(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
避妊治療を受ける健康な女性へのホルモン避妊薬処置に起因する酸化ストレスを低減するための薬剤を調整するための抗酸化剤組成物の使用であって、前記抗酸化剤組成物は、セレン酵母、ビタミンＢ６、アルファ−リポ酸、補酵素Ｑ１０、ベータ−カロチンを含む第１の副組成物及びカテキンを含む第２の副組成物を含み、第１の副組成物及び第２の副組成物は、それぞれでは、避妊治療を受ける健康な女性の酸化ストレスの低減において有効ではなく、組成物は避妊治療を受ける女性の酸化ストレスの低減に有効であり、抗酸化組成物は単位用量の形態であり、一単位用量は１５．８〜３１．５ｍｇのセレン酵母、１〜９．５ｍｇのビタミンＢ６、２〜１９ｍｇのアルファ−リポ酸、２〜１９ｍｇの補酵素Ｑ１０、０．１〜０．９５ｍｇのベータ−カロチン、８０〜１１０ｍｇのカテキンを含む、使用。
【請求項２】
前記カテキンが、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、没食子酸エピカテキン（ＥＣＧ）及びエピカテキン（ＥＣ）である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
カテキン重量に関し、少なくとも３５重量％がＥＧＣＧである、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記カテキンが、緑茶抽出物の形態である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
前記ビタミンＢ６が、ピリドキシン又はその塩である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
一単位用量が、２０〜２７．５ｍｇのセレン酵母、２〜５．５ｍｇのビタミンＢ６、７〜１１．８ｍｇのアルファ−リポ酸、７〜１１．８ｍｇの補酵素Ｑ１０、０．２〜０．５９ｍｇのベータ−カロチン及び８５〜９５ｍｇのカテキンを含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
一単位用量が、２４ｍｇのセレン酵母、２．４４ｍｇのビタミンＢ６、１０ｍｇのアルファ−リポ酸、１０ｍｇの補酵素Ｑ１０、０．５ｍｇのベータ−カロチン及び９０ｍｇのカテキンを含み、約４０％がＥＧＣＧである、請求項６に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホルモン避妊薬を用いた処置を受ける被験者の酸化ストレスを低減するための抗酸化剤組成物に関する。この組成物は、驚くほど効果的である他、身体が極めてよく我慢できるため、特に適していると証明された。
【背景技術】
【０００２】
５０年代には、プロゲステロンが排卵を抑制することを見出し、そして、血栓現象、特定の腫瘍型（即ち乳房）の発達の他、反対に他の腫瘍型（即ち結腸、直腸、卵巣）の縮小等の副作用が時間とともに観察されるという点で、妊娠を制御する問題が非常に複雑で繊細な側面を示すことを見出した。長時間に亘って討論され、最終的に証明された要因は、避妊治療（ＣＴ）を用いる際の酸化ストレス（ＯＳ）の存在である［１，２］。ＯＳは、実際、循環器疾患及び血栓エピソードの発症を促進でき、避妊治療それ自体に密接な関係があると思われるような、低エステロゲン・プロゲスチン用量を用いた際にも存在している。
【０００３】
これら現象の裏にある理由はまだ十分に明らかにされていないが、その理念は、低用量と有効性間での最善の歩み寄りを達成することに変わりはない。
【０００４】
実際、利益／危険の関係を最適化しようとする試みは、高プロゲスチン用量からエストロゲンと各種タイプのプロゲスチンの組み合わせにまで及んだ。この意味では、経皮放出系、子宮内放出系（ＩＵＤ，子宮内器具）及び皮下又は筋肉内貯蔵物を用いた系が知られている。一般に、現在入手可能な各種タイプの避妊薬は、健康状態及び生活習慣（喫煙等）に基づき処方される。
【０００５】
しかしながら、健康な女性の場合でさえ、酸化現象の増加は、月経周期中に見られ、ＯＳとして分類されるようなレベルには達していないが、それにもかかわらず、酸化現象の増加を卵子成熟期（エストロゲン期）及びその後の起こり得る着床期（プロゲステロン期）にて示す。
【０００６】
ＯＳ発生の根底にある意味を理解するため、月経周期のホルモン的側面を綿密に調べる。
【０００７】
正常月経周期に関係するホルモン的側面
女性の生殖機能に関係するステロイドホルモンは、視床下部弓状核及び下垂体前葉に位置する特定の機序によって調節されており、そのニューロンは、副腎、子宮及び卵巣と関係している。
【０００８】
簡単に言うと［３］、弓状核のニューロンは、１時間毎に、ノルアドレナリン刺激を受けたタイミングで、ＧｎＲＨ（ゴナドトロピン放出ホルモン）を放出する；対照的に、オピオイド、ドーパミン作動性及びＧＡＢＡ作動性ニューロンは、前述のニューロンを抑制状態で維持する。
【０００９】
よって、頻度及び振幅（振幅２ｍｌＵ／ＬＨのｍｌで１ピーク／時間）の観点から中心方向性刺激を生じるこれら「ドライバー」間のバランスが大切であることは、明らかである。
【００１０】
ＧｎＲＨは、下垂体に巻き付く所謂門脈循環（らせん状）を通して下垂体前葉に達し、それを刺激してＦＳＨ（卵胞刺激ホルモン）及びＬＨ（黄体形成ホルモン）のバーストを放出するため、ＧｎＲＨ放出と関係している；これらＦＳＨ及びＬＨは、エストラジオール（Ｅ２）及びプロゲステロン（Ｐｇ）の卵巣生産を調節する。
【００１１】
Ｅ２は、所謂、増殖期のホルモンである；それは、卵胞の成熟を可能にし、子宮内膜細胞の増殖及び分化を刺激する。粘膜細胞と子宮内膜血管のものの両方は、数（及び体積）が増加する；更に、Ｅ２は、細胞内におけるＰｇ受容体の生産を誘発し、それらは、黄体がそれを生産し始める場合、その存在に対して反応性が高くなる。
【００１２】
Ｐｇは、分泌期、即ち卵子を受け取る準備をする期のホルモンであり、空の卵胞の間質から生じる黄体に由来する。その作用は、増殖効果を制限し、より正確には、卵子（胚盤胞）の着床とよく一致している分泌物の脈管分化及び生産を刺激する。この期では、プロゲステロンはまた、中心レベル（オピオイド、ドーパミン作動性及びＧＡＢＡ作動性）のニューロンを刺激し、ＧｎＲＨ放出を抑制する。
【００１３】
Ｅ２及びＰｇの両方は、ＦＳＨと同時に、下垂体によるＬＨ生産を修正する；この修正は、ＬＨのピーク頻度を（１ピーク／時間の代わりに１ピーク／３時間に）低減し、その振幅を（２ｍｌＵ／ｍｌから３〜４ｍｌＵ／ＬＨのｍｌに）増加させることによって、達成される。
【００１４】
それ故、後者の側面は、卵子が着床しなかったら、ＬＨ分泌を低減するために作用し、Ｅ２及びＰｇレベルが下降して、その周期を月経出血により終わらせる。
【００１５】
しかしながら、卵子が代わりに着床したら、栄養膜と、次いで生じることになる胎盤とによって作られる絨毛性ゴナドトロピン（ｈＧＣ）が、黄体を刺激し、子宮の状態を妊娠のために維持する際に機能するＥ２及びＰｇを生産し続ける。一旦形成されると、胎盤は、両方のエストロゲンの生産が自給自足できるようになる。
【００１６】
また、これらエストロゲンは、再生産の目的で、補助的であるが重要な活動を行う；卵管において、Ｅ２は増殖及び分化を刺激するが、Ｐｇはそれを低減する；Ｅ２は子宮収縮力を増大させるが、Ｐｇはそれを低減する；Ｅ２は（精子の通過を容易にするため）頸部粘液の量及び流動性を増加させるが、Ｐｇはそれを低減し、それをより粘性のあるものとし、その稠度を変える。しかしながら、最も討論される問題の一つに、酸化ストレスに対するＥ２及びＰｇの作用がある。この二元性は、一方が他方と反対の作用を持つものであるものの、両者が、異なる役割にもかかわらず、細胞エネルギー利用及び代謝誘発に対する刺激作用を持つため、実用的であるとは思えない。従って、純粋に理論的な観点において、両者は、酸化促進剤ということもあり得るが、酸化バランスは、一方又は他方の刺激が内因性抗酸化剤の生産をどの程度可能にするかによって決まる。従って、この特定のテーマに関する技術の状態は、依然として明らかにされるべきものであり、一部の際立った特徴がすぐに議論されることになる。
【００１７】
正常月経周期中におけるＯＳの状態
図１に示されるように、卵胞及び黄体周期の両方は、初期及び後期に図式的に細分される。これらは、幾人かの著者［４］が記載したＯＳの状態の進行を、図表で区別できるようにする。
【００１８】
ＧＳＨ（還元グルタチオン）、ＧＳＳＧ（酸化グルタチオン）、ＧＳＨｐｘ（グルタチオンペルオキシダーゼ酵素）、最後にＭＤＡ（マロニルジアルデヒド）の局所濃度（子宮内膜組織）に関する分析の基礎を形成することによって、酸化状態の変化を評価することができた。次いで、前述の状態は、ホルモン（エストラジオール、プロゲステロン）、ＬＨ及びＦＳＨのレベルと関連付けられた。
【００１９】
これらのデータは、ＯＳのピークが、周期中期（卵胞期後期及び黄体期前期）にて、即ち、卵子成熟及び可能性のある卵子着床にて現れることを示す。この期は、ａ）ＧＳＨｐｘ生産の増加；ｂ）ＧＳＨの減少；ｃ）ＧＳＳＧの増加；ｄ）ＭＤＡの実質的安定性が認められる。これは、ＯＳが増加すると、ＭＤＡ濃度（脂質過酸化反応を示す）が一定のままであるように対応する補償があることを意味する；言い換えれば、その系は平衡状態で保たれている。
【００２０】
ＯＳピークは、エストロゲン及びＬＨのピークに対応するが、プロゲステロンのピークは、ＯＳの回復段階に対応するように見える。
【００２１】
これに関し、注意すべきことは、ＧＳＨｐｘが、ＧＳＨを基質として利用する酵素系であることであり、各種タイプのヒドロペルオキシドを還元できるようにし（Ｈ２Ｏ２、又はＲＯＯＨ等の脂質の性質を持つもの）、Ｈ２Ｏを形成する。
【００２２】
２種類のＧＳＨｐｘが存在し、即ち、赤血球を含めた全細胞の細胞質に見られるＧＳＨｐｘ１と、血漿を含めた細胞外液に見られるＧＳＨｐｘ３である。２つの酵素タイプは、両者がセレノ・システイン（ＳｅＣｙｓ）を含有する同一の４つのサブユニットから形成されるものの、実際には異なる。この点において、ＧＳＨｐｘ１に対するポリクローナル抗体は、ＧＳＨｐｘ３と反応しない。血漿に見られるＧＳＨｘ３は、その大部分が、腎臓の近位尿細管によって合成される。しかしながら、他の細胞もまた、それを合成することができ（肝臓、肺、心臓、乳房、腸、脳、筋肉）、それを分泌することができる［５］。
【００２３】
ヒドロペルオキシドに関連するＧＳＨ触媒反応は、次の通りである：
ＲＯＯＨ＋２ＧＳＨ＝ＲＯＨ＋Ｈ２Ｏ＋ＧＳＳＧ
【００２４】
従って、ＧＳＨｐｘの増加は、機能的な観点から、ＧＳＨ酸化の増加に対応する；それ故に、生体系において、その増加は、生理的にＧＳＨの減少に対応し、結果としてＧＳＳＧが増加する。この全てがＯＳを表す；それ故に、ＧＳＨｐｘ（あらゆる種類、１又は３）を抗酸化能力の指標であると考えることには誤りがあり、代わりに、それらは、ＧＳＨを用いてＯＳに対抗する必要性が増大していることの表れであると考えなくてはならない。
【００２５】
しかしながら、臨床状態がＧＳＨｐｘレベルの低減で特徴付けられる場合、これは、ＯＳに対抗するためのＧＳＨの使用がより困難になることを意味する。
【００２６】
これは、年齢がかさむこと（閉経期の典型的な状態）に関係があり、それ故に、抗酸化物質系の効率の低下に関係するようにも見えるが、閉経期に、例えば子宮内膜及び血漿の両方において生じる。
【００２７】
ＧＳＨｐｘ、ＳＯＤ（スーパーオキシドジスムターゼ）及びＣＡＴ（カタラーゼ）を月経周期中の血漿中で分析すると［６］、赤血球ＧＳＨｐｘのレベルが、卵胞期後期及び黄体期前期において、他の期と比較して増加することが分かり、一方、ＳＯＤ及びＣＡＴのレベルは、本質的に変化しないままである（以下、表１参照）。Ｅ２レベルとの相互関係の分析によれば、ＧＳＨｐｘレベルは、時間相関があることが示される（極度の合成では、一方の増加が他方の増加と同時に起こる）。
【００２８】
ＦＳＨ、ＬＨ、プロゲステロン、テストステロン及びアンドロステンジオンのレベルは、赤血球ＧＳＨｐｘのものと時間相関があるパターンを示さない。
【００２９】
実証され上述したことから、Ｅ２の分離可能な作用は、抗酸化的でなく、むしろ正確には反対であり［７］、分泌期におけるエネルギー必要量の増加に必要とされる細胞活性化に対応する。
【００３０】
卵子が受精した場合、黄体期は、細胞活動及び組織増殖の増加によっても特徴付けられ、その周期の終わり及び月経出血に先行し、子宮内膜をその周期の始まりの状態に戻す。
【００３１】
この期は、最終活動（粘液粘度の変化、血管成分の増加等）の観点から違って表されるが、酸化の観点からは、実質的に同じままであり、それは増殖期である。
【００３２】
この期は、Ｅ２の生産と組み合わされたＰｇの生産によって支配されており、それ自体は、卵子成熟期後の、エストロゲン・プロゲストゲンステロイドが最も発現する期である。
【００３３】
【表１】
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【００３４】
上記周期のこの部分の更なる特徴は、多量のＮＯ・ラジカルの生産である。ＮＯ・は、血管拡張、子宮筋層の弛緩、抗凝集作用、及び血管新生刺激に重要な媒介物である。該血管新生刺激は、ＮＯシンターゼを刺激するＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）によって行われ［８］、ＮＯ・がＮＯシンターゼの自己誘導によってそれ自体を維持しようとすることを意味する。
【００３５】
この後者は、全ての月経期で生じるが、ｅＮＯＳ（内皮）としてもｉＮＯＳ（誘導）としても、それは、プロゲストゲン刺激に対して実質的に増加する［９］。
【００３６】
この増加と同時に、ＳＯＤの局所増加もある。ＳＯＤは、Ｏ２・（スーパーオキシド）を不均化するものであり、ＮＯ・＋Ｏ２・の反応がＯＮＯＯ−イオン（ペルオキシ亜硝酸塩）を形成するのを防ぐ。ＯＮＯＯ−イオンは、酸化力が高い他、ＮＯ・を除去し、その有効性を制限する。しかし、前述した利用できる全てのＮＯ・は、Ｏ２・と反応し（２つの間の反応は、体内で群を抜いて最も迅速である（１×１０−９秒））、最後にＯＳを生産する。
【００３７】
子宮内膜の血管開通及びその定期的な血液供給は、特定のペプチドホルモン、即ちレラキシン（ＲＬＸ）によっても維持される。
【００３８】
ＲＬＸは、ＭＷが６ｋＤａのペプチドであり、２つのペプチド鎖からなり、両者が、内部と相互の両方でＳ−Ｓ架橋によって安定化されている［１０］。実際、これは、循環型Ｈ２が最も代表的であるホルモン（Ｈ１、Ｈ２及びＨ３）のファミリーである。
【００３９】
ＲＬＸは、主に黄体から分泌され、子宮内膜流量の変化を戦略的に防ぎ、上記周期の増殖期中、次いで起こり得る妊娠中での虚血及び再かん流現象を回避し、ＲＯＳの生産及び走化性によって反応過程を引き起こす可能性がある。
【００４０】
ＲＬＸの作用は、ｉＮＯＳ及びｅＮＯＳ並びに血管形成を、そこだけではないが、特に子宮内膜において、上方制御することによって起こる；この作用は、動脈及び静脈血管の両方（それ故に、平滑筋のない血管）に起こる。ＲＬＸが活性を持つ濃度は、ナノモル濃度レベルであり、それ故に、卵子着床及び妊娠の子宮内膜期中で達成可能である。また、血管新生作用もＲＬＸに特有であり、ＶＥＧＦ、更にはｂＦＧＦ（塩基性線維芽細胞増殖因子）によって行われる。
【００４１】
ＲＬＸの作用の重要な側面は、炎症性白血球の内皮への接着及び血小板凝集を阻害することである。この活性は、ＮＯ・生産の上方制御と一緒に、虚血／再かん流状態に特有であるＲＯＳの発生及び走化性誘引を防ぐ。
【００４２】
それ故、全体的に見ると、ＲＬＸは、子宮内膜における血液かん流及び供給に実質的に影響しており、ここでの理想的な流れ状態を維持し、典型的な抗炎症作用及び抗血栓作用を行う。
【００４３】
リポタンパク質の酸化に対するエストロゲンの作用
考慮されるべき最後の要因は、リポタンパク質酸化に対するエストロゲンの効果である。インビトロ又はイクスビボで行った大部分の実験は、Ｅ２の抗酸化能力を実証し、その脂質過酸化反応に対する効果が、α−トコフェロール又はβ−カロチンのものと同様であるものの、その代謝産物エストラジオール及びエストロンよりも明確であることを実証した。
【００４４】
実際、行われた実験［１１−１２］の大部分は、生理的濃度よりもかなり高い濃度、少なくとも１〜１０ｎｍｏｌ／ｍｌ程度（それぞれが２７３及び２７３０ｎｇ／ｍｌに対応する）で使用することによって行われた。エストロゲンピークが周期中期である場合、一定期間に限り、これら濃度に辛うじて達する；このため、それらは、困難でありながらも、ＬＤＬの保護的抗酸化作用を要求するしかない［１３］。
【００４５】
しかしながら、閉経期の女性で行った実験において、経動脈的又は経皮パッチでのＥ２の投与（３週間）は、それぞれ１１％及び１６％のＬＤＬ酸化の遅れ（遅延時間又はＣｕ２＋による酸化時間の増加）を明確に示しており、処置の中止で基準状態に戻った［１２］。２つの投与経路によって得られたＥ２レベルは、実際に生理的であったが、それらが一点のみで決定されたという点において、強い疑問が残る；１つは、動脈内投与によって得られた血液ピークがその分布前に安定することを検討すればよい。これ以外には、レベルがかなり違うにもかかわらず（パッチでは４〜７倍高い）、２つの投与タイプの間には、ＬＤＬの保護的活性における相違がないことに注目した。
【００４６】
行われた様々な研究から、（レベルの問題にかかわらず）抗酸化効果を観察するためには、Ｅ２をＬＤＬにただ加えた場合、活性が見られないため、Ｅ２が血漿と接触するべきであるという結果になる［１１］。この現象は、脂肪酸によってＥ２をエステル化するＬＣＡＴ（レシチン・コレステロールアシル基転移酵素）であると決定された血液成分によってＥ２が活性化される必要があるとして解釈された；これらの条件下でのみ、それは、リポタンパク質に対し保護的効果を発揮することができる。そのエステル化は、Ｃ１７炭素で起こると思われ、Ｃ３のヒドロキシル基を遊離のままにしておく；このエステルは、外面に向いた親水性部分と、膜内に親油性部分とを備えるリポタンパク質膜中に挿入されるように思われる［１４］。同様の配置は、理論上、Ｅ２エステルの酸化によって、酸化から膜を保護し得るが、ＬＤＬを保護する上でこれが十分であるかどうかについては依然として不明である。
【００４７】
それ故に、上記問題は、化学量論の観点から評価された。
【００４８】
閉経期前の女性におけるＥ２−エステルのレベルは、ほとんど測定できず、約０．１μｍｏｌ／ｌの濃度の最も高いレベルが卵胞液中で見られる［１５］。この全ては、ＬＤＬのみが血液中に少なくとも０．６μｍｏｌ／ｌ（２．６×１０６のｍｗでは１．６ｇ／ｌに相当する）程度存在するため、リポタンパク質（ＬＤＬ、ＨＤＬ、ＶＬＤＬ）間の比が非常に高いことを意味する。それ故に、リポタンパク質中におけるＥ２−エステルの存在は非常に少ないため（何千ものリポタンパク質当たり１分子のＥ２−エステル）、直接抗酸化作用と適合しない；ＬＤＬ保護の可能性がある機序は、酵素タイプだけかもしれないが（パラオキソナーゼ、アポＡ、アポＪ、ＧＳＨｐｘ等、リポタンパク質に存在する抗酸化酵素の活性化）、現在のところ不明である。
【００４９】
Ｅ２−エステルの種類に関し、卵胞液から単離したものは、大部分が、即ち９６％が不飽和で（リノール酸塩、アラキドン酸塩、パルミチン酸塩）、たった４％だけが飽和である（ステアリン酸塩）［１５］。
【００５０】
Ｅ２−エステルは、その存在が、閉経期前の女性中の大網及び皮下脂質において比較的一定であり（約１ｐｍｏｌ／組織のｇ）、それらが閉経中で実質的に降下する傾向があるため、Ｅ２を予備として利用できるようにしておく手段であると仮定される［１６］。
【００５１】
リポタンパク質でのそれらの存在に関して行われるべき考慮の１つは、このように、遊離のエストロゲンと対照的に、それらは、腎臓を経由して排除できず、ＬＤＬ受容体経路を通じて細胞中に放出されることである。その脂溶性のため、遊離のエストロゲンは、細胞膜を容易に通過することができ、ほとんど制御できない。
【００５２】
よって、全体的に見ると、Ｅ２−エステルの戦略的重要性が、直接的抗酸化剤として作用することではないことに疑いようもなく、どちらかと言えば、間接的抗酸化剤であり、Ｅ２放出を調節し、要求に応じて活性化されるべき予備を作ることにある。ステロイドホルモンのエステルを形成する機序と、アルブミン／グロブリンに結合せず、ＳＢＰ（ステロイド結合タンパク質）にもＣＢＧ（コルチコステロイド結合グロブリン）にも結合しない、保護された形態（リポタンパク質）での循環における不十分な存在は、必要であればすぐに利用できるステロイド予備としてそれらを用いる必要性の証拠である。
【００５３】
Ｅ２は、容易に酸化できるが、Ｅ２−エステルは、そうできない。
【００５４】
ＭＰＯ（ミエロペルオキシダーゼ）及びＨ２Ｏ２（この後者も内皮細胞から分泌される）の存在は、好中球によるＭＰＯ生産を誘発する他、酸化のプロパゲーターとして振る舞うＥ２の酸化を誘発する［１３］。
【００５５】
しかしながら、Ｅ２の酸化的側面は、非常に特殊である。
【００５６】
その挙動は、身体活動中に起こるものに似ていると思われる［１７］；即ち、ＬＤＬは、酸化され、肝受容体によって循環からより容易に取り込まれ、制御下で保たれ、筋肉内の抗酸化系によって部分的に「抑えられる」。しかしながら、抗酸化系が不十分で、そのレベルが増加すると、それらは、炎症性動脈硬化の過程を引き起こす（内皮下の）血管取り込みを受ける。実際、それらは、内皮下層においてＭＰＯ活性を受けるであろう。
【００５７】
これは、閉経期前の女性におけるコレステロール及びＬＤＬの低下を明らかにし、それらが部分的酸化状態にあることによって、ＬＤＬの取り込みの増加としてではなく、肝臓ＬＤＬ受容体の効率を向上させるものとして解釈される（注目すべきことは、マクロファージ反応を引き起こす最小の利用できる酸化限度が存在することである）。
【００５８】
このほぼバランスのとれた酸化平衡は、正常のエストロゲン・プロゲステロン分泌の生理的条件下で（それ故に、正常月経周期中で）バランスを保てると説明できるが、避妊（ＣＴ）治療を用いる場合、酸化促進に変わることができる。
【００５９】
上記現象は、あらゆるエストロゲン・プロゲスチン経口投与が、（ＣＴタイプに応じて）生理的サイズでない両方の血液ピークを作り、それ故に、「わずかな且つ制御可能な」酸化がＯＳになるため、理解できる。
【００６０】
このＯＳが、酸化ＬＤＬ量の増加、又は血液Ｃｕレベルの増加、又はｉＮＯｓの上方制御［１］、又はそれらの組み合わせによって生じるという事実は、実証されてきた［１，２］。生じる問題は、ＯＳ制御のものであるものの、これを達成するためには、まず、避妊治療を受ける場合にストレスを低減する作用をとるため、ＯＳの観点から正常状態で起きていることを実現することが必要である。
【発明の概要】
【００６１】
従って、身体がよく我慢でき、ホルモン避妊薬を用いた処置に起因する酸化ストレスを低減できる効果的な治療薬を見つける必要性を感じる。そこで、本発明の目的は、かかる治療薬を提供することにある。
【００６２】
この目的は、セレン酵母、ビタミンＢ６、アルファ−リポ酸、補酵素Ｑ１０、ベータ−カロチン及びカテキンを含む請求項１に記載の抗酸化剤組成物を用いて達成された。
【００６３】
他の態様において、本発明は、ホルモン避妊薬を用いた処置に起因する酸化ストレスを低減するために前述の組成物を使用することに関する。
【００６４】
更なる態様において、本発明は、前述の組成物を投与するためのキットに関する。
【００６５】
以下の詳細な説明から明らかになるように、本発明の組成物は、身体の高耐性を示す抗酸化剤成分の適切な組み合わせによって、ホルモン避妊薬を用いた処置を受ける個人において、酸化ストレスを驚くほど低減できるようにした。
【００６６】
本発明の特徴及び利点は、以下の詳細な説明、非限定的な例証目的で与えられる実施例、及び添付の図１から明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】月経周期の重要な事象を図式的に示す。
【発明を実施するための形態】
【００６８】
従って、本発明は、セレン酵母、ビタミンＢ６、アルファ−リポ酸、補酵素Ｑ１０、ベータ−カロチン及びカテキンを含む抗酸化剤組成物に関する。実際、これら成分の組み合わせは、驚くほど有利に、ホルモン避妊薬摂取に関連する酸化ストレスを低減できるようにすることが観察された。この配合物は、有利に、全種類の抗酸化物質、即ち全身性（セレン）、細胞質性（ビタミンＢ６）、ミトコンドリア（アルファ−リポ酸、補酵素Ｑ１０）、膜（ベータ−カロチン）、循環（カテキン）を含有する。
【００６９】
カテキンは、フラボノイド群に属する植物由来の抗酸化的代謝産物である。それらは、多くの植物種に見られるが、人間の食生活における最も重要な源は、茶樹カメリアシネンシスに由来する様々な茶である。乾燥茶葉は、カテキンの総含量が、植物の種類、成長部位、並びに光、季節及び高度の変化によって著しく変わり得るが、実際のところ、約２５重量％のカテキンを含有する。具体的に、カテキンは、白茶、緑茶、紅茶及びウーロン茶を含めた全種類の茶に存在するが、チョコレート、果物、野菜、ワイン及び多くの他の植物種にも存在している。本発明の好適な実施態様によれば、前述のカテキンは、緑茶抽出物に由来する。
【００７０】
好ましくは、前述の抗酸化剤組成物が、組成物重量に対して、８〜１６重量％のセレン酵母、０．５〜５重量％のビタミンＢ６、１〜１０重量％のアルファ−リポ酸、１〜１０重量％の補酵素Ｑ１０、０．０５〜０．５重量％のベータ−カロチン及び４０〜６０重量％のカテキンを含む。この好適な組み合わせは、完全で且つ相乗的な抗酸化作用を発揮する。具体的に、前述の割合では、行き渡った抗酸化作用が循環する抗酸化物質に起因すると考えられる。
【００７１】
より好ましくは、前述の抗酸化剤組成物が、組成物重量に対して、１０〜１４重量％のセレン酵母、１〜３重量％のビタミンＢ６、３．５〜６重量％のアルファ−リポ酸、３．５〜６重量％の補酵素Ｑ１０、０．１〜０．３重量％のベータ−カロチン及び４２〜５１重量％のカテキンを含む。この場合、抗酸化物質の組み合わせが、これらの範囲において、「非循環」抗酸化物質カテゴリーのより広範な発現を可能にし、それ故に、都合良く長期に亘る持続性作用を可能にする。
【００７２】
より一層好ましくは、前述の抗酸化剤組成物が、組成物重量に対して、１２〜１３重量％のセレン酵母、１．１〜２重量％のビタミンＢ６、４〜５．５重量％のアルファ−リポ酸、４〜５．５重量％の補酵素Ｑ１０、０．２〜０．３重量％のベータ−カロチン及び４５〜４８重量％のカテキンを含む。この場合、より長い持続期間の他、全身性抗酸化物質、細胞性抗酸化物質、ミトコンドリア抗酸化物質、膜抗酸化物質及びカテキン等の循環抗酸化物質間の理想的な比によって与えられるより強力な作用もある。
【００７３】
具体的には、前述のカテキンが、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、没食子酸エピカテキン（ＥＣＧ）及びエピカテキン（ＥＣ）である。更に好適な実施態様によれば、カテキン重量に関し、少なくとも３５重量％がＥＧＣＧである。カテキンは、良好な抗酸化活性を見せる他、特にはＥＧＣＧが、主要臓器（心臓、脳、肝臓、子宮等）における血液レベルの約８〜１０％の組織レベルに達することができるようにする良好な生物学的利用率も示した。
【００７４】
他の好適な実施態様によれば、前述のビタミンＢ６は、ピリドキシン又はその塩である。より好ましくは、それがピリドキシン塩酸塩である。
【００７５】
他の態様において、本発明は、薬剤用としての抗酸化剤組成物に関する。特に、前述の抗酸化剤組成物は、ホルモン避妊薬を用いた処置に起因する酸化ストレスを低減するために使用される。後に続く実施例から実際に分かるように、本発明の組成物は、各種成分の適切な組み合わせに由来する驚くべき相乗効果を示しており、反対に、別々では、有効性が実証されなかった。
【００７６】
好ましくは、前述の抗酸化剤組成物が、経口投与されるものである。
【００７７】
好ましくは、本発明の抗酸化剤組成物が、１５．８〜３１．５ｍｇのセレン酵母、１〜９．５ｍｇのビタミンＢ６、２〜１９ｍｇのアルファ−リポ酸、２〜１９ｍｇの補酵素Ｑ１０、０．１〜０．９５ｍｇのベータ−カロチン及び８０〜１１０ｍｇのカテキンを含む単位用量の形態である。
【００７８】
より好ましくは、前述の単位用量が、２０〜２７．５ｍｇのセレン酵母、２〜５．５ｍｇのビタミンＢ６、７〜１１．８ｍｇのアルファ−リポ酸、７〜１１．８ｍｇの補酵素Ｑ１０、０．２〜０．５９ｍｇのベータ−カロチン及び８５〜９５ｍｇのカテキンを含む。
【００７９】
好適な実施態様によれば、上記単位用量は、２４ｍｇのセレン酵母、２．４４ｍｇのビタミンＢ６、１０ｍｇのアルファ−リポ酸、１０ｍｇの補酵素Ｑ１０、０．５ｍｇのベータ−カロチン及び９０ｍｇのカテキンを含み、約４０％がＥＧＣＧである。
【００８０】
更なる態様において、本発明は、
ｉ）セレン酵母、ビタミンＢ６、アルファ−リポ酸、補酵素Ｑ１０及びベータ−カロチンを含む少なくとも１つの抗酸化剤組成物と；
ｉｉ）カテキンを含む少なくとも１つの水溶液と
を備えてなり、
上述の抗酸化剤組成物の、分離の、逐次の又は同時の投与のためのキットに関する。
【００８１】
好ましくは、前述のキットにおいて、前述の抗酸化剤組成物が、その経時的保存を改善するため、粉末状である。
【００８２】
上述の抗酸化剤組成物について好適で有利であると特定された全態様が、それ相応に、本発明のキットにも好適で有利であると考えられることは、理解されるべきである。
【００８３】
好適な実施態様によれば、上記粉末は、投与時に、前述の溶液と共に取り込まれる。更に、前述の溶液は、カフェイン抜きの緑茶であるのが好ましい。
【００８４】
以下、本発明の実施例が、非限定的な例証目的で提供される。
【実施例】
【００８５】
例１．
ＢＡＰテストによる本発明の組成物の抗酸化力の決定（生物学的抗酸化能）
正常月経の女性ボランティア１０人を選んだ。ボランティアの一般的特徴を以下に与える：
【００８６】
【表２】
0005852971.tif 000003
【００８７】
表１に記載される組成物を調製した。
【００８８】
【表３】
0005852971.tif 000004
【００８９】
活性及び長時間に亘る持続時間の観点から最も効果的な組成物を決定する目的で、健康なボランティアは、先に調製された組成物から異なる３つの組成物、即ち１Ａ、１Ｂ、１Ｃを異なる用量で消費するよう要求された。
【００９０】
その３つの組成物を、ＢＡＰテストによって活性の試験を行い、分析した。
【００９１】
カテキンは、緑茶抽出物の形態で供給された。ここで、前述のカテキンは、約６０重量％であった。
【００９２】
３つの組成物においては、１Ａから１Ｃに従って、カテキン及びピリドキシン（塩酸塩形態）の量が徐々に低減し、アルファ−リポ酸、ベータ−カロチン、セレン及び補酵素１０の量は同時に増加した。言い換えれば、ＡからＣの各種組成物においては、可溶性抗酸化物質の量が低減し、脂溶性抗酸化物質の量は増加した。
【００９３】
彼らの周期の終わり、月経出血の開始の３日後から開始し、連続する３日間に亘って、３つ全ての組成物をボランティアに投与した。
【００９４】
この期間中、他の治療を許可しなかった。前日の晩から断食して、午前中に実験を行い、７．００〜１３．００の期間中に水の消費のみ認めた。
【００９５】
上記組成物の投与は、常に、Ａ、Ｂ、Ｃの順で行われた。ヘパリン化微小管中に集められた指穿刺血液（血液０．１５〜０．２ｍｌ）を用いてＢＡＰテスト（Ｄｉａｃｒｏｎ  Ｓｒｌ，グロッセート，イタリアによって分布される）を行った；４つの収集物を取った：基底、各組成物の投与の１時間後、３時間後、５時間後（それぞれＴ１、Ｔ２、Ｔ３）である。
【００９６】
上記値間の差をｔ−テスト及び直交対比の分散分析（ＡＮＯＶＡ）に基づいて計算した。その結果を表２に与える。
【００９７】
【表４】
0005852971.tif 000005
【００９８】
データから、３つ全ての組成物は、血漿の抗酸化力を著しく有利に増大させたことが分かった；加えて、上記組成物１Ｂ及び１Ｃは、組成物１Ａよりも優れた持続作用を与えた；１時間後、組成物１Ｃは、他よりも著しく優れた作用を予想外に示した。
【００９９】
よって、観察から、全ての組成物が、かなりの抗酸化力を有し、それ故に生物学的に利用可能であり、組成物１Ｃについては、顕著な有効性を有し、長時間に亘るより実質的な持続作用を示すことが示された。
【０１００】
例２．
正常月経周期中の酸化ストレス（ＯＳ）の決定
このテストには、正常月経の女性ボランティア２０人を選んだ。彼らは、一見したところ健康なボランティアであり、いかなる治療も受けておらず、大部分が未経産であった（２０人の中から１４人）。栄養補助食品を用いたあらゆる治療の使用が、除外基準と判断された。
【０１０１】
月経周期（周期Ａ）中のＯＳをｄ−ＲＯＭｓテストを用いて分析した［１８］。それは、指穿刺後にヘパリン化微小管に集められた血液（０．１５〜０．２ｍｌ）中で検出可能な、血液（血漿又は血清）中のヒドロペルオキシドの評価が可能である。月経出血が終わった最初の日から始めて、次いで３日目、その後、月経出血の完全な停止まで３日毎に（ｔ１、ｔ３、ｔｎ・・・、ｔ２７と示される）、上記テストを行った。このように、経時的なＯＳの進行を決定した。
【０１０２】
最初のボランティア１０人において、プロトコルは、月経周期の分泌期及び黄体期とＯＳの相関を決定するため、時間ｔ６、ｔ９、ｔ１２、ｔ１５、ｔ１８、ｔ２１でのＥ２レベルと、ｔ１２、ｔ１８、ｔ２１でのＰｇレベルを評価することも求めた。
【０１０３】
既知のキット（エストラジオール：カタログＮｏＫＥ２Ｄ１；プロゲステロン：ＴＫＰＧ１；Ｉｎｔｅｒ  Ｍｅｄｉｃｏ  Ｍａｒｋｈａｍ，オンタリオ州−カナダ）を用いてＥ２及びＰｇを決定した。検出限界は、Ｅ２が５ｐｇ／ｍＬで、Ｐｇが０．１ｎｇ／ｍＬであり、変動係数は、Ｅ２が１３．１％で、Ｐｇが６．５％であった。上腕静脈からヘパリン化試験管に血液を集めた（５ｍｌの２つのアリコート）。
【０１０４】
ボランティアの一般的特徴を以下に与える：
【０１０５】
【表５】
0005852971.tif 000006
【０１０６】
テスト前の晩から断食して、８〜９．３０間の午前中に、全ての血液収集を行い、同日に分析を決定した。ボランティアには、実験室試験の前日に食物を過度に食べることを避けるように通知した。ｄ−ＲＯＭｓ試験結果の値、並びにＥ２及びＰｇレベルを表３に集める。
【０１０７】
【表６】
0005852971.tif 000007
【０１０８】
データの検討から、ＯＳはｔ６〜ｔ２４の間で発生し、ｔ２７では、そのレベルが、周期開始での基底値内に降下したことが推定された。付随する最大の増加は、エストロゲンピークに対して３日〜６日の遅れに対応した。
【０１０９】
Ｐｇレベルの上昇は、その血液中のピーク（ｔ２１）に達する際に、その前にはなかったＯＳを低減する効果があるようであった。
【０１１０】
注目すべきことは、ｄ−ＲＯＭｓテストの観点から、まさにＯＳが、通常、＞３００ＣＡＲＲ．Ｕ．の値によって定義されることである。平均値から推論できるように、周期開始の値に対するＣＡＲＲ．Ｕ．の増加は、ｔ１２からｔ２４までにＯＳ状態に達した。
【０１１１】
Ｅ２とｄ−ＲＯＭｓテストレベル間の相互関係は、観察されなかった；このことは、増加した全身性酸化の状態が、Ｅ２単独でも、上述の試験条件において特定できなかった他の要因（ＬＨ、ＦＳＨ、レラキシン等のレベルに関するもの）によっても引き起こされなかったことを示した。
【０１１２】
どんな場合でも、まさにエストロゲン期では、全身性酸化値が上昇し、次いでプロゲステロン増加に入ることが分かる明確な観察が確認された。
【０１１３】
例３．
２つの異なる抗酸化剤製品タイプを用いた共同処置後のＯＳレベルに対する避妊薬（ＣＴ）の活性及びＯＳの変化の評価
このテストについては、一見したところ健康で（例２で選ばれた人の一部）、いかなる治療も受けていない正常月経の女性ボランティア１０人を選んだ。ボランティアの一般的特徴は、例２と同一である。
【０１１４】
全テスト期間で、前の晩から断食したボランティアが、３日毎に、８．００〜９．３０の午前中、センターに通った。ｄ−ＲＯＭｓテスト評価のための血液を指から取り出し、０．１〜０．２ｍｌの量をヘパリン含有マイクロキュベットに集めた（ｄ−ＲＯＭｓテスト解析に十分な１０μｌの血漿）。
【０１１５】
分析は、常に、収集と同じ日に行われた。血液収集後直ちに、標準的な朝食を分配した。その他の点では、収集の前の晩に食物を過度に食べるのを避けることを除いて、他の制限を課さなかった。
【０１１６】
全月経周期中、ボランティアを監視し、血液検査を月経周期の初め（ｔ１）にて開始し、次いで３日目（ｔ３）、その後、月経出血期中のｔ２７まで３日毎に行った。その期間を周期Ｂと特定した。
【０１１７】
その結果を表４に集める。
【０１１８】
【表７】
0005852971.tif 000008
【０１１９】
この一連のデータでさえ、酸化状態の指標であるヒドロペルオキシドレベル（ＣＡＲＲ．Ｕ．単位）は、６日（ｔ６）以降の血液検査から増加し、ｔ１８日までそのままであったことが分かった。
【０１２０】
そのデータは、例２で得られたものとわずかに異なるが（ｄ−ＲＯＭｓテストのピークレベルが低い）、ＯＳは、卵子成熟期のエストロゲンピーク中に上昇し、その後の月経出血が起こるまでまさにプロゲステロン期（エストロゲン及びプロゲステロンが組み合わされる）中、減少する結果となることが確認された。
【０１２１】
また、これらのデータから、エストロゲン期中、制御されたＯＳの状態が引き起こされ、即ち、ヒドロペルオキシド生産の増加があったという結果になり、これは、酸化増加の指標であり、ＯＳの正常レベルを時々超えた。実際、ｄ−ＲＯＭテストの場合、ＯＳの状態は、＞３００ＣＡＲＲ．Ｕ．の値として決定され、ここでの実験条件下では、時折見られただけであった。
【０１２２】
個々のケースを分析することによって、ｔ９〜ｔ１５の間、即ちＥ２の増加時に、ｄ−ＲＯＭテスト値の最大増加が得られたことが分かった（それ故、一般的にＦＳＨ及びＬＨの生理的ピークのわずかに前である；図１参照）。そのレベルがｔ２１まで高いままであったという事実は、付随するプロゲステロン増加が酸化状態を実質的に変えることができないことを意味しており、それは、両方のホルモンのレベルが低減した後にのみ見えなくなる傾向がある。
【０１２３】
次に、同じボランティアが、エチニルエストラジオール５０μｇをレボノルゲストレル１２５μｇと組み合わせたものを用いたホルモン避妊薬（ＣＴ）処置の２種類の２８日周期に従った（Ｍｉｃｒｏｇｙｎｏｎ（登録商標）：治療２１日及びイナート７日）。
【０１２４】
第２の周期（周期Ｃ）の間、彼らは、先の周期Ａ及びＢに加えて、同一の収集方法及び同一の健康衛生プロトコルを用いて、ヒドロペルオキシドの一連のテストを再び受けた。
【０１２５】
ｄ−ＲＯＭｓテストの結果を表５に与える。
【０１２６】
【表８】
0005852971.tif 000009
【０１２７】
データを分析することによって、平均ｄ−ＲＯＭｓ値の実質的な増加が明らかであり、正常値を超えるもので（＜３００Ｕ．ＣＡＲＲ．と前述した）、ＣＴ治療の３日目の後でさえも始まるＯＳの存在の証拠となる。
【０１２８】
ｔ３〜ｔ２１間で分析した全てのケース（ＣＴピル消費時間）は、明らかに標準レベルを上回った。ｔ２１日にＣＴが不活性ピルに置き換えられた事実を考慮に入れると、３日の一時的中止（ｔ２４）後にＯＳ状態の回復が検出でき、ｔ２７にて完結したことは論理的であった。実際、ｔ２７に、ＯＳ状態にあるボランティアはいなかった。
【０１２９】
これらのデータを周期Ｂ（ＣＴ治療なし）のものと比較すると、ｔ３〜ｔ２４の値が有意に高かったことが明確である。これは、かかるホルモン避妊薬を用いた処置がＯＳの源であったことを明らかに示した。
【０１３０】
第４の連続した処置周期（周期Ｄ）については、再度、エチニルエストラジオール５０μｇをレボノルゲストレル１２５μｇと組み合わせたものに基づくものであるが（Ｍｉｃｒｏｇｙｎｏｎ（登録商標）：治療２１日及び不活性７日）、次いで、抗酸化活性が証明され認められた、ＡＲＤ  Ｓｔｅｎｏｖｉｔ（登録商標）（ＡＯＳｔ）として知られる、製剤の連日投与を加えた。
【０１３１】
この製剤は、抗酸化活性を持つ化合物を備えており、本テストで使用される処方を表６に与える。
【０１３２】
先の実験において、同一の製剤は、二重盲検対照実験の健康なボランティア［１９］と末梢動脈症を患う患者［１８］の両方に投与された場合に、ｄ−ＲＯＭｓテストに基づいて決定すると、抗酸化力を持つことが示された。
【０１３３】
【表９】
0005852971.tif 000010
【０１３４】
実際、この抗酸化製剤（ＡＯＳｔ）は、全４種類の抗酸化物質、即ち、膜抗酸化物質（ビタミンＥ及びベータ−カロチン）、循環抗酸化物質（ビタミンＣ  Ｌ−バイオフラボノイド）、細胞抗酸化物質（補酵素Ｑ及びピリドキシン）、並びにＧＳＨ及びＧＳＨｐｘの成分（それぞれグルタチオン及びグルタチオンペルオキシダーゼ）である全身性抗酸化物質（セレン及びＬ−システイン）を含んだ。
【０１３５】
ボランティアには、１０ｍｌ二相バイアル（投与時点で混合される）の形態でＡＯＳｔを、ＣＴピルと同時に投与した。この周期（周期Ｄ）の実験方法は、先の周期Ｂ及びＣのものと同一であった。
【０１３６】
一連の血液ヒドロペルオキシド値の結果を表７に与える。
【０１３７】
【表１０】
0005852971.tif 000011
【０１３８】
各種測定時間での平均値から分かるように、男女の健康なボランティアにおいてｄ−ＲＯＭｓテスト値を低減できることが証明されているＡＯＳｔを用いた処置［１９］は、予想外にも、ホルモン避妊薬（ＣＴ）を用いた処置に由来するＯＳに対し何らかの形で作用することができなかった。
【０１３９】
それ故、その結果から、ＣＴ治療に由来するＯＳは、証明済みの抗酸化製剤の投与にもかかわらず、事実上変わらないまま維持するような、かなり独特の機序によって生じることが推定できる。
【０１４０】
その後の洗い流し周期（ここで、ボランティアは同一ＣＴを用いた治療のみを続けた）を受け、彼らは、表８に具体的に与えられた本発明の抗酸化剤組成物（ＡＯｉｎｖ）と関連がある更なるＣＴ周期（周期Ｅ）を受けた。
【０１４１】
【表１１】
0005852971.tif 000012
【０１４２】
カテキンは、緑茶抽出物の形態で供給され、ここで、前述のカテキンが、６０重量％であった。
【０１４３】
ＡＯｉｎｖ組成物は、ＣＴピルと同時に投与された。前述の組成物は、キットの形態、即ち、粉末とカテキンが溶解したカフェイン抜きの緑茶水溶液１０ｍｌであり、消費の時に一緒に混合された。このテストの収集方法並びに健康及び衛生の提案は、先のテストと同一であった。
【０１４４】
本発明の組成物を用いた処置の結果を表９に与える。
【０１４５】
【表１２】
0005852971.tif 000013
【０１４６】
時間ｔ１及びｔ２７を除き、全てのｄ−ＲＯＭｓテスト値は、単独の避妊薬処置によって得られた値よりも有意に低かった；即ち、ＡＯｉｎｖ組成物との同時治療は、ホルモン避妊薬を用いる周期の全期間中、ＯＳの低減において、予想外にも驚くほど有意な効果があると示された。
【０１４７】
ＯＳ状態を決定する同一タイプのテストを用いて証明され文書化された有効性を持つ抗酸化剤製品の使用が全体的に不満足であると分かったことを考慮すると、これらの結果は、より一層驚くべきものであった。
【０１４８】
例４．
カテキン単独の作用と比較したＡＯｉｎｖによって示される相乗効果の評価
このテストでは、一見したところ健康な正常月経のボランティア６４人を選んだ。全ての人が、エチニルエストラジオール３０μｇ及びドロスピレノン３ｍｇ（Ｙａｓｍｉｎ（登録商標））を含有する低用量Ｃを用いた少なくとも６ヶ月間の避妊治療を受け、次いで、対照グループ及び治療グループの２つのグループに細分した。
【０１４９】
全ボランティアの選択基準は、付随する長期治療、閉経前の状態、あらゆるタイプの栄養補助食品の使用、喫煙、アルコールの強い飲料の使用、茶（＞７５０ｍｌ／日）及びチョコレート（＞５０ｇ／日）の過剰消費、並びにＢＭＩ＞２５を除外した。先行妊娠は、本テストの２年以上前であることが必要である。
【０１５０】
対照グループは、制御された茶の消費と関連するＣＴ療法を受けた；治療グループは、同一のＣＴと、表６に与えたＡＯｉｎｖ組成物の同時消費による療法を受けた。
【０１５１】
対照グループ（３３ケース；平均年齢３５．９±６．７１歳）は、製造業者が提案する標準的な手順に従ってＣＴを取り、正確な３回の瞬間にＯＳ監視の解析を受けた：
・ＣＴがＯＳを生じたかどうかを決定する目的を有する、選択のための第１の決定；
・ＯＳの基底値を評価するための第２の決定；
・８週間のＣによる治療後の第３の決定。
【０１５２】
実験プロトコルの不可欠な部分として、前述の対照グループは、午前中に茶１５０ｍｌを２杯消費するように求められた；そのうち一方は、朝食時で、他の人は午前中であった。加えて、日中に、茶を更に消費しないことを求めた。
【０１５３】
茶の種類は、実験的研究用に意図的に供給されたという点において、全てのボランティアで同一であった（３箱、それぞれが５０個のティーバッグ）。
【０１５４】
茶中のカテキン含量［２１，２２，２３］を表１０に与える。
【０１５５】
【表１３】
0005852971.tif 000014
【０１５６】
少なくとも２杯の茶を消費する要求は、ＡＯｉｎｖ組成物を用いて処置したボランティアのものより間違いなく高いカテキン量を投与するという選択に由来した。提案した量での茶の投与は、血液中のカテキンレベル及び相対抗酸化力［２１］を増加できるようにした。
【０１５７】
治療グループのボランティア（３１ケース；平均年齢３６±８．２２歳）は、同一スキームのＣＴ療法及びＯＳ監視を受けたが、基底調査後（選択のものの後）、彼らは、また、連続して８週間ものＡＯｉｎｖを用いた連続治療を受け、その後、ＯＳを再び調査した。このグループは、８週間の調査期間中、茶の消費を避けるか又は最大限でも１カップ／日（１５０ｍｌ）を超えない量に制限することと、チョコレートの消費を避けるように求められた。
【０１５８】
両グループのボランティアに配布した茶のインビトロでの抗酸化作用は、ＢＡＰ法を用いたＡＯ力の評価（生物学的抗酸化能）を受けて決定された［２５］。そのテストを行うため、熱湯１５０ｍｌを用いて５分間ティーバッグで茶を出すことによって、茶浸出液を調製した。また、再構成ＡＯｉｎｖのバイアル（１０ｍｌの水溶液に粉末を溶解したもの）を熱湯によって１５０ｍｌにした。この調製の１０分後にＢＡＰを決定した。異なる時間に作られた６つの茶調製物を二重反復試験で評価し、二重反復試験で評価された６つのＡＯｉｎｖ調製物と比較した。
【０１５９】
インビトロでの結果は、茶の抗酸化力が、ＡＯｉｎｖ組成物よりも有効であることを示した；即ち、茶浸出液が３７０２±３４７．３μｍｏｌ／ｌのビタミンＣで、ＡＯｉｎｖが３１２１±１３６．８μｍｏｌ／ｌのビタミンＣであった（ｐ＜０．０５  相互依存的データのｔ−テスト）。
【０１６０】
試験期間中、全てのボランティアは、彼らの習慣に従い、日中にコーヒーを飲むことが認められた。全てのボランティアは、前の晩から断食して、８．００〜９．３０の午前中にテストのために現れた。彼らは、例２で与えた方法に従って行われる血液テストの前の晩に食物を過度に食べることを避けるように通知された。
【０１６１】
ＯＳ評価のスキームは、上述の通り、３つの対照で構成された；選択、ベースライン測定、８週間後の測定のための対照であった。
【０１６２】
ケースのいずれについても、月経出血の直前に行わないように測定の時期を選んだ。測定結果を表１１に与える。
【０１６３】
示されたデータから分かるように、全てのボランティア（対照グループ及び治療グループの両方）は、観察期間の開始時に、ＯＳ状態にあった。実際、正常であると考えられるｄ−ＲＯＭｓテスト値、即ち＜３００Ｃａｒｒ．Ｕ．のボランティアはおらず、エストロゲンが低用量であるホルモン避妊薬もＯＳを引き起こすことが更に確認された。
【０１６４】
【表１４】
0005852971.tif 000015
【０１６５】
８週の期間が終わり、ＡＯｉｎｖを用いて治療したグループのｄ−ＲＯＭｓテスト値が、対照グループよりも有意に低く、ケースが高い割合で正常値内であった（７５％）ことに注目した。
【０１６６】
これは、ボランティアが多くのカテキンを消費したにもかかわらず、対照グループでは起きなかった（用いたティーバッグを数えたら、９８％のコンプライアンスであった）。
【０１６７】
更に、研究の２つのグループにおけるコーヒーの消費は、実質的に同じであることが分かった：平均が、対照グループで１．１カップ／日であり、治療グループで１．２カップ／日であった。ＡＯｉｎｖを用いて治療したグループのボランティアによる茶の消費は、平均して無視できる程であった（０．１カップ／日）。
【０１６８】
カテキンは、ＡＯｉｎｖに含まれるものより高い量で投与されたが、ＯＳに作用できないことが分かったので、低用量でもホルモン避妊薬ＣＴを用いた治療計画中にＯＳ制限作用を発揮したのが、カテキンではなかったことを実証したため、これらの結果は、驚くべきものであった。
【０１６９】
驚くべき結果は、特定の成分をカテキン作用と適切に結び付けることによって、ＯＳを有意に低減できるようにする予想外の相乗効果をもたらす本発明の抗酸化剤組成物に起因するという結果になった。先に報告されたインビトロでの抗酸化力の評価が、緑茶単独と比較して、本発明の組成物の使用を思いとどまらせることを考えると、これらの結果は、より一層予期しない驚くべきものであった。
【０１７０】
また、注目すべきことは、この有意な低減は、有利に、ＯＳ源であるホルモン避妊薬の使用に起因する全ての心臓血管イベントの他、表在性血栓症エピソードの頻度を結果的に低下させることにつながることである。
【０１７１】
例５．
単独成分、即ちカテキン無しの作用に対するＡＯｉｎｖによって示される相乗効果の評価
このテストを１８人のボランティア（例３のケースの一部）に対して行った。テストの目的は、ＡＯｉｎｖに含まれる抗酸化物質が、緑茶抽出物なしにもかかわらず、ホルモン避妊薬使用中（Ｙａｓｍｉｎ（登録商標））に生じるＯＳを低減するのに有効であるかどうかを検証することであった。
【０１７２】
従って、ボランティアの３つのグループを形成し［Ａ，Ｂ，Ｃ］、それぞれは、年齢、体重及び身長に基づき、全てのグループができる限り均一になるように選択された６人の被験者で構成された。全てのボランティアは、避妊を除き、全治療から１ヶ月の洗い出しを受けた。ボランティアの特徴を以下に示す：
【０１７３】
【表１５】
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【０１７４】
３つのボランティアグループは、以下のように処置された：
・グループＡは、ＡＯｉｎｖを用いた毎日の処置を受けた；
・グループＢは、例４で与えられた方法に従って、緑茶によって毎日処置された（午前中に、２杯の茶、各１５０ｍｌを消費する；この場合も、一方は朝食時であり、他方は午前中の間であった。加えて、日中に他のあらゆる茶の消費を避けるよう求められた。）；
・グループＣは、カテキンのないＡＯｉｎｖ組成物に相当する表１２に与えられた抗酸化剤組成物によって処置された。この最後のグループは、テストの時間中、茶を取らないよう求められた。
【０１７５】
【表１６】
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【０１７６】
上記処置は、継続的な避妊療法から開始され、８週間、中断せずに続けられた。テスト期間中、全てのボランティアは、彼らの習慣に従い、日中にコーヒーを飲むことが認められた。グループＣのボランティアも、習慣であれば、（茶の代わりではないという条件で）コーヒーを飲むことが認められた。
【０１７７】
抗酸化剤配合物を取り始める前と、その後８週間、ｄ−ＲＯＭｓテスト値を取得した。
【０１７８】
全てのボランティアは、前の晩から断食して、午前中の８．００〜９．３０の間に血液検査のため現れた。彼らは、例２で与えられた方法に従って行われる血液テストの前の晩に食物を過度に食べることを避けるよう知らされた。
【０１７９】
その結果を表１３に与える。
【０１８０】
【表１７】
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【０１８１】
データの分析は、抗酸化物質単独（グループＣ）又はカテキン単独（グループＢ、例４）の製剤を用いた処置は、全くＯＳに影響を及ぼすことができないことを明確に示した。従って、ホルモン避妊薬処置に由来するＯＳを低減する際のＡＯｉｎｖ組成物の有意な有効性は、適切な抗酸化成分とカテキンを組み合わせた結果であり、予期しない驚くべき相乗効果を与えたことが示された。
【０１８２】
書誌参照
１）De Groote D, Perrier d’Hauterive S, Pintiaux A et al. Effect of oral contraception with ethinylestradiol and drospirenone on oxidative stress in women 18-35 years old. Contraception 2009;80:187-193.
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【図１】
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