(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物：
【化１】
0005852269.tif 000040
（式中、
Ｒ１は、−ＣＨ３および−ＣＦ３から選択され、
Ｒ２は、Ｈおよび−ＣＨ３から選択され、
Ｒ３は、Ｈおよび−ＣＨ３から選択され、
Ｒ４は、Ｈ、−ＯＣ１−３アルキルおよびハロゲンから選択され、
Ｒ５は、Ｈ、−ＣＦ３、−ＯＣＨ３およびハロゲンから選択され、
Ｒ６は、Ｈおよびハロゲンから選択され、
但し、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６のうちの少なくとも１つはＨである）
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｒ１が−ＣＨ３である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が−ＣＦ３である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２がＨである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３がＨである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ４がＨおよびハロゲンから選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ５がＨ、−ＣＦ３、ＦおよびＣｌから選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ５がＨである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ６がＦである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
以下の式の化合物：
【化２】
0005852269.tif 000041
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１１】
前記薬学的に許容可能な塩が、塩化物塩およびマレイン酸塩から選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
前記薬学的に許容可能な塩が、マレイン酸塩である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）モルホリン−４−イル］メチル｝フェニル）エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩である、化合物。
【請求項１４】
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）モルホリン−４−イル］メチル｝フェニル）エチル］メタンスルホンアミドマレイン酸である、化合物。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤のうちの少なくとも１つを含む、医薬組成物。
【請求項１６】
高トリグリセリド血症を治療するための医薬の製造における請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（原文に該当記載なし）
【背景技術】
【０００２】
過剰な食事脂肪の摂取は食事誘導性肥満の主な原因であり、人々の健康に対して深刻な有害な作用を有し得る。ヒトについての食事脂肪の９０％より多くはトリアシルグリセロール（またはトリグリセリド）であり、これは小腸によりほぼ完全に吸収される。酵素アシルＣｏＡ：モノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ−２（ａｃｙｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ−２）（ＭＯＧＡＴ−２）は小腸内の食事脂肪の吸収において重要な役割を果たすと考えられている。ＭＯＧＡＴ−２欠損マウスは、高脂肪食を与えられた場合、肥満の発生、グルコース不耐性、高コレステロール血症および脂肪肝の発生を防ぐことが実証されている。さらに、ＭＯＧＡＴ−２欠損マウスは食餌性オリーブオイルチャレンジ後に低い血漿トリアシルグリセロールレベルを表すことも示されている（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Ｙｅｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２００９、１５（４）、４４２−４４６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
高トリグリセリド血症を治療するためのさらなる薬物についての必要性が存在している。また、ＭＯＧＡＴ−２受容体の新規阻害剤についての必要性も存在している。本発明は、高トリグリセリド血症を治療するのに好適であり得る、代替の化合物および治療方法を提供することによってこれらの必要性の１つ以上を扱う。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、式Ｉの化合物
【化１】
0005852269.tif 000002
（式中、Ｒ１は、−ＣＨ３および−ＣＦ３から選択され、Ｒ２は、Ｈおよび−ＣＨ３から選択され、Ｒ３は、Ｈおよび−ＣＨ３から選択され、Ｒ４は、Ｈ、−ＯＣ１−３アルキルおよびハロゲンから選択され、Ｒ５は、Ｈ、−ＣＦ３、−ＯＣＨ３およびハロゲンから選択され、Ｒ６は、Ｈおよびハロゲンから選択され、但し、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６の少なくとも１つはＨである）
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【０００６】
本発明の化合物は１つ以上のキラル中心を有し得る。以下の式ＩＩの化合物において、キラル中心の１つはアスタリスク（＊）で識別される。Ｒ１が−ＣＨ３である場合、好ましい化合物は、このキラル中心において（Ｒ）立体配置を有する。Ｒ１が−ＣＦ３である場合、好ましい化合物は（Ｓ）立体配置を有する。
【化２】
0005852269.tif 000003
【０００７】
一実施形態において、Ｒ１は−ＣＨ３である。別の実施形態において、Ｒ１は−ＣＦ３である。
【０００８】
好ましくは、Ｒ２はＨである。
【０００９】
好ましくは、Ｒ３はＨである。
【００１０】
好ましくは、Ｒ４は、Ｈ、−ＯＣＨ（ＣＨ３）２およびハロゲンから選択される。より好ましくは、Ｒ４は、Ｈおよびハロゲンから選択される。さらにより好ましくは、Ｒ４は、ＨおよびＣｌから選択される。
【００１１】
好ましくは、Ｒ５は、Ｈ、−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、ＦおよびＣｌから選択される。より好ましくは、Ｒ５は、Ｈ、−ＣＦ３、ＦおよびＣｌから選択される。さらにより好ましくは、Ｒ５はＨである。
【００１２】
好ましくは、Ｒ６は、ＨおよびＦから選択される。好ましくは、Ｒ６はＦである。
【００１３】
本発明は、以下の式ＩＩＩの化合物
【化３】
0005852269.tif 000004
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１４】
本発明は、式ＩまたはＩＩのいずれかに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２はＨおよび−ＣＨ３から選択され、Ｒ３はＨおよび−ＣＨ３から選択され、Ｒ４はＨ、−ＯＣＨ（ＣＨ３）２およびハロゲンから選択され、Ｒ５は、Ｈ、−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、ＣｌおよびＦから選択され、Ｒ６はＨまたはＦから選択される）またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１５】
本発明は、式ＩまたはＩＩのいずれかに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２はＨおよび−ＣＨ３から選択され、Ｒ３はＨおよび−ＣＨ３から選択され、Ｒ４はＨおよびハロゲンから選択され、Ｒ５は、Ｈ、−ＣＦ３、ＦおよびＣｌから選択され、Ｒ６はＨおよびＦから選択される）またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１６】
本発明は、式ＩまたはＩＩのいずれかに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２はＨおよび−ＣＨ３から選択され、Ｒ３はＨおよび−ＣＨ３から選択され、Ｒ４はＨおよびハロゲンから選択され、Ｒ５は、Ｈ、ＦおよびＣｌから選択され、Ｒ６はＨまたはＦから選択される）またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１７】
本発明は、式ＩまたはＩＩのいずれかに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はＨであり、Ｒ４はＨおよびＣｌから選択され、Ｒ５は、Ｈ、ＣｌおよびＦから選択され、Ｒ６はＨまたはＦから選択される）またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１８】
本発明は、式ＩまたはＩＩのいずれかに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はＨであり、Ｒ４はＨおよびＣｌから選択され、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＨまたはＦから選択される）またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１９】
本発明は、式ＩまたはＩＩのいずれかに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５の各々はＨであり、Ｒ６はＦである）を提供する。
【００２０】
本発明は、式ＩまたはＩＩのいずれかに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２はＨおよび−ＣＨ３から選択され、Ｒ３はＨおよび−ＣＨ３から選択され、Ｒ４はＨ、−ＯＣＨ（ＣＨ３）２およびハロゲンから選択され、Ｒ５は、Ｈ、−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、ＣｌおよびＦから選択され、Ｒ６はＨまたはＦから選択される）またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２１】
本発明は、式ＩまたはＩＩのいずれかに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２はＨおよび−ＣＨ３から選択され、Ｒ３はＨおよび−ＣＨ３から選択され、Ｒ４はＨおよびハロゲンから選択され、Ｒ５は、Ｈ、−ＣＦ３、ＦおよびＣｌから選択され、Ｒ６はＨおよびＦから選択される）またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２２】
本発明は、式ＩまたはＩＩのいずれかに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２はＨおよび−ＣＨ３から選択され、Ｒ３はＨおよび−ＣＨ３から選択され、Ｒ４はＨおよびハロゲンから選択され、Ｒ５はＨ、ＦおよびＣｌから選択され、Ｒ６はＨまたはＦから選択される）またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２３】
本発明は、式ＩまたはＩＩのいずれかに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はＨであり、Ｒ４はＨおよびＣｌから選択され、Ｒ５は、Ｈ、Ｃｌ、およびＦから選択され、Ｒ６はＨまたはＦから選択される）またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２４】
本発明は、式ＩまたはＩＩのいずれかに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＦ３であり、
Ｒ２はＨであり、Ｒ３はＨであり、Ｒ４はＨおよびＣｌから選択され、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＨまたはＦから選択される）またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００２５】
本発明は、式ＩまたはＩＩのいずれかに係る化合物（式中、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５の各々はＨであり、Ｒ６はＦである）を提供する。
【００２６】
好ましくは、薬学的に許容可能な塩は、塩化物塩およびマレイン酸塩から選択される。より好ましくは、薬学的に許容可能な塩はマレイン酸塩である。
【００２７】
好ましい化合物は、Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）モルホリン−４−イル］メチル｝フェニル）エチル］メタンスルホンアミド；
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）モルホリン−４−イル］メチル｝フェニル）エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩；および
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｓ−２−（４−フルオロフェニル）モルホリン−４−イル］メチル｝フェニル）エチル］メタンスルホンアミドマレイン酸である。
【００２８】
本発明は、上記の式Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩの化合物またはその薬学的に許容可能な塩および薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤の少なくとも１つを含む医薬組成物を提供する。
【００２９】
本発明はまた、高トリグリセリド血症のための治療を必要とする患者を治療する方法であって、有効量の上記の式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩに係る化合物を患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００３０】
本発明は、高トリグリセリド血症の治療に使用するための上記の式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩに係る化合物を提供する。
【００３１】
本発明は、高トリグリセリド血症を治療するための医薬の製造における上記の式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩに係る化合物の使用を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
「薬学的に許容可能な塩」という用語は、臨床および／または獣医用途に許容可能であるとみなされる本発明の化合物の塩を指す。薬学的に許容可能な塩およびそれらを調製するための一般的な方法は当該技術分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ、（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００２）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｖｏｌ．６６、Ｎｏ．１、１９７７年１月を参照のこと。
【００３３】
本発明の医薬製剤は、公知または容易に利用可能な添加剤を使用して当該技術分野において公知の手順により調製され得る。本明細書で使用される「薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤」という用語は、製剤の他の成分と適合性があり、患者に有害でない１種以上の担体、希釈剤および賦形剤を指す。医薬組成物およびそれらを調製するためのプロセスは当該技術分野において公知であり、例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、「Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」  （Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら、ｅｄｓ．第１９版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．）に見出され得る。このような製剤に好適である、薬学的に許容可能な担体、賦形剤および希釈剤の非限定的な例としては、以下：デンプン、糖、マンニトール、およびシリカ誘導体；カルボキシメチルセルロースおよび他のセルロース誘導体、アルギン酸塩、ゼラチンおよびポリビニル−ピロリドンなどの結合剤；グリセロールなどの保湿剤；炭酸カルシウムおよび炭酸水素ナトリウムなどの崩壊剤が挙げられる。
【００３４】
本明細書に使用される場合、患者は、治療を必要とする動物を指し、好ましくは哺乳動物に限らず、好ましくはヒトであり；またはイヌもしくはネコなどのペット；または家禽である。
【００３５】
反対に示されない限り、本明細書に示される化合物は、ＡＣＤＬＡＢＳまたはＳｙｍｙｘ  Ｄｒａｗ３．２のいずれかを使用して命名され、番号付けされる。
【００３６】
一般化学
本明細書に使用される場合、以下の用語は示した意味を有する：「ＡＣＮ」はアセトニトリルを指し；「ＤＣＭ」はジクロロメタンを指し；「ＤＥＡ」はジエチルアミンを指し；「ＤＭＥＡ」はジメチルエチルアミンを指し；「ＤＭＦ」はジメチルホルムアミドを指し；「ｅｅ」は鏡像異性体過剰を指し；「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し；「ＥｔＯＨ」はエタノールを指し；「ｈ」は時間を指し；「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィーを指し；「ＩＰＡ」はイソプロピルアルコールを指し；「異性体１」は第１の溶出異性体を指し；「異性体２」は第２の溶出異性体を指し；「ＬＣ／ＭＳ」は液体クロマトグラフィー、それに続く分光法を指し；「ＭｅＯＨ」はメタノールを指し；「ｍｉｎ」は分を指し；「ＭＳ」は質量分析を指し；「ＮＭＲ」は核磁気共鳴を指し；「ＳＦＣ」は超臨界流体クロマトグラフィーを指し；「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指す。
【００３７】
【化４】
0005852269.tif 000005
スキーム１は式Ｉの化合物の一般的合成を示す。
【００３８】
市販されているかまたは公知の文献の方法により合成される、置換モルホリン化合物１は、還元的アミノ化条件下でアルデヒドまたはケトン２と反応して式Ｉの化合物を生じる（（Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ：  ａ  ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｇｒｏｕｐ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ、第２版、８３５−８４６ページ、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、（１９９９）を参照のこと）。好ましくは、モルホリン化合物１は、トリアセトキシボロヒドリドなどの還元剤およびジクロロメタン中の酢酸などの酸の存在で化合物２と反応して式Ｉの化合物を生じ、それは、適切な酸、例えばＨＣｌにより好適な塩に変換されて塩酸塩を形成できる。
【実施例】
【００３９】
調製例１
（Ｎ−Ｚ）−Ｎ−［（４−ブロモフェニル）メチレン］−（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィンアミド
【化５】
0005852269.tif 000006
（Ｒ）−２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（４０．５ｇ、０．３３ｍｏｌ）をトルエン（２８３ｍＬ）中の４−ブロモベンズアルデヒド（６５．５７ｇ、０．３５ｍｏｌ）の溶液に少しずつ加える。周囲温度にて１５分間混合物を撹拌し、次いで水酸化ナトリウム（１．３４ｇ、０．３３ｍｏｌ）を加える。周囲温度にて１２時間懸濁液を撹拌する。硫酸ナトリウム（１６ｇ）およびセライト（登録商標）（１６ｇ）を加え、１５分間懸濁液を撹拌する。濾過し、減圧下で濾液を濃縮する。ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（１００％〜７０％ヘキサン）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより残渣を精製して、白色の固体（８５．５ｇ、８８％収率）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８８（Ｍ＋１）。
【００４０】
調製例２
Ｎ−［（１Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−２，２，２−トリフルオロ−エチル］−（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィンアミド
【化６】
0005852269.tif 000007
０℃にて未希釈の（トリフルオロメチル）トリメチルシラン（１０９ｍＬ、０．７４ｍｏｌ）を、０℃にてＤＭＦ（１．２Ｌ）中のテトラブチルアンモニウムアセテート（８８ｇ、０．２９ｍｏｌ）および（Ｎ−Ｚ）−Ｎ−［（４−ブロモフェニル）メチレン］−（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィンアミド（８５ｇ、０．２９ｍｏｌ）の撹拌溶液に加える。混合物を０〜５℃にて９０分間撹拌する。飽和塩化アンモニウム水溶液（１．２Ｌ）を加え、ＥｔＯＡｃ（４×４００ｍＬ）で抽出する。抽出物を合わせ、水、次いでブライン（２×１Ｌ）で抽出物を連続して洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濾液を濃縮する。残渣を１０分間ヘキサン（２００ｍＬ）で粉砕し、濾過し、減圧下で濾液を乾燥させて、黄色の固体（８１ｇ、７６％収率、＞９８ｄｅ）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５８（Ｍ＋１）。
【００４１】
調製例３
（１Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−２，２，２−トリフルオロエタンアミン
【化７】
0005852269.tif 000008
ＨＣｌ（ジオキサン中に４Ｍ、２２６ｍＬ、０．９ｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（６７０ｍＬ）中のＮ−［（１Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−２，２，２−トリフルオロ−エチル］−（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィンアミド（８１ｇ、０．２３ｍｏｌ）の懸濁液に加える。混合物を周囲温度にて１時間撹拌する。減圧下で溶媒を除去し、残渣をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２００ｍＬ）で１０分間粉砕して、茶色の固体としてＨＣｌ塩を得る。水（１．２）に塩を溶解し、２ＮのＮａＯＨ溶液を十分に加えて、水溶液のｐＨをｐＨ１０に上昇させる。混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３×５００ｍＬ）で抽出する。有機相を水、次いでブライン（各々５００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濾液を濃縮して、黄色の固体（４６ｇ、８０％収率、９８％ｅｅ）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５８（Ｍ＋１）。
【００４２】
調製例４
Ｎ−［（１Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−２，２，２−トリフルオロ−エチル］メタンスルホンアミド
【化８】
0005852269.tif 000009
メタンスルホニルクロリド（１６．４２ｍＬ、０．２１ｍｏｌ）を、０℃にてＤＣＭ（２５０ｍＬ）中の（１Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−２，２，２−トリフルオロエタンアミン（４９ｇ、０．１９ｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（１．１８ｇ、９．０ｍｍｏｌ）、２，６−ルチジン（６７ｍＬ、０．５７ｍｏｌ）の混合物に滴下して加える。混合物を周囲温度まで加温し、その温度にて２０時間撹拌する。反応混合物をＤＣＭ（３００ｍＬ）で希釈し、それを２ＭのＨＣｌ（２×２００ｍＬ）、水（２５０ｍＬ）、次いでブライン（２５０ｍＬ）で連続して洗浄する。有機相を回収し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濾液を濃縮する。残渣をヘキサン（２００ｍＬ）で１０分間粉砕し、濾過し、減圧下で固体を乾燥させて、薄茶色の固体（６０ｇ、９３％収率、９８％ｅｅ）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３２（Ｍ＋１）。
【００４３】
調製例５
Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−（４−ホルミルフェニル）エチル］メタンスルホンアミド
【化９】
0005852269.tif 000010
トルエン（１．５ｍＬ）中のＮ−［（１Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−２，２，２−トリフルオロ−エチル］メタンスルホンアミド（３０ｇ、９０ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．８１ｇ、３．６ｍｍｏｌ）、ブチルジ−１−アダマンチルホスフィン（３．８９ｇ、１０．８４ｍｍｏｌ）およびテトラメチルエチレンジアミン（１０．５０ｇ、９０ｍｍｏｌ）を、２ＬのＰＡＲＲリアクタに加える。リアクタを密閉し、合成ガス（７５ｐｓｉにて１：１のＣＯ／Ｈ２）を用いてそれに圧力をかける。９５℃にて温度を維持しながら、反応混合物を１６時間撹拌する。混合物を冷却し、通気し、リアクタを開口する。混合物をセライト（登録商標）で濾過し、減圧下で濾液を濃縮する。ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（８：２〜１：１）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより粗残渣を精製して、標題化合物（２２．８ｇ、９０％、８０％ｅｅ）を得る。キラルカラム：Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＳ−Ｈ（２．１×２５ｃｍ、５μＭ）ＣＯ２／ＥｔＯＨ（９：１）を通してそれを溶出することにより化合物のキラル純度を高めて、標題化合物（１９ｇ、７５％収率、９８％ｅｅ）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８２（Ｍ＋１）。
【００４４】
調製例６
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）エチル］メタンスルホンアミド
【化１０】
0005852269.tif 000011
メタンスルホニルクロリド（１３．４４ｍＬ、０．１７ｍｍｏｌ）を、０℃にてＤＣＭ（２５０ｍＬ）中の（１Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）エタンアミン（２５ｇ、０．１２ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（５１ｍＬ、０．３６ｍｏｌ）の混合物に加える。周囲温度に加温し、２．５時間撹拌する。反応混合物を２ＭのＨＣｌ水溶液（１００ｍｌ）で洗浄する。次いで有機相を水、次いでブライン（２×１００ｍＬ）で連続して洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濾液を濃縮して、残渣を得る。残渣をヘキサン（１５０ｍＬ）で粉砕し、濾過し、減圧下で乾燥させて、黄色の固体（３３．２４ｇ、９６％、ｅｅ＞９８％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７８（Ｍ＋１）。
【００４５】
調製例７
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−ホルミルフェニル）エチル］メタンスルホンアミド
【化１１】
0005852269.tif 000012
３００ｍＬのＰＡＲＲリアクタ中にＮ−［（１Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）エチル］−メタンスルホンアミド（１０ｇ、３５ｍｍｏｌ）、（１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（７３３ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（３．８１ｇ、３５ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（５０ｍＬ）を合わせる。トリエチルシラン（１１．６ｍＬ、０．７２ｍｍｏｌ）を加え、一酸化炭素で３回リアクタをパージする。リアクタに一酸化炭素（５０ｐｓｉ）を入れ、９０℃にて１５時間混合物を撹拌する。リアクタを周囲温度に冷却し、開口し、セライト（登録商標）パッドで混合物を濾過し、パッドをＤＣＭ（１５０ｍＬ）で洗浄する。濾液を水、次いでブライン（２×８０ｍＬ）で連続して洗浄する。有機相を減圧下で濃縮して、橙色の油として残渣を得る。ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（０〜３０％のＥｔＯＡｃ）で溶出するシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより橙色の油を精製して、標題化合物（５．６ｇ、７０％、ｅｅ＞９８％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２２８（Ｍ＋１）。
【００４６】
調製例８
（１Ｓ）−２−ブロモ−１−（４−フルオロフェニル）エタノール
【化１２】
0005852269.tif 000013
窒素雰囲気下で、３０リットルの丸底フラスコに、２２℃にて（Ｓ）−１−メチル−３，３−ジフェニル−３ａ，４，５，６−テトラヒドロピロロ［１，２−ｃ］［１，３，２］オキサザボロール（トルエン中に１Ｍ；４４ｍＬ；４４ｍｍｏｌ）の溶液を入れる。メチルｔ−ブチルエーテル（４．５Ｌ）中のボラン−Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン錯体（１２３０ｇ、７５４０ｍｍｏｌ）の溶液を加える。４０℃にて混合物を加熱し、３０分間維持する。メチルｔ−ブチルエーテル（４．５Ｌ）中のブロモ−４−フルオロアセトフェノン（１６４０ｇ、７５３０ｍｍｏｌ）の溶液を３０分にわたって滴下して加える。混合物を４０℃にて２時間撹拌する。氷水浴を使用して１０℃に冷却し、次いでＭｅＯＨ（５９０ｍＬ）をゆっくり加えて反応をクエンチする。混合物を１０〜２０℃に維持しながら３０分間撹拌する。塩酸（３．０Ｍ、７．５Ｌ）を１０℃のまま混合物に加える。１時間撹拌し、濾過する。濾液を収集する。濾液中の層を分離し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１×３Ｌ）で水相を抽出し、有機相を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濾液から揮発性物質を除去して、淡黄色の油（１６５０ｇ、９９％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２０１（Ｍ−ＯＨ）；ｅｅ値；９７．５％（１．０ｍＬ／分の流速で２５℃にて９９：１のヘキサン：ＥｔＯＨを使用したＡＤ−Ｈ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ×５μｍカラム）。
【００４７】
調製例９
（Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）オキシラン
【化１３】
0005852269.tif 000014
６．８Ｌのメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル中に（１Ｓ）−２−ブロモ−１−（４−フルオロフェニル）エタノール（１６５０ｇ、７．５３ｍｏｌ）を溶解する。混合物が２０℃の状態でＮａＯＨ（Ｈ２Ｏ中に２Ｍ、４．９３Ｌ）を加える。混合物を２０〜２２℃に維持しながらそれを３時間撹拌する。層を分離し、水層をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１×２Ｌ）で抽出する。有機相を合わせ、その有機相をブライン（１×２Ｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を濃縮して、残渣を得る。５０：１の石油エーテル：ＥｔＯＡｃｅの混合物を使用したシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、生成物を溶出する。生成物画分を濃縮して、淡黄色の油（８８０ｇ、８４％）として標題化合物を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：７．２７−７．２１（ｍ，２Ｈ），７．０６−７．０１（ｍ，２Ｈ），３．８６（ｄｄ，Ｊ＝２．６，４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．１６（ｄｄ，Ｊ＝４．１，５．５Ｈｚ，１Ｈ），２．７９（ｄｄ，Ｊ＝２．６，５．４Ｈｚ，１Ｈ）；ｅｅ値：９７．５％（１．０ｍＬ／分の流速で２５℃にて９９：５のヘキサン：エチルアルコールを使用したＡＤ−Ｈ  ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ×５μｍのカラム）。
【００４８】
調製例１０
（１Ｓ）−２−（ベンジルアミノ）−１−（４−フルオロフェニル）エタノール
【化１４】
0005852269.tif 000015
１０Ｌの丸底フラスコに、窒素雰囲気下で（Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）オキシラン（８８０ｇ、６．３８ｍｏｌ）を入れる。混合物を２０℃に維持しながら、ベンジルアミン（２０４７ｇ、１９．１３ｍｏｌ）を加える。混合物を８０℃に加熱し、それをその温度にて５時間撹拌する。２２℃に冷却し、１６時間撹拌する。Ｈ２Ｏ（３Ｌ）を加えて反応をクエンチする。濾過し、濾過ケーキを水（２×１Ｌ）で洗浄する。得られた固体をヘプタン（２Ｌ）でスラリーにし、濾過して、標題化合物（１２１６ｇ、７７％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４６（Ｍ＋１）；ｅｅ値：９９．０％（１．０ｍＬ／分の流速で２５℃にて９０：１０のヘキサン（０．０２％のジエチルアミンを含む）：ＥｔＯＨを使用したＡＤ−Ｈ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ×５μｍのカラム）。
【００４９】
調製例１１
Ｎ−ベンジル−２−クロロ−Ｎ−［（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）−２−ヒドロキシエチル］アセトアミド
【化１５】
0005852269.tif 000016
１２．１５ＬのＤＣＭ中に（１Ｓ）−２−（ベンジルアミノ）−１−（４−フルオロフェニル）エタノール（１２１５ｇ、４．９６ｍｏｌ）を溶解し、混合物を０℃に冷却する。ＮａＯＨ（Ｈ２Ｏ中に１Ｍ、５．４６Ｌ、５．４６ｍｏｌ）を３０分にわたって滴下して加える。混合物を０〜３℃にて維持しながら１０分間激しく撹拌し、次いで６℃以下の温度に維持しながら１時間にわたって４．８６ＬのＤＣＭ中のクロロアセチルクロリド（６１６．５ｇ、５．４６ｍｏｌ）の溶液を滴下して加える。混合物を０℃にて１時間撹拌し、層を分離し、水相をＤＣＭ（１×２Ｌ）で抽出する。有機層を合わせ、抽出し、１０％の塩酸（１．５Ｌ）、水（１．５Ｌ）および１ＭのＮａＯＨ（１Ｌ）でそれらを洗浄する。Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過する。濾液を回収し、減圧下で溶媒を除去して、無色の油（１４４０ｇ、９０％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２２（Ｍ＋１）。
【００５０】
調製例１２
（６Ｓ）−４−ベンジル−６−（４−フルオロフェニル）モルホリン−３−オン
【化１６】
0005852269.tif 000017
Ｎ−ベンジル−２−クロロ−Ｎ−［（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）−２−ヒドロキシエチル］アセトアミド（１４４０ｇ、４．４８ｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール（１４．５Ｌ）に加え、混合物を２２℃に維持しながら、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（７５３ｇ、６．７３ｍｏｌ）を滴下して加える。混合物を２２℃に維持し、１．５時間撹拌する。飽和塩化アンモニウム水溶液（１３０６ｇ）を加えて反応をクエンチする。さらに１時間撹拌し、次いでＨ２Ｏ（２Ｌ）を加える。ＥｔＯＡｃ（２×１０Ｌ）で抽出し、抽出物を合わせ、減圧下で抽出物を濃縮して残渣を得る。残渣をＥｔＯＡｃ（２０Ｌ）中に再溶解し、Ｈ２Ｏ（１０Ｌ）で洗浄する。ＥｔＯＡｃ溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過する。濾液を回収し、減圧下で溶媒を除去して、無色の油（１２５０ｇ、９８％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２８６（Ｍ＋１）。
【００５１】
調製例１３
（２Ｓ）−４−ベンジル−２−（４−フルオロフェニル）モルホリン
【化１７】
0005852269.tif 000018
窒素雰囲気下で、ＴＨＦ（２２Ｌ）中の（６Ｓ）−４−ベンジル−６−（４−フルオロフェニル）モルホリン−３−オン（６２５ｇ、２．１９ｍｏｌ）の溶液を、温度を２０℃に維持しながら、ＴＨＦ中の水素化アルミニウムリチウム（ＴＨＦ中に１Ｍ、５．０Ｌ、５ｍｏｌ）に滴下して加える。混合物を７０℃に加熱し、１．５時間撹拌する。混合物を０℃に冷却し、Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）を加えて反応をクエンチし、続いて、ＮａＯＨ水溶液（４Ｍ、１．２５Ｌ）、次いでさらにＨ２Ｏ（６００ｍＬ）を加える。得られた混合物を３０分間撹拌し、濾過し、ＥｔＯＡｃ（１０Ｌ）で固体をリンスする。濾液を回収し、減圧下でそれを濃縮して標題化合物（５６１ｇ、９４％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２７２（Ｍ＋１）。
【００５２】
調製例１４
（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）モルホリン塩酸塩
【化１８】
0005852269.tif 000019
１，２−ジクロロエタン（１７Ｌ）に（２Ｓ）−４−ベンジル−２−（４−フルオロフェニル）モルホリン（９４８ｇ、３．５ｍｏｌ）を溶解する。混合物を７０℃に加熱し、１−クロロエチルクロロホルメート（１５００ｇ、１０．５ｍｏｌ）を加熱しながら滴下して加える。混合物を７０℃にて３時間撹拌し、次いで混合物を濃縮して残渣を得る。残渣をＭｅＯＨ（１０Ｌ）に溶解し、１時間撹拌しながら７０℃に加熱する。溶液を減圧下で濃縮して残渣を得る。残渣をＥｔＯＡｃ（５Ｌ）でスラリーにし、濾過し、固体をＥｔＯＡｃ（１Ｌ）で洗浄して灰色がかった固体を得る。固体を１０：１のＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（１０：１、３Ｌ）でスラリーにし、濾過し、固体を回収して、白色固体（３００ｇ）として標題化合物を得る。母液を濃縮して、さらなる物質を得る。この物質をＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（２：１、１Ｌ）の混合物でスラリーにし、濾過して、白色固体としてさらに１０５ｇの標題化合物を得る。生成物のバッチを混合して、標題化合物（４０５ｇ、５３％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１８２（Ｍ−Ｃｌ）。ｅｅ値１００％（１．０ｍＬ／分の流速で２５℃にて９０：１０のヘキサン（０．０２％のＤＥＡを含む）：エチルアルコールを使用したＡＤ−Ｈ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ×５μｍのカラム）。
【００５３】
調製例１５
２−ブロモ−１−（２−イソプロポキシフェニル）エタノン
【化１９】
0005852269.tif 000020
１−（２−イソプロポキシフェニル）エタノン（１．０ｇ、６ｍｍｏｌ）をＥｔ２Ｏ（２５ｍＬ）に溶解し、周囲温度にて暗所で混合物を撹拌しながら、臭素（０．３ｍＬ、６ｍｍｏｌ）を滴下して加える。反応混合物を飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液で洗浄する。それをＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を回収し、減圧下で揮発性物質を除去して、標題化合物（１．５ｇ、８３％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２５８（Ｍ＋１）。
【００５４】
調製例１６
４−ベンジル−２−（２−クロロ−４−フルオロ−フェニル）モルホリン
【化２０】
0005852269.tif 000021
ギ酸（９８〜１００％、０．３０ｍＬ、８ｍｍｏｌ）および２−ベンジルアミノエタノール（１．２１ｇ、８ｍｍｏｌ）を合わせ、得られた混合物を氷浴で冷却する。２−ブロモ−１−（２−クロロ−４−フルオロ−フェニル）エタノン（１．０ｇ、４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を還流で加熱し、その温度にて２０時間撹拌する。混合物をＤＣＭで希釈し、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液で洗浄する。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濾液を回収し、減圧下で濃縮する。ヘキサン中の０〜２０％のメチルターシャリーブチルエーテルの勾配で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製する。生成物画分を合わせ、減圧下で溶媒を除去して、黄色の油（１．２２ｇ、４３％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３０６（Ｍ＋１）。
【００５５】
調製例１７
４−ベンジル−２−（２−イソプロポキシフェニル）モルホリン
【化２１】
0005852269.tif 000022
実質的に調製例１６の方法により４−ベンジル−２−（２−イソプロポキシフェニル）モルホリンを調製する。ＭＳ  ｍ／ｚ  ３１２（Ｍ＋１）。
【００５６】
調製例１８
２−（６−クロロ−４−フルオロ−シクロヘキサ−２，４−ジエン−１−イル）モルホリン
【化２２】
0005852269.tif 000023
４−ベンジル−２−（２−クロロ−４−フルオロ−フェニル）モルホリン（５２９ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２．５ｍＬ）に溶解する。１−クロロエチルクロロホルメート（１．２５ｇ、８．６５ｍｍｏｌ）を加え、８０℃に加熱し、一晩撹拌する。ＭｅＯＨ（２．５ｍＬ）を加え、６５℃にて３時間撹拌する。減圧下で濃縮し、ＭｅＯＨ中の０〜１００％の（２Ｎ  ＮＨ３／ＭｅＯＨ）の勾配で溶出するＳＣＸクロマトグラフィーにより精製する。生成物画分を合わせ、減圧下で溶媒を除去して、白色の固体（３４５ｍｇ、９２％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２１６（Ｍ＋１）。
【００５７】
調製例１９
２−（２−イソプロポキシフェニル）モルホリン
【化２３】
0005852269.tif 000024
窒素雰囲気下で、４−ベンジル−２−（２−イソプロポキシフェニル）モルホリン（０．５１ｇ、２ｍｍｏｌ）、１０％のＰｄＯＨ／炭素（０．５１ｇ、１０ｍｏｌ％）および無水ギ酸アンモニウム（０．５３ｇ、１０ｍｍｏｌ）を合わせる。得られた混合物を還流で加熱し、撹拌する。薄層クロマトグラフィーにより反応の進行をモニタする。完了後、セライト（登録商標）のパッドで反応混合物を濾過し、濾液を回収し、減圧下で溶媒を除去して、油（０．２５ｇ、６３％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３３（Ｍ＋１）。
【００５８】
調製例２０
Ｎ−［２−［２−ブロモ−１−（３−メトキシフェニル）エトキシ］エチル］−４−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド
【化２４】
0005852269.tif 000025
エチレンオキシド（１１ｍＬ、２２０ｍｍｏｌ）を、０℃に冷却したＤＣＭに全て一度に加え、次いでシリンジにより１−メトキシ−３−ビニルベンゼン（７．０９ｇ、５２．８２ｍｍｏｌ）を加える。混合物を０℃に維持しながら撹拌する。Ｎ−ブロモスクシンイミド（９．４ｇ、５２．８２ｍｍｏｌ）および４−ニトロベンゼンスルホンアミド（８．９ｇ、４４．０２ｍｍｏｌ）を加える。ホイルでフラスコを包み、反応混合物を周囲温度に維持しながら２０時間撹拌する。減圧下で濃縮し、濾過し、減圧下で濾液を濃縮して、残渣を得る。ヘキサン中のＥｔＯＡｃの５〜４０％勾配で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製する。生成物画分を合わせ、減圧下で溶媒を除去して、暗黄色の油（１４．２２ｇ、７０．３％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５９（Ｍ＋１）。
【００５９】
調製例２１
２−（３−メトキシフェニル）−４−（４−ニトロフェニル）スルホニル−モルホリン
【化２５】
0005852269.tif 000026
Ｎ−［２−［２−ブロモ−１−（３−メトキシフェニル）エトキシ］エチル］−４−ニトロ−ベンゼンスルホンアミド（１４．２２ｇ、３０．９６ｍｏｌｅ）をＡＣＮ（２００ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（６．４２ｇ、４６．４４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を還流に加熱する。混合物を還流しながら３時間撹拌する。得られた混合物を周囲温度に冷却し、それをＥｔＯＡｃで希釈する。セライト（登録商標）で濾過し、減圧下で濾液を濃縮して残渣を得る。ヘキサン中にＥｔＯＡｃの５０〜８０％の勾配で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製する。生成物画分を合わせ、減圧下で溶媒を除去して、橙色の固体（１１．２ｇ、９５．６％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３７９（Ｍ＋１）。
【００６０】
調製例２２
２−（３−メトキシフェニル）モルホリン
【化２６】
0005852269.tif 000027
２−（３−メトキシフェニル）−４−（４−ニトロフェニル）スルホニル−モルホリン（１１．２ｇ、２９．６ｍｍｏｌ）をＡＣＮ（１５０ｍＬ）および水（２．６７ｍＬ）に溶解する。混合物を撹拌しながらＬｉＯＨ（６．２１ｇ、１４７．９９ｍｍｏｌ）を加え、続いて１−プロパンチオール（１３．４２ｍＬ、１４７．９９ｍｍｏｌ）を加える。混合物を周囲温度にて２５時間撹拌する。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ブラインを加える。ＥｔＯＡｃで２回洗浄する。回収し、抽出物を減圧下で約２００ｍＬに濃縮し、次いで１ＮのＨＣｌで３回洗浄する。水性酸抽出物を合わせ、混合物が塩基性になるまでＮａ２ＣＯ３を加える。塩基性溶液をＥｔＯＡｃで３回抽出し、抽出物を合わせ、抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。濾過し、濾液を回収し、減圧下で溶媒を除去して残渣を得る。ＥｔＯＡｃ、続いて５〜１００％勾配の（ＭｅＯＨ中の１０％の２Ｍ  ＮＨ３）／ＤＣＭで溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製する。生成物画分を合わせ、減圧下で溶媒を除去して、黄色の油（３．０９ｇ、１５．９９ｍｍｏｌ）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１９４（Ｍ＋１）。
【００６１】
調製例２３
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−アセチルフェニル）エチル］メタンスルホンアミド
【化２７】
0005852269.tif 000028
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）エチル］メタンスルホンアミド（２９ｇ、１０４ｍｍｏｌ）、ブチルビニルエーテル（３４．２３ｍＬ、２６１ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（１４．０４ｇ、６３ｍｍｏｌ）、ビス−（１，３−ジフェニルホスフィノ）プロパン（５２．７ｇ、１２５ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１７．３ｇ、１２５ｍｍｏｌ）を管に入れる。管を２分間、窒素で脱気し、次いでＨ２Ｏ（６９．５ｍＬ）およびＤＭＦ（６９．５ｍＬ）を加える。管を密閉し、１１０℃にて２０時間撹拌する。反応混合物を周囲温度に冷却し、ＨＣｌ（２Ｎ、６０ｍＬ）を加える。混合物を周囲温度にて１０分間撹拌する。ＮａＯＨペレットを使用して混合物のｐＨをｐＨ７に調整し、ＤＣＭ（２２０ｍＬ）で希釈し、セライト（登録商標）パッドで濾過し、濾液をＫ２ＣＯ３水溶液（２×１２０ｍＬ）、ブライン（２×１００ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１００ｍＬ）で連続して洗浄する。混合物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濾液を濃縮して残渣を得る。ヘキサン中のＥｔＯＡｃ（０、５、１０、２０、３０および最終的に４０％のＥｔＯＡｃの段階勾配）で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製する。生成物画分を合わせ、減圧下で溶媒を除去して、黄色の油として標題化合物（１７．６ｇ、７０．０％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２４２（Ｍ＋１）。
【００６２】
調製例２４
Ｎ−［（１Ｒ）−１−［４−（１−ヒドロキシエチル）フェニル］エチル］メタンスルホンアミド、異性体２
【化２８】
0005852269.tif 000029
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−アセチルフェニル）エチル］メタンスルホンアミド（１５ｇ、６２ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（１５５．４ｍＬ）に溶解し、氷浴で冷却する。水素化ホウ素ナトリウム（１．２ｇ、３１．１ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を氷浴中で２時間撹拌する。反応をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）でクエンチし、減圧下で濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃ（９０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈する。層を分離し、有機層をブライン（２×５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濾液を濃縮して、残渣を得る。クロマトグラフィー条件Ｋ（以下を参照のこと）を使用して異性体を精製し、分離して、標題化合物（２．０１ｇ、１３％）として第２の溶出異性体を回収する。ＭＳ（ｍ／ｚ）：２６１（Ｍ＋１８）。
【００６３】
実施例１
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）モルホリン−４−イル］メチル｝フェニル）エチル］メタンスルホンアミド
【化２９】
0005852269.tif 000030
窒素雰囲気下で、（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）モルホリン塩酸塩（２９．５ｇ、１２８．８ｍｍｏｌ）を２２℃にてＤＣＭ（１７Ｌ）に懸濁し、トリエチルアミン（３５．８９ｍＬ、２５７．５ｍｍｏｌ）を加える。Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−ホルミルフェニル）エチル］メタンスルホンアミド（２９．２６ｇ、１２８．８ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を３０分間撹拌する。酢酸（８．８５ｍＬ、１５４．５ｍｍｏｌ）を加え、次いでナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（８６．１７ｇ、３８６．３ｍｍｏｌ）を３つのバッチに少しずつ加える。３時間撹拌し、反応を完了するまでＬＣＭＳによりモニタする。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２５９．３１ｍＬ）をゆっくり加えることにより反応をクエンチして、ｐＨ８の溶液を得る。層を分離し、２００ｍＬのＤＣＭで水層を抽出する。有機層を合わせ、飽和炭酸水素ナトリウム、水、ブラインで洗浄し、次いでＭｇＳＯ４で乾燥させる。濾過し、濾液を回収し、濃縮して、残渣を得る。１００％のＤＣＭ〜ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（９５：５）の勾配を使用してシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより残渣を精製する。生成物画分を合わせ、濃縮して、黄色の厚い油（４１ｇ、８１．１３％）として標題生成物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９３（Ｍ＋１）。
【００６４】
実施例２
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）モルホリン−４−イル］メチル｝フェニル）エチル］メタンスルホンアミドマレエート
【化３０】
0005852269.tif 000031
方法１：
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）モルホリン−４−イル］メチル｝フェニル）エチル］メタンスルホンアミド（２５０．４７ｍｇ）をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）に溶解する。６０℃にてＥｔＯＡｃ（２ｍＬ）に溶解したマレイン酸（８５ｍｇ）を加える。周囲温度に冷却し、混合物を３０分間撹拌する。スラリーを濾過し、ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）でリンスする。回収し、濾過ケーキを減圧下で乾燥させて、固体（２８０ｍｇ、９７．７％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９３（Ｍ−マレイン酸＋１）。
【００６５】
方法２：
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）モルホリン−４−イル］メチル｝フェニル）エチル］メタンスルホンアミド（２７０ｇ）をＥｔＯＡｃ（１０Ｌ）に溶解する。混合物を６０℃に加熱し、ＥｔＯＡｃ（２．８Ｌ）中のマレイン酸（９６ｇ、１．１当量）を加える。混合物を周囲温度に冷却し、得られた混合物を１４時間撹拌する。スラリーを濾過し、固体をＥｔＯＡｃ（５Ｌ）でリンスし、濾過ケーキを減圧下で乾燥させる。固体を５容量のＥｔＯＨ（１．４Ｌ）に溶解し、９０℃にて加熱し、水（２８０ｍＬ）を加える。混合物を９０℃にて１時間加熱し、次いでそれを周囲温度に一晩冷却する。沈殿物を濾過し、４０℃にて真空オーブン中で乾燥させて、白色の固体（２５６ｇ、７０％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９３（Ｍ−マレイン酸＋１）。
【００６６】
実施例３
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）モルホリン−４−イル］メチル｝フェニル）エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩
【化３１】
0005852269.tif 000032
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−｛［（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）モルホリン−４−イル］メチル｝フェニル）エチル］メタンスルホンアミド（５０ｇ、１２７．３９ｍｍｏｌ）を、イソプロピルアルコール（２００ｍＬ）に溶解する。ＨＣｌ（ジオキサン中に４Ｍ、６３．７０ｍＬ、２５４．７８ｍｍｏｌ）を溶液に滴下して加え、周囲温度にて５０分間撹拌する。減圧下で揮発性物質を除去し、Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）を加え、次いで水を蒸発させる。Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）およびイソプロピルアルコール（１００ｍＬ）を加え、全量８０ｍＬに濃縮する。得られた厚いスラリーを濾過し、固体をＨ２Ｏで洗浄し、濾過により回収し、減圧下で５５℃にて濾過ケーキを乾燥させて、白色の固体（４０．６ｇ、７５％）として標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３９３（Ｍ−Ｃｌ）。
【００６７】
実施例４
Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−｛１−［（２Ｓ）２−（４−フルオロフェニル）モルホリン−４−イル］エチル｝フェニル）エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩、異性体１
【化３２】
0005852269.tif 000033
実質的に実施例３の方法によって、Ｎ−［（１Ｒ）−１−（４−｛１−［２−（４−フルオロフェニル）モルホリン−４−イル］エチル｝フェニル）エチル］メタンスルホンアミド塩酸塩、異性体１を調製する。ＭＳ（ｍ／ｚ）４０７（Ｍ−Ｃｌ）。
【００６８】
実施例５
Ｎ−［（１Ｓ）−１−（４−｛［２−（２−クロロフェニル）モルホリン−４−イル］メチル｝フェニル）−２，２，２−トリフルオロエチル］メタンスルホンアミド塩酸塩、異性体２
【化３３】
0005852269.tif 000034
２−（２−クロロフェニル）モルホリン、シュウ酸塩（２００ｍｇ、０．６９６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１９３μＬ、１．３９ｍｍｏｌ）、Ｎ−［（１Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−（４−ホルミルフェニル）−エチル］−メタンスルホンアミド（２０５．３ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（１５ｍＬ）を合わせる。酢酸（４７．８μＬ、０．８３ｍｍｏｌ）およびナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（４６５ｍｇ、２．０９ｍｍｏｌ）を加え、周囲温度にて５時間撹拌する。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で混合物のｐＨを１０に調整する。ガス発生が停止するまで撹拌し、層を分離し、ＤＣＭで２回水層を抽出する。有機抽出物を合わせ、それらをブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させる。混合物を濾過し、濾液を回収し、それを減圧下で濃縮して、残渣を得る。残渣を１０ｇのＳＣＸカートリッジ上で精製し、ＤＣＭ、５０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、１００％ＭｅＯＨでカートリッジを洗浄し、次いでＭｅＯＨ（２Ｎ）中のＮＨ３で溶出する。減圧下で生成物の画分を濃縮して、油として粗生成物を得る。条件Ｅ（以下を参照のこと）を使用してキラルＨＰＬＣにより油を精製して、遊離塩基（１０４ｍｇ、３２．３％）を第２の溶出異性体として得る。遊離塩基（１０４ｍｇ、０．２２４ｍｍｏｌ）を１ｍＬのＤＣＭに溶解し、Ｅｔ２Ｏ中のＨＣｌ（２Ｍ、５６１．６μＬ、１．１２ｍｍｏｌ）を滴下して加える。周囲温度にて５分間撹拌し、次いで減圧下で溶媒を除去して、標題化合物（９９ｍｇ、８８．２％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６３（Ｍ−Ｃｌ）。
【００６９】
実質的に実施例５の方法によって以下の化合物を調製する。以下の表１の実施例全ては、キラル開始物質から開始して、および／または以下に示したクロマトグラフィーカラムおよび条件を使用して単一異性体として単離する。分離は遊離塩基またはその塩形態で実施され得る。
【００７０】
【表１−１】
0005852269.tif 000035
【表１−２】
0005852269.tif 000036
【００７１】
実施例１７
Ｎ−［（１Ｒ）−１−［４−［１−［（２Ｓ）２−（４−フルオロフェニル）モルホリン−４−イル］エチル］フェニル］エチル］メタンスルホンアミド、異性体１
【化３４】
0005852269.tif 000037
Ｎ−［（１Ｒ）−１−［４−（１−ヒドロキシエチル）フェニル］エチル］−メタンスルホンアミド異性体２（４２０ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（５ｍＬ）を合わせる。混合物を０℃に冷却し、それを窒素でパージする。臭化アセチル（２９５．８μＬ、３．４５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を０℃に維持しながら１０分間撹拌する。さらなる量の臭化アセチル（５１９．５μＬ、６．９０ｍｍｏｌ）を加え、さらに１０分間撹拌する。反応物をＤＣＭで希釈し、減圧下で溶媒を蒸発させて、残渣を得る。残渣をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、（２Ｓ）−２−（４−フルオロフェニル）モルホリン塩酸塩（７１．１ｍｇ、０．３２７ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１３５．４ｍｇ、０．９８０ｍｍｏｌ）を加え、周囲温度にて一晩撹拌する。反応物を濾過し、ＤＣＭ、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１：１）、ＭｅＯＨおよび最後に２ＭのＮＨ３／ＭｅＯＨの溶出順序でＳＣＸクロマトグラフィーを使用して濾液を精製する。生成物画分を合わせ、減圧下で溶媒を除去して、残渣を得る。逆相ＨＰＬＣ（ＸＴｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８カラム、ｐＨ８）により残渣を精製して、標題化合物（９．６ｍｇ、７．２％）として第１の溶出異性体（異性体１）を回収する。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０７（Ｍ＋１）。
【００７２】
【表２】
0005852269.tif 000038
【００７３】
ＭＯＧＡＴ−２阻害アッセイ
ヒトＭＯＧＡＴ−２に対する化合物のインビトロ阻害活性をこのアッセイで評価する。ＭＯＧＡＴ−２は、オレオイル基を、オレオイル−ＣｏＡ由来のモノオレオイル−グリセロール（「ＭＡＧ」）に変換して、腸トリグリセリド再合成経路においてジオレオイル−グリセロール（「ＤＡＧ」）を形成する。このアッセイは、１４Ｃ−ＤＡＧから１４Ｃ−オレオイル−ＣｏＡを分離するために、親水性分子より疎水性分子を選択的に抽出するＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔＥ抽出を利用する。
【００７４】
遺伝子操作した昆虫ＳＦ９細胞はヒトＭＯＧＡＴ−２を発現する。プロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅカタログ番号１１８７３５８０００１）を有する２０ｍＭのＮａＣｌ中で細胞溶解物を調製する。２０×２秒間、１５，０００ｒｐｍにてヒトＭＯＧＡＴ−２を発現するＳＦ９細胞をホモジナイズする（ＰＴ−３１００  Ｐｏｌｙｔｒｏｎｅ）。４℃にて１０分間、１０００ｇでホモジネートを遠心分離する。タンパク質定量および活性試験のために分離管内に上清を回収する。グリセロールモノオレエート基質（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、ＣＡＳ＃２５４９６−７２−４）をクロマトグラフィーにより精製する。リン脂質ベシクル（ジオレオイルホスファチジルコリン「ＤＯＰＣ」）中でモノアシルグリセロール（ＭＡＧ）基質を調製する。２０ｍＭの総脂質（ＭＡＧおよびＤＯＰＣ）の濃度にてＭＡＧ／ＤＯＰＣベシクルを調製する。化合物スクリーニング（８．９％）または化合物動力学的研究（２．６〜４０％）のいずれかのために異なるモル比のＭＡＧ対総脂質を調製する。ガラス管内のクロロホルム中で適切な量の精製したＭＡＧおよびＤＯＰＣ（Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ＃８５０３７５Ｃ）を混合する。続いてＮ２ガス流下でクロロホルムを蒸発させ、次いで３０分間減圧下で乾燥させる。所望の総脂質濃度のために適切な量の緩衝液（Ｔｒｉｓ−Ｃｌ  ｐＨ７．４、２５０ｍＭのスクロース、１ｍＭのＥＤＴＡ）を乾燥したＭＡＧ／ＤＯＰＣ混合物に加える。溶液が透明になるまでＭＡＧ／ＤＯＰＣ溶液を超音波処理する。均一性を確認するために動的光散乱を使用してベシクルのサイズを測定する。
【００７５】
アッセイ緩衝液は、１００ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  １５５６７−０２２）、１１％のＤＭＳＯ、２５０ｍＭのスクロース（Ｓｉｇｍａ  Ｓ−０３８９）、１ｍＭのＥＤＴＡ、および完全プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  １２４５４８００）からなる。試験化合物を基質および酵素と一緒に緩衝液に加える。反応についての最終濃度は、８．９：９１．１（モル比）のＭＡＧ：ＤＯＰＣからなる、超音波処理したベシクルの形態で、０．０１６ｍｇ／ｍＬのＳＦ９細胞抽出物、２０μＭのオレオイル−ＣｏＡ（３．５μＭの１４Ｃ−オレオイル−ＣｏＡ）、１．２６ｍＭの総脂質である。容量でＡＥＳＳＭ（１２．５％の１００％変性ＥｔＯＨ；１１％のＤＩ  Ｈ２Ｏ；２．５％の１．０Ｎ  ＮａＯＨ；５９％のイソプロパノール（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ  ３０３１−０８）；１５％のヘプタン（Ｏｍｎｉ  Ｓｏｌｖ  ＨＸ００７８））を加えることによって室温にて９０分のインキュベーション後、反応を停止させる。Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  Ｅを加え、次いでプレートを密閉し、室温にて少なくとも４時間の平衡後、シンチレーションカウンタでカウントする。濃度対相対ＭＯＧＡＴ−２活性をプロットすることによってＥｘｃｅｌ  Ｆｉｔソフトウェア（バージョン４；４−パラメータ非線形ロジスティック式（ＡＢａｓｅ  Ｅｑｕａｔｉｏｎ  ２０５）を使用したデータ分析）を使用してＩＣ５０（最大値の半分の阻害に到達する濃度）を計算する。
【００７６】
このＭＯＧＡＴ−２インビトロアッセイにおいて、本明細書に例示した全ての化合物は１００ｎＭ未満のＩＣ５０を有し、実施例２は１２ｎＭのＩＣ５０を有する。
【００７７】
ＭＯＧＡＴ−２細胞アッセイにおける阻害活性
細胞環境内のヒトＭＯＧＡＴ−２に対する化合物の阻害活性をこのアッセイにおいて評価する。Ｃａｃｏ−２は、ヒト結腸癌細胞株であり、多くの場合、腸上皮細胞のためのモデルとして使用される。Ｃａｃｏ−２はＭＯＧＡＴ−２を発現しないので、ヒトＭＯＧＡＴ−２を安定なトランスフェクションにより細胞株内で操作する。ＭＡＧ類似体、２−Ｏ−ヘキサデシルグリセロール（ＨＤＧ）を利用して細胞ＭＯＧＡＴ−２活性を検出する。なぜなら、ＨＤＧは加水分解せず、得られた生成物は質量分析により容易にモニタされるからである。基質は、超音波処理したベシクルの形態のＤＯＰＣと共に混合物として使用して細胞に送達される。
【００７８】
完全培地（３／１ＤＭＥＭ：Ｆ１２＋１０％ＦＢＳ＋２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ＋ゲンタマイシン）中で２４時間後、８０％コンフルエントになるようにＣａｃｏ２細胞を１００ｍｍディッシュ上に播種する。リポフェクタミン２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して細胞にｈＭＯＧＡＴ−２プラスミド（ＭＯＧＡＴ−２−ｐＣＤＮＡ３．１−Ｈｙｇｒｏ）をトランスフェクトする。トランスフェクション混合物に対する６時間の曝露後、ＰＢＳ中で細胞を３回洗浄し、次いで培地に加える。さらに１８時間のインキュベーションのために細胞をインキュベートし、細胞をトリプシン処理し、それらを１００ｍｍディッシュ中で連続希釈する。完全培地＋４００μｇ／ｍｌのハイグロマイシンに加え、クローンが現れるまでインキュベートする。クローンを単離し、２４ウェルディッシュ内に移し、コンフルエンシーまで増殖させる。Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮＡｅａｓｙキットを使用してこれらのクローンからＲＮＡを調製する。７９００配列検出システム（ＡＢＩ）でＡＢＩ  ｉｎｖｅｎｔｏｒｉｅｄアッセイ（ＨＳ００２２８２６２）を使用してＴａｑｍａｎ分析を実施する。ヤギポリクローナル抗体（ＭＯＧＡＴ−２に対応する３８ｋＤタンパク質のヒトＭＯＧＡＴ−２発現を確認するためのＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＳＣ−３２３９２）を使用したウェスタンブロット分析によりこれらのクローンから溶解物を分析する。
【００７９】
ガラス管内のクロロホルム中で２−Ｏ−ヘキサデシルグリセロール（「ＨＤＧ」、Ｂｉｏｓｙｎｔｈ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｙ、＃Ｈ−１８０６、２０ｍｇ／ｍｌの５６２．７μｌ）およびＤＯＰＣ（２０ｍｇ／ｍｌの１４．３ｍｌ）を混合し、Ｎ２ガス下で最初に乾燥させ、次いでさらに３０分間減圧下で乾燥させる。溶液が透明になるまで超音波処理しながら、２０ｍｌの緩衝液（１５０ｍＭのＴｒｉｓ−Ｃｌ  ｐＨ７．４、２５０ｍＭのスクロース、１ｍＭのＥＤＴＡ）を乾燥したＨＤＧ／ＤＯＰＣ混合物に加える。３７℃、５％ＣＯ２にて一晩、ポリ−Ｄ−リシンでコーティングした９６ウェルプレート（「細胞プレート」）内にＣａｃｏ２細胞を播種する。増殖培地を除去し、２％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ）を含有するＤＭＥＭＦ１２（３：１）培地（ＧＩＢＣＯ  ９３−０１５２ＤＫ）中の試験化合物で細胞を３０分間、前処理する。４０μＭのオレイン酸および８００μＭの８．９：９１．９（モル比）のＨＤＧ／ＤＯＰＣを含有する２％ＢＳＡ  ＤＭＥＭＦ１２（３：１）培地中で１つの試験化合物を用いて細胞を４時間処理する。５０μｌのトリプシン溶液で細胞をトリプシン処理し、５０μｌのＰＢＳを加える。乾燥氷上ですぐに細胞を凍結し、ＬＣ−ＭＳ分析のために−２０℃に保存する。以下のようにクロロホルム／メタノールで細胞を抽出する：細胞を２ｍｌプレートに移し、その細胞プレートを２００μＬのメタノールで洗浄し、次いでメタノール洗浄液を２ｍｌプレートに移し、２００μＬのＰＢＳで再び細胞プレートを洗浄し、ＰＢＳ洗浄液を２ｍｌプレートに移す。内部標準（１９．５２ｎｇ／ｍｌ）ＤＡＧ（１５：０、１５：０（Ｓｉｇｍａ））、Ｄ５−ＴＡＧ（３９．０３ｎｇ／ｍＬ）ＣＤＮ（１６，１６，１６）と共にクロロホルム（４００μＬ）を２ｍＬプレートに加える。密閉した２ｍＬプレートを上下にひっくり返し（１０回）、次いでボルテックスし、回転させる。２ｍＬプレートから４００μＬの下層を除去し、別のプレート「最終プレート」のウェルに加える。ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ（４００μＬ  ２：１）を２ｍＬプレートに加える。密閉した２ｍＬプレートを再び上下にひっくり返し（１０回）、ボルテックスし、回転させる。２ｍＬプレートから２２０μＬの下層を除去し、最終プレートに加える。最終プレートを乾燥させ、５００ｍＬのＩＰＡで再構成する。最終プレートを密閉し、５分間振盪する。Ｓｈｉｍａｄｚｕ溶媒送達システムに接続した、１０μＬループを備えるＬｅａｐ自動サンプラを使用して、６０℃に保持したＨａｌｏ  Ｃ８カラム（２．１×５０、２．７μＬ粒径）上に最終プレートから１０μｌの試料を注入する。Ｄ５  Ｃ１６  ＴＡＧ内部標準ならびにエーテルＴＡＧ、およびＣ５２およびＣ５４天然ＴＡＧについてのデータを収集するためにチャネルをモニタする。溶媒Ａは２０μＭの酢酸アンモニウムを有する８０／２０のＨ２Ｏ／メタノールである。溶媒Ｂは２０μＭの酢酸アンモニウムを有する５０／５０のＩＰＡ／ＴＨＦである。流速は０．４ｍＬ／分である。洗浄溶媒はＨ２Ｏ／ＭｅＯＨおよびＤＣＭであった。Ｘｃａｌｉｂｕｒソフトウェアを使用して、対象のピーク面積を抽出し、以下の式：（エーテルＴＡＧの面積／Ｃ５４天然ＴＡＧの面積）／ＩＳの面積を使用するＥｘｃｅｌにデータをエクスポートする。この比率は各ウェル内の細胞数の相違を効果的に考慮に入れる。このＭＯＧＡＴ−２細胞系アッセイについての結果を以下の表３に与える。ＭＯＧＡＴ−２細胞系アッセイの結果は、表６に記載した実施例が細胞環境内のヒトＭＯＧＡＴ−２を阻害することを実証する。
【００８０】
【表３】
0005852269.tif 000039
【００８１】
イヌのオイルボーラスモデルにおける薬理学的効果
小腸内に見られたＭＯＧＡＴ−２を阻害することは、過剰な脂肪摂取により引き起こされる高トリグリセリド血症を治療するのに有用であり得る。ＴＡＧ吸収を阻害する例示した化合物の能力を評価するために、２１匹のオスのビーグル犬（ｎ＝７／治療群）を各研究に登録し、各イヌが９〜１３ｋｇの体重を有するように選択した。標準的な明周期（１２時間の明および１２時間の暗）；室温：７２＋８°Ｆ；および３０％〜７０％の相対湿度でケージ内にイヌを収容する。研究の開始前に１６時間イヌを絶食させ、次いで絶食したイヌにビヒクル（１％ＨＥＣ、０．２５％Ｔｗｅｅｎ８０、Ａｎｔｉｆｏａｍ）またはそのビヒクル内の試験化合物の１つを投与する。０時の試料のために投与の１時間後、イヌを出血させる（頸静脈から０．５ｍｌ）。０時での試料の採取後すぐにイヌにオリーブオイル（Ｓｉｇｍａカタログ番号：Ｏ−１５１４、５ｍｌ／ｋｇ）を投与する。化合物／ビヒクル投与の１．５、２、３、５、７および９時間後、氷上でＥＤＴＡ管内に試料を採取する。試料を１５分間９０００ｃｐｍにて遠心分離し、Ｒｏｃｈｅ  Ｈｉｔａｃｈｉ９１７を使用して血漿総トリグリセリドについて分析する（Ｒｏｃｈｅカタログ番号１８７７７７１）。血漿ＴＡＧ１８．１＿１８．１＿１８．１測定のために、試料を抽出し、１０μＬの血漿を使用したＭＯＧＡＴ−２細胞アッセイにおける上記のものと同様のＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析を実施する。
【００８２】
検体は、９０２．８ｍ／ｚの質量を有する、ＴＡＧ１８：１  １８：１  １８：１の［Ｍ＋ＮＨ４］＋イオンであり、内部標準は、８２９．８ｍ／ｚの質量を有する、Ｄ５  ＴＡＧ１６：０  １６：０  １６：０である。ＴＡＧ  １８：１  １８：１  １８：１相対量において６０３．５ｍ／ｚ娘イオンの９０２．８ｍ／ｚ（ＴＡＧ  １８：１  １８：１  １８：１）および５５６．５ｍ／ｚ娘イオンの８２９．８ｍ／ｚ（Ｄ５  ＴＡＧ  １６：０  １６：０  １６：０内部標準）の割合の変化が現れる。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ４：（正味のＡＵＣＴＡＧ＝ＡＵＣＴＡＧオイルボーラス後−０時間でのＡＵＣＴＡＧ）を使用して全ＴＡＧ  ＡＵＣ−ベースラインＴＡＧ  ＡＵＣから正味の血漿ＴＡＧ  ＡＵＣを算出する。血漿トリグリセリドの阻害パーセントを以下のように計算する：（正味のＴＡＧ  ＡＵＣのオイルボーラス群平均−化合物処置した正味のＴＡＧ  ＡＵＣのオイルボーラス群平均／正味のＴＡＧ  ＡＵＣのオイルボーラス群平均）＊１００。最後の統計的解析は、対照との比較のためにＯｎｅ  ｗａｙ  Ａｎｏｖａのダネット法を使用する。全ての正味のＴＡＧ  ＡＵＣ値は、研究内の変動性を限定するために比較のためのランク付けした平均化ＡＵＣに変換する。ＭＯＧＡＴ−２活性を阻害し、インビボでＴＡＧ吸収を減少させる本発明の例示した化合物の能力は、このアッセイに従ってさらに評価できる。
【００８３】
３０ｍｇ／ｋｇ用量にて３回の研究、および７５ｍｇ／ｋｇ用量にて２回の研究でこのモデルにおいて実施例２を評価した。これらの研究からの結果の組み合わせは、食後のトリグリセリドの偏位の統計的に有意（ｐ＜０．０５）な減少を実証した。結果は以下の通りであった：３０ｍｇ／ｋｇ  ＰＯにてＴＡＧ吸収の４３％阻害（４５％の１８．１ＴＡＧ）および７５ｍｇ／ｋｇ  ＰＯにてＴＡＧ吸収の６４％阻害（６３％の１８．１ＴＡＧ）。
【００８４】
本発明の例示した化合物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｅｎｎａｒｏ、Ｅｄ．、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．Ｅａｓｔｏｎ  Ｐａ．１９９０に見出されるものなどの許容される実務に従って医薬組成物に容易に製剤化され得る。治療医師または他の医療専門家は、特に高トリグリセリド血症を治療するために、必要とするヒトを治療するための化合物の有効量を決定できる。好ましい医薬組成物は経口投与のための錠剤またはカプセル剤として製剤化され得る。錠剤またはカプセル剤は、治療を必要とする患者を治療するのに有効な量で本発明の化合物を含んでもよい。