(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
コハク酸を２０ｍＭ含有する培養培地で１２時間培養したときに、プロピオン酸を１０ｍＭ以上産生するファスコラークトバクテリウム（Phascolarctobacterium）属細菌を含有することを特徴とする飲食品。
【請求項２】
ファスコラークトバクテリウム属細菌が、配列番号１または配列番号２に記載の１６ＳｒＤＮＡ配列と９７％以上の配列相同性を有するものである請求項１記載の飲食品。
【請求項３】
ファスコラークトバクテリウム属細菌が、ＦＥＲＭ  Ｐ−２２１９８のファスコラークトバクテリウム・エスピーＹＩＴ１２０６７またはＦＥＲＭ  Ｐ−２２１９９のファスコラークトバクテリウム・エスピーＹＩＴ１２０６８である請求項１または２記載の飲食品。
【請求項４】
コハク酸を２０ｍＭ含有する培養培地で１２時間培養したときに、プロピオン酸を１０ｍＭ以上産生するファスコラークトバクテリウム属細菌を、コハク酸を含有する培養培地で培養することを特徴とするプロピオン酸の製造方法。
【請求項５】
ファスコラークトバクテリウム属細菌が、配列番号１または配列番号２に記載の１６ＳｒＤＮＡ配列と９７％以上の配列相同性を有するものである請求項４記載のプロピオン酸の製造方法。
【請求項６】
ファスコラークトバクテリウム属細菌が、ＦＥＲＭ  Ｐ−２２１９８のファスコラークトバクテリウム・エスピーＹＩＴ１２０６７またはＦＥＲＭ  Ｐ−２２１９９のファスコラークトバクテリウム・エスピーＹＩＴ１２０６８である請求項４または５記載のプロピオン酸の製造方法。
【請求項７】
コハク酸を２０ｍＭ含有する培養培地で１２時間培養したときに、プロピオン酸を１０ｍＭ以上産生するファスコラークトバクテリウム属細菌と、コハク酸を産生する細菌とを、コハク酸を産生する細菌がコハク酸を産生し得る原料を含有する培養培地で培養することを特徴とするプロピオン酸の製造方法。
【請求項８】
ファスコラークトバクテリウム属細菌が、配列番号１または配列番号２に記載の１６ＳｒＤＮＡ配列と９７％以上の配列相同性を有するものである請求項７記載のプロピオン酸の製造方法。
【請求項９】
ファスコラークトバクテリウム属細菌が、ＦＥＲＭ  Ｐ−２２１９８のファスコラークトバクテリウム・エスピーＹＩＴ１２０６７またはＦＥＲＭ  Ｐ−２２１９９のファスコラークトバクテリウム・エスピーＹＩＴ１２０６８である請求項７または８記載のプロピオン酸の製造方法。
【請求項１０】
コハク酸を産生する細菌が、パラプレボテラ・キシラニフィラ（Paraprevotella xylaniphila）であり、コハク酸を産生する細菌がコハク酸を産生し得る原料がキシランである請求項７〜９の何れかに記載のプロピオン酸の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ファスコラークトバクテリウム属細菌を利用した新規用途に関し、更に詳細には、ファスコラークトバクテリウム属細菌を利用した飲食品、下痢予防・防止剤、脂質代謝改善剤、プロピオン酸産生促進剤、プロピオン酸の製造方法、下痢予防・防止方法、脂質代謝改善方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
本願出願人は、腸内フローラの構造・機能をより深く解析するために、また、新たなプロバイオティクスの可能性を探るため、未知の腸内フローラ構成菌を分離・同定・収集する研究を行ってきた。
【０００３】
そして、上記研究において、ヒトの糞便から抗生物質または胆汁酸または食塩を含有する培地を用いたスクリーニングにより、１７株の新菌種を分離したことを報告している（非特許文献１〜１０）。
【０００４】
これら分離した新菌種のうち、ファスコラークトバクテリウム（Phascolarctobacterium）属細菌の新菌種にコハク酸をプロピオン酸に変換する能力が、従来より知られているコアラの糞便由来のファスコラークトバクテリウム・ファエシウム（Phascolarctobacterium faecium）（非特許文献１１）よりも高いことがわかった。
【０００５】
しかしながら、このファスコラークトバクテリウム属細菌は、従来の乳酸菌やビフィズス菌等のように乳を発酵する能力や糖の資化性がないため、何の用途も見つかっていなかったのが実情であった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 58, 970-975 (2008).
【非特許文献２】Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 58, 2716-2720 (2008).
【非特許文献３】Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 59, 1793-1797 (2009).
【非特許文献４】Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 59, 1895-1900 (2009).
【非特許文献５】Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 60, 1296-1302 (2010).
【非特許文献６】Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 60, 1788-1793 (2010).
【非特許文献７】Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 60, 1864-1869 (2010).
【非特許文献８】Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 60, 2639-2646 (2010).
【非特許文献９】Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 61, 637-643 (2011).
【非特許文献１０】Int. J. Syst. Evol. Microbiol. in press. (Christensenella minuta gen. nov., sp. nov., isolated from human faeces that forms a distinct branch in the order Clostridiales, and proposal of Christensenellaceae fam. nov.)
【非特許文献１１】Syst. Appl. Microbiol. 16, 380-384(1993).
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、本発明はファスコラークトバクテリウム属細菌の新菌種の新規用途を見出し、技術を豊富化することを課題とした。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、上記課題を解決するために鋭意研究した結果、ファスコラークトバクテリウム属細菌の新菌種は、飲食品、下痢予防・防止剤、脂質代謝改善剤、プロピオン酸産生促進剤、プロピオン酸の製造方法、下痢予防・防止方法、脂質代謝改善方法に利用できることを見出し、本発明を完成させた。
【０００９】
すなわち、本発明は次の（１）〜（８）である。
（１）コハク酸を２０ｍＭ含有する培養培地で１２時間培養したときに、プロピオン酸を１０ｍＭ以上産生するファスコラークトバクテリウム属細菌を含有することを特徴とする飲食品。
（２）コハク酸を２０ｍＭ含有する培養培地で１２時間培養したときに、プロピオン酸を１０ｍＭ以上産生するファスコラークトバクテリウム属細菌を含有することを特徴とする下痢予防・防止剤。
（３）コハク酸を２０ｍＭ含有する培養培地で１２時間培養したときに、プロピオン酸を１０ｍＭ以上産生するファスコラークトバクテリウム属細菌を含有することを特徴とする脂質代謝改善剤。
（４）コハク酸を２０ｍＭ含有する培養培地で１２時間培養したときに、プロピオン酸を１０ｍＭ以上産生するファスコラークトバクテリウム属細菌を含有することを特徴とするプロピオン酸産生促進剤。
（５）コハク酸を２０ｍＭ含有する培養培地で１２時間培養したときに、プロピオン酸を１０ｍＭ以上産生するファスコラークトバクテリウム属細菌を、コハク酸を含有する培養培地で培養することを特徴とするプロピオン酸の製造方法。
（６）コハク酸を２０ｍＭ含有する培養培地で１２時間培養したときに、プロピオン酸を１０ｍＭ以上産生するファスコラークトバクテリウム属細菌と、コハク酸を産生する細菌とを、コハク酸を産生する細菌がコハク酸を産生し得る原料を含有する培養培地で培養することを特徴とするプロピオン酸の製造方法。
（７）コハク酸を２０ｍＭ含有する培養培地で１２時間培養したときに、プロピオン酸を１０ｍＭ以上産生するファスコラークトバクテリウム属細菌を、ヒトを除く哺乳動物に投与することを特徴とする下痢予防・防止方法。
（８）コハク酸を２０ｍＭ含有する培養培地で１２時間培養したときに、プロピオン酸を１０ｍＭ以上産生するファスコラークトバクテリウム属細菌を、ヒトを除く哺乳動物に投与することを特徴とする脂質代謝改善方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の飲食品は、これに含有されるファスコラークトバクテリウム属細菌が、コハク酸をプロピオン酸に変換する能力があるため、摂取後に腸内等でプロピオン酸が産生される。そのため、本発明の飲食品を摂取するとプロピオン酸が有する各種効果を得ることができる。
【００１１】
また、本発明の下痢予防・防止剤は、これに含有されるファスコラークトバクテリウム属細菌が、下痢の原因となるコハク酸をプロピオン酸に変換する能力があるため、下痢を予防・防止することができる。
【００１２】
更に、本発明の脂質代謝改善剤は、これに含有されるファスコラークトバクテリウム属細菌が、肝臓におけるコレステロールやトリグリセリドの合成を抑制するプロピオン酸を産生することから、脂質代謝を改善することができる。
【００１３】
また更に、本発明のプロピオン酸産生促進剤は、これに含有されるファスコラークトバクテリウム属細菌が、コハク酸をプロピオン酸に変換する能力があるため、プロピオン酸の産生が促進される。そのため、本発明のプロピオン酸産生促進剤はプロピオン酸が有する各種効果を得ることができる。
【００１４】
更にまた、本発明のプロピオン酸の製造方法は、これに利用するファスコラークトバクテリウム属細菌が従来より知られているファスコラークトバクテリウム属細菌よりもコハク酸をプロピオン酸に変換する能力が高いため、コハク酸からプロピオン酸を効率良く製造することができる。また、上記製造において、コハク酸に代えてコハク酸を産生する細菌と、コハク酸を産生する細菌がコハク酸を産生し得る原料を用いることにより、廉価な原料を用いてプロピオン酸を製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、本発明で用いられるファスコラークトバクテリウム属細菌（ＹＩＴ１２０６７およびＹＩＴ１２０６８）の近隣結合法による系統解析の結果である（系統樹にはブートストラップ値が５０％以上のものを記した。また、系統樹中、●を記入した分岐点は、最尤法および最大節約法でも同一の結果が得られたことを示している。括弧内の文字は系統解析に用いた配列のアクセッション番号である。）
【図２】図２は、本発明で用いられるファスコラークトバクテリウム属細菌（ＹＩＴ１２０６７およびＹＩＴ１２０６８）と、ファスコラークトバクテリウム・ファエシウムのコハク酸からプロピオン酸を産生する能力を比較した結果である。
【図３】図３は、本発明で用いられるファスコラークトバクテリウム属細菌（ＹＩＴ１２０６７およびＹＩＴ１２０６８）と、コハク酸を産生する細菌と、シラカバ由来のキシランを含有する培養培地で培養した際の培養培地中のコハク酸、酢酸、プロピオン酸の濃度を測定した結果である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明で用いられるファスコラークトバクテリウム（Phascolarctobacterium）属細菌（以下、「本発明細菌」ということもある）は、コハク酸を２０ｍＭ含有する培養培地で、培地中の初発菌数が２.５×１０４ｃｆｕ／ｍｌ、３７℃で１２時間培養したときにプロピオン酸を１０ｍＭ以上、好ましくは１５ｍＭ以上、より好ましくは１８ｍＭ〜３０ｍＭ産生するものである。また、本発明細菌の上記培養培地における培養開始から培養１０時間後までのプロピオン酸産生速度は０.４ｍＭ／ｈ以上、好ましくは０.６ｍＭ／ｈ以上、より好ましくは０.８〜２.０ｍＭ／ｈである。
【００１７】
なお、上記で用いる培養培地としては、嫌気性腸内細菌の培養において従来より用いられてきた液体培地であれば特に制限されないが、例えば、ＰＹ培地（Holdeman, L. V., Cato, E. P. and Moore, W. E. C., Anaerobe Laboratory 308 Manual 4th edn. (1977)）、変法ＧＡＭ培地（日水製薬株式会社）等が挙げられる。
【００１８】
また、この培養の際に、培養培地に接種される本発明細菌の菌数は１〜５×１０４ｃｆｕ／ｍｌである。更に、この培養は、嫌気条件下、好ましくは気相を窒素ガス、炭酸ガス、３種混合ガス（窒素（８８質量％（以下、単に「％」という））・水素（７％）・二酸化炭素（５％））の何れかで置換した嫌気条件下、３５〜３９℃で行う。
【００１９】
本発明細菌は、上記性質の他に、配列番号１または配列番号２に記載の１６ＳｒＤＮＡ配列と９７％以上、好ましくは９８.７％以上の配列相同性を有するものである。なお、本明細書において、配列相同性は、ＥｚＴａｘｏｎプログラム（http://147.47.212.35:8080/）で計算された値に基づくものである。
【００２０】
更に、本発明細菌は、以下の生化学性状を有するものである。
【００２１】
（１）表現型
分離源：ヒト糞便
形態：長く、節の多い桿状体
ＤＮＡ Ｇ＋Ｃ含量（ｍｏｌ％）：４６〜４８
主要細胞脂肪酸：Ｃ１４：０  ｄｉｍｅｔｈｙｌ  ａｃｅｔａｌおよびｓｕｍｍｅｄ
ｆｅａｔｕｒｅ  ４  （Ｃ１５：２および／またはＣ１５：１ω８ｃおよび／または
脂肪酸炭素鎖値１４.７６２の脂肪酸）
２０％胆汁での生育：生育しない
【００２２】
（２）資化性
グルコース、Ｄ−マンニトール、ラクトース、スクロース、マルトース、サリシン、Ｄ
−キシロース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−セロビオース、Ｄ−マンノース、グリセロール
、Ｄ−メレチトース、Ｄ−ラフィノース、Ｄ−ソルビトール、ラムノース、Ｄ−トレハ
ロース、エスクリン：全て−
※＋：資化性あり
−：資化性なし
【００２３】
（３）酵素活性
インドール産生、ウレアーゼ、プロテアーゼ、カタラーゼ、アルギニンジヒドロラーゼ
、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、６−フォスフォ−β−ガラクトシダ
ーゼ、α−グルコシダーゼ、β−グルコシダーゼ、α−アラビノシダーゼ、β−グルク
ロニダーゼ、Ｎ−アセチル−β−グルコサミニダーゼ、グルタミン酸デカルボキシラー
ゼ、α−フッコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、アラニンアリルアミダーゼ、ア
ルギニンアリルアミダーゼ、プロリンアリルアミダーゼ、ロイシルグリシンアリルアミ
ダーゼ、フェニルアラニンアリルアミダーゼ、ロイシンアリルアミダーゼ、ピログルタ
ミン酸アリルアミダーゼ、チロシンアリルアミダーゼ、グリシンアリルアミダーゼ、ヒ
スチジンアリルアミダーゼ、グルタミルグルタミン酸アリルアミダーゼ、セリンアリル
アミダーゼ、エステラーゼ（Ｃ４）、エステラーゼリパーゼ（Ｃ８）、リパーゼ（Ｃ１
４）、バリンアリルアミダーゼ、シスチンアリルアミダーゼ、トリプシン、α−キモト
リプシン、酸性フォスファターゼ、ナフトール−ＡＳ−ＢＩ−フォスフォヒドロラーゼ
、α−マンノシダーゼ、硝酸塩還元、オキシダーゼ：全て−
※＋：活性あり
−：活性なし
【００２４】
上記のような性質を有する本発明細菌は、例えば、以下の方法によって得ることができる。
【００２５】
健康成人の糞便を希釈し、バンコマイシン（２０μｇｍＬ−１）またはオキサシリン（４  μｇｍＬ−１）を添加した変法ＧＡＭ寒天培地に塗抹後、混合ガス（窒素（８８％）・水素（７％）・二酸化炭素（５％））を充満させたグローブボックス内にて５日間、３７℃で培養する。その後、増殖したコロニーを実体顕微鏡にて観察し、形態の異なるコロニーを釣菌し継代し、変法ＧＡＭ寒天培地にて嫌気培養を繰り返すことにより、本発明細菌を分離できる。
【００２６】
具体的に、上記性質を全て有する細菌としては、本発明者らがヒト糞便から上記方法で分離したファスコラークトバクテリウム・エスピーＹＩＴ１２０６７およびファスコラークトバクテリウム・エスピーＹＩＴ１２０６８が挙げられる。これらは独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センター（茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６）に２０１１年１１月１１日付で、それぞれ受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−２２１９８およびＦＥＲＭ Ｐ−２２１９９で寄託した。
【００２７】
これらファスコラークトバクテリウム・エスピーＹＩＴ１２０６７またはファスコラークトバクテリウム・エスピーＹＩＴ１２０６８は、ファスコラークトバクテリウム・ファエシウムと、１６ＳｒＤＮＡの配列相同性が９１.４％および９１.５％（両者間は９９.９％の配列相同性）であること、２０％胆汁中で生育しないこと、コハク酸からのプロピオン酸変換能が高いことから、これらの細菌は、従来公知のファスコラークトバクテリウム属の細菌と異なり、新菌種であると判断される。なお、ファスコラークトバクテリウム・エスピーＹＩＴ１２０６７の１６ＳｒＤＮＡ（配列番号１）はＤＤＢＪ（http://www.ddbj.nig.ac.jp/index-j.html）にＡＢ４９０８１１として登録され、ファスコラークトバクテリウム・エスピーＹＩＴ１２０６８の１６ＳｒＤＮＡ（配列番号２）はＤＤＢＪにＡＢ４９０８１２として登録されている。
【００２８】
本発明細菌は、これをそのまま生菌または死菌として、あるいは凍結乾燥体、培養上清等の培養物、菌体処理物等として各種飲食品に含有させることができるが、プロピオン酸変換能は細菌由来の酵素により発揮されると考えられるので、酵素の活性を失活させない状態で含有させることが好ましい。本発明細菌を含有させることのできる飲食品としては、例えば、果汁飲料、茶飲料、コーヒー飲料、野菜飲料、発酵乳飲料等の飲料、タブレット状、粉末状の食品、ハム、ソーセージ等の食肉加工食品、かまぼこ、ちくわ等の水産加工食品、パン、菓子、発酵乳等が挙げられる。これらの飲食品には、本発明細菌を、例えば、１×１０２〜１４ｃｆｕ／ｍｌ（ｇ）、好ましくは１×１０４〜１２ｃｆｕ／ｍｌ（ｇ）で含有させればよい。
【００２９】
これら飲食品は、これに含有されるファスコラークトバクテリウム属細菌が、コハク酸をプロピオン酸に変換する能力があるため、摂取後に腸内等でプロピオン酸が産生される。そのため、本発明の飲食品はプロピオン酸が有する各種効果を得ることができる。
【００３０】
また、本発明細菌は、下痢の原因となるコハク酸をプロピオン酸に変換する能力を有するため、これを有効成分すれば下痢予防・防止剤とすることができる。なお、下痢とコハク酸の関連は文献（腸内細菌学雑誌１９：１６６９−１７７，２００５、J. Gen. Appl. Microbiol., 48, 143-154(2002)）で報告されている。
【００３１】
更に、本発明細菌は、肝臓におけるコレステロールやトリグリセリドの合成を抑制するプロピオン酸を産生することから、これを有効成分とすれば脂質代謝改善剤とすることができる。なお、脂質代謝とプロピオン酸との関連は文献（Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1990 Oct;195(1):26-9.）で報告されている。
【００３２】
また更に、本発明細菌は、コハク酸をプロピオン酸に変換する能力があるため、プロピオン酸の産生が促進されることから、これを有効成分とすればプロピオン酸産生促進剤とすることができる。
【００３３】
上記した、本発明細菌を有効成分とする下痢予防・防止剤、脂質代謝改善剤またはプロピオン酸産生促進剤は、飲食品の形態とすることができ、また、本発明細菌と、固体または液体の公知の医薬用無毒性担体等と混合等して公知の医薬品製剤の形態にすることもできる。上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、澱粉、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングルコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水等が挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤、賦形剤等の慣用の添加剤を適宜添加することもできる。また、本発明の下痢予防・防止剤、脂質代謝改善剤またはプロピオン酸産生促進剤には、本発明細菌を、例えば、１×１０２〜１４ｃｆｕ／ｍｌ（ｇ）、好ましくは１×１０４〜１２ｃｆｕ／ｍｌ（ｇ）で含有させればよい。
【００３４】
これら本発明細菌を有効成分とする下痢予防・防止剤、脂質代謝改善剤またはプロピオン酸産生促進剤は、ヒトに投与することができ、その投与間隔および投与期間は特に制限されるものではないが、１日〜２日間隔で、約１ヶ月間投与することが好ましい。
【００３５】
なお、本発明の下痢予防・防止剤、脂質代謝改善剤またはプロピオン酸産生促進剤はヒトを除く哺乳動物、好ましくは牛、豚等の草食動物に投与することもできる。この場合、その投与間隔および投与期間は特に制限されるものではないが、１日〜２日間隔で、約１ヶ月間投与することが好ましい。
【００３６】
本発明細菌は、コハク酸をプロピオン酸に変換する能力を有するため、この能力を利用してコハク酸からプロピオン酸を製造することができる。本発明細菌を用いてコハク酸からプロピオン酸を製造する方法としては、例えば、本発明細菌を、コハク酸を含有する培養培地で培養する方法が挙げられる。
【００３７】
具体的に、この方法でコハク酸からプロピオン酸を製造するには、ＰＹ培地または変法ＧＡＭ培地にコハク酸を２０〜８０ｍＭ添加して培養培地を調製し、この培養培地に前培養した本発明細菌を１〜５×１０４ｃｆｕ／ｍｌとなるように接種し、気相を嫌気条件下、好ましくは気相を窒素ガス、炭酸ガス、３種混合ガス（窒素（８８％）・水素（７％）・二酸化炭素（５％））の何れかで置換した嫌気条件下、３７℃で１〜３日間培養すればよい。この培養により培養培地中にプロピオン酸が製造される。培養後、イオン交換膜等の公知の分離手段で培養培地からプロピオン酸を精製してもよい。
【００３８】
また、コハク酸からプロピオン酸を製造する別の方法としては、本発明細菌とコハク酸を産生する細菌とを、コハク酸を産生する細菌がコハク酸を産生し得る原料を含有する培養培地で培養する方法が挙げられる。
【００３９】
この方法に用いられるコハク酸を産生する細菌としては、例えば、パラプレボテラ・キシラニフィラ（Paraprevotella xylaniphila）、バクテロイデス・フラジリス  （Bacteroides fragilis）等が挙げられる。また、前記細菌がコハク酸を産生し得る原料としては、コハク酸を産生する細菌がパラプレボテラ・キシラニフィラであればグルコース、キシラン等が挙げられ、好ましくはキシランであり、コハク酸を産生する細菌がバクテロイデス・フラジリスであれば、グルコース等が挙げられる。
【００４０】
また、この方法で用いられる培養培地は、コハク酸を含有する培養培地で培養する方法に用いられる培養培地のコハク酸の代わりにコハク酸を産生する細菌がコハク酸を産生しうる原料を１〜５％（重量比）添加すればよい。また、この方法においてコハク酸を産生する細菌は、１〜５×１０４ｃｆｕ／ｍｌ程度で培養培地に接種すればよい。それ以外の培養条件はコハク酸を含有する培養培地で培養する方法と同じでよい。
【実施例】
【００４１】
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に何ら限定されるものではない。
【００４２】
参  考  例  １
ファスコラークトバクテリウムの取得：
（１）健康成人の糞便を１０５倍に希釈し、バンコマイシンを２０μｇ／ｍｌ含有させた変法ＧＡＭ寒天培地の平板培地に塗沫後、グローブボックスにて５日間、３７℃で培養した。増殖したコロニーを実体顕微鏡にて観察し、形態の異なるコロニーを釣菌した。その後、気相を３種混合ガス（窒素（８８％）・水素（７％）・二酸化炭素（５％））で置換した嫌気条件下、変法ＧＡＭ寒天培地にて培養を繰り返して細菌Ａを単離した。
【００４３】
この細菌Ａの遺伝子解析を行ったところ、１６ＳｒＤＮＡ配列がファスコラークトバクテリウム・ファエシウムＡＣＭ３６７９Ｔ（以下、「ＡＣＭ３６７９」という）の１６ＳｒＤＮＡ配列と９１.４％の配列相同性を有していた。この細菌Ａはファスコラークトバクテリウム属の新種であることがわかった。本発明者らはこの細菌Ａをファスコラークトバクテリウム・エスピーＹＩＴ１２０６７（以下、「ＹＩＴ１２０６７」という）と名付けた。
【００４４】
（２）上記（１）で変法ＧＡＭ寒天培地の平板培地に含有させたバンコマイシン２０μｇ／ｍｌを、オキサシリン４μｇ／ｍｌに代える以外は、参考例１と同様にして細菌Ｂを単離した。
【００４５】
この細菌Ｂの遺伝子解析を行ったところ、１６ＳｒＤＮＡ配列がファスコラークトバクテリウム・ファエシウムＡＣＭ３６７９Ｔの１６ＳｒＤＮＡ配列と９１.５％の配列相同性を有していた。この細菌Ｂはファスコラークトバクテリウム属の新種であることがわかった。本発明者らはこの細菌Ｂをファスコラークトバクテリウム・エスピーＹＩＴ１２０６８（以下、「ＹＩＴ１２０６８」という）と名付けた。
【００４６】
また、ＹＩＴ１２０６８の１６ＳｒＤＮＡ配列は、ＹＩＴ１２０６７の１６ＳｒＤＮＡ配列と９９.９％の配列相同性を有していた。
【００４７】
ＹＩＴ１２０６７およびＹＩＴ１２０６８の１６ＳｒＤＮＡに基づく系統樹を図１に示した。
【００４８】
参  考  例  ２
ＹＩＴ１２０６７およびＹＩＴ１２０６８の性状：
参考例１で得られたＹＩＴ１２０６７およびＹＩＴ１２０６８の表現型を公知の方法で調べた。また、生化学性状を市販のＡＰＩキット（日本ビオメリューバイテック社製）を用いて調べた。それら結果を以下に示した。
【００４９】
（１）主な表現型
【表１】
0005883618.tif 000002
【００５０】
（２）生化学性状
（資化性）
＋：資化性あり
−：資化性なし
（酵素活性）
＋：活性あり
−：活性なし
＜ＡＰＩ ケンキによる性状試験結果＞
【表２】
0005883618.tif 000003
【００５１】
＜ＡＰＩ Ｒａｐｉｄによる性状試験結果＞
【表３】
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【００５２】
＜ＡＰＩ ＺＹＭによる性状試験結果＞
【表４】
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【００５３】
実  施  例  １
コハク酸存在下での培養試験（１）：
＜前培養＞
上記参考例で得られたＹＩＴ１２０６７およびＹＩＴ１２０６８をそれぞれ２０ｍＭのコハク酸を添加したＰＹ培地（以下、これを「ＰＹＳ培地」という）に植菌し、気相を窒素ガスで置換した嫌気条件下、３７℃で３６時間培養した。また、比較としてＡＣＭ３６７９を同様に培養した。
【００５４】
＜本培養＞
上記の培養で得られた前培養培地の５０μｌを、３ｍｌのＰＹＳ培地に植菌し（培地中の生菌数は２.５×１０４ｃｆｕ／ｍｌ）、気相を窒素ガスで置換した嫌気条件下、３７℃で培養した。
【００５５】
＜サンプリング＞
培養開始前と、培養開始から１０、１２および１３時間後に、培養培地からサンプルを少量採取し、ＨＰＬＣ（アライアンス２６９５：日本ウオーターズ製）で培養培地中のプロピオン酸濃度とコハク酸濃度を測定した。培養開始前と、培養開始から１０、１２および１３時間後の培養培地中のプロピオン酸濃度を図２に示した。
【００５６】
＜結果＞
全ての培養時間においてＹＩＴ１２０６７およびＹＩＴ１２０６８の培養培地中のプロピオン酸濃度はＡＣＭ３６７９よりも高かった。また、本培養１２時間後のプロピオン酸濃度はＹＩＴ１２０６７およびＹＩＴ１２０６８がそれぞれ２１.０３ｍＭおよび１９.７５ｍＭであったのに対し、ＡＣＭ３６７９は７.１７ｍＭであった。更に、培養培地中のコハク酸濃度は培養時間の経過と共に減少しており、その量はプロピオン酸の増加量とほぼ同量であった。また更に、本培養１０時間後のプロピオン酸濃度の数値を元に、各菌株のプロピオン酸産生速度を算出したところ、ＹＩＴ１２０６７およびＹＩＴ１２０６８は、ＡＣＭ３６７９と比べて、それぞれ５.８倍および３.０倍であった（表５）。
【００５７】
【表５】
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【００５８】
実  施  例  ２
コハク酸存在下での培養試験（２）：
実施例１と同様にして前培養を行ったＹＩＴ１２０６７およびＹＩＴ１２０６８の前培養培地５０μｌを８０ｍＭのコハク酸を添加した３ｍｌのＰＹ培地に植菌し（培地中の生菌数は２.５×１０４ｃｆｕ／ｍｌ）、気相を窒素ガスで置換した嫌気条件下、３７℃で１週間培養した。
【００５９】
培養後、ＹＩＴ１２０６７およびＹＩＴ１２０６８の培養培地中のプロピオン酸の濃度は、それぞれ８０.８１ｍＭおよび８４.１９ｍＭであった。
【００６０】
実  施  例  ３
コハク酸産生細菌との共培養：
キシランからコハク酸と酢酸を産生する微生物であるパラプレボテラ・キシラニフィラの基準株（ＤＳＭ１９６８１）であるＹＩＴ１１８４１（以下、「ＹＩＴ１１８４１」という）の前培養培地５０μｌ、ＹＩＴ１２０６７またはＹＩＴ１２０６８の前培養培地５０μｌを、シラカバ由来のキシランを１％添加した３ｍｌのＰＹ培地に、それぞれ同時に添加し（いずれの菌株も、培地中の生菌数は２.５×１０４ｃｆｕ／ｍｌ）、気相を窒素ガスで置換した嫌気条件下、３７℃で７２時間共培養させた。培養後、ＨＰＬＣでコハク酸、酢酸およびプロピオン酸の量を測定した。また、比較としてそれぞれを単独で培養し、同様の測定をした。各培養におけるコハク酸、酢酸およびプロピオン酸の濃度を図３に示した。
【００６１】
ＹＩＴ１１８４１とＹＩＴ１２０６７またはＹＩＴ１２０６８を組み合わせることによりキシランからプロピオン酸を効率良く得られることがわかった。
【００６２】
実  施  例  ４
タブレット：
下記の処方で各種成分を混合して造粒・乾燥・整粒した後に、打錠してタブレットを製造した。
（成分）                                （含有量）
ＹＩＴ１２０６７の菌体乾燥物１）        １０ｍｇ
微結晶セルロース                      １００ｍｇ
トレハロース                            １５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム                ０.５ｍｇ
メチルセルロース                        １２ｍｇ
１）ＹＩＴ１２０６７の生菌体を凍結乾燥して製造した（生菌体１×１０１０ｃｆｕ／ｇを含む）。
【００６３】
実  施  例  ５
清涼飲料：
下記の処方で、常法に従って各成分を配合し、均質化して清涼飲料を得た。得られた清涼飲料は褐色瓶に充填後、アルミキャップにて封印し、加熱処理を施した。
（成分）                                （含有量）
ＹＩＴ１２０６７の菌体乾燥物１）          ０.５ｇ
香料                                      ０.８ｇ
クエン酸                                  ０.２ｇ
エリスリトール                            ２.５ｇ
ラクチトール                              ２.５ｇ
水                                      ９３.５ｇ
１）ＹＩＴ１２０６７の生菌体を凍結乾燥して製造した（生菌体１×１０１０ｃｆｕ／ｇを含む）。
【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明の飲食品、下痢予防・防止剤、脂質代謝改善剤、プロピオン酸産生促進剤、プロピオン酸の製造方法、下痢予防・防止方法、脂質代謝改善方法は各種健康の増進に利用できる。
以    上
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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