(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0005853033.tif 000118
の化合物、またはその互変異性体もしくは立体異性体
（式中、
Ｒ1およびＲ2は、水素、ハロ、シアノ、Ｃ1〜3アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ1〜3アルキルまたはＣ3〜6シクロアルキルからなる群から独立して選択され；
Ｒ3は、水素、Ｃ1〜3アルキル、Ｃ3〜6シクロアルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ1〜3アルキル、ホモアリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、Ｘ4は、独立してＣ(Ｒ4）またはＮであるが、但し、その中でＮを表すのは２個以下であり；各Ｒ4は、水素、ハロ、Ｃ1〜3アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ1〜3アルキル、シアノ、Ｃ1〜3アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ1〜3アルキルオキシからなる群から選択され；
Ｌは、結合または−Ｎ(Ｒ5）ＣＯ−であり、式中、Ｒ5は水素またはＣ1〜3アルキルであり；
Ａｒは、ホモアリールまたはヘテロアリールであり；
ここで、ホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ1〜3アルキル、Ｃ1〜3アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ1〜3アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ1〜3アルキルオキシからなる群から選択される１個、２個もしくは３個の置換基で置換されたフェニルであり；
ヘテロアリールは、それぞれ任意選択によりハロ、シアノ、Ｃ1〜3アルキル、Ｃ1〜3アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ1〜3アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ1〜3アルキルオキシからなる群から選択される１個、２個または３個の置換基で置換された、ピリジル、ピリミジル、ピラジル、ピリダジル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、およびオキサジアゾリルからなる群から選択される）、または
その付加塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ1およびＲ2が、水素およびＣ1〜3アルキルから独立して選択され；
Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、Ｘ4が、独立してＣ(Ｒ4）であり、式中、各Ｒ4は水素およびハロから選択され；
Ｌが、結合または−Ｎ(Ｒ5）ＣＯ−であり、式中、Ｒ5は水素であり；
Ａｒが、ホモアリールまたはヘテロアリールであり；
ここで、ホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ1〜3アルキル、Ｃ1〜3アルキルオキシ、およびポリハロ−Ｃ1〜3アルキルオキシからなる群から選択される１個もしくは２個の置換基で置換されたフェニルであり；
ヘテロアリールは、それぞれ任意選択によりハロ、シアノ、Ｃ1〜3アルキル、Ｃ1〜3アルキルオキシ、およびポリハロ−Ｃ1〜3アルキルオキシからなる群から選択される１個または２個の置換基で置換された、ピリジル、ピリミジル、およびピラジルからなる群から選択される；
請求項１に記載の化合物、または
その付加塩もしくは溶媒和物。
【請求項３】
Ｒ1およびＲ2が、水素であり；
Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、Ｘ4が、ＣＨであり；
Ｌが、結合または−Ｎ(Ｒ5）ＣＯ−であり、式中、Ｒ5は水素であり；
Ａｒが、ホモアリールまたはヘテロアリールであり；
ここで、ホモアリールはクロロで置換されたフェニルであり；
ヘテロアリールは、それぞれ任意選択によりクロロ、フルオロ、シアノ、メチル、およびメトキシからなる群から選択される１個または２個の置換基で置換された、ピリジルおよびピリミジルからなる群から選択される；
請求項１に記載の化合物、または
その付加塩もしくは溶媒和物。
【請求項４】
前記Ｒ3で置換された炭素原子がＲ配置を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
治療有効量の請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物と、薬学的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
【請求項６】
薬学的に許容される担体が、治療有効量の請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物と完全に混合されることを特徴とする、請求項５に記載の医薬組成物の製造方法。
【請求項７】
アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老化現象、認知症、レヴィー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症、またはβアミロイドに関連する認知症の治療、防止、または予防に使用される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物を有効成分として含む、アルツハイマー病、軽度認知障害、老化現象、認知症、レヴィー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症、およびβアミロイドに関連する認知症からなる群から選択される障害を治療するための製薬学的製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、βサイトアミロイド切断酵素、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２、またはメマプシン２としても知られるβ−セクレターゼの阻害剤としての、新規な６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミン誘導体に関する。本発明は、また、このような化合物を含む医薬組成物、このような化合物および組成物の製造方法、ならびに、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老化現象、認知症、レヴィー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症、またはβアミロイドに関連する認知症などのβ−セクレターゼが関与する障害を予防および治療するためのこのような化合物および組成物の使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、老化に伴う神経変性疾患である。ＡＤ患者は、認知障害および記憶喪失、ならびに不安症などの行動問題を患う。ＡＤに罹患している人の９０％超が散発型の障害を有するが、この症例の１０％未満は家族性または遺伝性である。米国では、６５歳で１０人に約１人がＡＤを有するが、８５歳では２人に１人がＡＤに罹患している。初期診断からの平均寿命は７〜１０年であり、ＡＤ患者は、非常に費用のかかる介護付き生活施設での、または家族による広範な介護を必要とする。人口に占める高齢者の数が増加するにつれ、ＡＤに対する医学的関心が高まっている。現在使用可能なＡＤの治療法は単にこの疾患の症状を治療するに過ぎず、それには認知性を改善するためのアセチルコリンエステラーゼ阻害剤、ならびにこの病気に伴う行動問題をコントロールするための抗不安薬および抗精神病薬が含まれる。
【０００３】
ＡＤ患者の脳における顕著な病理学的特徴は、タウタンパク質の過剰リン酸化によって生じる神経原線維変化と、β−アミロイド１−４２（Ａβ１−４２）ペプチドの凝集によって形成されるアミロイド斑である。Ａβ１−４２は、オリゴマー、次いで原線維を形成し、最終的にはアミロイド斑を形成する。オリゴマーおよび原線維はとりわけ神経毒性があると考えられており、ＡＤに関連する神経損傷の大部分を引き起こし得る。Ａβ１−４２の生成を防止する薬剤は、ＡＤ治療用の疾患緩和剤となる可能性がある。Ａβ１−４２は、７７０個のアミノ酸から構成されるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）から生成される。Ａβ１−４２のＮ末端がβ−セクレターゼ（ＢＡＣＥ）により切断された後、γ−セクレターゼによりＣ末端が切断される。Ａβ１−４２の他に、γ−セクレターゼは、主要な切断産物であるＡβ１−４０、ならびにＡβ１−３８およびＡβ１−４３も遊離する。これらのＡβ型も凝集して、オリゴマーおよび原線維を形成し得る。従って、ＢＡＣＥの阻害剤は、Ａβ１−４２ならびにＡβ１−４０、Ａβ１−３８およびＡβ１−４３の生成を防止するものと期待され、ＡＤ治療における治療薬となる可能性がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、式（Ｉ）、
【化１】
0005853033.tif 000002
の化合物、またはその互変異性体もしくは立体異性体の形態
（式中、
Ｒ１およびＲ２は、水素、ハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ１〜３アルキルまたはＣ３〜６シクロアルキルからなる群から独立して選択され；
Ｒ３は、水素、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ１〜３アルキル、ホモアリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４は、独立してＣ(Ｒ４）またはＮであるが、但し、その中でＮを表すのは２個以下であり；各Ｒ４は、水素、ハロ、Ｃ１〜３アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ１〜３アルキル、シアノ、Ｃ１〜３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシからなる群から選択され；
Ｌは、結合または−Ｎ(Ｒ５）ＣＯ−であり、式中、Ｒ５は水素またはＣ１〜３アルキルであり；
Ａｒは、ホモアリールまたはヘテロアリールであり；
ここで、ホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ１〜３アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシからなる群から選択される１個、２個もしくは３個の置換基で置換されたフェニルであり；
ヘテロアリールは、それぞれ任意選択によりハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、モノ−およびポリハロ−Ｃ１〜３アルキル、モノ−およびポリハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシからなる群から選択される１個、２個または３個の置換基で置換された、ピリジル、ピリミジル、ピラジル、ピリダジル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、オキサゾリル、およびオキサジアゾリルからなる群から選択される）、または
その付加塩もしくは溶媒和物に関する。
【０００５】
本発明を例証するものとして、薬学的に許容される担体と前述の化合物のいずれかとを含む医薬組成物がある。本発明の例証として、前述の化合物のいずれかと薬学的に許容される担体とを混合することにより製造される医薬組成物がある。本発明を例証するものとして、前述の化合物のいずれかと薬学的に許容される担体とを混合する工程を含む医薬組成物の製造方法がある。
【０００６】
本発明を例示するものとして、必要とする対象に前述の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量投与する工程を含む、β−セクレターゼ酵素により媒介される障害の治療方法がある。
【０００７】
本発明をさらに例示するものとして、必要とする対象に前述の化合物または医薬組成物のいずれかを治療有効量投与する工程を含むβ−セクレターゼ酵素の阻害方法がある。
【０００８】
本発明の一例として、必要とする対象に前述の化合物または医薬組成物のいずれかを治
療有効量投与する工程を含む、アルツハイマー病、軽度認知障害、老化現象、認知症、レヴィー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症およびβアミロイドに関連する認知症からなる群から選択される障害、好ましくはアルツハイマー病の治療方法がある。
【０００９】
本発明の別の例として、必要とする対象の（ａ）アルツハイマー病、（ｂ）軽度認知障害、（ｃ）老化現象、（ｄ）認知症、（ｅ）レヴィー小体型認知症、（ｆ）ダウン症候群、（ｇ）脳卒中に伴う認知症、（ｈ）パーキンソン病に伴う認知症、および（ｉ）βアミロイドに関連する認知症の治療に使用される前述の化合物のいずれかがある。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明は、前述の式（Ｉ）の化合物ならびにその薬学的に許容される塩および溶媒和物に関する。式（Ｉ）の化合物は、β−セクレターゼ酵素（βサイト切断酵素、ＢＡＣＥ、ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２、またはメマプシン２としても知られる）の阻害剤であり、アルツハイマー病、軽度認知障害、老化現象、認知症、脳卒中に伴う認知症、レヴィー小体型認知症、ダウン症候群、パーキンソン病に伴う認知症、およびβアミロイドに関連する認知症、好ましくはアルツハイマー病、軽度認知障害、または認知症、より好ましくはアルツハイマー病の治療に有用である。
【００１１】
本発明の一実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、水素およびＣ１〜３アルキルから独立して選択され；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４は、独立してＣ(Ｒ４）であり、式中、各Ｒ４は水素およびハロから選択され；
Ｌは、結合または−Ｎ(Ｒ５）ＣＯ−であり、式中、Ｒ５は水素であり；
Ａｒは、ホモアリールまたはヘテロアリールであり；
ここで、ホモアリールは、フェニル、またはハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、およびポリハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシからなる群から選択される１個または２個の置換基で置換されたフェニルであり；
ヘテロアリールは、それぞれ任意選択によりハロ、シアノ、Ｃ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキルオキシ、およびポリハロ−Ｃ１〜３アルキルオキシからなる群から選択される１個または２個の置換基で置換された、ピリジル、ピリミジル、およびピラジルからなる群から選択される；または
その付加塩もしくは溶媒和物。
【００１２】
本発明の別の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、水素であり；
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４は、はＣＨであり；
Ｌは、結合または−Ｎ(Ｒ５）ＣＯ−であり、式中、Ｒ５は水素であり；
Ａｒは、ホモアリールまたはヘテロアリールであり；
ここで、ホモアリールは、クロロで置換されたフェニルであり；
ヘテロアリールは、それぞれ任意選択によりクロロ、フルオロ、シアノ、メチル、およびメトキシからなる群から選択される１個または２個の置換基で置換された、ピリジルおよびピリミジルからなる群から選択される；または
その付加塩もしくは溶媒和物。
【００１３】
別の実施形態では、Ｒ３で置換された炭素原子は、Ｒ配置を有する。
【００１４】
定義
「ハロ」は、フルオロ、クロロおよびブロモを意味するものとし；「Ｃ１〜３アルキル」は、炭素数１、２または３の直鎖または分岐鎖の飽和アルキル基、例えば、メチル、エチル、１−プロピルおよび２−プロピルを意味するものとし；「Ｃ１〜３アルキルオキシ
」は、Ｃ１〜３アルキルが前述の通りであるエーテル基を意味するものとし；「モノ−およびポリハロＣ１〜３アルキル」は、１個、２個、３個、または、可能な場合、４個以上の前述のハロ原子で置換された前述のＣ１〜３アルキルを意味するものとし；「モノ−およびポリハロＣ１〜３アルキルオキシ」は、モノ−およびポリハロＣ１〜３アルキルが前述の通りであるエーテル基を意味するものとし；「Ｃ３〜６シクロアルキル」は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを意味するものとし；「Ｃ３〜６シクロアルカンジイル」は、シクロプロパンジイル、シクロブタンジイル、シクロペンタンジイルおよびシクロヘキサンジイルなどの２価の基を意味するものとする。
【００１５】
本明細書で使用する場合、「対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）」という用語は、治療、観察、または実験の目的物（ｏｂｊｅｃｔ）となる、または目的物となった動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。
【００１６】
本明細書で使用する場合、「治療有効量」という用語は、治療される疾患または障害の症状の緩和を含む、研究者、獣医、医師または他の臨床医が求める、組織系、動物、またはヒトにおける生物学的または医学的反応を誘発する薬理活性化合物または医薬剤の量を意味する。
【００１７】
本明細書で使用する場合、「組成物」という用語は、特定の成分を特定の量で含む製品、ならびに特定の量の特定の成分の組み合わせから直接または間接的に得られる任意の製品を包含するものとする。
【００１８】
上記および以下において、「式（Ｉ）の化合物」という用語は、その付加塩、溶媒和物および立体異性体を含むものとする。
【００１９】
「立体異性体」または「立体化学的異性体の形態」という用語は、上記または下記において、互換的に使用される。
本発明は、式（Ｉ）の化合物の全ての立体異性体を、純粋な立体異性体としてまたは２種以上の立体異性体の混合物として含む。
【００２０】
鏡像異性体は、重ね合わせることができない互いの鏡像となっている立体異性体である。１組の鏡像異性体の１：１混合物は、ラセミ体またはラセミ混合物である。
【００２１】
ジアステレオマー（またはジアステレオ異性体）は、鏡像異性体ではない立体異性体である、即ち、それらは鏡像の関係にない。化合物が二重結合を含む場合、置換基は、Ｅ配置またはＺ配置となり得る。化合物が二置換シクロアルキル基を含有する場合、置換基は、ｃｉｓ配置またはｔｒａｎｓ配置となり得る。従って、本発明は、鏡像異性体、ジアステレオマー、ラセミ体、Ｅ異性体、Ｚ異性体、ｃｉｓ異性体、ｔｒａｎｓ異性体、およびこれらの混合物を含む。
【００２２】
絶対配置は、カーン−インゴルド−プレログ・システムに従って明記される。不斉原子での配置はＲまたはＳで明記される。絶対配置が未知の分割された化合物は、それらが平面偏光を回転させる方向に応じて、（＋）または（−）で示すことができる。
【００２３】
特定の立体異性体が同定されるとき、これは、前記立体異性体が他の異性体を実質的に含まない、即ち、共存する他の異性体が５０％未満、好ましくは２０％未満、より好ましくは１０％未満、さらにより好ましくは５％未満、特に２％未満、および最も好ましくは１％未満であることを意味する。従って、式（Ｉ）の化合物が、例えば、（Ｒ）と明記されるとき、これは、化合物が（Ｓ）異性体を実質的に含まないことを意味し；式（Ｉ）の化合物が、例えば、Ｅと明記されるとき、これは、化合物がＺ異性体を実質的に含まない
ことを意味し；式（Ｉ）の化合物が、例えば、ｃｉｓと明記されるとき、これは、化合物がｔｒａｎｓ異性体を実質的に含まないことを意味する。
【００２４】
式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ−１）の互変異性体と動的平衡状態で共存する。
【化２】
0005853033.tif 000003
【００２５】
さらに、本発明の化合物の結晶形の幾つかは多形として存在することがあり、このようなものとして本発明に含まれるものとする。さらに、本発明の化合物の幾つかは、水（即ち、水和物）または一般的な有機溶媒と溶媒和物を形成することができ、このような溶媒和物も本発明の範囲内に包含されるものとする。
【００２６】
医薬に使用される場合、本発明の化合物の塩は、無毒の「薬学的に許容される塩」を指す。しかし、他の塩も、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の製造に有用な場合がある。本化合物の好適な薬学的に許容される塩としては、例えば、化合物の溶液を、塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、またはリン酸などの薬学的に許容される酸の溶液と混合することにより生成し得る酸付加塩が挙げられる。さらに、本発明の化合物が酸性部分を有する場合、その好適な薬学的に許容される塩としては、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウム塩またはマグネシウム塩；および好適な有機配位子と共に形成された塩、例えば、四級アンモニウム塩を挙げることができる。
【００２７】
薬学的に許容される塩の製造に使用され得る代表的な酸としては、以下：酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アシル化アミノ酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、（＋）−樟脳酸、樟脳スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチジン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルコロン酸（Ｄ−ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、Ｌ−グルタミン酸、β−オキソ−グルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、（＋）−Ｌ−乳酸、（±）−ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、（±）−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、リン酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サリチル酸、４−アミノ−サリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロメチルスルホン酸、およびウンデシレン酸が挙げられるが、これらに限定されるものではない。薬学的に許容される塩の製造に使用され得る代表的な塩基としては、以下：アンモニア、Ｌ−アルギニン、ベネタミン、ベンザチン、水酸化カルシウム、コリン、ジメチルエタノールアミン、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、２−（ジエチルアミ
ノ）−エタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチル−グルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ−イミダゾール、Ｌ−リシン、水酸化マグネシウム、４−（２−ヒドロキシエチル）−モルホリン、ピペラジン、水酸化カリウム、１−（２−ヒドロキシエチル）−ピロリジン、第二級アミン、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン、トロメタミン、および水酸化亜鉛が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００２８】
本発明の化合物の化学名は、ケミカル・アブストラクト・サービスにより合意された命名法に従って命名された。式（Ｉ）の化合物の幾つかは、その互変異性体の形態でも存在し得る。このような形態は、上式中に明示的に示されていないが、本発明の範囲内に含まれるものとする。
【００２９】
Ａ．最終化合物の製造
実験手順１
式（Ｉ）の最終化合物は、式（ＩＩ）の中間化合物を、例えば塩化アンモニウムまたはアンモニア水などの適切なアンモニア源と、反応スキーム（１）に従って反応させること、即ち、例えば水またはメタノールなどの好適な反応不活性溶媒中で、例えば、反応混合物を６０〜９０℃で、例えば４〜１００時間加熱することなどの熱条件下で行われる反応により製造することができる。反応スキーム（１）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りである。
【化３】
0005853033.tif 000004
【００３０】
実験手順２
式（Ｉ−ａ）（式中、Ｌは−Ｎ(Ｒ５）ＣＯ−である）の最終化合物は、式（ＩＩＩ−ａ）の中間化合物を式（ＩＶ）の中間体と反応スキーム（２）に従って反応させること、即ち、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの好適な反応不活性溶媒中、例えばＫ３ＰＯ４などの好適な塩基、例えばＣｕＩなどの銅触媒、および、例えば（１Ｒ，２Ｒ）−（−）−１，２−ジアミノシクロヘキサンなどのジアミンの存在下、例えば、反応混合物にマイクロ波を照射し１８０℃で、例えば１３５分間加熱することなどの熱条件下で行われる反応により製造することができる。反応スキーム（２）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りであり、Ｗはハロである。
【化４】
0005853033.tif 000005
【００３１】
実験手順３
さらに、式（Ｉ−ａ）の最終化合物は、式（ＩＩＩ−ｂ）の中間化合物を式（Ｖ）の中間体と反応スキーム（３）に従って反応させること、即ち、例えばジクロロメタンまたはメタノールなどの好適な反応不活性溶媒中、任意選択により、例えばＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどの好適な塩基の存在下、例えばＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートまたは４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド］などの縮合剤の存在下、例えば、反応混合物を２５℃で、例えば２時間加熱することなどの熱条件下で行われる反応により製造することができる。反応スキーム（３）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りである。
【化５】
0005853033.tif 000006
【００３２】
実験手順４
さらに、式（Ｉ−ａ）の最終化合物は、式（ＩＩＩ−ｂ）の中間化合物を式（ＶＩ）の中間体と反応スキーム（４）に従って反応させること、即ち、例えばジクロロメタンなどの好適な反応不活性溶媒中、例えばピリジンなどの好適な塩基の存在下、例えば、反応混合物を２５℃で、例えば２時間加熱することなどの熱条件下で行われる反応により製造することができる。反応スキーム（４）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りであいり、Ｙはハロである。
【化６】
0005853033.tif 000007
【００３３】
実験手順５
式（Ｉ−ｂ）（式中、Ｌは結合である）の最終化合物は、式（ＩＩＩ−ａ）の中間化合物を式（ＶＩＩ）の中間体と反応スキーム（５）に従って反応させること、即ち、例えば１，４−ジオキサン／エタノールなどの不活性溶媒の混合物などの好適な反応不活性溶媒中、例えば、Ｋ２ＣＯ３などの好適な塩基、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）などのＰｄ錯体触媒の存在下、例えば、反応混合物を８０℃で、例えば２０時間加熱すること、または、例えば、反応混合物にマイクロ波を照射し１５０℃で１０分間〜３０分間加熱することなどの熱条件下で行われる反応により製造することができる。反応スキーム（５）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りであり、Ｗはハロである。Ｒ６およびＲ７は水素もしくはアルキルであってもよく、または、Ｒ６とＲ７は一緒に、例えば式−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、もしくは−Ｃ（ＣＨ３）２Ｃ（ＣＨ３）２−の２価の基を形成してもよい。
【化７】
0005853033.tif 000008
【００３４】
実験手順６
式（Ｉ−ｃ）（式中、Ｒ１は水素である）の最終化合物は、式（Ｉ−ｄ）（式中、Ｒ１は、塩素、臭素およびヨウ素からなる群から選択される）の対応する最終化合物から、反応スキーム（６）による当該技術分野で公知の還元法に従って製造することができる。例えば、前記還元は、反応物を水素雰囲気下、例えばパラジウム炭素、白金炭素、ラネーニッケルおよび同様の触媒などの適切な触媒の存在下で撹拌することにより行うことができる。好適な溶媒としては、例えば、水、例えばメタノールおよびエタノール等のアルカノール、例えば酢酸エチル等のエステルがある。前記還元反応の速度を向上させるために、反応混合物の温度および／または圧力を上昇させることが有利な場合がある。例えば、チオフェン等の触媒毒を反応混合物に添加することにより、反応物および反応生成物中の特定の官能基の望ましくない更なる水素化を防止することができる。反応スキーム（６）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りである。
【化８】
0005853033.tif 000009
【００３５】
前述の製造中の多くの中間体および出発物質は、当該技術分野で公知の前記または類似の化合物の製造方法に従って製造することができる既知の化合物であり、幾つかの中間体は新規である。多くのこのような製造方法について以下により詳細に説明する。
【００３６】
Ｂ．中間化合物の製造
実験手順７
式（ＩＩ）の中間体は、式（ＶＩＩＩ）の中間化合物を、例えば五硫化リンまたは２，４−ビス−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジホスフェタン２，４−ジスルフィド［ローソン試薬］などのチオアミド合成用の好適なイオウ供与試薬と、反応スキーム（７）に従って反応させること、即ち、例えばテトラヒドロフランまたはトルエンなどの反応不活性溶媒中、例えばピリジンなどの好適な塩基の存在下、例えば、反応混合物を１００℃で、例えば５時間加熱することなどの熱条件下で行われる反応により製造することができる。反応スキーム（７）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りである。
【化９】
0005853033.tif 000010
【００３７】
実験手順８
式（ＶＩＩＩ−ａ）（式中、Ｌは結合である）の中間体は、式（ＩＸ−ａ）の中間化合物を式（ＶＩＩ）の中間体と反応スキーム（８）に従って反応させること、即ち、例えば１，４−ジオキサン／水などの好適な不活性溶媒混合物中、例えばＮａ２ＣＯ３水溶液などの好適な塩基、例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）などのＰｄ錯体触媒の存在下、例えば、反応混合物を８０℃で、例えば２０時間加熱すること、または、例えば、反応混合物をにマイクロ波を照射し１５０℃で、例えば１５分間〜３０分間加熱することなどの熱条件下で行われる反応により製造することができる。反応スキーム（８）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りであり、Ｗはハロである。Ｒ６およびＲ７は水素もしくはアルキルであってもよく、または、Ｒ６とＲ７は一緒に、例えば式−Ｃ
Ｈ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、もしくは−Ｃ（ＣＨ３）２Ｃ（ＣＨ３）２−の２価の基を形成してもよい。
【化１０】
0005853033.tif 000011
【００３８】
実験手順９
式（ＩＩＩ−ｂ）の中間体は、式（ＩＩＩ−ａ）の対応する中間化合物から、反応スキーム（９）による当該技術分野で公知のブッフバルト・ハートウィッグ型カップリング法に従って製造することができる。前記カップリングは、式（ＩＩＩ−ａ）の中間化合物を式（Ｘ）の中間体と共に、例えば、エタノール、または１，２−ジメトキシエタン／水／エタノールなどの不活性溶媒の混合物などの好適な反応不活性溶媒中、例えばＫ３ＰＯ４水溶液またはＣｓ２ＣＯ３水溶液などの好適な塩基、例えば［１，１’−ビス(ジフェニルホスフィノ）フェロセン］−ジクロロパラジウム(ＩＩ）またはｔｒａｎｓ−ビス(ジシクロヘキシルアミン）パラジウムジアセテート［ＤＡＰＣｙ］などのＰｄ錯体触媒の存在下、例えば、反応混合物を８０℃で、例えば２０時間加熱すること、または、例えば、反応混合物にマイクロ波を照射し１３０℃で、例えば１０分間加熱することなどの熱条件下で処理することにより行うことができる。反応スキーム（９）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りであり、Ｗはハロである。Ｒ５は、水素またはＣ１〜３アルキルである。あるいは、Ｒ５が水素である場合、式（ＩＩＩ−ｂ）の中間体は２段階合成に従って得ることもできる。最初に、中間体（ＩＩＩ−ａ）とベンゾフェノンイミンなどの安定なイミンとの間で、ブッフバルト・ハートウィッグ型カップリングを当業者に公知の条件で行うことができる。第２段階では、カップリング生成物をイソプロパノールなどの好適な溶媒に溶解し、例えば塩酸などの酸で、例えば、反応混合物を２５℃で、例えば２時間加熱することなどの熱条件下で処理することにより、中間体（ＩＩＩ−ｂ）を第一級アミンとして得ることができる。
【化１１】
0005853033.tif 000012
【００３９】
実験手順１０
さらに、式（ＩＩＩ−ｂ）（式中、Ｒ５は水素である）の中間体は、式（ＩＩＩ−ｃ）
の対応する中間体から、反応スキーム（１０）による当該技術分野で公知のニトロからアミノへの還元法に従って製造することができる。例えば、前記還元は、塩化スズ、亜鉛または鉄などの適切な還元剤の存在下、エタノール、またはエタノール／酢酸もしくはメタノール／塩化アンモニウム水溶液のような混合物などの好適な不活性溶媒中、好適な反応条件下、例えば、通常７０℃〜１１０℃の範囲の好都合な温度で、確実に反応が終了する時間行うことができる。当業者には、中間体（ＩＩＩ−ｃ）のＲ１および／またはＲ２が塩素、臭素およびヨウ素からなる群から選択されるハロゲンであり、最終化合物中に望ましくない場合、前述の条件下で、酸化的付加−プロトン化プロセスを行い、中間体（ＩＩＩ−ｂ）（式中、Ｒ１および／またはＲ２は水素である）を得ることもできることが分かるであろう。あるいは、前記還元は、水素雰囲気下、および、例えばパラジウム炭素、白金炭素、ラネーニッケルおよび同様の触媒などの適切な触媒の存在下で反応物を撹拌することにより行うことができる。好適な溶媒としては、例えば、水、例えばメタノールおよびエタノール等のアルカノール、例えば酢酸エチル等のエステルがある。前記還元反応の速度を向上させるために、反応混合物の温度および／または圧力を上昇させることが有利な場合がある。例えばチオフェン等の触媒毒を反応混合物に添加することにより、反応物および反応生成物中の特定の官能基の望ましくないさらなる水素化を防止することができる。反応スキーム（１０）中、変数は全て式（Ｉ）に記載の通りである。
【化１２】
0005853033.tif 000013
【００４０】
実験手順１１
式（ＩＩＩ−ａ）および（ＩＩＩ−ｃ）の化合物は、一般に、下記の反応スキーム（１１）および（１２）に示す反応工程に従って製造することができる。
【化１３】
0005853033.tif 000014
【００４１】
上記反応スキーム（１１）中のアミジン誘導体は、好都合には、対応するチオアミド誘導体から、当該技術分野で公知のチオアミドからアミジンへの変換法に従って製造することができる（反応工程Ａ）。前記変換は、前記チオアミドを、例えば塩化アンモニウムまたはアンモニア水などのアンモニア源で、例えば水またはメタノール等の好適な反応不活性溶媒中、例えば、反応混合物を６０〜９０℃で、例えば６〜１００時間加熱することなどの熱条件下で処理することにより行うことができる。
【００４２】
上記反応スキーム（１１）中のチオアミド誘導体は、アミド誘導体から、当該技術分野で公知の加硫法に従って製造することができる（反応工程Ｂ）。前記変換は、好都合には、前記アミドを、例えば五硫化リンまたは２，４−ビス−（４−メトキシ−フェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジホスフェタン２，４−ジスルフィド［ローソン試薬］などの加硫剤で、無溶媒条件（ｎｅａｔ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）、または、例えばテトラヒドロフランもしくは１，４−ジオキサン等の反応不活性溶媒中で、任意選択によりピリジンのような好適な塩基の存在下、例えば、反応混合物を５０〜１００℃で、例えば２４時間加熱することなどの熱条件下で処理することにより行うことができる。
【００４３】
上記反応スキーム（１１）中の式（ＩＸ−ａ）および（ＩＸ−ｃ）のアミド誘導体は、式（ＸＩＩ−ａ）および（ＸＩＩ−ｃ）の対応する中間化合物から、当該技術分野で公知の環化法に従って製造することができる（反応工程Ｃ）。前記環化は、好都合には、式（ＸＩＩ−ａ）および（ＸＩＩ−ｃ）の中間化合物を酢酸カリウムなどの好適な塩基で、例えばエタノール等の好適な反応溶媒中、７０℃〜１００℃で、確実に反応が終了する時間、処理することにより行うことができる。
【００４４】
式（ＩＸ−ａ）（式中、Ｒ２は水素である）の中間体は、式（ＩＸ−ａ−１）（式中、Ｒ２はニトロである）の中間体から、ニトロをアミノ基に還元した後、ジアゾ化−脱アミノ化反応を行うことにより製造することができる。
【００４５】
式（ＩＸ−ａ）（式中、Ｒ２はジフルオロメチルである）の中間体は、式（ＩＸ−ａ−２）（式中、Ｒ２はアルコキシカルボニルである）の中間体から、当業者に公知の幾つかの方法の１つによりエステル基をアルデヒドに変換した後、アルデヒド基をＤＡＳＴと反応させることにより製造することができる。
【００４６】
上記反応スキーム（１１）中の式（ＸＩＩ−ａ）および（ＸＩＩ−ｃ）の中間化合物は、式（ＸＩＩＩ−ａ）および（ＸＩＩＩ−ｃ）の対応する中間化合物から、当業者に公知の方法に従って行われる保護基の除去により製造することができる（反応工程Ｄ）。
【００４７】
上記反応スキーム（１１）中の式（ＸＩＩＩ−ｃ）の中間化合物は、式（ＸＩＶ−ｃ）の対応する中間化合物から、当該技術分野で公知のメチル化法に従って製造することができる（反応工程Ｅ）。前記メチル化は、好都合には、式（ＸＩＶ−ｃ）の中間化合物を、リチウムジイソプロピルアミドなどの好適な塩基、およびドライアイスまたはクロロギ酸エチルなどの好適な求電子試薬で、例えばテトラヒドロフランなどの好適な反応溶媒中、−８０℃〜０℃で、確実に反応が終了する時間、処理することにより行うことができる。
【化１４】
0005853033.tif 000015
【００４８】
上記反応スキーム（１２）中の式（ＸＩＩＩ−ａ）および（ＸＩＶ−ｃ）の中間体は、式（ＸＶＩ−ａ）および（ＸＶＩ−ｃ）（式中、Ｚ１は、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基などのアミンの保護基である）の対応する中間化合物から、当該技術分野で公知のアルキル化法に従って製造することができる（反応工程Ｆ）。前記アルキル化は、好都合には、(ＸＶ−ａ）および（ＸＶ−ｃ）をそれぞれ式（ＸＶＩ−ａ）および（ＸＶＩ−
ｃ）の対応する中間化合物と共に、例えば炭酸ナトリウムまたは炭酸セシウムなどの好適な塩基で、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはジメトキシスルホキシドなどの好適な不活性溶媒中、例えば０℃などの低温で３０分間、次いで、例えば１００℃などの適度の高温で２４時間〜１００時間処理すること、または、例えば、反応混合物にマイクロ波を照射し１３０℃で、例えば３０分間〜４５分間加熱することにより行うことができる。
【００４９】
上記反応スキーム（１２）中の式（ＸＶＩ−ａ）および（ＸＶＩ−ｃ）の中間体は、式（ＸＶＩＩ−ａ）および（ＸＶＩＩ−ｃ）の中間化合物を当該技術分野で公知の酸化法に従って反応させることにより製造することができる（反応工程Ｇ）。前記酸化は、好都合には、式（ＸＶＩＩ−ａ）および（ＸＶＩＩ−ｃ）の対応する中間化合物を、例えば過ヨウ素酸ナトリウムなどの酸化剤で、例えばアセトニトリル／水などの好適な不活性溶媒中、塩化ルテニウム（ＩＩＩ）の存在下、例えば２５℃などの適度の高温で、例えば２時間処理することにより行うことができる。
【００５０】
上記反応スキーム（１２）中の式（ＸＶＩＩ−ａ）および（ＸＶＩＩ−ｃ）の中間体は、式（ＸＶＩＩＩ−ａ）および（ＸＶＩＩＩ−ｃ）の中間化合物を当該技術分野で公知のスルファミン酸エステル生成法に従って反応させることにより製造することができる（反応工程Ｈ）。前記変換は、好都合には、式（ＸＶＩＩＩ−ａ）および（ＸＶＩＩＩ−ｃ）の対応する中間化合物を塩化チオニルと、例えばピリジンなどの塩基の存在下、例えばアセトニトリルなどの好適な反応不活性溶媒中、例えば−４０℃などの低温で、例えば３０分間、次いで、例えば２５℃などの適度の高温で、例えば２４〜７２時間処理することにより行うことができる。
【００５１】
式（ＸＶＩＩＩ−ａ）および（ＸＶＩＩＩ−ｃ）（式中、Ｚ１は、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基などのアミンの保護基である）の中間体化合物は、一般に、文献に記載されている当該技術分野で公知のストレッカー型の方法に従って製造することができる。
【００５２】
薬理学
本発明の化合物およびその薬学的に許容される組成物はＢＡＣＥを阻害し、従って、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害（ＭＣＩ）、老化現象、認知症、レヴィー小体型認知症、脳アミロイド血管症、多発梗塞性認知症、ダウン症候群、パーキンソン病に伴う認知症、およびβアミロイドに関連する認知症の治療または予防に有用となり得る。
【００５３】
本発明は、医薬として使用される、一般式（Ｉ）の化合物、その立体異性体の形態、またはその薬学的に許容される酸付加塩もしくは塩基付加塩、またはその溶媒和物に関する。
【００５４】
本発明は、また、ＡＤ、ＭＣＩ、老化現象、認知症、レヴィー小体型認知症、脳アミロイド血管症、多発梗塞性認知症、ダウン症候群、パーキンソン病に伴う認知症、およびβアミロイドに関連する認知症からなる群から選択される疾患または症状の治療または予防に使用される、一般式（Ｉ）の化合物、その立体異性体の形態、またはその薬学的に許容される酸付加塩もしくは塩基付加塩、またはその溶媒和物にも関する。
【００５５】
本発明は、また、前述の疾患の症状のいずれか１つを治療または予防する医薬を製造するための、一般式（Ｉ）の化合物、その立体異性体の形態、またはその薬学的に許容される酸付加塩もしくは塩基付加塩、またはその溶媒和物の使用にも関する。
【００５６】
式（Ｉ）の化合物の有用性に鑑みて、前述の疾患のいずれか１つに罹患している、ヒト
を含む温血動物の治療方法、またはヒトを含む温血動物が前述の疾患のいずれか１つに罹患することを予防する方法を提供する。
【００５７】
前記方法は、一般式（Ｉ）の化合物、その立体異性体の形態、その薬学的に許容される付加塩またはその溶媒和物を有効量、ヒトを含む温血動物に投与すること、即ち、全身投与または局所投与すること、好ましくは経口投与することを含む。
【００５８】
治療方法は、また、有効成分を１日当たり１〜４回摂取する投与計画で投与することを含んでもよい。これらの治療方法では、本発明の化合物は、好ましくは投与前に製剤化される。後述のように、好適な医薬製剤は、周知の容易に入手可能な成分を使用して公知の方法で製造される。
【００５９】
アルツハイマー病またはその症状を治療または予防するのに好適な可能性がある本発明の化合物は、単独で投与されても、または１種以上の追加の治療薬と併用投与されてもよい。併用療法には、式（Ｉ）の化合物と１種以上の追加の治療薬とを含有する単一の医薬投与製剤を投与すること、ならびに式（Ｉ）の化合物と各追加の治療薬をそれ自体の別々の医薬投与製剤として投与することが含まれる。例えば、式（Ｉ）の化合物と治療薬を錠剤もしくはカプセルなどの単一の経口投与組成物として一緒に患者に投与してもよく、または各薬剤を別々の経口投与製剤として投与してもよい。
【００６０】
医薬組成物
本発明は、また、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害、老化現象、認知症、レヴィー小体型認知症、ダウン症候群、脳卒中に伴う認知症、パーキンソン病に伴う認知症、およびβアミロイドに関連する認知症などの、β−セクレターゼの阻害が有益である疾患を予防または治療するための組成物も提供する。治療有効量の式（Ｉ）の化合物と薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む前記組成物。
【００６１】
有効成分を単独で投与することも可能であるが、それを医薬組成物として提供することが好ましい。従って、本発明は、本発明の化合物を薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物をさらに提供する。担体または希釈剤は、組成物の他の成分と適合性があり、そのレシピエントに有害でないという意味で「許容される」ものでなければならない。
【００６２】
本発明の医薬組成物は、薬学の分野で周知の任意の方法により製造することができる。有効成分として塩基の形態または付加塩の形態の特定の化合物を治療有効量、薬学的に許容される担体と完全に混合して組み合わせるが、それは投与に望ましい製剤の形態に応じて非常に様々な形態を取り得る。望ましくは、これらの医薬組成物は、好ましくは、経口投与、経皮投与、もしくは非経口投与などの全身投与；または吸入、点鼻スプレー、点眼液による、もしくはクリーム、ゲル、もしくはシャンプー等による局所投与に好適な単位剤形である。例えば、経口剤形の組成物の製造において、懸濁剤、シロップ、エリキシル剤、および液剤などの経口液体製剤の場合、例えば、水、グリコール、油、およびアルコール等；または、散剤、丸剤、カプセル、および錠剤の場合、デンプン、糖類、カオリン、滑沢剤、結合剤、および崩壊剤等の固体担体などの、通常の医薬媒体のいずれかを使用することができる。投与が容易であるため、錠剤およびカプセルが最も有利な経口単位剤形であり、この場合、明らかに固体医薬担体が使用される。非経口組成物では、担体は、通常、少なくとも大部分、滅菌水を含むことになるが、例えば、溶解性を補助する他の成分が含まれてもよい。例えば、担体が生理食塩水、グルコース溶液、または生理食塩水とグルコース溶液との混合物を含む注射用液剤を製造してもよい。また、注射用懸濁剤を製造してもよく、この場合、適切な液体担体、および懸濁化剤等を使用してもよい。経皮投与に好適な組成物では、担体は、任意選択により浸透促進剤および／または好適な湿潤剤
を含み、それに任意選択により、皮膚に顕著な有害作用を引き起こさない任意の種類の好適な添加剤が少量、組み合わせられる。前記添加剤は皮膚への投与を促進し得るおよび／または所望の組成物の製造に有用となり得る。これらの組成物は、様々な方法で、例えば、経皮パッチとして、スポット・オン製剤（ｓｐｏｔ−ｏｎ）として、または軟膏として投与することができる。
【００６３】
投与の容易さと投与の均一性のため、前述の医薬組成物を単位剤形で製剤化することがとりわけ有利である。本明細書および特許請求の範囲で使用する場合、単位剤形とは、単位投与量として好適な物理的に別個の単位を指し、各単位は、所望の治療効果を生じるように計算された所定量の有効成分を、必要な医薬担体と共に含有する。このような単位剤形の例としては、錠剤（割線入り錠剤およびコーティング錠を含む）、カプセル、丸剤、散剤分包、カシェ剤、注射用液剤または懸濁剤、ティースプーン量、およびテーブルスプーン量等、ならびにこれらのそれぞれの倍数がある。
【００６４】
正確な投与量および投与頻度は、当業者に周知のように、使用される式（Ｉ）の特定の化合物、治療される特定の症状、治療される症状の重症度、特定の患者の年齢、体重、性別、障害の程度および全身健康状態、ならびにその個体が摂取している可能性がある他の医薬に依存する。さらに、治療される対象の反応に応じておよび／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、前記有効な一日量を増減し得ることが明らかである。
【００６５】
投与方法に応じて、医薬組成物は、有効成分を０．０５〜９９重量％、好ましくは０．１〜７０重量％、より好ましくは０．１〜５０重量％、および薬学的に許容される担体を１〜９９．９５重量％、好ましくは３０〜９９．９重量％、より好ましくは５０〜９９．９重量％含むことになり、パーセンテージは全て組成物の全重量に基づく。
【００６６】
本化合物は、経口投与、経皮投与、もしくは非経口投与などの全身投与；または吸入、点鼻スプレー、点眼液による、もしくはクリーム、ゲル、もしくはシャンプー等による局所投与に使用することができる。化合物は、好ましくは経口投与される。正確な投与量および投与頻度は、当業者に周知のように、使用される式（Ｉ）の特定の化合物、治療される特定の症状、治療される症状の重症度、特定の患者の年齢、体重、障害の程度および全身健康状態、ならびにその個体が摂取している可能性がある他の医薬に依存する。さらに、治療される対象の反応に応じておよび／または本発明の化合物を処方する医師の評価に応じて、前記有効な一日量を増減し得ることが明らかである。
【００６７】
単一剤形を製造するために担体物質と組み合わせることができる式（Ｉ）の化合物の量は、治療される疾患、哺乳動物種、および特定の投与方法に応じて変わることになる。しかし、一般的指針として、本発明の化合物の好適な単位用量は、例えば、好ましくは薬理活性化合物を０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇ含有することができる。好ましい単位用量は、１ｍｇ〜約５００ｍｇである。より好ましい単位用量は、１ｍｇ〜約３００ｍｇである。さらにより好ましい単位用量は、１ｍｇ〜約１００ｍｇである。７０ｋｇの成体に対する全投与量が１回の投与当たり対象の体重１ｋｇ当たり０．００１〜約１５ｍｇの範囲となるように、このような単位用量を１日２回以上、例えば、１日に２回、３回、４回、５回または６回、しかし、好ましくは１日当たり１回または２回投与することができる。好ましい投与量は、１回の投与当たり対象の体重１ｋｇ当たり０．０１〜約１．５ｍｇであり、このような療法は、何週間または何ヶ月間、場合によっては何年間にもわたり得る。しかし、任意の特定の患者に対する特定の用量レベルは、当業者に十分理解されるように、使用される特定の化合物の活性；治療される個体の年齢、体重、全身健康状態、性別および食事；投与の時間および経路；排泄速度；以前投与された他の薬物；ならびに治療を受ける特定の疾患の重症度を含む様々な要因に依存することになることが理解されるであろう。
【００６８】
当業者に明らかになるように、場合によっては、これらの範囲外の投与量を使用することが必要なことがある。さらに、臨床医または治療する医師は、個々の患者の反応に関して、療法を開始、中断、調節、または停止する方法および時を承知しているものとすることに留意されたい。
【００６９】
以下の実施例は、説明を目的とするものであって、本発明の範囲を制限するものではない。
【実施例】
【００７０】
実験部分
以下、「ＡｃＯＨ」という用語は酢酸を意味し、「ＨＣｌ」は塩酸を意味し、「ＡｃＯＥｔ」は酢酸エチルを意味し、「ＤＣＭ」はジクロロメタンを意味し、「ＤＩＰＥ」はジイソプロピルエーテルを意味し、「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを意味し、「ＣＯ２」は二酸化炭素を意味し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを意味し、「Ｅｔ２Ｏ」はジエチルエーテルを意味し、「Ｅｔ３Ｎ」はトリエチルアミンを意味し、「ＥｔＯＨ」はエタノールを意味し、「ｉＰｒＯＨ」はイソプロパノールを意味し、「ｉＰｒＮＨ２」はイソプロピルアミンを意味し、「ＭｅＣＮ」はアセトニトリルを意味し、「ＭｅＯＨ」はメタノールを意味し、「ＮａＯＨ」は水酸化ナトリウムを意味し、「ＮＨ４Ｃｌ」は塩化アンモニウムを意味し、「ＮＨ３」はアンモニアを意味し、「ＮａＨＣＯ３」は炭酸水素ナトリウムを意味し、「ＮａＨＳＯ４」は硫酸水素ナトリウムを意味し、「Ｎａ２ＣＯ３」は炭酸ナトリウムを意味し、「Ｎａ２ＳＯ４」は硫酸ナトリウムを意味し、「Ｈ２ＳＯ４」は硫酸を意味し、「ＭｇＳＯ４」は硫酸マグネシウムを意味し、「ＣｕＩ」はヨウ化銅を意味し、「ＴＦＡ」はトリフルオロメタンスルホン酸を意味し、「ＲｕＯ２」は酸化ルテニウムを意味し、「ＤＡＳＴ」は三フッ化ジエチルアミノ硫黄を意味し、「ＤＢＵ」は１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エンを意味し、「Ｎ２」は窒素を意味し、「ＣＯ２」は二酸化炭素を意味し、「ａｑ．」は水性を意味し、「ｍｉｎ」は分を意味し、「ｍ．ｐ．」は融点を意味し、「ｒａｃ」はラセミ体を意味し、「Ｒｔ」は保持時間を意味し、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを意味し、「ＳＦＣ」は超臨界流体クロマトグラフィーを意味する。
【００７１】
マイクロ波補助反応は、単一モード反応器：Ｅｍｒｙｓ（商標）Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒマイクロ波反応器（Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａ．Ｂ．、現Ｂｉｏｔａｇｅ）内で行った。
【００７２】
水素化反応は、ＴｈａｌｅｓＮａｎｏ  Ｎａｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．製の連続流水素化装置Ｈ−ＣＵＢＥ（登録商標）内で行った。
【００７３】
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、試薬用溶媒を使用してシリカゲル６０  Ｆ２５４プレート（Ｍｅｒｃｋ）で行った。オープンカラムクロマトグラフィーは、粒径６０Å、メッシュ＝２３０〜４００の（Ｍｅｒｃｋ）のシリカゲルで、標準的技術で行った。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、Ｍｅｒｃｋ製のすぐに接続できるカートリッジを使用し、粒径１５〜４０μｍの不規則なシリカゲル（順層使い捨てフラッシュカラム）で、Ａｒｍｅｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ製のＳＰＯＴまたはＬＡＦＬＡＳＨシステムで行った。
【００７４】
ナトリウムランプを有するＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ３４１旋光計で旋光を測定し、次のように報告した：［α］°（λ、ｃｇ／１００ｍｌ、溶媒、Ｔ℃）。
【００７５】
市販のＶａｐｏｕｒｔｅｃ  Ｒ２＋Ｒ４モジュール式装置内で流動反応を行った。
【００７６】
重要な中間体ならびに幾つかの最終化合物では、キラル中心の絶対配置（Ｒおよび／またはＳとして示す）は、既知の配置を有するサンプルとの比較、または、ＶＣＤ（円偏光二色性）もしくはＸ線結晶構造解析などの絶対配置の決定に好適な分析方法の使用により確定される。キラル中心での絶対配置が未知の場合、それを恣意的にＲ＊と示す。
【００７７】
Ａ．中間体の製造
実施例Ａ１
中間体Ａ１：ｒａｃ−２−アミノ−２−（３−ブロモ−フェニル）−プロピオニトリルの製造
【化１５】
0005853033.tif 000016
３−ブロモ−アセトフェノン（２０ｇ、１００ｍｍｏｌ）とＮＨ４Ｃｌ（１１ｇ、２００ｍｏｌ）をＮＨ３／ＭｅＯＨ（４００ｍＬ）に溶解し、その撹拌溶液にトリメチルシリルシアニド（２０ｇ、２００ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で４日間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させ、残留物をＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）に溶解した。固体を濾別し、濾液を減圧蒸発させて、中間体Ａ１（２０ｇ、収率８６％）を得、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。
【００７８】
実施例Ａ２
中間体Ａ２：ｒａｃ−２−アミノ−２−（３−ブロモ−フェニル）−プロピオン酸メチルエステルの製造
【化１６】
0005853033.tif 000017
中間体Ａ１（２０ｇ、８８．９ｍｍｏｌ）をＨＣｌ／ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）に溶解した。その混合物を４日間還流した。室温に冷却した後、ＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１００ｍＬ）を添加し、混合物をＡｃＯＥｔ（２×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた水層をＮＨ３溶液でｐＨ＝８になるまで塩基性化し、ＡｃＯＥｔ（５×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ２（１０．６ｇ、収率４６％）を油状物として得た。ＬＣＭＳ：２５８［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：３．７７ｍｉｎ（方法７）。
【００７９】
実施例Ａ１〜Ａ２に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【００８０】
実施例Ａ３
中間体Ａ３：ｒａｃ−２−アミノ−２−（３−ニトロ−フェニル）−プロピオン酸メチルエステルの製造
【化１７】
0005853033.tif 000018
ｒａｃ−２−アミノ−２−（３−ニトロ−フェニル）−プロピオニトリルから製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／石油エーテル）で、中間体３（６３％）を得た。ＬＣＭＳ：２２５［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．９８ｍｉｎ（方法９）。
【００８１】
実施例Ａ４
中間体Ａ４：ｒａｃ−２−アミノ−２−（３−ブロモ−フェニル）−プロパン−１−オールの製造
【化１８】
0005853033.tif 000019
中間体Ａ２（７．５ｇ、２９．１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２００ｍＬ）に溶解し、その撹拌溶液に−１５℃で水素化リチウムアルミニウム（１Ｍ  ＴＨＦ溶液；２２ｍＬ、２２ｍｍｏｌ）を滴下した。この混合物を１時間の間に０℃にゆっくり加温した。ＴＨＦ（１５０ｍＬ）をさらに添加し、それ以上水素が生成しなくなるまで飽和Ｎａ２ＳＯ４溶液を滴下した。無水Ｎａ２ＳＯ４を添加し、室温で終夜撹拌した。混合物を珪藻土で濾過し、ＴＨＦで洗浄し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ４（５．７０ｇ、収率８５％）を油状物として得た。ＬＣＭＳ：２３０［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．６９ｍｉｎ（方法１）。
【００８２】
実施例Ａ５
中間体Ａ５：ｒａｃ−２−アミノ−２−（３−ニトロ−フェニル）−プロパン−１−オールの製造
【化１９】
0005853033.tif 000020
中間体Ａ３（４８．３ｇ、２１４．７ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５００ｍＬ）に溶解し、その撹拌溶液に水素化ホウ素ナトリウム（１６．３ｇ、４２９．４ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を室温で１０時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させた。残留物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でｐＨ＝９になるまで塩基性化し、ＡｃＯＥｔ（３×２００ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ５（３０．２６ｇ、収率７２％）を得た。ＬＣＭＳ：１９７［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：３．１６ｍｉｎ（方法８）；ｍ．ｐ．２３８．７〜２４１．６℃（ＷＲＳ−２Ａ）。
【００８３】
実施例Ａ６
中間体Ａ６：（Ｒ）−２−アミノ−２−（３−ブロモ−フェニル）−プロパン−１−オールの製造
【化２０】
0005853033.tif 000021
中間体Ａ４（１５．４ｇ）のサンプルを、（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ（登録商標）Ｄａｉｃｅｌ  ＡＤ×２５０ｍｍ）、移動相（ＣＯ２、ｉＰｒＮＨ２を０．２％含有するＭｅＯＨ）での分取ＳＦＣにより対応する鏡像異性体に分離し、中間体Ａ６（７．２１ｇ、収率４０％）を得た。ＬＣＭＳ：２３０［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．７１ｍｉｎ（方法１）；αＤ：−１４．９o（５８９ｎｍ、ｃ０．２９４６ｗ／ｖ％、ＭｅＯＨ、２０℃）。
【００８４】
実施例Ａ７
中間体Ａ７：（Ｒ）−［１−（３−ブロモ−フェニル）−２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔブチルエステルの製造
【化２１】
0005853033.tif 000022
中間体Ａ６（１１．６ｇ、５０．４ｍｍｏｌ）を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１００ｍＬ）とＴＨＦ（１００ｍＬ）との混合物に溶解し、その撹拌溶液に０℃で二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１９．８ｇ、９０．７ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加した。混合物を０℃で１０分間、室温で１５時間撹拌した。混合物を氷／Ｈ２Ｏ浴中で冷却し、撹拌しながらＮａＨＳＯ４でｐＨ＝１〜２になるまで酸性化した。有機層を分離し、水層をさらにＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をショートカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ７（１６．４７ｇ、収率９９％）を無色油状物として得、これは静置すると凝固した。ＬＣＭＳ：３３０［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：２．５８ｍｉｎ（方法１）。
【００８５】
実施例Ａ８
中間体Ａ８：（Ｒ）−［３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−４−（３−ブロモ−フェニル）−４−メチル−［１，１，３］オキサチアゾリジン−２−オキサイドの製造
【化２２】
0005853033.tif 000023
塩化チオニル（７．９ｍＬ、１０８．３ｍｍｏｌ）を無水ＭｅＣＮ（２２６ｍＬ）に溶
解し、−４０℃に冷却した撹拌溶液に、Ｎ２雰囲気下で中間体Ａ７（１４．３、４３．３ｍｍｏｌ）の無水ＭｅＣＮ（８０ｍＬ）溶液を滴下した。反応混合物を３０分間−４０℃で撹拌した後、ピリジン（１７．４ｍＬ、２１６．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応を室温に加温し、６４時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させた。残留物をＥｔ２Ｏで処理した。固体を濾過し、濾液を減圧濃縮して中間体Ａ８（１５．５ｇ、収率９５％）を赤色油状物として得た。生成物をさらに精製することなく次の反応に使用した。ＬＣＭＳ：３９３［Ｍ＋ＮＨ４］＋；Ｒｔ：３．４ｍｉｎ（方法１）。
【００８６】
実施例Ａ９
中間体Ａ９：（Ｒ）−［３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−４−（３−ブロモ−フェニル）−４−メチル−［１，１，３］オキサチアゾリジン−２，２−ジオキサイドの製造
【化２３】
0005853033.tif 000024
中間体Ａ８（１５．３ｇ、４０．８ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮとＨ２Ｏ（１：１）の混合物（４３８ｍＬ）に溶解し、その溶液に０℃で塩化ルテニウム（ＩＩＩ）（８５ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）を添加した後、過ヨウ素酸ナトリウム（１３．１ｇ、６１．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応を室温に加温し、２時間撹拌した。混合物を珪藻土で濾過し、ＡｃＯＥｔ（１２５ｍＬ）で洗浄した。Ｈ２Ｏ（１２５ｍＬ）およびＡｃＯＥｔ（２５０ｍＬ）を濾液に添加した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ９（１４．４ｇ、収率９０％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ：４０９［Ｍ＋ＮＨ４］＋；Ｒｔ：３．３ｍｉｎ（方法１）；ｍ．ｐ．１３３．１℃（ＦＰ９０）；αＤ：−３５．６°（５８９ｎｍ、ｃ０．５５ｗ／ｖ％、ＤＭＦ、２０℃）。
【００８７】
実施例Ａ７〜Ａ９に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【００８８】
実施例Ａ１０
中間体Ａ１０：ｒａｃ−［３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−４−（３−ニトロ−フェニル）−４−メチル−［１，１，３］オキサチアゾリジン−２，２−ジオキサイドの製造
【化２４】
0005853033.tif 000025
ｒａｃ−［３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−４−（３−ニトロ−フェニル）−４−メチル−［１，１，３］オキサチアゾリジン−２−オキサイドから製造した。フ
ラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で、中間体Ａ１０を黄色固体として得た（９５％）。ＬＣＭＳ：３７６［Ｍ＋ＮＨ４］＋；Ｒｔ：１．３５ｍｉｎ（方法２）。
【００８９】
実施例Ａ１１
中間体Ａ１１：２−［２−（３−ブロモ−フェニル）−２Ｒ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−アミノ−プロピル］−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸エチルエステルの製造
【化２５】
0005853033.tif 000026
中間体Ａ９（０．６６１ｇ、１．６９ｍｍｏｌ）および２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸エチルエステル（２６０ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（８ｍＬ）に混合し、その混合物に室温で炭酸セシウム（８２４ｍｇ、２．５３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３０分間、１１０℃で３時間撹拌した。混合物を飽和クエン酸溶液およびＤＣＭ（２０ｍＬ）で処理し、２時間撹拌した。有機相を分離し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）で処理し、ＤＣＭ(２×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ１１（１８６ｍｇ、収率２４％）を無色油状物として得た。ＬＣＭＳ：４５２［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：４．２３ｍｉｎ（方法３）。
【００９０】
実施例Ａ１２
中間体Ａ１２：ｒａｃ−［２−（４−ブロモ−ピラゾール−１−イル）−１−メチル−１−（３−ニトロ−フェニル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化２６】
0005853033.tif 000027
中間体Ａ１０（１００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）および４−ブロモ−１Ｈ−ピラゾール（５３ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３ｍＬ）に混合し、その混合物に炭酸ナトリウム（５９ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１３０℃で２時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させた。残留物をＨ２Ｏ（２ｍＬ）で処理し、ＤＣＭ(２×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させ、冷Ｅｔ２Ｏで処理した後、中間体Ａ１２（１００ｍｇ、収率８４％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ：４２５［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：３．５７ｍｉｎ（方法３）；ｍ．ｐ．１５９．３°（ＦＰ９０）。
【００９１】
実施例Ａ１３
中間体Ａ１３：（Ｒ）−２−［２−アミノ−２−（３−ブロモ−フェニル）−プロピル］−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸エチルエステルの製造
【化２７】
0005853033.tif 000028
中間体Ａ１１（１８６ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解し、その撹拌溶液に０℃でトリフルオロ酢酸（１ｍＬ）を添加した。混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ１３（１８０ｍｇ、収率９４％）を無色油状物として得、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。ＬＣＭＳ：３５２［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：２．６９ｍｉｎ（方法３）。
【００９２】
実施例Ａ１４
中間体Ａ１４：ｒａｃ−４−ブロモ−２−［２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−（３−ニトロ−フェニル）−プロピル］−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸の製造
【化２８】
0005853033.tif 000029
リチウムジイソプロピルアミドの２Ｍ  ＴＨＦ／ヘプタン溶液（０．２５ｍＬ、０．４９ｍｍｏｌ）を、中間体Ａ１２（１００ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍＬ）溶液に−７８℃で添加した。反応混合物を−７８℃で１時間撹拌した。次いで、ドライアイスを添加し、混合物を２時間かけて室温に加温した。混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液で処理し、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、乾燥し、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ１４（６０ｍｇ、収率５４％）を無色油状物として得た。ＬＣＭＳ：４６９［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．７４ｍｉｎ（方法３）。
【００９３】
実施例Ａ１５
中間体Ａ１５：（Ｒ）−６−（３−ブロモ−フェニル）−６−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−オンの製造
【化２９】
0005853033.tif 000030
酢酸カリウム（８３ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を、中間体Ａ１３（１８０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５ｍＬ）溶液に室温で添加した。混合物を９０℃で５時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させた。残留物を０．５Ｍ  ＨＣｌ水溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ１５（１００ｍｇ、収率８４％）を無色油状物として得た。ＬＣＭＳ：３０６［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：２．０１ｍｉｎ（方法４）。
【００９４】
実施例Ａ１６
中間体Ａ１６：ｒａｃ−３−ブロモ−６−メチル−６−（３−ニトロ−フェニル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−オンの製造
【化３０】
0005853033.tif 000031
【００９５】
方法Ａ
トリフルオロ酢酸（３ｍＬ）を、中間体Ａ１４（２００ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）溶液に添加した。混合物を室温で２時間撹拌した。次いで、酢酸カリウム（５９ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（３ｍＬ）溶液を添加した。混合物を９０℃で３時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させた。粗製物を１Ｍ  ＨＣｌ水溶液（１０ｍＬ）で処理し、生成物をＡｃＯＥｔ（４×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ１６（１２０ｍｇ、収率１９％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ：３５１［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：２．４５ｍｉｎ（方法５）；ｍ．ｐ．２８５．３℃（ＦＰ９０）。
【００９６】
方法Ｂ
中間体Ａ２３（６．５ｇ、１３．０７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２００ｍＬ）に溶解し、その撹拌溶液に室温でトリフルオロ酢酸（１００ｍＬ）を添加した。混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させた後、酢酸カリウム（１．９２４ｇ、１９．６０ｍｍｏＬ）およびＥｔＯＨ（１００ｍＬ）を添加し、反応を４時間還流撹拌した。粗製物を減圧蒸発させ、残留物を１Ｍ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ＝３になるまで処理した。粗製物をＡｃＯＥｔ（３×５０ｍＬ）で抽出し、有機相を蒸発乾固させ、粗製物を冷ＥｔＯＨおよびＥｔ２
Ｏで処理し、中間体Ａ１６をベージュ色の固体として得た。合わせた溶媒を減圧蒸発させ、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ１６の追加のバッチを白色固体として得た（合計量４ｇ、８７％）。ＬＣＭＳ：３５１［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．６５ｍｉｎ（方法３）。
【００９７】
実施例Ａ１７
中間体Ａ１７：（Ｒ）−６−［３−（５−クロロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−６−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−オンの製造
【化３１】
0005853033.tif 000032
中間体Ａ１５（９０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）および５−クロロピリジン−３−ボロン酸（５５ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（５ｍＬ）と飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液（３ｍＬ）との混合物に懸濁し、その撹拌懸濁液に室温、Ｎ２下でテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３４ｍｇ、０．０２９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物にマイクロ波を照射し１５０℃で１５分間撹拌した。室温に冷却した後、混合物をＨ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させ、冷ＥｔＯＨおよびＥｔ２Ｏで洗浄し、中間体Ａ１７（８１ｍｇ、収率８１％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ：３３９［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．８９ｍｉｎ（方法２）。
【００９８】
実施例Ａ１８
中間体Ａ１８：（Ｒ）−６−［３−（５−クロロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−６−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−チオンの製造
【化３２】
0005853033.tif 000033
五硫化リン（７１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を、中間体Ａ１７（９０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）のピリジン（４ｍＬ）溶液に添加し、混合物を１００℃で５時間加熱した。溶媒を減圧蒸発させ、粗生成物をショートカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させ、中間体Ａ１８（６０ｍｇ、収率６３％）を黄色油状物として得た。ＬＣＭＳ：３５５［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：２．４ｍｉｎ（方法３）。
【００９９】
実施例Ａ１８に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１００】
実施例Ａ１９
中間体Ａ１９：ｒａｃ−３−ブロモ−６−メチル−６−（３−ニトロ−フェニル）−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−チオンの製造
【化３３】
0005853033.tif 000034
中間体Ａ１６から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で、中間体Ａ１９を黄色固体として得た（８７％）。ＬＣＭＳ：３６６［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：２．３７ｍｉｎ（方法３）。
【０１０１】
実施例Ａ２０
中間体Ａ２０：ｒａｃ−６−（３−アミノ−フェニル）−３−ブロモ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンの製造
【化３４】
0005853033.tif 000035
封管内で、ＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液（５ｍＬ）に中間体Ａ１９（６００ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）を混合し、その撹拌混合物に３２％ＮＨ３水溶液（３ｍＬ）を添加した。混合物を６０℃で４時間撹拌した。室温に冷却した後、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をＥｔＯＨ（２０ｍＬ）に溶解し、塩化スズ（ＩＩ）（３７２ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を９０℃で２４時間撹拌した。室温に冷却した後、混合物をセライトで濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。残留物を８％ＮａＯＨ水溶液（１０ｍＬ）で処理し、ＤＣＭで抽出した（３０ｍＬ）。混合物を室温で１時間撹拌した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ２０（２００ｍｇ、収率３８％）を黄色油状物として得た。ＬＣＭＳ：３２０［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．５ｍｉｎ（方法６）。
【０１０２】
実施例Ａ２１
中間体Ａ２０：ｒａｃ−６−（３−アミノ−フェニル）−３−ブロモ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンおよび中間体Ａ２１：ｒａｃ−３−ブロモ−６−メチル−６−（３−ニトロ−フェニル）−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンの製造
【化３５】
0005853033.tif 000036
封管内で、ＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液（６ｍＬ）に中間体Ａ１９（３．８ｇ、１０．３５ｍｍｏｌ）を混合し、その撹拌混合物に３２％ＮＨ３水溶液（４ｍＬ）を添加した。混合物を１００℃で６時間撹拌した。室温に冷却した後、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させ、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体２０（１００ｍｇ、収率３％）、中間体２１（２００ｍｇ、収率６％）、および中間体２０と中間体２１との混合物を含有する画分（２．５ｇ）を得た。ＬＣＭＳ：Ａ２０：３２２［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．８７ｍｉｎ（方法３）；Ａ２１：３５０［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．９５ｍｉｎ（方法２）。
【０１０３】
実施例Ａ２２
中間体Ａ２２：ｒａｃ−６−（３−アミノ−フェニル）−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンの製造
【化３６】
0005853033.tif 000037
【０１０４】
方法Ａ
中間体Ａ２０（２００ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（３０ｍＬ）およびＥｔ３Ｎ(５ｍＬ）に溶解し、その溶液をＨ−Ｃｕｂｅ反応器（１．２ｍＬ／分、３０ｍｍパラジウム炭素１０％カートリッジ、全水素モード、５０℃、３サイクル）内で水素化した。溶媒を減圧濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体２２（１００ｍｇ、収率６６％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ：４１５［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．５８ｍｉｎ（方法３）。
【０１０５】
方法Ｂ
実施例Ａ２１（２．５ｇ、７．４６ｍｍｏｌ）に記載の中間体２０と中間体２１との混合物を含有する画分をＥｔＯＨ(１００ｍＬ）およびＡｃＯＨ（２０ｍＬ）に入れ、それに亜鉛（１．３３ｇ、２０．４０ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を２４時間灌流撹拌した。室温に冷却した後、混合物をセライトで濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体２２（０．９３ｇ、収率５２％）を黄色油状物として得、これは静置すると沈殿する。
【０１０６】
ドライアイスの代りにクロロギ酸エチルを使用して、実施例Ａ１４に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１０７】
実施例Ａ２３
中間体Ａ２３：ｒａｃ−４−ブロモ−２−［２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−（３−ニトロフェニル）−プロピル］−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸エチルエステルの製造
【化３７】
0005853033.tif 000038
中間体Ａ１２から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ヘプタン）で、中間体Ａ２３（６５％）を得た。ＬＣＭＳ：４９９［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：４．０９ｍｉｎ（方法３）。
【０１０８】
実施例Ａ２４
中間体Ａ２４：ｒａｃ−［１−メチル−１−（３−ニトロ−フェニル）−２−（３−トリフルオロメチルピラゾール−１−イル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化３８】
0005853033.tif 000039
３−（トリフルオロメチル）ピラゾール（１．２３４ｇ、９．０６９ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１．９２８ｇ、１３．９５２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１７５ｍＬ）に溶解し、その撹拌溶液に室温で中間体Ａ１０（２．５ｇ、６．９７６ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、混合物を１１０℃で２時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残留物を飽和クエン酸溶液（８０ｍＬ）とＡｃＯＥｔ（１６０ｍＬ）で処理した。混合物を室温で１時間撹拌した。有機層を分離し、乾燥し、減圧蒸発させた。粗製物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧蒸発させて、透明油状物を得、これは、冷Ｅｔ２Ｏで処理し、静置した後、白色固体として沈殿した（２ｇ、６９％）。
【０１０９】
実施例Ａ２５
中間体Ａ２５：ｒａｃ−２−［２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−２−（３−ニトロ−フェニル）−プロピル］−５−トリフルオロメチル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸エチルエステルの製造
【化３９】
0005853033.tif 000040
中間体Ａ２４から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ヘプタン）で、中間体Ａ２５を得た（５１％）。ＬＣＭＳ：４８７［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：４．２２ｍｉｎ（方法３）。
【０１１０】
実施例Ａ１６〜方法Ｂに記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１１１】
実施例Ａ２６
中間体Ａ２６：ｒａｃ−６−メチル−６−（３−ニトロ−フェニル）−２−トリフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−オンの製造
【化４０】
0005853033.tif 000041
中間体Ａ２５から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で、中間体Ａ２６を白色固体として得た（９３％）。ＬＣＭＳ：３３９［Ｍ−Ｈ］−；Ｒｔ：２．２１ｍｉｎ（方法３）。実施例Ａ１８〜Ａ２１に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１１２】
実施例Ａ２７
中間体Ａ２７：ｒａｃ−６−メチル−６−（３−ニトロ−フェニル）−２−トリフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−チオンの製造
【化４１】
0005853033.tif 000042
中間体Ａ２６から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で、中間体Ａ２７を黄色固体として得た（９５％）。ＬＣＭＳ：３５５［Ｍ−Ｈ］−；Ｒｔ：１．２９ｍｉｎ（方法２）。
【０１１３】
実施例Ａ２８
中間体Ａ２８：ｒａｃ−６−（３−アミノ−フェニル）−６−メチル−２−トリフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンおよび中間体Ａ２９：６−メチル−６−（３−ニトロ−フェニル）−２−トリフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンの製造
【化４２】
0005853033.tif 000043
中間体Ａ２７から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で、中間体Ａ２８（１６％）および中間体Ａ２９（５９％）を得た。ＬＣＭＳ：Ａ２８：３０８［Ｍ−Ｈ］−；Ｒｔ：０．７７ｍｉｎ（方法２）；Ａ２９：３３８［Ｍ−Ｈ］−；Ｒｔ：２．２８ｍｉｎ（方法３）
【０１１４】
実施例Ａ２９
中間体Ａ２８：ｒａｃ−６−（３−アミノ−フェニル）−６−メチル−２−トリフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンの製造
【化４３】
0005853033.tif 000044
中間体２９（３４０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）およびＮＨ４Ｃｌ（１００ｍｇ）をＭｅＯＨ（２０．４ｍＬ）およびＨ２Ｏ（６．８ｍＬ）に混合し、その混合物に鉄（２７２ｍｇ、４．８７ｍｍｏｌ）を添加した。反応を８０℃で５時間撹拌した。粗製物を冷却し、セライトで濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体２８を透明油状物（２６０ｍｇ、収率８４％）として得た。ＬＣＭＳ：３１０［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：２．５０ｍｉｎ（方法５）。
【０１１５】
実施例Ａ１〜Ａ４に記載の合成手順に従って、次の中間体Ａ３０を製造した：
【０１１６】
実施例Ａ３０
中間体Ａ３０：ｒａｃ−２−アミノ−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−プロパン−１−オール、中間体Ａ３１：（Ｒ）−２−アミノ−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−プロパン−１−オールおよび中間体Ａ３２（Ｓ）（Ｓ）−２−アミノ−２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−プロパン−１−オールの製造：
【化４４】
0005853033.tif 000045
１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−エタノンから製造した。
次いで、このラセミ物質を、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  Ｄｉａｃｅｌ  ＡＤ２０μｍ（２０００ｇ）、移動相（ヘプタン７０％、０．１％Ｅｔ３Ｎを有するＥｔＯＨ３０％）での分取ＳＦＣによりさらに精製した。各鏡像異性体の所望の画分を回収し、減圧濃縮して、中間体Ａ３１（４４％）および中間体Ａ３２（４４％）を得た。
【０１１７】
実施例Ａ７〜Ａ１２に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１１８】
実施例Ａ３１
中間体Ａ３３：（Ｒ）−［１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−（４−フルオロ−ピラゾール−１−イル）−１−メチル−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化４５】
0005853033.tif 000046
中間体Ａ３１から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ヘプタン）で、中間体Ａ３３を透明油状物として得た（５５％）。ＬＣＭＳ：４１８［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．５７ｍｉｎ（方法２）。
【０１１９】
実施例Ａ２５に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１２０】
実施例Ａ３２
中間体Ａ３４：（Ｒ）−２−［２−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−ｔｅｒｔブトキシカルボニルアミノ−プロピル］−４−フルオロ−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸エチルエステルの製造
【化４６】
0005853033.tif 000047
中間体Ａ３３から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ヘプタン）で、中間体Ａ３４を透明油状物として得た（６７％）。ＬＣＭＳ：４９０［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．７１ｍｉｎ（方法２）。
【０１２１】
実施例Ａ１６〜方法Ｂに記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１２２】
実施例Ａ３３
中間体Ａ３５：（Ｒ）−６−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３−フルオロ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−オンの製造
【化４７】
0005853033.tif 000048
中間体Ａ３４から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で、中間体Ａ３５を油状物として得た（９０％）。ＬＣＭＳ：３４３［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．９６ｍｉｎ（方法２）。
【０１２３】
実施例Ａ１８に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１２４】
実施例Ａ３４
中間体Ａ３６：（Ｒ）−６−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３−フルオロ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−チオンの製造
【化４８】
0005853033.tif 000049
中間体Ａ３５から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で、中間体Ａ３６を黄色固体として得た（８５％）。ＬＣＭＳ：３６０［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．１９ｍｉｎ（方法２）。
【０１２５】
実施例Ａ３５
中間体Ａ３７：（Ｒ）−６−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３−フルオロ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンの製造
【化４９】
0005853033.tif 000050
３２％ＮＨ３水溶液（１．５ｍＬ）およびＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液（３ｍＬ）を、中間体Ａ３６（３３０ｍｇ、０．９２１ｍｍｏｌ）に室温で添加した。封管内で混合物を１００℃で６時間撹拌し、次いで、冷却後、溶媒を減圧留去した。粗製物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、中間体Ａ３７を透明油状物（２６０ｍｇ、８３％）として得た。ＬＣＭＳ：３４３［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．０３ｍｉｎ（方法２）。
【０１２６】
実施例Ａ３６
中間体Ａ３８：（Ｒ）−６−［５−（ベンズヒドリリデン−アミノ）−２−フルオロ−フェニル］−３−フルオロ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンの製造
【化５０】
0005853033.tif 000051
封管内で、中間体Ａ３７（３ｇ、８．１７８ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（７４９ｍｇ、０．８１８ｍｍｏｌ）、２，２’−ビス(ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（１．５２８ｇ、２．４５３ｍｍｏｌ）およびナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１．４１５ｇ、１４．７２ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ２下、室温でトルエン（５８ｍＬ）を添加した。混合物を数分間Ｎ２通気した後、ベンゾフェノンイミン（２．７４５ｍＬ、１６．３５６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を９０℃で１８時間撹拌した。混合物を減圧濃縮した後、混合物をＨ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ３８を淡黄色固体として得た（３ｇ、８３％）。ＬＣＭＳ：４４２［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．３９ｍｉｎ（方法２）。
【０１２７】
実施例Ａ３７
中間体Ａ３９：（Ｒ）−６−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−３−フルオロ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンの製造
【化５１】
0005853033.tif 000052
ＨＣｌ３７％（１．０５ｍＬ）を、中間体Ａ３８（３ｇ、６．７９５ｍｍｏｌ）のｉＰｒＯＨ（７８ｍＬ）溶液に添加した。混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を濃縮した後、Ｅｔ２Ｏでトリチュレートした。固体を濾別し、ｉＰｒＯＨに取った。ＮａＨＣＯ３（５．７０９ｇ）をそれに添加し、混合物を１時間撹拌した後、濾過し、濾液を減圧濃縮
した。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、淡黄色油状物を得た。この物質をＤＩＰＥ／Ｅｔ２Ｏの３：１混合物で処理し、中間体Ａ３９を黄色固体として得た（１．１ｇ、５８％）。ＬＣＭＳ：２７８［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．５６ｍｉｎ（方法２）。
【０１２８】
実施例Ａ３８
中間体Ａ４０：（３−アセチル−４−フルオロ−フェニル）−カルバミン酸ベンジルエステルの製造
【化５２】
0005853033.tif 000053
クロロギ酸ベンジル（３ｍＬ、２１．５ｍｍｏｌ）を、１−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）エタノン（３ｇ、１９．６ｍｍｏｌ）とテトラブチルアンモニウムブロマイドとの混合物に室温で添加した。反応を室温で２４時間撹拌し、粗製物をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で処理し、有機相を分離して、減圧蒸発させた。粗製物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、中間体Ａ４０をクリーム色の固体として得た（４．７ｇ、８４％）。ＬＣＭＳ：２８６［Ｍ−Ｈ］−；Ｒｔ：２．８１ｍｉｎ（方法３）。
【０１２９】
中間体Ａ１１の合成について記載した合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１３０】
実施例Ａ３９
中間体Ａ４１：ｒａｃ−｛３−［２−（４−ブロモ−ピラゾール−１−イル）−１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１−メチル−エチル］−４−フルオロ−フェニル｝−カルバミン酸エチルエステルの製造
【化５３】
0005853033.tif 000054
中間体Ａ４０から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ヘプタン）の後、ＤＩＰＥで洗浄し、中間体Ａ４１を白色固体として得た（７２％）。ＬＣＭＳ：４８７［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：３．５６ｍｉｎ（方法３）。
【０１３１】
実施例Ａ４０
中間体Ａ４２：ｒａｃ−エチル２−［２−［５−［ビス(エトキシカルボニル）アミノ］−２−フルオロ−フェニル］−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）プロピル］−４−ブロモ−ピラゾール−３−カルボキシレートの製造
【化５４】
0005853033.tif 000055
中間体Ａ４１（２．１ｇ、４．３２７ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（６６ｍＬ）に溶解し、その撹拌溶液に−７０℃、Ｎ２雰囲気下でリチウムジイソプロピルアミド（２Ｍシクロヘキサン／エチルベンゼン／ＴＨＦ溶液、７．３６ｍＬ、１４．７２１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を−７０℃で１時間撹拌した後、クロロギ酸エチル（０．９１ｍＬ、９．５１９ｍｍｏｌ）を−７０℃で添加し、反応を−３０℃で２時間加温した。粗製物を−５０℃で飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液（３０ｍＬ）で反応停止し、室温に加温し、粗製物をＡｃＯＥｔ（３×２０ｍＬ）で抽出し、有機相を減圧蒸発させ、乾燥し、得られた粗製物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ヘプタン）で精製した。所望の画分を回収し、減圧蒸発させ、中間体Ａ４２（１．６ｇ、５９％）を得た。ＬＣＭＳ：６３１［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：４．２２ｍｉｎ（方法３）。
【０１３２】
実施例Ａ１６〜方法Ｂに記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１３３】
実施例Ａ４１
中間体Ａ４３：ｒａｃ−エチルＮ−［３−（３−ブロモ−６−メチル−４−オキソ−５，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−Ｎ−エトキシカルボニル−カルバメート、および中間体Ａ４４：ｒａｃ−エチルＮ−［３−（３−ブロモ−６−メチル−４−オキソ−５，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］カルバメートの製造
【化５５】
0005853033.tif 000056
中間体Ａ４２から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ヘプタン）で、中間体Ａ４３を白色固体として（５２％）、および中間体Ａ４４をクリーム色の固体として（２０％）得た。ＬＣＭＳ：Ａ４３：４８５［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：２．１５ｍｉｎ（方法３）；Ａ４４：４１３［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．９８ｍｉｎ（方法２）。
【０１３４】
実施例Ａ１８に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１３５】
実施例Ａ４２
中間体Ａ４５：ｒａｃ−エチルＮ−［３−（３−ブロモ−６−メチル−４−チオキソ−５，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−Ｎ−エトキシカルボニル−カルバメート、および中間体Ａ４６：ｒａｃ−エチルＮ−［３−（３−ブロモ−６−メチル−４−チオキソ−５，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−
ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］カルバメートの製造
【化５６】
0005853033.tif 000057
中間体Ａ４３およびＡ４４から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で、中間体Ａ４５を黄色固体として（６５％）および中間体Ａ４６を黄色固体として（２８％）得た。ＬＣＭＳ：Ａ４５：５０１［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：２．７０ｍｉｎ（方法３）；Ａ４６：４２９［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：２．５３ｍｉｎ（方法３）。実施例Ａ３５に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１３６】
実施例Ａ４３
中間体Ａ４７：ｒａｃ−［３−（４−アミノ−３−ブロモ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−カルバミン酸エチルエステルの製造
【化５７】
0005853033.tif 000058
中間体Ａ４５およびＡ４６から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で、中間体Ａ４７をクリーム色の固体として得、これをそのまま次の工程に使用した。実施例Ａ２２〜方法Ｂに記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１３７】
実施例Ａ４４
中間体Ａ４８：ｒａｃ−［３−（４−アミノ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−カルバミン酸エチルエステルの製造
【化５８】
0005853033.tif 000059
中間体Ａ４７から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ）で、中間体Ａ４８を油状物として得た（７１％）。Ｌ
ＣＭＳ：３２２［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．６３ｍｉｎ（方法２）。
【０１３８】
実施例Ａ４５
中間体Ａ４９：６−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンの製造
【化５９】
0005853033.tif 000060
中間体Ａ４８（３００ｍｇ、０．９０５ｍｍｏｌ）をＨＣｌ溶液（６Ｍ  Ｈ２Ｏ溶液、１７．１ｍＬ）に室温で添加した。混合物を１１０℃で３５時間撹拌した後、溶媒を減圧留去し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液で処理し、ＡｃＯＥｔ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、減圧蒸発させた。粗製物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、中間体Ａ４９を透明油状物として得た（１６０ｍｇ、６８％）。ＬＣＭＳ：２６０［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．５１ｍｉｎ（方法３）。
【０１３９】
実施例Ａ８に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１４０】
実施例Ａ４６
中間体Ａ５０：ｒａｃ−４−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−ジフルオロメチル−２−オキソ−２λ＊４＊−［１，２，３］オキサチアゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化６０】
0005853033.tif 000061
カルバミン酸、Ｎ−［１−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−２，２−ジフルオロ−１−（ヒドロキシメチル）エチル］−，１，１−ジメチルエチルエステルから製造した。中間体Ａ５０を黄色油状物として得た（粗製物、ジアステレオ異性体の混合物、１００％）。
【０１４１】
実施例Ａ９に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１４２】
実施例Ａ４７
中間体Ａ５１：ｒａｃ−４−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−４−ジフルオロメチル−２，２−ジオキソ−２λ＊６＊−［１，２，３］オキサチアゾリジン−３−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化６１】
0005853033.tif 000062
中間体Ａ５０から製造した。ヘプタンでトリチュレートした後、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で、中間体Ａ５１を白色固体として得た（７８％）。ＬＣＭＳ：４６５［Ｍ＋ＮＨ４］＋；Ｒｔ：１．４６ｍｉｎ（方法２）。
【０１４３】
実施例Ａ４８
中間体Ａ５２：ｒａｃ−１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２，２−ジフルオロ−１−（５−メチル−３−ニトロ−ピラゾール−１−イルメチル）−エチルアミンの製造
【化６２】
0005853033.tif 000063
中間体Ａ５１（６．８ｇ、１５．２３８ｍｍｏｌ）およびエチル５−ニトロ−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキシレート（３．４ｇ、１８．３６５ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（１５０ｍＬ）溶液に、ＤＢＵ（５．１ｍＬ、３４．１０３ｍｍｏｌ）を室温で添加した。得られた混合物を６０℃で１８時間撹拌した。次いで、溶媒を減圧蒸発させ、残留物にＨＣｌ（４Ｍジオキサン溶液、４０ｍＬ）を室温で添加した。得られた溶液を室温で２時間撹拌した後、溶媒を減圧蒸発させた。Ｈ２Ｏおよび飽和Ｎａ２ＣＯ３を残留物に添加し、混合物をＤＣＭで抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ／ヘプタン、５０／５０）で精製した。所望の画分を回収し、減圧蒸発させ、中間体５２を粘性の泡状物として得た（４．６ｇ、６７％）。ＬＣＭＳ：４５３［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．４６ｍｉｎ（方法２）。
【０１４４】
実施例Ａ４９
中間体Ａ５３：ｒａｃ−６−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−６−ジフルオロメチル−２−ニトロ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−オンの製造
【化６３】
0005853033.tif 000064
封管内で、ＭｅＣＮ（４５ｍＬ）に中間体Ａ５２（４．１５ｇ、９．１９８ｍｍｏｌ）を混合し、その撹拌混合物にＤＢＵ（４．１２６ｍＬ、２７．６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物にマイクロ波を照射し１５０℃で３０分間撹拌した。混合物を１０％ＮＨ４Ｃｌで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧蒸発させ、中間体Ａ５４（２．４８ｇ、６７％）を得た。ＬＣＭＳ：４０５［Ｍ−Ｈ］−；Ｒｔ：１．１０ｍｉｎ（方法２）。
【０１４５】
実施例Ａ５０
中間体Ａ５４：ｒａｃ−２−アミノ−６−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−６−ジフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−オンの製造
【化６４】
0005853033.tif 000065
中間体Ａ５３（２．４ｇ、５．９２４ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）に溶解した。溶液をＲｕＯ２カートリッジ（５０℃、全水素、１ｍｌ／分）で水素化した。溶媒を減圧蒸発させ、残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ５４をオフホワイトの固体として得た（２．１ｇ、９４％）。ＬＣＭＳ：３７７［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．７４ｍｉｎ（方法２）。
【０１４６】
実施例Ａ５１
中間体Ａ５５：ｒａｃ−６−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−６−ジフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−オンの製造
【化６５】
0005853033.tif 000066
中間体Ａ５４（１．８ｇ、４．７９８ｍｍｏｌ）、ＥｔＯＨ（３６ｍＬ）およびＨ２ＳＯ４（０．７６７ｍＬ）の混合物を９０℃に加熱した。次いで、亜硝酸ナトリウム（８２８ｍｇ、１１．９９５ｍｍｏｌ）を少量ずつ添加し、混合物を９０℃で２０分間撹拌した。次いで、混合物を室温に冷却し、Ｎａ２ＣＯ３とＨ２Ｏとの飽和溶液に注ぎ入れ、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ５５を白色固体として得た（１．２５ｇ、７２％）。ＬＣＭＳ：４０３［Ｍ＋ＭｅＣＮ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．９２ｍｉｎ（方法２）。
【０１４７】
実施例Ａ１８に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１４８】
実施例Ａ５２
中間体Ａ５６：ｒａｃ−６−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−６−ジフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−チオンの製造
【化６６】
0005853033.tif 000067
中間体Ａ５５から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で、中間体５６を黄色固体として得た（１．１４ｇ、８８％）。ＬＣＭＳ：４１９［Ｍ＋ＭｅＣＮ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．１９ｍｉｎ（方法２）。
【０１４９】
実施例Ａ５３
中間体Ａ５７：ｒａｃ−６−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−６−ジフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンの製造
【化６７】
0005853033.tif 000068
中間体５６（１．１２ｇ、２．９７７ｍｍｏｌ）をＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液（３０ｍＬ）に溶解し、その溶液にマイクロ波を照射し１２０℃で３０分間撹拌した。溶媒を減圧蒸発させ、残留物をＤＣＭで処理し、希Ｎａ２ＣＯ３溶液で洗浄した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体５７を黄色固体として得た（１．０３ｇ、９６％）。ＬＣＭＳ：３６１［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．９９ｍｉｎ（方法２）。
【０１５０】
実施例Ａ３６〜Ａ３７に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１５１】
実施例Ａ５４
中間体Ａ５８：ｒａｃ−６−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−６−ジフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンの製造
【化６８】
0005853033.tif 000069
中間体Ａ５４から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ）で、中間体５８をオフホワイトの泡状物として（８６％）得た。ＬＣＭＳ：２９６［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．６１ｍｉｎ（方法２）。
【０１５２】
実施例Ａ５５
中間体Ａ５９：１Ｈ−ピラゾール−３，５−ジカルボン酸ジアミドの製造
【化６９】
0005853033.tif 000070
ジエチルピラゾール−３，５−ジカルボキシレート（５．２ｇ、２４．５ｍｍｏｌ）をＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液に溶解し、封管内でその混合物を７０℃で４８時間加熱した。次いで、溶媒を蒸発させ、中間体Ａ５９（３．７４ｇ、９９％）を固体として得た。
【０１５３】
実施例Ａ５６
中間体Ａ６０：１Ｈ−ピラゾール−３，５−ジカルボニトリルの製造
【化７０】
0005853033.tif 000071
中間体５９（３．７２ｇ、２４．１３６ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（９０ｍＬ）に混合し、その混合物に０℃でオキシ塩化リン（１１．２４９ｍＬ、１２０．６７９ｍｍｏｌ）を添加した。封管内で混合物を１２０℃で５時間（固体が消失するまで）撹拌した。反応を氷／Ｈ２Ｏの混合物に注ぎ、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させ、中間体Ａ６０を固体として得、それをさらに精製することなく次の工程に使用した。ＬＣＭＳ：１１７［Ｍ−Ｈ］−；Ｒｔ：０．６１ｍｉｎ（方法２）。
【０１５４】
実施例Ａ７〜Ａ１２に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１５５】
実施例Ａ５７
中間体Ａ６１：（Ｒ）−［１−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−（３，５−ジシアノピラゾール−１−イル）−１−メチル−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化７１】
0005853033.tif 000072
中間体Ａ３１から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ＤＣＭ）で、中間体Ａ６１を泡状物として得た（６０％）。ＬＣＭＳ：４６７［Ｍ＋ＮＨ４］＋；Ｒｔ：１．５７ｍｉｎ（方法２）。
【０１５６】
実施例Ａ５８
中間体Ａ６２：（Ｒ）−４−アミノ−６−（５−ブロモ−２−フルオロフェニル）−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−２−カルボニトリルの製造
【化７２】
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中間体Ａ６１（４．４８３ｇ、８．４ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（４０ｍＬ）に混合し、その撹拌混合物に室温でトリフルオロ酢酸（４ｍＬ）を添加した。混合物を２０時間、室温で撹拌した後、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液で塩基性化し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、減圧濃縮した。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ３の７Ｎ  ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ６２を得た（２．９ｇ、９９％）。ＬＣＭＳ：３４９［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．１３ｍｉｎ（方法２）。
【０１５７】
実施例Ａ５９
中間体Ａ６３：（Ｒ）−４−アミノ−６−（５−アミノ−２−フルオロフェニル）−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−２−カルボニトリルの製造
【化７３】
0005853033.tif 000074
反応を２つの同等のバッチで行った。使用する材料の全量を報告する。中間体Ａ６２（５００ｍｇ、１．４３６ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（２８４ｍｇ、４．３０８ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（２５５μＬ、２．３６９ｍｍｏｌ）およびＮａ２ＣＯ３（４５７ｍｇ、４．３０８ｍｍｏｌ）をＭｅＣＮ（１０ｍＬ）に懸濁し、その懸濁液にＣｕＩ（３４２ｍｇ、１．７９５ｍｍｏｌ）を添加し、反応を脱気した。混合物を１１０℃で４時間、次いで１２０℃でさらに２時間加熱した。次いで、混合物を１Ｍ
ＨＣｌで反応停止し、水層をＮＨ４ＯＨで塩基性化し、ＡｃＯＥｔ（３×）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ３の７Ｎ  ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ６３（３００ｍｇ、６５％）を得た。ＬＣＭＳ：２８５［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．７４ｍｉｎ（方法２）。
【０１５８】
実施例Ａ７〜Ａ９、Ａ１１、Ａ１３およびＡ１５に記載の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１５９】
実施例Ａ６０
中間体Ａ６４：（Ｒ）−６−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−６−メチル−４
−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−２−カルボン酸エチルエステルの製造
【化７４】
0005853033.tif 000075
ジエチルピラゾール−３，５−ジカルボキシレートから製造した。中間体Ａ６４を粗白色固体としてその後の反応に使用した。
【０１６０】
実施例Ａ６１
中間体Ａ６５：（Ｒ）−６−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−ヒドロキシメチル−６−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−オンの製造
【化７５】
0005853033.tif 000076
中間体６４（３．６ｇ、９．０８６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解し、その撹拌溶液に０℃で水素化ホウ素ナトリウム（３．０９４ｇ、８１．７７４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で１８時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、Ｈ２Ｏで処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させ、中間体Ａ６５（３．２ｇ、９９％）を白色固体として得た。
【０１６１】
実施例Ａ６２
中間体Ａ６６：（Ｒ）−６−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−６−メチル−４−オキソ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−２−カルバルデヒドの製造
【化７６】
0005853033.tif 000077
二酸化マンガン（７ｇ、８０．５ｍｍｏｌ）を、中間体Ａ６５(３．２ｇ、９．０３５ｍｍｏｌ）のクロロホルム（４８ｍＬ）溶液に添加した。反応混合物を６２℃で４時間撹
拌した。混合物をセライトで濾過し、ＤＣＭで洗浄した。有機層を濃縮し、中間体Ａ６６を薄橙色の飛散性固体として得た（２．３ｇ、７２％）。
【０１６２】
実施例Ａ６３
中間体Ａ６７：（Ｒ）−６−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−ジフルオロメチル−６−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−オンの製造
【化７７】
0005853033.tif 000078
中間体Ａ６６（２．３ｇ、６．５３１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍｌ）溶液とＤＡＳＴ（２．１９３ｍＬ、１６．３２８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍｌ）溶液をフローケミストリーＶａｐｏｕｒｔｅｃ  Ｒ２＋Ｒ４モジュール式装置、コイル１０ｍＬに、８０℃、Ｒｔ＝１５ｍｉｎで圧送した。流出液をＣａＣＯ３上に回収した。溶液をセライトで濾過し、ＤＣＭで洗浄し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄し、ＤＣＭで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧濃縮して、中間体Ａ６７（２．２ｇ、９０％）を褐色油状物として得た。
【０１６３】
実施例Ａ６４
中間体Ａ６８：（Ｒ）−６−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−ジフルオロメチル−６−メチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−チオンの製造
【化７８】
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五硫化リン（１．８７１ｇ、８．４１９ｍｍｏｌ）を中間体Ａ６７（２．１ｇ、５．６１３ｍｍｏｌ）のジオキサン（１ｍＬ）溶液に添加し、その混合物を１００℃で１８時間加熱した。混合物を減圧濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ６８（２ｇ、９１％）を黄色油状物として得た。ＬＣＭＳ：３９２［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．２９ｍｉｎ（方法２）。
【０１６４】
実施例Ａ６５
中間体Ａ６９：（Ｒ）−６−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−２−ジフルオロメチル−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンの製造
【化７９】
0005853033.tif 000080
反応を２つの同等のバッチで行った。使用する材料の全量を報告する。ＮＨ３（２Ｍ  ＥｔＯＨ溶液、３０ｍＬ、６０ｍｍｏｌ）を中間体Ａ６９（２ｇ、５．１２５ｍｍｏｌ）およびＮＨ４Ｃｌ（２．１７３ｇ、４１ｍｍｏｌ）に添加した。混合物にマイクロ波を照射し１７０℃で４５分間加熱した。混合物を濃縮し、ＮＨ３（２Ｍ  ＥｔＯＨ溶液）をさらに３０ｍＬ添加した。混合物にマイクロ波を照射し１７０℃で４５分間加熱した。この手順を４回、合計１８０分間繰り返した。混合物を濾過し、濾液を減圧濃縮した。粗製物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ６９（１ｇ、５２％）を油状物として得た。ＬＣＭＳ：３７５［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．１１ｍｉｎ（方法２）。
【０１６５】
実施例Ａ５９に記載のものと類似の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１６６】
実施例Ａ６６
中間体Ａ７０：（Ｒ）−６−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−２−ジフルオロメチル−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンの製造
【化８０】
0005853033.tif 000081
中間体Ａ６９から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で、中間体Ａ７０を油状物として得た（５１％）。ＬＣＭＳ：３１０［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：０．６９ｍｉｎ（方法２）。
【０１６７】
実施例Ａ７〜Ａ１１、Ａ４８、Ａ１５およびＡ１８に記載のものと類似の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１６８】
実施例Ａ６７
中間体Ａ７１：（Ｒ）−６−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３−フルオロ−２，６−ジメチル−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−チオンの製造
【化８１】
0005853033.tif 000082
４−フルオロ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸エチルエステルから製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＡｃＯＥｔ／ＤＣＭ）で、中間体Ａ７１を黄色固体として得た（９２％）。ＬＣＭＳ：３７４［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．２７ｍｉｎ（方法２）。
【０１６９】
実施例Ａ６８
中間体Ａ７２：（Ｒ）−６−（５−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３−フルオロ−２，６−ジメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンの製造
【化８２】
0005853033.tif 000083
ＮＨ３（２Ｍ  ＥｔＯＨ溶液、１０当量）を中間体７１（２．４ｇ、６．４４８ｍｍｏｌ）とＮＨ４Ｃｌ（４当量）との溶液に添加し、封管内でその混合物を８５℃で２４時間加熱した。溶媒を減圧蒸発させ、残留物をＤＣＭに懸濁し、Ｈ２Ｏで洗浄した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を減圧蒸発させた。残留物に、さらにＮＨ４Ｃｌ（４当量）を添加した後、ＮＨ３（２Ｍ  ＥｔＯＨ溶液、１０当量）を添加し、封管内で混合物を８５℃で２４時間加熱した。ＮＨ３（２Ｍ  ＥｔＯＨ溶液）の合計量が２７６ｍＬ、ＮＨ４Ｃｌ、８．２７７ｇとなるように、このプロセスをさらに４回繰り返した。次いで、生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、中間体Ａ７２（９６０ｍｇ、４２％）を淡黄色固体として得た。ＬＣＭＳ：３５７［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．１１ｍｉｎ（方法２）。
【０１７０】
実施例Ａ３６〜Ａ３７に記載のものと類似の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１７１】
実施例Ａ６９
中間体Ａ７３：（Ｒ）−６−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−３−フルオロ−２，６−ジメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンの製造
【化８３】
0005853033.tif 000084
中間体Ａ７２から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ３の７Ｎ  ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ）で、中間体Ａ７３を淡黄色固体として得た（４２％）。
【０１７２】
実施例Ａ７〜Ａ９、Ａ４８、Ａ２３、Ａ１６Ｂ．Ａ１８、Ａ２１、Ａ３６、Ａ３７に記載のものと類似の合成手順に従って次の中間体を製造した：
【０１７３】
実施例Ａ７０
中間体Ａ７４：（Ｒ）−６−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−３−クロロ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミンの製造
【化８４】
0005853033.tif 000085
中間体Ａ３１から製造した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）の後、ＤＩＰＥ／Ｅｔ２Ｏでトリチュレートし、中間体Ａ７４を黄色固体として得た（９４％）。ＬＣＭＳ：２９４［Ｍ＋Ｈ］＋；Ｒｔ：１．１３ｍｉｎ（方法）。
【０１７４】
最終化合物の製造
実施例Ｂ１
化合物１：（Ｒ）−６−［３−（５−クロロ−ピリジン−３−イル）−フェニル］−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−イルアミントリフルオロ酢酸塩の製造
【化８５】
0005853033.tif 000086
封管内で、ＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液（１．５ｍＬ）に中間体Ａ１８（６０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を混合し、その撹拌混合物に３２％ＮＨ３水溶液（０．５ｍＬ）を添加した。混合物を１００℃で５時間撹拌した。室温に冷却した後、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をショートカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮して画分を得、これを逆相ＨＰＬＣ（ＴＦＡの０．
１％Ｈ２Ｏ溶液８０％、ＣＨ３ＣＮ２０％から、ＴＦＡの０．１％Ｈ２Ｏ溶液０％、ＣＨ３ＣＮ１００％への勾配）でさらに精製し、ＤＩＰＥでトリチュレートし、化合物１（３６ｍｇ、収率４６％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．７９（ｓ，３Ｈ），４．６９（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），５．２５（ｄ，Ｊ＝１３．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９４−７．９６（ｍ，１Ｈ），８．２８（ｔ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），８．６６（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），８．８８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．２８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），９．８７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），１１．０６（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．
【０１７５】
実施例Ｂ２
化合物２：ｒａｃ−５−クロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−フェニル］−アミドの製造
【化８６】
0005853033.tif 000087
５−クロロ−ピリジン−２−カルボン酸（７１．８ｍｇ，０．６８ｍｍｏｌ）を、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（１３７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４ｍＬ）溶液に添加した。混合物を室温で５分間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ２２（１００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、３時間撹拌した。混合物をＮａ２ＣＯ３とＨ２Ｏとの飽和溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をＥｔ２Ｏでトリチュレートした後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させ、得られた画分をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）でさらに精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させ、化合物２（２１ｍｇ、収率１３％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．６７（ｓ，３Ｈ），４．３８（ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５３（ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，１Ｈ），４．７９（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．７２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．２４（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７３（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８５−７．９０（ｍ，２Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），８．５５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．８６（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．
【０１７６】
実施例Ｂ３
化合物３：ｒａｃ−３，５−ジクロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−フェニル］−アミドの製造
【化８７】
0005853033.tif 000088
３，５−ジクロロ−ピリジン−２−カルボン酸（１１２ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（１７６．２ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液に添加した。混合物を室温で５分間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ２２（１２８ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、３時間撹拌した。混合物をＮａ２ＣＯ３とＨ２Ｏとの飽和溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をＥｔ２Ｏでトリチュレートした後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、化合物３（１８０ｍｇ、収率８２％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．４１（ｓ，３Ｈ），４．１２−４．４５（ｍ，２Ｈ），６．５４（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２５−７．３２（ｍ，２Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｍ，Ｊ＝６．３，２．５，２．５Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），１０．６４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．
【０１７７】
実施例Ｂ４
化合物４：（Ｒ＊）−３，５−ジクロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−フェニル］−アミド、および化合物５：（Ｓ＊）−３，５−ジクロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−フェニル］−アミドの製造
【化８８】
0005853033.tif 000089
化合物３（０．５８ｇ）のサンプルを冷ＤＣＭで洗浄した後、Ｅｔ２Ｏで洗浄した。次いで、このラセミ化合物を、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ  ５μｍ（２５０×２０ｍｍ）、移動相（ｉＰｒＮＨ２０．３％、ＣＯ２６０％、ＥｔＯＨ４０％）での分取ＳＦＣにより、対応する鏡像異性体に分離した。各鏡像異性体に対する所望の画分を回収し、減圧濃縮し、化合物４（１５２ｍｇ、収率２６％）、１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．４１（ｓ，３Ｈ），４．２８（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．４１（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｓ，２Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．６０−７．６７（ｍ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），１０．６５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、および化合物５（１５５ｍｇ、収率２７％）、１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．４１（ｓ，３Ｈ），４．２８（ｓ，２Ｈ），６．４１（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ
，１Ｈ），７．２６−７．３３（ｍ，２Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５９−７．６９（ｍ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），１０．６５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）を共に白色固体として得た。
【０１７８】
実施例Ｂ５
化合物６：ｒａｃ−５−シアノ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−フェニル］−アミド、および化合物７：（Ｒ＊）−５−シアノ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−フェニル］−アミド、および化合物８：（Ｓ＊）−５−シアノ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−フェニル］−アミドの製造
【化８９】
0005853033.tif 000090
５−シアノ−ピリジン−２−カルボン酸（１８７．８ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）を、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（４１２．９ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）溶液に添加した。混合物を室温で５分間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ２２（３００ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、４時間撹拌した。混合物をＮａ２ＣＯ３とＨ２Ｏとの飽和溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をＥｔ２Ｏでトリチュレートした後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をＥｔＯＨおよびＥｔ２Ｏで洗浄した後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、化合物６（１２２ｍｇ、収率２６％）をクリーム色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．４２（ｓ，３Ｈ），４．３１（ｍ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，２Ｈ），６．６６（ｂｒ．ｓ，２Ｈ），６．６６（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２６−７．３３（ｍ，２Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｄｔ，Ｊ＝６．９，１．９Ｈｚ，１Ｈ），８．０１−８．０６（ｍ，１Ｈ），８．２９（ｄｄ，Ｊ＝８．１，０．６Ｈｚ，１Ｈ），８．５９（ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．１８−９．２２（ｍ，１Ｈ），１０．６８（ｓ，１Ｈ）．次いで、このラセミ化合物を、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ  ５μｍ（２５０×２０ｍｍ）、移動相（ｉＰｒＮＨ２０．３％、ＣＯ２６０％、ＥｔＯＨ４０％）での分取ＳＦＣによりさらに精製した。各鏡像異性体に対する所望の画分を回収し、減圧濃縮し、化合物７（４５．８ｍｇ、収率１０％）、１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．４１（ｓ，３Ｈ），４．２１−４．３５（ｍ，２Ｈ），６．３９（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．６４（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．２６−７．３５（ｍ，２Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），８．３０（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．６０（ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．２０−９．２２（ｍ，１Ｈ），１０．６８（ｓ，１Ｈ）、および化合物８（４６．５ｍｇ、収率１０％）、１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６
）δ  ｐｐｍ  １．４１（ｓ，３Ｈ），４．２９（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．４１（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２７−７．３４（ｍ，２Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７７−７．８０（ｍ，１Ｈ），８．０５（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），８．３０（ｄｄ，Ｊ＝８．２，０．７Ｈｚ，１Ｈ），８．６０（ｄｄ，Ｊ＝８．１，２．０Ｈｚ，１Ｈ），９．１９−９．２４（ｍ，１Ｈ），１０．６８（ｓ，１Ｈ）を共に白色固体として得た。
【０１７９】
実施例Ｂ６
化合物９：ｒａｃ−５−シアノ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−３−ブロモ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−フェニル］−アミドトリフルオロ酢酸塩の製造
【化９０】
0005853033.tif 000091
５−シアノ−ピリジン−２−カルボン酸（２３．６ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（５１．９ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液に添加した。その混合物を室温で５分間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ２０（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、４時間撹拌した。混合物をＮａ２ＣＯ３とＨ２Ｏとの飽和溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をＥｔ２Ｏでトリチュレートした後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣ（ＲＰ  Ｃ１８  ＸＳｅｌｅｃｔ  １９×１００  ５ｕｍ）、移動相（ＴＦＡの０．１％Ｈ２Ｏ溶液８０％、ＣＨ３ＣＮ２０％から、ＴＦＡの０．１％Ｈ２Ｏ溶液０％、ＣＨ３ＣＮ１００％への勾配）で精製し、化合物９（９．８ｍｇ、収率１１％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．７５（ｓ，３Ｈ），４．７４（ｄ，Ｊ＝１３．９Ｈｚ，１Ｈ），５．０９（ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１９−７．２４（ｍ，１Ｈ），７．４０（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８７（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｓ，１Ｈ），８．００（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），８．２９（ｄｄ，Ｊ＝８．１，０．６Ｈｚ，１Ｈ），８．６０（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．０Ｈｚ，１Ｈ），８．７８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），９．２１（ｄｄ，Ｊ＝２．０，０．９Ｈｚ，１Ｈ），９．７０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），１０．８９（ｓ，１Ｈ），１１．２３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．
【０１８０】
実施例Ｂ７
化合物１０：ｒａｃ−３，５−ジクロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−メチル−２−トリフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−フェニル］−アミド、および化合物１１：（Ｒ＊）−３，５−ジクロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−メチル−２−トリフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−フェニル］−アミド、および化合物１２：（Ｓ＊）−３，５−ジクロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−メチル−２−トリフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−フェニル］−アミドの製造
【化９１】
0005853033.tif 000092
３，５−ジクロロ−２−ピリジンカルボン酸（７０ｍｇ、０．３６６ｍｍｏｌ）を、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（１１９ｍｇ、０．４３１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液に添加した。混合物を室温で５分間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ２８（１１１ｍｇ、０．３５９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、４時間撹拌した。混合物をＮａ２ＣＯ３とＨ２Ｏとの飽和溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をＥｔ２Ｏでトリチュレートし、音波処理し、濾過し、５０℃で減圧乾燥して、化合物１０（９５ｍｇ、収率５５％）を白色固体として得た。次いで、このラセミ化合物を、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈ  ５μｍ（２５０×２０ｍｍ）、移動相（ｉＰｒＮＨ２０．３％、ＣＯ２７０％、ｉＰｒＯＨ３０％）での分取ＳＦＣによりさらに精製した。各鏡像異性体に対する所望の画分を回収し、減圧濃縮して、化合物１１（４０ｍｇ、収率２３％）、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．４２（ｓ，３Ｈ），４．３５−４．４７（ｍ，２Ｈ），６．６１（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），７．０９（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．２６−７．３５（ｍ，２Ｈ），７．５９−７．６７（ｍ，１Ｈ），７．８３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），８．４３（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），８．７２（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），１０．６７（ｓ，１Ｈ）、および、１Ｈ  ＮＭＲが化合物１１のものと一致した化合物１２（３８ｍｇ、収率２２％）を得た。
【０１８１】
実施例Ｂ８
化合物１３：（Ｒ）−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−３−フルオロ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造
【化９２】
0005853033.tif 000093
５−メトキシピラジン−２−カルボン酸（１２０ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）を、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（２３３ｍｇ、０．８４１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液に添加した。その混合物を室温で５分間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ３９（２１２ｍｇ、０．７６４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、４時間撹拌した。混合物をＮａ２ＣＯ３とＨ２Ｏとの飽和溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をＥｔ２Ｏでトリチュレートした後、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、減圧濃縮して、白色固体を得た。固体をＤＩＰＥで処
理し、化合物１３（１５５ｍｇ、４９％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．５９（ｓ，３Ｈ），４．０６（ｓ，３Ｈ），４．２８（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．５１（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ），５．０４（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），７．０９（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８４−７．９７（ｍ，２Ｈ），８．１２（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．９９（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），９．５１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．
【０１８２】
実施例Ｂ９
化合物１４：ｒａｃ−３，５−ジクロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミド、および化合物１５：（Ｒ＊）−３，５−ジクロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミド、および化合物１６：（Ｓ＊）−３，５−ジクロロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造
【化９３】
0005853033.tif 000094
３，５−ジクロロ−２−ピリジンカルボン酸（７５．５ｍｇ、０．３９３ｍｍｏｌ）を、４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（１２８ｍｇ、０．４６３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液に添加した。その混合物を室温で５分間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ４９（１００ｍｇ、０．３８６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、４時間撹拌した。混合物をＮａ２ＣＯ３とＨ２Ｏとの飽和溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をＥｔ２Ｏでトリチュレートし、音波処理し、濾過して、５０℃で減圧乾燥した。得られた化合物を、もう一回、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製し、ＡｃＯＥｔおよびＤＩＰＥで処理した後、化合物１４（９５ｍｇ、収率５７％）を白色固体として得た。次いで、このラセミ化合物を、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＤ−Ｈ  ５μｍ（２５０×２０ｍｍ）、移動相（ｉＰｒＮＨ２０．３％、ＣＯ２８５％、ＥｔＯＨ１５％）での分取ＳＦＣによりさらに精製した。各鏡像異性体に対する所望の画分を回収し、減圧濃縮して、化合物１５（３８ｍｇ、収率２３％）、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．５８（ｓ，３Ｈ），２．５２（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），４．４１（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｄｄ，Ｊ＝１３．２，０．９Ｈｚ，１Ｈ），６．４３（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄｄ，Ｊ＝１１．７，８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄｄ，Ｊ＝６．９，２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｄｄｄ，Ｊ＝８．８，４．１，３．０Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），９．７１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）、および、１Ｈ  ＮＭＲが化合物１５のものと一致した化合物１６（４０ｍｇ、収率２４％）を得た。
【０１８３】
実施例Ｂ１０
化合物１７：ｒａｃ−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−ジフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミド、および化合物１８：（Ｒ＊）−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−ジフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミド、および化合物１９：（Ｓ＊）−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−ジフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造
【化９４】
0005853033.tif 000095
４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（３３７ｍｇ、１．２１９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（６ｍＬ）に混合し、その混合物に５−メトキシピラジン−２−カルボン酸（１８７．９ｍｇ、１．２１９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で５分間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ５８（３００ｍｇ、１．０１６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、１時間撹拌した後、Ｎａ２ＣＯ３とＨ２Ｏとの飽和溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。生成物の一部をＤＣＭで沈殿させ、残りの粗製物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させた。得られた生成物を沈殿から得られたものと合わせ、ヘプタンでトリチュレートし、音波処理し、濾過して、化合物１７（２７８ｍｇ、収率６２％）を白色固体として得た。次いで、このラセミ化合物を、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＪ−Ｈ  ５μｍ（２５０×２０ｍｍ）、移動相（ｉＰｒＮＨ２０．３％、ＣＯ２７０％、ＥｔＯＨ３０％）での分取ＳＦＣによりさらに精製した。各鏡像異性体に対する所望の画分を回収し、減圧濃縮して、化合物１８（１０３ｍｇ、収率２３％）、１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ４．０３（ｓ，３Ｈ）４．５８（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ）４．７５（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ）６．２７（ｔ，Ｊ＝５５．５Ｈｚ，１Ｈ）６．６８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）６．９３（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）７．２０（ｄｄ，Ｊ＝１１．８，９．０Ｈｚ，１Ｈ）７．４８（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ）７．７８（ｄｔ，Ｊ＝８．４，３．６Ｈｚ，１Ｈ）８．１７（ｄｄ，Ｊ＝７．１，２．７Ｈｚ，１Ｈ）８．４２（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ）８．８８（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ）１０．５１（ｓ，１Ｈ）、および、１Ｈ  ＮＭＲが化合物１８のものと一致した化合物１９（１０２ｍｇ、収率２３％）を得た。
【０１８４】
実施例Ｂ１１
化合物２０：ｒａｃ−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−ジフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミド、および化合物２１：（Ｓ＊）−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−ジフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミド、および化合物２２：（Ｒ＊）−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−６−ジフルオロメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造
【化９５】
0005853033.tif 000096
４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（１４６ｍｇ、０．５２８ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（３ｍＬ）に混合し、その混合物に５−フルオロ−２−ピリジンカルボン酸（７４．５ｍｇ、０．５２８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で５分間撹拌した。次いで、混合物を０℃に冷却し、中間体Ａ５８（１３０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、１時間撹拌した後、Ｎａ２ＣＯ３とＨ２Ｏとの飽和溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させた。得られた生成物をヘプタンでトリチュレートし、音波処理し、濾過して、化合物１７（１１２ｍｇ、収率６０％）を白色固体として得た。次いで、このラセミ化合物を、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ  ＡＤ−Ｈカラム（５μｍ、２５０×２０ｍｍ）、移動相［ＣＯ２７０％、ＥｔＯＨ（＋ｉＰｒＮＨ２０．３％）３０％］での分取ＳＦＣによりさらに精製した。各鏡像異性体に対する所望の画分を回収し、減圧濃縮し、１Ｈ  ＮＭＲが化合物２２のものと一致した化合物２１（４１ｍｇ、収率２２％）、および化合物２２（４３ｍｇ、収率２３％）、１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  ４．５３−４．６１（ｍ，１Ｈ），４．７４（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ，１Ｈ），６．２６（ｔ，Ｊ＝５５．９Ｈｚ，１Ｈ），６．６７（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｂｒ．ｓ，２Ｈ），７．２０（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄｄｄ，Ｊ＝８．８，３．９，２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｔｄ，Ｊ＝８．７，２．９Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄｄ，Ｊ＝７．１，２．７Ｈｚ，１Ｈ），８．２１（ｄｄ，Ｊ＝８．８，４．６Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），１０．６２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）を得た。
【０１８５】
実施例Ｂ１２
化合物２３：（Ｒ）−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−２−シアノ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造
【化９６】
0005853033.tif 000097
４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（１７１．３ｍｇ、０．６１９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（３ｍＬ）に混合し、その混合物に５−メトキシピラジン−２−カルボン酸（９５．４ｍｇ、０．６１９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３０分間撹拌した後、それを０℃に冷却し、中間体Ａ６３（１６０ｍｇ、０．５６３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、２０時間撹拌した後、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液で処理し、数分間撹拌した。次いで、混合物をＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリ
カゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、乾燥後、化合物２３（１１５ｍｇ、収率４９％）を固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．５８（ｓ，３Ｈ），１．６６（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），４．０７（ｓ，３Ｈ），４．４７（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．６６（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，１Ｈ），６．８１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），７．０９（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，９．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７５−７．８１（ｍ，１Ｈ），７．９７（ｄｄ，Ｊ＝７．１，２．７Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），９．００（ｓ，１Ｈ），９．４９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０１８６】
実施例Ｂ１３
化合物２４：（Ｒ）−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−２−シアノ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造
【化９７】
0005853033.tif 000098
４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（１７１．３ｍｇ、０．６１９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（３ｍＬ）に混合し、その混合物に５−フルオロ−２−ピリジンカルボン酸（８７．４ｍｇ、０．６１９ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３０分間撹拌した後、それを０℃に冷却し、中間体Ａ６３（１６０ｍｇ、０．５６３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、２０時間撹拌した後、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液で処理し、数分間撹拌した。次いで、混合物をＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、油状物を得、これをＤＩＰＥでトリチュレートした。得られた固体を濾過し、乾燥して、化合物２４（９５ｍｇ、収率４１％）を固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．５８（ｂｒ．ｓ，３Ｈ）４．４６（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ，１Ｈ）４．６６（ｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ，１Ｈ）４．９０（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）６．８１（ｓ，１Ｈ）７．１０（ｄｄ，Ｊ＝１１．８，８．８Ｈｚ，１Ｈ）７．６０（ｔｄ，Ｊ＝８．３，２．８Ｈｚ，１Ｈ）７．７８−７．８６（ｍ，１Ｈ）７．９６（ｄｄ，Ｊ＝７．１，２．７Ｈｚ，１Ｈ）８．３２（ｄｄ，Ｊ＝８．７，４．５Ｈｚ，１Ｈ）８．４５（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ）９．８０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．
【０１８７】
実施例Ｂ１４
化合物２５：（Ｒ）−１−ジフルオロメチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸［３−（４−アミノ−２−シアノ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造
【化９８】
0005853033.tif 000099
４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（１５５ｍｇ、０．５６１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（３ｍＬ）に混合し、その混合物に１−ジフルオロメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（８２．７ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３０分間撹拌した後、それを０℃に冷却し、中間体Ａ６３（１４５ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、３時間撹拌した後、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液で処理し、数分間撹拌した。次いで、混合物をＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて油状物を得、これをヘプタンでトリチュレートした。得られた固体を濾過し、乾燥して、化合物２５（１００ｍｇ、収率４６％）を固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．５８（ｓ，３Ｈ）４．４７（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，１Ｈ）４．６５（ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，１Ｈ）４．９４（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）６．８１（ｓ，１Ｈ）７．０５（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ）７．０９（ｄｄ，Ｊ＝１１．６，９．０Ｈｚ，１Ｈ）７．２０（ｔ，Ｊ＝６０．４Ｈｚ，１Ｈ）７．６９−７．７５（ｍ，１Ｈ）７．８８（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ）７．９１（ｄｄ，Ｊ＝６．８，２．２Ｈｚ，１Ｈ）８．６２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．
【０１８８】
実施例Ｂ１５
化合物２６：（Ｒ）−５−シアノ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−２−シアノ−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造
【化９９】
0005853033.tif 000100
４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（１６３．８ｍｇ、０．５９２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（３ｍＬ）に混合し、その混合物に５−シアノ−２−ピリジンカルボン酸（７９．７ｍｇ、０．５３８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で３０分間撹拌した後、それを０℃に冷却し、中間体Ａ６３（１５３ｍｇ、０．５３８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、３時間撹拌した後、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液で処理し、数分間撹拌した。次いで、混合物をＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、溶媒を減圧蒸発させた。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、油状物を得、これをヘプタンでトリチュレートした。得られた固体を濾過し、乾燥して化合物２６（６３ｍｇ、収率２８％）を固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．４７（ｂｒ．ｓ，３Ｈ）４．４３−４．５５（ｍ，２Ｈ）６．７６（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）７．２０（ｄｄ，Ｊ＝１１．８，９．０Ｈｚ，１Ｈ）７．２７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）７．７１−７．７９（ｍ，１Ｈ）８．１０（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）８．２６（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）８．５７（ｄｄ，Ｊ＝８．２，１．６Ｈｚ，１Ｈ）９．１８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）１０．８１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．
【０１８９】
実施例Ｂ１６
化合物２７：（Ｒ）−５−フルオロ−ピリジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−２−ジフルオロメチル−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造
【化１００】
0005853033.tif 000101
４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（１４８ｍｇ、０．５３３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（３ｍＬ）に混合し、その混合物に５−フルオロ−２−ピリジンカルボン酸（６８ｍｇ、０．４８５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で５分間撹拌した後、それを０℃に冷却し、中間体Ａ７０（１５０ｍｇ、０．４８５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、４時間撹拌した後、冷浴中で減圧濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ドライ充填、シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、オフホワイトの固体を得、これをＣ１８  Ｓｕｎｆｉｒｅ（３０×１００  ５ｕｍ）、移動相：ＴＦＡの０．１％Ｈ２Ｏ溶液８０％、ＣＨ３ＣＮ２０％から、ＴＦＡの０．１％Ｈ２Ｏ溶液０％、ＣＨ３ＣＮ１００％への勾配でのＲＰ
ＨＰＬＣによりさらに精製し、化合物２７（５７ｍｇ、３３％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．８４（ｂｒ．ｓ，３Ｈ），４．７９（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．９Ｈｚ，１Ｈ），５．０２（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｔ，Ｊ＝５４．３Ｈｚ，１Ｈ），７．３０（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），７．８６−７．９１（ｍ，１Ｈ），７．９３（ｄｄ，Ｊ＝７．５，２．３Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｔｄ，Ｊ＝８．７，２．９Ｈｚ，１Ｈ），８．２０（ｄｄ，Ｊ＝８．７，４．６Ｈｚ，１Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ，１Ｈ），９．３３（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），１０．０７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ），１０．８０（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），１１．０９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０１９０】
実施例Ｂ１７
化合物２８：（Ｒ）−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−２−ジフルオロメチル−６−メチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造
【化１０１】
0005853033.tif 000102
４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（１４８ｍｇ、０．５３３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（３ｍＬ）に混合し、その混合物に５−メトキシピラジン−２−カルボン酸（７５ｍｇ、０．４８５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で５分間撹拌した後、それを０℃に冷却し、中間体Ａ７０（１５０ｍｇ、０．４８５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、４時間撹拌した後、冷浴中で減圧濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ドライ充填、シリカゲル；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させて、オフホワイトの固体を得、これをＣ１８  Ｓｕｎｆｉｒｅ（３０×１００  ５ｕｍ）、移動相：ＴＦＡの０．１％Ｈ２Ｏ溶液８０％、ＣＨ３ＣＮ２０％から、ＴＦＡの０．１％Ｈ２Ｏ溶液０％、ＣＨ３ＣＮ１００％への勾配でのＲＰ
ＨＰＬＣによりさらに精製し、化合物２７（３２ｍｇ、１２％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．８５（ｂｒ．ｓ．，３Ｈ）４．０３（ｓ，３Ｈ）４．８０（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．９Ｈｚ，１Ｈ）５．０３（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ，１Ｈ）７．１２（ｔ，Ｊ＝５４．３Ｈｚ，１Ｈ）７．３１（ｄｄ，Ｊ＝１１．８，９．０Ｈｚ，１Ｈ）７．４７（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．８４−７．９０（ｍ，１Ｈ）７．９６（ｄｄ，Ｊ＝７．４，２．２Ｈｚ，１Ｈ）８．４２（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ）８．８８（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ）９．３２（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）１０．０９（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）１０．７０（ｓ，１Ｈ）１１．０８（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．
【０１９１】
実施例Ｂ１８
化合物２９：（Ｒ）−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（４−アミノ−３−フルオロ−２，６−ジメチル−６，７−ジヒドロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−６−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドの製造
【化１０２】
0005853033.tif 000103
４−（４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロライド（１７５ｍｇ、０．６３１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２ｍＬ）に混合し、その混合物に５−メトキシピラジン−２−カルボン酸（９７ｍｇ、０．６３１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で５分間撹拌した後、それを０℃に冷却し、中間体Ａ７３（１７５ｍｇ、０．６０１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液を添加した。混合物を室温に加温し、２４時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、残留物をＤＣＭに懸濁し、飽和Ｎａ２ＣＯ３で処理した。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過して、減圧濃縮した。粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル；ＮＨ３の７Ｍ  ＭｅＯＨ溶液／ＤＣＭ）で精製した。所望の画分を回収し、溶媒を減圧蒸発させた。残留物をＥｔ２Ｏに懸濁した。沈殿物を濾別し、５０℃で減圧乾燥し、化合物２９（１９５ｍｇ、７６％）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ
１．４５（ｂｒ．ｓ，３Ｈ），２．１２（ｓ，３Ｈ），４．０２（ｓ，３Ｈ），４．１８（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，１Ｈ），６．２６（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ），７．１７（ｄｄ，Ｊ＝１２．０，８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６８−７．７７（ｍ，１Ｈ），８．０４（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），８．８７（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），１０．４６（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）．
【０１９２】
【表１】
0005853033.tif 000104
【０１９３】
【表２】
0005853033.tif 000105
【０１９４】
【表３】
0005853033.tif 000106
【０１９５】
【表４】
0005853033.tif 000107
【０１９６】
Ｃ．分析部分
核磁気共鳴（ＮＭＲ）
それぞれ４００ＭＨｚおよび５００ＭＨｚで動作するＢｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ−４００またはＢｒｕｋｅｒ  ＡＶ−５００分光計のいずれかで標準パルス系列を用いて、１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを記録した。化学シフト（δ）は、内部標準として使用したテトラメチルシラン（ＴＭＳ）から低磁場側へのシフトを百万分率（ｐｐｍ）で報告する。
【０１９７】
ＬＣＭＳ法
本発明の化合物の（ＬＣ）ＭＳによる特性評価のため、次の方法を使用した。
【０１９８】
Ａｃｑｕｉｔｙ−ＳＱＤ測定装置に関する一般的手順Ａ
ＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）測定は、サンプラーオーガナイザー、脱気装置を有するバイナリポンプ、４本のカラムを収容するオーブン、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）および各方法で明記するカラムを備えるＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ）システムを使用して行った。ＭＳ検出器は、エレクトロスプレーイオン源と共に構成された。質量スペクトルは、０．０８秒のチャンネル間遅延を使用して０．１秒で１００〜１０００の走査を行うことにより、シングル四重極型ＳＱＤ検出器で取得した。キ
ャピラリーニードル電圧は３．０ｋＶであった。コーン電圧は、正イオン化モードでは２５Ｖ、および負イオン化モードでは３０Ｖであった。窒素をネブライザーガスとして使用した。イオン源温度は１４０℃に維持した。データ取得は、ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘソフトウェアで行った。
【０１９９】
方法１：
一般的方法Ａに加えて：逆相ＵＰＬＣを、ＭＳ検出器に分岐することなく、Ｗａｔｅｒｓ製のＢＥＨ−Ｃ１８カラム（１．７μｍ、２．１×５０ｍｍ）で、流速１．０ｍｌ／分、５０℃で行った。使用した勾配条件は：Ａ（０．５ｇ／ｌ酢酸アンモニウム溶液＋５％アセトニトリル）９５％、Ｂ（アセトニトリル）５％から、３．８分でＡ４０％、Ｂ６０％に、４．６分でＡ５％、Ｂ９５％に変化させ、５．０分まで維持した。注入量２．０μｌ。
【０２００】
方法２：
一般的方法Ａに加えて：逆相ＵＰＬＣを、ＭＳ検出器に分岐することなく、Ａｇｉｌｅｎｔ製のＲＲＨＤ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ−Ｃ１８（１．８μｍ、２．１×５０ｍｍ）で、流速１．０ｍｌ／分、５０℃で行った。使用した勾配条件は：Ａ（０．５ｇ／ｌ酢酸アンモニウム溶液＋５％アセトニトリル）９５％、Ｂ（アセトニトリル）５％から、１．２分でＡ４０％、Ｂ６０％に、１．８分でＡ５％、Ｂ９５％に変化させ、２．０分まで維持した。注入容量２．０μｌ。
【０２０１】
方法３：
方法１と同じ勾配；使用したカラム：Ａｇｉｌｅｎｔ製のＲＲＨＤ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ−Ｃ１８（１．８μｍ、２．１×５０ｍｍ）。
【０２０２】
ＨＰ１１００−ＭＳ測定装置（ＴＯＦ、ＳＱＤまたはＭＳＤ）に関する一般的手順Ｂ
ＨＰＬＣ測定は、脱気装置付きポンプ（クォータナリまたはバイナリ）、オートサンプラー、カラムオーブン、ダイオード−アレイ検出器（ＤＡＤ）および各方法で明記するカラムを備える、ＨＰ  １１００（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）システムを使用して行った。ＭＳ検出器（ＳＱＤ、ＴＯＦまたはＭＳＤ）は、エレクトロスプレーイオン源またはＥＳＣＩデュアルイオン源（大気圧化学イオン化と組み合わせたエレクトロスプレー）と共に構成された。窒素をネブライザーガスとして使用した。イオン源温度は１４０℃または１００℃に維持した。データ取得は、ＭａｓｓＬｙｎｘ−ＯｐｅｎｌｙｎｘソフトウェアまたはＣｈｅｍｓａｔｉｏｎ−Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｄａｔａ  Ｂｒｏｗｓｅｒソフトウェアで行った。
【０２０３】
Ｂ１：質量スペクトルは、ＡＰＣＩモードのシングル四重極型ＭＳＤ検出器で、０．９９秒で１００〜１０００の走査を、ステップサイズ０．３０およびピーク幅０．１０分で行うことにより取得した。キャピラリーニードル電圧は３．０Ｋｖであり、フラグメンター電圧は、正イオン化モードと負イオン化モードで７０Ｖであり、コロナ強度は４μＡであった。
【０２０４】
Ｂ２：質量スペクトルは、シングル四重極型ＳＱＤ検出器で、０．０８秒のチャンネル間遅延を使用し、０．１秒で１００〜１０００の走査を行うことにより取得した。キャピラリーニードル電圧は３．０ｋＶであった。コーン電圧は、正イオン化モードでは２０Ｖ、および負イオン化モードでは３０Ｖであった。
【０２０５】
Ｂ３：質量スペクトルは、飛行時間（ＴＯＦ）型検出器で、０．３秒のデータ収集時間（ｄｗｅｌｌ  ｔｉｍｅ）を使用し、０．５秒で１００〜７５０の走査を行うことにより取得した。キャピラリーニードル電圧は、正イオン化モードでは２．５ｋＶ、負イオン化
モードでは２．９ｋＶであった。コーン電圧は、正イオン化モードと負イオン化モードの両方で２０Ｖであった。ロイシン−エンケファリンをロックマス（ｌｏｃｋ  ｍａｓｓ）校正に使用する標準物質とした。
【０２０６】
方法４：
一般的方法Ｂ１に加えて：逆相ＨＰＬＣを、Ａｇｉｌｅｎｔ製のＥｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ−Ｃ１８カラム（３．５μｍ、２．１×３０ｍｍ）で、流速１．０ｍｌ／分、６０℃で行った。使用した勾配条件は次の通りである：Ａ（ＮＨ４ＡｃＯの６．５ｍＭ  Ｈ２Ｏ溶液／ＡＣＮ、９５／５）９５％、Ｂ（ＡＣＮ）５％（０．２分維持）から、３．０分でＢ１００％に変化させ、３．１５分まで維持し、３．３分の時点で初期条件に平衡化させ、５．０分まで継続した。注入量２μｌ。
【０２０７】
方法５：
一般的方法Ｂ２に加えて：逆相ＨＰＬＣを、Ａｇｉｌｅｎｔ製のＥｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ−Ｃ１８カラム（３．５μｍ、２．１×３０ｍｍ）で、流速１．０ｍｌ／分、６０℃で行った。使用した勾配条件は次の通りである：Ａ（ＮＨ４ＡｃＯの６．５ｍＭ  Ｈ２Ｏ溶液／ＡＣＮ、９５／５）９５％、Ｂ（ＡＣＮ／ＭｅＯＨ、１／１）５％から、５．０分でＢ１００％に変化させ、５．１５分まで維持し、５．３０分の時点で初期条件に平衡化させ、７．０分まで継続した。注入量２μｌ。
【０２０８】
方法６：
一般的方法Ｂ３に加えて：逆相ＨＰＬＣを、Ａｇｉｌｅｎｔ製のＥｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ−Ｃ１８カラム（３．５μｍ、２．１×３０ｍｍ）で、流速１．０ｍｌ／分、６０℃で行った。使用した勾配条件は次の通りである：Ａ（ＮＨ４ＡｃＯの６．５ｍＭ  Ｈ２Ｏ溶液／ＡＣＮ、９５／５）９５％、Ｂ（ＡＣＮ）５％（０．２分維持）から、３．０分でＢ１００％に変化させ、３．１５分まで維持し、３．３分の時点で初期条件に平衡化させ、５．０分まで継続した。注入量２μｌ。
【０２０９】
一般的方法Ｃ
ＨＰＬＣ測定は、ポンプ、ダイオード−アレイ検出器（ＤＡＤ）（使用した波長２２０ｎｍ）、カラムヒーター、および下記の各方法で明記するカラムを備える、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００モジュールを使用して行った。カラムからの流れをＡｇｉｌｅｎｔ  ＭＳＤ
Ｓｅｒｉｅｓ  Ｇ１９４６ＣおよびＧ１９５６Ａに分岐した。ＭＳ検出器は、ＡＰＩ−ＥＳ（大気圧エレクトロスプレーイオン化）と共に構成された。質量スペクトルは、１００〜１０００の走査を行うことにより取得した。キャピラリーニードル電圧は、正イオン化モードでは２５００Ｖであり、負イオン化モードでは３０００Ｖであった。フラグメンテーション電圧は５０Ｖであった。乾燥ガス温度は１０ｌ／分の流量で３５０℃に維持した。
【０２１０】
方法７：
一般的方法Ｃに加えて：逆相ＨＰＬＣを、ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−ＡＱ、５０×２．０ｍｍ  ５μｍカラムで、流速０．８ｍｌ／分で行った。２種の移動相（移動相Ａ：０．１％ＴＦＡを有するＨ２Ｏ；移動相Ｂ：０．０５％ＴＦＡを有するＡＣＮ）を使用した。まず、Ａ１００％を１分間維持した。その後、勾配をかけて４分でＡ４０％およびＢ６０％に変化させ、２．５分間維持した。典型的な注入量２μｌを使用した。オーブン温度は５０℃であった。（ＭＳ極性：正）。
【０２１１】
方法８：
一般的方法Ｃに加えて：逆相ＨＰＬＣを、Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ＸＢ−Ｃ１８、５０×２．１ｍｍ  ５μｍカラムで、流速０．８ｍｌ／分で行った。２種の移動相（移動相Ｃ：１
０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＮＨ４ＨＣＯ３；移動相Ｄ：ＡＣＮ）を使用した。まず、Ｃ１００％を１分間維持した。その後、勾配をかけて４分でＣ４０％およびＤ６０％に変化させ、２．５分間維持した。典型的な注入量２μｌを使用した。オーブン温度は５０℃であった。（ＭＳ極性：正）。
【０２１２】
一般的手順Ｄ
ＵＨＰＬＣ測定は、ポンプ、フォトダイオードアレイ検出器（ＰＤＡ）（使用した波長２２０ｎｍ）、カラムオーブン、および下記の各方法で明記するカラムを備える、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ２０１０  ＬＣＭＳシステムを使用して行った。カラムからの流れをＳｈｉｍａｄｚｕ  ２０１０  ＭＳＤ検出器に分岐した。ＭＳ検出器は、ＡＰＩ−ＥＳ（大気圧エレクトロスプレーイオン化）と共に構成された。質量スペクトルは、１００〜１０００の走査を行うことにより取得した。インターフェース電圧は、正イオン化モードでは４５００Ｖであった。噴霧化ガス流量は１．５ｌ／分であった。ＣＤＬ（加熱キャピラリーを有する脱溶媒管）温度は２５０℃であり、ＣＤＬ電圧は３０Ｖであった。熱ブロック温度は２００℃であった。検出器電圧は１５００Ｖであった。
【０２１３】
方法９
一般的方法Ｄに加えて：逆相ＵＨＰＬＣを、Ｘｔｉｍａｔｅ  Ｃ１８（３０×２．１ｍｍ  ３．０μｍ）カラムで、流速１．２ｍＬ／分で行った。２種の移動相（Ａ：０．１５％ＴＦＡを有するＨ２Ｏ；Ｂ：０．７５％ＴＦＡを有するＡＣＮ）を使用した。まず、Ａ１００％を１分間維持した。その後、勾配をかけて０．９分でＡ４０％およびＢ６０％に変化させ、１．５分まで維持し、１．５１分の時点で初期条件に平衡化させ、２．０分まで継続した。典型的な注入量１．０μＬを使用した。オーブン温度は５０℃であった。（ＭＳ極性：正）。
【０２１４】
一般的手順Ｅ
ＬＣ測定は、脱気装置付きバイナリポンプ、オートサンプラー、ダイオード−アレイ検出器（ＤＡＤ）および下記の各方法で明記するカラムを備え、カラムが４０℃の温度に維持されるＵＰＬＣ（超高速液体クロマトグラフィー）Ａｃｑｕｉｔｙ（Ｗａｔｅｒｓ）システムを使用して行った。カラムからの流れをＭＳ検出器に導いた。ＭＳ検出器は、エレクトロスプレーイオン源と共に構成された。質量スペクトルは、トリプル四重極型質量分析装置Ｑｕａｔｔｒｏ検出器（Ｗａｔｅｒｓ）で、０．１秒のスキャン間遅延を使用し、０．２秒で１００〜１０００の走査を行うことにより取得した。キャピラリーニードル電圧は３ｋＶであり、イオン源温度は１３０℃に維持した。コーン電圧は、正イオン化モードと負イオン化モードで２０Ｖであった。窒素をネブライザーガスとして用いた。データ取得は、ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘソフトウェア（Ｗａｔｅｒｓ）で行った。
【０２１５】
方法１０：
一般的方法Ｅに加えて：逆相ＵＰＬＣを、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＢＥＨ（架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッド）Ｐｈｅｎｙｌ−Ｈｅｘｙｌカラム（１．７μｍ、２．１×１００ｍｍ）で、流速０．３４３ｍｌ／分で行った。２種の移動相（移動相Ａ：７ｍＭ  ＮＨ４ＡｃＯ９５％／ＡＣＮ５％；移動相Ｂ：ＡＣＮ１００％）を使用して、Ａ８４．２％およびＢ１５．８％（０．４９分間維持）から、２．１８分でＡ１０．５％およびＢ８９．５％に変化させ、１．９４分間維持し、０．７３分で初期条件に戻し、０．７３分間維持する勾配条件を実施した。注入量２ｍｌを使用した。
【０２１６】
融点
値はピーク値または溶融範囲のいずれかであり、得られた値は、一般にこの分析方法に伴う実験的不確かさを有する。
【０２１７】
Ｍｅｔｔｌｅｒ  ＦＰ  ８１ＨＴ／ＦＰ９０−ＦＰ６２装置（表２にＦＰ９０およびＦＰ６２で示す）
多くの化合物について、Ｍｅｔｔｌｅｒ  ＦＰ６２またはＭｅｔｔｌｅｒ  ＦＰ８１ＨＴ／ＦＰ９０装置のいずれかで、オープンキャピラリー内で融点を測定した。融点は、１、３、５または１０℃／分の温度勾配で測定した。最高温度は３００℃であった。融点は、デジタル表示装置から読み取った。
【０２１８】
【表５】
0005853033.tif 000108
【０２１９】
【表６】
0005853033.tif 000109
【０２２０】
ＳＦＣＭＳ−方法
ＳＦＣ−ＭＳ方法に関する一般的手順Ａ
ＳＦＣ測定は、二酸化炭素（ＣＯ２）と調節剤を供給するためのデュアルポンプ制御モジュール（ＦＣＭ−１２００）、１〜１５０℃の範囲で温度を制御するカラム加熱用熱制御モジュール（ＴＣＭ２１００）、および６本の異なるカラム用のカラム選択弁（Ｖａｌｃｏ，ＶＩＣＩ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ，ＵＳＡ）を備えるＢｅｒｇｅｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｎｅｗａｒｋ，ＤＥ，ＵＳＡ）製のＡｎａｌｙｔｉｃａｌ  ＳＦＣシステムを使用して行った。フォトダイオードアレイ検出器（Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００，Ｗａｌｄｂｒｏｎｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）は高圧フローセル（４００バール以下）を備え、ＣＴＣ
ＬＣ  Ｍｉｎｉ  ＰＡＬオートサンプラー（Ｌｅａｐ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｒｂｏｒｏ，ＮＣ，ＵＳＡ）と共に構成されている。直交型Ｚ−エレクトロスプレーインターフェースを有するＺＱ質量分析計（Ｗａｔｅｒｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ，ＵＳＡ）はＳＦＣシステムと連結される。測定装置制御、データ収集および処理は、ＳＦＣ  ＰｒｏＮＴｏソフトウェアおよびＭａｓｓｌｙｎｘソフトウェアからなる統合プラットフォームで行った。
【０２２１】
方法１
一般的方法Ａに加えて：ＳＦＣでのキラル分離を、５０℃のＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ−Ｈカラム（４．６ｍｍ、４．６×５００ｍｍ）で、流速３．０ｍｌ／分で行った。移動相はＣＯ２、ＭｅＯＨ（ｉＰｒＮＨ２を０．２％含有）２０％、１５．００分保持、定組成モードである。
【０２２２】
一般的手順Ｂ
ＳＦＣ測定は、二酸化炭素（ＣＯ２）と調節剤を供給するためのＦＣＭ−１２００デュアルポンプ流体制御モジュール、ＣＴＣ  Ａｎａｌｙｔｉｃｓ自動液体サンプラー、室温〜８０℃のカラム加熱用ＴＣＭ−２００００熱制御モジュールを備えるＢｅｒｇｅｒ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｎｅｗａｒｋ，ＤＥ，ＵＳＡ）製のＡｎａｌｙｔｉｃａｌ  ＳＦＣシステムを用いて行った。４００バールまで耐える高圧フローセルを備えるＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＵＶフォトダイオードアレイ検出器を使用した。カラムからの流れをＭＳ分光計に分岐した。ＭＳ検出器は、大気圧イオン源と共に構成された。イオン化後のＷａｔｅｒｓ  ＺＱ質量分光計のパラメータは：コロナ：９μａ、イオン源温度：１４０℃、コーン：３０Ｖ、プローブ温度４５０℃、抽出器３Ｖ，脱溶媒ガス４００Ｌ／時間、コーンガス７０Ｌ／時間である。窒素をネブライザーガスとして使用した。データ取得は、Ｗａｔｅｒｓ−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＭａｓｓＬｙｎｘ−Ｏｐｅｎｌｙｎｘデータシステムで行った。
【０２２３】
方法２
一般的方法Ｂに加えて：ＳＦＣでのキラル分離を、３５℃のＣＨＩＲＡＬＰＡＫ  ＡＤ
ＤＡＩＣＥＬカラム（１０μｍ、４．６×２５０ｍｍ）で、流速３．０ｍｌ／分で行った。移動相は、ＣＯ２、エタノール６０％、ＥｔＯＨ（ｉＰｒＮＨ２を０．３％含有）４０％、７分維持である。
【０２２４】
【表７】
0005853033.tif 000110
【０２２５】
旋光：
旋光は、ナトリウムランプを有するＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ３４１旋光計で測定し、次のように報告した：［α］λｔ℃（ｃｇ／１００ｍｌ、溶媒）。
【０２２６】
【表８】
0005853033.tif 000111
【０２２７】
薬理学的実施例
本発明で提供される化合物は、β部位ＡＰＰ切断酵素１（ＢＡＣＥ１）の阻害剤である。ＢＡＣＥ１、即ち、アスパラギン酸プロテアーゼの阻害は、アルツハイマー病（ＡＤ）の治療に密接に関連していると考えられる。β−アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）からのβ−アミロイドペプチド（Ａβ）の産生および蓄積は、ＡＤの発症および進行に重要な役割を果たすものと考えられる。Ａβは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）から、それぞれβ−セクレターゼおよびγ−セクレターゼでＡβドメインのＮ末端側およびＣ末端側を連続的に切断することにより産生される。
【０２２８】
式（Ｉ）の化合物は、酵素活性を阻害する能力があるため、ＢＡＣＥ１に対してかなり効果があるものと期待される。このような化合物、特に式（Ｉ）の化合物の同定に好適な後述の、生化学的蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）に基づくアッセイおよびＳＫＮＢＥ２細胞での細胞αｌｉｓａアッセイを使用して試験したこのような阻害剤の特性を表３に示す。
【０２２９】
生化学的ＦＲＥＴに基づくアッセイ
本アッセイは、蛍光共鳴エネルギー移動アッセイ（ＦＲＥＴ）に基づくアッセイである。このアッセイの基質は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）β−セクレターゼ切断部位の「スウェーデン」Ｌｙｓ−Ｍｅｔ／Ａｓｎ−Ｌｅｕ突然変異を含有するＡＰＰ由来の１３個のアミノ酸からなるペプチドである。この基質は２つのフルオロフォアも含有し：（７−メトキシクマリン−４−イル）酢酸（Ｍｃａ）は３２０ｎｍの励起波長と４０５ｎｍの発光とを有する蛍光ドナーであり、２，４−ジニトロフェニル（Ｄｎｐ）は専有の（ｐｒｏｐｒｉｅｔａｒｙ）消光剤アクセプターである。これらの２つの基の間の距離は、光励起時に、共鳴エネルギー移動により、ドナー蛍光エネルギーがアクセプターにより著しく消光されるように選択されている。ＢＡＣＥ１による切断時に、フルオロフォアＭｃａは消光基Ｄｎｐから分離され、ドナーの全蛍光収量を回復する。蛍光の増加は、タンパク質分解速度と比例関係がある（Ｋｏｉｋｅ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９９，１２６，２３５−４２）。
簡潔に言えば、３８４ウェルのフォーマットで、最終濃度１μｇ／ｍｌの組換えＢＡＣＥ１タンパク質を化合物の非存在下もしくは存在下、インキュベーションバッファー（４０ｍＭクエン酸バッファーｐＨ５．０、０．０４％ＰＥＧ、４％ＤＭＳＯ）中１０μｍの基質と共に室温で１２０分間インキュベートする。次に、タンパク質分解量をＴ＝０およびＴ＝１２０での蛍光測定により直接測定する（励起３２０ｎｍおよび発光４０５ｎｍ）。結果を、Ｔ１２０とＴ０間との差としてＲＦＵで表す。
最良適合曲線を、最小二乗法により％Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ対化合物濃度のプロットに適合させる。これからＩＣ５０値（活性の５０％阻害を引き起こす阻害濃度）を得ることができる。
ＬＣ＝低コントロール値の中央値
＝低コントロール：酵素なしの反応
ＨＣ＝高コントロール値の中央値
＝高コントロール：酵素を用いた反応
％効果＝１００−［（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）＊１００］
％コントロール＝（サンプル／ＨＣ）＊１００
％Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ＝（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）＊１００
【０２３０】
以下に例示する化合物は本質的に前述のように試験され、以下の活性を示した：
【０２３１】
【表９】
0005853033.tif 000112
【０２３２】
【表１０】
0005853033.tif 000113
【０２３３】
【表１１】
0005853033.tif 000114
【０２３４】
ＳＫＮＢＥ２細胞での細胞αｌｉｓａアッセイ
２つのαｌｉｓａアッセイでは、産生され、ヒト神経芽細胞腫ＳＫＮＢＥ２細胞の培地中に分泌される全ＡβおよびＡβ４２の濃度を定量する。アッセイは、野生型アミロイド前駆体タンパク質（ｈＡＰＰ６９５）を発現するヒト神経芽細胞腫ＳＫＮＢＥ２に基づく。化合物を希釈してこれらの細胞に添加し、１８時間インキュベートした後、Ａβ４２および全Ａβの測定を行う。全ＡβおよびＡβ４２は、サンドイッチαｌｉｓａで測定する。αｌｉｓａは、それぞれ全ＡβおよびＡβ４２を検出するための、ストレプトアビジン被覆ビーズに結合したビオチン化抗体ＡｂＮ／２５および抗体Ａｂ４Ｇ８またはｃＡｂ４２／２６結合アクセプタービーズを使用するサンドイッチアッセイである。全ＡβまたはＡβ４２の存在下でビーズは近接する。ドナービーズの励起により一重項酸素分子の放出が起こり、それによりアクセプタービーズで一連のエネルギー移動が起こり、その結果、発光が生じる。発光は１時間インキュベートした後に測定する（励起６５０ｎｍおよび発光６１５ｎｍ）。
【０２３５】
最良適合曲線を、最小二乗法により％Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ対化合物濃度のプロットに適合させる。これからＩＣ５０値（活性の５０％阻害を引き起こす阻害濃度）を得ることができる。
ＬＣ＝低コントロール値の中央値
＝低コントロール：αｌｉｓａにビオチン化Ａｂを用いることなく、化合物なしで予備インキュベートされた細胞
ＨＣ＝高コントロール値の中央値
＝高コントロール：化合物なしで予備インキュベートされた細胞
％効果＝１００−［（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）＊１００］
％コントロール＝（サンプル／ＨＣ）＊１００
％Ｃｏｎｔｒｏｌｍｉｎ＝（サンプル−ＬＣ）／（ＨＣ−ＬＣ）＊１００
【０２３６】
以下に例示する化合物は本質的に前述のように試験し、以下の活性を示した：
【０２３７】
【表１２】
0005853033.tif 000115
【０２３８】
【表１３】
0005853033.tif 000116
【０２３９】
ｉｎ  ｖｉｖｏ有効性の実証
本発明のＡβペプチド低下剤は、ヒトなどの哺乳動物のＡＤを治療するために使用することができる、または、あるいは、以下に限定されるものでないが、マウス、ラットもしくはモルモットなどの動物モデルで有効性を示す。哺乳動物はＡＤと診断されていなくてもよく、またはＡＤに関する遺伝的素因を有していなくてもよいが、しかし、ＡＤに罹患しているヒトに見られるものと同様にＡβを過剰産生し、最終的にそれを沈着するようなトランスジェニックとすることができる。
【０２４０】
Ａβペプチド低下剤は、任意の標準的形態で任意の標準的方法を使用して投与することができる。例えば、以下に限定されるものでないが、Ａβペプチド低下剤は、経口でまたは注射により摂取される液剤、錠剤またはカプセル剤の形態であってもよい。Ａβペプチド低下剤は、血液、血漿、血清、脳脊髄液（ＣＳＦ）または脳中のＡβペプチドの濃度を著しく低下させるのに十分な任意の用量で投与することができる。
【０２４１】
Ａβ４２ペプチド低下剤の急性投与によりｉｎ  ｖｉｖｏでＡβペプチド濃度が低下す
るかどうかを確認するため、非トランスジェニックげっ歯類、例えばマウスまたはラットを使用した。Ａβペプチド低下剤で処置した動物を検査し、非処置のものまたは溶媒で処置したものと比較し、可溶性Ａβ４２および全Ａβの脳内濃度を標準的な方法により、例えばＥＬＩＳＡを使用して定量した。処置期間は数時間（ｈ）から数日までの範囲とし、効果の現れる時間経過を確認できた後、Ａβ４２低下の結果に基づいて調節した。
【０２４２】
ｉｎ  ｖｉｖｏでのＡβ４２低下を測定する典型的プロトコルを示すが、それは検出可能なＡβの濃度を最適化するのに使用し得る多くの変法の１つに過ぎない。例えば、Ａβペプチド低下化合物を２０％ヒドロキシプロピルβシクロデキストリン中で製剤化した。Ａβペプチド低下剤を、一晩絶食した動物に単一経口用量（ｐ．ｏ．）としてまたは単一皮下用量（ｓ．ｃ．）として投与した。一定時間後、通常、２時間後または４時間後（表７に示す）に動物を犠牲にし、Ａβ４２濃度を分析した。
【０２４３】
断頭し、ＥＤＴＡ処理採血管に全血を採取することにより採血した。血液を１９００ｇで１０分（ｍｉｎ）間、４℃で遠心分離し、血漿を回収し、後で分析するために急速凍結した。脳を頭蓋および後脳から取り出した。小脳を除去し、左半球と右半球を分離した。左半球は、試験化合物濃度を定量分析するために−１８℃で保存した。右半球は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）緩衝液で洗浄し、直ぐにドライアイス上で凍結させ、生化学的アッセイのためホモジナイズするまで−８０℃で保存した。
【０２４４】
非トランスジェニック動物からのマウス脳を、組織１グラム当たり、プロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ−１１８７３５８０００１若しくは０４６９３１５９００１）を含有する０．４％ＤＥＡ（ジエチルアミン）／５０ｍＭ  ＮａＣｌ、８容量に再懸濁させた、例えば、脳０．１５８ｇに対して、０．４％ＤＥＡを１．２６４ｍｌ添加する。溶解マトリックスＤ（ＭＰＢｉｏ  ＃６９１３−１００）を使用し、ＦａｓｔＰｒｅｐ−２４システム（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）内で全サンプルを６ｍ／ｓで２０秒間、ホモジナイズした。ホモジネートを２２１．３００×ｇで５０分間、遠心分離した。次いで、得られた高速上清を新しいエッペンドルフ管に移した。上清９部を０．５Ｍトリス−ＨＣｌ  ｐＨ６．８、１部で中和し、全ＡβおよびＡβ４２の定量に使用した。
【０２４５】
脳ホモジネートの可溶性画分中の全ＡβおよびＡβ４２の量を定量するために、酵素結合免疫吸着検定法を使用した。簡潔に言えば、標準物質（合成Ａβ１−４０およびＡβ１−４２の希釈物、Ｂａｃｈｅｍ）を、最終濃度が１００００〜０．３ｐｇ／ｍｌの範囲となるように、Ｕｌｔｒａｃｕｌｔｕｒｅ内の１．５ｍｌエッペンドルフ管内で製造した。サンプルおよび標準物質を、Ａβ４２検出用のＨＲＰＯ標識Ｎ末端抗体および全Ａβ検出用のビオチン化中央ドメイン抗体４Ｇ８と一緒に共インキュベートした。次いで、５０μｌのコンジュゲート／サンプルまたはコンジュゲート／標準物質混合物を、抗体でコーティングしたプレートに添加した（捕獲抗体は、Ａβ４２のＣ末端を選択的に認識するＡβ４２検出用の抗体ＪＲＦ／ｃＡβ４２／２６と、ＡβのＮ末端を選択的に認識する全Ａβ検出用の抗体ＪＲＦ／ｒＡβ／２であった）。抗体−アミロイド複合体を形成させるため、このプレートを４℃で終夜インキュベートした。このインキュベーションおよびその後の洗浄工程の後、Ａβ４２を定量するためのＥＬＩＳＡを、製造業者の指示（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌ）に従いＱｕａｎｔａ  Ｂｌｕ蛍光原ペルオキシダーゼ基質を添加することにより終了した。読み取りは１０分〜１５分後に行った（励起３２０ｎｍ／発光４２０ｎｍ）。
【０２４６】
全Ａβ検出のため、ストレプトアビジン−ペルオキシダーゼコンジュゲートを添加し、６０分後に、追加の洗浄工程を行い、製造業者の指示（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏｒｐ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌ）に従いＱｕａｎｔａ  Ｂｌｕ蛍光原ペルオキシダーゼ基質を添加した。読み取りは１０分〜１５分後に行った（励起３２０ｎｍ／発光４２０ｎｍ）。
【０２４７】
このモデルでは、未処置動物と比較して少なくとも２０％のＡβ４２低下が有利であろう。
【０２４８】
例示する以下の化合物は本質的に前述のように試験され、次の活性を示した：
【０２４９】
【表１４】
0005853033.tif 000117