(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１個以上のポリペプチドを含むポリペプチド組成物であって、
前記１個以上のポリペプチドが、配列番号３５からなるポリペプチド、及び配列番号３５に対して９５％以上の同一性を有する配列からなるポリペプチドのいずれかを有し、
前記１個以上のポリペプチドが、マラリアに対する免疫応答を、脊椎動物において誘発することを特徴とするポリペプチド組成物。
【請求項２】
１個以上のポリペプチドが、配列番号３５からなるポリペプチドを有する請求項１に記載のポリペプチド組成物。
【請求項３】
配列番号２０、２８、３０、３１、及び３２からなるポリペプチドのいずれかから独立に選択される１個以上の更なるポリペプチドを更に含み、
前記１個以上のポリペプチドが、マラリアに対する免疫応答を、脊椎動物において誘発する請求項１から２のいずれかに記載のポリペプチド組成物。
【請求項４】
担体を更に含む請求項１から３のいずれかに記載のポリペプチド組成物。
【請求項５】
担体が、アジュバント及び賦形剤のいずれかを含む請求項４に記載のポリペプチド組成物。
【請求項６】
医薬における使用及び獣医学的使用の少なくともいずれかのための、請求項１から５のいずれかに記載のポリペプチド組成物。
【請求項７】
請求項１に記載の１個以上のポリペプチドと、
請求項３に記載の１個以上の更なるポリペプチド、担体、賦形剤、アジュバント、緩衝液、及び安定剤から選択される１個以上の更なる成分とを、混合する工程を含む、請求項１から６のいずれかに記載のポリペプチド組成物を製造する方法。
【請求項８】
請求項１から６のいずれかに記載のポリペプチド組成物中の１個以上のポリペプチドのコード配列を含む１個以上の核酸を含むことを特徴とする核酸構築物。
【請求項９】
プラスミド及び組換え体ウイルスのいずれかを含む請求項８に記載の核酸構築物。
【請求項１０】
請求項１から６のいずれかに記載のポリペプチド組成物、並びに請求項８及び９のいずれかに記載の核酸構築物のいずれかを含むことを特徴とするマラリアに対する薬剤組成物或いはワクチン組成物。
【請求項１１】
請求項１から６のいずれかに記載のポリペプチド組成物、並びに請求項８及び９のいずれかに記載の核酸構築物のいずれかと、適切な賦形剤及びアジュバントのいずれかとを混合する工程を含むことを特徴とする請求項１０に記載の薬剤組成物或いはワクチン組成物を製造する方法。
【請求項１２】
請求項１から６のいずれかに記載のポリペプチド組成物、請求項８及び９のいずれかに記載の核酸構築物、並びに請求項１０に記載の薬剤組成物或いはワクチン組成物のいずれかの、マラリアの治療及び予防のいずれかにおいて有効である薬剤或いはワクチンの製造における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペプチド配列、前記ペプチド配列を含む組成物、特に節足動物媒介性疾病に対するワクチンであって前記配列及び前記組成物を含むワクチン、及び前記配列の使用に関する。本発明は、特に、マラリアの１種以上の系統を含む、任意の１種以上のカ媒介性疾病からの保護を与えるワクチンに関する。
【背景技術】
【０００２】
疾病に対する防御は全ての動物の生存にとって重要であり、この目的のために用いられる防御機構が動物の免疫システムである。免疫システムの理解は、それゆえ、ヒトに及び同様に動物に対する新たなより洗練された治療の開発を理解するための鍵となる。
【０００３】
免疫システムの作動機構は、長年に亘って研究されている。このシステムは、多数の細胞種及び様々な分子から構成され、これらはシステムを非常に複雑にしている。長年の研究にも拘わらず、免疫システム成分の全範囲及び成分間の相互作用は、不完全にしか理解されていない。
【０００４】
何年も前には、ある特定の疾病から回復した人は、その疾病に対する将来のある種の防御を獲得しえるが、この人がまだ罹患していない疾病に対してはそのような防御は獲得し得ないと認識されていた。この免疫システムの基本的な様相は、当時は、ある種の病原体に一旦曝露されると免疫システムはその病原体に対するある種の「記憶」を獲得し、この「記憶」はその疾病に特異的であるというように理解されていた。
【０００５】
次第に、病原体のより無害な変異体への曝露が、より有害な変異体に対する防御を誘発し得ることが知られるようになってきた（例えば、牛痘に対する曝露が天然痘に対する防御を誘発し、不活化炭そ菌への曝露が生菌の炭そ菌への防御を誘発するなど）。このようにして、疾病に対する予防接種の考えが生じてきた。
【０００６】
現在、免疫システムは、先天性免疫及び適応免疫の少なくとも２つの区分を有することが知られている。先天性免疫システムは、病原体がシステムに侵入する前に、十分に機能しているが、適応免疫システムの機能は、病原体がシステムに侵入した後に開始される。適応免疫システムは、次に、その病原体に特異的な攻撃を開始する。先天性免疫システムは、例えば病原体などの異物を（名前が示すように）「食する」又は貪食するマクロファージなどの食細胞を含む多数の成分で構成されている。
【０００７】
本発明は、排他的にではないが典型的には、適応免疫システムに関し、特に断りがなければ、本明細書中で使用される「免疫システム」という用語は適応免疫システムを指す。
【０００８】
免疫システムがどのようにして機能するかについてより十分に理解するためには、免疫システムの個々の成分の役割を注意深く考慮しなければならない。適応免疫システムに関しては、病原体に対する免疫は、免疫システムの最も一般的な細胞種を構成するリンパ球の作用によって与えられることがよく知られている。リンパ球には、Ｂリンパ球とＴリンパ球の２種がある。これらは、一般に、それぞれＢ細胞及びＴ細胞と言われる。
【０００９】
Ｂ細胞は、形質細胞へと発達することができ、形質細胞は抗体を作る。抗体は、動物の免疫システムの非常に重要な成分である。抗体は、侵入病原体のある種の識別特性部位（病原体の抗原―ここで抗原とは免疫システムによって認識されるあらゆる外来物質と定義される）に対して反応して産生され、そして通常、その病原体に特異的である。しかし、もし２種の病原体が非常に類似しているか、少なくとも同一の抗原を含有する場合には、一方の病原体に対して産生された抗体は、上記に拘わらず、もう一方の病原体に対しても有効であり得る（抗体が「交差反応」し得る）。これは、なぜ牛痘の接種が天然痘に対する防御を与え得るのかの説明となる。抗体は、病原体全体ではなく、病原体の抗原分子の小部分しか「認識」しないことを理解することは重要である。これらの小部分は、エピトープと名付けられる。
【００１０】
Ｔ細胞は抗体を有さず産生もしない。その代り、Ｔ細胞は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）（又はヒトの場合、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ））と複合化した外来抗原の断片（即ちエピトープ）を、ＴＣＲ（Ｔ細胞受容体）として知られる分化した受容体を介して、認識する。Ｔ細胞は、制御的機能か又はエフェクター機能かを有し得る部分集合に分けることができる。エフェクター細胞は、外来物質の除去の「効果を果たす」のに関与する。例えば、細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）は、腫瘍細胞などの他の好ましくない細胞種と同様に、感染された細胞も殺すことのできるエフェクター細胞である。他方で、制御Ｔ細胞は、エフェクターＴ細胞及びＢ細胞がより有効になるように手伝う役割を果たす。この機能のために、これらの制御Ｔ細胞はしばしば「ヘルパー」Ｔ細胞と呼ばれる。「サプレッサー」Ｔ細胞と呼ばれる、他の制御Ｔ細胞は、免疫応答を抑制すると考えられるが、これについては「ヘルパー」Ｔ細胞ほどよくは理解されていない。制御Ｔ細胞は、先天性免疫システムの成分とも相互作用し得、それらの活性を高める。
【００１１】
正常健康個体では、免疫応答が惹起されるまで、免疫システムのリンパ球は、不活性な「休止」状態に維持される。免疫応答が必要となると、リンパ球は活性化され、増殖し、そして指定された機能を実行し始める。例えば、その表面にＭＨＣ分子と複合化した侵入病原体のエピトープを認識するＴＣＲを有するあらゆる休止Ｔ細胞が活性化され、増殖し（これはクローン性増殖と呼ばれる）、そして結果として生じた子孫細胞が侵入生物と対抗するのに必要な所定のエフェクター機能を活発に実行し始める。
【００１２】
免疫応答が終了すると（即ち、病原体及び／又は感染細胞が除去されると）、リンパ球は再度休止状態に戻る。この休止状態は、しかし、最初の不活性な休止状態と同等ではない。一度活性化されたが休止状態にあるリンパ球は、後の同じか又は密接に関連する病原体による感染に反応して、迅速に戦力として動員され、そして増殖するよう誘導され得る。
【００１３】
一度活性化されたが休止状態にあるリンパ球が、侵入病原体との２度目の接触の後で、より迅速により強力な反応を示すこの能力は、免疫システムに効果的に「記憶」を提供している。この免疫システムの記憶の利用は、全ての長期免疫予防薬（例えばワクチンなど）の根拠となっており、依然として非常に長期の免疫治療薬の開発における目標ともなっている。
【００１４】
細胞が、動物の複雑なシステム内でそれらの機能を実施するためには、細胞はそれらの表面に「受容体」を有する必要がある。これらの受容体は、活性化、増殖、及び他の細胞又は基質への付着などの様々な最も重要な過程を制御する特異的物質を「認識」可能である。例えば、免疫システムの場合では、Ｔ細胞及びＢ細胞上の受容体は、これらの細胞に抗原を認識させるばかりでなく、これらの細胞を相互作用させ、それゆえこれらの細胞の活動を調整する。このような受容体がなければ、細胞はコミュニケーションの最も重要な手段を欠き、多細胞生物の免疫システムにとって不可欠である協力した活動を効果的にすることができないであろう。
【００１５】
環境中に存在する広範囲の病原体を特異的に認識し対処することを可能とするために、免疫システムはリンパ球上で機能する２種の高度に可変の抗原受容体を発達させた。即ち、Ｂ細胞の抗体及びＴ細胞のＴ細胞受容体若しくはＴＣＲである。
【００１６】
生体内には非常に多くの異なる可能な抗原受容体が存在し、免疫システムが多様な侵入病原体を認識するのを可能にしている。実際、１個体に約１０１２個の異なるＢ細胞及びＴ細胞受容体が存在する。個々のＢ細胞はそれぞれ１種の受容体のみ有しており、これで特定の病原体に対処するので、その病原体の抗原に「最も適合した」受容体を有するＢ細胞が選択されなければならない。この過程は、「クローン選択」と呼ばれる。理論上は、病原体の示す抗原／エピトープの数及びこれらの抗原／エピトープに対する様々な選択されたＢ細胞の特異性に依存して、単一クローンのみが反応するか（モノクローナル反応）、数種のクローンか反応するか（オリゴクローナル反応）、又は多数のクローンが反応し得る（ポリクローナル反応）。
【００１７】
Ｂ細胞及びＴ細胞が認識できる抗原の種類には大きな違いがある。知られている限り、Ｂリンパ球の表面上の受容体（即ち抗体）のみが、ウイルス及び細菌上のタンパク質、又は体液中に溶解している外来分子などの抗原を直接認識可能である。Ｂ細胞が活性化され形質細胞に発達した場合、Ｂ細胞からの抗体は可溶型としても産生され得る。抗体は、イムノグロブリン（Ｉｇと略記する）とも呼ばれる。一方、Ｔ細胞受容体は、生体の細胞表面の、Ｔ細胞エピトープとしても知られる、短いペプチドのみを認識する。これらのＴ細胞エピトープは、自己（即ち自然発生の生体タンパク質）か又は非自己（即ち、生体に感染した外来生物に由来するタンパク質）のより大きなタンパク質の分解によって産生される。外来タンパク質に由来するペプチドのみ、即ち抗原のみが、通常は生体内の免疫応答を誘発できる。一旦産生されると、これらのエピトープは、特別な種類の分子であるＭＨＣ（主要組織適合遺伝子複合体）に結合し、そしてこの結果生じた複合体は次に、細胞表面に提示され、Ｔ細胞受容体と結合する。
【００１８】
免疫応答が破壊的性質を有するため、この反応は外来病原体に対してのみ作用し、生体の自身の細胞又はタンパク質に対しては作用しないようにしなければならないことは、明確にすべき点である。このように、免疫システムは、「自己」及び「非自己」を区別する必要がある。自己に対して反応するリンパ球のクローンも産生されるが、自己に対するいかなる反応も引き起こす前に、これらのクローンは除去されるという説が提案されている。この過程は「クローン除去」と名付けられている。いずれの自己に反応するリンパ球も保持され得るが、「スイッチを切られた」状態でのみ保持されるという説も提案されている。この機構は、クローン・アネルギーと名付けられている。考えられる過程が何であれ、胸腺などのリンパ系組織に、非自己に対してのみ反応するＴリンパ球のプールの中から自己に対して反応する個々のＴ細胞クローンを識別させる正確な基礎となる機構が何かについては依然として不明確なままである。
【００１９】
主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）が動物の免疫システムにおいて鍵となる役割を果たしていることが何年も前から知られてきた。ＭＨＣ分子は、既に上で論じたように、Ｔ細胞が抗原を認識するのを可能にする。ＭＨＣ分子には、クラスＩ、クラスＩＩ、及びクラスＩＩＩの３つの一般的な型がある。クラスＩ及びクラスＩＩのＭＨＣ分子は細胞表面に存在する糖タンパク質であり、クラスＩＩＩは通常可溶分子で細胞内部に存在する。ＭＨＣ分子には、非常に多数の異なる型が存在する。例えば、ヒトでは（ヒトではＭＨＣはヒト白血球抗原（ＨＬＡ）と呼ばれる）ＭＨＣ分子をコードする遺伝子の互いに異なる対立遺伝子が数百あり、ヒト個体群には多くの異なる型のＨＬＡが存在することを意味している。異なる動物種のＭＨＣは、マウスのＭＨＣがＨ−２、ラットがＲＴ１、そしてウサギがＲＬＡというように、一般的に異なる規約に従い名付けられている。個体において異なるＭＨＣ分子をコードする異なる遺伝子領域は、通常個別に名付けられ、例えばヒトでは、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｃなどである。
【００２０】
免疫システムに抗原のエピトープを提示するのはＭＨＣ分子なので、ＭＨＣ分子は重要な免疫システム分子である。例えば、Ｔ細胞が特定の病原体に反応するためには、病原体は、細胞表面でＭＨＣ分子に結合し得、そしてそれゆえＭＨＣ−ペプチド複合体に結合するＴ細胞と相互作用し得る少なくとも１つのエピトープ（タンパク質のペプチド部分など）を有する少なくとも１つの抗原（タンパク質など）を有さなくてはならない。このように、免疫応答は、ＭＨＣがエピトープに結合する能力に依存している。ＭＨＣが結合するエピトープがないか、ＭＨＣ−ペプチド複合体に結合するＴ細胞がない場合、免疫応答は起こらない。
【００２１】
「自己」タンパク質に関しては、しかし、数個のエピトープのうち１つがＭＨＣ分子に結合することができ、それゆえ潜在的に免疫応答を誘発し得る。これらの場合、自己に反応するリンパ球クローンが除去されるか又はそのリンパ球のスイッチが切られるように、特異的「信号」が発せられなければならない。
【００２２】
脊椎動物免疫システムの仕組みの理論的理解が進展しているにも関わらず、多くの疾病に対するワクチンは依然として理解しにくい。ある種の病原体は急速に突然変異しやすい（例えばＨＩＶ及びインフルエンザ）ので、１系統に対するワクチン標的として有用であり得たエピトープが、突然変異が生じた後新系統で変化し、ワクチン標的として有用でなくなることがある。Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ（マラリアの原因となる病原体）などの他の病原体も、広く研究されているが、病原体上の標的であって、ワクチン開発において有用であり得る標的が、同定困難であると判明しているか、単にｉｎ  ｖｉｖｏにおいて有効なワクチンを送達しそこねている状態である。
【００２３】
特に開発を進歩させる必要がある病原体には、節足動物によって媒介される、いわゆる「節足動物媒介疾病」を引き起こす病原体がある。このような疾病は、世界的に主要な死因となっており、このような疾病には、とりわけ、現代人類、特に世界のより貧乏な地域に住む人類の、最悪の致命的疾病であるマラリア及びデング熱が含まれる。節足動物媒介疾病の例としては、以下の表１に列挙されるものがあるが、これらに限定されるものではない。
【００２４】
【表１】
0005981883.tif 000002
【００２５】
以前は、節足動物媒介疾病のワクチンを提供する試みは、存在する病原体の系統を同定し、次にこの病原体に特異的なワクチンを製造することで行っていた。一般的に、前記ワクチンは、寄主のＢ細胞（抗体）反応（又は、時にＴ細胞反応）に基づいており、この抗体は、ワクチンが標的とする特異的病原体系統の表面抗原と反応する。概して、抗原を含む表面タンパク質は、疾病の病原体の系統ごとに変動し、異なる病原体では全く異なる。この結果、一般的に従来のワクチンは、（もしそれらが有効であったとしても）１種の特異的病原体からのみの保護及び１種の特異的病原体系統からのみの保護のいずれかしか与えず、他の系統からの保護及び突然変異によって生じる新系統からの保護は与えない。それゆえ、各々の疾病病原体からの保護、及びしばしば同一疾病の異なる病原体系統及び新病原体系統の少なくともいずれかからの保護のためには、別個のワクチンが必要になる。
【００２６】
節足動物の唾液中及び節足動物の腸中に発現される抗原のいずれかによる免疫感作によって個体を感染から保護することができることが知られるようになってしばらく経つ。このことについて詳細に論じられた論文の要約を以下に示す。
【００２７】
非特許文献１は、節足動物の唾液腺における既知の免疫調節因子について概説している。免疫調節因子は、節足動物による病原体の伝播を促進することができる。媒介動物の唾液は、止血の抑制、血管収縮の抑制、並びに炎症の発達の抑制及び免疫応答の発達の抑制などの能力を有する非常に多くの物質を含む。カにおいては、数種のＴ細胞抑制因子が存在する。節足動物の唾液が、前記節足動物が伝播する病原体による感染を促進するならば、前記感染を強化する唾液中の分子のワクチン接種を寄主にすることにより病原体の伝播を制御し、それによって前記唾液の促進効果を遮断し、従って病原体が寄主において感染を確立するのを防ぐことが可能になる。サシチョウバエ唾液における強力な血管拡張成分をコードするｍａｘａｄｉｌａｎ遺伝子或いはＭＡＸ遺伝子がクローン化され、この遺伝子のタンパク質生成物の活性が試験された。サシチョウバエＭＡＸの効果は、食細胞に対する一次効果を通して現れ、これは下流のＴ細胞反応に対する免疫調節／免疫抑制効果をもたらす。マウスに対して、完全フロイントアジュバント中のＭＡＸを注射すること、続けて不完全フロイントアジュバント中のＭＡＸを注射すること、及び次に可溶性ＭＡＸで追加免疫し血液循環する抗ＭＡＸ抗体の力価を１／１００００〜１／２００００の範囲とすることによって、ＭＡＸのワクチン接種を行った。そして前記ワクチン接種を施されたマウスを、感染から顕著に保護することに成功している。
【００２８】
非特許文献２には、カによる血液摂取が昆虫唾液に対する寄主の免疫応答を誘導することが示されている。これらには、過敏症反応と抗カ抗体産生の両方が含まれる。これらの抗体反応を測定することは、媒介動物個体群をモニターするため及びこのような反応を治療介入戦略の有効性評価の過程において適用するために、疫学的な価値を有し得る。節足動物媒介体或いは外部寄生虫の摂食、発育、及び生存の少なくともいずれかを損傷させるワクチンを製造することは、野心的な考えだとしても、魅力的である。この第１の重要な目的は、外部寄生性節足動物それ自体の管理を行うことであり、第２の目的は、前記抗節足動物ワクチン接種を、前記節足動物種内で前記節足動物が寄生虫を伝播する際か、前記節足動物が脊椎動物寄主に寄生虫を伝播する際に寄生虫に損傷を与える方法として使用することである。
【００２９】
非特許文献３によると、カの中腸は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍの生存と発育のためには最も厳しい環境の１つである。唾液腺へ向かう途中で中腸上皮を横切ろうと試みる際、運動性のあるオーキネートは、カ認識因子によって迅速に検知されそして標識され、中腸とそれをとり囲む体腔中の他の組織との両方から殺傷因子を集める様々な免疫反応によって破壊されるように、標的化される。これらの因子と寄生虫との間の正確な相互作用は、寄生虫侵入のタイミング及び経路と同様に、高度に種特異的及び系統特異的である。前記中腸は、消化酵素及び感染性因子から血体腔組織を隔離し、保護する物理的バリアとなっている。前記中腸は、単一層の極性のある上皮細胞からなり、上皮細胞のそれぞれの極は、分子の交換に関与する表面積を増加させるために適応し、異なる形態に変化している。上皮細胞の明瞭な微絨毛で覆われた頂端部側表面は、中腸内腔に露出しており、その１次的役割は消化酵素の分泌及び栄養物の吸収である。血液摂取によって引き起こされる構造上の変化として、中腸上皮によって分泌され、摂取された血液食によって重合させられる、厚い、非細胞質、キチン質の囲食膜マトリックス（ＰＭ）の形成がある。前記ＰＭは、食塊を取り囲み、中腸上皮を貫通しようとする寄生虫及び細菌に対するバリアとなる。
【００３０】
非特許文献４によると、カ中腸を標的とする抗体は、カワクチンの開発においても重要である。カによる摂食中の唾液の分泌は、寄主の血管の位置確定並びに寄主の止血反応及び免疫応答の操作を成功させるために、重要である。寄主の抗カ抗体による唾液抗原の認識を特徴づけるために免疫ブロット法が用いられている。摂食する際に、カは、可溶性及び細胞性の寄主の免疫因子を摂取し、それらは中腸中に活性化された状態で残る。唾液抗原と対照的に、カの体内部に存在する器官由来の抗原に対して、寄主が曝されることは通常なく、このことからこれらの「隠された」抗原をワクチンの標的として利用するという考えがもたらされる。隠された抗原の最良の供給源は中腸である。なぜならば、カの摂食の後その成分として免疫エフェクター分子及び免疫エフェクター細胞を保持している血液食を収容するためである。Ａｅ．Ａｅｇｙｐｔｉの中腸標本調製物及び全身標本調製物は、高力価の抗体をマウスに誘導し、その抗体を含有する血液を摂食したカの死亡率の上昇量は、カ中腸微絨毛に結合した抗体量と相関している。Ａｎ．Ｇａｍｂｉａｅの中腸のｃＤＮＡライブラリーをマウスに注射することによって、マウス血中にＩｇＧ応答を誘導することができ、次に中腸タンパク質を追加免疫することによって、高力価の抗体を産生させることができた。これらのマウスから吸血したカの生存率及び蔵卵数を再現性よく減少させることができており、興味深いことにこの殺カ効果は、体液性応答よりも細胞性応答によってもたらされるようであった。しかし、これらの研究は、問題に直面している。それは、実験の中においてさえも、結果の変動が大きくなることがあり、効果の再現性を良好にすることが困難であることである。中腸タンパク質抽出物の複合混合物か中腸ｃＤＮＡライブラリーの複合混合物を用いて免疫感作するということは、寄主を保護するワクチンの標的抗原は同定されていないことを意味している。
【００３１】
しかし、このような知見にも拘わらず、この作用機構を利用した、節足動物媒介疾病に対する有効なワクチンは、依然として開発されていない。節足動物媒介病原体に対する既存のワクチンの更なる重要な問題点は、ワクチンがＢ細胞応答に基づくかＴ細胞応答に基づくかに関わりなく、これらのワクチンはそれぞれ、単一病原体からの保護のみ、或いは、せいぜい単一の既存病原体系統からの保護のみ与え、将来生じ得る系統、或いは、複数の病原体からの保護は与えないことである。マラリア及びデング熱などの大規模な致命的疾病を含む複数の節足動物媒介疾病からの保護を与えるワクチンの必要性は、差し迫っている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００３２】
【非特許文献１】Ｒ．Ｇ．Ｔｉｔｕｓら，Ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｒｔｈｒｏｐｏｄ  ｓａｌｉｖａ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅｓｅ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｔｏ  ｓｅｒｖｅ  ａｓ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｔｏ  ｐｒｅｖｅｎｔ  ｐａｔｈｏｇｅｎ  ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ．（節足動物唾液の免疫調節因子及びこれらの因子の病原体伝染阻止のためのワクチンの標的としての働き），Ｐａｒａｓｉｔｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，（２００６），２８巻，ｐｐ．１３１−１４１
【非特許文献２】Ｇ．Ａ．Ｔ．Ｔａｒｇｅｔｔ，Ｐａｒａｓｉｔｅｓ，ａｒｔｈｒｏｐｏｄ  ｖｅｃｔｏｒｓ，ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ．（寄生虫、節足動物媒介体、及び免疫反応），Ｐａｒａｓｉｔｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，（２００６），２８巻，ｐｐ．１１７−１１９．
【非特許文献３】Ｍ．Ｍ．Ａ．Ｗｈｉｔｔｅｎら，Ｍｏｓｑｕｉｔｏ  ｍｉｄｇｕｔｓ  ａｎｄ  ｍａｌａｒｉａ：  ｃｅｌｌ  ｂｉｏｌｏｇｙ，  ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．(カ中腸及びマラリア：細胞生物学、区画化、及び免疫学)，Ｐａｒａｓｉｔｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，（２００６），２８巻，ｐｐ．１２１−１３０．
【非特許文献４】Ｐ．Ｆ．Ｂｉｌｌｉｎｇｓｌｅｙら，Ｉｍｍｕｎｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｍｏｓｑｕｉｔｏｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｈｏｓｔｓ．（カ及びその寄主間の免疫相互作用），Ｐａｒａｓｉｔｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，（２００６），２８巻，ｐｐ．１４３−１５３．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３３】
本発明者らは、現在、寄主に全ての節足動物媒介病原体からの保護を与えることのできる、節足動物唾液タンパク質中に存在する、特異的な、免疫原性を有するペプチド配列を同定し、同定した配列を用いて、これらの病原体が引き起こす疾病に対するワクチンを開発できるようにしている。したがって、本発明者らは、免疫応答、及び特に節足動物媒介疾病からの迅速な２次免疫応答を誘発する、ワクチンにおいて有用であるペプチドの開発に成功している。
【００３４】
したがって、本発明の目的は、上述の既知従来技術に関係する問題点を解決することである。本発明の更なる目的は、脊椎動物において、複数の節足動物媒介疾病、即ち複数の病原体及び複数の病原体系統のいずれかによって引き起こされる疾病に対する免疫応答（例えば、Ｔ細胞応答及びＢ細胞応答の少なくともいずれかを含む細胞性応答）を誘発することができるポリペプチド組成物を提供することである。本発明の更なる目的は、本発明のポリペプチド組成物を用いた節足動物媒介疾病ワクチンを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００３５】
したがって本発明は、節足動物唾液タンパク質画分に由来する少なくとも１個のエピトープを認識可能な免疫系細胞を脊椎動物に産生させる（又はそのような細胞の産生を促進する）、脊椎動物において免疫原性を有するポリペプチドを１個以上含むポリペプチド組成物であって、前記節足動物唾液タンパク質画分が、４０ｋＤａ以下の分子量を有し、及び前記ポリペプチドが、以下の（ａ）〜（ｃ）から独立に選択されるペプチド組成物を提供する；
（ａ）配列番号１〜４４のポリペプチド配列、及びこれらの部分配列のいずれか、但し前記部分配列は７アミノ酸残基以上を有する：
配列番号1    HLTLFTVAVLLLAAAALLLLLPPAYSTTLTPP
配列番号2    PLSYCHLFLTHTLARALSFSRSDCL
配列番号3    KNVFFALLLVVLVCCLVSVQGNEI
配列番号4    KLLVLLICLFFYHTHCTTAYLWLAMGV
配列番号5    FLKGSFPRFQMCVMLIGFFSSAKCL
配列番号6    NDYQALLGLCCPWIDLAAADLPMRRHAKA
配列番号7    FYSVGKLVKVLLVMAVCCLLLCTAPTGADPL
配列番号8    MKFAFAFVLIALFAVFAVSQALPQPEQAAA
配列番号9    DGASAITKIVLELTPEQAAAV
配列番号10    TLFIFLVCCQIPLFGIMSSDSADPFYWIRVILA
配列番号11    GRVMCLLRLMSTLLVVLSIVGK
配列番号12    LYSGYRLLVLLVMTVCCLLLFIAPTGADPLPGQTQRTL
配列番号13    MYCVIKGKTGGYCNSEGLCTCRAEDLHFLLKPIINKD
配列番号14    NAEDPRTELIGCGSVLFHLAANRLSLQLEEFAVCKR
配列番号15    ALIGLLLCSVQSVTANDPVDALGACSGNLFGLLMTRL
配列番号16    SKLFVLAFLCLALVVVVQSAPQYARGDVPT
配列番号17    SMLVAFATLSVALVVVVAIPANFNYGGGGGYFINGTGQ
配列番号18    IYEKLPAYLSEVSARVNVLQVSLQHDLPNLQ
配列番号19    EMKLAKVALVTISLWFMAWTPYLVINFTGI
配列番号20    LLPAKVIPDKTAAYVAYGGQETLVEHVEVLV
配列番号21    FYTCFLGTSSLAGFKNAVDYDELLKAG
配列番号22    VLEVLGFVEDNGELVFQELLGVLKMVDPDGD
配列番号23    KLTPTVVVVLLCLTFVADALTIQELRAQIAQQRIQQRYGVTVATT
配列番号24    SLSDYGLIELKEHCLECCQKDTEADSKLKVYPAAVLEV
配列番号25    TYICFILHGVSEIIPQQQKKTMKFLLLVASVLCLVLI
配列番号26    RYFVVIALICPLIIVETLAV
配列番号27    LLLYLDAADLRRALHQYQLLAAQGDRHLPQQIVKFV
配列番号28    VLLTPALQAYIMDEHNLNRSNIALGRIRPYPSAVKMP
配列番号29    VLKGETHKALKLKDGGHYLVEFKSIYM
配列番号30    VLHSMLVNASLAEMVKESYQTHGADGRMVVRMLKFVRLLP
配列番号31    RVRALRALLETLLQHQGEQNNDVYLIRLAHET
配列番号32    ELQQALSSLNAGSGSCAEVFNAYLPVHNKYIGVSRKI
配列番号33    KFYRLISTLLVVVVIAPRHQCSPFFFQYNRPYL
配列番号34    NYVPDVSALEQDIIEVDPETKEMLKHLDFNNIVVQL
配列番号35    QYSMECLEAAEPKYLDGLKTLADETAQC
配列番号36    EYAQVTKMLGNGRLEAMCFDGVKRLCHIRGKL
配列番号37    KLFLTLLSTLSVAMVFALPAHHHSRG
配列番号38    ELEEARLVAEELEERQQELDYLKRYLVGRLQAV
配列番号39    SYFLTVCLLALVQSETVQD
配列番号40    AMTNANLVGLTISLAYAIFFLLYTPPTGRSS
配列番号41    SFAWLLYGIILRSNFLVVQNLMALALSAVQLSLFII
配列番号42    AFPFISGFLSCFMWLKYGVLTEESTLILVNFIGSAL
配列番号43    GLLCCCLAVLFFASPLTMLAHVIR
配列番号44    LLLAMVLLPLLLLESVVPYAAAEKVW
（ｂ）節足動物唾液タンパク質の以下のアミノ酸残基によって定義される配列、及びこれらの部分配列のいずれか、但し前記部分配列は７アミノ酸残基以上を有する：
0005981883.tif 000003
0005981883.tif 000004
0005981883.tif 000005
0005981883.tif 000006
0005981883.tif 000007
又は、
（ｃ）、（ａ）及び（ｂ）のいずれかの配列の１個以上に対して８５％以上の相同性を有するポリペプチド配列であって、データベースの、ＧｅｎＢａｎｋ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ（ＰＩＲ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（ＰＲＦ）、或いはこれらのＣＤＳ翻訳（ＣＤＳ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ）の１つ以上に含まれるポリペプチド配列。
【００３６】
ＣＤＳは、「ＣｏＤｉｎｇ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ」の略であり、即ち予測されるタンパク質におけるアミノ酸配列に相当するヌクレオチド領域のことである。前記ＣＤＳは、開始コドン及び終止コドンを含むので、コード配列は、「ＡＴＧ」で始まり、終止コドンで終わる。５′非翻訳領域、３′非翻訳領域、イントロン、及びフレームシフトによって発現されなくなる塩基のいずれかを含む発現されない配列は、ＣＤＳには含まれない。なお、ＣＤＳは、実際のｍＲＮＡ配列には一致しない。したがって、ＣＤＳの翻訳物は、開始コドンと終止コドンとの間に存在する全てのコドンが翻訳された場合に生じるタンパク質となる。
【００３７】
ＰＤＢは、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋを意味する。このデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｃｓｂ．ｏｒｇ／ｐｄｂ／ｈｏｍｅ／ｈｏｍｅ．ｄｏ）は、生体高分子の３−Ｄ構造の研究を通して生体システムの機能の理論的理解を促進するという目的のために設立された非営利コンソーシアムＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｆｏｒ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  （ＲＣＳＢ）によって維持管理されている。
【００３８】
Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  （ＰＩＲ）（ｈｔｔｐ：／／ｐｉｒ．ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ．ｅｄｕ／）は、研究者がタンパク質配列情報を同定し、解釈する際の手助けとするための情報供給源として、１９８４年に、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  （ＮＢＲＦ）によって設立された統合された公開バイオインフォマティクスリソースである。（Ｗｕ  ＣＨ，Ｙｅｈ  ＬＳ，Ｈｕａｎｇ  Ｈ，Ａｒｍｉｎｓｋｉ  Ｌ，Ｃａｓｔｒｏ−Ａｌｖｅａｒ  Ｊ，Ｃｈｅｎ  Ｙ，Ｈｕ  Ｚ，Ｋｏｕｒｔｅｓｉｓ  Ｐ，Ｌｅｄｌｅｙ  ＲＳ，Ｓｕｚｅｋ  ＢＥ，Ｇａｒｒｅｔｔ  Ｌ，Ｖｉｎａｙａｋａ  ＣＲ，Ｚｈａｎｇ  Ｊ，Ｂａｒｋｅｒ  ＷＣ  Ｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ（２００３）  ３１巻（１号）、ｐｐ．３４５−７．）
【００３９】
ＰＲＦは、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  （ＰＲＦ）（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｒｆ．ｏｒ．ｊｐ／ｅｎ／ｉｎｄｅｘ．ｓｈｔｍｌ）によって維持管理されるオンラインデータベースである。このデータベースは、科学学術雑誌から収集したアミノ酸、ペプチド、及びタンパク質に関する情報、ペプチド配列データ及びタンパク質配列データに関する情報、並びにタンパク質の合成化合物及びその分子的様相に関係する情報を含む。
【００４０】
ＧｅｎＢａｎｋは、全ての一般に利用可能なＤＮＡ配列の注釈付コレクションである、ＮＩＨ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｄａｔａｂａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）である。２カ月毎に、新しく公開される。ＧｅｎＢａｎｋは、日本ＤＮＡデータバンク（ＤＮＡ  ＤａｔａＢａｎｋ  ｏｆ  Ｊａｐａｎ  （ＤＤＢＪ））、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＥＭＢＬ）、及びＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ内のＧｅｎＢａｎｋから構成されるＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ  Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｏｎの一部である。
【００４１】
Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔとしても知られる）は、Ｓｗｉｓｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（ＳＩＢ）によって維持管理される、監修されたタンパク質配列データベース（ｈｔｔｐ：／／ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｓｐｒｏｔ／）である。このデータベースは、高レベルの注釈（例えば、タンパク質の機能の記載、タンパク質のドメイン構造、タンパク質の翻訳後修飾、タンパク質の変異体など）を提供し、重複性を最小限に切り詰め、他のデータベースとの統合を高レベルで行うという目標を有している。
【００４２】
これらのデータベースは、毎週乃至毎月更新されており、本配列は、この特許出願の出願時にデータベース中にあった配列をカバーする。データベース内で望ましい相同性を有する配列を見つける際には、一致の程度の基準に従った、任意の方法を使用することができる。このような方法としては、ＢＬＡＳＴＰプログラム（ＢＬＡＳＴ及びそれに由来するプログラム（例えばＢＬＡＳＴＰ）は、パブリック・ドメイン・ソフトウェアである）を使用することが好ましい。
【００４３】
他の実施形態では、上述の（ｃ）で言及した８５％の相同性の代わりに（或いは、８５％の相同性に加えて）、上述のデータベース内のポリペプチド配列であって、（ａ）及び（ｂ）のいずれかにおける配列の一部と共通のアミノ酸を少なくとも８５％を有し（アミノ酸の同一性、及び配列中における位置の両方の点で共通のアミノ酸）、８アミノ酸残基以上の長さを有する、好ましくは８アミノ酸残基の長さから（ａ）及び（ｂ）のいずれかにおける配列の全長の３分の１の長さまでの長さを有するポリペプチド配列も包含する。換言すれば、（ａ）及び（ｂ）のいずれかにおける配列であって３０アミノ酸残基の長さを有する配列については、前記（ａ）及び（ｂ）のいずれかにおける配列の任意の部分と８５％以上のアミノ酸を共通とすれば、前記データベース中の配列であって、８アミノ酸残基以上の長さ、好ましくは８〜１０アミノ酸残基の長さを有する配列がこのポリペプチド配列に包含されることになる。同様に、（ａ）及び（ｂ）のいずれかにおける配列であって６０アミノ酸残基の長さを有する配列については、前記（ａ）及び（ｂ）のいずれかにおける配列の任意の部分と８５％以上のアミノ酸を共通とすれば、前記データベース中の配列であって、８アミノ酸残基以上の長さ、好ましくは８〜２０アミノ酸残基の長さを有する配列がこのポリペプチド配列に包含されることになる。アミノ酸の一致は、連続的である必要はない。例えば、（ａ）及び（ｂ）のいずれかにおける２０アミノ酸残基を有する配列の場合、相当するデータベースの配列が正しい位置で１７アミノ酸残基以上をこの配列と共通とするならば、これらの位置が全て連続的でなくとも、このデータベースからの配列をこのポリペプチド配列に包含することができる。
【００４４】
通常、本組成物中のポリペプチドは、完全な（ｃｏｍｐｌｅｔｅ）（最大限の（ｆｕｌｌ）或いは全長の（ｅｎｔｉｒｅ））節足動物唾液タンパク質ではない。「完全な（ｃｏｍｐｌｅｔｅ）」（「最大限の（ｆｕｌｌ）」或いは「全長の（ｅｎｔｉｒｅ）」）という語を使用することにより、本ペプチドは、任意の自然に分泌される節足動物唾液タンパク質に存在するアミノ酸残基の全部は、含有しないことを意味する。
【００４５】
このように、本ポリペプチドは、上述の配列のいずれかの全体をなすもの（或いは少なくとも１個の、上述の配列のいずれかの７アミノ酸残基以上の部分を、なすもの）であってよい。本ポリペプチドは、脊椎動物において、免疫原性も有していなくてはならない。通常は、この免疫原性によって、前記ポリペプチドが、脊椎動物に、節足動物唾液タンパク質画分に由来する少なくとも１個のエピトープを認識することが可能な免疫系細胞を産生させるようにすることができる。かくして、ポリペプチドがＴ細胞応答及びＢ細胞応答のいずれかを誘発する場合、このポリペプチドは、脊椎動物において免疫原性を有することになる。前記ポリペプチドは、二者択一に、Ｔヘルパーリンパ球（Ｔｈ）エピトープであっても、Ｂリンパ球エピトープであってもよい。
【００４６】
ポリペプチドが免疫原性を有するか否かを決定する１つの方法が、以下の実験２に詳述される。しかし、本発明は、このような方法には限定されず、当業者は、望むならば、免疫原性を決定するための任意の既知の方法を選択することができる。
【００４７】
ポリペプチド組成物中のポリペプチドが、配列番号１〜６、２０、２８、３０〜３２、及び３５から独立に選択される配列、或いはこれらの配列の部分配列であって７アミノ酸残基以上を有する部分配列、或いはこれらの配列の１個と８５％以上の相同性を有するポリペプチド配列であって、データベースのＧｅｎＢａｎｋ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ（ＰＩＲ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（ＰＲＦ）、或いはこれらのＣＤＳ翻訳（ＣＤＳ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ）の１つ以上に含まれるポリペプチド配列から独立に選択されるポリペプチドであることが特に好ましい。
【００４８】
これらに限るわけではないが、通常は、本発明のポリペプチド組成物は、２種以上のポリペプチドを含み、２種〜１０種のポリペプチドを含むことが好ましく、２種〜６種のポリペプチドを含むことがより好ましい。しかし、本組成物は、必要に応じて、単一種のポリペプチド及び更に非ポリペプチド成分を含んでいてもよい。
【００４９】
一般に、本発明によるポリペプチド組成物中においては、前記節足動物唾液タンパク質画分は４０ｋＤａ以下の分子量を有するか、３０ｋＤａ以下の分子量を有し、２０ｋＤａ以下の分子量を有するのが好ましい。前記画分は、また、２０ｋＤａ〜４０ｋＤａの分子量を有していても、２０ｋＤａ〜３０ｋＤａの分子量を有していても、１０ｋＤａ〜２０ｋＤａの分子量を有していてもよい。
【００５０】
本発明の別の実施形態においては、本発明のポリペプチド組成物は、配列番号１３１の配列のポリペプチドを含むか、７アミノ酸残基以上を有する、配列番号１３１の１種以上の部分配列のポリペプチドを含むか、これらの配列の１個に対して８５％以上の相同性を有する配列のポリペプチドであって、データベースの、ＧｅｎＢａｎｋ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ（ＰＩＲ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（ＰＲＦ）、或いはこれらのＣＤＳ翻訳（ＣＤＳ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ）の１つ以上に含まれるポリペプチド配列のポリペプチドを含む。
【００５１】
配列番号１３１
FLKGSFPRFQMCVMLIGFFSSAKCLFYSVGKLVKVLLVMAVCCLLLCTAPTGADPLMKFAFAFVLIALFAVFAVSQALPQPEQAAAGRVMCLLRLMSTLLVVLSIVGKLYSGYRLLVLLVMTVCCLLLFIAPTGADPLPGQTQRTLALIGLLLCSVQSVTANDPVDALGACSGNLFGLLMTRLSKLFVLAFLCLALVVVVQSAPQYARGDVPTLLPAKVIPDKTAAYVAYGGQETLVEHVEVLVRYFVVIALICPLIIVETLAVVLLTPALQAYIMDEHNLNRSNIALGRIRPYPSAVKMPVLHSMLVNASLAEMVKESYQTHGADGRMVVRMLKFVRLLPRVRALRALLETLLQHQGEQNNDVYLIRLAHETELQQALSSLNAGSGSCAEVFNAYLPVHNKYIGVSRKIQYSMECLEAAEPKYLDGLKTLADETAQCSFAWLLYGIILRSNFLVVQNLMALALSAVQLSLFIIAFPFISGFLSCFMWLKYGVLTEESTLILVNFIGSAL
【００５２】
本発明の別の実施形態においては、本発明のポリペプチド組成物は、配列番号１〜４、６、９、１０、１３、１４、１７〜１９、２１〜２５、２７、２９、３３、３４、３６〜４０、４３、及び４４から選択される１種以上の配列、或いはこれらの配列の部分配列であって７アミノ酸残基以上を有する１種以上の部分配列、或いはこれらの配列の１個と８５％以上の相同性を有するポリペプチド配列であって、データベースのＧｅｎＢａｎｋ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ（ＰＩＲ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（ＰＲＦ）、或いはこれらのＣＤＳ翻訳（ＣＤＳ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ）の１つ以上に含まれるポリペプチド配列のポリペプチドを含む。
【００５３】
更なる実施形態においては、本発明のポリペプチド組成物は、配列番号１３２の配列のポリペプチドを含むか、７アミノ酸残基以上を有する配列番号１３２の１種以上の部分配列のポリペプチドを含むか、これらの配列の１個に対して８５％以上の相同性を有するポリペプチド配列であって、データベースの、ＧｅｎＢａｎｋ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ（ＰＩＲ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（ＰＲＦ）、或いはこれらのＣＤＳ翻訳（ＣＤＳ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ）の１つ以上に含まれるポリペプチド配列のポリペプチドを含む。
【００５４】
配列番号１３２
HLTLFTVAVLLLAAAALLLLLPPAYSTTLTPPPLSYCHLFLTHTLARALSFSRSDCLKNVFFALLLVVLVCCLVSVQGNEIKLLVLLICLFFYHTHCTTAYLWLAMGVNDYQALLGLCCPWIDLAAADLPMRRHAKADGASAITKIVLELTPEQAAAVTLFIFLVCCQIPLFGIMSSDSADPFYWIRVILAMYCVIKGKTGGYCNSEGLCTCRAEDLHFLLKPIINKDNAEDPRTELIGCGSVLFHLAANRLSLQLEEFAVCKRSMLVAFATLSVALVVVVAIPANFNYGGGGGYFINGTGQIYEKLPAYLSEVSARVNVLQVSLQHDLPNLQEMKLAKVALVTISLWFMAWTPYLVINFTGIFYTCFLGTSSLAGFKNAVDYDELLKAGVLEVLGFVEDNGELVFQELLGVLKMVDPDGDKLTPTVVVVLLCLTFVADALTIQELRAQIAQQRIQQRYGVTVATTSLSDYGLIELKEHCLECCQKDTEADSKLKVYPAAVLEVTYICFILHGVSEIIPQQQKKTMKFLLLVASVLCLVLILLLYLDAADLRRALHQYQLLAAQGDRHLPQQIVKFVVLKGETHKALKLKDGGHYLVEFKSIYMKFYRLISTLLVVVVIAPRHQCSPFFFQYNRPYLNYVPDVSALEQDIIEVDPETKEMLKHLDFNNIVVQLEYAQVTKMLGNGRLEAMCFDGVKRLCHIRGKLKLFLTLLSTLSVAMVFALPAHHHSRGELEEARLVAEELEERQQELDYLKRYLVGRLQAVSYFLTVCLLALVQSETVQDAMTNANLVGLTISLAYAIFFLLYTPPTGRSSGLLCCCLAVLFFASPLTMLAHVIRLLLAMVLLPLLLLESVVPYAAAEKVW
【００５５】
なお更なる実施形態においては、本発明のポリペプチド組成物は、配列番号１３３の配列のポリペプチドを含むか、７アミノ酸残基以上を有する配列番号１３３の１種以上の部分配列のポリペプチドを含むか、これらの配列の１個に対して８５％以上の相同性を有するポリペプチド配列であって、データベースの、ＧｅｎＢａｎｋ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ（ＰＩＲ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（ＰＲＦ）、或いはこれらのＣＤＳ翻訳（ＣＤＳ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ）の１つ以上に含まれるポリペプチド配列のポリペプチドを含む。
【００５６】
配列番号１３３
HLTLFTVAVLLLAAAALLLLLPPAYSTTLTPPPLSYCHLFLTHTLARALSFSRSDCLKNVFFALLLVVLVCCLVSVQGNEIKLLVLLICLFFYHTHCTTAYLWLAMGVFLKGSFPRFQMCVMLIGFFSSAKCLNDYQALLGLCCPWIDLAAADLPMRRHAKA
【００５７】
更になお更なる実施形態においては、本発明のポリペプチド組成物は、配列番号１３４の配列のポリペプチドを含むか、７アミノ酸残基以上を有する配列番号１３４の１種以上の部分配列のポリペプチドを含むか、これらの配列の１個に対して８５％以上の相同性を有するポリペプチド配列であって、データベースの、ＧｅｎＢａｎｋ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ（ＰＩＲ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（ＰＲＦ）、又はこれらのＣＤＳ翻訳（ＣＤＳ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ）の１つ以上に含まれるポリペプチド配列のポリペプチドを含む。
【００５８】
配列番号１３４
LLPAKVIPDKTAAYVAYGGQETLVEHVEVLVVLLTPALQAYIMDEHNLNRSNIALGRIRPYPSAVKMPVLHSMLVNASLAEMVKESYQTHGADGRMVVRMLKFVRLLPRVRALRALLETLLQHQGEQNNDVYLIRLAHETELQQALSSLNAGSGSCAEVFNAYLPVHNKYIGVSRKIQYSMECLEAAEPKYLDGLKTLADETAQC
【００５９】
重要なことは、本発明の全ての実施形態において、前記列挙された配列のポリペプチドを単独でも２種以上でも、任意の組み合わせで使用することができることである。配列番号１〜６の配列を有するポリペプチド及び配列番号２０、２８、３０〜３２、３５の配列を有するポリペプチドの少なくともいずれかが特に好ましい。これらのいずれか１種以上が存在することが特に好ましく、配列番号１〜６の配列のポリペプチド全てか、配列番号２０、２８、３０〜３２、３５の配列のポリペプチド全てか、或いはこれら配列番号のポリペプチド全部が存在することがなお特に好ましい。
【００６０】
本発明者らは、上述の配列がエピトープ及び複数のエピトープのいずれかを含み、これらは、生物集団中の非常に多様な脊椎動物に、節足動物媒介疾病に対する保護を与えることができることを見出している。節足動物による刺咬によって、寄主体内には、節足動物の唾液成分に対する、Ｔｈ２表現型（即ち、ＩＦＮ−γ生成のダウンレギュレーション及びＩＬ−４生成のアップレギュレーション）（Ｍｂｏｗら，１９９８）によって特徴づけられる免疫応答が誘導される。この免疫応答が、これらの唾液中の分子の多くによる抗止血効果と共になって、一般的な寄生虫の伝播を促進し且つ強化すること（Ｄｈａｒ  ａｎｄ  Ｋｕｍａｒ，２００３）、そして特にリーシュマニア感染を進展させること（Ｋａｍｈａｗｉら，２０００）が見出されている。対照的に、両方ともがＴｈ１型サイトカインであるＩＦＮ−γ及びＩＬ−１２の生成の、感染部位（即ち、刺咬部位）での、増加によって特徴づけられる細胞性免疫応答の増加が、感染サシチョウバエの刺咬によるＬｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｍａｊｏｒ感染からの保護を誘導することが示されている（Ｋａｍｈａｗｉら，２０００）。
【００６１】
理論に拘束されることなく考えられることは、唾液タンパク質による免疫感作によって、Ｔｈ１型応答が活性化され、これにより刺咬部位で免疫系の細胞（活性化細胞障害性Ｔ細胞（ＣＴＬｓ）及びＴヘルパータイプ１細胞など）による唾液抗原の迅速な認識とＩＦＮ−γの産生がもたらされることである。このサイトカインは、（１）Ｔ細胞及びＮＫ細胞の両方を刺激し、より大量のＩＦＮ−γを生成させ、（２）マクロファージの殺微生物活性を促進し、（３）Ｂ細胞によるイムノグロブリンのアイソタイプをＩｇＧ２ａに変え、Ｂ細胞によるＩｇＧ２ａの産生を増加させ、そして（４）細胞内の寄生虫を殺す免疫反応のカスケードを開始させる複数のサイトカインの組み合わせ（例えば、ＴＮＦ−α、インターロイキン（ＩＬ）１２、及びＩＬ−１８）を産生させる。この現象に関する参考文献を以下に示す。
【００６２】
0005981883.tif 000008
【００６３】
上で論じられているように、Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｇａｍｂｉａｅにおける唾液タンパク質配列の解析を行った後に、本配列が同定されている。当業者には、本発明が、前記配列のポリペプチド及びそのエピトープのみならず、これらの配列のポリペプチドを含有する節足動物唾液タンパク質中のより大きな配列のポリペプチドにも、及びこれらの配列に対して相同性を有し、そのため免疫原性のある活性を有する配列のポリペプチドにも拡大適用できることが明らかである。それゆえ、コンセンサス配列に対していくらかの相同性を有する配列も、本発明の範囲に入る。このような相同性は、例えば、アミノ酸の８量体エピトープ、９量体エピトープ、１０量体エピトープ、及び１１量体エピトープのいずれかにおける、３アミノ酸残基までの置換を可能にしている（８量体エピトープの場合、相同性は６２．５％である）。配列番号１〜４４の配列のそれぞれの全長に相当する本発明の配列中において同定可能であるこのような置換は、１０個以下であることが好ましい（３０量体については、相同性は６６．６％となる）。このような置換は、既知の置換スキームと一致した同類置換であることが好ましい。
【００６４】
本発明は、以下の配列番号１〜４４の配列、若しくは、それに続く節足動物唾液タンパク質のアミノ酸残基によって定義される配列の１種以上を含むか、又は、これらの配列の、７アミノ酸残基以上を有する１種以上の部分配列を含むか、又は、前記配列の１種と８５％以上の相同性を有するポリペプチド配列であって、データベースのＧｅｎＢａｎｋ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ（ＰＩＲ）、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（ＰＲＦ）、或いはこれらのＣＤＳ翻訳（ＣＤＳ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓ）の１つ以上に含まれるポリペプチド配列を含むポリペプチドも提供する。
配列番号1    HLTLFTVAVLLLAAAALLLLLPPAYSTTLTPP
配列番号2    PLSYCHLFLTHTLARALSFSRSDCL
配列番号3    KNVFFALLLVVLVCCLVSVQGNEI
配列番号4    KLLVLLICLFFYHTHCTTAYLWLAMGV
配列番号5    FLKGSFPRFQMCVMLIGFFSSAKCL
配列番号6    NDYQALLGLCCPWIDLAAADLPMRRHAKA
配列番号7    FYSVGKLVKVLLVMAVCCLLLCTAPTGADPL
配列番号8    MKFAFAFVLIALFAVFAVSQALPQPEQAAA
配列番号9    DGASAITKIVLELTPEQAAAV
配列番号10    TLFIFLVCCQIPLFGIMSSDSADPFYWIRVILA
配列番号11    GRVMCLLRLMSTLLVVLSIVGK
配列番号12    LYSGYRLLVLLVMTVCCLLLFIAPTGADPLPGQTQRTL
配列番号13    MYCVIKGKTGGYCNSEGLCTCRAEDLHFLLKPIINKD
配列番号14    NAEDPRTELIGCGSVLFHLAANRLSLQLEEFAVCKR
配列番号15    ALIGLLLCSVQSVTANDPVDALGACSGNLFGLLMTRL
配列番号16    SKLFVLAFLCLALVVVVQSAPQYARGDVPT
配列番号17    SMLVAFATLSVALVVVVAIPANFNYGGGGGYFINGTGQ
配列番号18    IYEKLPAYLSEVSARVNVLQVSLQHDLPNLQ
配列番号19    EMKLAKVALVTISLWFMAWTPYLVINFTGI
配列番号20    LLPAKVIPDKTAAYVAYGGQETLVEHVEVLV
配列番号21    FYTCFLGTSSLAGFKNAVDYDELLKAG
配列番号22    VLEVLGFVEDNGELVFQELLGVLKMVDPDGD
配列番号23    KLTPTVVVVLLCLTFVADALTIQELRAQIAQQRIQQRYGVTVATT
配列番号24    SLSDYGLIELKEHCLECCQKDTEADSKLKVYPAAVLEV
配列番号25    TYICFILHGVSEIIPQQQKKTMKFLLLVASVLCLVLI
配列番号26    RYFVVIALICPLIIVETLAV
配列番号27    LLLYLDAADLRRALHQYQLLAAQGDRHLPQQIVKFV
配列番号28    VLLTPALQAYIMDEHNLNRSNIALGRIRPYPSAVKMP
配列番号29    VLKGETHKALKLKDGGHYLVEFKSIYM
配列番号30    VLHSMLVNASLAEMVKESYQTHGADGRMVVRMLKFVRLLP
配列番号31    RVRALRALLETLLQHQGEQNNDVYLIRLAHET
配列番号32    ELQQALSSLNAGSGSCAEVFNAYLPVHNKYIGVSRKI
配列番号33    KFYRLISTLLVVVVIAPRHQCSPFFFQYNRPYL
配列番号34    NYVPDVSALEQDIIEVDPETKEMLKHLDFNNIVVQL
配列番号35    QYSMECLEAAEPKYLDGLKTLADETAQC
配列番号36    EYAQVTKMLGNGRLEAMCFDGVKRLCHIRGKL
配列番号37    KLFLTLLSTLSVAMVFALPAHHHSRG
配列番号38    ELEEARLVAEELEERQQELDYLKRYLVGRLQAV
配列番号39    SYFLTVCLLALVQSETVQD
配列番号40    AMTNANLVGLTISLAYAIFFLLYTPPTGRSS
配列番号41    SFAWLLYGIILRSNFLVVQNLMALALSAVQLSLFII
配列番号42    AFPFISGFLSCFMWLKYGVLTEESTLILVNFIGSAL
配列番号43    GLLCCCLAVLFFASPLTMLAHVIR
配列番号44    LLLAMVLLPLLLLESVVPYAAAEKVW
【００６５】
0005981883.tif 000009
0005981883.tif 000010
0005981883.tif 000011
0005981883.tif 000012
0005981883.tif 000013
【００６６】
前記ポリペプチドは、完全な節足動物唾液タンパク質でないことが好ましい。
【００６７】
本発明の中で適用されるアミノ酸配列のアミノ酸の番号付けは、よく知られた原理に従い定義される。このように、番号付けは、認識される翻訳開始コドン（ＡＴＧ）を１番目のアミノ酸コドンとして始める。これは関心のあるタンパク質をコードするゲノムのセグメントのメチオニン（Ｍ）に対応する。言い換えれば、前記アミノ酸配列が公開されるデータベース（即ち、ＧｅｎＢａｎｋ、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔなど）によって使用され及び定義されるように、メチオニンを関心のあるタンパク質配列の第１番目のアミノ酸として、番号付けを始める。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
本発明を、そのほんの１例として以下の図面を参照して、詳細に説明する。
【図１】実施例に詳述されるプロトコールに従い作製された、Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｇａｍｂｉａｅの唾液腺サンプルの等電点電気泳動ゲル（ＩＥＦゲル；クーマシーブルー染色）像を示す。
【図２】図１のＩＥＦゲルのＳＤＳ−ＰＡＧＥ（銀染色）を示す。四角内は、１つの標的タンパク質群（３０ｋＤａ未満）の位置を示す。
【図３Ａ】寄主へのワクチン接種の寄主吸血カの繁殖力に対する効果：吸血したカの割合（％）。
【図３Ｂ】寄主へのワクチン接種の寄主吸血カの繁殖力に対する効果：平均蔵卵数。
【図３Ｃ】寄主へのワクチン接種の寄主吸血カの繁殖力に対する効果：平均産卵数。
【図３Ｄ】寄主へのワクチン接種の寄主吸血カの繁殖力に対する効果：孵化率（％）。
【図３Ｅ】寄主へのワクチン接種の寄主吸血カの繁殖力に対する効果：平均幼虫数。
【図３Ｆ】寄主へのワクチン接種の寄主吸血カの繁殖力に対する効果：平均蛹数。
【図３Ｇ】寄主へのワクチン接種の寄主吸血カの繁殖力に対する効果：蛹化率（％）。
【図３Ｈ】寄主へのワクチン接種の寄主吸血カの繁殖力に対する効果：羽化率（％）。
【図３Ｉ】寄主へのワクチン接種の寄主吸血カの繁殖力に対する効果：平均成虫数。
【図４】免疫感作マウスを吸血した後のカの生存率（％）に関するデータ。
【図５】実験３において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで９６時間の抗原刺激を与えた後のＩＦＮ−γ産生。
【図６】実験３に従い、与えた抗原に対する血清中の全Ｉｇの応答。
【図７】実験４に従い与えたＡＧＳミックスに対する２１日後の血清中の全Ｉｇの応答。
【図８】実験４においてＡＧＳミックスで免疫感作したマウスグループが対照のＮＲＰミックスで免疫感作したマウスグループよりも高い生存率を示すことを表わす生存曲線。
【図９】実施例に詳述されるプロトコールに従い生成された、Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｇａｍｂｉａｅの唾液腺の等電点電気泳動ゲル（ＩＥＦゲル；クーマシーブルー染色）像を示す。
【発明を実施するための形態】
【００６９】
通常上述のポリペプチドは、１個以上の（２個以上が好ましい）エピトープを含む。これらのエピトープは、細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）エピトープなどのＴ細胞エピトープであることが好ましいが、Ｂ細胞エピトープを含んでいてもよい。概して、前記ポリペプチドは、１つの節足動物唾液タンパク質に対する免疫原性を与え、複数のそのようなタンパク質に対する免疫原性を与えるのが好ましい。本発明の文脈において、節足動物唾液タンパク質に対する免疫原性を与えるポリペプチドとは、節足動物唾液タンパク質の一部であり、免疫系の応答を誘発するポリペプチドを意味する。あるポリペプチドがこのような免疫原性を有するかどうかを決定する１つの方法が、以下の実験２に詳述されている。しかし、本発明は、このような方法に限定されるものではなく、当業者は、免疫原性を決定するいかなる既知の方法も、必要に応じて、選択することができる。
【００７０】
本発明では、前記ポリペプチド組成物は、上記したようなアミノ酸配列を１個以上含む。通常、前記ポリペプチドは、必要に応じて、２個、３個、４個、５個及びこれを超える数のいずれかのこのようなアミノ酸配列を含み得る。このようなエピトープが多ければ多いほど、本ポリペプチド組成物は、異なるＨＬＡ或いはＭＨＣを有するヒト個体群内及び動物個体群内の少なくともいずれかでより大きな幅の防御を与える。このことが特に当てはまるのは、含有されるエピトープが、複数の異なる節足動物の唾液に由来するものであるか、異なる節足動物種の唾液タンパク質に共通するものかのいずれかであり、それゆえ複数の異なる節足動物によって媒介される疾病に対して保護を与えることができる場合である。通常、前記ポリペプチド組成物は、ポリペプチドを、１０個以下含み、６個以下含むことが好ましく、そして通常２個〜１０個含み、そして２個〜６個含むことがより好ましい。
【００７１】
本発明によるポリペプチド組成物は、望まれるなら、エピトープでない１種以上の更なる配列を含んでいてもよい。通常は、前記更なる配列は、１種以上の節足動物唾液タンパク質に由来し、配列番号４５〜８５の配列から選択される配列であるか、これらの部分配列であることが好ましい。これらの配列は、上述の２個以上の配列（エピトープ）の間に位置しても、前記ポリペプチドの１端及び両端のいずれかに位置してもよい。ポリペプチドの全体が大きくなりすぎて、脊椎動物免疫系中に前記エピトープを与えるのが妨害されるようなことがない限り、このような更なる配列の存在は、ポリペプチドの機能に影響を与えない。
【００７２】
上述のタンパク質に由来する前記更なる配列が以下の配列である（或いは以下の配列内にある）ものであることが最も好ましい。
配列番号４５-  >gi|18389913|gb|AAL68793.1|AF457563_1  hypothetical  protein  16  [Anopheles  gambiae]
MHLTLFTVAVLLLAAAALLLLLPPAYSTTLTPPAPPRLSHLGITIGRI
配列番号４６  -  >gi|18389909|gb|AAL68791.1|AF457561_1  hypothetical  protein  14  [Anopheles  gambiae]
MPLSYCHLFLTHTLARALSFSRSDCLKFSEKRLLFSGSKTFPTTLL
配列番号４７-  >gi|18389907|gb|AAL68790.1|AF457560_1  hypothetical  protein  13  [Anopheles  gambiae]
MKNVFFALLLVVLVCCLVSVQGNEIIQNVVKRSIPLRQLILQHNALDDSNSDSGSQ
配列番号４８-  >gi|18389903|gb|AAL68788.1|AF457558_1  hypothetical  protein  11  [Anopheles  gambiae]
MCIFFQAGIKLLVLLICLFFYHTHCTTAYLWLAMGVEAKSIKARGTAHSKSRTSTN
配列番号４９-  >gi|62546227|gb|AAX86005.1|  hyp3.5  precursor  [Anopheles  gambiae]
MFLKGSFPRFQMCVMLIGFFSSAKCLMCFADWEGMLLMTMEVFDFQLIVFTPVLKRS
配列番号５０-  >gi|18389899|gb|AAL68786.1|AF457556_1  salivary  gland  7-like  protein  [Anopheles  gambiae]
MAGESQKNARSKQNDYQALLGLCCPWIDLAAADLPMRRHAKAREAINFLLQAHEAGPNEEPSLPA
配列番号５１-  >gi|18389911|gb|AAL68792.1|AF457562_1  hypothetical  protein  15  [Anopheles  gambiae]
MKFYSVGKLVKVLLVMAVCCLLLCTAPTGADPLPGRDRNTIANKSKDKKASAPKHSLGTGARMALTGGGVLGGVLTNM
配列番号５２-  >gi|62546225|gb|AAX86004.1|  hyp6.3  precursor  [Anopheles  gambiae]
MKFAFAFVLIALFAVFAVSQALPQPEQAAASSNDGASAITKIVLELTPEQAAAVQKMGGRGFWPIMMKSVKKIMAIGCDLIDC
配列番号５３-  >gi|17026153|emb|CAD12038.1|  Sec61  protein  [Anopheles  gambiae]
MGIKFLEIIKPFCGILPEIAKPERKIQFREKVLWTAITLFIFLVCCQIPLFGIMSSDSADPFYWIRVILASNRGTLM
配列番号５４-  >gi|62546223|gb|AAX86003.1|  hyp6.2  precursor  [Anopheles  gambiae]
MGRVMCLLRLMSTLLVVLSIVGKKTNAAPQVTEAPGNVGSTYSPMADIGRLATGATKLFGQFWNTGTRFGTELSRRTFDFLRVKK
配列番号５５-  >gi|18389915|gb|AAL68794.1|AF457564_1  hypothetical  protein  17  [Anopheles  gambiae]
MAGDIQLFSTRETTMKLYSGYRLLVLLVMTVCCLLLFIAPTGADPLPGQTQRTLGYRGNDKRATPPMHSLGSGARMAMTGGGILGGIFSAL
配列番号５６-  >gi|87080391|gb|ABD18596.1|  defensin  [Anopheles  gambiae]
MDQCSVPRLCIIIMKSFIAAAVIALICAIAVSGTTVTLQSTCKLFTADVVSSITCKMYCVIKGKTGGYCNSEGLCTCRAEDLHFLLKPIINKD
配列番号５７-  >gi|18389901|gb|AAL68787.1|AF457557_1  hypothetical  protein  10  [Anopheles  gambiae]
MRFLSVLTVGLLVWVGVFATVNAEDPRTELIGCGSVLFHLAANRLSLQLEEFAVCKRSNPGYDCSDSIHRAISDLQQGLFDLNHCTKDIR
配列番号５８-  >gi|18389905|gb|AAL68789.1|AF457559_1  hypothetical  protein  12  [Anopheles  gambiae]
MRFCCVALIGLLLCSVQSVTANDPVDALGACSGNLFGLLMTRLQQMVEDFTACRQEATANDPQHDRSDSIQRAKVDLQQQLVNYSYCTKNIQ
配列番号５９-  >gi|4127344|emb|CAA76832.1|  cE5  protein  [Anopheles  gambiae]
MASKLFVLAFLCLALVVVVQSAPQYARGDVPTYDEEDFDEESLKPHSSSPSDDGEEEFDPSLLEEHADAPTARDPGRNPEFLRNSNTDEQASAPAASSSDS
配列番号６０-  >gi|4210617|emb|CAA10259.1|  SG2  protein  [Anopheles  gambiae]
MKSMLVAFATLSVALVVVVAIPANFNYGGGGGYFINGTGQSFNFSGESNGTSIPGLPDFGSFLPNLGNLTQQFGGSSGAFPQFSIPSWTNFTDAFTSILPFFGNGQGGGFPFFG
配列番号６１-  >gi|4127309|emb|CAA76820.1|  hypothetical  protein  [Anopheles  gambiae]
MTPLIATLAACALTLSIVHSRGLPESSDKLEACGQHYGXLLKASTTWNEKECNGSTKLAACVVSEHEQAYRELKQRCQEAHDERTAKVNAIYEKLPAYLSEVSARVNVLQVSLQHDLPNLQE
配列番号６２-  >gi|4375824|emb|CAA76825.1|  opsin  [Anopheles  gambiae]
PDVAEPLVHHHLRHLRVLAAAADHHLLVHLHPEGCVRSREEHARAGQEGNVASLRTQEAQNTSTEMKLAKVALVTISLWFMAWTPYLVINFTGIFKAAPISPLATIRGSLFAKANAVYNPIVYG
配列番号６３-  >gi|62546233|gb|AAX86008.1|  unknown  [Anopheles  gambiae]
MATTWIPTSVHGPYPPHMVPGGVDSDGAQIFVGRAHHAGDLLPAKVIPDKTAAYVAYGGQETLVEHVEVLVHKQLIWDTASAGQVPLGAVVGGHTSDGEILYVGRAYHEGSQTIGKVQCSHNCIYIPYGGAEVSVPTYEVLCER
配列番号６４-  >gi|3378531|emb|CAA03872.1|  D7r2  protein  [Anopheles  gambiae]
MFKKLLLSVGLVWCLISLGQARKESTVEECEKNIGDSLKDRVCELRQYTPVSSDDMDKHMQCVLEVVGFVDGNGEVKESVLLELLQRVDSGVNHAANMKKCVTEASTSGSDKKANTFYTCFLGTSSLAGFKNAVDYDELLKAGKMQTSDP
配列番号６５-  >gi|3378529|emb|CAA03871.1|  D7r3  protein  [Anopheles  gambiae]
MFGKLLPCAILLWCLFSLGQARQEETVEECERNIPASLKERVCELRQYTPVQGKDMDSHMQCVLEVLGFVEDNGELVFQELLGVLKMVDPDGDHAGSMKKCNGEAEKVDTSSKANTFYTCFLGTSSAQAFKYAVDYVXAXRAGKLDMGTTFNAGQV
配列番号６６-  >gi|18389893|gb|AAL68783.1|AF457553_1  mucin-like  protein  [Anopheles  gambiae]
AGGFSLFEALKQTTTRGEMFRRKLTPTVVVVLLCLTFVADALTIQELRAQIAQQRIQQRYGVTVATTSAATTTAATTSAATTSEATTTAAASTTQASDSDNTTTTAEATTTTEAQTTSSSDNSTTTEAAATTTAASETTADSSSTGTTSVEAGLRAQYRDQVRQQAIERALARAAAFG
配列番号６７-  >gi|18389881|gb|AAL68777.1|AF457547_1  selenoprotein  [Anopheles  gambiae]
MRLFAITCLLFSIVTVIGAEFSAEDCRELGLIKSQLFCSACSSLSDYGLIELKEHCLECCQKDTEADSKLKVYPAAVLEVCTCKFGAYPQIQAFIKSDRPAKFPNLTIKYVRGLDPIVKLMDEQGTVKETLSINKWNTDTVQEFFETRLAKVEDDDYIKTNRV
配列番号６８-  >gi|18389879|gb|AAL68776.1|AF457546_1  30  kDa  protein  [Anopheles  gambiae]
MAGAITYICFILHGVSEIIPQQQKKTMKFLLLVASVLCLVLIVSARPADDTSDQESSTELSDDAGAEEGAEDAGSDAEADAGAADGEEGATDTESGAEGDDSEMDSAMKEGEEGAGSDDAVSGADDETEESKDDAEEDSEEGGEEGGDSASGGEGGEKESPRNTYRQVHKLLKKIMKVDTKD
配列番号６９-  >gi|18378603|gb|AAL68639.1|AF458073_1  D7-related  5  protein  [Anopheles  gambiae]
MEWRYFVVIALICPLIIVETLAVSDCVRHVSESARNTVCDVRQYRVTKGVEADRYVQCFMTALGFADESGSIQRSNVLTALDAVETHDGVYTDAVDVCLSKAKKLPGTERSGYFFSCMLRTESALNFRDAVELQELRVASKWPEGERFDRSKVQQMMRELNSQLRC
配列番号７０-  >gi|18389897|gb|AAL68785.1|AF457555_1  salivary  gland  1-like  4  protein  [Anopheles  gambiae]
GREAIETMRTEQRNHRQQLLLLYLDAADLRRALHQYQLLAAQGDRHLPQQIVKFVYAAPRHENRRLENLLDLVRQLPARQDQRTLYQLLQPEIMKRPAQNQSTLAMLTALEMGQVVEGNGELKKQQDAMYQLVLKRWMFLCLAGQYREIVQFATKHPRLFE
配列番号７１-  >gi|18389883|gb|AAL68778.1|AF457548_1  antigen  5-related  1  protein  [Anopheles  gambiae]
MAIWIVCATLLLAVLSVVSVGGQYCSSDLCPRGGPHVGCNPPSSSGGPTCQGKQKARKVLLTPALQAYIMDEHNLNRSNIALGRIRPYPSAVKMPTLTWDPELASLADANARSCNYGHDRCRATKKFPYAGQNIAITQFFGYRFTEKDLIHKFVSSWWSEYLDARPEHVRKYPSSYSG
配列番号７２-  >gi|83016748|dbj|BAE53441.1|  DsRed  [synthetic  construct]
MKLASSENVITEFMRFKVRMEGTVNGHEFEIEGEGEGRPYEGHNTVKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFQYGSKVYVKHPADIPDYKKLSFPEGFKWERVMNFEDGGVATVTQDSSLQDGCFIYKVKFIGVNFPSDGPVMQKKTMGWEASTERLYPRDGVLKGETHKALKLKDGGHYLVEFKSIYMAKKPVQLPGYYYVDAKLDITSHNEDYTIVEQYERTEGRHHLFLRSRAPPPPPLT
配列番号７３-  >gi|18389895|gb|AAL68784.1|AF457554_1  salivary  gland  1-like  3  protein  [Anopheles  gambiae]
MAGQRHLIEQAWQYGAQLQHELMLTSMESDRVQRALVLHSMLVNASLAEMVKESYQTHGADGRMVVRMLKFVRLLPGADERVAVYKQLAELLKSNGQDGRFPAVIFSTDVRQLEDRYKPDHAQYEGKVVERWLAELQAGTFHEVVEFARDYPEYFARVEEPLYETLKQQWSAEGLDRMVSFPNALPVGVQRVRALRALLETLLQHQGEQNNDVYLIRLAHETGRVEATVGQADAAVRQALDDVKKLFEQFKYQRGFPDYEALYKLFKGL
配列番号７４-  >gi|18389891|gb|AAL68782.1|AF457552_1  D7  protein  long  form  [Anopheles  gambiae]
MIVPRVLLFILLELFVQATQAFKALDPEEAWYVYERCHEDHLPSGPNRETYLKTWKFWKLEPNDAVTHCYVKCTLAGLQMYDEKTNTFKPETVPVQHEAYKSFTEVESSKVNELQQALSSLNAGSGSCAEVFNAYLPVHNKYIGVSRKIYHGTVDSVAKIYEAKPEIKKQEESFFAYCAKKALGANGKEGYKKIRDYELADSAEFRNAMDCVFRGFRYMDDSGLKVDEVVRDFNLINKSDLEPEVRSVLASCTGTHAYDYYSCLLNSSVKEDFRNAFYFHELRSANYGYLAMGKVYEGPEKVKEELKKLNY
配列番号７５-  >emb|CAC35527.1|    gSG9  protein  [Anopheles  gambiae]
MCKFYRLISTLLVVVVIAPRHQCSPFFFQYNRPYLSQPSSQLASTAANVVQRSNVTVALGNRINTDTALDDYGTRV
配列番号７６-  >sp|Q9U9L1|RS17_ANOGA    40S  ribosomal  protein  S17
MGRVRTKTIKKASKVIIEKYYTRLTMDFDTNKRIVEEVAIIPTKPLRNKIAGFVTHLMKRLRHSQVRGISIKLQEEERERRDNYVPDVSALEQDIIEVDPETKEMLKHLDFNNIVVQLTNPTAPGYSNRRN
配列番号７７-  >emb|CAC35523.1|    gSG7  protein  [Anopheles  gambiae]
MHAKPAFVLIALGVICLLQTTPTSASTNHVQQLMKVFRSMTQNFDYTKKPSYLQRAKYGVQNQLRNPLVQKAGNLPKSAKLSDGCLKQMVARVTDLEASFYASFSYNCHDHDQYSMECLEAAEPKYLDGLKTLADETAQCMRDQQ
配列番号７８-  >gb|AAD47075.1|AF164151_1    translation  initiation  factor  4C  (1A)  [Anopheles  gambiae]
MPKNKGKGGKNRRRGKNENESEKRELIFKEDEQEYAQVTKMLGNGRLEAMCFDGVKRLCHIRGKLRKKVWINQGDIILIGLRDYQDSKADVILKYTPDEARNLKTYGEFPESVRINETVTFVENDMDDDIEFGDDYSSSEEGDAIDAI
配列番号７９-  >emb|CAC35519.1|    gSG2-like  protein  [Anopheles  gambiae]       
MKLFLTLLSTLSVAMVFALPAHHHSRGGDGSSANSTGNSDNNSAGVPDFGFNSQSNVPGFGNGQQPGQQQQGQQGQGFPFFGQGQSGFPSFGNRLQPFFGQNQQGQDGDAQQGRGVPFFGQGGGQGGIPSFGSGQQNGGVPFLGNGQGQSGFPSFGNGQQGGNFPFFG
配列番号８０-  >emb|CAC35451.1|    hypothetical  protein  [Anopheles  gambiae]
MKLYAFALVLCVGLAVGAEVDSVPEVPSDLQQQLDELQLADKPEAPVDDAEQPLPPNGDELPEDAPEPVPEDGSPDEEHLEEEQEEEAEADEEEADESESEESEESDELEEARLVAEELEERQQELDYLKRYLVGRLQAVAILDRRVRPAVIRRPWIRRPWIRRPG
配列番号８１>  emb|CAC35524.1|    D7r4  protein  [Anopheles  gambiae]
MIRQVIISYFLTVCLLALVQSETVQDCENKLPPSLKSRLCEIRRYEIIEGPEMDKHIHCVMRALDFVYEDGRGDYHKLYDPLNIIELDKRHDVNLEKCIGECVQVPTSERAHVFYKCLLKSTTGRTFKKVFDLMELKKAGKVPQHQRYTAEFVQIMKDYDKALNC
配列番号８２-  >ref|XP_001230998.1|    ENSANGP00000014906  [Anopheles  gambiae  str.  PEST]
MEAISEALQPYKEQVGMAAGILTVGQMFSGCFVCNDIRKKGTTDGFSAMPFVGGCGLTVLFLQHGMLMNDSAMTNANLVGLTISLAYAIFFLLYTPPTGRSSYWRQVGGTALFTITLLGYVKVENPSVVEDRFGMIITVLMLALIGQPLFGLPDIIRRKSTEGLPFAMILSGTIVGLSWLLYGVILNNVFVVCQNLAAVTLSGIQLALFAIYPSKAAPPSKKRE
配列番号８３-  >ref|XP_316361.2|    ENSANGP00000012984  [Anopheles  gambiae  str.  PEST]
MESIAVALQPYKDTVGLTAAIVTVVQFFSGVLALNAIRRQGNTRGFSALPFLGGTVFCLLNIQFGQMLRDDGMIRVNFIGLALNLLYVCGFYLYTEGPAKTAVWGQIGLAGALTAGVLSYVQYEDPQLVEFRFGLILTGLLWTLVGMPLLGLGDILKKKSTEGLPFPIIFLGAVVSFAWLLYGIILRSNFLVVQNLMALALSAVQLSLFIIFPSGAAKPPPTPAKKRN
配列番号８４-  >ref|XP_314140.3|    ENSANGP00000015780  [Anopheles  gambiae  str.  PEST]
MDGIMSKGSLASLATVATVLQFLTGTVICNRYIRKKSTGDTSAFPFISGFLSCFMWLKYGVLTEESTLILVNFIGSALFFSYTVVFFIFCVNKREVIRQMMVISCIILSATLYTLFETDDEKSIRVIGLLCCCLAVLFFASPLTMLAHVIRTQNTDSLPFPIIMASFFVCLLWTAYGVLIGDRFIQIPNLLGGILAGIQLTLYVIYPKKKASFSGGPRYSPLVSENPIL
配列番号８５-  >emb|CAC35522.1|    gSG6  protein  [Anopheles  gambiae]
MAIRVELLLAMVLLPLLLLESVVPYAAAEKVWVDRDKVYCGHLDCTRVATFKGERFCTLCDTRHFCECKETREPLPYMYACPGTEPCQSSDRLGSCSKSMHDVLCDRIDQAFLEQ
【００７３】
配列番号１〜４４のペプチド及び上述の配列番号１３１〜１３４内のペプチドなどの、本発明のペプチドを、ワクチンへと加工し易くするために、これらのペプチドの１端及び両端に１種以上の更なるアミノ酸を含ませることが好ましい。通常、これらの更なるアミノ酸は、上述の配列番号４５〜８５のより大きなタンパク質（これらのより大きなタンパク質は、配列番号１〜４４の配列を含む）中に示されるように、配列番号１〜４４の各末端に隣接している。各末端の更なるアミノ酸の数は、１個〜５個であり、１個〜３個であることがより好ましく、各末端に２個であることが最も好ましい。これらのケースそれぞれでは、配列番号１〜４４の配列のポリペプチドの末端の更なるアミノ酸が残基２個未満である場合は、この更なるアミノ酸としては、その末端では残るアミノ酸の全部を含む。配列番号１〜４４に対応する、この型の配列としては、以下の配列が特に好ましい。
【００７４】
配列番号86    MHLTLFTVAVLLLAAAALLLLLPPAYSTTLTPPAP
配列番号87    MPLSYCHLFLTHTLARALSFSRSDCLKF
配列番号88    MKNVFFALLLVVLVCCLVSVQGNEIIQ
配列番号89    GIKLLVLLICLFFYHTHCTTAYLWLAMGVEA
配列番号90    MFLKGSFPRFQMCVMLIGFFSSAKCLMC
配列番号91    KQNDYQALLGLCCPWIDLAAADLPMRRHAKARE
配列番号92    MKFYSVGKLVKVLLVMAVCCLLLCTAPTGADPLPG
配列番号93    MKFAFAFVLIALFAVFAVSQALPQPEQAAASS
配列番号94    SNDGASAITKIVLELTPEQAAAVQK
配列番号95    AITLFIFLVCCQIPLFGIMSSDSADPFYWIRVILASN
配列番号96    MGRVMCLLRLMSTLLVVLSIVGKKT
配列番号97    MKLYSGYRLLVLLVMTVCCLLLFIAPTGADPLPGQTQRTLGY
配列番号98    CKMYCVIKGKTGGYCNSEGLCTCRAEDLHFLLKPIINKD
配列番号99    TVNAEDPRTELIGCGSVLFHLAANRLSLQLEEFAVCKRSN
配列番号100    CVALIGLLLCSVQSVTANDPVDALGACSGNLFGLLMTRLQQ
配列番号101    MASKLFVLAFLCLALVVVVQSAPQYARGDVPTYD
配列番号102    MKSMLVAFATLSVALVVVVAIPANFNYGGGGGYFINGTGQSF
配列番号103    NAIYEKLPAYLSEVSARVNVLQVSLQHDLPNLQE
配列番号104    STEMKLAKVALVTISLWFMAWTPYLVINFTGIFK
配列番号105    GDLLPAKVIPDKTAAYVAYGGQETLVEHVEVLVHK
配列番号106    NTFYTCFLGTSSLAGFKNAVDYDELLKAGKM
配列番号107    QCVLEVLGFVEDNGELVFQELLGVLKMVDPDGDHA
配列番号108    RRKLTPTVVVVLLCLTFVADALTIQELRAQIAQQRIQQRYGVTVATTSA
配列番号109    CSSLSDYGLIELKEHCLECCQKDTEADSKLKVYPAAVLEVCT
配列番号110    AITYICFILHGVSEIIPQQQKKTMKFLLLVASVLCLVLIVS
配列番号111    EWRYFVVIALICPLIIVETLAVSD
配列番号112    QLLLLYLDAADLRRALHQYQLLAAQGDRHLPQQIVKFVYA
配列番号113    RKVLLTPALQAYIMDEHNLNRSNIALGRIRPYPSAVKMPTL
配列番号114    DGVLKGETHKALKLKDGGHYLVEFKSIYMAK
配列番号115    ALVLHSMLVNASLAEMVKESYQTHGADGRMVVRMLKFVRLLPGA
配列番号116    VQRVRALRALLETLLQHQGEQNNDVYLIRLAHETGR
配列番号117    VNELQQALSSLNAGSGSCAEVFNAYLPVHNKYIGVSRKIYH
配列番号118    MCKFYRLISTLLVVVVIAPRHQCSPFFFQYNRPYLSQ
配列番号119    RDNYVPDVSALEQDIIEVDPETKEMLKHLDFNNIVVQLTN
配列番号120    HDQYSMECLEAAEPKYLDGLKTLADETAQCMR
配列番号121    EQEYAQVTKMLGNGRLEAMCFDGVKRLCHIRGKLRK
配列番号122    MKLFLTLLSTLSVAMVFALPAHHHSRGGD
配列番号123    SDELEEARLVAEELEERQQELDYLKRYLVGRLQAVAI
配列番号124    IISYFLTVCLLALVQSETVQDCE
配列番号125    DSAMTNANLVGLTISLAYAIFFLLYTPPTGRSSYW
配列番号126    VVSFAWLLYGIILRSNFLVVQNLMALALSAVQLSLFIIFP
配列番号127    TSAFPFISGFLSCFMWLKYGVLTEESTLILVNFIGSALFF
配列番号128    VIGLLCCCLAVLFFASPLTMLAHVIRTQ
配列番号129    VELLLAMVLLPLLLLESVVPYAAAEKVWVD
【００７５】
このようなペプチドとしては、以下のペプチドを含むのが特に好ましい。
0005981883.tif 000014
0005981883.tif 000015
0005981883.tif 000016
0005981883.tif 000017
0005981883.tif 000018
【００７６】
本発明の他の実施形態においては、本発明の目的は、上述のポリペプチドと相同性を有するポリペプチド、特に配列番号１〜１３４のいずれかの配列と相同性を有するペプチドを含む組成物を提供することである。これらの配列において上述の相同性は、６０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、及び実質的に１００％のいずれかであることが好ましい。
【００７７】
本発明の文脈において言及される、第１のポリペプチド配列の第２のポリペプチド配列に対する相同性（％）とは、前記第１の配列に対して位置及び同一性の両方の点で一致する前記第２の配列中のアミノ酸残基の数を前記第２のポリペプチド中のアミノ酸残基の総数で除した値に１００をかけた値と定義される（第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとは同数のアミノ酸残基を有していなくてはならない）。本発明においては、ポリペプチドの前記定義された配列に対する相同性は、７５％以上、８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、及び１００％（或いは実質的に１００％）のいずれかであることが好ましい。
【００７８】
本発明においては、前記節足動物媒介疾病は、特に限定されず、前記ポリペプチドは、任意の既知の節足動物媒介疾病に対して免疫原性を有していてもよいし、任意の既知の節足動物媒介疾病に由来してもよいし、そのいずれであってもよい。本発明の対象とする、疾病、病原体、及び媒介体の例を、上の表１に詳述する。しかし、関連性する疾病は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍの系統のいずれかによって引き起こされるマラリア（任意のマラリア系統を含む）であることが好ましい。
【００７９】
上述の配列番号１〜１３４のいずれかに対して相同性を有する個々の配列は、以下のＵＲＬアドレス、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚ／ｑｕｅｒｙ／ｓｔａｔｉｃ／ｈｅｌｐ／ｈｅｌｐｄｏｃ．ｈｔｍｌ＃Ｐｒｏｔｅｉｎでオンラインでアクセスできる、公開ＮＣＢＩタンパク質データベースで見つけることのできる、既知の節足動物タンパク質の中の適切な位置に存在する配列であることが好ましい。通常、前記リストは、｜ｖｅｒｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ（ｇｉ  ｎｕｍｂｅｒ）｜ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋはｇｂ）｜ＮＣＢＩ  ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ｜ｏｐｔｉｏｎａｌ  ｆｕｒｔｈｅｒ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（例えば、そのタンパク質アミノ酸配列が由来するヌクレオチド配列のａｃｃｅｓｓｉｏｎ  ｎｕｍｂｅｒ）の形式で記載されている。このタンパク質データベースの配列は、ＧｅｎｅＢａｎｋ、ＥＭＢＬ及びＤＤＢＪにあるＤＮＡヌクレオチド配列からの翻訳コード領域に由来するアミノ酸配列データ、並びにＰｒｏｔｅｉｎ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  （ＰＩＲ）、ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ（ＰＲＦ）及びＰｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ  （ＰＤＢ）に提示されたタンパク質アミノ酸配列（アミノ酸構造が解明されたものからのアミノ酸配列）を含む。
【００８０】
上述の配列内のエピトープは、７アミノ酸残基以上有するならば、特に限定されない。前記エピトープが、特に脊椎動物種における、例えばヒトにおける、ＣＴＬエピトープ、Ｔヘルパー細胞エピトープ、及びＢ細胞エピトープなどの、より小型の免疫原性エピトープに適した長さを少なくとも有することが好ましい。通常は、前記エピトープは、８個、９個、１０個、及び１１個のいずれかの数のアミノ酸残基を有し、必要に応じてこれらを超える数のアミノ酸残基を有してもよい。
【００８１】
通常は、それらを超える数のアミノ酸を有し得るが、前記ポリペプチドは、１００個以下のアミノ酸を有し、７個〜１００個のアミノ酸を有することが好ましく、８個〜７５個のアミノ酸を有することがより好ましい。前記ポリペプチドのサイズは、有用なエピトープが、免疫系において寄主に対する保護効果のないエピトープとの競合で傷つくほど大きくなってはならず（この理由で、全タンパク質は含まれない）、また非常に狭い範囲の保護しか与えないほど小さくなってもならない。より好ましい範囲は、１５アミノ酸残基〜７５アミノ酸残基、２０アミノ酸残基〜５５アミノ酸残基、及び２３アミノ酸残基〜５０アミノ酸残基である。前記ポリペプチドが上述の配列から選択される配列からなる（或いは、から実質的になる）のが特に好ましい。
【００８２】
上述のポリペプチドに加えて、本発明は、多分枝ポリペプチドとして、又はコンカテマー化配列として、２個以上の本発明のポリペプチドを含む多エピトープ免疫原性ポリペプチドも提供する。これらの多エピトープポリペプチドのサイズは限定されず、例えば１，４００アミノ酸残基まで、９００アミノ酸残基まで、及び５５０アミノ酸残基までを含んでいてもよい。このように、多エピトープポリペプチドは、上で概説したようなポリペプチドを含むのみでなく、それぞれ本発明のポリペプチドからなるユニットを２個以上含むこれらのより大きなポリペプチドもまた含む。このように、本発明によるアミノ酸７量体ユニットの繰り返しを１００個有するポリペプチドが本発明に包含され、同様に例えば、１つのアミノ酸８量体エピトープの繰り返しユニットを５２個と第２のアミノ酸１０量体エピトープの繰り返しユニットを２３個有するポリペプチドなども含まれる。このタイプのポリペプチドは、１個又は２個のエピトープのみを含む同様の長さのポリペプチドに付随する競合問題の影響を受けない。疑義が生じないように述べると、前記多エピトープポリペプチドは、同一のエピトープの複数のコピー、又は複数の異なるエピトープの単一コピー、又は２個以上のエピトープの複数のコピーを含み得る。多エピトープポリペプチドを構成する配列が、配列番号１〜４４中に上述した配列（そして特に配列番号１〜６、７、８、１１、１２、１５、１６、２０、２６、２８、３０〜３２、３５、４１、及び４２の配列）、或いは配列番号８６〜１３４の配列の２種以上の配列であることが特に好ましい。
【００８３】
上述したように、本発明はまた、１種以上の、好ましくは２種以上の異なる、上で定義したポリペプチドを含むポリペプチド組成物を提供する。このように、前記ポリペプチド組成物は、同一配列中、同一混合物中及び同一処方物中のいずれかにおいて任意の数の本発明のポリペプチドを共に含み得る。複数のポリペプチドが共に存在することによって、それぞれのポリペプチドがそれ自身の免疫応答を誘発し、前記組成物の保護効果の範囲を広げることができるので、前記組成物は有用となる。前記組成物が、配列番号１〜４４の配列（及び特に配列番号１〜６、７、８、１１、１２、１５、１６、２０、２６、２８、３０〜３２、３５、４１、及び４２の配列）の２種以上の配列（或いは、全ての配列）を含む組成物、及び配列番号８６〜１３４内のエピトープを２種以上含む組成物の少なくともいずれかであることが特に好ましい。前記組成物においては、各配列及び各エピトープの少なくともいずれかを、別個のペプチドとして存在させてもよく、又は数個のコンカテマー化エピトープ及び数個のコンカテマー化配列の少なくともいずれかとしてそれらを含む多数のより大きなペプチドとして（例えば、３種の配列を１つのより大きなペプチド中にコンカテマー化し、別の４種の配列を別のより大きなペプチド中にコンカテマー化する）存在させてもよい。
【００８４】
本発明はまた、上で規定したポリペプチド及び担体を含む、ポリペプチド構築物を提供する。前記構築物は、上で規定された１個以上のエピトープ及びポリペプチドの少なくともいずれかと担体とを組み合わせることによって形成され得る。前記担体は、アジュバント及び賦形剤などの分子であってよい。この文脈の中で、「組み合わせる」とは、共に混合する、又は共に結合させる（例えば共有結合で）ことを意味する。
【００８５】
本発明は更に、医薬における使用のために、上で規定されたポリペプチドを提供する。本発明はまた、上で定義されたポリペプチド並びに１種以上の適切な賦形剤及びアジュバントの少なくともいずれか、或いは、上で定義されたポリペプチド構築物並びに任意に１種以上の適切な賦形剤及びアジュバントの少なくともいずれか（前記構築物の担体部分がそれ自体賦形剤或いはアジュバントの場合、更なる賦形剤或いはアジュバントは必要ない）を含む、節足動物媒介疾病に対抗する薬剤或いはワクチン組成物を提供する。前記賦形剤或いはアジュバントとしては特に制限はなく、薬剤及びワクチンにおいて使用される任意の賦形剤或いはアジュバントを使用してもよい。前記薬剤又はワクチン組成物は、本発明に適切に適合させた任意の既知の方法、例えば本発明のポリペプチドを適切な賦形剤と混合する方法などによって生成することができる。
【００８６】
上で定義されたポリペプチドを生成する方法もまた本発明によって提供される。前記方法としては特に制限はなく、通常、２個以上のエピトープを連結しポリペプチドを形成する工程を含む。前記ポリペプチドは、しかしながら、直接化学合成（例えば、完全なポリペプチドが形成されるまで、一度にアミノ酸を１個ずつ結合する方法）、或いは、遺伝子組み換え手法によって合成することができる。このような一般的方法は、当業者にはよく知られており、必要に応じて本発明に適合させることができる。幾つかの例では、本発明のポリペプチドは、ポリペプチドの合成に役立てるために、１端又は両端に追加のアミノ酸配列を含んでもよい。これらの追加のアミノ酸配列の長さは、１〜５アミノ酸残基であるのが好ましい。通常は、２アミノ酸残基が包含される。このような配列の例としては、上述の配列番号８６〜１２９の配列が挙げられる。
【００８７】
本発明はなおさらに、節足動物媒介疾病の治療又は予防において有効である、薬剤又はワクチンの製造における、上で定義したポリペプチド又は組成物の使用を提供する。本発明はまた、上で定義したポリペプチド、組成物、薬剤、或いはワクチンの脊椎動物への投与を含む、節足動物媒介疾病を治療又は予防する方法を提供する。投与方法は特に限定されず、皮下投与、筋内投与、静脈内投与、皮内投与、或いは鼻腔内投与を含むことができ、或いは、経口投与（例えば、錠剤又は液体調製物の形態などで）を、或いは、必要に応じて、坐薬の形態での投与を含むことができる。このような投与調製物の剤型は特に限定されず、当業者に明白である適切な変更をした既知の剤型を使用してもよい。用量は特に限定されず、投与する個体の体サイズ、体重及び種によって、個体当り１ｐｇ〜１００ｇの範囲のポリペプチド量であってもよく、１ｎｇ〜１００ｇの範囲のポリペプチド量であることが好ましい。
【００８８】
脊椎動物の免疫システムは同様の様式で機能するので、本発明はあらゆる脊椎動物に適用することができる。通常、本発明の文脈において言及される脊椎動物は、哺乳類、鳥類、爬虫類及び魚類のいずれかである。前記脊椎動物が、ヒト、家畜（ｄｏｍｅｓｔｉｃ  ａｎｉｍａｌ）（イヌ及びネコのいずれかなど）、産業動物（ｆａｒｍ  ａｎｉｍａｌ）（ブタ及びウマのいずれかなど）、ウシ亜科動物（ｂｏｖｉｎｅ  ａｎｉｍａｌ）（牛（ｃａｔｔｌｅ）など）、又は、家禽（家畜鳥（ｄｏｍｅｓｔｉｃ  ｂｉｒｄ）、産業動物鳥（ｆａｒｍ  ｂｉｒｄ）、猟鳥（ｇａｍｅ  ｂｉｒｄ））であることが特に好ましい。前記脊椎動物が鳥類である場合、これが、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル、及びガチョウのいずれかであることが好ましい。
【００８９】
本発明の特定のＴ細胞エピトープと関係し得るヒトＭＨＣ（ＨＬＡ）としては、例えば、以下のものが挙げられる：
HLA-A
A*010101,  A*010102,  A*010103,  A*0102,  A*0103,  A*0104N,  A*0106,  A*0107,  A*0108,  A*0109,  A*0110,  A*02010101,  A*02010102L,  A*020102,  A*020103,  A*020104,  A*020105,  A*020106,  A*020107,  A*020108,  A*020109,  A*020110,  A*020111,  A*0202,  A*020301,  A*020302,  A*0204,  A*0205,  A*020601,  A*020602,  A*020603,  A*0207,  A*0208,  A*0209,  A*0210,  A*0211,  A*0212,  A*0213,  A*0214,  A*0215N,  A*0216,  A*021701,  A*021702,  A*0218,  A*0219,  A*022001,  A*022002,  A*0221,  A*0222,  A*0224,  A*0225,  A*0226,  A*0227,  A*0228,  A*0229,  A*0230,  A*0231,  A*0232N,  A*0233,  A*0234,  A*023501,  A*023502,  A*0236,  A*0237,  A*0238,  A*0239,  A*0240,  A*0241,  A*0242,  A*0243N,  A*0244,  A*0245,  A*0246,  A*0247,  A*0248,  A*0249,  A*0250,  A*0251,  A*0252,  A*0253N,  A*0254,  A*0255,  A*0256,  A*0257,  A*0258,  A*0259,  A*0260,  A*0261,  A*0262,  A*0263,  A*0264,  A*0265,  A*0266,  A*0267,  A*0268,  A*0269,  A*0270,  A*0271,  A*0272,  A*0273,  A*03010101,  A*03010102N,  A*03010103,  A*030102,  A*030103,  A*0302,  A*0303N,  A*0304,  A*0305,  A*0306,  A*0307,  A*0308,  A*0309,  A*0310,  A*0311N,  A*0312,  A*0313,  A*0314,  A*110101,  A*110102,  A*1102,  A*1103,  A*1104,  A*1105,  A*1106,  A*1107,  A*1108,  A*1109,  A*1110,  A*1111,  A*1112,  A*1113,  A*1114,  A*1115,  A*1116,  A*1117,  A*1118,  A*1119,  A*2301,  A*2302,  A*2303,  A*2304,  A*2305,  A*2306,  A*2307N,  A*2308N,  A*2309,  A*2310,  A*2311N,  A*2312,  A*24020101,  A*24020102L,  A*240202,  A*240203,  A*240204,  A*240205,  A*240206,  A*240301,  A*240302,  A*2404,  A*2405,  A*2406,  A*2407,  A*2408,  A*2409N,  A*2410,  A*2411N,  A*2413,  A*2414,  A*2415,  A*2417,  A*2418,  A*2419,  A*2420,  A*2421,  A*2422,  A*2423,  A*2424,  A*2425,  A*2426,  A*2427,  A*2428,  A*2429,  A*2430,  A*2431,  A*2432,  A*2433,  A*2434,  A*2435,  A*2436N,  A*2437,  A*2438,  A*2439,  A*2440N,  A*2441,  A*2442,  A*2443,  A*2444,  A*2445N,  A*2446,  A*250101,  A*250102,  A*2502,  A*2503,  A*2504,  A*2601,  A*2602,  A*2603,  A*2604,  A*2605,  A*2606,  A*260701,  A*260702,  A*2608,  A*2609,  A*2610,  A*2611N,  A*2612,  A*2613,  A*2614,  A*2615,  A*2616,  A*2617,  A*2618,  A*2619,  A*2620,  A*2621,  A*2622,  A*2623,  A*29010101,  A*29010102N,  A*290201,  A*290202,  A*290203,  A*2903,  A*2904,  A*2905,  A*2906,  A*2907,  A*2908N,  A*2909,  A*2910,  A*2911,  A*300101,  A*300102,  A*300201,  A*300202,  A*3003,  A*3004,  A*3006,  A*3007,  A*3008,  A*3009,  A*3010,  A*3011,  A*3012,  A*310102,  A*3102,  A*3103,  A*3104,  A*3105,  A*3106,  A*3107,  A*3108,  A*3109,  A*3110,  A*3201,  A*3202,  A*3203,  A*3204,  A*3205,  A*3206,  A*3207,  A*3208,  A*3301,  A*330301,  A*330302,  A*3304,  A*3305,  A*3306,  A*3307,  A*3401,  A*3402,  A*3403,  A*3404,  A*3405,  A*3406,  A*3601,  A*3602,  A*3603,  A*3604,  A*4301,  A*6601,  A*6602,  A*6603,  A*6604,  A*680101,  A*680102,  A*680103,  A*6802,  A*680301,  A*680302,  A*6804,  A*6805,  A*6806,  A*6807,  A*6808,  A*6809,  A*6810,  A*6811N,  A*6812,  A*6813,  A*6814,  A*6815,  A*6816,  A*6817,  A*6818N,  A*6819,  A*6820,  A*6821,  A*6822,  A*6823,  A*6824,  A*6825,  A*6826,  A*6827,  A*6901,  A*7401,  A*7402,  A*7403,  A*7404,  A*7405,  A*7406,  A*7407,  A*7408,  A*7409,  A*7410,  A*8001.
HLA-B
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HLA-C
Cw*010201,  Cw*010202,  Cw*0103,  Cw*0104,  Cw*0105,  Cw*0106,  Cw*0107,  Cw*0108,  Cw*0109,  Cw*0110,  Cw*020201,  Cw*020202,  Cw*020203,  Cw*020204,  Cw*020205,  Cw*0203,  Cw*0204,  Cw*0205,  Cw*0206,  Cw*0207,  Cw*0208,  Cw*0209,  Cw*030201,  Cw*030202,  Cw*030301,  Cw*030302,  Cw*030303,  Cw*030304,  Cw*030401,  Cw*030402,  Cw*030403,  Cw*0305,  Cw*0306,  Cw*0307,  Cw*0308,  Cw*0309,  Cw*0310,  Cw*0311,  Cw*0312,  Cw*0313,  Cw*0314,  Cw*0315,  Cw*0316,  Cw*0317,  Cw*0318,  Cw*04010101,  Cw*04010102,  Cw*040102,  Cw*0403,  Cw*040401,  Cw*040402,  Cw*0405,  Cw*0406,  Cw*0407,  Cw*0408,  Cw*0409N,  Cw*0410,  Cw*0411,  Cw*0412,  Cw*0413,  Cw*0414,  Cw*0415,  Cw*050101,  Cw*050102,  Cw*0502,  Cw*0503,  Cw*0504,  Cw*0505,  Cw*0506,  Cw*0507N,  Cw*0508,  Cw*0509,  Cw*0510,  Cw*0602,  Cw*0603,  Cw*0604,  Cw*0605,  Cw*0606,  Cw*0607,  Cw*0608,  Cw*0609,  Cw*0610,  Cw*0611,  Cw*070101,  Cw*070102,  Cw*070103,  Cw*07020101,  Cw*07020102,  Cw*07020103,  Cw*0703,  Cw*070401,  Cw*070402,  Cw*0705,  Cw*0706,  Cw*0707,  Cw*0708,  Cw*0709,  Cw*0710,  Cw*0711,  Cw*0712,  Cw*0713,  Cw*0714,  Cw*0715,  Cw*0716,  Cw*0717,  Cw*0718,  Cw*0719,  Cw*0720,  Cw*0721,  Cw*0722,  Cw*0723,  Cw*0724,  Cw*0725,  Cw*0726,  Cw*0727,  Cw*0728,  Cw*0729,  Cw*080101,  Cw*080102,  Cw*0802,  Cw*0803,  Cw*0804,  Cw*0805,  Cw*0806,  Cw*0807,  Cw*0808,  Cw*0809,  Cw*0810,  Cw*0811,  Cw*0812,  Cw*120201,  Cw*120202,  Cw*120203,  Cw*120301,  Cw*120302,  Cw*120303,  Cw*120401,  Cw*120402,  Cw*1205,  Cw*1206,  Cw*1207,  Cw*1208,  Cw*1209,  Cw*1210,  Cw*1211,  Cw*1212,  Cw*1213,  Cw*1214,  Cw*1215,  Cw*140201,  Cw*140202,  Cw*140203,  Cw*1403,  Cw*1404,  Cw*1405,  Cw*150201,  Cw*150202,  Cw*1503,  Cw*1504,  Cw*150501,  Cw*150502,  Cw*150503,  Cw*150504,  Cw*1506,  Cw*1507,  Cw*1508,  Cw*1509,  Cw*1510,  Cw*1511,  Cw*1512,  Cw*1601,  Cw*1602,  Cw*160401,  Cw*1606,  Cw*1701,  Cw*1702,  Cw*1703,  Cw*1801,  Cw*1802.
HLA-E
E*0101,  E*010301,  E*010302,  E*010303,  E*0104.
HLA-F
F*010101,  F*010102.
HLA-G
G*010101,  G*010102,  G*010103,  G*010104,  G*010105,  G*010106,  G*010107,  G*010108,  G*0102,  G*0103,  G*010401,  G*010402,  G*010403,  G*0105N,  G*0106.
HLA-DRA
DRA*0101,  DRA*010201,  DRA*010202.
HLA-DRB1
DRB1*010101,  DRB1*010102,  DRB1*010103,  DRB1*010201,  DRB1*010202,  DRB1*010203,  DRB1*010204,  DRB1*0103,  DRB1*0104,  DRB1*0105,  DRB1*0106,  DRB1*0107,  DRB1*0108,  DRB1*0109,  DRB1*0110,  DRB1*0111,  DRB1*030101,  DRB1*030102,  DRB1*030201,  DRB1*030202,  DRB1*0303,  DRB1*0304,  DRB1*030501,  DRB1*030502,  DRB1*0306,  DRB1*0307,  DRB1*0308,  DRB1*0309,  DRB1*0310,  DRB1*0311,  DRB1*0312,  DRB1*0313,  DRB1*0314,  DRB1*0315,  DRB1*0316,  DRB1*0317,  DRB1*0318,  DRB1*0319,  DRB1*0320,  DRB1*0321,  DRB1*0322,  DRB1*0323,  DRB1*0324,  DRB1*0325,  DRB1*0326,  DRB1*0327,  DRB1*0328,  DRB1*040101,  DRB1*040102,  DRB1*0402,  DRB1*040301,  DRB1*040302,  DRB1*0404,  DRB1*040501,  DRB1*040502,  DRB1*040503,  DRB1*040504,  DRB1*0406,  DRB1*040701,  DRB1*040702,  DRB1*040703,  DRB1*0408,  DRB1*0409,  DRB1*0410,  DRB1*0411,  DRB1*0412,  DRB1*0413,  DRB1*0414,  DRB1*0415,  DRB1*0416,  DRB1*0417,  DRB1*0418,  DRB1*0419,  DRB1*0420,  DRB1*0421,  DRB1*0422,  DRB1*0423,  DRB1*0424,  DRB1*0425,  DRB1*0426,  DRB1*0427,  DRB1*0428,  DRB1*0429,  DRB1*0430,  DRB1*0431,  DRB1*0432,  DRB1*0433,  DRB1*0434,  DRB1*0435,  DRB1*0436,  DRB1*0437,  DRB1*0438,  DRB1*0439,  DRB1*0440,  DRB1*0441,  DRB1*0442,  DRB1*0443,  DRB1*0444,  DRB1*0445,  DRB1*0446,  DRB1*0447,  DRB1*0448,  DRB1*0449,  DRB1*0450,  DRB1*070101,  DRB1*070102,  DRB1*0703,  DRB1*0704,  DRB1*0705,  DRB1*0706,  DRB1*0707,  DRB1*0708,  DRB1*080101,  DRB1*080102,  DRB1*080201,  DRB1*080202,  DRB1*080203,  DRB1*080302,  DRB1*080401,  DRB1*080402,  DRB1*080403,  DRB1*080404,  DRB1*0805,  DRB1*0806,  DRB1*0807,  DRB1*0808,  DRB1*0809,  DRB1*0810,  DRB1*0811,  DRB1*0812,  DRB1*0813,  DRB1*0814,  DRB1*0815,  DRB1*0816,  DRB1*0817,  DRB1*0818,  DRB1*0819,  DRB1*0820,  DRB1*0821,  DRB1*0822,  DRB1*0823,  DRB1*0824,  DRB1*0825,  DRB1*0826,  DRB1*0827,  DRB1*0828,  DRB1*0829,  DRB1*090102,  DRB1*090103,  DRB1*0902,  DRB1*0903,  DRB1*100101,  DRB1*100102,  DRB1*110101,  DRB1*110102,  DRB1*110103,  DRB1*110104,  DRB1*110105,  DRB1*1102,  DRB1*1103,  DRB1*110401,  DRB1*110402,  DRB1*1105,  DRB1*110601,  DRB1*110602,  DRB1*1107,  DRB1*110801,  DRB1*110802,  DRB1*1109,  DRB1*1110,  DRB1*1111,  DRB1*111201,  DRB1*111202,  DRB1*1113,  DRB1*1114,  DRB1*1115,  DRB1*1116,  DRB1*1117,  DRB1*1118,  DRB1*1119,  DRB1*1120,  DRB1*1121,  DRB1*1122,  DRB1*1123,  DRB1*1124,  DRB1*1125,  DRB1*1126,  DRB1*112701,  DRB1*112702,  DRB1*1128,  DRB1*1129,  DRB1*1130,  DRB1*1131,  DRB1*1132,  DRB1*1133,  DRB1*1134,  DRB1*1135,  DRB1*1136,  DRB1*1137,  DRB1*1138,  DRB1*1139,  DRB1*1140,  DRB1*1141,  DRB1*1142,  DRB1*1143,  DRB1*1144,  DRB1*1145,  DRB1*1146,  DRB1*1147,  DRB1*1148,  DRB1*1149,  DRB1*1150,  DRB1*1151,  DRB1*1152,  DRB1*1153,  DRB1*1154,  DRB1*120101,  DRB1*120102,  DRB1*120201,  DRB1*120202,  DRB1*120302,  DRB1*1204,  DRB1*1205,  DRB1*1206,  DRB1*1207,  DRB1*1208,  DRB1*1209,  DRB1*1210,  DRB1*130101,  DRB1*130102,  DRB1*130103,  DRB1*130201,  DRB1*130202,  DRB1*130301,  DRB1*130302,  DRB1*1304,  DRB1*1305,  DRB1*1306,  DRB1*130701,  DRB1*130702,  DRB1*1308,  DRB1*1309,  DRB1*1310,  DRB1*1311,  DRB1*1312,  DRB1*1313,  DRB1*131401,  DRB1*131402,  DRB1*1315,  DRB1*1316,  DRB1*1317,  DRB1*1318,  DRB1*1319,  DRB1*1320,  DRB1*1321,  DRB1*1322,  DRB1*1323,  DRB1*1324,  DRB1*1325,  DRB1*1326,  DRB1*1327,  DRB1*1328,  DRB1*1329,  DRB1*1330,  DRB1*1331,  DRB1*1332,  DRB1*1333,  DRB1*1334,  DRB1*1335,  DRB1*1336,  DRB1*1337,  DRB1*1338,  DRB1*1339,  DRB1*1340,  DRB1*1341,  DRB1*1342,  DRB1*1343,  DRB1*1344,  DRB1*1345,  DRB1*1346,  DRB1*1347,  DRB1*1348,  DRB1*1349,  DRB1*1350,  DRB1*1351,  DRB1*1352,  DRB1*1353,  DRB1*1354,  DRB1*1355,  DRB1*1356,  DRB1*1357,  DRB1*1358,  DRB1*1359,  DRB1*1360,  DRB1*1361,  DRB1*1362,  DRB1*1363,  DRB1*1364,  DRB1*1365,  DRB1*140101,  DRB1*140102,  DRB1*1402,  DRB1*140301,  DRB1*140302,  DRB1*1404,  DRB1*140501,  DRB1*140502,  DRB1*1406,  DRB1*140701,  DRB1*140702,  DRB1*1408,  DRB1*1409,  DRB1*1410,  DRB1*1411,  DRB1*1412,  DRB1*1413,  DRB1*1414,  DRB1*1415,  DRB1*1416,  DRB1*1417,  DRB1*1418,  DRB1*1419,  DRB1*1420,  DRB1*1421,  DRB1*1422,  DRB1*1423,  DRB1*1424,  DRB1*1425,  DRB1*1426,  DRB1*1427,  DRB1*1428,  DRB1*1429,  DRB1*1430,  DRB1*1431,  DRB1*1432,  DRB1*1433,  DRB1*1434,  DRB1*1435,  DRB1*1436,  DRB1*1437,  DRB1*1438,  DRB1*1439,  DRB1*1440,  DRB1*1441,  DRB1*1442,  DRB1*1443,  DRB1*1444,  DRB1*1445,  DRB1*1446,  DRB1*1447,  DRB1*1448,  DRB1*150101,  DRB1*150102,  DRB1*150103,  DRB1*150104,  DRB1*150105,  DRB1*150201,  DRB1*150202,  DRB1*150203,  DRB1*1503,  DRB1*1504,  DRB1*1505,  DRB1*1506,  DRB1*1507,  DRB1*1508,  DRB1*1509,  DRB1*1510,  DRB1*1511,  DRB1*1512,  DRB1*1513,  DRB1*1514,  DRB1*1515,  DRB1*1516,  DRB1*160101,  DRB1*160102,  DRB1*160201,  DRB1*160202,  DRB1*1603,  DRB1*1604,  DRB1*160501,  DRB1*160502,  DRB1*1607,  DRB1*1608.
HLA-DRB2-9
DRB2*0101,  DRB3*010101,  DRB3*01010201,  DRB3*01010202,  DRB3*010103,  DRB3*010104,  DRB3*0102,  DRB3*0103,  DRB3*0104,  DRB3*0105,  DRB3*0106,  DRB3*0107,  DRB3*0108,  DRB3*0109,  DRB3*0110,  DRB3*0111,  DRB3*0201,  DRB3*020201,  DRB3*020202,  DRB3*020203,  DRB3*020204,  DRB3*0203,  DRB3*0204,  DRB3*0205,  DRB3*0206,  DRB3*0207,  DRB3*0208,  DRB3*0209,  DRB3*0210,  DRB3*0211,  DRB3*0212,  DRB3*0213,  DRB3*0214,  DRB3*0215,  DRB3*0216,  DRB3*0217,  DRB3*0218,  DRB3*0219,  DRB3*030101,  DRB3*030102,  DRB3*0302,  DRB3*0303,  DRB4*01010101,  DRB4*0102,  DRB4*01030101,  DRB4*01030102N,  DRB4*010302,  DRB4*010303,  DRB4*010304,  DRB4*0104,  DRB4*0105,  DRB4*0106,  DRB4*0107,  DRB4*0201N,  DRB4*0301N,  DRB5*010101,  DRB5*010102,  DRB5*0102,  DRB5*0103,  DRB5*0104,  DRB5*0105,  DRB5*0106,  DRB5*0107,  DRB5*0108N,  DRB5*0109,  DRB5*0110N,  DRB5*0111,  DRB5*0112,  DRB5*0113,  DRB5*0202,  DRB5*0203,  DRB5*0204,  DRB5*0205,  DRB6*0101,  DRB6*0201,  DRB6*0202,  DRB7*010101,  DRB7*010102,  DRB8*0101,  DRB9*0101.
HLA-DQA1
DQA1*010101,  DQA1*010102,  DQA1*010201,  DQA1*010202,  DQA1*0103,  DQA1*010401,  DQA1*010402,  DQA1*0105,  DQA1*0106,  DQA1*0107,  DQA1*0201,  DQA1*030101,  DQA1*0302,  DQA1*0303,  DQA1*040101,  DQA1*040102,  DQA1*0402,  DQA1*0403N,  DQA1*0404,  DQA1*050101,  DQA1*050102,  DQA1*0502,  DQA1*0503,  DQA1*0504,  DQA1*0505,  DQA1*060101,  DQA1*060102,  DQA1*0602.
HLA-DQB1
DQB1*020101,  DQB1*020102,  DQB1*0202,  DQB1*0203,  DQB1*030101,  DQB1*030102,  DQB1*030201,  DQB1*030202,  DQB1*030302,  DQB1*030303,  DQB1*0304,  DQB1*030501,  DQB1*030502,  DQB1*030503,  DQB1*0306,  DQB1*0307,  DQB1*0308,  DQB1*0309,  DQB1*0310,  DQB1*0311,  DQB1*0312,  DQB1*0313,  DQB1*0401,  DQB1*0402,  DQB1*050101,  DQB1*050102,  DQB1*050201,  DQB1*050202,  DQB1*050301,  DQB1*050302,  DQB1*0504,  DQB1*060101,  DQB1*060102,  DQB1*060103,  DQB1*0602,  DQB1*0603,  DQB1*060401,  DQB1*060402,  DQB1*060501,  DQB1*060502,  DQB1*0606,  DQB1*0607,  DQB1*0608,  DQB1*0609,  DQB1*0610,  DQB1*061101,  DQB1*061102,  DQB1*0612,  DQB1*0613,  DQB1*0614,  DQB1*0615,  DQB1*0616,  DQB1*0617,  DQB1*0618,  DQB1*0619,  DQB1*0620,  DQB1*0621,  DQB1*0622,  DQB1*0623.
HLA-DPA1
DPA1*010301,  DPA1*010302,  DPA1*010303,  DPA1*0104,  DPA1*0105,  DPA1*0106,  DPA1*0107,  DPA1*0108,  DPA1*020101,  DPA1*020102,  DPA1*020103,  DPA1*020104,  DPA1*020105,  DPA1*020106,  DPA1*020201,  DPA1*020202,  DPA1*020203,  DPA1*0203,  DPA1*0301,  DPA1*0302,  DPA1*0303,  DPA1*0401.
HLA-DPB1
DPB1*010101,  DPB1*010102,  DPB1*010103,  DPB1*0102,  DPB1*020102,  DPB1*020103,  DPB1*020104,  DPB1*020105,  DPB1*020106,  DPB1*0202,  DPB1*0203,  DPB1*030101,  DPB1*030102,  DPB1*0302,  DPB1*040101,  DPB1*040102,  DPB1*0402,  DPB1*0501,  DPB1*0601,  DPB1*0801,  DPB1*0901,  DPB1*1001,  DPB1*110101,  DPB1*110102,  DPB1*1301,  DPB1*1401,  DPB1*1501,  DPB1*1601,  DPB1*1701,  DPB1*1801,  DPB1*1901,  DPB1*200101,  DPB1*200102,  DPB1*2101,  DPB1*2201,  DPB1*2301,  DPB1*2401,  DPB1*2501,  DPB1*260101,  DPB1*260102,  DPB1*2701,  DPB1*2801,  DPB1*2901,  DPB1*3001,  DPB1*3101,  DPB1*3201,  DPB1*3301,  DPB1*3401,  DPB1*3501,  DPB1*3601,  DPB1*3701,  DPB1*3801,  DPB1*3901,  DPB1*4001,  DPB1*4101,  DPB1*4401,  DPB1*4501,  DPB1*4601,  DPB1*4701,  DPB1*4801,  DPB1*4901,  DPB1*5001,  DPB1*5101,  DPB1*5201,  DPB1*5301,  DPB1*5401,  DPB1*5501,  DPB1*5601,  DPB1*5701,  DPB1*5801,  DPB1*5901,  DPB1*6001,  DPB1*6101N,  DPB1*6201,  DPB1*6301,  DPB1*6401N,  DPB1*6501,  DPB1*6601,  DPB1*6701,  DPB1*6801,  DPB1*6901,  DPB1*7001,  DPB1*7101,  DPB1*7201,  DPB1*7301,  DPB1*7401,  DPB1*7501,  DPB1*7601,  DPB1*7701,  DPB1*7801,  DPB1*7901,  DPB1*8001,  DPB1*8101,  DPB1*8201,  DPB1*8301,  DPB1*8401,  DPB1*8501,  DPB1*8601,  DPB1*8701,  DPB1*8801,  DPB1*8901,  DPB1*9001,  DPB1*9101,  DPB1*9201,  DPB1*9301,  DPB1*9401,  DPB1*9501,  DPB1*9601,  DPB1*9701,  DPB1*9801,  DPB1*9901.
HLA-DMA
DMA*0101,  DMA*0102,  DMA*0103,  DMA*0104.
HLA-DMB
DMB*0101,  DMB*0102,  DMB*0103,  DMB*0104,  DMB*0105,  DMB*0106.
HLA-DOA
DOA*010101,  DOA*01010201,  DOA*01010202,  DOA*01010203,  DOA*010103,  DOA*01010401,  DOA*01010402,  DOA*010105.
HLA-DOB
DOB*01010101,  DOB*01010102,  DOB*010102,  DOB*010201,  DOB*010202,  DOB*0103,  DOB*01040101,  DOB*01040102.
MHC  Class  I
H-2Db,  H-2Dd,  H-2Dk,  H-2Dq,  H-2Kb,  H-2Kd,  H-2Kk,  H-2Ld,  H-2M3,  H-2Ad,  H-2Ag7,  H-2Ak,  H2-Ab,  H-2Ed,  H-2Ek,  H-2Bxk,  H-2F,  H-2I,  H-2P,  H-2R,  H-2S,  H-2Sxd,  H-2T4,  H-2U.
MHC  Class  II
I-Ab,  I-Ad,  I-Ag7,  I-Ak,  I-Ap,  I-Aq,  I-Ar,  I-As,  I-Au,  I-Av,  I-Ea,  I-Eb,  I-Ed,  I-Ek,  I-Es,  I-Eu,  H-2Q,  H-2Qa-2,  H-2Qa-2a,  Qa-1a,  Qa-1b.
【００９０】
本発明は、このようなＭＨＣ分子及びＨＬＡ分子に限定されず、必要ならば、ペプチドなどの物質がその分子に対して反応性を有することを単に立証することによって、新規に発見できるこれらのＭＨＣ分子及びＨＬＡ分子と類似の他の分子にも適用することができる。これは、当技術分野で標準である既知の技術を用いて容易に達成することができる。以下のＨＬＡ対立遺伝子を本発明において使用することが特に好ましい。
0005981883.tif 000019
0005981883.tif 000020
【００９１】
以下の本発明による対立遺伝子が最も好ましい：
HLA-A*0201,  HLA-A*0206,  HLA-A*0301,  HLA-A*1101,  HLA-A*2402,  HLA-A*3401,  HLA-B*0702,  HLA-B*0801,  HLA-B*1301,  HLA-B*27,  HLA-B*4002,  HLA-B*5101,  HLA-Cw*03,  HLA-cW*07
HLA-DRB1*0301,  HLA-DRB1*0401,  HLA-DRB1*0701,  HLA-DRB1*1501,  HLA-DRB1*1104,  HLA-DRB1*1101,  HLA-DRB4*0101
HLA-DQA1*01,  HLA-DQA1*02,  HLA-DQA1*05
HLA-DQB1*03,  HLA-DQB1*04,  HLA-DQB1*05,  HLA-DQB1*06
HLA-DPA1*01,  HLA-DPA1*02
HLA-DPB1*02,  HLA-DPB1*04
【実施例】
【００９２】
次の具体的実施形態に言及しつつ、本発明を説明するが、これはほんの1例に過ぎない。
【００９３】
（節足動物唾液タンパク質画分の調製）
本発明の特定の配列の効果を見い出すために、これらの配列の免疫原性を、さまざまな節足動物唾液タンパク質画分に対して、試験することができる。特定の唾液タンパク質画分中の少なくとも１種のエピトープを認識する免疫系細胞を、脊椎動物に産生させるこれらの配列は、本発明のワクチンにおいて有用である。
【００９４】
前記唾液タンパク質画分は、当業者によく知られた、標準的実験技術を使用して容易に単離することができる。本発明者らは、重要なのは、タンパク質画分のタンパク質の分子量範囲であることを見出したので、任意の節足動物唾液タンパク質の画分を使用することができる。特に有用なのは、分子量４０ｋＤａ以下のタンパク質画分、分子量３０ｋＤａ以下のタンパク質画分であり、分子量２０ｋＤａ〜４０ｋＤａのタンパク質画分が好ましく、分子量２０ｋＤａ以下のタンパク質画分がより好ましい。
【００９５】
以下のプロトコールは、試験において、候補配列との比較に用いることのできるタンパク質画分を例示するために提供される。ここでは、カ、Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｇａｍｂｉａｅから採取した唾液を使用しているが、任意の節足動物唾液も使用できる。
【００９６】
Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｇａｍｂｉａｅの唾液腺対（ＳＧＰ）を、コロニー中のメスカを切開して採取した。１５個のＳＧＰを２０μＬのＰＢＳ中に入れ、０．２５％の２−β−ＭＥを含有する５μＬの５×ＳＤＳ−ＰＡＧＥサンプル緩衝液を添加することで溶解した。ボルテックスしそして５分間煮沸した後、前記タンパク質混合物を、Ｎｏｖｅｘ４％〜２０％勾配トリス−グリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）上に添加した。次いで、前記ゲルを銀染色し、撮像した（図９参照）。
【００９７】
破線矢印は、免疫感作及び研究のために使用できるＳＧＰ画分の選択のための分離点の位置（即ち、＜２０ｋＤａ、２０ｋＤａ〜４０ｋＤａ、４０ｋＤａ〜８０ｋＤａ、及び＞８０ｋＤａ）を示す。実線矢印は、＜３０ｋＤａ及び＞３０ｋＤａのＳＧＰ画分の選択のための分離点の位置を示す。
【００９８】
（カ唾液由来の候補タンパク質サンプルの同定）
上で概説した例示的プロトコールと類似のアプローチをとり、研究のために数種の唾液タンパク質サンプルを調製した。
唾液腺（ＳＧ）を、Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｇａｍｂｉａｅメスカから切開して採取し、使用までＰＢＳ中に−７０°Ｃで保存した。
【００９９】
ゲル分析のために、ＳＧを、凍結融解ＮＯＶＥＸ（登録商標）ＩＥＦサンプル緩衝液ｐＨ３−１０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の添加により溶解し、その結果生じた試料をＮＯＶＥＸ（登録商標）ＩＥＦゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で分析した。前記ゲルを、次に１２％ＴＣＡで固定し、水中で３回洗浄し、そしてクーマシーブルーで染色した。この結果生じたゲルを図１に示す。
【０１００】
染色し、脱染色した後、ＩＥＦゲルを、２０％エタノール中で１０分間インキュベートし、そしてＳＧタンパク質のレーンを含むゲルの細長い切れを切り出した。このゲルの細長い切れを、２０％エタノールを含む２×ＳＤＳ−ＰＡＧＥサンプル緩衝液中で５分間平衡化し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥサンプル緩衝液中で２回リンスし、Ｎｏｖｅｘ（登録商標）４−２０％トリス−グリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の単一化ウェルに添加した。この結果生じたゲルを図２に示す。
【０１０１】
最後に、分離されたＳＧタンパク質を含むゲルを、製造元の使用説明書に従い、Ｐｒｏｔｅｏｓｉｌｖｅｒ染色キット（Ｓｉｇｍａ）を使用して染色した。
【０１０２】
前記ゲルから、４グループのタンパク質（化合物１、２、３、及び４と名付けられた）を分析のために同定した。
化合物１    唾液腺タンパク質画分  ＜２０ｋＤａ
化合物２    唾液腺タンパク質画分  ２０ｋＤａ＜Ｘ＜４０ｋＤａ
化合物３    唾液腺タンパク質画分  ４０ｋＤａ＜Ｘ＜８０ｋＤａ
化合物４    唾液腺タンパク質画分  ＞８０ｋＤａ
【０１０３】
（実験１）
目的：
（Ａ）感染を受けたカ（即ち、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｙｏｅｌｉｉ  ｎｉｇｅｒｉｅｎｓｉｓによる感染を受けたＡｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｇａｍｂｉａｅ）の刺咬による攻撃から動物を保護する効力を、候補化合物が有することの立証。
（Ｂ）候補化合物により誘導される抗カ応答の、異種のカ種（Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｇａｍｂｉａｅ及びＡｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｓｔｅｐｈｅｎｓｉ）における交差反応性レベルの評価。
（Ｃ）免疫感作マウス及び感染マウスを吸血した後の、カ（Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｇａｍｂｉａｅ及びＡｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｓｔｅｐｈｅｎｓｉ）のＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｙｏｅｌｉｉ  ｎｉｇｅｒｉｅｎｓｉｓによる感染を防止する効力を、候補化合物が有することの立証。
【０１０４】
候補化合物
選択される前記候補化合物は、上で同定されたものである：
化合物１    唾液腺タンパク質画分  ＜２０ｋＤａ
化合物２    唾液腺タンパク質画分  ２０ｋＤａ＜Ｘ＜４０ｋＤａ
化合物３    唾液腺タンパク質画分  ４０ｋＤａ＜Ｘ＜８０ｋＤａ
化合物４    唾液腺タンパク質画分  ＞８０ｋＤａ
【０１０５】
（供試動物の系統及び数）
マウスは、ＣＤ１マウスを使用した。各グループに９頭の（９）マウスを準備する、陰性対照グループであるグループ１、及び試験グループであるグループ２〜５の５種の実験グループ（１、２、３、４、及び５）を作製した。
【０１０６】
（実験プロトコール）
１日目：グループ２、３、４、及び５の４グループのそれぞれ９頭のＣＤ１マウス（Ｎ＝４×９＝３６）に対し、候補ワクチン化合物を１用量ずつ皮下に投与し（グループ２に対して化合物１、グループ３に対して化合物２、というように）、免疫感作した。
１４日目：全てのマウスに対して、同一の用量の候補ワクチン化合物の追加免疫を実施した（グループ２に対して化合物１、グループ３に対して化合物２、というように）。
２１日目：全てのマウスから、試験採血した。サンプルは、回収まで、凍結保存した（−２０℃）。各グループを更に、Ａ群（マウス５頭）とＢ群（マウス４頭）のサブグループに分けた。
グループ１Ａ〜マウス５頭        グループ１Ｂ〜マウス４頭
グループ２Ａ〜マウス５頭        グループ２Ｂ〜マウス４頭
グループ３Ａ〜マウス５頭        グループ３Ｂ〜マウス４頭
グループ４Ａ〜マウス５頭        グループ４Ｂ〜マウス４頭
グループ５Ａ〜マウス５頭        グループ５Ｂ〜マウス４頭
【０１０７】
（サブグループＡ）
２８日目：サブグループＡの全てのマウスの腹部領域を、５頭〜９頭の感染を受けたカ（即ち、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｙｏｅｌｉｉ  ｎｉｇｅｒｉｅｎｓｉｓによる感染を受けたＡｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｇａｍｂｉａｅ）に刺咬攻撃させた。全てのマウスを、寄生虫血症が最初に立証されるまでか、感染を受けたカに攻撃させた後最高６週間の間、飼育した。全てのマウスは、放血によって死亡させられ、そしてその血清サンプルは、回収まで凍結保存した（−２０℃）。
【０１０８】
（サブグループＢ）
２８日目：サブグループＢの全てのマウスの腹部領域を、以下の数の生きのよい（非感染）カに吸血させた。
Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｇａｍｂｉａｅ：５頭〜１０頭、及び
Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｓｔｅｐｈｅｎｓｉ：５頭〜１０頭
【０１０９】
これらの全てのカに対して以下の調査を実施した：
１．８日間の生存率
２．産卵数
３．蔵卵数
４．産卵から得られた成虫（Ｆ１）数
【０１１０】
３２日目：サブグループＢの全てのマウスに、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｙｏｅｌｉｉ  ｎｉｇｅｒｉｅｎｓｉｓを、寄生生物の直接的ＩＶ接種により、感染させた。
【０１１１】
３２日目：サブグループＢの全ての（又は少なくとも７５％の）マウスにおいて、進行性のマラリア感染が同定されるやいなや、全ての感染マウスの腹部領域に、非感染Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｇａｍｂｉａｅ及び非感染Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｓｔｅｐｈｅｎｓｉの両方を多数（マウス当たり＞１０）吸血させた。
【０１１２】
これらの全てのカに対して以下の項目について調べた：
１．８日間の生存率
２．必要とされるインキュベーション期間（１７日）生存したカのうち、唾液腺中にマラリア寄生虫が認められたカの数
３．産卵数
４．蔵卵数
５．産卵から得られた成虫（Ｆ１）数
【０１１３】
カに吸血させた後、全てのマウスは、放血により死亡させられ、その血清サンプルを回収まで凍結保存（−２０℃）した。
【０１１４】
この実験の最後まで残っていたあらゆる量の試験化合物は、回収まで凍結保存した（−２０℃）。
【０１１５】
（結果）
図３Ａ〜３Ｉ及び図４に、本実験の結果をグラフで表示した。最初の図のセット（図３Ｘ）は、グループ１〜５のそれぞれに対する、ワクチンのカの繁殖力への効果についてのデータを示し、それぞれ以下の繁殖力特性を示す。
３Ａ：吸血したカの割合（％）    ３Ｂ：平均蔵卵数
３Ｃ：平均産卵数                ３Ｄ：孵化率（％）
３Ｅ：平均幼虫数                ３Ｆ：平均蛹数
３Ｇ：蛹化率（％）              ３Ｈ：羽化率（％）
３Ｉ：平均成虫数
【０１１６】
これらグラフＡ〜Ｉのそれぞれを裏付ける数値データを、それぞれ以下の表２に記す（列Ａが図３Ａに対応するというように）。
【０１１７】
【表２】
0005981883.tif 000021
【０１１８】
以下の表３Ａ〜３Ｉに詳述されるデータは、上記のデータを、Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｅｎｅｙのノンパラメトリック統計解析を用いて処理した結果、得られたｐ値を示したものである。
【０１１９】
【表３Ａ】
0005981883.tif 000022
【０１２０】
【表３Ｂ】
0005981883.tif 000023
【０１２１】
【表３Ｃ】
0005981883.tif 000024
【０１２２】
【表３Ｄ】
0005981883.tif 000025
【０１２３】
【表３Ｅ】
0005981883.tif 000026
【０１２４】
【表３Ｆ】
0005981883.tif 000027
【０１２５】
【表３Ｇ】
0005981883.tif 000028
【０１２６】
【表３Ｈ】
0005981883.tif 000029
【０１２７】
【表３Ｉ】
0005981883.tif 000030
【０１２８】
図４は、５グループのそれぞれのカの８日間の生存率（％）である。０日目での各グループのカの数を以下に示す。
グループ１（対照）    １００
グループ２              ８９
グループ３            １００
グループ４              ９９
グループ５              ９８
【０１２９】
図４のグラフに関するデータを、以下の表４に詳述する。
【０１３０】
【表４】
0005981883.tif 000031
【０１３１】
以下の表５−１〜５−８に詳述するデータは、上記データのＭａｎｎ−Ｗｈｉｒｔｅｎｙノンパラメトリック法による統計解析で得られたＰ値を示す。
【０１３２】
【表５−１】
0005981883.tif 000032
【０１３３】
【表５−２】
0005981883.tif 000033
【０１３４】
【表５−３】
0005981883.tif 000034
【０１３５】
【表５−４】
0005981883.tif 000035
【０１３６】
【表５−５】
0005981883.tif 000036
【０１３７】
【表５−６】
0005981883.tif 000037
【０１３８】
【表５−７】
0005981883.tif 000038
【０１３９】
【表５−８】
0005981883.tif 000039
【０１４０】
（実験２：ポリペプチド抗原での免疫感作によるサイトカイン生成の誘導）
（ペプチド及び組み換えタンパク質）
実験2では、実験1から最も有効な画分を更に調査し、ワクチンに使用することのできるポリペプチドを同定した。本発明のペプチドとしての有用性を、以下のプロトコールを用いて決定した。
【０１４１】
（免疫感作）
調査対象の全てのポリペプチド（抗原調製物）は、Ｆｍｏｃ化学合成法により合成した。
【０１４２】
６週令から１０週令のＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下的に、マウス当たり２００μｌの用量の抗原調製物を、免疫感作した。試験グループにおける各抗原調製物の用量は、製造元の使用説明書に従いアジュバント（Ｓｉｇｍａ）中に調製したペプチドの等モル混合物（各ペプチドを１０ｎｍｏｌずつ含む）を含み、対照グループにおける各抗原調製物の用量は、製造元の使用説明書に従いＩＦＡ（Ｓｉｇｍａ）中に調製した、等価な薬量の無関係なポリペプチドを含んだ（ＮＲＰ調製物）。
【０１４３】
免疫感作後１５日目に、全てのマウスに対し、最初の免疫感作に用いたのと同一の用量及び感作経路で、追加免疫感作を施した。
【０１４４】
最後に２０日目に全てのマウスを死亡させ、その脾臓及び血清を採取した。
【０１４５】
（サイトカインのＥＬＩＳＡ）
同一の実験グループに属するマウスの脾臓をプールし、セルストレーナー（Ｃｅｌｌ  ｓｔｒａｉｎｅｒ）に穏やかに押し付けて通し、赤血球を赤血球溶血緩衝液（９部の０．１６Ｍ  ＮＨ４Ｃｌと１部の０．１７Ｍ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．２）による処理によって取り除いた。それぞれの実験グループからの脾細胞懸濁液を、０．０２ｍＭのβ−メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ）、５０ＩＵ／５０ｍｇ／ｍｌのペニシリン／ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ）、及び１０％ＦＣＳ（Ｓｉｇｍａ）を補充したＩＭＤＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）であって、それぞれの調査対象のポリペプチド抗原（２μＭ）を含むＩＭＤＭ培地を入れた９６ウェルプレートに、４連で、４×１０６細胞／ウェルの密度で、注入した。３７℃において３日間インキュベートした後、上清を集め、上清中のＩＦＮ−γ及びＩＬ−４を製造元のプロトコール（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）に従いサンドイッチサイトカインＥＬＩＳＡで分析した。アッセイの検出下限値は、ＩＬ−４が９．７７ｐｇ／ｍｌで、ＩＦＮ−γが３９．０６ｐｇ／ｍｌであった。
【０１４６】
（ＩｇＧ２ａ特異的ＥＬＩＳＡ）
マイクロタイターＥＬＩＳＡ９６ウェルプレート（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を、各試験ポリペプチドの２μＬのＰＢＳ溶液を使用して、各試験ポリペプチドで被覆した。一晩４℃でインキュベートした後、これらのプレートをＰＢＳＴ（０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ）で２回洗浄し、ウェルをＰＢＳＴ中に１％の濃度で溶解したＢＳＡ  Ｆｒａｃｔｉｏｎ  Ｖでブロックした。１時間インキュベートした後、プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、ある希釈範囲でＰＢＳＴに溶解した試験血清及び対照血清をウェルに添加した。２時間インキュベートした後、プレートをＰＢＳＴで６回洗浄し、全てのウェルに１次抗マウスＩｇ２ａ血清を添加した。１時間のインキュベーションの後、プレートをＰＢＳＴで６回洗浄し、全てのウェルに抗１次抗マウスＩｇ２ａ血清を添加した。１時間のインキュベーションの後、プレートをＰＢＳＴで７回洗浄し、全てのウェルにＴＭＢ基質を添加した。２０分〜３０分のインキュベーションの後、反応をＨＣｌで終了させ、４５０ｎｍの吸光度を測定した。
【０１４７】
（統計解析）
試験グループと対照グループの間での異なる抗原に対するＩＦＮ−γ応答の差が統計的に有意であることを、サンプルをノンパラメトリック法のＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ法によって解析することで立証した。応答の差は、Ｐ値が０．０５未満である場合に統計的に有意な差であるとした。
【０１４８】
（実験３：種々のポリペプチドに対する免疫応答の評価）
以下のポリペプチドについて調査した：配列番号２０、２８、３０、３１、３２、及び３５のポリペプチド。これらのペプチドを共に混合し、試験する候補ワクチン（ＡＧＳペプチドミックスと呼ぶ）を製造した。
【０１４９】
これらのペプチドのワクチン接種により誘導された免疫応答の種類及びレベルを、以下に示すプロトコールに従い評価した。
１日目：２グループのＣＤ１マウス（１グループにつき４頭）のそれぞれのグループに対して、以下の用量の候補ワクチン製造物を皮下投与し、免疫感作した。
無関係なペプチド（ＮＲＰ）のミックス（無関係なペプチドをそれぞれ１０ｎｍｏｌずつ含む）＋ＩＳＡ−５１
ＡＧＳペプチドミックス（ペプチドをそれぞれ１０ｎｍｏｌずつ含む）＋ＩＳＡ−５１
１５日目：同一の用量の候補ワクチン製造品で、全てのマウスを追加免疫した。
２１日目：全てのマウスに最期の放血をさせ、個体毎に脾臓を採取し、脾臓が以下の調製品／試薬に対してＩＦＮ−γの反応をするかどうかを試験した。
個々のＡＧＳペプチド（それぞれ２μＭ）
ＡＧＳミックス（それぞれのペプチドを０．５μＬ及び２μＬのいずれかの濃度で含む）
ＣｏｎＡ（７．５μｇ／ｍｌ）
ブランク
２１日より後：全ての血清の、ＡＧＳペプチドに対する応答を試験した。
【０１５０】
（結果）
前記抗原を用い、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、９６時間刺激した後のＩＦＮ−γ生成を図５にグラフで示す。
【０１５１】
配列番号２８、３０、及び３５のポリペプチド並びにＡＧＳミックス調製物に対するＩＦＮ−γ応答において、統計的に有意な差が認められた（ｐ＜０．０５）。
【０１５２】
配列番号２０、３１、及び３２は、ＡＧＳミックスで免疫感作したマウスにおいて高い応答を誘導したが、これらは、ＮＲＰミックスで免疫感作したマウスの脾細胞も、非特異的な様式で刺激していたようである。
【０１５３】
前記抗原に対する血清中の全Ｉｇ応答を図６にグラフで示した。配列番号２０及び配列番号３０に対する全Ｉｇ応答において、統計的に有意な差が認められた（ｐ＜０．０５）。
【０１５４】
（実験４：ＡＧＳペプチドミックスによる免疫感作後の攻撃試験）
ＡＧＳミックス調製物の免疫感作が天然のマラリアの感染に対して保護を与える能力を試験するために、ＣＤ１マウスを、以下のプロトコールにしたがって免疫感作し、攻撃させた。
０日目：全てのマウスから試験採血した。サンプルを、更なる分析のために保持した。
１日目：２グループのＣＤ１マウス（１グループにつき８頭）のそれぞれのグループに対して、以下の用量の候補ワクチン製造物を皮下投与し、免疫感作した。
無関係なペプチド（ＮＲＰ）のミックス（無関係なペプチドをそれぞれ１０ｎｍｏｌずつ含む）＋ＩＳＡ−５１
ＡＧＳペプチドミックス（ペプチドをそれぞれ１０ｎｍｏｌずつ含む）＋ＩＳＡ−５１
７日目：全てのマウスから試験採血した。サンプルを、更なる分析のために保持した。
１４日目：同一の用量の候補ワクチン製造物でマウスを追加免疫した。
２１日目：全てのマウスから試験採血した。サンプルを、更なる分析のために保持した。
２８日目：８頭の感染カ（即ち、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｙｏｅｌｌｉ  ｎｉｇｅｒｉｅｎｓｉｓを感染させたＡｎｏｐｈｅｌｅｓ  ｇａｍｂｉａｅ）に、その腹部を、刺咬させることにより、全てのマウスを攻撃させた。全てのマウスを、寄生虫血症が最初に立証されるまでか、感染を受けたカに攻撃させた後最高６週間の間、飼育した。
７０日目（最高）：全てのマウスから、最期の放血を行った。
【０１５５】
（結果）
２１日目での、ＡＧＳミックスの免疫感作に対する血清中の全Ｉｇ応答を図７にグラフで示した。
【０１５６】
ＡＧＳミックスによって免疫感作されたグループの中の１頭のマウスは、同一のグループの残るマウスよりも有意に低い全Ｉｇ応答を示した（この１頭のマウスの全Ｉｇ応答は、ＡＧＳミックスによって免疫感作されたマウスグループの平均全Ｉｇ応答の５０％未満であった）。
【０１５７】
攻撃させる日に、感染を受けたカの不足により、ＮＲＰミックスにより免疫感作させたマウスグループにおいて１頭のマウス、ＡＧＳミックスにより免疫感作させたグループにおいて２頭のマウスを、感染カに攻撃させることができなかった。
【０１５８】
攻撃を受けさせたマウスのうち、ＡＧＳミックスで免疫感作させていたグループの中のマウスの方が、対照のＮＲＰミックスで免疫感作させていたグループの中のマウスよりも、生存率が高くなっているのが示されている（図８を参照のこと）。前記ＡＧＳミックスで免疫感作させていたグループ中の、死亡している１頭は、ＡＧＳ調製物に対して強い抗体応答を示すことのできなかった個体であった。
【図５】
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【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図３Ｆ】
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【図３Ｇ】
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【図３Ｈ】
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【図３Ｉ】
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【図４】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【配列表】
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