(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
再構成された場合に、
ａ）２５〜１００ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ−１抗体、
ｂ）約７０ｍｇ／ｍＬのスクロース、
ｃ）約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、および
ｄ）ｐＨ５．０〜６．０の約１０ｍＭのヒスチジンバッファーを含む、抗ヒトＰＤ−１抗体の安定な凍結乾燥医薬製剤であって、該抗体が、
ｉ）配列番号３６のアミノ酸残基２０〜２３７を含む軽鎖と、
ｉｉ）配列番号３１のアミノ酸残基２０〜４６６を含む重鎖を含む、前記凍結乾燥医薬製剤。
【請求項２】
該抗ヒトＰＤ−１抗体が再構成溶液中に約２５ｍｇ／ｍＬで存在する、請求項１記載の安定な凍結乾燥医薬製剤。
【請求項３】
再構成溶液が約５．５のｐＨを有する、請求項１記載の安定な凍結乾燥医薬製剤。
【請求項４】
再構成溶液が、２５．０ｍｇ／ｍｌの抗ヒトＰＤ−１抗体、１．５５ｍｇ／ｍｌのヒスチジン、０．２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０、７０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含み、ｐＨ５．５であることを特徴とする、請求項１記載の安定な凍結乾燥医薬製剤。
【請求項５】
該抗体が、ｈ４０９Ａ１１である、請求項１記載の安定な凍結乾燥医薬製剤。
【請求項６】
ａ）２５〜１００ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ−１抗体、
ｂ）約７０ｍｇ／ｍＬのスクロース、
ｃ）約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、および
ｄ）ｐＨ５．０〜６．０の約１０ｍＭのヒスチジンバッファーを含む、抗ヒトＰＤ−１抗体の安定な液体医薬製剤であって、該抗体が、
ｉ）配列番号３６のアミノ酸残基２０〜２３７を含む軽鎖と、
ｉｉ）配列番号３１のアミノ酸残基２０〜４６６を含む重鎖を含む、安定な液体医薬製剤。
【請求項７】
１０ｍＭのヒスチジン（ｐＨ５．５）、７％のスクロース、０．０２％のポリソルベート８０及び２５．０ｍｇ／ｍｌの抗ヒトＰＤ−１抗体を含む、請求項６記載の安定な液体医薬製剤。
【請求項８】
該抗体が、ｈ４０９Ａ１１である、請求項６記載の安定な液体医薬製剤。
【請求項９】
癌の治療を必要とするヒト対象において癌を治療する方法のための医薬製剤の製造における抗ヒトＰＤ−１抗体の使用であって、該方法は抗ヒトＰＤ−１抗体の安定な医薬製剤の有効量を投与することを含み、当該医薬製剤は、
ａ）２５〜１００ｍｇ／ｍＬの抗ヒトＰＤ−１抗体、
ｂ）約７０ｍｇ／ｍＬのスクロース、
ｃ）約０．２ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、および
ｄ）ｐＨ５．０〜６．０の約１０ｍＭのヒスチジンバッファーを含み、該抗体が、
ｉ）配列番号３６のアミノ酸残基２０〜２３７を含む軽鎖と、
ｉｉ）配列番号３１のアミノ酸残基２０〜４６６を含む重鎖を含み、
前記安定な医薬製剤は、凍結乾燥医薬製剤から再構成されるか、または、予め凍結乾燥されていない液体医薬製剤であることを特徴とする、前記使用。
【請求項１０】
前記有効量が、治療の経過にわたって約１４日または約２１日の間隔で投与される約１．０、３．０および１０．０ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される用量を含む、請求項９記載の使用。
【請求項１１】
前記有効量が、治療の経過にわたって２週間または３週間ごとの間隔で投与される５．０または１０．０ｍｇ／ｋｇの用量を含む、請求項９記載の使用。
【請求項１２】
該対象がメラノーマに罹患しており、前記有効量が、治療の経過にわたって3週間ごとの間隔で投与される３．０ｍｇ／ｋｇの用量を含む、請求項９記載の使用。
【請求項１３】
対象が治療未経験である、請求項９記載の使用。
【請求項１４】
該医薬製剤が３０分間の静脈内注射によって投与される、請求項９記載の使用。
【請求項１５】
該対象がメラノーマに罹患している、請求項９記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
本出願は、２０１１年３月３１日付け出願の米国仮特許出願第６１／４７０，１２１号（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）の利益を主張するものである。
【０００２】
発明の分野
本発明は、ヒト・プラグラム死受容体ＰＤ−１に対する抗体またはその抗原結合性フラグメントの安定製剤に関する。本発明は更に、ヒトＰＤ−１に対する抗体またはその抗原結合性フラグメントの安定製剤での種々の癌および慢性感染の治療方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
ＣＤ２８共刺激遺伝子ファミリーのメンバーであるプログラム死（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ  Ｄｅａｔｈ）１（ＰＤ−１）は、ナイーブＴ、ＢおよびＮＫＴ細胞上で中等度に発現され、リンパ球、単球および骨髄性細胞上のＴ／Ｂ細胞受容体シグナリングによりアップレギュレーションされる（１）。ＰＤ−１は、異なる発現プロファイルを有する２つの公知リガンド、すなわち、ＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）およびＰＤ−Ｌ２（Ｂ７−ＤＣ）を有する。ＰＤ−Ｌ２の発現は比較的限定的であり、活性化樹状細胞、マクロファージおよび単球上ならびに血管内皮細胞上で見出される（１−３）。一方、ＰＤ−Ｌ１は、ナイーブリンパ球上を含め、より広範に発現され、その発現は、活性化ＢおよびＴ細胞、単球ならびに樹状細胞上で誘導される。更に、ｍＲＮＡにより、それは、血管内皮細胞、上皮細胞および筋肉細胞を含む非リンパ組織により発現される
ＰＤ−１は免疫調節および末梢性免疫寛容の維持における重要な担い手として認識されている。マウスにおいて、これは、ＰＤ−１細胞質ドメイン内のＩＴＩＭ配列が関わるＴ細胞活性化を負にモジュレーションするためには、末梢組織上のＰＤ−Ｌ１発現および潜在的に自己反応性のＴ細胞上のＰＤ−１の結合を要することが示された（１，４）。
【０００４】
具体的な遺伝的背景に応じて、ｐｄｃｄｌ−／−マウスはループス様現象または拡張性心筋症を自然発生する（５，６）。更に、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路の抗体誘発性遮断がＮＯＤマウスにおける自己免疫インスリン炎および糖尿病の発生開始を加速することが示された（７）。
【０００５】
種々の組織において生じるヒトの癌はＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２を過剰発現することが判明した。例えば卵巣、腎臓、結腸直腸、膵臓、肝臓癌およびメラノーマの大きなサンプルセットにおいて、ＰＤ−Ｌ１発現が、後続治療には無関係に、予後不良および全体的な生存の低下と相関することが示された（１５−２６）。同様に、腫瘍浸潤性リンパ球上のＰＤ−１発現は乳癌およびメラノーマにおける機能不全Ｔ細胞の指標となり（２７−２８）、腎臓癌における予後不良と相関することが判明した（２９）。一次患者サンプルを使用して、インビトロでのＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１の遮断がヒト腫瘍特異的Ｔ細胞活性化およびサイトカイン産生の増強をもたらすことが示された（３０）。その結果、幾つかのマウス同系腫瘍モデルにおいて、ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１の遮断は有意に腫瘍成長を抑制し、または完全な退縮を誘導した。
【０００６】
ＰＤ−１遮断性ｍＡｂ（ｈ４０９Ａ１１）が発見され、ヒト癌患者および慢性ウイルス感染患者の治療に使用するために開発された（同時係属出願ＷＯ２００８／１５６７１２に記載されている）。
【０００７】
抗原特異的Ｔ細胞機能不全または寛容は、インターロイキン２（ＩＬ−２）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）α、パーフォリン、インターフェロン（ＩＦＮ）γ（８）を産生する可能性の累積的喪失、およびＴ細胞受容体刺激に対する増殖性応答を惹起し得ないことにより例証される（１）。ＰＤ−１経路は抗原特異的Ｔ細胞寛容を制御するものであり、有効なＴ細胞免疫を制御し逃れるためにウイルス感染および腫瘍発生において利用されることが判明した。
【０００８】
ＬＣＭＶ（マウス）、ＨＩＶ、ＨＢＶまたはＨＣＶ（ヒト）による慢性感染においては、抗原特異的Ｔ細胞は、アネルギーまたは機能不全の状態に相関する異常に高いレベルのＰＤ−１を発現することが判明した（９）。インビボ（ＬＣＭＶ）またはインビトロ（ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ）でのＰＤ−１  −  ＰＤＬ１相互作用の遮断は抗ウイルスＴ細胞活性を回復させることが示された（１０−１２）。サル免疫不全ウイルスに最近感染したマカクにおけるＰＤ−１遮断はウイルス負荷の大幅な低下および生存の向上をもたらした（１３）。同様に、長期ＳＩＶ感染アカゲザルを使用するもう１つの研究において、ウイルス負荷の低下が確認された（１４）。
【０００９】
総合的には、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１経路は癌治療用の抗体治療剤の開発のための十分に実証された標的である。抗ＰＤ−１抗体は、慢性ウイルス感染を標的化するのにも有用である。急性ウイルス感染後に生成した記憶ＣＤ８＋Ｔ細胞は非常に機能的であり、防御免疫の重要な成分に相当する。一方、慢性感染は、しばしば、ウイルス特異的Ｔ細胞応答の種々の度合の機能不全（消耗）により特徴づけられ、この欠損は、持続性病原体を宿主が排除し得ない主要理由である。感染の初期段階に最初に機能的エフェクターＴ細胞が生じるが、それは慢性感染の経過中に次第に機能を喪失する。Ｂａｒｂｅｒら（Ｂａｒｂｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ  ４３９：６８２−６８７（２００６））は、ＬＣＭＶの実験株に感染したマウスが、血液および他の組織において高レベルのウイルスを示す慢性感染を発生することを示した。これらのマウスは最初は強力なＴ細胞応答を示したが、最終的には、Ｔ細胞消耗後に感染に屈した。該著者は、慢性感染マウスにおけるエフェクターＴ細胞の数および機能の低下が、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１との相互作用を遮断する抗体を注射することにより逆転されうることを見出した。
【００１０】
ＰＤ−１はＨＩＶ感染個体からのＴ細胞上で高度に発現されることも示されており、その受容体発現はＴ細胞機能の障害および疾患進行と相関する（Ｄａｙら，Ｎａｔｕｒｅ  ４４３：３５０−４（２００６）；Ｔｒａｕｔｍａｎｎ  Ｌ．ら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１２：１１９８−２０２（２００６））。どちらの研究においても、リガンドＰＤ−Ｌ１に対する抗体を使用するＰＤ−１経路の遮断はＨＩＶ特異的ＩＦＮガンマ産生細胞の増殖をインビトロで有意に増強した。
【００１１】
他の研究はまた、ウイルス感染の制御におけるＰＤ−１経路の重要性を示している。ＰＤ−１ノックアウトマウスは、野生型マウスより良好な、アデノウイルス感染の制御を示す（Ｉｗａｉら，Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９８：３９−５０（２００３））。また、ＨＢＶトランスジェニック動物へのＨＢＶ特異的Ｔ細胞の養子移入は肝炎の発生を開始させた（Ｉｓｏｇａｗａ  Ｍ．ら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２３：５３−６３（２００５））。肝臓における抗原認識および肝細胞によるＰＤ−１のアップレギュレーションの結果として、これらの動物の病態は変動する。
【００１２】
サイトカイン活性を遮断するために、治療用抗体が使用されうる。治療用物質としてインビボで抗体を使用する際の重大な問題は該抗体の免疫原性である。ほとんどのモノクローナル抗体は非ヒト種に由来するため、ヒトにおける反復使用は該治療用抗体に対する免疫応答の生成をもたらす。そのような免疫応答は少なくとも治療効力の喪失を、そして潜在的に、致命的なアナフィラキシー応答を引き起こす。したがって、ヒトにおける免疫原性が低減された抗体、例えばヒト化または安全ヒト抗体が、ヒト対象の治療には好ましい。ヒトＰＤ−１に特異的な典型的な治療用抗体は、共同で譲渡された米国特許出願公開番号ＵＳ２０１０／０２６６６１７および国際特許公開番号ＷＯ２００８／１５６７１２（それらの開示の全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に開示されている。
【００１３】
ヒト対象において使用するための抗体は、使用前に貯蔵され投与地点へ輸送される必要がある。対象における所望のレベルの抗体薬を再現可能に得るためには、該薬物が、該薬物の生物活性を維持する製剤中で貯蔵されることを要する。医薬用の、例えば種々の癌および感染症の治療のための、抗ヒトＰＤ−１抗体の安定製剤が必要とされている。好ましくは、そのような製剤は長期貯蔵寿命を示し、貯蔵および輸送の際に安定であり、例えば皮下投与における使用のための高濃度での、および例えば静脈内投与のための低濃度での投与に適したものである。
【発明の概要】
【００１４】
発明の概括
本発明はヒト・プログラム死受容体ＰＤ−１に対する抗体またはその抗原結合性フラグメントの安定製剤に関する。本発明は更に、ヒト・プログラム死受容体ＰＤ−１に対する抗体またはその抗原結合性フラグメントの安定製剤での種々の癌および慢性感染症の治療方法を提供する。
【００１５】
ある実施形態においては、本発明は、抗ヒトＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントの凍結乾燥製剤に関する。該凍結乾燥製剤は、ａ）該抗ヒトＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメント、ｂ）ヒスチジンバッファー、ｃ）ポリソルベート８０、およびｄ）スクロースを含む。
【００１６】
ある実施形態においては、該製剤は、還元（再構成）された場合に５．０〜６．０のｐＨを有する。
【００１７】
ある実施形態においては、該凍結乾燥製剤は、約２５ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬの濃度における該抗体またはその抗原結合性フラグメントの還元を可能にする。
【００１８】
ある実施形態においては、ポリソルベート８０は約０．０２％（ｗ／ｖ）の重量比で存在する。
【００１９】
ある実施形態においては、スクロースは約７％（ｗ／ｖ）の重量比で存在する。
【００２０】
更に追加的な実施形態においては、本発明は、ａ）２５〜１００ｍｇ／ｍＬ  抗抗体またはその抗原結合性フラグメント、ｂ）約７０ｍｇ／ｍＬ  スクロース、ｃ）約０．２ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０、およびｄ）ｐＨ５．０〜６．０の約１０ｍＭ  ヒスチジンバッファーを含む水溶液を凍結乾燥することにより製造される、抗ヒトＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントの凍結乾燥医薬製剤に関する。
【００２１】
ある実施形態においては、該抗ヒトＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントは該水溶液中に約２５ｍｇ／ｍＬで存在する。ある実施形態においては、該水溶液は約５．５のｐＨを有する。
【００２２】
更に追加的な実施形態においては、本発明は、還元された場合に、ａ）２５〜１００ｍｇ／ｍＬ  抗ヒトＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメント、ｂ）約７０ｍｇ／ｍＬ  スクロース、ｃ）約０．２ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０、およびｄ）ｐＨ５．０〜６．０の約１０ｍＭ  ヒスチジンバッファーを含む、抗ヒトＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントの凍結乾燥医薬製剤に関する。
【００２３】
ある実施形態においては、該抗ヒトＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントは該還元溶液中に約２５ｍｇ／ｍＬで存在する。ある実施形態においては、該還元溶液は約５．５のｐＨを有する。
【００２４】
更に追加的な実施形態においては、本発明は、ａ）２５〜１００ｍｇ／ｍＬ  抗抗体またはその抗原結合性フラグメント、ｂ）約７０ｍｇ／ｍＬ  スクロース、ｃ）約０．２ｍｇ／ｍＬ  ポリソルベート８０、およびｄ）ｐＨ５．０〜６．０の約１０ｍＭ  ヒスチジンバッファーを含む、抗ヒトＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントの液体医薬製剤に関する。
【００２５】
更に追加的な実施形態においては、本発明は、抗ヒトＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメントの医薬製剤に関する。該医薬製剤は、ａ）該抗ヒトＰＤ−１抗体またはその抗原結合性フラグメント、ｂ）ヒスチジンバッファー、ｃ）ポリソルベート８０、およびｄ）スクロースを含む。ある実施形態においては、該製剤は、還元された場合に５．０〜６．０のｐＨを有する。ある実施形態においては、該ポリソルベート８０は約０．０２％（ｗ／ｖ）の重量比で存在する。ある実施形態においては、該スクロースは約７％（ｗ／ｖ）の重量比で存在する。
【００２６】
更に追加的な実施形態においては、本発明は、該抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号９、１０、１１、１５、１６および１７からなる群から選択される３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖を含む、本明細書に記載されている製剤のいずれかに関する。
【００２７】
更に追加的な実施形態においては、本発明は、該抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号１２、１３、１４、１８、１９および２０からなる群から選択される３つのＣＤＲ配列を含む重鎖を含む、本明細書に記載されている製剤のいずれかに関する。
【００２８】
更に追加的な実施形態においては、本発明は、該抗体またはその抗原結合性フラグメントが、ｉ）３つのＣＤＲ配列  配列番号１５、１６および１７を含む軽鎖と、ｉｉ）３つのＣＤＲ配列  配列番号８、１９および２０を含む重鎖とを含む、本明細書に記載されている製剤のいずれかに関する。
【００２９】
更に追加的な実施形態においては、本発明は、該抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号３２のアミノ酸残基２０〜１３０を含む軽鎖可変ドメインを含む、本明細書に記載されている製剤のいずれかに関する。
【００３０】
更に追加的な実施形態においては、本発明は、該抗体またはその抗原結合性フラグメントが、配列番号３１を含む重鎖可変ドメインを含む、本明細書に記載されている製剤のいずれかに関する。
【００３１】
更に追加的な実施形態においては、本発明は、該抗体またはその抗原結合性フラグメントが、ｉ）配列番号３６のアミノ酸残基２０〜２３７を含む軽鎖と、ｉｉ）配列番号３１のアミノ酸残基２０〜４６６を含む重鎖とを含む、本明細書に記載されている製剤のいずれかに関する。
【００３２】
更に追加的な実施形態においては、本発明は、該抗体が、ｈ４０９Ａ１１、ｈ４０９Ａ１６およびｈ４０９Ａ１７からなる群から選択される、本明細書に記載されている製剤のいずれかに関する。
【００３３】
更に追加的な実施形態においては、本発明は、本明細書に記載されている製剤のいずれかの有効量を投与することを含む、慢性感染症の治療を要する哺乳動物対象における慢性感染症の治療方法に関する。
【００３４】
更に追加的な実施形態においては、本発明は、本明細書に記載されている製剤のいずれかの有効量を投与することを含む、癌の治療を要する哺乳動物対象における癌の治療方法に関する。ある実施形態においては、該有効量は、１．０、３．０および１０ｍｇ／ｋｇからなる群から選択される抗ヒトＰＤ−１抗体の用量を含む。
【００３５】
詳細な説明
本発明は、抗ＰＤ−１抗体の製剤、ならびに種々の癌および感染症の治療のためのその使用を提供する。
【００３６】
抗ＰＤ−１抗体ｈ４０９Ａ１１は、本明細書に記載されている安定製剤における典型的な抗体である。本製剤に適した３つのヒト化抗ＰＤ−１モノクローナル抗体（すなわち、ｈ４０９Ａ１１、ｈ４０９Ａ１６およびｈ５０９Ａ１７）が同時係属特許公開ＷＯ２００８／１５６７１２に記載されている。また、本明細書に記載されている製剤は、ある癌および慢性感染症を治療するのに有用である。表２はｈ４０９Ａ１１に関する対応ＣＤＲ配列の一覧を示す。表６は典型的な抗ＰＤ−１抗体の配列の一覧を示す。
【００３７】
本発明においては、当技術分野の技量の範囲内の通常の分子生物学、微生物学、タンパク質発現および精製、抗体ならびに組換えＤＮＡ技術が用いられうる。そのような技術は文献に十分に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．３ｒｄ  ｅｄ．Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ａｕｓｕｂｅｌら編（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．：Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｂｏｎｉｆａｃｉｎｏら編（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．：Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｃｏｌｉｇａｎら編（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．：Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｃｏｉｃｏら編（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．：Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｃｏｌｉｇａｎら編（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．：Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；およびＥｎｎａら編（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．：Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ．；Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｈｉｇｇｉｎｓ編（１９８５）；Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ，  Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｈｉｇｇｉｎｓ編（１９８４）；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編（１９８６）；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９８６）；Ｐｅｒｂａｌ，Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ（１９８４）；ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ：１９８８）を参照されたい。
【００３８】
Ｉ．定義
本明細書中で用いる「抗体」なる語は、所望の生物活性を示す抗体の任意の形態を意味する。したがって、それは最も広義に用いられ、特に、所望の生物活性を示すモノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体などを含む。
【００３９】
アジュバント
本明細書中で用いる「アジュバント」なる語は、抗原に対する免疫応答を増強する化合物または混合物を意味する。アジュバントは、該抗原を徐々に放出する組織デポーとして、そしてまた、該免疫応答を非特異的に増強するリンパ系活性化因子として働きうる（Ｈｏｏｄら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄ．，１９８４，Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ：Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ｐ．３８４）。しばしば、アジュバントの非存在下の抗原のみでの一次チャレンジは体液性または細胞性免疫応答を惹起しないであろう。アジュバントには、完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、サポニン、無機ゲル、例えば水酸化アルミニウム、界面活性物質、例えばリゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油または炭化水素エマルション、キーホールリンペットヘモシアニン、および潜在的に有用なヒトアジュバント、例えばＮ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン、ＢＣＧ（ｂａｃｉｌｌｅ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）およびコリネバクテリウム・パルブム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ）が含まれるが、これらに限定されるものではない。好ましくは、該アジュバントは医薬上許容されるものである。
【００４０】
サイトカイン
「サイトカイン」なる語は、１つの細胞集団により放出される、細胞間メディエーターとして別の細胞に作用するタンパク質の総称である。そのようなサイトカインの例としては、リンホカイン、モノカイン、ケモカインおよび伝統的なポリペプチドホルモンが挙げられる。典型的なサイトカインには、ヒトＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＩＬ−１７およびＩＬ−５が含まれる。
【００４１】
細胞毒性物質
本明細書中で用いる「細胞毒性物質」なる語は、細胞の機能を抑制もしくは妨害し、および／または細胞の破壊を引き起こす物質を意味する。該用語は、放射活性同位体（例えば、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０およびＲｅ１８６）、化学療法剤、および毒素、例えば、細菌、真菌、植物または動物由来の酵素的に活性な毒素、またはそれらの断片を含むと意図される。
【００４２】
治療用途および方法
ＰＤ−１遮断物質には、ヒトＰＤ−１に特異的に結合し、免疫応答を増大、増強、刺激またはアップレギュレーションするために使用可能であるものが含まれる。望ましい対象には、癌および／または慢性ウイルス感染を有する患者を含む、免疫応答の増強を要するヒト患者が含まれる。
【００４３】
癌
「癌」、「癌性」または「悪性」なる語は、無制御な細胞増殖により典型的に特徴づけられる、哺乳動物における生理的状態を意味し又は示す。癌の例には、癌腫、リンパ腫、白血病、芽腫および肉腫が含まれるが、これらに限定されるものではない。そのような癌の更に詳細な例には、扁平上皮癌、骨髄腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、胃腸（管）癌、腎臓癌、卵巣癌、肝臓癌、リンパ芽球性白血病、リンパ性白血病、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、前立腺癌、甲状腺癌、メラノーマ、軟骨肉腫、神経芽細胞腫、膵臓癌、多形性膠芽腫、子宮頸癌、脳の癌、胃癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌および頭頸部癌が含まれる。
【００４４】
ＰＤ−１遮断物質には、癌を治療するため（すなわち、腫瘍細胞の増殖または生存を抑制するため）に使用されるものが含まれる。抗ＰＤ−１抗体、例えばヒト化抗ＰＤ−１抗体ｈ４０９Ａ１１を使用して増殖が抑制されうる好ましい癌には、免疫療法に典型的に反応性である癌、そしてまた、これまでに免疫療法に関連づけられていない癌が含まれる。治療のための好ましい癌の非限定的な例には、メラノーマ（例えば、転移性悪性メラノーマ）、腎臓癌（例えば、明細胞癌）、前立腺癌（例えば、ホルモン抵抗性前立腺腺癌）、膵臓腺癌、乳癌、結腸癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、食道癌、頭頸部の扁平上皮癌、肝臓癌、卵巣癌、子宮頚癌、甲状腺癌、神経膠芽腫、神経膠腫、白血病、リンパ腫、および他の腫瘍性悪性疾患が含まれる。生検または外科的採取物における腫瘍浸潤性リンパ球の存在に関して改善された疾患非含有および全体的生存を示す悪性疾患、例えばメラノーマ、結腸直腸癌、肝臓癌、腎臓癌、胃/食道癌、乳癌、膵臓癌および卵巣癌が、本明細書に記載されている方法および治療に含まれる。そのような癌のサブタイプは、Ｔリンパ球による免疫制御に対して感受性であることが知られている。また、本明細書に記載されている抗体を使用して増殖が抑制されうる治療抵抗性または再発性悪性疾患が含まれる。特に好ましい癌には、被検組織サンプルにおけるＰＤ−１および／またはそのリガンドＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２の発現の上昇により特徴づけられるもの、例えば、卵巣癌、腎臓癌、結腸直腸癌、膵臓癌、乳癌、肝臓癌、胃癌、食道癌およびメラノーマが含まれる。抗ＰＤ−１抗体、例えばヒト化抗ＰＤ−１抗体ｈ４０９Ａ１１での治療から利益を受けうる追加的な癌には、カポジ肉腫、肝臓癌、咽頭癌、リンパ腫、子宮頸癌、外陰部癌、肛門癌、陰茎癌および口腔癌の原因に関連していることが知られているウイルス、例えばヒト免疫不全ウイルス、Ａ、ＢおよびＣ型肝炎ウイルス、エプスタインバーウイルス、ヒトパピローマウイルスの持続的感染に関連したものが含まれる。
【００４５】
化学療法剤
「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化合物である。抗ＰＤ−１抗体はいずれかの１以上の適当な化学療法剤と共に使用されうる。そのような化学療法剤の例には以下のものが含まれる：アルキル化剤、例えばチオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ）およびシクロスホスファミド（ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）；アルキルスルホナート、例えばブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、イムプロスルファン（ｉｍｐｒｏｓｕｌｆａｎ）およびピポスルファン（ｐｉｐｏｓｕｌｆａｎ）；アジリジン、例えばベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン（ｃａｒｂｏｑｕｏｎｅ）、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）；エチレンイミンおよびメチルアメルアミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）、例えばアルトレタミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド（ｔｒｉｅｔｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリエチレンチオホスルアミド（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈａｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチロロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｍｅ）；アセトゲニン（特にブルラタシン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎ）およびブルラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ）；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）を含む）；ブリオスタチン（ｂｒｙｏｓｔａｔｉｎ）；カルリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン（ａｄｏｚｅｌｅｓｉｎ）、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）およびビゼレシン（ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ）合成類似体を含む）；クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）；デュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎ）（合成類似体ＫＷ−２１８９およびＣＢＩ−ＴＭＩを含む）；エロイテロビン（ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｂｉｎ）；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチイン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；ナイトロジェンマスタード、例えばクロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、クロロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン（ｅｓｔｒａｍｕｓｔｉｎｅ）、イフォスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、メクロルエタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、メクロルエタミンオキシド塩酸塩、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、ノベムビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタード（ｕｒａｃｉｌ  ｍｕｓｔａｒｄ）；ニトロソ尿素、例えばカルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ニムスチン（ｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、ラニムスチン（ｒａｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質（例えば、���リケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、特にカリケアマイシン  ガンマ１Ｉおよびカリケアマイシン  ファイＩ１；例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）を参照されたい）；ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）、例えばダイネマイシンＡ；ビスホスホナート、例えばクロドロナート（ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ）；エスペラマイシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）；およびネオカルジノスタチン（ｎｅｏｃａｒｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎ）、アクチノマイシン（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン（ａｚａｓｅｒｉｎｅ）、ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン（ｃｈｒｏｍｏｍｙｃｉｎ）、ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ）、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎ）、ペプロマイシン（ｐｅｐｌｏｍｙｃｉｎ）、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン（ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン（ｓｔｒｅｐｔｏｎｉｇｒｉｎ）、ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメックス（ｕｂｅｎｉｍｅｘ）、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）；代謝拮抗物質、例えばメトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）および５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸類似体、例えばデノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）；プリン類似体、例えばフルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、６−メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニン（ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン（ａｎｃｉｔａｂｉｎｅ）、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、６−アザウリジン、カルモフール（ｃａｒｍｏｆｕｒ）、シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）、ジデオキシウリジン（ｄｉｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ）、ドキシフルリジン（ｄｏｘｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）、エノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、フロクスリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）；アンドロゲン、例えばカルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、ドロモスタノロン（ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ）プロピオナート、エピチオスタノール（ｅｐｉｔｉｏｓｔａｎｏｌ）、メピチオスタン（ｍｅｐｉｔｉｏｓｔａｎｅ）、テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）；抗アドレナール、例えばアミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、ミトタン（ｍｉｔｏｔａｎｅ）、トリロスタン（ｔｒｉｌｏｓｔａｎｅ）；葉酸補充物、例えばフロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；アセグラトン（ａｃｅｇｌａｔｏｎｅ）；アルドホスファミド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）グリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル（ｅｎｉｌｕｒａｃｉｌ）；アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）；ジアジクオン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）；エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）；エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン（ｌｅｎｔｉｎａｎ）；ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉｎｅ）；メイタンシノイド、例えばメイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）およびアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ）；ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；モピダモール（ｍｏｐｉｄａｍｏｌ）；ニトラクリン（ｎｉｔｒａｃｒｉｎｅ）；ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン（ｐｉｒａｒｕｂｉｃｉｎ）；ロソザントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）；ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）；リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフラン（ｓｉｚｏｆｕｒａｎ）；スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）；テヌアゾン酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）；トリアジクオン（ｔｒｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅ）（特にＴ−２毒素、ベルラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ）、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎ）Ａおよびアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ）；ウレタン；ビンデシン（ｖｉｎｄｅｓｉｎｅ）；ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）；マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）；ミトブロニトール（ｍｉｔｏｂｒｏｎｉｔｏｌ）；ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）；ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（ａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ）（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）；チオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ）；タキソイド、例えばパクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）およびドキセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）；クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）；ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）；６−チオグアニン；メルカプトプリン（ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）；メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）；白金類似体、例えばシスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）およびカルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）；ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）；白金；エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）（ＶＰ−１６）；イフォスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；マイトマイシンＣ；ミトザントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）；ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）；エダトレキセート（ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）；ダウノマイシン（ｄａｕｎｏｍｙｃｉｎ）；アミノプテリン（ａｍｉｎｏｐｔｅｒｉｎ）；キセロダ（ｘｅｌｏｄａ）；イバンドロネート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）；ＣＰＴ１１；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ｄｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えばレチノイン酸；カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）；ならびに前記のいずれかのものの医薬上許容される塩、酸または誘導体。また、以下のものも含まれる：腫瘍に対するホルモン作用を調節または抑制するよう作用する抗ホルモン剤、例えば抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、例えばタモキシフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）、４−ヒドロキシタモキシフェン（ｈｙｄｒｏｘｙｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、トリオキシフェン（ｔｒｉｏｘｉｆｅｎｅ）、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）およびトレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）（Ｆａｒｅｓｔｏｎ）；副腎内のエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼインヒビター、例えば４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド（ａｍｉｎｏｇｌｕｔｅｔｈｉｍｉｄｅ）、酢酸メゲストロール（ｍｅｇｅｓｔｒｏｌ
）、エクセメスタン（ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）、ホルメスタン（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｅ）、ファドロゾール（ｆａｄｒｏｚｏｌｅ）、ボロゾール（ｖｏｒｏｚｏｌｅ）、レトロゾール（ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）およびアナストロゾール（ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）；ならびに抗アンドロゲン、例えばフルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、ニルタミド（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ）、ビカルタミド（ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、ロイプロリド（ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ）およびゴセレリン（ｇｏｓｅｒｅｌｉｎ）；ならびに前記のいずれかのものの医薬上許容される塩、酸または誘導体。
【００４６】
増殖抑制物質
本明細書中で用いる「増殖（成長）抑制物質」は、細胞、特に、本明細書中で特定されている遺伝子のいずれかを過剰発現する癌細胞の増殖（成長）をインビトロまたはインビボのいずれかで抑制する化合物または組成物を意味する。したがって、増殖抑制物質は、Ｓ期において該遺伝子を過剰発現する細胞の比率を有意に減少させるものである。増殖抑制物質の例には、細胞周期の進行を（Ｓ期以外の時点で）阻止する物質、例えば、Ｇ１停止およびＭ期停止を誘導する物質が含まれる。古典的なＭ期ブロッカーには、ビンカ（ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）およびビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ））  タキサン、およびトポＩＩインヒビター、例えばドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）およびエトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）が含まれる。Ｇ１を停止する物質、例えばＤＮＡアルキル化剤、例えばダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）およびシスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）は、Ｓ期停止にも及ぶ。更なる情報はＴｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，ＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎおよびＩｓｒａｅｌ編，Ｃｈａｐｔｅｒ  １，題名“Ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｓ，ａｎｄ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ”，Ｍｕｒａｋａｍｉら（ＷＢ  Ｓａｕｎｄｅｒｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）に見出されうる。
【００４７】
追加的物質と組合される抗体または抗体フラグメント
抗ＰＤ−１抗体または抗体フラグメントは、単独で、または他の抗腫瘍物質もしくは免疫原性物質（例えば、弱毒化癌細胞、腫瘍抗原（組換えタンパク質、ペプチドおよび炭水化物分子を含む））、腫瘍提示細胞、例えば、腫瘍由来抗原もしくは核酸が添加された樹状細胞、免疫刺激性サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮα２、ＧＭ−ＣＳＦ）および免疫刺激性サイトカイン（限定的なものではないが、例えば、ＧＭ−ＣＳＦ）をコードする遺伝子でトランスフェクトされた細胞、標準的な癌治療（例えば、化学療法、放射線療法または手術）、あるいは他の抗体（限定的なものではないが、ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、ＶＥＧＦ受容体、他の増殖因子受容体、ＣＤ２０、ＣＤ４０、ＣＤ−４０Ｌ、ＣＴＬＡ−４、ＯＸ−４０、４−１ＢＢおよびＩＣＯＳに対する抗体を含む）と組合せて使用されうる。
【００４８】
感染症
アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体または抗体フラグメントは、感染および感染症を予防または治療するためにも使用されうる。これらの物質を、単独で、またはワクチンと組合せて使用して、病原体、毒素および自己抗原に対する免疫応答を刺激することが可能である。該抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ヒトに対して感染性であるウイルス、例えばヒト免疫不全ウイルス、Ａ、ＢおよびＣ型肝炎ウイルス、エプスタインバーウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトパピローマウイルスならびにヘルペスウイルス（これらに限定されるものではない）に対する免疫応答を刺激するために使用されうる。アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体または抗体フラグメントは、細菌または真菌寄生生物および他の病原体による感染に対する免疫応答を刺激するために使用されうる。このうち、Ｂ型およびＣ型肝炎ならびにＨＩＶによるウイルス感染は、慢性ウイルス感染だとみなされる感染である。
【００４９】
本明細書中で用いる「ＰＤ−１結合性フラグメント」、「その抗原結合性フラグメント」、「その結合性フラグメント」または「そのフラグメント」なる語は、抗原（ヒトＰＤ−１）に結合しその活性を抑制する（例えば、ＰＤＬ１およびＰＤＬ２へのＰＤ−１の結合を遮断する）その生物活性を実質的に尚も保有する、抗体のフラグメントまたは誘導体を含む。したがって、「抗体フラグメント」またはＰＤ−１結合性フラグメントなる語は、完全長抗体の一部分、一般には、その抗原結合性または可変領域を意味する。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント；ジアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗体分子、例えばｓｃ−Ｆｖ；ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が含まれる。典型的には、結合性フラグメントまたは誘導体はそのＰＤ−１抑制活性の少なくとも１０％を保有する。所望の生物学的効果を発揮するのに十分なアフィニティを有するいずれの結合性フラグメントも有用であるが、好ましくは、結合性フラグメントまたは誘導体はそのＰＤ−１抑制活性の少なくとも２５％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％または１００％（またはそれ以上）を保有する。ＰＤ−１結合性フラグメントは、その生物活性を実質的に改変しない保存的アミノ酸置換を有する変異体を含みうることも意図される。
【００５０】
「ドメイン抗体」は、重鎖の可変領域または軽鎖の可変領域のみを含有する免疫学的に機能的な免疫グロブリンフラグメントである。幾つかの場合には、２以上のＶＨ領域がペプチドリンカーと共有結合して２価ドメイン抗体を形成している。２価ドメイン抗体の、２つのＶＨ領域は、同じ又は異なる抗原を標的としうる。
【００５１】
「２価抗体」は２つの抗原結合部位を含む。幾つかの場合には、それらの２つの結合部位は同じ抗原特異性を有する。しかし、２価抗体は二重特異性でありうる。本明細書中で用いる「二重特異性抗体」なる語は、少なくとも２つの異なる抗原エピトープに対する結合特異性を有する抗体、典型的にはモノクローナル抗体を意味する。１つの実施形態においては、該エピトープは同一抗原からのものである。もう１つの実施形態においては、該エピトープは２つの異なる抗原からのものである。二重特異性抗体の製造方法は当技術分野で公知である。例えば、二重特異性抗体は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖ペアの共発現を用いて組換え製造されうる。例えば、Ｍｉｌｓｔｅｉｎら（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７−３９を参照されたい。あるいは、二重特異性抗体は、化学的連結を用いて製造されうる。例えば、Ｂｒｅｎｎａｎら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１を参照されたい。二重特異性抗体には、二重特異性抗体フラグメントが含まれる。例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４−４８、Ｇｒｕｂｅｒら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８を参照されたい。
【００５２】
本明細書中で用いる「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含む抗体フラグメントを意味し、ここで、これらのドメインは単一ポリペプチド鎖内に存在する。一般に、Ｆｖポリペプチドは更に、該ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成するのを可能にする、ＶＨおよびＶＬドメイン間のポリペプチドリンカーを含む。ｓｃＦｖの概説としては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４）ＴＨＥ  ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＹ  ＯＦ  ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，ｖｏｌ．１１３，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５を参照されたい。
【００５３】
本明細書におけるモノクローナル抗体には、ラクダ化単一ドメイン抗体も含まれる。例えば、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓら（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２６：２３０；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：２５；ＷＯ  ９４／０４６７８；ＷＯ  ９４／２５５９１；米国特許第６，００５，０７９号）を参照されたい。単一ドメイン抗体が形成されるような修飾を伴う２つのＶＨドメインを含む単一ドメイン抗体も含まれる。
【００５４】
本明細書中で用いる「ジアボディ」なる語は、２つの抗原結合部位を有する小型抗体フラグメントを意味し、該フラグメントは、同一ポリペプチド鎖内で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む（ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＨ）。同一鎖上の２つのドメイン間のペア形成を可能にするには短すぎるリンカーを用いることにより、それらのドメインは別の鎖の相補的ドメインとのペア形成を強要され、２つの抗原結合部位を形成する。ジアボディは、例えばＥＰ  ４０４，０９７、ＷＯ  ９３／１１１６１およびＨｏｌｌｉｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８に更に詳しく記載されている。操作された抗体変異体の概説としては、全般的には、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ（２００５）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２３：１１２６−１１３６を参照されたい。
【００５５】
本明細書中で用いる「ヒト化抗体」なる語は、非ヒト（例えば、マウス）抗体およびヒト抗体からの配列を含有する抗体の形態を意味する。そのような抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する。一般に、該ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全て又は実質的に全ては非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全てはヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、所望により、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（典型的にはヒト免疫グロブリンのもの）の少なくとも一部分を含む。アフィニティーを増加させるため、またはヒト化抗体の安定性を増強するため、または他の理由により、あるアミノ酸置換が含まれうるが、げっ歯類抗体のヒト化形態は、一般に、該親げっ歯類抗体の同一ＣＤＲ配列を含む。
【００５６】
本発明の抗体には、エフェクター機能の改変をもたらすために修飾された（または遮蔽された）Ｆｃ領域を有する抗体も含まれる。例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、ＷＯ  ２００３／０８６３１０、ＷＯ  ２００５／１２０５７１、ＷＯ  ２００６／００５７７０２、Ｐｒｅｓｔａ（２００６）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．５８：６４０−６５６を参照されたい。そのような修飾は、診断および療法における可能な有益な効果を伴って免疫系の種々の反応を増強または抑制するために用いられうる。Ｆｃ領域の改変には、アミノ酸変化（置換、欠失および挿入）、グリコシル化または脱グリコシル化および複数のＦｃの付加が含まれる。該Ｆｃに対する改変は治療用抗体における抗体の半減期をも変化させうる。より長い半減期はより低頻度の投与につながり、それに伴い、簡便さの向上および物質の使用量の減少をもたらすであろう。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１（７３４−３５）を参照されたい。
【００５７】
「完全ヒト抗体」なる語は、ヒト免疫グロブリンタンパク質配列のみを含む抗体を意味する。完全ヒト抗体は、マウスにおいて、またはマウス細胞において、またはマウス細胞由来のハイブリドーマにおいて産生された場合には、マウス炭水化物鎖を含有しうる。同様に、「マウス抗体」は、マウス免疫グロブリン配列のみを含む抗体を意味する。完全ヒト抗体は、ヒトにおいて、またはヒト免疫グロブリン生殖系列配列を有するトランスジェニック動物において、またはファージディスプレイもしくは他の分子生物学的方法により産生されうる。
【００５８】
本明細書中で用いる「超可変領域」なる語は、抗原結合をもたらす、抗体のアミノ酸残基を意味する。超可変領域は、「相補性決定領域」、すなわち「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基、例えば、軽鎖可変ドメイン内の残基２４−３４（ＣＤＲＬ１）、５０−５６（ＣＤＲＬ２）および８９−９７（ＣＤＲＬ３）ならびに重鎖可変ドメイン内の残基３１−３５（ＣＤＲＨ１）、５０−６５（ＣＤＲＨ２）および９５−１０２（ＣＤＲＨ３）（Ｋａｂａｔら，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）、ならびに／または「超可変ループ」からの残基、すなわち、軽鎖可変ドメイン内の残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）および９１−９６（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメイン内の２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）および９６−１０１（Ｈ３）（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）を含む。本明細書中で用いる「フレームワーク」または「ＦＲ」残基なる語は、本明細書中でＣＤＲ残基として定められた超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を意味する。前記の残基番号づけはＫａｂａｔ番号づけ体系に合致し、添付の配列表における配列番号づけに必ずしも厳密に対応しているわけではない。
【００５９】
「保存的修飾変異体」または「保存的置換」は、当業者に公知のアミノ酸置換を意味し、生じる分子の生物活性を改変することなく該ポリペプチドの必須領域においてさえもしばしば施されうる。そのような典型的な置換は、好ましくは、以下のとおりに表１に記載されているものに従い施される。
【００６０】
【表１】
0006014116.tif 000002
また、一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一のアミノ酸の置換は生物活性を実質的に改変しない、と当業者に認識されている。例えば、Ｗａｔｓｏｎら，（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）を参照されたい。
【００６１】
本明細書および特許請求の範囲の全体にわたって用いる「からなる」なる語またはその変形、例えば「から実質的になる」もしくは「から実質的になり」は、任意の列挙されている要素または要素群の包含、および特定されている投与計画、方法または組成物の基本的または新規特性を実質的に変化させない、列挙されている要素と類似した又は異なる性質の他の要素の随意的包含を示す。非限定的な例としては、列挙されているアミノ酸配列から実質的になる結合性化合物は、該結合性化合物の特性に実質的に影響を及ぼさない、１以上のアミノ酸残基の置換を含む、１以上のアミノ酸をも含みうる。
【００６２】
「免疫状態」または「免疫障害」は、例えば病的炎症、炎症障害および自己免疫障害または疾患を含む。「免疫状態」は、感染、持続的感染および増殖性状態、例えば癌、腫瘍および血管新生をも意味し、免疫系による除去に対して抵抗性を示す感染、腫瘍および癌をも含む。「癌状態」は、例えば、癌、癌細胞、腫瘍、血管新生および前癌状態、例えば過形成を含む。
【００６３】
想定される製剤または方法の抗体、または抗体の抗原結合部位に由来する結合性組成物は、無関係な抗原に対するアフィニティより少なくとも２倍大きな、好ましくは少なくとも１０倍大きな、より好ましくは少なくとも２０倍大きな、最も好ましくは少なくとも１００倍大きなアフィニティで、その抗原に結合する。好ましい実施形態においては、該抗体は、例えばスキャッチャード分析による測定で約１０９  リットル／ｍｏｌより大きなアフィニティを有する（Ｍｕｎｓｅｎら（１９８０）Ａｎａｌｙｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０−２３９）。
【００６４】
医薬組成物の定義
「増量剤」なる語は、該凍結乾燥産物の構造を与える物質を含む。増量剤に使用される一般的な例には、マンニトール、グリシン、ラクトースおよびスクロースが含まれる。医薬上優美なケークを与えることに加えて、増量剤は、崩壊温度の改変、凍結−融解保護の提供、および長期貯蔵にわたるタンパク質安定性の増強に関する有用な品質をも与えうる。これらの物質は等張性改変剤としても働きうる。
【００６５】
「バッファー」なる語は、凍結乾燥前に、許容されうる範囲内に溶液ｐＨを維持する物質を含み、スクシナート（ナトリウムまたはカリウム）、ヒスチジン、ホスファート（ナトリウムまたはカリウム）、トリス（Ｔｒｉｓ）（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ジエタノールアミン、シトラート（ナトリウム）などを含みうる。本発明のバッファーは約５．０〜約６．０の範囲のｐＨを有し、好ましくは、約５．５のｐＨを有する。この範囲のｐＨを制御するバッファーの例には、スクシナート（例えば、ナトリウムスクシナート）、グルコナート、ヒスチジン、シトラートおよび他の有機酸バッファーが含まれる。典型的製剤を得るために、５．０〜６．０のｐＨ範囲のヒスチジン、アセタートおよびシトラートバッファーが適合性に関して検討された。ヒスチジンおよびアセタートバッファー系は、シトラート系より優れた働きを示した。アセタートバッファー系は凍結乾燥法に適合しないため、ヒスチジンバッファーが好ましいバッファー系である。
【００６６】
「凍結保護物質」なる語は、一般に、おそらくタンパク質表面から優先的に除去されることにより、凍結誘発性ストレスに対する安定性を該タンパク質に付与する物質を含む。それらは一次および二次乾燥ならびに長期製品貯蔵中の保護をももたらしうる。具体例としては、重合体、例えばデキストランおよびポリエチレングリコール；糖、例えばスクロース、グルコース、トレハロースおよびラクトース；界面活性剤、例えばポリソルベート；ならびにアミノ酸、例えばグリシン、アルギニンおよびセリンが挙げられる。
【００６７】
「凍結乾燥」、「凍結乾燥された」および「凍結乾燥した」なる語は、乾燥されるべき物質を、まず、凍結させ、ついで、氷または凍結溶媒を真空環境中の昇華により除去する過程を意味する。予め凍結乾燥された製剤中には、貯蔵の際の凍結製品の安定性を増強するために、賦形剤が含まれうる。
【００６８】
「リオプロテクタント（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）」なる語は、おそらく無定形ガラス状マトリックスをもたらすこと、および水素結合により該タンパク質に結合して、乾燥過程中に除去される水分子に取って代わることにより、乾燥または「脱水」過程（一次および二次乾燥サイクル）中に該タンパク質に安定性を付与する物質を含む。これは、タンパク質のコンホメーションの維持、凍結乾燥サイクル中のタンパク質分解の最小化および長期製品安定性の改善を助ける。具体例には、ポリオールまたは糖、例えばスクロースおよびトレハロースが含まれる。
【００６９】
「医薬製剤」なる語は、該製剤が投与される対象に対して毒性である追加的成分を含有しない、有効成分を有効にしうる形態である製剤を意味する。
【００７０】
「医薬上許容される」賦形剤（ビヒクル、添加剤）は、使用する有効成分の有効量を供与するために対象哺乳動物に合理的に投与されうるものである。
【００７１】
「還元（再構成）時間」は、溶液で凍結乾燥製剤を粒子非含有清澄化溶液へと再水和させるのに要する時間である。
【００７２】
「安定」製剤は、それに含まれるタンパク質が貯蔵に際してその物理的安定性および／または化学的安定性および／または生物活性を実質的に保有するような製剤である。タンパク質安定性を測定するための種々の分析技術が当技術分野で利用可能であり、Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７−３０１，Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ｌｅｅ編，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）およびＪｏｎｅｓ，Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０（１９９３）に概説されている。安定性は、選択された温度で、選択された時間にわたって測定されうる。
【００７３】
「安定」凍結乾燥抗体製剤は、冷凍温度（２〜８℃）で少なくとも１２カ月間、好ましくは２年間、より好ましくは３年間にわたって、または室温（２３〜２７℃）で少なくとも３か月間、好ましくは６か月間、より好ましくは１年間にわたって観察される有意な変化を伴わない凍結抗体製剤である。安定性に関する典型的な許容されうる基準は以下のとおりである。ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより測定された場合に、抗体単量体の１０％以下、好ましくは５％以下が分解する。該再水和溶液は、典型的に、視覚的分析により、無色、または透明ないし微かにオパール色である。該製剤の濃度、ｐＨおよび浸透圧重量モル濃度は＋／−１０％以下の変化を有する。効力は、典型的に、参照体の５０〜１５０％の範囲内である。１０％以下、好ましくは５％以下のクリッピング（ｃｌｉｐｐｉｎｇ）が観察される。１０％以下、好ましくは５％以下の凝集が生じる。
【００７４】
「安定」医薬抗体製剤（凍結乾燥製剤、還元液体、および「最終」製剤（すなわち、予め凍結乾燥されていない）である液体製剤を含む）は、冷凍温度（２〜８℃）で少なくとも３か月間、好ましくは６か月間、より好ましくは１年間、より一層好ましくは２年間までにわたって観察される有意な変化を伴わない医薬抗体製剤である。また、「安定」液体製剤には、２５℃および４０℃を含む温度で、１か月間、３か月間、６か月間、１２か月間および／または２４か月間を含む期間にわたって所望の特徴を示すものが含まれる。安定性に関する典型的な許容される基準は以下のとおりである。ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより測定された場合に、典型的に、抗体単量体の約１０％以下、好ましくは約５％以下が分解する。該医薬抗体製剤は、視覚的分析により、無色、または透明ないし微かにオパール色である。該製剤の濃度、ｐＨおよび浸透圧重量モル濃度は＋／−１０％以下の変化を有する。効力は、典型的に、参照体の５０〜１５０％の範囲内である。典型的に、約１０％以下、好ましくは約５％以下のクリッピング（ｃｌｉｐｐｉｎｇ）が観察される。典型的に、約１０％以下、好ましくは約５％以下の凝集が生じる。
【００７５】
医薬製剤において抗体が「その物理的安定性を保有する」のは、それが、色および／または透明度の目視検査、あるいはＵＶ光散乱、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）および動的光散乱の際に凝集、沈殿および／または変性の有意な増加を示さない場合である。タンパク質コンホメーションの変化は、タンパク質の三次元構造を決定する蛍光分光法により、およびタンパク質の二次構造を決定するＦＴＩＲ分光法により評価されうる。
【００７６】
医薬製剤において抗体が「その化学的安定性を保有する」のは、それが有意な化学的変化を示さない場合である。化学的安定性は、化学的に変化した形態のタンパク質を検出し定量することにより評価されうる。タンパク質の化学構造をしばしば改変する分解過程は、加水分解またはクリッピング（サイズ排除クロマトグラフィーおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥのような方法により評価される）、酸化（質量分析またはＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ／ＭＳと組合されたペプチドマッピングのような方法により評価される）、脱アミド化（イオン交換クロマトグラフィー、毛管等電点フォーカシング、ペプチドマッピング、イソアスパラギン酸測定のような方法により評価される）および異性化（イソアスパラギン酸含量の測定、ペプチドマッピングなどにより評価される）を含む。
【００７７】
医薬製剤において抗体が「その生物活性を保有する」のは、ある時点における該抗体の生物活性が、該医薬製剤が製造された時点で示した生物活性の所定範囲内である場合である。抗体の生物活性は、例えば、抗原結合アッセイにより決定されうる。
【００７８】
「等張」なる語は、関心のある製剤が、ヒトの血液と実質的に同じ浸透圧を有することを意味する。等張製剤は、一般に、約２７０〜３２８ｍＯｓｍの浸透圧を有する。若干低い浸透圧は２５０〜２６９ｍＯｓｍであり、若干高い浸透圧は３２８〜３５０ｍＯｓｍである。浸透圧は、例えば、蒸気圧または氷凍結型浸透圧計を使用して測定されうる。
【００７９】
張性修飾剤：浸透圧を制御するための張性修飾剤として、塩（ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＭｇＣｌ２、ＣａＣｌ２など）が使用される。また、凍結保護剤／リオプロテクタントおよび／または増量剤、例えばスクロース、マンニトール、グリシンなどが、張性修飾剤として使用されうる。
【００８０】
分析方法
製品安定性を評価するのに適した分析方法には、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、動的光散乱試験（ＤＬＳ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、ｉｓｏ−ａｓｐ定量、効力、３４０ｎｍにおけるＵＶ、ＵＶ分光法およびＦＴＩＲが含まれる。ＳＥＣ（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎ．，８３：１６４５−１６５０，（１９９４）；Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１１：４８５（１９９４）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏ．Ａｎａｌ．，１５：１９２８（１９９７）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏ．Ａｎａｌ．，１４：１１３３−１１４０（１９８６））は産物中の単量体の比率を測定し、可溶性凝集物の量の情報を与える。ＤＳＣ（Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１５：２００（１９９８）；Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，９：１０９（１９８２））は、タンパク質変性温度およびガラス転移温度の情報を与える。ＤＬＳ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｌａｂ．，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ（１９９１））は平均拡散係数を測定し、可溶性および不溶性凝集物の量の情報を与える。３４０ｎｍにおけるＵＶは３４０ｎｍにおける散乱光強度を測定し、可溶性および不溶性凝集物の量に関する情報を与える。ＵＶ分光法は２７８ｎｍにおける吸光度を測定し、タンパク質濃度の情報を与える。ＦＴＩＲ（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．，４５：２３１（１９９８）；Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１２：１２５０（１９９５）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎ．，８５：１２９０（１９９６）；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉｅｎ．，８７：１０６９（１９９８））はアミドオン領域のＩＲスペクトルを測定し、タンパク質二次構造の情報を与える。
【００８１】
サンプル中のｉｓｏ−ａｓｐ含量は、Ｉｓｏｑｕａｎｔ  Ｉｓｏａｓｐａｒｔａｔｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定される。該キットは、標的タンパク質中のイソアスパラギン酸残基の存在を特異的に検出するために、酵素であるタンパク質イソアスパルチルメチルトランスフェラーゼ（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｓｏａｓｐａｒｔｙｌ  Ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）（ＰＩＭＴ）を使用する。ＰＩＭＴはアルファ−カルボキシル位におけるＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニンからイソアスパラギン酸へのメチル基の転移を触媒して、該方法においてＳ−アデノシル−Ｌ−ホモシステイン（ＳＡＨ）を与える。これは比較的小さな分子であり、通常、該キットにおいて提供されるＳＡＨ  ＨＰＬＣ標準物を使用する逆相ＨＰＬＣにより単離され、定量されうる。
【００８２】
抗体の効力または生物的同一性は、その抗原に結合するその能力により測定されうる。抗体のその抗原への特異的結合は、当業者に公知のいずれかの方法、例えばイムノアッセイ、例えばＥＬＩＳＡ（酵素結合イムノソルベントアッセイ）により定量されうる。
【００８３】
「還元（再構成）」製剤は、凍結乾燥タンパク質製剤を希釈剤に溶解させて、該タンパク質を該還元製剤中に分散させることにより調製された製剤である。該還元製剤は、投与、例えば非経口投与に適しており、皮下投与に適していることもある。
【００８４】
ヒト化抗ＰＤ−１抗体
ヒト化抗体ｈ４０９Ａ１１、ｈ４０９Ａ１６およびｈ４０９Ａ１７の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡ構築物はＷＯ２００８／１５６７１２に記載されている。
【００８５】
前記の明細書は、本発明を当業者が実施することを可能にするのに十分なものであるとみなされる。本発明は、寄託されている培養により、範囲において限定されるべきではない。なぜなら、寄託されている実施形態は本発明の一態様の一例と意図され、機能的に同等なあらゆる培養が本発明の範囲内である。本発明における材料の寄託は、本明細書に含まれる記載が、本発明の最良の態様を含む本発明の任意の態様の実施を可能にするのに不適当であるとの自認に相当するものではなく、また、それは、特許請求の範囲の範囲を、それが表す特定の例示に限定するものと解釈されるべきでもない。実際、本明細書に示され記載されているものに加えて、本発明の種々の修飾が前記説明から当業者に明らかとなり、添付の特許請求の範囲内に含まれる。
【００８６】
典型的な抗ヒトＰＤ−１抗体に関する配列を記載し、該配列の概要表を表６に示す。ＣＤＲは、ｈ４０９Ａ１１に関して表２に示されているとおり、別々の配列番号として示されている。
【００８７】
通常、該ヒト化抗ＰＤ−１抗体のアミノ酸配列変異体は、重鎖または軽鎖の元のヒト化抗体アミノ酸配列に対して少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５、９８または９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。この場合、この配列に対する同一性または相同性は、該配列を整列させ、必要に応じて、最大配列同一性が得られるようにギャップを導入した後、該配列同一性の一部としていずれの保存的置換をも考慮することなく、ヒト化抗ＰＤ−１残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基の百分率と定義される。該抗体配列内へのＮ末端、Ｃ末端もしくは内部の伸長、欠失または挿入はいずれも、配列同一性または相同性に影響を及ぼさないと解釈されるものとする。
【００８８】
該ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥを含む免疫グロブリンのいずれかのクラスから選択されうる。好ましくは、該抗体はＩｇＧ抗体である。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含むＩｇＧのいずれかのイソタイプが使用されうる。本発明において提供されるヒト化ＶＬおよびＶＨ領域には種々の定常ドメインが付加されうる。例えば、本発明の抗体（またはフラグメント）の個々の意図される用途が、改変されたエフェクター機能を求めるものである場合には、ＩｇＧ１以外の重鎖定常ドメインが使用されうる。ＩｇＧ１抗体は、長い半減期、ならびにエフェクター機能、例えば補体活性化および抗体依存性細胞性細胞傷害をもたらすが、そのような活性は該抗体の全ての用途に望ましいわけではないであろう。そのような場合、例えばＩｇＧ４定常ドメインが使用されうる。
【００８９】
同様に、本発明における組成物および方法においては、軽鎖のいずれかのクラスが使用されうる。特に、本組成物および方法においては、カッパ、ラムダまたはそれらの変異体が有用である。
【００９０】
ＣＤＲおよびＦＲ残基はＫａｂａｔの標準的な配列定義に従い決定される（Ｋａｂａｔら（１９８７）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  Ｍｄ．）。
【００９１】
シグナル配列、またはシグナル配列をコードする核酸配列がそれぞれの抗体鎖のＮ末端に付加されて、宿主からの分泌のための前駆体タンパク質を与えうる。代替的シグナル配列も使用可能であり、幾つかは“ＳＰｄｂ：ａ  Ｓｉｇｎａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｄａｔａｂａｓｅ．”Ｃｈｏｏら（２００５）ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ６：２４９に見出されうる。
【００９２】
【表２】
0006014116.tif 000003
ヒト化ＰＤ−１の生物活性
本発明の製剤は、還元された場合に又は液体形態で生物学的に活性である抗体およびそのフラグメントを含む。本明細書中で用いる「生物学的に活性」なる語は、所望の抗原エピトープに結合し直接的または間接的に生物学的効果を発揮しうる抗体または抗体フラグメントに関するものである。典型的には、これらの効果は、ＰＤ−１がそのリガンドに結合できないことにより生じる。「特異的」なる語は標的抗原エピトープへの該抗体の選択的結合を意味する。抗体は、ある与えられた組合せの条件下でＰＤ−１への結合を無関係な抗原または抗原混合物への結合と比較することにより、結合の特異性に関して試験されうる。
【００９３】
凍結乾燥医薬組成物
治療用タンパク質の凍結乾燥製剤は幾つかの利点をもたらす。凍結乾燥製剤は一般に、溶液製剤より良好な化学的安定性、したがって増加した半減期をもたらす。凍結乾燥製剤は、投薬または投与の経路のような臨床的要因に応じて、種々の濃度で還元されうる。例えば、凍結乾燥製剤は、皮下投与のために必要に応じて高濃度（すなわち、小容量）で、あるいは静脈内投与の場合にはより低い濃度で還元されうる。また、特定の対象に対しては、特に、注射容量を最小にしなければならない皮下投与の場合には、高濃度が必要かもしれない。１つのそのような凍結乾燥抗体製剤は米国特許第６，２６７，９５８号（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に開示されている。もう１つの治療用タンパク質の凍結乾燥製剤が米国特許第７，２４７，７０７号（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）に開示されている。
【００９４】
典型的には、該凍結乾燥製剤は、薬物産物（ＤＰ；典型的な実施形態においては、ヒト化ＰＤ−１抗体ｈ４０９Ａ１１またはその抗原結合性フラグメント）の高濃度での還元を見越して、すなわち、低容量の水中での還元を見越して製造される。ついで、より低い濃度へとＤＰを希釈するために、水または等張バッファーでの後続の希釈は容易に行われうる。典型的には、本発明の凍結乾燥製剤中に、例えば皮下投与のために高いＤＰ濃度で還元される場合にほぼ等張な製剤を与えるレベルで賦形剤が加えられる。より低いＤＰ濃度を与える、より大きな容量の水での還元は、必然的に、還元溶液の張性を低下させるが、そのような低下は、非皮下投与、例えば静脈内投与においてはそれほど重要ではない。より低いＤＰ濃度において張性が望ましい場合には、該凍結乾燥散剤は標準的な低容量の水で還元され、ついで等張希釈剤、例えば０．９％  塩化ナトリウムで更に希釈されうる。
【００９５】
本発明の１つの実施形態においては、ヒト化抗ＰＤ−１抗体（またはその抗原結合性フラグメント）は静脈内投与のための還元および使用のための凍結乾燥散剤として製剤化される。典型的な製剤は表３〜４および図１〜９に記載されている。ある実施形態においては、該抗体（またはその抗原結合性フラグメント）は約５０ｍｇ／バイアルで提供され、使用前に注射用無菌水で還元される。所望により、該還元抗体は無菌ＩＶ容器内で０．９％  Ｓｏｄｉｕｍ  Ｃｈｌｏｒｉｄｅ  Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ＵＳＰで無菌的に希釈されうる。該還元製剤の標的ｐＨは５．５±０．５である。種々の実施形態において、本発明の凍結乾燥製剤は、高濃度、例えば約２０、２５、３０、４０、５０、６０、７５、１００ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上への抗ＰＤ−１抗体の還元を可能にする。
【００９６】
本発明は、ある実施形態において、ヒト化抗ＰＤ−１抗体、ｐＨ約５．５またはｐＨ約５．０、例えば約５．１、５．２、５．３、５．４、５．６、５．７、５．８、５．９または６．０のヒスチジンバッファーを含む凍結乾燥製剤を提供する。
【００９７】
ｐＨ値の範囲が例えば「ｐＨ５．５〜６．０のｐＨ」のように列挙されている場合、該範囲は該列挙値を含むと意図される。特に示されていない限り、該ｐＨは本発明の凍結乾燥製剤の還元後のｐＨを意味する。該ｐＨは、典型的には、標準的なガラスバルブｐＨメータを使用して２５℃で測定される。本明細書中で用いる、「ｐＨ  Ｘのヒスチジンバッファー」を含む溶液は、ヒスチジンバッファーを含む、ｐＨ  Ｘの溶液を意味する。すなわち、該ｐＨは該溶液のｐＨを意味すると意図される。
【００９８】
表３の製剤は、バイアル内の凍結乾燥状態および還元状態のバッチ製剤中の成分の重量を表す。凍結乾燥製剤は、自明のこととして、本質的に乾燥しており、したがって、それを示す場合に濃度の概念は有用ではない。単位用量バイアル内の成分の重量に関して凍結乾燥製剤を示すことはより有用であるが、それは用量またはバイアルサイズによって変動するため、問題である。本発明の凍結乾燥製剤を示す場合、同じサンプル（例えば、バイアル）中の薬物物質（ＤＳ）の重量に対する成分の重量の比として、成分の量を表すことが有用である。この比は百分率として表されうる。そのような比は、バイアルサイズ、用量および還元法に無関係に、本発明の凍結乾燥製剤の固有の特性を表す。
【００９９】
他の実施形態においては、抗ヒトＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントの凍結乾燥製剤は、前凍結乾燥溶液のような該凍結乾燥製剤を製造するために使用される前凍結乾燥溶液に関して定義される。１つの実施形態においては、該前凍結乾燥溶液は、抗体またはその抗原結合性フラグメントを約２５ｍｇ／ｍＬの濃度で含む。そのような前凍結乾燥溶液はｐＨ４．４〜５．２（約４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１および５．２を含む）、例えば、好ましくはｐＨ約４．８またはｐＨ約５．５でありうる。
【０１００】
更に他の実施形態においては、抗ヒトＰＤ−１抗体または抗原結合性フラグメントの凍結乾燥製剤は、凍結乾燥製剤から得られた還元された溶液、例えば、表４に開示されている還元された溶液に関して定義される。
【０１０１】
還元（された）溶液は、抗体またはその抗原結合性フラグメントを約１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７５、８０、９０もしくは１００ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上の濃度、例えば、１５０ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬまたは約３００ｍｇ／ｍＬまでの濃度で含みうる。
【０１０２】
本発明の凍結乾燥製剤は前凍結乾燥溶液の凍結乾燥（フリーズドライ）により形成される。凍結乾燥は、該製剤を凍結させ、ついで、一次乾燥に適した温度で水を昇華させることにより達成される。この条件下、産物温度は該製剤の共融点または崩壊温度未満である。典型的には、一次乾燥のための貯蔵温度は、典型的には約５０〜２５０ｍＴｏｒｒの適当な圧力で、（該産物が一次乾燥中に凍結したままである限り）約−３０〜２５℃の範囲である。該製剤、サンプルを収容する容器（例えば、ガラスバイアル）のサイズおよびタイプならびに液体の容量が、乾燥に要する時間を決定し、これは数時間〜数日間（例えば、４０〜６０時間）の範囲でありうる。二次乾燥段階は、主として、容器のタイプおよびサイズならびに使用されるタンパク質のタイプに応じて、約０〜４０℃で行われうる。二次乾燥時間は製品中の所望の残留水分レベルにより決定され、典型的には少なくとも約５時間である。典型的には、凍結乾燥製剤の水分含量は約５％未満であり、好ましくは約３％未満である。該圧力は、一次乾燥工程中で用いたものと同じでありうる。凍結乾燥条件は該製剤およびバイアルサイズに応じて様々となりうる。
【０１０３】
幾つかの場合には、移し替えの工程を省くために、該タンパク質の還元が行われることになる容器内で該タンパク質製剤を凍結乾燥することが望ましいかもしれない。この場合の容器は、例えば、３、５、１０、２０、５０または１００ｃｃのバイアルでありうる。
【０１０４】
本発明の凍結乾燥製剤は投与前に還元される。該タンパク質は、約１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７５、８０、９０もしくは１００ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上の濃度、例えば、１５０ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬまたは約３００ｍｇ／ｍＬ、約５００ｍｇ／ｍＬまでの濃度で還元されうる。該還元製剤の皮下運搬が意図される場合には、高いタンパク質濃度が特に有用である。しかし、静脈内投与のような他の投与経路では、より低い濃度の該タンパク質が望ましいかもしれない（例えば、約５〜５０ｍｇ／ｍＬ）。
【０１０５】
還元は、一般に、完全な水和を確保するために約２５℃の温度で行われるが、所望により、他の温度も用いられうる。還元に要する時間は、例えば、希釈剤のタイプ、賦形剤およびタンパク質の量に左右される。典型的な希釈剤には、無菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝食塩水）、無菌塩類液、リンゲル液またはデキストロース溶液が含まれる。
【０１０６】
本発明の凍結乾燥製剤は、（図１〜９からの安定性データに基づけば）少なくとも約３６カ月間にわたって安定であると予想される。また、２〜８℃のポリプロピレンチューブ内の還元されたｈ４０９Ａ１１製剤からの２４カ月間の安定性データに基づけば、該液体製剤は少なくとも２４カ月間にわたって安定性を示すと予想される。
【０１０７】
図１〜９に示されている結果に一致して、ｈ４０９Ａ１１の凍結還元製剤に関して、２年間にわたる安定性が観察されている。ポリプロピレンチューブ内の２ｍＬのサンプルを５℃ならびに２５ＨおよびＲＨ４条件で貯蔵し、開始時、１、３、６、９、１２、１８および２４カ月の時点で試験した。この還元ｈ４０９Ａ１１製剤は、液体ｈ４０９Ａ１１製剤（すなわち、凍結乾燥されなかった製剤）と同じ濃度で同じ置換基を有しており、安定性は同じであると予想される。
【０１０８】
液体医薬組成物
液体抗体製剤は、薬物（例えば、抗ヒト化ＰＤ−１）を取り、精製プロセスの最終工程としてそれを所望のバッファー中にバッファー交換することにより製造されうる。この実施形態においては、凍結乾燥工程は存在しない。最終バッファー中の薬物を所望の濃度まで濃縮する。賦形剤、例えばスクロースおよびポリソルベート８０を該薬物に加え、適当なバッファーを使用して、それを最終タンパク質濃度まで希釈する。該最終製剤化薬物を、０．２２μｍ  フィルターを使用して濾過し、最終容器（例えば、ガラスバイアル）内に充填する。そのような液体製剤は、１０ｍＭ  ヒスチジン（ｐＨ５．５）、７％  スクロース、０．０２％  ポリソルベート８０および２５ｍｇ／ｍＬ  ｈ４０９Ａ１１を含む最終液体製剤により例示される。
【０１０９】
医薬上許容される担体または賦形剤の選択を促進するために、種々の参考文献が利用可能である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）；Ｈａｒｄｍａｎら（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓら（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら，（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｗｅｉｎｅｒ  ａｎｄ  Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい。
【０１１０】
毒性は、治療用物質、例えばヒト化抗ＰＤ−１抗体（またはその抗原結合性フラグメント）の適切な投与を選択する際の考慮事項である。該抗体組成物の毒性および治療効力は、例えばＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）を決定するための、細胞培養または実験動物における標準的な医薬的方法により決定されうる。毒性効果と治療効果との用量比は治療係数であり、それはＬＤ５０とＥＤ５０との比として表されうる。高い治療係数を示す抗体が好ましい。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトに用いる或る範囲の投与量を製剤化する際に使用されうる。そのような化合物の投与量は、好ましくは、毒性をほとんど又は全く伴わないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内である。該投与量は、使用される剤形および用いられる投与経路に応じて、この範囲内で変動しうる。
【０１１１】
適当な投与経路には、例えば非経口運搬、例えば筋肉内、皮内、皮下、髄内注射、および鞘内、直接的心室内、静脈内、腹腔内投与経路が含まれうる。薬物は、種々の通常の方法、例えば腹腔内、非経口、動脈内または静脈内注射により投与されうる。溶液の容量が制限される必要のある投与方法（例えば、皮下投与）は、高濃度での還元を可能にするために、凍結乾燥製剤を要する。
【０１１２】
あるいは、例えば、免疫病理により特徴づけられる病原体誘発性病変内への、しばしばデポーまたは徐放製剤での、直接的な該抗体の注射により、全身的ではなく局所的に、該抗体を投与することが可能である。更に、標的化薬物運搬系、例えば、免疫病理により特徴づけられる病原誘発性病変を標的化する、例えば、組織特異的抗体で被覆されたリポソームにより、該抗体を投与することが可能である。該リポソームは、選択的に、罹患組織に標的化され、罹患組織により取り込まれる。
【０１１３】
治療のための投与計画の選択は、該物体の血清または組織代謝回転速度、症状の度合、該物体の免疫原性、生物学的マトリックスにおける標的細胞の接近可能性を含む幾つかの要因に左右される。好ましくは、投与計画は、副作用の許容レベルに合致して、患者に運搬される治療用物質の量を最大にする。したがって、運搬される生物学的物質の量は、部分的には、個々の物体および治療される状態の重症度に左右される。抗体、サイトカインおよび小分子の適当な用量を選択する際の指針が利用可能である。例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（編）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１−６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６−１９７３；Ｓｌａｍｏｎら（２００１）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚら（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３−６１９；Ｇｈｏｓｈら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２；Ｌｉｐｓｋｙら（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４−１６０２；Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ２００３（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５７ｔｈ  Ｅｄ）；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ；ＩＳＢＮ：１５６３６３４４５７；５７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００２）を参照されたい。
【０１１４】
適当な用量の決定は、例えば、治療に影響を及ぼすことが当技術分野において知られている若しくは疑われている又は治療に影響を及ぼすと予想されるパラメータまたは因子を用いて、臨床家によりなされる。該タンパク質の適当な投与量（「治療的有効量」）は、例えば、治療されるべき状態、該状態の重症度および経過、該タンパク質が予防目的で投与されるのか又は治療目的で投与されるのか、過去の療法、患者の臨床病歴および該タンパク質に対する応答、使用されるタンパク質のタイプ、ならびに担当医師の判断に左右される。一般に、投与は、最適用量より幾分少ない量から開始し、ついで、いずれかの負の副作用との比較において所望の又は最適な効果が得られるまで、小さな増加量でそれを増加させる。重要な診断尺度には、例えば炎症の症状の尺度、または産生される炎症性サイトカインのレベルが含まれる。該抗体は、適切には、一度に又は反復的に患者に投与される。該抗体は、単独で、または他の薬物もしくは療法と組合せて投与されうる。
【０１１５】
医薬抗体製剤は、連続的注入により、または例えば１日、週１〜７回、１週間、２週間、３週間、毎月、隔月などの間隔の投与により投与されうる。好ましい投与法は、有意な望ましくない副作用を回避する最大用量または用量頻度を含むものである。毎週の合計用量は、一般に、少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ、０．２μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ体重またはそれ以上である。例えば、Ｙａｎｇら（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７−４３４；Ｈｅｒｏｌｄら（２００２）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２−１６９８；Ｌｉｕら（１９９９）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１−４５６；Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉら（２０００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３−１４４を参照されたい。小分子治療用物質、例えばペプチド模倣体、天然物または有機化合物の所望の用量は、モル／ｋｇ単位で、抗体またはポリペプチドの場合とほぼ同じである。
【０１１６】
ある実施形態においては、投与は、該医薬製剤、すなわち、ｈ４０９Ａ１１を含む製剤の１．０、３．０および１０ｍｇ／ｋｇの漸増用量を、治療の経過にわたって対象に投与することを含む。ｈ４０９Ａ１１を含む製剤は還元液体製剤であることが可能であり、あるいはそれは、未だ凍結乾燥されていない液体製剤であることが可能である。時間経過は様々であることが可能であり、所望の効果が得られる限り、継続可能である。ある実施形態においては、用量増加は約１０ｍｇ／ｋｇの用量まで継続される。ある実施形態においては、該対象はメラノーマまたは他の形態の充実性腫瘍の病歴または細胞学的診断を有し、ある場合には、対象は、測定可能でない疾患を有しうる。ある実施形態においては、該対象は他の化学療法で治療されたことがあり、他の実施形態においては、該対象は治療未経験者である。
【０１１７】
更に追加的な実施形態においては、該投与計画は、本明細書に記載されている医薬製剤（すなわち、ｈ４０９Ａ１１を含む製剤）の１、３または１０ｍｇ／ｋｇの用量を治療経過の全体にわたって投与することを含む。そのような一定の投与計画の場合、投与間の間隔は約１４日（±２日）である。ある実施形態においては、投与間の間隔は約２１日（±２日）である。
【０１１８】
ある実施形態においては、該投与計画は、患者における用量増加を伴って、０．００５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの用量を投与することを含む。ある実施形態においては、５ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇの用量を３週間ごと又は２週間ごとの間隔で投与する。更に追加的な実施形態においては、メラノーマ患者または他の充実性腫瘍を有する患者に、３ｍｇ／ｋｇの用量を３週間間隔で投与する。これらの実施形態においては、患者は非切除可能疾患を有するべきであるが、患者は、過去に手術を受けていることも可能である。
【０１１９】
ある実施形態においては、本明細書に記載されている医薬製剤のいずれかの３０分間のＩＶ注入を対象に投与する。用量を増加させる或る実施形態においては、第１投与と第２投与との間の投与間隔は約２８日（±１日）である。ある実施形態においては、第２投与と第３投与との間の間隔は約１４日（±２日）である。ある実施形態においては、第２投与後の投与の投与間隔は約１４日（±２日）である。
【０１２０】
ある実施形態においては、同時係属特許公開ＷＯ２０１２／０１８５３８またはＷＯ２００８／１５６７１２に記載されているとおりの細胞表面マーカーおよび／またはサイトカインマーカーの使用が、ＰＤ−１経路の遮断が関わるモニター、診断、患者選択および／または治療計画のためにバイオアッセイにおいて行われる。
【０１２１】
皮下投与は、シリンジまたは他の注射装置（例えば、Ｉｎｊｅｃｔ−ｅａｓｅ（登録商標）装置）、インジェクターペンまたは無針装置（例えば、ＭｅｄｉＪｅｃｔｏｒおよびＢｉｏＪｅｃｔｏｒ（登録商標））を行われうる。
【図面の簡単な説明】
【０１２２】
【図１Ａ】図１Ａ〜Ｂは、５℃で貯蔵（２４カ月）されたｐＨ５．５におけるｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図１Ｂ】図１Ａ〜Ｂは、５℃で貯蔵（２４カ月）されたｐＨ５．５におけるｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図２Ａ】図２Ａ〜Ｂは、２５Ｈ条件（２５℃、６０％  ＲＨ、１２カ月）で貯蔵されたｐＨ５．５におけるｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図２Ｂ】図２Ａ〜Ｂは、２５Ｈ条件（２５℃、６０％  ＲＨ、１２カ月）で貯蔵されたｐＨ５．５におけるｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図３Ａ】図３Ａ〜Ｂは、ＲＨ４条件（４０℃、７５％  ＲＨ、６カ月）で貯蔵されたｐＨ５．５におけるｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図３Ｂ】図３Ａ〜Ｂは、ＲＨ４条件（４０℃、７５％  ＲＨ、６カ月）で貯蔵されたｐＨ５．５におけるｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図４Ａ】図４Ａ〜Ｂは、５℃（２４カ月）で貯蔵されたｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図４Ｂ】図４Ａ〜Ｂは、５℃（２４カ月）で貯蔵されたｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図５Ａ】図５Ａ〜Ｂは、２５Ｈ条件（２５℃、６０％  ＲＨ、６カ月）で貯蔵されたｐＨ５．５におけるｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図５Ｂ】図５Ａ〜Ｂは、２５Ｈ条件（２５℃、６０％  ＲＨ、６カ月）で貯蔵されたｐＨ５．５におけるｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図６Ａ】図６Ａ〜Ｂは、ＲＨ４条件（４０℃、７５％  ＲＨ、６カ月）で貯蔵されたｐＨ５．５におけるｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図６Ｂ】図６Ａ〜Ｂは、ＲＨ４条件（４０℃、７５％  ＲＨ、６カ月）で貯蔵されたｐＨ５．５におけるｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図７Ａ】図７Ａ〜Ｂは、５℃（２４カ月）で貯蔵されたｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図７Ｂ】図７Ａ〜Ｂは、５℃（２４カ月）で貯蔵されたｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図８Ａ】図８Ａ〜Ｂは、２５Ｈ条件（２５℃、６０％  ＲＨ、６カ月）で貯蔵されたｐＨ５．５におけるｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図８Ｂ】図８Ａ〜Ｂは、２５Ｈ条件（２５℃、６０％  ＲＨ、６カ月）で貯蔵されたｐＨ５．５におけるｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図９Ａ】図９Ａ〜Ｂは、ＲＨ４条件（４０℃、７５％  ＲＨ、６カ月）で貯蔵されたｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。
【図９Ｂ】図９Ａ〜Ｂは、ＲＨ４条件（４０℃、７５％  ＲＨ、６カ月）で貯蔵されたｈ４０９Ａ１１の凍結乾燥製剤に関する安定性データを示す。  本発明の広範な範囲は以下の実施例により最も良く理解される。該実施例は、それらの特定の実施形態に本発明を限定するものではない。本明細書に記載されている特定の実施形態は例示として記載されているに過ぎず、本発明は、添付の特許請求の範囲の条項、およびそのような特許請求の範囲が特許請求する均等物の全範囲により限定されるべきである。
【０１２３】
実施例
実施例１
抗体の製造
ｈ４０９Ａ１１は、ヒトＰＤ−１に結合しＰＤ−１とそのリガンドＰＤＬ１およびＰＤＬ２との相互作用を遮断するヒト化モノクローナル抗体である。該抗体は、Ｆｃ領域内の安定化Ｓ２２８Ｐ配列改変を伴うＩｇＧ４／カッパイソタイプである。表２はＣＤＲ配列の一覧を示す。グリコシル化を除外すると、該アミノ酸配列に由来する重鎖および軽鎖の理論分子量は、それぞれ４９．３ｋＤａおよび２３．７ｋＤａである。マウスをｈＰＤ−１  ＤＮＡで免疫化することにより、親抗体（ｈＰＤ−１．０９Ａ）を製造した。同時係属ＷＯ２００８／１５６７１２に記載されているとおり、ＣＤＲグラフティング技術（例えば、米国特許第５，２２５，５３９号）を用いて、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）により、該親マウス抗ヒトＰＤ−１抗体のヒト化により、ｈ４０９Ａ１１抗体が製造された。
【０１２４】
ｈ４０９Ａ１１の重鎖および軽鎖の発現のために、発現プラスミドを構築した。該重鎖および軽鎖ならびにそれらのそれぞれのプロモーターおよびポリＡシグナル配列をコードするヌクレオチド配列をＤＮＡ配列分析により確認した。ついで該発現ベクターを使用して、ＣＨＯ細胞系をトランスフェクトした。増殖、生産性および生産安定性に基づいて、マスター・シード・バンク（Ｍａｓｔｅｒ  Ｓｅｅｄ  Ｂａｎｋ）（ＭＳＢ）の作製のために、抗体発現クローンを選択した。ついでこのＭＳＢを使用して、該抗体を製造し、マスター細胞バンク（Ｍａｓｔｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂａｎｋ）（ＭＣＢ）を作製した。
【０１２５】
ＭＣＢからの細胞を振とうフラスコ、培養バッグおよびシード・バイオリアクター内で増殖させて、該抗体産物を製造するための生産バイオリアクター用の接種物を得た。更なる加工は、３つのクロマトグラフィー工程（プロテインＡアフィニティ、カチオン交換およびアニオン交換クロマトグラフィー）、２つの直交（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ）ウイルス除去工程（低ｐＨウイルス不活化およびウイルス減少濾過）、限外濾過／ダイアフィルトレーションおよび最終的な０．２μｍ濾過工程を含むものであった。
【０１２６】
ｈ４０９Ａ１１の構造および特徴
ｈ４０９Ａ１１は、ヒトＰＤ−１とそのリガンドＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２との相互作用を遮断する高選択性ヒト化モノクローナル抗体である。ｈ４０９Ａ１１は、各重鎖のＦｃドメイン内のアスパラギン２９７において異種グリコシル化されていて、付加されたグリカン鎖に応じて典型的には１４８．９〜１４９．５ｋＤａの範囲の分子量を示す。ｈ４０９Ａ１１の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列は配列番号３１および配列番号３６に見出される。リーダー配列を伴わない軽鎖は配列番号３６のアミノ酸残基２０−２３７を含み、リーダー配列を伴わない重鎖は配列番号３１のアミノ酸残基２０−４６６を含む。
【０１２７】
安定ヒト化ＰＤ−１製剤
ある実施形態においては、安定なヒト化ＰＤ−１、例えばｈ４０９Ａ１１は、凍結条件（温度範囲は典型的には約２〜８℃であるが、ある状況下では、該水性製剤は、約２５℃および約４０℃を含む他の温度で約１２か月間までの期間にわたって安定性を示しうる）下で貯蔵される、１０ｍＭ  ヒスチジンバッファー（ｐＨ５．０〜６．０）中の２５ｍｇ／ｍＬ以上の濃度の水溶液である。ある実施形態においては、安定なヒト化ＰＤ−１、例えばｈ４０９Ａ１１は、１０ｍＭ  ヒスチジンバッファー（ｐＨ５．０〜６．０）中の約２５ｍｇ／ｍＬの濃度の水溶液である。該安定製剤（すなわち、薬物）は、典型的には、透明ないしオパール色の溶液であり、粒子を含有しうる。
【０１２８】
ある実施形態においては、ｈ４０９Ａ１１の液体または凍結溶液は、スクロースおよびポリソルベート８０を含有するヒスチジンバッファー（ｐＨ５．５）中で製剤化される。
【０１２９】
もう１つの典型的製剤は、凍結乾燥形態でスクロースおよびポリソルベート８０を含有するヒスチジンバッファー（ｐＨ５．５）中で製剤化されたｈ４０９Ａ１１を含む。
【０１３０】
ある実施形態においては、安定なヒト化ＰＤ−１製剤は、１回使用を意図したバイアル内の凍結乾燥散剤として提供される。
【０１３１】
ある実施形態においては、安定なヒト化ＰＤ−１製剤は注射用水（ＷＦＩ）で還元され、無菌ＩＶ容器内で注射用の適当な容量の０．９％  塩化ナトリウムで無菌的に希釈されて、混合溶液を与える。
【０１３２】
生物活性
ヒト化抗ＰＤ−１抗体の生物活性を、ヒトＰＤ−１への結合においてＰＤ−Ｌ１（ＰＤ−１の天然リガンド）と競合するその能力により測定され、参照物質と比較して競合ＥＬＩＳＡにおいて定量する。本明細書に記載されている安定製剤は、長期間、例えば少なくとも約１８カ月間にわたって生物活性を示す。種々の貯蔵条件下のｈ４０９Ａ１１の幾つかのバッチの安定性を図１〜９に示す。
【０１３３】
ヒト化抗ＰＤ−１抗体の安定製剤
抗ＰＤ−１抗体の凍結乾燥製剤を以下のとおりに製造する。ｈ４０９Ａ１１抗体の典型的なバッチ製剤を表３に示す。抗体の最終濃度は２５ｍｇ／ｍＬである。このバッチ製剤は、後記表４に関して記載されているとおり、凍結乾燥された５０ｍｇ／バイアルの単位を製造するために使用されうる。植物由来のポリソルベート８０を使用する。ｐＨを約５．５（±０．２）の所望の値に調節するために、追加的な塩酸または水酸化ナトリウムを加えることが可能である。該成分を無菌注射用水（ＷＦＩ）で１４Ｌの最終容量にする。表３に一覧されている量の比例的減少により、より小さな対応ロットを製造することが可能である。
【０１３４】
液体形態（例えば、水性製剤中のｈ４０９Ａ１１）である薬物（例えば、本明細書に記載されているバッチ製剤からの抗ヒト化ＰＤ−１）を取り、精製プロセスの最終工程としてそれを所望のバッファー中にバッファー交換することにより、典型的な液体抗体製剤を製造する。この場合、予め凍結乾燥工程は行わない。該最終バッファー中の薬物を所望の濃度まで濃縮する。賦形剤、例えばスクロースおよびポリソルベート８０を該薬物に加え、適当なバッファーを使用して、それを最終タンパク質濃度まで希釈する。該最終製剤化薬物を、０．２２μｍ  フィルターを使用して濾過し、最終容器（例えば、ガラスバイアル）内に充填する。そのような液体製剤は、１０ｍＭ  ヒスチジン（ｐＨ５．５）、７％  スクロース、０．０２％  ポリソルベート８０および２５ｍｇ／ｍＬ  ｈ４０９Ａ１１を含む最終液体製剤を含む。
【０１３５】
【表３】
0006014116.tif 000004
ヒト抗ＰＤ−１の典型的な最終凍結乾燥製剤の単位組成物を表４に示す。
【０１３６】
【表４】
0006014116.tif 000005
表４の単位製剤は、水を除去するための凍結乾燥の後、表３のバッチ製剤の１／２０，０００を含む。５０ｍｇのＤＳを表３の２５ｍｇ／ｍｌ  バッチ製剤の２．０ｍＬとして加える。各バイアルに２．４ｍＬを充填し、それを２．３ｍＬのｓＷＦＩで還元して、該凍結乾燥ケークの体積増加により約２．４ｍＬの還元溶液を得る。
【０１３７】
該薬物を無菌の２０ｍｍ頚、６Ｒ  ＤＩＮ、１型ガラス管バイアル内に充填し、２０ｍｍの灰色ブチルゴム栓で閉じ、アルミニウムのクリンプシールで密閉する。バイアルを２〜８℃で貯蔵し、出荷時に凍結させる。
【０１３８】
配合は以下の工程を含む。風袋計測された配合容器内に必要量の注射用水（ＷＦＩ）を加える。スクロース、ヒスチジンおよび植物由来のポリソルベート８０を加え、混合しながら溶解させる。ｐＨを測定し、必要に応じて、ｐＨを約５．４〜５．６に調節する。塩酸および／または水酸化ナトリウムを使用してｐＨを調節する。薬物を外界温度と平衡化し、該薬物を該配合容器内にゆっくり加える。起泡を避けるために、穏やかな混合を継続する。ｐＨを再び測定し、必要に応じて、ｐＨを約５．５に調節する。穏やかな混合を継続しながら、ＷＦＩをバルク溶液の最終重量まで加える。
【０１３９】
濾過は以下の工程を含む。清澄化フィルター（０．２２μｍ）および滅菌フィルター（０．２２μｍ）を該配合容器に接続する。清澄化濾過工程の後、生物負荷試験のために、該バルク溶液のアリコートを集める。無菌容器内に０．２２μｍ  フィルターを使用して無菌濾過を行う。バルク安定性試験のために、無菌濾過後、サンプルのアリコートを取り出す。産物濾過後、フィルター完全性試験を行う。
【０１４０】
充填は以下の工程を含む。適当な充填装置を使用し、２．４ｍＬの目標充填体積が達成されるように、滅菌されたＩ型ガラス管バイアル内に該産物溶液を無菌的に充填する。充填中に充填重量検査を行う。滅菌されたリオシェイプ（ｌｙｏ−ｓｈａｐｅ）栓を充填バイアル内に部分的に配置する。該充填バイアルを適当な凍結乾燥器内に配置する。
【０１４１】
凍結乾燥、栓付け、およびキャップ付けは以下の工程を含む。適当な凍結乾燥サイクルを用いて、該充填バイアルを凍結乾燥する。凍結乾燥が完了した後、該バイアルを０．２２μｍ濾過窒素で埋戻しし、完全に栓をする。該栓付きバイアルを該凍結乾燥機から取り出し、それらを密閉する。
【０１４２】
得られたバイアルを視認性欠損に関して検査し、２〜８℃で貯蔵する。完成した単位投与バイアルを凍結条件下で出荷する。
【０１４３】
実施例２
ヒト化抗ＰＤ−１抗体の凍結乾燥製剤の安定性試験
図１〜９は種々の貯蔵条件下のヒト化抗ヒトＰＤ−１抗体の凍結乾燥製剤の安定性試験のデータを示す。バイアルを直立配置で貯蔵した。後記に更に詳しく記載されているとおり、本発明の製剤は、ｐＨ５．５（ヒスチジンバッファー）で凍結乾燥された抗体および類似液体製剤に関しては、少なくとも２４カ月間にわたる安定性を示す。
【０１４４】
安定性を以下のとおりに評価した。サンプルを６Ｒ  ＤＩＮ  Ｉ型ガラスバイアル内で凍結乾燥し、２０ｍｍ  ブロモブチル・リオ栓（Ｈｅｌｖｏｅｔ  Ｒｕｂｂｅｒ  ＆  Ｐｌａｓｔｉｃ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＢＶ，Ｈｅｌｌｅｖｏｅｔｓｌｕｉｓ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）およびフリップ・オフ・アルミニウム・シールで密閉した。バイアルを安定性試験場に以下の貯蔵条件下で配置した：５℃（５±３℃）、２５Ｈ（２５、６０％相対湿度）またはＲＨ４（４０℃、７０％相対湿度）。開始時点、および或るサンプルに関しては、１、２、３、６、９、１２、１８および２４カ月を含む種々の時点で、サンプルを得た。
【０１４５】
該サンプルの安定性は、表１〜９の表に示されている種々の特性により表される。該凍結乾燥サンプルを目視検査し、還元（再構成）し、該還元製剤を目視検査した。還元後のサンプルのｐＨを測定し、タンパク質濃度をＵＶ吸光度により決定した。該サンプルをＣＥ−ＳＤＳ技術により分析した。該技術においては、タンパク質を還元および非還元条件下でドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）で変性させ、毛管電気泳動（ＣＥ）を用いて分離した。該タンパク質は、それらの見掛け分子量に基づいて分離される。非還元条件下、主要ＩｇＧピーク以外の全ての種は不純物として分類される。還元条件下、該ＩｇＧは重鎖および軽鎖へと分離される。全ての他の種は不純物として分類される。
【０１４６】
該サンプルの純度を高速サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）により更に評価した。この場合、単量体の百分率、ならびに高分子量種（おそらく凝集物）および後期溶出ピーク（おそらく分解産物）の百分率を決定した。
【０１４７】
追加的なサンプル特徴づけデータを図１〜９に示す。酸性または塩基性変異体の存在を示すことにより純度を評価するために、高速イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰ−ＩＥＸ）を用いた。結果は全観察物質に対する百分率として示されている。ヒトＰＤ−１への結合に関する酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて、生物学的機能に関して、該サンプルを更に特徴づけした。半最大結合を得るのに必要な抗体濃度はＥＣ５０と称される。ＥＣ５０の比率により該試験サンプルの結合曲線を参照物質（または対照）と比較することにより、該試験サンプルの効力を評価した。参照物質（または対照）に対する相対効力（％）として効力を表した。また、比色滴定により、該凍結乾燥粉末の水分含量も決定した。１０μｍ以上および２５μｍ以上の粒子を計数するために、粒状物数の測定を行った。これらの測定に用いた方法はＵＳＰ＜７８８＞に基づくものであった。
【０１４８】
これらの結果は、ｐＨ約５．５で少なくとも２４か月間にわたり、本発明の高安定性製剤を実証している。該データは、該試験貯蔵条件下のサンプルに関しては不安定性を反映する経時的な傾向を示していない。
【０１４９】
実施例３：初期臨床結果
進行充実性腫瘍を有する患者におけるｈ４０９Ａ１１（抗ＰＤ−１モノクローナル抗体）の第１相研究
第１相治験はｈ４０９Ａ１１の安全性、ＰＫ、ＰＤおよび抗腫瘍活性を検査した。標準的な化学療法に治療抵抗性である進行悪性疾患を有する患者において、非盲検・用量増加研究を行った。最初の患者の組合せにおいては、進行充実性腫瘍を有する患者を、本明細書に記載されている安定ｈ４０９Ａ１１製剤で治療した。手術に関する制限／制約は無かったが、患者は現在、手術の候補者ではなかった。３〜６名の患者のコホートを１、３または１０ｍｇ／ｋｇのＩＶ用量において登録した（３＋３の計画）。初期投与および２８日間のサイクルの後、患者に２週間ごとに複数用量を投与した。第１相のＡ部においては、３名の患者を１ｍｇ／ｋｇで治療し、３名の患者を３ｍｇ／ｋｇで治療し、９名の患者を１０ｍｇ／ｋｇで治療し、全員に２週間ごとに投与した。患者内用量増加は行わなかった。ＲＥＣＩＳＴ  １．１指針を用いて、８週間ごとに放射線評価を行った。
【０１５０】
９名の患者（各用量レベルの３名）が用量規制毒性（ＤＬＴ）期間（２８日間）を完了した。患者は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ，ｎ＝３）、直腸癌（ｎ＝２）、メラノーマ（ＭＥＬ，ｎ＝２）、肉腫（ｎ＝１）またはカルシノイド（ｎ＝１）を有していた。現在までに、ＤＬＴを伴わずに合計６３用量を投与した（中央値７／患者；最大１２）。全ての用量にわたる薬物関連の悪影響（ＡＥ）は、等級１の疲労（ｎ＝３）、悪心（Ｎ＝２）、下痢（ｎ＝１）、味覚障害（ｎ＝１）、乳房痛（ｎ＝１）および痒み（Ｎ＝１）を含んでいた。１つの薬物関連の等級２の痒みのＡＥが報告された。等級３以上の薬物関連ＡＥは観察されなかった。ＰＫデータを表５に示す。ＲＥＣＩＳＴに基づけば、６カ月を超える療法に際して、ＭＥＬを有する１名の患者が部分的応答を示し、進行癌を有する３名の追加的患者において、腫瘍サイズ減少（安定疾患）の予備的証拠が観察された。これらの結果は、ｈ４０９Ａ１１が、３つの試験用量レベル（すなわち、１、３および５ｍｇ／ｋｇ）で、ＤＬＴを伴わずに十分に耐えたことを示している。抗腫瘍活性の証拠が観察された。
【０１５１】
【表５】
0006014116.tif 000006
【０１５２】
【表６】
0006014116.tif 000007
添付の特許請求の範囲を含む本出願において用いる単数形の語は、文脈に明らかに矛盾しない限り、それらの対応する複数形対象物を含む。特に示されていない限り、本明細書中で言及されているタンパク質および対象は、別の種ではなくヒトタンパク質および対象である。
【０１５３】
参考文献
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【０１５４】
本明細書中に引用されている全ての参考文献を、各個の刊行物、データベースエントリー（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願または特許が参照により本明細書に組み入れられると具体的かつ個別に示されているのと同様に、参照により本明細書に組み入れることとする。参照により組み入れるというこの陳述は、そのような引用が、参照により組み入れるという宣誓陳述の直前直後でない場合であっても、３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．５７（ｂ）（１）に従い、各個の刊行物、データベースエントリー（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリー）、特許出願または特許[それらのそれぞれは３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．５７（ｂ）（２）に従い明らかに特定されるものである］に関連づけることを出願人が意図しているものである。参照により組み入れるという宣誓陳述が明細書中に含まれている場合、それは、参照により組み入れるというこの一般的陳述を何ら弱めるものではない。本明細書における参考文献の引用は、該参考文献が関連先行技術であると自認するものではなく、また、それは、これらの刊行物または文書の内容または日付に関して何ら自認するものでもない。
【図１Ａ】
0006014116.tif 000008
【図１Ｂ】
0006014116.tif 000009
【図２Ａ】
0006014116.tif 000010
【図２Ｂ】
0006014116.tif 000011
【図３Ａ】
0006014116.tif 000012
【図３Ｂ】
0006014116.tif 000013
【図４Ａ】
0006014116.tif 000014
【図４Ｂ】
0006014116.tif 000015
【図５Ａ】
0006014116.tif 000016
【図５Ｂ】
0006014116.tif 000017
【図６Ａ】
0006014116.tif 000018
【図６Ｂ】
0006014116.tif 000019
【図７Ａ】
0006014116.tif 000020
【図７Ｂ】
0006014116.tif 000021
【図８Ａ】
0006014116.tif 000022
【図８Ｂ】
0006014116.tif 000023
【図９Ａ】
0006014116.tif 000024
【図９Ｂ】
0006014116.tif 000025
【配列表】
0006014116000001.app