(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
0005922666.tif 000012
｛式中、
ＸがＡｓであり；
Ｚ1〜Ｚ4がそれぞれ独立してＣ1〜6アルキルであるか、またはＺ1とＺ2もしくはＺ3とＺ4、もしくはその両方が一緒にエチレン鎖もしくはプロピレン鎖を形成し；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6がそれぞれ水素であり；
Ｒ1が、ヒドロキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、およびＣ6〜Ｃ10アリールオキシからなる群から選択され、前記Ｃ1〜Ｃ6アルコキシまたはＣ6〜Ｃ10アリールオキシは、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されていてもよく；
Ｒ4は、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールであり；
Ｒ1およびＲ4の少なくとも１つが放射性同位体原子を含む｝
の化合物。
【請求項２】
ａ）Ｒ1がヒドロキシまたはメトキシであり；
Ｒ4が、少なくとも１個の11Ｃまたは14Ｃを含有する任意選択的に置換されたフェニルであって、前記フェニルは、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されていてもよい、か、
または、Ｒ4が、ＮＨＣ3Ｈ3、ＮＨ11ＣＨ3、ＮＨ14ＣＨ3、ＮＣＨ3（Ｃ3Ｈ3）、ＮＣＨ3（11ＣＨ3）、ＮＣＨ3（14ＣＨ3）、76Ｂｒ、123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、3Ｈ、または18Ｆの１つ以上で置換されたフェニルである；
あるいは：
ｂ）Ｒ1が、Ｃ3Ｈ3Ｏ、11ＣＨ3Ｏ、および14ＣＨ3Ｏからなる群から選択され；
Ｒ4が、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されたフェニルである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｚ1とＺ2、およびＺ3とＺ4が、それぞれ、一緒にエチレンを表し；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6が水素であり；
ａ）Ｒ1が、メトキシであり；
Ｒ4が、少なくとも１個の11Ｃまたは14Ｃを含有する任意選択的に置換されたフェニルであって、前記フェニルは、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されていてもよい、か、
または、Ｒ4が、ＮＨＣ3Ｈ3、ＮＨ11ＣＨ3、ＮＨ14ＣＨ3、ＮＣＨ3（Ｃ3Ｈ3）、ＮＣＨ3（11ＣＨ3）、ＮＣＨ3（14ＣＨ3）、76Ｂｒ、123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、3Ｈ、または18Ｆの１つ以上で置換されたフェニルである；
あるいは：
ｂ）Ｒ1が、Ｃ3Ｈ3Ｏ、11ＣＨ3Ｏ、および14ＣＨ3Ｏからなる群から選択され；
Ｒ4が４−フルオロフェニルである、
請求項１または請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
ａ１）式ＩＩＡ、
【化２】
0005922666.tif 000013
｛式中、
ＸがＡｓであり；
Ｚ1〜Ｚ4がそれぞれ独立してＣ1〜6アルキルであるか、またはＺ1とＺ2もしくはＺ3とＺ4、もしくはその両方が一緒にエチレン鎖もしくはプロピレン鎖を形成し；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6がそれぞれ水素であり；
Ｒ1が、ヒドロキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、およびＣ6〜Ｃ10アリールオキシからなる群から選択され、前記Ｃ1〜Ｃ6アルコキシまたはＣ6〜Ｃ10アリールオキシは、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されていてもよく；
Ｒ4は、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールである｝
の化合物を、
脱離基および少なくとも１個の同位体原子を含むＣ1〜Ｃ6アルキル基と反応させる工程；
または、
ａ２）式ＩＩＩＡ、
【化３】
0005922666.tif 000014
｛式中、
ＸがＡｓであり；
Ｚ1〜Ｚ4がそれぞれ独立してＣ1〜6アルキルであるか、またはＺ1とＺ2もしくはＺ3とＺ4、もしくはその両方が一緒にエチレン鎖もしくはプロピレン鎖を形成し；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6がそれぞれ水素であり；
Ｒ1が、ヒドロキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、およびＣ6〜Ｃ10アリールオキシからなる群から選択され、前記Ｃ1〜Ｃ6アルコキシまたはＣ6〜Ｃ10アリールオキシは、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されていてもよく；
Ｒ4は、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールである｝
の化合物を、同位体フッ素試薬と反応させる工程；
および、必要により
ｂ．このようにして得られた式Ｉの化合物をクロマトグラフィーで精製する工程、
および、必要により
ｃ．このようにして精製された式Ｉの化合物を溶媒で溶解または希釈する工程、
を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物の合成方法。
【請求項５】
請求項４に記載の式ＩＩＡまたは式ＩＩＩＡの化合物。
【請求項６】
前記テトラシステイン標識検体分子を、請求項１〜３のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物と接触させる工程を含む、テトラシステイン標識検体分子の可視化方法。
【請求項７】
前記テトラシステイン標識検体分子が、−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｘaa−Ｘaa−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−の形態の少なくとも１つのアミノ酸配列を含み、式中、各Ｘaaは非システインアミノ酸残基を表す［配列番号５］、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記式Ｉの化合物が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏオートラジオグラフィー、ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＰＥＴ、ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＳＰＥＣＴ、またはｉｎ  ｖｉｖｏ  ＭＲＩにより可視化される、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
前記検体分子がオリゴペプチド、タンパク質、糖タンパク質、または抗体である、請求項６〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
可視化の必要がある基質に投与する前に、前記式Ｉの化合物と前記テトラシステイン標識検体分子を予備混合する、請求項６〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記方法が、
ａ）前記テトラシステイン標識検体分子の第１のサンプルを、請求項１〜３のいずれか一項に記載の式Ｉの第１の化合物と接触させ、第１のテトラシステイン標識検体分子を生成する工程；および
ｂ）前記テトラシステイン標識検体分子の第２のサンプルを、請求項１〜３のいずれか一項に記載の式Ｉの第２の化合物と接触させ、第２のテトラシステイン標識検体分子を生成する工程；
を含み、
前記式Ｉの第１の化合物と第２の化合物は、それらが異なる同位体原子を含む点だけが異なり、前記第１のテトラシステイン標識検体分子と第２のテトラシステイン標識検体分子は異なる方法で可視化される、
請求項６〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
検体分子を可視化するための、請求項１〜３のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項１３】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物と、テトラシステイン標識分子との複合体。
【請求項１４】
前記テトラシステイン標識分子が−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｘaa−Ｘaa−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−（式中、各Ｘaaは非システインアミノ酸残基を表す。）［配列番号５］の形態の少なくとも１つの配列を含む、請求項１３に記載の複合体。
【請求項１５】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物、または、請求項５に記載の式ＩＩＡまたはＩＩＩＡの好適な前駆体化合物を含む、検体分子を可視化するのに有用なキット。
【請求項１６】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の式Ｉの第１の化合物、および請求項１〜３のいずれか一項に記載の式Ｉの第２の化合物を含むキットであって、前記式Ｉの第１の化合物と第２の化合物はそれらが異なる同位体原子を含む点だけが異なる、キット。
【請求項１７】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の式Ｉの第１の化合物とテトラシステイン標識分子の第１のサンプルとの第１の複合体；および
請求項１〜３のいずれか一項に記載の式Ｉの第２の化合物と前記テトラシステイン標識分子の第２のサンプルとの第２の複合体；
を含むキットであって、前記式Ｉの第１の化合物と第２の化合物は、それらが異なる同位体原子を含むという点だけが異なる、キット。
【請求項１８】
前記検体分子が、テトラシステイン標識された検体分子である、請求項１２に記載の使用、請求項１５に記載のキット、または請求項１３もしくは１４に記載の複合体。
【請求項１９】
前記検体分子が、テトラシステイン標識された、オリゴペプチド、タンパク質、糖タンパク質、または抗体である、請求項１８に記載の使用、キット、または複合体。
【請求項２０】
医薬として使用される、Ｒ1〜Ｒ6の少なくとも１つが放射性同位体原子を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、または請求項１３もしくは１４に記載の複合体。
【請求項２１】
医薬として使用される請求項２０に記載の複合体。
【請求項２２】
癌または他の過剰増殖性疾患の治療または予防に使用される、請求項２０に記載の化合物または複合体。
【請求項２３】
Ｒ1〜Ｒ6の少なくとも１つが放射性同位体原子を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、または請求項１３もしくは１４に記載の複合体の、癌または他の過剰増殖性疾患の治療または予防用の医薬を製造するための使用。
【請求項２４】
Ｒ1〜Ｒ6の少なくとも１つが放射性同位体原子を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物、または請求項１３もしくは１４に記載の複合体を、薬学的に許容される担体と一緒に含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化合物、特に、テトラシステイン部分を含有、またはそれに結合している化合物の可視化および分析に使用される放射性標識化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
二ヒ素（Ｂｉａｒｓｅｎｉｃａｌ）化合物は、例えば、Ｇｒｉｆｆｉｎ  ｅｔ．ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９８，２８１，２６９−２７２、Ａｄａｍｓ  ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００２，１２４，６０６３−６０７６、Ｇｅｎｉｎ  ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００８，１３０，８５９６−８５９７、Ｗｉｌｋｉｎｓ  ｅｔ．ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００９，１９，４２９６−４２９８、Ｍａｃｈｌｅｉｄｔ  ｅｔ．ａｌ．Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００６，３５６，２０９−２２０、国際公開第２００７１４４０７７号パンフレット、国際公開第２００５０４０１９７号パンフレット、米国特許出願公開第２００３００８３３７３号明細書、および国際公開第０３１０７０１０号パンフレットから公知である。これらの二ヒ素化合物は、適切な位置にあるヒ素部分が露出している。この特定の位置にあるヒ素部分は、テトラシステイン配列に強力に結合する。テトラシステイン配列は、幾つかのタンパク質の固有の特徴である。他のタンパク質では、それらを、例えば、標識（タグ）として配列に挿入することができる。あるいは、テトラシステイン配列は、ペプチドまたは他の化合物と非共有結合で結合する標識中に存在し得る。
【０００３】
このような二ヒ素化合物の開発は、蛍光標識により生物学的に重要な分子の可視化を可能にするといった、分子生物学および医学の分野における目的により推進された。そのような例として、例えば、タンパク質または他の生体分子の位置（例えば、細胞または組織内での位置）を特定することが挙げられる。
【０００４】
二ヒ素化合物の出現（ａｄｖｅｎｔ）は、もっぱら検出用の蛍光に依存したため、二ヒ素化合物は、通常、フルオロンおよびフルオレセインを含むキサンテン染料などの十分に確立された蛍光化合物またはコアをベースにしている。このような染料は、長い間、様々なマッピングおよび探索試験に使用されてきたが、これらは全て染料の蛍光特性に依存するものであり、Ｊｏｒｇｅ  ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００５，７０，６９０７−６９１２に最近記載された方法などにより製造することができる。
【０００５】
二ヒ素プローブは有用であったが、蛍光検出に依存するため、その適用範囲が限られている。例えば、有機染料は光退色という古くからの問題があり、それが固有の欠点となっていることは周知である。二ヒ素化合物による探索の拡大を妨げる他の側面には、検出限界が比較的高く（マイクロモル範囲）、蛍光シグナルの透過性が低い（青色〜赤色の波長の光）ことが含まれ、そのため、ｉｎ  ｖｉｖｏなどでの複雑な基質には適用できない。これらの欠点にも関わらず、二ヒ素化合物は広く使用され、様々なタンパク質構造へのその結合が広く研究されてきた。
【０００６】
米国特許出願公開第２００３／００８３３７３号明細書は、二ヒ素分子、特に、カルボキシル基を含有するフルオレセイン誘導体の提供に関するもので、3Ｈまたは125Ｉを含有するカルボキシ−フルオロセイン（ｆｌｕｏｒｏｓｃｅｉｎ）誘導体について言及している。しかし、それらの化合物について、合成の詳細または放射線分解安定性に関するデータは記載されていない。米国特許出願公開第２００３／００８３３７３号明細書はもっぱら、市販の２−カルボキシフェニルフルオロン／フルオレセインから製造することによる二ヒ素化合物の合成の詳細について記載している。
【０００７】
このようなフルオレセイン類似体中のカルボン酸基は高反応性部位であり、放射性標識試薬と相互作用することができる。このような分子の合成法はいずれも複雑で、保護基の使用を必要とする可能性があり、短寿命の放射化学合成にとって非常に重要な合成のための時間枠（タイムフレーム）に悪影響を及ぼす。実際、米国特許出願公開第２００３／００８３３７３号明細書に記載の化合物は、利用可能な放射化学方法を使用して製造することができない可能性がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
このようなカルボキシ−フルオレセイン化合物の他の欠点は、それらが互変異性を受け易く、そのため合成、精製、および目的の試験基質中での分布が非常に複雑になることである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
第１の態様では、本発明は、式Ｉ：
【化１】
0005922666.tif 000002
｛式中、
Ｘは、ＡｓまたはＰであり、
Ｚ1〜Ｚ4はそれぞれ独立して低級アルキルであるか、またはＺ1とＺ2もしくはＺ3とＺ4、もしくはその両方が一緒にエチレン鎖もしくはプロピレン鎖を形成し、それらは、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ、Ｃ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、および−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から独立して選択される１個以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよく；
Ｒ1およびＲ4は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ6〜Ｃ10ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオおよびＣ6〜Ｃ10アリールチオからなる群から選択され、ここで、前記Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ6〜Ｃ10ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオおよびＣ6〜Ｃ10アリールチオは、それぞれ、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ、Ｃ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、および−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から独立して選択される１個以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよく；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ6〜Ｃ10ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオおよびＣ6〜Ｃ10アリールチオからなる群から選択され、ここで、前記Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ6〜Ｃ10ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオおよびＣ6〜Ｃ10アリールチオは、それぞれ、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ、Ｃ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、および−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から独立して選択される１個以上の置換基で任意選択的に置換されてもよく；
Ｒ1〜Ｒ6の少なくとも１つは同位体原子を含む｝
の化合物を提供する。
【００１０】
式Ｉの化合物は、同位体標識（例えば、放射性標識）二ヒ素プローブとして、例えば、テトラシステイン標識検体分子の可視化方法に有用である。本発明の同位体標識化合物は、容易に製造することができ、分子を可視化するためのプローブとして有用となるのに十分な量で得ることができる。
【００１１】
第２の態様では、本発明は、テトラシステイン標識検体分子の可視化方法を提供し、本方法は前記テトラシステイン標識検体分子を前述の式Ｉの化合物と接触させる工程を含む。
【００１２】
第３の態様では、本発明は、前駆体分子、および必要により前駆体を式Ｉの化合物に変換するための説明書、および必要により同位体（例えば、放射性）基を提供する試薬、他の試薬、取扱説明書、安全情報、または科学的バックグラウンド物質（ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ  ｍａｔｅｒｉａｌ）の１つ以上を含むキットを提供する。本発明はまた、式Ｉの第１の化合物、式Ｉの第２の化合物を含むキットも提供し、ここで、前記式Ｉの第１の化合物と第２の化合物は、それらが異なる同位体原子を含むという点だけが異なる。本発明はまた、式Ｉの第１の化合物とテトラシステイン標識分子の第１のサンプルとの間で形成された第１の複合体；および式Ｉの第２の化合物とテトラシステイン標識分子の第２のサンプルとの間で形成された第２の複合体を含むキットも提供し、ここで、前記式Ｉの第１の化合物と第２の化合物は、それらが異なる同位体原子を含むという点だけが異なる。
【００１３】
第４の態様では、本発明は、式Ｉの化合物の合成方法を提供する。本発明はまた、式ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＩおよびＩＩＩＡの中間体も提供する。
【００１４】
第５の態様では、本発明は、二ヒ素プローブに関連する放射化学研究開発における基準物質として有用な式Ｉの新規な非標識化合物を提供する。特に、一般式Ｉ（式中、Ｒ2はメトキシであり、および／またはＲ4は４−フルオロフェニルである）の化合物が有用である。
【００１５】
第６の態様では、本発明は、前述のテトラシステイン標識検体分子と、前述の式Ｉの化合物との複合体を提供する。このような複合体は、複数のＡｓ／Ｐ−Ｓ相互作用による高い結合親和性を特徴とし、単離して、例えば、ＮＭＲ、放射能検出（ｒａｄｉｏｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）または質量分析法などの当該技術分野で公知の方法により特性評価することができる。
【００１６】
第７の態様では、本発明は、哺乳動物の癌または他の過剰増殖性疾患（ｈｙｐｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）の治療または予防方法を提供し、本方法は、前述の式Ｉ（式中、Ｒ1〜Ｒ6の少なくとも１つは放射性同位体原子を含む）の化合物を治療有効量、哺乳動物に投与する工程を含む。必要により、テトラシステイン標識された生体分子、例えば、ペプチド、タンパク質または抗体との複合体の形態であってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１（Ａ）】表面プラズモン共鳴法（ＢｉａＣｏｒｅ  ３０００）を使用する、ＰＳＭＸＢ−６と固定化ビオチン−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ、［配列番号１］とのリアルタイム相互作用を示す図である。固定化ビオチン−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ［配列番号２］を有するセンサーチップ上に１００μＭ  ＰＳＭＸＢ−６を注入した。
【図１（Ｂ）】注入段階の終わりの時点での、Ｎ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｃ［配列番号３］（ビオチン−ＣＣＰＧＣＣ［配列番号４］）および無関係の対照ペプチドへのＰＳＭＸＢ−６の結合の概要を示す図である。
【図２】化合物ＰＳＭＸＢ−４とテトラシステイン標識ペプチドとの間で形成された複合体に関するＬＣ−ＭＳデータを示す図である。
【図３】化合物ＰＳＭＸＢ−６とテトラシステイン標識ペプチドとの間で形成された複合体に関するＬＣ−ＭＳデータを示す図である。
【図４】化合物６−［3Ｈ3ＣＯ］−ＰＳＭＸＢ−６に関するＬＣＭＳデータを示す図である。
【図５（Ａ）】化合物６−［3Ｈ3ＣＯ］−ＰＳＭＸＢ−６とテトラシステイン標識ペプチドとの間で形成された複合体に関するＬＣＭＳおよび放射能検出データを示す図である。
【図５（Ｂ）】化合物６−［3Ｈ3ＣＯ］−ＰＳＭＸＢ−６とテトラシステイン標識ペプチドとの間で形成された複合体に関するＬＣＭＳおよび放射能検出データを示す図である。
【図５（Ｃ）】化合物６−［3Ｈ3ＣＯ］−ＰＳＭＸＢ−６とテトラシステイン標識ペプチドとの間で形成された複合体に関するＬＣＭＳおよび放射能検出データを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明は、式Ｉによる１種類以上の同位体標識（例えば、放射性標識）二ヒ素プローブの提供を可能にする。本プローブは、どのような同位体（例えば、１個または複数個の放射性原子）を使用するかにかかわらず、同じ構造を有し、目的とする用途に最も適切な放射性原子を存在させることができる。それ故に、本発明では、好適な放射性同位体を選択しても、プローブ（即ち、式Ｉの化合物）の化学構造、従って特性が維持されることから、様々な基質および状況において、目的とする同じテトラシステイン標識検体を可視化する独自の機会を提供する。
【００１９】
以下の定義は、別段特定の場合に限定されない限り、本明細書全体を通して使用される用語に適用される。
【００２０】
本明細書で使用する場合、「アルキル」という用語は、直鎖および分岐鎖の飽和炭化水素基の両方を意味する。アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ペンチル基、およびヘキシル基が挙げられる。
【００２１】
本明細書で使用する場合、「アルコキシ」という用語は、Ｏ−アルキル基を意味し、ここで、「アルキル」は前述のように使用される。アルコキシ基の例としては、メトキシ基およびエトキシ基が挙げられる。他の例としては、プロポキシおよびブトキシが挙げられる。
【００２２】
本明細書で使用する場合、「アルケニル」という用語は、少なくとも１つの炭素炭素二重結合を有する直鎖および分岐鎖の不飽和炭化水素基の両方を意味する。アルケニル基の例としては、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、およびヘキセニルが挙げられる。
【００２３】
本明細書で使用する場合、「アルキニル」という用語は、少なくとも１つの炭素炭素三重結合を有する直鎖および分岐鎖の不飽和炭化水素基の両方を意味する。アルキニル基の例としては、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、およびヘキセニルが挙げられる。
【００２４】
本明細書で使用する場合、「アリール」という用語は、単環式または二環式の芳香族炭素環基を意味する。アリール基の例としては、フェニルおよびナフチルが挙げられる。二環式芳香族基では、環の１つが、例えば、部分的に飽和していてもよい。このような基の例としては、インダニルおよびテトラヒドロキナフチルが挙げられる。
【００２５】
本明細書で使用する場合、「ヘテロアリール」という用語は、炭素原子の１〜３個が窒素、酸素、またはイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子で置換されている芳香族炭素環基を意味する。ヘテロアリール基は、例えば、単環式または二環式であってもよい。二環式複素環基では、各環にまたは環の１つだけに１個以上のヘテロ原子があってもよい。ヘテロ原子は、好ましくはＯまたはＮである。
【００２６】
本明細書で使用する場合、「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。
【００２７】
式Ｉの化合物、とりわけ標識された形態、例えば、放射性標識された形態のものは、プローブと称されることがある。
【００２８】
本明細書で使用する場合、「タンパク質」とは、ペプチド結合を含有する任意の分子を含むものとする。
【００２９】
本発明の化合物は、少なくとも１個の同位体原子を含む（即ち、Ｒ1〜Ｒ6の少なくとも１つは同位体原子を含む）。本明細書では、「同位体原子」とは、最も多い天然同位体ではない元素の原子である。同位体原子は、本発明の化合物のバルク材料中に、その天然存在比より高レベルで存在する。好ましくは、本発明の化合物は１〜２個の同位体原子を含有する。好ましい一実施形態では、本発明の化合物は、１個の同位体原子を含有する。別の実施形態では、本発明の化合物は２個の同位体原子を含有し、その場合、同位体原子は同じであってもよく、または、より好ましくは異なってもよい。
【００３０】
同位体原子は放射性であっても、または放射性でなくてもよい。本発明に関して有用な、検出可能な放射性原子（同位体）としては、ＰＥＴに使用する場合には：11Ｃ、18Ｆ、75Ｂｒ、76Ｂｒおよび120Ｉ、ＳＰＥＣＴに使用する場合には：123Ｉおよび131Ｉ、ならびに、ｉｎ−ｖｉｔｒｏ、組織、および死後サンプル中の検出には：3Ｈ、14Ｃおよび125Ｉが挙げられる。最も好ましい放射性原子は、11Ｃ、18Ｆ、123Ｉ、19Ｆ、3Ｈおよび14Ｃである。ＭＲＩ用には、非放射性同位体の19Ｆおよび13Ｃが有用である。好ましくは、同位体原子は放射性原子である。（即ち、Ｒ1〜Ｒ6の少なくとも１つは放射性同位体原子を含む）。
【００３１】
好ましくは、ＸはＡｓである。
【００３２】
本発明に関して、特記しない限り、任意選択的に置換される（＝置換されていてもよい）という用語は、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ、Ｃ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、および−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなるリストから独立して選択される１個以上の置換基の任意選択的な存在（＝場合により存在していてもよい）を示す。好ましい任意選択的な置換基としては、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ、Ｃ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、および−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）が挙げられる。幾つかの実施形態では、任意選択的な置換基は、それぞれ独立して、Ｃ1〜Ｃ3アルキル、Ｃ6アリール、Ｃ1〜Ｃ3アシル、Ｃ6アロイル、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシ、Ｃ6アリールオキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ3アルキルアミノ、ジ−Ｃ6アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ3アルキルチオ、Ｃ6アリールチオ、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ3アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ3アルキル）2、および−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ3アルキル）からなる群から選択されてもよい。他の実施形態では、任意選択的な置換基は、それぞれ独立して、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノからなる群から選択されてもよい。
【００３３】
各任意選択的に置換された基は、前述の任意選択的な置換基を１個有することが好ましいが、原子価および立体因子が許す場合、２個以上の任意選択的な置換基が存在してもよい。例えば、任意選択的に置換された基に２個または３個の置換基が存在してもよい。
【００３４】
好ましくは、Ｚ1〜Ｚ4は独立して低級アルキルであるか、またはＺ1とＺ2もしくはＺ3とＺ4、もしくはその両方が一緒にエチレン鎖もしくはプロピレン鎖を形成し、そのアルキル、エチレン鎖またはプロピレン鎖は、ハロゲンおよびＣ1〜Ｃ3アルコキシからなる群から独立して選択される１個以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよい。より好ましくは、Ｚ1〜Ｚ4は独立してＣ1〜6アルキルであるか、またはＺ1とＺ2もしくはＺ3とＺ4、もしくはその両方が一緒にエチレン鎖もしくはプロピレン鎖を形成する（即ち、式Ｉの化合物は好ましくは、Ｚ1〜Ｚ4基に任意選択的な置換基を含まない）。好ましくは、Ｚ1とＺ2は一緒にエチレンなどのアルキレンを表し、Ｚ3とＺ4は一緒にエチレンなどのアルキレンを表す。
【００３５】
好ましくは、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも１つは、同位体（例えば、放射性）原子を含む。Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4および／またはＲ5に同位体原子を含有する化合物は、それらの同位体原子がカルボニル基に対してオルト位に位置していないため、特に優れた放射線分解安定性を有する。カルボニル基に対してオルト位に同位体原子を含有する化合物は、カルボニル基に関連する互変異性効果のため、安定性が低い可能性がある。従って、一実施形態では、本発明の化合物はＲ2またはＲ6に同位体原子を含有しない。
【００３６】
より好ましくは、Ｒ1およびＲ4の少なくとも１つが同位体（例えば、放射性）原子を含む。一実施形態では、Ｒ1が同位体（例えば、放射性）原子を含む。別の実施形態では、Ｒ4が同位体（例えば、放射性）原子を含む。別の実施形態では、Ｒ1とＲ4がそれぞれ同位体（例えば、放射性）原子を含む。このような好ましい放射性原子には、3Ｈ、11Ｃ、14Ｃ、および18Ｆがある。
【００３７】
Ｒ1が放射性原子を含む場合、好ましくは、Ｒ1は、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、例えば、メトキシ、即ち、Ｈ314ＣＯ−、Ｈ311ＣＯ−または3ＨnＨ3-nＣＯ−（式中、ｎは１、２、または３であり、そのうちｎ＝３が好ましい）である。
【００３８】
Ｒ4が放射性原子を含む場合、好ましくは、Ｒ4は、フルオロアリール、例えば、フルオロフェニル、とりわけ４−フルオロフェニルである。このようなＲ4基は、18Ｆ、または11Ｃ、14Ｃもしくは3Ｈを含んでもよいが、18Ｆが好ましい。
【００３９】
あるいは、Ｒ4が放射性原子を含む場合、好ましくは、Ｒ4は、ヨードアリール、例えば、ヨードフェニル、とりわけ４−ヨードフェニルである。このようなＲ4基は、120Ｉ、123Ｉ、125Ｉまたは131Ｉを含んでもよい。
【００４０】
別の好ましい実施形態では、Ｒ4は、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシで置換されたＣ6〜Ｃ10アリール（例えば、フェニル）である。その好ましい実施形態では、Ｃ1〜Ｃ3アルコキシは、例えば、メトキシ、即ち、Ｈ314ＣＯ−、Ｈ311ＣＯ−または3ＨnＨ3-nＣＯ−（式中、ｎは１、２、または３であり、そのうちｎ＝３が好ましい）である。
【００４１】
別の好ましい実施形態では、Ｒ4は、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノで置換されたＣ6〜Ｃ10アリール（例えば、フェニル）である。その好ましい実施形態では、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノは、例えば、メチルアミノまたはジメチルアミノ、即ち、ＮＨ11ＣＨ3、ＮＨ14ＣＨ3、もしくはＮＨＣ3ＨnＨ3-n（式中、ｎは１、２、または３であり、そのうちｎ＝３が好ましい）；または、ＮＣＨ3（11ＣＨ3）、ＮＣＨ3（14ＣＨ3）、もしくはＮＣＨ3（Ｃ3ＨnＨ3-n）（式中、ｎは１、２または３であり、そのうちｎ＝３が好ましい）である。
【００４２】
好ましくは、Ｒ1は、ヒドロキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、およびＣ6〜Ｃ10アリールオキシからなる群から選択され、ここで、前記Ｃ1〜Ｃ6アルコキシまたはＣ6〜Ｃ10アリールオキシは、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜6アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されていてもよい。より好ましくは、Ｒ1は、ヒドロキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、およびＣ6〜Ｃ10アリールオキシからなる群から選択され、ここで、前記Ｃ1〜Ｃ6アルコキシまたはＣ6〜Ｃ10アリールオキシは、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜6アルコキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されていてもよい。さらにより好ましくは、Ｒ1はヒドロキシまたはＣ1〜Ｃ6アルコキシである。さらにより好ましくは、Ｒ1はＣ1〜Ｃ6アルコキシである。好ましい一実施形態では、Ｒ1はメトキシである。別の実施形態では、Ｒ1はヒドロキシまたはメトキシである。
【００４３】
好ましくは、Ｒ4は、ハロゲン、ホルミル、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ6〜Ｃ10ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオおよびＣ6〜Ｃ10アリールチオであり、ここで、前記Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ6〜Ｃ10ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオおよびＣ6〜Ｃ10アリールチオは、それぞれ、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ、Ｃ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、および−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から独立して選択される１個以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよい。より好ましくは、Ｒ4は、ハロゲン、Ｃ6〜Ｃ10アリールまたはＣ6〜Ｃ10ヘテロアリールであり、ここで、前記Ｃ6〜Ｃ10アリールまたはＣ6〜Ｃ10ヘテロアリールは、それぞれ、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノからなる群から独立して選択される１個以上の置換基で任意選択的に置換されてもよい。好ましい一実施形態では、Ｒ4は、ハロゲン、Ｃ6〜Ｃ10アリールまたはＣ6〜Ｃ10ヘテロアリールであり、ここで、前記Ｃ6〜Ｃ10アリールまたはＣ6〜Ｃ10ヘテロアリールは、それぞれ、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノからなる群から独立して選択される１個以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよい。さらにより好ましくは、Ｒ4は、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールである。さらにより好ましくは、Ｒ4は、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールである。
【００４４】
好ましい一実施形態では、Ｒ4は、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されたフェニルである。別の好ましい実施形態では、Ｒ4は、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されたフェニルである。別の好ましい実施形態では、Ｒ4は、３個以下のハロゲンで任意選択的に置換されたフェニルである。別の好ましい実施形態では、Ｒ4は４−フルオロフェニルである。
【００４５】
好ましい一実施形態では、Ｒ4は、少なくとも１個の11Ｃまたは14Ｃを含有する任意選択的に置換されたフェニルであり、ここで、前記フェニルは、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されていてもよい。好ましい一実施形態では、Ｒ4は、ＮＨＣ3Ｈ3、ＮＨ11ＣＨ3、ＮＨ14ＣＨ3、ＮＣＨ3（Ｃ3Ｈ3）、ＮＣＨ3（11ＣＨ3）、ＮＣＨ3（14ＣＨ3）、76Ｂｒ、123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、3Ｈ、または18Ｆの１つ以上で置換されたフェニルである。
【００４６】
好ましくは、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ1〜Ｃ3アルキルおよびＣ1〜Ｃ3アルコキシからなる群から選択される。さらに好ましい実施形態では、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つ、例えば、３つ、好ましくは全部が水素である。
【００４７】
好ましい一実施形態では、Ｒ2およびＲ6は水素であり；Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4、およびＲ5の少なくとも１つは同位体原子を含む。
【００４８】
別の好ましい実施形態では、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6は水素であり；Ｒ1およびＲ4の少なくとも１つは同位体原子を含む。
【００４９】
好ましい実施形態では、前述の式Ｉの化合物は、Ｚ1〜Ｚ4基およびＲ1〜Ｒ6基に任意選択的な置換基を含まない。
【００５０】
別の好ましい実施形態では、Ｒ1は、ヒドロキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、およびＣ6〜Ｃ10アリールオキシからなる群から選択され、ここで、前記Ｃ1〜Ｃ6アルコキシまたはＣ6〜Ｃ10アリールオキシは、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜6アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されていてもよく；Ｒ1およびＲ4の少なくとも１つは同位体原子を含む。
【００５１】
別の好ましい実施形態では、Ｒ4は、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールであり；Ｒ1およびＲ4の少なくとも１つは同位体原子を含む。
【００５２】
別の好ましい実施形態では、ＸはＡｓであり；Ｚ1〜Ｚ4は独立してＣ1〜6アルキルであるか、またはＺ1とＺ2もしくはＺ3とＺ4、もしくはその両方が一緒にエチレン鎖もしくはプロピレン鎖を形成し；Ｒ4は、ハロゲン、ホルミル、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ6〜Ｃ10ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオおよびＣ6〜Ｃ10アリールチオであり、ここで、前記Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ6〜Ｃ10ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオおよびＣ6〜Ｃ10アリールチオは、それぞれ、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ、Ｃ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、および−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から独立して選択される１個以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよく；Ｒ1およびＲ4の少なくとも１つは同位体原子を含む。
【００５３】
別の好ましい実施形態では、ＸはＡｓであり；Ｚ1〜Ｚ4は独立してＣ1〜6アルキルであるか、またはＺ1とＺ2もしくはＺ3とＺ4、もしくはその両方が一緒にエチレン鎖もしくはプロピレン鎖を形成し；Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6はそれぞれ水素であり；Ｒ1は、ヒドロキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、およびＣ6〜Ｃ10アリールオキシからなる群から選択され、ここで、前記Ｃ1〜Ｃ6アルコキシまたはＣ6〜Ｃ10アリールオキシは、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されていてもよく；Ｒ4は、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールであり；Ｒ1およびＲ4の少なくとも１つは同位体原子を含む。
【００５４】
別の好ましい実施形態では、ＸはＡｓであり；Ｚ1〜Ｚ4は独立してＣ1〜6アルキルであるか、またはＺ1とＺ2もしくはＺ3とＺ4、もしくはその両方が一緒にエチレン鎖もしくはプロピレン鎖を形成し；Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6はそれぞれ水素であり；Ｒ1はＣ1〜Ｃ6アルコキシ、およびＣ6〜Ｃ10アリールオキシからなる群から選択され、ここで、前記Ｃ1〜Ｃ6アルコキシまたはＣ6〜Ｃ10アリールオキシは、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されていてもよく；Ｒ4は、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールであり；Ｒ1およびＲ4の少なくとも１つは同位体原子を含む。
【００５５】
別の好ましい実施形態では、ＸはＡｓであり；Ｚ1〜Ｚ4は独立してＣ1〜6アルキルであるか、またはＺ1とＺ2もしくはＺ3とＺ4、もしくはその両方が一緒にエチレン鎖もしくはプロピレン鎖を形成し；Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6はそれぞれ水素であり；Ｒ1は、ヒドロキシ、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、およびＣ6〜Ｃ10アリールオキシからなる群から選択され、ここで、前記Ｃ1〜Ｃ6アルコキシまたはＣ6〜Ｃ10アリールオキシは、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されていてもよく；Ｒ4は、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールであり；Ｒ1およびＲ4の少なくとも１つは同位体原子を含む。
【００５６】
別の好ましい実施形態では、ＸはＡｓであり；Ｚ1〜Ｚ4は独立してＣ1〜6アルキルであるか、またはＺ1とＺ2もしくはＺ3とＺ4、もしくはその両方が一緒にエチレン鎖もしくはプロピレン鎖を形成し；Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6はそれぞれ水素であり；Ｒ1は、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシであり；Ｒ4は、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールであり；Ｒ1およびＲ4の少なくとも１つは同位体原子を含む。
【００５７】
別の好ましい実施形態では、
ａ）Ｒ1はヒドロキシまたはメトキシであり；
Ｒ4は、少なくとも１個の11Ｃまたは14Ｃを含有する任意選択的に置換されたフェニル（ここで、前記フェニルは、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されていてもよい）であるか、
または、Ｒ4は、ＮＨＣ3Ｈ3、ＮＨ11ＣＨ3、ＮＨ14ＣＨ3、ＮＣＨ3（Ｃ3Ｈ3）、ＮＣＨ3（11ＣＨ3）、ＮＣＨ3（14ＣＨ3）、76Ｂｒ、123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、3Ｈ、または18Ｆの１つ以上で置換されたフェニルである；
あるいは：
ｂ）Ｒ1は、Ｃ3Ｈ3Ｏ、11ＣＨ3Ｏ、および14ＣＨ3Ｏからなる群から選択され；
Ｒ4は、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されたフェニルである。
【００５８】
別の好ましい実施形態では、
Ｚ1とＺ2、およびＺ3とＺ4は、それぞれ、一緒にエチレンを表し；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6は水素であり；
ａ）Ｒ1はメトキシであり；
Ｒ4は、少なくとも１個の11Ｃまたは14Ｃを含有する任意選択的に置換されたフェニル（ここで、前記フェニルは、ハロゲン、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜6アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、Ｃ2〜4アルキニル、Ｃ1〜3アルコキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、およびシアノから独立して選択される３個以下の置換基で任意選択的に置換されていてもよい）であるか、
または、Ｒ4は、ＮＨＣ3Ｈ3、ＮＨ11ＣＨ3、ＮＨ14ＣＨ3、ＮＣＨ3（Ｃ3Ｈ3）、ＮＣＨ3（11ＣＨ3）、ＮＣＨ3（14ＣＨ3）、76Ｂｒ、123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、3Ｈ、または18Ｆの１つ以上で置換されたフェニルである；
あるいは：
ｂ）Ｒ1は、Ｃ3Ｈ3Ｏ、11ＣＨ3Ｏ、および14ＣＨ3Ｏからなる群から選択され；
Ｒ4は４−フルオロフェニルである。
【００５９】
好ましい実施形態では、前述の式Ｉの化合物は、Ｚ1〜Ｚ4基およびＲ1〜Ｒ6基に任意選択的な置換基を含まない。
【００６０】
とりわけ好ましい実施形態では、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6は全て水素であり、Ｒ1は、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、例えば、メトキシであり、Ｒ4はフルオロアリール、例えば、フルオロフェニル、とりわけ４−フルオロフェニルであり、Ｚ1とＺ2は一緒にエチレンを表し、Ｚ3とＺ4は一緒にエチレンを表し、Ｒ1またはＲ4は、放射性原子を１個または複数個含むが、１個含むことが好ましい。この実施形態では、Ｒ4は通常18Ｆを含有するが、Ｒ1は通常、11Ｃ、14Ｃを１個、または3Ｈを１個以上含有する。
【００６１】
本発明は、また、式Ｉ｛式中、ＸはＡｓであり；Ｚ1〜Ｚ4は独立して低級アルキルであるか、またはＺ1とＺ2もしくはＺ3とＺ4、もしくはその両方が一緒にエチレン鎖もしくはプロピレン鎖を形成し、それらは任意選択的に置換されていてもよく；Ｒ1〜Ｒ6は、水素、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリール、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アシル、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アロイル、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルコキシ、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールオキシ、任意選択的に置換されたモノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、任意選択的に置換されたモノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキルチオ、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、カルボキシル、アミノ、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から独立して選択され、Ｒ1〜Ｒ6の少なくとも１つは同位体原子を含む｝の化合物も提供する。その実施形態では、好ましくは、Ｒ1〜Ｒ6は、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アシル、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アロイル、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルコキシ、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールオキシ、任意選択的に置換されたモノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、任意選択的に置換されたモノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキルチオ、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ホルミル、カルボキシル、アミノ、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から独立して選択される。より好ましくは、Ｒ1〜Ｒ6は、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アシル、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アロイル、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルコキシ、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールオキシ、任意選択的に置換されたモノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、任意選択的に置換されたモノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキルチオ、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から独立して選択される。好ましくは、Ｒ4は、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールであり、Ｒ1およびＲ4の少なくとも１つは、少なくとも１個の放射性原子を含有する。より好ましくは、
ａ）Ｒ1は、ヒドロキシまたはメトキシであり；Ｒ4は、少なくとも１個の11Ｃもしくは14Ｃを含有する任意選択的に置換されたフェニルであるか、またはＮＨＣ3Ｈ3、ＮＨ11ＣＨ3、ＮＨ14ＣＨ3、ＮＣＨ3（Ｃ3Ｈ3）、ＮＣＨ3（11ＣＨ3）、ＮＣＨ3（14ＣＨ3）、76Ｂｒ、123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、3Ｈ、または18Ｆの１つ以上で置換されたフェニルである；あるいは
ｂ）Ｒ1は、Ｃ3Ｈ3Ｏ、11ＣＨ3Ｏ、および14ＣＨ3Ｏからなる群から選択され、
Ｒ4は、任意選択的に置換されたフェニルであり；Ｒ1〜Ｒ6の少なくとも１つは、同位体（例えば、放射性同位体）原子を含む。さらにより好ましくは、Ｚ1とＺ2、およびＺ3とＺ4はそれぞれ、一緒にエチレンを表し；Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6は水素であり、ａ）Ｒ1はメトキシであり、Ｒ4は、11Ｃもしくは14Ｃを少なくとも１個含有する任意選択的に置換されたフェニルであるか、またはＮＨＣ3Ｈ3、ＮＨ11ＣＨ3、ＮＨ14ＣＨ3、ＮＣＨ3（Ｃ3Ｈ3）、ＮＣＨ3（11ＣＨ3）、ＮＣＨ3（14ＣＨ3）、76Ｂｒ、123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、3Ｈ、または18Ｆの１つで置換されたフェニルである；あるいはｂ）Ｒ1は、Ｃ3Ｈ3Ｏ、11ＣＨ3Ｏ、および14ＣＨ3Ｏからなる群から選択され、Ｒ4は４−フルオロフェニルである。
【００６２】
本発明の好ましい実施形態は、幾つかの関連する同位体（例えば、放射性同位体）を式Ｉのプローブ化合物中に、異なる別個の分子の形態で使用することを可能にするものである。このような実施形態では、式Ｉのプローブの構造を変化させることなく、関連する原子の１個以上が放射性同位体などの同位体で置換される。従って、本発明の好ましい実施形態は、各同位体標識化合物を実際に直接標識（ｒａｄｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）することが可能な位置でフッ素、ヨウ素、水素、および炭素の少なくとも２つ、好ましくは３つ、または４つ全てを結合させるものである。例えば、ヨウ素またはフッ素同位体原子（このうち、一般にフッ素が好ましい）、ならびに水素または炭素同位体原子（例えば、放射性同位体）を含み得る官能基（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ）を組み込む式Ｉの化合物が好ましい。通常、後者は、メトキシ、即ち、3ＨnＨ3-nＣ−（式中、ｎは１、２、または３であり、そのうち後者が好ましい）、または、Ｈ314Ｃ−、もしくはＨ311Ｃ−などのＣ1〜Ｃ6アルコキシから選択されるＲ1である。
【００６３】
１個以上の安定同位体、通常、2Ｈ、19Ｆまたは13Ｃを含む式Ｉの好ましい化合物は、前述の式Ｉの放射性標識化合物の好ましい実施形態と同じ構造を有する。さらに、19Ｆを含有する式Ｉの化合物では、化合物の特に好ましい基は、Ｒ1位にＣ19Ｆ3Ｏ−基を含む。
【００６４】
本発明の好ましい化合物は、同位体（例えば、放射性同位体）原子であってもよい２個以上の原子または基を含む。これらの化合物により、同じ本発明の化合物を用いて異なる方法を使用して可視化および分析することが可能となり、異なる標識の施された複数の同じ化学構造（異なる同位体原子の存在以外）のプローブを使用して、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏオートラジオグラフィー、ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＰＥＴ、ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＳＰＥＣＴ、またはｉｎ  ｖｉｖｏ  ＭＲＩなどの基質間での結果の変換が可能となる。
【００６５】
本発明はまたテトラシステイン標識検体分子の可視化方法も提供し、本方法は、前記テトラシステイン標識検体分子を式Ｉの化合物と接触させる工程を含む。
【００６６】
本方法では、式Ｉの化合物を既知の経路および方法でサンプルに導入し、標準的装置および方法で放射線を検出する。例えば、蛍光体画像法（ｐｈｏｓｐｈｏｒ  ｉｍａｇｉｎｇ）、陽電子放出型断層撮影法、写真フィルム画像法、単光子放射型コンピュータ断層撮影法、シンチレーション検出、質量分析法、または加速質量分析法を使用して、サンプルからの放射線を検出することができる。他の好適な手段、例えば、ＮＭＲ、ＭＲＩまたは質量分析法または加速質量分析法で非放射性標識を検出することができる。
【００６７】
検体分子が、適切な位置にあるシステイン残基を有する場合、本方法は、目的とする任意の検体分子の位置解析（即ち、マッピングまたは探索）、可視化、位置特定、測定、または定量化を提供する。本方法の利点は、二ヒ素化合物を使用する蛍光マッピングに関する従来技術の知識、添加剤、検査（ｗｏｒｋ−ｕｐ）手順、適用モードまたはサンプル調製を本方法に直接、通常通り使用できることである。
【００６８】
一実施形態では、後でプローブを導入する前に、検体分子を目的の基質に入れる（プレターゲティング）。
【００６９】
別の実施形態では、検体分子がプローブに結合してなる複合体を目的の基質に入れる。
【００７０】
本明細書に記載の方法の別の利点は、同じプローブ（即ち、同一の構造を有するプローブ）を、例えば、細胞、小器官、組織、または他の任意の関連する基質などのｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる試験、および、微生物、動物個体、またはヒトなどのｉｎ  ｖｉｖｏで行われる試験を含む、いずれの試験にも適用できることである。当業者は、適用され得る各用途に好適な形態の放射線に関連する適切な放射性原子または基を選択することができる。本発明は、例えば、3Ｈ、11Ｃ、14Ｃ、18Ｆを含むがこれらに限定されるものではない様々な放射性原子もしくは基、または他の関連する同位体を選択し、それを構造的に異なる単一のプローブに組み込む独自の機会を提供する。とりわけ、本発明の重要な態様の説明に使用し得る簡単な一例は、式Ｉ｛式中、ＸはＡｓであり、Ｚ1はＺ2と一緒に、およびＺ3はＺ4と一緒に共にエチレンを表し、Ｒ1はメトキシであり、Ｒ4は４−フルオロフェニルであり、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6は全て水素である｝の化合物を使用するテトラシステイン標識検体分子の可視化方法である。このような方法は、例えば、Ｒ1に3Ｈ、11Ｃ、もしくは14Ｃ、またはＲ4に18Ｆの１つを組み込むと共に、このようにして製造される一組の、異なる標識の施された４つのプローブが同じ分子構造、物理化学的特性、および結合親和性を維持する、独自の機会を提供する。同様に、例えば、４−ヨードフェニルなどのヨードフェニルであってもよいＲ4中にヨウ素同位体を有するプローブを、Ｒ1中に3Ｈ、11Ｃ、または14Ｃを有する同一構造のプローブと組み合わせてもよい。このようなものとして、本明細書に記載の方法は、創薬研究開発、農業研究、ならびに分子生物学を含む生命科学に広く使用される。
【００７１】
従って、一実施形態では、テトラシステイン標識検体分子の可視化方法は、ａ）前記テトラシステイン標識検体分子の第１のサンプルを式Ｉの第１の化合物と接触させて第１のテトラシステイン標識検体分子を生成する工程；およびｂ）前記テトラシステイン標識検体分子の第２のサンプルを式Ｉの第２の化合物と接触させて第２のテトラシステイン標識検体分子を生成する工程；を含み、ここで、前記式Ｉの第１の化合物と第２の化合物はそれらが異なる同位体原子を含む点だけが異なり、ここで、前記第１のテトラシステイン標識検体分子と第２のテトラシステイン標識検体分子は異なる方法で可視化される。
【００７２】
本発明はまた、式Ｉの第１の化合物と式Ｉの第２の化合物を含むキットも提供し、ここで、前記式Ｉの第１の化合物と第２の化合物は、それらが異なる同位体原子を含む点だけが異なる。本発明はまた、式Ｉの第１の化合物と、テトラシステイン標識分子の第１のサンプルとの第１の複合体；および、式Ｉの第２の化合物とテトラシステイン標識分子の第２のサンプルとの第２の複合体を含むキットも提供し、ここで、前記式Ｉの第１の化合物と第２の化合物は、それらが異なる同位体原子を含む点だけが異なる。本キットは上記方法に使用される。
【００７３】
本発明者らは、本方法に使用される種類のプローブ、即ち、一般式Ｉの化合物が、既知の二ヒ素化合物と同様に、典型的なテトラシステイン標識検体分子に対して高い親和性を示すことを実験により示してきた。放射性標識された二ヒ素化合物はこれまでに全く合成されなかったため、放射線分解に関する問題の対処もなされてこなかった。既知の蛍光二ヒ素化合物中には常に存在したが、本発明には全く適していないカルボン酸をＲ4基に含まない二ヒ素化合物は、有機溶媒に不溶も同然であり、このためそれらの製造および精製は非常に困難であるということが一般に言える。
【００７４】
本方法の一実施形態では、通常、式Ｉの化合物を目的の標識検体分子と混合し、目的の宿主、組織、器官、基質、細胞培養物、細胞ホモジネート、または他の標的系に提供する。本方法による適用は、注射器による注入、ピペッティング、浸漬（ｓｏａｋｉｎｇ）、液浸（ｉｍｍｅｒｓｉｎｇ）、または当業者に公知の他の手段により行うことができる。
【００７５】
必要により、本方法はジチオール解毒剤の添加を含んでもよく、これは非特異的結合または毒性を最小限に抑えるのに有用となり得る。このような有用なジチオールとしては、１，２−ジチオール、例えば、エタンジチオール、２，３−ジメルカプトプロパノール、およびジチオトレイトール等が挙げられる。
【００７６】
前記検体分子が適切な位置にあるシステイン残基を含む場合、本発明は任意のテトラシステイン標識検体分子を可視化、位置特定、測定、または定量化する方法を提供する。例えば、それは、−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｘaa−Ｘaa−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−［配列番号５］の形態の少なくとも１つのアミノ酸配列を含んでもよく、式中、各Ｘaaは、天然のアミノ酸残基、非天然のアミノ酸残基、および、一般式−ＨＮ−ＣＡ1Ａ2−ＣＯ−（式中、Ａ1とＡ2は同じであるかまたは異なり、任意の置換基を表す）の他の残基を含む、任意の非システインアミノ酸残基を表す。好ましい配列は、−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｘaa−Ｘaa−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−が−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−［配列番号６］の場合である。本方法が特に有用な検体分子としては、オリゴペプチド、タンパク質、糖タンパク質、および抗体が挙げられる。
【００７７】
本明細書に記載の方法の他の利点としては、二ヒ素プローブの製造および精製と、標準的方法による標識検体の可視化の両方に関して、十分に確立された放射化学方法が適用されることが挙げられる。さらに、検体親和性または他の関連する観測は標識種に直接移行可能であるため、本方法の範囲をさらに一層広げるために、様々な有用な放射性標識二ヒ素プローブをまず放射性標識されていない形態で設計、合成、および試験することができる。そのため、式Ｉの新規な非同位体標識化合物（例えば、非放射性標識化合物）も本発明の一部となる。
【００７８】
本発明者らには、式Ｉの化合物の放射性標識された変種を採用する方法の他に、標識が2Ｈ、19Ｆまたは13Ｃの１つ以上の原子などの非放射性（即ち、安定）同位体である方法の用途もあることが分かった。本方法のこのような変法も本発明の範囲に含まれる。式Ｉの化合物が、例えば、安定同位体である2Ｈおよび13Ｃの１つ以上を含む場合、本発明は、各標識部位に、天然同位体存在比による通常存在するレベルを十分上回るレベルの同位体を提供するものとする。例えば、13Ｃ標識を有する式Ｉの任意の化合物は、複数の標識を組み込む場合、好ましくは、各標識位置におけるこの同位体のレベルが、２％超、通常５０％超、好ましくは８０％超、理想的には９０％超のものとする。必ずしも同一ではないが、類似のレベルが2Ｈおよび19Ｆの場合にも適用される。
【００７９】
本発明の第２の態様の好ましい実施形態は、テトラシステイン標識検体分子の可視化方法であり、本方法は、前記テトラシステイン標識検体分子を、上記に詳述した好ましい実施形態のいずれかに記載の式Ｉの好ましい化合物と接触させる工程を含む。
【００８０】
本明細書に開示される方法の他の好ましい実施形態は、テトラシステイン標識検体分子が−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｘaa−Ｘaa−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−［配列番号５］の形態の少なくとも１つのアミノ酸配列を含む方法を含み、式中、各Ｘaaは非システインアミノ酸残基を表す。代替の実施形態では、配列は、２組のＣｙｓ残基間に１個、３個、４個または５個のＸaa基を含む［配列番号８］。
【００８１】
典型的な実施形態は、Ｘaaが、天然のアミノ酸残基、非天然のアミノ酸残基、および、一般式−ＨＮ−ＣＡ1Ａ2−ＣＯ−（Ａ1とＡ2は同じであるかまたは異なり、任意の置換基を表す）の他の残基を含む、任意の非システインアミノ酸残基を表すものである。
【００８２】
好ましい配列は、テトラシステイン標識検体分子が−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−の配列［配列番号６］を含有する場合である。
【００８３】
本方法では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏオートラジオグラフィー、ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＰＥＴ、ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＳＰＥＣＴ、またはｉｎ  ｖｉｖｏ  ＭＲＩで式Ｉの化合物を可視化することが好ましい。検体分子がオリゴペプチド、タンパク質、糖タンパク質、または抗体であることがさらに好ましい。とりわけ好ましい検体としては、タンパク質および抗体、特にタンパク質が挙げられる。
【００８４】
さらに、本発明の方法は、可視化の必要がある基質に投与する前に、式Ｉの化合物とテトラシステイン標識検体分子を予備混合することを特に特徴とする。
【００８５】
本明細書に開示される方法による可視化は、例えば、3Ｈ、11Ｃ、14Ｃ、18Ｆを含むがこれらに限定されるものではない、関連するいずれか１つの同位体を、構造的に異なる単一のプローブ、即ち、式Ｉの化合物に意図的に組み込むことができる場合、とりわけ有効である。
【００８６】
必要により、本方法は、例えば、合成により同位体原子（例えば、放射性原子）または基を組み込むことにより、式Ｉの化合物の好適な前駆体を標識プローブに変換する追加の工程を含んでもよい。必要により、このようにして得られたプローブを当業者に公知の標準的な方法で精製してもよい。
【００８７】
本発明は、式Ｉの化合物に変換され得る前駆体分子、ならびに、前駆体を式Ｉの化合物に変換するための説明書、試薬、取扱説明書、安全情報、および科学的バックグラウンド物質の１つ以上を含むキットを含む。好ましくは、キットは、前述の式Ｉの好ましい化合物の前駆体を含む。例えば、キットは、前述の式ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＩまたはＩＩＩＡの化合物を含んでもよい。キットの残りの構成要素は、好ましくは、前述の好ましい検体分子の可視化を可能にする。
【００８８】
本発明はまた、多くの同位体原子（例えば、放射性同位体原子）のいずれかを含有する一連の分子プローブの、柔軟な合成法も提供する。本発明の合成方法により、様々な同位体原子のいずれかを含有する基が、同じキサンテン骨格／構造に制御導入される。これにより、全く同じ化学構造を有するが異なる標識の施された複数のプローブを使用して、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏオートラジオグラフィー、ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＰＥＴ、ｉｎ  ｖｉｖｏ  ＳＰＥＣＴ、またはｉｎ  ｖｉｖｏ  ＭＲＩなどの基質間での結果の変換が可能となる。
【００８９】
第４の態様では、本発明は、
１）好適な前駆体分子を、同位体（例えば、放射性）原子または基を導入することができる試薬と反応させる工程、および、必要により
２）このようにして得られた式Ｉの化合物を精製および単離する工程、
を含む、前述の式Ｉの化合物の合成方法を提供する。
【００９０】
好適な前駆体分子の例としては、式ＩＩ：
【化２】
0005922666.tif 000003
｛式中、
Ｘは、Ｐ、またはより好ましくはＡｓであり；
Ｚ1〜Ｚ4は独立してＣ1〜6アルキルであるか、またはＺ1とＺ2もしくはＺ3とＺ4、もしくはその両方が一緒にエチレン鎖もしくはプロピレン鎖を形成し、それらは任意選択的に置換されていてもよく；
Ｒ1〜Ｒ6の１つは、ＯＨ、ＳＨまたはＮＨ2基であり；
Ｒ1〜Ｒ6の残りは、水素、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリール、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アシル、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アロイル、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルコキシ、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールオキシ、任意選択的に置換されたモノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、任意選択的に置換されたモノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキルチオ、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）を含む群から独立して選択される｝
の化合物が挙げられる。
【００９１】
このような前駆体を、少なくとも１個の同位体（例えば、放射性）原子を有するアルキル化剤と反応させてもよい。有用な試薬は、3Ｈ、11Ｃ、または14Ｃを少なくとも１個、およびさらに、アリールオキシ基、アリールチオ基、またはアリールアミノ基で置換されていてもよい脱離基（ｎｕｃｌｅｏｐｈｕｇｅ）を含有するものである。特に有用な試薬には、Ｃ1〜Ｃ6アルキルハライドおよびＣ1〜Ｃ6アルキルスルホネート、Ｃ1〜Ｃ6アルキルトリフレート、Ｃ1〜Ｃ6アルキルトシレート、Ｃ1〜Ｃ6アルキルメシレート、Ｃ1〜Ｃ6アルキルブロシレート、Ｃ1〜Ｃ6アルキルノシレートが挙げられ、これらは１個以上の3Ｈ、11Ｃ、または14Ｃ原子を有し得る。当該技術分野では、3ＨnＨ3-nＣ−Ｘ｛式中、Ｘは、ハライドまたはスルホネート、トリフレート、トシレート、メシレート、ブロシレート、またはノシレートなどの脱離基であり、ｎは１、２、または３である｝などの試薬が公知であり、類似体の2ＨnＨ3-nＣ−Ｘ試薬も公知である。同様に、Ｈ313Ｃ−Ｘ，  Ｈ314Ｃ−Ｘ、Ｈ311Ｃ−Ｘ（式中、Ｘは前述の脱離基である）などの試薬も使用可能である。3ＨnＨ3-nＣ−Ｘの好ましい形態は、3Ｈ3Ｃ−Ｘである。
【００９２】
他の好適な前駆体分子としては、式ＩＩＩ：
【化３】
0005922666.tif 000004
｛式中、
Ｘは、Ｐ、またはより好ましくはＡｓであり；
Ｚ1〜Ｚ4は独立してＣ1〜6アルキルであるか、またはＺ1とＺ2もしくはＺ3とＺ4、もしくはその両方が一緒にエチレン鎖もしくはプロピレン鎖を形成し、それらは任意選択的に置換されていてもよく；
Ｒ4は、トリメチルアンモニウム基、ハロゲンまたはニトロ基で置換されたフェニルあり；
Ｒ1〜Ｒ6の残りは、水素、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリール、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アシル、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アロイル、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルコキシ、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールオキシ、任意選択的に置換されたモノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、任意選択的に置換されたモノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキルチオ、任意選択的に置換されたＣ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、アミノ、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）を含む群から独立して選択される｝
の化合物が挙げられる。
【００９３】
このような前駆体分子中で、Ｒ4は、例えば、芳香族求核置換による、例えば、フッ素またはヨウ素の同位体による置換が可能な基を有する。このような前駆体を、例えば、放射性フッ素試薬と反応させて式Ｉの18Ｆ標識化合物を得てもよく、または19Ｆ含有試薬と反応させて式Ｉの19Ｆ標識化合物を得てもよい。
【００９４】
本発明はさらに、式Ｉの化合物の合成方法も提供し、ここで、式Ｉの化合物は前述の式Ｉの好ましい化合物である。本方法は、好適な前駆体分子を、放射性原子または基を導入することができる試薬と反応させる工程、および必要により、このようにして得られた式Ｉの化合物を精製および単離する工程の一方または両方を含んでもよい。一般に、これらの工程を両方とも本合成方法に組み込むことが好ましい。
【００９５】
本明細書に組み込まれる合成方法に関連する好ましい前駆体分子は、式ＩＩおよび前述の好ましい実施形態の化合物であり、式中、Ｒ1は、フェノール基、即ち、ＨＯ−である。このような前駆体を、少なくとも１個の同位体（例えば、放射性）原子を有するアルキル化剤と反応させてもよい。有用な試薬は、3Ｈ、11Ｃ、または14Ｃを少なくとも１個、およびさらに、アリールオキシ基で置換されていてもよい脱離基を含有するものである。特に有用な試薬としては、Ｃ1〜Ｃ6アルキルハライドおよびＣ1〜Ｃ6アルキルトリフレート、Ｃ1〜Ｃ6アルキルトシレート、Ｃ1〜Ｃ6アルキルメシレート、Ｃ1〜Ｃ6アルキルブロシレート、Ｃ1〜Ｃ6アルキルノシレートが挙げられ、これらは１個以上の3Ｈ、11Ｃ、または14Ｃ原子を有し得る。当該技術分野では、3ＨnＨ3-nＣ−Ｘ｛式中、Ｘは、ハライドまたはスルホネートなどの脱離基であり、ｎは１、２、または３である｝などの試薬が公知であり、類似体の2ＨnＨ3-nＣ−Ｘ試薬も公知である。同様に、Ｈ313Ｃ−Ｘ、Ｈ314Ｃ−Ｘ、Ｈ311Ｃ−Ｘ（式中、Ｘはハライドまたはスルホネートなどの脱離基である）などの試薬も使用可能である。
【００９６】
他の好ましい好適な前駆体分子としては、式ＩＩＩ（式中、Ｒ4は、トリメチルアンモニウム、ブロモ、ヨード、またはニトロ置換基を、好ましくはフェニル基の４位に有するフェニル基である）の化合物が挙げられる。芳香族求核置換により、例えば、Ｋａｒｒａｍｋａｍ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｌａｂｅｌｌｅｄ  Ｃｏｍｐｄ．Ｒａｄ．２００３，４６，９７９および国際公開第２００７／０２０４００号パンフレットに記載のようにマイクロ波照射下でＤＭＳＯなどの好適な溶媒中でＫ［18Ｆ］−Ｋ222を使用することにより、このような前駆体を放射性フッ素試薬と反応させてもよい。
【００９７】
陽電子放出同位体である11Ｃおよび18Ｆを含有する試薬をサイクロトロン内で生成した後、好適な方法で捕捉し、必要により、さらなる合成工程を経て、所望の試薬を得ることができる。標識された試薬および中間体の生成およびさらなる操作、ならびにより複雑な標的の合成におけるそれらの使用は、放射化学の分野で当業者に周知であり、例えば、Ｌａｎｇｓｔｒｏｅｍ  ｅｔ  ａｌ．Ａｃｔａ  Ｃｈｅｍ．Ｓｃａｎｄ．１９９９，５３，６５１）に概説されている。他の参考文献として、例えば、Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  １９９６，４２３、Ａｎｔｏｎｉ  Ｇ．，Ｋｉｈｌｂｅｒｇ  Ｔ．，ａｎｄ  Ｌａｎｇｓｔｒｏｅｍ  Ｂ．（２００３）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｖｅｒｔｅｓ  Ａ．，Ｎａｇｙ  Ｓ．，ａｎｄ  Ｋｌｅｎｓｃａｒ  Ｚ．，Ｖｏｌ．４，１１９−１６５、Ｓａｌｊｏｕｇｈｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ２００２，１７８１、またはＭｃＣａｒｔｈｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．２０００，６，１０５７を参照されたい。
【００９８】
本発明はまた、
ａ１）式ＩＩＡ、
【化４】
0005922666.tif 000005
｛式中、
ＸはＡｓまたはＰであり；
Ｚ1〜Ｚ4は独立して低級アルキルであるか、またはＺ1とＺ2もしくはＺ3とＺ4、もしくはその両方が一緒にエチレン鎖もしくはプロピレン鎖を形成し、そのアルキル、エチレン鎖またはプロピレン鎖は、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ、Ｃ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、および−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から独立して選択される１個以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよく；
Ｒ1は、ヒドロキシであり；
Ｒ4は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ6〜Ｃ10ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオおよびＣ6〜Ｃ10アリールチオからなる群から選択され、ここで、前記Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ6〜Ｃ10ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオおよびＣ6〜Ｃ10アリールチオは、それぞれ、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ、Ｃ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、および−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から独立して選択される１個以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよく；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ6〜Ｃ10ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオおよびＣ6〜Ｃ10アリールチオからなる群から選択され、ここで、前記Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ6〜Ｃ10ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオおよびＣ6〜Ｃ10アリールチオは、それぞれ、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ、Ｃ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、および−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から独立して選択される１個以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよい；｝
の化合物を、
脱離基および少なくとも１個の同位体原子を含むＣ1〜Ｃ6アルキル基と反応させる工程；
または、
ａ２）式ＩＩＩＡ、
【化５】
0005922666.tif 000006
｛式中、
ＸはＡｓまたはＰであり；
Ｚ1〜Ｚ4は独立して低級アルキルであるか、またはＺ1とＺ2もしくはＺ3とＺ4、もしくはその両方が一緒にエチレン鎖もしくはプロピレン鎖を形成し、そのアルキル、エチレン鎖またはプロピレン鎖は、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ、Ｃ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、および−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から独立して選択される１個以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよく；
Ｒ1は、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ6〜Ｃ10ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオおよびＣ6〜Ｃ10アリールチオからなる群から選択され、ここで、前記Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ6〜Ｃ10ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオおよびＣ6〜Ｃ10アリールチオは、それぞれ、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、モノ−またはジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、モノ−またはジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ、Ｃ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ヒドロキシ、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、および−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から独立して選択される１個以上の置換基で任意選択的に置換されていてもよく；
Ｒ4は、脱離基で置換されたフェニルであり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6は、水素、ハロゲン、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ6〜Ｃ10ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオおよびＣ6〜Ｃ10アリールチオからなる群から独立して選択され、ここで、前記Ｃ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ6〜Ｃ10ヘテロアリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオおよびＣ6〜Ｃ10アリールチオは、それぞれ、１個以上のハロゲンで任意選択的に置換されたＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｃ2〜Ｃ6アルケニル、Ｃ2〜Ｃ4アルキニル、Ｃ6〜Ｃ10アリール、Ｃ1〜Ｃ6アシル、Ｃ6〜Ｃ10アロイル、Ｃ1〜Ｃ6アルコキシ、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ、ジ−Ｃ1〜Ｃ6アルキルアミノ、ジ−Ｃ6〜Ｃ10アリールアミノ、Ｃ1〜Ｃ6アルキルチオ、Ｃ6〜Ｃ10アリールチオ、ハロゲン、ホルミル、シアノ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）、−ＣＯＮ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）2、および−ＮＨＣＯ（Ｃ1〜Ｃ6アルキル）からなる群から独立して選択される１個以上の置換基で任意選択的に置換されてもよい｝
の化合物を、同位体フッ素試薬と反応させる工程；
および、必要により
ｂ）このようにして得られた式Ｉの化合物をクロマトグラフィーで精製する工程、
および、必要により
ｃ）このようにして精製された式Ｉの化合物を溶媒で溶解または希釈する工程、
を含む式Ｉの化合物の合成方法も提供する。
【００９９】
好適な脱離基としては、ハライド、スルホネート、トリフレート、トシレート、メシレート、ブロシレート、ノシレート、ニトロ基およびトリアルキルアンモニウム基（例えば、トリメチルアンモニウム）が挙げられる。脱離基で置換されたフェニル基の場合、脱離基は、好ましくはハライド、ニトロ基またはトリアルキルアンモニウム基（例えば、トリメチルアンモニウム）である。脱離基を含むＣ1〜6アルキル基の場合、脱離基は好ましくはハライド、ハライド、スルホネート、トリフレート、トシレート、メシレート、ブロシレートまたはノシレートである。
【０１００】
好適な同位体フッ素試薬が当該技術分野で公知であり、それにはＫ［18Ｆ］−Ｋ222が含まれる。
【０１０１】
また、前述の式ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＩおよびＩＩＩＡの化合物も提供する。このような化合物は、本発明の化合物の合成に有用な中間体である。例えば、中間体を、異なる同位体原子（例えば、放射性同位体原子）を含有する好適な基と反応させて式Ｉの第１の化合物と第２の化合物を生成することができ、それらは異なる同位体原子を有すること以外、同じ化学構造を有する。そのため、同じプローブ（即ち、異なる同位体原子が存在すること以外、同一の構造を有するプローブ）を、例えば、細胞、小器官、組織、または他の関連する基質などのｉｎ  ｖｉｔｒｏで行われる試験、および、微生物、動物個体、またはヒトなどのｉｎ  ｖｉｖｏで行われる試験を含む、いずれの試験にも適用することができる。式ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＩおよびＩＩＩＡの化合物中の置換基Ｘ、Ｚ1〜Ｚ4、およびＲ1〜Ｒ6に好ましいものは、式Ｉの化合物について前述した通りである。
【０１０２】
本発明はまた、
ａ１）式Ｉ（式中、Ｒ1はヒドロキシである）の化合物をアルキル化することにより、Ｒ1中に11Ｃ、18Ｆ、75Ｂｒ、76Ｂｒ、120Ｉ、123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、3Ｈ、および14Ｃからなる群から選択される少なくとも１個の放射性原子を導入する工程、
または
ａ２）式Ｉ（式中、Ｒ4は、−ＮＯ2、−Ｂｒ、−Ｉ、およびＮ+Ｍｅ3から選択される脱離基を含む）の化合物を置換することにより、Ｒ4中に11Ｃ、18Ｆ、75Ｂｒ、76Ｂｒ、120Ｉ、123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、3Ｈ、および14Ｃからなる群から選択される少なくとも１個の放射性原子を導入する工程、
および、必要により
ｂ）このようにして得られた式Ｉの化合物をクロマトグラフィーで精製する工程、
および、必要により
ｃ）このようにして精製された式Ｉの化合物を目的の用途に好適な溶媒で溶解または希釈する工程、
を含む、式Ｉの化合物の合成方法も提供する。
【０１０３】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＩまたはＩＩＩＡの化合物の合成に有用なキサンテン前駆体の一般的合成（ａｓｓｅｍｂｌｙ）経路は、当該技術分野で、例えば、Ｙａｎｇ  ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００５，７０，６９０７−６９１２、およびその引用文献から公知である。関連する前駆体の製造、および式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＩまたはＩＩＩＡの有用な化合物へのそれらの変換の非限定例は、本明細書の実施例に記載されている。
【０１０４】
第５の態様では、本発明は、二ヒ素プローブに関連する放射化学研究開発における基準物質として有用な式Ｉの新規な非標識化合物を提供する。特に、一般式Ｉ（式中、Ｒ2はメトキシであるおよび／またはＲ4は４−フルオロフェニルである）の化合物が有用である。
【０１０５】
一般式Ｉ（式中、Ｒ2はメトキシであり、Ｒ4は４−フルオロフェニルである）の化合物を含む、二ヒ素プローブに関連する放射化学研究開発における基準物質として有用な式Ｉの新規な非標識化合物も提供する。この実施形態では、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つ、例えば、３つ、好ましくは全部が水素であることが好ましい。式Ｉ（式中、Ｒ2はメトキシであり、Ｒ4は４−フルオロフェニルであり、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6の少なくとも２つ、例えば、３つ、好ましくは全部が水素である）の化合物がさらに好ましい。
【０１０６】
好ましい非標識化合物としては、Ｒ1がＣ1〜Ｃ6アルコキシ、例えば、メトキシであり、Ｒ4がフルオロフェニル、例えば、４−フルオロフェニルであり、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5およびＲ6の少なくとも３つ、好ましくは全部が水素であるものが挙げられる。Ｚ1とＺ2が一緒にエチレンなどのアルキレンを表し、Ｚ3とＺ4が一緒にエチレンなどのアルキレンを表し、ＸがＡｓである非標識化合物がさらに好ましい。
【０１０７】
第６の態様では、本発明は、前述のテトラシステイン標識検体分子と、前述の式Ｉの化合物との複合体を提供する。
【０１０８】
このような複合体は、複数のＡｓ／Ｐ−Ｓ相互作用による高い結合親和性を特徴とし、単離して、当該技術分野で公知の方法、例えば、ＮＭＲ、放射能検出または質量分析法により特性評価することができる。
【０１０９】
本発明の複合体は、複合体が、前述のこのような好ましい検体分子を含む前述のテトラシステイン標識検体分子を含有し、且つ前述の式Ｉの好ましい化合物を含む場合、好ましい構造を有する。
【０１１０】
本明細書に詳述する本発明は、テトラシステイン標識検体分子を可視化するための式Ｉの化合物の使用をさらに提供する。これに関する好ましい実施形態は、前述の式Ｉの好ましい化合物、または前述の好ましい検体分子、前述の好ましい複合体、または上記に詳述した好ましい実施形態の組み合わせを使用する。
【０１１１】
第７の態様では、本発明は、哺乳動物の癌または他の過剰増殖性疾患の治療または予防方法を提供し、本方法は、前述の式Ｉ（式中、Ｒ1〜Ｒ6の少なくとも１つは放射性同位体原子を含む）の化合物を治療有効量、哺乳動物に投与する工程を含む。この態様では、式Ｉの化合物は、テトラシステイン標識された生体分子との複合体として提供される。
【０１１２】
本方法は、それを必要とする哺乳動物、例えば、ヒトに治療が提供されるように、細胞、例えば、腫瘍細胞、または他の悪性細胞もしくは他に疾患に関連する細胞に影響を及ぼすのに十分な性質および強度の放射線を放出することができる好適な放射性同位体を有する式Ｉの化合物を使用した、標的放射線治療を可能にする。標的放射線治療方法では、式Ｉの化合物を、テトラシステイン標識などの好適な標識により、例えば、標的細胞または組織に対する親和性を有する抗体または他のタンパク質などの好適な標的化成分との複合体として提供することができる。
【０１１３】
本発明はまた、例えば、癌または他の過剰増殖性疾患の治療または予防における医薬として使用される、前述の式Ｉ（式中、Ｒ1〜Ｒ6の少なくとも１つは放射性同位体原子を含む）の化合物も提供する。本発明はまた、前述の式Ｉ（式中、Ｒ1〜Ｒ6の少なくとも１つは放射性同位体原子を含む）の化合物を薬学的に許容される担体と共に含む、医薬組成物も提供する。
【実施例】
【０１１４】
実施例１：式Ｉの化合物の合成
概要
市販の試薬を受け取った状態で使用した。１Ｈおよび１３Ｃ化学シフトの完全帰属（ｆｕｌｌ  ａｓｓｉｇｎｍｅｎｔ）は、Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＩＩＩ  ４００  ＭＨｚ装置での１Ｄおよび２Ｄ  ＦＴ  ＮＭＲスペクトルに基づく。13Ｃ−および1Ｈ−ＮＭＲの溶媒ピークを化学シフト基準値として使用した。水分または酸素に敏感な反応は全て、Ａｒ雰囲気下、火炎乾燥したガラス器具内で行った。使用前に、ＴＨＦはカリウムを用いて蒸留し、ＣＨ2Ｃｌ2はＣａＨ2を用いて蒸留した。
【０１１５】
２，５−ジ−（１，３，２−ジチアルソラン−２−イル）−９−（４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシ−３−フルオロンの合成
ビス（２，４−ジメトキシフェニル）−４−フルオロフェニルメタノール（ＰＳＭＸＢ−８）
【化６】
0005922666.tif 000007
滴下漏斗および冷却器を備えた１−Ｌ三口丸底フラスコに、削り状のマグネシウム（６．９２３ｇ、２８５ｍｍｏｌ）および数個のＩ2結晶を入れた。無水ＴＨＦ６０ｍＬに２，４−ジメトキシブロモベンゼン（４２．７ｍＬ、２９４ｍｍｏｌ）を溶解した溶液をマグネシウムに滴下した。追加のＴＨＦ（約３００ｍＬ）を分けて（ｂｙ  ｐｏｒｔｉｏｎ）添加し、反応を冷却した。混合物を３０分間撹拌した。得られたグリニャール試薬（２，４−ジメトキシフェニルマグネシウムブロマイド）をドライアイス／アセトン浴で冷却した後、無水ＴＨＦ１１０ｍＬに４−フルオロメチルベンゾエート（１５．５ｍＬ、１２０ｍｍｏｌ）を溶解した溶液を滴下した。混合物を終夜撹拌した後、蒸留水１Ｌで反応停止させ、２Ｎ  ＨＣｌで中和した。得られた未処理の混合物を酢酸エチル（３×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、蒸発乾固した。ＥｔＯＡｃおよびヘプタンを使用して沈殿させることにより残留物を精製し、オフホワイトの固体を得た（３７ｇ、７７％）。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２７−７．１８（ｍ，Ｊ＝８．４，５．７Ｈｚ，２Ｈ），７．００−６．８１（ｍ，４Ｈ），６．５０（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，２Ｈ），６．４０（ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．１Ｈｚ，２Ｈ），５．１２（ｓ，１Ｈ），３．８０（ｓ，６Ｈ），３．５４（ｓ，６Ｈ）．13Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ１６１．６４（ｄ，Ｊ＝２４４．２Ｈｚ），１４３．２９（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），１２９．４５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），１１３．８６（ｄ，Ｊ＝２１．１Ｈｚ）。
【０１１６】
上記実施例と同様に、次の中間体を製造する：ビス（２，４−ジメトキシフェニル）−４−ブロモオフェニルメタノール、ビス（２，４−ジメトキシフェニル）−４−ヨードフェニルメタノール、ビス（２，４−ジメトキシフェニル）−４−ニトロフェニルメタノール。
【０１１７】
９−（４−フルオロフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン（ＰＳＭＸＢ−２）
上記のように得られたＰＳＭＸＢ−８をジクロロメタンに溶解し、ＴＬＣが完全な変換を示すまで６モル当量のＢＢｒ3で−７８℃にて処理した。得られた溶液を室温に到達させ、水で反応停止させ、酢酸エチルで抽出した。次いで、有機相を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発乾固させた。得られた粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製することにより低溶解性の固体が得られ、これをそれ以上精製することなく使用した。ＬＣ−ＭＳは、ｍ／ｚ  ３２１［Ｍ＋１］+で期待される分子イオンを示した。
【０１１８】
９−（４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシ−３−フルオロン（ＰＳＭＸＢ−１）
【化７】
0005922666.tif 000008
無水ＣＨ2Ｃｌ2、５００ｍＬにビス（２，４−ジメトキシフェニル）−４−フルオロフェニルメタノール（１７ｇ、４２．７ｍｍｏｌ）を溶解した溶液を、ドライアイス／ＥｔＯＨ浴を使用して−７８℃に冷却した後、ＢＢｒ3（６６ｍＬ、６８３ｍｍｏｌ）を４０分にわたり添加した。混合物を徐々に室温に加熱し、終夜撹拌した。カニューレを使用して反応混合物を冷水２Ｌ中に移し入れた。層を分離し、水をＣＨ2Ｃｌ2（２×４００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（５×４００ｍＬ）で抽出した。赤色沈殿物を濾取し、廃棄した。合わせた抽出物をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮した。メタノールおよびＥｔＯＡｃを使用して沈殿することにより残留物を精製し、マスタード色の粉末を得た（２．３８ｇ、１８％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ７．８１（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２Ｈ），７．６９−７．６４（ｍ，２Ｈ），７．５５−７．４８（ｍ，２Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，２Ｈ），７．３０（ｄｄ，Ｊ＝９．３，２．３Ｈｚ，２Ｈ）。
【０１１９】
同様に、前述の条件を使用し、ＴＬＣが完全な変換を示すまで好適な過剰のＢＢｒ3を−７８℃で使用して、中間体であるビス（２，４−ジメトキシフェニル）−４−ブロモオフェニルメタノール、ビス（２，４−ジメトキシフェニル）−４−ヨードフェニルメタノール、ビス（２，４−ジメトキシフェニル）−４−ニトロフェニルメタノールを対応するフルオロン、即ち、９−（４−ブロモフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン、９−（４−ヨードフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン、９−（４−ニトロフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロンに変換する。
【０１２０】
９−（４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシ−３−フルオロン−２，５−二水銀（ｄｉｍｅｒｃｕｒｉｃ）トリフルオロアセテート（ＰＳＭＸＢ−３）
【化８】
0005922666.tif 000009
ＨｇＯ（２．７７ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸３０ｍｌに溶解し、９−（４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシ−３−フルオロン（１．９５ｇ、６．３９ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を終夜撹拌した。ＴＦＡを蒸発させ、水５０ｍＬを添加した。生成物を濾取し、水で３回洗浄した。高真空ポンプを使用して生成物を乾燥させ、橙色の固体を得た（５．０６ｇ、８５％）。
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ＋ＴＦＡ）δ７．７４−７．６６（ｍ，２Ｈ），７．６１−７．５４（ｍ，４Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ）．
【０１２１】
９−（４−フルオロフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン−２，５−二水銀トリフルオロアセテート（ＰＳＭＸＢ−５）
トリフルオロ酢酸２ｍＬに酸化銀４０ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）を溶解した溶液に、ＰＳＭＸＢ−２を３０ｍｇ（０．０９５ｍｍｏｌ）添加し、混合物を室温で終夜撹拌した。トリフルオロ酢酸（ａｃｔｅｉｃ  ａｃｉｄ）を除去し（ｒｅｍｏｗｅｄ）、残留物を水３ｍＬで２回トリチュレーションした。真空乾燥し、深赤色の粉末７０ｍｇ（７８％）を得た。
【０１２２】
中間体である９−（４−ブロモフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン−２，５−二水銀トリフルオロアセテート、９−（４−ヨードフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン−２，５−二水銀トリフルオロアセテート、９−（４−ニトロフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン−２，５−二水銀トリフルオロアセテートを前述の実施例と同様に製造する。
【０１２３】
２−（１，３，２−ジチアルソラン−２−イル）−９−（４−フルオロフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン（ＰＳＭＸＢ−７）
無水ＮＭＰ、１ｍＬにＰＳＭＸＢ−５を７０ｍｇ（０．０７４ｍｍｏｌ）溶解した溶液に、三塩化ヒ素１２０マイクロリットル（１．４７ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルアミン１００マイクロリットル、Ｐｄ（ＯＡｃ）2、５ｍｇを添加した。反応混合物をアルゴン下で終夜、磁気撹拌した後、０．２Ｍ  ＫＨ2ＰＯ4（水溶液）ｐＨ７緩衝液とアセトンの１：１混合物３０ｍＬに移した。ＣＨＣｌ3で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を除去し、最後に勾配シリカゲルクロマトグラフィー（純トルエン〜トルエン／酢酸エチル４：１）で精製して、ＰＳＭＸＢ−７を得た。この物質は期待されたＭＳおよびＮＭＲスペクトルを示した。
【０１２４】
同様に、９−（４−ブロモフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン−２，５−二水銀トリフルオロアセテート、９−（４−ヨードフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン−２，５−二水銀トリフルオロアセテート、および９−（４−ニトロフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン−２，５−二水銀トリフルオロアセテートから、対応する式Ｉの化合物、即ち、２−（１，３，２−ジチアルソラン−２−イル）−９−（４−ブロモフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン、２−（１，３，２−ジチアルソラン−２−イル）−９−（４−ヨードフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン、および２−（１，３，２−ジチアルソラン−２−イル）−９−（４−ニトロフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロンが得られる。
【０１２５】
後者を、必要により、ＥｔＯＨ中のジチオン酸塩または触媒水素化で還元することにより、Ｒ4に４−トリメチルアンモニウムフェニル基を有する前駆体に変化させた後、メチルトリフレートで完全にメチル化する。
【０１２６】
２，５−ジ−（１，３，２−ジチアルソラン−２−イル）−９−（４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシ−３−フルオロン（ＰＳＭＸＢ−４）
【化９】
0005922666.tif 000010
アルゴン雰囲気下、無水Ｎ−メチルピロリドン５３ｍＬに９−（４−フルオロフェニル）−６−ヒドロキシ−３−フルオロン−２，５−二水銀トリフルオロアセテート（５．０ｇ、５．３７ｍｍｏｌ）を溶解させ、ＡｓＣｌ3（９．０ｍＬ、１０７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（７．５ｍＬ、４３．０ｍｍｏｌ）をシリンジで添加した。酢酸パラジウム（ＩＩ）３２ｍｇを添加し、混合物を５５℃で２時間、その後室温で終夜撹拌した。十分撹拌された０．３Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．９）とアセトンの１：１  ｖｏｌ／ｖｏｌ混合物３２０ｍＬが入った５００−ｍＬエルレンマイヤーフラスコに、反応混合物を移した。１，２−エタンジチオール２１ｍＬを溶液に添加し、３０分間撹拌した後、クロロホルム１００ｍＬを添加し、さらに２０分間撹拌した。有機相を分離し、水をクロロホルムで３回抽出し、合わせた有機層を水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、濃縮した。メタノールを添加すると、多量の白色沈殿物が生成し、少量の暗赤色液体もフラスコの底に生成した。沈殿物をデカントし、残りの赤色液体をクロロホルムに溶解し、回収した。この手順を３回繰り返した。合わせた粗生成物を濃縮し、カラムクロマトグラフィーで純トルエン〜トルエン：アセトン５０：４を使用して精製し、橙赤色の固体を得た（１．０ｇ、３１％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１０．５７（ｓ，１Ｈ），７．４１−７．２１（ｍ，２Ｈ），７．０８−６．９７（ｍ，１Ｈ），６．６２（ｂｒｏａｄ  ｓ，１Ｈ），３．８８−３．２７（ｂｒｏａｄ  ｍ、１Ｈ）．
類似の構造を有する化合物の合成は、ＪＯＣ  ２００５，７０，６９０７；ＪＡＣＳ  ２００８，３０，８５９６、およびＮａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ２００８，３，１５２７に記載されている。
【０１２７】
２，５−ジ−（１，３，２−ジチアルソラン−２−イル）−９−（４−フルオロフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン（ＰＳＭＸＢ−６）
無水ＤＭＦ、１ｍＬにＰＳＭＸＢ−４を５ｍｇ（７．８マイクロモル）溶解した溶液に、ヨウ化メチル２当量を導入し、混合物を終夜撹拌した。粗生成物を、ＨＰＬＣ（Ｃｈｒｏｍａｓｉｌ  １００−５−Ｃ１８カラム  ２５０×１０ｍｍ）で溶離液として８０％アセトニトリル／５０ｍＭ酢酸アンモニウムを２．０ｍＬ／分で使用して精製した（ｔR２１．７分）。このようにして得られた  ＰＳＭＸＢ−６は、ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ  ６５３［Ｍ＋１］+）およびＮＭＲによれば純粋であった。
【０１２８】
２，５−ジ−（１，３，２−ジチアルソラン−２−イル）−９−（４−フルオロフェニル）−６−［13Ｃ2Ｈ3］メトキシ−３−フルオロン（６−［13Ｃ2Ｈ3］ＰＳＭＸＢ−６）
無水ＤＭＦ０．５ｍＬにＰＳＭＸＢ−４を１ｍｇ（１．５６マイクロモル）溶解した溶液に、［13Ｃ2Ｈ3］ヨウ化メチルを２当量添加し、混合物を室温で終夜撹拌した。粗混合物をＨＰＬＣ（Ｃｈｒｏｍａｓｉｌ  １００−５−Ｃ１８カラム  ２５０×１０ｍｍ）で溶離液として８０％アセトニトリル／５０ｍＭ酢酸アンモニウムを２．０ｍＬ／分で使用して精製した（ｔR２１．７分）。分析は純粋な13Ｃ2Ｈ3ＰＳＭＸＢ−６と一致した（ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ６５７［Ｍ＋１］+；Ｈ−ＮＭＲは期待されたピークパターンを示した）。
【０１２９】
２，５−ジ−（１，３，２−ジチアルソラン−２−イル）−９−（４−フルオロフェニル）−６−［14Ｃ］メトキシ−３−フルオロン（６−［14Ｃ］ＰＳＭＸＢ−６）。
無水ＤＭＦ、０．４ｍＬにＰＳＭＸＢ−４、３１．９ｍｇ（０．０５ｍｍｏｌ）を溶解した溶液に、［14Ｃ］ヨウ化メチルを１０分の１当量添加し、混合物を室温で終夜撹拌した。次いで、粗混合物をＨＰＬＣ（Ｃｈｒｏｍａｓｉｌ  １００−５−Ｃ１８カラム  ２５０×１０ｍｍ）で溶離液として８０％アセトニトリル／５０ｍＭ酢酸アンモニウムを２．０ｍＬ／分で使用して精製した（ｔR２１．７分）。分析は純粋な［14Ｃ］ＰＳＭＸＢ−６と一致した（ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ６５５［Ｍ＋１］+；ＮＭＲは期待されたピークパターンを示した）。
【０１３０】
２，５−ジ−（１，３，２−ジチアルソラン−２−イル）−９−（４−フルオロフェニル）−６−［3Ｈ3］メトキシ−３−フルオロン（６−［3Ｈ3ＣＯ］−ＰＳＭＸＢ−６）。
無水ＤＭＦ、０．５ｍＬにＰＳＭＸＢ−４を１ｍｇ（１．５６マイクロモル）溶解した溶液に、［3Ｈ3］ヨウ化メチルを１／２０当量（０．０８マイクロモル）添加し、混合物を室温で終夜撹拌した。次いで、粗混合物をＨＰＬＣ（Ｃｈｒｏｍａｓｉｌ  １００−５−Ｃ１８カラム  ２５０×１０ｍｍ）で溶離液として８０％アセトニトリル／５０ｍＭ酢酸アンモニウムを２．０ｍＬ／分で使用して精製した（ｔR２１．７分）。プールした画分の分析ＨＰＬＣ−ＭＳは、約３．５分にピークを示し、期待された分子量（ｍ／ｚ  ６５９）を有し（図４参照）、非常に高い比放射能を有する純粋な（６−［3Ｈ3ＣＯ］ＰＳＭＸＢ−６）の存在が証明された。
【０１３１】
２，５−ジ−（１，３，２−ジチアルソラン−２−イル）−９−（４−［18Ｆ］フルオロフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン
第四級メチルアンモニウム樹脂を使用して、サイクロトロンターゲット水から［18Ｆ］フッ化物を単離する。炭酸カリウム水溶液と相間移動触媒（ｋｒｙｐｔｏｆｉｘなど）のアセトニトリル溶液を用いて［18Ｆ］フッ化物を溶離する。溶出物を乾燥させ、放射性標識に適切な前駆体、例えば、２−（１，３，２−ジチアルソラン−２−イル）−９−（４−ブロモフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン、２−（１，３，２−ジチアルソラン−２−イル）−９−（４−ヨードフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロン、または２−（１，３，２−ジチアルソラン−２−イル）−９−（４−ニトロフェニル）−６−メトキシ−３−フルオロンの溶液を乾燥残留物に添加する。反応混合物を加熱してフッ素化を達成し、希釈した後、ＨＰＬＣで精製する。オンライン放射能検出を使用して決定される、生成物を有する画分を回収し、溶媒を除去した後、好適な媒体、例えば、静脈内注射に好適な媒体である等張生理食塩水に再溶解する。最後に生成物溶液を濾過滅菌により滅菌する。
【０１３２】
化学構造
【化１０】
0005922666.tif 000011
ＰＳＭＸＢ−１；Ｒ2，Ｒ3，Ｒ5，Ｒ6＝Ｈ，Ｇ1，Ｇ2＝Ｈ，Ｒ1＝ＯＨ，Ｒ4＝４−ＦＣ6Ｈ4
ＰＳＭＸＢ−３；Ｒ2，Ｒ3，Ｒ5，Ｒ6＝Ｈ，Ｇ1，Ｇ2＝Ｈｇ（ＯＣＯＣＦ3），Ｒ1＝ＯＨ，Ｒ4＝４−ＦＣ6Ｈ4
ＰＳＭＸＢ−４；Ｒ2，Ｒ3，Ｒ5，Ｒ6＝Ｈ，Ｇ1，Ｇ2＝Ａｓ（ＳＣＨ2ＣＨ2Ｓ），Ｒ1＝ＯＨ，Ｒ4＝４−ＦＣ6Ｈ4
ＰＳＭＸＢ−６；Ｒ2，Ｒ3，Ｒ5，Ｒ6＝Ｈ，Ｇ1，Ｇ2＝Ａｓ（ＳＣＨ2ＣＨ2Ｓ），Ｒ1＝ＯＭｅ，Ｒ4＝４−ＦＣ6Ｈ4
【０１３３】
実施例２：結合試験および複合体
化合物ＰＳＭＸＢ−６のビオチン−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ［配列番号２］への結合
標的ペプチド配列Ｎ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｃ［配列番号３］を合成し、文献の手順（Ｍａｒｔｉｎ  ＢＲ，Ｇｉｅｐｍａｎｓ  ＢＮ，Ａｄａｍｓ  ＳＲ，Ｔｓｉｅｎ  ＲＹ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５，２２３（１０），１３０８−１４）に従いビオチンとＮ末端で結合させた。製造業者の指示に従い、ストレプトアビジンへの非共有結合捕捉によりセンサーチップ（Ｓｅｎｓｏｒ  Ｃｈｉｐ  ＳＡ  ＢｉａＣｏｒｅ）上にビオチン化ペプチドを固定化した。Ｎ末端ビオチンを有する無関係のペプチドを参照チャンネルに結合させた。脱気した緩衝液、０．０１ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌで希釈した１００μＭ  ＰＳＭＸＢ−６の溶液をセンサー表面に５マイクロリットル／分で５分間注入した（注入矢印、図１Ａ）。１００マイクロＭ  ＰＳＭＸＢ−６は、テトラシステイン標識された標的配列Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ［配列番号３］と迅速に相互作用し、約４４０ＲＵ（応答単位）の安定状態レベルに達した（図１）。図１Ａは、表面プラズモン共鳴法（ＢｉａＣｏｒｅ  ３０００）を使用した、ＰＳＭＸＢ−６と固定化ビオチン−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ［配列番号１］とのリアルタイム相互作用を示す。注入段階の終わりに、センサー表面を０．０１ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌで洗浄した（洗浄矢印図１Ａ）。洗浄手順中、ＰＳＭＸＢ−６の結合は安定であり、非常に低いＰＳＭＸＢ−６解離率を示した。図１Ｂに示すように、無関係の非標識ペプチドＮ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｃ［配列番号３］（ビオチン−ＣＣＰＧＣＣ［配列番号４］）との相互作用は検出されなかった。結合したＰＳＭＸＢ−６の安定状態レベルは、期待される１：１の化学量論での標的ペプチド配列への結合に対応する。図１に示されるＮ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｃ［配列番号３］に結合するＰＳＭＸＢ−６の高い結合率と低い解離率は、親和性相互作用が高いことを示す。
【０１３４】
化合物ＰＳＭＸＢ−４およびＰＳＭＸＢ−６のテトラシステイン標識ペプチドへの結合。
実験は、Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｖｏｌ．３  Ｎｏ．９，１５２７−１５３４，（Ａｄａｍｓ  ＆  Ｔｓｉｅｎ）に準拠し、若干の変更を加えて行った。
【０１３５】
材料：ペプチド（ＮＨ２−）ＦＬＮＣＣＰＧＣＣＭＥＰ（−ＣＯＯＨ）［配列番号９］、Ｍ．ｗ：１３１６．６３、ＩＮＮＯＶＡＧＥＮ、スウェーデンにより供給、ＭＯＰＳナトリウム塩ＦＷ：２３１．２  ＣＡＳ［７１１１９−２２−７］、ＭＥＳナトリウム塩ＦＷ：１６４．１６  ＣＡＳ［１９７６７−４５−４］、およびＥＤＴ  ＦＷ：９４．２  ＣＡＳ［５４０−６３−６］は受け取った状態で使用した。
【０１３６】
ＨＰＬＣ分析は、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｃ１８  ３．０×５０ｍｍ  ３．５μｍカラムを備えたＷａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２７９５  ＬＣシステムを採用した。質量検出器は、極性ＥＳ＋／極性ＥＳ−を有した。溶媒、Ａ：０．１Ｍ  ＮＨ3ミリＱ水溶液、Ｂ：ＭｅＯＨ。勾配、Ａ：９５％  ０．１分、０．１〜４分  Ａ：９５％〜Ｂ：１００％、４．０〜４．６分  Ｂ：１００％。
【０１３７】
採用した放射能検出器は、Ｒａｙｔｅｓｔ  Ｓｔａｒ（固体セル）であった。Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８、５μ  ２５０×１０ｍｍカラムおよび３５％アセトニトリル／５０ｍＭ酢酸アンモニウムからなる等張溶離液を流速２．０ｍＬ／分で使用して、放射能検出と共にクロマトグラフィーを行った。
【０１３８】
ＰＳＭＸＢ−４の結合
ＭＯＰＳ１００ｍＭ緩衝液３００μＬに、新たに調製した１Ｍ  ＭＥＳ#、２５μＬ、および新たに調製した１０ｍＭ  ＥＤＴ（ＤＭＳＯ溶液）２．５μＬを添加した。この溶液に１ｍＭ  ＰＳＭＸＢ−４（ＤＭＳＯ溶液）２００μＬを添加した。混合物を１分間激しく撹拌した後、１ｍＭペプチド（溶媒：５０％アセトニトリル／水＋０．１％ＴＦＡ）２００μＬを導入した。反応混合物を３０分間撹拌した。ＬＣ−ＭＳ分析は、複合体と一致する質量スペクトルを示した（ｍ／ｚ  ８８２；５８８）（図２参照）。質量ピークは、ジアニオン種およびトリアニオン種に対応した。
【０１３９】
ＰＳＭＸＢ−６の結合。
ＭＯＰＳ１００ｍＭ緩衝液３００μＬに、新たに調製した１Ｍ  ＭＥＳ#、２５μＬ、および新たに調製した１０ｍＭ  ＥＤＴ（ＤＭＳＯ溶液）２．５μＬを添加した。この溶液に、１ｍＭ  ＰＳＭＸＢ−６（ＤＭＳＯ溶液）２００μＬを添加した。混合物を１分間激しく撹拌した後、１ｍＭペプチド（溶媒：５０％アセトニトリル／水＋０．１％ＴＦＡ）２００μＬを導入した。反応混合物を３０分間撹拌した。ＬＣ−ＭＳ分析は、複合体と一致する質量スペクトルを示した（ｍ／ｚ  ８９０）（図３参照）。質量ピークは、ジアニオン種に対応した。
【０１４０】
上記で製造した２種類の複合体は、溶液の状態で、室温で２週間より長期間安定であり、分解の兆候を示さないことが分かった。
【０１４１】
標識ＰＳＭＸＢ−６の結合
ＭＯＰＳ１００ｍＭ緩衝液２５０ｕＬに、新たに調製した１Ｍ  ＭＥＳ#、２５μＬ、および新たに調製した１０ｍＭ  ＥＤＴ（ＤＭＳＯ溶液）２．５μＬを添加した。この溶液に、２０ＭＢｑ  ６−［3Ｈ3ＣＯ］−ＰＳＭＸＢ−６（ＤＭＳＯ溶液）２００μＬを添加した。混合物を１分間激しく撹拌した後、１ｍＭペプチド（５０％アセトニトリル／水＋０．１％ＴＦＡ中、２５０ｕｇペプチド）２５０μＬを導入した。反応混合物を１０分間撹拌した。ＬＣ−ＭＳ分析は、複合体への完全な変換と一致する質量スペクトル（ｍ／ｚ  ８９３）を示した。質量ピークは、ジアニオン種に対応した。放射能検出器を備えたＨＰＬＣシステムに同じ複合体を注入した場合、保持時間約１０分でのピークは、先に溶離した複数の不純物ピークと共に現れた。ＨＰＬＣで精製することにより、純粋なトリチウム化複合体を単離することができた。図５Ａ、５Ｂおよび５Ｃは、ＬＣ−ＭＳによる分析（ここでも保持時間約２分でピークが現れ、ｍ／ｚはジアニオン複合体（８９３）に帰属された）、および放射能検出（ｔR１０分に単一の放射性種の存在を明示する）を示す。重要なことには、複合体を単離して数週間後に再分析を行った結果、放射性標識種が十分な安定性を有することが分かった。
【０１４２】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの化合物ＰＳＭＸＢ−６のテトラシステイン標識ペプチドへの結合。
材料：ＭＳＨペプチド（ＣＣＰＧＣＣ標識を有するメラニン刺激ホルモン）ＮＨ２−Ａｃ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｎｌｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｃｙｓ−Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−ＣＯＯＨ［配列番号８］、ＩＮＮＯＶＡＧＥＮ、スウェーデンにより供給、ＭＯＰＳナトリウム塩ＦＷ：２３１．２  ＣＡＳ［７１１１９−２２−７］、ＭＥＳナトリウム塩ＦＷ：１６４．１６  ＣＡＳ［１９７６７−４５−４］、およびＥＤＴ  ＦＷ：９４．２  ＣＡＳ［５４０−６３−６］
【０１４３】
ＭＳＨ−ペプチドへの６−［3Ｈ3ＣＯ］−ＰＳＭＸＢ−６の結合
実験は、Ｎａｔｕｒｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ２００８，Ｖｏｌ．３  Ｎｏ．９，１５２７−１５３４に準拠し、若干の変更を加えて行う。ＭＯＰＳ１００ｍＭ緩衝液３００μＬに、新たに調製した１Ｍ  ＭＥＳ、２５μＬ、および新たに調製した１０ｍＭ  ＥＤＴ（ＤＭＳＯ）２．５μＬを添加する。この溶液に、１０μＭ  ６−［3Ｈ3ＣＯ］−ＰＳＭＸＢ−６（ＤＭＳＯ溶液）２００μＬを添加する。１分間混合物を激しく撹拌した後、１ｍＭペプチド（溶媒：５０％アセトニトリル／水＋０．１％ＴＦＡ）２００μＬを導入する。反応混合物を３０分間撹拌する。質量ピークのＬＣ−ＭＳ分析を使用して、６−［3Ｈ3ＣＯ］−ＰＳＭＸＢ−６−ＭＳＨ−ペプチド複合体を同定し、半分取ＨＰＬＣを使用して放射性標識ＭＳＨペプチド（［3Ｈ］ＰＳＭＸＢ−６−ＭＳＨ−ペプチド）を精製する。
【０１４４】
小動物でのメラノーマ腫瘍細胞への６−［3Ｈ3ＣＯ］−ＰＳＭＸＢ−６−ＭＳＨ−ペプチドの結合のｅｘ  ｖｉｖｏオートラジオグラフィー
実験は、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００７，Ｖｏｌ．４８  Ｎｏ．６，９８７−９９４に準拠し、若干の変更を加えて行う。高レベルのメラノコルチン１受容体を発現するＢ１６−Ｆ１０メラノーマ腫瘍細胞（ＡＴＣＣ）を雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスに皮下接種する。接種７日後〜１４日後に、動物の１群に精製した６−［3Ｈ3ＣＯ］−ＰＳＭＸＢ−６−ＭＳＨ−ペプチド（１００〜２００ｎｍｏｌ／ｋｇ）を３０秒間にわたり尾静脈から静脈内注入する。別のＢ１６／Ｆ１０接種雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウス群では、ＮＤＰ（［Ｎｌｅ4，Ｄ−Ｐｈｅ7］μ−ＭＳＨ、２００μｇの後、６−［3Ｈ3ＣＯ］−ＰＳＭＸＢ−６−ＭＳＨ−ペプチド（１００〜２００ｎｍｏｌ／ｋｇ）を、尾静脈から注入することによりブロッキング実験を行う。注射の１〜１２時間後の様々な時点で動物を犠牲にし、ドライアイスとメタノールの混合物中で急速凍結する。Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ．Ｍｅｔａｂ．，２００２  Ｖｏｌ．３  Ｎｏ．５，４５１−４６２に記載のように、全身オートラジオグラフィー分析を行う。データから、６−［3Ｈ3ＣＯ］−ＰＳＭＸＢ−６−ＭＳＨ−ペプチドの腫瘍取り込み値は、Ｂ１６／Ｆ１０接種Ｃ５７ＢＬ／６マウスの周囲組織のものより著しく高いことが判明する。腫瘍組織中の特異的結合成分は、過剰のブロッキングペプチドＮＤＰを予め注射することによりブロッキングされる。これは、６−［3Ｈ3ＣＯ］−ＰＳＭＸＢ−６−ＭＳＨ−ペプチドが、生きたマウスのメラノコルチン１受容体に結合できることを示す。
【図１（Ａ）】
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【図１（Ｂ）】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５（Ａ）】
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【図５（Ｂ）】
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【図５（Ｃ）】
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【配列表】
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