(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ツルムラサキ（Ｂａｓｅｌｌａ  ａｌｂａ）エキスの美白組成物または抗紫外線組成物であって、
前記ツルムラサキエキスは、
（１）ツルムラサキをすりおろした濃厚液に水またはアルコール類を加えて、５０℃から１５０℃で、１〜６時間ほど加熱する、
（２）ペーパーフィルターでこした（１）の液をエタノール内で１〜４８時間沈殿させる、
（３）（２）の液から上澄み液を取り除いて、ツルムラサキ水抽出エキス、またはツルムラサキアルコール抽出エキスを得る、という手順で調製され、
これらの組成物は、皮膚外用または経口投与または他の適切な剤型に製することにより、食品、化粧品、薬品といった保健、美容、医薬の用途に応用され、
前記皮膚外用の剤型は、軟膏、クリーム、ローション、水薬、化粧マスク、バスエッセンス（Ｂａｔｈ  ｅｓｅｅｓｎｃｅ）からなる群から選択されることを特徴とする、
ツルムラサキエキスの美白組成物または抗紫外線組成物。
【請求項２】
請求項１における美白組成物または抗紫外線組成物であって、
保湿剤、乳化剤、抗酸化剤、紫外線吸収剤、界面活性剤、植物エキス成分、各種の栄養剤、ビタミンＣ及びその派生物、コウジ酸、アルブチン、エラグ酸、カモミラＥＴ、ニコチンアミド、トラネキサム酸、メトキシサリチル酸カリウム、及び請求項１の組成物に応用可能な油溶性または水溶性成分、のグループから選択した添加物を添加した、ツルムラサキエキスの美白組成物または抗紫外線組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ツルムラサキエキス及びその用途に関するものであり、ツルムラサキエキスを有効成分として含む美白剤、日焼け防止剤、及びそれを含む皮膚外用剤、食品、化粧品、薬品などに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の色は、表皮内のメラニン（Ｍｅｌａｎｉｎ）の影響を受ける。基底細胞層におけるメラノサイト（Ｍｅｌａｎｏｃｙｔｅｓ）によって生成されたメラニンが、角質層を経て皮膚の表面に転移して色素沈着する。
【０００３】
メラニンは一連の化学反応及び活性酵素の作用により生成される。皮膚が紫外線に照射されると、メラノサイト内のチロシナーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）が活性化され、メラノサイト内のチロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ）を酸化してジヒドロオキシフェニルアラニン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ、通称ＤＯＰＡ）が形成され、ＤＯＰＡがチロシナーゼによってドーパクロム（ｄｏｐａｃｈｒｏｍｅ）へと代謝されて、さらに酸化反応を経てメラニンが合成される。
【０００４】
チロシナーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）は銅イオンを含む多フェノール酸化酵素であり、メラノサイトにより合成され、チロシナーゼがチロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ）と結合する部位には銅イオンの活性中心が３個あることから、チロシナーゼを抑制するには次の二種類のメカニズムを利用することになる。
（１）銅イオンと結合させてチロシナーゼの活性を阻害する
（２）チロシナーゼ基質との競合阻害を促す
【０００５】
皮膚は常に紫外線にさらされることから、各種の細胞ホルモンや炎症を起こさせる因子が刺激されて炎症を引き起こし、アレルギーやシミの発生につながっていく。
【０００６】
そのうち、皮膚の黒化現象やシミ、ソバカスを防止し、きれいな肌を維持するための応用成分としては、コウジ酸、アルブチンなどがあるが、これらでは十分に満足する効果が得られていない。また、紫外線のもたらす炎症を抑制する美白剤としては、ビタミンＣやその派生物が知られているが、効果や製剤中における安定性という点で、いまだに不十分である。    
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、（１）ツルムラサキエキスをすりおろした濃厚液に水またはアルコール類を加えて、５０℃から１５０℃で、１〜６時間ほど加熱する、（２）ペーパーフィルターでこした液をエタノール内で１〜４８時間沈殿させる、（３）上澄み液を取り除いて、ツルムラサキ水抽出エキス、またはツルムラサキアルコール抽出エキスを得る、という手順で調製されたツルムラサキエキス（Ｂａｓｅｌｌａ  ａｌｂａ）を得ることにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
前記目的を達成するため、ステップ（１）のアルコール類は、エタノール、グリセリン（Ｇｌｙｃｅｒｉｎ）、１，３−ブチレングリコール（１，３−Ｂｕｔｙｌｅｎｅ  Ｇｌｙｃｏｌ）、プロピレングリコール（Ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  Ｇｌｙｃｏｌ）とする。
【０００９】
本発明の別の目的として、美白剤調製に用いるツルムラサキエキスの用途を提供することがあり、この場合のエキスとは前記のツルムラサキエキスである。また、本発明におけるツルムラサキエキスは、肌の黒化現象の抑制、シミの抑制といった効果を有する。
【００１０】
本発明の別の目的として、抗紫外線剤に用いるツルムラサキエキスの用途を提供することがあり、この場合のエキスとは前記のツルムラサキエキスである。
【００１１】
本発明の別の目的として、消炎剤に用いるツルムラサキエキスの用途を提供することがあり、この場合のエキスとは前記のツルムラサキエキスである。
【００１２】
本発明の別の目的として、前記のツルムラサキエキスを含む食品を提供することがある。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】ツルムラサキ水抽出エキス、アルコール抽出エキスのメラニン生成抑制量
【図２】ツルムラサキ水抽出エキス、アルコール抽出エキスのチロシナーゼ活性抑制試験
【図３】ツルムラサキ水抽出エキス抗ＵＶ試験
【図４】ツルムラサキアルコール抽出エキス抗ＵＶ試験
【図５】ツルムラサキ水抽出エキス、アルコール抽出エキスのＩＬ−６抑制量
【図６】ツルムラサキ水抽出エキス、アルコール抽出エキスのＴＮＦ−α抑制量
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本文書に用いる技術的、科学的用語は、別途定義されている場合を除き、その用語が属する領域で通常の技能を有する者が共有する認識に基づいて解釈する。
【００１５】
本発明における皮膚外用剤の組成物は、剤型及び必要性に応じて、一般化粧品及び医薬品などの皮膚外用剤に用いる成分を基剤として適宜添加してもよい。
【００１６】
本発明であるツルムラサキエキスの応用形式としては、食品、飲料水、健康食品、動物用及びヒト用医薬組成物、食品添加物、飲料添加物が含まれるが、この限りではない。
【００１７】
上述のツルムラサキエキスにおいては、必要性に応じて、製剤の領域で通常使用される溶解補助剤、緩衝剤、保存剤、着色剤、香料、風味剤を、一種類以上用いてもよい。
【００１８】
本発明の別の実施例として、ツルムラサキエキスに添加物を添加する場合、以下のグループから選択する。ビタミンＣ及びその派生物（Ａｓｃｏｒｂｉｃ  Ａｃｉｄ  ａｎｄ  Ｉｔｓ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）、コウジ酸（Ｋｏｊｉｃ  Ａｃｉｄ）、アルブチン（Ａｒｂｕｔｉｎ）、エラグ酸（Ｅｌｌａｇｉｃ  Ａｃｉｄ）、カモミラＥＴ（Ｃｈａｍｏｍｉｌｅ  ＥＴ）、トラネキサム酸（Ｔｒａｎｅｘａｍｉｃ  ａｃｉｄ）、ニコチンアミド（Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ）、メトキシサリチル酸カリウム（Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ｍｅｔｈｏｘｙｓａｌｉｃｙｌａｔｅ）。
【００１９】
以下に本発明の実施例を記述するが、これに限るものではない。
【００２０】
＜実施例一＞
本発明に用いる原料はツルムラサキ（Ｂａｓｅｌｌａ  ａｌｂａ  Ｌ．）である。ツルムラサキエキスは以下の手順で調製する。
１．すりおろしたツルムラサキ３００グラムをビーカーに入れ、二次水または８０％アルコール５００ｍｌを加え、恒温水槽中で３時間、９０℃の湯せんにする。
２．冷卻後、１２５  ｍｍペーパーフィルターでこし、ろ過液と９９．５％無水アルコールとを１：２の比率で混合し、一日沈殿させる。
３．回転数８０００ｒｐｍで１５〜２０分間、遠心分離機にかけ、上澄み液を除去して得たプリフォームを−８０℃の環境に一日置いて冷凍乾燥させ、ツルムラサキ粉末サンプルを得る。
【００２１】
＜実施例二＞
メラニン（ｍｅｌａｎｉｎ）含有量測定
（１）３×１０４  ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌのｍｅｌａｎｏｍａ  Ｂ１６−Ｆ０細胞を、２４時間培養する。
（２）ツルムラサキ水抽出エキス、アルコール抽出エキスのそれぞれを、１０μｇ／ｍｌ及び５０  μｇ／ｍｌ（有機物の粗抽出液濃度で計量）の二種類ずつ用意した単独実験群、これらにアスコルビン酸エチル（Ｅｔｈｙｌ  Ａｓｃｏｒｂｉｃ  Ａｃｉｄ  ２．５  ｍｇ／ｍｌ、５  ｍｇ／ｍｌ）を加えた複合実験群、及び陽性対象としてアスコルビン酸エチル（１０  ｍｇ／ｍｌ）を用意して、２４時間培養する。
（３）ＰＢＳで二回洗浄した後、サンプルを自然乾燥させ、１０％  ＤＭＳＯを含む１Ｍ水酸化ナトリウム２００μｌに溶解させる、８０℃で１時間加熱した後、冷却し、４７５ｎｍのもとで吸光度を測定する。
【００２２】
この実験において、市販のアスコルビン酸エチルを陽性対照群（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ）とした結果、ツルムラサキ水抽出エキスは良好なメラニン抑制効果があり、しかもアスコルビン酸エチルよりも優れていることが判明した（図１）。
【００２３】
＜実施例三＞
チロシナーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）抑制率測定
（１）緩衝液として、リン酸水素ジナトリウム−リン酸二水素カリウム（１／１５Ｍ、ｐＨ６．８）を用意する。
（２）チロシナーゼ溶液を用意する。
（３）０．０３％  Ｌ−ＤＯＰＡを用意する。
（４）測定対象のサンプル５０μＬとチロシナーゼ５０μＬを均一になるまで混合して１５分間放置する。
（５）０．０３％  Ｌ−ＤＯＰＡ  ５０μＬを加えて１５分間放置する。
（６）ＯＤ４７５ｎｍで測定する。
【００２４】
実験群は以下のとおり。
（１）１％ビタミンＣ、
（２）０．２５％ビタミンＣ、
（３）１０μｇ／ｍｌツルムラサキ水抽出エキス（Ｈ１０）、
（４）０．２５％ビタミンＣ＋１０μｇ／ｍｌツルムラサキ水抽出エキス（０．２５ＶｉｔＣ＋Ｈ１０）、
（５）５０μｇ／ｍｌツルムラサキ水抽出エキス（Ｈ５０）、
（６）０．２５％ビタミンＣ＋５０μｇ／ｍｌツルムラサキ水抽出エキス（０．２５ＶｉｔＣ＋Ｈ５０）、
（７）１０μｇ／ｍｌツルムラサキアルコール抽出エキス（Ｅ１０）、
（８）０．２５％ビタミンＣ＋１０μｇ／ｍｌツルムラサキアルコール抽出エキス（０．２５ＶｉｔＣ＋Ｅ１０）、
（９）５０μｇ／ｍｌツルムラサキアルコール抽出エキス（Ｅ５０）、
（１０）０．２５％ビタミンＣ＋５０μｇ／ｍｌツルムラサキアルコール抽出エキス（０．２５ＶｉｔＣ＋Ｅ５０）。
【００２５】
＜実験結果＞
この実験では、ツルムラサキエキスがチロシナーゼの活性を抑制することが実証されており、ツルムラサキ水抽出エキスがチロシナーゼ活性を抑制する作用は１％ビタミンＣ派生物よりも優れており、ビタミンＣ派生物との混合作用の場合においては、ツルムラサキエキス処方量が多いほうが効果が高い（図２）。
【００２６】
＜実施例四＞
ヒト繊維芽細胞株ＷＩ３８（ＡＴＣＣ：ＣＣＬ−７５）を培養して、ＵＶ生物活性を測定分析する。抗ＵＶ分析方法は、細胞をＵＶ  ３００  ｍＪ／ｃｍ２  で３、６、９、１２、２４時間照射する。対照群には照射しない。細胞の生存率を分析評価する（ＭＴＴ  Ａｓｓａｙ）。
【００２７】
＜生存率分析＞
（１）９６ウェル培養トレイ（５０００細胞／１００μｌ／ｗｅｌｌ）で細胞を培養し、翌日まで放置しておく。
（２）実験群によって６−１２時間照射した後、培養液を除去し、５００μｇ／ｍｌ  ＭＴＴを含む培養液１００μｌを加え、３７°Ｃで１時間作用させる。
（３）ＭＴＴを含む培養液を吸収除去し、１００μｌ  ＤＭＳＯを加えて溶解させ、ＥＬＩＳＡ  ｒｅａｄｅｒで５７０ｎｍ吸光度を読み取る。
【００２８】
３００ｍＪ／ｃｍ２  ＵＶ照射６時間でＷＩ３８細胞株の抗紫外線能力を評価する。実験の結果、ツルムラサキ水抽出エキスには細胞の抗紫外線能力を保護する作用はなく（図３）、ツルムラサキアルコール抽出エキスは細胞の抗紫外線能力を保護する作用が顕著である（図４）。
【００２９】
＜実施例五＞
ＷＩ３８を培養して、炎症促進性分子ＩＬ−６を分析する細胞とする。
炎症促進性分子ＩＬ−６試験
（１）９６ウェルトレイの各ウェルに１００μｌ  ｐｒｉｍａｒｙ  ａｎｔｉｂｏｄｙを加えて、４℃で約１６〜１８時間放置する。
（２）Ｗａｓｈ  ｂｕｆｆｅｒを用いて三回洗浄する（毎回３００μｌ、軽くたたいて乾かす）。
（３）各ウェルに２００μｌ  １Ｘ  ａｓｓａｙ  ｂｕｆｆｅｒを加えて１時間放置する。
（４）Ｗａｓｈ  ｂｕｆｆｅｒを用いて三回洗浄する（毎回３００μｌ、軽くたたいて乾かす）。
（５）標準曲線とサンプルを用意し、各ウェルに１００μｌ加えてから２時間放置する。
（６）Ｗａｓｈ  ｂｕｆｆｅｒを用いて三回洗浄する（毎回３００μｌ、軽くたたいて乾かす）。
（７）各ウェルに１００μｌ  ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ａｎｔｉｂｏｄｙを加えてから１時間放置する。
（８）Ｗａｓｈ  ｂｕｆｆｅｒを用いて三回洗浄する（毎回３００μｌ、軽くたたいて乾かす）。
（９）各ウェルに１００μｌのＨＲＰを加えてから３０分間放置する。
（１０）Ｗａｓｈ  ｂｕｆｆｅｒを用いて四回洗浄する（毎回３００μｌ、軽くたたいて乾かす）。
（１１）各ウェルに１００μｌ  ＴＭＢ混合物を加えてから、光を避けて１５分間放置する。
（１２）各ウェルに１００μｌ  終止液（２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４）を加えてから３０分間放置する。
（１３）ＯＤ４５０を測定する。
【００３０】
炎症促進性分子ＩＬ−６の抑制量は、ＵＶ照射無しで６０％以上、ＵＶ照射で３０％以上。５μｇ／ｍｌツルムラサキアルコール抽出エキスは、ＵＶ照射無しの環境で、ＩＬ−６抑制量７０％以上であり、ＵＶ照射環境においてもＩＬ−６抑制量４０％以上を記録した（図５）。
【００３１】
＜実施例六＞
ＷＩ３８を培養して、炎症促進性分子ＴＮＦ−αを分析する細胞とする。ＴＮＦ−α測定方法は前記実施例四に同じであり、測定対象がＴＮＦ−αの抗体となるだけである。
【００３２】
実験の結果、５μｇ／ｍｌツルムラサキ水抽出エキスは、ＵＶ照射無しでＴＮＦ−α抑制量７０％以上、ＵＶ照射環境下でもＴＮＦ−α抑制量３０％以上を記録した。１０μｇ／ｍｌツルムラサキアルコール抽出エキスは、ＵＶ照射無しではＴＮＦ−α抑制量５０％以上だったが、ＵＶ照射環境下においてはＴＮＦ−αを抑制できなかった（図６）。
【要約】      （修正有）【課題】美白組成物、抗紫外線組成物、または消炎組成物の提供。【解決手段】ツルムラサキエキスであって、ツルムラサキをすりおろした濃厚液に水又はアルコール類を加えて、５０〜１５０℃で、１〜６時間ほど加熱することによる、ツルムラサキ水抽出エキス、またはツルムラサキアルコール抽出エキス。前記ツルムラサキ抽出エキスを含有する美白組成物、抗紫外線組成物又は、消炎組成として、軟膏、クリーム、ローション、水薬、化粧マスク、バスエッセンスでの使用。【選択図】図１【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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