(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＤＮＡＭ−１中和抗体を有効成分として含む、同種間での心臓、血管または腎臓の移植後の急性拒絶および慢性拒絶を抑制し、移植された心臓、血管または腎臓の生着を維持するために用いられる薬剤。
【請求項２】
前記ＤＮＡＭ−１中和抗体が、ＴＸ４２である、請求項１に記載の薬剤。
【請求項３】
さらに、免疫抑制剤を含む、請求項１または２に記載の薬剤。
【請求項４】
前記免疫抑制剤が、ＦＫ５０６（タクロリムス）である、請求項３に記載の薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、同種間での移植心臓、移植血管、または移植腎臓の生着を維持するために用いられる薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ドナーの固形臓器をレシピエント（ドナーから臓器を受け取る者）に移植すると拒絶反応が起こる。たとえば、心移植、血管移植、腎臓移植の場合、移植された心臓や血管、腎臓は、一時的には生着しているものの、次第に剥離などが見られるようになる。そのため、移植医療分野においては、このような拒絶反応を抑制するために、様々な免疫抑制剤が開発されている。
【０００３】
たとえば、特許文献１には、ＩＬ−６阻害剤（たとえば、ＩＬ−６受容体を認識する抗体）を有効成分として含有する、心移植における急性拒絶反応などに用いられる、細胞傷害性Ｔ細胞の誘導抑制剤が開示されている（特許請求の範囲など）。
【０００４】
ところで、ＤＮＡＭ−１は、ＣＤ２２６とも称され、分子量６５ｋＤａの免疫グロブリンスーパーファミリーに属する接着分子である。ヒトおよびマウスともにＣＤ４陽性Ｔ細胞、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージ、樹状細胞など、種々の免疫細胞に発現している。
【０００５】
非特許文献１では、ＤＮＡＭ−１は巨核球・血小板にも発現しており、その機能としては、血小板の凝集などの活性化や血管内皮細胞への接着などが示唆されているものの、ＤＮＡＭ−１の機能は、依然として未解明である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】再表２００７／０５８１９４
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Kojima, H., H. Kanada, S. Shimizu, E. Kasama, K. Shibuya, H. Nakauchi, T. Nagasawa, & A. Shibuya. "CD226 mediates platelet and megakaryocytic cell adhesion to vascular endothelial cells" J. Biol.Chem., 278:36748-36753,2003．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、同種間での移植心臓、移植血管、または移植腎臓の生着を長期間に亘って維持できる、新規の薬剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、ＤＮＡＭ−１の機能について検討した結果、以下のような知見を得た。
１）心臓、血管、腎臓の同種移植において、ＤＮＡＭ−１分子遺伝子欠損マウスをレシピエントとした際に、野生型マウスをレシピエントとした場合と比較すると、移植した心臓、血管、腎臓の生着期間が延長すること、
２）また野生型マウスにＤＮＡＭ−１に対する中和抗体（ＴＸ４２）を投与しておくと、心臓、血管の生着期間が延長すること、
３）ＣＤ８＋細胞上のＤＮＡＭ−１が臓器移植拒絶に働くこと、
４）さらにＤＮＡＭ−１がメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の誘導を促進し、急性拒絶のみならず慢性拒絶にも働いていること。
【００１０】
本発明は、このような知見に基づいて完成されたものであり、具体的には以下のとおりである。
［１］ＤＮＡＭ−１中和抗体を有効成分として含む、同種間での移植心臓、移植血管、または移植腎臓の生着を維持するために用いられる薬剤。
［２］前記ＤＮＡＭ−１中和抗体が、ＴＸ４２である、［１］に記載の薬剤。
［３］さらに、免疫抑制剤を含む、［１］または［２］に記載の薬剤。
［４］前記免疫抑制剤が、ＦＫ５０６（タクロリムス）である、［３］に記載の薬剤。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の薬剤によれば、ＤＮＡＭ−１の機能を阻害することで、同種間での移植心臓、移植血管、または移植腎臓の生着を長期間に亘って維持できる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１(Ａ)〜(Ｄ)は、試験例Ａで得られた結果を示す図面である。
【図２−１】図2-1(Ａ)および(Ｂ)は、試験例Ｂで得られた結果を示す図面である。
【図２−２】図2-2(Ｃ)は、試験例Ｂで得られた結果を示す図面である。
【図３−１】図3-1(Ａ)および(Ｂ)は、試験例Ｃで得られた結果を示す図面である。
【図３−２】図3-2(Ｃ)は、試験例Ｃで得られた結果を示す図面である。
【図４−１】図4-1(Ａ)は、試験例Ｄで得られた結果を示す図面である。
【図４−２】図4-2(Ｂ)は、試験例Ｄで得られた結果を示す図面である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明に係る薬剤について、以下詳細に説明する。
１．本発明の薬剤
本発明に係る薬剤は、同種間での移植心臓、移植血管、または移植腎臓の生着を維持するために使用され、有効成分としてＤＮＡＭ−１に対する中和抗体（a）を含み、必要に応じて、各種任意成分を含んでいてもよい。
【００１４】
本発明の薬剤に有効成分として含まれる中和抗体（ａ）は、ＤＮＡＭ−１に対する抗体であって、ＤＮＡＭ−１の機能を喪失乃至低下させる限り特に限定されない。また、中和抗体（ａ）は、たとえば、ＴＸ４２モノクローナル抗体などのモノクローナル抗体であってもよいし、ポリクローナル抗体であってもよい。
【００１５】
また、生着延長効果が向上するという観点からは、本発明の薬剤は、ＦＫ５０６（タクロリムス）などの免疫抑制剤を含んでいることが好ましい。
本発明の薬剤は、必要に応じて、薬学的に許容され得る担体を含んでいてもよい。
【００１６】
薬学的に許容され得る担体とは、本発明の目的に反しないものである限り特に限定されず、たとえば、水性希釈剤や非水性希釈剤等の希釈剤、抗酸化剤（亜硫酸塩など）等の安定剤・保存剤、リン酸塩類等の緩衝剤、界面活性剤等の乳化剤、着色剤、粘稠剤、リドカインなどの局所麻酔剤、グリコール類などの溶解補助剤、塩化ナトリウムやグリセリン等の等張化剤あるいはその他の添加剤等が挙げられる。
【００１７】
本発明の薬剤は、剤形が注射剤である場合、所望の粘度や含有成分の濃度になるように希釈剤を含み、中和抗体（ａ）が希釈剤に溶解または分散されていることが好ましい。このような希釈剤としては、生理食塩水または市販の注射用蒸留水等の水性希釈剤、ポリエチレングリコール、エタノール等のアルコール類等の非水性希釈剤が挙げられる。
【００１８】
なお、剤形が注射剤である場合、フィルターによる濾過滅菌されてもよいし、殺菌剤の配合等により無菌化されてもよく、注射剤として使用する場合、用時調製の形態としてもよい。たとえば、凍結乾燥法などによって中和抗体（ａ）を含む固体剤を調製し、使用前に希釈剤に溶解または分散させて使用することができる。
【００１９】
２．本発明の薬剤の用途・使用方法
本発明の薬剤は、同種間（すなわち、ドナーとレシピエントとが同種類の哺乳類）の心移植、血管移植、腎移植後に生じる拒絶反応を抑制させ、移植された心臓や血管、腎臓の生着期間を延長するために使用される。
【００２０】
ここで、本発明の薬剤の投与形態は、たとえば静脈内注射、動脈内注射、皮下注射、皮内注射、筋肉内注射、腹腔内注射等の注射投与などが挙げられるが、生着延長効果が向上するという観点からは、静脈内注射が好ましい。なお、本発明の薬剤の投与回数は、特に限定されないが、たとえば、１日あたり１回〜数回である。
【００２１】
また、本発明の薬剤の投与量は、患者の年齢、性別、体重及び症状、必要とされる治療効果の程度、投与方法、処理時間、あるいは中和抗体（ａ）の含有量などにより異なり、適宜調整されてもよい。生着延長効果を一層向上させるという観点からは、本発明の薬剤には、投与されるヒトまたは動物１ｋｇあたり中和抗体（ａ）の投与量が通常0.1〜1,000ｍｇ、好ましくは１〜100ｍｇ、より好ましくは5〜20ｍｇになるように製剤化されている。
【実施例】
【００２２】
以下、本発明を、実施例を用いてより具体的に説明するが、本発明は、以下の実施例によって限定されるものではない。
［実施例で使用したマウス］
（ｉ）Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ−２b）野生型マウス（ＷＴマウス）
（ｉｉ）Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ−２b）ＤＮＡＭ−１ノックアウトマウス（ＤＮＡＭ−１  ＫＯマウス）
なお、ＤＮＡＭ−１欠損マウスは、ＤＮＡＭ−１遺伝子の第エクソン2、3を欠損している。
（ｉｉｉ）ＣＢ６Ｆ１マウス
ＢＡＬＢ/ｃマウスと上記Ｃ５７ＢＬ/６（Ｈ−２b）野生型マウス（ＷＴマウス）との交配で得られたマウスを、「ＣＢ６Ｆ１マウス」とした。
【００２３】
また、各試験群間における生存率の統計学的有意差は、ログランク試験で評価した。また、増殖アッセイでは、Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ検定で評価した。Ｐ値＜０．０５を、有意なものとみなした。
【００２４】
［試験例Ａ：マウス心移植拒絶に対する抗ＤＮＡＭ−１の効果］
１．実施例Ａ１
Ｃ５７ＢＬ/６（Ｈ−２b）野生型マウス（野生型マウス、WTマウス）またはＣ５７ＢＬ/６（Ｈ−２b）ＤＮＡＭ−１ノックアウトマウス（DNAM-1  KOマウス）をレシピエントとし、ＢＡＬＢ／Ｃ（Ｈ−２d）野生型マウス（WTマウス）をドナーマウスとして用い、マウス心移植試験（異所性心移植試験）を実施した。
【００２５】
具体的には、まず、摘出したドナーマウスの心臓の上行大動脈および肺動脈を、それぞれ、レシピエントマウスの腹部大動脈および下大静脈に端側吻合して、ドナーマウスの心臓をレシピエントマウスに移植した。移植した翌日、触診にてレシピエントマウスの移植心臓の拍動を観察し、該移植心臓の拍動が停止した日を拒絶日として移植心の生存率を評価した。
【００２６】
図１（Ａ）に示されるように、シピエントマウスがＫＯマウスである場合、ＤＮＡＭ−１  ＷＴマウスである場合よりも、有意に生存期間が長いことが示される。すなわち、レシピエントの免疫細胞に発現するＤＮＡＭ−１が同種心移植拒絶に重要な役割を担うことが理解される。
【００２７】
２．実施例Ａ２
レシピエントマウスとしてＣ５７ＢＬ/６（Ｈ−２b）ＷＴマウス、ドナーマウスとしてＢＡＬＢ／Ｃ（Ｈ−２d）野生型マウス（ＷＴマウス）の心臓を用いて、実施例Ａ１と同様にして、マウス心移植試験（異所性心移植試験）を実施した。レシピエントマウスに、移植前（移植日数：０日）、移植日数３日目、６日目、９日目および１２日目において、ＤＮＡＭ−１の中和抗体である「ＴＸ４２」またはコントロール抗体（ラットＩｇＧ）を、０．２５ｍｇ／レシピエントマウスの投与量になるように、腹腔内注射で投与し、実施例Ａ１と同様にして移植心の生存率を評価した。
【００２８】
さらに、移植後０日（すなわち移植前）、移植日数１日目、２日目、３日目、５日目、７日目および９日目において、ＤＮＡＭ−１の中和抗体である「ＴＸ４２」、ＤＮＡＭ−１の中和抗体である「１０Ｅ５」（eBioscience社製）またはコントロール抗体（ラットＩｇＧ）を、０．１ｍｇ／レシピエントマウスの投与量になるように、腹腔内注射で投与し、実施例１と同様にして移植心の生存率を評価した。
【００２９】
得られた結果を図１（Ｂ）に示す。図１（Ｂ）に示されるように、投与抗体が、「ＴＸ４２」または「１０Ｅ５」である場合において、コントロール抗体である場合に比べて、有意に移植心の生存期間が長かった。すなわち、レシピエントの免疫細胞に発現するＤＮＡＭ−１の機能を抑制することで、同種心移植拒絶を抑制できることが理解される。
【００３０】
３．実施例Ａ３
ドナーマウスとして、ＣＢ６Ｆ１マウス（雄または雌）を用い、抗体をレシピエントに腹腔内注射で投与した日時を、移植後０日（すなわち移植前）、３日目、６日目、９日目および１２日目としたことを除いては、実施例Ａ２と同様にして、マウス心移植（異所性心移植）および抗体を投与し、移植心の生存率を評価した。
【００３１】
得られた結果を図１（Ｃ）に示す。図１（Ｃ）に示されるように、投与抗体が、「ＴＸ４２」である場合は、コントロール抗体である場合に比べて、有意に移植心臓の生存期間が長かった。すなわち、レシピエントの免疫細胞に発現するＤＮＡＭ−１の機能を抑制することで、同種心移植拒絶を抑制することができることが理解できる。
【００３２】
４．実施例Ａ４
免疫抑制剤である「ＦＫ５０６」（Ｓｉｇｍａ社製）を、移植後０日から６日目にかけて連続的に、０．１ｍｇ／マウス体重１ｋｇの投与量になるように、腹腔内注射で投与したことを除いては、実施例Ａ３と同様にして、マウス心移植（異所性心移植）を実施するとともに、抗体を投与し、移植心の生存率を評価した。
【００３３】
得られた結果を図１（Ｄ）に示す。図１（Ｄ）に示されるように、「ＴＸ４２」と「ＦＫ５０６」との両方を投与した場合、コントロール抗体とＦＫ５０６とを投与した場合に比べて、有意に移植心臓の生存期間が長かった。すなわち、免疫抑制剤に抗ＤＮＡＭ−１中和抗体を加えることで、より強力に同種心移植拒絶を抑制できることが理解される。
【００３４】
［試験例Ｂ：マウス血管移植拒絶に対する抗ＤＮＡＭ−１の効果］
１．実施例Ｂ１
Ｃ５７ＢＬ/６（Ｈ−２b）ＷＴマウスまたはＤＮＡＭ−１  ＫＯマウスをレシピエントとし、ＢＡＬＢ/ｃ（Ｈ−２d）マウスをドナーマウスとして用い、マウス血管移植試験を実施した。
【００３５】
具体的には、摘出したドナーマウスの腹部大動脈を、それぞれ、レシピエントマウスの腹部大動脈に端端吻合して、ドナーマウスの腹部大動脈をレシピエントマウスに移植した。
また、移植後０日目、１２日目および２０日目において、免疫抑制剤「ＦＫ５０６」を、０または０．１ｍｇ／マウス体重１ｋｇの投与量で、皮下注射で投与した。
【００３６】
移植４２日後にレシピエントマウスから採血およびドナーマウス由来の移植片を回収して、下記基準に基づいて、アロ抗原特異的抗体価を測定し、病理解析を実施した。
［病理解析］
回収された移植片を、１０％ホルマリン緩衝液で固定し、パラフィンで包埋した後、切片を作成し、ＨＥ（ヘマトキシリン・エオシン）で染色した。染色された切片を顕微鏡観察に供し、血管内膜部分の面積（ｍｍ2）を算出して、肥厚の程度を比較した。
【００３７】
［アロ抗原特異的抗体価］
レシピエントから採血して得られた血漿を用いて抗アロ抗体価を測定した。
具体的には、ＢＡＬＢ/ｃマウス由来の脾細胞（細胞数：１．５×１０5）に、ＰＢＳ／２％  ＦＢＳで希釈した血漿を全量２５μｌになるように加え、氷上で３０分インキュベートした。次いで、ＰＢＳ／２％  ＦＢＳで洗浄した後、２次抗体として、ＦＩＴＣ−結合型抗マウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ２ｂ（何れも、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）を用いて氷上で３０分染色した。染色後、再度ＰＢＳ／２％  ＦＢＳで洗浄した後、２次抗体が細胞表面上に結合した細胞数をフローサイトメーター（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ、日本ＢＤ社製）で測定した。そして、アロ抗原特異的抗体価を、異なる希釈率で上記血漿を加えたときの各２次抗体の陽性細胞の割合（％）として算出した。
【００３８】
図２−１（Ａ）および（Ｂ）に示されるように、レシピエントマウスが、ＤＮＡＭ−１  ＫＯマウスである場合より、ＷＴマウスである場合の方が、有意に移植血管の内膜の肥厚の程度が大きかった。また、図２−２（Ｃ）に示されるように、免疫抑制剤を投与すると、同種抗原に対するＩｇＧ１抗体の産生も、レシピエントマウスが、ＤＮＡＭ−１  ＫＯマウスである場合より、ＷＴマウスである場合の方が、高いことが分かる。
【００３９】
これらの結果から、レシピエントの免疫細胞に発現するＤＮＡＭ−１が同種血管移植拒絶に重要な役割を担うことが理解される。
［試験例Ｃ：同種抗原に対するメモリーＴ細胞の誘導におけるＤＮＡＭ−１の役割］
１．実施例Ｃ１
Ｃ５７ＢＬ/６（Ｈ−２b）ＷＴマウスまたはＤＮＡＭ−１  ＫＯマウスをレシピエントとし、ＢＡＬＢ/ｃマウス由来の皮膚を移植した。
【００４０】
移植から６週間経過後に、ドナーマウスとしてＣＢ６Ｆ１マウスまたはＢＡＬＢ/ｃマウス由来の心臓の上行大動脈および肺動脈を、それぞれ、レシピエントマウスの腹部大動脈および下大静脈に端側吻合して、ドナーマウスの心臓をレシピエントマウスに移植した。
【００４１】
移植した翌日、触診にてレシピエントマウスの移植心臓の拍動を観察し、該移植心臓の拍動が停止した日を拒絶日として移植心の生存率を評価した。結果を図３−１（Ａ）に示す。
【００４２】
図３−１（Ａ）に示されるように、移植心の生存期間は、ドナーマウスがＣＢ６Ｆ１マウスである時、レシピエントマウスがＤＮＡＭ−１  ＫＯマウスである場合、ＷＴマウスである場合に比べて、有意に延長した。
【００４３】
２．実施例Ｃ２
実施例３Ａで得られたＢＡＬＢ/ｃマウス由来の皮膚が移植されて６週間経過後のＷＴマウスまたはＤＮＡＭ−１  ＫＯマウスから、脾臓ＣＤ８＋Ｔ細胞を調製した。調製されたＣＤ８＋Ｔ細胞を、免疫不全マウスであるＲａｇ１遺伝子欠損マウス移入して、レシピエントマウスを作製した。
【００４４】
また、皮膚移植をしなかったＷＴまたはＫＯのＣ５７ＢＬ/６マウスの脾臓ＣＤ８＋Ｔ細胞を調製し、調製されたナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞を、免疫不全マウスであるＲａｇ１遺伝子欠損マウス移入して、コントロール用レシピエントマウスを作製した。
【００４５】
これらのレシピエントマウスに、ＢＡＬＢ/ｃマウス由来の心臓の上行大動脈および肺動脈を、それぞれ、レシピエントマウスの腹部大動脈および下大静脈に端側吻合して、ドナーマウスの心臓をレシピエントマウスに移植した。
【００４６】
移植した翌日、触診にてレシピエントマウスの移植心臓の拍動を観察し、該移植心臓の拍動が停止した日を拒絶日として移植心の生存率を評価した。レシピエントマウスとしてＷＴマウスと、ドナーマウスとしてＷＴマウスおよびＤＮＡＭ−１  ＫＯマウスとを用いて得られた結果を図３−２（Ｃ）に示す。
【００４７】
図３−２（Ｃ）に示されるように、皮膚移植を受けた野生型Ｃ５７ＢＬ/６マウスＣＤ８＋Ｔ細胞を移入したＲａｇ１遺伝子欠損マウスでは、皮膚移植を受けたＫＯ  Ｃ５７ＢＬ/６マウスＣＤ８＋Ｔ細胞を移入したＲａｇ１遺伝子欠損マウスよりも有意に移植心の生存期間が短かった。すなわち、ＤＮＡＭ−１は同種抗原特異的メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の誘導に重要な役割を担うことが理解される。
【００４８】
３．実施例Ｃ３
ＤＮＡＭ−１  遺伝子欠損Ｃ５７ＢＬ/６マウスまたは野生型Ｃ５７ＢＬ/６マウスに、ＢＡＬＢ/ｃマウス由来の皮膚を移植し、移植後６週間後に、各マウスの脾臓からＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を調製した。コントロールとして、皮膚移植をしなかった野生型Ｃ５７ＢＬ/６マウスの脾臓ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞を調製した。
【００４９】
これらのＴ細胞に、同系マウス（Ｃ５７ＢＬ/６マウス）、または同種マウス（ＢＡＬＢ/ｃまたはＣ３Ｈ）からの脾細胞を加えて刺激し、Ｔ細胞の増殖を解析した。
図３−２（Ｃ）に示されるように、同系マウス（Ｃ５７ＢＬ/６）の刺激ではＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方ともほとんど増殖しなかったが、ＢＡＬＢ/ｃマウスの脾細胞で刺激した野生型ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞では、二次刺激をしない野生型ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞に比べて有意に増殖が亢進した。しかし、ＤＮＡＭ−１遺伝子欠損Ｃ５７ＢＬ/６マウスからのＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＢＡＬＢ/ｃマウスの脾細胞で刺激しても増殖の亢進がみられなかった。以上の結果から、ＤＮＡＭ−１は同種抗原特異的メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の誘導に重要な役割を担うことが理解される。
【００５０】
［試験例Ｄ：同種腎移植拒絶におけるＤＮＡＭ−１の役割］
１．実施例Ｄ１
Ｃ５７ＢＬ/６（Ｈ−２b）ＷＴマウスまたはＤＮＡＭ−１  ＫＯマウス、またはＢＡＬＢ/ｃマウスをレシピエントとし、ＢＡＬＢ/ｃマウス由来の腎臓を移植した。具体的には、ドナーの右腎臓を摘出し、このとき、腎動脈、腎静脈と一緒に腹部大動脈、後大静脈の一部も含めて摘出し、大動脈、大静脈の端を吻合口とした。また尿管も一緒に摘出した。次に、レシピエントの右腎を腎動脈、腎静脈、尿管で結紮し取り除き、代わりに摘出したドナー腎を移植した。摘出腎の大動脈、大静脈をそれぞれレシピエントの腹部大動脈、下大静脈に端側吻合し、尿管はレシピエントの膀胱内に挿入固定した。血液を再潅流後、レシピエントの左腎を腎動脈、腎静脈、尿管で結紮して取り除き、移植腎のみとした。
【００５１】
移植後42日目に採血して血清中クレアチニン、BUN値およびドナー特異的抗体量を測定した。また、移植腎を摘出し重量変化も測定して評価した。移植をしないナイーブＣ５７ＢＬ/６（Ｈ−２b）ＷＴマウスのCre、BUN、腎重量をコントロールとして同様に測定した。
【００５２】
図４−１（Ａ）で示されるように、ナイーブＣ５７ＢＬ/６（Ｈ−２b）ＷＴマウス、および同系移植を受けたＢＡＬＢ/ｃマウス(Ｓｙｎコントロール)のCre、BUN、腎重量に比較し、同種移植を受けたＣ５７ＢＬ/６（Ｈ−２b）ＷＴマウスまたはＤＮＡＭ−１  ＫＯマウスのCre、BUN、腎重量はより高値を示した。しかし、Ｃ５７ＢＬ/６（Ｈ−２b）ＷＴマウスとＤＮＡＭ−１  ＫＯマウスとで比較すると、ＷＴマウスの方がＫＯマウスより有意に高かった。
【００５３】
一方、同様に移植６週間後のこれらのマウスの血清中のアロ抗原特異的抗体を測定した。
図４−２（Ｂ）で示されるように、ナイーブＣ５７ＢＬ/６（Ｈ−２b）ＷＴマウス、および同系移植を受けたＢＡＬＢ/ｃマウスのアロ抗原特異的抗体に比較し、同種移植を受けたＣ５７ＢＬ/６（Ｈ−２b）ＷＴマウスまたはＤＮＡＭ−１  ＫＯマウスのドナー特異的抗体（ＤＳＡ）は高値を示した。しかし、Ｃ５７ＢＬ/６（Ｈ−２b）ＷＴマウスとＤＮＡＭ−１  ＫＯマウスとで比較すると、ＷＴマウスの方がＫＯマウスより、より高値を示す傾向がみられた。
【００５４】
以上の結果から、ＤＮＡＭ−１は同種腎移植拒絶に働くことが理解される。
【図１】
0006048949.tif 000002
【図３−１】
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【図２−１】
0006048949.tif 000004
【図２−２】
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【図３−２】
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【図４−１】
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【図４−２】
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