(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
スルフォラファンを有効成分とする繊毛虫類駆除剤。
【請求項２】
前記スルフォラファンが、下記（Ａ）群から選ばれる１種又は２種以上の形態として与えられる請求項１に記載の繊毛虫類駆除剤。
（Ａ）化学合成品、植物から単離・精製されたスルフォラファン、スルフォラファンを含む植物の抽出液、スルフォラファンを含む植物、スルフォラファンを含む植物の破砕物及び／又は粉砕物、スルフォラファンの配糖体を含む植物の抽出液、スルフォラファンの配糖体を含む植物、スルフォラファンの配糖体を含む植物の破砕物及び／又は粉砕物。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の繊毛虫類駆除剤を淡水、海水、汽水又は水溶液に添加し、淡水、海水、汽水又は水溶液中の繊毛虫類を駆除する繊毛虫類の駆除方法。
【請求項４】
請求項１又は２に記載の繊毛虫類駆除剤を淡水、海水、汽水又は水溶液が貯留又は充填されている水槽、生簀又は容器に投入し、淡水、海水、汽水、水溶液中の繊毛虫類又は水槽、生簀又は容器の壁面又は水槽、生簀又は容器中の石、砂、植物などに付着する繊毛虫類を駆除する繊毛虫類の駆除方法。
【請求項５】
淡水、海水、汽水又は水溶液中の浮遊物質を含む固形分をろ過し除去するろ過装置を備え、水槽、生簀又は容器との間で淡水、海水、汽水又は水溶液を循環させながら使用する循環方式のろ過槽、又は淡水、海水、汽水又は水溶液中の浮遊物質を含む固形分をろ過し除去するろ過装置を備え、ろ過した淡水、海水、汽水又は水溶液を水槽、生簀又は容器に送る掛け流し方式のろ過槽に、請求項１又は２に記載の繊毛虫類駆除剤を投入し、淡水、海水、汽水又は水溶液中の繊毛虫類、前記浮遊物質を含む固形分に付着する繊毛虫類、前記ろ過槽の壁面又は前記ろ過装置に付着する繊毛虫類を駆除する繊毛虫類の駆除方法。
【請求項６】
請求項１又は２に記載の繊毛虫類駆除剤を魚類、甲殻類、貝類のような水産生物が生息する淡水、海水、汽水又は浜に投与し、前記水産生物に寄生する繊毛虫類及び淡水、海水、汽水又は浜に生息する繊毛虫類を駆除する繊毛虫類の駆除方法。
【請求項７】
請求項１又は２に記載の繊毛虫類駆除剤を添加した淡水、海水、汽水又は水溶液に魚類、甲殻類、貝類のような水産生物を投入し、水産生物に寄生する繊毛虫類を駆除する繊毛虫類の駆除方法。
【請求項８】
スルフォラファンを繊毛虫類を駆除する有効成分として含有する飼料を給餌して、魚類、甲殻類、貝類のような水産生物に寄生する繊毛虫類及び／又は前記水産生物が生息する環境中の繊毛虫類を駆除する繊毛虫類の駆除方法。
【請求項９】
淡水、海水、汽水、水溶液中の繊毛虫類、又は淡水、海水、汽水、水溶液が貯留又は充填されている水槽、容器の壁面又は水槽、容器中の石、砂、植物などに付着する繊毛虫類を駆除し水質を浄化する、スルフォラファンを有効成分とする水質浄化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、魚に寄生するスクーチカなど繊毛虫類を駆除する繊毛虫類駆除剤、繊毛虫類の駆除方法及び水中の繊毛虫類を駆除し水質を浄化する水質浄化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
繊毛虫類は自然界に幅広く生息している。そのうちの一部は寄生性で水産生物に被害を及ぼしている。特にスクーチカ（Miamiensis avidus）は、ヒラメ、タイおよびフグに寄生して感染魚を死に至らしめるため、水産業の現場で大きな問題になっている。ヒラメの病虫害に占めるスクーチカ症の割合は年次変動が大きい。ただし、一度発生すると繰り返し発生しやすく、感染魚の死亡率が高いため、水産養殖業者に壊滅的な被害を与えることもある。
【０００３】
上記問題を解決するためにこれまでにも多くの方法が提案されている。例えば養殖場におけるスクーチカ感染症を予防する方法として、所定濃度の安定化二酸化塩素、酢酸、過酸化水素を含有する薬液に、紫外線を遮断した状態で魚を薬浴させる方法がある（例えば特許文献１参照）。また植物抽出物を利用した、養殖魚類の寄生性疾病治療効果を有する駆虫剤組成物として、ニッブ（Azadirachta indica）、チモ（Thymus vulgaris）およびセラ（Cymbopogon citratus）からなる群より選択された１種以上の植物抽出物を有効成分として含む魚類寄生虫駆虫用組成物がある（例えば特許文献２参照）。また薬剤の副作用や魚への薬剤残留による影響が少ない経口投与可能な寄生虫の予防組成物として、生薬であるクジンの注出物を含有する組成物がある（例えば特許文献３参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特許第３８８２９３９号公報
【特許文献２】特開２００７−１３１６１１号公報
【特許文献３】特許第４６０８２５５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
今後、水産現場では、繊毛虫などの寄生虫被害は増大すると見込まれており、安全性が高い薬剤の開発が切望されている。人間や他の生物に対して影響が小さい植物由来成分を有効成分とする薬剤は、安全性の点において好ましい薬剤であり、このような薬剤のうち繊毛虫類の駆除に優れた効果を示す薬剤を繊毛虫類駆除剤として好適に使用することができる。また植物由来成分を有効成分とする薬剤の場合、該植物が入手容易なこと、又は栽培が可能なことが実用化の点において重要となる。
【０００６】
本発明の目的は、人間や他の生物に対して影響が小さい植物由来成分を有効成分とし、繊毛虫類の駆除に優れた効果を示す繊毛虫類駆除剤、繊毛虫類の駆除方法及び水質浄化剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
日本国内で採取、栽培でき、生態系への悪影響が少ないと考えられる在来植物および野菜、花卉を中心にスクリーニングを行った結果，スクーチカの増殖抑制効果を示す数種類の植物を発見した。そのなかで最も強い増殖抑制効果を示したブロッコリーについて、有効成分の単離・同定を行い、スルフォラファンがスクーチカ増殖抑制効果を示す物質であることを見出し発明を完成するに至った。本発明は、次の通りである。
【０００８】
本発明は、スルフォラファンを有効成分とする繊毛虫類駆除剤である。
【０００９】
本発明の繊毛虫類駆除剤において、前記スルフォラファンは、下記（Ａ）群から選ばれる１種又は２種以上の形態として与えることができる。
（Ａ）化学合成品、植物から単離・精製されたスルフォラファン、スルフォラファンを含む植物の抽出液、スルフォラファンを含む植物、スルフォラファンを含む植物の破砕物及び／又は粉砕物、スルフォラファンの配糖体を含む植物の抽出液、スルフォラファンの配糖体を含む植物、スルフォラファンの配糖体を含む植物の破砕物及び／又は粉砕物。
【００１０】
また本発明は、前記繊毛虫類駆除剤を淡水、海水、汽水又は水溶液に添加し、淡水、海水、汽水又は水溶液中の繊毛虫類を駆除する繊毛虫類の駆除方法である。
【００１１】
また本発明は、前記繊毛虫類駆除剤を淡水、海水、汽水又は水溶液が貯留又は充填されている水槽、生簀又は容器に投入し、淡水、海水、汽水、水溶液中の繊毛虫類又は水槽、生簀又は容器の壁面又は水槽、生簀又は容器中の石、砂、植物などに付着する繊毛虫類を駆除する繊毛虫類の駆除方法である。
【００１２】
また本発明は、淡水、海水、汽水又は水溶液中の浮遊物質を含む固形分をろ過し除去するろ過装置を備え、水槽、生簀又は容器との間で淡水、海水、汽水又は水溶液を循環させながら使用する循環方式のろ過槽、又は淡水、海水、汽水又は水溶液中の浮遊物質を含む固形分をろ過し除去するろ過装置を備え、ろ過した淡水、海水、汽水又は水溶液を水槽、生簀又は容器に送る掛け流し方式のろ過槽に、前記繊毛虫類駆除剤を投入し、淡水、海水、汽水又は水溶液中の繊毛虫類、前記浮遊物質を含む固形分に付着する繊毛虫類、前記ろ過槽の壁面又は前記ろ過装置に付着する繊毛虫類を駆除する繊毛虫類の駆除方法である。
【００１３】
また本発明は、前記繊毛虫類駆除剤を魚類、甲殻類、貝類のような水産生物が生息する淡水、海水、汽水又は浜に投与し、前記水産生物に寄生する繊毛虫類及び淡水、海水、汽水又は浜に生息する繊毛虫類を駆除する繊毛虫類の駆除方法である。
【００１４】
また本発明は、前記繊毛虫類駆除剤を添加した淡水、海水、汽水又は水溶液に魚類、甲殻類、貝類のような水産生物を投入し、水産生物に寄生する繊毛虫類を駆除する繊毛虫類の駆除方法である。
【００１６】
また本発明は、スルフォラファンを繊毛虫類を駆除する有効成分として含有する飼料を給餌して、魚類、甲殻類、貝類のような水産生物に寄生する繊毛虫類及び／又は前記水産生物が生息する環境中の繊毛虫類を駆除する繊毛虫類の駆除方法である。
【００１７】
また本発明は、淡水、海水、汽水、水溶液中の繊毛虫類、又は淡水、海水、汽水、水溶液が貯留又は充填されている水槽、容器の壁面又は水槽、容器中の石、砂、植物などに付着する繊毛虫類を駆除し水質を浄化する、スルフォラファンを有効成分とする水質浄化剤である。
【発明の効果】
【００１８】
本発明の繊毛虫類駆除剤は、人間や他の生物に対して影響が小さいスルフォラファンを有効成分とする薬剤であり、繊毛虫類の駆除に優れた効果を示す。また本発明の繊毛虫類の駆除方法を用いることで繊毛虫類を効果的に駆除することができる。また本発明の水質浄化剤は、人間や他の生物に対して影響が小さいスルフォラファンを有効成分とする水質浄化剤であり、該水質浄化剤を用いることで繊毛虫類を効果的に駆除し、水質を浄化することができる。スルフォラファンは、ブロッコリーに多く含まれるので、入手も容易であり、本発明の繊毛虫類駆除剤及び水質浄化剤は、実用化し易い。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】スルフォラファンを使用したスクーチカの駆除実験結果を示す図である。
【図２】スルフォラファンを使用したツリガネムシの駆除実験時の顕微鏡写真である。
【図３】スルフォラファンを使用したツリガネムシの駆除実験時の顕微鏡写真である。
【図４】スルフォラファンを使用したツリガネムシの駆除実験時の顕微鏡写真である。
【図５】スルフォラファンを使用したツリガネムシの駆除実験時の顕微鏡写真である。
【図６】スルフォラファンを使用したツリガネムシの駆除実験時の顕微鏡写真である。
【図７】スルフォラファンを使用したツリガネムシの駆除実験時の顕微鏡写真である。
【図８】スルフォラファンを使用したツリガネムシの駆除実験時の顕微鏡写真である。
【図９】スルフォラファンを使用したツリガネムシの駆除実験時の顕微鏡写真である。
【図１０】スルフォラファンを使用したツリガネムシの駆除実験時の顕微鏡写真である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本発明の繊毛虫類駆除剤は、スルフォラファンを有効成分とする繊毛虫類駆除剤である。本発明の繊毛虫類駆除剤は、幅広い繊毛虫類の駆除、増殖抑制に使用することが可能であり、特にスクーチカ、ツリガネムシ類の駆除、増殖抑制に好適に使用することができる。
【００２１】
スルフォラファンは、イソチオシアネートの一種で、ブロッコリー、カリフラワー、キャベツ、ケールといったアブラナ科植物に広く含まれ、特にブロッコリーに多く含まれる。ブロッコリー中のスルフォラファンの含有量は、成熟した植物体の場合、４４．３〜１７１．３ｍｇ／１００ｇ−ｄｒｙ ｐｌａｎｔ、スプラウトの場合１１５３．０ｍｇ／１００ｇ−ｄｒｙ ｐｌａｎｔである（出典：Nakagawa，et al.， J．Agric．Food Chem．2006；54：2479-2483）。植物体内では主にスルフォラファン配糖体の形で存在し、ミロシナーゼによってスルフォラファン配糖体が加水分解されてスルフォラファンとなる。
【００２２】
スルフォラファンについては、緑内障性網膜症および視神経障害の処置のための薬剤（例えば特許公開２０１１−４６７３６号公報）や大腸癌予防剤（例えば特許公開２００５−６０２２９号公報）など人の疾病に関する効果や、有害化合物の無害化方法（例えば特許公開２００９−１５４０２９号公報）、ピロリ菌の殺菌効果（出典：Fahey，et al.，Proc． Natl．Acad．Sci．USA．2002；99（11）：7610-7615）が示されているが、繊毛虫に対する効果は示されていない。人に対しては有用な機能性成分として働き、悪影響が少ない成分と考えられる。
【００２３】
繊毛虫類駆除剤で使用するスルフォラファンは、種々の形態のスルフォラファンを使用することができる。ブロッコリーのような植物から単離・精製されたスルフォラファン、化学的に合成されたスルフォラファンを使用することができる。この他、スルフォラファンを含む植物の抽出液、スルフォラファンを含む植物、スルフォラファンを含む植物の破砕物及び／又は粉砕物、スルフォラファンの配糖体を含む植物の抽出液、スルフォラファンの配糖体を含む植物、スルフォラファンの配糖体を含む植物の破砕物及び／又は粉砕物を使用することができる。これらは１種で使用しても、スルフォラファンを含む植物の抽出液とスルフォラファンを含む植物の破砕物及び／又は粉砕物など２種以上を同時に使用してもよい。
【００２４】
スルフォラファンを含む植物の抽出液、スルフォラファンの配糖体を含む植物の抽出液は、スルフォラファンを含む植物、スルフォラファンの配糖体を含む植物を溶媒を用いて抽出することで得られる。抽出方法は、特定の方法に限定されるものではなく、例えば、水、エタノールを抽出溶媒とし、ブロッコリーなどを常温下、１〜２４時間抽出溶媒に浸けておけばよい。抽出溶媒は、人間や他の生物に対して影響が小さい溶媒を使用する。
【００２５】
抽出溶媒に酸性の溶媒を使用してもよいが、抽出溶媒にアルカリ性の溶媒を使用する、又は抽出液をアルカリ性にすると繊毛虫類を駆除する能力が低下するので好ましくない。ブロッコリー植物体の抽出液を酸（塩酸）でｐＨ３またはアルカリ（アンモニア水）でｐＨ１１に調整し、これを用いたスクーチカの駆除実験を行ったところ、ｐＨ３処理の場合、１００％の増殖阻害率を示したが、ｐＨ１１処理の場合、増殖阻害率は０であり、全く増殖阻害能を示さなかった。
【００２６】
スルフォラファンを含む植物、スルフォラファンを含む植物の破砕物及び／又は粉砕物、スルフォラファンの配糖体を含む植物、スルフォラファンの配糖体を含む植物の破砕物及び／又は粉砕物は、水に接するとスルフォラファンが抽出されるので、スルフォラファンを含む植物等をスルフォラファンの代わりに使用することができる。
【００２７】
繊毛虫類駆除剤は、公知の方法で液剤、顆粒剤、錠剤とし、使用することができる。繊毛虫類駆除剤の使用方法は、特定の方法に限定されない。例えば淡水、海水、汽水又は水溶液に繊毛虫類駆除剤を添加することで、これら水中の繊毛虫類を駆除することができる。また淡水、海水、汽水又は水溶液が貯留又は充填されている水槽、生簀又は容器に繊毛虫類駆除剤を投入することで淡水、海水、汽水、水溶液中の繊毛虫類はもちろん、水槽、生簀又は容器の壁面又は水槽、生簀又は容器中の石、砂、植物などに付着する繊毛虫類を駆除することができる。
【００２８】
同様に、淡水、海水、汽水又は水溶液中の浮遊物質を含む固形分をろ過し除去するろ過装置を備え、水槽、生簀又は容器との間で淡水、海水、汽水又は水溶液を循環させながら使用する循環方式のろ過槽、又は淡水、海水、汽水又は水溶液中の浮遊物質を含む固形分をろ過し除去するろ過装置を備え、ろ過した淡水、海水、汽水又は水溶液を水槽、生簀又は容器に送る掛け流し方式のろ過槽に繊毛虫類駆除剤を投入することで、淡水、海水、汽水又は水溶液中の繊毛虫類、浮遊物質を含む固形分に付着する繊毛虫類、ろ過槽の壁面又はろ過装置に付着する繊毛虫類を駆除することができる。
【００２９】
上記方法は、水中、又は水槽の壁面、石などに付着する繊毛虫類を駆除する方法であるが、水産生物に寄生する繊毛虫類を駆除することもできる。この場合には、魚類、甲殻類、貝類のような水産生物が生息する淡水、海水、汽水又は浜に繊毛虫類駆除剤を投与し、前記水産生物に寄生する繊毛虫類及び淡水、海水、汽水又は浜に生息する繊毛虫類を駆除すればよい。さらに繊毛虫類駆除剤を薬浴剤として使用し、繊毛虫類駆除剤を添加した淡水、海水、汽水又は水溶液に魚類、甲殻類、貝類のような水産生物を投入し、水産生物に寄生する繊毛虫類を駆除することもできる。
【００３０】
またスルフォラファンを繊毛虫類を駆除する有効成分として含有する飼料も本発明に含まれる。本発明の飼料で使用するスルフォラファンには、上記繊毛虫類駆除剤と同様に、ブロッコリーのような植物から単離・精製されたスルフォラファン、化学的に合成されたスルフォラファンを使用することができる。この他、スルフォラファンを含む植物の抽出液、スルフォラファンを含む植物、スルフォラファンを含む植物の破砕物及び／又は粉砕物、スルフォラファンの配糖体を含む植物の抽出液、スルフォラファンの配糖体を含む植物、スルフォラファンの配糖体を含む植物の破砕物及び／又は粉砕物を使用することができる。これらは１種で使用しても、スルフォラファンを含む植物の抽出液とスルフォラファンを含む植物の破砕物及び／又は粉砕物など２種以上を同時に使用してもよい。
【００３１】
本発明の飼料は、対象としている魚類、甲殻類、貝類のような水産生物に与えられている従来の飼料に上記形態のスルフォラファンを配合すればよい。本発明の飼料を給餌することでスルフォラファンが経口投与され、魚類、甲殻類、貝類のような水産生物に寄生する繊毛虫類が駆除される。さらに飼料が水に溶解、又は水中で分散することで水中にスルフォラファンが溶出し、水産生物が生息する淡水、海水、汽水又は水溶液さらには浜など環境中の繊毛虫類を駆除することができる。
【００３２】
さらに淡水、海水、汽水又は水溶液中の繊毛虫類を駆除し水質を浄化する、スルフォラファンを有効成分とする水質浄化剤も本発明に含まれる。本発明の水質浄化剤で使用するスルフォラファンには、上記繊毛虫類駆除剤と同様に、ブロッコリーのような植物から単離・精製されたスルフォラファン、化学的に合成されたスルフォラファンを使用することができる。この他、スルフォラファンを含む植物の抽出液、スルフォラファンを含む植物、スルフォラファンを含む植物の破砕物及び／又は粉砕物、スルフォラファンの配糖体を含む植物の抽出液、スルフォラファンの配糖体を含む植物、スルフォラファンの配糖体を含む植物の破砕物及び／又は粉砕物を使用することができる。これらは１種で使用しても、スルフォラファンを含む植物の抽出液とスルフォラファンを含む植物の破砕物及び／又は粉砕物など２種以上を同時に使用してもよい。
【００３３】
スルフォラファンを有効成分とする水質浄化剤を水、海水、汽水又は水溶液中に添加すると、水に溶解、又は水中で分散し水中にスルフォラファンが溶出する。これにより淡水、海水、汽水又は水溶液中の繊毛虫類を駆除し水質を浄化することができる。また淡水、海水、汽水、水溶液が貯留又は充填されている水槽、容器に繊毛虫類駆除剤を投入することで淡水、海水、汽水、水溶液中の繊毛虫類はもちろん、水槽、容器の壁面又は水槽、容器中の石、砂、植物などに付着する繊毛虫類を駆除し水質を浄化することができる。
【００３４】
上記のように本発明の繊毛虫類駆除剤及び飼料は、人間や他の生物に対して影響が小さいスルフォラファンを有効成分とする薬剤及び飼料であり、繊毛虫類の駆除に優れた効果を示す。また本発明の繊毛虫類の駆除方法を用いることで繊毛虫類を効果的に駆除することができる。また本発明の水質浄化剤は、人間や他の生物に対して影響が小さいスルフォラファンを有効成分とする水質浄化剤であり、該水質浄化剤を用いることで繊毛虫類を効果的に駆除し、水質を浄化することができる。スルフォラファンは、ブロッコリーに多く含まれるので、入手も容易であり、本発明の繊毛虫類駆除剤、飼料及び水質浄化剤、さらには該薬剤を使用した繊毛虫類駆除方法、水質浄化方法は、実用化し易い。
【実施例】
【００３５】
＜供試材料と抽出液の作成条件＞
６０℃で２４時間乾燥させた植物体（ブロッコリー種子やスプラウト）２５０ｍｇを純水５ｍＬ、２０℃で１時間抽出し、遠心分離した上清を０．４５μｍのメンブレンフィルターでろ過滅菌した。
【００３６】
＜スクーチカを用いたバイオアッセイ方法＞
Ａ．顕微鏡下での計数による方法
以下の実験において、スクーチカは、鳥取県栽培漁業センターから分与されたものを使用した。φ３０ｍｍシャーレに、スルフォラファンまたは抽出液と３０〜４０個体／μＬに調整したスクーチカ培養液２ｍＬとを加えて混和し、２５℃、暗所にて２４時間培養後に生存スクーチカ数を顕微鏡下で計数した。このとき、スルフォラファンや抽出液を加えたシャーレを処理区、加えないシャーレを対照区とした。
Ｂ．吸光度法によるスクーチカの密度測定
９６穴マイクロプレートに抽出液と３０〜４０個体／μＬに調整したスクーチカ培養液２００μＬを分注し、２５℃、暗所にて４日間培養した。培養開始時と終了時にマイクロプレートリーダーを用いて５９５ｎｍの吸光度を測定し、スクーチカの増殖阻害率を算出した。増殖阻害率の算出方法は式（１）による。増殖阻害率が高いほど駆除効果が高い。なお、この方法は簡易で迅速な分析が可能だが、スクーチカ個体数が培養開始時（３０〜４０匹／μＬ）よりも低下する場合には適用できない。
【００３７】
【数１】
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【００３８】
＜植物の種類および生育ステージと駆除効果＞
アブラナ科植物によるスクーチカ駆除試験を以下の要領で行った。０．５ｍｇ ｄｒｙ ｐｌａｎｔ／ｍＬとなるように抽出液を添加したスクーチカ培養液を９６穴マイクロプレートに分注し、２５℃、暗所にて４日間培養後、５９５ｎｍの吸光度を測定した。培養開始時と終了時にマイクロプレートリーダーを用いて５９５ｎｍの吸光度を測定し、スクーチカの増殖阻害率を算出した。
【００３９】
表１に、使用した植物名及びその部位（生育ステージ）及び増殖阻害率の測定結果を示した。ブロッコリー以外にもアブラナ科植物にはスクーチカ増殖抑制効果を持つものが複数あることが確認された。さらに、同じ植物でも時期や部位によって阻害の程度に差がある。ブロッコリーでは生育時期によってスルフォラファンの含有率が変化することが知られており、今回、同じ植物でも増殖阻害率に差があるのは植物のスルフォラファン含有量の差によると考えられる。
【００４０】
【表１】
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【００４１】
＜海水と同様のＮａＣｌ濃度３％の培地における駆除効果＞
海水のＮａＣｌ濃度はおよそ３％で、スクーチカの培地の０．８％に比べて濃度が高い。そこで３％および０．８％ＮａＣｌの培地で生育しているスクーチカに対する駆除効果を調べた。通常の培地のＮａＣｌ濃度は０．８％であり、培地の急激なＮａＣｌ濃度変化はスクーチカの増殖を阻害するため、３％ＮａＣｌ培地には馴化させてから試験を行った。０．００５、０．０１７、０．０５、０．１６７、０．５、１．６６７ｍｇ ｄｒｙ ｐｌａｎｔ／ｍＬとなるようにスクーチカ培養液に添加し、２５℃、暗所で２４時間培養後にスクーチカ数を計数した。スクーチカの増殖量は顕微鏡下での計数で測定した。
【００４２】
結果を表２に示した。３％、０．８％ＮａＣｌ培地ともブロッコリー植物体抽出液は同様の増殖阻害を示した。そのため，ＮａＣｌ濃度が約３％の海水中でも培地中と同等のスクーチカ増殖抑制効果を示すと考えられる。終了時のスクーチカ個体数がＮａＣｌ濃度によって異なるのは，３％ＮａＣｌ培地での増殖速度が遅いためである。
【００４３】
【表２】
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【００４４】
＜処理濃度と時間の関係＞
スルフォラファン（購入試薬）またはスルフォラファンを多く含むブロッコリー乾燥種子の抽出液をスクーチカの培養液に添加し、２５℃、暗所にて培養を行い、培養２、４、６、８、１２、１６、２０、２４、２８，３６、４８時間に培養液中の生存個体数を計数した。スルフォラファン濃度は、培養液１ｍＬ当たり０、０．３、１．０、３．０、１０及び３０μｇの６種類とした。ブロッコリー乾燥種子抽出液は、培養液１ｍＬ当たり０．３、１．０ｍｇ ｄｒｙ ｐｌａｎｔの２種類とした。
【００４５】
結果を図１に示した。スクーチカに対する駆除効果は培地中のスルフォラファン濃度１μｇ／ｍＬ以上で得られた。スクーチカに対する駆除効果の発現時間は濃度が高いほど短く、３０μｇ／ｍＬで２時間以下、１０μｇ／ｍＬで６時間後、３μｇ／ｍＬで１６時間後に９０％以上の駆除率となった。１μｇ／ｍＬでは２８時間後まで弱い駆除効果がみられたが、その後は増殖抑制効果のみがみられた。ブロッコリー種子から精製したスルフォラファンでも同様の結果であった。
【００４６】
ブロッコリー乾燥種子抽出液でもスルフォラファン（購入試薬）と同様に、スクーチカに対する駆除効果は、濃度が高いほど駆除効果の発現までの時間が短くなっていた。ブロッコリー乾燥種子では培地中の濃度が０．３ｍｇ ｄｒｙ ｐｌａｎｔ／ｍＬの濃度で２４時間後、１ｍｇ ｄｒｙ ｐｌａｎｔ／ｍＬで１２時間後に９０％以上の殺虫率となった。
【００４７】
＜スルフォラファン（購入試薬）を使用したツリガネムシの駆除実験＞
容器に人工下水と微生物を保持する担体を入れてばっ気し、ツリガネムシを含む微生物を増殖させた。人工下水は１０〜１２時間で容器内の全量が入れ替わるように流し続けた。担体から微生物を採取し、微生物のけん濁液を作成し、φ３０ｍｍシャーレに２ｍＬずつ分注して２５℃、暗所、２４時間、静置培養してツリガネムシをシャーレ表面に定着させた。その後、シャーレ内の人工下水と共にゴミを除去した。新たに人工下水２ｍＬとスルフォラファンを添加して混和後、２５℃、暗所、２４時間、静置培養した。
【００４８】
添加するスルフォラファンの濃度は、培養液１ｍＬ当たり０、０．３、１．０、３．０及び６．０μｇの５種類とした。スルフォラファンを添加して混和した直後の顕微鏡写真、及び２５℃、暗所、２４時間、静置培養後の顕微鏡写真を図２〜図６に示した。また表３に２５℃、暗所、２４時間、静置培養後の観察結果を記載した。図２〜図６において、（Ａ）がスルフォラファンを添加して混和した直後、（Ｂ）が、２５℃、暗所、２４時間、静置培養後である。
【００４９】
【表３】
0005988240.tif 000005
【００５０】
実験の結果、培養液中のスルフォラファン濃度が３μｇ／ｍＬ以上において、ツリガネムシが駆除された。なお、処理開始時のツリガネムシの形態は正常で、繊毛および柄の伸縮運動が観察された。
【００５１】
＜ブロッコリー種子抽出液を使用したツリガネムシの駆除実験＞
６０℃で２４時間乾燥させたブロッコリー種子１００ｇを水１Ｌで１時間抽出したのち一部を分取し、ろ過滅菌を行った。この滅菌した抽出液を本実験で使用した。
【００５２】
容器に人工下水と微生物を保持する担体を入れてばっ気し、ツリガネムシを含む微生物を増殖させた。人工下水は１０〜１２時間で容器内の全量が入れ替わるように流し続けた。担体から微生物を採取し、微生物のけん濁液を作成し、φ３０ｍｍシャーレに２ｍＬずつ分注して２５℃、暗所、２４時間、静置培養してツリガネムシをシャーレ表面に定着させた。その後、シャーレ内の人工下水と共にゴミを除去した。新たに人工下水２ｍＬと抽出液を添加して混和後、２５℃、暗所、２４時間、静置培養した。
【００５３】
添加する抽出液の量は、培養液１ｍＬ当たり０、１．０、３．０及び１０ｍｇ ｄｒｙ ｐｌａｎｔの４種類とした。抽出液を添加して混和した直後の顕微鏡写真、及び２５℃、暗所、２４時間、静置培養後の顕微鏡写真を図７〜図１０に示した。また表４に２５℃、暗所、２４時間、静置培養後の観察結果を記載した。図７〜図１０において、（Ａ）が抽出液を添加して混和した直後、（Ｂ）が、２５℃、暗所、２４時間、静置培養後である。
【００５４】
【表４】
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【００５５】
実験の結果、培養液中の乾燥種子濃度が１ｍｇ ｄｒｙ ｐｌａｎｔ／ｍＬ以上において、ツリガネムシが駆除され、ブロッコリー種子からの精製品は、購入試薬と同様に駆除効果があった。なお、処理開始時のツリガネムシの形態は正常で，繊毛および柄の伸縮運動が観察された。また抽出液を添加した区の背景が白っぽいのは抽出液由来の濁りによる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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