(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＣＤ２７に結合する、単離されたモノクローナル抗体であって、配列番号３８を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、配列番号３９を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２、配列番号４０を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３、配列番号４４を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、配列番号４５を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２、および配列番号４６を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３を含む、単離されたモノクローナル抗体。
【請求項２】
抗体が、
(i)それぞれ、配列番号３７および４３に示されるアミノ酸配列と少なくとも95%同一であるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域および軽鎖可変領域；または
(ii)  それぞれ、配列番号３５および４１に示される核酸配列と少なくとも95%同一である核酸配列によってコードされる、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、請求項１に記載の単離されたモノクローナル抗体。
【請求項３】
抗体が、それぞれ配列番号３７および４３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、請求項１または２に記載の単離されたモノクローナル抗体。
【請求項４】
抗体が、それぞれ、配列番号３５および４１に示される核酸配列によってコードされる重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、請求項１または２に記載の単離されたモノクローナル抗体。
【請求項５】
抗体が、
(i)  IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD、およびIgE抗体；ならびに／または
(ii)  ヒト抗体、ヒト化抗体、もしくはキメラ抗体
から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体を含む二重特異性分子であって、該抗体とは異なる結合特異性を有する第２の分子と連結している前記二重特異性分子。
【請求項７】
第2の分子が、Fc受容体、NK受容体、またはCD3、CD40、およびCD25から選択されるT細胞受容体に結合する、請求項６に記載の二重特異性分子。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む、発現ベクター。
【請求項９】
請求項８に記載の発現ベクターで形質転換された細胞。
【請求項１０】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体または請求項６もしくは７に記載の二重特異性分子、および担体を含む、組成物。
【請求項１１】
さらに以下を含む、請求項１０に記載の組成物：
(i)  アジュバントおよび／もしくは免疫賦活剤；または
(ii)  免疫抑制剤、別の抗体、および／もしくは抗原。
【請求項１２】
免疫賦活剤が、CD40リガンド、FLT3リガンド、サイトカイン、コロニー刺激因子、抗CTLA-4抗体、LPS（エンドトキシン）、ssRNA、dsRNA、カルメット−ゲラン桿菌（BCG）、塩酸レバミソール、静注用免疫グロブリン、およびトール様受容体（TLR）作動薬から選択される、請求項１１記載の組成物。
【請求項１３】
トール様受容体（TLR）作動薬が、TLR3作動薬、TLR4作動薬、TLR5作動薬、TLR7作動薬、TLR8作動薬、およびTLR9作動薬から選択される、請求項１２記載の組成物。
【請求項１４】
抗原が、病原体の成分、アレルゲン、自己抗原、または腫瘍抗原を含む、請求項１１記載の組成物。
【請求項１５】
腫瘍抗原が、βhCG、gp100またはPmel17、HER2/neu、WT1、メソテリン、CEA、gp100、MART1、TRP-2、melan-A、NY-ESO-1、NY-BR-1、NY-CO-58、MN（gp250）、イディオタイプ、MAGE-1、MAGE-3、MAGE-A3、チロシナーゼ、テロメラーゼ、SSX2抗原、MUC-1抗原、および生殖細胞由来の腫瘍抗原から選択される、請求項１４記載の組成物。
【請求項１６】
白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、真性多血症リンパ腫（Ｐｏｌｙｃｙｔｈｅｍｉａ  ｖｅｒａ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ）、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、固形腫瘍、肉腫および癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸肉腫（ｃｏｌｏｎ  ｓａｒｃｏｍａ）、結腸直腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起細胞腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、上咽頭癌、食道癌、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系（ＣＮＳ）癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮体癌、食道癌、眼癌、頭頸部癌、胃癌、上皮内腫瘍、腎臓癌、喉頭癌、肝癌、肺癌（小細胞、大細胞）、黒色腫、神経芽細胞腫、口腔癌、口唇癌、舌癌、口癌、咽頭癌、卵巣癌、膵癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、ならびに泌尿器系の癌から成る群から選択される癌を治療する方法において使用するための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１７】
生物学的試料中のCD27の存在または非存在を検出するための方法であって、
(a)  生物学的試料と、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体とを接触させる段階であって、該抗体は、検出可能な物質で標識されている、段階；および
(b)  CD27に結合した抗体を検出して、該生物学的試料中のCD27の存在または非存在を検出する段階
を含む、方法。
【請求項１８】
白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、真性多血症リンパ腫(Polycythemia vera Lymphoma)、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、固形腫瘍、肉腫および癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫(endotheliosarcoma)、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫(lymphangioendotheliosarcoma)、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸肉腫(colon sarcoma)、結腸直腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起細胞腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、上咽頭癌、食道癌、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系(CNS)癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮体癌、食道癌、眼癌、頭頸部癌、胃癌、上皮内腫瘍、腎臓癌、喉頭癌、肝癌、肺癌（小細胞、大細胞）、黒色腫、神経芽細胞腫、口腔癌、口唇癌、舌癌、口癌、咽頭癌、卵巣癌、膵癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、ならびに泌尿器系の癌から成る群から選択される癌を治療する方法において使用するための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体を含む薬学的組成物。
【請求項１９】
白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、真性多血症リンパ腫(Polycythemia vera Lymphoma)、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、固形腫瘍、肉腫および癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫(endotheliosarcoma)、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫(lymphangioendotheliosarcoma)、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸肉腫(colon sarcoma)、結腸直腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起細胞腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、上咽頭癌、食道癌、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系(CNS)癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮体癌、食道癌、眼癌、頭頸部癌、胃癌、上皮内腫瘍、腎臓癌、喉頭癌、肝癌、肺癌（小細胞、大細胞）、黒色腫、神経芽細胞腫、口腔癌、口唇癌、舌癌、口癌、咽頭癌、卵巣癌、膵癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、ならびに泌尿器系の癌から成る群から選択される癌を治療する方法において使用するための薬学的組成物を製造するための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
発明の背景
Ｔ細胞と抗原提示細胞との間の相互作用は、免疫応答の発生を促進する種々のアクセサリ分子を伴う。１つのそのような分子は、ＣＤ２７であり、これは、ＣＤ７０と結合し、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）スーパーファミリーに属する（Ｒａｎｈｅｉｍ  ＥＡ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１９９５  Ｊｕｎｅ  １５；８５（１２）：３５５６−６５（非特許文献１））。ＣＤ２７は、一般的に、グリコシル化Ｉ型膜貫通タンパク質として存在し、しばしば、２つの単量体を連結するジスルフィド架橋を伴うホモ二量体の形態である。ジスルフィド架橋は、膜に近い細胞外ドメインの中にある（Ｃａｍｅｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：３１６５−６９（１９９１）（非特許文献２））。ＣＤ２７は、可溶形態で発現する場合もある（例えば、ｖａｎ  Ｏｅｒｓ  ＭＨ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１９９３  Ｄｅｃ  １；８２（１１）：３４３０−６（非特許文献３）、およびＬｏｅｎｅｎ  ＷＡ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：４４７，１９９２（非特許文献４）を参照されたい）。Ｔ細胞上でＣＤ２７抗原を架橋させることで、Ｔ細胞受容体架橋と協調してＴ細胞の増殖および細胞免疫活性化を誘発することができる、共刺激シグナルを提供する。
【０００２】
ＣＤ２７は、成熟胸腺細胞、大部分のＣＤ４＋およびＣＤ８＋末梢血Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、およびＢ細胞上で発現する（Ｋｏｂａｔａ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ  Ｓ  Ａ．１９９５  Ｎｏｖ  ２１；９２（２４）：１１２４９−５３（非特許文献５））。ＣＤ２７はまた、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫およびＢ細胞慢性リンパ球性白血病に対して高発現する（Ｒａｎｈｅｉｍ  ＥＡ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１９９５  Ｊｕｎ  １５；８５（１２）：３５５６−６５（非特許文献１））。加えて、可溶性ＣＤ２７タンパク質の増加したレベルは、寄生虫感染、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染、サルコイドーシス、多発性硬化症、およびＢ細胞慢性リンパ球性白血病における血清または疾患活性の部位で同定されている（Ｌｏｅｎｅｎ  ＷＡ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：４４７，１９９２（非特許文献４））。
【０００３】
ＣＤ２７に対する作動性モノクローナル抗体は、近年、Ｔ細胞応答を促進することを示しており、抗癌治療法として有望である（例えば、Ｓａｋａｎｉｓｈｉ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１０  Ｆｅｂ  １８（非特許文献６）、および国際公開公報第２００８／０５１４２４号（特許文献１）を参照されたい）。しかしながら、これまでに得られた結果は、免疫治療のための有用な目標としてＣＤ２７を確立しているが、抗ＣＤ２７モノクローナル抗体のどの特定の特徴が治療目的に特に好都合であるのか知られていない。よって、当技術分野では、抗ＣＤ２７抗体を治療上有効なものにする特定の機能的性質のさらなる洞察、ならびに疾患の治療および／または予防にさらに有効である、ＣＤ２７に対する改善された治療抗体の必要性がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開公報第２００８／０５１４２４号
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｒａｎｈｅｉｍ  ＥＡ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１９９５  Ｊｕｎｅ  １５；８５（１２）：３５５６−６５
【非特許文献２】Ｃａｍｅｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：３１６５−６９（１９９１）
【非特許文献３】ｖａｎ  Ｏｅｒｓ  ＭＨ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１９９３  Ｄｅｃ  １；８２（１１）：３４３０−６（非特許文献３）
【非特許文献４】Ｌｏｅｎｅｎ  ＷＡ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：４４７，１９９２
【非特許文献５】Ｋｏｂａｔａ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ  Ｓ  Ａ．１９９５  Ｎｏｖ  ２１；９２（２４）：１１２４９−５３
【非特許文献６】Ｓａｋａｎｉｓｈｉ  Ｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１０  Ｆｅｂ  １８
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、とりわけ、有利で望ましい治療効果と結び付けることができる特定の機能的性質を有する、単離された抗ＣＤ２７抗体を提供する。具体的には、（例えば、抗原特異的Ｔ細胞応答の誘発または増強によって明らかにされるように）Ｔ細胞媒介性免疫応答を上方制御することが可能であり、特に、ワクチン療法との組み合わせに好適である、抗ＣＤ２７モノクローナル抗体が、本発明によって生成されて特徴付けられた。一実施形態において、作動性抗ＣＤ２７抗体は、活性ワクチン接種との組み合わせによって、または内因性免疫応答を増強することによって、癌または感染性疾患に対する免疫応答を増強することができる。そのような抗体はまた、サイトカイン発現を直接的または間接的に誘発し得る。加えて、Ｔ細胞媒介性免疫応答を下方制御し、特に、移植片拒絶反応、アレルギー、および自己免疫性疾患等の免疫障害の治療に好適である、抗ＣＤ２７抗体が生成されて特徴付けられた。さらに、直接細胞殺傷機構（例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞介在性細胞傷害性（ＣＤＣＣ））によってＣＤ２７発現細胞の増殖を阻害し、特に、細胞増殖を伴う様々な疾患（例えば、癌）を治療する際に有効である、抗ＣＤ２７抗体が生成されて特徴付けられた。
【０００７】
一実施形態において、本発明の抗ＣＤ２７抗体は、以下の性質のうちの１つ以上を呈する：
（ａ）１０μｇ／ｍＬの抗体濃度で、ＣＤ２７へのsＣＤ７０の結合を少なくとも約７０％遮断する、
（ｂ）１０−９Ｍ以下の平衡解離定数Ｋｄで、または代替として、１０＋９Ｍ−１以上の平衡会合定数Ｋａで、ヒトＣＤ２７に結合する、
（ｃ）３μｇ／ｍＬの抗体濃度および約６％のウサギ血清補体で、少なくとも１０％のＣＤ２７発現細胞の特異的補体媒介性細胞傷害性（ＣＤＣ）を誘発する、
（ｄ）３μｇ／ｍＬの抗体濃度および７５：１のエフェクター細胞対標的細胞の比率で、少なくとも１０％のＣＤ２７発現細胞の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）特異的溶解を誘発する、
（ｅ）腫瘍細胞（５×１０５個のＲａｊｉ細胞または１×１０６個のＤａｕｄｉ細胞）のインビボ接種後の重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウスにおいて、３週間にわたって少なくとも週に２回、０．３ｍｇを投与（腹腔内）した場合に、抗体が投与されないマウスと比較して生存期間中央値を少なくとも２０％向上させる、
（ｆ）ワクチンまたは内因性抗原との組み合わせで、抗原特異的免疫応答を誘発または増強する、
（ｇ）ワクチンまたは内因性抗原との組み合わせで、抗原特異的ＴＨ１免疫応答を誘発または増強する、
（ｈ）ワクチンまたは内因性抗原との組み合わせで、抗原特異的Ｔ細胞の増殖または活性化を誘発または増強する、
（ｉ）Ｔ細胞の増殖または活性化を低減または阻害する、
（ｊ）同時の、別々の、または連続的なＴＣＲ活性化と組み合わせた場合に、Ｔ細胞活性を誘発または増強する、
（ｋ）１０μｇ／ｍＬの抗体濃度で、ＣＤ２７へのsＣＤ７０の結合を少なくとも約７０％遮断し、かつＦｃ受容体に結合できないか、またはＦｃ受容体への結合が低減されている場合に、Ｔ細胞活性を低減または阻害する、
（ｌ）マカクにおいて、２９日間にわたって３ｍｇ／ｋｇで投与（静脈内）した場合に、投与直後にＣＤ３＋Ｔ細胞（ＮＫ細胞以外）の減少が５０％を下回る結果となる、または
（ｍ）マカクにおいて、２９日間にわたって３ｍｇ／ｋｇで投与（静脈内）した場合に、投与直後に記憶Ｂ細胞の減少が５０％を下回る結果となる。
【０００８】
特定の実施形態において、本発明の抗体は、これらの機能的性質の組み合わせを呈する。
【０００９】
故に、一態様において、本発明は、免疫応答（例えば、Ｔ細胞媒介性免疫応答）を誘発および／または増強する、抗ＣＤ２７抗体を提供する。さらなる実施形態において、抗体は、細胞上のＣＤ２７へのＣＤ７０の結合を阻害する。これらの性質の組み合わせを有する特定の抗体としては、それぞれ配列番号３７および／または４３を含む重鎖可変領域配列および／または軽鎖可変領域配列を含むｍＡｂ  １Ｆ５が挙げられる。代替として、抗体は、細胞上のＣＤ２７へのＣＤ７０の結合を阻害しない。これらの性質の組み合わせを有する特定の抗体としては、それぞれ配列番号７および／もしくは１３、またはそれぞれ配列番号７および／もしくは１９を含む重鎖可変領域配列および／または軽鎖可変領域配列を含むｍＡｂ  ３Ｈ８が挙げられる。そのような抗ＣＤ２７抗体はまた、Ｔ細胞受容体（例えば、ＣＤ３、ＣＤ２５、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４＿）、もしくはＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ１（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）、ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）、Ｆｃα／μＲ、およびＦｃＲｎ）、もしくはＮＫ受容体（例えば、ＣＤ５６）、またはＢ細胞受容体（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０））等の、抗体とは異なる結合特異性を有する第２の分子（例えば、二重特異性分子として）と連結していてもよい。
【００１０】
本発明に従って免疫応答の誘発または増強に使用することを意図した抗体は、Ｆｃ受容体への結合を可能にする機能的Ｆｃドメインを有してもよく、また、増加したレベルのＦｃ受容体への結合を有する変異Ｆｃドメインを含んでもよい。
【００１１】
別の態様において、本発明は、ＣＤ７０へのＣＤ２７の結合を、これらのタンパク質を発現する細胞上で阻害することによってＴ細胞媒介性免疫応答を下方制御する、抗ＣＤ２７抗体を提供する。特定の実施形態において、抗体は、少なくとも約７０％、ＣＤ２７発現細胞への可溶性ＣＤ７０（ｓＣＤ７０）の結合を阻害する。この種類の範囲に入る特定の抗体としては、例えば、配列番号３７および／もしくは４３（ｍＡｂ  １Ｆ５）、配列番号４９および／もしくは５５（ｍＡｂ  １Ｈ８）、または配列番号１０３および／もしくは１０９（ｍＡｂ  ３Ｈ１２）を含む重鎖可変領域配列および／または軽鎖可変領域配列を含むｍＡｂが挙げられる。
【００１２】
さらに別の態様において、本発明は、エフェクター細胞機能（例えば、ＡＤＣＣまたはＣＤＣを介した細胞殺傷）を誘発または増強する、抗ＣＤ２７抗体を提供する。一実施形態において、抗体は、１０μｇ／ｍＬの抗体濃度で、ＡＤＣＣを介してＣＤ２７発現細胞の特異的溶解を少なくとも約３０％誘発し、および／または１０μｇ／ｍＬの濃度で、ＣＤ２７発現細胞のＣＤＣを少なくとも約３０％誘発する。ＡＤＣＣエフェクター機能を呈するこの種類の範囲に入る特定の抗体としては、例えば、配列番号６１および／もしくは６７（ｍＡｂ  １Ｇ５）、配列番号８５および／もしくは９１、８５および／もしくは９７（ｍＡｂ  ３Ａ１０）、配列番号：３７および／もしくは４３（ｍＡｂ  １Ｆ５）、配列番号７および／もしくは１３、７および／もしくは１９（ｍＡｂ  ３Ｈ８）、配列番号４９および／もしくは５５（ｍＡｂ  １Ｈ８）、または配列番号１０３および／もしくは１０９（ｍＡｂ  ３Ｈ１２）を含む重鎖可変領域配列および／または軽鎖可変領域配列を含むｍＡｂが挙げられる。さらなる実施形態において、抗体はまた、細胞上のＣＤ２７へのＣＤ７０の結合を阻害する。これらの性質の組み合わせを有する特定の抗体としては、例えば、配列番号３７および／または４３（ｍＡｂ  １Ｆ５）、配列番号４９および／または５５（ｍＡｂ  １Ｈ８）、配列番号１０３および／または１０９（ｍＡｂ  ３Ｈ１２）を含む重鎖可変領域配列および／または軽鎖可変領域配列を含むｍＡｂが挙げられる。代替として、抗体は、前述のようにＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣを誘発するが、細胞上のＣＤ２７へのＣＤ７０の結合を阻害しない。これらの特徴を有する特定の抗体としては、例えば、配列番号６１および／または６７（ｍＡｂ  １Ｇ５）、配列番号８５および／または９１、８５および／または９７（ｍＡｂ  ３Ａ１０）、配列番号７および／または１３、７および／または１９（ｍＡｂ  ３Ｈ８）を含む重鎖可変領域配列および／または軽鎖可変領域配列を含むｍＡｂが挙げられる。エフェクター細胞機能（例えば、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ）を誘発または増強することが可能な抗ＣＤ２７抗体はまた、特異的Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ１（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ２（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）、ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）、Ｆｃα／μＲ、およびＦｃＲｎ）に対する結合特異性に適切に寄与するＦｃ領域を含むように構築することができる。
【００１３】
さらなる実施形態では、ｉ）抗ＣＤ２７抗体、およびｉｉ）抗原を対象に投与することによる、抗原に対する免疫応答をそれを必要とする対象において増強する方法であって、該抗ＣＤ２７抗体が、該抗原とは別々に、かつ該抗原が投与される前に投与される、方法を提供する。
【００１４】
一般的に、そのような方法において、抗ＣＤ２７抗体は、抗原の少なくとも２時間前〜９６時間前に投与されてもよい。例えば、そのような方法において、抗ＣＤ２７抗体は、抗原の少なくとも２時間前に、例えば、抗原の少なくとも１２時間前に、好適には、抗原の少なくとも２４時間前に、抗原の少なくとも４８時間前に、または抗原の少なくとも７２時間前に投与されてもよい。ＴＬＲ作動薬は、ＴＬＲ３作動薬である。
【００１５】
さらなる実施形態では、ｉ）抗ＣＤ２７抗体、ｉｉ）ＴＬＲ作動薬、およびｉｉｉ）任意で、抗原を対象に同時に、別々に、または連続的に投与することによる、抗原に対する免疫応答をそれを必要とする対象において増強するための方法を提供する。
【００１６】
そのような方法の好ましい実施形態において、ＴＬＲ作動薬は、例えば、ポリＩＣ：ＬＣであるが、これに限定されない、ＴＬＲ３作動薬である。
【００１７】
ＣＤ２７発現細胞としては、ＣＤ２７を発現する、任意および全ての細胞が挙げられ、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、およびＴ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、ＣＤ２７発現細胞としては、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｒａｊｉ細胞、Ｒａｍｏｓ細胞、およびＤａｕｄｉ細胞等の、癌細胞株が挙げられる。別の実施形態において、ＣＤ２７発現細胞は、腫瘍細胞または癌細胞である。別の実施形態において、ＣＤ２７発現細胞としては、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および腫瘍浸潤リンパ球とも呼ばれる、腫瘍に浸潤することが分かっているＴ細胞を含む、Ｔ細胞が挙げられる。
【００１８】
本発明の特定の抗体は、特定のヒト生殖系列を利用する、すなわち、生殖系列遺伝子によってコードされるが、抗体成熟中に起こる遺伝的再編成および変異（例えば、体細胞変異）を含む、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、本発明の抗体の重鎖可変領域は、ヒト生殖系列３−７または３−３３遺伝子に由来する。別の実施形態において、抗体の軽鎖可変領域は、ヒト生殖系列３−２０、３−１１、２４、１Ｄ−１６、または１−１３遺伝子に由来する。特定の実施形態において、抗体の重鎖可変領域は、ヒト生殖系列ＶＨ３−７またはＶＨ３−３３遺伝子由来であり、抗体の軽鎖可変領域は、ヒト生殖系列ＶＫ３−２０、ＶＫ３−１１、ＶＫ１Ｄ−１６、またはＶＫ１−１３遺伝子に由来する。
ＶＨ３−３３生殖系列配列は、以下のように提供される（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号：ＡＡＰ４４３８２）。
0006002659.tif 000002
ＶＨ３−７生殖系列配列は、以下のように提供される（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号：ＡＡＰ４４３８９）。
0006002659.tif 000003
【００１９】
別の実施形態において、重鎖可変領域のＣＤＲ３の配列は、配列番号１０、２８、４０、５２、６４、７６、８８、１０６、およびそれらの保存的配列改変体（例えば、保存的アミノ酸置換体）から成る群から選択される。抗体は、配列番号１６、２２、３４、４６、５８、７０、８２、９４、１００、１１２、およびそれらの保存的配列改変体から成る群から選択される、軽鎖可変領域のＣＤＲ３の配列をさらに含んでもよい。別の実施形態において、重鎖のＣＤＲ２の配列および重鎖のＣＤＲ１の配列は、それぞれ、配列番号９、２７、３９、５１、６３、７５、８７、１０５、および配列番号８、２６、３８、５０、６２、７４、８６、１０４、ならびにそれらの保存的配列改変体から選択される。軽鎖のＣＤＲ２の配列および軽鎖のＣＤＲ１の配列は、それぞれ、配列番号１５、２１、３３、４５、５７、６９、８１、９３、９９、１１１、および配列番号１４、２０、３２、４４、５６、６８、８０、９２、９８、１１０、ならびにそれらの保存的配列改変体から選択される。
【００２０】
さらに別の実施形態において、本発明は、ＣＤ２７に結合し、かつ以下から成る群から選択される重軽鎖可変領域および軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３の配列を含む、単離された抗体を提供する：
（ｉ）配列番号３８を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、
配列番号３９を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２、
配列番号４０を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３、
配列番号４４を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、
配列番号４５を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２、
配列番号４６を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、または
それらの保存的配列改変体、
（ｉｉ）配列番号５０を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、
配列番号５１を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２、
配列番号５２を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３、
配列番号５６を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、
配列番号５７を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２、
配列番号５８を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、または
それらの保存的配列改変体、
（ｉｉｉ）配列番号１０４を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、
配列番号１０５を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２、
配列番号１０６を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３、
配列番号１１０を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、
配列番号１１１を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２、
配列番号１１２を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、または
それらの保存的配列改変体、
（ｉｖ）配列番号８６を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、
配列番号８７を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２、
配列番号８８を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３、
配列番号９２もしくは９８を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、
配列番号９３もしくは９９を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２、
配列番号９４もしくは１００を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、または
それらの保存的配列改変体、
（ｖ）配列番号２６を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、
配列番号２７を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２、
配列番号２８を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３、
配列番号３２を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、
配列番号３３を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２、
配列番号３４を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、または
それらの保存的配列改変体、
（ｖｉ）配列番号７４を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、
配列番号７５を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２、
配列番号７６を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３、
配列番号８０を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、
配列番号８１を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２、
配列番号８２を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、または
それらの保存的配列改変体、
（ｖｉｉ）配列番号８を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、
配列番号９を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２、
配列番号１０を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３、
配列番号１４もしくは２０を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、
配列番号１５もしくは２１を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２、
配列番号１６もしくは２２を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、または
それらの保存的配列改変体、および
（ｖｉｉｉ）配列番号６２を含む重鎖可変領域のＣＤＲ１、
配列番号６３を含む重鎖可変領域のＣＤＲ２、
配列番号６４を含む重鎖可変領域のＣＤＲ３、
配列番号６８を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ１、
配列番号６９を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ２、
配列番号７０を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ３、または
それらの保存的配列改変体。
【００２１】
別の実施形態において、重鎖可変領域のＣＤＲ３の配列は、コンセンサス配列Ｒ（Ｇ，Ｅ，Ｄ）（Ｓ，Ｌ，Ｇ，−）（Ｇ，Ｌ，Ｔ，Ｗ，−）（Ｎ，Ａ，Ｔ，Ｈ，−）（Ｖ，Ｔ，−）（Ｍ，Ｐ，−）（Ｇ，Ｖ，−）（Ｒ，−）（Ｇ，Ｍ，−）（Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｔ，Ｗ）（Ａ，Ｇ，Ｎ，Ｗ）（Ｄ，Ｆ，Ｖ，Ｙ）（Ｆ，Ｌ）（Ｄ，Ｅ）（Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｙ）（配列番号１１３）から選択されるアミノ酸配列を含み、配列中、「−」は、そのコンセンサス位置にいかなるアミノ酸残基も存在しないという選択肢を示す。抗体は、コンセンサス配列Ｑ（Ｆ，Ｒ，Ｙ）（Ｎ，Ｓ）（Ｎ，Ｔ，Ｓ）（Ｙ，Ｗ）Ｐ（Ｆ，Ｌ，Ｐ，Ｒ）Ｔ（配列番号１１４）から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域のＣＤＲ３をさらに含んでもよく、配列中、「−」は、そのコンセンサス位置にいかなるアミノ酸残基も存在しないという選択肢を示す。別の実施形態において、重鎖可変領域のＣＤＲ２の配列は、コンセンサス配列Ｉ（Ｋ，Ｗ）（Ｙ，Ｎ，Ｑ）Ｄ  Ｇ  Ｓ（Ｅ，Ｎ）（Ｋ，Ｑ）（配列番号１１５）から選択されるアミノ酸配列を含み、配列中、「−」は、そのコンセンサス位置にいかなるアミノ酸残基も存在しないという選択肢を示し、軽鎖可変領域のＣＤＲ２の配列は、コンセンサス配列（Ａ，Ｄ）Ａ  Ｓ（配列番号１１６）から選択されるアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、重鎖可変領域のＣＤＲ１の配列は、コンセンサス配列Ｇ  Ｆ（Ｔ，Ｓ）（Ｆ，Ｌ）（Ｓ，Ｎ）（Ｉ，Ｓ，Ｈ）（Ｙ，Ｈ）（配列番号１１７）から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域のＣＤＲ１の配列は、コンセンサス配列Ｑ（Ｄ，Ｇ，Ｓ）（Ｉ，Ｖ）（Ｄ，Ｓ）（Ｒ，Ｓ）（Ａ，Ｗ，Ｙ）（配列番号１１８）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【００２２】
別の実施形態において、本発明の単離された抗体は、ヒトＣＤ２７に結合し、かつ配列番号６、７、２４、２５、３６、３７、４８、４９、６０、６１、７２、７３、８４、８５、１０２、１０３、およびそれらの保存的配列改変体から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。抗体は、配列番号１２、１３、１８、１９、３０、３１、４２、４３、５４、５５、６６、６７、７８、７９、９０、９１、９６、９７、１０８、１０９、およびそれらの保存的配列改変体から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をさらに含んでもよい。
【００２３】
さらなる実施形態において、本発明の単離された抗体は、ヒトＣＤ２７に結合し、かつ以下から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む：
（ａ）それぞれ、配列番号３７および／または４３、ならびにそれらの保存的配列改変体、
（ｂ）それぞれ、配列番号４９および／または５５、ならびにそれらの保存的配列改変体、
（ｃ）それぞれ、配列番号１０３および／または１０９、ならびにそれらの保存的配列改変体、
（ｄ）それぞれ、配列番号８５および／または９１、および／または９７、ならびにそれらの保存的配列改変体、
（ｅ）それぞれ、配列番号２５および／または３１、ならびにそれらの保存的配列改変体、
（ｆ）それぞれ、配列番号７３および／または７９、ならびにそれらの保存的配列改変体、
（ｇ）それぞれ、配列番号７および／または１３、および／または１９、ならびにそれらの保存的配列改変体、ならびに、
（ｈ）それぞれ、配列番号６１および／または６７、ならびにそれらの保存的配列改変体。
【００２４】
本発明はまた、前述の配列のいずれかに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれ以上の配列同一性を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、単離された抗体も含む。また、前述の値の中間値、例えば、前述の配列のいずれかに対して少なくとも８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、または９５〜１００％の配列同一性を有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域も、本発明に包含することを意図している。
【００２５】
また、ＣＤ２７への結合について、本発明の抗体と競合する、単離された抗体も、本発明に包含される。特定の実施形態において、本抗体は、ＣＤ２７への結合について、それぞれ、配列番号３７および４３、配列番号４９および５５、配列番号１０３および１０９、配列番号８５および９１、配列番号８５および９７、配列番号２５および３１、配列番号７３および７９、配列番号７および１３、配列番号７および１９、配列番号６１および６７で記述されるアミノ酸配列、またはそれらに対して少なくとも８０％の同一性であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。別の実施形態において、本抗体は、ＣＤ２７への結合について、配列番号３７および４３（１Ｆ５）、配列番号４９および５５（１Ｈ８）、または配列番号１０３および１０９（３Ｈ１２）で記述されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。別の実施形態において、本抗体は、ＣＤ２７への結合について、配列番号２５および３１（２Ｃ２）、配列番号７および１３（３Ｈ８）、配列番号７および１９（３Ｈ８）、配列番号６１および６７（１Ｇ５）、または配列番号７３および７９（２Ｇ９）で記述されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。さらに別の実施形態において、本抗体は、ＣＤ２７への結合について、配列番号８５および９１（３Ａ１０）または配列番号８５および９７（３Ａ１０）で記述されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。
【００２６】
本発明の他の抗体は、本明細書で説明される抗体によって認識されるＣＤ２７上のエピトープに結合する。別の特定の実施形態において、本抗体は、それぞれ、配列番号３７および４３、配列番号４９および５５、配列番号１０３および１０９、配列番号８５および９１、配列番号８５および９７、配列番号２５および３１、配列番号７３および７９、配列番号７および１３、配列番号７および１９、配列番号６１および６７で記述されるアミノ酸配列、またはそれらに対して少なくとも８０％の同一性であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む抗体によって認識されるＣＤ２７上のエピトープに結合する。別の実施形態において、本抗体は、配列番号３７および４３（１Ｆ５）、配列番号４９および５５（１Ｈ８）、または配列番号１０３および１０９（３Ｈ１２）で記述されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む抗体によって認識されるＣＤ２７上のエピトープに結合する。別の実施形態において、本抗体は、配列番号２５および３１（２Ｃ２）、配列番号７および１３（３Ｈ８）、配列番号７および１９（３Ｈ８）、配列番号６１および６７（１Ｇ５）、または配列番号７３および７９（２Ｇ９）で記述されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む抗体によって認識されるＣＤ２７上のエピトープに結合する。さらに別の実施形態において、本抗体は、配列番号８５および９１（３Ａ１０）、または配列番号８５および９７（３Ａ１０）で記述されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含む抗体によって認識されるＣＤ２７上のエピトープに結合する。
【００２７】
本発明の抗体は、完全長とするか、例えば、アイソタイプ：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＡｓｅｃ、ＩｇＤ、およびＩｇＥのいずれかとすることができる。代替として、抗体は、抗原結合部分等の断片、または１本鎖抗体（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、１本鎖Ｆｖ断片、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、または、２つ以上の単離されたＣＤＲの組み合わせ）とすることができる。抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、およびキメラ抗体が挙げられるが、これらに限定されない、任意の種類の抗体とすることができる。
【００２８】
本発明によって用いられる（例えば、本発明の抗ＣＤ２７抗体と組み合わせて使用されるワクチン中の）腫瘍抗原としては、腫瘍細胞上に存在（またはこれと関連）するが一般的に正常な細胞上には存在しない任意の抗原もしくは抗原決定基、または正常な（非腫瘍）細胞上よりも多く腫瘍細胞上に存在するまたはこれと関連する抗原もしくは抗原決定基、または正常な（非腫瘍）細胞上で見られる形態とは異なる形態で腫瘍細胞上に存在する抗原もしくは抗原決定基が挙げられる。そのような抗原としては、腫瘍特異性膜抗原を含む腫瘍特異抗原、腫瘍関連抗原を含む腫瘍関連膜抗原、腫瘍上の胎児抗原、成長因子受容体、成長因子リガンド、および癌と関連する任意の他の種類の抗原が挙げられる。腫瘍抗原は、例えば、上皮癌抗原（例えば、乳房、胃腸、肺）、前立腺特異的癌抗原（ＰＳＡ）もしくは前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、膀胱癌抗原、肺（例えば、小細胞肺）癌抗原、結腸癌抗原、卵巣癌抗原、脳腫瘍抗原、胃癌抗原、腎細胞癌抗原、膵癌抗原、肝癌抗原、食道癌抗原、頭頸部癌抗原、または結腸直腸癌抗原であってもよい。例えば、抗原としては、βｈＣＧ、ｇｐ１００またはＰｍｅｌ１７、ＣＥＡ、ｇｐ１００、ＴＲＰ−２、ＮＹ−ＢＲ−１、ＮＹ−ＣＯ−５８、ＭＮ（ｇｐ２５０）、イディオタイプ、チロシナーゼ、テロメラーゼ、ＳＳＸ２、ＭＵＣ−１、ＭＡＧＥ−Ａ３、および高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷ―ＭＡＡ）ＭＡＲＴ１等の腫瘍抗原、ｍｅｌａｎ−Ａ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−３、ＷＴ１、Ｈｅｒ２、またはメソテリンが挙げられる。本発明によって用いられる（例えば、本発明の抗ＣＤ２７抗体と組み合わせて使用されるワクチン中の）腫瘍抗原としては、ウイルス、細菌、寄生虫、および真菌等の感染性疾患の病原体由来の抗原が挙げられ、その例は、本明細書で開示される。
【００２９】
本発明はまた、本発明の抗体とは異なる結合特異性を有する第２の機能的部分と連結している本発明の抗体を含む、二重特異性分子も提供する。例えば、一実施形態において、第２の分子は、Ｔ細胞受容体（例えば、ＣＤ３、ＣＤ４０）に結合してもよい。
【００３０】
また、薬学的に許容される担体とともに調合される、本明細書で説明される抗体または二重特異性分子を含む組成物も提供する。組成物は、アジュバント、免疫賦活剤（例えば、ＣＤ４０リガンド、ＦＬＴ３リガンド、サイトカイン、コロニー刺激因子、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗４１ＢＢ抗体、抗ＯＸ−４０抗体、ＬＰＳ（エンドトキシン）、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、カルメット−ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、塩酸レバミソール、静注用免疫グロブリン、およびトール様受容体（ＴＬＲ）作動薬（例えば、ポリＩＣ等のＴＬＲ３作動薬、ＴＬＲ４作動薬、ＴＬＲ５作動薬、ＴＬＲ７作動薬、ＴＬＲ８作動薬、およびＴＬＲ９作動薬））、免疫抑制剤、別の抗体、または抗原をさらに含んでもよい。例示的な抗原としては、病原体の成分、腫瘍抗原（例えば、βｈＣＧ、ｇｐ１００またはＰｍｅｌ１７、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＷＴ１、メソテリン、ＣＥＡ、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ１、ＴＲＰ−２、ｍｅｌａｎ−Ａ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＮＹ−ＢＲ−１、ＮＹ−ＣＯ−５８、ＭＮ（ｇｐ２５０）、イディオタイプ、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−Ａ３、チロシナーゼ、テロメラーゼ、ＳＳＸ２抗原、ＭＵＣ−１抗原、および生殖細胞由来の腫瘍抗原）、感染性疾患抗原（例えばウイルス抗原、細菌抗原、および寄生虫抗原）アレルゲン、または自己抗原が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で開示される抗原のいずれをも、本発明の組成物に含むことができる。
【００３１】
また、本発明の抗体をコードする核酸分子、ならびにそのような核酸を含む発現ベクターおよびそのような発現ベクターを含む宿主細胞も、本発明に包含される。例えば、一実施形態において、本発明は、ヒトＣＤ２７に結合し、かつ（ａ）それぞれ、配列番号５および１１、（ｂ）それぞれ、配列番号５および１７、（ｃ）それぞれ、配列番号２３および２９、（ｄ）それぞれ、配列番号３５および４１、（ｅ）それぞれ、配列番号４７および５３、（ｆ）それぞれ、配列番号５９および６５、（ｇ）それぞれ、配列番号７１および７７、（ｈ）配列番号８３および８９、（ｉ）配列番号８３および９５、（ｊ）それぞれ、配列番号１０１および１０７から成る群から選択される核酸配列、または（ａ）〜（ｈ）の核酸配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する核酸配列によってコードされる重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体を提供する。
【００３２】
別の実施形態において、本発明は、本明細書で説明される抗体（例えば、完全長抗体）、組成物、または二重特異性分子の有効量を対象に投与することによる、対象における抗原に対する免疫応答（例えば、Ｔ細胞媒介性免疫応答、および／またはＮＫ媒介性応答、および／またはＢ細胞媒介性免疫応答）を誘発または増強するための方法を提供する。そのような方法は、特にワクチン療法での使用に適切である。
【００３３】
本発明の抗体および他の組成物はまた、ＣＤ２７発現細胞と、（例えば、癌の治療において）ＣＤ２７発現細胞の増殖を阻害するのに有効な量の抗体または組成物とを接触させることによって、ＣＤ２７発現細胞の増殖を阻害するために使用することができる。ＣＤ２７発現細胞の増殖を阻害するのに有用な抗体としては、完全長抗体およびその断片、ならびにＦｃ受容体に対する第２の結合特異性を備える抗体が挙げられる。一実施形態においては、ＣＤ２７発現細胞を、エフェクター細胞の存在下、標的細胞の抗体依存性細胞介在性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘発するのに十分な条件下で抗体と接触させる（例えば、抗体は、１０μｇ／ｍＬの濃度で、ＣＤ２７発現細胞の特異的溶解を少なくとも約４０％誘発し、かつ配列番号６１、６７、８５、９１、９７、３７、および／または４３を含む）。別の実施形態においては、細胞を、該細胞の補体媒介性細胞傷害性（ＣＤＣ）を誘発するのに十分な条件下で抗体と接触させる（例えば、抗体は、１０μｇ／ｍＬの濃度で、ＣＤ２７発現細胞の補体媒介性細胞傷害性（ＣＤＣ）を少なくとも約４０％誘発し、かつ配列番号７、１３、１９、４９、５５、１０３、および／または１０９を含む）。
【００３４】
さらなる実施形態において、ＣＤ２７発現細胞の増殖を阻害するために用いられる抗体は、さらなる機能的特徴を持っていても（またはそれが欠如していても）よい。例えば、抗体はまた、ＣＤ２７へのＣＤ７０の結合をこれらのタンパク質を発現する細胞上で阻害してもよい（例えば、配列番号３７および／もしくは４３（ｍＡｂ  １Ｆ５）、配列番号４９および／もしくは５５（ｍＡｂ  １Ｈ８）、または配列番号１０３および／もしくは１０９（ｍＡｂ  ３Ｈ１２）を含む重鎖可変領域配列および／または軽鎖可変領域配列を含む、ｍＡｂ）。代替として、抗体は、そのような細胞上のＣＤ２７へのＣＤ７０の結合を阻害しなくてもよい（例えば、配列番号６１および／もしくは６７（ｍＡｂ  １Ｇ５）、配列番号８５および／もしくは９１、８５および／もしくは９７（ｍＡｂ  ３Ａ１０）、または配列番号：７および／もしくは１３、７および／もしくは１９（ｍＡｂ  ３Ｈ８）を含む重鎖可変領域配列および／または軽鎖可変領域配列を含む、ｍＡｂ）。
【００３５】
ＣＤ２７発現細胞としては、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、およびＴ細胞を含む、ＣＤ２７を発現する任意および全ての細胞が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、ＣＤ２７発現細胞としては、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｒａｊｉ細胞、Ｒａｍｏｓ細胞、およびＤａｕｄｉ細胞等の、細胞株が挙げられる。別の実施形態において、ＣＤ２７発現細胞は、腫瘍細胞または癌細胞である。別の実施形態において、ＣＤ２７発現細胞としては、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、および腫瘍浸潤リンパ球とも呼ばれる、腫瘍または癌細胞に浸潤することが分かっている、Ｔ細胞が挙げられる。
【００３６】
本明細書で説明される、ＣＤ２７発現細胞の増殖を阻害する方法は、様々な疾患および障害を治療および予防するために使用することができる。例えば、一実施形態において、本方法は、癌を治療または予防するために使用することができる（例えば、白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、真性多血症リンパ腫（Ｐｏｌｙｃｙｔｈｅｍｉａ  ｖｅｒａ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ）、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、固形腫瘍、肉腫、および癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸肉腫（ｃｏｌｏｎ  ｓａｒｃｏｍａ）、結腸直腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起細胞腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、上咽頭癌、食道癌、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系（ＣＮＳ）癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮体癌、食道癌、眼癌、頭頸部癌、胃癌、上皮内腫瘍、腎臓癌、喉頭癌、肝癌、肺癌（小細胞、大細胞）、黒色腫、神経芽細胞腫、口腔癌（例えば、口唇、舌、口、および咽頭）、卵巣癌、膵癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、および泌尿器系の癌、から成る群から選択される癌）。好ましい癌としては、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫、および辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫から成る群から選択されるＣＤ２７発現腫瘍が挙げられる。別の実施形態において、本方法は、細菌感染症、真菌感染症、ウイルス感染症、または寄生虫感染症を治療または予防するために使用することができる。
【００３７】
本発明は、本発明で説明される抗体または組成物を対象に投与することによる、障害を有する対象における細胞上のＣＤ２７へのＣＤ７０の結合を阻害するための方法、ならびに、本発明で説明される抗体または組成物を対象に投与することによる、障害を有する個人におけるＴ細胞応答を下方制御する方法をさらに提供する。これらの方法は、移植片拒絶反応、自己免疫疾患、およびアレルギー等の免疫障害の治療での使用に理想的に適している。これらの方法において有用な抗体は、Ｆａｂ断片を含むのみならず、抗体がＦｃ受容体に結合しないかまたは有意に低減したＦｃ受容体への結合を呈するように変異されたＦｃ領域を含む。特定の実施形態において、抗体は、配列番号３７および／もしくは４３（ｍＡｂ  １Ｆ５）、配列番号４９および／もしくは５５（ｍＡｂ  １Ｈ８）、または配列番号１０３および／もしくは１０９（ｍＡｂ  ３Ｈ１２）を含む重鎖可変領域配列および／または軽鎖可変領域配列を含む。
【００３８】
細胞上のＣＤ２７へのＣＤ７０の結合を阻害するための、およびＴ細胞応答を下方制御するための本明細書で説明される方法は、移植片拒絶反応、アレルギー、および自己免疫疾患が挙げられるが、これらに限定されない、様々な疾患および障害を治療するために使用することができる。特定の実施形態において、疾患は、自己免疫疾患である（例えば、多発性硬化症、関節リウマチ、１型糖尿病、乾癬、クローン病および潰瘍性大腸炎等の他の炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性脳脊髄炎、重症筋無力症（ＭＧ）、橋本甲状腺炎、グッドパスチャー症候群、天疱瘡、グレーブス病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、抗コラーゲン抗体による強皮症、混合性結合組織疾患、多発性筋炎、悪性貧血、特発性アジソン病、自己免疫関連性の不妊、糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎、増殖性糸球体腎炎、水疱性類天疱瘡、シェーグレン症候群、乾癬性関節炎、インスリン抵抗性、自己免疫性糖尿病、自己免疫性肝炎、自己免疫性血友病、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性肝炎、自己免疫性血友病、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性ブドウ膜網膜炎、ギラン・バレー症候群、動脈硬化、およびアルツハイマー病）。
【００３９】
本発明は、本明細書で説明される抗体、組成物、および二重特異性分子の特定の使用をさらに提供する。例えば、一実施形態において、本発明は、対象における抗原に対する免疫応答を誘発または増強するための薬剤の製造における抗体、組成物、または二重特異性分子の使用を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、ＣＤ２７発現細胞の増殖を阻害するための薬剤の製造における抗体または組成物の使用、障害を有する対象における細胞上のＣＤ２７へのＣＤ７０の結合を阻害するための薬剤の製造における抗体または組成物の使用、および障害を有する個人におけるＴ細胞応答を下方制御するための薬剤の製造における抗体または組成物の使用を提供する。本発明は、対象における抗原に対する免疫応答を誘発または増強する際に使用するための抗体、組成物、または二重特異性分子；ＣＤ２７発現細胞の増殖を阻害する際に使用するための抗体または組成物；障害を有する対象における細胞上のＣＤ２７へのＣＤ７０の結合を阻害する際に使用するための抗体または組成物；障害を有する個人におけるＴ細胞応答を下方制御する際に使用するための抗体または組成物をさらに含む。
【００４０】
本発明はまた、（１）生物学的試料と、本明細書で説明される抗体（該抗体は、検出可能な物質で標識されている）とを接触させることと、（２）ＣＤ２７に結合した抗体を検出することとによる、生物学的試料中のＣＤ２７の存在または非存在を検出するための方法も提供する。
【００４１】
また、本発明の組成物（例えば、抗体および／または二重特異性分子）、および任意で使用説明書を含むキットも、本発明の範囲内である。このキットは、サイトカインまたは補体等の少なくとも１つのさらなる試薬、または本発明の１つ以上のさらなる抗体をさらに含むことができる。
【００４２】
[本発明1001]
ヒトＣＤ27に結合する、単離されたヒトモノクローナル抗体またはヒト化モノクローナル抗体であって、以下の性質のうちの少なくとも1つを呈する前記抗体：
（ａ）10μｇ／ｍＬの抗体濃度で、ＣＤ27へのsＣＤ70の結合を少なくとも約70％遮断する、
（ｂ）10−9Ｍ以下の平衡解離定数Ｋｄで、または代替として、10＋9Ｍ−1以上の平衡会合定数Ｋａで、ヒトＣＤ27に結合する、
（ｃ）3μｇ／ｍＬの抗体濃度および約6％のウサギ血清補体で、少なくとも10％のＣＤ27発現細胞の特異的補体媒介性細胞傷害性（ＣＤＣ）を誘発する、
（ｄ）3μｇ／ｍＬの抗体濃度および75：1のエフェクター細胞対標的細胞の比率で、少なくとも10％のＣＤ27発現細胞の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）特異的溶解を誘発する、
（ｅ）腫瘍細胞（5×105個のＲａｊｉ細胞または1×106個のＤａｕｄｉ細胞）のインビボ接種後の重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウスにおいて、3週間にわたって少なくとも週に2回、0．3ｍｇを投与（腹腔内）した場合に、抗体が投与されないマウスと比較して生存期間中央値を少なくとも20％向上させる、
（ｆ）ワクチンまたは内因性抗原との組み合わせで、抗原特異的免疫応答を誘発または増強する、
（ｇ）ワクチンまたは内因性抗原との組み合わせで、抗原特異的ＴＨ1免疫応答を誘発または増強する、
（ｈ）ワクチンまたは内因性抗原との組み合わせで、抗原特異的Ｔ細胞の増殖または活性化を誘発または増強する、
（ｉ）Ｔ細胞の増殖または活性化を低減または阻害する、
（ｊ）同時の、別々の、または連続的なＴＣＲ活性化と組み合わせた場合に、Ｔ細胞活性を誘発または増強する、
（ｋ）10μｇ／ｍＬの抗体濃度で、ＣＤ27へのsＣＤ70の結合を少なくとも約70％遮断し、かつＦｃ受容体に結合できないか、またはＦｃ受容体への結合が低減されている場合に、Ｔ細胞活性を低減または阻害する、
（ｌ）マカクにおいて、29日間にわたって3ｍｇ／ｋｇで投与（静脈内）した場合に、投与直後にＣＤ3＋Ｔ細胞（ＮＫ細胞以外）の減少が50％を下回る結果となる、または
（ｍ）マカクにおいて、29日間にわたって3ｍｇ／ｋｇで投与（静脈内）した場合に、投与直後に記憶Ｂ細胞の減少が50％を下回る結果となる。
[本発明1002]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ抗原に対する免疫応答を誘発または増強する、単離されたモノクローナル抗体。
[本発明1003]
ＴＨ1免疫応答を誘発または増強する、本発明1002の抗体。
[本発明1004]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ抗原に対する免疫応答を誘発または増強する、単離されたモノクローナル抗体であって、Ｔ細胞の増殖または活性化を誘発または増強する前記抗体。
[本発明1005]
ＣＤ8＋Ｔ細胞の増殖または活性化を誘発または増強する、本発明1004の抗体。
[本発明1006]
細胞上のＣＤ27へのＣＤ70の結合をさらに阻害する、本発明1004または1005の抗体。
[本発明1007]
配列番号37および／または43を含む、本発明1002〜1006のいずれかの抗体。
[本発明1008]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ細胞上のＣＤ27へのＣＤ70の結合を有意には阻害しない、本発明1002〜1005のいずれかの抗体。
[本発明1009]
配列番号7、13、および／または19を含む、本発明1008の抗体。
[本発明1010]
Ｆｃ受容体への有効な結合が可能なＦｃ領域を含む、本発明1002〜1009のいずれかの抗体。
[本発明1011]
本発明1002〜1010のいずれかの抗体を含む二重特異性分子であって、該抗体とは異なる結合特異性を有する第2の分子と連結している前記二重特異性分子。
[本発明1012]
第2の分子がＴ細胞受容体に結合する、本発明1011の二重特異性分子。
[本発明1013]
Ｔ細胞受容体が、ＣＤ3、ＣＤ40、およびＣＤ25から成る群から選択される、本発明1012の二重特異性分子。
[本発明1014]
第2の分子がＦｃ受容体に結合する、本発明1011の二重特異性分子。
[本発明1015]
第2の分子がＮＫ受容体に結合する、本発明1011の二重特異性分子。
[本発明1016]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ細胞上のＣＤ27へのＣＤ70の結合を阻害する、単離されたモノクローナル抗体であって、10μｇ／ｍＬの抗体濃度で、ＣＤ27発現細胞へのsＣＤ70の結合を少なくとも約70％阻害し、かつ抗原に対する免疫応答を阻害または低減する前記抗体。
[本発明1017]
Ｔ細胞の増殖または活性化を阻害または低減する、本発明1016の抗体。
[本発明1018]
ＣＤ8＋Ｔ細胞の増殖または活性化を阻害または低減する、本発明1016または1017の抗体。
[本発明1019]
配列番号37、43、49、55、103、および／または109を含む、本発明1016〜1018のいずれかの抗体。
[本発明1020]
配列番号37および／または43を含む、本発明1016〜1018のいずれかの抗体。
[本発明1021]
機能的Ｆｃドメインを含まない断片である、本発明1016〜1020のいずれかの抗体。
[本発明1022]
Ｆｃ受容体への低減した結合を示すか、またはＦｃ受容体への結合を示さない変異Ｆｃ領域を含む、本発明1016〜1020のいずれかの抗体。
[本発明1023]
ヒトＣＤ27に結合し、かつエフェクター細胞機能を誘発または増強する、単離されたモノクローナル抗体であって、10μｇ／ｍＬの抗体濃度で、ＣＤ27発現細胞のＡＤＣＣ特異的溶解を少なくとも約40％誘発するか、または10μｇ／ｍＬの濃度で、ＣＤ27発現細胞の補体媒介性細胞傷害性（ＣＤＣ）を少なくとも約40％誘発する前記抗体。
[本発明1024]
配列番号61、67、85、91、97、37、43、49、55、19、49、55、103、および／または109を含む、本発明1023の抗体。
[本発明1025]
細胞上のＣＤ27へのＣＤ70の結合を阻害する、本発明1023〜1024のいずれかの抗体。
[本発明1026]
配列番号37、43、49、55、19、103、および／または109を含む、本発明1025の抗体。
[本発明1027]
細胞上のＣＤ27へのＣＤ70の結合を阻害しない、本発明1023または1024の抗体。
[本発明1028]
配列番号61、67、85、91、97、7、13、および／または19を含む、本発明1027の抗体。
[本発明1029]
配列番号37、43、7、13、および／または19を含む、本発明1028の抗体。
[本発明1030]
完全長抗体である、本発明1023〜1029のいずれかの抗体。
[本発明1031]
Ｆｃ受容体に対する第2の結合特異性を備える、前記本発明のいずれかの抗体。
[本発明1032]
ＣＤ27発現細胞がＢ細胞である、前記本発明のいずれかの抗体。
[本発明1033]
ＣＤ27発現細胞がＴ細胞である、本発明1001〜1031のいずれかの抗体。
[本発明1034]
ＣＤ27発現細胞がＣＤ8＋Ｔ細胞である、本発明1001〜1031のいずれかの抗体。
[本発明1035]
ＣＤ27発現細胞が、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｒａｊｉ細胞、Ｒａｍｏｓ細胞、およびＤａｕｄｉ細胞から成る群から選択される、前記本発明のいずれかの抗体。
[本発明1036]
ＣＤ27発現細胞が腫瘍細胞である、前記本発明のいずれかの抗体。
[本発明1037]
ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4、ＩｇＭ、ＩｇＡ1、ＩｇＡ2、ＩｇＤ、およびＩｇＥ抗体から成る群から選択される、前記本発明のいずれかの抗体。
[本発明1038]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ
ヒト生殖系列ＶＨ3−7またはＶＨ3−33遺伝子由来の重鎖可変領域を含む、
単離されたモノクローナル抗体。
[本発明1039]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ
ヒト生殖系列ＶＫ3−20、ＶＫ3−11、ＶＫ1Ｄ−16、またはＶＫ1−13遺伝子由来の軽鎖可変領域を含む、
単離されたモノクローナル抗体。
[本発明1040]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ
ヒト生殖系列ＶＨ3−7またはＶＨ3−33遺伝子由来の重鎖可変領域と、ヒト生殖系列ＶＫ3−20、ＶＫ3−11、ＶＫ1Ｄ−16、またはＶＫ1−13遺伝子由来の軽鎖可変領域とを含む、
単離されたモノクローナル抗体。
[本発明1041]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ
ＣＤＲ1、ＣＤＲ2、およびＣＤＲ3の配列を含む重鎖可変領域と、ＣＤＲ1、ＣＤＲ2、およびＣＤＲ3の配列を含む軽鎖可変領域とを含む、
単離されたモノクローナル抗体であって、
該重鎖可変領域のＣＤＲ3の配列が、コンセンサス配列Ｒ（Ｇ，Ｅ，Ｄ）（Ｓ，Ｌ，Ｇ，−）（Ｇ，Ｌ，Ｔ，Ｗ，−）（Ｎ，Ａ，Ｔ，Ｈ，−）（Ｖ，Ｔ，−）（Ｍ，Ｐ，−）（Ｇ，Ｖ，−）（Ｒ，−）（Ｇ，Ｍ，−）（Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｔ，Ｗ）（Ａ，Ｇ，Ｎ，Ｗ）（Ｄ，Ｆ，Ｖ，Ｙ）（Ｆ，Ｌ）（Ｄ，Ｅ）（Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｙ）（配列番号113）から選択されるアミノ酸配列を含み、配列中、「−」は、そのコンセンサス位置にいかなるアミノ酸残基も存在しないという選択肢を示す、
前記抗体。
[本発明1042]
軽鎖可変領域のＣＤＲ3の配列が、コンセンサス配列Ｑ（Ｆ，Ｒ，Ｙ）（Ｎ，Ｓ）（Ｎ，Ｔ，Ｓ）（Ｙ，Ｗ）Ｐ（Ｆ，Ｌ，Ｐ，Ｒ）Ｔ（配列番号114）から選択されるアミノ酸配列を含み、配列中、「−」は、そのコンセンサス位置にいかなるアミノ酸残基も存在しないという選択肢を示す、本発明1041の抗体。
[本発明1043]
重鎖可変領域のＣＤＲ2の配列が、コンセンサス配列Ｉ（Ｋ，Ｗ）（Ｙ，Ｎ，Ｑ）Ｄ  Ｇ  Ｓ（Ｅ，Ｎ）（Ｋ，Ｑ）（配列番号115）から選択されるアミノ酸配列を含み、配列中、「−」は、そのコンセンサス位置にいかなるアミノ酸残基も存在しないという選択肢を示し、軽鎖可変領域のＣＤＲ2の配列が、コンセンサス配列（Ａ，Ｄ）Ａ  Ｓ（配列番号116）から選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1042の抗体。
[本発明1044]
重鎖可変領域のＣＤＲ1の配列が、コンセンサス配列Ｇ  Ｆ（Ｔ，Ｓ）（Ｆ，Ｌ）（Ｓ，Ｎ）（Ｉ，Ｓ，Ｈ）（Ｙ，Ｈ）（配列番号117）から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域のＣＤＲ1の配列が、コンセンサス配列Ｑ（Ｄ，Ｇ，Ｓ）（Ｉ，Ｖ）（Ｄ，Ｓ）（Ｒ，Ｓ）（Ａ，Ｗ，Ｙ）（配列番号118）から選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1043の抗体。
[本発明1045]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ
以下から成る群から選択される重鎖可変領域および軽鎖可変領域のＣＤＲ1、ＣＤＲ2、およびＣＤＲ3の配列を含む、
単離されたモノクローナル抗体：
（ｉ）コンセンサス配列Ｇ  Ｆ（Ｔ，Ｓ）（Ｆ，Ｌ）（Ｓ，Ｎ）（Ｉ，Ｓ，Ｈ）（Ｙ，Ｈ）（配列番号117）から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域のＣＤＲ1、
（ｉｉ）コンセンサス配列Ｉ（Ｋ，Ｗ）（Ｙ，Ｎ，Ｑ）Ｄ  Ｇ  Ｓ（Ｅ，Ｎ）（Ｋ，Ｑ）（配列番号115）から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域のＣＤＲ2、
（ｉｉｉ）コンセンサス配列Ｒ（Ｇ，Ｅ，Ｄ）（Ｓ，Ｌ，Ｇ，−）（Ｇ，Ｌ，Ｔ，Ｗ，−）（Ｎ，Ａ，Ｔ，Ｈ，−）（Ｖ，Ｔ，−）（Ｍ，Ｐ，−）（Ｇ，Ｖ，−）（Ｒ，−）（Ｇ，Ｍ，−）（Ｄ，Ｈ，Ｌ，Ｔ，Ｗ）（Ａ，Ｇ，Ｎ，Ｗ）（Ｄ，Ｆ，Ｖ，Ｙ）（Ｆ，Ｌ）（Ｄ，Ｅ）（Ｈ，Ｉ，Ｌ，Ｙ）（配列番号113）から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域のＣＤＲ3、
（ｉｖ）コンセンサス配列Ｑ（Ｄ，Ｇ，Ｓ）（Ｉ，Ｖ）（Ｄ，Ｓ）（Ｒ，Ｓ）（Ａ，Ｗ，Ｙ）（配列番号118）から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域のＣＤＲ1、
（ｖ）コンセンサス配列（Ａ，Ｄ）Ａ  Ｓ（配列番号116）から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域のＣＤＲ2、
（ｖｉ）コンセンサス配列Ｑ（Ｆ，Ｒ，Ｙ）（Ｎ，Ｓ）（Ｎ，Ｔ，Ｓ）（Ｙ，Ｗ）Ｐ（Ｆ，Ｌ，Ｐ，Ｒ）Ｔ（配列番号114）から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域のＣＤＲ3、
配列中、「−」は、そのコンセンサス位置にいかなるアミノ酸残基も存在しないという選択肢を示す。
[本発明1046]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ
ＣＤＲ1、ＣＤＲ2、およびＣＤＲ3の配列を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、
単離されたモノクローナル抗体であって、
（ａ）該重鎖可変領域のＣＤＲ3の配列が、配列番号10、28、40、52、64、76、88、106、およびそれらの保存的アミノ酸配列改変体から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）該軽鎖可変領域のＣＤＲ3の配列が、配列番号16、22、34、46、58、70、82、94、100、112、およびそれらの保存的アミノ酸配列改変体から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、
前記抗体。
[本発明1047]
重鎖可変領域のＣＤＲ2の配列が、配列番号9、27、39、51、63、75、87、105、およびそれらの保存的アミノ酸配列改変体から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域のＣＤＲ2の配列が、配列番号15、21、33、45、57、69、81、93、99、111、およびそれらの保存的アミノ酸配列改変体から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、本発明1046の抗体。
[本発明1048]
重鎖可変領域のＣＤＲ1の配列が、配列番号8、26、38、50、62、74、86、104、およびそれらの保存的アミノ酸配列改変体から成る群から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域のＣＤＲ1の配列が、配列番号14、20、32、44、56、68、80、92、98、110、およびそれらの保存的アミノ酸配列改変体から成る群から選択される、本発明1047の抗体。
[本発明1049]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ以下を含む、単離されたモノクローナル抗体：
（ｉ）配列番号38を含む重鎖可変領域のＣＤＲ1、
配列番号39を含む重鎖可変領域のＣＤＲ2、
配列番号40を含む重鎖可変領域のＣＤＲ3、
配列番号44を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ1、
配列番号45を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ2、および
配列番号46を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ3、
（ｉｉ）配列番号50を含む重鎖可変領域のＣＤＲ1、
配列番号51を含む重鎖可変領域のＣＤＲ2、
配列番号52を含む重鎖可変領域のＣＤＲ3、
配列番号56を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ1、
配列番号57を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ2、および
配列番号58を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ3、
（ｉｉｉ）配列番号104を含む重鎖可変領域のＣＤＲ1、
配列番号105を含む重鎖可変領域のＣＤＲ2、
配列番号106を含む重鎖可変領域のＣＤＲ3、
配列番号110を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ1、
配列番号111を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ2、および
配列番号112を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ3、
（ｉｖ）配列番号86を含む重鎖可変領域のＣＤＲ1、
配列番号87を含む重鎖可変領域のＣＤＲ2、
配列番号88を含む重鎖可変領域のＣＤＲ3、
配列番号92もしくは98を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ1、
配列番号93もしくは99を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ2、および
配列番号94もしくは100を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ3、
（ｖ）配列番号26を含む重鎖可変領域のＣＤＲ1、
配列番号27を含む重鎖可変領域のＣＤＲ2、
配列番号28を含む重鎖可変領域のＣＤＲ3、
配列番号32を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ1、
配列番号33を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ2、および
配列番号34を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ3、
（ｖｉ）配列番号74を含む重鎖可変領域のＣＤＲ1、
配列番号75を含む重鎖可変領域のＣＤＲ2、
配列番号76を含む重鎖可変領域のＣＤＲ3、
配列番号80を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ1、
配列番号81を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ2、および
配列番号82を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ3、
（ｖｉｉ）配列番号8を含む重鎖可変領域のＣＤＲ1、
配列番号9を含む重鎖可変領域のＣＤＲ2、
配列番号10を含む重鎖可変領域のＣＤＲ3、
配列番号14もしくは20を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ1、
配列番号15もしくは21を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ2、および
配列番号16もしくは22を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ3、または
（ｖｉｉｉ）配列番号62を含む重鎖可変領域のＣＤＲ1、
配列番号63を含む重鎖可変領域のＣＤＲ2、
配列番号64を含む重鎖可変領域のＣＤＲ3、
配列番号68を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ1、
配列番号69を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ2、および
配列番号70を含む軽鎖可変領域のＣＤＲ3。
[本発明1050]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ
配列番号6、7、24、25、36、37、48、49、60、61、72、73、84、85、102、および103から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも90％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、
単離されたモノクローナル抗体。
[本発明1051]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ
配列番号12、13、18、19、30、31、42、43、54、55、66、67、78、79、90、91、96、97、108、および109から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも90％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、
単離されたモノクローナル抗体。
[本発明1052]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ
以下から成る群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも90％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、
単離されたモノクローナル抗体：
（ａ）それぞれ、配列番号37および43、
（ｂ）それぞれ、配列番号49および55、
（ｃ）それぞれ、配列番号103および109、
（ｄ）それぞれ、配列番号85および91、
（ｅ）それぞれ、配列番号85および97、
（ｆ）それぞれ、配列番号25および31、
（ｇ）それぞれ、配列番号73および79、
（ｈ）それぞれ、配列番号7および13、
（ｉ）それぞれ、配列番号7および19、ならびに
（ｊ）それぞれ、配列番号61および67。
[本発明1053]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ以下を含む、単離されたモノクローナル抗体：
（ａ）配列番号37もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、重鎖可変領域、および配列番号43もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号49もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、重鎖可変領域、および配列番号55もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号103もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、重鎖可変領域、および配列番号109もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、軽鎖可変領域、
（ｄ）配列番号85もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、重鎖可変領域、および配列番号91もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、軽鎖可変領域、
（ｅ）配列番号85もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、重鎖可変領域、および配列番号97もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、軽鎖可変領域、
（ｆ）配列番号25もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、重鎖可変領域、および配列番号31もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、軽鎖可変領域、
（ｇ）配列番号73もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、重鎖可変領域、および配列番号79もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、軽鎖可変領域、
（ｈ）配列番号7もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、重鎖可変領域、および配列番号13もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、軽鎖可変領域、
（ｉ）配列番号7もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、重鎖可変領域、および配列番号19もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、軽鎖可変領域、または
（ｊ）配列番号61もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、重鎖可変領域、および配列番号67もしくはその保存的アミノ酸置換体を含む、軽鎖可変領域。
[本発明1054]
ヒトＣＤ27への結合について本発明1052の抗体と競合する、単離された抗体。
[本発明1055]
本発明1052の抗体によって結合されるエピトープ
に結合する、単離された抗体。
[本発明1056]
ヒト抗体またはヒト化抗体である、前記本発明のいずれかの抗体。
[本発明1057]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ
以下を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗体と、結合について競合する、
単離された抗体：
（ａ）それぞれ、配列番号37および43、
（ｂ）それぞれ、配列番号49および55、
（ｃ）それぞれ、配列番号103および109、
（ｄ）それぞれ、配列番号85および91、
（ｅ）それぞれ、配列番号85および97、
（ｆ）それぞれ、配列番号25および31、
（ｇ）それぞれ、配列番号73および79、
（ｈ）それぞれ、配列番号7および13、
（ｉ）それぞれ、配列番号7および19、または
（ｊ）それぞれ、配列番号61および67。
[本発明1058]
以下を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗体によって結合されるヒトＣＤ27上のエピトープ
に結合する、単離された抗体：
（ａ）それぞれ、配列番号37および43、
（ｂ）それぞれ、配列番号49および55、
（ｃ）それぞれ、配列番号103および109、
（ｄ）それぞれ、配列番号85および91、
（ｅ）それぞれ、配列番号85および97、
（ｆ）それぞれ、配列番号25および31、
（ｇ）それぞれ、配列番号73および79、
（ｈ）それぞれ、配列番号7および13、
（ｉ）それぞれ、配列番号7および19、または
（ｊ）それぞれ、配列番号61および67。
[本発明1059]
ヒトＣＤ27に結合し、かつ
（ａ）それぞれ、配列番号5および11、
（ｂ）それぞれ、配列番号5および17、
（ｃ）それぞれ、配列番号23および29、
（ｄ）それぞれ、配列番号35および41、
（ｅ）それぞれ、配列番号47および53、
（ｆ）それぞれ、配列番号59および65、
（ｇ）それぞれ、配列番号71および77、
（ｈ）配列番号83および89、
（ｉ）配列番号83および95、ならびに
（ｊ）それぞれ、配列番号101および107
から成る群から選択される核酸配列、または
（ａ）〜（ｊ）の核酸配列に対して少なくとも90％の同一性を有する核酸配列
によってコードされる重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、
単離されたモノクローナル抗体。
[本発明1060]
本発明1050または1051のヒトＣＤ27に結合する抗体の軽鎖、重鎖、または軽鎖および重鎖双方の可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む、発現ベクター。
[本発明1061]
本発明1060の発現ベクターで形質転換された細胞。
[本発明1062]
ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4、ＩｇＭ、ＩｇＡ1、ＩｇＡ2、ＩｇＡｓｅｃ、ＩｇＤ、およびＩｇＥ抗体から成る群から選択される、本発明1001〜1010または本発明1016〜1059のいずれかの抗体。
[本発明1063]
ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である、本発明1001〜1010または本発明1016〜1059のいずれかの抗体。
[本発明1064]
本発明1001〜1059のいずれかの抗体または二重特異性分子と、担体とを含む、組成物。
[本発明1065]
アジュバントをさらに含む、本発明1064の組成物。
[本発明1066]
免疫賦活剤をさらに含む、本発明1064または1065の組成物。
[本発明1067]
免疫賦活剤が、ＣＤ40リガンド、ＦＬＴ3リガンド、サイトカイン、コロニー刺激因子、抗ＣＴＬＡ−4抗体、ＬＰＳ（エンドトキシン）、ｓｓＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、カルメット−ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、塩酸レバミソール、静注用免疫グロブリン、およびトール様受容体（ＴＬＲ）作動薬から成る群から選択される、本発明1066の組成物。
[本発明1068]
トール様受容体作動薬が、ＴＬＲ3作動薬、ＴＬＲ4作動薬、ＴＬＲ5作動薬、ＴＬＲ7作動薬、ＴＬＲ8作動薬、およびＴＬＲ9作動薬から成る群から選択される、本発明1067の組成物。
[本発明1069]
免疫抑制剤をさらに含む、本発明1064の組成物。
[本発明1070]
別の抗体をさらに含む、本発明1064の組成物。
[本発明1071]
抗原をさらに含む、本発明1064の組成物。
[本発明1072]
抗原が病原体の成分を含む、本発明1071の組成物。
[本発明1073]
抗原が、腫瘍抗原、アレルゲン、または自己抗原を含む、本発明1071の組成物。
[本発明1074]
抗原が腫瘍抗原を含む、本発明1071の組成物。
[本発明1075]
腫瘍抗原が、βｈＣＧ、ｇｐ100またはＰｍｅｌ17、ＨＥＲ2／ｎｅｕ、ＷＴ1、メソテリン、ＣＥＡ、ｇｐ100、ＭＡＲＴ1、ＴＲＰ−2、ｍｅｌａｎ−Ａ、ＮＹ−ＥＳＯ−1、ＮＹ−ＢＲ−1、ＮＹ−ＣＯ−58、ＭＮ（ｇｐ250）、イディオタイプ、ＭＡＧＥ−1、ＭＡＧＥ−3、ＭＡＧＥ−Ａ3、チロシナーゼ、テロメラーゼ、ＳＳＸ2抗原、ＭＵＣ−1抗原、および生殖細胞由来の腫瘍抗原から成る群から選択される、本発明1074の組成物。
[本発明1076]
抗原に対する免疫応答を誘発または増強するのに有効な量の前記本発明のいずれかの抗体、組成物、または二重特異性分子を対象に投与することを含む、対象における抗原に対する免疫応答を誘発または増強するための方法。
[本発明1077]
抗体が、細胞上のＣＤ27へのＣＤ70の結合を阻害する、本発明1077の方法。
[本発明1078]
抗体が配列番号37および／または43を含む、本発明1077の方法。
[本発明1079]
抗体が、細胞上のＣＤ27へのＣＤ70の結合を阻害しない、本発明1076の方法。
[本発明1080]
抗体が配列番号7、13、および／または19を含む、本発明1079の方法。
[本発明1081]
抗体が完全長抗体である、本発明1076〜1080のいずれかの方法。
[本発明1082]
ＣＤ27発現細胞と、ＣＤ27発現細胞の増殖を阻害するのに有効な量の前記本発明のいずれかの抗体または組成物とを接触させることを含む、ＣＤ27発現細胞の増殖を阻害する方法。
[本発明1083]
細胞を、エフェクター細胞の存在下、標的細胞の抗体依存性細胞介在性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘発するのに十分な条件下で抗体と接触させる、本発明1082の方法。
[本発明1084]
抗体が、10μｇ／ｍＬの濃度で、ＣＤ27発現細胞のＡＤＣＣ媒介性特異的溶解を少なくとも約40％誘発し、かつ配列番号61、67、85、91、97、37、および／または43を含む、本発明1083の方法。
[本発明1085]
細胞を、該細胞のＣＤＣを誘発するのに十分な条件下で抗体と接触させる、本発明1082の方法。
[本発明1086]
抗体が、10μｇ／ｍＬの濃度で、ＣＤ27発現細胞のＣＤＣを少なくとも約40％誘発し、かつ配列番号7、13、19、49、55、103、および／または109を含む、本発明1085の方法。
[本発明1087]
抗体が、ヒトＣＤ27に結合し、かつ細胞上のＣＤ27へのＣＤ70の結合を遮断または防止する、本発明1082の方法。
[本発明1088]
抗体が配列番号37、43、7、13、19、103、および／または109を含む、本発明1087の方法。
[本発明1089]
抗体が、ヒトＣＤ27に結合し、かつ細胞上のＣＤ27へのＣＤ70の結合を遮断または防止しない、本発明1082の方法。
[本発明1090]
抗体が配列番号61、67、85、91、97、7、13、および／または19を含む、本発明1089の方法。
[本発明1091]
抗体が配列番号37、43、7、13、および／または19を含む、本発明1082の方法。
[本発明1092]
抗体が完全長抗体である、本発明1082〜1091のいずれかの方法。
[本発明1093]
抗体が、Ｆｃ受容体に対する第2の結合特異性を備える、本発明1082〜1091のいずれかの方法。
[本発明1094]
細胞が腫瘍細胞である、本発明1082〜1091のいずれかの方法。
[本発明1095]
障害が、白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫および辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、真性多血症リンパ腫（Ｐｏｌｙｃｙｔｈｅｍｉａ  ｖｅｒａ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ）、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、固形腫瘍、肉腫、および癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸肉腫（ｃｏｌｏｎ  ｓａｒｃｏｍａ）、結腸直腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起細胞腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、上咽頭癌、食道癌、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系（ＣＮＳ）癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮体癌、食道癌、眼癌、頭頸部癌、胃癌、上皮内腫瘍、腎臓癌、喉頭癌、肝癌、肺癌（小細胞、大細胞）、黒色腫、神経芽細胞腫、口腔癌（例えば、口唇、舌、口、および咽頭）、卵巣癌、膵癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、ならびに泌尿器系の癌から成る群から選択される癌である、本発明1082の方法。
[本発明1096]
障害が、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫、および辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫から成る群から選択される癌である、本発明1082の方法。
[本発明1097]
障害が、細菌、真菌、ウイルス、および寄生虫感染性の疾患から成る障害の群から選択される、本発明1082の方法。
[本発明1098]
前記本発明のいずれかの抗体、二重特異性分子、または組成物を対象に投与することによる、障害を有する対象における細胞上のＣＤ27へのＣＤ70の結合を阻害する方法。
[本発明1099]
前記本発明のいずれかの抗体、二重特異性分子、または組成物を対象に投与することによる、障害を有する個人におけるＴ細胞応答を下方制御する方法。
[本発明1100]
配列番号37、43、49、55、103、および／または109を含む抗体が対象に投与される、本発明1098の方法。
[本発明1101]
抗体が配列番号37および／または43を含む、本発明1100の方法。
[本発明1102]
抗体がＦａｂ断片である、本発明1098〜1101のいずれかの方法。
[本発明1103]
抗体が変異Ｆｃ領域を含む、本発明1098〜1101のいずれかの方法。
[本発明1104]
障害が、移植片拒絶反応、アレルギー、および自己免疫疾患から成る群から選択される、本発明1098〜1101のいずれかの方法。
[本発明1105]
自己免疫疾患が、多発性硬化症、関節リウマチ、1型糖尿病、乾癬、クローン病および潰瘍性大腸炎等の他の炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性脳脊髄炎、重症筋無力症（ＭＧ）、橋本甲状腺炎、グッドパスチャー症候群、天疱瘡、グレーブス病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、抗コラーゲン抗体による強皮症、混合性結合組織疾患、多発性筋炎、悪性貧血、特発性アジソン病、自己免疫関連性の不妊、糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎、増殖性糸球体腎炎、水疱性類天疱瘡、シェーグレン症候群、乾癬性関節炎、インスリン抵抗性、自己免疫性糖尿病、自己免疫性肝炎、自己免疫性血友病、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性肝炎、自己免疫性血友病、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性ブドウ膜網膜炎、ギラン・バレー症候群、動脈硬化、ならびにアルツハイマー病から成る群から選択される、本発明1104の方法。
[本発明1106]
生物学的試料中のＣＤ27の存在または非存在を検出するための方法であって、
（ａ）生物学的試料と、検出可能な物質で標識されている本発明1001〜1010または本発明1016〜1059のいずれかの抗体とを接触させることと、
（ｂ）ＣＤ27に結合した該抗体を検出し、それによって、該生物学的試料中のＣＤ27の存在または非存在を検出することと
を含む前記方法。
[本発明1107]
ｉ）ヒト抗ＣＤ27抗体またはヒト化抗ＣＤ27抗体、および
ｉｉ）抗原
を対象に投与することによる、該抗原に対する免疫応答をそれを必要とする対象において増強するための方法であって、
該抗ＣＤ27抗体が、該抗原とは別々に、かつ該抗原が投与される前に投与される、
前記方法。
[本発明1108]
抗ＣＤ27抗体が、抗原の少なくとも2時間前に投与される、本発明1107の方法。
[本発明1109]
抗ＣＤ27抗体が、抗原の少なくとも12時間前に投与される、本発明1107の方法。
[本発明1110]
抗ＣＤ27抗体が、抗原の少なくとも24時間前に投与される、本発明1107の方法。
[本発明1111]
抗ＣＤ27抗体が、抗原の少なくとも48時間前に投与される、本発明1107の方法。
[本発明1112]
抗ＣＤ27抗体が、抗原の少なくとも72時間前に投与される、本発明1107の方法。
[本発明1113]
抗ＣＤ27抗体が、抗原の少なくとも2時間前〜96時間前に投与される、本発明1107の方法。
[本発明1114]
ｉ）ヒト抗ＣＤ27抗体またはヒト化抗ＣＤ27抗体、
ｉｉ）ＴＬＲ作動薬、および
ｉｉｉ）任意で、抗原
を対象に同時に、別々に、または連続的に投与することによる、該抗原に対する免疫応答をそれを必要とする対象において増強するための方法。
[本発明1115]
ＴＬＲ作動薬がＴＬＲ3作動薬である、本発明1114の方法。
[本発明1116]
ＴＬＲ作動薬がポリＩＣ：ＬＣである、本発明1114の方法。
本発明の他の特徴および利点は、以下の発明を実施するための形態および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】組換えヒトＣＤ２７をチップ上に固定した状態で、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ）によって判定したときの、ｍＡｂ  １Ｇ５、１Ｈ８、３Ｈ１２、３Ｈ８、２Ｇ９、１Ｆ５、３Ａ１０、２Ｃ２、ｍｓ  １Ａ４、ｍｓ  ９Ｆ４、およびｍｓ  Ｍ−Ｔ２７１の親和性および動力学的パラメータを表す図である。
【図２】ＥＬＩＳＡを使用した、組換え精製したヒトＣＤ２７へのヒト抗ＣＤ２７抗体（２Ｃ２、３Ｈ８、１Ｆ５、１Ｇ５、１Ｈ８、２Ｇ９、３Ａ１０、および３Ｈ１２）の結合を示すグラフである。
【図３】ＥＬＩＳＡによる、組換え精製したヒトまたはサル（マカク）ＣＤ２７への１Ｆ５の結合を示すグラフである。
【図４】ＥＬＩＳＡによる、ＣＤ２７タンパク質への可溶性ＣＤ７０（ｓＣＤ７０）の結合に対する、ヒト抗ＣＤ２７抗体（２Ｃ２、３Ｈ８、１Ｆ５、１Ｇ５、１Ｈ８、２Ｇ９、３Ａ１０、および３Ｈ１２）およびＭｓＩｇＧ（１Ａ４、９Ｆ４およびＭ−Ｔ２７１）の効果を示すグラフである（遮断率（％）で示す）。
【図５】ヒトリンパ芽球様細胞株への１Ｆ５の結合、およびsＣＤ７０結合の遮断のフローサイトメトリー分析を示す図である。
【図６】図６Ａ〜Ｄは、フローサイトメトリーによって評価したときの、Ｊｕｒｋａｔ細胞（図４Ａ）、Ｒａｊｉ細胞（図４Ｂ）、Ｒａｍｏｓ細胞（図４Ｃ）、およびＤａｕｄｉ細胞（図４Ｄ）上のＣＤ２７へのヒト抗ＣＤ２７抗体（２Ｃ２、３Ｈ８、および１Ｆ５）の結合を示すグラフである。
【図７】フローサイトメトリーによって評価したときの、Ｄａｕｄｉ細胞上のＣＤ２７へのヒト抗ＣＤ２７抗体（２Ｃ２、３Ｈ８、１Ｆ５、１Ｇ５、１Ｈ８、２Ｇ９、３Ａ１０、および３Ｈ１２）の結合を示すグラフである。
【図８】抗ＣＤ２７の交差遮断のＥＬＩＳＡ実験の結果を示す棒グラフであり、抗体１Ｆ５、１Ｈ８、および３Ｈ１２が互いに交差遮断し、したがって同じエピトープに結合することを実証している。
【図９】抗ＣＤ２７の交差遮断のＥＬＩＳＡ実験の結果を示す棒グラフであり、抗体２Ｃ２、３Ｈ８、１Ｇ５、および２Ｇ９が互いに交差遮断し、したがって同じエピトープに結合することを実証している。
【図１０】抗ＣＤ２７の交差遮断のＥＬＩＳＡ実験の結果を示す棒グラフであり、ＣＤ２７への抗体３Ａ１０の結合は、試験した他の抗ＣＤ２７抗体のいずれによっても完全には交差遮断されず、したがって、３Ａ１０は、固有のエピトープに結合するが、３Ａ１０の結合は、抗体１Ｆ５、１Ｈ８、および３Ｈ１２によって部分的に交差遮断されることを示し、３Ａ１０に対するエピトープは、抗体１Ｆ５、１Ｈ８、および３Ｈ１２が結合したエピトープに近いものであり得ることを実証している。
【図１１】ｍＡｂ  １Ｆ５、２Ｃ２、３Ｈ８、１Ｇ５、１Ｈ８、２Ｇ９、３Ａ１０、および３Ｈ１２を使用した、補体依存性細胞介在性細胞傷害性（ＣＤＣＣ）アッセイの結果を表すグラフである。
【図１２】ｍＡｂ  １Ｆ５を使用した、さらなる補体依存性細胞介在性細胞傷害性（ＣＤＣＣ）アッセイの結果を表すグラフである。
【図１３】ｍＡｂ  ２Ｃ２、１Ｆ５、３Ｈ８、１Ｇ５、１Ｈ８、２Ｇ９、３Ａ１０、３Ｈ１２、リツキサン（Ｒｉｔｕｘａｎ）、およびＨｕｌｇＧを使用した、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）アッセイの結果を表すグラフである。
【図１４】ｍＡｂ  １Ｆ５を使用した、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）アッセイの結果を表すグラフである。
【図１５】ヒト抗ＣＤ２７抗体（１Ｆ５、１Ｇ５、１Ｈ８、２Ｃ２、２Ｇ９、３Ａ１０、３Ｈ１２、および３Ｈ８）のＶＨ配列のアラインメントの図である。
【図１６】ヒト抗ＣＤ２７抗体（１Ｆ５、１Ｇ５、１Ｈ８、２Ｃ２、２Ｇ９、３Ａ１０、３Ｈ１２、および３Ｈ８）のＶＬ配列のアラインメントの図である。
【図１７】ｍＡｂ  １Ｆ５を使用した、インビボの非ヒト霊長類研究による結果を示す図である。具体的には、図１７は、単回投薬後の循環リンパ球上の１Ｆ５を示す。
【図１８】ｍＡｂ  １Ｆ５を使用した、インビボの非ヒト霊長類研究による結果を示す図である。具体的には、図１８は、１Ｆ５が循環リンパ球を有意には減少させないことを示す。
【図１９】マウス末梢血球および脾細胞に関する五量体染色アッセイの結果を表す図である。
【図２０】抗ＣＤ２７抗体を使用した、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果および増強したＩＦＮγ産生を表す図である。
【図２１】五量体染色およびＩＦＮ  ＥＬＩＳＰＯＴによる、トランスジェニックマウスモデルにおけるワクチン抗原に対するＴ細胞応答の、抗ＣＤ２７ ｍＡｂによる増強を示す図である。
【図２２】図２２Ａ〜Ｃは、抗ＣＤ２７が、ＡＰＣ標的ワクチン（α−ＤＥＣ２０５−ＯＶＡ）に対するＴ細胞応答を増強することを示す、実験のプロトコルおよび結果の図である。図２２Ａは、実験のプロトコルを示す図である。図２２Ｂは、抗原特異的Ｔ細胞を測定するための四量体染色実験の結果を示す図である。図２２Ｃは、抗原特異的Ｔ細胞を測定するためのＩＦＮ−ガンマＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果を示す図である。
【図２３】図２３Ａ〜Ｄは、ＴＬＲ３作動薬ＰｏｌｙＩＣ（２５μｇ、５０μｇ、または１００μｇで）と組み合わせた抗ＣＤ２７が、ＡＰＣ標的ワクチン（α−ＤＥＣ２０５−ＯＶＡ）に対するＴ細胞応答を増強することを示す、実験の結果を示す図である。図２３Ａは、ポリＩＣおよび抗ＣＤ２７ ｍＡｂ  １Ｆ５で治療した野生型マウス、ポリＩＣおよび対照ヒトＩｇＧ１抗体で治療したｈｕＣＤ２７トランスジェニックマウス、またはポリＩＣおよび抗ＣＤ２７ ｍＡｂ  １Ｆ５で治療したｈｕＣＤ２７トランスジェニックマウスのいずれかの、ＣＤ８＋Ｔ細胞のうちのＩＦＮ−γ陽性細胞の割合を示すグラフである。
【図２４】Ｔ：ＬＲ作動薬の存在下または非存在下でのワクチン接種前の抗ＣＤ２７ ｍＡｂの投与の研究による結果を示し、また、ワクチンに対する抗体の投与のタイミングの有意性を示す図である。
【図２５】Ｔ：ＬＲ作動薬の存在下または非存在下でのワクチン接種前の抗ＣＤ２７ ｍＡｂの投与の研究による結果を示し、また、ワクチンに対する抗体の投与のタイミングの有意性を示す図である。
【図２６】増殖およびサイトカイン産生によって示される、ヒトＣＤ２７トランスジェニックマウス由来のＴＣＲ活性化イオン（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｏｎ）Ｔ細胞と組み合わせた抗ＣＤ２７ ｍＡｂの投与による結果を示す図である。
【図２７】増殖およびサイトカイン産生によって示される、ヒトＣＤ２７トランスジェニックマウス由来のＴＣＲ活性化イオン（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｏｎ）Ｔ細胞と組み合わせた抗ＣＤ２７ ｍＡｂの投与による結果を示す図である。
【図２８】図２８Ａ〜Ｄは、抗ＣＤ２７が、ＭＯ４（Ｂ１６−ＯＶＡ）メラノーマチャレンジモデルにおけるα−ＤＥＣ２０５−ＯＶＡワクチンの有効性を増強することを示す、実験のプロトコルおよび結果を示す図である。図２４Ａは、実験のためのプロトコルを示す。図２４Ｂは、処置しなかったマウスにおける腫瘍接種後の日数に対する腫瘍サイズ（ｍｍ２）をプロットしたグラフである。図２４Ｃは、ワクチンで単独で処置したマウスにおける腫瘍接種後の日数に対する腫瘍サイズ（ｍｍ２）をプロットしたグラフである。図２４Ｄは、抗ＣＤ２７抗体と組み合わせたワクチンで処置したマウスにおける腫瘍接種後の日数に対する腫瘍サイズ（ｍｍ２）をプロットしたグラフである。
【図２９】図２９ＡおよびＢは、同一遺伝子のリンパ腫によるチャレンジ、および種々の用量の抗ＣＤ２７ ｍＡｂ  １Ｆ５の投与後の、ヒトＣＤ２７トランスジェニックマウス（腫瘍モデル）の延長された生存を示すグラフである。
【図３０】ＳＣＩＤマウスのＲａｊｉ異種移植モデルにおける抗ＣＤ２７治療の効果を試験する実験の結果を示す図である。図３０Ａは、処置をしなかったマウス、対照ヒトＩｇＧ１抗体で処置したマウス、または抗ＣＤ２７  １Ｆ５および３Ｈ８抗体で処置したマウスの、腫瘍接種後の日数に対する腫瘍サイズ（ｍｍ３）をプロットした図である。矢印は、腹腔内注射によって抗体治療が与えられた日を示す。図３０Ｂは、生存をカプラン−マイヤープロットで示す図である。
【図３１】ＳＣＩＤマウスのＲａｊｉ異種移植モデルにおける抗ＣＤ２７治療の効果を試験する実験の結果を示す図である。図３１Ａは、処置をしなかったマウス、対照ヒトＩｇＧ１抗体で処置したマウス、または抗ＣＤ２７  １Ｆ５抗体で処置したマウスの、腫瘍接種後の日数に対する腫瘍サイズ（ｍｍ３）をプロットした図である。矢印は、腹腔内注射によって抗体治療が与えられた日を示す。図３１Ｂは、生存をカプラン−マイヤープロットで示す図である。
【図３２】ＳＣＩＤマウスのＲａｊｉ異種移植モデルにおける抗ＣＤ２７治療の効果を試験するさらなる実験の結果をカプラン−マイヤープロットで示す図である。
【図３３】ＳＣＩＤマウスのＤａｕｄｉ異種移植モデルにおける抗ＣＤ２７処置の効果を試験する実験の結果を示す図である。図３３Ａは、対照ヒトＩｇＧ１抗体で処置したマウス、または抗ＣＤ２７  １Ｆ５抗体で処置したマウス（０．１ｍｇまたは０．３ｍｇ）の、腫瘍接種後の日数に対する腫瘍サイズ（ｍｍ３）のプロットである。矢印は、腹腔内注射によって抗体治療が与えられた日を示す。図３３Ｂは、生存をカプラン−マイヤープロットで示す図である。
【図３４】ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果を示し、ＩｇＧのＦｃ部分がＦｃ受容体に係合できない場合、抗ＣＤ２７抗体を用いる増強された抗原特異的ＩＦＮｇの産生が、抑制されることを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４４】
発明の詳細な説明
本発明は、免疫機能（例えば、ワクチン療法にあるようなＴ細胞媒介性免疫応答、癌治療におけるＮＫ活性化）の上方制御、細胞増殖（例えば、癌治療において）の阻害、およびＴ細胞媒介性免疫応答（例えば、自己免疫性治療において）の下方制御を含む、顕著な治療効果と相関する特定の機能的性質を呈する、抗ＣＤ２７抗体を提供する。これらの機能的特徴としては、例えば、（１）ＣＤ２７発現細胞への可溶性ＣＤ７０の結合の、少なくとも約７０％、さらには、例えば、少なくとも８０％または少なくとも９０％の阻害（例えば、完全なまたは部分的な遮断）、（２）１×１０−９Ｍ以下のＫＤでのヒトＣＤ２７への結合、（３）１０μｇ／ｍＬの濃度での、ＣＤ２７発現細胞の、少なくとも約４０％の補体媒介性細胞傷害性（ＣＤＣ）の誘発、（４）１０μｇ／ｍＬの濃度での、ＡＤＣＣによるＣＤ２７発現細胞の、少なくとも約４０％の特異的溶解（さらには、例えば、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、または少なくとも約７０％の特異的溶解）の誘発、（５）免疫応答、特にＴＨ１応答の誘発または増強、および／または（６）Ｔ細胞活性、特に特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の数および／または活性の誘発または増強が挙げられる。他の実施形態において、抗体は、特定の重鎖可変領域および軽鎖可変領域、ならびに／またはＣＤＲの配列を含む。
【００４５】
本発明がより容易に理解され得るように、最初に、特定の用語が定義される。さらなる定義は、発明を実施するための形態の全体を通して記述される。
【００４６】
「ＣＤ２７」という用語（「ＣＤ２７分子」、「ＣＤ２７Ｌ受容体」、「Ｓ１５２１」、「Ｔ細胞活性化抗原ＣＤ２７」、「ＴＮＦＲＳＦ７」、「ＭＧＣ２０３９３」、「腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー、メンバー７」、「Ｔ細胞活性化抗原Ｓ１５２」「Ｔｐ５５」、「腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー７」、「ＣＤ２７抗原」、および「Ｔ細胞活性化抗原ＣＤ２７」とも称される）は、リガンドＣＤ７０に結合する、ＴＮＦ−受容体スーパーファミリーのメンバーである受容体を指す。ＣＤ２７は、Ｔ細胞免疫の生成および長期にわたる維持に必要とされ、Ｂ細胞活性化および免疫グロブリン合成を調節する際に重要な役割を果たす。「ＣＤ２７」という用語は、細胞によって自然に発現するＣＤ２７の任意の変異体またはアイソフォームを含む（例えば、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＡＡＨ１２１６０．１で寄託されるヒトＣＤ２７）。故に、本発明の抗体は、ヒト以外の種由来のＣＤ２７と交差反応し得る。代替として、抗体は、ヒトＣＤ２７に特異的であってもよく、他の種との任意の交差反応性を呈しなくてもよい。ＣＤ２７または任意の変異体およびそのアイソフォームは、それらを自然に発現する細胞または組織から単離されてもよく、または当技術分野でよく知られている手法および／または本明細書で説明される手法を使用して組換えにより産生されてもよい。好ましくは、抗体は、正常なグリコシル化パターンを有するｈＣＤ２７を標的とする。
【００４７】
Ｇｅｎｂａｎｋ（登録商標）（アクセッション番号ＡＡＨ１２１６０．１）は、以下のように、ヒトＣＤ２７のアミノ酸配列を報告している（配列番号１）。
0006002659.tif 000004
【００４８】
「ＣＤ７０」という用語（「ＣＤ７０分子」、「ＣＤ２７Ｌ」、「ＣＤ２７ＬＧ」、「ＴＮＦＳＦ７」、「腫瘍壊死因子（リガンド）スーパーファミリーメンバー７」、「ＣＤ２７リガンド」、「ＣＤ７０抗原」、「表面抗原ＣＤ７０」、「腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリー、メンバー７」、「Ｋｉ−２４抗原」、および「ＣＤ２７−Ｌ」とも称される）は、ＣＤ２７のリガンドを指す（例えば、Ｂｏｗｍａｎ  ＭＲ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４  Ｆｅｂ  １５；１５２（４）：１７５６−６１を参照されたい）。ＣＤ７０は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）リガンドファミリーに属する、ＩＩ型膜貫通タンパク質である。それは、共刺激されたＴ細胞の増殖を誘発し、細胞溶解性Ｔ細胞の生成を増強し、Ｔ細胞活性化に寄与する、ＴおよびＢリンパ球上の表面抗原である。ＣＤ７０は、Ｂ細胞の活性化、ナチュラルキラー細胞の細胞傷害性機能、および免疫グロブリンの合成に関与することも示唆されている（Ｈｉｎｔｚｅｎ  ＲＱ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４  Ｆｅｂ  １５；１５２（４）：１７６２−７３）。
【００４９】
Ｇｅｎｂａｎｋ（登録商標）（アクセッション番号ＮＰ＿００１２４３）は、以下のように、ヒトＣＤ７０のアミノ酸配列を報告している（配列番号２）。
0006002659.tif 000005
【００５０】
本明細書で参照される「抗体」という用語は、抗体全体および任意の抗原結合断片（すなわち、「抗原結合部分」）、またはその単一鎖を含む。「抗体」は、好ましい一実施形態において、ジスルフィド結合によって相互接続する少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質、またはその抗原結合部分を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書では、ＶＨと略記される）および重鎖定常領域から成る。重鎖定常領域は、３つのドメイン、すなわち、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３から成る。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書では、ＶＬと略記される）および軽鎖定常領域から成る。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、すなわち、ＣＬから成る。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに細分化することができ、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と称される、より保存された領域とともに散在している。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲと、４つのＦＲとから成り、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で、アミノ末端からカルボキシル末端まで配列される。重鎖可変領域および軽鎖可変領域は、抗原と相互作用する、結合領域を含む。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【００５１】
本明細書で使用される、抗体の「抗原結合部分」（または単純に「抗体部分」）という用語は、抗原（例えば、ヒトＣＤ２７）に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つ以上の断片を指す。そのような「断片」は、例えば、約８個〜約１５００個の間の長さのアミノ酸、適切には、約８個〜約７４５個の間の長さのアミノ酸、適切には、約８個〜約３００個、例えば約８個〜約２００個のアミノ酸、または約１０個〜約５０個もしくは１００個の長さのアミノ酸である。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって行うことができることが示されている。抗体の「抗原結合部分」という用語の範囲内に包含される結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、すなわち、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインから成る一価の断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ'）２断片、すなわち、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結される２個のＦａｂ断片を含む二価の断片、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインから成るＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一の腕のＶＬおよびＶＨドメインから成るＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインから成るｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）、（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、または（ｖｉｉ）合成リンカーによって任意で連結されてもよい、２つ以上の単離ＣＤＲの組み合わせ、が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬ、およびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、それらを、組換え方法を使用して、ＶＬ領域およびＶＨ領域を一対にして、単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている一価の分子を形成する単一のタンパク質鎖として作製することを可能にする、合成リンカーによって連結することができる。例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６、および  Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照されたい。そのような１本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されることを意図している。これらの抗体断片は、当業者に知られている従来の手法を使用して得られ、該断片は、無傷の抗体と同じ様式で、有用性がスクリーニングされる。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ手法によって、または無傷の免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断によって産生することができる。
【００５２】
「二重特異性」または「二機能性抗体」は、２つの異なる重鎖／軽鎖の対および２つの異なる結合部位を有する、人工ハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ'断片の連結を含む種々の方法によって産生することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ＆  Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１（１９９０）、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい。
【００５３】
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、特定のエピトープに対しての単一の結合特異性および親和性を示す、抗体を指す。故に、「ヒトのモノクローナル抗体」という用語は、単一の結合特異性を示し、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および任意で定常領域を有する、抗体を指す。一実施形態において、ヒトのモノクローナル抗体は、不死化した細胞と融合させた、ヒト重鎖導入遺伝子と軽鎖導入遺伝子とを含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物（例えば、トランスジェニックマウス）から得られるＢ細胞を含む、ハイブリドーマによって産生される。
【００５４】
本明細書で使用される「組換えヒト抗体」という用語は、組換え手段によって調製される、発現させる、作成される、または単離される、全てのヒト抗体を含み、すなわち、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニックもしくはトランスクロモソーマル動物（例えばマウス）から、またはそれから調製したハイブリドーマから単離される抗体、（ｂ）抗体を発現するように形質転換した宿主細胞、例えばトランスフェクトーマから単離される抗体、（ｃ）組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離される抗体、および（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライシングすることを含む、任意の他の手段によって調製される、発現させる、作成される、または単離される抗体、等である。そのような組換えヒト抗体は、生殖系列遺伝子によってコードされる特定のヒト生殖系列免疫グロブリン配列を利用するが、例えば抗体成熟中に起こる、以降の再編成および変異を含む、可変領域および定常領域を含む。当技術分野で知られているように（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ（２００５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３（９）：１１１７−１１２５を参照されたい）、可変領域は、再編成して異種抗原に特異的な抗体を形成する種々の遺伝子によってコードされる、抗原結合ドメインを含む。再編成に加えて、可変領域は、異種抗原に対する抗体の親和性を増加させるために、複数の単一アミノ酸変化（体細胞変異または超変異と称される）によってさらに改変することができる。定常領域は、さらに、抗原にさらに応答して変化する（すなわち、アイソタイプスイッチ）。したがって、抗原に応答して軽鎖および重鎖免疫グロブリンポリペプチドをコードする、再編成されて体細胞的に変異させた核酸分子は、元の核酸分子との配列同一性を有しない場合があるが、代わりに、実質的に同一であるかまたは類似する（すなわち、少なくとも８０％の同一性を有する）。
【００５５】
「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列の可変領域および定常領域（存在する場合）を有する抗体を含む。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（インビトロのランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発によって、またはインビボの体細胞変異によって導入される変異）を含むことができる（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９）、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９４）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３：４９−１０１; Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｄ．（１９９５）  Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．１３：６５−９３、およびＨａｒｄｉｎｇ，Ｆ．ａｎｄ  Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９５）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ７６４：５３６−５４６）を参照されたい）。しかしながら、「ヒト抗体」という用語は、マウス等の別の哺乳類の種の生殖系列由来のＣＤＲの配列がヒトフレームワーク配列上に移植された抗体（すなわち、ヒト化抗体）を含まない。
【００５６】
本明細書で使用される「異種抗体」は、そのような抗体を産生するトランスジェニック非ヒト生物に関連して定義される。この用語は、トランスジェニック非ヒト動物から成らない生物に見られるものに対応する、アミノ酸配列またはコード核酸配列を有し、概して、トランスジェニック非ヒト動物のアミノ酸配列以外の種に由来する抗体を指す。
【００５７】
本明細書で使用される「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体（例えば、ヒトＣＤ２７に特異的に結合する単離された抗体は、ヒトＣＤ２７以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）を指すことを意図している。しかしながら、エピトープに特異的に結合する単離された抗体は、異なる種由来の他のＣＤ２７タンパク質に対する交差反応性を有し得る。しかしながら、抗体は、好ましくは常時ヒトＣＤ２７に結合する。加えて、単離された抗体は、一般的に、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まない。本発明の一実施形態では、異なるＣＤ２７特異性を有する「単離された」抗体の組み合わせは、明確な組成で組み合わせられる。
【００５８】
「エピトープ」または「抗原決定基」という用語は、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する、抗原上の部位を指す。エピトープは、隣接するアミノ酸、またはタンパク質の三次折り畳みによって並置される隣接しないアミノ酸のどちらからも形成することができる。隣接するアミノ酸から形成されるエピトープは、一般的に、変性溶媒への暴露の際に保持される一方で、三次折り畳みによって形成されるエピトープは、一般的に、変性溶媒での処理によって失われる。エピトープは、一般的に、少なくとも３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、または１５個のアミノ酸を特有の空間的高次構造で含む。所与の抗体がどのようなエピトープに結合したのかを判定するための方法（すなわち、エピトープマッピング）は、当技術分野でよく知られており、例えば、免疫ブロット法および免疫沈澱アッセイが挙げられ、ＣＤ２７由来の重複または隣接するペプチドは、所与の抗ＣＤ２７抗体との反応性について試験される。エピトープの空間的高次構造を決定する方法としては、当技術分野の手法および本明細書で説明されるもの、例えばＸ線結晶学および２次元核磁気共鳴が挙げられる（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照されたい）。
【００５９】
また、本明細書で説明される特定の抗体によって認識されるエピトープの全てまたは一部（例えば、同じもしくは重複領域、または領域の間、もしくは領域にまたがる）を含む、ＣＤ２７上のエピトープに結合する抗体も、本発明に包含される。
【００６０】
また、同じエピトープに結合する抗体、および／またはヒトＣＤ２７への結合について本明細書で説明される抗体と競合する抗体も、本発明に包含される。同じエピトープを認識するか、または結合に対して競合する抗体は、通常の手法を使用して同定することができる。そのような手法としては、例えば、ある抗体が、標的抗原への別の抗体の結合を遮断する能力を示す、免疫アッセイ、すなわち、競合的結合アッセイが挙げられる。競合的結合は、試験中の免疫グロブリンが、ＣＤ２７等の共通抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイで判定される。数多くの種類の競合的結合アッセイが知られており、例えば、固相直接または間接放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ９：２４２（１９８３）を参照されたい）、固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９８６）を参照されたい）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（１９８８）を参照されたい）、Ｉ−１２５標識を使用した固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７（１９８８）を参照されたい）、固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７６：５４６（１９９０）を参照されたい）、および直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７（１９９０））である。一般的に、そのようなアッセイは、非標識試験免疫グロブリンおよび標識参照免疫グロブリンのいずれかを保有する固体表面または細胞に結合した精製した抗原の使用を含む。競合的阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面または細胞に結合する標識の量を判定することによって測定される。通常、試験免疫グロブリンは、過度に存在する。通常、競合抗体が過剰に存在するときには、少なくとも５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％、またはそれ以上、共通抗原への参照抗体の特異的結合を阻害する。
【００６１】
他の手法としては、例えば、エピトープの原子分解を提供する抗原−抗体複合体の結晶のＸ線分析等の、エピトープマッピング法が挙げられる。他の方法は、抗原の断片または抗原の変異バリエーションへの抗体の結合を監視し、抗原配列内のアミノ酸残基の改変による結合の喪失は、しばしば、エピトープ成分の指標とみなされる。加えて、エピトープマッピングのための計算的コンビナトリアル方法も使用することができる。これらの方法は、コンビナトリアルファージディスプレイペプチドライブラリーから特異的短ペプチドを親和性単離する、関心の抗体の能力に依存する。よって、ペプチドは、ペプチドライブラリーをスクリーニングするために使用される抗体に対応するエピトープの定義に関する手がかりであると考えられる。エピトープマッピングについて、高次構造的な非連続性エピトープをマップすることが分かっている、計算アルゴリズムも開発されている。
【００６２】
本明細書で使用される「特異的結合」、「選択的結合」、「選択的に結合する」、および「特異的に結合する」という用語は、所定の抗原上のエピトープへの抗体結合を指す。一般的に、抗体は、検体として組換えヒトＣＤ２７を使用し、リガンドとして本抗体を使用して、ＢＩＡＣＯＲＥ２０００計測器の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって判定したときに、約１０−７Ｍ未満（約１０−８Ｍ未満、約１０−９Ｍ未満、約１０−１０Ｍ未満、またはそれより少ない等）の平衡解離定数（ＫＤ）で結合し、また、所定の抗原または密接に関連する抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合に関するその親和性よりも少なくとも２倍大きい親和性で所定の抗原に結合する。本明細書では、「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」という句は、「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と同じ意味で使用される。
【００６３】
本明細書で使用される「ＫＤ」という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離平衡定数を指すことを意図している。一般的に、本発明のヒト抗体は、検体として組換えヒトＣＤ２７を使用し、リガンドとして本抗体を使用して、ＢＩＡＣＯＲＥ２０００計測器の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって判定したときに、約１０−８Ｍ以下（約１０−９Ｍ未満、約１０−１０Ｍ未満、またはそれより少ない等）の平衡解離定数（ＫＤ）でＣＤ２７に結合する。
【００６４】
本明細書で使用される「ｋｄ」という用語は、抗体−抗原複合体からの抗体の解離に関するオフレート定数を指すことを意図している。
【００６５】
本明細書で使用される「ｋａ」という用語は、抗体と抗原との会合に関するオンレート定数を指すことを意図している。
【００６６】
本明細書で使用される「ＥＣ５０」という用語は、最大応答の５０％、すなわち、最大応答と基線との間の中間である応答を、インビトロまたはインビボアッセイのいずれかで誘発する、抗体またはその抗原結合部分の濃度を指す。
【００６７】
本明細書で使用される「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる、抗体クラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）を指す。一実施形態において、本発明のヒトモノクローナル抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプである。別の実施形態において、本発明のヒトモノクローナル抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプである。
【００６８】
「固定化ＣＤ２７に結合する」という用語は、例えば細胞の表面上で発現させた、または固体支持体に付着したＣＤ２７に結合する、本発明のヒト抗体の能力を指す。
【００６９】
本明細書で使用される「交差反応する」という用語は、異なる種由来のＣＤ２７に結合する、本発明の抗体の能力を指す。例えば、ヒトＣＤ２７に結合する本発明の抗体はまた、ＣＤ２７の別の種に結合し得る。本明細書で使用される交差反応性は、結合アッセイ（例えば、ＳＰＲ、ＥＬＩＳＡ）において、精製した抗原との特異的反応性の検出によって、またはＣＤ２７を生理学的に発現する細胞との結合、もしくはそうでなければそれとの機能的相互作用の検出によって測定する。交差反応性を判定するための方法としては、例えばＢｉａｃｏｒｅ（商標）２０００ＳＰＲ計測器（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用したＢｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析、またはフローサイトメトリー法による、本明細書で説明される標準的な結合アッセイが挙げられる。
【００７０】
本明細書で使用される「アイソタイプスイッチング」は、抗体のクラスまたはアイソタイプが、あるＩｇクラスから別のＩｇクラスの１つに変化する現象を指す。
【００７１】
本明細書で使用される「非スイッチングアイソタイプ」は、いかなるアイソタイプスイッチングも行われなかったときに産生される、重鎖のアイソタイプクラスを指し、非スイッチングアイソタイプをコードするＣＨ遺伝子は、一般的に、機能的に再編成されたＶＤＪ遺伝子のすぐ下流の第１のＣＨ遺伝子である。アイソタイプスイッチングは、古典的または非古典的アイソタイプスイッチングに分類されている。古典的アイソタイプスイッチングは、導入遺伝子の少なくとも１つのスイッチ配列領域を含む組換え事象によって起こる。非古典的アイソタイプスイッチングは、例えばヒトσμとヒトΣμとの間の相同的組換え（δ関連欠失）によって起こり得る。とりわけ、導入遺伝子間および／または染色体間組換え等の代替的な非古典的スイッチング機構が起こり、アイソタイプスイッチングを達成することがあり得る。
【００７２】
本明細書で使用される「スイッチ配列」という用語は、スイッチ組換えを担うＤＮＡ配列を指す。「スイッチドナー」配列、一般的にμスイッチ領域は、スイッチ組換え中に削除される構成領域の５'（すなわち上流）側となる。「スイッチ受容体」領域は、削除される構成領域と置換定常領域（例えば、γ、ε等）の間となる。組換えが常時起こる特異的な部位はないので、最終的な遺伝子配列は、一般的に、構築体からは予測できないと考えられる。
【００７３】
本明細書で使用される「グリコシル化パターン」は、タンパク質、より具体的には、免疫グロブリンタンパク質に共有結合した、糖質ユニットのパターンとして定義される。異種抗体のグリコシル化パターンは、当業者が、該異種抗体のグリコシル化パターンが、導入遺伝子のＣＨ遺伝子が由来する種のグリコシル化のパターンよりも、非ヒトトランスジェニック動物の種の該パターンに類似していると認識する場合に、非ヒトトランスジェニック動物の種によって産生される抗体に自然発生するグリコシル化パターンに実質的に類似していると特徴付けられうる。
【００７４】
本明細書で使用される、物体に適用される「自然発生の」という用語は、ある物体を天然で見出すことができるという事実を指す。例えば、天然の源から単離することができ、かつ実験者によって意図的に改変されていない、生物（ウイルスを含む）の中に存在するポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、自然発生である。
【００７５】
本明細書で使用される「再編成した」という用語は、重鎖または軽鎖免疫グロブリン座の構成を指し、その構成において、Ｖセグメントは、完全なＶＨまたはＶＬドメインを本質的にコードする高次構造においてＤ−ＪまたはＪセグメントに直接隣接して位置する。再編成した免疫グロブリン遺伝子座は、生殖系列ＤＮＡとの比較によって同定することができ、再編成した座は、少なくとも１つの再び組み合わせた七量体／九量体相同性要素を有する。
【００７６】
Ｖセグメントに関して本明細書で使用される「非再編成」または「生殖系列構成」という用語は、ＶセグメントがＤまたはＪセグメントに直接隣接するように再び組み合わされていない構成を指す。
【００７７】
本明細書で使用される「核酸分子」という用語は、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を含むことを意図している。核酸分子は、１本鎖または２本鎖であってもよいが、好ましくは２本鎖ＤＮＡである。
【００７８】
ＣＤ２７に結合する抗体または抗体部分（例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲ３）をコードする核酸に関して本明細書で使用される「単離された核酸分子」という用語は、抗体または抗体部分をコードするヌクレオチド配列が、ＣＤ２７以外の抗原に結合する抗体または抗体部分をコードする他のヌクレオチド配列を含まない核酸分子を指すことを意図しており、他の配列は、ヒトゲノムＤＮＡの核酸において自然に隣接してもよい。例えば、配列番号３５および４１、４７および５３、１０１および１０７、８３および８９、８３および９５、２３および２９、７１および７７は、それぞれ、抗ＣＤ２７抗体モノクローナル抗体１Ｆ５、１Ｈ８、３Ｈ１２、３Ａ１０、２Ｃ２、２Ｇ９、３Ｈ８および１Ｇ５の重鎖（ＶＨ）可変領域および軽鎖（ＶＬ）可変領域を含む、ヌクレオチド配列に対応する。
【００７９】
本発明はまた、配列番号５〜１１２で記述される配列の「保存的配列改変」、すなわち、ヌクレオチド配列によってコードされるか、またはアミノ酸配列を含む抗体の抗原への結合を排除しない、ヌクレオチドおよびアミノ酸配列の改変も包含する。そのような保存的配列改変としては、保存的ヌクレオチドおよびアミノ酸置換、ならびにアミノ酸付加および欠失が挙げられる。例えば、改変は、部位特異的突然変異およびＰＣＲ媒介性変異誘発等の当技術分野で知られている標準的な手法によって、配列番号５〜１１２の中に導入することができる。保存的アミノ酸置換としては、アミノ酸残基を、類似する側鎖を有するアミノ酸残基と置換したものが挙げられる。類似する側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖を伴うアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を伴うアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を伴うアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を伴うアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖を伴うアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖を伴うアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。したがって、ヒト抗ＣＤ２７抗体中の予測される非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリー由来の別のアミノ酸残基と置換される。抗原結合を排除しないヌクレオチドおよびアミノ酸の保存的置換を同定する方法は当技術分野においてよく知られている、（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１１８０−１１８７（１９９３）、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１２（１０）：８７９−８８４（１９９９）、およびＢｕｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：４１２−４１７（１９９７）を参照されたい）。
【００８０】
代替として、別の実施形態において、変異は、飽和変異誘発等によって抗ＣＤ２７抗体の全部または一部に沿って無作為に導入することができ、結果として生じる改変された抗ＣＤ２７抗体は、結合活性についてスクリーニングすることができる。
【００８１】
核酸について、「実質的な相同性」という用語は、最適に配列して比較したときに、２つの核酸またはその指定された配列が、適切なヌクレオチド挿入体または欠失体と、少なくとも約８０％のヌクレオチド、通常は少なくとも約９０％〜９５％、より好ましくは約９８％〜９９．５％のヌクレオチドが同一であることを示す。代替として、実質的な相同性は、選択的ハイブリッド形成条件下で、セグメントが相補鎖にハイブリッド形成するときに存在する。
【００８２】
２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要がある、ギャップの数、および各ギャップの長さを考慮した、配列が共有する同一の位置の数の関数（すなわち、同一性％＝同一の位置の数÷位置の総数×１００）である。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの判定は、下記の限定的でない例で説明されるように、数学アルゴリズムを使用して達成することができる。
【００８３】
２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰ行列、４０、５０、６０、７０、または８０のギャップウェイト、および１、２、３、４、５、または６の長さウェイトを使用した、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムを使用して決定することができる。２つのヌクレオチド配列間またはアミノ酸配列間の同一性パーセントはまた、ＰＡＭ１２０ウェイト残基表、１２のギャップ長さペナルティ、および４のギャップペナルティを使用した、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥ．Ｍｅｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム（ＣＡＢＩＯＳ，４：１１−１７（１９８９））を使用して決定することもできる。さらに、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２行列またはＰＡＭ２５０行列のいずれか、および１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップウェイト、および１、２、３、４、５、または６の長さウェイトを使用した、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）のＧＡＰプログラムに組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（４８）：４４４−４５３（１９７０））アルゴリズムを使用して決定することができる。
【００８４】
本発明の核酸配列およびタンパク質配列は、例えば関連する配列を同定するために、公共データベースに対する検索を行うための「クエリ配列」としてさらに使用することができる。そのような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して行うことができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴプログラムで、スコア＝１００、ワード長＝１２によって行って、本発明の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラムで、スコア＝５０、ワード長＝３によって行って、本発明のタンパク質分子に相同なアミノ酸を得ることができる。比較の目的でギャップアラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９−３４０２で説明されるように、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを使用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムを使用するときには、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい。
【００８５】
核酸は、全細胞の中に、細胞溶解物中に、または部分的に精製した形態もしくは実質的に純粋な形態で存在し得る。アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィ、アガロースゲル電気泳動、および当技術分野でよく知られている他の技術を含む、標準的な技術によって、他の細胞成分または他の夾雑物（例えば、他の細胞核酸またはタンパク質）から精製されたときに、核酸は、「単離される」か、または「実質的に純粋になる」。Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８７）を参照されたい。
【００８６】
ｃＤＮＡ、ゲノム、またはその混合物のいずれか由来の本発明の核酸組成物は、天然配列（改変された制限部位等を除く）であることが多いが、遺伝子配列を提供するための標準的な技術に従って変異させてもよい。コード配列については、これらの変異は、所望に応じてアミノ酸配列に影響を及ぼし得る。具体的には、天然のＶ配列、Ｄ配列、Ｊ配列、定常配列、スイッチ配列、および本明細書で説明される他のそのような配列と実質的に相同であるか、またはこれらに由来するＤＮＡ配列を企図している（「由来する」は、ある配列が別の配列と同一であるか、別の配列から改変されていることを示す）。
【００８７】
核酸は、別の核酸配列と機能的な関係におかれているときに、「機能的に連結されている」。例えば、プロモーターまたはエンハンサーは、配列の転写に影響を及ぼす場合に、コード配列に機能的に連結されている。転写調節配列に関して、「機能的に連結されている」とは、連結されているＤＮＡ配列が連続しており、２つのタンパク質コード領域を連結する必要がある場合には、連続し、かつ読み枠中に存在していることを意味する。スイッチ配列について、「機能的に連結されている」とは、配列がスイッチ組換えを生じさせることが可能であることを示す。
【００８８】
本明細書で使用する「ベクター」という用語は、そこに連結された別の核酸を輸送することが可能である核酸分子を指すことを意図している。ベクターの１つの型は「プラスミド」であり、これは、さらなるＤＮＡセグメントがライゲーションされてもよい環状の２本鎖ＤＮＡループを指す。ベクターの別の型は、さらなるＤＮＡセグメントをウイルスゲノムにライゲーションしてもよい、ウイルスベクターである。ある特定のベクターは、ベクターが導入される宿主細胞において自律複製することが可能である（例えば、細菌の複製起源を有する細菌ベクター、および哺乳類のエピソームベクター）。他のベクター（例えば、哺乳類の非エピソームベクター）は、宿主細胞への導入の際に宿主細胞のゲノムの中に組み込むことができ、それによって、宿主ゲノムとともに複製される。さらに、ある特定のベクターは、ベクターに機能的に連結された遺伝子の発現を指示することが可能である。そのようなベクターを、本明細書では、「組換え発現ベクター」（または、単純に、「発現ベクター」）と称する。一般に、組換えＤＮＡ手法において有用な発現ベクターは、しばしば、プラスミドの形態である。プラスミドは最も一般的に使用されるベクターの形態であるので、本明細書では、「プラスミド」および「ベクター」が同じ意味で使われる場合がある。しかしながら、本発明は、同等の機能を果たす、ウイルスベクター等のそのような他の発現ベクターの形態（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ関連ウイルス）を含むことを意図している。
【００８９】
本明細書で使用される「組換え宿主細胞」（または、単純に、「宿主細胞」）という用語は、そこに組換え発現ベクターが導入されている細胞を指すことを意図している。そのような用語は、特定の対象細胞だけでなく、そのような細胞の子孫も指すことを意図していることを理解されたい。変異または環境の影響のいずれかにより特定の改変が後世で起こる場合があるので、そのような子孫は、実際には、親細胞と同一でなくてもよいが、それでも、本明細書で使用される「宿主細胞」という用語の範囲内に含まれる。
【００９０】
本明細書で使用される「抗原」という用語は、タンパク質、ペプチド、またはハプテン等の、任意の天然または合成の免疫原性物質を指す。本発明で使用するための（例えば、本発明の抗ＣＤ２７抗体と組み合わせたワクチン中の）適切な抗原としては、例えば、その抗原に対して保護的または治療的な応答が所望される、感染性疾患抗原および腫瘍抗原（例えば、腫瘍細胞もしくは病原性生物によって発現する抗原、または感染性疾患抗原）が挙げられる。例えば、適切な抗原としては、癌の予防または治療のための腫瘍関連抗原が挙げられる。腫瘍関連抗原の例としては、βｈＣＧ、ｇｐ１００またはＰｍｅｌ１７、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＷＴ１、メソテリン、ＣＥＡ、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ１、ＴＲＰ−２、ｍｅｌａｎ−Ａ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＮＹ−ＢＲ−１、ＮＹ−ＣＯ−５８、ＭＮ（ｇｐ２５０）、イディオタイプ、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−Ａ３、チロシナーゼ、テロメラーゼ、ＳＳＸ２、およびＭＵＣ−１抗原、ならびに生殖細胞由来の腫瘍抗原の配列の全部または一部を含む配列が挙げられるが、これらに限定されない。腫瘍関連抗原には、血液型抗原、例えば、Ｌｅａ、Ｌｅｂ、ＬｅＸ、ＬｅＹ、Ｈ−２、Ｂ−１、Ｂ−２抗原も挙げられる。代替として、２つ以上の抗原を、本発明の抗原−抗体構築体の中に含むことができる。例えば、ＭＡＧＥ抗原は、ＧＭ−ＣＳＦまたはＩＬ−１２等のアジュバントとともに、ｍｅｌａｎｉｎＡ、チロシナーゼ、およびｇｐ１００等の他の抗原と組み合わせて、抗ＡＰＣ抗体に連結させることができる。
【００９１】
他の適切な抗原としては、ウイルス疾患の予防または治療のためのウイルス抗原が挙げられる。ウイルス抗原の例としては、ＨＩＶ−１ｇａｇ、ＨＩＶ−１ｅｎｖ、ＨＩＶ−１ｎｅｆ、ＨＢＶ（表面抗原またはコア抗原）、ＨＰＶ、ＦＡＳ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、ｐ１７、ＯＲＦ２、およびＯＲＦ３抗原が挙げられるが、これらに限定されない。細菌抗原の例としては、トキソプラズマ・ゴンジまたは梅毒トレポネーマが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の抗体−細菌抗原コンジュゲートは、炭疽熱、ボツリヌス中毒症、破傷風、クラミジア、コレラ、ジフテリア、ライム病、梅毒、および結核等の、種々の細菌疾患の治療または予防で使用することができる。ウイルス、細菌、寄生虫、および真菌等の感染性疾患病原体由来の、他の適切な抗原を下記に開示する。
【００９２】
前述の抗原の配列は、当技術分野でよく知られている。例えば、ＭＡＧＥ−３  ｃＤＮＡ配列の例は、米国特許第６，２３５，５２５号（Ｌｕｄｗｉｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）で提供され、ＮＹ−ＥＳＯ−１核酸配列およびタンパク質配列の例は、米国特許第５，８０４，３８１号および米国特許第６，０６９，２３３号（Ｌｕｄｗｉｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）で提供され、Ｍｅｌａｎ−Ａ核酸配列およびタンパク質配列の例は、米国特許第５，６２０，８８６号および米国特許第５，８５４，２０３（Ｌｕｄｗｉｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）で提供され、ＮＹ−ＢＲ−１核酸配列およびタンパク質配列の例は、米国特許第６，７７４，２２６号および米国特許第６，９１１，５２９号（Ｌｕｄｗｉｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）で提供され、ＮＹ−ＣＯ−５８核酸配列およびタンパク質配列の例は、国際公開公報第０２０９０９８６号（Ｌｕｄｗｉｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）で提供され、ＨＥＲ−２／ｎｅｕタンパク質のアミノ酸配列の例は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＡＡＡ５８６３７で利用可能であり、ヒト癌胎児性抗原様１（ＣＥＡ−１）のヌクレオチド配列（ｍＲＮＡ）は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＮＭ＿０２０２１９で利用可能である。
【００９３】
本発明の組成物および方法で使用してもよいＨＰＶ抗原としては、例えば、ＨＰＶ−１６抗原、ＨＰＶ−１８抗原、ＨＰＶ−３１抗原、ＨＰＶ−３３抗原、ならびに／またはＨＰＶ−３５抗原が挙げられ、ＨＰＶ−１６抗原および／またはＨＰＶ−１８抗原が適切である。ＨＰＶ−１６のゲノムは、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１４５：１８１−１８５（１９８５）で説明されており、ＨＰＶ−１８をコードするＤＮＡ配列は、米国特許第５，８４０，３０６号で説明されており、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＨＰＶ−１６抗原（例えば、ＨＰＶ−１６のＥ１および／またはＥ２タンパク質の血清反応性領域）は、米国特許第６，５３１，１２７号で説明されており、ＨＰＶ−１８抗原（例えば、ＨＰＶ−１８のＬ１および／またはＬ２タンパク質の血清反応性領域）は、米国特許第５，８４０，３０６号で説明されており、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。同様に、ＨＢＶの完全なゲノムは、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号ＮＣ＿００３９７７で利用可能であり、その開示は、本明細書に組み込まれる。ＨＣＶのゲノムは、欧州特許出願第３１８２１６号で説明されており、その開示は、本明細書に組み込まれる。ＰＣＴ／ＵＳ９０／０１３４８号は、ＨＣＶゲノムのクローンの配列情報、ＨＣＶウイルスタンパク質のアミノ酸配列、ならびにＨＣＶタンパク質およびこれに由来するペプチドを含むＨＣＶワクチンのための組成物の作製方法、およびそのような組成物の使用方法を開示しており、参照により本明細書に組み込まれる。
【００９４】
タンパク質の抗原ペプチド（すなわち、Ｔ細胞エピトープを含むもの）は、当技術分野でよく知られている種々の様式で同定することができる。例えば、Ｔ細胞エピトープは、ウェブに基づく予測アルゴリズム（ＢＩＭＡＳ  ＆  ＳＹＦＰＥＩＴＨＩ）を使用してタンパク質配列を分析して、ＣＴＬによって以前に定義した１０，０００の十分に特徴付けられたＭＨＣ結合ペプチドの内部データベースに適合する潜在的なＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ結合ペプチドを生成することによって予測することができる。高スコアのペプチドをランク付けして、所与のＭＨＣ分子に対する高親和性に基づいて、「関心対象」として選択することができる。
【００９５】
別の方法では、Ｔ細胞エピトープ含有抗原ペプチドを同定する方法は、組換えにより、合成により、または一定の制限された条件下でのタンパク質の化学的切断により産生することができる所望の長さの非重複ペプチドまたは所望の長さの重複ペプチドへとタンパク質を分割し、免疫原性質、例えばＴ細胞応答の誘発（すなわち、増殖またはリンホカイン分泌）について試験することによる。
【００９６】
例えば、細密なマッピング手法によってタンパク質の正確なＴ細胞エピトープを判定するために、Ｔ細胞の生物学的手法によって判定したときに、Ｔ細胞刺激活性を有し、したがって、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むペプチドを、ペプチドのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかでのアミノ酸残基の付加または欠失によって改変して、改変ペプチドに対するＴ細胞反応性の変化を判定するように試験することができる。Ｔ細胞の生物学的手法によって判定したときに、天然タンパク質配列の重複領域を共有する２つ以上のペプチドがヒトＴ細胞刺激活性を有することが分かった場合に、そのようなペプチドの全部または一部を含むさらなるペプチドを産生することができ、これらのさらなるペプチドは、類似する手順で試験することができる。この手法に従って、ペプチドが選択されて、組換えまたは合成によって産生される。ペプチドは、ペプチドに対するＴ細胞応答の強度（例えば、刺激指数）を含む、種々の要因に基づいて選択される。次いで、これらの選択されたペプチドの物理的および化学的性質（例えば、溶解性、安定性）を試験して、ペプチドが治療組成物での使用に適切であるかどうか、またはペプチドが改変を必要とするかどうかを判定することができる。
【００９７】
「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」という用語は、その表面上でＭＨＣと複合化する異種抗原を示す細胞である。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いてこの複合体を認識する。ＡＰＣの例としては、樹状細胞（ＤＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、単球（ＴＨＰ−１等）、Ｂリンパ芽球様細胞（Ｃ１Ｒ．Ａ２、１５１８Ｂ−ＬＣＬ等）、および単球由来樹状細胞（ＤＣ）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかのＡＰＣは、食作用または受容体媒介エンドサイトーシスのいずれかによって抗原を内在化する。ＡＰＣ受容体の例としては、ヒト樹状細胞および上皮細胞２０５受容体（ＣＤ２７）等のＣ型レクチン、およびヒトマクロファージマンノース受容体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９８】
「抗原提示」という用語は、ＡＰＣが抗原を捕捉し、例えばＭＨＣ−Ｉコンジュゲートおよび／またはＭＨＣ−ＩＩコンジュゲートの成分として、Ｔ細胞によってそれらを認識することが可能である過程を指す。
【００９９】
「ＭＨＣ分子」は、２種類の分子、すなわち、ＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩを含む。ＭＨＣクラスＩ分子は、特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞に抗原を提示し、ＭＨＣクラスＩＩ分子は、特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞に抗原を提示する。ＡＰＣに外因的に送達された抗原は、主にＭＨＣクラスＩＩとの会合のために処理される。対照的に、ＡＰＣに内因的に送達された抗原は、主にＭＨＣクラスＩとの会合のために処理される。
【０１００】
本明細書で使用される「免疫賦活剤」という用語は、ＤＣおよびマクロファージ等のＡＰＣを刺激することが可能な化合物を含むが、これらに限定されない。例えば、本発明で使用するための適切な免疫賦活剤は、ＡＰＣの成熟過程が加速され、ＡＰＣ増殖を増加させ、ならびに／または共刺激分子（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＣＡＭ−１、ＭＨＣ分子、およびＣＣＲ７）および炎症誘発性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、およびＩＦＮ−γ）の動員または放出が上方制御されるように、ＡＰＣを刺激することが可能である。適切な免疫賦活剤はまた、Ｔ細胞増殖を増加させることも可能である。そのような免疫賦活剤としては、ＣＤ４０リガンド；ＦＬＴ３リガンド；ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、およびＩＬ−２等のサイトカイン；Ｇ−ＣＳＦ（顆粒球コロニー刺激因子）およびＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子）等のコロニー刺激因子；抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＰＤ１抗体、抗４１ＢＢ抗体、または抗ＯＸ−４０抗体；ＬＰＳ（エンドトキシン）；ｓｓＲＮＡ；ｄｓＲＮＡ；カルメット−ゲラン桿菌（ＢＣＧ）；塩酸レバミソール；および静注用免疫グロブリンが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、免疫賦活剤は、トール様受容体（ＴＬＲ）作動薬であってもよい。例えば、免疫賦活剤は、２本鎖イノシン：シトシンポリヌクレオチド（ＰｏｌｙＩ：Ｃ、例えば、Ｈｅｍｉｓｐｈｅｒｘ  Ｂｉｐｈａｒｍａ，ＰＡ，ＵＳからＡｍｐｌｉｇｅｎ（商標）として、またはＯｎｃｏｖｉｒからＰｏｌｙＩＣ：ＬＣとして入手可能）、またはＰｏｌｙＡ：Ｕ等のＴＬＲ３作動薬；モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）またはＲＣ−５２９（例えば、ＧＳＫ，ＵＫから入手可能である）等のＴＬＲ４作動薬；フラジェリン等のＴＬＲ５作動薬；イミダゾキノリンＴＬＲ７またはＴＬＲ８作動薬（例えば、イミキモド（例えば、Ａｌｄａｒａ（商標））またはレシキモドおよび関連するイミダゾキノリン剤（例えば、３Ｍ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能））等のＴＬＲ７またはＴＬＲ８作動薬；または非メチル化ＣｐＧモチーフ（いわゆる「ＣｐＧｓ」、例えば、Ｃｏｌｅｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌから入手可能）を伴うデオキシヌクレオチド等のＴＬＲ９作動薬であってもよい。好ましい免疫賦活剤は、ＴＬＲ３作動薬、好ましくは、ＰｏｌｙＩ:Ｃである。そのような免疫賦活剤は、本発明の抗体および構築体と同時に、別々に、または連続的に投与されてもよく、抗体および構築体に物理的に連結されてもよい。
【０１０１】
本明細書で使用する「連結された」という用語は、２つ以上の分子の会合を指す。連結は、共有結合性または非共有結合性であり得る。連結はまた、遺伝的でもあり得る（すなわち、組換えによって融合している）。そのような連結は、化学的コンジュゲーションおよび組換えタンパク質産生等の、当該分野で認識される様々な技術を使用して達成することができる。
【０１０２】
本明細書で使用される抗原「交差提示」という用語は、ＡＰＣ上のＭＨＣクラスＩおよびクラスＩＩ分子を介した、Ｔ細胞への外因性タンパク質抗原の提示を指す。
【０１０３】
本明細書で使用される「Ｔ細胞媒介性応答」という用語は、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞）およびヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋細胞）を含む、Ｔ細胞によって媒介される任意の応答を指す。Ｔ細胞媒介性応答としては、例えば、Ｔ細胞傷害性および増殖が挙げられる。
【０１０４】
本明細書で使用される「細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答」という用語は、細胞傷害性Ｔ細胞によって誘発される免疫応答を指す。ＣＴＬ応答は、主にＣＤ８＋Ｔ細胞によって媒介される。
【０１０５】
本明細書で使用される「阻害する」または「遮断する」という用語（例えば、細胞上のＣＤ２７へのＣＤ７０の結合の阻害／遮断を指す）は、同じ意味で使用され、部分的および完全な阻害／遮断を包含する。好ましくは、ＣＤ７０の阻害／遮断は、阻害または遮断を伴わずにＣＤ７０の結合が起こったときに起こる正常なレベルまたは種類の活性を、低減または変更する。阻害および遮断はまた、抗ＣＤ２７抗体と接触していないＣＤ７０と比較して、抗ＣＤ２７抗体と接触したときのＣＤ７０の結合親和性における任意の測定可能な減少を含むことも意図しており、例えば、ＣＤ７０の結合を、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％阻害する。好ましい実施形態において、抗ＣＤ２７抗体は、ＣＤ７０の結合を少なくとも約７０％阻害する。別の実施形態において、抗ＣＤ２７抗体は、ＣＤ７０の結合を少なくとも８０％阻害する。
【０１０６】
本明細書で使用する（例えば、細胞に関して）「増殖を阻害する」という用語は、細胞の増殖の任意の測定可能な減少、例えば、細胞の増殖の、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％、または１００％の阻害を含むことを意図している。
【０１０７】
「免疫応答を誘発すること」および「免疫応答を増強すること」という用語は、同じ意味で使用され、特定の抗原に対する免疫応答の刺激（すなわち、受動的または順応的）を指す。ＣＤＣまたはＡＤＣＣを誘発することに関して使用される「誘発する」という用語は、特定の直接細胞殺傷機構の刺激を指す。例えば、一実施形態において、抗体は、１０μｇ／ｍＬの濃度で、ＣＤ２７発現細胞のＣＤＣを介した溶解を少なくとも約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、または６０％誘発する。好ましい実施形態において、抗体は、１０μｇ／ｍＬの濃度で、ＣＤ２７発現細胞のＣＤＣを介した溶解を少なくとも約４０％誘発する。別の実施形態において、抗体は、１０μｇ／ｍＬの濃度で、ＣＤ２７発現細胞のＡＤＣＣを介した溶解（すなわち、特異的溶解）を少なくとも約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％誘発する。好ましい実施形態において、抗体は、１０μｇ／ｍＬの濃度で、ＣＤ２７発現細胞のＡＤＣＣを介した溶解を少なくとも約４０％誘発する。
【０１０８】
本明細書で使用される「治療する」、「治療すること」、および「治療」という用語は、本明細書で説明される治療的または予防的手段を指す。本「治療」方法は、障害または再発性障害の１つ以上の症状を予防するか、治癒させるか、遅延させるか、その重篤性を低減するか、もしくは改善するために、または治療を行わない場合の予想を超えて患者の生存を延長するために、本発明のヒト抗体を、そのような治療を必要とする対象（例えば、特定の抗原に対する増強された免疫応答を必要とする対象、または最終的にそのような障害を受け得る対象）に投与することを用いる。
【０１０９】
「有効用量」または「有効投薬量」という用語は、所望の効果を達成するか、または少なくとも部分的に達成するのに十分な量として定義される。「治療上有効用量」という用語は、既に疾患を罹患している患者の疾患およびその合併症を治癒させるか、少なくとも部分的に抑制するのに十分な量として定義される。この用途に対する有効な量は、治療されている障害の重篤性および患者自身の免疫系の一般的な状態に依存する。
【０１１０】
「患者」という用語は、予防的または治療的な処置を受ける、ヒトおよび他の哺乳類の対象を含む。
【０１１１】
本明細書で使用される「対象」という用語は、任意のヒトまたは非ヒト動物を含む。例えば、本発明の方法および組成物は、免疫障害を伴う対象を治療するために使用することができる。「非ヒト動物」という用語は、全ての脊椎動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類等の、哺乳動物および非哺乳動物を含む。
【０１１２】
本開示の種々の態様を以下のサブセクションでさらに詳細に説明する。
【０１１３】
Ｉ．ＣＤ２７に対する抗体の産生
本発明は、抗体、例えばＣＤ２７に結合する完全なヒト抗体（例えば、ヒトＣＤ２７）を包含する。ＣＤ２７に結合する例示的なモノクローナル抗体としては、１Ｆ５、１Ｈ８、３Ｈ１２、３Ａ１０、２Ｃ２、２Ｇ９、３Ｈ８、および１Ｇ５が挙げられる。本発明のモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５（１９７５）によって説明される標準的な体細胞ハイブリッド形成手法等の、種々の既知の手法を使用して産生することができる。体細胞ハイブリッド形成手順が好ましいが、基本的に、モノクローナル抗体を産生するための他の手法、例えば、Ｂリンパ球のウイルス形質転換または癌化、ヒト抗体遺伝子のライブラリーを使用したファージディスプレイ技術も使用することができる。
【０１１４】
故に、一実施形態では、ヒトＣＤ２７に結合する抗体を産生するために、ハイブリドーマ法が使用される。この方法では、免疫化のために使用される抗原に特異的に結合する抗体を産生するか、産生することが可能であるリンパ球を誘発するために、マウスまたは他の適切な宿主動物を適切な抗原で免疫化することができる。代替として、リンパ球は、インビトロで免疫化されてもよい。次いで、リンパ球を、ポリエチレングリコール等の適切な融合剤を使用して骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成することができる（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。ハイブリドーマ細胞が増殖している培養培地を、抗原を対象とするモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。所望の特異性、親和性、および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を同定した後、クローンを限界希釈手順によってサブクローン化し、標準的な方法によって増殖させてもよい（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。この目的のための適切な培養培地としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭ培地またはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。加えて、ハイブリドーマ細胞は、動物の腹水腫瘍としてインビボで増殖させてもよい。サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析、または親和性クロマトグラフィ等の、従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地、腹水液、または血清から分離することができる。
【０１１５】
別の実施形態において、ヒトＣＤ２７に結合する抗体および抗体の一部は、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４（１９９０）、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）  、およびＨｏｅｔ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３，３４４−３４８、Ｌａｄｎｅｒ他への米国特許第５，２２３，４０９号、第５，４０３，４８４号、および第５，５７１，６９８号、Ｄｏｗｅｒ他への米国特許第５，４２７，９０８号および第５，５８０，７１７号、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ他への米国特許第５，９６９，１０８号および第６，１７２，１９７号、およびＧｒｉｆｆｉｔｈｓ他への米国特許第５，８８５，７９３号、第６，５２１，４０４号、第６，５４４，７３１号、第６，５５５，３１３号、第６，５８２，９１５号、および第６，５９３，０８１号で説明される手法を使用して、生成した抗体ファージライブラリーから単離することができる。加えて、鎖シャフリング（Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２））、ならびに非常に大きいファージライブラリーを構築するための方策としてのコンビナトリアル感染およびインビボの組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，２１：２２６５−２２６６（１９９３））による、高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の産生が使用されてもよい。
【０１１６】
特定の実施形態において、ヒトＣＤ２７に結合する抗体は、前掲のＨｏｅｔ  ｅｔ  ａｌ．によって説明されるファージディスプレイ手法を使用して産生される。この手法は、ヒトドナーから単離された免疫グロブリン配列の特有の組み合わせを有し、かつ重鎖のＣＤＲに合成の多様性を有する、ヒトＦａｂライブラリーが生成されることを含む。次いで、このライブラリーを、ヒトＣＤ２７に結合するＦａｂについてスクリーニングする。
【０１１７】
本発明の抗体を産生するハイブリドーマを生成するための好ましい動物系は、マウス系である。免疫化プロトコル、および免疫化された脾細胞を単離して融合させるための手法を含む、マウスにおけるハイブリドーマの産生は、当技術分野でよく知られている。
【０１１８】
一実施形態において、ＣＤ２７を対象とする抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の一部を担持するトランスジェニックマウスまたはトランスクロモソーマルマウスを使用して生成する。一実施形態において、本発明は、内因性μおよびκ鎖座を不活化する標的化された変異とともに、非再編成ヒト重鎖（μおよびγ）およびκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリンミニ遺伝子座を含む、本明細書で「ＨｕＭＡｂマウス」と称する、トランスジェニックマウスを使用する（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９）。故に、マウスは、マウスＩｇＭまたはκの減少した発現を呈し、そして、免疫化に応答して、導入されたヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子は、クラススイッチングおよび体細胞変異を受けて、高親和性ヒトＩｇＧκモノクローナル抗体を生成する（前掲のＬｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．（１９９４）、概説として、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９４）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３：４９−１０１、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｄ．（１９９５）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．１３：６５−９３、およびＨａｒｄｉｎｇ，Ｆ．ａｎｄ  Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９５）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ７６４：５３６−５４６）。ＨｕＭＡｂマウスの調製は、下記セクションＩＩで、およびＴａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０：６２８７−６２９５、Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５：６４７−６５６、Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０：３７２０−３７２４、Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４：１１７−１２３、Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：８２１−８３０、Ｔｕａｉｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：２９１２−２９２０、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９４）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３：４９−１０１、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６：５７９−５９１、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｄ．（１９９５）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．１３：６５−９３、Ｈａｒｄｉｎｇ，Ｆ．ａｎｄ  Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．（１９９５）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ７６４：５３６−５４６、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−８５１で詳細に説明されている。さらに、米国特許第５，５４５，８０６号、第５，５６９，８２５号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，７８９，６５０号、第５，８７７，３９７号、第５，６６１，０１６号、第５，８１４，３１８号、第５，８７��，２９９号、および第５，７７０，４２９号（全て、ＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙ、ならびにＧｅｎＰｈａｒｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌに付与）、Ｓｕｒａｎｉ他への米国特許第５，５４５，８０７号、１９９８年６月１１日に公開の国際公開公報第９８／２４８８４号、１９９４年１１月１０日に公開の国際公開公報第９４／２５５８５号、１９９３年６月２４日に公開の国際公開公報第９３／１２２７号、１９９２年１２月２３日に公開の国際公開公報第９２／２２６４５号、１９９２年３月１９日に公開の国際公開公報第９２／０３９１８号を参照されたい。
【０１１９】
免疫化
ＣＤ２７に対する完全なヒト抗体を生成するために、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含むトランスジェニックマウスまたはトランスクロモソーマルマウス（例えば、ＨＣｏ１２マウス、ＨＣｏ７マウス、またはＫＭマウス）を、例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８（６４７４）：８５６−８５９、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８４５−８５１、および国際公開公報第９８／２４８８４号によって説明されているように、ＣＤ２７抗原の精製した調製物もしくは富化した調製物、および／またはＣＤ２７を発現する細胞で免疫化することができる。本明細書で説明されるように、ＨｕＭＡｂマウスは、免疫原としての組換えＣＤ２７タンパク質またはＣＤ２７を発現する細胞株のいずれかで免疫化される。代替として、マウスは、ヒトＣＤ２７をコードするＤＮＡで免疫化することができる。好ましくは、マウスは、最初の注入時に６〜１６週齢である。例えば、組換えＣＤ２７抗原の精製した調製物または富化した調製物（５〜５０μｇ）を使用して、ＨｕＭＡｂマウス腹腔内で免疫化することができる。ＣＤ２７抗原の精製した調製物または富化した調製物を使用した免疫化によって抗体が得られなかった場合は、免疫応答を促進するために、ＣＤ２７を発現する細胞（例えば、細胞株）でマウスを免疫化することもできる。例示的な細胞株としては、ＣＤ２７を過剰発現する安定したＣＨＯ細胞株およびＲａｊｉ細胞株が挙げられる。
【０１２０】
種々の抗原による累積された経験は、最初に完全なフロイントアジュバント中の抗原により腹腔内（ＩＰ）または皮下（ＳＣ）で免疫化し、続いて、１週間おきに、不完全なフロイントアジュバント中の抗原によりＩＰ／ＳＣで免疫化したとき（合計１０回まで）に、ＨｕＭＡｂトランスジェニックマウスが最良に応答することを示した。免疫応答を、眼窩後出血によって得られた血漿試料による一連の免疫化プロトコルにわたって監視することができる。血漿は、ＥＬＩＳＡ（以下で説明する）によってスクリーニングすることができ、十分な力価の抗ＣＤ２７ヒト免疫グロブリンを伴うマウスを融合に使用することができる。マウスを、屠殺して脾臓を取り出す３日前に、抗原により静脈内で追加免疫することができる。
【０１２１】
ＣＤ２７に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの生成
ＣＤ２７に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを生成するために、免疫化マウス由来の脾細胞およびリンパ節細胞を単離して、マウス骨髄腫細胞株等の適切な不死化細胞株に融合することができる。次いで、結果として生じるハイブリドーマを、抗原特異的抗体の産生についてスクリーニングすることができる。例えば、免疫化マウス由来の脾臓リンパ球の単一細胞懸濁物を、５０％のＰＥＧ（ｗ／ｖ）で、ＳＰ２／０−Ａｇ８．６５３非分泌マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ１５８０）に融合することができる。細胞は、平底マイクロタイタープレート中で約１×１０５個を平板培養し、続いて、通常の試薬の他に、１０％の胎児クローン血清、５〜１０％のＯｒｉｇｅｎハイブリドーマクローニング因子（ＩＧＥＮ）、および１Ｘ ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ）を含有する選択培地中で２週間インキュベートすることができる。約２週間後に、細胞は、ＨＡＴをＨＴと置換した培地中で培養することができる。次いで、個々のウェルは、ヒト抗ＣＤ２７モノクローナルＩｇＭ抗体およびＩｇＧ抗体についてＥＬＩＳＡによってスクリーニングするか、またはＣＤ２７を発現する細胞、例えばＣＤ２７を発現するＣＨＯ細胞株の表面への結合について、ＦＬＩＳＡ（蛍光結合免疫吸着アッセイ）によってスクリーニングすることができる。大規模なハイブリドーマ増殖が起こると、通常１０〜１４日後に培地を観察することができる。抗体分泌ハイブリドーマを再度平板培養し、再度スクリーニングし、それでもＩｇＧについて陽性であった場合、抗ＣＤ２７モノクローナル抗体は、限界希釈によって少なくとも２回サブクローン化することができる。次いで、安定したサブクローンをインビトロで培養して、特徴付けのために、組織培養培地中で抗体を生成することができる。
【０１２２】
ＣＤ２７に対するモノクローナル抗体を産生するトランスフェクトーマの生成
本発明の抗体はまた、当技術分野でよく知られているように、例えば、組換えＤＮＡ手法と遺伝子形質移入法との組み合わせを使用して、宿主細胞トランスフェクトーマ中で産生することもできる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２）。
【０１２３】
例えば、一実施形態において、関心の遺伝子（例えば、ヒト抗体遺伝子）は、国際公開公報第８７／０４４６２号、国際公開公報第８９／０１０３６号、およびＥＰ３３８８４１号で開示されているＧＳ遺伝子発現系、または当技術分野でよく知られている他の発現系等によって使用される、真核生物発現プラスミド等の発現ベクターにライゲーションすることができる。クローン化抗体遺伝子を伴う精製したプラスミドは、ＣＨＯ細胞もしくはＮＳＯ細胞、または代替として、植物由来の細胞、真菌、もしくは酵母細胞のような他の真核細胞等の、真核生物宿主細胞に導入することができる。これらの遺伝子を導入するために使用される方法は、エレクトロポレーション、リポフェクチン、またはリポフェクタミン等の当技術分野で説明される方法とすることが可能である。これらの抗体遺伝子を宿主細胞に導入した後に、抗体を発現する細胞を同定および選択することができる。これらの細胞は、トランスフェクトーマを表し、これらは、次いで、その発現レベルのために増幅して、抗体を産生するために規模拡大することができる。組換え抗体は、これらの培養上清および／または細胞から単離および精製することができる。
【０１２４】
代替として、これらのクローン化抗体遺伝子は、大腸菌等の他の発現系または完全な生物中で発現させるか、合成的に発現させることができる。
【０１２５】
無傷の抗体を発現させるための部分抗体配列の使用
抗体は、主に６つの重鎖および軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）の中に位置するアミノ酸残基を通して、標的抗原と相互作用する。このため、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、ＣＤＲの外側の配列よりも個々の抗体間で多様である。ＣＤＲの配列は、大部分の抗体−抗原相互作用を担うので、異なる性質を伴う異なる抗体由来のフレームワーク配列上に移植される特異的な自然発生する抗体由来のＣＤＲの配列を含む発現ベクターを構築することによって、特異的な自然発生する抗体の性質を模倣する、組換え抗体を発現することが可能である（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７、Ｊｏｎｅｓ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５、およびＱｕｅｅｎ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：１００２９−１００３３を参照されたい）。そのようなフレームワーク配列は、生殖系列抗体遺伝子配列を含む、公開ＤＮＡデータベースから得ることができる。これらの生殖系列配列は、Ｂ細胞成熟中にＶ（Ｄ）Ｊ連結によって形成される完全に組み立てられた可変遺伝子を含まないので、成熟抗体遺伝子配列とは異なる。生殖細胞遺伝子配列はまた、可変領域全体にわたって、それぞれにおいて高親和性二次レパートリー抗体の配列と均一に異なる。例えば、体細胞変異は、フレームワーク領域のアミノ末端部分では比較的に頻度が少ない。例えば、体細胞変異は、フレームワーク領域１のアミノ末端部分およびフレームワーク領域４のカルボキシ末端部分では比較的に頻度が少ない。さらに、多くの体細胞変異は、抗体の結合性を有意には変化させない。このため、元の抗体に類似する結合特性を有する無傷の組換え抗体を再作成するために、特定の抗体の全ＤＮＡ配列を得る必要はない（１９９９年３月１２日に出願のＰＣＴ／ＵＳ９９／０５５３５号を参照されたい）。一般的に、この目的には、ＣＤＲ領域に及ぶ部分的な重鎖および軽鎖の配列で十分である。この部分的な配列を使用して、どの生殖系列の可変および連結遺伝子セグメントが組換え抗体可変遺伝子に寄与したのかを決定する。次いで、生殖系列配列を使用して、可変領域の喪失部分を埋める。重鎖および軽鎖のリーダー配列は、タンパク質成熟中に開裂され、最終的な抗体の性質に寄与しない。喪失配列を加えるために、クローン化ｃＤＮＡ配列を、ライゲーションまたはＰＣＲ増幅によって合成オリゴヌクレオチドと組み合わせることができる。代替として、全可変領域を、一組の短い重複したオリゴヌクレオチドとして合成し、ＰＣＲ増幅によって組み合わせて、完全合成の可変領域クローンを作成することができる。この過程は、特定の制限部位の除去もしくは包含、または特定のコドンの最適化等の一定の利点を有する。
【０１２６】
ハイブリドーマ由来の重鎖転写物および軽鎖転写物のヌクレオチド配列が、一組の重複した合成オリゴヌクレオチドを設計して、天然の配列と同一のアミノ酸コード能を伴う合成Ｖ配列を作成するために使用される。合成重鎖およびカッパ鎖配列は、以下の３つの点で天然配列と異なり得る。すなわち、オリゴヌクレオチドの合成およびＰＣＲ増幅を容易にするために、一連の繰り返しヌクレオチド塩基が中断されていること、Ｋｏｚａｋ規則に従って最適な翻訳開始部位が組み込まれていること（Ｋｏｚａｋ，１９９１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：１９８６７−１９８７０）、およびＨｉｎｄＩＩＩ部位が翻訳開始部位の上流に操作されていること、である。
【０１２７】
重鎖可変領域および軽鎖可変領域の双方について、最適化されたコードストランド配列および対応する非コードストランド配列を、対応する非コードオリゴヌクレオチドのほぼ中間で、３０個〜５０個のヌクレオチドに分解する。したがって、各鎖について、オリゴヌクレオチドを、１５０個〜４００個のヌクレオチドのセグメントに及ぶ複数組の重複２本ストランドに組み立てることができる。次いで、このプールを、１５０個〜４００個のヌクレオチドのＰＣＲ増幅産物を産生するために、テンプレートとして使用する。一般的には、単一組の可変領域オリゴヌクレオチドを、２つのプールに分解して、別々に増幅させて、２つの重複ＰＣＲ産物を生成する。次いで、これらの重複産物をＰＣＲ増幅によって組み合わせて、完全な可変領域を形成する。また、発現ベクター構築体の中へと容易にクローン化することができるフラグメントを生成するために、ＰＣＲ増幅の際に、重鎖定常領域または軽鎖定常領域の重複フラグメント（カッパ軽鎖のＢｂｓＩ部位、またはガンマ重鎖の場合はＡｇｅＩ部位を含む）を含むことが望ましい場合もある。
【０１２８】
次いで、再構築した重鎖可変領域および軽鎖可変領域を、クローン化プロモーター配列、リーダー配列、翻訳開始配列、リーダー配列、定常領域配列、３'非翻訳配列、ポリアデニル化配列、および転写終結配列と組み合わせて、発現ベクター構築体を形成する。重鎖発現構築体および軽鎖発現構築体は、単一のベクターに組み合わせてもよく、宿主細胞に共形質移入してもよく、連続的に形質移入してもよく、または別々に形質移入し、次いで、それを融合させてどちらの鎖も発現する宿主細胞を形成してもよい。
【０１２９】
発現ベクターの構築で使用するためのプラスミドは、ＰＣＲ増幅したＶ重鎖ｃＤＮＡ配列およびＶカッパ軽鎖ｃＤＮＡ配列を、完全な重鎖ミニ遺伝子および軽鎖ミニ遺伝子を再構築するために使用できるように構築した。これらのプラスミドは、完全なヒトＩｇＧ１κまたはＩｇＧ４κ抗体を発現させるために使用することができる。本発明の完全なヒト抗体およびキメラ抗体としては、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＤ抗体も挙げられる。類似するプラスミドを、他の重鎖アイソタイプの発現のために、またはラムダ軽鎖を含む抗体の発現のために構築することができる。
【０１３０】
したがって、本発明の別の態様において、本発明の抗ＣＤ２７抗体の構造的特徴は、本発明の抗体の少なくとも１つの機能的性質を保持する、構造的に関連する抗ＣＤ２７抗体を作成するために使用される。該機能的性質は、例えば、
（１）ＣＤ２７発現細胞へのＣＤ７０の結合を少なくとも約７０％（例えば、１０μｇ／ｍＬ抗体濃度で、少なくとも約７０％、または少なくとも７０％）阻害すること、
（２）１０−９Ｍ以下の平衡解離定数Ｋｄで、または代替として、１０＋９Ｍ−１以上の平衡会合定数Ｋａで、ヒトＣＤ２７に結合すること、
（３）１０μｇ／ｍＬの濃度で、ＣＤ２７発現細胞の補体媒介性細胞傷害性（ＣＤＣ）を少なくとも約３０％誘発する（または１０μｇ／ｍＬの濃度で、ＣＤ２７発現細胞のＣＤＣを少なくとも３０％、もしくは少なくとも約４０％、もしくは少なくとも４０％誘発する）こと、
（４）１０μｇ／ｍＬの濃度で、ＣＤ２７発現細胞の特異的ＡＤＣＣ媒介性溶解を少なくとも約３０％誘発する（または１０μｇ／ｍＬの濃度で、ＣＤ２７発現細胞の特異的ＡＤＣＣ媒介性溶解を少なくとも３０％、もしくは少なくとも約４０％、もしくは少なくとも４０％誘発する）こと、
（５）異種移植モデルにおけるＣＤ２７発現腫瘍細胞の増殖を防止または阻害する（例えば、インビボで０．５ｍｇの腫瘍細胞を腹腔内接種して２０日目の重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウスにおいて、少なくとも６日目に、腫瘍のサイズが少なくとも約５０％低減する）こと、
（６）ワクチンまたは他の抗原と組み合わせた場合に、抗原特異的免疫応答を誘発または増強すること、
（７）特にＴＨ１免疫応答が挙げられるが、これに限定されない、免疫応答を誘発または増強すること、 
（８）特に特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の数もしくは機能活性が挙げられるが、これに限定されない、Ｔ細胞の活性、またはＴ細胞の増殖もしくは活性化を誘発または増強すること、および／または
（９）Ｔ細胞の増殖または活性化を低減または阻害すること、等である。一実施形態では、本発明の抗体の１つ以上のＣＤＲ領域を、既知のフレームワーク領域およびＣＤＲと組換えにより組み合わせて、さらなる組換えにより操作された本発明の抗ＣＤ２７抗体を作成することができる。重鎖および軽鎖可変フレームワーク領域は、同一であるかまたは異なる抗体配列に由来することができる。抗体配列は、自然発生的な抗体の配列とすることができ、または複数の抗体のコンセンサス配列とすることができる。Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４：７７３（１９９１）、Ｋｏｌｂｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ６：９７１（１９９３）、およびＣａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，国際公開公報第９２／２２６５３号を参照されたい。
【０１３１】
故に、別の実施形態において、本発明は、（１）重鎖のフレームワーク領域および重鎖のＣＤＲ（少なくとも１つの重鎖のＣＤＲが、配列番号８、９、１０、２６、２７、２８、３８、３９、４０、５０、５１、５２、６２、６３、６４、７４、７５、７６、８６、８７、８８、１０４、１０５、１０６で示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む）と、（２）軽鎖のフレームワーク領域および軽鎖のＣＤＲ（少なくとも１つの軽鎖のＣＤＲが、配列番号１４、１５、１６、２０、２１、２２、３２、３３、３４、４４、４５、４６、５６、５７、５８、６８、６９、７０、８０、８１、８２、９２、９３、９４、９８、９９、１００、１１０、１１１、１１２で示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む）と、を含み、ＣＤ２７に結合する能力を保持する、抗ＣＤ２７抗体を調製するための方法を提供する。抗体がＣＤ２７に結合する能力は、実施例で記述されているような、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して判定することができる。
【０１３２】
抗体の重鎖および軽鎖のＣＤＲ３ドメインが、抗原に対する抗体の結合特異性／親和性において特に重要な役割を果たすことは、当技術分野でよく知られている（Ｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｕｎｏｌ．，１４９：１６０５−１６１２（１９９２）、Ｐｏｌｙｍｅｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３１８−５３２９（１９９４）、Ｊａｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌ．，１９３：４００−４１９（１９９５）、Ｋｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）、Ｂｅｉｂｏｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２９６：８３３−８４９（２０００）、Ｒａｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５：８９１０−８９１５（１９９８）、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１６：２１６１−２１６２（１９９４）、Ｄｉｔｚｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５７：７３９−７４９（１９９６）を参照されたい）。故に、前述のように調製される本発明の組換え抗体は、好ましくは、抗体１Ｆ５、１Ｈ８、３Ｈ１２、３Ａ１０、２Ｃ２、２Ｇ９、３Ｈ８、および１Ｇ５の重鎖および／または軽鎖のＣＤＲ３を含む。抗体は、さらに、抗体１Ｆ５、１Ｈ８、３Ｈ１２、３Ａ１０、２Ｃ２、２Ｇ９、３Ｈ８、および１Ｇ５のＣＤＲ２を含むことができる。抗体は、さらに、抗体１Ｆ５、１Ｈ８、３Ｈ１２、３Ａ１０、２Ｃ２、２Ｇ９、３Ｈ８、および１Ｇ５のＣＤＲ１を含むことができる。抗体は、ＣＤＲの任意の組み合わせをさらに含むことができる。
【０１３３】
故に、別の実施形態において、本発明は、（１）重鎖のフレームワーク領域、重鎖のＣＤＲ１領域、重鎖のＣＤＲ２領域、および重鎖のＣＤＲ３領域（重鎖のＣＤＲ３領域は、１Ｆ５、１Ｈ８、３Ｈ１２、３Ａ１０、２Ｃ２、２Ｇ９、３Ｈ８、および１Ｇ５のＣＤＲ３から選択される）と、（２）軽鎖のフレームワーク領域、軽鎖のＣＤＲ１領域、軽鎖のＣＤＲ２領域、および軽鎖のＣＤＲ３領域（軽鎖のＣＤＲ３領域は、１Ｆ５、１Ｈ８、３Ｈ１２、３Ａ１０、２Ｃ２、２Ｇ９、３Ｈ８、および１Ｇ５のＣＤＲ３から選択される）と、を含み、ＣＤ２７に結合する、抗ＣＤ２７抗体をさらに提供する。抗体は、抗体１Ｆ５、１Ｈ８、３Ｈ１２、３Ａ１０、２Ｃ２、２Ｇ９、３Ｈ８、および１Ｇ５の重鎖のＣＤＲ２および／または軽鎖のＣＤＲ２をさらに含んでもよい。抗体は、抗体１Ｆ５、１Ｈ８、３Ｈ１２、３Ａ１０、２Ｃ２、２Ｇ９、３Ｈ８、および１Ｇ５の重鎖のＣＤＲ１および／または軽鎖のＣＤＲ１をさらに含んでもよい。
【０１３４】
改変配列を有する抗体の生成
別の実施形態において、本発明の抗ＣＤ２７抗体の可変領域配列またはその一部分は、結合（すなわち、未改変抗体と同じエピトープへの）を保持し、したがって、機能的に同等である、構造的に関連する抗ＣＤ２７抗体を作成するために改変される。抗原結合を除去せずに変化させることができる残基を同定するための方法は、当技術分野においてよく知られている（例えば、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９９２）１０（７）：７７９−８３（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ  ｌｉｇｈｔ  ｃｈａｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ，  ｔｈｅｎ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｆｉｘｅｄ  ＣＤＲ３  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｃｈａｎｇｅｓ）、Ｊｅｓｐｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １２（９）：８９９−９０３（ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｒｏｍ  ｐｈａｇｅ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ  ｔｏ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ｅｐｉｔｏｐｅ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉｇｅｎ）、Ｓｈａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８３（８）：２６２８−３１（ｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ａｎ  ｉｎｖａｒｉａｎｔ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ａｔ  ｔｈｅ  ｖａｒｉａｂｌｅ−ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｓｅｇｍｅｎｔｓ  ｊｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、Ｃａｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５（１２）：５６４７−５４（ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｏｓｓ  ａｎｄ  ｃｈａｎｇｅ  ｏｆ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ  ｆｒｏｍ  ｒａｎｄｏｍ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎ）を参照されたい）。
【０１３５】
故に、本発明の一態様において、前述した操作された抗体のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３領域は、本明細書で開示される抗体１Ｆ５、１Ｈ８、３Ｈ１２、３Ａ１０、２Ｃ２、２Ｇ９、３Ｈ８、および１Ｇ５の配列のような、正確なアミノ酸配列を含むことができる。しかしながら、本発明の他の態様において、抗体は、正確な１Ｆ５、１Ｈ８、３Ｈ１２、３Ａ１０、２Ｃ２、２Ｇ９、３Ｈ８、および１Ｇ５のＣＤＲ配列由来の誘導体を含み、依然として効率的にＣＤ２７に結合する能力を保持する。そのような配列改変体は、１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、または置換、例えば、前述したような保存的配列改変を含んでもよい。配列改変体はまた、抗体１Ｆ５、１Ｈ８、３Ｈ１２、３Ａ１０、２Ｃ２、２Ｇ９、３Ｈ８、および１Ｇ５の特定のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列について前述したコンセンサス配列に基づいてもよい。
【０１３６】
故に、別の実施形態において、操作された抗体は、例えば、抗体１Ｆ５、１Ｈ８、３Ｈ１２、３Ａ１０、２Ｃ２、２Ｇ９、３Ｈ８、および１Ｇ５の１つ以上のＣＤＲと９０％、９５％、９８％、または９９．５％同一である１つ以上のＣＤＲから構成されてもよい。中間から前述の値までの範囲、例えば前述の配列の１つ以上に対して９０〜９５％、９５〜９８％、または９８〜１００％の同一性であるＣＤＲも、本発明に包含することを意図している。
【０１３７】
別の実施形態において、ＣＤＲの１つ以上の残基は、結合を改変して、より好ましいオンレート結合、より好ましいオフレート結合、またはその両方を達成するために変化させてもよく、よって、理想的な結合定数が達成される。この方策を使用して、例えば１０１０Ｍ−１以上の、非常に高い結合親和性を有する抗体を達成することができる。当技術分野で知られており、本明細書で説明される親和性成熟手法は、ＣＤＲ領域を変化させ、続いて、結果として生じた結合分子を所望の結合の変化についてスクリーニングするために使用することができる。故に、ＣＤＲが変化したときの、結合親和性および免疫原性の変化を監視してスコアリングすることができ、よって、最良に組み合わせた結合および低い免疫原性のために最適化された抗体が達成される。
【０１３８】
ＣＤＲ内の改変に加えてまたはその代わりに、これらの改変が抗体の結合親和性を排除しない限り、抗体の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のフレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４のうちの１つ以上において改変を行うこともできる。例えば、本発明の抗体の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域のフレームワーク領域の中の１つ以上の非生殖系列アミノ酸残基が、生殖系列アミノ酸残基（すなわち、抗体が有意な配列同一性を有する、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のヒト生殖系列配列の中の対応するアミノ酸残基）で置換される。例えば、抗体鎖は、有意な配列同一性を共有する生殖系列抗体鎖にアラインメントすることができ、抗体フレームワーク配列と生殖系列鎖のフレームワークとの間で一致しないアミノ酸残基を、生殖系列配列由来の対応する残基と置換することができる。抗体可変フレームワーク領域と、対応するヒト生殖系列配列可変フレームワーク領域との間でアミノ酸が異なるときに、アミノ酸が以下のカテゴリーのうちの１つに該当することが合理的に予想される場合、抗体フレームワークアミノ酸は、通常、等価なヒト生殖系列配列アミノ酸によって置換されるべきである。
（１）抗原に直接非共有結合するアミノ酸残基、
（２）ＣＤＲ領域に隣接するアミノ酸残基、
（３）別の場合であればＣＤＲ領域と相互作用する（例えば、コンピュータモデリングによって判定したときに、ＣＤＲ領域の約３〜６Åの範囲である）アミノ酸残基、または
（４）ＶＬ−ＶＨ界面に関与するアミノ酸残基。
【０１３９】
「抗原に直接非共有結合する」残基としては、確立された化学力、例えば水素結合、ファンデルワールス力、および疎水性相互作用等に従って、抗原上のアミノ酸と直接相互作用する可能性が高いフレームワーク領域の中の適所のアミノ酸が挙げられる。故に、一実施形態において、本発明の抗体のフレームワーク領域の中のアミノ酸残基は、抗原に直接非共有結合する、対応する生殖系列アミノ酸残基で置換される。
【０１４０】
「ＣＤＲ領域に隣接する」残基としては、抗体の一次配列の中のＣＤＲの１つ以上に直接隣接する位置、例えば、Ｋａｂａｔによって定義されるようなＣＤＲ、またはＣｈｏｔｈｉａによって定義されるようなＣＤＲに直接隣接する位置のアミノ酸残基が挙げられる。（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１（１９８７）を参照されたい）。故に、一実施形態において、本発明の抗体のフレームワーク領域の中のアミノ酸残基は、ＣＤＲ領域に隣接する、対応する生殖系列アミノ酸残基で置換される。
【０１４１】
「別の場合であればＣＤＲ領域と相互作用する」残基としては、二次構造分析によって、ＣＤＲ領域に影響を及ぼすのに十分な空間的配向にあると判定される残基が挙げられる。そのようなアミノ酸は、概して、ＣＤＲの中のいくつかの原子の約３オングストローム単位（Å）の範囲内に側鎖原子を有することになり、また、上記に列記したような確立された化学力に従って、ＣＤＲ原子と相互作用することが可能である原子を含まなければならない。故に、一実施形態において、本発明の抗体のフレームワーク領域の中のアミノ酸残基は、別の場合であればＣＤＲ領域と相互作用する、対応する生殖系列アミノ酸残基で置換される。
【０１４２】
フレームワークの中の複数の位置のアミノ酸は、多数の抗体における（例えば、ＣＤＲと相互作用することが可能な）ＣＤＲ確認の判定に重要であることが分かっている（前掲のＣｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ、前掲のＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．、およびＴｒａｍｏｎｔａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：１７５（１９９０）。これらは全て参照により本明細書に組み込まれる）。これらの著者は、複数の既知の抗体の構造の分析によって、ＣＤＲ高次構造に重要な保存されたフレームワーク残基を同定した。分析した抗体は、ＣＤＲの高次構造に基づいて、限定された数の構造的または「カノニカル」なクラスに分類した。カノニカルクラスのメンバー内の保存されたフレームワーク残基を、「カノニカル」残基と称する。カノニカル残基としては、軽鎖の残基２、２５、２９、３０、３３、４８、６４、７１、９０、９４、および９５、ならびに重鎖の残基２４、２６、２９、３４、５４、５５、７１、および９４が挙げられる。さらなる残基（例えば、ＣＤＲ構造決定残基）は、Ｍａｒｔｉｎ  ａｎｄ  Ｔｈｏｒｔｏｎ（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：８００の方法論に従って同定することができる。特に、軽鎖の位置２、４８、６４、および７１、ならびに重鎖の位置２６〜３０、７１、および９４のアミノ酸（Ｋａｂａｔによる番号付け）は、多数の抗体の中のＣＤＲとの相互作用が可能であることが分かっている。軽鎖における位置３５のアミノ酸、ならびに重鎖における位置９３および１０３もまた、ＣＤＲと相互作用する可能性が高い。ＣＤＲの高次構造に影響を及ぼし得るさらなる残基は、Ｆｏｏｔｅ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７の方法論に従って同定することができる。そのような残基は、「バーニア」残基と称され、ＣＤＲに密接した基礎となる（すなわち、ＣＤＲの下に「プラットフォーム」を形成する）フレームワーク領域の中の残基である。
【０１４３】
「ＶＬ−ＶＨ界面に関与する」残基または「パッキング残基」としては、例えば、Ｎｏｖｏｔｎｙ  ａｎｄ  Ｈａｂｅｒ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：４５９２−６６（１９８５）または前掲のＣｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．によって定義されるような、ＶＬとＶＨとの間の界面の残基が挙げられる。
【０１４４】
特定のアミノ酸が前述のカテゴリーの１つ以上に含まれるかどうかについて、いくらか不正確なこともある。そのような場合、一方がその特定の置換を有し、他方はそれを持たない、別の変異抗体が産生される。このように産生された別の変異抗体は、本明細書で説明されるアッセイのいずれかで、所望の活性について試験し、好ましい抗体を選択することができる。
【０１４５】
フレームワーク領域内の置換のさらなる候補は、その位置で抗体に対して通常でない、すなわち「稀な」アミノ酸である。これらのアミノ酸は、ヒト生殖系列配列の対応する位置由来の、またはより典型的な抗体の等価な位置由来のアミノ酸で置換することができる。例えば、抗体のフレームワーク領域の中のアミノ酸がその位置について稀であり、かつ生殖系列配列の中の対応するアミノ酸が免疫グロブリン配列の中のその位置について一般的であるとき、または、抗体の中のアミノ酸がその位置について稀であり、かつ他の配列と比較して、生殖系列配列の中の対応するアミノ酸も稀であるときには、置換が望ましい場合がある。通常でないアミノ酸を、抗体に典型的に発生する生殖系列配列由来のアミノ酸で置換することによって、抗体の免疫原性を低くし得ることを企図している。
【０１４６】
本明細書で使用される「稀な」という用語は、代表的な試料の配列において、配列の約２０％未満、好ましくは約１０％未満、より好ましくは約５％未満、さらに好ましくは約３％未満、さらに好ましくは約２％未満、さらに好ましくは約１％未満で、その位置に生じるアミノ酸を示す。本明細書で使用される「一般的な」という用語は、代表的な試料における配列の約２５％を超えるが、通常約５０％を超えて生じる、アミノ酸を示す。例えば、全ての軽鎖可変領域配列および重鎖可変領域配列は、それぞれ、相互に特異的に相同であり、特定の重要な位置に同じアミノ酸を有する配列の「サブグループ」に分類される（前掲のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．）。抗体配列の中のアミノ酸が配列の中で「稀」であるか「一般的」であるかを判定するときには、しばしば、抗体配列と同じサブグループの中の配列だけを考慮することが好ましいと考えられる。
【０１４７】
概して、抗体のフレームワーク領域は、通常、それらが由来したヒト生殖系列配列のフレームワーク領域と実質的に同一であり、より通常には、同一である。当然、フレームワーク領域の中のアミノ酸の多くは、抗体の特異性または親和性にほとんどまたは全く直接的に寄与しない。したがって、フレームワーク残基の多数の個々の保存的置換は、結果として生じる免疫グロブリンの特異性または親和性の大幅な変化を伴わずに許容することができる。したがって、一実施形態において、抗体の可変フレームワーク領域は、ヒト生殖系列可変フレームワーク領域配列またはそのような配列のコンセンサスに対して少なくとも８５％の配列同一性を共有する。別の実施形態において、抗体の可変フレームワーク領域は、ヒト生殖系列可変フレームワーク領域配列またはそのような配列のコンセンサスに対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を共有する。
【０１４８】
単純にＣＤ２７に結合すること加えて、抗体は、本発明の抗体の他の機能的性質のその保持のために選択されてもよい。該機能的性質は、例えば、
（１）ＣＤ２７発現細胞へのＣＤ７０の結合を少なくとも約７０％阻害する（例えば、完全にまたは部分的に遮断する）こと、
（２）１０−９Ｍ以下の平衡解離定数Ｋｄで、または代替として、１０＋９Ｍ−１以上の平衡会合定数Ｋａで、ヒトＣＤ２７に結合すること、
（３）１０μｇ／ｍＬの濃度で、ＣＤ２７発現細胞の補体媒介性細胞傷害性（ＣＤＣ）を少なくとも約４０％誘発すること、および／または
（４）１０μｇ／ｍＬの濃度で、ＣＤ２７発現細胞のＡＤＣＣ媒介性特異的溶解を少なくとも約４０％誘発すること、等である。
【０１４９】
ＣＤ２７に対するモノクローナル抗体の特徴付け
本発明のモノクローナル抗体は、種々の既知の手法を使用して、ＣＤ２７への結合について特徴付けることができる。一般には、抗体を、最初にＥＬＩＳＡによって特徴付ける。簡潔に述べると、マイクロタイタープレートを、精製したＰＢＳ中のＣＤ２７で被覆し、次いで、ＰＢＳで希釈したウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）等の、無関係なタンパク質で遮断することができる。ＣＤ２７で免疫化したマウス由来の血漿の希釈物を各ウェルに加えて、３７℃で１〜２時間インキュベートする。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄し、次いで、３７℃で１時間、アルカリホスファターゼにコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異的ポリクローナル試薬とともにインキュベートする。洗浄後、プレートをＡＢＴＳ基質で発色させて、ＯＤ４０５で分析する。好ましくは、最も高い力価を生じるマウスを融合に使用する。
【０１５０】
前述のようなＥＬＩＳＡアッセイを使用して、抗体についてスクリーニングし、したがって、ＣＤ２７免疫原と陽性反応性を示す抗体を産生するハイブリドーマについてスクリーニングすることができる。次いで、好ましくは高親和性でＣＤ２７に結合するハイブリドーマをサブクローン化し、さらに特徴付けることができる。次いで、親細胞の反応性を保持する（ＥＬＩＳＡによる）各ハイブリドーマ由来の１つのクローンを、細胞バンクを作製するために、および抗体精製のために選択することができる。
【０１５１】
抗ＣＤ２７抗体を精製するために、選択したハイブリドーマは、ローラーボトル、２リットルのスピナーフラスコ、または他の培養系で増殖させることができる。上清は、濾過して濃縮した後、プロテインＡ−セファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）による親和性クロマトグラフィを行ってタンパク質を精製することができる。緩衝剤をＰＢＳに交換した後、濃度は、吸光係数１．４３を使用したＯＤ２８０によって、または好ましくは比濁分析によって決定することができる。ＩｇＧは、ゲル電気泳動および抗原特異的方法によって確認することができる。
【０１５２】
選択した抗ＣＤ２７モノクローナル抗体が固有のエピトープに結合するかどうかを判定するために、各抗体は、市販の試薬（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を使用してビオチン化することができる。ビオチン化したＭＡｂ結合は、ストレプトアビジン標識プローブで検出することができる。精製した抗体のアイソタイプを判定するために、当該分野で認識された技術を使用してアイソタイプＥＬＩＳＡを行うことができる。例えば、マイクロタイタープレートのウェルを、４℃で一晩、１０μｇ／ｍＬの抗Ｉｇにて被覆することができる。５％のＢＳＡで遮断した後、周囲温度で２時間、プレートを１０μｇ／ｍＬのモノクローナル抗体または精製したアイソタイプ対照と反応させる。次いで、ウェルを、ＩｇＧ１または他のアイソタイプ特異的コンジュゲートプローブのいずれかと反応させることができる。前述のようにプレートを発色させて、分析する。
【０１５３】
ＣＤ２７を発現する生細胞へのモノクローナル抗体の結合を試験するために、フローサイトメトリーを使用することができる。簡潔に述べると、膜結合ＣＤ２７を発現する細胞株および／またはヒトＰＢＭＣ（標準的な増殖条件下で増殖させたもの）を、４℃で１時間、０．１％のＢＳＡを含有するＰＢＳ中で種々の濃度のモノクローナル抗体と混合する。洗浄後、細胞を、一次抗体染色と同じ条件下で、フルオレセイン標識した抗ＩｇＧ抗体と反応させる。試料は、単一の細胞をゲートするための光散乱性および側方散乱性を使用したＦＡＣＳｃａｎ装置によって分析して、標識抗体の結合を判定することができる。フローサイトメトリーアッセイ（に加えてまたはその代わりに）、蛍光顕微鏡法を使用した代替のアッセイを使用してもよい。細胞は、前述と全く同様に染色して、蛍光顕微鏡法によって検査することができる。この方法は、個々の細胞を視覚化することが可能であるが、抗原の密度に依存して感度が低下する場合がある。
【０１５４】
抗ＣＤ２７  ＩｇＧは、ウエスタンブロット法によって、ＣＤ２７抗原との反応性についてさらに試験することができる。簡潔に述べると、ＣＤ２７を発現する細胞由来の細胞抽出物を調製して、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動に供することができる。電気泳動後、分離した抗原を、ニトロセルロース膜に移し、２０％のマウス血清で遮断して、試験すべきモノクローナル抗体でプローブする。ＩｇＧの結合は、抗ＩｇＧアルカリホスファターゼを使用して検出し、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ基質タブレット（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で発色させることができる。
【０１５５】
種々の抗ＣＤ２７抗体の結合親和性、交差反応性、および結合反応速度を分析するための方法としては、技術分野で知られている標準的なアッセイ、例えば、本明細書の実施例２で説明されるＢｉａｃｏｒｅ（商標）２０００ＳＰＲ計測器（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用したＢｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析が挙げられる。
【０１５６】
ＩＩ．免疫毒素
別の実施形態において、本発明の抗体は、例えば細胞毒素、薬物、または放射性同位体等の治療部分に連結させる。細胞毒素とコンジュゲートさせた場合、これらの抗体コンジュゲートを「免疫毒素」と称する。細胞毒素または細胞毒性剤には、細胞に有害な（例えば、死滅させる）任意の薬剤が含まれる。例としては、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにその類似体または相同体が挙げられる。治療薬としては、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパ（ｔｈｉｏｅｐａ）クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ならびにｃｉｓ−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前は、ダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前は、アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））、および有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の抗体は、放射性同位体（例えば、放射性ヨウ素）とコンジュゲートさせて、自己免疫疾患または炎症性疾患等の樹状突起関連の障害、または移植片対宿主疾患を治療するための細胞毒性放射性医薬を生成することができる。
【０１５７】
本発明の抗体コンジュゲートは、所与の生物学的応答を改変するために使用することができ、薬物部分は、古典的な化学治療薬に制限されないと解釈されたい。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性を保有するタンパク質またはポリペプチドであってもよい。そのようなタンパク質としては、例えば、酵素活性毒素またはその活性部分（アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素、またはジフテリア毒素等）、タンパク質（腫瘍壊死因子またはインターフェロンγ等）、または生物学的応答調節物質（例えば、リンホカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）、または他の成長因子等）が挙げられる。
【０１５８】
そのような治療部分を抗体とコンジュゲートするための手法はよく知られており、例えば、Ａｒｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３−５６（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」，ｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  （２ｎｄ  Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．６２３−５３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）、Ｔｈｏｒｐｅ，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ」，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ'８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５−５０６（１９８５）、「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ＡｎｄＦｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ」，ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．３０３−１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９８５）、およびＴｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｔｈｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｔｏｘｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，６２：１１９−５８（１９８２）を参照されたい。
【０１５９】
ＩＩＩ． 組成物
別の実施形態において、本発明は、組成物、例えば、担体（薬学的に許容される担体）とともに調合される、本発明のモノクローナル抗体の１つまたは組み合わせを含有する組成物を提供する。本発明の抗体を含む二重特異性分子を含有する組成物も提供する。一実施形態において、組成物は、複数の（例えば、２つ以上の）本発明の単離された抗体の組み合わせを含む。好ましくは、組成物の抗体のそれぞれは、ＣＤ２７の、予め選択した異なるエピトープに結合する。
【０１６０】
本発明の薬学的組成物はまた、併用療法で、すなわち、他の薬剤と組み合わせて投与することもできる。例えば、併用療法は、抗炎症薬、ＤＭＡＲＤ（疾患修飾性抗リウマチ薬）、免疫抑制剤、および化学療法剤等の、少なくとも１つ以上のさらなる治療薬を伴う、本発明の組成物を含むことができる。本発明の薬学的組成物はまた、放射線療法と併せて投与することもできる。他の抗体との共投与もまた、本発明によって包含される。
【０１６１】
本明細書で使用される「担体」および「薬学的に許容可能な担体」という用語は、生理学的に適合する任意のおよび全ての溶媒、分散媒、被覆剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤、および吸収遅延剤等を含む。好ましくは、担体は、（例えば、注射または注入による）静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄、または表皮投与に適切である。投与経路に応じて、活性化合物、すなわち、抗体、二重特異性分子、および多重特異性分子は、材料を被覆して、化合物を不活性化し得る酸および他の自然条件の作用から該化合物を保護してもよい。
【０１６２】
本発明の抗体および構築体とともに使用してもよいアジュバントの例としては、フロイント不完全アジュバントおよび完全アジュバント（Ｄｉｆｃｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，Ｍｉｃｈ．）、Ｍｅｒｃｋアジュバント６５（Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）、ＡＳ−２（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．）、アルミニウム塩（水酸化アルミニウムゲル（ミョウバン）またはリン酸アルミニウム等）、カルシウム塩、鉄塩、または亜鉛塩、アシル化チロシンの不溶性懸濁液、アシル化糖、カチオンまたはアニオン誘導体化ポリサッカリド、ポリホスファゼン、生分解性微小球、サイトカイン（ＧＭ−ＣＳＦ、インターロイキン−２、−７、−１２、および他の同様の因子等）、３Ｄ−ＭＰＬ、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、およびモノホスホリル脂質Ａ（例えば、３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａ）が挙げられる。
【０１６３】
ＭＰＬアジュバントは、Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手可能である（Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈ。例えば、米国特許第４，４３６，７２７号、第４，８７７，６１１号、第４，８６６，０３４号、および第４，９１２，０９４号を参照されたい）。ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド（ＣｐＧジヌクレオチドがメチル化されていない）がよく知られており、例えば、国際公開公報第９６／０２５５５号、国際公開公報第９９／３３４８８号、ならびに米国特許第６，００８，２００号および第５，８５６，４６２号で説明されている。また、例えば、Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７３：３５２，１９９６によって、免疫賦活剤のＤＮＡ配列も説明されている。
【０１６４】
さらなる別のアジュバントとしては、例えば、サポニン（ＱＳ２１およびＱＳ７（Ａｑｕｉｌａ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．，Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ，Ｍａｓｓ．）を含む、ＱｕｉｌＡまたはその誘導体等）；エスシン；ジギトニン；またはジプソフィリアもしくはケノポジキノアサポニン；Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ  ７２０（Ｓｅｐｐｉｃ、Ｆｒａｎｃｅ）；ＳＡＦ（Ｃｈｉｒｏｎ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ）；ＩＳＣＯＭ（ＣＳＬ）、ＭＦ−５９（Ｃｈｉｒｏｎ）；ＳＢＡＳシリーズのアジュバント（例えば、ＳＢＡＳ−２またはＳＢＡＳ−４（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ，Ｒｉｘｅｎｓａｒｔ，Ｂｅｌｇｉｕｍから入手可能）；Ｄｅｔｏｘ（Ｅｎｈａｎｚｙｎ（商標））（Ｃｏｒｉｘａ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍｏｎｔ．）；ＲＣ−５２９（Ｃｏｒｉｘａ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ｍｏｎｔ．）および他のアミノアルキルグルコサミニド４−リン酸（ＡＧＰ）；ポリオキシエチレンエーテルアジュバント（国際公開公報第９９／５２５４９Ａ１号で説明されるもの等）；イミキモド［Ｓ−２６３０８，Ｒ−８３７］等の合成イミダゾキノリン（Ｈａｒｒｉｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：１８２０−１８２６（２００１）；およびレシキモド［Ｓ−２８４６３、Ｒ−８４８］（Ｖａｓｉｌａｋｏｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２０４：６４−７４，２０００）；ツカレソール等（Ｒｈｏｄｅｓ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３７７：７１−７５，１９９５）の、抗原提示細胞およびＴ細胞表面上で構成的に発現するカルボニルおよびアミンのシッフ塩基；タンパク質またはペプチドのいずれかとしてのサイトカイン、ケモカイン、および共刺激分子（例えば、炎症促進性サイトカイン（インターフェロン、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＴＧＦ−アルファ、およびＴＧＦ−ベータ等）、Ｔｈ１誘発剤（インターフェロンガンマ、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、およびＩＬ−２１等）、Ｔｈ２誘発剤（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１３、および他のケモカイン等）、および共刺激遺伝子（ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１アルファ、ＭＩＰ−１ベータ、ＲＡＮＴＥＳ、ＴＣＡ−３、ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびＣＤ４０Ｌ等）を含む）；免疫賦活剤標的リガンド（ＣＴＬＡ−４およびＬ−セレクチン、アポトーシス刺激タンパク質、ならびにＦａｓ等のペプチド等）；合成脂質ベースのアジュバント（Ｖａｘｆｅｃｔｉｎ（Ｒｅｙｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：３７７８−３７８６，２００１）、スクアレン、アルファ−トコフェロール、ポリソルベート８０、ＤＯＰＣ、およびコレステロール等）；内毒素、［ＬＰＳ］（Ｂｅｕｔｌｅｒ，Ｂ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ３：２３−３０，２０００）；Ｔｈ１誘発性サイトカインを産生するようにＴｏｌｌ受容体を誘発するリガンド（合成マイコバクテリウムリポタンパク質、マイコバクテリウムタンパク質ｐ１９、ペプチドグリカン、テイコ酸、および脂質Ａ等）；ならびにＣＴ（コレラ毒素のサブユニットＡおよびＢ）およびＬＴ（大腸菌由��の易熱性エンテロトキシンのサブユニットＡおよびＢ）、熱ショックタンパク質ファミリー（ＨＳＰ）、およびＬＬＯ（リステリオリシンＯ；国際公開公報第０１／７２３２９号）が挙げられる。これらのおよび種々のさらなるトール様受容体（ＴＬＲ）作動薬は、例えばＫａｎｚｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍａｙ  ２００７，Ｖｏｌ．１３，Ｎｏ．５で説明されている。本発明の抗ＣＤ２７抗体と組み合わせて使用するための好ましい免疫賦活剤は、ポリＩＣ等のＴＬＲ３作動薬である。
【０１６５】
「薬学的に許容される塩」とは、親化合物の所望の生物活性を保持し、かついかなる望ましくない毒物学的影響も与えない塩を指す（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照されたい）。そのような塩の例としては、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、および亜リン酸等の非毒性無機酸に由来するもの、ならびに、脂肪族モノカルボン酸およびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、ならびに脂肪族スルホン酸および芳香族スルホン酸等の非毒性有機酸に由来するものが挙げられる。塩基付加塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属由来のもの、ならびに、Ｎ，Ｎ'−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカイン等の非毒性有機アミン由来のものが挙げられる。
【０１６６】
本発明の組成物は、当技術分野で知られている種々の方法によって投与することができる。当業者に認識されるように、投与の経路および／または様式は、所望の結果に応じて変化する。活性化合物は、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化した送達系を含む放出制御製剤等の、化合物を迅速な放出から保護する担体とともに調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸等の、生分解性で生体適合性のポリマーを使用することができる。そのような製剤を調製するための多数の方法は、特許を受けているか、または当業者に一般に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。
【０１６７】
一定の投与経路によって本発明の化合物を投与するために、その不活性化を防止する物質で化合物を被覆するか、または化合物と共投与することが必要になり得る。例えば、化合物は、適切な担体、例えば、リポソームまたは希釈剤中で対象に投与してもよい。許容される希釈剤としては、食塩および水性緩衝液が挙げられる。リポソームとしては、水中油中水型ＣＧＦ乳濁液、ならびに従来のリポソーム（Ｓｔｒｅｊａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．７：２７）が挙げられる。
【０１６８】
担体としては、注射可能な無菌溶液または無菌分散体の即時調製のための、無菌水溶液または分散液、および無菌粉末が挙げられる。薬学的に活性な物質のためのそのような培地および薬剤の使用は、当技術分野で知られている。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と適合しない場合を除き、本発明の薬学的組成物中でのその使用が意図される。また、補助的な活性化合物をこの組成物に組み込むことができる。
【０１６９】
治療組成物は、一般的に、製造および貯蔵の条件下で無菌であり、かつ安定していなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高薬物濃度に適切な他の秩序構造として調合することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール等）およびその適切な混合物を含有する、溶媒または分散媒とすることができる。適切な流動性は、例えば、レシチン等の被覆の使用、分散液の場合は必要とされる粒径の維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。多くの場合において、等張剤、例えば、糖類、ポリアルコール類（マンニトール、ソルビトール等）、または塩化ナトリウムを組成物中に含むことが好ましい。注射可能な組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含めることによってもたらすことができる。
【０１７０】
無菌の注射可能な溶液は、必要とされる量の活性化合物を上記に列挙した成分の１つまたは組み合わせを伴う適切な溶媒中に組み込み、必要に応じてその後に滅菌精密濾過を行うことによって調製することができる。一般に、分散液は、塩基性分散媒および上記に列挙される必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルの中に活性化合物を組み込むことによって調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、その予め濾過滅菌した溶液から有効成分および任意のさらなる所望の成分の粉末が得られる、真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）である。
【０１７１】
投薬量／投薬計画は、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整される。例えば、単回ボーラスを投与してもよく、複数の分割した用量を経時的に投与してもよく、または治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例的に増加または低減させてもよい。例えば、本発明の抗体は、皮下注射もしくは筋肉内注射によって週に１回もしくは２回投与されてもよく、または皮下注射もしくは筋肉内注射によって月に１回もしくは２回投与されてもよい。
【０１７２】
投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位形態で非経口組成物を調合することが特に有利である。本明細書で使用される投薬単位形態は、治療される対象の単位投薬量として適している物理的に不連続な単位を指し、各単位は、必要とされる薬学的担体と共同して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含有する。本発明の単位投薬形態の仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特性および達成すべき特定の治療効果、ならびに（ｂ）個人の感受性を治療するためのそのような活性化合物を調合する技術に固有の制限によって決定され、これらに直接依存する。
【０１７３】
薬学的に許容可能な抗酸化剤の例としては、（１）水溶性抗酸化剤（アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、および亜硫酸ナトリウム等）、（２）油溶性抗酸化剤（パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、プロピルガレート、およびα−トコフェロール等）、および（３）金属キレート剤（クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、およびリン酸等）、が挙げられる。
【０１７４】
治療組成物について、本発明の製剤としては、経口、鼻腔内、局所（口内および舌下を含む）、直腸、膣内、および／または非経口投与に適切な製剤が挙げられる。製剤は、好都合に単位投薬形態で提示されてもよく、薬学の分野で知られている任意の方法によって調製されてもよい。単回投薬形態を生成するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、治療されている対象および特定の投与様式に応じて変動する。単回投薬形態を生成するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、一般に、治療効果を生じる組成物の量である。一般に、１００パーセントのうち、この量は、約０．００１パーセント〜約９０パーセントの有効成分、好ましくは約０．００５パーセント〜約７０パーセント、最も好ましくは約０．０１パーセント〜約３０パーセントの範囲となる。
【０１７５】
膣内投与に適切な本発明の製剤としては、当技術分野で知られているような担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡沫、または噴霧製剤が挙げられる。本発明の組成物の局所投与または経皮投与のための投薬形態としては、粉末、噴霧、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチ、および吸入が挙げられる。活性化合物は、無菌状態下で、薬学的に許容される担体と混合し、そして必要であり得る任意の防腐剤、緩衝剤、または噴射剤と混合してもよい。
【０１７６】
本明細書で使用される「非経口投与」および「非経口的に投与する」という句は、通常は注射による、腸内および局所投与以外の投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外、および胸骨内注射および注入が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１７７】
本発明の薬学的組成物で使用されてもよい適切な水性担体および非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、およびその適切な混合物、オリーブ油等の植物油、ならびにオレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチン等の被覆材料の使用、分散液の場合は必要とされる粒径の維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。
【０１７８】
これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤等のアジュバントを含有してもよい。微生物の存在の予防は、前掲の滅菌手順、および例えば、パラベン、クロロブタノール、およびフェノールソルビン酸等の種々の抗菌剤および抗真菌剤の包含の両方によって確保することができる。また、糖および塩化ナトリウム等の等張剤を組成物中に含むことが望ましい場合もある。加えて、注射可能な薬学的形態の持続的吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン等の吸収を遅延させる薬剤を含むことによってもたらすことができる。
【０１７９】
本発明の化合物を医薬としてヒトおよび動物に投与するときに、本発明の化合物は、単独で与えるか、または例えば、薬学的に許容可能な担体と組み合わせて、０．００１〜９０％（より好ましくは、０．０１〜３０％等の０．００５〜７０％）の有効成分を含有する薬学的組成物として与えることができる。
【０１８０】
選択した投与経路に関わらず、適切な水和形態で使用されてもよい本発明の化合物および／または本発明の薬学的組成物は、当業者に知られている従来の方法によって薬学的に許容可能な投薬形態に調合される。
【０１８１】
本発明の薬学的組成物中の活性成分の実際の投薬レベルは、患者に有毒になることなく、特定の患者に対する所望の治療応答、組成物、および投与様式を達成するのに有効である活性成分の量を得るように変化させてもよい。選択される投薬量レベルは、用いられる特定の本発明の組成物、またはエステル、その塩もしくはアミド、投与経路、投与時間、用いられている特定の化合物の排泄速度、治療期間、用いられる特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物、および／または材料、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、全体的な健康、および事前の病歴、ならびに医学分野でよく知られている類似する要因を含む、種々の薬物動態学的要因に依存する。当分野の通常の技術を有する医師または獣医師は、必要とされる薬学的組成物の有効量を容易に決定して、処方することができる。例えば、医師または獣医師は、薬学的組成物で用いられる本発明の化合物の用量を、所望の治療効果を達成するために必要とされるレベルよりも低いレベルから始めて、所望の効果が達成されるまで投薬量を徐々に増加させることが可能である。一般に、本発明の組成物の適切な１日の用量は、治療効果を生じる最も低い用量である化合物の量となる。そのような有効用量は、一般に、前述した要因に依存する。投与は、静脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下であることが好ましく、好ましくは、標的部位の近位に投与する。所望であれば、治療組成物の有効な１日の用量は、任意で単位投薬形態で、１日を通して適切な間隔で別々に投与される２回、３回、４回、５回、６回の、またはそれを超える副用量として投与することができる。本発明の化合物は、単独で投与することが可能であるが、本化合物は、薬学的製剤（組成物）として投与することが好ましい。
【０１８２】
治療組成物は、当技術分野で知られている医療デバイスで投与することができる。例えば、好ましい実施形態において、本発明の治療組成物は、米国特許第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２４号、または第４，５９６，５５６で開示されているデバイス等の、無針皮下注射デバイスで投与することができる。本発明において有用なよく知られているインプラントおよびモジュールの例としては、米国特許第４，４８７，６０３号（制御された速度で薬物を分注するための移植可能なマイクロ注入ポンプを開示）、米国特許第４，４８６，１９４号（皮膚を通して薬物を投与するための治療デバイスを開示）、米国特許第４，４４７，２３３号（正確な注入速度での薬物を送達するための薬物注入ポンプを開示）、米国特許第４，４４７，２２４号（薬物持続送達のための移植可能な可変流量注入装置を開示）、米国特許第４，４３９，１９６号（多室区画を有する浸透性薬物送達システムを開示）、および米国特許第４，４７５，１９６号（浸透性薬物送達システムを開示）が挙げられる。数多くの他のそのようなインプラント、送達システム、およびモジュールは、当業者に知られている。
【０１８３】
一定の実施形態において、本発明の抗体は、インビボでの適切な分布を確保するように調合することができる。例えば、血液脳障壁（ＢＢＢ）は、多数の高親水性化合物を排除する。本発明の治療化合物がＢＢＢを通過することを確保するために（それを所望する場合）、該治療化合物は、例えば、リポソーム中に調合することができる。リポソームの製造方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号、第５，３７４，５４８号、および第５，３９９，３３１号を参照されたい。リポソームは、特定の細胞または器官の中に選択的に輸送される１つ以上の部分を含んでもよく、したがって、標的型薬物送達を増強する（例えば、Ｖ．Ｖ．Ｒａｎａｄｅ（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５を参照されたい）。例示的な標的部分としては、葉酸またはビオチン（例えば、Ｌｏｗ他への米国特許第５，４１６，０１６号を参照されたい）；マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８）；抗体（Ｐ．Ｇ．Ｂｌｏｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３５７：１４０；Ｍ．Ｏｗａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０）；界面活性プロテインＡ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４）、その異なる種は、本発明の製剤、ならびに本発明の分子の成分を含み得る；ｐ１２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９０９０）が挙げられる。また、Ｋ．Ｋｅｉｎａｎｅｎ、Ｍ．Ｌ．Ｌａｕｋｋａｎｅｎ（１９９４）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３４６：１２３；Ｊ．Ｊ．Ｋｉｌｌｉｏｎ、Ｉ．Ｊ．Ｆｉｄｌｅｒ（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２７３も参照されたい。本発明の一実施形態において、本発明の治療的な化合物は、リポソーム中に調合され、より好適な一実施形態において、リポソームは、標的部分を含む。最も好ましい実施形態において、リポソーム中の治療化合物は、ボーラス注射によって腫瘍または感染の近位の部位に送達される。組成物は、容易な注射可能性が存在する程度に流動的でなければならない。組成物は、製造および貯蔵の条件下で安定していなければならず、細菌および真菌等の微生物の汚染作用に対して保存されなければならない。
【０１８４】
化合物が癌を阻害する能力は、ヒト腫瘍における有効性を予測する動物モデル系で評価することができる。代替として、組成物のこの性質は、化合物がそのような阻害を阻害する能力を、当業者に知られているアッセイによってインビトロで試験することによって評価することができる。治療上有効量の治療化合物は、対象における腫瘍サイズを減少させることができるか、またはそうでなければ、症状を改善することができる。当業者は、対象のサイズ、対象の症状の重篤性、および選択した特定の組成物または投与経路等の要因に基づいて、そのような量を決定することが可能であると考えられる。
【０１８５】
組成物は、無菌であり、かつ組成物を注射器によって送達できる程度の流動性がなくてはならない。水に加えて、担体は、等張緩衝化生理食塩水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール等）、およびその適切な混合物とすることができる。適切な流動性は、例えば、レシチン等の被覆の使用、分散液の場合は必要とされる粒径の維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。多くの場合において、等張剤、例えば、糖類、ポリアルコール類（マンニトール、またはソルビトール等）、および塩化ナトリウムを組成物中に含むことが好ましい。注射可能な組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物中に含めることによってもたらすことができる。
【０１８６】
前述のように、活性化合物が適切に保護されたときに、化合物は、例えば、不活性希釈剤または吸収可能な可食性担体とともに経口的に投与されてもよい。
【０１８７】
ＩＶ．本発明の用途および方法
一実施形態において、本発明の抗体、二重特異性分子、および組成物は、種々の疾患および状態を治療および／または予防（例えば、それらに対して免疫化）するために使用することができる。
【０１８８】
治療することができる主な疾患適応症の１つは、癌である。具体的には、免疫応答を誘発または増強する抗ＣＤ２７抗体を、癌の治療で使用することができる。癌の種類としては、白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫および辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、真性多血症リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖病、固形腫瘍、肉腫、および癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸肉腫、結腸直腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、ヘパトーマ、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起細胞腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、上咽頭癌、食道癌、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系（ＣＮＳ）癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸直腸癌、結合組織癌、消化器系の癌、子宮体癌、食道癌、眼癌、頭頸部癌、胃癌、上皮内腫瘍、腎臓癌、喉頭癌、肝癌、肺癌（小細胞、大細胞）、黒色腫、神経芽細胞腫、口腔癌（例えば、口唇、舌、口、および咽頭）、卵巣癌、膵癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系の癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌、ならびに泌尿器系の癌が挙げられるが、これらに限定されない。好ましい癌としては、慢性リンパ球性白血病、マントル細胞リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、バーキットリンパ腫、および辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫から成る群から選択される、ＣＤ２７発現腫瘍が挙げられる。
【０１８９】
免疫応答を誘発または増強する抗ＣＤ２７抗体を使用する他の疾患適応症としては、細菌、真菌、ウイルス、および寄生虫感染性の疾患が挙げられる。免疫応答を阻害または低減する抗ＣＤ２７抗体を使用する他の疾患適応症としては、移植片拒絶反応、アレルギー、および自己免疫性疾患が挙げられる。
【０１９０】
例示的な自己免疫性疾患としては、多発性硬化症、関節リウマチ、１型糖尿病、乾癬、クローン病および潰瘍性大腸炎等の他の炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性脳脊髄炎、重症筋無力症（ＭＧ）、橋本甲状腺炎、グッドパスチャー症候群、天疱瘡、グレーブス病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、抗コラーゲン抗体による強皮症、混合性結合組織疾患、多発性筋炎、悪性貧血、特発性アジソン病、自己免疫関連性の不妊、糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎、増殖性糸球体腎炎、水疱性類天疱瘡、シェーグレン症候群、乾癬性関節炎、インスリン抵抗性、自己免疫性糖尿病、自己免疫性肝炎、自己免疫性血友病、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性肝炎、自己免疫性血友病、自己免疫性リンパ増殖症候群、自己免疫性ブドウ膜網膜炎、ギラン・バレー症候群、動脈硬化、ならびにアルツハイマー病が挙げられるが、これらに限定されない。例示的なアレルギー性障害としては、アレルギー性結膜炎、春季結膜炎、春季角結膜炎、および巨大乳頭結膜炎；アレルギー性鼻炎および副鼻腔炎を含む鼻アレルギー性障害；耳管掻痒を含む耳性アレルギー性障害；内因性喘息および外因性喘息を含む上気道および下気道のアレルギー性障害；皮膚炎、湿疹、および蕁麻疹を含む皮膚のアレルギー性障害；ならびに胃腸管のアレルギー性障害が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９１】
別の態様において、本発明の抗体は、ワクチンと組み合わせて、ワクチン抗原、例えば、腫瘍抗原（それによって、腫瘍に対する免疫応答を増強する）、または感染性疾患病原体由来の抗原（それによって、感染性疾患病原体に対する免疫応答を増強する）に対する免疫応答を増強するために投与される。故に、この実施形態において、ワクチン抗原は、例えば、腫瘍に対する、またはウイルス、細菌、寄生虫、または真菌等の感染性疾患病原体に対する免疫応答を誘発することが可能な抗原または抗原組成物を含むことができる。１つまたは複数の抗原は、例えば、ペプチド／タンパク質、多糖類、および／または脂質とすることができる。１つまたは複数の抗原は、本明細書で以前に開示した種々の腫瘍抗原等のように、腫瘍に由来し得る。代替として、１つまたは複数の抗原は、本明細書で以前に開示した病原体抗原等のように、種々のウイルス、細菌、寄生虫、および／または真菌等の病原体に由来することができる。適切な病原体抗原のさらなる例としては、以下が挙げられるが、それらに限定されない。
【０１９２】
ウイルス抗原または抗原決定基は、例えば、サイトメガロウイルス（特にヒト、ｇＢまたはその誘導体等）、エプスタインバーウイルス（ｇｐ３５０等）、フラビウイルス（例えば、黄熱ウイルス、デング熱ウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス）、肝炎ウイルス（Ｂ型肝炎ウイルス（例えば、ＰｒｅＳ１、ＰｒｅＳ２およびＥＰ−Ａ−４１４３７４で説明されるＳ抗原、ＥＰ−Ａ−０３０４５７８、およびＥＰ−Ａ−１９８４７４等のＢ型肝炎表面抗原）、Ａ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、およびＥ型肝炎ウイルス等）、ＨＩＶ−１（ｔａｔ、ｎｅｆ、ｇｐ１２０、またはｇｐ１６０等）、ヒトヘルペスウイルス（ＨＳＶ１またはＨＳＶ２由来のＩＣＰ２７等の、ｇＤもしくはその誘導体、または前初期タンパク質等）、ヒト乳頭腫ウイルス（例えば、ＨＰＶ６、１１、１６、１８）、インフルエンザウイルス（生存全ウイルスもしくは不活性化ウイルス、卵もしくはＭＤＣＫ細胞、またはベロ細胞の中で増殖させたスプリットインフルエンザウイルス、または全ｆｌｕビロソーム（Ｇｌｕｃｋ，Ｖａｃｃｉｎｅ，１９９２，１０，９１５−９２０で説明されるもの）、またはＮＰ、ＮＡ、ＨＡ、もしくはＭタンパク質等のその精製したタンパク質もしくは組換えタンパク質）、麻疹ウイルス、耳下腺炎ウイルス、パラインフルエンザウイルス、狂犬病ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（Ｆタンパク質およびＧタンパク質等）、ロタウイルス（生弱毒化ウイルスを含む）、天然痘ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス（ｇｐＩ、ｇｐＩＩ、およびＩＥ６３等）、ならびに子宮頸癌の原因となるＨＰＶウイルス（例えば、タンパク質Ｄ担体と融合して、ＨＰＶ１６由来のタンパク質Ｄ−Ｅ６もしくはＥ７融合体を形成する、初期タンパク質Ｅ６もしくはＥ７、またはその組み合わせ）、またはＥ６またはＥ７のＬ２との組み合わせ（例えば、国際公開公報第９６／２６２７７号を参照されたい）に由来することができる。
【０１９３】
細菌抗原または抗原決定基は、例えば、バチルス・アンスラシス（Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ）（例えば、ボツリヌス毒素）を含むバチルス属の種；ボルデテラ・パータシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）（例えば、パータクチン、百日咳毒素、フィラメンテアス、血球凝集素、アデニレートシクラーゼ、フィムブリエ）を含むボルデテラ属の種；ボレリア・ブルグドフェリ（Ｂ．ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、ボレリア・ガリニ（Ｂ．ｇａｒｉｎｉｉ）（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、ボレリア・アフゼリ（Ｂ．ａｆｚｅｌｉｉ）（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、ボレリア・アンダーソニー（Ｂ．ａｎｄｅｒｓｏｎｉｉ）（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、ボレリア・ヘルムシ（Ｂ．ｈｅｒｍｓｉｉ）を含むボレリア属の種；カンピロバクター・ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）（例えば、毒素、アドヘシンおよびインベイシン）およびカンピロバクター・コリを含むカンピロバクター属の種；クラミジア・トラコマチス（Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）（例えば、ＭＯＭＰ、ヘパリン結合タンパク質）、クラミジア・ニューモニア（Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉｅ）（例えば、ＭＯＭＰ、ヘパリン結合タンパク質）、クラミジア・シッタシ（Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ）を含むクラミジア属の種；クロストリジウム・テタニ（Ｃ．ｔｅｔａｎｉ）（破傷風毒素等）、クロストリジウム・ボツリナム（Ｃ．ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）（例えば、ボツリヌス毒素）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）（例えば、クロストリジウム毒素ＡまたはＢ）を含むクロストリジウム属の種；コリネバクテリウム・ジフテリア（Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）（例えば、ジフテリア毒素）を含むコリネバクテリウム属の種；エールリヒア・エクイ（Ｅ．ｅｑｕｉ）およびヒト顆粒球エールリヒア症の作用因子；リケッチア・リケッチ（Ｒ．ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ）などのリケッチア属の種；エンテロコッカス・ファカリス（Ｅ．ｆａｅｃａｌｉｓ）、エンテロコッカス・ファシウム（Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ）などのエンテロコッカス属の種；腸毒性大腸菌（例えば、コロニー形成因子、熱不安定毒素もしくはその誘導体、または熱安定毒素）、腸管出血性大腸菌、病原性大腸菌（例えば、志賀毒素様毒素）を含むエシェリシア属の種；Ｂ型インフルエンザ菌（例えば、ＰＲＰ）、非分類性インフルエンザ菌、例えば、ＯＭＰ２６、高分子量アドヘシン、Ｐ５、Ｐ６、タンパク質Ｄおよびリポタンパク質Ｄ、ならびにフィンブリンおよびフィンブリン由来ペプチド（米国特許第５，８４３，４６４号を参照されたい）を含むヘモフィルス属の種；ヘリコバクター・ピロリ（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）（例えば、ウレアーゼ、カタラーゼ、空胞化毒素）を含むヘリコバクター属の種；シュードモナス・エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）を含むシュードモナス属の種；レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌ．ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）を含むレジオネラ属の種；レプトスピラ・インテロガンス（Ｌ．ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ）を含むレプトスピラ属の種；リステリア・モノサイトジェンス（Ｌ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）を含むリステリア属の種；モラクセラ・カタラリス（Ｍ．ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）（ブランハメラ・カタラリス（Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）としても知られる）を含むモラクセラ属の種（例えば、高分子量および低分子量アドヘシンおよびインベイシン）；モレクセラ・カタラリス（Ｍｏｒｅｘｅｌｌａ  Ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）（その外膜小胞、およびＯＭＰ１０６（例えば、国際公開公報第９７／４１７３１号を参照されたい）を含む）；マイコバクテリウム・ツベルクロシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）（例えば、ＥＳＡＴ６、８５Ａ、−Ｂもしくは−Ｃ抗原）、マイコバクテリウム・ボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）、マイコバクテリウム・レプラ（Ｍ．ｌｅｐｒａｅ）、マイコバクテリウム・アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、マイコバクテリウム・パラツベルクロシス（Ｍ．ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、マイコバクテリウム・スメングマティス（Ｍ．ｓｍｅｎｇｍａｔｉｓ）を含むマイコバクテリウム属の種；ナイセリア・ゴノレア（Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｅａ）およびナイセリア・メニンギティディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）を含むナイセリア属の種（例えば、莢膜多糖類およびそのコンジュゲート、トランスフェリン結合タンパク質、ラクトフェリン結合タンパク質、ＰｉｌＣ、アドヘシン）；ナイセリア・メニンギティディスＢ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ  Ｂ）（その外膜小胞、およびＮｓｐＡ（例えば、国際公開公報第９６／２９４１２号を参照されたい）を含む）；サルモネラ・ティフィ（Ｓ．ｔｙｐｈｉ）、サルモネラ・パラティフィ（Ｓ．ｐａｒａｔｙｐｈｉ）、サルモネラ・コレラスイス（Ｓ．ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ）、サルモネラ・エンテリティディス（Ｓ．ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）を含むサルモネラ属の種；シゲラ・ソネイ（Ｓ．ｓｏｎｎｅｉ）、シゲラ・ディセンテリエ（Ｓ．ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、シゲラ・フレクスネリ（Ｓ．ｆｌｅｘｎｅｒｉｉ）などのシゲラ属の種；スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス・エピデルミディス（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）を含むスタフィロコッカス属の種；ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉｅ）（例えば、莢膜多糖類およびそのコンジュゲート、ＰｓａＡ、ＰｓｐＡ、ストレプトリジン、コリン結合タンパク質）およびタンパク質抗原ニューモリシン（Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ，１９８９，６７，１００７、Ｒｕｂｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，２５，３３７−３４２）、ならびにその変異無毒化誘導体（例えば、国際公開公報第９０／０６９５１号、国際公開公報第９９／０３８８４号を参照されたい）を含むストレプトコッカス属の種；トレポネーマ・パリダム（Ｔ．ｐａｌｌｉｄｕｍ）（例えば、外膜タンパク質）、トレポネーマ・デンティコラ（Ｔ．ｄｅｎｔｉｃｏｌａ）、トレポネーマ・ハイオディセンテリー（Ｔ．ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）を含むトレポネーマ属の種；ビブリオ・コレラ（Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａ）（例えば、コレラ毒素）を含むビブリオ属の種；ならびにエルシニア・エンテロコリティカ（Ｙ．ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ）（例えば、Ｙｏｐタンパク質）、エルシニア・ペスティス（Ｙ．ｐｅｓｔｉｓ）、エルシニア・シュードツベルクロシス（Ｙ．ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）などのエルシニア属の種、に由来することができる。
【０１９４】
寄生虫／真菌抗原または抗原決定基は、例えば、バベシア・ミクロチ（Ｂ．ｍｉｃｒｏｔｉ）を含むバベシア属の種、カンジダ・アルビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）を含むカンジダ属の種、クリプトコッカス・ネオフォーマンス（Ｃ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）を含むクリプトコッカス属の種、エントアメーバ・ヒストリティカ（Ｅ．ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）を含むエントアメーバ属の種、ジアルジア・ランブリア（Ｇ．ｌａｍｂｌｉａ）を含むジアルジア属の種、レーシュマニア・メジャー（Ｌ．ｍａｊｏｒ）を含むレーシュマニア属の種、プラスモディウム・ファルシパラム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）（ＭＳＰ１、ＡＭＡ１、ＭＳＰ３、ＥＢＡ、ＧＬＵＲＰ、ＲＡＰ１、ＲＡＰ２、Ｓｅｑｕｅｓｔｒｉｎ、ＰｆＥＭＰ１、Ｐｆ３３２、ＬＳＡ１、ＬＳＡ３、ＳＴＡＲＰ、ＳＡＬＳＡ、ＰｆＥＸＰ１、Ｐｆｓ２５、Ｐｆｓ２８、ＰＦＳ２７／２５、Ｐｆｓ１６、Ｐｆｓ４８／４５、Ｐｆｓ２３０、およびプラスモディウム属の種におけるそれらの類似体）、ニューモシスティス・カリニ（Ｐ．ｃａｒｉｎｉｉ）を含むニューモシスティス属の種、マンソン住血吸虫（Ｓ．ｍａｎｓｏｎｉ）を含むシストソーマ属の種、トリコモナス・バギナリス（Ｔ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ）を含むトリコモナス属の種、トキソプラズマ・ゴンジ（Ｔ．ｇｏｎｄｉｉ）（例えば、ＳＡＧ２、ＳＡＧ３、Ｔｇ３４）を含むトキソプラズマ属の種、トリパノソーマ・クルージ（Ｔ．ｃｒｕｚｉ）を含むトリパノソーマ属の種、に由来することができる。
【０１９５】
本発明のこの態様によれば、抗原および抗原決定基は、数多くの異なる形態で使用できることが認識される。例えば、抗原または抗原決定基は、（例えば、いわゆる「サブユニットワクチン」の形態で）単離されたタンパク質またはペプチドとして、または、例えば、（例えば、生きたまたは殺傷された病原体株において）細胞関連もしくはウイルス関連抗原または抗原決定基として存在することができる。生存病原菌は、好ましくは、既知の様式で弱毒化される。代替として、抗原または抗原決定基は、抗原または抗原決定基をポリヌクレオチドでコードすること（いわゆる、「ＤＮＡワクチン接種」）によって、対象においてインサイツで生成されてもよい。ただし、この手法とともに使用することができるポリヌクレオチドは、ＤＮＡに限定されず、前述のようにＲＮＡおよび改変ポリヌクレオチドを含んでもよいことが理解されるであろう。
【０１９６】
一実施形態において、ワクチン抗原はまた、例えば、特定の細胞型または特定の組織を標的とすることもできる。例えば、ワクチン抗原は、例えば国際公開公報第２００９／０６１９９６号（Ｃｅｌｌｄｅｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ）で論じられるようなＤＥＣ−２０５、または例えば国際公開公報第０３０４０１６９号（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．）で論じられるようなマンノース受容体（ＣＤ２０６）等の、抗原提示細胞（ＡＰＣ）表面受容体を標的とする抗体等の薬剤を使用して、ＡＰＣを標的とすることができる。
【０１９７】
治療で使用するために、本発明の抗体は、単独で、または免疫賦活剤、ワクチン、化学療法、もしくは放射線療法等の他の治療とともに、直接（すなわち、インビボで）対象に投与することができる。全ての場合において、抗体、二重特異性抗体、組成物、および免疫賦活性薬剤、ならびに他の治療は、それらの所望の治療効果を及ぼすための有効量で投与される。「有効量」という用語は、所望の生物学的効果を実現するのに必要であるか、または十分な量を指す。例えば、有効量は、腫瘍、癌、または細菌、ウイルス、もしくは真菌の感染を排除するのに必要な量であり得る。いかなる特定の適用に対する有効量も、治療されている疾患もしくは状態、投与されている特定の抗体、対象のサイズ、または疾患もしくは状態の重篤性等の要因に応じて変化させることができる。当業者は、過度の実験を必要とせずに特定の分子の有効量を経験的に決定することができる。
【０１９８】
ワクチンの好ましい投与経路としては、例えば、注射（例えば、皮下、静脈内、非経口、腹腔内、髄腔内）が挙げられる。注射は、ボーラス注入または持続注入とすることができる。投与の他の経路としては、経口投与が挙げられる。
【０１９９】
本発明の抗体および二重特異性分子はまた、アジュバントおよび他の治療薬と共投与することもできる。本明細書で使用される「共投与される」という用語は、投与計画の一部としての投与を含む、アジュバントおよび他の薬剤を伴う本発明の抗体およびコンジュゲートの一部または全部の同時の投与、別々の投与、または連続的な投与を含むことが認識される。抗体は、一般的に、単独で、またはそのような薬剤と組み合わせて担体中に調合される。そのような担体の例としては、溶液、溶媒、分散媒、遅延剤、乳濁液等が挙げられる。薬学的活性物質に対するそのような媒体の使用は、当技術分野でよく知られている。分子との使用に適切ないかなる他の従来の担体も、本発明の範囲内に含まれる。
【０２００】
抗体、コンジュゲート、二重特異体、および組成物との共投与のための適切な薬剤としては、他の抗体、細胞毒素、および／または薬物、ならびにアジュバント、免疫賦活性剤、および／または免疫抑制剤が挙げられる。一実施形態において、薬剤は、化学療法剤である。抗体、二重特異体、および組成物は、放射線と組み合わせて投与することができる。
【０２０１】
腫瘍の治療における本発明の抗体およびコンジュゲートとの共投与に適切な化学療法剤としては、例えば、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにその類似体または相同体が挙げられる。さらなる薬剤としては、例えば、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、ならびにシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、ならびにアントラマイシン（ＡＭＣ））、および有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、ならびにテモゾロミドが挙げられる。
【０２０２】
また、例えば、免疫細胞（例えば、調節性Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、骨髄由来サプレッサー細胞、未成熟または抑制性樹状細胞）または腫瘍もしくは腫瘍の局所微小環境中の宿主細胞によって産生される抑制因子（例えば、ＴＧＦベータ、インドールアミン２，３ジオキシゲナーゼ−ＩＤＯ）による免疫抑制活性を欠失または阻害する薬剤が、本発明の抗体およびコンジュゲートとともに投与されてもよい。そのような薬剤としては、抗体および小分子薬物（１メチルトリプトファンまたは誘導体等のＩＤＯ阻害剤等）が挙げられる。
【０２０３】
そのような免疫障害を治療するための本発明の抗体との共投与に適切な薬剤としては、例えば、ラパマイシン、シクロスポリン、およびＦＫ５０６等の免疫抑制剤、エタネルセプト、アダリムマブ、およびインフリキシマブ等の抗ＴＮＦａ剤、ならびにステロイドが挙げられる。特異的天然ステロイドおよび合成ステロイドの例としては、例えば、アルドステロン、ベクロメタゾン、ベータメタゾン、ブデソニド、クロプレドノール、コルチゾン、コルチバゾール、デオキシコルトン、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフルオロコルトロン、フルクロロロン、フルメタゾン、フルニソリド、フルオシノロン、フルオシノニド、フルオコルチンブチル、フルオロコルチゾン、フルオロコルトロン、フルオロメトロン、フルランドレノロン、フルチカゾン、ハルシノニド、ヒドロコルチゾン、イコメタゾン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、チキソコルトール、およびトリアムシノロンが挙げられる。
【０２０４】
免疫応答を誘発または増強するための本発明の抗体および二重特異体との共投与に適切な薬剤としては、例えば、アジュバントおよび／または免疫賦活剤が挙げられ、その限定的でない例が、上文に開示されている。好ましい免疫賦活剤は、ポリＩＣ等のＴＬＲ３作動薬である。
【０２０５】
本発明を以下の実施例によってさらに例証するが、これらの実施例を、本発明をさらに限定するものとして解釈すべきではない。本出願の全体を通して引用される配列表、図面、ならびに全ての参考文献、特許および特許出願公開の内容は、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【実施例】
【０２０６】
実施例１
ＣＤ２７特異的ヒトモノクローナル抗体の生成
ヒト抗ＣＤ２７モノクローナル抗体は、ＨｕＭＡｂ（登録商標）トランスジェニックマウス（「ＨｕＭａｂ」は、Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙの商標である）のＨＣ２／ＫＣｏ７株を、可溶性ヒトＣＤ２７抗原で免疫化することによって生成した。ＨＣ２／ＫＣｏ７  ＨｕＭＡｂマウスを、米国特許第５，７７０，４２９号および同第５，５４５，８０６号（その開示全体が参照により本明細書に組み込まれる）で説明されるように作製した。
【０２０７】
抗原および免疫化：抗原は、抗体Ｆｃドメイン（組換えヒトＣＤ２７−Ｆｃキメラタンパク質（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ））と融合させたＣＤ２７細胞外ドメインを含む、可溶性融合タンパク質であった。抗原を、最初の免疫化のために、完全フロイント（Ｓｉｇｍａ）アジュバントと混合した。その後に、抗原を、不完全フロイント（Ｓｉｇｍａ）と混合した。さらなるマウスを、ＲＩＢＩ  ＭＰＬプラスＴＤＭアジュバント系（Ｓｉｇｍａ）中の可溶性ＣＤ２７タンパク質で免疫化した。ＰＢＳ中の５〜２５マイクログラムの可溶性組換えＣＤ２７抗原、またはＰＢＳ中のヒトＣＤ２７の表面発現のために形質移入した５×１０６個のＣＨＯ細胞を、アジュバントと１：１で混合した。１００マイクロリットルの調製した抗原を１４日毎にマウスの腹膜腔内に注射した。融合の３〜４日前に、１０マイクログラムの可溶性組換えＣＤ２７抗原を、抗ＣＤ２７力価を生じた動物に静脈内注射した。マウスの脾臓を採取し、単離した脾細胞をハイブリドーマの調製に使用した。
【０２０８】
ハイブリドーマの調製：Ｐ３ｘ６３Ａｇ８．６５３マウス骨髄腫細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ１５８０）を融合に使用した。１０％のＦＢＳを含有するＲＰＭＩ１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、骨髄腫細胞を培養した。追加の培地用サプリメントをハイブリドーマ増殖培地に加えた。この培地は、３％のＯｒｉｇｅｎ−ハイブリドーマクローニング因子（Ｉｇｅｎ）、１０％のＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）、Ｌ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ）、０．１％のゲンタマイシン（Ｇｉｂｃｏ）、２−メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ；１．０×１０４Ｍのヒポキサンチン、４．０×１０−７Ｍのアミノプテリン、１．６×１０−５Ｍのチミジン）、またはＨＴ（Ｓｉｇｍａ；１．０×１０−４Ｍのヒポキサンチン、１．６×１０−５Ｍのチミジン）培地を含むものであった。
【０２０９】
脾臓細胞を、６：１の比率でＰ３ｘ６３Ａｇ８．６５３骨髄腫細胞と混合し、遠心分離によってペレット化した。融合を促進するために、慎重に混合しながらポリエチレングリコールを滴下した。ハイブリドーマを、目に見えるコロニーが確立されるまで、１〜２週間増殖させた。上清を採取し、ヒトカッパ鎖特異的捕捉を使用したＥＬＩＳＡおよびヒトＦｃ特異的検出を介したヒトＩｇＧの初期スクリーニングに使用した。次いで、ＩｇＧ陽性上清を、抗ＣＤ２７を検出するために、フローサイトメトリーを介してまたはＥＬＩＳＡを使用して、ＣＤ２７の特異性についてアッセイした。
【０２１０】
特異的ヒトモノクローナル抗体（ヒトｍＡｂ；ＩｇＧ）を産生するハイブリドーマを、サブクローン化して拡大した。次いで、産生したヒトｍＡｂを、標準的な条件に従って、プロテインＡカラムクロマトグラフィによって精製し、特に関心の、いくつかの抗体の単離をもたらした。これらの抗体は、４Ｂ７−１Ｂ３（本明細書では、４Ｂ７とも称される）、３Ｈ１２−１Ｃ８（本明細書では、３Ｈ１２とも称される）、１Ｆ５−１Ｈ５（本明細書では、１Ｆ５とも称される）、２Ｃ２−１Ａ１０（本明細書では、２Ｃ２とも称される）、２Ｇ９−１Ｄ１１（本明細書では、２Ｇ９とも称される）、１Ｈ８−Ｂ４（本明細書では、１Ｈ８とも称される）、３Ｈ１２−１Ｅ１２（本明細書では、３Ｈ１２とも称される）、３Ｇ１−１Ａ１１（本明細書では、３Ｇ１とも称される）（１Ｂ１０）、４Ａ２−Ｂ１１（本明細書では、４Ａ２とも称される）、３Ａ１０−Ｇ１０（本明細書では、３Ａ１０とも称される）、２Ｇ１１−Ｂ５（本明細書では、２Ｇ１１とも称される）、４Ｈ１１−Ｇ１１（本明細書では、４Ｈ１１とも称される）、２Ｈ３−Ｅ８（本明細書では、２Ｈ３とも称される）、４Ａ７−Ｂ３（本明細書では、４Ａ７とも称される）、３Ｈ８−１Ｂ１１（本明細書では、３Ｈ８とも称される）および１Ｇ５−１Ｂ９（本明細書では、１Ｇ５とも称される）と命名した。
【０２１１】
また、ハイブリドーマを、アカゲザルマカクＣＤ２７との交差反応性についてスクリーニングしたが、全て、結合について陽性であった。
【０２１２】
実施例２
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によるヒトｍＡｂ親和定数および速度定数の決定
実施例１由来の種々のヒト抗ＣＤ２７抗体の結合親和性および結合反応速度を、製造業者のガイドラインに従って、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）２０００ＳＰＲ計測器（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析によって検査した。
【０２１３】
精製した組換えヒトＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７／Ｆｃキメラ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号：３８２−ＣＤ）のタンパク質を、製造者のガイドラインに従ってＢｉａｃｏｒｅによって提供されるＡｍｉｎｅ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｋｉｔ（ＢＩＡｃｏｒｅ製品番号ＢＲ−１０００−５０、カップリング試薬のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）および１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣ）を含む）による標準的なアミンカップリング化学を使用して、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）ＣＭ５センサチップ（金の表面に共有結合させたカルボキシメチル化デキストラン；Ｂｉａｃｏｒｅ製品番号ＢＲ−１０００−１４）に共有結合的に連結させた。低レベルのリガンドを固定して、観察されるＲＭＡＸがほぼ１００〜４００ＲＵ程度であるように、動態パラメータに対する分析物の任意の物質移動効果を制限した。
【０２１４】
ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液、Ｂｉａｃｏｒｅ製品番号ＢＲ−１００１−８８：４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）０．０１Ｍ、塩化ナトリウム０．１５Ｍ、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）３ｍＭ、界面活性剤Ｐ２０  ０．００５％）中のセンサチップ上に、１８０秒間、１．５６〜５０ｎＭの範囲の濃度および３０μＬ／分の流量で抗体を流すことによって、結合を測定した。抗原−抗体の会合速度および解離速度を４８０秒間、またはより遅い解離速度を伴う抗体については１２００秒間、追跡した。
【０２１５】
それぞれの場合において、「バックグラウンド」の減算のためにいかなるタンパク質も固定化していないブランクフローセルを使用して、対応する対照を行った。研究の全体を通した再生条件として、１０秒間５０μＬ／分での１０ｍＭのＨＣｌ、その後の３０秒間５０μＬ／分での１０ｍＭのグリシン（ｐＨ２．０）の連続注入を用いた。
【０２１６】
それぞれの場合において、Ｂｉａｃｏｒｅ  ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア、バージョン３．２（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して、ＨＢＳ−ＥＰランニング緩衝剤で希釈した検体の濃度系列から動態パラメータを導いた。製造者のガイドラインに従って、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ）を使用して、会合および解離曲線を１：１ラングミュア結合モデルに当てはめた。
【０２１７】
判定した親和性パラメータおよび動態パラメータ（バックグラウンドの減算を伴う）を図１に示す。
【０２１８】
各抗体について、示される図は、それぞれの場合において別々に調製したフローセルを使用した、２つの別々の一連の実験の平均である（ｋａ＝会合速度定数、ｋｄ＝解離速度定数、ＫＤ＝解離平衡定数（親和性の測度）、ＫＡ＝会合平衡定数、Ｒｍａｘ＝最大ＳＰＲ応答シグナル）。
【０２１９】
実施例３
ＣＤ２７に対するヒトｍＡｂ結合特性を判定するためのＥＬＩＳＡアッセイ
マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中の可溶性または組換えヒトもしくはマカクＣＤ２７で被覆し、次いで、ＰＢＳ中の５％のウシ血清アルブミンで遮断した。プロテインＡ精製したヒトｍＡｂおよびアイソタイプ対照を、飽和濃度で加え、３７℃でインキュベートした。プレートを、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄し、次いで、アルカリホスファターゼとコンジュゲートしたヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異的ポリクローナル試薬とともに３７℃でインキュベートした。洗浄後、プレートを、ｐＮＰＰ基質（１ｍｇ／ｍＬ）で発色させて、マイクロタイタープレートリーダーを使用してＯＤ４０５−６５０で分析した。代表的な結合曲線を図２に示す。この結果を使用して、下記表１に示されるように、５０％飽和濃度（４パラメータ適合曲線のＣ値）も推定した。
【０２２０】
カニクイザルマカクが抗ＣＤ２７ｍＡｂを試験するための適切なモデルであることを確立するために、種々の濃度の精製したマカクＣＤ２７またはヒトＣＤ２７を、抗Ｆｌａｇ抗体を用いてＥＬＩＳＡプレートに捕捉し、続いて、抗ヒトＣＤ２７ｍＡｂとともにインキュベーションした。ヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ−ＨＲＰ抗体および基質Ｓｕｐｅｒ  ＢｌｕｅＴＭＢを、検出のために使用した。結果を表１に示すが、結果は、マカクおよびヒト由来のＣＤ２７への類似した結合を示している。抗体１Ｆ５の代表的な結合曲線を図３に示す。
【０２２１】
（表１）選択した抗ＣＤ２７ｍＡｂの特徴付け
0006002659.tif 000006
＊＊ＥＬＩＳＡ形式で、ＣＤ２７を被覆したプレートへの結合によって算定した。
【０２２２】
さらなる実験において、末梢血液細胞に対する１Ｆ５結合の類似した分布を確立するために、ＰＢＭＣを、３人のヒトおよび３匹のカニクイザルマカクの全血から単離した。細胞を、マーカーとともに１Ｆ５ ｍＡｂで染色して、ＣＤ２７を発現する主なＴ細胞およびＢ細胞集団を描写した。以下の表（表２）は、細胞発現ＣＤ２７の割合（％）および発現強度（ＭＦＩ）に関してヒト細胞およびマカク細胞の結果の平均±標準誤差を要約する。これらのデータは、ヒトおよびサル由来の末梢血液細胞に対する１Ｆ５結合の類似した分布を確立する。
【０２２３】
（表２）
0006002659.tif 000007
【０２２４】
実施例４
４Ａ：ＥＬＩＳＡによるｓＣＤ７０の結合の遮断
可溶性ＣＤ７０（ｓＣＤ７０）のＣＤ２７タンパク質への結合に対する実施例１によるヒトｍＡｂの影響を、ＥＬＩＳＡによって測定した。マイクロタイタープレートを、１μｇ／ｍＬの可溶性組換えヒトＣＤ２７および１μｇ／ｍＬのＦｃキメラ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）で被覆し、次いで、５％のＰＢＡで遮断した。抗ＣＤ２７抗体（［最終］＝２５μｇ／ｍＬ）を、可溶性ヒト組換えＣＤ７０−ビオチン（ＵＳ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）（［最終］＝０．５μｇ／ｍＬ）と事前に混合して、プレートに加えた。ＣＤ２７捕捉ｒＣＤ７０を、ストレプトアビジン−ＨＲＰおよび基質Ｓｕｐｅｒ  ＢｌｕｅＴＭＢで検出した。示される対照とともに結果（遮断割合（％）で示される）を図４に示す。これらの結果は、抗体のいくつか（１Ｆ５、１Ｈ８、３Ｈ１２、および１Ａ４を含む）が、ｓＣＤ７０の結合を遮断するか、または少なくとも有意に阻害する性質を有したことを示している。
【０２２５】
４Ｂ：ＣＤ２７ｍＡｂは、ヒトリンパ芽球様細胞株上のＣＤ２７に結合して、リガンド（ＣＤ７０）の結合を遮断する
ヒトリンパ芽球様細胞株への抗ヒトＣＤ２７ ｍＡｂ  １Ｆ５の結合と、ｓＣＤ７０の結合の遮断とを、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩフローサイトメーターを使用して、フローサイトメトリーによって分析した。図５に示される結果は、１Ｆ５が種々の細胞株と効果的に結合して、ｓＣＤ７０の結合を、競合的に阻害することを示す。
【０２２６】
実施例５
ヒトＣＤ２７を発現する細胞へのヒトｍＡｂの結合
抗ＣＤ２７ヒトｍＡｂがヒトＣＤ２７を発現する細胞上でそれらの表面でＣＤ２７に結合する能力を、以下のようにフローサイトメトリーによって調査した。
【０２２７】
抗体は、ヒトＤ２７を発現するヒト細胞株へ、それらの表面での結合について試験した。プロテインＡ精製したヒトｍＡｂ  ２Ｃ２、３Ｈ８、および１Ｆ５を、４℃で、ヒトＣＤ２７を発現するＪｕｒｋａｔ細胞、Ｒａｊｉ細胞、Ｒａｍｏｓ細胞、およびＤａｕｄｉ細胞、ならびに対照細胞とともにインキュベートした。全ての抗体は、飽和濃度で使用した。１時間後、細胞を０．１％のＢＳＡおよび０．０５％のＮａＮ３（ＰＢＡ）を含有するＰＢＳで洗浄し、結合した抗体を、４℃で、ＰＥで標識したヤギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ特異的プローブとともに細胞をインキュベートすることによって検出した。過剰なプローブを細胞からＰＢＡで洗浄し、細胞関連蛍光を、製造業者の指示に従って、ＬＳＲ（商標）計測器（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡ）を使用した分析によって判定した。
【０２２８】
図６および図７に示されるように、ヒトｍＡｂが、ヒトＣＤ２７を発現する細胞に高レベルで結合すること実証した。これらのデータは、これらの抗体が、対照細胞と比較して、生細胞上で発現するヒトＣＤ２７に効率的かつ特異的に結合することを実証している。
【０２２９】
実施例６
ＥＬＩＳＡによって判定されるヒトｍＡｂの交差遮断／競合
マイクロタイタープレートを、組換えヒトＣＤ２７−Ｆｃキメラ融合タンパク質で被覆し、次いで、ＰＢＳ中の５％のＢＳＡで遮断した。非コンジュゲートヒトｍＡｂ（２０μｇ／ｍＬ）を西洋わさびペルオキシダーゼで標識した二次抗体（０．５μｇ／ｍＬ）と混合し、次いで、プレートに加えて、３７℃でインキュベートした。プレートをＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄し、ＴＭＢ基質で発色させて、マイクロタイタープレートリーダーを使用してＯＤ４５０で分析した。図８〜１０に示される結果は、第１のヒトｍＡｂ組（ｍＡｂ  １Ｆ５、１Ｈ８、および３Ｈ１２を含む）が相互に交差競合したことを示し（図８を参照されたい）、さらなるヒトｍＡｂ組（ｍＡｂ  ２Ｃ２、３Ｈ８、１Ｇ５、および２Ｇ９を含む）も相互に交差競合したことを示し（図９を参照されたい）、また、ヒトｍＡｂ  ３Ａ１０は、固有のエピトープに結合するが、ｍＡｂ  １Ｆ５、１Ｈ８、および３Ｈ１２がＣＤ２７への３Ａ１０の結合を部分的に交差遮断することが可能であるので、これらの抗体の結合部位とは異なる部位であるが、可能性としてその近くに結合し得ることを示している（図１０を参照されたい）。
【０２３０】
実施例７
補体依存性細胞介在性細胞傷害性（ＣＤＣＣまたはＣＤＣ）
標的細胞（リンパ腫Ｒａｊｉ細胞）を、１５０μＬの最終体積で、抗ＣＤ２７抗体およびウサギ補体（１：１５の最終希釈割合）の存在下で、３７℃、５％のＣＯ２で１〜２時間（ＡＩＭ−Ｖ培地中で）培養した。同様に、漏出シグナル（標的のみ）および最大シグナル（４％の最終濃度に対して１２％のＬｙｓｏｌ（商標）洗浄剤を伴う標的）を伴う適切な対照も含めた。細胞を、１×１０６個／ｍＬに調整し、（５０，０００個／ウェルの細胞を得るように）５０μＬを各ウェルに加えた。次いで、ウェルを再懸濁し、１００μＬの細胞懸濁液を不透明な白色のプレートに移した。これらのウェルのそれぞれに対して、１００μＬのＰｒｏｍｅｇａ  ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏ試薬を加え、プレートを室温で２分間混合した。プレートを、１０分間インキュベートして、発光シグナルを安定させた。発光を、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘ４プレートリーダー上で記録した。細胞傷害性を、次式で判定した。（１００−（（試料−最大）／（漏出−最大）））×１００。結果（溶解％で示す）を図１１に示す。この結果から、数多くの抗ＣＤ２７抗体がかなりのＣＤＣＣ活性を示したことが分かる。
【０２３１】
さらなる実験では、標的細胞（Ｒａｍｏｓ細胞）を洗浄して、Ｃａｌｃｅｉｎ ＡＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を充填した。次いで、充填された細胞を、再度洗浄し、培養培地（ＲＰＭＩ＋１０％のＦＢＳ）中で１×１０６個／ｍＬに再懸濁した。標的細胞を、１５０μＬの最終体積で、抗ＣＤ２７抗体およびウサギ補体（１：１５の最終希釈割合）の存在下で、３７℃、５％のＣＯ２で２時間培養した。漏出シグナル（標的のみ）および最大シグナル（２％の最終濃度に対して２０％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００を伴う標的）を伴う適切な対照も含めた。インキュベーションに続いて、ウェルから７５μＬの上清を、不透明な黒色のプレートに移した。蛍光（Ｅｘ：４８５、Ｅｍ：５３５）を、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘ４プレートリーダー上で記録した。特異的細胞傷害性を、次式を使用して判定した。（実験−自発的溶解）／（最大溶解−自発的溶解）×１００。図１２に示される結果は、抗ＣＤ２７ｍＡｂ（１Ｆ５）が、３μｇ／ｍＬの抗体濃度で、Ｒａｍｏｓ細胞において少なくとも１０％、ＣＤＣ活性を示したことを示している。
【０２３２】
実施例８
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）
標的細胞（リンパ腫Ｒａｊｉ細胞）を洗浄して、ＢＡＴＤＡ試薬（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を充填した。次いで、充填された細胞を、再度洗浄し、培養培地（ＲＰＭＩ＋１０％のＦＢＳ）中で２×１０５個／ｍＬに再懸濁した。エフェクター細胞を、エフェクターと標的との所望の比率（１００：１〜５０：１）を得るように、培養培地中で適切な濃度に調製および調整した。丸底プレートにおいて、１５０μＬの最終体積で、標的細胞、エフェクター細胞、および抗体を加えた。漏出シグナル（標的のみ）、自発的溶解シグナル（標的＋エフェクター）、および最大溶解シグナル（４％の最終濃度に対して１２％の標的＋Ｌｙｓｏｌ（商標）洗浄剤を伴う標的）を含む、適切な対照を使用した。細胞を、プレート中でペレット化して、３７℃、５％ＣＯ２で２時間インキュベートした。インキュベーションに続いて、ウェルから２０μＬの上清を、不透明な白色のプレートに移した。これらのウェルのそれぞれに対して、２００μＬのＥｕｒｏｐｉｕｍ溶液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を加え、プレートを１５分間混合した。時間分解蛍光を、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘ４プレートリーダー上で記録した。特異的細胞傷害性を、次式を使用して判定した。（実験−自発的溶解）／（最大溶解−自発的溶解）×１００。結果（溶解割合で示す）を図１３に示す。この結果から、数多くの抗ＣＤ２７抗体がかなりのＡＤＣＣ活性を示したことが分かる。
【０２３３】
さらなる実験において、標的細胞（リンパ腫Ｒａｍｏｓ細胞およびＤａｕｄｉ細胞）を洗浄して、Ｃａｌｃｅｉｎ ＡＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を充填した。次いで、充填された細胞を、再度洗浄し、培養培地（ＲＰＭＩ＋１０％のＦＢＳ）中で１×１０５個／ｍＬに再懸濁した。エフェクター細胞を、エフェクターと標的との所望の比率（７５：１）を得るように、培養培地中で適切な濃度に調製および調整した。丸底プレートにおいて、１５０μＬの最終体積で、標的細胞、エフェクター細胞、および抗体を加えた。漏出シグナル（標的のみ）、自発的溶解シグナル（標的＋エフェクター）、および最大溶解シグナル（２％の最終濃度に対して２０％の標的＋Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を伴う標的）を含む、適切な対照を使用した。細胞を、プレート中でペレット化して、３７℃、５％ＣＯ２で４時間インキュベートした。インキュベーションに続いて、ウェルから７５μＬの上清を、不透明な黒色のプレートに移した。蛍光（Ｅｘ：４８５、Ｅｍ：５３５）を、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘ４プレートリーダー上で記録した。特異的細胞傷害性を、次式を使用して判定した。（実験−自発的溶解）／（最大溶解−自発的溶解）×１００。図１４に示される結果は、抗ＣＤ２７ｍＡｂ（１Ｆ５）が、３μｇ／ｍＬの抗体濃度および７５：１のエフェクターと標的との比率で、Ｄａｕｄｉ細胞およびＲａｍｏｓ細胞において少なくとも１０％、ＡＤＣＣ活性（特異的細胞傷害性として測定される）を示したことを示している。
【０２３４】
実施例９
抗体の配列決定
実施例１において前述したように、特異的ヒトｍＡｂ  ＩｇＧを産生するハイブリドーマ由来のヒトｍＡｂをプロテインＡカラムクロマトグラフィによって精製し、特に関心の抗体のパネル（ヒトｍＡｂ）を単離した。ヒトｍＡｂ  ４Ｂ７、３Ｈ１２、１Ｆ５、２Ｃ２、２Ｇ９、１Ｈ８、３Ｈ１２、３Ｇ１（１Ｂ１０）４Ａ２、３Ａ１０、２Ｇ１１、４Ｈ１１、２Ｈ３、４Ａ７、３Ｈ８、および１Ｇ５のＶＨおよびＶＬコード領域を、対応するハイブリドーマ由来のＲＮＡを使用して同定した。ＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写し、Ｖコード領域をＰＣＲによって増幅し、ＰＣＲ産物を配列決定した。以下は、ヒトｍＡｂのＶＨおよびＶＬ領域の核酸配列およびアミノ酸配列である（アミノ酸配列の場合、相補性決定領域（ＣＤＲ）に下線を引いている）。
【０２３５】
３Ｈ８  ＶＨ  （ＶＨ  ３−７；  Ｄ７−２７；  ＪＨ２）
ＶＨ核酸配列（配列番号５）
0006002659.tif 000008
ＶＨアミノ酸配列（配列番号６）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000009
シグナルペプチドを除くＶＨ「成熟」アミノ酸配列（配列番号７）：
0006002659.tif 000010
【０２３６】
３Ｈ８  ＶＫ  ＃２  （ＶＫ  ３−１１；  ＪＫ１）
ＶＬ核酸配列（配列番号１１）
0006002659.tif 000011
ＶＬアミノ酸配列（配列番号１２）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000012
シグナルペプチドを除くＶＬアミノ酸配列（配列番号１３）：
0006002659.tif 000013
【０２３７】
３Ｈ８  ＶＫ  ＃３  （ＶＫ  ３−１１；  ＪＫ１）
以下のようにさらなる軽鎖が活性であることも分かった（ただし、上述の実施例では、上述の軽鎖（３Ｈ８−１Ｂ１１  ＶＫ＃２）だけを使用した）：
ＶＬ核酸配列（配列番号１７）
0006002659.tif 000014
ＶＬアミノ酸配列（配列番号１８）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000015
シグナルペプチドを除くＶＬアミノ酸配列（配列番号１９）：
0006002659.tif 000016
【０２３８】
２Ｃ２  ＶＨ  （ＶＨ  ３−３３；  Ｄ１−７；  ＪＨ４）
ＶＨ核酸配列（配列番号２３）
0006002659.tif 000017
ＶＨアミノ酸配列（配列番号２４）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000018
シグナルペプチドを除くＶＨアミノ酸配列（配列番号２５）：
0006002659.tif 000019
【０２３９】
２Ｃ２  ＶＫ  （ＶＫ  １Ｄ−１６；  ＪＫ４）
ＶＬ核酸配列（配列番号２９）
0006002659.tif 000020
ＶＬアミノ酸配列（配列番号３０）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000021
シグナルペプチドを除くＶＬアミノ酸配列（配列番号３１）：
0006002659.tif 000022
【０２４０】
１Ｆ５  ＶＨ  （ＶＨ  ３−３３；  Ｄ７−２７；  ＪＨ４）
ＶＨ核酸配列（配列番号３５）
0006002659.tif 000023
ＶＨアミノ酸配列（配列番号３６）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000024
シグナルペプチドを除くＶＨアミノ酸配列（配列番号３７）：
0006002659.tif 000025
【０２４１】
１Ｆ５  ＶＫ  ＃２  （ＶＫ  １Ｄ−１６；  ＪＫ１）
ＶＬ核酸配列（配列番号４１）
0006002659.tif 000026
ＶＬアミノ酸配列（配列番号４２）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000027
シグナルペプチドを除くＶＬアミノ酸配列（配列番号４３）：
0006002659.tif 000028
【０２４２】
１Ｈ８  ＶＨ  （ＶＨ  ３−３３；  Ｄ７−２７；  ＪＨ４）
ＶＨ核酸配列（配列番号４７）
0006002659.tif 000029
ＶＨアミノ酸配列（配列番号４８）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000030
シグナルペプチドを除くＶＨアミノ酸配列（配列番号４９）：
0006002659.tif 000031
【０２４３】
１Ｈ８  ＶＫ  （ＶＫ  １Ｄ−１６；  ＪＫ１）
ＶＬ核酸配列（配列番号５３）
0006002659.tif 000032
ＶＬアミノ酸配列（配列番号５４）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000033
シグナルペプチドを除くＶＬアミノ酸配列（配列番号５５）：
0006002659.tif 000034
【０２４４】
１Ｇ５  ＶＨ  （ＶＨ  ３−３３；  Ｄ６−１９；  ＪＨ２）
ＶＨ核酸配列（配列番号５９）
0006002659.tif 000035
ＶＨアミノ酸配列（配列番号６０）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000036
シグナルペプチドを除くＶＨアミノ酸配列（配列番号６１）：
0006002659.tif 000037
【０２４５】
１Ｇ５  ＶＫ  （ＶＫ  １−１３；  ＪＫ１）
ＶＬ核酸配列（配列番号６５）
0006002659.tif 000038
ＶＬアミノ酸配列（配列番号６６）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000039
シグナルペプチドを除くＶＬアミノ酸配列（配列番号６７）：
0006002659.tif 000040
【０２４６】
２Ｇ９  ＶＨ  （ＶＨ  ３−３３；  Ｄ１−７；  ＪＨ４）
ＶＨ核酸配列（配列番号７１）
0006002659.tif 000041
ＶＨアミノ酸配列（配列番号７２）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000042
ＶＨアミノ酸配列（配列番号７３）シグナルペプチドを除く：
0006002659.tif 000043
【０２４７】
２Ｇ９  ＶＫ  （ＶＫ  １Ｄ−１６；  ＪＫ４）
ＶＬ核酸配列（配列番号７７）
0006002659.tif 000044
ＶＬアミノ酸配列（配列番号７８）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000045
シグナルペプチドを除くＶＬアミノ酸配列（配列番号７９）：
0006002659.tif 000046
【０２４８】
３Ａ１０  ＶＨ  （ＶＨ  ３−３３；  Ｄ３−１０；  ＪＨ３）
ＶＨ核酸配列（配列番号８３）
0006002659.tif 000047
ＶＨアミノ酸配列（配列番号８４）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000048
シグナルペプチドを除くＶＨアミノ酸配列（配列番号８５）：
0006002659.tif 000049
【０２４９】
３Ａ１０  ＶＫ  ＃１  （ＶＫ  １Ｄ−１６；  ＪＫ５）
ＶＬ核酸配列（配列番号８９）
0006002659.tif 000050
ＶＬアミノ酸配列（配列番号９０）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000051
ＶＬアミノ酸配列（配列番号９１）シグナルペプチドを除く：
0006002659.tif 000052
【０２５０】
３Ａ１０  ＶＫ  ＃４  （ＶＫ  １−１３；  ＪＫ５）
以下のようにさらなる軽鎖が活性であることも分かった（ただし、上述の実施例では、上述の軽鎖（３Ｈ８−１Ｂ１１  ＶＫ＃１）だけを使用した）：
ＶＬ核酸配列（配列番号９５）
0006002659.tif 000053
ＶＬアミノ酸配列（配列番号９６）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000054
シグナルペプチドを除くＶＬアミノ酸配列（配列番号９７）：
0006002659.tif 000055
【０２５１】
３Ｈ１２  ＶＨ  （ＶＨ  ３−３３；  Ｄ７−２７；  ＪＨ４）
ＶＨ核酸配列（配列番号１０１）
0006002659.tif 000056
ＶＨアミノ酸配列（配列番号１０２）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000057
ＶＨアミノ酸配列（配列番号１０３）シグナルペプチドを除く：
0006002659.tif 000058
【０２５２】
３Ｈ１２  ＶＫ  ＃２  （ＶＫ  １Ｄ−１６；  ＪＫ１）
ＶＬ核酸配列（配列番号１０７）
0006002659.tif 000059
ＶＬアミノ酸配列（配列番号１０８）（下線付きイタリック体のシグナルペプチドを含む）：
0006002659.tif 000060
シグナルペプチドを除くＶＬアミノ酸配列（配列番号１０９）：
0006002659.tif 000061
アラインメントを図１５および図１６に示す。
【０２５３】
実施例１０
非ヒト霊長類のインビボ研究
非ヒト霊長類における抗ヒトＣＤ２７ｍＡｂ  １Ｆ５の耐容性を評価するために、３匹のカニクイザルを１、３、または１０ｍｇ／ｋｇの１Ｆ５の単回静脈内投薬で処置した。動物を２９日にわたって観察した。総リンパ球（側方散乱および前方散乱サイズに基づく）、記憶Ｂ細胞（ＣＤ２０＋およびＣＤ９５ブライト）、および単球（側方散乱および前方散乱サイズに基づく）を、抗ヒトＩｇＧ抗体（太字線）で染色して、未染色の対照（陰影のあるヒストグラム）と比較した。結果を図１７に示す。これらの結果は、１Ｆ５  ｍＡｂが、試験期間全体にわたって、ＣＤ２７を発現することが分かっている循環リンパ球の表面に結合したことを示している。ＣＤ２７を発現しない細胞である単球は、１Ｆ５を結合させなかった。
【０２５４】
加えて、循環リンパ球集団に対する１Ｆ５の影響を判定するために、リンパ球をサブセットのマーカーで染色し、異なる用量（四角い点＝１ｍｇ／ｋｇ、丸い点＝３ｍｇ／ｋｇ、三角の点＝１０ｍｇ／ｋｇ）で処置した各動物について、図１７に、時間に対して陽性細胞の割合（％）をプロットした。結果を図１８に示す。
【０２５５】
まとめると、図１７および図１８に示されるこれらの試験による結果は、１〜１０ｍｇ／ｋｇの単回投与の後に、１Ｆ５が、十分に耐容性を示し、循環リンパ球を有意には減少させなかった（ＮＫ細胞のいくつかの一過性の減少を除く）ことを実証している。加えて、体温の上昇はなく、また、いかなる検出可能なレベルのＴＮＦ−α、ＩＬ−６、またはＩＬ−１βもなかった。
【０２５６】
実施例１１
抗ＣＤ２７ｍＡｂは、抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖および活性化を増強した
マウス末梢血液細胞および脾細胞の五量体染色
ヒトＣＤ２７トランスジェニックマウス（ｈｕＣＤ２７−Ｔｇ）に、５ｍｇのニワトリオバルブミンおよび実施例１のように生成したヒトＣＤ２７（ＣＤ２７ヒトｍＡｂ）を認識する完全ヒト抗体のパネルを注射した。ラット抗マウスＣＤ２７クローンＡＴ１２４および無関係なヒトＩｇＧ１を、それぞれ、陽性対照および陰性対照として含めた。各抗体（２５０μｇ）を、０日目にオバルブミンと共注射し、さらに１日目に２５０μｇの抗体を単独で注射した。末梢血液および脾臓細胞を、７日目に採取した。脾細胞（１×１０６個）または全血（１００μＬ）を、染色に使用した。Ｆｃ受容体の遮断後に、細胞を、室温で３０分間、１０μＬのＨ−２Ｋｂ／ＳＩＩＮＦＥＫＬ、オバルブミン（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）由来のペプチドＴ細胞エピトープと複合体化したマウスＭＨＣの四量体複合体もしくは類似する五量体複合体（ＰｒｏＩｍｍｕｎｅ）、抗ＣＤ８（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、および抗ｈｕＣＤ２７ｍＡｂもしくは抗ｍｓＣＤ２７ｍＡｂ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。次いで、細胞を、ＲＢＣ溶解し、洗浄し、固定して、フローサイトメーターＬＳＲ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で少なくとも１００，０００イベントを得た。ＣＤ８＋またはＣＤ２７＋のゲートした集団中の四量体または五量体陽性細胞の画分を判定した。結果を図１９および図２１に示す。これらの結果から、抗ＣＤ２７抗体が免疫応答を有意に増強したことが分かる。
【０２５７】
実施例１２
ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ
上述の実施例８の五量体染色にて調製したもの由来の脾細胞（２．５×１０５個および０．５×１０５個）を、ＲＢＣ溶解の後に、３つ一組のウェルで抗ＩＦＮγモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を被覆したプレートに配置した。ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチドを、２μｇ／ｍＬの最終濃度で加えた。バックグラウンド対照を、ペプチドの非存在下で、３つ一組の各試料について準備した。刺激を、組織培養恒温器中で、３７℃で一晩維持した。製造業者のプロトコルに従って、ＥＬＩＳＰＯＴキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＥＬＩＳＰＯＴ検出を行った。ＩＦＮγ−スポット数を数えた。結果を図２０および図２１に示す。これらの結果から、抗ＣＤ２７ ｍＡｂがＴ細胞活性を有意に増強したことがわかる。
【０２５８】
実施例１３
抗ＣＤ２７ｍＡｂは、ワクチン抗原に対するＴ細胞応答を増強する
ＨｕＣＤ２７トランスジェニックマウスを、種々の用量（２５、５０、１００、２００、または４００μｇ）で、抗ＣＤ２７ヒトｍＡｂ  １Ｆ５（腹腔内）と組み合わせて、オバルブミン（ＯＶＡ）に融合させた抗マウスＤＥＣ−２０５  ＩｇＧ抗体（α−ｍＤＥＣ−２０５−ＯＶＡと称する）を含む、５μｇのＡＰＣ標的ワクチンで（皮下）免疫化した。１週間後、それぞれ、実施例８および実施例９で概ね説明されている手順によって、四量体染色によるＯＶＡ  ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチド（ＯＶＡペプチド２５７〜２６４）、およびＩＮＦ−γＥＬＩＳＰＯＴに対するＣＤ８＋Ｔ細胞の反応性（全ＣＤ８＋の四量体陽性の割合（％）で示す）について分析した。結果を図２２Ａ〜Ｃに示すが、図２２Ａは、使用したプロトコルを示し、図２２Ｂは、四量体染色実験の結果を示し、図２２Ｃは、ＩＮＦ−γＥＬＩＳＰＯＴ実験の結果を示す。これらの結果は、共投与したヒトｍＡｂ  １Ｆ５が、投与されたワクチン成分に対するＴ細胞応答を有意に増強したことを示す。
【０２５９】
実施例１４
ワクチン（抗ＤＥＣ２０５−ＯＶＡ）へのＴ細胞応答に対する、抗ＣＤ２７ｍＡｂ（１Ｆ５）およびＴＬＲ作動薬（ポリＩＣ）の相乗効果
３日前に、抗ＣＤ２７ｍＡｂ  １Ｆ５（５０μｇ）をｈｕＣＤ２７−Ｔｇ（トランスジェニック）マウスおよび野生型（ＷＴ）マウス同腹子に腹腔内注射し、次いで、０日目に、抗ｍＤｅｃ２０５−ＯＶＡ（５μｇ）＋ポリＩＣ（０、２５、５０、または１００μｇ）を４つの足から皮下注射した。脾臓を、７日目に採集し、四量体染色、ＩＦＮγ−ＥＬＩＳＰＯＴ、およびＩＦＮγ−ＩＣＳによって評価した。１群あたり３匹のマウス由来のゲートしたＣＤ８Ｔ細胞の中の陽性ＩＦＮγ−ＩＣＳの平均±標準偏差を計算し、代表的なドットプロットのパネルを収集した。図２３Ａ〜Ｄに示される結果は、抗ＣＤ２７ヒトｍＡｂが、ＴＬＲ３作動薬ポリＩＣと相乗的に作用して、投与されたワクチンの成分に対するＴ細胞応答を増強したことを示している。
【０２６０】
実施例１５
ＴＬＲ作動薬の非存在または存在における、Ｄｅｃ２０５標的ワクチン前の抗ＣＤ２７ｍＡｂの投与
図２８で示されるようにワクチンに関連して、種々の日数に抗ＣＤ２７ｍＡｂ（５０μｇ）をｈｕＣＤ２７−Ｔｇマウスおよび野生型（ＷＴ）同腹子に腹腔内注射し、そして０日目に、抗ｍＤｅｃ２０５−ＯＶＡ（５μｇ）をＴＬＲ作動薬ポリＩＣ−ＬＣ（２０μｇ）とともに、またはそれを含めずに４つの足から皮下注射した。脾臓を、７日目に採集し、四量体染色およびＩＦＮγ−ＥＬＩＳＰＯＴによって評価した。ゲートしたＣＤ８Ｔ細胞の中の四量体染色の代表パネルを図２４および図２５に示す。ＩＦＮγ−ＥＬＩＳＰＯＴは、類似したパターンを示した。
【０２６１】
これらの結果は、驚くべきことに、抗ＣＤ２７抗体が、ＴＬＲ作動薬の存在下または非存在下で、ワクチンと組み合わせて投与された場合、Ｔ細胞の活性化は、ワクチンの前に、例えば、ワクチン（抗体）が投与される日またはそれよりも前に抗体が投与されたときにより大きくなることを示している。
【０２６２】
実施例１６
ＴＣＲ活性化と組み合わせた抗ＣＤ２７ｍＡｂは、ヒトＣＤ２７トランスジェニックマウス由来のＴ細胞を活性化する
１Ｆ５  ｍＡｂのＴ細胞活性化能力を評価するために、Ｔ細胞を、ビーズによる負の選択によってｈＣＤ２７−Ｔｇマウスの脾臓から精製した。細胞は、ＣＦＳＥで標識し、３日間、０．２μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２７ヒトｍＡｂ  １Ｆ５またはアイソタイプ対照とともにインキュベートした。使用前に、架橋抗ヒトＩｇＧをエンドトキシン除去カラムに通過させた。ＣＤ８およびＣＤ４Ｔ細胞の中のＩＦＮγ−ＩＣおよびＣＳＦＥ希釈を、図２６および図２７に示す。ＴＮＦａ−ＩＣは、ＩＦＮｇと同じパターンを示した。図２６および図２７に示されるように、ＴＣＲ活性化と組み合わせた場合に、１Ｆ５  ｍＡｂは、インビトロでの増殖およびＴ細胞からのサイトカイン産生を誘発する。データは、抗ヒトＩｇＧによる架橋および抗ＣＤ３ｍＡｂによるＴ細胞受容体の活性化が、どちらも１Ｆ５誘発増殖およびサイトカイン産生に必要であったことを示している。
【０２６３】
実施例１７
抗ＣＤ２７ｍＡｂは、ＭＯ４メラノーマチャレンジモデルにおけるワクチンの有効性を増強する
インビボでの抗腫瘍活性を評価するために、０日目に、０．３×１０５個のＭＯ４細胞を、ｈｕＣＤ２７−ＴｇおよびＷＴ対照（１群あたり８匹のマウス）に皮下接種した。５日目および１２日目に、抗ＣＤ２７ｍＡｂ  １Ｆ５（５０μｇ）を、これらのマウスに腹腔内注射した。８日目および１５日目に、ＣＤ２７  ＨｕＭａｂ（５０μｇ）をさらに投与し、抗ｍＤｅｃ２０５−ＯＶＡ（５μｇ）を接種した。腫瘍成長を、週２回カリパスで測定した。結果を図２４に示す。
【０２６４】
さらなる試験において、０日目に、１×１０５個のＭＯ４細胞を、ｈｕＣＤ２７−ＴｇおよびＷＴ対照（１群あたり５匹のマウス）に皮下接種した。５日目および１２日目に、抗ｍＤｅｃ２０５−ＯＶＡ（５μｇ）およびＴＬＲ作動薬ポリＩＣ−ＬＣ（１０μｇ）を、これらのマウスに腹腔内ワクチン接種した。６日目および１３日目に、抗ＣＤ２７ｍＡｂ  １Ｆ５（５０μｇ）をマウスに注射した。腫瘍成長は、図２８５Ａで例示されるプロトコルで示されるように、週に２回カリパスで測定した。図２８Ｂ、２８Ｃ、および２８Ｄに示される結果は、腫瘍接種後の日数の関数として、マウスの腫瘍サイズに関する、処置なし（図２８Ｂ）、ワクチン単独治療（図２８Ｃ）、または抗ＣＤ２７治療と組み合わせたワクチン治療（図２８Ｄ）の効果を示す。結果は、抗ＣＤ２７ｍＡｂ（１Ｆ５）との組み合わせ治療が、腫瘍チャレンジしたマウスの生存を有意に延長したことを実証している。
【０２６５】
実施例１８
１Ｆ５は、ＢＣＬ１  Ｂリンパ腫の同系トランスジェニックマウスの腫瘍チャレンジモデルにおいて、強力な抗腫瘍活性を呈する
インビボでの１Ｆ５の抗腫瘍活性を評価するために、群あたり９〜１０のｈＣＤ２７トランスジェニックマウス（Ｂａｌｂ／ｃバックグラウンド）を、０日目に、静脈内投与した１０７個のＢＣＬ１  Ｂリンパ腫細胞でチャレンジした。次いで、動物を、示されるように、５用量の抗ヒトＣＤ２７ｍＡｂ  １Ｆ５で処置した。図２９Ａおよび２９Ｂに示されるように、用量に依存する様式で、腫瘍チャレンジしたマウスの生存を有意に延長した。
【０２６６】
実施例１９
Ｒａｊｉ異種移植片ＳＣＩＤマウスモデルにおける腫瘍の殺傷
ＣＢ．１７  ＳＣＩＤマウス（Ｔａｃｏｎｉｃから購入）を、病原体を含まないマウス施設で維持した。リンパ腫Ｒａｊｉ細胞（１×１０５個）を、ＳＣＩＤマウス（１群あたり４匹のマウス）に皮下注射した。６日目に、これらのマウスをＣＤ２７ヒトｍＡｂｓで処置し、３週間にわたって投与１回あたり０．５ｍｇで週２回投与した。腫瘍の成長を、週３回カリパスで測定した。腫瘍の成長およびカプラン−マイヤー分析の結果を図３０Ａおよび３０Ｂに示す。これらの結果から、抗ＣＤ２７ｍＡｂが、腫瘍チャレンジしたマウスの生存を有意に延長したことが分かる。
【０２６７】
さらなる実験において、ＣＢ．１７  ＳＣＩＤマウス（Ｔａｃｏｎｉｃから購入）を、病原体を含まないマウス施設で維持した。ヒトリンパ腫Ｒａｊｉ細胞（５×１０５個）を、０日目に、ＳＣＩＤマウス（１群あたり６匹のマウス）に皮下注射した。５日目に、これらのマウスを、抗ＣＤ２７ｍＡｂ  １Ｆ５で処置し、３週間にわたって投与１回あたり０．０３３、０．１、または０．３ｍｇで週２回投与した。腫瘍成長を、週２回カリパスで測定した。
【０２６８】
図３１Ａに示される結果は、抗ＣＤ２７ｍＡｂ（１Ｆ５）が、腫瘍成長を有意に阻害し、したがって、腫瘍チャレンジしたマウスの生存を有意に延長したことを示している。また、データのカプラン−マイヤー生存プロットを図３１Ｂに示す。この図は、生存期間中央値が、対照群と比較して、処置群からのマウスにおいて少なくとも１０日増加したことを示している。さらなる異種移植実験を１Ｇ５で行い、その結果を図３２に示す。
【０２６９】
実施例２０
Ｄａｕｄｉ異種移植片ＳＣＩＤマウスモデルにおける腫瘍の殺傷
ＣＢ．１７  ＳＣＩＤマウス（Ｔａｃｏｎｉｃから購入）を、病原体を含まないマウス施設で維持した。ヒトリンパ腫Ｄａｕｄｉ細胞（１×１０６個）を、０日目に、ＳＣＩＤマウス（１群あたり６匹のマウス）に皮下注射した。５日目に、これらのマウスを、抗ＣＤ２７ヒトｍＡｂ  １Ｆ５で処置し、３週間にわたって投与１回あたり０．０３３、０．１、または０．３ｍｇで週２回投与した。腫瘍成長を、週２回カリパスで測定した。
【０２７０】
図３３に示される結果は、抗ＣＤ２７  ｍＡｂ（１Ｆ５）が腫瘍成長を有意に阻害したことを示し（図３３Ａ）、したがって、腫瘍チャレンジしたマウスの生存を有意に延長したことを示している（図３３Ｂのカプラン−マイヤープロット）。
【０２７１】
実施例２１
受容体に結合しないように操作した抗ＣＤ２７ｍＡｂは、ワクチン抗原に対するＴ細胞応答を増強しない
ＨｕＣＤ２７トランスジェニックマウスを、抗ＣＤ２７ヒトｍＡｂ  １Ｆ５（腹腔内）もしくはｍＡｂ  １Ｆ５変異株（Ｆｃ受容体結合を予防するように、Ｆｃ部分を変異させた）、または対照ＩｇＧ  ｍＡｂと組み合わせて、オバルブミン（ＯＶＡ）（α−ｍＤＥＣ−２０５−ＯＶＡと称する）に融合させた抗マウスＤＥＣ−２０５  ＩｇＧ抗体を含む、５μｇのＡＰＣ標的ワクチンで（皮下）免疫化した。１週間後、一般に説明される手順によって、ＯＶＡ  ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチド（ＯＶＡペプチド２５７〜２６４）およびＩＮＦ−γＥＬＩＳＰＯＴに対するＣＤ８＋Ｔ細胞の反応性について分析した。
【０２７２】
図３４に示される結果は、変化させたヒトｍＡｂ  １Ｆ５が、ワクチンに対するＴ細胞応答を増強せず、ＣＤ７０／ＣＤ２７経路を遮断するための有効な薬剤となることを実証している。
【０２７３】
等価物
当業者は、日常的実験を超えるものを用いなくても、本明細書で説明される本発明の特定の実施形態には多くの等価物があることを認識するであろうし、または確認することが可能であろう。このような等価物は、以下の請求項によって包含されることが意図される。
【０２７４】
配列表の要約
0006002659.tif 000062
0006002659.tif 000063
0006002659.tif 000064
0006002659.tif 000065
0006002659.tif 000066
【図１】
0006002659.tif 000067
【図２】
0006002659.tif 000068
【図３】
0006002659.tif 000069
【図４】
0006002659.tif 000070
【図５】
0006002659.tif 000071
【図６Ａ】
0006002659.tif 000072
【図６Ｂ】
0006002659.tif 000073
【図６Ｃ】
0006002659.tif 000074
【図６Ｄ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【配列表】
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