(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）
【化１】
0005926616.tif 000004
（式中、Ｒ1は炭素数１〜２３の飽和直鎖アルキル基を表し、Ｒ2は水素原子を表し、Ｒ1はＲ2のパラ位に位置する）
で示される化合物を有効成分とするサーチュイン活性化剤（ただしＮＦκＢ阻害剤として皮膚老化抑制に使用する場合を除く）。
【請求項２】
前記式（Ｉ）で示される化合物が、５−ペンチルレゾルシノール、５−ヘプチルレゾルシノール、５−ノニルレゾルシノール、５−ウンデシルレゾルシノール、５−トリデシルレゾルシノール、５−ペンタデシルレゾルシノール、５−ヘプタデシルレゾルシノール、５−ノナデシルレゾルシノール、５−ヘンイコシルレゾルシノール、及び５−トリコシルレゾルシノールから選択される、請求項１記載のサーチュイン活性化剤。
【請求項３】
前記式（Ｉ）で示される化合物を含有する小麦またはライ麦抽出物を含む、請求項１又は２記載のサーチュイン活性化剤。
【請求項４】
下記式（Ｉ）
【化２】
0005926616.tif 000005
（式中、Ｒ1は炭素数１〜２３の飽和直鎖アルキル基を表し、Ｒ2は水素原子を表し、Ｒ1はＲ2のパラ位に位置する）
で示される化合物を有効成分とする老化抑制剤（ただしＮＦκＢ阻害剤として皮膚老化抑制に使用する場合を除く）。
【請求項５】
前記式（Ｉ）で示される化合物が、５−ペンチルレゾルシノール、５−ヘプチルレゾルシノール、５−ノニルレゾルシノール、５−ウンデシルレゾルシノール、５−トリデシルレゾルシノール、５−ペンタデシルレゾルシノール、５−ヘプタデシルレゾルシノール、５−ノナデシルレゾルシノール、５−ヘンイコシルレゾルシノール、及び５−トリコシルレゾルシノールから選択される、請求項４記載の老化抑制剤。
【請求項６】
前記式（Ｉ）で示される化合物を含有する小麦またはライ麦抽出物を含む、請求項４又は５記載の老化抑制剤。
【請求項７】
寿命延長のために使用される、請求項４〜６のいずれか１項記載の老化抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、老化の抑制に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトを含む動物においては、加齢とともに個体の機能低下、例えば、視力または聴力の低下、運動能力の低下、免疫機能の低下、記憶障害、生体内の各臓器の機能低下などが引き起こされる。このような個体の機能低下を老化と称する。老化は、個体の様々な組織や器官で徐々に進行する多面的な現象である。老化が進行すると、個体はその恒常性を維持することができなくなり、最終的には死に到る。
【０００３】
現在、先進諸国では、医療技術の発達によって人々の寿命そのものは顕著に延長しているが、しかしその一方で、高齢者らは、老化に伴う心身の機能低下により生活に支障が生じたり、様々な疾患に罹患したりするなどの問題を抱えている。高齢者らのための福祉や医療の費用の増加は、先進諸国における深刻な問題となっている。したがって、個体の恒常性を維持し、老化に伴う心身の機能低下や疾患を引き起こすことなく寿命を延長させることができれば、福祉や医療費の抑制および個人のQOL（Quality of life）の観点から有用である。
【０００４】
老化を抑制しまたは寿命を延長する効果を有する薬剤として、いくつかの化合物がこれまでに報告されている。例えば、ワインに含まれているポリフェノールの１種であるレスベラトロールが、高カロリー食を摂取したマウスの寿命を延長させることができることが報告されている（非特許文献１）。しかしながら、より効果の高い老化抑制剤の開発が所望されている。
【０００５】
サーチュイン遺伝子は、その活性化により生物の寿命の延長に貢献することが報告されている遺伝子である。サーチュイン遺伝子は、長寿遺伝子または抗老化遺伝子とも呼ばれている。サーチュイン遺伝子は、酵母のＳｉｒ２や哺乳類のＳＩＲＴ１〜７等が知られているが、タンパク質サーチュイン（Ｓｉｒｔｕｉｎ）をコードしている。サーチュインは、ＮＡＤ依存的ヒストン脱アセチル化酵素として働き、ヒストンやｐ５３等の転写因子上のアセチル化タンパク質のアセチル基を脱離する。サーチュイン遺伝子が活性化されると、サーチュイン発現が上昇し、その結果様々な遺伝子の発現が調節されることで、寿命が延長すると考えられている（非特許文献２）。サーチュイン遺伝子の活性化による寿命延長効果は、酵母（非特許文献３、４）、線虫（非特許文献５）、ショウジョウバエ（非特許文献６）、マウス（非特許文献７）で報告されている。
【０００６】
サーチュインの寿命延長効果は、サーチュイン発現の増加またはサーチュイン蛋白の活性化によってもたらされる、種々の作用によるものと考えられている。そのような作用としては、加齢による生理学的な機能低下を抑制する作用、（非特許文献８）、自己免疫による障害を回復する作用（非特許文献９）、テロメア遺伝子の不具合に起因する細胞増殖の不具合を回復する作用、神経変性に起因する障害（例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症）を回復する作用、脳における神経栄養因子遺伝子の機能低下を回復し、学習、記憶能力を改善する作用（非特許文献１０）等が考えられる。
【０００７】
サーチュインを活性化または老化を抑制する因子としては、カロリー制限やレスベラトロールが以前より知られている（非特許文献２、４等）。さらに最近、レスベラトロールよりも強いサーチュイン活性化作用を有する化合物として、グネツム科植物メリンジョの実もしくは種子の抽出物またはグネチンＣ（特許文献１）、およびε−ビニフェリン（特許文献２）が開示された。
【０００８】
アルキルレゾシノールは、小麦やライ麦などの多くの植物や菌類に含まれている化合物である。アルキルレゾシノールは、腸内炭水化物加水分解酵素の阻害剤（特許文献３）として知られ、またライ麦の栄養阻害効果への関与が示唆されている（非特許文献１１）。しかし、アルキルレゾシノールがサーチュイン蛋白を直接活性化することや老化抑制に貢献することはこれまで知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２０１１−０７９７９７号公報
【特許文献２】特開２０１１−０５７５８０号公報
【特許文献３】特開平５−１７０６４５号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Baur et al, Nature, 444:337-342 (2006)
【非特許文献２】Tissenbaum and Guarente, Dev Cell, 2:9-19 (2002)
【非特許文献３】Kaeberlein et al, Genes Dev, 13:2570-2580 (1999)
【非特許文献４】Howitz et al, Nature 425：191-196 (2003)
【非特許文献５】Tissenbaum and Guarente, Nature, 410:227-230 (2001)
【非特許文献６】Rogina and Helfand, Proc Natl Acad Sci U S A, 101:15998-16003 (2004)
【非特許文献７】Kanfi et al, Nature 483:218-221 (2012)
【非特許文献８】Colak Y et al, Med Sci Monit. May;17(5):HY5-9 (2011)
【非特許文献９】Kong S et al, Immunol Cell Biol. Jan;90(1):6-13 (2012)
【非特許文献１０】Carafa V et al, Front Pharmacol. 3:4. Epub (2012)
【非特許文献１１】Ross et al, Nutrition Review, 62:81-95 (2004)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、生体の恒常性維持に有効であり、個体の老化を防止して寿命を延長することができ、且つ長期間継続的に摂取しても安全な素材の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、特定の構造を有するアルキルレゾルシノール類が、サーチュイン活性化作用および老化抑制作用を有し、個体の寿命を延長させる効果をもたらすことを見出し、本発明を完成した。
【００１３】
すなわち、本発明は、下記式（Ｉ）：
【化１】
0005926616.tif 000002
（式中、Ｒ1は飽和または不飽和の直鎖または分岐鎖アルキル基を表し、Ｒ2は水素原子またはメチル基を表す）
で表される化合物を有効成分とするサーチュイン活性化剤を提供する。
また、本発明は、上記式（Ｉ）で表される化合物を有効成分とする老化抑制剤を提供する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明のサーチュイン活性化剤および老化抑制剤によれば、生体の機能や恒常性を維持したまま、寿命を延長させることができる。また当該本発明の剤によれば、個体の老化を抑制し、その寿命を延長させることができる。さらに、当該本発明の剤の有効成分であるアルキルレゾルシノールは、穀物に含まれる成分であるため、連続的に服用しても有害な副作用がなく、安全性が高い。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】式（Ｉ）化合物によるサーチュイン活性化。
【図２】式（Ｉ）化合物によるサーチュイン活性化。
【図３】試験例３で計測された雄ショウジョウバエの生存曲線。
【図４】試験例３で計測された雌ショウジョウバエの生存曲線。
【図５】試験例３で計測された雄ショウジョウバエの平均寿命。エラーバー＝標準偏差
【図６】試験例３で計測された雌ショウジョウバエの平均寿命。エラーバー＝標準偏差
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明のサーチュイン活性化剤または老化抑制剤は、下記式（Ｉ）で表されるアルキルレゾルシノール化合物（本明細書において以下、式（Ｉ）化合物とも称する）を有効成分とする。
【００１７】
【化２】
0005926616.tif 000003
【００１８】
式（Ｉ）中、Ｒ1は、飽和または不飽和の直鎖または分岐鎖アルキル基を表す。Ｒ1で表されるアルキル基の炭素数は、制限されるものではないが、好ましくは１〜２３、より好ましくは３〜２３、さらに好ましくは５〜２１、なお好ましくは５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９および２１である。
【００１９】
好ましくは、Ｒ1は、飽和または不飽和の直鎖アルキル基であり、より好ましくは飽和直鎖アルキル基である。Ｒ1で表される飽和直鎖アルキル基の例としては、メチル、ｎ−プロピル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘプチル、ｎ−ノニル、ｎ−ウンデシル、ｎ−トリデシル、ｎ−ペンタデシル、ｎ−ヘプタデシル、ｎ−ノナデシル、ｎ−ヘンイコシル、ｎ−トリコシルなどが挙げられる。
Ｒ1で表される不飽和直鎖アルキル基の不飽和結合の位置や数は、特に制限されるものではない。当該不飽和直鎖アルキル基の例としては、上述した飽和直鎖アルキル基の炭素鎖上の任意の位置に不飽和結合を有するアルキル基が挙げられる。
Ｒ1で表される飽和または不飽和の分岐鎖アルキル基の分岐の位置や数、および不飽和結合の位置や数は、特に制限されるものではない。
【００２０】
式（Ｉ）中、Ｒ2は、水素原子またはメチル基を表し、好ましくは水素原子である。
【００２１】
式（Ｉ）中、好ましくはＲ1はＲ2のパラ位に位置する。
【００２２】
上記式（Ｉ）化合物の好ましい例としては、以下が挙げられる。
５−ペンチルレゾルシノール［オリベトールまたは１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンチルベンゼン（Ｃ５：０）］
５−ヘプチルレゾルシノール［または１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプチルベンゼン（Ｃ７：０）］
５−ノニルレゾルシノール［または１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ノニルベンゼン（Ｃ９：０）］
５−ウンデシルレゾルシノール［または１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ウンデシルベンゼン（Ｃ１１：０）］
５−トリデシルレゾルシノール［または１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−トリデシルベンゼン（Ｃ１３：０）］
５−ペンタデシルレゾルシノール［または１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタデシルベンゼン（Ｃ１５：０）］
５−ヘプタデシルレゾルシノール［または１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタデシルベンゼン（Ｃ１７：０）］
５−ノナデシルレゾルシノール［または１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ノナデシルベンゼン（Ｃ１９：０）］
５−ヘンイコシルレゾルシノール［または１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘンイコシルベンゼン（Ｃ２１：０）］
５−トリコシルレゾルシノール［または１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−トリコシルベンゼン（Ｃ２３：０）］
【００２３】
上記式（Ｉ）化合物は、市販品を入手することができ、また、植物から常法により抽出することができる。市販品は、ＲｅｓｅａＣｈｅｍ  ＧｍｂＨ、ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨなどから購入することができる。さらに上記式（Ｉ）の化合物は、国際公開ＷＯ２００７／７７７７０号パンフレットなどを参考にして、化学合成法により製造することもできる。
【００２４】
式（Ｉ）化合物を含有する植物としては、ウルシ科、イチョウ科、ヤマモガシ科、ヤブコウジ科、サクラソウ科、ニクズク科、アヤメ科、サトイモ科、マメ科、イネ科などに属する植物、およびキク科のヨモギが挙げられる。これらの植物の中でも、イネ科植物は、可食部にアルキルレゾルシノールを含有しているため、式（Ｉ）化合物の原料として好ましい。イネ科植物の中でも、小麦およびライ麦がより好ましい。さらに、小麦およびライ麦の糟糠類および全穀粒は、式（Ｉ）化合物を豊富に含有しているため（全粒質量の０．０１５〜０．３質量％程度）、式（Ｉ）化合物の原料のさらに好適な例として挙げられる。イネ科植物の発酵物もまた、式（Ｉ）化合物の原料の好ましい例として挙げられる。
【００２５】
上記植物からの式（Ｉ）化合物の抽出方法としては、上記植物またはその発酵物を常圧または加圧下で室温または加温した抽出溶媒中に必要に応じて攪拌しながら浸漬させる方法、還流抽出法、などが挙げられる。上記植物は、抽出溶媒に添加される前に、必要に応じて切断、粉砕、圧搾、乾燥、またはそれらの組み合わせにかけられてもよい。
【００２６】
上記抽出溶媒としては、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノールおよびｎ−ブタノールなどの低級アルコール、および１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなどの多価アルコールなどの室温で液体であるアルコール類；ジエチルエーテルおよびプロピルエーテルなどのエーテル類；酢酸ブチルおよび酢酸エチルなどのエステル類；アセトンおよびエチルメチルケトンなどのケトン類；ヘキサン；ならびにクロロホルム、などの有機溶媒が挙げられる。これらの溶媒は単独で用いてもよいし、２種以上を組み合わせて用いてもよい。上記の溶媒のうち、操作性や環境に対する影響などの点から、室温で液体であるアルコール類、例えば、炭素原子数１〜４の低級アルコールを用いるのが好ましく、残留溶媒による安全性の観点からはエタノールを用いるのがより好ましい。
【００２７】
上記有機溶媒には、さらに水性成分が含まれている含水有機溶媒も包含され得る。抽出効率を高く保持する観点からは、上記含水有機溶媒中の水性成分の含有量は、通常５０体積％以下、好ましくは３０体積％以下、より好ましくは２０体積％以下であるのが望ましい。含水有機溶媒としては、好ましくは上記のような室温で液体であるアルコール類にさらに水性成分が含まれている含水アルコール、より好ましくは含水エタノールが挙げられる。
【００２８】
抽出のための温度および時間は、使用する抽出溶媒の種類や抽出条件などによって適宜設定することができるが、抽出温度は２〜１００℃、抽出時間は３０分〜６０時間程度とするのが好ましい。抽出溶媒の量は、上記イネ科植物またはその発酵物１００質量部に対し、好ましくは２００〜２０００質量部程度にすればよい。
【００２９】
次いで、抽出液および残渣を含む混合物を、必要に応じて濾過または遠心分離などに供し、残渣である固形成分を除去して、式（Ｉ）化合物を含む抽出物を得る。なお、除去した固形成分を再度、抽出溶媒を用いた抽出操作に供することもでき、さらにこの操作を何回か繰り返してもよい。また得られた抽出物を、さらに液体クロマトグラフィー等により精製することが好ましい。このようにして得られた式（Ｉ）化合物を含む抽出物は、そのまま、または必要に応じて、さらに濃縮、凍結乾燥、熱風乾燥、粉砕、粉末化、分級、希釈、加水混合などの処理を施した後、本発明に使用することができる。
【００３０】
式（Ｉ）化合物は、後述の実施例に示すように、サーチュイン蛋白ＳＩＲＴ１を活性化する作用を有し、また動物個体の寿命を延長する作用を有する。したがって、式（Ｉ）化合物は、サーチュイン活性化、寿命の延長、老化抑制、加齢とともに生じ得る疾患や状態の予防もしくは改善、等のために使用することができる。
【００３１】
従って、本発明は、式（Ｉ）化合物を有効成分とするサーチュイン活性化剤を提供する。また本発明は、式（Ｉ）化合物を有効成分とする老化抑制剤を提供する。また本発明は、式（Ｉ）化合物を有効成分とする寿命延長剤を提供する。また本発明は、式（Ｉ）化合物を有効成分とする、加齢とともに生じ得る疾患や状態の予防もしくは改善剤を提供する。一実施形態において、上記の剤は、式（Ｉ）化合物から本質的に構成されていてもよい。別の実施形態において、上記の剤は、式（Ｉ）で示される化合物を含有する植物抽出物、好ましくは小麦またはライ麦抽出物を含む。
【００３２】
本明細書において、「老化」としては、加齢とともに生じる動物個体の生理機能低下、例えば、視力または聴力の低下、運動能力の低下、恒常性維持機能の低下、免疫機能の低下、記憶障害等の脳機能の低下、生体内の各臓器の機能低下などが挙げられる。本明細書において、「老化抑制」とは、上記加齢とともに生じる動物個体の生理機能低下の抑制、当該生理機能低下に起因する疾患や障害の抑制、および老化の進行による個体の死の抑制（すなわち、寿命の延長）を含む概念である。
また本明細書において「加齢とともに生じ得る疾患や状態」としては、上述の加齢とともに生じる動物個体の生理機能低下に起因する種々の疾患や状態、例えば、自己免疫による障害、テロメア遺伝子の不具合に起因する細胞増殖の不具合、神経変性に起因する障害（例えば、パーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症）、脳における神経栄養因子遺伝子の機能低下、学習、記憶能力の低下等が挙げられる。
【００３３】
式（Ｉ）化合物は、食経験が豊富な小麦やライムギに含まれている成分であることから、長期間継続的摂取しても生体に有害な作用をもたらす懸念が少ない、安全な化合物である。したがって、式（Ｉ）化合物は、健常者や成人だけでなく、本発明を特に必要とする高齢者または病弱者にも、安全且つ継続的に接種され得る。したがって、式（Ｉ）化合物は、ヒトまたは動物用の医薬、飲食品、飼料等として、あるいはそれらを製造するために有用である。
【００３４】
よって、本発明はまた、式（Ｉ）化合物を有効成分として含有する医薬、飲食品、および飼料を提供する。当該医薬、飲食品、および飼料は、サーチュイン活性化、寿命の延長、老化抑制、加齢とともに生じ得る疾患や状態の予防もしくは改善、等のために使用することができる。
【００３５】
上記医薬は、式（Ｉ）化合物を有効成分として含有するサーチュイン活性化薬、寿命延長薬、老化抑制薬、加齢とともに生じ得る疾患や状態の予防もしくは改善薬、等であり得る。上記医薬の剤型としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、ドライシロップ剤、液剤、懸濁剤等の経口剤、および吸入剤、経皮製剤、坐剤等の経腸製剤、点滴剤、注射剤等の非経口剤が挙げられる。上記液剤、懸濁剤等の液体製剤は、服用直前に水または他の適当な媒体に溶解または懸濁する形であってもよく、上記錠剤および顆粒剤は周知の方法でその表面をコーティングされていてもよい。また上記注射剤は、必要に応じて溶解補助剤を含む式（Ｉ）化合物の滅菌蒸留水または滅菌生理食塩水の溶液であり得る。
【００３６】
上記医薬は、有効成分である式（Ｉ）化合物に加えて、必要に応じて薬学的に許容される種々の担体、例えば賦形剤、安定化剤、その他の添加剤等を含有していてもよく、あるいは、さらに他の薬効成分、例えば各種ビタミン類、ミネラル類、生薬等を含有していてもよい。当該医薬は、式（Ｉ）化合物またそれを含有する植物抽出物に、上述の担体および他の薬効成分を配合し、常法に従って製造することができる。
【００３７】
上記飲食品または飼料は、式（Ｉ）化合物を有効成分として含有し、且つサーチュイン活性化、寿命の延長、老化抑制、加齢とともに生じ得る疾患や状態の予防もしくは改善、等の効果を企図して、その旨を表示した健康食品、機能性飲食品、特定保健用飲食品、病者用飲食品、家畜、競走馬、鑑賞動物等のための飼料、ペットフード等であり得る。
【００３８】
上記飲食品および飼料の形態は特に制限されず、式（Ｉ）化合物を配合できる全ての形態が含まれる。例えば当該形態としては、固形、半固形または液状であり得、あるいは、錠剤、チュアブル錠、粉剤、カプセル、顆粒、ドリンク、ゲル、シロップ、経管経腸栄養用流動食等の各種形態が挙げられる。
【００３９】
具体的な飲食品の形態の例としては、緑茶、ウーロン茶や紅茶等の茶飲料、コーヒー飲料、清涼飲料、ゼリー飲料、スポーツ飲料、乳飲料、炭酸飲料、果汁飲料、乳酸菌飲料、発酵乳飲料、粉末飲料、ココア飲料、アルコール飲料、精製水等の飲料、バター、ジャム、ふりかけ、マーガリン等のスプレッド類、マヨネーズ、ショートニング、クリーム、ドレッシング類、パン類、米飯類、麺類、パスタ、味噌汁、豆腐、牛乳、ヨーグルト、スープまたはソース類、菓子（例えばビスケットやクッキー類、チョコレート、キャンディ、ケーキ、アイスクリーム、チューインガム、タブレット）等が挙げられる。
上記飼料は上記飲食品とほぼ同様の組成や形態で利用できることから、本明細書における飲食品に関する記載は、飼料についても同様に当てはめることが出来る。
【００４０】
上記飲食品および飼料は、式（Ｉ）化合物またそれを含有する植物抽出物に飲食品や飼料の製造に用いられる他の飲食品素材、各種栄養素、各種ビタミン、ミネラル、アミノ酸、各種油脂、種々の添加剤（たとえば呈味成分、甘味料、有機酸等の酸味料、界面活性剤、ｐＨ調整剤、安定剤、酸化防止剤、色素、フレーバー）等を配合して、常法に従って製造することができる。あるいは、通常食されている飲食品または飼料に式（Ｉ）化合物またそれを含有する植物抽出物を配合することにより、本発明に係る飲食品または飼料を製造することができる。
【００４１】
上記医薬、飲食品または飼料における式（Ｉ）化合物の含有量は、所望のサーチュイン活性化効果、寿命延長効果、老化抑制効果等の効果が得られる量であればよく、医薬の剤型や食品の形態、投与または摂取する個体の種、症状、年齢、性別などに応じて適宜変更され得る。ヒトを対象とする場合、通常、式（Ｉ）化合物の好ましい投与量は、成人１人１日当たり０．０１〜１０ｇであり得る。当該１日投与量は、１回で投与されてもよいが、数回に分けて投与されてもよい。上記医薬の剤型もしくは投与レジメン、または上記飲食品もしくは飼料の形態は、当該投与量を適切に管理できるような形であることが望ましい。
【実施例】
【００４２】
以下の実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００４３】
製造例１  式（Ｉ）化合物を含有するライ麦抽出物の製造
ライ麦外皮２ｇを、マルチビーズショッカー（多検体細胞破砕機／ＭＢ３０１（Ｓ）：安井器械株式会社製）で粉砕した後、５倍量のエタノールを添加して、１５０ｒｐｍ、室温の条件で２時間振とう抽出し、次いで、３５００ｒｐｍ、室温の条件で１５分間遠心分離し、上清を遠心濃縮機で乾燥して、ライ麦外皮エタノール抽出物を得た。この抽出物を高速液体クロマトグラフィーを用いて精製し、分析したところ、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンタデシルベンゼン（Ｃ１５：０）、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタデシルベンゼン（Ｃ１７：０）、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ノナデシルベンゼン（Ｃ１９：０）、および１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘンイコシルベンゼン（Ｃ２１：０）を合計で約８０％含有していた。
【００４４】
試験例１  式（Ｉ）化合物によるサーチュイン活性化−１
試験化合物として、１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ヘプタデシルベンゼン（Ｃ１７：０）（ＲｅｓｅａＣｈｅｍ  ＧｍｂＨ社より購入）を使用した。サーチュインＳＩＲＴ１の活性化を、ＳＩＲＴ１／Ｓｉｒ２  Ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（サイクレックス社）を使用して以下に示す方法により測定した。エタノールにより各濃度に調整した試験化合物の溶液に、終濃度で５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．８）、０．５ｍＭのＤＴＴ、０．２５ｍＡＵ／ｍｌのＬｙｓｙｌｅｎｄｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ、１μＭのＴｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎ  Ａ、２００μＭのＮＡＤ、２０μＭの蛍光基質ペプチド、および０．０２Ｕ／ｍＬのＳＩＲＴ１酵素を添加混合した。対照として、試験化合物溶液の代わりにエタノールのみを添加した。当該混合物の蛍光を、２５℃にて６０分間、蛍光プレートリーダーにより、励起波長３５０ｎｍ、発光波長４５０ｎｍにてカイネティックス測定した。
【００４５】
試験化合物（終濃度１０μＭ）によるＳＩＲＴ１活性化のカイネティックスカーブを図１に示す。対照と比べて、試験化合物による蛍光強度の変化の初速は増加していることから、試験化合物がＳＩＲＴ１酵素活性を直接的に活性化したことが確認された。
【００４６】
試験例２  式（Ｉ）化合物によるサーチュイン活性化−２
試験化合物として、オリベトール［１，３−ジヒドロキシ−５−ｎ−ペンチルベンゼン（Ｃ５：０）］（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨより購入）を使用し、試験例１と同様の手順で蛍光のカイネティックス測定を行い、ＳＩＲＴ１酵素活性を評価した。試験化合物の最終濃度は１、１０および１００μＭとした。反応時間１０００秒における、蛍光強度の対照（エタノール）に対する増加率を図２に示す。試験化合物により濃度依存的にＳＩＲＴ１酵素活性が増強されたことが示された。
【００４７】
試験例３  式（Ｉ）化合物によるショウジョウバエの生存期間延長
（ショウジョウバエの準備）
被験対象として、多くのショウジョウバエ研究で野生型相当として扱われる系統であり、Magwire et al, PLoS Genet, 6:e1001037, 2010 他に記載されている系統であるDrosophila melanogaster Ｗ１１１８を、ショウジョウバエ遺伝資源センター（京都市右京区嵯峨一本木町1、京都工芸繊維大学内）より入手して使用した。ショウジョウバエの継代飼育には、通常培地（１０％Ｄ−グルコース、７％コーンミール、４％エビオス、０．５５％寒天、および防腐剤として０．３％プロピオン酸、０．３５％ｐ−ｂｕｔｙｌ  ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏａｔｅを含む）を用いた。
培地を敷いた飼育容器（バイアル瓶：直径３ｃｍ×高さ９ｃｍ）内にショウジョウバエの成虫を放ち、室温２５℃、１２時間明暗、湿度５０％に保たれた部屋で飼育を行った。成虫は培地上に産卵し、孵化した幼虫はバイアル瓶の側面に這い上がり蛹になる。蛹から羽化した成虫を新たな飼育容器に移し継代を行った。なお、４〜５日毎に培地の交換を行った。
（試験培地）
上記通常培地に製造例１で調製したライ麦外皮エタノール抽出物の精製物を、式（Ｉ）化合物（Ｃ１５：０、Ｃ１７：０、Ｃ１９：０、Ｃ２１：０の混合物）として０．０７質量％になるよう添加した培地を、試験培地とした。陽性対照として、上記通常培地に１００μＭレスベラトロールを添加し調製した通常培地を、陰性対照として、化合物非添加の通常培地を使用した。
（生存期間測定）
本試験例におけるショウジョウバエ生存期間測定の手順は、ショウジョウバエ成虫個体の生存期間を測定するための一般的な方法（例えば、Muffat et al, Proc Natl Acad Sci U S A, 105:7088-7093, 2008などに記載の方法）に準拠した。各培地を敷いたバイアル瓶に、羽化直後のショウジョウバエ成虫を１バイアルにつき雄２０匹または雌２０匹を入れて飼育した。バイアル瓶は雌雄各２４バイアル作製した。ハエを週に２回新鮮な培地に移し、死亡したハエの数を培地交換のときに計数した。雄および雌のそれぞれについて全個体の生存日数の平均値を求め、平均寿命とした。
【００４８】
図３に雄ショウジョウバエの生存曲線を、図４に雌ショウジョウバエの生存曲線を示す。雄雌のショウジョウバエともに、陰性対照に比べて、式（Ｉ）化合物を含む試験培地群では生存期間が延長した。試験培地群の生存期間は、雄では、陽性対照（レスベラトロール）群と同程度またはそれ以上に延長されており、雌では、陽性対照群での生存期間延長が顕著ではなかったが、陽性対照群と比べて大幅に延長されていた。雄および雌ショウジョウバエの平均寿命を、それぞれ図５および図６に示す。試験培地群の平均寿命は、陰性対照に比べて１０日程度延長した。雄では、試験培地群、陽性対照群共に、有意（P≦0.005）に平均寿命を延長した。雌では、試験培地群が陰性対照群に比べて有意（P≦0.005）に平均寿命を延長した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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