(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物に結合するＨＬＡ−ペプチド複合体を同定する方法であって、当該方法は、
支持部材における複数のアドレスに位置づけられた複数のＨＬＡ−ペプチド複合体を含むＨＬＡライブラリを提供する工程であって、当該ＨＬＡ−ペプチド複合体の各々は、別個のアドレスに割り当てられている、工程；
該ＨＬＡ−ペプチド複合体に化合物を接触させる工程；
該ＨＬＡ−ペプチド複合体のうちの一に該化合物が結合するか否かを決定する工程；および
当該化合物が該ＨＬＡ−ペプチド複合体のうちの一に結合したときに、該化合物に結合した当該一のＨＬＡ−ペプチド複合体をそのアドレスに基づき同定する工程
を含み、
前記化合物が３ｋＤａ未満の低分子薬物または低分子薬物候補である、方法。
【請求項２】
前記ＨＬＡ−ペプチド複合体がＨＬＡクラスＩ−ペプチド複合体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＨＬＡクラスＩ−ペプチド複合体がＨＬＡ−Ｂ−ペプチド複合体である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＨＬＡ−ペプチド複合体が、ＨＬＡクラスＩＩ−ペプチド複合体である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ＨＬＡクラスＩＩ−ペプチド複合体がＨＬＡ−ＤＲ−ペプチド複合体である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ＨＬＡライブラリが、前記複数のＨＬＡ−ペプチド複合体が前記支持部材に結合されたマイクロチップベースライブラリである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ＨＬＡ−ペプチド複合体が、その天然に存在する対応物の細胞外ドメインである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記決定する工程は、表面プラスモン共鳴法によって行われる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記ＨＬＡライブラリが、前記複数のＨＬＡ−ペプチド複合体を発現する複数の細胞を含む細胞ベースライブラリである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＨＬＡ−ペプチド複合体が、その天然に存在する対応物の細胞外ドメインである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記複数の細胞の各々は、ＨＬＡクラスＩ複合体をＨＬＡクラスＩ欠損親細胞で発現することによって、調製される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記複数の細胞の各々は、ＨＬＡクラスＩＩ複合体をＨＬＡクラスＩＩ欠損親細胞で発現することによって、調製される、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記決定する工程は、各アドレスからそのＨＬＡ−ペプチド複合体を回収して当該ＨＬＡ−ペプチド複合体が前記化合物に結合するか否かを質量分析法により決定することによって行われる、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
前記化合物は放射性の標識が施され、かつ前記決定する工程は、各アドレスの放射能を調べることによって行われる、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
化合物が被検体に投与されたときに当該化合物が薬物有害反応を誘導する危険性を評価する方法であって、当該方法は、
支持部材における複数のアドレスに位置づけられた複数のＨＬＡ−ペプチド複合体を含むＨＬＡライブラリを提供する工程であって、当該ＨＬＡ−ペプチド複合体の各々は、別個のアドレスに割り当てられている、工程；
該ＨＬＡ−ペプチド複合体に該化合物を接触させる工程；および
該ＨＬＡ−ペプチド複合体のうちの一に該化合物が結合するか否かを決定する工程；
を包含し、ここで、当該化合物が当該ＨＬＡ−ペプチド複合体の一に結合することは、当該化合物が被検体に投与された際に薬物有害反応を誘導する危険性があることを示し、
前記化合物が３ｋＤａ未満の低分子薬物または低分子薬物候補である、方法。
【請求項１６】
前記化合物が前記ＨＬＡ−ペプチド複合体のうちの一に結合したときに、該化合物に結合した当該一のＨＬＡ−ペプチド複合体をそのアドレスに基づき同定する工程をさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＨＬＡ−ペプチド複合体がＨＬＡクラスＩ−ペプチド複合体である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＨＬＡクラスＩ−ペプチド複合体がＨＬＡ−Ｂ−ペプチド複合体である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＨＬＡ−ペプチド複合体が、ＨＬＡクラスＩＩ−ペプチド複合体である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＨＬＡクラスＩＩ−ペプチド複合体が、ＨＬＡ−ＤＲ−ペプチド複合体である、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の参照）
本願は、２０１０年４月１２日に出願した米国仮出願第６１／３２３，０６７号に対する優先権主張を行う。この先の出願の内容は、本願明細書においてその全体が参照することで援用される。
【背景技術】
【０００２】
（本発明の背景）
薬物有害反応（Ａｄｖｅｒｓｅ  ｄｒｕｇ  ｒｅａｃｔｉｏｎ；以下、「ＡＤＲ」）は、依然として、医療および製薬産業の両方において重大な問題である。多くの種類のＡＤＲの中で、スティーブンス・ジョンソン症候群（Ｓｔｅｖｅｎｓ−Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ＳＪＳ）、中毒性表皮壊死症（ｔｏｘｉｃ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｎｅｃｒｏｌｙｓｉｓ；ＴＥＮ）および過敏症症候群（ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ；ＨＳＳ）は、最も由由しくかつ致死性の状態であり、このＳＪＳおよびＴＥＮは、１０〜５０％の死亡率を維持している。Ｒｏｕｊｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３３：１６００−１６０７（１９９５）を参照のこと。ＳＪＳ／ＴＥＮ／ＨＳＳの発生率は低いとはいえ、これらの状態は、それまで健常であった人々を死に至らしめ、または重度の障害を有するようになし得る。製薬産業にとっては、重度の過敏症症候群の発生が有害なものとなり得て、わずかな症例のために、新たに発売された薬物を市場から撤退させることを余儀なくされる。ワールドワイドウェブにおいて、ｆｄａ．ｇｏｖ／ｓａｆｅｔｙ／ｒｅｃａｌｌｓ／ｄｅｆａｕｌｔ．ｈｔｍを参照のこと。
【０００３】
ある種のＨＬＡクラスＩアレル（例えば、ＨＬＡ−ＡおよびＨＬＡ−Ｂのアレル）およびある種のＨＬＡクラスＩＩアレル（例えば、ＨＬＡ−ＤＲアレル）が、ＡＤＲに関連性があることが判明した。以下の文献を参照のこと：Ｃｈｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．４２８：４８６（２００４）；Ｈｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０２：４１３４−４１３９（２００５）；Ｃｈｅｓｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２８，８２２−８３２（２００８）；Ｄａｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４１：８１６−８１９（２００９）；Ｓｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４２：７１１−７１４（２０１０）；Ｍａｌｌａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３５８：５６８−５７９（２０８）；Ｒｏｍａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｓｔｈｍａ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．８０：４３３−４３７（１９９８）；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ  ３５：３３９−３４４（２００５）；Ｈｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｅｔ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １６：２９７−３０６（２００６）；Ｄｅｔｔｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｊ．７：３２５−３３２（２００７）；Ｏ’Ｄｏｎｏｈｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｕｔ  ４７：７１７−７２０（２０００）；Ｌｏｎｊｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｅｔ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １８：９９−１０７（２００８）；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ  １１：８７９−８８４（２０１０）；Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＩＤＳ  １９：９７−９９（２００５）；Ｌｉｔｔｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＩＤＳ  ２０：１６２４−１６２６（２００６）；Ｌｏｃｈａｒｅｒｎｋｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ  ４９：２０８７−２０９１（２００８）；およびＫｉｎｄｍａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ  Ｊ．８：１８６−１９５（２００８）。これらのＡＤＲ−ＨＬＡアレル（ａｌｌｅｌｅ）との関連づけの全ては、認可された薬物によって誘導されたＡＤＲに罹患する患者において決定された。現時点で、開発中の薬物候補が人体においてＳＪＳ、ＴＥＮ、ＨＳＳのような生命を危うくする状態を生じるか否かを予測するための方法を利用することができてない。
【０００４】
新規薬物の開発が平均して１０億ドルの費用、１０年の月日がかかり得るので、薬物開発の初期段階で薬物候補の安全性プロファイルを予測するのに有用なスクリーニング方法を開発することは、途方もなく価値があることである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の要旨）
本発明は、ある種の化合物に結合するＨＬＡ複合体を、それが存在する場合に、ＨＬＡライブラリから同定する方法に関する。本方法は、化合物が薬物有害反応を誘導するか否かを予測するのに信頼性が高いものであり、そのため、ヒトの集団においても信頼性が高く予測し得る。
【０００６】
本発明の方法は、少なくとも次の４つの工程（ｉ）から（ｉｖ）までを含む：
（ｉ）支持部材における複数のアドレスに位置づけられた複数のＨＬＡ複合体（例えば、可溶性ＨＬＡ複合体）を含むＨＬＡライブラリ（例えば、クラスＩまたはクラスＩＩのＨＬＡライブラリ）を提供する工程であって、当該ＨＬＡ複合体の各々は、別個のアドレスに割り当てられている、工程；（ｉｉ）そのＨＬＡ複合体に化合物を接触させる工程；
（ｉｉｉ）そのライブラリにおけるＨＬＡ複合体の一に当該化合物が結合するか否かを決定する工程；および（ｉｖ）その場合に、当該化合物に結合したＨＬＡ複合体を、そのＨＬＡ複合体のアドレスに基づき同定する工程。本明細書で使用される場合、「別個のアドレス」との用語は、支持部材におけるスポットであって、一種（ｏｎｅ  ａｎｄ  ｏｎｌｙ  ｏｎｅ  ｔｙｐｅ）のＨＬＡ複合体が位置づけられたものをいう。
【０００７】
１つの実施例において、そのＨＬＡライブラリは、支持部材に結合した種々のＨＬＡ複合体を備えるマイクロチップベースライブラリである。この場合、その決定する工程は、表面プラスモン共鳴法（ＳＰＲ）によって実行され得る。別の実施例では、そのＨＬＡライブラリは、複数の細胞系を備え、その細胞系の各々が特定のＨＬＡ複合体を発現する細胞ベースライブラリである。細胞系の各々は、親細胞でＨＬＡ複合体を発現することによって調製され得えて、この親細胞は、好ましくは、少なくともの１種のＨＬＡ（例えば、ＨＬＡクラスＩ）を欠損する。この場合、その決定する工程は、各アドレスからそのＨＬＡ複合体を回収し、そして、そのＨＬＡ複合体が当該化合物に結合するか否かを質量分析法により決定することによって実行され得る。あるいは、その化合物は、放射性同位体により標識されていてもよく、その際、その決定する工程は、各アドレスにおける放射能を調べることにより実行される。
【０００８】
本発明の１以上の実施形態についての詳細が、以下の詳細な説明において記載される。本発明の他の特徴または利点は、添付の図面および実施例の詳細な説明から明らかであり、また、その添付の特許請求の範囲からも明らかである。
【０００９】
まず、図面について説明する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、可溶性ＨＬＡ−Ｂ分子を安定的に発現するＣ１Ｒ細胞において産生されるＨＬＡ−Ｂ−β２ミクログロブリン複合体に結合し得るペプチドを取得するプロセスを説明するためのスキームである。
【図２】図２は、表面プラスモン共鳴アッセイを説明するためのスキームである。
【図３】図３は、パルスしていない自己由来Ｂ−ＬＣＬ細胞（白色棒）または２５μｇ／ｍｌのＣＢＺ、ＯＸＣ、ＧＡＢまたはビヒクルコントロールで３７℃にて一晩に亘りパルスした自己由来Ｂ−ＬＣＬ細胞（黒色棒）の特異的な溶解を示すチャートである。３名の患者からのデータを分析して、平均±ＳＤの値を得た。ここで、記号＊は、ｐ＜０．０５（「パルスしていないＢ−ＬＣＬ細胞群」対「パルスしたＢ−ＬＣＬ細胞」）である。記号＊＊は、ｐ＜０．００１（「薬物処置した群」対「ビヒクル処置した群」）である。
【図４】図４は、固定したＢ−ＬＣＬ（黒色棒）および固定していないＢ−ＬＣＬ（白色棒）の存在下での、自己由来Ｔ細胞増殖量を示すチャートである。Ｔ細胞の増殖は、従来型の［３Ｈ］チミジン取り込みアッセイにより決定した。記号＊は、ｐ＜０．０５（「薬物処置した群」対「ビヒクル処置した群」）を示す。
【図５】図５は、可溶性ＨＬＡ−５＊１５０２で覆ったＣＭ５チップに対する、様々な濃度（６２．５〜１０００μＭ）のＣＢＺおよびそのアナログの結合を示すチャートである。相対応答（Ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ；Ｒ．Ｕ．）を、４から７までの独立した実験から、Ｔ１００評価用ソフトウェアを使用して、標準ＤＭＳＯ溶媒補正曲線により計算した。
【図６】図６は、様々なＨＬＡ−Ｂ分子に対するＣＢＺおよびそのアナログの結合を示すチャートである。このチャートで示されているデータは、４〜７件の独立した実験における、（平均値）±（平均値の標準誤差［ＳＥＭ］）を示している。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
（発明の詳細な説明）
本明細書で記載するものは、ある種の化合物（例えば、低分子薬物または薬物候補）に特異的に相互作用するＨＬＡ複合体を、それが存在する場合に、ＨＬＡライブラリを用いてスクリーニングする方法である。この方法は、その化合物が薬物有害反応を誘導する可能性を評価するため、または、その試験化合物に反応して薬物過敏症を発症する危険性が高いヒト集団（すなわち、本方法で同定されるＨＬＡ複合体を保持するヒト集団）を同定するために、使用され得る。そのため、薬物候補が薬物有害反応を生じる可能性があるか否かを予測し、その薬物候補が薬物有害反応を生じる可能性がある場合に、どの患者の集団において生じる可能性があるのかを予測することを本方法は支援するため、本方法は、創薬において特に重要である。
【００１２】
本発明の方法で使用されるＨＬＡライブラリは、１以上のサブグループのＨＬＡ複合体を含むクラスＩライブラリ（例えば、ＨＬＡ−Ｂライブラリ）であり得る。ＨＬＡ−Ｂアレルは、最も多型である遺伝子の１つであり、８００種を超えるバリアントが存在する。「Ｍａｒｓｈ  ａｎｄ  Ｗｈｏ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｆａｃｔｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｌａ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｈｕｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７１（４）：４３２−６；２０１０」を参照のこと。必要である場合は、ＨＬＡ−Ｂライブラリは、８００種を超える既知の異なるＨＬＡ−Ｂ複合体のうちの全てを含み得る。上記ＨＬＡライブラリは、１以上のサブグループのＨＬＡクラスＩＩ複合体を含むクラスＩＩライブラリ（例えば、ＨＬＡ−ＤＲライブラリ）であり得る。あるいは、そのライブラリは、ＨＬＡクラスＩ複合体およびＨＬＡクラスＩＩ複合体の両方を含み得る。必要である場合、上述のライブラリのうちいずれも、新規のＨＬＡ複合体を含むように拡張されてもよい。
【００１３】
ＨＬＡクラスＩアレルおよびＨＬＡクラスＩＩアレルはともに、当該分野で周知である。例えば、これらのアレルは、ＧｅｎＢａｎｋから、またはＨＵＧＯ遺伝子命名法委員会、ＥＭＢＬの一部門（ヒンクストン）、欧州バイオインフォマティクス研究所（ウェルカムトラストゲノムキャンパス［ヒンクストン  ケンブリッジ  ＣＢ１０  １ＳＤ，ＵＫ］）（ワールド・ワイド・ウェブのｇｅｎｅｎａｍｅｓ．ｏｒｇを参照。）により提供されたデータベースから検索可能である。
【００１４】
本発明の方法は、細胞ベースＨＬＡライブラリまたはマイクロチップベースＨＬＡライブラリのいずれかを使用して実行され得る。
【００１５】
（細胞ベースＨＬＡライブラリ）
細胞ベースＨＬＡライブラリは、複数の細胞系を含み、その細胞系の各々は、別個のＨＬＡ複合体を産生する。細胞系の各々は、（ａ）ＨＬＡクラスＩα鎖および（その親細胞が内因性β２−ミクログロブリンを発現しない場合には）必要に応じてβ２ミクログロブリン、または（ｂ）ＨＬＡクラスＩＩα鎖およびＨＬＡクラスＩＩβ鎖を発現するために、親細胞（好ましくは、哺乳動物細胞）を従来の組換え技術により遺伝的に改変することによって調製され得る。好ましくは、このライブラリを構築するための親細胞は、少なくとも１種類のＨＬＡアレル、例えば、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡクラスＩＩまたはそのサブグループのアレルを欠損している。このよう細胞系としては、以下のものが挙げられるがこれらに限定されない：ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１９９３（Ｃ１Ｒ）、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２３０９（ＫｅｒＴｒ）、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１９９２（Ｔ２）、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２１３４（ＬＳ５１３）、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２１５８（ＬＳ１０３４）、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２１５９（ＬＳ４１１Ｎ）、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２５４７（Ｐａｎｃ  １０．０５）、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２５５１（Ｐａｎｃ  ０８．１３）、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２５５３（Ｐａｎｃ  ０２．０３）、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２５４９（Ｐａｎｃ  ０３．２７）、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２５５４（Ｐａｎｃ  ０２．１３）、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２５５５（Ｐａｎｃ  ０４．０３）、およびＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２５５７（Ｐａｎｃ  ０５．０４）。このリストにおいて、最初の２つの細胞系は、ＨＬＡクラスＩ欠損であり、そして、残りの細胞系は、ＨＬＡクラスＩＩ欠損である。
【００１６】
所望のＨＬＡ分子を安定的に発現するトランスフェクト細胞は、慣用手順により選択され得る。高レベルのＨＬＡクラスＩ複合体（これは、ＨＬＡクラスＩα鎖およびβ２ミクログロブリンで構成される）またはクラスＩＩ複合体（これは、ＨＬＡクラスＩＩα鎖およびＨＬＡクラスＩＩβ鎖で構成される）を産生する安定細胞系は、この細胞ベースＨＬＡライブラリの構成体として選択され得る。１つの実施例において、その選択された細胞系は、全長ＨＬＡ分子を発現する。別の実施例において、それは、ＨＬＡ分子の細胞外ドメインを含む、ＨＬＡ分子のフラグメントを発現する。このような細胞系は、可溶性ＨＬＡ複合体を産生する。
【００１７】
上述の手順の後に、種々のＨＬＡ複合体を発現する細胞系であって、その各々の細胞系が、ＨＬＡ複合体のうちの１種類を産生するものが、構築され得る。この種々のＨＬＡ複合体は、ＨＬＡクラスＩ（例えば、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ｋ、ＨＬＡ−Ｌまたはそれらの組み合わせ）、ＨＬＡクラスＩＩ（例えば、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＭ、ＨＬＡ−ＤＯまたはそれらの組み合わせ）を含み得る。これらの安定細胞系は、細胞ベースＨＬＡライブラリを形成する。
【００１８】
これらの安定細胞系の各々は、支持部材のウェル（すなわち、別個のアドレス部）に配置され得る。本明細書に記載されるスクリーニング法を実行するために、その細胞系の各々が、適切な期間に亘り試験化合物とインキュベートされる。次いで、これらの細胞を洗浄し、その化合物のうち遊離した分子を取り除き、その後、その細胞を調べて、その細胞により発現されたＨＬＡ複合体がその化合物に結合したか否かを判定する。図１を参照のこと。１つの実施例において、その化合物は、放射性同位体により標識され、その化合物とＨＬＡ複合体との間の結合は、ブランクコントロールに対する各ウェルにおける放射能レベルに基づき判定される。特定のウェルでその放射能レベルが、ブランクコントロールよりも大きかった場合、それは、そのウェルの細胞により産生されたＨＬＡ複合体がその化合物と結合可能であることを示す。
【００１９】
可溶性ＨＬＡ複合体を産生する細胞系が使用される場合、これらが試験化合物に結合することは、以下のように決定され得る。試験化合物で細胞が処理された後、各ウェルの上清が、回収され、そして、その可溶性ＨＬＡ複合体は、ＨＬＡ特異的な薬剤（例えば、全ての種類のＨＬＡクラスＩおよびクラスＩＩに結合する抗体）を含むアフィニティカラムを使用することで精製される。精製したＨＬＡ複合体を含むサンプルを、適切な温度（例えば、７０℃）で１０分間に亘り加熱して、（ペプチドに結合し得る）その化合物とそのＨＬＡ複合体との間の結合を解離させる。低分子量成分（例えば、３ｋＤａ未満）を含む画分は、例えば、３ｋＤａカットオフの遠心式フィルタ（Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−４，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の使用により回収され、液体クロマトグラフィ−タンデム型質量分析に供され、それらがその試験化合物を含むか否かを決定される。
【００２０】
抗原提示細胞（ＡＰＣ）による特定の薬物（例えば、アバカビルおよびペニシリン）の提示は、処理（プロセッシング）依存的であることが知られている。すなわち、細胞に入った後、これらの化合物は、キャリアタンパク質と共有結合性の結合をなし、その後、ＡＰＣによって処理され、そして、提示される。例えば、Ｃｈｅｓｓｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２８，８２２−８３２（２００８）；およびＰａｄｏｖａｎｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７；１３０３−１３０７．（１９９７）を参照のこと。この細胞ベースＨＬＡクラスＩライブラリは、プロセッシング依存的パスウェイを介してＡＰＣにより提示される化合物に特異的なＨＬＡ複合体をスクリーニングするのに特に有用である。
【００２１】
（チップベースＨＬＡライブラリ）
チップベースＨＬＡライブラリは、種々のＨＬＡ複合体、好ましくは、そのＨＬＡ分子の細胞外ドメインを含むものを、慣用された手法を利用して固定し、その各々がマイクロチップの別個のスポットに固定されることによって調製され得る。例えば、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．１：５１５−５２８（２００２）を参照のこと。この種々のＨＬＡ複合体は、上述した安定細胞系から取得され得る。
【００２２】
試験化合物に結合し得るＨＬＡ複合体をスクリーニングするために、そのマイクロチップに結合した種々のＨＬＡ複合体は、当該化合物がそのコグネイトＨＬＡ複合体に結合することを可能にする条件下で適切な期間に亘りその化合物とともにインキュベーションに供され得る。次いで、そのチップは、結合しなかった化合物を除去するために洗浄され、その後、化合物が結合したＨＬＡ複合体を同定するためにＳＰＲ測定に供される。ＨＬＡ複合体が試験化合物に結合したことが判明した後、そのチップ上のアドレスに基づいてその同定結果は決定され得る。
【００２３】
ＳＰＲ技術は、ハイスループット処理をなす標識を要しない相互作用分析のためのシステムであり、新規医薬品の発見、抗体評価、プロテオミクス、免疫原性評価、バイオセラピューティック（Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）の開発・生産、ならびに多くのライフサイエンス研究技術のような分野において使用されている。表面プラスモン共鳴法（ＳＰＲ）は、センサチップの表層のごく近傍の屈折率変化を検出する。ＳＰＲは、その表面にある物質の質量に依存する角度で当該表面から反射したシャープな陰影として観測される。このＳＰＲ角度は、生体分子が表面に結合して表層の質量を変化させたときに（左下欄のダイアグラムにおいて、ＩからＩＩへと）シフトする。この共鳴角度の変化は、時間に対し（質量変化に比例する）共鳴信号のプロットとしてリアルタイムで非侵襲的にモニタリングされ得る。図２を参照のこと。
【００２４】
チップベースＨＬＡライブラリの使用によって、処理非依存的パスウェイ、すなわち、ＨＬＡ複合体に直接的に結合することを介してＡＰＣにより提示される化合物に特異的なＨＬＡ複合体が同定され得る。例えば、以下を参照のこと：Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１８：２３３−２４１（２００６）；Ｓｃｈｎｙｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１００：１３６−１４１（１９９７）；およびＮａｉｓｂｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１１：１３９３−１４０３（２００３）。
【００２５】
試験化合物に結合するＨＬＡ複合体が本発明の方法で同定されない場合、このことは、この化合物がＡＤＲを誘導する確率が低いことを示している。他方、試験化合物に結合するＨＬＡ複合体が本方法で同定された場合、このことは、この化合物がＡＤＲを誘導する確率が高く、特にそのＨＬＡ複合体を発現するヒトにおいて高いことを示している。
【００２６】
特定のＨＬＡアレルが、特定の人間の民族において他の民族よりも高い存在頻度を有することが当該分野において知られている。ワールド・ワイド・ウェブで「ａｌｌｅｌｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ．ｎｅｔ」を参照のこと。この知見に基づけば、本発明の方法から得られた結果を使用して、特定の薬物または薬物候補に対して感応性である民族（群）を予測すること可能である。これにより、薬物開発が、臨床試験における患者の選定およびマーケッティングにおける判断が導かれる。
【００２７】
以下の表１は、白色人系、アジア系、およびアフリカ系米国人における主要なＨＬＡ−Ｂアレルを列挙した。
【００２８】
【表１】
0005996524.tif 000002
【００２９】
さらに過大に手をかけること（ｅｌａｂｏｒａｔｉｏｎ）なしに、当業者は、上述の記載に基づいて本発明をその最大限の範囲まで実施し得ると考えられる。後述の具体的な実施例によって、化合物（例えば、カルバマゼピン（ｃａｒｂａｍａｚｅｐｉｎｅ；ＣＢＺ）とＨＬＡ−Ｂ複合体（例えば、ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２）との間の結合の決定の仕方を説明する。これは、単に説明目的であって、その開示における他の部分をいかなる方法においても限定するものでないと解釈されるべきである。本明細書において引用された刊行物は、参照することにより援用される。
【００３０】
（材料および方法）
（ｉ）ドナーの特徴
血液サンプルを、８名のＣＢＺ−ＳＪＳ／ＴＥＮ患者および１名のＣＢＺ耐性患者から取得した。全てのＳＪＳ／ＴＥＮ患者を、２名の皮膚科医が写真、病理学的スライドおよび診療記録を精査することにより評価した。耐性患者は、薬物有害反応のエビデンスなく少なくとも３ヶ月に亘ってＣＢＺを受容してきた者である。その病院およびアカデミア  シニカ（中央研究院）治験審査委員会（Ａｃａｄｅｍｉａ  Ｓｉｎｉｃａ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ）の認可を得て、インフォームドコンセントを関係者の各々から得た。
【００３１】
（ｉｉ）化合物
３つグループの化合物を、本研究では使用した。グループ１としては、カルバマゼピン（ＣＢＺ）、カルバマゼピン１０，１１−エポキシド（ＥＣＢＺ，ＣＢＺの主な活性代謝物）、オキシカルバゼピン（ｏｘｃａｒｂａｚｅｐｉｎｅ；ＯＸＣ）、エスリカルバゼピン（ｅｓｌｉｃａｒｂａｚｅｐｉｎｅ；ＥＳＬ）、１０−モノヒドロキシカルバマゼピン（ＭＨＤ；主要なＯＸＣおよびＥＳＬの活性代謝産物）および、その３環系構造のみ有する５Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｆ］アゼピン（５Ｈ−Ｄｉｂｅｎｚ［ｂ，ｆ］ａｚｅｐｉｎｅ；５ＨＢ）が挙げられる。グループ２としては、フェニトイン（ｐｈｅｎｙｔｏｉｎ；ＰＨＴ）のような他の芳香族抗てんかん剤（ａｎｔｉｅｐｉｌｅｐｔｉｃ  ｄｒｕｇ；ＡＥＤ）およびラモトリジン（Ｌａｍｏｔｒｉｇｉｎｅ；ＬＴＧ）が挙げられる。グループ３としては、ＣＢＺと共通の構造を有さない非芳香族系（ｎｏｎａｒｏｍａｔｉｃｅ）ＡＥＤ（例えば、ガパペンチン（ｇａｂａｐｅｎｔｉｎ；ＧＡＢ）、レベチラセタム（ｌｅｖｅｔｉｒａｃｅｔａｍ；ＬＥＶ）およびトピラメート（ｔｏｐｉｒａｍａｔｅ；ＴＯＰ）が挙げられる。
【００３２】
（ｉｉｉ）細胞
ＰＢＭＣを、その製造者説明書（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，ＵＳＡ）に従い密度勾配Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ法によって単離した。ＣＢＺ−ＳＪＳ患者から得たＣＤ８＋Ｔ細胞を、インビトロにて１１〜１４日間に亘り、２５ｇ／ｍｌのＣＢＺで刺激した。刺激後、次いで、その増殖したＴ細胞を、自己由来Ｂリンパ芽球様細胞（Ｂ−ＬＣＬ）およびＣＢＺを用いて２４時間に亘り再刺激をした。３回から４回の再刺激後、ＣＤ８＋Ｔ細胞を、さらなる機能アッセイのために分類した。Ｔ細胞を、１０％熱不活性化ヒト型ＡＢ血清（Ｌａｂｑｕｉｄ  Ｉｎｃ，Ｏｎｔａｒｉｏ，ＣＡ）および５０Ｕ／ｍｌ  ＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ，ＵＳＡ）を補充したＲＰＭＩ１６４０からなるＲＰＭＩ−ＨＳ培地で培養した。ＥＢＶ形質転換Ｂ細胞系（Ｂ−ＬＣＬ）を、そのＥＢＶを産生する細胞系Ｂ９−８５に由来する上清を用いてドナーのＰＢＭＣを形質転換することによって作製した。
【００３３】
（ｉｖ）可溶性ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２を発現する安定Ｃ１Ｒクローンの構築および生成
ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２薬物改変ペプチドを同定するために、（ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２の細胞外ドメインをコードする）エキソン１〜４を含む短縮型ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２  ｃＤＮＡをＣ１Ｒ細胞へ導入することによって、Ｏｕ−Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２０：８７０−８７７（２００７）に記載されるように、可溶性ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２を安定的に発現するＣ１Ｒクローン（Ｃ１Ｒ−ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２）を、樹立した。それにより発現されたＨＬＡ−Ｂ＊１５０２タンパク質が、内因性β２−ミクログロブリンタンパク質と結合してＨＬＡ−Ｂ＊１５０２複合体を形成した。Ｃ１Ｒは、ヒトのＢリンパ芽球様細胞系Ｈｍｙ２．Ｃ１Ｒ（ＣＲＬ−１９９３，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）であり、ＨＬＡ  クラスＩ欠損、ＨＬＡ−Ａの検出なし、低レベルのＨＬＡ−Ｂ３５、通常の発現のＨＬＡ−Ｃｗ４、およびインタクトな抗原処理（プロセッシング）および抗原提示のパスウェイのものである。
【００３４】
簡潔にいえば、短縮型ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２  ｃＤＮＡを、鋳型として全長ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２  ｃＤＮＡと、以下の２つプライマーとを使用してＰＣＲにより得た：
【００３５】
【化１】
0005996524.tif 000003
【００３６】
これらの２つのプライマーは、ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位とＥｃｏＲＩ制限部位を含む。この短縮型ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２  ｃＤＮＡを、発現プラスミドにクローニングし、２５０Ｖかつ９７５μＦの初期パルスで、そして、その後に同じ条件で３０秒間の第２パルスでバイオラド・パルスシステム（Ｂｉｏｒａｄ  ｐｕｌｓｅ  ｓｙｓｔｅｍ）を使用してエレクトロポレーションをなすことによって、Ｃ１Ｒ細胞へ導入した。可溶性ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２を安定的に発現するトランスフェクトクローンを、従来法により、選択して増殖させた。
【００３７】
（ｖ）ＨＬＡ−Ｂ結合薬物改変ペプチドの分析
５０ｍｇ／ｍＬのジメチルスルホキシド（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｐｈｏｘｉｄｅ）に溶かしたＣＢＺ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を、上述のＣ１Ｒ−ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２クローンの細胞培養物に最終濃度５０μｇ／ｍＬで４８時間に亘り添加した。次いで、この培養培地を回収し、遠心分離して、０．４５μｍメンブレン（Ｄｕｒａｐｏｒｅ；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，Ｍａｓｓ）に通して、細胞破砕物を取り除き、そして、ｗ６／３２モノクローナル抗体を結合したＣＮＢｒ活性化セファロース４Ｂ（Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いてアフィニティクロマトグラフィに供した。このｗ６／３２モノクローナル抗体は、いずれのＨＬＡクラスＩ分子にも結合し得る。２回のリサイクル後、このカラムを、１０％飽和ＮａＣｌおよび０．５％ノニデッド（Ｎｏｎｉｄｅｔ）Ｐ−４０を含むＰＥＴ緩衝液（２０ｍＭリン酸緩衝液、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭエチレンジアミン四酢酸、および０．１％  ＮａＮ３（ｐＨ７．４））、５％飽和ＮａＣｌおよび０．５％ノニデッドＰ−４０を含むＰＥＴ緩衝液、ＰＥＴ緩衝液およびリン酸緩衝食塩水を用いて幅広く洗浄した。これらの可溶性ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２およびβ２−ミクログロブリンを含む複合体を、０．２Ｎ酢酸で溶出して透析に処し、−８０℃にて保存した。可溶性のＨＬＡ−Ｂ＊１５０１または１５０３とβ２−ミクログロブリンを含む複合体を、上述したものと同じ手順に従い調製した。ＨＬＡ−Ｂ＊４００１および５１０１は、ＰｕｒｅＰｒｏｔｅｉｎ  ＬＬＣ（Ｏｋａｌａｈｏｍａ，ＯＫ，ＵＳＡ）から購入した。
【００３８】
次いで、ＨＬＡ−Ｂ−β２−ミクログロブリン複合体を、１０分間に亘り７０℃で加熱して、３ｋＤａカットオフで遠心濾過（Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−４；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に供し、ＨＬＡ−Ｂ分子およびβ２−ミクログロブリンに結合した全てのペプチドから、そのＨＬＡ−Ｂ分子およびβ２−ミクログロブリンを分離した。図１を参照のこと。次いで、このペプチドを含むことが疑われた画分を、液体クロマトグラフィータンデム型質量分析法により分析した。
【００３９】
（ｖｉ）［３Ｈ］取り込みアッセイ：
照射を受けたＡＰＣ（１０３）およびＴ細胞（１０４）を、試験化合物ととも４８時間に亘るインキュベーションに供して、Ｔ細胞の増殖を、［３Ｈ］チミジンの取り込みにより測定した。固定アッセイ（ｆｉｘａｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ）のために、自己由来Ｂ−ＬＣＬを、０．０５％パラホルムアルデヒドで３０秒間に亘り前処理した。パルス実験のために、薬物を、Ｂ−ＬＣＬとともに一晩、プレインキュベーションに供した。次いで、Ｂ−ＬＣＬを繰り返し洗浄し、非共有結合的に結合した薬物を除去し、次いで、Ｔ細胞とともにインキュベーションに供した。
【００４０】
（ｖｉｉ）５１Ｃｒ放出アッセイ：
ＩＦＮ−γ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ，ＵＳＡ）で一晩に亘りプレインキュベーションに供したＢ−ＬＣＬを、まず、３７℃で１時間に亘り、５１Ｃｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）とのインキュベーションに供した。この処理した細胞を、洗浄し、ＲＰＭＩ−ＦＢＳに１×１０５／ｍＬの濃度となるまで再懸濁し、この５０μｌの細胞を、試験化合物が存在する状態または存在しない状態において、９６ウェルのＶ型底部プレートにおけるウェルの各々に加えた。１％ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ  １００（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳＡ）を、ポジティブコントロールとして使用した。患者から得た末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をインビトロで増殖することにより調製された細胞傷害性Ｔ細胞を、４時間に亘りＢ−ＬＣＬ細胞とともにインキュベーションに供した。各ウェルから得た上清の放射能を、Ｔｏｐｃｏｕｎｔ（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍｅｒｉｄｅｎ，Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ，ＵＳＡ）により測定した。この特異的な溶解のパーセンテージを、以下のように計算した：
（試験ウェルの５１Ｃｒ放出量−自発性５１Ｃｒ放出量）／（最大５１Ｃｒ放出量―自発性５１Ｃｒ放出量）。
【００４１】
（ｖｉｉｉ）表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）の測定および分析
Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００  ＳＰＲバイオセンサを、製造者（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，ＵＳＡ）によるプロトコルに従い、低分子量化合物のスクリーニングのために使用した。簡潔にいうと、２００ｎｇ／ｍｌの精製したＨＬＡ−Ｂ分子のＮａＡｃ溶液（ｐＨ５．０）で、ＧＥ固定用キットとともにＧＥ固定用ウィザード（ＧＥ  ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｗｉｚａｒｄ）を使用してＣＭ５チップを覆った。ＰＢＳを泳動用緩衝液（ラニングバッファ）として使用し、その流速を１０μｇ／分とした。５％  ＤＭＳＯ  ＰＢＳ溶液に溶解した異なる濃度を有する薬物を、泳動用緩衝液として５％ＤＭＳＯ  ＰＢＳ溶液を用い、アナリスト（ａｎａｌｙｓｔ）として実施した。それらの化合物からの応答は、ＤＭＳＯ効果につき補正した。データ分析については、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ３．１を用いた。
【００４２】
（結果）
（ｉ）カルバマゼピンにより共有結合的に改変されたペプチドの未検出
液体クロマトグラフィーにより溶出したペプチドの大体のパターンは、次の点を除いて類似していた。すなわち、ＣＢＺ処理したサンプルにおいて８３分間の時点でピークが現れたが、ＣＢＺ処理をしていないサンプルでは、そのような８３分間の時点のピークは現れなかった。このピークは、同じタンデム型質量分析アッセイで発生した純粋なＣＢＺのピークと一致したことにより、ＣＢＺであることが実証された。この研究から得られた結果は、ＣＢＺがペプチドに共有結合しないことを示している。
【００４３】
（ｉｉ）ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２によるＣＢＺ認識は、代謝に非依存的である
図３に示されているように、ＣＢＺ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれも、ＣＢＺで一晩パルスされ細胞傷害性試験前に洗浄処理がなされた自己由来Ｂ−ＬＣＬに応答しなった。この結果は、ＨＬＡ−Ｂ１５０２によるＣＢＺの認識が、代謝に非依存的であることを示している。
【００４４】
（ｉｉｉ）ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２によるＣＢＺの提示は、プロセッシングに非依存的である
ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２によるＣＢＺの提示が細胞でのプロセッシングを必要としているか否かを調べるために、自己由来Ｂ−ＬＣＬを固定し、その後、ＣＢＺとのインキュベーションをなし、ＣＢＺ特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を、その増殖によってモニタリングした。ＣＢＺは、固定された自己由来Ｂ−ＬＣＬおよび固定されてない自己由来Ｂ−ＬＣＬの両方により提示され、ＣＢＺ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞が活性化された。図４を参照のこと。対照的に、ビヒクルコントロールまたはＧＡＢで処置した細胞では、ネガティブの結果を観察した。
【００４５】
（ｉｖ）ＣＢＺおよびその構造アナログは、ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２と直接的に結合する
抗原提示機構が存在しない状態で、ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２がＣＢＺアナログを如何にして認識し、そして、提示するかについて理解を深めるために、ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２タンパク質と薬物との間の直接相互作用を、表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）解析により調べた。ＨＬＡ−Ｂ分子のうち５種類の可溶性形態（ｓＨＬＡ−Ｂ＊１５０１、１５０２、１５０３、４００１および５１０１）と、１１種の様々な化学物質（ＣＢＺ、ＥＣＢＺ、ＯＸＣ、ＥＬＩ、ＭＨＤ、５ＨＢ、ＰＨＴ、ＬＴＧ、ＬＥＶ、ＴＯＰおよびＧＡＢ）とを、この生体分子相互作用解析に使用した。そのＳＰＲスクリーニングのデータは、ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２が、５ＨＢを除く全てのＣＢＺアナログと直接的に相互作用し得ることを実証した。図５を参照のこと。このアナログと比較した際に、ＣＢＺは、ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２に対する強い結合能力を有し、ＯＸＣ、ＥＣＢＺおよびＥＬＩは中程度の結合能力を有しており、ＭＨＤは、最も弱い相互作用を示した。機能的研究および遺伝学的研究と同様に、ＰＨＴおよびＬＴＧの両方は、中程度のＨＬＡ−Ｂ＊１５０２への結合能力を示した。ＬＥＶ、ＴＯＰおよびＧＡＢ、ＳＪＳ／ＴＥＮを引き起こすことは殆ど知られていないこの３つの薬物は、治療濃度にある、ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２にも、また、他のＨＬＡ−Ｂ分子にも、結合しなかった。
【００４６】
（ｖ）直接的なＣＢＺ相互作用は、ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２特異的である。
【００４７】
ＣＢＺまたはそのアナログと、ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２またはそれと関連するＨＬＡ分子との結合を、上述の方法に従って調べた。その結果は、ＣＢＺもその７種のアナログ（上記「化合物」の節を参照のこと。）も、ＨＬＡ−Ｂ＊１５０１およびＨＬＡ−Ｂ＊１５０３に結合しないことを示している。この２つＨＬＡ分子は、ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２に非常に関連がある。漢民族の集団に共通する他の２つのＨＬＡ−Ｂ分子、すなわち、ＨＬＡ−Ｂ＊４００１およびＨＬＡ−Ｂ＊５１０１もまた、ＣＢＺおよびそのアナログに結合しなかった。図６を参照のこと。これらの結果は、ＣＢＺまたはそのアナログは、ＨＬＡ−Ｂ＊１５０２に対して特異的に結合することを示している。これは、ＨＬＡ−＊１５０２アレルを保持する個体がそれらのＡＥＤを受けたときにＳＪＳ／ＴＥＮを発症する危険性があることを示している遺伝学的データと符合する。Ｃｈｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４２８：４８６（２００４）および米国特許第７，４７０，５１３号を参照のこと。
【００４８】
（他の実施形態）
本明細書において開示された特徴の全ては、いずれの組み合わせによって併用されてもよい。本明細書において開示された特徴の各々は、同一、均等あるいは類似の目的を担う代替的な特徴によって置換され得る。したがって、特段別の言及をしない場合には、開示された特徴の各々は、均等もしくは類似の特徴を有する属の一例にすぎない。
【００４９】
上述の記載から、当業者は、本発明の本質的な部分を容易に理解するものであり、その趣旨および範囲を逸脱することなく、本発明を種々の用途または条件に対して適応させるために本発明における種々の変更および改変をなし得る。したがって、他の実施形態も、本願発明の範囲にある。
【図１】
0005996524.tif 000004
【図２】
0005996524.tif 000005
【図３】
0005996524.tif 000006
【図４】
0005996524.tif 000007
【図５】
0005996524.tif 000008
【図６】
0005996524.tif 000009
【配列表】
0005996524000001.app