(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品を提供する、
（２）アセトンを用いて、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品に対し３回繰返しの抽出を行い、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品とアセトンとの比例は１：１０〜１：５０である、
（３）ステップ（２）より得られた生成物を４０℃〜６０℃において、減圧濃縮方法により濃度を高める、
（４．１）ステップ（３）によって得られた生成物を一つのシリカゲルカラム（ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ｃｏｌｕｍｎ）に加える、
（４．２）複数種の洗浄液を順を追って前記シリカゲルカラムに加える、複数種の洗浄液は順を追って、ヘキサン（Ｈｅｘａｎｅ）、ヘキサン：エタノール（Ｅｔｈａｎｏｌ）＝９：１、ヘキサン：エタノール＝８：２、ヘキサン：エタノール＝７：３、ヘキサン：エタノール＝１：１及びエタノールである、
（４．３）所定の時間ごとに、シリカゲルカラムより流出される分離液を収集し、合計１２〜１５の分離液を収集する、
（４．４）一つの高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＰＬＣ）に、ホトダイオードアレー（ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ−ａｒｒａｙ，  ＰＤＡ）を合わせて、ステップ（４．３）によって収集された各分離液の分析を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液をスクリーニングする、
（４．５）ステップ（４．４）によってスクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、色素分離液を取得する、
（５．１）ステップ（４．１）〜（４．５）によって得られた色素分離液をＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０  ｃｏｌｕｍｎ）に加える、
（５．２）メタノール（Ｍｅｔｈａｎｏｌ）：アセトニトリル（Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）＝９：１からなる洗浄液をＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムに加える、
（５．３）所定の時間ごとに、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムより流出される分離液を収集し、合計３〜５の分離液を収集する、
（５．４）一つの高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＰＬＣ）に、ホトダイオードアレー（ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ−ａｒｒａｙ，  ＰＤＡ）と組み合わせて、ステップ（５．３）によって収集された各分離液の分析を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液をスクリーニングする、
（５．５）ステップ（５．４）によってスクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、色素分離液を取得する、
（６．１）ステップ（５）によって得られた黄色素分離液を一つのシリカゲルカラムに加える、
（６．２）複数種の洗浄液を順を追って前記シリカゲルカラムに加える、複数種の洗浄液は順を追って、ジクロロメタン（Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ）：エタノール（Ｅｔｈａｎｏｌ）＝９５：５、ジクロロメタン：エタノール＝９：１及びジクロロメタン：エタノール＝４：１である、
（６．３）所定の時間ごとに、シリカゲルカラムより流出される分離液を収集し、合計３〜５の分離液を収集する、
（６．４）一つの高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＰＬＣ）に、ホトダイオードアレー（ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ−ａｒｒａｙ，  ＰＤＡ）と組み合わせて、ステップ（６．３）によって収集された各分離液の分析を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液をスクリーニングする、
（６．５）ステップ（６．４）によってスクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液を取得する、
（７．１）ステップ（６．１）〜（６．５）によって得られた、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液は、Ｃ１８カラムに一つのＨＰＬＣ及び、メタノール（Ｍｅｔｈａｎｏｌ）：水＝８５：１５からなる洗浄液を合わせて、洗浄分離を行う、
（７．２）所定の時間ごとに、Ｃ１８カラムより流出される分離液を収集し、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）成分を含む分離液とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液との合計２の分離液を収集する、
（７．３）一つの高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＰＬＣ）に、ホトダイオードアレー（ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ−ａｒｒａｙ，  ＰＤＡ）と組み合わせて、ステップ（７．２）によって収集された各分離液の分析を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）成分を含む分離液をスクリーニングして当該モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）成分を含む分離液を得る、
ステップを少なくとも含む、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物の製造方法。
【請求項２】
（１）Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品を提供する、
（２）アセトンを用いて、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品に対し３回繰返しの抽出を行い、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品とアセトンとの比例は１：１０〜１：５０である、
（３）ステップ（２）より得られた生成物を４０℃〜６０℃において、減圧濃縮方法により濃度を高める、
（４．１）ステップ（３）によって得られた生成物を一つのシリカゲルカラム（ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ｃｏｌｕｍｎ）に加える、
（４．２）複数種の洗浄液を順を追って前記シリカゲルカラムに加える、複数種の洗浄液は順を追って、ヘキサン（Ｈｅｘａｎｅ）、ヘキサン：エタノール（Ｅｔｈａｎｏｌ）＝９：１、ヘキサン：エタノール＝８：２、ヘキサン：エタノール＝７：３、ヘキサン：エタノール＝１：１及びエタノールである、
（４．３）所定の時間ごとに、シリカゲルカラムより流出される分離液を収集し、合計１２〜１５の分離液を収集する、
（４．４）一つの高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＰＬＣ）に、ホトダイオードアレー（ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ−ａｒｒａｙ，  ＰＤＡ）と組み合わせて、ステップ（４．３）によって収集された各分離液の分析を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液をスクリーニングする、
（４．５）ステップ（４．４）によってスクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、色素分離液を取得する、
（５．１）ステップ（４．１）〜（４．５）によって得られた色素分離液をＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０  ｃｏｌｕｍｎ）に加える、
（５．２）メタノール（Ｍｅｔｈａｎｏｌ）：アセトニトリル（Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）＝９：１からなる洗浄液をＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムに加える、
（５．３）所定の時間ごとに、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムより流出される分離液を収集し、合計３〜５の分離液を収集する、
（５．４）一つの高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＰＬＣ）に、ホトダイオードアレー（ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ−ａｒｒａｙ，  ＰＤＡ）と組み合わせて、ステップ（５．３）によって収集された各分離液の分析を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液をスクリーニングする、
（５．５）ステップ（５．４）によってスクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、色素分離液を取得する、
（６．１）ステップ（５）によって得られた黄色素分離液を一つのシリカゲルカラムに加える、
（６．２）複数種の洗浄液を順を追って前記シリカゲルカラムに加える、複数種の洗浄液は順を追って、ジクロロメタン（Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ）：エタノール（Ｅｔｈａｎｏｌ）＝９５：５、ジクロロメタン：エタノール＝９：１及びジクロロメタン：エタノール＝４：１である、
（６．３）所定の時間ごとに、シリカゲルカラムより流出される分離液を収集し、合計３〜５の分離液を収集する、
（６．４）一つの高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＰＬＣ）に、ホトダイオードアレー（ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ−ａｒｒａｙ，  ＰＤＡ）と組み合わせて、ステップ（６．３）によって収集された各分離液の分析を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液をスクリーニングする、
（６．５）ステップ（６．４）によってスクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液を取得する、
（７．１）ステップ（６）によって得られた、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液は、Ｃ１８カラムに一つのＨＰＬＣ及び、メタノール（Ｍｅｔｈａｎｏｌ）：水＝８５：１５からなる洗浄液を合わせて、洗浄分離を行う、
（７．２）所定の時間ごとに、Ｃ１８カラムより流出される分離液を収集し、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）成分を含む分離液とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液との合計２の分離液を収集する、
（７．３）一つの高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＰＬＣ）に、ホトダイオードアレー（ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ−ａｒｒａｙ，  ＰＤＡ）と組み合わせて、ステップ（７．２）によって収集された各分離液の分析を行い、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液をスクリーニングして当該アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液を得る、
ステップを少なくとも含む、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物の製造方法。
【請求項３】
（１）Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品を提供する、
（２）アセトンを用いて、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品に対し３回繰返しの抽出を行い、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品とアセトンとの比例は１：１０〜１：５０である、
（３）ステップ（２）より得られた生成物を４０℃〜６０℃において、減圧濃縮方法により濃度を高める、
（４．１）ステップ（３）によって得られた生成物を一つのシリカゲルカラム（ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ｃｏｌｕｍｎ）に加える、
（４．２）複数種の洗浄液を順を追って前記シリカゲルカラムに加える、複数種の洗浄液は順を追って、ヘキサン（Ｈｅｘａｎｅ）、ヘキサン：エタノール（Ｅｔｈａｎｏｌ）＝９：１、ヘキサン：エタノール＝８：２、ヘキサン：エタノール＝７：３、ヘキサン：エタノール＝１：１及びエタノールである、
（４．３）所定の時間ごとに、シリカゲルカラムより流出される分離液を収集し、合計１２〜１５の分離液を収集する、
（４．４）一つの高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＰＬＣ）に、ホトダイオードアレー（ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ−ａｒｒａｙ，  ＰＤＡ）を合わせて、ステップ（４．３）によって収集された各分離液の分析を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液をスクリーニングする、
（４．５）ステップ（４．４）によってスクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、色素分離液を取得する、
（５．１）ステップ（４．１）〜（４．５）によって得られた色素分離液をＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０  ｃｏｌｕｍｎ）に加える、
（５．２）メタノール（Ｍｅｔｈａｎｏｌ）：アセトニトリル（Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）＝９：１からなる洗浄液をＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムに加える、
（５．３）所定の時間ごとに、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムより流出される分離液を収集し、合計３〜５の分離液を収集する、
（５．４）一つの高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＰＬＣ）に、ホトダイオードアレー（ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ−ａｒｒａｙ，  ＰＤＡ）と組み合わせて、ステップ（５．３）によって収集された各分離液の分析を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液をスクリーニングする、
（５．５）ステップ（５．４）によってスクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、色素分離液を取得する、
（６．１）ステップ（５）によって得られた黄色素分離液を一つのシリカゲルカラムに加える、
（６．２）複数種の洗浄液を順を追って前記シリカゲルカラムに加える、複数種の洗浄液は順を追って、ジクロロメタン（Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ）：エタノール（Ｅｔｈａｎｏｌ）＝９５：５、ジクロロメタン：エタノール＝９：１及びジクロロメタン：エタノール＝４：１である、
（６．３）所定の時間ごとに、シリカゲルカラムより流出される分離液を収集し、合計３〜５の分離液を収集する、
（６．４）一つの高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＰＬＣ）に、ホトダイオードアレー（ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ−ａｒｒａｙ，  ＰＤＡ）と組み合わせて、ステップ（６．３）によって収集された各分離液の分析を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液をスクリーニングする、
（６．５）ステップ（６．４）によってスクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液を取得する、
（７．１）ステップ（６．１）〜（６．５）によって得られた、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液は、Ｃ１８カラムに一つのＨＰＬＣ及び、メタノール（Ｍｅｔｈａｎｏｌ）：水＝８５：１５からなる洗浄液を合わせて、洗浄分離を行う、
（７．２）所定の時間ごとに、Ｃ１８カラムより流出される分離液を収集し、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）成分を含む分離液とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液との合計２の分離液を収集する、
（７．３）一つの高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＰＬＣ）に、ホトダイオードアレー（ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ−ａｒｒａｙ，  ＰＤＡ）と組み合わせて、ステップ（７．２）によって収集された各分離液の分析を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）成分とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含む分離液をスクリーニングする、
（８）ステップ（７．３）によってスクリーニングして分離液として得られたモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の成分を、含量比率は３．５６：１によって混合するステップを少なくとも含む、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物に関し、特に、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）またはアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）、もしくはモナシンとアンカフラビンを同時に含有する混合物であって、かつ血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げる機能を有するものに関する。
【背景技術】
【０００２】
血液中のコレステロール含量が心臓血管系疾患の発生率と密接に関係する。研究結果によれば、脂質異常は、心臓血管系疾患の罹患は、重要な関係がある。よって、血液中のコレステロール含量は、とっても良い予測指標である。血液中のコレステロール含量が２００  ｍｇ／Ｄｌを超えると、冠状動脈性心疾患に起因する死亡の機会は急増加することが指摘されている。コレステロール値が高いにつれて、冠状動脈性心疾患の罹病率と死亡率も高くなる。しかし、非薬物または薬物の治療でコレステロール値を引き下げれば、冠状動脈硬化による心臓血管系疾の罹病率を顕著的に引き下げることは確かなことである。
【０００３】
近年、健康食品の発展は盛んであり、複数効果を有する機能性の発酵製品紅麹は、段々重視されつつある。アジア地域では、Ｍｏｎａｓｃｕｓ種（Ｍｏｎａｓｃｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）が飲食、医薬方面での応用は、１千年の歴史を有する。
【０００４】
Ｍｏｎａｓｃｕｓ種の二次代謝物は、（１）一つグループの色素、赤色色素ルブロパンクタミン（ｒｕｂｒｏｐｕｎｃｔａｍｉｎｅ）、モナスコルブラミン（ｍｏｎａｓｃｏｒｕｂｒａｍｉｎｅ）、黄色色素アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）及びオレンジ色色素ｒｕｂｒｏｐｕｎｃｔａｎｉｎ、モナスコルブリン（ｍｏｎａｓｃｏｒｕｂｒｉｎ）、（２）コレステロールを引き下げる物質、モナコリンＫ（ｍｏｎａｃｏｌｉｎ  Ｋ）またはロバスタチン（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）、メビノリン（ｍｅｖｉｎｏｌｉｎ）及びメバコール（ｍｅｖａｃｏｒ）、（３）抗高血圧物質、γ−アミノ酪酸，  （γ−ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ，  ＧＡＢＡ）、（４）抗酸化物質、ジメルミン酸（ｄｉｍｅｒｕｍｉｃ  ａｃｉｄ）と３−ヒドロキシ−４−メトキシ安息香酸（３−ｈｙｄｏｘｙ−４−ｍｅｔｈｏｘｙ−  ｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ）の４種類を含める。
【０００５】
Ｍｏｎａｓｃｕｓ種の二次代謝物のうち、モナコリンＫ（ｍｏｎａｃｏｌｉｎ  Ｋ）は、コレステロールの生合成経路の鍵酵素ヒドロキシメチルグルタリル‐コエンザイムＡ還元酵素（ｈｙｄｒｏｘｙ  ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ−ＣｏＡ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＨＭＧ−ＣｏＡ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ））活性の抑制機能を有する。よって、モナコリンＫ（ｍｏｎａｃｏｌｉｎ  Ｋ）は、非常に顕著なコレステロール引き下げ効果を有する。
【０００６】
このほか、血液中のコレステロールは、高比重リポ蛋白コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）と低密度リポ蛋白コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）に分けることができる。研究により、高比重リポ蛋白コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）と低密度リポ蛋白コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）は、心臓血管系疾患とアテローム硬化症の発生機会に寄与することが知られている。
【０００７】
総コレステロール（ｔｏｔａｌ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，  ＴＣ）は、ＨＤＬ−Ｃ、ＬＤＬ−Ｃ、トリグリセリド（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ，  ＴＧ）及びその他リポ蛋白コレステロールからなる。従って、ＨＤＬ−ＣとＬＤＬ−Ｃは、ＴＣ値の顕著な増加によって大量に増加される。多くの研究により、コレステロール降下剤を使用しＴＣ値を引き下げると同時に、ＨＤＬ−Ｃ値の大幅な低下が見られる。そこで、ＨＤＬ−Ｃ値を維持するまたは引き上げることは、心臓血管系疾患の予防につながることが知られている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかし、前述モナコリンＫ（ｍｏｎａｃｏｌｉｎ  Ｋ）は、コレステロールを引き下げる効果はあるものの、ＨＤＬ−Ｃ値を引き上げることはできない。よって、心臓血管系疾患とアテローム硬化症に対する予防効果は、限られている。
この点について、混合物が血液脂質を引き下げるとＨＤＬ−Ｃ値を引き上げる機能を同時に備えて、心臓血管系疾患とアテローム硬化症の発生機会を有効に低減できる、斬新な混合物とその製造方法を提供する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明人は、前述欠点について、研究と考案を努めた結果、本発明の血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物とその製造方法を考案した。
【００１０】
本発明の主な目的は、少なくともモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）を含み、有効に血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロール値を引き上げることができる、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物を提供する。
【００１１】
前述目的を達成するため、本発明は、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品より抽出される紅こうじ黄色素であって、少なくともモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）を含み、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物を提供する。
【００１２】
本発明もう一つの目的は、シリーズ的な抽出ステップ及び浄化を経て、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）を含める混合物を取得する。この混合物は、有効に血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物の製造方法を提供する。
【００１３】
前述目的を達成するため、本発明より、少なくとも以下のステップを含めた、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げる混合物の製造方法を提供する。
【００１４】
（１）            Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品を提供する。
【００１５】
（２）            アセトンを用いて、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品に対し３回繰返しの抽出を行う。
【００１６】
（３）            ステップ（２）より得られた生成物を所定の温度条件において、減圧濃縮方法により濃度を高める。
【００１７】
（４）            ステップ（３）より得られた生成物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ｃｏｌｕｍｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を利用し、１回目の分離浄化を行い、色素分解液を分離する。
【００１８】
（５）            ステップ（４）の分離によって得られた色素分離液は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０  ｃｏｌｕｍｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を利用し、２回目の分離浄化を行い、黄色素分解液を分離する。
【００１９】
（６）            ステップ（５）の分離によって得られた黄色素分離液は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、３回目の分離浄化を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含める分離液を分離する。
【００２０】
（７）            ステップ（６）の分離によって得られたモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含める分離液は、分取ＨＰＬＣ（ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ｐｒｅ−ＨＰＬＣ）によって、４回目の分離浄化を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）の成分を分離する。
【００２１】
本発明もう一つの目的は、少なくともアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含み、有効に血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロール値を引き上げることができる、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物を提供する。
【００２２】
前述目的を達成するため、本発明は、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品より抽出される紅こうじ黄色素であって、少なくともアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含み、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物を提供する。
【００２３】
本発明のまた一つの目的は、シリーズ的な抽出ステップと浄化により、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含める混合物を抽出し、この混合物は、有効に血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げるができる、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物の製造方法を提供する。
【００２４】
前述目的を達成するため、本発明より、少なくとも以下のステップを含める血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げる混合物の製造方法を提供する。
【００２５】
（１）            Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品を提供する。
【００２６】
（２）            アセトンを用いて、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品に対し３回繰返しの抽出を行う。
【００２７】
（３）            ステップ（２）より得られた生成物を所定の温度条件において、減圧濃縮方法により濃度を高める。
【００２８】
（４）            ステップ（３）より得られた生成物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、１回目の分離浄化を行い、色素分解液を分離する。
【００２９】
（５）            ステップ（４）の分離によって得られた色素分離液は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィーを利用し、２回目の分離浄化を行い、黄色素分解液を分離する。
【００３０】
（６）            ステップ（５）の分離によって得られた黄色素分離液は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、３回目の分離浄化を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含める分離液を分離する。
【００３１】
（７）            ステップ（６）の分離によって得られたモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含める分離液は、分取ＨＰＬＣ（ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ｐｒｅ−ＨＰＬＣ）によって、４回目の分離浄化を行い、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の成分を分離する。
【００３２】
本発明のさらに一つの目的は、少なくともモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含み、有効に血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロール値を引き上げることができる、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物を提供する。
【００３３】
前述目的を達成するため、本発明は、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品より抽出される紅こうじ黄色素であって、少なくともモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含み、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物を提供する。
【００３４】
本発明のさらに一つの目的は、シリーズ的な抽出ステップと浄化により、（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含める混合物を抽出し、この混合物は、有効に血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げるができる、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物の製造方法を提供する。
【００３５】
前述目的を達成するため、本発明より、少なくとも以下のステップを含める血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げる混合物の製造方法を提供する。
【００３６】
（１）            Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品を提供する。
【００３７】
（２）            アセトンを用いて、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品に対し３回繰返しの抽出を行う。
【００３８】
（３）            ステップ（２）より得られた生成物を所定の温度条件において、減圧濃縮方法により濃度を高める。
【００３９】
（４）            ステップ（３）より得られた生成物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、１回目の分離浄化を行い、色素分解液を分離する。
【００４０】
（５）            ステップ（４）の分離によって得られた色素分離液は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィーを利用し、２回目の分離浄化を行い、黄色素分解液を分離する。
【００４１】
（６）            ステップ（５）の分離によって得られた黄色素分離液は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、３回目の分離浄化を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含める分離液を分離する。
【００４２】
（７）            ステップ（６）の分離によって得られたモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含める分離液は、分取ＨＰＬＣ（ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ｐｒｅ−ＨＰＬＣ）によって、４回目の分離浄化を行い、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の成分をそれぞれ分離する。
【００４３】
（８）            モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の成分を所定の比例によって混合する。
【発明の効果】
【００４４】
本発明のシステム構造及び技術特徴は説明のとおり、以下の長所をまとめることができる。
【００４５】
１．            本発明で提供されたすべての混合物は、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げる効果があるため、心臓血管系疾患とアテローム硬化症の予防及び治療とも極めて大きい効果を有する。
【００４６】
２．            本発明の製造方法によれば、本発明で提供された各種混合物の成分を高純度により抽出すれば、心臓血管系疾患とアテローム硬化症の罹患率を有効に軽減できる。
【００４７】
３．            本発明で提供された各種混合物は、人工合成による化合物ではなく、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品から抽出されたものであり、自然食品のサプリメントとして食用できる。心臓血管系疾患とアテローム硬化症の罹患率を有効に軽減できるほか、副作用を引き起こす恐れはない。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】本発明のＭｏｎａｓｃｕｓ発酵製品の製造方法フロー図である。
【図２】本発明の血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物実施例１の製造方法フロー図である。
【図３】本発明実施例１のステップ１０４の詳細ステップフロー図である。
【図４】本発明実施例１のステップ１０５の詳細ステップフロー図である。
【図５】本発明実施例１のステップ１０６の詳細ステップフロー図である。
【図６】本発明実施例１のステップ１０７の詳細ステップフロー図である。
【図７】本発明の血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物実施例２の製造方法フロー図である。
【図８】本発明実施例２のステップ２０７の詳細ステップフロー図である。
【図９】本発明の血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物実施例３の製造方法フロー図である。
【図１０】本発明実施例３のステップ３０７の詳細ステップフロー図である。
【図１１】脂質斑を染色した量化結果図である。
【図１２】同じ濃度のモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）とモナコリン  Ｋ（ｍｏｎａｃｏｌｉｎ  Ｋ）によるコレステロール生成抑制効果の比較図である。
【発明を実施するための形態】
【００４９】
前述目的及び効果を達成するため、本発明人はＭｏｎａｓｃｕｓ発酵製品を抽出基質とし、試験及び調整を繰り返した結果、本発明の血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物とその製造方法を得ることができた。本発明の血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物とその製造方法は、３つの好ましい実施例がある。本発明の混合物とその製造方法は、以下のとおり詳細説明する。
【実施例】
【００５０】
まず、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品の製造方法を説明する。図１、本発明のＭｏｎａｓｃｕｓ発酵製品の製造法のフロー図を参照し、以下のステップを含める。
【００５１】
（ステップ００１）    培養基質を提供する。培養基質は、たとえば米または乾燥の山芋のいずれかである。水分含量は１５％以下であり、最適な水分含量は７％である。
【００５２】
（ステップ００２）    水を培養基質に加え、培養基質と水の比率は１：０．５％〜１：１．５％であり、最適な比率は１：０．７５％である。
【００５３】
（ステップ００３）    培養基質を水に浸し、浸け時間は０〜６０分、最適な浸け時間は３０分である。
【００５４】
（ステップ００４）    培養基質の滅菌を行い、滅菌条件は１２１℃、１０〜６０分間である。
【００５５】
（ステップ００５）    滅菌完了の培養基質を冷却する。
【００５６】
（ステップ００６）    所定のモナスカス属のアンカを培養基質に接菌し、所定のモナスカス属のアンカは、たとえばモナスカスパーパレウス（Ｍｏｎａｓｃｕｓ  ｐｕｒｐｕｒｅｕｓ）である。
【００５７】
（ステップ００７）    接菌完了の培養基質を培養する。培養条件は温度２５〜３７℃、湿度５０〜８０％の環境において、８〜２０日間を培養する。最適な培養条件は、温度３０℃、湿度６０％の環境において、１０日間を培養する。
【００５８】
（ステップ００８）    培養を完了して得られたＭｏｎａｓｃｕｓ発酵製品の乾燥を行い、含水率を１５％以下にし、最適な含水率６％である。これにより、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品の製造プロセスを完了する。
【実施例１】
【００５９】
引き続き、本発明の実施例１について、詳細説明する。本発明の血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物の実施例１において、その成分は、紅こうじ黄色素であって、少なくともモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）を含み、前述Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品より抽出されたものである。モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）の投与量は大人において、１日２．４  ｍｇ以上を摂食しなければ、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロール値を引き上げることはできない。
【００６０】
引き続き、図２、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物実施例１の製造方法フロー図を参照する。本実施例は、以下のステップを含める。Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品を提供する（ステップ１０１）。アセトンを用いて、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品に対して３回の抽出を行う（ステップ１０２）。そのうち、Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品とアセトンとの比例は、１：１０  〜  １：５０である。ステップ１０２により得られた生成物を所定の温度範囲条件において、減圧濃縮方法を用いて、濃度を高める（ステップ１０３）。そのうち、所定の温度は４０℃〜６０℃である。ステップ１０３により得られた生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ｃｏｌｕｍｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）によって、１回目の分離浄化を行い、色素分解液を分離する（ステップ１０４）。ステップ１０４により、分離された色素分解液は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０  ｃｏｌｕｍｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を利用し、２回目の分離浄化を行い、黄色素分離液を分離する（ステップ１０５）。ステップ１０５により、分離し得られた黄色素分離液は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを利用し、３回目の分離浄化を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含める分離液を分離する（ステップ１０６）。ステップ１０６により、分離し得られたモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含める分離液を分取ＨＰＬＣ法（ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ｐｒｅ−ＨＰＬＣ）によって、４回目の分離浄化を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）成分を分離する（ステップ１０７）。
【００６１】
引き続き、図３、本発明の実施例１の好ましい実施例ステップ１０４の詳細ステップフロー図を参照する。前記ステップ１０４はさらに、以下のステップを細分化できる。ステップ１０３により得られた生成物をシリカゲルカラム（ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ｃｏｌｕｍｎ）に加える（ステップ１０４ａ）。複数種の洗浄液は、順を追ってシリカゲルカラムに加える（ステップ１０４ｂ）。そのうち、前記複数種の洗浄液の順は、ヘキサン（Ｈｅｘａｎｅ）、ヘキサン：エタノール（Ｅｔｈａｎｏｌ）＝  ９：１、Ｈｅｘａｎｅ  ：  Ｅｔｈａｎｏｌ  ＝  ８：２、ヘキサン：エタノール＝  ７：３、ヘキサン：エタノール＝  １：１及びエタノールである。所定の時間ごとに、シリカゲルカラムより留出される分離液を収集し、合計１２〜１５の分離液を収集する（ステップ１０４ｃ）。そのうち、前記所定の時間は、５〜１０分である。高速液体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，  ＨＰＬＣ）に、ホトダイオードアレー（ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ−ａｒｒａｙ，  ＰＤＡ）と組み合わせて、ステップ１０４ｃによって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分の分離液をスクリーニングする（ステップ１０４ｄ）。ステップ１０４ｄにより、スクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、色素分解液が得られる（ステップ１０４ｅ）。
【００６２】
引き続き、図４、本発明の実施例１の好ましい実施例ステップ１０５の詳細ステップフロー図を参照する。前述ステップ１０５はさらに、以下のステップを細分化できる。
【００６３】
（ステップ１０５ａ）    ステップ１０４によって、得られた色素分解液をＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラム（Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０  ｃｏｌｕｍｎ）に加える。
【００６４】
（ステップ１０５ｂ）    洗浄液をＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムに加え、前記洗浄液は、メタノール（Ｍｅｔｈａｎｏｌ）  ：  アセトニトリル（Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）＝  ９：１である。
【００６５】
（ステップ１０５ｃ）    所定の時間ごとに、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムより流出される分離液を収集し、合計３〜５の分離液を収集する。そのうち、前述所定の時間は、５〜１０分である。
【００６６】
（ステップ１０５ｄ）    高速液体クロマトグラフィーに、ホトダイオードアレーを合わせて、ステップ１０５ｃによって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含める分離液をスクリーニングする。
【００６７】
（ステップ１０５ｅ）    ステップ１０５ｄによって、スクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、黄色素分離液を取得する。
【００６８】
引き続き、図５、本発明の実施例１の好ましい実施例ステップ１０６の詳細ステップフロー図を参照する。前述ステップ１０６はさらに、以下のステップを細分化できる。
【００６９】
（ステップ１０６ａ）    ステップ１０５によって、得られた黄色素分離液をシリカゲルカラムに加える。
【００７０】
（ステップ１０６ｂ）    複数種の洗浄液は、順を追ってシリカゲルカラムに加える。前記複数種の洗浄液の順は、ジクロロメタン（Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ）：エタノール＝  ９５：５、ジクロロメタン：エタノール＝  ９：１及びジクロロメタン：エタノール＝  ４：１である。
【００７１】
（ステップ１０６ｃ）    所定の時間ごとに、シリカゲルカラムより流出される分離液を収集し、合計３〜５の分離液を収集する。そのうち、前述所定の時間は、５〜１０分である。
【００７２】
（ステップ１０６ｄ）    高速液体クロマトグラフィーに、ホトダイオードアレーを合わせて、ステップ１０６ｃによって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含める分離液をスクリーニングする。
【００７３】
（ステップ１０６ｅ）    ステップ１０６ｄによって、スクリーニングし得られた分離液を一体に混合して、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含める分離液を取得する。
【００７４】
引き続き、図６、本発明の実施例１の好ましい実施例ステップ１０７の詳細ステップフロー図を参照する。前述ステップ１０７はさらに、以下のステップを細分化できる。
【００７５】
（ステップ１０７ａ）    ステップ１０６によって得られた、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含める分離液は、Ｃ１８カラムにＨＰＬＣ及び洗浄液を合わせて、洗浄分離を行い、前述洗浄液は、メタノール：水＝  ８５：１５である。
【００７６】
（ステップ１０７ｂ）    所定の時間ごとに、Ｃ１８カラムより流出される分離液を収集し、合計２の分離液を収集する。そのうち、前述所定の時間は、５〜１０分である。
【００７７】
（ステップ１０７ｃ）    高速液体クロマトグラフィーに、ホトダイオードアレーを合わせて、ステップ１０７ｂによって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）成分を含める分離液をスクリーニングする。
【００７８】
前述ステップ１０４ｄ、１０５ｄ及び１０６ｄにおいて、ＨＰＬＣ分析法で使用するカラム（ｃｏｌｕｍｎ）は、Ｃ１８カラム（２５  ｃｍ  ｘ  ４．６  ｍｍ，  ｉ．ｄ．  ＝  ５  μｍ）、移動相はアセトニトリル：水：  トリフルオロ酢酸塩＝  ６２：３８：０．０５、流速１  ｍＬ／ｍｉｎである。多波長検出器（ｍｕｌｔｉｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ  ｄｅｔｅｃｔｏｒ）により、２３１  ｎｍにおけるＵＶ吸収波長（モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）は、２３１  ｎｍのＵＶ吸収波長において、波高点を発生する）を検出する。さらに、対照群としてモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の標準品を利用する。標準品の波高点の時間と被測定物の波高点とのマッチングを行い、被測定物がモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）であるか否かを判定する。
【００７９】
このほか、前述ステップ１０７ｃにおいて、ＨＰＬＣ分析法で使用される条件は、ステップ１０４ｄ、１０５ｄ及び１０６ｄとほぼ同じである。ステップ１０７ｃが特殊な点は、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）は極性違いの特性によって、互いに分離される。Ｃ１８カラムにて、高極性成分は、先に分離される。モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）は、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）に比べ、低極性成分であるため、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）は、先に分離され、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）はその後に分離される。この特性を利用して、先に分離された分離液を集めて、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）標準品と時間及び吸収波長の対照を行い、分離液にモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）を含まれているかを確認する。
【実施例２】
【００８０】
引き続き、本発明の実施例２について、詳細説明する。本発明の血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物の実施例２において、その成分は、紅こうじ黄色素であって、少なくともアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含み、前述Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品より抽出されたものである。そのうち、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の投与量は大人において、１日０．６  ｍｇ以上を摂食しなければ、血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロール値を引き上げることはできない。
【００８１】
図７、本発明の血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物実施例２の製造方法フロー図を参照する。そのうち、ステップ２０１〜２０６は、ほぼ前述実施例１と同じため、ここでの説明を省略する。異なる点は、本実施例２のステップ２０７は、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の分離は、分取ＨＰＬＣ法によるものである。
【００８２】
引き続き、図８、本発明の実施例２の好ましい実施例ステップ２０７の詳細ステップフロー図を参照する。前述ステップ２０７はさらに、以下のステップを細分化できる。
【００８３】
（ステップ２０７ａ）    ステップ２０６によって得られた、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含める分離液は、Ｃ１８カラムにＨＰＬＣ及び洗浄液を合わせて、洗浄分離を行い、前述洗浄液は、メタノール：水＝  ８５：１５である。
【００８４】
（ステップ２０７ｂ）    所定の時間ごとに、Ｃ１８カラムより流出される分離液を収集し、合計２の分離液を収集する。そのうち、前述所定の時間は、５〜１０分である。
【００８５】
（ステップ２０７ｃ）    高速液体クロマトグラフィーに、ホトダイオードアレーを合わせて、ステップ２０７ｂによって、収集された各分離液の分析を行い、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含める分離液をスクリーニングする。
【００８６】
前述ステップ２０７ｃにおいて、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）は、極性違いによって、互いに分離される。Ｃ１８カラムにて、高極性成分が先に分離される。モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）はアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）に比べ、高極性成分であるため、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）は先に分離される。この特性を利用して、後に分離される分離液を集めて、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）標準品と時間及び吸収波長の対照を行い、分離液にアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含まれているかを確認する。
【実施例３】
【００８７】
引き続き、本発明の実施例３について、詳細説明する。本発明の血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物の実施例３において、その成分は、紅こうじ黄色素であって、少なくともモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含み、前述Ｍｏｎａｓｃｕｓ発酵製品より抽出されたものである。そのうち、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）含量比率の範囲は１：１〜１０：１であり、最適な含量比率は３．５６：１であれば、有効に血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる。そのほか、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）の投与量は大人において、１日２．４  ｍｇ以上、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の投与量は大人において、１日０．６  ｍｇ以上を摂食しなければ、有効に血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロール値を引き上げることはできない。
【００８８】
引き続き、図９、本発明の血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げることができる混合物実施例３の製造方法フロー図を参照する。本実施例において、ステップ３０１〜３０６は、前述実施例１と実施例２とほぼ同じであるため、ここでの説明を省略する。異なる点は、実施例３におけるステップ３０７は、分取ＨＰＬＣ法を利用し、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の成分それぞれ分離した後、最後にステップ３０８に説明のとおり、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の成分を所定の比例によって混合する。前述所定比例の範囲値は１：１  〜  １０：１であり、最適値は３．５６：１である。
【００８９】
引き続き、図１０、本発明の実施例３の好ましい実施例ステップ３０７の詳細ステップフロー図を参照する。前述ステップ３０７はさらに、以下のステップを細分化できる。
【００９０】
（ステップ３０７ａ）    ステップ３０６によって得られた、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含める分離液は、Ｃ１８カラムにＨＰＬＣ及び洗浄液を合わせて、洗浄分離を行い、前述洗浄液は、メタノール：水＝  ８５：１５である。
【００９１】
（ステップ３０７ｂ）    所定の時間ごとに、Ｃ１８カラムより流出される分離液を収集し、合計２の分離液を収集する。そのうち、前述所定の時間は、５〜１０分である。
【００９２】
（ステップ３０７ｃ）    高速液体クロマトグラフィーに、ホトダイオードアレーを合わせて、ステップ３０７ｂによって、収集された各分離液の分析を行い、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）成分を含める分離液をスクリーニングする。
【００９３】
前述ステップ３０７ｃにおいて、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）は、極性違いによって、互いに分離される。Ｃ１８カラムにて、高極性成分は先に分離される。モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）はアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）に比べ、高極性成分であるため、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）は、先に分離される。この特性を利用して、先と後に分離される分離液を集めて、それぞれモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）標準品と時間及び吸収波長の対照を行い、分離液にモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）またはアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含まれているかを確認する。
【００９４】
本発明実施例１ないし３の混合物による血液脂質を引き下げ、ＨＤＬコレステロールを引き上げる効果を確認するため、以下は複数種の実験を用いて、分析と比較を行う。以下の分析内容において、本考案実施例１の混合物は、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ，  ＭＳ）であり、投与量は大人において、１日に９．８２  ｍｇを摂食する。実施例２の混合物は、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ，  ＡＦ）であり、投与量は大人において、１日に１．４３  ｍｇを摂食する。実施例３の混合物は、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）及びアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）（ＭＳ＋ＡＦという。）投与量は大人において、１日に９．８２  ｍｇ及び１．４３  ｍｇである。そのほか、モナコリンＫ（ｍｏｎａｃｏｌｉｎ  Ｋ，  ＭＫという。）を含める混合物を対照群にした。
【００９５】
まず、高コレステロール摂食のハムスターを実験動物に利用し、それぞれＭＳ、ＡＦ、ＭＳ＋ＡＦ及びＭＫを８週間投与し後、血中総コレステロール（ｔｏｔａｌ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，  ＴＣ）含量、トリグリセリド（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ，  ＴＧ）含量、高比重リポ蛋白コレステロール（ｈｉｇｈ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，  ＨＤＬ−Ｃ）含量、低密度リポ蛋白コレステロール（ｌｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，  ＬＤＬ−Ｃ）含量、ＬＤＬ−ＣとＨＤＬ−Ｃの比例及び血中脂質のマロンジアルデヒド（ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ，  ＭＤＡ）含量など、各種コレステロールパラメータの分析を行う。そのうち、ＭＫの投与量は大人において、１日２．８９  ｍｇの摂食に相当する。このほか、正常飲食組は、ＮＯＲ組といい、高コレステロール摂食組は、ＨＣという。
【００９６】
下表１は、前述動物試験の結果であり、表２は、ＭＳ、ＡＦ、ＭＳ＋ＡＦ及びＭＫ組がＨＣ組と対照した各種パラメータの降下または増加率。まず、ＴＣ降下の結果において、ＭＳ組とＡＦ組とも血中ＴＣ含量の降下が顕著的であり、かつその効果はＭＫ組より高い。さらに、ＭＳ＋ＡＦ組によるＴＣ降下効果は、他の組より高いことを示されている。ＴＧの降下効果において、ＭＳ組、ＡＦ組及びＭＳ＋ＡＦ組ともＴＧ含量の降下が顕著的であり、かつその効果はＭＫ組より高い。ＨＤＬ−Ｃの上昇率結果において、ＭＳ組とＡＦ組とも血中ＨＤＬ−Ｃ含量の増加が顕著的であり、かつその効果はＭＫ組より高い。さらに、ＭＳ＋ＡＦ組によるＴＣ増加効果は、他の組より高いことを示されている。ＨＤＬ−Ｃ降下率の結果は、ＭＳ組の効果は、ＭＫ組とさほど差は認められないが、ＡＦ組とＭＳ＋ＡＦ組は、血中ＨＤＬ−Ｃの降下効果は、ＭＫ組より高い。ＬＤＬ／ＨＤＬ比値の降下効果において、ＭＳ組の効果は、ＭＫ組より高く、ＡＦ組とＭＳ＋ＡＦ組の効果は他の組より高い。よって、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）とモナシン＋アンカフラビン（ｍｏｎａｓｃｉｎ＋ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）は、モナコリン（ｍｏｎａｃｏｌｉｎ  Ｋ）に比べ、心臓血管系疾患とアテローム硬化症の発生の改善に寄与できることが分かる。ＭＤＡ降下効果において、ＭＳ組、ＡＦ組及びＭＳ＋ＡＦ組ともＭＤＡ含量の降下が顕著的であり、かつその効果はＭＫ組より高い。
【００９７】
【表１】
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【００９８】
【表２】
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【００９９】
アテローム硬化症を評価するもう一つの重要な指標は、動脈脂肪斑の染色分析であり、染色結果により、脂肪斑が動脈血管の沈積状況を知ることができる。大量な過酸化脂質は、泡沫細胞の大量沈積を引き起し、血管壁が弾性を失われ、かつ大量な脂質斑を沈積して、アテローム硬化症を引き起こす。図１１、脂質斑を染色した量化結果図を参照する。研究結果によると、８週間連続した高コレステロールの摂食は、実験動物の胸腔動脈血管斑が大量に沈積していて、正常飲食組に比べ、増加現象は顕著的であった。ＭＫ組（投与量２．８９  ｍｇ／日）は脂質斑の量の降下は見られるものの、その効果は、ＭＳ組（投与量９．８２  ｍｇ／日）、ＡＦ組（投与量１．４３  ｍｇ／日）及びＭＳ＋ＡＦ組（ＭＳとＡＦの比例は３．５６：１）である。このほか、ＡＦ組の効果は、ＭＳ組より高く、かつＭＳ＋ＡＦ組の効果はＡＦ組より高い。
【０１００】
モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）とモナシン及びモナコリンＫ（ｍｏｎａｃｏｌｉｎ  Ｋ）によるコレステロール生成の抑制効果を比較するため、細胞実験法を用いて、同じ濃度（１００  ｐｐｂ）のモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）及びモナコリンＫ（ｍｏｎａｃｏｌｉｎ  Ｋ）条件により細胞を処理し、コレステロール生成への影響を検討した。図１２、同じ濃度のモナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）とモナシン及びモナコリンＫ（ｍｏｎａｃｏｌｉｎ  Ｋ）によるコレステロール生成の抑制効果比較図を参照する。コレステロール生成の抑制効果は、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）、モナコリンＫ（ｍｏｎａｃｏｌｉｎ  Ｋ）の順である。この結果は、動物試験の結果に同じ、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）とモナシンは、モナコリンＫ（ｍｏｎａｃｏｌｉｎ  Ｋ）に比べ、より良い血中脂質降下効果を有し、かつその結果は、細胞におけるコレステロール生成の抑制効果は、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）、モナコリンＫ（ｍｏｎａｃｏｌｉｎ  Ｋ）の順である。
【０１０１】
前述動物試験結果から、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）、アンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）とモナシン＋アンカフラビン（ｍｏｎａｓｃｉｎ＋ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）とも顕著な血清ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ−Ｃ、ＭＤＡ、動脈脂肪斑の降下効果及びＨＤＬ−Ｃを引き上げる効果があり、しかもモナコリンＫ（ｍｏｎａｃｏｌｉｎ  Ｋ）より高い。このほか、モナシン＋アンカフラビン（ｍｏｎａｓｃｉｎ＋ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の効果は、モナシン（ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）に比べ、より顕著である。よって、本発明実施例１ないし３の混合物は、血中総コレステロールを有効に引き下げるほか、血中ＨＤＬ−Ｃ濃度を引き上げることができ、心臓血管系疾患とアテローム硬化症の発生に対する抑制効果は、極めて大きい。
【符号の説明】
【０１０２】
００１〜００８        ステップ番号
１０１〜１０７        ステップ番号
１０４ａ〜１０４ｅ    ステップ番号
１０５ａ〜１０５ｅ    ステップ番号
１０６ａ〜１０６ｅ    ステップ番号
１０７ａ〜１０７ｃ    ステップ番号
２０１〜２０７        ステップ番号
２０７ａ〜２０７ｃ    ステップ番号
３０１〜３０８        ステップ番号
３０７ａ〜３０７ｃ    ステップ番号
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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