(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）で示される化合物：
【化１】
0005980953.tif 000008
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す）
又はその塩を含有する核磁気共鳴診断剤であって、
前記核磁気共鳴診断剤が、ＭＲＩに用いる造影剤であり、
前記核磁気共鳴診断剤は、核磁気共鳴を利用して、Ｔ２強調画像のコントラストを増大させるために用いられる、
核磁気共鳴診断剤。
【請求項２】
請求項１に記載の核磁気共鳴診断剤であって、
Ｒ１及びＲ２が、水素原子である、
核磁気共鳴診断剤。
【請求項３】
請求項１または２に記載の核磁気共鳴診断剤であって、
腫瘍性疾患、感染性疾患、炎症性疾患、自己免疫性疾患、脱髄性疾患、代謝性疾患、変性疾患、血管障害及び外傷からなる群から選択される疾患又は状態の診断用である、
核磁気共鳴診断剤。
【請求項４】
請求項１から３のいずれか一項に記載の核磁気共鳴診断剤であって、
さらに、一種又は二種以上の金属含有化合物を含有する、
核磁気共鳴診断剤。
【請求項５】
請求項４に記載の核磁気共鳴診断剤であって、
前記金属含有化合物が、鉄を含有する化合物である、
核磁気共鳴診断剤。
【請求項６】
ＭＲＩにおいてコントラストが増大されたＴ２強調画像を得る方法であって、
（１）下記式（Ｉ）で示される化合物：
【化４】
0005980953.tif 000009
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す）
又はその塩を、ヒトを除く対象に投与するステップ；
（２）核磁気共鳴を利用して、ＭＲＩを前記対象に適用するステップ；及び
（３）前記対象におけるＴ２強調画像を得るステップ
を含む、Ｔ２強調画像を得る方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核磁気共鳴診断剤に関し、より詳しくは、５−アミノレブリン酸若しくはその誘導体又はそれらの塩を含有する、核磁気共鳴診断剤に関する。また、本発明は、前記核磁気共鳴診断剤を用いた、対象内の細胞、組織又は臓器の状態を検出又は診断する方法、又は、ＭＲＩにおいてコントラストが増大されたＴ２強調画像を得る方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
疾病や状態などに対する生体内診断には、例えば、Ｘ線ＣＴ（コンピュータ断層撮影）、ＰＥＴ（電子放出断層撮影法）又はＭＲＩ（磁気共鳴画像法）等が利用されてきた。【０００３】
しかしながら、Ｘ線ＣＴは、検査時のＸ線照射による外部被爆の問題があった。【０００４】
また、ＰＥＴは、例えば１１Ｃ−メチオニンのような放射性同位体をトレーサーとして生体内に投与する必要性があることから、放射性同位体の管理の問題や内部被爆の問題があった。さらに、ＰＥＴの空間分解能は低いことが知られていた。【０００５】
一方、ＭＲＩは、核磁気共鳴（ＮＭＲ）現象をコンピュータ断層撮影法に応用した技法であり、Ｘ線ＣＴやＰＥＴと異なり、放射線被爆は存在しないと考えられている。また、ＭＲＩは、Ｘ線ＣＴなど他のモダリティと比較して、組織特異性が高いことでも知られている。【０００６】
一般に、ＭＲＩ検査／診断では、対象とする単位面積に含まれるプロトン（水素原子核）の状態（縦緩和又はＴ１緩和、及び、横緩和又はＴ２緩和）に関して、Ｔ１強調画像（主に、縦緩和によってコントラストのついた核磁化分布を画像化したもの）と、Ｔ２強調画像（主に、横緩和によってコントラストのついた核磁化分布を画像化したもの）という、２種類の異なる画像データを、エコー時間（ＴＥ）、繰り返し時間（ＴＲ）等のパラメーター値を調整して撮像し、分析する。観察する組織または臓器等におけるプロトンの状態ごとに、異なる画像コントラストを有するＴ１強調画像及び／又はＴ２強調画像が得られる。通常は、濃淡を持つ白黒画像に処理・出力される。
Ｔ１値（Ｔ１緩和時間）を測定した場合、その時間が短いほど白く（高信号となり）、長いほど黒く（低信号となる）コントラスト化されて、画像化される（Ｔ１強調画像）。一方、Ｔ２値（Ｔ２緩和時間）を測定した場合、その時間が長いほど白く（高信号となり）、短いほど黒く（低信号となる）コントラスト化されて、画像化される（Ｔ２強調画像）。【０００７】
また、ＭＲＩ検査／診断において、ＭＲＩ画像のコントラスト、組織特異性をさらに高める目的で、様々な造影剤が開発されてきた。【０００８】
代表的な造影剤としては、Ｔ１緩和時間の短縮作用を有し、Ｔ１強調画像でコントラスト（信号強度）を増大させる、Ｇｄ−ＤＴＰＡ（ガドリニウム−ジエチレントリアミン五酢酸）などのガドリニウム錯体が挙げられる。
Ｇｄ−ＤＴＰＡは、例えば、グリオーマの検出に用いられている。Ｇｄ−ＤＴＰＡは、キレート化されているため、その副作用は、遊離のガドリニウムよりも軽減はされてはいるが、依然として、アレルギー反応、肝毒性又は腎毒性等の副作用を有する。また、Ｇｄ−ＤＴＰＡは、部位特異性（例えば、腫瘍選択性）を有さないため、例えば、腫瘍とそれ以外の組織とのコントラストを明確にするために、多量に投与する必要があった（特許文献１）。【０００９】
しかしながら、これらの手法、造影剤の代替品となるものが存在せず、新たな診断剤及び診断手法の開発が長年望まれてきた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開パンフレット第２００９／１５７５６１号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、生体への毒性、副作用がより低減され、かつ、特定の細胞、組織又は臓器等への部位特異性を有する、核磁気共鳴診断剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
プロトポルフィリンＩＸ（以下「ＰｐＩＸ」ともいう）は、ヘムやクロロフィル等の色素の前駆体として知られており、例えば、がん組織等へ部位特異的に蓄積する性質を有することで知られている。一方、５−アミノレブリン酸（以下「ＡＬＡ」ともいう）及びその誘導体は、色素生合成経路の中間体として知られており、細胞内でヘム生合成経路の一連の酵素群により、ＰｐＩＸへと代謝活性化されることが知られている（例えば、特開２０１１−２６２２１号及び特許第２７３１０３２号公報）。【００１３】
本発明者らは、鋭意検討の結果、生体内に投与したＡＬＡ又はその誘導体の代謝物（特にはＰｐＩＸ）が特定の細胞、組織又は臓器等に蓄積する現象に着眼し、ＡＬＡの生体投与後に当該代謝物が蓄積したであろう部位を、核磁気共鳴を利用して解析したところ、驚くべきことに、ＡＬＡ及びその誘導体が、前記課題を解決する診断剤として有用であることを見出し、本発明を完成させた。これまで、ＡＬＡ又はその誘導体の生体投与と核磁気共鳴法とを組み合わせた例は報告されていない。【００１４】
すなわち、本発明の目的は、
下記式（Ｉ）で示される化合物：
【化１】
0005980953.tif 000002
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す）
又はその塩を含有する核磁気共鳴診断剤を提供することによって、達成される。【００１５】
また、本発明の核磁気共鳴診断剤は、一態様において、
Ｒ１及びＲ２が、水素原子であることが好ましい。【００１６】
また、本発明の核磁気共鳴診断剤は、一態様において、
前記核磁気共鳴診断剤が、ＭＲＩに用いる造影剤であることが好ましい。【００１７】
また、本発明の核磁気共鳴診断剤は、一態様において、
核磁気共鳴を利用して、Ｔ２強調画像のコントラストを増大させることが好ましい。【００１８】
また、本発明の核磁気共鳴診断剤は、一態様において、
腫瘍性疾患、感染性疾患、炎症性疾患、自己免疫性疾患、脱髄性疾患、代謝性疾患、変性疾患、血管障害及び外傷からなる群から選択される疾患又は状態の診断用であることが好ましい。【００１９】
また、本発明の核磁気共鳴診断剤は、一態様において、
さらに、一種又は二種以上の金属含有化合物を含有することが好ましい。【００２０】
また、本発明の核磁気共鳴診断剤は、一態様において、
さらに、金属含有化合物として、鉄含有化合物を含有することが好ましい。【００２１】
本発明は、別の態様において、
対象内の細胞、組織又は臓器の状態を検出する方法であって、
下記式（Ｉ）で示される化合物：
【化２】
0005980953.tif 000003
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す）
又はその塩を投与された対象内の細胞、組織又は臓器の状態を、核磁気共鳴を利用して検出するステップ
を含む、検出する方法を提供する。【００２２】
本発明は、別の態様において、
対象内の細胞、組織又は臓器の状態を診断する方法であって、
（ａ）下記式（Ｉ）で示される化合物：
【化３】
0005980953.tif 000004
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す）
又はその塩を対象に投与するステップ；
（ｂ）核磁気共鳴を利用して、前記対象内の細胞、組織又は臓器の状態を検出するステップ；及び
（ｃ）前記検出結果に基づき、前記対象内の細胞、組織又は臓器の状態を診断するステップ
を含む、診断する方法を提供する。【００２３】
また、本発明の対象内の細胞、組織又は臓器の状態を診断する方法は、一態様において、
前記対象内の細胞、組織又は臓器が、前記式（Ｉ）で示される化合物又はその塩の代謝物の蓄積部位であることが好ましい。【００２４】
また、本発明の対象内の細胞、組織又は臓器の状態を診断する方法は、一態様において、
前記対象内の細胞、組織又は臓器が、前記式（Ｉ）で示される化合物又はその塩の代謝物の蓄積部位である、腫瘍であることが好ましい。【００２５】
本発明は、別の態様において、
ＭＲＩにおいてコントラストが増大されたＴ２強調画像を得る方法であって、
（１）下記式（Ｉ）で示される化合物：
【化４】
0005980953.tif 000005
（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す）
又はその塩を対象に投与するステップ；
（２）核磁気共鳴を利用して、ＭＲＩを前記対象に適用するステップ；及び
（３）前記対象におけるＴ２強調画像を得るステップ
を含む、Ｔ２強調画像を得る方法を提供する。【００２６】
以上述べた本発明の一又は複数の特徴を、適宜、任意に組み合わせたものも、本発明に含まれることはいうまでもない。
【発明の効果】
【００２７】
本発明の核磁気共鳴診断剤を使用することで、生体への毒性、副作用がより低減され、かつ、対象内の細胞、組織又は臓器の状態の、部位特異的な検出又は診断等が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】ＭＲＩ装置により撮像した画像に関して、ＡＬＡ投与群より回収した腫瘍部分において、Ｔ１値／Ｔ２値の測定に使用するＲＯＩの設定の一例を示す図である。  図１Ａは、２Ｄ−ＲＡＲＥによる撮像画像に関し、参照画像として示した。なお、例えば、図１Ａ中、Ａは、ガントリ中の方向において、前方部であることを示す。  図１Ｂは、Ｔ１飽和回復（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ）に関するパラメトリック画像に関する。  図１Ｃは、Ｔ２緩和に関するパラメトリック画像に関する。  図１Ｄは、２Ｄ−ＲＡＲＥによる撮像画像に関し、参照画像として示した。  図１Ａ〜図１Ｃは、いずれも、ＡＬＡ投与群より回収した、同一の、腫瘍部分サンプルの断面についての画像である。図１Ｄは、コントロール群より回収した腫瘍部分サンプルの断面についての画像である。
【図２】ＡＬＡ投与群と（ネガティブ）コントロール群に関して、ＭＲＩ装置により撮像した、Ｔ１強調画像とＴ２強調画像の一例を示す図である。  図２ＡはＡＬＡ投与群におけるＴ２強調画像に関する。白丸枠内領域は、移植した腫瘍部分の断面の一部を示し、図１において設定したＲＯＩ領域に相当する。白四角枠内領域は、腫瘍細胞を移植したラットに由来する、非腫瘍組織（皮膚組織等）の断面の一部を示す。なお、黒矢印は、ＡＬＡ投与群において、腫瘍部分断面であるにも関わらず、Ｔ２強調画像で暗く（低信号で）撮像された円形部分において、当該腫瘍部分断面の辺縁部が高信号の帯で観察されたことを指し示すものである。  図２ＢはＡＬＡ投与群におけるＴ１強調画像に関する。  図２Ｃはコントロール群におけるＴ２強調画像に関する。白丸枠内領域は、移植した腫瘍部分の断面の一部を示す。白四角枠内領域は、腫瘍細胞を移植したラットに由来する、非腫瘍組織（皮膚組織等）の断面の一部を示す。また、黒三角枠内領域は、腫瘍細胞を移植したラットに由来する皮膚組織と、腫瘍組織との間に存在する、疎な結合組織の断面の一部を示す。  図２Ｄはコントロール群におけるＴ１強調画像に関する。
【図３】ＡＬＡ投与群と（ネガティブ）コントロール群に関して、ＭＲＩ装置により撮像したＴ２強調画像の一例を示す図である。白丸枠内領域は、移植した腫瘍部分の断面の一部を示す。白四角枠内領域は、腫瘍細胞を移植したラットに由来する、非腫瘍組織（皮膚組織等）の断面の一部を示す。  図３Ａ及び図３Ｃは、ＡＬＡ投与群から回収した組織を、スライス面を別にして撮像した、Ｔ２強調画像に関する。  図３Ｂ及び図３Ｄは、コントロール群から回収した組織を、スライス面を別にして撮像した、Ｔ２強調画像に関する。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
ＡＬＡ又はその誘導体は、生体に安全であることが報告されている（例えば、Ｊ  Ｅｎｄｏｕｒｏｌ．  ２００９  Ｓｅｐ  ２３（９）  １３８７−９４頁；Ｕｒｏｌｏｇｙ．  ２００８  Ａｕｇ  ７２（２）  ３４５−８頁  Ｅｐｕｂ  ２００８  Ａｐｒ  １１；Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２００１  Ｊａｎ  ５  ８４（１）  ３３−７頁）。したがって、本発明の核磁気共鳴診断剤は、従来の生体内診断剤（例えばガドリニウム造影剤や放射性同位体）と比較して、生体への毒性、副作用が低減される。
【００３０】
本発明の核磁気共鳴診断剤に含有される、有効成分としての化合物は、ＡＬＡ若しくはその誘導体又はそれらの塩であって、前記式（Ｉ）で示される化合物又はその塩（以下、これらを総称して「ＡＬＡ類」ともいう）として例示することができる。δ−アミノレブリン酸とも呼ばれるＡＬＡは、前記式（Ｉ）のＲ１及びＲ２が共に水素原子の場合であり、アミノ酸の１種である。ＡＬＡ誘導体としては、前記式（Ｉ）のＲ１が水素原子又はアシル基であり、かつ、前記式（Ｉ）のＲ２が水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基である、ＡＬＡ以外の化合物を挙げることができる。
【００３１】
前記式（Ｉ）におけるアシル基としては、限定はされないが、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イソバレリル、ピバロイル、ヘキサノイル、オクタノイル、ベンジルカルボニル基等の直鎖又は分岐状の炭素数１〜８のアルカノイル基や、ベンゾイル、１−ナフトイル、２−ナフトイル基等の炭素数７〜１４のアロイル基を挙げることができる。
【００３２】
前記式（Ｉ）におけるアルキル基としては、限定はされないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル基等の直鎖又は分岐状の炭素数１〜８のアルキル基を挙げることができる。
【００３３】
前記式（Ｉ）におけるシクロアルキル基としては、限定はされないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロドデシル、１−シクロヘキセニル基等の飽和、又は一部不飽和結合が存在してもよい、炭素数３〜８のシクロアルキル基を挙げることができる。
【００３４】
前記式（Ｉ）におけるアリール基としては、限定はされないが、フェニル、ナフチル、アントリル、フェナントリル基等の炭素数６〜１４のアリール基を挙げることができる。
【００３５】
前記式（Ｉ）におけるアラルキル基としては、限定はされないが、アリール部分は前記アリール基と同じ例示ができ、アルキル部分は前記アルキル基と同じ例示ができ、具体的には、ベンジル、フェネチル、フェニルプロピル、フェニルブチル、ベンズヒドリル、トリチル、ナフチルメチル、ナフチルエチル基等の炭素数７〜１５のアラルキル基を挙げることができる。
【００３６】
前記ＡＬＡ誘導体としては、限定はされないが、一実施態様において、前記Ｒ１が、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル基等である化合物や、前記Ｒ２が、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル基等である化合物が好ましい。さらに、限定はされないが、特定の一実施態様において、前記Ｒ１と前記Ｒ２の組合せが、ホルミルとメチル、アセチルとメチル、プロピオニルとメチル、ブチリルとメチル、ホルミルとエチル、アセチルとエチル、プロピオニルとエチル、ブチリルとエチルの各組合せなどを好ましく挙げることができる。
【００３７】
ＡＬＡ類は、投与する態様に応じて、例えば、溶解性を上げるための各種の塩、エステル、または生体内の酵素で分解されるプロドラッグ（前駆体）として投与してよい。例えば、ＡＬＡ又はその誘導体の塩としては、薬理学的に許容される酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩等を挙げることができる。酸付加塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、リン酸塩、硝酸塩、硫酸塩等の各無機酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、トルエンスルホン酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、グリコール酸塩、メタンスルホン酸塩、酪酸塩、吉草酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩等の各有機酸付加塩を例示することができる。金属塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等の各アルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等の各アルカリ土類金属塩、アルミニウム、亜鉛等の各金属塩を例示することができる。アンモニウム塩としては、アンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩等のアルキルアンモニウム塩等を例示することができる。有機アミン塩としては、トリエチルアミン塩、ピペリジン塩、モルホリン塩、トルイジン塩等の各塩を例示することができる。なお、これらの塩は使用時において溶液としても用いることができる。
【００３８】
以上のＡＬＡ類のうち、望ましいものは、ＡＬＡ、及び、ＡＬＡメチルエステル、ＡＬＡエチルエステル、ＡＬＡプロピルエステル、ＡＬＡブチルエステル、ＡＬＡペンチルエステル等の各種エステル類、並びに、これらの塩酸塩、リン酸塩、硫酸塩である。ＡＬＡ塩酸塩、ＡＬＡリン酸塩がより好ましい。
【００３９】
ＡＬＡ類は、例えば、化学合成、微生物による生産、酵素による生産など公知の方法によって製造することができる。また、前記ＡＬＡ類は、水和物又は溶媒和物を形成していてもよく、またＡＬＡ類を、単独で又は２種以上を適宜組み合わせて用いることもできる。
【００４０】
一態様において、本発明の核磁気共鳴診断剤は、生体等に許容できない悪影響を与えず、本発明の目的及び課題を達成できる限り、金属含有化合物を含んでもよい。このような金属含有化合物における金属部分としては、限定はされないが、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、バナジウム、コバルト、銅、クロム、モリブデン等を挙げることができる。当業者は、適宜、金属含有化合物の適切な投与量を選択し、ＡＬＡ類と共に投与できる。
【００４１】
核磁気共鳴画像（ＭＲＩ）装置で撮像した場合、一般に、金属は、生体内において、Ｔ２緩和時間を減少させることが知られている。
前述のとおり、ＰｐＩＸは、ヘムの色素の前駆体であることから、ＡＬＡ類とともに鉄を生体に投与すると、生体内の特定部位に選択的に蓄積した、ＡＬＡ類の代謝物ＰｐＩＸが、ヘムにさらに代謝される。かかる場合において、鉄化合物を併用することで、正常組織中のＡＬＡ類の代謝物（特にはＰｐＩＸ）の蓄積が、ヘムへのさらなる代謝により抑えられる一方で、ＡＬＡ類の代謝物（特にはＰｐＩＸ）を蓄積しやすい胃癌細胞等では、十分なＡＬＡ類の代謝物（特にはＰｐＩＸ）の蓄積を保持できる。したがって、ＡＬＡ類に鉄化合物を併用して投与することで、例えばＭＲＩによるＴ２強調画像における、正常組織と腫瘍組織の画像コントラスト差に関連して、シグナル対ノイズ比（Ｓ／Ｎ比）を上昇させることが可能である。したがって、一態様において、本発明の核磁気共鳴診断剤は、生体等に許容できない悪影響を与えず、本発明の目的及び課題を達成できる限り、鉄含有化合物を好ましくは含有してよい。
【００４２】
前記鉄化合物としては、有機塩でも無機塩でもよい。無機塩としては、限定はされないが、塩化第二鉄、三二酸化鉄、硫酸鉄、ピロリン酸第一鉄を挙げることができる。有機塩としては、限定はされないが、カルボン酸塩、例えばヒドロキシカルボン酸塩である、クエン酸第一鉄、クエン酸鉄ナトリウム、クエン酸第一鉄ナトリウム、クエン酸鉄アンモニウム等のクエン酸塩や、ピロリン酸第二鉄、乳酸鉄、グルコン酸第一鉄、ジエチレントリアミン五酢酸鉄ナトリウム、ジエチレントリアミン五酢酸鉄アンモニウム、エチレンジアミン四酢酸鉄ナトリウム、エチレンジアミン五酢酸鉄アンモニウム、ジカルボキシメチルグルタミン酸鉄ナトリウム、ジカルボキシメチルグルタミン酸鉄アンモニウム、フマル酸第一鉄、酢酸鉄、シュウ酸鉄、コハク酸第一鉄、コハク酸クエン酸鉄ナトリウム等の有機酸塩や、ヘム鉄、デキストラン鉄、トリエチレンテトラアミン鉄、ラクトフェリン鉄、トランスフェリン鉄、鉄クロロフィリンナトリウム、フェリチン鉄、含糖酸化鉄、グリシン第一鉄硫酸塩（ｆｅｒｒｏｕｓ  ｇｌｙｃｉｎｅ  ｓｕｌｐｈａｔｅ）を挙げることができる。
【００４３】
一実施態様において、前記鉄含有化合物の投与量としては、ＡＬＡ類の投与量（ＡＬＡ換算）に対して、限定はされないが、モル比で０．０１〜１００倍であってよく、０．０５倍〜１０倍が好ましく、０．１倍〜８倍がより好ましい。当業者は、適宜、鉄含有化合物の適切な投与量を選択し、ＡＬＡ類と共に投与できる。鉄含有化合物以外の金属含有化合物の投与量についても、本発明の目的及び課題に照らして、同様に、当業者は、適宜、決定できる。
【００４４】
一態様において、本発明の核磁気共鳴診断剤に含有されるＡＬＡ類と金属含有化合物は、ＡＬＡ類と金属含有化合物とを含む組成物としても、あるいは、それぞれ単独でも投与することができる。それぞれ単独で投与する場合、同時に投与することが好ましい。ここで、同時とは、同時刻に行われることのみならず、同時刻でなくともＡＬＡ類と金属含有化合物との投与が相加的効果、好ましくは相乗的効果を奏することができるように、両者間で相当の間隔をおかずに行われることを意味する。
【００４５】
本発明の核磁気共鳴診断剤は、核磁気共鳴現象を利用するものであれば、特に限定されずに用いられてよい。好ましくは、本発明の核磁気共鳴診断剤は、ＭＲＩ装置、ＭＲＳ（磁気共鳴スペクトロスコピー）装置、ＮＭＲ装置等に用いられてよい。また、これらの装置は、当業者に公知の知見に基づいて、本発明の目的に応じて、実施してよい。例えば、核磁気共鳴画像（ＭＲＩ）法は、解剖学的情報の分析に適している。また、ＭＲＳ法は、ＭＲＩで行う撮影方法の一つであり、代謝物質の化学的情報の分析に優れている。本発明において、「核磁気共鳴診断剤」とは、核磁気共鳴現象の原理を利用し、診断的用途に適用し得る剤又は組成物であれば限定されない。例えば、一態様において、本発明の核磁気共鳴診断剤は、ＡＬＡ類及びその代謝物の対象内の動態（分布）や局在性等の検出又は解析；対象内の細胞、組織又は臓器の臨床的、薬理学的特徴の検出又は臨床的若しくは薬理学的診断；疾患又は状態を同定する指標となる情報の検出又は疾患若しくは状態の同定又は診断；疾患又は状態の形状又は位置の検出、同定又は診断；治療効果の確認（例えば抗がん剤投与後の治療有効性の確認等）；外科的手術を行う際の併用的診断等、に利用する剤、薬又は組成物であると理解されよう。例えば、本発明の核磁気共鳴診断剤をＭＲＩ検査／診断に用いる場合には、造影剤（ＭＲＩ画像における画像コントラストを、例えば、生体内の、特定の細胞、組織又は臓器等において強調して撮影するために、生体に投与される剤又は組成物を指す。）として使用できる。例えば、本発明の核磁気共鳴診断剤をＭＲＳ検出／診断に用いる場合には、生体内の、特定の細胞、組織又は臓器等について、ＭＲＳ装置で測定される波形パターンを変更させるために、生体に投与される剤、薬又は組成物として使用できる。
【００４６】
ＭＲＩ装置としては、超伝導電磁石又は永久磁石等を使用するものが知られている。超伝導電磁石を使用するＭＲＩ装置は、強磁場を発生させることで、画像を精細かつ高コントラストで構成可能である。超伝導電磁石を使用するＭＲＩ装置の場合、撮像の対象（例えばヒト等）において許容される限り、限定はされないが、例えば、１０、９．４、８、７、６、５、４、３、２、１．５、１又は０．５テスラ等の磁場を有するものであってよい。一実施態様において、費用、簡便性の観点等からは、磁場は低い方が好ましく、空間分解能の観点等からは、磁場は高い方が好ましい。
【００４７】
核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）について、限定はされないが、スピンエコー法（ＳＥ）、グラディエントエコー法（ＧＲＥ）、エコープラナー法（ＥＰＩ）、プロトン密度強調画像、フレアー法（ＦＬＡＩＲ；  ｆｌｕｉｄ  ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ  ｉｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ）、拡散強調画像（ＤＷＩ；  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  ｗｅｉｇｈｔｅｄ  ｉｍａｇｅ）、脂肪抑制法、ＲＡＲＥ法（Ｒａｐｉｄ  Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ）等、様々な方法が当業者に知られており、それらの全てが、本発明の核磁気共鳴診断剤のために使用され得る。本発明の目的及び課題に照らして、適宜、適切な方法を選択して、最適なＭＲＩコントラスト画像（Ｔ１強調画像及び特にはＴ２強調画像）を得られ得ることを当業者であれば理解する。例えば、ＡＬＡ類を造影剤として用いた場合、ＡＬＡ類非投与の場合と比較して、ＡＬＡ類の代謝物（特にはＰｐＩＸ）の部位特異的蓄積部位（例えば腫瘍組織等）において、Ｔ２強調画像のコントラストが増大されて、当該蓄積部位が白く出力される（高信号となる）（言い換えると、Ｔ２緩和時間が延長される。）。かかるコントラストの差をさらに増大させるために、ＴＲ、ＴＥ、磁場等を調整して、画像コントラストを最適化してもよい。
【００４８】
限定はされないが、一実施態様において、本発明の、ＡＬＡ類を含む核磁気共鳴診断剤をＭＲＩ造影剤として用いた場合、特には、腫瘍組織等において、ＡＬＡ類非投与の場合と比較して、Ｔ２緩和時間を有意に延長させるのが好ましい。例えば、１．１倍〜１０倍以上（例えば、１．２倍〜５倍以上など）延長させるのがより好ましい。
【００４９】
本発明の核磁気共鳴診断剤の、対象（生体等）への投与経路としては、全身投与であっても、局所投与であってもよい。限定はされないが、舌下投与も含む経口投与、あるいは吸入投与、カテーテルによる、標的組織又は臓器に対する直接投与、点滴を含む静脈内投与、パップ剤等による経皮投与、座薬、又は、経鼻胃管、経鼻腸管、胃ろうチューブ若しくは腸ろうチューブを用いる強制的経腸栄養法による投与等の非経口投与などを挙げることができる。
【００５０】
本発明の核磁気共鳴診断剤の剤型としては、前記投与経路に応じて適宜決定してよく、限定はされないが、注射剤、点滴剤、錠剤、カプセル剤、細粒剤、散剤、液剤、シロップ等に溶解した水剤、パップ剤、座薬剤等を挙げることができる。
【００５１】
本発明の核磁気共鳴診断剤を調製するために、必要に応じて、例えば、薬理学的に許容し得る担体、賦形剤、希釈剤、添加剤、崩壊剤、結合剤、被覆剤、潤滑剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、可溶化剤、溶剤、ゲル化剤、栄養剤等を添加してよく、さらに、それらによって、本発明の核磁気共鳴診断剤の吸収性や血中濃度に影響を及ぼし、体内動態の変化をもたらしてもよい。具体的には、水、生理食塩水、動物性脂肪及び油、植物油、乳糖、デンプン、ゼラチン、結晶性セルロース、ガム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコール、グリセリン等を例示することができる。本発明の核磁気共鳴診断剤を水溶液として調製する場合、ＡＬＡ類の分解を防ぐため、水溶液がアルカリ性とならないように留意する必要があり、アルカリ性となってしまう場合は、酸素を除去することによって分解を防ぐこともできる。
【００５２】
本発明の核磁気共鳴診断剤の、対象への投与の量、タイミング、頻度、期間としては、対象の年齢、体重、あるいは、検出、同定又は診断しようとする対象内の細胞、組織又は臓器の状態等、あるいは、対象において検出、同定又は診断しようとする症状又は状態等により異なってよい。
【００５３】
本発明の核磁気共鳴診断剤を投与（適用）する対象とは、限定はされないが、哺乳動物（ヒト、非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウサギ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ等）または非哺乳動物（例えば、魚類、爬虫類、両生類または鳥類））、植物、昆虫、細菌、またはそれら由来の細胞（培養細胞を含む）、組織または器官等を含んでよい。あるいは、当該対象は、人工的な環境（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ反応系等）であってもよい。本発明における対象は、好ましくは哺乳動物であり、特に好ましくはヒトである。
【００５４】
例えば、ヒト、又は、マウス若しくはラットなどの齧歯類において、ＡＬＡ類を投与してから、約２時間後には、標的部位（例えば腫瘍部位）に、その代謝物であるＰｐＩＸが部位特異的に十分に蓄積することを利用して、ＡＬＡ類の投与量、タイミング、頻度、期間等を、適宜調整してよい。標的部位とは、投与するＡＬＡ類の代謝物（特にはＰｐＩＸ）が蓄積する、対象内における部位（組織又は臓器等）であってよい。
例えば、ＡＬＡ類の投与量としては、対象がヒトである場合、ＡＬＡのモル換算で、成人一人当たり、一態様において、０．１ｍｍｏｌ〜１２０ｍｍｏｌ／日、好ましくは０．２ｍｍｏｌ〜９０ｍｍｏｌ／日、より好ましくは０．３ｍｍｏｌ〜６０ｍｍｏｌ／日、さらに好ましくは０．３５ｍｍｏｌ〜４０ｍｍｏｌ／日を挙げることができる。その他のＡＬＡ類を用いる場合にも、モル換算をすることにより、好ましい投与量を計算することができる。また、局所投与は、全身投与よりも、少ないＡＬＡ類を要求するであろう。
ＡＬＡ類の投与頻度としては、一日一回〜複数回の投与又は点滴等による連続的投与を例示することができる。ＡＬＡ類を診断剤として用いて正確な検出又は診断を行うために、投与したＡＬＡ類及びそれにより生じる代謝物が生体内で完全に代謝・分解された後に、必要に応じて、次のＡＬＡ類を投与することが好ましい。
ＡＬＡ類の投与期間は、例えば、対象の、検出又は診断しようとする症状又は状態等に鑑みて、種々の臨床学的指標等に基づいて、当該技術分野の薬理学者や臨床医が既知の方法により決定することができる。
【００５５】
ＡＬＡ類を対象に投与すると、対象内の、所望の細胞、組織又は臓器におけるＡＬＡ類の代謝物（特にはＰｐＩＸ）の蓄積（量）は、約２時間程度でピークに達し、その蓄積（量）は、その後、数時間（例えば８時間）等にわたってピークを維持した後に、減少していくことが、生体におけるＰｐＩＸの蛍光強度観察から確認できる。したがって、一実施態様において、本発明の、ＡＬＡ類を含む核磁気共鳴診断剤を対象に投与した後、限定はされないが、例えば、１〜２４時間、好ましくは、１．５〜１５時間、より好ましくは２〜８時間後に、ＭＲＩ装置、ＭＲＳ装置又はＮＭＲ装置等を用いて、対象内の、所望の細胞、組織又は臓器の状態を検出又は診断してもよい。当業者であれば、対象内の、所望の細胞、組織又は臓器等への、ＡＬＡ類の代謝物の到達時間、蓄積時間、当該所望の細胞、組織又は臓器においてＡＬＡ類の代謝物が飽和される（ピークに達する）時間等に鑑みて、適宜、最適な測定タイミングを決定できることが理解される。好ましくは、本発明の核磁気共鳴診断剤をＭＲＩ造影剤として用い、対象内の細胞、組織又は臓器を撮像し、画像データ（特にはコントラストが増大されたＴ２強調画像データ）を得ることにより、投与したＡＬＡ類の代謝物の蓄積部位を特定してよい。
【００５６】
したがって、一実施態様において、本発明の核磁気共鳴診断剤は、核磁気共鳴の原理を利用した、対象内の細胞、組織又は臓器の状態の検出（本発明において、検出とは、例えば、ＭＲＩ装置を利用して画像（における信号の強さ）として検出すること、又は、ＭＲＳ装置を利用して波形として検出すること等が挙げられる）又は診断等に用いられてよい。技術的に矛盾しない限り、本明細書に記載の、あらゆる態様の任意の一又は複数を適宜組み合わせて、本発明を実施してよい。
【００５７】
一実施態様において、本発明の核磁気共鳴診断剤は、限定はされないが、腫瘍性疾患、感染性疾患、炎症性疾患、自己免疫性疾患、脱髄性疾患、代謝性疾患、変性疾患、血管障害及び外傷等の疾患又は状態の、検出、診断、分析、外科手術との併用等に用いられてよい。限定はされないが、前記疾患又は状態は、腫瘍性疾患、変性疾患、炎症性疾患、自己免疫性疾患及び脱髄性疾患からなる群から選択される疾患又は状態であるのが好ましく、腫瘍性疾患及び変性疾患からなる群から選択される疾患又は状態であるのがより好ましい。また、一実施態様において、本発明の核磁気共鳴診断剤は、ＭＲＩ造影剤として、これらの疾患又は状態の、検出又は診断等に用いられるのが好ましい。
【００５８】
前記腫瘍性疾患に関して、腫瘍とは、限定はされないが、
血管腫、腺腫、乳頭腫、ポリープ、嚢腺腫、線維腫、粘液腫、脂肪腫、骨腫、軟骨腫、平滑筋腫、及び横紋筋腫等の良性腫瘍であるか、あるいは、
脳腫瘍、脊髄腫瘍、上顎洞癌、膵液腺癌、歯肉癌、舌癌、口唇癌、上咽頭癌、中咽頭癌、下咽頭癌、喉頭癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、肺癌、胸膜腫瘍、癌性腹膜炎、癌性胸膜炎、食道癌、胃癌、大腸癌、胆管癌、胆嚢癌、膵臓癌、肝癌、腎臓癌、膀胱癌、前立腺癌、陰茎癌、精巣腫瘍、副腎癌、子宮頸癌、子宮体癌、膣癌、外陰癌、卵巣癌、骨腫瘍、乳癌、皮膚癌、メラノーマ、基底細胞腫、白血病、リンパ腫、ホジキン病、形質細胞腫、骨肉腫、軟骨肉腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫及び線維肉腫を含む、原発性又は転移性の、かつ、浸潤性又は非浸潤性の、癌又は肉腫等が挙げられる。好ましい前記腫瘍としては、限定はされないが、脳腫瘍及び脊髄腫瘍（例えば、膠芽腫などのグリオーマ）、血管腫等が挙げられ、当該脳腫瘍は転移性脳腫瘍であってもよい。
【００５９】
前記感染性疾患とは、限定はされないが、例えば、ウイルス、マイコプラズマ、細菌、寄生虫等が体内に侵入することで、それによって発症する、細菌感染症、真菌感染症、ウイルス感染症等の疾病又は状態であれば特に限定はされない。前記感染性疾患の具体例としては、下記炎症性疾患において列挙されるものと同一であってもよい。
【００６０】
前記炎症性疾患は、限定はされないが、髄膜炎、脳炎、鼻炎、副鼻腔炎、咽頭炎、喉頭炎、眼窩蜂窩織炎、喉頭蓋炎、咽頭後壁膿瘍、亜急性甲状腺炎、レミエール症候群、肺炎、気管支炎、結核、感染性心内膜炎、心外膜炎、心筋炎、感染性大動脈炎、敗血症、胆嚢炎、胆管炎、肝炎、肝膿瘍、膵炎、脾膿瘍、胃炎・胃潰瘍、腸炎、虫垂炎、腸腰筋膿瘍、泌尿器、腎盂腎炎、膀胱炎、前立腺炎、膣炎、骨盤内感染症、感染性関節炎、骨髄炎、筋膜炎、筋炎、リンパ節炎等が挙げられる。好ましい前記感染性疾患としては、限定はされないが、脳炎、髄膜炎等が挙げられる。
【００６１】
前記自己免疫性疾患とは、限定はされないが、異物を認識し排除するための役割を持つ免疫系が、自分自身の正常な細胞や組織に対しても過剰に反応し攻撃を加えることで生じる疾患又は状態を意味してよい。前記自己免疫性疾患は、限定はされないが、
ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、慢性胃炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性膵炎、急速進行性糸球体腎炎、自己免疫性視神経症等の臓器特異性自己免疫疾患であるか、あるいは、
関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性筋炎、シェーグレン症候群及び血管炎症候群等の全身性自己免疫疾患であってもよい。
【００６２】
前記脱髄性疾患とは、限定はされないが、神経疾患の一種であって、有髄神経の髄鞘が障害されることで起こる疾患又は状態を意味してよい。前記脱髄性疾患は、限定はされないが、
多発性硬化症、視神経脊髄炎（Ｄｅｖｉｃ症候群）、同心円硬化症（Ｂａｌｏ病）、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、炎症性広汎性硬化症（Ｓｃｈｉｌｄｅｒ病）、進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）等の中枢神経系に生じる疾患又は状態、あるいは
ギラン・バレー症候群、フィッシャー症候群、慢性炎症性脱髄性多発根神経炎等の末梢神経系に生じる疾患又は状態が挙げられる。
【００６３】
前記代謝性疾患とは、限定はされないが、生体内の物質代謝の障害によって起こる疾病又は状態を意味してよい。前記代謝性疾患は、限定はされないが、アミノ酸代謝異常、有機酸代謝異常、糖質代謝異常、ムコ多糖体代謝異常、脂質代謝異常、核酸代謝異常、ビタミン代謝異常等を原因とする疾患又は状態が挙げられる。
【００６４】
前記変性疾患とは、限定はされないが、神経細胞、神経組織等に徐々に崩壊が観察される疾病または状態を意味してよい。前記変性疾患は、限定はされないが、アルツハイマー病、パーキンソン病、ピック病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、脊髄小脳変性症（ＳＣＤ）等が挙げられる。
【００６５】
前記血管障害は、限定はされないが、
脳梗塞、脳出血、クモ膜下出血、慢性硬膜下血腫、急性硬膜外血腫等の脳血管障害、あるいは
動脈硬化を含む、種々の、抹消血管障害等が挙げられる。
【００６６】
前記外傷とは、限定はされないが、外的要因による組織または臓器等の損傷状態を意味してよい。前記外傷は、限定はされないが、物理的要因、放射線要因、化学的要因等によって引き起こされる、例えば、内出血、骨折、内臓破裂等が挙げられる。
【００６７】
別の態様において、本発明の対象内の細胞、組織又は臓器の状態を検出する方法は、技術的に矛盾しない限り、本明細書に記載の、あらゆる態様の任意の一又は複数を適宜組み合わせて実施してよい。その方法は、前記式（Ｉ）で示される化合物若しくはその塩、又は、場合により、前記式（Ｉ）で示される化合物若しくはその塩と金属含有化合物（特には鉄含有化合物）とが、検出有効量で投与された対象内の、所望の細胞、組織又は臓器等の状態を検出するステップを含む方法であってよい。当該検出とは、限定はされないが、核磁気共鳴の原理を利用して検出し得るあらゆる情報に基づいてよく、ＡＬＡ類及びその代謝物の対象内の動態（分布）の検出、局在性等の検出；対象内の細胞、組織又は臓器の臨床的、薬理学的特徴の検出；疾患又は状態を同定する指標となる情報の検出；疾患又は状態の形状又は位置を同定する指標となる情報の検出等が挙げられる。当該検出方法は非侵襲的な検出方法であってよい。限定はされないが、例えば、ＭＲＩ装置を利用して、Ｔ２強調画像における画像コントラストの増大（Ｔ２値の増加、つまり、Ｔ２緩和時間の延長）を指標として、ＡＬＡ類の代謝物（特にはＰｐＩＸ）の蓄積部位を検出（例えば、画像化して検出）すること等が挙げられる。対象内の細胞、組織又は臓器の特定の領域における、Ｔ２強調画像における画像コントラストの増大（Ｔ２値の増加）は、当該領域に、ＡＬＡ類の代謝物（特にはＰｐＩＸ）が蓄積したことを指し示す。当該検出は、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏのいずれの環境下で行ってもよい。例えば、ＡＬＡの投与後に生体から摘出した、細胞、組織又は臓器などに対して、当該検出を行ってもよい。
【００６８】
別の態様において、本発明の対象内の細胞、組織又は臓器の状態を診断する方法は、技術的に矛盾しない限り、本明細書に記載の、あらゆる態様の任意の一又は複数を適宜組み合わせて実施してよい。その方法は、例えば、
（Ａ）前記式（Ｉ）で示される化合物若しくはその塩、又は、場合により、前記式（Ｉ）で示される化合物若しくはその塩と金属含有化合物（特には鉄含有化合物）とを、ヒトなどの対象に、診断有効量で、投与するステップ；
（Ｂ）核磁気共鳴を利用して、前記対象内の細胞、組織又は臓器の状態を検出するステップ；及び
（Ｃ）前記検出結果に基づき、前記対象内の細胞、組織又は臓器の状態を診断するステップ
を含んでよい。
【００６９】
前記ステップ（Ｂ）は、限定はされないが、例えば、ＭＲＩ装置を利用して、Ｔ２強調画像における画像コントラストの増大（Ｔ２緩和時間の延長）を指標として、ＡＬＡ類の代謝物（特にはＰｐＩＸ）の蓄積部位を検出（例えば、画像化して検出）すること等が挙げられる。対象内の細胞、組織又は臓器の特定の領域における、Ｔ２強調画像における画像コントラストの増大は、当該領域に、ＡＬＡ類の代謝物（特にはＰｐＩＸ）が蓄積したことを指し示す。当該検出は、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏのいずれの環境下で行ってもよい。
【００７０】
前記ステップ（Ｃ）における前記診断とは、限定はされないが、核磁気共鳴の原理を利用して検出し得るあらゆる情報に基づいてよく、投与したＡＬＡ類及びその代謝物の対象内の動態（分布）解析、局在性等の解析；対象内の細胞、組織又は臓器の臨床的、薬理学的診断；疾患又は状態の同定又は診断；疾患又は状態の形状又は位置の同定又は診断；治療効果の確認（例えば抗がん剤投与後の治療有効性の確認等）；ＭＲＩを併用した、脳腫瘍の外科手術を行う際の標的脳腫瘍の位置や状態の確認等が挙げられる。前記診断は、例えば、同一対象において、ＡＬＡ類の代謝物（特にはＰｐＩＸ）の蓄積部位と非蓄積部位とを比較してもよいし、異なる対象において、同一の種類の細胞、組織又は臓器等を比較してもよい。
【００７１】
前記「対象内の細胞、組織又は臓器」とは、本発明の核磁気共鳴診断剤を用いて検出、診断等するための、前記対象における、あらゆる標的を意味してよい。
【００７２】
特定の一実施態様において、本発明の対象内の細胞、組織又は臓器の状態を検出する方法は、例えば、
（Ｏ）前記式（Ｉ）で示される化合物若しくはその塩、又は、場合により、前記式（Ｉ）で示される化合物若しくはその塩と鉄含有化合物とを、検出有効量で、対象に投与するステップ；
（Ｐ）ＭＲＩを利用して、前記対象内の細胞、組織又は臓器におけるＴ２値を第１の測定値として検出するステップ；
（Ｑ）前記対象に、評価したい治療剤（例えば、抗がん剤等）を投与するステップ；
（Ｒ）前記式（Ｉ）で示される化合物若しくはその塩、又は、場合により、前記式（Ｉ）で示される化合物若しくはその塩と鉄含有化合物とを、検出有効量で、対象に投与するステップ；及び
（Ｓ）ＭＲＩを利用して、前記対象内の細胞、組織又は臓器におけるＴ２値を第２の測定値として検出するステップ
を含み、前記第２のＴ２測定値が前記第１のＴ２測定値よりも低い場合に、前記治療剤が治療効果を有することが指し示される、対象内の細胞、組織又は臓器の状態を検出する方法であってよい。
かかる場合、前記ステップ（Ｒ）と前記ステップ（Ｓ）との間に、ＭＲＩを利用して、前記対象内の細胞、組織又は臓器におけるＴ２値を第３、第４・・・の測定値として、所望の回数、検出するステップがあってもよく、それぞれのＴ２測定値の変動から、前記治療剤の治療効果が指し示されてもよい。各ステップは、他のステップ及び得られる結果に干渉しないように実施するのが望ましい。また、前記ステップ（Ｏ）の前に、前記ステップ（Ｑ）における治療剤と同一または異なる治療剤を投与してもよい。
また、前記検出結果に基づき、前記対象内の細胞、組織又は臓器の状態を診断するステップを含む、本発明の対象内の細胞、組織又は臓器の状態を診断する方法を実施してもよい。
【００７３】
別の態様において、本発明は、ＭＲＩにおいてコントラストが増大されたＴ２強調画像を得る方法（造影方法）に関する。技術的に矛盾しない限り、本明細書に記載の、あらゆる態様の任意の一又は複数を適宜組み合わせて実施してよい。
【００７４】
別の態様において、本発明は、核磁気共鳴診断用の、前記式（Ｉ）で示される化合物若しくはその塩（の使用）、又は、場合により、前記式（Ｉ）で示される化合物若しくはその塩と金属含有化合物（特には鉄含有化合物）（の使用）に関する。技術的に矛盾しない限り、本明細書に記載の、あらゆる態様の任意の一又は複数を適宜組み合わせて実施してよい。
【００７５】
さらに別の態様において、本発明は、核磁気共鳴診断剤の調製または製造用の、前記式（Ｉ）で示される化合物若しくはその塩、又は、場合により、前記式（Ｉ）で示される化合物若しくはその塩と金属含有化合物（特には鉄含有化合物）の使用に関する。技術的に矛盾しない限り、本明細書に記載の、あらゆる態様の任意の一又は複数を適宜組み合わせて実施してよい。
【００７６】
本発明の核磁気共鳴診断剤は、ＰＥＴと比べて、検出限界度が高く、簡便で汎用なものとなることが期待される。
【００７７】
ＡＬＡ類をＭＲＩ用の造影剤として投与した場合、特には、腫瘍組織等におけるＲＯＩ（関心領域（ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ））において、ＡＬＡ類非投与群と比較して、Ｔ２緩和時間が有意に延長されることを、本発明者らは驚くべきことに発見した。
これまでに報告された造影剤は、
Ｔ１緩和時間及びＴ２緩和時間のいずれをも短縮させる造影剤；
Ｔ１緩和時間又はＴ２緩和時間のいずれか一方のみを短縮させる造影剤；又は
Ｔ１緩和時間のみを延長させる造影剤（ただし実用化はされていない）
のいずれかに分類され、Ｔ２緩和時間を延長させるものはまったく知られていなかった。したがって、ＡＬＡ類は、新しいメカニズムを有する造影剤（すなわち、Ｔ２緩和時間を延長させる、陽性造影剤）として、その用途が大きく期待される。
【００７８】
ガドリニウム錯体を用いて脳腫瘍をＭＲＩ撮像する場合、血液脳関門（ＢＢＢ）の破綻により、ガドリニウムが腫瘍に蓄積することで、腫瘍部分のＴ１強調画像のコントラストを増強することができる。しかしながら、その造影効果は副次的なものに過ぎず、撮像される腫瘍部分は画像コントラスト上で真っ白になり、必ずしも脳腫瘍の血管分布状態を反映するわけではない。
一方、ＡＬＡ類を造影剤として用いると、Ｔ２強調画像において、腫瘍部分はガドリニウム錯体のようには白くなり過ぎず、腫瘍中の血管なども確認可能である。ＡＬＡ類は、Ｔ２強調画像上で、腫瘍等の存在の検出に利用できるのみならず、腫瘍等の形状までをも解析できることが期待される。また、ＡＬＡ類の代謝物は部位特異性（例えば、腫瘍選択性）を有するため、部位特異性を有さない造影剤に比べて、少量で投与することも可能である。
【００７９】
また、腫瘍組織内には、生きている腫瘍部分と壊死した腫瘍部分がしばしば混在していることが知られており、腫瘍における中心部分は、酸素欠乏等により、しばしば壊死していることも知られている。増殖中の生きている腫瘍部分においては、代謝が活発に起きていることから、ＡＬＡ類の代謝物（特にはＰｐＩＸ）が特異的に蓄積し、ＭＲＩ撮像によりＴ２値が増加する（Ｔ２緩和時間が延長する）。一方、壊死したか、壊死しつつある腫瘍部分では、ＡＬＡ類の代謝物（特にはＰｐＩＸ）は（ほとんど）蓄積しないことから、壊死したか、壊死しつつある腫瘍部分においては、Ｔ２値が減少する（Ｔ２緩和時間が短縮する）。これにより、例えば、中心部分が壊死している腫瘍においては、腫瘍の周辺部分においてＴ２値が増加し、腫瘍の中心部分においてＴ２値が減少するであろう。したがって、一実施態様において、ＡＬＡ類は、核磁気共鳴を利用して、腫瘍部分における、腫瘍細胞の生死又は代謝の活動度の検出又は判定等にも利用可能である。
また、ＡＬＡ類に加えて鉄化合物を投与し、ＭＲＩ撮像した場合、腫瘍組織内において、壊死した腫瘍部分では、ＡＬＡ類の代謝物（特にはＰｐＩＸ）が蓄積しないか、ＰｐＩＸは代謝されてヘムが増大すると考えられる。したがって、ＡＬＡ類に加えて鉄化合物を投与した場合、生きている腫瘍部分においてＴ２値の増加（Ｔ２緩和時間の延長）を維持しつつ、壊死した腫瘍部分において、Ｔ２値の減少（Ｔ２緩和時間の短縮）が促進され、生きている腫瘍部分／壊死した腫瘍部分におけるＴ２値のシグナル比の増大の検出が期待できる。
【００８０】
理論に拘束されることを意図しないが、ＡＬＡ類をＭＲＩ造影剤として用いた場合、ＡＬＡ類の代謝物（例えばＰｐＩＸ）が腫瘍等の部位に蓄積し、何らかの理由で、結合水を自由水へと変化させる、言い換えれば、ハミルトニアンの変化が水分子のプロトンに影響を与えて、Ｔ２緩和時間が延長されるものと考えられる。
【００８１】
本明細書において用いられる用語は、特定の実施態様を説明するために用いられるのであり、発明を限定する意図ではない。
【００８２】
本明細書において用いられる「含有する」又は「含む」との用語は、文脈上明らかに異なる理解をすべき場合を除き、記載された事項（部材、ステップ、要素または数字等）が存在することを意図するものであり、それ以外の事項（部材、ステップ、要素または数字等）が存在することを排除しない。前記それ以外の事項（部材、ステップ、要素または数字等）が存在することを排除する場合、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｏｆ）」という用語があてられてよい。用語「含有する」又は「含む」の概念は、用語「からなる」の概念を包含する。
【００８３】
異なる定義が無い限り、ここに用いられるすべての用語（技術用語及び科学用語を含む。）は、本発明が属する技術の当業者によって広く理解されるのと同じ意味を有する。ここに用いられる用語は、異なる定義が明示されていない限り、本明細書及び関連技術分野における意味と整合的な意味を有するものとして解釈されるべきであり、理想化され、又は、過度に形式的な意味において解釈されるべきではない。
【００８４】
本発明の実施態様は模式図を参照しつつ説明される場合があるが、模式図である場合、説明を明確にするために、誇張されて表現されている場合がある。
【００８５】
第１の、第２の、・・・等の用語が種々の要素を表現するために用いられるが、これらの要素はそれらの用語によって限定されるべきではないことが理解される。これらの用語は一つの要素を他の要素と区別するためのみに用いられているのであり、例えば、第１の要素を第２の要素と記し、同様に、第２の要素は第１の要素と記すことは、技術的に矛盾しない限り、本発明の範囲を逸脱することなく可能であることが理解される。
【００８６】
本明細書において、例えば、「炭素数１〜８のアルキル基」と表現されている場合、当業者は、当該表現が、炭素数が１、２、３、４、５、６、７又は８のアルキル基を個別具体的に指すことを理解する。
【００８７】
本明細書において、成分含有量や数値範囲を示すのに用いられるあらゆる数値は、特に明示がない限り、用語「約」の意味を包含するものとして解釈される。例えば、「１０倍」とは、特に明示がない限り、「約１０倍」を意味するものと理解される。
【００８８】
本明細書中に引用される文献は、それらのすべての開示が、本明細書中に援用されているとみなされるべきであって、当業者は、本明細書の文脈に従って、本発明の精神及び範囲を逸脱することなく、それらの先行技術文献における関連する開示内容を、本明細書の一部として援用して理解する。
【００８９】
以下において、本発明を、実施例を参照してより詳細に説明する。しかしながら、本発明はいろいろな態様により具現化することができ、ここに記載される実施例に限定されるものとして解釈されてはならない。
【実施例】
【００９０】
本実施例において用いられる略語の一部を以下に説明する：
ＲＯＩ：関心領域（ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ）
Ｔ１：縦緩和時間
Ｔ２：横緩和時間
Ｔ１ＷＩ：Ｔ１強調画像（Ｔ１  ｗｅｉｇｈｔｅｄ  ｉｍａｇｅ）
Ｔ２ＷＩ：Ｔ２強調画像（Ｔ２  ｗｅｉｇｈｔｅｄ  ｉｍａｇｅ）
２Ｄ−ＲＡＲＥ：２Ｄ−Ｒａｐｉｄ  Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｒｅｌａｘａｔｉｏｎ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ
ＦＡ：フリップアングル（ｆｌｉｐ  ａｎｇｌｅ）
ＴＥ：エコー時間
ＴＲ：繰り返し時間
ＮＥＸ：加算回数（ｎｕｍｂｅｒ  ｏｆ  ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎｓ）
ＥＴＬ：エコートレイン長（ｅｃｈｏ  ｔｒａｉｎ  ｌｅｎｇｔｈ）
ＦＯＶ：有効視野（ｆｉｅｌｄ  ｏｆ  ｖｉｅｗ）【００９１】
脳腫瘍（９Ｌ神経膠肉腫（ｇｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）：Ｆｉｓｈｅｒ３４４ラットグリア細胞由来）を、Ｆｉｓｈｅｒ３４４ラット（オス、８週齢）の背部皮下に注入して定着させ、１３日間成長させた（腫瘍直径約１ｃｍ）。次いで、ラットにＡＬＡ（５−アミノレブリン酸）を１００ｍｇ／ｋｇ投与し、その３時間後に、成長した腫瘍部分を切除して、リン酸緩衝生理食塩水で保存したものを本発明のサンプル群（ＡＬＡ投与群又はＡＬＡ＋ともいう）とした。
また、ＡＬＡを投与しなかった以外はＡＬＡ投与群と同様に実験を行い、成長した腫瘍部分を切除して、リン酸緩衝生理食塩水で保存したものを（ネガティブ）コントロール群（ＡＬＡ−ともいう）とした。【００９２】
これら本発明のＡＬＡ投与群とコントロール群由来の腫瘍部分を、リン酸緩衝生理食塩水と共に、それぞれ、直径約３ｃｍのファルコン容器に入れ、ＭＲＩ装置である、７Ｔ−ＭＲＩ（ＢｉｏＳｐｅｃ７０／２０，Ｂｒｕｋｅｒ  ＢｉｏＳｐｉｎ  ＧｍｂＨ，  Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて、２Ｄ‐ＲＡＲＥにより、以下の条件で撮像を行った（なお、２Ｄ−ＲＡＲＥは２Ｄ、すなわち、１スライスずつ撮像したＲＡＲＥ法を指し、当業者に周知の方法である。）。
ＦＡ＝１８０°
ＴＥ＝１１，３３，５５，７７，９９又は１００ｍｓ
ＴＲ＝５０００，３０００，１５００，８００，４００又は２３７ｍｓ
ＮＥＸ＝１又は５
Ｓｌｉｃｅ  Ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ＝１ｍｍ
Ｓｐａｃｉｎｇ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｓｌｉｃｅｓ＝１．１又は１．５ｍｍ
Ｓｌｉｃｅｓ＝２又は９
Ｓｃａｎ  Ｐｌａｎｅ＝Ａｘｉａｌ
ＥＴＬ＝２又は６
Ｐｉｘｅｌ  Ｂａｎｄｗｉｄｔｈ＝約２６３又は約２６７Ｈｚ／ｐｉｘ
Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ  Ｍａｔｒｉｘ＝１２８＊１７０，１９２ｘ２６０又は１９２ｘ５２０（ＰｘＲ）
Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  Ｍａｔｒｉｘ＝１７０ｘ１７０，又は２６０ｘ２６０
ＦＯＶ＝２６＊２６ｍｍ２又は２７＊２７ｍｍ２
撮像を行う断面は、腫瘍の中心を横切る二面を選んだ。【００９３】
得られた画像データ（ＤＩＣＯＭフォーマット）を用いて、固定したＴＥに対してＴＲを変化させると理論的には信号値が１−ｅｘｐ（−ＴＲ／Ｔ１）となることを利用する、飽和回復法（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｍｅｔｈｏｄ）を用いて、Ｔ１値を測定した（飽和回復法とは、９０°パルスで非平衡状態を作り、平衡磁化に戻る過程を励起パルスを照射して観測する方法である。）。また、固定したＴＲに対してＴＥを変化させると、信号値が理論的に指数関数的に変化する（ｅｘｐ（−ＴＥ／Ｔ２））ことを利用して、Ｔ２値を決定した。【００９４】
これらの手法を用いて、ＡＬＡ投与群及びコントロール群について撮像したそれぞれのＭＲＩ画像の各ピクセル毎に、Ｔ１値、Ｔ２値を決定し、それぞれ、Ｔ１マップ、Ｔ２マップを作成した。ついで、Ｍａｇｎｉｔｕｄｅ画像上で、腫瘍と同定できる部分をＲＯＩとして円形で囲み、かかる円形部分のＲＯＩにおける平均のＴ１値、Ｔ２値とそれらの標準偏差を決定した。【００９５】
図１に、例示として、ＡＬＡ投与群より回収した腫瘍部分について、Ｔ１値／Ｔ２値の測定に使用したＲＯＩの設定の一例を示す。図１Ａ、図１Ｄは、それぞれ、２Ｄ−ＲＡＲＥ法による撮像ＭＲＩ画像に関し、参照画像として示した。図１ＢはＴ１飽和回復に関するパラメトリック画像に関する。図１ＣはＴ２緩和に関するパラメトリック画像に関する。図１Ａ〜図１Ｃは、いずれも、ＡＬＡ投与群より回収した同一腫瘍部分サンプルの断面についての画像を示す。図１Ｄは、コントロール群より回収した腫瘍部分サンプルの断面についての画像を示す。図１Ｂ、図１Ｃにおいて、ＲＯＩを設定した領域は、それぞれ、Ｔ１マップ、Ｔ２マップに相当する。画像信号そのものがＴ１値、Ｔ２値を表すので、これらのマップ上でＴ１値、Ｔ２値の、各ピクセル毎の測定等が可能である。【００９６】
これらの実験を、原則的に同一条件下で、独立に２回行った。また、ＡＬＡ投与群とコントロール群より回収した腫瘍部分サンプルにおいて、測定部位を複数にすることでデータの信頼性を高めた。このようにして測定したＲＯＩにおける平均のＴ１値、Ｔ２値とそれらの標準偏差の結果を表１に示す。
【表１】
0005980953.tif 000006
その結果、まったく予期しなかったことに、ＡＬＡ投与群においては、コントロール群と比較して、Ｔ２値の増加（Ｔ２緩和時間の延長）がもたらされたことが判明した。また、そのシグナル比（ＡＬＡ投与群／コントロール群）は、それぞれ、約１．４倍（１回目）、約１．３倍（２回目）であった。【００９７】
前述したＭＲＩ装置を用いて撮像した画像のうちの一部を、図２及び図３にそれぞれ示す。これらは、それぞれ、以下の条件で撮像を行った。
【表２】
0005980953.tif 000007
【００９８】
図２Ａ（ＡＬＡ投与群、Ｔ２強調画像）と図２Ｃ（コントロール群、Ｔ２強調画像）において、白丸枠内領域どうし（これらは腫瘍部分断面に相当する）を比較すると、ＡＬＡ投与群（図２Ａ）では、コントロール群（図２Ｃ）と比較して、白く（高信号で）撮像された。言い換えれば、ＡＬＡを投与することで、Ｔ２強調画像において、腫瘍領域の信号が上昇した（増大した）。
なお、図２Ａ及び図２Ｃにおいて、白四角枠内領域は、腫瘍細胞を移植したラットに由来する、非腫瘍組織（皮膚組織等）の断面の一部を示す。
図２Ａ（ＡＬＡ投与群、Ｔ２強調画像）において、白く（高信号で）撮像された、前記白丸枠内領域は、図１について説明した、設定したＲＯＩに相当する。一方、これらの領域の近傍には、腫瘍部分断面であるにも関わらず、若干、暗く（低信号で）撮像された円形部分が存在した。かかる画像コントラストの相違は、撮像コイルが画像下にあり、当該円形部分が、感度が下がっている部分に位置したために、信号が低下して、ＡＬＡの投与による変化が認められにくかったものと考えられる。あるいは、理論に拘束されることを意図しないが、ＡＬＡが腫瘍細胞に取り込まれ、ＰｐＩＸ等に代謝活性化された程度の違いを反映したものとも考えられる。例えば、図２Ａ中の黒矢印は、腫瘍部分断面であるにも関わらず、Ｔ２強調画像で暗く（低信号で）撮像された円形部分において、当該腫瘍部分断面の辺縁部が高信号の帯で観察されたことを指し示すものである。このような変化はコントロール群における腫瘍部分断面においては観察されなかった。したがって、ＡＬＡ投与群における黒矢印で示す高信号の帯の領域は、当該円形部分における辺縁部の腫瘍が十分に活動していることを示唆しているものと考えられる。【００９９】
また、図３Ａ及び図３Ｃ（ＡＬＡ投与群、Ｔ２強調画像）と図３Ｂ及び図３Ｄ（コントロール群、Ｔ２強調画像）との比較においても、ＡＬＡ投与群（図３Ａ及び図３Ｃ）では、コントロール群（図３Ｂ及び図３Ｄ）と比較して、腫瘍部分の断面（例えば、白丸枠内領域）が白く（高信号で）撮像された。
【産業上の利用可能性】
【０１００】
本発明の核磁気共鳴診断剤は、医療分野において有利に利用することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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