(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
血糖を調節するための薬剤の製造における、
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−６−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＣ）
【化１】
0005996571.tif 000038
（Ｓ，Ｅ）−２−（２−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＤ）
【化２】
0005996571.tif 000039
（Ｓ，Ｅ）−２−（３−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−４，５−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＦ）
【化３】
0005996571.tif 000040
（Ｓ，Ｅ）−２−（２−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（３−メチルブタ−２−エン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＧ）
【化４】
0005996571.tif 000041
（Ｓ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＩ）
【化５】
0005996571.tif 000042
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−２−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＡ）
【化６】
0005996571.tif 000043
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−５−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＢ）
【化７】
0005996571.tif 000044
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（Ｐｏｋｉｎａｗａｎ）
【化８】
0005996571.tif 000045
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−２−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（３−ヒドロキシ−３−メチルブチル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン
【化９】
0005996571.tif 000046
および
（Ｓ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（（２Ｅ，６Ｅ）−１１−ヒドロキシ−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン
【化１０】
0005996571.tif 000047
から選択される化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項２】
前記薬剤が糖尿病の治療又は予防に用いるためのものである、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記糖尿病がＩＩ型糖尿病である、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
血糖を調節するための健康食品又は栄養補助食品の製造における、
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−６−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＣ）
【化１１】
0005996571.tif 000048
（Ｓ，Ｅ）−２−（２−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＤ）
【化１２】
0005996571.tif 000049
（Ｓ，Ｅ）−２−（３−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−４，５−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＦ）
【化１３】
0005996571.tif 000050
（Ｓ，Ｅ）−２−（２−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（３−メチルブタ−２−エン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＧ）
【化１４】
0005996571.tif 000051
（Ｓ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＩ）
【化１５】
0005996571.tif 000052
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−２−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＡ）
【化１６】
0005996571.tif 000053
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−５−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＢ）
【化１７】
0005996571.tif 000054
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（Ｐｏｋｉｎａｗａｎ）
【化１８】
0005996571.tif 000055
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−２−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（３−ヒドロキシ−３−メチルブチル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン
【化１９】
0005996571.tif 000056
および
（Ｓ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（（２Ｅ，６Ｅ）−１１−ヒドロキシ−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン
【化２０】
0005996571.tif 000057
から選択される化合物又はその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項５】
請求項１で規定される化合物を含む、糖尿病を治療又は予防するための医薬組成物。
【請求項６】
血糖を調節するための薬剤の製造における、台湾グリーンプロポリス又はその抽出物の使用であって、該台湾グリーンプロポリス又はその抽出物が下記の化合物の少なくとも１つを含む使用。
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−６−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＣ）
【化２１】
0005996571.tif 000058
（Ｓ，Ｅ）−２−（２−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＤ）
【化２２】
0005996571.tif 000059
（Ｓ，Ｅ）−２−（３−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−４，５−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＦ）
【化２３】
0005996571.tif 000060
（Ｓ，Ｅ）−２−（２−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（３−メチルブタ−２−エン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＧ）
【化２４】
0005996571.tif 000061
（Ｓ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＩ）
【化２５】
0005996571.tif 000062
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−２−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＡ）
【化２６】
0005996571.tif 000063
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−５−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＢ）
【化２７】
0005996571.tif 000064
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（Ｐｏｋｉｎａｗａｎ）
【化２８】
0005996571.tif 000065
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−２−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（３−ヒドロキシ−３−メチルブチル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン
【化２９】
0005996571.tif 000066
および
（Ｓ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（（２Ｅ，６Ｅ）−１１−ヒドロキシ−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン。
【化３０】
0005996571.tif 000067
【請求項７】
前記台湾グリーンプロポリス又はその抽出物が糖尿病を治療又は予防するための薬剤の製造に用いられる、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記糖尿病がＩＩ型糖尿病である、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
血糖を調節するための健康食品又は栄養補助食品の製造における、台湾グリーンプロポリス又はその抽出物の使用であって、該台湾グリーンプロポリス又はその抽出物が下記の化合物の少なくとも１つを含む使用。
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−６−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＣ）
【化３１】
0005996571.tif 000068
（Ｓ，Ｅ）−２−（２−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＤ）
【化３２】
0005996571.tif 000069
（Ｓ，Ｅ）−２−（３−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−４，５−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＦ）
【化３３】
0005996571.tif 000070
（Ｓ，Ｅ）−２−（２−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（３−メチルブタ−２−エン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＧ）
【化３４】
0005996571.tif 000071
（Ｓ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＩ）
【化３５】
0005996571.tif 000072
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−２−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＡ）
【化３６】
0005996571.tif 000073
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−５−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＢ）
【化３７】
0005996571.tif 000074
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（Ｐｏｋｉｎａｗａｎ）
【化３８】
0005996571.tif 000075
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−２−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（３−ヒドロキシ−３−メチルブチル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン
【化３９】
0005996571.tif 000076
および
（Ｓ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（（２Ｅ，６Ｅ）−１１−ヒドロキシ−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン。
【化４０】
0005996571.tif 000077
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血糖を調節する、好ましくは糖尿病を治療又は予防する組成物の製造における、プレニルフラバノン化合物の新規な使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病はエジプトにおいて紀元前約１５００年から知られているが（非特許文献１、非特許文献２）、その発症機序は西暦１９００年まで理解されていなかった。世界保健機関（ＷＨＯ）の統計から、世界中で約３億４６００万人が糖尿病を罹患し、中でもＩＩ型糖尿病（即ち、インスリン非依存性糖尿病）を罹患している患者が多く存在した。
【０００３】
糖尿病は糖の代謝異常を伴う疾患である。かかる疾患の発症は体内のインスリン減少に関連しており、多食、多飲及び多尿、体重減少並びに高血糖及び高尿糖等の病態を生じることが多い。インスリンは主に体内の筋肉細胞及び脂肪組織細胞におけるブドウ糖の吸収及び利用をコントロールするホルモンである。インスリン不足の場合、血中のブドウ糖がこれらの組織細胞に入って利用されることが不可能になり、高血糖及び他の深刻な影響を引き起こす。
【０００４】
糖尿病はＷＨＯによって４群に分類されている（非特許文献３）：（１）Ｉ型糖尿病（インスリン依存性）、（２）ＩＩ型糖尿病（インスリン非依存性）、（３）二次性糖尿病及び（４）妊娠糖尿病。かかる４タイプの糖尿病は機序及び原因が異なるが、膵臓のランゲルハンス島β細胞からのインスリン分泌が不十分である結果としての病理学的特徴は比較的似ており、血糖濃度を低減させることができず、高血糖を引き起こす。
【０００５】
Ｉ型糖尿病は、大抵はβ細胞に損傷を与え、インスリン分泌不全を引き起こす自己免疫疾患を罹患した結果として、小児において発症することが多い。ＩＩ型糖尿病は中年の成人において発症することが多く、生活習慣及び肥満によって引き起こされる可能性がある。分子機序については、β細胞が一部損傷され、インスリン分泌が不十分になるか、又は分泌は十分であるものの、インスリンが組織細胞表面上のインスリン受容体に正常に結合することができないため、ブドウ糖を細胞内に誘導して更に利用することができないか、又は他の未知の原因により生じる可能性がある。ＩＩ型糖尿病と同様に、妊娠糖尿病はホルモンによる干渉効果によって引き起こされ得るが、出産後にホルモンによる干渉効果は正常レベルに戻る。
【０００６】
糖尿病をコントロール及び治療する薬物として、インスリン及び多くの血糖を調節する経口薬が過去数十年の間に販売されているが、依然として血糖をコントロールする効果が小さく、Ｉ型糖尿病又はＩＩ型糖尿病を治癒するものではない。糖尿病自体は恐ろしいものではないが、糖尿病により生じる合併症が患者を死に導く最大の原因である。かかる糖尿病による合併症としては、低血糖、ケトアシドーシス、循環器疾患、慢性腎不全、網膜症、神経障害及び微小血管障害が挙げられる。
【０００７】
研究及び統計によれば、全ての糖尿病患者のうち約９０％がＩＩ型糖尿病を罹患している（非特許文献４）。経口血糖降下薬は主要なＩＩ型糖尿病治療薬であり、下記の通り分類される（非特許文献５）：ビグアナイド、スルホニル尿素（sulfaureas）、チアゾリジン（thiazolidiones）、メグリチニド、α−グリコシダーゼ阻害剤及びジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−４）阻害剤。
【０００８】
ビグアナイド薬は、主な作用機序として肝臓から放出されるブドウ糖を低減させ、インスリン耐性を改善することを通じて血糖を低減させることができる。ビグアナイド薬としては、メトホルミン、フェンホルミン及びブホルミンが挙げられる。スルホニル尿素薬は、主な作用機序として膵島β細胞を刺激してインスリンを分泌させて、体内のインスリンのレベルを増加させることを通じて血糖を低減させることができる。スルホニル尿素薬としては、トルブタミド（tobutamide）、アセトヘキサミド、トラザミド及びクロルプロパミドが挙げられる。チアゾリジン薬は、主な作用機序としてインスリンの効果に対する標的細胞の感度を高めることを通じて血糖を低減させることができる。チアゾリジン薬としては、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン及びトログリタゾンが挙げられる。メグリチニド薬は、主な作用機序としてインスリンの早期分泌を刺激することを通じて食後血糖を低減させることができる。メグリチニド薬としては、レパグリニド及びナテグリニドが挙げられる。α−グリコシダーゼ阻害剤は、主な作用機序として小腸の上部における糖質の吸収を阻害することを通じて食後血糖を低減させることができる。α−グリコシダーゼ阻害剤としては、ミグリトール、アカルボース及びボグリボースが挙げられる。ジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−４）阻害剤は、ＤＰＰ−４を阻害することによって体内のＧＬＰ−１の活性を高め、体内のＧＬＰ−１の作用時間を延長することができる。ジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−４）阻害剤としては、ビルダグリプチン、シタグリプチン、サキサグリプチン及びリナグリプチンが挙げられる。上記薬物は血糖の調節及び疾患の進行の予防を達成することしかできず、それによって糖尿病を治癒することはできない。そのため、現在、より信頼性があり且つより効果的な糖尿病治療薬を開発することが重要な課題として残されている。
【０００９】
プロポリスは、蜜蝋と、ミツバチが採集した植物の新芽由来の汁とを混合することによって、又は果皮外層由来の分泌物とを混合することによって形成される有色ガム状物質である。プロポリスは、ミツバチが蜂巣を修復し、病原菌の侵入に耐えるために重要な物質であるため、蜂群の繁殖及び生存に重要な役割を果たす（非特許文献６）。プロポリスには、従来の医薬として用いられてきた何百年もの歴史がある（非特許文献７）。現在、プロポリスは天然の栄養補助食品の原料として広く用いられている。
【００１０】
研究において、プロポリスが広範な生物学的活性、例えば抗生（非特許文献８）、抗ウイルス（非特許文献９）、抗がん（非特許文献１０）、免疫制御（非特許文献１１）、肝臓の保護（非特許文献１２）、並びに血糖の調節（非特許文献１３）及び抗酸化（非特許文献１４）等の活性を有することが見出された。様々な季節、様々な地域でプロポリスを産生する植物源が異なるため、プロポリスは様々な活性成分を有する。現在、世界中でプロポリスは６タイプに分類することができ、台湾（非特許文献１５、非特許文献１６、非特許文献１７、非特許文献１８、非特許文献１９，非特許文献２０、非特許文献２１、非特許文献２２）、沖縄（日本）（非特許文献２３、非特許文献２４、非特許文献２５、非特許文献２６）及びソロモン諸島（非特許文献２７）でしか見られない、プロポリンを主成分とするプロポリスは太平洋プロポリスとして分類される。
【００１１】
台湾産のプロポリスは台湾グリーンプロポリスと呼ばれる。これは夏に産生され、主活性成分がプレニルフラバノンとして単離及び同定され、プロポリンＡ〜Ｊ（ＰＰＡ〜ＰＰＪ）という１０種の活性成分を含むことが知られている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】台湾特許出願公開第２０１３０４７８９号
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ripoll, Brian C. Leutholtz, Ignacio. Exercise and disease management. 2nd ed. Boca Raton: CRC Press: 25. ISBN 978-1-4398-2759-8.
【非特許文献２】editor, Leonid Poretsky,. Principles of diabetes mellitus. 2nd ed. New York: Springer. 2009: 3. ISBN 978-0-387-09840-1.
【非特許文献３】Diabetes, World Health Organization. September 2011 (2011-11-15]).
【非特許文献４】Bergenstal RM, Wysham C, Macconell L, Malloy J, Walsh B, Yan P, Wilhelm K, Malone J, Porter LE, DURATION-2 Study Group. Efficacy and safety of exenatide once weekly versus sitagliptin or pioglitazone as an adjunct to metformin for treatment of type 2 diabetes (DURATION-2): a randomised trial. The Lancet, 376(9739):431-9.
【非特許文献５】The Guidelines on Prevention of Diabetes II in China 2010.
【非特許文献６】Burdock GA. Review of the biological properties and toxicity of bee propolis (propolis). Food Chem Toxicol. 1998, 36, 347-363.
【非特許文献７】Daugsch A, Moraes CS, Fort P, Park YK. Brazilian red propolis-chemical composition and botanical origin. Evid Based Complement Alternat Med. 2008, 5, 435-441.
【非特許文献８】Drago L, De Vecchi E, Nicola L, Gismondo MR. In vitro antimicrobial activity of a novel propolis formulation (Actichelated propolis). J Appl Microbiol. 2007, 103, 1914-1921.
【非特許文献９】Shimizu T, Hino A, Tsutsumi A, Park YK, Watanabe W, Kurokawa M. Anti-influenza virus activity of propolis in vitro and its efficacy against influenza infection in mice. Antivir Chem Chemother. 2008, 19, 7-13.
【非特許文献１０】Watanabe MA, Amarante MK, Conti BJ, Sforcin JM. Cytotoxic constituents of propolis inducing anticancer effects: a review. J Pharm Pharmacol. 2011, 63, 1378-1386.
【非特許文献１１】Orsatti CL, Missima F, Pagliarone AC, Bachiega TF, Bufalo MC, Araujo JP Jr, Sforcin JM. Propolis immunomodulatory action in vivo on Toll-like receptors 2 and 4 expression and on pro-inflammatory cytokines production in mice. Phytother Res. 2010 Aug; 24(8): 1141-6.
【非特許文献１２】Nakamura T, Ohta Y, Ohashi K, Ikeno K, Watanabe R, Tokunaga K, Harada N. Protective Effect of Brazilian Propolis Against Hepatic Oxidative Damage in Rats with Water-immersion Restraint Stress. Phytother Res. 2012 Feb 1. doi: 10.1002/ptr.460
【非特許文献１３】Zhu W, Chen M, Shou Q, Li Y, Hu F. Biological activities of chinese propolis and brazilian propolis on streptozotocin-induced type 1 diabetes mellitus in rats. Evid Based Complement Alternat Med. 2011; 2011: 468529.
【非特許文献１４】Tsai YC, Wang YH, Liou CC, Lin YC, Huang H, Liu YC. Induction of oxidative DNA damage by flavonoids of propolis: its mechanism and implication about antioxidant capacity. Chem Res Toxicol. 2012 Jan 13; 25(1): 191-6.
【非特許文献１５】Chen CN, Wu CL, Shy HS, Lin JK. Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis. J Nat Prod. 2003 Apr; 66(4): 503-6.
【非特許文献１６】Chen CN, Wu CL, Lin JK. Propolin C from propolis induces apoptosis through activating caspases, Bid and cytochrome c release in human melanoma cells. Biochem Pharmacol. 2004 Jan 1; 67(1): 53-66.
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【非特許文献２１】Chen YW, Wu SW, Ho KK, Lin SB, Huang CY, Chen CC. Characterisation of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons. Journal of the Science of Food and Agriculture. 01/2008; 88: 412-419.
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【非特許文献２７】Raghukumar R, Vali L, Watson D, Fearnley J, Seidel V. Antimethicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) activity of 'pacific propolis' and isolated prenylflavanones. Phytother Res. 2010 Aug; 24(8): 1181-7.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
現在の研究から、台湾グリーンプロポリスが神経栄養、抗がん、抗生及び抗酸化の主生物活性を有することが知られている。台湾グリーンプロポリス又はプレニルフラバノンが血糖に影響をもたらすことを示唆又は予測する報告又は従来技術はない。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明は、意外なことに、プレニルフラバノン化合物が血糖を調節し、それにより糖尿病を治療する効果を有することを見出した。
【００１６】
本発明は、血糖を調節する組成物の製造における、プレニルフラバノン化合物の新規な使用を提供し、該プレニルフラバノン化合物が、式（１）：
【化１】
0005996571.tif 000002
（式中、
Ｒ１、Ｒ３及びＲ６はそれぞれ独立してＨ又はＸ−Ｒ９であり、Ｘは−ＣＨ２−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ＝、−Ｃ（＝Ｏ）−又は−ＯＣ（＝Ｏ）−から選択され、Ｒ９はＨ、Ｃ１〜１２アルキル基、Ｃ２〜１２アルケニル基又はＣ２〜１２アルキニル基から選択され、
Ｒ２はＣ１〜１２アルキル基、Ｃ２〜１２アルケニル基又はＣ２〜１２アルキニル基から選択され、Ｃ１〜１２アルキル基、Ｃ２〜１２アルケニル基又はＣ２〜１２アルキニル基は無置換であるか、又は１つ若しくは複数のＣ１〜６アルキル基、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、ＮＯ、ＣＨＯ若しくはハロゲンで置換され、
Ｒ４及びＲ８はそれぞれＨ、Ｃ１〜１２アルキル基、Ｃ２〜１２アルケニル基又はＣ２〜１２アルキニル基から選択され、Ｃ１〜１２アルキル基、Ｃ２〜１２アルケニル基又はＣ２〜１２アルキニル基は無置換であるか、又は１つ若しくは複数のＣ１〜６アルキル基、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、ＮＯ、ＣＨＯ若しくはハロゲンで置換され、
Ｒ５及びＲ７はそれぞれＨ、ＯＨ、Ｃ１〜１２アルキル基、Ｃ２〜１２アルケニル基又はＣ２〜１２アルキニル基であり、Ｃ１〜１２アルキル基、Ｃ２〜１２アルケニル基又はＣ２〜１２アルキニル基は無置換であるか、又は１つ若しくは複数のＣ１〜６アルキル基、ＯＨ、ＮＨ２、ＣＮ、ＮＯ、ＣＨＯ若しくはハロゲンで置換され、
又は、その薬学的に許容可能な塩である）
を有する。
【００１７】
本発明の一実施形態では、式（１）の化合物が下記の構造：
【化２】
0005996571.tif 000003
（式中、Ｒ１〜Ｒ８は上記で規定される）
を有する。
【００１８】
本発明の一実施形態では、Ｒ１、Ｒ３及びＲ６がそれぞれ好ましくはＨ、ＯＨ、ＯＣＨ３又はＯＣＨ２ＣＨ３から選択される。
【００１９】
本発明の一実施形態では、Ｒ２が好ましくはＨ、
【化３】
0005996571.tif 000004
【化４】
0005996571.tif 000005
【化５】
0005996571.tif 000006
【化６】
0005996571.tif 000007
【化７】
0005996571.tif 000008
又は
【化８】
0005996571.tif 000009
から選択される。
【００２０】
本発明の一実施形態では、Ｒ４及びＲ８がそれぞれ好ましくはＨ、
【化９】
0005996571.tif 000010
又は
【化１０】
0005996571.tif 000011
から選択される。
【００２１】
本発明の一実施形態では、Ｒ５及びＲ７がそれぞれ好ましくはＨ、ＯＨ、
【化１１】
0005996571.tif 000012
又は
【化１２】
0005996571.tif 000013
から選択される。
【００２２】
本発明の好ましい一実施形態では、式（１）の化合物が下記の通りである：
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−６−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＣ）
【化１３】
0005996571.tif 000014
（Ｓ，Ｅ）−２−（２−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＤ）
【化１４】
0005996571.tif 000015
（Ｓ，Ｅ）−２−（３−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−４，５−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＦ）
【化１５】
0005996571.tif 000016
（Ｓ，Ｅ）−２−（２−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（３−メチルブタ−２−エン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＧ）
【化１６】
0005996571.tif 000017
（Ｓ，Ｅ）−２−（３−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−４−ヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＨ）
【化１７】
0005996571.tif 000018
（Ｓ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＩ）
【化１８】
0005996571.tif 000019
（Ｓ，Ｅ）−６−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−５，７−ジヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＪ）
【化１９】
0005996571.tif 000020
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−２−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＡ）
【化２０】
0005996571.tif 000021
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−５−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＢ）
【化２１】
0005996571.tif 000022
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（Ｐｏｋｉｎａｗａｎ）
【化２２】
0005996571.tif 000023
（Ｓ，Ｅ）−５，７−ジヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＥ）
【化２３】
0005996571.tif 000024
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−２−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（３−ヒドロキシ−３−メチルブチル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン
【化２４】
0005996571.tif 000025
（Ｓ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（（２Ｅ，６Ｅ）−１１−ヒドロキシ−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン
【化２５】
0005996571.tif 000026
又は
（Ｓ，Ｅ）−５，７−ジヒドロキシ−６−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン
【化２６】
0005996571.tif 000027
【００２３】
本発明の一実施形態では、式（１）の化合物を、糖尿病を治療又は予防する組成物の製造に用いることができる。本発明の好ましい一実施形態では、式（１）の化合物を、ＩＩ型糖尿病を治療又は予防する組成物の製造に用いることができる。
【００２４】
本発明の別の目的は、上述の式（１）の化合物を含む糖尿病を治療又は予防する組成物を提供することである。
【００２５】
本発明の別の目的は、血糖を調節する、好ましくは、糖尿病を治療又は予防する、更に好ましくは、ＩＩ型糖尿病を治療又は予防する組成物の製造における、台湾グリーンプロポリス又はその抽出物の新規な使用を提供することである。
【００２６】
本発明によれば、血糖を調節する組成物を薬物、健康食品又は栄養補助食品として用いることができる。
【００２７】
本発明によれば、台湾グリーンプロポリス又はその抽出物が下記の化合物：
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−６−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＣ）
【化２７】
0005996571.tif 000028
（Ｓ，Ｅ）−２−（２−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＤ）
【化２８】
0005996571.tif 000029
（Ｓ，Ｅ）−２−（３−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−４，５−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＦ）
【化２９】
0005996571.tif 000030
（Ｓ，Ｅ）−２−（２−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（３−メチルブタ−２−エン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＧ）
【化３０】
0005996571.tif 000031
（Ｓ，Ｅ）−２−（３−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−４−ヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＨ）
【化３１】
0005996571.tif 000032
（Ｓ）−２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−６−（（２Ｅ，６Ｅ）−３，７，１１−トリメチルドデカ−２，６，１０−トリエン−１−イル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＩ）
【化３２】
0005996571.tif 000033
（Ｓ，Ｅ）−６−（３，７−ジメチルオクタ−２，６−ジエン−１−イル）−５，７−ジヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシフェニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＪ）
【化３３】
0005996571.tif 000034
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−２−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＡ）
【化３４】
0005996571.tif 000035
（Ｓ，Ｅ）−２−（３，４−ジヒドロキシ−５−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＢ）
【化３５】
0005996571.tif 000036
又は
（Ｓ，Ｅ）−５，７−ジヒドロキシ−２−（４−ヒドロキシ−３−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチルオクタ−２−エン−１−イル）フェニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン（ＰＰＥ）
【化３６】
0005996571.tif 000037
の少なくとも１つを含む。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】台湾グリーンプロポリスアルコール抽出物（ＴＰＥ）のＨＰＬＣ分析の図である。
【図２】ＴＰＥを投与した後のマウスの体重の変動を示す。
【図３】ＴＰＥを投与した後のマウスにおける血糖の変動を示す。
【図４】ＴＰＥを投与した後のマウスの摂食量の変動を示す。
【図５】ＴＰＥを投与した後のマウスの摂水量の変動を示す。
【図６】ＴＰＥを投与した後のマウスにおける血糖の変動を示す。
【図７】ＴＰＥを投与した後のマウスにおける血糖のＡＵＣグラフを示す。
【図８】ＴＰＥを投与した後のマウスにおけるグリコヘモグロビンのデータを示す。
【図９】ＰＰＣを投与した後のマウスの体重の変動を示す。
【図１０】ＰＰＤを投与した後のマウスの体重の変動を示す。
【図１１】ＰＰＦを投与した後のマウスの体重の変動を示す。
【図１２】ＰＰＧを投与した後のマウスの体重の変動を示す。
【図１３】ＰＰＣを投与した後のマウスにおける血糖の変動を示す。
【図１４】ＰＰＤを投与した後のマウスにおける血糖の変動を示す。
【図１５】ＰＰＦを投与した後のマウスにおける血糖の変動を示す。
【図１６】ＰＰＧを投与した後のマウスにおける血糖の変動を示す。
【図１７】ＰＰＣを投与した後のマウスの摂食量の変動を示す。
【図１８】ＰＰＤを投与した後のマウスの摂食量の変動を示す。
【図１９】ＰＰＦを投与した後のマウスの摂食量の変動を示す。
【図２０】ＰＰＧを投与した後のマウスの摂食量の変動を示す。
【図２１】ＰＰＣを投与した後のマウスの摂水量の変動を示す。
【図２２】ＰＰＤを投与した後のマウスの摂水量の変動を示す。
【図２３】ＰＰＦを投与した後のマウスの摂水量の変動を示す。
【図２４】ＰＰＧを投与した後のマウスの摂水量の変動を示す。
【図２５】ＰＰＣを投与した後のマウスの血糖の変動を示す。
【図２６】ＰＰＤを投与した後のマウスの血糖の変動を示す。
【図２７】ＰＰＦを投与した後のマウスの血糖の変動を示す。
【図２８】ＰＰＧを投与した後のマウスの血糖の変動を示す。
【図２９】ＰＰＣを投与した後のマウスにおける血糖のＡＵＣグラフを示す。
【図３０】ＰＰＤを投与した後のマウスにおける血糖のＡＵＣグラフを示す。
【図３１】ＰＰＦを投与した後のマウスにおける血糖のＡＵＣグラフを示す。
【図３２】ＰＰＧを投与した後のマウスにおける血糖のＡＵＣグラフを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本明細書中のありとあらゆる実施形態は本発明を完全に説明することを目的とするに過ぎず、本発明の範囲を限定するものではない。
【００３０】
本発明の一実施形態において、血糖を調節する新規な薬剤として用いる化合物は台湾グリーンプロポリスから抽出される。分析から、得られた抽出物がＰＰＡ〜ＰＰＪ及びそれらの誘導体を主成分とすることが分かった。
【００３１】
＜材料及び方法＞
［台湾グリーンプロポリスアルコール抽出物（ＴＰＥ）の製造］
台南（台湾）の養蜂場から台湾グリーンプロポリス約２ｋｇを採取した。台湾グリーンプロポリスは脱蝋した後、９５％アルコールで３週間抽出した。アルコールの濾過及び不純物の除去後、濾液を減圧濃縮して台湾グリーンプロポリス抽出物を得た。これを用いるまで−２０℃の冷凍庫に入れた。抽出物中の活性化合物の組成をＨＰＬＣ分析によって同定した。
【００３２】
［台湾グリーンプロポリスアルコール抽出物のＨＰＬＣ分析］
高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）によってプロポリンの組成について台湾グリーンプロポリスアルコール抽出物を分析した。LunaのＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１８カラム（Ｃ１８、２５０ｍｍ×４．６ｍｍ）を用いた。メタノールと水との比が８５：１５（ｖ／ｖ）の混合溶媒を移動相として用い、流速は１．０ｍｌ／分であった。検出波長は２８０ｎｍである。試料の注入量はそれぞれ２０μＬであった。
【００３３】
［台湾グリーンプロポリスアルコール抽出物の化学組成］
台湾グリーンプロポリスアルコール抽出物は、主に、ＰＰＣ、ＰＰＤ、ＰＰＦ、ＰＰＧ及びＰＰＨのようなプロポリンを主成分とし、そのなかでもＰＰＣを最も多く含んでいる。その他、例えばＰＰＤ、ＰＰＦ、ＰＰＧ及びＰＰＨの含有量が多い。図１は台湾グリーンプロポリスアルコール抽出物のＨＰＬＣ分析の図であり、台湾グリーンプロポリスアルコール抽出物中のＰＰＡ〜ＰＰＪという１０種の化合物の保持時間及び含有量を明確に示す。
【００３４】
［マウスの糖尿病の誘発］
BioLASCO Co．（宜蘭（台湾））から市販されている、５週齢の雄性ＦＢＶマウスを１週間馴化した後、４０ｍｇ／ｋｇのストレプトゾトシン（ＳＴＺ）を３日間連続して投与した。ＳＴＺに氷上でクエン酸ナトリウム水溶液（ｐＨ４．５、７３．５ｍｇ／５ｍＬ）を配合した後、配合物１００μＬを腹腔内注射によって投与した。２日目から、マウスに５％（ｗ／ｖ）ブドウ糖水溶液を６日間連続して投与した。マウスを１０日間静置した後、血糖レベルを測定した。ＳＴＺを１週間投与した後、各マウスの尾静脈から約５μＬの血液を採取し、血糖モニター及びチップ（FORA（カリフォルニア（米国））によって血糖についてアッセイを行った。１週間後、もう一度血糖を検出し、血糖がスムースであるか否かを評価した後、群分けした。糖尿病への罹患を誘発させた全てのマウスにおける血糖値が３００ｍｇ／ｄＬ±５０ｍｇ／ｄＬの範囲内に入るようにした。
【００３５】
［台湾グリーンプロポリスアルコール抽出物（ＴＰＥ）処置群］
適量の台湾グリーンプロポリスアルコール抽出物を９５％アルコール３ｍｌに溶解した後、共溶媒であるＴｗｅｅｎ  ８０（登録商標）８０μＬと均一混合し、減圧濃縮してアルコールを除去した後、水１６ｍｌに分散して台湾グリーンプロポリス抽出物の液体混合物を得た。この混合物を、２００μＬ胃管栄養法によって、台湾グリーンプロポリス抽出物処置群に指定した糖尿病マウスに与えた。
【００３６】
［プロポリン処置群］
適量の個々のプロポリン、例えばＰＰＡ、ＰＰＢ、ＰＰＣ、ＰＰＤ、ＰＰＥ、ＰＰＦ、ＰＰＧ、ＰＰＨ、ＰＰＩ又はＰＰＪを９５％アルコール３ｍｌで溶解した後、Ｔｗｅｅｎ  ８０（登録商標）８０μＬと均一混合し、減圧濃縮してアルコールを除去した後、水１６ｍｌに均一分散し、プロポリンの液体混合物を得た。この混合物を、２００μＬ胃管栄養法によって、プロポリン及びその関連誘導体群に指定した糖尿病マウスに与えた。
【００３７】
［ＤＰＰ４抑制剤処置群（ＤＰＰ４Ｉ）（シタグリプチン）］
米国メルク社（American Merck Co．）から市販されている、シタグリプチン（商品名：Ｊａｎｕｖｉａ）は、ＤＰＰ４阻害剤である。適量のシタグリプチンを水に溶解してマウスに３７０ｍｇ／ｋｇの用量で投与することができる最終濃度にした。下記の実施例において、ＤＰＰ４阻害剤であるシタグリプチンを陽性対照として用いる。
【００３８】
［ＳＴＺ群（ＳＴＺ誘発糖尿病マウス）及び対照群（Ｃｏｎ）］
Ｔｗｅｅｎ  ８０（登録商標）（８０μＬ）を水１６ｍｌに混合してプラセボを得た。これを２００μＬ胃管栄養法によってＳＴＺ誘発糖尿病マウス又は正常マウス（即ち、糖尿病を誘発しないマウス）に与えた。経口胃管栄養法は各日１回決められた時間に実行し、体重、摂餌量及び摂水量は１２週間〜１３週間で試験が終了するまで毎週測定した。
【００３９】
［経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）］
動物に試験物質を１２週間投与した後、ＯＧＴＴ試験を実施してブドウ糖がどれくらいすばやく血中から消えるかを評価した。試験における全てのマウスは、試験物質を投与した後、ゼロ点と呼ばれる第１の点での血液サンプリングの前に４時間絶食させた。その後、マウスに経口胃管栄養法によって１．０ｇ／ｋｇの用量に相当するブドウ糖水溶液２００μＬを与えた。投与後、血糖のアッセイ用に１５分、３０分、６０分、１２０分及び１８０分にそれぞれ血液を採取した。０分を含む、合計６点を得た。各マウスの尾静脈から約５μＬの血液を採取した後、血糖モニター及びチップ（FORA（カリフォルニア（米国））によって血糖についてアッセイを行った。Ｘ軸の時点に対してＹ軸の血糖値をプロットした。比較用に各群の曲線下面積を計算した。血糖を制御する効力を、試験物質とブドウ糖がどれくらいすばやく血中から消えるかとの間の関係を示す該面積によって評価した。
【００４０】
［グリコヘモグロビンＨｂＡ１ｃの分析］
グリコヘモグロビンを用いて試験物質の血糖を制御する効力を評価した。試験物質を１２週間投与した後、グリコヘモグロビンＨｂＡ１ｃの分析用に血液を採取した。各マウスから採取した血液５００μＬをSuper Laboratory Co．（新北市（台湾））に送り分析した。分析により、各群のマウスに対して平均及び標準偏差が与えられ得る。試験物質に血糖調節効力がある場合には、この値はより低いものとなり、試験物質に血糖調節効力がない場合には、この値はより高いものとなる。
【００４１】
＜結果＞
［糖尿病マウスの体重に対するＴＰＥの効果］
文献による推奨に従って、ＤＰＰ４Ｉ処置群の糖尿病マウスに３７０ｍｇ／ｋｇ／マウスでシタグリプチンを投与し、この用量は６０ｋｇの成人への投与に対しては２４６６．７ｍｇ／日の用量に等しい。糖尿病患者に対しては、シタグリプチンを１日１回１００ｍｇ用いることが推奨された。下記の実施例においては、人間に対する推奨投与量よりも約２５倍高い用量でシタグリプチンを用いた。下記の実施例においては、シタグリプチン群を陽性対照群として用い、ＳＴＺ誘発しない健康マウスを陰性対照群として用い、ＳＴＺ誘発糖尿病マウスを対照群として用いた。ここで、これらの対照群を薬物又は試験物質で処置せず、プラセボのみを投与した。本発明の一実施例において、台湾グリーンプロポリスアルコール抽出物（ＴＰＥ）の日用量は６０ｋｇの成人に対する２４０ｍｇ／日の用量に相当する３６ｍｇ／ｋｇ／マウスであった。
【００４２】
図２はＴＰＥを投与した後のマウスの体重の変動を示す。１３週間投与した後、全ての群のマウスの体重に有意な変化はなかった。
【００４３】
［糖尿病マウスにおける血糖に対するＴＰＥの効果］
各群７匹の糖尿病マウスに対し、血糖値が約３５０ｍｇ／ｄＬとなった時点で３６ｍｇ／ｋｇ／日の用量で台湾グリーンプロポリス抽出物（ＴＰＥ）を経口投与した。この用量は６０ｋｇの成人に対する２４０ｍｇ／日の用量に相当する。経口投与は各日決められた時間に１回実行し、体重、摂餌量、摂水量及び血糖は毎週測定し、１３週間投与した。文献における推奨に従って、陽性対照群で用いたシタグリプチンはマウスに３７０ｍｇ／ｋｇの用量で経口投与した。この用量は６０ｋｇの成人に対する２４６７ｍｇ／日の用量に相当する。ＳＴＺ誘発しないマウスを陰性対照群として用いた一方、ＳＴＺ誘発糖尿病マウスを対照群として用いた。
【００４４】
図３はＴＰＥを投与した後のマウスにおける血糖の変動を示す。１３週間投与した後、血糖はＴＰＥによって有意に調節された。６週間〜７週間投与した後、ＴＰＥの血糖を調節する効力は有意であり、シタグリプチンの血糖を調節する効力と等価であった。陰性対照群（正常健康マウス）において、血糖値は約１８０ｍｇ／ｄＬに比較的一定に保たれた。対照群において、血糖値は３５０ｍｇ／ｄＬから４７０ｍｇ／ｄＬに増加した。試験結果から、ＴＰＥの血糖を調節する効力が有意であることを明確に認めることができる。
【００４５】
［糖尿病マウスの摂餌量に対するＴＰＥの効果］
図４はＴＰＥを投与した後のマウスの摂食量の変動を示す。ＴＰＥ群のマウスにおいて、当初の摂餌量は、約４．０ｇ／日／マウスであった。ＴＰＥを１３週間投与した後、摂食量は約３．５ｇ／日／マウスに減少した。試験結果はシタグリプチン群の場合と同一であった。ＳＴＺ群とは対照的に、プラセボを８週間投与した後、摂食量は元々の４．０ｇ／日／マウスから６．０ｇ／日／マウスに増加し、１３週間経っても摂食量は依然として５．７ｇ／日／マウスに保たれた。陰性対照群において、摂食量は約３．２ｇ／日／マウス〜３．５ｇ／日／マウスであった。試験結果から、本発明に係るＴＰＥがシタグリプチンと同様の効力を有し、糖尿病マウスの摂食量の低減に効果的であり得ることは明らかである。図２に示すように、ＴＰＥで処置されたマウスの体重はＳＴＺ群の体重と同一であったが、摂餌量は相違した。このことから、ＴＰＥ及びシタグリプチンが血糖を調節する効力を有し、摂食エネルギーの好ましい利用が可能になることが示唆される。
【００４６】
［糖尿病マウスの摂水量に対するＴＰＥの効果］
図５はＴＰＥを投与した後のマウスの摂水量の変動を示す。ＳＴＺ群において、プラセボを８週間投与した後、摂水量は１週目の７．５ｍＬ／日／マウスから１２．５ｍＬ／日／マウスに増加した。この際、ＴＰＥ処置されたマウスでは、摂水量は１週目の５．８ｍＬ／日／マウスから６．０ｍＬ／日／マウスに増加し、シタグリプチンで処置されたマウスでは、１週目の７．０ｍＬ／日／マウスから５．４ｍＬ／日／マウスに減少した。
【００４７】
ＳＴＺ群において、プラセボを１３週間投与した後、摂水量は１週目の７．５ｍＬ／日／マウスから１３．８ｍＬ／日／マウスに増加した。この際、摂水量は、ＴＰＥ群のマウスでは１週目の５．８ｍＬ／日／マウスから５．３ｍＬ／日／マウスに減少し、シタグリプチン群のマウスでは１週目の７．０ｍＬ／日／マウスから３．８ｍＬ／日／マウスに減少した。これらの結果から、台湾グリーンプロポリスは糖尿病マウスの摂水量を有意に低減させることができるため、糖尿病を治療する効力を有することが認められる。
【００４８】
［ブドウ糖負荷試験におけるＴＰＥの効力］
図６はブドウ糖負荷試験においてＴＰＥを投与した後のマウスにおける血糖の変動を示す。ＳＴＺ群の基礎血糖値は約４５０ｍｇ／ｄＬであり、ブドウ糖水溶液を投与した後３０分で約５４０ｍｇ／ｄＬであり、６０分〜９０分で約５６０ｍｇ／ｄＬのピークに達し、１８０分で４９０ｍｇ／ｄＬに戻った。ＴＰＥ群の基礎血糖値は約３００ｍｇ／ｄＬであり、ブドウ糖水溶液を投与した後３０分で約４６０ｍｇ／ｄＬであり、６０分〜９０分で約４３０ｍｇ／ｄＬ〜４０５ｍｇ／ｄＬであり、１８０分で３６０ｍｇ／ｄＬに戻った。シタグリプチン群の基礎血糖値は約２６０ｍｇ／ｄＬであり、ブドウ糖水溶液を投与した後３０分で約４２０ｍｇ／ｄＬのピークに達し、６０分〜９０分で約３９０ｍｇ／ｄＬ〜３４０ｍｇ／ｄＬであり、１８０分で２４０ｍｇ／ｄＬに戻った。陰性対照群の基礎血糖値は約１９０ｍｇ／ｄＬであり、ブドウ糖水溶液を投与した後３０分で約２３０ｍｇ／ｄＬのピークに達し、６０分〜９０分で約２２０ｍｇ／ｄＬ〜２１５ｍｇ／ｄＬであり、１８０分で１９０ｍｇ／ｄＬに戻った。試験結果から、ＴＰＥが有意に血糖を正常レベルに戻すことができることが明らかに認められる。
【００４９】
図７は、シグマプロットソフトウェアによって解析し、積分面積で計算した、ＴＰＥを投与した後のマウスにおける血糖のＡＵＣグラフ（Ｘ軸の時間対Ｙ軸の血糖値）を示す。図７に示すように、陰性対照群のマウスにおいてはβ細胞からのインスリン分泌機能が正常であるため、積分面積が最小となっている（ＡＵＣ値は約３．８×１０４）。それに対し、ＳＴＺ群のマウスにおいては、β細胞が損傷され、インスリン分泌が少ないため、積分面積が最大となっている（ＡＵＣ値は約９．７×１０４）。ＤＰＰ４ＩおよびＴＰＥ処置群のマウスにおいてはβ細胞の機能の一部が回復し、基礎インスリン分泌が維持されるため、２つの群のＡＵＣ値は、それぞれ約５．８×１０４および約７．２×１０４となった。ＳＴＺ群及びＤＰＰ４Ｉ群又はＴＰＥ群をそれぞれ比較した場合、シタグリプチン及びＴＰＥはＡＵＣをそれぞれ６６．１％及び４２．４％低減することができる。試験結果から、ＴＰＥが実際に血糖を調節する効力を有することが明らかに認められる。
【００５０】
［グリコヘモグロビンに対するＴＰＥの効果］
図８はＴＰＥを投与した後のマウスにおけるグリコヘモグロビンのデータを示す。図８に示すように、プラセボ又は試験物質をそれぞれ１３週間投与した後、グリコヘモグロビンの値はＳＴＺ群のマウスにおいて約５．７％であり、陰性対照群において約３．７％であり、ＤＰＰ４Ｉ群において約４．６％であり、ＴＰＥ群において約５．１％であった。試験結果から、シタグリプチンはグリコヘモグロビンの生成を５５％低減させるのに効果的であることが明らかに認められる。ＴＰＥの用量（３６ｍｇ／ｋｇ）はシタグリプチンの用量（３７０ｍｇ／ｋｇ）の９．７％しかないが、ＴＰＥもグリコヘモグロビンの生成を３０％低減させることができた。したがって、本発明に係るＴＰＥはグリコヘモグロビンの生成を抑制する優れた効果を有する。
【００５１】
［糖尿病マウスの体重に対するＰＰＣ、ＰＰＤ、ＰＰＦ及びＰＰＧの効果］
下記の実施例においては、台湾グリーンプロポリス中の４つの成分、例えばＰＰＣ、ＰＰＤ、ＰＰＦ及びＰＰＧを糖尿病マウスにおける試験用に選択した。ＰＰＣの用量は、６０ｋｇの成人に対する６０ｍｇ／日の用量に相当する９．０ｍｇ／ｋｇ／マウスであり、ＰＰＤの用量は６０ｋｇの成人に対する４５ｍｇ／日の用量に相当する６．７５ｍｇ／ｋｇ／マウスであり、ＰＰＦの用量は６０ｋｇの成人に対する３０ｍｇ／日の用量に相当する４．５ｍｇ／ｋｇ／マウスであり、ＰＰＧの用量は６０ｋｇの成人に対する３０ｍｇ／日の用量に相当する４．５ｍｇ／ｋｇ／マウスの用量である。文献における推奨によれば、シタグリプチンの用量は３７０ｍｇ／ｋｇ／マウスであった。図９〜図１２はＰＰＣ、ＰＰＤ、ＰＰＦ及びＰＰＧを投与した後のマウスの体重の変化を示す。８週間投与した後、ＰＰＣ群、ＰＰＤ群、ＰＰＦ群及びＰＰＧ群、陰性対照群、対照群並びに陽性対照群におけるマウスの体重に有意な変動は無かった。
【００５２】
［糖尿病マウスにおける血糖に対するＰＰＣの効果］
投与したＰＰＣの用量は、６０ｋｇの成人に対する６０ｍｇ／日の用量に相当する９．０ｍｇ／ｋｇ／マウスであった。ＰＰＣはマウスに胃管栄養法によって毎日決められた時間に合計８週間投与した。図１３はＰＰＣを投与した後のマウスにおける血糖の変化を示す。図１３に示すように、ＳＴＺ群のマウスにおける血糖値は０週間での３３０ｍｇ／ｄＬから８週間での５３０ｍｇ／ｄＬに増加し、シタグリプチンを８週間投与した後、ＤＰＰ４Ｉ群のマウスにおける血糖値は３３０ｍｇ／ｄＬに効果的に維持された。ＰＰＣを８週間投与した後、マウスにおける血糖は０週間での３３０ｍｇ／ｄＬから２９８ｍｇ／ｄＬに僅かに減少した。陰性対照群において、マウスにおける血糖は１８０ｍｇ／ｄＬに安定に維持された。試験結果から、シタグリプチンの用量の２．４％しかＰＰＣを用いない場合、血糖が高効果的に調節されることが明らかに認められる。
【００５３】
［糖尿病マウスにおける血糖に対するＰＰＤの効果］
投与したＰＰＤの用量は、６０ｋｇの成人に対する４５ｍｇ／日の用量に相当する６．７５ｍｇ／ｋｇ／マウスであった。ＰＰＤはマウスに胃管栄養法によって毎日決められた時間に合計８週間投与した。図１４はＰＰＤを投与した後のマウスにおける血糖の変化を示す。図１４に示すように、ＳＴＺ群のマウスにおける血糖値は０週間での３３０ｍｇ／ｄＬから８週間での５３０ｍｇ／ｄＬに増加し、シタグリプチンを８週間投与した後、ＤＰＰ４Ｉ群のマウスにおける血糖値は３３０ｍｇ／ｄＬに効果的に維持された。ＰＰＤを８週間投与した後、マウスにおける血糖は０週間での３３０ｍｇ／ｄＬから４００ｍｇ／ｄＬに僅かに増加した。陰性対照群において、マウスにおける血糖は１８０ｍｇ／ｄＬに安定に維持された。試験結果から、用いたＰＰＤの用量がシタグリプチンの用量の１．８％である場合、血糖が効果的に調節されることが明らかに認められる。
【００５４】
［糖尿病マウスにおける血糖に対するＰＰＦの効果］
投与したＰＰＦの用量は、６０ｋｇの成人に対する３０ｍｇ／日の用量に相当する４．５ｍｇ／ｋｇ／マウスであった。ＰＰＦは毎日決められた時間に合計８週間、胃管栄養法によってマウスに投与した。図１５はＰＰＦを投与した後のマウスにおける血糖の変化を示す。図１５に示すように、ＳＴＺ群のマウスにおける血糖値は０週間での３３０ｍｇ／ｄＬから８週間での５３０ｍｇ／ｄＬに増加し、シタグリプチンを８週間投与した後、ＤＰＰ４Ｉ群のマウスにおける血糖値は３３０ｍｇ／ｄＬに効果的に維持された。ＰＰＦを８週間投与した後、マウスにおける血糖は０週間での３３０ｍｇ／ｄＬから３９８ｍｇ／ｄＬに僅かに増加した。陰性対照群において、マウスにおける血糖は１８０ｍｇ／ｄＬに安定に維持された。試験結果から、用いたＰＰＦの用量がシタグリプチンの用量の１．２％である場合、血糖が効果的に調節されることが明らかに認められる。
【００５５】
［糖尿病マウスにおける血糖に対するＰＰＧの効果］
投与したＰＰＧの用量は、６０ｋｇの成人に対する３０ｍｇ／日の用量に相当する４．５ｍｇ／ｋｇ／マウスであった。ＰＰＧは毎日決められた時間に合計８週間、胃管栄養法によってマウスに投与した。図１６はＰＰＧを投与した後のマウスにおける血糖の変化を示す。図１６に示すように、ＳＴＺ群のマウスにおける血糖値は０週間での３３０ｍｇ／ｄＬから８週間での５３０ｍｇ／ｄＬに増加し、シタグリプチンを８週間投与した後、ＤＰＰ４Ｉ群のマウスにおける血糖値は３３０ｍｇ／ｄＬに効果的に維持された。ＰＰＧを８週間投与した後、マウスにおける血糖は０週間での３３０ｍｇ／ｄＬから２９８ｍｇ／ｄＬに僅かに減少した。驚くべきことに、ＰＰＧ群の血糖値は全てＤＰＰ４Ｉ群よりも低く、ましてや用いたＰＰＧの用量はシタグリプチンの用量の１．２％にすぎない。したがって、ＰＰＧはシタグリプチンよりも高い血糖調節活性を有する。陰性対照群において、マウスにおける血糖は１８０ｍｇ／ｄＬに安定に維持された。試験結果から、現段階の研究では、ＰＰＧは血糖を調節する最も効果的な化合物であることが明らかに認められる。
【００５６】
［糖尿病マウスの摂餌量に対するＰＰＣ、ＰＰＤ、ＰＰＦ及びＰＰＧの効果］
図２１〜図２４はＰＰＣ、ＰＰＤ、ＰＰＦ及びＰＰＧをそれぞれ投与した後のマウスの摂食量の変化を示す。ＳＴＺ群のマウスにおいて、摂餌量は１週間で８．０ｇ／マウスであり、６週間で１５．０ｇ／マウスに増加し、８週間で１２．５ｇ／マウスであった。ＤＰＰ４Ｉ群のマウスにおいて、摂餌量は１週間で５．５ｇ／マウスであり、６週間で６．５ｇ／マウスに増加し、８週間で依然として６．４ｇ／マウスに保たれた。陰性対照群では、摂餌量は１週間で５．１ｇ／マウスであり、６週間で５．４ｇ／マウスに増加し、８週間で５．１ｇ／マウスに減少した。
【００５７】
図１７に示すように、ＰＰＣ群では、摂餌量は１週間で７．２ｇ／マウスであり、６週間で８．０ｇ／マウスに増加し、８週間で依然として７．９ｇ／マウスに保たれた。図１８に示すように、ＰＰＤ群では、摂餌量は１週間で７．２ｇ／マウスであり、６週間及び８週間で依然として７．２ｇ／マウスに保たれた。図１９に示すように、ＰＰＦ群では、摂餌量は１週間で６．３ｇ／マウスであり、６週間で７．０ｇ／マウスに増加し、８週間で６．３ｇ／マウスに低下した。図２０に示すように、ＰＰＧ群では、摂餌量は１週間で４．８ｇ／マウスであり、６週間で７．０ｇ／マウスに増加し、８週間で依然として７．２ｇ／マウスに保たれた。
【００５８】
試験結果から、ＰＰＣ、ＰＰＤ、ＰＰＦ及びＰＰＧが糖尿病マウスの摂餌を有意に阻害するため、プロポリンが実際にマウスの摂餌を増やすことなくマウスにおける血糖を改善することができることが明らかに認められる。
【００５９】
［糖尿病マウスの摂水量に対するＰＰＣ、ＰＰＤ、ＰＰＦ及びＰＰＧの効果］
図１７〜図２０はＰＰＣ、ＰＰＤ、ＰＰＦ及びＰＰＧをそれぞれ投与した後のマウスの摂水量の変化を示す。陰性対照群では、摂水量は１週間で４．０ｍＬ／マウスであり、６週間で３．５ｍＬ／マウスに増加し、８週間で依然として３．５ｍＬ／マウスに保たれた。ＳＴＺ群では、摂水量は１週間で１０．５ｍＬ／マウスであり、６週間で２７．０ｍＬ／マウスに増加し、８週間で２３．５ｍＬ／マウスであった。ＤＰＰ４Ｉ群では、摂水量は１週間で８．０ｍＬ／マウスであり、６週間で１２．０ｍＬ／マウスに増加し、８週間で依然として１２．５ｍＬ／マウスに保たれた。
【００６０】
図２１に示すように、ＰＰＣ群では、摂水量は１週間で８．２ｍＬ／マウスであり、６週間で１６．０ｍＬ／マウスに増加し、８週間で２４．０ｍＬ／マウスであった。図２２に示すように、ＰＰＤ群では、摂水量は１週間で８．０ｍＬ／マウスであり、６週間で１４．０ｍＬ／マウスに増加し、８週間で１６．０ｍＬ／マウスであった。図２３に示すように、ＰＰＦ群では、摂水量は１週間で８．０ｍＬ／マウスであり、６週間で１３．０ｍＬ／マウスに増加し、８週間で１０．０ｍＬ／マウスに低下した。図２４に示すように、ＰＰＧ群では、摂水量は１週間で６．５ｍＬ／マウスであり、６週間で９．０ｍＬ／マウスに増加し、８週間で依然として９．０ｍＬ／マウスに保たれた。
【００６１】
試験結果から、プロポリンはマウスが過剰な摂水を必要とせずに血糖を低減させることができることが明らかに認められる。本願の実施形態において、ＰＰＣ、ＰＰＤ、ＰＰＦ及びＰＰＧは、糖尿病マウスの摂水を有意に阻害することができ、ＰＰＦおよびＰＰＧにいたっては、市販薬シタグリプチンよりも高い効力を有する。
【００６２】
［ブドウ糖負荷試験におけるＰＰＣ、ＰＰＤ、ＰＰＦ及びＰＰＧの効力］
図２５〜図２８はブドウ糖負荷試験においてＰＰＣ、ＰＰＤ、ＰＰＦ及びＰＰＧを投与した後のマウスにおける血糖の変化を示す。陰性対照群では、基礎血糖値（ゼロ点）は約１９０ｍｇ／ｄＬであり、ブドウ糖水溶液を投与した後３０分で約２４０ｍｇ／ｄＬのピークに達し、１２０分で１９０ｍｇ／ｄＬであり、１８０分で１４０ｍｇ／ｄＬに減少した。ＳＴＺ群では、基礎血糖値は約４７０ｍｇ／ｄＬであり、ブドウ糖水溶液を投与した後３０分で約５９０ｍｇ／ｄＬのピークに達し、１２０分で約５２０ｍｇ／ｄＬであり、１８０分で依然として５２０ｍｇ／ｄＬに保たれた。ＤＰＰ４Ｉ群では、基礎血糖値は約３８０ｍｇ／ｄＬであり、ブドウ糖水溶液を投与した後３０分で約４５０ｍｇ／ｄＬのピークに達し、１２０分で約４５０ｍｇ／ｄＬであり、１８０分で４００ｍｇ／ｄＬであった。
【００６３】
図２５に示すように、ＰＰＣ群の基礎血糖値は約３５０ｍｇ／ｄＬであり、ブドウ糖水溶液を投与した後３０分で約４５０ｍｇ／ｄＬのピークに達し、１２０分で約４３０ｍｇ／ｄＬであり、１８０分で４００ｍｇ／ｄＬに減少した。
【００６４】
図２６に示すように、ＰＰＤ群の基礎血糖値は約３８０ｍｇ／ｄＬであり、ブドウ糖水溶液を投与した後３０分で約５３０ｍｇ／ｄＬのピークに達し、１２０分で約４９０ｍｇ／ｄＬであり、１８０分で４６０ｍｇ／ｄＬに減少した。
【００６５】
図２７に示すように、ＰＰＦ群の基礎血糖値は約３９０ｍｇ／ｄＬであり、ブドウ糖水溶液を投与した後３０分で約５２５ｍｇ／ｄＬのピークに達し、１２０分で約４２０ｍｇ／ｄＬであり、１８０分で４３０ｍｇ／ｄＬに保たれた。
【００６６】
図２８に示すように、ＰＰＧ群の基礎血糖値は約３８５ｍｇ／ｄＬであり、ブドウ糖水溶液を投与した後３０分で約５２５ｍｇ／ｄＬのピークに達し、１２０分で約３８０ｍｇ／ｄＬであり、１８０分で３５０ｍｇ／ｄＬに減少した。
【００６７】
ブドウ糖投与後３０分後の対照群の血漿血糖値は、他の群より低く、１２０分で基礎血糖値に戻った。このことは、正常マウスにおいては、β細胞が正常にインスリンを分泌することができるので細胞におけるブドウ糖の吸収及び利用が迅速であることを明らかに示している。ＰＰＧ群の血糖値は、ブドウ糖水溶液を投与した３０分後に非常に高くなったが、ブドウ糖は３０分〜１２０分の期間にかけて迅速に吸収及び利用され、１２０分後に基礎血糖値に戻った。この試験結果から、プロポリンは、細胞におけるブドウ糖の吸収を高める機能に関与していると結論付けられる。
【００６８】
図２９〜図３２はそれぞれシグマプロットソフトウェアによって解析し、積分面積で計算した、ＰＰＣ、ＰＰＤ、ＰＰＦ及びＰＰＧを投与した後のマウスにおける血糖のＡＵＣ計算値（Ｘ軸の時間対Ｙ軸の血糖値）を示す。
【００６９】
陰性対照群では、β細胞からのインスリン分泌としての正常機能のために、積分面積が最小となる（ＡＵＣ値は約３．８×１０４）。ＳＴＺ群では、β細胞が損傷され、インスリン分泌が低いため、積分面積が最大となる（ＡＵＣ値は約９．６５×１０４）。ＤＰＰ４Ｉ群では、インスリン分泌の増加によって、ＳＴＺ群と比較した場合、積分面積が有意に減少する（ＡＵＣ値は約７．２×１０４）。図２９に示すように、ＰＰＣ群の血糖に対するＡＵＣ値は約８．０×１０４であった。図３０に示すように、ＰＰＤ群の血糖に対するＡＵＣ値は約８．７×１０４であった。図３１に示すように、ＰＰＦ群の血糖に対するＡＵＣ値は約８．２×１０４であった。図３２に示すように、ＰＰＧ群の血糖に対するＡＵＣ値は約７．８×１０４であった。この試験結果から、プロポリンがシタグリプチンと同様にインスリン分泌を高め、血糖を調節する効果を有することが明らかに認められる。
【００７０】
ＳＴＺ群、および、シタグリプチンと比較した場合、プロポリンＣ、Ｄ、Ｆ、Ｇは血漿ブドウ糖値をそれぞれ４２．０％、２８．２％、１６．２％、１５．０％、３１．７％低減させることができた。ＰＰＣの用量はシタグリプチンの用量のわずか２．４％であり、ＰＰＤの用量はシタグリプチンの用量のわずか１．８％であり、ＰＰＦの用量はシタグリプチンの用量のわずか１．２％であり、ＰＰＧの用量はシタグリプチンの用量のわずか１．２％であった。この試験結果から、プロポリンは低用量で血糖の調節に効果的であり、ＰＰＧが最も優れた効力を有することが明らかに認められる。
【００７１】
上記試験結果から、プロポリンが実際に効果的に血糖を調節し、マウスの摂餌量を低減させ、摂水量を有意に低減させることができる。ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）において、ＳＴＺ群と比較した場合、プロポリン投与群のマウスでは血糖が有意に減少することが示唆された。同様に、グリコヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）も有意に減少した。そのため、各種台湾グリーンプロポリス及びそれらのアナログ中にプロポリンを含む、本発明によって提供される式（１）の化合物は実際に血糖を調節する活性を有し、糖尿病薬の製造に用いられ得る。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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