(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
エタネルセプトと、クエン酸塩緩衝液と、リジンおよびプロリンならびにこれらの医薬的に許容される塩からなる群から選択されるアミノ酸と、を含む医薬組成物。
【請求項２】
２５ｍＭから１２０ｍＭまでの濃度でクエン酸塩緩衝液を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
１５ｍＭから１００ｍＭまでの濃度でアミノ酸を含み、好ましくは該アミノ酸がリジンまたはその医薬的に許容される塩である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
請求項１から３のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、さらに浸透圧調節剤を含み、好ましくは、該浸透圧調節剤が塩化ナトリウム、システイン、ヒスチジン、グリシン、塩化カリウム、スクロース、グルコースおよびマンニトールからなる群から選択され、より好ましくは、該浸透圧調節剤が塩化ナトリウムおよび／またはスクロースである、医薬組成物。
【請求項５】
総濃度が５ｍＭから２００ｍＭまでの少なくとも１種の浸透圧調節剤を含む、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、さらに少なくとも１種の賦形剤を含み、好ましくは、少なくとも１種の賦形剤がラクトース、グリセロール、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、マルトース、イノシトール、トレハロース、グルコース、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、デキストラン、ポリ酢酸ビニル（ＰＶＡ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ゼラチン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール、グリセロール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｌ−セリン、グルタミン酸ナトリウム、アラニン、グリシン、サルコシン、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）；ポリオキシエチレンソルビタンモノラウラート、好ましくはＴｗｅｅｎ−２０；ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート、好ましくはＴｗｅｅｎ−８０；ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ポリソルベート、ポリオキシエチレン共重合体、リン酸カリウム、酢酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、トリメチルアミンＮ−オキシド、ベタイン、亜鉛イオン、銅イオン、カルシウムイオン、マンガンイオン、マグネシウムイオン、ＣＨＡＰＳ、スクロースモノラウラート、および２−Ｏ−β−マンノグリセラートからなる群から選択される、医薬組成物。
【請求項７】
総濃度が０．１ｍＭから０．７ｍＭまでの少なくとも１種の賦形剤を含む、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
濃度０．１ｍＭから０．７ｍＭのエタネルセプトを含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記組成物が医薬的に許容される溶媒をさらに含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
凍結乾燥される、請求項１から８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
０．１ｍＭから０．７ｍＭまでのエタネルセプト、２５ｍＭから１２０ｍＭまでのクエン酸塩緩衝液、１５ｍＭから１００ｍＭまでのリジン、１０から１００ｍＭまでのスクロースおよび５ｍＭから２００ｍＭまでの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むか、または０．３ｍＭのエタネルセプト、５０ｍＭのクエン酸塩緩衝液、２５ｍＭのリジン、２９ｍＭのスクロースおよび７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むか、または０．３ｍＭのエタネルセプト、２５ｍＭのクエン酸塩緩衝液、２５ｍＭのリジン、２９ｍＭのスクロースおよび８８ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むか、または０．１ｍＭから０．７ｍＭまでのエタネルセプト、２５ｍＭから１２０ｍＭまでのクエン酸塩緩衝液、１５ｍＭから１００ｍＭまでのプロリン、１０ｍＭから１００ｍＭまでのスクロースおよび５ｍＭから２００ｍＭまでの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むか、または０．３ｍＭのエタネルセプト、２５ｍＭのクエン酸塩緩衝液、２５ｍＭのプロリン、２９ｍＭのスクロースおよび７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１から１１のいずれか一項に記載の組成物と該組成物の使用説明書を含むキットであって、好ましくは該組成物はプレフィルドシリンジに含まれるかまたは該組成物はプレフィルドバイアルに含まれ、より好ましくは該組成物は凍結乾燥されてバイアルに含まれる、キット。
【請求項１３】
エタネルセプトと、クエン酸塩緩衝液と、リジンおよびプロリンならびにこれらの医薬的に許容される塩からなる群から選択されるアミノ酸とを組み合わせることを含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の医薬組成物を製造する、方法。
【請求項１４】
請求項４または５に記載の少なくとも１種の浸透圧調節剤、および／または医薬的に許容される溶媒を添加することをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
請求項６または７に記載の賦形剤を添加することをさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
凍結乾燥ステップをさらに含む、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
自己免疫疾患、強直性脊椎炎、若年性関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、慢性関節リウマチ、ウェゲナー疾患（肉芽腫症）、クローン病または炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、Ｃ型肝炎、子宮内膜症、喘息、悪液質、アトピー性皮膚炎、アルツハイマーおよびがんからなる疾患群から選択される疾患の治療において使用するための、請求項１から１１のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、種々の緩衝系および安定剤を含むＴＮＦＲ：Ｆｃ融合タンパク質の安定した医薬液剤に関する。特に、クエン酸塩緩衝液系ならびに安定剤としてリジンおよび／またはプロリンを使用することにより、ＴＮＦＲ：Ｆｃの物理安定度を著しく改善することを証明し得る。
【背景技術】
【０００２】
市販抗体は、一般にリン酸緩衝液中に処方される。さらに、ＴＮＦＲ：Ｆｃは、一般にリン酸ナトリウムでも緩衝される。（特許文献１、特許文献２）。現在、例えば、ＴＮＦＲ：Ｆｃタンパク質エタネルセプト（Ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）は、表１に示すような組成物を有する商品名エンブレル（登録商標）として市販されている。
【０００３】
表１  エタネルセプト（エンブレル（登録商標））の組成物
0005996631.tif 000002
【０００４】
抗体生成物の凝集は、両親媒性低分子の添加によって制御することができる。これについて、市販の製剤ではタンパク質相互作用を抑制するアミノ酸にＬ−アルギニンを採用している（特許文献３）。Ｌ−アルギニンは極性添加剤であるので、タンパク質フォールディング中間体の凝集を防止する。
【０００５】
Ｌ−アルギニンのように、Ｌ−リジンはリゾチームの熱および希釈誘導凝集を著しく防止する能力がある（非特許文献１）。サンドグロブリン（Ｓａｎｄｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）（登録商標）またはプリビゲン（Ｐｒｉｖｉｇｅｎ）（登録商標）のような免疫グロブリン液剤における安定剤としてＬ−プロリンが確立されている。疎水性アミノ酸として、疎水性タンパク質−タンパク質相互作用を妨害し、それにより、変性および凝集からＩｇＧを保護すると想定される。その上、Ｌ−プロリンは、主要な免疫不全患者に投与した場合の良好な安全記録を持っており、低毒性のアミノ酸にあたることが動物研究で見出された。（非特許文献２）。
【０００６】
最近の試験では、クエン酸塩緩衝液がアスパラギン脱アミド化のように効率的に分解を最小限に抑えるのでモノクローナル抗体製剤に有益であると考えられている（非特許文献３）。クエン酸塩緩衝液の別の利点は、凍結中にｐＨを安定化するその能力であるが、＋２５から−３０℃まで温度を低下させた場合、確立されたリン酸緩衝液系が最も大きなｐＨ変化を示す（非特許文献４）。
【０００７】
融合タンパク質は、その後活性低下および副作用（免疫原性のような）さえもたらす、様々な分解および凝集生成物を生じる場合がある。このため、ＴＮＦＲ：Ｆｃ融合タンパク質の安定した液剤の必要性が依然として存在している。
【０００８】
このような製剤は、様々な課題を全うしなければならない。このような製剤は生理学上許容されなければならず、好ましくは治療上効果的な濃度の生物製剤の安定性を保証する環境を提供しなければならない。さらに、製剤は医薬品の十分な期間の保存を可能にしなければならない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】欧州特許第１４７８３９４号明細書
【特許文献２】国際公開第０３／０７２０６０Ａ２号パンフレット
【特許文献３】Ｂａｙｎｅｓら（２００５）４４（１２）：４９１９〜２５、欧州特許第１４７８３９４号明細書
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｓｈｉｒａｋｉら（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ、１３２（４）：５９１〜５
【非特許文献２】Ｂｏｌｌｉら、（２００１）Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、３８（１）：１５０〜７
【非特許文献３】ＺｈｅｎｇおよびＪａｎｉｓ、（２００６）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ、３０８（１〜２）：４６〜５１
【非特許文献４】Ｋｏｌｈｅら、（２０１０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｐｒｏｇ、２６（３）：７２７〜３３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
したがって、本発明の目的は、先行技術から公知であるこれらの製剤の代わりとして使用することができるＴＮＦＲ：Ｆｃの医薬製剤を提供することにある。本発明の別の目的は、先行技術から公知の製剤と比較して有利であるＴＮＦＲ：Ｆｃの医薬製剤を提供することである。本発明のさらに別の目的は、先行技術から公知の製剤より医薬品凝集を引き起こすことが少ないＴＮＦＲ：Ｆｃのための医薬製剤を提供することである。
【００１２】
例えば一般に使用されるリン酸緩衝液系をクエン酸塩緩衝液系に、およびアルギニン安定剤をリジンに交換することによって、ＴＮＦＲ：Ｆｃの物理的安定性は著しく改善することができるということを本発明は証明する。提案されたクエン酸緩衝液およびリジン安定剤は、機械的および温度応力（２５および４０℃）によって誘導される分解からＴＮＦＲ：Ｆｃを保護し、２〜８℃での目的とする保存において、提案された製剤では、一般に使用されるリン酸緩衝製剤と比較してタンパク質の分解が著しく低かった。したがって、生成物の物理的安定性に関する品質パラメータを改善することが可能である。医薬品の物理的安定性の増加により、一般的な製剤と比較した有効期間の延長が可能になり、製品の安全性が確保される。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
第１の態様では、本発明は、ＴＮＦＲ：Ｆｃ、クエン酸塩緩衝液ならびにリジンおよびプロリンならびにこれらの医薬的に許容される塩からなる群から選択されるアミノ酸を含む医薬組成物に関する。
【００１４】
第２の態様では、本発明は、第1の態様による組成物をおよび前記組成物の使用説明書を含むキットに関する。
【００１５】
さらに第３の態様では、本発明は、ＴＮＦＲ：Ｆｃと、クエン酸塩緩衝液と、リジンおよびプロリンならびにこれらの医薬的に許容される塩からなる群から選択されるアミノ酸とを組み合わせることを含む、第１の態様による医薬組成物を製造する方法に関する。
【００１６】
最後の態様では、本発明は、さらに内科的治療、特に、自己免疫疾患、強直性脊椎炎、若年性関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、慢性関節リウマチ、ウェゲナー疾患（肉芽腫症）、クローン病（または炎症性腸疾患）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、Ｃ型肝炎、子宮内膜症、喘息、悪液質、アトピー性皮膚炎、アルツハイマーおよびがんから選択される疾患の治療に使用する第１の態様による組成物に関する。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
ＴＮＦＲ：Ｆｃの保存中の分解産物の形成は、分子の最も重要な性状であるように思われる。クエン酸塩製剤中のＴＮＦＲ：Ｆｃは、一般に低い分解能力を示すが、これはリン酸ナトリウムと比較してクエン酸ナトリウムの方が、正味電荷が大きく、そのため荷電ＴＮＦＲ：Ｆｃ分子との交互作用が可能であるためであり得る。
【００１８】
したがって、第１の態様では、本発明は、ＴＮＦＲ：Ｆｃ、クエン酸塩緩衝液ならびにリジンおよびプロリンならびにこれらの医薬的に許容される塩からなる群から選択されるアミノ酸を含む医薬組成物に関する。
【００１９】
腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−アルファ）は急性期反応を刺激する一群のサイトカインのメンバーであり、したがって、全身性炎症に関与するサイトカインである。ＴＮＦ−アルファは、炎症の誘導、アポトーシス細胞死の誘導、ならびに腫瘍形成およびウィルス複製阻害が可能である。ＴＮＦ−アルファ生成の調節不全は、自己免疫疾患、強直性脊椎炎、若年性関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、慢性関節リウマチ、ウェゲナー疾患（肉芽腫症）、クローン病または炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、Ｃ型肝炎、子宮内膜症、喘息、悪液質、アトピー性皮膚炎、アルツハイマーおよびがんのような、様々なヒト疾患に結びつけられて来た。
【００２０】
この受容体分子は、ＴＮＦＲ１（１型ＴＮＦ受容体、ＣＤ１２０ａ、ｐ５５／６０、ヒト用：ＲｅｆＳｅｑ（ｍＲＮＡ）：ＮＭ＿００１０６５、ＲｅｆＳｅｑ（タンパク質）：ＮＰ＿００１０５６（配列番号１））およびＴＮＦＲ２（２型ＴＮＦ受容体、ＣＤ１２０ｂ、ｐ７５／８０、ヒト用：ＲｅｆＳｅｑ（ｍＲＮＡ）：ＮＭ＿００１０６６、ＲｅｆＳｅｑ（タンパク質）：ＮＰ＿００１０５７（配列番号２））を含む。ＴＮＦ−Ｒ１は、ほとんどの組織に発現し、ＴＮＦの膜結合型および可溶性三量体の両方の形態によって完全に活性化することができるが、ＴＮＦ−Ｒ２は、免疫系細胞の中にのみ見出され、ＴＮＦホモ三量体の膜結合型に応答する。ＴＮＦアルファと接触すると同時に、ＴＮＦ受容体は三量体を形成し、それによって細胞内シグナル伝達を開始する。
【００２１】
したがって、ＴＮＦ−アルファに結合することができる可溶性ＴＮＦＲ分子またはその断片は、ＴＮＦ−アルファの競合的阻害剤として使用することができる。本発明は、ヒト免疫グロブリンのＦｃ部分に融合するこのような可溶性ＴＮＦＲ分子（ＴＮＦＲ：Ｆｃ）に関する。
【００２２】
本発明の文脈において、ＴＮＦＲ：ＦｃのＴＮＦＲ部分は、ＥＬＩＳＡまたは任意の他の便利なアッセイによって決定される、ＴＮＦＲ１またはＴＮＦＲ２、好ましくはＴＮＦＲ２の少なくとも１５０〜２５０、好ましくは少なくとも１７５〜２４５、より好ましくはＴＮＦＲ２の細胞外部分の２００〜２４０、および最も好ましくは２２５〜２３５アミノ酸を含む、少なくとも９０％、少なくとも９２％または少なくとも９３％などの好ましくは少なくとも９１％、より好ましくは少なくとも９５％または少なくとも９６％などの少なくとも９４％、さらにより好ましくは少なくとも９８％または少なくとも９９％などの少なくとも９７％、および最も好ましくは１００％同一のアミノ酸配列を有しており、なおＴＮＦ−アルファに結合している任意のＴＮＦＲポリペプチドを指す。より好ましくは、前記ＴＮＦＲは、ＥＬＩＳＡまたは他の便利なアッセイによって決定されるＴＮＦ−アルファおよびリンフォトキシンアルファ（ＬＴ−アルファ）に結合する能力がある。このようなアッセイは当業者に周知である。
【００２３】
一般に、問題の配列がアミノ酸配列の最も良く一致した配列に合っている場合および並んでいる配列に対するアミノ酸間の配列同一性が少なくともｘ％である場合、ポリペプチドは、既定の長さのアミノ酸に対して別のポリペプチドと「少なくともｘ％の同一性」を有する。例えばＮＣＢＩのホームページ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｌａｓｔ／ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ）で提供されている「ｂｌａｓｔｐ」などの「ブラスト（ＢＬＡＳＴ）」プログラムなどの、公的に利用可能なコンピュータ相同性プログラムを使用し、その中に提供されているデフォルト設定を使用して、このようなアライメントを実施することができる。ポリペプチドの組の配列同一性パーセンテージを算出するさらなる方法が当技術分野で公知である。
【００２４】
ＩｇＧが抗体の２本の重鎖の第２および第３定常ドメインで構成されている場合、Ｆｃ領域（断片結晶化可能領域）は抗体の尾部領域を指す。特定の実施形態において、Ｆｃポリペプチドは、ＩｇＧクラス重鎖定常領域もしくは断片および／またはその変異体を含んでおり、他の実施形態では、他の免疫グロブリンアイソタイプの定常領域を使用してこのようなＴＮＦＲ：Ｆｃ融合を生じることができる。例えば、ＩｇＭクラスの重鎖定常領域もしくは断片および／またはその変異体を含むＴＮＦＲ：Ｆｃポリペプチドを使用することができ得る。好ましくは、Ｆｃ断片はＩｇＧ由来、より好ましくはＩｇＧ１由来、さらにより好ましくはヒトＩｇＧ１由来である。配列番号３で示されるヒトＩｇＧ１クラスの重鎖定常ドメインの具体例では、ＣＨ１ドメイン（配列番号３のアミノ酸１〜９８）、ヒンジ領域（配列番号３のアミノ酸９９〜１１０）、ＣＨ２ドメイン（配列番号３のアミノ酸１１１〜２２３）、およびＣＨ３ドメイン（配列番号３のアミノ酸２２４〜３３０）が免疫グロブリン重鎖定常領域に含まれる。本明細書で使用する場合、Ｆｃドメインは、上記の重鎖ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインの一部もしくは全部または断片もしくはその変異体を含むことができる。本発明の特定の実施形態では、配列番号３の全部または一部に融合したＴＮＦＲ１（配列番号１）またはＴＮＦＲ２（配列番号２）の細胞外ドメインの全部または一部を含むＴＮＦＲ：Ｆｃが、場合によりＴＮＦＲ：ＦｃのＴＮＦＲ部分とＦｃ部分との間のリンカーポリペプチドとともに含まれる。例えば、ＣＨ１、ＣＨ２および全ヒンジ領域は分子中に存在してもよい。さらなる実施形態では、ＣＨ１の少なくとも一部を含む重鎖定常領域は、ＴＮＦＲ：ＦｃのＦｃ部分である。特定の実施形態は、例えば、ヒンジ領域の全部または重鎖間のジスフィルド架橋を提供するヒンジ領域のＣ末端半分も含むことができる。例えば、ＣＨ１はヒンジの最初の７アミノ酸（配列番号３のアミノ酸９９〜１０５）とともに存在することがある。本発明の特定の実施形態では、ＴＮＦＲポリペプチドは、重鎖定常ドメインのＣＨ１領域の少なくとも一部のＮ末端に共有結合で（場合によりポリペプチドリンカーを介して）連結してＴＮＦＲ：Ｆｃを形成する。
【００２５】
二量体ＴＮＦＲ：Ｆｃが望ましい場合、重鎖間（例えば、配列番号３のアミノ酸１０９を含む配列番号３のアミノ酸９９〜１１０の一部）のジスルフィド結合形成に結びつけられるヒンジ領域部分を含むことが重要である。本発明のさらなる実施形態では、ＴＮＦＲ：Ｆｃは、Ｃ末端リジン残基（配列番号３のアミノ酸３３０）を含まないＣＨ３ドメインの部分を含むことができるが、この残基はＩｇＧ重鎖ポリペプチドの翻訳後プロセシングで除去されることが観察されている。Ｆｃ融合およびＦｃ断片は当技術分野で周知である。
【００２６】
好ましくは、ＴＮＦＲ：Ｆｃは、エタネルセプトと本質的に同一の／類似しており、より好ましくは、ＴＮＦＲ：Ｆｃはエタネルセプトである。
【００２７】
エタネルセプトは、ｐ７５ＴＮＦ−アルファ受容体の細胞外部分２分子の二量体であり、各分子は、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分のアミノ酸２３２個に融合するＴＮＦＲ由来ポリペプチドのアミノ酸２３５個からなる。エタネルセプトの単量体成分のアミノ酸配列は、配列番号４として示されている。この分子の二量体形態では、これらの２つの融合ポリペプチド（または「単量体」）が２つの単量体の免疫グロブリン部分間を結ぶ３つのジスルフィド結合で結合している。したがって、エタネルセプト二量体は、９３４個のアミノ酸からなり、外見上約１５０キロダルトンの分子量を有する。北米ではエタネルセプトは、１つは粉末形態、もう１つはプレミックス液という２つの別々の製剤で、商品名エンブレル（登録商標）の名の下にＡｍｇｅｎおよびＰｆｉｚｅｒによって共同販売されている。武田薬品工業株式会社がこの医薬品を販売している日本を除く北米外で、Ｗｙｅｔｈは、エンブレル（登録商標）の唯一の販売業者である。
【００２８】
本明細書で使用する場合、「エタネルセプトと本質的に同一の／類似した」という用語は、ＴＮＦＲ：Ｆｃのアミノ酸配列が、配列番号４で示されるアミノ酸配列に対する少なくとも９５％の同一性、より好ましくは９７％の同一性などの少なくとも９６％の同一性、および最も好ましくは配列番号４で示されるアミノ酸配列に対して９９％の同一性などの９８％の同一性を有していることを意味する。あるいはまたはさらに、ＴＮＦＲ：Ｆｃは、翻訳後修飾によって（例えばグリコシル化によって）（のみ）エタネルセプトと異なることがある。グリコシル化部位の導入または欠失などのグリコシル化パターンを変化させることに適した手順、およびグリコシル化パターンを決定するための試験は、当業者に周知である。
【００２９】
ＴＮＦＲ：Ｆｃは、遺伝子組換えで生成してもよく、好ましくは哺乳類細胞に基づいた発現系を使用した遺伝子組換えで生成してもよい。好ましくは、前記哺乳類細胞に基づいた発現系は、ベビーハムスター腎臓細胞株（例えばＢＨＫ２１）、チャイニーズハムスター卵巣細胞株（例えばＣＨＯ−Ｋ１、ＣＨＯ−ＤＧ４４、ＣＨＯ−ＤＸＢ、またはＣＨＯ−ｄｈｆｒ−）、マウス骨髄腫細胞株（例えばＳＰ２／０）、マウス骨髄腫細胞株（例えばＮＳＯ）、ヒト胎生期腎臓細胞株（例えばＨＥＫ−２９３）、ヒト網膜由来細胞株（例えばＰＥＲ−Ｃ６）および／または羊膜細胞株（例えばＣＡＰ）からなる群から選択される少なくとも１つである。好ましくは、ハムスター細胞に基づいた発現系が使用されている。ＢＨＫ２１（「ベビーハムスター腎臓」）細胞は、異常に迅速に成長する新生仔ハムスター腎臓組織の初代培養由来のクローンの子孫であるシリアンハムスター細胞の偽二倍体樹立株に属する。商業上有用であり、本発明の文脈で使用することができるＢＨＫ−２１細胞株の非限定例としては、ＢＨＫ−２１（Ｃ−１３）、ＢＨＫ２１−ｐｃＤＮＡ３．１−Ｈｃ、ＢＨＫ５７０、Ｆｌｐ−Ｉｎ−ＢＨＫ細胞株および／またはＢＨＫ２１（クローン１３）ハムスター細胞株が挙げられる。
【００３０】
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞は、チャイニーズハムスターの卵巣由来の細胞株である。これらは、生物学的および医学的調査にしばしば使用され、治療用タンパク質の生成に商業的に用いられている。これらは１９６０年代に導入され、元は単層培養として培養された。今日、ＣＨＯ細胞は、遺伝子組換えタンパク質療法の工業生産に最も一般に使用される哺乳動物宿主であり、通常浮遊培養で培養する。
【００３１】
商業的に有用であり、本発明の文脈で使用することができるＣＨＯ細胞株の非限定例としては、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ  ＣＨＯ−Ｓ細胞、ＥＲ−ＣＨＯ細胞株、ＣＨＯ  １−１５  ５００  ＣＨＩＮＥＳＥ  ＨＡＭ、ＣＨＯ−ＤＸＢ、ＣＨＯ−ｄｈｆｒ−、ＣＨＯ  ＤＰ−１２  クローン＃１９３４、ＣＨＯ−ＣＤ３６、ＣＨＯ−ＩＣＡＭ−１、ＣＨＯ−Ｋ１、卵巣、ＨｕＺＰ３−ＣＨＯＬｅｃ３．２．８．１、ｘｒｓ５、ＣＨＯ−Ｋ１／ＢＢ２細胞、ＣＨＯ−Ｋ１／ＢＢ３細胞、ＣＨＯ−Ｋ１／ＥＤＧ８／Ｇａｌｐｈａ１５細胞、ＣＨＯ−Ｋ１／Ｍ５細胞、ＣＨＯ−Ｋ１／ＮＫ１細胞、ＣＨＯ−Ｋ１／ＮＫ３細胞、ＣＨＯ−Ｋ１／ＮＭＵＲ１細胞、ＣＨＯ−Ｋ１／ＮＴＳＲ１細胞、ＣＨＯ−Ｋ１／ＯＸ１細胞、ＣＨＯ−Ｋ１／ＰＡＣ１／Ｇα１５細胞、ＣＨＯ−Ｋ１／ＰＴＡＦＲ細胞、ＣＨＯ−Ｋ１／ＴＲＨ１細胞、ＣＨＯ−Ｋ１／Ｖ１Ｂ細胞、５ＨＴ１Ａ  Ｇａｌｐｈａ−１５−ＮＦＡＴ−ＢＬＡ  ＣＨＯ−Ｋ１細胞株、ＡＶＰＲ２  ＣＲＥ−ＢＬＡ  ＣＨＯ−Ｋ１細胞株、ＣＨＯ−Ｓ細胞  ＳＦＭ適応型、ＤＧ４４細胞、Ｆｌｐ−Ｉｎ−ＣＨＯ細胞株、ＧｅｎｅＳｗｉｔｃｈ−ＣＨＯ細胞株、ＮＦＡＴ−ｂｌａ  ＣＨＯ−Ｋ１細胞株、Ｔ−ＲＥｘ−ＣＨＯ細胞株、ＧｅｎｏＳｔａｔ  ＣＨＯ  Ｋ−１安定化細胞株、ＧｅｎｏＳｔａｔ  ＣＨＯ  Ｋ−１安定化細胞株キット、ＣＨＯ−Ｋ１細胞株ハムスター、ＣＨＯ−ＰＥＰＴ１細胞株、ＣＨＯ  ＳＳＦ３および／またはＣＨＯ−ＨＰＴ１細胞株が挙げられる。特に好ましい実施形態では、ハムスター細胞に基づいた発現系はＣＨＯ−ｄｈｆｒ−細胞株である。
【００３２】
医薬組成物は、０．２ｍＭまたは０．６ｍＭなどの０．１ｍＭから０．７ｍＭまでの濃度で、好ましくは０．４ｍＭまたは０．４５ｍＭなどの０．１５ｍＭから０．５ｍＭまでの濃度で、より好ましくは約０．３ｍｍなどの０．２５ｍＭから０．３５ｍＭまでの濃度でＴＮＦＲ：Ｆｃを含んでもよい。
【００３３】
クエン酸塩緩衝液は、任意の適切なクエン酸塩緩衝液であってもよい。例えば、クエン酸塩緩衝液は、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、クエン酸もしくはその混合物を含んでいるかまたはこれらからなっていてもよい。クエン酸塩緩衝液は、製剤の安定性に最も大きな影響があるように思われる。２５ｍＭのクエン酸塩緩衝液製剤と比較した５０ｍＭのクエン酸塩緩衝液製剤の安定性の増加を実施例に示す。少なくとも１２０ｍＭまでの増加によって、さらに効果が増加し得る。最低２５ｍＭのクエン酸塩緩衝液が安定化に必須であるように思われる。したがって、医薬組成物は、３０ｍＭから１１５ｍＭまでなどの２５ｍＭから１２０ｍＭまでの濃度で、好ましくは４５ｍＭから１０５ｍＭまでなどの４０ｍＭから１１０ｍＭまでの濃度で、より好ましくは５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭまたは９５ｍＭの濃度などの５０ｍＭから１００ｍＭまでの濃度で、クエン酸塩緩衝液を含んでもよい。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、実施例の節に記載した組成物に示したような濃度でクエン酸塩緩衝液を含む。
【００３４】
ｐＨは、好ましくは５．５から７までなどの５から７．５まで、さらに好ましくは６．１から６．５までなどの６から６．６まで、最も好ましくは約６．３などの６．２から６．４までの値である。ｐＨは好ましくは５から７．５までの値、あるいは２．８までの低さのｐＨ値（例えば２．８から４．０までの範囲の）が、代わりに用いられてもよい。
【００３５】
医薬組成物は、リジンおよびプロリンならびにこれらの医薬的に許容される塩（塩酸塩などの）からなる群から選択されるアミノ酸を含む。アミノ酸は、Ｄ、ＬまたはＤＬ立体配置、好ましくはＬ立体配置であってもよい。
【００３６】
約２５ｍＭの添加による塩基性アミノ酸リジンと組み合わせた添加の効果は顕著であった。１００ｍＭまでのリジンの添加は添加効果を有すると考えられる。したがって、医薬組成物は、１５ｍＭから１００ｍＭまでの濃度で、好ましくは２０ｍＭから９０ｍＭまでの濃度で、より好ましくは２５ｍＭから７５ｍＭまでの濃度でアミノ酸を含んでもよい。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、実施例の節に記載した組成物に示したような濃度でアミノ酸を含む。特に好ましい実施形態では、アミノ酸は、リジン、またはその医薬的に許容される塩である。
【００３７】
さらに、医薬組成物は少なくとも１種の浸透圧調節剤をさらに含んでもよい。本明細書で使用する場合、用語「浸透圧調節剤」は、溶液の重量モル浸透圧濃度に寄与するクエン酸塩、リジンまたはプロリン以外の分子を記載することを意図するものである。好ましくは、有効成分を安定化させるためおよび投与時の患者の不快感を最小限に抑えるために、医薬組成物の重量モル浸透圧濃度を調節する。一般に、医薬組成物は、同じまたは同様の重量モル浸透圧濃度、つまり約１８０から４８０ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇまでの重量モル浸透圧濃度を有することによって血清と等張になるのが好ましい。好ましくは、少なくとも１種の浸透圧調節剤は、塩化ナトリウム、システイン、ヒスチジン、グリシン、塩化カリウム、スクロース、グルコースおよびマンニトールからなる群から選択され、より好ましくは、浸透圧調節剤は塩化ナトリウムおよび／またはスクロースである。医薬組成物は、全体の濃度が１０ｍＭから１９０ｍＭまで、１５ｍＭから１８０ｍＭまで、２０ｍＭから１７０ｍＭまで、２５ｍＭから１６０ｍＭまで、３０ｍＭから１５０ｍＭまで、３５ｍＭから１４０ｍＭまで、４０ｍＭから１３０ｍＭまで、または４５ｍＭから１２０ｍＭまで、例えば１１０ｍＭなどの５ｍＭから２００ｍＭまでの少なくとも１種の浸透圧調節剤を含んでもよいが、濃度５０ｍＭから１００ｍＭまでであるのが好ましい。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、実施例の節に記載した組成物に示したような濃度で浸透圧調節剤を含む。
【００３８】
さらに、医薬組成物は少なくとも１種の賦形剤を含んでもよい。本明細書で使用する場合、用語「賦形剤」は、医薬組成物中の活性薬剤の担体として使用する薬理学的に不活性な物質を指す。場合によっては、「活性」物質は人体に投与され、吸収されにくい。このような場合、問題の物質を賦形剤と混合するかまたは賦形剤溶液中に溶解してもよい。便利で正確な投薬を容易にするために、極めて強力な有効成分を含有する製剤のかさ上げのためにも時には賦形剤を使用する。賦形剤を、単回投与の量について使用するだけでなく、関係する有効成分の取扱いを最適化するために製造工程で使用してことができる。医薬組成物の投与経路および形態に応じて、様々な賦形剤を使用してもよい。したがって、賦形剤はとりわけ抗接着剤、結合剤、染料および防腐剤（抗酸化剤など）を含んでもよい。
【００３９】
例えば、少なくとも１種の賦形剤を、ラクトース、グリセロール、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、マルトース、イノシトール、トレハロース、グルコース、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、デキストラン、ポリ酢酸ビニル（ＰＶＡ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ゼラチン、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール、グリセロール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｌ−セリン、グルタミン酸ナトリウム、アラニン、グリシン、サルコシン、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウラート（Ｔｗｅｅｎ−２０）、ポリオキシエチレン・ソルビタンモノオレアート（Ｔｗｅｅｎ−８０）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、ポリソルベート、ポリオキシエチレン共重合体、リン酸カリウム、酢酸ナトリウム、硫酸アンモニウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、トリメチルアミンＮ−オキシド、ベタイン、亜鉛イオン、銅イオン、カルシウムイオン、マンガンイオン、マグネシウムイオン、ＣＨＡＰＳ、スクロースモノラウラートおよび２−Ｏ−β−マンノグリセラートからなる群から選択してもよい。好ましい一実施形態では、実施例の節に記載したものから賦形剤を選んでもよい。
【００４０】
医薬組成物は、総濃度が少なくとも０．１ｍＭ、例えば、濃度０．６ｍＭなどの０．１ｍＭから０．７ｍＭまで、好ましくは濃度０．２ｍＭから０．４ｍＭまでなどの０．１５ｍＭから０．５ｍＭまで、より好ましくは濃度０．２４ｍＭから０．３４ｍｍまでの少なくとも１種の賦形剤を含んでもよい。別の好ましい実施形態では、医薬組成物は、実施例の節に記載した組成物に示したような濃度で賦形剤を含む。
【００４１】
好ましくは、組成物は液体である。しかしながら、別の実施形態では、医薬組成物を凍結乾燥してもよく、例えば水を添加して再構成し、液状組成物を形成することができる。したがって、医薬組成物は、医薬的に許容される溶媒をさらに含んでもよい。好ましい実施形態では、医薬的に許容される溶媒は水である。本明細書に示した成分の濃度は、液体製剤の他に構成凍結乾燥物または凍結乾燥される予定の製剤も指す。
【００４２】
賦形剤は、凍結乾燥製剤を凍結している間の保護効果、いわゆる凍結保護特徴を示してもよい。さらに、金属キレート剤および界面活性剤を添加することができる。一部の薬剤は二重の役割を有していてもよい、例えば一部の糖類または糖アルコールは、例えば賦形剤、凍結防止剤および／または緊張剤（ｔｏｎｉｆｙｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）としての役割を果たすことができる。水溶性状態の本製剤は使用準備ができているが、凍結乾燥状態の本製剤は、例えば注射用水を添加することによって液体製剤にすることができる。
【００４３】
特に好ましい組成物は、０．１ｍＭから０．７ｍＭまでのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、２５ｍＭから１２０ｍＭまでのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、１５ｍＭから１００ｍＭまでのリジン（例えば塩酸リジン）、１０ｍＭから１００ｍＭまでのスクロースおよび５ｍＭから２００ｍＭまでの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたはこれらからなる。
【００４４】
あるいは、医薬組成物は０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、５０ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなっていてもよい。
【００４５】
なお別の好ましい実施形態では、医薬組成物は０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、２５ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび８８ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなっていてもよい。
【００４６】
しかしながら、医薬組成物は、さらに０．１ｍＭから０．７ｍＭまでのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、２５ｍＭから１２０ｍＭまでのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、１５ｍＭから１００ｍＭまでのプロリン、１０ｍＭから１００ｍＭまでのスクロースおよび５ｍＭから２００ｍＭまでの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたはこれらからなっていてもよい。
【００４７】
最終的に、医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、２５ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのプロリン、２９ｍＭのスクロースおよび７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたはこれらからなっていてもよい。
【００４８】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、５０ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなっていてもよい。
【００４９】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、１２０ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００５０】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、１２０ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００５１】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、５０ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび５１ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００５２】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、１２０ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび２２ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００５３】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、１２０ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、および２９ｍＭのスクロースをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００５４】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、５０ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、および７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００５５】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、１２０ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、および３６ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００５６】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、１２０ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、および１７ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００５７】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、５０ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００５８】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、７５ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００５９】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、７５ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００６０】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、７５ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび５６ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００６１】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、７５ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび３１ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００６２】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、７５ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、１９ｍＭのスクロースおよび７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００６３】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、７５ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、および５９ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００６４】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、２５ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００６５】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、２５ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００６６】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、５０ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００６７】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、５０ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００６８】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、５０ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび４８ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００６９】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、２５ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび８８ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００７０】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、２５ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのプロリン、２９ｍＭのスクロースおよび８８ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００７１】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、２５ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのプロリン、２９ｍＭのスクロースおよび１００ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００７２】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、２５ｍＭのリン酸緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび８８ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００７３】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、２５ｍＭのリン酸緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび７５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００７４】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、５０ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび５０ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００７５】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、７５ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび５０ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００７６】
医薬組成物は、さらに０．３ｍＭのＴＮＦＲ：Ｆｃ（例えばエタネルセプト）、６５ｍＭのクエン酸塩緩衝液（例えばクエン酸ナトリウム）、２５ｍＭのリジン（例えば塩酸リジン）、２９ｍＭのスクロースおよび５５ｍＭの塩化ナトリウムをｐＨ値約６．３で含むかまたこれらからなってもよい。
【００７７】
好ましくは、医薬組成物は安定した液状組成物である。本明細書で使用する場合、用語「安定した」は、ＴＮＦＲ：Ｆｃが以下の特徴の１つ以上を示すことを意味する。すなわち、
（ｉ）２５ｍＭのリン酸緩衝液、２５ｍＭのアルギニンおよび７５ｍＭを超えるモル濃度のまたは等張性の調整に必要とされる量の塩化ナトリウムからなる基質に０、３ｍＭのエタネルセプトを含有する一般に使用されるリン酸緩衝製剤に処方されるのと同じＴＮＦＲ：Ｆｃと比較して、９９％未満の凝集生成物（ＳＵＭ  ＡＰｓ）、より好ましくは９８、５％未満のＳＵＭ  ＡＰｓ、さらに好ましくは９８％未満のＳＵＭ  ＡＰｓ、最も好ましくは９７、５％未満のＳＵＭ  ＡＰｓを示すことであって、ＳＵＭ  ＡＰｓはＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）により４０℃で３か月保存した後に決定される、
（ｉｉ）および／または２５ｍＭのリン酸緩衝液、２５ｍＭのアルギニンおよび７５ｍＭを超えるモル濃度のまたは等張性の調整に必要とされる量の塩化ナトリウムからなる基質に０、３ｍＭのエタネルセプトを含有する一般に使用されるリン酸緩衝製剤に処方されるのと同じＴＮＦＲ：Ｆｃと比較して、９９％未満の分解産物（ＳＵＭ  ＤＰｓ）、より好ましくは９７％未満のＳＵＭ  ＤＰｓなどの９８％未満のＳＵＭ  ＤＰｓ、さらにより好ましくは９５％未満のＳＵＭ  ＤＰｓなどの９６％未満のＳＵＭ  ＤＰｓ、最も好ましくは９３％未満のＳＵＭ  ＤＰｓなどの９４％未満のＳＵＭ  ＤＰｓを示すことであって、ＳＵＭ  ＤＰｓはＳＥＣによって４０℃で３か月保存した後に決定される。
【００７８】
したがって、本発明による医薬製剤は、長期保存に適するように処方されてもよい。本明細書で使用する場合、用語「長期保存」は、１か月以上の間、好ましくは２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１またはさらに１２か月以上の間、医薬製剤を含む組成物の保存を指すものとする。
【００７９】
下に例証するように、安定剤としてリジンまたはプロリンのいずれかと組み合わせたクエン酸塩緩衝液系またはリン酸緩衝液系を含有する製剤の安定性を、目的とする貯蔵条件（２〜８℃）の他に加速貯蔵条件（２５および４０℃）で、３か月の安定性試験中に評価した。ポストピークの形成（例えばＲＰＣ（逆相クロマトグラフィー）で決定されるような）、分解産物の形成（例えばＳＥＣによって決定されるような）および酸性ピークの形成（例えばＣＥＸ（陽イオン交換）によって決定されるような）の点で、クエン酸塩緩衝液系を含有する製剤は、リン酸緩衝液系を含有する製剤と比較して優位なことがそれによって決定した。
【００８０】
記載した効果は、クエン酸塩／リジン製剤基質に処方されたＴＮＦＲ：Ｆｃの優れた安定化を含めて、部分的にさらにより顕著であり、製剤をバイアル中に保存した場合、より大きな液体／空気交互作用面を示す。液状組成物の安定性の決定は、実施例の節、特に実施例３でさらに例証する。
【００８１】
第１の態様による医薬組成物は、内科的治療で使用することができる。本発明の医薬組成物を使用して治療してもよい疾患は、自己免疫疾患、強直性脊椎炎、若年性関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、慢性関節リウマチ、ウェゲナー疾患（肉芽腫症）、クローン病または炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、Ｃ型肝炎、子宮内膜症、喘息、悪液質、アトピー性皮膚炎、アルツハイマー病およびがんを含むが限定するものではない。したがって、第１の態様による組成物をこれらの必要のある患者、例えば上記疾患のうちの１つを患う患者に投与することを含む治療法も考慮される。
【００８２】
ＴＮＦＲ：Ｆｃの用量は、疾患、症状の重症度、患者の病歴、および（前）治療に対する反応によって決まり、医師が調整および監視することとなる。医薬組成物をボーラス注射または持続注射のいずれかによって、皮下、筋肉内、静脈内、腹腔内、脳脊髄内、関節内、関節滑液襄内および／またはくも膜下腔内になど、非経口的に投与してもよい。
【００８３】
成人１人当たりのＴＮＦＲ：Ｆｃの用量は、約１〜５００ｍｇ／ｍ２まで、または約１〜２００ｍｇ／ｍ２まで、または約１〜４０ｍｇ／ｍ２までまたは約５〜２５ｍｇ／ｍ２までの範囲であってもよい。あるいは、量が、２〜５００ｍｇ／用量まで、２〜１００ｍｇ／用量までまたは約１０〜８０ｍｇ／用量までの範囲のフラット用量（ｆｌａｔ  ｄｏｓｅ）を投与してもよい。用量は、１用量２５〜１００ｍｇ／用量の範囲で週２回以上など、週１回以上投与してもよい。また別の実施形態では、注射投与の容認用量は、８０〜１００ｍｇ／用量、例えば１用量当たり８０ｍｇを含む。用量は毎週、週２回または数週間（例えば、３週間）に分けて投与することができる。
【００８４】
少なくとも３週間の期間にわたって週１から３回１用量１００ｍｇまでの医薬組成物で患者の状態が改善するが、望ましい程度の改善を誘導するにはより長い期間の治療が必要となることもあるということがさらに考慮される。しかしながら、不治の慢性症状に対しては投与計画を無期限に続けてもよい。小児科の患者（年齢４〜１７歳）に適した投与計画には、１用量０．４ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇのＴＮＦＲ：Ｆｃを週１回以上投与することが含まれていてもよい。
【００８５】
より具体的には、慢性関節リウマチの場合には、２５ｍｇのＴＮＦＲ：Ｆｃを週２回投与してもよい。あるいは、５０ｍｇ週１回の投与は安全で効果的であることが明らかとなっている。
【００８６】
乾癬性関節炎および強直性脊椎炎の場合には、推奨用量は、ＴＮＦＲ：Ｆｃ２５ｍｇ週２回投与または５０ｍｇ週１回投与である。
【００８７】
プラーク乾癬になると、ＴＮＦＲ：Ｆｃの推奨用量は、２５ｍｇ週２回投与または５０ｍｇ週１回投与である。あるいは、５０ｍｇ週２回投与を１２週間までの間使用し、その後必要に応じて１用量２５ｍｇを週２回または５０ｍｇを週１回で使用してもよい。寛解を達成するまで、２４週間までの間ＴＮＦＲ：Ｆｃを用いた治療を継続すべきである。２４週間を越える継続的な治療は、一部の成人患者にとって適切である場合がある。１２週間後に応答を示さない患者の治療は中止するべきである。ＴＮＦＲ：Ｆｃを用いた再治療が示される場合、治療継続期間と同じガイダンスに従うべきである。用量は２５ｍｇ週２回または５０ｍｇ週１回であるべきである。
【００８８】
若年性特発性関節炎（年齢４歳以上）に関して、溶媒１ｍｌ中に２５ｍｇのＴＮＦＲ：Ｆｃを再構成した後、０．４ｍｇ／ｋｇ（１用量当たり最大２５ｍｇまで）を、用量間隔３〜４日で皮下注射として週２回投与してもよい。
【００８９】
小児科のプラーク乾癬（年齢８歳以上）に関しては、０．８ｍｇ／ｋｇ週１回（１用量当たり最大５０ｍｇまで）を２４週間までの間投与してもよい。１２週間後に応答を示さない患者の治療は中止するべきである。ＴＮＦＲ：Ｆｃを用いた再治療の必要が示される場合、治療継続期間に関する上記ガイダンスに従うべきである。用量は０．８ｍｇ／ｋｇ（１用量当たり最大５０ｍｇまで）週１回とするべきである。
【００９０】
腎および肝障害の場合には、用量調整は不要である。
【００９１】
第２の態様では、本発明は、第１の態様による組成物および本組成物の使用説明書を含むキットに関する。
【００９２】
好ましい実施形態では、組成物をプレフィルドシリンジに充填する。別の好ましい実施形態では、組成物をプレフィルドバイアルに充填する。キットは、本発明の医薬組成物を含有する１種以上の単位剤形を含んでもよい。適切なシリンジの実施例は、長さ１ｍｌのＢＤ  Ｈｙｐａｋ  ＳＣＦ、すなわちＰＴＦＥコートした栓（Ｗｅｓｔ社製ゴム品質４０２３／５０）を組込んだガラス製プレフィラブルシリンジである。例えばガラスバイアルはＰＴＦＥコートした栓（Ｗｅｓｔ社製ゴム品質４０２３／５０）を組込んだ６Ｒガラスバイアル（加水分解クラスＩ）であってもよい。しかしながら、他の任意の適切なシリンジまたはバイアルを使用してもよい。キットは、さらに自動注射装置などの別の第２の容器に本発明の医薬組成物を含んでいてもよい。
【００９３】
プレフィルドシリンジに水性形態で製剤が充填されていてもよい。さらに、記載したシリンジには１回だけの使用のための使い捨て用品であることが多い自動注射装置が付いていてもよく、例えば、０．１から１ｍｌの間の容積を有していてもよい。しかしながら、さらにシリンジまたは自動注射装置は、多重使用または多重投薬用であってもよい。記載したバイアルには凍結乾燥または水性状態で製剤が充填されていてもよく、単回または複数回使用の装置として利用してもよい。バイアルは、例えば１から１０ｍｌの間の容積を有していてもよい。
【００９４】
第３の態様では、本発明は、ＴＮＦＲ：Ｆｃと、クエン酸塩緩衝液と、リジンおよびプロリンならびにこれらの医薬的に許容される塩からなる群から選択されるアミノ酸とを組み合わせることを含む、第１の態様による医薬組成物を製造する方法に関する。
【００９５】
特定の一実施形態では、方法は、上記に限定されるような医薬的に許容される溶媒を添加するさらなるステップを含んでもよい。方法は、塩化ナトリウムおよび／またはスクロースなどの少なくとも１種の浸透圧調節剤および場合により上記に限定されるような賦形剤を添加するステップをさらに含んでもよい。最後の好ましい実施形態では、方法はさらに凍結乾燥ステップを含んでいてもよく、このステップは少なくとも１種の浸透圧調節剤および／または上記に定義されるような賦形剤を添加する前または添加した後であってもよい。
【００９６】
本発明は、以下の実施例に対する参照によって、より完全に理解されるであろう。しかしながら、この実施例は本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきでない。
【図面の簡単な説明】
【００９７】
【図１】焦点を置いたスクリーニング中のＴＮＦＲ：ＦｃのＳＥＣ分析の結果；略語：Ｐｈｏ＝リン酸緩衝液系、Ｃｉｔ＝クエン酸塩緩衝液系、Ｐｒｏ＝Ｌ−プロリン、Ｌｙｓ＝Ｌ−リジン。Ａ：２５℃で保存した後の分解産物の係数プロット。Ｂ：４０℃で保存した後の分解産物の係数プロット。Ｃ：毎分回転数６００で４８時間撹拌した後の分解産物の係数プロット。Ｄ：凍結融解３サイクル後の分解産物の係数プロット。
【実施例】
【００９８】
物質の説明
記載した実施例に使用されたＴＮＦＲ：Ｆｃは、合成培地の流加培養プロセスで培養した遺伝子組換えＣＨＯ細胞由来である。ＴＮＦＲ：Ｆｃは、プロテインＡ樹脂のアフィニティークロマトグラフィーを含む標準方法によって、さらにクロマトグラフィーおよび濾過ステップによって、細胞を含まない回収物から精製される。
【００９９】
方法の説明
一般
クロマトグラフはすべてＵＶおよび蛍光検出を備えたＡｇｉｌｅｎｔ１１００および  １２００ＨＰＬＣシステムで実施した。
【０１００】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
サイズ排除クロマトグラフィーを使用してＴＮＦＲ：Ｆｃの変異体の他に任意の不純物および製剤成分も低分子量と高分子量とに分離した。凝集ピーク（ＡＰｓ）の合計および分解ピーク（ＤＰｓ）の合計として結果を記載した。ＳＥＣでは、クロマトグラフィーの主なピークの保持時間と標準試料の主なピークの保持時間との比較によって試験サンプルの同一性を決定した。
【０１０１】
ＳＥＣは２つの連続したＴｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＴＳＫ−Ｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷＸＬ  カラム（５μｍ、２５０Å、７．８ｍｍＩ．Ｄ．ｘ３００ｍｍ長）（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）および１５０ｍＭのリン酸カリウムを充填したｐＨ６．５の移動相を使用して実施した。流速を０．４ｍｌ／分およびカラム温度を３０℃に設定した。試料を０．７５ｍｇ／ｍｌの濃度まで移動相で希釈し、注射量を１０μｌにした。
【０１０２】
逆相クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＲＰＣ）
カラム温度７０℃でＣ８カラム（５μｍ、３００Å、２．１ｍｍＩ．Ｄ．ｘ７５ｍｍ長）を使用してＲＰ−ＨＰＬＣによって試料の含有量を決定した。流速１．０ｍｌ／分で移動相Ｂ２０から３０％までの直線濃度勾配（移動相Ａ：１０％アセトニトリル、０．３％ＰＥＧ３００、０．１％ＴＦＡ、および移動相Ｂ：９０％アセトニトリル、０．３％ＰＥＧ３００、０．１％ＴＦＡ）を用いて生成物変異体の分離を達成した。注射の前に試料を脱シアリル化し、２．５ｍｇ／ｍｌの濃度まで希釈した。ＵＶ検出クロマトグラムを純度評価に使用した。含有量としての他にポストピーク（合計ＰＰｓ）としても結果を示した。
【０１０３】
陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）
ポリアスパラギン酸の結合コーティングをしたシリカベースの陽イオン交換樹脂（１００ｍｍ長ｘ４．６ｍｍｉ．ｄ．、３μｍ粒子）を使用して陽イオン交換分離を実施した。注射の前に、試料を脱シアリル化し、脱シアリル化緩衝液で濃度を２．５ｍｇ／ｍｌに調整した。２０分にわたる移動相Ｂ３０から５０％までの直線濃度勾配（Ａ：５０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ５．２、Ｂ：５０ｍＭの酢酸ナトリウム、２５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ５．２）によって試料を溶出した。流速および温度をそれぞれ１．０ｍｌ／分および３０℃に設定した。ＵＶ検出のクロマトグラムをデータ評価に使用した。結果を、酸性ピークの合計（合計ＡＰｓ）および塩基性ピークの合計（合計ＢＰｓ）として示した。
【０１０４】
粒子計数（ＰＣ）方法
Ａｃｃｕｓｉｚｅｒ  Ｎｉｃｏｍｂ  ＳＩＳ  ７８０測定器を用いて光遮蔽により粒子計数を実施した。この手法は液体環境内部の粒子／凝集体による散乱光を検出する。シグナルは検出された粒子／凝集体の流体力学半径に算出されることとなる。２．８ｍｌの全試料容積を用いて３つの測定値からの平均値を算出した。以下の測定器パラメータを使用した。すなわち、範囲：０．５〜５００μｍ（５１２チャネル、対数目盛）、流速：５ｍｌ／分。
【０１０５】
実施例１〜３に記載した試験を行う前に、ＴＮＦＲ：Ｆｃの凝集に関するスクロース、アルギニンおよびＮａＣｌ賦形剤の効果を評価した。結果として生じた製剤に、撹拌および振動を含む応力安定性試験を行った。ＳＥＣによって半径２００ｎｍまでの凝集体を検出したが、粒子計数は５００ｎｍから４００μｍまでの範囲の粒子を決定した。
【０１０６】
アルギニン：
ＳＥＣによって応力をかけられた製剤の分析によって、アルギニンの添加による凝集体の減少が明らかになった。同時に、アルギニンのモル濃度増加に伴ってより大きなサイズの粒子が形成されたことがＰＣ方法によって検出された。したがって、ＴＮＦＲ：Ｆｃ製剤中のアルギニン量の増加によって、より小さなサイズの粒子（ｒ＝２００ｎｍまで）の減少が促進されるが、その原因として最も考えられるのは、粒子計数方法によってのみ検出できる大きなサイズの粒子に凝集体をクラスター化することであると結論付けることができる。
【０１０７】
ＮａＣｌ：
高モル濃度ＮａＣｌの添加は、アルギニンの添加と同じＰＣ結果になった。ＳＥＣ方法によって検出されたＤＰ量は、ＮａＣｌのモル濃度増加に伴って増加した。
【０１０８】
スクロース：
スクロースのモル濃度を増加する添加が、ＰＣ法によって検出された粒子半径の減少をもたらしたように思われた。著しい結果はＳＥＣによって検出されなかった。
【０１０９】
実施例１
製剤スクリーニング
ＤｏＥ（実験計画法）と単一パラメータ試験との組合せによって評価を実施した。全製剤はＴＮＦＲ：Ｆｃ  ５０ｍｇ／ｍｌ、ＮａＣｌ  １００ｍＭを含有しており、ｐＨは約ｐＨ６．３に調整した。製剤を界面活性剤、緩衝液、安定剤Ｉ（糖類および糖アルコール含有）の他に安定剤ＩＩ（アミノ酸）と呼ぶ群に分けたが、安定剤群については統計的計画（表３）を設計して評価した。これらの群の結果を統計的有意性に関して評価した。結果をＴＮＦＲ：Ｆｃのエンブレル（登録商標）（表１）に対応する先行技術製剤とさらに比較した。
【０１１０】
表３．ＴＮＦＲ：Ｆｃの製剤スクリーニング中の評価因子
0005996631.tif 000003
【０１１１】
結果として生じた製剤（表４）に機械的に応力をかけ、短期応力安定性試験（表５）を行った。対照として、エタネルセプト製剤（つまり表１に記載したように）を供給した。
【０１１２】
表４．  製剤スクリーニング段階中に評価した製剤。緩衝液（製剤１〜４）の単一パラメータ評価の他に、糖類または糖アルコールを含む安定剤群Ｉ（製剤５〜９）およびアミノ酸を含む安定剤群ＩＩ（製剤１０〜１４）に対するＤｏＥ方法を組み合わせて構成した。さらに、エンブレル（登録商標）に対応する先行技術製剤と同様であるがアルギニンを取り除いた製剤（製剤１８）の他、アルギニンを取り除き高濃度のＮａＣｌを添加した製剤（製剤１９）も試験した。エンブレル（登録商標）に対応する先行技術製剤を対照（製剤１）として供給した。
0005996631.tif 000004
【０１１３】
表５．  製剤スクリーニング段階の間に適用した分析方法および応力条件。毎分回転数（ｒｐｍ）、毎分撹拌数（ａｐｍ）
0005996631.tif 000005
【０１１４】
ｏｕｔパラメータＲＰＣ、ＣＥＸおよびＳＥＣに対するＴＮＦＲ：Ｆｃの品質性状に関するプラス効果を、次のように定義した。すなわち、
●含有量（ＲＰＣ）―減少なし
●合計ＡＰｓ（ＣＥＸ）―低濃度
●合計ＢＰｓ（ＣＥＸ）―先行技術に基づいた製剤に匹敵
●合計ＡＰｓ（ＳＥＣ）―低濃度
●合計ＤＰｓ（ＳＥＣ）―低濃度
【０１１５】
上記パラメータに従って、さらに結果をエンブレル（登録商標）に対応する先行技術製剤中のＴＮＦＲ：Ｆｃと比較し、エンブレル（登録商標）に対応する先行技術製剤の結果に少なくとも匹敵した場合または、エンブレル（登録商標）に対応する先行技術製剤の結果を上回っていた場合にプラスの印を付けた。製剤中のＴＮＦＲ：Ｆｃ安定性に関するプラス効果は、プロリン、リジン、スクロースおよびクエン酸塩評価因子を示した（表６）。
【０１１６】
表６．  製剤スクリーニングの結果。様々な因子の効果をマイナス（−）または（＋）記号で記載し、−は、エンブレル（登録商標）に対応する先行技術製剤および／または予想結果と比較したマイナス効果を表すが、＋は、エンブレル（登録商標）に対応する先行技術製剤および／または予想結果と比較したプラス効果を表し、括弧でくくった結果は、効果が明らかではないことを示し、無意味な結果は空白にした。また、太字で表示した因子は、製品の品質に関するプラスの影響を示し、イタリック体で表示した因子は、さらに調査され（実施例３を参照）、アスタリスク（＊）を付けた因子は副作用を示し、さらなる調査から除外した。
0005996631.tif 000006
【０１１７】
実施例２
焦点を置いたスクリーニング
著しい効果をもたらす製剤スクリーニングから選択される因子を別のＤｏＥ方法（製剤１〜１３、因子：プロリン、リジン、リン酸、クエン酸塩）と組み合わせるだけでなく、単一パラメータを変更する製剤（リジン／スクシナート（製剤１５）、プロリン／スクシナート（製剤１６）、リジン／クエン酸塩／ポロキサマー（製剤１７）およびトレハロース／クエン酸塩／リジン（製剤１８））と組み合わせることによっても、さらにこれらの因子を評価した。製剤１９はエンブレル（登録商標）に対応する先行技術製剤を表す。
【０１１８】
表７．  焦点を置いたスクリーニング中に評価した製剤１〜１９
0005996631.tif 000007
【０１１９】
結果として生じた製剤に、短期応力安定性試験を行った（表８）。ＳＥＣ、ＣＥＸおよびＲＰＣ分析方法を用いた。
【０１２０】
表８．  焦点を置いたスクリーニング中に用いた分析方法および応力条件
0005996631.tif 000008
【０１２１】
製剤１から１３の結果を図１Ａ〜Ｄに示す。２５（Ａ）および４０℃（Ｂ）でのＴＮＦＲ：Ｆｃ製剤の保存のための他に４８時間（Ｃ）の間撹拌ならびに凍結および融解（Ｄ）の３サイクルの間の付加応力のための分解産物の形成に関して、リジン、プロリン、クエン酸塩緩衝液およびリン酸緩衝液因子を評価した。ｏｕｔパラメータＳＥＣに対するＴＮＦＲ：Ｆｃの品質性状に関するプラス効果を次のように定義した。すなわち、
●合計ＤＰ（ＳＥＣ）―低濃度、増加なし
【０１２２】
表８に記載した条件でのＴＮＦＲ：Ｆｃ製剤の調節で低濃度分解産物をもたらしたクエン酸塩緩衝液因子に対して著しいプラス効果を決定した。その上、２５℃で保存したときおよび６００毎分回転数で４８時間撹拌した後にプロリンだけがわずかに著しい効果を示し、分解産物は付加応力に伴って増加していた。
【０１２３】
リジンまたはプロリン、ポロキサマーおよびトレハロースと組み合わせたスクシナート緩衝液の賦形剤の評価をＲＰＣ、ＳＥＣおよびＣＥＸ分析によって実施した（表９）。ＴＮＦＲ：Ｆｃの品質性状に関するプラス効果を次のように定義した。すなわち、
●含有量（ＲＰＣ）―減少なし
●合計ＡＰｓ（ＣＥＸ）―低濃度
●合計ＤＰｓ（ＳＥＣ）―低濃度
【０１２４】
スクシナート含有製剤（製剤１５（リジンを含む）、製剤１６（プロリンを含む））は、４０℃での保存時に新たな分解ピークの形成を示した。したがって、スクシナートをさらなる評価から除外した。界面活性剤ポロキサマーおよび安定剤トレハロースは安定性に関する優れた影響を示さなかった（エンブレル（登録商標）に対応する先行技術製剤の範囲で）ので、ポロキサマーおよびトレハロースもさらなる評価から除外した。
【０１２５】
表９．  焦点を置いたスクリーニング中に評価されたスクシナート、ポロキサマーおよびトレハロース賦形剤の効果の概要。
0005996631.tif 000009
【０１２６】
実施例３
製剤最適化
先の評価のうちの最も有望な４製剤（製剤１〜４）に、目的とする貯蔵条件（２〜８℃）の他に加速貯蔵条件（２５および４０℃）でも長期安定性試験を行った。シリンジ（０、５ｍｌ）およびバイアル（１ｍｌ）に充填したＴＮＦＲ：Ｆｃ製剤で長期安定性試験を実施した。表１０は、試験した製剤の概要を示す。対照として、エンブレル（登録商標）に対応する先行技術製剤（製剤５）を供給した。全製剤を互いに比較した他に記載した対照とも比較した。
【０１２７】
表１０．  製剤最適化を試験した概要
0005996631.tif 000010
【０１２８】
ポストピークの合計（ＲＰＣ）、凝集および分解産物の合計（ＳＥＣ）の他に酸性ピークの合計（ＣＥＸ）の出力パラメータに対する安定性が対照と比較して上回っていた場合、安定剤としてのリジンおよびプロリン他にクエン酸塩およびリン酸緩衝液系評価因子のプラス効果を示した。出力パラメータの標的を表１１に記載する。
【０１２９】
表１１．  製剤最適化中の標的の説明
0005996631.tif 000011
【０１３０】
ＲＰＣ／ポストピーク（ＰＰ）の合計、ＳＥＣ／凝集産物（ＡＰｓ）および分解産物（ＤＰｓ）の合計ならびにＣＥＸ／酸性ピーク（ＡＰｓ）の合計の出力パラメータの結果を、表１２、１３（２〜８℃での保存）、表１４、１５（２５℃での保存）の他に表１６、１７（４０℃での保存）も示す。安定性試験の最初の他に、記載した温度で１か月、２か月および３か月保存した後にも試料の分析を実施した。
【０１３１】
３か月の間２〜８、２５および４０℃で保存したＴＮＦＲ：Ｆｃ製剤の結果概要（表１２）
１）ＲＰＣ―ポストピークの合計（合計ＰＰｓ）
２〜８、２５および４０℃で３か月保存した後、クエン酸塩緩衝液系（製剤１〜３）を含有するＴＮＦＲ：Ｆｃ製剤はリン酸緩衝液を含有する製剤（製剤４および５）と比較して低いポストピーク値を示した。５０ｍＭのクエン酸塩緩衝液および２５ｍＭのリジンを含有する製剤（製剤１）に対して絶対的な最低値を検出した。記載した効果は、バイアルに保存したＴＮＦＲ：Ｆｃ製剤でさらにより顕著であった。
【０１３２】
２）ＳＥＣ―凝集生成物の合計（合計ＡＰｓ）
２〜８、２５および４０℃で３か月保存した後、凝集生成物の量に関してＴＮＦＲ：Ｆｃ製剤１から５を比較することが可能である。さらにバイアルまたはシリンジに充填した製剤の間に差は検出されなかった。
【０１３３】
３）ＳＥＣ―分解産物の合計（合計ＤＰｓ）
２〜８、２５および４０℃で３か月保存した後、クエン酸塩緩衝液系含有ＴＮＦＲ：Ｆｃ製剤は、（製剤１〜３）リン酸緩衝液含有製剤（製剤４および５）と比較して著しく低い分解産物値を示した。５０ｍＭのクエン酸塩緩衝液および２５ｍＭのリジン含有製剤（製剤１）で絶対的な最低値を検出した。記載した効果は、バイアルに保存したＴＮＦＲ：Ｆｃ製剤でより顕著であった。
【０１３４】
４）ＣＥＸ―酸性ピークの合計（合計ＡＰｓ）
２〜８、２５℃および４０℃で３か月保存した後、プレフィルドシリンジ中のクエン酸塩緩衝液系を含有するＴＮＦＲ：Ｆｃ製剤（製剤１〜３）は、リン酸緩衝液を含有する製剤（製剤４および５）と比較して著しく低い酸性ピーク値を示した。記載した効果は、２〜８℃でバイアルに保存したＴＮＦＲ：Ｆｃ製剤でより顕著であった。
【０１３５】
製剤最適化の結論
２〜８、２５および４０℃で３か月保存している間の製剤１から５の安定性をＲＰＣ、ＳＥＣおよびＣＥＸ分析により評価した。クエン酸塩緩衝液系を含有する製剤（製剤１〜３）はポストピーク（ＲＰＣ）形成、分解産物（ＳＥＣ）形成および酸性ピーク（ＣＥＸ）形成に関して、リン酸緩衝液系を含有する製剤（製剤４および５）と比較して優位であることを決定した。安定剤として５０ｍＭのクエン酸塩緩衝液系および２５ｍＭのリジンを含有する製剤で絶対的な最良の結果をＲＰＣおよびＳＥＣによって決定した。最悪の製剤が対照でなかったならば、エンブレル（登録商標）に対応する先行技術製剤（製剤５）が最悪であった。製剤がバイアルに保存されていた場合、ＲＰＣ、ＳＥＣおよびＣＥＸによって決定されたＴＮＦＲ：Ｆｃの分解は、一般に、さらに著しかった。この原因として最も考えられるのは、シリンジと比較してバイアルによって示されたより大きな液体／空気相互作用表面である。したがって、効果は、クエン酸塩／リジン製剤基質に処方したＴＮＦＲ：Ｆｃの優れた安定化を含み、部分的にさらにより顕著であった。
【０１３６】
表１２．  製剤最適化の要約結果
0005996631.tif 000012
【０１３７】
２〜８℃で保存したＴＮＦＲ：Ｆｃ―シリンジおよびバイアル
表１３．  シリンジ―２〜８℃
0005996631.tif 000013
【０１３８】
表１４．  バイアル―２〜８℃
0005996631.tif 000014
【０１３９】
２５℃で保存したＴＮＦＲ：Ｆｃ―シリンジおよびバイアル
表１５．  シリンジ―２５℃
0005996631.tif 000015
【０１４０】
表１６．  バイアル―２５℃
0005996631.tif 000016
【０１４１】
４０℃で保存したＴＮＦＲ：Ｆｃ―シリンジおよびバイアル
表１７．  シリンジ―４０℃
0005996631.tif 000017
【０１４２】
表１８．  バイアル―４０℃
0005996631.tif 000018
【０１４３】
参考文献一覧
国際公開第０３／０７２０６０Ａ２号パンフレット
欧州特許第１４７８３９４号明細書
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