(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式１の２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン誘導体：
【化１】
0005894351.tif 000012
（式中、
Ａｒは、フェニル、４−クロロフェニル、１−ナフチル、２−ナフチル基またはパラ、メタもしくはオルト位で、１つのＦ、Ｃｌ、ＢｒもしくはＩ原子、１〜１２個の炭素原子を有するアルキル置換基、１〜１２個の炭素原子を有するアルコキシ基、ニトロもしくはトリフルオロメチル基で置換されるフェニル基；あるいは任意の位置で、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ、１〜１２個の炭素原子を有するアルキル置換基、１〜１２個の炭素原子を有するアルコキシ基、ニトロまたはトリフルオロメチル基の群の２つの同一または異なる置換基で置換されるフェニル基であり；
Ｒは、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、ジフルオロメチル、ペルフルオロエチル、１−フルオロエチル、２−フルオロエチル、１，１−ジフルオロエチル、１，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、１，１，２−トリフルオロエチル、１，２，２−トリフルオロエチル、１，１，２，２−テトラフルオロエチル、１，２，２，２−テトラフルオロエチル基である）。
【請求項２】
一般式１の２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン誘導体：
【化２】
0005894351.tif 000013
（式中、ＡｒおよびＲは請求項１に定義される通りである）
を製造するためのプロセスであり、脂肪族アミンの存在下で、一般式２のトリアゾリド
【化３】
0005894351.tif 000014
（式中、Ａｒは、フェニル、４−クロロフェニル、１−ナフチル、２−ナフチル基または
パラ、メタもしくはオルト位で、１つのＦ、Ｃｌ、ＢｒもしくはＩ原子、１〜１２個の炭素原子を有するアルキル置換基、１〜１２個の炭素原子を有するアルコキシ基、ニトロもしくはトリフルオロメチル基で置換されるフェニル基；あるいは任意の位置で、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒもしくはＩ、１〜１２個の炭素原子を有するアルキル置換基、１〜１２個の炭素原子を有するアルコキシ基、ニトロもしくはトリフルオロメチル基の群の２つの同一もしくは異なる置換基で置換されるフェニル基である）
と、一般式３のフッ素化アミン
Ｒ−ＮＨ２      （３）
（式中、Ｒは、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、ジフルオロメチル、ペルフルオロエチル、１−フルオロエチル、２−フルオロエチル、１，１−ジフルオロエチル、１，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、１，１，２−トリフルオロエチル、１，２，２−トリフルオロエチル、１，１，２，２−テトラフルオロエチル、１，２，２，２−テトラフルオロエチル基である）
または一般式４のアミン塩
Ｒ−ＮＨ３＋Ｘ−      （４）
（式中、Ｒは上記の通りであり、Ｘ−は、Ｃｌ−、Ｂｒ−、ＨＳＯ４−、ＳＯ４２−、ＮＯ３−の群の無機陰イオンである）
との反応を含む、プロセス。
【請求項３】
前記脂肪族アミンがトリエチルアミンである、請求項２に記載のプロセス。
【請求項４】
抗癌治療に使用される治療製剤を製造するための、一般式１の２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン誘導体：
【化４】
0005894351.tif 000015
（式中、Ａｒは、ｐａｒａ−クロロフェニルまたはフェニルであり、Ｒは、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３または−ＣＦ２−ＣＦ３である）
の使用。
【請求項５】
２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン５’−［Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−Ｏ−（４−クロロフェニル）］ホスフェートが、乳癌化学療法に使用される薬物を製造するために使用される、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン５’−［Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−Ｏ−（４−クロロフェニル）］ホスフェートが、子宮頸癌化学療法に使用される薬物を製造するために使用される、請求項４に記載の使用。
【請求項７】
２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン５’−［Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−Ｏ−（４−クロロフェニル）］ホスフェートが、肺癌化学療法に使用される薬物を製造するために使用される、請求項４に記載の使用。
【請求項８】
２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン５’−［Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−Ｏ−（４−クロロフェニル）］ホスフェートが、鼻咽頭癌化学療法に使用される薬物を製造するために使用される、請求項４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題は、新規２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン誘導体およびそれを製造するためのプロセスならびにまた、細胞毒性剤としてのそれらの使用である。
【背景技術】
【０００２】
癌疾患は、最も高い死亡率を有し、新たな症例の数が増加しており、第一に寿命期間の増加およびライフスタイルに関連している、ヒトにおいて報告されている主要な健康障害の１つである。癌疾患の処置は困難であり、費用がかかり、多くの場合、効果的でない。したがって、細胞増殖抑制作用を有する新規物質についての差し迫った必要性が存在している。それらは、天然産物およびそれらの誘導体ならびに構成合成化合物を起源とすることができる。
【０００３】
プリンまたはピリミジン塩基の誘導体または類似体および修飾ヌクレオシドは、合成細胞増殖抑制剤の非常に重要な群である。これらは、５−フルオロウラシルおよびその誘導体、例えば５−フルオロ−２’−デオキシウリジン（フロキシウリジン）などの化合物を含む。５−フルオロウラシルおよび５−フルオロ−２’−デオキシウリジンの両方は、同様の細胞増殖抑制活性を有し、ここ数年、単剤療法または他の薬剤との組み合わせのいずれかで、乳癌、胃癌、大腸癌、卵巣癌などの癌の治療に使用されている。５−フルオロ−２’−デオキシウリジンはまた、５−フルオロウラシルと比較して良好な肝代謝に起因して肝癌の治療に使用されている。５−フルオロウラシルおよび５−フルオロ−２’−デオキシウリジンを使用する困難性は、これらの長期間の摂取に起因してこれらの薬剤に対する癌性細胞耐性の発生に関連している。５−フルオロウラシルの使用の重要な制限は、望ましくない神経毒および心臓毒性作用を生じる比較的高い毒性である。５−フルオロウラシルおよび５−フルオロ−２’−デオキシウリジンは癌性細胞および正常細胞に対して選択的ではないので、治療におけるこれらの使用はかなり制限される。
【０００４】
Ｓｒｉｖａｓｔａｖにより示されているように、２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジンは、ＨＢＶに対して弱い抗ウイルス活性およびＨｕｈ−７株に対してごくわずかな細胞毒性活性（ＩＣ５０＞２００ｇ／ｍＬ）を有する（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｓｒｉｖａｓｔａｖ，Ｍ．Ｍａｋ，Ｂ．Ａｇｒａｗａｌ，Ｄ．Ｌ．Ｊ．Ｔｙｒｒｅｌｌ，Ｒ．Ｋｕｍａｒ  Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、２０１０、２０、６７９０−６７９３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、癌細胞に対して高い選択性を示す、２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン誘導体である新規細胞毒性化合物および癌治療におけるその使用を開発することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の主題は、一般式１の２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン誘導体：
【化１】
0005894351.tif 000002
（式中、
Ａｒは、フェニル、４−クロロフェニル、１−ナフチル、２−ナフチル基またはパラ、メタもしくはオルト位で、１つのＦ、Ｃｌ、ＢｒもしくはＩ原子、１〜１２個の炭素原子を有するアルキル置換基、１〜１２個の炭素原子を有するアルコキシ基、ニトロもしくはトリフルオロメチル基で置換されるフェニル基；あるいは任意の位置で、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ、１〜１２個の炭素原子を有するアルキル置換基、１〜１２個の炭素原子を有するアルコキシ基、ニトロまたはトリフルオロメチル基の群の２つの同一または異なる置換基で置換されるフェニル基であり；
Ｒは、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、ジフルオロメチル、ペルフルオロエチル、１−フルオロエチル、２−フルオロエチル、１，１−ジフルオロエチル、１，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、１，１，２−トリフルオロエチル、１，２，２−トリフルオロエチル、１，１，２，２−テトラフルオロエチル、１，２，２，２−テトラフルオロエチル基である）
である。
【０００８】
第２の態様において、本発明の主題は、一般式１の２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン誘導体：
【化２】
0005894351.tif 000003
（式中、ＡｒおよびＲは上記に定義される通りである）
を製造するためのプロセスであり、脂肪族アミン、好ましくはトリエチルアミンの存在下で、一般式２のトリアゾリド
【化３】
0005894351.tif 000004
（式中、Ａｒは、フェニル、４−クロロフェニル、１−ナフチル、２−ナフチル基または
パラ、メタもしくはオルト位で、１つのＦ、Ｃｌ、ＢｒもしくはＩ原子、１〜１２個の炭素原子を有するアルキル置換基、１〜１２個の炭素原子を有するアルコキシ基、ニトロもしくはトリフルオロメチル基で置換されるフェニル基；あるいは任意の位置で、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒもしくはＩ、１〜１２個の炭素原子を有するアルキル置換基、１〜１２個の炭素原子を有するアルコキシ基、ニトロもしくはトリフルオロメチル基の群の２つの同一もしくは異なる置換基で置換されるフェニル基である）
と、一般式３のフッ素化アミン
Ｒ−ＮＨ２      （３）
（式中、Ｒは、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、ジフルオロメチル、ペルフルオロエチル、１−フルオロエチル、２−フルオロエチル、１，１−ジフルオロエチル、１，２−ジフルオロエチル、２，２−ジフルオロエチル、１，１，２−トリフルオロエチル、１，２，２−トリフルオロエチル、１，１，２，２−テトラフルオロエチル、１，２，２，２−テトラフルオロエチル基である）
または一般式４のアミン塩
Ｒ−ＮＨ３＋Ｘ−      （４）
（式中、Ｒは上記の通りであり、Ｘ−は、Ｃｌ−、Ｂｒ−、ＨＳＯ４−、ＳＯ４２−、ＮＯ３−の群の無機陰イオンである）
との反応を含む。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
一般式２のトリアゾリドを有する溶液が、トリアゾリドに対して０．１〜５当量、より好ましくは３当量の量で一般式３のフッ素化アミンで処理される場合、反応は開始する。あるいは、一般式２のトリアゾリドの反応は、一般式４のフッ素化アミン塩、最も好ましくはアミン塩酸塩を用いて実施され得る。そのような場合、トリアゾリドを有する溶液は、トリアゾリドに対して０．１〜５当量、最も好ましくは３当量の量で一般式４のフッ素化脂肪族アミン塩、およびトリアゾリドに対して０．１〜５当量、最も好ましくは３当量の量で第三級脂肪族アミンまたはピリジン、最も好ましくはトリエチルアミンで処理される。さらなる反応手順は、一般式３のアミンまたは一般式４のその塩が使用されるか否かに関わらず同一である。反応は１０分〜１０時間、最も好ましくは２時間実施される。反応媒体は、低級脂肪族ニトリル、無水ＤＭＦまたはＤＭＳＯの群の溶媒である。最も好ましくは、それはアセトニトリルである。反応は０℃から７０℃の温度で進行するが、実務的な理由のために、反応は最も好ましくは室温で実施される。得られた生成物は、溶媒の除去およびシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーを使用した、好ましくは０．５％から５０％体積のメタノール、最も好ましくは１％を含有する移動相としてクロロホルム−メタノール混合物を使用した精製によって反応混合物から単離される。
【００１０】
時間の節約および市販の試薬を考慮して、一般式１の２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン誘導体を合成するための好ましい選択は、単一反応容器内で全ての反応を実施することである（いわゆるワンポット合成）。そのような場合、スキーム１に従って中間体が単離されないように、３工程からなる合成が１つずつ実施される。
【００１１】
【化４】
0005894351.tif 000005
工程１において、例えば、Ｌｅｗａｎｄｏｗｓｋａ，Ｍ．、Ｒｕｓｚｋｏｗｓｋｉ，Ｐ．、Ｂａｒａｎｉａｋ，Ｄ．、Ｃｚａｒｎｅｃｋａ，Ａ．、Ｋｌｅｃｚｅｗｓｋａ，Ｎ．、Ｃｅｌｅｗｉｃｚ，Ｌ．（２０１３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、２０１３、６７、１８８−１９５に報告されている手順に従って、低級脂肪族ニトリル、無水ＤＭＦもしくはＤＥＳＯの群の溶媒中、最も好ましくはアセトニトリル中の２〜４当量、最も好ましくは２．５当量の量のトリエチルアミンの存在下で、一般式５のアリールジクロロホスフェート
【化５】
0005894351.tif 000006
（式中、Ａｒは、フェニル、４−クロロフェニル、１−ナフチル、２−ナフチル基またはパラ、メタもしくはオルト位で、１つのＦ、Ｃｌ、ＢｒもしくはＩ原子、１〜１２個の炭素原子を有するアルキル置換基、１〜１２個の炭素原子を有するアルコキシ基、ニトロもしくはトリフルオロメチル基で置換されるフェニル基；または任意の位置で、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒもしくはＩ、１〜１２個の炭素原子を有するアルキル置換基、１〜１２個の炭素原子を有するアルコキシ基、ニトロもしくはトリフルオロメチル基の群の２つの同一もしくは異なる置換基で置換されるフェニル基である）
が、２〜４当量、最も好ましくは３当量の量で１，２，４−トリアゾールと反応される。
【００１２】
この工程は、一般式６のビス−トリアゾリド
【化６】
0005894351.tif 000007
（式中、Ａｒは上記に定義される通りである）
の形成を生じる。
【００１３】
工程２において、得られた一般式６のビス−トリアゾリドは、一般式２のトリアゾリド（式中、Ａｒは上記に定義される通りである）を形成する、２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン（ＡｄＦＵ）と反応される。
【００１４】
この工程は、２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン（ＡｄＦＵ）を、工程１で使用される一般式５のアリールジクロロホスフェートに対して、０．１〜１当量、最も好ましくは０．６６当量の量で反応混合物に加えることによって行われる。アミン、最も好ましくはピリジンは、ＡｄＦＵに対して１〜３当量、最も好ましくは２当量の量で使用される、ＡｄＦＵ溶解度を改善する、この工程に使用される必要な添加剤である。プロセス段階は、１０分〜１０時間、好ましくは３時間、最も好ましくは１時間実施される。
【００１５】
工程３において、工程２において得られる一般式２のトリアゾリドは、トリエチルアミンの存在下で、一般式３のフッ素化アミンまたは一般式４のその塩、最も好ましくは塩酸塩と反応されて、一般式１の最終生成物を生じる。この工程は、一般式３のフッ素化アミンを、工程２で使用される２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン（ＡｄＦＵ）に対して０．１〜５当量、最も好ましくは３当量の量で、一般式２の得られた化合物を含有する反応混合物に添加することによって実施される。あるいは、工程３で調製された一般式２のトリアゾリドの反応は、一般式４のフッ素化アミン塩、最も好ましくは塩酸塩を用いて実施され得る。そのような場合、一般式４のフッ素化脂肪族アミン塩は、工程２で使用される２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン（ＡｄＦＵ）に対して０．１〜５当量、最も好ましくは３当量の量で、一般式２のトリアゾールおよび２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン（ＡｄＦＵ）に対して０．１〜５当量の量、最も好ましくは３当量で、第三級脂肪族アミンまたはピリジン、最も好ましくはトリエチルアミンを含有する溶液に加えられる。さらなる反応手順は、一般式３のアミンまたは一般式４のその塩が使用されるか否かに関わらず同一である。反応は、０℃〜７０℃の温度にて１０分〜１０時間、最も好ましくは２時間実施されるが、実務的な理由のために、反応は最も好ましくは室温で実施される。得られた生成物は、溶媒の除去およびシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーを使用した、好ましくは移動相として０．５％〜５０％体積のメタノール、最も好ましくは１％を含有するクロロホルム−メタノール混合物を使用した精製によって反応混合物から単離される。
【００１６】
第３の態様において、本発明の主題は、乳癌、子宮頸癌、肺癌または鼻咽頭癌の治療における、一般式１の２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン誘導体（式中、Ａｒはパラ−クロロフェニルまたはフェニルであり、Ｒは−ＣＦ３または−ＣＦ２−ＣＦ３である）、特に２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン５’−［Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−Ｏ−（４−クロロフェニル）］ホスフェート−本発明のＦＥＡｄＦＵの使用である。乳癌、子宮頸癌、肺癌および鼻咽頭癌の癌細胞株におけるインビトロ研究により、同一条件で試験される場合、治療に既に利用されている２’−デオキシ−５−フルオロウリジン（５ＦｄＵ）および５−フルオロウラシルのものより高い活性を有する強力な細胞毒性効果が確認された。さらに、ＦＥＡｄＦＵは、正常細胞に対して低い毒性で、癌細胞に対して高く、選択的な細胞毒性を示す、有益で高い選択指数（ＳＩ）を有する。
【実施例】
【００１７】
ＥＣＡＣＣ（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ）から得た以下の癌細胞株：ＭＣＦ−７（乳癌）、ＨｅＬａ（子宮頸癌）、Ａ５４９（肺癌）およびＫＢ（鼻咽頭癌）および正常細胞（ヒト皮膚線維芽細胞、ＨＤＦ）を使用して細胞毒性活性試験を実施した。
【００１８】
スルホローダミンＢを用いた標準的な手段を使用して細胞毒性活性試験を実施した。それらは、７２時間、試験化合物と共に、対数増殖期における癌細胞株のインキュベーション、続いて、細胞タンパク質に結合する色素（スルホローダミンＢ）の吸着を使用した細胞増殖阻害の程度の分光光度定量を含んだ。その定量は、Ｖｉｃｈａｉ，Ｖ．，Ｋｉｒｔｉｋａｒａ，Ｋ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、２００６、１、１１１２に報告されている手順に従って実施した。
【００１９】
細胞毒性の定量
実験のための細胞の調製：
対数増殖期に試験した細胞株の細胞を、２０，０００細胞／２ｍＬ増殖培地／ウェルの量で２４ウェルプレート上に播種し、続いて、５％ＣＯ２雰囲気下で３７℃にて２４時間、インキュベータでインキュベートした。
【００２０】
試験化合物溶液は、以下の濃度範囲：０．０５；０．１；０．５；１；５；１０；５０；１００；５００μＭでＤＭＳＯ中で調製した。
【００２１】
試験した細胞株を、以下の手段に従って無菌作業条件を確実にする層流チャンバ内で試験化合物の溶液で処理した：最初に対照として３つのウェルを使用した：それらは２０μＬのＤＭＳＯのみを含有した；最も低い濃度で開始する、試験化合物の連続溶液を後のウェル（２０μＬ）に加えた（各々の濃度レベルについて３つのウェル）。続いて、プレートを７２時間３７℃にてインキュベータに入れた。インキュベーションの終了後、５００μＬの冷（４℃）５０％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）を加えることによって接着細胞を固定し、４℃にて１時間インキュベートした。続いて、各ウェルを滅菌水でリンスし、乾燥させた。リンスを５回繰り返した。１％酢酸に溶解した５００μＬの０．４％の色素溶液（スルホローダミンＢ）を加えることによって、固定した細胞を３０分間染色した。プレートからデカントすることによって未結合の色素を除去し、細胞を１％酢酸で４回洗浄した。続いて、プレートを約５分間空気中で乾燥させた。１５００μＬの１０ｍＭのＴｒｉｓ−塩基性緩衝液（トリスヒドロキシメチルアミノメタン）を各ウェルに加えることによって未結合の色素を溶解し、オービタルシェーカーを使用して５分間振盪した。続いて、各ウェルからの２００μＬの溶液を新たな９６ウェルプレート上の２つのウェルの各々に移し、溶液の吸収を、プレートリーダーを使用して４９０〜５３０ｎｍの波長にて分光光度法で定量した。対照溶液の吸収を１００％と仮定して、試験化合物による細胞増殖の阻害パーセントを計算した。
【００２２】
他の化合物および細胞株についての細胞毒性試験を同一の手順に従って実施した。
【００２３】
細胞株の種類に応じて、以下の増殖培地を使用した：
ＭＣＦ−７株はＳｉｇｍａ（カタログ番号Ｄ５７９６）製のダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥ）中で増殖させ、一方、ＨｅＬａ、Ａ５４９およびＫＢ株はＳｉｇｍａ（カタログ番号Ｒ８７５８）製のＲＰＭＩ−１６４０培地中で増殖させた。
【００２４】
細胞増殖の５０％阻害を得るのに必要な化合物の濃度であるＩＣ５０値を、試験した全ての誘導体について算出した。ＩＣ５０＜４μｇ／ｍＬの誘導体は一般に活性であると仮定され（Ａと省略される）、４〜３０μｇ／ｍＬの範囲のＩＣ５０の値を有する誘導体は中間の活性とみなされ（ＭＡと省略される）、一方、ＩＣ５０＞３０μｇ／ｍＬの誘導体は非活性とみなされる（ＮＡと省略される）。
【００２５】
比較を可能にするために、公知の細胞毒性物質：５−フルオロ−２’−デオキシウリジンおよび５−フルオロウラシルを使用して同一の試験を実施した。
【００２６】
さらに、選択指数（ＳＩ）を、ＦＥＡｄＦＵについて計算し、ＳＩ＝正常細胞株（ＨＤＦ線維芽細胞）についてのＩＣ５０／癌細胞株についてのＩＣ５０と定義した。有益な高い選択指数（ＳＩ）は、癌細胞に対する化合物の活性が、正常細胞に対するその毒性より高いことを示す。
【００２７】
一般式１の化合物についての細胞毒性活性試験の結果を表１に示す。値は３回の独立した実験の平均の結果である。
【００２８】
【表１】
0005894351.tif 000008
【００２９】
本出願の主題である２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン５’−［Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−Ｏ−（４−クロロフェニル）］ホスフェート（ＦＥＡｄＦＵ）の細胞毒性を、高い活性として試験した。さらに、この化合物は、上記に定義した高い選択指数（ＳＩ）を有し、正常細胞（線維芽細胞）に対して低い活性で癌細胞に対して高い選択活性を示す。
【００３０】
ＭＦＥＡｄＦＵ誘導体（式中、Ａｒはパラ−クロロフェニルであり、Ｒは−ＣＨ２−ＣＨ２Ｆである）の細胞毒性および選択指数はＦＥＡｄＦＵに対してかなり低い。
【００３１】
本発明の主題は、特に、乳癌化学療法に使用される薬物を製造するためのＦＥＡｄＦＵの使用である。試験において、ＦＥＡｄＦＵが、０．２４のＩＣ５０で、５ＦｄＵより４７倍高く、５ＦＵより７５倍高い、乳癌細胞（ＭＣＦ−７株）に対して非常に高い活性を有することが確認された。それはまた、オリジナルの２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン（ＡｄＦＵ）より６７倍高い活性を有した。さらに、その化合物は、その株の癌細胞に対して効果的な活性および線維芽細胞に対して低い活性を示す非常に高い選択指数（ＳＩ＝５０）を有した。
【００３２】
別の態様において、本発明の主題は、特に、子宮頸癌化学療法に使用される薬物を製造するためのＦＥＡｄＦＵの使用である。試験において、ＦＥＡｄＦＵは、０．３６のＩＣ５０で、５ＦｄＵより３６倍高く、５ＦＵより５８倍高く、ＡｄＦＵより１３３倍高い細胞毒性で、子宮頸癌細胞（ＨｅＬａ株）に対して非常に高い活性を有することが確認された。さらに、その化合物は、その株の癌細胞に対して効果的な活性および線維芽細胞に対して低い活性を示す非常に高い選択指数（ＳＩ＝３３）を有した。
【００３３】
別の態様において、本発明の主題は、特に、肺癌化学療法に使用される薬物を製造するためのＦＥＡｄＦＵの使用である。実施した試験において、ＦＥＡｄＦＵが、０．４μＭのＩＣ５０で、５ＦｄＵより３３倍高い細胞毒性、および５ＦＵより５３倍高い細胞毒性で、肺癌細胞（Ａ５４９株）に対して非常に高い活性を有することが確認された。さらに、その化合物は、その株の癌細胞に対して効果的な活性および線維芽細胞に対して低い活性を示す非常に高い選択指数（ＳＩ＝３０）を有した。
【００３４】
最後の態様において、本発明の主題は、特に、鼻咽頭癌化学療法に使用される薬物を製造するためのＦＥＡｄＦＵの使用である。試験において、ＦＥＡｄＦＵが、０．４μＭのＩＣ５０で、５ＦｄＵより３４倍高い細胞毒性、５ＦＵより５５倍高い細胞毒性、およびＡｄＦＵより１２０倍高い細胞毒性で、鼻咽頭癌細胞（ＫＢ株）に対して非常に高い活性を有することが確認された。さらに、その化合物は、その株の癌細胞に対して効果的な活性および線維芽細胞に対して低い活性を示す非常に高い選択指数（ＳＩ＝３０）を有した。
【００３５】
本発明の主題は、その範囲を限定せずに本発明を例示する特定の実施形態を使用して説明される。
【００３６】
溶媒および他の化学試薬は、Ａｌｄｒｉｃｈ，ＭｅｒｃｋおよびＰＯＣｈから得て、それをそのまま使用した。カラムクロマトグラフィーは、Ｍｅｒｃｋ製の固定相（０．０４５〜０．０７５ｍｍ／２００〜３００メッシュ）として使用したシリカゲル６０Ｈで実施した。
【００３７】
化合物の１Ｈ  ＮＭＲ、１３Ｃ  ＮＭＲおよび１９Ｆ  ＮＭＲスペクトルは、以下の内部標準：１Ｈ  ＮＭＲおよび１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルを記録する場合、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）ならびに１９Ｆ  ＮＭＲスペクトルについてトリクロロフルオロメタン（ＣＦＣｌ３）と共にＶａｒｉａｎ−Ｇｅｍｉｎｉ（３００ＭＨｚ）およびＢｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ（６００ＭＨｚ）分光計を使用して記録した。
【００３８】
実施例１
ＦＥＡｄＦＵの合成
【化７】
0005894351.tif 000009
ピリジン（４ｍＬ）中の２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン（１．０７ｍｍｏｌ、０．２４４ｇ）を、アセトニトリル（４ｍＬ）中の４−クロロフェニルジ（１，２，４−トリアゾール）ホスフェート（１．０７ｍｍｏｌ、０．３３２ｇ）の溶液に加えた。反応物を室温にて１時間撹拌し；続いて、２，２，２−トリフルオロエチルアミン塩酸塩（５．３５ｍｍｏｌ、０．７２５ｇ）およびトリエチルアミン（２．０ｍＬ）を反応混合物に加え、反応物を室温にて１時間撹拌した。反応の進行を、溶出液としてＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（１０：１）を用いた薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を使用してモニターした。基質が完全に消費した場合、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１０ｍＬ）を反応混合物に加え、続いてクロロホルムで抽出した。有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、トルエンで２回蒸発させて、微量のピリジンを除去した。得られた生成物を、溶出液としてクロロホルム／メタノール混合物（１００：１、ｖ／ｖ）を使用して、シリカゲルを用いたクロマトグラフィーカラムで精製した。収率：４０％。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．３３−２．４０（ｍ，２Ｈ，Ｎ−ＣＨ２）；２．４９−２．５３（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−２’’）；３．０３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’）；３．４６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−５’’）；４．２２−４．３５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’）；５．９３（ｐｓｅｕｄｏｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，Ｈ−１’）；６．４５（ｍ，１Ｈ，ＮＨ−Ｃ−Ｃ）；７．２３，７．２７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，４−ＣｌＰｈ）；７．４３，７．４８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，４−ＣｌＰｈ）；８．１４，８．１７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，Ｈ−６）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ３１．２６，４３．４２，５９．３８，７７．５２，８５．４２，８７．３４，１２２．１２，１２２．５８，１２５．５９，１２９．７２，１３９．１８，１４４．２７，１４９．１２，１５１．７０，１６２．９３。
１９Ｆ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ−１５８．２６（ｄ，１Ｆ，Ｊ＝５．０Ｈｚ）；−７１．４０，−７１．３６（ｔ，３Ｆ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，Ｎ−Ｃ−ＣＦ３）。
３１Ｐ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ５．０５；５．２０。
ＭＳ−ＥＳＩｍ／ｚ：５００，５０２［Ｍ＋Ｈ］＋；５２２，５２４［Ｍ＋Ｎａ］＋；５３８，５４０［Ｍ＋ＣＬ］−．４９８，５００［Ｍ−Ｈ］−；５３４，５３６，５３８［Ｍ＋Ｃｌ］−。
【００３９】
実施例２
ＦＥＡｄＦＵの合成−ワンポット手順
【化８】
0005894351.tif 000010
１，２，４−トリアゾール（５．５３ｍｍｏｌ、０．３８２ｇ）およびトリエチルアミン（０．６２ｍＬ）を、アセトニトリル（４．５ｍＬ）中の４−クロロフェニルジクロロホスフェート（１．８４ｍｍｏｌ、０．４５２ｇ）の溶液に加えた。反応物を室温にて３０分間撹拌した。最初の工程の終了後、２，３’−アンヒドロ−２’−ジデオキシ−５−フルオロウリジン（０．８８ｍｍｏｌ、０．２００ｇ）およびピリジン（４．５ｍＬ）を反応混合物に加えた。反応物を室温にて１時間撹拌した。続いて、２，２，２−トリフルオロエチルアミン塩酸塩（２．６４ｍｍｏｌ、０．１２０ｇ）およびトリエチルアミン（１．５ｍＬ）を反応混合物に加え、反応物を室温にて２時間撹拌した。反応の進行を、溶出液としてＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（１０：１）を用いた薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を使用してモニターした。基質が完全に消費した場合、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１０ｍＬ）を反応混合物に加え、続いてクロロホルムで抽出した。有機相を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、トルエンで２回蒸発させて、微量のピリジンを除去した。得られた生成物を、溶出液としてクロロホルム／メタノール混合物（１００：１、ｖ／ｖ）を使用して、シリカゲルを用いたクロマトグラフカラムで精製した。収率４２％。
【００４０】
生成物は実施例１に記載したものと同一のスペクトル特徴を有した。
【００４１】
実施例３
ＭＦＥＡｄＦＵの合成
【化９】
0005894351.tif 000011
実施例２と同一の手順を使用して、リン酸化２，３’−アンヒドロ−２’−デオキシ−５−フルオロウリジン（０．８８ｍｍｏｌ、０．２００ｇ）と２−フルオロエチルアミン塩酸塩（２６３ｍｇ；２．６４ｍｍｏｌ）との反応を実施した。クロマトグラフ精製の後、生成物（ＭＦＥＡｄＦＵ）を３４％収率で得た。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：２．５６−２．７５（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２’，Ｈ−２’’），３．００−３．２３（ｍ，２Ｈ，Ｎ−ＣＨ２−Ｃ），３．８７−４．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４’），４．５４（ｍ，２Ｈ，Ｈ−５’，Ｈ−５’’），４．６８−４．７９（ｍ，２Ｈ，Ｎ−Ｃ−ＣＨ２），５．５４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３’），６．０４（ｐｓｅｕｄｏ  ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−１’），６．７２（ｍ，１Ｈ，ＮＨ−Ｃ−Ｃ），７．２４，７．２８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，４−ＣｌＰｈ），７．４４，７．４８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，４−ＣｌＰｈ），８．１５，８．１８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，Ｈ−６），１１．９９（ｂｒｓ，１Ｈ，３−ＮＨ）。
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：３３．１２，４５．５１，６３．８９，７７．１２，８２．４８，８３．２４，８７．５８，１２１．７４，１２５．９７（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝３７．３Ｈｚ），１２８．１２，１３１．０７，１４３．７４（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２３２．３Ｈｚ），１４９．０５，１５１．４８，１６２．９９（ｄ，ＪＣ−Ｆ＝２６．０Ｈｚ）。
１９Ｆ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：−７１．１７（ｍ，１Ｆ），−１５８．１９（ｍ，１Ｆ）。
３１Ｐ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ５．９６；６．０１。
ＭＳ−ＥＳＩｍ／ｚ：４６４，４６６［Ｍ＋Ｈ］＋；４８６，４８８［Ｍ＋Ｎａ］＋；５０２，５０４［Ｍ＋Ｋ］＋；４６２，４６４［Ｍ−Ｈ］−；４９８，５００，５０２［Ｍ＋Ｃｌ］−。