(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
内因性または外因性中毒性疾患を患う患者の腹膜透析に使用するためのリポソーム又はリポソーム様組成物であって、該リポソーム様組成物は、ポリマーから作られるか（ポリマーソーム）、界面活性剤から作られ（ニオソーム）、前記リポソーム又はリポソーム様小胞内のｐＨは腹膜腔内のｐＨとは異なり、そしてリポソーム又はリポソーム様小胞内のｐＨにより荷電毒素がリポソーム又はリポソーム様小胞に被包される、リポソーム又はリポソーム様組成物。
【請求項２】
リポソーム又はリポソーム様小胞の直径のサイズが、６００nmより大きく、好ましくは６００nm〜１０μm、より好ましくは７００nm〜１０μm、最も好ましくは８００nm〜５μmである、請求項１記載のリポソーム又はリポソーム様組成物。
【請求項３】
リポソーム又はリポソーム様組成物内のｐＨが１〜６．５、好ましくは１．５〜５、より好ましくは１．５〜４である、請求項１または２記載のリポソーム又はリポソーム様組成物。
【請求項４】
リポソーム又はリポソーム様組成物内のｐＨが８．５〜１２、好ましくは９〜１１、より好ましくは９〜１０である、請求項１または２記載のリポソーム又はリポソーム様組成物。
【請求項５】
リポソーム又はリポソーム様小胞が単層膜および／または多重膜であり、かつ
（ｉ）好ましくはＤＬＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＰＰＥ、ＤＳＰＥ、ＤＯＰＥ、ＭＰＰＣ、ＰＭＰＣ、ＳＰＰＣ、ＰＳＰＣ、ＤＭＰＧ、ＤＰＰＧ、ＤＳＰＧ、ＤＯＰＧ、ＤＭＰＡ、ＤＰＰＡ、ＤＰＰＳ、ＥＰＣおよびＳＰＣからなる群より選択された、１〜１００、好ましくは４０〜７０モル％の生理学的に許容されるリン脂質；および／または
（ｉｉ）１〜１００、好ましくは４０〜７０モル％のスフィンゴ脂質、好ましくはスフィンゴミエリン；および／または
（ｉｉｉ）１〜１００、好ましくは４０〜７０モル％の界面活性剤、好ましくは疎水性アルキルエーテル（例えばポリアルキレングリコールエーテル）、アルキルエステル、ポリソルベート、ソルビタンアルキルエステル、またはアルキルアミドを特色とする界面活性剤；および／または
（ｉｖ）５〜１００、好ましくは５０〜１００モル％の両親媒性ポリマーおよび／またはコポリマー、好ましくは少なくとも１つの親水性ポリマーまたはコポリマーのブロック、例えばポリエチレングリコールと、少なくとも１つの疎水性ポリマーまたはコポリマーのブロック、例えばポリ（ラクチド）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ブチレンオキシド）、ポリ（スチレンオキシド）、ポリ（スチレン）、ポリ（エチルエチレン）またはポリジメチルシロキサンとを含むブロックコポリマー、および任意的に
（ｖ）０〜６０モル％、好ましくは２０〜５０モル％のステロール誘導体、好ましくはコレステロール、および任意的に
（ｖｉ）０〜３０モル％、好ましくは１〜５モル％の立体安定剤、好ましくはＰＥＧ化化合物（ＰＥＧ、ポリエチレングリコール）、好ましくはＰＥＧ化脂質、より好ましくはＤＳＰＥ−ＰＥＧを含む、
請求項１〜４のいずれか記載のリポソーム又はリポソーム様組成物。
【請求項６】
リポソーム二重層が、
（ｉ）５０〜６０、好ましくは約５４モル％の１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、
（ｉｉ）４０〜５０、好ましくは約４５モル％のコレステロール（ＣＨＯＬ）、および０．５〜２、好ましくは約１モル％の１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ）を含み、リポソーム内の水溶液が、ｐＨ１．５〜３、好ましくは２に緩衝化された２５０mMのクエン酸溶液を含み、リポソームの直径が８００nmまたはそれより大きい、好ましくは９００nmまたはそれより大きい、より好ましくは１０００nmまたはそれより大きい、請求項１〜５のいずれか記載のリポソーム組成物。
【請求項７】
外来性中毒性疾患が、薬物、駆除剤、殺虫剤、毒素および化学兵器による中毒性疾患からなる群より選択される、請求項１〜６のいずれか記載のリポソーム又はリポソーム様組成物。
【請求項８】
内因性中毒性疾患が、高アンモニア血症、アルギニノコハク酸血症、高尿酸血症、イソ吉草酸血症、およびプロピオン酸血症からなる群より選択された代謝産物による中毒性疾患である、請求項１〜６のいずれか記載のリポソーム又はリポソーム様組成物。
【請求項９】
薬物による中毒性疾患が、酸性薬物および塩基性薬物からなる群より選択される、請求項１〜７のいずれか記載のリポソーム又はリポソーム様組成物。
【請求項１０】
酸性薬物または塩基性薬物が、
（１）好ましくはミトキサントロン、エピルビシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、シプロフロキサシン、ビンクリスチン、ビノレルビン、またはビンブラスチンからなる群より選択された抗悪性腫瘍薬；
（２）好ましくはプロカイン、リドカイン、ブピバカイン、クロルプロマジン、ミダゾラム、またはジブカインから選択された局所麻酔薬；
（３）アドレナリン遮断薬、好ましくはプロプラノロール、フェニレフリン、アルプレノロール、アテノロール、クレンブテロール、サルブタモールまたはチモロール；
（４）抗不整脈剤、好ましくはキニジン；
（５）コリン作動剤、好ましくはピロカルピンまたはフィゾスチグミン；
（６）抗うつ剤、好ましくはイミプラミン、ノルトリプチリン、アミトリプチリン、ブプロピオン、ドキセピン、またはベンラファキシン；
（７）抗ヒスタミン剤、好ましくはジフェニルヒドラミンまたはクロルフェナミン：
（８）抗マラリア剤、好ましくはプリマキン、キニーネ、クロロキン、アモジアキン、またはピリメタミン；
（９）抗原虫剤、好ましくはキナクリン；
（１０）鎮痛剤、好ましくはコデイン、アセトアミノフェン、アスピリン、フェンタニル、メサドン、またはペチジン；
（１１）心血管系薬物、好ましくはジルチアゼム、ベラパミルまたはジピリダモール：
（１２）抗痙攣薬、好ましくはバルプロ酸またはフェノバルビタール；
（１３）抗精神病薬、好ましくはクエチアピン、クロルプロマジン、またはハロペリドール；
（１４）抗不安薬、好ましくはアルプラゾラムまたはジアゼパム；
（１５）抗炎症薬、好ましくはジクロフェナクまたはイブプロフェン；
（１６）勃起不全薬、好ましくはシルデナフィルまたはタダラフィル；
（１７）抗結核薬、好ましくはエサンブトール、イソニアジド、またはピラジナミド；
（１８）神経伝達物質、好ましくはエピネフリンまたはノルエピネフリン；
（１９）覚醒剤、好ましくはアンフェタミン、ＭＤＭＡ、メチルフェニデート、コカインまたはヘロイン
からなる群より選択される、請求項９記載のリポソーム又はリポソーム様組成物。
【請求項１１】
内因性または外因性中毒性疾患を患う患者がヒトから選択される、請求項１〜１０のいずれか記載のリポソーム又はリポソーム様組成物。
【請求項１２】
内因性または外因性中毒性疾患を患う患者が、哺乳動物および鳥類から、好ましくはブタ、ウシ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギおよびウマからなる群より選択された哺乳動物から選択される、請求項１〜１０のいずれか記載のリポソーム又はリポソーム様組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、内因性または外因性中毒性疾患を患う患者の腹膜透析に使用するためのリポソーム組成物に関し、当該リポソーム内のｐＨは腹膜腔内のｐＨとは異なり、そしてリポソーム内のｐＨにより荷電毒素がリポソームに被包される。本発明はまた、前記リポソームを含む薬学的組成物にも関する。本発明のさらなる局面は、本発明のリポソームを、治療有効量で、それを必要とする患者の腹膜空間に投与する工程を含む、好ましくは薬物、代謝産物、駆除剤、殺虫剤、毒素、および化学兵器による中毒性疾患、より好ましくは高アンモニア血症から選択された、内因性または外因性中毒性疾患を患う患者を処置する方法に関する。ヒトの次に、本発明は、特に動物の状況に適している。
【０００２】
発明の背景
薬物の薬物動態特性および体内分布特性を改変させるために、リポソーム、すなわち、ナノメートルからマイクロメートルのサイズの範囲の直径を有する小さな脂質二重層の粒子を含む、多種多様な脂質およびポリマーをベースとした粒子が開発および特徴付けられており、脂質二重層は内側に水性環境を囲む。リポソームは現在、薬物送達のための医薬に、および薬物解毒のための研究に使用されている。
【０００３】
薬物を、多くの技術によって、例えば受動的方法およびｐＨ勾配技術によってリポソームに被包することができる。概説については、Fenske and Cullis, Encapsulation of Drugs within Liposomes by pH-Gradient Techniques, Liposome Technology, Volume II, Edited by Gregory Gregoriadis, Informa Healthcare September 2006, 27-50を参照されたい。脂質二重層を横切るｐＨ勾配の利点は、一旦薬物が中に入ると、薬物およびｐＨに依存して薬物がプロトン化または脱プロトン化によって帯電し得、よって親油性膜を通って外へのその逆移動が妨げられることである。例えば、Mayer et al., Biochimica et Biophysica Acta, 857:123-126, 1986 and Madden et al., Chemistry and Physics of Lipids, 53:37-46, 1990を参照されたい。それ故、リポソーム担体系は、薬物をその内腔に封入することによって前記薬物の毒性をかなり緩衝化し得る。リポソーム薬物は、静脈内にまたは目的とする薬物作用部位に、例えば腹腔内に定期的に投与される。腹腔内へのリポソーム薬物送達についての言及は、例えば、Verschraegen et al., J. Cancer Res. Clin. Oncol., 129:549-555, 2003およびParker et al., Cancer Res. 41: 1311-1317, 1981になされている。腹腔内に投与されたリポソームに封入された薬物の腹膜保持は、製剤の組成、例えば脂質二重層の脂質組成、含まれるコレステロールの量、リポソームのサイズ、リポソームの電荷、および／またはリポソームの例えばＰＥＧ（ポリエチレングリコール）を用いてのコーティングに依存する。腹腔内に投与されたリポソーム薬物は、血液およびリンパによる輸送が行なわれ、それらは血中、リンパ節並びに多くの器官に検出され得る。特にリポソームのサイズは、腹膜保持に対して影響を及ぼす。静脈内注射されたリポソームについては、約１００nmの直径がしばしば、より長時間の血液循環にとって最適であると考えられ、リポソームサイズの増加は、腹腔内に注射された場合、より高い腹膜保持をもたらす。約１０００nmまたはそれ以上のサイズを有するリポソームは、最も高い腹膜腔保持を有する。腹腔内に投与されたリポソームの腹膜保持に影響を及ぼす因子に関するさらなる情報については、例えば、Sadzuka et al., Toxicology Letters 116:51-59, 2000; Dadashzadeh et al., Journal of Controlled Release, 148:177-186, 2010; Mirahmadhi et al., International Journal of Pharmaceutics, 383:7-13, 2010; Hirano and Hunt, Journal of Pharmaceutical Sciences, 74 (9), 915-921, 1985に言及されている。
【０００４】
さらに、リポソーム並びにエマルション中の脂質は、薬物解毒において有用性を有する。
【０００５】
Jamaty et al., Clinical Toxicology 48:1-27, 2010は、急性薬物中毒の処置における、静脈内脂肪エマルション（ＩＦＥ）、すなわち、脂質エマルションの使用に関する文献を概説している。Intralipid（登録商標）は、栄養不良状態の場合の静脈内または非経口的に投与される栄養素のための、１０、２０または３０重量％の精製大豆油並びに精製卵リン脂質、グリセリンおよび水を含む、臨床的に関連した市販の脂肪エマルションの商品名である。さらに、それは、麻酔薬プロポフォールおよびエトミデートのためのビヒクルとして、並びに、ブピバカインなどの局所麻酔薬の過剰投与によって引き起こされた深刻な心毒性を処置し一般的な蘇生法にさもなくば応答しない患者を救うためのビヒクルとして有用性を有する。栄養療法および解毒療法のために、Intralipid（登録商標）は静脈内に投与される。CaveおよびHarvey (Academic Emergency Medicine, 16:151-156, 2009)は、解毒療法におけるＩＦＥの使用に関する文献を概説した。およびクロミプラミン注入により処置されたウサギ動物モデルにおいて、静脈内にかつ腹腔内投与と同時に投与されたIntralipid（登録商標）は、Intralipid（登録商標）単独の静脈内投与よりも、増強されたクロミプラミンの抽出を示した（Harvey et al., Academic Emergency Medicine, 16:815-824, 2009を参照）。ＩＦＥの根底にある解毒機序は、脂質製剤が、脂質による抽出によって毒性薬物を捕集し、それにより毒性薬物を遮蔽するというものである。勿論、この機序は、十分な親油性を有する薬物についてのみ利用可能であり、かつ、脂質組成物における薬物の抽出係数に依存する。
【０００６】
ＩＦＥと同様に、心血管系薬物による中毒を処置するめの静脈内投与されたリポソームが研究されている。J.-C. Leroux, Nature Biotechnology, 2:679-864, 2007は、薬物解毒のための注射可能なナノ担体、特にリポソームの使用を概説する。Bertrand et al., ACS Nano, 4 (12), 7552-7558, 2010は、心血管系薬物のジルチアゼムの静脈内ボーラスまたはジルチアゼムを用いての灌流を受けたラットにおける、静脈内に投与された膜ｐＨ勾配を有するリポソームを用いての解毒を実証した。ＩＦＥを用いての脂質抽出とは異なり、リポソームの作用機序は、リポソームによる薬物の取り込みおよびｐＨ勾配による薬物の帯電であり、これにより取り込みは不可逆となる。ＩＦＥと比較して、薬物捕集リポソームは、薬物、特にカルシウムチャネル遮断剤を捕獲するのにはるかにより効率的であり、例えば、Forster et al., Biomaterials 33, 3578-3585, 2012を参照されたい。
【０００７】
高アンモニア血症は、中枢神経系（ＣＮＳ）の異常を含む様々な症状によって顕現するアンモニアレベルの上昇に関連した臨床容態を指す。高い濃度で存在する場合にはアンモニアは毒性である。内因性アンモニア中毒は、先天的な酵素欠損症に見られるような、窒素廃棄物を排泄する身体の能力が損なわれている場合に起こり得る。多種多様な環境的な原因および薬物療法もまた、アンモニア毒性を引き起こし得る。アンモニア血症の概説については、Auron and Brophy, Pediatr. Nephrol., 27:207-222, 2012; and Clay and Hainline, CHEST, Official journal of the American College of Chest Physicians, (132), 1368-1378, 2007に言及がなされている。通常、高アンモニア血症は、脳浮腫、低下した脳代謝、および増加した脳血流量に関連する。頭蓋内圧亢進を処置する療法、タンパク質の異化反応を防ぐための栄養サポート、およびタンパク質の栄養摂取の停止の次に、積極的にアンモニアを除去することによってアンモニアレベルを低下させることが必要であり得る。薬理学的な操作、例えばフェニル酢酸ナトリウムおよび安息香酸ナトリウムの投与を通して窒素を排除することにより「代替的な」代謝経路を通してアンモニアの排除を促進する他に、腹膜透析、血液透析、連続的な静静脈血液濾過、連続的な静静脈血液ダイアフィルトレーション、および連続的な動静脈血液ダイアフィルトレーションが、アンモニアを除去する効果的な方法であり、小児および成人における尿素サイクル異常症に関連した高アンモニア血症を処置するのに役立つ。特に先天的な代謝異常を有する小児においては、静静脈血液透析および連続的な腹膜透析は、高アンモニア血症の急性対応のための最適な処置であり、例えば、Arbeiter et al., Nephrol. Dial. Transplant., 25:1257-1265, 2010およびPela et al.; Pediatr. Nephrol., 23:163-168, 2008を参照されたい。
【０００８】
本発明の根底にある目的は、リポソーム組成物の新規な医学的用途の提供である。別の目的は、内因性および外因性中毒性疾患、特に薬物、代謝産物、駆除剤、殺虫剤、毒素および化学兵器による中毒性疾患のための新規な療法の提供である。本発明のさらなる目的は、高アンモニア血症のための新規な処置の提供である。
【０００９】
上記の目的は、内因性または外因性中毒性疾患を患う患者の腹膜透析に使用するためのリポソーム組成物によって解決し、リポソーム内のｐＨは腹膜腔内のｐＨとは異なり、当該リポソーム内のｐＨにより荷電毒素がリポソームに被包される。
【００１０】
「腹膜透析に使用するためのリポソーム組成物」という用語は、（ｉ）腹膜内投与に適し、すなわち、それは生理学的に許容される脂質およびさらなる成分からなり、（ｉｉ）生理的条件下、特に腹膜腔および血液の条件下で、薬物および代謝産物の取り込みおよび長時間におよぶ保持に適した時間にわたり安定であり、（ｉｉｉ）膜移行能を示す、リポソーム組成物を指すことを意味する。
【００１１】
本発明を実施するために、リポソーム内のｐＨは腹膜腔内のｐＨとは異なり、リポソーム内のｐＨにより結果としてリポソームに被包された荷電毒素がもたらされることが必要である。
【００１２】
上記の観点から、本発明のリポソーム組成物は、特定の毒素がリポソーム内で荷電するようにｐＨの適応した、腹腔内投与に適した、生理学的に許容され安定な膜ｐＨ勾配を有するリポソーム組成物である。
【００１３】
本明細書において使用される「腹膜透析」という用語は、腹膜透析処置の分野の技術者によって一般的に理解されるように理解されることを意味する。本発明の実施のために、薬学的に有効な量の本発明のリポソーム組成物が、腹膜腔に、例えば１回のボーラスとしての注射によって、または連続注入もしくは灌流によって投与される。腔内並びに近傍組織および器官内のリポソームは、対象の毒素を取り込むだろう。リポソーム内のｐＨは、毒素が膜移動時に帯電し、すなわちプロトン化または脱プロトン化され、疎水性リポソーム二重層を通って逆移動できない正または負に荷電した毒素化合物が生じるように適応している。
【００１４】
薬物封入リポソームは、より長い時間におよび毒素を捕捉し、かつ遊離化合物の毒性濃度を低下させる。リポソームの最終的な生体分解および毒素の放出から生じる毒素濃度が、患者に病的ではないならば、リポソームは腹膜腔および生体組織に残されていてもよい。一方で、リポソーム組成物および／またはサイズが、腹膜への局在化を延長するように適応されることが好ましい。その場合、腹膜腔における毒素の負荷されたリポソームは、腹膜腔から吸引抽出されることが好ましい。腹膜腔内投与および抽出は、その後および／または同時に実施され得る。
【００１５】
本発明の実施に適した生理学的に許容され膜ｐＨ勾配を有するリポソーム組成物は、従来技術に豊富に記載されているように、例えば上記に参照した文書に記載されているように調製され得る。リポソーム製剤は、多様な組成、ｐＨおよび浸透圧強度の水性媒体を囲い込んだ、種々の性質（単層膜、多重膜）、組成、サイズ、および特徴の小胞を含み得る。好ましい態様において、リポソーム脂質層膜の主要構成成分は、天然または合成リン脂質、例えば以下に列挙したものなどからなる群より選択される：
−  １，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、
−  １，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、
−  １，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、
−  １，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、
−  １，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、
−  １，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、
−  １，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、
−  １，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、
−  １，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、
−  １−ミリストイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＭＰＰＣ）、
−  １−パルミトイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＭＰＣ）、
−  １−ステアロイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＳＰＰＣ）、
−  １−パルミトイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＳＰＣ）、
−  １，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）］（ＤＭＰＧ）、
−  １，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）］（ＤＰＰＧ）、
−  １，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）］（ＤＳＰＧ）、
−  １，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−ｒａｃ−（１−グリセロール）］（ＤＯＰＧ）、
−  １，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸（ＤＭＰＡ）、
−  １，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−リン酸（ＤＰＰＡ）、
−  １，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−［ホスホ−Ｌ―セリン］（ＤＰＰＳ）、
−  天然Ｌ−α−ホスファチジルコリン（ニワトリ卵からＥＰＣ、大豆からＳＰＣ）。
【００１６】
好ましいリン脂質は、長鎖飽和リン脂質、例えば１２個を超える、好ましくは１４個を超える、より好ましくは１６個を超える、最も好ましくは１８個を超える炭素原子のアルキル鎖を有するものである。
【００１７】
本発明による使用のための好ましいリポソーム組成物は、好ましくは、リポソームが単層膜および／または多重膜であり、かつ、
（ｉ）好ましくはＤＬＰＣ、ＤＭＰＣ、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣ、ＤＯＰＣ、ＤＭＰＥ、ＤＰＰＥ、ＤＳＰＥ、ＤＯＰＥ、ＭＰＰＣ、ＰＭＰＣ、ＳＰＰＣ、ＰＳＰＣ、ＤＭＰＧ、ＤＰＰＧ、ＤＳＰＧ、ＤＯＰＧ、ＤＭＰＡ、ＤＰＰＡ、ＤＰＰＳ、ＥＰＣおよび／またはＳＰＣからなる群より選択された、１〜１００、好ましくは４０〜７０モル％の生理学的に許容されるリン脂質、
（ｉｉ）１〜１００、好ましくは４０〜７０モル％のスフィンゴ脂質、好ましくはスフィンゴミエリン；
（ｉｉｉ）１〜１００、好ましくは４０〜７０モル％の界面活性剤、好ましくは疎水性アルキルエーテル（例えばBrij）、アルキルエステル、ポリソルベート、ソルビタンエステルおよび／またはアルキルアミドを特色とする界面活性剤；
（ｉｖ）５〜１００、好ましくは５０〜１００モル％の両親媒性ポリマーおよび／またはコポリマー、好ましくは少なくとも１つの親水性ポリマーまたはコポリマーのブロック、例えばポリエチレングリコールと、少なくとも１つの疎水性ポリマーまたはコポリマーのブロック、例えばポリ（ラクチド）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ブチレンオキシド）、ポリ（スチレンオキシド）、ポリ（スチレン）、ポリ（エチルエチレン）またはポリジメチルシロキサンとを含むブロックコポリマー、
（ｖ）０〜６０モル％、好ましくは２０〜５０モル％の毒素保持増強化合物、好ましくはステロール誘導体、好ましくはコレステロール、
（ｖｉ）０〜３０モル％、好ましくは１〜５モル％の立体安定剤、好ましくはＰＥＧ化化合物、好ましくはＰＥＧ化脂質、より好ましくはＤＳＰＥ−ＰＥＧを含むものである。
【００１８】
好ましい態様において、リポソーム様小胞はポリマーから作られ、かつ脂質を全く含まず、その理由から、それらは公式にはリポソームと判断されず、ポリマーソームと呼ばれる。しかしながら、本発明の目的では、ポリマーソームは、本発明および特許請求の範囲の定義に使用されているようなリポソームという用語によって包含されることを意味する。
【００１９】
同様に、合成界面活性剤から作られかつ脂質を全く含まないリポソーム様小胞は、ニオソームと呼ばれる。しかしながら、本発明の目的では、ニオソームは、本発明および特許請求の範囲の定義に使用されているようなリポソームという用語によって包含されることを意味する。
【００２０】
好ましい態様において、本発明に使用するためのリポソームは、１０〜１００、より好ましくは３０〜８０、より好ましくは４０〜７０、最も好ましくは５０〜６０モル％の生理学的に許容されるリン脂質を含む。
【００２１】
好ましい態様において、本発明に使用するためのリポソームは、１０〜１００、より好ましくは２５〜７５、より好ましくは４０〜７０、最も好ましくは５０〜６０モル％のスフィンゴ脂質、好ましくはスフィンゴミエリンを含む。
【００２２】
好ましい態様において、本発明に使用するためのリポソームは、３０〜１００、より好ましくは４０〜９５、最も好ましくは４５〜６０モル％の界面活性剤を含む。
【００２３】
好ましい態様において、本発明に使用するためのリポソームは、５〜１００、より好ましくは３０〜１００、より好ましくは６０〜１００、最も好ましくは９５〜１００モル％の両親媒性ポリマーおよび／またはコポリマーを含む。
【００２４】
好ましい態様において、リポソーム組成物中のステロール濃度は、代謝産物または薬物の増強された保持のために、０〜６０、好ましくは２０〜５０、より好ましくは３０〜４５モル％で変化する。
【００２５】
さらに好ましい態様において、リポソーム組成物中の立体安定剤、好ましくはＰＥＧ化脂質の濃度は、０〜３０、好ましくは０．５〜２０、より好ましくは１〜５モル％で変化する。
【００２６】
別の好ましい態様において、リポソームの直径サイズは、腹膜空間からの急速すぎる排出を回避するために、６００nmより大きい、好ましくは７００nmより大きい、最も好ましくは８００nmより大きい、すなわち、６００nm〜１０μm、好ましくは７００nm〜１０μm、より好ましくは８００nm〜５μmの直径サイズである。
【００２７】
本発明のリポソームの脂質二重層内の水溶液は、好ましくは等張であり、好ましくは塩基性化合物の高い保持のために低いｐＨで高い緩衝能を有し（例えば、クエン酸、硫酸、酢酸、安息香酸、ギ酸、グリコール酸、リンゴ酸緩衝液）、酸性化合物の高い保持のために高いｐＨで高い緩衝能を有する（例えば、酢酸カルシウム、ビス−トリスプロパン、スルホネート（ＣＡＰＳ、ＣＡＢＳ、ＴＡＢＳ、ＣＨＥＳ）、ビシン、トリシン、エタノールアミン緩衝液）。ｐＨおよび緩衝化合物は、対象の毒素に適応していなければならない。例えば、硫酸アンモニウム、すなわち弱塩基は、強塩基アンモニアを捕集するのに（すなわち高アンモニア血症の処置に）適していないだろう。なぜなら、それは体内に、除去することを目指している化合物であるアンモニアを導入するからである。弱酸の捕捉のために、内部の水溶液は塩基性緩衝液であるべきである（例えば酢酸カルシウム）。
【００２８】
好ましくは、本発明のリポソーム組成物は、１〜６．５、好ましくは１．５〜５、より好ましくは１．５〜４のリポソーム組成物内のｐＨを特色とする。
【００２９】
また、本発明に使用するためのリポソーム組成物は、８．５〜１２、好ましくは９〜１１、より好ましくは９〜１０のリポソーム組成物内のｐＨを特色とすることが好ましい。
【００３０】
最も好ましい態様において、本発明に使用するためのリポソーム組成物は、リポソーム二重層が、
（ｉ）５０〜６０、好ましくは約５４モル％のＤＰＰＣ、
（ｉｉ）４０〜５０、好ましくは４５モル％のコレステロール（ＣＨＯＬ）、
および０．５〜２、好ましくは１モル％の１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］（ＤＳＰＥ−ＰＥＧ）
を含み、
かつリポソーム内の水溶液が、ｐＨ１．５〜３、好ましくは２に緩衝化された２５０mMのクエン酸溶液を含み、
前記リポソームの直径が８００nm以上、好ましくは９００nm以上、より好ましくは１０００nm以上であるものである。
【００３１】
上記のリポソーム組成物は、高アンモニア血症の処置に好ましい。本発明の実施に適したリポソームのさらなる例は、（モル比で）：ＤＭＰＣ／ＣＨＯＬ、２：１；ＤＰＰＣ／ＣＨＯＬ、２：１；ＤＳＰＣ：ＣＨＯＬ、２：１；ＤＳＰＣ／ＣＨＯＬ／ＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ、２：１：０．２；ＤＳＰＣ／ＤＳＰＧ／ＣＨＯＬ、６０：１０：３０；ＤＳＰＣ／ＤＳＰＧ／ＣＨＯＬ／ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥ、５５．８３：１０：２７．９２：６．２５、ＥＰＣ／ＣＨＯＬ／ＤＥＳＰ−ＰＥＧ、５０：４５：５、スフィンゴミエリン／ＤＰＰＣ／-ＣＨＯＬ／ＤＳＰＥ−ＰＥＧ、２５：２５：４５：５であり、ｐＨ４で１１０mM、またはｐＨ３で２００mM、またはｐＨ３で２５０mM、またはｐＨ２で２５０mM、またはｐＨ２で３００mMの内部クエン酸緩衝液を含む。
【００３２】
外因性および内因性中毒性疾患という用語は、生体によって産生された毒素、すなわち内因性毒素、または外部から体内に導入された毒素、すなわち外因性毒素の関与を示す。
【００３３】
好ましくは、本発明のリポソーム組成物は、代謝産物、薬物、駆除剤、殺虫剤、毒素、および化学兵器による中毒性疾患からなる群より選択された外因性中毒性疾患を処置するためである。好ましい除草剤による中毒は、オーキシンまたはアトラジンに由来し、好ましい殺虫剤による中毒はネオニコチノイドに由来する。
【００３４】
好ましい態様において、本発明は、代謝産物による中毒性疾患の処置に関する。本明細書に使用される「代謝産物による中毒性疾患」という用語は、病的容態をもたらす内因性化合物、例えばアンモニア、アルギニノコハク酸、尿酸、イソ吉草酸、プロピオン酸などの毒性濃度を示すことを意味する。前記用語は、外因性代謝産物、例えば薬物代謝産物に基づいた病態を含まない。
【００３５】
好ましい代謝産物による中毒性疾患は、高アンモニア血症、アルギニノコハク酸血症、高尿酸血症、イソ吉草酸血症、およびプロピオン酸血症からなる群より選択される。
【００３６】
さらに好ましい態様において、本発明は、好ましくは酸性薬物および塩基性薬物からなる群より選択された薬物による中毒性疾患の処置に関する。
【００３７】
本発明による腹腔内リポソーム封入に適した薬物は、好ましくは、
（１）好ましくはミトキサントロン、エピルビシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、シプロフロキサシン、ビンクリスチン、ビノレルビン、またはビンブラスチンからなる群より選択された抗悪性腫瘍薬；
（２）好ましくはプロカイン、リドカイン、ブピバカイン、クロルプロマジン、ミダゾラム、またはジブカインから選択された局所麻酔薬；
（３）アドレナリン遮断薬、好ましくはプロプラノロール、フェニレフリン、アルプレノロール、アテノロール、クレンブテロール、サルブタモールまたはチモロール；
（４）抗不整脈剤、好ましくはキニジン；
（５）コリン作動剤、好ましくはピロカルピンまたはフィゾスチグミン；
（６）抗うつ剤、好ましくはイミプラミン、ノルトリプチリン、アミトリプチリン、ブプロピオン、ドキセピン、またはベンラファキシン：
（７）抗ヒスタミン剤、好ましくはジフェニルヒドラミンまたはクロルフェナミン：
（８）抗マラリア剤、好ましくはプリマキン、キニーネ、クロロキン、アモジアキン、またはピリメタミン；
（９）抗原虫剤、好ましくはキナクリン；
（１０）鎮痛剤、好ましくはコデイン、アセトアミノフェン、アスピリン、フェンタニル、メサドン、またはペチジン；
（１１）心血管系薬物、好ましくはジルチアゼム、ベラパミルまたはジピリダモール：
（１２）抗痙攣薬、好ましくはバルプロ酸またはフェノバルビタール；
（１３）抗精神病薬、好ましくはクエチアピン、クロルプロマジン、またはハロペリドール；
（１４）抗不安薬、好ましくはアルプラゾラムまたはジアゼパム；
（１５）抗炎症薬、好ましくはジクロフェナクまたはイブプロフェン；
（１６）勃起不全薬、好ましくはシルデナフィルまたはタダラフィル；
（１７）抗結核薬、好ましくはエサンブトール、イソニアジド、またはピラジナミド；
（１８）神経伝達物質、好ましくはエピネフリンまたはノルエピネフリン；
（１９）覚醒剤、好ましくはアンフェタミン、ＭＤＭＡ、メチルフェニデート、コカインまたはヘロイン
からなる群より選択される。
【００３８】
本発明の腹膜透析のためのリポソーム組成物を用いて処置され得る中毒に関与する最も好ましい薬物は、アセチルサリチル酸、アルプラゾラム、アミトリプチリン、アムロジピン、アンフェタミン、アテノロール、アトロピン、ブピバカイン、ブプロピオン、カプトプリル、クロロキン、クロルフェニラミン、クロルプロマジン、クロルプロパミド、クレンブテロール、コカイン、コデイン、ジアゼパム、ジルチアゼム、ジフェンヒドラミン、ジピリダモール、ジソピラミド、ドキセピン、エサンブトール、フェンタニル、ハロペリドール、ヘロイン、イブプロフェン、イミプラミン、イソニアジド、ケトプロフェン、リドカイン、ロラゼパム、ＭＤＭＡ、メトホルミン、メサドン、メチルフェニデート、ニフェジピン、ノルトリプチリン、ペチジン、フェノバルビタール、フェンプロクモン、プロカインアミド、プロプラノロール、ピリメタミン、クエチアピン、キナクリン、キニジン、キニーネ、ロピバカイン、シルデナフィル、バルプロ酸、ベンラファキシン、ベラパミル、ワーファリンである。
【００３９】
本発明のリポソーム組成物は、好ましくは、内因性または外因性中毒性疾患を患うヒト患者を処置するために使用される。また、好ましいのは、内因性または外因性中毒性疾患を患う哺乳動物および鳥類、好ましくはブタ、ウシ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギおよびウマなどからなる群より選択された哺乳動物を処置するためのリポソーム組成物の使用である。
【００４０】
本発明のさらなる局面は、少なくとも１つの本発明のリポソーム組成物および場合により１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む、薬学的組成物に関する。本発明の薬学的組成物は、典型的には、治療有効量の本発明のリポソーム組成物および場合により補助的な物質、例えば薬学的に許容される賦形剤（群）を含む。前記薬学的組成物は、製薬分野において周知の様式で調製される。担体または賦形剤は、活性成分のためのビヒクルまたは媒体として役立ち得る液体材料であり得る。適切な担体または賦形剤は、当技術分野において周知であり、これには例えば、安定化剤、懸濁化剤、等張化剤（例えばグルコース溶液、ゼラチン、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、グルコースポリマー（例えばイコデキストリン）またはアミノ酸、抗微生物性保存剤、抗酸化剤、ｐＨ調節物質（例えば乳酸ナトリウムおよびカリウム）、着色剤などが挙げられる。本発明の薬学的調製物は、腹膜内投与に適していなければならず、患者、好ましくはヒトに、液剤、懸濁剤などの剤形で投与され得る。
【００４１】
本発明の別の局面は、本発明によるリポソーム組成物を治療有効量で、それを必要とする患者の腹膜空間に投与する工程を含む、処置法、すなわち、内因性または外因性中毒性疾患を患う患者を処置する方法に関する。
【００４２】
好ましくは、処置しようとする外因性中毒性疾患は、薬物、駆除剤、殺虫剤、毒素、および化学兵器による中毒性疾患からなる群より選択される。また、処置しようとする代謝産物による中毒性疾患が、高アンモニア血症、アルギニノコハク酸血症、高尿酸血症、イソ吉草酸血症およびプロピオン酸血症からなる群より選択されることが好ましい。
【００４３】
好ましくは、本発明に従って処置される患者はヒトである。
【００４４】
本発明の方法の代替的な態様において、内因性または外因性中毒性疾患を患う患者は、哺乳動物および鳥類から、好ましくはブタ、ウシ、イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギおよびウマなどからなる群より選択された哺乳動物から選択される。
【００４５】
上記したような内因性または外因性中毒性疾患を患う患者の処置を行なう際に、本発明のリポソーム組成物は、有効量のリポソームまたはリポソーム様小胞、例えばポリマーソームまたはニオソームが、腹腔内で生物学的に利用可能となるような任意の剤形または形態で投与され得る。好ましくは、腹腔内へのリポソーム投与は、ボーラス注射、注入および／または灌流による。腹腔内製剤を調製する分野の技術者は、捕捉および／または除去しようとする毒素の特定の特徴に依存して、適切な剤形および投与形態を容易に選択することができる。
【００４６】
好ましい態様において、本発明の方法はさらに、投与工程の後および／または同時のいずれかに腹腔からリポソームを抽出する工程を含む。
【００４７】
以下において、本発明は、具体的な実験態様および図面を参照して説明され、このいずれもが、添付の特許請求の範囲を超えて本発明を限定することを意味するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】膜ｐＨ勾配を有するリポソームによる腹膜空間における毒物（例えば薬物またはアンモニア、ＮＨ３）の隔離を示す（弱塩基の場合）。非イオン化化合物は毛細血管から腹膜空間へと拡散し、そこでイオン化形（ＮＨ４＋）で小胞に閉じ込められるようになる。リポソームの内部緩衝能が打ちのめされるまで拡散は続く。
【図２】腹腔内投与後の腹膜空間から血液へのリポソームの排出を示したグラフである。交換不可能なステロール色素（コレステリルBODIPY（登録商標） FL-C12、Invitrogen）をリポソーム膜に取り込んだ（０．０５モル％）（脂質フィルム産生プロセス中）。リポソームの腹膜内投与後、血漿アリコート中の色素の蛍光（λex=４７０nm, λem=５２０nm）を測定し、検量線と比較して、リポソーム脂質濃度を得た。より大きなリポソームは腹膜空間により長く留まったが（８時間）、小さなリポソームは４時間後に血中に重要な濃度で見られた。平均値±ＳＤ（ｎ＝３）。
【図３】３７℃で５０％ウシ胎児血清中のｐＨ勾配を有するリポソームによるインビトロにおけるアンモニアの取り込みを示したグラフである。リポソームは、急速かつ効率的なアンモニアの取り込みを示した。初期のアンモニアおよびリポソーム濃度は、１．７および３．８mMで設定され、１μmolの脂質あたり０．４５μmolのアンモニアの最大捕獲能を許容する可能性がある。興味深いことに、前記小胞は、系に負荷された全量のアンモニアを超える量を捕捉した（点線）。過剰は、血清中に存在する天然アンモニアに由来するものであった。リポソーム直径は８４０nmであった。平均値±ＳＤ（ｎ＝６）。
【図４】リポソームの非存在下（黒い三角）および存在下（白い三角）、腹膜透析液中のアンモニア（ＮＨ３）の濃度を示したグラフである。透析液を、健康ラットにｔ＝０で腹膜腔内に注射した。注射されたリポソーム投与量は１８０mg/kgであり、透析液中の脂質濃度は１５mMであった。リポソーム直径は８５０nmであった。
【図５】リポソームの非存在下（黒い三角）および存在下（白い三角）、腹膜透析液中のベラパミル（ＶＰ）濃度を示したグラフである。ＶＰがｔ＝０ｈに（５０mg/kg、n）経口胃管栄養法によって投与され、その後、ｔ＝１ｈに（↑）透析液が腹膜内注射によって投与された。リポソームの直径は８５０nmであった。
【００４９】
実施例
以下の実施例において、例示的なリポソーム組成物（実施例１）は、リポソームのサイズに依存して腹膜内投与後に腹膜空間中により長時間保持され得ることが実証された（実施例２）。これらのリポソームは、５０％ウシ胎児血清中における急速かつ効率的なアンモニアの取り込みを示した（実施例３）。さらに、これらのリポソームは、アンモニア（実施例４）および経口投与された薬物ベラパミル（実施例５）を腹膜空間に封入および濃縮することができ、従って、腹腔内投与による代謝産物および薬物の解毒のためのこのようなリポソームの有用性が実証される。
【００５０】
実施例１−  リポソームの組成および調製
インビボの以下の実験で試験された製剤は、ＤＰＰＣと、４５モル％のＣＨＯＬおよび５モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧから構成された。リポソーム内の水溶液は、ｐＨ２に緩衝化された２５０mMのクエン酸ナトリウム溶液であった。製剤は、脂質フィルム水和／押し出し法によって調製された（Hope M, Bally M, Webb G, Cullis PR. Production of large unilamellar vesicles by a rapid extrusion procedure. Characterization of size distribution, trapped volume and ability to maintain a membrane potential. Biochim Biophys Acta 1985, 55-65）。脂質、ＣＨＯＬ、および最終的にInvitrogenのコレステリルBODIPY（登録商標）FL-C12色素（０．０５モル％）をクロロホルムに溶解し、これをその後、連続的な窒素気流および高真空下で１２時間超かけて除去した。脂質フィルムをクエン酸緩衝液（２５０mM、ｐＨ２）を用いて水和した。大きな小胞が、５μmの２つの積み重なった膜を通して押し出されることによって得られた。膜ｐＨ勾配は、通常の食塩水中での１２時間を超える透析によって確立された（膜カットオフ：１０００kDa）。
【００５１】
実施例２−  腹膜内投与後の腹膜空間から血液へのリポソームの排出
Sprague-dawleyラット（雄、３００ｇ）を、イソフルラン吸入（２％）によって軽く麻酔し、その膜に交換不可能なステロール色素（コレステリルBODIPY（登録商標）FL-C12、Invitrogen、０．０５モル％)を有するイコデキストリン７．５％含有リポソーム（２５０または８５０nmのいずれかの直径）溶液２０mLを、無菌穿刺を通して腹膜空間にゆっくりと注射した。その後、２５０μLの血液アリコートを、尾静脈を通して腹膜内注射から１５分後、１時間後、２時間後、４時間後、６時間後、８時間後、１０時間後、１２時間後、１４時間後、１６時間後にサンプリングした。血漿を遠心分離によって（６０００ｇで１０分間）血液アリコートから分離し、血漿中のλem=５２０nm (λex=４７０nm)における色素蛍光を測定した。
【００５２】
実施例３−  ５０％ウシ胎児血清中におけるｐＨ勾配リポソームによるインビトロにおけるアンモニアの取り込み
比較拡散セル（PermGear, Hellertown, PA）におけるアンモニア（ＮＨ３）の取り込み動態を、３７℃で５０％ＰＢＳ中でモニタリングした。この実験に使用されたリポソームは直径８５０nmを有し、５４モル％のＤＰＰＣ、４５モル％のコレステロール、および１モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ、およびｐＨ２に緩衝化された内部クエン酸溶液（２５０mM）を含んでいた。ドナー区画（リポソームを含まない）は、レシーバー区画（リポソームを含む）とは、１００nmの孔を有するポリカーボネート膜によって隔てられた。ＮＨ３と脂質のモル比は０．４５に設定され、平衡に達成した両セルにおける初期のＮＨ３濃度は１．７mMであった。レシーバー区画における小胞によるＮＨ３の取り込みは、ドナー細胞中の毒素濃度の減少に直接関連していた。レシーバー区画へのｐＨ勾配リポソームの注射から３分後、３０分後、１時間後、２時間後、４時間後、８時間後および２４時間後にドナー区画から１００μLのアリコートをサンプリングした。その後、ＮＨ３を、比色アッセイによって定量した（Berthelot MPE, Violet d'aniline. Repert Chim Appl 1859, 1:284）。
【００５３】
実施例４−  リポソームの非存在下および存在下における腹膜透析液中のアンモニアの濃度
Sprague-dawleyラット（３００ｇ）をイソフルラン（２．５％、０．６L/分のＯ２）を用いて軽く麻酔し、加温ブランケット上に保持し、リポソーム（３mg/mL）を有する（または有さない）２０mLのイコデキストリン７．５％溶液を、２２Ｇのシリコンカテーテル（Venflon; Becton Dickinson）を用いて無菌腹部穿刺を通して腹膜空間にゆっくりと注入した。この実験に使用されたリポソームは、８５０nmの直径を有し、５４モル％のＤＰＰＣ、４５モル％のコレステロール、および１モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ、およびｐＨ２に緩衝化された内部クエン酸溶液（２５０mM）を含んでいた。腹膜透析液のアリコートを、透析開始から０．５、１、１．５、２、３および４時間後にサンプリングした。腹膜液試料中のアンモニア含量を、比色アッセイによってアッセイした（Berthelot MPE, Violet d'aniline. Repert Chim Appl 1859, 1:284）。
【００５４】
実施例５−  リポソームの非存在下および存在下における腹膜透析液中のベラパミルの濃度
Sprague-dawleyラット（３００ｇ）へのベラパミル（５０mg/kg、経口投与）の投与から１時間後、動物をイソフルラン（２．５％、０．６L/分のＯ２）を用いて軽く麻酔し、加温ブランケット上に保持し、リポソーム（３mg/mL）を有する（または有さない）２０mLのイコデキストリン７．５％溶液を、２２Ｇのシリコンカテーテル（Venflon; Becton Dickinson）を用いて無菌腹部穿刺を通して腹膜空間にゆっくりと注入した。この実験に使用されたリポソームは、８５０nmの直径を有し、５４モル％のＤＰＰＣ、４５モル％のコレステロール、および１モル％のＤＳＰＥ−ＰＥＧ、およびｐＨ２に緩衝化された内部クエン酸溶液（２５０mM）を含んでいた。腹膜透析液のアリコートを、ベラパミルの経口胃管栄養法から２、４、６、８、１０および１２時間後にサンプリングした。腹膜液中の薬物含量を、例えば、Forster et al., Biomaterials 33, 3578-3585, 2012に記載のように、ＨＰＬＣによってアッセイした。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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