(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アカキャベツ（Brassica oleracea  L．var．capitata）抽出物を有効成分とする、過活動膀胱の予防又は改善剤。
【請求項２】
過活動膀胱の予防又は改善がＡＴＰ放出抑制によるものである、請求項１記載の過活動膀胱の予防又は改善剤。
【請求項３】
アカキャベツ（Brassica oleracea  L．var．capitata）抽出物を有効成分とする、ＡＴＰ放出抑制剤。
【請求項４】
アカキャベツ（Brassica oleracea  L．var．capitata）抽出物を有効成分とする、頻尿予防又は改善剤。
【請求項５】
頻尿の予防または改善がＡＴＰ放出抑制によるものである、請求項４記載の頻尿の予防又は改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、過活動膀胱の予防、改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
頻尿（ひんにょう）とは、様々な原因により１日の排尿回数が増えてしまう症状である。頻尿の原因としては、尿崩症、高血圧症、水分、カフェイン、アルコールの過剰摂取などの尿量の増加に因るものと、過活動膀胱、尿路感染、間質性膀胱炎など尿量の増加に因らないものに大別される。さらに、膀胱や前立腺など泌尿器系の臓器に病気が存在して起こる場合や、神経的な緊張も、頻尿の原因の１つと言われている。
一方、過活動膀胱（overactive  bladder：OAB）は、尿意切迫感、切迫性尿失禁の排尿障害を呈する疾患である。過活動膀胱の症状は日常生活に支障をきたし生活の質を低下させること、特に高齢者に多く見られ４０歳以上の罹患者は８００万人を超えると推定されていることから、近年の高齢化社会に伴って注目が集まっている。健常人では膀胱内の蓄尿量と尿意は相関関係にあるが、過活動膀胱患者では尿の蓄積によらず膀胱の収縮が起こるため尿意切迫感を引き起こすと考えられている。しかしながら、その発症機構には未だ不明な点が多い。
【０００３】
近年、過活動膀胱を引き起こす要因の１つとして、膀胱知覚神経系（膀胱求心性神経系）の興奮性の亢進が指摘されている。この知覚神経系の興奮は、蓄尿による膀胱の伸展刺激を受けて膀胱上皮細胞から放出される各種の伝達物質（アデノシン三リン酸（adenosine  triphosphate：以下ＡＴＰとも略記する）、アセチルコリン（acetylcholine）等）によって引き起こされると考えられている。ヒトでは加齢により膀胱上皮から放出されるＡＴＰ量が増加すること、及び過活動膀胱患者では膀胱伸展時のＡＴＰ放出量が増大していることが報告されている（例えば、非特許文献１参照）。また、ラットの膀胱にＡＴＰを投与すると排尿筋の過活動が誘発されて排尿間隔が短縮するとの報告もある（例えば、非特許文献２参照）。
【０００４】
現在のところ、薬物による過活動膀胱の治療には、膀胱収縮を促すアセチルコリンの作用を抑制する抗コリン薬が主に使われている。しかし、抗コリン薬は服用に伴う、口の渇き、便秘、排尿の困難性等の副作用を起こすことが知られている。このような実情から、より効果的な過活動膀胱の予防、治療剤が望まれている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】日本脊髄障害医学会雑誌，2005年，第18巻，p.18-19
【非特許文献２】Journal  of  Urology，2002年，第168巻，p.1230-1234
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、過活動膀胱、又は尿意切迫感、切迫性尿失禁等の排尿障害を予防及び／又は改善する、過活動膀胱の予防又は改善剤を提供することを課題とする。また、本発明は、排尿を制御する神経伝達物質であるＡＴＰの膀胱上皮細胞からの放出を抑制する、ＡＴＰ放出抑制剤を提供することを課題とする。さらに、本発明は、頻尿を予防又は改善する、頻尿予防又は改善剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、過活動膀胱の原因とされる種々の要因の中から、特に膀胱求心性神経の興奮性亢進に着目し、この興奮を引き起こしている膀胱上皮からのＡＴＰ放出を抑制する物質が、過活動膀胱の予防又は改善剤として有用であることを明らかにしている（特開２０１１−１３３４４０号公報参照）。
そして、本発明者らは更に研究を進めたところ、アカキャベツ（Brassica oleracea  L．var．capitata）抽出物、ユッカフォーム抽出物、ステビア（Stevia rebaudiana）抽出物、β−カロテン、ベニコウジ黄色素、タチジャコウソウ（Thymus vulgaris）抽出物、ベニバナ（Carthamus tinctorius）抽出物、ノートカトン（Nootkatone）、メバスタチン（mevastatin）及びバナナ（Musa paradisiaca）抽出物にＡＴＰ放出を抑制する効果があり、過活動膀胱の予防又は改善、並びに頻尿の予防又は改善に有用であることを見出した。本発明はこれらの知見に基づいて完成するに至ったものである。
【０００８】
本発明は、アカキャベツ抽出物、ユッカフォーム抽出物、ステビア抽出物、β−カロテン、ベニコウジ黄色素、タチジャコウソウ抽出物、ベニバナ抽出物、ノートカトン、メバスタチン及びバナナ抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする、過活動膀胱の予防又は改善剤に関する。
さらに、本発明は、アカキャベツ抽出物、ユッカフォーム抽出物、ステビア抽出物、β−カロテン、ベニコウジ黄色素、タチジャコウソウ抽出物、ベニバナ抽出物、ノートカトン、メバスタチン及びバナナ抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする、ＡＴＰ放出抑制剤に関する。
さらに、本発明は、アカキャベツ抽出物、ユッカフォーム抽出物、ステビア抽出物、β−カロテン、ベニコウジ黄色素、タチジャコウソウ抽出物、ベニバナ抽出物、ノートカトン、メバスタチン及びバナナ抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする、頻尿予防又は改善剤に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の過活動膀胱の予防又は改善剤は、過活動膀胱、又は尿意切迫感、切迫性尿失禁等の排尿障害を予防及び／又は改善することができる。また、本発明のＡＴＰ放出抑制剤は、膀胱上皮細胞からのＡＴＰの放出を抑制することができる。さらに、本発明の頻尿予防又は改善剤は、頻尿を予防又は改善することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の過活動膀胱の予防又は改善剤、ＡＴＰ放出抑制剤及び頻尿予防又は改善剤は、アカキャベツ抽出物、ユッカフォーム抽出物、ステビア抽出物、β−カロテン、ベニコウジ黄色素、タチジャコウソウ抽出物、ベニバナ抽出物、ノートカトン、メバスタチン及びバナナ抽出物からなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする。
【００１１】
本発明に用いる有効成分のうち、植物抽出物について説明する。
本発明におけるアカキャベツとは、アブラナ（Brassicaceae）科アブラナ（Brassica）属の多年草で、野菜として広く利用されている。
本発明におけるユッカフォームとは、ユッカ・シジゲラ（Yucca schidigera）、ユッカ・アラボレセンス（Yucca arborescens）、ユッカ・モヘーブ（Yucca mohavensis）などの、リュウゼツラン（Agavaceae）科ユッカ（Yucca）属の多年草植物の総称である。
本発明におけるステビアとは、キク（Asteraceae）科ステビア（Stevia）属の多年草植物で、食用、医薬品として利用されている。
本発明におけるタチジャコウソウとは、シソ（Lamiaceae）科イブキジャコウソウ（Thymus）属の多年生植物で、香辛料として用いられている。
本発明におけるベニバナとは、キク（Asteraceae）科ベニバナ（Carthamus）属の一年草で、染料や食用油の原料として広く利用されている。
本発明におけるバナナとは、バショウ（Asteraceae）科バショウ（Musa）属の植物で、食用として広く利用されている。
【００１２】
本発明における前記植物は、その植物の全ての任意の部分が使用可能である。例えば、上記植物の全木、全草、根、根茎、幹、枝、茎、葉、樹皮、樹液、樹脂、花、果実、種子、果皮、莢、芽、花穂、心材等の任意の部分、及びそれらの組み合わせのいずれか１つ又は２つ以上を使用することができる。
本発明においてアカキャベツ抽出物を得るには、アカキャベツの葉を抽出することが好ましい。あるいは、赤キャベツ色素（アカキャベツの葉を室温時弱酸性水溶液で抽出して得られる）として市販されているものをアカキャベツ抽出物として用いてもよい。
本発明においてユッカフォーム抽出物を得るには、ユッカフォームの全草を抽出することが好ましい。あるいは、ユッカ・アラボレセンス、ユッカ・シジゲラなどの全草より、熱時水で、又は室温時〜微温時でエタノール水溶液又はイソプロピルアルコール水溶液で抽出して得られたものをユッカフォーム抽出物として用いてもよい。
本発明においてステビア抽出物を得るには、ステビアの葉を抽出することが好ましい。あるいは、ステビアの甘味料（ステビアの葉を室温時〜熱時水で抽出し、精製して得られる）として市販されているものをステビア抽出物として用いてもよい。
本発明においてタチジャコウソウ抽出物を得るには、タチジャコウソウの地上部を抽出することが好ましい。あるいは、地上部の水蒸気蒸留品であり、香辛料として市販されているものをタチジャコウソウ抽出物として用いてもよい。
本発明においてベニバナ抽出物を得るには、ベニバナの花を抽出することが好ましい。あるいは、ベニバナ赤色素（ベニバナの花、又はこれを発酵若しくは酵素処理したものから黄色素を除去し、室温時弱アルカリ性水溶液で抽出し、中和して得られる）として市販されているものをベニバナ抽出物として用いてもよい。
本発明においてバナナ抽出物を得るには、バナナの果実を抽出することが好ましい。
【００１３】
本発明において用いる、アカキャベツ、ユッカフォーム、ステビア、タチジャコウソウ、ベニバナ、及びバナナの抽出物の製造方法については特に限定はなく、上記植物を通常の方法で抽出することにより抽出物を得ることができる。具体的には、前記植物を乾燥させた乾燥物又はその粉砕物、その粉砕物等を圧搾抽出することにより得られる搾汁、水蒸気蒸留物、各種抽出溶剤による粗抽出物、粗抽出物を分配又はカラムクロマトなどの各種クロマトグラフィーなどで精製して得られた抽出物画分などを本発明における抽出物として用いることができる。また、このようにして得られた抽出物画分は、必要により公知の方法により脱臭、脱色等の処理を施してから用いてもよい。
上記の植物はそのまま抽出に供することも可能であるが、より抽出効率を高めるために、乾燥、細断、粉砕等の工程を加えることも好ましい。また、本発明においては、前記抽出物、水蒸気蒸留物、圧搾物等のいずれかを単独で、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。なかでも、本発明の植物抽出物としては、上記植物を乾燥させた乾燥物又はその粉砕物から、抽出溶剤を用いて得られた抽出物を用いることがより好ましい。
【００１４】
抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができ、これらを混合して用いることもできる。例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類；超臨界二酸化炭素；油脂、ワックス、その他オイル等が挙げられる。あるいは、上記溶剤の２種以上を組み合わせた混合物を、抽出溶剤として用いることができる。このうち、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類等を用いるのが好ましく、水、エタノール混液を用いるのがより好ましい。
【００１５】
本発明で用いられる抽出物を得るための抽出条件については、使用する溶剤によって異なり特に制限はなく、通常の条件を適用できる。例えば、上記植物１質量部に対して１〜１０質量部の溶媒を用い、０〜７０℃、好ましくは１０〜３０℃で数時間〜数週間、好ましくは１２時間〜２日間、浸漬、煎出、浸出、還流抽出、超臨界抽出、超音波抽出及び／又はマイクロ波抽出を行えばよい。また、水蒸気蒸留によっても前記抽出物を得ることが出来る。抽出効率を向上させるため、併せて攪拌を行ったり、溶媒中でホモジナイズ処理を行ってもよい。
【００１６】
上記溶媒で抽出して得られた抽出物はそのまま使用してもよいが、さらに適当な分離手段、例えばゲル濾過、クロマトグラフィー、精密蒸留、活性炭処理等により活性の高い画分を分画して用いることもできる。本発明において、植物の抽出物とは、ソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて得られる各種溶剤抽出液、その希釈液、その濃縮液、その精製物又はそれらの乾燥末を包含するものである。
【００１７】
次に、本発明に用いる有効成分のうち、ベニコウジ黄色素について説明する。
本発明におけるベニコウジ黄色素とは、ベニコウジ菌（例えば、Monascus pilosus又はMonascus purpureusなどの糸状菌）の培養生成物から抽出して得られる水溶性の黄色色素であり、その主成分はキサントモナシン類などである。ベニコウジ黄色素の調製方法としては、ベニコウジ菌の培養液を乾燥して粉砕し、微温下で、塩酸やエタノール等で抽出し、中和する方法等があるが、本発明はこれに制限するものではない。本発明において、市販されているベニコウジ黄色素を用いてもよい。
【００１８】
次に、本発明に用いる有効成分のうち、β−カロテン、ノートカトン及びメバスタチンについて説明する。
【００１９】
本発明で用いるβ−カロテンは下記式で表される化合物である。
【００２０】
【化１】
0005897354.tif 000002
【００２１】
前記β−カロテンの製造方法に特に制限はなく、通常の有機化学的合成、微生物を用いた合成等により製造することができ、天然物由来の材料から抽出や精製等したものであってもよい。例えば、オオヒゲマワリ科デュナリエラ（Dunaliella bardawil、Dunaliella salina）の全藻より、熱時油脂で、又は室温時若しくは熱時で、ヘキサン又は加圧下で二酸化炭素で抽出してβ−カロテンを得ることができる。また、試薬として市販されているものをβ−カロテンとして用いることもできる。
【００２２】
本発明で用いるノートカトンとは、4,4a,5,6,7,8-ヘキサヒドロ-6-イソプロペニル-4,4a-ジメチル-2(3H)-ナフタレノンなるセスキテルペンケトンをいう。当該ノートカトンには、８種類の光学異性体が存在する。本発明においては、それら異性体を単独又は混合して用いることができるが、(+)-ノートカトンを用いるのが好ましい。
【００２３】
【化２】
0005897354.tif 000003
【００２４】
前記ノートカトンの製造方法に特に制限はなく、通常の有機化学的合成、微生物を用いた合成等により製造することができ、例えば、特開２００４−１２３５６１号公報、特開２００３−２５０５９１号公報、特表平１１−５０１０５２号公報に記載の方法により得ることができる。また、本発明で用いるノートカトンは、ノートカトンを含有する天然物から通常の方法により抽出することにより得ることもできる。ここで、抽出は、例えば、水、熱水、エタノール、メタノール、イソプロパノール等のアルコール水、アセトン、酢酸エチル、ジエチルエーテル等の有機溶剤等を用いて行う抽出操作と高速液体クロマトグラフやカラムクロマトグラフ等による精製操作や蒸留操作を適宜組み合わせて行う方法により行うことができる。ノートカトンを含有する天然物としては特に制限はないが、例えばミカン（Rutaceae）科のグレープフルーツ（Citrus paradisi）、ザボン（Citrus maxima）、ナツミカン（Citrus natsudaidai）等が挙げられる。グレープフルーツからノートカトンを抽出する場合、その原料としては例えば、グレープフルーツ果実、グレープフルーツ果皮、グレープフルーツオイル、グレープフルーツ濃縮果汁、グレープフルーツ果汁搾汁後の残渣等を用いることができる。抽出条件は通常の条件を適用でき、例えばグレープフルーツなどの天然物を４０〜１００℃で１分〜３日間浸漬又は加熱還流したり、圧搾すればよい。
【００２５】
本発明で用いるメバスタチンは下記式で表される化合物であり、高脂血症の特効薬として広く利用されている。
【００２６】
【化３】
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【００２７】
前記メバスタチンの製造方法に特に制限はなく、通常の有機化学的合成、微生物を用いた合成等により製造することができ、天然物由来の材料から抽出や精製等したものであってもよい。また、試薬として市販されているものをメバスタチンとして用いることもできる。
【００２８】
本発明の過活動膀胱の予防又は改善剤、ＡＴＰ放出抑制剤及び頻尿予防又は改善剤には、前記有効成分のうちのいずれか１種を利用しても、２種以上を併用してもよい。
【００２９】
前述のように、ＡＴＰは蓄尿による膀胱の伸展刺激を受けて膀胱上皮細胞から放出される。このＡＴＰ放出には、膀胱上皮の伸展という機械的刺激を感知する受容体（メカノセンサー）が関与する。ヒトの膀胱上皮には、ENaC（Epithelial  Na  channel）ファミリーやTRP（transient  receptor  potential）ファミリーに属するメカノセンサーが存在することが知られている。過活動膀胱や尿路閉塞患者の膀胱上皮細胞では、これらのメカノセンサーが健常人に比べて高発現しているとの報告がある（Urologia  Internationals，2006年，第76巻，p．289-295；Urology  View2，2007，第5巻，p．31-36）。さらには、過活動膀胱は頻尿の原因の１つでもある。
後記実施例でも示すように、アカキャベツ抽出物、ユッカフォーム抽出物、ステビア抽出物、β−カロテン、ベニコウジ黄色素、タチジャコウソウ抽出物、ベニバナ抽出物、ノートカトン、メバスタチン及びバナナ抽出物は、ＡＴＰ放出抑制効果を示す。したがって、ヒトを含む動物がアカキャベツ抽出物、ユッカフォーム抽出物、ステビア抽出物、β−カロテン、ベニコウジ黄色素、タチジャコウソウ抽出物、ベニバナ抽出物、ノートカトン、メバスタチン及び／又はバナナ抽出物を摂取又は投与することで、過活動膀胱の予防又は改善や頻尿の予防又は改善が可能となる。
【００３０】
本発明の過活動膀胱の予防又は改善剤、ＡＴＰ放出抑制剤及び頻尿予防又は改善剤は、医薬品、医薬部外品、食品、飲料等の用途に適用することができる。さらに本発明の過活動膀胱の予防又は改善剤、ＡＴＰ放出抑制剤及び頻尿予防又は改善剤は、液状、固形状、乳液状、ペースト状、ゲル状、パウダー状（粉末状）、顆粒状、ペレット状、スティック状等、ヒトや動物に適用されうる各種剤型をとることができる。
【００３１】
本発明の過活動膀胱の予防又は改善剤、ＡＴＰ放出抑制剤及び頻尿予防又は改善剤を医薬品、医薬部外品に適用する場合、必要により各種添加剤を配合し、前記有効成分を適量含有させて、各種剤形の医薬品又は医薬部外品として調製することができる。例えば、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、腸溶剤、トローチ剤、ドリンク剤等の経口医薬として、又は、注射剤、坐剤、経皮吸収剤、外用剤等といった非経口医薬として調製することができる。これらの形態のうち、好ましい形態は経口医薬である。このような種々の剤型の医薬製剤を調製するには、各種添加剤を用いて常法に従って製造すればよい。使用する添加剤には特に制限はなく、通常用いられているものを使用することができる。その例としては、薬学的に許容される賦形剤（ソルビトール、グルコース、乳糖、デキストリン、澱粉等の糖類、炭酸カルシウム等の無機物、結晶セルロース、蒸留水、ゴマ油、とうもろこし油、オリーブ油、菜種油等）、液体担体（蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール等のアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、油性担体（各種の動植物油、白色ワセリン、パラフィン、ロウ類等）、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤、崩壊剤、滑沢剤、増量剤、界面活性剤、分散剤、懸濁剤、希釈剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、光沢剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、矯臭剤、細菌抑制剤等が挙げられる。
【００３２】
本発明の過活動膀胱の予防又は改善剤、ＡＴＰ放出抑制剤及び頻尿予防又は改善剤を飲食品、飼料・ペットフード等に適用する場合、食用又は飲料用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して提供することができる。さらに、前記飲食品は、一般飲食品の他、過活動膀胱の予防若しくは改善、又は頻尿の予防若しくは改善剤をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した美容食品、病者用食品、栄養機能食品又は特定保健用食品等の機能性飲食品の形態とすることができる。
【００３３】
飲食品の形態としては特に制限はなく、例えば、パン、麺類等に代表される小麦粉加工食品、お粥、炊き込みご飯等の米加工食品、ビスケット、ケーキ、ゼリー、チョコレート、せんべい、アイスクリーム等の菓子類、豆腐、その加工食品等の大豆加工食品、清涼飲料、果汁飲料、乳飲料、炭酸飲料等の飲料類、ヨーグルト、チーズ、バター、牛乳等の乳製品、醤油、ソース、味噌、マヨネーズ、ドレッシング等の調味料、ハム、ベーコン、ソーセージ等の蓄肉、蓄肉加工食品、はんぺん、ちくわ、魚の缶詰等の水産加工食品、調理油ならびにフライ用油等が挙げられる。また、錠剤（タブレット）、カプセル等の錠剤食、濃厚流動食、自然流動食、半消化態栄養食、成分栄養食、ドリンク栄養食等の経口経腸栄養食品、機能性食品等の形態としてもよい。
飼料の形態としては特に制限はなく、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、犬、猫、小鳥、リス等に用いるペットフード等が挙げられる。
これらの飲食品は、例えば、甘味剤、着色剤、抗酸化剤、ビタミン類、香料、ミネラル等の添加剤、タンパク質、脂質、糖質、炭水化物、食物繊維等の食品原料を適宜組み合わせて用い、これと本発明の過活動膀胱の予防若しくは改善剤、ＡＴＰ放出抑制剤又は頻尿予防若しくは改善剤とを含有させ、常法に従って各種飲食品の形態とすることにより調製することができる。
【００３４】
本発明の過活動膀胱の予防又は改善剤、ＡＴＰ放出抑制剤及び頻尿予防又は改善剤はそのままで医薬品、医薬部外品、食品、飲料等として用いてもよいし、医薬品、医薬部外品、食品、飲料等の添加剤又は配合剤として用いてもよい。
【００３５】
本発明の過活動膀胱の予防又は改善剤、ＡＴＰ放出抑制剤及び頻尿予防又は改善剤における前記有効成分の配合量はその使用形態により異なるが、医薬品、例えば、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等の経口用固形製剤、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤の場合は、固形分濃度として０．００１〜１００質量％が好ましく、０．０１〜９５質量％がより好ましい。飲食品やペットフード等に配合する場合は、固形分濃度として０．００１〜５０質量％が好ましく、０．０１〜１０質量％がより好ましい。
【００３６】
本発明の過活動膀胱の予防又は改善剤、ＡＴＰ放出抑制剤及び頻尿予防又は改善剤の投与又は摂取量は、個体の状態、体重、性別、年齢、素材の活性又はその他の要因に従って適宜選択、決定される。例えば、成人（６０ｋｇ）１日の投与又は摂取量としては、一般に０．００１〜２５０ｇが好ましい。また、本発明の過活動膀胱の予防又は改善剤、ＡＴＰ放出抑制剤及び頻尿予防又は改善剤は、１日１回〜数回に分け、又は任意の期間及び間隔で摂取・投与され得る。
【００３７】
上記医薬品、医薬部外品又は食品の摂取又は投与対象として特に限定されないが、過活動膀胱又は尿意切迫感及び切迫性尿失禁等の排尿障害の予防又は改善又は治療を目的とするヒトやヒト以外の哺乳動物が好ましい。なお、摂取又は投与対象には、過活動膀胱の症状が認められるヒトやヒト以外の哺乳動物、及びそのおそれがあるヒトやヒト以外の哺乳動物、その疾患・症状の予防を期待するヒトやヒト以外の哺乳動物も含まれる。
【実施例】
【００３８】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００３９】
調製例１  アカキャベツ抽出物の調製
アカキャベツ抽出物（商品名：レッドカラーDC、三菱化学フーズ社より入手）を濃度が１％（ｗ／ｖ）となるように５０体積％エタノールで希釈した。
【００４０】
調製例２  ユッカフォーム抽出物の調製
ユッカフォーム抽出物（商品名：サラキープALS、丸善製薬社より入手）を濃度が１％（ｗ／ｖ）となるように５０体積％エタノールで希釈した。
【００４１】
調製例３  ステビア抽出物の調製
ステビア抽出物（商品名：レバウディオA7-10、守田化学社製）を濃度が１％（ｗ／ｖ）となるように５０体積％エタノールで溶解した。
【００４２】
調製例４  β−カロテンの調製
バイオカロチン30MCT（商品名、協和発酵社より入手）を濃度が１％（ｗ／ｖ）となるように９９．５体積％エタノールで溶解した。
【００４３】
調製例５  ベニコウジ黄色素の調製
ベニコウジ黄色素（商品名：マルカラーYM、丸善製薬社より入手）を濃度が１％（ｗ／ｖ）となるように５０体積％エタノールで希釈した。
【００４４】
調製例６  タチジャコウソウ抽出物の調製
香辛料抽出物製剤（商品名：タイムSP-61515、三栄源エフエフアイ社より入手）を原液のまま、タチジャコウソウ抽出物として使用した。
【００４５】
調製例７  ベニバナ抽出物の調製
ベニバナ赤色素（OCI社より入手）を５０体積％エタノールに濃度が１％（ｗ／ｖ）となるように溶解した。
【００４６】
調製例８  ノートカトンの調製
ノートカトン（和光純薬社より入手）を濃度が１００ｍＭになるように５０体積％エタノールに溶解した。
【００４７】
調製例９  メバスタチンの調製
メバスタチン（和光純薬社より入手）を濃度が１０ｍＭになるように９９．５体積％エタノールに溶解した。
【００４８】
調製例１０  バナナ抽出物の調製
バナナ透明果汁（バナナの圧搾抽出液、雄山商事より入手）を濃度が１．４０％（ｗ／ｖ）となるように２０体積％エタノールで希釈した。
【００４９】
試験例１  ＡＴＰ放出抑制試験
特開２０１１−１３３４４０号公報に記載の方法を参考に、下記に示すようにＡＴＰ放出抑制試験を行った。
膀胱上皮細胞株としてHT-1376（ATCC社より購入、下記表１に細胞情報を示す）を用い、下記に示す組成の培地を用いて３７℃、５％CO2条件下で培養した。
HT-1376用培地：MEM（Minimum  Essential  Medium）
Earle's（Invitrogen社製）に、10％FCS（ウシ胎仔血清）、ピルビン酸ナトリウム（0.055ｇ／500ｍＬ）、L-グルタミン（0.146ｇ／500ｍＬ）を添加
【００５０】
【表１】
0005897354.tif 000005
【００５１】
96wellプレートに、４．１×１０4cells/wellになるようにHT-1376を播種し、上記培養条件にて２４時間培養した。培地を吸引除去して等浸透圧液（組成を表２に示す）で２回洗浄し、前記製造例で調製した各成分を表３に示す濃度で含有する等浸透圧液をそれぞれ７５μＬ／well加えて、３７℃、５％CO2環境下で６０分インキュベートした。さらに、前記製造例で調製した各成分を表３に示す濃度で含有する低浸透圧液（組成を表２に示す）を７５μＬ／well添加し、３７℃、５％CO2環境下で６０分インキュベートし、溶液を回収した。
【００５２】
【表２】
0005897354.tif 000006
【００５３】
回収したサンプル中のＡＴＰ濃度を、ATP  Bioluminescent  Assay  Kit（SIGMA製）を用いてルシフェリン・ルシフェラーゼ法により測定した。すなわち、サンプルと、ATP  Bioluminescent  Assay  Kit中のATP  Assay  Mix  solutionとを等量で混合し、撹拌後にホタルルシフェラーゼ活性を１秒間測定してＡＴＰ濃度を決定し、ＡＴＰ放出率を測定した。結果を表３に示す。なお、溶媒対照の低浸透圧液を添加した際のＡＴＰ放出率を１００％としたときの相対値で表した。
【００５４】
【表３】
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【００５５】
等浸透圧から低浸透圧へと浸透圧を変化させることで膀胱上皮細胞を刺激し伸展させると、ＡＴＰの放出が亢進する。しかし、表３の結果から明らかなように、浸透圧を変化させても、各有効成分を添加することにより、用量依存的にＡＴＰ放出が抑制された。これより、アカキャベツ抽出物、ユッカフォーム抽出物、ステビア抽出物、β−カロテン、ベニコウジ黄色素、タチジャコウソウ抽出物、ベニバナ抽出物、ノートカトン、メバスタチン及びバナナ抽出物にはＡＴＰ放抑制作用を有することが示された。
【００５６】
試験例２  ＡＴＰ放出に対する、前記有効成分のクエンチング効果の評価
試験例１において、ＡＴＰ濃度はルシフェリン・ルシフェラーゼ法により測定しているが、サンプルに各有効成分が含まれている。そのため、本発明の各有効成分にクエンチング効果がある場合には、ＡＴＰ濃度が低く計算されてしまい、ＡＴＰ放出阻害活性が擬陽性となる。そこで、本発明の各有効成分のクエンチング効果を検証する目的で、各有効成分含有サンプルのＡＴＰ添加回収率を評価した。
【００５７】
空の96wellプレートに、表４に示す濃度で各有効成分を含む等浸透圧液を７５μＬ／well添加し、３７℃、５％CO2環境下で６０分インキュベートした。さらに、ＡＴＰ及び表４に示す濃度で各有効成分を含む低浸透圧液（ＡＴＰ終濃度：５×１０-8Ｍ）を７５μＬ／well添加し、３７℃、５％CO2環境下で６０分インキュベートし、溶液を回収した。
回収したサンプル溶液は、試験例１と同様に、ルシフェリン・ルシフェラーゼ法により回収したサンプル中のＡＴＰ濃度を測定した。メバスタチン及びノートカトン以外の各有効成分は終濃度0.01％（ｗ／ｖ）、メバスタチン及びノートカトンは終濃度５０μＭにて評価した。結果を表４に示す。結果は、各有効成分を含まない溶液のＡＴＰ濃度に対する相対値（％）で表した。
【００５８】
【表４】
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【００５９】
その結果、各成分に高いＡＴＰ添加回収性が認められた。これより、アカキャベツ抽出物、ユッカフォーム抽出物、ステビア抽出物、β−カロテン、ベニコウジ黄色素、タチジャコウソウ抽出物、ベニバナ抽出物、ノートカトン、メバスタチン及びバナナ抽出物自体はＡＴＰ濃度の測定に影響を及ぼさないことが示された。
【００６０】
以上のように、アカキャベツ抽出物、ユッカフォーム抽出物、ステビア抽出物、β−カロテン、ベニコウジ黄色素、タチジャコウソウ抽出物、ベニバナ抽出物、ノートカトン、メバスタチン及びバナナ抽出物は、膀胱上皮細胞伸展時に亢進するＡＴＰ放出を抑制する効果を有する。したがって、アカキャベツ抽出物、ユッカフォーム抽出物、ステビア抽出物、β−カロテン、ベニコウジ黄色素、タチジャコウソウ抽出物、ベニバナ抽出物、ノートカトン、メバスタチン及びバナナ抽出物は、過活動膀胱の予防又は改善効果や頻尿の予防又は改善効果を有する。