(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルコール使用障害を治療するための、式：
【化１】
0006002778.tif 000019
（式中、
Ａは、
【化２】
0006002778.tif 000020
または
【化３】
0006002778.tif 000021
である；
Ｒ１は、フルオロまたはクロロである；
Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、各々水素である、または各々フルオロである；
Ｒ３は、水素、メチル、ヒドロキシメチル、または（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシメチルである；
Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、シアノメチル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、シクロプロピル、ヒドロキシメチル、メトキシ、シクロプロピルメトキシ、アミノカルボニルメトキシ、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシメチル、シクロプロピルオキシメチル、シクロプロピルメトキシメチル、１−ヒドロキシ−１−メチルエチル、アミノカルボニルオキシメチル、メチルアミノカルボニルオキシメチル、ジメチルアミノカルボニルオキシメチル、アミノカルボニル、アミノカルボニルメチル、−ＣＨ２−ＮＲ５Ｒ６、ヒドロキシイミン、メトキシイミン、モルホリン−４−イル、モルホリン−４−イルメチル、Ａｒ１、−ＣＨ２Ａｒ１、テトラヒドロフラン−２−イル、３−オキソモルホリン−４−イルメチル、２−オキソピロリジン−１−イルメチル、および２−オキソピペリジン−１−イルメチルからなる群から選択される；
Ｒ４’は、フルオロ、クロロ、シアノ、シアノメチル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、シクロプロピル、ヒドロキシメチル、メトキシ、メトキシメチル、アミノカルボニルオキシメチル、メチルアミノカルボニルオキシメチル、ジメチルアミノカルボニルオキシメチル、メチルカルボニル、アミノカルボニル、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、−ＮＲ５’Ｒ６、−ＣＨ２−ＮＲ５’Ｒ６、モルホリン−４−イル、モルホリン−４−イルメチル、Ａｒ２、−ＣＨ２Ａｒ２、３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イルメチル、ピロリジン−１−イルメチル、１−アミノシクロプロピル、１−メチルアミノシクロプロピル、および１−ジメチルアミノシクロプロピルからなる群から選択される；
Ｒ５は、水素、Ｃ１−Ｃ３アルキル、シアノメチル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、またはアミノカルボニルメチルである；
Ｒ５’は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、シクロプロピル、ヒドロキシエチル、メトキシエチル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、または−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである；
Ｒ６は、水素またはメチルである；
Ｒ７は、水素、フルオロ、クロロ、メチル、ヒドロキシメチル、またはメトキシである；
Ａｒ１は、イミダゾ−ル−１−イル、イミダゾール−２−イル、２−メチルイミダゾール−１−イル、ピラゾール−１−イル、１，２，３−トリアゾール−１−イル；１，２，３−トリアゾール−２−イル；１，２，４−トリアゾール−１−イル、イソキサゾール−３−イル、オキサゾール−５−イル、および３−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−５−イルからなる群から選択される部分である；ならびに
Ａｒ２は、イミダゾール−１−イル、イミダゾール−２−イル、２−メチルイミダゾール−１−イル、１−メチルイミダゾール−２−イル、および１，２，４−トリアゾール−３−イルからなる群から選択される部分である）
の化合物またはその医薬的に許容可能な塩を含む医薬組成物。
【請求項２】
Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、各々フルオロである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
Ｒ１はクロロであり、Ｒ３はメチルまたはヒドロキシメチルである、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
Ｒ３はメチルである、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記化合物は、
［２−［４−［（２−クロロ−４，４−ジフルオロ−スピロ［５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−１’−イル）メチル］−３−メチル−ピラゾール−１−イル］−３−ピリジル］メタノール、
２−クロロ−４，４−ジフルオロ−１’−［［１−（３−フルオロ−２−ピリジル）−３−メチル−ピラゾール−４−イル］メチル］スピロ［５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］、もしくは
２−クロロ−１’−［［１−（２，６−ジフルオロフェニル）−３−メチル−ピラゾール−４−イル］メチル］−４，４−ジフルオロ−スピロ［５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］、またはその医薬的に許容可能な塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記化合物は、
［２−［４−［（２−クロロ−４，４−ジフルオロ−スピロ［５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−１’−イル）メチル］−３−メチル−ピラゾール−１−イル］−３−ピリジル］メタノール、またはその医薬的に許容可能な塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の概要】
【０００１】
本発明は、アルコール使用障害を治療するための、ノシセプチン／オルファニンＦＱ受容体（ＮＯＣ／ＯＦＱ）アンタゴニスト、特にＯＲＬ−１受容体アンタゴニストの使用に関する。
【０００２】
アルコール使用障害、例えばアルコール依存症およびアルコール乱用は、重大な健康問題や社会問題を引き起こす。世界貿易機関（ＷＴＯ）は、アルコール使用障害を「世界中の早過ぎる死亡や身体的障害にとって第３の重要なリスク因子」であると認定している。世界中で年間およそ２５０万人がアルコール関連の原因で死亡しており、死亡の約１０％は３０歳未満の人々において発生している。有害なアルコール使用は、障害調整損失生命年で測定される世界疾病負荷の約４．５％を占めており、神経精神病や他の健康問題、例えば心血管疾患、肝硬変ならびに口腔、喉頭、咽頭、食道、胸部、および腸の癌にとっての主要リスク因子である。現在の標準治療薬は、アルコール渇望を減少させること、およびアルコールが摂取された時点に得られる満足感を遮断することによって患者の禁酒の継続に役立つナルトレキソンおよびアカンプロセートである。しかし現在利用できる治療法は、併存する気分障害の治療にはほとんど効果がない。実際に、ナルトレキソンは、一部の人々では快感消失症を生じさせることがある。そこで、アルコール使用障害を治療するための改良された治療薬に対する必要性がある。
【０００３】
ノシセプチン／オルファニンＦＱ受容体（ＮＯＣ／ＯＦＱ）、特にＯＲＬ−１受容体は、主として中枢神経系および末梢神経系、ならびに消化管、平滑筋および免疫系において発現するクラスＡのＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）である。構造的にはオピオイド受容体に関連しているが、ＯＦＱ／ノシセプチン系は、古典的なオピオイド受容体であるμ、δ、およびκとの有意な交差反応性を示さない。さらに、ノシセプチンは、インビボで抗オピオイド活性を示す（例えば、ＯＲＬ−１受容体に対する天然リガンドであるＯＲＱ／ノシセプチンは、抗侵害受容特性を示すと報告されている）。
【０００４】
ノシセプチン／オルファニンＦＱ受容体（ＮＯＣ／ＯＦＱ）アンタゴニスト、特にＯＲＬ−１受容体のアンタゴニストは、うつ病および摂食行動についての数種の動物モデルにおいて抗うつ薬様活性および食欲抑制活性を実証してきた。そこで、ＯＲＬ−１アンタゴニストは、うつ病の治療および／または過体重、肥満の治療、および／または過体重もしくは肥満に対する治療後の体重維持において有用であると思われる。他の研究は、疼痛、認知症およびパーキンソン症候群の治療におけるアンタゴニストの使用可能性を提案している。ノシセプチン／オルファニンＦＱ受容体（ＮＯＣ／ＯＦＱ）アゴニストは、他方では、アルコール使用障害、不安、疼痛、ストレス誘発性拒食症、咳、神経因性膀胱、水腫、および薬物依存症の治療に結び付けられてきた（例えば、Ｍｕｒｐｈｙ，Ｎｉａｌｌ  Ｐ．（２０１０），Ｔｈｅ  Ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ／Ｏｒｐｈａｎｉｎ  ＦＱ  Ｓｙｓｔｅｍ  ａｓ  ａ  Ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  Ｔｒｅａｔｉｎｇ  Ａｌｃｏｈｏｌｉｓｍ．ＣＮＳ  ＆  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ−Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｔｇｅｔｓ  ９：８７−９３；およびＣｈｉｏｕ，Ｌ．Ｃ．，Ｌｉａｏ，Ｙ．Ｙ．，Ｆａｎ，Ｐ．Ｃ．，Ｋｕｏ，Ｐ．Ｈ．，Ｗａｎｇ，Ｃ．Ｈ．，Ｒｉｅｍｅｒ，Ｃ．ａｎｄ  Ｐｒｉｎｓｓｅｎ，Ｅ．Ｐ．（２００７），Ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ／Ｏｒｐｈａｎｉｎ  ＦＱ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ８：１１７−１３５を参照されたい）。
【０００５】
国際公開第２０１１／０６００３５号および国際公開第２０１１／０６０２１７号は、うつ病、過体重、肥満、体重維持および偏頭痛の治療において使用するためのＯＲＬ−１アンタゴニストとしての所定のスピロピペリジン化合物について記載している。
【０００６】
予想外にも、本発明者らはここで、今ではＯＲＬ−１アンタゴニスト化合物がアルコール使用障害の治療において、例えばアルコール乱用の治療またはアルコール依存症の治療におけるように有用な可能性があることを見いだした。そこで本発明は、アルコール使用障害の治療において使用するためのＯＲＬ−１受容体に対する高アンタゴニスト効力を備える４’，５’−ジヒドロスピロ［ピペリジン−４，７’−チエノ［２，３−ｃ］ピラン］化合物のファミリーを提供する。
【０００７】
本発明の１つの態様は、アルコール使用障害の治療において使用するための式Ｉ：
【化１】
0006002778.tif 000002
（式中、
Ａは、
【化２】
0006002778.tif 000003
または
【化３】
0006002778.tif 000004
である；
Ｒ１は、フルオロまたはクロロである；
Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、各々水素である、または各々フルオロである；
Ｒ３は、水素、メチル、ヒドロキシメチル、または（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシメチルである；
Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、シアノメチル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、シクロプロピル、ヒドロキシメチル、メトキシ、シクロプロピルメトキシ、アミノカルボニルメトキシ、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシメチル、シクロプロピルオキシメチル、シクロプロピルメトキシメチル、１−ヒドロキシ−１−メチルエチル、アミノカルボニルオキシメチル、メチルアミノカルボニルオキシメチル、ジメチルアミノカルボニルオキシメチル、アミノカルボニル、アミノカルボニルメチル、−ＣＨ２−ＮＲ５Ｒ６、ヒドロキシイミン、メトキシイミン、モルホリン−４−イル、モルホリン−４−イルメチル、Ａｒ１、−ＣＨ２Ａｒ１、テトラヒドロフラン−２−イル、３−オキソモルホリン−４−イルメチル、２−オキソピロリジン−１−イルメチル、および２−オキソピペリジン−１−イルメチルからなる群から選択される；
Ｒ４’は、フルオロ、クロロ、シアノ、シアノメチル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、シクロプロピル、ヒドロキシメチル、メトキシ、メトキシメチル、アミノカルボニルオキシメチル、メチルアミノカルボニルオキシメチル、ジメチルアミノカルボニルオキシメチル、メチルカルボニル、アミノカルボニル、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、−ＮＲ５’Ｒ６、−ＣＨ２−ＮＲ５’Ｒ６、モルホリン−４−イル、モルホリン−４−イルメチル、Ａｒ２、−ＣＨ２Ａｒ２、３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イルメチル、ピロリジン−１−イルメチル、１−アミノシクロプロピル、１−メチルアミノシクロプロピル、および１−ジメチルアミノシクロプロピルからなる群から選択される；
Ｒ５は、水素、Ｃ１−Ｃ３アルキル、シアノメチル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、またはアミノカルボニルメチルである；
Ｒ５’は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、シクロプロピル、ヒドロキシエチル、メトキシエチル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、または−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである；
Ｒ６は、水素またはメチルである；
Ｒ７は、水素、フルオロ、クロロ、メチル、ヒドロキシメチル、またはメトキシである；
Ａｒ１は、イミダゾ−ル−１−イル、イミダゾール−２−イル、２−メチルイミダゾール−１−イル、ピラゾール−１−イル、１，２，３−トリアゾール−１−イル；１，２，３−トリアゾール−２−イル；１，２，４−トリアゾール−１−イル、イソキサゾール−３−イル、オキサゾール−５−イル、および３−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−５−イルからなる群から選択される部分である；ならびに
Ａｒ２は、イミダゾール−１−イル、イミダゾール−２−イル、２−メチルイミダゾール−１−イル、１−メチルイミダゾール−２−イル、および１，２，４−トリアゾール−３−イルからなる群から選択される部分である）
の化合物またはその医薬的に許容可能な塩を提供する。
【０００８】
本発明のこの態様のさらなる実施形態では、アルコール使用障害は、アルコール依存症またはアルコール乱用またはその両方である。さらなる実施形態では、該使用は、また別の治療成分との同時、個別、または連続併用である。
【０００９】
本発明のまた別の態様では、アルコール使用障害を治療するための医薬組成物であって、式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、およびその１つ以上の医薬的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤を含む医薬組成物が提供される。本発明のこの態様のまた別の実施形態では、アルコール依存症もしくはアルコール乱用またはその両方を治療するための医薬組成物であって、式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、およびその１つ以上の医薬的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤を含む医薬組成物が提供される。本発明のこの態様のさらなる実施形態は、式Ｉによる化合物、またはその医薬的に許容可能な塩、ならびに少なくとも１つの医薬的に許容可能な担体、賦形剤または希釈剤、および場合により他の治療成分を含む医薬組成物を提供する。
【００１０】
本発明のまた別の態様は、ヒトにおけるアルコール使用障害を治療する方法であって、そのような治療を必要とするヒトに有効量の式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩を投与することを含む方法を提供する。本発明のこの態様のさらなる実施形態は、アルコール依存症もしくはアルコール乱用またはその両方を治療する方法であって、そのような治療を必要とするヒトに有効量の式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩を投与することを含む方法を提供する。
【００１１】
本発明のまた別の態様は、アルコール使用障害を治療するための医薬品の製造における、式Ｉの化合物、またはその医薬的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明のこの態様の他の実施形態では、アルコール使用障害は、アルコール依存症もしくはアルコール乱用またはその両方である。本発明において使用するための化合物は塩基であり、したがって多数の有機酸および無機酸と反応して医薬的に許容可能な塩を形成する。本発明の化合物各々の医薬的に許容可能な塩は、本出願の範囲内に含まれることが企図されている。本明細書で使用する用語「医薬的に許容可能な塩」は、生体にとって実質的に非毒性である式Ｉの化合物の任意の塩を意味する。そのような医薬的に許容可能な塩およびそれらを調製するための一般的方法は、当分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌ，ｅｔ  ａｌ．，ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＡＬＴＳ：ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，ＳＥＬＥＣＴＩＯＮ  ＡＮＤ  ＵＳＥ，（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，２００８）を参照されたい。１つの実施形態では、塩は、酒石酸塩である。また別の実施形態では、塩は、ＨＣｌ塩である。
【００１２】
本発明において使用するために好ましい化合物は、
１）Ｒ１は、クロロである；
２）Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、各々フルオロである；
３）Ｒ１はクロロであり、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは各々フルオロである；
４）Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは各々水素である；
５）Ｒ３は、水素、メチル、ヒドロキシメチル、またはメトキシメチルである；
６）Ｒ３は、メチルである；
７）Ｒ３は、ヒドロキシメチルである；
８）Ｒ１はクロロであり、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは各々フルオロであり、ならびにＲ３はメチルである；
９）Ｒ１はクロロであり、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは各々フルオロであり、ならびにＲ３はヒドロキシメチルである；
１０）Ｒ４は、フルオロ、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、またはピラゾール−１−イルメチルである；
１１）Ｒ４は、フルオロである；
１２）Ｒ４は、ヒドロキシメチルである；
１３）Ｒ４は、メトキシメチルである；
１４）Ｒ４は、ピラゾール−１−イルメチルである；
１５）好ましい実施形態１）〜９）（このとき、Ｒ４は、フルオロである）のいずれか１つである；
１６）好ましい実施形態１）〜９）（このとき、Ｒ４は、ヒドロキシメチルである）のいずれか１つである；
１７）好ましい実施形態１）〜９）（このとき、Ｒ４は、メトキシメチルである）のいずれか１つである；
１８）好ましい実施形態１）〜９）（このとき、Ｒ４は、ピラゾール−１−イルメチルである）のいずれか１つである；
１９）Ｒ７は、水素、フルオロまたはクロロである；
２０）Ｒ７は、フルオロである；
２１）Ｒ１はクロロであり、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは各々フルオロであり、ならびにＲ７はフルオロである；
２２）Ｒ１はクロロであり、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは各々フルオロであり、Ｒ３はメチルであり、ならびにＲ７はフルオロである；
２３）Ｒ１はクロロであり、Ｒ２ａおよびＲ２ｂは各々フルオロであり、Ｒ３はヒドロキシメチルであり、ならびにＲ７はフルオロである；
２４）Ｒ４は、フルオロ、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、メチルカルボニルまたは２−メチルイミダゾール−１−イルである；
２５）Ｒ４’は、フルオロである；
２６）Ｒ４’は、ヒドロキシメチルである；
２７）Ｒ４’は、メトキシメチルである；
２８）Ｒ４’は、メチルカルボニルである；
２９）Ｒ４’は、２−メチルイミダゾール−１−イルである；
３０）好ましい実施形態１）〜９）または１９）〜２３）（このとき、Ｒ４’は、フルオロである）のいずれか１つである；
３１）好ましい実施形態１）〜９）または１９）〜２３）（このとき、Ｒ４’は、ヒドロキシメチルである）のいずれか１つである；
３２）好ましい実施形態１）〜９）または１９）〜２３）（このとき、Ｒ４’は、メトキシメチルである）のいずれか１つである；
３３）好ましい実施形態１）〜９）または１９）〜２３）（このとき、Ｒ４’は、メチルカルボニルである）のいずれか１つである；
３４）好ましい実施形態１）〜９）または１９）〜２３）（このとき、Ｒ４’は、２−メチルイミダゾール−１−イルである）のいずれか１つである
化合物である。
【００１３】
本発明の方法および使用において使用するための所定の好ましい化合物は、下記の表に記載の化合物およびそれらの医薬的に許容可能な塩である。
【００１４】
【表Ａ−１】
0006002778.tif 000005
【００１５】
【表Ａ−２】
0006002778.tif 000006
【００１６】
【表Ａ−３】
0006002778.tif 000007
【００１７】
Ｒ２ａおよびＲ２ｂが各々フルオロである化合物は、該化合物が酸化的代謝に対してより安定性であるより有益な薬物動態プロファイルを有するために好ましい。これは、本化合物の経口バイオアベイラビリティを改良する一般的効果を有する。
【００１８】
本発明において使用するための化合物およびそれらを製造する方法は、当分野において公知であり、強力で選択的なＯＲＬ−１受容体アンタゴニストであると特徴付けられている。それらは、当分野において周知で正しく認識されている方法による公知の合成スキームにしたがって調製できる。例えば、国際公開第２０１１／０６００３５号パンフレットおよび同第２０１１／０６０２１７号パンフレットを参照されたい。
【００１９】
非臨床動物試験において生成されたデータは、アルコール使用障害、例えばアルコール乱用およびアルコール依存症の治療においてＯＲＬ−１受容体アンタゴニストが役割を果たすことを裏付けている。詳細には、所定のＯＲＬ−１受容体アンタゴニストは、アルコール使用障害の齧歯類モデルにおいて有効であることが見いだされている。本化合物のこれらの特性を証明するために、代表的化合物を下記のインビボアッセイにおいてランすることができる：
【００２０】
アルコール嗜好性ラットにおけるエタノール自己投与
数種の系のアルコール嗜好性ラットは、妥当性が確認されたアルコール中毒症の動物モデルについての基準を満たす選択的繁殖技術を通して作成されている。詳細には、該動物モデルは、摂食または摂水制限の非存在下で薬理学的に重要な濃度のエタノールを自発的に摂取し、該動物モデルは、味覚、嗅覚、またはカロリー値ではなくその中毒作用のために過剰な濃度のエタノールを摂取し、長期間にわたって中毒を維持し、エタノールを摂取しようと努力し、持続的に摂取するにつれて耐性および依存を発生する（例えば、Ｌｅｓｔｅｒ  Ｄ  ａｎｄ  Ｆｒｅｅｄ  ＥＸ（１９７３）Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ａｎ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ａｌｃｏｈｏｌｉｓｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｅｈａｖｉｏｒ  １：１０３−１０７を参照されたい）。アルコール嗜好性（Ｐ）およびＭａｒｃｈｉｇｉａｎ  Ｓａｒｄｉｎｉａｎアルコール嗜好性（ｍｓＰ）ラットを含むそのような系は、それらが上記の基準を満たすために、そしてヒトにおけるアルコール摂取量を減少させるナルトレキソンおよびアカンプロセートを含む薬物はこれらの系におけるエタノール摂取量を減少させるために、アルコール使用障害のための潜在的薬物療法を評価するために有用であると考えられる。オペラントおよび自由選択自己投与方法は、ＰおよびｍｓＰラットにおける新規なノシセプチン／ＯＲＬ−１アンタゴニストの潜在的治療抗嗜癖活性を評価するために使用できる。
【００２１】
Ｐラットにおけるオペラント自己投与：
雌性Ｐラットを入手し、民間コロニー（Ｔａｃｏｎｉｃ社、ニューヨーク州ジャーマンタウン）から１対ずつ収容する。新規性誘導性のエタノール回避を減少させるために、ホームケージ上の採水器は、オペラント訓練に先行する２日間は１５％エタノール水溶液（ｖ／ｖ、水溶液）を含有するボトルと置換する。残りの実験を通して、ラットは、水および標準実験動物用飼料を随意に摂取するが、ホームケージ内のエタノールについてはそれ以上摂取しない。
【００２２】
ラットは、音響減衰チャンバ（ＭＥＤ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ社、バーモント州セントオルバンズ）内に含有された標準ラットオペラントチャンバ内で実施する１日１回の３０分間のセッションにおいてエタノール強化のためにレバーを押すように訓練する。これらのチャンバは、２枚のステンレススチール製および２枚の透明プレキシガラス製の壁から構成される。オペラントチャンバの床グリッドは、およそ１．５ｃｍの間隔をあけた０．５ｃｍ径のステンレススチール製の棒からなる。各オペラントチャンバは、グリッド床のおよそ６ｃｍ上方に１３ｃｍ離して配置された２本の格納式オペラントレバーを含有している。内側が凹んだ容器は、それを通して応答付随性エタノール（１５％、ｖ／ｖ、水溶液）を送達するためにディッパーカップ（容量：０．１ｍＬ）が上昇させられるレバー間の空間に配置する。応答が強化されると、４秒間のディッパーカップへのアクセスを通してその上に応答されるレバーの上方を刺激光が照明する。刺激の操作および行動応答は、オフライン分析用のパーソナルコンピュータによって制御および記録される（ＭＥＤ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ社、バーモント州セントオルバンズ）。
【００２３】
オペラント訓練中、いずれかのレバーでの応答は正応答であると見なされ、０．１ｍＬのエタノール強化を用いて報酬が与えられる。レバーを押すとエタノール報酬を得られることをラットが学習すると、応答偶発性は、一方のレバー（能動レバー）上で行われた応答が、他方の（非能動）レバーでの応答が強化されない間に固定比（ＦＲ）−１強化スケジュールを用いて強化されるように変化させられる。安定性ベースライン応答がＦＲ−１強化スケジュールに達すると、応答付随性はＦＲ−２へ増加され、その後さらにＦＲ−３へ増加されるので、各強化のためには３回のレバー押しが必要とされる。ラットがＦＲ−３スケジュール上で安定レベルの応答に達すると、応答偶発性は、それに対してラットが各エタノール報酬を受け取るためには漸進的により一生懸命励まなければならないように各実験セッションを通して応答要件が緩徐に増加される累進比率強化スケジュールへ変化させられる。詳細には、応答要件は下記のように増加される：全ラットは、各セッションをＦＲ−１強化スケジュールで開始する；３回の強化後、スケジュールはＦＲ−２へ増加される；そのレベルでの３回の強化後、スケジュールは２ずつＦＲ−４へ増加される；３回の強化後、スケジュールは２ずつＦＲ−６へ増加されるなどと続く（例えば、Ｏｓｔｅｒ  ＳＭ，Ｔｏａｌｓｔｏｎ  ＪＥ，Ｋｕｃ  ＫＡ，Ｐｏｍｍｅｒ  ＴＪ，Ｍｕｒｐｈｙ  ＪＭ，Ｌｕｍｅｎｇ  Ｌ，Ｂｅｌｌ  ＲＬ，ＭｃＢｒｉｄｅ  ＷＪ  ａｎｄ  Ｒｏｄｄ  ＺＡ（２００６）Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ａｌｃｏｈｏｌ  ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎｓ  ｏｎ  ｏｐｅｒａｎｔ  ｅｔｈａｎｏｌ  ｓｅｌｆ−ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｈｉｇｈ−ａｌｃｏｈｏｌ−ｄｒｉｎｋｉｎｇ  ｒｅｐｌｉｃａｔｅ  ｒａｔ  ｌｉｎｅｓ．Ａｌｃｏｈｏｌ  ３８：１５５−１６４を参照されたい）。各セッションは計３０分間継続され、その後、全ての刺激は停止され、レバーは引き戻される。セッションの終了時に、能動および非能動レバーでの応答回数、および該セッション中に到達した最高ＦＲ値として規定されている区切り点が記録される。摂取されたエタノールの量は、能動レバー押し回数から計算され、ｇ／ｋｇ（摂取されたＥｔＯＨ）に変換される。ラットは、該セッションの６０分前に、被験者内、クロスオーバー試験デザイン（次の投与との間に３〜４日間のウォッシュアウト期間をおく）を使用して、３、１０、もしくは３０ｍｇ／ｋｇの用量範囲内のビヒクルまたは試験化合物（２５ｍＭのリン酸バッファ（ｐＨ＝２）中の２０％  Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）からなるビヒクル中に溶解させた、３ｍＬ／ｋｇの用量体積）、または陽性コントロールとしての非選択的オピオイド受容体アンタゴニストであるナルトレキソン（１０ｍｇ／ｋｇ）の経口投与を受ける。別個の機会に、ラットはクロスオーバー試験デザインを使用して、該セッションの３０分前に、ビヒクルまたは３０ｍｇ／ｋｇの試験化合物（２５ｍＭリン酸バッファ中の２０％  Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）からなるビヒクル中に溶解させた、１ｍＬ／ｋｇの用量体積）の経口投与を受ける。
【００２４】
代表的な化合物を本質的には上述したようにアッセイすると、累進比率強化スケジュールで維持されたＰラットにおいて、エタノール動機付け応答、したがってエタノール摂取量を減少させることが見いだされている。化合物１および２を本質的には上述したように試験すると、表１におけるようにエタノール動機付け応答を減少させることが見いだされている。重要なことに、非能動レバーでの応答は、ＯＲＬ−１アンタゴニストによる影響を受けないが、これは非特異的運動副作用が欠如することを示している（ｐ＞０．０５）。
【００２５】
【表１】
0006002778.tif 000008
【００２６】
ｍｓＰラットにおけるストレス誘導性復帰：
ストレスは、ヒトおよび齧歯類における薬物およびアルコール探索が再発するための重要な誘因であり（Ｓｉｎｈａ  Ｒ（２００８）Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｓｔｒｅｓｓ，ｄｒｕｇ  ｕｓｅ，ａｎｄ  ｖｕｌｎｅｒａｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ａｄｄｉｃｔｉｏｎ．Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １１４１：１０５−１３０）、ラットにおいてストレス誘導性復帰法を使用してモデリングすることができる。この方法では、アルコール探索のストレス誘導性復帰は、公知の薬理学的ストレッサであるα２アドレナリン受容体アンタゴニストであるヨヒンビンの投与によって誘発する（Ｌｅ  ＡＤ，Ｈａｒｄｉｎｇ  Ｓ，Ｊｕｚｙｔｓｃｈ  Ｗ，Ｆｕｎｋ  Ｄ  ａｎｄ  Ｓｈａｈａｍ  Ｙ（２００５）Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ａｌｐｈａ−２  ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｓｔｒｅｓｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｒｅｉｎｓｔａｔｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｌｃｏｈｏｌ  ｓｅｅｋｉｎｇ  ａｎｄ  ａｌｃｏｈｏｌ  ｓｅｌｆ−ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｔｓ．Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（Ｂｅｒｌ）１７９：３６６−３７３）。
【００２７】
雄性ｍｓＰラットはカメリーノ大学（イタリア国マルシュ）から入手し、個別に収容して水および標準実験動物用飼料を随意に摂取させる。ラットは、音響減衰、換気環境小区画内に配置した標準オペラントチャンバ（ＭＥＤ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ社、バーモント州セントオルバンズ）内で１０％エタノール水溶液（ｖ／ｖ）を求めてレバー押しするように訓練する。これらのオペラントチャンバは、２枚のステンレススチール製および２枚の透明プレキシガラス製の壁から構成される。オペラントチャンバの床グリッドは、およそ１．５ｃｍの間隔をあけた０．５ｃｍ径のステンレススチール製の棒からなる。各オペラントチャンバには、グリッド床の４ｃｍ上方に、飲用水容器の両側でおよそ３ｃｍに配置された２本の格納式オペラントレバーを備える飲用水リザーバが装備されている。流体送達、レバー押し、および視覚刺激（白色室内灯の照明）の提示は、オフライン分析のためのＩＢＭ互換型コンピュータによって制御される。
【００２８】
ラットは、能動レバーでの各応答が０．１ｍＬのエタノールの送達を生じさせるＦＲ１強化スケジュール下で、３０分間の１日１回のオペラントセッションにおいてエタノール溶液を自己投与するように最初に訓練する。各エタノール送達には、白色室内灯の照明によってシグナリングされる５秒間のタイムアウトが結び付いている。アルコール自己投与訓練は、安定性ベースライン応答が達成されるまで継続する。安定性応答が達成されると、動物は３０分間の消光セッションを受けるので、その間のレバーでの応答は送達機序を駆動するがエタノールの送達は生じさせない。各セッションの方法は、レバー応答がもはや強化されないこと以外はエタノール自己投与セッションと同一である。動物は、経口投与方法に習熟させるために、ＯＲＬ−１受容体アンタゴニストの初期投与前の３日間にわたりビヒクルを用いて予備処置する。次にｍｓＰラットは、同一消光条件下で実施する復帰試験を受けさせる。復帰は、ビヒクルまたは試験化合物の経口投与（４５〜６０℃の水浴中での緩徐な加温を使用する、蒸留水および１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４の１：１混合液中に可溶化させた３または３０ｍｇ／ｋｇ、ｎ＝１０／群）からなり、さらに３０分後にオペラントセッション３０分前のヨヒンビン（２．０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内投与を実施する。
【００２９】
代表的化合物を本質的には上述したようにアッセイすると、エタノール探索のストレス誘導性復帰を用量依存性で減少させることが見いだされている。重要なことに、非能動レバー応答は治療による影響を受けないが、これはヨヒンビン誘導性復帰の減少が運動活動の非特異的変化に起因しなかったことを示している。化合物１および２を本質的には上述したように試験すると、表２におけるようにエタノール探索のストレス誘導性復帰を減少させることが見いだされている。
【００３０】
【表２】
0006002778.tif 000009
【００３１】
アルコール嗜好性ラットにおける自由選択エタノール自己投与：
Ｐラット：
本方法（Ｒｏｄｄ−Ｈｅｎｒｉｃｋｓ  ＺＡ，ＭｃＫｉｎｚｉｅ  ＤＬ，Ｓｈａｉｋｈ  ＳＲ，Ｍｕｒｐｈｙ  ＪＭ，ＭｃＢｒｉｄｅ  ＷＪ，Ｌｕｍｅｎｇ  Ｌ  ａｎｄ  Ｌｉ  ＴＫ（２０００）Ａｌｃｏｈｏｌ  ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ  ｅｆｆｅｃｔ  ｉｓ  ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｌｃｏｈｏｌ  ｐｒｅｆｅｒｒｉｎｇ（Ｐ）ｒａｔ  ａｆｔｅｒ  ｒｅｐｅａｔｅｄ  ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎｓ．Ａｌｃｏｈｏｌ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｒｅｓ  ２４：８−１６を一部変更した）では、雌性Ｐラットを民間コロニー（Ｔａｃｏｎｉｃ社、ニューヨーク州ジャーマンタウン）から入手し、個別収容して飼料、１５％エタノール（ｖ／ｖ、水溶液）、および水を随意に摂取させ、１２時間明暗周期（１６：００で消灯）で維持する。チャンバには、飼料および液体摂取の継続的監視ができるようにエタノール、水および飼料容器に取り付けた力変換システム（ＴＳＥ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、独国バートホンブルク）が装備されている。ラットは、薬物試験に先行する数カ月間にわたり、およそ５ｇ／ｋｇの平均１日摂取量で自発的に１５％エタノールを摂取する。ラットは、被験者内、クロスオーバー試験デザイン（次の投与との間に３〜４日間のウォッシュアウト期間をおく）を使用して、３、１０、もしくは３０ｍｇ／ｋｇの用量範囲内のビヒクルまたは試験化合物（３ｍＬ／ｋｇの用量体積、２５ｍＭのリン酸バッファ（ｐＨ＝２）中の２０％  Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）からなるビヒクル中に溶解させた）、またはナルトレキソン（１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ／ｋｇの用量体積、水溶液）を用いて暗周期の開始直前に経口処置する。別個の実験で、被検者間試験デザインを使用して、ラットに暗周期の開始直前にビヒクルの経口投与、その後に４回にわたる１日１回のビヒクルまたは３０ｍｇ／ｋｇの試験化合物の経口投与を摂取させる。
【００３２】
ｍｓＰラット：
別個の試験において、雄性ｍｓＰラットを民間コロニー（カメリーノ大学、イタリア国マルシュ）から入手し、個別収容し、飼料、１０％エタノール（ｖ／ｖ、水溶液）、および水を随意に摂取させ、１２時間明暗周期で維持する。エタノールおよび水は、摂取されたエタノールの体積を評価するために計量ボトルを使用して計量する（Ｅｃｏｎｏｍｉｄｏｕ  Ｄ，Ｆｅｄｅｌｉ  Ａ，Ｆａｒｄｏｎ  ＲＭ，Ｗｅｉｓｓ  Ｆ，Ｍａｓｓｉ  Ｍ  ａｎｄ  Ｃｉｃｃｏｃｉｏｐｐｏ  Ｒ（２００６）Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｎ／ｏｒｐｈａｎｉｎ  ＦＱ−ＮＯＰ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｌｉｇａｎｄｓ  ｏｎ  ｅｔｈａｎｏｌ  ｄｒｉｎｋｉｎｇ  ｉｎ  ａｌｃｏｈｏｌ−ｐｒｅｆｅｒｒｉｎｇ  ｍｓＰ  ｒａｔｓ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ２７：３２９９−３３０６）。飼料摂取量は、飼料容器を計量することによって監視する。ラットが５〜６ｇ／ｋｇ／日の自発的エタノール摂取量の安定性ベースラインに達したら（約４〜５月齢）、ラットは、被検者内、クロスオーバー試験デザイン（次の投与との間に３〜４日間のウォッシュアウト期間をおく）を使用して、暗周期の開始１時間前に、１：１の蒸留水：１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４（１〜５ｍＬ／ｋｇ用量体積）からなる調製物中の３または３０ｍｇ／ｋｇの用量範囲にある試験化合物を用いて経口処置する。動物にエタノール、水および飼料を暗周期の開始時に与え、飼料および液体の摂取量は２、８、および２４時間間隔で測定する。
【００３３】
代表的化合物を本質的には上述したようにアッセイすると、エタノールを自由選択で摂取させたＰラットおよびｍｓＰラットの両方におけるエタノール自己投与において、飼料または水の摂取量に有意な影響を及ぼすことなく、選択的用量依存性減少を生じさせることが見いだされている。化合物１、２および５を本質的には上述したようにアッセイすると、表３に示したように、エタノール自己投与を有意に減少させることが見いだされている。別個の実験において、化合物１は、表４に示したように、タキフィラキシーを伴わずに１日１回投与を行う４日間を通してＰラットにおけるエタノール摂取量の抑制を維持することが見いだされている。
【００３４】
【表３】
0006002778.tif 000010
【００３５】
【表４】
0006002778.tif 000011
【００３６】
側坐核内の細胞外ドーパミン濃度におけるエタノール刺激性増加
エタノールおよびその他の薬物の乱用が、脳報酬回路内、特に側坐核内のドーパミン（ＤＡ）の細胞外濃度を増加させることは公知である（Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ  Ｋ，ＭｃＢｒｉｄｅ  ＷＪ，Ｌｕｍｅｎｇ  Ｌ  ａｎｄ  Ｌｉ  ＴＫ（１９９２）Ａｌｃｏｈｏｌ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ａｎｄ  ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｎｕｃｌｅｕｓ  ａｃｃｕｍｂｅｎｓ．Ａｌｃｏｈｏｌ  ９：１７−２２；Ｄｉ  Ｃｈｉａｒａ  Ｇ  ａｎｄ  Ｉｍｐｅｒａｔｏ  Ａ（１９８８）Ｄｒｕｇｓ  ａｂｕｓｅｄ  ｂｙ  ｈｕｍａｎｓ  ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｅｓｏｌｉｍｂｉｃ  ｓｙｓｔｅｍ  ｏｆ  ｆｒｅｅｌｙ  ｍｏｖｉｎｇ  ｒａｔｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８５：５２７４−５２７８）。側坐核内ＤＡ濃度の増加の大きさは、快楽および報酬の主観的報告と直接に相関しており、乱用の可能性と関連している。アルコール依存症を治療するための市販薬であるナルトレキソンは、側坐核内でのエタノール刺激性ＤＡ遊離を遮断する（Ｇｏｎｚａｌｅｓ  ＲＡ  ａｎｄ  Ｗｅｉｓｓ  Ｆ（１９９８）Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｅｔｈａｎｏｌ−ｒｅｉｎｆｏｒｃｅｄ  ｂｅｈａｖｉｏｒ  ｂｙ  ｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｔｈａｎｏｌ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｉｎ  ｄｉａｌｙｓａｔｅ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｎｕｃｌｅｕｓ  ａｃｃｕｍｂｅｎｓ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  １８：１０６６３−１０６７１）。
【００３７】
Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ社（ニューヨーク州ジャーマンタウン）からの体重２６０〜３００ｇを備える雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系ラットの側坐核内に、実験５〜７日前に、供給業者によってガイドカニューラ（Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、インディアナ州ウェストラフィエット）が挿入される。側坐核用カニューラのための定位座標は：Ａ（前方からブレグマまで）、１．７ｍｍ；Ｌ（後方から正中矢状縫合まで、右側）、１．０ｍｍ；およびＶ（硬膜表面から腹側まで）、−６．０ｍｍである（Ｐａｘｉｎｏｓ  ａｎｄ  Ｗａｔｓｏｎ，１９８６）。Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社（インディアナ州ウェストラフィエット）製の同心型プローブ（ＢＲ−２）を水でフラッシュ洗浄し、メンブランチップの２ｍｍがガイドカニューラの末端の下方に伸びるように、実験の約１６時間前にカニューラ内に注意深く挿入する。次にラットを試験用プラスチック製ボウル内に入れて、一晩順化させる。Ｍｅｌｅｎｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．の方法（Ｍｅｌｅｎｄｅｚ  ＲＩ，Ｒｏｄｄ−Ｈｅｎｒｉｃｋｓ  ＺＡ，ＭｃＢｒｉｄｅ  ＷＪ  ａｎｄ  Ｍｕｒｐｈｙ  ＪＭ（２００３），Ａｌｃｏｈｏｌ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｖｅｎｔｒａｌ  ｐａｌｌｉｄｕｍ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇｌｏｂｕｓ  ｐａｌｌｉｄｕｓ：ａ  ｄｕａｌ−ｐｒｏｂｅ  ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ  ｓｔｕｄｙ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２８：９３９−９４６）を修正した方法に基づいて、ラットを実験当日の朝に、自由に行動する動物のためのフラクション収集システムに接続する（Ｒａｔｕｒｎ、ＢｉｏＡｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、インディアナ州ウェストラフィエット）。透析プローブの供給管は、人工脳脊髄液（１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＫＣｌ、１．７ｍＭのＣａＣｌ２および０．９ｍＭのＭｇＣｌ２（ｐＨ６．０））をプローブへ１．５μＬ／分の最終収集速度で送達するシリンジポンプ（ＢｅｅＨｉｖｅ  ａｎｄ  ＢａｂｙＢｅｅ、Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、インディアナ州ウェストラフィエット）へ接続する。ラットからの排出管を冷却フラクション収集装置（Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、インディアナ州ウェストラフィエット）へ取り付ける。５．０μＬ／分の初期潅流量で約１時間の期間後、１時間にわたりプローブを平衡させて安定性ベースライン濃度を確立するために流量を２．０μＬ／分に低下させ、次に２０分間フラクションの収集を開始する。あらゆる薬物の注射前に、４例のベースラインサンプルを収集する。
【００３８】
試験化合物は、３０ｍｇ／ｋｇ（２ｍＬ／ｋｇ用量体積、２５ｍＭリン酸バッファ（ｐＨ＝３）中の２０％  Ｃａｐｔｉｓｏｌ（登録商標）からなるビヒクル中に溶解）で経口投与する。本化合物は、単独（第４サンプル内へ１０分間；０分時点）、またはエタノールとの併用（第１サンプル内へ１０分間；−６０分の時点）のいずれかで投与する。エタノールは、ラット１匹当たり２．９ｍＬの体積での０．９％食塩液中の１５％（ｖ／ｖ）溶液で１．１ｇ／ｋｇの用量で腹腔内（ｉｐ）投与する。エタノールは、第４サンプル内に１０分間投与する（０分時点）。透析サンプルは、５℃へ設定したサンプル冷却トレイを備えるＡｌｃｏｔｔ  ７１８オートサンプラー／インジェクターへ移す（Ａｌｃｏｔｔ社、ジョージア州ノークロス）。ＨＰＬＣ分析法は、同一透析液中でノルエピネフリン（ＮＥ）、ドーパミン（ＤＡ）、およびセロトニン（５−ＨＴ）ならびにそれらの代謝産物である３，４−ジヒドロキシフェニル酢酸（ＤＯＰＡＣ）、ホモバニリン酸（ＨＶＡ）、３−メトキシ−４−ヒドロキシ−フェニルグリコール（ＭＨＰＧ）、およびセロトニン代謝産物である５−ヒドロキシインドール酢酸（５−ＨＩＡＡ）を同時に検出する。１０ポートＨＰＬＣ弁および２０μＬサンプルループを備えるＢＤＳ−Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  ３μｍ  Ｃ１８分析カラム（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ社製、２×１５０ｍｍ）は、透析サンプル中に含有される後期溶出ピークを捕捉する小さなサンプル浄化カラム（ＢＤＳ−Ｈｙｐｅｒｓｉｌ  ３μｍ  Ｃ１８、２×１０ｍｍ）を備える構成で使用する。両方のカラムについての移動相は同一であり、７５ｍＭの第一リン酸ナトリウム、３５０ｍｇ／Ｌの１−オクタンスルホン酸ナトリウム塩、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、０．８％のテトラヒドロフラン（ＨＰＬＣ等級、インヒビターフリー）および８％のアセトニトリル（ｐＨ３）（リン酸を用いて調整）からなる。両方のカラムについての流量は、０．２０ｍＬ／分である。分析カラムは、カラムヒータを用いて４０℃で維持するが、その間はサンプル浄化カラムを室温で１０ポート弁上に取り付ける。二重グラッシーカーボン電極を備える電気化学的検出器（ＥＧ  ＆  Ｇ  ＰＡＲＣ社、ニュージャージー州プリンストン）を使用する（Ｅ１＝６８０ｍＶ、Ｅ２＝１００ｍＶ、範囲＝両方の電極上で０．５ｎＡ）。代謝産物はＥ１で検出され、ＮＥおよびＤＡはＥ２で検出される。細胞外ＤＯＰＡＣ、ＨＶＡおよび５−ＨＩＡＡ濃度はＤＡおよびＮＥ濃度よりはるかに高いので、ＤＯＰＡＣ、ＨＶＡおよび５−ＨＩＡＡピークは、代謝産物ピークがスケール上に留まることを可能にするコンピュータへ個別チャネルを送信するＥＧ＆Ｇ検出器上の１０ボルト出力を利用して分析する。全３つのチャネルのデータは、ピーク高さおよびサンプル濃度を計算したＥＺＣｈｒｏｍクロマトグラフィデータシステム（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ社、カリフォルニア州サンラモン）を使用して収集する。ＮＥ、ＤＡおよび５ＨＴに対する感度は、０．１ｐｍｏｌ／ｍＬ（透析液）または２ｆｍｏｌ／サンプル（２０μＬ）である。
【００３９】
ビヒクル＋エタノール（１．１ｇ／ｋｇ、ＩＰ）はラット側坐核内のＤＡの細胞外濃度をベースライン濃度のおよそ１２５〜１３０％へ増加させるが、これは文献において報告された、乱用の全薬物によって様々な程度に生成される作用に類似する作用である。代表的化合物を本質的には上述したようにアッセイすると、ラット側坐核内における細胞外ＤＡ濃度の増加を防止することが見いだされている。重要なことに、エタノールの非存在下で投与すると、これらの化合物は側坐核内のＤＡの細胞外濃度には全く作用を有していない。化合物１を本質的には上述したようにアッセイすると、表５に示したように、側坐核内における細胞外ＤＡ濃度の増加を防止することが見いだされている。
【００４０】
【表５】
0006002778.tif 000012
【００４１】
本明細書に提示したデータに基づくと、本発明の化合物は、アルコール使用障害を治療する際の有効性を証明すると予想される。
【００４２】
本発明の方法において使用した化合物は任意の調製物を含まずに直接的に投与することができるが、本化合物は、通例は有効成分としての式Ｉの少なくとも１つの化合物、または医薬的に許容可能な塩、ならびに少なくとも１つの医薬的に許容可能な担体、希釈剤および／または賦形剤を含む医薬組成物の形態で投与される。これらの組成物は、経口、鼻腔内、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、および肺を含む様々な経路によって投与できる。当該の医薬組成物およびそれらを調製するための方法は、当分野において周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ｅｄ．，２１ｓｔ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｃｏ．，２００５）を参照されたい。
【００４３】
これらの組成物は、好ましくは単位剤形で製造され、各剤形は約０．１〜約５００ｍｇ、より通例は約１．０〜約２００ｍｇ、例えば約５〜５０ｍｇの有効成分を含有する。用語「単位剤形」は、ヒト被験者および他の哺乳動物のための単一用量として適合する物理的不連続単位を意味しており、各単位は所望の治療作用を生成するために計算された規定量の有効物質を、少なくとも１つの適切な医薬的に許容可能な担体、希釈剤および／または賦形剤と組み合わせて含有する。
【００４４】
式Ｉの化合物は、一般には広い用量範囲にわたって有効である。例えば、１日当たりの用量は、通例は約０．０１〜約５０ｍｇ／ｋｇ、より通例は約０．０５〜５．０ｍｇ／ｋｇ、および例えば０．１〜１．０ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲内に含まれる。一部の場合には、上述の範囲の下限より下方の用量レベルが十分以上である可能性があるが、他の場合にはいっそう多い用量を任意の有害な副作用を引き起こすことなく使用できるので、このため上述の用量範囲は本発明の範囲を制限することは決して企図されていない。実際に投与される化合物の量は、治療対象の状態、選択された投与経路、投与される実際の化合物、個別患者の年齢、体重、および反応、ならびに患者の症状の重症度を含む関連状況に照らして、医師によって決定されることは理解されよう。
以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］  ヒトにおけるアルコール使用障害を治療する方法であって、有効量の式：
【化４】
0006002778.tif 000013

（式中、
Ａは、
【化５】
0006002778.tif 000014

または
【化６】
0006002778.tif 000015

である；
Ｒ１は、フルオロまたはクロロである；
Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、各々水素である、または各々フルオロである；
Ｒ３は、水素、メチル、ヒドロキシメチル、または（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシメチルである；
Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、シアノメチル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、シクロプロピル、ヒドロキシメチル、メトキシ、シクロプロピルメトキシ、アミノカルボニルメトキシ、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシメチル、シクロプロピルオキシメチル、シクロプロピルメトキシメチル、１−ヒドロキシ−１−メチルエチル、アミノカルボニルオキシメチル、メチルアミノカルボニルオキシメチル、ジメチルアミノカルボニルオキシメチル、アミノカルボニル、アミノカルボニルメチル、−ＣＨ２−ＮＲ５Ｒ６、ヒドロキシイミン、メトキシイミン、モルホリン−４−イル、モルホリン−４−イルメチル、Ａｒ１、−ＣＨ２Ａｒ１、テトラヒドロフラン−２−イル、３−オキソモルホリン−４−イルメチル、２−オキソピロリジン−１−イルメチル、および２−オキソピペリジン−１−イルメチルからなる群から選択される；
Ｒ４’は、フルオロ、クロロ、シアノ、シアノメチル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、シクロプロピル、ヒドロキシメチル、メトキシ、メトキシメチル、アミノカルボニルオキシメチル、メチルアミノカルボニルオキシメチル、ジメチルアミノカルボニルオキシメチル、メチルカルボニル、アミノカルボニル、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、−ＮＲ５’Ｒ６、−ＣＨ２−ＮＲ５’Ｒ６、モルホリン−４−イル、モルホリン−４−イルメチル、Ａｒ２、−ＣＨ２Ａｒ２、３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イルメチル、ピロリジン−１−イルメチル、１−アミノシクロプロピル、１−メチルアミノシクロプロピル、および１−ジメチルアミノシクロプロピルからなる群から選択される；
Ｒ５は、水素、Ｃ１−Ｃ３アルキル、シアノメチル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、またはアミノカルボニルメチルである；
Ｒ５’は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、シクロプロピル、ヒドロキシエチル、メトキシエチル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、または−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである；
Ｒ６は、水素またはメチルである；
Ｒ７は、水素、フルオロ、クロロ、メチル、ヒドロキシメチル、またはメトキシである；
Ａｒ１は、イミダゾ−ル−１−イル、イミダゾール−２−イル、２−メチルイミダゾール−１−イル、ピラゾール−１−イル、１，２，３−トリアゾール−１−イル；１，２，３−トリアゾール−２−イル；１，２，４−トリアゾール−１−イル、イソキサゾール−３−イル、オキサゾール−５−イル、および３−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−５−イルからなる群から選択される部分である；ならびに
Ａｒ２は、イミダゾール−１−イル、イミダゾール−２−イル、２−メチルイミダゾール−１−イル、１−メチルイミダゾール−２−イル、および１，２，４−トリアゾール−３−イルからなる群から選択される部分である）
の化合物またはその医薬的に許容可能な塩をそのような治療を必要とするヒトに投与することを含む方法。
［２］  Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、各々フルオロである、［１］に記載の方法。
［３］  Ｒ１はクロロであり、Ｒ３はメチルまたはヒドロキシメチルである、［２］に記載の方法。
［４］  Ｒ３は、メチルである、［３］に記載の方法。
［５］  前記化合物は、
［２−［４−［（２−クロロ−４，４−ジフルオロ−スピロ［５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−１’−イル）メチル］−３−メチル−ピラゾール−１−イル］−３−ピリジル］メタノール、
２−クロロ−４，４−ジフルオロ−１’−［［１−（３−フルオロ−２−ピリジル）−３−メチル−ピラゾール−４−イル］メチル］スピロ［５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］、もしくは
２−クロロ−１’−［［１−（２，６−ジフルオロフェニル）−３−メチル−ピラゾール−４−イル］メチル］−４，４−ジフルオロ−スピロ［５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］、またはその医薬的に許容可能な塩である、［１］に記載の方法。
［６］  前記化合物は、［２−［４−［（２−クロロ−４，４−ジフルオロ−スピロ［５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−１’−イル）メチル］−３−メチル−ピラゾール−１−イル］−３−ピリジル］メタノール、またはその医薬的に許容可能な塩である、［１］に記載の方法。
［７］  前記アルコール使用障害は、アルコール依存症である、［１］に記載の方法。
［８］  前記アルコール使用障害は、アルコール依存症である、［２］に記載の方法。
［９］  前記アルコール使用障害は、アルコール依存症である、［５］に記載の方法。
［１０］  前記アルコール使用障害は、アルコール依存症である、［６］に記載の方法。
［１１］  前記アルコール使用障害は、アルコール乱用である、［１］に記載の方法。
［１２］  前記アルコール使用障害は、アルコール乱用である、［２］に記載の方法。
［１３］  前記アルコール使用障害は、アルコール乱用である、［５］に記載の方法。
［１４］  前記アルコール使用障害は、アルコール乱用である、［６］に記載の方法。
［１５］  アルコール使用障害の治療において使用するための
式：
【化７】
0006002778.tif 000016

（式中、
Ａは、
【化８】
0006002778.tif 000017

または
【化９】
0006002778.tif 000018

である；
Ｒ１は、フルオロまたはクロロである；
Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、各々水素である、または各々フルオロである；
Ｒ３は、水素、メチル、ヒドロキシメチル、または（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシメチルである；
Ｒ４は、フルオロ、クロロ、シアノ、シアノメチル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、シクロプロピル、ヒドロキシメチル、メトキシ、シクロプロピルメトキシ、アミノカルボニルメトキシ、（Ｃ１−Ｃ３）アルコキシメチル、シクロプロピルオキシメチル、シクロプロピルメトキシメチル、１−ヒドロキシ−１−メチルエチル、アミノカルボニルオキシメチル、メチルアミノカルボニルオキシメチル、ジメチルアミノカルボニルオキシメチル、アミノカルボニル、アミノカルボニルメチル、−ＣＨ２−ＮＲ５Ｒ６、ヒドロキシイミン、メトキシイミン、モルホリン−４−イル、モルホリン−４−イルメチル、Ａｒ１、−ＣＨ２Ａｒ１、テトラヒドロフラン−２−イル、３−オキソモルホリン−４−イルメチル、２−オキソピロリジン−１−イルメチル、および２−オキソピペリジン−１−イルメチルからなる群から選択される；
Ｒ４’は、フルオロ、クロロ、シアノ、シアノメチル、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、シクロプロピル、ヒドロキシメチル、メトキシ、メトキシメチル、アミノカルボニルオキシメチル、メチルアミノカルボニルオキシメチル、ジメチルアミノカルボニルオキシメチル、メチルカルボニル、アミノカルボニル、メチルアミノカルボニル、ジメチルアミノカルボニル、−ＮＲ５’Ｒ６、−ＣＨ２−ＮＲ５’Ｒ６、モルホリン−４−イル、モルホリン−４−イルメチル、Ａｒ２、−ＣＨ２Ａｒ２、３，３−ジフルオロアゼチジン−１−イルメチル、ピロリジン−１−イルメチル、１−アミノシクロプロピル、１−メチルアミノシクロプロピル、および１−ジメチルアミノシクロプロピルからなる群から選択される；
Ｒ５は、水素、Ｃ１−Ｃ３アルキル、シアノメチル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、またはアミノカルボニルメチルである；
Ｒ５’は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、シクロプロピル、ヒドロキシエチル、メトキシエチル、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、または−Ｃ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ３）アルキルである；
Ｒ６は、水素またはメチルである；
Ｒ７は、水素、フルオロ、クロロ、メチル、ヒドロキシメチル、またはメトキシである；
Ａｒ１は、イミダゾ−ル−１−イル、イミダゾール−２−イル、２−メチルイミダゾール−１−イル、ピラゾール−１−イル、１，２，３−トリアゾール−１−イル；１，２，３−トリアゾール−２−イル；１，２，４−トリアゾール−１−イル、イソキサゾール−３−イル、オキサゾール−５−イル、および３−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−５−イルからなる群から選択される部分である；ならびに
Ａｒ２は、イミダゾール−１−イル、イミダゾール−２−イル、２−メチルイミダゾール−１−イル、１−メチルイミダゾール−２−イル、および１，２，４−トリアゾール−３−イルからなる群から選択される部分である）
の化合物またはその医薬的に許容可能な塩。
［１６］  Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、各々フルオロである、［１５］に記載の使用のための化合物または塩。
［１７］  Ｒ１はクロロであり、Ｒ３はメチルまたはヒドロキシメチルである、［１６］に記載の使用のための化合物または塩。
［１８］  Ｒ３はメチルである、［１７］に記載の使用のための化合物または塩。
［１９］  前記化合物は、
［２−［４−［（２−クロロ−４，４−ジフルオロ−スピロ［５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−１’−イル）メチル］−３−メチル−ピラゾール−１−イル］−３−ピリジル］メタノール、
２−クロロ−４，４−ジフルオロ−１’−［［１−（３−フルオロ−２−ピリジル）−３−メチル−ピラゾール−４−イル］メチル］スピロ［５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］、もしくは
２−クロロ−１’−［［１−（２，６−ジフルオロフェニル）−３−メチル−ピラゾール−４−イル］メチル］−４，４−ジフルオロ−スピロ［５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］、またはその医薬的に許容可能な塩である、［１５］に記載の使用のための化合物。
［２０］  前記化合物は、
［２−［４−［（２−クロロ−４，４−ジフルオロ−スピロ［５Ｈ−チエノ［２，３−ｃ］ピラン−７，４’−ピペリジン］−１’−イル）メチル］−３−メチル−ピラゾール−１−イル］−３−ピリジル］メタノール、またはその医薬的に許容可能な塩である、［１５］に記載の使用のための化合物。
［２１］  前記アルコール使用障害は、アルコール依存症である、［１５］〜［２０］のいずれかに記載の使用のための化合物または塩。
［２２］  前記アルコール使用障害は、アルコール乱用である、［１５］〜［２０］のいずれかに記載の使用のための化合物または塩。