(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体液からエンドトキシンを除去するための収着剤であり、
中性の疎水性表面を備える水不溶性多孔質担体を含み、前記担体の表面がポリミキシン及びアルブミンからなる吸着性の被覆を有しており、ポリミキシン及びアルブミンは非共有的に前記担体表面に結合しており、
前記非共有的な結合は疎水性相互作用である、収着剤。
【請求項２】
前記担体が疎水性ポリマーであることを特徴とする、請求項１に記載の収着剤。
【請求項３】
前記疎水性ポリマーが、架橋ポリスチレンポリマー、特にポリスチレン−ジビニルベンゼン共重合体であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の収着剤。
【請求項４】
前記担体が少なくとも１５ｎｍ、好ましくは３０ｎｍの平均孔径を有していることを特徴とする、請求項１〜３のうちいずれか一項に記載の収着剤。
【請求項５】
前記担体が１２０ｎｍ以下の平均孔径を有していることを特徴とする、請求項１〜４のうちいずれか一項に記載の収着剤。
【請求項６】
前記収着剤が微粒子の形状を有することを特徴とする、請求項１〜６のうちいずれか一項に記載の収着剤。
【請求項７】
前記微粒子が、２０μｍ以下の粒度、好ましくは８μｍ以下の粒度、最適には５μｍ以下の粒度を有していることを特徴とする、請求項６に記載の収着剤。
【請求項８】
請求項１〜７のうちいずれか一項に記載の収着剤を含む収着装置。
【請求項９】
請求項１〜７のうちいずれか一項に記載の収着剤の懸濁液を含む血漿循環回路。
【請求項１０】
請求項１〜７のうちいずれか一項に記載の収着剤の製造方法であり、
ａ）中性の疎水性表面を備える水不溶性の多孔質担体を準備し、
ｂ）前記担体とポリミキシン含有水溶液との接触および培養によって、前記担体表面にポリミキシンを吸着被覆し、
ｃ）結合していないポリミキシンを除去するため前記担体を洗浄し、
ｄ）前記担体とアルブミン含有水溶液との接触および培養によって、ポリミキシンで被覆された前記担体表面にアルブミンを吸着被覆し、
ｅ）必要に応じて、結合していないアルブミンを除去するため前記担体を洗浄する、という工程を含む方法。
【請求項１１】
前記担体が工程ｂ）とｃ）との間に、又は工程ｃ）とｄ）との間にオートクレーブ処理されることを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
エンドトキシンで汚染された生体液が、請求項１〜７のうちいずれか一項に記載の収着剤と接触することを特徴とする、生体液からのエンドトキシン除去方法。
【請求項１３】
前記生体液が、血液又は血漿であることを特徴とする、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
敗血症を治療するための、請求項１〜７のうちいずれか一項に記載の収着剤。
【請求項１５】
マイクロスフェアベースの解毒システム（ＭＤＳ）における収着剤としての、請求項１〜７のうちいずれか一項に記載の収着剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリミキシンで被覆した、生体液からエンドトキシンを除去するための収着剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
エンドトキシンは、グラム陰性菌の細胞壁中のリポ多糖（ＬＰＳ）であり、細胞溶解によって遊離される。実際には、グラム陰性菌の外膜の最も一般的な脂質成分のリポ多糖体である。エンドトキシンは発熱性物質であり、すなわちエンドトキシンが、例えば微生物汚染の過程で体内に入り込み、全身性作用を示す場合、罹患した患者には、強い炎症反応と発熱とが生じる。血液循環の中にエンドトキシンが存在すると、制御不能な免疫細胞の活性化及び凝固系の不均衡が引き起こされる。エンドトキシンは、その濃度に応じ、特に、高熱、低血圧、及び重篤なケースでは多臓器不全によって特徴づけられる敗血症を引き起こすことがある。敗血症は非常に深刻な病気であり、重症敗血症患者又は敗血症性ショックを有する患者の死亡率は、疾患の重度に応じて、約３０〜６０％である。例えば肝臓病患者又は化学療法中の患者など、免疫防御に障害のある患者も細菌感染症になりやすいため、エンドトキシン中毒の症状を示す。
【０００３】
リポ多糖体分子の構造は３つの部分からなる。リピドＡは細菌細胞に向かい合う分子部分を形成し、このリピドＡによって、分子はグラム陰性菌の外膜に固定される。ＬＰＳ分子は、さらに、高度に保存された中央のコア領域を有し、この領域はリピドＡに接続されている。第３の最も外側の部分は、Ｏ−特異的多糖類（Ｏ−抗原）によって形成され、その構造は、様々なグラム陰性菌の間で大きく異なっていることがある。毒性効果は、細胞溶解時にまず遊離されるリピドＡに起因する。
【０００４】
エンドトキシンで汚染された血液又は血清などの生体液は、適切な収着剤を使ってエンドトキシンを除去することができる。エンドトキシン中毒患者又は敗血症患者の治療は、特に、体外血液浄化法（アフェレーシス療法）の中で行われる。
【０００５】
アフェレーシス療法は体外で実施される治療法であり、この場合、病態生理学的に重要な血液及び血漿成分、例えば（糖）タンパク質、ペプチド、脂質、リポタンパク質及びリポ多糖などの生体分子が除去されるが、また血液細胞および血漿もまた除去される。アフェレーシス療法は、診断及び治療目的に使用することができる一方で、健常者から十分な量の特定の血液成分を十分に高い純度で得るための非常に有効な方法でもある。治療的アフェレーシスが重要であるのは、特定の適応症において、これがしばしば薬物治療の代替として非常に効果的かつ副作用の少ない方法だからである。従って、血漿交換の場合、血漿は完全に分離され、置換液と交換することができるか、又はＬＤＬ、エンドトキシンもしくは免疫グロブリンなどの特定の成分だけが収着剤によって血漿から除去され、その後で血漿はドナー／患者に戻される。
【０００６】
エンドトキシンによって汚染されている生体液（大抵は血液又は血漿）からエンドトキシンを除去するため、この生体液は、通常は収着装置の中にある収着剤と密接に接触させられる。エンドトキシンは、収着剤の表面に付着し、生体液から取り除かれる。エンドトキシンを除去した生体液は、再び患者に戻される。吸着装置は、体外循環回路の血液側に配置されているか、又は体外血液浄化装置の血漿循環回路の濾液側に配置されている。この場合、エンドトキシン結合容量及び速度は、収着剤の性質に左右される。
【０００７】
収着剤によるエンドトキシン結合速度は、患者の生存にとって重要である。エンドトキシンを患者の血液から取り除くために残された時間は非常に短く（１２時間未満）、重症敗血症の場合は数時間しかないこともある。
【０００８】
陰イオン交換樹脂（例えば、セルロースに結合しているＤＥＡＥ又はＰＥＩグループ）は、エンドトキシン結合に非常に適していることが明らかになっている。しかし、その欠点は、プロテインＣ及びプロテインＳなどの体内凝固系の重要因子の好ましくない結合と、それに関連して生じる凝固の問題である。
【０００９】
この凝固問題は、エンドトキシンに対する固定化抗体を有する特殊な収着剤を使用することによって回避することができる。しかし、この方法は経済的理由から限定的にしか用いることができない。
【００１０】
非常に有用な代替の方法として、冒頭に述べた種類の収着剤が知られており、この方法では、ポリミキシン分子が水不溶性多孔質担体に固定されている。
【００１１】
ポリミキシンは、グラム陰性菌感染症を治療する抗生物質である。ポリミキシンは細胞膜の透過性を増加させることによって細胞璧構造の中に入り込み、それによって細胞溶解を引き起こす。ポリミキシンは、リン脂質だけでなく、リポ多糖（エンドトキシン）とも高い親和性をもつ。ポリミキシンには神経毒性及び腎毒性作用があるため、ポリミキシンＢ及びポリミキシンＥ（コリスチン）のみが、ある程度の治療上の重要性を持っている。従って、ポリミキシンＢ又はポリミキシンＥは、経口又は局所療法にのみ適用可能である。これらは、その毒性効果のために、エンドトキシン中毒又は敗血症の非経口での全身療法には適していない。
【００１２】
ポリミキシンの神経毒性及び腎毒性作用により、患者の安全性という意味において、ポリミキシンでコーティングされた収着剤を臨床応用する場合、例えばポリミキシンが担体から剥離するなど、患者血液がポリミキシンによって汚染されるのをできる限り少なくするか、又は防止するため、ポリミキシンをできる限り強固に担体に結合する試みがなされている。このことから、ポリミキシン、特にポリミキシンＢを水不溶性担体に共有的に結合し、この方法によってポリミキシンＢでコーティングした担体を、汚染されている生体液からエンドトキシンを除去する収着剤として使用することは必要であると考えられていた。
【００１３】
ＥＰ０１１０４０９Ａには、多孔質ガラス（ＦＰＧ２０００）からなるポリミキシンＢ固定担体及びセルロース（セルロファインＡ−３）系のポリミキシンＢ固定多糖類担体が開示されている。同様に、ポリミキシンＢが共有結合したセルロースまたはセルロース誘導体からなる微粒子も知られている［Ｗｅｂｅｒ  Ｖ．，Ｌｏｔｈ  Ｆ．，Ｌｉｎｓｂｅｒｇｅｒ  Ｉ．，Ｆａｌｋｅｎｈａｇｅｎ  Ｄ.：Ｉｎｔ．Ｊ．Ａｒｔｉｆ．Ｏｒｇａｎｓ  ２５（７），６７９］。ポリミキシン被覆セルロース担体により、高レベルのエンドトキシン吸着を達成することができたが、極めて高い経費をかけてポリミキシンＢをこれらの担体に共有結合させる必要があり、従ってポリミキシンを結合させる前にこのセルロースを化学的に活性化させなければならないという欠点を有している。
【００１４】
ＥＰ０１２９７８６Ａ２には、繊維状の担体を備えるエンドトキシン解毒材料が説明されており、この材料にポリミキシンが共有的に固定化されている。この繊維状担体は、担体の表面にポリミキシンを共有的に結合させるために官能基を有している。ＥＰ０１２９７８６のエンドトキシン解毒材料は、吸着モジュール用の充填材として市販されており（商品名：Ｔｏｒａｙｍｙｘｉｎ（トレミキシン））［Ｓｈｏｊｉ  Ｈ．２００３．Ｅｘｔｒａｃｏｐｏｒｅａｌ  ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  ｒｅｍｏｖａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｅｐｓｉｓ：ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（Ｔｏｒａｙｍｙｘｉｎ）］、現在のところ、これが商業利用の体外血液浄化の分野でエンドトキシンを除去する、敗血症の臨床治療のために認可されている唯一の収着剤である。固定化ポリミキシンＢを備える繊維状担体の有効性について批判的なレビューが出版されており、この中で治療の質は最適以下であるとされている［Ｃｒｕｚ  ＤＮ  ｅｔ  ａｌ．２００７；Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  ｏｆ  ｐｏｌｙｍｙｘｉｎ  Ｂ−ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  ｆｉｂｅｒ  ｃｏｌｕｍｎ  ｉｎ  ｓｅｐｓｉｓ：ａ  ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｒｅｖｉｅｗ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  １１（３）：１３７］。
【００１５】
ポリミキシンによるエンドトキシンの結合に基づく周知の収着剤の欠点は、エンドトキシン結合容量及び速度が低いことである。ポリミキシンは、ＮＨ２基によってポリマーに結合しているため、エンドトキシンへの接近が損なわれる。その他の欠点は、コストのかかる複雑な製造方法と、それに伴うより高額な製造コストである。
【００１６】
エンドトキシン中毒、特に敗血症に罹患した患者の死亡率は、上述のトレミキシン吸着モジュールの臨床応用によって低下させることができたが、重症敗血症及び敗血症性ショックの患者の死亡率は、最大限の治療を行っても依然として非常に高い。このような理由と、敗血症状態の高い出現率及びその増加傾向とからみて、エンドトキシンに対する収着性能が改善され、さらにその臨床応用に関して高い安全性要求にも対応する収着剤の需要は大きい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】欧州特許出願公開第０１１０４０９Ａ
【特許文献２】欧州特許出願公開第０１２９７８６Ａ２
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】Ｗｅｂｅｒ  Ｖ．，Ｌｏｔｈ  Ｆ．，Ｌｉｎｓｂｅｒｇｅｒ  Ｉ．，Ｆａｌｋｅｎｈａｇｅｎ  Ｄ.：Ｉｎｔ．Ｊ．Ａｒｔｉｆ．Ｏｒｇａｎｓ  ２５（７），６７９
【非特許文献２】Ｓｈｏｊｉ  Ｈ．２００３．Ｅｘｔｒａｃｏｐｏｒｅａｌ  ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  ｒｅｍｏｖａｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｅｐｓｉｓ：ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（Ｔｏｒａｙｍｙｘｉｎ）
【非特許文献３】Ｃｒｕｚ  ＤＮ  ｅｔ  ａｌ．２００７；Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  ｏｆ  ｐｏｌｙｍｙｘｉｎ  Ｂ−ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  ｆｉｂｅｒ  ｃｏｌｕｍｎ  ｉｎ  ｓｅｐｓｉｓ：ａ  ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｒｅｖｉｅｗ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  １１（３）：１３７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
本発明の課題は、生体液からエンドトキシンを高い度合及び速度で除去することができ、さらに患者の健康に対する追加的なリスクを含まない、臨床応用に問題のない収着剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
この課題は、冒頭で述べたような、生体液からエンドトキシンを除去するためのポリミキシンで被覆された収着剤によって解決され、この収着剤は、本発明に基づき、中性の疎水性表面を備える水不溶性多孔質担体を含み、この担体の表面はポリミキシン及びアルブミンからなる吸着性の被覆を有しており、その際、ポリミキシン及びアルブミンは非共有的に担体表面に結合している。
【００２１】
本発明に基づく収着剤により、ポリミキシンを共有的に結合した収着剤と比べ、エンドトキシン収着容量及びエンドトキシン収着速度の明らかな改善を達成することができた。本発明者らは、予想の範囲を超えて、周知の収着剤と比較し、本発明に基づく収着剤が、短い滞留時間ですでにエンドトキシンで汚染された生体液から多量のエンドトキシンを結合させ得ることを確認した。大量の生体液からエンドトキシンを短時間で取り除くことができるため、このことは、特に敗血症患者に対する大きな治療上のメリットを有している。本発明に基づく収着剤によって、重症敗血症患者の生存可能性を改善することができる。すでに言及したように、収着剤によるエンドトキシン結合速度は患者の生存にとって重要である。体外血液浄化における治療時間も、本発明に基づく収着剤によって短縮することができるため、時間的、財政的及び人的な資源を節約することができる。
【００２２】
さらに本発明者らは、ポリミキシンとアルブミンの両方を備える担体の吸着性被覆により、ポリミキシンだけで吸着的に被覆された担体と比べ、担体表面のポリミキシンの脱離を明らかに減少させられるという驚くべき事実を確認した。本発明によって、担体表面から脱離するポリミキシンは明らかに減少する。結果的に、有毒なポリミキシンが生体液、特に血液に達する量は明らかに少なくなるため、患者の安全を非常に高いレベルで維持することができる。アルブミンによる追加的被覆は、ポリミキシンだけで吸着的に被覆された担体に比べ、ポリミキシンによるエンドトキシン収着に何の影響も与えない。
【００２３】
すでに言及したように、多くの吸収体は、除去すべき物質だけでなく、血液凝固系の生理学的に重要なタンパク質又は因子（抗凝結剤並びに凝結促進剤）もまた、非常に高い度合で取り除かれるという欠点を有している。さらに、プロテインＣなどの血液の重要な自然凝固因子又はヘパリンなど血液に添加される抗凝固剤が、本発明に基づく収着剤では僅かな量しか吸着されないことを確認することができ、しかも驚くべきことに、ポリミキシンだけで被覆された担体に比べ、本発明に基づく収着剤によるヘパリンとプロテインＣの吸着はより少なくなることが観察された。体内凝固系の不均衡リスク又は体外もしくは体内血液循環回路における好ましくない抗凝固がこれによって最小化される。
【００２４】
周知の収着剤に対する本発明のもう１つの利点は、特に簡単な製造である。ポリミキシンは、従来技術で知られている収着剤と比較すると、共有的にではなく、ポリミキシン分子の疎水性部分を用いることにより、特に疎水性相互作用によって担体の中性の疎水性表面に固定化される。本発明に基づく収着剤のエンドトキシン結合効果の増加は、おそらく、特に疎水性相互作用によって媒介される結合がポリミキシンのＮＨ２基を解放し、これらの基のほぼ全部がエンドトキシン結合に使用可能であるということによって説明され得る。ポリミキシンを担体上に固定化する複雑な化学的工程は必要ない。アルブミンの結合も、共有的にではなく、同様に吸着プロセスによって行われる。ここでも、その他の化学的固定化工程もしくは架橋工程は不要であり、収着剤の臨床応用から再び残らず排除されるかもしれない化学薬品の使用も必要ない。アルブミンを備える表面の吸着性被覆は周知であり、例えばＥＬＩＳＡ法などの免疫学的測定法では、非特異的結合を防止するために、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）が使用される。従って、本発明に基づく収着剤の製造は、経済的に、再現可能に、及び追加の化学薬品の使用なしに実施することができる。
【００２５】
ポリミキシン及びアルブミンからなる「吸着性被覆」とは、ポリミキシンとアルブミンとが表面の吸着プロセスを介して結合し、それによってこれらが非共有的に担体の表面と結合していることを意味する。すでに言及したように、特に疎水性相互作用（疎水性交互作用とも言う）が重要な役割を担っていると考えることができる。この疎水性相互作用は、生化学的に非常に重要であり、極性環境では疎水性分子が会合しやすいという現象に基づいている。従って、この疎水性相互作用は、本質的に力ではなく、むしろ極性環境によって強制されるものである。本発明の場合、この疎水性相互作用は、特にポリミキシン分子の疎水性部分又はアルブミンの疎水性側鎖と、多孔質担体の中性の疎水性内部及び外部表面との間で起こる。両親媒性分子を備える表面の吸着性被覆は、当業者には周知である。例えばＨＩＣ（疎水性相互作用クロマトグラフィ）や逆相クロマトグラフィなどの基本的なクロマトグラフ分離プロセスは、疎水性相互作用に基づいており、そのため、一般的に担体表面の非常に強い分子の結合が達成される。その他の非共有的相互作用（イオン結合、水素結合及びファン・デル・ワールス交互作用を含むが、これに限定されるものではない）も、ポリミキシン及びアルブミンの吸着に役割を果たすことができる。本発明に基づく効果は、ポリミキシンの脱離が、ポリミキシン分子とアルブミン分子との間で生じる多数の非共有的交互作用によって縮小されることにより生じる、という説明が考えられる。
【００２６】
本開示の範囲内において「収着剤」とは、収着、好ましくは吸着を実施するための手段を意味しており、つまり生体液中にある分子が収着剤の表面力によって保持される。従って、本明細書においては、「収着剤」の代わりに、「吸着剤」又は「吸着体」又は「吸収体」という用語も使用される。本発明に基づき、この収着剤は、エンドトキシンで汚染された生体液からエンドトキシンを吸着するために設けられている。本発明に基づく収着剤は、特に敗血症状態の患者における体外血液浄化に用いられる。
【００２７】
ここで使用されている「アルブミン」という用語は、自然に発生するアルブミン、特にヒトアルブミン、類似物質及びそれらのバリエーションに関係する。さらに「アルブミン」という用語は、アルブミン類似のポリペプチドも含む。アルブミン類似のポリペプチドは、その構造に関してアルブミンに似ているか、又はアルブミンに類似した特性を有している。アルブミン類似のポリペプチドは、とりわけ、プレアルブミンなどのアルブミン亜型から構成されている。アルブミン類似のポリペプチドは、自然源から由来するか、又は合成的に製造することもできる。
【００２８】
本発明の範囲内で使用されている「生体液」という表現は、無細胞の液体、特に血漿に関係するか、又は細胞を含む液体、特に血液に関係することができる。体外血液浄化の過程で、例えば抗凝固剤など他の液体を含む溶液（ヘパリン溶液、クエン酸塩溶液）または置換溶液（電解液、液体の損失を補正するための液体）を体外血液循環回路又は血漿循環回路の中に供給することも必要であるため、生体液とは、希釈血液または希釈血漿も意味することができる。本発明は、主として人間医学の分野を想定しており、従ってヒトの生体液に関係している。しかし、このことは獣医学分野における本発明の使用を排除するものではない。
【００２９】
ポリミキシンは、もともと細菌のバチルス・ポリミキサに由来する周知の化合物である。特に、ポリミキシンＢ及びポリミキシンＥ（コリスチン）は、本発明のために有用なポリミキシンとして強調されなければならない。
【００３０】
独立請求項１で用いられているように、「中性の疎水性表面を備える水不溶性の多孔質担体」とは、本開示の範囲内において、外部及び内部表面を有する多孔質の水不溶性固体に関係している。これらの外部及び内部表面は、中性で疎水性である。「中性」とは、非イオン性を意味している。本発明はとりわけ粒子状の担体を対象としている。
【００３１】
本発明に基づく収着剤を製造するため、ポリミキシンとアルブミンとは、独立の連続した被覆工程の中で担体に吸着される。この場合、担体を最初にポリミキシンで吸着被覆し、続いて余分なポリミキシンを取り除く洗浄工程後に、アルブミンで吸着被覆を実施するのが有利であると証明された。これにより、両方の被覆工程の間にオートクレーブ工程を挿入することが可能である。基本的に、担体を最初にアルブミンで被覆し、続いてポリミキシンで被覆することも可能であるが、そのような担体の滅菌製造は、アルブミン被覆がオートクレーブ条件下で変性し、そのためにすべての工程を滅菌溶液、特に滅菌濾過された溶液に通過させなければならないため、手間のかかることになる。従って、ポリミキシンで吸着被覆した後に担体を滅菌し、続いてアルブミンによる被覆を行うことが有利である。本発明に基づく収着剤の製造にも適している滅菌アルブミン溶液は、しばしば使用されており、一般に販売されている（例えば、ヒトアルブミン２０％、オクタファーマ、ウィーン、オーストリア）。
【００３２】
本発明に基づく収着剤は、好ましくは、本発明の一部でもある方法によって製造され、以下の工程を含んでいる。すなわち、
ａ）中性の疎水性表面を備える水不溶性の多孔質担体の準備し、
ｂ）担体とポリミキシン含有水溶液との接触および培養によって、担体表面にポリミキシンを吸着被覆し、
ｃ）結合していないポリミキシンを除去するため担体を洗浄し、
ｄ）担体とアルブミン含有水溶液との接触および培養によって、ポリミキシンで被覆された担体表面にアルブミンを吸着被覆し、
ｅ）必要に応じて、結合していないアルブミンを除去するため担体を洗浄する。
【００３３】
洗浄工程ｅ）はオプションであり、省略することもできる。しかし、ポリミキシンとアルブミンとで被覆された担体を、使用する前に長時間一時保管する場合は、保管する前に工程ｅ）を実施するのが適切である。
【００３４】
ポリミキシン又はアルブミンを含む含水溶液の製造には、薬学的に容認される塩が使用される。ナトリウムなどの薬学的に容認されるカチオンは、イオン強度に影響を与えるために使用される。収着剤を直接血液と接触させる血液浄化に対して適用する場合、アルブミンは好ましくは等張液の中に、さらに好ましくは等張食塩水の中に溶かされている。適合する滅菌アルブミン溶液は、上述したように市販されている。本製造方法において、結合していないポリミキシン又はアルブミンを取り除くための担体の洗浄は、同様に等張液によって、特に等張食塩水によって行われる。
【００３５】
収着剤の滅菌に関しての高い要求に対応するため、工程ｂ）とｃ）との間又は工程ｃ）とｄ）との間に担体をオートクレーブ法で滅菌する場合は有利である。オートクレーブは、通常の手順に従って、例えば１２１℃で２０分間行われる。当業者には、オートクレーブ後に使用される溶液、すなわちアルブミン含有水溶液と、洗浄のために用いられる溶液とが、臨床的要求に対応しており、特にそれらの溶液が滅菌され、発熱物質がない状態であることは明らかである。
【００３６】
実際には、この担体が疎水性ポリマーである場合は特に有利である。それにより、特に多孔性及び粒度に関して、担体材料の優れた再現性が保証される。さらに、多孔性及び粒度は、非常にうまく変更することが可能である。疎水性ポリマーは、ホモポリマーでも、ヘテロポリマーでもよい。実際に実施するには、架橋ポリスチレンポリマーが特に適切であることが判明している。体外血液浄化の場合、患者体液に接触する装置部品の滅菌に対する要求は高い。このことは、収着剤にも該当する。架橋ポリスチレンポリマーは熱及び化学物質に対する高い安定性を特徴とし、すでに臨床診療で確立されている。
【００３７】
ポリミキシンと担体との間の疎水性相互作用の強度は、一方では中性の疎水性担体の疎水性によって、他方では媒体のイオン強度によって決まる。すでに言及したように、ポリミキシンは神経毒性及び腎毒性を有している。従って、担体の外部及び内部表面へのポリミキシンの結合はできるだけ強固であることが望ましい。特に好ましい変更例では、この架橋ポリスチレンポリマーがポリスチレン−ジビニルベンゼン共重合体である。ポリスチレン−ジビニルベンゼン供重合体の表面は高い疎水性を有していることから、担体表面へのポリミキシンの強い結合が達成される。その他の疎水性の高い中性疎水性ポリマーを使用することももちろん可能であり、これらは当業者にはよく知られている。しかし、ポリミキシンを中性の疎水性ポリマーに固定した後でも、なお、ある程度の量のポリマーが担体表面から脱離し、生体液の中に放出されることが確認された。この脱離は、ポリミキシンによるエンドトキシン収着容量に大きく影響することはないが、少量のポリミキシンでも神経毒性及び腎毒性を発揮するおそれがあり、そのために患者の健康を損なうリスクとなり得る。ポリミキシンの脱離は、ポリミキシンの他にアルブミンでも被覆されている本発明に基づく収着剤によって、顕著に低下させることができる。
【００３８】
さらに、エンドトキシン吸着に関して、多孔質担体の孔径も重要であることが見出された。従って、また再現性の理由からも、この多孔質担体が規定の平均孔径を有していることが有利である。担体の平均孔径は、常に、疎水性相互作用によるポリミキシンの固定化前の平均孔径に関係している。
【００３９】
多孔質担体が合成ポリマーから製造されている場合、平均孔径をとりわけ良好に調整することができる。本領域の業者には、「平均粒径」が何を意味しているか、多孔性又は平均孔径をどのようにして適切に調整し得るかについては周知であるが、明確化するという理由から、この用語をここで簡単に定義しておく必要がある。平均孔径は、孔の平均直径に関係している。多孔質材料の孔径のガウス分布において、平均口径は、分布曲線の最大値に相当する孔径である。この平均孔径は、例えば窒素吸着によって（Ｗｅｂｅｒ  ｅｔ．ａｌ．２００８．Ｎｅｕｔｒａｌ  ｓｔｙｒｅｎｅ  ｄｉｖｉｎｙｌｂｅｎｚｅｎｅ  ｃｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｆｏｒ  ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｏｘｉｎｓ  ｉｎ  ｌｉｖｅｒ  ｆａｉｌｕｒｅ．Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ９（４）：１３２２−１３２８で説明されているように）、又は水銀圧入によって特定することができる。ポリマーの孔径は、関与するモノマー又はコモノマー、溶剤又は修飾物質の濃度変更によって調整される。ポリマーの孔が小さくなるほど、収着、特に吸着に使用可能なポリマーの内部表面積は大きくなる。孔が大きいほど、大きな分子が孔に近接しやすくなる。本発明に使用できるような特定の孔径をもつ疎水性合成ポリマーの製造方法は、上述したウェーバらの出版物の中で説明されている。
【００４０】
担体が少なくとも１５ｎｍの平均孔径を有している場合、収着剤によるエンドトキシン収着は特に良好であることが示された。好ましいのは、担体が少なくとも３０ｎｍの平均孔径を有していることである。しかし、体外血液浄化の臨床応用には、非被覆担体の平均孔径が１２０ｎｍ以下であることが有利である。１２０ｎｍより大きいと、収着剤の内部表面積が小さくなりすぎるため、結果としてエンドトキシン収着容量（エンドトキシン吸着容量）が減少するおそれがある。従って、担体は１５〜１２０ｎｍの中から選択される平均孔径を有しているのが好ましい。
【００４１】
有利な変更例では、非被覆担体が約３０〜４００ｎｍの平均孔径を有しており、この場合、特に速い速度と非常に高い効率で生体液からエンドトキシンが取り除かれる。従って、多量のエンドトキシンを結合するために、僅かな量の収着剤しか必要としない。
【００４２】
例えば、体外血漿循環回路の中で懸濁液として用いられる場合、本発明に基づく収着剤の濃度は１％（容量％）とすることができる。微粒子型収着剤の懸濁液を含んでいる体外血漿循環回路は、マイクロスフェアベースの解毒システム（ＭＤＳ）の中心的構成要素である。ＭＤＳは、ＥＰ０７７６２２３Ｂ及びＵＳ５８５５７８２から知られている。
【００４３】
さらに、収着プロセスにおける本発明に基づく収着剤の形状も重要である。有利なバリエーションでは、本発明に基づく収着剤が微粒子の形状になっている。粒度は吸着の動態に影響を与える。さらに、粒度が小さい場合、表面積／体積比が大きくなる。有利な下位変更例では、微粒子が２０μｍまたはそれより小さい粒度を有している。
【００４４】
すでに言及したように、微粒子は特にＭＤＳで使用される。微粒子は、懸濁液としてメンブランフィルターの濾液側にある浄化回路（血漿循環）内を循環する。しかしながら、メンブランフィルターに漏れがある場合、微粒子が体外血液循環回路内に到達し、続いて患者の体内に達して、そこで肺塞栓症を引き起こす危険がある。この理由から、もう１つの下位変更例では、微粒子が８μｍ以下、最適には５μｍ以下の粒度を有している場合は有利である。というのも、このような小さな粒度の場合は肺塞栓の危険を回避することができるからである。
【００４５】
本発明に基づく収着剤は、主に体外血液浄化（アフェレーシス）に適用するために設けられている。
【００４６】
本発明の重要な適用形態においては、この収着剤を収着装置用の充填剤として用いることができる。この収着装置は、カラムあるいはカートリッジとして形成することができる。どの血液浄化装置または血液浄化方法（血液灌流、血漿交換／血漿収着）を使用するのかに応じて、この収着装置を、体外血液循環回路の血液側に配置するか、又は血漿循環回路の濾液側に配置することができる。生体液（血液又は血漿）がこの収着装置を通過すると、エンドトキシンは収着剤の固定化ポリミキシン分子に結合する。浄化された血液又は血漿は患者に戻される。
【００４７】
もう１つの使用可能性は血漿循環回路に関し、この血漿循環回路内では収着剤が血漿中の懸濁液として分散した状態にある。このような血漿循環の例は、装置エレメントとして上述のＭＤＳにおいて見られる。血漿循環回路において懸濁液の中にある収着剤は、微粒子型であるのが好ましい。
【００４８】
本発明に基づくエンドトキシン収着剤は、第１に体外血液浄化（アフェレーシス）で使用するために設けられているが、クロマトグラフィでの使用も同様に考えられる。この場合、この収着剤は、エンドトキシンで汚染された血液又は血漿を浄化するためのクロマトグラフィカラム用の充填剤として使用することができる。生体液又は水からエンドトキシンを除去するという、その他の用途も考えられる。
【００４９】
本発明に基づく収着剤、又は本発明に基づく収着剤を含む収着装置、又は本発明に基づく収着剤の懸濁液を含む血漿循環回路は、特に敗血症の治療に適している。
【００５０】
さらに、本発明は、生体液からエンドトキシンを除去する方法に関し、この方法では、エンドトキシンで汚染された生体液が、本発明に基づく収着剤と接触する。上述のように、生体液はこの収着剤を含む収着装置を通過することができる。しかし、この収着剤は、生体液の中に懸濁させることもできる。後者の例が、すでに説明したＭＤＳである。生体液は、血液又は血漿とすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】ヘパリン血漿中における、様々に被覆したＨＰＲ１０担体のＰＭＢ脱離
【図２】へパリン血漿中におけるエンドトキシン吸着
【図３】ヘパリン血漿中における、様々な吸収体によるヘパリンの吸着
【図４】クエン酸血漿中における、様々な吸収体によるプロテインＣの吸着
【発明を実施するための形態】
【００５２】
以下に、本発明を非制限的な実施例に基づいて詳しく説明する。
【実施例１】
【００５３】
１．本発明に基づく収着剤（吸収体）の製造
本発明に基づく収着剤を製造するため、中性の疎水性ポリスチレン−ジビニルベンゼン共重合体を、まずポリミキシンＢ（ＰＭＢ）で被覆し、次にヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）で吸着被覆させた。
【００５４】
１．１中性の疎水性表面を備える水不溶性の多孔質担体の準備
様々な粒度のポリスチレン−ジビニルベンゼン共重合体（以下、短縮して「ポリマー」又は「担体」又は「非被覆吸収体」と呼ぶ）をダウ・ケミカル社から購入し、これは３０〜４０ｎｍの平均孔径を有している。これらのポリスチレン‐ジビニルベンゼン共重合体は表１に掲載されている。
【００５５】
ポリスチレン‐ジビニルベンゼン共重合体
【００５６】
【表１】
0005858299.tif 000002
【００５７】
担体＃１８２４は、製造者によって懸濁液で納入され、ＮａＣｌで５回洗浄された。
【００５８】
担体ＨＰＲ１０は、製造元の指示に従って全処理される。
【００５９】
１．２ポリミキシンＢ（ＰＭＢ）とヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）とによるポリマーの吸着被覆
表１に記載された担体＃１８２４及びＨＰＲ１０を、ＰＭＢ及びＨＳＡで以下の工程に従って被覆した。
ａ）被覆のため、該当する量の５ｍｇ／ｍｌ濃度のＰＭＢ溶液を作成する。ポリミキシンＢ（ＰＭＢ）は、シグマ社（カタログ番号：８１３３４、ロット：１３４８７４４）から購入した。被覆のため、５０ｍｇＰＭＢを１０ｍｌのＬＡＬ水で溶解して、ポリミキシンＢ溶液（ＰＭＢ溶液）を作成した。
ｂ）前処理された担体を遠心分離し（４０００ｇ、１０分）、上澄みを廃棄し、被覆のために担体沈殿物１ｍｌ当たり５ｍＬのＰＭＢ溶液をピペットで加える。
ｃ）この担体を２０℃で６０分間、ＰＭＢ溶液で培養する。
ｄ）培養後、すでにＰＭＢで被覆された吸収体懸濁液を１２１℃で２０分間、無菌のガラス瓶内でオートクレーブ処理する。
ｅ）次に、ＰＭＢで被覆した吸収体を遠心分離し（４０００ｇ、１０分）、５倍の量の０．９％ＮａＣｌで３回洗浄する。
ｆ）ＰＭＢで被覆した吸収体は、０．９％ＮａＣｌの５０％懸濁液として冷蔵庫内で一時保管するか、又はすぐにＨＳＡで被覆することができる。
ｇ）ＨＳＡによる吸着被覆のために、適量の１０％ヒト血清アルブミン溶液（ＨＳＡ溶液）を作成する（購入元：ヒトアルブミン、２０％、オクタファーマ、ウィーン、オーストリア）。
ｈ）ＰＭＢ被覆及びオートクレーブ処理された吸収体を遠心分離し（４０００ｇ、１０分）、上澄みを廃棄し、被覆のために吸収体沈殿物１ｍｌ当たり２．５ｍＬのＨＳＡ溶液をピペットで加える。
Ｉ）この吸収体懸濁液を、１０℃で少なくとも１２時間、ＨＳＡ溶液で培養する。
ｊ）培養時間後、ＰＭＢとＨＳＡとによって被覆された吸収体を５倍の量の０．９％ＮａＣｌ溶液で１回洗浄する。
ｋ）ＰＭＢとＨＳＡで被覆した吸収体を、０．９％ＮａＣｌの５０％懸濁液として冷蔵庫で保管する。
【００６０】
担体を被覆するために添加されたＰＭＢ量のほぼ全部が吸着されるため、吸収体の湿重量１ｇ当たりのＰＭＢ量は２５ｍｇである。
【００６１】
ＰＭＢ及びＨＳＡで被覆された本発明に基づく吸収体が表２にまとめられている。
本発明に基づくＰＭＢ及びＨＳＡ被覆吸収体
【００６２】
【表２】
0005858299.tif 000003
【実施例２】
【００６３】
２．ポリミキシンＢの脱離及びエンドトキシン吸着‐バッチテスト
２．１  使用吸収体
吸収体ＨＰＲ１０＋ＰＭＢ＋ＨＳＡ表面からのポリミキシンＢの脱離と吸収体ＨＰＲ１０＋ＰＭＢ＋ＨＳＡによるエンドトキシン吸着とがバッチテストで試験された。
【００６４】
ＰＭＢとＨＳＡとで被覆された吸収体ＨＰＲ１０＋ＰＭＢ＋ＨＳＡ（製造は実施例１の１．２を参照）を、ポリミキシンＢ脱離試験において、その他の以下の２つの吸収体と比較した。
・ＨＰＲ１０＋ＰＭＢ：ＰＭＢだけで被覆された担体ＨＰＲ１０製造は、第１．２項の製造プロトコルによる工程ａ）〜ｆ）に基づいて行われた。
・ＨＰＲ１０＋ＨＳＡ＋ＰＭＢ：担体ＨＰＲをまずアルブミンで被覆し、次にポリミキシンＢで被覆した。この吸収体は、同様に本発明に基づく吸収体であり、その製造は以下に記載された工程ａ）〜ｊ）に基づいて行う。
ａ）全処理したＨＰＲ１０担体を、０．９％ＮａＣｌの５０％懸濁液として、１２１℃で、２０分間オートクレーブ処理する。
ｂ）オートクレーブ処理後、この担体を遠心分離してからアルブミン被覆を実施する。
ｃ）被覆のために、適量の１０％ＨＳＡ溶液（購入元：ヒトアルブミン、２０％、オクタファーマ、ウィーン、オーストリア）を作成し、被覆のために担体沈殿物１ｍｌ当たり２．５ｍｌのＨＳＡ溶液をピペットで加える。
ｄ）この担体懸濁液を、１０℃で少なくとも１２時間、ＨＳＡ溶液で培養する。
ｅ）培養後、ＨＳＡ被覆ＨＰＲ１０吸収体を、５倍の量の０．９％ＮａＣｌ溶液で１回洗浄し、遠心分離する（４０００ｇ、１０分）。上澄みを廃棄し、次にＰＭＢ被覆を実施する。
ｆ）ＰＭＢ被覆のため、適量の５ｍｇ／ｍｌ濃度のＰＭＢ溶液を作成する。ポリミキシンＢ（ＰＭＢ）は、シグマ社から購入した（カタログ番号：８１３３４、ロット：１３４８７４４）。
ｇ）被覆のために吸収体沈殿物１ｍｌ当たり５ｍｌのＰＭＢ溶液をピペットで加える。
ｈ）この吸収体懸濁液を２０℃で６０分間、ＰＭＢ溶液で培養する。
ｉ）培養後、吸収体懸濁液を遠心分離し（４０００ｇ、１０分）、５倍の量の０．９％ＮａＣｌで３回洗浄する。
ｊ）ＨＳＡとＰＭＢで被覆したＨＰＲ１０吸収体（ＨＰＲ１０＋ＨＳＡ＋ＰＭＢ）は、０．９％ＮａＣｌの５０％懸濁液として冷蔵庫で保管される。
【００６５】
エンドトキシン吸着試験では、ＨＰＲ１０＋ＰＭＢ＋ＨＳＡとＨＰＲ１０＋ＰＭＢとを比較した。コントロールとして、吸収体を含まない試験管（Ｋｏ  ｏ  Ａｄｓ）が使用された。
【００６６】
２．２  バッチテスト
１％（ｖ／ｖ）吸収体（ＨＰＲ１０＋ＰＭＢ、ＨＰＲ１０＋ＨＳＡ＋ＰＭＢ及びＨＰＲ１０＋ＰＭＢ＋ＨＳＡ）を、エンドトキシンスパイク（５ｎｇ／ｍｌ）を含むヘパリン血漿内で培養した。
【００６７】
エンドトキシンスパイクには、ＬＰＳ緑膿菌（シグマ社、Ｌ７０１８、Ｃｈａｒｇｅ  １２８Ｋ４１１５）を使用した。分割され（それぞれ１００μｌ中に１０−３ｇ／ｍｌ（１ｍｇ／ｍｌ））、ミクロ遠心分離チューブ内において−７０℃で保存されていたエンドトキシンを解凍し、９００μｌのＬＡＬ水と混合した。次に、このエンドトキシンが必要な濃度５０ｎｇ／ｍｌになるまで、ＮａＣｌ中でさらに希釈した。試験準備では、最終濃度が５ｎｇ／ｍｌになるまでエンドトキシン溶液をさらに希釈した。
【００６８】
３、６、２４時間後に検体を取り出し、ヘパリン血漿内に脱離したＰＭＢ量を、ＰＭＢアッセイ［Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ，２００８，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｖｅｒｓｅｄ−ｐｈａｓｅ  ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｐｏｌｙｍｙｘｉｎ  Ｂ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｌａｓｍａ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ６２：１００９−１０１４］によって分析した。このバッチテストは、２回繰り返して実施された。２４時間後の平均のＰＭＢ脱離は、ＨＰＲ１０−ＰＭＢが２６．６ｍｇ／ｌ及びＨＰＲ１０−ＨＳＡ−ＰＭＢが１３．４ｍｇ／ｌ、ＨＰＲ１０−ＰＭＢ−ＨＳＡが１４．４ｍｇ／ｌであった（図１を参照）。吸収体表面からのＰＭＢの脱離は、本発明に基づきＰＭＢとＨＳＡとで被覆した収着剤によって、ポリミキシンだけで被覆した収着剤（ＨＰＲ１０＋ＰＭＢ）と比較して、４５％減少させることができる。
【００６９】
エンドトキシン吸着能力は、アルブミンによる追加被覆による影響を受けない（図２を参照）。
【００７０】
まとめると、本発明に基づく収着剤は、ポリミキシンだけで被覆した収着剤と同様の、高いエンドトキシン収着効率及び速度を有している。しかし、追加のアルブミン被覆は、毒性のあるポリミキシンＢの担体からの脱離を顕著に低下させ、それによって患者の安全性を向上させる。
【実施例３】
【００７１】
３．ヘパリンとプロテインＣの吸着
３．１  試験の背景
多くの吸収体は、除去すべき物質（本件ではエンドトキシン）だけでなく、血液凝固系の生理学的に重要なタンパク質又は因子（抗凝結剤並びに凝結促進剤）もまた、非常に高い度合で取り除かれるという欠点を有している。ここでは、特に、プロテインＣ及びプロテインＳなどの患者固有の抗凝固剤を挙げることができる。特に重要なのは、抗凝固因子としてのプロテインＣである。体内のプロテインＣ濃度の減少は、静脈血栓症や肺塞栓症などの重篤な合併症を引き起こす。点滴によって追加的に体外血液循環に供給される抗凝結剤のヘパリンも、多くの吸収体によって除去される。その結果、体内凝固系の不均衡が生じるか、又は体外又は体内血液循環回路内の抗凝固が好ましくない状態となり、このことは患者にとって大きな危険を意味する。
【００７２】
従って、この実施例３での試験は、ヘパリン及びプロテインＣの好ましくない吸着に関して、本発明に基づく新しい種類の収着剤を検査するために行われる。様々な被覆状態（被覆なし／ポリミキシンＢでのみ被覆／ポリミキシンＢ及びヒト血清アルブミンで被覆）において、異なる粒度（＃１８２４／５μｍとＨＰＲ１０／１０μｍ、実施例１を参照）を持つ２つの異なる担体を比較した。ヘパリン吸着は、ヘパリン血漿内（ヘパリン加血漿）で検査した。プロテインＣの吸着は、クエン酸血漿内（クエン酸加血漿）で検査した。
【００７３】
３．２  使用吸収体
以下の、互いに異なる被覆を備える吸収体を比較した。
- 非被覆担体（＃１８２４及びＨＰＲ１０）
- ポリミキシンＢでのみ被覆した担体（＃１８２４＋ＰＭＢ及びＨＰＲ１０＋ＰＭＢ）
- 本発明に基づき、ポリミキシンＢ及びアルブミンで被覆した担体（＃１８２４＋ＰＭＢ＋ＨＳＡ及びＨＰＲ１０＋ＰＭＢ＋ＨＳＡ）
【００７４】
本発明に基づく吸収体＃１８２４＋ＰＭＢ＋ＨＳＡ及びＨＰＲ１０＋ＰＭＢ＋ＨＳＡの５０％吸収体懸濁液は、上述の製造プロトコルの工程１．２に従って作成された。
【００７５】
ポリミキシンＢでのみ被覆した吸収体の５０％吸収体懸濁液の作成は、実施例１の製造プロトコルに基づき工程ａ）〜ｆ）に従って行った。
【００７６】
この実施例３で使用した吸収体が表３にまとめられている。
【００７７】
【表３】
0005858299.tif 000004
【００７８】
コントロールとして、吸収体を含まない血漿を入れた試験管が使用された（Ｋｏ  ｏ  Ａｄｓ）。
【００７９】
３．３  血漿
ａ）ヘパリン血漿（規定値：血漿１ｍｌ当たりヘパリン１０ＩＵ）
ｂ）クエン酸血漿（規定値：血漿１ｌ当たりクエン酸１１ｍｍｏｌ）
【００８０】
３．４  バッチテスト
２つのバッチテストＡ及びＢを実施し、試験準備として、ヘパリン血漿（バッチテストＡ）及びクエン酸血漿（バッチテストＢ）を使って、様々な吸収体の５０％懸濁液を試験管内で培養し、その場合、それぞれ１４７０ｍｌの血漿に３０ｍｌの吸収体懸濁液が混合された。
【００８１】
ヘパリン（ヘパリン血漿中）及びプロテインＣ（クエン酸血漿中）の吸着を０分、１５分、６０分の時間経過において分析した。
【００８２】
１５分及び６０分後の検体採取：
１５分後に、５００μｌの検体を採取し、４０００ｇで５分間遠心分離し、 １×１００μｌ（プロテインＣ）、１×２５０μｌ（ヘパリン）、１×残量（約１５０μｌ）に分割する。これらのアリコートを、分析まで−２０℃で保管する。
【００８３】
６０分後、５００μｌの検体を採取し、４０００ｇで５分間遠心分離し、 １×１００μｌ（プロテインＣ）、１×２５０μｌ（ヘパリン）、１×残量（約１５０μｌ）に分割する。これらのアリコートを、分析まで−２０℃で保管する。
【００８４】
３．５  バッチテストの結果
バッチテストの結果が図３及び４に示されている。
【００８５】
図３は、ヘパリン血漿中における、様々な吸収体によるヘパリンの吸着を示している。驚くべきことに、ヘパリンの好ましくない吸着は、本発明に基づくポリミキシンＢとＨＳＡとで被覆した収着剤（吸収体）によって（特に粒度の小さい吸収体（粒度５μｍ）の場合に）減少することが示された。
【００８６】
図４は、クエン酸血漿中における、様々な吸収体によるプロテインＣの吸着を示している。プロテインＣは、本発明に基づく吸収体によって全く吸着されず、その他の吸収体と比較して（被覆なし又はポリミキシンＢでのみ被覆）、プロテインＣ吸着はほぼ同じであるか（ＨＰＲ１０＋ＰＭＢ＋ＨＳＡ、粒度１０μｍ）、又は明らかに減少する（＃１８２４＋ＰＭＢ＋ＨＳＡ、粒度５μｍ）ことが示された。
【図１】
0005858299.tif 000005
【図２】
0005858299.tif 000006
【図３】
0005858299.tif 000007
【図４】
0005858299.tif 000008