(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
表面微生物を試料採取及び検出するための物品において、前記物品は、
親水性の作用剤がない上方及び下方主表面を有する水不透過性基材を含む試料回収具であって、
前記基材の下方主表面は接合された多孔質材料を含む、試料回収具と、
前記試料回収具に取り付けられた試薬ストリップであって、
前記試薬ストリップは、上方及び下方主表面を有する自立型基材を含み、
上方主表面の少なくとも一部分は、冷水に可溶なゲル化剤と、微生物を増殖させるための栄養素と、選択的作用剤、バッファ、指示薬、及び上記の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される親水性の作用剤と、でコーティングされている、試薬ストリップと、
を含み、
前記接合された材料が前記試薬ストリップに面しているように、前記試薬ストリップは、前記試料回収具に取り付けられている、物品。
【請求項２】
前記試料回収具が、前記試薬ストリップに着脱可能に取り付けられる、請求項１に記載の物品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、米国特許出願第６０／９８９，３５６号（２００７年１１月２０日出願）の利益を請求するものであり、この開示内容全体が本明細書に参照により組み込まれている。
【背景技術】
【０００２】
表面が、細菌、真菌、酵母、ウイルス又は他の微小な生物、すなわち、「微生物」、で汚染されてしまうと、病気（罹患）、時には死（死亡）に至ることがある。これは特に、食品加工工場及び保健医療施設（病院）における表面が微生物で汚染されてしまうときに当てはまる。
【０００３】
食品加工工場では、表面（例えば、固体表面、装置表面、保護衣など）が汚染されることがある。このような汚染は、肉若しくは他の食品により生じることがあり、又はこれらに移されることがある。保健医療施設では、微生物は、感染した個人から、ないしは別の方法で、表面（例えば、固体表面、装置表面、衣類など）上に放出されることがある。いったん表面が微生物で汚染されるようになると、汚染された表面との接触により、微生物は、別の表面、個人、装置、食品又はこれらに類するものなどの他の場所に容易にかつ直ちに移動することがある。
【０００４】
周知のように、特定の環境における微生物汚染及び微生物の移動は、有意な健康上の危険を呈することがある。例えば、汚染された食品加工工場から出た食品は、引き続いて食され、病気、及び場合によっては死亡を引き起こすことがある。リステリア・モノサイトゲネス、サルモネラ・エンテリディティス及び大腸菌Ｏ１５７：Ｈ７などの微生物には、特に関心が向けられている。
【０００５】
微生物汚染は、保健医療施設において関心が向けられているが、それはこのような施設の一部の患者が、多くの場合、病原性微生物による感染症に苦しみ、それゆえに病原性微生物をこのような施設に持ち込むからである。更に、このような施設にいるもの（例えば、患者）の多くは病気であり、免疫学的に危険にさらされ得る。これらの個人は、それゆえに、汚染性微生物による感染から病気になる危険が高い。
【０００６】
微生物汚染の潜在的危険、特に、微生物が特定の環境において移動させられ得る容易さ、及び特定の環境の汚染に伴う健康被害の点で、このような汚染を検出して即時に対処できるように、種々の技術が開発及び採用されてきている。
【０００７】
従来、環境微生物試験は、表面から試料を獲得する工程を含む。これは、典型的には、スワブ又はスポンジなどの滅菌試料採取器具と表面を接触させる（例えば、拭く、拭い取るなど）ことにより行われる。この方法で試験される表面は、通常、きわめて清浄である。それゆえに、試料採取器具により捕捉される微生物の数は典型的には非常に少ない。微生物の数が少ないことにより、典型的には（例えば、試料採取器具に捕捉されて）試料採取器具上にいる任意の微生物が、更なる分析のための十分な数の生物を準備するために、再生産、すなわち、「増殖」又は「培養」され得る。したがって、試料の少なくとも一部は、次に、典型的には中和され、所望により、安定化され、修復され又は集積され、次に、対象の微生物が増殖するのを助ける栄養素を含む適切な増殖培地（例えば、寒天（ゼラチン又はゼラチン状物質）、ブロス（液体）など）に適用（例えば、移植、スワイプ、浸漬及び撹拌など）される。増殖培地は選択的であってもよく、すなわち、増殖培地は、一部の微生物が他の微生物よりも大きな速度で増殖するようにする成分を含むか、又は増殖培地は少なくとも一部の所望されない微生物の増殖を防止する成分を含み得る。増殖培地は、所定の期間、典型的には約２４〜約４８時間にわたって、若しくは微生物の増殖が視覚的に顕著になるまで、特定の温度で、インキュベート又は保持される。
【０００８】
いったん試料が、増殖するために十分な機会を有したならば、次に、増殖した細菌の量（例えば、寒天プレート上のコロニーの数）を評価（例えば、個人により、又は自動化装置を用いて）して、試料を取る時点−通常は１日又は２日前−において表面の特定の面積上に存在した微生物の数及び種類に関する何らかの指標を提供することができる。免疫学的又は他の試験もまた、試料中に存在した任意の対象微生物が何であるかを判定又は確認するために実行され得る。
【０００９】
例えば、細菌のうちサルモネラ種について試験するとき、サルモネラ種を潜在的に含む試料が、選択的増殖培地に適用され得る。次に、選択的増殖培地は、約２４〜約４８時間の期間にわたって、サルモネラ微生物の増殖が可視になるまで、インキュベートされ得る。いったんサルモネラコロニーが選択的増殖培地上に可視的に存在したならば、コロニーを評価して、これらが何であるか確認し、所望により、数えて、試験されている表面の特定の面積上に存在するサルモネラ微生物の数を概算することができる。代わりに又は追加的に、培養した微生物をイムノアッセイ又は核酸アッセイにかけて、これらが何であるかより直接的に確認してもよい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
環境生物に対してより簡潔で迅速、正確な試験が必要とされている。本発明は、このような試験のための器具及び方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
１つの態様では、本発明は、表面の微生物を試料採取及び検出するための物品を含む。この物品は、親水性の作用剤が実質的にない試料回収具と、それに取り付けられた試薬ストリップと、を含むことができる。この試料回収具は、上方及び下方主表面を有する基材を含むことができ、少なくとも１つの主表面は水不透過性であり、少なくとも１つの主表面は多孔質材料を含む。試薬ストリップは、上方及び下方主表面を有する自立型基材を含むことができ、１つの主表面の少なくとも一部分は、冷水に可溶なゲル化剤と、微生物を増殖させるための栄養素、選択的作用剤、バッファ、指示薬、及び上記の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される親水性の作用剤と、でコーティングされている。所望により、この物品は、バリア層を更に含んでもよい。
【００１２】
別の態様では、本発明は、微生物を検出又は計数するための物品を含む。この物品は、底部材と、それに取り付けられたカバーシートと、を含むことができる。底部材は、上方及び下方主表面を有する自立型水不透過性基材を含むことができ、上方主表面は取り付け構造を含む。カバーシートは、上方及び下方主表面を含むことができ、カバーシートの下方主表面の少なくとも一部分は、少なくとも１つのゲル化剤を含む、冷水に可溶な粉末でコーティングされている。底部材の上方主表面は、カバーシートの下方主表面に面する。
【００１３】
別の態様では、本発明は、環境表面試料を回収するための試料回収具を含む。試料回収具は、上方及び下方主表面を有する基材を含むことができ、少なくとも１つの主表面は水不透過性であり、少なくとも１つの主表面は多孔質材料を含み、試料回収具は、親水性の作用剤が実質的にない。
【００１４】
別の態様では、本発明は、底部材、スペーサ、カバーシート及び耐水性バリア層を含む試料ハウジングを含む。底部材は、上方及び下方主表面を有する自立型水不透過性基材を含むことができる。スペーサは、開口を含むことができ、底部材の上方表面に接着される。カバーシートは、上方及び下方主表面を有する基材を含むことができ、１つの主表面の少なくとも一部分は、少なくとも１つのゲル化剤を含む冷水に可溶な粉末でコーティングされている。耐水性バリア層は、カバーシートとスペーサとの間に配置され、これにより、カバーシートのコーティングされた表面は、バリア層に面する。
【００１５】
別の態様では、本発明は、微生物の検出のための試薬ストリップを含む。試薬ストリップは、上方及び下方主表面と、両方の主表面の少なくとも一部上の乾燥コーティングと、を有する自立型基材を含む。コーティングは、微生物を増殖させるための栄養素と指示薬とを含む親水性の作用剤、及び冷水に可溶なゲル化剤を含むことができる。
【００１６】
別の態様では、本発明は、表面の微生物を試料採取及び検出するためのキットを含む。このキットは、試料回収具及び試薬ストリップを含むことができる。試料回収具は、親水性の作用剤が実質的になく、上方及び下方主表面を有する水不透過性基材を含むことができ、少なくとも１つの主表面は多孔質材料を含む。試薬ストリップは、上方及び下方主表面を有する自立型基材を含むことができ、１つの主表面の少なくとも一部分は、冷水に可溶なゲル化剤と、微生物を増殖させるための栄養素、選択的作用剤、バッファ、指示薬、及び上記の任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される親水性の作用剤と、でコーティングされている。
【００１７】
別の態様では、本発明は、微生物を試料採取及び計数するためのキットを含む。このキットは、試料回収具、試料ハウジング、及び所望により試薬ストリップを含むことができる。この試料回収具は、上方及び下方主表面を有する基材を含むことができ、少なくとも１つの主表面は水不透過性である。試料ハウジングは、底部材及びカバーシートを含むことができる。底部材は、上方及び下方主表面を有する自立型水不透過性基材を含むことができる。カバーシートは、上方及び下方主表面を有する基材を含むことができ、１つの主表面の少なくとも一部分は、少なくとも１つのゲル化剤を含む冷水に可溶な粉末でコーティングされている。
【００１８】
別の態様では、本発明は、微生物を試料採取及び計数するためのキットを含む。このキットは、試料回収具、カバーシート及び底部材を含むことができる。この試料回収具は、上方及び下方主表面を有する基材から本質的になり、少なくとも１つの主表面は水不透過性である。カバーシートは、上方表面及び下方主表面を有する基材を含むことができ、１つの主表面の少なくとも一部分は、少なくとも１つのゲル化剤を含む冷水に可溶な粉末でコーティングされている。底部材は、上方及び下方表面を有する自立型水不透過性基材、並びに取り付け構造を含むことができる。
【００１９】
別の態様では、本発明は、環境表面上の微生物を検出するための方法を含む。この方法は、液体試料懸濁培地、試料回収具、試料ハウジング及び試薬ストリップを提供する工程を含むことができる。この試料回収具は、上方及び下方主表面を有する基材を含むことができ、少なくとも１つの主表面は水不透過性である。試料ハウジングは、底部材と、上方及び下方主表面を有する基材を含むカバーシートと、を含むことができ、カバーシートの１つの主表面の少なくとも一部分は、少なくとも１つのゲル化剤を含む冷水に可溶な粉末でコーティングされている。試薬ストリップは、上方及び下方主表面を有する自立型基材を含むことができ、１つの主表面の少なくとも一部分は、冷水に可溶なゲル化剤と、微生物を増殖させるための栄養素、選択的作用剤、バッファ、指示薬、及び上記の任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される親水性の作用剤と、でコーティングされている。この方法は、試料回収具の少なくとも１つの主表面上に試料を獲得する工程、試料を含む少なくとも１つの主表面をカバーシートに向けて試料ハウジングの中に試料回収具を配置することにより組立体を形成する工程、試料を含む試料回収具主表面に試料懸濁培地を適用する工程、水和ゲルを形成するために試料懸濁培地にカバーシートの下方表面を接触させる工程、試薬ストリップのコーティングされた表面を水和ゲルに接触させて配置する工程、ある期間にわたって組立体をインキュベートする工程、及び微生物増殖の指示薬を観察する工程を更に含むことができる。
【００２０】
別の態様では、本発明は、環境表面上の微生物を検出するための方法を含む。この方法は、バリア層、試料懸濁培地、試料回収具、試料ハウジング及び試薬ストリップを提供する工程を含むことができる。この試料回収具は、上方及び下方主表面を有する基材を含むことができ、少なくとも１つの主表面は水不透過性である。試料ハウジングは、上方及び下方主表面を有する自立型水不透過性基材を含む底部材と、上方及び下方主表面を有する基材を含むカバーシートと、を含むことができ、１つの主表面の少なくとも一部分は、少なくとも１つのゲル化剤を含む冷水に可溶な粉末でコーティングされている。この方法は、試料回収具の少なくとも１つの主表面上に試料を獲得する工程、試料を含む少なくとも１つの主表面をカバーシートに向けて、試料ハウジングの中に試料回収具を配置することにより組立体を形成する工程、試料を含む試料回収具主表面に試料懸濁培地を適用する工程、ある期間にわたって試料ハウジングをインキュベートする工程、試料ハウジングから少なくとも一部のバリア層を取り外す工程、水和ゲルを形成するために試料懸濁培地にカバーシートの下方表面を接触させる工程、試薬ストリップのコーティングされた表面を水和ゲルに接触させて配置する工程、ある期間にわたって組立体をインキュベートする工程、及び微生物増殖の指示薬を観察する工程を更に含むことができる。
【００２１】
別の態様では、本発明は、環境試料中のリステリア種を検出する方法を提供する。この方法は、表面を有する試料回収具、試料懸濁培地及び試薬ストリップを提供する工程、試料回収具の表面上に試料を獲得する工程、試料又は試薬ストリップを水和する工程、並びに試薬ストリップと試料とを接触させる工程を含むことができる。試薬ストリップは、微生物を増殖させるための栄養素及び指示薬を含む親水性の作用剤と、冷水に可溶なゲル化剤と、を含むことができる乾燥コーティングを含む。
【００２２】
別の態様では、本発明は、環境試料中のリステリア種を検出する方法を提供する。この方法は、表面を有する試料回収具、試料懸濁培地、試料ハウジング及び試薬ストリップを提供する工程、試料回収具の表面上に試料を獲得する工程、試料ハウジングの中に試料回収具を配置する工程、試料又は試薬ストリップを水和する工程、並びに試薬ストリップと試料とを接触させる工程を含むことができる。試薬ストリップは、微生物を増殖させるための栄養素及び指示薬を含む親水性の作用剤と、冷水に可溶なゲル化剤と、を含むことができる乾燥コーティングを含む。
【００２３】
用語「好ましい」及び「好ましくは」は、特定の状況下で、特定の利点をもたらし得る本発明の実施形態を指す。しかしながら、同じ又は他の状況下において、他の実施形態もまた好ましい可能性がある。更に、１つ以上の好ましい実施形態の詳細説明は、他の実施形態が有用でないことを示すものではなく、本発明の範囲内から他の実施形態を排除することを意図するものではない。
【００２４】
用語「含む」及びこの変形は、これらの用語が明細書及び特許請求の範囲中に現れる場合、制限する意味を有しない。
【００２５】
本明細書で使用するとき、「１つの（a）」、「１つの（an）」、「その（the）」、「少なくとも１つの」及び「１つ以上の」は、同じ意味で使用される。それゆえに、例えば、「１つの（a）」バリア層を含む試料ハウジングは、試料ハウジングが「１つ以上の」バリア層を含むことができることを意味すると解釈することができる。
【００２６】
用語「及び／又は」は、列記されている要素の１つ若しくは全て、又は列記されている要素の２つ以上の組み合わせを意味する。
【００２７】
また本明細書において、端点による数の範囲の列挙には、その範囲内に包含される全ての数（例えば、１〜５には、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５等）が包含される。
【００２８】
本発明の上記の「課題を解決するための手段」は、本発明が開示する各実施形態又は全ての実施例を説明することを意図したものではない。以下の説明により、例示的な実施形態をより具体的に例示する。本明細書にわたっていくつかの箇所で、実施例の一覧を通してガイダンスを提供するが、実施例は様々な組み合わせにおいて使用できる。それぞれの事例において、列挙された一覧は、代表的な群としてのみ役目を果たすのであって、排他的な一覧として解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
本発明は、以下に列挙される図面を参照して更に説明され、類似構造は、いくつかの図にわたって、類似番号によって参照される。
【図１】本発明による試料回収具の例示的な実施形態の斜視図。
【図２Ａ】本発明による非平滑な試料回収具の例示的な実施形態の上面斜視図。
【図２Ｂ】本発明による多孔質材料を含む試料回収具の例示的な実施形態の斜視図。
【図３Ａ】本発明によるスペーサを含む試料ハウジングの例示的な実施形態の断面概略図。
【図３Ｂ】図３Ａの試料ハウジングの平面図。
【図４】微生物の試料回収及び計数のための物品の１つの実施形態の断面概略図。
【図５】本発明による試薬ストリップの１つの実施形態の斜視概略図。
【図６】微生物の試料回収及び計数のための物品の代替的な実施形態の断面概略図。
【図７】微生物の試料回収及び計数のための物品の代替的な実施形態の断面概略図。
【図８】微生物の試料回収及び計数のための物品の代替的な実施形態の断面概略図。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本開示は、表面を試料採取する、試料を一時的に保存する、並びに試料中に存在する微生物を増殖させ、検出するための物品及び方法を提供する。下記に詳細に説明するように、本発明の器具は、試料回収具、試料ハウジング、試薬ストリップ、バリア層の個々の要素、上記要素の２つ以上の組み合わせ、及びこのような器具の使用方法を包含する。本開示はまた、表面を表面採取する、及び微生物を検出するためのキット、並びにこのようなキットの使用方法を包含する。いくつかの従来の表面微生物試料採取手順は、集積培養手順を伴い、その後、集積培養物の一部は、生化学的、免疫学的又は遺伝学的試験手順を使用して標的微生物について試験される。他の従来の表面微生物試料採取手順は、湿らせたスポンジ又はスワブを使用して、表面を拭く。スポンジは、引き続いて、中和バッファで抽出され、スポンジ又はスワブから抽出できる標的微生物の部分は、標的微生物の存在について試験される。対照的に、本開示の器具及び方法は、元々の試料回収具全体を試験するための手段を提供し、これにより、表面上の非常に少数の微生物の存在を検出するより強い傾向を有する。更に、本開示の器具及び方法は、表面試料中の生物を検出するための従来の方法よりも簡便である。
【００３１】
本開示の器具は、標準的な寒天プレート法及び他の微生物試験に基づく先行技術の器具及び手法に比べ、著しい向上を提供する。本発明の器具上でコーティングされた培地は、細菌コロニーを可視化及び単離できるその能力に逆効果をもたらすマトリックスを含有しない。この方法及び器具により提供される培地が、器具中で増殖する細菌コロニーの計数を可能にするだけではなく、このコロニーは、ペトリ皿内における従来の寒天培地上で増殖する細菌コロニーと同様に更なる試験のために容易に単離することができる。この器具は、ペトリ皿よりもはるかにコンパクトで軽量であるという更なる特徴を有し、実験室内のスペースをあまり取らない。更に、この器具は、完全に使い捨てであり、使用後のより安全かつより迅速な清浄化を可能にする。
【００３２】
試料回収具
図１は、環境表面又は患者表面を試料採取するための比較的平滑な基材１１２を有する試料回収具１１０の１つの実施形態を示す。基材１１２は、上方主表面１１４及び下方主表面１１６を有する。基材１１２の主表面の少なくとも１つは、水不透過性であり、並びに／又は、水不透過性コーティングを含んでもよい。いくつかの実施形態では、試料回収具１１０は、比較的可撓性であり、不均一表面にぴったり一致し、そのまま接触を維持することができる。試料回収具１１０の主表面の少なくとも１つは、試料領域と接触させられると、試料領域から試料回収具１１０への、液体、固体、準固体、又はこれらの組み合わせなどの物質の移動をもたらす。試料回収具１１０は、分析されるべき食品接触表面又は表在性創傷などの試料領域から物質を回収するために、使用されてもよい。
【００３３】
試料回収具１１０の基材１１２は、様々な材料から作製され得る。好適な材料の非限定的な例には、ポリエチレン、ポリプロピレン若しくはポリエステルなどのプラスチックフィルム、少なくとも１つの主表面を水不透過性にするコーティング若しくは組成物を含む、紙若しくは厚紙などのセルロース系材料、ポリエチレン若しくはポリスチレン発泡体などの発泡体、又は、水不透過性である少なくとも１つの主表面を有する布地が挙げられる。
【００３４】
いくつかの実施形態では、試料回収具１１０の少なくとも１つの主表面は、非平滑化されている。本明細書で使用するとき、用語「非平滑化」は、試料物質を回収するために使用される表面の特性を指す。例えば、試料回収具１１０の主表面の質感は、図１に示されるように、比較的平滑であってもよい。あるいは、試料回収具１１０の主表面の質感は、比較的粗くてもよい。図２Ａは、比較的粗い質感を有する主表面２１４を含む試料回収具２１０の１つの実施形態を示す。この実施形態では、基材２１２は、凸構造２１８及び凹構造２２０の組み合わせを含み得る。あるいは、基材２１２は、凸構造２１８又は凹構造２２０を含み得る。凸構造２１８は、様々なサイズで存在してもよく、瘤、釘、隆起線及びこれらに類するもの、又はこれらの組み合わせなどの様々な形状で存在してもよい。凸構造２１８は、基材２１２の表面にわたってランダムに配分されてもよく、又は別の方法として、均一に間隔をあけてもよい。凹構造２２０は、様々な寸法で存在してもよく、穴、窩、谷、トラフ、溝及びこれらに類するもの、又はこれらの組み合わせなどの様々な形状で存在してもよい。凸構造２１８又は凹構造２２０は、試料回収具２１０を作る基材２１２の材料の一体部分であってもよい。あるいは、これらの構造は、基材２１２に接合されてもよい。理論に束縛されるものではないが、凸構造２１８又は凹構造２２０のいずれかを含む試料回収具２１０は、試料物質を捕捉すること並びに／又は試料採取される表面から物質を擦過及び回収することができる構造を提供することにより、環境表面又は患者表面から試料物質を回収することにおいて利点を提供できると考えられている。試料を回収している間に試料回収具２１０を保持するために便利な領域を提供する所望によるタブ２２８もまた図２Ａに示されている。
【００３５】
図２Ｂは、代替的な非平滑化構造を有する試料回収具２１０を示す。試料回収具２１０は、接着層２２２により基材２１２の主表面に接着された、不織布などの接合された材料２２４を含むことができる。接着層２２２は、非水溶性であってもよく、微生物の増殖に対して非阻害性であるべきであり、無菌化プロセスに耐えることができるべきである。好ましくは、接着層２２２及び接合された材料２２４は、接着層２２２でコーティングされた基材２１２を通して細菌コロニーを見ることができるように、濡れたときに十分に透明である。いくつかの実施形態では、接着層２２２は感圧性接着剤を含む。基材２１２に接着された、接合された材料２２４の代表的な実施形態には、粘着付与高感圧性イソオクチルアクリレート／アクリル酸コポリマー接着剤（９６重量％のイソオクチルアクリレート及び４重量％のアクリル酸）などの感圧性接着層２２２により、白色ポリエステル（厚さ０．１３ｍｍ（５ｍｉｌ））などのプラスチック基材２１２に接着された、Ｇｅｈｒｉｎｇ  Ｔｅｘｔｉｌｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｇａｒｄｅｎ  Ｃｉｔｙ，ＮＹ）から入手される編目（knitted loop）不織布などの不織布材料又はガラス繊維フィルターが挙げられる。あるいは、接合された材料２２４は、発泡体（例えば、ポリウレタン発泡体）、布地又はセルロース系材料（例えば、濾紙）などの他の非平滑化材料を含んでもよい。穿孔２２６により試料回収具２１０から便利に着脱可能であるタブ２２８は、図１Ｃにも示される。
【００３６】
試料ハウジング
試料ハウジングを、その中に試料回収具を試料回収具上に位置する試料物質と共に配置することができ、所望によりある期間にわたって保存することができる物品である。試料ハウジングは更に、中に溶液及び／又は試薬を加えて微生物の増殖、検出又は計数を促進し得る物品として使用してもよい。ある実施形態では、試料ハウジングは、中で試料が試薬ストリップ及び／又は試薬と共にインキュベートされて微生物の増殖、検出又は計数を促進する物品として使用されてもよい。
【００３７】
図３Ａは、例示的な試料ハウジング３６０を示す。試料ハウジング３６０は、底部材３５０、バリア層３７０及びカバーシート３３０を含む。
【００３８】
底部材３５０は、上方及び下方主表面を有する自立型水不透過性基材３５２を含む。底部材３５０は、好ましくは、水を吸収しない、ないしは別の方法で水により影響されない、ポリエステル、ポリプロピレン又はポリスチレンフィルムなどの比較的硬い材料である。例えば、厚さ約０．１〜０．２ｍｍ（０．００４〜０．００７インチ）のポリエステルフィルム、厚さ約０．１〜０．２ｍｍ（０．００４〜０．００８インチ）のポリプロピレンフィルム及び厚さ約０．３８ｍｍ（０．０１５インチ）のポリスチレンフィルムは、良好に機能する。他の好適な基材には、ポリエチレン又は他の耐水性コーティングを有する紙が挙げられる。底部材３５０は、底部材３５０を通して細菌コロニーを見たいかどうかに依存して透明又は不透明のいずれかであり得る。参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４，５６５，７８３号に記載されるように、細菌コロニーの数え上げを促進するために、底部材３５０は、その上に正方形の格子パターンが印刷されてもよい。底部材３５０を作製するために使用される材料は、微生物に対して比較的不活性であるべきであり、無菌化プロセスと適合性を有するべきである。
【００３９】
この実施形態では、底部材３５０は、基材３５２の上方表面上に位置する接着層３５４及びスペーサ３５６を更に含む。接着層３５４は、スペーサ３５６と基材３５２との間の取り付けを形成する。接着層３５４は、上記の試料回収具２１０の接着層２２２についてのガイドラインに従って選択されるべきである。開口３５７を含むスペーサ３５６は、非水溶性材料から作製されるべきである。開口３５７の壁は、所定のサイズ及び形状の穴を提供して、試料ハウジング３６０に加えられる液体媒体の容量を制限する。所望の容量、例えば、１ミリリットル、２ミリリットル、３ミリリットル又は５ミリリットル、の穴を形成するために、スペーサ３５６は十分に厚く、開口３５７は十分に大きくあるべきである。独立気泡ポリエチレン発泡体又はポリスチレン発泡体は、スペーサ３５６に好適な材料であるが、疎水性（非濡れ性）であり、微生物に対して不活性であり、好ましくは無菌化プロセスに耐えることができる任意の材料が使用され得る。図３Ａに示されるように、開口３５７により形成される穴の底は、接着層３５４を含み得、これは試料回収具（図３Ａに示されず）を固定するために使用することができる。あるいは、開口３５７により形成される穴の底は、取り付け構造（下記に記載）を含んでもよく、又は非接着層３５４若しくは取り付け構造を含まなくてもよい。
【００４０】
バリア層３７０は、スペーサ３５６の上方表面に取り付けられる。この実施形態では、スペーサ３５６及びバリア層３７０は、両面接着テープ３４０により一緒に接合される。バリア層３７０は、耐水性であるべきである。バリア層３７０は、好ましくは、バリア層３７０の下に位置する物体の観察を可能にするために透明であり、細菌、水及び水蒸気に対して実質的に不透過性である。概して、バリア層３７０は、底部材３５０と同一の特性を有することができるが、同様に硬い必要はない。バリア層３７０について代表的な材料には、例えば、ポリプロピレンフィルム（例えば、０．６マイクロメートル（１．６ｍｉｌ）の二軸延伸ポリプロピレン（ＢＯＰＰ））又はポリエチレンフィルムが挙げられる。図３Ａを再び参照すると、バリア層３７０が所望による穿孔３７２と共に示されており、これは、試料ハウジング３６０からバリア層の少なくとも一部を取り外し可能にするために容易に裂くことができる。バリア層３７０はまた、所望による伸長又はタブ３７４と共に示されており、これは、穿孔３７２を裂くためにバリア層３７０を容易に掴むのを可能にする。
【００４１】
カバーシート３３０は、バリア層３７０の上方表面に取り付けられる。バリア層３７０及びカバーシート３３０は、両面接着テープ３４０により一緒に接合される。試料ハウジング３６０の端部の近くで試料ハウジングスペーサ３５６をバリア層３７０及びカバーシート３３０に取り付けることは、便宜的に蝶番領域３４５を形成し、バリア層３７０及び／又はカバーシート３３０が持ち上げられるようにし、それゆえに構成要素部分の位置合わせを維持したまま、試料ハウジング３６０の内側部分を露出する。米国特許第５，１１８，７５０号に記載されているものなどの特定の低粘着性接着剤混合物を両面接着テープ３４０の少なくとも１つの側に使用して、要素（例えば、カバーシート、バリア層及び底部材）間に着脱可能な取り付けを形成してもよい。あるいは、カバーシート３３０及びバリア層３７０は、例えば、超音波溶接、クランプ又はかすがいといった他の手段により、底部材３５０に接合されてもよい。
【００４２】
カバーシート３３０は、上方及び下方主表面を有する基材３３２を含む。接着層３３４は、下方主表面（バリア層３７０に面している）の少なくとも一部分上にコーティングされる。少なくとも１つのゲル化剤を含む冷水に可溶な粉末３３６は、接着層３３４に接着される。あるいは、カバーシート３３０の少なくとも一部、例えば、蝶番領域３４５は、接着剤のみでコーティングされてもよく、又はどの種類のコーティングも実質的になくてもよい。
【００４３】
接着層３３４は、好ましくは粉末状ゲル化剤及び／又は栄養素の粒子の直径よりも小さい厚さで、カバーシート３３０上にコーティングされるべきである。この目的は、基材に粒子を接着するために、接着層３３４の中に十分な、しかしながら粒子が接着剤の中に完全に埋没してしまわない程度の、接着剤を適用することである。粉末３３６の均一な単層は、水和のために露出される十分な表面積を有することが所望される。概して、０．００５〜０．０１２ｍｍ（０．０００２〜０．０００５インチ）の範囲の厚さの接着層３３４が好適である。接着層３３４で使用される代表的な粘着剤は、イソオクチルアクリレート／アクリルアミド（９４／６のモル比で）のコポリマーである。使用されてもよい他の感圧性接着剤には、イソオクチルアクリレート／アクリル酸（９５／５又は９４／６のモル比で）及びシリコ−ンゴムが挙げられる。水への露出時に乳化する接着剤は、あまり好ましくないが、不透明な基材と共に、又はコロニー可視化が必要とされない場合に、使用されてもよい。
【００４４】
冷水に可溶な粉末３３６の単層は、接着層３３４に均一に接着される。粉末３３６は、ゲル化剤又はゲル化剤の混合物を含んでもよい。本明細書及び特許請求の範囲で使用するとき、用語「粉末」は、４００マイクロメートル未満の平均直径を有する超微粒子状物質を指す。本明細書及び特許請求の範囲で使用するとき、用語「冷水に可溶」は、室温において水中で溶液を形成する物質を指す。粉末３３６中に含むのに好適なゲル化剤には、室温において水中で溶液を形成する天然及び合成の両方のゲル化剤が挙げられる。ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリアクリルアミド、ローカストビーンガム及びアルギンなどのゲル化剤は、室温において水中で溶液を形成し、「冷水に可溶」である粉末を準備するために好適なゲル化剤である。粉末３３６について好ましいゲル化剤は、グアーガム及びキサンタンガムであり、これらのゲル化剤は個別でも又はお互いに組み合わせても有用である。
【００４５】
ゲル化剤は、好ましくは、少なくとも１５００ｃｐｓのＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ粘度を有する実質的に透明なゲルを形成するのに十分な量で存在する。十分な量のゲル化剤は、試料ハウジング３６０内に配置された所定の量、例えば、１〜３ミリリットル、の水又は水性試料が、２５℃においてＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  Ｍｏｄｅｌ  ＬＶＦ粘度計を用いて６０ｒｐｍで測定されるときに約１５００ｃｐｓ以上の粘度を有するゲルを形成するように、カバーシート３３０に接着されるべきである。この粘度のゲルは、便利な操作及び積層を可能にし、明確なコロニー同定を提供する。ほとんどの場合、５．０７ｃｍ２（３．１４インチ２）の表面領域上に０．０２５〜０．０５０グラムのグアーガムが、１〜３ミリリットルの水性試料で水和されるときに、十分な粘性ゲルを提供する。単位面積当たりのコーティング重量を制御するために、粉末３３６の粒子のサイズを使用してもよい。例えば、約１００メッシュのグアーガムは、重量約０．０５グラム／直径５．１ｃｍ（２インチ）のディスクに対してコーティングし、４００メッシュのグアーガムは、重量０．０２５グラム／直径５．１ｃｍ（２インチ）のディスクに対してコーティングする。
【００４６】
カバーシート３３０は、試料の保存及び／又はインキュベーション時における汚染を防止すべく、試料ハウジング３６０を覆うための手段を提供する。カバーシート３３０は、底部材３５０の１つの端部に蝶番領域状方式で直接又は間接的に取り付けられた耐水性シートであることができる。カバーシート３３０は、好ましくは、細菌コロニーの数え上げを促進するために透明であり、細菌及び水蒸気に対して実質的に不透過性である。本明細書で使用するとき、「細菌及び水蒸気に対して実質的に不透過性」は、器具の運送、保管及び使用時に試料ハウジング３６０の所望されない汚染を防止する、並びにインキュベーション期間の間に微生物の増殖を助ける環境を提供する、カバーシート３３０を指す。概して、カバーシート３３０は、底部材３５０と同一の特性を有することができるが、同様に硬い必要はない。カバーシート３３０は、増殖することが所望される微生物の種類に必要な酸素透過量を提供するように、選択することができる。例えば、ポリエステルフィルムは、低い酸素透過性（厚さ０．０２５ｍｍ（０．００１インチ）当たり５ｇ／６４５ｃｍ２（１００インチ２）／２４時間未満）を有し、嫌気性細菌を増殖させるのに好適である。一方で、ポリエチレンは、非常に高い酸素透過性（厚さ０．０２５ｍｍ（０．００１インチ）当たり約５００ｇ／６４５ｃｍ２（１００インチ２）／２４時間）を有し、好気性細菌を増殖させるのに好適である。カバーシート３３０に好ましい材料は、４０．６マイクロメートル（１．６ｍｉｌ）の二軸延伸ポリプロピレンフィルムである。
【００４７】
カバーシート３３０は簡単に持ち上げることができ、液体試料懸濁培地は基材上に配置することができ、次いで、カバーシート３３０はその元の位置に戻し、それによりゲル化培地の中に固着することができる。カバーシート３３０は、好ましくは、細菌コロニーを見るのを可能にするように、透明である。カバーシート３３０を形成するために使用される材料は、酸素などの気体について所望の透過性を得るように便宜的に選択され得る。
【００４８】
図３Ｂは、図３Ａの試料ハウジング３６０の平面図を示す。蝶番領域３４５は、試料ハウジング３６０の上端に沿って位置する。所望による穿孔３７２は、蝶番領域３４５に近接する。スペーサ３５６内の円形開口３５７は、試料ハウジング３６０の中央領域内に位置する。蝶番領域３４５と反対側の試料ハウジング３６０の端部に、カバーシート３３０の端部を越えて広がるバリア層３７０のタブ３７４を見ることができる。
【００４９】
図４は、試料ハウジング４６０の代替的な実施形態を示す。試料ハウジング４６０は、カバーシート４３０、バリア層１７０及び底部材４５０の要素を含み、例えば、両面接着テープ４４０により蝶番領域４４５において固定されている。この実施形態では、底部材４５０は、基材４５２及び所望による取り付け構造４５８を含む。取り付け構造４５８は、適所に試料回収具を保持するために使用できる、接着剤、フック・アンド・ループ取り付け手段の構成要素、米国特許出願公開第２００３／００８８９４６Ａ号に記載のものなどのステムウェブ構造、又はこれらに類するものを含んでもよい。バリア層４７０は、穿孔４７２及び／又はタブ４７４を含んでもよく、上記のように作製することができる。ある実施形態では、バリア層４７０の下方主表面は、取り付け構造４５８に接着するのを防止するために、剥離材を含んでもよい。剥離コーティングは当該技術分野において既知であり、接着剤とプラスチックフィルムとの間の接着を低減するために、日常的に使用される。カバーシート４３０は、基材４３２、接着層４３４及び粉末４３６を含み、上記のように作製することができる。
【００５０】
試薬ストリップ
図５は、本発明による試薬ストリップ５８０の１つの実施形態を示す。試薬ストリップ５８０は、上方及び下方主表面を有する基材５８２を含む。この実施形態では、基材５８２の両方の主表面の少なくとも一部は、所望による接着剤５８４及び親水性作用剤５８６でコーティングされる。いくつかの実施形態では、表面５８２の１つの主表面の少なくとも一部は、所望による接着剤５８４及び／又は親水性の作用剤５８６でコーティングされる。いくつかの実施形態では、試薬ストリップ５８０は、所望によるタブ５８８を含む。タブは、所望による穿孔５８９を含んでもよく、これはタブ５８８が試薬ストリップ５８０から分離されるようにする。
【００５１】
試料中の微生物の検出は、多くの場合、親水性作用剤などの試薬の使用を伴って、特定の微生物の、増殖の促進、増殖の抑制、及び／又は、代謝活性の検出を行う。本明細書で使用するとき、「親水性の作用剤」には、特定の微生物の増殖を促進するために使用され得る濃度での栄養素（例えば、タンパク質、ペプチド、炭水化物、ビタミン）、特定の微生物の増殖を選択的に抑制するために使用され得る濃度での塩（例えば、ＮａＣｌ、ＬｉＣｌ、亜テルル酸カリウム）又は阻害剤（例えば、ナリジキシン酸（naladixic acid）、アズトレオナム、他の抗生物質、染料）、酵素活性又は発酵プロセスなどの代謝活性を検出するために使用され得る非抑制濃度での染料又は指示薬（例えば、トリフェニルテトラゾリウムクロリド、クロロフェノールレッド、ブロモチモールブルー（bromthymol blue）、ｏ−ニトロフェニルホスフェート、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−グルコピラノシド）、及びゲル化剤（例えば、寒天、キサンタンガム、グアーガム）が挙げられる。
【００５２】
接着剤５８４は、粉末などの特定の親水性の作用剤５８６を上記のように基材５８２上にコーティングするときに必要とされ得る。いくつかの実施形態では、親水性の作用剤５８６は、ゲルを形成するために水和されるときに基材５８２上に直接コーティングされ得るゲル化剤を含む。基材５８２は、底部材、バリア層及びカバーシートの作製のための上記材料などの多数の材料から選択され得る。ある実施形態では、試薬ストリップ５８０の基材５８２は自立している。ある実施形態では、試薬ストリップ５８０の基材５８２は、水に対して実質的に不透過性である。代替的な実施形態では、試薬ストリップ５８０の基材５８２は、濾紙又は親水性発泡体のように、吸水性であってもよい。ある実施形態では、試薬ストリップ５８０は、ポリエチレンでコーティングされた紙から作製されてもよく、微生物のコロニーの数え上げを促進するために、所望による印刷された格子（図示されず）を含んでもよい。
【００５３】
試薬ストリップ５８０上に含まれる親水性の作用剤５８６の中に染料を組み込むことが望ましくあり得る。染料は、基材５８２上にコーティングされたゲル又は粉末混合物の中に組み込まれてもよい。あるいは、染料は、接着剤５８４の中に組み込まれてもよい。好適な染料は、微生物を増殖させることにより代謝され、より容易な可視化のために着色されるコロニーを生じるものである。このような染料の例には、トリフェニルテトラゾリウムクロリド、ｐ−トリルテトラゾリウムレッド、テトラゾリウムバイオレット、ベラトリルテトラゾリウムブルー及び関連する染料が挙げられる。他の好適な染料は、ニュートラルレッド又はクロロフェノールレッドなどの、ｐＨ変化に対して感応性のものである。
【００５４】
試薬ストリップ５８０上の親水性の作用剤５８６に採用される材料は、冷水で戻すことができる。本明細書で使用するとき、「冷水で戻すことができる」は、室温において水中で溶液、ゾル又はゲルを形成する物質を指す。この実施形態のコーティングの中に含むのに好適なゲル化剤（これらがコーティング中に含有されるならば）には、室温において水中で溶液を形成する、グアーガム及びローカストビーンガムなどの上記ゲル化剤が挙げられる。
【００５５】
試薬ストリップは、リステリア属のメンバーなどの特定の生物の増殖について選択するために使用され得る。これらの実施形態では、親水性の作用剤は、栄養素と、表面試料中に存在し得る他の微生物よりもリステリア種の増殖を好む選択的阻害剤を含んでもよい。例えば、試薬ストリップには、リステリア種の増殖の補助及び／又は非リステリア種の増殖の抑制を行うのに有効である濃度での、カゼインの膵臓消化物、プロテオースペプトン＃３などのプロテオースペプトン、酵母抽出物、リン酸二ナトリウム及びリン酸一カリウムなどの緩衝系、塩化ナトリウム、塩化リチウム、ナリジキシン酸（naladixic acid）、アクリフラビン、モキサラクタム並びにポリミキシンＢ硫酸塩を挙げてもよい。試薬ストリップは、試料中のリステリア種の存在を検出するのに有効である濃度で、発色酵素基質（例えば、６−クロロ−３−インドキシル−α−Ｄ−マンノピラノシド）などの指示薬系、及び所望により、対応する酵素誘導剤（例えば、１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−マンノピラノシド）を更に含んでもよい。
【００５６】
微生物検出又は計数物品
本発明は、表面試料中の微生物を検出及び／又は計数するために使用される物品を含む。上記試料ハウジングを含むこのような物品は、上記要素（例えば、カバーシート、試料回収具、バリア層、底部材）の様々な組み合わせを含む。
【００５７】
図６は、試料回収及び微生物計数のための物品６００の１つの実施形態を示す。物品６００は、上記のように作製された、試料回収具６１０及び試薬ストリップ６８０を含む。試料回収具６１０は、水不透過性基材６１２及び接合された基材６２４を含む。接合された基材６２４は、接着剤６２２により基材６１２の下方主表面に取り付けられる。この実施形態では、試薬ストリップ６８０は、上方及び下方表面を有する自立型基材６８２を含み、１つの主表面の少なくとも一部は親水性の作用剤６８６でコーティングされている。所望による接着剤６８４は、図６にも示される。試料回収具６１０及び試薬ストリップ６８０は、この実施形態では、蝶番領域６４５において両面接着テープ６４０により取り付けられる。米国特許第５，１１８，７５０号に記載されているものなどの特定の低粘着性接着剤混合物を両面接着テープ６４０の少なくとも１つの側に使用して、試料回収具６１０と試薬ストリップ６８０との間に着脱可能（及び再取り付け可能）な取り付けを形成してもよい。
【００５８】
好ましくは、試料回収具６１０及び試薬ストリップ６８０は、物品６００の１つの端部の近くに取り付けられ、蝶番領域６４５を形成する。当業者であれば、接着剤、熱接合、超音波溶接、及びこれらに類するものなどの、蝶番領域６４５を形成するための他の好適な方法も認識するであろう。試料回収具６１０及び試薬ストリップ６８０が水不透過性材料の一体成形物から形成され得、蝶番領域６４５が材料をそれ自体の裏に折り畳むことにより形成される（図示されず）こともまた想到される。
【００５９】
図７は、試料回収及び微生物計数のための物品７００の代替的な実施形態を示す。物品７００は、試料回収具７１０、カバーシート７３０及び底部材７５０の要素を含み、この要素は上記のように作製される。カバーシート７３０は、基材７３２、接着層７３４及び粉末７３６を含む。試料回収具７１０は、両面接着テープ７４０を介してカバーシート７３０に取り付けられることができる。試料回収具７１０は、例えば、試料回収のために、接着層７２２により基材７１２に取り付けられ接合された材料７２４を含む。この実施形態では、試料回収具７１０は、物品７００から試料回収具７１０を取り外しやすくするために、蝶番領域７４５の近くに穿孔７２６を含む。試料回収具はまた、操作時に試料回収具７１０を掴むためにタブ７２８を含む。底部材７５０は、両面接着テープ７４０を介して試料回収具７１０に取り付けられる。底部材７５０は、基材７５２と、試料回収具７１０を固定できる所望による取り付け構造７５８を含む。取り付け構造７５８は、適所に試料回収具７１０を保持するために使用できる、接着剤、フック・アンド・ループ取り付け手段の構成要素又はこれらに類するものを含んでもよい。ある実施形態では、取り付け構造７５８に面する試料回収具７１０主表面は、この取り付け構造７５８が接着剤を含むとき、試料回収具７１０の、取り付け構造７５８への接着を制御するために、剥離材を含んでもよい。剥離コーティングは当該技術分野において既知であり、接着剤とプラスチックフィルムとの間の接着を低減するために、日常的に使用される。
【００６０】
図８は、試料回収及び微生物計数のための物品８００の代替的な実施形態を示す。物品８００は、カバーシート８３０、バリア層８７０、試料回収具８１０及び底部材８５０の要素を含み、これらの要素は上記のように作製される。カバーシート８３０は、基材８３２、接着層８３４及び粉末８３６を含む。試料回収具８１０は、両面接着テープ８４０を介してカバーシート８３０に取り付けることができる。試料回収具８１０は、試料回収のために、接着層８２２により基材８１２に取り付けられた接合された材料８２４を含む。この実施形態では、試料回収具８１０は、物品８００から試料回収具８１０を取り外しやすくするために、蝶番領域８４５の近くに穿孔８２６を含む。試料回収具はまた、操作時に試料回収具８１０を掴むためにタブ８２８を含む。バリア層８７０は、両面接着テープ８４０を介して試料回収具８１０に取り付けられる。バリア層８７０はまた、蝶番領域８４５の近くの穿孔８７２と、操作時にバリア層８７０を掴むためのタブ８７４と、を含む。底部材８５０は、両面接着テープ８４０を介してバリア層８７０に取り付けられる。底部材８５０は、基材８５２と、試料回収具８１０が固定できる試料による取り付け構造８５８と、を含む。取り付け構造８５８は、適所に試料回収具８１０を保持するために使用できる、接着剤、フック・アンド・ループ取り付け手段の構成要素又はこれらに類するものを含んでもよい。ある実施形態では、取り付け構造８５８に面するバリア層８７０主表面は、この取り付け構造８５８が接着剤を含むとき、試料回収具８１０の、取り付け構造８５８への接着を制御するために、剥離材を含んでもよい。剥離コーティングは当該技術分野において既知であり、接着剤とプラスチックフィルムとの間の接着を低減するために、日常的に使用される。
【００６１】
試料及び微生物
本発明の１つの態様は、非常に様々な表面上に存在する生物を検出するのに使用してもよいものである。本発明の器具及び方法は、種々の用途のために使用してもよく、食品表面（例えば、牛屠殺体、農産物外表面）、食品加工表面、水又は水膜表面、患者表面、患者処理表面、病院環境表面、診療所環境表面及び法医学的環境表面が挙げられるが、これらに限定されない表面上に存在する生物を試験するために望ましい。試料は、固体、半固体、ゼラチン状又は液体の材料から、単独又は種々の組み合わせで、実質的になる。本発明の器具及びシステム、並びに本発明の方法は、対象の１つ以上の微生物の存在を質的又は量的に判定するために、使用され得る。
【００６２】
検出する対象の代表的な医療検体は、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）である。黄色ブドウ球菌は、小さな皮下膿瘍及び創傷感染等の表面型病変、心内膜炎、肺炎及び敗血症などの全身性でかつ生命に脅威を及ぼす状態、並びに食中毒及び中毒性ショック症候群などの中毒症を含めた広範な感染症を引き起こす病原菌である。いくつかの菌株（例えば、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌すなわちＭＲＳＡ）は、わずかに選ばれた抗生物質の他は全てに耐性がある。
【００６３】
対象を食品加工領域内で検出するための代表的な検体は、リステリア属のメンバーである。リステリアは、グラム陽性棹状菌として分類され、リステリア・モノサイトゲネス、Ｌ．イノキュア、Ｌ．ウェルシメリ（L. welshimeri）、Ｌ．シーリゲリー（L. seeligeri）、Ｌ．イバノビイ（L. ivanovii）及びＬ．グライイ（L. grayi）の種からなる。これらの中で、Ｌ．モノサイトゲネスは、ヒトリステリア症の症例の多くに対して原因となっており、免疫不全症者及び妊娠女性、高齢者及び新生児は、感染の感受性が高い。リステリア症の最も一般的な症状は、敗血症、髄膜炎及び流産である。
【００６４】
分析目的のために特に対象となる他の微生物には、原核及び真核生物、特にグラム陽性細菌、グラム陰性細菌、真菌、マイコプラズマ及び酵母が挙げられる。特に関連性のある生物には、腸内細菌科若しくは球菌科、又はブドウ球菌属の種、連鎖球菌種、シュードモナス種、腸球菌種、サルモネラ種、レジオネラ種、赤痢菌種、エルニシア種、エンテロバクター種、エシェリキア種、バチルス種、ビブリオ種、クロストリジウム種、コリネバクテリア種、並びにアスペルギルス種、フサリウム種及びカンジダ種のメンバーが挙げられる。特に悪性の生物には、黄色ブドウ球菌（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）などの耐性菌株を包含する）、表皮ブドウ球菌、肺炎球菌、ストレプトコッカス・アガラクチア、化膿レンサ球菌、エンテロコッカス・フィカリス、バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌（ＶＲＳＡ）、バンコマイシン低度耐性黄色ブドウ球菌（ＶＩＳＡ）、炭疽菌、緑膿菌、大腸菌、クロコウジカビ、アスペルギルス・フミガータス、アスペルギルス・クラバタス、フザリウム・ソラニ、フザリウム・オキシスポラム、フザリウム・クラミドスポラム（F. chlamydosporum）、コレラ菌、腸炎ビブリオ、サルモネラ・コレラスイス、チフス菌、ネズミチフス菌、カンジダ・アルビカンス、カンジダ・グラブラタ、カンジダ・クルセイ、エンテロバクター・サカザキ、大腸菌Ｏ１５７、ＥＳＢＬ含有微生物、及び多剤耐性グラム陰性桿菌（ＭＤＲ）が挙げられる。
【００６５】
製造物品
本発明の試料ハウジング及び／又は物品は、梱包材料と組み合わせて、表面上の微生物を試料採取及び検出するためのキットとして販売することができる。例えば、キットは、一緒に梱包された２つ以上の構成要素（例えば、底部材、スペーサ、バリア層、カバーシート及び／又は試薬ストリップ、上記のような構成要素）を含んでもよい。いくつかの実施形態では、２つ以上の構成要素（例えば、底部材、バリア層及びカバーシート）は、例示された実施形態で示されるように、互いに取り付けられて、好ましくは蝶番領域を形成して、提供されてもよい。これらの実施形態では、特定の構成要素（例えば、試料回収具、試薬ストリップ及び／又はバリア層）は着脱可能であってもよい。他の実施形態では、構成要素は別々に提供されてもよく、使用時に組み立てることができる。キットは、試料懸濁培地、ピペット、標識、試料キャリア又は手袋などの、試料採取及び試験付属品を更に含んでもよい。
【００６６】
環境試料採取及び検出方法
本開示は、環境表面上で微生物を検出するための方法を含む。この方法は、標的微生物の微生物的増殖の指示薬を観察することにより、標的微生物の存在又は不在を検出するために使用され得る。この方法は、更に、試料中の微生物を計数するために使用され得る。これらの方法に使用される要素（例えば、試料回収具、カバーシート、バリア層など）は、別々に提供されてもよく、又は上記試料ハウジングのように、組立体の部品であってもよい。更に、個々の要素及び／又は組立体は、上記のように、キットで提供されてもよい。実施形態は本明細書に記載される。
【００６７】
１つの実施形態では、本方法は、液体試料懸濁培地、試料回収具２１０（図２Ｂ）などの試料回収具、底部材４５０とカバーシート４３０とを含む試料ハウジング４６０（図４）などの試料ハウジング、及び試薬ストリップ５８０（図５）などの試薬ストリップを提供する工程を含む。本方法は、試料回収具２１０の、接合された材料２２４などの、主表面の１つを、試験される表面又は物質と、接触させる工程を更に含む。典型的には、操作者は、無菌鉗子又はこれに類するものを使用してもよく、試料が回収される間、手袋をした手を使用して試料回収具を保持してもよい。試料回収具２１０は、既知の寸法の領域における生物の数を概算するために、５ｃｍ×５ｃｍ、１０ｃｍ×１０ｃｍ又は２５ｃｍ×２５ｃｍなどの指定された表面領域と物理的に接触する（例えば、触れる、拭く又は擦る）ようにされる。この実施形態では、バリア層４７０は底部材４５０から持ち上げられ、試料回収具２１０は、試料がバリア層４７０に向けて、取り付け構造４５８に接触して配置される。本方法は、試料を含む試料回収具２１０の接合された材料に試料懸濁培地を適用する工程を更に含む。試料懸濁培地は、ピペットを使用して、又は他の好適な手段により、適用してもよい。試料懸濁培地を加えた後で、バリア層４７０を下げてもよい。所望により、試料は、損傷した微生物を回復させるために、標的微生物に依存して、少なくとも３０分、少なくとも６０分、又は少なくとも１２０分などのある期間にわたってインキュベートされ得る。インキュベーション温度は、標的微生物により選択され得る。所望によるインキュベーション期間の後、カバーシート４３０は持ち上げられ、バリア層４７０は、例えば、穿孔４７２においてバリア層４７０を分離することにより取り外される。本方法は、水和ゲルを形成するために、試料懸濁培地にカバーシート４３０の下方表面を接触させる工程を更に含む。これは、例えば、一方の手でカバーシート４３０を掴み、もう一方の手で底部材４５０を掴み、カバーシート４３０を持ち上げることにより、達成され得る。水和ゲルは数秒のうちに形成されるが、水和ゲルを露出する器具を開く前に、ゲルが少なくとも５〜１０分にわたって形成されるようにすることが好ましく、より好ましくは少なくとも１０〜３０分にわたってである。ゲルは、カバーシート４３０に取り付けられたままであってもよく、ゲルは試料回収具２１０に取り付けられたままであってもよく、ゲルの別々の部分がカバーシート４３０に及び試料回収具２１０に取り付けられたままであってもよい。所望により、本方法は、試薬ストリップ５８０のコーティングされた表面を水和ゲルに接触させて配置する工程を更に含む。カバーシート４３０が持ち上げられている間、試薬ストリップ５８０は、試薬ストリップ５８０の親水性の作用剤５８６をゲルに向けて、試料ハウジング４６０の中に挿入されてもよい。試料ハウジング４６０は、試料中に存在する微生物の数を増加させるために、及び／又は、微生物の代謝活性に指示薬の検出可能な変化を生じさせるために、一定期間にわたってインキュベートされる。器具は、典型的には２５〜４５℃、好ましくは２５〜３７℃、の温度でインキュベートされる。ある実施形態では、微生物は、水和ゲル中に分離性コロニーを形成する。元々の試料中の微生物の数は、コロニーを数えることにより、計数することができる。
【００６８】
別の実施形態では、本方法は、液体試料懸濁培地、任意の試料回収具（例えば、図１、図２Ａ〜Ｂを参照されたい）、底部材３５０とバリア層３７０とカバーシート３３０とを含む試料ハウジング３６０（図３Ａ）などの試料ハウジング、及び試薬ストリップ５８０（図５）などの試薬ストリップを含む。本方法は、試料回収具の基材又は接合された材料の主表面の１つを、上記のように試験される表面又は物質と、接触させる工程を更に含む。試料回収具は、試料をバリア層３７０に向けて、試料ハウジング３６０の中に配置することができる。この実施形態では、バリア層３７０は持ち上げることができ、試料回収具は、試料を上方に（バリア層３７０に向かって）向けて、穿孔３５７により形成された穴の中に配置することができる。いくつかの実施形態では、試料回収具は、穿孔３５７により形成された穴の内側に完全に嵌合するようなサイズ又は形状にされてもよい。本方法は、試料回収具を含有する穴の中に試料懸濁培地を分配する工程を更に含む。試料懸濁培地は、ピペットを使用して、又は他の好適な手段により、分配してもよい。試料懸濁培地を加えた後で、バリア層３７０を下げてもよい。所望により、試料は、損傷した微生物を回復させるために、標的微生物に依存して、少なくとも３０分、少なくとも６０分、又は少なくとも１２０分などのある期間にわたってインキュベートされ得る。所望によるインキュベーション期間の後、カバーシート３３０は持ち上げられ、バリア層３７０は、例えば、穿孔３７２においてバリア層３７０を分離することにより取り外される。本方法は、上記のように、水和ゲルを形成するために、試料懸濁培地にカバーシート３３０の下方表面を接触させることを更に含む。水和ゲルは数秒のうちに形成されるが、水和ゲルを露出する器具を開く前に、ゲルが、好ましくは少なくとも５〜１０分にわたって、より好ましくは少なくとも１０〜３０分にわたって、形成されるようにすることが好ましい。所望により、本方法は、試薬ストリップ５８０のコーティングされた表面を水和ゲルに接触させて配置する工程を更に含む。このプロセスでは、カバーシート３３０は、水和ゲルを露出するために持ち上げられ、試薬ストリップ５８０は、試料ハウジング３６０内の開口３５７の中及び／又は近くに配置され、カバーシート３３０は、試薬ストリップを水和ゲルと接触させるようにするために下げられる。次に、試料ハウジング３６０は、一定期間にわたってインキュベートされ、その後、器具は微生物増殖の指示薬について観察される。器具は、典型的には２０〜４５℃、好ましくは２５〜３７℃、の温度でインキュベートされる。器具は、試料中に存在する微生物の数を増加させるために、及び／又は、微生物の代謝活性に指示薬の検出可能な変化を生じさせるために、一定期間（標的微生物の増殖率及び指示薬系に依存して、例えば、１８〜４８時間）にわたってインキュベートされる。ある実施形態では、微生物は、水和ゲル中に分離性コロニーを形成する。元々の試料中の微生物の数は、コロニーを数えることにより、計数することができる。
【実施例】
【００６９】
（実施例１）
表面からのリステリア・イノキュアの検出及び計数
試薬ストリップの調製
表１に挙げた処方により、リステリア種の増殖及び検出のための液体増殖培地を作製した。酵素誘導剤（１−Ｏ−メチル−α−Ｄ−マンノピラノシド）及び発色酵素基質（６−クロロ−３−インドキシル−α−Ｄ−マンノピラノシド）をＢｉｏｓｙｎｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（Ｎａｐｅｒｖｉｌｌｅ，ＩＬ）から入手した。Ｍ１５０のエタノールで洗浄したグアーをＤａｎｉｓｃｏ（Ｋｒｅｕｔｚｌｉｎｇｅｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から入手した。
【表１】
0006033914.tif 000002
【００７０】
試薬ストリップをコーティングするために使用された基材は、幅２１．５ｃｍ（８．５”）、厚さ０．０７ｍｍ（２．９１ｍｉｌ）の透明なポリエステルフィルムであった。０．１８ｍｍ（７ｍｉｌ）の間隙を有するナイフコーターを使用して、液体培地を基材の第１の側上にコーティングし、引き続いて、コーティングされた基材をおよそ１１０℃（２３０°Ｆ）に設定した乾燥炉に通した。炉での乾燥時間は、およそ２分半であった。コーティング及び乾燥手順を基材の反対側上でも繰り返し、同一の増殖培地で両側をコーティングされたプラスチックフィルムを得た。コーティングされたフィルムの各側のおおよそのコーティング重量は、０．２３０ｇ／１５５ｃｍ２（０．２３０ｇ／２４インチ２）であった。二重コーティングされた基材を円形にダイカットし、各円は直径２．８７５インチ（７．３０ｃｍ）を有した。
【００７１】
試料ハウジング器具の調製
以下の構成要素を１つのユニットに組み立てることにより、試料ハウジング器具を作製した：底部材、発泡体スペーサ、バリア層及びカバーシート。下記のように底部材上にコーティングした接着剤により、発泡体スペーサを底部材に取り付けた。幅３／８インチ（９．５ｍｍ）の両面接着テープを使用して、バリア層を発泡体スペーサの１つの端部に沿って取り付けた。両面接着テープを使用して、カバーフィルムをバリア層に（同一の端部に沿って）取り付けた。この構成体の図は、図３Ａ及び３Ｂに見ることができる。
【００７２】
底部材は、厚さ０．１６ｍｍ（６．３ｍｉｌ）のポリコーティングされた紙（Ｗａｕｓａｕ−Ｍｏｉｓｉｎｅｅ  Ｐａｐｅｒ  Ｃｏｒｐ．，Ｒｈｉｎｅｌａｎｄｅｒ，ＷＩから入手される８３  ｐｏｕｎｄ  ＨＤ  ＲＨＩ−Ｌｅａｓｅ  ＦＡ  ３４  Ｙｅｌｌｏｗ  Ｇｒｉｄ，Ｇｒａｄｅ  ４０６−８３０１０）から構成された。黄色格子（全領域にわたって１ｃｍ間隔で離れた垂直な直線）を紙の非シリコーン処理（「底」）側上に印刷した。イソオクチルアクリレート／アクリルアミドコポリマー接着剤（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮから入手される９６重量％のイソオクチルアクリレート及び４重量％のアクリルアミド、約１４５〜２００ｍｇ／２００ｃｍ２のコーティング重量）で紙のシリコーン処理（「上」）側をコーティングした。
【００７３】
スペーサは、ポリスチレン発泡体材料（ＣＬ３Ｖ  Ｃａｐｌｉｎｅｒ，Ｗｈｉｔｅ、幅２１．６ｃｍ（８．５インチ）、厚さ０．５１ｍｍ（２０ｍｉｌ）、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｆｕｊｉ  Ｓｅａｌ，Ｂａｒｄｓｔｏｗｎ，ＫＹから入手）から構成された。７．３０ｃｍ（２．８７５インチ）の円をダイカットし、スペーサ材料から取り外した。次に、底部材とダイカットしたスペーサとをニップローラーを通して動かすことにより、底部材の接着コーティングされた側にスペーサ材料を積層した。図３Ａに示すように、スペーサ材料から切り出された円は、円形の窪み又は「穴」を形成し、底部材は、積層体の穴の底表面を形成した。
【００７４】
バリアフィルムは、ポリエステル（ＣＰＦｉｌｍｓ  Ｉｎｃ．，Ｍａｒｔｉｎｓｖｉｌｌｅ，ＶＡから入手される２００ゲージのポリエステルフィルム、Ｃｏｌｏｒ  Ｋ３９９  Ｌｉｇｈｔ  Ｂｌｕｅ）から構成された。バリアフィルムの１つの側面上に剥離材をコーティングした。バリアフィルムの、剥離材がコーティングされた側が底部材に面するように、両面接着テープを使用して、バリアフィルムを発泡体スペーサの１つの端部に沿って取り付けた。
【００７５】
イソオクチルアクリレート／アクリルアミドコポリマー接着剤（９６重量％のイソオクチルアクリレート及び４重量％のアクリルアミド、１６５〜２６０ｍｇ／２００ｃｍ２のコーティング重量）で予めコーティングされた厚さ０．０４ｍｍ（１．６ｍｉｌ）の２軸配向ポリプロピレン（ＢＯＰＰ）フィルムからカバーシートを作製した。ＢＯＰＰフィルムの接着剤がコーティングされた側を、引き続いて、Ｍ１５０の非エタノールで洗浄されたグアーガム粉末（Ｄａｎｉｓｃｏから入手、約０．３０〜０．６０ｇ／１５５ｃｍ２（０．３０〜０．６０ｇ／２４インチ２）の粉末コーティング重量））でコーティングした。上記のように、両面接着テープでカバーシートをバリア層に積層した。
【００７６】
試料回収具の調製
２つのタイプの試料回収具を作製した。透明な７６マイクロメートル（３ｍｉｌ）のポリエステルフィルムを使用して、タイプＩ試料回収具を作製した。このフィルムを直径７．３ｃｍ（２．８７５インチ）の円形にダイカットした。不織布材料をプラスチック基材に積層することにより、タイプＩＩ試料回収具を作製した。タイプＩＩ試料回収具のために、粘着付与高感圧性イソオクチルアクリレート／アクリル酸コポリマー接着剤（９６重量％のイソオクチルアクリレート及び４重量％のアクリル酸、品番ＡＺ−１２２９、３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ、コーティング厚さはおよそ０．０５ｍｍ（２ｍｉｌ）であった）を厚さ０．１３ｍｍ（５ｍｉｌ）の白色ポリエステルフィルム（２２６Ｍｅｌｉｎｅｘ、ＤｕＰｏｎｔ  Ｔｅｉｊｉｎ  Ｆｉｌｍｓ，Ｈｏｐｅｗｅｌｌ，ＶＡから入手）に積層し、引き続いて、吸収性材料（図２に示す）をこの接着剤上に積層した。積層体を作製した後に、タイプＩＩ試料回収具を直径７．２４ｃｍ（２．８７５インチ）の円形にダイカットした。表２にこれらの実験で使用した試料回収具を挙げる。
【表２】
0006033914.tif 000003
【００７７】
接種表面の調製
０．６％の酵母抽出物を有するトリプティックソイブロス中で大豆リステリア・イノキュア（ＡＴＣＣ＃３３０９１）を３５℃で一晩増殖した。７５マイクロリットルの一晩培養物を０．６％の酵母抽出物を有する５０ｍＬのトリプティックソイブロスに希釈した。懸濁液を振盪し、無菌Ｄａｃｒｏｎポリエステルチップを取り付けたアプリケータを使用して、２つの０．５ｍＬ試料を平らな無菌ステンレス鋼の１０×１０ｃｍ（４×４インチ）区域上に広げた。ステンレス鋼表面を室温で乾燥させた。鋼表面が乾燥した後で、上記器具を使用して、ステンレス鋼の表面上の微生物を回収及び定量した。
【００７８】
表面試験手順
標準的な方法と比較して下記実験手順を評価した。標準的な方法は以下から構成された：ｉ）中和バッファで予め湿らせたスポンジ（Ｎａｓｃｏ，１８−ｏｚ．Ｗｈｉｒｌ−Ｐａｋ  Ｈｙｄｒａｔｅｄ  Ｓｐｅｃｉ−Ｓｐｏｎｇｅ  Ｂａｇ、製品ＩＤ−ＢＯ１４２２ＷＡ、Ｈａｒｄｙ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｓａｎｔａ  Ｍａｒｉａ，ＣＡから）を１０ｃｍ（４インチ）×１０ｃｍ（４インチ）（１０３ｃｍ２）の接種領域上に擦り付け、それを取り出した元の袋の中に配置した、ｉｉ）５ミリリットルの緩衝化ペプトン水をこのスポンジを含有する袋に加え、この袋をおよそ３０秒にわたって手で揉んで、スポンジから細菌を放出させた、ｉｉｉ）このスポンジを含有する袋と緩衝化ペプトン水を１〜１．５時間にわたって室温で放置した、ｉｖ）ピペットを使用して、３ミリリットルの懸濁液をこの袋から取り出し、Ｐｅｔｒｉｆｉｌｍ（商標）Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｐｌａｔｅ（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）に分配した、並びにｖ）このＰｅｔｒｉｆｉｌｍプレートをインキュベートし、任意の細菌コロニーの出現を製造者の取り扱い説明に従って解釈した。
【００７９】
実験手順では、接種された、乾燥ステンレス鋼表面の１０ｃｍ（４インチ）×１０ｃｍ（４インチ）（１０３ｃｍ２）区域上に試料回収具を３０〜６０秒間にわたって擦り付けた。場合によっては、試料回収具を乾燥させた。他の場合には、スプレーボトルを使用して、試料回収具に軽エアゾール（およそ０．５〜１．０ミリリットルの緩衝化ペプトン水）を適用することにより、試料回収具を予め湿らせておいた。
【００８０】
試料側を上方（ポリエステルバリア層方向）に向けながら、試料回収具を試料ハウジングの中、発泡体スペーサにより形成された「穴」の中、に配置した。引き続いて、試料ハウジングを約２５分にわたって室温で保持した。カバーフィルム及びバリアフィルムを発泡体スペーサから持ち上げ、バリアフィルムを取り外し、３ｍＬの緩衝化ペプトン水を試料回収具上に滴下した。両面接着テープでカバーフィルムを発泡体スペーサに再び取り付け、引き続いて、カバーフィルムを発泡体スペーサ上に下げ、粉末グアーガムを緩衝化ペプトン水と接触させて、ゲルを形成させた。試料ハウジングを約６０分にわたって平らな表面上に置いておき、微生物をある程度増殖させた。その後、カバーフィルムを持ち上げ、試薬ストリップの一方の側が試料回収具に接触し、もう一方の側がカバーフィルムの水和部分に接触するように、二重コーティングされた試薬ストリップを試料ハウジングの中に挿入した。次に、試料ハウジングを２６時間にわたって３５℃においてインキュベータの中に配置した。細菌コロニー（典型的には様々なサイズの小さな点として出現し、赤みを帯びた異なる色調を有する）の存在について試薬ストリップを検査した。この試験の結果を表３及び表４に示す。
【表３】
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【表４】
0006033914.tif 000005
【００８１】
（実施例２）
表面からの黄色ブドウ球菌の検出及び計数
試料ハウジング器具の調製
この実験で使用される試料ハウジング器具は、３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）から入手される３Ｍ  ＰＥＴＲＩＦＩＬＭ  Ｓｔａｐｈ  Ｅｘｐｒｅｓｓ（ＳＴＸ）Ｃｏｕｎｔ  Ｓｙｓｔｅｍプレートであった。各プレート内の乾燥している培地を１ミリリットルのＢｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄのリン酸塩希釈剤で水和し、この実験におけるプレートの使用に先立って、ゲル化させておいた。
【００８２】
試料回収具の調製
実施例１に記載しているように、透明な７６マイクロメートル（３ｍｉｌ）のポリエステルフィルムを使用することにより、タイプＩ試料回収具を作製した。感圧性アクリル系接着剤を使用して、指定の接合された材料（例えば、チーズクロス）を透明な７６マイクロメートル（３ｍｉｌ）のポリエチレンフィルムに積層することにより、タイプＩＩ試料回収具を作製した。ＣＥＲＥＸ  Ｇ１９２９８８不織布材料は、ＣＥＲＥＸ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｆａｂｒｉｃｓ（Ｃａｎｔｏｎｍｅｎｔ，ＦＬ）から入手した。Ｈａｎｅｓ  Ｗｅｔｌａｉｄ  Ｈｙｄｒｏｇｕａｒｄ  １５０  ＨＥＭ  ＰＥＴ／セルロースは、Ｈａｎｅｓ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（Ｃｏｎｏｖｅｒ，ＮＣ）から入手した。Ｈａｎｅｓ材料をＳＰＡＮ  ２０（Ｕｎｉｑｕｅｍａ，Ｓｔａｎｆｏｒｄ，ＦＬから入手）で前処理して、親水性にした。前処理は、ＳＰＡＮ−２０の溶液（９７．５％（重量／体積）のイソプロピルアルコール中、２．５％（重量／体積）のＳＰＡＮ−２０−ソルビタンモノラウレート）で布地材料を、布地が溶液で飽和するまで拭くことから構成された。この布地を室温で空気乾燥させた。数滴の水を布地の表面上に移して布地の中に水が吸収される（逃がれる）のを観察することにより、この処理された布地の一部を試験した。
【００８３】
接種表面の調製
３５℃において１８時間にわたってトリプティックソイブロス中で黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ  ２５９２３を増殖させた。２０マイクロリットルの一晩培養物を９９ｍＬのＢｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄのリン酸塩希釈剤に希釈し、得られた混合物を振盪して、懸濁液中で細菌を均一に分布させた。１ミリリットルの緩衝化細菌懸濁液をＢｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄのリン酸塩希釈剤の第２の瓶（９９ｍＬ）に移した。希釈した懸濁液を振盪し、無菌ガラススプレッダーを使用して３つの０．５ｍＬ試料を別々の平たい無菌ステンレス鋼試片の１０×１０ｃｍ（４×４インチ）区域上に広げた。層流フードの中で３０〜６０分にわたって室温においてステンレス鋼表面を乾燥させた。この手順で各ステンレス鋼試片を黄色ブドウ球菌細胞の約６０のコロニー形成単位（ＣＦＵ）で接種したと推定した。鋼表面が乾燥した後で、上記試料回収具を使用して、ステンレス鋼の表面上の微生物を回収及び定量した。
【００８４】
表面試験手順
スプレーボトルを使用して、試料回収具にＢｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄのリン酸塩希釈剤の軽エアゾール（約０．５〜１．０ｍＬ）を塗布することにより、試料回収具を湿らせた。接種し、乾燥させたステンレス鋼表面の１０ｃｍ（４インチ）×１０ｃｍ（４インチ）（１０３ｃｍ２）区域上に試料回収具の表面を激しく擦り付けることにより、試料を回収した。表面を１つの方向で側方に擦り付け、次に表面を最初に擦り付けた方向と垂直である方向で側方に擦り付けた。
【００８５】
予め水和したＰＥＴＲＩＦＩＬＭ  ＳＴＸプレートのカバーシートを持ち上げ、発泡体スペーサの中央の穴を露出させた（すなわち、脱水された培地により形成されたゲルは、カバーシートに取り付けられたままであった）。試料側を上方（カバーシート方向）に向けて、試料回収具を試料ハウジングの中（発泡体スペーサ中の開口により形成された穴の中）に配置した。カバーシートを下げ、水和ゲルを試料回収具上の試料と接触させた。試料ハウジングを３５℃で約１８時間にわたってインキュベーターの中に配置し、小さな赤い点として出現したコロニーを数えた。各プレート内のコロニーの数を表５に示す。回収具としてのポリエチレンフィルム試料での実験におけるコロニー形成単位の不在は、実験の経過中に試験表面上に接種された細菌の生存能の欠失に起因し得る。
【表５】
0006033914.tif 000006
【００８６】
ここで、本発明は、可能な記述が実施可能な発明者によって予測される、いくつかの特定の実施形態を参照して記載されている。現在予測されていない修正を含む、本発明の実体の無い修正は、それでもなお、それらと同等であると定めることができる。したがって、本発明の範囲は、本明細書において説明した詳細及び構造に限定されるべきではなく、むしろ、以下の特許請求の範囲、及びそれらと同等の物によって単に限定されるべきである。
【図１】
0006033914.tif 000007
【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
0006033914.tif 000009
【図３Ａ】
0006033914.tif 000010
【図３Ｂ】
0006033914.tif 000011
【図４】
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【図５】
0006033914.tif 000013
【図６】
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【図７】
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【図８】
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