(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゾレドロン酸と、水と、Ｌ−リシン、ＤＬ−リシン、ニコチンアミド、アデニンおよびゾレドロン酸塩から選択される化合物と、を含むか、またはゾレドロン酸と、グリシンと、を含む、ゾレドロン酸の結晶性分子錯体。
【請求項２】
ゾレドロン酸、ゾレドロン酸ナトリウムおよび水錯体、
ゾレドロン酸アンモニウムおよび水錯体、
ゾレドロン酸ジアンモニア水錯体、
ゾレドロン酸、Ｌ−リシン、および水錯体、
ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水錯体、
ゾレドロン酸、ゾレドロン酸塩、ＤＬ−リシン、エタノール、および水錯体、
ゾレドロン酸、アデニン、および水錯体、
ゾレドロン酸、ニコチンアミド、および水錯体、ならびに
ゾレドロン酸およびグリシン錯体、
から成る群から選択される、請求項１に記載のゾレドロン酸の結晶性分子錯体。
【請求項３】
前記結晶性分子錯体は、
８．１、１３．３、２１．５、２４．６、および２５．６±０．２°２θにピークを有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする結晶性分子錯体である、結晶性ゾレドロン酸、ゾレドロン酸ナトリウム、および水分子錯体、
１１．０、１４．６、１５．４、１９．９、および２９．４±０．２°２θに強いピークを有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする結晶性分子錯体である、結晶性ゾレドロン酸アンモニウムおよび水分子錯体、
１２．２、１３．０、１４．１、１７．１、および１９．３±０．２°２θに強いピークを有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする結晶性分子錯体である、ゾレドロン酸ジアンモニウム水分子錯体、
９．０、１４．４、１８．１、２６．０、および２９．６±０．２°２θにピークを有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする結晶性分子錯体である、結晶性ゾレドロン酸、Ｌ−リシン、および水分子錯体、
９．６、１０．７、１４．３、２１．４、２３．５±０．２°２θにピークを有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする結晶性分子錯体である、結晶性ゾレドロン酸、Ｌ−リシン、および水分子錯体、
８．３、１１．８、１２．３、１５．８、および２０．８±０．２°２θにピークを有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする結晶性分子錯体である、結晶性ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水分子錯体、
９．１、１４．７、１８．０、２１．２、および２６．０±０．２°２θにピークを有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする結晶性分子錯体である、結晶性ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水分子錯体、
９．７、１０．８、１４．４、１８．９、２１．４±０．２°２θにピークを有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする結晶性分子錯体である、結晶性ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水分子錯体、
８．８、９．７、１７．６、２３．１、および２６．５±０．２°２θにピークを有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする結晶性分子錯体である、結晶性ゾレドロン酸、ゾレドロン酸塩、ＤＬ−リシン、エタノール、および水分子錯体、
１３．６、１５．９、１９．７、２７．９、および２９．５±０．２°２θにピークを有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする結晶性分子錯体である、結晶性ゾレドロン酸、アデニン、および水分子錯体、
１３．１、１５．２、２１．０、２３．９、および２６．５±０．２°２θに強いピークを有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする結晶性分子錯体である、結晶性ゾレドロン酸、ニコチンアミド、および水分子錯体、または
１０．２、１７．８、１９．９、２２．９、および２８．１±０．２°２θにピークを有するＸ線粉末回折パターンを特徴とする結晶性分子錯体である、結晶性ゾレドロン酸およびグリシン分子錯体、
である、請求項２に記載のゾレドロン酸の結晶性分子錯体。
【請求項４】
ゾレドロン酸と、リシンと、を含む、結晶性分子錯体。
【請求項５】
リシンが、Ｌ−リシンまたはＤＬ−リシンである、請求項４に記載の結晶性分子錯体。
【請求項６】
さらに、水、エタノールまたはそれらの組み合わせを含む、請求項５に記載の結晶性分子錯体。
【請求項７】
結晶性ゾレドロン酸、Ｌ−リシン、および水分子錯体、
結晶性ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水分子錯体、ならびに
結晶性ゾレドロン酸、ゾレドロン酸塩、ＤＬ−リシン、エタノール、および水分子錯体、
から成る群から選択される、請求項６に記載の結晶性分子錯体。
【請求項８】
請求項５〜７のいずれか一項に記載の結晶性分子錯体と、リシンと、を含む組成物。
【請求項９】
ゾレドロン酸と、グリシンと、を含む、結晶性分子錯体。
【請求項１０】
請求項９に記載の結晶性分子錯体と、グリシンと、を含む組成物。
【請求項１１】
請求項１〜７および９のいずれかに記載の結晶性分子錯体あるいは請求項８または１０に記載の組成物と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、医薬組成物。
【請求項１２】
前記組成物は、経口固体投薬形態である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
骨粗しょう症、高カルシウム血症、癌誘発性骨転移、パジェット病に関連する疾患状態の治療および／または予防、あるいはアジュバントまたはネオアジュバント癌療法のための医薬組成物であって、請求項１−７および９のいずれかに記載の結晶性分子錯体あるいは請求項８または１０に記載の組成物の治療有効量を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連特許の相互参照
本願は、２００９年７月３１日出願の米国特許出願第６１／２３０，２２２号、２００９年１２月１８日出願の米国特許出願第６１／２８８，０３６号、２０１０年２月６日出願の米国特許出願第６１／３０２，１１０号、２０１０年３月１１日出願の米国特許出願第６１／３１２，８７９号、２０１０年３月２９日出願の米国特許出願第６１／３１８，５０３号、および２０１０年６月２９日出願の米国特許出願第６１／３５９，５４４号（参照により本明細書に組み込まれる）の優先権を請求するものである。
【０００２】
本開示は、低浸透性および難水溶性薬物化合物の新規結晶性形態を生成することにより、そのような薬物の水溶性ならびに浸透性を改良することに関する。新規形態は、それらの共結晶、塩、水和物、溶媒和物、塩の溶媒和物、および混合物を含むが、それらに限定されない。これらの新しい形態のうちの１つ以上を含む、薬物送達システムに好適な調製および医薬組成物のための方法を開示する。
【背景技術】
【０００３】
多くの生物調製分類システム（ＢＣＳ）クラスＩＩＩまたはＩＶ薬物は、消化（ＧＩ）管膜浸透性の欠如により、経口生物学的利用能が乏しい。浸透性、ひいては、そのような薬物の経口生物学的利用能を改良するための異なる戦略が実施されている。例えば、米国特許出願公開第２００６／００６８０１０号は、１つ以上のアミノ酸、少なくとも１つの粒間親水性ポリマー、および付加的即放賦形剤との薬物の物理的固体混合物の造粒によって、薬物の浸透性を改良し、ひいては、その生物学的利用能を向上させるための調合方法について説明している。別の出願である、国際公開第２００６／０２００９  Ａ１号は、ビスホスフォネート等の低浸透性薬物の経口生物学的利用能の向上について開示している。すなわち、それらの薬物のうちの１つとして、リセドロン酸を、エチレンジアミン四酢酸塩（ＥＤＴＡ）および他の賦形剤等のキレート剤と混合し、経口投薬形態を生成するというものである。さらに別の出願である、国際公開第２００７／０９３２２６  Ａ１号は、修飾されたアミノ酸（アミノ基とフェニルまたはシクロヘキシルのアシル化あるいはスルホン化）および他の賦形剤との薬物の物理的混合物を生成することによって、イバンドロン酸の生物学的利用能を改良するための方法について説明している。別の出願である、国際公開第２００３／００７９１６  Ａ１号は、ビタミンＤと経口的に調合され、ビタミンＤの即放１時間後に放出される、低浸透性薬物である、アレンドロネートの生物学的利用能を改良するための胃貯留システムについて報告している。国際公開第２００６／０８０７８０号はさらに、キトサンと薬物の最大で１０：１の重量比によって、それを生体適合性カチオンポリマー（すなわち、水溶性キトサン）と混合することによって、低浸透性ビスホスフォネートである、アレンドロネートの浸透性および生物学的利用能を改良するための別の方法について開示しており、結果として得られる混合物は、固体または液体経口投薬形態に調合可能である。薬物材料の浸透性を改良するためのさらなる方法は、米国特許出願公開第２００７／０１４３１９  Ａ１号に論じられており、そこでは、経口投薬形態は、不活性成分（中鎖脂肪酸のエステルまたは脂溶性ポリエチレングリコールエステルのいずれか）とビスホスホン酸（例えば、ゾレドロン酸）の粉末混合物によって調合される。類似アプローチは、米国特許出願公開第２００７／０２３８７０７  Ａ１号に開示されており、そこでは、中鎖脂肪酸またはその誘導体（６−２０個の炭素原子脂肪酸鎖）が、腸溶性被覆された（enterically coated）カプセル内に、低浸透性薬物（例えば、ゾレドロン酸）と物理的に混合される。
【０００４】
（１−ヒドロキシ−２−イミダゾール−１−イル−１−ホスホノ−エチル）ホスホン酸として知られる、ゾレドロン酸は、以下の化学構造によって描写される。
【化１】
0005852569.tif 000002
ゾレドロン酸は、有効性の観点から、前の世代のものを遥かに上回るものであって、主に、骨粗しょう症、パジェット病、高カルシウム血症の適応症、および骨転移の阻害のために、使用される、第三世代ビスホスフォネートである。Ｎｏｖａｒｔｉｓによって最初に開発され、Ｚｏｍｅｔａ（登録商標）およびＲｅｃｌａｓｔ（登録商標）の商標名において、一水和物として市販された。ゾレドロン酸は、カナダにおいて、高カルシウム血症の治療に対して、２０００年に初めて承認された。後に、米国において、２００１年には、高カルシウム血症、２００２年には、固形腫瘍からの多発性骨髄腫および骨転移、２００７年には、骨粗しょう症およびパジェット病のための使用に対して承認された。臨床試験もまた、行われ、ネオアジュバントまたはアジュバント癌療法におけるゾレドロン酸の使用について、継続的模索が行われている（Ｃｏｌｅｍａｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１０；  １０２（７）：１０９９−１１０５，  Ｇｎａｎｔ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．  ２００９，  ３６０（１７）：６７９−６９１  ａｎｄ  Ｄａｖｉｅｓ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，  ２０１０，  ２８（７ｓ）：Ａｂｓｔｒａｃｔ  ８０２１）。ゾレドロン酸は、悪性腫瘍、多発性骨髄腫、および固形腫瘍からの骨転移の高カルシウム血症の場合、１５分にわたって、４ｍｇの静脈内（ＩＶ）用量として投与される一方、骨粗しょう症およびパジェット病の場合、１５分間の５ｍｇのＩＶ用量が使用される。
【０００５】
ゾレドロン酸は、水および０．１  Ｎ  ＨＣｌ溶液には難溶性であるが、０．１  Ｎ  ＮａＯＨには、易溶性である。ゾレドロン酸は、事実上、種々の有機溶媒には不溶性である。
【０００６】
その水溶性、浸透性、およびその後の経口生物学的利用能を改良するために、結晶化および金属塩形成を通して、ゾレドロン酸の新規経口製剤を生成する、多くの努力が成されている。米国特許出願公開第２００６／０１７８４３９  Ａ１号および世界国際公開第２００７／０３２８０８号では、結晶性三水和物が、開示されている。ゾレドロン酸の可変水和程度を伴う、７つの水和形態、非晶質形態、３つのモノナトリウム塩、および１１個のジナトリウム塩もまた、国際公開第２００５／００５４４７  Ａ２号に開示されている。Ｎａ＋、Ｍｇ２＋、Ｚｎ２＋を含む、ゾレドロン酸金属塩は、学術誌Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ（Ｓｏｒｂｅｒａ  ｅｔ  ａｌ，  ２５（３），  Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ，  （２０００））に報告されている。ゾレドロネート、ゾレドロン酸、またはゾレドロン酸塩は、ゾレドロン酸のイオン形態を表す。Ｎｏｖａｒｔｉｓの国際公開第２００８／０６４８４９  Ａ１号は、２つのＣａ２＋塩、２つのＺｎ２＋塩、１つのＭｇ２＋塩、ならびに一水和物、三水和物、非晶質形態、および無水形態を含む、付加的金属塩を開示している。
【０００７】
ゾレドロン酸に関する米国食品医薬品局（ＦＤＡ）の新医薬品承認審査概要（ＳＢＡ）によると、低経口生物学的利用能（約１％）は、一部には、ＧＩ管におけるその低浸透性によるものである。また、最も一般的には、カルシウムを伴って、不溶性金属錯体が、腸上部に形成されることも注記されている。ゾレドロン酸はまた、深刻な胃および腸の炎症を引き起こすことが分かっている。
【０００８】
ゾレドロン酸の経口生物学的利用能を改良するための前述の試みはすべて、新規固体形態を生成することによって、またはＧＩ管浸透性を向上させた不活性成分と薬物を混合することのいずれかによって、水溶性を改良することに焦点が当てられていた。水溶性の改良は、不溶性ゾレドロン酸カルシウム錯体の形成が阻止される可能性が低いため、ゾレドロン酸の生物学的利用能を改良するのには失敗となっている。一方、低浸透性薬物と不活性浸透性増進剤の粉末混合物は、薬物の生物学的利用能を改良した。異なる粒子サイズおよびサイズ分布を伴う、異なる材料を混合する本アプローチは、低混合／物理的混合物均一性を与え得る。混合物の構成物もまた、輸送の際、または震盪および振動によって、分離し得る。加えて、粉末混合は、混合バッチの均一性を保証するために、厳密なバッチ間の一貫性を要求する。
【０００９】
発明者らが知る限りでは、本発明に先立って、単一結晶性構造において、薬物と付加的構成要素（共形成体）の分子錯体を作り出すための意図的分子設計の試みは成されていない。そのような設計の利点は、粉末混合物が、多くの場合、被る、バッチ間混合均一性および粒子分離問題のすべての排除につながる可能性がある。加えて、本発明は、最終固体投薬形態が、一実施形態では、分子錯体の粉末となるように、固体投薬形態（薬物および賦形剤から成る）の製造を簡略化する。
【００１０】
加えて、結果として得られる分子錯体は、親薬物、共形成体、またはその物理的混合物と比較して、非常に異なる物理化学的特性を呈する。これらの特性は、溶融点、熱および電気伝導性、水溶性、溶解速度、ならびにＧＩ管膜にわたっての浸透性を含むが、それらに限定されない。浸透性改良は、ＢＣＳクラスＩＩＩおよびＩＶ薬物の経口生物学的利用能の向上を与え得る。設計による分子錯体の概念が、ゾレドロン酸等の低浸透性薬物の浸透性およびその後の生物学的利用を改良するために採用されたのは、これが初めてである。しかしながら、浸透性向上の背後にある機構については、完全には理解されていない。
【００１１】
経口薬物の使用における増加傾向は、特に、健康管理の全体的コストを削減するという目標を踏まえて、継続している。経口投与される薬物は、癌を含む、種々の治療領域において、益々好ましくなっている。明らかに、経口投薬形態が、その低水溶性および／または低浸透性のために今まで存在しない、ＩＶ薬物の経口投薬形態を作り出し、患者のための明確な臨床的利益を提供する機会が存在する。ゾレドロン酸は、ＩＶ投与に対してのみ承認されていると事実を考慮し、ゾレドロン酸の経口投薬形態を開発する必要性が存在する。薬学的に容認可能かつ／または承認された共形成体を使用して、ゾレドロン酸と水素結合させることによって、改良された水溶性および／または浸透性を伴う、新規分子錯体（例えば、それらの共結晶、塩、溶媒和物、および混合物）を作り出すことが可能である。これらの新規分子錯体は、ゾレドロン酸のための経口投薬形態の開発において使用され得る。
【発明の概要】
【００１２】
本開示は、改良された水溶性、溶解速度、および／または改良された浸透性、したがって、向上された生物学的利用能を伴う、前述のゾレドロン酸の治療上の有効性を有する、ゾレドロン酸の新しい形態を生成することを対象とする。本開示の一態様は、そのような材料を含有する、共結晶、塩、および溶媒和物（例えば、水和物、および混合された溶媒和物、ならびに塩の溶媒和物）、および混合物を含む、ゾレドロン酸の新規分子錯体を含む。加えて、本開示はさらに、そのような錯体の調製のための方法を含む。
【００１３】
本開示はさらに、医薬投薬形態に組み込むために好適なゾレドロン酸の分子錯体の組成物を含む。本開示に関する特異的分子錯体は、ナトリウム、アンモニウム、アンモニア、Ｌ−リシン、ＤＬ−リシン、ニコチンアミド、アデニン、およびグリシンとのゾレドロン酸の錯体を含むが、それらに限定されない。図面および実施例によって説明されるものを含む、本開示における開示されるゾレドロン酸形態の明白な変形例は、本開示を有する当業者には容易に明白となり、そのような変形例は、本発明の一部とみなされる。
【００１４】
本開示はまた、ラットおよびイヌモデルにおける、本発明の方法によって調製された、親（純）ゾレドロン酸および選択されたゾレドロン酸錯体のインビボ研究の結果を含む。ラット血漿およびイヌ血清試料中の薬物濃度とともに、薬物動態（ＰＫ）プロファイルもまた、含まれる。
【００１５】
開示される技術の前述および他の特徴ならびに利点は、添付の図面を参照して記載される、以下の発明を実施するための形態からより明白となるであろう。そのような説明は、本発明の例示であって、限定を意図するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】（Ａ＝ゾレドロン酸、ゾレドロン酸ナトリウム、および水錯体）、（Ｂ＝ＮａＣｌ）、（Ｚｌ＝ゾレドロン酸一水和物）、（Ｚ３＝ゾレドロン酸三水和物）のＰＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図２】ゾレドロン酸、ゾレドロン酸ナトリウム、および水を含む、錯体のＦＴＩＲスペクトルである。
【図３】（Ｃ＝ゾレドロン酸アンモニウムおよび水錯体）、（Ｚｌ＝ゾレドロン酸一水和物）、および（Ｚ３＝ゾレドロン酸三水和物）のＰＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図４】ゾレドロン酸アンモニウムおよび水錯体のＦＴＩＲスペクトルである。
【図５】のＰＸＲＤディフラクトグラムを示す（Ｄ＝ゾレドロン酸、Ｌ−リシン、および水錯体）、（Ｅ＝Ｌ−リシン）、（Ｚｌ＝ゾレドロン酸一水和物）、および（Ｚ３＝ゾレドロン酸三水和物）。
【図６】ゾレドロン酸、Ｌ−リシン、および水錯体のＦＴＩＲスペクトルである。
【図７】（Ｆ＝ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水錯体）、（Ｇ＝ＤＬ−リシン）、（Ｚｌ＝ゾレドロン酸一水和物）、および（Ｚ３＝ゾレドロン酸三水和物）のＰＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図８】ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水錯体のＦＴＩＲスペクトルである。
【図９】（Ｈ＝ゾレドロン酸、ゾレドロン酸塩、ＤＬ−リシン、エタノール、および水錯体）、（Ｇ＝ＤＬ−リシン）、（Ｚｌ＝ゾレドロン酸一水和物）、（Ｚ３＝ゾレドロン酸三水和物）のＰＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図１０】ゾレドロン酸、ゾレドロン酸塩、ＤＬ−リシン、エタノール、および水錯体のＦＴＩＲスペクトルである。
【図１１】（Ｉ＝ゾレドロン酸、ニコチンアミド、および水錯体）、（Ｊ＝ニコチンアミド）、（Ｚｌ＝ゾレドロン酸一水和物）、および（Ｚ３＝ゾレドロン酸三水和物）のＰＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図１２】ゾレドロン酸、ニコチンアミド、および水錯体のＦＴＩＲスペクトルである。
【図１３】（Ｋ＝ゾレドロン酸、アデニン、および水錯体）、（Ｌ＝アデニン）、（Ｚｌ＝ゾレドロン酸一水和物）、（Ｚ３＝ゾレドロン酸三水和物）のＰＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図１４】ゾレドロン酸、アデニン、および水錯体のＦＴＩＲスペクトルである。
【図１５】（Ｍ＝ゾレドロン酸およびグリシン錯体）、（Ｎ＝グリシン）、（Ｚｌ＝ゾレドロン酸一水和物）、および（Ｚ３＝ゾレドロン酸三水和物）のＰＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図１６】ゾレドロン酸およびグリシン錯体のＦＴＩＲスペクトルである。
【図１７】（Ｏ＝ゾレドロン酸ジアンモニウム水錯体）、（Ｚｌ＝ゾレドロン酸一水和物）、および（Ｚ３＝ゾレドロン酸三水和物）のＰＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図１８】ゾレドロン酸ジアンモニウム水錯体のＦＴＩＲスペクトルである。
【図１９】（Ｐ＝ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水錯体）、（Ｇ＝ＤＬ−リシン）、（Ｚｌ＝ゾレドロン酸一水和物）、および（Ｚ３＝ゾレドロン酸三水和物）のＰＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図２０】ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水錯体のＦＴＩＲスペクトルである。
【図２１】（Ｒ＝ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水錯体）、（Ｇ＝ＤＬ−リシン）、（Ｚｌ＝ゾレドロン酸一水和物）、および（Ｚ３＝ゾレドロン酸三水和物）のＰＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図２２】ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水錯体のＦＴＩＲスペクトルである。
【図２３】（Ｒ＝ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水錯体）、（Ｇ＝ＤＬ−リシン）、（Ｚｌ＝ゾレドロン酸一水和物）、および（Ｚ３＝ゾレドロン酸三水和物）のＰＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図２４】ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水錯体のＦＴＩＲスペクトルである。
【図２５】（Ｑ＝ゾレドロン酸、Ｌ−リシン、および水錯体）、（Ｅ＝Ｌ−リシン）、（Ｚｌ＝ゾレドロン酸一水和物）、および（Ｚ３＝ゾレドロン酸三水和物）のＰＸＲＤディフラクトグラムを示す。
【図２６】ゾレドロン酸、Ｌ−リシン、および水錯体のＦＴＩＲスペクトルである。
【図２７】ＩＶ、経口、および十二指腸内（ＩＤ）経路を介して送達される、親ゾレドロン酸およびゾレドロン酸錯体の２４時間ラット血漿ＰＫプロファイルを示す。
【図２８】経口送達される、親ゾレドロン酸およびゾレドロン酸錯体の４時間ラット血漿ＰＫプロファイルを示す。
【図２９】ＩＤ送達される、親ゾレドロン酸およびゾレドロン酸錯体の４時間ラット血漿ＰＫプロファイルを示す。
【図３０】経口強制送達される、親ゾレドロン酸およびゾレドロン酸錯体の２４時間ラット血漿ＰＫプロファイルを示す。
【図３１】経口送達される、親ゾレドロン酸およびゾレドロン酸錯体の４時間ラット血漿ＰＫプロファイルを示す。
【図３２】経口送達される、親ゾレドロン酸および選択されたゾレドロン酸錯体の４時間ラット血漿ＰＫプロファイルを示す。
【図３３】ＩＶおよび経口送達される、親ゾレドロン酸およびゾレドロン酸錯体のイヌ血清ＰＫプロファイルを示す。
【図３４】ＩＶおよび経口送達される、親ゾレドロン酸およびゾレドロン酸錯体の４時間イヌ血清ＰＫプロファイルを示す。
【図３５】ＩＶおよび経口（腸溶性および非腸溶性被覆されたカプセル）送達される、親ゾレドロン酸およびゾレドロン酸錯体のイヌ血清ＰＫプロファイルを示す。
【図３６】ＩＶおよび経口（腸溶性および非腸溶性被覆されたカプセル）送達される、親ゾレドロン酸およびゾレドロン酸錯体の６時間イヌ血清ＰＫプロファイルを示す。
【図３７】腸溶性および非腸溶性被覆された硬質ゼラチンカプセルのイヌＰＫデータを示す。
【図３８】ＩＶおよび経口送達される、ゾレドロン酸錯体の２４時間イヌ血清ＰＫプロファイルを示す。
【図３９】ＩＶおよび経口送達される、ゾレドロン酸錯体の４時間イヌ血清ＰＫプロファイルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
一般に、医薬組成物における活性医薬成分（ＡＰＩ）は、プロドラッグ、非晶質形態、溶媒和物、水和物、共結晶、塩、および多形体を含む、種々の異なる形態で調製可能である。新規ＡＰＩ形態の発見は、医薬生成物の性能特徴を改良する機会を提供し得る。加えて、薬物形態の発見は、目的とする放出プロファイルまたは他の所望の特徴を有する医薬投薬形態を設計するために利用可能な資源の範囲を広げる。
【００１８】
標的化可能な特異的特徴は、ＡＰＩの結晶形態を含む。所与のＡＰＩの結晶形態の改変により、標的分子の物理的特性が変化する。例えば、所与のＡＰＩの種々の多形体は、異なる水溶性を呈し、熱力学的に安定な多形体は、準安定多形体より水溶性が低いと思われる。加えて、医薬多形体は、溶解速度、保存期間、生物学的利用能、形態構造、蒸気圧、密度、色、および圧縮率等の特性が異なる可能性がある。故に、水溶性、溶解速度、生物学的利用能、最高血中濃度、最高血中濃度到達時間、物理化学的安定性、下流処理可能性（例えば、流動性、圧縮率、脆弱度、粒子サイズ操作）、多形体形態多様性の低減、毒性、味、生産コスト、および製造方法に関して、共結晶、塩、溶媒和物、または水和物等の分子錯体を形成することによって、ＡＰＩの特性を向上させることが望ましい。
【００１９】
経口送達される薬物の開発では、多くの場合、増加した水溶性および安定性を含む、改良された特性を保有する、そのような薬物の新規結晶形態を有することが有利である。多くの場合、薬物の溶解速度の加速は、その生物学的利用能を潜在的に増加させるため、望ましい。これはまた、対象に経口投与されると、用量毎ベースにおけるＩＶまたは他の製剤と比較して、より優れたまたは類似生物学的利用能およびＰＫプロファイルを達成し得る、ゾレドロン酸の新規形態の開発にも該当する。
【００２０】
本発明のゾレドロン酸の共結晶、塩、溶媒和物、および水和物は、ゾレドロン酸の改良された特性を提供し得る。例えば、ゾレドロン酸の新しい形態は、経口送達されるゾレドロン酸の生物学的利用能を改良可能な場合、特に、有利である。いくつかの新規ゾレドロン酸形態が、合成され、特性評価され、および本明細書に開示されている。特に着目すべきは、他のゾレドロン酸の分子錯体と比較して、向上された浸透性を示す、ゾレドロン酸および標準的アミノ酸である。これらの錯体の向上された浸透性の機構は、未だ理解されておらず、本説明に拘束されるわけではないが、不溶性Ｃａ２＋ゾレドロン酸塩の形成を抑制し、密着結合を通して、より多くのゾレドロン酸を傍細胞的に吸収させることが可能性として考えられる。これは、向上された浸透性の可能性として考えられる機構であることを強調されたい。
【００２１】
ゾレドロン酸：アミノ酸錯体（本発明の２つの実施形態である、ゾレドロン酸：リシン錯体およびゾレドロン酸：グリシン錯体）の概略図が、以下に示される。略図は、錯体の分子構造と、構成物の物理的混合物と異なる、錯体の構成物間の可能性として考えられる相互作用と、を示す。
【化２】
0005852569.tif 000003
これらは、薬物および標準的アミノ酸共形成体の分子が、高相対湿度（ＲＨ）環境において、熱的に応力を加えられた場合でも、その元々の構成物に対して、劣化または崩壊のいかなる兆候も示さなかった、安定した錯体を形成するように相互作用し得る、配列の１つを表す。そのような安定性は、これらの分子錯体における水素結合（四角内に破線で示す）に起因する可能性がある。結晶構造に充填されると、これらの錯体は、その粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）パターンによって示されるように、その構成物またはその物理的混合物のものに対して、非常に異なる形態構造を有し、したがって、異なる予測し得ない物理化学的特性を保有するであろう。
【００２２】
本発明は、約８．１、１３．３、２１．５、２４．６、および２５．６±０．２°２θに強いピークを有する、Ｘ線粉末回折パターンを特徴とするゾレドロン酸、ゾレドロン酸ナトリウム、および水錯体の形態における、ゾレドロン酸の新しい結晶形態を提供する。
【００２３】
本発明は、約１１．０、１４．６、１５．４、１９．９、および２９．４±０．２°２θに強いピークを有する、Ｘ線粉末回折パターンを特徴とするゾレドロン酸アンモニウムおよび水錯体の形態における、ゾレドロン酸の新しい結晶形態を提供する。
【００２４】
本発明は、約９．０、１４．４、１８．１、２６．０、および２９．６±０．２°２θに強いピークを有する、Ｘ線粉末回折パターンを特徴とするゾレドロン酸、Ｌ−リシン、および水錯体の形態における、ゾレドロン酸の新しい結晶形態を提供する。
【００２５】
本発明は、約９．１、１４．７、１８．０、２１．２、および２６．０±０．２°２θに強いピークを有する、Ｘ線粉末回折パターンを特徴とするゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水錯体の形態における、ゾレドロン酸の新しい結晶形態を提供する。
【００２６】
本発明は、約８．８、９．７、１７．６、２３．１、および２６．５±０．２°２θに強いピークを有する、Ｘ線粉末回折パターンを特徴とするゾレドロン酸、ゾレドロン酸塩、ＤＬ−リシン、エタノール、および水錯体の形態における、ゾレドロン酸の新しい結晶形態を提供する。
【００２７】
本発明は、約１３．１、１５．２、２１．０、２３．９、および２６．５±０．２°２θに強いピークを有する、Ｘ線粉末回折パターンを特徴とするゾレドロン酸、ニコチンアミド、および水錯体の形態における、ゾレドロン酸の新しい結晶形態を提供する。
【００２８】
本発明は、約１３．６、１５．９、１９．７、２７．９、および２９．５±０．２°２θに強いピークを有する、Ｘ線粉末回折パターンを特徴とするゾレドロン酸、アデニン、および水錯体の形態における、ゾレドロン酸の新しい結晶形態を提供する。
【００２９】
本発明は、約１０．２、１７．８、１９．９、２２．９、および２８．１±０．２°２θに強いピークを有する、Ｘ線粉末回折パターンを特徴とするゾレドロン酸、およびグリシン錯体の形態における、ゾレドロン酸の新しい結晶形態を提供する。
【００３０】
本発明は、約１２．２、１３．０、１４．１、１７．１、および１９．３±０．２°２θに強いピークを有する、Ｘ線粉末回折パターンを特徴とするゾレドロン酸ジアンモニウム水錯体の形態における、ゾレドロン酸の新しい結晶形態を提供する。
【００３１】
本発明は、約８．３、１１．８、１２．３、１５．８、および２０．８±０．２°２θに強いピークを有する、Ｘ線粉末回折パターンを特徴とするゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水錯体の形態における、ゾレドロン酸の新しい結晶形態を提供する。
【００３２】
本発明は、約９．６、１０．７、１４．３、２１．４、２３．５±０．２°２θに強いピークを有する、Ｘ線粉末回折パターンを特徴とするゾレドロン酸、Ｌ−リシン、および水錯体の形態における、ゾレドロン酸の新しい結晶形態を提供する。
【００３３】
本発明は、約９．７、１０．８、１４．４、１８．９、２１．４±０．２°２θに強いピークを有する、Ｘ線粉末回折パターンを特徴とするゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水錯体の形態における、ゾレドロン酸の新しい結晶形態を提供する。
【００３４】
本発明は、ＩＶ、経口、およびＩＤ送達されるゾレドロン酸親化合物対本発明の方法を使用して作り出されたゾレドロン酸の錯体のラット血漿またはイヌ血清濃度レベルおよびＰＫプロファイルを提供する。
【００３５】
故に、第１の態様では、本発明は、例えば、乾燥または溶媒滴粉砕（液体支援粉砕）、単一または混合された溶媒系におけるその溶液の加熱または溶媒蒸発、スラリー懸濁液、超臨界流体、あるいは当業者に周知の他の手法を通して、固体状態において錯化可能な、ナトリウム、アンモニウム、アンモニア、Ｌ−リシン、ＤＬ−リシン、ニコチンアミド、アデニン、およびグリシンとのゾレドロン酸の錯体を含む。
【００３６】
本発明の別の態様は、水：酢酸エチル（１：１ｖ／ｖ）中に両方の化合物を溶解し、溶媒混合物を蒸発させ、結晶性材料を形成することによって、ゾレドロン酸およびニコチンアミド錯体を提供する。
【００３７】
本発明の別の態様は、両方の化合物を水中に溶解し、溶媒を蒸発させ、結晶性材料を形成することから、ゾレドロン酸およびグリシン固体錯体を提供する。
【００３８】
本発明の別の態様は、ヒトの身体に経口送達可能な医薬製剤に好適な、ゾレドロン酸と、ナトリウム、アンモニウム、アンモニア、Ｌ−リシン、ＤＬ−リシン、ニコチンアミド、アデニン、およびグリシンの錯体を提供する。医薬製剤は、本発明によるゾレドロン酸の新規分子錯体および少なくとも１つの薬学的に許容される担体（また、当技術分野において、薬学的に許容される賦形剤としても知られる）のうちの少なくとも１つの治療上有効量を含有する。ゾレドロン酸の新規分子錯体は、前述の骨粗しょう症、高カルシウム血症（ＴＩＨ）、癌誘発性骨転移、パジェット病、あるいはアジュバントまたはネオアジュバント療法に関連する、疾患状態の治療および／または予防のために治療上有用である。
【００３９】
本発明はまた、本発明のゾレドロン酸の新規分子錯体またはそれらを含有する医薬製剤を使用する、治療の方法に関する。本発明の医薬製剤は、本発明によるゾレドロン酸の新規分子錯体を含有する、医薬形態にあってもよい。医薬製剤は、例えば、錠剤、カプセル、液体懸濁液、注射剤、坐薬、局所薬、または経皮薬であってもよい。医薬製剤は、概して、約１％乃至約９９重量％の本発明のゾレドロン酸の少なくとも１つの新規分子錯体と、９９％乃至１重量％の好適な医薬賦形剤と、を含有する。
【００４０】
ゾレドロン酸と、ナトリウム、アンモニウム、アンモニア、Ｌ−リシン、ＤＬ−リシン、ニコチンアミド、アデニン、およびグリシンの錯体は、そのＰＸＲＤパターンおよびＦＴＩＲスペクトル別に観察される。
【００４１】
本発明の別の態様は、経口および十二指腸内送達される、経口ゾレドロン酸の生物学的利用能に関する、ラットにおけるインビボデータを提供する。
【００４２】
本発明の別の態様は、異なる経路（ＩＶ、経口、およびＩＤ）によって送達される、親化合物のＰＫプロファイルを提供する。
【００４３】
本発明の別の態様は、経口送達される親化合物と比較して、本発明の方法によって調製される、新規ゾレドロン酸錯体の修正された経口生物学的利用能値を提供する。
【００４４】
本発明の別の態様は、錯体中の共形成体と同一、異なる共形成体、またはそれらの混合物であり得る、過剰な少なくとも１種の共形成体のゾレドロン酸錯体への添加を提供する。
【００４５】
本発明の別の態様は、過剰共結晶形成体は、標準的アミノ酸から成る、方法を提供する。
【００４６】
本発明の別の態様は、経口送達される親化合物と比較して、過剰共結晶形成体とのゾレドロン酸錯体の修正されたＰＫプロファイルを提供する。
【００４７】
本発明の別の態様は、親化合物と比較して、新規ゾレドロン酸錯体の改良された水溶性を提供する。
【００４８】
本発明の別の態様は、経口送達される親化合物と比較して、過剰共結晶形成体との新規ゾレドロン酸錯体の修正された経口生物学的利用能値を提供する。
【００４９】
本発明の別の態様は、ＩＶまたは経口投与される、経口ゾレドロン酸の生物学的利用能に関する、イヌにおけるインビボデータを提供する。
【００５０】
本発明の別の態様は、経口送達される親化合物と比較して、ゼラチンカプセル内で送達される、本発明の方法によって調製された、新規ゾレドロン酸錯体のイヌにおける修正された経口生物学的利用能値を提供する。
【００５１】
本発明の別の態様は、親化合物と比較して、腸溶性被覆されたゲルカプセル内で送達さされる、本発明の方法によって調製された、新規ゾレドロン酸錯体のイヌにおける修正された経口生物学的利用能値を提供する。
【００５２】
本発明の別の態様は、硬質ゼラチンカプセル内で送達される、本発明の方法によって調製された、過剰共結晶形成体との新規ゾレドロン酸錯体のイヌにおける経口生物学的利用能値の実質的改良を提供する。
【００５３】
本発明の別の態様は、腸溶性被覆されたカプセルを通して経口送達される、ゾレドロン酸および新規ゾレドロン酸錯体を介した、イヌにおけるゾレドロン酸に対する経口生物学的利用能値の若干の改良を提供する。
【００５４】
本発明の別の態様は、共形成体の過剰物理的混合物との新規ゾレドロン酸錯体を介した、イヌにおけるゾレドロン酸に対する低減された経口生物学的利用能値を提供する。
【００５５】
本発明の別の態様は、分子錯体由来ビスホスホン酸またはその塩の生物学的利用能が、共形成体なしでの、ビスホスホン酸またはその塩の生物学的利用能を上回る、ビスホスホン酸またはその塩と、少なくとも１種の共形成体と、を含む、分子錯体を提供する。ビスホスホン酸は、例えば、ゾレドロン酸、クロドロン酸、チルドロン酸、パミドロン酸、アレンドロン酸、リセドロン酸イバンドロン酸、または当技術分野において周知の他のビスホスホン酸であってもよい。
【００５６】
本発明の別の態様は、それを必要とする患者に、分子錯体の形態における、治療上有効量のビスホスホン酸を投与することを含む、ビスホスホン酸の生物学的利用能または浸透性を向上させるための方法を提供する。
【００５７】
本開示に記載の手法およびアプローチはさらに、当業者によって、その変形例を調製するために使用可能であって、該変形例は、本発明の開示の一部とみなされる。
【実施例】
【００５８】
以下の実施例は、発明の範囲を限定することを意図することなく、本発明を例示する。
【００５９】
本開示における全実験において使用される、開示材料としてのゾレドロン酸は、Ｆａｒｍｋｅｍｉ  Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ｗｕｈａｎ  Ｐｈａｒｍａ  Ｃｈｉｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）（中国）によって供給され、純度約９８％を伴い、水からの再結晶化を介して、さらに精製された。他の純化学薬品（分析グレード）はすべて、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈによって供給され、さらなる精製を伴わずに、使用された。
【００６０】
ゼラチンカプセルの腸溶性被覆は、ＡｚｏＰｈａｒｍａ（Ｈｏｌｌｙｗｏｏｄ、ＦＬ、ＵＳＡ）に外注された。精製された水およびアセトン中、Ｅｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ１００−５５の１０％ｗ／ｗ被覆溶液と、クエン酸トリエチル、それぞれ、９．０９および０．９１ｗ／ｗ％を、Ｖｅｃｔｏｒ  ＬＤＣＳパンコーティング機内で使用され、カプセル上に均一被覆層を達成した。十二指腸送達のための被覆均一性および機能性が、７５ｒｐｍおよび３７℃で撹拌された疑似胃液中、２時間溶解によって試験された。全カプセルは、本試験の持続時間の間、閉鎖されたままとした。
固相特性評価
【００６１】
結晶性形態を観察するために使用された分析手法は、粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）およびフーリエ変換赤外分光（ＦＴＩＲ）を含む。そのような分析手法において使用される特定の方法論は、例示としてみなされ、データ収集の文脈に限定されるべきではない。例えば、データを収集するために使用される特定の器具が、変更されてもよく、日常的オペレータエラーまたは較正基準が、変更されてもよく、試料調製方法が、変更されてもよい（例えば、ＦＴＩＲ分析のためのＫＢｒディスクまたはヌジョールマル法の使用）。
【００６２】
フーリエ変換ＦＴＩＲ分光法（ＦＴＩＲ）：ＦＴＩＲ分析は、固体状態ＡＴＲ付属品を備えた、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  １００  ＦＴＩＲ分光計上で行われた。
【００６３】
粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）：全ゾレドロン酸分子錯体生成物は、Ｃｕ  Ｋα（λ＝１．５４０５６２  A）、４０ｋＶ、４０ｍＡを使用して、Ｄ−８  Ｂｒｕｋｅｒ  Ｘ−ｒａｙ  Ｐｏｗｄｅｒ  Ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｅｒによって観察された。データは、刻み幅０．０５°２θおよびスキャン速度６．１７°／分を使用して、室温で、連続スキャンモードにおいて、角度範囲３°乃至４０°２θにわたって収集された。
【００６４】
実施例１：ゾレドロン酸、ゾレドロン酸ナトリウム、および水錯体の調製。
【００６５】
２００ｍｇのゾレドロン酸を、一晩かけて、１ｍＬの１：１エタノール：水内で、１８０ｍｇの塩化ナトリウムとともにスラリー状にした。材料を濾過し、漱洗した。粒子状材料を回収し、その後の分析のために、スクリューキャップバイアル内に保存した。材料を、それぞれ、図１および図２に対応するＰＸＲＤならびにＦＴＩＲによって、特性評価した。
【００６６】
実施例２：ゾレドロン酸アンモニウムおよび水錯体の調製。
【００６７】
３００ｍｇのゾレドロン酸を、一晩かけて、メタノール中７Ｎアンモニア内でスラリー状にした。材料を濾過し、漱洗した。粒子状材料を、水中に溶解し、周囲条件で蒸発させ、１週間後、無色プレートを得た。材料を、それぞれ、図３および図４に対応する、ＰＸＲＤならびにＦＴＩＲによって特性評価した。
【００６８】
実施例３：ゾレドロン酸、Ｌ−リシン、および水錯体の調製。
【００６９】
２００ｍｇのゾレドロン酸および５４ｍｇのＬ−リシンを、一晩かけて、２ｍＬのテトラヒドロフランおよび２００μＬの水内でスラリー状にした。濾過後に回収された固体を乾燥させ、その後の分析のために、スクリューキャップバイアル内に保存した。材料を、それぞれ、図５および図６に対応する、ＰＸＲＤならびにＦＴＩＲによって特性評価した。
【００７０】
実施例４：ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水錯体の調製。
【００７１】
２０４ｍｇのゾレドロン酸および５９ｍｇのＤＬ−リシンを、一晩かけて、２ｍＬのテトラヒドロフランおよび２００μＬの水内でスラリー状にした。濾過後に回収された固体を乾燥させ、その後の分析のために、スクリューキャップバイアル内に保存した。材料を、それぞれ、図７および図８に対応する、ＰＸＲＤならびにＦＴＩＲによって特性評価した。
【００７２】
実施例５：ゾレドロン酸、ゾレドロン酸塩、ＤＬ−リシン、エタノール、および水錯体の調製。
【００７３】
１０３ｍｇのゾレドロン酸および５４ｍｇのＤＬ−リシンを、４００μＬの水中に溶解し、キャップし、一晩かけて、撹拌した。翌日、０．２５ｍＬのエタノールを滴下添加した。バイアルを、スクリューキャップでキャップし、１日後、結晶が表出し、濾過除去した。材料を、その後の分析のために、保存した。材料を、それぞれ、図９および図１０に対応する、ＰＸＲＤならびにＦＴＩＲによって特性評価した。
【００７４】
実施例６：溶媒滴粉砕による、ゾレドロン酸、ニコチンアミド、および水錯体の調製。
【００７５】
９９ｍｇのゾレドロン酸を、４４ｍｇのニコチンアミドによって粉砕し、４０μＬの水を、固体混合物に添加した。粉砕後回収された固体を、その後の分析のために、スクリューキャップバイアル内に保存した。材料を、それぞれ、図１１および図１２に対応する、ＰＸＲＤならびにＦＴＩＲによって特性評価した。
【００７６】
実施例７：溶液結晶化からのゾレドロン酸、ニコチンアミド、および水錯体の調製。
【００７７】
２５ｍｇのゾレドロン酸および１３８ｍｇのニコチンアミドを、２ｍＬの水：酢酸エチル混合物（１：１ｖ／ｖ）中に溶解した。次いで、数時間、溶液を放置し、溶媒をゆっくり蒸発させた。回収された固体を特性評価すると、実施例７生成物のものと非常に類似するＰＸＲＤならびにＦＴＩＲパターンが得られた。
【００７８】
実施例８：溶媒滴粉砕による、ゾレドロン酸、アデニン、および水錯体の調製。
【００７９】
９６ｍｇのゾレドロン酸を、６５ｍｇのアデニンによって粉砕し、６０μＬの水を、固体混合物に添加した。粉砕後回収された固体を、その後の分析のために、スクリューキャップバイアル内に保存した。材料を、それぞれ、図１３および図１４に対応する、ＰＸＲＤならびにＦＴＩＲによって特性評価した。
【００８０】
実施例９：水溶液スラリーからのゾレドロン酸、アデニン、および水錯体の調製。
【００８１】
９９ｍｇのゾレドロン酸および５４ｍｇのアデニンを、一晩かけて、２ｍＬの水：エタノール混合物（１：１ｖ／ｖ）内でスラリー状にした。濾過後に回収された固体を乾燥させ、特性評価すると、実施例８生成物のものと非常に類似するＰＸＲＤならびにＦＴＩＲパターンが得られた。
【００８２】
実施例１０：ゾレドロン酸およびグリシン錯体の調製。
【００８３】
１７８ｍｇのゾレドロン酸および４５ｍｇのグリシンを、一晩かけて、２ｍＬの水内でスラリー状にした。濾過後に回収された固体を乾燥させ、その後の分析のために、スクリューキャップバイアル内に保存した。材料を、それぞれ、図１５および図１に対応する６、ＰＸＲＤならびにＦＴＩＲによって特性評価した。
【００８４】
実施例１１：ゾレドロン酸ジアンモニウム水錯体の調製。
【００８５】
１．５ｇのゾレドロン酸を、一晩かけて、メタノール中７Ｎアンモニア内でスラリー状にした。材料を濾過し、漱洗した。粒子状材料を、中温で水中に溶解し、周囲条件で蒸発させ、１日後、無色ブロックを得た。材料を、それぞれ、図１７および図１８に対応する、ＰＸＲＤならびにＦＴＩＲによって特性評価した。
【００８６】
実施例１２：ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水錯体の調製。
【００８７】
２００ｍｇのゾレドロン酸および１０２ｍｇのＤＬ−リシンを、一晩かけて、２ｍＬのテトラヒドロフランおよび４００μＬの水内でスラリー状にした。濾過後に回収された固体を乾燥させ、その後の分析のために、スクリューキャップバイアル内に保存した。材料を、それぞれ、図１９および図２０に対応する、ＰＸＲＤならびにＦＴＩＲによって特性評価した。
【００８８】
実施例１３：ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水錯体の調製。
【００８９】
１ｇのゾレドロン酸および２８３ｍｇのＤＬ−リシンを、一晩かけて、８０ｍＬのテトラヒドロフランおよび８ｍＬの水内でスラリー状にした。濾過後に回収された固体を乾燥させ、その後の分析のために、スクリューキャップバイアル内に保存した。材料を、それぞれ、図２１および図２２に対応する、ＰＸＲＤならびにＦＴＩＲによって特性評価した。
【００９０】
実施例１４：逆溶媒法による、ゾレドロン酸、ＤＬ−リシン、および水錯体の調製。
【００９１】
本錯体はまた、５ｍＬのお湯に１ｇのゾレドロン酸および２８３ｍｇのＤＬ−リシンを溶解し、逆溶媒として、４０ｍＬのエタノールを添加し、一晩かけて、撹拌させる、逆溶媒法によって、調製可能である。類似ＰＸＲＤならびにＦＴＩＲプロファイルが、それぞれ、図２３および２４に示されるように、得られた。
【００９２】
実施例１５：ゾレドロン酸、Ｌ−リシン、および水錯体の調製。
【００９３】
１ｇのゾレドロン酸および２５５ｍｇのＬ−リシンを、６０ｍＬのお湯に溶解した。次いで、１００ｍＬのエタノールを、逆溶媒として添加した。濾過後に回収された固体を乾燥させ、その後の分析のために、スクリューキャップバイアル内に保存した。材料を、それぞれ、図２５および図２６に対応する、ＰＸＲＤならびにＦＴＩＲによって特性評価した。
【００９４】
実施例１６：動物ＰＫ試験
【００９５】
これらの試験は、ゾレドロン酸に対する好適な動物モデルとして、ラットおよびイヌにおいて行われた。これは、両動物が、歴史的に、安全評価およびＰＫスクリーニング試験で使用されており、適切な規制機関によって推奨されているという事実に起因し得る。加えて、ラットおよびイヌはまた、ゾレドロン酸を含む、ビスホスフォネート薬物の吸収を査定するための適切な種として確立されている。
【００９６】
純ゾレドロン酸および本発明における方法によって調製されたゾレドロン酸錯体は、ＩＶまたは経口経路を通して、ラットおよびイヌに送達された。追加の試験として、ラットにおけるＩＤ投与およびイヌにおける腸溶性被覆されたカプセルの投与を含んだ。送達された全化合物は、顕著な有害事象または物理的異常を伴うことなく、動物による良好な耐性を示した。
【００９７】
試験対象：８週齢オスＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（２１７−２５９グラム）を、Ｈｉｌｌｔｏｐ  Ｌａｂ  Ａｎｉｍａｌｓ（Ｓｃｏｔｔｄａｌｅ、ＰＡ  ＵＳＡ）から入手した。外科手術用カテーテル（内頸静脈および十二指腸内）を、試験前に動物に埋め込んだ。Ｍａｒｓｈａｌｌ  Ｆａｒｍｓ（ＮＹ、ＵＳＡ）から入手した、体重（９−１２ｋｇ）のビーグル犬を、本試験において使用した。外科手術用カテーテル（内頸静脈）を、試験前に埋め込んだ。
【００９８】
居住：ラットは、ステンレス鋼ケージ内に個別に収容され、カテーテル露出を防止した。順応（投薬前段階）は、１日間とした。イヌは、既に試験施設（Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．、ＵＳＡ）内におり、順応は必要なかった。
【００９９】
環境：動物質の環境制御は、１８乃至２６℃、相対湿度３０乃至７０％、最低１０回の換気／時間、および１２時間の明／１２時間の暗周期を維持するように設定された。明／暗周期は、試験関連活動のために中断され得た。
【０１００】
餌食：ラットの場合、水および認定Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ  ＃８７２８Ｃ（Ｈａｒｌａｎ  Ｔｅｋｌａｄ）が提供された。イヌの場合、水および標準的イヌの食餌が、１日に１２回（１２時間毎）与えられた。
【０１０１】
絶食：全試験動物は、ゾレドロン酸またはゾレドロン酸錯体のＩＶ、経口、あるいはＩＤ投与前、一晩、絶食させた。
【０１０２】
ラット投薬の経路：ゾレドロン酸およびその錯体製剤は、ＩＶ、経口、およびＩＤを通して投与された。全試験ラットへの投与の用量は、懸濁液中に含有される錯体形態としてではなく、ゾレドロン酸として、測定された。
ｉ．ＩＶ投与：ＩＶ投与のためのゾレドロン酸の用量は、０．５ｍｇ／ｋｇであった。各ラットの用量は、ラット当たりベースで計算された（ロット内の全ラットの平均重量ではなく）。
ｉｉ．経口強制投与：固体懸濁液が投与された。各ラットの用量は、ラット当たりベースで計算された（ロット内の全ラットの平均重量ではなく）。固体懸濁液の場合、動物は、５ｍｇ／ｋｇのゾレドロン酸またはＰＥＧ４００の懸濁液中に含有されるゾレドロン酸錯体中５ｍｇ／ｋｇのゾレドロン酸を投与された。
ｉｉｉ．十二指腸カニューレ投与：固体懸濁液が投与された。各ラットの用量は、ラット当たりベースで計算された（ロット内の全ラットの平均重量ではなく）。固体懸濁液の場合、動物は、５ｍｇ／ｋｇのゾレドロン酸またはＰＥＧ４００の懸濁液中に含有されるゾレドロン酸錯体中５ｍｇ／ｋｇのゾレドロン酸を投与された。
【０１０３】
イヌ投薬の経路：ゾレドロン酸およびその錯体製剤は、ＩＶおよび経口投与された。全被験イヌに投与された用量は、ゼラチンカプセル内の粉末またはＩＶのための溶液中に含有される錯体形態としてではなく、各錯体中のゾレドロン酸として測定された。
ｉ．ＩＶ投与：各イヌの用量体積が、イヌの平均重量に基づいて調節された。
ｉｉ．経口投与：ゾレドロン酸およびそのゾレドロン酸錯体製剤の等量が、イヌの平均重量に基づいて、サイズ０ゼラチンカプセルを通して投与された。
ｉｉｉ．腸溶性被覆されたカプセルによる経口投与：ゾレドロン酸およびそのゾレドロン酸錯体製剤の等量が、イヌの平均重量に基づいて、サイズ０腸溶性被覆されたゼラチンカプセル投与された。
ｉｖ．付加的共形成体との分子錯体の経口投与：付加的共形成体とのゾレドロン酸錯体の物理的混合物が、サイズ０ゼラチンカプセルを通して投与された。
【０１０４】
群：動物の２つの主要群が、試験のために選択された。
群１：４つの亜群（Ｉ−ＩＶ）から成る、ラットであって、ＰＫプロファイルグラフ上の各データ点の結果は、３匹のラットの血漿中の平均薬物濃度である。
群２：イヌＰＫ試験は、亜群（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、およびＦ）を伴う、３つの群を含み、ＰＫプロファイルグラフ上の各データ点の結果は、５匹のイヌの血清の平均薬物濃度である。
【０１０５】
群１ラット投薬の詳細
【表１】
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ＩＶ比較群は、経口群に対して、ＭＡＴ（平均吸収時間）およびｋａ（吸収速度定数）を計算するために行われた。
【表２】
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【表３】
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【表４】
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【０１０６】
ラット血液試料収集、取扱、および分析：血液（試料当たり約３００μＬ）試料を、ゾレドロン酸またはその錯体の初期投与後、５分、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、８時間、および２４時間の８つの時間点において、群Ｉ（ＩＶ投与）内の３匹の動物のそれぞれからＥＤＴＡ血漿管内に採取した。４℃で５分間、１３，０００ｒｐｍで遠心分離後、血漿を収集し、直ぐに冷凍し、分析まで-６０乃至-８０℃で保存した。
【０１０７】
試料を分析の日に解凍し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ方法によって分析し、試料中のゾレドロン酸の量を定量化した。
【０１０８】
群２イヌ投薬の詳細：投薬に先立って、全イヌは、２０ｍＬ用量のクエン酸（水中２４ｍｇ／ｍＬ）を摂取し、その胃のｐＨを低下させた。投薬カプセルまたはＩＶ投薬後、全イヌは、漱洗として、追加の６．２５ｍＬクエン酸溶液（水中２４ｍｇ／ｍＬ）を摂取した。
【表５】
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ＩＶ比較群は、経口群のためのＭＡＴ（平均吸収時間）およびｋａ（吸収速度定数）を計算するために行われた。
【表６】
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【表７】
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【表８】
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【表９】
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【表１０】
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【０１０９】
ゾレドロン酸またはその錯体の初期投与後、血液（試料当たり約２．５ｍＬ）を、群Ａ（ＩＶ投与）：投薬前（０）、２、５、１０、１５、３０、４５分、１、１．５、２、４、６、８、２４、および４８時間の１５の時間点において、群Ｂ（経口投与）：投薬前（０）、５、１０、１５、３０、４５分、１、１．５、２、４、６、８、および２４時間の１３の時間点において、５匹の動物のそれぞれから採取した。血液試料は、抗凝血剤を使用せず載置し、約３０分間、室温で放置した。次いで、試料を、４℃の温度で５分間、１３，０００ｒｐｍの速度で遠心分離した。血清を収集し、２つの一定分量に分割し、分析まで冷凍保存した（−８０℃）。試料を分析の日に解凍し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析方法を含む、ゾレドロン酸のための分析手順を使用して、処理した。
【０１１０】
動物ＰＫ試験結果
【０１１１】
ラット試験：第１のラット試験の結果は、表１に要約される。血漿試料中のゾレドロン酸の濃度（ｎｇ／ｍＬ）は、３匹のラットの分析結果の平均値である。加えて、ＩＶ、経口、およびＩＤ群のＰＫプロファイルが、図２７に示される。経口およびＩＤ群のプロファイルは、図２８および２９に示される。いくつかのゾレドロン酸錯体は、親ゾレドロン酸と比較して、改良された経口生物学的利用能を有することを示唆する。改良された生物学的利用能を伴う錯体はさらに、過剰共形成体がゾレドロン酸錯体に添加され、次いで、経口強制によって、ラットに投与される、第２のラットＰＫ試験において試験された。本第２の試験の結果は、表２に要約され、そのＰＫプロファイルは、図３０、３１、および３２に示される。これらの図は、過剰共形成体を伴ういくつかのゾレドロン酸錯体の改良された生物学的利用能を示す。
【０１１２】
イヌ試験：第１のイヌ試験の結果は、表３に要約される。ゾレドロン酸の濃度（ｎｇ／ｍＬ）は、５匹のイヌの分析結果の平均値である。ＩＶおよび経口群のＰＫプロファイルは、４８時間ＰＫプロファイルの最初の４時間を表す、図３３および３４に示される。これらの結果および図３４は、全部ではないが、大部分のゾレドロン酸錯体が、経口送達される、親ゾレドロン酸のものと比較して、改良された経口生物学的利用能を達成したことを示唆する。
【０１１３】
第２のイヌ試験の結果は、表４に要約される。示されるゾレドロン酸の濃度（ｎｇ／ｍＬ）は、５匹のイヌの分析結果の平均値である。ＩＶおよび経口群のＰＫプロファイルは、図３５および３６に示される。図３６は、２４時間ＰＫプロファイルの最初の６時間を表す。これらの結果および図３５は、全部ではないが、大部分のゾレドロン酸錯体が、経口送達される、親ゾレドロン酸のものと比較して、改良された経口生物学的利用能を達成したことを示唆する。具体的には、親薬物のものと比較して、過剰アミノ酸共形成体を伴う新規ゾレドロン酸錯体（Ｌｅｇ１１、図３７）のゾレドロン酸生物学的利用能において、有意な改良が認められる。結果はまた、非腸溶性被覆されたカプセルと比較して、腸溶性被覆されたカプセルの生物学的利用能における改良が認められたことも示す（図３７、Ｌｅｇ７および２、Ｌｅｇ８および３、Ｌｅｇ１２および４）が、驚くべきことに、生物学的利用能は、過剰アミノ酸共形成体が、腸溶性被覆されたカプセルに、物理的混合物を形成するために添加されると、有意に改変された（図３７、Ｌｅｇ９および１０）。この背後にある理由は、完全には理解されていない。
【０１１４】
結果は、未希釈（すなわち、過剰共形成体を含まない）ゾレドロン酸アミノ酸錯体で充填された、腸溶性被覆されたカプセルからの経口ゾレドロン酸の生物学的利用能に若干の増加が認められたこを示す。したがって、新規ゾレドロン酸錯体との過剰共形成体もまた、腸溶性被覆されたカプセル内で送達されると、生物学的利用能の増加につながることが予測される。驚くべきことに、過剰共形成体が、ゾレドロン酸に添加されると、腸溶性被覆されたカプセルの生物学的利用能は、非腸溶性被覆されたカプセルのものより低くなる。これは、分子錯体および過剰共形成体の物理的粉末混合物が、十二指腸に送達されると、生物学的利用能を低下させる場合があることを示唆する。
【０１１５】
第３のイヌ試験の分析結果が、５匹のイヌからの平均データを含む、表５に示される。ＩＶおよび経口群のＰＫプロファイルは、図３８および３９に示される。図３９は、２４時間ＰＫプロファイルの最初の４時間を表す。
【表１１】
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【表１２】
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【表１３−１】
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【表１３−２】
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【表１４−１】
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【表１４−２】
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【表１５−１】
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【表１５−２】
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【表１５−３】
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【表１６−１】
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【表１６−２】
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【表１７】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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