(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の化合物：
【化１】
0005922031.tif 000036
並びにそれらの薬学的に許容され得る塩から選択される化合物。
【請求項２】
以下の化合物：
【化２】
0005922031.tif 000037
又はその薬学的に許容され得る塩。
【請求項３】
請求項２に記載の化合物又はその薬学的に許容され得る塩と、１種又は２種以上の薬学的に許容され得る賦形剤とを含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シヌクレイン病を治療及び／又は予防するための使用に適した化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質のミスフォールディング及び凝集による毒性オリゴマーの形成は、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）及びその他の加齢に伴う神経障害における神経変性プロセスと関連する。ＡＤ及びＰＤを合わせると、米国及びヨーロッパだけでも１０００万人以上が罹患している。ＰＤ及び関連症状（例えば、レビー小体認知症（ＤＬＢ）、パーキンソン病認知症（ＰＤＤ）、多系統萎縮症（ＭＳＡ））において、神経終末のダメージが、生理的条件下でシナプス小胞供給（recruitment）及び可塑性（plasticity）に関連するシナプスタンパク質であるα−シヌクレイン（ＳＹＮ）の異常蓄積に関連する。ＰＤ、ＰＤＤ及びＤＬＢは合わせてレビー小体病（ＬＢＤ）と呼ばれる。ＰＤ患者において、運動障害がドーパミン作動性ニューロンの変性と関連付けられている。しかしながら、ＰＤ患者は、ＣＮＳにおけるその他の神経細胞群の変性によって生じる非運動症状（例えば、記憶障害及び嗅覚欠損）も発症する。
【０００３】
従前の研究において、ＳＹＮは非構造化分子と考えられていたが、長年にわたる生体膜での研究及び分子動力学的研究によって、ＳＹＮは、Ｎ末端に２つのαヘリックスを有するとともに可動性（movable）Ｃ末端テイルを有する複雑な構造をとり得ることが示された。これらの研究に基づいて、最近、ＳＹＮが成長性ダイマー（propagating dimer）及び非成長性ダイマー（non-propagating dimer）を形成し得ることが発見された。成長性ダイマーは、tail-to-tail配置（あるＳＹＮのＮ末端と別のＳＹＮのＮ末端）で配列し、さらに別のＳＹＮ分子を取り込むことができる。非成長性ダイマー（あるＳＹＮのＮ末端と別のＳＹＮのＣ末端）は、head-to-tail配置で配列し、さらなる凝集は可能でない。分子動力学シミュレーション及びin vitro研究によって、成長性ダイマーが、ＰＤ及び関連症状の発症に主に関連する毒性オリゴマー（ペンタマー，ヘキサマー，ヘプタマー）の形成の基礎（nidus）を構成することが示された。
【０００４】
ＰＤに関して現在試験されている大部分の化合物は、ドーパミン作動性神経伝達を改善するようにデザインされている。幾つかの新規試験化合物が、オリゴマーよりもむしろ線維形成の阻止によってＳＹＮ凝集を標的化するために開発されている。ＰＤにおける線維形成の役割が注目されており、大部分の最近の研究では、線維形成がより多くの毒性オリゴマーを単離（isolate）する役割を果たすと考えられている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
現在、比較的特異的なＳＹＮ阻害剤及び非特異的なＳＹＮ阻害剤が多数、開発段階にある。これらの分子（例えば、クルクミン、リファンピシン及びフラボノイド）の大部分が、抗酸化特性を示す。しかしながら、毒性オリゴマーの形成に関連するＳＹＮ配置を特異的に標的とする化合物は知られていない。
【０００６】
本発明の目的は、成長性ダイマー及び毒性ＳＹＮオリゴマーの形成を特異的に阻止する化合物を提供することにある。その結果として、これらの化合物の使用により、シヌクレイン病に罹患する対象の治療、該疾患の進行の遅延及び発症の予防が可能となる。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、式（Ｉ）:
【化１】
0005922031.tif 000002
［式中、
Ｒ1は、置換若しくは非置換の芳香族複素若しくは単素環基、又は置換若しくは非置換の脂環式複素若しくは単素環基であり、
Ｒ2は、１〜１８個の炭素原子を有するアルキル基、又は置換若しくは非置換のシクロアルキル若しくはアリール基であり、
Ｒ3は、置換若しくは非置換の芳香族複素若しくは単素環基、又は置換若しくは非置換の脂環式複素若しくは単素環基であり、
Ｌは、単結合、１〜６個、好ましくは１〜５個、さらに好ましくは１〜４個、さらに一層好ましくは１〜３個の炭素原子を有するアルキル基、ＮＨＣＯ、Ｏ、Ｓ、ＮＨＣＯＮＨ又はＮＨＣＯＯであり、
Ｘ、Ｙ及びＺは、独立して、Ｏ、Ｎ、ＮＨ、Ｓ又はＣＨであり、
Ｗは、単結合又は１〜６個の炭素原子を有するアルキル基である。］
の化合物若しくはその薬学的に許容され得る塩、又は前記化合物若しくは塩の薬学的に許容され得る溶媒和物に関する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、ＤＬＢ及びＰＤ患者の脳におけるα−シヌクレイン蓄積のパターンを示す。（Ａ）は、対照及びＡＤと比較して、ＬＢＤ症例の膜フラクションにおけるα−ｓｙｎオリゴマー蓄積が増加したことを示すイムノブロット分析である。（Ｂ−Ｅ）は、シナプス、神経細胞体及び軸索におけるα−ｓｙｎ蓄積に関する免疫細胞化学である。（Ｆ）は、膜に結合するα−ｓｙｎを示す分子動力学的研究である。
【図２Ａ】図２Ａは、シヌクレインを阻害する複素芳香族有機化合物の化学構造及び合成を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、シヌクレインを阻害する複素芳香族有機化合物の化学構造及び合成を示す（図２Ａの続き）。
【図３Ａ】図３Ａは、シヌクレインを阻害する複素芳香族有機化合物の化学組成及び化学式の具体例を示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、シヌクレインを阻害する複素芳香族有機化合物の化学組成及び化学式の具体例を示す（図３Ａの続き）。
【図３Ｃ】図３Ｃは、シヌクレインを阻害する複素芳香族有機化合物の化学組成及び化学式の具体例を示す（図３Ｂの続き）。
【図３Ｄ】図３Ｄは、シヌクレインを阻害する複素芳香族有機化合物の化学組成及び化学式の具体例を示す（図３Ｃの続き）。
【図４】図４は、シヌクレイン凝集の阻止に関する複素芳香族有機化合物の作用の無細胞系イムノブロット分析を示す。
【図５】図５は、神経細胞系アッセイにおけるα−シヌクレイン凝集の減少に関する複素芳香族有機化合物の作用のイムノブロット分析を示す。
【図６Ａ】図６Ａは、神経細胞病変の改善に関する複素芳香族有機化合物の作用の共焦点顕微鏡分析を示す。（Ａ−Ｅ）は、神経細胞のα−ｓｙｎ蓄積レベルの分析を示す。（Ｆ−Ｊ）は、神経突起の長さ及び伸長の分析を示す。
【図６Ｂ】図６Ｂは、神経細胞病変の改善に関する複素芳香族有機化合物の作用の共焦点顕微鏡分析を示す（図６Ａの続き）。
【図７】図７は、α−シヌクレインを発現する神経細胞のカルシウムレベルに関する複素芳香族有機化合物の作用の分析を示す。
【図８】図８は、本発明の化合物の化学合成の概要を示す。
【図９】図９は、実施例１で得られた生成物の質量スペクトルを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
式（Ｉ）を有する本発明の有機複素芳香族化合物が、成長性ダイマー及び毒性ＳＹＮオリゴマーの形成を特異的に阻止することが見出された。これらの化合物は、ミスフォールドしたＳＹＮに選択的に結合し、毒性種を生じるオリゴマーの凝集を阻害する。これらの化合物は、その結果として、成長性ダイマーの形成を阻止する。
【００１０】
上記一般式で示される、３つの異なる種類の基Ｒ1、Ｒ2及びＲ3に結合した芳香族複素環中心構造を有する、分子量１５０〜６００、好ましくは２００〜５００の有機化合物が、ＳＹＮ凝集を阻止するのに好適であることが見出された。式（Ｉ）の化合物の中心構造は、−ＮＨ−ＣＯ−及び芳香族複素環構造からなる。この構造は、Ｌ及びＷで表されるリンカー基を介して、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3に結合する（式Ｉ）。Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、標的であるＳＹＮに対する化合物のアフィニティーに影響を与える、多様性因子（input）である。Ｒ1は、置換若しくは非置換の芳香族複素若しくは単素環基、又は置換若しくは非置換の脂環式複素若しくは単素環基である。Ｒ1は、好ましくは、置換若しくは非置換の芳香族若しくは複素環基、好ましくは、少なくとも１個の塩基性窒素原子を含む縮合芳香族複素環である。Ｒ2は、好ましくは、脂環式環構造に結合した、直鎖状脂肪族基又は短鎖脂肪族基のいずれかである。但し、式（Ｉ）における置換基Ｒ2は疎水性である。Ｒ2のこの性質は、本発明の化合物の生物学的活性にとって重要である。Ｒ3は、置換若しくは非置換の芳香族複素又は単素環基、又は置換若しくは非置換の脂環式複素若しくは単素環基である。Ｒ3は、好ましくは、塩基性窒素原子を含む塩基性の脂環式又は直鎖構造からなる。
【００１１】
中心構造は、様々な構造の５員複素環（例えば、トリアゾール、イミダゾール、イミド、オキサゾール、チアゾール、環内に窒素原子、酸素原子又は硫黄原子を独立して有するヘテロ原子の任意の組合せ）からなる。リンカー基Ｌは、炭化水素鎖、エステル基、チオエーテル、メチレンスルホキシド、メチレンスルホン又は単純な酸素、硫黄又はカルボニル架橋、好ましくはＮＨＣＯ、Ｏ、Ｓ、ＮＨＣＯＮＨ又はＮＨＣＯＯであることができる。リンカーＷは、不存在（すなわち、単結合）（この場合、置換基Ｒ3を欠く又は置換基Ｒ3が式（Ｉ）の５員複素環の炭素原子に直接結合する化合物が生じる）、あるいは、１〜６個又は１〜１５個、好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜８個、さらに一層好ましくは１〜５個の炭素原子を含む又はからなるアルキル基であることができる。
【００１２】
本明細書に記載された複素芳香族化合物は、従前の研究に基づくと膜に通常存在する病理的なＳＹＮに結合するようにデザインされている。従前の研究に基づくと、病理的なＳＹＮは、通常、膜に存在する一方、生理的なＳＹＮは、通常、細胞質フラクションで観察される。このことは、天然分子が本発明の化合物による影響を受ける際、本発明の化合物は既に異常ＳＹＮにアクセスしていることを示す。
【００１３】
置換基Ｒ1及びＲ3は、同一であってもよいし異なっていてもよい。
【００１４】
本発明の特に好ましい実施形態において、置換基ＬはＮＨＣＯＮＨである。式（Ｉ）又は（Ｉａ）の化合物がこの位置に尿素基を有する場合、Ｌが別の置換基である場合よりも安定であることが判明した。
【００１５】
本明細書で使用される「薬学的に許容され得る塩」という用語は、ヒト及び動物への投与に関して毒物学的に安全な塩に関連する。例えば、好適な薬学的に許容され得るとしては、これらに限定されるわけではないが、薬学的に許容され得る無機酸（例えば、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、炭酸、ホウ酸及びスルファミン酸）の塩、又は薬学的に許容され得る有機酸（例えば、酢酸、プロピオン酸、酪酸、酒石酸、ヒドロキシマレイン酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、乳酸、グルコン酸、安息香酸、コハク酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、フェニル酢酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、サリチル酸、スルファニル酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、エデト酸、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、ラウリン酸、パントテン酸、タンニン酸、アスコルビン酸及び吉草酸）の塩が挙げられる。
【００１６】
本発明の別の態様は、式（Ｉａ）：
【化２】
0005922031.tif 000003
［式中、
Ｒ1は、親水性芳香族又は複素環基であり、
Ｒ2は、脂肪族炭化水素若しくは脂環式疎水基又は不存在であり、
Ｒ3は、塩基性を有する脂肪族又は脂環式基であり、
Ｘは、ＮＨ、Ｏ、Ｓ又はＣＨ2であり、
Ｙは、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ又はＣ＝ＮＨであり、
Ｚは、独立して、ＣＨ、Ｃ＝Ｏ、Ｏ、Ｓ、−Ｎ−又はＮＨであり、
Ｌは、ＣＨ2、ＣＯ2、ＣＨ2−Ｓ、ＣＨ2−ＳＯ、ＣＨ2−ＳＯ2、Ｏ、Ｓ若しくはＣ＝Ｏ又は不存在である。］
の化合物若しくはその薬学的に許容され得る塩、又は該化合物若しくは塩の薬学的に許容され得る溶媒和物に関する。
【００１７】
式（Ｉａ）において、Ｚ1はＣ又はＮであることができ、Ｚ2はＣ、Ｎ、Ｃ＝Ｏ又はＮＨであることができ、Ｚ3はＣ＝Ｏ、Ｎ又はＣであることができ、Ｚ4はＣであることができ、Ｚ5はＮ、Ｓ、ＮＨ、Ｏ、Ｃ＝Ｏ又はＳであることができる。
【００１８】
式（Ｉａ）において、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は、それぞれ、親水性芳香族若しくは複素環基、脂肪族炭化水素若しくは脂環式疎水基、又は塩基性を有する脂肪族若しくは脂環式基であることが好ましい。
【００１９】
本発明の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のＲ1は、フェニル、ナフチル、ピリジニル、ピリミジニル、キノリニル、ベンゾチエニル、インドリル、ピラジニル、イソインドリル、イソキノリル、キナゾリニル、イミダゾリニル、ベンゾフラニル、チエニル、ピロリル及びチアゾリル基からなる群より選択されるか、又は、アルコキシ置換基若しくはフルオロ、クロロ、ブロモ及びヨード基からなる群より選択されるハロ置換基を含む置換複素環構造である。
【００２０】
本発明の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のＲ2は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及びシクロオクチルからなる群より選択される置換若しくは非置換のシクロアルキル基、又はフェニル、アルコキシフェニル及びフルオロ、クロロ、ブロモ又はヨード基を含むハロゲン化置換フェニル基からなる群より選択される置換若しくは非置換のアリール基である。
【００２１】
本発明の好ましい実施形態において、式（Ｉ）のＲ3は、ピペリジン、ピペラジン、モルホリノ、チオモルホリン、イミダゾール、ピロリドニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、イミダゾリジニル及びメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキサニル、ヘプチル又はオクチル置換基を含む置換Ｎ−置換ピペラジンからなる群より選択される。
【００２２】
本発明の特に好ましい実施形態において、Ｒ1は、二環式複素芳香族基、好ましくは、
【化３】
0005922031.tif 000004
からなる群より選択される二環式複素芳香族基である。
【００２３】
本発明の好ましい実施形態において、Ｒ2は、１〜１５個、好ましくは１〜１０個、さらに好ましくは１〜８個、さらに一層好ましくは１〜５個の炭素原子を有するアルキル基である。
【００２４】
本発明の好ましい別の実施形態において、Ｒ2は、
【化４】
0005922031.tif 000005
からなる群より選択される。
【００２５】
Ｒ3は、好ましくは、複素脂環式基、好ましくは
【化５】
0005922031.tif 000006
からなる群より選択される複素脂環式基である。
【００２６】
本発明の好ましい実施形態において、
【化６】
0005922031.tif 000007
は、
【化７】
0005922031.tif 000008
からなる群より選択される。
【００２７】
本発明の特に好ましい実施形態において、式（Ｉ）の一般構造を有する本発明の化合物は、以下の置換基を有する：
【００２８】
【表１−１】
0005922031.tif 000009
【００２９】
【表１−２】
0005922031.tif 000010
【００３０】
【表１−３】
0005922031.tif 000011
【００３１】
【表１−４】
0005922031.tif 000012
【００３２】
【表１−５】
0005922031.tif 000013
【００３３】
【表１−６】
0005922031.tif 000014
【００３４】
【表１−７】
0005922031.tif 000015
【００３５】
【表１−８】
0005922031.tif 000016
【００３６】
【表１−９】
0005922031.tif 000017
【００３７】
本発明の化合物は、好ましくは、
【化８】
0005922031.tif 000018
からなる群より選択される。
【００３８】
式（Ｉａ）に含まれ得る化合物は、さらに、以下の置換基及び構造を有してもよい。
【化９】
0005922031.tif 000019
は、
【化１０】
0005922031.tif 000020
からなる群より選択することができる。
【００３９】
さらに、式（Ｉａ）には、以下の構造が含まれ得る。
【００４０】
【化１１】
0005922031.tif 000021
【００４１】
本発明の化合物は、シヌクレイン病を治療、改善及び／又は予防するために使用することができる。
【００４２】
シヌクレイン病は、好ましくは、パーキンソン病、パーキンソン病認知症、レビー小体認知症、ピック病、ダウン症候群、多系統萎縮症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）及びハレルフォルデン−スパッツ症候群からなる群より選択される。
【００４３】
本発明の別の態様は、有効量の本発明の化合物若しくはその薬学的に許容され得る塩又は該化合物若しくは塩の薬学的に許容され得る溶媒和物と、１種又は２種以上の薬学的に許容され得る賦形剤とを含む医薬製剤に関する。
【００４４】
本発明の化合物又はその薬学的に許容され得る塩の製剤化には、薬物送達に関する技術分野で公知の数多くの方法を使用することができる。本発明の化合物又はその薬学的に許容され得る塩は、もちろん、数多くの方法により投与することができるが、この際、全ての製剤があらゆる投与経路に適しているわけではないことに留意が必要である。それらは、固形状又は液体状の剤形で投与することができる。投与は、経口、直腸、経鼻、局所（例えば、口腔及び舌下）により、又は吸入により実施することができる。本発明の化合物又はその薬学的に許容され得る塩は、通常の薬学的に許容され得る助剤、担体及び／又は希釈剤とともに投与することができる。固形状の剤形としては、錠剤、カプセル剤、粉末剤、丸剤、トローチ、坐剤、ゲル及び顆粒等の投与剤形が挙げられる。それらは、担体又は添加剤、例えば、香味料、色素、希釈剤、軟化剤、結合剤、保存料、耐久性付与剤（lasting agent）及び／又は被覆材料（enclosing material）を含んでもよい。液体状の投与剤形としては、例えば、溶液、懸濁液及びエマルションが挙げられる。これらは、上記添加剤と組み合わせてもよい。
【００４５】
本発明の化合物又はその薬学的に許容され得る塩の溶液及び懸濁液は（もちろん、これらの溶液及び懸濁液が適当な粘度を有するという条件で）注射することができる。懸濁液が注射にとって高すぎる粘性を有する場合、医薬製剤は、そのような目的のためにデザインされたデバイスを使用して移植することができる。徐放性製剤は、一般的に、非経口投与又は腸内投与される。非経口投与は、本発明の化合物又はその薬学的に許容され得る塩のもう１つの投与経路である。
【００４６】
本発明の化合物の投与には、経口投与剤形を利用することができる。経口投与製剤は、好ましくは、例えばカプセル若しくは錠剤の形態で又は水溶液として、１日あたり１回、２回又は３回投与される。本発明の化合物を静脈内投与する場合、投与は、連日、継続的、週１回又は週３回のいずれかで行うことができる。
【００４７】
本発明の化合物に加えて、シヌクレイン病及びパーキンソン病様疾患の症状を治療、予防又は改善するのに適する他の物質を含む医薬組成物を提供することもできる。これらの組合せは、固形状又は液体状で、単一の製剤若しくは組成物として又は別個の製剤又は組成物として投与することができる。
【００４８】
本発明の好ましい実施形態において、医薬組成物は、本発明の化合物を、約０．０１ｍｇ〜約５．０ｇ、好ましくは約０．０５ｍｇ〜２ｇ、さらに好ましくは約０．５ｍｇ〜１ｇ、さらに一層好ましくは約１ｍｇ〜５００ｍｇ含む。本発明の化合物は、患者に、体重１ｋｇあたり、約０．０１ｍｇ〜約５ｇ、好ましくは約０．０５ｍｇ〜２ｇ、さらに好ましくは約０．５ｍｇ〜１ｇ、さらに一層好ましくは約１ｍｇ〜約５００ｍｇを投与することができる。
【００４９】
本発明の化合物はまた、徐放性経口製剤として提供されてもよい。このような製剤は、一般的に、血流への吸収を遅らせるために、溶解性を低下させた本発明の化合物を含む。さらに、このような製剤は、本発明の化合物の吸収遅延に役立つその他の成分、薬剤、担体等を含んでもよい。マイクロカプセル化、ポリマー封入システム及び浸透圧ポンプ（これらは、生体内分解性であってもよいし、そうでなくてもよい）を使用することにより、カプセル又はマトリックスからの本発明の化合物の拡散を遅延化又は制御することもできる。
【００５０】
本明細書で使用される「有効量」という用語は、α−シヌクレイン病又はパーキンソン病様疾患、特にＰＤの治療又は予防の文脈において、存在するシヌクレイン病又はパーキンソン病様疾患の予防及び／又は治療に有効な量の本発明の化合物の投与又は付与に関連する。有効量は、処置すべき対象の健康及び身体状態、処置すべき対象の分類群、組成物の処方、医学的状況の評価、並びにその他の関連因子に応じて変化する。
【００５１】
本発明の別の態様は、シヌクレイン病を治療、改善及び／又は予防する医薬を製造するための、本発明の化合物若しくはその薬学的に許容され得る塩又は該化合物若しくは塩の薬学的に許容され得る溶媒和物の使用に関する。
【００５２】
シヌクレイン病は、好ましくは、パーキンソン病、パーキンソン病認知症、レビー小体認知症、ピック病、ダウン症候群、多系統萎縮症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）及びハレルフォルデン−スパッツ症候群からなる群より選択される。
【００５３】
本発明の別の態様は、本発明の化合物を製造する方法に関する。
【００５４】
式（Ｉ）の化合物及び式（Ｉａ）の化合物は、公知の化学反応及び方法により調製することができ、その出発物質は当業者に周知である。Streitwieser等の「Introduction to organic chemistry」（Macmilan Publishers 4th Edition, 1992）に記載された一般的な調製方法に従って、当業者は、これらの化合物を合成することができるが、さらに詳細な具体例として、下記反応スキーム及び実施例に示される。
【００５５】
置換及び非置換のオキサジアゾール、チアゾール、トリアゾール、イミダゾール、チアトリアゾール、チオフェン、ピロール、ピロリン、ピラゾールは、標準的な方法を使用して調製することができる（例えば、AR Katritzky, Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, Vol. 5. MH Palmer. Heterocyclic Compounds, Arnold Ltd, London (1967)参照）。
【００５６】
式Ｉのうち特定の化合物の合成に関する全体的な反応スキームを以下に示す。
【００５７】
化合物Ａを導く例として示されるオキサゾールの合成は、２つのフラグメント、すなわち、インドール環を含むもの（化合物７）及びオキサゾール骨格を含むもの（化合物１３）の縮合反応の後、化合物１１において示すようにピペリジン部分を脱保護することにより、達成することができる。
【００５８】
化合物７は、他のアナログの調製に使用可能な一般的な中間体である。例えば、トリアゾール化合物Ｂは、化合物Ａにおいて示すように化合物１８を脱保護した後、中間体化合物７とアミド化することにより、合成することができる。
【００５９】
また、チアゾール骨格を含むアナログは、中間体化合物７及びチアゾール環を有する中間体化合物２３を介して調製することができる。
【００６０】
ブチルエステル基に代えてイソブテン側鎖を有するイミド環骨格を導く反応経路は、中間体化合物２５〜３４を使用する反応スキームに示すように、実施することができる。
【００６１】
さらに別の変更を、化合物Ｅ及びＦの合成に関連するスキームに示す。
【００６２】
阻害物質の合成に関する反応スキーム：
【００６３】
【化１２】
0005922031.tif 000022
【００６４】
【化１３】
0005922031.tif 000023
【００６５】
トリプトファンを出発物質とする上記スキームの変更を以下に示す。この変更は、最終産物を得るために必要な工程数を有意に減少させる。
【００６６】
等モル量のトリプトファン（化合物１）及びブタノールの反応によって化合物２が得られる。ピペラジンカルボン酸のアミノ基は、TW Greene等（Protective groups in organic synthesis, Third edition, Wiley Interscience (1999)）に記載の標準的方法によって保護化することができ、その後、オキサゾール中間体を得るための一般的なスキームで化合物９とさらに反応させることができる。水酸化ナトリウムを使用した化合物１２の脱エステル化によってカルボン酸１３が得られる。中間体１３及び化合物２の反応によって中間体１４が得られ、化合物１４の脱保護化によって最終産物（化合物Ａ１）が得られる。
【００６７】
【化１４】
0005922031.tif 000024
【００６８】
上記合成工程の以下のような変更によってトリアゾール中間体化合物１８が得られ、これを、化合物Ａ１と同様にして中間体化合物２と反応させることによって、最終産物であるトリアゾールアナログ化合物Ｂ１が得られる。
【００６９】
【化１５】
0005922031.tif 000025
【００７０】
また、上記工程を変更して、以下の反応スキーム例に示すチアゾールアナログを得ることができる。
【００７１】
【化１６】
0005922031.tif 000026
【００７２】
全ての反応は、アルゴン又は窒素の陽圧下、火力乾燥又はオーブン乾燥したガラス製品中で実施することができる。反応容器をマグネットスターラで撹拌した。反応しやすい（sensitive）液体及び溶液はシリンジを使用して移し、ゴム製セプタを通じて反応溶液に導入した。
【００７３】
本発明の別の態様は、シヌクレイン病に罹患している又は罹患するリスクのある対象に、有効量の本発明の化合物又は医薬製剤を投与することにより、シヌクレイン病及び／又はその症状を治療、改善及び／又は予防する方法に関する。
【００７４】
本発明の別の態様は、バイオマーカーとしての、本発明の化合物の使用に関する。本発明の化合物は、患者がα−シヌクレイン又は本発明の化合物が結合可能なその他のプラーク（plaque）を含むか否かを決定するために、適宜標識して（例えば、放射性標識して）、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）で使用することができる。これにより、体内におけるプラークの位置を特定することができるとともに、該プラークの量を特定することができる。これにより、医師がシヌクレイン病に関連する症状を治療又は予防することが可能となる。化合物の標識方法は、当業者に周知である。
【００７５】
本発明は、図面及び下記実施例によってさらに説明されるが、それらに限定されるわけではない。
【実施例】
【００７６】
実施例１：
上記式（Ｉ）を有する化合物の化学合成は、下記構造を有する化合物の合成を一例として説明される。
【００７７】
【化１７】
0005922031.tif 000027
【００７８】
合成スキームは、図８に示される。
１．２−ピペラジニル−チアゾール−５−カルボン酸２の合成
２−ブロモチアゾールカルボン酸１（１ｇ；４．８ｍｍｏｌ）及びピペラジン（６．２ｇ；７２ｍｍｏｌ；２４当量）をジオキサンに溶解し、Ｋ2ＣＯ3（３．３２ｇ；２４ｍｍｏｌ；５当量）を加え、懸濁液を一晩還流した。溶媒をロータリーエバポレーターで除去し、残渣をエタノールに溶解し、ろ過し、再結晶した。粗生成物を油ポンプで乾燥し、以下の工程で直接使用した。
【００７９】
２．Ｂｏｃによる化合物２の保護
粗生成物１、トリエチルアミン（２４ｍｍｏｌ；３．４ｍｌ）及びジ−ｔｅｒｔブチル−ジカーボネート（１４．４ｍｍｏｌ；３．１４ｇ）をメタノールに溶解し、一晩還流した。溶媒をロータリーエバポレーターで除去し、残渣を短シリカゲルカラムでクロマトグラフィー処理した。
化合物３の収量：１．１８ｇ（２工程で７２％）
【００８０】
３．トリプトファンブチルエステル５の合成
Ｌ−トリプトファン（５ｇ；２４．５ｍｍｏｌ）及び塩化チオニル（７３．５ｍｍｏｌ；５．３ｍｌ）をｎ−ブタノール（８０ｍｌ）に溶解し、１００℃で一晩攪拌した。室温まで冷却した後、沈殿した生成物５を濾取し、氷冷ブタノール及び石油エーテルで洗浄した。生成物を油ポンプで乾燥し、化合物５を５．８ｇの収量（９１％）で得た。
【００８１】
４．化合物３及び５のカップリング
ａ）スクシンイミジルエステルの形成
２−（１−Ｂｏｃ−ピペラジン−４−イル）−チアゾール−５−カルボン酸３（２５０ｍｇ；０．８ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１１０ｍｇ；０．９５ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルカルボジイミド（０．１５ｍｌ；０．９５ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（５ｍｇ；０．０４ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタンに溶解し、室温で一晩攪拌した（薄層クロマトグラフィーで反応をモニタリングした）。１ＭのＫＨＳＯ4水溶液を加え、濾過により沈殿物を除去し、有機相を水で抽出した。
【００８２】
ｂ）化合物５とのカップリング
粗スクシンイミジルエステル、トリプトファンブチルエステル５（２５０ｍｇ；０．９６ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．６５ｍｌ）を無水ＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解し、５０℃で２４時間攪拌した。ＴＨＦを減圧留去した。残渣をジクロロメタンで回収し、１ＭのＫＨＳＯ4水溶液で抽出した。粗生成物６を精製することなく以下の工程で使用した。
【００８３】
５．ｎ−ブチルアミド７の形成
粗生成物６をｎ−ブチルアミン１０ｍｌに溶解し、一晩還流した（ＨＰＬＣ−ＭＳにより反応をモニタリングした）。溶媒であるｎ−ブチルアミンをロータリーエバポレーターで除去し、残渣を油ポンプで乾燥し、メタノールから再結晶し、カラムクロマトグラフィーで精製した（ＤＣＭ−＞ＭｅＯＨ）。収量：３４０ｍｇ（０．６１ｍｍｏｌ；２工程で６４％）
【００８４】
６．化合物７の脱保護
Ｂｏｃで保護された化合物６を４５％ＴＨＦ、４５％トリフルオロ酢酸及び１０％水に溶解し、ＴＨＦ及びＴＦＡをロータリーエバポレーターでゆっくりと除去した。残渣を凍結乾燥し、ジエチルエーテル中で沈殿させ、シリカゲルでクロマトグラフィー処理して精製した（ＤＣＭ−＞ＭｅＯＨ）。収量：２２３ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ；８０％）。得られた生成物を質量分析に供した（図９参照）。
【００８５】
実施例２：
式Ｉａの化合物
【化１８】
0005922031.tif 000028
は、公知の化学反応及び方法により調製することができ、その出発物質は当業者に周知である。
【００８６】
式Ｉのうち特定の化合物の合成に関する全体的な反応スキームを以下に示す。
化合物Ａを導く実施例で例示されるオキサゾールの合成は、２つのフラグメント、すなわち、インドール環を含むもの（化合物７）及びオキサゾール骨格を含むもの（化合物１３）の縮合反応の後、化合物１１において示すようにピペリジン部分を脱保護することにより、達成することができる。
【００８７】
化合物７は、他のアナログの調製に使用可能な一般的な中間体である。例えば、トリアゾール化合物Ｂは、化合物Ａにおいて示すように化合物１８を脱保護した後、中間体化合物７とアミド化することにより、合成することができる。
【００８８】
また、チアゾール骨格を含むアナログは、中間体化合物７及びチアゾール環を有する中間体化合物２３を介して調製することができる。
【００８９】
ブチルエステル基に代えてイソブテン側鎖を有するイミド環骨格を導く反応経路は、中間体化合物２５〜３４を使用する反応スキームに示すように、実施することができる。
【００９０】
さらに別の変更を、化合物Ｅ及びＦの合成に関連するスキームに示す。
阻害物質の合成に関する反応スキーム：
【００９１】
【化１９】
0005922031.tif 000029
【００９２】
【化２０】
0005922031.tif 000030
【００９３】
【化２１】
0005922031.tif 000031
【００９４】
トリプトファンを出発物質とする上記スキームの変更を以下に示す。この変更は、最終産物を得るために必要な工程数を有意に減少させる。
【００９５】
等モル量のトリプトファン（化合物１）及びブタノールの反応によって化合物２が得られる。ピペラジンカルボン酸のアミノ基は、TW Greene等（Protective groups in organic synthesis, Third edition, Wiley Interscience (1999)）に記載の標準的方法によって保護化することができ、その後、オキサゾール中間体を得るための一般的なスキームで化合物９とさらに反応させることができる。水酸化ナトリウムを使用した化合物１２の脱エステル化によってカルボン酸１３が得られる。中間体１３及び化合物２の反応によって中間体１４が得られ、化合物１４の脱保護化によって最終産物（化合物Ａ１）が得られる。
【００９６】
【化２２】
0005922031.tif 000032
【００９７】
上記合成工程の以下のような変更によってトリアゾール中間体化合物１８が得られ、これを、化合物Ａ１と同様にして中間体化合物２と反応させることによって、最終産物であるトリアゾールアナログ化合物Ｂ１が得られる。
【００９８】
【化２３】
0005922031.tif 000033
【００９９】
また、上記工程を変更して、以下の反応スキーム例に示すチアゾールアナログを得ることができる。
【０１００】
【化２４】
0005922031.tif 000034
【０１０１】
全ての反応は、アルゴン又は窒素の陽圧下、火力乾燥又はオーブン乾燥したガラス製品中で実施した。反応容器をマグネットスターラで撹拌した。反応しやすい（sensitive）液体及び溶液はシリンジを使用して移し、ゴム製セプタを通じて反応溶液に導入した。
【０１０２】
薄層クロマトグラフィーを、ホワットマン（Whatman）シリカゲルプレコーテッドガラスプレートを使用して実施した。紫外線照射又はヨウ素蒸気への曝露によってゲルを視覚化した。カラムクロマトグラフィーを、２３０−４００メッシュＥＭサイエンスシリカゲルを使用して実施した。
【０１０３】
ＮＭＲスペクトルを、Ｖａｒｉａｎ５００分光光度計を使用して測定した。ＮＭＲスペクトルを、重水素化クロロホルム、メタノール又はＤＭＳＯを標準として使用して測定した。
【０１０４】
ＬＣ／質量スペクトルを、クォータナリー・ポンプ（quaternary pump）、可変長検出器（variable length detector）及びＣ−１８カラムを備えたＡｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズ装置を用いて得た。
【０１０５】
実施例３：
ＳＹＮ凝集阻害における本発明のＨＡＯＣ（複素芳香族有機化合物）の有効性及び理想的投与量を選定するために、２種類のアッセイを利用することができる。第１のアッセイは、無細胞系及び細胞系システムにおけるin vitroアッセイを含み、第２のアッセイは、ＰＤのトランスジェニックマウスモデルにおけるin vivo研究を含む。
本実施例では、ＮＰＴ２００−５と呼ばれる、以下のＨＡＯＣを使用した。
【０１０６】
【化２５】
0005922031.tif 000035
【０１０７】
目的は、投与量１μＭにおいて、３つのアッセイのうち２つが５０％効果を示す陽性反応を、in vitroアッセイを用いて特定することにある。
【０１０８】
１．ＳＹＮ凝集及び毒性のin vitroアッセイ
in vitro研究は、下記事項：ｉ）ＳＹＮ凝集の無細胞系イムノブロットアッセイにおけるＳＹＮオリゴマーに対する作用；ｉｉ）ＬＶ−ＳＹＮ構築物を感染させた神経細胞培養物におけるＳＹＮ蓄積及び神経突起伸長に対する作用；及びｉｉｉ）ＬＶ−ＳＹＮ構築物を感染させた神経細胞培養物におけるＳＹＮオリゴマーに対する作用を含む。
【０１０９】
この目的のために、組換えＳＹＮ（１μＭ，Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，ＵＳＡ）は、３７℃、次いで５６℃で、１６時間、インキュベーションされる。インキュベーションの１時間後、ＮＰＴ２００−５及びアナログが１ｎＭ〜１００μＭの濃度で混合物に加えられる。サンプルは、ウサギポリクローナルＳＹＮ抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）及びＳＹＮに対するマウスモノクローナル抗体（ＳＹＮ２１１，１：１０００，Ｓｉｇｍａ）を使用したイムノブロットアッセイに供され、Ｑｕａｎｔｉｔｙ  Ｏｎｅ  ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＢｉｏＲａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用したＶｅｒｓａＤｏｃイメージングシステムで分析される。
【０１１０】
神経細胞系アッセイのために、神経芽腫細胞株Ｂ１０３が使用される。無血清培地中、細胞にＬＶ−ＳＹＮベクターを２４時間感染させ、０，０．１，１及び１０μＭのＮＰＴ２００−５で２４時間処理する。神経細胞にＬＶベクターを感染させるために、０．１，１又は５（２９３Ｔ細胞に対するＴＵ／ｍＬを基準）の感染多重度（ＭＯＩ）が使用される。in vitroで４〜５日後、導入遺伝子発現細胞の割合（％）が分析される。Ｂ１０３細胞は、３７℃，５％ＣＯ2下、１０％ウシ胎児血清（Ｉｒｖｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）及び１％（ｖ／ｖ）ペニシリン／ストレプトマイシンを添加したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ，高グルコース）中に維持される。ＳＹＮ凝集の分析のために、細胞ホモジネートが、ＳＹＮに対する抗体を用いたイムノブロット及びカバースリップ中での免疫細胞化学により分析される。神経突起伸長の評価のために、カバースリップは、ＭＡＰ２に対する抗体を用いて免疫染色され、デジタルオリンパス顕微鏡及びイメージＱｕａｎｔシステムを用いて分析される。
【０１１１】
ＬＤＨ放出アッセイ（ＣｙｔｏＴｏｘ  ９６  ａｓｓａｙ，Ｐｒｏｍｅｇａ）が実施され、（もしあれば）毒性のレベルが測定される。細胞の生存に関する追加確認が、ヘキスト染色及びカルセインＡＭ／エチジウムホモダイマー染色（Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ  ａｓｓａｙ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を用いて行われる。全てのアッセイは、製造業者の説明書に従って９６ウェルプレートを用いて３回実施される。
【０１１２】
２．ＳＹＮ蓄積のトランスジェニックモデルにおけるin vivo試験
活性の高い化合物群が特定されると、次のステップとして、ＮＰＴ２００−５及び対照物質がＳＹＮトランスジェニック（ｔｇ）マウスに注射され、そのin vivo作用が試験される。第１の試験群では、２週間、毎日、１，１０及び１００ｎＭの化合物が注射される。ＳＹＮ及び化合物のレベルについて、血液，ＣＳＦ，脳及び肝臓が分析される。予備データが得られた後、２０匹のマウス群を用いたさらに詳細な研究が実施され、そこでは、３及び６ヶ月の処置の間、毎日、３及び６月齢マウスに注射される。マウスは、ＳＹＮ凝集及び神経変性に関して、行動学的、神経病理学的及び生化学的に分析される。ＳＹＮ及びＮＰＴ２００−５のレベルについて、血液及びＣＳＦが質量分析及びＮＭＲにより分析される。化合物は、透過性、脳へのアクセス及びバイオアベイラビリティが増加するように、さらに精製及び修飾される。選択された化合物は、最初に、非ｔｇマウスにおいて、毒性に関して試験される。ＳＹＮノックアウトマウスは生存能力があり、神経学的に正常である。これは、ＳＹＮをブロックする化合物の使用は、ＳＹＮｔｇマウス試験において、低毒性又は無毒性であることを示唆する。
【０１１３】
これらin vivo試験でスクリーニングされたリード化合物は、次いで、毒性試験及び第一相臨床試験に供される。長期目標は、ＰＤ患者における第二相臨床試験のために、この化合物を提供及び開発することにある。
【０１１４】
本発明の化合物は、細胞膜における神経毒性ＳＹＮオリゴマー形成の阻止に基づく、ＰＤ，ＬＢＤ，ＡＤ及びＭＳＡの新規治療をもたらす。
【０１１５】
ＳＹＮ凝集を阻止する可能性が高い化合物について、コンピュータシミュレーション及び計算によるプレスクリーニングを実施した。この複素芳香族有機化合物の１つ（図４）を適当な対照とともに、無細胞系で試験した。この目的のために、組換えＳＹＮ（１０μＭ）を、３７℃で０，８，１６及び２４時間、０，０．１，１及び１０μＭのペプチドとともにインキュベーションした。対照試験を、凝集ＳＹＮ分子（対照−１）を認識しない化合物、β及びγ−シヌクレイン、並びに該ペプチドに結合できない変異ＳＹＮ分子を用いて実施した。混合物をゲル泳動した後、ＳＹＮ抗体を用いてイムノブロット試験を実施した。この試験により、ＮＰＴ２００−５（図２）が、オリゴマー形成プロセス（図４）の初期及び後期の時点において、ＳＹＮ凝集を完全に阻止できることが示された。このアッセイのために、ＳＹＮを５μＭで使用した。ＮＰＴ２００−５は、０．１μＭの濃度で、ＳＹＮ凝集を５０％減少させた。
【０１１６】
ＮＰＴ２００−５のin vivo活性を試験するために、Ｂ１０３神経細胞株に、ＳＹＮ（野生型）を発現するレンチウイルス又は空ベクター（対照）を感染させ、ＳＹＮを発現する細胞に、ＮＰＴ２００−５を、０，０．１，１及び１０μＭの濃度で、２４時間曝露した。ＳＹＮ凝集について、細胞をイムノブロット、共焦点顕微鏡、神経突起伸長及び生存アッセイにより分析した。イムノブロットにより、対照と比較して、ＬＶ−ＳＹＮ感染した神経細胞は、可溶性及び不溶性フラクションにおいて、ＳＹＮモノマー（１４ｋＤａ）並びにダイマー、トリマー及びテトラマーと一致するオリゴマー（図５）の高レベル発現の存在を示した。ＮＰＴ２００−５での処理後、様々なフラクションにおいて、凝集体のレベルが５０−６０％減少した（モノマーも同様）（図５）。ビヒクルでの処理又は対照不活性化合物での処理は、ＳＹＮレベルに作用を示さなかった。ＮＰＴ２００−５は、０．１μＭの濃度で、ＳＹＮレベルを５０％減少させた。
【０１１７】
同様に、神経細胞をカバースリップに固定し、ＬＶ−ＳＹＮベクターを２４時間感染させ、無血清培地中、０，０．１，１及び１０μＭのＮＰＴ２００−５で２４時間処理し、免疫細胞化学、共焦点顕微鏡及びイメージ分析により分析した。ＬＶ−空ベクター対照と比較して、ＬＶ−ＳＹＮ感染した神経細胞は、高レベルのＳＹＮ蓄積を示した（ＳＹＮｔｇマウス及びＰＤ患者の脳で観察され得るものと同様）（図６）。ＮＰＴ２００−５での処理後、神経細胞体及び神経突起において、凝集体のレベルが６０−６５％減少した（図６）。ビヒクルでの処理又は対照不活性化合物での処理は、ＳＹＮレベルに作用を示さなかった。ＮＰＴ２００−５は、０．１μＭの濃度で、ＳＹＮレベルを５０％減少させた。細胞骨格タンパク質ＭＡＰ２に対する抗体を用いて分析したところ、高レベルのＳＹＮを発現する神経細胞は、神経突起伸長の減少を示した。ＮＰＴ２００−５での処理（０．１μＭ）は、神経突起伸長に対する有害作用を軽減し、細胞形態を改善した（図６）。ビヒクルでの処理又は対照不活性化合物での処理は、保護作用を示さなかった。
【０１１８】
次に、神経細胞活性に対する作用を確認するために、細胞に、ＬＶ−ＳＹＮベクターを２４時間感染させ、無血清培地中、０，０．１，１及び１０μＭのＮＰＴ２００−５で２４時間処理し、Ｆｌｏｕ−４にかけ、ＦＬＩＰＲアッセイにより分析し、Ｃａ++レベルを測定した。ＬＶ−空ベクター対照と比較して、ＬＶ−ＳＹＮ感染した神経細胞は、２５−３０％高いレベルのＣａ++フローを示した（図７）。ＮＰＴ２００−５での処理後、Ｃａ++レベルは、ベースラインに回復した（図７）。ビヒクルでの処理又は対照不活性化合物での処理は、Ｃａ++レベルを回復させることができなかった。ＮＰＴ２００−５は、０．１μＭの濃度で、Ｃａ++レベルを５０％改善した。最後に、神経細胞の生存に対する作用を調べるために、ＭＴＴ，ＬＤＨ及びＢｒＤｕアッセイを実施した。この研究により、０．１−１０μＭの投与量のＮＰＴ２００−５化合物が、毒性を示さないことが示された（図７）。全てのin vitro及び細胞系アッセイは少なくとも４回繰り返し、試験は盲検法で実施した。
【０１１９】
次のステップでは、ＮＰＴ２００−５及び対照物質をＳＹＮトランスジェニック（ｔｇ）マウスに注射し、in vivo作用を試験した。第１の試験群では、２週間、毎日、１，１０及び１００ｎＭの化合物を注射した。ＳＹＮ及び化合物のレベルについて、血液，ＣＳＦ，脳及び肝臓を分析した。予備データを得た後、２０匹のマウス群を用いたさらに詳細な試験を実施し、そこでは、３及び６ヶ月の処置の間、毎日、３及び６月齢のマウスに注射した。マウスを、ＳＹＮ凝集及び神経変性に関して、行動学的、神経病理学的及び生化学的に分析した。ＳＹＮ及びＮＰＴ２００−５のレベルについて、血液及びＣＳＦを質量分析及びＮＭＲにより分析した。化合物を、透過性、脳へのアクセス及びバイオアベイラビリティが増加するように、さらに精製及び修飾した。選択された化合物を、非ｔｇマウスにおいて、毒性に関して試験した。ＳＹＮノックアウトマウスは生存能力があり、神経学的に正常である。これは、ＳＹＮをブロックする化合物の使用は、ＳＹＮｔｇマウス試験において、低毒性又は無毒性であることを示唆する。
【図１】
0005922031.tif 000038
【図２Ａ】
0005922031.tif 000039
【図２Ｂ】
0005922031.tif 000040
【図３Ａ】
0005922031.tif 000041
【図３Ｂ】
0005922031.tif 000042
【図３Ｃ】
0005922031.tif 000043
【図３Ｄ】
0005922031.tif 000044
【図４】
0005922031.tif 000045
【図５】
0005922031.tif 000046
【図６Ａ】
0005922031.tif 000047
【図６Ｂ】
0005922031.tif 000048
【図７】
0005922031.tif 000049
【図８】
0005922031.tif 000050
【図９】
0005922031.tif 000051