(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１４で表されるアミノ酸配列からなるProthrombin由来ペプチドTHRBである、認知機能障害疾患診断のためのバイオマーカー。
【請求項２】
配列番号１４で表されるアミノ酸配列からなるペプチドであって、認知機能障害疾患患者生体試料中において、精神疾患に罹患していない被験者の生体試料中と比較し出現または増加する認知機能障害疾患バイオマーカー。
【請求項３】
配列番号１４で表されるアミノ酸配列からなるペプチドであって、アルツハイマー病患者生体試料中において、精神疾患に罹患していない被験者の生体試料中と比較し出現または増加するアルツハイマー病バイオマーカー。
【請求項４】
配列番号１４で表されるアミノ酸配列からなるペプチドであって、軽度認知障害患者生体試料中において、精神疾患に罹患していない被験者の生体試料中と比較し出現または増加する軽度認知障害バイオマーカー。
【請求項５】
生体試料中の請求項１〜４のいずれか１項に記載のバイオマーカーを測定することを含む、認知機能障害疾患診断のためのバイオマーカーの検出方法。
【請求項６】
検出がイムノ・ブロット法またはウエスタン・ブロット法、酵素もしくは蛍光もしくは放射性物質標識抗体法または質量分析法またはimmunoMS法または表面プラズモン共鳴法により行われる請求項５に記載の認知機能障害疾患診断のためのバイオマーカーの検出方法。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のバイオマーカーを測定するための認知機能障害疾患の検出キット。
【請求項８】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のバイオマーカーに対する抗体もしくはアプタマーを含む認知機能障害疾患の検出キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、軽度認知障害およびアルツハイマー病を含む認知機能障害疾患の検出に用い得る新規なタンパク質およびペプチドであるバイオマーカーおよび該バイオマーカーを用いた認知機能障害疾患の検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体の正常と正常以外の状態を呈する試料を用いてその差異を判別する手段としては、一般的には体外診断薬において用いられてきた技術が主たる従来技術である。体外診断薬のうち最も多いのが、血液中の成分をバイオマーカーとして分析することで診断検査を行うものである。本分野における従来技術では、血液中の単独の特定のタンパク質または分子量１万以下のいわゆるペプチドの存在量、あるいは酵素タンパク質の場合は活性の測定を行って、正常（健常人）試料と疾患試料との明らかな差をもって診断の一助としてきた。すなわちあらかじめ一定数の健常人と疾患患者由来の試料における単独もしくは複数の特定のタンパク質またはペプチドの量もしくは活性量を計測し、異常値と正常値の範囲を決め、評価する試料を同様の方法で測定し、異常値と正常値のどちらの範囲に属するかによって検査評価を行うものである。
【０００３】
具体的な計測方法としては、試料をそのまま、またはあらかじめ希釈しておき、単独または複数の特定のタンパク質またはペプチドの量を、基質と反応させると発色する酵素によって標識された特異的１次抗体または２次抗体を用いて、試料の発色量で計測する酵素結合免疫吸着測定法(ELISA;  Enzyme  Linked  Immmunosorbent  Assay)や化学発光測定法(CLIA;  ChemiLuminescent  Immunoassay)と、１次抗体または２次抗体に結合させたラジオアイソトープを用いて計測する放射性免疫測定法(RIA;  RadioImmunoassay)、タンパク質が酵素の場合は直接基質を与えて産生物を発色などで計測する酵素活性測定法などがある。抗体を用いるこれらの方法を酵素もしくは蛍光もしくは放射性物質標識抗体法と呼ぶこととする。また酵素の基質分解産物を高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で分析する方法もある。またHPLCと質量分析装置を組み合わせたLC-MS/MS法ならびにこれを用いたselected  reaction  monitoring(SRM)/multiple  reaction  monitoring(MRM)法もある。また、試料に適当な前処理を施した後、２次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動(2D-PAGE)を行ってタンパク質またはペプチドを分離した後、目的のタンパク質またはペプチドについて銀染色、クマシーブルー染色、あるいは対応する抗体を用いた免疫染色（ウエスタン・ブロッティング）を行って、試料中の濃度を測定する方法もある。また、生体試料をカラムクロマトグラフィーによって分画し、その画分に含まれるタンパク質とペプチドを質量分析によって分析する手法がある。またカラムクロマトグラフィーではなく、前処理としてプロテインチップを用いて質量分析する方法や、前処理として磁気ビーズを用いて質量分析する方法がある。
【０００４】
さらに、発明者はビーズ（磁気ビーズを含む）に対象となるタンパク質またはペプチドに対する抗体を結合させ、これにより測定したいタンパク質またはペプチドを捕捉したのち、ビーズから溶出して質量分析により測定するimmunoMS法を開発している。またインタクトなタンパク質の解析を目的としてトリプシンなどで分解した後、上記の方法で質量分析まで行う方法も報告されている（特許文献１参照）。しかしいずれもインタクトなタンパク質の性質を利用して、そのまま分画し、または特異的に吸着するタンパク質分子を選別して質量分析で解析するものである。
【０００５】
アルツハイマー病を主とする認知機能障害疾患は、我が国においても近年の高齢化に伴って急激に増加している。1995年に約130万人であったが、2005年には約190万人となり、2020年には約300万人に達すると予想されている。アルツハイマー病は認知機能障害疾患の60〜90%を占めると言われている。本疾患は患者の記憶を喪失させるのみでなく人格をも崩壊して患者の社会生活機能を喪失させてしまうことから、社会問題化しつつある。本邦においては1999年末に抗アセチルコリンエステラーゼ阻害薬である塩酸Donepezilが認可を受け、早期に投与されれば高い確率で認知機能の低下を「遅らせる」ことができるようになった。アルツハイマー病においては、現状の治療法やこれから開発される治療薬効果をあげるためには早期に診断することが最重要の課題となっている。
【０００６】
米国精神医学会によるアルツハイマー病の主たる診断基準(DSM  IV)を以下に示す。
A．多彩な認知欠損の発現で、以下の両方により明らかにされる。
（1）記憶障害（新しい情報を学習したり、以前に学習した情報を想起する能力の障害）
（2）以下の認知障害の一つまたはそれ以上
a）失語（言語の障害）
b）失行（運動機能の障害がないにもかかわらず、動作を行う能力の障害）
c）失認（感覚機能の障害がないにもかかわらず、対象を認識または同定する能力の障害）
d）実行能力（計画を立てる・組織化する・順序だてる・抽象化する）の障害
B．基準A（1）およびA（2）の認知欠損は、その各々が社会的または職業的機能の著しい障害を引き起こし、病前の機能水準から著しい低下を示す（非特許文献１）。
【０００７】
アルツハイマー病(Alzheimer  disease)(AD)の関連疾患にはいろいろなものがある。ADなどの認知症は徐々に認知機能の低下が出現するため、認知症の前駆状態と呼ぶべき状態が存在する。このような状態を軽度認知障害(mild  cognitive  impairment)(MCI)と呼んでいる。米国のデータでは物忘れ外来を受診したMCIのうち、1年に10〜15％、4年間でおよそ50％がADに移行するという。ADの前駆状態の大部分は健忘型MCIに含まれる。現在の定義によると、MCIは認知機能の低下に関する訴えが聞かれるが、基本的な日常生活には支障がない状態とされる。前頭側頭型認知症(FTD)は認知機能低下とともに周囲を気にせずわが道を行く行動が特徴的で、周囲に合わせようとするADと対照的である。FTDには大脳皮質に組織学的にPick球の存在を認めるPick病が含まれる。レビー小体型認知症(DLB)は、記憶障害が進行性であり幻視などの視覚認知障害があることを特徴としている。臨床症状からの診断では認知症の10〜30％がDLBであり、老年期の変性性認知症疾患ではアルツハイマー型認知症(AD)に次いで2番目に多いとされる。組織学的には大脳におけるレビー小体の存在を特徴とする。FTDおよびDLBは認知症を認め痴呆型であるので痴呆型神経疾患とも呼ばれる（非特許文献１）。
【０００８】
本発明において、認知機能障害疾患と総称するとき、MCI、ADおよび痴呆型神経疾患を含むものとする。
【０００９】
認知症の診断に広く用いられている検査は、改訂長谷川式知能評価スケール(HDS-R)とMMSE  (Mini-Mental  State  Examination)で、被験者への問診を行い、その結果から判断するものである。HDSは1991年に改訂されてHDS-Rと称されるようになった。これは9項目の質問からなり、見当識、記銘力、計算能力、記憶・想起および常識をテストするものである。30点満点で23点以下を認知症の疑いありとする。また、MMSEは痴呆の診断のために米国で考案されたもので、見当識、記憶力、計算力、言語的能力、図形的能力などをカバーする。30点満点で11の質問からなり、HDS-Rと同様に23点以下で認知症の疑いありとする。両テストの結果は割合によく一致するとされている。これらの問診法はあくまでスクリーニングの目的で用いられ、確定診断に至ることはないし、HDS-R、MMSEともに重症度分類に用いられることはない（非特許文献１）。
【００１０】
画像診断法としては、脳萎縮・脳溝脳室拡大など、脳の形態的異常を見るCT・MRIと脳血流量を見る脳血流シンチグラフィ(SPECT)および酸素消費量・ブドウ糖消費量を見るポジトロン断層法(PET)がある。SPECTおよびPETは核医学的方法で、形態的異常の起きる前に異常を検出することができるとされている（非特許文献１）。しかし、これらの画像診断は特殊な設備を必要とするため、すべての医療機関で実施することができないという欠点を有する。また画像を見る医師によって判断が異なることがあり、客観性に欠ける。
【００１１】
このようにADを含む認知症の診断は、客観性を欠く、かつ高価な装置の使用を前提とした方法に依存しているのが現状であり、疾患発見のためのスクリーニングは不可能である。ここに血液（血清、血漿を含む）のような容易に得られる患者の試料を用いて客観的診断を可能にするバイオマーカーが見出されるならば、スクリーニングを行うことによって、現在最重要の課題となっている認知機能障害疾患の早期発見が可能となる。本発明はそのような新規バイオマーカーおよび該バイオマーカーを用いた認知機能障害疾患の検出方法を提供するものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】特開2004-333274号公報
【特許文献２】特開2006-308533号公報
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】中野今治、水澤英洋編集：よくわかるアルツハイマー病、2004、永井書店
【非特許文献２】N. Benkiraneら、J. Biol. Chem. Vol. 268, 26279-26285,1993
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、非認知機能障害被験者（健常人を含み、何らかの疾患に罹患していてもよいが認知機能障害疾患を含む精神疾患に罹患していない認知機能障害被験者と年齢と性別をマッチさせた被験者non-demented  control、以下、NDCと略称する）と認知機能障害疾患患者において存在の有無、存在量が異なるタンパク質およびその部分ペプチドを用いて軽度認知障害およびアルツハイマー病を含む認知機能障害疾患を検出する方法を提供し、さらに該タンパク質および該部分ペプチドからなる軽度認知障害およびアルツハイマー病を含む認知機能障害疾患検出のためのバイオマーカーの提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者は、認知機能障害疾患を検出する方法について鋭意検討を行い、軽度認知障害およびアルツハイマー病を含む認知機能障害疾患を検出することができるペプチドを血清中に見出した。本発明において見出された該ペプチドは血清中のみならず、血液、血漿、脳脊髄液、尿などの他の生体試料中に検出される場合もバイオマーカーとして意義をもつものである。同時に、これらのペプチドの起源であるタンパク質またはペプチド（以下、インタクトタンパク質またはペプチドと称する）もバイオマーカーとしての意義をもつ。
【００１６】
具体的には、本発明者は、配列番号１で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C3、配列番号３で表されるアミノ酸配列からなるTranscription  factor  AP-2  gamma、配列番号５で表されるアミノ酸配列からなるSynapsin-3、配列番号７で表されるアミノ酸配列からなるOxytocin  receptor、配列番号９で表されるアミノ酸配列からなるInter-alpha-trypsin  inhibitor  heavy  chain  H5-like  protein、配列番号１１で表されるアミノ酸配列からなるE3  ubiquitin-protein  ligase  HERC2、配列番号１３で表されるアミノ酸配列からなるProthrombin、配列番号１５で表されるアミノ酸配列からなるTransthyretin、配列番号１７で表されるアミノ酸配列からなるTumor  necrosis  factor  receptor  superfamily  member  16、配列番号１９で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C4-A、配列番号２１で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C4-B、配列番号２３で表されるアミノ酸配列からなるFibrinogen  alpha  chain  (isoform  1)、および配列番号２５で表されるアミノ酸配列からなるFibrinogen  alpha  chain  (isoform  2)からなる群から選択される少なくとも１つのタンパク質ないしペプチドまたは該タンパク質ないし該ペプチドから生じるアミノ酸残基５個以上のペプチド断片を認知機能障害疾患診断のためのバイオマーカーとして用い得ることを見出した。
【００１７】
さらに、配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C3由来ペプチドCO3、配列番号４で表されるアミノ酸配列からなるTranscription  factor  AP-2  gamma由来ペプチド  AP2C、配列番号６で表されるアミノ酸配列からなるSynapsin-3由来ペプチドSYN3、配列番号８で表されるアミノ酸配列からなるOxytocin  receptor由来ペプチドOXYR、配列番号１０で表されるアミノ酸配列からなるInter-alpha-trypsin  inhibitor  heavy  chain  H5-like  protein由来ペプチドITH5L、配列番号１２で表されるアミノ酸配列からなるE3  ubiquitin-protein  ligase  HERC2由来ペプチドHERC2、配列番号１４で表されるアミノ酸配列からなるProthrombin由来ペプチドTHRB、配列番号１６で表されるアミノ酸配列からなるTransthyretin由来ペプチドTTHY、配列番号１８で表されるアミノ酸配列からなるTumor  necrosis  factor  receptor  superfamily  member  16由来ペプチドTNR16、配列番号２０で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C4由来ペプチドCO4-1、配列番号２２で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C4由来ペプチドCO4-2、配列番号２４で表されるアミノ酸配列からなるFibrinogen  alpha  chain由来ペプチドFIBA-1、配列番号２６で表されるアミノ酸配列からなるFibrinogen  alpha  chain由来ペプチドFIBA-2、および配列番号２７で表されるアミノ酸配列からなるFibrinogen  alpha  chain由来ペプチドFIBA-3を認知機能障害疾患診断のためのバイオマーカーとして用い得ることを見出した。
【００１８】
本発明者らは、さらに、これらのタンパク質やペプチドないしペプチド断片を２次元液体クロマトグラフィー(2D-LC)  MALDI  TOF-MS法（質量分析法）やimmunoMS法を用いることにより、一度に多数のタンパク質ないしペプチドないしペプチド断片を測定することに成功し、本発明を完成させるに至った。
【００１９】
すなわち、本発明の態様は以下のとおりである。
［１］  配列番号１３で表されるアミノ酸配列からなるProthrombinであるタンパク質ないしペプチドまたは該タンパク質ないし該ペプチドから生じるアミノ酸残基５個以上のペプチド断片からなる認知機能障害疾患診断のためのバイオマーカー。
【００２０】
［２］  配列番号１４で表されるアミノ酸配列からなるProthrombin由来ペプチドTHRBである、認知機能障害疾患診断のためのバイオマーカー。
【００２１】
［３］  配列番号１４で表されるアミノ酸配列からなるペプチドであって、認知機能障害疾患患者生体試料中において、精神疾患に罹患していない被験者の生体試料中と比較し出現または増加する認知機能障害疾患バイオマーカー。
【００２２】
［４］  配列番号１４で表されるアミノ酸配列からなるペプチドであって、アルツハイマー病患者生体試料中において、精神疾患に罹患していない被験者の生体試料中と比較し出現または増加するアルツハイマー病バイオマーカー。
【００２３】
［５］  配列番号１４で表されるアミノ酸配列からなるペプチドであって、軽度認知障害患者生体試料中において、精神疾患に罹患していない被験者の生体試料中と比較し出現または増加する軽度認知障害バイオマーカー。
【００２４】
［６］  生体試料中の［１］〜［５］のいずれか１項に記載のバイオマーカーを測定することを含む、認知機能障害疾患の検出方法。
【００２５】
［７］  検出がイムノ・ブロット法またはウエスタン・ブロット法、酵素もしくは蛍光もしくは放射性物質標識抗体法または質量分析法またはimmunoMS法または表面プラズモン共鳴法により行われる［６］に記載の認知機能障害疾患の検出方法。
【００２６】
［８］  ［１］〜［５］のいずれか１項に記載のバイオマーカーを測定するための認知機能障害疾患の検出キット。
【００２７】
［９］  ［１］〜［５］のいずれか１項に記載のバイオマーカーに対する抗体もしくはアプタマーを含む認知機能障害疾患の検出キット。
【発明の効果】
【００２８】
本発明によれば、被験者由来の生体試料中の配列番号１で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C3、配列番号３で表されるアミノ酸配列からなるTranscription  factor  AP-2  gamma、配列番号５で表されるアミノ酸配列からなるSynapsin-3、配列番号７で表されるアミノ酸配列からなるOxytocin  receptor、配列番号９で表されるアミノ酸配列からなるInter-alpha-trypsin  inhibitor  heavy  chain  H5-like  protein、配列番号１１で表されるアミノ酸配列からなるE3  ubiquitin-protein  ligase  HERC2、配列番号１３で表されるアミノ酸配列からなるProthrombin、配列番号１５で表されるアミノ酸配列からなるTransthyretin、配列番号１７で表されるアミノ酸配列からなるTumor  necrosis  factor  receptor  superfamily  member  16、配列番号１９で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C4-A、配列番号２１で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C4-B、配列番号２３で表されるアミノ酸配列からなるFibrinogen  alpha  chain  (isoform  1)、および配列番号２５で表されるアミノ酸配列からなるFibrinogen  alpha  chain  (isoform  2)からなる群から選択される少なくとも１つのタンパク質ないしペプチドまたは該タンパク質ないし該ペプチドから生じるアミノ酸残基５個以上のペプチド断片から選択される少なくとも１つのバイオマーカーの量を計測することにより、精神疾患に罹患していない被験者の生体試料中と比較し出現または増加する場合に当該被験者は軽度認知障害ないしアルツハイマー病を含む認知機能障害疾患に罹患していると診断することができる。
【００２９】
また、本発明によれば、被験者由来の生体試料中の配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C3由来ペプチドCO3、配列番号４で表されるアミノ酸配列からなるTranscription  factor  AP-2  gamma由来ペプチドAP2C、配列番号６で表されるアミノ酸配列からなるSynapsin-3由来ペプチドSYN3、配列番号８で表されるアミノ酸配列からなるOxytocin  receptor由来ペプチドOXYR、配列番号１０で表されるアミノ酸配列からなるInter-alpha-trypsin  inhibitor  heavy  chain  H5-like  protein由来ペプチドITH5L、配列番号１２で表されるアミノ酸配列からなるE3  ubiquitin-protein  ligase  HERC2由来ペプチドHERC2、配列番号１４で表されるアミノ酸配列からなるProthrombin由来ペプチドTHRB、配列番号１６で表されるアミノ酸配列からなるTransthyretin由来ペプチドTTHY、配列番号１８で表されるアミノ酸配列からなるTumor  necrosis  factor  receptor  superfamily  member  16由来ペプチドTNR16、配列番号２０で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C4由来ペプチドCO4-1、配列番号２２で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C4由来ペプチドCO4-2、配列番号２４で表されるアミノ酸配列からなるFibrinogen  alpha  chain由来ペプチドFIBA-1、配列番号２６で表されるアミノ酸配列からなるFibrinogen  alpha  chain由来ペプチドFIBA-2、および配列番号２７で表されるアミノ酸配列からなるFibrinogen  alpha  chain由来ペプチドFIBA-3からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドの種類および量を計測することにより、精神疾患には罹患していない被験者の生体試料中と比較し出現または増加する場合に当該被験者は軽度認知障害ないしアルツハイマー病を含む認知機能障害疾患に罹患していると診断することができる。
【００３０】
本発明は、また精度および特異性の両方が極めて高い診断システムを提供する。本発明によって血液のような生体試料について特定の検査方法がなかった認知機能障害疾患に対して精度の高い診断がはじめて可能になる。さらに、本発明のバイオマーカーは、薬剤効果判定においても有用性が高い。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】(A)で示す長方形内の点（その集団をクラスターと呼ぶ）は個々の被験者の血清に検出されたMarker  AのC18逆相クロマトグラフィー（２次元目）における質量ピークの保持時間(Retention  Time)とm/zである。クラスター内の点は誤差範囲内で同一m/zかつ同一保持時間にあるとみなすことができ、同一ペプチドに由来すると規定される。
【図２】Marker  Aの場合の差異解析の結果（ドット図）。Marker  Aは図４のMS/MS解析の結果得られたアミノ酸配列に示すように、Complement  C3由来ペプチドCO3である。図２はCO3に関する認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)とNDC間の比較である。
【図３】配列番号２  CO3のROC曲線。ROC曲線の定義は実施例、結果の項を参照。A)はAD対NDC、B)はMCI対NDCの比較における、受信者操作特性曲線による分析で得たROC曲線である。
【図４】TOF/TOF型質量分析計によるMS/MSスペクトル図。図４上部にCO3のアミノ酸配列と、MS/MSスペクトルで現れるbイオンとyイオンを示した。
【図５】配列番号４  AP2Cの差異解析の結果。精神疾患に罹患していない被験者(NDC)と認知機能障害疾患患者(AD、MCI、DLB、FTD)間の比較である。
【図６】配列番号６  SYN3の差異解析の結果。精神疾患に罹患していない被験者(NDC)と認知機能障害疾患患者(AD、MCI、DLB、FTD)間の比較である。
【図７】配列番号８  OXYRの差異解析の結果。精神疾患に罹患していない被験者(NDC)と認知機能障害疾患患者(AD、MCI、DLB、FTD)間の比較である。
【図８】配列番号１０  ITH5Lの差異解析の結果。精神疾患に罹患していない被験者(NDC)と認知機能障害疾患患者(AD、MCI、DLB、FTD)間の比較である。
【図９】配列番号１２  HERC2の差異解析の結果。精神疾患に罹患していない被験者(NDC)と認知機能障害疾患患者(AD、MCI、DLB、FTD)間の比較である。
【図１０】配列番号１４  THRBの差異解析の結果。精神疾患に罹患していない被験者(NDC)と認知機能障害疾患患者(AD、MCI、DLB、FTD)間の比較である。
【図１１】配列番号１６  TTHYの差異解析の結果。精神疾患に罹患していない被験者(NDC)と認知機能障害疾患患者(AD、MCI、DLB、FTD)間の比較である。
【図１２】配列番号１８  TNR16の差異解析の結果。精神疾患に罹患していない被験者(NDC)と認知機能障害疾患患者(AD、MCI、DLB、FTD)間の比較である。
【図１３】配列番号２０  CO4-1の差異解析の結果。精神疾患に罹患していない被験者(NDC)と認知機能障害疾患患者(AD、MCI、DLB、FTD)間の比較である。
【図１４】配列番号２２  CO4-2の差異解析の結果。精神疾患に罹患していない被験者(NDC)と認知機能障害疾患患者(AD、MCI、DLB、FTD)間の比較である。
【図１５】配列番号２４  FIBA-1の差異解析の結果。精神疾患に罹患していない被験者(NDC)と認知機能障害疾患患者(AD、MCI、DLB、FTD)間の比較である。
【図１６】配列番号２６  FIBA-2の差異解析の結果。精神疾患に罹患していない被験者(NDC)と認知機能障害疾患患者(AD、MCI、DLB、FTD)間の比較である。
【図１７】配列番号２７  FIBA-3の差異解析の結果。精神疾患に罹患していない被験者(NDC)と認知機能障害疾患患者(AD、MCI、DLB、FTD)間の比較である。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
本発明は、被験者が認知機能障害疾患に罹患しているとき、インタクトなタンパク質および／またはその部分ペプチドの種類および量を検出すると同時に、インタクトなタンパク質とその部分ペプチドの種類と量の変動を測定することにより被験者が認知機能障害疾患に罹患しているかどうかを診断する方法である。ここで、ペプチドは、一般的には分子量１万以下のアミノ酸が連結したものをいい、あるいはアミノ酸残基の数としては数個から50個以下程度のものをいう。本発明においては、インタクトなタンパク質の部分ペプチドを認知機能障害疾患検出のためのバイオマーカーとして用い得るが、部分ペプチドという場合、インタクトなタンパク質の有するアミノ酸配列の一部の部分的アミノ酸配列を有するペプチドであって分子量１万以下のものをいう。本発明において、インタクトなタンパク質の部分ペプチドとは、インタクトなタンパク質の有するアミノ酸配列の一部の部分的アミノ酸配列を有するペプチドをいい、転写・翻訳による発現合成過程で部分ペプチドとして生成する場合と、インタクトなタンパク質として合成された後に、生体内で消化分解を受けて消化分解産物ペプチドとして生成する場合がある。この原因としては、生体が認知機能障害疾患等の正常以外の状態にあるときに、タンパク質の合成および制御機構が脱制御されることが挙げられる。すなわち、本発明は、生体内のタンパク質の発現合成および／または消化分解を指標として被験者が正常状態であるか認知機能障害疾患に罹患しているかを判別し、また認知機能障害疾患に罹患している場合の疾患の進行度をも評価判別する方法でもある。本発明において、認知機能障害疾患の検出とは、被験者が認知機能障害疾患に罹患しているかどうかの評価判別、すなわち診断を行うことをいう。また、被験者がより重篤な認知機能障害に罹患するリスクの評価等も含み得る。
【００３３】
本発明の方法において、認知機能障害疾患検出のためのバイオマーカーとして用い得るインタクトなタンパク質として、具体的には、配列番号１で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C3、配列番号３で表されるアミノ酸配列からなるTranscription  factor  AP-2  gamma、配列番号５で表されるアミノ酸配列からなるSynapsin-3、配列番号７で表されるアミノ酸配列からなるOxytocin  receptor、配列番号９で表されるアミノ酸配列からなるInter-alpha-trypsin  inhibitor  heavy  chain  H5-like  protein、配列番号１１で表されるアミノ酸配列からなるE3  ubiquitin-protein  ligase  HERC2、配列番号１３で表されるアミノ酸配列からなるProthrombin、配列番号１５で表されるアミノ酸配列からなるTransthyretin、配列番号１７で表されるアミノ酸配列からなるTumor  necrosis  factor  receptor  superfamily  member  16、配列番号１９で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C4-A、配列番号２１で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C4-B、配列番号２３で表されるアミノ酸配列からなるFibrinogen  alpha  chain  (isoform  1)、および配列番号２５で表されるアミノ酸配列からなるFibrinogen  alpha  chain  (isoform  2)が挙げられ、これらのインタクトなタンパク質の部分ペプチドであるアミノ酸残基５個以上のペプチド断片も同じ目的に用い得る。
【００３４】
また、認知機能障害疾患検出のためのバイオマーカーとして用い得る部分ペプチドとして、配列番号２で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C3由来ペプチドCO3、配列番号４で表されるアミノ酸配列からなるTranscription  factor  AP-2  gamma由来ペプチドAP2C、配列番号６で表されるアミノ酸配列からなるSynapsin-3由来ペプチドSYN3、配列番号８で表されるアミノ酸配列からなるOxytocin  receptor由来ペプチドOXYR、配列番号１０で表されるアミノ酸配列からなるInter-alpha-trypsin  inhibitor  heavy  chain  H5-like  protein由来ペプチド  ITH5L、配列番号１２で表されるアミノ酸配列からなるE3  ubiquitin-protein  ligase  HERC2由来ペプチドHERC2、配列番号１４で表されるアミノ酸配列からなるProthrombin由来ペプチドTHRB、配列番号１６で表されるアミノ酸配列からなるTransthyretin由来ペプチドTTHY、配列番号１８で表されるアミノ酸配列からなるTumor  necrosis  factor  receptor  superfamily  member  16由来ペプチドTNR16、配列番号２０で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C4由来ペプチドCO4-1、配列番号２２で表されるアミノ酸配列からなるComplement  C4由来ペプチドCO4-2、配列番号２４で表されるアミノ酸配列からなるFibrinogen  alpha  chain由来ペプチドFIBA-1、配列番号２６で表されるアミノ酸配列からなるFibrinogen  alpha  chain由来ペプチドFIBA-2、および配列番号２７で表されるアミノ酸配列からなるFibrinogen  alpha  chain由来ペプチドFIBA-3が挙げられる。本発明においては、上記のインタクトなタンパク質およびペプチドをマーカーとして用いるが、配列番号１〜２７で表されるアミノ酸配列において、１個または数個のアミノ酸が欠失、置換、付加したアミノ酸配列からなるタンパク質およびペプチドも含み、これらのタンパク質またはペプチドも本発明の方法においてバイオマーカーとして用いることができる。ここで、「１個または数個」とは「１個または３個」、「１個または２個」または「１個」をいう。さらに、認知機能障害疾患検出のためのバイオマーカーとして用い得るこれらのペプチドとして、配列番号１〜２７で表されるアミノ酸配列から生じるアミノ酸残基５個以上のペプチド断片も含まれる。ペプチド断片についてアミノ酸残基５個以上とした理由は、非特許文献２の以下の記載による。すなわち、ヒストンH3のC端(130〜135)のアミノ酸残基配列IRGERAについてRをKに置換したペプチドおよびIRを欠失させ、代わりにCGGをGERAに結合させたペプチドCGGGERAがペプチドIRGERAを免疫原として得た抗体によって認識されたとの報告である。これは、抗原性の認識が４個以上のアミノ酸残基からなるペプチドによってなされることを示している。本発明では、ヒストンH3のC端以外にも一般性を持たせるために、残基数を１つ増やして、５個以上としたが、このような低分子のペプチドをも対象とすることは、イムノ・ブロット法、ELISA法、immunoMS法などのような免疫学的手法を用いて検出ならびに分別する方法を用いるときに重要である。
【００３５】
なお、インタクトなタンパク質またはその部分ペプチドに糖鎖が付加されることがある。これらの糖鎖が付加したタンパク質および部分ペプチドも認知機能障害疾患検出のためのバイオマーカーとして用い得る。
【００３６】
なお、本発明において、バイオマーカーを定量してもよいし、定性により存在、非存在を決定してもよい。
【００３７】
本発明で血清等の生体試料中のバイオマーカーを分離する方法としては、２次元電気泳動あるいは２次元クロマトグラフィーを用い得る。この場合の２種類のクロマトグラフィーは、イオン交換クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー等の公知のクロマトグラフィーから選択すればよい。またLC-MS/MS法を用いたSRM/MRM法で定量することもできる。さらに、発明者が開発したビーズ（磁気ビーズを含む）に対象となるタンパク質またはペプチドに対する抗体を結合させ、これにより測定したいタンパク質またはペプチドを捕捉したのち、ビーズから溶出して質量分析により測定するimmunoMS法を用いれば、２次元電気泳動あるいはクロマトグラフィーを用いることなく、簡便に目的のタンパク質、タンパク質断片、ペプチドの有無あるいは量を評価することができる。
【００３８】
本発明の方法によれば、被験者の認知機能障害が軽度の段階で評価することができ、予防医学にも有用である。さらに、認知機能障害疾患に罹患した患者に心理療法や薬物療法を行った場合、障害の進行が抑制されるならば、血清などの生体試料中のタンパク質／部分ペプチドの量にも反映される。これを測定することにより、治療効果の評価と判定を行うこともできる。
【００３９】
生体試料中のタンパク質の種類および量は種々の方法で測定することができる。対象となるタンパク質（タンパク質断片および部分ペプチドを含む）が特定されていて、それに対する抗体（１次抗体）が得られている場合は、以下の方法を用いることができる。
【００４０】
１．イムノ・ブロット法
最も単純な方法である。数段階に希釈した被験血清を用意し、その一定量（１マイクロリットル前後）をニトロセルローズ・メンブレンなどの適当なメンブレンに滴下し、風乾する。BSAなどのタンパク質を含むブロッキング溶液で処理した後、洗浄し、１次抗体を反応させ、洗浄後１次抗体を検出するための標識された２次抗体を反応させる。メンブレンを洗浄後、標識を可視化して濃度を測定する。
【００４１】
２．ウエスタン・ブロット法
等電点ないしSDS-PAGEを含む１次元ないし２次元ゲル電気泳動を行った後で、分離されたタンパク質を一旦、PVDFメンブレンなどの適当なメンブレンに転写し、１次抗体と標識された２次抗体を用いて上述のイムノ・ブロット法と同様に操作して、目的のタンパク質の存在量を測定する。
【００４２】
３．ＥＬＩＳＡ法
タンパク質またはその部分ペプチドに対する抗体をあらかじめ特殊な化学修飾をしたマイクロタイタープレート等の担体に結合させ、試料を段階希釈後、抗体を結合させたマイクロタイタープレートにこれを適当量加えてインキュベーションする。その後洗浄し、捕捉されなかったタンパク質および部分ペプチドを除く。次に蛍光もしくは化学発光物質または酵素を結合させた２次抗体を加えインキュベーションする。検出はそれぞれの基質を加えた後、蛍光もしくは化学発光物質または酵素反応による可視光を計測することによって評価判定を行う。抗体の代わりにタンパク質またはその部分ペプチドに結合し得る物質を用いてもよい。例えば、アプタマー等を用いることができる。
【００４３】
さらに以下に方法（特許文献２参照）を例示するが、それらには限定されない。
４．マイクロアレイ（マイクロチップ）を用いた方法
マイクロアレイとは、担体（基板）上に測定しようとする物質に結合し得る物質を整列（アレイ）固定化させたデバイスを総称していう。本発明の場合、タンパク質および部分ペプチドに対する抗体またはアプタマーを整列固定化させて用いればよい。測定は、固相化した抗体等に、生体試料を添加し、マイクロアレイ上に測定しようとするタンパク質または部分ペプチドを結合させ、次に蛍光もしくは化学発光物質または酵素を結合させた２次抗体を加えインキュベーションする。検出はそれぞれの基質を加えた後、蛍光もしくは化学発光物質または酵素反応による可視光を計測すればよい。
【００４４】
５．質量分析法
質量分析法においては、例えば、特定のタンパク質とその部分ペプチドに対する抗体をあらかじめ特殊な化学修飾をしたマイクロビーズもしくは基板（プロテインチップ）に結合させる。マイクロビーズは磁気ビーズであってもよい。基板の素材は問わない。使用する抗体は（１）特定のタンパク質の完全長のみを認識する抗体、（２）部分ペプチドのみを認識する抗体、（３）特定のタンパク質とその部分ペプチドの両方を認識する抗体のすべて、または上記（１）と（２）、（１）と（３）、もしくは（２）と（３）の組み合わせでもよい。試料を原液または緩衝液で段階希釈後、抗体を結合させたマイクロビーズまたは基板にこれを適当量加え、インキュベーションする。その後洗浄し、捕捉されなかったタンパク質および部分ペプチドを除く。その後、マイクロビーズまたは基板上に捕捉されたタンパク質および部分ペプチドをMALDI-TOF-MS、SELDI-TOF-MSなどを用いた質量分析によって分析し、タンパク質、タンパク質断片および部分ペプチドのピークの質量数とピーク強度を計測する。適当な内部標準物質をもとの生体試料に一定量加えておき、そのピーク強度を測定して、対象となる物質のピーク強度との比を求めることにより、もとの生体試料中の濃度を知ることができる。この方法をimmunoMS法という。また試料を原液または緩衝液で希釈または一部のタンパク質を除去した後、HPLCで分離、エレクトロスプレーイオン化(ESI)法を用いた質量分析によって定量することができる。その際に、同位体標識した内部標準ペプチドを用いたSRM/MRM法による絶対定量によって資料中の濃度を知ることができる。
【００４５】
さらに、上記の方法の他、２次元電気泳動を用いた方法、表面プラズモン共鳴を用いた方法等によっても、タンパク質および部分ペプチドを解析することが可能である。
【００４６】
本発明は、被験者から採取した生体試料を２次元電気泳動ないし表面プラズモン共鳴法に供し、前記バイオマーカーの有無ないし量を指標に認知機能障害疾患を検出する方法をも包含する。
【実施例】
【００４７】
２次元液体クロマトグラフィー−質量分析(2D-LC  MALDI  TOF-MS)による認知機能障害疾患診断マーカーペプチドの探索
【００４８】
（１）血清試料
以下、括弧の前は略称である。
AD（アルツハイマー病）40例、MCI（軽度認知障害）35例、DLB（レビー小体型認知症）13例、FTD（前頭側頭型認知症）7例、およびNDC（精神疾患に罹患していない被験者）21例からなる。
【００４９】
（２）方法
血清25μlの各々に475μlの0.1％トリフルオロ酢酸(TFA)を加え、100℃で15分間煮沸した。その後、分子量1万以下のペプチドを回収するためにミリポア社YM-10を用いて限外ろ過を行った。次に以下のように、2D-LC  MALDI  TOF-MS法による分析を行った。すなわち、限外ろ過で回収されたサンプルを２次元HPLC（１次元目SCX陽イオン交換ならびに２次元目C18逆相カラム）を用いて1サンプルあたり合計382に分画した。SCX陽イオン交換カラムでは2つの画分に分画した、すなわちSCX  1は素通り画分、SCX  2は塩濃度100%で溶出した画分である。SCXで分画された2つの画分はそれぞれC18逆相カラムクロマトグラフィーにより191の画分に分画した。1画分は6秒で溶出し、保持時間(Retention  Time)は溶出済み画分数−1に6秒を乗じて求められた。すべてのサンプルはオンラインで接続されたスポッティングロボット(AccuSpot,  SHIMADZU)を用いてMALDI  TOF/TOF型質量分析計(ultraflex  TOF/TOF,  BRUKER  DALTONICS)用のMALDIターゲットプレート(MTP  AnchorChip(TM)  600/384  plate(BRUKER  DALTONICS))上のウエルにマトリックス溶液（α-シアノ-ヒドロキシケイ皮酸,  α-CHCA）と混合しながらスポットし共結晶化した。ultraflex  TOF/TOFに装着後した後、レーザーを照射しリフレクトロンモードで質量ならびにその質量におけるピーク面積（以下に述べる正規化プロセスを含む）を自動測定した。ピーク面積はマトリックス溶液に予め加えられた各ウエル当り250fmoleのbradykinin  1-7で正規化し、Area値とした。すなわち、サンプルの特定の質量におけるピーク面積をbradykinin  1-7から得られるピーク面積で割った値をArea値とした。このArea値はサンプル血清25μlに対応する。群間で血清中の存在量に差のあるペプチドの検出（差異解析）は、我々が開発した多群間統計解析ソフトウェアであるParnassum(TM)(MCBI)を用いて行った。存在量に差の認められたペプチドは、そのままultraflex  TOF/TOFでMS/MSにてアミノ酸配列を決定し、その起源であるインタクトタンパク質またはペプチドを同定した。
【００５０】
（３）結果
以下に、個々の被験者の血清を2D-LC  MALDI  TOF-MSに供して得られたデータについてParnassumソフトウェアで差異解析を行った結果を示す。図１は１次元目のSCX陽イオン交換カラムで2つの画分に分画したもののうち、最初に分画される画分(SCX  1)を２次元目にC18逆相カラムで191の画分に分画した画分をMALDI  TOF-MSで測定したスペクトルについて、横軸は単位荷電当たりの質量(m/z)を、縦軸は２次元目の逆相カラムクロマトグラフィーの保持時間で表した図である。図中の点はそれぞれ個々の被験者に由来するTOF-MSのピークであり、点が集合している部分は誤差範囲内で同一m/zかつ同一保持時間の1個のペプチドに由来するピークと規定し、これをクラスターとして示している。図１の(A)で示された長方形内の点の集合はMarker  Aのクラスターである。
【００５１】
図２はMarker  Aの差異解析の結果を示す。Marker  Aは後に図４に示すように、Complement  C3由来ペプチドCO3である。図２は認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)と精神疾患に罹患していない被験者(NDC)間の比較である。Area値は、NDCと比較して認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)のほうがt−検定の結果、統計的に有意に(p<0.05)高値であった。
【００５２】
図２の結果から、Marker  Aがバイオマーカーとしてどの程度に有用であるかを評価するために受信者操作特性曲線（receiver  operating  characteristic  curve,  ROC曲線）による分析を行った。図3のA)、B)はそれぞれAD対NDC、MCI対NDCの比較におけるROC曲線である。ROC曲線の下部の面積値(AUC of ROC)（以下、AUC値という）が1に近いほどバイオマーカーとしての有用性が高くなる。感度(sensitivity)と特異度(specificity)の代表的な値は図3のA)、B)においてy軸上の100%の点からROC曲線に直線を引いたとき、その距離が最小となるROC曲線上の点の座標（図中のopen  square）の値である。この点を与えるcutoff値が異なる群の間の分別に有用な閾値となり、そのときの感度と特異度（すなわち上述の代表的な値）がAUC値とともにバイオマーカーの有用性の指標となる。
図３のA)では、AD対NDCにおいて代表的な値としての感度(sensitivity)が73.0%、特異度(specificity)が100%、AUC値が0.88であり、B)ではMCI対NDCにおいて代表的な値としての感度(sensitivity)が70.6%、特異度(specificity)が89.5%、AUC値が0.83であった。
【００５３】
以上の結果から、Marker  AはAD患者およびMCI患者を精神疾患に罹患していない被験者(NDC)と区別するのに有用であることが分かった。とくに、MCIはADの前段階であることから、ADに移行する可能性がある被験者を早期に診断、検出するマーカーとしてMarker  Aはきわめて有用と考えられる。
【００５４】
図４はMarker  Aについて、ultraflex  TOF/TOF型質量分析計でMS/MS解析した結果を示す。y-ion、b-ion、a-ionを示すシグナルが十分に現れており、アミノ酸配列が容易に決定できた。この結果についてMascotによる検索を行い、その起源であるタンパク質またはペプチド（以下、インタクトタンパク質またはペプチドという）がComplement  C3と同定され、検出されたペプチドがこのたんぱく質に由来するアミノ酸配列APVIHQEMIGGLRNであることが明らかとなった。検出されたペプチドについてはUniProtのEntry  NameであるCO3をペプチド名の略称として用いる。以下、CO3以外のペプチドについても同様とする。
【００５５】
Marker  Aを含め、群間で血清中の存在量に差のあるペプチドをultraflex  TOF/TOFにてMS/MSを行い、アミノ酸配列を決定するとともに、インタクトタンパク質またはペプチドを同定した。結果を以下に示す。Marker  A以外のペプチドについてもy-ionおよびb-ionを示すシグナルが十分に現れており、アミノ酸配列が容易に決定できた。以下のアミノ酸配列は２つの配列のセットを１組として示しているが、そのうちの１番目の配列はインタクトタンパク質のアミノ酸配列であり、２番目の配列は検出されたペプチドの配列である。１番目の配列の下線部が検出されたペプチドの配列に対応している。配列中の(0001)から始まるアミノ酸配列はＮ末端側であることを表わす。
【００５６】
〔１〕  Complement  C3由来ペプチド  CO3
配列番号２のCO3はParnassum(TM)を用いたクラスタリングにより、図１のクラスターを形成していた。図２に示すように、Area値はNDCと比較して認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)のほうがt−検定の結果、統計的に有意に(p<0.05)高値であり、認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)患者と精神疾患に罹患していない被験者(NDC)とを区別する上で配列番号２のCO3は有用であることが分かった。受信者操作特性曲線による分析によれば、ADおよびMCI患者と精神疾患に罹患していない被験者とを区別するのに有用であることが明らかである（図３のA)、B)、表１）。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  SPMYSIITPN  ILRLESEETM  VLEAHDAQGD  VPVTVTVHDF  PGKKLVLSSE
0051  KTVLTPATNH  MGNVTFTIPA  NREFKSEKGR  NKFVTVQATF  GTQVVEKVVL
0101  VSLQSGYLFI  QTDKTIYTPG  STVLYRIFTV  NHKLLPVGRT  VMVNIENPEG
0151  IPVKQDSLSS  QNQLGVLPLS  WDIPELVNMG  QWKIRAYYEN  SPQQVFSTEF
0201  EVKEYVLPSF  EVIVEPTEKF  YYIYNEKGLE  VTITARFLYG  KKVEGTAFVI
0251  FGIQDGEQRI  SLPESLKRIP  IEDGSGEVVL  SRKVLLDGVQ  NPRAEDLVGK
0301  SLYVSATVIL  HSGSDMVQAE  RSGIPIVTSP  YQIHFTKTPK  YFKPGMPFDL
0351  MVFVTNPDGS  PAYRVPVAVQ  GEDTVQSLTQ  GDGVAKLSIN  THPSQKPLSI
0401  TVRTKKQELS  EAEQATRTMQ  ALPYSTVGNS  NNYLHLSVLR  TELRPGETLN
0451  VNFLLRMDRA  HEAKIRYYTY  LIMNKGRLLK  AGRQVREPGQ  DLVVLPLSIT
0501  TDFIPSFRLV  AYYTLIGASG  QREVVADSVW  VDVKDSCVGS  LVVKSGQSED
0551  RQPVPGQQMT  LKIEGDHGAR  VVLVAVDKGV  FVLNKKNKLT  QSKIWDVVEK
0601  ADIGCTPGSG  KDYAGVFSDA  GLTFTSSSGQ  QTAQRAELQC  PQPAARRRRS
0651  VQLTEKRMDK  VGKYPKELRK  CCEDGMRENP  MRFSCQRRTR  FISLGEACKK
0701  VFLDCCNYIT  ELRRQHARAS  HLGLARSNLD  EDIIAEENIV  SRSEFPESWL
0751  WNVEDLKEPP  KNGISTKLMN  IFLKDSITTW  EILAVSMSDK  KGICVADPFE
0801  VTVMQDFFID  LRLPYSVVRN  EQVEIRAVLY  NYRQNQELKV  RVELLHNPAF
0851  CSLATTKRRH  QQTVTIPPKS  SLSVPYVIVP  LKTGLQEVEV  KAAVYHHFIS
0901  DGVRKSLKVV  PEGIRMNKTV  AVRTLDPERL  GREGVQKEDI  PPADLSDQVP
0951  DTESETRILL  QGTPVAQMTE  DAVDAERLKH  LIVTPSGCGE  QNMIGMTPTV
1001  IAVHYLDETE  QWEKFGLEKR  QGALELIKKG  YTQQLAFRQP  SSAFAAFVKR
1051  APSTWLTAYV  VKVFSLAVNL  IAIDSQVLCG  AVKWLILEKQ  KPDGVFQEDA
1101  PVIHQEMIGG  LRNNNEKDMA  LTAFVLISLQ  EAKDICEEQV  NSLPGSITKA
1151  GDFLEANYMN  LQRSYTVAIA  GYALAQMGRL  KGPLLNKFLT  TAKDKNRWED
1201  PGKQLYNVEA  TSYALLALLQ  LKDFDFVPPV  VRWLNEQRYY  GGGYGSTQAT
1251  FMVFQALAQY  QKDAPDHQEL  NLDVSLQLPS  RSSKITHRIH  WESASLLRSE
1301  ETKENEGFTV  TAEGKGQGTL  SVVTMYHAKA  KDQLTCNKFD  LKVTIKPAPE
1351  TEKRPQDAKN  TMILEICTRY  RGDQDATMSI  LDISMMTGFA  PDTDDLKQLA
1401  NGVDRYISKY  ELDKAFSDRN  TLIIYLDKVS  HSEDDCLAFK  VHQYFNVELI
1451  QPGAVKVYAY  YNLEESCTRF  YHPEKEDGKL  NKLCRDELCR  CAEENCFIQK
1501  SDDKVTLEER  LDKACEPGVD  YVYKTRLVKV  QLSNDFDEYI  MAIEQTIKSG
1551  SDEVQVGQQR  TFISPIKCRE  ALKLEEKKHY  LMWGLSSDFW  GEKPNLSYII
1601  GKDTWVEHWP  EEDECQDEEN  QKQCQDLGAF  TESMVVFGCP  N（配列番号１）
【００５７】
Complement  C3由来ペプチド  CO3
APVIHQEMIG  GLRN（配列番号２）
【００５８】
〔２〕  Transcription  factor  AP-2  gamma由来ペプチド  AP2C
配列番号４のAP2CのArea値はNDCと比較して認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)のほうがt−検定の結果、統計的に有意に(p<0.05)高値であり（図５）、認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)患者と精神疾患に罹患していない被験者(NDC)とを区別する上で配列番号４のAP2Cは有用であることが分かった。受信者操作特性曲線による分析によれば、ADおよびMCI患者と精神疾患に罹患していない被験者とを区別するのに有用であることが明らかである（表１）。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  MLWKITDNVK  YEEDCEDRHD  GSSNGNPRVP  HLSSAGQHLY  SPAPPLSHTG
0051  VAEYQPPPYF  PPPYQQLAYS  QSADPYSHLG  EAYAAAINPL  HQPAPTGSQQ
0101  QAWPGRQSQE  GAGLPSHHGR  PAGLLPHLSG  LEAGAVSARR  DAYRRSDLLL
0151  PHAHALDAAG  LAENLGLHDM  PHQMDEVQNV  DDQHLLLHDQ  TVIRKGPISM
0201  TKNPLNLPCQ  KELVGAVMNP  TEVFCSVPGR  LSLLSSTSKY  KVTVAEVQRR
0251  LSPPECLNAS  LLGGVLRRAK  SKNGGRSLRE  KLDKIGLNLP  AGRRKAAHVT
0301  LLTSLVEGEA  VHLARDFAYV  CEAEFPSKPV  AEYLTRPHLG  GRNEMAARKN
0351  MLLAAQQLCK  EFTELLSQDR  TPHGTSRLAP  VLETNIQNCL  SHFSLITHGF
0401  GSQAICAAVS  ALQNYIKEAL  IVIDKSYMNP  GDQSPADSNK  TLEKMEKHRK（配列番号３）
【００５９】
Transcription  factor  AP-2  gamma由来ペプチド  AP2C
PGRQSQEGAG  LPSHHG（配列番号４）
【００６０】
〔３〕  Synapsin-3由来ペプチド  SYN3
配列番号６のSYN3のArea値はNDCと比較して認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)のほうがt−検定の結果、統計的に有意に(p<0.05)高値であり（図６）、認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)患者と精神疾患に罹患していない被験者(NDC)とを区別する上で配列番号６のSYN3は有用であることが分かった。受信者操作特性曲線による分析によれば、ADおよびMCI患者と精神疾患に罹患していない被験者とを区別するのに有用であることが明らかである（表１）。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  MNFLRRRLSD  SSFMANLPNG  YMTDLQRPDS  STSSPASPAM  ERRHPQPLAA
0051  SFSSPGSSLF  SSLSSAMKQA  PQATSGLMEP  PGPSTPIVQR  PRILLVIDDA
0101  HTDWSKYFHG  KKVNGEIEIR  VEQAEFSELN  LAAYVTGGCM  VDMQVVRNGT
0151  KVVSRSFKPD  FILVRQHAYS  MALGEDYRSL  VIGLQYGGLP  AVNSLYSVYN
0201  FCSKPWVFSQ  LIKIFHSLGP  EKFPLVEQTF  FPNHKPMVTA  PHFPVVVKLG
0251  HAHAGMGKIK  VENQLDFQDI  TSVVAMAKTY  ATTEAFIDSK  YDIRIQKIGS
0301  NYKAYMRTSI  SGNWKANTGS  AMLEQVAMTE  RYRLWVDSCS  EMFGGLDICA
0351  VKAVHSKDGR  DYIIEVMDSS  MPLIGEHVEE  DRQLMADLVV  SKMSQLPMPG
0401  GTAPSPLRPW  APQIKSAKSP  GQAQLGPQLG  QPQPRPPPQG  GPRQAQSPQP
0451  QRSGSPSQQR  LSPQGQQPLS  PQSGSPQQQR  SPGSPQLSRA  SSGSSPNQAS
0501  KPGATLASQP  RPPVQGRSTS  QQGEESKKPA  PPHPHLNKSQ  SLTNSLSTSD
0551  TSQRGTPSED  EAKAETIRNL  RKSFASLFSD（配列番号５）
【００６１】
Synapsin-3由来ペプチド  SYN3
EMFGGLDICA  VKAVHSK（配列番号６）
【００６２】
〔４〕  Oxytocin  receptor由来ペプチド  OXYR
配列番号８のOXYRのArea値はNDCと比較して認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)のほうがt−検定の結果、統計的に有意に(p<0.05)高値であり（図７）、認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)患者と精神疾患に罹患していない被験者(NDC)とを区別する上で配列番号８のOXYRは有用であることが分かった。受信者操作特性曲線による分析によれば、ADおよびMCI患者と精神疾患に罹患していない被験者とを区別するのに有用であることが明らかである（表１）。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  MEGALAANWS  AEAANASAAP  PGAEGNRTAG  PPRRNEALAR  VEVAVLCLIL
0051  LLALSGNACV  LLALRTTRQK  HSRLFFFMKH  LSIADLVVAV  FQVLPQLLWD
0101  ITFRFYGPDL  LCRLVKYLQV  VGMFASTYLL  LLMSLDRCLA  ICQPLRSLRR
0151  RTDRLAVLAT  WLGCLVASAP  QVHIFSLREV  ADGVFDCWAV  FIQPWGPKAY
0201  ITWITLAVYI  VPVIVLAACY  GLISFKIWQN  LRLKTAAAAA  AEAPEGAAAG
0251  DGGRVALARV  SSVKLISKAK  IRTVKMTFII  VLAFIVCWTP  FFFVQMWSVW
0301  DANAPKEASA  FIIVMLLASL  NSCCNPWIYM  LFTGHLFHEL  VQRFLCCSAS
0351  YLKGRRLGET  SASKKSNSSS  FVLSHRSSSQ  RSCSQPSTA（配列番号７）
【００６３】
Oxytocin  receptor由来ペプチド  OXYR
AAPPGAEGNR  T（配列番号８）
【００６４】
〔５〕  Inter-alpha-trypsin  inhibitor  heavy  chain  H5-like  protein由来ペプチド  ITH5L
配列番号１０のITH5LのArea値はNDCと比較して認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB)のほうがt−検定の結果、統計的に有意に(p<0.05)高値であり（図８）、認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB)患者と精神疾患に罹患していない被験者(NDC)とを区別する上で配列番号１０のITH5Lは有用であることが分かった。受信者操作特性曲線による分析によれば、ADおよびMCI患者と精神疾患に罹患していない被験者とを区別するのに有用であることが明らかである（表１）。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  GPPVPASSST  KLLMTSYSMR  STVVSRYAHT  LVTSVLFNPH  AEAHEAIFDL
0051  DLPHLAFISN  FTMTINNKVY  IAEVKEKHQA  KKIYEEAHQQ  GKTAAHVGIR
0101  DRESEKFRIS  TSLAAGTEVT  FSLAYEELLQ  RHQGQYQLVV  SLRPGQLVKR
0151  LSIEVTVSER  TGISYVHIPP  LRTGRLRTNA  HASEVDSPPS  TRIERGETCV
0201  RITYCPTLQD  QSSISGSGIM  ADFLVQYDVV  MEDIIGDVQI  YDDYFIHYFA
0251  PRGLPPMEKN  VVFVIDVSSS  MFGTKMEQTK  TAMNVILSDL  QANDYFNIIS
0301  FSDTVNVWKA  GGSIQATIQN  VHSAKDYLHC  MEADGWTDVN  SALLAAASVL
0351  NHSNQEPGRG  PSVGRIPLII  FLTDGEPTAG  VTTPSVILSN  VRQALGHRVS
0401  LFSLAFGDDA  DFTLLRRLSL  ENRGIARRIY  EDTDAALQLK  GLYEEISMPL
0451  LADVRLNYLG  GLVGASPWAV  FPNYFGGSEL  VVAGQVQPGK  QELGIHLAAR
0501  GPKDQLLVAH  HSEGATNNSQ  KAFGCPGEPA  PNVAHFIRRL  WAYVTIGELL
0551  DAHFQARDTT  TRHLLAAKVL  NLSLEYNFVT  PLTSLVMVQP  KQASEETRRQ
0601  TSTSAGPDTI  MPSSSSRHGL  GVSTAQPALV  PKVISPKSRP  VKPKFYLSST
0651  TTASTKKMLS  SKELEPLGES  PHTLSMPTYP  KAKIPAQQDS  GTLAQPTLRT
0701  KPTILVPSNS  GTLLPLKPGS  LSHQNPDILP  TNSRTQVPPV  KPGIPASPKA
0751  DTVKCVTPLH  SKPGAPSHPQ  LGALTSQAPK  GLPQSRPGVS  TLQVPKYPLH
0801  TRPRVPAPKT  RNNMPHLGPG  ILLSKTPKIL  LSLKPSAPPH  QISTSISLSK
0851  PETPNPHMPQ  TPLPPRPDRP  RPPLPESLST  FPNTISSSTG  PSSTTTTSVL
0901  GEPLPMPFTP  TLPPGRFWHQ  YDLLPGPQRT  RQVLGPSRPG  VPTMSLLNSS
0951  RPTPEGSPPN  LPILLPSSIL  PEAISLLLLP  EELELLSESM  VESKFVESLN
1001  PPAFYTFLTP  DEDGSPNWDG  NSEEILGGAG  GSMESQGSSV  GLAKGTLPSI
1051  FTFSSSVDGD  PHFVIQIPHS  EEKICFTLNG  HPGDLLQLIE  DPKAGLHVSG
1101  KLLGAPPRPG  HKDQTRTYFQ  IITVTTDKPR  AYTITISRSS  ISLRGEGTLR
1151  LSWDQPALLK  RPQLELYVAA  AARLTLRLGP  YLEFLVLRHR  YRHPSTLQLP
1201  HLGFYVANGS  GLSPSARGLI  GQFQHADIRL  VTGPMGPCLR  RHHGPDVPVI
1251  LGKRLLKDSP  RLLPRWASCW  LVKRSHVELL  LGHPYLSYVL（配列番号９）
【００６５】
Inter-alpha-trypsin  inhibitor  heavy  chain  H5-like  protein由来ペプチド  ITH5L
RVSLFSLAFG  DDAD（配列番号１０）
【００６６】
〔６〕  E3  ubiquitin-protein  ligase  HERC2由来ペプチド  HERC2
配列番号１２のHERC2のArea値はNDCと比較して認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB)のほうがt−検定の結果、統計的に有意に(p<0.05)高値であり（図９）、認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB)患者と精神疾患に罹患していない被験者(NDC)とを区別する上で配列番号１２のHERC2は有用であることが分かった。受信者操作特性曲線による分析によれば、ADおよびMCI患者と精神疾患に罹患していない被験者とを区別するのに有用であることが明らかである（表１）。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  MPSESFCLAA  QARLDSKWLK  TDIQLAFTRD  GLCGLWNEMV  KDGEIVYTGT
0051  ESTQNGELPP  RKDDSVEPSG  TKKEDLNDKE  KKDEEETPAP  IYRAKSILDS
0101  WVWGKQPDVN  ELKECLSVLV  KEQQALAVQS  ATTTLSALRL  KQRLVILERY
0151  FIALNRTVFQ  ENVKVKWKSS  GISLPPVDKK  SSRPAGKGVE  GLARVGSRAA
0201  LSFAFAFLRR  AWRSGEDADL  CSELLQESLD  ALRALPEASL  FDESTVSSVW
0251  LEVVERATRF  LRSVVTGDVH  GTPATKGPGS  IPLQDQHLAL  AILLELAVQR
0301  GTLSQMLSAI  LLLLQLWDSG  AQETDNERSA  QGTSAPLLPL  LQRFQSIICR
0351  KDAPHSEGDM  HLLSGPLSPN  ESFLRYLTLP  QDNELAIDLR  QTAVVVMAHL
0401  DRLATPCMPP  LCSSPTSHKG  SLQEVIGWGL  IGWKYYANVI  GPIQCEGLAN
0451  LGVTQIACAE  KRFLILSRNG  RVYTQAYNSD  TLAPQLVQGL  ASRNIVKIAA
0501  HSDGHHYLAL  AATGEVYSWG  CGDGGRLGHG  DTVPLEEPKV  ISAFSGKQAG
0551  KHVVHIACGS  TYSAAITAEG  ELYTWGRGNY  GRLGHGSSED  EAIPMLVAGL
0601  KGLKVIDVAC  GSGDAQTLAV  TENGQVWSWG  DGDYGKLGRG  GSDGCKTPKL
0651  IEKLQDLDVV  KVRCGSQFSI  ALTKDGQVYS  WGKGDNQRLG  HGTEEHVRYP
0701  KLLEGLQGKK  VIDVAAGSTH  CLALTEDSEV  HSWGSNDQCQ  HFDTLRVTKP
0751  EPAALPGLDT  KHIVGIACGP  AQSFAWSSCS  EWSIGLRVPF  VVDICSMTFE
0801  QLDLLLRQVS  EGMDGSADWP  PPQEKECVAV  ATLNLLRLQL  HAAISHQVDP
0851  EFLGLGLGSI  LLNSLKQTVV  TLASSAGVLS  TVQSAAQAVL  QSGWSVLLPT
0901  AEERARALSA  LLPCAVSGNE  VNISPGRRFM  IDLLVGSLMA  DGGLESALHA
0951  AITAEIQDIE  AKKEAQKEKE  IDEQEANAST  FHRSRTPLDK  DLINTGICES
1001  SGKQCLPLVQ  LIQQLLRNIA  SQTVARLKDV  ARRISSCLDF  EQHSRERSAS
1051  LDLLLRFQRL  LISKLYPGES  IGQTSDISSP  ELMGVGSLLK  KYTALLCTHI
1101  GDILPVAASI  ASTSWRHFAE  VAYIVEGDFT  GVLLPELVVS  IVLLLSKNAG
1151  LMQEAGAVPL  LGGLLEHLDR  FNHLAPGKER  DDHEELAWPG  IMESFFTGQN
1201  CRNNEEVTLI  RKADLENHNK  DGGFWTVIDG  KVYDIKDFQT  QSLTGNSILA
1251  QFAGEDPVVA  LEAALQFEDT  RESMHAFCVG  QYLEPDQEIV  TIPDLGSLSS
1301  PLIDTERNLG  LLLGLHASYL  AMSTPLSPVE  IECAKWLQSS  IFSGGLQTSQ
1351  IHYSYNEEKD  EDHCSSPGGT  PASKSRLCSH  RRALGDHSQA  FLQAIADNNI
1401  QDHNVKDFLC  QIERYCRQCH  LTTPIMFPPE  HPVEEVGRLL  LCCLLKHEDL
1451  GHVALSLVHA  GALGIEQVKH  RTLPKSVVDV  CRVVYQAKCS  LIKTHQEQGR
1501  SYKEVCAPVI  ERLRFLFNEL  RPAVCNDLSI  MSKFKLLSSL  PRWRRIAQKI
1551  IRERRKKRVP  KKPESTDDEE  KIGNEESDLE  EACILPHSPI  NVDKRPIAIK
1601  SPKDKWQPLL  STVTGVHKYK  WLKQNVQGLY  PQSPLLSTIA  EFALKEEPVD
1651  VEKMRKCLLK  QLERAEVRLE  GIDTILKLAS  KNFLLPSVQY  AMFCGWQRLI
1701  PEGIDIGEPL  TDCLKDVDLI  PPFNRMLLEV  TFGKLYAWAV  QNIRNVLMDA
1751  SAKFKELGIQ  PVPLQTITNE  NPSGPSLGTI  PQARFLLVML  SMLTLQHGAN
1801  NLDLLLNSGM  LALTQTALRL  IGPSCDNVEE  DMNASAQGAS  ATVLEETRKE
1851  TAPVQLPVSG  PELAAMMKIG  TRVMRGVDWK  WGDQDGPPPG  LGRVIGELGE
1901  DGWIRVQWDT  GSTNSYRMGK  EGKYDLKLAE  LPAAAQPSAE  DSDTEDDSEA
1951  EQTERNIHPT  AMMFTSTINL  LQTLCLSAGV  HAEIMQSEAT  KTLCGLLRML
2001  VESGTTDKTS  SPNRLVYREQ  HRSWCTLGFV  RSIALTPQVC  GALSSPQWIT
2051  LLMKVVEGHA  PFTATSLQRQ  ILAVHLLQAV  LPSWDKTERA  RDMKCLVEKL
2101  FDFLGSLLTT  CSSDVPLLRE  STLRRRRVRP  QASLTATHSS  TLAEEVVALL
2151  RTLHSLTQWN  GLINKYINSQ  LRSITHSFVG  RPSEGAQLED  YFPDSENPEV
2201  GGLMAVLAVI  GGIDGRLRLG  GQVMHDEFGE  GTVTRITPKG  KITVQFSDMR
2251  TCRVCPLNQL  KPLPAVAFNV  NNLPFTEPML  SVWAQLVNLA  GSKLEKHKIK
2301  KSTKQAFAGQ  VDLDLLRCQQ  LKLYILKAGR  ALLSHQDKLR  QILSQPAVQE
2351  TGTVHTDDGA  VVSPDLGDMS  PEGPQPPMIL  LQQLLASATQ  PSPVKAIFDK
2401  QELEAAALAV  CQCLAVESTH  PSSPGFEDCS  SSEATTPVAV  QHIRPARVKR
2451  RKQSPVPALP  IVVQLMEMGF  SRRNIEFALK  SLTGASGNAS  SLPGVEALVG
2501  WLLDHSDIQV  TELSDADTVS  DEYSDEEVVE  DVDDAAYSMS  TGAVVTESQT
2551  YKKRADFLSN  DDYAVYVREN  IQVGMMVRCC  RAYEEVCEGD  VGKVIKLDRD
2601  GLHDLNVQCD  WQQKGGTYWV  RYIHVELIGY  PPPSSSSHIK  IGDKVRVKAS
2651  VTTPKYKWGS  VTHQSVGVVK  AFSANGKDII  VDFPQQSHWT  GLLSEMELVP
2701  SIHPGVTCDG  CQMFPINGSR  FKCRNCDDFD  FCETCFKTKK  HNTRHTFGRI
2751  NEPGQSAVFC  GRSGKQLKRC  HSSQPGMLLD  SWSRMVKSLN  VSSSVNQASR
2801  LIDGSEPCWQ  SSGSQGKHWI  RLEIFPDVLV  HRLKMIVDPA  DSSYMPSLVV
2851  VSGGNSLNNL  IELKTININP  SDTTVPLLND  CTEYHRYIEI  AIKQCRSSGI
2901  DCKIHGLILL  GRIRAEEEDL  AAVPFLASDN  EEEEDEKGNS  GSLIRKKAAG
2951  LESAATIRTK  VFVWGLNDKD  QLGGLKGSKI  KVPSFSETLS  ALNVVQVAGG
3001  SKSLFAVTVE  GKVYACGEAT  NGRLGLGISS  GTVPIPRQIT  ALSSYVVKKV
3051  AVHSGGRHAT  ALTVDGKVFS  WGEGDDGKLG  HFSRMNCDKP  RLIEALKTKR
3101  IRDIACGSSH  SAALTSSGEL  YTWGLGEYGR  LGHGDNTTQL  KPKMVKVLLG
3151  HRVIQVACGS  RDAQTLALTD  EGLVFSWGDG  DFGKLGRGGS  EGCNIPQNIE
3201  RLNGQGVCQI  ECGAQFSLAL  TKSGVVWTWG  KGDYFRLGHG  SDVHVRKPQV
3251  VEGLRGKKIV  HVAVGALHCL  AVTDSGQVYA  WGDNDHGQQG  NGTTTVNRKP
3301  TLVQGLEGQK  ITRVACGSSH  SVAWTTVDVA  TPSVHEPVLF  QTARDPLGAS
3351  YLGVPSDADS  SAASNKISGA  SNSKPNRPSL  AKILLSLDGN  LAKQQALSHI
3401  LTALQIMYAR  DAVVGALMPA  AMIAPVECPS  FSSAAPSDAS  AMASPMNGEE
3451  CMLAVDIEDR  LSPNPWQEKR  EIVSSEDAVT  PSAVTPSAPS  ASARPFIPVT
3501  DDLGAASIIA  ETMTKTKEDV  ESQNKAAGPE  PQALDEFTSL  LIADDTRVVV
3551  DLLKLSVCSR  AGDRGRDVLS  AVLSGMGTAY  PQVADMLLEL  CVTELEDVAT
3601  DSQSGRLSSQ  PVVVESSHPY  TDDTSTSGTV  KIPGAEGLRV  EFDRQCSTER
3651  RHDPLTVMDG  VNRIVSVRSG  REWSDWSSEL  RIPGDELKWK  FISDGSVNGW
3701  GWRFTVYPIM  PAAGPKELLS  DRCVLSCPSM  DLVTCLLDFR  LNLASNRSIV
3751  PRLAASLAAC  AQLSALAASH  RMWALQRLRK  LLTTEFGQSI  NINRLLGEND
3801  GETRALSFTG  SALAALVKGL  PEALQRQFEY  EDPIVRGGKQ  LLHSPFFKVL
3851  VALACDLELD  TLPCCAETHK  WAWFRRYCMA  SRVAVALDKR  TPLPRLFLDE
3901  VAKKIRELMA  DSENMDVLHE  SHDIFKREQD  EQLVQWMNRR  PDDWTLSAGG
3951  SGTIYGWGHN  HRGQLGGIEG  AKVKVPTPCE  ALATLRPVQL  IGGEQTLFAV
4001  TADGKLYATG  YGAGGRLGIG  GTESVSTPTL  LESIQHVFIK  KVAVNSGGKH
4051  CLALSSEGEV  YSWGEAEDGK  LGHGNRSPCD  RPRVIESLRG  IEVVDVAAGG
4101  AHSACVTAAG  DLYTWGKGRY  GRLGHSDSED  QLKPKLVEAL  QGHRVVDIAC
4151  GSGDAQTLCL  TDDDTVWSWG  DGDYGKLGRG  GSDGCKVPMK  IDSLTGLGVV
4201  KVECGSQFSV  ALTKSGAVYT  WGKGDYHRLG  HGSDDHVRRP  RQVQGLQGKK
4251  VIAIATGSLH  CVCCTEDGEV  YTWGDNDEGQ  LGDGTTNAIQ  RPRLVAALQG
4301  KKVNRVACGS  AHTLAWSTSK  PASAGKLPAQ  VPMEYNHLQE  IPIIALRNRL
4351  LLLHHLSELF  CPCIPMFDLE  GSLDETGLGP  SVGFDTLRGI  LISQGKEAAF
4401  RKVVQATMVR  DRQHGPVVEL  NRIQVKRSRS  KGGLAGPDGT  KSVFGQMCAK
4451  MSSFGPDSLL  LPHRVWKVKF  VGESVDDCGG  GYSESIAEIC  EELQNGLTPL
4501  LIVTPNGRDE  SGANRDCYLL  SPAARAPVHS  SMFRFLGVLL  GIAIRTGSPL
4551  SLNLAEPVWK  QLAGMSLTIA  DLSEVDKDFI  PGLMYIRDNE  ATSEEFEAMS
4601  LPFTVPSASG  QDIQLSSKHT  HITLDNRAEY  VRLAINYRLH  EFDEQVAAVR
4651  EGMARVVPVP  LLSLFTGYEL  ETMVCGSPDI  PLHLLKSVAT  YKGIEPSASL
4701  IQWFWEVMES  FSNTERSLFL  RFVWGRTRLP  RTIADFRGRD  FVIQVLDKYN
4751  PPDHFLPESY  TCFFLLKLPR  YSCKQVLEEK  LKYAIHFCKS  IDTDDYARIA
4801  LTGEPAADDS  SDDSDNEDVD  SFASDSTQDY  LTGH（配列番号１１）
【００６７】
E3  ubiquitin-protein  ligase  HERC2由来ペプチド  HERC2
KLAELPAAAQ  PSAEDSD（配列番号１２）
【００６８】
〔７〕  Prothrombin由来ペプチド  THRB
配列番号１４のTHRBのArea値はNDCと比較して認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)のほうがt−検定の結果、統計的に有意に(p<0.05)高値であり（図１０）、認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)患者と精神疾患に罹患していない被験者(NDC)とを区別する上で配列番号１４のTHRBは有用であることが分かった。受信者操作特性曲線による分析によれば、ADおよびMCI患者と精神疾患に罹患していない被験者とを区別するのに有用であることが明らかである（表１）。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  ANTFLEEVRK  GNLERECVEE  TCSYEEAFEA  LESSTATDVF  WAKYTACETA
0051  RTPRDKLAAC  LEGNCAEGLG  TNYRGHVNIT  RSGIECQLWR  SRYPHKPEIN
0101  STTHPGADLQ  ENFCRNPDSS  TTGPWCYTTD  PTVRRQECSI  PVCGQDQVTV
0151  AMTPRSEGSS  VNLSPPLEQC  VPDRGQQYQG  RLAVTTHGLP  CLAWASAQAK
0201  ALSKHQDFNS  AVQLVENFCR  NPDGDEEGVW  CYVAGKPGDF  GYCDLNYCEE
0251  AVEEETGDGL  DEDSDRAIEG  RTATSEYQTF  FNPRTFGSGE  ADCGLRPLFE
0301  KKSLEDKTER  ELLESYIDGR  IVEGSDAEIG  MSPWQVMLFR  KSPQELLCGA
0351  SLISDRWVLT  AAHCLLYPPW  DKNFTENDLL  VRIGKHSRTR  YERNIEKISM
0401  LEKIYIHPRY  NWRENLDRDI  ALMKLKKPVA  FSDYIHPVCL  PDRETAASLL
0451  QAGYKGRVTG  WGNLKETWTA  NVGKGQPSVL  QVVNLPIVER  PVCKDSTRIR
0501  ITDNMFCAGY  KPDEGKRGDA  CEGDSGGPFV  MKSPFNNRWY  QMGIVSWGEG
0551  CDRDGKYGFY  THVFRLKKWI  QKVIDQFGE（配列番号１３）
【００６９】
Prothrombin由来ペプチド  THRB
TATSEYQTFF  NPRTFGSGEA  D（配列番号１４）
【００７０】
〔８〕  Transthyretin由来ペプチド  TTHY
配列番号１６のTTHYのArea値はNDCと比較して認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)のほうがt−検定の結果、統計的に有意に(p<0.05)高値であり（図１１）、認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)患者と精神疾患に罹患していない被験者(NDC)とを区別する上で配列番号１６のTTHYは有用であることが分かった。受信者操作特性曲線による分析によれば、ADおよびMCI患者と精神疾患に罹患していない被験者とを区別するのに有用であることが明らかである（表１）。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  GPTGTGESKC  PLMVKVLDAV  RGSPAINVAV  HVFRKAADDT  WEPFASGKTS
0051  ESGELHGLTT  EEEFVEGIYK  VEIDTKSYWK  ALGISPFHEH  AEVVFTANDS
0101  GPRRYTIAAL  LSPYSYSTTA  VVTNPKE（配列番号１５）
【００７１】
Transthyretin由来ペプチド  TTHY
AVRGSPAINV  AVHVFRKAAD（配列番号１６）
【００７２】
〔９〕  Tumor  necrosis  factor  receptor  superfamily  member  16由来ペプチド  TNR16
配列番号１８のTNR16のArea値はNDCと比較して認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)のほうがt−検定の結果、統計的に有意に(p<0.05)高値であり（図１２）、認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)患者と精神疾患に罹患していない被験者(NDC)とを区別する上で配列番号１８のTNR16は有用であることが分かった。受信者操作特性曲線による分析によれば、ADおよびMCI患者と精神疾患に罹患していない被験者とを区別するのに有用であることが明らかである（表１）。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  KEACPTGLYT  HSGECCKACN  LGEGVAQPCG  ANQTVCEPCL  DSVTFSDVVS
0051  ATEPCKPCTE  CVGLQSMSAP  CVEADDAVCR  CAYGYYQDET  TGRCEACRVC
0101  EAGSGLVFSC  QDKQNTVCEE  CPDGTYSDEA  NHVDPCLPCT  VCEDTERQLR
0151  ECTRWADAEC  EEIPGRWITR  STPPEGSDST  APSTQEPEAP  PEQDLIASTV
0201  AGVVTTVMGS  SQPVVTRGTT  DNLIPVYCSI  LAAVVVGLVA  YIAFKRWNSC
0251  KQNKQGANSR  PVNQTPPPEG  EKLHSDSGIS  VDSQSLHDQQ  PHTQTASGQA
0301  LKGDGGLYSS  LPPAKREEVE  KLLNGSAGDT  WRHLAGELGY  QPEHIDSFTH
0351  EACPVRALLA  SWATQDSATL  DALLAALRRI  QRADLVESLC  SESTATSPV（配列番号１７）
【００７３】
Tumor  necrosis  factor  receptor  superfamily  member  16由来ペプチド  TNR16
QTASGQALKG  DGGLYS（配列番号１８）
【００７４】
〔１０〕  Complement  C4-A由来ペプチド  CO4-1
配列番号２０のCO4-1のArea値はNDCと比較して認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)のほうがt−検定の結果、統計的に有意に(p<0.05)高値であり（図１３）、認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)患者と精神疾患に罹患していない被験者(NDC)とを区別する上で配列番号２０のCO4-1は有用であることが分かった。受信者操作特性曲線による分析によれば、ADおよびMCI患者と精神疾患に罹患していない被験者とを区別するのに有用であることが明らかである（表１）。
Complement  C4-Aタンパク質は生合成後、プロセシングによりComplement  C4  beta  chain、Complement  C4-A  alpha  chain、Complement  C4  gamma  chainに分かれる。配列番号１９は、これらのすべてを含むインタクトタンパク質Complement  C4-Aのアミノ酸配列である。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  KPRLLLFSPS  VVHLGVPLSV  GVQLQDVPRG  QVVKGSVFLR  NPSRNNVPCS
0051  PKVDFTLSSE  RDFALLSLQV  PLKDAKSCGL  HQLLRGPEVQ  LVAHSPWLKD
0101  SLSRTTNIQG  INLLFSSRRG  HLFLQTDQPI  YNPGQRVRYR  VFALDQKMRP
0151  STDTITVMVE  NSHGLRVRKK  EVYMPSSIFQ  DDFVIPDISE  PGTWKISARF
0201  SDGLESNSST  QFEVKKYVLP  NFEVKITPGK  PYILTVPGHL  DEMQLDIQAR
0251  YIYGKPVQGV  AYVRFGLLDE  DGKKTFFRGL  ESQTKLVNGQ  SHISLSKAEF
0301  QDALEKLNMG  ITDLQGLRLY  VAAAIIESPG  GEMEEAELTS  WYFVSSPFSL
0351  DLSKTKRHLV  PGAPFLLQAL  VREMSGSPAS  GIPVKVSATV  SSPGSVPEVQ
0401  DIQQNTDGSG  QVSIPIIIPQ  TISELQLSVS  AGSPHPAIAR  LTVAAPPSGG
0451  PGFLSIERPD  SRPPRVGDTL  NLNLRAVGSG  ATFSHYYYMI  LSRGQIVFMN
0501  REPKRTLTSV  SVFVDHHLAP  SFYFVAFYYH  GDHPVANSLR  VDVQAGACEG
0551  KLELSVDGAK  QYRNGESVKL  HLETDSLALV  ALGALDTALY  AAGSKSHKPL
0601  NMGKVFEAMN  SYDLGCGPGG  GDSALQVFQA  AGLAFSDGDQ  WTLSRKRLSC
0651  PKEKTTRKKR  NVNFQKAINE  KLGQYASPTA  KRCCQDGVTR  LPMMRSCEQR
0701  AARVQQPDCR  EPFLSCCQFA  ESLRKKSRDK  GQAGLQRALE  ILQEEDLIDE
0751  DDIPVRSFFP  ENWLWRVETV  DRFQILTLWL  PDSLTTWEIH  GLSLSKTKGL
0801  CVATPVQLRV  FREFHLHLRL  PMSVRRFEQL  ELRPVLYNYL  DKNLTVSVHV
0851  SPVEGLCLAG  GGGLAQQVLV  PAGSARPVAF  SVVPTAAAAV  SLKVVARGSF
0901  EFPVGDAVSK  VLQIEKEGAI  HREELVYELN  PLDHRGRTLE  IPGNSDPNMI
0951  PDGDFNSYVR  VTASDPLDTL  GSEGALSPGG  VASLLRLPRG  CGEQTMIYLA
1001  PTLAASRYLD  KTEQWSTLPP  ETKDHAVDLI  QKGYMRIQQF  RKADGSYAAW
1051  LSRDSSTWLT  AFVLKVLSLA  QEQVGGSPEK  LQETSNWLLS  QQQADGSFQD
1101  PCPVLDRSMQ  GGLVGNDETV  ALTAFVTIAL  HHGLAVFQDE  GAEPLKQRVE
1151  ASISKANSFL  GEKASAGLLG  AHAAAITAYA  LSLTKAPVDL  LGVAHNNLMA
1201  MAQETGDNLY  WGSVTGSQSN  AVSPTPAPRN  PSDPMPQAPA  LWIETTAYAL
1251  LHLLLHEGKA  EMADQASAWL  TRQGSFQGGF  RSTQDTVIAL  DALSAYWIAS
1301  HTTEERGLNV  TLSSTGRNGF  KSHALQLNNR  QIRGLEEELQ  FSLGSKINVK
1351  VGGNSKGTLK  VLRTYNVLDM  KNTTCQDLQI  EVTVKGHVEY  TMEANEDYED
1401  YEYDELPAKD  DPDAPLQPVT  PLQLFEGRRN  RRRREAPKVV  EEQESRVHYT
1451  VCIWRNGKVG  LSGMAIADVT  LLSGFHALRA  DLEKLTSLSD  RYVSHFETEG
1501  PHVLLYFDSV  PTSRECVGFE  AVQEVPVGLV  QPASATLYDY  YNPERRCSVF
1551  YGAPSKSRLL  ATLCSAEVCQ  CAEGKCPRQR  RALERGLQDE  DGYRMKFACY
1601  YPRVEYGFQV  KVLREDSRAA  FRLFETKITQ  VLHFTKDVKA  AANQMRNFLV
1651  RASCRLRLEP  GKEYLIMGLD  GATYDLEGHP  QYLLDSNSWI  EEMPSERLCR
1701  STRQRAACAQ  LNDFLQEYGT  QGCQV（配列番号１９）
【００７５】
Complement  C4由来ペプチド  CO4-1
NGFKSHALQL  NNRQIR（配列番号２０）
【００７６】
〔１１〕  Complement  C4-B由来ペプチド  CO4-1
配列番号２０のペプチドCO4-1はMS/MSおよび、MASCOTデータベース検索の結果から、Complement  C4-A（配列番号１９）およびComplement  C4-Bのタンパク質に共通するトポロジカル領域部分に存在するアミノ酸配列である。
Complement  C4-Bタンパク質は生合成後、プロセシングによりComplement  C4  beta  chain、Complement  C4-B  alpha  chain、Complement  C4  gamma  chainに分かれる。配列番号２１は、これらのすべてを含むインタクトタンパク質Complement  C4-Bのアミノ酸配列である。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  KPRLLLFSPS  VVHLGVPLSV  GVQLQDVPRG  QVVKGSVFLR  NPSRNNVPCS
0051  PKVDFTLSSE  RDFALLSLQV  PLKDAKSCGL  HQLLRGPEVQ  LVAHSPWLKD
0101  SLSRTTNIQG  INLLFSSRRG  HLFLQTDQPI  YNPGQRVRYR  VFALDQKMRP
0151  STDTITVMVE  NSHGLRVRKK  EVYMPSSIFQ  DDFVIPDISE  PGTWKISARF
0201  SDGLESNSST  QFEVKKYVLP  NFEVKITPGK  PYILTVPGHL  DEMQLDIQAR
0251  YIYGKPVQGV  AYVRFGLLDE  DGKKTFFRGL  ESQTKLVNGQ  SHISLSKAEF
0301  QDALEKLNMG  ITDLQGLRLY  VAAAIIESPG  GEMEEAELTS  WYFVSSPFSL
0351  DLSKTKRHLV  PGAPFLLQAL  VREMSGSPAS  GIPVKVSATV  SSPGSVPEVQ
0401  DIQQNTDGSG  QVSIPIIIPQ  TISELQLSVS  AGSPHPAIAR  LTVAAPPSGG
0451  PGFLSIERPD  SRPPRVGDTL  NLNLRAVGSG  ATFSHYYYMI  LSRGQIVFMN
0501  REPKRTLTSV  SVFVDHHLAP  SFYFVAFYYH  GDHPVANSLR  VDVQAGACEG
0551  KLELSVDGAK  QYRNGESVKL  HLETDSLALV  ALGALDTALY  AAGSKSHKPL
0601  NMGKVFEAMN  SYDLGCGPGG  GDSALQVFQA  AGLAFSDGDQ  WTLSRKRLSC
0651  PKEKTTRKKR  NVNFQKAINE  KLGQYASPTA  KRCCQDGVTR  LPMMRSCEQR
0701  AARVQQPDCR  EPFLSCCQFA  ESLRKKSRDK  GQAGLQRALE  ILQEEDLIDE
0751  DDIPVRSFFP  ENWLWRVETV  DRFQILTLWL  PDSLTTWEIH  GLSLSKTKGL
0801  CVATPVQLRV  FREFHLHLRL  PMSVRRFEQL  ELRPVLYNYL  DKNLTVSVHV
0851  SPVEGLCLAG  GGGLAQQVLV  PAGSARPVAF  SVVPTAAAAV  SLKVVARGSF
0901  EFPVGDAVSK  VLQIEKEGAI  HREELVYELN  PLDHRGRTLE  IPGNSDPNMI
0951  PDGDFNSYVR  VTASDPLDTL  GSEGALSPGG  VASLLRLPRG  CGEQTMIYLA
1001  PTLAASRYLD  KTEQWSTLPP  ETKDHAVDLI  QKGYMRIQQF  RKADGSYAAW
1051  LSRDSSTWLT  AFVLKVLSLA  QEQVGGSPEK  LQETSNWLLS  QQQADGSFQD
1101  LSPVIHRSMQ  GGLVGNDETV  ALTAFVTIAL  HHGLAVFQDE  GAEPLKQRVE
1151  ASISKANSFL  GEKASAGLLG  AHAAAITAYA  LSLTKAPVDL  LGVAHNNLMA
1201  MAQETGDNLY  WGSVTGSQSN  AVSPTPAPRN  PSDPMPQAPA  LWIETTAYAL
1251  LHLLLHEGKA  EMADQASAWL  TRQGSFQGGF  RSTQDTVIAL  DALSAYWIAS
1301  HTTEERGLNV  TLSSTGRNGF  KSHALQLNNR  QIRGLEEELQ  FSLGSKINVK
1351  VGGNSKGTLK  VLRTYNVLDM  KNTTCQDLQI  EVTVKGHVEY  TMEANEDYED
1401  YEYDELPAKD  DPDAPLQPVT  PLQLFEGRRN  RRRREAPKVV  EEQESRVHYT
1451  VCIWRNGKVG  LSGMAIADVT  LLSGFHALRA  DLEKLTSLSD  RYVSHFETEG
1501  PHVLLYFDSV  PTSRECVGFE  AVQEVPVGLV  QPASATLYDY  YNPERRCSVF
1551  YGAPSKSRLL  ATLCSAEVCQ  CAEGKCPRQR  RALERGLQDE  DGYRMKFACY
1601  YPRVEYGFQV  KVLREDSRAA  FRLFETKITQ  VLHFTKDVKA  AANQMRNFLV
1651  RASCRLRLEP  GKEYLIMGLD  GATYDLEGHP  QYLLDSNSWI  EEMPSERLCR
1701  STRQRAACAQ  LNDFLQEYGT  QGCQV（配列番号２１）
【００７７】
念のため、CO4-1の配列を以下に示す。
Complement  C4由来ペプチド  CO4-1
NGFKSHALQL  NNRQIR（配列番号２０）
【００７８】
〔１２〕  Complement  C4-A由来ペプチド  CO4-2
配列番号２２のCO4-2のArea値はNDCと比較して認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)のほうがt−検定の結果、統計的に有意に(p<0.05)高値であり（図１４）、認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)患者と精神疾患に罹患していない被験者(NDC)とを区別する上で配列番号２２のCO4-2は有用であることが分かった。受信者操作特性曲線による分析によれば、ADおよびMCI患者と精神疾患に罹患していない被験者とを区別するのに有用であることが明らかである（表１）。
Complement  C4-Aタンパク質は生合成後、プロセシングによりComplement  C4  beta  chain、Complement  C4-A  alpha  chain、Complement  C4  gamma  chainに分かれる。配列番号１９は、これらのすべてを含むインタクトタンパク質Complement  C4-Aのアミノ酸配列である。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  KPRLLLFSPS  VVHLGVPLSV  GVQLQDVPRG  QVVKGSVFLR  NPSRNNVPCS
0051  PKVDFTLSSE  RDFALLSLQV  PLKDAKSCGL  HQLLRGPEVQ  LVAHSPWLKD
0101  SLSRTTNIQG  INLLFSSRRG  HLFLQTDQPI  YNPGQRVRYR  VFALDQKMRP
0151  STDTITVMVE  NSHGLRVRKK  EVYMPSSIFQ  DDFVIPDISE  PGTWKISARF
0201  SDGLESNSST  QFEVKKYVLP  NFEVKITPGK  PYILTVPGHL  DEMQLDIQAR
0251  YIYGKPVQGV  AYVRFGLLDE  DGKKTFFRGL  ESQTKLVNGQ  SHISLSKAEF
0301  QDALEKLNMG  ITDLQGLRLY  VAAAIIESPG  GEMEEAELTS  WYFVSSPFSL
0351  DLSKTKRHLV  PGAPFLLQAL  VREMSGSPAS  GIPVKVSATV  SSPGSVPEVQ
0401  DIQQNTDGSG  QVSIPIIIPQ  TISELQLSVS  AGSPHPAIAR  LTVAAPPSGG
0451  PGFLSIERPD  SRPPRVGDTL  NLNLRAVGSG  ATFSHYYYMI  LSRGQIVFMN
0501  REPKRTLTSV  SVFVDHHLAP  SFYFVAFYYH  GDHPVANSLR  VDVQAGACEG
0551  KLELSVDGAK  QYRNGESVKL  HLETDSLALV  ALGALDTALY  AAGSKSHKPL
0601  NMGKVFEAMN  SYDLGCGPGG  GDSALQVFQA  AGLAFSDGDQ  WTLSRKRLSC
0651  PKEKTTRKKR  NVNFQKAINE  KLGQYASPTA  KRCCQDGVTR  LPMMRSCEQR
0701  AARVQQPDCR  EPFLSCCQFA  ESLRKKSRDK  GQAGLQRALE  ILQEEDLIDE
0751  DDIPVRSFFP  ENWLWRVETV  DRFQILTLWL  PDSLTTWEIH  GLSLSKTKGL
0801  CVATPVQLRV  FREFHLHLRL  PMSVRRFEQL  ELRPVLYNYL  DKNLTVSVHV
0851  SPVEGLCLAG  GGGLAQQVLV  PAGSARPVAF  SVVPTAAAAV  SLKVVARGSF
0901  EFPVGDAVSK  VLQIEKEGAI  HREELVYELN  PLDHRGRTLE  IPGNSDPNMI
0951  PDGDFNSYVR  VTASDPLDTL  GSEGALSPGG  VASLLRLPRG  CGEQTMIYLA
1001  PTLAASRYLD  KTEQWSTLPP  ETKDHAVDLI  QKGYMRIQQF  RKADGSYAAW
1051  LSRDSSTWLT  AFVLKVLSLA  QEQVGGSPEK  LQETSNWLLS  QQQADGSFQD
1101  PCPVLDRSMQ  GGLVGNDETV  ALTAFVTIAL  HHGLAVFQDE  GAEPLKQRVE
1151  ASISKANSFL  GEKASAGLLG  AHAAAITAYA  LSLTKAPVDL  LGVAHNNLMA
1201  MAQETGDNLY  WGSVTGSQSN  AVSPTPAPRN  PSDPMPQAPA  LWIETTAYAL
1251  LHLLLHEGKA  EMADQASAWL  TRQGSFQGGF  RSTQDTVIAL  DALSAYWIAS
1301  HTTEERGLNV  TLSSTGRNGF  KSHALQLNNR  QIRGLEEELQ  FSLGSKINVK
1351  VGGNSKGTLK  VLRTYNVLDM  KNTTCQDLQI  EVTVKGHVEY  TMEANEDYED
1401  YEYDELPAKD  DPDAPLQPVT  PLQLFEGRRN  RRRREAPKVV  EEQESRVHYT
1451  VCIWRNGKVG  LSGMAIADVT  LLSGFHALRA  DLEKLTSLSD  RYVSHFETEG
1501  PHVLLYFDSV  PTSRECVGFE  AVQEVPVGLV  QPASATLYDY  YNPERRCSVF
1551  YGAPSKSRLL  ATLCSAEVCQ  CAEGKCPRQR  RALERGLQDE  DGYRMKFACY
1601  YPRVEYGFQV  KVLREDSRAA  FRLFETKITQ  VLHFTKDVKA  AANQMRNFLV
1651  RASCRLRLEP  GKEYLIMGLD  GATYDLEGHP  QYLLDSNSWI  EEMPSERLCR
1701  STRQRAACAQ  LNDFLQEYGT  QGCQV（配列番号１９）
【００７９】
Complement  C4由来ペプチド  CO4-2
APLQPVTPLQ  LFEGRRN（配列番号２２）
【００８０】
〔１３〕  Complement  C4-B由来ペプチド  CO4-2
配列番号２２のペプチドCO4-2はMS/MSおよび、MASCOTデータベース検索の結果から、Complement  C4-A（配列番号１９）およびComplement  C4-Bのタンパク質に共通するトポロジカル領域部分に存在するアミノ酸配列である。
Complement  C4-Bタンパク質は生合成後、プロセシングによりComplement  C4  beta  chain、Complement  C4-B  alpha  chain、Complement  C4  gamma  chainに分かれる。配列番号２１は、これらのすべてを含むインタクトタンパク質Complement  C4-Bのアミノ酸配列である。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  KPRLLLFSPS  VVHLGVPLSV  GVQLQDVPRG  QVVKGSVFLR  NPSRNNVPCS
0051  PKVDFTLSSE  RDFALLSLQV  PLKDAKSCGL  HQLLRGPEVQ  LVAHSPWLKD
0101  SLSRTTNIQG  INLLFSSRRG  HLFLQTDQPI  YNPGQRVRYR  VFALDQKMRP
0151  STDTITVMVE  NSHGLRVRKK  EVYMPSSIFQ  DDFVIPDISE  PGTWKISARF
0201  SDGLESNSST  QFEVKKYVLP  NFEVKITPGK  PYILTVPGHL  DEMQLDIQAR
0251  YIYGKPVQGV  AYVRFGLLDE  DGKKTFFRGL  ESQTKLVNGQ  SHISLSKAEF
0301  QDALEKLNMG  ITDLQGLRLY  VAAAIIESPG  GEMEEAELTS  WYFVSSPFSL
0351  DLSKTKRHLV  PGAPFLLQAL  VREMSGSPAS  GIPVKVSATV  SSPGSVPEVQ
0401  DIQQNTDGSG  QVSIPIIIPQ  TISELQLSVS  AGSPHPAIAR  LTVAAPPSGG
0451  PGFLSIERPD  SRPPRVGDTL  NLNLRAVGSG  ATFSHYYYMI  LSRGQIVFMN
0501  REPKRTLTSV  SVFVDHHLAP  SFYFVAFYYH  GDHPVANSLR  VDVQAGACEG
0551  KLELSVDGAK  QYRNGESVKL  HLETDSLALV  ALGALDTALY  AAGSKSHKPL
0601  NMGKVFEAMN  SYDLGCGPGG  GDSALQVFQA  AGLAFSDGDQ  WTLSRKRLSC
0651  PKEKTTRKKR  NVNFQKAINE  KLGQYASPTA  KRCCQDGVTR  LPMMRSCEQR
0701  AARVQQPDCR  EPFLSCCQFA  ESLRKKSRDK  GQAGLQRALE  ILQEEDLIDE
0751  DDIPVRSFFP  ENWLWRVETV  DRFQILTLWL  PDSLTTWEIH  GLSLSKTKGL
0801  CVATPVQLRV  FREFHLHLRL  PMSVRRFEQL  ELRPVLYNYL  DKNLTVSVHV
0851  SPVEGLCLAG  GGGLAQQVLV  PAGSARPVAF  SVVPTAAAAV  SLKVVARGSF
0901  EFPVGDAVSK  VLQIEKEGAI  HREELVYELN  PLDHRGRTLE  IPGNSDPNMI
0951  PDGDFNSYVR  VTASDPLDTL  GSEGALSPGG  VASLLRLPRG  CGEQTMIYLA
1001  PTLAASRYLD  KTEQWSTLPP  ETKDHAVDLI  QKGYMRIQQF  RKADGSYAAW
1051  LSRDSSTWLT  AFVLKVLSLA  QEQVGGSPEK  LQETSNWLLS  QQQADGSFQD
1101  LSPVIHRSMQ  GGLVGNDETV  ALTAFVTIAL  HHGLAVFQDE  GAEPLKQRVE
1151  ASISKANSFL  GEKASAGLLG  AHAAAITAYA  LSLTKAPVDL  LGVAHNNLMA
1201  MAQETGDNLY  WGSVTGSQSN  AVSPTPAPRN  PSDPMPQAPA  LWIETTAYAL
1251  LHLLLHEGKA  EMADQASAWL  TRQGSFQGGF  RSTQDTVIAL  DALSAYWIAS
1301  HTTEERGLNV  TLSSTGRNGF  KSHALQLNNR  QIRGLEEELQ  FSLGSKINVK
1351  VGGNSKGTLK  VLRTYNVLDM  KNTTCQDLQI  EVTVKGHVEY  TMEANEDYED
1401  YEYDELPAKD  DPDAPLQPVT  PLQLFEGRRN  RRRREAPKVV  EEQESRVHYT
1451  VCIWRNGKVG  LSGMAIADVT  LLSGFHALRA  DLEKLTSLSD  RYVSHFETEG
1501  PHVLLYFDSV  PTSRECVGFE  AVQEVPVGLV  QPASATLYDY  YNPERRCSVF
1551  YGAPSKSRLL  ATLCSAEVCQ  CAEGKCPRQR  RALERGLQDE  DGYRMKFACY
1601  YPRVEYGFQV  KVLREDSRAA  FRLFETKITQ  VLHFTKDVKA  AANQMRNFLV
1651  RASCRLRLEP  GKEYLIMGLD  GATYDLEGHP  QYLLDSNSWI  EEMPSERLCR
1701  STRQRAACAQ  LNDFLQEYGT  QGCQV（配列番号２１）
【００８１】
念のため、CO4-2の配列を以下に示す。
Complement  C4由来ペプチド  CO4-2
APLQPVTPLQ  LFEGRRN（配列番号２２）
【００８２】
〔１４〕  Fibrinogen  alpha  chain  (isoform  1)由来ペプチド  FIBA-1
配列番号２４のFIBA-1のArea値はNDCと比較して認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)のほうがt−検定の結果、統計的に有意に(p<0.05)高値であり（図１５）、認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)患者と精神疾患に罹患していない被験者(NDC)とを区別する上で配列番号２４のFIBA-1は有用であることが分かった。受信者操作特性曲線による分析によれば、ADおよびMCI患者と精神疾患に罹患していない被験者とを区別するのに有用であることが明らかである（表１）。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  GPRVVERHQS  ACKDSDWPFC  SDEDWNYKCP  SGCRMKGLID  EVNQDFTNRI
0051  NKLKNSLFEY  QKNNKDSHSL  TTNIMEILRG  DFSSANNRDN  TYNRVSEDLR
0101  SRIEVLKRKV  IEKVQHIQLL  QKNVRAQLVD  MKRLEVDIDI  KIRSCRGSCS
0151  RALAREVDLK  DYEDQQKQLE  QVIAKDLLPS  RDRQHLPLIK  MKPVPDLVPG
0201  NFKSQLQKVP  PEWKALTDMP  QMRMELERPG  GNEITRGGST  SYGTGSETES
0251  PRNPSSAGSW  NSGSSGPGST  GNRNPGSSGT  GGTATWKPGS  SGPGSTGSWN
0301  SGSSGTGSTG  NQNPGSPRPG  STGTWNPGSS  ERGSAGHWTS  ESSVSGSTGQ
0351  WHSESGSFRP  DSPGSGNARP  NNPDWGTFEE  VSGNVSPGTR  REYHTEKLVT
0401  SKGDKELRTG  KEKVTSGSTT  TTRRSCSKTV  TKTVIGPDGH  KEVTKEVVTS
0451  EDGSDCPEAM  DLGTLSGIGT  LDGFRHRHPD  EAAFFDTAST  GKTFPGFFSP
0501  MLGEFVSETE  SRGSESGIFT  NTKESSSHHP  GIAEFPSRGK  SSSYSKQFTS
0551  STSYNRGDST  FESKSYKMAD  EAGSEADHEG  THSTKRGHAK  SRPVRDCDDV
0601  LQTHPSGTQS  GIFNIKLPGS  SKIFSVYCDQ  ETSLGGWLLI  QQRMDGSLNF
0651  NRTWQDYKRG  FGSLNDEGEG  EFWLGNDYLH  LLTQRGSVLR  VELEDWAGNE
0701  AYAEYHFRVG  SEAEGYALQV  SSYEGTAGDA  LIEGSVEEGA  EYTSHNNMQF
0751  STFDRDADQW  EENCAEVYGG  GWWYNNCQAA  NLNGIYYPGG  SYDPRNNSPY
0801  EIENGVVWVS  FRGADYSLRA  VRMKIRPLVT  Q（配列番号２３）
【００８３】
Fibrinogen  alpha  chain由来ペプチド  FIBA-1
SSSYSKQFTS  STSYNRGDST  FES（配列番号２４）
【００８４】
〔１５〕  Fibrinogen  alpha  chain  (isoform  2)由来ペプチド  FIBA-1
配列番号２４のペプチドFIBA-1はMS/MSおよび、MASCOTデータベース検索の結果から、Fibrinogen  alpha  chain  (isoform  1)（配列番号２３）および、Fibrinogen  alpha  chain  (isoform  2)のタンパク質に共通するトポロジカル領域部分に存在するアミノ酸配列である。以下に配列番号２５として、Fibrinogen  alpha  chain  (isoform  2)インタクトタンパク質のアミノ酸配列を示す。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  GPRVVERHQS  ACKDSDWPFC  SDEDWNYKCP  SGCRMKGLID  EVNQDFTNRI
0051  NKLKNSLFEY  QKNNKDSHSL  TTNIMEILRG  DFSSANNRDN  TYNRVSEDLR
0101  SRIEVLKRKV  IEKVQHIQLL  QKNVRAQLVD  MKRLEVDIDI  KIRSCRGSCS
0151  RALAREVDLK  DYEDQQKQLE  QVIAKDLLPS  RDRQHLPLIK  MKPVPDLVPG
0201  NFKSQLQKVP  PEWKALTDMP  QMRMELERPG  GNEITRGGST  SYGTGSETES
0251  PRNPSSAGSW  NSGSSGPGST  GNRNPGSSGT  GGTATWKPGS  SGPGSTGSWN
0301  SGSSGTGSTG  NQNPGSPRPG  STGTWNPGSS  ERGSAGHWTS  ESSVSGSTGQ
0351  WHSESGSFRP  DSPGSGNARP  NNPDWGTFEE  VSGNVSPGTR  REYHTEKLVT
0401  SKGDKELRTG  KEKVTSGSTT  TTRRSCSKTV  TKTVIGPDGH  KEVTKEVVTS
0451  EDGSDCPEAM  DLGTLSGIGT  LDGFRHRHPD  EAAFFDTAST  GKTFPGFFSP
0501  MLGEFVSETE  SRGSESGIFT  NTKESSSHHP  GIAEFPSRGK  SSSYSKQFTS
0551  STSYNRGDST  FESKSYKMAD  EAGSEADHEG  THSTKRGHAK  SRPVRGIHTS
0601  PLGKPSLSP（配列番号２５）
【００８５】
念のため、FIBA-1の配列を以下に示す。
Fibrinogen  alpha  chain由来ペプチド  FIBA-1
SSSYSKQFTS  STSYNRGDST  FES（配列番号２４）
【００８６】
〔１６〕  Fibrinogen  alpha  chain  (isoform  1)由来ペプチド  FIBA-2
配列番号２６のFIBA-2のArea値はNDCと比較して認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)のほうがt−検定の結果、統計的に有意に(p<0.05)高値であり（図１６）、認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)患者と精神疾患に罹患していない被験者(NDC)とを区別する上で配列番号２６のFIBA-2は有用であることが分かった。受信者操作特性曲線による分析によれば、ADおよびMCI患者と精神疾患に罹患していない被験者とを区別するのに有用であることが明らかである（表１）。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  GPRVVERHQS  ACKDSDWPFC  SDEDWNYKCP  SGCRMKGLID  EVNQDFTNRI
0051  NKLKNSLFEY  QKNNKDSHSL  TTNIMEILRG  DFSSANNRDN  TYNRVSEDLR
0101  SRIEVLKRKV  IEKVQHIQLL  QKNVRAQLVD  MKRLEVDIDI  KIRSCRGSCS
0151  RALAREVDLK  DYEDQQKQLE  QVIAKDLLPS  RDRQHLPLIK  MKPVPDLVPG
0201  NFKSQLQKVP  PEWKALTDMP  QMRMELERPG  GNEITRGGST  SYGTGSETES
0251  PRNPSSAGSW  NSGSSGPGST  GNRNPGSSGT  GGTATWKPGS  SGPGSTGSWN
0301  SGSSGTGSTG  NQNPGSPRPG  STGTWNPGSS  ERGSAGHWTS  ESSVSGSTGQ
0351  WHSESGSFRP  DSPGSGNARP  NNPDWGTFEE  VSGNVSPGTR  REYHTEKLVT
0401  SKGDKELRTG  KEKVTSGSTT  TTRRSCSKTV  TKTVIGPDGH  KEVTKEVVTS
0451  EDGSDCPEAM  DLGTLSGIGT  LDGFRHRHPD  EAAFFDTAST  GKTFPGFFSP
0501  MLGEFVSETE  SRGSESGIFT  NTKESSSHHP  GIAEFPSRGK  SSSYSKQFTS
0551  STSYNRGDST  FESKSYKMAD  EAGSEADHEG  THSTKRGHAK  SRPVRDCDDV
0601  LQTHPSGTQS  GIFNIKLPGS  SKIFSVYCDQ  ETSLGGWLLI  QQRMDGSLNF
0651  NRTWQDYKRG  FGSLNDEGEG  EFWLGNDYLH  LLTQRGSVLR  VELEDWAGNE
0701  AYAEYHFRVG  SEAEGYALQV  SSYEGTAGDA  LIEGSVEEGA  EYTSHNNMQF
0751  STFDRDADQW  EENCAEVYGG  GWWYNNCQAA  NLNGIYYPGG  SYDPRNNSPY
0801  EIENGVVWVS  FRGADYSLRA  VRMKIRPLVT  Q（配列番号２３）
【００８７】
Fibrinogen  alpha  chain由来ペプチド  FIBA-2
SSSYSKQFTS  STSYNRGDST  FESKS（配列番号２６）
【００８８】
〔１７〕  Fibrinogen  alpha  chain  (isoform  2)由来ペプチド  FIBA-2
配列番号２６のペプチドFIBA-2はMS/MSおよび、MASCOTデータベース検索の結果から、Fibrinogen  alpha  chain  (isoform  1)（配列番号２３）および、Fibrinogen  alpha  chain  (isoform  2)のタンパク質に共通するトポロジカル領域部分に存在するアミノ酸配列である。以下に配列番号２５として、Fibrinogen  alpha  chain  (isoform  2)インタクトタンパク質のアミノ酸配列を示す。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  GPRVVERHQS  ACKDSDWPFC  SDEDWNYKCP  SGCRMKGLID  EVNQDFTNRI
0051  NKLKNSLFEY  QKNNKDSHSL  TTNIMEILRG  DFSSANNRDN  TYNRVSEDLR
0101  SRIEVLKRKV  IEKVQHIQLL  QKNVRAQLVD  MKRLEVDIDI  KIRSCRGSCS
0151  RALAREVDLK  DYEDQQKQLE  QVIAKDLLPS  RDRQHLPLIK  MKPVPDLVPG
0201  NFKSQLQKVP  PEWKALTDMP  QMRMELERPG  GNEITRGGST  SYGTGSETES
0251  PRNPSSAGSW  NSGSSGPGST  GNRNPGSSGT  GGTATWKPGS  SGPGSTGSWN
0301  SGSSGTGSTG  NQNPGSPRPG  STGTWNPGSS  ERGSAGHWTS  ESSVSGSTGQ
0351  WHSESGSFRP  DSPGSGNARP  NNPDWGTFEE  VSGNVSPGTR  REYHTEKLVT
0401  SKGDKELRTG  KEKVTSGSTT  TTRRSCSKTV  TKTVIGPDGH  KEVTKEVVTS
0451  EDGSDCPEAM  DLGTLSGIGT  LDGFRHRHPD  EAAFFDTAST  GKTFPGFFSP
0501  MLGEFVSETE  SRGSESGIFT  NTKESSSHHP  GIAEFPSRGK  SSSYSKQFTS
0551  STSYNRGDST  FESKSYKMAD  EAGSEADHEG  THSTKRGHAK  SRPVRGIHTS
0601  PLGKPSLSP（配列番号２５）
【００８９】
念のため、FIBA-2の配列を以下に示す。
Fibrinogen  alpha  chain由来ペプチド  FIBA-2
SSSYSKQFTS  STSYNRGDST  FESKS（配列番号２６）
【００９０】
〔１８〕  Fibrinogen  alpha  chain  (isoform  1)由来ペプチド  FIBA-3
配列番号２７のFIBA-3のArea値はNDCと比較して認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)のほうがt−検定の結果、統計的に有意に(p<0.05)高値であり（図１７）、認知機能障害疾患(AD、MCI、DLB、FTD)患者と精神疾患に罹患していない被験者(NDC)とを区別する上で配列番号２７のFIBA-3は有用であることが分かった。受信者操作特性曲線による分析によれば、ADおよびMCI患者と精神疾患に罹患していない被験者とを区別するのに有用であることが明らかである（表１）。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  GPRVVERHQS  ACKDSDWPFC  SDEDWNYKCP  SGCRMKGLID  EVNQDFTNRI
0051  NKLKNSLFEY  QKNNKDSHSL  TTNIMEILRG  DFSSANNRDN  TYNRVSEDLR
0101  SRIEVLKRKV  IEKVQHIQLL  QKNVRAQLVD  MKRLEVDIDI  KIRSCRGSCS
0151  RALAREVDLK  DYEDQQKQLE  QVIAKDLLPS  RDRQHLPLIK  MKPVPDLVPG
0201  NFKSQLQKVP  PEWKALTDMP  QMRMELERPG  GNEITRGGST  SYGTGSETES
0251  PRNPSSAGSW  NSGSSGPGST  GNRNPGSSGT  GGTATWKPGS  SGPGSTGSWN
0301  SGSSGTGSTG  NQNPGSPRPG  STGTWNPGSS  ERGSAGHWTS  ESSVSGSTGQ
0351  WHSESGSFRP  DSPGSGNARP  NNPDWGTFEE  VSGNVSPGTR  REYHTEKLVT
0401  SKGDKELRTG  KEKVTSGSTT  TTRRSCSKTV  TKTVIGPDGH  KEVTKEVVTS
0451  EDGSDCPEAM  DLGTLSGIGT  LDGFRHRHPD  EAAFFDTAST  GKTFPGFFSP
0501  MLGEFVSETE  SRGSESGIFT  NTKESSSHHP  GIAEFPSRGK  SSSYSKQFTS
0551  STSYNRGDST  FESKSYKMAD  EAGSEADHEG  THSTKRGHAK  SRPVRDCDDV
0601  LQTHPSGTQS  GIFNIKLPGS  SKIFSVYCDQ  ETSLGGWLLI  QQRMDGSLNF
0651  NRTWQDYKRG  FGSLNDEGEG  EFWLGNDYLH  LLTQRGSVLR  VELEDWAGNE
0701  AYAEYHFRVG  SEAEGYALQV  SSYEGTAGDA  LIEGSVEEGA  EYTSHNNMQF
0751  STFDRDADQW  EENCAEVYGG  GWWYNNCQAA  NLNGIYYPGG  SYDPRNNSPY
0801  EIENGVVWVS  FRGADYSLRA  VRMKIRPLVT  Q（配列番号２３）
【００９１】
Fibrinogen  alpha  chain由来ペプチド  FIBA-3
SSSYSKQFTS  STSYNRGDST  FESKSY（配列番号２７）
【００９２】
〔１９〕  Fibrinogen  alpha  chain  (isoform  2)由来ペプチド  FIBA-3
配列番号２６のペプチドFIBA-3はMS/MSおよび、MASCOTデータベース検索の結果から、Fibrinogen  alpha  chain  (isoform  1)（配列番号２３）および、Fibrinogen  alpha  chain  (isoform  2)のタンパク質に共通するトポロジカル領域部分に存在するアミノ酸配列である。以下に配列番号２５として、Fibrinogen  alpha  chain  (isoform  2)インタクトタンパク質のアミノ酸配列を示す。
インタクトタンパク質／ペプチド
0001  GPRVVERHQS  ACKDSDWPFC  SDEDWNYKCP  SGCRMKGLID  EVNQDFTNRI
0051  NKLKNSLFEY  QKNNKDSHSL  TTNIMEILRG  DFSSANNRDN  TYNRVSEDLR
0101  SRIEVLKRKV  IEKVQHIQLL  QKNVRAQLVD  MKRLEVDIDI  KIRSCRGSCS
0151  RALAREVDLK  DYEDQQKQLE  QVIAKDLLPS  RDRQHLPLIK  MKPVPDLVPG
0201  NFKSQLQKVP  PEWKALTDMP  QMRMELERPG  GNEITRGGST  SYGTGSETES
0251  PRNPSSAGSW  NSGSSGPGST  GNRNPGSSGT  GGTATWKPGS  SGPGSTGSWN
0301  SGSSGTGSTG  NQNPGSPRPG  STGTWNPGSS  ERGSAGHWTS  ESSVSGSTGQ
0351  WHSESGSFRP  DSPGSGNARP  NNPDWGTFEE  VSGNVSPGTR  REYHTEKLVT
0401  SKGDKELRTG  KEKVTSGSTT  TTRRSCSKTV  TKTVIGPDGH  KEVTKEVVTS
0451  EDGSDCPEAM  DLGTLSGIGT  LDGFRHRHPD  EAAFFDTAST  GKTFPGFFSP
0501  MLGEFVSETE  SRGSESGIFT  NTKESSSHHP  GIAEFPSRGK  SSSYSKQFTS
0551  STSYNRGDST  FESKSYKMAD  EAGSEADHEG  THSTKRGHAK  SRPVRGIHTS
0601  PLGKPSLSP（配列番号２５）
【００９３】
念のため、FIBA-3の配列を以下に示す。
Fibrinogen  alpha  chain由来ペプチド  FIBA-3
SSSYSKQFTS  STSYNRGDST  FESKSY（配列番号２７）
【００９４】
【表１】
0006012923.tif 000002
【００９５】
表１には各マーカーペプチドの認知機能障害疾患の検出における受信者操作特性曲線による分析で得たAUC値が示されている。
【００９６】
これらのマーカーペプチドをそれぞれ単独、あるいは組み合わせで用いて、液体クロマトグラフィーおよび／または他の適当な分離手段を用いて、あるいは用いないで直接、血清中あるいは血漿中の存在量を質量分析または免疫学的あるいは酵素学的方法などの他の方法によって測定することにより、AD、MCI、DLB、FTDのような認知機能障害疾患を診断上、健常人を含む非精神疾患被験者と区別することが可能である。
【産業上の利用可能性】
【００９７】
本発明において開示されたバイオマーカーを用いて、軽度認知障害およびアルツハイマー病を含む認知機能障害疾患を検出することができるので、診断薬を含む診断分野における用途に適用できる。
【図１】
0006012923.tif 000003
【図２】
0006012923.tif 000004
【図３】
0006012923.tif 000005
【図４】
0006012923.tif 000006
【図５】
0006012923.tif 000007
【図６】
0006012923.tif 000008
【図７】
0006012923.tif 000009
【図８】
0006012923.tif 000010
【図９】
0006012923.tif 000011
【図１０】
0006012923.tif 000012
【図１１】
0006012923.tif 000013
【図１２】
0006012923.tif 000014
【図１３】
0006012923.tif 000015
【図１４】
0006012923.tif 000016
【図１５】
0006012923.tif 000017
【図１６】
0006012923.tif 000018
【図１７】
0006012923.tif 000019
【配列表】
0006012923000001.app