(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(３)及び(２７)：
【化１】
0005883852.tif 000031
のいずれかの化合物を含む、全身性強皮症(ＳＳｃ)または全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症の予防および／または処置剤。
【請求項２】
式(３)の化合物を含む、請求項１に記載の予防および／または処置剤。
【請求項３】
前記化合物をシルデナフィルまたはバルデナフィルと組み合わせて用いることを特徴とする、請求項１又は２に記載の予防および／または処置剤。
【請求項４】
全身性強皮症(ＳＳｃ)が、びまん型全身性強皮症(ｄＳＳｃ)、限局型全身性強皮症(ｌＳＳｃ)、オーバーラップ型全身性強皮症、未分化型全身性強皮症、皮膚硬化のない全身性強皮症、皮膚線維症、強皮症、腎性線維化性皮膚症(ＮＦＤ)、腎性全身性線維症(ＮＳＦ)またはケロイド形成である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の予防および／または処置剤。
【請求項５】
全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症が、腸、肺、腎臓または血管を含む内臓の全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の予防および／または処置剤。
【請求項６】
全身性強皮症(ＳＳｃ)または全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症の予防および／または処置用の医薬を製造するための、請求項１又は２に記載の少なくとも１種の化合物の使用。
【請求項７】
全身性強皮症(ＳＳｃ)または全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症の予防および／または処置用の医薬を製造するための、シルデナフィルまたはバルデナフィルと請求項１又は２に記載の少なくとも１種の化合物の使用。
【請求項８】
全身性強皮症(ＳＳｃ)が、びまん型全身性強皮症(ｄＳＳｃ)、限局型全身性強皮症(ｌＳＳｃ)、オーバーラップ型全身性強皮症、未分化型全身性強皮症、皮膚硬化のない全身性強皮症、皮膚線維症、強皮症、腎性線維化性皮膚症(ＮＦＤ)またはケロイド形成である、請求項６または７に記載の使用。
【請求項９】
全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症が、腸、肺、腎臓または血管を含む内臓の全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症である、請求項６または７に記載の使用。
【請求項１０】
全身性強皮症(ＳＳｃ)または全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症の予防および／または処置用の、請求項１又は２に記載の少なくとも１種の化合物を含む医薬製剤。
【請求項１１】
全身性強皮症(ＳＳｃ)または全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症の予防および／または処置用の、請求項１又は２に記載の少なくとも１種の化合物とシルデナフィルまたはバルデナフィルとを含む医薬製剤。
【請求項１２】
全身性強皮症(ＳＳｃ)が、びまん型全身性強皮症(ｄＳＳｃ)、限局型全身性強皮症(ｌＳＳｃ)、オーバーラップ型全身性強皮症、未分化型全身性強皮症、皮膚硬化のない全身性強皮症、皮膚線維症、強皮症、腎性線維化性皮膚症(ＮＦＤ)またはケロイド形成である、請求項１０又は１１に記載の医薬製剤。
【請求項１３】
全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症が、腸、肺、腎臓または血管を含む内臓の全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症である、請求項１０又は１１に記載の医薬製剤。
【請求項１４】
全身性強皮症(ＳＳｃ)または全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症の予防および／または処置用の、
ａ）請求項１又は２に記載の少なくとも１種の化合物を含む医薬製剤、および、ｂ）シルデナフィルまたはバルデナフィルを含む医薬製剤
を含むキット。
【請求項１５】
全身性強皮症(ＳＳｃ)が、びまん型全身性強皮症(ｄＳＳｃ)、限局型全身性強皮症(ｌＳＳｃ)、オーバーラップ型全身性強皮症、未分化型全身性強皮症、皮膚硬化のない全身性強皮症、皮膚線維症、強皮症、腎性線維化性皮膚症(ＮＦＤ)またはケロイド形成である、請求項１４に記載のキット。
【請求項１６】
全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症が、腸、肺、腎臓または血管を含む内臓の全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症である、請求項１４に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
線維性疾患、例えば全身性強皮症、強皮症およびそれらに付随する内臓の線維症を予防および処置するための、ｓＧＣ刺激剤、ｓＧＣアクチベーター単独またはＰＤＥ５阻害剤との組み合わせ剤の使用。
【背景技術】
【０００２】
本発明の背景
＜全身性強皮症＞
全身性強皮症(ＳＳｃ)の病因は、未だ不明であり、分からないままである。しかし、強皮症は、非遺伝性かつ非感染性疾患であり、自己免疫疾患であると考えられている。ＳＳｃは、皮膚線維症を起こす真皮中の細胞外マトリックスの過剰な沈着によって引き起こされる多様な症状を有する。後期では、ＳＳｃは、他の内臓、例えば腸、肺または腎臓を冒す進行性組織線維症によって特徴付けられる。従って、強皮症は、例えば肺線維症、腎線維症、心臓、腸または血管の線維症を含む疾患のホールマークである。炎症、自己免疫障害または血管損傷が線維芽細胞を活性化することが示唆されている。線維増殖は、Ｉ型コラーゲンが優勢である、過剰な細胞外マトリックスが付随し、その結果、末期臓器機能不全を起こし、末期ＳＳｃ患者の高い罹患率および死亡率をもたらし得る進行性組織線維症を起こす(Harris et al. 2005 - Kelley's Textbook of Rhematology 7th edition. Elsevier Saunders, Philadelphia PA)。
【０００３】
全身性強皮症(ＳＳｃ)のための原因に対する利用可能な処置は未だなく、現行の治療は、コルチコステロイド、シクロホスファミド、メトトレキサートによる免疫系の抑制を基礎としている。最近では、キナーゼ阻害剤が、ＳＳｃにおける免疫抑制剤および抗線維症剤として治験下にあるが、耐容性はＳＳｃ患者において限定されている(Khanna and Denton 2010 - Best. Pract. Res. Clin. Rheumatol. 24:387-400, Ong and Denton 2010 - Curr. Opin. Rheumatol. 22:264-272, Spiera 2011 - Ann. Rheum. Dis. Epub Mar 2011)。単独でまたは組み合わせた処置として用いられるこれらの治療は、その効果が限定的であり、強い副作用を示した。従って、有効で安全なＳＳｃ処置の他の選択肢の必要に迫られている。
【０００４】
＜ｃＧＭＰの抗線維症作用＞
環状ヌクレオチドである環状アデノシン モノホスフェート(ｃＡＭＰ)および環状グアノシン モノホスフェート(ｃＧＭＰ)は、数十年前に発見され、細胞内の最も重要な二次メッセンジャー経路の１つを表す。細胞内ｃＧＭＰ貯蔵の制御は、生理学および病態生理学に対して実質的な影響を有し、薬理学的介入の１つの基本原則であることが、十分に確立されている(Evgenov et al. 2006 - Nat. Rev. Drug. Discov. 5(9):755-768)。心血管、肺またはＣＮＳ障害の処置に加えて、ｃＧＭＰ増加が泌尿器科の障害にも非常に有効な処置選択肢であるという十分な証拠がある(Sandner et al. 2009 - Handbook Exper. Pharmacol. 191:507-531)。ＰＤＥ５阻害剤は勃起不全(ＥＤ)の処置において代表的なものであるが、ＰＤＥ５阻害剤は、過活動膀胱(ＯＡＢ)および下部尿路症状(ＬＵＴＳ)によって特徴付けられる症候性ＢＰＨの処置に有用であることが示された(Porst et al. 2008 - Curr. Urol. Rep. 9:295-301; .McVary et al. 2007 - J. Urol. 177:1071-1077, J Urol. 177:1401-1407, Kaplan and Gonzalez. 2007 - Rev. Urol. 9:73-77)。ｓＧＣ刺激剤およびｓＧＣアクチベーターであるバルデナフィルの抗線維症作用は、まだ理解されていない。他の臓器において、おそらくｃＧＭＰが介在する一酸化窒素の抗線維症作用について幾らか記載があり、ＰＤＥ５阻害剤またはグアニル酸シクラーゼ刺激剤は、それぞれ、陰茎線維症(ペイロニー病)(Ferrini et al. 2006 - B. J. Urol. 97:625-633)および肝臓線維症(Knorr et al. 2008 - Arzneimittelforschung 58:71-80)に効果を示す。
【０００５】
ＮＯ／ｃＧＭＰ系がＳＳｃに関係するかどうか、およびｃＧＭＰ増加がこの疾患における処置の選択肢を提供するかどうかは、知られていない。我々は、内因性ＮＯ／ｃＧＭＰ産生と無関係に、ｓＧＣ刺激剤およびアクチベーターが、全身性強皮症(ＳＳｃ)における有効な処置の選択肢であるという仮説を立てた。
【０００６】
従って、我々は、ｓＧＣ刺激剤およびｓＧＣアクチベーター、すなわち式：
【化１】
0005883852.tif 000002
の化合物である実施例２７の化合物と、そのＰＤＥ５阻害剤との組み合わせについて、ＳＳｃにおけるインビトロおよびインビボ動物モデルで調べた。インビボ試験は、マウスのブレオマイシン誘発皮膚および肺線維症試験およびＴＳＫマウスの皮膚線維症試験を含む。さらに、抗線維症可能性について試験した投与量範囲を、マウスの血圧および心拍数分析のための遠隔測定インプラントでも分析した。
【０００７】
我々は、我々の動物モデルにおいて、インビボで、以下の事項を見出した：
・マウスのブレオマイシン誘発ＳＳｃにおいて、ｓＧＣ刺激剤またはｓＧＣアクチベーター、すなわち実施例２７、実施例３、実施例６の化合物は、予防投与量レジメで投与したとき、皮膚の厚み、皮膚のヒドロキシプロリン含量および皮膚の筋線維芽細胞数を有意に減少させた(実施例Ａ：表１、表２)。これらのデータは、これらの化合物を予防的に与えたとき、全身性強皮症における抗線維症作用を示唆している。
・マウスのブレオマイシン誘発ＳＳｃにおいて、ｓＧＣ刺激剤またはｓＧＣアクチベーター、すなわち実施例２７の化合物は、線維症を確立させた後に治療投与量レジメで投与したとき、皮膚の厚み、皮膚のヒドロキシプロリン含量および皮膚の筋線維芽細胞数を有意に減少させた(実施例Ｂ：表３)。これらのデータは、当該化合物を治療的に与えたとき、全身性強皮症における抗線維症作用および確立された線維症の退縮を示唆している。
・ｓＧＣ刺激剤またはｓＧＣアクチベーター、すなわち実施例２７の化合物は、ＴＳＫマウスの皮膚の厚み、皮膚のヒドロキシプロリン含量および皮膚の筋線維芽細胞数を有意に減少させた。ＴＳＫマウスが処置の開始前にすでに確立された線維症を示すため、実施例２７の化合物は、線維症の退縮を起こした(実施例Ｃ：表４)。これらのデータは、当該化合物を治療的に与えたとき、全身性強皮症における抗線維症作用および確立された線維症の退縮を示唆している。
・ｓＧＣ刺激剤またはｓＧＣアクチベーター、すなわち実施例２７、実施例３、実施例４、実施例６の化合物を、遠隔測定インプラントを有する意識のあるマウスにおいて調べ、血圧および心拍数をモニターした(実施例Ｄ)。実施例２７、実施例３、実施例４、実施例７の化合物は、抗線維症性を有する投与量で、マウスの血液動態プロファイルを変化させないか、または穏やかに変化させるのみであった(実施例Ｄ：図１、２Ａ、２Ｂ、３Ａ、３Ｂ、４Ａ、４Ｂ)。これらのデータは、これらの化合物による、血圧低下と無関係のｓＧＣ刺激剤およびｓＧＣアクチベーターの直接的抗線維症作用機序を示唆している。
・ｓＧＣ刺激剤またはｓＧＣアクチベーター、すなわち実施例２７の化合物は、単独およびＰＤＥ５阻害剤(すなわちバルデナフィル)との組み合わせで、ヒトの皮膚線維症において、インビトロで、ＴＧＦ誘発コラーゲン遺伝子発現を遮断した(実施例Ｅ)。これらのデータは、コラーゲン産生のレベルに対する直接的抗線維症効果を示唆する。
【０００８】
従って、我々は、ｓＧＣ刺激剤またはｓＧＣアクチベーター、すなわち実施例２７の化合物が、ブレオマイシン誘発線維症モデルおよびＴＳＫマウスモデルを含む炎症性および非炎症性ＳＳｃの異なる動物モデルで、線維症を予防し、確立された線維症を退縮することを、全く予測せずに、初めて見出した。
【０００９】
さらに、全身の血圧に対して顕著な作用が見られず、このことから、これらのｓＧＣ刺激剤が血圧低下と無関係にＳＳｃの直接的抗線維症性を有することを初めて示した。
さらに、ｓＧＣ刺激剤およびｓＧＣアクチベーターは、ＳＳｃ以外の他の線維性障害への広範な抗線維症効果を意味するＴＧＦβ誘発コラーゲン合成を遮断した。
【００１０】
総合すると、このデータは、ｓＧＣ刺激剤およびｓＧＣアクチベーター、すなわち実施例２７、実施例３、実施例４、実施例６の化合物が、ＳＳｃのためのさらなる処置の選択肢を表すことを、初めて示したものである。
【発明の概要】
【００１１】
本発明の開示
特に、実質的な利点を有して、単独またはＰＤＥ５阻害剤と組み合わせた上記のｓＧＣ刺激剤またはｓＧＣアクチベーターが処置することができる、本発明の治療薬によって対処される線維性障害は、全身性強皮症(ＳＳｃ)、全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症および線維性疾患を含むがこれらに限定されない。
【００１２】
全身性強皮症(ＳＳｃ)は、びまん型全身性強皮症(ｄＳＳｃ)、限局型全身性強皮症(ｌＳＳｃ)、オーバーラップ型全身性強皮症、未分化型全身性強皮症、皮膚硬化のない全身性強皮症、皮膚線維症、強皮症、腎性線維化性皮膚症(ＮＦＤ)、腎性全身性線維症(ＮＳＦ)、ケロイド形成を言うが、これらに限定されない。
【００１３】
ＳＳｃ付随線維症は、腸、肺、腎臓および血管を含むがこれらに限定されない内臓の線維症を言う。
【００１４】
線維性疾患は、病因、すなわち自己免疫障害、放射線治療、中毒、糖尿病、手術と無関係に、コラーゲン過剰が、皮膚、腸、肝臓、肺、心臓、膀胱、前立腺、血管の線維症または他の何れかの組織中の局在化したもしくは全身の線維症状態をもたらす状態を含むが、これらに限定されない。
【００１５】
本発明の好ましい態様は、線維性疾患、例えば全身性強皮症、強皮症およびそれらに付随する内臓の線維症を予防および処置するための、下に示した式(１)〜(２７)の化合物である：
・  国際公開第00/06569号に実施例１６として開示された２−[１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−イル]−５−(４−モルホリニル)−４,６−ピリミジンジアミン(１)、
・  国際公開第02/42301号に実施例１として開示された２−[１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−イル]−５−(４−ピリジニル)−４−ピリミジンアミン(２)、
・  国際公開第03/095451号に実施例８として開示されたメチル−４,６−ジアミノ−２−[１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−イル]−５−ピリミジニル−(メチル)カルバメート(３)、
・  国際公開第03/095451号に実施例５として開示されたメチル−４,６−ジアミノ−２−[１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−イル]−５−ピリミジニル−カルバメート(４)、
・  国際公開第01/019780号に実施例８ａとして開示された４−({(４−カルボキシブチル)[２−(２−{[４−(２−フェニルエチル)ベンジル]オキシ}フェニル)エチル]アミノ}メチル)カルボン酸(５)、
・  メチル−{４,６−ジアミノ−２−[５−フルオロ−１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−イル]ピリミジン−５−イル}カルバメート(６)、
・  メチル−{４,６−ジアミノ−２−[５−フルオロ−１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−イル]ピリミジン−５−イル}メチルカルバメート(７)、
・  メチル−{４,６−ジアミノ−２−[５−フルオロ−１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−イル]ピリミジン−５−イル}(２,２,２−トリフルオロエチル)カルバメート(８)、
・  国際公開第00/02851号に開示された５−クロロ−２−(５−クロロチオフェン−２−スルホニルアミノ−Ｎ−(４−(モルホリン−４−スルホニル)−フェニル)−ベンズアミドのナトリウム塩(９)、
・  国際公開第00/02851号に開示された２−(４−クロロ−フェニルスルホニルアミノ)−４,５−ジメトキシ−Ｎ−(４−(チオモルホリン−４−スルホニル)−フェニル)−ベンズアミド(１０)、
・  国際公開第2009/032249号に開示された１−{６−[５−クロロ−２−({４−ｔｒａｎｓ−４−}トリフルオロメチル)シクロヘキシル]ベンジル}オキシ)フェニル]ピリジン−２−イル}−５−(トリフルオロメチル)−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸(１１)、
・  国際公開第2009/071504号に開示された１−[６−(２−(２−メチル−４−(４−トリフルオロメトキシフェニル)ベンジルオキシ)−フェニル)ピリジン−２−イル]−５−トリフルオロメチル−ピラゾール−４−カルボン酸(１２)、
【００１６】
・  国際公開第2009/068652号に開示された１−[６−(３,４−ジクロロフェニル)−２−ピリジニル−５−(トリフルオロメチル)−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸(１３)、
・  国際公開第2009/123316号に開示された１−({２−[３−クロロ−５−(トリフルオロメチル)フェニル]−５−メチル−１,３−チアゾール−４−イル}メチル)−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸(１４)、４−({２−[３−(トリフルオロメチル)フェニル]−１,３−チアゾール−４−イル}メチル)安息香酸(１５)および１−({２−[２−フルオロ−３−(トリフルオロメチル)フェニル]−５−メチル−１,３−チアゾール−４−イル}メチル)−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸(１６)、
・  国際公開第2010/065275号に開示された４−アミノ−２−[５−クロロ−３−(３,３,３−トリフルオロプロピル)−１Ｈ−インダゾール−１−イル]−５,５−ジメチル−５,７−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−６−オン(１７)、４−アミノ−２−[５−クロロ−３−(２,３,６−トリフルオロベンジル)−１Ｈ−インダゾール−１−イル]−５,５−ジメチル−５,７−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−６−オン(１８)、４−アミノ−５,５−ジメチル−２−[３−(２,３,６−トリフルオロベンジル)−１Ｈ−チエノ[３,４−ｃ]ピラゾール−１−イル]−５,７−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−６−オン(１９)、４−アミノ−５,５−ジメチル−２−[３−(２,３,６−トリフルオロベンジル)−１Ｈ−チエノ[２,３−ｄ]ピラゾール−１−イル]−５,５−ジメチル−５,７−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−６−オン(２０)、４−アミノ−５,５−ジメチル−２−[７−(２,３,６−トリフルオロベンジル)イミダゾ[１,５−ｂ]ピリダジン−５−イル]−５,７−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−６−オン(２１)、４−アミノ−２−[６−クロロ−３−(２,３,６−トリフルオロベンジル)イミダゾ[１,５−ａ]ピリジン−１−イル]]−５,５−ジメチル−５,７−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−６−オン(２２)、４−アミノ−２−[６−フルオロ−３−(２,３,６−トリフルオロベンジル)イミダゾ[１,５−ａ]ピリジン−１−イル]]−５,５−ジメチル−５,７−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−６−オン(２３)、４−アミノ−２−[６−フルオロ−３−(２,３,６−トリフルオロベンジル)−６−フルオロイミダゾ[１,５−ａ]ピリジン−１−イル]−５,５−ジメチル−５,７−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−６−オン(２４)、４−アミノ−５,５−ジメチル−２−[３−(２,４,６−トリフルオロベンジル)イミダゾ[１,５−ａ]ピリジン−１−イル]]−５,７−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−６−オン(２５)、４−アミノ−２−[３−(２−シクロペンチルエチル)イミダゾ[１,５−ａ]ピリジン−１−イル]−５,５−ジメチル−５,７−ジヒドロ−６Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−６−オン(２６)、
・  国際公開第00/06568号に実施例１として開示された、BAY 41-2272として知られる３−(４−アミノ−５−シクロプロピルピリミジン−２−イル)−１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン(２７)。
【００１７】
【化２】
0005883852.tif 000003
【００１８】
【化３】
0005883852.tif 000004
【００１９】
【化４】
0005883852.tif 000005
【００２０】
【化５】
0005883852.tif 000006
【００２１】
【化６】
0005883852.tif 000007
【００２２】
【化７】
0005883852.tif 000008
【００２３】
【化８】
0005883852.tif 000009
【００２４】
【化９】
0005883852.tif 000010
【００２５】
【化１０】
0005883852.tif 000011
【００２６】
式(１)、(２)、(３)、(４)、(６)〜(８)および(１７)〜(２７)の化合物は、ｓＧＣ刺激剤として知られている。式(１)、(２)、(３)、(４)、(６)、(７)および(２７)の化合物が好ましい。式(３)、(４)、(６)および(７)の化合物が特に好ましい。
【００２７】
式(５)および(９)〜(１６)の化合物は、ｓＧＣアクチベーターとして知られている。式(５)の化合物が好ましい。
【００２８】
本発明のさらなる態様は、線維性疾患、例えば全身性強皮症、強皮症およびそれらに付随する内臓の線維症を予防および処置するための、可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および／またはアクチベーターと、ＰＤＥ５阻害剤との組み合わせ剤である。ｓＧＣ刺激剤および／またはアクチベーターとの組み合わせ剤において、下記のＰＤＥ５阻害剤が好ましい：タダラフィル((６Ｒ,１２ａＲ)−２,３,６,７,１２,１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−６−(３,４−メチレン−ジオキシフェニル)ピラジノ(１',２'：１,６)ピリド(３,４−ｂ)インドール−１,４−ジオン)、バルデナフィル(２−(２−エトキシ−５−(４−エチルピペラジン−１−イル−１−スルホニル)フェニル)−５−メチル−７−プロピル−３Ｈ−イミダゾ(５,１−ｆ)(１,２,４)トリアジン−４−オン)、シルデナフィル(３−[２−エトキシ−５−(４−メチルピペラジン−１−イル)スルホニル−フェニル]−７−メチル−９−プロピル−２,４,７,８−テトラアザビシクロ[４.３.０]ノナ−３,８,１０−トリエン−５−オン)、ウデナフィル(５−[２−プロピルオキシ−５−(１−メチル−２−ピロリジニルエチルアミドスルホニル)フェニル]−メチル−３−プロピル−１,６−ジヒドロ−７Ｈ−ピラゾロ(４,３−ｄ)ピリミジン−７−オン)、ダサンタフィル(Dasantafil)(７−(３−ブロモ−４−メトキシベンジル)−１−エチル−８−[[(１,２)−２−ヒドロキシシクロペンチル]アミノ]−３−(２−ヒドロキシエチル)−３,７−ジヒドロ−１−プリン−２,６−ジオン)、アバナフィル(Avanafil)(４−{[(３−クロロ−４−メトキシフェニル)メチル]アミノ}−２−[(２Ｓ)−２−(ヒドロキシメチル)ピロリジン−１−イル]−Ｎ−(ピリミジン−２−イルメチル)ピリミジン−５−カルボキサミド)、ミロデナフィル(Mirodenafil)、ロデナフィル(Lodenafil)、UK 369.003、UK 371.800、Surface Logix社のSLx 2101、LAS 34179(トリアゾロ[１,２−]キサンチン,６−メチル−４−プロピル−２−[２−プロポキシ−５−(４−メチルピペラジノ)スルホニル]フェニル)またはそれらの塩、水和物または塩の水和物。
【００２９】
式(１)、(２)、(３)、(４)、(６)、(７)、(２７)および／または(５)の化合物と、バルデナフィルおよび／またはシルデナフィルとの組み合わせ剤が特に好ましい。
全身性強皮症(ＳＳｃ)の予防および／または処置に使用するための、式(３)、(４)、(６)、(７)および／または(５)の化合物と、バルデナフィルおよび／またはシルデナフィルとの組み合わせ剤が特に好ましい。
【００３０】
全身性強皮症(ＳＳｃ)の予防および／または処置に使用するための、式(３)、(４)、(６)および／または(７)の化合物が特に好ましい。
全身性強皮症(ＳＳｃ)の予防および／または処置に使用するための、式(３)、(４)および／または(６)の化合物が特に好ましい。
【００３１】
強皮症の予防および／または処置に使用するための、バルデナフィルまたはシルデナフィルと組み合わせた、少なくとも１つの式(３)、(４)、(６)および／または(７)の化合物が特に好ましい。
【００３２】
本発明のさらなる態様は、可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および／またはアクチベーターと、免疫抑制治療剤(すなわちシクロホスファミド ＣＹＰ、メトトレキサート ＭＴＸ)、キナーゼ阻害剤(すなわちソラフェニブ、レゴラフェニブ、イマチニブ、ダサチニブ)、グルココルチコイド(すなわちプレドニゾロン、メチルプレドニゾロン)、抗ＣＤ２０抗体、Ｐ１４４β−グリカン、アバタセプトとの組み合わせ剤である。
【００３３】
本発明のさらなる態様は、可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤および／またはアクチベーターと、ＡＣＥ阻害剤(すなわちカプトプリル、エナラプリル)、カルシウムチャネル遮断薬(すなわちニフェジピン)、プロスタノイド(すなわちイロプロスト)、エンドセリンアンタゴニスト(すなわちボセンタン)との組み合わせ剤である。
【００３４】
本発明の他の好ましい態様は、全身性強皮症(ＳＳｃ)、びまん型全身性強皮症(ｄＳＳｃ)、限局型全身性強皮症(ｌＳＳｃ)、オーバーラップ型全身性強皮症、未分化型全身性強皮症、皮膚硬化のない全身性強皮症、皮膚線維症、強皮症、腎性線維化性皮膚症(ＮＦＤ)、ケロイド形成の予防および／または処置に使用するための、上に示した化合物および／または組み合わせ剤である。
【００３５】
本発明の他の好ましい態様は、強皮症の予防および／または処置に使用するための、上に示した化合物および／または組み合わせ剤である。
【００３６】
本発明の他の好ましい態様は、腸、肺、腎臓および血管を含む内臓の全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症の予防および／または処置に使用するための、上に示した化合物および／または組み合わせ剤である。
【００３７】
本発明の他の好ましい態様は、全身性強皮症(ＳＳｃ)を予防および／または処置するための、有効量の上に示した化合物および／または組み合わせ剤を含む医薬の製造における使用である。
【００３８】
本発明の他の好ましい態様は、強皮症を予防および／または処置するための、有効量の上に示した化合物および／または組み合わせ剤を含む医薬の製造における使用である。
【００３９】
本発明の他の好ましい態様は、全身性強皮症(ＳＳｃ)、びまん型全身性強皮症(ｄＳＳｃ)、限局型全身性強皮症(ｌＳＳｃ)、オーバーラップ型全身性強皮症、未分化型全身性強皮症、皮膚硬化のない全身性強皮症、皮膚線維症、強皮症、腎性線維化性皮膚症(ＮＦＤ)、ケロイド形成を予防および／または処置するための、有効量の上に示した化合物および／または組み合わせ剤を含む医薬の製造における使用である。
【００４０】
本発明の他の好ましい態様は、腸、肺、腎臓および血管を含む内臓の全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症を予防および／または処置するための、有効量の上に示した化合物および／または組み合わせ剤を含む医薬の製造における使用である。
【００４１】
本発明の他の好ましい態様は、全身性強皮症(ＳＳｃ)の予防および／または処置に使用するための、上に示した少なくとも１種の化合物または１つの組み合わせ剤を含む医薬製剤である。
【００４２】
本発明の他の好ましい態様は、全身性強皮症(ＳＳｃ)、びまん型全身性強皮症(ｄＳＳｃ)、限局型全身性強皮症(ｌＳＳｃ)、オーバーラップ型全身性強皮症、未分化型全身性強皮症、皮膚硬化のない全身性強皮症、皮膚線維症、強皮症、腎性線維化性皮膚症(ＮＦＤ)、ケロイド形成の予防および／または処置に使用するための、上に示した少なくとも１種の化合物または１つの組み合わせ剤を含む医薬製剤である。
【００４３】
本発明の他の好ましい態様は、全身性強皮症(ＳＳｃ)の予防および／または処置に使用するための、上に示した少なくとも１種の化合物または１つの組み合わせ剤を含む医薬製剤である。
【００４４】
本発明の他の好ましい態様は、腸、肺、腎臓および血管を含む内臓の全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症の予防および／または処置に使用するための、上に示した少なくとも１種の化合物または１つの組み合わせ剤を含む医薬製剤である。
【００４５】
本発明の他の好ましい態様は、全身性強皮症(ＳＳｃ)の予防および／または処置に使用するための、少なくとも１種の上に示したｓＧＣ刺激剤および／またはアクチベーター、または上に示した組み合わせ剤を含むキットである。
【００４６】
本発明の他の好ましい態様は、全身性強皮症(ＳＳｃ)、びまん型全身性強皮症(ｄＳＳｃ)、限局型全身性強皮症(ｌＳＳｃ)、オーバーラップ型全身性強皮症、未分化型全身性強皮症、皮膚硬化のない全身性強皮症、皮膚線維症、強皮症、腎性線維化性皮膚症(ＮＦＤ)、ケロイド形成の予防および／または処置に使用するための、上に示したキットである。
【００４７】
本発明の他の好ましい態様は、強皮症の予防および／または処置に使用するための、少なくとも１種の上に示したｓＧＣ刺激剤および／またはアクチベーター、または、上に示した組み合わせ剤を含むキットである。
【００４８】
本発明の他の好ましい態様は、腸、肺、腎臓および血管を含む内臓の全身性強皮症(ＳＳｃ)付随線維症の予防および／または処置に使用するための上に示したキットである。
【００４９】
本発明の医薬組成物は、意図された投与経路に適合するように製剤化される。投与経路の例は、非経腸、例えば静脈内、皮内、皮下、経口(例えば‘吸入')、経皮(局所)、経粘膜および直腸投与を含む。注射可能な使用に適当な医薬組成物は、滅菌処理した水溶液(水に可溶な場合)または分散液、および、滅菌処理された注射可能な溶液または分散液を即時調製するための滅菌処理された粉末を含む。担体は、溶媒または分散媒体であってもよく、例えば水、エタノール、薬学的に許容されるポリオール、例えばグリセロール、プロピレン グリコール、液体ポリエチレン グリコールおよび適当なそれらの混合物を含む。例えばレシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合は必要とされる粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって、適切な流動性を維持することができる。種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって、微細物の作用の予防を達成することができる。多くの場合において、組成物中に、等張剤、例えば糖類、ポリアルコール類、例えばマンニトール(maitol)、ソルビトール、塩化ナトリウムを含むことが好ましい。
【００５０】
経口組成物は、一般的に、不活性な希釈剤または食用担体を含む。それらを、ゼラチンカプセルに封入することも、錠剤に圧縮することもできる。経口治療投与の目的のために、活性な化合物を、添加物と組み合わせて、錠剤、トローチ剤またはカプセル剤の形態で用いることができる。また、流体担体中の本化合物を経口で適用し、口を漱ぎ、吐き出し、または飲み込む洗口液として使用するために、流体担体を用いて、経口組成物を製造することもできる。
【００５１】
薬学的に適合性の結合剤および／またはアジュバント物質を、組成物の一部として含むことができる。錠剤、丸薬、カプセル剤、トローチ剤などは、下記の何れかの成分または同様の性質の化合物を含むことができる：結合剤、例えば微晶性セルロース、トラガカントゴムまたはゼラチン；添加物、例えば澱粉または乳糖、崩壊剤、例えばアルギン酸、Primogelまたはトウモロコシ澱粉；滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸エステル(sterotes)；滑剤、例えばコロイド状二酸化ケイ素；甘味料、例えばショ糖またはサッカリン；または風味剤、例えばペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジ香料。
【００５２】
吸入によって投与するために、本化合物は、適当な噴射剤、例えばガス、例えば二酸化炭素を含む加圧容器またはディスペンサー、またはネブライザーから、エアゾールスプレーの形態で送達される。
【００５３】
全身投与はまた、経粘膜または経皮手段によって行うことができる。経粘膜または経皮投与のために、浸透されるべき障壁に適切な浸透剤が製剤に用いられる。このような浸透剤は、一般的に、当技術分野で知られており、例えば、経粘膜投与のためには、界面活性剤、胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与を、鼻用スプレーまたは坐剤によって達成することができる。経皮投与のためには、活性な化合物は、当技術分野で一般的に知られている軟膏、ロウ膏、ゲルまたはクリームに製剤化される。
【００５４】
また、本化合物を、坐剤(例えば慣用の坐剤用基剤、例えばカカオ脂および他のグリセリドと共に)または直腸送達用停留浣腸の形態で製造することができる。
【００５５】
一つの態様において、活性な化合物は、身体からの迅速な排泄から化合物を保護する担体と共に、例えば、インプラントおよびミクロカプセル化送達系を含む制御放出製剤として製造される。生分解性生体適合性ポリマー、例えばエチレン ビニル アセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸を用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００５６】
【図１】平均動脈血圧(左)および心拍数(右)に対する実施例２７の化合物の効果
【図２Ａ】収縮期血圧に対する実施例３の化合物の効果
【図２Ｂ】心拍数に対する実施例３の化合物の効果
【図３Ａ】収縮期血圧に対する実施例４の化合物の効果
【図３Ｂ】心拍数に対する実施例４の化合物の効果
【図４Ａ】収縮期血圧に対する実施例７の化合物の効果
【図４Ｂ】心拍数に対する実施例７の化合物の効果
【発明を実施するための形態】
【００５７】
実験部
Ａ. 実施例
略号および頭字語：
【表１】
0005883852.tif 000012
【００５８】
ＬＣ／ＭＳ法：
方法１：ＭＳ装置：Waters ZQ；ＨＰＬＣ装置：Agilent 1100 Series；ＵＶ  ＤＡＤ；カラム：Thermo Hypersil GOLD 3μ 20mm×4mm；溶出液Ａ：１Ｌ  水＋０.５ml  ５０％  蟻酸, 溶出剤Ｂ：１Ｌ  アセトニトリル＋０.５mlの５０％  蟻酸；濃度勾配：０.０分  １００％  Ａ→３.０分  １０％  Ａ→４.０分  １０％  Ａ→４.１分  １００％  Ａ(流速  ２.５ml/分)；オーブン：５５℃；流速：２ml/分；ＵＶ検出：２１０nm。
方法２：装置：Waters ACQUITY SQD UPLC System；カラム：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ 50×1mm；溶出液Ａ：１Ｌ  水＋０.２５ml  ９９％  蟻酸, 溶出液Ｂ：１Ｌ  アセトニトリル＋０.２５ml  ９９％  蟻酸；濃度勾配：０.０分  ９０％  Ａ→１.２分  ５％  Ａ→２.０分  ５％  Ａ；オーブン：５０℃；流速：０.４０ml/分；ＵＶ検出：２１０〜４００nm。
【実施例】
【００５９】
＜出発化合物および中間体＞
実施例１Ａ
２,６−ジクロロ−５−フルオロニコチンアミド
【化１１】
0005883852.tif 000013
濃硫酸(１２５ml)中の２５ｇ(１３０.９０mmol)の２,６−ジクロロ−５−フルオロ−３−シアノピリジンの懸濁液を６０〜６５℃で１時間撹拌した。室温まで冷却した後、フラスコの内容物を氷水に注ぎ、酢酸エチル(それぞれ１００ml)で３回抽出した。合わせた有機相を、水(１００ml)で、次いで飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(１００ml)で洗浄し、乾燥させ、ロータリーエバポレーターで濃縮した。得られた物質を高真空下で乾燥させた。
収量：24.5 g (理論値の90%)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.95 (br s, 1H), 8.11 (br s, 1H), 8.24 (d, 1H)。
【００６０】
実施例２Ａ
２−クロロ−５−フルオロニコチンアミド
【化１２】
0005883852.tif 000014
メタノール(２０７ml)中の２１.９ｇ(３３５.３５mmol)の亜鉛の懸濁液を、室温で、４４ｇ(２１０.５８mmol)の２,６−ジクロロ−５−フルオロニコチンアミドと混合した。酢酸(１８.５ml)を加え、混合物を撹拌しながら２４時間還流した。その後、フラスコの内容物を傾斜して亜鉛と分け、酢酸エチル(４１４ml)および飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(４１４ml)を加え、次に激しく撹拌抽出した。続いて、反応混合物を珪藻土で吸引濾過し、濾過生成物を酢酸エチル(それぞれ５１７ml)で３回洗浄した。有機相を分離して取り、水相を酢酸エチル(２５８ml)で洗浄した。合わせた有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(４１４ml)で１回洗浄し、乾燥させ、減圧下で濃縮した。得られた結晶をジクロロメタン(３８８ml)と混合し、２０分間撹拌抽出した。再度吸引濾過を行い、濾過生成物をジエチルエーテルで洗浄し、吸引して乾燥させた。
収量：20.2 g (理論値の53%)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 7.87 (br s, 1H), 7.99 (dd, 1H), 8.10 (br s, 1H), 8.52 (d, 1H)。
【００６１】
実施例３Ａ
２−クロロ−５−フルオロニコチノニトリル
【化１３】
0005883852.tif 000015
ジクロロメタン(７８３ml)中の４６.２ｇ(２６４.６６mmol)の２−クロロ−５−フルオロニコチンアミドの懸濁液を、８１.２ml(５８２.２５mmol)のトリエチルアミンと混合し、０℃に冷却した。撹拌しながら、４１.１２ml(２９１.１３mmol)の無水トリフルオロ酢酸をゆっくりと滴下し、混合物を０℃で１.５時間撹拌した。次に、反応溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(それぞれ３９１ml)で２回洗浄し、乾燥させ、減圧下で濃縮した。
収量：42.1 g (理論値の90%)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 8.66 (dd, 1H), 8.82 (d, 1H)。
【００６２】
実施例４Ａ
５−フルオロ−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−アミン
【化１４】
0005883852.tif 000016
１,２−エタンジオール(３８０ml)中の３８.５ｇ(２４５.９３mmol)の２−クロロ−５−フルオロニコチノニトリルの懸濁液を導入し、続いてヒドラジン水和物(１１９.６ml, ２.４５９mol)と混合した。混合物を撹拌しながら４時間加熱した。冷却時、生成物が沈殿した。黄色の結晶を水(３８０ml)と混合し、室温で１０分間撹拌抽出した。懸濁液をフリットで吸引濾過し、濾過生成物を、水(２００ml)で、そして−１０℃に冷却したＴＨＦ(２００ml)で洗浄した。残渣を、高真空下、五酸化リンで乾燥させた。
収量：22.8 g (理論値の61%)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 5.54 (s, 2H), 7.96 (dd, 1H), 8.38 (m, 1H), 12.07(m, 1H)。
【００６３】
実施例５Ａ
５−フルオロ−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン
【化１５】
0005883852.tif 000017
ＴＨＦ(３２９ml)に、１０ｇ(６５.７５mmol)の５−フルオロ−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−アミンを導入し、０℃に冷却した。１６.６５ml(１３１.４６mmol)の三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体をゆっくりと加えた。反応混合物をさらに−１０℃まで冷却した。ＴＨＦ(２４.３９ml)中の１０.０１ｇ(８５.４５mmol)の亜硝酸イソペンチルの溶液をゆっくりと加え、続いてさらに３０分間撹拌した。混合物を冷ジエチルエーテル(３２９ml)で希釈し、得られた固体を濾過によって単離した。このようにして製造されたジアゾニウム塩を、アセトン(３２９ml)中の１２.８１ｇ(８５.４５mmol)のヨウ化ナトリウムの０℃に冷却した溶液に少しずつ加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。反応混合物を氷水(１.８Ｌ)に注ぎ、酢酸エチル(それぞれ４８７ml)で２回抽出した。集めた有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液(２４４ml)で洗浄し、乾燥させ、濾過し、濃縮した。これにより、１２.１ｇ(純度８６％, 理論値の６０％)の望ましい化合物を褐色の固体の形態で得た。粗生成物をさらに精製することなく反応させた。
LC-MS (方法1): Rt = 1.68分;
MS (ESIpos): m/z = 264 (M+H)+。
【００６４】
実施例６Ａ
５−フルオロ−１−(２−フルオロベンジル)−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン
【化１６】
0005883852.tif 000018
ＤＭＦ(２５３８ml)に、１４１ｇ(４６２.１１mmol)の実施例５Ａの化合物を導入し、９６.０９ｇ(５０８.３２mmol)の臭化 ２−フルオロベンジルおよび１６５.６２ｇ(５０８.３２mmol)の炭酸セシウムを加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化ナトリウム水溶液(１３６７０ml)に注ぎ、酢酸エチル(５８５８ml)で２回抽出した。集めた有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液(３９０５ml)で洗浄し、乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣についてシリカゲルのクロマトグラフィーを行い(溶出液：石油エーテル／酢酸エチル  ９７：３)、生成物のフラクションを濃縮した。得られた固体をジクロロメタンに溶解し、飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液(５００ml)で１回、そして飽和塩化ナトリウム水溶液(５００ml)で洗浄した。生成物を濃縮乾固し、残渣をジエチルエーテルと共に懸濁し、吸引濾過によって単離し、高真空下で乾燥させた。これにより１０６.６ｇ(理論値の６２％)の望ましい化合物を得た。
LC-MS (方法1): Rt = 2.57分。
MS (ESIpos): m/z = 372 (M+H)+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 5.73 (s, 2H), 7.13 - 7.26 (m, 3H), 7.33 - 7.41 (m, 1H), 7.94 (dd, 1H), 8.69 - 8.73 (m, 1H)。
【００６５】
実施例７Ａ
２−[５−フルオロ−１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−イル]−５−ニトロピリミジン−４,６−ジアミン
【化１７】
0005883852.tif 000019
１,４−ジオキサン(８６ml)に、アルゴン下、８６０mg(２.３２mmol)の実施例６Ａの化合物を導入し、反応混合物にアルゴンを１０分間吹き付けた。３.５１ml(６.９５mmol)のヘキサブチル 二錫および４８３mg(２.５５mmol)の２−クロロ−５−ニトロピリミジン−４,６−ジアミン(Helvetica Chimica Acta (1951), 34, 835-40の方法によって製造)を加えた。次に、８６０mg(０.７４４mmol)のテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)を加え、反応混合物を一夜還流した。それを室温まで冷却し、水と混合し、酢酸エチルで２回抽出した。集めた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣を酢酸エチル中で撹拌抽出を行い、固体を濾過によって単離し、高真空下で乾燥させた。これにより、３５５mg(純度６２％, 理論値の２４％)の望ましい化合物を得た。粗生成物をさらに精製することなく反応させた。
LC-MS (方法2): Rt = 1.03分。
MS (ESIpos): m/z = 399 (M+H)+。
【００６６】
実施例８Ａ
５−フルオロ−１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−カルボニトリル
【化１８】
0005883852.tif 000020
ＤＭＳＯ(１２０ml)中の１６.０３ｇ(４３.１９mmol)の５−フルオロ−１−(２−フルオロベンジル)−３−ヨード−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン(実施例６Ａ)および４.２５ｇ(４７.５１mmol)のシアン化銅の懸濁液を導入し、１５０℃で２時間撹拌した。冷却後、フラスコの内容物を約４０℃まで冷却し、濃アンモニア水(９０ml)および水(５００ml)の溶液に注ぎ、酢酸エチル(２００ml)と混合し、短時間撹拌抽出した。水相を分離し、酢酸エチル(それぞれ２００ml)で２回以上抽出した。合わせた有機相を濃度１０％の塩化ナトリウム水溶液(それぞれ１００ml)で２回洗浄し、乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗生成物を、さらに精製することなく反応させた。
収量：11.1 g (理論値の91%)。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 5.87 (s, 2H), 7.17 - 7.42 (m, 4H), 8.52 (dd, 1H), 8.87 (dd, 1H)。
【００６７】
実施例９Ａ
５−フルオロ−１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−カルボキシミドアミド 酢酸塩
【化１９】
0005883852.tif 000021
メタノール(２７０ml)中の２.２２ｇ(４１.０７mmol)のナトリウム メトキシドに、１１.１ｇ(４１.０７mmol)の５−フルオロ−１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−カルボニトリル(実施例８Ａ)を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。２.６４ｇ(４９.２９mmol)の塩化アンモニウムおよび酢酸(９.１７ml)を加え、混合物を一夜還流した。それを濃縮乾固し、残渣を水(１００ml)および酢酸エチル(１００ml)に溶かし、２Ｎ  水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐＨ  １０に調節した。それを室温で約１時間激しく撹拌した。得られた懸濁液を吸引濾過し、濾過生成物を、酢酸エチル(１００ml)で、水(１００ml)で、そして酢酸エチル(１００ml)で再度洗浄した。残渣を、高真空下、五酸化リンで乾燥させた。
収量：9.6 g (理論値の78%)。
MS (ESIpos): m/z = 288 (M+H)+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 1.85 (s, 3H), 5.80 (s, 2H), 7.14 - 7.25 (m, 3H), 7.36 (m, 1H), 8.42 (dd, 1H), 8.72 (dd, 1H)。
【００６８】
実施例１０Ａ
２−[５−フルオロ−１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−イル]−５−[(Ｅ)−フェニルジアゼニル]ピリミジン−４,６−ジアミン
【化２０】
0005883852.tif 000022
水(４０ml)および濃塩酸(７.０７ml)を、撹拌しながら、３.８５ｇ(４１.３４mmol)のアニリンと混合し、この混合物を０℃まで冷却した。水(２１ml)中の２.８５ｇ(４１.３４mmol)の亜硝酸ナトリウムの溶液を、０℃から５℃の間で滴下し、次に０℃で１５分間撹拌した。その後、０℃で、水(１９ml)中の４.２８ｇ(５２.２５mmol)の酢酸ナトリウムの溶液を迅速に滴下し、十分に撹拌しながら、エタノール(１０ml)中の２.７３ｇ(４１.３４mmol)のマロノニトリルの溶液を滴下した。０℃で２時間後、得られた沈殿物を吸引濾過によって単離し、水(それぞれ５０ml)で３回、そして石油エーテル(５０ml)で洗浄した。未だ湿っている残渣を、ＤＭＦ(４６ml)に溶解して、正確に８５℃で、ＤＭＦ(４６ml)およびトリエチルアミン(５.７６ml)中の９.５ｇ(３３.０７mmol)の５−フルオロ−１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−カルボキシミドアミド 酢酸塩(実施例９Ａ)の溶液に滴下した。混合物を１００℃で４時間撹拌し、一夜室温まで冷却した。混合物を水(４８０ml)に注ぎ、室温で１時間撹拌抽出した。沈殿物を吸引濾過によって単離した後、それを水(それぞれ１００ml)で２回、そしてメタノール(それぞれ５０ml)で２回洗浄し、高真空下で乾燥させた。
収量：9.6 g (理論値の59%)。
LC-MS (方法2): Rt = 1.21分。
MS (ESIpos): m/z = 458 (M+H)+。
【００６９】
実施例１１Ａ
２−[５−フルオロ−１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−イル]ピリミジン−４,５,６−トリアミン
【化２１】
0005883852.tif 000023
【００７０】
変法Ａ：  実施例７Ａから出発する製法：
ピリジン(３０ml)に、３７８mg(０.９４９mmol)の実施例７Ａの化合物を導入し、１４３mg(０.１３５mmol)のパラジウム(１０％, 炭素上)を加えた。混合物を、室温で一夜、標準水素圧下で水素化した。懸濁液を珪藻土で濾過し、フィルターケーキをエタノールで洗浄した。濾液を濃縮し、２３３mg(純度８１％, 理論値の５１％)の望ましい化合物を得た。これをさらに精製することなく反応させた。
【００７１】
変法Ｂ：  実施例１０Ａから出発する製法：
ＤＭＦ(８００ml)に、３９.２３ｇ(８５.７５mmol)の実施例１０Ａの化合物を導入し、４ｇのパラジウム(１０％, 炭素上)を加えた。混合物を、撹拌しながら、標準水素圧下で一夜水素化した。バッチを珪藻土で濾過し、濾過生成物を、少量のＤＭＦで、そして少量のメタノールで洗浄し、濃縮乾固した。残渣を酢酸エチルと混合し、激しく撹拌し、沈殿物を吸引濾過し、酢酸エチルで、そしてジイソプロピル エーテルで洗浄し、高真空下、Sicapentで乾燥させた。
収量：31.7 g (理論値の100%)。
LC-MS (方法2): Rt+ = 0.81分。
MS (ESIpos): m/z = 369 (M+H)+。
【００７２】
＜実施例＞
実施例１
{４,６−ジアミノ−２−[５−フルオロ−１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−イル]ピリミジン−５−イル}カルバミン酸メチル
【化２２】
0005883852.tif 000024
アルゴン下、ピリジン(６００ml)に、３１.７５ｇ(８６.２０mmol)の実施例１１Ａの化合物を導入し、０℃まで冷却した。ジクロロメタン(１０ml)中の６.６６ml(８６.２０mmol)のクロロ蟻酸メチルの溶液を滴下し、混合物を０℃で１時間撹拌した。その後、反応混合物を室温とし、減圧下で濃縮し、トルエンと共蒸留した。残渣を水／エタノールと共に撹拌し、フリットで濾過した。その後、それをエタノールで、そして酢酸エチルで洗浄した。続いて、残渣を、再度ジエチルエーテルと共に撹拌し、吸引濾過によって単離し、高真空下で乾燥させた。
収量：24.24 g (理論値の65%)。
LC-MS (方法2): Rt = 0.79分。
MS (ESIpos): m/z = 427 (M+H)+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 3.62 (br. s, 3H), 5.79 (s, 2H), 6.22 (br. s, 4H), 7.10 - 7.19 (m, 2H), 7.19 - 7.26 (m, 1H), 7.32 - 7.40 (m, 1H), 7.67 (br. s, 0.2H), 7.99 (br. s, 0.8H), 8.66 (m, 1H), 8.89 (d, 1H)。
【００７３】
実施例２
{４,６−ジアミノ−２−[５−フルオロ−１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−イル]ピリミジン−５−イル}メチルカルバミン酸メチル
【化２３】
0005883852.tif 000025
２００mg(０.４６９mmol)の{４,６−ジアミノ−２−[５−フルオロ−１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−イル]ピリミジン−５−イル}カルバミン酸メチル(実施例１)を、０℃で、ＴＨＦ(５ml)に導入した。０.７０４ml(０.７０４mmol)のヘキサメチルジシラザン リチウム溶液(ＴＨＦ中１Ｍ)を加え、混合物をこの温度で２０分間撹拌した。続いて、４３.８μｌ(０.７０４mmol)のヨードメタンを加え、混合物を室温まで温めた。この温度で１時間後、反応を水(１ml)で終了させ、反応混合物を濃縮し、残渣を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ(水(＋０.０５％  蟻酸)−アセトニトリルの濃度勾配)によって分離した。
収量：90 mg (理論値の44%)。
LC-MS (方法2): Rt = 0.85分。
MS (ESIpos): m/z = 441 (M+H)+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 3.00 (s, 3H), 3.53 (s, 2.2H), 3.66 (s, 0.8H), 5.81 (s, 2H), 6.57 (br. s, 4H), 7.13 (m, 2H), 7.22 (m, 1H), 7.35 (m, 1H), 8.67 (m, 1H), 8.87 (dd, 1H)。
【００７４】
実施例３
{４,６−ジアミノ−２−[５−フルオロ−１−(２−フルオロベンジル)−１Ｈ−ピラゾロ[３,４−ｂ]ピリジン−３−イル]ピリミジン−５−イル}(２,２,２−トリフルオロエチル)カルバミン酸メチル
【化２４】
0005883852.tif 000026
３.４７０ｇ(８.１３８mmol)の実施例１の化合物を、３５mlのＴＨＦに懸濁し、０℃で、３５８mg(８.９５２mmol)の水素化ナトリウム(鉱物油中６０％懸濁液)と混合し、０℃で９０分間撹拌した。その過程で、溶液が形成した。２.５１９ｇ(８.９５２mmol)の２,２,２−トリフルオロエチル トリクロロメタンスルホネートを加え、混合物を室温で４８時間撹拌した。それを水と共に撹拌し、ロータリーエバポレーターで濃縮した。残渣を酢酸エチルに溶かし、有機相を水で２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。これにより、５.００５ｇの標的化合物を得た(理論値の７９％, ＨＰＬＣによる純度６５％)。２５０mgの残渣を分取ＨＰＬＣ(溶出液：メタノール／水, 濃度勾配３０：７０→９０：１０)によって精製した。
LC-MS (方法2): Rt = 0.97分。
MS (EIpos): m/z = 509 [M+H]+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 3.63 (s, 3H), 4.06-4.15 (m, 2H), 5.80 (s, 2H), 6.46 (s br, 4H) 7.11-7.15 (m, 2H), 7.20-7.25 (m, 1H), 7.33-7.38 (m, 1H), 8.66 (dd, 1H), 8.91 (dd, 1H)。
【００７５】
実施例Ａ
ブレオマイシン誘発皮膚線維症
局所皮膚線維症を、６週齢の病原を持たないメスのＤＢＡ／２マウス(Charles River, Sulzfeld, Germany)に、背中上部の規定領域にブレオマイシン(食塩水中０.５mg/ml)の皮下注射を繰り返す(１日おき)ことによって誘発させた。コントロールマウスに、同じ方法で、食塩水のみを注射して、対照とした。全てのグループにおいて、注射容量は１００μｌであった。ブレオマイシン処置と同時に、マウスを、経口で、試験薬またはビークルで処置した。マウスを、ａ)ビークル、ｂ)１mg/kg  実施例２７、およびｃ)３mg/kg  実施例２７で、１日２回、胃管栄養法で、２１日間処置した。３週間の処置期間後、動物を屠殺し、分析のために皮膚サンプルを得た。
【００７６】
組織学的分析
注射された皮膚領域を、４％  ホルマリン中で固定化し、パラフィン中に包埋した。組織学的切片を、皮膚の厚みを測定するために、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。上皮−真皮接合部と、真皮−皮下脂肪接合部の間の最大距離を測定することによって、皮膚の厚みを測定した。測定は、マウスの処置について盲検化された試験官によって行われた。
【００７７】
ヒドロキシプロリン アッセイ
皮膚サンプル中のコラーゲン含量を分析するために、ヒドロキシプロリン アッセイを行った。パンチ生検(直径３mm)を、６Ｍ  ＨＣｌ中で、１２０℃で３時間消化した後、クロラミンＴ(０.０６Ｍ)を加え、サンプルを混合し、室温で２０分間インキュベートした。３.１５Ｍ  過塩素酸および２０％  ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒドを加え、サンプルを６０℃でさらに２０分間インキュベートした。吸光度を５５７nmで測定した。
【００７８】
α−平滑筋アクチンにおける免疫組織化学
パラフィン包埋切片において、α−平滑筋アクチン(αＳＭＡ)の発現を分析した。パラフィン除去後、サンプルを、３％  ウシ血清アルブミンと共にインキュベートし、次に３％  Ｈ２Ｏ２と共にインキュベートした。マウス切片において、αＳＭＡ陽性細胞を、モノクローナル抗αＳＭＡ抗体(クローン 1A4, Sigma-Aldrich, Steinheim, Germany)と共にインキュベートすることによって検出した。コントロールとして、同じ濃度の無関係なアイソタイプ抗体を用いた(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA)。西洋ワサビペルオキシダーゼ標識抗体(Dako, Hamburg, Germany)を二次抗体として用いた。ＮＩＣＤおよびαＳＭＡの発現を、ＤＡＢペルオキシダーゼ基質溶液(Sigma-Aldrich)で可視化した。筋線維芽細胞の数を、各マウスについて４個の異なる損傷性皮膚切片から、マウスの処置について盲検化された試験官が計数した。
【００７９】
表１：ブレオマイシン誘発皮膚線維症の発症に対する実施例２７の化合物の効果
【表２】
0005883852.tif 000027
線維症パラメーターは、ビークル処置コントロールに関するｘ軸変化として表される。
【００８０】
これらの投与量依存の顕著な効果は、他の実施例、すなわち実施例３、実施例６の化合物でも同様に見られた。
線維症パラメーターは、ビークル処置コントロールに関するｘ軸変化として表される。
表２：ブレオマイシン誘発皮膚線維症の発症に対する実施例３および実施例６の化合物の効果
【表３】
0005883852.tif 000028
線維症パラメーターは、ビークル処置コントロールに関するｘ軸変化として表される。
【００８１】
実施例Ｂ
ブレオマイシン誘発皮膚線維症
局所皮膚線維症を、６週齢の病原を持たないメスのＤＢＡ／２マウス(Charles River, Sulzfeld, Germany)に、背中上部の規定領域にブレオマイシン(食塩水中０.５mg/ml)の皮下注射を繰り返す(１日おき)ことによって誘発させた。コントロールマウスに、同じ方法で、食塩水のみを注射した。全てのグループにおいて、注射容量は１００μｌであった。試験は、
ａ) 食塩水の注射を６週間受けたマウス(対照として)
ｂ) ブレオマイシン注射を６週間受けたマウス
ｃ) ブレオマイシン注射を６週間受け、さらに最後の３週間に実施例２７の化合物(３mg/kg)で１日２回胃管栄養法で処置されたマウス
ｄ) 最初の３週間にブレオマイシン注射を受け、次の３週間に食塩水の注射を受けたマウス
の４つのアームを含む。
【００８２】
６週後に動物を屠殺し、分析のために皮膚サンプルを得た。
組織学的分析、ヒドロキシプロリン アッセイおよびα−平滑筋アクチンにおける免疫組織化学を、実施例Ａの章に記載した通りに行った。
【００８３】
表３：確立されたブレオマイシン誘発皮膚線維症に対する実施例２７の化合物(３mg/kg p.o.)の効果
【表４】
0005883852.tif 000029
線維症パラメーターは、ビークル処置コントロール(グループａ)に関するｘ軸変化として表される。
【００８４】
実施例Ｃ
Tight skinマウスモデル
ブレオマイシン誘発皮膚線維症のマウスモデルに加えて、全身性強皮症のtight-skin (Ｔｓｋ−１)マウスモデルを、試験薬物の抗線維症能を評価するために用いた。フィブリリン−１の優位な変異のために、Ｔｓｋ−１の表現型は、皮下組織の厚みの増大によって特徴付けられる。Ｔｓｋ−１マウスの遺伝子型は、変異させたフィブリリン−１／Ｔｓｋ−１のフォワードプライマー：5'−GTTGGCAACTATACCTGCAT−3'、リバースプライマー：5'−CCTTTCCTGGTAACATAGGA−3'で、ＰＣＲを行った。Ｔｓｋ−１マウスを、経口胃管栄養法によって、試験薬物またはビークルで、それぞれ１日１回処置した。さらに、対応する野生型(ｐａ／ｐａ)マウスのグループをビークルで処置した。処置を５週齢で開始した。処置の５週後にマウスを頚部脱臼によって屠殺し、分析のために皮膚サンプルを得た。
組織学的分析、ヒドロキシプロリン アッセイおよびα−平滑筋アクチンにおける免疫組織化学を、実施例Ａの章に記載した通りに行った。
【００８５】
表４：Ｔｓｋマウスにおける確立した皮膚線維症に対する実施例２７の化合物の効果
【表５】
0005883852.tif 000030
線維症パラメーターは、ビークル処置野生型マウスに関するｘ軸変化として表される。
【００８６】
実施例Ｄ
意識のあるマウスにおいて、実施例３、実施例４、実施例６の化合物の血行動態効果を分析した。遠隔測定インプラント(DSI(登録商標))を用いた。シグナルをRMC1-DSI(登録商標) receiver plateで受け取り、PONEMAH(登録商標) physiology platform softwareでコンパイルして分析した。
【００８７】
マウスに、プラセボ(tylose)、０.３mg/kg  実施例２７の化合物、１mg/kg  実施例２７の化合物、３mg/kg  実施例２７の化合物(図１)、１.０mg/kg  実施例３の化合物、３.０mg/kg  実施例３の化合物、１０.０mg/kg  実施例３の化合物(図２Ａ、２Ｂ)、１.０mg/kg  実施例４の化合物、３.０mg/kg  実施例４の化合物、１０.０mg/kg  実施例４の化合物(図３Ａ／３Ｂ)、０.３mg/kg  実施例６の化合物、１.０mg/kg  実施例６の化合物、３.０mg/kg、１０.０mg/kg  実施例６の化合物(図４Ａ／４Ｂ)の何れかを投与した。プラセボまたは化合物の適用前および後に、血圧および心拍数をモニターした。図１は、血圧(左)および心拍数(右)に対する実施例２７の化合物の効果を示し、図２は、血圧(図２Ａ)および心拍数(図２Ｂ)に対する実施例３の化合物の効果を示し、図３は、血圧(図３Ａ)および心拍数(図３Ｂ)に対する実施例４の化合物の効果を示し、図４は、血圧(図４Ａ)および心拍数(図４Ｂ)に対する実施例６の化合物の効果を示す。
【００８８】
実施例Ｅ
実施例２７の化合物およびバルデナフィルの単独および組み合わせの効果を、インビトロのヒト皮膚線維芽細胞で、インビトロで分析した。実施例２７の化合物、バルデナフィルおよびそれらの組み合わせは、ＴＧＦβ誘発コラーゲン遺伝子発現およびヒドロキシプロリン(ＨＰ)堆積を、優位に遮断する。
【００８９】
参考文献：
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【図１】
0005883852.tif 000032
【図１Ａ】
0005883852.tif 000033
【図１Ａ−１】
0005883852.tif 000034
【図１Ａ−２】
0005883852.tif 000035
【図１Ａ−３】
0005883852.tif 000036
【図１Ｂ】
0005883852.tif 000037
【図１Ｂ−１】
0005883852.tif 000038
【図１Ｂ−２】
0005883852.tif 000039
【図１Ｂ−３】
0005883852.tif 000040
【図２Ａ】
0005883852.tif 000041
【図２Ａ−１】
0005883852.tif 000042
【図２Ａ−２】
0005883852.tif 000043
【図２Ａ−３】
0005883852.tif 000044
【図２Ｂ】
0005883852.tif 000045
【図２Ｂ−１】
0005883852.tif 000046
【図２Ｂ−２】
0005883852.tif 000047
【図２Ｂ−３】
0005883852.tif 000048
【図３Ａ】
0005883852.tif 000049
【図３Ａ−１】
0005883852.tif 000050
【図３Ａ−２】
0005883852.tif 000051
【図３Ａ−３】
0005883852.tif 000052
【図３Ｂ】
0005883852.tif 000053
【図３Ｂ−１】
0005883852.tif 000054
【図３Ｂ−２】
0005883852.tif 000055
【図３Ｂ−３】
0005883852.tif 000056
【図４Ａ】
0005883852.tif 000057
【図４Ａ−１】
0005883852.tif 000058
【図４Ａ−２】
0005883852.tif 000059
【図４Ａ−３】
0005883852.tif 000060
【図４Ａ−４】
0005883852.tif 000061
【図４Ｂ】
0005883852.tif 000062
【図４Ｂ−１】
0005883852.tif 000063
【図４Ｂ−２】
0005883852.tif 000064
【図４Ｂ−３】
0005883852.tif 000065
【図４Ｂ−４】
0005883852.tif 000066