(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
紅茶茶葉を１３０〜１５０℃で加圧加熱処理して紅茶茶葉抽出液を得る工程と、
前記紅茶茶葉抽出液の５０重量％以上の有機溶媒不溶画分を得る工程と、
前記有機溶媒不溶画分に含まれ、５０重量％以上の有機溶媒に不溶な糖を含む親水性分画物を得る工程と、を含む紅茶茶葉の親水性分画物の製造方法。
【請求項２】
前記紅茶茶葉が１００℃以下での温水抽出後の残渣である請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
前記有機溶媒が酢酸エチル、酢酸ブチル、メタノール、エタノール、ブタノール、イソプロピルアルコール、ヘプタン、ヘキサン、イソオクタン、アセトン、メチルエチルケトン、ベンゼン、トルエン、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルエーテル、塩化メチレン、クロロホルム、及び１，２−ジクロロエタンからなる群から選択される１又は複数の有機溶媒である請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項４】
前記有機溶媒がエタノールである請求項３に記載の製造方法。
【請求項５】
紅茶茶葉を１３０〜１５０℃で加圧加熱処理して紅茶茶葉抽出液を得る工程と、
前記紅茶茶葉抽出液の５０重量％以上の有機溶媒不溶画分を得る工程と、
前記有機溶媒不溶画分に含まれ、５０重量％以上の有機溶媒に不溶な糖を含む親水性分画物を得る工程と、を含む前記親水性分画物を有効成分とするペルオキシソーム増殖因子活性化受容体活性化剤の製造方法。
【請求項６】
紅茶茶葉を１３０〜１５０℃で加圧加熱処理して紅茶茶葉抽出液を得る工程と、
前記紅茶茶葉抽出液の５０重量％以上の有機溶媒不溶画分を得る工程と、
前記有機溶媒不溶画分に含まれ、５０重量％以上の有機溶媒に不溶な糖を含む親水性分画物を得る工程と、を含む前記親水性分画物を含有する食品添加剤の製造方法。
【請求項７】
紅茶茶葉を１３０〜１５０℃で加圧加熱処理して紅茶茶葉抽出液を得る工程と、
前記紅茶茶葉抽出液の５０重量％以上の有機溶媒不溶画分を得る工程と、
前記有機溶媒不溶画分に含まれ、５０重量％以上の有機溶媒に不溶な糖を含む親水性分画物を得る工程と、を含む前記親水性分画物を含有する医薬品組成物の製造方法。
【請求項８】
前記医薬品組成物が高脂血症、内臓脂肪蓄積及び／又は肥満の抑制及び／又は改善に用いられる請求項７に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紅茶茶葉の親水性分画物の製造方法と該親水性分画物を含むペルオキシソーム増殖因子活性化受容体活性化剤及び食品添加剤並びに医薬品組成物に関する。より詳しくは、紅茶茶葉中の機能性成分を含む紅茶抽出物を得るための製造方法等に関する。
【背景技術】
【０００２】
茶は、緑茶、烏龍茶、紅茶などの形態で、世界中で広く飲まれている。茶は、ツバキ属の樹（Camellia sinensis）から製造される。茶は、製法の違いによって不発酵茶（緑茶）、半発酵茶（烏龍茶）、発酵茶（紅茶）に大別できる。
【０００３】
紅茶に含まれるポリフェノール類には、様々な機能が見出されている。その一つに血中脂質抑制機能がある（非特許文献１参照）。紅茶には、カテキン類の酸化発酵によって産生されるテアルビジン及びテアフラビンなどのポリフェノール類が含まれている（非特許文献２，３参照）。これらのポリフェノール類は、膵リパーゼ阻害作用を有し、膵リパーゼによる脂肪分解を阻害して食事に含まれるトリアシルグリセロールの腸管吸収を阻害することで、血中脂質量を抑制する。従って、これらのポリフェノール類は、肥満及び肥満に起因したメタボリックシンドロームを予防又は改善し得るものとして期待されている。
【０００４】
一方、茶に含まれる機能性成分として、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（Peroxisome Proliferator Activated Receptor：ＰＰＡＲ）を活性化する作用を有する物質が知られている（特許文献１参照）。ＰＰＡＲは、核内受容体の一種であり、脂肪分解に関与する細胞内小器官であるペルオキシソームを増加させる作用を仲介するタンパク質として同定された。ＰＰＡＲは、主として肝臓及び骨格筋に発現し、脂質代謝調節に重要な役割を果たしていると考えられている。茶に含まれるＰＰＡＲ活性化作用を有する物質としては、没食子酸誘導体、ケルセチン類、フラボン誘導体、イソフラボン誘導体及びカテキン類が知られている（同特許文献参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００２−８０３６２号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】"Black-tea polyphenols suppress postprandial hypertriacylglycerolemia by suppressing lymphatic transport of dietary fat in rats." Kobayashi, M. et al. J. Agric. Food Chem. 2009, 57, 7131-7136.
【非特許文献２】" Sub- and supercritical fluid extraction of functional ingredients from different natural sources: Plants, food-by-products, algae and microalgae: A review." Herrero, M. et. al., Food Chem. 2006, 98, 136-148.
【非特許文献３】"Orlistat, a lipase inhibitor, for weight maintenance after conventional dieting: a 1-y study." Hill, J. O. et. al., Am. J. Clin. Nutr. 1999, 69, 1108-1116.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
近年、缶、ペットボトルあるいは紙パックに入った紅茶飲料の消費が増加しており、紅茶の抽出残渣の廃棄量が増加している。紅茶の抽出は比較的短時間で行われるため、抽出残渣中には有用な成分が多く残存していると考えられる。しかし、抽出残渣は、一部が飼料及び肥料などのコンポスト原料として使用されているものの、多くは廃棄されてきた。
【０００８】
抽出残渣から機能性成分を含む紅茶抽出物を得ることができれば、機能性食品への添加や紅茶製品への機能付加などの用途に利用することが可能であり、抽出残渣の有効利用の観点からも好ましいと考えられる。
【０００９】
そこで、本発明は、紅茶の抽出残渣を原料として用い、工業的に温和な条件で、機能性成分を含む紅茶抽出物を得るための技術を提供することを主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記課題解決のため、本発明は、紅茶茶葉を１３０〜１５０℃で加圧加熱処理して紅茶茶葉抽出液を得る工程と、前記紅茶茶葉抽出液の５０重量％以上の有機溶媒不溶画分を得る工程と、前記有機溶媒不溶画分に含まれ、５０重量％以上の有機溶媒に不溶な糖を含む親水性分画物を得る工程と、を含む紅茶茶葉の親水性分画物の製造方法を提供する。
この製造方法において、前記紅茶茶葉には、１００℃以下での温水抽出後の残渣を用いることができる。また、前記有機溶媒には、酢酸エチル、酢酸ブチル、メタノール、エタノール、ブタノール、イソプロピルアルコール、ヘプタン、ヘキサン、イソオクタン、アセトン、メチルエチルケトン、ベンゼン、トルエン、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルエーテル、塩化メチレン、クロロホルム、及び１，２−ジクロロエタンからなる群から選択される１又は複数の有機溶媒を用いることが好ましく、エタノールを用いることがより好ましい。
この製造方法で得られる紅茶茶葉の５０重量％以上の有機溶媒に不溶な糖を含む親水性分画物は、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体を活性化する作用を有する。従って、この親水性分画物は、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体活性化剤の有効成分として利用できる。
また、本発明は、上記ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体活性化剤を含有する食品添加剤及び医薬品組成物の製造方法を提供する。このうち、医薬品組成物は、高脂血症、内臓脂肪蓄積及び／又は肥満の抑制及び／又は改善のために利用できる。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、紅茶の抽出残渣を原料として用い、工業的に温和な条件で、機能性成分を含む紅茶抽出物を得るための技術が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】試験例１における紅茶茶葉抽出液の調製手順を説明するための図である。
【図２】試験例１において、加圧加熱処理温度を変化させて得た抽出液中のポリフェノール類総量及び膵リパーゼ阻害物質量を測定した結果を示す図面代用グラフである。
【図３】試験例１において、製品紅茶及び加圧加熱処理温度を変化させて得た抽出液のＰＰＡＲα活性化作用を測定した結果を示す図面代用グラフである。
【図４】試験例１における紅茶茶葉抽出液の分画手順を説明するための図である。
【図５】試験例１において、溶媒分画後の上清と沈殿のＰＰＡＲα活性化作用を測定した結果を示す図面代用グラフである。
【図６】試験例１において、クロマトグラフィー分画後の各画分のＰＰＡＲα活性化作用を測定した結果を示す図面代用グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明を実施するための好適な形態について説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本発明の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより本発明の範囲が狭く解釈されることはない。
【００１４】
１．紅茶分画物の製造方法
本発明に係る紅茶茶葉の親水性分画物の製造方法は、紅茶茶葉を１３０〜１５０℃で加圧加熱処理して紅茶茶葉抽出液を得る工程（加圧加熱処理工程）を含む。また、この製造方法は、前記紅茶茶葉抽出液の有機溶媒不溶画分を得る工程と、前記有機溶媒不溶画分に含まれる親水性分画物を得る工程と、の２つの工程（分画工程）を含む。この製造方法では、紅茶茶葉として、１００℃以下での温水抽出後の残渣を用いることができる。紅茶茶葉の温水抽出は、広く一般に行われており、一側面において紅茶茶葉の温水処理する工程ともみなすことができる。従って、本発明に係る紅茶茶葉の親水性分画物の製造方法は、上記加圧加熱処理工程の前工程として、紅茶茶葉を１００℃以下で温水処理する工程（温水処理工程）を含むものと換言することが可能である。
【００１５】
温水処理工程に続けて加圧加熱処理工程を行うことにより、温水抽出後の残渣中に残存している紅茶茶葉成分が化学的物理的変化を受け、ＰＰＡＲα活性化作用を有する物質を水中に溶出させることができる。なお、この際、ＰＰＡＲα活性化作用を有する物質とともに、膵リパーゼ阻害作用を有するポリフェノール類も水中に溶出させることが可能である。膵リパーゼ阻害活性を有する物質は、膵リパーゼによる脂肪分解を阻害して食事に含まれるトリアシルグリセロールの腸管吸収を阻害することで、血中脂質量を抑制する。これらのポリフェノール類は、肥満及び肥満に起因したメタボリックシンドロームを予防又は改善し得るものである。
【００１６】
［温水処理工程］
温水処理工程は、一般に行われているのと同様に、紅茶茶葉を１００℃以下の温水中に浸漬することによって行うことができる。処理温度は、７０〜１００℃、通常は８０〜９５℃程度とされる。また、処理時間は、１〜１５分、通常は３〜１０分程度とされる。
【００１７】
［加圧加熱処理工程］
加圧加熱処理工程では、温水処理工程後の紅茶茶葉の残渣を用いて、密閉容器内において飽和蒸気圧下で高温高圧水抽出処理を行う。処理温度は、１００℃よりも高く設定されればよいが、特に１２０〜１５０℃が好ましく、１３０〜１５０℃がより好ましい。処理温度を１２０℃以上とすることで、膵リパーゼ阻害作用を有するポリフェノール類をより多く含む紅茶茶葉抽出液を得ることができる（後述図２参照）。また、処理温度を１３０℃以上とすれば、ＰＰＡＲα活性化作用を有する物質もより多く含む紅茶茶葉抽出液が得られる。処理温度が１６０℃以上となると、得られるＰＰＡＲα活性化作用を有する物質の量が著しく減少するため好ましくない（後述図３参照）。なお、処理時間は、特に限定されないが、例えば１〜３０分、好ましくは５〜１５分とできる。
【００１８】
加圧加熱処理工程は、例えば、反応容器、撹拌機、圧力計及び内外温度計等から構成された小型反応装置（ポータブルリアクター）を用いて行うことができる。ポータブルリアクターには、市販の装置（例えばTPR-1-TVS-N-500、耐圧硝子工業株式会社）を使用すればよい。
【００１９】
加圧加熱処理工程は、具体的には例えば以下のようにして行うことができる。まず、温水処理工程後の紅茶残渣と常温のイオン交換水とを反応容器内に加えて密閉し、コイルヒーターによって反応容器内を加熱する。この際、反応容器内の圧力は成り行きとする。次に、反応容器を冷却した後に開放し、処理サンプルを回収する。得られた処理サンプルからふるいを用いて残渣を濾別し、抽出液を得る。抽出液は、残渣から得られる圧搾液を混合し、遠心分離を行って得た上清としてもよい。また、得られた上清は、必要に応じて濾紙を用いて濾別を行った濾液としてもよい。
【００２０】
［分画工程］
紅茶茶葉抽出液の有機溶媒不溶画分を得る工程と、有機溶媒不溶画分に含まれる親水性分画物を得る工程とからなる分画工程は、紅茶茶葉抽出液中のＰＰＡＲα活性化作用を有する物質を濃縮するための工程である。紅茶茶葉抽出液の有機溶媒不溶画分の分画は、紅茶茶葉抽出液に５０重量％濃度以上の有機溶媒を添加して行う。
【００２１】
紅茶茶葉抽出液の分画は、溶媒を用いた分画及びクロマトグラフィーによる分画などの公知の手法によって行うことができる。溶媒を用いた分画には、例えば、酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル、メタノール、エタノール、ブタノール、イソプロピルアルコール等のアルコール、ヘプタン、ヘキサン、イソオクタン等の脂肪属炭化水素、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン、ベンゼン、トルエン等の芳香族化合物、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルエーテル等のエーテル、塩化メチレン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン等の低級脂肪族炭化水素化合物などの有機溶媒が用いられる。ＰＰＡＲα活性化作用を有する物質は、エタノール不溶画分に分画されることが分かっていることから、これらの溶媒のうち特にエタノールを好適に用いることができる。これらの溶媒は、適宜濃度を調整して用いることができるが、５０重量％濃度以上の有機溶媒を用いることが好ましい。また、溶媒は、複数種を任意の混合比で組み合わせて用いてもよい。
【００２２】
クロマトグラフィーによる分画は、ゲルろ過クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、分配クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）など従来公知の手法によって行うことができる。例えば、ゲルろ過クロマトグラフィーによれば、上記のエタノール不溶画分うちの水可溶画分にＰＰＡＲα活性化作用を有する物質を濃縮できる。
【００２３】
本発明に係る紅茶茶葉の親水性分画物の製造方法では、温水抽出後の紅茶茶葉の残渣を用いて、機能性成分を含む紅茶抽出物を得ることができる。このため、この製造方法では、従来多くが廃棄されていた温水抽出後の残渣を有効利用することが可能である。また、温水処理工程、加圧加熱処理工程及び分画工程のいずれの工程も、工業的に温和な条件で実施することが可能である。
【００２４】
２．紅茶茶葉の親水性分画物
上述の製造方法により得られる紅茶茶葉の親水性分画物は、紅茶製品への機能付加あるいは機能増強、及び機能性食品への添加などの種々の用途に利用できる。特に、この紅茶茶葉の親水性分画物は、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体活性化作用を有する物質を含むため（後述の実施例を参照）、脂質代謝改善を目的とした食品添加剤及び医薬品組成物として有効に利用できる。紅茶茶葉の親水性分画物の他の用途としては、風味改善剤、抗酸化剤、抗菌剤、抗う蝕剤、抗インフルエンザウイルス剤などが挙げられる。
【００２５】
ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）は、α型、β／δ型及びγ型の３つのサブタイプが存在している。このうち、ＰＰＡＲαについては、高脂血症治療薬であるフィブラート系化合物がそのアゴニストとなることが明らかにされている。このことから、ＰＰＡＲα活性化作用を有する物質は、脂質代謝を活性化して、肥満及び肥満に起因したメタボリックシンドロームを予防又は改善し得るものと期待されている（上記特許文献１参照）。
【００２６】
本発明に係る紅茶茶葉の親水性分画物は、ＰＰＡＲα活性化作用を有する物質を含むことにより、肥満及び肥満に起因したメタボリックシンドロームの予防又は改善のために有効に適用され得る。
【００２７】
ＰＰＡＲα活性化作用を有する物質は具体的には特定されていないが、紅茶茶葉を熱水にさらすことで茶葉中から分解抽出される親水性成分と考えられる。なお、上述の膵リパーゼ阻害活性を有するポリフェノール類は、カテキン類の酸化発酵によって産生されるポリフェノール類であって、具体的にはテアフラビン、テアフラビン−３−ガレート、テアフラビン−３´−ガレート、テアフラビン−３，３´−ガレート、エピガロカテキンガレート、エピカテキンガレートなどが挙げられる。
【００２８】
３．ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体活性化剤
本発明に係るＰＰＡＲ活性化剤は、上述の親水性分画物を含む。ＰＰＡＲ活性化剤は、肥満及び肥満に起因したメタボリックシンドロームの予防又は改善を目的とした医薬品組成物、及び、食品組成物又は飼料組成物に配合される食品添加剤として利用できる。食品組成物としては、特にいわゆる機能性食品が好適である。医薬品組成物は、紅茶由来成分を有効成分とするため、長期にわたって連続的に適用できる可能性が高く、副作用も少ない可能性が高い。また、同様に、食品添加剤についても高い安全性を有する。
【００２９】
ＰＰＡＲ活性化剤は、紅茶茶葉の親水性分画物そのままの液状物、あるいは親水性分画物を乾燥させた粉末物、粉末物を固形化した固形物などの任意の形態であってよい。
【００３０】
［医薬品組成物］
医薬品組成物は、ＰＰＡＲ活性化剤と薬理学的に許容される各種添加剤とにより製剤化される。添加剤としては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、注射用溶剤等の添加剤を使用することが可能である。医薬品組成物は、特に、高脂血症、内臓脂肪蓄積及び／又は肥満の抑制及び／又は改善のために有効である。
【００３１】
賦形剤としては、例えば、乳糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット等の糖誘導体；トウモロコシ澱粉、馬鈴薯澱粉、α−デンプン、デキストリン、カルボキシメチルデンプン等のデンプン誘導体；結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等のセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルラン；軽質無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等のケイ酸塩誘導体；リン酸ナトリウム、リン酸カルシウム等のリン酸塩誘導体；炭酸ナトリウム、炭酸カルシウム等の炭酸塩誘導体；硫酸ナトリウム、硫酸カルシウム等の硫酸塩誘導体が挙げられる。
【００３２】
結合剤としては、例えば、上記賦形剤のほか、ゼラチン；ポリビニルピロリドン；マクロゴール等が挙げられる。
崩壊剤としては、例えば、上記賦形剤の他、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン等の化学修飾されたデンプン又はセルロース誘導体等が挙げられる。
滑沢剤としては、例えば、タルク；ステアリン酸；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸金属塩；コロイドシリカ；ビーガム、ゲイロウ等のワックス類；ホウ酸；グリコール；フマル酸、アジピン酸等のカルボン酸類；安息香酸ナトリウム等のカルボン酸ナトリウム塩；硫酸ナトリウム等の硫酸塩；ロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム等のラウリル硫酸塩；無水ケイ酸、ケイ酸水和物等のケイ酸類；デンプン誘導体等が挙げられる。
安定剤としては、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール等のアルコール類；塩化ベンザルコニウム；無水酢酸；ソルビン酸等が挙げられる。
矯味矯臭剤としては、例えば、甘味料、酸味料、香料等が挙げられる。注射用溶剤としては、例えば、水、エタノール、グリセリン等が挙げられる。
【００３３】
医薬品組成物の投与経路としては、例えば、経口投与、経腸投与等の非経口投与が挙げられる。医薬品組成物の投与剤形としては、例えば、注射剤、噴霧剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、シロップ剤、乳剤、坐剤、軟膏、テープ剤等が挙げられる。また、医薬品組成物は飲食品又は飼料等に配合して投与することもできる。投与量及び投与回数は、目的とする作用効果、投与方法、治療期間、年齢、性別、体重等により適宜設定され得る。
【００３４】
［食品添加剤］
ＰＰＡＲ活性化剤は、食品組成物又は飼料組成物に配合される食品添加剤として利用することもできる。この食品添加剤も、高脂血症、内臓脂肪蓄積及び／又は肥満の抑制及び／又は改善のために有効である。
【００３５】
食品添加剤は、ＰＰＡＲ活性化剤に、デキストリン、デンプン等の糖類；ゼラチン、カゼイン、ホエー、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質；アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類；セルロース、グアガム、ジェランガム、アラビアガム等の多糖類；大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類等を配合することにより製造できる。
【００３６】
食品組成物の形態としては、紅茶を含む茶飲料、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果汁飲料、乳酸菌飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、シャーベット、氷菓等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、餃子及びしゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、チョコレート、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、錠菓等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳、調製粉乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物；パン類；経腸栄養食；機能性食品等が例示される。
【００３７】
飼料組成物としては、トウモロコシ、小麦、大麦、ライ麦等の穀類；ふすま、麦糠、米糠、脱脂米糠等の糠類；コーングルテンミール、コーンジャムミール等の製造粕類；脱脂粉乳、ホエー、魚粉、骨粉等の動物性飼料類；ビール酵母等の酵母類；リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の鉱物質飼料；油脂類；アミノ酸類；糖類等が挙げられる。これらの飼料組成物の形態としては、愛玩動物用飼料（ペットフード等）、家畜飼料、養魚飼料等が例示される。
【実施例】
【００３８】
＜試験例１＞
１．紅茶茶葉抽出液の調製
（１）温水抽出（温水処理工程）
紅茶葉（セイロン）を温水抽出し（９０℃、６分間）、紅茶液（以下「製品紅茶」と称する）と残渣（以下「残渣１」と称する）を得た（図１参照）。
【００３９】
（２）加圧加熱処理工程
残渣１を、密閉容器内において飽和蒸気圧下で加圧加熱抽出処理し、抽出液と残渣（以下「残渣２」と称する）を得た（図１参照）。加圧加熱処理は、「表１」の条件に従って１００〜２００℃で行った。
【００４０】
加圧加熱処理工程は、具体的には以下のようにして行った。まず、温水処理工程後の紅茶残渣（２１ｇ）と常温のイオン交換水（３００ｍＬ）とを反応容器内に加えて密閉した。次に、コイルヒーターを４００℃程度まで加熱し、反応容器内の温度が所定温度に達した時点で冷却を開始した。この際、反応容器内の圧力は成り行きとした。その後、反応容器内の温度が９０℃程度になった時点で反応容器を開放し、処理サンプルを回収した。得られた処理サンプルをふるい（４２メッシュ）を用いて残渣と抽出液とに濾別した。残渣は圧搾した後、凍結乾燥した。抽出液と、残渣から得られた圧搾液とを混合した後、遠心分離を行って上清を得る。得られた上清を、濾紙（Qualitative filter paper No. 1, 125mm, 東洋濾紙株式会社）を用いて濾別し、得られた濾液を加圧加熱処理抽出液とした。加圧加熱処理抽出液は凍結乾燥し、粉末とした。
【００４１】
【表１】
0005883701.tif 000002
【００４２】
２．ポリフェノール類の膵リパーゼ阻害作用の評価
（１）ポリフェノール総量の測定
抽出液中のポリフェノール類の総量を、フォーリン・デニス（Folin-Denis）法の改変法を用いて測定した。具体的には、サンプルを超純水で固形０．０１％となるように溶解し、０．２５ｍＬを試験管に入れた。さらに、２倍希釈したフェノール試薬１．２５ｍＬと１０％炭酸ナトリウム１．２５ｍＬを試験管に添加して撹拌した。２５℃で２０分間静置した後、マイクロプレートリーダー（Corona Electric Co., Ibaraki, Japan）を用いて７６０ｎｍにおける吸光度を測定し、没食子酸を用いて作成した検量線から没食子酸相当量としてポリフェノール総量を算出した。ブランクには、フェノール試薬の代わりに純水を添加したものを用いた。
【００４３】
（２）膵リパーゼ阻害物質の定量
膵リパーゼ阻害物質である、没食子酸を有するポリフェノール類の抽出液中の量を以下の方法により測定した。１００〜２００℃の加圧加熱処理後に得られた抽出固形分を０．１％（w/v）となるよう超純水に溶解し、ＬＣ−ＭＳ分析によって各成分を定量した。定量は、各標品を所定の濃度に調製した後、ＬＣ−ＭＳに供して作成した検量線に基づいて行った。標品は、theaflavin (TF1)、theaflavin 3-O-gallate (TF2)、theaflavin 3’-O-gallate (TF3)、theaflavin 3, 3-O-gallate (TF4)については、長良サイエンス株式会社から購入したものを使用した。また、(-)-Epigallocatechin (EGC)、(-)-epigallocatechin gallate (EGCG)、(-)-epicatechin gallate (ECG)、(-)-epicatechin (EC)、(+)-catechinについては、栗田工業株式会社社製のCatechin kitを使用した。
【００４４】
加圧加熱温度を変化させて得た抽出液中のポリフェノール総量及び膵リパーゼ阻害物質量を図２に示す。処理温度が高い程、抽出液中のポリフェノール総量は増加した。一方、膵リパーゼ阻害物質量は、処理温度１２０〜１５０℃で最も多くなることが確認された。
【００４５】
（３）膵リパーゼ阻害活性の測定
抽出液及び製品紅茶の膵リパーゼ阻害活性を以下の方法により測定した。リパーゼ活性は、オレイン酸４−メチルウンエリフェリル（４−ＵＭＯ）にリパーゼを作用させ、生成する４−メチルウンエリフェロンの蛍光を測定することによって評価した。１５０ｍＭ  塩化ナトリウム、１．３６ｍＭ  塩化カルシウムを含む１３ｍＭ  トリス塩酸バッファー（ｐＨ８）を調製し、同バッファーを用いて０．１ｍＭ  ４−ＵＭＯ溶液及び４００Ｕ／ｍＬ膵リパーゼ溶液を調製した。
【００４６】
９６穴プレート（蛍光測定用）に０．１ｍＭ  ４−ＵＭＯ溶液５０μＬとサンプル溶液２５μＬを添加して混合した。さらに、４００Ｕ／ｍＬ膵リパーゼ溶液２５μＬを添加して、２５℃で３０分間インキュベートした。インキュベート後、０．１Ｍ  クエン酸バッファー（ｐＨ４．２）１００μＬを添加して酵素反応を停止した。プレートリーダーで４−メチルウンエリフェロンの発する蛍光を測定した（励起波長３６０ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍ）。コントロールはサンプル溶液として純水を用いた。ブランクには膵リパーゼ溶液の代わりに純水を添加した。膵リパーゼ阻害活性は下記の式により算出した。
膵リパーゼ阻害活性（％）＝１００×［１−｛（サンプル添加時の蛍光量−サンプルのブランク）／（コントロールの蛍光量−コントロールブランク）｝］
【００４７】
製品紅茶及び加圧加熱処理温度を変化させて得た抽出液の膵リパーゼ阻害活性（ＩＣ５０）を表２に示す。ＩＣ５０は製品紅茶で最も低く、製品紅茶は高い膵リパーゼ阻害活性を示した。一方、抽出液では、処理温度１００〜１５０℃で比較的ＩＣ５０が小さく、高い膵リパーゼ阻害活性が認められた。
【００４８】
【表２】
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【００４９】
これらの結果から、紅茶残渣を１２０〜１５０℃で加圧加熱して得られる抽出液が、膵リパーゼ阻害作用を有するポリフェノール類を多く含み、膵リパーゼ阻害活性を示すことが明らかとなった。
【００５０】
３．ＰＰＡＲα活性化作用の評価
（１）ＰＰＡＲα活性化作用の測定
抽出液及び製品紅茶のＰＰＡＲα活性化作用を、市販のアッセイキット（EnBio RCAS for PPARα、藤倉化成株式会社）を用いて測定した。
【００５１】
製品紅茶及び加圧加熱処理温度を変化させて得た抽出液のＰＰＡＲα活性化作用を図３に示す。図の縦軸には、サンプルのアゴニスト様活性（Ｂ）を、ポジティブコントロールとして用いたＰＰＡＲαアゴニストＧＷ７６４７（５００ｎＭ）のアゴニスト様活性（Ｂｍａｘ）に対する比（Ｂ／Ｂｍａｘ）により示す。処理温度１３０〜１５０℃で得られる抽出液において、高い活性が検出された。一方、製品紅茶及び１２０℃以下あるいは１６０℃以上の処理温度で得られる抽出液においては、ほとんど活性は検出されなかった。
【００５２】
（２）ＰＰＡＲα活性化作用を有する物質の濃縮
処理温度１５０℃で得た抽出液について溶媒を用いた分画とカラムクロマトグラフィーによる分画を行い、ＰＰＡＲα活性化作用成分を濃縮した。抽出液を凍結乾燥し、８０％エタノールに２．５％（weight / volume）となるよう溶解し、遠心分離（12,000 g, 10 min）により上清と沈殿に分離した（図４参照）。さらに、沈殿を凍結乾燥した後、水に２．５％（weight / volume）となるよう溶解し、カラムクロマトグラフィー（Sephadex LH-20）によって、水溶出画分１、５０％エタノール溶出画分２及び５０％アセトン溶出画分３に分画した（図４参照）。
【００５３】
遠心分離後の上清と沈殿のＰＰＡＲα活性化作用を図５に示す。ＰＰＡＲα活性化作用は沈殿でのみ確認された。また、カラムクロマトグラフィーによる分画後の画分１〜３のＰＰＡＲα活性化作用を図６に示す。ＰＰＡＲα活性化作用は水溶出画分１のみで検出された。
【００５４】
これらの結果から、紅茶残渣を１３０〜１５０℃で加圧加熱処理して得られる抽出液が、ＰＰＡＲα活性化作用を有する物質を多く含むことが明らかとなった。ＰＰＡＲα活性化作用成分は、この抽出液の８０％エタノール不溶画分のうち水溶出画分に特に多く含まれていた。ＰＰＡＲα活性化作用成分は、紅茶茶葉を熱水にさらすことで茶葉中から分解抽出される親水性成分であることから、糖又は糖関連物質と推定された。残渣１に比べて残渣２ではヘミセルロースが減少しており、加圧加熱処理により残渣中の糖が水中に分解溶出されていることも上記推定を支持するものと考えられた。なお、本発明者らの知る限りにおいて、これまで糖がＰＰＡＲα活性化作用を示すことは報告されていない。
【００５５】
以上、試験例１の結果から、温水抽出後の紅茶残渣を１３０〜１５０℃で加圧加熱処理して水中に得られる紅茶茶葉抽出液に、膵リパーゼ阻害作用を有するポリフェノール類とＰＰＡＲα活性化作用を有する物質が多く含まれていることが示された。さらに、この紅茶茶葉抽出液のエタノール不溶画分に含まれる親水性分画物が、ＰＰＡＲα活性化作用を有する物質を特に多く含むことが示された。
【産業上の利用可能性】
【００５６】
本発明に係る紅茶茶葉の親水性分画物の製造方法は、紅茶の抽出残渣を原料として用い、工業的に温和な条件で、肥満及び肥満に起因したメタボリックシンドロームを予防又は改善に機能する成分を含む親水性分画物を調製できる。このため、本発明によれば、紅茶の抽出残渣を有効に利用して、肥満等を予防又は改善可能な食品添加剤及び医薬組成品などを製造することが可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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