(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分であって、該抗体もしくはその抗原結合部分は、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む重鎖可変ドメイン、ならびに、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含む軽鎖可変ドメインを含み、該重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびに、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、以下：
ａ）それぞれ、配列番号６０、６４、６７、７０、７３、および７５；
ｂ）それぞれ、配列番号６０、６４、６７、７１、７３、および７５；
ｃ）それぞれ、配列番号７７、７９、６７、７０、７３、および７５；ならびに
ｄ）それぞれ、配列番号７７、７９、６７、７１、７３、および７５
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、モノクローナル抗体もしくはその抗原結合部分。
【請求項２】
前記抗体が、以下：
ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含む、重鎖可変ドメイン；および
ｂ）配列番号１５もしくは１６のアミノ酸配列を含む、軽鎖可変ドメイン
のうちの少なくとも１つを含む、請求項１に記載のモノクローナル抗体もしくはその抗原結合部分。
【請求項３】
前記重鎖可変ドメインおよび前記軽鎖可変ドメインは、それぞれ、以下：
ａ）配列番号９および１５；ならびに
ｂ）配列番号９および１６
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体もしくは抗原結合部分。
【請求項４】
ａ）前記重鎖が、シグナル配列を含まない配列番号１、および配列番号１０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むか；または
ｂ）前記重鎖が、シグナル配列を含まない配列番号１、および配列番号１０８からなる群より選択されるアミノ酸配列において、Ｃ末端リジンを欠いているアミノ酸配列を含むか；または
ｃ）前記軽鎖が、シグナル配列を含まない配列番号７および８、ならびに配列番号１１０および１１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、
請求項１に記載のモノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体。
【請求項５】
前記重鎖および前記軽鎖は、それぞれ、以下：
ａ）配列番号１および７；
ｂ）配列番号１および８；
ｃ）配列番号１０８および１１０；ならびに
ｄ）配列番号１０８および１１２
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、
ここで該アミノ酸配列は、シグナル配列（存在する場合）を欠いており、ここで、配列番号１は、必要に応じて、Ｃ末端リジンを欠いている、請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
ヒト化抗体である、請求項１〜４のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
【請求項７】
前記抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４の定常ドメインを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項８】
単鎖抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、二重特異性単鎖Ｆｖダイマー、ダイアボディー、ドメイン欠失抗体もしくは単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗原結合部分。
【請求項９】
以下：
ａ）ヒトＣＣＬ１６に結合しない；
ｂ）カニクイザルもしくはアカゲザルのＣＣＬ２０には結合するが、マウスのＣＣＬ２０にもラットのＣＣＬ２０にも結合しない；
ｃ）一価表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、７０ｐＭ以下の、ヒトＣＣＬ２０に対する結合親和性を有する；
ｄ）二価表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、１２ｐＭ以下の、ヒトＣＣＬ２０に対する結合親和性を有する；
ｅ）ヒトＣＣＲ６に対する結合親和性より高い、ヒトＣＣＬ２０に対する結合親和性を有する；
ｆ）ヒトＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ４，ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３，ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、もしくはＸＣＬ１を上回る、ヒトＣＣＬ２０に対する選択性を有する；
ｇ）１．７ｎＭ以下のＩＣ５０で、ＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性化学走性を低下させる；
ｈ）インビボで、ＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性化学走性を低下させる；
ｉ）インビトロで、ＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性化学走性を低下させる；
ｊ）被験体において、関節炎症状の進行を減じる；
ｋ）被験体において、骨粗鬆症、骨侵食、もしくは新たな骨形成を減じる；
ｌ）被験体において、軟骨オリゴマーマトリクスタンパク質（ＣＯＭＰ）血清レベルを低下させる；
ｍ）被験体において、ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＫ、ＴＲＡＰ、もしくはカテプシンＫのｍＲＮＡレベルを低下させる；
ｎ）被験体において、アトピー性皮膚炎の進行を減じる；および
ｏ）被験体において、アレルギー性接触性皮膚炎の進行を減じる、
からなる群より選択される、１種以上の特性を有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
【請求項１０】
以下：
ａ）配列番号８４の残基７〜９；
ｂ）配列番号８４の残基１０〜１９；および
ｃ）配列番号８４の残基２０〜２２、
からなる群より選択される１種以上のアミノ酸配列を含むヒトＣＣＬ２０のエピトープに結合する、請求項１〜９のいずれか１項に記載のモノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分。
【請求項１１】
前記エピトープは、以下：
ａ）配列番号８４の残基３９〜５５；
ｂ）配列番号８４の残基５６〜６７；および
ｃ）配列番号８４の残基６１〜７０
からなる群より選択される１種以上のアミノ酸配列をさらに含む、請求項１０に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
【請求項１２】
前記エピトープは、配列番号８４の残基７〜９、１０〜１９、２０〜２２、３９〜５５、５６〜６７、および６１〜７０を含む、請求項１１に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
【請求項１３】
ａ）請求項１もしくは１０に記載の抗体もしくは部分の、重鎖もしくはその抗原結合部分；
ｂ）請求項１もしくは１０に記載の抗体もしくは部分の、軽鎖もしくはその抗原結合部分；または
ｃ）請求項１もしくは１０に記載の抗体もしくは部分の、重鎖もしくはその抗原結合部分および軽鎖もしくはその抗原結合部分
をコードする、単離された核酸分子。
【請求項１４】
請求項１もしくは１０に記載の抗体もしくは部分の、（１）重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸配列、（２）軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸配列、または（３）その両方を含む、医薬として使用するための組成物。
【請求項１５】
請求項１もしくは１０に記載の抗体もしくは部分の、（１）重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸配列、（２）軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸配列、または（３）その両方を含む、組換えベクター。
【請求項１６】
請求項１もしくは１０に記載の抗体もしくは部分の重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする第１の核酸配列であって、発現制御エレメントに作動可能に連結された第１の核酸配列と、該抗体もしくは部分の軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする第２の核酸配列であって、発現制御エレメントに作動可能に連結された第２の核酸配列とを含む、宿主細胞。
【請求項１７】
抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分を作製する方法であって、請求項１６に記載の宿主細胞を、該抗体もしくは部分の発現に適した条件下で維持する工程を包含する、方法。
【請求項１８】
請求項１もしくは１０に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分、および薬学的に受容可能なビヒクルもしくはキャリアを含む、組成物。
【請求項１９】
医薬として使用するための、請求項１〜８、１０、１１もしくは１２のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分を含む組成物または請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
状態を処置するための、請求項１〜８、１０、１１もしくは１２のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分を含む組成物または請求項１８に記載の組成物であって、該状態は、以下：
ＣＣＲ６関連状態、自己免疫状態もしくは炎症状態、がん、関節リウマチ、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、クローン病、炎症性腸疾患、グレーブス病、白斑、甲状線機能亢進症、慢性肝炎、子宮頸部のヒトパピローマウイルス感染、菌状息肉腫、骨粗鬆症、歯周病、肘もしくは膝に対して遠位の四肢の関節病変、紅斑、腫脹、軟骨オリゴマーマトリクスタンパク質（ＣＯＭＰ）血清レベルの増大、核因子κΒリガンドのレセプターアクチベーター（ＲＡＮＫＬ）のｍＲＮＡレベルの増大、核因子κΒのレセプターアクチベーター（ＲＡＮＫ）のｍＲＮＡレベルの増大、酒石酸耐性酸ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）のｍＲＮＡレベルの増大、カテプシンＫのｍＲＮＡレベルの増大、アトピー性皮膚炎およびアレルギー性接触性皮膚炎
からなる群より選択される、組成物。
【請求項２１】
前記がんは、Ｂ細胞悪性腫瘍、乳腺癌、神経膠芽腫、肝細胞癌、膵腺癌、もしくは甲状腺乳頭状癌である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
請求項１〜８、１０、１１もしくは１２のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分を含む組成物または請求項１８に記載の組成物であって、該組成物は、以下：
ａ）被験体においてＣＣＲ６＋細胞のＣＣＬ２０誘導性化学走性を低下させること；
ｂ）インビトロでＣＣＲ６＋細胞のＣＣＬ２０誘導性化学走性を低下させること；
ｃ）関節炎患者において軟骨オリゴマーマトリクスタンパク質（ＣＯＭＰ）血清レベルを低下させること；
ｄ）関節炎患者の関節組織における核因子κΒリガンドのレセプターアクチベーター（ＲＡＮＫＬ）のｍＲＮＡレベルを低下させること；
ｅ）関節炎患者の関節組織における核因子κΒのレセプターアクチベーター（ＲＡＮＫ）のｍＲＮＡレベルを低下させること；
ｆ）関節炎患者の関節組織における酒石酸耐性酸ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）のｍＲＮＡレベルを低下させること；および
ｇ）関節炎患者の関節組織におけるカテプシンＫのｍＲＮＡレベルを低下させること；からなる群より選択される目的のためのものである、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１０年１１月１９日に出願された米国仮特許出願第６１／４１５，６１４号からの優先権を主張する。この米国仮特許出願の開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、ヒトＣＣケモカインリガンド２０（ＣＣＬ２０）に対して特異的に指向される、新規なヒト化抗体、キメラ抗体およびマウス抗体に関する。本発明のヒト化抗体は、炎症性疾患および自己免疫疾患の処置のための治療剤として特に十分に適している。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
免疫系は、非自己（例えば、外来生物もしくは外来物質）を自己から区別するために身体によって使用される、非常に精巧な生体回路である。身体における非自己の検出は、炎症を生じ得、ここで種々の細胞成分および分子成分が調整されて、上記非自己の生物もしくは物質によって引き起こされる潜在的に有害な事象に応答する。その炎症プロセスは、外来の攻撃から身体を守る一助にはなるものの、免疫系の統制解除は、自己攻撃（例えば、自己免疫疾患）のような負の結果をもたらし得る。炎症性分子（例えば、ケモカイン）の機能を変化させることによって、免疫／炎症応答に関連する障害の開始および進行を減じることは、可能であり得る。
【０００４】
ケモカインは、炎症において中心的役割を果たす低分子（８〜１０ｋＤａ）タンパク質のファミリーである。上記炎症プロセスの間に、ケモカインは、有害刺激の部位において局所的に生成され、それらの同族レセプターである７回膜貫通Ｇプロテイン共役レセプター（ＧＰＣＲ）を発現する免疫細胞を動員する中心的なプレーヤーとして働く。ＣＣＬ２０（肝臓および活性化調節ケモカイン（ｌｉｖｅｒ  ａｎｄ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ）（ＬＡＲＣ）、マクロファージ炎症性タンパク質−３α（ＭＩＰ−３α）、もしくはＥｘｏｄｕｓ−１とも称される）は、上皮細胞によって発現される可溶性ケモカインである。上皮ケラチノサイトおよび滑膜裏打ち細胞（ｓｙｎｏｖｉｕｍ−ｌｉｎｉｎｇ  ｃｅｌｌ）は、恒常的な状態、ならびに炎症状態および病的な状態（例えば、がん、乾癬、および関節リウマチ）の間に、多量のＣＣＬ２０を生成することが公知である。ＣＣＬ２０の同族レセプターは、ＣＣケモカインレセプター６（ＣＣＲ６）であり；ＣＣＬ２０は、ＣＣＲ６と相互作用することが公知の唯一のケモカインである。上記ＣＣＬ２０シグナルへの応答において、ＣＣＲ６を有する免疫細胞（例えば、未熟樹状細胞（ＤＣ）、エフェクター／記憶Ｔ細胞、およびＢ細胞）は、周りの組織に移動しかつ浸潤し、従って、炎症カスケードを活性化させる。
【０００５】
ＣＣＬ２０発現は、炎症性サイトカイン（例えば、インターロイキン１β（ＩＬ−１β）および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α））によって誘発される炎症において有意に増強されるので、上記ＣＣＬ２０−ＣＣＲ６相互作用は、病的な炎症プロセスにおいて役割を果たすと考えられている。
【０００６】
関節リウマチ（ＲＡ）は、最も一般的な自己免疫疾患のうちの１つである。ＲＡの最初の徴候は、しばしば、腫脹した、疼痛のある関節として現れる滑膜炎である。滑膜炎を開始する特定の因子は未知のままであるが、滑膜裏打ち上皮細胞および滑膜線維芽細胞は、上記炎症反応の主な誘導因子であると考えられている。ＲＡ患者に由来する滑液は、ヒト単球および炎症促進性Ｔヘルパー１７（Ｔｈ１７）細胞を効率的に化学誘引し、次いで、上記Ｔｈ１７細胞は、ＲＡ炎症プロセスを誘導および増悪させる。反応性滑膜細胞は、多量のＣＣＬ２０を（特に、ＩＬ−１βおよびＴＮＦ−αの影響下で）生成し得る一方で、ＣＣＲ６は、Ｔｈ１７細胞の主要なレセプターであるので、上記ＣＣＬ２０−ＣＣＲ６相互作用は、上記炎症プロセスにおいて重要な役割を果たすと考えられている。
【０００７】
上記ＣＣＬ２０−ＣＣＲ６相互作用はまた、特定のタイプの皮膚炎において重要な役割を果たし得る。例えば、乾癬は、皮膚において（環境因子および／もしくは遺伝的因子によって誘導される）有害乾癬事象とともに開始し、続いて、Ｔｈ１７細胞の浸潤が続く。ＣＣＲ６は、Ｔｈ１７細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、および組織損傷エフェクターＴ細胞の表面で発現されるので、ＣＣＬ２０は、乾癬においてこれら細胞タイプの主要な化学誘引物質を代表し得る。上記ＣＣＬ２０−ＣＣＲ６相互作用の重要性のさらなる証拠は、乾癬の、インターロイキン２３（ＩＬ−２３）誘発マウスモデルを使用した研究において見いだされ得る（Ｈｅｄｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １１９：２３１７−２３２９  （２００９））。このモデルにおいて、ＩＬ−２３の注射は、インターロイキン２２（ＩＬ−２２）依存性乾癬性炎症を引き起こす。しかし、Ｃｃｒ６−／−マウスは、ＩＬ−２３を注射した場合に乾癬様症状を示さない。このことは、ＣＣＲ６が、乾癬の発症に必要とされることを示す。
【０００８】
ヒトケラチノサイトは、多量のＣＣＬ２０を、特に、Ｔｈ１７由来サイトカインであるインターロイキン１７（ＩＬ−１７）、ＩＬ−２２、およびＴＮＦ−αの影響下で生成し得る。ＣＣＬ２０およびＣＣＲ６は、希に正常皮膚において検出される一方で、これらはともに、アトピー性皮膚炎および膿胞性乾癬において増大した発現レベルを示す。ＣＣＬ２０の強い誘導およびＣＣＲ６＋細胞の蓄積は、ヒト皮膚炎病変の顕微鏡による免疫組織化学的分析において観察され得る。これら観察は、皮膚炎炎症プロセスにおいてＣＣＬ２０およびＣＣＲ６の役割のさらなる証拠を提供する。
【０００９】
免疫障害を処置するための現在利用可能なＭＡｂ生物製剤は、大きく３つの群に分類され得る：免疫刺激性サイトカインのインヒビター（例えば、抗ＴＮＦ−α  ＭＡｂ）、免疫細胞除去剤（例えば、抗ＣＤ２０  ＭＡｂ）、およびアクセサリー分子のブロッカー（例えば、アバタセプト）。これらの生物製剤は、炎症性疾患の処置において有用であり得る；しかし、これらの処置への主な非応答性もしくは徐々に応答率が低下することに起因して、例えば、ＣＣＬ２０／ＣＣＲ６媒介性障害を有する患者の医療的ニーズを満たすための、新規な作用機構を有する代替の生物製剤が早急に必要である。本発明の主題の抗体は、このような代替の生物製剤を示す。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（発明の要旨）
本発明は、中和抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分に関する。特定の実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体は、ヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体であり、これは、マウス抗ヒトＣＣＬ２０抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体は、マウスもしくはキメラの抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分である。
【００１１】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、ヒトＣＣＬ２０に結合する。いくつかの実施形態において、上記抗体もしくは部分は、ヒトＣＣＬ１６に結合しない。
【００１２】
本発明の抗体は、ＣＣＬ２０に特異的に結合する。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、カニクイザルおよび／もしくはアカゲザルのＣＣＬ２０、ならびにヒトＣＣＬ２０に結合する。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、マウスおよび／もしくはラットのＣＣＬ２０に結合しない。一実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくは抗原結合部分は、ヒト、カニクイザル、およびアカゲザルのＣＣＬ２０に結合するが、マウスおよびラットのＣＣＬ２０に結合しない。
【００１３】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、以下より小さい、ヒトＣＣＬ２０に対する結合親和性（ＫＤ）を有する：
−  一価（ｍｏｎｏｖａｌｅｎｔ）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、１ｎＭ、５００ｐＭ、１００ｐＭ、９０ｐＭ、８０Ｍ、７０ｐＭ、６０ｐＭ、もしくは５０ｐＭ、または
−  二価（ｂｉｖａｌｅｎｔ）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、１ｎＭ、５００ｐＭ、１００ｐＭ、７５ｐＭ、５０ｐＭ、２５ｐＭ、２０ｐＭ、１５ｐＭ、１４ｐＭ、１３ｐＭ、１２ｐＭ、１１ｐＭ、１０ｐＭ、９ｐＭ、８ｐＭ、７ｐＭ、６ｐＭ、もしくは５ｐＭ。
【００１４】
特定の実施形態において、上記抗体もしくは部分は、ヒトＣＣＲ６より高い、ヒトＣＣＬ２０に対する結合親和性を有する。
【００１５】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、二価表面プラズモン共鳴によって決定される場合、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、もしくは３０（×１０５Ｍ−１  ｓｅｃ−１）未満の、ヒトＣＣＬ２０に対するｋａを有する。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、二価表面プラズモン共鳴によって決定される場合、１０、９、８、７、６、５、４、もしくは３（×１０−５  ｓｅｃ−１）未満の、ヒトＣＣＬ２０に対するｋｄを有する。
【００１６】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、二価表面プラズモン共鳴によって決定される場合、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、もしくは３０（×１０５Ｍ−１  ｓｅｃ−１）未満の、アカゲザルＣＣＬ２０に対するｋａを有する。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、二価表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５０、４０、３０、２０、１０、９、８、７、６、５、４、３、もしくは２（×１０−５  ｓｅｃ−１）未満の、アカゲザルＣＣＬ２０に対するｋｄを有する。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、二価表面プラズモン共鳴によって決定される場合、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、もしくは１０ｐＭ未満の、アカゲザルＣＣＬ２０に対するＫＤを有する。
【００１７】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、二価表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５００、４００、３００、２００、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、もしくは３０（×１０５Ｍ−１  ｓｅｃ−１）未満の、カニクイザルＣＣＬ２０に対するｋａを有する。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、二価表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５０、４０、３０、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、もしくは６（×１０−５  ｓｅｃ−１）未満の、カニクイザルＣＣＬ２０に対するｋｄを有する。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、二価表面プラズモン共鳴によって決定される場合、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１９、１８、１７、１６、もしくは１５ｐＭ未満の、カニクイザルＣＣＬ２０に対するＫＤを有する。
【００１８】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３９、３８、３７、３６、３５、もしくは３４ｐＭ未満のＥＣ５０で、ヒトＣＣＬ２０に結合する。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、５００、４００、３００、２００、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７０、６５、６０、５９、５８、５７、５６、５５、５４、５３、５２、５１、もしくは５０ｐＭ未満のＥＣ５０で、アカゲザルＣＣＬ２０に結合する。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、５００、４００、３５０、３００、２５０、２００、１９０、１８０、１７０、１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１０９、１０８、１０７、１０６、１０５、１０４、１０３、もしくは１０２ｐＭ未満のＥＣ５０で、カニクイザルＣＣＬ２０に結合する。
【００１９】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、他のヒトケモカイン（ＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ４、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、および／もしくはＸＣＬ１が挙げられるが、これらに限定されない）を上回る、ヒトＣＣＬ２０に対する選択性を有する。特定の実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくは抗原結合部分は、上記ケモカインの全てを上回る、ヒトＣＣＬ２０に対する選択性を有する。
【００２０】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、もしくは１．１ｎＭ未満のＩＣ５０で、ヒトもしくはマウスのＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性化学走性を低下させる。特定の実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、もしくは１．１ｎＭ未満のＩＣ５０で、ヒトもしくはマウスのＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性化学走性を低下させる。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１、４．９、４．８、４．７、もしくは４．６ｎＭ未満のＩＣ９０で、ヒトもしくはマウスのＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性化学走性を低下させる。特定の実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、６、５．５、５．４、５．３、５．２、５．１  、４．９、４．８、４．７、もしくは４．６ｎＭ未満のＩＣ９０で、ヒトもしくはマウスのＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性化学走性を低下させる。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、９、８、もしくは７ｎＭ未満のＩＣ９５で、ヒトもしくはマウスのＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性走化性を低下させる。特定の実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、１０、９．９、９．８、９．７、９．６、９．５、９．４、９．３、９．２、９．１、もしくは９ｎＭ未満のＩＣ９５で、ヒトもしくはマウスのＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性走化性を低下させる。
【００２１】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、インビトロでヒトもしくはマウスのＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性走化性を低下させる。
【００２２】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、インビボでヒトもしくはマウスのＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性走化性を低下させる。
【００２３】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、被験体における関節症状（例えば、肘もしくは膝に対して遠位の四肢の関節病変、ならびに紅斑および腫脹の程度）の進行を、例えば、コラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）および／もしくはグルコース−６−ホスフェートイソメラーゼ（Ｇ６Ｐ１）誘発性関節炎のマウスモデルにおいて減じる。いくつかの実施形態において、上記抗体もしくはその抗原結合部分は、例えば、ＣＩＡモデルにおいて、被験体における骨病変（骨粗鬆症、骨侵食、および／もしくは新たな骨形成が挙げられる）を減じる。いくつかの実施形態において、上記抗体もしくは抗原結合部分は、被験体における（例えば、ＣＩＡモデルにおける）軟骨オリゴマーマトリクスタンパク質（ＣＯＭＰ）の血清レベルを低下させる。いくつかの実施形態において、上記抗体もしくはその抗原結合部分は、被験体における（例えば、ＣＩＡモデルにおけるマウスの足における）核因子κΒリガンドのレセプターアクチベーター（ＲＡＮＫＬ）、核因子κΒのレセプターアクチベーター（ＲＡＮＫ）、酒石酸耐性酸ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）、および／もしくはカテプシンＫのｍＲＮＡレベルを低下させる。いくつかの実施形態において、上記抗体もしくはその抗原結合部分は、被験体におけるアトピー性皮膚炎症状（例えば、乾燥、鱗屑、紅斑、滲出／痂皮形成、および／もしくは擦過傷）（例えば、ＮＣ／Ｎｇａ系統マウスにおけるオキサゾロン誘発性アトピー性皮膚炎の症状）を減じる。いくつかの実施形態において、上記抗体もしくは抗原結合部分は、被験体におけるアレルギー性接触性皮膚炎症状（例えば、マウスモデルにおけるジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）誘発性アレルギー性接触性皮膚炎の症状）を減じる。
【００２４】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、ＣＤＲ３（Ｈ−ＣＤＲ３）が、配列番号６７もしくは６８の配列を含む重鎖を含む。
【００２５】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、ＣＤＲ３（Ｌ−ＣＤＲ３）が、配列番号７５の配列を含む軽鎖を含む。
【００２６】
特定の実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、配列が配列番号６７を含むＨ−ＣＤＲ３、および配列が配列番号７５を含むＬ−ＣＤＲ３を含むか；または配列が配列番号６８を含むＨ−ＣＤＲ３、および配列が配列番号７５を含むＬ−ＣＤＲ３を含む。
【００２７】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、ＣＤＲ１（Ｈ−ＣＤＲ１）、ＣＤＲ２（Ｈ−ＣＤＲ２）、およびＣＤＲ３（Ｈ−ＣＤＲ３）がそれぞれ、以下の配列：
−配列番号６０、６３、および６７；
−配列番号６０、６４、および６７；
−配列番号６１、６５、および６８；
−配列番号７７、７９、および６７；または
−配列番号７８、８０、および６８
を含む重鎖を含む。
【００２８】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、ＣＤＲ１（Ｌ−ＣＤＲ１）、ＣＤＲ２（Ｌ−ＣＤＲ２）、およびＣＤＲ３（Ｌ−ＣＤＲ３）がそれぞれ、以下の配列：
−配列番号７０、７３、および７５；または
−配列番号７１、７３、および７５
を含む軽鎖を含む。
【００２９】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、以下：
−配列番号６０〜６２、７７、および７８からなる群より選択される配列を含むＨ−ＣＤＲ１；
−配列番号６３〜６６および７９〜８１からなる群より選択される配列を含むＨ−ＣＤＲ２；
−配列番号６７もしくは６８の配列を含むＨ−ＣＤＲ３；
−配列番号７０〜７２からなる群より選択される配列を含むＬ−ＣＤＲ１；
−配列番号７３もしくは７４の配列を含むＬ−ＣＤＲ２；または
−配列番号７５を含むＬ−ＣＤＲ３；
または任意のこれらの組み合わせ
を含む。
【００３０】
特定の実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、以下の配列：
−配列番号６０、６３、６７、７０、７３、および７５；
−配列番号６０、６４、６７、７０、７３、および７５；
−配列番号６１、６５、６８、７０、７３、および７５；
−配列番号７７、７９、６７、７０、７３、および７５；
−配列番号７８、８０、６８、７０、７３、および７５；
−配列番号６０、６３、６７、７１、７３、および７５；
−配列番号６０、６４、６７、７１、７３、および７５；
−配列番号６１、６５、６８、７１、７３、および７５；
−配列番号７７、７９、６７、７１、７３、および７５；または
−配列番号７８、８０、６８、７１、７３、および７５
をそれぞれ含む、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、Ｈ−ＣＤＲ３、Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、およびＬ−ＣＤＲ３を含む。
【００３１】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、配列番号９〜１４からなる群より選択される配列を含む重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、配列番号３９、４１、および４３からなる群より選択される配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【００３２】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、配列番号１５もしくは１６の配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、配列番号４０、４２、および４４からなる群より選択される配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。
【００３３】
特定の実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、以下の配列：
−配列番号９および配列番号１５；
−配列番号１０および配列番号１５；
−配列番号１１および配列番号１５；
−配列番号１２および配列番号１５；
−配列番号１３および配列番号１５；
−配列番号１４および配列番号１５；
−配列番号９および配列番号１６；
−配列番号１０および配列番号１６；
−配列番号１１および配列番号１６；
−配列番号１２および配列番号１６；
−配列番号１３および配列番号１６；または
−配列番号１４および配列番号１６
をそれぞれ含む、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。
【００３４】
特定の実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、以下の配列：
−配列番号３９および配列番号４０；
−配列番号３９および配列番号４２；
−配列番号３９および配列番号４４；
−配列番号４１および配列番号４０；
−配列番号４１および配列番号４２；
−配列番号４１および配列番号４４；
−配列番号４３および配列番号４０；
−配列番号４３および配列番号４２；または
−配列番号４３および配列番号４４
をそれぞれ含む、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。
【００３５】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、配列番号１〜６および１０８からなる群より選択される配列であって、シグナル配列（存在する場合）を含まず、必要に応じて、Ｃ末端リジンを含まない配列、を有する重鎖を含む。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、シグナル配列（存在する場合）を含まない配列番号７、８、１１０、および１１２からなる群より選択される配列を有する、軽鎖を含む。特定の実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体は、以下の配列：
−配列番号１および配列番号７；
−配列番号２および配列番号７；
−配列番号３および配列番号７；
−配列番号４および配列番号７；
−配列番号５および配列番号７；
−配列番号６および配列番号７；
−配列番号１および配列番号８；
−配列番号２および配列番号８；
−配列番号３および配列番号８；
−配列番号４および配列番号８；
−配列番号５および配列番号８；
−配列番号６および配列番号８；
−配列番号１０８および配列番号１１０；または
−配列番号１０８および１１２；
であって、
該両方の配列がシグナル配列を有さず、配列番号１〜６および１０８が必要に応じてＣ末端リジンを含まない配列、をそれぞれ有する、重鎖および軽鎖を含む。
【００３６】
本発明はまた、配列番号２５〜３０からなる群より選択される配列によってコードされる重鎖可変ドメインを含む抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分を提供する。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、配列番号５１、５３、および５５からなる群より選択される配列によってコードされる重鎖可変ドメインを含む。
【００３７】
さらに、本発明は、配列番号３１もしくは３２の配列によってコードされる軽鎖可変ドメインを含む抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分を提供する。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、配列番号５２、５４、および５６からなる群より選択される配列によってコードされる軽鎖可変ドメインを含む。
【００３８】
特定の実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、以下の配列：
−配列番号２５および配列番号３１：
−配列番号２６および配列番号３１；
−配列番号２７および配列番号３１；
−配列番号２８および配列番号３１；
−配列番号２９および配列番号３１；
−配列番号３０および配列番号３１；
−配列番号２５および配列番号３２；
−配列番号２６および配列番号３２；
−配列番号２７および配列番号３２；
−配列番号２８および配列番号３２；
−配列番号２９および配列番号３２；または
−配列番号３０および配列番号３２
によってそれぞれコードされる、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。
【００３９】
特定の実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、以下の配列：
−配列番号５１および配列番号５２；
−配列番号５１および配列番号５４；
−配列番号５１および配列番号５６；
−配列番号５３および配列番号５２；
−配列番号５３および配列番号５４；
−配列番号５３および配列番号５６；
−配列番号５５および配列番号５２；
−配列番号５５および配列番号５４；または
−配列番号５５および配列番号５６
によってそれぞれコードされる、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む。
【００４０】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、配列番号１７〜２２および１０９からなる群より選択される配列であって、シグナル配列（存在する場合）をコードする配列を欠いており、必要に応じてＣ末端リジンをコードする配列を欠いている配列、によってコードされる重鎖を含む。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、配列番号２３、２４、１１１、および１１３からなる群より選択される配列であって、シグナル配列（存在する場合）をコードする配列を欠いている配列、によってコードされる軽鎖を含む。特定の実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体は、以下の配列：
−配列番号１７および配列番号２３；
−配列番号１８および配列番号２３；
−配列番号１９および配列番号２３；
−配列番号２０および配列番号２３；
−配列番号２１および配列番号２３；
−配列番号２２および配列番号２３；
−配列番号１７および配列番号２４；
−配列番号１８および配列番号２４；
−配列番号１９および配列番号２４；
−配列番号２０および配列番号２４；
−配列番号２１および配列番号２４；
−配列番号２２および配列番号２４；
−配列番号１０９および配列番号１１１；または
−配列番号１０９および配列番号１１３；
であって、
該両方の配列がシグナル配列（存在する場合）をコードする配列を欠いており、配列番号１７〜２２および１０９が必要に応じてＣ末端リジンをコードする配列を欠いている配列、によってそれぞれコードされる、重鎖および軽鎖を含む。
【００４１】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、ヒト化されているか、もしくはキメラである。いくつかの実施形態において、上記ヒト化抗ＣＣＬ２０抗体もしくは部分の重鎖のフレームワーク領域は、ＩＧＨＶ１−４６＊０３ヒト生殖細胞系列遺伝子を利用する（例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  「Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ  ａｎｄ  ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ：  ａ  ｎｅｗ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｓｅａｒｃｈ  ｐｒｏｇｒａｍｓ」，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：３３８９−３４０２  （１９９７）を参照のこと）。特定の実施形態において、上記重鎖フレームワーク領域は、上記ＩＧＨＶ１−４６＊０３ヒト生殖細胞系列遺伝子のフレームワーク領域に対して少なくとも５０％相同性を有する。例えば、上記重鎖フレームワーク領域は、上記ＩＧＨＶ１−４６＊０３ヒト生殖細胞系列遺伝子のフレームワーク領域に対して、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくはさらに１００％同一であり得る。いくつかの実施形態において、上記ヒト化抗ＣＣＬ２０抗体もしくは部分の軽鎖のフレームワーク領域は、ＩＧＫＶ１Ｄ−３９＊０１ヒト生殖細胞系列遺伝子を利用し（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，前出を参照のこと）、特定の実施形態において、上記軽鎖フレームワーク領域は、上記ＩＧＫＶ１Ｄ−３９＊０１ヒト生殖細胞系列遺伝子のフレームワーク領域に対して少なくとも５０％相同性を有する。例えば、上記軽鎖フレームワーク領域は、上記ＩＧＫＶ１Ｄ−３９＊０１ヒト生殖細胞系列遺伝子のフレームワーク領域に対して、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくはさらに１００％同一であり得る。
【００４２】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分（上記部分が、重鎖定常領域の少なくとも一部を含む程度まで）は、ＩｇＧ分子、ＩｇＭ分子、ＩｇＥ分子、ＩｇＡ分子、もしくはＩｇＤ分子である。特定の実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、ＩｇＧ１サブタイプ、ＩｇＧ２サブタイプ、ＩｇＧ３サブタイプ、もしくはＩｇＧ４サブタイプのものである。
【００４３】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体は、モノクローナル抗体である。
【００４４】
本発明はまた、上記分子のＮ−ループ領域および／もしくはβ２−β３ヘアピン領域に位置するヒトＣＣＬ２０のエピトープに結合する抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分を提供する。いくつかの実施形態において、上記抗抗ＣＣＬ２０抗体もしくは部分は、本明細書に記載される抗体もしくは部分と同じ、ヒトＣＣＬ２０上のエピトープに結合する。さらに、本発明は、本明細書に記載される抗体もしくは部分と、ヒトＣＣＬ２０への結合について競合もしくは交叉競合する抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分を提供する。
【００４５】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合部分によって結合される上記ヒトＣＣＬ２０エピトープは、以下：
−配列番号８４の残基７〜９；
−配列番号８４の残基１０〜１９；
−配列番号８４の残基２０〜２１；および
−配列番号８４の残基２０〜２２、
または配列番号８４の上記残基に対応する野生型ヒトＣＣＬ２０の残基
からなる群より選択される１種以上のアミノ酸配列を含む。
【００４６】
いくつかの実施形態において、上記ヒトＣＣＬ２０エピトープは、以下：
−配列番号８４の残基３９〜５５；
−配列番号８４の残基３９〜５７；
−配列番号８４の残基５６〜６７；および
−配列番号８４の残基６１〜７０、
または配列番号８４の上記残基に対応する野生型ヒトＣＣＬ２０の残基
からなる群より選択される１種以上のアミノ酸配列をさらに含む。
【００４７】
特定の実施形態において、上記ヒトＣＣＬ２０エピトープは、配列番号８４の残基７〜９、１０〜１９、２０〜２２、３９〜５５、５６〜５７、および６１〜７０、または配列番号８４の上記残基に対応する野生型ヒトＣＣＬ２０の残基からなるアミノ酸配列の任意の組み合わせを含む。
【００４８】
特定の実施形態において、上記ヒトＣＣＬ２０エピトープは、配列番号８４の残基７〜９、１０〜１９、および２０〜２２、または配列番号８４の上記残基に対応する野生型ヒトＣＣＬ２０の残基を含む。特定の実施形態において、上記ヒトＣＣＬ２０エピトープは、配列番号８４の残基７〜９、１０〜１９、２０〜２２、３９〜５５、５６〜５７、および６１〜７０、または配列番号８４の上記残基に対応する野生型ヒトＣＣＬ２０の残基を含む。特定の実施形態において、上記ヒトＣＣＬ２０エピトープは、配列番号８４の残基７〜９、１０〜１９、２０〜２２、３９〜５７、および６１〜７０、または配列番号８４の上記残基に対応する野生型ヒトＣＣＬ２０の残基を含む。
【００４９】
特定の実施形態において、上記ヒトＣＣＬ２０エピトープは、配列番号８４の残基７〜９、１０〜１９、および２０〜２１、または配列番号８４の上記残基に対応する野生型ヒトＣＣＬ２０の残基を含む。特定の実施形態において、上記ヒトＣＣＬ２０エピトープは、配列番号８４の残基７〜９、１０〜１９、２０〜２１、３９〜５５、５６〜６７、および６１〜７０、または配列番号８４の上記残基に対応する野生型ヒトＣＣＬ２０の残基を含む。特定の実施形態において、上記ヒトＣＣＬ２０エピトープは、配列番号８４の残基７〜９、１０〜１９、２０〜２１、３９〜５７、および６１〜７０、または配列番号８４の上記残基に対応する野生型ヒトＣＣＬ２０の残基を含む。
【００５０】
いくつかの実施形態において、上記抗体もしくはその抗原結合部分によって結合される上記ヒトＣＣＬ２０エピトープは、残基７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、および７０から選択される配列番号８４の１個以上のアミノ酸残基（または配列番号８４の上記残基に対応する野生型ヒトＣＣＬ２０の残基）、またはこれらの任意の組み合わせを含む。
【００５１】
本発明はまた、本明細書で記載される抗ＣＣＬ２０抗体のうちのいずれかの抗原結合部分を提供する。上記抗原結合部分は、例えば、単鎖抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、二重特異性単鎖Ｆｖダイマー、多価単鎖Ｆｖマルチマー、ダイアボディー、ドメイン欠失抗体、または単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）であり得る。
【００５２】
本発明はまた、本明細書に記載される抗体もしくは抗原結合部分の改変体であって、ここで上記改変体は、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個もしくは１０個のアミノ酸置換が、上記抗体もしくは部分とは異なる、改変体を提供する。
【００５３】
一局面において、本発明は、ヒトＣＣＬ２０に対して指向される抗体であって、ここで上記抗体の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインは、それぞれ、以下の配列：
−配列番号９および１５；
−配列番号９および１６；
−配列番号１０および１６；
−配列番号１１および１５；
−配列番号１１および１６；
−配列番号１２および１６；
−配列番号１３および１６；または
−配列番号１４および１６
を含む、抗体を提供する。
【００５４】
一局面において、本発明は、重鎖が配列番号１を含み、軽鎖が配列番号７を含む抗体であって、ここで、該両方のアミノ酸配列がシグナル配列を欠いている抗体、を提供する。
【００５５】
別の局面において、本発明は、重鎖がＣ末端リジンを含まない配列番号１を含み、そして軽鎖が配列番号７を含む抗体であって、ここで、該両方のアミノ酸配列がシグナル配列を欠いている抗体、を提供する。
【００５６】
一局面において、本発明は、重鎖が配列番号１を含み、軽鎖が配列番号８を含む抗体であって、ここで、該両方のアミノ酸配列がシグナル配列を欠いている抗体、を提供する。
【００５７】
別の局面において、本発明は、重鎖がＣ末端リジンを含まない配列番号１を含み、そして軽鎖が配列番号８を含む抗体であって、ここで、該両方のアミノ酸配列がシグナル配列を欠いている抗体、を提供する。
【００５８】
一局面において、本発明は、重鎖が配列番号２を含み、軽鎖が配列番号８を含む抗体であって、ここで、該両方のアミノ酸配列がシグナル配列を欠いている抗体、を提供する。
【００５９】
別の局面において、本発明は、重鎖がＣ末端リジンを含まない配列番号２を含み、そして軽鎖が配列番号８を含む抗体であって、ここで、該両方のアミノ酸配列がシグナル配列を欠いている抗体、を提供する。
【００６０】
一局面において、本発明は、重鎖が配列番号３を含み、軽鎖が配列番号７を含む抗体であって、ここで、該両方のアミノ酸配列がシグナル配列を欠いている抗体、を提供する。
【００６１】
別の局面において、本発明は、重鎖がＣ末端リジンを含まない配列番号３を含み、そして軽鎖が配列番号７を含む抗体であって、ここで、該両方のアミノ酸配列がシグナル配列を欠いている抗体、を提供する。
【００６２】
一局面において、本発明は、重鎖が配列番号３を含み、軽鎖が配列番号８を含む抗体であって、ここで、該両方のアミノ酸配列がシグナル配列を欠いている抗体、を提供する。
【００６３】
別の局面において、本発明は、重鎖がＣ末端リジンを含まない配列番号３を含み、そして軽鎖が配列番号８を含む抗体であって、ここで、該両方のアミノ酸配列がシグナル配列を欠いている抗体を提供する。
【００６４】
一局面において、本発明は、重鎖が配列番号４を含み、軽鎖が配列番号８を含む抗体であって、ここで、該両方のアミノ酸配列がシグナル配列を欠いている抗体、を提供する。
【００６５】
別の局面において、本発明は、重鎖がＣ末端リジンを含まない配列番号４を含み、そして軽鎖が配列番号８を含む抗体であって、ここで、該両方のアミノ酸配列がシグナル配列を欠いている抗体、を提供する。
【００６６】
一局面において、本発明は、重鎖が配列番号５を含み、軽鎖が配列番号８を含む抗体であって、ここで、該両方のアミノ酸配列がシグナル配列を欠いている抗体、を提供する。
【００６７】
別の局面において、本発明は、重鎖がＣ末端リジンを含まない配列番号５を含み、そして軽鎖が配列番号８を含む抗体であって、ここで、該両方のアミノ酸配列がシグナル配列を欠いている抗体、を提供する。
【００６８】
一局面において、本発明は、重鎖が配列番号６を含み、軽鎖が配列番号８を含む抗体であって、ここで、該両方のアミノ酸配列がシグナル配列を欠いている抗体、を提供する。
【００６９】
別の局面において、本発明は、重鎖がＣ末端リジンを含まない配列番号６を含み、そして軽鎖が配列番号８を含む抗体であって、ここで、該両方のアミノ酸配列がシグナル配列を欠いている抗体、を提供する。
【００７０】
一局面において、本発明は、重鎖が配列番号１０８を含み、軽鎖が配列番号１１０を含む抗体を提供する。
【００７１】
別の局面において、本発明は、重鎖がＣ末端リジンを含まない配列番号１０８を含み、そして軽鎖が配列番号１１０を含む抗体、を提供する。
【００７２】
一局面において、本発明は、重鎖が配列番号１０８を含み、軽鎖が配列番号１１２を含む抗体、を提供する。
【００７３】
別の局面において、本発明は、重鎖がＣ末端リジンを含まない配列番号１０８を含み、そして軽鎖が配列番号１１２を含む抗体、を提供する。
【００７４】
別の局面において、本発明は、１種以上の核酸分子（例えば、重鎖もしくはその抗原結合部分、または軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子）であって、ここで上記重鎖および軽鎖もしくはこれらの抗原結合部分は、抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分を形成するように会合し得る、核酸分子を提供する。いくつかの実施形態において、上記重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸分子は、配列番号１７〜２２、２５〜３０、および１０９からなる群より選択されるヌクレオチド配列、または、シグナル配列をコードする配列（存在する場合）を含まない該ヌクレオチド配列を含む。配列番号１７〜２２および１０９のヌクレオチド配列はまた、必要に応じて、Ｃ末端リジンをコードする配列（存在する場合）を欠き得る。いくつかの実施形態において、上記軽鎖またはその抗原結合部分をコードする核酸分子は、配列番号２３、２４、３１、３２、１１１、および１１３からなる群より選択されるヌクレオチド配列、または、シグナル配列をコードする配列（存在する場合）を含まない該ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、上記１種以上の核酸分子は、本明細書に記載の抗体もしくは部分の、上記重鎖もしくはその抗原結合部分および上記軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする。特定の実施形態において、１種の核酸分子は、上記重鎖もしくはその抗原結合部分および上記軽鎖もしくはその抗原結合部分の両方をコードする。
【００７５】
一実施形態において、上記重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸分子、上記軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸分子、または上記重鎖および上記軽鎖もしくはこれらの抗原結合部分をコードする核酸分子（複数可）が、それを必要とする被験体を処置するために使用される。
【００７６】
別の局面において、本発明は、本明細書に記載される抗体もしくは部分の重鎖もしくはその抗原結合部分、軽鎖もしくはその抗原結合部分、またはその両方をコードする核酸配列（複数可）を含むベクターを提供する。
【００７７】
別の局面において、本発明は、本明細書に記載される抗体もしくは部分の重鎖もしくはその抗原結合部分、軽鎖もしくはその抗原結合部分、またはその両方を発現する細胞を提供する。
【００７８】
別の局面において、本発明は、本明細書に記載される抗体もしくは部分を作製するための方法であって、本明細書に記載される細胞を、上記抗体もしくは部分の発現に適した条件下で維持する工程を包含する、方法を提供する。いくつかの実施形態において、上記方法は、上記抗体もしくは部分を単離する工程を包含する。
【００７９】
本発明はまた、抗ＣＣＬ２０抗体を分泌するハイブリドーマを生成する方法を提供する。特定の実施形態において、上記ハイブリドーマは、野生型ヒトＣＣＬ２０に結合する抗体を生成する。本発明はまた、本発明の方法によって生成されるハイブリドーマを提供する。必要に応じて、上記ハイブリドーマによって分泌されるモノクローナル抗体は、集められ、そしてさらに精製され得る（例えば、実質的に精製されるか、単離される）。他の実施形態において、上記方法は、上記ハイブリドーマによって分泌されるモノクローナル抗体のヌクレオチド配列を決定する工程をさらに包含する。
【００８０】
別の局面において、本発明は、本明細書に記載される抗体もしくは部分、および薬学的に受容可能なビヒクルもしくはキャリアを含む組成物を提供する。
【００８１】
一局面において、本明細書に記載される抗体もしくは部分は、医薬として使用される。特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体もしくは部分は、それを必要とする被験体を処置するために使用される。特定の実施形態において、上記抗体もしくは部分は、ＣＣＲ６関連状態、ＣＣＬ２０関連状態もしくはその両方を処置するために使用される。このような状態としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：炎症疾患および自己免疫疾患（特に、関節炎（特に、関節リウマチ）、アトピー性皮膚炎もしくはアレルギー性皮膚炎、および乾癬）。別の特定の実施形態において、上記抗体もしくは部分は、がんを処置するために使用される。上記抗体もしくは部分は、例えば、グレーブス病、白斑、甲状線機能亢進症、関節リウマチ、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、クローン病、炎症性腸疾患、Ｂ細胞悪性腫瘍、乳腺癌、慢性肝炎、接触性皮膚炎、神経膠芽腫、肝細胞癌、子宮頸部のヒトパピローマウイルス感染、菌状息肉腫、膵腺癌、歯周病、甲状腺乳頭状癌、掌蹠膿疱症状、点状丘疹性発疹（ｍａｃｕｌｏｐａｐｕｌａｒ  ｅｘａｎｔｈｅｍａ）と関連する状態、表皮水疱症、円形脱毛症、多発性硬化症、多発性筋炎、皮膚筋炎、ベーチェット病、急性汎発性発疹性膿疱症、脈管炎（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｄｅｓ）、若年性特発性関節炎、サルコイドーシス、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、腎臓同種移植片拒絶、移植片対宿主病、肝臓同種移植片拒絶、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、糸球体腎炎、呼吸器系合胞体ウイルス感染、多発性骨髄腫、および／またはランゲルハンス細胞組織球症を処置するために使用され得る。
【００８２】
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくは部分は、それを必要とする被験体におけるＣＣＲ６＋細胞のＣＣＬ２０媒介性化学走性を低下させるために使用される。
【００８３】
いくつかの実施形態において、本発明は、以下を提供する：
１．相補性決定領域３（ＣＤＲ３）が配列番号６７もしくは配列番号６８を含む、重鎖を含む、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分。
２．上記重鎖の相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、および相補性決定領域３（ＣＤＲ３）が、それぞれ、以下：
ａ）配列番号６０、６４、および６７；
ｂ）配列番号６０、６３、および６７；
ｃ）配列番号６１、６５、および６８；
ｄ）配列番号７７、７９、および６７；ならびに
ｅ）配列番号７８、８０、および６８
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
３．相補性決定領域３（ＣＤＲ３）が配列番号７５を含む軽鎖を含むモノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体、もしくはその抗原結合部分。
４．上記軽鎖の相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、および相補性決定領域３（ＣＤＲ３）が、それぞれ、以下：
ａ）配列番号７０、７３、および７５；ならびに
ｂ）配列番号７１、７３、および７５
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態３に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
５．上記抗体の上記重鎖が、配列番号６７もしくは６８を含むＣＤＲ３を含み、上記抗体の上記軽鎖が、配列番号７５を含むＣＤＲ３を含む、実施形態１または３に記載の抗体もしくは抗原結合部分。
６．上記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ならびに上記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、それぞれ、以下：
ａ）配列番号６０、６４、６７、７０、７３、および７５；
ｂ）配列番号６０、６４、６７、７１、７３、および７５；
ｃ）配列番号６０、６３、６７、７０、７３、および７５；
ｄ）配列番号６０、６３、６７、７１、７３、および７５；
ｅ）配列番号６１、６５、６８、７０、７３、および７５；
ｆ）配列番号６１、６５、６８、７１、７３、および７５；
ｇ）配列番号７７、７９、６７、７０、７３、および７５；
ｈ）配列番号７７、７９、６７、７１、７３、および７５；
ｉ）配列番号７８、８０、６８、７０、７３、および７５；ならびに
ｊ）配列番号７８、８０、６８、７１、７３、および７５
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態２または４に記載の抗体もしくは抗原結合部分。
７．可変ドメインが配列番号９〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含むモノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体、もしくはその抗原結合部分。
８．可変ドメインが配列番号１５もしくは１６を含む軽鎖を含むモノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体、もしくはその抗原結合部分。
９．上記重鎖可変ドメインおよび上記軽鎖可変ドメインは、それぞれ、以下：
ａ）配列番号９および１５；
ｂ）配列番号９および１６；
ｃ）配列番号１０および１６；
ｄ）配列番号１１および１５；
ｅ）配列番号１１および１６；
ｆ）配列番号１２および１６；
ｇ）配列番号１３および１６；ならびに
ｈ）配列番号１４および１６
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態７または８に記載の抗体もしくは抗原結合部分。
１０．重鎖が、シグナル配列を含まない配列番号１〜６および配列番号１０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体。
１１．重鎖が、シグナル配列を含まない配列番号１〜６および配列番号１０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体であって、ここで該アミノ酸配列がＣ末端リジンを欠いている、抗体。
１２．軽鎖が、シグナル配列を含まない配列番号７および８、ならびに配列番号１１０および１１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体。
１３．上記重鎖および上記軽鎖は、それぞれ、以下：
ａ）配列番号１および７；
ｂ）配列番号１および８；
ｃ）配列番号２および８；
ｄ）配列番号３および７；
ｅ）配列番号３および８；
ｆ）配列番号４および８；
ｇ）配列番号５および８；
ｈ）配列番号６および８；
ｉ）配列番号１０８および１１０；ならびに
ｊ）配列番号１０８および１１２
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、
ここで、該アミノ酸配列は、シグナル配列（存在する場合）を欠いており、ここで、配列番号１〜６は、必要に応じて、Ｃ末端リジンを欠いている、実施形態１０〜１２のいずれか１つに記載の抗体。
１４．重鎖が配列番号１０８を含み、軽鎖が配列番号１１０を含む、モノクローナル抗体。
１５．重鎖がＣ末端リジンを含まない配列番号１０８を含み、軽鎖が配列番号１１０を含む、モノクローナル抗体。
１６．重鎖が配列番号１０８を含み、軽鎖が配列番号１１２を含む、モノクローナル抗体。
１７．重鎖がＣ末端リジンを含まない配列番号１０８を含み、軽鎖が配列番号１１２を含む、モノクローナル抗体。
１８．実施形態１〜１７のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分と、ヒトＣＣＬ２０の同じエピトープに結合する、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分。
１９．ヒトＣＣＬ２０への結合について、実施形態１〜１７のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分と競合する、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分。
２０．ヒトＣＣＬ２０への結合について、実施形態１〜１７のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分と交叉競合する、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分。
２１．ヒト化抗体である、実施形態１〜１２のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
２２．上記重鎖のフレームワーク領域は、ＩＧＨＶ１−４６＊０３ヒト生殖細胞系列配列を利用し、上記軽鎖のフレームワーク領域は、ＩＧＫＶ１Ｄ−３９＊０１ヒト生殖細胞系列配列を利用する、実施形態１〜６のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
２３．上記抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４の定常ドメインを含む、実施形態１〜９および１８〜２２のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体。
２４．重鎖は、配列番号３９、４１、および４３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変ドメインを含む、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分。
２５．軽鎖は、配列番号４０、４２、および４４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変ドメインを含む、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分。
２６．上記重鎖は、配列番号３９、４１、および４３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、上記軽鎖は、配列番号４０、４２、および４４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態２４または２５に記載の抗体もしくは抗原結合部分。
２７．上記重鎖および上記軽鎖は、それぞれ、以下：
ａ）配列番号３９および４０；
ｂ）配列番号４１および４２；ならびに
ｃ）配列番号４３および４４
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態２６に記載の抗体。
２８．配列番号３９を含む重鎖および配列番号４０を含む軽鎖を含むモノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体、もしくはその抗原結合部分。
２９．キメラ抗体である、実施形態２４〜２８のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
３０．単鎖抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、二重特異性単鎖Ｆｖダイマー、ダイアボディー、ドメイン欠失抗体もしくは単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）である、実施形態１〜９、１８〜２２、および２４〜２８のいずれか１つに記載の抗原結合部分。
３１．以下：
ａ）ヒトＣＣＬ１６に結合しない；
ｂ）カニクイザルもしくはアカゲザルのＣＣＬ２０には結合するが、マウスやラットのＣＣＬ２０には結合しない；
ｃ）一価表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、７０ｐＭ以下の、ヒトＣＣＬ２０に対する結合親和性を有する；
ｄ）二価表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、１２ｐＭ以下の、ヒトＣＣＬ２０に対する結合親和性を有する；
ｅ）ヒトＣＣＲ６に対する結合親和性より高い、ヒトＣＣＬ２０に対する結合親和性を有する；
ｆ）ヒトＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ４，ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３，ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、もしくはＸＣＬ１を上回る、ヒトＣＣＬ２０に対する選択性を有する；
ｇ）１．７ｎＭ以下のＩＣ５０で、ＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性化学走性を低下させる；
ｈ）インビボで、ＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性化学走性を低下させる；
ｉ）インビトロで、ＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性化学走性を低下させる；
ｊ）被験体において、関節炎症状の進行を減じる；
ｋ）被験体において、骨粗鬆症、骨侵食、もしくは新たな骨形成を減じる；
ｌ）被験体において、軟骨オリゴマーマトリクスタンパク質（ＣＯＭＰ）血清レベルを低下させる；
ｍ）被験体において、ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＫ、ＴＲＡＰ、もしくはカテプシンＫのｍＲＮＡレベルを低下させる；
ｎ）被験体において、アトピー性皮膚炎の進行を減じる；および
ｏ）被験体において、アレルギー性接触性皮膚炎の進行を減じる、
からなる群より選択される、１種以上の特性を有する、実施形態１〜３０のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
３２．以下：
ａ）配列番号８４の残基７〜９；
ｂ）配列番号８４の残基１０〜１９；および
ｃ）配列番号８４の残基２０〜２２、
からなる群より選択される１種以上のアミノ酸配列を含むヒトＣＣＬ２０のエピトープに結合する、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分。
３３．上記エピトープは、配列番号８４の残基７〜９、１０〜１９、および２０〜２２を含む、実施形態３２に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
３４．上記エピトープは、以下：
ａ）配列番号８４の残基３９〜５５；
ｂ）配列番号８４の残基５６〜６７；および
ｃ）配列番号８４の残基６１〜７０
からなる群より選択される１種以上のアミノ酸配列をさらに含む、実施形態３２に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
３５．上記エピトープは、配列番号８４の残基７〜９、１０〜１９、２０〜２２、３９〜５５、５６〜６７、および６１〜７０を含む、実施形態３４に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
３６．実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の抗体もしくは部分の、重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子。
３７．実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の抗体もしくは部分の、軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子。
３８．実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の抗体もしくは部分の、重鎖もしくはその抗原結合部分および軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子。３９．モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体の重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子であって、ここで、該核酸分子は、配列番号１７〜２２、２５〜３０、および１０９からなる群より選択されるヌクレオチド配列、またはシグナル配列（存在する場合）をコードする配列を含まない該ヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
４０．モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体の軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子であって、ここで、該核酸分子は、配列番号２３、２４、３１、３２、１１１、および１１３からなる群より選択されるヌクレオチド配列、またはシグナル配列（存在する場合）をコードする配列を含まない該ヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
４１．実施形態３９または４０に記載の単離された核酸分子であって、配列番号１７〜２２、２５〜３０、および１０９からなる群より選択されるヌクレオチド配列、またはシグナル配列（存在する場合）をコードする配列を含まない該ヌクレオチド配列を含み；そしてここで、配列番号２３、２４、３１、３２、１１１、および１１３からなる群より選択されるヌクレオチド配列、またはシグナル配列（存在する場合）をコードする配列を含まない該ヌクレオチド配列をさらに含む、単離された核酸分子。
４２．実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の抗体もしくは部分の、（１）重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸配列、（２）軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸配列、または（３）その両方の、医薬としての使用。
４３．実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の抗体もしくは部分の、（１）重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸配列、（２）軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸配列、または（３）その両方を含む、組換えベクター。
４４．実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の抗体もしくは部分の重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする第１の核酸配列であって、発現制御エレメントに作動可能に連結された第１の核酸配列と、実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の抗体もしくは部分の軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする第２の核酸配列であって、発現制御エレメントに作動可能に連結された第２の核酸配列とを含む、宿主細胞。
４５．抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分を作製する方法であって、実施形態４４に記載の宿主細胞を、上記抗体もしくは部分の発現に適した条件下で維持する工程を包含する、方法。
４６．上記抗体もしくは部分を単離する工程をさらに包含する、実施形態４５に記載の方法。
４７．実施形態１〜３５のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分、および薬学的に受容可能なビヒクルもしくはキャリアを含む、組成物。
４８．処置を必要とする被験体を処置するための方法であって、有効量の、実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合部分、または実施形態４７に記載の組成物を、処置を必要とする被験体に投与する工程を包含する、方法。
４９．状態の処置を必要とする被験体における状態を処置するための方法であって、有効量の、実施形態１〜３５のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、または実施形態４７に記載の組成物を、状態の処置を必要とする被験体に投与する工程を包含する、方法。
５０．上記状態は、ＣＣＲ６関連状態である、実施形態４９に記載の方法。
５１．上記状態は、自己免疫状態もしくは炎症状態である、実施形態４９に記載の方法。５２．上記状態は、関節リウマチ、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、クローン病、炎症性腸疾患、グレーブス病、白斑、甲状線機能亢進症、慢性肝炎、子宮頸部のヒトパピローマウイルス感染、菌状息肉腫、骨粗鬆症、もしくは歯周病である、実施形態４９に記載の方法。
５３．がんを処置するための方法であって、有効量の、実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合部分、または実施形態４７に記載の組成物を被験体に投与する工程を包含する、方法。
５４．上記がんは、Ｂ細胞悪性腫瘍、乳腺癌、神経膠芽腫、肝細胞癌、膵腺癌、もしくは甲状腺乳頭状癌である、実施形態５３に記載の方法。
５５．ＣＣＲ６＋細胞のＣＣＬ２０媒介性化学走性の低下を必要とする被験体におけるＣＣＲ６＋細胞のＣＣＬ２０媒介性化学走性を低下させるための方法であって、実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合部分、または実施形態４７に記載の組成物を、ＣＣＲ６＋細胞のＣＣＬ２０媒介性化学走性の低下を必要とする被験体に投与する工程を包含する、方法。
５６．実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合部分、または実施形態４７に記載の組成物を使用して、インビトロでＣＣＲ６＋細胞のＣＣＬ２０媒介性化学走性を低下させるための方法。
５７．被験体における状態を処置するための方法であって、実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合部分、または実施形態４７に記載の組成物を、該被験体に投与する工程を包含し、ここで該状態は、以下：
ａ）肘もしくは膝に対して遠位の四肢の関節病変；
ｂ）紅斑；
ｃ）腫脹；
ｄ）軟骨オリゴマーマトリクスタンパク質（ＣＯＭＰ）血清レベルの増大；
ｅ）核因子κΒリガンドのレセプターアクチベーター（ＲＡＮＫＬ）、核因子κΒのレセプターアクチベーター（ＲＡＮＫ）、酒石酸耐性酸ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）、もしくはカテプシンＫのｍＲＮＡレベルの増大；
ｆ）アトピー性皮膚炎；ならびに
ｇ）アレルギー性接触性皮膚炎、
からなる群より選択される、方法。
５８．医薬の製造のための、実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合部分、または実施形態４７に記載の組成物の使用。
５９．医薬としての、実施形態１〜３５のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合部分、または実施形態４７に記載の組成物の使用。
本発明は、さらに以下の項目も提供する。
（項目１）
モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分であって、ここで該抗体は重鎖を含み、該重鎖の相補性決定領域３（ＣＤＲ３）が配列番号６７もしくは配列番号６８を含む、モノクローナル抗体もしくはその抗原結合部分。
（項目２）
前記重鎖の相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、および相補性決定領域３（ＣＤＲ３）は、それぞれ、以下：
ａ）配列番号６０、６４、および６７；
ｂ）配列番号６０、６３、および６７；
ｃ）配列番号６１、６５、および６８；
ｄ）配列番号７７、７９、および６７；ならびに
ｅ）配列番号７８、８０、および６８
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、項目１に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
（項目３）
モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分であって、ここで該抗体は軽鎖を含み、該軽鎖の相補性決定領域３（ＣＤＲ３）が配列番号７５を含む、モノクローナル抗体もしくはその抗原結合部分。
（項目４）
前記軽鎖の相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、および相補性決定領域３（ＣＤＲ３）は、それぞれ、以下：
ａ）配列番号７０、７３、および７５；ならびに
ｂ）配列番号７１、７３、および７５
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、項目３に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
（項目５）
前記抗体の前記重鎖は、配列番号６７もしくは６８を含むＣＤＲ３を含み、前記抗体の前記軽鎖は、配列番号７５を含むＣＤＲ３を含む、項目１または３に記載の抗体もしくは抗原結合部分。
（項目６）
前記重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ならびに前記軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、それぞれ、以下：
ａ）配列番号６０、６４、６７、７０、７３、および７５；
ｂ）配列番号６０、６４、６７、７１、７３、および７５；
ｃ）配列番号６０、６３、６７、７０、７３、および７５；
ｄ）配列番号６０、６３、６７、７１、７３、および７５；
ｅ）配列番号６１、６５、６８、７０、７３、および７５；
ｆ）配列番号６１、６５、６８、７１、７３、および７５；
ｇ）配列番号７７、７９、６７、７０、７３、および７５；
ｈ）配列番号７７、７９、６７、７１、７３、および７５；
ｉ）配列番号７８、８０、６８、７０、７３、および７５；ならびに
ｊ）配列番号７８、８０、６８、７１、７３、および７５
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、項目２または４に記載の抗体もしくは抗原結合部分。
（項目７）
モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分であって、ここで該抗体は重鎖を含み、該重鎖の可変ドメインが配列番号９〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む、モノクローナル抗体もしくはその抗原結合部分。
（項目８）
モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分であって、ここで該抗体は軽鎖を含み、該軽鎖の可変ドメインが配列番号１５もしくは１６を含む、モノクローナル抗体もしくはその抗原結合部分。
（項目９）
前記重鎖可変ドメインおよび前記軽鎖可変ドメインは、それぞれ、以下：
ａ）配列番号９および１５；
ｂ）配列番号９および１６；
ｃ）配列番号１０および１６；
ｄ）配列番号１１および１５；
ｅ）配列番号１１および１６；
ｆ）配列番号１２および１６；
ｇ）配列番号１３および１６；ならびに
ｈ）配列番号１４および１６
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、項目７または８に記載の抗体もしくは抗原結合部分。
（項目１０）
モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体であって、該抗体の重鎖が、シグナル配列を含まない配列番号１〜６、および配列番号１０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、モノクローナル抗体。
（項目１１）
重鎖が、シグナル配列を含まない配列番号１〜６および配列番号１０８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体であって、ここで該アミノ酸配列がＣ末端リジンを欠いている、抗体。
（項目１２）
軽鎖が、シグナル配列を含まない配列番号７および８、ならびに配列番号１１０および１１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体。
（項目１３）
前記重鎖および前記軽鎖は、それぞれ、以下：
ａ）配列番号１および７；
ｂ）配列番号１および８；
ｃ）配列番号２および８；
ｄ）配列番号３および７；
ｅ）配列番号３および８；
ｆ）配列番号４および８；
ｇ）配列番号５および８；
ｈ）配列番号６および８；
ｉ）配列番号１０８および１１０；ならびに
ｊ）配列番号１０８および１１２
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、
ここで該アミノ酸配列は、シグナル配列（存在する場合）を欠いており、ここで、配列番号１〜６は、必要に応じて、Ｃ末端リジンを欠いている、項目１０〜１２のいずれか１項に記載の抗体。
（項目１４）
重鎖が配列番号１０８を含み、軽鎖が配列番号１１０を含む、モノクローナル抗体。
（項目１５）
モノクローナル抗体であって、該抗体の重鎖がＣ末端リジンを含まない配列番号１０８を含み、該抗体の軽鎖が配列番号１１０を含む、モノクローナル抗体。
（項目１６）
重鎖が配列番号１０８を含み、軽鎖が配列番号１１２を含む、モノクローナル抗体。
（項目１７）
モノクローナル抗体であって、該抗体の重鎖がＣ末端リジンを含まない配列番号１０８を含み、該抗体の軽鎖が配列番号１１２を含む、モノクローナル抗体。
（項目１８）
項目１〜１７のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分と、ヒトＣＣＬ２０の同じエピトープに結合する、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分。
（項目１９）
ヒトＣＣＬ２０への結合について、項目１〜１７のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分と競合する、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分。
（項目２０）
ヒトＣＣＬ２０への結合について、項目１〜１７のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分と交叉競合する、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分。
（項目２１）
ヒト化抗体である、項目１〜１２のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
（項目２２）
前記重鎖のフレームワーク領域は、ＩＧＨＶ１−４６＊０３ヒト生殖細胞系列配列を利用し、前記軽鎖のフレームワーク領域は、ＩＧＫＶ１Ｄ−３９＊０１ヒト生殖細胞系列配列を利用する、項目１〜６のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
（項目２３）
前記抗体は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４の定常ドメインを含む、項目１〜９および１８〜２２のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
（項目２４）
重鎖は、配列番号３９、４１、および４３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変ドメインを含む、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分。
（項目２５）
軽鎖は、配列番号４０、４２、および４４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む可変ドメインを含む、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分。
（項目２６）
前記重鎖は、配列番号３９、４１、および４３からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、配列番号４０、４２、および４４からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、項目２４または２５に記載の抗体もしくは抗原結合部分。
（項目２７）
前記重鎖および前記軽鎖は、それぞれ、以下：
ａ）配列番号３９および４０；
ｂ）配列番号４１および４２；ならびに
ｃ）配列番号４３および４４
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、項目２６に記載の抗体。
（項目２８）
配列番号３９を含む重鎖および配列番号４０を含む軽鎖を含むモノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体、もしくはその抗原結合部分。
（項目２９）
キメラ抗体である、項目２４〜２８のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
（項目３０）
単鎖抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、二重特異性単鎖Ｆｖダイマー、ダイアボディー、ドメイン欠失抗体もしくは単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）である、項目１〜９、１８〜２２、および２４〜２８のいずれか１項に記載の抗原結合部分。
（項目３１）
以下：
ａ）ヒトＣＣＬ１６に結合しない；
ｂ）カニクイザルもしくはアカゲザルのＣＣＬ２０には結合するが、マウスのＣＣＬ２０にもラットのＣＣＬ２０にも結合しない；
ｃ）一価表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、７０ｐＭ以下の、ヒトＣＣＬ２０に対する結合親和性を有する；
ｄ）二価表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、１２ｐＭ以下の、ヒトＣＣＬ２０に対する結合親和性を有する；
ｅ）ヒトＣＣＲ６に対する結合親和性より高い、ヒトＣＣＬ２０に対する結合親和性を有する；
ｆ）ヒトＣＸ３ＣＬ１、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ４，ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１６、ＣＣＬ１、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３，ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ７、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１３、ＣＣＬ１６、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ２４、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２７、ＣＣＬ２８、もしくはＸＣＬ１を上回る、ヒトＣＣＬ２０に対する選択性を有する；
ｇ）１．７ｎＭ以下のＩＣ５０で、ＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性化学走性を低下させる；
ｈ）インビボで、ＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性化学走性を低下させる；
ｉ）インビトロで、ＣＣＲ６＋細胞のヒトＣＣＬ２０誘導性化学走性を低下させる；
ｊ）被験体において、関節炎症状の進行を減じる；
ｋ）被験体において、骨粗鬆症、骨侵食、もしくは新たな骨形成を減じる；
ｌ）被験体において、軟骨オリゴマーマトリクスタンパク質（ＣＯＭＰ）血清レベルを低下させる；
ｍ）被験体において、ＲＡＮＫＬ、ＲＡＮＫ、ＴＲＡＰ、もしくはカテプシンＫのｍＲＮＡレベルを低下させる；
ｎ）被験体において、アトピー性皮膚炎の進行を減じる；および
ｏ）被験体において、アレルギー性接触性皮膚炎の進行を減じる、
からなる群より選択される、１種以上の特性を有する、項目１〜３０のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
（項目３２）
以下：
ａ）配列番号８４の残基７〜９；
ｂ）配列番号８４の残基１０〜１９；および
ｃ）配列番号８４の残基２０〜２２、
からなる群より選択される１種以上のアミノ酸配列を含むヒトＣＣＬ２０のエピトープに結合する、モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分。
（項目３３）
前記エピトープは、配列番号８４の残基７〜９、１０〜１９、および２０〜２２を含む、項目３２に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
（項目３４）
前記エピトープは、以下：
ａ）配列番号８４の残基３９〜５５；
ｂ）配列番号８４の残基５６〜６７；および
ｃ）配列番号８４の残基６１〜７０
からなる群より選択される１種以上のアミノ酸配列をさらに含む、項目３２に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
（項目３５）
前記エピトープは、配列番号８４の残基７〜９、１０〜１９、２０〜２２、３９〜５５、５６〜６７、および６１〜７０を含む、項目３４に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分。
（項目３６）
項目１〜３５のいずれか１項に記載の抗体もしくは部分の、重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子。
（項目３７）
項目１〜３５のいずれか１項に記載の抗体もしくは部分の、軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子。
（項目３８）
項目１〜３５のいずれか１項に記載の抗体もしくは部分の、重鎖もしくはその抗原結合部分および軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子。
（項目３９）
モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体の重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子であって、ここで、該核酸分子は、配列番号１７〜２２、２５〜３０、および１０９からなる群より選択されるヌクレオチド配列、またはシグナル配列（存在する場合）をコードする配列を含まない該ヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
（項目４０）
モノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体の軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする、単離された核酸分子であって、ここで、該核酸分子は、配列番号２３、２４、３１、３２、１１１、および１１３からなる群より選択されるヌクレオチド配列、またはシグナル配列（存在する場合）をコードする配列を含まない該ヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
（項目４１）
項目３９または４０に記載の単離された核酸分子であって、配列番号１７〜２２、２５〜３０、および１０９からなる群より選択されるヌクレオチド配列、またはシグナル配列（存在する場合）をコードする配列を含ない該ヌクレオチド配列を含み；そしてここで、配列番号２３、２４、３１、３２、１１１、および１１３からなる群より選択されるヌクレオチド配列、またはシグナル配列（存在する場合）をコードする配列を含まない該ヌクレオチド配列をさらに含む、単離された核酸分子。
（項目４２）
項目１〜３５のいずれか１項に記載の抗体もしくは部分の、（１）重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸配列、（２）軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸配列、または（３）その両方の、医薬としての使用。
（項目４３）
項目１〜３５のいずれか１項に記載の抗体もしくは部分の、（１）重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸配列、（２）軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸配列、または（３）その両方を含む、組換えベクター。
（項目４４）
項目１〜３５のいずれか１項に記載の抗体もしくは部分の重鎖もしくはその抗原結合部分をコードする第１の核酸配列であって、発現制御エレメントに作動可能に連結された第１の核酸配列と、該抗体もしくは部分の軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする第２の核酸配列であって、発現制御エレメントに作動可能に連結された第２の核酸配列とを含む、宿主細胞。
（項目４５）
抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分を作製する方法であって、項目４４に記載の宿主細胞を、該抗体もしくは部分の発現に適した条件下で維持する工程を包含する、方法。
（項目４６）
前記抗体もしくは部分を単離する工程をさらに包含する、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
項目１〜３５のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体もしくは抗原結合部分、および薬学的に受容可能なビヒクルもしくはキャリアを含む、組成物。
（項目４８）
処置を必要とする被験体を処置するための方法であって、有効量の、項目１〜３５のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、または項目４７に記載の組成物を、該被験体に投与する工程を包含する、方法。
（項目４９）
状態の処置を必要とする被験体における状態を処置するための方法であって、有効量の、項目１〜３５のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、または項目４７に記載の組成物を、該被験体に投与する工程を包含する、方法。
（項目５０）
前記状態は、ＣＣＲ６関連状態である、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記状態は、自己免疫状態もしくは炎症状態である、項目４９に記載の方法。
（項目５２）
前記状態は、関節リウマチ、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、クローン病、炎症性腸疾患、グレーブス病、白斑、甲状線機能亢進症、慢性肝炎、子宮頸部のヒトパピローマウイルス感染、菌状息肉腫、骨粗鬆症、もしくは歯周病である、項目４９に記載の方法。
（項目５３）
がんを処置するための方法であって、有効量の、項目１〜３５のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、または項目４７に記載の組成物を被験体に投与する工程を包含する、方法。
（項目５４）
前記がんは、Ｂ細胞悪性腫瘍、乳腺癌、神経膠芽腫、肝細胞癌、膵腺癌、もしくは甲状腺乳頭状癌である、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
ＣＣＲ６＋細胞のＣＣＬ２０媒介性化学走性の低下を必要とする被験体におけるＣＣＲ６＋細胞のＣＣＬ２０媒介性化学走性を低下させるための方法であって、項目１〜３５のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、または項目４７に記載の組成物を、該被験体に投与する工程を包含する、方法。
（項目５６）
項目１〜３５のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、または項目４７に記載の組成物を使用して、インビトロでＣＣＲ６＋細胞のＣＣＬ２０媒介性化学走性を低下させるための方法。
（項目５７）
被験体における状態を処置するための方法であって、項目１〜３５のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、または項目４７に記載の組成物を、該被験体に投与する工程を包含し、ここで該状態は、以下：
ａ）肘もしくは膝に対して遠位の四肢の関節病変；
ｂ）紅斑；
ｃ）腫脹；
ｄ）軟骨オリゴマーマトリクスタンパク質（ＣＯＭＰ）血清レベルの増大；
ｅ）核因子κΒリガンドのレセプターアクチベーター（ＲＡＮＫＬ）、核因子κΒのレセプターアクチベーター（ＲＡＮＫ）、酒石酸耐性酸ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）、もしくはカテプシンＫのｍＲＮＡレベルの増大；
ｆ）アトピー性皮膚炎；ならびに
ｇ）アレルギー性接触性皮膚炎、
からなる群より選択される、方法。
（項目５８）
医薬の製造のための、項目１〜３５のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、または項目４７に記載の組成物の使用。
（項目５９）
医薬としての、項目１〜３５のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部分、または項目４７に記載の組成物の使用。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】図１は、ＣＣＲ６欠損マウスが、野生型マウスよりコラーゲン誘発性関節炎に対して感受性が低いことを示すグラフである。野生型、ＣＣＲ６＋／＋マウス；Ｈｅｔ、ＣＣＲ６＋／−マウス；ノックアウト、ＣＣＲ６−／−マウス。実施例１を参照のこと。
【図２】図２は、ＣＣＲ６欠損マウスが、野生型マウスとの比較において、コラーゲン誘発性関節炎病変におけるＴ細胞の損なわれた浸潤を示す（ＣＤ３レベルによって示される場合）ことを示すグラフである。データは、１実験からの平均値±ＳＥＭとして示される（ｎ＝７マウス／群）。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。実施例１を参照のこと。
【図３】図３は、ＣＣＲ６欠損マウスが、野生型マウスとの比較において、コラーゲン誘発性関節炎病変におけるマクロファージの損なわれた浸潤を示す（Ｆ４／８０レベルによって示される場合）ことを示すグラフである。データは、１実験からの平均値±ＳＥＭとして示される（ｎ＝７マウス／群）。＊＊ｐ＜０．０１。実施例１を参照のこと。
【図４】図４は、野生型マウスとの比較において、ＣＣＲ６欠損マウスが、ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）誘発性アレルギー性接触性皮膚炎モデルにおいて耳の厚みの増大に抵抗性であることを示すグラフである。ＷＴ、野生型マウス；ＫＯ、ＣＣＲ６欠損マウス。実施例１を参照のこと。
【図５】図５は、２Ｆ５−５  ＭＡｂが、ＣＣＬ２０誘導性走化性を阻害することを示すグラフである。実施例２を参照のこと。
【図６Ａ】図６Ａ〜Ｃは、本発明の抗体の可変ドメイン（配列番号９〜１６）と、マウス抗ヒト抗体３６Ｆ７Ｃ１０の可変ドメイン（ＶＨ：配列番号３９；  ＶＬ：配列番号４０）および４２Ｇ５Ｂ１０の可変ドメイン（ＶＨ：配列番号４３）、ならびに生殖細胞系列配列ＩＧＨＶ１−４６＊０３（配列番号５７）、ＪＨ４（配列番号５８）、およびＩＧＫＶ１Ｄ−３９＊０１（配列番号５９）との配列アラインメントを示す。各ＣＤＲのＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの定義が示される。ＡＢＭ６７２１２（配列番号８２）およびＢＡＨ０４８６７．１（配列番号８３）は、示されるヒト化抗体鎖のフレームワーク領域が由来したヒト抗体である。実施例３を参照のこと。
【図６Ｂ】図６Ａ〜Ｃは、本発明の抗体の可変ドメイン（配列番号９〜１６）と、マウス抗ヒト抗体３６Ｆ７Ｃ１０の可変ドメイン（ＶＨ：配列番号３９；  ＶＬ：配列番号４０）および４２Ｇ５Ｂ１０の可変ドメイン（ＶＨ：配列番号４３）、ならびに生殖細胞系列配列ＩＧＨＶ１−４６＊０３（配列番号５７）、ＪＨ４（配列番号５８）、およびＩＧＫＶ１Ｄ−３９＊０１（配列番号５９）との配列アラインメントを示す。各ＣＤＲのＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの定義が示される。ＡＢＭ６７２１２（配列番号８２）およびＢＡＨ０４８６７．１（配列番号８３）は、示されるヒト化抗体鎖のフレームワーク領域が由来したヒト抗体である。実施例３を参照のこと。
【図６Ｃ】図６Ａ〜Ｃは、本発明の抗体の可変ドメイン（配列番号９〜１６）と、マウス抗ヒト抗体３６Ｆ７Ｃ１０の可変ドメイン（ＶＨ：配列番号３９；  ＶＬ：配列番号４０）および４２Ｇ５Ｂ１０の可変ドメイン（ＶＨ：配列番号４３）、ならびに生殖細胞系列配列ＩＧＨＶ１−４６＊０３（配列番号５７）、ＪＨ４（配列番号５８）、およびＩＧＫＶ１Ｄ−３９＊０１（配列番号５９）との配列アラインメントを示す。各ＣＤＲのＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの定義が示される。ＡＢＭ６７２１２（配列番号８２）およびＢＡＨ０４８６７．１（配列番号８３）は、示されるヒト化抗体鎖のフレームワーク領域が由来したヒト抗体である。実施例３を参照のこと。
【図７Ａ】図７Ａ〜Ｃは、ヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体鎖の異なる組み合わせによるインビトロ化学走性の阻害を示す表である。データは、示された場合を除いて３回の試行を示す。実施例４を参照のこと。
【図７Ｂ】図７Ａ〜Ｃは、ヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体鎖の異なる組み合わせによるインビトロ化学走性の阻害を示す表である。データは、示された場合を除いて３回の試行を示す。実施例４を参照のこと。
【図７Ｃ】図７Ａ〜Ｃは、ヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体鎖の異なる組み合わせによるインビトロ化学走性の阻害を示す表である。データは、示された場合を除いて３回の試行を示す。実施例４を参照のこと。
【図８Ａ】図８Ａ〜Ｃは、上記ヒト化ＨＣ２／ＬＫ３抗ヒトＣＣＬ２０抗体の阻害効果を評価するために行った３回の独立した試行を示す。上記ＨＣ２／ＬＫ３抗体は、ＣＣＬ２０誘導性走化性を阻害することが示される。ＩＣ５０、ＩＣ９０、およびＩＣ９５の値は、各実験について示される。実施例４を参照のこと。
【図８Ｂ】図８Ａ〜Ｃは、上記ヒト化ＨＣ２／ＬＫ３抗ヒトＣＣＬ２０抗体の阻害効果を評価するために行った３回の独立した試行を示す。上記ＨＣ２／ＬＫ３抗体は、ＣＣＬ２０誘導性走化性を阻害することが示される。ＩＣ５０、ＩＣ９０、およびＩＣ９５の値は、各実験について示される。実施例４を参照のこと。
【図８Ｃ】図８Ａ〜Ｃは、上記ヒト化ＨＣ２／ＬＫ３抗ヒトＣＣＬ２０抗体の阻害効果を評価するために行った３回の独立した試行を示す。上記ＨＣ２／ＬＫ３抗体は、ＣＣＬ２０誘導性走化性を阻害することが示される。ＩＣ５０、ＩＣ９０、およびＩＣ９５の値は、各実験について示される。実施例４を参照のこと。
【図９Ａ】図９Ａ〜Ｃは、ヒト化抗体  Ｂ）ＨＣ２／ＬＫ３およびＣ）ＨＣ２／ＬＣ３が、経内皮移動アッセイにおいて、Ａ）マウス抗体３６Ｆ７Ｃ１０のものに匹敵する細胞移動の用量依存性阻害を示すことを示す一連のグラフを示す。実施例４を参照のこと。
【図９Ｂ】図９Ａ〜Ｃは、ヒト化抗体  Ｂ）ＨＣ２／ＬＫ３およびＣ）ＨＣ２／ＬＣ３が、経内皮移動アッセイにおいて、Ａ）マウス抗体３６Ｆ７Ｃ１０のものに匹敵する細胞移動の用量依存性阻害を示すことを示す一連のグラフを示す。実施例４を参照のこと。
【図９Ｃ】図９Ａ〜Ｃは、ヒト化抗体  Ｂ）ＨＣ２／ＬＫ３およびＣ）ＨＣ２／ＬＣ３が、経内皮移動アッセイにおいて、Ａ）マウス抗体３６Ｆ７Ｃ１０のものに匹敵する細胞移動の用量依存性阻害を示すことを示す一連のグラフを示す。実施例４を参照のこと。
【００８５】
【図１０Ａ】図１０Ａおよび図１０Ｂは、上記Ａ）ＨＣ２／ＬＣ３およびＢ）ＨＣ２／ＬＫ３ヒト化抗体が、濃度依存性様式でヒトＣＣＬ２０に結合することを実証するＢｉａｃｏｒｅＴＭセンサーグラム（ｓｅｎｓｏｇｒａｍ）を示す。実施例５を参照のこと。
【図１０Ｂ】図１０Ａおよび図１０Ｂは、上記Ａ）ＨＣ２／ＬＣ３およびＢ）ＨＣ２／ＬＫ３ヒト化抗体が、濃度依存性様式でヒトＣＣＬ２０に結合することを実証するＢｉａｃｏｒｅＴＭセンサーグラム（ｓｅｎｓｏｇｒａｍ）を示す。実施例５を参照のこと。
【図１１Ａ】図１１Ａ〜Ｄは、抗ヒトＣＣＬ２０抗体が、ヒトＣＣＬ２０に特異的に結合することを示す。プレートに結合したＣＣＬ２０および他のケモカイン（１μｇ／ｍｌにおいて）を用いたＥＬＩＳＡアッセイを使用して、Ａ）３６Ｆ７Ｃ１０およびキメラ抗体、ならびにＢ）ヒト化ＨＣ２ＬＫ３およびＨＣ２ＬＣ３抗体の結合を検出した。Ｃ）Ｈｉｓタグ固定したＣＣＬ２０を用いたＥＬＩＳＡアッセイを使用して、結合を検出した。Ｄ）ＢｉａｃｏｒｅＴＭ実験から、抗ヒトＣＣＬ２０抗体がヒトＣＣＬ２０に結合し、ＣＸＣＬ４への無視できる程度の結合を示すことが確認される。実施例６を参照のこと。
【図１１Ｂ】図１１Ａ〜Ｄは、抗ヒトＣＣＬ２０抗体が、ヒトＣＣＬ２０に特異的に結合することを示す。プレートに結合したＣＣＬ２０および他のケモカイン（１μｇ／ｍｌにおいて）を用いたＥＬＩＳＡアッセイを使用して、Ａ）３６Ｆ７Ｃ１０およびキメラ抗体、ならびにＢ）ヒト化ＨＣ２ＬＫ３およびＨＣ２ＬＣ３抗体の結合を検出した。Ｃ）Ｈｉｓタグ固定したＣＣＬ２０を用いたＥＬＩＳＡアッセイを使用して、結合を検出した。Ｄ）ＢｉａｃｏｒｅＴＭ実験から、抗ヒトＣＣＬ２０抗体がヒトＣＣＬ２０に結合し、ＣＸＣＬ４への無視できる程度の結合を示すことが確認される。実施例６を参照のこと。
【図１１Ｃ】図１１Ａ〜Ｄは、抗ヒトＣＣＬ２０抗体が、ヒトＣＣＬ２０に特異的に結合することを示す。プレートに結合したＣＣＬ２０および他のケモカイン（１μｇ／ｍｌにおいて）を用いたＥＬＩＳＡアッセイを使用して、Ａ）３６Ｆ７Ｃ１０およびキメラ抗体、ならびにＢ）ヒト化ＨＣ２ＬＫ３およびＨＣ２ＬＣ３抗体の結合を検出した。Ｃ）Ｈｉｓタグ固定したＣＣＬ２０を用いたＥＬＩＳＡアッセイを使用して、結合を検出した。Ｄ）ＢｉａｃｏｒｅＴＭ実験から、抗ヒトＣＣＬ２０抗体がヒトＣＣＬ２０に結合し、ＣＸＣＬ４への無視できる程度の結合を示すことが確認される。実施例６を参照のこと。
【図１１Ｄ】図１１Ａ〜Ｄは、抗ヒトＣＣＬ２０抗体が、ヒトＣＣＬ２０に特異的に結合することを示す。プレートに結合したＣＣＬ２０および他のケモカイン（１μｇ／ｍｌにおいて）を用いたＥＬＩＳＡアッセイを使用して、Ａ）３６Ｆ７Ｃ１０およびキメラ抗体、ならびにＢ）ヒト化ＨＣ２ＬＫ３およびＨＣ２ＬＣ３抗体の結合を検出した。Ｃ）Ｈｉｓタグ固定したＣＣＬ２０を用いたＥＬＩＳＡアッセイを使用して、結合を検出した。Ｄ）ＢｉａｃｏｒｅＴＭ実験から、抗ヒトＣＣＬ２０抗体がヒトＣＣＬ２０に結合し、ＣＸＣＬ４への無視できる程度の結合を示すことが確認される。実施例６を参照のこと。
【図１２】図１２は、ＣＣＬ２０（配列番号１１４）とＣＣＬ１６（配列番号１１５）との５６残基の重複部分の間のアミノ酸配列アラインメントを示す。実施例６を参照のこと。
【図１３Ａ】図１３Ａおよび図１３Ｂは、Ａ）キメラ抗ヒトＣＣＬ２０抗体およびＢ）ヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体が、ＣＣＬ２０と特異的に反応し、ＣＣＬ１６とは反応しないことを示す一連のグラフである。実施例６を参照のこと。
【図１３Ｂ】図１３Ａおよび図１３Ｂは、Ａ）キメラ抗ヒトＣＣＬ２０抗体およびＢ）ヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体が、ＣＣＬ２０と特異的に反応し、ＣＣＬ１６とは反応しないことを示す一連のグラフである。実施例６を参照のこと。
【図１４】図１４は、ヒト（第一の開示は配列番号８５であり、第二の開示は配列番号８５の残基２〜９６である）、アカゲザル（配列番号８６）、カニクイザル（配列番号８７）、およびマウス（配列番号８８）のＣＣＬ２０オルソログの間のアミノ酸配列アラインメントを示す。実施例７を参照のこと。
【図１５】図１５は、ＥＬＩＳＡアッセイにおける抗ヒトＣＣＬ２０抗体検出の模式図である。実施例７を参照のこと。
【図１６Ａ】図１６Ａ〜Ｃは、Ａ）キメラ抗ヒトＣＣＬ２０抗体、およびＢ）、Ｃ）ヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体が、ヒト、アカゲザル、およびカニクイザルのＣＣＬ２０に効率的に結合するが、マウスＣＣＬ２０には結合しないことを示す一連のグラフを示す。実施例７を参照のこと。
【図１６Ｂ】図１６Ａ〜Ｃは、Ａ）キメラ抗ヒトＣＣＬ２０抗体、およびＢ）、Ｃ）ヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体が、ヒト、アカゲザル、およびカニクイザルのＣＣＬ２０に効率的に結合するが、マウスＣＣＬ２０には結合しないことを示す一連のグラフを示す。実施例７を参照のこと。
【図１６Ｃ】図１６Ａ〜Ｃは、Ａ）キメラ抗ヒトＣＣＬ２０抗体、およびＢ）、Ｃ）ヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体が、ヒト、アカゲザル、およびカニクイザルのＣＣＬ２０に効率的に結合するが、マウスＣＣＬ２０には結合しないことを示す一連のグラフを示す。実施例７を参照のこと。
【図１７Ａ】図１７Ａおよび図１７Ｂは、ヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体およびキメラ抗ヒトＣＣＬ２０抗体が、ヒト、アカゲザル、およびカニクイザルのＣＣＬ２０に効率的に結合するが、ラットもしくはマウスのＣＣＬ２０には結合しないことを示すグラフを示す。Ｂ）ヒト化抗体およびＡ）キメラ抗体は、これらが由来するＡ）マウス抗体３６Ｆ７Ｃ１０の結合特異性を保持する。実施例７を参照のこと。
【図１７Ｂ】図１７Ａおよび図１７Ｂは、ヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体およびキメラ抗ヒトＣＣＬ２０抗体が、ヒト、アカゲザル、およびカニクイザルのＣＣＬ２０に効率的に結合するが、ラットもしくはマウスのＣＣＬ２０には結合しないことを示すグラフを示す。Ｂ）ヒト化抗体およびＡ）キメラ抗体は、これらが由来するＡ）マウス抗体３６Ｆ７Ｃ１０の結合特異性を保持する。実施例７を参照のこと。
【図１８Ａ】図１８Ａおよび図１８Ｂは、水素／重水素交換によるヒトＣＣＬ２０のエピトープマッピングの結果を示す。この実験は、Ｒ＆Ｄ  ＳｙｓｔｅｍｓのヒトＣＣＬ２０の改変体（配列番号８４）を利用した。ここで最後から２番目の残基は、上記野生型配列において示されるＮの代わりに、Ｄである。Ａ）ＣＣＬ２０の各残基の重水素化レベルは、４つの時間点において示される（上から：１５０ｓ、５００ｓ、１５００ｓ、および５０００ｓ）。Ｂ）ヒトＣＣＬ２０の構造であって、本発明の抗体が結合するエピトープを示している。実施例９を参照のこと。
【図１８Ｂ】図１８Ａおよび図１８Ｂは、水素／重水素交換によるヒトＣＣＬ２０のエピトープマッピングの結果を示す。この実験は、Ｒ＆Ｄ  ＳｙｓｔｅｍｓのヒトＣＣＬ２０の改変体（配列番号８４）を利用した。ここで最後から２番目の残基は、上記野生型配列において示されるＮの代わりに、Ｄである。Ａ）ＣＣＬ２０の各残基の重水素化レベルは、４つの時間点において示される（上から：１５０ｓ、５００ｓ、１５００ｓ、および５０００ｓ）。Ｂ）ヒトＣＣＬ２０の構造であって、本発明の抗体が結合するエピトープを示している。実施例９を参照のこと。
【図１９】図１９は、マウスＣＣＲ６を形質導入したＢ３００細胞が、マウスおよびヒト両方のＣＣＬ２０に向かって移動することを実証する１対のグラフである。実施例１０を参照のこと。
【図２０】図２０は、マウス抗ヒトＣＣＬ２０抗体、キメラ抗ヒトＣＣＬ２０抗体、およびヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体が、ヒトＣＣＬ２０に向かうマウスＴ細胞の移動をインビボで用量依存性様式で阻害することを示すグラフである。実施例１０を参照のこと。
【図２１】図２１は、ハムスター抗マウスＣＣＬ２０  ＭＡｂ  ２Ｆ５−５がマウスにおけるコラーゲン誘発性関節炎症状を減じることを示すグラフである。実施例１１を参照のこと。
【図２２】図２２は、２Ｆ５−５  ＭＡｂが、コラーゲン誘発性関節炎症状の進行を減じることを実証する個々の動物の臨床スコアの表である。実施例１１を参照のこと。
【図２３】図２３は、Ｘ線スコア付けによるマウスの足の格付けを示すグラフである。２Ｆ５−５  ＭＡｂは、コラーゲン誘発性関節炎を有するマウスにおける骨の病変を減じることが示される。Ｃｏｎｔ：コントロールＩｇＧ。実施例１１を参照のこと。
【図２４】図２４は、コラーゲン誘発性関節炎を有するマウスの足における骨の病変を示すスコア付けされたＸ線の例を示す。Ｏ：骨粗鬆症、Ｅ：骨侵食、Ｎ：新たな骨形成。実施例１１を参照のこと。
【図２５Ａ】図２５Ａ〜Ｃは、コラーゲン誘発性関節炎マウスモデルにおいて、軟骨破壊のマーカーである、血清軟骨オリゴマーマトリクスタンパク質（ＣＯＭＰ）の測定値を示す。Ａ）ＣＯＭＰ標準での較正データ。Ｘ軸、単位／リットル；Ｙ軸、４５０ｎｍでの光学密度。Ｂ）ハムスターコントロールＩｇＧもしくは２Ｆ５−５  ＭＡｂで処置したマウスについてのプレートテンプレートおよび生データ。Ｃ）個々の動物のデータは、コントロールＩｇＧ抗体で処置した動物と比較して、２Ｆ５−５  ＭＡｂで処置した動物における低下したＣＯＭＰレベルを実証する。実施例１１を参照のこと。
【図２５Ｂ】図２５Ａ〜Ｃは、コラーゲン誘発性関節炎マウスモデルにおいて、軟骨破壊のマーカーである、血清軟骨オリゴマーマトリクスタンパク質（ＣＯＭＰ）の測定値を示す。Ａ）ＣＯＭＰ標準での較正データ。Ｘ軸、単位／リットル；Ｙ軸、４５０ｎｍでの光学密度。Ｂ）ハムスターコントロールＩｇＧもしくは２Ｆ５−５  ＭＡｂで処置したマウスについてのプレートテンプレートおよび生データ。Ｃ）個々の動物のデータは、コントロールＩｇＧ抗体で処置した動物と比較して、２Ｆ５−５  ＭＡｂで処置した動物における低下したＣＯＭＰレベルを実証する。実施例１１を参照のこと。
【図２５Ｃ】図２５Ａ〜Ｃは、コラーゲン誘発性関節炎マウスモデルにおいて、軟骨破壊のマーカーである、血清軟骨オリゴマーマトリクスタンパク質（ＣＯＭＰ）の測定値を示す。Ａ）ＣＯＭＰ標準での較正データ。Ｘ軸、単位／リットル；Ｙ軸、４５０ｎｍでの光学密度。Ｂ）ハムスターコントロールＩｇＧもしくは２Ｆ５−５  ＭＡｂで処置したマウスについてのプレートテンプレートおよび生データ。Ｃ）個々の動物のデータは、コントロールＩｇＧ抗体で処置した動物と比較して、２Ｆ５−５  ＭＡｂで処置した動物における低下したＣＯＭＰレベルを実証する。実施例１１を参照のこと。
【図２６】図２６は、２Ｆ５−５  ＭＡｂが、マウスにおけるＣＯＭＰの血清レベルを低下させることを示すグラフである。Ｃｔｒｌ  ＩｇＧ：アイソタイプマッチさせた抗体；ＣＣＬ２０  ｍＡｂ：２Ｆ５−５  ＭＡｂ。実施例１１を参照のこと。
【図２７Ａ】図２７Ａおよび図２７Ｂは、２Ｆ５−５  ＭＡｂが、破骨細胞マーカーであるＡ）ＲＡＮＫＬおよびＲＡＮＫ、ならびにＢ）ＴＲＡＰおよびカテプシンＫのｍＲＮＡ発現を低下させることを示すグラフである。Ｃｔｒｌ  ＩｇＧ：アイソタイプマッチさせた抗体；ＣＣＬ２０  ｍＡｂ：２Ｆ５−５ＭＡｂ；Ｙ軸：定量的ＰＣＲ単位。実施例１１を参照のこと。
【図２７Ｂ】図２７Ａおよび図２７Ｂは、２Ｆ５−５  ＭＡｂが、破骨細胞マーカーであるＡ）ＲＡＮＫＬおよびＲＡＮＫ、ならびにＢ）ＴＲＡＰおよびカテプシンＫのｍＲＮＡ発現を低下させることを示すグラフである。Ｃｔｒｌ  ＩｇＧ：アイソタイプマッチさせた抗体；ＣＣＬ２０  ｍＡｂ：２Ｆ５−５ＭＡｂ；Ｙ軸：定量的ＰＣＲ単位。実施例１１を参照のこと。
【図２８】図２８は、２Ｆ５−５  ＭＡｂが、マウスにおけるグルコース−６−ホスフェートイソメラーゼ誘発性関節炎に対する予防効果を有することを示すグラフである。実施例１２を参照のこと。
【図２９】図２９は、２Ｆ５−５  ＭＡｂが、マウスにおけるオキサゾロン誘発性アトピー性皮膚炎の進行を抑制することを示すグラフである。実施例１３を参照のこと。
【図３０】図３０は、２Ｆ５−５  ＭＡｂが、マウスにおけるジニトロフルオロベンゼン誘発性アレルギー性接触性皮膚炎を阻害する（耳の厚みによって測定した場合）ことを示すグラフである。実施例１４を参照のこと。
【発明を実施するための形態】
【００８６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、ＣＣＬ２０もしくはその部分（例えば、その抗原性部分）に特異的に結合する抗体に関する。本発明はまた、上記抗体の抗原結合部分に関する。一実施形態において、上記抗体は、ＣＣＬ２０の１種以上の活性を中和する。抗体は、非ＣＣＬ２０分子に実質的に結合しなければ、ＣＣＬ２０に特異的に結合するといわれる。実質的な結合は、ＢｉａｃｏｒｅＴＭ（二価フォーマットにおいて）によって決定される場合、例えば、≦１００ｎＭ、好ましくは、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦１００ｐＭ、≦５０ｐＭ、≦４０ｐＭ、もしくは≦３５ｐＭのＫＤでの結合である。一実施形態において、上記抗体もしくは部分は、ヒトＣＣＬ２０もしくはその部分に、ヒトＣＣＬ２０のいくつかの配列改変体（例えば、対立遺伝子改変体）に特異的に結合し、他の種に由来するＣＣＬ２０と交叉反応し得る。一実施形態において、上記抗体もしくは部分は、野生型（天然に存在するもしくは内因性ともいわれる）ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有する。別段示されなければ、「ヒトＣＣＬ２０」とは、野生型ヒトＣＣＬ２０を指す。シグナル配列を有する野生型ヒトＣＣＬ２０のアミノ酸配列は、図１４に示される（配列番号８５）。シグナル配列（配列番号８５の残基１〜２６）を含まない野生型ヒトＣＣＬ２０のアミノ酸配列は、配列番号９９に見いだされる（表１８を参照のこと）。図１８は、シグナル配列を含まないヒトＣＣＬ２０の改変体（配列番号８４）を示し、ここで最後の残基の隣の残基は、上記野生型配列（配列番号８５）におけるようなＮの代わりに、Ｄである。いくつかの実施形態において、上記抗体もしくは部分は、野生型ヒトＣＣＬ２０に結合するか、または、最後の残基の隣の残基が上記野生型配列（シグナル配列を有するかもしくは有さないかのいずれかの配列（例えば、配列番号８４、８５、もしくは９９））に示されるＮの代わりに、ＤであるヒトＣＣＬ２０に結合する。特定の実施形態において、上記抗体もしくは部分は、ヒト、アカゲザル、およびカニクイザルのＣＣＬ２０に特異的に結合するが、マウスもしくはラットのＣＣＬ２０には結合しない。
【００８７】
本明細書に記載される抗体およびその抗原結合部分は、公知の技術を使用して、精製および／もしくは単離され得る。「精製」もしくは「単離」されている抗体もしくは部分は、それらの元の供給源（例えば、細胞の上清；ライブラリーにおける抗体の混合物中などの混合物中、など）の分子（例えば、ペプチド）から分離されており、本明細書に記載される方法もしくは他の適切な方法によって得られる抗体を含む。単離された抗体は、実質的に純粋な（例えば、本質的に純粋な）抗体、ならびに化学合成、組み換え技術およびこれらの組み合わせによって生成される抗体を含む。
【００８８】
より具体的には、本発明は、抗ヒトＣＣＬ２０抗体、上記抗体の抗原結合部分（すなわち、部分）、上記抗体の軽鎖、上記抗体の重鎖、およびこれら軽鎖もしくは重鎖の部分に関する。本発明はまた、上記重鎖および／もしくは軽鎖のシグナル配列を欠いている抗体、ならびにグリコシル化抗体に関する。本発明はまた、前駆抗体（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、非グリコシル化抗体、ならびに重鎖および／もしくは軽鎖がシグナル配列を含む抗体に関する。本発明はまた、上記抗体の重鎖および／もしくは軽鎖のうちのいずれかをコードする核酸分子、または本明細書に記載されるその部分；このような核酸を含むベクターおよび宿主細胞；本明細書に記載される抗体の重鎖および／または軽鎖もしくはその部分のうちのいずれかを生成する方法；ならびに上記抗体、抗体鎖、もしくは部分を使用する方法に関する。
【００８９】
本発明の抗体およびその抗原結合部分は、処置を必要とする被験体（例えば、ヒト患者）を処置して、ＣＣＲ６へのＣＣＬ２０の結合を低下させる、ＣＣＬ２０媒介性炎症を減じる、および／もしくは必要とされる場合、ＣＣＲ６＋細胞のＣＣＬ２０媒介性化学走性を低下させるために使用され得る。
【００９０】
本発明の抗体は、２本の重鎖および２本の軽鎖を含む従来の抗体を包含する。いくつかの実施形態において、上記重鎖および／もしくは軽鎖のうちの１つ以上は、可変ドメイン（本明細書において「可変領域」ともいわれる）および定常ドメイン（本明細書において「定常領域」ともいわれる）を含む。完全可変ドメインは、存在する場合、４個のフレームワーク領域（ＦＲ）および３個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、アミノ末端から始めて、順番に、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４と配置される。視覚的検査および配列分析は、上記ＣＤＲ境界を同定するために行われ得る。本発明に関して、上記ＣＤＲ配列は、例えば、図６に示されるように、Ｋａｂａｔシステム（Ｋａｂａｔ，  Ｅ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  Ｕ．Ｓ．Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ  （１９９１））および／もしくはＣｈｏｔｈｉａシステム（Ｃｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ，  Ｃａｎｏｎｉｃａｌ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １９６：９０１−９１７  （１９８７））を使用することによって定義される。
【００９１】
ヒト重鎖定常領域を含む本発明の実施形態は、該重鎖が、それぞれ、ガンマ（γ）、ミュー（μ）、およびアルファ（α）、デルタ（δ）もしくはエプシロン（ε）タイプのものである、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥを含む任意のアイソタイプのヒト定常領域、および該重鎖が、それぞれ、γ１、γ２、γ３、γ４、α１およびα２タイプのものである、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む任意のサブクラスのヒト定常領域を含み得る。ヒト軽鎖を含む実施形態は、ヒトカッパ（κ）もしくはヒトラムダ（λ）軽鎖を含み得る。
【００９２】
本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、完全抗体（２本の全長重鎖および２本の全長軽鎖を含む）を指す。用語「抗原結合フラグメント」とは、別段示されなければ、本明細書において、用語「抗原結合部分」と交換可能に使用される。抗体の抗原結合部分は、例えば、単鎖抗体、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄフラグメント、単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）、二重特異性単鎖Ｆｖダイマー（ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９６６５）、ダイアボディー、ドメイン欠失抗体および単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）の様式で存在し得る。例えば、Ｊｅｓｐｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２２（９）：  １１６１−１１６５  （２００４））を参照のこと。ＶＨおよび／もしくはＶＬを含む抗原結合分子もまた、本発明の範囲内である。ＶＨの場合には、上記分子はまた、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域のうちの１種以上を含み得る。
【００９３】
抗体部分は、酵素切断によって、もしくは組換え技術によって、生成され得る。例えば、パパインもしくはペプシンでの切断は、それぞれ、ＦａｂもしくはＦ（ａｂ’）２フラグメントを生成するために使用され得る。抗体はまた、１個以上の終止コドンが天然の終止部位の上流に導入された抗体遺伝子を使用して、種々の短縮型形態で生成され得る。例えば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの重鎖をコードする組換え構築物は、上記重鎖のＣＨ１ドメインおよびヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を含むように設計され得る。
【００９４】
別の実施形態において、別のポリペプチドに連結された、本発明の抗ＣＣＬ２０抗体のうちの全てもしくは部分を含む、融合抗体もしくはイムノアドヘシンが作製され得る。一実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体の可変ドメインのみが、上記ポリペプチドに連結される。別の実施形態において、抗ＣＣＬ２０抗体のＶＨドメインは、第１のポリペプチドに連結される一方で、抗ＣＣＬ２０抗体のＶＬドメインは、該ＶＨドメインおよび該ＶＬドメインが互いに相互作用して、抗原結合部位を形成し得るような様式で、該第１のポリペプチドと会合する第２のポリペプチドに連結される。なお別の実施形態において、上記ＶＨドメインは、該ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、互いに相互作用し得るように、リンカーによって該ＶＬドメインから分離される（以下の単鎖抗体を参照のこと）。次いで、上記ＶＨ−リンカー−ＶＬ抗体は、目的の上記ポリペプチドに連結される。さらに、融合抗体が、作られ得、ここで２種（もしくはそれより多い）単鎖抗体が互いに連結されて、単一のポリペプチド鎖上で二価もしくは多価の抗体を作製し得るか、または二重特異性抗体を作製し得る。
【００９５】
本発明の単鎖抗体を作製するために、上記ＶＨコードＤＮＡフラグメントおよびＶＬコードＤＮＡフラグメントは、可撓性リンカーをコードする（例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）３（配列番号１１６）をコードする）別のフラグメントに作用的に連結され、その結果、上記ＶＨ配列およびＶＬ配列は、該可撓性リンカーによって繋げられた上記ＶＬドメインおよびＶＨドメインを有する連続した単鎖タンパク質（ｃｏｎｔｉｇｕｏｕｓ  ｓｉｎｇｌｅ−ｃｈａｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ）として、発現され得る。例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６  （１９８８）；  Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３  （１９８８）；  ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．  ，  Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：  ５５２−５５４  （１９９０）；などを参照のこと。いくつかの実施形態において、上記単鎖抗体は、一価（単一のＶＨおよびＶＬのみが使用される）、二価（２つのＶＨおよびＶＬが使用される）、もしくは多価（２つより多くのＶＨおよびＶＬが使用される）である。本発明はまた、ヒトＣＣＬ２０および別の分子に特異的に結合する二重特異性抗体もしくは多価抗体を企図する。
【００９６】
他の実施形態において、他の改変された抗体は、抗ＣＣＬ２０抗体コード核酸分子を使用して、調製され得る。例えば、「カッパボディー（Ｋａｐｐａ  ｂｏｄｙ）」（Ｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  １０：９４９−５７  （１９９７））、「ミニボディー」（Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．．  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １３：５３０３−９  （１９９４））、「ダイアボディー」（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８  （１９９３））、もしくは「ヤヌシン（Ｊａｎｕｓｉｎ）」（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．  ，  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １０：３６５５−３６５９  （１９９１  ）およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  （Ｓｕｐｐｌ．）  ７：５１−５２  （１９９２））は、本明細書の技術に従い、標準的な分子生物学的技術を使用して調製され得る。
【００９７】
別の局面において、本発明は、本明細書で例示される抗体の改変体、もしくは該改変抗体の抗原結合部分を提供し、ここで該改変抗体は、ヒトＣＣＬ２０に特異的に結合するが、上記例示される抗体とは、配列において、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、もしくはそれより多くのアミノ酸置換（例えば、ＣＤＲ領域、ＦＲ領域、および／もしくは定常ドメインにおいて）だけ異なる。本発明によれば、上記改変抗体は、上記重鎖、上記重鎖可変ドメイン、上記軽鎖、上記軽鎖可変ドメイン、上記６個のＣＤＲ、もしくは上記８個のＦＲにおいて、参照抗体に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％同一であり得る。
【００９８】
本明細書で使用される場合、ポリペプチドについての配列類似性（これは、配列同一性としても言及される）は、代表的には、配列分析ソフトウェア（これは、種々の置換、欠失および他の改変（保存的アミノ酸置換が挙げられる）に割り当てられた類似性の尺度を使用して、類似の配列をマッチさせる）を使用して測定される。例えば、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ  （ＧＣＧ）  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅは、「ギャップ」および「ベストフィット」のようなプログラムを含み、これらは、密接に関連したポリペプチド（例えば、生物の異なる種に由来する相同なポリペプチド）の間で、または野生型タンパク質とそのムテインとの間で、配列相同性もしくは配列同一性を決定するためにデフォルトパラメーターで使用することができる。例えば、ＧＣＧ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．１を参照のこと。ポリペプチド配列はまた、デフォルトパラメーターもしくは推奨されるパラメーターを使用して、ＦＡＳＴＡ（ＧＣＧ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ６．１中のプログラム）で比較することができる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、質問配列と検索配列との間の最もよい重複の領域のアラインメントおよび％配列同一性を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １８３  ：６３−９８  （１９９０）；  Ｐｅａｒｓｏｎ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  １３２：１８５−２１９  （２０００））。本発明の配列と、異なる生物に由来する多数の配列を含むデータベースとを比較する場合に使用される別のアルゴリズムは、デフォルトパラメーターを使用する、コンピュータープログラムＢＬＡＳＴ（特に、ｂｌａｓｔｐもしくはｔｂｌａｓｔｎ）である。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５：４０３−４１０  （１９９０）；  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：３３８９−４０２  （１９９７）（本明細書に参考として援用される）を参照のこと。
【００９９】
本発明によれば、上記抗体中の１個以上のシステイン（これらは、化学的に反応性であり得る）は、別の残基（例えば、アラニンもしくはセリンが挙げられるが、これらに限定されない）に変化させられ得る。一実施形態において、非標準的（ｎｏｎ−ｃａｎｏｎｉｃａｌ）システインは、置換され得る。上記置換は、抗体の可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域において、または定常ドメインにおいて、行われ得る。いくつかの実施形態において、上記システインは、標準的である。いくつかの実施形態において、上記抗体における潜在的タンパク質分解部位は、除去される。このような部位は、抗体の可変ドメインのＣＤＲもしくはフレームワーク領域に、または定常ドメインに、存在し得る。システイン残基の置換およびタンパク質分解部位の除去は、抗体生成物における不均一性というリスクを減じ得るので、その均一性を増大させ得る。いくつかの実施形態において、アスパラギン−グリシン対（これは、潜在的な脱アミド化部位を形成する）は、上記残基のうちの一方もしくは両方を変化させることによって、除去される。いくつかの実施形態において、上記抗体は、その免疫原性を低下させるために、脱免疫（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）される。抗体の免疫原性を低下させるための技術は、当該分野で周知である。例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９８／５２９７６およびＷＯ  ００／３４３１７を参照のこと。
【０１００】
いくつかの実施形態において、上記抗体は、本発明の例示される抗体と比較される場合、１つ以上の保存的アミノ酸置換を有する。「保存的アミノ酸置換」とは、あるアミノ酸残基が、類似の化学的特性（例えば、電荷もしくは疎水性）を有する側鎖Ｒ基を有する別のアミノ酸残基で置換される置換である。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させない。２種以上のアミノ酸配列が、保存的置換によって互いに異なる場合、％配列同一性もしくは類似性の程度は、該置換の保存的性質について補正する（ｃｏｒｒｅｃｔ）ために、上方に調節され得る。この調節を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２４３：３０７−３１  （１９９４）を参照のこと。
【０１０１】
類似の化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸の群の例としては、以下が挙げられる：１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、およびイソロイシン；２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリンおよびスレオニン；３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン；５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン；６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸；ならびに７）含硫側鎖：システインおよびメチオニン。好ましい保存的アミノ酸置換群は、以下である：バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタメート−アスパルテート、およびアスパラギン−グルタミン。あるいは、保存的置換は、Ｇｏｎｎｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６：１４４３−４５（１９９２）において開示されるＰＡＭ２５０対数尤度行列（ｌｏｇ−ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ  ｍａｔｒｉｘ）において正の値を有する任意の変化である。「中程度の保存的」置換は、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において負ではない値を有する任意の変化である。
【０１０２】
特定の実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分に対するアミノ酸置換は、以下である置換である：（１）タンパク質分解に対する感受性を低下させる、（２）酸化に対する感受性を低下させる、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変化させる（例えば、上記抗体のＡＤＣＣ活性およびＣＤＣ活性を増強するための）、（４）このようなアナログの他の物理化学的特性もしくは機能的特性を付与するかもしくは改変するが、ヒトＣＣＬ２０への特異的結合性を保持する、（５）Ｃ末端リジンを除去する、および（６）グリコシル化部位を付加もしくは除去する。
【０１０３】
一局面において、本発明は、本発明の抗体の重鎖もしくは軽鎖であるか、または該重鎖もしくは軽鎖の可変ドメイン含有部分である、新しくかつ新規なポリペプチドを提供する。このようなポリペプチドは有用である。なぜなら、それは、それぞれ、抗体軽鎖もしくは抗体重鎖と組み合わせて、抗ＣＣＬ２０抗体を形成し得るからである。
【０１０４】
新規なマウス抗ヒトＣＣＬ２０抗体のＣＤＲを含む、新規なヒト化中和抗ＣＣＬ２０抗体、および該ヒト化抗体の抗原結合部分が、本明細書に記載される。用語「ヒト化抗ＣＣＬ２０抗体」とは、本明細書で使用される場合、非ヒト起源の抗ＣＣＬ２０抗体（本明細書においてドナー抗体ともいう（例えば、マウス抗ＣＣＬ２０抗体））の１種以上のＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）、およびヒト配列に由来する少なくとも部分を含む抗体を指す。上記ヒト抗体部分は、１種以上のフレームワーク領域（例えば、上記フレームワーク領域のうちの全て）、および／または定常領域のうちの全てもしくは一部であり得る。いくつかの実施形態において、上記ヒト配列フレームワーク領域は、生殖細胞系列配列を含むが、非生殖細胞系列変異を含み得る。非ヒト抗ＣＣＬ２０抗体の６個のＣＤＲがヒトフレームワークに移植される、ＣＤＲを移植した抗ＣＣＬ２０抗体は、本発明のヒト化抗ＣＣＬ２０抗体の例である。例えば、Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第４，８１６，５６７号；  Ｃａｂｉｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，欧州特許第０，１２５，０２３  Ｂ１号；  Ｂｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第４，８１６，３９７号；  Ｂｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，欧州特許第０，１２０，６９４  Ｂ１号；  Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，  Ｍ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ  ８６／０１５３３；  Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，  Ｍ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  欧州特許第０，１９４，２７６  Ｂ１号；  Ｗｉｎｔｅｒ，  米国特許第５，２２５，５３９号；  Ｗｉｎｔｅｒ，欧州特許第０，２３９，４００  Ｂ１号；  Ｐａｄｌａｎ，  Ｅ．Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，欧州特許出願第０，５１９，５９６  Ａ１号を参照のこと。Ｌａｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第４，９４６，７７８号；  Ｈｕｓｔｏｎ，米国特許第５，４７６，７８６号；およびＢｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６  （１９８８））もまた参照のこと。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、脱免疫抗体である。潜在的Ｔ細胞エピトープの数を低下させ、それにより、ヒトへ投与された際の、免疫応答を惹起する抗体の性質を弱めるように改変された脱免疫抗体に関しては、例えば、Ｃａｒｒ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第７，２６４，８０６号を参照のこと。
【０１０５】
特定の実施形態において、上記ヒト化抗体は、以下のマウスモノクローナル抗ヒトＣＣＬ２０抗体：３６Ｆ７Ｃ１０、４２Ｇ５Ｂ１０、および４０−１Ｃ１０Ｂ９のうちの１種以上の、１種以上の軽鎖ＣＤＲおよび／もしくは１種以上の重鎖ＣＤＲを含み、ここで、該ＣＤＲは、Ｋａｂａｔシステム、Ｃｈｏｔｈｉａシステム、もしくはこれらの任意の組み合わせに従って同定される。いくつかの実施形態において、上記ヒト化抗体は、抗体３６Ｆ７Ｃ１０、４２Ｇ５Ｂ１０、もしくは４０−１Ｃ１０Ｂ９の３種全ての重鎖ＣＤＲおよび３種全ての軽鎖ＣＤＲを含む。
【０１０６】
別の実施形態において、上記ヒト化抗体は、本発明のマウス抗ヒトＣＣＬ２０抗体の結合特異性（例えば、ヒトＣＣＬ２０に対する特異性、同じもしくは類似のエピトープ特異性）を有し、そして／または中和活性を有する。上記ヒト化抗体は、本明細書に記載されるマウス抗ヒトＣＣＬ２０抗体、キメラ抗ヒトＣＣＬ２０抗体、もしくはヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体の結合特異性、エピトープ特異性、および／もしくは中和活性を有し得る。例えば、本発明のヒト化抗体は、ヒトＣＣＬ２０への結合について、上記マウス抗ヒトＣＣＬ２０抗体、キメラ抗ヒトＣＣＬ２０抗体、もしくはヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体と競合し得、そして／または該マウス抗ヒトＣＣＬ２０抗体、キメラ抗ヒトＣＣＬ２０抗体、もしくはヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体の中和機能を有し得る。特定の実施形態において、上記ヒト化抗体は、マウス抗体３６Ｆ７Ｃ１０、４２Ｇ５Ｂ１０、および４０−１Ｃ１０Ｂ９のうちのいずれか１つの結合特異性、エピトープ特異性および／もしくは中和活性を有する。
【０１０７】
上記ヒト化抗体のヒト配列部分（例えば、フレームワーク領域；定常領域）は、任意の適切なヒト抗体に由来し得る。例えば、ヒト化抗体もしくはキメラ抗体におけるヒト定常領域もしくはその部分は、対立遺伝子改変体を含め、ヒトκもしくはλ軽鎖遺伝子によって、および／またはヒトγ（例えば、γ１、γ２、γ３、γ４）、μ、α（例えば、α１、α２）、δもしくはε重鎖遺伝子によってコードされ得る。特定のヒト定常領域アイソタイプ（例えば、ＩｇＧ１；ＩｇＧ２）、その改変体もしくは部分は、エフェクター機能を調整するように選択され得る。例えば、変異した定常領域（すなわち、改変体）は、上記抗体へと組み込まれ得、Ｆｃレセプターへの結合および／もしくは補体を固定する能力を低下させ得る（例えば、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ＧＢ  ２，２０９，７５７  Ｂ；  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ  ８９／０７１４２；  Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ  ９４／２９３５１を参照のこと）。
【０１０８】
本明細書で使用される場合、用語「生殖細胞系列」とは、上記抗体遺伝子および遺伝子セグメントのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を指す。なぜなら、それらが、生殖細胞を介して親から子孫へと受け継がれるからである。この生殖細胞系列配列は、親和性成熟過程の間の組換え事象および超変異事象により改変されている、Ｂ細胞における特定の抗体をコードするヌクレオチド配列から区別される。特定の生殖細胞系列を「利用する」抗体は、他の生殖細胞系列配列と比較して、それが指定する、生殖細胞系列ヌクレオチド配列と、もしくはアミノ酸配列と、最も厳密に整列するヌクレオチド配列もしくはアミノ酸配列を有する。このような抗体は、上記生殖細胞系列配列と比較して変異している配列によってコードされ得るか、またはそのような配列を含み得る。
【０１０９】
いくつかの実施形態において、上記ヒトフレームワークは、生殖細胞系列配列から最小限のバリエーションを有する。例えば、３個未満の、４個未満の、５個未満の、６個未満の、７個未満の、８個未満の、、９個未満の、もしくは１０個未満のアクセプターフレームワーク残基が、上記抗体の１種以上の特性を改善するために置き換えられてきた。いくつかの実施形態において、アクセプターフレームワーク残基は、ドナーフレームワーク残基で置き換えられて、例えば、結合親和性が改善される（例えば、Ｑｕｅｅｎ  ｅｌ  ａｌ．，米国特許第５，５３０，１０１号を参照のこと）。特定の実施形態において、ヒト化抗体鎖のフレームワークにおける制限された数のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、もしくは１０個のアミノ酸）が、アクセプター配列におけるよりむしろ、ドナー配列におけるそれらの位置において、上記アミノ酸と同じであるように選択されて（すなわち、「復帰変異を受ける（ｂａｃｋ−ｍｕｔａｔｅｄ）」）、ヒトＣＣＬ２０に関する上記ヒト化抗体鎖を含む抗体の親和性を増大させる。
【０１１０】
ヒトフレームワーク領域（例えば、重鎖および／もしくは軽鎖の可変領域の）は、好ましくは、上記ドナー抗体（例えば、マウス抗ＣＣＬ２０抗体）の抗原結合領域の類似のもしくは等価な領域（例えば、重鎖もしくは軽鎖の可変領域）に対して配列類似性を有するヒト生殖細胞系列配列から得られるかもしくはこれらに由来する。ヒト化抗体のヒト配列部分のフレームワーク領域の他の供給源は、ヒト可変領域コンセンサス配列を含む（例えば、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４：７７３−７８３  （１９９１）；  Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ＷＯ  ９４／０４６７９；  Ｃａｒｔｅｒ  米国特許第６．４０７，２１３号）を参照のこと）。例えば、非ヒト部分を得るために使用される上記抗体のドナー配列（例えば、上記可変領域の配列）の領域は、Ｋａｂａｔ，  Ｅ．  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，  Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，  Ｕ．Ｓ．Ｇｏｖｅｒｎｍｅｎｔ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｏｆｆｉｃｅ  （１９９１）に記載されるヒト配列と比較されて、上記ヒト化抗体のヒト部分の特定の供給源（例えば、上記フレームワーク領域の供給源）を選択し得る。
【０１１１】
一実施形態において、上記ヒト化抗体鎖のフレームワーク領域は、非ヒトドナーの可変領域と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％もしくは少なくとも約９５％の全体的な配列同一性を有するヒトＩｇ可変領域から得られるか、もしくは該ヒトＩｇ可変領域に由来する。特定の実施形態において、上記ヒト化抗体鎖のフレームワーク領域は、非ヒトドナー抗体の可変領域のフレームワーク領域と、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、もしくは少なくとも約９５％の全体配列同一性を有するヒト可変領域フレームワーク領域から得られるか、または該領域に由来する。
【０１１２】
一実施形態において、上記ヒト化抗体のフレームワーク領域（ＦＲ）のうちの少なくとも１種は、ヒト配列のうちの１個以上の鎖から得られるか、もしくはこれらに由来する。従って、上記ＦＲは、１種以上のヒト配列抗体から（例えば、ヒト抗体鎖から、ヒトコンセンサス配列から）得られるか、またはこれらに由来する、ＦＲ１および／もしくはＦＲ２および／もしくはＦＲ３および／もしくはＦＲ４を含み得る。
【０１１３】
いくつかの場合において、上記マウス抗ＣＣＬ２０抗体（複数可）の１種以上のＣＤＲに隣接する残基が、直接的もしくは間接的のいずれかで、機能（例えば、結合性）に寄与し得、そしていくつかの場合においては、必須であり得ることは、当業者によって認識される。よって、いくつかの実施形態において、マウスフレームワークの１種以上のＣＤＲに隣接する１個以上のアミノ酸（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、もしくはこれより多くの隣接するアミノ酸）はまた、上記ヒト化抗体に含まれる。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、本発明のヒト化抗体のヒト重鎖フレームワーク領域は、ヒトＩＧＨＶ１−４６＊０３生殖細胞系列配列を利用する。いくつかの実施形態において、本発明のヒト化抗体のヒト軽鎖フレームワーク領域は、ヒトＩＧＫＶ１Ｄ−３９＊０１生殖細胞系列配列を利用する。変異（例えば、復帰変異）は、必要に応じて、上記ヒト化抗体のＣＣＬ２０結合親和性を改善するために、これらＦＲ領域において（例えば、以下の実施例において記載される残基のうちの１個以上において）行われ得る。
【０１１５】
「親和性」とは、結合相互作用の強度を記載する技術用語であり、代表的には、上記抗原への上記抗体の結合の全体的な強度を指す。上記抗原に対する上記抗体の親和性は、代表的には、特定の抗体−抗原相互作用の結合親和性平衡定数（ＫＤ）として表される。
【０１１６】
いくつかの実施形態において、上記抗体は、一価表面プラズモン共鳴によって決定される場合、５００ｐＭ以下、４００ｐＭ以下、３００ｐＭ以下、２００ｐＭ以下、１００ｐＭ以下、９０ｐＭ以下、８０ｐＭ以下、７０ｐＭ以下、６０ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、もしくは４５ｐＭ以下；または二価表面プラズモン共鳴によって決定される場合、１２ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、８ｐＭ以下、６ｐＭ以下、もしくは５ｐＭ以下の親和性（ＫＤ；  ＫＤ＝Ｋｏｆｆ（ｋｄ）／Ｋｏｎ（ｋａ））でヒトＣＣＬ２０に結合する。いくつかの実施形態において、上記抗体は、１価表面プラズモン共鳴（ＢｉａｃｏｒｅＴＭ）によって決定される場合、１０００×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１以下、９００×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１以下、８００×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１以下、７００×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１以下、６００×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１以下、５００×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１以下、４００×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１以下、３００×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１以下、２４０×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１以下、２００×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１以下、１９０×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１以下、１８０×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１以下、１７０×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１以下、１６０×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１以下、もしくは１５０×１０５Ｍ−１ｓｅｃ−１以下のｋａでヒトＣＣＬ２０に結合する。いくつかの実施形態において、上記抗体は、１価表面プラズモン共鳴（ＢｉａｃｏｒｅＴＭ）によって決定される場合、１０００×１０−５ｓｅｃ−１以下、９００×１０−５ｓｅｃ−１以下、８００×１０−５ｓｅｃ−１以下、７００×１０−５ｓｅｃ−１以下、６００×１０−５ｓｅｃ−１以下、５００×１０−５ｓｅｃ−１以下、４００×１０−５ｓｅｃ−１以下、３００×１０−５ｓｅｃ−１以下、２４０×１０−５ｓｅｃ−１以下、２００×１０−５ｓｅｃ−１以下、１９０×１０−５ｓｅｃ−１以下、１８０×１０−５ｓｅｃ−１以下、１７０×１０−５ｓｅｃ−１以下、１６０×１０−５ｓｅｃ−１以下、１５０×１０−５ｓｅｃ−１以下、１４０×１０−５ｓｅｃ−１以下、１３０×１０−５ｓｅｃ−１以下、１２０×１０−５ｓｅｃ−１以下、１００×１０−５ｓｅｃ−１以下、９０×１０−５ｓｅｃ−１以下、８０×１０−５ｓｅｃ−１以下、７０×１０−５ｓｅｃ−１以下、もしくは６５×１０−５ｓｅｃ−１以下のｋｄでヒトＣＣＬ２０に結合する。
【０１１７】
当業者に明らかであるように、種々の方法を使用して、本明細書に提供されかつ当該分野で公知の方法に従って生成される抗体およびその抗原結合部分が、必要な特異性（例えば、結合特異性、エピトープ特異性）を有することを確認し得る。例えば、ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有する本発明のヒト化抗ＣＣＬ２０抗体もしくは部分の結合機能は、任意の適切な方法（例えば、上記ヒト化抗体もしくは部分と、ヒトＣＣＬ２０（または例えば、ＣＣＬ２０のアミノ酸配列を有するペプチドもしくはヒトＣＣＬ２０を含む固体支持体）との間の複合体の形成をモニターするアッセイ）を使用して、検出され得る。
【０１１８】
本明細書で開示される特定のマウスモノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、もしくはヒト化モノクローナル抗体と、ヒトＣＣＬ２０上の同じエピトープに結合する、本発明の抗体もしくはその抗原結合部分（例えば、本発明のヒト化抗体もしくは部分）の能力、または本明細書で開示される特定のマウスモノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、もしくはヒト化モノクローナル抗体が結合する、ヒトＣＣＬ２０上のエピトープと重複するヒトＣＣＬ２０上のエピトープに結合する能力は、当業者に公知の種々の技術（例えば、競合的結合アッセイを含む）を使用して容易に決定され得る。これらは、上記特定の抗体の標識された形態の使用、および本発明の抗体の存在下および非存在下での、ヒトＣＣＬ２０へのその標識された抗体の結合性の測定を包含し得る。
【０１１９】
「エピトープ」とは、本明細書で使用される場合、抗体に特異的結合し得る任意のタンパク質決定基を包含する。抗体が結合するエピトープを特徴付けるための方法は、当該分野で公知である。本発明の抗ＣＣＬ２０抗体によって結合されるエピトープを特徴付ける１つの方法は、実施例９に記載される。抗原上の所望のエピトープがいったん決定されると、例えば、本発明において記載される技術を使用して、そのエピトープに対する抗体を生成することは可能である。あるいは、その発見プロセスの間に、抗体の生成および特徴付けを行って、所望のエピトープについての情報を明らかにし得る。次いで、この情報から、同じエピトープへの結合について抗体を競合的にスクリーニングすることが可能である。例えば、当業者は、互いに競合的に結合する抗体（すなわち、その抗原のへ結合について競合する抗体）を見いだすために、競合研究を行い得る。
【０１２０】
一実施形態において、試験抗体もしくはその抗原結合部分が、本発明のヒト化抗体と同じもしくは重複するエピトープに結合するかどうかを決定するために、本発明の抗ＣＣＬ２０抗体を、飽和条件下でＣＣＬ２０に結合させ、次いで、上記試験抗体がＣＣＬ２０に結合する能力を測定する。上記試験抗体が、参照抗ＣＣＬ２０抗体と同時にＣＣＬ２０に結合し得る場合、上記試験抗体は、上記参照抗ＣＣＬ２０抗体とは異なるエピトープに結合し得る。しかし、上記試験抗体が同時にＣＣＬ２０に結合し得ない場合、上記試験抗体は、同じエピトープ、重複エピトープ、もしくは本発明の抗ＣＣＬ２０抗体が結合するエピトープに極めて近接して存在するエピトープに結合し得る。この実験は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、ＢｉａｃｏｒｅＴＭ、もしくはフローサイトメトリーを使用して行われ得る。抗ＣＣＬ２０抗体が別の抗ＣＣＬ２０抗体と交叉競合するかどうかを試験するために、二方向において、上記の競合方法を使用し得る（すなわち、上記参照抗体が、上記試験抗体をブロックするかどうか、そしてその逆も同様に決定する）。いくつかの実施形態において、上記実験は、ＢｉａｃｏｒｅＴＭを使用して行われる。
【０１２１】
エピトープビニング（ｂｉｎｎｉｎｇ）はまた、本発明の抗体を特徴付けるために有用であり得る。用語「ビニング」とは、それらの抗原結合特徴に基づいて抗体をグループ分けする方法を指す。それらの交叉競合に基づいて抗体を「ビニング」するためのハイスループットプロセスは、国際特許出願番号ＷＯ  ０３／４８７３１に記載されている。上記「エピトープビニング」は、抗ＣＣＬ２０抗体の非標識形態「Ａ」を、ＣＣＬ２０の配列に対応する合成ペプチドもしくはＣＣＬ２０陽性細胞に結合させることによって、調査され得る。その後、標識された第２の抗ＣＣＬ２０抗体「Ｂ」が添加され、上記細胞もしくは合成ペプチドが、抗ＣＣＬ２０抗体「Ａ」に以前に曝されなかったコントロールサンプルと比べて結合し得る、標識された抗体の量が評価され得る。あるいは、抗ＣＣＬ２０抗体「Ａ」および「Ｂ」がともに、検出を可能にする、異なる蛍光色素もしくは化学物質で標識され得、上記標識を検出し得るデバイスを使用して、同時にＣＣＬ２０ペプチドに結合し得る両方の標識された抗体の量が測定され得るか、またはフローサイトメトリーによってＣＣＬ２０陽性細胞に同時にに結合する両方の抗体の量が測定され得る。ＢｉａｃｏｒｅＴＭおよびＯｃｔｅｔ技術は、抗体の非標識形態の競合的結合を調査することを可能にする。抗体の非標識形態のこの使用は望ましい。なぜなら、いくつかの抗体の化学的改変は、上記結合活性を損ない得るからである。Ｊｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８８：９１−９８  （２００４）（これは、エピトープビニングを行うことにおいても有用である）に記載される技術もまた参照のこと。
【０１２２】
本発明の抗ＣＣＬ２０抗体の部分（例えば、軽鎖、重鎖、ならびに軽鎖および重鎖の部分）もまた、本明細書において提供される。これら抗体部分は、抗体から（例えば、還元および／もしくは切断によって）得られるかもしくは該抗体に由来し得るか、または所望の特性（例えば、ヒトＣＣＬ２０を結合する、配列類似性）を有する抗体の部分もしくは鎖をコードする核酸によって生成もしくは発現され得る。それらはまた、例えば、関連部分のデノボ合成によって調製され得る。ヒトおよび非ヒト起源の所望の部分（例えば、抗原結合領域、ＣＤＲ、ＦＲ、Ｃ領域）を含むヒト化抗体は、所望のヒト化された鎖をコードする構築物（例えば、ｃＤＮＡ）を調製するために、合成および／もしくは組換え核酸を使用して生成され得る。例えば、抗体の部分（例えば、鎖の部分）を調製するために、１個以上の終止コドンが、上記核酸配列の所望の部位に導入され得る。ヒト化可変領域をコードする核酸（例えば、ＤＮＡ）配列は、既存のＤＮＡ配列を改変するＰＣＲ変異誘発法を使用して構築され得る（例えば、Ｋａｍｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １７：５４０４  （１９８９）を参照のこと）。新たなＣＤＲをコードするＰＣＲプライマーは、同じか、もしくは非常に類似のヒト可変領域に基づいている、以前にヒト化された可変領域のＤＮＡテンプレートにハイブリダイズされ得る（Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．、  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：８５１−８５６  （１９９３））。類似のＤＮＡ配列が、テンプレートとして利用可能でない場合、可変領域配列をコードする配列を含む核酸が、合成オリゴヌクレオチドから構築され得る（例えば、Ｋｏｌｂｉｎｇｅｒ，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ８：９７１−９８０  （１９９３）を参照のこと）。シグナルペプチドをコードする配列（「シグナル配列」）はまた、上記核酸に（例えば、合成で、ベクターへの挿入によって）組み込まれ得る。シグナルペプチド配列が利用可能でない（例えば、代表的には、存在しない）場合、別の抗体に由来するシグナルペプチド配列が使用され得る（例えば、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４：７７３−７８３  （１９９１）を参照のこと）。これら方法、本明細書に記載される方法もしくは他の適切な方法を使用して、改変体を容易に生成し得る。
【０１２３】
本明細書で使用される場合、頭字語「ｍＡｂ」（もしくは「ＭＡｂ」）とは、モノクローナル抗体を指し、これは、例えば、細胞のクローン集団によって合成される抗体もしくはヒト化抗体であり得る。モノクローナル抗体を生成するクローン集団は、不死化細胞のクローン集団であり得る。いくつかの実施形態において、上記クローン集団中の不死化細胞は、ハイブリッド細胞（ハイブリドーマ）であり、代表的には、免疫した動物に由来する個々のＢリンパ球と、リンパ球性腫瘍に由来する個々の細胞との融合によって生成される。
【０１２４】
本発明は、一部、ヒトＣＣＬ２０に対する結合特異性を有するヒト化抗体もしくはその抗原結合部分に関するもので、ヒト化軽鎖およびヒト化重鎖ならびに／またはこれらの部分を含む。一実施形態において、上記ヒト化抗体は、配列番号７の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む軽鎖および配列番号１の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む重鎖；配列番号７の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む軽鎖および配列番号２の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む重鎖；配列番号７の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む軽鎖および配列番号３の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む重鎖；配列番号７の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む軽鎖および配列番号４の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む重鎖；配列番号７の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む軽鎖および配列番号５の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む重鎖；配列番号７の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む軽鎖および配列番号６の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む重鎖；配列番号８の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む軽鎖および配列番号１の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む重鎖；配列番号８の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む軽鎖および配列番号２の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む重鎖；配列番号８の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む軽鎖および配列番号３の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む重鎖；配列番号８の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む軽鎖および配列番号４の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む重鎖；配列番号８の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む軽鎖および配列番号５の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む重鎖；または配列番号８の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む軽鎖および配列番号６の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む重鎖を含む。
【０１２５】
一実施形態において、本発明のヒト化抗体は、アミノ酸配列が以下：
ａ）それぞれ、配列番号６０、６４、６７、７０、７３、および７５；
ｂ）それぞれ、配列番号６０、６４、６７、７１、７３、および７５；
ｃ）それぞれ、配列番号６０、６３、６７、７０、７３、および７５；
ｄ）それぞれ、配列番号６０、６３、６７、７１、７３、および７５；
ｅ）それぞれ、配列番号６１、６５、６８、７０、７３、および７５；
ｆ）それぞれ、配列番号６１、６５、６８、７１、７３、および７５；
ｇ）それぞれ、配列番号７７、７９、６７、７０、７３、および７５；
ｈ）それぞれ、配列番号７７、７９、６７、７１、７３、および７５；
ｉ）それぞれ、配列番号７８、８０、６８、７０、７３、および７５；ならびに
ｊ）それぞれ、配列番号７８、８０、６８、７１、７３、および７５
である重鎖（Ｈ）−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、Ｈ−ＣＤＲ３、軽鎖（Ｌ）−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、およびＬ−ＣＤＲ３を含む。
【０１２６】
別の実施形態において、本発明のヒト化抗体は、配列が配列番号６７もしくは６８であるＨ−ＣＤＲ３を含む。特定の実施形態において、本発明のヒト化抗体は、配列がそれぞれ、配列番号６７および７５であるか；またはそれぞれ、配列番号６８および７５であるＨ−ＣＤＲ３およびＬ−ＣＤＲ３を含む。
【０１２７】
別の実施形態において、上記ヒト化抗体は、ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有し、配列番号７０もしくは７１；７３；および７５、またはこれらの組み合わせからなる群より選択される１種以上のＣＤＲを含む軽鎖；ならびに配列番号６０、６１、７７、もしくは７８；６３、６４、６５、７９、もしくは８０；および６７もしくは６８；またはこれらの組み合わせからなる群より選択される１種以上のＣＤＲを含む重鎖を含む。
【０１２８】
別の実施形態において、ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有する上記ヒト化抗体は、配列番号７、８、１１０、もしくは１１２の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む軽鎖、ならびに配列番号１、２、３、４、５、６、もしくは１０８の１種以上のＣＤＲ（例えば、３種全てのＣＤＲ）を含む重鎖を含む。
【０１２９】
本発明はまた、本明細書に記載されるヒト化抗体のヒト化抗体軽鎖に関する。一実施形態において、上記ヒト化抗体軽鎖は、７０もしくは７１；７３；および７５、またはこれらの組み合わせからなる群より選択される１種以上のＣＤＲを含む。例えば、上記ヒト化抗体は、アミノ酸配列が、それぞれ、７０、７３、および７５；またはそれぞれ、７１、７３、および７５であるＬ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２、およびＬ−ＣＤＲ３を有する。
【０１３０】
本発明はまた、本明細書に記載されるヒト化抗体のヒト化抗体重鎖に関する。一実施形態において、上記ヒト化抗体重鎖は、６０、６１、７７、もしくは７８；６３、６４、６５、７９、もしくは８０；および６７もしくは６８；またはこれらの組み合わせからなる群より選択される１種以上のＣＤＲを含む。例えば、上記ヒト化抗体は、アミノ酸配列が以下：
ａ）配列番号６０、６３、および６７；
ｂ）配列番号６０、６４、および６７；
ｃ）配列番号６１、６５、および６８；
ｄ）配列番号７７、７９、および６７；または
ｅ）配列番号７８、８０、および６８
であるＨ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２、およびＨ−ＣＤＲ３を有する。
【０１３１】
一実施形態において、本発明のヒト化抗体は、配列番号１５もしくは１６の可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む軽鎖を含む。関連実施形態において、上記ヒト化抗体は、アミノ酸配列が配列番号７、８、１１０、および１１２のうちの１つを含むか、またはアミノ酸配列が配列番号７、８、１１０、および１１２のうちの１つからなる軽鎖を含む。一実施形態において、上記ヒト化抗体は、アミノ酸配列が、シグナル配列を含まない配列番号７もしくは８を含むか、またはシグナル配列を含まない配列番号７もしくは８からなる軽鎖を含む。
【０１３２】
一実施形態において、本発明のヒト化抗体は、配列番号９〜１４のうちの１つの可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む重鎖を含む。関連実施形態において、上記ヒト化抗体は、アミノ酸配列が、配列番号１〜６および１０８のうちの１つを含むか、または配列番号１〜６および１０８のうちの１つからなる重鎖を含む。一実施形態において、上記ヒト化抗体は、アミノ酸配列が、シグナル配列を含まない、および必要に応じて、Ｃ末端リジンを含まない配列番号１〜６のうちの１つを含むかまたはシグナル配列を含まない、および必要に応じて、Ｃ末端リジンを含まない配列番号１〜６のうちの１つからなる重鎖を含む。一実施形態において、上記ヒト化抗体は、アミノ酸配列が、Ｃ末端リジンを含まない配列番号１０８を含むかまたはＣ末端リジンを含まない配列番号１０８からなる重鎖を含む。
【０１３３】
いくつかの実施形態において、本発明のヒト化抗体は、アミノ酸配列が、以下：
ａ）配列番号９および配列番号１５；
ｂ）配列番号１０および配列番号１５；
ｃ）配列番号１１および配列番号１５；
ｄ）配列番号１２および配列番号１５；
ｅ）配列番号１３および配列番号１５；
ｆ）配列番号１４および配列番号１５；
ｇ）配列番号９および配列番号１６；
ｈ）配列番号１０および配列番号１６；
ｉ）配列番号１１および配列番号１６；
ｊ）配列番号１２および配列番号１６；
ｋ）配列番号１３および配列番号１６；または
ｌ）配列番号１４および配列番号１６
を含むかまたはそれからなるＶＨおよびＶＬを含む。
【０１３４】
一実施形態において、本発明のヒト化抗体は、アミノ酸配列が、以下：
ａ）配列番号１および配列番号７；
ｂ）配列番号２および配列番号７；
ｃ）配列番号３および配列番号７；
ｄ）配列番号４および配列番号７；
ｅ）配列番号５および配列番号７；
ｆ）配列番号６および配列番号７；
ｇ）配列番号１および配列番号８；
ｈ）配列番号２および配列番号８；
ｉ）配列番号３および配列番号８；
ｊ）配列番号４および配列番号８；
ｋ）配列番号５および配列番号８；
ｌ）配列番号６および配列番号８；
ｍ）配列番号１０８および配列番号１１０；ならびに
ｎ）配列番号１０８および配列番号１１２；
を含むかまたはそれからなる軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）であって、
ここで、上記アミノ酸配列が、シグナル配列（存在する場合）を欠いており、配列番号１〜６および配列番号１０８は、必要に応じて、Ｃ末端リジンを欠いている、軽鎖（ＬＣ）および重鎖（ＨＣ）を含む。
【０１３５】
本発明は、本発明の例示されるヒト化重鎖もしくはその抗原結合部分、および例示されるヒト化軽鎖もしくはその抗原結合部分を含む任意の組み合わせを提供し；言い換えると、上記重鎖および軽鎖は、「混合および適合させられ（ｍｉｘｅｄ  ａｎｄ  ｍａｔｃｈｅｄ）」得る。任意のこのような組み合わせが、ヒトＣＣＬ２０への結合性、ならびに化学走性中和活性を保持するようであることは、理解される。これら機能的特性は、本明細書に記載される方法を使用して、容易に試験され得る。実際に、図７は、本発明の例示されるヒト化重鎖および軽鎖のいくつかの組み合わせの中和活性を実証する。
【０１３６】
本発明はまた、本明細書で例示される抗体が結合するのと同じエピトープに結合し、そして／または該抗体と競合するかもしくは交叉競合する、抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分を提供する。これら抗体は、例えば、ヒト化抗体、キメラ抗体、もしくはマウス抗体であり得る。例えば、本発明は、マウス抗ＣＣＬ２０抗体である、３６Ｆ７Ｃ１０、４０−１Ｃ１０Ｂ９、および４２Ｇ５Ｂ１０、またはこれらマウス抗体のヒト化バージョンもしくはキメラバージョンのうちの１つが結合するのと同じエピトープに結合し、そして／または該抗体と競合するかもしくは交叉競合する抗ヒトＣＣＬ２０抗体および部分を提供する。参照抗体が結合するのと同じエピトープに結合するか、または該参照抗体と競合するかもしくは交叉競合する、抗体の能力は、本明細書で記載されるように決定され得る。非限定的例によって、マウス抗体３６Ｆ７Ｃ１０に由来する３種の重鎖ＣＤＲおよび３種の軽鎖ＣＤＲを含む任意の抗体もしくは部分は、マウス抗体３６Ｆ７Ｃ１０が結合するのと同じエピトープに結合し、該マウス抗体と競合し、そして交叉競合すると予測される。このような抗体は、例えば、重鎖が配列番号９〜１１のうちのいずれか１つを含み、軽鎖が配列番号１５もしくは１６を含む抗体を包含し得る。いくつかの実施形態において、このような抗体は、例えば、重鎖が配列番号１２〜１４のうちのいずれか１つを含み、軽鎖が配列番号１５もしくは１６を含む抗体をさらに含み得る。
【０１３７】
所望であれば、例えば、診断目的もしくはアッセイ目的で（例えば、例えば、治療のモニタリングを可能にするように画像化する）、上記ヒト化抗体（もしくはその抗原結合部分）は、検出可能な標識を含み得る。適切な検出可能な標識およびヒト化抗体もしくはその抗原結合部分の標識のための方法は、当該分野で周知である。適切な検出可能な標識としては、例えば、放射性同位体（例えば、インジウム−１１１、テクネチウム−９９ｍもしくはヨウ素−１３１）、陽電子放射標識（例えば、フッ素−１９）、常磁性イオン（例えば、ガドリニウム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ））、エピトープ標識（タグ）、親和性標識（例えば、ビオチン、アビジン）、スピン標識、酵素、蛍光基もしくは化学発光基が挙げられる。標識が使用されない場合、複合体形成（例えば、ヒト化抗体とヒトＣＣＬ２０との間）は、表面プラズモン共鳴、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ、もしくは他の適切な方法によって決定され得る。
【０１３８】
本発明において使用される抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分はまた、例えば、化学反応もしくは遺伝子改変を介して、上記抗体の薬物動態（例えば、半減期）を改善する他の部分（例えば、ペグ化（ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎ）部分）に結合体化され得る。いくつかの実施形態において、本発明において使用される抗ＣＣＬ２０抗体は、適切なサイトカインに、例えば、化学結合体化もしくは遺伝子改変を介して連結され得る（例えば、抗体コード配列にインフレームで上記サイトカインのコード配列を付加し、それによって、抗体：サイトカイン融合タンパク質を作り出す）。
【０１３９】
本発明はまた、本発明のヒト化抗体（もしくはその抗原結合部分）が、別の治療剤（例えば、生物活性化合物（例えば、サイトカイン、超抗原、細胞傷害剤もしくは毒素））に結合させる免疫結合体に関する。例えば、ヒトＣＣＬ２０（もしくはその抗原結合部分）に対して結合特異性を有する上記ヒト化抗体は、生物学的タンパク質、植物もしくは細菌起源の分子（もしくはその誘導体）、インターロイキン−２抗体もしくはジフテリア毒素抗体に結合させることができる。
【０１４０】
本明細書に記載されるように、ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有するマウスモノクローナル抗体が、生成された。本発明のヒト化抗体およびキメラ抗体は、本発明のマウスモノクローナル抗体に由来し得る。すなわち、いくつかの実施形態において、本発明のヒト化抗ＣＣＬ２０抗体およびキメラ抗ＣＣＬ２０抗体は、本発明のマウスモノクローナル抗体から得た配列（例えば、１種以上のＣＤＲ配列（例えば、６種全てのＣＤＲ配列）または１種以上の可変ドメイン（例えば、上記重鎖可変ドメインおよび上記軽鎖可変ドメイン））を含む。
【０１４１】
本明細書で使用される場合、用語「マウスモノクローナル抗体」は、マウス抗体の軽鎖ＣＤＲ（Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＣＤＲ２およびＬ−ＣＤＲ３）および重鎖ＣＤＲ（Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＣＤＲ２およびＨ−ＣＤＲ３）、ならびにマウス起源のフレームワーク領域および定常領域を含む抗体を指す。
【０１４２】
本発明は、本明細書に記載されるマウスモノクローナル抗体、ならびに上記マウスモノクローナル抗体の抗原結合部分、上記マウスモノクローナル抗体の軽鎖、上記マウスモノクローナル抗体の重鎖、ならびにこれら重鎖および軽鎖の部分に関する。特定の実施形態において、上記マウスモノクローナル抗体は、３６Ｆ７Ｃ１０、４０−１Ｃ１０Ｂ９、もしくは４２Ｇ５Ｂ１０である。本発明は、重鎖シグナル配列および軽鎖シグナル配列を欠いているマウスモノクローナル抗体、ならびにグリコシル化されているマウスモノクローナル抗体に関する。本発明はまた、前駆抗体、非グリコシル化抗体、および重鎖および／もしくは軽鎖がシグナル配列を含む抗体に関する。本発明はまた、上記マウス抗体の重鎖、軽鎖、もしくはこれらの部分のうちのいずれかをコードする核酸分子；このような核酸を含むベクターおよび宿主細胞；上記マウスの重鎖もしくは軽鎖またはこれらの部分のうちのいずれかを生成する方法；ならびに上記マウス抗体もしくはその抗原結合部分を使用する方法に関する。
【０１４３】
ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有するマウスモノクローナル抗体もしくはその抗原結合部分の結合機能は、任意の適切な方法を使用して、例えば、マウスモノクローナル抗体もしくは部分と、ヒトＣＣＬ２０（または例えば、ＣＣＬ２０のアミノ酸配列を有するペプチドもしくはヒトＣＣＬ２０を含む固体支持体）との間の複合体の形成をモニターするアッセイを使用して、検出され得る。
【０１４４】
軽鎖、重鎖、ならびに軽鎖および重鎖の部分を含む上記マウス抗体の部分もまた、本明細書において提供される。これら抗体部分は、例えば、ヒト化抗体部分について本明細書に記載される手段によって、得られ得るかもしくは誘導し得る。
【０１４５】
一実施形態において、本発明のマウスモノクローナル抗体は、配列番号４０、４２、もしくは４４を含む軽鎖を含み、配列番号３９、４１、もしくは４３を含む重鎖をさらに含む。特定の実施形態において、上記マウスモノクローナル抗体は、配列番号４０を含む軽鎖および配列番号３９を含む重鎖；配列番号４２を含む軽鎖および配列番号４１を含む重鎖；または配列番号４４を含む軽鎖および配列番号４３を含む重鎖を含む。
【０１４６】
別の実施形態において、本発明はまた、配列番号４０、４２、および４４からなる群より選択される配列に軽鎖可変領域；ならびに配列番号３９、４１、および４３からなる群より選択される配列に重鎖可変領域を含む、ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有するマウスモノクローナル抗体に関する。
【０１４７】
本発明はまた、軽鎖が配列番号４０、４２、もしくは４４に可変領域を含む、マウスモノクローナル抗体に関する。
【０１４８】
本発明はまた、重鎖が配列番号３９、４１、もしくは４３に可変領域を含む、マウスモノクローナル抗体に関する。
【０１４９】
所望であれば、例えば、診断目的もしくはアッセイ目的で（例えば、画像化）、上記マウスモノクローナル抗体もしくはその抗原結合部分は、例えば、ヒト化抗体について本明細書で記載されるように、検出可能な標識を含み得る。本発明のヒト化抗体について本明細書に記載される全ての適切な方法および技術はまた、本発明のマウスモノクローナル抗体について使用され得る。
【０１５０】
本明細書で記載されるように、ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有するキメラ抗体が、生成された。本明細書で使用される場合、用語「キメラ抗体」とは、１つの種に由来する抗体の可変ドメインを含む一方で、上記抗体の定常ドメインは、異なる種に由来する組換えタンパク質を指す。一実施形態において、ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有するキメラ抗体は、マウス抗ヒトＣＣＬ２０モノクローナル抗体に由来する可変ドメインを含む。一実施形態において、ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有するキメラ抗体は、ヒト抗体に由来する定常ドメインを含む。特定の実施形態において、上記キメラ抗体は、マウス抗ヒトＣＣＬ２０モノクローナル抗体に由来する可変ドメインおよびヒト抗体に由来する定常ドメインを含む。
【０１５１】
本発明は、本明細書に記載されるキメラ抗体、ならびに上記キメラ抗体の抗原結合部分、上記キメラ抗体の軽鎖および重鎖、ならびにこれら軽鎖および重鎖の部分に関する。本発明は、上記重鎖および軽鎖のシグナル配列を欠いているキメラ抗体、ならびにグリコシル化されているキメラ抗体に関する。本発明はまた、前駆抗体、非グリコシル化抗体、および重鎖および／もしくは軽鎖がシグナル配列を含む抗体に関する。本発明はまた、上記キメラ抗体の重鎖、軽鎖、もしくはその部分のうちのいずれかをコードする核酸分子；またはこのような核酸を含むベクターおよび宿主細胞；上記キメラ抗体の重鎖もしくは軽鎖またはその部分のうちのこれらいずれかを生成する方法；ならびに上記キメラ抗体を使用する方法に関する。
【０１５２】
ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有するキメラ抗体の結合機能は、任意の適切な方法を使用して、例えば、キメラ抗体と、ヒトＣＣＬ２０（または、例えば、ＣＣＬ２０のアミノ酸配列を有するペプチドもしくはヒトＣＣＬ２０を含む固体支持体）との間の複合体の形成をモニターするアッセイを使用して、検出され得る。
【０１５３】
軽鎖、重鎖、ならびに軽鎖および重鎖の部分を含むキメラ抗体の部分もまた、本明細書において提供される。これら抗体部分は、例えば、ヒト化抗体部分について本明細書に記載される手段によって、得られ得るかもしくは誘導し得る。
【０１５４】
一実施形態において、本発明のキメラ抗体は、配列番号４０の軽鎖可変領域および配列番号３９の重鎖可変領域；配列番号４２の軽鎖可変領域および配列番号４１の重鎖可変領域；または配列番号４４の軽鎖可変領域および配列番号４３の重鎖可変領域を含む。
【０１５５】
本発明はまた、配列番号４０、４２、もしくは４４における軽鎖可変領域からなる群より選択される軽鎖可変領域配列を含み；および配列番号３９、４１、もしくは４３における重鎖可変領域からなる群より選択される重鎖可変領域配列をさらに含む、ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有するキメラ抗体に関する。
【０１５６】
本発明はまた、配列番号４０、４２、もしくは４４における可変領域を含むキメラ軽鎖に関する。
【０１５７】
本発明はまた、配列番号３９、４１、もしくは４３における可変領域を含むキメラ重鎖に関する。
【０１５８】
所望であれば、例えば、診断目的もしくはアッセイ目的で（例えば、画像化）、上記キメラ抗体もしくはその抗原結合部分は、例えば、ヒト化抗体について本明細書に記載されるように、検出可能な標識を含み得る。本発明のヒト化抗体について本明細書に記載される全ての適切な方法および技術はまた、本発明のキメラ抗体のために使用され得る。
【０１５９】
いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＣＬ２０抗体は、完全にヒト抗体である。本明細書で使用される場合、用語「ヒト抗体」とは、上記可変ドメイン配列および定常ドメイン配列が、ヒト配列である任意の抗体を意味する。上記用語は、ヒト遺伝子に由来するが、例えば、可能な免疫原性を低下させる、親和性を増大させる、望ましくない折りたたみを引き起こし得るシステインを除去するなどのように変化させられた配列を有する抗体を包含する。上記用語はまた、非ヒト細胞において組換え生成され、ヒト細胞に代表的でないグリコシル化を付与し得るそのような抗体を包含する。完全にヒト抗体を調製するための方法は、当該分野で公知である。例えば、ヒト抗ＣＣＬ２０抗体は、インビトロ方法（例えば、ファージディスプレイ、リボソームディスプレイ（ＣＡＴ）、酵母ディスプレイなど）を介して同定されてもよいし、ヒトＢ細胞もしくはヒトハイブリドーマ細胞から生成されてもよい。あるいは、ヒト抗体は、多くの非ヒトトランスジェニック動物（彼らのゲノムの中にヒト免疫グロブリン重鎖および軽鎖の遺伝子座のうちのいくらかもしくは全てを含む）のうちのいずれかを、ＣＣＬ２０抗原で免疫することによって生成され得る。いくつかの実施形態において、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン「ミニ遺伝子座」を有する動物（例えば、ＧｅｎＰｈａｒｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  Ｉｎｃ．）である。いくつかの実施形態において、ヒト抗ＣＣＬ２０抗体は、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（登録商標）マウス（Ａｂｇｅｎｉｘ，  Ｉｎｃ．，  Ｆｒｅｍｏｎｔ，  ＣＡ）、ＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）マウス（Ｍｃｄａｒｅｘ，  Ｉｎｃ．）、ＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅ（登録商標）マウス（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｉｎｃ．）、ＡｌｉｖａＭａｂマウス（Ａｂｌｅｘｉｓ，  ＬＬＣ）、ＫＭＴＭマウス（Ｋｉｒｉｎ  Ｐｈａｒｍａ  ＵＳＡ，  Ｉｎｃ．）などを使用して、生成される。
【０１６０】
本発明はまた、本発明のヒト化抗体またはその軽鎖もしくは重鎖、マウスモノクローナル抗体またはその軽鎖もしくは重鎖、キメラ抗体またはその軽鎖もしくは重鎖、あるいは上記のうちのいずれかの抗原結合部分をコードする配列を含む、単離されたおよび／もしくは組換え核酸に関する。いくつかの実施形態において、本発明は、配列番号１７〜３２、５１〜５６、１０９、１１１、および１１３からなる群より選択される核酸配列を提供する。
【０１６１】
いくつかの実施形態において、本発明の核酸分子は、高度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするか、あるいは本明細書に記載される核酸配列または上記提供されるＶＨ配列もしくはＶＬ配列のうちのいずれかのアミノ酸配列をコードする核酸配列のうちの１種以上に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％もしくは９９％同一である核酸配列を包含する。
【０１６２】
本明細書において「単離された」もしくは「精製された」といわれる核酸は、それらの起源となる供給源のゲノムＤＮＡもしくは細胞ＲＮＡの核酸（例えば、それらが細胞中に、もしくは核酸の混合物（例えば、ライブラリー）中に存在する場合）から分離された核酸であり、本明細書に記載の方法もしくは他の適切な方法によって得られる核酸を包含する。いくつかの実施形態において、上記単離された核酸は、本質的に純粋な核酸、化学合成によって生成される核酸、生物学的方法および化学的方法の組み合わせによって生成される核酸、もしくは単離される組換え核酸である（例えば、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １９（９）：２４７１−２４７６  （１９９１）；  Ｌｅｗｉｓ  ａｎｄ  Ｃｒｏｗｅ．  Ｇｅｎｅ  １０１：  ２９７−３０２  （１９９１）を参照のこと）。
【０１６３】
ヌクレオチド配列への言及は、別段特定されなければ、その相補体を包含する。従って、特定の配列を有する核酸への言及は、その相補的配列を有するその相補鎖を包含することが理解されるべきである。用語「ポリヌクレオチド」とは、本明細書で言及される場合、ポリマー状の（おそらく単離された）、少なくとも１０塩基長のヌクレオチド（リボヌクレオチドもしくはデオキシリボヌクレオチドのいずれか）の形態、またはヌクレオチドのいずれかのタイプの改変形態を意味する。上記用語は、一本鎖形態および二本鎖形態を含む。
【０１６４】
本明細書において「組換え体」といわれる核酸は、組換えＤＮＡ方法論によって生成された核酸（人工的組換えの方法に依拠する手順（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）および／もしくは制限酵素を使用するベクターへのクローニング）によって生成される核酸が挙げられる）である。いくつかの実施形態において、上記組換え核酸は、細胞の天然の機構を介して起こる組換え事象から生じるが、所望の組換え事象を可能にしかつ確実にするように設計された細胞へ核酸の導入した後に選択される。
【０１６５】
本発明はまた、より具体的には、ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有するヒト化抗体、マウス抗体もしくはキメラ抗体、または上記抗体の抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列を含む単離されたおよび／もしくは組換え核酸に関する。いくつかの実施形態において、上記抗体は、本発明のマウス抗体、本発明のヒト化抗体（ここでその非ヒト部分（複数可）は、マウス抗ＣＣＬ２０モノクローナル抗体に由来する）；または本発明のキメラ抗体（ここでその非ヒト部分（複数可）は、マウス抗ＣＣＬ２０モノクローナル抗体に由来する）である。
【０１６６】
いくつかの実施形態において、本発明の核酸は、ヒトＣＣＬ２０に対する結合特異性を有するヒト化抗体、ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有するマウス抗体、およびヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有するキメラ抗体を生成するために使用される。例えば、本発明のヒト化抗体、マウス抗体もしくはキメラ抗体をコードする１種の核酸（例えば、ＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ）もしくはＲＮＡ）、または１種以上の核酸は、配列のさらなる操作のために、または適切な宿主細胞において上記コードされる抗体の生成のために、適切な構築物（例えば、組換えベクター）の中に組み込まれ得る。
【０１６７】
ヒトＣＣＬ２０に対する結合特異性を有するヒト化抗体、ヒトＣＣＬ２０に対する結合特異性を有するマウス抗体またはヒトＣＣＬ２０に対する結合特異性を有するキメラ抗体の発現に適した構築物もしくはベクターもまた、提供される。種々のベクターが利用可能であり、これらとしては、宿主細胞において単一コピーもしくは複数コピーにおいて維持されるか、または宿主細胞の染色体（複数可）への組み込まれるベクターが挙げられる。上記構築物もしくはベクターは、適切な宿主細胞へ導入され得、本発明のヒト化抗体、マウス抗体もしくはキメラ抗体を発現する細胞が、生成され得、培養物中で維持され得る。単一のベクターもしくは複数のベクターが、ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有するヒト化抗体、マウス抗体もしくはキメラ抗体の発現のために使用され得る。
【０１６８】
適切な発現ベクター（例えば、哺乳動物細胞発現ベクター）はまた、多くの成分（以下のうちの１種以上を含むが、これらに限定されない：複製起点；選択マーカー遺伝子；１種以上の発現制御エレメント（例えば、転写制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、ターミネーター）、１種以上の翻訳シグナル）；および／または膜標的化もしくは分泌のためのシグナル配列もしくはリーダー配列（「シグナルペプチド」をコードする））を含み得る。構築物もしくはベクターにおいて、シグナル配列は、上記構築物もしくはベクター、または他の供給源によって提供され得る。例えば、転写シグナルおよび／もしくは翻訳シグナルは、発現を指向するために使用され得る。
【０１６９】
いくつかの実施形態において、プロモーターは、適切な宿主細胞において本発明の抗体もしくは抗体鎖の発現のために提供される。いくつかの実施形態において、上記プロモーターは、構成性である。いくつかの実施形態において、上記プロモーターは誘導性である。上記プロモーターは、抗体もしくは抗体鎖、または上記抗体もしくは抗体鎖の抗原結合部分をコードする核酸に作動可能に連結され得、その結果、上記プロモーターは、上記コードされるポリペプチドの発現を誘導する。原核生物宿主のための種々の適切なプロモーター（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉのためのｌａｃ、ｔａｃ、Ｔ３、Ｔ７プロモーター）および真核生物宿主のための種々の適切なプロモーター（例えば、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ（ＡＤＨ１）、ＳＶ４０、ＣＭＶ）が、利用可能である。当業者は、本発明の抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分を発現するための適切なプロモーターを選択し得る。
【０１７０】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくは抗体鎖をコードするベクターは、該ベクターを有する宿主の選択のための選択マーカーを含む。いくつかの実施形態において、上記選択マーカーは、原核生物細胞（例えば、β−ラクタマーゼ遺伝子（アンピシリン耐性）、Ｔｅｔ遺伝子（テトラサイクリン耐性）など）および真核生物細胞（例えば、ネオマイシン（Ｇ４１８もしくはジェネティシン）耐性遺伝子、ｇｐｔ（ミコフェノール酸）耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、もしくはハイグロマイシン耐性遺伝子）において使用され得る抗生物質耐性もしくは薬物耐性を付与する生成物をコードする遺伝子である。いくつかの実施形態において、上記選択マーカーは、種々の宿主においてメトトレキサートでの選択を可能にするジヒドロ葉酸レダクタ−ゼであり、いくつかの実施形態において、上記選択マーカーは、上記宿主の、例えば、酵母において使用するための栄養要求性マーカーをコードする遺伝子（例えば、ＬＥＵ２、ＵＲＡ３、ＨＩＳ３）である。いくつかの実施形態において、上記ベクターは、ウイルスベクター（例えば、バキュロウイルス）もしくがファージベクターである。一実施形態において、上記ベクターは、上記宿主細胞のゲノムへ組み込まれ得る（例えば、レトロウイルスベクター）。いくつかの実施形態において、上記ベクターは、複製可能なベクターであり、複製起点を含む。
【０１７１】
本発明は、従って、本発明のヒト化抗体、ヒト化軽鎖、ヒト化重鎖、マウス抗体、マウス抗体軽鎖、マウス抗体重鎖、キメラ抗体、キメラ軽鎖、もしくはキメラ重鎖をコードする単離された核酸分子に関する。本発明はまた、これら抗体もしくはこれら抗体の鎖のうちのいずれかの抗原結合部分をコードする単離された核酸分子に関する。本発明の核酸によってコードされるポリペプチド配列は、上記に記載され、以下の実施例において記載される。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、本発明の核酸もしくはベクターは、本発明の重鎖（もしくはその抗原結合部分）または軽鎖（もしくはその抗原結合部分）をコードする。上記重鎖コード核酸および上記軽鎖コード核酸の両方、または上記重鎖および上記軽鎖の抗原結合部分をコードする核酸を含む宿主細胞は、重鎖および軽鎖を含む抗体（または該抗体の抗原結合部分）を作製するために使用され得る。上記重鎖コード核酸および上記軽鎖コード核酸は、別個の発現ベクターに配置され得る。それらはまた、同じかまたは異なる発現制御下にある単一の発現ベクターに配置され得る。例えば、米国特許第６，３３１，４１５号および同第７，６６２，６２３号を参照のこと。
【０１７３】
本発明の別の局面は、本発明の抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分を作製する方法に関する。上記抗体もしくは部分は、例えば、適切な宿主細胞における上記抗体もしくは部分をコードする１種以上の組換え核酸の発現によって生成され得る。上記宿主細胞は、任意の適切な方法を使用して生成され得る。例えば、本明細書に記載される１種以上の発現構築物は、適切な宿主細胞に導入され得、得られた細胞は、上記構築物（複数可）もしくはベクター（複数可）の発現に適した条件下で維持され得る。いくつかの実施形態において、上記得られた細胞は、培養物、動物、もしくは植物中で維持される。適切な宿主細胞は、原核生物細胞（細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、ＤＨ５αＴＭ株（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ））、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓおよび／もしくは他の適切な細菌）が挙げられる）；真核生物細胞（例えば、真菌細胞もしくは酵母細胞（例えば、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｐ．、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ））、または他のより下等な真核生物細胞、およびより高等な真核生物の細胞（例えば、以下に由来するもの：昆虫（例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  Ｓ２細胞、Ｓｆ９昆虫細胞（ＷＯ  ９４／２６０８７  （Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ）、ＴＮ５Ｂ１−４  （ＨＩＧＨ  ５）昆虫細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））、哺乳動物（例えば、ＣＯＳ細胞（例えば、ＣＯＳ−１（ＡＴＣＣアクセッション番号ＣＲＬ−１６５０）およびＣＯＳ−７（ＡＴＣＣアクセッション番号ＣＲＬ−１６５１））、ＣＨＯ（例えば、ＡＴＣＣアクセッション番号ＣＲＬ−９０９６）、ＣＨＯ  ＤＧ４４（Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｃ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７７（７）：４２１６−４２２０  （１９８０））、２９３（ＡＴＣＣアクセッション番号ＣＲＬ−１５７３）、ＨｅＬａ（ＡＴＣＣアクセッション番号ＣＣＬ−２）、ＣＶ１（ＡＴＣＣアクセッション番号ＣＣＬ−７０）、ＷＯＰ（Ｄａｉｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｖｉｒｏｌ．  ５４：７３９−７４９  （１９８５））、３Ｔ３、２９３Ｔ（Ｐｅａｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９０：８３９２−８３９６  （１９９３））、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＨｕＴ  ７８細胞など））、または植物（例えば、タバコ、ウキクサ科（ｌｅｍｎａ）（ウキクサ科）、および藻類））（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ，  ｅｄｓ．  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．  （１９９３）を参照のこと）。いくつかの実施形態において、上記宿主細胞は、多細胞生物（例えば、植物もしくは動物）の一部ではない。特定の実施形態において、上記宿主細胞は、単離された宿主細胞であるか、または細胞培養物の一部である。
【０１７４】
本発明はまた、本発明の核酸もしくはベクターを含む細胞に関する。いくつかの実施形態において、上記ベクターは、発現ベクターである。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体の重鎖および軽鎖もしくはその抗原結合部分、マウス抗体の重鎖および軽鎖もしくはその抗原結合部分、またはキメラ抗体の重鎖および軽鎖もしくはその抗原結合部分、ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有する上記抗体もしくは部分をコードする１種以上の核酸、あるいはこのような核酸（複数可）を含む１種以上の構築物は、選択した適切な宿主細胞に適した方法によって、該宿主細胞へと導入され得る。いくつかの実施形態において、導入方法は、例えば、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーション、もしくは感染である。いくつかの実施形態において、上記核酸（複数可）は、１種以上の発現制御エレメントに作動可能に連結される。特定の実施形態において、上記核酸（複数可）は、ベクター中に、上記細胞におけるプロセスによって作り出された構築物中に、または上記宿主細胞ゲノムに組み込まれて存在する。宿主細胞は、発現に適した条件下で維持され得る。いくつかの実施形態において、これら条件は、誘導因子、もしくは適切な媒体（例えば、適切な塩、増殖因子、抗生物質、栄養補助物質などが補充されている）の存在を含み、それによって上記コードされるポリペプチド（複数可）が生成される。これらプロセスは、トランスジェニック動物もしくは植物（例えば、タバコ）の宿主細胞（例えば、乳腺細胞）における発現を包含する（例えば、ＷＯ  ９２／０３９１８を参照のこと）。いくつかの実施形態において、上記抗体もしくは部分は、上記宿主細胞、培養培地、もしくは乳汁から単離される。
【０１７５】
本発明はまた、本発明の抗体もしくは部分（例えば、ヒト化抗体もしくは部分）が、融合タンパク質にとって、Ｎ末端位置、Ｃ末端位置もしくは内部で別の部分（例えば、天然において見いだされる場合の抗体には存在しない部分）へと連結される、融合タンパク質に関する。いくつかの実施形態において、上記融合タンパク質は、適切な発現ベクター（例えば、ｐＥＴベクター（例えば、ｐＥＴ−１５ｂ，Ｎｏｖａｇｅｎ）、ファージベクター（例えば、ｐＣＡＮＴＡＢ  ５  Ｅ，  Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、もしくは他のベクター（例えば、ｐＲ１Ｔ２Ｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ融合ベクター，  Ｐｈａｒｍａｃｉａ）への、抗体配列（複数可）をコードする核酸の挿入によって生成され得る。得られた構築物は、発現に適した宿主細胞へと導入され得る。いくつかの実施形態において、上記発現される融合タンパク質は、適切なアフィニティーマトリクスによって、細胞溶解物から単離もしくは精製される（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  （Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｌ  ａｌ．，  Ｅｄｓ．，  Ｖｏｌ．  ２，  Ｓｕｐｐｌ．  ２６，  ｐｐ．  １６．４．１−１６．７．８  （１９９１））。
【０１７６】
本発明は、本明細書で提供される抗体もしくは部分、あるいはその重鎖および／または軽鎖（例えば、本発明のヒト化抗体、ヒト化軽鎖もしくはヒト化重鎖、マウス抗体、マウス軽鎖もしくはマウス重鎖、キメラ抗体、またはキメラ重鎖もしくはキメラ軽鎖）をコードする組換え核酸（複数可）を含む宿主細胞に関する。本発明はまた、上記抗体もしくはその鎖の抗原結合部分をコードする組換え核酸（複数可）を含む宿主細胞に関する。いくつかの実施形態において、上記宿主細胞は、本明細書で言及されるように、本発明の組換えベクターを含む。いくつかの実施形態において、上記組換えベクターは、発現ベクターである。特定の実施形態において、上記組換えベクターは、哺乳動物細胞発現ベクターである。
【０１７７】
本発明はまた、本発明の抗体もしくは部分、またはその重鎖もしくは軽鎖を調製する方法に関する。一実施形態において、上記方法は、上記抗体もしくは部分またはその重鎖および／もしくは軽鎖の発現に適した条件下で、本明細書に記載されるように、本発明の宿主細胞を維持する工程を包含する。いくつかの実施形態において、上記宿主細胞は、本発明の抗体もしくは部分、またはその重鎖および／もしくは軽鎖をコードする１種以上の単離された核酸を含む。いくつかの実施形態において、上記宿主細胞は、基材上でもしくは懸濁物中で培養される。いくつかの実施形態において、上記方法は、上記抗体もしくは抗体鎖を精製もしくは単離する工程をさらに包含する。
【０１７８】
本発明はさらに、ファージディスプレイを介して抗体もしくはその抗原結合部分を調製する方法に関する。いくつかの実施形態において、ＣＣＬ２０抗原に対してナイーブな抗体ファージディスプレイライブラリーが、パニングされる。いくつかの実施形態において、誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）を介して抗体を調製する方法が使用される（例えば、米国特許公開ＵＳ  ２００６−０２５１６５８  Ａ１を参照のこと）。特定の実施形態において、例えば、既知の抗ＣＣＬ２０抗体の固定された重鎖（および／もしくは軽鎖）ＣＤＲ３領域の周りに構築されるカスタムライブラリーが、作製される。上記重鎖および軽鎖のＣＤＲ１領域およびＣＤＲ２領域は、ナイーブなレパートリーに由来し得る（Ｏｓｂｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６．６１−６８  （２００５））。一実施形態において、抗ＣＣＬ２０  ｓｃＦｖは、所望の結合特性を有するマウス−ヒトキメラ抗体を得るために使用されるｓｃＦｖナイーブ抗体ライブラリーから生成される。これらライブラリーは、所望の結合特性を有する抗体についてスクリーニングされ得る。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖファージライブラリーが使用される。特定の実施形態において、ヒトＣＣＬ２０を認識するｓｃＦｖは、Ｖａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  １４：３０９−３１４  （１９９６）に本質的に記載されるように、組換えヒトＣＣＬ２０に対して反復される一連の選択サイクルの後に、ｓｃＦｖ誘導選択ライブラリーから単離される。簡潔には、上記ライブラリーとのインキュベーション後、固定された抗原（これは、常磁性ビーズと予め結合されている）、および結合したファージが、磁気分離によって回収され得るその一方で、非結合ファージが洗い流される。次いで、結合したファージは、Ｖａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６；  前出）に記載されるように、および上記反復される選択プロセスによって回収され得る。
【０１７９】
特定の実施形態において、単鎖様式で、ナイーブなヒト軽鎖可変領域のレパートリーへと融合される、マウス抗ＣＣＬ２０抗体の重鎖の可変ドメイン全体からなるライブラリーが構築される。選択後、上記マウス重鎖可変領域を補う上記ヒト軽鎖可変領域が、同定される。次いで、上記のように選択されたヒト軽鎖可変領域のレパートリーからなるラブラリーが構築され、これは、単鎖様式で、ナイーブなヒトＣＤＲ１およびＣＤＲ２領域、ならびに上記マウス抗ＣＣＬ２０抗体重鎖可変ドメインに由来する固定されたＣＤＲ３領域からなるキメラ重鎖可変領域へと融合される。ＣＣＬ２０結合物質（ｂｉｎｄｅｒ）の選択後、最良の結合クローンを選択する。上記６個のＣＤＲ領域のうちの５個は、ヒト起源であり得る一方で、上記重鎖可変領域のＣＤＲ３は、上記マウス重鎖可変ドメインの元のＣＤＲ３と同一であり得る。
【０１８０】
いくつかの実施形態において、選択は、製造業者の推奨に従って、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ  Ｍ−２７０アミン（Ｄｙｎａｌ）に結合されたＣＣＬ２０を使用して行われる。いくつかの実施形態において、ビオチン化ＣＣＬ２０を使用する選択は、製造業者の指示（ＥＺ  ｌｉｎｋ  ＮＨＳ  ＬＣ  Ｂｉｏｔｉｎ，  Ｐｉｅｒｃｅ）に従って、一級アミン特異的試薬であるスクシンイミジル−６−（ビオチンアミド）ヘキサノエートを使用して調製し得る。
【０１８１】
いくつかの実施形態において、選択からの生成物（ｏｕｔｐｕｔ）は、ＣＣＬ２０への結合について競合する、細胞周辺（ｐｅｒｉｐｌａｓｍｉｃ）調製物に存在するｓｃＦｖの能力を測定する競合アッセイに基づく、ハイスループットスクリーニングにおいて細胞周辺調製物として試験される。
【０１８２】
ハイスループットスクリーニングにおいて競合し得るサンプルは、Ｖａｕｇｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６；前出）およびＯｓｂｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．  （２００５；前出）に記載されるように、ＤＮＡ配列決定に供され得る。次いで、クローンは、ｓｃＦｖもしくはＩｇＧとして発現および精製され得、ＣＣＬ２０に結合するか、ＣＣＬ２０を中和するか、またはこれらの組み合わせのそれらの能力について、例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）アッセイおよび補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）アッセイなどのアッセイを使用して、評価され得る。精製されたｓｃＦｖ調製物は、次いで、ＷＯ  ０１／６６７５４の実施例３に記載されるように調製され得る。精製されるｓｃＦｖ調製物のタンパク質濃度を、ＢＣＡ法（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して決定した。類似のアプローチを使用して、固定された全長抗体重鎖もしくは軽鎖、または重鎖もしくは軽鎖の可変ドメインの至適パートナー（反対鎖）についてスクリーニングし得る。
【０１８３】
別の実施形態において、抗ヒトＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分は、ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９３／０６２１３（本明細書に参考として援用される）に記載されるエピトープインプリンティング法を使用して、本明細書に記載されるように、ＣＣＬ２０に対して類似の結合活性を有する重鎖配列および軽鎖配列を選択するために最初に使用される。特定の実施形態において、この方法において使用される抗体ライブラリーは、ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９２／０１０４７、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４  （１９９０）；およびＧｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ，  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １２：７２５−７３４  （１９９３）（全て本明細書に参考として援用される）に記載されるように、調製されかつスクリーニングされるｓｃＦｖライブラリーである。特定の実施形態において、上記ｓｃＦｖ抗体ライブラリーは、抗原としてヒトＣＣＬ２０を使用してスクリーニングされる。
【０１８４】
最初のＶＬドメインおよびＶＨドメインがいったん選択されると、「混合および適合（ｍｉｘ  ａｎｄ  ｍａｔｃｈ）」実験が行われ得、ここで上記最初に選択されたＶＬセグメントおよびＶＨセグメントの異なる対が、ＣＣＬ２０結合についてスクリーニングされて、好ましいＶＬ／ＶＨ対の組み合わせが選択される。さらに、上記抗体の質をさらに改善するために、好ましいＶＬ／ＶＨ対（複数可）の上記ＶＬセグメントおよびＶＨセグメントが、天然の免疫応答の間に抗体の親和性成熟を担うインビボ体細胞変異プロセスに類似のプロセスにおいて、無作為に変異を受け得る。いくつかの実施形態において、上記ランダム変異は、ＶＨおよび／もしくはＶＬのＣＤＲ３領域内で起こる。特定の実施形態において、このインビトロ親和性成熟は、例えば、ＶＨドメインおよびＶＬドメインを、それぞれ、上記ＶＨ  ＣＤＲ３もしくはＶＬのＣＤＲ３に相補的なＰＣＲプライマーを使用して増幅することによって達成され、ここで上記プライマーは、得られるＰＣＲ生成物が、ＶＨセグメントおよびＶＬセグメント（ランダム変異が、ＶＨおよび／もしくはＶＬ  ＣＤＲ３領域の中に導入される）をコードするように、特定の位置において４種のヌクレオチド塩基のランダム混合物で「スパイク」された。これら無作為に変異したＶＨセグメントおよびＶＬセグメントは、ＣＣＬ２０への結合に対して再スクリーニングされ得る。
【０１８５】
組換え抗体ディスプレイライブラリーから本発明の抗ＣＣＬ２０抗体をスクリーニングおよび単離した後に、上記選択された抗体をコードする核酸は、ディスプレイパッケージから（例えば、ファージゲノムから）回収され得、標準的な組換えＤＮＡ技術によって他の発現ベクターへサブクローニングされ得る。いくつかの実施形態において、上記核酸は、本明細書に記載されるように、本発明の他の抗体形態を作り出すようにさらに操作される。特定の実施形態において、コンビナトリアルライブラリーのスクリーニングによって単離された組換えヒト抗体を発現するために、上記抗体をコードするＤＮＡは、本明細書に記載されるように、組換え発現ベクターにクローニングされ、哺乳動物宿主細胞へと導入される。
【０１８６】
特定の実施形態において、本発明は、ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを生成する方法であって、ＣＣＬ２０トランスジェニックマウスのリンパ球を、上記ヒトＣＣＬ２０トランスジェニックマウスと同じ系統（例えば、ＣＤ１）を有する非トランスジェニックマウスに投与し、それによって、免疫された非トランスジェニックマウスを生成する工程を包含する方法を提供する。上記免疫した非トランスジェニックマウスの脾細胞を、不死化細胞と接触させ、それによって、融合細胞を生成し、該融合細胞を、ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマが生成される条件下で維持し、それによって、ヒトＣＣＬ２０に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを生成する。
【０１８７】
本発明はまた、本発明の抗ＣＣＬ２０抗体およびその抗原結合部分が変異を受けた形態を調製する方法を提供する。いくつかの実施形態において、上記抗体もしくは部分は、上記重鎖および／もしくは軽鎖の可変ドメインに変異を受ける。特定の実施形態において、上記変異は、上記抗体もしくは部分の１種以上の結合特性を変化させる。特定の実施形態において、変異は、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくは部分のＫＤを増大もしくは低下させるか、ｋｏｆｆを増大もしくは低下させるか、または上記抗体もしくは部分の結合特異性を変化させるように、上記ＣＤＲ領域のうちの１種以上においてなされる。部位特異的変異誘発の技術は、当該分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．およびＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（前出）を参照のこと。別の実施形態において、１つ以上の変異が、本発明のモノクローナル抗体における生殖細胞系列と比較して変化していることが公知であるアミノ酸残基においてなされる。特定の実施形態において、上記変異は、可変ドメインのＣＤＲ領域もしくはフレームワーク領域において、または定常ドメインにおいてなされる。特定の実施形態において、上記変異は、可変ドメインにおいてなされる。いくつかの実施形態において、１つ以上の変異は、本発明の抗体もしくは部分の可変ドメインのＣＤＲ領域もしくはフレームワーク領域における生殖細胞系列と比較して変化していることが公知のアミノ酸残基においてなされる。
【０１８８】
別の実施形態において、上記フレームワーク領域は、得られたフレームワーク領域（複数可）が、対応する生殖細胞系列遺伝子のアミノ酸配列を有するように変異を受ける。特定の実施形態において、１つ以上の変異は、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくは部分の半減期を増大させるために、フレームワーク領域もしくは定常ドメインにおいてなされる。例えば、ＰＣＴ公開  ＷＯ  ００／０９５６０を参照のこと。特定の実施形態において、フレームワーク領域もしくは定常ドメインにおける変異は、上記抗体の免疫原性を変化させるために、または別の分子への共有結合もしくは非共有結合のための部位を提供するために、なされる。本発明によれば、単一の抗体もしくは部分は、上記可変ドメインのＣＤＲ領域もしくはフレームワーク領域のうちのいずれか１種以上において、または上記定常ドメインにおいて変異を有し得る。
【０１８９】
本発明の抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分はまた、目的の上記抗体重鎖配列および軽鎖配列に関してトランスジェニックである哺乳動物もしくは植物の生成、ならびにそこからの回収可能な形態での上記抗体の生成を介してトランスジェニックに（ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃａｌｌｙ）生成され得る。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくは部分は、ヤギ、ウシ、もしくは他の哺乳動物の乳汁中に生成され、そこから回収される。例えば、米国特許第５，８２７，６９０号、同第５，７５６．６８７号、同第５，７５０，１７２号、および同第５，７４１，９５７号を参照のこと。いくつかの実施形態において、ヒト抗体遺伝子座を含む非ヒトトランスジェニック動物は、上記で記載されるように、ヒトＣＣＬ２０もしくはその免疫原性部分で免疫される。植物において抗体を作製するための方法は、例えば、米国特許第６，０４６，０３７号および同第５，９５９，１７７号に記載される。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、非ヒトトランスジェニック動物もしくは植物は、本発明の抗ＣＣＬ２０抗体もしくは部分をコードする１種以上の核酸分子を、標準的なトランスジェニック技術によって、上記動物もしくは植物に導入することによって生成される。Ｈｏｇａｎおよび米国特許第６，４１７，４２９号（前出）を参照のこと。特定の実施形態において、上記トランスジェニック動物を作製するために使用されるトランスジェニック細胞は、胚性幹細胞もしくは体細胞もしくは受精卵であり得る。いくつかの実施形態において、上記非ヒトトランスジェニック動物もしくは植物は、キメラヘテロ接合体、非キメラヘテロ接合体、もしくは非キメラホモ接合体である。例えば、Ｈｏｇａｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ２ｎｄ  ｅｄ．，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ  （１９９９）；  Ｊａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ，  Ｍｏｕｓｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｓ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ  （２０００）；およびＰｉｎｋｅｒｔ，  Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  Ａｎｉｍａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  （１９９９）を参照のこと。いくつかの実施形態において、上記非ヒトトランスジェニック動物もしくは植物は、目的の重鎖および／もしくは軽鎖をコードする標的化構築物による標的化された破壊および置き換えを有する。特定の実施形態において、上記トランスジェニック動物もしくは植物は、ヒトＣＣＬ２０に対して特異的に結合する重鎖および軽鎖をコードする核酸分子を含み、これを発現する。上記抗ＣＣＬ２０抗体もしくは部分は、任意の非ヒトトランスジェニック動物もしくは植物に作製され得る。特定の実施形態において、上記非ヒト動物は、マウス、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシもしくはウマである。上記非ヒトトランスジェニック動物は、血液、乳汁、尿、唾液、涙液、粘液および他の体液に上記コードされるポリペプチドを発現し得る。
【０１９１】
本発明の抗体およびその抗原結合部分は、例えば、ＣＣＲ６＋細胞（例えば、未熟樹状細胞（ＤＣ）、エフェクター／記憶Ｔ細胞、およびＢ細胞）のＣＣＬ２０誘導性化学誘引を中和することにおいて有用である。従って、上記抗体および部分は、種々の疾患および状態（例えば、炎症、自己免疫疾患、およびがん）を処置することにおいて有用であり得る。本発明の抗体もしくは抗原結合部分で処置され得る疾患および状態の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：グレーブス病、白斑、甲状線機能亢進症、関節リウマチ、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、クローン病、炎症性腸疾患、Ｂ細胞悪性腫瘍、乳腺癌、慢性肝炎、接触性皮膚炎、神経膠芽腫、肝細胞癌、子宮頸部のヒトパピローマウイルス感染、菌状息肉腫、膵腺癌、歯周病、甲状腺乳頭状癌、掌蹠膿疱症状、点状丘疹性発疹と関連する状態、表皮水疱症、円形脱毛症、多発性硬化症、多発性筋炎、皮膚筋炎、ベーチェット病、急性汎発性発疹性膿疱症、脈管炎、若年性特発性関節炎、サルコイドーシス、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、腎臓同種移植片拒絶、移植片対宿主病、肝臓同種移植片拒絶、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、糸球体腎炎、呼吸器系合胞体ウイルス感染、多発性骨髄腫、およびランゲルハンス細胞組織球症。いくつかの実施形態において、本発明は、任意のＣＣＲ６関連状態を処置するための方法を提供する。
【０１９２】
よって、本発明は、有効量の、本発明の抗体もしくは部分を、それを必要とする被験体に投与することによって、炎症、自己免疫疾患、もしくはがんを処置するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、上記被験体は、自己免疫疾患、がん、および／もしくは炎症を有するか、または自己免疫疾患、がん、および／もしくは炎症を有するリスクがあるヒト患者である。いくつかの実施形態において、上記抗体もしくは部分は、炎症、自己免疫疾患、もしくはがんの発症もしくは再発を防止するために、予防的に投与される。
【０１９３】
本発明の抗体およびその抗原結合部分は、個体（例えば、ヒト）に、単独で、もしくは組み合わせ治療において別の作用物質（ａｇｅｎｔ）とともに投与され得る。上記抗体もしくは部分は、事前に、さらなる作用物質との混合物として、該さらなる作用物質と別個であるが同時に、または該さらなる作用物質の投与の後に、投与され得る。いくつかの実施形態において、上記さらなる作用物質は、以下を含む群より選択されるが、これらに限定されない：免疫刺激性サイトカインのインヒビター（例えば、抗ＴＮＦ−α  ＭＡｂ）、免疫細胞除去因子（例えば、抗ＣＤ２０  ＭＡｂ）、アクセサリー分子のブロッカー（例えば、アバタセプト）、リウマチ性疾患の疾患改変因子（例えば、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、メトトレキサート、レチノイン酸、およびビタミンＤ３アナログ）、ならびに免疫抑制剤（例えば、カルシニューリンインヒビター）。いくつかの実施形態において、上記さらなる作用物質は、以下を含む群より選択されるが、これらに限定されない：ステロイド剤、免疫調節剤、ソマトスタチン作用物質（ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｃ  ａｇｅｎｔ）、従来の免疫治療剤、サイトカインもしくはサイトカインアンタゴニスト、および／または増殖因子もしくは増殖因子アンタゴニスト。いくつかの実施形態において、抗ＣＣＬ２０抗体治療は、標準医療でのがん処置（例えば、化学療法、外科手術、もしくは放射線療法）とともに、または別の標的化された治療（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体治療）とともに、使用され得る。いくつかの実施形態において、抗ＣＣＬ２０抗体治療は、予防的レジメンとともに使用され得る。一実施形態において、合成ペプチド摸倣物は、本発明の抗体とともに投与され得る。別の実施形態において、ホルモン療法は、本発明の抗体もしくは部分とともに施され得る。
【０１９４】
一実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分は、単独で、もしくは抗炎症剤と組み合わせて投与される。本発明の抗体とともに投与され得る抗炎症剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：コルチコステロイド（例えば、ベタメタゾン、ブデソニド、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、およびトリアムシノロン）、非ステロイド系抗炎症薬（例えば、バルサラジド、セレコキシブ、ジクロフェナク、ジフルニサル、エトドラク、フェノプロフェン、フロクタフェニン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、メクロフェナメート、メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン、オルサラジン、オキサプロジン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、サルサレート、スリンダク、テノキシカム、チアプロフェン酸、およびトルメチン）、ならびにアセトアミノフェン、抗ヒスタミン剤、アミノアリールカルボン酸誘導体、アリール酢酸誘導体、アリール酪酸誘導体、アリールカルボン酸、アリールプロピオン酸誘導体、ピラゾール、ピラゾロン、サリチル酸誘導体（例えば、スルファサラジン（ｓｕｌｆａｓａｌａｚｏｎｅ）およびメサラミン）、チアジンカルボキサミド、ε−アセトアミドカプロン酸、Ｓ−アデノシルメチオニン、３−アミノ−４−ヒドロキシ酪酸、アミキセトリン（ａｍｉｘｅｔｒｉｎｅ）、ベンダザック、ベンジダミン、ブコローム、ジフェンピラミド、ジタゾール、エモルファゾン、グアイアズレン、ナブメトン、ニメスリド、オルゴテイン、オキサセプロール、パラニリン、ペリソキサール、ピホキシム、プロクアゾン、プロキサゾール、およびテニダップ。
【０１９５】
本発明の抗体と組み合わせて投与され得る従来の非特異的免疫抑制剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ステロイド、シクロスポリン、シクロスポリンアナログ、シクロホスファミド、メチルプレドニゾン、プレドニゾン、アザチオプリン、ＦＫ−５０６、１５−デオキシスペルグアリン、ナタリズマブ、およびＴ細胞応答機能を抑制することによって作用する他の免疫抑制剤。
【０１９６】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分は、免疫抑制剤と組み合わせて投与される。本発明の抗体とともに投与され得る免疫抑制調製物としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＯＲＴＨＯＣＬＯＮＥＴＭ（ＯＫＴ３）、ＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥＴＭ／ＮＥＯＲＡＬＴＭ／ＳＡＮＧＤＹＡＴＭ（シクロスポリン）、ＰＲＯＧＲＡＦＴＭ（タクロリムス）、ＣＥＬＬＣＥＰＴＴＭ（ミコフェノレート）、アザチオプリン、グルココルチコステロイド類（ｇｌｕｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄｓ）、ＡＶＯＮＥＸＴＭ（インターフェロン−β  １Ａ）、およびＲＡＰＡＭＵＮＥＴＭ（シロリムス）。一実施形態において、免疫抑制剤は、器官もしくは骨髄の移植の拒絶を防止するために使用され得る。
【０１９７】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分は、化学療法剤と組み合わせて投与される。本発明の抗体とともに投与され得る化学療法剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：抗生物質誘導体（例えば、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、およびダクチノマイシン）；抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン）；代謝拮抗物質（例えば、フルオロウラシル、５−ＦＵ、フロクスウリジン、インターフェロンα−２ｂ、グルタミン酸、プリカマイシン、メルカプトプリン、および６−チオグアニン）；細胞傷害剤（例えば、カルムスチン、ＢＣＮＵ、ロムスチン、ＣＣＮＵ、シトシンアラビノシド、シクロホスファミド、エストラムスチン、ヒドロキシウレア、プロカルバジン、マイトマイシン、ブスルファン、シスプラチン、および硫酸ビンクリスチン）；ホルモン（例えば、メドロキシプロゲステロン、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エチニルエストラジオール、エストラジオール、エピネフリン、酢酸メゲストロール、メチルテストステロン、ジエチルスチルベストロールジホスフェート、クロロトリアニセン、およびテストラクトン）；ナイトロジェンマスタード誘導体（例えば、メルファラン（ｍｅｐｈａｌｅｎ）、クロラムブシル（ｃｈｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）およびチオテパ）；ステロイドおよび組み合わせ（例えば、ベタメタゾンリン酸ナトリウム）；および他（例えば、ダカルバジン（ｄｉｃａｒｂａｚｉｎｅ）、アスパラギナーゼ、ミトタン、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンブラスチン、リツキシマブ、およびエトポシド）。
【０１９８】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分は、ＴＮＦアンタゴニストと組み合わせて投与される。本発明の抗体もしくは抗原結合部分とともに投与され得るＴＮＦアンタゴニストは、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥＴＭ）、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡＴＭ）、セルトリズマブペゴール（ＣＩＭＺＩＡＴＭ）、ゴリムマブ（ＳＩＭＰＯＮＩＴＭ）、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬＴＭ）、キサンチン誘導体（例えば、ペントキシフィリン）およびブプロピオン（ＷＥＬＬＢＵＲＴＩＮＴＭ、ＺＹＢＡＮＴＭ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９９】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分は、単独で、もしくは１種以上の静脈内免疫グロブリン調製物と組み合わせて投与される。本発明の抗体もしくは部分とともに投与され得る静脈内免疫グロブリン調製物としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＧＡＭＭＡＲＴＭ、ＩＶＥＥＧＡＭＴＭ、ＳＡＮＤＯＧＬＯＢＵＬＩＮＴＭ、ＧＡＭＭＡＧＡＲＤ  Ｓ／ＤＴＭ、およびＧＡＭＩＭＵＮＥＴＭ。いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分は、移植治療（例えば、骨髄移植）において静脈内免疫グロブリン調製物と組み合わせて投与される。
【０２００】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分は、サイトカインもしくはサイトカインアンタゴニストと組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分は、任意のサイトカインもしくはサイトカインアンタゴニストとともに投与され得、これらとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＩＬ２、ＩＬ３、１Ｉ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１５、抗ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αまたはこれらの任意のアンタゴニスト。いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分は、任意のインターロイキンもしくはインターロイキンアンタゴニストとともに投与され得、これらとしては以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、およびＩＬ−２１またはこれらの任意のアンタゴニスト。
【０２０１】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分は、１種以上のケモカインもしくはケモカインアンタゴニストと組み合わせて投与される。具体的実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分は、以下からなる群より選択されるα（ＣｘＣ）ケモカイン：γ−インターフェロン誘導性タンパク質−１０（γＩＰ−１０）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、血小板因子−４（ＰＦ４）、好中球活性化タンパク質（ＮＡＰ−２）、ＧＲＯ−α、ＧＲＯ−β、ＧＲＯ−γ、好中球活性化ペプチド（ＥＮＡ−７８）、顆粒球化学誘引タンパク質−２（ＧＣＰ−２）、および間質細胞由来因子−１（ＳＤＦ−１、もしくはプレ−Ｂ細胞刺激因子（ＰＢＳＦ））；ならびに／または以下からなる群より選択されるβ（ＣＣ）ケモカイン：ＲＡＮＴＥＳ（ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，  ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ）、マクロファージ炎症タンパク質−１α（ＭＩＰ−１α）、マクロファージ炎症タンパク質−１β（ＭＩＰ−１β）、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）、単球走化性タンパク質−２（ＭＣＰ−２）、単球走化性タンパク質−３（ＭＣＰ−３）、単球走化性タンパク質−４（ＭＣＰ−４）、マクロファージ炎症タンパク質−１γ（ＭＩＰ−１γ）、マクロファージ炎症タンパク質−３α（ＭＩＰ−３α）、マクロファージ炎症タンパク質−３β（ＭＩＰ−３β）、マクロファージ炎症タンパク質−４（ＭＩＰ−４／ＤＣ−ＣＫ−１／ＰＡＲＣ）、エオタキシン、Ｅｘｏｄｕｓ、および１−３０９；ならびに／またはγ（Ｃ）ケモカインであるリンホタクチン；あるいはこれらの任意のアンタゴニストと組み合わせて投与される。
【０２０２】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分は、ケモカインβ−８、ケモカインβ−１、および／もしくはマクロファージ炎症タンパク質−４、またはこれらの任意のアンタゴニストとともに投与される。好ましい実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分は、ケモカインβ−８もしくはそのアンタゴニストとともに投与される。
【０２０３】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分は、ＩＬ−４アンタゴニストと組み合わせて投与される。本発明の抗体および抗体組成物とともに投与され得るＩＬ−４アンタゴニストとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：可溶性ＩＬ−４レセプターポリペプチド、可溶性ＩＬ−４レセプターポリペプチドのマルチマー形態、ＩＬ−４によって誘発される生物学的シグナルを伝達することなくＩＬ−４レセプターと結合する抗ＩＬ−４レセプター抗体、１種以上のＩＬ−４レセプターへのＩＬ−４の結合をブロックする抗ＩＬ４抗体、およびＩＬ−４レセプターを結合するが、ＩＬ−４によって誘発される生物学的シグナルを伝達しないＩＬ−４のムテイン。好ましくは、この方法に従って使用される上記抗ＩＬ４抗体は、モノクローナル抗体であり；その抗原結合部分もまた、使用され得る。
【０２０４】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分は、ＴＮＦファミリーのメンバー、もしくはそのアンタゴニストと組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくは抗原結合部分は、以下が挙げられるが、これらに限定されない作用物質と組み合わせて投与される：ＴＮＦ−αの可溶性形態、リンホトキシン−α（ＬＴ−α，ＴＮＦ−βとしても公知）、ＬＴ−β（複合ヘテロトリマーＬＴ−α２−β中で見いだされる）、ＯＰＧＬ、ＦａｓＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＤｃＲ３、ＯＸ４０Ｌ、ＴＮＦ−γ（国際公開番号ＷＯ  ９６／１４３２８）、ＡＩＭ−Ｉ（国際公開番号ＷＯ  ９７／３３８９９）、エンドカイン（ｅｎｄｏｋｉｎｅ）−α（国際公開番号ＷＯ  ９８／０７８８０）、ＯＰＧ、ニュートロカイン（ｎｅｕｔｒｏｋｉｎｅ）−α（国際公開番号ＷＯ  ９８／１８９２１）、ＯＸ４０、神経増殖因子（ＮＧＦ）、Ｆａｓの可溶性形態、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０  ４−１ＢＢ、ＴＲ２（国際公開番号ＷＯ  ９６／３４０９５）、ＤＲ３（国際公開番号ＷＯ  ９７／３３９０４）、ＤＲ４（国際公開番号ＷＯ  ９８／３２８５６）、ＴＲ５（国際公開番号ＷＯ  ９８／３０６９３）、ＴＲ６（国際公開番号ＷＯ  ９８／３０６９４）、ＴＲ７（国際公開番号ＷＯ  ９８／４１６２９）、ＴＲＡＮＫ、ＴＲ９（国際公開番号ＷＯ  ９８／５６８９２）、ＴＲ１０（国際公開番号ＷＯ  ９８／５４２０２）、３１２Ｃ２（国際公開番号ＷＯ  ９８／０６８４２）、ＴＲ１２、ならびにＣＤ１５４、ＣＤ７０、およびＣＤ１５３の可溶性形態；またはこれらの任意のアンタゴニスト。
【０２０５】
本明細書で使用される場合、用語「治療上有効な量」とは、処置されている障害の症状のうちの１つ以上をある程度軽減もしくは防止する、投与される治療剤の量を指す。疾患を処置するための抗ＣＣＬ２０抗体もしくはその抗原結合部分の有効量は、１種以上の所望の臨床エンドポイントに達するように、処置される被験体の助けとなる量である。
【０２０６】
いくつかの実施形態において、免疫原性を最小にするために、ヒト化抗体もしくは部分は、本発明の治療法および組成物で、ヒト患者を処置するために使用される。反復投与が必要でない場合では、いくつかの実施形態において、本発明のマウス抗体もしくはキメラ抗体または部分をヒト患者に投与することもまた、適切であり得る。
【０２０７】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体もしくはその抗原結合部分は、例えば、免疫刺激性サイトカインのインヒビター（例えば、抗ＴＮＦ−α  ＭＡｂ）、免疫細胞除去因子（例えば、抗ＣＤ２０  ＭＡｂ）、および／もしくはアクセサリー分子のブロッカー（例えば、アバタセプト）で以前に処置されてきた個体を処置するために使用され得る。いくつかの実施形態において、上記抗体もしくは部分は、これらの他の処置に対して一次非応答性または応答速度において徐々に低下を示した患者を処置するために使用される。
【０２０８】
本発明の抗体もしくはその抗原結合部分は、ヘルスケア提供者によって適切であるとみなされる任意の時点において、単一の単位用量もしくは複数用量で投与され得る。上記投与量は、当該分野で公知の方法によって決定され得、例えば、上記個体の年齢、感受性、耐性および全体的な健康状態に依存し得る。当該分野で受容されている任意の投与法が、本発明の抗体および部分に適切に使用され得、これらとしては、処置されるべき疾患もしくは状態に依存して、非経口（例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、髄腔内（ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌ）、腹腔内、皮下の注射）、経口（例えば、食餌）、局所に（ｌｏｃａｌｌｙ）、局所（ｔｏｐｉｃａｌ）、吸入（例えば、気管支内、鼻内もしくは経口吸入、点鼻）、または直腸が挙げられるが、必ずしもこれらに限定されない。一実施形態において、上記抗体もしくは部分は、非経口投与される。
【０２０９】
製剤は、選択される投与経路に従って変わる（例えば、液剤、エマルジョン）。投与されるべき抗体もしくは部分を含む適切な組成物は、生理学的に受容可能なビヒクルもしくはキャリア中に調製され得る。上記組成物は、複数用量を含み得るか、または単一の単位用量組成物であり得る。液剤もしくは乳剤に関しては、適切なキャリアとしては、例えば、水性もしくはアルコール性／水性溶剤、乳化剤、もしくは懸濁化剤（食塩水および緩衝媒体が挙げられる）が挙げられる。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルのデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲルもしくは不揮発性油が挙げられ得る。静脈内ビヒクルとしては、種々の添加剤、保存剤、もしくは流動性の、栄養素もしくは電解質補充物が挙げられ得る（一般には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，  ＰＡ，  １９８５を参照のこと）。吸入に関しては、上記化合物は、投与に適切なディスペンサー（例えば、噴霧器、ネブライザもしくは加圧エアロゾルディスペンサー）へと可溶化および充填され得る。
【０２１０】
投与量レジメンは、最適な所望の応答を提供するよう調整され得る。  特定の実施形態において、単一ボーラスが投与され得、いくつかの分割用量が、経時的に投与され得るか、または上記用量は、治療状況の緊急性によって示されるものと調和して低減もしくは増大してよい。投与の容易さおよび投与量の均一性のために、単位剤形で非経口組成物を製剤化することは、特に有利ある。単位剤形は、本明細書で使用される場合、処置されるべき上記患者／被験体のための単位投与量として適した、物理的に別個の単位を指し；各単位は、必要とされる薬学的キャリアと共同して所望の治療効果を生み出すように計算された活性化合物の所定の量を含む。本発明の単位剤形の仕様は、一般に、（ａ）上記治療剤の固有の特徴、および達成されるべき特定の治療効果もしくは予防効果、ならびに（ｂ）個体における感受性に対する上記処置のためのこのような活性化合物を調合することの当該分野に固有の制限、によって規定され、かつこれらに直接依存する。
【０２１１】
従って、当業者は、本明細書で提供される開示に基づいて、上記用量および投与レジメンが、治療分野で周知の方法に従って調節されることを認識する。すなわち、最大耐量は、容易に確立され得、検出可能な治療上の利益を患者に提供する有効量もまた、各作用物質を投与するための時間的な要件が上記患者への検出可能な治療上の利益を提供し得るように、決定され得る。よって、特定の用量および投与レジメンが本明細書において例示されるが、これらの例は、本発明を実施することにおいて、患者に提供され得る用量および投与レジメンを決して限定しない。
【０２１２】
投与量の値は、緩和されるべき状態のタイプおよび重症度とともに変化し得、単一用量もしくは複数用量を含み得ることは、特に言及されるべきである。任意の特定の被験体について、特定の投与レジメンが、個々の必要性ならびに上記組成物を投与するかもしくは上記組成物の投与を監督するヒトの専門的な判断に従って、経時的に調節されるべきであり、本明細書に示される投与量範囲は例示に過ぎず、本請求される組成物の範囲もしくは実施を限定するとは解釈されないことはさらに理解されるべきである。さらに、本発明の組成物での投与レジメンは、種々の要因に基づき得る。上記要因としては、疾患のタイプ、上記患者の年齢、体重、性別および医学的状態、該状態の重症度、投与経路、ならびに使用される特定の抗体が挙げられる。従って、上記投与レジメンは、広く変動し得るが、標準的な方法を使用して慣用的に決定され得る。例えば、用量は、薬物動態パラメーターもしくは薬力学的パラメーターに基づいて調節され得、これらパラメーターは、臨床効果（例えば、毒性作用および／もしくは実験室値）を含み得る。従って、本発明は、当業者によって決定されるように、患者内用量増加（ｉｎｔｒａ−ｐａｔｉｃｎｔ  ｄｏｓｅ−ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ）を包含する。適切な投与量およびレジメンを決定する方法は、関連分野において周知であり、本明細書で開示される教示がいったん提供されれば、当業者によって達成されることが理解される。
【０２１３】
いくつかの実施形態において、ヒト被験体への投与について、本発明の抗体もしくは抗体部分の全１ヶ月用量は、当然のことながら、投与様式に依存して、０．５ｍｇ／患者〜１２００ｍｇ／患者の範囲にある。特定の実施形態において、静脈内の１ヶ月用量は、約１ｍｇ／患者〜１０００ｍｇ／患者を必要とする。上記全１ヶ月用量は、単一用量もしくは分割用量において投与され得、医師の判断において、本明細書で提供される代表的範囲の外であってもよい。
【０２１４】
特定の実施形態において、本発明の抗体もしくは抗体部分の治療上もしくは予防上有効な量についての範囲は、１ｍｇ／ｋｇ／患者／月〜１０００ｍｇ／ｋｇ／患者／月である。一実施形態において、本発明の抗体もしくはその部分は、約１ｍｇ／患者／月〜２００ｍｇ／患者／月もしくは１ｍｇ／患者／月〜１５０ｍｇ／患者／月で投与され得る。特定の実施形態において、上記抗体もしくは部分は、１ｍｇ／ｋｇ／患者、２ｍｇ／ｋｇ／患者、３ｍｇ／ｋｇ／患者、４ｍｇ／ｋｇ／患者、５ｍｇ／ｋｇ／患者、６ｍｇ／ｋｇ／患者、７ｍｇ／ｋｇ／患者、８ｍｇ／ｋｇ／患者、９ｍｇ／ｋｇ／患者、もしくは１０ｍｇ／ｋｇ／患者の注射が、１ヶ月に１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０回投与される。特定の実施形態において、上記抗体もしくは部分は、１〜５ｍｇ／ｋｇ／患者の注射が、１ヶ月に１回もしくは２回投与される。
【０２１５】
本発明の抗体およびその抗原結合部分はまた、研究および診断における適用に関する、種々のプロセスにおいて有用である。いくつかの実施形態において、上記抗体および部分は、ヒトＣＣＬ２０もしくはその改変体を（例えば、アフィニティー精製もしくは他の適切な方法（例えば、細胞（例えば、懸濁物中の、リンパ球）に関しては、例えば、フローサイトメトリー）によって）、検出、単離および／もしくは精製するために、そしてヒトＣＣＬ２０構造（例えば、コンホメーション）および機能を研究するために、使用される。上記抗体の免疫原性が懸念事項でないインビトロ適用に関しては、本発明のマウス抗体およびキメラ抗体、ならびにそれらの抗原結合部分は、ヒト化抗体に加えて、有用である。
【０２１６】
本発明の抗体もしくはその抗原結合部分は、診断適用において（例えば、インビトロ、エキソビボで）使用され得る。いくつかの実施形態において、本発明のヒト化抗体もしくは部分は、サンプル中のヒトＣＣＬ２０のレベルを検出および／もしくは測定するために使用される。特定の実施形態において、上記サンプルは、例えば、ヒトＣＣＬ２０を発現する細胞もしくは組織、および／または体液（例えば、ヒトＣＣＬ２０を有する、炎症滲出物、血液、血清、および／もしくは腸液）を含む。サンプルは、個体から得られ得、本明細書に記載される抗体もしくは部分は、ヒトＣＣＬ２０発現を検出および／もしくは測定するための適切な免疫学的方法（フローサイトメトリー（例えば、リンパ球のような懸濁物中の細胞に関して）、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）（化学発光アッセイ、ラジオイムノアッセイ、および免疫組織学が挙げられる）などの方法が挙げられる）において使用され得る。
【０２１７】
一実施形態において、サンプル中のヒトＣＣＬ２０を検出する方法は、該サンプルと、本発明の抗体もしくは部分とを、ヒトＣＣＬ２０への該抗体もしくは部分の特異的結合に適した条件下で接触させる工程、および形成される抗体−ＣＣＬ２０複合体を検出する工程を包含する。一実施形態において、本明細書に記載される抗体もしくは部分は、ヒトＣＣＬ２０反応性および／もしくは発現に関して、正常組織対炎症組織（例えば、ヒト由来）を分析して（例えば、免疫組織学的に）、ヒトＣＣＬ２０（例えば、罹患組織における）の増大した発現と、以下から選択されるが、これらに限定されない１種以上の障害との間の関係性を検出するために使用され得る：グレーブス病、白斑、甲状線機能亢進症、関節リウマチ、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、クローン病、炎症性腸疾患、Ｂ細胞悪性腫瘍、乳腺癌、慢性肝炎、接触性皮膚炎、神経膠芽腫、肝細胞癌、子宮頸部のヒトパピローマウイルス感染、菌状息肉腫、膵腺癌、歯周病、甲状腺乳頭状癌、掌蹠膿疱症状、点状丘疹性発疹と関連する状態、表皮水疱症、円形脱毛症、多発性硬化症、多発性筋炎、皮膚筋炎、ベーチェット病、急性汎発性発疹性膿疱症、脈管炎、若年性特発性関節炎、サルコイドーシス、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、腎臓同種移植片拒絶、移植片対宿主病、肝臓同種移植片拒絶、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、糸球体腎炎、呼吸器系合胞体ウイルス感染、多発性骨髄腫、ランゲルハンス細胞組織球症、もしくは他の状態。従って、本発明の抗体は、正常組織もしくは炎症組織におけるヒトＣＣＬ２０の存在を評価する免疫学的方法を可能にする。上記方法を介して、疾患の存在、疾患の進行および／もしくは疾患（例えば、炎症疾患および／もしくは免疫疾患）の処置における抗ヒトＣＣＬ２０治療の効力が、評価され得る。
【０２１８】
本発明の方法および技術は、一般には、当該分野で周知の従来方法に従って、および、別段示されなければ、本明細書全体にわたって引用および考察される種々の一般的なかつより具体的な参考文献に記載されるように、行われる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ  ．  ＆  Ｒｕｓｓｅｌｌ  Ｄ．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．  ３ｒｄ  ｅｄ．，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．  （２０００）；  Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：  Ａ  Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｒｏｍ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．  Ｗｉｌｅｙ，  Ｊｏｈｎ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  （２００２）；  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ  Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．  （１９９８）；およびＣｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｗｉｌｅｙ，  Ｊｏｈｎ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．  （２００３）を参照のこと。酵素反応および精製技術は、当該分野で一般に達成されるように、もしくは本明細書で記載されるように、製造業者の仕様に従って行われる。本明細書で記載される分析化学、合成有機化学、ならびに医化学および薬化学の実験手順および技術に関連して使用される命名法、ならびに該実験手順および技術は、周知のものであり、当該分野で一般に使用される。
【０２１９】
別段定義されなければ、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。例示的方法および材料が以下に記載されるものの、本明細書に記載されるものに類似もしくは等価な方法および材料がまた、本発明の実施もしくは試験において使用され得る。本明細書で言及される全ての刊行物および他の参考文献は、それらの全体において参考として援用される。矛盾する場合には、本明細書（定義を含む）が優先する。多くの文書が本明細書で引用されているが、この引用は、これら文書のうちのいずれかが、当該分野での通常の一般知識の一部を形成するという許容を構成しない。本明細書および特許請求の範囲全体を通じて、語句「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む、包含する（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、示される整数もしくは整数の群を包含するが、任意の他の整数もしくは整数の群を排除しないことを意味することと理解される。上記材料、方法、および実施例は、例示に過ぎず、限定することが意図されない。
【０２２０】
本発明がよりよく理解され得るために、以下の実施例が示される。これら実施例は、例示目的に過ぎず、本発明の範囲を限定するとは如何様にも解釈されるべきでない。
【実施例】
【０２２１】
（実施例１：自己免疫／炎症性障害におけるＣＣＬ２０の関与）
自己免疫状態および炎症状態におけるＣＣＬ２０の関与についての証拠を得るために、本発明者らは、ＩＩ型コラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）マウス関節リウマチ（ＲＡ）モデルにおいてＣＣＬ２０レセプターＣＣＲ６をノックアウトすることの効果を研究した。ＣＣＲ６野生型マウス、ＣＣＲ６＋／−（ヘテロ接合性）マウス、およびＣＣＲ６−／−（ホモ接合性）ノックアウトマウス（各ｎ＝１０）を、完全フロイントアジュバント（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ，  ＃７００１）中で乳化したウシＩＩ型コラーゲン（１５０μｇ／マウス）を尾の基部に免疫した。３週間後、不完全アジュバント中の同じ量のウシＩＩ型コラーゲンエマルジョンのブースター注射を、上記尾の基部に投与した。本発明者らは、Ｇｒｉｓｗｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ３１（１１）：  １４０６−１４１２  （１９８８）に記載されるように、各マウスの足の関節炎症状の重症度を等級付けした。簡潔には、本発明者らは、関与した関節の数、ならびに紅斑および腫脹の程度に基づいて、０〜４のスケールで肘もしくは膝に対して遠位の四肢の関節病変を等級づけした。関節炎スコアを、各動物について四肢全てのスコアの合計として計算した。ＣＣＲ６野生型動物は関節炎を発症した一方で、ＣＣＲ６−／−動物は、該疾患に対して強い抵抗性を示した（図１）。興味深いことに、ＣＣＲ６＋／−動物はまた、あるレベルの抵抗性を示した。このことは、ＣＣＬ２０機能の完全な排除が、関節炎表現型を打ち消すのに必要とされないことを示す。
【０２２２】
さらに、本発明者らは、ＣＤ３陽性Ｔ細胞もしくはＦ４／８０陽性マクロファージの存在について、マウスの後足を免疫組織化学的に分析した。４３日目に、マウスを捕獲し、彼らの後足をホルマリン中で固定した。次いで、上記足を切片にし、スライド上に置いた。上記足のサンプルの脱石灰化の後に、そのスライドを、抗ＣＤ３抗体（＃Ｎ  １５８０，  ＤＡＫＯ）および抗Ｆ４／８０抗体（Ｃｌｏｎｅ  ＣＩ：Ａ３−１，  ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ）で免疫組織化学的に染色した。染色の強度は、Ａｐｅｒｉｏ機器（Ａｐｅｒｉｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で上記サンプルをスキャンすることによって、２人の独立した観察者によってスコア付けされた。上記スコア付けスケールは、以下のとおりであった：０，正常；  １，足全体にわたって軽度の染色もしくは１本の指において強い染色；  ２，複数の指に中程度の染色；  ３，複数の指において強い染色もしくは全体にわたって中程度；  ４，全ての指および足全体にわたって強い染色。上記ＣＩＡ誘発性病変に浸潤しているＴ細胞数（図２）およびマクロファージ数（図３）は、ＣＣＲ６＋／−マウスおよびＣＣＲ６−／−マウスの両方において強く低下した。
【０２２３】
本発明者らはまた、ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）誘発性アレルギー性接触性皮膚炎マウスモデルにおいてＣＣＲ６をノックアウトすることの効果を研究した。各６匹のマウスの２つの群（一方の群のマウスは、ＣＣＲ６について野生型であり、一方の群は、ＣＣＲ６欠損性である）を、２連続日（０日目および１日目）にわたって剃毛した腹部に２５μｌの０．４％  ＤＮＦＢ溶液（４：１  アセトン：オリーブ油中）を塗布することによって感作させた。５日目に、マウスに、２０μｌの０．１％  ＤＮＦＢ（４：１  アセトン：オリーブ油中）を一方の耳の片側に塗布することによって、再チャレンジした。浮腫のインジケーターとして、耳の厚みを、ＤＮＦＢチャレンジ前および５日目に最後のチャレンジをして２４時間後に、厚みゲージ（ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ  ｇａｕｇｅ）を使用することによって測定した。ＣＣＲ６欠損マウスは、ＤＮＦＢでの処置後に、ほとんど耳の厚みの増大を示さなかった。このことにより、ＤＮＦＢ誘発性接触性過敏に対する抵抗性が示された（図４）。
【０２２４】
これらデータは、自己免疫／炎症性障害におけるＣＣＲ６およびＣＣＬ２０の役割を裏付ける。
【０２２５】
（実施例２：ハムスター抗マウスＣＣＬ２０  ２Ｆ５−５  ＭＡｂによるＣＣＬ２０誘導性走化性の阻害）
潜在的治療標的としてのＣＣＬ２０の役割をさらに調べるために、本発明者らは、ハムスター抗マウスＣＣＬ２０抗体（２Ｆ５−５）を使用して実験を行った。本発明者らは、最初に、上記２Ｆ５−５  ＭＡｂが、マウス、ヒト、およびアカゲザルのＣＣＬ２０に結合する能力を特徴付けた。各々の種の可溶性ＣＣＬ２０分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）抗原を、以下のとおりに調製した。ヒト、カニクイザル、アカゲザル、ラットおよびマウスのＣＣＬ２０をコードするｃＤＮＡを増幅し、ｐｃＤＮＡ３．１  （＋）  ｄＳａｌＩ  ＳＥＡＰベクターにサブクローニングした。上記ベクターは、ＳＥＡＰ  ｃＤＮＡを含み、そのＳａｌＩ部位が欠失している（ｐｃＤＮＡ  ３．１  （＋）はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入；  ＳＥＡＰ  ｃＤＮＡは、ｐＳＥＡＰ−Ｅｎｈａｎｃｅｒベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）に由来）。上記発現ベクターを、ヒト胚性腎細胞系ＨＥＫ２９３ＥＢＮＡ（ＨＥＫ２９３Ｅ，  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）へとトランスフェクトした。上記ＨＥＫ２９３Ｅ細胞を、トランスフェクション前日に、１０％  ウシ胎仔血清を補充したＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて播種した。トランスフェクションの当日に、培養培地を、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ  ＩＩ無血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で置き換えた。上記発現ベクターを、製造業者のプロトコルに従って、ＴｒａｎｓＩＴ  ＬＴ１（ＴＡＫＡＲＡ  Ｂｉｏ  Ｉｎｃ．，  Ｓｈｉｇａ，  Ｊａｐａｎ）を使用してトランスフェクトした。５％  ＣＯ２および３７℃で３日間インキュベートした後、培養上清を採取した。各培養物中のＣＣＬ２０−ＳＥＡＰの濃度を、Ｇｒｅａｔ  ＥｓｃＡＰｃ  ＳＥＡＰ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｋｉｔ  ２．０（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を使用することによって測定した。
【０２２６】
次いで、本発明者らは、表面プラズモン共鳴（ＢｉａｃｏｒｅＴＭ）結合研究を行って、マウス、ヒト、アカゲザル、およびカニクイザルのＣＣＬ２０−ＳＥＡＰ抗原への２Ｆ５−５  ＭＡｂの結合性を測定した。抗ＳＥＡＰ（モノクローナル抗マウス胎盤アルカリホスファターゼ，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  Ｃａｔ  ＃  ＭＡＩ−１９３５４，  Ｌｏｔ  ＃  ＫＬ１２７４８Ｍ）を、標準的なＮＨＳ／ＥＤＣアミンカップリング手順を使用して、ＣＭ５センサーチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に固定した。ＳＥＡＰタグ化マウスＣＣＬ２０（上清中１００ｎＭ，  ＩＤ７３５，  Ｌｏｔ  ＃  ０９１１３０）を、０．００５  ％  Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＴＢＳ−Ｐで５ｎＭへと希釈し、上記ＣＭ５センサーチップ上に捕捉した。ＴＢＳ−Ｐ中のハムスター抗マウスＣＣＬ２０（２Ｆ５−５，  Ｌｏｔ  ＃  ０６０２１５，  ２ｍｇ／ｍｌ）の０．２ｎＭ〜８０ｎＭ  希釈物を、流速３０μｌ／分で上記センサーチップの上に注入した。ハムスター抗マウスＣＣＬ２０とマウスＣＣＬ２０との会合および解離を、それぞれ、４分間および１６分間にわたってモニターした。上記チップ表面を、１０ｍＭ  グリシン（ｐＨ２．２５）を使用して注入の間に再生した。捕捉されたマウスＣＣＬ２０なしの参照セルへのハムスター抗マウスＣＣＬ２０注入、および捕捉されたマウスＣＣＬ２０上へのＴＢＳ−Ｐの注入を差し引きすることによって、センサーグラムを二重参照した（ｄｏｕｂｌｅ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｄ）。上記センサーグラムを、ＢＩＡ評価ソフトウェア（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，  バージョン３．２）において１：１  ラングミュア結合モデルを使用して分析した。このアッセイにおいて、２Ｆ５−５  ＭＡｂは、マウスＣＣＬ２０に３２ｐＭの親和性で結合するが、ヒト、アカゲザル、もしくはカニクイザルのＣＣＬ２０には結合しない（表１）。
【０２２７】
【表１】
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ＣＣＬ２０機能に対する２Ｆ５−５  ＭＡｂの効果を試験するために、本発明者らは、インビトロ化学走性アッセイを使用して、マウスＣＣＬ２０に対するその中和活性を評価した。ＣＣＲ６形質導入したＢ３００．１９細胞および組換えマウスＣＣＬ２０（１ｎＭ）を、トランスウェル培養プレートに添加した。４時間後、下側のチャンバに移動した細胞を、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）によって計数した。２Ｆ５−５  ＭＡｂは、０．０４μｇ／ｍｌ（０．２７ｎＭ）の推定ＩＣ５０値を有して、１μｇ／ｍｌで化学走性を完全に阻害した（図５）。対照的に、コントロールハムスター抗体（１０μｇ／ｍｌ）は、化学走性を阻害しなかった（１００％コントロール；データは示さず）。
【０２２８】
（実施例３：マウス抗ＣＣＬ２０  ＭＡｂのヒト化）
ヒトＣＣＬ２０に対するモノクローナル抗体を得るために、本発明者らは、マウス抗ヒトＣＣＬ２０抗体の一団を生成した。フロイント完全アジュバント（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ−Ｋａｇａｋｕ  Ｙａｔｒｏｎ，  ＲＭ６０６−１）で乳化した組換えヒトＣＣＬ２０（Ｒ＆Ｄ，  ＃３６０−ＭＰ−０２５／ＣＦ，  １７．５μｇ／匹）を、マウスの足蹠へと皮下注射した。次いで、２回の連続注射（ｔｗｏ  ｃｏｎｓｅｑｕｔｉｖｅ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ）を、３日ごとに施した。最後の免疫の３日後に、上記動物を屠殺し、鼠径リンパ節細胞を、Ｐ３Ｕ１骨髄腫細胞と、２：１〜１０：１比で、５０％  ポリエチレングリコールの存在下、融合した。次いで、上記細胞を、９６ウェルプラスチックプレート中で培養した。
【０２２９】
サンドイッチＥＬＩＳＡを、一次スクリーニングに使用した。９６ウェルプレートを、ポリクローナル抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ，  ＃７０９−００５−１４９，  ＰＢＳ（−）中２μｇ／ｍｌ）で被覆した。４℃で一晩インキュベートした後、上記ウェルを、１×Ｂｌｏｃｋ−Ａｃｅ（Ｄａｉｎｉｐｐｏｎ  Ｓｕｍｉｔｏｍｏ  Ｐｈａｒｍａ，  ＵＫ−Ｂ８０）で、１時間にわたって室温でブロッキングした。次いで、上記ウェルを、０．０２％  Ｔｗｅｅｎ  ２０／ＰＢＳ（−）で洗浄し、その後、０．０２％  Ｔｗｅｅｎ  ２０／ＰＢＳ（−）中の１ｎＭ  ヒトＣＣＬ２０−ｈＩｇＧ  Ｆｃキメラタンパク質を、上記ウェルに添加した（５０μｌ／ウェル）。室温で１時間インキュベートした後、上記のように、さらに３回洗浄した。次いで、各ハイブリドーマ由来の培養上清を、０．０２％  Ｔｗｅｅｎ  ２０／ＰＢＳ（−）中の２０％  ＦＢＳおよび２００μｇ／ｍｌ  ヒトＩｇＧ（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ  Ｗｅｌｐｈａｒｍａ）で２倍希釈し、上記ウェルに添加し、１時間にわたって室温でインキュベートした。さらに３回洗浄した後、上記ウェルを、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体化抗マウスＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ，  ＃７１５−０３５−１５０，  ０．０２％  Ｔｗｅｅｎ  ２０／ＰＢＳ（−）で５０００倍希釈）とともに１時間にわたって室温でインキュベートした。次いで、上記ウェルを３回洗浄し、ＴＭＢＺ（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）溶液中で１５〜３０分間にわたってインキュベートした。次いで、等容積の２Ｍ  Ｈ２ＳＯ４を添加して、反応を停止させ、その光学密度を、４５０ｎｍにおいてＡＲＶＯ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で読み取った。上記サンドイッチＥＬＩＳＡから、２４の陽性ウェルが同定された。
【０２３０】
本発明者らは、次いで、二次スクリーニングとして化学走性アッセイを行った。上記化学走性アッセイを、トランスウェル培養プレート（Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ  孔  ５μｍ，  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，  ＃ＭＡＭＩＣ  ５Ｓ１０）において行った。第１に、化学走性緩衝液（ＲＰＭＩ１６４０（ｌｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中の０．５％  ＢＳＡ、０．５％  ＦＢＳ、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、５０μΜ  ２−メルカプトエタノール）中の５０μｌ／ウェルの３００ｎｇ／ｍｌ  組換えヒトＣＣＬ２０（Ｒ＆Ｄ，  ＃３６０−ＭＰ−０２５／ＣＦ）を、上記ハイブリドーマ由来の１００μｌ／ウェルの培養上清と、上記プレートの下側ウェル中で、室温で３０分間にわたって（１００ｎｇ／ｍｌの最終ＣＣＬ２０濃度について）プレインキュベートした。３０分後、ヒトＣＣＲ６（配列番号１０４）（２×１０５細胞／７５μｌ）でトランスフェクトしたＢ３００．１９細胞を、上側のウェルに加え、５％  ＣＯ２インキュベーター中、３７℃で４時間にわたってインキュベートした。上記インキュベーション後、上記下側のウェルから１５０μｌを採取し、５０μｌの４％  ＰＦＡ／ＰＢＳ（−）で固定した。３０μｌの各サンプルを、ＦＡＣＳＣａｎｔｏＩＩ細胞分析器（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に入れて、移動した細胞を計数した。中和活性を、４個のウェルに見いだした。
【０２３１】
次いで、本発明者らは、標準的な限界希釈法を使用して、上記４個の陽性ウェルからハイブリドーマクローンを得た。本発明者らは、上記インビトロ化学走性アッセイを使用して、各クローン由来の上清の中和活性を確認した。これらクローン（抗体３６Ｆ７Ｃ１０（表２）、４２Ｇ５Ｂ１０（表３）、および４０−１Ｃ１０Ｂ９（表４））によって生成されるマウス抗ヒトＣＣＬ２０モノクローナル抗体のうちの３種は、ヒトＣＣＬ２０に対する中和活性を示した。
【０２３２】
【表２】
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【０２３３】
【表３】
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【０２３４】
【表４】
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上記３６Ｆ７Ｃ１０、４２Ｇ５Ｂ１０、および４０−１Ｃ１０Ｂ９マウス抗体を、次いで、ヒト化抗体重鎖および軽鎖を生成するために使用した。そのヒト化方法は、Ｋａｂａｔ番号付けに従ってＫａｂａｔおよび／もしくはＣｈｏｔｈｉａ定義法によって同定される場合、マウス相補性決定領域（ＣＤＲ）を、上記ＣＤＲが由来する元のマウス配列と最良のフレームワークマッチを表すヒト重鎖および軽鎖の生殖細胞系列配列へとグラフト化する工程を包含した（図６Ａ〜Ｃ；太字は、上記マウス抗体と上記ヒト生殖細胞系列配列の間で異なる残基を示し；下線および太字は、グラフト化されたマウスＣＤＲを示し；斜体および太字は、対応するマウス抗体残基で置換されたフレームワーク残基を示す；そして下線、斜体および太字は、対応するヒト生殖細胞系列残基で置換されたＣＤＲ残基を示す）。フレームワークマッチを、ｌｇＢｌａｓｔデータベースを使用して、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５：３３８９−３４０２  （１９９７）に記載される方法に従って同定した。代わりのヒト化鎖バージョンを得るために、本発明者らは、２つの方法を使用した：  １）上記ＣＤＲ残基と相互作用する、フレームワーク内の重要なマウス残基を推定する３Ｄモデリング技術、および２）標準的ＣＤＲ配列に直ぐ隣り合うマウス残基を同定するための配列アラインメント。
【０２３５】
上記ヒト化配列を発現ベクター中に構築して、抗体生成のために哺乳動物細胞系（例えば、ＨＥＫ２９３Ｅ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））へとトランスフェクトした。次いで、このプロセスによって得られる抗体を、機能的アッセイおよび物理化学的アッセイにおいて特徴付けした。
【０２３６】
（実施例４：ヒト化抗ヒトＣＣＬ２０Ａｂの中和活性を示すインビトロ化学走性アッセイ）
本発明者らは、ＣＣＲ６形質導入したＢ３００．１９細胞を使用するインビトロ化学走性アッセイを行うことによって、上記ヒトＣＣＬ２０リガンドを活発に中和するヒト化抗体を同定した。ＩＣ５０値、ＩＣ９０値、およびＩＣ９５値（図７Ａ〜Ｃ）の決定した後、ＩＣ９５表において低下した値を示す抗体を、有意な中和活性を有するとみなした（図７Ｃ）。生成された１４種のヒト化重鎖および２６種のヒト化軽鎖のうち、本発明者らは、４１の組み合わせを試験した。これら組み合わせのうちの８つは、化学走性を有意に中和することを示した。これら８つのヒト化抗体を以下に列挙する：
・３６ＬＫ３／３６ＨＫＫ３
・３６ＬＫ３／４２ＨＫＫ１
・３６ＬＫ３／４２ＨＫＫ２
・３６ＬＫ３／４２ＨＫＫ３
・３６ＬＫ３／３６ＨＣ２
・３６ＬＫ３／３６ＨＣ３
・３６ＬＣ３／３６ＨＫＫ３
・３６ＬＣ３／３６ＨＣ２。
【０２３７】
ヒト化重鎖であるＨＣ２、ＨＣ３、３６ＨＫＫ３、４２ＨＫＫ１、４２ＨＫＫ２、および４２ＨＫＫ３、ならびにヒト化軽鎖であるＬＣ３およびＬＫ３のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列は、表５〜１２に示される。これら重鎖および軽鎖によって利用されるヒト生殖細胞系列遺伝子によってコードされるアミノ酸配列は、表１３に示される。
【０２３８】
【表５−１】
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【０２３９】
【表５−２】
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【０２４０】
【表５−３】
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【０２４１】
【表５−４】
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【０２４２】
【表６−１】
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【０２４３】
【表６−２】
0005996549.tif 000011
【０２４４】
【表６−３】
0005996549.tif 000012
【０２４５】
【表７−１】
0005996549.tif 000013
【０２４６】
【表７−２】
0005996549.tif 000014
【０２４７】
【表８−１】
0005996549.tif 000015
【０２４８】
【表８−２】
0005996549.tif 000016
【０２４９】
【表９−１】
0005996549.tif 000017
【０２５０】
【表９−２】
0005996549.tif 000018
【０２５１】
【表１０−１】
0005996549.tif 000019
【０２５２】
【表１０−２】
0005996549.tif 000020
【０２５３】
【表１０−３】
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【０２５４】
【表１１−１】
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【０２５５】
【表１１−２】
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【０２５６】
【表１１−３】
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【０２５７】
【表１２−１】
0005996549.tif 000025
【０２５８】
【表１２−２】
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【０２５９】
【表１３】
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上記評価結果に基づいて、本発明者らは、さらなる研究のために、３６ＬＫ３／３６ＨＣ２（「ＨＣ２／ＬＫ３」）および３６ＬＣ３／３６ＨＣ２（「ＨＣ２／ＬＣ３」）を選択した。これら２種の抗体に関して、インビトロ化学走性アッセイを、親マウスクローン３６Ｆ７Ｃ１０およびそのキメラ形態（ヒトＦｃ部分を含む）と並行して行った。このアッセイにおいて、本発明者らは、上側の層に播種したＢ３００．１９  ＣＣＲ６＋細胞および下側の層に組換えヒトＣＣＬ２０リガンドを有するトランスウェル培養プレートを使用した。組換えヒトＣＣＬ２０（１０ｎＭ  最終，  Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、上記ヒト化抗ＣＣＬ２０抗体とともに室温でプレインキュベートした。３０分後に、ヒトＣＣＲ６形質導入したマウスプレＢ細胞（Ｂ３００．１９（東京大学のＨ．  Ｋａｗａｓａｋｉ博士により提供））を、上記上側の層を加え、化学走性を、３７℃で４時間にわたって起こさせた。インキュベーションの最後に、ＦＡＣＳを使用して、移動した細胞を測定した。次いで、ＨＣ２／ＬＫ３およびＨＣ２／ＬＣ３についての５０％阻害濃度、９０％阻害濃度および９５％阻害濃度（それぞれ、ＩＣ５０、ＩＣ９０、およびＩＣ９５）を計算した（表１４）。親マウスＭＡｂと比較して、ヒト化抗体のいずれも、中和活性を失わなかった。ＩＣ５０値は、約１ｎＭと計算された。
【０２６０】
【表１４】
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上記ＨＣ２／ＬＫ３抗体での代表的試験に関する用量応答を、図８Ａ〜Ｃに示す。３回の独立した実験を示す。
【０２６１】
本発明者らはさらに、ＣＣＲ６形質導入した人工細胞の代わりに新しく単離されたヒト末梢血単核細胞を用いる、経内皮移動（ｔｒａｎｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ）（ＴＥＭ）アッセイを使用して、ＨＣ２／ＬＫ３およびＨＣ２／ＬＣ３の中和活性を確認した。ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋記憶Ｔ細胞およびＣＤ１９＋  Ｂ細胞は、ＣＣＲ６陽性細胞で富化されることが周知であるので、本発明者らは、上記ＨＣ２／ＬＫ３抗体およびＨＣ２／ＬＣ３抗体、ならびに上記親マウス抗体３６Ｆ７Ｃ１０の存在下もしくは非存在下で、これら集団の移動した細胞数を測定した。両方のヒト化抗体（図９ＢおよびＣ）は、３６Ｆ７Ｃ１０のもの（図９Ａ）に匹敵する用量依存性細胞移動阻害を実証し、これにより、それらの中和活性のさらなる証拠が提供された。
【０２６２】
（実施例５：ヒトＣＣＬ２０へのヒト化抗ヒトＣＣＬ２０  ＭＡｂの結合性）
表面プラズモン共鳴（ＢｉａｃｏｒｅＴＭ）によってヒト化抗体ＨＣ２／ＬＣ３およびＨＣ２／ＬＫ３の結合親和性を測定するために、本発明者らは、一過性にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｆ細胞の馴化培地から上記抗体を発現および精製し、泳動緩衝液としてＨＢＳ−ＥＰを使用して、抗ヒトＦｃモノクローナル抗体で被覆したＣＭ５チップ上で該抗体を捕捉した。本発明者らは、次いで、ヒトＣＣＬ２０タンパク質（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）のいくつかの希釈物（１００、２０、４、０．８、０．１６、および０ｎＭ）を、上記被覆したチップ表面上に注入し、最大２０分間にわたって、結合したＣＣＬ２０の解離を観察した（図１０ＡおよびＢ）。本発明者らは、１：１  ラングミュアモデルへと結合性のデータを全体的にフィットさせた。その結果を表１５に示す。その結果は２回の独立した実験の平均を表す。ＣＣＬ２０とそのレセプターであるＣＣＲ６との間の親和性は、初代ヒト細胞において５００ｐＭとして報告された（Ｌｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６８（１０）：４８７１−  ４８８０  （２００２））；これらデータは、ＣＣＬ２０に対する上記ＨＣ２／ＬＣ３抗体およびＨＣ２／ＬＫ３抗体の親和性が、ＣＣＬ２０に対するＣＣＲ６の親和性より約１０倍高いことを実証する。
【０２６３】
【表１５】
0005996549.tif 000029
（実施例６：ケモカインパラログに対するヒト化抗ヒトＣＣＬ２０  ＭＡｂの交叉反応性）
本発明者らは、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して、ケモカインパネルに対するＨＣ２／ＬＫ３およびＨＣ２／ＬＣ３の交叉反応性を分析することによって、ヒトＣＣＬ２０に対するそれらの特異性についてＨＣ２／ＬＫ３およびＨＣ２／ＬＣ３を試験した（表１６）。
【０２６４】
【表１６】
0005996549.tif 000030
９６ウェルプレートのウェルを、ＰＢＳ（−）中の１μｇ／ｍｌの上記組換えヒトケモカインで被覆した。４℃で一晩インキュベートした後、上記ウェルを、１×Ｂｌｏｃｋ−Ａｃｅ（Ｄａｉｎｉｐｐｏｎ  Ｓｕｍｉｔｏｍｏ  Ｐｈａｒｍａ，  ＵＫ−Ｂ８０）で、１時間にわたって室温でブロッキングした。０．０２％  Ｔｗｅｅｎ  ２０／ＰＢＳ（−）で２回洗浄した後、本発明者らは、５０μｌの、０．０２％  Ｔｗｅｅｎ  ２０／ＰＢＳ（−）中１０μｇ／ｍｌの精製３６Ｆ７Ｃ１０、キメラ３６Ｆ７１０、ＨＣ２／ＬＫ３、もしくはＨＣ２／ＬＣ３を各ウェルに添加した。上記ウェルを１時間にわたって室温でインキュベートし、実施例３に記載されるように、３回洗浄した。次いで、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合体化抗マウスＩｇＧ抗体（３６Ｆ７Ｃ１０については、Ｊａｃｋｓｏｎ，  ＃７１５−０３５−１５０）もしくはＨＲＰ結合体化抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃγフラグメント（キメラｍＡｂおよびヒト化ｍＡｂについては、Ｊａｃｋｓｏｎ，  ＃１０９−０３５−０９８）を、（０．０２％  Ｔｗｅｅｎ  ２０／ＰＢＳ（−）で５０００倍希釈して）添加し、上記ウェルを、１時間にわたって室温でインキュベートした。５回洗浄した後、ＴＭＢＺ（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）溶液（Ν，Ν−ジメチルホルムアミド中１％）を上記ウェルに添加し、１５〜３０分間にわたってインキュベートした。等容積の２Ｍ  Ｈ２ＳＯ４停止溶液を添加することによって反応を停止させ、その光学密度を、４５０ｎｍにおいてＡＲＶＯ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で読み取った。図１１Ｂにおいて実証されるように、ＨＣ２／ＬＫ３およびＨＣ２／ＬＣ３は、上記パネル中の他のケモカインよりヒトＣＣＬ２０に対して特異的に結合する。
【０２６５】
これらアッセイにおいて、ＨＣ２／ＬＫ３は、プレート結合ヒトＣＣＬ２０に対して反応性であったが、上記マウス３６Ｆ７Ｃ１０抗体もしくはキメラ３６Ｆ７Ｃ１０−ｈＦｃ抗体より効力が低いようであった（図１１Ａ）。しかし、上記ＨＣ２／ＬＫ３は、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、Ｈｉｓタグ（これは、上記溶媒への全てのＣＣＬ２０部分の曝露を可能にする）を介して固定されたＣＣＬ２０に対して明確かつ強力な結合性を示した（図１１Ｃ）。このことは、ＨＣ２／ＬＫ３に対するＣＣＬ２０エピトープ（複数可）が、上記第１のアッセイ様式においてプレート表面にＣＣＬ２０を結合するために使用される手順では、隠されているかもしくはふさがれていることを示し得る。この考えられる人工産物を回避するために、本発明者らは、ＢｉａｃｏｒｅＴＭ分析（ここで遊離ＣＣＬ２０は、センサーチップ上に捕捉されたＭＡｂ上に加えられた）を使用した。上記ＢｉａｃｏｒｅＴＭアッセイにおいて、ＨＣ２／ＬＫ３およびＨＣ２／ＬＣ３は、上記３６Ｆ７Ｃ１０−ｈＦｃキメラ抗体のものに匹敵する、強力なＣＣＬ２０結合性を示した（図１１Ｄ）。さらに、図１１Ｂにおいて観察されたＣＸＣＬ４に対する小さな反応は、上記ＢｉａｃｏｒｅＴＭアッセイにおいて無視できるものであることが分かった（図１１Ｄ）。
【０２６６】
Ｄｅｒｃｅｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  （Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  １  （３６）：Ｗ４６５−４６９  （２００８））による系統発生分析は、ＣＣＬ１６が、配列においてＣＣＬ２０に最も近いケモカインであるが、ＣＣＬ２０とＣＣＬ１６との間の％同一性は、３７．５％未満（成熟ＣＣＬ２０ペプチド（ＳＩＭ−  タンパク質配列のためのアラインメントツール（Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ），  Ｓｗｉｓｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ））を構成する７０アミノ酸のうちわずか５６アミノ酸において相同性）であることを示す（図１２）。本発明者らは、ＢｉａｃｏｒｅＴＭ分析を使用して、ＨＣ２／ＬＫ３およびＨＣ２／ＬＣ３が、ＣＣＬ１６と交叉反応するかどうかを試験した。モノクローナルマウス抗ヒトＦｃを、０．２ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡを含むＨＢＳ−ＥＰ緩衝液で流速  ２５μｌ／分において、ＣＭ５チップの全４つのフローセル上に固定した。その後、０．２ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡを含むＨＢＳ−ＥＰ緩衝液中のキメラ抗体、ＨＣ２／ＬＣ３抗体、もしくはＨＣ２／ＬＫ３抗体の１μｇ／ｍｌ  溶液５０μｌを、それぞれ、フローセル２、３および４上に注入した。次いで、０．２ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡを含むＨＢＳ−ＥＰ緩衝液中のＣＣＬ２０もしくはＣＣＬ１６の１００ｎＭ  溶液（または緩衝液のみ）１５０μｌを、流速４０μｌ／分で全４つのフローセル上に注入した。２０分間にわたって解離を追跡した。フローセル１（抗ヒトＦｃ抗体のみ）を、全フローセルの参照として使用した。
【０２６７】
これら条件下で、ヒトＣＣＬ２０は、類似の強度で、上記チップに捕捉した上記キメラ抗体（図１３Ａ）、ＨＣ２／ＬＣ３抗体（図１３Ｂ）、およびＨＣ２／ＬＫ３抗体（図１３Ｂ）に結合した。対照的に、ヒトＣＣＬ１６が上記チップを通って流動した場合、有意な結合は検出されなかった。このことは、ＣＣＬ１６が、配列においてＣＣＬ２０に最も近いケモカインであるが、ＣＣＬ２０およびＣＣＬ１６は、上記ヒト化抗ＣＣＬ２０抗体をＣＣＬ１６と交叉反応させるために充分な相同性を有さない（上記で考察されるように、＜３７％）ことを示していた。
【０２６８】
これらデータは、ＨＣ２／ＬＫ３およびＨＣ２／ＬＣ３が、他のケモカインよりヒトＣＣＬ２０に対して特異的であることを示す。
【０２６９】
（実施例７：ヒト化抗ヒトＣＣＬ２０  ＭＡｂの種オルソログに対する交叉反応性）
本発明者らは、次いで、他の種に由来するＣＣＬ２０への上記ＨＣ２／ＬＣ３  ＭＡｂおよびＨＣ２／ＬＫ３  ＭＡｂの交叉反応性を決定した。ＣＣＬ２０オルソログ（ＳＩＭ  −タンパク質配列のためのアラインメントツール（Ｓｗｉｓｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ）を使用して得た）の中でのアミノ酸配列アラインメントは、カニクイザル／アカゲザルとヒトＣＣＬ２０との間の同一性が８６％である一方で、マウスとヒトＣＣＬ２０との間の相同性が６４％である（図１４；ヒトＣＣＬ２０−配列番号８５；アカゲザルＣＣＬ２０−配列番号８６；カニクイザルＣＣＬ２０−配列番号８７；部分マウスＣＣＬ２０−配列番号８８（マウスＣＣＬ２０アミノ酸配列全体は、配列番号１０２において見いだされ得る；残基１〜２７は、シグナル配列を構成する；表１８を参照のこと））を示す。
【０２７０】
上記キメラ抗体およびヒト化抗体が、マウス、カニクイザル、もしくはアカゲザルのＣＣＬ２０オルソログに結合し得るかどうかを試験するために、本発明者らは、図１５に図示されるような、ＥＬＩＳＡアッセイを使用した。組換え分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）−ケモカイン融合タンパク質を、実施例２に記載されるように工学的に作製し、試験される上記ＣＣＬ２０オルソログの全てについて、発現させ、精製した。Ｎｕｎｃ  ＭａｘｉＳｏｒｂ平底ブラックプレートを、５０ｍＭ  炭酸水素ナトリウム（ｐＨ９．４）中の１μｇ／ｍｌ  マウス抗胎盤アルカリホスファターゼ抗体（Ｐｉｅｒｃｅ，  ｃａｔ＃  ＭＡ１−１９３５４）で、一晩４℃で被覆した。次いで、プレートを、Ｔｗｅｅｎ−２０を含む１×リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳＴ）（５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む）を使用して、２時間にわたって室温でブロッキングした。２０ｎＭ  ＳＥＡＰ−ＣＣＬ２０融合タンパク質から、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で５倍希釈系列を作製した。キメラ抗体およびヒト化抗体（ＨＣ２／ＬＣ３およびＨＣ２／ＬＫ３）を、１×ＰＢＳＴ（５％  ＢＳＡを含む）中１μｇ／ｍｌへと希釈し、上記プレートに添加し、１時間にわたって室温でインキュベートした。次いで、上記プレートを、１×ＰＢＳＴ（５％  ＢＳＡをふくむ）で３回洗浄した。ヤギ抗ヒトＩｇＧ＋ＩｇＭ（Ｈ＋Ｌ）  ＨＲＰ結合体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  ｃａｔ＃  １０９−０３５−１２７）を、８０ｎｇ／ｍｌへと希釈し、上記プレートに添加し、１時間にわたって室温でインキュベートした。ＱｕａｎｔａＢｌｕ蛍光ＨＲＰ基質（Ｐｉｅｒｃｅ  ｃａｔ＃  １５１６９）を添加し、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＭＳ（励起３２５ｎｍ／発光４２０ｎｍ）プレートリーダーにおいて蛍光を測定することによって、結合した抗体を検出した。
【０２７１】
上記ハムスター抗マウスＣＣＬ２０抗体  ２Ｆ５−５  ＭＡｂが、６４ｐＭという５０％  有効用量（ＥＣ５０）でマウスＣＣＬ２０を結合した（データは示さず）一方で、上記キメラ抗ヒトＣＣＬ２０抗体もヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体も、上記の条件下では、マウスＣＣＬ２０にもラットＣＣＬ２０にも検出可能に結合しなかった。対照的に、上記キメラ抗体およびヒト化抗体はともに、ヒト、アカゲザル、およびカニクイザルのＣＣＬ２０に効率的に結合した（図１６Ａ〜Ｃ、１７ＡおよびＢ）。ヒトおよびアカゲザルのＣＣＬ２０に対するＥＣ５０は、類似しているようである（例えば、ＨＣ２／ＬＣ３については、６２ｐＭおよび１０１ｐＭ）一方で、カニクイザルＣＣＬ２０に対するＥＣ５０は、ＨＣ２／ＬＣ３については３４０ｐＭであり、ヒトＣＣＬ２０に対して５．４倍の差異であった。類似の結果が、ＨＣ２／ＬＫ３について認められた。このことは、ヒトもしくはアカゲザルのＣＣＬ２０に対する結合量と同じ結合量をカニクイザルＣＣＬ２０に対して達成するために、遙かに高い濃度の抗体が必要とされたことを示唆する。
【０２７２】
（実施例８：ヒト化抗ＣＣＬ２０  ＭＡｂのＣＣＬ２０種オルソログに対する交叉反応性のための表面プラズモン共鳴アッセイ）
本発明者らはまた、表面プラズモン共鳴（ＢｉａｃｏｒｅＴＭ）分析を使用して、ＨＣ２／ＬＣ３およびＨＣ２／ＬＫ３が、マウス、カニクイザル、もしくはアカゲザルのＣＣＬ２０オルソログに結合し得るかどうかを試験した。モノクローナルマウス抗ヒト胎盤アルカリホスファターゼを、流速２５μｌ／分において、ＣＭ５チップの全４つのフローセル上に固定した。ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液中のヒト、アカゲザル、カニクイザル、もしくはマウスのＣＣＬ２０−ＳＥＡＰの２ｎＭ  溶液２５μｌを、フローセル２、３、もしくは４上に注入した。抗体結合のために、ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液中のＨＣ２／ＬＣ３  ＭＡｂ、ＨＣ２／ＬＫ３  ＭＡｂ、もしくは２Ｆ５−５  ＭＡｂの０〜８０ｎＭ  希釈物（もしくは緩衝液のみ）２４０μｌを、流速５０μｌ／分において、全４つのフローセル上に注入した。解離を４５分間にわたって追跡した。フローセル１（抗ＳＥＡＰのみ）を、全４つのフローセルの参照として使用した。上記フローセルの再生を、１０ｍＭ  グリシン（ｐＨ２．２５）で行った。上記チップの捕捉能に対する再生効果に起因して、抗体注入を、低濃度から高濃度まで逐次的に行った。データ適合を、１：１  ラングミュアモデルを使用して行った。
【０２７３】
上記の条件下では、ハムスター抗マウスＣＣＬ２０抗体  ２Ｆ５−５は、４．９ｐＭという（二価）ＫＤでマウスＣＣＬ２０を結合したが、ヒト、アカゲザル、もしくはカニクイザルのＣＣＬ２０には有意に結合しなかった。対照的には、キメラ抗体、ＨＣ２／ＬＣ３抗体、およびＨＣ２／ＬＫ３抗体は、ヒト、アカゲザル、およびカニクイザルのＣＣＬ２０に効率的に結合した（表１７）。
【０２７４】
（表１５において示されるデータについて使用される１価様式に対して）使用される上記アッセイ様式の二価の（より高い親和性）性質に起因して、測定した見かけの親和性値は、以前に実施例５において検出したものよりこのアッセイにおいて高かった（例えば、本アッセイにおいては、ＨＣ２／ＬＣ３について４．７ｐＭ  対  表３において４４ｐＭ）。アカゲザルおよびカニクイザルのＣＣＬ２０に対するＫＤ値は、ヒトＣＣＬ２０に対するものより一般に高かった（３倍）。このことは、上記抗体が、ヒトＣＣＬ２０に対してより特異的に結合することを示していた。しかし、実施例７からのＥＬＩＳＡデータとは対照的に、本発明者らは、アカゲザルおよびカニクイザルのＣＣＬ２０に対する結合親和性の間に有意差を認めなかった。
【０２７５】
【表１７】
0005996549.tif 000031
（実施例９：マウス抗ヒトＣＣＬ２０クローン  ３６Ｆ７Ｃ１０に対するエピトープマッピング）
マウス抗ヒトＣＣＬ２０モノクローナル抗体  ３６Ｆ７Ｃ１０が結合するヒトＣＣＬ２０エピトープ（複数可）を決定するために、本発明者らは、水素／重水素交換法（ここで抗体結合は、上記エピトープの重水素化を防御し、そのため、上記エピトープの重水素化から保護する）を使用した。図１８Ａに示されるように、本発明者らは、ヒトＣＣＬ２０のＮ末端付近の、残基７〜９、１０〜１９、および２０〜２２（おそらく、エピトープ（複数可）を表す）に非常に強い摂動（ｐｅｒｔｕｒｂａｔｉｏｎ）を認めた。辺縁の防御はまた、Ｃ末端付近の残基３９〜５５、５６〜６７、および６１〜７０で認められた。これらセグメントは、上記エピトープにとって周辺に存在し得るか、またはそれらの呼吸運動（ｂｒｅａｔｈｉｎｇ  ｍｏｔｉｏｎ）は、上記エピトープに結合体化され得る。各示されるアミノ酸の重水素化レベルは、４つの時点で示される：上から下に、１５０ｓ、５００ｓ、１ｓ、５００ｓ、および５，０００ｓ。
【０２７６】
３６Ｆ７Ｃ１０のエピトープとして同定された領域は、ＣＣＬ２０のＮ末端領域およびループ領域内に含まれる。これらは、ＣＣＲ６結合およびシグナル伝達に重要であることが公知である（Ｍａｌｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ  Ｆ６２：６３１−６３４  （２００６））（図１８Ｂ）。３６Ｆ７Ｃ１０に由来するキメラ抗体およびヒト化抗体、特に、３６Ｆ７Ｃ１０と同じ重鎖および軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する抗体、または３６Ｆ７Ｃ１０と類似の重鎖および軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３のアミノ酸配列を有する抗体（例えば、３６Ｆ７Ｃ１０のＣＤＲと比較して、３個未満、２個未満、もしくは１個未満のアミノ酸置換を有する抗体）は、同じエピトープに結合すると予測される。従って、このエピトープの同定は、上記３６Ｆ７Ｃ１０  ＭＡｂ、ならびにこれに由来するキメラ抗体およびヒト化抗体の、ＣＣＬ２０活性を中和する能力を説明し得る。
【０２７７】
（実施例１０：ヒト化抗ヒトＣＣＬ２０抗体についてのインビボ走化性アッセイ）
ＨＣ２／ＬＣ３およびＨＣ２／ＬＫ３が、ＣＣＬ２０誘導性走化性をインビボで阻害し得るかどうかを試験するために、本発明者らは、ヒトＣＣＬ２０が、マウスＣＣＲ６（配列番号１０６）と相互作用して、マウスＴ細胞の化学走性を誘導し得るという事実を利用した（図１９）。本発明者らは、マウスＴ細胞が皮内注射したヒトＣＣＬ２０に向かって移動することを測定するハイブリッドインビボシステムを使用した（図２０）。
【０２７８】
組換えヒトＣＣＬ２０（１０ｎｇ／匹）およびビヒクルを、それぞれ、試験マウスの背部の右側および左側の剃毛した皮膚へと皮内注射した（ｎ＝３の群）。次いで、カルセイン−ＡＭ標識マウス脾性Ｔ細胞（５×１０６細胞／マウス）を、尾静脈内へと静脈内に移入し、図２０に示される投与量で、示された抗体を尾静脈へと同時に注射した。１時間後、蛍光陽性細胞を、皮内注射の部位において立体顕微鏡を使用して計数した。
【０２７９】
ＨＣ２／ＬＫ３およびＨＣ２／ＬＣ３はともに、親マウス抗体３６Ｆ７Ｃ１０およびそのキメラ形態のレベルに匹敵するレベルで、上記ＣＣＬ２０注射部位への細胞移動を有意に阻害した。Ｔ細胞の化学走性は、炎症カスケードにおいて重要なステップであるので、この移動の防止は、自己免疫状態および炎症状態を処置する上で臨床的意味を有する。
【０２８０】
（実施例１１：ＩＩ型コラーゲン誘発性関節炎に対する２Ｆ５−５  ＭＡｂの効果）
治療適応のための抗ＣＣＬ２０抗体の使用をさらに評価するために、本発明者らは、ハムスター抗マウス  ２Ｆ５−５  ＭＡｂを使用して、マウスにおけるインビボ研究をさらに行った。第１に、本発明者らは、ＣＩＡマウス（関節リウマチの動物モデル）において、ＣＣＬ２０媒介性化学走性を中和する２Ｆ５−５の能力を評価した。ＣＩＡを、実施例１に本質的に記載されるように誘発した。関節炎の発症後（関節炎スコア１〜３）、マウスを無作為化し、２Ｆ５−５  ＭＡｂもしくはコントロールＩｇＧ抗体のいずれか５００μｇ／マウスを用いて処置した。両方の場合において、上記抗体を、１日おきに静脈内投与した。上記コントロールＩｇＧと比較して、２Ｆ５−５  ＭＡｂは、関節炎症状のさらなる発達を阻害した（図２１、２２）。
【０２８１】
本発明者らはまた、Ｘ線スコア付けを使用して、骨病変（これは、関節リウマチにおいて頻繁に認められる）に対する２Ｆ５−５  ＭＡｂの効果を決定した。スコア付けを、Ｉｎｏｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  ３９：  １８７−１９４  （１９９３）に記載されるように行った。簡潔には、ＣＩＡマウスの各足を、Ｘ線画像に従って、骨粗鬆症（Ｏ）の重症度、骨侵食（Ｅ）、および新たな骨形成（Ｎ）に基づいて０〜３のスケールで等級付けした。使用したスケールは、以下であった：  ０，変化なし；  １，僅かな変化；  ２，中程度の変化；および３，重度の変化。各因子のスコアを加えて、骨病変についての累積Ｘ線スコアを明らかにした。２Ｆ５−５  ＭＡｂで処置したマウスは、コントロールＩｇＧで処置したマウスと比較して、３９日目に、明らかに低い重症度のＸ線スコアを示した（図２３、２４）。
【０２８２】
本発明者らは、ＥＬＩＳＡを使用していくつかのバイオマーカーを分析することによって、骨病変に対する２Ｆ５−５  ＭＡｂ処置の効果を確認した。５００μｇの２Ｆ５−５抗体もしくはコントロールＩｇＧ抗体で上記のように、ＣＩＡマウスを免疫し、処置した。血漿サンプルを、２回目の免疫後の１１日目および１２日目にマウスから調製した。軟骨破壊のマーカーである、血清軟骨オリゴマーマトリクスタンパク質（ＣＯＭＰ）を、Ａｎｉｍａｌ  ＣＯＭＰ  ＥＬＩＳＡ  Ｅｎｚｙｍｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙキット（ＡｎａＭａｒ  Ｍｅｄｉｃａｌ）を使用して、動物の血漿サンプルを、１：２０希釈したことを除いて、製造業者の指示（本明細書に参考として援用される）に従って定量化した。ＣＯＭＰは、プレートに予め被覆されているので、これは、競合ＥＬＩＳＡである。それによって、上記ＣＯＭＰ標準もしくはＣＯＭＰ含有血漿の添加は、ＯＤ４５０の低下を生じる（図２５Ａ）。サンプルアッセイからの生データは、図２５Ｂおよび２５Ｃに示される。ＣＩＡマウスにおけるＣＯＭＰ血清レベルは、２Ｆ５−５  ＭＡｂでの処置によって、ほぼ正常レベルまで低下した（図２６）。このことから、２Ｆ５−５の、軟骨破壊を阻害する能力が実証される。
【０２８３】
破骨細胞の形成および分化は、ＲＡ関連骨粗鬆症および侵食の原因であるので、本発明者らは、関節炎治療のインジケーターとして、破骨細胞誘導分子である、核因子κＢリガンドのレセプターアクチベーター（ＲＡＮＫＬ）、および破骨細胞マーカー（例えば、核因子κＢのレセプターアクチベーター（ＲＡＮＫ）、酒石酸耐性酸ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）、およびカテプシンＫ）のレベルを測定した。本発明者らは、ホモジナイズしたマウス足から単離した総ＲＮＡを使用して、定量的ＰＣＲによって、これらマーカーのｍＲＮＡ発現レベルを評価した。上記足を、最初に、Ｔｒｉｚｏｌ試薬を含む組織溶解緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）に浸漬した後に、ホモジナイザーでホモジナイズした。クロロホルムを添加した後、サンプルを、１４，０００ｒｐｍにおいて１５分間にわたって、４℃で遠心分離して、上記溶液を、水相と有機相とに分離した。上記水相を取り出し、これにイソプロパノールを添加し、続いて、１４，０００ｒｐｍにおいて１５分間にわたって、４℃で遠心分離して、ＲＮＡペレットを得た。ＲＮＡｓｅを含まない水で溶解したＲＮＡペレットを、ＲＮＡｅａｓｙミニキット（ＱＩＡＧＥＮ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）に使用して、上記ＲＮＡを単離し、ＤＮＡｓｅで処理して、いかなるＤＮＡをも除去した。相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を、上記ＲＮＡから、ＲＴ反応キット（ＲＮＡ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ，  ＴＡＫＡＲＡ  Ｂｉｏ，  Ｉｎｃ．  Ｓｈｉｇａ，  Ｊａｐａｎ）で、製造業者のプロトコルに従って生成した。各ｃＤＮＡ種に対する定量的リアルタイムＰＣＲを行い、ハウスキーピング遺伝子であるヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）のレベルに対して比較した。以下の順方向プライマーおよび逆方向プライマーセットを、ＰＣＲ反応において使用した：
【０２８４】
【化１】
0005996549.tif 000032
全てのプライマーを、ウェブベースのソフトウェアＰｒｉｍｅｒ  ３（Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，  ＭＡ，  ＵＳＡ）を使用して設計して、ＲＮＡの非特異的増幅を回避した。ｃＤＮＡテンプレート、プライマー、ウラシルＤＮＡグリコシラーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）、およびＱｕａｎｔｉＴｃｃｔ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（ＱＩＡＧＥＮ，  Ｖａｌｅｎｃｉａ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）を含む反応混合物を、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７７００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｆｏｓｔｅｒ，  ＣＡ，  ＵＳＡ）の増幅反応に使用した。発現レベルを、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７７００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ  Ｓｏｆｔｗａｒｅによって自動的に定量化した。
【０２８５】
２Ｆ５−５  ＭＡｂ処置の後、ｍＲＮＡレベルは、関節組織における全てのマーカーについて抑制された（図２７ＡおよびＢ；ハウスキーピング遺伝子ＨＰＲＴと比較しての、発現レベルの倍数変化を示す）。このことから、２Ｆ５−５がインビボで骨病変を阻害するというさらなる証拠が提供された。
【０２８６】
（実施例１２：グルコース−６−ホスフェートイソメラーゼ誘発性関節炎に対する２Ｆ５−５  ＭＡｂの効果）
本発明者らは、グルコース−６−ホスフェートイソメラーゼ（Ｇ６Ｐ１）誘発性関節炎を有するマウス（ＲＡの別のマウスモデル）における２Ｆ５−５  ＭＡｂ処置の抗関節炎効果を試験した。フロイント完全アジュバント中で乳化してＤＢＡ／１マウスの尾の基部に注射した、組換えＧＳＴ−Ｇ６ＰＩ（３００μｇ／マウス）による皮内感作によって、関節炎を誘発した。上記Ｇ６Ｐ１免疫の６日後かつ関節腫張の発生の直前に、マウスを無作為化し、アイソタイプマッチ抗体もしくは２Ｆ５−５  ＭＡｂのいずれか５００μｇ／マウスを用いて処置した。各マウスの足における関節炎症状の重症度を、先の実施例１において記載されるように等級付けした。２Ｆ５−５  ＭＡｂで処置したマウスは、アイソタイプマッチ抗体で処置したマウスより有意に低い関節炎スコアを示した。このことは、２Ｆ５−５が、上記コントロールと比較して、関節炎の発達を強力に抑制することを示していた（図２８）。
【０２８７】
これらデータは、インビボ関節炎モデルにおける抗ＣＣＬ２０抗体処置の効力を実証し、抗ＣＣＬ２０抗体の使用が、関節リウマチの処置において有益であり得ることを示唆する。
【０２８８】
（実施例１３：オキサゾロン誘発性  アトピー性皮膚炎に対する２Ｆ５−５  ＭＡｂの効果）
本発明者らは、次いで、皮膚炎のマウスモデルにおいて２Ｆ５−５  ＭＡｂ処置の効果を評価した。１つのモデルにおいて、オキサゾロンを使用して、上記疾患に罹りやすいマウス（ＮＣ／Ｎｇａ系統）においてアトピー性皮膚炎を誘発した。上記マウスの腹部皮膚を剃毛し、０日目、５日目、および８日目に、オキサゾロンに曝した。１３日目に、皮膚炎の徴候（スコア２）を示すマウスを選択し、オキサゾロンで再び免疫した。その後、マウスを、２Ｆ５−５  ＭＡｂもしくはアイソタイプマッチコントロールＩｇＧ抗体（５００μｇ／マウス，１日おきに静脈内投与した）いずれかでの処置のために６匹の群に無作為化した。本発明者らは、以下のように盲検試験において皮膚スコアをアッセイした：各皮膚炎症状（例えば、乾燥、鱗屑、紅斑、滲出／痂皮形成、および擦過傷）を、０〜３（０＝なし、１＝軽度、２＝中程度、３＝重度）のスケールでスコア付けした；これらスコアを、次いで、累積皮膚炎スコアのために加えた（Ｌｅｕｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ８５（５）：９２７−９３３  （１９９０）に記載されるとおり）。本発明者らは、１３日目から１８日目までの曲線下面積（「ＡＵＣ」）を定量化することによって、上記２群の間の疾患抑制の程度を比較した。この皮膚炎モデルにおいて、２Ｆ５−５  ＭＡｂは、コントロールＩｇＧと比較して、疾患進行の統計的に有意な（ｐ＜０．０５）抑制を誘導した（図２９）。
【０２８９】
（実施例１４：ＤＮＦＢ誘発性アレルギー性接触性皮膚炎に対する２Ｆ５−５  ＭＡｂの効果）
本発明者らは、ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）誘発性アレルギー性接触性皮膚炎（皮膚炎の第２のマウスモデル）において、２Ｆ５−５  ＭＡｂ処置の効果を試験した。マウスを６匹の群に分け、２５μｌのＤＮＦＢ溶液（アセトン：オリーブオイルの４：１溶液中の０．４％  ＤＮＦＢ）を、２連続日（０日目および１日目）にわたって剃毛した腹部に塗布することによって、感作した。１つの群を、２Ｆ５−５  ＭＡｂで処置した一方で、他方の群を、アイソタイプマッチコントロール抗体で処置した（５００μｇ／マウスに、０日目、２日目および５日目に静脈内で）。５日目に、上記マウスを、２０μｌの０．２％  ＤＮＦＢ溶液（４：１  アセトン：オリーブオイル中）を、一方の耳の片側に塗布することによって、再チャレンジした。耳の厚みを、厚みゲージを使用して、６日目に浮腫のインジケーターとして測定した。２Ｆ５−５  ＭＡｂでの処置は、耳の厚みを低下させた。このことから、皮膚炎発達の成功裏な防止が示された（図３０）。
【０２９０】
本明細書において引用される全ての刊行物、特許、および特許出願は、本明細書に参考として援用される。前述の発明は、幾分詳細に、理解を明瞭にする目的で図示および例示によって記載されてきたものの、特定の変更および改変が、添付の特許請求の範囲の趣旨もしくは範囲から逸脱することなく、本発明に対して行われ得ることは、本発明の教示に鑑みれば、当業者には容易に明らかである。
【０２９１】
【表１８−１】
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【０２９２】
【表１８−２】
0005996549.tif 000034
【０２９３】
【表１９−１】
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【０２９４】
【表１９−２】
0005996549.tif 000036
【０２９５】
【表１９−３】
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【０２９６】
【表１９−４】
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【０２９７】
【表２０】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２５Ｃ】
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【図２６】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【配列表】
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