(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式Ｉ：
【化１】
0005981434.tif 000017
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、水素であり；
Ｒ１１は、水素であり；
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、ハロゲン、グルクロニド、−ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、−ＮＨＣＮ、−ＣＨＯ、−ＯＳＯ２アルキル、−ＳＨ、−ＳＣＨ３、−ＣＨ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］ＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−Ｎ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＣＮ、−ＳＯ２アルキル、−Ｂ（ＯＨ）２、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝Ｓ）ＣＨ３、および−ＮＨＮＨ２から選択され；
Ｙは、−ＯＨであり；
ｍは、０〜２０の整数であり；
ｎは、０〜８の整数であり；
記号−−−は、単結合を表し；
ならびに
記号：
【化２】
0005981434.tif 000018
は、立体化学を問わず、あらゆる種類の結合を表す；
で表される化合物、またはそれらのそれぞれの光学異性体、立体化学異性体、水和物、溶媒和物、互変異性体もしくは製薬上許容される塩の、神経障害痛治療のための薬の製造における使用。
【請求項２】
前記化合物が、下記化学式：
【化３】
0005981434.tif 000019
を有する、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記化合物において、
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、および−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；
ｍは、１〜２０の整数であり；ならびに
ｎは、０〜８の整数である、
請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記化合物において、
Ｙは、（Ｓ）配置である−ＯＨであり；
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；
ｍは、１〜６の整数であり；ならびに
ｎは、０〜３の整数である、
請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記化合物が、下記化学式：
【化４】
0005981434.tif 000020
を有する、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記化合物において、
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、および−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；
ｍは、１〜２０の整数であり；ならびに
ｎは、０〜８の整数である、
請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記化合物において、
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；
ｍは、１〜１２の整数であり；ならびに
ｎは、０〜４の整数であり、
かつＣ−１７ヒドロキシ基は、（Ｓ）配置である、
請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記化合物が、下記化学式：
【化５】
0005981434.tif 000021
である、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
前記化合物において、
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２，−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、および−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；
ｍは、１〜２０の整数であり；ならびに
ｎは、０〜８の整数である、
請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記化合物において、
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；
ｍは、１〜１２の整数であり；ならびに
ｎは、０〜４の整数であり、
かつＣ−１７ヒドロキシ基は、（Ｓ）配置である、
請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
前記化合物が、下記化学式：
【化６】
0005981434.tif 000022
である、請求項１に記載の使用。
【請求項１２】
前記化合物において、
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、および−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；
ｍは、１〜２０の整数であり；ならびに
ｎは、０〜８の整数である、
請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記化合物において、
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；
ｍは、１〜１２の整数であり；ならびに
ｎは、０〜４の整数であり、
かつＣ−１７ヒドロキシ基は、（Ｓ）配置である、
請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記化合物が、下記化学式：
【化７】
0005981434.tif 000023
式中、Ｚは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−から選択される、
で表される、請求項１に記載の使用。
【請求項１５】
前記化合物において、
ｍは、１〜１２であり；
ｎは、０〜４であり；ならびに
Ｚは、−Ｏ−および−Ｓ−から選択される、
請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
前記化合物において、
ｍは、２〜８であり；
ｎは、０〜３であり；ならびに
Ｚは、−Ｏ−であり、
かつＣ−１７ヒドロキシ基は、（Ｓ）配置である、
請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記化合物が、下記化学式：
【化８】
0005981434.tif 000024
である、請求項１に記載の使用。
【請求項１８】
前記化合物において、
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、および−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；
ｍは、１〜２０の整数であり；
ｎは、０〜８の整数である、
請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記化合物において、
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；
ｍは、１〜１２の整数であり；
ｎは、０〜４の整数である、
請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記化合物が、
ｂ）（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（メトキシメチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
ｃ）（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
ｄ）（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
ｅ）（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
ｆ）（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（（（メトキシメチル）アミノ）メチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
ｇ）メチル（（（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ジヒドロキシ−１３−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）メチル）カーバメート；
ｈ）（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−メトキシ−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
ｉ）（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（２−メトキシエチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
ｊ）（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（４−メトキシブチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
ｋ）（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（８−メトキシオクチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
ｍ）（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（４−プロポキシブチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；および
ｎ）（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（５−エトキシペンチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール
から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項２１】
前記化合物が、ＥＲ−β受容体に選択的に結合する、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、参照によりその全体が本明細書に援用される、２０１０年９月１４日出願の米国特許仮出願第６１／３８２，７５２号の優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、組成物、ならびに６−置換１３−デメチル−エストラジオール化合物、それらの製薬上許容される塩または本明細書に説明され記載されたプロドラックを製造する方法および使用する方法に関する。当該化合物は、実質的にＥＲαとの機能的活動を有していない、ＥＲβ選択的アゴニストとして予想以上に有用であることが見出された。そのため、本発明では、診断分野および神経障害痛（ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ  ｐａｉｎ）の治療のどちらにおいても、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏのどちらかである、その化合物を含む医薬組成物についても関連する。
【発明の概要】
【０００３】
本発明の背景
エストロゲン受容体の機能および活動、構造およびそれらの機能に関する研究は、近年の多くの調査の対象となっている。エストロゲン受容体は、構造的に関連したリガンド誘導性転写（ｌｉｇａｎｄ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）因子の大きな科に属しており、それらは、核受容体として知られるステロイド受容体、チロイド／レチノイド受容体、ビタミンＤ受容体を含む。核受容体としての真のリガンドは開示されていないが、そのような受容体に結合し、細胞応答を引き起こすことのできる明確な小さい分子が存在する。
【０００４】
エストロゲンおよびエストロゲン受容体モジュレーター（ｍｏｄｕｌａｔｏｒ）は、エストロゲン受容体に結合し、αとβの二つの型に分類され、標的遺伝子の発現を調節することによって、多様な組織特異性効果を発揮する個々の分子複合体を形成する。リガンド結合エストロゲン受容体は、種々の分子経路における重要な転写因子として作用し、ＥＲ発現レベルの調節（ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）は細胞成長能（ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）の決定において重要である。
【０００５】
これらの種類の受容体は双方が、他のアゴニストおよびアンタゴニストと同様にエストロゲンに結合する一方で、二つの受容体は、体内で明確に異なる局在化濃度（ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を有している。αおよびβ型のいくらかの構造的な相違を別にしても、エストロゲンとの錯体となると、二者は、エストロゲンによりエストロゲン受容体α（ＥＲａ）の存在下での転写の活性化、および、エストロゲン受容体β（ＥＲβ）の存在下での転写の阻害、という反対方向のシグナルを示す。
【０００６】
エストロゲンは、疼痛知覚を含む神経機能の大きな範囲（ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を調節する。近年では、ホットプレートおよびホルマリン試験が野生型（ｗｉｌｄ  ｔｙｐｅ）（ＷＴ）で実施され、ＥＲβノックアウト（ＫＯ）マウスが痛覚抑制メカニズムおよび初期の持続性疼痛がＥＲβ欠乏によって修正されることを実証した。Ｓｐｏｏｎｅｒ，  Ｍ．Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １５０，  ６７５−６８０  （２００７）。Ｓｐｏｏｎｅｒらは、急性および後期強直期（ａｃｕｔｅ  ａｎｄ  ｌａｔｅ  ｔｏｎｉｃ  ｐｈａｓｅｓ）ではなく、ホルマリンテストの中間期（ｉｎｔｅｒｐｈａｓｅ）および初期強直期（ｅａｒｌｙ  ｔｏｎｉｃ  ｐｈａｓｅ）ＩＩの間、侵害応答（ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ）が、ＷＴ雌マウスよりもＥＲβＫＯ雌マウスの方が低いことを見出した。これは、そのＥＲβへの作用を通して、エストロゲンが、中間期の間の内因性疼痛調節（ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ｐａｉｎ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）メカニズムおよび／または初期フェイズＩＩにおける炎症の効率を抑え、脊髄侵害ニューロン活動（ｓｐｉｎａｌ  ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）の増加を引き起こすことを提言している。
【０００７】
さらに、非ステロイド系のＥＲβリガンドであるＥＲｂ−１３１は、神経損傷および感作（ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ）を伴う数種の疼痛動物モデルにおいて評価された。Ｐｉｕ，  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ５９０，  ４２３−４２９  （２００８）；  Ｐｉｕ，  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ５９２，  １５８−１５９  （２００８）。機能性および結合分析を用いることにより、ＥＲｂ−１３１は、有効で、選択的ＥＲβアゴニストとして見なされた。Ｉｎ  ｖｉｖｏでのラット子宮肥大試験（ｒａｔ  ｕｔｅｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ａｓｓａｙ）の評価において、ＥＲｂ−１３１はエストロゲン受容体アルファ活性を有していない。また、ＥＲｂ−１３１はカプサイシンにより引き起こされた触覚の痛覚過敏症（ｔａｃｔｉｌｅ  ｈｙｐｅｒａｌｇｅｓｉａ）を軽減し、脊髄神経結紮（ｓｐｉｎａｌ  ｎｅｒｖｅ  ｌｉｇａｔｉｏｎ）や種々の化学損傷により引き起こされた触覚の異痛を改善した。さらには、ＥＲｂ−１３１は通常の健常な動物の疼痛の限界（ｐａｉｎ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）に影響しなかった。慢性ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ  ａｄｊｕｖａｎｔモデルにおいて、ＥＲｂ−１３１は、慢性痛の炎症および痛覚過敏成分のどちらも解決した。よって、Ｐｉｕらは、抗侵害受容状態の広域な範囲を軽減する点においてＥＲβアゴニズムは重要なエフェクターであることを実証している。
【０００８】
したがって、疼痛（ｐａｉｎ）の治療を助けるためにＥＲβに選択的に作用する新規な化合物への需要がある。従来技術において、この種の治療に対して用いることのできる効果的な６−置換１３−デメチルエストラジオール誘導体を提供するものはこれまでにない。
【０００９】
発明の要約
上述のことを考慮すると、本発明は、鎮痛性（ａｎａｌｇｅｓｉｃ）の化合物、組成物ならびにそれらを使用および製造する方法を目的とし、それにより上述の点を含む従来技術における種々の不足および欠点を克服するためのものである。したがって、本発明のひとつの目的は、エストロゲン−依存条件（ｅｓｔｒｏｇｅｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）の治療において有効な化合物を提供することである。
【００１０】
本発明の他の目的は、化合物および選択的にＥＲβに作用する化合物を用いた疼痛の治療方法を提供することである。化合物は、選択的なＥＲβアゴニストまたはアンタゴニストである。
【００１１】
本発明は、式Ｉで表される化合物を含む。
【００１２】
【化１】
0005981434.tif 000002
【００１３】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロゲン、硫酸塩（ｓｕｌｆａｔｅ）、グルクロニド（ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ）、−ＯＨ、嵩高い基（ｂｕｌｋｙ  ｇｒｏｕｐ）、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、−Ｎ（ＣＨ２）ｎ；リン酸基（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｇｒｏｕｐ）、およびホスフィン酸基（ｐｈｏｓｐｈｉｎａｔｅ  ｇｒｏｕｐ）から選択され；Ｒ１１は、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロゲン、硫酸塩（ｓｕｌｆａｔｅ）、グルクロニド（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｄｅ）、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ−、−ＮＨＣＮ−、−ＣＨＯ、＝ＣＨＯＣＨ３、−ＣＯＯ塩、−ＯＳＯ２アルキル、−ＮＨ２、および−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｎから選択され；Ｘは、水素、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、ハロゲン、グルクロニド（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｄｅ）、−ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、−ＮＨＣＮ、−ＣＨＯ、−ＣＯＯ塩、−ＯＳＯ２アルキル、−ＳＨ、−ＳＣＨ３、−ＣＨ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］ＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−Ｎ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＣＮ、−ＳＯ２アルキル、−Ｂ（ＯＨ）２、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝Ｓ）ＣＨ３、および−ＮＨＮＨ２から選択され；ならびにＹは、水素、＝Ｏ、−ＯＣＯ（Ｒ６）および−ＯＨから選択され；この際、ｍは、０〜２０の整数であり、ｎは、０〜８の整数であり、記号−−−は、単結合または３または７位にケト基を形成しうる二重結合のどちらかを表し；および記号：
【００１４】
【化２】
0005981434.tif 000003
【００１５】
は、立体化学を問わず、あらゆる種類の結合を表し；ならびにそれらの化合物のそれぞれの光学異性体、立体化学異性体、水和物、溶媒和物、互変異性体および製薬上許容される塩である。
【００１６】
式Ｉの化合物の具体例を下記に示す。
【００１７】
【化３】
0005981434.tif 000004
【００１８】
少なくとも本発明の他の態様としては、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、特定の活性のある化合物に変換しうる好適な類似体が、その治療活性を発揮するために患者に投与された後に変換することができるデリバリーシステムに関する。
【００１９】
本発明の化合物は、哺乳類対象者への併用に基づいた（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ−ｂａｓｅｄ）効果的な疼痛の治療（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐａｉｎ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ）に対しても用いられうる。そのような方法は、従来公知の他の補佐的な疼痛の治療と組み合わせて式Ｉの化合物を投与することを含む。
【００２０】
本発明のあらゆる化合物は、薬、プロドラック、またはさらには活性な代謝物の形態で哺乳類対象者へ投与することを考慮してもよい。本発明の治療方法において、「投与」という語は、具体的に開示された化合物または具体的には開示されていないが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて患者への投与後に特定の化合物に変換され治療活性を示す化合物を用いて述べられた種々の条件の治療を包含しうる。
【００２１】
本発明の他の目的、特徴、恩恵および利点は、要約および後述する詳細な説明から明確なものであり、種々の化学療法化合物、方法および／または実施形態の知識を有する当業者であれば容易に理解されうるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、種々の細胞株における本発明の化合物Ｂ、Ｉおよび１、ならびにタモキシフェンのＥＣ５０値のグラフである。
【図２】図２は、ＩおよびＢのＥＲαおよびＥＲβへのＥ２活性％を示す。
【図３】図３は、ルシフェラーゼ分析で測定された（Ａ）化合物Ｉ、（Ｂ）化合物ＢのＥＲαおよびＥＲβへの応答を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
発明の詳細な説明
特に言及しない場合、本明細書で用いられるすべての技術的および科学的な語は、本発明の属する当業者により一般的に理解されうる意味と同様の意味を有し、また後述する意味を有するように理解されうる。本明細書で言及されるすべての出版物および特許は、参照によりその全てを援用される。特に言及しない場合、特定の化合物の言及は、ラセミ体およびそれらの混合物を包含する異性体を含む。特に言及しない場合、特定の化合物の言及は、たとえば本明細書で述べられたように、それらのイオン、塩、溶媒和物（たとえば、水和物）、保護された形態（ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  ｆｏｒｍｓ）、プロドラック、および他の立体異性体を含む。
【００２４】
相当する活性な化合物の塩、たとえば、製剤的に許容される塩を、準備し、精製し、および／または取り扱うのが便利または好ましい。製剤的に許容される塩としては、たとえば、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９７７，  “Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  Ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  Ｓａｌｔｓ，”  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．，  Ｖｏｌ．  ６６，  ｐｐ．  １−１９で述べられているもの、および本明細書で述べられているものである。
【００２５】
本発明の化合物は、疼痛の治療への応用性があり、よって本発明は、さらに抗侵害受容薬（ａｎｔｉ−ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔ）、または鎮痛剤を提供する。本明細書中、「抗侵害受容薬」の語は、治療する（ｔｒｅａｔｓ）、遅延させる（ｄｅｌａｙｓ）、軽減する（ｅｄｕｃｅｓ）、および／または疼痛耐性（ｔｈｅ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｏｆ，  ｐａｉｎ）を増加する化合物に関連する。鎮痛効果は、１以上のメカニズムまたはそれらの組み合わせを通して生じうる。
【００２６】
本発明は、さらに、治療によるヒトまたは動物身体の治療方法に使用するための活性化合物を提供する。この方法としては、そのような対象者に治療的に有効な量の活性な化合物を、好ましくは本明細書でさらに述べられるような医薬組成物の形態として、投与することを含む。
【００２７】
本明細書中、「エストロゲン」との語は、自然に生成され、細胞膜を透過しエストロゲン受容体と結合することにより細胞内で活性を示すことのできる、ステロイド様のホルモンを包含する。そのような化合物としては、これに制限されないが、エストラジオール、エストロール（ｅｓｔｒｏｌｓ）、およびエステレン（ｅｓｔｅｒｅｎｅｓ）が含まれる。
【００２８】
本明細書で使用する「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「療法（ｔｈｅｒａｐｙ）」の語は、疾患の治療に照らして、ヒトまたはヒト以外の動物（たとえば、獣医学的に）のいずれでも、哺乳類対象者の一般的な治療や療法に関連し、例えば、病気の進行の阻害、進行の減速や進行速度の停止、状態の改善および／または回復などの望まれる治療効果を示すものである。疾病予防としての治療も含まれており、経時的または同時に併用される２種またはそれ以上の治療と療法の併用も含む。以下のような治療や療法には限らないが、治療および療法としては、例えば化学療法（例えば、薬剤、抗体（例えば免疫治療で用いるもの）、プロドラッグ（例えば３位や１７位の適当な位置にリン酸誘導体やリン酸エステルを保護基に有するものや光力学療法、ＧＤＥＰＴ、ＡＤＥＰＴなどに用いる他の化合物）等の活性薬剤の投与）；外科手術；放射線治療；および遺伝子治療が含まれる。
【００２９】
本明細書で使用する「立体異性体」の語は、空間で原子の配向の仕方のみが互いに異なる異性体を意味する。本発明において特に重要な二つの立体異性体は、互いに鏡像関係であるかどうかによって決まるエナンチオマーとジアステレオマーである。好ましい実施形態では、特許請求される製剤は、単離され、光学分割され、および「実質的に他の異性体を含まない」ような化合物を含む。
【００３０】
本明細書で使用する「治療上有効な量」の語は、活性化合物の量、または、活性化合物を含む材料、組成物もしくは薬剤の形態の量に関し、妥当な利益／リスク比率に見合う何らかの所望の治療効果を与えるのに効果的である。
【００３１】
本明細書で使用する「患者」の語は哺乳類を含む動物をいい、好ましくはヒトである。
【００３２】
「患者の領域」は特定の領域または例えば疼痛に苦しむ患者の部分を参照し、時には患者の全体の領域をいう。そのような領域は、例えば、肺領域、胃腸領域、胸部領域、腎臓領域であり、同様に他の体の領域、組織、リンパ球、受容器官、血管および循環系を含む器官など、並びに癌組織である。「患者の領域」は例えば開示された化合物および組成物で治療される領域を含む。「患者の領域」は外部または内部でありうる。
【００３３】
「組織」の語は一般的に特定の機能を果たす分化した細胞をいう。「組織」の語は個々の細胞または複数の細胞もしくは、例えば細胞膜や血液、器官のような集合体の細胞をいう。「組織」は個々の異常細胞や複数の異常細胞も含む。例えば、組織は胸部細胞を含む胸部組織、内皮および上皮、基底層（ｌａｍｉｎａｅ）を含む膜組織（ｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ  ｔｉｓｓｕｅ）、間質組織を含む結合組織、腫瘍組織を含む。
【００３４】
本発明において「アルキル」とは、炭素原子１〜２０の直鎖または分岐鎖のアルキルラジカルを意味し、好ましくは炭素原子１〜１２である。たとえば、これに制限されないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、２−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、および３−メチルペンチルなどが挙げられる。それぞれのアルキル基は、１、２または３以上の置換基、例えば、ハロゲン、ヒドロキシ、シクロアルキル、アリール、アルケニルまたはアルコキシ基などの置換基で置換されていてもよい。
【００３５】
「アリール」とは、単環（たとえば、フェニル）、多環（たとえば、ビフェニル）、または少なくとも１つが芳香族である縮合多環（たとえば、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル）を有する芳香族炭素環式のラジカルを意味する。アリール基は、また、ハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、またはアルコキシなどのモノ−、ジ−、またはトリ置換体であってもよい。
【００３６】
「ヘテロアリール」とは、窒素、酸素および硫黄から選択されるヘテロ原子を少なくともひとつおよび４つ以下含む５−，６−または７−員環の単環、縮合多環系を意味する。ヘテロアリール基としては、特に制限されないが、フラニル、チエニル、ピリジニル、ピリミジニル、ベンズイミダゾリル（ｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｙｌ）およびベンズオキサゾリルなどが挙げられる。ヘテロアリール基は、たとえば、ハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、またはアルコキシなどのモノ−、ジ−、またはトリ置換体であってもよい。
【００３７】
「シクロアルキル」とは、単環（たとえばジクロヘキシル）、多環（たとえばビシクロヘキシル）または縮合多環を有する炭素環式のラジカルを意味する。シクロアルキル基としては、１〜４のヘテロ原子を含んでいてもよい。さらに、シクロアルキル基は１以上の２重結合を有していてもよい。シクロアルキル基は、また、ハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルケニル、アリール、またはアルコキシなどのモノ−、ジ−、またはトリ置換体であってもよい。
【００３８】
「アルコキシ」とは、アルキル部分を有する酸素含有ラジカルを意味する。例としては、これに制限されないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシが挙げられる。アルコキシ基は、また、ハロゲン、ヒドロキシ、アリール、シクロアルキル、またはアルコキシなどのモノ−、ジ−、またはトリ置換体であってもよい。
【００３９】
「アルケニル」は、１〜３の二重結合を有する炭素数２〜２０、好ましくは２〜６の直鎖または分岐の炭化水素ラジカルを意味する。たとえば、エテニル（ｅｔｈｅｎｙｌ）、プロペニル、１−ブト−３−エニル（１−ｂｕｔ−３−ｅｎｙｌ）、１−ペント−３−エニル（１−ｐｅｎｔ−３−ｅｎｙｌ）、１−ヘキシ−５−エニル（１−ｈｅｘ−５−ｅｎｙｌ）を含む。アルケニル基は、また、ハロゲン、ヒドロキシ、アリール、シクロアルキル、またはアルコキシなどのモノ−、ジ−、またはトリ置換体であってもよい。
【００４０】
「ハロ」または「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素のハロゲンラジカルである。
【００４１】
「グルクロニド（ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ）」とは、グルクロン酸（ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）のグルコシドラジカルを意味する。
【００４２】
「硫酸塩（ｓｕｌｆａｔｅ）」との語は、一般式−ＯＳ（Ｏ）２−ＯＲ’（Ｒ’は水素、金属またはアルキル基）を有するラジカルを意味する。
【００４３】
「リン酸塩」との語は、一般式−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ’）２（Ｒ’は、それぞれ独立して、水素、金属またはアルキル基）を有するラジカルを意味する。
【００４４】
「ホスフィン酸塩（ｐｈｏｓｐｈｉｎａｔｅ）」とは、一般式−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ’）２（Ｒ’は、それぞれ独立して、水素、金属またはアルキル基）を有するラジカルを意味する。
【００４５】
「嵩高い基（ｂｕｌｋｙ  ｇｒｏｕｐ）」とは、それが結合する空間について立体的障害を生み出す置換基を意味し、ｔ−ブチル基などが挙げられる。
【００４６】
本明細書中で用いられる「アミノアルキル」とは、アミノ基をアルキル基上に有するアルキル基（この際、結合する部分はアルキル鎖の炭素である）を意味し、たとえば、Ｈ２Ｎ−ＣＨ２−、Ｈ２Ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−、Ｍｅ２ＮＣＨ２−などが挙げられる。本明細書中で用いられる「アルキルアミノ」とは、窒素原子に結合したアルキル基を有するアミノ基（この際、結合する部分はアミノ基の窒素原子を経由する）を意味し、たとえば、ＣＨ３ＮＨ−、ＥｔＮＨ−、ｉＰｒ−ＮＨ−などが挙げられる。連続したラジカルを用いた全ての他の語は、同様の規則に従う。
【００４７】
「デメチル（ｄｅｍｅｔｈｙｌ）」とは、メチル基がないことを意味する。
【００４８】
本明細書で用いられる「増殖細胞異常（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｃｅｌｌ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）」とは、腫瘍、原発性悪性腫瘍（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｔｕｍｏｒ）、他の過剰増殖性状態（ｈｙｐｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）のような疾患を意味する。「原発性悪性腫瘍（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｔｕｍｏｒ（ｓ））」および「がん（ｃａｎｃｅｒ（ｓ））」の語は、同様の意味で用いられる。
【００４９】
化合物
本発明は、特に、エストラジオールのＢ環上のＣ−６位に特定の修飾を有し、Ｃ環上のＣ−１３位にメチル基を有していない１３−デメチルエストラジオール誘導体に関する。少なくとも本発明の１つの態様としては、上記式（Ｉ）の一般的構造を有する化合物を目的とする。
【００５０】
本発明のひとつの形態において、好ましい化合物は、下記式Ｉａ：
【００５１】
【化４】
0005981434.tif 000005
【００５２】
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ＸおよびＹは、式Ｉで定義したものと同様である、
で示される一般的構造を有する。より好ましくは、Ｙは、＝Ｏおよび−ＯＨから選択され；Ｒ４は、水素、ハロおよびＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；Ｒ２は、水素、−ＯＨおよびハロから選択され；Ｒ３は、水素、ハロおよび−ＯＨから選択され；ならびにＸは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；ｍは、１〜２０の整数であり；ｎは、０〜８の整数であり；記号−−−は、単結合または二重結合のどちらかを表す。さらに好ましくは、Ｙは、（Ｓ）−ＯＨであり；Ｒ４は、水素およびアルキルから選択され；Ｒ２は、水素であり；Ｒ３は、水素であり；ならびにＸは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；ｍは１〜１２の整数であり；ｎは０〜４の整数である。
【００５３】
さらに、本発明の他の形態としては、式Ｉｂ：
【００５４】
【化５】
0005981434.tif 000006
【００５５】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＸは、式Ｉで定義したものと同様である、
で表される化学療法の化合物を目的とする。より好ましくは、Ｒ１は、水素、−ＯＨおよびハロから選択され；Ｒ４-は水素、ハロおよびＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；Ｒ２は、水素およびハロから選択され；Ｒ３は、水素、ハロおよび−ＯＨから選択され；ならびにＸは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；ｍは、１−２０の整数であり；ならびにｎは０−８の整数である。さらに好ましくは、Ｒ１は水素であり；Ｒ４-は水素またはアルキルから選択され；Ｒ２は水素であり；Ｒ３は水素であり；ならびにＸは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；ｍは１−１２の整数であり；ｎは０−４の整数であり；ならびにＣ−１７ヒドロキシは（Ｓ）配置である。
【００５６】
さらに本発明の他の形態は、式Ｉｃ：
【００５７】
【化６】
0005981434.tif 000007
【００５８】
式中、Ｒ１１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＸは、式Ｉで定義したものと同様である、
の化合物を目的とする。より好ましくは、Ｒ１１は水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；Ｒ４-は、水素、ハロおよびＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；Ｒ２は、水素およびハロから選択され；Ｒ３は、水素、ハロおよび−ＯＨから選択され；ならびにＸは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；ｍは１−２０の整数であり；ならびにｎは０−８の整数である。さらに好ましくは、Ｒ１１は水素であり；Ｒ４は水素またはアルキルから選択され；Ｒ２は水素であり；Ｒ３は水素であり；ならびにＸは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；ｍは１−１２の整数であり；ｎは０−４の整数であり；ならびにＣ−１７ヒドロキシは（Ｓ）配置である。
【００５９】
本発明の他の形態は、式Ｉｄ：
【００６０】
【化７】
0005981434.tif 000008
【００６１】
式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＸは、式Ｉで定義したものと同様である、
の化合物を目的とする。より好ましくは、Ｒ１は水素、−ＯＨおよびハロから選択され；Ｒ２は水素およびハロから選択され；ならびにＸは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；ｍは１−２０の整数であり；ならびにｎは０−８の整数である。さらに好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は水素であり；ｍは１−１２の整数であり；ｎは０−４の整数であり；ならびにＣ−１７ヒドロキシは（Ｓ）配置である。
【００６２】
さらに本発明の他の形態は、式Ｉｅ：
【００６３】
【化８】
0005981434.tif 000009
【００６４】
式中、ｍ、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、上記式Ｉで定義したものと同様であり、Ｚは−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−から選択される、
の化合物を目的とする。より好ましくは、ｍは１−１２であり、ｎは０−４であり、Ｒ１は、水素、−ＯＨおよびハロから選択され；Ｒ４-は、水素、ハロおよびＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；Ｒ２は、水素およびハロから選択され；Ｒ３は、水素、ハロおよび−ＯＨから選択され；Ｚは、−Ｏ−および−Ｓ−から選択され；ならびにＣ−１７ヒドロキシは（Ｓ）配置である。
【００６５】
さらに本発明の他の形態は、式Ｉｆ：
【００６６】
【化９】
0005981434.tif 000010
【００６７】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＸは、式Ｉで定義したものと同様である、
の化合物を目的とする。より好ましくは、Ｒ１は、水素、−ＯＨおよびハロから選択され；Ｒ４-は、水素、ハロおよびＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；Ｒ２は、水素およびハロから選択され；Ｒ３は、水素、ハロおよび−ＯＨから選択され；ならびにＸは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ  Ｎ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；ｍは１−２０の整数であり；ならびにｎは０−８の整数である。さらに好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は水素であり；ｍは１−１２の整数であり；ならびにｎは０−４の整数である。
【００６８】
本発明の形態である化合物は、医薬組成物に用いられる。そのような組成物は、上述した化合物、下記に例示した化合物または本明細書で言及した化合物から選択される１以上の化合物およびそれらの組み合わせを含みうる。ある実施形態においては、組成物は、製薬上許容されるキャリア成分を含みうる。特に制限されず、組成物は化合物のラセミ混合体を含みうる。ある実施形態においては、化合物はＳおよびＲエナンチオマーとして存在しうるが、好ましくは、実質的には他の異性体のない、それらの単離体および精製物である。Ｒ５またはＲ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルまたは置換されたアルキル、およびハロゲンから選択されうる。
【００６９】
本発明の化合物は、不斉中心を有し、ラセミ化合物、ラセミ混合物として、または個体として、および精製されたジアステレオマーまたはエナンチオマーとして生じうる。たとえば、（ＣｈｅｍＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａ、Ｖｅｒｓｉｏｎ  １２．０  またはそれと同等のものを用いて命名）
（８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物２）；
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（メトキシメチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物１）；
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物３）；
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物４）；
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物５）；
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（（（メトキシメチル）アミノ）メチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
メチル（（（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ジヒドロキシ−１３−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）メチル）カーバメート（化合物６）；
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−メトキシ−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物７）；
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（２−メトキシエチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物８）；
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（４−メトキシブチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物９）；
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（８−メトキシオクチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物１０）；
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イル  ステアレート（化合物１１）；
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（４−プロポキシブチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物１２）および
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（５−エトキシペンチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオールが挙げられる。
【００７０】
本発明の一形態は、６位置換されたエストラジオールのＲもしくはＳエナンチオマー、および／またはＲもしくはＳジアステレオマーの製造に関する。このような異性体の製造方法（たとえば不斉合成）や分離方法（たとえば分別結晶およびクラマトグラフィー法）は、一般的に当業者に知られている方法、または本明細書に提示された方法を採用することにより容易に得られる。たとえばＵＳ特許第７，８４６，９１８号明細書に記載の方法論は、その全体を本明細書に組み込まれる。
【００７１】
本発明の化合物は、下記スキームに示された方法により合成されうる。デメチルエストラジオール誘導体１は、１７−オン化合物Ｃ（１７−ｏｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｃ）を経由し、化合物ＣがオキシムＥに変換され製造される。続いて、Ｅのｄ環は開環して、メチレンプロパンニトリルＦを製造する。その後エポキシドＧを生成し、続いてｄ環の再形成により化合物Ｈが生成する。Ｈはその後還元されて化合物１が生成する。
【００７２】
【化１０】
0005981434.tif 000011
【００７３】
エストラジオール誘導体を製造する反応スキーム２−４を下記に示す。当該方法は、エストラジオールのｔ−ブチルジメチルシリル誘導体とＬＩＤＡＫＯＲ／ＴＨＦ／ホルムアルデヒドの反応を含み、６−ヒドロキシル化物を次のように得る；（ｉ）加水分解をしてエストラジオールの６−ヒドロキシメチル誘導体を得る；および／または（ｉｉ）ジメチル硫酸塩（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆａｔｅ）での処理、続いて加水分解をしてエストラジオールの６−メチロキシメチル誘導体を得る。
【００７４】
代替方法として、エストラジオール化合物は、以下のようなステップを含む方法で製造できる：（ｉ）エストラジオール化合物を保護する、（ｉｉ）６位にベンジル保護したエストラジオール化合物をＬＩＤＡＫＯＲ／ブチル−リチウム／ジイソプロピルアミン／カリウム  ｔｅｒｔ−アミレートでアシル化する、（ｉｉｉ）６位のアルデヒドをリチウムアルミニウムヒドリドで還元する、（ｉｖ）エストラジオール化合物の保護された領域を脱保護する。エストラジオール誘導体を製造する反応スキームを下記スキーム２に示す。
【００７５】
【化１１】
0005981434.tif 000012
【００７６】
【化１２】
0005981434.tif 000013
【００７７】
種々のアルキルオキシアルキル誘導体は、本発明によれば、アルキル化剤の選択を伴う。このような誘導体は、本発明を知る当業者には理解され、本明細書に記載された種類の合成手順を通して利用可能である。したがって、対応するアルキルオキシアルキル誘導体を製造するために、さまざまなＣ１〜Ｃ６アルキルおよび置換されたアルキル試薬が本明細書に記載されたように、制限なく使用することができる。
【００７８】
本発明の他の態様として、エストラジオールの６−アミノ誘導体を製造する方法が下記反応スキームに開示される。したがって、スキーム２−３に示された６−メトキシ化エストラジオール誘導体が採用され、それぞれそれらのアミノ誘導体に変換される。
【００７９】
【化１３】
0005981434.tif 000014
【００８０】
使用方法
本発明は、哺乳類対象者（たとえばヒトの患者）に対して疼痛を治療する方法に関する。このような方法において、対象者は、Ｉａ−Ｉｆを含む式Ｉの化合物、または製薬上許容されるそれらの塩もしくは加水分解物で治療される。
【００８１】
本発明の少なくとも他の態様においては、その治療を必要とする患者に対して、Ｉａ−Ｉｆを含む式Ｉの化合物の効果的な投与量を投与される。
【００８２】
本発明の一態様において、本明細書に開示された化合物は、前述した受容体のひとつのみに特異的に結合する。たとえば、式ＩおよびＩａ−Ｉｆの化合物は、特定のアゴニストおよび／または特定のエストロゲン受容体のアンタゴニストとして用いられる。好ましい実施形態としては、本発明の化合物は、ＥＲβアゴニストとして特異的に用いられる。このように、化合物は、ＥＲβによって媒介される疾患、たとえば疼痛、免疫異常または炎症などの疾患を治療または抑制する方法において用いられる。
【００８３】
さらに、疼痛を治療するための本発明の化合物の投与は、他の補助的な疼痛の治療と組み合わせてＩａ−Ｉｆを含む式Ｉの化合物の投与することを含む。ＥＲβアゴニストの使用を通した疼痛の調節は、Ｓｐｏｏｎｅｒ，  Ｍ．Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １５０，  ６７５−６８０  （２００７）；  Ｐｉｕ，  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ５９０，  ４２３−４２９  （２００８）；  Ｐｉｕ，  Ｆ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ５９２，  １５８−１５９  （２００８）；により実証されているようによく知られており、これらのすべては参照により本明細書に組み込まれる。
【００８４】
本発明の化合物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ分析の一端として用いることができ、たとえば、あるホスト候補が対象の化合物を用いた治療から利益を得られそうかどうかを決定するために用いることができる。本発明のどの活性化合物においても基準として用いることができ、たとえば、分析において、他の活性化合物、他の抗増殖性試薬、他の抗炎症試薬等を識別するために用いることができる。
【００８５】
少なくとも本発明のひとつの態様において、候補化合物はエストロゲン受容体アンタゴニスト活性（ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）を評価される。化合物がエストロゲン受容体アンタゴニストかどうかについての評価は、この技術分野で公知の多様な方法で実施されうる。本明細書において、そのような能力は、本明細書に記載のスクリーニング方法によるルシフェラーゼ結合分析を実施することにより決定した。
【００８６】
本発明の本態様の他の実施形態では、エストロゲン受容体結合能を、ＥＲ（α）またはＥＲ（β）のいずれかについての遺伝子発現コンストラクトを、ＥＲＥ−ｔｋ−ルシフェラーゼレポーターコンストラクトとともにＣＶ−１細胞に一過的に導入することで評価する。その後、その細胞は対照群と候補群に分け、対照群は未処理、またはエストラジオールのみ（１ｎＭ）で処理、候補群はエストラジオールに加えて、本発明の化合物を異なった濃度で処理した。１６〜２４時間後にその細胞を採取し、市販のアッセイキットを使ってルシフェラーゼ活性を試験した。
【００８７】
さらに本発明の他の態様では、候補化合物のＩＣ５０すなわち最大阻害濃度の半分の濃度を、インビボ使用における薬剤効力および効果的な投与法を調べるために決定した。当業者であれば、一般に知られる方法でかような情報を確認することができる。本技術分野においてよく開示されているように、ＩＣ５０は、特定の物質／分子が何らかの生化学的プロセスの５０％を阻害するのにどれくらいの量を要するかを測定し示す。本発明の場合には、候補化合物のＩＣ５０はビヒクル対照細胞に比較して５０％の応答を示す濃度として決定した。
【００８８】
本明細書で記載するように、本発明の化合物の塩は無毒の「製薬上許容される塩」である。しかしながら、他の塩もまた、本発明の化合物の調製や製薬上許容されうる塩の調製に有益である。本発明の化合物が塩基性の官能基を含むとき、「製薬上許容される塩」に含まれる塩は一般的に遊離塩基と適当な有機酸または無機酸との反応で製造される無毒な塩をいう。代表的な塩は本技術分野で知られる任意の塩を含む。本発明の化合物は酸性部位を有しており、適当な製薬上許容される塩はナトリウム塩やカリウム塩のようなアルカリ金属塩；カルシウム塩やマグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩；さらには４級アンモニウム塩のような適当な有機配位子を持つ塩を含みうる。
【００８９】
ヒト患者等の哺乳類対象者を治療するため、本発明の一以上の化合物、または製薬上許容される塩の有効量を、疼痛を有する哺乳類対象者に投与する。効果的な投与形態や投与方式、投与量は経験的に決定され、その決定は当該分野の技術的常識の範囲内である。その投与量は、当業者である医師、獣医師、臨床医師により、使用する特定の化合物の活性、病症の経過および／または進行、投与方法、化合物の排泄速度、患者の腎機能や肝機能、治療の持続期間、同じ患者に投与されている他の薬の種類、年齢、大きさ等の医学上知られたファクターによって変化することが理解される。ここで議論するように、本発明の化合物は、錠剤、カプセル（それぞれ持続性放出や時間放出製剤）、ピル、粉末、微粉化された組成物、顆粒剤、エリキシル剤、チンク剤、懸濁剤、シロップ、エマルジョンとして経口投与形態で投与される。同様に、それらは静脈（大量静注、点滴）や、服膣内、局所（例えば点眼剤）、皮下、筋肉内、経皮的（例えば、パッチ）形態、医薬分野の当業者に周知のすべての形態で投与され得る。さらに、通常の技術的知識を有する医師、獣医師、臨床医師は、症状の進行を予防し、処置し、停止するのに必要とされる効果的な量を容易にし、処方することができる。
【００９０】
本発明の経口投薬量は、示された効果を得るために使用するには、日あたり体重ｋｇあたり約０．０１ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）〜約１００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙの範囲であり、好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙであり、もっと好ましくは０．１〜５．０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙである。経口投与では、組成物は好ましくは、治療される患者に応じて症状の調整をするために、活性成分を０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００および５００ミリグラム含む錠剤の形態で提供される。薬剤は典型的には活性成分を約０．０１ｍｇから約５００ｍｇ含み、好ましくは活性成分を約１ｍｇから１００ｍｇ含む。静脈投与では、一定速度の点滴で、約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ／分の範囲の投与がもっとも好ましい。本発明の化合物は毎日１回で投与してもよく、合計日用量を毎日２回、３回、または４回の投与に分けてもよい。
【００９１】
上述のように、本発明の化合物は他の抗侵害剤（ａｎｔｉ−ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔｓ）や哺乳類対象者の治療計画を向上する薬剤と組み合わせて利用可能である。そのような組み合わせの個々の成分は、治療過程の異なった時に別個に、または、患者や患者のその治療の必要な部位に同時に別個に、または組み合わせた単一の形態で投与され得る。したがって、本発明はそのような同時のまた交互の治療の計画をすべて含むものと理解され、「投与」の語はそのように解釈される。標的とする癌症状を治療するのに有用な他の薬剤と本発明の化合物の組み合わせの範囲は、原則としてエストロゲン機能に関連する病気の治療に有効な任意の薬剤組成物との任意の組み合わせを含む。
【００９２】
プロドラッグの形態で活性化合物を調製、精製および／または取り扱うことが都合が良く、または望ましい。本明細書で用いる「プロドラッグ」の語は、代謝されたときに、所望の活性化合物を生成し、またはそのものの内部に活性化合物が存在する、化合物に関連する。これは、例えば３、６、１０または１７位等の適当な位置にリン酸エステル部位を追加することを含む。典型的には、プロドラッグは不活性であるか活性化合物よりも不活性であるが、取り扱いや、投与、代謝特性が有利でありうる。例えば、あるプロドラッグは活性化合物のエーテルであり、代謝によりエーテル基は分解し活性薬を生成する。また、あるプロドラッグは酵素作用により活性化され活性化合物を生成し、またはさらなる化学反応により活性化合物を生成する化合物である。このように、本明細書が開示する本発明の治療方法において、「投与」は、具体的に開示された、または具体的に開示されていないが、患者への投与後にインビボで特定の化合物に変換する化合物を用いた様々な状態の治療を含む。これらの化合物の代謝産物は、本発明の化合物を哺乳類対象者に導入することで生成する活性種を含む。
【００９３】
どんな理論にも拘束されることなく、エストラジオールは、Ｃ１７−ＯＨ（Ｈｉｓ５２４を介し）およびＣ３−ＯＨ（Ａｒｇ３９４およびＧｌｕ３５３を介し）を介してエストロゲン受容体（ＥＲαとＥＲβの両方）の受容体リガンドポケットに結合すると報告されている。エストラジオールと同様に、化合物１のジオールは類似のアミノ酸結合を介してＥＲαおよびＥＲβの同じリガンドポケットに結合しえる。好ましくは、ＥＲβのみに結合しえる。さらに、化合物１のＣ−６炭素のアルコキシアルキル置換基は通常のリガンド結合受容体の配座を変え、観察される抗腫瘍活性の原因となる改変された活性をもたらし得る。
【００９４】
組成物
本明細書で使用するように、「組成物」の語は、特定の量の特定の成分の組み合わせから直接または間接に結果として得られる任意の製品と同様に、特定の量で特定の成分を含む製品を包含することを意図する。
【００９５】
本発明の医薬製剤は、経口投与、経鼻投与、局所投与（口腔および舌下を含む）、直腸投与、膣内投与、および／または非経口投与を含む。投与経路にかかわらず、活性成分は本技術分野において公知の慣用法により製薬上許容される薬剤形態に製剤化される。
【００９６】
担体材料と結合される活性成分の量は、単一の薬剤形態に製造するには、治療されるホスト、特定の投与方式および上記した他の全てのファクターに応じて変化させる。一般的に、単一の薬剤形態に製造するために担体材料と結合される活性成分の量は、治療効果をもたらすのに有効な最も低い投与量である。
【００９７】
医薬製剤または組成物を調製する方法は、担体および選択的に一以上の補助的な成分の組み合わせに活性成分を導入するステップを含む。一般的に、製剤は、液体担体、もしくは微細に分割した固体担体の組み合わせ、またはその両方に、均一かつ密接に活性成分を導入して調製され、必要に応じて製品に成型する。
【００９８】
経口投与に適した本発明の製剤は、カプセルやカシェ剤、ピル、錠剤、ロゼンジ剤（通常、スクロースやアカシア、トラガカントなど矯味ベースを使用する）、粉末剤、顆粒剤の形態で、または、水もしくは水以外の液体の溶液もしくは懸濁液として、または水中油系、油中水系エマルジョンとして、またはエリキシルやシロップとして、またはさらにはトローチ（ゼラチンやグリセリン、スクロース、アカシアのような不活性ベースを使用する）として、および／または口腔洗浄剤として、提供され得、それぞれ所定量の活性成分を含む。活性成分はボーラス、舐剤または糊剤としても投与される。
【００９９】
経口投与（カプセル、錠剤、ピル、糖衣剤、粉末剤、顆粒剤など）のための本発明の固体薬剤形態においては、プロドラッグ、活性成分（微小な形態で）は、クエン酸ナトリウムやリン酸ジカルシウムおよび／または以下に示すような一つ以上の製薬上許容される担体と混合され得る：（１）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよび／またはケイ酸等の充填剤またはエクステンダー；（２）カルボキシメチルセルロース、アルギン酸エステル、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、および／またはアカシア等の結合剤；（３）グリセロール等の保湿剤；（４）寒天、炭酸カルシウム、芋デンプン、タピオカデンプン、アルギニン酸、ある種の珪酸塩、炭酸ナトリウム等の崩壊剤；（５）パラフィン等の溶液遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒｅｔａｒｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）；（６）４級アンモニウム化合物等の吸収促進剤；（７）セチルアルコール、モノステアリン酸グリセリン等の湿潤剤；（８）カオリン、ベントナイト粘度等の吸収剤；（９）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固化ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、それらの混合物のような潤滑剤：（１０）着色剤。カプセルや錠剤、ピルの場合、医薬成分は緩衝剤をも含む。同様のタイプの固体組成物は、高分子量のポリエチレングリコール等と同様に、ラクトースや乳糖等の賦形剤を使用する軟質および硬質充填ゼラチンカプセル内で、充填物として用いられうる。
【０１００】
錠剤は、選択的に一以上の補助的な成分と共に圧縮成型や鋳型成型により製造され得る。圧縮錠剤は、結合剤（例えばゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、グルコース酸ナトリウムデンプンやカルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性または分散剤を用いて製造されうる。鋳型錠剤は、不活性な液体希釈剤に湿らせた粉末状の活性成分の混合物を適当な機械内で成型することで製造しうる。
【０１０１】
錠剤や、糖衣剤、カプセル、ピル、顆粒剤等の本発明の医薬組成物の他の固体投薬形態は、任意に得ればよく、また、医薬調合技術において周知の腸溶コーティングおよび他のコーティング等のコーティングや外殻と共に製造してもよい。それらは、内部の活性成分が緩やかにまたは制御されて放出するように、例えば、所望の放出プロフィールを提供するために種々の比率で、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、リポソーム、および／またはマイクロスフィアを用いて製剤化されてもよい。それらは、例えば細菌捕捉フィルターでの濾過により殺菌されてもよい。それら組成物は、選択的に乳白剤を含んでもよく、活性成分を消化管の特定の部分でのみ、選択的に、遅延して放出する組成物であってもよい。使用し得る包埋組成物の例は、高分子物質とワックスを含む。活性成分はマイクロカプセル化された形態であってもよい。
【０１０２】
活性成分の経口投与のための液体薬剤形態は、製薬上許容し得るエマルジョンやマイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、エリキシル液を含む。活性成分に加えて、液体薬剤形態は、例えば水または他の溶媒、溶解剤、および、エチルアルコールやイソプロピルアルコール、酢酸エチル、ブチルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、グリコール、オイル（特に、綿実油や落花生油、とうもろこし油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、ごま油）、グリセロール、アミルアルコール、テトラヒドロフリルポリエチレングリコール、ソルビタンの脂肪酸エステル等の乳化剤、並びにそれらの混合物等の本技術分野で通常用いられる不活性希釈剤を含みうる。
【０１０３】
不活性希釈剤に加えて、経口組成物は、湿潤剤、乳化および懸濁剤、甘味、矯味、着色、芳香および防腐剤等の補助物質をも含むことができる。懸濁液は、活性成分に加えて、エトキシル化アルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、ソルビタンエステル、微結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、トラガカント、およびそれらの混合物等の懸濁剤を含んでもよい。
【０１０４】
直腸や膣内投与のための発明の薬剤組成物の剤形は、活性成分と一以上の適当な非刺激性賦形剤、またはココアバター、ポリエチレングリコール、ワックス、サリチル酸エステル等の担体とを混合して調製され得、室温で固体であるが体温では液体であり、したがって、直腸または膣腔で融解し活性成分を放出する、座薬として提供され得る。膣内投与に適した本発明の剤形は、適当な技術分野で公知の担体を含む、ペッサリーやタンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、スプレー剤形であってもよい。
【０１０５】
活性成分の局所的または経皮投与のための薬剤形態は、パウダースプレー、軟膏剤、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチ、吸引剤を含む。活性成分は、製薬上許容されうる担体、および任意の緩衝剤、または必要な噴射剤と共に、無菌状態で混合されうる。
【０１０６】
活性成分に加えて、軟膏剤、ペースト、クリームおよびゲルは、動物脂肪や植物脂肪、オイル、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、珪酸、タルク、酸化亜鉛またはそれらの混合物等の賦形剤を含んでいてもよい。粉末やスプレーは、活性成分に加えて、ラクトースやタルク、珪酸、水酸化アルミニウム、珪酸カルシウム、ポリアミドパウダーおよびこれらの混合物等の賦形剤を含んでいてもよい。スプレーは、さらに、クロロフルオロヒドロカーボン等の一般的な噴射剤、ブタンおよびプロパン等の揮発性の無置換炭化水素を含む。
【０１０７】
本発明の化合物は、適当な鼻腔用ビヒクルの局所的使用を介して、鼻腔投与形態で投与されてもよいし、または当該技術分野の技術者に周知の経皮用皮膚パッチの形態を使用し、経皮経路で投与されてもよい。経皮のデリバリーシステムは、その薬剤処方の連続的な投与を提供する。経皮パッチは活性成分を制御して体に供給する付加的な利点がある。そのような薬剤形態は、エラストマーマトリックス材料等の適当な媒体中に、溶解させるか、分散させるか、または、組み込むことで製造できる。吸収促進剤は皮膚を透過する活性成分の流れを増加するために使用される。そのような流れの速度は、速度制御膜を供給することまたは高分子マトリックスやゲルに活性成分を分散させることのいずれかで制御可能である。
【０１０８】
本発明の化合物は、小型単層ベシクルや大型単層ベシクル、多層ベシクル等のリポソームデリバリーシステムの形態で投与され得る。リポソームは、コレステロールやステアリルアミンまたはフォスファチジルコリン等の様々なリン脂質から形成され得る。
【０１０９】
本発明の化合物の他のデリバリー方式は、その化合物の分子が結合する個々の担体としてのモノクローナル抗体の利用によるデリバリーであり得る。本発明の化合物は標的指向性の薬剤担体としての可溶性ポリマーとも結合し得る。そのようなポリマーとしては、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシ−エチルアスパルトアミド−フェノール、ポリヒドロキシ−エチルアスパルトアミド−フェノール、またはパルミトイル残基のあるポリエチレンオキシド−ポリリシンが含まれる。さらに本発明の化合物は、薬剤の放出を制御するときに有用な生分解性ポリマーの一群に結合する。生分解性ポリマーは例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸およびポリグリコール酸の共重合体、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシブチル酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロック共重合体である。
【０１１０】
非経口的投与に適した本発明の薬剤組成物は、活性成分と、一以上の製薬上許容され得る無菌等張水性もしくは非水性溶液、懸濁液もしくはエマルジョン、または、抗酸化剤、緩衝液、患者の血液と等張にするための処方の溶質、懸濁もしくは増粘剤を含む、使用前に無菌注射溶液や分散液を再構成する無菌粉末と、を組み合わせて含む。
【０１１１】
本発明の医薬組成物に使用される、適した水性もしくは非水性担体の例は、水、エタノール、ポリオール（グリセロールやプロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、およびそれらの適当な混合物、オリーブ油等の植物油、エチルオレエート等のな注射可能な有機エステルを含む。適正な流動性が、例えば、レシチン等のコーティング剤の使用や、要求される粒子サイズの維持、界面活性剤の使用により維持され得る。
【０１１２】
これらの組成物は湿潤剤や乳化剤、分散剤のような補助剤をも含んでいてもよい。またその成分の中に砂糖や、塩化ナトリウムなどのような等張剤を含むことが好ましい場合がある。さらに、注射可能な薬理形態の遅延型吸収はモノステアリン酸アルミニウムやゼラチンのような吸収を遅らせる試薬の含有によりもたらされ得る。
【０１１３】
ある場合には、活性成分の効果を持続させるために、皮下、または筋肉注射から、薬剤の吸収を遅らせることが望ましい。これは水に溶解しにくい結晶質のまたは非晶質の懸濁液を使用することで達成され得る。活性成分の吸収速度は、むしろ、結晶サイズや結晶形に依存し得る、結晶質や非晶質の溶解速度に依存する。代わりに、活性成分の非経口的投与の吸収遅延はオイルビヒクルに活性成分を溶解または懸濁させることで達成される。
【０１１４】
注射可能な蓄積形態（ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  ｄｅｐｏｔ  ｆｏｒｍ）は、ポリラクチド−ポリグリコリドのような生分解性ポリマー内に活性成分のマイクロカプセルマトリックスを形成することにより作製される。ポリマーに対する活性成分の割合や使用されるポリマーの性質に依存して、活性成分の放出速度は制御されうる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）およびポリ（アンヒドリド）が含まれる。注射可能な蓄積処方は、生体組織に適合するリポソームまたはマイクロエマルジョンに活性成分を封じ込めて調製される。注射可能な材料は細菌捕捉フィルターを用いた濾過によって滅菌することも可能である。
【０１１５】
好ましくは、注射可能な薬剤形態でデリバリーされる組成物は、生体適合性高分子、ここで開示した化合物および生体適合性高分子を溶解させる生体適合性溶媒との適合形態を含み、生体適合性高分子、前記化合物（ｔｈｅ  ｉｎｓｔａｎｔ）および生体適合性溶媒の重量％は完成した組成物の全重量に基づき；さらに、十分な量の前記高分子を前記組成物内で使用し、血管部位への運搬により、高分子は沈殿でき、腫瘍増殖を停止するのに十分な量の活性化合物を放出することができる。
【０１１６】
本実施形態の他の態様では、前記組成物の適当な粘度が、好ましくは、４０℃で１０〜２００ｃＳｔの範囲で観察される。
【０１１７】
より好ましくは、組成物は、全成分の重量パーセントは、完成した組成物の全重量に基づき、生体適合性高分子を約１〜９５重量％の濃度で、活性化合物を約５〜約７５重量％の濃度で、および、生体適合性溶媒を約５〜約９５重量％で含み、さらに、組成物は、４０℃で、少なくとも１０〜約２００、より好ましくは、少なくとも約２００ｃＳｔの粘度を有する。
【０１１８】
生分解性高分子は、本技術分野で知られている。例えば、Ｄｕｎｎらの米国特許第４，９３８，６６３号明細書は、以下の生分解性高分子の例を開示している：ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、ポリアンヒドリド、ポリアミド、ポリウレタン、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリジオキサノン、ポリアセタール、ポリケタール、ポリカーボネート、ポリオルトカーボネート、ポリフォスファゼン、ポリヒドロキシブチレート、ポリヒドロキシバレレート、ポリアルキレンオキサレート、ポリアルキレンサクシネート、ポリ（マレイン酸）、ポリ（アミノ酸）、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリヒドロキシセルロース、キチン、キトサンおよびコポリマー、ターポリマーおよびこれらの組み合わせ等の直鎖高分子。他の生分解性高分子は、例えば、ゼラチン、コラーゲンなどを含む。
【０１１９】
適当な非生分解性生体適合性高分子は、例示として、セルロースアセテート、エチレンビニルアルコールコポリマー、ヒドロゲル（例えば、アクリル）、ポリアクリロニトリル、ポリビニルアセテート、セルロースアセテートブチレート、ニトロセルロース、ウレタン／カーボネートのコポリマー、スチレン／マレイン酸のコポリマー、およびそれらの組み合わせを含む。
【０１２０】
好ましい生体適合性高分子は、アクリル系高分子、セルロースジアセテートおよびエチレンビニルアルコールコポリマー、ポリエチレングリコール、キトサン、コラーゲン並びにゼラチンを含み得る。そのような高分子は、市販品を入手するかこの分野で認められている手順で製造できる。好ましい実施形態では、ゲルパーミエーションクロマトグラフィ組成で決定した数平均分子量が、約５、０００〜約２００、０００、より好ましくは約２５，０００〜約１８０，０００、さらに好ましくは約５０，０００〜１００，０００である。
【０１２１】
組成物中に生体適合性造影剤を使用する本発明の他の態様は、関心のある局所的な部位の臨床上の進行を観察しモニターすることである。これらの造影剤は、水溶性造影剤および非水溶性造影剤を含む。好ましくは、非水溶性造影剤は、硫酸バリウム、タンタル粉末および酸化タンタルからなる群から選択される生体適合性材料である。さらに好ましい実施形態では、生体適合性溶媒は水、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、エタノール、乳酸エチルまたはアセトンである。
【０１２２】
製剤は、例えばアンプルおよびバイアル等の単位用量または多用量密封容器に入れて提供でき、注射のために使用直前に滅菌液体担体、例えば水、の添加のみを必要とする、凍結乾燥した状態で貯蔵することもできる。即時の注射用液体や懸濁液は、前記の種類の滅菌粉末、顆粒剤、ナノ粒子および錠剤から調製されてもよい。
【０１２３】
本発明の医薬組成物は、以下の適合を含む動物用製剤の形態で使用してもよい：（１）例えば、飲薬方（水性または非水性溶液、懸濁液）、錠剤、丸薬、粉末、顆粒剤、飼料と混ぜるペレット、舌に適用するペースト等の経口投与、（２）「アンプル」として、例えば無菌溶液もしくは懸濁液を経皮もしくは筋肉内、静脈注射による、または適当な場合には、乳頭から動物の乳房に懸濁液または溶液を導入する乳房注射による、非経口的投与、（３）例えば、クリーム、軟膏剤もしくはスプレーとして皮膚に塗布する局所適用、（４）例えば膣座薬、クリーム、泡、または当業者による関心のある領域に適した他の方法として、膣内投与。
【０１２４】
本発明は特定の実施例を参照して記載しているが、本技術分野の当業者は、本発明は記載した実施例以外によっても実施され、これらは説明のための目的で示され限定の目的で示されていないことを理解するだろう。したがって、請求の範囲はここに含まれている実施例の記述に限定されるものではない。
【０１２５】
Ｉａ−Ｉｆを含む式Ｉで例示される本発明の化合物の製造について、スキームで与えられる一般的な方法を以下の実施例によってさらに説明する。特に規定されない限り、すべての原料および試薬は標準的な市販グレードのものであり、さらに精製することなく使われているか、通常の方法でそのような材料から容易に調製されている。有機合成分野の当業者は出発原料や反応条件は所望の最終生成物を得るために変更し得ることを理解するであろう。すべての化合物はＣｈｅｍＢｉｏＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａ  １１．０もしくは１２．０、または同様のバージョンを用いて命名した。
【実施例】
【０１２６】
実施例１
６−ヒドロキシメチル−アンドロスタ−１，４−ジエン−３，１７−ジオンの製造方法
反応系において、十分な量の（＋）アンドロスタ−１，４−ジエン−３，１７−ジオン（ＡＤＤ）、１２．２当量のピロリジン、触媒の酢酸、変性エタノール（９５／５  エタノール／メタノール）、および６〜７％のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）を３０℃〜４０℃にて少なくとも１６時間加熱し、１，３−ジピロリジノアンドロスタ−３，５−ジエン−１７−オンを生成した。一旦、ＡＤＤ含有量がＨＰＬＣ面積によれば３％未満になる、または定常的になる、または最終的なジピロリジノアンドロスタジエンがＡＤＤに戻り始めたら、反応混合物は５±５℃に冷やす。得られた化合物を集め、冷変性エタノールで洗浄した。収率は通常乾燥後で７０〜８０％であり、純度はＨＰＬＣの面積パーセントによれば通常、無水ベースで、９０〜９５％である。
【０１２７】
得られた１，３−ジピロリジノアンドロスタ−３，５−ジエン−１７−オン１当量を、室温にて１０ｍｌ／ｇのジクロロメタン中の２．６当量のホルマリン（ホルムアルデヒド）と混合した。反応混合物を２％硫酸溶液でｐＨ約２に酸性化する。その後、有機層が形成され、それを２％硫酸および１：１の水／食塩水で洗浄した。溶媒をトルエン（約１０ｍｌ／ｇ）に変え、トルエン交換が進むにつれ、生成物が結晶化する。前記生成物を集め、洗浄し、乾燥して６−ヒドロキシメチル−アンドロスタ−１，４−ジエン−３，１７−ジオンを得た。もし望めば当業者は６位の立体化学を当該技術分野の既知技術によりさらに変更できる。
【０１２８】
実施例２
化合物ＢおよびＢ’の製造方法
スキーム２に示されるように、エストラジオール化合物ＢおよびＢ’を以下の方法で合成した。保護したエストラジオール化合物を、触媒としてトルエンスルホン酸またはカンファースルホン酸を用いて、β−エストラジオールとジヒドロピランとのＴＨＦ中での反応により合成する。当業者であれば、この反応は平衡反応であり、そのような条件では完了しないことが理解できる。反応混合物中に、１置換基が保護された両方の（ｂｏｔｈ  ｔｈｅ  ｍｏｎｏ−ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ）エストラジオールが確認できる。そのような粗反応混合物を、所望のｂｉｓ−ＴＨＰエストラジオールを得るためにアセトニトリルを用いて粉末化工程を実施し、約７０％の収率で結晶化する。
【０１２９】
スキーム２に示すように、ＬｉＤＡＫＯＲ（ブチルリチウム、ジイソプロピルアミンおよびカリウム  ｔｅｒｔ−アミレート）で示される強塩基混合物を用いたベンジルの６位でのアシル化を経由し、中間体のアルデヒドが得られる。当業者であれば、−７０℃の条件下で、ベンジル位のプロトンが引き抜かれることを理解できる。中間体のアルデヒドをカラムクロマトグラフィーで精製し、収率約５０％のシロップを得る。過剰の水素化リチウムアルミニウムによるアルデヒドの還元により、ガラス状の泡であるラセミ体のヒドロキシメチルエストラジオール化合物が高収率で得られる。
【０１３０】
化合物ＢおよびＢ’を製造する目的で、ラセミ体のヒドロキシメチルエストラジオール化合物を水素化ナトリウムおよびヨウ化メチルでメチル化することにより、メトキシメチル中間体化合物を製造する。メトキシメチル中間体化合物はカラムクロマトグラフィーで精製し、ガラス状の泡を得る。保護基の脱保護により、脱保護されたラセミ体の６−メトキシメチルエストラジオールを得る。キラル分離（ｃｈｉｒａｌ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ）ＨＰＬＣを用いてエナンチオマーの分離を実施することにより、化合物ＢおよびＢ’を得る。化合物Ｂは、キラル純度＞９５：５（Ｒ：Ｓ）が実現される。化合物Ｂ’はキラル純度８６：１４（Ｓ：Ｒ）が実現される。当業者であれば、４位と６位のプロトンを診断する、６位の絶対立体配置の決定にＮＭＲを用いるのが好適である。
【０１３１】
実施例３
化合物ＤおよびＥの製造方法
実施例２に記載の方法と同様の方法を用いて、ラセミ体のヒドロキシメチルエストラジオール化合物を合成する。当該化合物の脱保護はメタノール中の触媒の塩化水素を用いて達成され、得られたラセミ体トリオールは、キラル分離ＨＰＬＣにより２つの留分に分け、一つは化合物Ｄを多く含み、もう一つは化合物Ｅを多く含んでいる。それぞれの化合物は、キラル純度＞９５：５  Ｒ：ＳおよびＳ：Ｒがそれぞれ実現される。６位の絶対立体配置は、４位と６位のプロトンを診断する、ＮＭＲにより決定される。
【０１３２】
実施例４
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−１７−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン（Ａ）−市販されている（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６−デカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７（６Ｈ）−ジオン（２００ｇ、０．６０８ｍｏｌ）を、５Ｌの３つ口フラスコに入れ、エタノール（１．３Ｌ）および水（４００ｍＬ）に溶解する。得られた混合物を氷浴で０℃まで冷却する。その後、ＮａＢＨ４の溶液（４０％ＮａＯＨ中１２ｗｔ％、４２．５ｍＬ、０．１８２ｍｏｌ）を滴下して加え、温度を５℃以下に維持する。得られた混合物を２時間、＜１０℃で撹拌する。反応混合物をＬＣ−ＭＳで、９５％までの変換率＋５％を超える還元率を示すのを確認する。次に、反応混合物を水（４００ｍＬ）でクエンチし、６Ｎ  ＨＣｌ水溶液を添加することによりｐＨをｐＨ３〜４に調整する。続いて、混合物を３Ｌ丸底フラスコに移し、減圧下で揮発物を除去する。残った水溶混合物をＴＢＭＥ（３×５００ｍＬ）で抽出する。混合した有機層を飽和ＮａＨＣＯ３（１Ｌ）、水（１Ｌ）および食塩水（１Ｌ）で洗浄した。最後に、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥、ろ過し、減圧下で濃縮して、淡黄色固体のジエノンＡ（１８８ｇ、ｃｙ９４％）を得た。生成物は、１ＨＮＭＲおよびＨＰＬＣ−ＭＳにより〜９５％＋〜５％を超える還元率を同定する。
【０１３３】
実施例５
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（Ｉ）の製造方法
ａ）（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−クロロメチルメチルエーテル（７．０ｍＬ、９２．０ｍｍｏｌ）を、１００ｍＬのＴＨＦ中のβ−エストラジオール（５ｇ、１８．４ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１６．０ｍＬ、９２ｍｍｏｌ）の溶液に添加する。反応混合物を還流するまで加熱し、１８時間撹拌する。ＴＨＦを真空で除去し、黄色／茶色のオイルを水とＣＨ２Ｃｌ２との間で分離する。有機層は分離し、食塩水で洗浄、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過をし、真空で濃縮して金色のオイルを得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィ（１０％  ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）による精製を行い、粘性のある透明なオイルの表題の化合物（５．７ｇ、８６％）を得た。
【０１３４】
ｂ）（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−オール−アルゴン雰囲気下の−７８℃に冷却したカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８．８７ｇ、７９．０ｍｍｏｌ）とジイソプロピルアミン（１１．２ｍＬ、７９．０ｍｍｏｌ）の８０ｍＬの無水ＴＨＦの溶液に、ｎ−ブチルリチウム（４９．４ｍＬ、７９．０ｍｍｏｌ、ヘキサン中１．６Ｍ）を滴下して加える。反応混合物を−７８℃で３０〜４５分撹拌する。その後、ＴＨＦ４５ｍＬ中のａ）からの化合物（５．７ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、反応混合物を−７８℃で３時間撹拌する。ａ）からの化合物の添加の間、反応は深い赤色に変化する。その後、トリメチルボレート（１０．６ｍＬ、９４．８ｍｍｏｌ）をゆっくり添加し、混合物を０℃まで温め、２時間撹拌する。続いて過酸化水素（３０％水溶液２４ｍＬ）を加え、反応混合物を室温まで温め、さらに１時間攪拌する。反応は０℃まで冷却し、注意深く１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（７０ｍＬ）でクエンチする。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（２×）で抽出し、混合した有機抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空で濃縮し、黄色／茶色のオイルを得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィ（２５％  ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）による精製により、白色固体の表題の化合物（３，５ｇ、５９％）を得た。
【０１３５】
ｃ）（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−オン−デス・マーチンペルヨージナン（Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ  Ｐｅｒｉｏｄｉｎａｎｅ）（９．４６ｇ、２２．３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２３００ｍＬ中のｂ）からの化合物（７．０ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）の溶液に分割（ｐｏｒｔｉｏｎｗｉｓｅ）して添加する。得られた反応混合物を室温で３時間撹拌する。混合物を水に注ぎ、層を分離させる。水層をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、混合した有機抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空で濃縮して、どろどろした（ｇｏｏｅｙ）茶色固体を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィ（１５％  ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）による精製により、粘性のある淡黄色オイルの表題の化合物（６．０ｇ、８６％）を得た。
【０１３６】
ｄ）エチル２−（（（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イリデン）アセテート−トリエチルフォスフォノアセテート（４．１ｍＬ、２０．８ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ２５ｍＬ中の水素化ナトリウム（８３２ｍｇ、２０．８ｍｍｏｌ）の混合物に室温で添加する。約１０分後、ＴＨＦ１０ｍＬ中のｃ）からの化合物（３．９ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加える。得られた反応混合物を密閉したチューブ中で、７２時間、還流するまで加熱する。混合物は真空下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（５％  ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘから４０％  ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘの勾配）で精製し、透明な粘性のあるオイル状の表題の化合物（３．４ｇ、７４％）を得た。
【０１３７】
ｅ）２−（（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イリデン）エタノール−ＴＨＦ６５ｍＬ中のｄ）からの化合物（３．１ｇ、６．９７ｍｍｏｌ）の溶液を、水素化アルミニウムリチウム（５．２ｍＬ、１０．４６ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中２Ｍ）の０℃滴下により処理する。氷浴を除去し、反応混合物を室温で１５分間撹拌する。反応を０℃まで冷却し、注意深く１．３ｍＬの水、続いて２．６ｍＬの２Ｎ  ＮａＯＨ、その後１．３ｍＬの水を添加することでクエンチした。混合物は白色固体状態となるまで激しく撹拌する。混合物をろ過し、ろ液を真空下で濃縮し、透明なオイル状の表題の化合物（２．８ｇ、９９％）を得た。
【０１３８】
ｆ）２−（（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）アセトアルデヒド−酢酸エチル１００ｍＬ中のｅ）からの化合物（３．０９ｇ、７．６８ｍｍｏｌ）および１０％  Ｐｄ／Ｃ（５００ｍｇ）の混合物を、室温で５分間Ｈ２（ｇ）４０ｐｓｉ下で撹拌する。混合物をセライトでろ過し、セライトを酢酸エチルでよく洗浄する。ろ液を真空下で濃縮し、淡黄色オイル（３．１ｇ）を得た。オイルを１００ｍＬのジクロロメタンに溶解し、デス・マーチンペルヨージナン（３．９ｇ、９．２２ｍｍｏｌ）を分割して添加する。得られた反応混合物を室温で３０分間撹拌する。混合物を水に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。混合した有機抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空下で濃縮し、茶色固体を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィ（１５％  ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）の精製により、透明なオイル状の表題の化合物（２．０ｇ、６５％）を得た。
【０１３９】
ｇ）４−（（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）ブテ−２−エン−１−オール−リチウム  ビス（トリメチルシリル）アミド（１８．４ｍＬ、１８．４ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１．０Ｍ）を、ＴＨＦ６０ｍＬ中の（２−ヒドロキシエチル）トリフェニルホスフォニウムブロマイド（３．３７ｇ、８．７０ｍｍｏｌ）懸濁液に０℃で滴下して添加する。１時間後、きつね色溶液を、ＴＨＦ１０ｍＬ１滴（ｄｒｏｐｗｉｓｅ）中のｆ）からの化合物（１．４ｇ、３．４８ｍｍｏｌ）の溶液で処理する。得られた反応混合物を０℃で４０分間撹拌した後、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチする。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（２×）で抽出し、混合した有機抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮して茶色のオイルを得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィ（２０％  ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘから７５％  ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘの勾配）の精製により、黄色の粘性のあるオイル状の表題の化合物（６８０ｍｇ、４５％）を得た。
【０１４０】
ｈ）４−（（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）ブテ−２−エナール−デス・マーチンペルヨージナン（４３７ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２１５ｍＬ中のｇ）からの化合物（３７０ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）の溶液に室温で加える。得られた反応混合物を１０分間撹拌した後、水に注ぐ。層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（２×）で抽出する。混合した有機抽出物を、食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空下で濃縮して茶色のオイルを得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィ（５％  ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２から１０％  ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２の勾配）の精製により、淡黄色の粘性のあるオイル状の表題の化合物（３５８ｍｇ、８６％）を得た。
【０１４１】
ｉ）６−（（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）ヘキサ−２，４−ジエン−１−オール−リチウム  ビス（トリメチルシリル）アミド（４．３ｍＬ、４．２９ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１．０Ｍ）を、ＴＨＦ１４ｍＬ中の（２−ヒドロキシエチル）トリフェニルホスフォニウムブロマイド（７８６ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）の懸濁液に０℃で滴下して添加する。３０分後、きつね色溶液を、ＴＨＦ２ｍＬ中のｈ）からの化合物（３４５ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）の滴下により処理する。得られた反応混合物を０℃で２０分間撹拌し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチする。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（２×）で抽出し、混合した有機抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮して茶色のオイルを得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィ（５％  ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２から４０％  ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２の勾配）の精製により、黄色の粘性のあるオイル状の表題の化合物（１４０ｍｇ、３８％）を得た。
【０１４２】
ｊ）（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（６−メトキシヘキサ−２，４−ジエン−１−イル）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−ｉ）中の化合物（１３５ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の溶液を０℃まで冷却し、水素化ナトリウム（１２０ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を分割して添加する。５〜１０分後、ヨードメタン（０．１９ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）を滴下して添加し、得られた反応混合物を室温まで温め、４時間撹拌する。ＥｔＯＡｃを加え、反応を水で注意深くクエンチする。層を分離し、有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、濃縮して茶色のオイル状残留物を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィ（５％  ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘから２０％  ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘの勾配）の精製により、透明なオイル状の表題の化合物（９２ｍｇ、６５％）を得た。
【０１４３】
ｋ）（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−５〜１０ｍＬの酢酸エチル中のｊ）中の化合物（９０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）および１０％  Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）の混合物を、Ｈ２（ｇ）の風船下で室温で１６時間撹拌する。混合物はセライトを用いてろ過し、セライトは酢酸エチルでよく洗浄する。ろ液を真空下で濃縮し、透明なオイル状の表題の化合物（９０ｍｇ、９９％）を得た。
【０１４４】
ｌ）（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（Ｉ）−６Ｎ  ＨＣｌおよびＴＨＦのそれぞれ１．５ｍＬ中のｋ）からの化合物（９０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）の溶液を室温で５時間撹拌する。反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×）で抽出する。混合した有機抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し、真空下で濃縮して透明なオイル状の残留物を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィ（ＣＨ２Ｃｌ２から３０％  ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２の勾配）の精製により、白色固体泡状のＩ（３８ｍｇ、５２％）を得た。
【０１４５】
実施例６
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（Ｂ）−２０Ｌのフランジフラスコを加熱コイル中に配置し、最上部にＮ２ガス導入口を有するコンデンサークーラー、メカニカルスターラー、撹拌棒＋ブレードおよび２つのガラスストッパーを配備した。その後、組立装置（ｓｅｔｕｐ）を１９０℃で３時間加熱し、Ｎ２雰囲気下で週末の間静置した。Ｎ２ガス導入口をアルゴン導入口で置き換え、組立装置をアルゴンブリード下においた。フラスコを無水ＴＨＦ（４Ｌ、新ボトル）でチャージした。その後、リチウムワイヤー（２８．８ｇ、４．６１ｍｏｌ、鉱油中に保存）を細かい破片（〜０．３ｃｍ）に切断し、Ｎ２ガス雰囲気下、ヘプタンで破片を撹拌することによりオイルを除去した。ヘプタンを静かに注ぎ、反応フラスコ中の撹拌したＴＨＦ中にリチウム破片を添加した。ビフェニル（１７５．８ｇ、１．１４ｍｏｌ）を、撹拌によりすぐに消失する緑色を有するリチウム破片の表面で反応が行われるよう、ワンロットで加えた。５分の撹拌後、緑色が再び現れた。その後、ジフェニルメタン（９５．９ｇ、０．５７ｍｏｌ）をワンロットで添加した。得られた深い緑色の混合物を還流するまで加熱し（反応混合物が還流を開始するまでの最初の外部温度１３０℃、その後は外部温度１０８℃で還流を継続）、続いて無水ＴＨＦ１Ｌ中のジエノンＡ（１８８．７ｇ、０．５７ｍｏｌ）の溶液を滴下により添加した。６０分後、添加を終了し、黄色／茶色の粘着性の固体を得た。加熱を終了し、反応混合物を２時間以内に＜４０℃まで冷却した。反応混合物に１５分かけてＭｅＯＨ（３００ｍＬ）を添加してクエンチし、粘性のあるゼリー状の黄色混合物を形成した。次に、反応混合物を６Ｍ  ＨＣｌ溶液の１時間かけての滴加によりｐＨ２〜４にした。黄色の混合物が得られた。混合物を水（２Ｌ）で希釈し、１５分間撹拌した。得られた２層混合物を２０Ｌの丸底フラスコに移し、揮発物（ＴＨＦ／  ＭｅＯＨ）を減圧下で除去した。残った酸性の水層をｔ−ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ）（２Ｌ）で抽出し、下層の水層を分離した（ＴＢＭＥ層は大部分のビフェニルおよびジフェニルを含有している）。有機層を水（１Ｌ）で洗浄した。その後、有機層を２Ｍ  ＫＯＨ溶液（２×１Ｌ）および水（１Ｌ）で洗浄した。混合した塩基性の水層を６Ｍ  ＨＣｌの添加によりｐＨ２〜４（ｐＨ紙）とした。適当なｐＨに達したら、固体が析出し、混合物がオフホワイトになった。ＴＢＭＥ（１５００ｍＬ）を加え、１５分間の撹拌後、透明な黄色の有機層および濁った黄色の水層が形成した。混合物を分液ロートに移し、さらに１ＬのＴＢＭＥを分液ロートに加え、混合物を激しく振とうした。２つの透明な層に分離した。水層をＴＢＭＥ（１Ｌ）で２回抽出し、両方の有機抽出層を混合した。混合した有機層を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１Ｌ）、水（１Ｌ）および食塩水（１Ｌ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥、ろ過し、真空下で濃縮し、淡黄色の固体Ｂ（１１７ｇ  粗生成物）を得た。
【０１４６】
実施例７
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１５，１６−オクタヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７（１４Ｈ）−オン（Ｃ）−ＤＭＳＯ（２００ｍＬ）およびジクロロメタン（ＤＣＭ）（２００ｍＬ）中のＢ（２０ｇ、６０ｍｍｏｌ）の５℃の溶液に、トリエチルアミン（５６ｍＬ、０．４ｍｏｌ）を加えた。次に、三酸化硫黄ピリジン複合体（４０ｇ、０．２５ｍｏｌ）を１５分かけてゆっくりと添加した。この間、温度を０℃〜５℃の間に維持した。その後、混合物を２００ｍＬの氷水に加え、６Ｎ  ＨＣｌ溶液でｐＨ＜１に酸性化した。得られた混合物をＤＣＭ（４×１００ｍＬ）で４回抽出した。混合した有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過し濃縮した。この反応を４回繰り返した（原料として合計５６ｇのＢ）。粗材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（２／３  ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）で精製し、４３ｇの白色固体（Ｃ）（７６％）の表題の化合物を得た。
【０１４７】
実施例８
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−１７−オキソ−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル  メタンスルホネート（Ｄ）−塩化メタンスルホニル（２７ｍＬ、０．３５ｍｏｌ）を、ピリジン（２７０ｍＬ）中の化合物Ｃ（４３．６ｇ、０．１３９ｍｏｌ）の溶液に０℃で滴下して添加した。反応は、室温で９０分間撹拌し、続いて水を添加した。析出物を形成した。ろ過後、固体をＤＣＭに溶解し、無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過し、濃縮して、白色固体の化合物Ｄ（５７．１ｇ、定量的）を得た。
【０１４８】
実施例９
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１７−（ヒドロキシイミノ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル  メタンスルホネート（Ｅ）−ヒドロキシルアミン塩酸塩（３０．３１ｇ、４７０ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（６０ｇ、８２０ｍｍｏｌ）を、無水エタノール（８００ｍＬ）中の化合物Ｄ（５７．１ｇ、１４６ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応は９０分間還流し、終夜で室温まで冷却した。続いて、反応混合物は水および酢酸エチルで希釈した。得られた層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。混合した有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および食塩水で洗浄した。溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過し、濃縮して、白色固体の表題の化合物Ｅ（４７ｇ、８０％）を得た。
【０１４９】
実施例１０
（４ｂＳ，８Ｓ，８ａＳ，１０Ｒ）−８−（２−シアノエチル）−１０−（メトキシメチル）−７−メチレン−４ｂ，５，６，７，８，８ａ，９，１０−オクタヒドロフェナントレン−２−イル  メタンスルホネート（Ｆ）−トリフルオロ酢酸（１．３ｍＬ）を、無水ＤＭＳＯ（５０ｍＬ）中の化合物Ｅ（１０ｇ、２４．５ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１５ｇ、７３．７ｍｍｏｌ）の溶液に０℃から５℃で滴下して添加した。２．５時間後、氷冷水を加えて、混合物をＤＣＭで３回抽出した。混合した有機層を水、飽和炭酸水素水溶液および食塩水で洗浄した。溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過し、濃縮した。反応は２×８ｇスケールおよび２×５ｇスケールで実施した。混合した粗材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（５０％  ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）で精製し、透明なオイル状の表題の化合物Ｆ（１１．９ｇ、２７％）を得た。副生成物を分離し、ＨＮＭＲを用いた。
【０１５０】
実施例１１
（１’Ｓ，４ａ’Ｓ，９’Ｒ，１０ａ’Ｒ）−１’−（２−シアノエチル）−９’−（メトキシメチル）−３’，４’，４ａ’，９’，１０’，１０ａ’−ヘキサヒドロ−１’Ｈ−スピロ［オキシラン−２，２’−フェナントレン］−７’−イル  メタンスルホネート（Ｇ）−ｍ−クロロペルオキシ安息香酸（８ｇ、３２．３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１５０ｍＬ）中の化合物Ｆ（４．２ｇ、１１．７８ｍｍｏｌ）の溶液に分割して添加し、反応を室温で２時間撹拌した。反応混合物を１０％ヨウ化カリウム水、１Ｍ  ヒドロ亜硫酸ナトリウム水、飽和炭酸水素ナトリウム水および食塩水で洗浄した。続いて溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過し、濃縮した。反応は２回繰り返した（３．９ｇおよび３．８ｇ）。混合した粗材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（１：４〜１：１  ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）で精製し、表題の化合物Ｇ（８．８ｇ、７２％収率）を得た。
【０１５１】
実施例１２
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１７−オキソ−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル  メタンスルホネート（Ｈ）−三フッ化ホウ素エーテル（Ｂｏｒｏｎ  ｔｒｉｆｌｏｕｒｉｄｅ  ｅｔｈｅｒａｔｅ）（２．２８ｍＬ、１６．９ｍｍｏｌ）を、無水トルエン（２２ｍＬ）中の化合物Ｇ（１．３６ｇ、３．３ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応を１５分間１００℃まで電子レンジ中で加熱した。室温まで冷却した後、硬い固体を形成した。固体からトルエンを除去した後、固体を飽和炭酸水素ナトリウム水および酢酸エチル（ＥＡ）で処理した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過し、濃縮した。この反応を繰り返した（１．４ｇ、０．６１３ｇ、０．８７ｇ、１．１ｘ４ｇ）。粗材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（５〜５０％  ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）で精製し、表題の化合物Ｈ（１．４１ｇ、１５％）を得た。
【０１５２】
実施例１３
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（１）−水素化アルミニウムリチウム（７００ｍｇ、１８．４５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０．０ｍＬ）中の化合物Ｈ（５５０ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加した。反応は１時間還流した。その後、反応は酒石酸Ｎａ／Ｋでクエンチし、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）およびＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で３回抽出した。有機層を５Ｎ  ＨＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄し、水層をＥＡ（２×５０ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過し、濃縮した。粗材料をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（０〜５０％  ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）で精製し、５０％の収率で表題の化合物１（２２０ｍｇ）を得た。同じ反応を５１０ｍｇの化合物Ｈを用いて繰り返し、１５０ｍｇの生成物を分離した。
【０１５３】
実施例１４
ルシフェラーゼ活性を利用したエストロゲン受容体結合能の決定方法
エストロゲン受容体−ネガティブＣＶ−１腎細胞は、湿潤５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で、１０％の牛血清と１００単位／ｍｌのペニシリン−ストレプトマイシンが添加された、４．５ｇ／Ｌグルコースを含有するダルベッコ改変イーグル培地に維持した。上記細胞を、１０％木炭−デキストラン−ストリップ牛血清を含むフェノールレッドフリーのダルベッコ改変イーグル培地中でウェルあたり２×１０５の密度で６−ウェルシャーレに培養した。製造者のプロトコルに従って、ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ試薬を使用してＣＶ−１細胞に核酸を導入した。核酸導入は、１．５μｇのレポータープラスミド（チミジンキナーゼプロモーター上流をクローンしたシングルＥＲＥおよびルシフェラーゼ遺伝子を含むＥＲＥ−ｔｋ−ルシフェラーゼを含んでいる）および０．５μｇのＥＲαまたはＥＲβ発現ベクター（それぞれ完全な長さのコード配列であるＣＭＶ−ＥＲαまたはＣＭＶ−ＥＲβを含む）を含む。翌日、細胞を未処理のまま（対照）、またはエストラジオールのみ（１ｎＭ）、もしくはエストラジオールに本発明の化合物を（濃度を変えながら）加えたものにより処理した。１６〜２４時間後、細胞を採取し、ルシフェラーゼ活性を分析した。
【０１５４】
開始時に、細胞単層を、氷冷下のリン酸緩衝生理食飽和食塩水で２度洗浄し、２５０μｌの１Ｘ細胞培養溶解試薬（プロメガ、マディソン、ＷＩ）中で１５分間培養した。細胞抽出液を新しい試験管に移し、ルシフェラーゼ分析システム（プロメガ）を使用して分析した。それぞれの分析では１０μｌの抽出液を９０μｌの１Ｘ細胞培養溶解試薬で希釈した。蛍光はＡｕｔｏＬｕｍａｔ  ＬＢ９５３発光光度計を使って測定した。
【０１５５】
本明細書に記載する結合分析により同定される化合物またはその塩は、エストロゲン受容体のリガンド結合部位でエストラジオールの結合を阻害する化合物である。具体的には、細胞増殖停止（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｓｔａｔａｓｉｓ）を引き起こし、したがって薬理活性を示すと想定されている化合物またはその塩である。
【０１５６】
ＣＶ−１細胞にふたつのプラスミドコンストラクト、レポーターコンストラクトＥＲＥ−ｔｋ−ルシフェラーゼおよびＣＭＶ−ＥＲ−βコンストラクトを用いて核酸導入した。エストラジオール処理細胞が１０−９Ｍ（１ｎＭ）エストラジオールＥ２）のみ添加されたのに対して、核酸導入した対照群（Ｃｔｒｌ）ＣＶ−１細胞は、未処理とした。本発明の化合物の場合は、それぞれの化合物が、１０−８Ｍ（１０ｎＭ）のみ、または１０−８Ｍプラス１０−９Ｍのエストラジオール（Ｅ２）のどちらかである。
【０１５７】
実施例１５
候補化合物のＩＣ５０値の決定方法
リストした細胞株を、当該細胞株に適した培地に約５％ＣＯ２、３７℃、９５％相対湿度で維持した。細胞は２、３日毎に継代培養し、きれいな９６ウェル平面プレートに１×１０４細胞／ウェルの密度で播種し、分析の開始前、約５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃で一晩培養した。細胞の生存能力分析を開始するとき、細胞プレート（１００μＬ）中の培地を新しい培地（１００μＬ）に置き換えた。試験物質を新たな培地に連続的に１：２に希釈し、複製し、最終の試験物質濃度が、２００μＬの合計容量中、０．４６、１．３７、４．１２、１２．３５、３７．０４、１１１．１、３３３．３、１０００μＭ（≦１％ＤＭＳＯ）となるように、セル（１００μＬ）に加えた。細胞を含んでいないウェルと、０．１％トリトン−Ｘで溶解させた細胞を含むウェルとを、ベースライン対照として使用した。タモキシフェンを各分析の既知対照として用い、ＤＭＳＯのみをビヒクル対照として用いた。試料は、湿潤５％ＣＯ２雰囲気下で、約３７℃で７２時間培養した。培養期間中、プレートを１日１回モニターし、集密状態に特に注意を払った。もし細胞が７２時間の培養時間経過前に集密したときは、実験をその時点で終了し、細胞の生存能力を以下に記載するように測定した。
【０１５８】
細胞の生存能を、蛍光によりＡＴＰレベルを決定するための市販キットを用いて決定した。つまり、細胞プレートから培地を除去し、１００μＬの新しい培地で置き換え、緩衝液および凍結乾燥した基質を室温で平衡にした。細胞プレートのウェルへの添加前に、緩衝液を用いて基質を再構成した（ウェルあたり１００μＬ）。プレートをＩｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ２００プレートリーダー中に載置し、１０分間振動させた後１０分間静置し、プレートを０．５秒の積分時間で減衰なしで読み取った。
【０１５９】
そのウェルの正味の発光を得るため、対照の平均ベースライン（トリトンＸ−１００または細胞のないウェル）を、全発光から差し引いた。この全体をＤＭＳＯのみの対照と比較した。ＩＣ５０は、ビヒクル対照細胞と比較して、５０％の応答をもたらす濃度として計算した。したがって、当業者はクレームした組成物のＲ配置（Ｃ−６位）は他の立体異性体よりも優れていることが理解できる。
【０１６０】
表Ｉは、組み換え型ＥＲαおよびＥＲβを用いたエストロゲン受容体へのＢ、Ｉ、１およびＥ２の結合能を示す。組み換え型ＥＲは、試験化合物の存在下または非存在下で、終夜４℃で、３Ｈ−Ｅ２とともに培養した。
【０１６１】
図１は、様々な細胞株における本発明の化合物Ｂ、Ｉ、１およびタモキシフェンのＥＣ５０値のグラフである。図２はＥＲαおよびＥＲβへのＩおよびＢのＥ２活性の％を示す。
【０１６２】
ＥＲαおよびＥＲβへのＩおよびＢの応答をルシフェラーゼ分析により測定した。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞に、ＥＲαまたはＥＲβのどちらかをエンコードした発現ベクターを用いて一時的に核酸導入し、ルシフェラーゼレポーターコンストラクトを同時導入した。細胞は試験物質の量を増やしながら２４時間３７℃で処理した。比較すると、図３はＥＲαおよびＥＲβへの１のＥ２活性の％を示す。図２および３ならびに表１より、ＢおよびＩと比較して、１は驚くほどＥＲβ特異的アゴニストであることがわかった。
【０１６３】
実施例１６
ＮＳＣＬ，  ＰａｎｃｒｅａｓおよびＯｖａｒｉａｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅｓにおける化合物１、ＢおよびＩの発現プロファイリング
研究は３つのヒト腫瘍細胞株：Ａ５４９、Ｐａｎｃ−１、およびＳＫ−ＯＶ−３を含む。株をそれぞれ２つのフラスコ内で生育し、おおよそ４０％の集密状態まで培養した。フラスコの１つは、培地にさまざまな濃度で薬を添加することにより処理した。他方の模擬処理（ｍｏｃｋ  ｔｒｅａｔｅｄ）用のフラスコは、薬を溶解し運搬するのに用いられたビヒクルのみで処理をした。処理および未処理のサンプルのペアから抽出されたＲＮＡについて、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｗｈｏｌｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ  （Ｇ４１１２Ｆ）でのマイクロアレイ分析を行った。
【０１６４】
それぞれの分析は、アレイにおける４１，０００の特異性ｍＲＮＡ検出器（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｍＲＮＡ  ｄｅｔｅｃｔｏｒｓ）のそれぞれに対するメッセンジャーＲＮＡの分布の違いを示している。それぞれの細胞株における処理と未処理のサンプルの直接比較により、薬処理から引き起こされるｍＲＮＡ発現量の変化について、極めて感度高く検出されている。それぞれの細胞株比較は、自己正常化されており（ｓｅｌｆ−ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ）、高い確信をもって、サンプルを通して結果を比較することができる。
【０１６５】
細胞の調製
３つのヒト腫瘍細胞株、Ａ５４９、Ｐａｎｃ−１およびＳＫ−ＯＶ−３は、それぞれ２つのフラスコ内で生育し、おおよそ４０％の集密状態まで培養した。フラスコの１つを、表１の濃度で化合物１を培地に添加することにより処理した。他方の模擬処理用のフラスコは、薬を溶解し運搬するのに用いられたビヒクルのみで処理をした。すべてのフラスコはさらに２４時間培養され、その後細胞を破砕（ｓｃｒａｐ）し、氷冷ＰＢＳ中で洗浄し、遠心分離により回収した。採取された細胞をすぐに凍結し、−８０℃以下で保存した。処理した細胞は、未処理細胞よりも少ない質量であったことは視覚的にも明らかである。
【０１６６】
ＲＮＡ精製
すべてのＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ−ｂａｓｅｄ細胞溶解を用いて凍結組織サンプルから調製し、続いて６５℃の温フェノール抽出およびＲＮｅａｓｙクロマトグラフィ精製を行った。精製したＲＮＡサンプルは分光光度法で分析した。ＲＮＡの濃度は２６０ｎｍ（Ａ２６０）の吸収を測定することにより決定した。ｐＨ１１で測定した場合、２６０ｎｍの１ユニットの吸収はｍＬあたりＲＮＡ３５μｇに相当する。
【０１６７】
ＲＮＡの質評価−Ａ２６０／Ａ２８０吸収比
２６０ｎｍおよび２８０ｎｍでの測定値の比（Ａ２６０／Ａ２８０）により、タンパク質のようなＵＶを吸収する混入物質に対するＲＮＡの純度が予測できる。ＲＮＡは約２．１という理論的Ａ２６０／Ａ２８０比を有する（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ・Ｃｌ、ｐＨ７．５）。この分析において、抽出されたＲＮＡのＡ２６０／Ａ２８０比が１．８以上であれば優れた結果であることを示す。
【０１６８】
ＲＮＡ質評価−キャピラリー電気泳動
キャピラリー電気泳動（Ａｇｉｌｅｎｔ  ＢｉｏＡｎａｌｙｚｅｒ）を用いて損傷のない２８Ｓおよび１８ＳリボソームＲＮＡ（ｒｉｂｏｓｏｍａｌ  ＲＮＡｓ）の比を決定することにより、ＲＮＡの相対整合性（ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ）の試験を行った。完全に損傷のないＲＮＡの２８Ｓ／１８Ｓ比は２．２である。アレイ分析を行ったすべてのＲＮＡは、１を超える比を有しており、この１は、２８Ｓ／１８Ｓ比の異なるサンプル間での内部の再現性（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ）の確認により決定される、信頼性をもって再現可能なマイクロアレイ（ｒｅｌｉａｂｌｙ  ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ  ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ）の結果における最小の２８Ｓ／１８Ｓ比である。
【０１６９】
プローブ産生（Ｐｒｏｂｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）およびチップハイブリダイゼーション（Ｃｈｉｐ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）
すべてのＲＮＡについて、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｌｏｗ  Ｉｎｐｕｔ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ反応への投入（ｉｎｐｕｔ）として、ＲＮＡ  １マイクログラムを用いて標識した。
【０１７０】
試験ＲＮＡはＣｙ５（６５０ｎｍ放射体（ｅｍｉｔｔｅｒ））で標識し、リファレンスＲＮＡはＣｙ３（５５０ｎｍ放射体）ヌクレオチドで標識した。標識、ハイブリダイゼーションおよびその後の洗浄はＡｇｉｌｅｎｔ  Ｈ１Ａｖ２  ヒト発現チップで実施した。得られたハイブリダイゼーションされたチップはＡｇｉｌｅｎｔマイクロアレイスキャナー上でスキャンされ、スキャンされた画像からそれぞれの検出器スポットの強度情報をＡｇｉｌｅｎｔ  ｆｅａｔｕｒｅ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎソフトウエアを用いて抽出した。データ画像およびそれぞれの画像から抽出された測定がセットで供給される。
【０１７１】
ハイブリダイゼーションの質の最も有効な試験は、それらのチップにプリントされた多くの遺伝子複製から報告される比の変化（ｖａｒｉａｎｃｅ）のレベルである。遺伝子プローブのセットはアレイのランダムな位置においてそれぞれ１０回プリントされる。すべてのセットのＬｏｇ比の標準偏差の平均値は、すべてのアレイのすべての標準偏差の推定量として用いられる。
【０１７２】
データおよび分析
すべての３つのハイブリダイゼーションについての重要なデータは、特定の転写パターンを示す遺伝子を識別することができる調査構築を容易にするためにＦｉｌｅＭａｋｅｒ  Ｐｒｏリレーショナル・データベースで回収された。報告されたデータは赤（処理）および緑（未処理）の背景抜き（ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ−ｓｕｂｔｒａｃｔｅｄ）の印である。これは、少なくともデータを改変した状態である。背景の「表面」は、ヒトＤＮＡに補完していない多数のプローブに基づいて、スライドを評価した。これらは、標識化したｃＲＮＡのアレイ表面への非特異的な結合および標識化したｃＲＮＡの固定化したＤＮＡオリゴマーへの非特異的な結合の両方の推定量として役に立つ。この情報を用いて、それぞれのプローブ付近の局所的なノイズが予測され、これはアレイ上のそれぞれ特定のプローブ特性においてオリゴヌクレオチド沈着領域で見られるシグナルから差し引かれる（ｇＢＧＳｕｂＳｉｇｎａｌ、ｒＢＧＳｕｂＳｉｇｎａｌ）。処理した細胞のＲＮＡおよび未処理の細胞のＲＮＡからのシグナル比は直接比およびＬｏｇ比の両方で報告される（比、Ｌｏｇ２比）。比は、それぞれのチャンネルにおける強度を標準化した反復プロセスで決定され、これにより、ほぼ同一の転写レベルを有する多数の遺伝子の強度の類似性を最大化するスカラーを見出すことができ、よって、当該比は、１に極めて近い比を有するはずである。
【０１７３】
比を標準化データとして計算した後、さまざまなコントロールサンプルおよび複製サンプルについて分析を行い、どのように再現可能か、そしてこの再現性がどのようにシグナル強度やノイズに依存して変化するかというモデルを構築する。同一の強度分布を示した単一のプロセスから赤および緑の強度がランダムに観察される場合には、これらのパラメータを用いて、それぞれの比が生じる可能性の予測が算出される。この可能性は、それぞれのサンプルで報告され、処理および未処理シグナル強度（ＰＶａｌＬｏｇＲａｔｉｏ）間において比が相違を示す可能性の指標である。この可能性は変化した遺伝子および未変化の遺伝子への結果を得るための閾値として用いられうる。データベースでは、ｐ≦０．００１の閾値は処理および未処理サンプル間のｍＲＮＡ発現量の有意な変化におけるカットポイントとして用いられる（Ｓｉｇ０．００１）。この閾値は、予想される擬陽性（ｆａｌｓｅ  ｐｏｓｉｔｉｖｅｓ）の数を、それぞれの分析において調査される〜４０，０００比を与える適当なレベルにまで減らす。未処理サンプルと比較した場合の有意な変化および変化の方向を示す分野（Ｆｉｅｌｄ）は、分析結果を３つからなる分類に減らす；１  未処理に対して高く制御されている、０  未処理に対して未変化、−１  未処理に対して低く制御されている（３分類）。この説明を用いて、単一または多重にセットされたどのような実験においても変化する遺伝子を識別する調査を容易に構築することができる。
【０１７４】
ＴＲＥＫ１およびＴＲＥＫ２における遺伝子影響（Ｇｅｎｅ  ｉｍｐａｃｔ）は、ＢまたはＩのない状態で、１と共にのみ観測される（表２参照）。具体的には、ＴＲＥＫ１の遺伝子転写は１の存在下で２〜５０倍に高く制御され、それに対して、ＴＲＥＫ２の遺伝子転写は１の存在下で８〜５０倍に高く制御される。ＴＲＥＫ１は、侵害受容器（ｎｏｃｉｃｅｐｔｏｒ）の励起が生じる温度閾値および温度範囲の定義において、ならびにそれが生じる際の励起強度において重要である。Ｎｏｅｌ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｊ．  ２８，  １３０８−１３１８  （２００８）、参照により本明細書に組み込まれる。同様に、ＴＲＥＫ２は、神経障害性の疼痛の知覚において重要である。Ｈｕａｎｇ，  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓ  ７０，  ６１８−６２４  （２００７）。１はＥＲβの特異的アゴニストを示し、ＴＲＥＫ１およびＴＲＫ２転写に重要な影響を有するため、本発明の６−置換１３−デメチルエストラジオール誘導体は疼痛の治療に有効性を示す。
【０１７５】
【表１】
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【０１７６】
【表２】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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