(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
芽胞状態の枯草菌及びシュードモナス属菌（Pseudomonas）に属する微生物菌体を培養した後、遠心分離することによって培養液と菌体とに分離した後、芽胞状態の枯草菌とシュードモナス属菌（Pseudomonas）に属する微生物菌体を固体培養しアルコールで懸濁液を溶解抽出し、当該懸濁液を濾過することによって、増殖可能な菌体が排除された酵素及び抗菌活性物質を産生する生理活性物質からなる液状又は半流動状の物質を得ることを特徴とする、建物の天井、壁あるいは床に発生する黴の予防又は除去に使用される抗カビ剤の製造方法。
【請求項２】
前記遠心分離をする前に、３．０〜７．０×１０9／ｍｌの芽胞状態の枯草菌と、１．０〜３．０×１０9／ｍｌのシュードモナス属菌とを、混合して培養することを特徴とする請求項１に記載された抗カビ剤の製造方法。
【請求項３】
芽胞状態の枯草菌及びシュードモナス属菌（Pseudomonas）に属する微生物菌体を培養しコロニーを形成した後、遠心分離することによって培養液と菌体とに分離した後、芽胞状態の枯草菌とシュードモナス属菌（Pseudomonas）に属する微生物菌体を固体培養しアルコールで懸濁液を溶解抽出し、当該懸濁液を濾過することによって、増殖可能な菌体が排除された酵素及び抗菌活性物質を産生する生理活性物質からなる液状又は半流動状の物質を、建物の天井、壁あるいは床に塗布及び／又は噴霧する工程を有することを特徴とする黴の予防又は除去を行う抗カビ方法。
【請求項４】
前記液状又は半流動状の物質を塗布／又は噴霧する工程の前に、遠心分離して得られた培養液を使用した抗カビ剤を塗布及び／又は噴霧する工程を有することを特徴とする請求項３に記載された抗カビ方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、建物の天井、壁あるいは床に発生する黴の予防又は除去に使用される抗カビ剤に関し、特に発生している黴を除去するだけでなく、長期間にわたって黴の発生を予防することができる抗カビ剤及び抗カビ方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
建物の内部には、経年により多糖類等の有機物が付着し、その有機物が栄養となり黴が発生・増殖することがある。
又、ペットや鳩の糞に含まれる真菌（悪性病原菌：ＷＨＯではＰ３レベル感染症のおそれがある物質とみなされている。）により黴が発生することも知れられている。このような黴の発生を抑止するために、建物の窓にネットをはる等の対策がとられているが、ネットでは真菌の侵入を十分に抑止することができないのが現状である。
建材に生育する黴としては、グルゴ酸発酵菌で酸化、中性化することで建材の劣化の原因となるＡ．ｎｉｇｅｒ（アスペルギルス・ニガー）、日本国内に特に多く樹脂やボードに害を及ぼすＡ．Ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ（アスペルギルス・バージカラー）、建材・住環境・食品等衣食住のすべてを汚染するｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ（ペニシリウム）、輸入木材・畳・ボード・ベニヤ板等に繁殖するＥｕｒｏｔｉｕｍ（ユーロチウム、日本名：カワキコウジカビ）、建材・工業製品等の損耗原因となる好浸透圧黴のＡ．ｒｅｓｔｒｉｃｔｕｓ（アスペルギルス・レステリクタス）、浴室や湿度の高い箇所の塩化ビニル樹脂等に繁殖し建材の損耗事故の原因となるＡｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ（アウレオバジリウム、日本名：黒色酵母様菌）、アフラトキシンを産生し人・動植物に対し毒性を有するＦｕｓａｒｉｍ（フザリウム、日本名：赤カビ）、木材・塗料・樹脂の劣化や腐朽やアレルゲンの原因ともなり紫外線・加熱に高い抵抗性を有するＣｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ（クラドスポリウム、日本名：クロカビ）、湿地の土壌中に多く、毒物アフラトキシンの前駆物質といわれるＣｈａｅｔｏｍｉｕｍ（チャイトミウム、日本名：ケマタカビ属）、日本国内に多い木材腐朽菌Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ（トリコデルマ）等が挙げられる。
【０００３】
このような黴は建物の内部の美観を損ねるだけではなく、アレルギーやシックハウス症候群との関連も指摘されている。特に米国においては、近年、住宅や公共施設での黴による健康被害の訴訟が多数発生し、増加傾向にある。
又、近年の気候変動により、日本国内における高温多湿化は顕著になり、黴の成育状況、被害状況に大きな変化が現れている。そのようなことから、黴が原因のアレルギー、シックハウス、真菌症といった問題は益々深刻度合いを増している。
【０００４】
発生した黴を除去するために、従来、塩素系又は酸素系漂白剤を主成分とする洗浄剤（例えば、特許文献１、２）、アルコール分を主成分とする洗浄剤（例えば、特許文献３、４、５）を使用する方法、ＴＢＺ（農薬としてメルク社が開発した製品）等の合成物質をエマルジョン塗装に添加する方法等が知られていた。
しかし、次亜塩素酸ソーダのような塩素系漂白剤、ハイドロサルファイト等の漂白剤を主成分とするものは、黴色素の漂白力と黴の除去性能は優れているものの、酸性の洗浄剤と混合した場合に人体に有毒な塩素ガスが発生したり、塩素臭が強すぎる等の欠点を有している。特にトイレ等の床や壁等に付着している尿素等が前記の洗浄剤と化学反応をおこし、トリハロメタン（発ガン性物質）が発生することが知られている。又、ハロゲン等の漂白剤は、汚れや黴色素を漂白するのみで、黴自体を消滅させることはできなかった。
又、過酸化水素水を主成分とする酸素系漂白剤を主成分とするものは、酸素系漂白剤単体では十分に黴の除去・予防を行うことができなかった。そのため他の漂白活性化剤等と併用して使用する必要があった（例えば、特許文献２）。又、酸素系漂白剤も汚れや黴自体を一時的に漂白するだけで、黴の発生を防止することはできなった。それどころか、生分解率の低い洗浄剤では、かえって黴の増殖を促す環境を作ってしまうという欠点があった。
【０００５】
又、アルコールを主成分とする洗浄剤は、黴に対して殺菌力を有しているが、汚れや黴の再発生を予防する効果は低い。即ち、主成分となるアルコールは揮発性が高いため、効果の持続期間が短く、洗浄剤を塗布した後すぐに黴が発生する環境になってしまうという欠点があった。又、建材としてヒバ材が使用されている場合、アルコールを主成分とする洗浄剤を使用すると、ヒバ独自の風合いが消滅してしまうことが知られている。更に、アルコールには浸透性がないため、木材やセメント材の奥にある黴の根に洗浄剤が届かないことも問題となっている。
【０００６】
更にＴＢＺ等の合成物質を配合した洗浄剤は、効果の持続期間が短く、水等に溶け難い性質を有することから、空中に飛散することによって目や皮膚を痛める危険性も大きく、シックハウス症候群の原因ともなり得るため、二次的被害が生じるという欠点があった。
本発明者は、上記のような様々な問題点に鑑みて、枯草菌を使用した洗浄剤を発明した（特許文献６参照）。この特許発明に係る洗浄剤によってビニルクロス等の建材の表面に発生する黴の除去を図ることができた。
しかし、上記特許発明に係る洗浄剤は、木材やセメント材等で形成されている壁や天井に発生した黴の除去及び予防に対しては万全な効果を発揮するものではないことが分かった。本発明者はこのような新たな問題点を研究した結果、上記特許発明に係る洗浄剤は、このような壁材等の奥にある黴の根にまで届いていないことを突き止めた。そして、その理由は、０．７５μｍ程度である微小な黴菌が、木材やセメント材の奥の方へ入り込んで根を作っていることが原因であることを突き止めたのである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０００−１６９３０６号公報
【特許文献２】特開平２−２２５６００号公報
【特許文献３】特開２０１０−５８７５号公報
【特許文献４】特開２００５−３３６０８７号公報
【特許文献５】特開２００３−３４２１０３号公報
【特許文献６】特許第４２６０５７６号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
従来の細菌胞子に対する抗カビ剤は、毒性の高い酸化剤、アルキル化剤又はタンパク質変性剤であった。抗生物質のようにタンパク質合成、ＤＮＡ・ＲＮＡ合成、細胞壁合成、呼吸系・電子伝達系及び輸送や排出等の代謝系を阻害する従来の抗カビ剤は、非常に簡単なプロセスによって耐性菌が発現してしまう。
【０００９】
そこで本発明は、幅広い菌種に対して抗カビ効果を有する生理活性物質である抗カビ剤の提供を目的とする。特に胞子を形成する微生物に対する顕著な抗カビ効果を有する抗カビ剤の提供を目的とする。
また本発明は、発生している黴を除去するだけでなく、長期間にわたり耐性菌の発現を予防することにより黴の発生を予防することを目的とする。
更に本発明は、洗浄剤の主成分となる菌の過度な増殖を抑制し、微生物が産生する酵素、抗菌活性物質のみを使用した抗カビ剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者は、上記の問題点を解決するため、以下の構成を有する抗カビ剤及び抗カビ方法を採用した。
（１）建物の天井、壁あるいは床に発生する黴の予防又は除去に使用される抗カビ剤であって、少なくとも、芽胞状態の枯草菌と、シュードモナス属菌（Psuedomonas）に属する微生物菌体と、を含有した液状又は半流動状の物質であることを特徴とする抗カビ剤である。
（２）前記芽胞状態の枯草菌とシュードモナス属菌に属する微生物菌体とを有する抗カビ剤が、増殖可能な菌体が排除された酵素及び抗菌活性物質を産生する生理活性物質からなることを特徴とする上記（１）に記載された抗カビ剤である。
（３）前記抗カビ剤が、３．０〜７．０×１０9／ｍｌの芽胞状態の枯草菌と、１．０〜３．０×１０9／ｍｌのシュードモナス属菌を有する洗浄剤であることを特徴とする上記（１）に記載された抗カビ剤である。
【００１１】
（４）建物の天井、壁あるいは床に発生する黴の予防又は除去に使用される抗カビ方法であって、芽胞状態の枯草菌と、シュードモナス属菌（Psuedomonas）に属する微生物菌体と、を含有した液状又は半流動状の抗カビ剤を塗布及び／又は噴霧する工程を有することを特徴とする抗カビ方法である。
（５）前記抗カビ剤が、芽胞状態の枯草菌及びシュードモナス属菌を培養しコロニーを形成した後、遠心分離機を使用して培養液と菌体とに分離し、当該菌体を固体培養しエタノール又は無水アルコールで抽出した後、抽出された懸濁液を濾過することによって得られた生理活性物質であることを特徴とする上記（４）に記載された抗カビ方法である。
（６）前記抗カビ剤を塗布及び／又は噴霧する工程の前に、遠心分離して得られた培養液を使用した抗カビ剤を塗布及び／又は噴霧する工程を有することを特徴とする上記（５）に記載された抗カビ方法である。
【発明の効果】
【００１２】
本発明に係る抗カビ剤及び抗カビ方法を採用することによって、幅広い菌種に対して抗黴効果を発揮することができる。特に胞子を形成する微生物に対する顕著な抗カビ効果を奏する優れた効果がある。
すなわち、本発明に係る抗カビ剤及び抗カビ方法を採用することによって、建物の天井、壁あるいは床に発生した黴を効果的に除去することができる。
【００１３】
また本発明に係る抗カビ剤及び抗カビ方法を採用することによって、発生している黴を除去するだけでなく、耐性菌の発現を予防し、長期間にわたり黴の発生を予防することができる。
更に本発明に係る抗カビ剤及び抗カビ方法を採用することによって、抗カビ剤の主成分となる菌の過度な増殖を抑制し、微生物が産生する酵素、抗菌活性物質のみを使用するという優れた効果を奏する。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明に係る抗カビ剤及び抗カビ方法は、芽胞状態の枯草菌と、シュードモナス属菌（Psuedomonas）に属する微生物菌体との二種類の菌を含有することを特徴とする。
ここで芽胞状態の枯草菌とは、Bacillus subtilisと言われる真正細菌の一種であり、０．７〜０．８μｍ×２．０〜３．０μｍの好気性のグラム陽性桿菌で、芽胞状態となったものをいう。Bacillus subtilisは、土壌中や、空気中に飛散している常在細菌（空中雑菌）の一つで、枯れた草の表面などからも分離されることが多い。培養には細心の注意が必要となるが、本発明者は、トリプトソイ寒天培地に土壌中に広く存在する枯草菌を植え、３７±１℃で３日間培養した後、低温に放置し、希釈液に懸濁して回収することによって培養している。ただし、本発明に係る芽胞状態の枯草菌は、他の方法によって培養しても良く、上記培養方法に限定されるものではない。
【００１５】
次にシュードモナス属菌とは、特にシュードモナス・スタッツェリ（Psuedomonas stutzeri）が好ましく、グラム陰性桿菌で、好気性真正細菌の一属である。シュードモナス・スタッツェリは、公害物質や膠質の固着した汚れを強力に分解する性質を有しているためである。建材に生育する黴を分解する作用を有するものであればいずれの菌株を用いても良いが、本発明者が現在認識している菌株の中では、シュードモナス属ＮＢＲＣ（NITE Biological Resource Center）１４１６５を使用するのが最も好ましい。かかる菌株は、増殖可能であり、安全レベルはハザードレベル１である（ハザードレベル１とは、一般需要者にも取扱い可能なレベルである。）。もちろん本発明は、前記菌株に限定するものではなく、人工合成有機物を処理する能力がある菌株であれば良い。
【００１６】
本発明に係る抗カビ剤は、増殖可能な菌体が排除された酵素及び抗菌活性物質を産生する生理活性物質からなることを特徴とする。
ここで、増殖可能な菌体が排除された酵素及び抗菌活性物質を産生する生理活性物質は以下の方法で産生することができる。芽胞状態の枯草菌とシュードモナス属菌の培養液を２０，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、培養液と菌体とに分離した後、菌体を固体培養しエタノール又は無水アルコール等で溶解抽出する。その後、抽出した懸濁液体を濾過することによって増殖可能な菌体を排除することができる。このようにして抗カビ剤の主成分となる菌の過度な増殖を抑制し、微生物が産生する酵素、抗菌活性物質のみを使用することが可能となる。
【００１７】
このようにして得られた抗カビ剤は、発生している黴を効果的に除去することができる。又、菌体の増殖が抑制されているため、抗カビ剤としての効果が持続するため、耐性菌の発現を効果的に抑止し、長期間にわたり黴の発生を予防することができる。更に、人や動物の健康に害を与えないという優れた効果も奏している。
他方、本発明に係る抗カビ剤としては、３．０〜７．０×１０9／ｍｌの芽胞状態の枯草菌と、１．０〜３．０×１０9／ｍｌのシュードモナス属菌を使用するのが好ましい。
芽胞状態の枯草菌を３．０×１０9／ｍｌ未満、又はシュードモナス属菌１．０×１０9／ｍｌ未満とすると、本発明の効果を十分に発揮できない可能性がある。一方、芽胞状態の枯草菌を７．０×１０9／ｍｌ超、又はシュードモナス属菌３．０×１０9／ｍｌ超とするのは、純粋培養による増殖が現在の技術では困難となるからである。特に上限値によっては、純粋培養の方法を工夫することにより、前記の値を超えたものを産生して用いても良い。
【００１８】
上記の数値範囲にある萌芽状態の枯草菌とシュードモナス属菌を２０，０００ｒｐｍで３０分間遠心分離し、培養液と菌体とに分離する。このようにして得られた培養液は洗浄剤に添加することができる。例えば、石鹸水に５．０×１０9／ｍｌの枯草菌と、１．９×１０9／ｍｌのシュードモナス属菌とを混合し、１０〜１５ｐｐｍにした後に重曹３％を添加し、汚れ落しと除菌を主な用途とする抗カビ剤を得ることができる。
【００１９】
本発明に係る抗カビ剤は、以下のようにして生産することができる。以下の生産方法は、本発明に係る抗カビ剤の製法の一例であって、本発明を限定するものではない。もちろん他の方法で本発明に係る抗カビ剤を生産しても良い。
まず、５．０×１０9／ｍｌの芽胞状態の枯草菌を好適条件のもとで一定期間培養する。コロニーを確認した後、遠心分離機によって２０，０００ｒｐｍ、３０分間遠心分離し、培養液と菌体とに分離する。分離された菌体を固体培養し、エタノール又は無水アルコールによって溶解抽出をする。
抽出された懸濁液体を０．２μｍ濾過膜を使用し濾過することによって菌の過度な増殖が抑制された枯草菌から産生された生理活性物質を得ることができる。
抽出された懸濁液体を濾過することによって、増殖可能な菌体を排除することができる。その結果、増殖可能な菌体が排除された微生物による酵素、抗菌活性物質のみを産生することができる。増殖可能な菌体を排除することによって、抗カビ剤の主成分となる菌の過度な増殖を抑制することができるため、高温、高湿等を含む環境の変化や、密閉性等の影響を受けず、衣食住あらゆる環境に対して、長期間にわたり抗カビ、抗菌効果を発揮し続けることが可能となる。又、抗カビ剤が存在する限りにおいて半永久的に抗カビ効果等が持続する。更に、人体や動物に対する毒性がなく、安全な抗カビ剤を得ることができる。
【００２０】
同時に１．９×１０9／ｍｌのシュードモナス属菌とを好適条件のもとで一定期間培養する。コロニーを確認した後、遠心分離機によって２０，０００ｒｐｍ、３０分間遠心分離し、培養液と菌体とに分離する。分離された菌体を固体培養し、エタノール又は無水アルコールによって溶解抽出をする。
抽出された懸濁液体を０．２μｍ濾過膜を使用し濾過することによって菌の過度な増殖が抑制されたシュードモナス属菌から産生された生理活性物質を得ることができる。
このようにして枯草菌から産生された生理活性物質とシュードモナス属菌から産生された生理活性物質とを１：１の割合で混合したものを０．３ｐｐｍ〜１．０ｐｐｍの抗カビ剤として使用することができた。
【００２１】
他方、得られた０．３ｐｐｍ〜１．０ｐｐｍの抗カビ剤は、添加剤として混和することにより、接着剤、住宅用洗浄剤、カビ取り剤、塗料、樹脂ワックス、漆喰、土壁、セメント、食品の洗浄剤、白木用蜜ロウ（白木用保護剤）、食器の洗浄剤、動物の洗浄剤、人間の洗浄剤（手指、体、顔、頭髪、シミ、水虫、白髪、シワ）等に応用することができる。例えば、０．３ｐｐｍ〜１．０ｐｐｍの抗カビ剤を精製水中に１％添加することによって、黴の発生しやすい箇所に噴霧し防黴を目的とするカビ取り剤として使用することができる。又、純水石鹸水に０．３ｐｐｍ〜１．０ｐｐｍの抗カビ剤を１％添加することによって、野菜、食器、手指の除菌及び公害物質、農薬等を除去することを目的とした洗浄剤として使用することができる。更に、純水にアルコールと０．３ｐｐｍ〜１．０ｐｐｍの抗カビ剤を１％添加することによって、店舗内、厨房内、調理器具、手指等の除菌を目的とした衛生管理用品として使用することができる。特に本発明に係る抗カビ剤は、菌の増殖がないため、食品工場や飲食店の厨房の衛生管理用途に使用することができる。
又、得られた０．３ｐｐｍ〜１．０ｐｐｍの抗カビ剤は、塗布剤として、木材、紙、ビニールクロス、タイル、タイル目地、樹脂ボード、ベニヤ板、畳、太陽光パネルの洗浄剤等として使用することができる。
【００２２】
次に本発明に係る抗カビ剤の作用効果について説明する。
本発明に係る抗カビ剤は、黴、糸状菌の菌糸に対しては、菌糸を変形させ膨潤させることによって、菌糸の破裂を促す。このような現象について、発明者は、本発明に係る抗カビ剤が生体膜に作用し、菌糸の脂質屑に溶解し、陽イオンとの複合体を生成し、イオンの透過性を高めることに起因すると考えている。
そのため本発明に係る抗カビ剤は、従来使用されていた抗生物質や抗カビ剤のようなタンパク質合成阻害によるものではないため、ほとんど毒性はなく、耐性菌の出現を抑制することができる。
従って、本発明に係る抗カビ剤を採用することによって、耐性菌の出現を予防し、幅広い菌種に対して抗黴効果を奏することができる。
【００２３】
次に本発明に係る抗カビ剤の実施形態を説明する。
実施形態１
５．０×１０9／ｍｌの芽胞状態の枯草菌を好適条件のもとで一定期間培養した。又、１．９×１０9／ｍｌのシュードモナス属菌を好適条件のもとで一定期間培養した。
夫々コロニーを確認した後、遠心分離機によって２０，０００ｒｐｍ、３０分間遠心分離し、培養液と菌体とに分離した。
このようにして、枯草菌から産生された培養液からなる第一抗カビ剤と、シュードモナス属菌から産生された培養液からなる第一抗カビ剤とが産生された。
前記遠心分離機によって分離された菌体は、夫々固体培養し、エタノールによって溶解抽出された。
抽出された懸濁液体を、夫々０．２μｍ濾過膜を使用して濾過することによって枯草菌から産生された生理活性物質と、シュードモナス属菌から産生された生理活性物質とを得た。
このようにして、枯草菌から産生された生理活性物質からなる第二抗カビ剤と、シュードモナス属菌から産生された生理活性物質からなる第二抗カビ剤とが産生された。
次に本発明に係る抗カビ剤を使用した抗カビ方法の一例を説明する。以下の抗カビ方法は、本発明に係る抗カビ方法の一例であって、本発明を限定するものではない。
【００２４】
（第一工程）
過酸化水素水を含んだ水溶性溶液及び酸性の非イオン水とを以下の割合で混合した第一洗浄剤を用意した。
Ｈ2Ｏ2を含有した水溶液           ０．１５重量％
酸性の非イオン水              ９９．８５重量％
（上記の成分及び割合は、温度、湿度等の環境条件や臭気の原因物質の種類や程度によって変わる場合があり、本発明がこれに限定されるものではない。以下の抗カビ剤においても同様である。）
かかる第一洗浄剤は、弱酸性、水溶性であり、約６時間で水と酸素に化学分解（気化）するため、二次汚染の危険性がない。
上記第一洗浄剤を建物の天井、壁あるいは床に発生している対象物に噴霧又は塗布した。対象物によっては、この第一工程を省略してもよい。
【００２５】
（第二工程）
上記で得られた二種類の培養液（第一抗カビ剤）、すなわち枯草菌から産生された第一抗カビ剤と、シュードモナス属菌から産生された第一抗カビ剤と、を以下の割合で混合した第二洗浄剤を用意した。
石鹸水にアミゾールＣＤＥ、ＰＥＧ約１％
重曹０．３％
枯草菌培養濾過液  １０〜１５ｐｐｍ
シュードモナス属菌培養濾過液  １０〜１５ｐｐｍ（枯草菌培養濾過液とシュードモナス属菌培養濾過液との配合比率は１：１とした。）
上記第二洗浄剤を上記第一工程で塗布された箇所に噴霧又は塗布した。
【００２６】
（第三工程）
枯草菌から産生された生理活性物質からなる第二抗カビ剤と、シュードモナス属菌から産生された生理活性物質からなる第二抗カビ剤とを、１：１の配合比率で混合した混合剤を用意した。かかる混合剤を精製水に０．３〜１ｐｐｍ添加することにより抗カビ剤を製造した。
前記抗カビ剤を、上記第二工程で塗布された箇所に塗布した。更に、コンプレッサを使用して前記抗カビ剤を対称面及び空間に噴射した。
【００２７】
上記の工法によって対象物を観察したところ、アスペルギルス・ニガー、アスペルギルス・バージカラー、ペニシリウム、カワキコウジカビ、アスペルギルス・レステリクタス、黒色酵母様菌、赤カビ、クロカビ、ケマタカビ属、トリコデルマといった幅広い菌種に対して抗黴効果が発揮されることが分かった。なお、このような抗黴効果は、ＮＰＯ法人カビ相談センターによる抗カビ試験によって証明されたものである。更に現在汚れや黴の再発生についても効果が確認されているが、黴の再発生については１０年間を目処とした経過観察中であることも追記する。