(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＩ）：
（Ｐ1）ＡＡ1−ＡＡ2−ＡＡ3−ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2    （ＩＩ）
（式中、ＡＡ1はＤ−２Ｎａｌであり、ＡＡ2はＤ−４Ｃｐａであり、ＡＡ3はＤ−３Ｐａｌであり、ＡＡ4はＳｅｒであり、ＡＡ5は４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）であり、ＡＡ6はＤ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）であり、ＡＡ7はＬｅｕであり、ＡＡ8はＬｙｓ（ｉＰｒ）であり、ＡＡ9はＰｒｏであり、ＡＡ10はＤ−Ａｌａであり；
Ｐ1はアミノ保護基またはアセチルであり；
Ｐ4は水素またはヒドロキシル保護基であり；
Ｐ6は水素またはアミノ保護基であり；
Ｐ8はアミノ保護基である）
により表されるデカペプチドまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を液相製造する方法であって、
ペプチドカップリング試薬の存在下で、液体試薬媒体中、式（ＩＩＩ）：
（Ｐ1）ＡＡ1−ＡＡ2−ＡＡ3    （ＩＩＩ）
により表される第１のポリペプチドまたはその塩を、式（ＩＶ）：
ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2    （ＩＶ）
により表される第２のポリペプチドまたはその塩とカップリングするステップ
を含む、方法。
【請求項２】
Ｐ4がヒドロキシル保護基である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｐ6がアミノ保護基である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｐ1がアセチルであり、Ｐ4がヒドロキシル保護基であり、Ｐ6が水素またはアミノ保護基であり、Ｐ8がアミノ保護基である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか一項に記載の方法の後、式（ＩＩ）により表されるデカペプチドまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を、保護基Ｐ4、Ｐ6、およびＰ8を除去するための切断試薬による処理に供する方法が引き続いて行われる、デガレリクスを調製する液相法。
【請求項６】
Ｐ1がアセチルであり、Ｐ4がｔＢｕであり、Ｐ6が水素またはｔＢｕであり、Ｐ8がＢｏｃである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
式（ＩＶ）：
（Ｐ4）ＡＡ4−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2    （ＩＶ）
（式中、
Ｐ4は水素またはヒドロキシル保護基であり；
Ｐ6は水素またはアミノ保護基であり；
Ｐ8はアミノ保護基である）
により表されるポリペプチドを調製する方法であって、
式（Ｖ）：
（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7    （Ｖ）
により表されるポリペプチドまたはその塩もしくは溶媒和物を、式（ＶＩ）：
ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2    （ＶＩ）
により表されるポリペプチドまたはその塩もしくは溶媒和物とカップリングし、
次いで、脱保護基ＰNを除去する（式中、ＡＡ4〜ＡＡ10、Ｐ4、Ｐ6およびＰ8は請求項１と同じであり、ＰNは水素付加により除去することができる保護基である）
ことにより調製する、方法。
【請求項８】
Ｐ4がヒドロキシル保護基である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
Ｐ6がアミノ保護基である、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
ＰNが、Ｐｄ／Ｃ触媒の存在下で、化合物（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2に水素付加することにより除去されるベンジルオキシカルボニルである、請求項７〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
請求項１から６のいずれか一項に記載の方法が引き続いて行われる、請求項７〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7（式中、ＡＡ4〜ＡＡ7、Ｐ4およびＰ6は請求項１と同じであり、ＰNは水素付加により除去することができる保護基である）の化合物を製造する方法であって、
以下のステップ：
（ａ）（ＰN2）ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7（ＰC）（式中、Ｐ6は請求項１と同じであり、（ＰN2）はＮ末端アミノ保護基または水素であり、（ＰC）は水素付加により切断することができるＣ末端カルボニル保護基である）を用意するステップ；
（ｂ）アミノ保護基（ＰN2）が存在する場合、そのアミノ保護基（ＰN2）を除去するステップ；
（ｃ）Ｈ−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7（ＰC）に水素付加してＨ−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7を得るステップ；および
（ｄ）Ｈ−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7に（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）の活性化エステルを反応させて、（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7（式中、ＡＡ4は請求項１と同じであり、（Ｐ4）はヒドロキシル保護基または水素であり、ＰNは水素付加により除去することができる保護基である）を得るステップ；
を含む、方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法の後に、請求項５または６に記載の方法が引き続いて行われる、デガレリクス溶液を調製する方法。
【請求項１４】
ｐＨが９未満、好ましくは８未満に保たれる、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
以下の式：
ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2、
（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2、
（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7、
により表されるポリペプチド化合物
（式中、ＡＡ4はＳｅｒであり、ＡＡ5は４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）であり、ＡＡ6はＤ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）であり、ＡＡ7はＬｅｕであり、ＡＡ8はＬｙｓ（ｉＰｒ）であり、ＡＡ9はＰｒｏであり、ＡＡ10はＤ−Ａｌａであり；
Ｐ4は水素またはヒドロキシル保護基であり；
Ｐ6は水素またはアミノ保護基であり；
Ｐ8はアミノ保護基であり、ＰNは保護基である）
または薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項１６】
Ｐ4がヒドロキシル保護基である、請求項１５に記載のポリペプチド化合物。
【請求項１７】
Ｐ6がアミノ保護基である、請求項１５に記載のポリペプチド化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、デカペプチドであるデガレリクス、その保護された前駆体および他の有用な中間体を調製するための液相（または溶液相）製造法に関する。本発明はさらに、前記溶液相製造法に有用なポリペプチド、およびデガレリクス自体の精製に関する。
【背景技術】
【０００２】
前立腺がんは、工業先進国における男性の罹病および死亡の主な原因である。ＦＥ２００４８６としても知られているデガレリクスは、アンドロゲン除去療法を必要とする前立腺がん患者のために開発され、近年承認された第三世代ゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）受容体拮抗薬（ＧｎＲＨ遮断薬）である（Ｄｏｅｈｎ他、Ｄｒｕｇｓ  ２００６、第９巻、第８号、５６５〜５７１頁；ＷＯ０９８４６６３４）。デガレリクスは、下垂体でＧｎＲＨ受容体の即時型および競合的遮断により作用し、他のＧｎＲＨ拮抗薬と同様に、視床下部−下垂体−生殖腺軸を介した黄体形成ホルモン産生の初期刺激を引き起こさないので、テストステロン急増や臨床的発赤を引き起こさない（Ｖａｎ  Ｐｏｐｐｅｌ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２０１０：２  ３９〜５２；Ｖａｎ  Ｐｏｐｐｅｌ他、Ｕｒｏｌｏｇｙ、２００８、７１（６）、１００１〜１００６）；Ｊａｍｅｓ，Ｅ．Ｆ．他、Ｄｒｕｇｓ、２００９、６９（１４）、１９６７〜１９７６）。
【０００３】
デガレリクスは、５個がＤ−アミノ酸である７個の人工的アミノ酸を含む合成直鎖デカペプチドである。デガレリクスは、デカペプチドの主鎖に１０個のキラル中心を有する。配列中の５位のアミノ酸残基は、側鎖置換で追加のキラル中心を有し、合計で１１個のキラル中心を与える。デガレリクスのＣＡＳ登録番号は２１４７６６−７８−６（遊離塩基）であり、デガレリクスは、商標Ｆｉｒｍａｇｏｎ（商標）で市販されている。原薬は、Ｄ−アラニンアミド、Ｎ−アセチル−３−（２−ナフタレニル）−Ｄ−アラニル−４−クロロ−Ｄ−フェニルアラニル−３−（３−ピリジニル）−Ｄ−アラニル−Ｌ−セリル−４−［［［（４Ｓ）−ヘキサヒドロ−２，６−ジオキソ−４−ピリミジニル］カルボニル］アミノ］−Ｌ−フェニルアラニル−４−［（アミノカルボニル）アミノ］−Ｄ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシル−Ｎ６−（１−メチルエチル）−Ｌ−リジル−Ｌ−プロリル−と化学的に命名され、以下の化学構造（以下で式Ｉとも呼ぶ）により表される。
【０００４】
【化１】
0006007187.tif 000002
【０００５】
デガレリクスの構造はまた、
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（Ｃｂｍ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
（式中、Ａｃはアセチルであり、２Ｎａｌは２−ナフチルアラニンであり、４Ｃｐａは４−クロロフェニルアラニンであり、３Ｐａｌは３−ピリジルアラニンであり、Ｓｅｒはセリンであり、４Ａｐｈは４−アミノフェニルアラニンであり、Ｈｏｒはヒドロオロチルであり、Ｃｂｍはカルバモイルであり、Ｌｅｕはロイシンであり、Ｌｙｓ（ｉＰｒ）はＮ６−イソプロピルリジンであり、Ｐｒｏはプロリンであり、Ａｌａはアラニンである）
と表すこともできる。
【０００６】
本発明を説明するために、デガレリクスの各アミノ酸に以下の通り短縮表記を与える：
ＡＡ1はＤ−２Ｎａｌであり、ＡＡ2はＤ−４Ｃｐａであり、ＡＡ3はＤ−３Ｐａｌであり、ＡＡ4はＳｅｒであり、ＡＡ5は４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）であり、ＡＡ6はＤ−Ａｐｈ（Ｃｂｍ）であり、ＡＡ7はＬｅｕであり、ＡＡ8はＬｙｓ（ｉＰｒ）であり、ＡＡ9はＰｒｏであり、ＡＡ10はＤ−Ａｌａである。
【０００７】
したがって、例えば、デガレリクスは、Ａｃ−ＡＡ1−ＡＡ10−ＮＨ2と表すことができ、テトラペプチドＡｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣＰａ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒは、Ａｃ−ＡＡ1−ＡＡ4と表すことができ、ヘキサペプチド４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（Ｃｂｍ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2は、ＡＡ5−ＡＡ10−ＮＨ2と表すことができる。
【０００８】
デガレリクスは、以前はＷＯ９８／４６６３４およびＪｉａｎｇ他、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１、４４、４５３〜４６７に報告されているＢｏｃ固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）法を使用して調製されていた。基本的には、最初に、Ｂｏｃ保護されたＤ−Ａｌａを、活性化試薬またはカップリング試薬としてジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を使用して、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）／ＣＨ2Ｃｌ2中でＭＢＨＡ樹脂に結合させる。Ｄ−Ａｌａが樹脂に結合したら、デカペプチドが完成するまで、洗浄、非ブロック化、次いで次のアミノ酸残基のカップリングにより合成が進行する。５位の４Ａｐｈおよび６位のＤ−４Ａｐｈを添加する際に、それらの側鎖第一級アミノ基をＦｍｏｃで保護し、鎖の次のアミノ酸を添加する前に、それぞれＬ−ＨｏｒおよびＣｂｍで修飾する。これには、最初にピペリジンにより側鎖保護を除去するステップ、ペプチド樹脂上の新たな遊離アミノ基をｔｅｒｔ−ブチルイソシアネートまたはＬ−ヒドロオロト酸と反応させるステップ、反応が完了したことをニンヒドリン試験で確実にするステップ、および次いで次のアミノ酸残基を添加する前にペプチド樹脂を洗浄するステップの追加のステップが必要となる（Ｓｏｒｂｅｒａ他、Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  ２００６、第３１巻、第９号、７５５〜７６６頁も参照）。
【０００９】
Ｂｏｃ−ＳＰＰＳ法は、現在までに十分な量のデガレリクスを供給してきたが、このポリペプチドに対する需要の高まりは、より大量に必要であることを意味している。ＨＦ切断を必要とするＢｏｃ−ＳＰＰＳは、大規模工業合成には適さない。実際、ＷＯ９８／４６６３４は、ＳＰＰＳが最大１ｋｇまでの限られた量にのみ適しており、より大量の製品には古典的なペプチド溶液合成または液相ペプチド合成（ＬＰＰＳ）が好ましいと述べている。ＷＯ９８／４６６３４は、このような合成をどう行うべきか明示していない。デガレリクスの液相ペプチド合成の存在は報告されているが［ＥＭＥＡ  Ｒｅｐｏｒｔ：Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｒｅｐｏｒｔ  ｆｏｒ  Ｆｉｒｍａｇｏｎ（商標）（Ｄｅｇａｒｅｌｉｘ）：Ｄｏｃ．Ｒｅｆ．ＥＭＥＡ／ＣＨＭＰ／６３５７６１／２００８］、現在のところ、このような方法の詳細は公に開示されていない。
【００１０】
ＷＯ９７／３４９２３およびＷＯ９９／２６９６４は、生物活性ペプチドを調製するための液相法に関する文献である。ＷＯ９９／２６９６４は特に、ＧｎＲＨ拮抗薬としての活性を有するデカペプチドの液相合成に関する。ＷＯ９９／２６９６４は、Ｓｅｒのヒドロキシ基、ＡｐｈおよびＤ−Ａｐｈの芳香族アミノ基、Ｌｙｓ（ｉ−Ｐｒ）のε−ｉ−プロピルアミノ基などの全ての反応性側鎖を保護する必要性に加えて、樹脂の限られた容量ならびに大過剰の試薬およびアミノ酸が必要とされることなど、ＧｎＲＨ拮抗薬を製造するためのＳＰＰＳ方法論のいくつかの固有の制限を列挙している。
【００１１】
ＷＯ９９／２６９６４は、非常に精巧に作られた側鎖を有するデカペプチドの５位および６位の中心ペプチド断片を最初に調製するステップと、次いで、「４−２−４」、「３−３−４」または「３−４−３」断片組立パターンを通してペプチドを組み立てるステップとを含む液相法を提案している。例えば、ＧｎＲＨ拮抗薬アザリンＢの調製では、テトラペプチドをヘキサペプチドとカップリングして、所望のデカペプチドを形成する。同じ断片組立パターンをデガレリクスに試みると、Ｓｅｒアミノ酸（ＡＡ4）のラセミ化が起こり、Ｌ−Ｓｅｒの約２０％不純物が生じる。この不純物は、最終デカペプチドまで持ち越され、除去することが困難である。さらに、ＷＯ９９／２６９６４に記載されている手順に従って、Ｓｅｒ単位をトリペプチドＡＡ1−ＡＡ3に付加することによりテトラペプチドＡＡ1−ＡＡ4を調製する場合、その後の操作中にベンジルエステル基の加水分解からのテトラブチルアンモニウムイオンを完全に除去することができず、最終生成物にまで残ってしまった。デガレリクス合成において、Ｌ−ジヒドロオロト酸を４ＡｍｐとカップリングしてＡＡ5を調製すると、Ｌ−ヒドロオロチル基がそのヒダントインアセチル類似体に再配列することがさらに分かった。デガレリクスの溶液相合成についてのこれらのおよび他の課題が今克服され、このデカペプチドの新規な溶液相ポリペプチド合成が初めて本明細書で開示される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
ＷＯ９７／３４９２３およびＷＯ９９／２６９６４に記載されているようなデガレリクスを調製するためのＳＳＰＳ法の課題およびＬＬＰＳ法の欠点は今克服され、それらが本発明の主題である。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
概して、本発明はデカペプチドであるデガレリクスの液相合成に関する。
【００１４】
一態様では、本発明は、式Ａｃ−ＡＡ1−ＡＡ10−ＮＨ2を有するデガレリクスまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を調製する液相法であって、以下の式ＩＩのデガレリクス前駆体：
【００１５】
【化２】
0006007187.tif 000003
またはその塩もしくは溶媒和物を切断試薬による処理に供するステップを含む、液相法に関する。
【００１６】
したがって、式ＩＩの化合物は、
（Ｐ1）ＡＡ1−ＡＡ2−ＡＡ3−ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2  （ＩＩ）
（式中、ＡＡ1〜ＡＡ10は式（Ｉ）と同じであり、
Ｐ1はアミノ保護基またはアセチルであり；
Ｐ4は水素またはヒドロキシル保護基、好ましくはヒドロキシル保護基であり；
Ｐ6は水素またはアミノ保護基、好ましくはアミノ保護基であり；
Ｐ8はアミノ保護基である）
に相当する。
【００１７】
好ましくは、保護基Ｐ1は、存在する場合、Ｐ8に直交する、すなわち、両保護基を独立に切断することができる。
【００１８】
好ましい実施形態では、Ｐ1はアセチルであり、Ｐ4およびＰ8の各々は単一のステップで切断することができる保護基であり、Ｐ6は水素または保護基Ｐ4およびＰ8と共に切断することができる保護基である。保護基の切断は、好ましくは式ＩＩの前駆体をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で処理することにより行う。Ｐ4、Ｐ6およびＰ8が、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔＢｕ）およびｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）から選択される保護基であることが特に好ましく、Ｐ4がｔＢｕであり、Ｐ6が水素またはｔＢｕであり、Ｐ8がＢｏｃである式ＩＩの前駆体が最も好ましい。
【００１９】
本発明はまた、式（ＩＩ）により表される中間体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を液相製造する方法であって、任意選択で有機アミン塩基と共に、ペプチドカップリング試薬の存在下で、液体試薬媒体中、式（ＩＩＩ）
（Ｐ1）ＡＡ1−ＡＡ2−ＡＡ3  （ＩＩＩ）
により表される第１のポリペプチドまたはその塩を、式（ＩＶ）
ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2  （ＩＶ）
により表される第２のポリペプチドまたはその塩とカップリングして、式（ＩＩ）により表されるデカペプチドを形成するステップを含む、方法に関する。この場合、ＡＡ1〜ＡＡ10、Ｐ4、Ｐ6およびＰ8は、式（ＩＩ）と同じである。
【００２０】
塩には、塩酸塩などの酸性塩、ならびにアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩およびアンモニウム塩などの塩基性塩が含まれる。
【００２１】
本発明によると、式（ＩＶ）により表される第２のポリペプチドは、以下の化合物（ＩＶａ）：
（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2  （ＩＶａ）
から保護基ＰNを除去することにより調製することができる。
【００２２】
ＰNは、好ましくはＮ末端アミノ保護基、より好ましくはベンジルオキシカルボニルなどの水素付加により除去することができる保護基である。
【００２３】
式（ＩＶａ）の化合物は、式（Ｖ）により表されるポリペプチドを、式（ＶＩ）により表されるポリペプチドとカップリングすることにより得ることができ、
（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7  （Ｖ）
ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2  （ＶＩ）
またはこれらの化合物は塩であってもよい（式中、ＡＡ4〜ＡＡ10、ＰN、Ｐ4、Ｐ6およびＰ8は式（ＩＶａ）と同じである）。
【００２４】
本発明はまた、本発明の液相製造法に有用な式（ＩＩ）〜（ＶＩ）により表されるポリペプチドに関する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】ペプチド合成のためのＡＡ1およびＡＡ2の誘導体の合成についてのフロー略図である。
【図２】ペプチド合成のためのＡＡ2−ＡＡ3の誘導体の合成についてのフロー略図である。
【図３】Ａｃ−ＡＡ1−ＡＡ3の合成についてのフロー略図である。
【図４】ＡＡ6−ＡＡ7の誘導体の合成についてのフロー略図である。
【図５】ＡＡ5−ＡＡ7の誘導体の合成についてのフロー略図である。
【図６】Ｚ−ＡＡ4−ＡＡ7の合成についてのフロー略図である。
【図７】ＡＡ9−ＡＡ10の合成についてのフロー略図である。
【図８】Ｚ−ＡＡ8−ＡＡ10の合成についてのフロー略図である。
【図９】Ｚ−ＡＡ8−ＡＡ10の合成についてのフロー略図である。
【図１０】Ｚ−ＡＡ4−ＡＡ10の合成についてのフロー略図である。
【図１１】式ＩＩの前駆体の合成についてのフロー略図である。
【図１２】式ＩＩの前駆体からのデガレリクスの合成ならびに精製および凍結乾燥についてのフロー略図である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
以下、本発明についてより詳細に説明する。
【００２７】
脱保護ステップ
第１の態様では、本発明は、式Ａｃ−ＡＡ1−ＡＡ10−ＮＨ2を有するデガレリクスまたはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を調製するための液相法に関する。この方法は、式ＩＩ（（Ｐ1）ＡＡ1−ＡＡ2−ＡＡ3−ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2）のデガレリクス前駆体またはその塩もしくは溶媒和物から、保護基（Ｐ4）、（Ｐ6）および（Ｐ8）が存在する場合にはこれらの保護基を、溶解している前記前駆体および切断試薬を含む有機溶液中で切断するステップを含む。
【００２８】
式ＩＩのＡＡ1〜ＡＡ10は式（Ｉ）と同じ意味を有し、Ｐ1はアミノ保護基またはアセチル、好ましくはアセチルである。
【００２９】
Ｐ8はアミノ保護基である。好ましくは、Ｐ8はＥ．Ｇｒｏｓｓ＆Ｊ．Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ、Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｂｉｏｌｏｇｙ、第３巻：Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．、１９８１）に記載されているものなどの当技術分野で既知の任意の側鎖保護基である。適当な例としては、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣｂｚもしくはＺ）および置換Ｃｂｚ、例えば、２−ブロモ−ベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、２−クロロ−ベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−６−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニルおよびｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル、２，４−ジクロロベンジルオキシカルボニル、２，６−ジクロロベンジルオキシカルボニルなど；脂肪族ウレタン型保護基、例えば、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｔ−アミルオキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、２−（ｐ−ビフェニリル）−イソプロピルオキシカルボニルなど；シクロアルキルウレタン型保護基、例えば、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニルおよびシクロヘキシルオキシカルボニル；アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、トリフルオロアセチル（Ｔｆａ）、トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）、ベンジル（Ｂｎ）、トリフェニルメチル（Ｔｒｔ）、ｏ−ニトロフェニル−スルフェニル（Ｎｐｓ）、ｔ−ブチル−ジメチルシリルオキシカルボニル、［２−（３，５−ジメトキシフェニル）−プロピル−２−オキシカルボニル］（Ｄｄｚ）、２，２，２−トリクロロエチルオキシカルボニル（Ｔｒｏｃ）、ビフェニリルイソプロピルオキシカルボニル（Ｂｐｏｃ）およびｏ−ニトロベンジルオキシカルボニルが挙げられる。好ましい保護基は、Ｆｍｏｃ、ＢｏｃおよびＡｌｌｏｃであり、Ｂｏｃが最も好ましい。
【００３０】
Ｐ4は水素またはヒドロキシル保護基、好ましくはヒドロキシル保護基である。Ｓｅｒのヒドロキシル基（Ｐ4）は、好ましくはＣ4〜Ｃ6アルキル（例えば、ｔ−ブチル、シクロヘキシル）、アセチル（Ａｃ）、トリチル、ベンジル、ベンジルエーテル、例えばｐ−メトキシベンジル、または他の置換ベンジル、例えば、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−クロロベンジル、ｏ−クロロベンジルおよび２，６−ジクロロベンジル、テトラヒドロピラニル、トリ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルシリル、２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）、４−ジメチルカルバモイルベンジル、およびＯ−フェノキシアセチルエーテルである。
【００３１】
ｔ−ブチル、ベンジルおよび９−フルオレニルメチルエーテルが特に好ましく、ｔ−ブチルが最も好ましい。
【００３２】
Ｐ6は水素またはアミノ保護基、好ましくはアミノ保護基である。好ましい保護基には、Ｃ4〜Ｃ6アルキル（例えば、ｔ−ブチル、シクロヘキシル）、アセチル（Ａｃ）、トリチル、ベンジル、ベンジルエーテル、例えばｐ−メトキシベンジル、または他の置換ベンジル、例えば、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−クロロベンジル、ｏ−クロロベンジルおよび２，６−ジクロロベンジル、テトラヒドロピラニル、トリ（Ｃ1〜Ｃ6）アルキルシリル、２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）、４−ジメチルカルバモイルベンジルおよびＯ−フェノキシアセチルエーテルが含まれる。ｔ−ブチル、ベンジルおよび９−フルオレニルメチルエーテルが特に好ましく、ｔ−ブチルが最も好ましい。
【００３３】
保護基を除去するために使用する切断試薬は、保護基の性質に依存し、当技術分野で周知である。
【００３４】
Ｓｅｒヒドロキシル保護基Ｐ4のための好ましい切断試薬は、
・特に保護基としてのｔ−ブチルエーテルのためには、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ＨＣｌまたはメタンスルホン酸であり、
・特に保護基としてのベンジルエーテルのためには、Ｈ2／Ｐｄ−Ｃ、ＨＦまたはトリフルオロメタン−スルホン酸であり、
・特に保護基としての２−（メチルスルフィニル）ベンジルエーテルのためには、ＳｉＣｌ4／アニソールである。
【００３５】
アミノ保護基Ｐ8のための好ましい切断試薬は、
・特に保護基としてのｔ−ブチルカルバメートのためには、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ＨＣｌまたはメタンスルホン酸であり、
・特に保護基としてのベンジルカルバメートのためには、Ｈ2／Ｐｄ−Ｃ、ＨＦまたはトリフルオロメタン−スルホン酸であり、
・特に保護基としてのＦｍｏｃのためには、ピペリジン、ＤＢＵおよびＤＥＡである。
【００３６】
好ましい溶媒としては、ＤＣＭ、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ジオキサン、ＥｔＯＨ、ニートＨＦおよびＴＦＡが挙げられる。
【００３７】
以下の表１に示す種々の切断条件が特に好ましい。
【００３８】
【表１】
0006007187.tif 000004
【００３９】
典型的には、式ＩＩの前駆体を、室温（２０〜２５℃）で、追加の溶媒を用いてまたは用いずに、２０〜３０時間、好ましくは２４時間、切断試薬、好ましくはＴＦＡに溶解する。保護基を除去したら（好ましくは、転換が収率９５％超、最も好ましくは９９％超である）、粗製デガレリクスを、好ましくは緩衝水−エタノール混合液に注いで、その後の精製に供する粗製デガレリクスの緩衝溶液を得る。好ましいｐＨは、好ましくは２〜４の範囲、より好ましくは２．５〜３．５の範囲、最も好ましくはおよそ３である。
【００４０】
脱保護ステップの特定の実施形態を、図１２および実施例４（ステップ１２参照）に示す。
【００４１】
精製および凍結乾燥
粗製デガレリクスの溶液を、好ましくは分取逆相クロマトグラフィー（ＲＰＣ）などのクロマトグラフィー技術を使用して精製する。
【００４２】
次いで、得られた生成物を好ましくは凍結乾燥する。
【００４３】
３＋７カップリング
さらなる態様では、本発明はまた、ペプチドカップリング試薬および任意選択で有機アミン塩基の存在下で、液体試薬媒体中、式（ＩＩＩ）
（Ｐ1）ＡＡ1−ＡＡ2−ＡＡ3    （ＩＩＩ）
により表される第１のポリペプチドまたはその塩を、式（ＩＶ）
ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2    （ＩＶ）
により表される第２のポリペプチドまたはその塩とカップリングして、式（ＩＩ）により表されるデカペプチドを形成するステップを含む、式（ＩＩ）により表される中間体またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を液相製造する方法に関する。この場合、ＡＡ1〜ＡＡ10、Ｐ1、Ｐ4、Ｐ6およびＰ8は、式（ＩＩ）と同じである。塩には、塩酸塩などの酸性塩、ならびにアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩およびアンモニウム塩などの塩基性塩が含まれる。
【００４４】
カップリング反応は、２個のペプチドおよびペプチドカップリング試薬ならびに任意選択で有機アミン塩基が溶解した有機溶液中で行う。ペプチドカップリング添加剤および／または有機アミンも存在してよい。
【００４５】
有機溶媒、ペプチドカップリング試薬、ペプチドカップリング添加剤および有機アミン塩基は、ＬＰＰＳの技術分野で既知のもののいずれであってもよい。
【００４６】
典型的な有機溶媒は、ＴＨＦ、ＮＭＰ（Ｎ−メチルピロリドン）、ＤＣＭ、ＤＭＦ、ＤＭＳＯおよびこれらの混合物である。最も好ましい溶媒はＤＭＳＯである。
【００４７】
典型的なペプチドカップリング試薬は、ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＨＡＴＵ）、ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＨＢＴＵ）、ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（ＴＢＴＵ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＰｙＢＯＰ）、Ｎ，Ｎ−ビス−（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホン酸ジクロリド（ＢＯＰ−Ｃｌ）、ブロモ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＰｙＢｒｏＰ）、イソ−ブチルクロロギ酸塩（ＩＢＣＦ）、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１，３−ジイソプロピル−カルボジイミド（ＤＩＣ）、１−（ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣＤＩ）、Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、クロロギ酸イソプロピル（ＩＰＣＦ）、２−（５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミド）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（ＴＮＴＵ）、プロパンホスホン酸無水物（ＰＰＡＡ）および２−サクシニミド−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（ＴＳＴＵ）の１つまたは複数である。
【００４８】
好ましいカップリング試薬はＤＣＣである。ＤＣＣを好ましくは有機アミンなしで使用する。特に好ましい実施形態では、ＤＣＣをＤＭＳＯと組み合わせて使用する。ＤＣＣを、トリペプチドに対して、好ましくは１．３〜２、最も好ましくは１．４〜１．６当量の量で使用する。
【００４９】
別の好ましいカップリング試薬はＤＩＣであり、これは、好ましくは６−クロロ−ＨＯＢｔと組み合わせて、任意選択により銅塩と共に使用する。
【００５０】
典型的なペプチドカップリング添加剤は、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、６−クロロ−ＨＯＢｔおよび１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）である。
【００５１】
典型的な有機アミン塩基はＮＭＭ、ＤＩＰＥＡ、ＴＥＡおよびコリジンである。
【００５２】
溶媒としてＤＭＳＯおよびカップリング試薬としてＤＣＣを使用してカップリング反応を行うことが特に好ましい。
【００５３】
カップリングステップの特定の実施形態を図１１および実施例４（ステップ１１参照）に示す。
【００５４】
ヘプタペプチドの合成
式ＩＶ、すなわち、ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2の化合物は、好ましくは以下の化合物ＩＶａ：
（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2    （ＩＶａ）
の保護基ＰNを除去することにより得られる。
【００５５】
ＡＡ4〜ＡＡ10、Ｐ4、Ｐ6およびＰ8は上記と同じ意味を有するが、ＰNはＮ末端アミノ保護基である。好ましい実施形態では、ＰNは、例えば、水素およびパラジウム触媒（Ｐｄ／Ｃなど）を使用して、水素付加により除去することができる保護基である。最も好ましい保護基ＰNは、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）である。
【００５６】
ＰNの除去ステップの特定の実施形態を図１１および実施例４（ステップ１１参照）に示す。
【００５７】
式（ＩＶａ）の化合物は、式（Ｖ）により表されるポリペプチドを、式（ＶＩ）により表されるポリペプチドとカップリングすることにより得ることができ、
（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7   （Ｖ）
ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2    （ＶＩ）
またはこれらの化合物の一方もしくは両方は塩であってもよい（式中、ＡＡ4〜ＡＡ10、Ｐ4、Ｐ6およびＰ8は式（ＩＶａ）と同じである）。カップリング反応は、２個のペプチドおよびペプチドカップリング試薬が溶解した有機溶液中で行われる。ペプチドカップリング添加剤および／または有機アミンも存在してよい。上記と同じペプチドカップリング試薬、有機溶媒、ペプチドカップリング添加剤および有機アミンを使用することができる。好ましい実施形態では、任意選択の溶媒としての酢酸エチルと共に、ＤＣＣをカップリング試薬として使用する。
【００５８】
式Ｖのテトラペプチドの合成
好ましい実施形態では、式Ｖ、すなわち、（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7のテトラペプチドは、以下のステップ：
（ａ）（ＰN2）ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7（ＰC）（式中、Ｐ6は上述の式ＩＶａ中でと同じ意味を有し、（ＰN2）はＮ末端アミノ保護基または水素であり、（ＰC）は水素付加により切断することができるＣ末端カルボキシル保護基である）を用意するステップ；
（ｂ）アミノ保護基（ＰN2）が存在する場合、アミノ保護基（ＰN2）を除去するステップ；
（ｃ）Ｈ−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7（ＰC）に水素付加してＨ−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7を得るステップ；および
（ｄ）Ｈ−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7に（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）の活性化エステルを反応させて（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7（式中、（Ｐ4）はヒドロキシル保護基または水素であり、Ｐ6は水素またはアミノ保護基であり、ＰNは、好ましくは、例えば水素およびパラジウム触媒（Ｐｄ／Ｃなど）を使用して、水素付加により除去することができる保護基である）を得るステップ、
を含む方法により調製される。
【００５９】
最も好ましい保護基ＰNはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）である。
【００６０】
（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）の好ましい活性化エステルは４−ニトロフェニルエステル（ＯＮｐ）である。
【００６１】
したがって、好ましくは、ＡＡ5−ＡＡ7中間体においてベンジルエステルを除去して、Ｎ−およびＣ−無保護ＡＡ5−ＡＡ7の両方を得る。次いで、このトリペプチドをプレ活性化（ｐｒｅａｃｔｉｖａｔｅｄ）セリン（例えば、Ｚ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＮｐ）と反応させる。
【００６２】
デガレリクス製造
このように、本発明はデガレリクスの製造に関し、上で論じた脱保護ステップがこの製造の必須のステップである。好ましい実施形態では、この脱保護ステップは上で論じた３＋７カップリングの後に行われる。さらにより好ましい実施形態では、３＋７カップリングは上で論じたヘプタペプチドの合成の後に行われる、すなわち、本方法は以下のステップ：
ａ）ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2またはその塩もしくは溶媒和物を合成するステップ；
ｂ）ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2と（Ｐ1）ＡＡ1−ＡＡ2−ＡＡ3のカップリングにより（Ｐ1）ＡＡ1−ＡＡ2−ＡＡ3−ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2またはその塩もしくは溶媒和物を得るステップ；
ｃ）（Ｐ1）ＡＡ1−ＡＡ2−ＡＡ3−ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2またはその塩もしくは溶媒和物を脱保護してデガレリクスまたはその溶媒和物もしくは塩を得るステップ
を含む。
【００６３】
ＡＡ1〜ＡＡ10およびＰ1、Ｐ4、Ｐ6およびＰ8は上に定義したのと同じ意味を有する。
【００６４】
特に好ましい実施形態では、
・Ｐ1はアセチルであり；
・Ｐ4はＴＦＡにより切断可能な保護基、好ましくはｔＢｕであり；
・Ｐ6は水素またはＴＦＡにより切断可能な保護基、好ましくはｔＢｕであり；
・Ｐ8はＴＦＡにより切断可能な保護基、好ましくはＢｏｃである。
【００６５】
最も好ましい実施形態では、ヘプタペプチドを、上記ヘプタペプチド合成を使用して製造する。さらに、脱保護ステップの後に、好ましくは上記精製方法および凍結乾燥方法が続いて行われる。
【００６６】
デガレリクスまたはその前駆体の合成、特にヒドロオロチル部分を有するペプチドを含む全ステップでは、ｐＨを９より下、好ましくは８．５より下、さらに好ましくは８より下に保つことが好ましい。ｐＨ調整のためにＮａＨＣＯ3などの弱塩基を使用することが好ましい。カップリングステップ後の全ての抽出はｐＨ２〜９、好ましくはｐＨ２．５〜８（実験の部のステップ６、７、１０および１１参照）の範囲内で行うことが特に好ましい。抽出または洗浄ステップの前にｎ−ブタノールまたは２−ブタノールなどのＣ４〜５脂肪族アルコールを添加することがさらに好ましい。
【００６７】
中間体
本発明はまた、本発明の液相製造法に有用な式（ＩＩ）〜（ＶＩ）により表されるポリペプチドに関する。
【００６８】
式（ＩＩ）の好ましい実施形態
【００６９】
【化３】
0006007187.tif 000005
（Ｐ1）ＡＡ1−ＡＡ2−ＡＡ3−ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2  （ＩＩ）
【００７０】
【表２】
0006007187.tif 000006
【００７１】
好ましい実施形態にはこれらの化合物の塩が含まれる。
【００７２】
式（ＩＩＩ）の好ましい実施形態
【００７３】
【化４】
0006007187.tif 000007
（ＰN）ＡＡ1−ＡＡ2−ＡＡ3  （ＩＩＩ）
【００７４】
【表３】
0006007187.tif 000008
【００７５】
好ましい実施形態にはこれらの化合物の塩が含まれる。
【００７６】
式（ＩＶ）／（ＩＶＡ）の好ましい実施形態
【００７７】
【化５】
0006007187.tif 000009
（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7−ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2  （ＩＶ）
【００７８】
【表４】
0006007187.tif 000010
【００７９】
好ましい実施形態にはこれらの化合物の塩が含まれる。
【００８０】
式（Ｖ）の好ましい実施形態
【００８１】
【化６】
0006007187.tif 000011
（ＰN）ＡＡ4（Ｐ4）−ＡＡ5−ＡＡ6（Ｐ6）−ＡＡ7  （Ｖ）
【００８２】
【表５】
0006007187.tif 000012
【００８３】
好ましい実施形態にはこれらの化合物の塩および溶媒和物が含まれる。
【００８４】
式（ＶＩ）の好ましい実施形態
【００８５】
【化７】
0006007187.tif 000013
ＡＡ8（Ｐ8）−ＡＡ9−ＡＡ10−ＮＨ2  （ＶＩ）
【００８６】
【表６】
0006007187.tif 000014
【００８７】
保護基が存在しない場合、官能基は脱保護された基（例えば、＞ＮＨ）である。
【００８８】
好ましい実施形態にはこれらの化合物の塩が含まれる。
【００８９】
実験の部
実験の部で使用する物質
実験の部で使用する物質を以下に列挙する。
【００９０】
化学薬品：
アンモニア水ＮＨ3（ａｑ）
アセトニトリルＣ2Ｈ3Ｎ
ｎ−ブタノールＣ4Ｈ10Ｏ
２−ブタノールＣ4Ｈ10Ｏ
イソプロパノール（イソプロパノール）Ｃ3Ｈ8Ｏ
酢酸ブチルＣ5Ｈ12Ｏ2
エタノール、９９．９％Ｃ2Ｈ6Ｏ
メタノールＣＨ4Ｏ
ヘプタンＣ7Ｈ16
精製水Ｈ2Ｏ
酢酸エチルＣ3Ｈ8Ｏ2
酢酸Ｃ2Ｈ4Ｏ2
酢酸アンモニウムＣ2Ｈ7ＮＯ2
アセチルイミダゾールＣ5Ｈ6Ｎ2Ｏ
トリエチルアミンＣ6Ｈ15Ｎ
Ｎ−メチルモルホリンＣ5Ｈ11ＮＯ
Ｎ−メチルピロリドンＣ5Ｈ9ＮＯ
Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドＣ13Ｈ22Ｎ2
ジシクロヘキシルアミンＣ12Ｈ23Ｎ
Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミドＣ7Ｈ14Ｎ2
Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミンＣ4Ｈ12Ｎ
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドＣ3Ｈ7ＮＯ
ジメチルスルホキシドＣ2Ｈ6ＯＳ
１−ヒドロキシベンゾトリアゾールＣ6Ｈ5Ｎ3Ｏ
ｐ−ニトロフェノールＣ6Ｈ5ＮＯ3
Ｎ−ヒドロキシサクシニミドＣ4Ｈ5ＮＯ3
クロロギ酸イソブチルＣ5Ｈ9ＣｌＯ2
塩化ナトリウムＮａＣｌ
水酸化ナトリウム、ＮａＯＨ水溶液（ａｑ）
塩酸、ＨＣｌ水溶液（ａｑ）
リン酸Ｈ3ＰＯ4
硫酸水素ナトリウムＮａＨＳＯ4
炭酸水素ナトリウムＮａＨＣＯ3
メタンスルホン酸ＣＨ4ＳＯ3
トリフルオロ酢酸Ｃ2ＨＦ3Ｏ2
パラジウム炭素、５％Ｐｄ−Ｃ
水素Ｈ2
トルエンＣ7Ｈ8
【００９１】
出発物質：
Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−４−クロロフェニルアラニン  Ｂｏｃ−Ｄ−４Ｃｐａ−ＯＨ  Ｃ14Ｈ18ＮＯ4
Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−２−ナフチルアラニン  Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＨ  Ｃ18Ｈ21ＮＯ4
Ｄ−３−ピリジルアラニン塩酸塩  Ｈ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ×２ＨＣｌ  Ｃ8Ｈ12Ｃｌ2Ｎ2Ｏ2
Ｎ−α−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ−４−（ｔ−ブチルカルバモイル）−Ｄ−４−アミノフェニルアラニン  Ｂｏｃ−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−ＯＨ  Ｃ19Ｈ29Ｎ3Ｏ5
Ｎ−α−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ−４−（Ｌ−ヒドロオロチル）−４−アミノフェニルアラニン  Ｂｏｃ−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−ＯＨ  Ｃ19Ｈ24Ｎ4Ｏ7
ｐ−トシル酸ロイシンベンジルエステル  Ｈ−Ｌｅｕ−ＯＢｚｌ×ＴＯＳ  Ｃ20Ｈ27ＮＯ5
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｏ−ｔ−ブチル−セリン  Ｚ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ  Ｃ8Ｈ15ＮＯ5
Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−プロリン  Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ  Ｃ10Ｈ17ＮＯ4
Ｄ−アラニンアミド塩酸塩  Ｈ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2×ＨＣｌ  Ｃ3Ｈ8ＣｌＮＯ2
Ｎ−α−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ−ε−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｎ−ε−イソプロピル−リジン、ジシクロヘキシルアミン塩  Ｚ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−ＯＨ×ＤＣＨＡ  Ｃ34Ｈ57Ｎ3Ｏ6
【実施例１】
【００９２】
中間体Ａｃ（１−３）ＯＮａ：Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＮａ［７］の合成
Ｂｏｃ−Ｄ−４Ｃｐａ−ＯＨの活性化および単離
ステップ１（反応ステップ）
Ｂｏｃ−Ｄ−４Ｃｐａ−ＯＨ（２９９．７５ｇ）をｉＰｒＯＨ（３．５３ｋｇ）に溶解し、混合物を攪拌し、ＨＯＳｕ（０．１８４ｋｇ）およびＤＩＣ（０．１６４ｋｇ）を添加し、０℃で１時間攪拌する。沈殿を濾過して、ｉＰｒＯＨで洗浄する。固体を減圧下で乾燥させてＢｏｃ−Ｄ−４Ｃｐａ−ＯＳｕ［１］を得る。
【００９３】
Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＨの活性化および単離
ステップ２（反応ステップ）
Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＨ（３１５．３８ｇ）をｉＰｒＯＨ（５．３５ｋｇ）に溶解し、ＩＢＣ（１５７．０７ｇ）およびＮＭＭ（１１６．７ｇ）を添加する。追加のＮＭＭ（１０．１１ｇ）と共に−１０℃に冷却した後、水（４２ｍＬ）、ｉＰｒＯＨ（１．１ｋｇ）およびＨＯＳｕ（２３０．１４ｇ）の混合物を添加し、混合物を３０分間攪拌する。水（０．８２Ｌ）を添加し、沈殿を濾過し、ｉＰｒＯＨで洗浄し、減圧下で乾燥させてＢｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＳｕ［２］を得る。
【００９４】
Ｂｏｃ（２−３）ＯＨ：Ｂｏｃ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨの合成
ステップ３（反応ステップ）
Ｈ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ×２ＨＣｌ（０．２５１ｋｇ）およびステップ１からのＢｏｃ−Ｄ−４Ｃｐａ−ＯＳｕ［１］（０．３９７ｋｇ）をＤＭＳＯ（３．３３Ｌ）に溶解し、ＮＭＭ（３１８．８ｇ）を添加する。混合物を２０℃で６時間攪拌する。水（１７Ｌ）を添加し、ＨＣｌを添加することによりｐＨをｐＨ４．２５に調整する。沈殿を濾過し、水に分散させる。次いで、得られたスラリーを濾過し、水で洗浄する。固体を減圧下で乾燥させてＢｏｃ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ［３］を得る。
【００９５】
中間体Ａｃ（１−３）ＯＮａ：Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＮａ［７］（式ＩＩＩａの化合物）の合成
ステップ４（反応ステップ）
ステップ３からのＢｏｃ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ［３］（４４７．９３ｇ）をＡｃＯＥｔ（３．４Ｌ）およびＡｃＯＨ（６７５ｍＬ）の混合物に溶解し、混合物を５℃に冷却し、その後ＭＳＡ（６７２．７７ｇ）を添加する。反応を１０℃で２時間継続し、この溶液にＴＦＡ（１２１４．２８ｇ）を添加してＨ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ［４］を得る。
ステップ２からのＢｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＳｕ［２］（４１２．４４ｇ）をＨ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ［４］に添加し、２０℃で２４時間攪拌する。２５％ＮＨ3水（０．１５４Ｌ）およびｎ−ブタノール（４．５Ｌ）を添加し、混合物を４５℃で１時間攪拌する。
溶液を、
・水
・ｐＨ９．５の水（ＮａＯＨ水溶液を用い攪拌しながらｐＨを調整する）
・水
で洗浄する。
ＡｃＯＨ（４．５Ｌ）を有機相に添加し、溶液を減圧下で油状に濃縮する。油状物質をＡｃＯＨ（４．５Ｌ）に再溶解し、減圧下で再濃縮して油状のＢｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ［５］を得る。
Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ［５］を水（０．０９Ｌ）およびＡｃＯＨ（１．８Ｌ）に溶解する。ＭＳＡ（６７２．７７ｇ）を添加し、混合物を３５℃未満で２時間攪拌する。溶液をＴＥＡ（７７９．１６ｇ）で中和する。溶液を減圧下で油状に濃縮する。油状物質をトルエン（２．５Ｌ）に再溶解し、減圧下で油状に再濃縮する。最後のステップを繰り返してＨ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ［６］を得る。
Ｈ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ［６］をトルエン（２．０Ｌ）に溶解し、アセチルイミダゾール（１３２．１４ｇ）をトルエン（０．２５Ｌ）に溶解した溶液を添加する。溶液を２０℃で２時間攪拌し、水（０．１Ｌ）を添加する。
ｎ−ブタノール（４．５Ｌ）を添加し、有機混合物を３５℃にて
・５％ＮａＣｌ水溶液
・酸性ｐＨ５．５のメタノールおよび水（ＮａＯＨ水溶液を用い攪拌しながらｐＨを調整する）
・ｐＨ１１のメタノールおよび水（ＮａＯＨ水溶液を用い攪拌しながらｐＨを調整する）
・メタノールおよび１０％ＮａＣｌ水溶液
で洗浄する。
抽出した有機相を攪拌しながら、そこへヘプタン（１５Ｌ）を２０℃で１時間添加し、得られた懸濁液を２０℃で１時間攪拌しながら放置する。沈殿を濾過により単離し、ヘプタン（３．５Ｌ）に懸濁する。懸濁液を再度濾過する。ヘプタンによる最後の洗浄ステップおよび濾過を繰り返す。次いで、固体を減圧下で乾燥させてＡｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＮａ［７］を得る。
【００９６】
重要な中間体の特定
ステップ４  中間体Ａｃ（１−３）ＯＮａ［７］
品質管理        許容基準
性状            「白色からわずかに黄色の粉末（目視検査）」
同定（１）      「５８７．２±０．４Ｄａ（ＭＳ）」
同定（２）      「２Ｎａｌ０．９〜１．１、４Ｃｐａ０．９〜１．１、３Ｐａｌ０．９〜１．１（ＡＡＡ）」
キラル純度      Ｌ−２Ｎａｌ≦１．３％、Ｌ−４Ｃｐａ≦０．７％、Ｌ−３Ｐａｌ≦２．０％（ＧＣ−ＭＳ）
純度            ≧９０％（ＨＰＬＣ、面積％）
【実施例２】
【００９７】
中間体Ｚ（４−７）ＯＨ×ＤＣＨＡ：Ｚ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−ＯＨ×ＤＣＨＡ［１５］の合成
中間体Ｂｏｃ（６−７）ＯＢｚｌ：Ｂｏｃ−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−ＯＢｚｌの合成
ステップ５（反応ステップ）
Ｂｏｃ−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−ＯＨ（３７９．４５ｇ）をＮＭＰ（０．７６Ｌ）およびＡｃＯＥｔ（４．４ｋｇ）に溶解する。−４℃で冷却した後、ＩＢＣ（１５０．２ｇ）およびＮＭＭ（１０１．１ｇ）を添加し、溶液を−７℃で０．５時間攪拌してＢｏｃ−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−ＯＡｃｔ［８］を得る。
Ｈ−Ｌｅｕ−ＯＢｚｌ×ＴＯＳ（４９１．８８ｇ）をＮＭＰ（１．５Ｌ）に溶解し、ＡｃＯＥｔ（２．７ｋｇ）を添加し、引き続いてＮＭＭ（１２６．４ｇ）を添加する。その後この溶液をＢｏｃ−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−ＯＡｃｔ［８］に移し、−１０℃で１時間攪拌する。次いで、水（０．５Ｌ）を添加する。
反応混合物を２０℃にて
・ｐＨ８．５の水（ＮａＯＨ水溶液を用い攪拌しながらｐＨを調整する）
・ｐＨ２．０の水（ＨＣｌ水溶液を用い攪拌しながらｐＨを調整する）
・水
で洗浄する。
【００９８】
有機相を減圧下で油状に濃縮する。油状物質をＡｃＯＥｔ（０．６ｋｇ）に再溶解し、減圧下で油状に再濃縮する。残存している油状物質をＡｃＯＥｔ（０．６ｋｇ）に溶解する。２０℃で攪拌しながらヘプタン（１５．５Ｌ）を添加する。沈殿を濾過により単離し、ヘプタンで洗浄し、その後減圧下で乾燥させてＢｏｃ−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−ＯＢｚｌ［９］を得る。
【００９９】
Ｂｏｃ−（５−７）−ＯＢｚｌ：Ｂｏｃ−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−ＯＢｚｌの合成
ステップ６（反応ステップ）
ステップ５からのＢｏｃ−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−ＯＢｚｌ［９］（５８２．７ｇ）をＡｃＯＥｔ（３．１５ｋｇ）に溶解する。ＭＳＡ（４８１ｇ）を添加し、１５℃未満で５時間攪拌し、ＴＥＡ（４０６ｇ）を添加する。ＤＭＦ（０．３３３ｋｇ）を添加し、引き続いてＴＥＡ（１０１ｇ）およびＮＭＭ（５１ｇ）を添加してＨ−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−ＯＢｚｌ［１０］を得る。
Ｂｏｃ−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−ＯＨ（４６２．４６ｇ）をＤＭＦ（２．０９ｋｇ）およびＡｃＯＥｔ（１．４４ｋｇ）に溶解する。ＩＢＣ（１５０．２４ｇ）およびＮＭＭ（１１１．２７ｇ）を添加し、−１０℃で０．５時間攪拌してＢｏｃ−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−ＯＡｃｔ［１１］を得る。
Ｈ−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−ＯＢｚｌ［１０］をＢｏｃ−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−ＯＡｃｔ［１１］に添加し、−１０℃で１．５時間攪拌する。次いで、ＡｃＯＥｔ（５．４ｋｇ）およびｎ−ブタノール（６．０Ｌ）を添加する。
有機相を２０℃で
・約ｐＨ８の５％ＮａＨＣＯ3水溶液（ＮａＨＣＯ3水溶液を用い攪拌しながらｐＨを調整する）
・ｐＨ２．５の１０％ＮａＣｌ水溶液（Ｈ3ＰＯ4水溶液を用い攪拌しながらｐＨを調整する）
で洗浄する。
【０１００】
ＤＭＦ（０．９Ｌ）を有機相に添加し、次いで、これを減圧下で油状に濃縮する。溶液を攪拌しながら水（１４Ｌ）に注ぐ。沈殿をフィルター上で単離し、水で洗浄する。固体を減圧下で乾燥させてＢｏｃ−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−ＯＢｚｌ［１２］を得る。
【０１０１】
中間体Ｚ（４−７）ＯＨ×ＤＣＨＡ：Ｚ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−ＯＨ×ＤＣＨＡ（式Ｖａの化合物）の合成
ステップ７（反応ステップ）
ステップ６からのＢｏｃ−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−ＯＢｚｌ［１２］（８８５．０２ｇ）をＭＳＡ（９６１．１ｇ）およびＡｃＯＥｔ（７．２ｋｇ）の混合物に添加し、２−ブタノール（２Ｌ）を添加し、得られた混合物を０℃で６時間攪拌する。次いで、ＭＳＡをＴＥＡ（９０９．０ｇ）で中和する。
２−ブタノール（１Ｌ）に分散した５％Ｐｄ／Ｃ（８８．５ｇ）を添加し、混合物に減圧下２０℃で３時間水素付加する。次いで、Ｐｄ／Ｃを濾過し、２−ブタノールで洗浄してＨ−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−ＯＨ［１３］を含む溶液を得る。
Ｚ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（４１３．５ｇ）をＭｅＣＮ（２．５Ｌ）に溶解し、溶液を−５℃に冷却する。ＨＯＮｐ（１９５ｇ）を添加し、引き続いてＤＣＣ（２７８．５ｇ）を添加し、混合物を２０℃で２４時間攪拌する。次いで、混合物を濾過し、ＭｅＣＮで洗浄してＺ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＮｐ［１４］を得る。ＮＭＭ（３５４．２ｇ）、ＤＭＦ（４．７５ｋｇ）およびＺ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−ＯＮｐ［１４］をＨ−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−ＯＨ［１３］の溶液に添加し、混合物を２０℃で３日間攪拌しながら放置する。
得られた混合物を
・ｐＨ２．５の１０％ＮａＣｌ水溶液（ＨＣｌ水溶液を用い攪拌しながらｐＨを調整する）
・酸性ｐＨ（ｐＨ２．５）の水（ＨＣｌ水溶液を用い攪拌しながらｐＨを調整する）
・７．５％ＮａＨＣＯ3水溶液
・ｐＨ２．５の５％ＮａＣｌ水溶液（ＨＣｌ水溶液を用い攪拌しながらｐＨを調整する）
・１０％ＮａＣｌ水溶液
で洗浄する。
【０１０２】
最終有機相にＤＣＨＡ（１８１ｇ）を添加し、有機相を減圧下で油状に濃縮する。油状物質をｉＰｒＯＨ（３．１４ｋｇ）に再溶解し、減圧下で油状に再濃縮する。残存している油状物質をｉＰｒＯＨ（３．１４ｋｇ）に再溶解し、攪拌しながら溶液をＡｃＯＥｔ（３１．５ｋｇ）に注ぐ。沈殿するまで攪拌を２０℃で１時間継続し、次いで、沈殿を濾過により単離し、ＡｃＯＥｔで洗浄する。固体を減圧下３０℃で３０時間乾燥させてＺ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−ＯＨ×ＤＣＨＡ［１５］を得る。中間体Ｚ（４−７）ＯＨ×ＤＣＨＡ［１５］の純度は８０％以上である（ＨＰＬＣ）。
【０１０３】
ステップ７  中間体Ｚ（４−７）ＯＨ［１５］
品質管理        許容基準
性状            「白色から黄色の粉末（目視検査）」
同定（１）      「９７２．５±０．４Ｄａ（ＭＳ）」
同定（２）      「Ｓｅｒ０．９〜１．１、４Ａｐｈ１．８〜２．２、Ｌｅｕ０．９〜１．１（ＡＡＡ）」
キラル純度      Ｄ−Ｓｅｒ≦２．０％、Ｄ−４Ａｐｈ４７〜５３％、Ｄ−Ｌｅｕ≦０．７％（ＧＣ−ＭＳ）
純度（１）      ［４Ａｐｈ5（ヒダントインアセチル）］Ｚ（４−７）ＯＨ  ＤＣＨＡ≦０．５％（ＨＰＬＣ、面積％）
純度（２）      ≧８０％（ＨＰＬＣ、面積％）
【実施例３】
【０１０４】
中間体Ｈ（８−１０）ＮＨ2：Ｈ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［２１］の合成
Ｂｏｃ（９−１０）ＮＨ2：Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2の合成
ステップ８（反応ステップ）
Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ（２２６．０２ｇ）をｉＰｒＯＨ（１．７３ｋｇ）に溶解する。反応混合物を−５℃に冷却する。ＩＢＣ（１４３．４ｇ）およびＮＭＭ（１０６．２ｇ）を添加し、混合物を５℃で０．５時間攪拌してＢｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＡｃｔ［１６］を得る。
Ｈ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2×ＨＣｌ（１２４．５７ｇ）をｉＰｒＯＨ（１．５７ｋｇ）およびＮＭＭ（１０６．２ｇ）の混合物に懸濁する。懸濁液をＢｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＡｃｔ［１６］に添加する。反応混合物を１０℃で３時間攪拌しながら放置する。次いで、ＤＭＥＤＡ（１０．６ｍｌ）を添加する。混合物を濾過し、濾液を減圧下で油状に濃縮する。油状物質をＡｃＯＥｔ（１．１２５ｋｇ）で再溶解および再濃縮する。
残留油をＡｃＯＥｔ（１．８ｋｇ）およびｎ−ブタノール（０．６Ｌ）の混合物に溶解する。有機相を
・ｐＨ２．５の１５％ＮａＣｌ水溶液（ＨＣｌ水溶液を用いて攪拌しながらｐＨを調整する）
・ｐＨ９．５の１５％ＮａＣｌ水溶液（ＮａＯＨ水溶液を用いて攪拌しながらｐＨを調整する）
で洗浄する。
有機相を減圧下で濃縮し、ＡｃＯＥｔ（１．０８ｋｇ）に再溶解し、油状に再濃縮する。
ＡｃＯＥｔ（０．３３ｋｇ）およびヘプタン（０．７５Ｌ）の混合物を２０℃で添加し、１６時間攪拌する。得られた沈殿を濾過し、フィルター上にてＡｃＯＥｔおよびヘプタンの混合物で洗浄する。次いで、固体を減圧下で乾燥させてＢｏｃ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［１７］を得る。
【０１０５】
中間体Ｈ（８−１０）ＮＨ2：Ｈ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（式ＶＩａの化合物）の合成
ステップ９（反応ステップ）
ステップ８からのＢｏｃ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［１７］（３１３．８９ｇ）をＭＳＡ（５２８．６１ｇ）およびｉＰｒＯＨ（０．７８５ｋｇ）の混合物に溶解し、溶液を４５℃で１時間攪拌する。次いで、混合物をＴＥＡ（６０７．１４ｇ）で中和してＨ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［１８］を得る。
Ｚ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−ＯＨ×ＤＣＨＡ（６０３．８３ｇ）をＡｃＯＥｔ（１．１７ｋｇ）に懸濁し、
・１２％ＮａＨＳＯ4水溶液
・水
・１５％ＮａＣｌ水溶液
で洗浄する。
抽出したＺ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−ＯＨ［１９］の有機相をＨ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［１８］に添加する。ＡｃＯＥｔ（０．１３５ｋｇ）に溶解したＨＯＢｔ（１８３．７９ｇ）およびＤＣＣ（２２７．０ｇ）を添加し、混合物を２０℃で０．５時間攪拌する。次いで、水（０．２Ｌ）を添加する。混合物を濾過し、ＡｃＯＥｔで洗浄する。合わせた濾液を減圧下で油状に濃縮する。油状物質をＡｃＯＥｔ（０．９ｋｇ）に溶解し、濾過し、溶液を
・ｐＨ２．５の水（ＨＣｌ水溶液を用い攪拌しながらｐＨを調整する）
・ｐＨ９の水（ＮａＯＨ水溶液を用い攪拌しながらｐＨを調整する）
・ｐＨ７の１０％ＮａＣｌ水溶液（ＨＣｌ水溶液またはＮａＯＨ水溶液を用い攪拌しながらｐＨを調整する）
で洗浄する。
有機相を減圧下で濃縮してＺ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［２０］を得る。
Ｚ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［２０］をエタノール（０．０４ｋｇ）および水（０．５Ｌ）に溶解し、５％Ｐｄ／Ｃ（５０ｇ）を添加する。６ＭのＨＣｌを添加することによりスラリーをｐＨ２．５に酸性化し、２０℃で水素付加する。反応完了後、触媒を濾過により除去し、３２％ＮａＯＨを添加することによりｐＨをｐＨ７．０に上げる。その後、エタノールを減圧下で蒸発により除去する。ｎ−ブタノール（１Ｌ）を得られた水相に添加し、ＮａＯＨ水溶液でｐＨをアルカリ性ｐＨ９に調整し、抽出を開始する。このステップを繰り返す。合わせた有機相を減圧下で油状に濃縮する。
油状物質をＡｃＯＢｕ（０．５Ｌ）に溶解し、減圧下２０℃で濃縮し、ＡｃＯＢｕ（０．５Ｌ）に再溶解する。次いで、ヘプタン（２Ｌ）を５０℃で１時間かけて添加する。懸濁液を０℃で１６時間攪拌しながら放置する。沈殿を濾過により単離し、ヘプタンで洗浄する。最後に、固体を減圧下で乾燥させてＨ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［２１］を得る。中間体Ｈ（８−１０）ＮＨ2［２１］の純度は９５％以上である（ＨＰＬＣ）。
【０１０６】
ステップ９  中間体Ｈ（８−１０）ＮＨ2［２１］
品質管理        許容基準
性状            「白色からわずかに黄色の粉末（目視検査）」
同定（１）      「４５６．３±０．４Ｄａ（ＭＳ）」
同定（２）      「Ｌｙｓ（ｉＰｒ）０．９〜１．１、Ｐｒｏ０．９〜１．１、Ａｌａ０．９〜１．１（ＡＡＡ）」
キラル純度      Ｄ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）≦０．３％、Ｄ−Ｐｒｏ≦０．３％、Ｌ−Ａｌａ≦０．５％（ＧＣ−ＭＳ）
純度            ≧９５％（ＨＰＬＣ、面積％）
【実施例４】
【０１０７】
最終中間体（式ＩＩの化合物）へのセグメント縮合
中間体Ｚ（４−１０）ＮＨ2：Ｚ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［２２］（式ＩＶｇの化合物）
ステップ１０（反応ステップ）
ステップ７からのＺ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−ＯＨ×ＤＣＨＡ［１５］（１１５３．４１ｇ）をＤＭＦ（２．１ｋｇ）に溶解する。次いで、ＨＯＢｔ（１５３．２ｇ）をＡｃＯＥｔ（６．９ｋｇ）およびステップ９からのＨ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［２１］（５６９．５ｇ）と共に添加する。全固体が溶解したら、ＭＳＡ（９６．１ｇ）を添加する。溶液を５℃未満に冷却し、ＡｃＯＥｔ（０．８１０ｋｇ）に溶解したＤＣＣ（３０９．５ｇ）を添加する。温度を２０℃に上げ、反応を２４時間継続する。Ｚ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−ＯＨ×ＤＣＨＡ［１５］の転換は９６％以上である（ＨＰＬＣ）。ＡｃＯＥｔ（４．９５ｋｇ）および水（５．５Ｌ）を添加し、混合物を攪拌し、濾過する。攪拌しながら、７．５％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）（３５Ｌ）を濾液に添加する。相を分離し、有機層を
・７．５％ＮａＨＣＯ3
・ｐＨ３の水（ＨＣｌ水溶液を用い攪拌しながらｐＨを調整する）
・水
でさらに洗浄する。
最終有機相を減圧下で油状に濃縮する。油状物質をＥｔＯＨ（０．４０５ｋｇ）、その後ＡｃＯＥｔ（０．４５ｋｇ）で再濃縮する。残存している油状物質をＥｔＯＨ（０．４０５ｋｇ）に溶解し、ＡｃＯＥｔ（０．４５ｋｇ）およびＡｃＯＢｕ（４．６Ｌ）を添加する。溶液を２０℃で１時間かけてヘプタン（２７．６Ｌ）に添加する。次いで、沈殿を濾過し、ヘプタンで洗浄する。固体を減圧下で最大限に乾燥させてＺ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［２２］を得る。Ｚ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［２２］の純度は７０％以上である（ＨＰＬＣ）。
【０１０８】
最終中間体Ａｃ（１−１０）ＮＨ2：Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［２４］
ステップ１１（反応ステップ）
ステップ１０からのＺ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［２２］（１４０９．６７ｇ）をＥｔＯＨ（１０．９８ｋｇ）および水（３．２Ｌ）の混合物に添加し、溶液が均質になるまで攪拌する。５％Ｐｄ／Ｃ（２１１ｇ）を添加する。ＨＣｌ水溶液によりｐＨ２．５にｐＨ制御しながら２０℃で混合物に水素付加する。
触媒を濾過により除去し、ＮａＯＨ水溶液によりｐＨをｐＨ３．８に調整する。濾液を減圧下で油状に濃縮する。ＥｔＯＨ（４．７ｋｇ）を油状物質に添加し、再濃縮する。次いで、ＡｃＯＥｔ（５．４ｋｇ）を油状物質に添加し、再濃縮し、この工程を再度繰り返してＨ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［２３］を得る。
Ｈ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［２３］をＡｃＯＥｔ（１．１２５ｋｇ）に分散させ、次いで、ＨＯＢｔ（１５３．１６ｇ）を添加し、混合物を０℃に冷却する。ステップ４からのＡｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＮａ［７］（６０９．０５ｇ）をＤＭＳＯ（２．５Ｌ）に溶解し、この溶液をＨ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［２３］を含むスラリーと混合し、ＡｃＯＥｔ（０．４５ｋｇ）に溶解したＤＣＣ（３０９．５ｇ）を添加する。混合物を５℃で２４時間攪拌する。［２３］の転換は９６％以上である（ＨＰＬＣ）。
水（１５０ｍＬ）およびＤＭＳＯ（０．５Ｌ）を添加し、攪拌を２０℃で３時間より長く継続する。沈殿を濾過し、ＡｃＯＥｔおよびＤＭＳＯの混合物で洗浄する。濾液を合わせて、ｎ−ブタノール（１７Ｌ）を添加する。有機溶液を
・ｐＨ２．５の水（ＨＣｌ水溶液を用い攪拌しながらｐＨを調整する）
・７％ＮａＨＣＯ3（ａｑ）
・１０％ＮａＣｌ水溶液（必要に応じて、ＨＣｌ水溶液を用い攪拌しながら混合物のｐＨをｐＨ７．０に中和する）
で洗浄する。
【０１０９】
ＤＭＦ（４．７５ｋｇ）を添加し、有機相を減圧下で油状に濃縮する。油状物質を激しい攪拌下、２０℃で１時間かけて、水（５０Ｌ）にゆっくり添加する。沈殿をフィルター上で単離し、水で２回洗浄する。その後、固体を減圧下で乾燥させてＡｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［２４］［最終中間体］を得る。［２４］の純度は７０％以上である（ＨＰＬＣ）。
【実施例５】
【０１１０】
最終中間体Ａｃ（１−１０）ＮＨ2の粗製デガレリクス［２５］への脱保護
ステップ１２（反応ステップ）
ステップ１１からのＡｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（ｔＢｕＣｂｍ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ、Ｂｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［２４］（式ＩＩｂの化合物）（１８４４．５９ｇ）を２０℃でＴＦＡ（２８．３ｋｇ）に溶解する。溶液を２０℃で２４時間攪拌する（３個の保護基の除去）。［２４］の転換は９９％以上である（ＨＰＬＣ）。
【０１１１】
次いで、反応混合物を水（７４Ｌ）、ＡｃＯＮＨ4（１９．１ｋｇ）、ＡｃＯＨ（１８．４Ｌ）およびＥｔＯＨ（１４．５２ｋｇ）の冷溶液（１０℃未満）と混合する。２つの溶液の混合中、温度を２５℃未満に保つ。必要に応じてＴＦＡまたはＡｃＯＮＨ4により最終溶液のｐＨをｐＨ３に調整して、Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４Ｃｐａ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ−４Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−Ｄ−４Ａｐｈ（Ｃｂｍ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2［２５］［粗製デガレリクス］の溶液を得る。
【０１１２】
ステップ１３（精製および凍結乾燥）
粗製デガレリクスの溶液を、逆相カラムを通して吸い上げる。デガレリクスをＥｔＯＨ／水中０．１２％ＴＦＡの勾配によりカラムから溶離する。純度９５％以上の分画をＥｔＯＨ／水中１％ＡｃＯＨの勾配を使用して逆相カラムで再精製する。高純度の分画を凍結乾燥する。
【図１】
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【図２】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図３】
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【図８】
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