４８．９０  ±０．０２％、又は
２１３７．９２  ±０．０２％
（２）上記質量に起因する分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）又はその他のヤク種に特異的に検出される質量電荷比（ｍ／ｚ）：９２５５．５  ±０．０２％、７３９２．６  ±０．０２％、５９０８．７  ±０．０２％、５５４３．１  ±０．０２％、
５９４９．９０  ±０．０２％、１９８３．５２  ±０．０２％、
１４８７．６４  ±０．０２％、１１９１．５２  ±０．０２％、
２１３８．９２  ±０．０２％、又は１０６９．９８  ±０．０２％
（ＩＩ）カシミヤ種について、
（１）カシミヤ種に特異的に検出される質量：８９７６．４５  ±０．０２％、７１０２．１８  ±０．０２％、又は７０７４．１８  ±０．０２％、
（２）上記質量に起因する分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）又はその他のカシミヤ種に特異的に検出される質量電荷比（ｍ／ｚ）：１０３８４．２  ±０．０２％、８９７６．９  ±０．０２％、６６６２．２  ±０．０２％、６０９３．２  ±０．０２％、
６００２．２  ±０．０２％、８９７７．４５  ±０．０２％、
２２４４．５０  ±０．０２％、１７９５．７８  ±０．０２％、
７１０３．１８  ±０．０２％、１７７６．５４  ±０．０２％、
１４２１．４４  ±０．０２％、７０７５．１８  ±０．０２％、
１７６９．５５  ±０．０２％、又は１４１５．８３  ±０．０２％
（ＩＩＩ）ヒツジ種について
（１）ヒツジ種に特異的に検出される質量：１７５３８．８８  ±０．０２％、又は
１７５８４．２６  ±０．０２％
（２）上記質量に起因する分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）又はその他のヒツジ種に特異的に検出される質量電荷比（ｍ／ｚ）：１０３３９．６  ±０．０２％、８９５４．６  ±０．０２％、６６６５．７  ±０．０２％、
６０３６．４  ±０．０２％、１７５３９．８８  ±０．０２％、
１９４９．８４  ±０．０２％、１７５４．８２  ±０．０２％、
１５９５．４７  ±０．０２％、１７５８５．２６  ±０．０２％、
１９５５．１０  ±０．０２％、１７５９．４７  ±０．０２％、又は
１５９９．５５  ±０．０２％
（ＩＶ）アンゴラ種（モヘヤとも表記する）について
（１）アンゴラ種に特異的に検出される質量：６３２９．５２  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（Ｖ）ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）について
（１）アルパカ種に特異的に検出される質量：
６３５８．６０  ±０．０２％、又は６３４２，７０  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（ＶＩ）ウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種（アンゴラとも表記する）
（１）アンゴラウサギ種に特異的に検出される質量：１０４２．４３  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）２−４−１−２  また、上記した前処理においてプロテアーゼ処理として、リジルエンドペプチダーゼ処理した場合については、以下の参照データが得られている。
（Ｉ）ウシ科ウシ属ヤク種について
（１）ヤク種に特異的に検出される質量
１３６４．７０  ±０．０２％、１３８３．７２  ±０．０２％、
１４３１．６７  ±０．０２％、２４６９．２７  ±０．０２％、又は
２４９５．３０  ±０．０２％
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（ＩＩ）ウシ科ヤギ属カシミヤ種について
（１）カシミヤ種に特異的に検出される質量、
２２１８．１９  ±０．０２％、３３７９．４８  ±０．０２％、又は
２３９１．９９  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（ＩＩＩ）ウシ科ヒツジ属ヒツジ種について
（１）ヒツジ種に特異的に検出される質量、
２４７９．３０  ±０．０２％、４９７７．２４  ±０．０２％、
２３４０．０３  ±０．０２％、２３５８．０２  ±０．０２％、
１０５１．４１  ±０．０２％、１０３３．３９  ±０．０２％、
２０７４．１２  ±０．０２％、又は２１７４．００  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（ＩＶ）ラクダ科ラクダ属について
（１）ラクダ属に特異的に検出される質量、２８８８．３５  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（Ｖ）ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）について
（１）アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）に特異的に検出される質量、
４５９９．３７  ±０．０２％、９０１．４７  ±０．０２％、又は
５３２．３２  ±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
（ＶＩ）ウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種
（１）アンゴラウサギ種に特異的に検出される質量、
２３０３．０７±０．０２％、２５０２．１５±０．０２％、
２０５８．０２±０．０２％、又は１５５４．８１±０．０２％、
（２）上記（１）記載の質量から算出される分子イオンの質量電荷比（ｍ／ｚ）
２−４−２．サンプルの獣毛種の同定
種名を鑑別しようとする獣毛含有試料について、上記２−２の前処理及び上記２−３の質量分析を、上記参照試料について行った条件と同じ条件で行い、試料の検出データを上記種特異的参照データと比較し、該種特異的な値を含む場合は、前記試料に当該種の獣毛が含まれていたことがわかる。より具体的には、以下のような方法が例示できる。
（１）  検査試料の獣毛含有試料をプロテアーゼ処理せずに、上記２−２の前処理及び上記２−３の質量分析をして得た結果である質量又は質量電荷比（ｍ／ｚ）を、上記２−４−１−１に列挙したウシ科ヤギ属カシミヤ種、ウシ科ヤギ属アンゴラ種、ウシ科ウシ属ヤク種、ウシ科ヒツジ属ヒツジ種、ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）、及びウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種にそれぞれ特異的な質量又は質量電荷比（ｍ／ｚ）の参照データと比較し、前記いずれか種に特異的な質量又は質量電荷比（ｍ／ｚ）が、質量分析結果に含まれていれば、当該試料は、その種の獣毛を含んでいると判断することができる。
（２）  また、検査試料の獣毛含有試料をプロテアーゼであるリジルエンドペプチダーゼで処理した場合、上記２−２の前処理及び上記２−３の質量分析をして得た結果である質量又は質量電荷比（ｍ／ｚ）を、上記２−４−１−２に列挙したウシ科ヤギ属カシミヤ種、ウシ科ウシ属ヤク種、及びウシ科ヒツジ属ヒツジ種、にそれぞれ特異的な質量又は質量電荷比（ｍ／ｚ）の参照データと比較し、前記いずれか種に特異的な質量又は質量電荷比（ｍ／ｚ）が、質量分析結果に含まれていれば、当該試料は、その種の獣毛を含んでいると判断することができる。
（３）  さらに、検査試料の獣毛含有試料をプロテアーゼ処理し又は処理せずに、上記２−２の前処理及び上記２−３の質量分析をして得た結果である種特異的分子種由来のｍ／ｚ溶出時間については、液体クロマトグラフ（ＬＣまたはＵＰＬＣ）でのプログラム溶出条件が同じであれば同じ時間で検出されることから、２つの試料について種特異的分子種由来のｍ／ｚ溶出時間が、同一のプログラム条件で同じ時間に出てくる獣毛を同じ種類由来の獣毛と判断することができる。
２−５．獣種特異的なポリペプチド配列
本願発明者らは、タンデムマス（ＭＳＭＳ）により、いくつかの獣毛について、獣毛種特有のペプチド配列及び該配列をコードする核酸配列を見出した。
（１）  具体的には、ヤク種については、特異的なペプチドとして、配列番号１：ＧＬＮＮＲＦＡＡＦＩＤＫで表されるアミノ酸配列を含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオン、並びに前記配列番号１をコードする配列番号２：ＧＧＴ  ＣＴＣ  ＡＡＣ  ＡＡＣ  ＡＧＧ  ＴＴＴ  ＧＣＴ  ＧＣＣ  ＴＴＣ  ＡＴＣ  ＧＡＣ  ＡＡＧ  ＧＴＧ  ＣＧＣを同定した。
（２）  カシミヤ種については、特異的ポリペプチドとして、配列番号３：ＳＤ（Ｌ又はＩ）ＥＡ（Ｑ又はＫ）ＶＥＳ（Ｌ又はＩ）（Ｑ又はＫ）Ｍ（Ｑ又はＫ）ＦＤＶＲＰＫで表されるアミノ酸配列を含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオンを同定した。
（３）ヒツジ種については、特異的ポリペプチドとして以下の（ａ）及び（ｂ）を見出した。（ａ）配列番号４乃至９で表されるアミノ酸配列の２つ以上組み合わせを含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオン
0005945590.tif 000014
（ｂ）配列番号１０乃至１３で表されるアミノ酸配列の２つ以上組み合わせを含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオン。
0005945590.tif 000015
上記に掲げたペプチドは、それぞれ、ヤク種獣毛、カシミヤ種獣毛、及びヒツジ種獣毛のマーカーとして利用することができる。これらのマーカー分子は、質量分析法、又は従来周知のアミノ酸配列分析法若しくは前記アミノ酸配列をコードする核酸配列の分析法等により、上記した獣種特異的配列であるマーカー分子の存在の有無によっても、獣毛の種別を鑑別することはできる。
更にこれらのマーカーは、下記する定量法においても標準物質として使用することができる。
２−６．獣毛の定量方法
獣毛の定量は種々の周知の方法により行うことができるが、その１例を例示する。
（１）混用率の算出法１
（１−１）獣毛種の同定：
獣毛試料について、まず、上記２−５に従い獣毛種を同定する。ここで、１以上の種が同定されたときはその混用率は、次のように算出できる。この場合は、上記２−５と同様に、参照データを利用でき、前処理で酵素処理していない場合は、２−４−１−１に列挙した種特異的な質量又は質量電荷比（ｍ／ｚ）の参照データを、前処理で酵素処理（リジルエンドペプチダーゼ処理）した場合は、２−４−１−２に列挙した種特異的な質量又は質量電荷比（ｍ／ｚ）の参照データを利用できる。
（１−２）各獣毛種特異的質量電荷の選択及びピーク面積の算出：
同定された種について、２種ごとに、片方の種の種特異的分子種由来のｍ／ｚについてのイオンクロマトグラムを作成し、ピーク面積を求める。これは、例えば、該同定された種の一方の種の獣毛試料の全質量のイオンクロマトグラムから該獣種に特異的質量電荷比のみを抽出して表示させたイオンクロマトグラムを作成し、このクロマトグラムをデータ処理し、当該獣毛種特異的質量電荷比のピーク面積を算出することができる。
なお、当該獣毛種特異的質量電荷比としては、前処理で酵素処理していない場合は、２−４−１−１に列挙した種特異的な質量電荷比（ｍ／ｚ）の参照データを、前処理で酵素処理（リジルエンドペプチダーゼ処理）した場合は、２−４−１−２に列挙した種特異的な質量電荷比（ｍ／ｚ）の参照データを利用できる。
（１−３）各獣毛に共通する質量の選択及び共通質量のピーク面積の算定：
同様に、２種共通の分子種由来の特異的分子質量電荷比（ｍ／ｚ）についてのイオンクロマトグラムを作成し、ピーク面積を求める。
カシミヤ、ヤク、及びヒツジ種に共通な質量電荷比として、以下に掲げる質量電荷比を用いることができる。
（イ）質量１０７０．５  ±０．０２％  から算出される分子イオンの質量電荷比
（ロ）質量１５５５．７６  ±０．０２％  から算出される分子イオンの質量電荷比
（ハ）質量１１６０．５８  ±０．０２％  から算出される分子イオンの質量電荷比
（ニ）質量  ６０２．３０  ±０．０２％  から算出される分子イオンの質量電荷比
（１−４）検量線の作成：この共通質量のピーク面積と混用率を求める対象種特異的質量のピーク面積から比を出し、グラフ化し検量線を作成する。なお、混用率を求める対象種特異的質量のピーク面積でも検量線を作成することはできる。ただし、共通質量でデータを補正することで、より精度の高い検量線となる。
（１−５）混用率の算出
検量線を利用して、混用率を算出する。
（２）混用率の算定法２
まず、未知試料は、上記２−５に従い、作成した参照データにより、どの獣毛が使われているのかを同定する。
例えば、２種類の獣種が含まれる場合は、含まれる獣種１と獣種２について、それぞれ、種特異的質量電荷比を測定し、種特異的質量電荷比のピーク面積を算出する。次にあらかじめ獣種１と獣種２の混用率がわかっている、異なる混用率の複数の参照試料を用いて、ピーク面積を測定して、検量線を作成する。
なお、種特異的質量電荷比についての参照データとしては、上記混用率の算出法１と同様に、上記２−４−１−１に列挙した種特異的な質量電荷比（ｍ／ｚ）の参照データ、及び２−４−１−２に列挙した種特異的な質量電荷比（ｍ／ｚ）の参照データを用いることができる。
該検量線を用いて、獣種１又は２の混用率を算出することができる。
（３）混用率の算出法３
２種より多い獣種が含まれる試料についても同様に混用率を算出できる。具体的には、２以上の種類（以下Ｎ種と記載）の獣毛を含む試料において、（Ｎ−１）種類の獣毛種の混用率を算出し、１００％からの差によりＮ種の混用率を求めることで、混用率を算出できる。例えば、カシミヤ、ヤク、ヒツジの３種混合試料については、カシミヤ、ヤク、ヒツジなどに共通して検出される質量を利用すれば、前記共通質量の質量電荷比のピーク面積に対し、（ｉ）カシミヤ特異的質量電荷比ピーク面積を利用してカシミヤが１００％の時と比較して何割存在するかを算出し、（ｉｉ）ヤク特異的質量ピーク面積を利用してヤクが１００％の時と比較して何割存在するかを算出し、（ｉｉｉ）ヒツジ特異的質量ピーク面積を利用してヒツジが１００％の時と比較して何割存在するかを算出し、（ｉｖ）以上から混用率を算出することが可能である。
なお、種特異的質量電荷比としては、上記混用率の算出法１と同様に、上記２−４−１−１に列挙した種特異的な質量電荷比（ｍ／ｚ）の参照データ、及び２−４−１−２に列挙した種特異的な質量電荷比（ｍ／ｚ）の参照データを用いることができる。
また、共通質量の質量電荷比としては、上記混用率の算出法１の（１−３）に記載した、カシミヤ、ヤク、ヒツジに共通して検出される質量電荷比を利用することができる。
（４）獣毛と獣毛以外の繊維とが混合されているサンプルの分析
獣毛と獣毛以外の繊維の混合比についてはＪＩＳＬ１０３０−２規程の解じょ法や溶解法、顕微鏡法を用い算出することができ、使用されている獣毛に関して本願発明の方法により、種の特定および獣毛種ごとの混用率の算出が可能である。
（４−１）ＪＩＳ  Ｌ１０３０−２規程の解じょ法は、製品を糸にほぐし、繊維種別ごとに分類し混用率を算出する。
例えばたて糸が羊毛でよこ糸がポリエステルで構成された製品においては、たて糸とよこ糸にほぐし、それぞれの糸の質量を求め、百分率で表す。
（４−２）ＪＩＳ  Ｌ１０３０−２規程の溶解法は、選択した溶液で特定の構成成分を溶解させ、溶解しなかったものの量を測定することで混用率を算出する。溶解させる成分により、各種濃度の濃硫酸や、次亜塩素酸ナトリウム、水酸化ナトリウム溶液、アセトン、ジメチルホルムアミドなどが用いられる。例えば次亜塩素酸ナトリウムを用いた試験方法では羊毛やモヘヤ、カシミヤなどの獣毛を溶解させることができる。
（５）定量方法
前記のように配列が解明された基準ペプチドについて、質量分析により基準ペプチド分子のピーク面積を算出し、検査試料由来の該当分子の質量ピーク面積から量を算出し、サンプル（抽出液）の中にどれくらいの量その獣毛が含まれているかを判断することができる。なお、判断に用いる基準ペプチドは配列を同じにしておくことで、イオン化の効率をそろえることができるので絶対定量が可能となる。
ヤクについて具体的に示すと、次のようにして算出できる。
（ｉ）  ヤク種に特異的な質量電荷比のイオンクロマトグラムを表示し、有無を確認する。そして、イオンが検出されている場合は解析によりピーク面積を算出する。次に、合成ペプチド（分子質量＝１３７１．６６Ｄａ）に由来の分子イオンについても解析によりピーク面積を算出する。
（ｉｉ）  合成ペプチドの濃度から合成ペプチド由来のピーク面積を濃度もしくは量に換算し、抽出液試料由来のピーク面積と比較することで抽出液試料に含まれるヤク種判定ペプチドの定量を行う。
【実施例】
【０００７】
［実施例１］獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）抽出物の質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ型質量分析装置）
（１）獣毛抽出液の調製
分析サンプル（獣毛（原毛）８ｍｇにタンパク質抽出バッファー（７Ｍ  尿素、０．０５Ｍ  ＤＴＴ（ジチオスレイトール）及び０．０５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌを含有する水溶液（ｐＨ９．５））を５００μｌ加えて３７℃で一晩保温した。反応後、４℃、遠心分離を行い（５分、１５０００ｒｐｍ）、上清を回収し抽出液とした。
なお、ウシ科ヤギ属カシミヤ種、ウシ科ウシ属ヤク種、及びウシ科ヒツジ属ヒツジ種の獣毛を用いた。
（２）質量分析
抽出液１μｌにマトリックス溶液（５００μｌの０．１％トリフルオロ酢酸／アセトニトリル（２：１）にＣＨＣＡ（α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸）７．５ｍｇを溶解したもの）を４μｌ加えて混合し、そのうち１μｌを質量分析用ターゲットプレートに滴下した。室温下で乾燥後、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ（マトリックス支援レーザー脱離イオン化法−飛行時間）型質量分析装置（Ｕｌｔｒａｆｌｅｘ−ＴＯＦ／ＴＯＦ（登録商標）、ブルカ−ダルトニクス（Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ）社製）により、リフレクターモード：ポジティブイオンモードおよびリニアモード：ポジティブイオンモードで分析を行った。
（３）分析結果
分析結果を図１に示す。なお、図中カシミヤはウシ科ヤギ属カシミヤ種の獣毛抽出物、ヤク毛はウシ科ウシ属ヤク種の獣毛抽出物、羊毛はウシ科ヒツジ属ヒツジ種の獣毛抽出物の分析結果である。
［実施例２］獣毛（原毛もしくは原料とも表記する）抽出物の質量分析（ＵＰＬＣ−ＭＳ分析装置）
（１）獣毛抽出液の調製
実施例１と同様に、ウシ科ヤギ属カシミヤ種、ウシ科ヤギ属アンゴラ種、ウシ科ウシ属ヤク種、ウシ科ヒツジ属ヒツジ種、ラクダ科ラクダ属、ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）、及びウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種の各獣毛から抽出液を得た。
（２）質量分析
抽出液を０．２２μｍの濾過チューブを用いて遠心し、ＬＣ−ＭＳ分析容器へ移した。ＵＰＬＣ−ＭＳ分析装置はＷａｔｅｒｓ（Ｒ）Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  システムおよびＸｅｖｏＴＭＱＴｏｆ  ＭＳを用いた。カラムはＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（Ｒ）ＢＥＨ  Ｃ４（２．１ｍｍ×５０ｍｍ，１．７μｍ）とし、カラム温度（６０℃）、オートサンプラー温度（５℃）、注入ボリュームは５μｌで分析を行った。移動相には溶剤Ａ（０．１％ギ酸）、溶剤Ｂ（０．１％ギ酸、アセトニトリル）を使用し、流速０．２ｍｌ／ｍｉｎで分析を行った。分離プログラムは３３ｍｉｎ。０ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝９０：１０）、直線勾配で０−２５ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝４０：６０）、２５−２６ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝５：９５）、２６−３０ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝５：９５）、３０−３０．１ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝９０：１０）、３０．１−３３ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝９０：１０）とした。質量分析条件はキャピラリー電圧（３．０ｋＶ）、サンプルコーン電圧（３０ｋＶ）、デソルベーション温度（５００℃）、ソース温度（１５０℃）とした。
（３）分析結果
実施例１および２の結果から、
○ウシ科ヤギ属カシミヤ種特異的分子質量として、以下の分子質量があげられる。
８９７６．４５  ±０．０２％、
７１０２．１８  ±０．０２％、及び
７０７４．１８  ±０．０２％、
また、上記分子質量に起因する分子イオンの質量電荷比又はその他のウシ科ヤギ属カシミヤ種特異的ｍ／ｚ値としては以下が挙げられる。
１０３８４．２  ±０．０２％、
８９７６．９  ±０．０２％、
６６６２．２  ±０．０２％、
６０９３．２  ±０．０２％、
６００２．２  ±０．０２％、
８９７７．４５  ±０．０２％、
２２４４．５０  ±０．０２％、
１７９５．７８  ±０．０２％、
７１０３．１８  ±０．０２％、
１７７６．５４  ±０．０２％、
１４２１．４４  ±０．０２％、
７０７５．１８  ±０．０２％、
１７６９．５５  ±０．０２％、及び
１４１５．８３  ±０．０２％  などの質量電荷比、
○ウシ科ウシ属ヤク種特異的分子質量として、以下が挙げられる。
５９４８．９０  ±０．０２％、及び
２１３７．９２  ±０．０２％
また、上記分子質量に起因する分子イオンの質量電荷比又はウシ科ウシ属ヤク種特異的質量電荷比ｍ／ｚ値としては、以下が挙げられる。
９２５５．５  ±０．０２％、
７３９２．６  ±０．０２％、
５９０８．７  ±０．０２％、
５５４３．１  ±０．０２％、
５９４９．９０  ±０．０２％、
１９８３．５２  ±０．０２％、
１４８７．６４  ±０．０２％、
１１９１．５２  ±０．０２％、
２１３８．９２  ±０．０２％、及び
１０６９．９８  ±０．０２％
○ウシ科ヒツジ属ヒツジ種特異的分子質量として、以下が挙げられる。
１７５３８．８８  ±０．０２％、及び
１７５８４．２６  ±０．０２％
また、上記分子質量に起因する分子イオンの質量電荷比又はウシ科ヒツジ属ヒツジ種特異的質量電荷比ｍ／ｚ値としては、以下が挙げられる。
１０３３９．６  ±０．０２％、
８９５４．６  ±０．０２％、
６６６５．７  ±０．０２％、
６０３６．４  ±０．０２％、
１７５３９．８８  ±０．０２％、
１９４９．８４  ±０．０２％、
１７５４．８２  ±０．０２％、
１５９５．４７  ±０．０２％、
１７５８５．２６  ±０．０２％、
１９５５．１０  ±０．０２％、
１７５９．４７  ±０．０２％、及び
１５９９．５５  ±０．０２％
○ラクダ科ラクダ属特異的分子質量として、以下が挙げられる。
２８８７．３５  ±０．０２％
ラクダ科ラクダ属特異的質量電荷比としては上記分子質量に起因する分子イオンの質量電荷比が挙げられる。
○ウシ科ヤギ属アンゴラ種（モヘヤとも表記する）特異的分子質量として、以下が挙げられる。
６３２９．５２  ±０．０２％
ウシ科ヤギ属アンゴラ種特異的質量電荷比（ｍ／ｚ）としては上記分子質量に起因する分子イオンの質量電荷比が挙げられる。
○ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）特異的分子質量として、以下が挙げられる。
６３５８．６０  ±０．０２％、又は６３４２，７０  ±０．０２％
ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）としては上記分子質量に起因する分子イオンの質量電荷比が挙げられる。
○ウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種特異的分子質量として、以下が挙げられる。
１０４２．４３  ±０．０２％
ウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種としては上記分子質量に起因する分子イオンの質量電荷比が挙げられる。
［実施例３］獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）抽出物を酵素処理し質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ型質量分析装置）
（１）獣毛抽出液の調製
実施例１と同様に、ウシ科ヤギ属カシミヤ種、ウシ科ヤギ属アンゴラ種、ウシ科ウシ属ヤク種、ウシ科ヒツジ属ヒツジ種、ラクダ科ラクダ属、ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）、及びウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種の各獣毛から抽出液を得た。
（２）抽出液の酵素処理
得られた抽出液１μｌをプロテアーゼ消化用Ｂｕｆｆｅｒ（５０％  アセトニトリル，０．０００５％  Ｔｒｉｏｎ  Ｘ−４５，２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．８））１８μｌと混合し、さらにプロテア―ゼ溶液（リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃ）２０μｇを２ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）４００μｌで溶解したもの）１μｌを加えて３７℃で２時間半反応させた。
（３）質量分析
抽出液の酵素処理液１μｌを、実施例１と同様に、マトリックスとしてＣＨＣＡ（α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸）を用い分析を行った。
（４）分析結果
各種サンプルの分析結果から、ウシ科ウシ属ヤク種において質量電荷比ｍ／ｚ＝１３６５．７（分子質量（１３６４．７０）由来の分子イオン質量電荷比）、および、質量電荷比ｍ／ｚ＝２２８７（分子質量２２８６由来の分子イオン質量電荷比）が、種特異的であることがわかった。
ヤク種獣毛抽出液を酵素処理した試料の質量分析結果から、図３−１に質量電荷比ｍ／ｚ＝１３６５．７付近の拡大図、および、図３−２に質量電荷比ｍ／ｚ＝２２８７付近の拡大図を示す。なお、ヤク種原毛サンプル５０例を分析した結果、５０例すべてに質量電荷比（ｍ／ｚ＝１３６５．７、分子質量（１３６４．７０）由来の分子イオン質量電荷比）が検出され、質量電荷比ｍ／ｚ＝２２８７については４０例検出された。
［実施例４］染色処理等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ型質量分析装置）
（１）抽出液の調製
実施例１と同様に、染色処理（含金染料染め、酸性染料染め、反応染料染め、及びクロム染料染め）を施したウシ科ウシ属ヤク種原毛、および、脱色処理後染色処理（含金染料染め、酸性染料染め、反応染料染め、及びクロム染料染め）を施したウシ科ウシ属ヤク種原毛から抽出液を得た。
（２）抽出液の酵素処理
実施例３と同様に、プロテアーゼ（リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃ）により処理を行った。
（３）質量分析
抽出液の酵素処理液１μｌを、実施例３と同様に、マトリックスとしてＣＨＣＡ（α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸）を用い分析を行った。
（４）分析結果
分析結果を図４ａ，図４ｂ示す。ヤク種原毛に脱色及び／又は染色処理を行っても、すべてに質量電荷比（ｍ／ｚ＝１３６５．７）が検出され、ＤＮＡによる鑑別法では判別が困難になる可能性のあるこのような脱色及び／又は染色処理を行ったヤク毛又はその製品でも、本発明の方法は、確実にヤク種獣毛であると判別できる。
［実施例５−１］獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）抽出物を酵素処理し質量分析（ＵＰＬＣ−ＭＳ分析装置）
（１）獣毛抽出液の調製
実施例１と同様に、ウシ科ヤギ属カシミヤ種、ウシ科ヤギ属アンゴラ種、ウシ科ウシ属ヤク種、ウシ科ヒツジ属ヒツジ種、ラクダ科ラクダ属、ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）、及びウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種の各獣毛から抽出液を得た。
なお、抽出バッファーを加え３７℃で一晩保温した後、０．０５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌを含有する水溶液（ｐＨ９．５）に対し透析操作を行った試料を抽出液とする場合もある。
（２）抽出液の酵素処理
得られた抽出液をプロテアーゼ消化用ｂｕｆｆｅｒと等量混合し、さらにプロテアーゼ溶液（リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃ））を加えて３７℃で定めた時間反応した。なお、プロテアーゼ消化用ｂｕｆｆｅｒ及びプロテアーゼ溶液（リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃ））は、実施例３と同様の組成である。
（３）質量分析
抽出液を０．２２μｍの濾過チューブを用いて遠心し、ＬＣ−ＭＳ分析容器へ移した。
ＵＰＬＣ−ＭＳ分析装置はＷａｔｅｒｓ（Ｒ）Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  システムおよびＸｅｖｏＴＭＱＴｏｆ  ＭＳを用いた。カラムはＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（２．１ｍｍ×１００ｍｍ，１．７μｍ）とし、カラム温度（４０℃）、オートサンプラー温度（５℃）、注入ボリュームは５μｌで分析を行った。移動相には溶剤Ａ（０．１％ギ酸）、溶剤Ｂ（アセトニトリル）を使用し、流速０．４ｍｌ／ｍｉｎで分析を行った。分離プログラムは１７ｍｉｎ。０−１ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝９０：１０）、直線勾配で１−１１ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝５０：５０）、１１−１１．５ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝１０：９０）、１１．５−１４．５ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝１０：９０）、１４．５−１４．６ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝９０：１０）、１４．６−１７ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝１０：９０）とした。
なお、カラムにＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（２．１ｍｍ×５０ｍｍ，１．７μｍ）を用いた場合は、分離プログラムは１０ｍｉｎ。０−０．５ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝９０：１０）、直線勾配で０．５−６．５ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝５０：５０）、６．５−７ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝１０：９０）、７−８．５ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝１０：９０）、８．５−８．６ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝９０：１０）、８．６−１０ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝１０：９０）とした。
質量分析条件はキャピラリー電圧（３．０ｋＶ）、サンプルコーン電圧（３０ｋＶ）、デソルベーション温度（５００℃）、ソース温度（１５０℃）とした。
（４）分析結果
現在までに、ウシ科ヤギ属カシミヤ種（５２サンプル）、ウシ科ヤギ属アンゴラ種（１２サンプル）、ウシ科ウシ属ヤク種（７０サンプル）、ウシ科ヒツジ属ヒツジ種（４１サンプル）、ラクダ科ラクダ属（１６サンプル）、ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）（９サンプル）、及びウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種（９サンプル）の分析を行った。
（５）考察
実施例３、４および５の結果から
○ウシ科ヤギ属カシミヤ種特異的分子質量として、以下が挙げられる。
２２１８．１９  ±０．０２％
３３７９．４８  ±０．０２％、及び
２３９１．９９  ±０．０２％
また、ウシ科ヤギ属カシミヤ種特異的な質量電荷比（ｍ／ｚ値）としては、上記分子質量（Ｍ）に起因する分子イオンの質量電荷比などがあり、例えば以下が挙げられる。
２２１９．１９  ±０．０２％、
１１１０．１０  ±０．０２％、
７４０．４０  ±０．０２％、及び
５５５．５５  ±０．０２％
○ウシ科ウシ属ヤク種特異的分子質量として、以下が挙げられる。
１３６４．７０  ±０．０２％、
１３８３．７２  ±０．０２％、
１４３１．６７  ±０．０２％、
２４６９．２７  ±０．０２％、及び
２４９５．３０  ±０．０２％
また、ウシ科ウシ属ヤク種特異的特異的な質量電荷比（ｍ／ｚ値）としては、上記分子質量（Ｍ）に起因する分子イオンの質量電荷比などがあり、例えば以下が挙げられる。
１３６５．７  ±０．０２％、
６８３．３５  ±０．０２％、及び
４５５．９０  ±０．０２％
○ウシ科ヒツジ属ヒツジ種の特異的分子質量として、以下が挙げられる。
２４７９．３０  ±０．０２％、
４９７７．２４  ±０．０２％、
２３４０．０３  ±０．０２％、
２３５８．０２  ±０．０２％、
１０５１．４１  ±０．０２％、
１０３３．３９  ±０．０２％、
２０７４．１２  ±０．０２％、及び
２１７４．００  ±０．０２％
また、ウシ科ヒツジ属ヒツジ種特異的特異的な質量電荷比（ｍ／ｚ値）としては、上記分子質量（Ｍ）に起因する分子イオンの質量電荷比などがあり、例えば以下が挙げられる。
２４８０．３０  ±０．０２％、
１２４０．６５  ±０．０２％、
８２７．４３  ±０．０２％
６２０．８２  ±０．０２％、
及び４９６．８６  ±０．０２％、並びに
２０７５．１２  ±０．０２％、
１０３８．０６  ±０．０２％、
６９２．３７  ±０．０２％
５１９．５３  ±０．０２％、及び
４１５．８２  ±０．０２％。
○ラクダ科ラクダ属の特異的質量として、
２８８８．３５  ±０．０２％
また、ラクダ科ラクダ属特異的な質量電荷比（ｍ／ｚ値）としては、上記分子質量（Ｍ）に起因する分子イオンの質量電荷比などがある。
○ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）の特異的分子質量として、以下が挙げられる。
４５９９．３７  ±０．０２％、又は９０１．４７  ±０．０２％、及び５３２．３２  ±０．０２％
また、ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）種特異的特異的な質量電荷比（ｍ／ｚ値）としては、上記分子質量（Ｍ）に起因する分子イオンの質量電荷比などがある。
○ウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種の特異的分子質量として、以下が挙げられる。
２３０３．０７±０．０２％、２５０２．１５±０．０２％、２０５８．０２±０．０２％、及び１５５４．８１±０．０２％、
また、ウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種特異的特異的な質量電荷比（ｍ／ｚ値）としては、上記分子質量（Ｍ）に起因する分子イオンの質量電荷比が検出され、それぞれの質量電荷比の溶出時間とともに、各種特異的分子質量および質量電荷比と判断した。
分析結果のうち、ウシ科ヤギ属カシミヤ種獣毛（図中カシミヤと表記）、ウシ科ウシ属ヤク種獣毛（図中ヤクと表記）およびウシ科ヒツジ属ヒツジ種獣毛（図中ヒツジと表記）についての分析結果（全質量クロマトグラム）と、各種特異的質量のクロマトグラムを図５−１から５−４に示す。
［実施例５−２］未知試料の同定
（１）抽出液の調製
未知試料（１５ｍｇから２５ｍｇの範囲）で用意し、重量を測定する。なお、ベルトポンチ等を用いると簡便に用意できる。
粉砕機により粉砕し、試料重量（ｍｇ）の３０倍量（μｌ）のタンパク質抽出バッファー加え保温する。タンパク質抽出バッファーは、実施例１と同様の組成である。
（２）抽出液の酵素処理
得られた抽出液３５μｌをプロテアーゼ消化用ｂｕｆｆｅｒ３５μｌと混合し、さらにプロテアーゼ溶液（リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃ））を加えて３７℃で定めた時間反応した。なお、プロテアーゼ消化用ｂｕｆｆｅｒ及びプロテアーゼ溶液（リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃ））は、実施例３と同様の組成である。
（３）質量分析
実施例５−１  （３）質量分析記載の方法にて分析を行った。
（４）
横軸：溶出時間、縦軸：質量分布としたマップ表示を行った。
画像解析ソフトなどによりレファレンスマップ（各種獣毛で作成したマップ）と比較することにより種の鑑定が可能である。画像解析ソフトとして、Ｗａｔｅｒｓ社ＭａｓｓＬｙｎｘを用い、各種獣毛で作成したマップを図５−５から図５−７に示す。
［実施例６］混合比を変えた獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）混合物から抽出後、酵素処理し質量分析（ＵＰＬＣ−ＭＳ分析装置）
（１）抽出液の調製
実施例５−１と同様に行った。
カシミヤ種原毛とヤク種原毛を、混合比＝カシミヤ種原毛：ヤク種原毛＝１００：０、９８：２、９５：５、８０：２０、６５：３５、５０：５０、３５：６５、２０：８０、５：９５、又は０：１００  で混合した原毛サンプルから抽出液を得た。
（２）抽出液の酵素処理
実施例５−１と同様に、プロテアーゼ（リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃ）により処理を行った。
（３）質量分析
実施例５−１と同様に、カラムはＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（２．１ｍｍ×１００ｍｍ，１．７μｍ）とし、分離プログラムは１７ｍｉｎで分析した。
（４）混合比の算出法
ヤク種に特異的な質量電荷比のイオンクロマトグラムを表示し、有無を確認する。そして、イオンが検出されている場合は解析によりピーク面積を算出する。
また、カシミヤとヤクに共通に検出される質量電荷比ｍ／ｚ＝７７８．９０についても解析によりピーク面積を算出する。
（縦軸にヤクに特異的な質量電荷比のピーク面積に対するカシミヤ及びヤク共通に検出される質量電荷比のピーク面積の比率、横軸にヤクの混用率とするグラフに、上記混合した原毛サンプルについての前記ピーク面積比をプロットし、検量線を作成する。）
検量線から上記ピーク面積を基にヤク毛の混用率を算出する。そして、カシミヤ種混用率は１００％からの差とする。
（５）分析結果
図６−１に各サンプルの全質量イオンクロマトグラムを、図６−２にヤク種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝６８３．３５  （ｍ／ｚ＝１３６５．７に相当する分子質量（１３６４．７０）由来の２価分子イオン）のイオンクロマトグラム（ＳＩＣ）を示す。カシミヤ種原毛とヤク種原毛の混合において、混合比＝カシミヤ種原毛：ヤク種原毛＝９８：２の場合からヤク種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝１３６５．７に相当する分子質量（１３６４．７０）由来の多価分子イオンの質量電荷比ｍ／ｚ＝６８３．３５および４５５．９０が確認でき、カシミヤ製品にヤク種獣毛が２％混用されている場合でも混用が判定できる。
また、図６−２から得られるピーク面積と混用比率をプロットした検量線を図６−３に示す。混合比＝カシミヤ種原毛：ヤク種原毛＝９８：２〜０：１００において、直線的な検量線が作成でき、本発明の方法によれば、ヤク種獣毛が混用されたカシミヤ製品を分析して、混用率が２％以上であれば、混用率が具体的に特定できる。
［実施例７］染色処理等を施した獣毛（原毛もしくは原料ともとも表記する）から抽出後、酵素処理し質量分析
（ＵＰＬＣ−ＭＳ分析装置）
（１）抽出液の調製
実施例５−１と同様に、染色処理（含金染料染め、酸性染料染め、反応染料染め、及びクロム染料染めを施した各種原毛、および脱色処理後染色処理（含金染料染め、酸性染料染め、反応染料染め、及びクロム染料染め）を施した各種原毛、および撥水加工もしくは柔軟加工を施した各種原毛から抽出液を得た。
なお、原毛としては、ウシ科ヤギ属カシミヤ種、ウシ科ヤギ属アンゴラ種、ウシ科ウシ属ヤク種、ウシ科ヒツジ属ヒツジ種、ラクダ科ラクダ属、ラクダ科リャマ属アルパカ種（もしくは、ビクーニャ属アルパカ種）、ウサギ科アナウサギ属アンゴラウサギ種の原毛を用い、前述処理を施した原毛からそれぞれ抽出液を得た。
（２）抽出液の酵素処理
実施例５−１と同様に、プロテアーゼ（リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃ）により処理を行った。
（３）質量分析
実施例５−１と同様に、カラムはＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（２．１ｍｍ×１００ｍｍ，１．７μｍ）とし、分離プログラムは１７ｍｉｎで分析した。
（４）分析結果
分析結果を図７−１〜図７−２４に示す。
［実施例８］製品抽出物を酵素処理し質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ型質量分析装置）
（１）抽出液の調製
製品からベルトポンチ（５ｍｍ径）を用いくり抜いた試料（通常は２枚とし、生地の厚さにより２〜５枚の範囲で用いた）を１．５ｍｌチューブにいれ、重量を測定し、空チューブの重さを引くことで試料の重量とした。そこへタンパク質抽出バッファー（７Ｍ尿素、０．０５Ｍ  ＤＴＴ（ジチオスレイトール）及び０．０５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌを含有する水溶液（ｐＨ９．５））を５００μｌ加えて３７℃で一晩保温した。反応後、室温下、遠心分離を行い（５分、１５０００ｒｐｍ）、上清を回収し抽出液とした。
もしくは、製品からベルトポンチ（５ｍｍ径）を用いくり抜いた試料（通常は４枚）を前述と同様に重量を測定した後、ビーズ破砕機（タイテック社、μＴ−１２）により、直径５ｍｍジルコニアビーズ５個を用い、２ｍｌチューブ中で、３０００ｒｐｍで３０秒装置を稼働し、これを６回繰り返し粉砕した。その後チューブにタンパク質抽出バッファーを５００μｌ加えて３７℃で一晩保温し、遠心分離後上清を回収し、抽出液とした。
なお、ＪＩＳ規格（顕微鏡法による鑑定）により鑑別された、カシミヤ種獣毛製品（カシミヤもしくはカシミヤ製品とも表記）、ヤク種獣毛製品（ヤクもしくはヤク製品とも表記）、ヒツジ種獣毛製品（ウールもしくはウール製品とも表記）、およびＪＩＳ規格（顕微鏡法による鑑定）により混用率の算出が行われた前述獣毛を混用した製品の抽出液の調製を行った。
（２）抽出液の酵素処理
実施例３と同様に、プロテアーゼ（リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃ）により処理を行った。
（３）質量分析
実施例３と同様に分析を行った。
現在までに
○カシミヤ１００％表示（鑑定）製品（カシミヤ１００％もしくはカシミヤ１００％製品とも表記）については、２４サンプル、
○ヤク種獣毛１００％表示（鑑定）製品（ヤク１００％もしくはヤク１００％製品とも表記）については、１５２サンプル、
○ウール１００％表示（鑑定）製品（ヒツジ種獣毛１００％表示（鑑定）製品、ウール１００％もしくはウール１００％製品とも表記）については、５サンプル
○各種混用製品については、３９サンプルの分析を行った。
代表的な分析結果を図８−１〜図８−３に示す。
［実施例９］製品抽出物を酵素処理し質量分析（ＵＰＬＣ−ＭＳ分析装置）
（１）抽出液の調製
実施例８と同様にして、製品抽出液を調製した。
（２）抽出液の酵素処理
実施例５−１と同様に、プロテアーゼ（リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃ）により処理を行った。
（３）質量分析
実施例５−１と同様に、カラムにＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（２．１ｍｍ×１００ｍｍ，１．７μｍ）を用いた場合は、分離プログラムは１７ｍｉｎで分析し、カラムにＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（２．１ｍｍ×５０ｍｍ，１．７μｍ）を用いた場合は、分離プログラムは１０ｍｉｎで分析した。
（４）分析結果
現在までに、
○カシミヤ１００％表示（鑑定）製品（カシミヤ１００％もしくはカシミヤ１００％製品とも表記）については１６サンプル、
○ヤク種獣毛１００％表示（鑑定）製品（ヤク１００％もしくはヤク１００％製品とも表記）については１サンプル、
○ウール１００％表示（鑑定）製品（ヒツジ種獣毛１００％表示（鑑定）製品、ウール１００％もしくはウール１００％製品とも表記）については２サンプル、
○各種混用製品については３６サンプルの分析を行った。
分析結果のうち、カシミヤ１００％表示（鑑定）製品（図中カシミヤと表記）、ヤク種獣毛１００％表示（鑑定）製品（図中ヤクと表記）およびウール１００％表示（鑑定）製品（図中ヒツジと表記）についての分析結果（全質量クロマトグラム）と、各種特異的質量のクロマトグラムを図９−１から９−４に示す。
［実施例１０］種特異的分子質量のアミノ酸配列の検討（該当質量電荷比のＭＳＭＳによる分析）
（１）抽出液の調製
実施例５−１と同様に、ウシ科ヤギ属カシミヤ種、ウシ科ウシ属ヤク種、およびウシ科ヒツジ属ヒツジ種、の各獣毛から抽出液を得た。
（２）抽出液の酵素処理
実施例５−１と同様に、プロテア―ゼ（リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃ）により処理を行った。
（３）質量分析
実施例５−１と同様に、カラムはＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（２．１ｍｍ×１００ｍｍ，１．７μｍ）とし、分離プログラムは１７ｍｉｎで分離した。なお、質量（ＭＳＭＳ）分析条件において、５０〜１５００Ｄａの質量範囲で、コリジョン電圧は２５Ｖから３５Ｖの範囲で選択した。プリカーサーイオンとして、
ヤク種に特異的な質量電荷比の場合は、ｍ／ｚ＝１３６５．７に相当する分子質量（１３６４．７０）由来の２価分子イオンの質量電荷比ｍ／ｚ＝６８３．３５を選択し、
カシミヤ種に特異的な質量電荷比の場合は、ｍ／ｚ＝２２１９．１９に相当する分子質量（２２１８．１９）由来の３価分子イオンの質量電荷比ｍ／ｚ＝７４０．４
を選択し、
ヒツジ種に特異的な質量電荷比の場合は、ｍ／ｚ＝２４８０．３に相当する分子質量（２４７９．３）由来の４価分子イオンの質量電荷比ｍ／ｚ＝６２０．８、および、ｍ／ｚ＝２０７５．１２に相当する分子質量（２０７４．１２）由来の３価分子イオンの質量電荷比ｍ／ｚ＝６９２．４を選択した。
（４）分析結果
図１０−１に、ヤク種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝６８３．３５の分析結果を示す。検出質量からヤク種に特異的な質量電荷比ｍ／ｚ＝６８３．３５は、ＦＡＡＦ（Ｌ又はＩ）ＤＫで表されるアミノ酸配列を含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオンであることがわかった。
図１０−２に、カシミヤ種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝７４０．４  の分析結果を示す。検出質量からカシミヤ種に特異的な質量電荷比ｍ／ｚ＝７４０．４は、ＳＤ（Ｌ又はＩ）ＥＡＶＥＱＳ（Ｌ又はＩ）ＱＭＱＦＤＶＲＰＫで表されるアミノ酸配列を含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオンであることがわかった。
図１０−３に、ヒツジ種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝６２０．８の分析結果を示す。検出質量からカシミヤ種に特異的な質量電荷比ｍ／ｚ＝６２０．８は、ＱＦ（Ｌ又はＩ）、ＦＥＮＥＹ、ＱＮＦＶＡ（Ｌ又はＩ）Ｑ又はこの逆の配列で表されるアミノ酸配列を１つ以上含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオンであることがわかった。
図１０−４に、ヒツジ種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝６９２．４の分析結果を示す。検出質量からカシミヤ種に特異的な質量電荷比ｍ／ｚ＝６９２．４は、ＳＤ（Ｌ又はＩ）Ｅ、（Ｑ又はＫ）ＥＥ（Ｌ又はＩ）（Ｌ又はＩ）Ｃ（Ｌ又はＩ）Ｋ又はこの逆の配列で表されるアミノ酸配列を１つ以上含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオンであることがわかった。
［実施例１１］ヤク種特異的分子質量の塩基配列の検討
（１）ＤＮＡの抽出
１．５ｍｌチューブに２５ｍｇのサンプルを量り取り、ＤＮＡ抽出溶液４７５μｌ（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，５ｍＭＣａＣｌ２，１ｍＭ  ＥＤＴＡ，５０ｍＭ  ＤＴＴ，２Ｍ  ＧｕＨＣｌ）にＰｒｏｔｅｉｎａｓｅ  Ｋ  ２５μｌを加え５００μｌとし、３７℃で２時間反応させた。反応終了後、１５，０００ｒｐｍで５分遠心して上清を回収し、ＤＮＡ溶液とした。回収したＤＮＡ溶液に１５μｌのガラスパウダーを加え、よく浴攪拌し室温に５分間放置した。５分後、１０，０００ｒｐｍで１０秒間、遠心した。上清をできるだけ除き、７５０μｌの洗浄用緩衝液を加えピペッティング行い、１０，０００ｒｐｍで１０秒間、遠心した。再び７５０μｌの洗浄用緩衝液を加え同じ操作を行った。壁についた少量の液をきれいにのぞくため、再度遠心し液を除く。沈殿に３０μｌのＴＥ  Ｂｕｆｆｅｒを加え、よく懸濁し、５５℃で２分間保温した。５分後、１０，０００ｒｐｍで１０秒間遠心し、上清２８μｌを回収した。沈殿に再び、３０μｌのＴＥ  Ｂｕｆｆｅｒを加えて、抽出を繰り返した。２回目の抽出時には、３０μｌの上清を回収した。
（２）ＰＣＲ（１回目・外側）
抽出したＤＮＡを用いて一度ＰＣＲを行ってから、その産物を鋳型としてさらにＰＣＲを行うこととした。１回目・外側のＰＣＲにはＴａＫａＲａ  ＴａｑＴＭ（タカラバイオ社）を用いた。まず、１回目の反応組成は１０×ＰＣＲ  Ｂｕｆｆｅｒ  ５μｌ、ｄＮＴＰ  Ｍｉｘｔｕｒｅ  ４μｌ、ｐｒｉｍｅｒ＿Ｆ  ｏｕｔ（５’  ＣＴＣ  ＡＣＡ  ＣＣＣ  ＣＴＣ  ＡＡＣ  ＣＴＧ  ＧＡＧ  ＡＴＴ  ＧＡＣ  ＣＣＣ  ＡＡ  ３’）  １００ｐｍｏｌ／μｌ  １μｌ、ｐｒｉｍｅｒＲ  ｏｕｔ  （５’  ＧＴＴ  ＣＴＧ  ＡＴＡ  ＧＡＡ  ＣＴＧ  ＣＡＧ  ＣＴＴ  ＧＧＴ  ＣＴＣ  ＣＡＧ  ３’）  １００ｐｍｏｌ／μｌ  １μｌ、回収したＤＮＡ溶液  ３μｌ、Ｔａｑ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（５Ｕ／μｌ）  ０．５μｌ、ｄＨ２Ｏ  ３５．５μｌを加え５０μｌとした。ＰＣＲプログラムは、予備変性ステップ  ９４℃  ２分、変性ステップ  ９４℃  ０．５分、アニーリングステップ  ５５℃  ０．５分、伸長ステップ  ７２℃  ０．５分、反応終了後  ４℃、サイクル数３５サイクルとした。
反応終了後、ＰＣＲ溶液５０μｌに１２５μｌのエタノールを加え−８０℃で一晩放置した。翌日、１５，０００ｒｐｍで３０分間遠心した。遠心後上清を捨て、７０％エタノール１ｍｌを加え５分間遠心し、その後デシケーターで１０分間乾燥させた。１０分後、１５μｌのＴＥ  Ｂｕｆｆｅｒで沈殿を溶解する。
（３）ＰＣＲ（２回目・内側）
１回目のＰＣＲより増幅させたＤＮＡをテンプレートとし、さらに内側のＤＮＡの増幅を行った。２回目プライマーｐｒｉｍｅｒ＿Ｆｉｎ（５’ＧＡＧ  ＡＡＧ  ＧＡＧ  ＣＡＧ  ＡＴＣ  ＡＡＧ  ３’）、ｐｒｉｍｅｒ＿Ｒｉｎ（５’ＴＴＣ  ＣＴＧ  ＧＡＧ  ＣＡＧ  ＣＡＧ  ＡＡＣ  ３’）を用いて２回目のＰＣＲを行った。酵素は１回目と同様にＴａＫａＲａ  ＴａｑＴＭ（タカラバイオ社）を使用した。反応組成は、Ｔａｑ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（５Ｕ／μｌ）  ０．５μｌ、１０×ＰＣＲ  Ｂｕｆｆｅｒ  ５μｌ、ｄＮＴＰ  Ｍｉｘｔｕｒｅ  ４μｌ，ＤＮＡ溶液（１５μｌのうち）  ３μｌ、ｐｒｉｍｅｒ＿Ｆｉｎ  １μｌ、ｐｒｉｍｅｒ＿Ｒｉｎ  １μｌ、ｄＨ２Ｏ  ３５．５μｌを加え５０μｌとした。ＰＣＲプログラムは、予備変性ステップ  ９４℃  ２分、変性ステップ  ９４℃  ０．５分、アニーリングステップ  ４０℃  ０．５分、伸長ステップ  ７２℃  ０．５分・反応終了後  ４℃、サイクル数３５サイクルとした。反応終了後、３％アガロース電気泳動を行い、ＤＮＡの増幅確認をした。その後目的のバンドを切り出し、エッペンドルフチューブへ入れた。
（４）ＤＮＡの精製
切り出したゲルは、−８０℃の冷凍庫で１０分程度凍らせた。ろ過チューブ（Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ−ＭＣ）内側のカップに凍らせたゲルを移し１０，０００ｒｐｍ、４℃で２０分遠心した。ろ液に１／１０容量の３Ｍ  ＮａＣｌ、１０  Ａ２６０  ＲＮＡＭｉｘを加えてから、２．５倍量のエタノールを加え−８０℃で１０分以上放置した。その後、１５，０００ｒｐｍ、４℃で３０分遠心した。遠心後上清を除き、７０％エタノールを１ｍｌ加えてさらに１５，０００ｒｐｍ、４℃で５分遠心した。遠心後上清を除き、沈殿をデシケータにより減圧乾燥した。
（５）Ｌｉｇａｔｉｏｎ反応と形質転換
沈殿はＫｌｅｎｏｗ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ（タカラバイオ社）により末端平滑化反応を行った。反応組成はＰＣＲ増幅したＤＮＡ（沈殿）、１０×Ｋｌｅｎｏｗ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ  Ｂｕｆｆｅｒ  ２．５μｌ、２．５ｍＭ  ｄＮＴＰ  ２μｌ、Ｋｌｅｎｏｗ  Ｆｒａｇｍｅｎｔ  ０．１Ｕに滅菌水を加え２５μｌとした。これを３７℃で３０分反応し、７０℃、１０分で酵素を失活した。末端平滑化したＰＣＲ産物と制限酵素ＨｉｎｃＩＩで消化したプラスミドＤＮＡであるｐＵＣ１９（０．１μｇ）を混合し、混合液に１／１０容量の３Ｍ  ＮａＣｌ、１０  Ａ２６０  ＲＮＡＭｉｘを加えてから２．５倍量のエタノールを加え−８０℃で１０分以上放置した。その後、１５，０００ｒｐｍ、４℃で３０分遠心した。遠心後上清を除き、７０％エタノールを１ｍｌ加えてさらに１５，０００ｒｐｍ、４℃で５分遠心した。遠心後上清を除き、沈殿をデシケータにより減圧乾燥した。乾燥後、Ｌｉｇａｔｉｏｎ  Ｐａｃｋ（ニッポンジーン社）を使用し１６℃でＬｉｇａｔｉｏｎ反応を３０分以上行った。反応組成はＰＣＲ増幅したＤＮＡ（沈殿）、ｐＵＣ１９（沈殿）、１０×Ｌｉｇａｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒ  ２μｌ、２ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ２．５μｌ、Ｔ４  ＤＮＡ  ｌｉｇａｓｅ  １．５μｌ、２０ｍｍｏｌ／ｌ  Ｓｐｅｒｍｉｄｉｎｅ  １μｌに滅菌水を加え２０μｌとした。反応後、コンピテントセルＪＭ１０９にＬｉｇａｔｉｏｎ反応液１０μｌを加え氷上で５分放置してからＬＢ−ａｍｐプレート（Ｘ−Ｇａｌ、ＩＰＴＧを含む）に塗り広げ、３７℃で一晩放置した。
（６）プラスミドＤＮＡの調製
翌日、得られた白コロニーを４ｍｌのＬＢ−ａｍｐ培地に植菌し、３７℃で一晩培養した。翌日、エッペンドルフチューブに１．５ｍｌの培養液を分注し、１５，０００ｒｐｍ、室温で２分遠心した。培地をできるだけ除き、さらに１．５ｍｌの培養液を加え１５，０００ｒｐｍ、室温で２分遠心した。培地をできるだけ除いた後、菌体を１００μｌのＳｏｌｕｔｉｏｎＩ（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、５０ｍＭグルコース）でよく懸濁した。２００μｌのＳｏｌｕｔｉｏｎＩＩ．２  Ｍ  ＮａＯＨ、１％  ＳＤＳ）を加えチューブを何度か上下して穏やかに撹拌し、さらに１５０μｌのＳｏｌｕｔｉｏｎＩＩＩ酢酸カリウム、氷酢酸）を加え直ちにチューブを何度か上下して撹拌した。１５０μｌのフェノール・クロロホルムを加え充分に懸濁し、１５，０００ｒｐｍ、室温で５分遠心した。上層４００μｌを吸い取り新しいチューブに移し、２．５倍量のエタノールを加え−８０℃で１０分以上放置した。その後、１５，０００ｒｐｍ、４℃で１０分遠心した。遠心後上清を除き５０μｌのＴＥ  ｂｕｆｆｅｒに溶解した後、５０μｌの２Ｍ  ＮａＣｌ、０．２Ｍ  ＭｇＣｌ２を加えよく混合し氷上で１０分放置した。１５，０００ｒｐｍ、４℃、５分遠心後、上清を別のチューブに移し２００μｌのエタノールを加え、１５，０００ｒｐｍ、４℃、５分遠心した。遠心後上清を除き１ｍｌの７０％エタノールを加え、１５，０００ｒｐｍ、４℃、３分遠心した。遠心後上清を除きデシケータで１０分乾燥し、沈殿を３０μｌの滅菌水に溶解した。そのうち１μｌを鋳型とし、２回目のＰＣＲと同様の条件で反応を行った。ＰＣＲ後、３％アガロース電気泳動によりクローニングの成否を確認し、クローニングが成功していると思われるものについて配列確認を行った。
ＤＮＡ配列はＧＧＴ  ＣＴＣ  ＡＡＣ  ＡＡＣ  ＡＧＧ  ＴＴＴ  ＧＣＴ  ＧＣＣ  ＴＴＣ  ＡＴＣ  ＧＡＣ  ＡＡＧ  ＧＴＧ  ＣＧＣであった。
これをアミノ配列に置き換えるとＧＬＮＮＲＦＡＡＦＩＤＫであることが分かり、この配列の分子質量を計算すると１３６４．７Ｄａ、分子イオン質量電荷比ｍ／ｚ＝１３６５．７であることが分かった。
［実施例１２］ヤク種特異的分子質量を利用したヤク種獣毛の定量の検討
（１）抽出液の調製
実施例５−１と同様に、ウシ科ウシ属ヤク種獣毛から抽出液を得た。
（２）抽出液の酵素処理
ヤク種獣毛タンパク質抽出液（タンパク質濃度５．３ｍｇ／ｍｌ）を透析により脱塩し、１５０μｇタンパク質量分のヤク種獣毛抽出液を、実施例５−１と同様に、プロテアーゼ（リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃ）により処理を行った。
（３）質量分析
実施例５−１と同様に、カラムはＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（２．１ｍｍ×１００ｍｍ，１．７μｍ）を用い、分析を行った。なお、分析サンプルは、ヤク種獣毛抽出液の酵素処理溶液に、合成ペプチドＧＬＮＮＲＦＡＡＦＩＤＫ（ただしＬは安定同位体１３Ｃおよび１５Ｎから構成：分子質量＝１３７１．６６Ｄａ）を１μｇ加え１００μｌとし、注入ボリュームは４μｌとした。分離プログラムは２０ｍｉｎで、直線勾配で０ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝９０：１０）、０−１４ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝５０：５０）、１４−１４．５ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝１０：９０）、１４．５−１７．５ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝１０：９０）、１７．５−１７．６ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝９０：１０）、１７．６−２０ｍｉｎ（Ａ：Ｂ＝１０：９０）とした。
（４）未知試料の定量方法を以下に記す。
抽出および質量分析は実施例１３と同様の方法で行うこともできる。
（ｉ）  ヤク種に特異的な質量電荷比のイオンクロマトグラムを表示し、有無を確認する。そして、イオンが検出されている場合は解析によりピーク面積を算出する。次に、合成ペプチド（分子質量＝１３７１．６６Ｄａ）に由来の分子イオンについても解析によりピーク面積を算出する。
（ｉｉ）  合成ペプチドの濃度から合成ペプチド由来のピーク面積を濃度もしくは量に換算し、抽出液試料由来のピーク面積と比較することで抽出液試料に含まれるヤク種判定ペプチドの定量を行う。
（５）分析結果
分析結果を図１１に示す。
上段は全質量イオンクロマトグラム、中段はヤク種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝６８３．３５  （ｍ／ｚ＝１３６５．７に相当する分子質量（１３６４．７０）由来の２価分子イオン）のイオンクロマトグラム（ＳＩＣ）、下段は合成ペプチドＧＬＮＮＲＦＡＡＦＩＤＫ（ただしＬは安定同位体１３Ｃおよび１５Ｎから構成）の質量電荷比  ｍ／ｚ＝６８６．８３  （ｍ／ｚ＝１３７２．６６に相当する分子質量（１３７１．６６）由来の２価分子イオン）のイオンクロマトグラム（ＳＩＣ）を示す。
下段から、合成ペプチドの量０．０４μｇ当たり、合成ペプチドの質量電荷比ｍ／ｚ＝６８６．８３のピーク面積が２４８．１３となり、ピーク面積あたり０．０００１６１μｇ（０．１６１ｎｇ）となる。中段から、ヤク種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝６８３．３５のピーク面積が３１．７４、であることからペプチド量に換算すると０．００５１μｇ（５．１ｎｇ）となった。
このことから１５０μｇタンパク質量分の抽出液を前述の条件で分析し、ヤク種に特異的なペプチド配列ＧＬＮＮＲＦＡＡＦＩＤＫ量が０．００５１μｇ（５．１ｎｇ）存在すればヤク毛１００％と考えられ、この配列を含むペプチド及び／又はタンパク質による分子イオンの有無、および特定質量のイオンクロマトグラム・ピーク面積からがヤク種の特定及び／又は定量が可能であることがわかった。
［実施例１３］
（１）抽出液の調製
実施例８と同様に粉砕機を用い粉砕後、タンパク質抽出バッファーをベルトポンチにてくり抜いた試料の重量（ｍｇ）の３０倍の量（μｌ）加え抽出操作を行った。
なお、ＪＩＳ規格（顕微鏡法による鑑定）により鑑別された。
カシミヤ種獣毛製品（カシミヤもしくはカシミヤ製品とも表記）
ヤク種獣毛製品（ヤクもしくはヤク製品とも表記）
ヒツジ種獣毛製品（ウールもしくはウール製品とも表記）を
下記混合比（ベルトポンチの枚数、重量および混用比（重量パーセント））にて混合した製品サンプルから抽出液を得た。
・カシミヤ４枚（１６．７ｍｇ）：ウール０枚
＿ウール混用率    ０％
・カシミヤ３枚（１２．２４ｍｇ）：ウール１枚（  ６．０５ｍｇ）
＿ウール混用率  ３３．０８％
・カシミヤ２枚（  ８．７６ｍｇ）：ウール２枚（１１．５３ｍｇ）
＿ウール混用率  ５６．８３％
・カシミヤ１枚（  ４．３８ｍｇ）：ウール３枚（１７．１７ｍｇ）
＿ウール混用率  ７９．６８％
・カシミヤ０枚：ウール４枚（２２．６２ｍｇ）
＿ウール混用率１００％
・カシミヤ４枚（１７．９２ｍｇ）ヤク０枚
＿ヤク混用率    ０％
・カシミヤ３枚（１３．７４ｍｇ）：ヤク１枚（  ５．３０ｍｇ）
＿ヤク混用率  ２７．８４％
・カシミヤ２枚（  ８．２５ｍｇ）：ヤク２枚（１０．０１ｍｇ）
＿ヤク混用率  ５４．８２％
・カシミヤ１枚（  ３．９７ｍｇ）：ヤク３枚（１５．６４ｍｇ）
＿ヤク混用率  ７９．７６％
・カシミヤ０枚：ヤク４枚（１９．９５ｍｇ）
＿ヤク混用率１００％
（２）タンパク質抽出液の酵素処理
実施例５−１と同様に、プロテアーゼ（リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃ）により処理を行った。得られた抽出液３５μｌをプロテアーゼ消化用ｂｕｆｆｅｒ３５μｌと混合し、さらにプロテアーゼ溶液（リジルエンドペプチダーゼ（Ｌｙｓ−Ｃ）２０μｇを２ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）４００μｌで溶解したもの）２．５μｌを加えて３７℃で２時間半反応させた。
（３）質量分析
実施例５−１  （３）質量分析記載の方法にて分析を行った。カラムはＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８（２．１ｍｍ×１００ｍｍ，１．７μｍ）とし、分離プログラムは１７ｍｉｎで分析した。
（４）この実施例を用いた、未知試料の混用率算出方法を以下に記す。
ヤク種およびヒツジ種など種特異的な質量電荷比のイオンクロマトグラムを表示し、有無を確認する。イオンが検出されている場合はピーク面積を基に、検量線から混用率を計算する。カシミヤ種混用率は１００％からの差とする。
（５）分析結果
図１２−１にカシミヤとヤクの各サンプルの全質量イオンクロマトグラムを、図１２−２にヤク種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝６８３．３５  （ｍ／ｚ＝１３６５．７に相当する分子質量（１３６４．７０）由来の２価分子イオン）のイオンクロマトグラム（ＳＩＣ）を示す。図１２−３にカシミヤとヒツジの各サンプルの全質量イオンクロマトグラムを、図１２−４にヒツジ種に特異的な質量電荷比  ｍ／ｚ＝６２０．８２  （ｍ／ｚ＝２４８０．２９８に相当する分子質量（２４８０．２９８）由来の４価分子イオン）のイオンクロマトグラム（ＳＩＣ）を示す。
また、図１２−２から得られるピーク面積と混用率（重量％）をプロットした検量線を図１２−５に示し、図１２−４から得られるピーク面積と混用率（重量％）をプロットした検量線を図１２−６に示す。
【産業上の利用可能性】
【０００８】
従来の目視鑑別においては毛の外観などを判断基準としているため、鑑別者の熟練度や獣毛及びその製品の処理方法により鑑定結果が左右される可能性があり、また１日に鑑定できる数が限られていた。これに対し、本発明においては、簡便な操作でかつ多量のサンプルを短時間で客観的に鑑定することが可能となる。
また、ＤＮＡによる鑑別とは異なり、獣毛の構成分子を直接解析することから、製品によって解析・鑑別できないなどのリスクが非常に低くいという優れた効果を奏する。
特に、本発明によれば、カシミヤ製品中やウール製品中のヤク毛混入の有無及び／又はヤク毛混用率を短時間で確実に鑑定できるという優れた効果も奏する。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
［配列表］
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【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図２−４】
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【図２−５】
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【図２−６】
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【図２−７】
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【図２−８】
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【図２−９】
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【図２−１０】
0005945590.tif 000033
【図２−１１】
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【図３−１】
0005945590.tif 000035
【図３−２】
0005945590.tif 000036
【図４ａ】
0005945590.tif 000037
【図４ｂ】
0005945590.tif 000038
【図５−１】
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【図５−２】
0005945590.tif 000040
【図５−３】
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【図５−４】
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【図６−１】
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【図６−２】
0005945590.tif 000044
【図６−３】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図７−３】
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【図７−４】
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【図７−５】
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【図７−６】
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【図７−７】
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【図７−８】
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【図７−９】
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【図７−１０】
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【図７−１１】
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【図７−１２】
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【図７−１３】
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【図７−１４】
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【図７−１５】
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【図７−１６】
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【図７−１７】
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【図７−１８】
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【図７−１９】
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【図７−２０】
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【図７−２１】
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【図７−２２】
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【図７−２３】
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【図７−２４】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図８−３】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図９−３】
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【図９−４】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１０−３】
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【図１０−４】
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【図１１】
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【図１２−１】
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【図１２−２】
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【図１２−３】
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【図１２−４】
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【図１２−５】
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【図１２−６】
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【図５−５】
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【図５−６】
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【図５−７】
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