(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
人参の発酵過程で分離されるペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｖａｒｉｏｔｉｉ ｖａｒ． ｂｒｕｎｎｅｏｌｕｓ）ＧＰＰ１１０１Ｂ（微生物寄託番号ＫＣＴＣ１１９９３ＢＰ）の菌株。
【請求項２】
請求項１に記載のペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｖａｒｉｏｔｉｉ ｖａｒ． ｂｒｕｎｎｅｏｌｕｓ）ＧＰＰ１１０１Ｂ（微生物寄託番号ＫＣＴＣ１１９９３ＢＰ）の菌株を人参又は紅参のエキスに投入して培養された培養液を含有することを特徴とする免疫活性剤の製造方法。
【請求項３】
前記培養液は、肥大成長した前記菌株をろ過した培養ろ液であることを特徴とする請求項２に記載の免疫活性剤の製造方法。
【請求項４】
前記培養液を凍結乾燥して含有することを特徴とする請求項２又は請求項３記載の免疫活性剤の製造方法。
【請求項５】
請求項１に記載のペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｖａｒｉｏｔｉｉ ｖａｒ． ｂｒｕｎｎｅｏｌｕｓ）ＧＰＰ１１０１Ｂ（微生物寄託番号ＫＣＴＣ１１９９３ＢＰ）の菌株を人参又は紅参のエキスに投入して培養された培養液を含有することを特徴とする抗菌活性剤の製造方法。
【請求項６】
前記培養液は、肥大成長した前記菌株をろ過した培養ろ液であることを特徴とする請求項５に記載の抗菌活性剤の製造方法。
【請求項７】
前記培養液を凍結乾燥して含有することを特徴とする請求項５又は請求項６記載の抗菌活性剤の製造方法。
【請求項８】
請求項１記載のペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｖａｒｉｏｔｉｉ ｖａｒ． ｂｒｕｎｎｅｏｌｕｓ）ＧＰＰ１１０１Ｂ（微生物寄託番号ＫＣＴＣ１１９９３ＢＰ）の菌株を人参又は紅参のエキスに投入して培養された培養ろ液を含有することを特徴とする抗癌剤の製造方法。
【請求項９】
前記培養ろ液は、肥大成長した前記菌株をろ過した培養ろ液であることを特徴とする請求項８に記載の抗癌剤の製造方法。
【請求項１０】
前記培養ろ液を凍結乾燥して含有することを特徴とする請求項８又は請求項９記載の抗癌剤の製造方法。
【請求項１１】
請求項１に記載のペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｖａｒｉｏｔｉｉ ｖａｒ． ｂｒｕｎｎｅｏｌｕｓ）ＧＰＰ１１０１Ｂ（微生物寄託番号ＫＣＴＣ１１９９３ＢＰ）の菌株を人参又は紅参のエキスに投入して培養された培養ろ液を含有することを特徴とする抗突然変異剤の製造方法。
【請求項１２】
前記培養ろ液は、肥大成長した前記菌株をろ過した培養ろ液であることを特徴とする請求項１１記載の抗突然変異剤の製造方法。
【請求項１３】
前記培養ろ液を凍結乾燥して含有することを特徴とする請求項１１又は請求項１２記載の抗突然変異剤の製造方法。
【請求項１４】
請求項１に記載のペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｖａｒｉｏｔｉｉ ｖａｒ． ｂｒｕｎｎｅｏｌｕｓ）ＧＰＰ１１０１Ｂ（微生物寄託番号ＫＣＴＣ１１９９３ＢＰ）の菌株を人参又は紅参のエキスに投入して培養することを特徴とする培養液の製造方法。
【請求項１５】
前記人参又は紅参のエキスは、人参または紅参を水に入れて６０〜１００℃の温度において１２〜７２時間加熱し、人参または紅参をろ過した溶液であることを特徴とする請求項１４記載の培養液の製造方法。
【請求項１６】
前記培養は、前記菌株を投入した前記人参又は紅参のエキスを、培養器を用いて１５〜３５℃の温度において１０〜６０日間行うことを特徴とする請求項１４に記載の培養液の製造方法。
【請求項１７】
前記培養の後、肥大成長した前記菌株をろ過して培養ろ液を製造することを特徴とする請求項１４乃至請求項１６のうちいずれか一項記載の培養液の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラスＧＰＰ１１０１Ｂ菌株及びこれを用いた製剤に係り、さらに詳しくは、人参エキスや紅参エキスに投入されることにより優れた抗癌及び免疫調節効能と突然変異抑制及び抗菌活性効能を持たせるペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラスＧＰＰ１１０１Ｂ菌株及びこれを用いた製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に、人参（高麗人参）は、抗疲労、抗ストレス、免疫機能の向上、血糖降下を目的に漢方で頻繁に使用される薬用植物であり、その効能の主な成分としてサポニンが認められている。
【０００３】
このような人参のサポニン成分のうち、その効能をさらに向上させるための人参の加工技術に関する研究が盛んに行われており、これにより、紅参及び黒参を開発し、一般の水参及び乾参に見られない種類のサポニン成分を見出し、これを通じてその効能の優秀さを裏付けようとする試みが行われている。
【０００４】
従来の人参に対する効能を改善するための技術としては、大韓民国登録特許公報第１０−０１４４１３０号の「免疫増強効果を示す人参蛋白多糖体（「ジンサン」）が開示されているが、これは、グルコース及びガラクトースよりなる６炭糖４０．０〜５０．０％、酸性糖であるガラクツロン酸４１．０〜４４．８％及びリシン、ヒスチジン、アルギニン、アスパラギン酸、トレオニン、セリン、グルタミン酸、プロリン、グリシン、アラニン、バリン、メチオニン、イソロイシン、ロイシン、チロシン、システイン及びフェニルアラニンよりなる蛋白質３．７〜５．２％を含有し、分子量が５０，０００〜１５０，０００の物質であり、免疫増強効果を示す人参多糖体に関するものである。
【０００５】
また、大韓民国登録特許公報第１０−０３６１１８７号には「造血促進作用、骨髄防御作用、癌細胞殺傷免疫細胞の生成作用及び放射線敏感作用に優れた人参多糖体」が開示されているが、これは、人参根粉末をメタノールで抽出してメタノール不溶性残渣を陰乾しした後、蒸留水で抽出して得た水可溶性分画を凍結乾燥させ、前記収得物にエタノールを加えてエタノール不溶性分画を得た後、これをセルロース透析膜で透析させて多糖体を得た後、セファクリルＳ−５００カラムクロマトグラフィにかけて６個の分画を得、これらをそれぞれＤＥＡＥ−セルロースカラムクロマトグラフィにかけて純粋に分離精製した人参多糖体であり、造血促進作用、骨髄防御作用、癌細胞殺傷免疫細胞の生成作用及び放射線敏感作用を有する人参多糖体に関するものである。
【０００６】
しかしながら、これらの従来の技術はその利用範囲が限られており、その精製効率が高くないため所望の効能を発揮するのに限界を有している。この理由から、人参を用い、優れた効能を有しながらも全く新規な概念の免疫活性剤の開発が必要となった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】韓国登録特許第１０−０１４４１３０号公報
【特許文献２】韓国登録特許第１０−０３６１１８７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
上述のような従来の問題点を解消するために、本発明は、人参エキスや紅参エキスを投入することにより、優れた抗癌及び免疫調節効能と突然変異抑制及び抗菌活性効能を持たせるところを目的とする。
【０００９】
本発明の他の目的は、以下の実施例に関する説明から一層容易に理解されるであろう。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上述した目的を達成するために、本発明の一側面によれば、人参の発酵過程で分離されるペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｖａｒｉｏｔｉｉ ｖａｒ． ｂｒｕｎｎｅｏｌｕｓ）ＧＰＰ１１０１Ｂ（微生物寄託番号ＫＣＴＣ１１９９３ＢＰ）の菌株が提供される。
【００１１】
本発明の他の側面によれば、ペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｖａｒｉｏｔｉｉ ｖａｒ． ｂｒｕｎｎｅｏｌｕｓ）ＧＰＰ１１０１Ｂ（微生物寄託番号ＫＣＴＣ１１９９３ＢＰ）の菌株を人参又は紅参のエキスに投入して培養された培養液を含有することを特徴とする免疫活性剤が提供される。
【００１２】
前記免疫活性剤において、前記培養液は、肥大成長した前記菌株をろ過した培養ろ液であってもよい。
【００１３】
前記免疫活性剤において、前記培養液を凍結乾燥して含有してもよい。
【００１４】
本発明のさらに他の側面によれば、ペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｖａｒｉｏｔｉｉ ｖａｒ． ｂｒｕｎｎｅｏｌｕｓ）ＧＰＰ１１０１Ｂ（微生物寄託番号ＫＣＴＣ１１９９３ＢＰ）の菌株を人参又は紅参のエキスに投入して培養された培養液を含有する抗菌活性剤を提供する。
【００１５】
前記抗菌活性剤において、前記培養液は、肥大成長した前記菌株をろ過した培養ろ液であってもよい。
【００１６】
前記抗菌活性剤において、前記培養液を凍結乾燥して含有してもよい。
【００１７】
本発明のさらに他の側面によれば、ペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｖａｒｉｏｔｉｉ ｖａｒ． ｂｒｕｎｎｅｏｌｕｓ）ＧＰＰ１１０１Ｂ（微生物寄託番号ＫＣＴＣ１１９９３ＢＰ）の菌株を人参又は紅参のエキスに投入して培養された培養ろ液を含有する抗癌剤が提供される。
【００１８】
前記抗癌剤において、前記培養ろ液は、肥大成長した前記菌株をろ過した培養ろ液であってもよい。
【００１９】
前記抗癌剤において、前記培養ろ液を凍結乾燥して含有してもよい。
【００２０】
本発明のさらに他の側面によれば、ペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｖａｒｉｏｔｉｉ ｖａｒ． ｂｒｕｎｎｅｏｌｕｓ）ＧＰＰ１１０１Ｂ（微生物寄託番号ＫＣＴＣ１１９９３ＢＰ）の菌株を人参又は紅参のエキスに投入して培養された培養ろ液を含有する抗突然変異剤が提供される。
【００２１】
前記抗突然変異剤において、前記培養ろ液は、肥大成長した前記菌株をろ過した培養ろ液であってもよい。
【００２２】
前記抗突然変異剤において、前記培養ろ液を凍結乾燥して含有してもよい。
【００２３】
本発明のさらに他の側面によれば、ペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｖａｒｉｏｔｉｉ ｖａｒ． ｂｒｕｎｎｅｏｌｕｓ）ＧＰＰ１１０１Ｂ（微生物寄託番号ＫＣＴＣ１１９９３ＢＰ）の菌株を人参又は紅参のエキスに投入して培養する培養液の製造方法が提供される。
【００２４】
前記培養液の製造方法において、前記人参又は紅参のエキスは、人参や紅参を水に入れて６０〜１００℃の温度において１２〜７２時間加熱して人参や紅参をろ過した溶液であってもよい。
【００２５】
前記培養液の製造方法において、前記培養は、前記菌株を投入した前記人参又は紅参のエキスを、培養器を用いて１５〜３５℃の温度において１０〜６０日間行ってもよい。
前記培養液の製造方法において、前記培養を終えた後、肥大成長した前記菌株をろ過して培養ろ液を製造してもよい。
【発明の効果】
【００２６】
本発明によるペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラスＧＰＰ１１０１Ｂ菌株及びこれを用いた製剤によれば、人参エキスや紅参エキスに投入されることにより優れた抗癌及び免疫調節効能と突然変異抑制及び抗菌活性効能を持たせられる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】本発明による菌株の光学顕微鏡で観察した分生子梗及び分生胞子を示す写真である。
【図２】本発明による菌株の電子顕微鏡で観察した分生胞子の形状を示す写真である。
【図３】本発明による製剤の抗癌特性に対する実験結果を示すグラフである。
【図４】本発明による製剤の抗癌特性に対する実験結果を示すグラフである。
【図５】本発明による製剤の抗癌特性に対する実験結果を示すグラフである。
【図６】本発明による製剤の抗癌特性に対する実験結果を示すグラフである。
【図７】本発明による製剤の免疫調節特性に対する実験結果を示すグラフである。
【図８】本発明による製剤の免疫調節特性に対する実験結果を示すグラフである。
【図９】本発明による製剤の抗菌活性評価写真である。
【図１０】本発明による製剤の抗菌活性評価写真である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明には様々な変更を加えることができ、種々の実施例を有し得るが、特定の実施例を図面に例示して詳細に説明する。しかしながら、これは本発明を特定の実施形態に限定するものではなく、本発明の技術思想及び技術範囲に含まれるあらゆる変更、均等物又は代替物を含むものと理解されるべきであり、種々の他の形態に変形可能であり、本発明の範囲が下記の実施例に限定されることはない。
【００２９】
以下、添付図面に基づき、本発明による実施例を詳細に説明するが、図面符号に依らず、同一又は類似の構成要素には同じ参照符号を付し、これについての重複する説明を省略する。
【００３０】
本発明による抗菌活性及び免疫活性を示すことを特徴とするペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｖａｒｉｏｔｉｉ ｖａｒ． ｂｒｕｎｎｅｏｌｕｓ）ＧＰＰ１１０１Ｂ（微生物寄託番号ＫＣＴＣ１１９９３ＢＰ）の菌株は、人参の発酵過程で分離され、抗菌活性及び免疫活性を示す。
【００３１】
人参の発酵槽で黄色い特異的なカビを採集して分離した菌株を適当な培地で培養した後、これを分離して既存に報告された他の菌との相同性を測定して分離菌株を同定した。その結果、分離菌株であるＧＰＰ１１０１Ｂは、ペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラス菌株であることが確認された。
【００３２】
ＧＰＰ１１０１Ｂの菌株を有効成分として含有させる食品組成物などの免疫活性剤として製造可能であるが、このような免疫活性剤は、ＧＰＰ１１０１Ｂの菌株を人参発酵液で培養して培養ろ液を抽出して凍結乾燥させる過程により製造可能であり、このような菌株の培養は１０〜３０℃の好気性の状態で行われる。
【００３３】
また、ＧＰＰ１１０１Ｂの菌株、すなわち、ペシロマイセス・バリオティ・バラエティ・ブルンネオラス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｖａｒｉｏｔｉｉ ｖａｒ． ｂｒｕｎｎｅｏｌｕｓ）ＧＰＰ１１０１Ｂ（微生物寄託番号ＫＣＴＣ１１９９３ＢＰ）の菌株を人参又は紅参のエキスに投入して培養された培養液を含有する免疫活性剤、抗菌活性剤、抗癌剤及び抗突然変異剤などの製剤を製造することができる。このような製剤は、ＧＰＰ１１０１Ｂの菌株を人参又は紅参のエキスに投入して培養された培養液そのものが免疫活性、抗菌活性、抗癌及び抗突然変異作用をするだけではなく、一部や全部又は有効成分として含有する、薬剤を含むことはもとより、食品も含まれる。ここで、培養液は、培養後に肥大成長したＧＰＰ１１０１Ｂの菌株をろ過した培養ろ液であってもよく、製剤に凍結乾燥させて含有してもよい。
【００３４】
一方、免疫活性剤、抗菌活性剤、抗癌剤及び抗突然変異剤などの製剤に含有する培養液は、ＧＰＰ１１０１Ｂの菌株を人参又は紅参のエキスに投入して培養することにより製造されるが、ここで、人参又は紅参のエキスは、人参や紅参を水に入れて湯煎器において６０〜１００℃の温度において１２〜７２時間加熱し、人参や紅参をろ過した溶液であってもよく、その培養は、ＧＰＰ１１０１Ｂの菌株を投入した人参又は紅参のエキスを、培養器の湯煎を用いて１５〜３５℃の温度において１０〜６０日間行ってもよい。一方、培養液は、培養を終えた後、肥大成長したＧＰＰ１１０１Ｂの菌株をろ過して培養ろ液として製造される。
【００３５】
＜実施例１＞菌株の分離及び同定
【００３６】
農家が用いる人参発酵槽にて黄色い特異的なカビを採集して光学顕微鏡で確認し、ストレプトマイシン２００ｐｐｍを添加したジャガイモ寒天培地（ＰＤＡ）に載せて ２５℃の培養器において５日間培養した。
【００３７】
培地に形成された菌叢中で黄色い胞子を多数形成して、単一胞子をとってＧＰＰ１１０１Ｂ菌株として純粋に分離した。
【００３８】
その後、分離菌株は、実験室において最も頻繁に用られるジャガイモ寒天斜面培地（ジャガイモ２００ｇ、寒天１５ｇ、デキストロース１５ｇ、蒸留水１Ｌ）に培養して、十分に生長したときに冷蔵庫に保管しながら実験に使用した。
【００３９】
ＧＰＰ１１０１Ｂはどんな培地でも良く育つ特性を有しており、副産物においても良く育つことが確認された。また、分生子柄は、図１の光学顕微鏡写真から明らかなように、形状が単純であり、分岐されないという特性を有している。また、胞子は、図２の電子顕微鏡写真から明らかなように、米粒状の単細胞であり、胞子の大きさは数μｍと非常に小さく、まるで連結環のように分生子を形成している。
【００４０】
ＧＰＰ１１０１Ｂの生育は１０〜３０℃の好気性の状態で良く育ち、特に、２０〜２６℃が菌糸生育の最適な温度であり、平板培地よりは液体培地における振とう培養時に菌糸及び胞子の形成量が急増した。胞子の形成は、１０〜３０℃において良く行われるが、特に、１５〜２６℃において優れていた。
【００４１】
ＧＰＰ１１０１Ｂは種々の形態学的な特性が、既存のペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）とは異なり、長鎖を形成して早い生育を示し、形態学的にはペシロマイセス属（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ属）と同定したが、ＰＣＲを用いた同定をバイニックスに依頼し、９９％の類似度により同定した。この属は様々な植物に非病原性である菌であり、稀に昆虫に対して疾病を引き起こすカビである。また、このような菌株は、人参又は紅参のエキスで培養して培養ろ液を抽出して凍結乾燥させた後に、所定量を培地に添加した後、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）と黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）を接種した結果、はっきりとした阻止円を形成し、大腸菌とサルモネラ菌には効果を示さなかった。また、このような培養ろ液に対する試料を高圧滅菌（ａｕｔｏｃｌａｖｅ、１２１℃、１５分）処理すれば抗菌活性が消失することから、この物質は熱に弱いものと推定した。なお、カビと放線菌に対しては低い抗菌活性を示す。
【００４２】
ＧＰＰ１１０１Ｂは、２０１１年８月４日付けで韓国生命工学研究院微生物資源センター（ＫＣＴＣ）に寄託番号ＫＣＴＣ１１９９３ＢＰで寄託された。また、２０１２年１月２６日付けで韓国食品研究院（ＫＦＲＩ、参考番号ＡＯ２０１２−０２−０１−０２８）に既存の人参抽出溶液（１０２号）と人参抽出溶液のＧＰＰ１１０１Ｂ培養液（１０５号）に対する試料に対して成分分析を依頼した結果を下記表１に示す。
【００４３】
【表１】
0005956078.tif 000002
【００４４】
１）ＰＰＴ：Ｐｒｏｔｏｐａｎａｘａｔｒｉｏｌ．（プロトパナキサトリオール）
２）Ｋ：Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｋ．（コンパウンド−Ｋ）
３）ＰＰＤ：Ｐｒｏｔｏｐａｎａｘａｄｉｏｌ．（プロトパナキサジオール）
【００４５】
表１によれば、人参エキスのＧＰＰ１１０１Ｂ培養液（１０５号）は、痛症の抑制及び脂質過酸化の抑制などの作用を示すＲｆ、実験的肝障害抑制作用などを示すＲｈ１、血小板凝集抑制、記憶減退改善などの効能を示すＲｇ２、糖及び脂肪代謝の促進、抗糖尿作用などを示すＲｂ２、副腎皮質刺激ホルモン、コルチコステロン分泌促進作用を示すＲｄ、癌細胞転移抑制作用、実験的肝障害抑制などの作用を示すＲｇ３などにおいて、既存の人参エキス（１０２号）に比べて多量の成分を含んでいることが分かる。
【００４６】
＜実施例２＞  抗癌特性
【００４７】
ＧＰＰ１１０１Ｂを用いた試料に対する抗癌特性に対して実験を行った。
【００４８】
細胞生存率を測定するためにＭＴＴアッセイを用いたが、試料は人参培養液（ＫＪＳ）１〜１００μｇ／ｍＬであり、継代細胞株はＴＨＰ−１（ヒト急性単球性白血病細胞株）、Ｍｏｌｔ−４（ヒトリンパ球性白血病細胞株）、Ｕ−９３７（ヒト単球性白血病細胞株）、ＨＬ−６０（ヒト急性前骨髄性白血病細胞株）である。また、試料は、湯煎器に水と人参又は紅参を入れて６０〜１００℃の温度において１２〜７２時間煮沸して得た試料溶液をＧＰＰ１１０１Ｂ菌株とともに培養器に入れて１５〜３５℃において１０〜６０日間培養して得られ、これは、今後の他の実施例（実施例３から実施例５）の試料にも同様に適用される。
【００４９】
実験方法として、ＭＴＴ法によりＴＨＰ−１など白血病細胞培養系に各濃度（０．１〜１０μｇ／ｍＬ）の試料を添加して４８時間３７℃のＣＯ２培養器（５％−ＣＯ２、９５％−ａｉｒ）内において培養する方法が挙げられる。培養終了４時間前に、５ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＰＢＳ−Ａ（ｐＨ７．４）に希釈したＭＴＴ溶液２０μＬを各ウェルに添加し、０.１Ｎ ＨＣＬに溶かした１０％ ＳＤＳ １００μＬに溶解して１８時間銀箔で光を遮断する。発色された各ウェルの吸光度を、ＥＬＩＳＡリーダー（ｒｅａｄｅｒ）を用いて５７０ｎｍにおいて測定し、対照群の吸光度と比較して細胞生存率を百分率に換算して図３から図６に示す。
【００５０】
ＴＨＰ−１（ヒト急性単球性白血病細胞株）、Ｍｏｌｔ−４（ヒトリンパ球性白血病細胞株）、Ｕ−９３７（ヒト組織球性白血病細胞株）及びＨＬ−６０（ヒト急性前骨髄性白血病細胞株）細胞を継代培養しながら各濃度（０．１〜１０μｇ／ｍＬ）の人参培養液（ＫＪＳ）を添加して白血病細胞の細胞生存率を調べた結果、図３から図６に示すように、実験に供された全ての白血病細胞株において、濃度に依存して細胞生存率を抑制する抗癌活性が観察され、特に、ＴＨＰ−１細胞とＭｏｌｔ−４細胞において生存率の抑制効果が顕著であった。
【００５１】
＜実施例３＞  免疫調節特性
【００５２】
ＧＰＰ１１０１Ｂを用いた試料に対する免疫調節特性に対して実験を行った。
【００５３】
リンパ球（Ｔ、Ｂ細胞）亜集団（ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）を測定するために、ＢＡＬＢ／ｃ系マウスに試料を４週間経口投与（２５０又は５００ｍｇ／ｋｇＢ．Ｗ．）し、脾臓及び胸腺を摘出した後、脾臓及び胸腺細胞浮遊液を調製し、１×１０６細胞／ｗｅｌｌにＰＥ共役抗マウスＢ２２０抗体及びＦＩＴＣ共役抗マウスＴｈｙ−１抗体とＰＥ−抗ＣＤ４／ＦＩＴＣ−抗ＣＤ８抗体（Ｓｉｇｍａ）で二重染色して４℃において３０分間反応させ、フローサイトメーター （励起：４８８ｎｍ、放射：５２５ｎｍ／ＦＩＴＣ、５７５ｎｍ／ＰＥ）を用いてリンパ球の亜集団を測定した。
【００５４】
また、血中サイトカイン（ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４）を測定するために、マウス ＩＦＮ−γ ＥＬＩＳＡ Ｒｅａｄｙ−Ｓｅｔ−Ｇｏ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）キットで血清内のＩＦＮ−γの濃度を測定した。
【００５５】
マイクロプレート（Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ）（９６ｗｅｌｌ）に、精製された抗マウスＩＦＮ−γ抗体をコーティング（１００μＬ／ｗｅｌｌ）し、４℃において遮光（一晩中）しながら吸着させた。各ウェル（ｗｅｌｌ）を吸引し、洗浄緩衝液（３００μＬ／ｗｅｌｌ）で３回洗浄し、アッセイ希釈緩衝溶液で希釈して室温下で１時間反応させた。各ウェルを吸引し、検体及び標準溶液（組換えマウスＩＦＮ−γ、１μｇ／ｍＬ）を１ウェル当たりに１００μＬずつ加えて室温下で２時間反応させ、３回洗浄した後、アッセイ希釈液（１×）で希釈した検出抗体を１ウェル当たりに１００μＬずつ注入し、室温下で１時間反応させた。洗浄緩衝液（３００μＬ／ｗｅｌｌ）で３回洗浄し、アビジン−ＨＲＰ抗体を各ウェル当たりに１００μＬずつ入れて室温下で３０分間反応させた後、３回洗浄した後に基質溶液を各ウェル当たりに１００μＬずつ加えて遮光下で１５分間発色させた。５０μＬの停止液を加えて反応を停止させ、ＥＬＩＳＡリーダーで４５０ｎｍ波長における吸光度を測定した。なお、ＩＬ−２及びＩＬ−４の測定は、ＩＦＮ−γの測定方法に準拠して行った。
【００５６】
このような実験が脾臓及び胸腺リンパ球亜集団に及ぼす効果は、下記表２及び図７の通りである。
【００５７】
【表２】
0005956078.tif 000003
【００５８】
ＢＡＬＢ／ｃマウスにＫＪＳ試料を４週間経口投与し、脾臓及び胸腺リンパ球亜集団を測定したところ、特に、２００ｍｇ／ｋｇ Ｂ．Ｗ投与濃度においてＢリンパ球及びＴリンパ球の数（活性）が有意的に増大した。これは、人参培養液が免疫能を上向き調節していることを示す結果であると解釈される。
【００５９】
また、このような実験が血中リンフォカイン（ＩＦＮ−γ、ＩＬ−２、ＩＬ−４）の生成に及ぼす効果は、下記表３および添付の図８の通りである。
【００６０】
【表３】
0005956078.tif 000004
【００６１】
ＢＡＬＢ／ｃマウスにＫＪＳ試料（２５０ｍｇ／ｋｇ Ｂ．Ｗ）を４週間経口投与し、血中リンフォカインの生成をＥＬＩＳＡ方法を用いて測定したところ、インターフェロン−γが２倍以上増大し、ＩＬ−２は対照群に比べて約５３％増大した。この結果は、リンパ球亜集団の結果から明らかなように、Ｔリンパ球の活性が増加された結果、特に、Ｔｈ１細胞から分離されるＩＦＮ−γ及びＩＬ−２などのリンフォカインの生成が増加したものと認められる。以上の結果は、ＫＪＳは免疫系活性を上向き調節する効能を有していると解釈される。
【００６２】
＜実施例４＞ 抗菌活性特性
【００６３】
ＧＰＰ１１０１Ｂを用いた試料に対する抗菌活性特性に対して実験を行った。
【００６４】
試料をろ過（ｗｈａｔｍａｎ Ｎｏ．２）した後に凍結乾燥を行って粉末を得、これを滅菌水に溶解させて実験用材料として用いた。
【００６５】
抗菌性の評価は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（緑膿菌）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（黄色ブドウ球菌）、Ｅｓｃｈｅｒｉｃａｈｉａ ｃｏｌｉ（大腸菌）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ（サルモネラ）、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ（泡盛麹黴（黒麹菌））、ＦＫ９１８（自体分離放線菌）を生育培地に２００μＬずつ塗抹した後、２時間放置する。滅菌されたペーパーディスク（６ｍｍ）を置き、ここに蒸留水に溶解させた試料０．４ｍｇ／ｍＬ、２ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬを各々２５μＬずつ分注して、一般細菌は３７℃において２４時間、カビ及び放線菌は３０℃において４８〜６０時間培養してクリアゾーンを測定した。
【００６６】
試料に対する抗菌活性は、図９及び図１０に示すように、グラム陽性菌として黄色ブドウ球菌、グラム陰性菌として緑膿菌、大腸菌、サルモネラと、カビ（Ａｓｐ．ａｗａｍｏｒｉ）、放線菌（実験室分離菌株）に対して行った。
【００６７】
試料濃度０．１ｍｇ／２５μＬ、０．５ｍｇ／２５μＬ、１．０ｍｇ／２５μＬの場合、下記表４に示すように、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）は各々２０．７９ｍｍ、２３.２６ｍｍ、２５．４１ｍｍのクリアゾーンを形成し、ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）は各々１９．７３ｍｍ、１９．４５ｍｍ、２３．４９ｍｍのクリアゾーンを形成したが、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）とサルモネラ（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）はクリアゾーンを形成しなかった。カビ（Ａｓｐ．ａｗａｍｏｒｉ）は９．３４ｍｍ、１０．５２ｍｍ、１３．９４ｍｍのクリアゾーンを形成し、放線菌（ＦＫ９１８）は１０．６７ｍｍ、９．０８ｍｍ、９．３７ｍｍのクリアゾーンを形成した。
【００６８】
【表４】
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【００６９】
試料は、抗菌活性の評価において、緑膿菌、ブドウ球菌には強い抗菌活性を示し、カビ及び放線菌には低い抗菌活性を示す。しかしながら、大腸菌とサルモネラには抗菌活性を示さず、試料を高圧滅菌処理（１２１℃、１５分）した場合は、抗菌活性が消えることが分かる。グラム陰性である緑膿菌とグラム陽性であるブドウ球菌に抗菌活性を示すことから、特定の菌株に特異的に抗菌活性を示すと認められる。
【００７０】
＜実施例５＞  抗突然変異原性
【００７１】
ＧＰＰ１１０１Ｂを用いた試料に対する抗突然変異原性特性に対して実験を行った。
【００７２】
試料をろ過（ｗｈａｔｍａｎ Ｎｏ．２）した後に凍結乾燥を行って粉末を得、これを滅菌水に溶解させて実験用材料として用いた。
【００７３】
試料の抗突然変異原性の評価は、サルモネラ（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）ＴＡ９８菌株と突然変異原として１−ニトロピレン、Ｔｒｐ−Ｐ−１、アフラトキシンＢ１を用いて突然変異の抑制効果を観察することにより行った。すなわち、滅菌試験管に０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝溶液５５０μＬ、各濃度別の試料５０μＬ、栄養ブロスＮｏ．２（Ｏｘｏｉｄ  ｎｕｔｒｉｅｎｔ  ｂｒｏｔｈ  Ｎｏ．２）（２５ｇ／Ｌ）において１２時間培養した菌培養液（１〜２×１０９ＣＦＵ／ｍＬ）１００μＬを混合して、３７℃において２１０ｒｐｍにて２０分間振とう培養した。この培養液を１／１５Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．０）で希釈して５×１０３ＣＦＵ／ｍＬの濃度にした後、この菌希釈液１００μＬに上層寒天［寒天６ｇ、ＮａＣｌ ５ｇ／Ｌ（４５℃）］２ｍＬを添加して混合し、ＶＢＮＭ［寒天１５ｇ、蒸留水９２０ｍＬ、５０×ＶＢ塩２０ｍＬ、４０％グルコース１０ｍＬ、栄養ブロスＮｏ．２（Ｏｘｏｉｄ  ｎｕｔｒｉｅｎｔ  ｂｒｏｔｈ  Ｎｏ．２）（２５ｇ／Ｌ）５０ｍＬ］平板培地の上に塗布して３７℃において１２時間培養した。
【００７４】
試料を０．１ｍｇ／ｐｌａｔｅ、０．５ｍｇ／ｐｌａｔｅ、１．０ｍｇ／ｐｌａｔｅの濃度に各々製造して抗突然変異原性を評価した。表５に示すように、突然変異原を１−ニトロピレン（１−ＮＰ）にした場合は各濃度において７％、１９％、５４％の突然変異の抑制効果を、Ｔｒｐ−ｐ−１を突然変異原とした場合は１％、５％、９％の突然変異の抑制効果を、アフラトキシンＢ１（ＡＦＢ１）を突然変異原とした場合は１０％、１６％、５３％の突然変異の抑制効果を各々示す。
【００７５】
【表５】
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【００７６】
抗突然変異原性の評価において、１−ＮＰ及びＡＦＢ１に対して１．０ｍｇ／ｐｌａｔｅの濃度において５０％以上の高い抗突然変異原性を示す。抗菌活性の評価において、サルモネラに対する抗菌活性を示さないことから、この試料は、１−ＮＰ及びＡＦＢ１に対して抗突然変異原性を示すと認められる。
【００７７】
このように添付図面を参照して本発明を説明したが、本発明の技術的思想を逸脱しない範囲内において種々の修正及び変形が行われるということはいうまでもない。よって、本発明の範囲は説明された実施例に制限されて定められるものではなく、後述する特許請求の範囲だけではなく、このような特許請求の範囲と均等なものによって定められるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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