(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
白血病、メラノーマ、結腸癌、前立腺癌、又は乳癌を治療するために構成された薬剤であって、約５μｇ／ｍｌ以上のエモジンと組み合わせた有効な量のジゴキシンを含む、薬剤。
【請求項２】
約１０μｇ／ｍｌ以上のエモジンを含む、請求項１の薬剤。
【請求項３】
約０．０５μｇ／ｍｌ以上のジゴキシンを含む、請求項１又は２の薬剤。
【請求項４】
約０．１μｇ／ｍｌ以上のジゴキシンを含む、請求項１又は２の薬剤。
【請求項５】
約１０μｇ／ｍｌ以上のエモジン及び約０．０５μｇ／ｍｌ以上のジゴキシンを含む、請求項１の薬剤。
【請求項６】
約１０μｇ／ｍｌ以上のエモジン及び約０．１０μｇ／ｍｌ以上のジゴキシンを含む、請求項１の薬剤。
【請求項７】
約５μｇ／ｍｌから約１０μｇ／ｍｌのエモジン及び約０．０５μｇ／ｍｌから約０．１μｇ／ｍｌのジゴキシンを含む、請求項１の薬剤。
【請求項８】
ＤＭＳＯを含む、請求項１〜７いずれか一項の薬剤。
【請求項９】
前記エモジンがダイオウ（Rhubarb）、クロウメモドキ（Buckthorn）、及び／又はイタドリ（Japanese Knotweed）から抽出されたものである、請求項１〜８いずれか一項の薬剤。
【請求項１０】
前記エモジンがダイオウ（Rhubarb）の根茎から抽出されたものである、請求項１〜９いずれか一項の薬剤。
【請求項１１】
白血病、メラノーマ、結腸癌、前立腺癌、又は乳癌を治療するためのレジメン用に構成された薬剤であって、前記レジメン用に構成された薬剤は約５μｇ／ｍｌ以上のエモジンと組み合わせた有効な量のジゴキシンを含む、薬剤。
【請求項１２】
約１０μｇ／ｍｌ以上のエモジンを含む、請求項１１の薬剤。
【請求項１３】
約０．０５μｇ／ｍｌ以上のジゴキシンを含む、請求項１１又は１２の薬剤。
【請求項１４】
約０．１μｇ／ｍｌ以上のジゴキシンを含む、請求項１１又は１２の薬剤。
【請求項１５】
約１０μｇ／ｍｌ以上のエモジン及び約０．０５μｇ／ｍｌ以上のジゴキシンを含む、請求項１１の薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
優先権
本出願は、引用により本明細書に取り込まれる、２０１０年１１月１３日に提出した、米国仮特許出願６１／４１３，４３０番に基づいて優先権を主張する、２０１１年２月１日に提出した、米国特許出願１３／０１８，４３５番に基づく優先権の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
本発明の背景技術
１．本発明の技術分野
本発明は、一般的に、癌治療に関する。特に、癌の治療のための、エモジン及びそのアナログとともに用いる、ジゴキシン及びクアバイン（Ｑｕａｂａｉｎ）など、強心性配糖体の使用に関する。
【発明の概要】
【０００３】
２．  関連技術の説明
植物性薬品（Ｈｅｒｂａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ）は依然として普及しており、世界中の多くの人口の医薬の需要を満たす。グローバルな植物性薬品市場は現在約３００億ドルの規模である。１様々な病気の制御に有効であり得るとされる生物活性フィトケミカル（ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を薬草から単離するための努力が増大している。生物活性フィトケミカルの分子構造及び作用機構の決定は、それらの効能のエビデンス並びに漢方薬を提供するために等しく重要であり、さらに、潜在的に合成又は半合成薬品の医薬開発へ導くことができる。２スコーパス（Ｓｃｏｐｕｓ）（２８）２に引用されたスコーパス（Ｓｃｏｐｕｓ）の記録を見てください。癌研究の植物性薬品について、いくつかの従来の研究は、薬草の中に存在する、あるフィトケミカルが抗癌活性を働かせることを実証する。エモジン（ｅｍｏｄｉｎ）、フィスシオン（ｐｈｙｓｃｉｏｎ）及びクリソファノール（ｃｈｒｙｓｏｐｈａｎｏｌ）を含む、３つの、構造上関連するアントラキノンの中で、エモジンは、腫瘍細胞で最も有力な細胞毒性を示した。エモジン（１，３，８−トリヒドロキシ−６−メチルアントラキノン（１，３，８−ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ−６−ｍｅｔｈｙｌａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ））及びアロエ‐エモジン（ａｌｏｅ−ｅｍｏｄｉｎ）、（１，８−ジヒドロキシ−３−ヒドロキシメチル−９，１０−アントラセンジオン（１，８−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ−９，１０−ａｎｔｈｒａｃｅｎｅｄｉｏｎｅ））は、膀胱癌３、肺癌４、肝癌５、及び白血病を含む様々なタイプの癌の治療のために動物モデル及びインビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）で化学療法活性を示す。アロエ‐エモジンは、ダイオウ（Ｒｈｅｉ  Ｒｈｉｚｏｍａ）及びレウム・パルマツム（Ｒｈｅｕｍ  ｐａｌｍａｔｕｍ）など、いくつかの従来の薬用植物の中に存在する天然のアントラキノン化合物である。興味深いことに、アロエ‐エモジンは、通常のヒト細胞へのより少ない細胞毒性を有すると分かった。６
【０００４】
ジゴキシンなど、植物由来強心性配糖体は、うっ血性心不全及び他の心臓障害の治療に使用される（１）。それらの主な薬理作用は、ナトリウムポンプ、Ｎａ＋‐及びＫ＋‐依存のＡＴＰアーゼ（ＮＫＡ）１（ＥＣ  ３．６．３．９）の抑制を通して媒介される（２）。ＮＫＡ、ユビキタスな細胞膜のカチオン輸送体タンパク質は、高いＫ＋及び低いＮａ＋濃度を維持することによりすべての真核細胞中で正常な膜電位をコントロールする。それは触媒サブユニット及びβグリコプロテインサブユニットから成る（３）。研究は、様々な癌細胞の中で、植物由来強心性配糖体が、増殖とアポトーシスなど、いくつかの細胞のプロセスを調整することを示唆した（４）（５）（６）（７）。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】図１は、ＮＢ４白血病細胞でのジゴキシン、エモジン、及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。
【図２】図２は、ＨＬ−６０白血病細胞でのジゴキシン、エモジン、及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。
【図３】図３は、ジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）Ｔ細胞白血病細胞でのジゴキシン、エモジン、及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。
【図４】図４は、ＨＴ２９結腸癌細胞でのジゴキシン、エモジン、及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。
【図５】図５は、ＰＣ３前立腺腫瘍細胞でのジゴキシン、エモジン、及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。
【図６】図６は、ＭＤＡ  ４３５乳癌細胞でのジゴキシン、エモジン、及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。
【図７】図７は、メラノーマ及び乳癌のＭＤＡ  ４３５細胞系統でのジゴキシン、エモジン、及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。
【図８】図８は、ヘパラナーゼ（Ｈｅｐａｒａｎａｓｅ）活性でのジゴキシン、エモジン及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。
【図９】図９は、ＨＭＶＥＣ活性でのジゴキシン、エモジン、及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。
【図１０】図１０は、ＡＭＬ（急性マイロ（Ｍｉｌｏ）白血病）のＮＢ−４細胞系統でのジゴキシン、エモジン、及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。
【図１１】図１１は、ＡＭＬ（急性マイロ（Ｍｉｌｏ）白血病）のＮＢ−４細胞系統でのジゴキシン、エモジン、及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。
【図１２】図１２は、ＨＬ−６０細胞系統でのジゴキシン、エモジン、及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。
【図１３】図１３は、ジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）細胞系統でのジゴキシン、エモジン、及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。
【図１４】図１４は、ＨＴ−２９細胞系統でのジゴキシン、エモジン、及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。
【０００６】
参照によるとり込み
次ものは参考文献一覧であり、上述及び後述の本明細書に引用された参考文献に加え、背景、発明の趣旨、図面の簡単な説明、図面及び要約として記載されるものを含み、これによって、下記に詳細に記載がなければ、好ましい実施態様の要素または特徴の代替的な実施態様を開示するように、下記の好ましい実施態様の詳細な説明の中への参照によって組込まれる。これらの参照文献の単一のものまたは２つ以上の組み合わせは、下記の詳細な説明に述べられた好ましい実施態様の変形を得るために調べられてよい。さらに特許、特許出願、及び非特許参照文献は書かれた記述で引用され、そして、参照によって、次の参照文献に関して丁度記載された同じ効果を持った好ましい実施態様に組み入れられる：
米国特許番号５，８７２，１０３，  ６，１９７，７５４，  ６，７４０，６６５，  ６，８１２，２５５，  ７，２６８，１６２，  ７，３５８，２２２，  ７，３８１，５３５，  ７，３９３，６５６，  ７，５６３，５８４，  ７，６９５，９２６，  ７，７９０，９０５，及び米国公表出願番号２００３／０２１１１８０，  ２００５／００２６８４９，  ２００５／０１９６４７３，  ２００６／０２０５６７９，  ２００７／０１９１２６２，  ２００８／０１５２７００，  ２００８／０２２０４４１，  ２００９／００１８０８８，  ２００９／０１４３２７９，  ２００９／０２１５０４２，  ２００９／０２６９７７２，  ２０１０／００６８１９８，  ２０１０／００９２５８５，  ２０１０／０１４４６４７，  ２０１０／０１６７２８６；及び
ＰＣＴ及び外国公表出願番号  ＷＯ／０１６６１２３，  ＷＯ２００４／０５２２９４，  ＷＯ２００６／０５３０４９，  ＷＯ２００７／１３０１２４；ＲＵ２００８１０７５８５；  ＭＸ２０１０００５０８１；  ＫＲ１００２２１７６２；  ＣＮ０１３６２７０２；  ＣＮ１３７０５８７；及び
サイテーション：
Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ＆  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，  Ｍｅｄｉｆｏｃｕｓ．ｃｏｍ  Ｍｅｄｉｆｏｃｕｓ  Ｇｕｉｄｅ  ｏｎ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ；
ＲＡＮＪＩＴ  ＴＨＯＭＡＳ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ，  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ，  ２００２，  １１６，  ３４１−３４５；
ＤＲＡＧＯＭＩＲ  ＭＡＲＩＳＡＶＬＪＥＶＩＣ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ，  Ｈａｅｍａ  ２００３；  ６（３）：  ３９４−３９７；
ＵＰＳＨＡＷ  ＪＤ，  Ｊｒ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ  Ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｂ  ｃｅｌｌ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  Ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ  ｉｎ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ，  Ｓｏｕｔｈ  Ｍｅｄ  Ｊ．  ２００２  Ｊｕｎｅ  １９９５（６）：  ６４７−９；
ＷＩＥＲＮＩＫ  ＰＨ，  Ｓｅｃｏｎｄ  ｎｅｏｐｌａｓｍｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｔｒｅａｔ  Ｏｐｔｉｏｎｓ  Ｏｎｃｏｌ．  ２００４  Ｊｕｎ；  ５（３）：２１５−２３；
ＬＵＩＳ  ＦＡＹＡＤ，  Ｍ．Ｄ．  ａｎｄ  ＳＵＳＡＮ  Ｏ’ＢＲＩＥＮ，  Ｍ．Ｄ．，  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｎｄ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ：  Ａ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｒｅｖｉｅｗ，  １９９５；
ＭＩＣＨＡＥＬ  Ｊ．  ＫＥＡＴＩＮＧ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ２００３，  １５３−１７５；
ＧＥ  ＭＡＲＴＩ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｖｅ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｎｉｃ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  （ＣＬＬ）。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
好ましい実施態様の詳細な説明
本発明は白血病または他の癌を治療する方法を提供する。治療は白血病または他の癌と診断された患者にエモジン及びジゴキシンの組み合わせの周期的な投与量を含むレジメンを施すことを含む。
【０００８】
治療方法は、それぞれ、０．０５  ｕｇ／ｍｌ以上または０．１０  ｕｇ／ｍｌ以上のジゴキシンと共に、約５ｕｇ／ｍｌ以上または１０  ｕｇ／ｍｌ以上のエモジンを含む周期的な量を含んでもよい。治療に用いてよい他の組み合わせは、５ｕｇ／ｍｌ以上のエモジンと少なくとも約０．１０ｕｇ／ｍｌのジゴキシンとの組み合わせ、少なくとも約１０ｕｇ／ｍｌのエモジンと少なくとも約０．１０ｕｇ／ｍｌのジゴキシンとの組み合わせ、５ｕｇ／ｍｌを超えるエモジンと少なくとも約０．０５ｕｇ／ｍｌジゴキシンとの組み合わせ、又は、少なくとも約１０ｕｇ／ｍｌのエモジンと少なくとも約０．０５ｕｇ／ｍｌジゴキシンとの組み合わせでよい。他の組み合わせを、体重にだけでなく、年齢、性別、家族または患者病歴、または患者に特有の他の特性のようなファクターにも依存して、医師によって処方され、使用されてもよい。
【０００９】
治療レジメンは一日一回の投与量又は一日二回の投与量、または一週間２回以上の投与量、又はその他の投与量を含んでもよい。各投与量の量が治療の周期性によって決定されながら、投与量は１日１回又は２回を超えて投与されてよい。
【００１０】
また、本発明は、白血病または他の癌治療薬を調製する方法であって、エモジン及びジゴキシンの組み合わせを含むカクテルを調製することを含む方法も提供する。
【００１１】
また、白血病または他の癌治療薬であって、エモジン及びジゴキシンの組み合わせを含むカクテルを含む治療薬も提供する。
【００１２】
本発明は、癌の治療のための、ジゴキシン及びクアバイン（ｑｕａｂａｉｎ）など、強心性配糖体単独での、またはエモジン及びそのアナログと併用での、新規な治療適用に関する。とくに、癌は血液の癌である。予期せぬことに、本発明は、癌細胞死を刺激するためにジゴキシンがエモジンとともに相乗作用を有することを初めて開示する。
【００１３】
図１は、ＮＢ４白血病細胞でのジゴキシン、エモジン及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。結果は、三重反復試験の平均±ＳＴＤＥＶを表わす。生細胞及び死細胞のパーセンテージは、死細胞についてＰＩ染色を使用し、生細胞の数はＦＡＣＳによって決定された。
【００１４】
図２は、ＨＬ−６０白血病細胞上でのジゴキシン、エモジン及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。結果は、三重反復試験の平均±ＳＴＤＥＶを表わす。生細胞及び死細胞のパーセンテージは、死細胞についてＰＩ染色を使用し、生細胞の数はＦＡＣＳによって決定された。
【００１５】
図３はジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）Ｔ細胞白血病細胞でのジゴキシン、エモジン及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。結果は、三重反復試験の平均±ＳＴＤＥＶを表わす。生細胞及び死細胞のパーセンテージは、死細胞についてＰＩ染色を使用し、生細胞の数はＦＡＣＳによって決定された。
【００１６】
図４は、ＨＴ２９結腸癌細胞でのジゴキシン、エモジン及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。結果は、三重反復試験の平均±ＳＴＤＥＶを表わす。生細胞及び死細胞のパーセンテージは、死細胞についてＰＩ染色を使用し、生細胞の数はＦＡＣＳによって決定された。
【００１７】
図５は、ＰＣ３前立腺腫瘍細胞でのジゴキシン、エモジン及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。結果は、三重反復試験の平均±ＳＴＤＥＶを表わす。生細胞及び死細胞のパーセンテージは、死細胞についてはＰＩ染色を使用し、生細胞の数はＦＡＣＳによって決定された。
【００１８】
図６は、乳癌の細胞系統であるＭＤＡ  ４３５でのジゴキシンのエモジン及びのそれらの組み合わせ増殖の効果を示す。インビトロ(ｉｎ  ｖｉｔｒｏ)の実験では、濃度依存性がある。
【００１９】
図７は、メラノーマ及び乳癌の細胞系統であるＭＤＡ  ４３５でのジゴキシン、エモジン及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。この場合、１／１００の濃度は効力がなく（コントロールと同じ）、１／３の濃度は、効果が良好であり、１／１０の濃度は、細胞をすべて殺した。正常細胞は、病的な細胞の割合より５０−９０％効果が弱かった。
【００２０】
図８は、ヘパラナーゼ（Ｈｅｐａｒａｎａｓｅ）活性でのジゴキシン、エモジン及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。ヘパラナーゼは、血管新生（ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）（先に存在する血管から新しい血管の成長に関する生理的なプロセス）に関係のある酵素である。このスライドは、ジゴキシン及びエモジンの組み合わせの増殖がこの酵素の活性を遅らせるという事実を示す。
【００２１】
図９は、血管新生に関係のある酵素であるＨＭＶＥＣでの、ジゴキシン、エモジン及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。
【００２２】
図１０及び１１は、ＡＭＬ（急性マイロ白血病（Ａｃｕｔｅ  Ｍｉｌｏ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ））のための細胞系統であるＮＢ−４でのジゴキシン、エモジン及びそれらの組み合わせの増殖の効果を示す。図１０中の２本の左の棒はコントロール（ＤＭＳＯを含む）である。ジゴキシン単独０．１  ｕｇ／ｍｌ（３番目の棒によって説明される）が、強い効果を示す。エモジン単独が高い濃度（約１０  ｕｇ／ｍｌ以上）にのみ効果がある。図１０中の右の３つの棒はジゴキシンとエモジンの組み合わせの効果である。ジゴキシン０．１ｕｇ／ｍｌ及びエモジン１０ｕｇ／ｍｌを投与することは単独で作用する２つのどちらのものより非常に強い効果がある。実際、エモジンだけが使用される時、８９２の生細胞が測定され、ジゴキシンだけが使用される時、８９２の生細胞が測定され、ジゴキシンとエモジンの両方が併用して使用された時、３７１の生細胞が測定され、効果は、２倍以上である。ジゴキシンとエモジンの組み合わせのこの驚くべき効果は、本発明の有利な特徴を示す。
【００２３】
図１２−１３は、急性Ｔ細胞白血病であるジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）及び前骨髄球性白血病であるＨＬ−６０について、同じ驚くほど有利な相乗効果が観察されたことを示す。
【００２４】
また、図１４は、ＨＴ−２９細胞系統でのジゴキシン及びエモジンの組み合わせを使用することの有利な相乗効果を示す。
【実施例】
【００２５】
本発明の実施態様は、癌に対する、有益な薬、治療及び薬の調製の方法、並びに治療法に関する。ここで、ジゴキシン「Ｄ」及びエモジン「Ｅ」の組み合わせは、腫瘍細胞増殖を防止するために使用される。ＮＢ４、ＨＬ６０、ジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）白血病細胞及びＨＴ２９結腸癌及び前立腺の腫瘍細胞の生存におけるＣＸＣＲ４アンタゴニストの効果を検討した。ジゴキシンは、（０．０５−１μｇ／ｍｌ）の間の濃度で白血病細胞の成長を著しく阻害した。エモジン単独では、５μｇ／ｍｌより高い濃度でのみ白血病細胞の成長を阻害した。０．１μｇ／ｍｌの濃度でのジゴキシン及び５または１０μｇ／ｍｌのいずれかの濃度でのエモジンの組み合わせは、両方の化合物の腫瘍死滅能力を著しく増加させた。また、ジゴキシン、エモジン及びそれらの組み合わせは、ＨＴ２９腫瘍細胞での部分的な、しかしながら、顕著な効果も与える。
【００２６】
異なる起源からの癌細胞株の生存率での、ジゴキシン、エモジン、及びそれらの組み合わせの増殖の効果を実験した。収穫された非接着性ヒト造血器腫瘍細胞系統、ＮＢ４、ＨＬ６０及びジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）細胞は、１０％のＦＣＳを補給した培地中、三重反復試験で、２４のウェル・プレートに１つのウェル当たりの２ｘ１０５生細胞／１ｍｌで接種され、ジゴキシン、エモジン及びそれらの組み合わせの異なる濃度で２４時間インキュベートされた。インキュベーションに続いて、細胞はヨウ化プロピジウム（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ  ｉｏｄｉｄｅ）（ＰＩ）（シグマ、セントルイス、ＭＯ）で染色され、培養中の生存可能なＰＩ−ネガティブ細胞のパーセントは、セルクエスト（ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ）ソフトウェアを使用して、ＦＡＣＳ  ｃａｌｉｂｕｒ分析（ベクトン・ディキンソン・イムノサイトメトリ・システム（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ））によって決定された。接着性前立腺癌ＰＣ３細胞及び結腸癌ＨＴ２９細胞は、上記に記載した条件の下で、２４ウェル・プレートに１つのウェル当たりの１ｘ１０５生細胞／１ｍｌで接種され、ジゴキシン、エモジン及びそれらの組み合わせに２４時間の暴露後、細胞は収穫され、ＰＢＳで洗われ、ＰＩで染色され、造血細胞について記載したように数えられた。
【００２７】
マウスにおけるエモジンのＬＤ５０値が０．５６ｇ／ｋ”ｇであると考えられる一方、ジゴキシンの治療指数は０．１２５  ｍ”ｇから０．５  ｍ”ｇの間にあると考えられる。
【００２８】
本発明によるＤ及びＥを組み合わせる場合、驚くべき、予期しない共生効果がある。
【００２９】
本発明の治療は、ジゴキシン「Ｄ」及びエモジン「Ｅ」を別々に有すると知られている薬草の混合物として調製されていてもよい。アロエ‐エモジンは、大黄（Ｒｈｅｉ  Ｒｈｉｚｏｍａ）及びレウム・パルマツム（Ｒｈｅｕｍ  ｐａｌｍａｔｕｍ）等、いくつかの従来の薬用植物中に存在する天然のアントラキノン化合物である。興味深いことには、アロエ‐エモジンは、正常ヒト細胞へのより少ない細胞毒性を有すると分かった。合成されたＤ及びＥ分子を用いて、インビトロ（Ｉｎ−ｖｉｔｒｏ）で、テストが細胞系統で行なわれた。植物を用いたインビトロのテストは単離された分子を用いたものに似ていた。
【００３０】
エモジンは「大黄（Ｒｈｅｉ  Ｒｈｉｚｏｍａ）及びレウム・パルマツム（Ｒｈｅｕｍ  ｐａｌｍａｔｕｍ）等、従来の薬用植物」から抽出されてもよい。ある実施態様においては、使用されるエモジンの源はＤａ  Ｈｕａｎｇ−中国語の名前、または大黄の根茎（Ｒｈｕｂａｒｂ  Ｒｏｏｔ）−英語の名前、またはレウム・パルマツム（Ｒｈｅｕｍ  Ｐｌａｍａｔｕｍ）−植物学の名前、または  Ｒａｄｉｘ  Ｒｈｉｓｏｍａ  Ｒｈｅｉ−薬物の名前である。エモジンはダイオウ（Ｒｈｕｂａｒｂ）、クロウメモドキ（Ｂｕｃｋｔｈｏｒｎ）及び／又はイタドリ（Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｋｎｏｔｗｅｅｄ）（Ｆａｌｌｏｐｉａ  Ｊａｐｏｎｉｃａ）から抽出されてもよい。ソコトリナ・アロエ、バルバドス・アロエ、及びザンジバル・アロエで見つかったエモジンの一種であるアロエ‐エモジンを用いてよい。
【００３１】
ある実施態様においては、エモジンを使用する癌治療用の薬は、約１０：１の比で水に薬草を混合することにより調製される。薬草は細粉に粉砕されてもよい。水は細かい粉末の薬草に加えられてよく、ポットに蓋をしてもよい。沸騰の後、ある実施態様においては、熱は摂氏約７０度まで低下する。液状混合物をさらに一時間煮る。その後、液体はコンテナーへ漉される。ある場合には、これを２度行ってよい。二回目の煮出しでは、比は、７．５：１へ低減して行ってよい。二回目の煮出しは、沸騰を含み約４５分かかってもよい。
【００３２】
ある実施態様において、ジゴキシンの源は  Ｓｈｅｎｇ  Ｄｉ  Ｈｕａｎｇ−中国語名、またはジギタリスの根茎（Ｆｏｘｇｌｏｖｅ  ｒｏｏｔ）‐英語名、または  Ｒａｄｉｘ  Ｒｈｅｍａｎｉａ‐薬物名である。ジゴキシンの調製はエモジンと同様でよい。ある実施態様においては、エモジン及びジゴキシンが抽出される薬草は一緒に煮出される。ジゴキシンはジギタリス・プルプレア（Ｄｉｇｉｔａｌｉｓ  Ｐｕｒｐｕｒｅａ）または  ムラサキ・キツネノテブクロ（Ｐｕｒｐｌｅ  Ｆｏｘｇｌｏｖｅ）から抽出されてもよい。
【００３３】
収穫された、非接着性ヒト造血器腫瘍細胞系統、ＮＢ４（ＡＭＬ）、ＨＬ６０及びジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）細胞は、１０％のＦＣＳを補給した培地中、三重反復試験で、２４ウェル・プレートに、１つのウェル当たりの２ｘ１０５生細胞／１ｍｌで接種され、ジゴキシン、エモジン及びそれらの組み合わせの異なる濃度で２４時間インキュベートされた。インキュベーションに続いて、細胞はヨウ化プロピジウム（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ  ｉｏｄｉｄｅ）（ＰＩ）（シグマ、セントルイス、ＭＯ）で染色され、培養中の生存可能なＰＩ−ネガティブ細胞のパーセントは、セルクエスト（ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ）ソフトウェアを使用して、ＦＡＣＳ  ｃａｌｉｂｕｒ分析（ベクトン・ディキンソン・イムノサイトメトリ・システム（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ））によって決定された。接着性前立腺癌ＰＣ３細胞及び結腸癌ＨＴ２９細胞は、上記に記載した条件の下で、２４ウェル・プレートに、１つのウェル当たりの１ｘ１０５生細胞／１ｍｌで接種され、ジゴキシン、エモジン及びそれらの組み合わせに２４時間の暴露後、細胞は収穫され、ＰＢＳで洗われ、ＰＩで染色され、また造血細胞について記載したように数えられた。
【００３４】
エモジン及びジゴキシンの組み合わせを含むカクテルを投与することを含む癌治療は、当業者が理解できるような他の治療、及び／又は有効な癌治療において、エモジン、ジゴキシン  カクテルと組みわせてもよい、他の態様及び化合物を開示するような文献（これは、参照により組み込まれる）に記載されうる他の治療と組み合わせてよい。
【００３５】
また、エモジン及びジゴキシンの有利な組み合わせを用いる治療は、乾癬及び炎症性疾患など、他の病気を治療するために提供されてもよいと考えられている。
【００３６】
本発明はいくつかの実施態様の点から記載されているが、当業者は、本発明が記載された実施態様に制限されないが、添付した特許請求の範囲の精神及び範囲内の修正及び変更で実行することができることを認識するだろう。つまり、その記載は、発明を限定するかわりに、添付した特許請求の範囲について構造かつ機能的な等価物を含む、添付した特許請求の範囲で述べられるような、実例となるように見なされる。
【００３７】
本発明の典型的な図面及び具体的な実施態様が、記載され、説明されながら、本発明の範囲が、議論した特定の実施態様に制限されるべきでないことは理解される。したがって、実施態様は制限的であるというよりむしろ実例であると見なされ、下記請求項及びそれらの構造的及び機能的等価物に記載のように、本発明の範囲から逸脱されずに、当業者により、変化がそれらの実施態様の中で作られてもよいことが理解されるはずである。
【００３８】
さらに、本明細書における好ましい実施態様によって実施されうる方法及び上記に記載されうる方法においては、操作は選択された印刷上の順序で記載された。しかしながら、もし明らかに述べられなかったか、当業者によって必要であると理解されなかったならば、順序は印刷上の便宜のために選択され、整理され、操作を行なうための任意の特定の順序を意味するようには意図されない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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