(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
３−シクロブチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリルである化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項２】
（Ｒ）−３−シクロブチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリルである請求項１記載の化合物、またはその医薬上許容される塩。
【請求項３】
（Ｓ）−３−シクロブチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリルである請求項１記載の化合物、またはその医薬上許容される塩。
【請求項４】
３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（３−メチルシクロブチル）プロパンニトリルである化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項５】
３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｔｒａｎｓ）−３−メチルシクロブチル）プロパンニトリルである請求項４記載の化合物、またはその医薬上許容される塩。
【請求項６】
（３Ｒ）−３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｔｒａｎｓ）−３−メチルシクロブチル）プロパンニトリルである請求項５記載の化合物、またはその医薬上許容される塩。
【請求項７】
（３Ｓ）−３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｔｒａｎｓ）−３−メチルシクロブチル）プロパンニトリルである請求項５記載の化合物、またはその医薬上許容される塩。
【請求項８】
３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｃｉｓ）−３−メチルシクロブチル）プロパンニトリルである請求項４記載の化合物、またはその医薬上許容される塩。
【請求項９】
（３Ｒ）−３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｃｉｓ）−３−メチルシクロブチル）プロパンニトリルである請求項８記載の化合物、またはその医薬上許容される塩。
【請求項１０】
（３Ｓ）−３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｃｉｓ）−３−メチルシクロブチル）プロパンニトリルである請求項８記載の化合物、またはその医薬上許容される塩。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物のリン酸塩。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬上許容される塩と、少なくとも１種の医薬上許容される担体とを含む組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬上許容される塩を含む、自己免疫疾患処置用医薬。
【請求項１４】
前記自己免疫疾患が、皮膚疾患、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、若年性関節炎、Ｉ型糖尿病、紅斑性狼瘡、炎症性腸疾患、クローン病、重症筋無力症、免疫グロブリン腎症、心筋炎、または自己免疫性甲状腺疾患である、請求項１３記載の医薬。
【請求項１５】
前記自己免疫疾患が関節リウマチである、請求項１３記載の医薬。
【請求項１６】
前記自己免疫疾患が皮膚疾患である、請求項１３記載の医薬。
【請求項１７】
前記皮膚疾患が、アトピー性皮膚炎、乾癬、皮膚感作、皮膚炎、皮膚発疹、接触性皮膚炎またはアレルギー性接触感作である、請求項１６記載の医薬。
【請求項１８】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬上許容される塩を含む、癌処置用医薬。
【請求項１９】
前記癌が固形腫瘍である、請求項１８記載の医薬。
【請求項２０】
前記癌が、前立腺癌、腎臓癌、肝臓癌、乳癌、肺癌、甲状腺癌、カポジ肉腫、キャッスルマン病または膵臓癌である、請求項１８記載の医薬。
【請求項２１】
前記癌が、リンパ腫、白血病または多発性骨髄腫である、請求項１８記載の医薬。
【請求項２２】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬上許容される塩を含む、骨髄増殖性疾患処置用医薬。
【請求項２３】
前記骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）が、真性赤血球増加症（ＰＶ）、本態性血小板血症（ＥＴ）、原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）、骨髄化生を伴う骨髄線維症（ＭＭＭ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、好酸球増加症候群（ＨＥＳ）、特発性骨髄線維症（ＩＭＦ）、全身性肥満細胞疾患（ＳＭＣＤ）、または真性赤血球増加症／本態性血小板血症後の骨髄線維症（Ｐｏｓｔ−ＰＶ／ＥＴ  ＭＦ）である、請求項２２記載の医薬。
【請求項２４】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬上許容される塩を含む、炎症性疾患処置用医薬。
【請求項２５】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬上許容される塩を含む、臓器移植拒絶反応処置用医薬。
【請求項２６】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物またはその医薬上許容される塩を含む、ドライアイ処置用医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本願は、「Ｊａｎｕｓキナーゼ阻害薬としてのシクロブタンおよびメチルシクロブタン誘導体」という発明の名称で２０１０年２月１８日に出願された、米国仮出願番号第６１／３０５，６３０号の優先権を主張する。その明細書を通して引用されている任意の特許、特許出願および参考資料の内容は、その全体が出典明示により本明細書の一部となる。
【０００２】
（発明の技術分野）
本発明は、シクロブタンおよびメチルシクロブタン誘導体、ならびにそれらの塩、組成物、および使用方法に関する。これらの化合物は、例えば、炎症性疾患および自己免疫疾患、ならびに癌および骨髄増殖性疾患を含む、ＪＡＫ関連疾患の処置に有用なＪａｎｕｓキナーゼ（ＪＡＫ）阻害薬である。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景技術）
プロテインキナーゼ（ＰＫｓ）は、とりわけ、細胞増殖、生存および分化、臓器形成および形態形成、新血管形成、組織修復および再生を含む、種々の重要な生体内作用を調節する酵素の一群である。プロテインキナーゼは、タンパク質（または基質）のリン酸化を触媒することによって、種々の生物学的状況における基質の細胞内活性を調節して、それらの生理作用を発揮する。正常な組織／臓器における機能に加えて、種々のプロテインキナーゼはまた、癌を含む、種々のヒト疾患においてより特異的な役割を果たす。プロテインキナーゼのサブセット（発癌性プロテインキナーゼとも称される）は、調節されない場合、腫瘍形成および成長を引き起こし、さらに腫瘍維持および進行に寄与しうる。これまで、発癌性プロテインキナーゼは、癌処置介入および薬剤開発のための最大かつ最も魅力的な標的タンパク質群の一つを表している。
【０００４】
Ｊａｎｕｓキナーゼ（ＪＡＫ）ファミリーは、免疫反応に関与する細胞の増殖および機能のサイトカイン依存性調節において役割を果たす。現在、４種の既知の哺乳動物ＪＡＫファミリーメンバーが存在している：ＪＡＫ１（Ｊａｎｕｓキナーゼ−１としても周知）、ＪＡＫ２（Ｊａｎｕｓキナーゼ−２としても周知）、ＪＡＫ３（Ｊａｎｕｓキナーゼ、白血球；ＪＡＫＬ；Ｌ−ＪＡＫおよびＪａｎｕｓキナーゼ−３としても周知）およびＴＹＫ２（プロテイン−チロシンキナーゼ２としても周知）。ＪＡＫタンパク質は、サイズが１２０〜１４０ｋＤａの範囲であり、７種類の保存されたＪＡＫホモロジー（ＪＨ）ドメインを含む；これらの１つは機能的触媒キナーゼドメインであり、他は制御機能を果たすおよび／またはＳＴＡＴに対するドッキング部位として機能する可能性のある偽キナーゼドメインである。
【０００５】
ＪＡＫキナーゼのレベルでシグナル伝達を阻害することは、数例挙げると、炎症性疾患、自己免疫疾患、骨髄増殖性疾患、およびヒト癌の処置法の開発に有望である。ＪＡＫキナーゼの阻害はまた、皮膚免疫疾患、例えば、乾癬、および皮膚感作に罹患している患者において治療上の利益になると想定されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、キナーゼ、例えば、Ｊａｎｕｓキナーゼを阻害する新規または改良された薬剤は、癌および他の疾患を処置するための新規かつより効果的な医薬品を開発するために絶えず必要である。本明細書に記載の化合物、塩、および組成物は、これらの必要性および他の目的の対象とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の要約）
本発明は、３−シクロブチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリルである化合物またはその医薬上許容される塩を提供する。ある実施態様において、上記の化合物は、Ｒ型またはＳ型エナンチオマーである。
【０００８】
さらに、本発明は、３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（３−メチルシクロブチル）プロパンニトリルである化合物またはその医薬上許容される塩を提供する。さらに、本発明は、Ｒ型およびＳ型エナンチオマーならびにｃｉｓ型およびｔｒａｎｓ型幾何異性体を含む、上記の化合物の種々の立体異性体を含む。
【０００９】
さらに、本発明は、本明細書に記載のシクロブチルまたはメチルシクロブチル化合物のいずれかのリン酸塩を提供する。
【００１０】
さらに、本発明は、本明細書に記載の化合物またはその医薬上許容される塩および少なくとも１種の医薬上許容される担体を含む組成物を提供する。
【００１１】
さらに、本発明は、患者におけるＪＡＫ関連疾患または障害の処置方法であって、治療上有効な量の本明細書に記載の化合物またはその医薬上許容される塩を前記患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００１２】
さらに、本発明は、治療に用いるための、本明細書に記載の化合物またはそれらの医薬上許容される塩を提供する。
【００１３】
さらに、本発明は、治療に用いるための医薬の調製のための、本明細書に記載の化合物またはそれらの医薬上許容される塩の使用を提供する。
【００１４】
本発明はまた、患者における自己免疫疾患の処置方法であって、治療上有効な量の本発明の化合物またはその医薬上許容される塩を前記患者に投与することを含む、方法を提供する。一の実施態様において、自己免疫疾患は、皮膚疾患、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬性関節炎、若年性関節炎、Ｉ型糖尿病、紅斑性狼瘡、炎症性腸疾患、クローン病、重症筋無力症、免疫グロブリン腎症、心筋炎、または自己免疫性甲状腺疾患である。別の実施態様において、自己免疫疾患は、関節リウマチである。また別の実施態様において、自己免疫疾患は、皮膚疾患、例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、皮膚感作、皮膚炎、皮膚発疹、接触性皮膚炎またはアレルギー性接触感作である。
【００１５】
別の態様において、本発明は、患者における癌の処置方法であって、治療上有効な量の本発明の化合物またはその医薬上許容される塩を前記患者に投与することを含む、方法を提供する。一の実施態様において、癌は、固形腫瘍である。別の実施態様において、癌は、前立腺癌、腎臓癌、肝臓癌、乳癌、肺癌、甲状腺癌、カポジ肉腫、キャッスルマン病または膵臓癌である。また別の実施態様において、癌は、骨髄腫、白血病または多発性骨髄腫である。
【００１６】
また別の態様において、本発明は、患者における骨髄増殖性疾患の処置方法であって、治療上有効な量の本発明の化合物またはその医薬上許容される塩を前記患者に投与することを含む、方法を提供する。一の実施態様において、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）は、真性赤血球増加症（ＰＶ）、本態性血小板血症（ＥＴ）、原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）、骨髄化生を伴う骨髄線維症（ＭＭＭ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、好酸球増加症候群（ＨＥＳ）、特発性骨髄線維症（ＩＭＦ）、全身性肥満細胞疾患（ＳＭＣＤ）、または真性赤血球増加症／本態性血小板血症後の骨髄線維症（Ｐｏｓｔ−ＰＶ／ＥＴ  ＭＦ）である。
【００１７】
別の態様において、本発明は、患者における炎症性疾患の処置方法であって、治療上有効な量の本発明の化合物またはその医薬上許容される塩を前記患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００１８】
さらに別の態様において、本発明は、患者における臓器移植拒絶反応の処置方法であって、治療上有効な量の本発明の化合物またはその医薬上許容される塩を前記患者に投与することを含む、方法を提供する。
【００１９】
また別の態様において、本発明は、患者におけるドライアイの処置方法であって、治療上有効な量の本発明の化合物またはその医薬上許容される塩を前記患者に投与することを含む、方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
（詳細な記載）
本発明は、とりわけ、ＪＡＫ阻害化合物：３−シクロブチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（式Ｉ）およびその医薬上許容される塩を提供する。
【化１】
0005858434.tif 000002
【００２１】
さらに、本発明は、化合物、（Ｒ）−３−シクロブチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（式Ｉ−Ｒ）および（Ｓ）−３−シクロブチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（式Ｉ−Ｓ）またはそれらの医薬上許容される塩を提供する。
【化２】
0005858434.tif 000003
【００２２】
さらに、本発明は、ＪＡＫ阻害化合物、３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル（式ＩＩ）およびその医薬上許容される塩を提供する。
【化３】
0005858434.tif 000004
【００２３】
さらに、本発明は、式ＩＩで示される化合物のｃｉｓ型およびｔｒａｎｓ型異性体を提供する。これらのｃｉｓ型およびｔｒａｎｓ型異性体は、以下のものである：
３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｔｒａｎｓ）−３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル（式ＩＩ−ｔｒａｎｓ）；および
３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｃｉｓ）−３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル（式ＩＩ−ｃｉｓ）。
【化４】
0005858434.tif 000005
【００２４】
さらに、本発明は、式ＩＩで示される化合物のＲ型およびＳ型エナンチオマーを提供する。これらのＲ型およびＳ型異性体は、以下のものである：
（３Ｒ）−３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル（式ＩＩ−Ｒ）；および
（３Ｓ）−３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル（式ＩＩ−Ｓ）。
【化５】
0005858434.tif 000006
【００２５】
さらに、本発明は、式ＩＩで示される化合物のＲ／ｔｒａｎｓ、Ｒ／ｃｉｓ、Ｓ／ｔｒａｎｓ、およびＳ／ｃｉｓ異性体を提供する。これらの異性体は、以下のものである：
（３Ｒ）−３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｔｒａｎｓ）−３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル（式ＩＩ−Ｒ／ｔｒａｎｓ）、
（３Ｓ）−３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｔｒａｎｓ）−３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル（式ＩＩ−Ｓ／ｔｒａｎｓ）、
（３Ｒ）−３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｃｉｓ）−３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル（式ＩＩ−Ｒ／ｃｉｓ）、および
（３Ｓ）−３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｃｉｓ）−３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル（式ＩＩ−Ｓ／ｃｉｓ）。
【化６】
0005858434.tif 000007
【００２６】
上記の化合物は、本明細書において「本発明の化合物」と称される。本明細書などにおいて、化合物の名称と化合物の構造の間に相違が存在する場合には、該化学構造が統制する。
【００２７】
さらに、本発明は、上記の化合物のいずれかの医薬上許容される塩を提供する。ある実施態様において、医薬上許容される塩はリン酸塩である。
【００２８】
本明細書に記載の化合物は非対称である（例えば、１つまたはそれ以上の立体中心を有する）。特に明記しない限り、あらゆる立体異性体、例えば、エナンチオマーおよびジアステレオマーが対象である。非対称に置換された炭素原子を含有する本発明の化合物は、光学活性形態またはラセミ形態で単離されうる。光学活性形態の調製方法は、当該技術分野において周知である、例えば、ラセミ混合物の分解または立体選択的合成によるものである。幾何異性体はまた、本明細書に記載の化合物において存在することができ、そのようなあらゆる安定な異性体が本発明において考慮されている。本発明の化合物のｃｉｓ型およびｔｒａｎｓ型幾何異性体は記載されており、異性体の混合物としてまたは実質的に分離された異性体として単離されうる。立体異性（例えば、光学および／または幾何異性）能を有する化合物が、特異的Ｒ／Ｓまたはｃｉｓ／ｔｒａｎｓ立体配置を考慮せずにその構造または名称において示される場合には、そのようなあらゆる異性体が考慮されていることが意図とされている。例えば、上記の式ＩおよびＩＩは、分子がかかる異性を可能にする範囲でＲ型およびＳ型異性体ならびにｃｉｓ型およびｔｒａｎｓ型異性体の両方を含むものと理解される。
【００２９】
ラセミ混合物の分解、または光学および／または幾何異性体の混合物の分離は、クロマトグラフ法（例えば、キラルカラムクロマトグラフィー）または分別再結晶を含む当該技術分野にて周知の種々の方法のいずれかによって実施されうる。
【００３０】
本発明の化合物はまた、互変異性体を含みうる。互変異性体は、プロトンの同時移動と一緒に単結合と隣接した二重結合とが置き換わることから生じる。互変異性体には、同一の実験式および全電荷を有する異性体プロトン化状態であるプロトトロピー互変異性体が含まれる。プロトトロピー互変異性体の例として、ケトン−エノール対、アミド−イミド酸対、ラクタム−ラクチム対、アミド−イミド酸対、エナミン−イミン対、およびプロトンが複素環系の２またはそれ以上の位置を占有しうる環状形態、例えば、１Ｈ−および３Ｈ−イミダゾール、１Ｈ−、２Ｈ−および４Ｈ−１，２，４−トリアゾール、１Ｈ−および２Ｈ−イソインドール、ならびに１Ｈ−および２Ｈ−ピラゾールが挙げられる。
【００３１】
本発明の化合物および塩は、水和物および溶媒和物を形成するために、他の分子、例えば、溶媒および水分子と一緒に見出されうる。
【００３２】
本発明の化合物および塩はまた、その中に存在する原子のあらゆる同位体を含みうる。同位体には、原子番号は同一であるが、原子数が異なる原子が含まれる。例えば、水素の同位体には、トリチウムおよびジュウテリウムが含まれる。
【００３３】
ある実施態様において、本発明の化合物およびその塩は、実質的に単離される。「実質的に単離される」は、化合物が形成されるかまたは検出される状況から化合物が少なくとも部分的にまたは実質的に分離されることを意味する。部分分離には、例えば、本発明の化合物または塩が豊富な組成物が含まれうる。実質的分離には、少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、または少なくとも約９９重量％の本発明の化合物またはその塩が含まれうる。
【００３４】
「医薬上許容される」なる語句は、正しい医学的判断の範囲内にあって、適当な効果／リスク比に比例する、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わない人間および動物の組織に接触させて用いるのに適当な化合物、塩、物質、組成物および／または剤形を示すために本明細書にて用いられる。
【００３５】
本発明はまた、本明細書に記載の化合物の医薬上許容される塩を含みうる。本明細書に用いられる、「医薬上許容される塩」なる語句は、親化合物が存在する酸または塩基部分をその塩形態に変換することによって修飾されている、開示された化合物の誘導体を示す。医薬上許容される塩の例として、限定されるものではないが、塩基残基、例えば、アミンの鉱酸または有機酸塩；酸残基、例えば、カルボン酸残基のアルカリまたは有機塩などが挙げられる。本発明の医薬上許容される塩には、例えば、無毒性無機または有機酸から形成された親化合物の慣習的な無毒性塩が含まれる。本発明の医薬上許容される塩は、慣習的な化学的方法によって塩基または酸部分を含有する親化合物から合成されうる。一般的には、かかる塩は、水中または有機溶媒中、またはその２種の混合液中で遊離酸または塩基形態のこれらの化合物を化学量の適当な塩基または酸と反応させることによって調製されうる。適当な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７版，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８およびＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２（１９７７）にて見出され、その各々はその全体が出典明示により本明細書の一部となる。
【００３６】
方法
本発明の化合物および塩は、１種またはそれ以上のＪａｎｕｓキナーゼ（ＪＡＫ）の活性を阻害しうる。本発明の化合物が結合および／または阻害するＪＡＫには、任意のメンバーのＪＡＫファミリーが含まれる。本発明の化合物は、ＪＡＫ１およびＪＡＫ２の両方の活性を阻害する。
【００３７】
本発明の別の態様は、治療上有効な量または用量の本発明の化合物もしくは塩またはその医薬組成物を処置が必要な個体に投与することによって個体（例えば、患者）におけるＪＡＫ関連疾患または障害を処置する方法に関連する。ＪＡＫ関連疾患には、過剰発現および／または異常な活性レベルを含む、ＪＡＫの発現または活性に直接的または間接的に付随している任意の疾患、障害または病態が含まれうる。ＪＡＫ関連疾患には、ＪＡＫ活性を調節することによって予防、緩和、または治療されうる任意の疾患、障害または病態も含まれうる。
【００３８】
ＪＡＫ関連疾患の例として、例えば、臓器移植拒絶反応（例えば、同種移植拒絶反応および移植片対宿主病）を含む、免疫系に関与する疾患が挙げられる。
【００３９】
ＪＡＫ関連疾患のさらなる例として、自己免疫疾患、例えば、多発性硬化症、関節リウマチ、若年性関節炎、乾癬性関節炎、Ｉ型糖尿病、紅斑性狼瘡、乾癬、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、重症筋無力症、免疫グロブリン腎症、自己免疫性甲状腺疾患などが挙げられる。ある実施態様において、自己免疫疾患は、自己免疫性水疱性皮膚疾患、例えば、尋常性天疱瘡（ＰＶ）または水疱性類天疱瘡（ＢＰ）である。
【００４０】
ＪＡＫ関連疾患のさらなる例として、アレルギー状態、例えば、喘息、食物アレルギー、アトピー性皮膚炎および鼻炎が挙げられる。ＪＡＫ関連疾患のさらなる例として、ウイルス疾患、例えば、エプスタイン・バー・ウイルス（ＥＢＶ）、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ  １、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）およびヒト・パピローマ・ウイルス（ＨＰＶ）が挙げられる。
【００４１】
ＪＡＫ関連疾患または病態のさらなる例として、皮膚疾患、例えば、乾癬（例えば、尋常性乾癬）、アトピー性皮膚炎、皮膚発疹、皮膚炎、皮膚感作（例えば、接触性皮膚炎またはアレルギー性接触性皮膚炎）が挙げられる。例えば、いくつかの医薬品を含む特定の物質は、局所的に適用される場合、皮膚感作を引き起こしうる。ある実施態様において、望ましくない感作を引き起こす薬剤と一緒の本発明の少なくとも１種のＪＡＫ阻害薬の共投与または連続投与は、かかる望ましくない感作または皮膚炎を処置するのに有用でありうる。ある実施態様において、皮膚疾患は、少なくとも１種の本発明のＪＡＫ阻害薬の局所投与によって処置される。
【００４２】
さらなる実施態様において、ＪＡＫ関連疾患は、固形腫瘍（例えば、前立腺癌、腎臓癌、肝臓癌、膵臓癌、胃癌、乳癌、肺癌、頭頸部癌、甲状腺癌、グリア芽腫、カポジ肉腫、キャッスルマン病、メラノーマなど）、血液癌（例えば、リンパ腫、白血病、例えば、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または多発性骨髄腫）、および皮膚癌、例えば、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）および皮膚Ｂ細胞リンパ腫によって特徴付けられるものを含む癌である。皮膚Ｔ細胞リンパ腫の例として、セザリー症候群および菌状息肉腫が挙げられる。
【００４３】
さらに、ＪＡＫ関連疾患には、変種ＪＡＫ２、例えば、偽キナーゼドメイン中に少なくとも１つの変異を有するもの（例えば、ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ）の発現によって特徴付けられるものが含まれうる。
【００４４】
さらに、ＪＡＫ関連疾患には、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、例えば、真性赤血球増加症（ＰＶ）、本態性血小板血症（ＥＴ）、骨髄化生を伴う骨髄線維症（ＭＭＭ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、好酸球増加症候群（ＨＥＳ）、全身性肥満細胞疾患（ＳＭＣＤ）などが含まれうる。ある実施態様において、骨髄増殖性疾患は、原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）または真性赤血球増加症／本態性血小板血症後の骨髄線維症（Ｐｏｓｔ−ＰＶ／ＥＴ  ＭＦ）である。
【００４５】
さらなるＪＡＫ関連疾患には、炎症および炎症性疾患が含まれる。炎症性疾患の例として、眼の炎症性疾患（例えば、虹彩炎、ブドウ膜炎、強膜炎、結膜炎、または関連疾患）、気道の炎症性疾患（例えば、鼻および鼻腔、例えば、鼻炎もしくは副鼻腔炎を含む上気道または気管支炎、慢性閉塞性肺疾患などを含む下気道）、炎症性菌疾患、例えば、心筋炎、および他の炎症性疾患が挙げられる。
【００４６】
本明細書に記載のＪＡＫ阻害薬は、さらに虚血再かん流傷害または炎症性虚血性事象に付随する疾患もしくは病態、例えば、脳卒中または心停止を処置するために用いられうる。本明細書に記載のＪＡＫ阻害薬は、さらに拒食症、悪液質、または疲労、例えば、癌から生じるものまたは癌に付随するものを処置するために用いられうる。本明細書に記載のＪＡＫ阻害薬は、さらに再狭窄、強皮症、または線維症を処置するために用いられうる。本明細書に記載のＪＡＫ阻害薬は、低酸素症またはアストログリオーシスに付随する病態、例えば、糖尿病性網膜症、癌、または神経変性などを処置するために用いられうる。例えば、Ｄｕｄｌｅｙ，Ａ．Ｃ．ら．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２００５，３９０（Ｐｔ  ２）：４２７−３６およびＳｒｉｒａｍ，Ｋ．ら．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００４，２７９（１９）：１９９３６−４７．Ｅｐｕｂ  ２００４  Ｍａｒ  ２を参照のこと。本明細書に記載のＪＡＫ阻害薬は、アルツハイマー病を処置するために用いられうる。
【００４７】
本明細書に記載のＪＡＫ阻害薬は、さらに他の炎症性疾患、例えば、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）および敗血性ショックを処置するために用いられうる。
【００４８】
本明細書に記載のＪＡＫ阻害薬は、痛風および例えば、前立腺肥大症または良性前立腺過形成による前立腺サイズの増大を処置するために用いられうる。
【００４９】
本明細書に記載のＪＡＫ阻害薬ならびにＩＬ−６／ＳＴＡＴ３シグナル伝達に影響を及ぼしうる他のＪＡＫ阻害薬は、さらに炎症関連増殖性疾患を処置するために用いられうる。炎症は、ある種の癌の発症に関連することが示されている。例えば、炎症性腸疾患、例えば、潰瘍性大腸炎に罹患している患者は、結腸直腸癌を発症する危険性がかなり高いことが示されている。これらの種類の炎症関連癌は、大腸炎関連癌（ＣＡＣ）と称されている。複数の研究は、ＩＬ−６／ＳＴＡＴ３シグナル伝達がＣＡＣの促進に関与することを示している。例えば、ＳＴＡＴ３腸上皮細胞が欠損しているマウスは、ＣＡＣの動物モデルにおける腫瘍のサイズおよび発生を低下させた。Ｂｒｏｍｂｅｒｇら，「Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ：ＩＬ−６  ａｎｄ  ＳＴＡＴ３  ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ｔｈｅ  ｌｉｎｋ」，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ，１５：７９−８０（２００９）。同様の結果は、野生型マウスより少なくかつ小さい腺腫を発症したＩＬ−６欠損マウスで得られた。Ｇｒｉｖｅｎｎｉｋｏｖら，「ＩＬ−６  ａｎｄ  ＳＴＡＴ３  ａｒｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｏｌｉｔｉｓ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｃａｎｃｅｒ」，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ，１５：１０３−１１１（２００９）。Ｂｏｌｌｒａｔｈら，「ｇｐ１３０−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  ＳＴＡＴ３  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｅｓ  ｒｅｇｕｌａｔｒｅｓ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ−ｃｙｃｌｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ｃｏｌｉｔｉｓ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ」，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ，１５：９１−１０２（２００９）；およびＫｏｒｔｙｌｅｗｓｋｉら，「Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＩＬ−２３  ａｎｄ  ＩＬ−１２  ｂａｌａｎｃｅ  ｂｙ  Ｓｔａｔ３  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ」，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ，１５：１１４−１２３（２００９）も参照のこと。
【００５０】
したがって、ある実施態様において、本発明のＪＡＫ阻害薬およびＩＬ−６／ＳＴＡＴ３シグナル伝達に影響を及ぼすものは、炎症関連癌を処置するために用いられうる。ある実施態様において、癌は炎症性腸疾患に付随する。ある実施態様において、炎症性腸疾患は潰瘍性大腸炎である。ある実施態様において、炎症性腸疾患はクローン病である。ある実施態様において、炎症関連癌は大腸炎関連癌である。ある実施態様において、炎症関連癌は結腸癌または結腸直腸癌である。ある実施態様において、癌は胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、腺癌、小腸癌、または直腸癌である。本明細書にて提供される化合物に加えて、炎症関連癌の処置に用いられうるＪＡＫ阻害薬の例として、ＵＳ２００６／０１０６０２０；ＵＳ２００６／０１８３９０６；ＵＳ２００７／０１４９５０６；ＵＳ２００７／０１３５４６１；ＵＳ２００８／０１８８５００；ＵＳ２００８／０３１２２５８；ＵＳ２００８／０３１２２５９；およびＵ．Ｓ．Ｓｅｒ．Ｎｏ．１２／２７０，１３５に記載のものが挙げられる。
【００５１】
ＪＡＫ阻害薬は、炎症関連癌の処置における潜在的有効性について動物モデルにて試験されうる。例えば、ＣＡＣは、Ｇｒｉｖｅｎｎｉｋｏｖら，「ＩＬ−６  ａｎｄ  ＳＴＡＴ３  ａｒｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｏｆ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｏｌｉｔｉｓ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｃａｎｃｅｒ」，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ，１５：１０３−１１１（２００９）に要約される方法によって処置された（例えば、ＪＡＫ阻害薬で）または未処置のマウスにおいて誘導されうる。疾患の進行は、体重の測定および直腸出血および下痢の兆候のモニタリングによって追跡されうる。動物の屠殺後、遠位結腸の一部は分析のために取り除かれる。
【００５２】
ある実施態様において、本明細書に記載のＪＡＫ阻害薬は、さらにドライアイ障害を処置するために用いられうる。本明細書に用いられる、「ドライアイ障害」は、「不快感、視覚障害、および眼表面の潜在的損傷を伴う涙液層の不安定化の症状を生じる涙液および眼表面の多因子疾患。涙液層の浸透圧の増加および眼表面の炎症を伴う。」としてドライアイを定義している、Ｄｒｙ  Ｅｙｅ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ（ＤＥＷＳ）の最近の公式報告に要約される病態を包含することを意図とする。Ｌｅｍｐ，「Ｔｈｅ  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｒｙ  Ｅｙｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ：  Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｕｂｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｙ  Ｅｙｅ  ＷｏｒｋＳｈｏｐ」，Ｔｈｅ  Ｏｃｕｌａｒ  Ｓｕｒｆａｃｅ，５（２），７５−９２  Ａｐｒｉｌ  ２００７、その全体が出典明示により本明細書の一部となる。ドライアイはまた、乾性角結膜炎と称される場合もある。ある実施態様において、ドライアイ障害の処置は、ドライアイ障害の特定の症状、例えば、眼の不快感、視覚障害、涙液層の不安定化、涙液の高浸透圧、および眼表面の炎症の改善に関与する。ドライアイの処置のためのＪＡＫ阻害薬の使用は、２００９年１０月１日に出願された、米国シリアル番号第１２／５７１，８３４号（出典明示により本明細書の一部となる）にて提供される。
【００５３】
さらなる態様において、本発明は、結膜炎、ブドウ膜炎（慢性ブドウ膜炎を含む）、脈絡膜炎、網膜炎、毛様体炎、強膜炎、上強膜炎、または虹彩炎の処置方法；角膜移植、ＬＡＳＩＫ（レーザー光線による近視手術）、レーザー屈折矯正角膜切除術、またはＬＡＳＥＫ（レーザー光線による角膜上皮下切除術）に付随する炎症または疼痛の処置方法；角膜移植、ＬＡＳＩＫ、レーザー屈折矯正角膜切除術、またはＬＡＳＥＫに付随する視力の低下の抑制方法；または治療上有効な量の式Ｉの化合物、またはその医薬上許容される塩もしくはＮ−オキシドを患者に投与することを含む、それを必要とする患者における移植拒絶反応の抑制方法を提供する。ある実施態様において、該化合物、またはその医薬上許容される塩もしくはＮ−オキシドは、角膜移植、ＬＡＳＩＫ、レーザー屈折矯正角膜切除術、およびＬＡＳＥＫから選択される処置を受けようとしている患者に対し術前に投与される。ある実施態様において、該化合物、またはその医薬上許容される塩もしくはＮ−オキシドは、処置中および処置後の炎症または疼痛を抑制または軽減する。ある実施態様において、該化合物、またはその医薬上許容される塩もしくはＮ−オキシドは、処置の約１日〜約２日前に投与される。ある実施態様において、該化合物、またはその医薬上許容される塩もしくはＮ−オキシドは、角膜移植、ＬＡＳＩＫ、レーザー屈折矯正角膜切除術、およびＬＡＳＥＫから選択される処置を受けている患者に対し術後に投与される。ある実施態様において、視力の低下を抑制することは、視力の低下を軽減することを意味する。ある実施態様において、術後または術前の処置は、処置後の瘢痕化および線維性集塊の量を軽減する。ある実施態様において、視力の低下を抑制することは、患者が視力を保つことを意味する。ある実施態様において、移植拒絶反応を抑制することは、該化合物、またはその医薬上許容される塩もしくはＮ−オキシドが免疫抑制薬であるため、角膜移植のあらゆる拒絶反応を抑制することを意味する。
【００５４】
一の実施態様において、本発明は、対象における癌の処置方法であって、３−シクロブチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル、その異性体、またはその医薬上許容される塩を該対象に投与することを含む、方法を提供する。別の実施態様において、本発明は、対象における骨髄線維症の処置方法であって、３−シクロブチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル、その異性体、またはその医薬上許容される塩を該対象に投与することを含む、方法を提供する。別の実施態様において、本発明は、対象における関節リウマチ（ＲＡ）の処置方法であって、３−シクロブチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル、その異性体、またはその医薬上許容される塩を該対象に投与することを含む、方法を提供する。別の実施態様において、本発明は、対象における真性赤血球増加症（ＰＶ）の処置方法であって、３−シクロブチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル、その異性体、またはその医薬上許容される塩を該対象に投与することを含む、方法を提供する。別の実施態様において、本発明は、対象における本態性血小板血症（ＥＴ）の処置方法であって、３−シクロブチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル、その異性体、またはその医薬上許容される塩を該対象に投与することを含む、方法を提供する。別の実施態様において、本発明は、対象における固形腫瘍の処置方法であって、３−シクロブチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル、その異性体、またはその医薬上許容される塩を該対象に投与することを含む、方法を提供する。別の実施態様において、本発明は、対象における乾癬の処置方法であって、３−シクロブチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル、その異性体、またはその医薬上許容される塩を該対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００５５】
一の実施態様において、本発明は、対象における癌の処置方法であって、３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル、その異性体、その医薬上許容される塩を該対象に投与することを含む、方法を提供する。別の実施態様において、本発明は、対象における骨髄線維症の処置方法であって、３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル、その異性体、またはその医薬上許容される塩を該対象に投与することを含む、方法を提供する。別の実施態様において、本発明は、対象における関節リウマチ（ＲＡ）の処置方法であって、３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル、その異性体、またはその医薬上許容される塩を該対象に投与することを含む、方法を提供する。別の実施態様において、本発明は、対象における真性赤血球増加症（ＰＶ）の処置方法であって、３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル、その異性体、またはその医薬上許容される塩を該対象に投与することを含む、方法を提供する。別の実施態様において、本発明は、対象における本態性血小板血症（ＥＴ）の処置方法であって、３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル、その異性体、またはその医薬上許容される塩を該対象に投与することを含む、方法を提供する。別の実施態様において、本発明は、対象における固形腫瘍の処置方法であって、３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル、その異性体、またはその医薬上許容される塩を該対象に投与することを含む、方法を提供する。別の実施態様において、本発明は、対象における乾癬の処置方法であって、３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル、その異性体、またはその医薬上許容される塩を該対象に投与することを含む、方法を提供する。
【００５６】
本明細書に用いられる、「接触させること」なる語は、インビトロ系またはインビボ系において所定の部分を集めることをいう。例えば、ＪＡＫと本発明の化合物を「接触させること」には、ＪＡＫを有する、個体または患者、例えば、ヒトへの本発明の化合物の投与、ならびに例えば、ＪＡＫを含有する細胞調製物または精製品を含有するサンプルに本発明の化合物を導入することが含まれる。
【００５７】
本明細書に用いられる、「個体」または「患者」なる語（交互に用いられる）は、哺乳動物を含む、任意の動物、好ましくは、マウス、ラット、他の齧歯動物、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、または霊長類、および最も好ましくは、ヒトをいう。
【００５８】
本明細書に用いられる、「治療上有効な量」なる語句は、研究者、獣医、医師または他の臨床医によって組織、系、動物、個体またはヒトにおいて求められている生物学的または医学的反応を引き起こす活性化合物または医薬物質の量をいう。
【００５９】
本明細書に用いられる、「処置すること」または「処置」なる語は、（１）疾患を予防すること；例えば、疾患、病態または障害に罹患しやすいかもしれないが、疾患の病状または症状をまだ経験または示していない個体における疾患、病態または障害を予防すること；（２）疾患を抑制すること；例えば、疾患、病態または障害の病状または症状を経験または示している個体における疾患、病態または障害を抑制すること；および（３）疾患を軽減すること；例えば、疾患、病態または障害の病状または症状を経験または示している個体における疾患、病態または障害を軽減すること（すなわち、病状および／または症状を回復に向かわせること）、例えば、疾患の重症度を減少させることの１つまたはそれ以上をいう。
【００６０】
「使用」なる語には、それぞれ、以下の本発明の実施態様のいずれか１つまたはそれ以上が含まれる：疾患の処置における使用；疾患の処置に用いるための医薬組成物の製造のための使用、例えば、医薬の製造における使用；これらの疾患の処置における本発明の化合物の使用方法；これらの疾患の処置のための本発明の化合物を有する医薬製剤；およびこれらの疾患の処置に用いるための本発明の化合物；特に明記されていない場合、適当な方法。特に、本発明の化合物の使用が好ましい、治療される疾患は、ＪＡＫキナーゼの活性に付随する疾患から選択される。
【００６１】
組み合わせ療法
１種またはそれ以上のさらなる医薬物質、例えば、化学療法剤、抗炎症剤、ステロイド類、免疫抑制剤、ならびにＢｃｒ−Ａｂｌ、Ｆｌｔ−３、ＲＡＦおよびＦＡＫキナーゼ阻害薬、例えば、ＷＯ２００６／０５６３９９に記載されるもの、または他の治療剤などは、ＪＡＫ関連疾患、障害または病態の処置のために本発明の化合物または塩と組み合わせて用いられうる。１種またはそれ以上のさらなる医薬物質は、同時にまたは連続して患者に投与されうる。
【００６２】
化学療法剤の例として、プロテアソーム阻害薬（例えば、ボルテゾミブ）、サリドマイド、レブラミド、およびＤＮＡ損傷物質、例えば、メルファラン、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ビンクリスチン、エトポシド、カルムスチンなどが挙げられる。
【００６３】
ステロイドの例として、コルチコステロイド、例えば、デキサメタゾンまたはプレドニゾロンが挙げられる。
【００６４】
Ｂｃｒ−Ａｂｌ阻害薬の例として、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，５２１，１８４、ＷＯ０４／００５２８１、およびＷＯ２００５／１２３７１９に開示される属および種の化合物およびその医薬上許容される塩が挙げられる。
【００６５】
適当なＦｌｔ−３阻害薬の例として、ＷＯ０３／０３７３４７、ＷＯ０３／０９９７７１、およびＷＯ０４／０４６１２０に開示された化合物およびそれらの医薬上許容される塩が挙げられる。
【００６６】
適当なＲＡＦ阻害薬の例として、ＷＯ００／０９４９５およびＷＯ０５／０２８４４４に開示された化合物およびそれら医薬上許容される塩が挙げられる。
【００６７】
適当なＦＡＫ阻害薬の例として、ＷＯ０４／０８０９８０、ＷＯ０４／０５６７８６、ＷＯ０３／０２４９６７、ＷＯ０１／０６４６５５、ＷＯ００／０５３５９５、およびＷＯ０１／０１４４０２に開示された化合物およびそれらの医薬上許容される塩が挙げられる。
【００６８】
ある実施態様において、１種またはそれ以上の本発明の化合物は、特にイマチニブまたは他のキナーゼ阻害薬に耐性を示す患者を処置するためにイマチニブを含む１種またはそれ以上の他のキナーゼ阻害薬と組み合わせて用いられうる。
【００６９】
ある実施態様において、１種またはそれ以上の本発明のＪＡＫ阻害薬は、癌の処置において化学療法剤と組み合わせて用いられ、その毒性作用の増悪を伴うことなく、化学療法剤単独での反応と比べて処置反応を潜在的に改善しうる。多発性骨髄腫の処置に用いられるさらなる医薬物質の例として、例えば、限定するものではないが、メルファラン、メルファラン＋プレドニゾロン［ＭＰ］、ドキソルビシン、デキサメタゾン、およびベルケイド（ボルテゾミブ）が挙げられうる。さらに、多発性骨髄腫の処置に用いられるさらなる物質には、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、Ｆｌｔ−３、ＲＡＦおよびＦＡＫキナーゼ阻害薬が含まれる。相加または相乗効果は、本発明のＪＡＫ阻害薬とさらなる物質の組み合わせの望ましい結果である。さらに、物質、例えば、デキサメタゾンに対する多発性骨髄腫細胞の耐性は、本発明のＪＡＫ阻害薬での処置により可逆的でありうる。該物質は、単一または連続剤形において本発明化合物と組み合わせられうるか、または該物質は、別々の剤形として同時にまたは連続して投与されうる。
【００７０】
ある実施態様において、コルチコステロイド、例えば、デキサメタゾンは、デキサメタゾンが連続的とは対照的な断続的に投与される場合、少なくとも１種のＪＡＫ阻害薬と組み合わせて患者に投与される。
【００７１】
あるさらなる実施態様において、１種またはそれ以上の本発明のＪＡＫ阻害薬と他の治療剤との組合せは、骨髄移植または幹細胞移植前、移植中および／または移植後に患者に投与されうる。
【００７２】
ある実施態様において、少なくとも１種のさらなる治療剤は、ドライアイ障害および眼の他の障害の処置に関連して用いられうる。ある実施態様において、さらなる治療剤は、フルオシノロンアセトニド（Ｒｅｔｉｓｅｒｔ（登録商標））、またはメキソロン（ＡＬ−２１７８，Ｖｅｘｏｌ，Ａｌｃｏｎ）である。ある実施態様において、さらなる治療剤は、シクロスポリン（Ｒｅｓｔａｓｉｓ（登録商標））である。ある実施態様において、さらなる治療剤は、コルチコステロイドである。ある実施態様において、トリアムシノロン、デキサメタゾン、フルオシノロン、コルチゾン、プレドニゾロン、またはフルメトロンである。
【００７３】
ある実施態様において、さらなる治療剤は、Ｄｅｈｙｄｒｅｘ（商標）（Ｈｏｌｌｅｓ  Ｌａｂｓ）、シバミド（Civamide）（Ｏｐｋｏ）、ヒアルロン酸ナトリウム（Ｖｉｓｍｅｄ，Ｌａｎｔｉｂｉｏ／ＴＲＢ  Ｃｈｅｍｅｄｉａ）、シクロスポリン（ＳＴ−６０３，Ｓｉｒｉｏｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＡＲＧ１０１（Ｔ）（テストステロン，Ａｒｇｅｎｔｉｓ）、ＡＧＲ１０１２（Ｐ）（Ａｒｇｅｎｔｉｓ）、エカベトナトリウム（Ｓｅｎｊｕ−Ｉｓｔａ）、ゲファルナート（Ｓａｎｔｅｎ）、１５−（ｓ）−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（１５（Ｓ）−ＨＥＴＥ）、セビレミン（cevilemine）、ドキシサイクリン（doxycline）（ＡＬＴＹ−０５０１，Ａｌａｃｒｉｔｙ）、ミノサイクリン、ｉＤｅｓｔｒｉｎ（商標）（ＮＰ５０３０１，ＮａｓｃｅｎｔＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、シクロスポリンＡ（Ｎｏｖａ２２００７，Ｎｏｖａｇａｌｉ）、オキシテトラサイクリン（ズラマイシン，ＭＯＬＩ１９０１，Ｌａｎｔｉｂｉｏ）、ＣＦ１０１（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−［６−［（３−ヨードフェニル）メチルアミノ］プリン−９−イル］−Ｎ−メチル−オキソラン−２−カルバミル，Ｃａｎ−Ｆｉｔｅ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）、ボクロスポリン（ＬＸ２１２またはＬＸ２１４，Ｌｕｘ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＡＲＧ１０３（Ａｇｅｎｔｉｓ）、ＲＸ−１００４５（合成レゾルビンアナログ，Ｒｅｓｏｌｖｙｘ）、ＤＹＮ１５（Ｄｙａｎｍｉｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、リボグリタゾン（ＤＥ０１１，Ｄａｉｉｃｈｉ  Ｓａｎｋｏ）、ＴＢ４（ＲｅｇｅｎｅＲｘ）、ＯＰＨ−０１（Ｏｐｈｔａｌｍｉｓ  Ｍｏｎａｃｏ）、ＰＣＳ１０１（Ｐｅｒｉｃｏｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、ＲＥＶ１−３１（Ｅｖｏｌｕｔｅｃ）、ラクリチン（Ｓｅｎｊｕ）、レバミピド（Ｏｔｓｕｋａ−Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＯＴ−５５１（Ｏｔｈｅｒａ）、ＰＡＩ−２（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  ａｎｄ  Ｔｅｍｐｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）、ピロカルピン、タクロリムス、ピメクロリムス（ＡＭＳ９８１，Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、エタボン酸ロテプレドノール、リツキシマブ、シクアホソル四ナトリウム（ＩＮＳ３６５，Ｉｎｓｐｉｒｅ）、ＫＬＳ−０６１１（Ｋｉｓｓｅｉ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、デヒドロエピアンドロステロン、アナキンラ、エファリズマブ、ミコフェノール酸ナトリウム、エタネルセプト（Ｅｍｂｒｅｌ（登録商標））、ヒドロキシクロロキン、ＮＧＸ２６７（ＴｏｒｒｅｙＰｉｎｅｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、またはサリドマイドから選択される。
【００７４】
ある実施態様において、さらなる治療剤は、血管新生阻害剤、コリン作動薬、ＴＲＰ−１受容体モジュレーター、カルシウムチャネル阻害薬、ムチン分泌促進剤、ＭＵＣ１刺激薬、カルシニューリン阻害薬、コルチコステロイド、Ｐ２Ｙ２受容体アゴニスト、ムスカリン受容体アゴニスト、別のＪＡＫ阻害薬、Ｂｃｒ−Ａｂｌキナーゼ阻害薬、Ｆｌｔ−３キナーゼ阻害薬、ＲＡＦキナーゼ阻害薬、およびＦＡＫキナーゼ阻害薬、例えば、ＷＯ２００６／０５６３９９に記載されたものなどである。ある実施態様において、さらなる治療剤は、テトラサイクリン誘導体（例えば、ミノサイクリンまたはドキシサイクリン）である。
【００７５】
ある実施態様において、さらなる治療剤（複数）は、鎮痛点眼薬（「人口涙液」としても周知）であり、それには、限定されるものではないが、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、グリセリン、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００）、またはカルボキシメチルセルロースを含有する組成物が含まれる。人工涙液は、涙液層の低下した水分および潤滑の能力を補うことによってドライアイの処置に有用でありうる。ある実施態様において、さらなる治療剤は、粘液溶解薬、例えば、Ｎ−アセチル−システインであり、それは、涙液層の粘性を低下させるためにムコタンパク質と相互作用しうる。
【００７６】
ある実施態様において、さらなる治療剤には、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、麻酔薬、ステロイド性および非ステロイド性抗炎症剤を含む抗炎症剤、および抗アレルギー剤が含まれる。適当な医薬の例として、アミノグリコシド、例えば、アミカシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、ストレプトマイシン、ネチルマイシン、およびカナマイシン；フルオロキノロン、例えば、シプロフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、ロメフロキサシン、レボフロキサシン、およびエノキサシン；スルホンアミド；ポリミキシン；クロラムフェニコール；ネオマイシン；パロモマイシン（paramomomycin）；コリスチメタート；バシトラシン；バンコマイシン；テトラサイクリン；リファンピンおよびその誘導体（「リファンピシン」）；シクロセリン；β−ラクタム；セファロスポリン；アンフォテリシン；フルコナゾール；フルシトシン；ナタマイシン；ミコナゾール；ケトコナゾール；コルチコステロイド；ジクロフェナク；フルルビプロフェン；ケトロラック；スプロフェン；コモリン（comolyn）；ロドキサミド；レボカバスチン；ナファゾリン（naphazoling）；アンタゾリン；フェニラミン（pheniramimane）またはアザライド系抗生物質が挙げられる。
【００７７】
医薬処方物および剤形
医薬品として用いる場合、本発明の化合物および塩は、医薬組成物の形態で投与されうる。これらの組成物は、医薬分野における周知の手法で調製され、局所または全身処置が望ましいかどうかおよび処置される領域に応じて、種々の経路によって投与されうる。投与は、局所投与（経皮投与、表皮投与、眼投与ならびに鼻腔内投与、膣内投与および直腸輸送を含む粘膜への投与を含む）、肺投与（例えば、ネブライザーによる投与を含む、粉末またはエアロゾルの吸入または注入による投与；気管内投与または鼻腔内投与）、経口投与または非経口投与でありうる。非経口投与には、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内または筋肉内注射または注入；または頭蓋内、例えば、髄腔内または脳室内投与が含まれる。非経口投与は、単回ボーラス投与の形態でありうるか、または例えば、持続注入ポンプによるものでありうる。局所投与のための医薬組成物および処方物には、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、滴剤、坐剤、スプレー、液体および粉末が含まれうる。慣習的な医薬担体、水性、粉末状または油性基剤、増粘剤などは、必要であってもよくまたは望ましくてもよい。被覆されたコンドーム、グローブなども有用でありうる。
【００７８】
本発明はまた、１種またはそれ以上の医薬上許容される担体（賦形剤）と組み合わせて活性成分として、１種またはそれ以上の上記の本発明の化合物を含有する医薬組成物を含む。本発明の組成物の製造において、活性成分は、典型的には、賦形剤と混合されるか、賦形剤によって希釈されるかまたは例えば、カプセル、サシェ、ペーパー、または他の容器の形態でかかる担体内に封入される。賦形剤が希釈剤として機能を果たす場合、それは、ビヒクル、担体または活性成分のための媒体として機能する、固体、半固体、または液体物質でありうる。したがって、組成物は、錠剤、ピル、散剤、ロゼンジ、サシェ、カシェー、エリキシル剤、懸濁液、乳液、溶液、シロップ、エアロゾル（固体としてまたは液体培地における）、例えば、最大１０重量％の活性成分を含有する軟膏、軟および硬ゼラチンカプセル、坐剤、滅菌注射溶液、および滅菌包装散剤の形態でありうる。
【００７９】
処方物の調製において、活性化合物は、他の成分と組み合わせる前に適当な粒子径を得るために破砕されうる。活性化合物が実質的に不溶性であるならば、それは、２００ｍｅｓｈ未満の粒子径に破砕されうる。活性化合物が実質的に水溶性であるならば、粒子径は、処方物における実質的に均一な分布を得るために破砕することによって調整されうる、例えば、約４０ｍｅｓｈ。
【００８０】
本発明の化合物は、錠剤形成および他の処方形態に適当な粒子径を得るために既知の破砕製法、例えば、湿式破砕を用いて破砕されうる。本発明の化合物の微粉化（ナノ粒子）製剤は、当該技術分野にて周知の製法によって調製されうる、例えば、国際特許出願番号ＷＯ２００２／０００１９６を参照のこと。
【００８１】
適当な賦形剤のいくつかの例として、乳糖、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、およびメチルセルロースが挙げられる。加えて、処方物には、潤滑剤、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、および鉱油；湿潤剤；乳化剤および懸濁化剤；保存剤、例えば、メチル−およびプロピルヒドロキシ−安息香酸塩；甘味剤；および香味剤が含まれる。本発明の組成物は、当該技術分野にて周知の製法を用いて患者に投与した後に活性成分の速放、徐放または遅延放出を提供するように処方されうる。
【００８２】
組成物は、単位剤形で処方され得、その各剤形は、約５〜約１０００ｍｇ（１ｇ）、より一般的には、約１００〜約５００ｍｇの活性成分を含有する。「単位剤形」なる語は、単回投与量としてヒト対象および他の動物に適当な物理的に別々の単位をいい、その各単位は、適当な医薬賦形剤と共に、所望の治療効果をもたらすために算出された所定量の活性物質を含有する。
【００８３】
活性化合物は、広い投与量範囲にわたって効果的であり得、一般的には、医薬上有効な量で投与される。しかしながら、実際に投与される化合物の量は通常、治療されている病態、選択された投与経路、実際の投与化合物、個体患者の年齢、体重および反応、患者の症状の重症度などを含む、関連の事情に応じて、医師によって決定されると理解されるであろう。
【００８４】
固体組成物、例えば、錠剤を調製するために、主要な活性成分は、本発明の化合物の均一混合物を含有する固体予備処方組成物を形成するために医薬賦形剤と合される。これらの予備処方組成物が均一であると見なされる場合、活性成分は、典型的には、組成物が同等に有効な単位剤形、例えば、錠剤、ピルおよびカプセルに容易に細分されるように組成物全体に均一に分散される。次いで、該固体予備処方物は、例えば、約０．１〜約１０００ｍｇの本発明の活性成分を含有する上記の種類の単位剤形に細分される。
【００８５】
本発明の錠剤またはピルは、持続性作用の利点をもたらす剤形を得るために被覆されうるかあるいは配合されうる。例えば、錠剤またはピルは、内部投与成分および外部投与成分を含み得、後者は前者を覆う外層の形態である。２種の成分は、胃中の分解に耐性であって、内部成分を完全な状態で十二指腸に到達させるかまたは放出を遅延させるのに有用である腸溶性層によって分離されうる。種々の物質は、かかる腸溶性層またはコーティングのために用いられ得、かかる物質には、多数のポリマー酸およびポリマー酸とかかる物質、例えば、セラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースとの混合物が含まれる。
【００８６】
本発明の化合物および組成物が経口投与または注射による投与のために組み込まれうる液体形態には、水性溶液、適当には、フレーバーシロップ、水性または油性懸濁液、および食用油、例えば、綿実油、ゴマ油、ヤシ油またはラッカセイ油を有するフレーバーエマルジョン、ならびにエリキシル剤および同様の医薬ビヒクルが含まれる。
【００８７】
吸入または注入のための組成物には、医薬上許容される水性もしくは有機溶媒、またはその混合液中溶液または懸濁液、および散剤が含まれる。液体または固体組成物は、上記の適当な医薬上許容される賦形剤を含有しうる。ある実施態様において、組成物は、局所または全身作用のために経口または鼻腔呼吸経路によって投与される。組成物は、不活性ガスの使用によって噴霧されうる。噴霧された溶液は噴霧器から直接吸い込まれうるかあるいは噴霧器はフェイスマスクテント、または間欠的陽圧呼吸機器に取り付けられうる。溶液、懸濁液、または粉末組成物は、適当な手法で処方物を輸送するデバイスから経口または鼻腔投与されうる。
【００８８】
患者に投与される化合物または組成物の量は、投与されているもの、投与目的、例えば、予防または治療、患者の状態、投与の手法などに応じて変化しうる。治療的用途において、組成物は、疾患の症状またはその合併症を治療または少なくとも部分的に抑制するのに十分な量で疾患にすでに罹患している患者に投与されうる。有効な用量は、治療を受けている病態ならびに因子、例えば、疾患の重症度、患者の年齢、体重および一般的状態などに応じてかかりつけ医師の判断によって決定するであろう。
【００８９】
患者に投与される組成物は、上記の医薬組成物の形態でありうる。これらの組成物は、慣習的な滅菌技法によって滅菌されうるか、または滅菌濾過されうる。水性溶液は、そのままで使用するために包装されうるかまたは凍結乾燥され得、該凍結乾燥された製剤は、投与前に滅菌水性担体と組み合わせられる。化合物製剤のｐＨは、典型的には、３〜１１、より好ましくは５〜９および最も好ましくは７〜８であろう。特定の前記の賦形剤、担体、または安定化剤の使用は、医薬の塩の形成をもたらすと理解されるであろう。
【００９０】
本発明の化合物の治療的投与量は、例えば、処置される特定の用途、化合物の投与方法、患者の健康および状態、および処方医の判断に応じて変化しうる。医薬組成物における本発明の化合物の割合または濃度は、投与量、化学的特性（例えば、疎水性）、および投与経路を含む多数の因子に応じて変化しうる。例えば、本発明の化合物は、非経口投与のために約０．１〜約１０％ｗ／ｖの化合物を含有する水性生理学的バッファー溶液中に提供されうる。いくつかの典型的な用量範囲は、約１μｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇ体重／日である。ある実施態様において、用量範囲は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日である。用量は、疾患または障害の進行のタイプおよび程度、特定患者の全体的な健康状態、選択された化合物の生物効果比、賦形剤の処方、およびその投与経路などの可変因子に依存する可能性がある。有効な用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られる用量反応曲線から予測されうる。
【００９１】
ある実施態様において、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩は、眼組成物として投与される。したがって、ある実施態様において、該方法は、該化合物またはその医薬上許容される塩および眼科学的に許容される担体の投与を含む。ある実施態様において、眼組成物は、液体組成物、半固体組成物、インサート、フィルム、微粒子またはナノ粒子である。眼組成物は、２００９年１０月１日に出願された、米国シリアル番号第１２／５７１，８３４号（出典明示により本明細書の一部となる）に記載されている。
【００９２】
さらに、明確にするために別々の実施態様の文脈中に記載されている、本発明のある特徴が、単一の実施態様において組み合わせて提供されうるも明らかである。逆に、簡潔にするために単一の実施態様の文脈中に記載されている、本発明の種々の特徴はまた、別々にまたは任意の適当な小結合において提供されうる。
【００９３】
本明細書に記載のものに加えて、本発明の種々の修飾は、明細書から当業者に明らかになるであろう。本願に引用される各参考資料は、その全体が出典明示により本明細書の一部となる。
【００９４】
本発明は、実施例によってより詳細に記載されている。以下の実施例は、説明するためのものであって、いかなる方法によっても本発明を限定することを意図とするものではない。原則的に同一の結果を得るために変更または修飾されうる種々の重要性の低いパラメータを当業者であれば容易に理解するであろう。
【実施例】
【００９５】
実施例
実施例１
（ＲまたはＳ）−３−シクロブチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル
【化７】
0005858434.tif 000008
工程１．シクロブタンカルボキシアルデヒド
ジメチルスルホキシド（３４．６ｍＬ、０．４８８ｍｏｌ）の塩化メチレン（１００ｍＬ）中溶液を、−７８℃にて塩化メチレン（７００ｍＬ、１０ｍｏｌ）中塩化オキサリル（２０．６ｍＬ、０．２４４ｍｏｌ）に加えた。１０分後、塩化メチレン（１００ｍＬ）中シクロブチルメタノール（Ａｌｄｒｉｃｈ、１７．５ｇ、０．２０３ｍｏｌ）を加え、得られた混合物を−７８℃にて３０分間撹拌した。次いで、トリエチルアミン（１４０ｍＬ、１．０ｍｏｌ）の塩化メチレン（１００ｍＬ）中溶液を加え、混合物を室温（ｒｔ）まで徐々に昇温させた温度にて５時間撹拌した。水でクエンチした後、混合物を分離した。有機層を水（ｘ２）、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させて、濾過した。濾液を蒸留し、８６−９２℃の画分を回収して、アルデヒドを得た（１８．６ｇ、５４．４％）。
【００９６】
工程２．３−シクロブチルアクリロニトリル
０℃にて、１．００Ｍカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドのテトラヒドロフラン（１１６ｍＬ、０．１１６ｍｏｌ）中溶液に、ジエチルシアノメチルホスホネート（Ａｌｄｒｉｃｈ、１９．７ｍＬ、０．１２２ｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）中溶液を滴下した。反応物を室温に昇温させ、次いで、再度０℃に冷却した。反応混合物にシクロブタンカルボキシアルデヒド（工程１参照、１８．６ｇ、０．１１０ｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）中溶液を加えた。反応物を、室温（ｒｔ）まで昇温させ、室温にて一晩撹拌した。水でクエンチした後、混合物をエーテルで抽出した。合した有機層を、水、ブラインで洗浄し、乾燥させて、蒸発乾固した。粗混合物を、ヘキサン中０〜４０％ＥｔＯＡｃで溶出する、シリカゲルに付して精製して、所望の生成物を得た（５．３０ｇ、４４．７％）。Ｃ７Ｈ１０Ｎ（Ｍ＋Ｈ）＋について算出されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１０８．１；実測値：１０８．１．
【００９７】
工程３．（Ｒ）−３−シクロブチル−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリルおよび（Ｓ）−３−シクロブチル−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］−メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル
４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（米国公開番号ＵＳ２００７／０１３５４６１を参照のこと、１５．６ｇ、０．０５０ｍｏｌ）のアセトニトリル（１２４ｍＬ、２．３７ｍｏｌ）中溶液に、３−シクロブチルアクリロニトリル（５．３０ｇ、０．０５０ｍｏｌ）、次いで、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（３．７０ｍＬ、０．０２５ｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温にて一晩撹拌し、次いで、蒸発乾固した。混合物を、ヘキサン中０〜６０％ＥｔＯＡｃで溶出する、シリカゲルに付して精製し、ラセミ混合物として所望の生成物を得た（１６ｇ、７６％）。Ｃ２２Ｈ３１Ｎ６ＯＳｉ（Ｍ＋Ｈ）＋について算出されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝４２３．２；実測値：４２３．０。ラセミ混合物を、キラルＨＰＬＣ（カラム：ＣｈｉｒａｌＣｅｌ  ＯＪ−Ｈ，３０ｘ２５０ｍｍ，５μｍ；移動相：３０％エタノール／７０％ヘキサン；流速：２４ｍＬ／分）で分離して、２種のエナンチオマーを得た。キラル分析ＨＰＬＣ上（カラム：ＣｈｉｒａｌＣｅｌ  ＯＪ−Ｈ，４．６ｘ２５０ｍｍ，５μｍ；移動相：３０％エタノール／７０％ヘキサン；流速：０．８ｍＬ／分）：第１ピークの保持時間：６．６分；第２ピークの保持時間：８．１分。
【００９８】
工程４．（ＲまたはＳ）−３−シクロブチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル
スターラーバー、コンデンサー、および窒素入口を備えている５００ｍＬ丸底フラスコ中に、アセトニトリル（５５ｍＬ）、水（４．８ｍＬ）および（ＲまたはＳ）−３−シクロブチル−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（工程３におけるキラル分離からの第２ピーク、２．８ｇ、６．６ｍｍｏｌ）を加えた。リチウムテトラフルオロボレート（７．５０ｇ、０．０７８ｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、一晩還流温度に昇温させ、室温に冷却し、５分かけて少しずつ３．００Ｍの水中水酸化アンモニウム（９．７８ｍＬ）を加え、ｐＨを９〜１０に調整した。３０分後、得られた混合物を、ＲＰ−ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ３０ｘ１００ｍｍカラム、注入量５ｍＬ（約５０ｍｇ／注入）、０．１５％ＮＨ４ＯＨを含有するアセトニトリル／水の勾配で溶出、流速６０ｍＬ／分）に付して精製し、遊離塩基として所望の生成物を得た（１．５１ｇ、７７．９６％）。Ｃ１６Ｈ１７Ｎ６（Ｍ＋Ｈ）＋について算出されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝２９３．２；実測値：２９３．１。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ８．６５（１Ｈ，ｓ），８．５９（１Ｈ，ｓ），８．３４（１Ｈ，ｓ），７．５０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），６．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），４．６９（１Ｈ，ｍ），３．０７〜２．９７（３Ｈ，ｍ），２．２１（１Ｈ，ｍ），１．９７〜１．８４（５Ｈ，ｍ）ｐｐｍ。ｅｅ９８．８％。
他のエナンチオマーは、工程３におけるキラル分離から得られる第１ピークに相当する化合物で出発して同一手法にて調製されうる。
【００９９】
実施例２
（３Ｒまたは３Ｓ）−３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｔｒａｎｓ）−３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル  リン酸塩
【化８】
0005858434.tif 000009
工程１．３−メチレンシクロブタンカルボン酸
コンデンサーを取り付けた丸底フラスコに、３−メチレンシクロブタンカルボニトリル（ＢｅＰｈａｒｍａ、１０．０ｇ、０．１０７ｍｏｌ）を加えた。フラスコに、水酸化カリウム（２４．１ｇ、０．３６５ｍｏｌ）のエタノール（１１２ｍＬ）および水（８８ｍＬ）中溶液を加え、混合物を１００℃に加熱した。約２時間後、アンモニアの発生が終了し、溶媒を減圧下で蒸発乾固した。固体を水（７５ｍＬ）に溶解し、氷浴中で冷却し、濃塩酸で約１のｐＨに酸性化した。得られた上層を、ジクロロメタンで２回抽出した。有機層を合し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。有機溶媒を除去して、所望の粗生成物を得た（１１．８ｇ、９７．６７％）。
【０１００】
工程２．Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−３−メチレンシクロブタンカルボキサミド
３−メチレンシクロブタンカルボン酸（工程１、５．８８ｇ、５２．４ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１００ｍＬ）中混合物に、塩化オキサリル（Ａｌｄｒｉｃｈ、５．３３ｍＬ、６２．９ｍｍｏｌ）、次いで、触媒量のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を加えた。反応物を室温にて２時間撹拌し、次いで、蒸発乾固した。粗酸塩化物を、塩化メチレン（２００ｍＬ）に溶解した。得られた溶液に、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシアミン塩酸塩（Ａｌｄｒｉｃｈ、６．１４ｇ、６２．９ｍｍｏｌ）、次いで、トリエチルアミン（ＴＥＡ）（２１．９ｍＬ、０．１５７ｍｏｌ）を０℃にて滴下した。反応物を室温にて一晩撹拌し、ＴＥＡ  ＨＣｌ塩を濾去した。濾液を１Ｎ  ＨＣｌで、次いで、水性重炭酸ナトリウム、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させて、蒸発乾固した。粗アミド（７．３０ｇ、８９．７％）を、次の工程において直接用いた。Ｃ８Ｈ１４ＮＯ２（Ｍ＋Ｈ）＋について算出されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝１５６．１；実測値：１５６．３。
【０１０１】
工程３．３−メチレンシクロブタンカルバルデヒド
リチウムテトラヒドロアルミネート（２．１８ｇ、５７．５ｍｍｏｌ）のエーテル（２００ｍＬ）中懸濁液に、Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル−３−メチレンシクロブタンカルボキサミド（工程２、７．１４ｇ、４６．０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（７５ｍＬ）中溶液を−１５℃にて滴下した。反応物を、０〜−１５℃にて３０分間撹拌し、次いで、水性硫酸水素カリウムでクエンチした。得られた混合物を、エーテルで抽出した。合した有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発させた。粗生成物（６．７０ｇ、１５１．５％）を、次の工程において直接用いた。
【０１０２】
工程４．３−（３−メチレンシクロブチル）アクリロニトリル
０℃にて、１．００Ｍのカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドのテトラヒドロフラン（４８．３ｍＬ、４８．３ｍｍｏｌ）中溶液に、ジエチルシアノメチルホスホネート（Ａｌｄｒｉｃｈ、８．１９ｍＬ、５０．６ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（８０ｍＬ）中溶液を滴下した。反応物を、室温に昇温させ、次いで、０℃に冷却した。反応混合物に、３−メチレンシクロブタンカルバルデヒド（工程４、４．４２ｇ、４６．０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）中溶液を加えた。反応物を、室温に昇温させ、次いで、室温にて一晩撹拌した。水でクエンチした後、混合物をエーテルで抽出した。合した有機層を、水、ブラインで洗浄し、乾燥させ、蒸発乾固した。粗混合物（５．９０ｇ、１０７．７％）を次の工程において直接用いた。
【０１０３】
工程５．３−（３−メチレンシクロブチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル
４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（米国公開番号ＵＳ２００７／０１３５４６１参照、７．２５ｇ、２３．０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（５７．４ｍＬ）中溶液に、粗３−（３−メチレンシクロブチル）アクリロニトリル（工程４、２．７４ｇ、２３．０ｍｍｏｌ）、次いで、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（３．４４ｍＬ、２３．０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を、室温にて週末にわたって撹拌し、次いで、蒸発乾固した。残渣を、ヘキサン中０〜８０％ＥｔＯＡｃで溶出する、シリカゲルに付して精製し、所望の生成物を得た（６．０ｇ、６０．１％）。Ｃ２３Ｈ３１Ｎ６ＯＳｉ（Ｍ＋Ｈ）＋について算出されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝４３５．２；実測値：４３５．４。
【０１０４】
工程６．（３Ｒまたは３Ｓ）−３−（（ｔｒａｎｓ）−３−メチルシクロブチル）−３−（４−（７−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパンニトリル
３−（３−メチレンシクロブチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（工程５、４．０ｇ、９．２ｍｏｌ）の１００ｍＬのメタノール中混合物を、水素のバルーン圧下で１時間、０．６ｇの１０％Ｐｄ／Ｃの存在下において水素化した。触媒を濾去した後、濾液を蒸発乾固し、ヘキサン中０〜１００％ＥｔＯＡｃで溶出する、シリカゲルに付して精製し、ｔｒａｎｓ−およびｃｉｓ−異性体の混合物として所望の生成物を得た。Ｃ２３Ｈ３３Ｎ６ＯＳｉ（Ｍ＋Ｈ）＋について算出されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝４３７．３；実測値：４３７．４。生成物をキラルＨＰＬＣカラムに付して２回精製した。最初のＨＰＬＣ分離（カラム：ＣｈｉｒａｌＣｅｌ  ＯＤ−Ｈ、３０ｘ２５０ｍｍ、５μｍ；移動相：１５％エタノール／８５％ヘキサン；流速：２８ｍＬ／分）により、２つの画分、ＡおよびＢを得た。画分Ａは、１種のエナンチオマーのｃｉｓ／ｔｒａｎｓ混合物であった。保持時間：１０．５１分。画分Ｂは、保持時間が１３．０５分と１３．９２分である２種の非分離ピークを示す、他のエナンチオマーのｃｉｓ／ｔｒａｎｓ混合物であった。第１画分（Ａ）は、さらなるキラルＨＰＬＣ分離（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＩＡ，２０ｘ２５０ｍｍ，５μｍ；移動相：１０％エタノール／９０％ヘキサン；流速：１５ｍＬ／分）に付して、２つのピーク、Ａ１およびＡ２を得た（１のピークはｃｉｓに相当し、もう一方はｔｒａｎｓに相当する）。キラル分析ＨＰＬＣによれば（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＩＡ、４．６ｘ２５０ｍｍ、５μｍ；移動相：１５％エタノール／８５％ヘキサン；流速：１．０ｍＬ／分）：第１ピーク（Ａ１）保持時間：１１．７９分；第２ピーク（Ａ２）保持時間：１２．７８分。第２画分（Ｂ）は、キラルＨＰＬＣ分離（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＩＡ，２０ｘ２５０ｍｍ、５μｍ；移動相：１５％エタノール／８５％ヘキサン；流速：１５ｍＬ／分）に付して、２つのピーク、Ｂ１およびＢ２を得た（各ピークは、８００ｍｇ、１９．９％）。その後、Ｂ１はＮＯＥによりｃｉｓ異性体であることが示され、Ｂ２は他のエナンチオマーのｔｒａｎｓ異性体であることが示された。キラル分析ＨＰＬＣによれば（カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＩＡ，４．６ｘ２５０ｍｍ，５μｍ；移動相：１５％エタノール／８５％ヘキサン；流速：１．０ｍＬ／分）：第１ピーク（Ｂ１）保持時間：１２．４８分および第２ピーク（Ｂ２）保持時間：１４．１６分。
【０１０５】
工程７．（３Ｒまたは３Ｓ）−３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｔｒａｎｓ）−３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル
スターラーバー、コンデンサーおよび窒素入口を備えている５００ｍＬ丸底フラスコ中に、アセトニトリル（９．６９ｍＬ）、水（０．８４ｍＬ）および３−（（ｔｒａｎｓ）−３−メチルシクロブチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（０．６０ｇ、１．４ｍｏｌ）（前工程におけるキラル分離からのＢ２（すなわち、第２画分のピーク２））を得た。リチウムテトラフルオロボレート（１．３１ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を一晩還流温度に昇温させ、次いで、室温にて５分かけて少しずつ７．２Ｍの水中水酸化アンモニウム（０．７１ｍＬ、５．１ｍｍｏｌ）を加えて、ｐＨを９−１０に調整した。反応物を室温にて２時間撹拌した。固体を濾去し、濾液をＲＰ−ＨＰＬＣ（（ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ３０ｘ１００ｍｍカラム、注入量５ｍＬ（約５０ｍｇ／注入）、０．１５％ＮＨ４ＯＨを含有するアセトニトリル／水の勾配で溶出、流速６０ｍＬ／分）に付して精製し、遊離塩基として所望の生成物を得た。Ｃ１７Ｈ１９Ｎ６（Ｍ＋Ｈ）＋について算出されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝３０７．２；実測値：３０７．４。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．０８（１Ｈ，ｓ），８．７８（１Ｈ，ｓ），８．６８（１Ｈ，ｓ），８．３６（１Ｈ，ｓ），７．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），６．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），４．７８（１Ｈ，ｍ），３．１２（２Ｈ，ｍ），２．８８（１Ｈ，ｍ），２．３０（１Ｈ，ｍ），２．０６（１Ｈ，ｍ），１．８８（１Ｈ，ｍ），１．７４（１Ｈ，ｍ），１．４４（１Ｈ，ｍ），１．０８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）ｐｐｍ。ｅｅ９３．３％。
他のエナンチオマーは、工程６の画分Ａに相当する化合物で出発して同一方法によって調製されうる。
【０１０６】
工程８．（３Ｒまたは３Ｓ）−３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｔｒａｎｓ）−３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル  リン酸塩
（３Ｒまたは３Ｓ）−３−（（ｔｒａｎｓ）−３−メチルシクロブチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（工程７、０．２７５ｇ、０．８９８ｍｍｏｌ）のイソプロピルアルコール（５．８３ｍＬ）中溶液に、６０℃にて１．０ｍＬイソプロパノール中リン酸（９６．８ｍｇ、０．９８７ｍｍｏｌ）を加えた。１時間撹拌した後、混合物を室温に冷却した。沈殿物を濾去し、空気乾燥し、次いで、エチルエーテルでリンスして、さらに空気乾燥して、所望のホスフェート生成物を得た（３３０ｍｇ、９０．９％）。
【０１０７】
実施例３
（３Ｒまたは３Ｓ）−３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｃｉｓ）−３−メチルシクロブチル）−プロパンニトリル  リン酸塩
【化９】
0005858434.tif 000010
工程１．（３Ｒまたは３Ｓ）−３−（（ｃｉｓ）−３−メチルシクロブチル）−３−（４−（７−（（２−（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）プロパンニトリル
スターラーバー、コンデンサーおよび窒素入口を備えている５００ｍＬ丸底フラスコ中に、アセトニトリル（８．１ｍＬ）、水（０．７０ｍＬ）および（３Ｒまたは３Ｓ）−３−（（ｃｉｓ）−３−メチルシクロブチル）−３−［４−（７−｛［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（０．５０ｇ、１．１ｍｍｏｌ）（実施例２、工程６に記載のキラル分離からのＢ１（すなわち、第２画分のピーク１））を加えた。リチウムテトラフルオロボレート（１．１０ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を一晩還流温度に昇温させた。次いで、水酸化アンモニウムの水中溶液（７．２Ｍ、０．５９ｍＬ、４．３ｍｍｏｌ）を、室温にて５分かけて少しずつ該溶液に加えて、ｐＨを９〜１０に調整した。反応物を室温にて２時間撹拌した。固体を濾去し、濾液をＲＰ−ＨＰＬＣ（ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ３０ｘ１００ｍｍカラム、注入量５ｍＬ（約５０ｍｇ／注入）、０．１５％ＮＨ４ＯＨを含有するアセトニトリル／水の勾配で溶出、流速６０ｍＬ／分）に付して精製し、所望の生成物を得た。Ｃ１７Ｈ１９Ｎ６（Ｍ＋Ｈ）＋について算出されたＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝３０７．２；実測値：３０７．４。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．０８（１Ｈ，ｓ），８．７５（１Ｈ，ｓ），８．６８（１Ｈ，ｓ），８．３６（１Ｈ，ｓ），７．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），６．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），４．６６（１Ｈ，ｍ），３．１１（２Ｈ，ｍ），２．６６（１Ｈ，ｍ），２．２０（２Ｈ，ｍ），１．８８（１Ｈ，ｍ），１．４２（２Ｈ，ｍ），０．９７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）ｐｐｍ。ｅｅ９９．８％。
他のエナンチオマーは、実施例２、工程６からの画分Ａに相当する化合物で出発して同一方法によって調製されうる。
【０１０８】
工程２．（３Ｒまたは３Ｓ）−３−（４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル）−３−（（ｃｉｓ）−３−メチルシクロブチル）プロパンニトリル  リン酸塩
（３Ｒまたは３Ｓ）−３−（（ｃｉｓ）−３−メチルシクロブチル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル（工程１、０．２３ｇ、０．７５１ｍｍｏｌ）のイソプロピルアルコール（４．８７ｍＬ）中溶液に、６０℃にて１．０ｍＬイソプロパノール中リン酸（８０．９ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２時間撹拌し、次いで、室温に冷却した。沈殿物を濾去し、空気乾燥し、次いで、エチルエーテルでリンスして、さらに空気乾燥して、所望のホスフェート生成物を得た（３００ｍｇ、９８．８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１２．０８（１Ｈ，ｓ），８．７５（１Ｈ，ｓ），８．６５（１Ｈ，ｓ），８．３４（１Ｈ，ｓ），７．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），６．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），４．６３（１Ｈ，ｍ），３．０９（２Ｈ，ｍ），２．６４（１Ｈ，ｍ），２．１８（２Ｈ，ｍ），１．８６（１Ｈ，ｍ），１．４０（２Ｈ，ｍ），０．９６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）ｐｐｍ。
【０１０９】
実施例Ａ：インビトロＪＡＫキナーゼアッセイ
本発明の化合物は、Ｐａｒｋら，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９９，２６９，９４−１０４に記載された以下のインビトロアッセイにしたがって、ＪＡＫ標的の抑制活性について試験された。Ｎ末端Ｈｉｓタグを有するヒトＪＡＫ１（ａ．ａ．８３７−１１４２）、ＪＡＫ２（ａ．ａ．８２８−１１３２）およびＪＡＫ３（ａ．ａ．７８１−１１２４）の触媒ドメインを、昆虫細胞中でバキュロウイルスを用いて発現して、精製した。ＪＡＫ１、ＪＡＫ２またはＪＡＫ３の触媒活性を、ビオチン化ペプチドのリン酸化を測定することによってアッセイした。リン酸化ペプチドを、均一系時間分解蛍光法（ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ  ｔｉｍｅ  ｒｅｓｏｌｖｅｄ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）（ＨＴＲＦ）によって検出した。化合物のＩＣ５０は、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＤＴＴ、および０．１ｍｇ／ｍＬ（０．０１％）ＢＳＡを有する５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．８）バッファー中に酵素、ＡＴＰおよび５００ｎＭペプチドを含有する反応物中の各キナーゼを測定した。反応物中のＡＴＰ濃度は、ＪＡＫ１については９０μＭ、ＪＡＫ２については３０μＭおよびＪＡＫ３については３μＭであった。室温にて１時間反応を実施し、次いで、２０μＬのアッセイバッファー中４５ｍＭ  ＥＤＴＡ、３００ｎＭ  ＳＡ−ＡＰＣ、６ｎＭ  Ｅｕ−Ｐｙ２０で停止した（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）。ユーロピウム標識抗体に対する結合が４０分間生じ、ＨＴＲＦシグナルをＦｕｓｉｏｎプレートリーダー上で測定した（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）。実施例１、２および３の化合物は、ＪＡＫ１については２ｎＭ未満およびＪＡＫ２については１ｎＭ未満のＩＣ５０値を有することが見出された。
【０１１０】
実施例Ｂ：細胞アッセイ
１種またはそれ以上の本発明の化合物は、以下の細胞アッセイの少なくとも１つにしたがって、ＪＡＫ標的の抑制活性について試験された。
【０１１１】
増殖のために、サイトカイン、つまり、ＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達に依存する癌細胞株を、ＲＰＭＩ  １６４０、１０％ＦＢＳ、および１ｎＧ／ｍＬの適当なサイトカイン中で６０００細胞／ウェル（９６ウェルプレート型）にて播種した。化合物を、ＤＭＳＯ／培地（最終濃度０．２％ＤＭＳＯ）中細胞に加え、３７℃、５％ＣＯ２にて７２時間インキュベートした。細胞生存における化合物の効果を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、次いで、ＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）定量法を用いて評価した。化合物の潜在的な非特異的効果を、同一のアッセイ計測値を有する非ＪＡＫ誘導細胞株を用いて並行して測定した。すべての実験を繰り返し行った。
【０１１２】
上記の細胞株はまた、ＪＡＫキナーゼまたは潜在的な下流基質、例えば、ＳＴＡＴタンパク質、Ａｋｔ、Ｓｈｐ２、またはＥｒｋのリン酸化における化合物の効果を測定するために用いられうる。これらの実験は、一晩のサイトカイン欠乏、次いで、短時間の化合物との前培養（２時間以下）および約１時間以下のサイトカイン刺激にしたがって行われうる。次いで、タンパク質を細胞から抽出し、リン酸化タンパク質と全タンパク質を区別しうる抗体を用いてウエスタンブロット法またはＥＬＩＳＡを含む当業者に周知の技法によって分析する。これらの実験は、腫瘍細胞生存生態または炎症性疾患のモジュレーターにおける化合物の活性を調査するために正常細胞または癌細胞を利用しうる。例えば、後者に関しては、サイトカイン、例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−２３、またはＩＦＮが、ＳＴＡＴタンパク質（複数でも可）のリン酸化および潜在的に転写プロフィール（配列またはｑＰＣＲ技術によって評価された）またはタンパク質、例えば、ＩＬ−１７の産生および／または分泌をもたらすＪＡＫ活性を刺激するために用いられうる。これらのサイトカイン媒介効果を抑制するための化合物の能力は、当業者に周知の技法を用いて測定されうる。
【０１１３】
本発明の化合物はまた、変種ＪＡＫ、例えば、骨髄増殖性疾患において見出されるＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ変種に対するそれらの効力および活性を評価するために設計された細胞モデルにおいて試験されうる。これらの実験は、大抵、野生型または変種ＪＡＫキナーゼが異所的に発現される、血液学的系統のサイトカイン依存性細胞（例えば、ＢａＦ／３）を利用する（Ｊａｍｅｓ，Ｃ．ら．Ｎａｔｕｒｅ  ４３４：１１４４−１１４８；Ｓｔａｅｒｋ，Ｊ．ら．ＪＢＣ  ２８０：４１８９３−４１８９９）。エンドポイントには、細胞生存、増殖、およびリン酸化ＪＡＫ、ＳＴＡＴ、Ａｋｔ、またはＥｒｋタンパク質における化合物の効果が含まれる。
【０１１４】
本発明のある化合物は、Ｔ細胞増殖を抑制するそれらの活性について評価されているかまたは評価されうる。第二サイトカイン（すなわち、ＪＡＫ）誘導増殖アッセイなどのアッセイが検討され、また、免疫抑制または免疫活性の抑制の単純アッセイも検討されうる。以下は、かかる実験がどのように行われうるかについての概要である。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、Ｆｉｃｏｌｌ  Ｈｙｐａｑｕｅ分離法およびを用いてヒト全血サンプルから調製され、Ｔ細胞（画分２０００）は、水簸によってＰＢＭＣから得られうる。新しく単離されたヒトＴ細胞は、最大２日間３７℃で２ｘ１０６細胞／ｍｌの密度にて培地（１０％ウシ胎仔血清、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンが追加されたＲＰＭＩ  １６４０）中で保持されうる。ＩＬ−２刺激細胞増殖分析について、Ｔ細胞を、最初に７２時間１０μｇ／ｍＬの最終濃度でフィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）にて処置する。ＰＢＳで１回洗浄した後、９６ウェルプレート中で６０００細胞／ウェルにて播種し、１００Ｕ／ｍＬヒトＩＬ−２（ＰｒｏＳｐｅｃ−Ｔａｎｙ  ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ；Ｒｅｈｏｖｏｔ，Ｉｓｒａｅｌ）の存在下において培地中で異なる濃度にて化合物で処置する。プレートを７２時間３７℃にてインキュベートし、増殖指数を製造推奨プロトコルにしたがってＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ試薬を用いて評価する（Ｐｒｏｍｅｇａ；Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）。
【０１１５】
実施例Ｃ：インビボ抗腫瘍効果
本発明の化合物は、免疫不全マウスにおけるヒト腫瘍異種移植モデルにおいて評価されうる。例えば、ＩＮＡ−６形質細胞腫細胞株の腫瘍形成変異体は、ＳＣＩＤマウスに皮下接種するために用いられうる（Ｂｕｒｇｅｒ，Ｒ．ら．Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｊ．２：４２−５３，２００１）。次いで、担癌動物は、薬物処置群またはビヒクル処置群に無作為に分類され得、化合物の異なる用量は、経口、腹腔内、または埋め込み型ポンプを用いる持続注入を含む種々の通常の経路によって投与されうる。キャリバーを用いて徐々に腫瘍成長が起こる。さらに、腫瘍サンプルは、ＪＡＫ活性および下流シグナル経路における化合物効果を評価するために上記（実施例Ｂ）の分析のための処置の開始後いつでも採取されうる。さらに、化合物（群）の選択性は、他の既知のキナーゼ（例えば、Ｂｃｒ−Ａｂｌ）によって誘導される異種移植腫瘍モデル、例えば、Ｋ５６２腫瘍モデルを用いて評価されうる。
【０１１６】
実施例Ｄ：マウス皮膚接触遅延型過敏反応試験
本発明の化合物はまた、Ｔ細胞誘導性マウス遅延型過敏症試験モデルにおいて（ＪＡＫ標的の阻害の）それらの効果について試験されうる。マウス皮膚接触遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応は、臨床接触性皮膚炎、および他の皮膚のＴリンパ球媒介免疫疾患、例えば、乾癬の有効なモデルであると考えられている（Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ．１９９８  Ｊａｎ；１９（１）：３７−４４）。マウスＤＴＨは、免疫浸潤、炎症サイトカインの付随増加、およびケラチン生成細胞過剰増殖を含む、多数の特性を乾癬と共有する。さらに、外来において乾癬を処置するのに効果的である多種類の物質はまた、マウスにおけるＤＴＨ反応の有効な阻害剤である（Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ．１９９３  Ｊａｎ；３８（１−２）：１１６−２１）。
【０１１７】
０日目および１日目に、Ｂａｌｂ／ｃマウスを、抗原２，４，ジニトロ−フルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）をそれらの切り落とされた腹部に局所適用して過敏にする。５日目に、技術者のマイクロメータを用いて耳の厚さを測定する。該測定値を記録し、基準として用いる。次いで、０．２％の濃度で総量２０μＬ（内耳介に対し１０μＬおよび外耳介１０μＬ）のＤＮＦＢの局所適用によって動物の両耳に投与する。投与の２４時間〜７２時間後に、耳を再度測定する。試験化合物での処置は、感作および投与期（−１日目〜７日目）にわたって行われたかまたは投与期前および投与期（通常、４日目の午後〜７日目）にわたって行われた。試験化合物の処置（異なる濃度における）は、全身または局所（耳への処置の局所適用）のいずれかで投与された。試験化合物の効果は、処置していない場合に比べて耳の腫れの軽減によって示される。２０％以上の軽減をもたらす化合物は有効と考えられた。いくつかの実験において、マウスは投与されているが、過敏ではない（負対照）。
【０１１８】
試験化合物の抑制効果（ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路の活性化の抑制）は、免疫組織学的分析によって確認されうる。ＪＡＫ−ＳＴＡＴ経路（複数）の活性化は、機能的転写因子の形成および転位をもたらす。さらに、免疫細胞の流入およびケラチン生成細胞過剰増殖はまた、調査および定量化されうる耳の特異的発現プロフィール変化を提供するであろう。ホルマリン固定およびパラフィン包埋された耳の一部（ＤＴＨモデルにおける投与期後に採取）は、リン酸化ＳＴＡＴ３（クローン５８Ｅ１２，Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と特異的に相互作用する抗体を用いて免疫組織化学分析に付される。マウスの耳は、比較のためにＤＴＨモデルにおいて、試験化合物、ビヒクル、またはデキサメタゾン（乾癬の臨床的に有効な処置）で処置されるか、あるいは何ら処置が行われない。試験化合物およびデキサメタゾンは、質的および量的に同様の転写変化をもたらすことができ、試験化合物およびデキサメタゾンの両方とも、湿潤細胞の数を減少させることができる。試験化合物の全身および局所投与の両方とも、抑制効果、すなわち、湿潤細胞の数の減少および転写変化の阻害をもたらしうる。
【０１１９】
実施例Ｅ：インビボ抗炎症活性
本発明の化合物は、単一または複数の炎症反応を再現するために設計された齧歯類モデルまたは非齧歯類モデルにおいて評価されうる。例えば、関節炎の齧歯類モデルは、予防的にまたは治療的に投与された化合物の治療可能性を評価するために用いられうる。これらのモデルには、限定されるものではないが、マウスまたはラットコラーゲン誘導性関節炎、ラットアジュバント誘導性関節炎、およびコラーゲン抗体誘導性関節炎が含まれる。限定されるものではないが、多発性硬化症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜網膜炎、甲状腺炎、重症筋無力症、免疫グロブリン腎症、心筋炎、気道感作（喘息）、紅斑性狼瘡、または大腸炎を含無事故免疫疾患はまた、本発明の化合物の治療可能性を評価するために用いられうる。これらのモデルは、研究団体において確立されており、当業者によく知られている（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ  ３．，Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｊ．Ｅ．ら，Ｗｉｌｅｙ  Ｐｒｅｓｓ．；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｖｏｌ．２２５，Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．，Ｗｉｎｙａｒｄ，Ｐ．Ｇ．ａｎｄ  Ｗｉｌｌｏｕｇｈｂｙ，Ｄ．Ａ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，２００３．）。
【０１２０】
実施例Ｆ：ドライアイ、ブドウ膜炎、および結膜炎の処置のための動物モデル
化合物は、限定されるものではないが、ウサギコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）涙腺モデル、スコポラミンマウスモデル（皮下または経皮）、ボツリヌスマウス涙腺モデル、または眼の腺機能不全をもたらす多数の自発齧歯類自己免疫モデルのいずれか（例えば、ＮＯＤ−ＳＣＩＤ、ＭＲＬ／ｌｐｒ、またはＮＺＢ／ＮＺＷ）を含む、１つまたはそれ以上の当業者に周知のドライアイの前臨床モデルにおいて評価されうる（Ｂａｒａｂｉｎｏら，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００４，７９，６１３−６２１およびＳｃｈｒａｄｅｒら，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，Ｋａｒｇｅｒ  ２００８，４１，２９８−３１２、その各々はその全体が出典明示により本明細書の一部となる）。これらのモデルのエンドポイントには、眼の腺および眼（角膜など）の組織病理および場合によっては、涙液産生を測定する一般的なシルマー試験またはその改良バージョン（Ｂａｒａｂｉｎｏら）が含まれる。活性は、測定可能な疾患が存在する前または後に開始しうる複数の投与経路（例えば、全身または局所）を介する投与によって評価されうる。
【０１２１】
化合物は、当業者に周知の１つまたはそれ以上のブドウ膜炎の前臨床モデルにおいて評価されうる。これらには、限定されるものではないが、実験的自己免疫ブドウ膜炎（ＥＡＵ）おおびエンドトキシン誘導性ブドウ膜炎（ＥＩＵ）が含まれる。ＥＡＵ実験は、ウサギ、ラット、またはマウスにおいて実施されてもよく、受動または能動免疫に関与しうる。例えば、多数のレチナール抗原のいずれかは、動物に同一抗原が眼に投与された後に関連の免疫原に対し動物を過敏にするために用いられうる。ＥＩＵモデルは、より急性であり、致死未満量でリポ多糖類の局所または全身投与に寄与する。ＥＩＵおよびＥＡＵの両モデルのエンドポイントには、眼底検査、とりわけ組織病理学が含まれうる。これらのモデルは、Ｓｍｉｔｈらによって確認されている（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １９９８，７６，４９７−５１２、その全体が出典明示により本明細書の一部となる）。活性は、測定可能な疾患が存在する前または後に開始しうる複数の投与経路（例えば、全身または局所）を介する投与によって評価されうる。上記のいくつかのモデルはまた、強膜炎／上強膜炎、脈絡膜炎、毛様体炎、または虹彩炎を発症しうるため、これらの疾患の治療的処置のための化合物の潜在的活性を調査するのに有用である。
【０１２２】
化合物はまた、当業者に周知の１つ又はそれ以上の結膜炎の前臨床モデルにおいて評価されうる。これらには、限定されるものではないが、モルモット、ラットまたはマウスを利用する齧歯類モデルが含まれる。モルモットモデルには、能動または受動免疫を利用するものおよび／または抗原、例えば、オボアルブミンまたはブタクサでの免疫攻撃プロトコルが含まれる（Ｇｒｏｎｅｂｅｒｇ，Ｄ．Ａ．ら，Ａｌｌｅｒｇｙ  ２００３，５８，１１０１−１１１３において確認、その全体は出典明示により本明細書の一部となる）。ラットおよびマウスモデルは、モルモットにおけるものと同様の一般的な設計である（Ｇｒｏｎｅｂｅｒｇによっても確認）。活性は、測定可能な疾患が存在する前または後に開始しうる複数の投与経路（例えば、全身または局所）を介する投与によって評価されうる。かかる研究のエンドポイントには、例えば、眼組織、例えば、結膜の組織学的、免疫学的、生物学的、または分子分析が含まれうる。
【０１２３】
本明細書に記載のものに加えて、本発明の種々の修飾は、明細書から当業者に明らかになるであろう。本願に引用される各参考資料は、その全体が出典明示により本明細書の一部となる。