(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１のパンドラチンＡ、化学式２の４−ヒドロキシパンドラチンＡ（4-hydroxypaduratinＡ）、及び化学式３のイソパンドラチンＡからなる群より選ばれたパンドラチン誘導体又はこれの塩の筋肉増加促進用製剤の製造のための使用。
【化１】
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【化２】
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【化３】
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【請求項２】
前記パンドラチン誘導体が、ボエセンベルギアパンドラターから抽出されたことを特徴とする請求項１記載の筋肉増加促進用製剤の製造のための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は2010年05月20日出願された大韓民国特許出願第10-2010-0047369号を優先権主張し、前記明細書全体は本発明の参考文献である。
【０００２】
本発明はパンドラチン誘導体又はボエセンベルギアパンドラター（Boesenbergia  pandurata）抽出物の筋肉増加促進、抗疲労及び運動遂行能力向上に関する新たな用途に関するもので、より詳しくはパンドラチン誘導体又はこれの塩又はボエセンベルギアパンドラター抽出物を有効成分として含み、筋肉増強及び疲労回復を促進して運動性を増進させる運動遂行能力向上、筋肉増加促進及び抗疲労用組成物、パンドラチン誘導体又はこれの塩又はボエセンベルギアパンドラター抽出物をこれを必要とする個体に投与する運動遂行能力向上、筋肉増加促進及び抗疲労方法等に関する。
【背景技術】
【０００３】
一般的に、筋肉は持続的に運動をしない場合、老化により筋肉機能が低下して筋肉量及び筋肉神経連接（neuromuscular  junction,motor  unit）の減少が起こり容易に疲労を感じて無気力になり、生活の活力が減少して人生そのものの質が急激に落込む（J.Appl.Physiol.2003,95,p1717-1727）。これを防止するために、抵抗力運動（resistance  traning）のような運動を持続的に実施して（大韓民国公開特許10-2009-0089815）、これとともに適切な食餌療法を併行させることが勧奨されている。このように人生の質を向上させるためには規則的な運動が必要であり、運動選手だけでなく、一般人たちも日常生活でより多くのエネルギー及び持久力を必要とするようになった。しかし、忙しい生活に追われる現代人の場合、大部分の人々は、運動よりは健康補助剤（dietary  supplement）に依存したがる傾向がある。従って、肉体的な運動遂行能力を向上させるための補助剤、機能性食品、食品組成物等の研究が長期間持続されており、実際にステロイド、カフェイン等の化合物を服用することにより、運動能力が増加するものとして知られている。しかし、このような薬物は致命的な副作用を引起こすこともあり得るのでその使用は極めて制限される。
【０００４】
骨格筋繊維は一般的に、第１型（Oxidative/slow）と第２型（Glycolytic/fast）繊維に分類され、筋繊維は形態によって収縮、代謝、疲労敏感性（susceptibility  to  fatigue）において顕著な差を示す。第１型繊維はミトコンドリアが多く、主にエネルギー生成のための酸化的代謝（Oxidative  metabolism）を使用するので、長時間安定的にATP供給をすることができて疲労に耐えられる。従って、第１型繊維が多い骨格筋は筋肉消耗が起こらない（Muscle  Nerve  2005,31,p339-348）。第２型繊維はミトコンドリア酸化酵素が少なく、主要なエネルギー資源としてグリコーリチック代謝（glycolytic  metabolism）に依存して容易に疲労するようになる。
【０００５】
PPARδ（パーオキシソム増殖子活性化受容体δ（Peroxisome  Proliferator  Activated  Receptorδ））は骨格筋、特に第１型繊維に主に多く存在し（PARαの10倍、  PPARγの50倍）、長鎖脂肪酸のベータ酸化と関連した酵素等を活性化して脂肪細胞内の脂肪を燃焼させる主要転写調節因子であり（Cell  2003,113,p159-170）、第１型繊維形成を促進させる第１の転写因子である。このようなPPARδは活性時ミトコンドリアの生合成を調節し、運動能力を増進させ、肥満に対する抵抗性を増進させる複雑な経路に関与しているものと知られている（PLOS  Biology  2004,2,p1532-1539）。従って、運動を通じて適応的に作られた第１型繊維は疲労に強いものとして知られている。しかし、運動を通じずに筋肉内で人為的にPPARδを過多発現させても同一な効果を有することが報告された。マウスの筋肉に人為的にPPARδを過多発現させた結果、ミトコンドリア生合成が増加し、さらに脂肪酸ベータ酸化酵素の発現及び第１型筋繊維が増加して一般ねずみに比べて持続的に走れる時間と距離がそれぞれ67%,92%増加した（PLOS  Biology  2004,2,p1532-1539）。従って、PPARδが活性化されると筋肉繊維の形態が変化されて、これにより運動遂行能力も向上される結果をもたらし得るものである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ここに、本発明者等は筋肉内PPARδの活性を増加させ、安定性が優れた天然物を探索する研究を行い、ショウガ科（Zingiberaceae  family）植物であるボエセンベルギアパンドウラター（Boesenbergia  pandurata）の抽出物、及びこれより分離されたパンドラチン誘導体が筋肉内PPARδ蛋白質の発現を増加させ、筋肉増強及び疲労回復を促進させて、運動遂行能力を向上させることを確認し、本発明を完成した。
【０００７】
本発明の目的はパンドラチン誘導体又はこれの塩を有効成分として含む運動遂行能力向上用組成物を提供することである。
【０００８】
本発明の他の目的はボエセンベルギアパンドラター抽出物を有効成分として含む運動遂行能力向上用組成物を提供することである。
【０００９】
本発明のさらに他の目的はパンドラチン誘導体又はこれの塩を有効成分として含む筋肉増加促進用組成物を提供することである。
【００１０】
本発明のさらに他の目的はボエセンベルギアパンドラタ抽出物を有効成分として含む筋肉増加促進用組成物を提供することである。
【００１１】
本発明のさらに他の目的はパンドラチン誘導体又はこれの塩を有効成分として含む抗疲労用組成物を提供することである。
【００１２】
本発明のさらに他の目的はボエセンベルギアパンドラター抽出物を有効成分として含む抗疲労用組成物を提供することである。
【００１３】
本発明のさらに他の目的はパンドラチン誘導体又はこれの塩を必要とする個体に有効量を投与することを特徴とする運動遂行能力向上方法を提供することである。
【００１４】
本発明のさらに他の目的は運動遂行能力向上用製剤の製造のためのパンドラチン誘導体又はこれの塩の用途を提供することである。
【００１５】
本発明のさらに他の目的はボエセンベルギアパンドラター抽出物をこれを必要とする個体に有効量を投与することを特徴とする運動遂行能力向上方法を提供することである。    本発明のさらに他の目的は運動遂行能力向上用製剤の製造のためのボエセンベルギアパンドラター抽出物の用途を提供することである。
【００１６】
本発明のさらに他の目的はパンドラチン誘導体又はこれの塩を必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする筋肉増加促進方法を提供することである。
【００１７】
本発明のさらに他の目的は筋肉増加促進用製剤の製造のためのパンドラチン誘導体又はこれの塩の用途を提供することである。
【００１８】
本発明のさらに他の目的はボエセンベルギアパンドラター抽出物を必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする筋肉増加促進方法を提供することである。
【００１９】
本発明のさらに他の目的は筋肉増加促進用製剤の製造のためのボエセンベルギアパンドラター抽出物の用途を提供することである。
【００２０】
本発明のさらに他の目的はパンドラチン誘導体又はこれの塩を必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする抗疲労方法を提供することである。
【００２１】
本発明のさらに他の目的は抗疲労用製剤の製造のためのパンドラチン誘導体又はこれの塩の用途を提供することである。
【００２２】
本発明のさらに他の目的はボエセンベルギアパンドラター抽出物を必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする抗疲労方法を提供することである。
【００２３】
本発明のさらに他の目的は抗疲労用製剤の製造のためのボエセンベルギアパンドラター抽出物の用途を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
前記のような目的を達成するために、本発明はパンドラチン誘導体又はこれの塩を有効成分として含む運動遂行能力向上用組成物を提供する。
【００２５】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明はボエセンベルギアパンドラター抽出物を有効成分として含む運動遂行能力向上用組成物を提供する。
【００２６】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明のはパンドラチン誘導体又はこれの塩を有効成分として含む筋肉増加促進用組成物を提供する。
【００２７】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明はボエセンベルギアパンドラター抽出物を有効成分として含む筋肉増加促進用組成物を提供する。
【００２８】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明はパンドラチン誘導体又はこれの塩を有効成分として含む抗疲労用組成物を提供する。
【００２９】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明はボエセンベルギアパンドラター抽出物を有効成分として含む抗疲労用組成物を提供する。
【００３０】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明はパンドラチン誘導体又はこれの塩を必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする運動遂行能力向上方法を提供する。
【００３１】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明は運動遂行能力向上用製剤の製造のためのパンドラチン誘導体又はこれの塩の用途を提供する。
【００３２】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明はボエセンベルギアパンドラター抽出物を、これを必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする運動遂行能力向上方法を提供する。
【００３３】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明は運動遂行能力向上用製剤の製造のためのボエセンベルギアパンドラター抽出物の用途を提供する。
【００３４】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明はパンドラチン誘導体又はこれの塩を必要ようとする個体に、有効量で投与することを特徴とする筋肉増加促進方法を提供する。
【００３５】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明は筋肉増加促進用製剤の製造のためのパンドラチン誘導体又はこれの塩の用途を提供する。
【００３６】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明はボエセンベルギアパンドラター抽出物をこれを必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする筋肉増加促進方法を提供する。
【００３７】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明は筋肉増加促進用製剤の製造のためのボエセンベルギアパンドラター抽出物の用途を提供する。
【００３８】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明はパンドラチン誘導体又はこれの塩を必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする抗疲労方法を提供する。
【００３９】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明は抗疲労用製剤の製造のためのパンドラチン誘導体又はこれの塩の用途を提供する。
【００４０】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明はボエセンベルギアパンドラター抽出物を、これを必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする抗疲労方法を提供する。
【００４１】
本発明のさらに他の目的を達成するために、本発明は抗疲労用製剤の製造のためのボエセンベルギアパンドラター抽出物の用途を提供する。
【００４２】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００４３】
本発明の組成物はパンドラチン誘導体又はこれの塩を有効成分として含み、これは筋肉細胞のPPARδ発現を増加させ、筋肉量を増加させて疲労を回復させることにより、運動遂行能力を向上させる効果がある。
【００４４】
パンドラチン誘導体は、下記化学式１で表示されるパンドラチンＡ（panduratinＡ）、化学式２で表示される４ーヒドロキシパンドラチンＡ（4-hydroxypapanduratinＡ）及び化学式３で表示されるイソパンドラチンＡ（isopanduratinＡ）を含む物質である。パンドラチンＡは（2,6ジヒドロキシ-4-メトキシフェニル）［3-メチル2-（3-メチルブト-2-エニル）-5-フェニルシクロヘキス-3-エニル］メタノンであり、分子式はＣ26Ｈ30Ｏ4である。4-ヒドロキシパンドラチンＡは（2,4,6-トリヒドロキシフェニル［3-メチル-2-（3-メチルブト-2-エニル）-6-フェニルシクロヘキス-3-エニル］メタノンであり、分子式はＣ25Ｈ28Ｏ4である。イソパンドラチンＡは（2-メトキシ-4,6-ジヒドロキシフェニル）-［3-メチル-2-（3-メチルブト-2-エニル）-6-フェニルシクロヘキス-3-エニル］メタノンであり、分子式はＣ26Ｈ30Ｏ4である。
【００４５】
前記パンドラチン誘導体は一般的に、購買可能な物質であるか又は、公知の合成方法を利用して製造することができ、ボエセンベルギアパンドラター抽出物又はボエセンベルギアパンドラター植物を圧搾して得たオイルから分離、精製して収得することができる。
【化１】
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【化２】
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【化３】
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【００４６】
本発明の組成物に含まれるパンドラチン誘導体は乾燥させたボエセンベルギアパンドラター根茎を食品加工に適合した精製水、エタノール及び亜臨界数又は超臨界数二酸化炭素を利用して抽出、精製して得られるか、又はボエセンベルキアパンドラター植物を直接圧搾して得たオイルから分離精製して得ることができる。本発明の組成物に含まれるパンドラチン又はこれの塩、又はボエセンベルギアパンドラター抽出物を収得するために、抽出物溶媒として前記抽出溶媒以外にメタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、アセトン、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、エチルアセテート、メチレンクロライド、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の各種溶媒を単独で、又は混合して使用できる。
【００４７】
ボエセンベルキアパンドラター抽出物からのパンドラチン誘導体の分離及び精製では、シリカゲル（silica  gel）や活性アルミナ（alumina）等の各種合成樹脂を充填したカラムクロマトグラフィー及び高性能液体クロマトグラフィー（HPLC）等を単独で、又は併行して使用できるが、パンドラチン誘導体の抽出及び分離精製方法が必ずしも前記方法に限定されるものではない。
【００４８】
本発明の組成物は運動遂行能力向上効果を有することを特徴とする。“運動遂行能力”とは、運動選手らの競技力及び記録向上と密接に関係して、心肺機能改善、エネルギー代謝促進、疲労回復及び筋力増加を通じてこれを向上させることができる。つまり、長期的にトレーニングの際、累積される疲労を速やかに回復させ、運動の際の持久力を増加させる方法を通じて運動遂行能力が向上するようになる。本発明の組成物は骨格筋繊維の内、第１型繊維に多量に含有されたPPARδの発現を増加させる機能をする。PPARδは前記の通り、第１型繊維の転写を促進させる因子であって、第１型繊維が多い筋肉では脂肪をエネルギー源とすることから、乳酸生成がなされないので筋肉内疲労が累積せず、結果的に運動遂行能力が向上するのである。
【００４９】
さらに、本発明はボエセンベルギアパンドラター抽出物を有効成分として含む組成物に関するものである。ボエセンベルギアパンドラターは、ショウガ科（Zingiberaceae  family）植物の一種にして、ケンフェリアパンドラター（Kaempferia  pandurata）とも称す。ボエセンベルギアパンドラター抽出物は、ピノセンブリンケルコン（pinocembrin  chalcone）、カルダモニン（cardamonin）、ピノセンブリン（pinocembrin）、ピノストリビン（pinostribin）、４ヒドロキチパンドラチンＡ（４−hydroxypanduratinＡ）、パンドラチンＡ（panduratinＡ）及びイソパンドラチンＡ（isopanduratinＡ）等の成分を含む。前記成分等は抗癌効果（Trakoontivakorn,G.,等、J.Arig.Food  Chem.,49,30463050,2001;Yun,J.M.,等，Carcinogenesis,27（7）,14541464,2006）、抗炎症効果（Yun,J.M.,等、Planta  Medica,69,11021108,2003）、抗皮膚老化作用（Shim,J.S.,等，Planta  Medica,74,239244,2008）又は抗菌効果（Hwang,J.K.,等Int.J.Antimicrob.Agents,23,377381,2004;Park,K.M.,等、Food  Sci.Biotechnol.,14（2）,286289,2005）を有するものとして報告されたが、本発明の以前には、筋肉増強及び疲労回復を促進して運動能力を増進させる効果について知られていなかった。
【００５０】
本発明の一実施例ではボエセンベルギアパンドラター抽出物から、パンドラチンＡを抽出、分離した（実施例１乃至２参照）。
【００５１】
本発明の他の実施例では分離されたそれぞれのパンドラチン及びボエセンベルギアパンドラター抽出物を、高脂肪食餌により肥満が誘導されたマウスに摂取させた結果、筋肉細胞のPPARδの発現量、筋肉量及び運動性が増進されたことを確認することができた。
（実施例３乃至５参照）。
【００５２】
本発明のパンドラチン誘導体はそれ自体、又は薬学的に許容可能な塩の形態で使用できる。前記において“薬学的に許容可能な”とは、生理学的に許容されてヒトに投与された時、一般的にアレルギー反応又はこれと類似した反応を起こさないことを意味し、前記塩としては薬学的に許容可能な遊離酸（free  acid）により形成された酸付加塩が好ましい。前記遊離酸としては有機酸と無機酸を使用できる。前記有機酸はこれに制限はされないが、クエン酸、酢酸、乳酸、酒石酸、マレイン酸、フマル酸、ホルム酸、プロピオン酸、蓚酸、トリフルオロアセト酸、ベンゾ酸、グルコン酸、メタスルホン酸、グリコール酸、コハク酸、４−トルエンスルホン酸、グルタミン酸及びアスパラギン酸を含む。さらに、前記無機酸はこれに制限はされないが、塩酸、臭素酸、硫酸及びリン酸を含む。
【００５３】
本発明の組成物は筋肉増加促進効果を有することを特徴とする。“筋肉増加”は身体成分の中でも特に筋肉の性能を向上させるものであって、肉体的運動及び持久力向上を通じて筋肉量を増加することができ、筋肉増加効果を有する物質を体内に投与する方式で筋肉量を増加させることができる。筋肉はその種類に制限はされないが、本発明の組成物は特に第１型骨格筋繊維の増加を促進させる効果を有する。
【００５４】
本発明の組成物は抗疲労効果を有することを特徴とする。“疲労”は精神的疲労と肉体的疲労にわけられるが、本発明で“疲労”は運動遂行後筋肉に累積される肉体的疲労を意味し、筋肉内グリコーゲン濃度、乳酸ジヒドロゲナーゼ活性及びクエン酸合成酵素活性によって誘発されるものである。本発明の組成物は酸化的代謝をしてＡＴＰを十分に合成できる第１型骨格筋繊維の転写を促進するPPARδの発現を増加させ、筋肉に疲労が累積するのを減少させる効果を有する。
【００５５】
本発明の組成物は薬学的組成物又は食品組成物の形態で提供できる。本発明の薬学的組成物は薬学的に有効な量のパンドラチン誘導体又はボエセンベルギアパンドラター抽出物を単独で含むか、又は一つ以上の薬学的に許容される担体を含むことができる。本発明の薬学的組成物にはパンドラチン誘導体又はボエセンベルギアパンドラター抽出物を0.01乃至99.99%含むことができ、残量は薬学的に許容可能な担体が占めることができる。
【００５６】
本発明に伴うパンドラチン誘導体又はボエセンベルギアパンドラター抽出物の薬学的に有効な量は0.001乃至300mg/day/体重kg、好ましくは0.01乃至200mg/day/体重kgである。しかし、前記薬学的に有効な量は疾患及びこれの重症程度、患者の年齢、体重、健康状態、性別、投与経路及び治療期間等のような多様な因子により適切に変化できる。
【００５７】
前記において“薬学的に許容される”とは、生理学的に許容されてヒトに投与する時、活性成分の作用を阻害せず、一般的に胃腸障害、眩気症のようなアレルギー反応又はこれと類似した反応を起こさない非毒性組成物を意味する。前記担体には全ての種類の溶媒、分散媒質、水中油又は油中水エマルジョン、水性組成物、リポソム、マイクロビード及びマイクロソムが含まれる。
【００５８】
一方、本発明に伴う薬学的組成物は投与経路によって適合した担体とともに、剤形化されることもある。前記本発明に伴う薬学的組成物の投与経路はこれに限定はされないが、経口的又は非経口的に投与できる。非経口的投与経路には、例えば、経皮、鼻腔、腹腔、筋肉、皮下又は静脈等の多くの経路が含まれる。
【００５９】
本発明の薬学的組成物を経口投与する場合、本発明の薬学的組成物は、適合した経口投与用担体とともに、当業界に公知の方法により、粉末、顆粒、錠剤、丸剤、糖衣錠剤、カプセル剤、液剤、シロップ剤、懸濁液、ウエハー等の形態で剤形化することもできる。適合した担体の例には、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール及びマルチトール等を含む糖類とトウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉、及び馬鈴薯澱粉等を含む澱粉類、セルロース、メチルセルロース、ナトリウム、カルボキシメチルセルロース及びヒドロキシプロフィールメチルセルロース等を含むセルロース類、ゼラチン、ポリビニルピロリドン等のような充填剤が含まれることもある。さらに、場合によっては、架橋結合ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸又はナトリウムアルキネート等を崩解剤として添加できる。さらには、前記薬学的組成物は抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤及び防腐剤等を追加して含まれ得る。
【００６０】
さらに、非経口的に投与する場合、本発明の薬学的組成物は、適合した非経口用担体とともに、注射剤、経皮投与剤及び鼻腔吸い込み剤の形態で当業界に公知の方法により剤形化することができる。前記注射剤の場合には必ず滅菌しなければならず、バクテリア及び眞菌のような微生物の汚染から保護されなければならない。注射剤の場合、適合した担体の例はこれに限定はされないが、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコール等）、これらの混合物及び／又は植物油を含む溶媒又は分散媒質でもあり得る。より好ましくは、適合した担体としては、ヘンクス溶液、リンゲル溶液、トリエタノールアミンが含有されたＰＢＳ（phosphate  buffered  saline）又は注射用滅菌水、10%エタノール、40%プロピレングリコール及び5%デキストロースのような等張溶液等を使用することができる。
【００６１】
前記注射剤を微生物の汚染から保護するためには、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等のような多様な抗菌剤及び抗眞菌剤を追加して含むことができる。さらに、前記注射剤は大部分の場合、糖又はナトリウムクロライドのような等張化剤を追加して含め得る。
【００６２】
経皮投与剤の場合、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、外用液剤、パスター剤、リニメント剤、エアロー剤等の形態が含まれる。前記で“経皮投与”とは、薬学的組成物を局所的に皮膚に投与して薬学的組成物に含有された有効な量の活性成分が皮膚内に伝達されることを意味する。これらの剤形は製薬化学に一般的に広く知られた処方箋の文献（Remington's  Phamaceutical  Science,15th  Edition  ,1975,Mack  Publishing  Company  Easton,Pennsylvania）に記述されている。
【００６３】
吸込み投与剤の場合、本発明によって使用される化合物は、適合した推進剤、例えば、ジクロロフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロメタン、二酸化炭素、又は他の適合した気体を使用して加圧パック又は煙霧器からエアロゾルスプレー形態で便利に伝達することができる。加圧エアロゾルの場合、投薬単位は計量された量を伝達する弁を提供して決めることができる。例えば、吸込み器又は取込み器に使用されるゼラチンカプセル及びカートリッジは化合物、及びラクトース又は澱粉のような適合した粉末基剤の粉末混合物を含有するように剤形化することができる。
【００６４】
その他の薬学的に許容される担体には、下記の文献に記載されていることを参考にすることができる（Remington's  Phamaceutical  Science,19th  ed.,Mack  Publishing  Company  Easton,PA,1995）。
【００６５】
さらに、本発明に伴う薬学的組成物は、一つ以上の緩衝剤（例えば、食塩又はＰＢＳ）、カーボハイドレート（例えば、グルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン）、抗酸化剤、静菌剤、キレート化剤（例えば、EDTA又はグルタチオン）、アジュバント（例えば、アルミニウムヒドロキサイド）、懸濁剤、濃厚剤及び／又は保存剤を追加して含むことができる。
【００６６】
さらには、本発明に伴うパンドラチン誘導体又はボエセンベルギアパンドラター抽出物は、筋肉増強及び疲労回復を促進して運動遂行能力を増進させる食品組成物の形態で提供できる。本発明の食品組成物は機能性食品（functional  food）、栄養補助剤（nutritional  supplement）、健康食品（health  food）、食品添加剤（food  additives）及び飼料等の形態を含み、ヒト又は家畜を含めた動物を摂取対象とする。前記類型の食品組成物は当業界に公知の一般的な方法により多様な形態で製造できる。
【００６７】
例えば、健康食品として、本発明のパンドラチン誘導体又はボエセンベルギアパンドラター抽出物そのものを、お茶、ジュース及びドリンクの形態で製造して飲用に供するか、又は顆粒化、カプセル化及び粉末化して摂取することができる。本発明のパンドラチン又はボエセンベルギアパンドラター抽出物を、筋肉増強及び疲労回復を促進して運動能力を増進させる効果があるとして知られた活性成分とともに混合して組成物の形態で製造することができる。
【００６８】
さらに、機能性食品は、飲料（アルコール性飲料を含む）、果実及びその加工食品（例：果物缶詰、瓶詰、ジャム、マーマレード等）、魚類、肉類及びその加工食品）（例：ハム、ソーセージ、コーンビーフ等）、パン類及び麺類（例：うどん、そば、ラーメン、スパゲッティ、マカロニ等）、果汁、各種ドリンク、クッキー、飴、乳製品（例：バター、チーズ等）、食用植物油脂、マーガリン、植物性蛋白質、レトルト食品、冷凍食品、各種調味料（例：味噌、醤油、ソース等）等に、本発明のパンドラチン誘導体又はボエセンベルギアパンドラター抽出物を添加して製造することができる。
【００６９】
さらに、本発明のパンドラチン誘導体又はボエセンベルギアパンドラター抽出物を食品添加剤の形態で使用するには、粉末又は濃縮液形態に製造して使用することができる。    本発明の食品組成物の内、本発明のパンドラチン誘導体又はボエセンベルギアパンドラター抽出物の好ましい含有量として、食品全体の重量に対して約0.01乃至100重量％を含むことができる。
【００７０】
一方、本発明のパンドラチン誘導体又はこれの塩を必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする運動遂行能力向上方法を提供する。同時に、本発明は運動遂行能力向上用製剤の製造のためのパンドラチン誘導体又はこれの塩の用途を提供する。
【００７１】
一方、本発明はボエセンベルギアパンドラター抽出物をこれを必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする運動遂行能力向上方法を提供する。同時に、本発明は運動遂行能力向上用製剤を製造するための、ボエセンベルギアパンドラター抽出物の用途を提供する。
【００７２】
一方、本発明はパンドラチン誘導体又はこれの塩を必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする筋肉増加促進方法を提供する。同時に本発明は筋肉増加促進用製剤の製造のためのパンドラチン誘導体、又はこれの塩の用途を提供する。
【００７３】
一方、本発明はボエセンベルギアパンドラター抽出物を、これを必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする筋肉増加促進方法を提供する。同時に本発明は筋肉増加促進用製剤の製造のためのボエセンベルギアパンドラター抽出物の用途を提供する。
【００７４】
一方、本発明はパンドラチン誘導体又はこれの塩を必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする抗疲労方法を提供する。また、本発明は抗疲労用製剤の製造のためのパンドラチン誘導体又はこれの塩の用途を提供する。
【００７５】
一方、本発明はボエセンベルギアパンドラター抽出物をこれを必要とする個体に有効量で投与することを特徴とする抗疲労方法を提供する。また、本発明は抗疲労用製剤の製造のためのボエセンベルギアパンドラター抽出物の用途を提供する。
【００７６】
本発明で“有効量”とは、本発明でのパンドラチン誘導体又はこれの塩又はボエセンベルギアパンドラター抽出物が投与対象である個体内で有効な効果、つまり、運動遂行能力向上又は筋肉増加促進又は抗疲労効果を示す量を意味し、前記“個体”とは、哺乳動物、特にヒトを含む動物を意味する。前記個体は運動遂行能力向上が必要な、又は筋肉増加が必要な又は疲労抑制が必要な個体でもある。
【発明の効果】
【００７７】
従って、本発明はパンドラチン誘導体又はこれの塩又はボエセンベルギアパンドラター抽出物を含む筋肉増加促進、抗疲労及び運動遂行能力向上用組成物（又は方法、用途）を提供する。本発明のパンドラチン誘導体又はボエセンベルギアパンドラター抽出物は、副作用なく安全に使用することができ、筋肉内PPARδの発現を増加させ、筋肉量増加、疲労回復及び運動性増加等の運動遂行能力向上に優れた効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】図１は、高脂肪食餌対照群、ボエセンベルギアパンドラター抽出物100mg/kg/day（KPE  100）、ボエセンベルギアパンドラター抽出物200mg/kg/day（KPE  200）、パンドラチンＡ投与群（PAN  50）のPPARδ蛋白質の発現量を測定した結果である。
【図２】図２は、高脂肪食餌対照群、ボエセンベルギアパンドラター抽出物100mg/kg/day（KPE  100）、ボエセンベルギアパンドラター抽出物200mg/kg/day（KPE  200）、パンドラチンＡ投与群（PAN  50）の筋肉量増加効果を測定した結果である。
【図３】図３は、高脂肪食餌対照群、ボエセンベルギアパンドラター抽出物100mg/kg/day（KPE  100）、ボエセンベルギアパンドラター抽出物200mg/kg/day（KPE  200）、パンドラチンＡ投与群（PAN  50）の気力が尽きた時間を比較したもので、運動性増進効果を測定した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００７９】
以下、本発明を実施例により詳細に説明する
ただし、下記実施例は本発明を例示するのみであり、本発明の内容は下記実施例に限定されるものではない。
【００８０】
<実施例１>
パンドラチンを含むボエセンベルギアパンドラター抽出物の製造
乾燥させたボエセンベルギアパンドラター抽出物をミキサーで粉砕して、粉砕したボエセンベルギアパンドラター試料100gをエタノール500mlに入れて、50℃で30分間撹拌しながら抽出した。抽出された試料はワットマン（Whatman）２番ろ過紙でろ過して、ろ過された抽出液を真空回転濃縮機で濃縮して溶媒成分を除去した後、凍結乾燥して物性分を除去することにより、ボエセンベルギアパンドラター抽出物を得た。
【００８１】
<実施例２>
パンドラチンＡの分離及び構造決定
<２−1>パンドラチンＡの分離
前記実施例１で得た濃縮されたボエセンベルギアパンドラター抽出物と、エチルアセテートを混合してエチルアセテート溶解性成分を抽出し、エチルアセテートを減圧下で除去してエチルアセテート溶解性成分を濃縮した。その後、シリカゲルを615cmに充填したカラムに前記濃縮された成分を積載して、ヘキサン、クロロホルム、エチルアセテートを15:5:1.5（v/v/v）の比率で混合した溶媒システムを利用して分取した。前記分取順に従い合計６個の分画に分けて、それぞれの分画を濃縮乾燥した。６個の分画の内、３番分画（分画３）をヘキサン、エチルアセテート、メタノールをそれぞれ18:2:1（v/v/v）の展開溶媒に用いて、薄層クロマトグラフィー（TLC,silica  gel  60F154,Merck）を行い、分取した順に従って、合計３個の分画に分けて濃縮乾燥した。最終的に前記３個の分画の内、２番分画（分画32）を利用して、リサイクリング高性能液体クロマトグラフィー（recycling  HPLC,W252,20.0  mm  ID500mm  L）を行い、分取順に従って、合計２個の分画に分けて、それぞれの分画を濃縮乾燥した。最終的に前記２個の分画の内、２番分画（分画322）を濃縮乾燥させて、純粋な単一活性物質を分離した。
【００８２】
<２−２>パンドラチンＡの構造決定
前記実施例２−１で分離された単一活性物質の構造決定のために、1H-NMRスペクトルと13C-NMRスペクトルをそれぞれ500MHZと125MHZ（溶媒：CDC13）で測定した。収得された13C-NMRスペクトルと1H-NMRスペクトルの結果を基に、1H-1Hの相関関係と、1H-13Cの相関関係を測定するために、1H-1HCOSYスペクトルと1H-13CHSQCスペクトルを測定し、炭素共鳴を通じて出てくる波長でそれぞれの炭素信号を区別してその結果を測定した。
さらに、前記分離された単一物質の質量分析のため、EI/MSを測定した。本化合物はEI/MSで［Ｍ+Ｈ+］がm/z407で観測されて分子量が406と判明し、分子式はＣ26Ｈ30Ｏ4  であった。
【００８３】
以上の1H-NMR、13C-NMR、1H-1HCOSY、1H-13CHSQC及びEI/MSに対する結果と既に発表された研究報告（Woo,W.S.et  al.,Phytochemistry,26:15/121543,1987）を比較分析して同定した結果、前記実施例２−１で分離された単一物質は（2,6ジヒドロキシ-4-メトキシフェニル）［3-メチル2（3-メチルブト-2-エニル）-5-フェニルシクロヘキス-3-エニル］メタノーンであって、下記化学式１で表示されるパンドラチンＡ化合物と確認された。
【化４】
0005905874.tif 000005
【００８４】
<実施例３>
ボエセンベルギアパンドラター抽出物とパンドラチンＡのPPAR蛋白質発現効果
３週令のＣ57BL/6マウスを１週間適応させて肥満を誘導するために、高脂肪食餌（Product#D12492,Research  Diet  Inc.,New  Brunswick,NJ,USA）を７週間供給して肥満を誘導した後、体重を基に無作為的にグループ配置して、それぞれ８匹ずつ合計３グループに分けて実験に利用した。実験群には、パンドラチンＡ及びボエセンベルギアパンドラター抽出物を0.25%カルボキシメチルセルロースに懸濁し、パンドラチンＡを50mg/kg体重（PAN50）、ボエセンベルギアパンドラター抽出物を100mg/kg体重（KPE100）と200mg/kg（KPE200）体重の２種の濃度で、１日１回ずつ８週間一定した時間に投与した。この際、対照群には実験群が摂取する同一量の0.25%カルボキシメチルセルロースに高脂肪食餌を投与したグループを使用した。８週間飼料を投与した後、12時間以上絶食させ、腹部を切開して筋肉組織を摘出して実験前まで−70℃で保管した。各グループのマウスから分離した100mgの筋肉を溶解バッファ（lysis  beffer）を利用して均質化し、PPARδ抗体を利用したウェスタンブロット実験を利用して検出した。
【００８５】
その結果、図１に示した通り、対照群と比べてパンドラチンＡ及びボエセンベルギアパンドラター抽出物を投与したグループで、PPARδの発現量が増加した。PPARδは第１型骨格筋繊維の転写因子として作用するものであるので、PPARδの発現量が増加すれば第１型骨格筋繊維の量が増加することが予測される。さらに、KPE200投与群においてKPE100投与群に比べてPPARδの発現量が高く表われ、ボエセンベルギアパンドラター抽出物のPPARδ発現量調節メカニズムは濃度依存的であることが分かった。
【００８６】
<実施例４>
パンドラチンの筋肉量増加効果
３週令のＣ57BL/6マウスを１週間適応させて肥満を誘導するために、高脂肪食餌（Product#D12492,Research  Diet  Inc.,New  Brunswick,NJ,USA）を７週間供給して肥満を誘導した後、体重を基に無作為的にグループ配置して、それぞれ８匹ずつ合計３グループに分けて実験に利用した。実験群には、パンドラチンＡ及びボエセンベルギアパンドラター抽出物を0.25%カルボキシメチルセルロースに懸濁し、パンドラチンＡを50mg/kg体重（PAN50）、ボエセンベルギアパンドラター抽出物を100mg/kg体重（KPE100）と200mg/kg（KPE200）体重の２種の濃度で、１日１回ずつ８週間一定した時間に投与した。この際、対照群には実験群が摂取する同一量の0.25%カルボキシメチルセルロースに高脂肪食餌を投与したグループを使用した。８週間飼料を投与した後、マイクロＣＴ（Micro  computed  tomography）を利用してマウスの総嵩及び組織別嵩を測定した。
【００８７】
その結果、図２に示した通り、対照群と比べてパンドラチンＡ及びボエセンベルギアパンドラター抽出物を投与したグループにおいて筋肉の嵩が増加した。ボエセンベルギアパンドラター抽出物を投与したグループは対照群に比べて２倍以上に筋肉量が増加したことを示したが、これは筋肉内にPPARδの発現の増加と関連したものと思われる。パンドラチンＡを投与したグループも1.88倍に筋肉量が増加した。
【００８８】
<実施例５>
トレッドミル（treadmill）実験
３週令のＣ57BL/6マウスを１週間適応させて肥満を誘導するために、高脂肪食餌を７週間供給して肥満を誘導した後、体重を基に無作為的にグループ配置して、それぞれ８匹ずつ合計３グループに分けて実験に利用した。実験群には、パンドラチンＡ及びボエセンベルギアパンドラター抽出物を0.25%カルボキシメチルセルロースに懸濁し、パンドラチンＡを50mg/kg体重（PAN50）、ボエセンベルギアパンドラター抽出物を100mg/kg体重（KPE  100）と200mg/kg（KPE200）体重の２種の濃度で、１日１回ずつ８週間一定した時間に投与した。この際、対照群には実験群が摂取する同一量の0.25%カルボキシメチルセルロースに高脂肪食餌を投与したグループを使用した。８週間飼料を投与した後、Exer-3Rトレッドミルを利用して、10%の傾きで11m/minの速度で運動能力を測定した。
【００８９】
電気刺激誘導に伴う運動時間を測定した結果、図３に示した通り、ボエセンベルギアパンドラター抽出物200mg/kg体重（KPE200）を投与したグループのマウスは高脂肪食餌の対照群に比べて4.38倍の運動性増進効果を示した。さらに、ボエセンベルギアパンドラター抽出物100mg/kg体重（KPE100）を投与したグループのマウスは2.92倍、パンドラチンＡ（PAN50）を投与したグループのマウスは2.77倍の運動性が増進され、運動性の増進程度がKPE200に比べて多少低めであることが分かる。これは筋肉内PPARδの発現量実験と類似した結果であって、ボエセンベルギアパンドラター抽出物の濃度に依存的に運動性が増加することを示している。
【産業上の利用可能性】
【００９０】
以上説明した通り、本発明はパンドラチン誘導体又はこれの塩、又はボエセンベルギアパンドラター抽出物を含む筋肉増加促進、抗疲労及び運動遂行能力向上用組成物を提供する。本発明のパンドラチン誘導体又はボエセンベルギアパンドラター抽出物は副作用無く、安全に使用することができ、筋肉内PPARδの発現を増加させ、筋肉量増加、疲労回復及び運動性増加等の運動遂行能力の向上に優れた効果を有する。
【図１】
0005905874.tif 000009
【図２】
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【図３】
0005905874.tif 000011