(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の菌株を含むものであり、過敏性腸症候群の治療に使用するためのものであることを特徴とするプロバイオティクス製剤。
【請求項２】
前記受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の菌株を含むものであり、腹痛、鼓脹、便秘、消化不全、緊急の、減少した便通の回数、増加した便通の回数、排便が不完全である感覚、又はそれらの組み合わせの軽減、予防及び／又は治療に使用するためのものであることを特徴とする請求項１に記載のプロバイオティクス製剤。
【請求項３】
前記受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の菌株を含むものであり、少なくともイヌリン及び／又はフルクトオリゴ糖を含んでもよいものであることを特徴とする請求項１又は請求項２に記載の使用のためのプロバイオティクス製剤。
【請求項４】
前記受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の菌株を含むものであり、少なくとも１つの薬理学上許容可能な化合物、少なくとも１つの経口摂取可能なキャリア、少なくとも１つのアジュバント、少なくとも１つの細菌成分、少なくとも１つの原体、又は少なくとも１つの生体化合物を含むものであることを特徴とする請求項１乃至請求項３のいずれか１項に記載の使用のためのプロバイオティクス製剤。
【請求項５】
前記受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の菌株を含むものであり、前記少なくとも１つの薬理学上許容可能な化合物が、ビタミン、ビタミンＢ類、ミネラル、カルシウム、マグネシウム、微量元素、糖質、ラクトース、マルトデキストリン、イヌリン、デキストロース、マンニトール、マルトース、デキストリン、ソルビトール、フルクトースからなるグループから選択されるものであり、
及び／又は前記生体化合物が、蛋白質、ペプチド、特にグルタミン／グルタミン酸が豊富である蛋白質、特にグルタミン／グルタミン酸が豊富であるペプチド、脂質から選択されるものであることを特徴とする請求項４に記載の使用のためのプロバイオティクス製剤。
【請求項６】
前記受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の菌株を含むものであり、前記経口摂取可能なキャリアがカプセル、錠剤、粉末又は食品であることを特徴とする請求項４又は請求項５に記載の使用のためのプロバイオティクス製剤。
【請求項７】
前記受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の菌株を含むものであり、前記食品が乳製品、酸性乳、ヨーグルト、冷凍ヨーグルト、粉乳、濃縮乳、チーズスプレッド、ドレッシング又は飲料であることを特徴とする請求項６に記載の使用のためのプロバイオティクス製剤。
【請求項８】
前記受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の菌株を含むものであり、前記菌株が１カプセル又は１錠剤又は粉末の１単位又は１食品あたりに１０１ｃｆｕより多く存在することを特徴とする請求項６又は請求項７に記載の使用のためのプロバイオティクス製剤。
【請求項９】
前記受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の菌株を含むものであり、前記菌株が１カプセル又は１錠剤又は粉末の１単位又は１食品あたり１０２、１０３、１０４、１０５又は１０６ｃｆｕ以上存在することを特徴とする請求項６又は請求項７に記載の使用のためのプロバイオティクス製剤。
【請求項１０】
前記受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の菌株を含むものであり、患者１人に１日に投与する前記菌株の量が１カプセル又は１錠剤又は粉末の１単位又は１食品あたり１０１ｃｆｕ以上であることを特徴とする請求項６乃至請求項９のいずれか１項に記載の使用のためのプロバイオティクス製剤。
【請求項１１】
前記受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の菌株を含むものであり、患者１人に１日に投与する前記菌株の量が１カプセル又は１錠剤又は粉末の１単位又は１食品あたり１０２、１０３、１０４、１０５又は１０６ｃｆｕ以上であることを特徴とする請求項６乃至請求項１０のいずれか１項に記載の使用のためのプロバイオティクス製剤。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
今日、消化管の機能障害及び／又は消化器系の望ましくない炎症反応と関連する疾患は罹患率が高い一般的な疾患である。そのいずれのグループに属する疾患も、腹痛、不快感、膨満、鼓脹、下痢、便秘、消化不全、緊急の便意及び／又は減少した及び／又は増加した便通の回数、排便が不完全である感覚及び／又はそれらの組み合わせによって特徴づけられ、したがって罹患した人の総合的な生活状態を著しく下げることにつながる。特に、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）については効果的な治療方法がまだない（Ｂｒｅｎｎｅｒ  ａｎｄ  Ｃｈｅｙ、２００９年）。ＩＢＳのためのいくつかの薬剤は、有害事象のために回収又は制限された。さらに、現在の治療は主に１つの症状を標的としており、総合的にＩＢＳを軽減したり、生活の質（ＱｏＬ）を改善したりすることはできない。
【０００２】
ＩＢＳや炎症性腸疾患など、消化管の機能障害と関連する疾患は、（ｉ）腸内微生物叢の不均衡（Ｋａｓｓｉｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、２００７年）及び／又は（ｉｉ）消化管内
の腸管バリアの機能不全（Ｍａｒｓｈａｌｌ  ｅｔ  ａｌ．、２００４年）を伴うと広く考えられている。このことによって、消化管内でビフィドバクテリウム属（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）などのプロバイオティックな細菌が減少すると考えられている。さらに、腸管バリアの機能不全は、病原性通性嫌気性菌の粘膜への望ましくない進入を起こし、消化器系の炎症反応に結果的につながりうると考えられている。最近の研究では、この炎症によって腸の疼痛、運動及び機能不全などの典型的なＩＢＳの症状が惹起されることが示唆されている。
【０００３】
腸内微生物叢の不均衡は、主に、ビフィドバクテリウム属などヒト由来の非病原性微生物の数が減少し、一方でエンテロバクテリウム属など病原性通性嫌気性の微生物の数が増加することを特徴とする（Ｊｉａｎ−Ｍｉｎ  ｅｔ  ａｌ．、２００４年）。この不均衡は、ガス状の化合物及び短鎖脂肪酸の生成の増加、運動不全、鼓脹及び影響を受ける人の疼痛につながると考えられている。したがって、腸内微生物叢を均衡状態に戻すためにプロバイオティックな細菌が注目された。プロバイオティックな細菌は、競合的阻害による免疫機能への有益な効果を有すると推定され、腸内微生物の均衡を改善することによって被投与者に有益な影響を与える可能性がある。ヒト由来、非病原性のプロバイオティックな細菌を含む「プロバイオティクス」とは、一定数を経口摂取した場合に本来の基本的な栄養を超える健康への影響を示す、生きた微生物を含む食品および薬物、と定義されている。特にラクトバチルス属及び連鎖球菌属の多様な微生物の混合物が、伝統的に、発酵乳製品又は薬物の中で健康増進のために使用されてきた。
【０００４】
この問題については多くの研究がなされてきたが、腸内微生物叢の不均衡はコインの一面のみであることから、単にプロバイオティクスを消化管に届けることのみに注目した治療法のほとんどが、消化管の機能障害の患者のすべての症状を緩和することはできなかったのは驚くべきことではない。例えば、ＩＢＳはＲｏｍｅＩＩＩ基準によって診断されるが、この診断基準は基本的に次の通りである。腹痛又は腹部不快感が最近３ヶ月の中の１ヶ月につき少なくとも３日を占め、下記の条件の少なくとも２つを伴う、少なくとも６ヶ月以上前に発現した症状を示す。
（ａ）症状が排便により軽減する。
（ｂ）症状の発現が排便頻度の変化を伴う。
（ｃ）症状の発現が便性状の変化を伴う。
また、ＩＢＳはしばしば鼓脹又は膨満、便秘及び／又は下痢である排便困難を伴う。これらの症状とともに、患者は社会的及び個人的な役割を損ない、生活の質が低減することによって苦しむ可能性がある。疼痛／不快感、鼓脹／膨満、便意の急迫などの症状の大部分が取り除かれたとしても、患者の健康状態に関連する総合的な生活の質（ＱｏＬ）を改善するのは非常に望まれることである。今日提供されている、プロバイオティクス及び他のものを含む治療法は、いずれも疼痛／不快感、鼓脹／膨満及び消化不全などの症状をＱｏＬと同時に改善することができない。
【０００５】
この点については、消化管の機能障害が発達するにあたって２番目に重要な面を考慮せねばならず、これは、透過性の亢進を特徴とする消化管内の腸管バリアの機能不全に関係している。この点についての１つの非常に普及している説は、腸及び全身の免疫システムの両方の動揺によって、腸内微生物叢が不均衡である場合には支配的となる可能性のある病原性微生物がバリアを通過し、粘膜を透過して炎症反応を起こすというものである。この仮説にもとづき、炎症反応の治療及び予防、並びにその消化管への影響に注目した研究がいくつかなされた。例えばＥＰ１１４１２３５には、ＩＬ−８レベルを減少させ（Ｗｈｏｒｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．、２００６年）、ＩＬ−１０／ＩＬ−１２比を正常化させる（Ｏ’Ｍａｈｏｎｙ  ｅｔ  ａｌ．、２００５年）ことによって投与された者の体内で抗炎症反応を誘導する強い能力を示した、栄養サプリメント及び薬剤に適用するためのビフィドバクテリウム・ロングム・インファンティス（Ｂ．インファンティス）ＵＣＣ３５６２４株が記載されている。この能力が、ＩＢＳ及び炎症性腸疾患の症状に対するビフィドバクテリウム・ロングム・インファンティスＵＣＣ３５６２４株の効果の主な理由である可能性があると言われている。しかし、異なる情報源では、Ｂ．インファンティスの効果を直接抗炎症性に帰することができるのか疑問が呈されている。さらに、ラクトバチルス・サリバリウスもｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びマウスモデルにおいてＢ．インファンティスに匹敵する強い抗炎症効果を示すが、ＩＢＳ及びその症状を軽減することに明らかな効果は示していない。
【０００６】
最も重要なことは、プロバイオティクスの効能は高度に菌株特異的であり、一定の菌株のみがＩＢＳ及びその症状を改善することができる可能性があるということである。今日までに、いくつかの研究によって、ＩＢＳなど消化管の機能障害に関連する疾患の症状に対するプロバイオティクスの効果が研究されている（Ｏ’Ｍａｈｏｎｙ  ｅｔ  ａｌ．、２００５年、Ｋａｊａｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、２００５年、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．、２００８年、Ｇｕｙｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．、２００７年）。しかし、明らかな利益を示すことができたのはわずかの研究のみであった。さらに、どのプロバイオティックな菌株も、過敏性腸症候群の症状を明らかに緩和する効果と同時に生活の質の改善を示すことはできなかった。これらの結果は、プロバイオティクスの効能が高度に菌株特異的であるという事実に帰することができる。１つのプロバイオティックな菌株の特性は、別の菌株に移すことができないことが広く認知されている（Ｂｒｅｎｎｅｒ  ａｎｄ  Ｃｈｅｙ、２００９年）。したがって、単一のプロバイオティックな菌株の効能及び効果を予測することはできず、単一の菌株の効能について試験を行い証明することの重要性が強調されることが認められるべきである。このため、実験部においてその方法を記載する。
【０００７】
従来、プロバイオティクスについての研究で、ＩＢＳのような疾患において、上述の症状（疼痛／膨満／鼓脹／緊急の便意／消化不全）の低減と同時に患者の生活の質の向上を示すことができた例はない。したがって、腸内微生物叢を均衡状態に戻し、さらに腸管壁の機能を回復することを考慮に入れた、消化管の機能障害の患者の疼痛／不快感、膨満／鼓脹、緊急の便意及び消化不全などの症状及び総合的な生活の質を改善するための治療には重大な需要が存在する。
【発明の概要】
【０００８】
したがって、本発明は、上皮細胞単層１ｍｍ２につき少なくとも約１０細菌細胞の接着を示す、又は少なくとも１．５の接着指数を有する、食品中及び／又は薬剤としてのプロバイオティクスとして使用するためのビフィドバクテリウム・ビフィドゥム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｍ）（Ｂ．ビフィドゥム（Ｂ．  ｂｉｆｉｄｕｍ））の菌株又はその変異体若しくは多様体を提供する。また、腹痛／不快感、膨満／鼓脹、緊急の便意及び／又は消化不全など、消化器病、特にＩＢＳの症状の明らかな改善と、さらに同時に患者の生活の質の明らかな向上につながる、食品中及び／又は薬剤としてのプロバイオティクスとして使用するためのビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体である、受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５又はその変異体若しくは多様体を提供する。さらに、プロバイオティクス製剤並びに菌株及びプロバイオティクス製剤の使用についても提供する。上皮細胞単層１ｍｍ２につき少なくとも約１０細菌細胞の接着を示す、又は少なくとも１．５の接着指数を有するビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体や、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体である、受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５又はその変異体若しくは多様体など本発明の菌株によって疼痛／不快感、膨満／鼓脹、緊急の便意及び／又は消化不全など単一の症状の改善と同時にＱｏＬの改善を伴って、総合的にＩＢＳが軽減されることは予期せぬ結果であった。なぜなら、先行技術においてプロバイオティクスの効果性は高度に菌株特異的であることが知られ、認められているように、１つのビフィドバクテリウム菌株の中で近い関係にあるもの同士ですら通常は匹敵する特性をもたず、消化器病に対して不活性であることもあるからである（Ｂｒｅｎｎｅｒ  ａｎｄ  Ｃｈｅｙ、２００９年）。１つの説に固執する意図なく、発明者らは、本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥム菌株、特にビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の並外れた、予期せぬ有効性は、消化管内の腸管バリアを介して病原性の細菌が通過すること及びそれらが粘膜を透過することを予防する能力によると考える。腸管バリアの機能不全は、病原性の微生物がそこを通して粘膜に入ることができるような「穴」又は腸管壁の弱い部分によると推定し、発明者らは、非病原性細胞が腸管壁に接着することによってバリアの透過性が減少し、「穴を塞ぐ」作用で腸管壁を改善すると考える。このように、本発明の菌株及びプロバイオティクス製剤は、粘膜の炎症反応を予防するだけでなく、腸内微生物叢を均衡状態に戻すため、腸内細菌叢及び健康に対する二重の有益な効果を有する。さらに、ウォッシュアウト期、すなわち治療終了後の期間であり、例えば本発明の菌株、その変異体若しくは多様体、又は本発明の菌株、その変異体若しくは多様体を含むプロバイオティクス製剤を被験者又は患者にもう投与しない期間を通じて症状又は疾患自体の軽減が保たれていることが非常に重要であ���。下記で詳細に説明し、さらに実施例及び図面部でも示すように、本発明の菌株、その変異体又は多様体の場合、本発明の菌株、その変異体、又は多様体の有益な効果は、全体的なＩＢＳの症状、腹痛／不快感、膨満／鼓脹及び消化不全について、ウォッシュアウト期を通じて保たれている。
【０００９】
したがって、本発明は、上皮細胞単層１ｍｍ２につき少なくとも約１０細菌細胞の接着を示す、又は少なくとも１．５の接着指数を有する、食品中及び／又は薬剤としてのプロバイオティクスとして使用するためのビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体を提供する。この菌株は、受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５又はその変異体若しくは多様体であることが好ましい。また、本発明は、食品中及び／又は薬剤としてのプロバイオティクスとして使用するためのビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体である、受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５又はその変異体若しくは多様体を提供する。この菌株、変異体又は多様体は特に、消化管の機能障害、消化器系の望ましくない炎症反応、腸内微生物叢の不均衡、消化管内のビフィドバクテリウム属の減少及び／又は消化管内の腸管バリアの機能不全に関連する疾患の予防及び／又は治療において食品中及び／又は薬剤としてのプロバイオティクスとして使用すること、及び／又は腹痛、不快感、膨満、鼓脹、緊急の便意、消化不全、及び／又は減少した及び／又は増加した便通の回数、排便が不完全である感覚、全体的なＩＢＳの症状及び／又はそれらの組み合わせの患者の苦痛を軽減、予防及び／又は治療するために使用すること、又は患者の生活の質を改善することを目的とするものである。腹痛、不快感、膨満、消化不全、鼓脹、緊急の便意及び／又は減少した及び／又は増加した便通の回数、排便が不完全である感覚、全体的なＩＢＳの症状及び／又はそれらの組み合わせの患者の苦痛の軽減、予防及び／又は治療において食品中及び／又は薬剤として使用するプロバイオティックとしての、菌株、変異体又は多様体の有用性は、下記でさらに説明するように、臨床研究において一般的に使用される７ポイントリッカートスケールを用いて評価することができる。患者の生活の質（ＱｏＬ）は、本発明の技術分野において、臨床研究において、またＱｏＬを測定する認められた基準について通常の知識を有する人には一般的である、標準のＳＦ−１２調査票を用いて評価することができる。さらに、全体的なＩＢＳの症状である腹痛／不快感、膨満／鼓脹については、下記で詳細に説明し、実施例及び図面部でも示すように、本発明の菌株、変異体又は多様体の有益な効果はウォッシュアウト期を通じて保たれている。
【００１０】
１つの実施態様では、疾患は過敏性便通、クローン病又は潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、回腸嚢炎又は感染性大腸炎、消化器癌、関節リウマチなどの全身疾患、望ましくない炎症反応による自己免疫障害、クロストリジウム・ディフィシル関連下痢、抗生物質関連下痢、ロタウイルス関連下痢又は感染性下痢などの望ましくない炎症反応による下痢疾患及びそれらの組み合わせからなるグループから選択され、好ましくは、疾患は過敏性便通である。
【００１１】
１つの実施態様では、本発明の菌株、変異体又は多様体は、遺伝子的に操作された変異体又は自然に発生した多様体である。別の実施態様では、菌株、変異体又は多様体の細胞は生細胞又は不活化細胞である。不活化細胞については製品の調製がより単純で、細胞を簡単に薬剤に導入することができ、生細胞の場合よりも貯蔵条件の制限がずっと少ない。細胞は熱処理によって又は変化させたｐＨにさらすことによって又は圧力を作用させることによって殺すことができる。しかし、生細胞は本発明に記載された疾患又は症状の患者の腸管システムの中で生息することができ、したがってそのような疾患又は症状の患者の苦痛を軽減、予防及び／又は治療する高い効能を有する。
【００１２】
本発明はさらに、受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５又はその変異体若しくは多様体など、上皮細胞単層１ｍｍ２につき少なくとも約１０細菌細胞の接着を示す、又は少なくとも１．５の接着指数を有する、食品中及び／又は薬剤としてのプロバイオティクスとして使用するためのビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体を含むプロバイオティクス製剤を提供する。好ましくは、プロバイオティクス製剤は、食品中及び／又は薬剤としてのプロバイオティクスとして使用するためのものである。
【００１３】
好ましい実施態様では、プロバイオティクス製剤が少なくとも１つのプレバイオティクスを含む。好ましくは、プレバイオティクスはイヌリンまたはフルクトオリゴ糖である。
【００１４】
上記のいずれの実施態様においても、プロバイオティクス製剤は、少なくとも１つの薬理学上許容可能な化合物、経口摂取可能なキャリア、アジュバント、細菌成分、原体、生体化合物及び／又は蛋白質及び／又はペプチド、特にグルタミン／グルタミン酸が豊富である蛋白質及び／又はペプチド、脂質、糖質、ビタミン、ミネラル及び／又は微量元素を含み、少なくとも１つの薬理学上許容可能な化合物は、ビタミンＢ類など１つ以上のビタミン、カルシウム又はマグネシウムなど１つ以上のミネラル、ラクトース、マルトデキストリン、イヌリン、デキストロース、マンニトール、マルトース、デキストリン、ソルビトール、フルクトースなど１つ以上の糖質及びそれらの混合物からなるグループから選択されてもよい。好ましくは、経口摂取可能なキャリアはカプセル、錠剤、粉末又は食品であり、この食品は乳製品、酸性乳、ヨーグルト、冷凍ヨーグルト、発酵ヨーグルト飲料や飲用ヨーグルトなどのヨーグルト製品、チーズ、発酵クリーム、牛乳ベースのデザート、発酵乳又は人乳近似乳、粉乳、濃縮乳、チーズスプレッド、ドレッシング、飲料及びその他のものであってもよい。
【００１５】
１つの実施態様では、プロバイオティクス製剤は蛋白質及び／又はペプチド、特にグルタミン／グルタミン酸が豊富である蛋白質及び／又はペプチド、脂質、糖質、ビタミン、ミネラル及び／又は微量元素を含む。
【００１６】
上記のいずれの実施態様においても、プロバイオティクス製剤中で、菌株、変異体又は多様体が１カプセル又は１錠剤又は粉末の１単位又は１食品あたりに１０１ｃｆｕより多く存在し、１カプセル又は１錠剤又は粉末の１単位又は１食品あたり１０２、１０３、１０４、１０５又は１０６コロニー形成単位（ｃｆｕ）以上であってもよく、好ましくは菌株、変異体又は多様体が１カプセル又は１錠剤又は粉末の１単位又は１食品あたり１０７ｃｆｕより多く存在し、より好ましくは菌株、変異体又は多様体が１カプセル又は１錠剤又は粉末の１単位又は１食品あたり１０８ｃｆｕより多く存在し、さらに好ましくは菌株、変異体又は多様体が１カプセル又は１錠剤又は粉末の１単位又は１食品あたり１０９ｃｆｕ又は１０１０ｃｆｕより多く存在する。「粉末の１単位」とは、１０１ｃｆｕより多く、任意により１０２、１０３、１０４、１０５又は１０６コロニー形成単位（ｃｆｕ）以上、好ましくは１０７ｃｆｕより多く、より好ましくは１０８ｃｆｕより多く、さらに好ましくは１０９ｃｆｕ又は１０１０ｃｆｕより多くを含む粉末の量を示す。したがって、粉末の１単位は患者１人に対する１日の標準投与量を含む量を表すが、１日の投与量は下記のように複数の理由によって複数の方法で増量または減量してもよい。粉末の１単位の、重量による通常の量は、容易に経口摂取可能でありかつ消化可能であるべきであり、ｍｇから数グラムの幅で変化し、例えば５ｇ、１０ｇ、１５ｇまたはそれ以上である。粉末の１単位は、さらに、本発明で言及するすべての食品及び当業者によって適切であると考えられる他の食品と混合することができる。したがって、粉末の重量による量あたりのｃｆｕの量は、容易に経口摂取可能でありかつ消化可能であると考えられる量の粉末中の１日の標準投与量よりもずっと多いことがある。この場合、粉末は上記のようにプロバイオティクス製剤に含まれてもよい他の成分によって希釈されなければならない。「食品の１単位」又は「食品」は、概して経口摂取可能なキャリアとして使用される特定の食品の標準の又は通常の量と考えられている、重量又は体積による通常の量を示す。この通常の量は、食べたり飲んだりする消費分、包装単位又は同等のものとして提示される。したがって、「経口摂取可能なキャリアの１単位」は、１錠剤、１カプセル、座薬又は同等のもの、粉末の１単位又は経口摂取可能なキャリアとして使用される特定の食品の標準の又は通常の量と考えられている、重量又は体積による通常の量であり、食べたり飲んだりする消費分、包装単位又は同等のものとして提示される通常の量を示す食品の１単位を示す。
【００１７】
上記のいずれの実施態様においても、患者１人に１日に投与するプロバイオティクス製剤中の菌株、変異体又は多様体の量は１カプセル又は１錠剤又は粉末の１単位又は１食品あたり１０１ｃｆｕ以上であり、１０２、１０３、１０４、１０５又は１０６ｃｆｕ以上であってもよく、好ましくは１０７ｃｆｕ以上であり、より好ましくは１０８ｃｆｕ以上であり、さらに好ましくは１０９ｃｆｕ又は１０１０ｃｆｕ以上である。
【００１８】
上記のどの実施態様によるプロバイオティクス製剤も有用であり、消化管の機能障害、消化器系の望ましくない炎症反応、消化管内のビフィドバクテリウム属の減少及び／又は消化管内の腸管バリアの機能不全に関連する疾患の予防及び／又は治療において食品中及び／又は薬剤としてのプロバイオティクスとして使用すること、及び／又は腹痛、不快感、膨満、鼓脹、消化不全、緊急の便意及び／又は減少した及び／又は増加した便通の回数、排便が不完全である感覚、全体的なＩＢＳの症状及び／又はそれらの組み合わせの患者の苦痛を軽減、予防及び／又は治療するために使用することを目的として提供される。疾患は、過敏性便通、クローン病又は潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、回腸嚢炎又は感染性大腸炎、消化器癌、関節リウマチなどの全身疾患、望ましくない炎症反応による自己免疫障害、クロストリジウム・ディフィシル関連下痢、抗生物質関連下痢、ロタウイルス関連下痢又は感染性下痢などの望ましくない炎症反応による下痢疾患及びそれらの組み合わせからなるグループから選択されてもよい。好ましくは、疾患は過敏性便通である。
【００１９】
本発明はさらに、消化管の機能障害、消化器系の望ましくない炎症反応、消化管内のビフィドバクテリウム属の減少及び／又は消化管内の腸管バリアの機能不全に関連する疾患の予防及び／又は治療における食品中及び／又は薬剤としてのプロバイオティクスとして、及び／又は腹痛、不快感、膨満、鼓脹、消化不全、緊急の及び／又は減少した及び／又は増加した便通の回数、排便が不完全である感覚及び／又はそれらの組み合わせの患者の苦痛を軽減、予防及び／又は治療するための本発明の菌株、変異体又は多様体及び本発明のプロバイオティクス製剤の使用を提供する。疾患は、過敏性便通、クローン病又は潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、回腸嚢炎又は感染性大腸炎、消化器癌、関節リウマチなどの全身疾患、望ましくない炎症反応による自己免疫障害、クロストリジウム・ディフィシル関連下痢、抗生物質関連下痢、ロタウイルス関連下痢又は感染性下痢などの望ましくない炎症反応による下痢疾患及びそれらの組み合わせからなるグループから選択されてもよい。
【００２０】
また、少なくとも下記の工程ａ）−ｄ）を含む本発明のプロバイオティクス製剤の製造方法が提供される。
ａ）蛋白質に富んだ液体増殖培地中で、本発明の菌株又は変異体若しくは多様体、好ましくは上皮細胞単層１ｍｍ２につき少なくとも約１０細菌細胞の接着を示す、又は少なくとも１．５の接着指数を有する菌株又はその変異体若しくは多様体、又は受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５又はその変異体若しくは多様体を発酵及び／又は増殖させる工程。
ｂ）遠心、安定化、冷凍乾燥、摩砕及び篩分によって細胞を回収する工程。
ｃ）所望により細胞を、プレバイオティクス、薬理学上許容可能な化合物、アジュバント、細菌成分、原体、生体化合物、蛋白質及び／又はペプチド又は他のものからなるグループの１つ以上の構成要素と混合／混和する工程。
ｄ）工程ｂ）の細胞又は工程ｃ）の混合物を経口摂取可能なキャリアに導入する工程。
【００２１】
受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５又はその変異体若しくは多様体などの上皮細胞単層１ｍｍ２につき少なくとも約１０細菌細胞の接着を示す、又は少なくとも１．５の接着指数を有する、食品中及び／又は薬剤としてのプロバイオティクスとして使用するためのビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体と、食品中及び／又は薬剤としてのプロバイオティクスとして使用するためのビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体である、受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５又はその変異体若しくは多様体（いずれの菌株も、本発明の「菌株」又は「細胞」として言及される）は、グラム陽性であり、非運動性で、しばしば分枝している嫌気性の細菌であり、通常は消化管及び膣に存在するビフィドバクテリウム属に属する細菌である。通常、健康な幼児及び成人の糞便から単離することができる。菌株に言及するとき、その菌株の細胞をも意味している。ビフィドバクテリウム属はすでに、消化を補助し、アレルギーの発生率をより低くすることと関連し、また腫瘍の成長を何らかの形で予防する役割を担う可能性があると説明されている。ビフィドバクテリウム属は、放線菌門、ビフィドバクテリウム科に属する。ビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５は、イタリア、ミラノのミラノ大学、ＤｉＳＴＡＭの産業用微生物培養コレクションから手に入れることができ、２０１１年１月２６日に受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとでＤＳＭＺ（ドイツ、ブラウンシュヴァイクのＤｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ）にビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の寄託が行われた。本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株、変異体又は多様体は、広い範囲のグラム陽性及びグラム陰性細菌に対して阻害作用を有する。本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株、その変異体又は多様体は、ブドウ球菌属、シュードモナス属、腸内細菌科及びバチルス属を含む細菌に対して広いスペクトルの活性を示す。本発明の菌株の「変異体」は、操作された、すなわち当業者に知られている標準の分子細胞生物学の技術によって変異させられたビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株を示す。本発明の菌株の「多様体」は自然に発生した多様体、すなわち健康な幼児及び成人の消化管及び膣中で発生する多様体であり、近い関係にあるビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株である。本発明の菌株の変異体及び多様体のいずれも、本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株、特にビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５と類似した、本発明に記載するいかなる疾患又は症状の患者にとっても有益な特性を有する。変異体及び多様体のいずれも、菌株のＤＮＡ相同体であると考えられる。本発明の範囲では、「相同体」という用語は、染色体ＤＮＡレベルにおいて一定の程度の「相同性」、すなわち「同一性」又は「類似性」を共有する菌株に言及する際に用いられる。この相同性又は類似性の程度を決定するために多くのアルゴリズムが存在する。相同性は、ウィスコンシン州（アメリカ合衆国）、マディソンのＤＮＡ  ｓｔａｒ  Ｉｎｃ．社製のソフトウェアＬａｓｅｒｇｅｎｅによってＣＬＵＳＴＡＬ法を用いて決定されるのが好ましい（Ｈｉｇｇｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．、１９８９年、Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．、５（２）、１５１頁）。染色体ＤＮＡレベルで「相同性を有する」（＝本質的に類似している）生物は、染色体ＤＮＡレベルにおいて少なくとも５５％又は６０％、好ましくは少なくとも６５％又は７０％、より好ましくは少なくとも７５％又は８０％、さらに好ましくは少なくとも８５％又は９０％、最も好ましくは少なくとも９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の相同性を有する。
【００２２】
本発明における「疾患」とは、患者又はヒトとも呼ばれる被験者の、健康であると考えられる状態と比較して変化したあらゆる状態を示す。概して、本発明の疾患は、消化管の機能障害、消化器系の望ましくない炎症反応、腸内微生物叢の不均衡、消化管内のビフィドバクテリウム属の減少、消化管内の腸管バリアの機能不全及び／又はそれらの組み合わせに関連する。本発明の菌株、変異体、多様体、プロバイオティクス製剤及びそれらの使用で言及される典型的な疾患は、過敏性便通、クローン病又は潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、回腸嚢炎又は感染性大腸炎、消化器癌、関節リウマチなどの全身疾患、望ましくない炎症反応による自己免疫障害、クロストリジウム・ディフィシル関連下痢、抗生物質関連下痢、ロタウイルス関連下痢又は感染性下痢などの望ましくない炎症反応による下痢疾患、又は他の疾患及びそれらの組み合わせなど、すべて消化管又は消化器系の疾患である。本発明における「症状」又は「個別の症状」とは、腹痛、不快感、膨満、鼓脹、消化不全、緊急の便意及び／又は減少した及び／又は増加した便通の回数、排便が不完全である感覚、全体的なＩＢＳの症状及び／又はそれらの組み合わせ及び総合的に低減した生活の質など、被験者の疾患の現れ方である。「全体的なＩＢＳの症状」は、ＩＢＳに関する上記のすべての個別の症状の総合的な評価を含む。「患者」（＝人間又はヒト又は動物）とは、次の２つの健康又は健康でない被験者を示す。本発明のプロバイオティクス製剤、又は、上皮細胞単層１ｍｍ２につき少なくとも約１０細菌細胞の接着を示す、又は少なくとも１．５の接着指数を有する、又はビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体を用いる治療の、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体である、受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５又はその変異体若しくは多様体を、本発明に記載する疾患又は症状を有することなく予防の目的で経口摂取する被験者。本発明のプロバイオティクス製剤、又は、上皮細胞単層１ｍｍ２につき少なくとも約１０細菌細胞の接着を示す、又は少なくとも１．５の接着指数を有する、又はビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体を用いる治療の、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体である、受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５又はその変異体若しくは多様体を、消化管の疾患又は消化管の機能障害、消化器系の望ましくない炎症反応、腸内微生物叢の不均衡、消化管内のビフィドバクテリウム属の減少、及び／又は消化管内の腸管バリアの機能不全に関連する疾患など本発明に記載する疾患、又は腹痛、不快感、膨満、鼓脹、消化不全、緊急の便意及び／又は減少した及び／又は増加した便通の回数、排便が不完全である感覚、及び／又はそれらの組み合わせ及び低減した生活の質などの症状を患者、人間、ヒト又は動物が有するため、治療の目的で経口摂取する被験者。したがって、患者（＝人間）は、上皮細胞単層１ｍｍ２につき少なくとも約１０細菌細胞の接着を示す、又は少なくとも１．５の接着指数を有するビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体、又はビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体を用いる治療のビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体である、受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５又はその変異体若しくは多様体を用いる治療などの、新しい治療を必要としている。患者、人間又は被験者は、上記の疾患又は症状のいずれも有しない人間であってもよい。
【００２３】
本発明における「接着性の菌株」とは、ヒト結腸細胞に対して接着する特性を有し、ヒト又は動物の腸管壁細胞に結合することが可能であり、これによって腸管バリアの透過性を減少させ、「穴を塞ぐ」作用で腸管壁を改善するビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体である。この特性についてビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体に試験を行う簡単な方法が、実施例部に示されている。この点について、上皮細胞単層１ｍｍ２につき少なくとも約１０、好ましくは約２０、より好ましくは約３０、さらに好ましくは約４０、最も好ましくは約５０又は５５細菌細胞の接着を示す、又は少なくとも１．５、好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも２．５、さらに好ましくは少なくとも３の接着指数を有するビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体が、接着性の菌株又はその変異体若しくは多様体であると考えられる。
【００２４】
本発明のプロバイオティクス製剤は食品中及び／又は薬剤としてのプロバイオティクスとして使用するためのものであり、上皮細胞単層１ｍｍ２につき少なくとも約１０、好ましくは約２０、より好ましくは約３０、さらに好ましくは約４０、最も好ましくは約５０又は５５細菌細胞の接着を示す、又は少なくとも１．５、好ましくは少なくとも２、より好ましくは少なくとも２．５、さらに好ましくは少なくとも３の接着指数を有するビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又は接着性の菌株、又はその変異体若しくは多様体を含む。又は、本発明のプロバイオティクス製剤は食品中及び／又は薬剤としてのプロバイオティクスとして使用するためのものであり、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体である、受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５又はその変異体若しくは多様体を含む。本発明のプロバイオティクス製剤は、医薬製剤とも考えることができる。「食品」とは、原則として、ヒトと、好ましくは動物によっても経口摂取可能であり消化可能である、あらゆる形の物質又は素材を示す。概してこれは身体に栄養的サポートを提供するため、及び／又は喜びのために食べたり飲んだりできる物質又は素材を含む。ヒトの場合、この物質は植物、微生物、又は動物由来であってもよい。本発明の場合、食品とは、特に、少なくとも本発明の菌株である微生物と、本発明においてプロバイオティクス製剤に含まれてもよいものとして言及される他の物質、例えば少なくとも１つの薬理学上許容可能な化合物、経口摂取可能なキャリア、アジュバント、細菌成分、原体、生体化合物及び／又は蛋白質及び／又はペプチド、特にグルタミン／グルタミン酸が豊富である蛋白質及び／又はペプチド、脂質、糖質、ビタミン、ミネラル及び／又は微量元素を含み、少なくとも１つの薬理学上許容可能な化合物はビタミンＢ類など１つ以上のビタミン、カルシウム又はマグネシウムなど１つ以上のミネラル、ラクトース、マルトデキストリン、イヌリン、デキストロース、マンニトール、マルトース、デキストリン、ソルビトール、フルクトースなど１つ以上の糖質及びそれらの混合物からなるグループから選択されるものである。「薬剤」とは、一般的には健康な状態ではなく疾患であると考えられる状態にあるヒト又は患者にのみ投与されるため、概して食品であるとは考えられていない。しかしながら、鬱の患者の場合でのように、身体に栄養的サポート及び／又は喜びを薬剤が提供することもできる。概して薬剤及び治療用品はより厳格な規制及び認可プロセスに従う。この認可プロセスは、本発明の菌株、変異体又は多様体の主な投与方法及び適用方法であると理解されている食品の場合には不要である。上記のとおり、本発明における「プロバイオティクス」は非病原性、ヒト由来のプロバイオティックな細菌を含み、一定数を経口摂取した場合に本来の基本的な栄養を超える健康への影響を示す生きた微生物を含む食品および医学的サプリメントとして定義されている。多様な微生物、特にラクトバチルス属及びレンサ球菌属の微生物の混合物が、伝統的に、発酵乳製品中で健康増進のために使用されてきた。本発明のプロバイオティクスは、少なくとも本発明の接着性のビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体又は多様体、又は本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５又はその変異体若しくは多様体を含む。しかし、本発明のプロバイオティクス製剤には、細菌成分として、有用なプロバイオティクスであると考えられる他種の別の菌株、細胞、変異体又は多様体が存在してもよい。これらは例えばラクトバチルス属、ビフィドバクテリウム属、サッカロミセス属、レンサ球菌属のプロバイオティックな菌株又はそれらの混合物である。このように「細菌成分」とは、上記のように、例えば生体分子、多糖類、脂質、又は細菌由来若しくは細菌による発酵あるいは発現で生成される他の物質など、化合物に使用されてもよい、プロバイオティックな菌株の生きた又は不活性化された菌株又は細胞を示す。どのような菌種の死物質でも細菌成分として理解されてよい。
【００２５】
本発明のプロバイオティクス製剤は、少なくとも１つのプレバイオティクス又は２つ、３つ、４つ又はそれ以上の異なるプレバイオティクスの組み合わせを含んでもよい。本発明における「プレバイオティクス」は、本発明の菌株に対する栄養として、それらを冷凍乾燥状態から解凍したのち生存可能で健康な状態に保つ役割を果たす。微生物細胞１ｇあたり、すなわち菌株１ｇあたり、概して２−５、好ましくは２．５ｇまで、より好ましくは少なくとも２．５ｇ、さらに好ましくは少なくとも３ｇ、最も好ましくは少なくとも４ｇのプレバイオティクスが必要である。一般的に、一定の糖類などヒトが消化不可能な食品原料がプレバイオティクスとして用いられる。プレバイオティクスの例には、好ましくはオリゴ糖、イヌリン、フルクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、シャゼンシ、オリゴフルクトース、イソマルトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、ソイオリゴ糖、マルトデキストリン、グルコオリゴ糖、マンナンオリゴ糖、アラビノガラクタン、アラビンキシラン、ラクトスクロース、グルコナンナン、ラクツロース、ポリデキストロース、オリゴデキストラン、ゲンチオリゴ糖、ペクチンオリゴ糖、キサンタンガム、アラビアガム、ヘミセルロース、難消化性デンプン及びその誘導体、及びそれらの混合物及び／又は組み合わせである糖類がある。
【００２６】
本発明のプロバイオティクス製剤は、少なくとも１つの薬理学上許容可能な化合物、少なくとも１つの経口摂取可能なキャリア、少なくとも１つのアジュバント、少なくとも１つの細菌成分、少なくとも１つの原体、少なくとも１つの生体化合物及び／又は少なくとも１つの蛋白質及び／又はペプチド、特にグルタミン／グルタミン酸が豊富である蛋白質及び／又はペプチド、脂質、糖質、ビタミン、ミネラル及び／又は微量元素を含んでもよい。
【００２７】
「薬理学上許容可能な化合物」とは、ヒト及び動物の生理学及び生体における高い耐用性を特徴とし、薬理学上不活性であるか又は受容者の生理機能に有害な影響がない、薬剤化合物又は製剤中に許容可能な液体、固体、又は気体の化学的化合物又は生体化合物を示す。少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の異なる薬理学上許容可能な化合物が本発明のプロバイオティクス製剤中に異なる量で存在してもよい。その量は、製造者によって、使用されるビフィドバクテリウム・ビフィドゥム菌株に特異的な必要性に応じて、また特定の適用方法、投与方法又は投薬の予定に応じて調整することができる。薬理学上許容可能な化合物の例は、プレバイオティクス、糖類、脂質、ビタミン、ミネラル、微量元素、アミノ酸、核酸、マルトデキストリン、イヌリン、ラクトース、グルコース、スクロース、マルトース、デキストリン、デキストロース、フルクトース、ソルビトール、フルクトオリゴ糖、マンニトール、コーンスターチ、結晶セルロース、アラビアガム、リン酸カルシウム、アルギン酸、ケイ酸カルシウム、微小結晶セルロース、セルロース、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、ゼラチン、好ましくはウシゼラチン、シロップ、アミノサリチル酸、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸、４−アミノサリチル酸、ベンザラジン、二塩化水素化物塩、オルサラジン、バルサラジド、ビスマスサブサリチル酸、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルヒドロキシベンゼン酸エステル、プロピルヒドロキシベンゼン酸エステル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、不活性重合体、水及び鉱物油、ヨウ素、マグネシウム、アスパラギン酸−アスコルビン酸マグネシウム複合体、マグネシウムアミノ酸キレート、亜鉛、亜鉛アミノ酸キレート、セレン、セレンアミノ酸複合体、銅、銅アミノ酸キレート、マンガン、マンガンアミノ酸キレート、クロム、クロムポリニコチネート、モリブデン、モリブデンアミノ酸キレート、カリウム、アスパラギン酸−アスコルビン酸カリウム複合体、コリン、重酒石酸コリン、イノシトール、バナジウム、硫酸バナジル、ボロン、アスパラギン酸−クエン酸ボロン、柑橘類ビオフラビノイド、変性セルロースガム、ケイ酸、植物性ステアリン、二酸化チタン、ステアリン酸マグネシウムを含み、好ましくは、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上の薬理学上許容可能な化合物が、ビタミンＢ類など１つ以上のビタミン、マグネシウム及びカルシウムなど１つ以上のミネラル、１つ以上の糖質、好ましくはウシゼラチンであるゼラチン、マンニトール、デキストリン、フルクトース、ソルビトール、プレバイオティクス、マルトース、マルトデキストリン、イヌリン、デキストロース、鉄、ラクトース及びそれらの混合物からなるグループから選択されたものである。さらに、プロバイオティクス製剤は、当業者に既知の薬理学上許容可能な充填剤、結合剤、潤滑剤、湿潤剤、崩壊剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤、甘味剤及び調味剤を含むことができる。
【００２８】
本発明のプロバイオティクス製剤及び菌株又はその変異体若しくは多様体は、患者への投与後、菌株又は細胞が急速に、連続的に、又は緩徐に放出されるように形成されてもよい。本発明のプロバイオティクス製剤に含まれてもよいビタミンの例は、ビタミンＡ（例えばレチノール、レチナール、ベータカロチンを含むカロチノイド）、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（例えばナイアシン、ナイアシンアミド、ニコチンアミド）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ６（例えばピリドキシン、ピリドキサミン、ピリドキサール）、ビタミンＢ７（ビオチン）、ビタミンＢ９（例えば葉酸、フォリン酸）、ビタミンＢ１２（例えばシアノコバラミン、ヒドロキシコバラミン、メチルコバラミン）、ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビタミンＤ（例えばエルゴカルシフェロール、コレカルシフェロール）、ビタミンＥ（例えばトコフェロール、トコトリエノール）、ビタミンＫ（例えばフィロキノン、メナキノン）などの水溶性及び非水溶性ビタミンであり、好ましくは本発明のプロバイオティクス製剤にビタミンＢ群、例えばビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（例えばナイアシン、ナイアシンアミド、ニコチンアミド）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ６（例えばピリドキシン、ピリドキサミン、ピリドキサール）、ビタミンＢ７（ビオチン）、ビタミンＢ９（例えば葉酸、フォリン酸）、ビタミンＢ１２（例えばシアノコバラミン、ヒドロキシコバラミン、メチルコバラミン）及びそれらの混合物が含まれる。本発明のプロバイオティクス製剤に含まれるミネラルの例はマグネシウム、カルシウム、亜鉛、セレン、鉄、銅、マンガン、クロム、モリブデン、カリウム、バナジウム、ボロン、チタンであり、好ましくはマグネシウム及び／又はカルシウムが存在する。「微量元素」とは、好ましくはヒトの生体である生体の成長、発達及び／又は生理機能にとって非常に少ない量のみ必要であるような化学元素である。「糖類」とは、炭素、水素、酸素のみからなり、水素対酸素の原子比が２：１である実験式Ｃｍ（Ｈ２Ｏ）ｎを有する有機化合物である。「脂質」とは、長い疎水性の炭水化物部を有するために、少なくとも部分的に非水溶性である生体化合物である。脂質は生体システムの中では細胞膜の非常に重要な部分である。
【００２９】
本発明における「経口摂取可能なキャリア」とは、本発明のプロバイオティクス製剤、菌株又はその変異体若しくは多様体の、被験者又は患者に対する適用に用いられ、本発明のプロバイオティクス製剤、菌株及びその変異体若しくは多様体の経口摂取を助ける。本発明において用いられる「乳製品」という用語の意味には、動物及び／又は植物由来の乳を含む媒質が含まれる。動物由来の乳には、牛、羊、ヤギ及びバッファローの乳が含まれる。植物由来の乳としては、本発明に従って利用することができる植物由来の発酵可能なあらゆる物質、特に大豆、米又は穀物由来の物質を挙げることができる。経口摂取可能なキャリアとして利用可能なのはカプセル、錠剤、粉末、顆粒、トローチ、カシェ剤、エリキシール剤、乳化剤、溶液、シロップ、懸濁剤、柔らかいゼラチンカプセル及び堅いゼラチンカプセル、坐薬、無菌包装された粉末又は食品からなるグループから選択されるものであり、食品は乳製品、酸性乳、ヨーグルト、冷凍ヨーグルト、発酵ヨーグルト飲料や飲用ヨーグルトなどのヨーグルト製品、チーズ、発酵クリーム、牛乳ベースのデザート、発酵乳又は人乳近似乳、粉乳、濃縮乳、チーズスプレッド、ドレッシング、飲料及びその他のものであってもよい。本発明における「アジュバント」とは、単独で使用したときには直接的な影響があるとしてもわずかである一方、薬剤又はワクチンなどの他の物質、又は本発明のプロバイオティクス製剤、菌株又はその変異体若しくは多様体の効果を変化させる薬理学的又は免疫学的薬剤である。
【００３０】
「原体」は、患者に対して薬理学的に耐容性を有する一方、薬理学的に活性を有する化学的化合物又は生体化合物、例えばビサコジル、ロペラミド、アミノサリチル酸、スルファサラジン、５−アミノサリチル酸、４−アミノサリチル酸、ベンザラジン、二塩化水素化物塩、オルサラジン、バルサラジド、ビスマスサブサリチル酸又はそれらの混合物などを指す。この化合物は、本発明のプロバイオティクス製剤、菌株又はその変異体若しくは多様体の有益な効果を直接的あるいは間接的に促進するいかなる化合物であってもよい。直接的とは、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体自体が保護され、その成長又は腸管バリアへの接着が補助されることを意味する。間接的とは、消化管の機能障害、消化器系の望ましくない炎症反応、腸内微生物叢の不均衡、消化管内のビフィドバクテリウム属の減少及び／又は消化管内の腸管バリアの機能不全に関連する疾患の予防及び／又は治療、又は腹痛、不快感、膨満、鼓脹、消化不全、緊急の便意及び／又は減少した及び／又は増加した便通の回数、排便が不完全である感覚及び／又はそれらの組み合わせの患者の苦痛を軽減、予防及び／又は治療すること、又は患者の生活の質を改善することに有用であると知られている追加の物質又は化合物、すなわち原体が、単独で又は他の原体との組み合わせでプロバイオティクス製剤に加えられ、含まれてもよいことを意味する。特に、原体は、過敏性便通、クローン病又は潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、回腸嚢炎又は感染性大腸炎、消化器癌、関節リウマチなどの全身疾患、望ましくない炎症反応による自己免疫障害、クロストリジウム・ディフィシル関連下痢、抗生物質関連下痢、ロタウイルス関連下痢又は感染性下痢などの望ましくない炎症反応による下痢疾患及びそれらの組み合わせなどの消化器疾患を治療するための既知の薬剤であるものがプロバイオティクス製剤に含まれてもよい。このような原体の、当業者に知られた例は、ロートリスト（ドイツ、２０１０年）又は他のどのような薬剤登録簿においても見ることができる。「生体化合物」とは、糖質、アミノ酸、脂質、核酸、蛋白質、ペプチド、細胞隔室、リン脂質、ポリエーテル、植物性、動物性、又は微生物性の化合物など、どのような生体化合物であってもよい。「蛋白質」、「ペプチド」又は「ポリペプチド」はそれらの一般的な意味に従って理解されるもので、蛋白性アミノ酸又は非蛋白性アミノ酸の直線的な構成物であり、蛋白質は１つ以上のサブユニットと、ビタミン、ミネラルなどの触媒相当物質を含んでもよい。
【００３１】
「コロニー形成単位」（ｃｆｕ）は、本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体の生菌細胞の計測単位である。本発明のプロバイオティクス製剤は、菌株、その変異体又は多様体を１カプセル又は１錠剤又は粉末の１単位又は１食品あたりに１０１ｃｆｕより多く含み、１カプセル又は１錠剤又は粉末の１単位又は１食品あたり１０２、１０３、１０４、１０５又は１０６コロニー形成単位（ｃｆｕ）以上含んでもよく、好ましくは菌株、変異体又は多様体が１カプセル又は１錠剤又は粉末の１単位又は１食品あたり１０７ｃｆｕより多く存在し、より好ましくは菌株、変異体又は多様体が１カプセル又は１錠剤又は粉末の１単位又は１食品あたり１０８ｃｆｕより多く存在し、さらに好ましくは菌株、変異体又は多様体が１カプセル又は１錠剤又は粉末の１単位又は１食品あたり１０９ｃｆｕより多く存在する。プロバイオティクス製剤中の、患者１人に１日に投与する菌株、変異体又は多様体の量は１０１ｃｆｕ以上であり、１０２、１０３、１０４、１０５又は１０６ｃｆｕ以上であってもよく、好ましくは１０７ｃｆｕ以上であり、より好ましくは１０８ｃｆｕ以上であり、さらに好ましくは１０９ｃｆｕ以上又は１０１０ｃｆｕ以上である。１日の投与量は患者の生理的状態に応じて、すなわち症状が重篤である場合、増量してもよい。投与量は、１日の量を２倍、３倍、又は複数倍にするように増量することができる。反対に、例えば不耐性の場合又は薬物を追加する場合に２等分又は２分、３分、４分して減量することができる。又は上記の１日の投与量を毎日ではなく、２日又は３日に１度、又は１週間に１度投与して減量することもできる。菌株、その変異体又は多様体又はプロバイオティクス製剤は、その人間又は患者が都合がよいと考えるとき、例えば朝、正午、午後又は夕方などのいつ服用してもよく、好ましくは、服用時間は起床後など朝、又は就寝前など夕方である。菌株、その変異体又は多様体又はプロバイオティクス製剤が含む経口摂取可能なキャリアが食品であれば、投与はその経口摂取可能なキャリア、すなわち食品の特性に応じて行われる。菌株、その変異体又は多様体又はプロバイオティクス製剤が含む経口摂取可能なキャリアがカプセル、錠剤又はそれに類似した経口摂取可能なキャリアである場合には、飲料又は水、好ましくは水を伴って経口的に投与される。
【００３２】
概して、本発明のプロバイオティクス製剤及び菌株の投与は、プロバイオティクス、食品又は薬剤の特定の形態に応じて行われる。従って通常は、本発明のプロバイオティクス及び菌株は経口的、好ましくは非経口的に、又は直腸を通じて投与される。
【００３３】
本発明のプロバイオティクス製剤を製造する方法は、少なくとも下記の工程を含む。
ａ）蛋白質に富んだ液体増殖培地中で、上皮細胞単層１ｍｍ２につき少なくとも約１０細菌細胞の接着を示す、又は少なくとも１．５の接着指数を有するビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体、又はビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株又はその変異体若しくは多様体である受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５又はその変異体若しくは多様体を発酵及び／又は増殖させる工程。
ｂ）遠心、安定化、冷凍乾燥、摩砕及び篩分によって上記菌株の細胞を回収する工程。
ｃ）所望により細胞を、プレバイオティクス、薬理学上許容可能な化合物、アジュバント、細菌成分、原体、生体化合物、蛋白質及び／又はペプチドからなるグループの１つ以上の構成要素と混合／混和する工程。
ｄ）工程ｂ）の細胞又は工程ｃ）の混合物を経口摂取可能なキャリアに導入する工程。
【００３４】
まず、本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株、変異体又は多様体の発酵及び増殖は、“Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｃｌａｉｍｓ”Ｗｏｌｆｇａｎｇ  Ｋｎｅｉｆｅｌ、Ｓｅｐｐｏ  Ｓａｌｍｉｎｅｎ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、第１版（２０１１年１月７日）に記載されているように、当業者に知られた通常の手段及び方法によって行うことができることに留意すべきである。
【００３５】
概して、本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株、変異体又は多様体を増殖させる及び／又は発酵するための培地は、少なくとも水、デキストロース、酵母エキス及びミネラルを含む。本発明の菌株及びその変異体若しくは多様体を増殖させる及び／又は発酵するために使用される標準培地はＭＲＳ液体培地（アメリカ合衆国、ミシガン州、デトロイト、Ｄｉｆｃｏ）に０．０５％Ｌ−システイン塩酸塩を補ったもの（ｃＭＲＳ）である。当業者は、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株などの細菌を増殖させ、発酵及び前培養するために他の培地を使用することもできるという事実を十分に認識している。所望により、工程ａ）に先だって菌株又はその変異体若しくは多様体が振蕩フラスコ中で前培養される。このために、上記の標準培地少なくとも２００ｍｌ、好ましくは少なくとも３００ｍｌ、より好ましくは少なくとも４００ｍｌ、さらに好ましくは少なくとも５００ｍｌ、最も好ましくは少なくとも６００ｍｌに、菌株又はその変異体若しくは多様体の少なくとも１つの細胞を播種する。この前培養では、一般的に、３７℃、２２０ｒｐｍで嫌気的に一晩増殖させる。
【００３６】
前培養は、続いて少なくとも５００ｌ、好ましくは少なくとも６００ｌ、より好ましくは少なくとも７００ｌ、さらに好ましくは少なくとも８００ｌ、最も好ましくは少なくとも１０００ｌの容量を有する前発酵槽中でより高度な発酵の播種を行うために、完全に又は部分的に使用することができる。前発酵槽中での本発明の菌株、変異体及び多様体を発酵した後、その菌株、多様体及び変異体を含む細胞培養物は、少なくとも５０００ｌ、好ましくは少なくとも７５００ｌ、より好ましくは少なくとも１０，０００ｌ、さらに好ましくは少なくとも１５，０００ｌ、最も好ましくは少なくとも２０，０００ｌの容量を有する主発酵槽に、少なくとも部分的に移される。前発酵槽及び主発酵槽では、本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥム菌株、その変異体又は多様体を発酵及び増殖させるために上記の標準培地が使用される。本発明の菌株、変異体及び多様体の栄養としての役割を果たす培地中の糖類が枯渇した後、発酵及び細胞増殖が停止し、細胞が回収される。一般的に、枯渇後の細胞密度は少なくとも１０１ｃｆｕであり、任意により１０２、１０３、１０４、１０５又は１０６細胞／ｍｌ以上、好ましくは少なくとも１０７細胞／ｍｌ、より好ましくは少なくとも１０８細胞／ｍｌ、さらに好ましくは少なくとも１０９細胞／ｍｌ又は少なくとも１０１０細胞／ｍｌである。当業者は、標準的な乾燥方法及びあらかじめ重量測定したガラス管の重量測定を用いた乾燥重量としての生物量決定方法、又は（日本、Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｕ−１１００などの）分光光度計を用いた吸収５７８ｎｍでの光学濃度の測定による細胞密度又は生物量を決定する方法を知っている。
【００３７】
前発酵槽及び主発酵槽は、本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥムの菌株、菌株の変異体及び／又は多様体を培養、発酵、増殖させる及び／又は処理するのに適した標準的なバイオリアクターから派生させることができる。標準的なバイオリアクターの提供者は、例えばＡｐｐｌｉｋｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｂ．Ｖ．（オランダ、スキーダム）、Ｉｎｆｏｒｓ（スイス、ボットミンゲン）、Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（スイス、ヴァルト）及びＳａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｓｔｅｄｉｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＧｍｂＨ（ドイツ、ゲッティンゲン）である。前発酵及び主発酵の両方がバッチモードで行われる。これは発酵中に培地又は他の構成物が補充されることがないということを意味する。
【００３８】
主発酵後、ＧＥＡ  Ｗｅｓｔｆａｌｉａ  Ｓｅｐａｒａｔｏｒ  Ｇｒｏｕｐ  ＧｍｂＨ（ドイツ、エルデ）ほかによって提供されるような、約２０００−１５，０００ｌ／時の運転状態時許容量を有するディスク遠心器又は分離器などを使用した遠心によって細胞が回収される。続いて、当業者によく知られた標準の適用及び手段を用いて細胞が安定化、冷凍乾燥、摩砕及び篩分される。冷凍乾燥によって、５００ｌから１０００ｌ、好ましくは６００ｌから８００ｌの体積を有し、約１００ｋｇから２００ｋｇ、好ましくは１５０ｋｇまでの重量を有する濃縮物が得られる。
【００３９】
のちに、細胞は所望によりプレバイオティクス及び／又は以下のものからなるグループの１つ以上の構成要素と混合される。薬理学上許容可能な化合物、経口摂取可能なキャリア、アジュバント、細菌成分、原体、生体化合物及び／又は蛋白質及び／又はペプチド及び／又はそれらの混合物、特にグルタミン／グルタミン酸が豊富である蛋白質及び／又はペプチド、脂質、糖質、ミネラル及び／又は微量元素。上記の少なくとも１つの薬理学上許容可能な化合物は、ビタミンＢ類など１つ以上のビタミン、カルシウム又はマグネシウムなど１つ以上のミネラル、ラクトース、マルトデキストリン、イヌリン、デキストロース、マンニトール、マルトース、デキストリン、ソルビトール、フルクトースなど１つ以上の糖質及びそれらの異なる量での混合物からなるグループから選択されたものであってもよい。
【００４０】
本発明のプロバイオティクス製剤を得るために、全体として１５−４０ｇ、好ましくは１８−３５ｇ、より好ましくは２０−３０ｇ、さらに好ましくは２２−２８ｇ、最も好ましくは２５ｇの本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥム細胞、菌株、その変異体又は多様体と、５０−１００ｇ、好ましくは６０−９０ｇ、より好ましくは６５−８５ｇ、さらに好ましくは７０−８０ｇ、最も好ましくは７５ｇの、細胞、菌株、その変異体又は多様体の栄養としてのプレバイオティクス、糖質、薬理学上許容可能な化合物又はそれらの混合物からなるグループの１つ以上の構成要素を混合し、所望により３０−７０ｇ、好ましくは３５−６５ｇ、より好ましくは４０−６０ｇ、さらに好ましくは４５−５５ｇ、最も好ましくは５０ｇの薬理学上許容可能な化合物、経口摂取可能なキャリア、アジュバント、細菌成分、原体、生体化合物及び／又は蛋白質及び／又はペプチド、特にグルタミン／グルタミン酸が豊富である蛋白質及び／又はペプチド、脂質、糖質、ビタミン、ミネラル、微量元素及び／又はそれらの混合物からなるグループの１つ以上の構成要素を、プロバイオティクス製剤の注入性を改善するために混合する。１５−４０ｇ、好ましくは１８−３５ｇ、より好ましくは２０−３０ｇ、さらに好ましくは２２−２８ｇ、最も好ましくは２５ｇの本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥム細胞、菌株、その変異体又は多様体を、５０−１００ｇ、好ましくは６０−９０ｇ、より好ましくは６５−８５ｇ、さらに好ましくは７０−８０ｇ、最も好ましくは７５ｇの糖質、糖質混合物、プレバイオティクス又はそれらの混合物と混合し、そして所望により３０−７０ｇ、好ましくは３５−６５ｇ、より好ましくは４０−６０ｇ、さらに好ましくは４５−５５ｇ、最も好ましくは５０ｇの薬理学上許容可能な化合物、糖質、ビタミン、ミネラル、微量元素及び／又はそれらの混合物からなるグループの１つ以上の構成要素と混合することが好ましい。より好ましいのは、１５−４０ｇ、好ましくは１８−３５ｇ、より好ましくは２０−３０ｇ、さらに好ましくは２２−２８ｇ、最も好ましくは２５ｇの本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥム細胞、菌株、その変異体又は多様体を５０−１００ｇ、好ましくは６０−９０ｇ、より好ましくは６５−８５ｇ、さらに好ましくは７０−８０ｇ、最も好ましくは７５ｇの糖質、イヌリン、フルクトオリゴ糖又はそれらの混合物と混合し、そして所望により３０−７０ｇ、好ましくは３５−６５ｇ、より好ましくは４０−６０ｇ、さらに好ましくは４５−５５ｇ、最も好ましくは５０ｇのビタミンＢ類などのビタミン、カルシウム又はマグネシウムなど１つ以上のミネラル、ラクトース、マルトデキストリン、イヌリン、デキストロース、マンニトール、フルクトオリゴ糖、マンニット、マルトース、デキストリン、ソルビトール、フルクトースなど１つ以上の糖質及びそれらの混合物からなるグループの１つ以上の構成要素と混合することである。さらに好ましいのは、２５ｇの本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥム細胞、菌株、その変異体又は多様体を、７５ｇの、糖質、プレバイオティクス、マルトデキストリン、イヌリン、デキストロース、マンニトール、マルトース、デキストリン、ソルビトール、フルクトース及びそれらの混合物からなるグループから選択された１つの構成要素と混合し、そして５０ｇのセルロース、薬理学上許容可能な化合物、経口摂取可能なキャリア、アジュバント、細菌成分、原体、生体化合物及び／又は蛋白質及び／又はペプチド、特にグルタミン／グルタミン酸が豊富である蛋白質及び／又はペプチド、脂質、糖質、ビタミン、ミネラル、微量元素及びそれらの混合物からなるグループから選択された１つの構成要素と混合することである。最も好ましいのは、２５ｇの本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥム細胞、菌株、その変異体又は多様体を、７５ｇのマルトデキストリンと混合し、５０ｇのセルロースと混合することである。菌株の発酵及び／又は増殖、回収、安定化、冷凍乾燥、摩砕及び篩分後の、本発明の細胞、菌株、その変異体又は多様体と構成要素の混合／混和は、当業者に知られている標準的な技術、適用及び方法によって行われてもよく、好ましくはカラムブレンダーが使用される。構成要素の比が上記の比と一致する限り、当然、混合／混和に使用する装置の容量に応じて、より多い又は少ない量を混合／混和に使用してもよい。典型的な比は、例えば菌株２５％、プレバイオティクス又は糖質又はマルトデキストリン７５％、セルロースなどの薬理学上許容可能な化合物５０％である。
【００４１】
例えば、５０−３００ｍｇ、好ましくは７５−２５０ｍｇ、より好ましくは１００−２００ｍｇ、さらに好ましくは１２０−１７５ｍｇ、最も好ましくは１５０ｍｇの、本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥム細胞、菌株、その変異体又は多様体、又は上記の混合物、又は本発明のプロバイオティクス製剤を、経口摂取可能なキャリアの１単位、例えばカプセル、錠剤、トローチ、カシェ剤、エリキシール剤、乳化剤、溶液、シロップ、懸濁剤、柔らかいゼラチンカプセル及び堅いゼラチンカプセル、坐薬、無菌包装された粉末又は食品、例えば乳製品、酸性乳、ヨーグルト、冷凍ヨーグルト、発酵ヨーグルト飲料や飲用ヨーグルトなどのヨーグルト製品、チーズ、発酵クリーム、牛乳ベースのデザート、発酵乳又は人乳近似乳、粉乳、濃縮乳、チーズスプレッド、ドレッシング、飲料及びその他のものに導入する。５０ｍｇ、好ましくは７５ｍｇ、より好ましくは１００ｍｇ、さらに好ましくは１２０ｍｇ、そして最も好ましくは１５０ｍｇの本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥム細胞、菌株、その変異体又は多様体、又は上記の混合物を、カプセル、錠剤、トローチ、カシェ剤、柔らかいゼラチンカプセル及び堅いゼラチンカプセル、坐薬、より好ましくはカプセル、柔らかいゼラチンカプセル及び堅いゼラチンカプセルに導入することが好ましい。従って、経口摂取可能なキャリアの１単位、すなわちカプセル、錠剤、粉末、顆粒、トローチ、カシェ剤、エリキシール剤、乳化剤、溶液、シロップ、懸濁剤、柔らかいゼラチンカプセル及び堅いゼラチンカプセル、坐薬、無菌包装された粉末又は食品、例えば乳製品、酸性乳、ヨーグルト、冷凍ヨーグルト、発酵ヨーグルトや飲用ヨーグルトなどのヨーグルト製品、チーズ、発酵クリーム、牛乳ベースのデザート、発酵乳又は人乳近似乳、粉乳、濃縮乳、チーズスプレッド、ドレッシング、及び／又は飲料への導入後には、１０１ｃｆｕより多く、任意により１０２、１０３、１０４、１０５又は１０６ｃｆｕ以上、好ましくは１０７ｃｆｕより多く、より好ましくは１０８ｃｆｕより多く、さらに好ましくは１０９ｃｆｕ又は１０１０ｃｆｕより多くを含む。どのような場合にも、重量による量はｃｆｕの濃度に応じて、カプセル、錠剤、粉末、顆粒、トローチ、カシェ剤、エリキシール剤、乳化剤、溶液、シロップ、懸濁剤、柔らかいゼラチンカプセル及び堅いゼラチンカプセル、坐薬、無菌包装された粉末又は食品などの最終的な製品中の、本発明のビフィドバクテリウム・ビフィドゥム細胞、菌株、その変異体又は多様体の量が１０１ｃｆｕより多く、任意により１０２、１０３、１０４、１０５又は１０６ｃｆｕ以上、好ましくは１０７ｃｆｕより多く、より好ましくは１０８ｃｆｕより多く、さらに好ましくは１０９ｃｆｕ又は１０１０ｃｆｕより多くなるように調節することができる。ｃｆｕの量が１０１ｃｆｕより少ない場合、任意により１０２、１０３、１０４、１０５又は１０６ｃｆｕ、１０７ｃｆｕ、１０８ｃｆｕ、１０９ｃｆｕ以上、又は１０１０より少ない場合にも、患者が経口摂取可能なキャリアを１単位より多く摂ることによって前述のｃｆｕの量に適応することができる。
【００４２】
１つの実施態様の例では、２５ｍｇの受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５細胞、すなわち少なくとも１０９ｃｆｕの受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５、７５ｍｇのマルトデキストリン及び５０ｍｇのセルロースが、好ましくはウシゼラチンカプセルである１つのゼラチンカプセルに導入される。好ましくは、受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５細胞２５ｍｇを含む上記のカプセルが、少なくとも１０９ｃｆｕの受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５、７５ｍｇのマルトデキストリン及び５０ｍｇのセルロースを含み、１日１回投与される。経口摂取可能なキャリアは、一般に、質の水準が高く、栄養補助食品の衛生基準を満たし、様々な製造者から得られるものであるべきである。カプセル、例えばウシゼラチンカプセルは、例えばＣａｐｓｕｇｅｌ（ベルギー、ボルネム）から得ることができる。
【００４３】
別の好ましい実施態様では、好ましくは少なくとも１０９ｃｆｕの受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５を含む、２５ｍｇの受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の細胞及び２ｇのマルトデキストリンを混合し、粉末の１単位と考える。好ましくは、上記の、２５ｍｇの受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５細胞を含む粉末の１単位、すなわち少なくとも１０９ｃｆｕの受託番号ＤＳＭ２４５１４のもとで寄託されているビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５が１日１回投与される。
【００４４】
人間又は患者によって選択された特定の経口摂取可能なキャリアとは独立に、患者に投与されるプロバイオティクス製剤中のビフィドバクテリウム・ビフィドゥム細胞、菌株、変異体又は多様体の１日の量は、１０１ｃｆｕ以上、任意により１０２、１０３、１０４、１０５又は１０６ｃｆｕ以上、好ましくは１０７ｃｆｕ以上、より好ましくは１０８ｃｆｕ以上、さらに好ましくは１０９ｃｆｕ又は１０１０ｃｆｕ以上である。これに代わる服用量は上記で議論されている。
【００４５】
本発明は、上記の、詳細において異なっていてもよい実施態様に限定されるものではない。
【実施例】
【００４６】
１．  細菌培養条件
概して、ビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５などビフィドバクテリウム属は、決まった手順として、ＭＲＳ液体培地（アメリカ合衆国、ミシガン州、デトロイト、Ｄｉｆｃｏ）に０．０５％Ｌ−システイン塩酸塩を補ったもの（ｃＭＲＳ）の中で嫌気的に、３７℃で、一晩増殖させた。
【００４７】
２．  ビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５のヒト腸管上皮細胞培養株Ｃａｃｏ−２に対する接着特性試験
２．１  Ｃａｃｏ−２細胞に対する細菌接着
この試験は、特定のビフィドバクテリウム属の菌株がヒトの結腸細胞に対する接着特性を有するかどうか、従って、本発明において接着性の菌株として理解できるかどうかを試験するために行うことができる。ヒト結腸腺癌Ｃａｃｏ−２細胞（ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−３７）を、３ｃｍペトリ皿中、顕微鏡用カバーガラス上で、１０％（体積／体積）熱不活化（５６℃で３０分間）ウシ胎児血清、１００Ｕｍｌ−１ペニシリン、１００ｍｇ・ｍｌ−１ストレプトマイシン、０．１ｍＭ非必須アミノ酸及び２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを補ったダルベッコ変法イーグル培地の中で手順通り増殖させ、３７℃、９５％空気及び５％二酸化炭素の環境で、ウォータージャケットインキュベーターの中でインキュベートした。この試験には、生体内から得たどのような上皮細胞でも適しており、これはヒト消化管由来の上皮細胞を含みながらこれに限定されるものではないが、ＣａＣｏ−２細胞又はその誘導体が最も好ましく、ＡＴＣＣ及びＥＣＡＣＣ等の培養コレクションバンクから商業的に入手可能である。培地は週に２回交換した。接着アッセイには、合流後１５日の細胞（完全に分化させた細胞）が用いられた。細菌細胞を加える前に、細胞の単層をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．３）で２回注意深く洗浄した。一晩増殖させた培養物の細菌細胞濃度は、ＤＡＰＩ（４’，６’−ジアミジノ−２−フェニリンドール）染色後、顕微鏡的に決定した。ＰＢＳ（ｐＨ７．３）に再懸濁した各菌株約２×１０８細胞を完全に分化したＣａｃｏ−２細胞の単層と共にインキュベートした。嫌気的条件中、３７℃で１時間経過したのち、結合していない細菌を取り除くためにすべての単層をＰＢＳで３回洗浄した。次に細胞を３ｍｌのメタノールで固定し、室温で８分間インキュベートした。メタノールを取り除いた後、細胞を３ｍｌのギムザ染色液（１：２０）（イタリア、ミラノ、Ｃａｒｌｏ  Ｅｒｂａ）で染色し、室温で３０分間放置した。次に、洗浄液が無色になるまでウェルを洗浄し、インキュベーター中で１時間乾燥した。顕微鏡用カバーガラスをペトリ皿から取り除き、顕微鏡的に（倍率１００倍）、油浸を用いて観察した。ランダムに選択した２０の視野で接着した細菌の数を計測し、平均した。統計的に有意な差があるかどうかには、スチューデントの独立ｔ検定を行った。
【００４８】
ビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５は、この菌株の細胞のかなり大部分がＣａｃｏ−２単層に接着したままであり、接着が単なる非特異的な物理的取り込みでないことの根拠を提供したように、ヒト結腸細胞Ｃａｃｏ−２に対する高い接着性を有することがわかった。具体的には、上皮細胞単層１ｍｍ２に対して５５細菌細胞が接着し、３，８７４の接着指数（細菌細胞／Ｃａｃｏ−２細胞１００個）（Ｐ＜０．０２６）を示す結果となった。この点については、上皮細胞単層１ｍｍ２につき少なくとも１０細菌細胞の接着を示す、又は少なくとも１．５の接着指数を有するビフィドバクテリウム属の菌株は接着性の菌株であると考えられる。
【００４９】
２．２  細菌細胞壁抽出物の調製
０．２ｌの液体培養物から遠心によって細菌細胞を回収し、細胞を破砕するためにフレンチプレス（１２，０００ｌｂ／ｉｎ２、〜２，１４２ｋｇ／ｃｍ２）の改変された使用を伴うＭａｔｔａｒｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３年）に記載されている方法によって処理した。
【００５０】
３．  過敏性腸症候群を有する患者におけるビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の効果を評価するための二重盲検ランダム化プラセボコントロール研究
３．１  概要
１２２人の患者が、プラセボ（Ｎ＝６２）又はビフィドバクテリウム・ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５（Ｎ＝６０）（「ビフィドバクテリウム群」とも呼ぶ）を投与される群にランダム化された。被験者は、１×１０９ｃｆｕ／カプセル又はプラセボを１日１回、４週間服用した。ＩＢＳの重篤度及び個別のＩＢＳ症状を、７ポイントリッカートスケールで毎日記録した。
【００５１】
３．２  研究対象集団
患者は、研究責任者から採用され、また広告によって募集された。栄養学上の研究プロトコルは、バイエルン州医師会の倫理委員会に提示された。１８歳から６８歳の、軽度から中程度のＩＢＳ（ＲｏｍｅＩＩＩ基準）を有する、臨床的に目立たない被験者が考慮され算入された。炎症性の器質的な消化器疾患、全身疾患、癌、自己免疫疾患、糖尿病、既知の乳糖不耐症又は免疫不全、虫垂切除術を除く既知の腹部手術歴を有する、５０歳より年上である場合過去五年間に疾患のないＳ字結腸鏡検査又は結腸鏡検査を受けていない、甲状腺機能亢進症と診断された、研究開始前少なくとも３ヶ月に抗精神病薬又は全身的副腎皮質ステロイドの使用があった、重大な精神科疾患、セリアック病又は妊娠している個人は除外された。
【００５２】
３．３  研究デザイン
この研究は、前向き、多中心、ランダム化、二重盲検、プラセボコントロール、二群の栄養学的研究として行われた。研究全体を通じて、患者は自分の全体的なＩＢＳの症状と個別のＩＢＳの症状を、患者日記を用いて毎日記録した。さらに、患者は通院の外来で全体的なＩＢＳの症状並びに個別のＩＢＳの症状（外来２−４）及び生活の質（外来３及び４）について質問された。外来は、スクリーニング時、２週間後（ならし期）、６週間後（治療の終了）及び８週間後（ウォッシュアウト期の終了）に行われた（図１）。
【００５３】
患者が書面によるインフォームドコンセントを出した後、１日目（外来１）に、完全な病歴聴取及び身体診察を含むスクリーニング検査を受けた。中央検査室での、妊娠検査を含む分析のために血液検体が採取された。スクリーニング外来時に、患者は研究期間を通じて自分の食習慣及び生活習慣を維持するよう指示された。また患者日記が配布された。
【００５４】
２回目の外来（１５日目）では、日記の精査が行われた。ならし期の２週目に、軽度から中程度の疼痛がある日が少なくとも２日あり、すべての算入条件を満たし、除外条件のいずれにも当てはまらなかった患者をランダムにＢ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５又はプラセボを投与される１：１の群に分けた。治療はコンピューターによって生成されたブロックサイズ４のブロックランダム化リストに従って割り当てられた。ブロックサイズは研究者に対して開示されなかった。介入期の間、患者は、プロバイオティクス製剤を含む１カプセル又は全く同じ外見のプラセボを、４週間、毎日服用した。割り当ては患者及び病院スタッフの双方に対して隠された。
【００５５】
治療の終了期（外来３、４３日目）に、コンプライアンスを確認するために未使用の研究用製品及び空の包装を研究者が回収した。日記が回収され、精査された。
【００５６】
栄養補助なしのウォッシュアウト期後（訪問４、５７日目）に完全な身体診察が行われ、血液検体が採取された。非常時の薬剤としてビサコジル及びロペラミドが許可された。研究用製品の効能に影響を与えうる他のプロバイオティクス及び薬剤は許可されなかった。
【００５７】
３．４  プロバイオティクスの調製
栄養補助剤は、適正製造基準（ＧＭＰ）条件下で調製された。Ｂ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５は蛋白質が豊富な液体増殖培地中で増殖させ、遠心によって回収し、安定化させ、冷凍乾燥し、摩砕し、篩分した。乾燥粉末状の細菌は薬理学上許容可能な化合物と混合され、１×１０９ｃｆｕのカプセルに充填した。プラセボカプセルは全く同じ外見であり、マルトデキストリンを含んでいた。
【００５８】
３．５  エンドポイントの定義
前向きに定義された第１の効果の変数は、７ポイントリッカートスケールを用いた被験者のＩＢＳ症状の全体的な評価であった。患者は毎日「あなたのＩＢＳの症状（例えば腹痛／不快感、膨満／鼓脹、消化不全、緊急の便意、排便の習慣）を全体的に考えると、この２４時間でどのぐらいあなたはこれらの症状に影響されましたか。」という質問に答えるように言われた。可能な答えは０（全くない）から、１（非常に軽い）、２（軽い）、３（中程度）、４（強い）、５（非常に強い）、６（耐えられない）にわたった。
【００５９】
第２の効果の変数は、同じ７ポイントリッカートスケールで記録したＩＢＳの個別の症状、例えば「腹痛／不快感」、「膨満／鼓脹」、「消化不全」及び「緊急の便通」などを含むものであった。個別の症状のスコアは、３つの個別の症状のスコアの相加平均として合成症状スコアに加法的に組み入れられた。さらに、減少した及び／又は増加した便通の回数、排便が不完全である感覚及び他の薬剤の服用が日記に毎日記録された。
【００６０】
治療の終了時に、そして研究の終了時に再度、医師から患者に効果の全体的な評価及び耐容性の評価に関する質問を行った。効果は次の質問で評価された。「あなたが、４週間の治療の間、あなたの全体的な生活状態、腹部不快感／腹痛や変化した排便の習慣といった症状についてどう感じたかを考えてください。研究用の薬剤を服用する前に普段感じていたのと比べて、最近４週間の症状の軽減をどう評価しますか。」可能な答えは「完全に軽減された（１）、かなり軽減された（２）、少し軽減された（３）、不変（４）又は悪化した（５）」であった。「完全に軽減された」及び「かなり軽減された」が「十分な軽減」と定義された。健康関連の生活の質は、ＳＦ−１２調査票を用いて、治療の開始前と治療の終了後に評価された。
【００６１】
研究の全体にわたって有害事象が記録され、耐容性の全体的な評価については外来３及び４で質問された。スクリーニング外来時及び研究の終了時に臨床検査値及びバイタルサインが調べられた。
【００６２】
３．６  統計学的方法
３．６．１  標本サイズ推定
主観的包括的アセスメント（ＳＧＡ）が、７ポイントリッカートスケール上で少なくとも２０％減少したことは、適切な治療の効果であると考えられた。公開されたデータ（Ｗｈｏｒｗｅｌｌ、２００６年）に基づいて、Ｂ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５とプラセボの間のＩＢＳ症状のＳＧＡにおいて、７ポイントリッカートスケール上で０．６ポイントの差が予測された（例えばプラセボグループで３．０、ビフィドバクテリウム群で２．４）。同じデータを用いて標準偏差は１．０と推定された。これらの仮定に基づいて、両側の有意水準がα＝０．０５であり、１−β＝０．８の検出力のウィルコクソン−マン−ホイットニー検定で、各グループにつき４７人の患者という標本サイズが必要であった。ランダム化後の脱落率が推定１５−２０％であることを考慮し、ランダム化される患者は１１０人を予定され、研究開始前にありうる辞退分を補うために、１３２人の患者が採用された。
【００６３】
３．６．２  統計学的解析
本研究の第１の目的は、ビフィドバクテリア群で、治療の終了時に全体的なＩＢＳの症状のＳＧＡをプラセボ群に対して有意に減少させることであった。各被験者についてＳＧＡはベースライン、治療期間中及びウォッシュアウト期間中で相加平均として計算された。ベースラインの値に生じうる差を補正するため、４週間の治療期間の平均スコアから、ならし期（１−２週目）の間の平均スコアを引いたものとして計算されたベースラインからの変化が、１次目標の基準として定められた。研究センターによって階層化されたノンパラメトリックなファン・エルターレン検定が治療群の比較に用いられた。Ｐ＜０．０５が統計的に有意であると考えられた。
【００６４】
１次解析は、ランダム化に成功したすべての患者が含まれるｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ集団に基づいて行われた。欠けているベースライン後の値は、１次目標の基準のためのベースラインの値に帰せられ、これらの患者は非反応者として評価された。補助的な目的で、追加のプロトコル群分析が行われた。
【００６５】
２次目標の基準の記述的な分析は、入手可能なデータに基づいて行われた。治療の差は、連続的な変数にノンパラメトリックなウィルコキソン検定を行うか、２値変数にフィッシャー検定を行うことで検定した。すべてのｐの値は両側のものである。
【００６６】
第２の効果の変数は、治療の間の症状緩和の５０％ルールに基づく反応を含んでいた（治療期間中、４週間のうち少なくとも２週間での改善であり、改善はベースラインから少なくとも１ポイントの減少として定義された）。すべての統計学的分析は、アメリカ合衆国、ノースキャロライナ州、ケーリー、ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｃ．によるウィンドウズのためのＳＡＳバージョン９．１．３を用いて行われた。
【００６７】
３．７  結果
３．７．１  被験者
研究に合計１３２人の患者が含められ、１２２人の患者がプラセボ（Ｎ＝６２）又はＢ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５（Ｎ＝６０）のいずれかを投与されるようにうまくランダム化された。すべてのランダム化された患者がｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ（ＩＴＴ）解析を行われた（Ｎ＝１２２）。１人のランダム化後外来のなかった患者が有害事象の解析から除外された。合計１０３人（４９プラセボ、５４真薬）がプロトコル群として解析された（図２）。
【００６８】
３．７．２  ベースライン特性
ベースライン特性としては、２群の間に有意差は存在しなかった。２１．５％は下痢優位型ＩＢＳ、１９．８％が便秘優位型ＩＢＳ、５８．７％が両型として分類され、ビフィドバクテリウム群とプラセボ群で有意差が存在しなかった。
【００６９】
人口統計は治療群間で均衡がとれており、６７％の女性の患者を含み、平均体重が７１ｋｇで、対応するＢＭＩは２４であった。患者はプラセボ群で平均４１歳であり、ビフィドバクテリウム群で平均３７歳であった（表１）。
【表１】
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Ｉｎｔｅｎｔ  ｔｏ  ｔｒｅａｔ（ＩＴＴ）集団の人口統計特性
ＳＤ−標準偏差、ＢＭＩ−体重指数
【００７０】
３．７．３  被験者のＩＢＳ症状についての主観的包括的アセスメント（ＳＧＡ）
第１のエンドポイントは主観的包括的アセスメント日記上でＩＢＳ症状のＳＧＡが減少することであった。７ポイントリッカートスケールを使用した上で、プラセボ群の−０．１６ポイント［９５％信頼区間（ＣＩ）：−０．３２；０．００］（ならし期の２．７９から治療期の２．６３）と比較して、Ｂ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５は全体的なＩＢＳ症状を−０．８８ポイントと有意に改善した［９５％ＣＩ：−１．０７；−０．６９］（ならし期の２．９５から治療期の２．０７）（ｐ＜０．０００１）。週単位でのＳＧＡの評価では、治療期の２週目から研究の終了時まで毎週、ビフィドバクテリウム群の患者について有意に有益な影響が示された（図３）。
【００７１】
３．７．４  第２のエンドポイント
第２のエンドポイントは、７ポイントリッカートスケール上での個別のＩＢＳ症状、例えば「疼痛／不快感」、「膨満／鼓脹」、「消化不全」、「緊急の便意」、「減少した及び／又は増加した便通の回数」及び「排便が不完全である感覚」の変化を含んでいた。
疼痛／不快感については、治療期間中、プラセボ群の−０．１８ポイント［９５％ＣＩ：−０．３５；−０．０１］に対してＢ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５は−０．８２ポイント［９５％ＣＩ：−１．０１；−０．６３］（ｐ＜０．０００１）、膨満／鼓脹についてはプラセボ群の−０．２１ポイント［９５％ＣＩ：−０．３７；−０．０５］に対してＢ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５は−０．９２ポイント［９５％ＣＩ：−１．１５；−０．６９］（ｐ＜０．０００１）と有意な低減を示した。この低減はウォッシュアウト期を通じて維持された。緊急の便意は、プラセボ群の−０．２１ポイント［９５％ＣＩ：−０．３５；−０．０７］に対して−０．６７ポイント［９５％ＣＩ：−０．８６；−０．４８］（ｐ＜０．０００１）と治療期間中には有意に低減されたが、ウォッシュアウト期中は続かなかった。排便の頻度及び排便が不完全である感覚については影響を検出することができなかった（図４）。
【００７２】
週単位での個別のＩＢＳ症状、疼痛／不快感及び膨満／鼓脹の評価では、プラセボ群と比較して、治療期の２週目から研究の終了時まで毎週、ビフィドバクテリウム群の患者について有意に有益な効果が示された。ビフィドバクテリウム群とプラセボ群での緊急の便意についての有意差は４週目と６週目の間で示された（図５及び６）。
【００７３】
消化不全は、外来での調査票の「便通満足度」の項目によって測定された。便通満足度は、治療後、プラセボ群での３．６９から６．４７の変化に対し、ビフィドバクテリウム群で３．８９から２．４４に低減した（ｐ＝０．０００２）。低減はウォッシュアウトフェーズを通じて維持された（プラセボ群の３．４７に対してビフィドバクテリウム群での２．３３、ｐ＜０．０００１）。
【００７４】
３．７．５  合成スコア
個別のＩＢＳ症状（疼痛／不快感、膨満／鼓脹、緊急の便意）について合成スコアが計算された。ならし期には、スコアは両グループで類似していた。ビフィドバクテリウム群の患者は、Ｂ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の服用によって、プラセボ群に対して有意に有益な影響を受けていた（ビフィドバクテリウム群で−０．８０、プラセボ群で−０．２０；ｐ＜０．０００１）。この改善はウォッシュアウト期を通じて保たれていた（ビフィドバクテリウム群で−０．８５；プラセボ群で−０．３１；ｐ＜０．０００１）。
【００７５】
３．７．６  治療反応者
総合的な反応者は、第１のパラメーター（ＩＢＳ症状のＳＧＡ）について、リッカートスケール上少なくとも１ポイント、４週間の治療期間のうち少なくとも２週で（５０％ルール）、週間平均スコアが改善している患者として定義された。腹痛の反応者は、同じ５０％ルールを用いて「疼痛／不快感」の解析について少なくとも平均１ポイント改善しているものとして定義された。総合的な反応者の割合は、ビフィドバクテリウム群で５６．７％であり、プラセボ群で２１．０％のみであった（ｐ＝０．０００１）。治療群間での差は、「疼痛／不快感」の症状のみを考慮したときには少し少なく、ビフィドバクテリウム群で反応者の割合が４８．３％であり、プラセボ群で２４．２％のみであった（ｐ＝０．００８）（図７）。
【００７６】
３．７．７  外来での全体的な効果
総合的な効果の評価としては、プラセボ群と比較してビフィドバクテリウム群で有意に改善していた。治療の終了時には、ビフィドバクテリウム群の患者の４３．３％が十分な軽減を達成していたが、プラセボ群では８．１％のみであった（ｐ＜０．０００１）。研究の終了時には、ビフィドバクテリウム群で４６．７％、プラセボ群で１１．３％の患者の充分な軽減が報告された（ｐ＜０．０００１；図８）。
【００７７】
３．７．８  健康関連の生活の質
ＳＦ−１２総計スコアの評価では、ビフィドバクテリウム群において有意な生活の質の改善が示された。身体的な健康の総計スコアは、ベースラインと比較してビフィドバクテリウム群では３．９９改善し、プラセボ群では１．０８しか改善しなかった（ｐ＝０．０１８５）。精神的な健康の総計スコアは、ベースラインと比較してビフィドバクテリウム群で５．７８改善し、プラセボ群でわずか１．５８しか改善しなかった（ｐ＝０．００８３）。
【００７８】
３．７．９  有害事象
研究用製品との関連が疑われる有害事象の報告は３６件のみであり、その１３件がプラセボ群、２３件が治療群であったが、Ｂ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５対プラセボで副作用の特性に有意な差は見いだされなかった。
【００７９】
３．７．１０  要約
Ｂ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５は、ＩＢＳ症状の主観的包括的アセスメント（ＳＧＡ）をプラセボ群の−０．１６ポイントのみ［９５％信頼区間（ＣＩ）：−０．３２；０．００］と比較して、−０．８８ポイントと有意に減少させた［９５％ＣＩ：−１．０７；−０．６９］（ｐ＜０．０００１）。Ｂ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５はさらに個別のＩＢＳ症状、疼痛／不快感、膨満／鼓脹、消化不全及び緊急の便意を有意に改善した。ＳＦ−１２総計スコアの評価では、ビフィドバクテリウム群内で有意に生活の質が向上したことが示された。さらに、ビフィドバクテリウム群の患者の４６．７％で充分な軽減が報告され、プラセボ群の患者では充分な軽減を報告したのは１１．３％のみであった（ｐ＜０．０００１）。総合的な反応者の割合はビフィドバクテリウム群で５６．７％であり、プラセボ群で２１．０％のみであった（ｐ＝０．０００１）。Ｂ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５は耐容性に優れており、有害事象はプラセボと異なるものではなかった。
【００８０】
３．８  結論
Ｂ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５は全体的なＩＢＳを効果的に軽減し、個別のＩＢＳ症状も改善する。ＩＢＳに対するＢ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の高い効果性と、良い副作用特性を考慮すると、Ｂ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５はＩＢＳ治療の有望な候補である。
【００８１】
このランダム化、二重盲検、プラセボコントロール研究は、Ｂ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５がＩＢＳの治療において有益な効果を有するということを示す。本研究では、Ｂ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５は全体的なＩＢＳ及びその関連症状、例えば疼痛／不快感及び鼓脹を、プラセボと比較して有意に改善した。さらに、Ｂ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５は生活の質も有意に改善した。これらの有益な影響は、服用なしのウォッシュアウト期を通じて維持された。総合的な反応者の割合は、プラセボ群の患者の２１．０％のみと比較して、ビフィドバクテリウム群で５６．７％と優勢であった（ｐ＝０．０００１）。研究の終了時には、ビフィドバクテリウム群の患者の４６．７％で、プラセボ群の患者では１１．３％のみで充分な軽減が報告された（ｐ＜０．０００１）。
【００８２】
今日までに、数個の研究がＩＢＳ及びその症状へのビフィドバクテリウム属の影響を検討している。しかしながら、有意な有益な影響を示すことができたものはわずかであった。さらに、発明者たちの知識によると、過敏性腸症候群の有意な軽減と、生活の質の改善を同時に示すことができるプロバイオティックな菌株はなかった。いくつかの研究は、標本サイズの小ささ及びランダム化における間違いによって効果を示すことができなかった可能性はあるが、複数の異なるプロバイオティックな菌株は、繰り返し、ＩＢＳの有意な改善を示さなかった。近年、Ｂｒｅｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００９年）がＩＢＳの治療におけるプロバイオティクスの効果性、安全性及び耐容性の評価を対象としたランダム化コントロール試験（ＲＣＴ）のシステマティックレビューを出版した。合計１６のＲＣＴが解析に含められた。これらの中で、例外的に１つのビフィドバクテリウム属の菌株が２つの適切にデザインされた研究においてＩＢＳ症状の改善に対して効果を示した。この発見は、プロバイオティクスの効果性は高度に菌株特異的であり、わずかの菌株のみがＩＢＳにおいて効果を示すことができるという事実に帰することができる。
【００８３】
結論として、Ｂ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５は全体的なＩＢＳとそのＩＢＳ症状を改善するとともに、良い副作用特性を有している。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】研究の概略図である。
【図２】研究フローの線図である。
【図３】週単位での、全体的なＩＢＳの症状（ＳＧＡによる。０−６スケールによって記録）に対するプラセボとＢ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の効果の比較である。ビフィドバクテリウム群対プラセボで、全体的なＩＢＳ症状の有意な改善を示している。
【図４】ＩＢＳ症状の減少の、ベースラインから治療期の平均スコア変化での比較（Ｂ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５対プラセボ）を示す図である。
【図５】週単位での、疼痛／不快感（０−６リッカートスケールによって記録）に対するプラセボとＢ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の効果の比較を示す図である。ビフィドバクテリウム群対プラセボで有意な改善を示している。
【図６】週単位での、膨満／鼓脹（０−６スケールによって記録）に対するプラセボとＢ．ビフィドゥムＭＩＭＢｂ７５の効果の比較を示す図である。ビフィドバクテリウム群対プラセボで有意な改善を示している。
【図７】治療期間中の総合的な反応者を示す図である（ＩＴＴ）。
【図８】治療後の充分な軽減を示す図である（ＩＴＴ）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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