(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
関節リウマチを治療するための薬物の製造における治療的有効量の第一の活性剤の使用であって、該第一の活性剤が式(I)の化合物又はその医薬として許容し得る塩であり、該治療が、治療的有効量の追加の活性剤の投与を含み、かつ該追加の活性剤が、シクロスポリンAである、前記使用：
【化１】
0006022548.tif 000016
。
【請求項２】
前記第一の活性剤の治療的有効量が、1日に約10mg〜約200mgである、請求項１記載の使用。
【請求項３】
前記活性剤の1つ又は複数が、経口投与される、請求項１記載の使用。
【請求項４】
前記第一の活性剤が、錠剤又はカプセル剤の形態で経口投与される、請求項３記載の使用。
【請求項５】
前記活性剤の1つ又は複数が、局所投与される、請求項１記載の使用。
【請求項６】
前記局所投与が、ローション剤又は液剤の形態である、請求項５記載の使用。
【請求項７】
前記第一の活性剤の治療的有効量が、1日に患者の体重1kg当たり約0.01mg〜約100mgである、請求項１〜６のいずれか一項記載の使用。
【請求項８】
前記第一の活性剤の治療的有効量が、1日に10、20、30、50及び100mgからなる量から選択される、請求項２記載の使用。
【請求項９】
前記第一の活性剤が、1日に2回投与される、請求項８記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その全体が引用により本明細書中に組み込まれている、2011年4月28日に出願された米国仮特許出願第61/480,263号に対する優先権を主張する。
【０００２】
(1.分野)
本明細書に提供されるのは、限定されないが、脊椎炎、若年性関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、変形性関節症、強直性脊椎炎、及び関節リウマチを含む、自己免疫性及び炎症性疾患及び障害を、他の治療法と組み合わせたホスホジエステラーゼ4(PDE4)阻害剤の投与により、治療、予防、又は管理する方法である。特に、本明細書に提供されるのは、関節炎、乾癬、乾癬性関節炎、及び関節リウマチを、シクロスポリンAもしくは他のカルニニューリン(calnineurin)阻害剤、エタネルセプトもしくは他のTNF阻害剤、又はメトトレキサートもしくは他の代謝拮抗薬のいずれかと組み合わせた(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-1,3-ジオキソイソインドリン-4-イル)アセトアミドを用いて、及び/或いはシクロスポリンA、エタネルセプト、もしくはメトトレキサートのいずれか、又は同様の薬物と組み合わせた(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-3-オキソイソインドリン-4-イル)シクロプロパンカルボキサミドを用いて、治療、予防、又は管理する方法である。
【背景技術】
【０００３】
(2.背景)
炎症は、宿主防御及び免疫媒介性疾患の進行において基本的な役割を果たしている。炎症応答は、損傷(例えば、外傷、虚血、及び外来粒子)並びに感染(例えば、細菌感染又はウイルス感染)に応答して、化学伝達物質(例えば、サイトカイン及びプロスタグランジン)並びに炎症細胞(例えば、白血球)を含む一連の複雑な事象により開始される。炎症応答は、血流の増加、毛細血管透過性の増加、及び食細胞の流入を特徴とする。これらの事象は、損傷又は感染の部位で腫脹、発赤、熱感(ヒートパターンの変化)、及び化膿を生じさせる。
【０００４】
サイトカイン及びプロスタグランジンは炎症応答を制御し、秩序ある自己限定性のカスケードにおいて血液又は罹患組織に放出される。こうしたサイトカイン及びプロスタグランジンの放出によって、損傷又は感染の部位への血流が増加し、発赤及び熱感が生じ得る。これらの化学物質のいくつかは、組織への流体の漏出を引き起こし、腫脹を生じさせる。この防御過程は、神経を刺激し、疼痛を引き起こし得る。これらの変化は、限られた期間、関連部位に生じる場合、身体の利益のために作用する。
【０００５】
腫瘍壊死因子アルファ(TNF-α)は、主に、免疫刺激物質に応答した単核貪食細胞によって放出されるサイトカインである。TNF-αは、分化、動員、増殖、及びタンパク質分解などのほとんどの細胞プロセスを増強することができる。低レベルでは、TNF-αは、感染体、腫瘍、及び組織損傷に対する防御を付与する。しかし、TNF-αは、多くの疾患においても役割を果たしている。哺乳動物又はヒトに投与されたとき、TNF-αは、炎症、発熱、心血管作用、出血、凝固、並びに急性感染及びショック状態において見られるのと同様の急性期応答を引き起こすか、又はこれらを悪化させる。増強された又は無調節なTNF-α産生は、いくつかの疾患及び医学的状態、例えば、癌、例えば、固形腫瘍及び血行性腫瘍;心疾患、例えば、鬱血性心不全;並びにウイルス性疾患、遺伝的疾患、炎症性疾患、アレルギー性疾患、及び自己免疫疾患に関係があるとされている。
【０００６】
アデノシン3',5'-環状一リン酸(cAMP)も、限定されないが、喘息及び炎症、並びに他の疾病などの、多くの疾患及び疾病において役割を果たしている(Lowe及びChengらの文献、Drugs of the Future, 17(9), 799-807, 1992)。炎症性白血球中のcAMPの上昇が、その活性化、並びにその後のTNF-α及びNF-κBを含む炎症性メディエーターの放出を阻害することが示されている。cAMPのレベルの増加は、気道平滑筋の弛緩も引き起こす。
【０００７】
cAMPの不活化のための主な細胞機構は、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ(PDE)と呼ばれるアイソザイムのファミリーによるcAMPの分解であると考えられている(Beavo及びReitsnyderの文献、Trends in Pharm., 11, 150-155, 1990)。11種の既知のPDEファミリーが存在する。例えば、PDE IV型の阻害は、炎症性メディエーター放出の阻害と気道平滑筋の弛緩の両方に特に効果的であることが認められている(Vergheseらの文献、Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 272(3), 1313-1320, 1995)。したがって、PDE4を特異的に阻害する化合物は、炎症を阻害し、気道平滑筋の弛緩を助け、心血管作用又は抗血小板作用などの望まれない副作用を最小限に抑えることができる。現在使用されているPDE4阻害剤には、許容し得る治療的用量での選択的作用が欠如している。
【０００８】
炎症性疾患、例えば、関節炎、関連する関節炎状態(例えば、変形性関節症、関節リウマチ、及び乾癬性関節炎)、炎症性腸疾患(例えば、クローン病及び潰瘍性大腸炎)、敗血症、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、並びに慢性閉塞性肺疾患、慢性炎症性肺疾患もまた、一般的でかつ問題のある病気である。増強された又は無調節なTNF-α産生は、炎症応答において中心的な役割を果たしており、その拮抗薬の投与は、炎症性疾患の動物モデルにおいて慢性及び急性応答を遮断する。
【０００９】
関節炎は、身体の関節の損傷を伴う疾病群を指し得る全身性自己免疫疾患である。100を超える様々な形態の関節炎が存在する。最も一般的な形態は、変形性関節症(変性性関節疾患)であり、他の関節炎形態は、関節リウマチ、乾癬性関節炎、及び関連自己免疫疾患、例えば、狼瘡及び痛風である。関節リウマチは、関節の慢性炎症を特徴とする。滑膜組織と滑液の両方が、サイトカイン産生をもたらす炎症細胞に侵される。関節に浸潤するT細胞及び単球は、1型及び2型免疫応答マーカーの活性化の増大を示す。
【００１０】
乾癬は、皮膚に現われる慢性全身性自己免疫疾患である。5種類の乾癬:尋常性乾癬、滴状乾癬、逆位乾癬、膿疱性乾癬、及び乾癬性紅皮症がある。最も一般的な形態の尋常性乾癬は、一般に、表皮の上部第一層に現われる赤色及び白色の落屑性斑として見られる。しかし、皮膚症状がない患者もいる。尋常性乾癬では、皮膚は、これらの部位で急速に積み重なり、これにより、皮膚に銀白色の外観が与えられる。プラークは、肘及び膝の皮膚に頻発するが、頭皮、手掌及び足蹠、並びに生殖器を含む、任意の部位を冒し得る。湿疹とは対照的に、乾癬は、関節の外側に見られる可能性が高い。この障害は、重症度が、小さい局所的な斑から完全に身体を覆うものまで様々である慢性再発性疾病である。手指の爪及び足指の爪は、高い頻度で冒され(乾癬性爪ジストロフィー)、また、単発症状として見られることもある。乾癬は、乾癬性関節炎として知られる関節の炎症を引き起こすこともある。乾癬において、1つの仮説は、T細胞が活性化されるようになり、真皮に移動して、サイトカイン、特に、TNF-αの放出を引き起こし、これにより、炎症及びケラチノサイトの急速増殖がもたらされるというものである。
【００１１】
乾癬性関節炎は、皮膚と、関節と、腱、靱帯、及び筋膜の付着部とを冒す慢性炎症性関節炎状態である。Gladmanの文献、Current Opinion in Rheumatology, 「乾癬性関節炎における最新の概念(Current concepts in psoriatic arthritis)」, 2002, 14:361-366、及びRuddyらの文献、リウマチ学(Rheumatology), 第2巻, 第71章, 1071頁, 第6版, 2001。乾癬性関節炎は、一般に、乾癬に付随する(同上)。乾癬患者の約7％が乾癬性関節炎を発症する。メルクマニュアル(The Merck Manual), 448(第17版, 1999)。
【００１２】
乾癬性関節炎は、種々の臨床パターンで現われ得る。乾癬性関節炎の5つの一般的なパターン:遠位指節間関節の関節炎、破壊性関節炎、関節リウマチと区別できない対称性多発性関節炎、非対称性少関節炎、及び脊椎関節症がある。Ruddyらの文献、1073頁。乾癬は、患者の60〜80％において、乾癬性関節炎の発症に先行すると思われる。時として、関節炎及び乾癬は同時に現われる。関節症が皮膚発疹に先行する場合もある。
【００１３】
乾癬性関節炎の症状としては、骨外形成(extra bone formation)、関節硬直、指炎、腱付着部症、腱炎、及び脊椎炎が挙げられる。Gladmanの文献、362頁。大部分の患者は古典的な乾癬パターンの皮膚病変を有する。Ruddyらの文献、1075頁。落屑性の紅斑性プラーク、滴状病巣、膿湖、及び紅皮症は、乾癬性関節炎を有する患者で見られ得る乾癬性皮膚病変である。陥凹、ボー線、爪甲白斑症、爪甲離床症、油点、爪下角質増殖症、線状出血、斑点のある爪半月、及び亀裂を含む爪の病変は、乾癬性関節炎の発症と顕著に関連する臨床特徴である。Ruddyらの文献、1076頁。乾癬性関節炎における眼症状としては、結膜炎、虹彩炎、上強膜炎、乾性角結膜炎、及び大動脈弁閉鎖不全症が挙げられる。
【００１４】
乾癬性関節炎の正確な原因は不明であるが、遺伝的因子、環境因子、免疫学的因子、及び血管因子が人の素因に寄与する。Ruddyらの文献、1071〜72頁、及びGladmanの文献、363頁。この疾患は、一般集団よりも罹患している一等親血縁者で起こる可能性が高い。Ruddyらの文献、1071頁。集団調査から、多数のヒト白血球抗原(HLA)が関連することが示されている。British Society for Rheumatology, Rheumatology, 2001; 40:243、及びGladmanの文献、362頁。多くの証拠により、T細胞媒介性過程が乾癬性関節炎の病態生理を促進することが示唆されている。Ruddyらの文献、1071及び1077頁、並びにGladmanの文献、363頁。活性化T細胞は、滑液中に見られるサイトカインの産生増強に寄与し得る。Th1サイトカイン(例えば、腫瘍壊死因子-α(TNF-α)、インターロイキン(IL)-1β、及びIL-10)は、関節リウマチよりも乾癬性関節炎でより多く見られ、この2つの疾患が異なる機構によって引き起こされ得ることを示唆している。Ruddyらの文献、1071頁。単球も乾癬性関節炎において役割を果たしており、乾癬性関節炎を有する患者の関節の破壊的変化を媒介し得るマトリックスメタロプロテイナーゼの産生に関与している。Gladmanの文献、364頁。
【００１５】
国際的に、乾癬性関節炎の発生率は1〜40％である。乾癬性関節炎は、通常、40代から60代で発症するが、それは、ほとんどどの年齢でも起こり得る。男性と女性は同等に罹患するが、男性では脊椎炎形態が優勢であるのに対し、女性ではリウマチ形態が優勢である。Ruddyらの文献、1077頁。
【００１６】
特に、従来の治療に不応性である患者のための、乾癬性関節炎を治療、予防、及び管理する安全でかつ効果的な方法が大いに必要とされている。さらに、そのような疾患を治療すると同時に、従来の療法に付随する毒性及び/又は副作用を軽減又は回避する必要がある。
【００１７】
したがって、PDE4、及びTNF-αを含む特定のサイトカインの活性を遮断するか、又はそれらの産生を阻害することができる化合物及び組成物は、有益な治療法であり得る。多くの小分子阻害剤は、PDE4又はTNF-αが関与するとされる炎症性疾患を治療又は予防する能力を示している(総説については、Loweの文献、1998 Exp. Opin. Ther. Patents 8:1309-1332を参照されたい)。1つのそのような分子のクラスは、その全てが引用により完全に本明細書中に組み込まれている、米国特許第6,020,358号;第6,962,940号;第7,208,526号;及び第7,659,302号、並びに米国特許公開第2008/0234359号に記載の置換フェネチルスルホンである。例えば、アプレミラストは、PDE4を特異的に阻害し、ヒトのリウマチ性滑膜細胞からのTNF-αの自然産生を阻害し、かつ実験的関節炎を改善する新規の経口多能性免疫調節剤である。(McCannらの文献、Arthritis Res. Ther. 2010, 12(3):R107)。さらに、エタネルセプト(Enbrel(登録商標))は、有用なTNF-α阻害剤である。
【００１８】
炎症応答における液性免疫要素と細胞性免疫要素の均衡の取れた繊細な相互作用によって、有害物の排除、及び損傷組織の修復の開始が可能となる。この繊細に均衡の取れた相互作用が破壊されると、炎症応答は、正常組織にかなりの損傷をもたらし得るし、また、反応を開始したもとの損傷よりも多くの害を及ぼし得る。これらの無制御な炎症応答の場合、組織損傷及び器官機能不全を予防するために、臨床的介入が必要とされる。乾癬、関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、クローン病、喘息、アレルギー、又は炎症性腸疾患などの疾患は、慢性炎症を特徴とする。
【００１９】
炎症性障害に対する現在の治療は、症状を制御するための対症的投薬治療及び免疫抑制剤を伴う。例えば、非ステロイド性抗炎症薬(NSAID)、例えば、アスピリン、イブプロフェン、フェノプロフェン、ナプロキセン、トルメチン、スリンダク、メクロフェナメートナトリウム、ピロキシカム、フルルビプロフェン、ジクロフェナク、オキサプロジン、ナブメトン、エトドラク、及びケトプロフェンは、鎮痛作用及び抗炎症作用を有する。しかしながら、NSAIDは、疾患の進行を変化させることができないと考えられている。(Tierneyら(編)、最新の医療診断及び治療(Current Medical Diagnosis & Treatment), 第37版, Appleton & Lange(1998), 793頁)。さらに、NSAIDは、消化管副作用を引き起こし、下部消化管に影響を及ぼして、穿孔を引き起こすか又は炎症性腸疾患を悪化させ、腎毒性を生じさせ、かつ出血時間を延長させることが多い。コルチコステロイドは、炎症症状を制御するために一般に使用される別のクラスの薬物である。コルチコステロイドは、NSAIDと同様に、疾患の自然な進行を変化させることがなく、したがって、活動性疾患の臨床症状は一般に、薬物を中止したときに、再び現われる。長期のコルチコステロイド療法に起因する深刻な有害反応の問題(例えば、骨粗鬆症、感染リスクの増加、食欲増加、高血圧、浮腫、消化性潰瘍、精神病)のために、その長期使用は大きく制限される。
【００２０】
低用量の免疫抑制剤、例えば、細胞毒性剤を炎症性障害の治療に使用することができる。例えば、乾癬及び関節炎に対するいくつかの治療は、疾患修飾性抗リウマチ薬(DMARD、例えば、シクロスポリンA及びメトトレキサート)、抗炎症剤(TNF-α阻害剤、例えば、エタネルセプト)、並びに鎮痛薬に基づいている。
【００２１】
炎症性障害及び自己免疫障害のための新しい治療が絶えず求められている。特に、現在使用されている薬剤の投薬量及び/もしくは投与頻度を低下させるか、又は現在使用されている治療をより効果的にすることができる何らかの新しい治療が絶えず求められている。白血病及び皮膚癌のモデルにおけるPDE4阻害剤とコルチコステロイドの組合せの報告はあるが、炎症性疾患の治療のためのPDE4阻害剤とTNF-α阻害剤、カルシニューリン阻害剤、又は代謝拮抗薬との組合せはまだ利用されていない。例えば、Dong, Hらの文献、Biochem Pharmacol., 2010, 79(3): 321-329; Kowalczyk Pらの文献、Eur J Pharmacol., 2009, 610(1-3): 29-36; Meyers, J.A.らの文献、Clin Cancer Res., 2007, 13(16): 4920-4927を参照されたい。
【発明の概要】
【００２２】
(3.概要)
本明細書に提供されるのは、PDE4阻害剤又はその医薬として許容し得る塩、水和物、溶媒和物、包摂化合物、プロドラッグ、もしくは多形を第二の活性剤と組み合わせて用いて、疾患及び障害を治療する方法である。ある実施態様において、1つ又は複数の第二の活性剤は、TNF-α阻害剤、カルシニューリン阻害剤、又は代謝拮抗薬である。ある実施態様において、該疾患又は障害としては、炎症性疾患又は自己免疫疾患、例えば、脊椎炎(例えば、強直性脊椎炎)、若年性関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、狼瘡、痛風、ベーチェット病、及び変形性関節症が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２３】
一実施態様において、本明細書に提供されるのは、乾癬又は関節炎を治療する方法であって、そのような治療を必要としている患者に、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-1,3-ジオキソイソインドリン-4-イル)アセトアミド、又はその医薬として許容し得るプロドラッグ、多形、塩、もしくは溶媒和物の治療的有効量、並びに抗炎症剤(例えば、NSAID)、疾患修飾性抗リウマチ薬(DMARD)、例えば、シクロスポリンA又はメトトレキサート、ミコフェノレートモフェチル、生物剤(例えば、エタネルセプト)、TNF-α阻害剤(例えば、エタネルセプト)、Cox-2阻害剤、及び鎮痛薬からなる群から選択される1以上の追加の活性剤の治療的有効量を投与することを含む、方法である。
【００２４】
別の実施態様において、本明細書に提供されるのは、乾癬又は関節炎を治療する方法であって、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-3-オキソイソインドリン-4-イル)シクロプロパンカルボキサミド、又はその医薬として許容し得るプロドラッグ、多形、塩、もしくは溶媒和物の治療的有効量、並びに抗炎症剤(例えば、NSAID)、疾患修飾性抗リウマチ薬(DMARD)、例えば、シクロスポリンA又はメトトレキサート、ミコフェノレートモフェチル、生物剤(例えば、エタネルセプト)、TNF-α阻害剤(例えば、エタネルセプト)、Cox-2阻害剤、及び鎮痛薬からなる群から選択される1以上の追加の活性剤の治療的有効量を投与することを含む、方法である。
【００２５】
ある実施態様において、関節炎の形態は、関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、狼瘡、及び痛風からなる群から選択される。
【００２６】
一実施態様において、第一の活性剤は、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-1,3-ジオキソイソインドリン-4-イル)アセトアミド、又はその医薬として許容し得るプロドラッグ、多形、塩、もしくは溶媒和物であり、追加の活性剤は、シクロスポリンAである。
【００２７】
一実施態様において、第一の活性剤は、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-1,3-ジオキソイソインドリン-4-イル)アセトアミド、又はその医薬として許容し得るプロドラッグ、多形、塩、もしくは溶媒和物であり、追加の活性剤は、メトトレキサートである。
【００２８】
一実施態様において、第一の活性剤は、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-1,3-ジオキソイソインドリン-4-イル)アセトアミド、又はその医薬として許容し得るプロドラッグ、多形、塩、もしくは溶媒和物であり、追加の活性剤は、エタネルセプトである。
【００２９】
一実施態様において、第一の活性剤は、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-3-オキソイソインドリン-4-イル)シクロプロパンカルボキサミド、又はその医薬として許容し得るプロドラッグ、多形、塩、もしくは溶媒和物であり、追加の活性剤は、シクロスポリンAである。
【００３０】
一実施態様において、第一の活性剤は、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-3-オキソイソインドリン-4-イル)シクロプロパンカルボキサミド、又はその医薬として許容し得るプロドラッグ、多形、塩、もしくは溶媒和物であり、追加の活性剤は、メトトレキサートである。
【００３１】
一実施態様において、第一の活性剤は、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-3-オキソイソインドリン-4-イル)シクロプロパンカルボキサミド、又はその医薬として許容し得るプロドラッグ、多形、塩、もしくは溶媒和物であり、追加の活性剤は、エタネルセプトである。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
(4.図面の簡単な説明)
【図１】マウスの後足厚に対する(+)-2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-アセチルアミノイソインドリン-1,3-ジオン(化合物A)及びデキサメタゾンの効果を示す図である。
【００３３】
【図２】マウスの後足厚に対する(+)-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-アセチルアミノイソインドリン-1,3-ジオン(化合物A)及びエタネルセプトの効果を示す図である。
【００３４】
【図３】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したインターフェロン-γ産生を示す図である。
【００３５】
【図４】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したインターロイキン-2産生を示す図である。
【００３６】
【図５】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したインターロイキン-4産生を示す図である。
【００３７】
【図６】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したインターロイキン-10産生を示す図である。
【００３８】
【図７】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したインターロイキン-13産生を示す図である。
【００３９】
【図８】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したインターフェロン誘導タンパク質10産生を示す図である。
【００４０】
【図９】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したマクロファージ炎症性タンパク質-1α産生を示す図である。
【００４１】
【図１０】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したマクロファージ炎症性タンパク質-1β産生を示す図である。
【００４２】
【図１１】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したTNF-α産生を示す図である。
【００４３】
【図１２】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したインターフェロン-γ産生を示す図である。
【００４４】
【図１３】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したインターロイキン-2産生を示す図である。
【００４５】
【図１４】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したインターロイキン4産生を示す図である。
【００４６】
【図１５】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したインターロイキン-10産生を示す図である。
【００４７】
【図１６】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したインターロイキン-13産生を示す図である。
【００４８】
【図１７】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したインターフェロン誘導タンパク質10産生を示す図である。
【００４９】
【図１８】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したマクロファージ炎症性タンパク質-1α産生を示す図である。
【００５０】
【図１９】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したマクロファージ炎症性タンパク質-1β産生を示す図である。
【００５１】
【図２０】シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したTNF-α産生を示す図である。
【００５２】
【図２１】ブドウ球菌エンテロトキシンBで処理した末梢血単核細胞における、シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したインターロイキン-10産生を示す図である。
【００５３】
【図２２】ブドウ球菌エンテロトキシンBで処理した末梢血単核細胞における、シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したインターフェロン誘導タンパク質-10産生を示す図である。
【００５４】
【図２３】ブドウ球菌エンテロトキシンBで処理した末梢血単核細胞における、シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したマクロファージ炎症性タンパク質-1α産生を示す図である。
【００５５】
【図２４】ブドウ球菌エンテロトキシンBで処理した末梢血単核細胞における、シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したマクロファージ炎症性タンパク質-1β産生を示す図である。
【００５６】
【図２５】ブドウ球菌エンテロトキシンBで処理した末梢血単核細胞における、シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたPDE4阻害剤に応答したTNF-α産生を示す図である。
【００５７】
【図２６】単独の及びメトトレキサートと組み合わせた、化合物Aに応答したIL-7産生を示す図である。
【００５８】
【図２７】単独の及びエタネルセプトと組み合わせた、化合物Aに応答したIL-7産生を示す図である。
【００５９】
【図２８】単独の及びプレドニゾンと組み合わせた、化合物Aに応答したIL-7産生を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００６０】
(5.詳細な説明)
(5.1.炎症に対するPDE4阻害剤を含む組合せ療法)
本明細書に提供されるのは、限定されないが、乾癬性関節炎及び関節リウマチを含む、乾癬及び/又は関節炎を治療、管理、又は予防する方法であって、そのような治療、管理、又は予防を必要としている患者に、アプレミラストとしても知られる、2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-アセチルアミノイソインドリン-1,3-ジオンの(+)エナンチオマーである化合物A、又はその医薬として許容し得るプロドラッグ、代謝体、多形、塩、溶媒和物、もしくは包摂化合物の治療的又は予防的有効量を、第二の活性剤と組み合わせて投与することを含む、方法である。理論によって制限されるものではないが、2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-アセチルアミノイソインドリン-1,3-ジオンの(+)エナンチオマーは、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-1,3-ジオキソイソインドリン-4-イル)アセトアミドであると考えられ、これは、以下の構造を有する。
【化１】
0006022548.tif 000002
【００６１】
化合物Aは、その各々が引用により本明細書中に組み込まれている、「(+)-2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-アセチルアミノイソインドリン-1,3-ジオン:その使用方法及び組成物（(+)-2-[1-(3-Ethoxy-4-methoxyphenyl)-2-methylsulfonylethyl]-4-acetylaminoisoindoline-1,3-dione: Methods Of Using And Compositions Thereof)」と題された米国特許第6,962,940号、又は米国特許公開第2010/0168475号に開示されている方法に従って調製することができる。一般に、ラセミ化合物の2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-アセチルアミノイソインドリン-1,3-ジオンは、引用により本明細書中に組み込まれている、米国特許第6,020,358号に記載の方法を用いて容易に調製することができる。対応する(+)エナンチオマーは、当技術分野で公知の技術により、ラセミ化合物から分離することができる。例としては、キラル塩の形成及びキラル又は高速液体クロマトグラフィー「HPLC」の使用、並びにキラル塩の形成及び結晶化が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Jacques, J.らの文献、エナンチオマー、ラセミ化合物、及び分割(Enantiomers, Racemates and Resolutions)(Wiley Interscience, New York, 1981);Wilen, S. H.らの文献、Tetrahedron 33:2725(1977);Eliel, E. L.の文献、炭素化合物の立体化学(Stereochemistry of Carbon Compounds)(McGraw Hill社, NY, 1962);及びWilen, S. H.の文献、分割剤及び光学分割の表(Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions), 268頁(E.L. Eliel編, Univ. of Notre Dame Press社, Notre Dame, IN, 1972)を参照されたい。
【００６２】
具体的な方法において、2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-アセチルアミノイソインドリン-1,3-ジオンの(+)エナンチオマーは、無水3-アセトアミドフタル酸と(S)-2-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-1-(メチルスルホニル)-エト-2-イルアミンのキラルアミノ酸塩とから合成される。(S)-2-(3 エトキシ-4-メトキシフェニル)-1-(メチルスルホニル)-エト-2-イルアミンのキラルアミノ酸塩としては、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、オルニチン、4-アミノ酪酸、2-アミノイソ酪酸、3-アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、システイン酸、t-ブチルグリシン、t-ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、及びN-アセチル-L-ロイシンのL異性体とともに形成される塩が挙げられるが、これらに限定されない。具体的なキラルアミノ酸塩は、(S)-2-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-1-(メチルスルホニル)-エト-2-イルアミンN-アセチル-L-ロイシン塩であり、これは、メタノール中の2-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-1-(メチルスルホニル)-エト-2-イルアミン及びN-アセチル-L-ロイシンから分割される。
【００６３】
また本明細書に提供されるのは、限定されないが、乾癬性関節炎及び関節リウマチを含む、乾癬及び関節炎を治療、管理、又は予防する方法であって、そのような治療、管理、又は予防を必要としている患者に、エナンチオマー的に純粋なシクロプロパンカルボン酸{2-[(1S)-1-(3-エトキシ-4-メトキシ-フェニル)-2-メタンスルホニル-エチル]-3-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソインドール-4-イル}-アミドを表す化合物Bの治療的又は予防的有効量を、第二の活性剤と組み合わせて投与することを含む、方法である。理論によって制限されるものではないが、化合物Bは、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-3-オキソイソインドリン-4-イル)シクロプロパンカルボキサミドであると考えられ、これは、以下の構造を有する。
【化２】
0006022548.tif 000003
【００６４】
いくつかの実施態様において、PDE4阻害剤である、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-1,3-ジオキソイソインドリン-4-イル)アセトアミド(「化合物A」)又は(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-3-オキソイソインドリン-4-イル)シクロプロパンカルボキサミド(「化合物B」)のどちらか1つを、抗TNF生物製剤、例えば、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリブマブ、ゴリムマブ、又はセルトリズマブ;カルシニューリン阻害剤、例えば、シクロスポリンA、タクロリムス、及びバクロスポリン(vaclosporin);コルチコステロイド、例えば、プレドニゾン、メチルプレドニゾン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、ベクロメタゾン、フルドロコルチゾン、デオキシコルチコステロン、及びアルドステロン;並びに/又は代謝拮抗薬、例えば、メトトレキサートから選択される第二の活性剤と、T細胞、軟骨細胞、及び滑膜細胞を侵す炎症性疾患及び免疫疾患の治療のために組み合わせる。ある実施態様において、該炎症性疾患又は免疫疾患は、関節リウマチ、脊椎関節炎(乾癬性関節炎及び強直性脊椎炎を含む)、変形性関節症、乾癬、アトピー性皮膚炎、ベーチェット病、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、皮膚エリテマトーデス、並びに全身性エリテマトーデスから選択される。一実施態様において、該疾患は、関節リウマチ又は乾癬である。
【００６５】
いくつかの実施態様において、PDE4阻害剤である、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-1,3-ジオキソイソインドリン-4-イル)アセトアミド(「化合物A」)又は(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-3-オキソイソインドリン-4-イル)シクロプロパンカルボキサミド(「化合物B」)のどちらか1つと、シクロスポリンA(「CsA」)、エタネルセプト(「ETC」もしくは「ETN」)、又はメトトレキサート(「MTX」)の少なくともどれか1つとの組合せは、関節リウマチ及び乾癬と関連するサイトカインの阻害のための相乗効果をもたらす。本明細書に提供されるように、化合物A又は化合物Bのどちらか1つの添加が、CsA、MTX、又はETC単独によってもたらされるサイトカイン産生の阻害と比べてサイトカイン産生の阻害を強化するかどうかの決定は、ヒト抗CD3モノクローナル抗体(mAb)で刺激したT細胞及びブドウ球菌エンテロトキシンB(SEB)で処理したPBMCで評価された。プロファイリングされたサイトカインとしては、インターフェロン-γ(IFN-γ)、インターロイキン(IL)-2、IL-4、IL-10、IL-13、インターフェロン誘導タンパク質10(IP-10)、マクロファージ炎症性タンパク質-1α(MIP-1α)及びマクロファージ炎症性タンパク質-1β(MIP-1β)、並びに腫瘍壊死因子-α(TNF-α)が挙げられる。
【００６６】
(5.2.定義)
本明細書で使用されるように、「化合物A」という用語は、アプレミラストとしても知られ、メタノールに溶解させたときに、平面偏光を(+)方向に回転させる、2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-アセチルアミノイソインドリン-1,3-ジオンのエナンチオマー的に純粋な形態を指す。理論によって制限されるものではないが、化合物Aは、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-1,3-ジオキソイソインドリン-4-イル)アセトアミドであると考えられ、これは、以下の構造を有する。
【化３】
0006022548.tif 000004
【００６７】
本明細書で使用されるように、「化合物B」という用語は、エナンチオマー的に純粋なシクロプロパンカルボン酸{2-[(1S)-1-(3-エトキシ-4-メトキシ-フェニル)-2-メタンスルホニル-エチル]-3-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソインドール-4-イル}-アミドを指す。理論によって制限されるものではないが、化合物Bは、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-3-オキソイソインドリン-4-イル)シクロプロパンカルボキサミドであると考えられ、これは、以下の構造を有する。
【化４】
0006022548.tif 000005
【００６８】
本明細書で使用されるように、別途示されない限り、「医薬として許容し得る塩」という用語は、無機酸及び無機塩基並びに有機酸及び有機塩基を含む、医薬として許容し得る無毒な酸又は塩基から調製される塩を含むが、これらに限定されない。好適な医薬として許容し得る塩基付加塩としては、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、及び亜鉛から作られる金属塩、又はリジン、N,N'-ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン(N-メチルグルカミン)、及びプロカインから作られる有機塩が挙げられるが、これらに限定されない。好適な無毒な酸としては、無機酸及び有機酸、例えば、酢酸、アルギン酸、アントラニル酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エテンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、フロ酸、ガラクツロン酸、グルコン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、グリコール酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、硝酸、パモン酸、パントテン酸、フェニル酢酸、リン酸、プロピオン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、硫酸、酒石酸、及びp-トルエンスルホン酸が挙げられるが、これらに限定されない。具体的な無毒な酸としては、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、及びメタンスルホン酸が挙げられる。したがって、具体的な塩の例としては、塩酸塩及びメシル酸塩が挙げられる。
【００６９】
本明細書で使用されるように、別途示されない限り、「水和物」という用語は、非共有結合的分子間力によって結合された化学量論的又は非化学量論的量の水をさらに含む、本明細書に提供される化合物又はその塩を意味する。
【００７０】
本明細書で使用されるように、別途示されない限り、「溶媒和物」という用語は、本明細書に提供される化合物に対する1以上の溶媒分子の会合から形成される溶媒和物を意味する。「溶媒和物」という用語は、水和物(例えば、一水和物、二水和物、三水和物、四水和物など)を含む。
【００７１】
本明細書で使用されるように、別途示されない限り、「多形」という用語は、本明細書に提供される化合物又はその錯体の固体結晶性形態を意味する。同じ化合物の異なる多形は、異なる物理的、化学的、及び/又は分光学的特性を示すことができる。
【００７２】
本明細書で使用されるように、別途規定されない限り、「プロドラッグ」という用語は、生物学的条件(インビトロ又はインビボ)下で、加水分解し、酸化し、又は別の形で反応して、化合物を生じさせることができる化合物の誘導体を意味する。プロドラッグの例としては、生体加水分解性部分、例えば、生体加水分解性アミド、生体加水分解性エステル、生体加水分解性カルバメート、生体加水分解性カルボネート、生体加水分解性ウレイド、及び生体加水分解性ホスフェート類似体を含む、(+)-2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-アセチルアミノイソインドリン-1,3-ジオンの誘導体及び代謝体が挙げられるが、これらに限定されない。プロドラッグは、通常、周知の方法、例えば、1 Burgerの医薬品化学及び創薬(1 Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery), 172-178, 949-982(Manfred E. Wolff編, 第5版、1995)に記載の方法を用いて調製することができる。
【００７３】
本明細書で使用されるように、別途規定されない限り、「エナンチオマー」、「異性体」、又は「立体異性体」という用語は、全てのエナンチオマー的/ステレオマー的に純粋な及びエナンチオマー的/ステレオマー的に濃縮された本明細書に提供される化合物を包含する。
【００７４】
本明細書で使用されるように、別途示されない限り、「ステレオマー的に純粋な」又は「エナンチオマー的に純粋な」という用語は、化合物が1つの立体異性体を含み、かつその反対の立体異性体又はエナンチオマーを実質的に含まないことを意味する。例えば、化合物は、該化合物が、80％、90％、95％、98％、又は99％以上のある立体異性体、及び20％、10％、5％、2％、1％、又はそれ未満のその反対の立体異性体を含む場合、ステレオマー的に又はエナンチオマー的に純粋である。「その(-)エナンチオマーを実質的に含まない」は、ステレオマー的に純粋な又はエナンチオマー的に純粋なという用語に包含される。
【００７５】
本明細書で使用されるように、「有害作用」という用語には、胃腸毒性、腎毒性、及び肝毒性、白血球減少、例えば、血小板減少による出血時間の延長、及び妊娠の延長、吐き気、嘔吐、眠気、無力症、目まい、催奇形性、錐体外路症状、静座不能、心血管障害を含む心毒性、炎症、男性の性的機能不全、並びに血清肝酵素レベルの上昇が含まれるが、これらに限定されない。「胃腸毒性」という用語には、胃及び腸の潰瘍形成及びびらんが含まれるが、これらに限定されない。「腎毒性」という用語には、乳頭壊死及び慢性間質性腎炎のような疾病が含まれるが、これらに限定されない。
【００７６】
本明細書で使用されるように、「患者」という用語は、哺乳動物、特に、ヒトを指す。いくつかの実施態様において、患者は、女性である。さらなる実施態様において、患者は、男性である。さらなる実施態様において、患者は、子供である。
【００７７】
本明細書で使用されるように、別途規定されない限り、「治療する(treat)」、「治療する(treating)」、及び「治療」という用語は、患者が特定の疾患又は障害に罹患している間に行なわれる行為であって、該疾患もしくは障害の重症度もしくは症状を軽減するか、又は該疾患もしくは障害の進行もしくは症状を遅延化もしくは緩徐化させる行為を企図している。
【００７８】
本明細書で使用されるように、別途規定されない限り、「予防する(prevent)」、「予防する(preventing)」、及び「予防」という用語は、患者が特定の疾患又障害に罹患し始める前に行なわれる行為であって、該疾患又障害の重症度又は症状を抑制又は軽減する行為を企図している。
【００７９】
本明細書で使用されるように、別途示されない限り、「管理する(manage)」、「管理する(managing)」、及び「管理」という用語は、特定の疾患もしく障害の再発を該疾患もしくは障害に既に罹患している患者において予防すること、及び/又は該疾患もしくは障害に罹患している患者が寛解期にある時間を延長することを包含する。該用語は、該疾患もしくは障害の閾値、発症、及び/もしくは持続時間を調節すること、又は患者が該疾患もしくは障害に応答する方法を変化させることを包含する。
【００８０】
(5.3.治療方法)
本明細書に提供されるのは、乾癬及び/又は関節炎-限定されないが、関節リウマチ及び/又は乾癬性関節炎を含む-を治療、管理、及び/又は予防する方法であって、そのような治療、管理、又は予防を必要としている患者に、化合物Aもしくは化合物B、又はその医薬として許容し得るプロドラッグ、代謝体、多形、塩、溶媒和物、もしくは包摂化合物の治療的又は予防的有効量を投与することを含む、方法である。いくつかの実施態様において、化合物A又は化合物Bの塩又は溶媒和物を使用する。他の実施態様において、化合物A又は化合物Bの遊離塩基を使用する。
【００８１】
本明細書に提供される方法は、その(-)エナンチオマーを実質的に含まない、化合物Aもしくは化合物Bのどちらか1つ、又はその医薬として許容し得るプロドラッグ、代謝体、多形、塩、溶媒和物、もしくは包摂化合物を、乾癬性関節炎及び/又は関節リウマチの症状の発症後に投与することを含む。
【００８２】
本明細書に提供される方法は、乾癬性関節炎及び/又は関節リウマチの症状を抑制又は防止すること、並びに症状の発症前に、化合物Aもしくは化合物B、又はその医薬として許容し得るプロドラッグ、代謝体、多形、塩、溶媒和物、もしくは包摂化合物を投与することによって、該疾患自体に対処することも含む。いくつかの実施態様において、本明細書に提供される方法によって治療される患者は、乾癬又は関節炎の病歴を有する。ある実施態様において、該方法は、化合物Aもしくは化合物Bのどらか1つ、又はその医薬として許容し得るプロドラッグ、代謝体、多形、塩、溶媒和物、もしくは包摂化合物を、乾癬及び/もしくは関節炎(限定されないが、乾癬性関節炎及び/もしくは関節リウマチを含む)に罹患しているか、又はそれらに罹患する可能性が高い患者(例えば、ヒト)に投与することを含む。
【００８３】
PDE4阻害剤である、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-1,3-ジオキソイソインドリン-4-イル)アセトアミド及び(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-3-オキソイソインドリン-4-イル)シクロプロパンカルボキサミドを、限定されないが、関節リウマチ及び乾癬性関節炎を含む、乾癬及び/又は関節炎の治療、管理、又は予防において使用することができる。しかしながら、関節炎の急性又は慢性管理における特定の活性成分の予防的又は治療的用量の大きさは、疾患又は疾病の性質及び重症度、並びに活性成分が投与される経路によって様々に異なる。用量、そして、おそらくは投与頻度も、個々の患者の年齢、体重、及び応答によって様々に異なる。好適な投与レジメンは、そのような因子を十分に考慮して、当業者によって容易に選択されることができる。
【００８４】
一般に、本明細書に記載の疾病に対する推奨される1日用量範囲は、1日1回の単回投与としてか、又は1日を通じた分割用量として投与される、1日に約0.1mg〜約1,000mgの範囲内に収まる。より具体的には、1日用量は、1日に1回、2回、3回、又は4回、等分割用量で投与することができる。具体的には、1日用量範囲は、1日に約1mg〜約500mg、より具体的には、1日に約10mg〜約200mgであることができる。具体的には、1日用量は、1mg、5mg、6.25mg、10mg、15mg、20mg、25mg、30mg、50mg、100mg、200mg、300mg、400mg、又は500mg剤形(Q.D.又はB.I.D.)で投与することができる。患者を管理する際に、療法は、より低い用量、おそらくは、約1mg〜約25mgで開始し、必要であれば、患者の全体的な応答に応じて、単回用量又は分割用量のいずれかとして、1日に最大約200mg〜約1000mgまで増加させることができる。さらなる実施態様において、化合物A又は化合物Bのどちらかの1日用量は、患者の体重1kg当たり約0.01mg〜約100mgである。いくつかの実施態様において、選択された化合物の1日用量は、約1mg/kg、5mg/kg、6.25mg/kg、10mg/kg、又は25mg/kgである。ある実施態様において、本明細書に提供される第一の活性剤の治療的有効量は、1日に患者の体重1kg当たり約1、5、又は25mgであり、本明細書に提供される追加の活性剤の治療的有効量は、1日に患者の体重1kg当たり約1、5、又は6.25mgである。
【００８５】
(5.3.1.組合せ療法)
本明細書に提供されるように、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-1,3-ジオキソイソインドリン-4-イル)アセトアミド又は(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-3-オキソイソインドリン-4-イル)シクロプロパンカルボキサミドは、限定されないが、関節リウマチ及び/又は乾癬性関節炎を含む、乾癬及び/又は関節炎を治療、管理、及び/又は予防するための別の薬物(「第二の活性剤」又は「追加の活性剤」)と組み合わせて投与することができる。
【００８６】
化合物A又は化合物Bのどちらか1つを本明細書に提供される方法において1以上の第二の活性剤と組み合わせることができる。いくつかの実施態様において、本明細書に提供されるのは、限定されないが、関節リウマチ及び乾癬性関節炎を含む、乾癬及び/又は関節炎の治療、管理、及び/又は予防のための相乗的組合せである。いくつかの実施態様において、化合物A又は化合物Bのどちらか1つを用いて、特定の第二の活性剤と関連する有害作用を軽減することもできる。或いは、いくつかの実施態様において、特定の第二の活性剤を用いて、化合物A又は化合物Bのどちらか1つと関連する有害作用を軽減することができる。
【００８７】
本明細書に提供される方法において、化合物A又は化合物Bと組み合わせて使用し得る第二の活性剤としては、疾患修飾性抗リウマチ薬(DMARD、例えば、シクロスポリンA及びメトトレキサート)、抗炎症剤、例えば、非ステロイド性抗炎症薬(NSAID)、免疫抑制薬、ミコフェノレートモフェチル、生物剤、TNF-α阻害剤(例えば、エタネルセプト)、Cox-2阻害剤、並びに鎮痛薬が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８８】
該第二の活性剤は、化合物A又は化合物Bのどちらか1つの前に、その後に、又はそれと同時に投与することができる。
【００８９】
いくつかの実施態様において、該第二の活性剤としては、抗炎症薬、例えば、NSAID、例えば、限定されないが、ジクロフェナク(例えば、ARTHROTEC(登録商標))、ジフルニサル(例えば、DOLOBID(登録商標))、エトドラク(例えば、LODINE(登録商標))フェノプロフェン(例えば、NALFON(登録商標))、イブプロフェン(例えば、ADVIL、CHILDREN'S ADVIL/MOTRIN、MEDIPREN、MOTRIN、NUPRIN、又はPEDIACARE FEVER (登録商標))、インドメタシン(例えば、ARTHREXIN(登録商標))、ケトプロフェン(例えば、ORUVAIL(登録商標))、ケトロラク(例えば、TORADOL(登録商標))、ホスホマイシントロメタミン(例えば、MONURAL(登録商標))、メクロフェナメート(例えば、Meclomen(登録商標))、ナブメトン(例えば、RELAFEN(登録商標))、ナプロキセン(例えば、ANAPROX(登録商標)、ANAPROX(登録商標) DS、EC-NAPROSYN(登録商標)、NAPRELAN(登録商標)、又はNAPROSYN(登録商標))、オキサプロジン(例えば、DAYPRO(登録商標))、ピロキシカム(例えば、FELDENE(登録商標))、スリンダク(例えば、CLINORIL(登録商標))、及びトルメチン(例えば、TOLECTIN(登録商標) DS又はTOLECTIN(登録商標))を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００９０】
他の実施態様において、該第二の活性剤としては、疾患修飾性抗リウマチ薬(DMARD)又は免疫抑制薬、例えば、メトトレキサート(Rheumatrex(登録商標))、スルファサラジン(Azulfidine(登録商標))、及びシクロスポリン(Sandimmune(登録商標)又はNeroal(登録商標);シクロスポリンA)を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００９１】
他の実施態様において、該第二の活性剤としては、ミコフェノレートモフェチル(CellCept(登録商標))という、臓器移植において広く使用され、自己免疫疾患及び炎症性皮膚疾患を治療する際に恩恵を得る免疫抑制剤を挙げることができるが、これに限定されない。
【００９２】
さらなる実施態様において、該第二の活性剤としては、生物剤、例えば、エタネルセプト(Enbrel(登録商標))、インフリキシマブ(Remicade(登録商標))、及びアダリブマブ(Humira(登録商標))を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００９３】
関心対象のさらなる実施態様において、該第二の活性剤としては、Cox-2阻害剤、例えば、セレコキシブ(Celebrex(登録商標))、バルデコキシブ(Bextra(登録商標))、及びメロキシカム(Mobic(登録商標))を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００９４】
いくつかの実施態様において、化合物A又は化合物Bのどちらか1つは、エタネルセプト、シクロスポリンA、及びメトトレキサートからなる群から選択される第二の活性剤の1つとともに投与される。
【００９５】
いくつかの実施態様において、化合物Aとエタネルセプトの組合せの投与は、限定されないが、関節リウマチ及び/又は乾癬性関節炎を含む、乾癬及び/又は関節炎の治療、管理、及び/又は予防のための相乗的治療効果をもたらす。
【００９６】
いくつかの実施態様において、化合物AとシクロスポリンAの組合せの投与は、限定されないが、関節リウマチ及び/又は乾癬性関節炎を含む、乾癬及び/又は関節炎の治療、管理、及び/又は予防のための相乗的治療効果をもたらす。
【００９７】
いくつかの実施態様において、化合物Aとメトトレキサートの組合せの投与は、限定されないが、関節リウマチ及び/又は乾癬性関節炎を含む、乾癬及び/又は関節炎の治療、管理、及び/又は予防のための相乗的治療効果をもたらす。
【００９８】
いくつかの実施態様において、化合物Bとエタネルセプトの組合せの投与は、限定されないが、関節リウマチ及び/又は乾癬性関節炎を含む、乾癬及び/又は関節炎の治療、管理、及び/又は予防のための相乗的治療効果をもたらす。
【００９９】
いくつかの実施態様において、化合物BとシクロスポリンAの組合せの投与は、限定されないが、関節リウマチ及び/又は乾癬性関節炎を含む、乾癬及び/又は関節炎の治療、管理、及び/又は予防のための相乗的治療効果をもたらす。
【０１００】
いくつかの実施態様において、化合物Bとメトトレキサートの組合せの投与は、限定されないが、関節リウマチ及び/又は乾癬性関節炎を含む、乾癬及び/又は関節炎の治療、管理、及び/又は予防のための相乗的治療効果をもたらす。
【０１０１】
患者に対する(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-1,3-ジオキソイソインドリン-4-イル)アセトアミド又は(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-3-オキソイソインドリン-4-イル)シクロプロパンカルボキサミドのどちらか1つ及び第二の活性剤-限定されないが、エタネルセプト、シクロスポリンA、及び/又はメトトレキサートを含む-の投与は、同時に又は連続的に、同じ又は異なる投与経路で行なうことができる。特定の第二の活性剤のために利用される特定の投与経路の好適性は、第二の活性剤それ自体(例えば、それが、血流に入る前に分解されることなく、経口又は局所投与され得るかどうかということ)、及び治療されている対象によって決まる。2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-アセチルアミノイソインドリン-1,3-ジオンの(+)エナンチオマーの特定の投与経路は、錠剤又はカプセル剤の剤形での経口投与である。本明細書に提供される第二の活性剤又は活性成分のための特定の投与経路は、当業者に公知である。例えば、メルクマニュアル(The Merck Manual), 448(第17版, 1999)を参照されたい。
【０１０２】
投与される第二の活性剤の量は、使用される具体的な薬剤、治療されている対象、疾患の重症度及び病期、並びに化合物A又は化合物Bのどちらか1つ及び患者に同時に投与される任意の追加の第二の活性剤の量に基づいて決定することができる。当業者は、当技術分野で公知の従来の手順に従って具体的な量を決定することができる。まず最初は、該療法で従来使用されている第二の活性剤の量から開始し、上記の因子に応じて該量を調整することができる。例えば、医師用卓上参考書(Physician's Desk Reference)(第56版、2004)を参照されたい。
【０１０３】
当業者には明らかであるように、場合によっては、本明細書に開示される範囲から外れる活性成分の投薬量を使用する必要があり得る。さらに、臨床医又は治療医は、個別の患者応答との関連において、どのようにして、いつ治療を中断、調整、又は終了すべきかを知っていることに留意されたい。
【０１０４】
本明細書で使用される「治療的有効量」、「予防的有効量」、及び「治療的又は予防的有効量」という語句は、上記の投薬量及び投与頻度スケジュールを包含する。当業者には容易に分かるように、異なる治療的有効量を、異なる疾患及び疾病に対して適用することができる。同様に、そのような障害を治療又は予防するのに十分であるが、化合物Aもしくは化合物Bのどちらか1つのラセミ体と関連する有害作用を引き起こすのに不十分な、又は該有害作用を軽減するのに十分な量もまた、本明細書に記載の投薬量、及び投与頻度スケジュールによって包含される。
【０１０５】
(5.4.医薬組成物及び剤形)
医薬組成物を、個別的な、単一単位剤形の調製において使用することができる。本明細書に提供される医薬組成物及び剤形は、限定されないが、化合物Aもしくは化合物Bを含む、PDE4阻害剤、又はその医薬として許容し得る塩、溶媒和物、水和物、包摂化合物、もしくはプロドラッグと、限定されないが、本明細書に記載の抗炎症剤を含む、第二の活性剤とを含むことができる。医薬組成物及び剤形は、1以上の担体、賦形剤、又は希釈剤をさらに含むことができる。
【０１０６】
本明細書に提供される単一単位剤形は、患者に対する経口、粘膜(例えば、鼻腔、舌下、膣、嚢胞、直腸、包皮、眼球、口腔、又は耳)、非経口(例えば、皮下、静脈内、ボーラス注射、筋肉内、又は動脈内)、局所(例えば、点眼薬又は他の眼科調製物)、経皮(transdermal)又は経皮(transcutaneous)投与に好適である。剤形の非限定的な例としては、錠剤;カプレット剤;カプセル剤、例えば、軟弾性ゼラチンカプセル剤;カシェ剤;トローチ剤;舐剤;分散剤;坐剤;散剤;エアゾール剤(例えば、鼻スプレー剤又は吸入剤);ゲル剤;懸濁剤(例えば、水性もしくは非水性液体懸濁剤、水中油型乳剤、又は油中水液体型乳剤)、液剤、及びエリキシル剤を含む、患者に対する経口又は粘膜投与に好適な液体剤形;患者に対する非経口投与に好適な液体剤形;局所投与に好適な点眼薬又は他の眼科調製物;並びに患者に対する非経口投与に好適な液体剤形を提供するために再構成することができる滅菌固体(例えば、結晶性又は非晶質固体)が挙げられる。
【０１０７】
本明細書に提供される剤形の組成、形状、及び種類は、通常、その用途に応じて異なる。例えば、疾患の急性治療において使用される剤形は、同じ疾患の慢性治療において使用される剤形よりも多くの量のそれが含む1以上の活性成分を含むことができる。同様に、非経口剤形は、同じ疾患を治療するのに使用される経口剤形よりも少ない量のそれが含む1以上の活性成分を含むことができる。本明細書に提供される具体的な剤形が互いに異なるこれらの及びその他の方法は、当業者には容易に明らかとなるであろう。例えば、レミントンの医薬科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)、第20版, Mack Publishing社, Easton PA(2000)を参照されたい。
【０１０８】
典型的な医薬組成物及び剤形は、1以上の賦形剤を含む。好適な賦形剤は、薬学の分野の当業者に周知であり、好適な賦形剤の非限定的な例が本明細書に提供される。特定の賦形剤が、医薬組成物又は剤形への組込みに好適であるかどうかは、該剤形が患者に投与される方法を含むが、これに限定されない、当技術分野で周知の種々の因子によって決まる。例えば、経口剤形、例えば、錠剤は、非経口剤形での使用に好適でない賦形剤を含むことができる。特定の賦形剤の好適性は、剤形中の具体的な活性成分によっても決まり得る。例えば、いくつかの活性成分の分解を、ラクトースなどのいくつかの賦形剤によって、又は水に曝したときに、加速させることができる。第1級又は第2級アミンを含む活性成分は、そのような加速的分解を特に受けやすい。結果として、本明細書に提供されるのは、あるとしても、ごく少量のラクトース、他の単糖又は二糖しか含まない医薬組成物及び剤形である。本明細書で使用されるように、「ラクトース不含」という用語は、存在するラクトースの量が、あるとしても、活性成分の分解速度を実質的に上昇させるのに不十分であることを意味する。
【０１０９】
本明細書に提供されるラクトース不含組成物は、当技術分野で周知であり、かつ例えば、米国薬局方(USP)25-NF20(2002)に記載されている賦形剤を含むことができる。一般に、ラクトース不含組成物は、活性成分、結合剤/充填剤、及び滑沢剤を、医薬として適合性がありかつ医薬として許容し得る量で含む。特定のラクトース不含剤形は、活性成分、微結晶性セルロース、アルファ化デンプン、及びステアリン酸マグネシウムを含む。
【０１１０】
また本明細書に提供されるのは、活性成分を含む無水医薬組成物及び剤形であるが、それは、水がいくつかの化合物の分解を促進し得るからである。例えば、水(例えば、5％)の添加は、有効期間又は時間経過に伴う製剤の安定性などの特徴を決定するために長期貯蔵をシミュレートする手段として製薬技術において広く許容されている。例えば、Jens T. Carstensenの文献、薬物安定性:原理及び実践(Drug Stability: Principles & Practice), 第2版, Marcel Dekker, NY, NY, 1995, 379〜80頁を参照されたい。実際、水及び熱は、いくつかの化合物の分解を加速する。したがって、製剤の製造時、取扱い時、包装時、貯蔵時、輸送時、及び使用時には、通常、水分及び/又は湿気に曝されるので、製剤に対する水の影響は、非常に重大であり得る。
【０１１１】
本明細書に提供される無水医薬組成物及び剤形は、無水又は低水分含有成分、及び低水分又は低湿度条件を用いて調製することができる。製造時、包装時、及び/又は貯蔵時に水分及び/又は湿気との実質的な接触が予想される場合、ラクトースと、第1級又は第2級アミンを含む少なくとも1つの活性成分とを含む医薬組成物及び剤形は、無水であることが好ましい。
【０１１２】
無水医薬組成物は、その無水性が維持されるように調製及び貯蔵すべきである。したがって、無水組成物は、それを好適な処方キットに含めることができるように、水への曝露を防ぐことが知られている材料を用いて包装されることが好ましい。好適な包装の非限定的な例としては、密閉されたホイル、プラスチック、単位用量容器(例えば、バイアル)、ブリスターパック、及びストリップパックが挙げられる。
【０１１３】
また本明細書に提供されるのは、活性成分が分解する速度を低下させる1以上の化合物を含む医薬組成物及び剤形である。そのような化合物は、本明細書では「安定化剤」と呼ばれ、これには、アスコルビン酸などの抗酸化剤、pH緩衝剤、又は塩緩衝剤が含まれるが、これらに限定されない。賦形剤の量及び種類と同様に、剤形中の活性成分の量及び具体的な種類は、限定されないが、それが患者に投与されることになっている経路などの因子によって異なり得る。しかしながら、本明細書に提供される典型的な剤形は、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-1,3-ジオキソイソインドリン-4-イル)アセトアミドもしくは(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-3-オキソイソインドリン-4-イル)シクロプロパンカルボキサミドのどちらか1つ、又はその医薬として許容し得る塩もしくは溶媒和物を、約1〜約1,000mgの量で含む。典型的な剤形は、化合物Aもしくは化合物Bのどちらか1つ、又はその医薬として許容し得る塩もしくは溶媒和物を、約1、2、5、7.5、10、12.5、15、17.5、20、25、30、50、100、150、又は200mgの量で含む。特定の実施態様において、剤形は、化合物A又は化合物Bのどちらか1つを、約1、5、10、15、20、25、30、50、100、又は200mgの量で含む。
【０１１４】
当然、抗関節炎薬の具体的な量は、使用される具体的な薬剤、治療又は管理されている関節炎の種類、並びに本明細書に提供されるPDE4阻害剤及び患者に同時に投与される任意の追加の活性剤の量によって決まる。
【０１１５】
(5.4.1.経口剤形)
経口投与に好適である本明細書に提供される医薬組成物は、個別剤形、例えば、限定されないが、錠剤(例えば、チュアブル錠)、カプレット剤、カプセル剤、及び液体(例えば、フレーバーシロップ)として提示することができる。そのような剤形は、所定量の活性成分を含有しており、当業者に周知の薬学の方法によって調製することができる。一般に、レミントンの医薬科学(Remington's Pharmaceutical Sciences), 第20版, Mack Publishing社, Easton PA(2000)を参照されたい。
【０１１６】
本明細書に提供される典型的な経口剤形は、従来の医薬配合技術に従って、活性成分を少なくとも1つの賦形剤と密接に混合させて組み合わせることによって調製される。賦形剤は、投与に望ましい調製物の形態に応じて、多種多様な形態を取ることができる。経口液又はエアゾール剤形中での使用に好適な賦形剤の非限定的な例としては、水、グリコール、油、アルコール、着香剤、防腐剤、及び着色剤が挙げられる。固体経口剤形(例えば、散剤、錠剤、カプセル剤、及びカプレット剤)中での使用に好適な賦形剤の非限定的な例としては、デンプン、糖、微結晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、及び崩壊剤が挙げられる。
【０１１７】
その投与の容易さのために、錠剤及びカプセル剤は、最も有利な経口投薬単位形態であり、その場合には、固体賦形剤が利用される。所望の場合、錠剤は、標準的な水性又は非水性技術によってコーティングすることができる。そのような剤形は、薬学の方法のいずれかによって調製することができる。一般に、医薬組成物及び剤形は、活性成分を液体担体、微細に分割された固体担体、又はその両方と均一かつ緊密に混合し、その後、必要であれば、生成物を所望の体裁に成形することによって調製される。
【０１１８】
例えば、錠剤は、圧縮又は成形によって調製することができる。圧縮錠は、粉末又は顆粒などの自由流動形態の活性成分を、任意に賦形剤と混合して、好適な機械の中で圧縮することによって調製することができる。成形錠は、不活性な液体希釈剤で湿潤させた粉末化合物の混合物を、好適な機械の中で成形することによって作製することができる。
【０１１９】
本明細書に提供される経口剤形中で使用することができる賦形剤の非限定的な例としては、結合剤、充填剤、崩壊剤、及び滑沢剤が挙げられる。医薬組成物及び剤形中での使用に好適な結合剤の非限定的な例としては、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、又は他のデンプン、ゼラチン、天然及び合成ゴム、例えば、アカシア、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸、他のアルギネート、粉末化トラガカント、グアーガム、セルロース及びその誘導体(例えば、エチルセルロース、セルロースアセテート、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ナトリウムカルボキシメチルセルロース)、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、アルファ化デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース(例えば、番号2208、2906、2910)、微結晶性セルロース、並びにこれらの混合物が挙げられる。
【０１２０】
微結晶性セルロースの好適な形態の非限定的な例としては、AVICEL-PH-101、AVICEL-PH-103  AVICEL RC-581、AVICEL-PH-105(FMC社, American Viscose Division, Avicel Sales, Marcus Hook, PAから入手可能)として販売されている材料、及びそれらの混合物が挙げられる。具体的な結合剤は、AVICEL RC-581として販売されている、微結晶性セルロースとナトリウムカルボキシメチルセルロースの混合物である。好適な無水又は低水分の賦形剤又は添加物としては、AVICEL-PH-103(商標)及びStarch 1500 LMが挙げられる。
【０１２１】
本明細書に開示される医薬組成物及び剤形中での使用に好適な充填剤の非限定的な例としては、タルク、炭酸カルシウム(例えば、顆粒又は粉末)、微結晶性セルロース、粉末化セルロース、デキストレート、カオリン、マンニトール、ケイ酸、ソルビトール、デンプン、アルファ化デンプン、及びこれらの混合物が挙げられる。医薬組成物中の結合剤又は充填剤は、通常、該医薬組成物又は剤形の約50〜約99重量パーセントで存在する。
【０１２２】
崩壊剤を本明細書に提供される組成物中で用いて、水性環境に曝露されたときに崩壊する錠剤を提供することができる。多過ぎる崩壊剤を含む錠剤は貯蔵中に崩壊する場合があり、一方、少な過ぎる崩壊剤を含む錠剤は、所望の速度又は所望の条件下で崩壊しない場合がある。したがって、活性成分の放出を悪く変化させるほど多過ぎることも少な過ぎることもない十分な量の崩壊剤を用いて、固体経口剤形を形成させるべきである。使用される崩壊剤の量は、製剤の種類に基づいて異なり、かつ当業者に容易に認識される。典型的な医薬組成物は、約0.5〜約15重量パーセントの崩壊剤、好ましくは、約1〜約5重量パーセントの崩壊剤を含む。
【０１２３】
本明細書に提供される医薬組成物及び剤形中で使用することができる崩壊剤の非限定的な例としては、寒天-寒天、アルギン酸、炭酸カルシウム、微結晶性セルロース、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポラクリリンカリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ジャガイモデンプン又はタピオカデンプン、他のデンプン、アルファ化デンプン、他のデンプン、粘土、他のアルギン、他のセルロース、ゴム、及びこれらの混合物が挙げられる。
【０１２４】
本明細書に提供される医薬組成物及び剤形中で使用することができる滑沢剤の非限定的な例としては、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、鉱油、軽鉱油、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、他のグリコール、ステアリン酸、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、水素化植物油(例えば、ピーナッツ油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、及び大豆油)、ステアリン酸亜鉛、オレイン酸エチル、エチルラウレエート(ethyl laureate)、寒天、及びこれらの混合物が挙げられる。さらなる滑沢剤としては、例えば、syloidシリカゲル(AEROSIL200、Baltimore, MDのW.R.Grace社により製造されている)、合成シリカの凝集エアゾール(Plano, TXのDegussa社により市販されている)、CAB-O-SIL(Boston, MAのCabot社により販売されている発熱性二酸化ケイ素製品)、及びこれらの混合物が挙げられる。使用されるとしても、滑沢剤は、通常、それが組み込まれる医薬組成物又は剤形の約1重量パーセント未満の量で使用される。
【０１２５】
一実施態様において、本明細書に提供される固体経口剤形は、化合物A又は化合物Bのどちらか1つ、無水ラクトース、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸、コロイド状無水シリカ、及びゼラチンを含む。
【０１２６】
(5.4.2.遅延放出剤形)
活性成分は、制御放出手段によるか、又は当業者に周知である送達装置によって投与することができる。制御放出手段又は送達装置の非限定的な例としては、その各々が引用により本明細書中に組み込まれている、米国特許第:3,845,770号;第3,916,899号;第3,536,809号;第3,598,123号;及び第4,008,719号、第5,674,533号、第5,059,595号、第5,591,767号、第5,120,548号、第5,073,543号、第5,639,476号、第5,354,556号、及び第5,733,566号に記載されているものが挙げられる。そのような剤形を用いて、例えば、所望の放出プロファイルを提供するためにヒドロプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、ゲル、透過膜、浸透圧系、多層コーティング、微粒子、リポソーム、ミクロスフェア、又はこれらの組合せを様々な割合で用いて、1以上の活性成分の低速又は制御放出を提供することができる。本明細書に記載されているものを含む、当業者に公知の好適な制御放出製剤は、本明細書に提供される活性成分とともに使用するために容易に選択することができる。したがって、いくつかの実施態様において、本明細書に提供されるのは、経口投与に好適な単一単位剤形、例えば、限定されないが、制御放出に適している錠剤、カプセル剤、ゲルキャップ剤、及びカプレット剤である。
【０１２７】
制御放出医薬製品は全て、その非制御対応物によって達成されるものよりも薬物療法を改善させるという共通の目的を有する。理想的には、医療における最適に設計された制御放出調製物の使用は、最小限の原薬を用いて最小限の時間で疾病を治癒させるか又は制御することを特徴とする。制御放出製剤の利点としては、薬物活性の延長、投薬頻度の低下、及び患者コンプライアンスの向上が挙げられる。さらに、制御放出製剤を用いて、作用発現時間、又は薬物の血中濃度などの他の特性に影響を及ぼすことができ、したがって、副作用(例えば、有害作用)の発生に影響を及ぼすことができる。
【０１２８】
ほとんどの制御放出製剤は、所望の治療効果を素早くもたらす量の薬物(活性成分)を最初に放出し、このレベルの治療又は予防効果を長期間にわたって維持する他の量の薬物を徐々にかつ継続的に放出するように設計されている。この一定の薬物レベルを体内で維持するために、薬物は、代謝されて体から排泄される薬物の量を補う速度で剤形から放出されなければならない。活性成分の制御放出は、限定されないが、pH、温度、酵素、水、又は他の生理的条件もしくは化合物を含む、様々な条件によって刺激することができる。
【０１２９】
(5.4.3.非経口剤形)
非経口剤形は、限定されないが、皮下、静脈内(ボーラス注射を含む)、筋肉内、及び動脈内を含む、様々な経路によって患者に投与することができる。その投与は、通常、汚染物質に対する患者の自然防御を回避するので、非経口剤形は、滅菌されているか、又は患者に投与する前に滅菌することができることが好ましい。非経口剤形の非限定的な例としては、注射にそのまま利用可能な液剤、注射用の医薬として許容し得るビヒクルにすぐに溶解又は懸濁させることができる乾燥品、注射にそのまま利用可能な懸濁剤、及び乳剤が挙げられる。
【０１３０】
非経口剤形を提供するために使用することができる好適なビヒクルは、当業者に周知である。好適なビヒクルの非限定的な例としては、注射用水USP;水性ビヒクル、例えば、限定されないが、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロースと塩化ナトリウムの注射液、及び乳酸加リンゲル注射液;水混和性ビヒクル、例えば、限定されないが、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、及びポリプロピレングリコール;並びに非水性ビヒクル、例えば、限定されないが、トウモロコシ油、綿実油、ピーナッツ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、及び安息香酸ベンジルが挙げられる。
【０１３１】
本明細書に開示されている活性成分の1つ又は複数の溶解性を増大させる化合物を、本明細書に提供される非経口剤形に組み込むこともできる。例えば、シクロデキストリン及びその誘導体を用いて、(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-1,3-ジオキソイソインドリン-4-イル)アセトアミド又は(S)-N-(2-(1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル)-3-オキソイソインドリン-4-イル)シクロプロパンカルボキサミドのどちらか1つ及びその誘導体の溶解性を増大させることができる。
【０１３２】
(5.4.4.局所及び粘膜剤形)
薬物は、皮膚及びその付属器に、又は種々の粘膜に局所的に適用することができる。使用することができる経路としては、鼻腔、舌下、膣、嚢胞、直腸、包皮、眼球、口腔、又は耳が挙げられる。多くの剤形は、活性成分を適用部位に送達し、局所的効果をもたらすように開発されている。本明細書に提供される局所及び粘膜剤形の非限定的な例としては、スプレー剤、吸入剤、エアゾール剤、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、散布剤、ローション剤、リニメント剤、湿布剤、液剤、乳剤、懸濁剤、点眼薬もしくは他の眼科調製物、又は当業者に公知の他の形態が挙げられる。例えば、レミントンの医薬科学(Remington's Pharmaceutical Sciences), 第20版, Mack Publishing社, Easton PA(2000);及び医薬剤形入門(Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms), 第4版, Lea & Febiger社, Philadelphia(1985)を参照されたい。口腔内の粘膜組織を治療するのに好適な剤形は、マウスウォッシュとしてか又はオーラルゲルとして製剤化することができる。
【０１３３】
好適な賦形剤(例えば、担体及び希釈剤)、並びに局所及び粘膜剤形を提供するために使用することができる他の材料は、医薬分野の当業者に周知であり、所与の医薬組成物又は剤形が適用される特定の組織によって決まる。典型的な賦形剤の非限定的な例としては、液剤、乳剤、又はゲル剤を形成するための、無毒でかつ医薬として許容し得る、水、アセトン、エタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブタン-1,3-ジオール、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、鉱油、及びこれらの混合物が挙げられる。
【０１３４】
望ましい場合、モイスチャライザー、例えば、オクルーシブ、保湿剤、皮膚軟化剤、及びタンパク質レジュビネーター(protein rejuvenator)を医薬組成物及び剤形に添加することもできる。そのような追加の成分の例は、当技術分野で公知で周知である。例えば、レミントンの医薬科学(Remington's Pharmaceutical Sciences), 第20版, Mack Publishing社, Easton PA(2000)を参照されたい。
【０１３５】
オクルーシブは、角質層における水分損失を物理的に阻止する物質である。オクルーシブの非限定的な例としては、ワセリン、ラノリン、鉱油、シリコーン、例えば、ジメチコーン、酸化亜鉛、及びこれらの組合せが挙げられる。好ましくは、オクルーシブは、ワセリン及びラノリン、より好ましくは、5％の最小濃度のワセリンである。
【０１３６】
保湿剤は、皮膚に適用したときに水を引き寄せ、理論的には、角質層の水和を向上させる物質である。しかしながら、皮膚に引き付けられる水は、他の細胞由来の水であり、大気中の水ではない。この種のモイスチャライザーを用いると、皮膚からの蒸発が持続することがあり、実際、乾燥をより悪化させることがある。保湿剤の非限定的な例としては、グリセリン、ソルビトール、尿素、α-ヒドロキシ酸、糖、及びこれらの組合せが挙げられる。好ましくは、保湿剤は、αヒドロキシ酸、例えば、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、クエン酸、及び酒石酸である。
【０１３７】
皮膚軟化剤は、皮膚片と皮膚片の隙間に油滴を充填することによって皮膚を滑らかにする物質であり、大量に適用しない限り、通常は閉塞性ではない。乳化剤と組み合わせた場合、それらは、角質層に油分及び水分を保持するのを助けることができる。ビタミンEは、皮膚軟化剤として以外は作用がないと思われる一般的な添加物である。同様に、他のビタミン、例えば、A及びDも添加されるが、それらの作用は疑わしい。皮膚軟化剤の非限定的な例としては、鉱油、ラノリン、脂肪酸、コレステロール、スクアレン、構造脂質、及びこれらの組合せが挙げられる。
【０１３８】
タンパク質レジュビネーターは、必須タンパク質を補充することによって皮膚を若返らせる物質である。タンパク質レジュビネーターの非限定的な例としては、コラーゲン、ケラチン、エラスチン、及びこれらの組合せが挙げられる。
【０１３９】
医薬組成物又は剤形のpHを調整して、1以上の活性成分の送達を向上させることもできる。同様に、溶媒担体の極性、そのイオン強度、又は等張性を調整して、送達を向上させることもできる。例えば、皮膚からの吸収は、密封包帯、塗擦、又は担体としてのジメチルスルホキシドの使用によって増強することもできる。化合物、例えば、ステアリン酸金属塩(例えば、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸リチウム、ステアリン酸カリウムなど)を医薬組成物又は剤形に添加して、送達を向上させるように、1以上の活性成分の親水性又は親油性を有利に変化させることもできる。これに関して、ステアリン酸塩は、製剤用の脂質ビヒクルとしての、乳化剤又は界面活性剤としての、及び送達増強剤又は透過増強剤としての役割を果たすことができる。活性成分の様々な塩、水和物、又は溶媒和物を用いて、得られる組成物の特性をさらに調整することができる。
【０１４０】
ある実施態様において、本明細書に提供される活性剤の一方又は両方を、非経口、経皮、粘膜、鼻腔、口腔、舌下、局所、又は経口投与する。ある実施態様において、第一の活性剤を錠剤又はカプセル剤の形態で経口投与する。ある実施態様において、活性剤の1つ又は複数を局所的に(例えば、ローション剤又は液剤の剤形で)投与する。
【０１４１】
(5.4.5  キット)
活性成分は、多くの場合、患者に、同時に投与されることも、同じ投与経路で投与されることもない。いくつかの実施態様において、本明細書に提供されるのは、医療実践者が使用するときに、患者への適量の活性成分の投与を簡略化することができるキットである。
【０１４２】
典型的なキットは、化合物Aもしくは化合物B、又は化合物Aもしくは化合物Bの医薬として許容し得る塩、溶媒和物、水和物、包摂化合物、多形、もしくはプロドラッグの単位剤形、及び第二の活性成分の単位剤形を含む。第二の活性成分の例としては、本明細書に記載されているもの、例えば、エタネルセプト、メトトレキサート、及びシクロスポリンAが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４３】
キットは、活性成分(複数可)を投与するために使用される装置をさらに含む。そのような装置の例としては、注射器、点滴袋、パッチ、及び吸入器が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４４】
キットは、1以上の活性成分を投与するために使用することができる医薬として許容し得るビヒクルをさらに含むことができる。例えば、活性成分が、非経口投与用に再構成されなければならない固体形態で提供される場合、キットは、好適なビヒクルの密封容器を含むことができ、このビヒクルの中で、活性成分を溶解させて、非経口投与に好適である、微粒子を含まない滅菌溶液を形成させることができる。医薬として許容し得るビヒクルの例としては:注射用水USP;水性ビヒクル、例えば、限定されないが、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロースと塩化ナトリウムの注射液、及び乳酸加リンゲル注射液;水混和性ビヒクル、例えば、限定されないが、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、及びポリプロピレングリコール;並びに非水性ビヒクル、例えば、限定されないが、トウモロコシ油、綿実油、ピーナッツ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、及び安息香酸ベンジルが挙げられるが、これらに限定されない。
【実施例】
【０１４５】
(6.実施例)
本明細書に提供されるいくつかの実施態様を以下の非限定的な実施例によって説明する。これらの実施例は、その範囲の限定とみなされるべきではない。
【０１４６】
(6.1.実施例1: 2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-アセチルアミノイソインドリン-1,3-ジオンの合成)
1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-メチルスルホニルエチルアミン(1.0g、3.7mmol)及び無水3-アセトアミドフタル酸(751mg、3.66mmol)の酢酸(20mL)撹拌溶液を還流状態で15時間加熱した。溶媒を真空中で除去すると、油状物が得られた。得られた油状物のクロマトグラフィーにより、生成物が黄色の固体(1.0g、59％収率)として得られた: mp、144℃;
【化５】
0006022548.tif 000006
C22H24NO7Sの分析計算値: C, 57.38; H, 5.25; N, 6.08. 実測値: C, 57.31; H, 5.34; N, 5.83.
【０１４７】
(6.2.実施例2: (+)-2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-アセチルアミノイソインドリン-1,3-ジオン(「化合物A」)の調製)
(6.2.1. 3-アミノフタル酸の調製)
10％Pd/C(2.5g)と3-ニトロフタル酸(75.0g、355mmol)とエタノール(1.5L)の混合物を、2.5LのParr水素化装置に、窒素雰囲気下で仕込んだ。水素を該反応容器に55psiまで仕込んだ。水素圧を50〜55psiに維持して、混合物を13時間振盪させた。水素を放出させ、混合物を窒素で3回パージした。懸濁液をセライト床に通して濾過し、メタノールですすいだ。濾液を真空中で濃縮した。得られた固体をエーテル中で再スラリー化させ、真空濾過により分離した。該固体を真空中で一定重量まで乾燥させると、54g(84％収率)の3-アミノフタル酸が黄色の生成物として得られた。
【化６】
0006022548.tif 000007
【０１４８】
(6.2.2.無水3-アセトアミドフタル酸の調製)
1Lの3つ口丸底フラスコに、機械撹拌器、温度計、及び冷却器を装備し、3-アミノフタル酸(108g、596mmol)及び無水酢酸(550mL)を仕込んだ。反応混合物を3時間加熱還流させ、周囲温度に冷却し、さらに0〜5℃までもう1時間冷却した。結晶性固体を真空濾過により収集し、エーテルで洗浄した。固体生成物を真空中で周囲温度で一定重量まで乾燥させると、75g(61％収率)の無水3-アセトアミドフタル酸が白色の生成物として得られた。
【化７】
0006022548.tif 000008
【０１４９】
(6.2.3. 2-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-1-(メチルスルホニル)-エト-2-イルアミンの分割)
3Lの3つ口丸底フラスコに、機械撹拌器、温度計、及び冷却器を装備し、2-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-1-(メチルスルホニル)-エト-2-イルアミン(137.0g、500mmol)、N-アセチル-L-ロイシン(52g、300mmol)、及びメタノール(1.0L)を仕込んだ。撹拌スラリーを1時間加熱還流させた。撹拌混合物を周囲温度に冷却させておき、周囲温度でさらに3時間、撹拌し続けた。スラリーを濾過し、メタノール(250L)で洗浄した。固体を風乾させ、その後、真空中で周囲温度で一定重量まで乾燥させると、109.5g(98％収率)の粗生成物(85.8％ee)が得られた。粗固体(55.0g)及びメタノール(440mL)を1時間還流させ、室温に冷却し、周囲温度でさらに3時間撹拌した。スラリーを濾過し、濾過ケーキをメタノール(200mL)で洗浄した。固体を風乾させ、その後、真空中で30℃で一定重量まで乾燥させると、49.6g(90％回収)の(S)-2-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-1-(メチルスルホニル)-エト-2-イルアミン-N-アセチル-L-ロイシン塩(98.4％ee)が得られた。キラルHPLC(1/99 EtOH/20mM KH2PO4 ＠pH 7.0、Agilent Technologies社製のUltron Chiral ES-OVS、150mm×4.6mm、0.5mL/分、＠240nm):18.4分(S-異性体、99.2％)、25.5分(R-異性体、0.8％)。
【０１５０】
(6.2.4. (+)-2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-アセチルアミノイソインドリン-1,3-ジオンの調製)
500mLの3つ口丸底フラスコに、機械撹拌器、温度計、及び冷却器を装備した。該反応容器に、(S)-2-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-1-(メチルスルホニル)-エト-2-イルアミンN-アセチル-L-ロイシン塩(25g、56mmol、98％ee)、無水3-アセトアミドフタル酸(12.1g、58.8mmol)、及び氷酢酸(250mL)を仕込んだ。混合物を一晩還流させ、その後、＜50℃に冷却した。溶媒を真空中で除去し、残渣を酢酸エチルに溶解させた。得られた溶液を水(250mL×2)、飽和水性NaHCO3(250mL×2)、ブライン(250mL×2)で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を真空中で蒸発させると、残渣が、エタノール(150mL)及びアセトン(75mL)を含む二成分溶媒から再結晶化した。固体を真空濾過により分離し、エタノール(100mL×2)で洗浄した。生成物を真空中で60℃で一定重量まで乾燥させると、19.4g(75％収率)のS-{2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-イノイソインドリン-1,3-ジオンが98％eeで得られた。キラルHPLC(15/85 EtOH/20mM KH2PO4 ＠pH .5、Agilent Technology社製のUltron Chiral ES-OVS、150mm×4.6mm、0.4mL/分、＠240nm):25.4分(S-異性体、98.7％)、29.5分(R-異性体、1.2％)。
【化８】
0006022548.tif 000009
【０１５１】
化合物Aの特定の結晶性形態は、その開示が引用により完全に本明細書中に組み込まれている、米国特許第7,893,101号に従って調製することができる。
【０１５２】
(6.3.実施例3: mAB/LPS誘導性実験的マウス関節炎発症モデルにおける抗関節炎活性の評価)
(+)-2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-アセチルアミノイソインドリン-1,3-ジオン(「(+)異性体」;化合物A)の抗関節炎活性をmAB/LPS誘導性実験的マウス関節炎発症モデルで評価した。マウスに、1、5、及び25mg/kgの1日1回の経口(PO)強制飼養を連続5日間の処置日にわたって施した。処置群は、1群当たりn＝8匹のBALB/c雄マウスを含んでいた。2つの同じ大きさの群を、それぞれ、陽性対照又はビヒクル対照としての役割を果たす、デキサメタゾン(1mg/kg)、又は0.5％CMC/0.25％Tween 80懸濁液のいずれかで処置した。
【０１５３】
実験的関節炎をまず、試験の0日目に、4種のモノクローナル抗体(mAB)のカクテルを100mg/kgの用量で静脈内(IV)注射し、次いで、約72時間後に、2.5mg/kgのLPSを腹腔内(IP)注射することによって誘導した。
【０１５４】
足の厚さを、電子デジタルキャリパーを用いて、6回(0、4、5、6、7、及び9日目)決定し、左後足と右後足の両方についての平均の群平均値として示した。結果を図1に示す。データから、最大用量(25mg/kg)の化合物A処置群において、高度に統計的に有意で(ビヒクル対照に対して、p＜0.01)かつ一定の足腫脹の抑制が明白に示され、これは、陽性対照のデキサメタゾン群で見られるものと同等であった。より低い程度(ビヒクル対照に対して、p＜0.05)は、5mg/kgの(+)異性体(中間用量)を投与した動物で明らかとなったが、9日目の測定回に限られた。
【０１５５】
この試験において、1日1回、25mg/kgの用量で、連続5日間経口投与された化合物Aは、同一の投与レジメンで適用されたデキサメタゾン(1mg/kg)によって達成された統計的に有意な足腫脹の軽減から明らかなように、同程度の潜在的な抗関節炎活性を示した。
【０１５６】
(6.3.1.組織病理学的評価)
(+)-2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-アセチルアミノイソインドリン-1,3-ジオン(「(+)異性体」;化合物A)の潜在的な抗関節炎活性を明らかにするために、合計16匹の動物をビヒクル対照又は25mg/kgの(+)異性体を用いて組織病理学的評価のために試験した。左後肢を10％中性緩衝ホルマリン中で1週間固定し、その後、緩衝無機酸中に移し(約48時間の脱灰プロセス)、10％ホルマリン中に戻した後、貯蔵した。足関節、すなわち、脚と足の間の関節(脛骨-足根関節)を含むように、脛骨の真ん中及び遠位から得られた各々の肢を、真ん中で縦方向に切断し、両半分をパラフィンに包埋し、6ミクロン厚のスライドを切り、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した。これらの関節の組織病理学的変化を記載し、変化の重症度(0＝目立たない、1＝最小限、2＝軽度、3＝中程度、4＝顕著)を考慮して、5つの等級(0〜4)の半定量的等級付けを用いてスコア化した。個々の所見を表1に示す。これらの結果は、等級3(中程度)の重症度を達成する、関節炎モデルの誘導の成功を示している。この関節炎で特徴的に見られる全ての典型的な変化範囲を記述した。試験化合物Aで処置した動物由来の全ての試料には、関節炎が事実上存在せず、関節炎発症を阻害する極めて強力な能力が示された。
【表１】
0006022548.tif 000010
【０１５７】
(6.3.2.マウスにおける抗体誘導性関節炎)
潜在的な抗関節炎活性を、5及び25mg/kgで、1日1回、反復経口投与により連続11日間の処置日にわたって投与された(+)-2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メチルスルホニルエチル]-4-アセチルアミノイソインドリン-1,3-ジオン(「(+)異性体」;化合物A)のmAb/LPS誘導性実験的マウス関節炎発症モデルで評価した。試験品で処置した群は、1群当たりn＝8匹のBALB/c雄マウスを含んでいた。さらに、4つの同じ大きさの群を、Enbrel(5もしくは6.25mg/kg、陽性対照)、0.5％CMC/0.25％Tween 80の懸濁液(5ml/kg、ビヒクル対照)、又はEnbrelと化合物Aの組合せ(各5mg/kg、陽性対照-試験品群)のいずれかで処置した。
【０１５８】
実験的関節炎をまず、試験の0日目に、4種のモノクローナル抗体(mAb)のカクテルを100mg/kgの用量レベルで単回静脈内注射し、次いで、約72時間後に、2.5mg/kgのLPSを単回腹腔内(IP)注射することによって誘導した。
【０１５９】
明白な処置関連の有害反応は、立毛、自発運動活性の低下、及び軽い下痢を特徴とする、LPS注射に対する通常の反応を除いて、14日間の観察期間の全体を通して、どの化合物A処置動物でも認められなかった。
【０１６０】
後足厚を、8回(0、4、5、6、7、9、11、及び14日目)決定し、左後足と右後足の両方についての平均の群平均値として示した。結果を図2に示す。データから、5又は25mg/kgの化合物Aの反復投与を受けた動物において高度に有意な減少(ビヒクル対照に対して、p＜0.01)が明白に示され、これは、試験5、7、9、11、及び14日目に、陽性対照で処置した動物(5もしくは6.25mg/kgのEnbrel)、又はEnbrel-化合物Aの組合せ処置で見られるものと同等であった。
【０１６１】
Enbrel-化合物Aの組合せを受けた動物及び6.25mg/kgのEnbrelを受けた動物における両後足の群平均関節炎発症スコア値(左右の平均値/動物)は、試験7、9、11、及び14日目にビヒクル対照群で記録された該スコア値よりも高度〜極度に統計的に低かった(それぞれ、p＜0.01及びp＜0.001)。さらに、25mg/kgの化合物Aを受けた動物では、ビヒクル対照群と比べた、統計的に有意〜極度に有意な低下(p＜0.05、p＜0.01、p＜0.001)が、それぞれ、9、11、及び14日目に明らかになった。
【０１６２】
関節炎誘導開始(試験0日目に採用される)に対する後足厚の群平均変化率は、ビヒクル対照群と比較して、腫脹期間の全体を通して、7、9、11、及び14日目に、5もしくは25mg/kgの(+)異性体、5もしくは6.25mg/kgのEnbrelの反復投与を受けた動物、又はEnbrel-化合物Aの組合せで処置した群で高度に有意に低い(P＜0.01)ことが分かった。
【０１６３】
この試験において、5及び25mg/kgで、1日1回、連続11日間の処置日にわたって経口投与された化合物Aは、同一の投与レジメンで適用された、5又は6.25mg/kgの両方のEnbrelによって達成された統計的に有意な足腫脹の軽減から明らかなように、同程度の潜在的な抗関節炎活性を示した。
【０１６４】
(6.4.実施例4:インビトロ及びコラーゲン抗体誘導性関節炎のマウスモデルにおけるT細胞に対する化合物Aの単独及び併用での抗炎症活性)
T細胞における化合物Aの抗炎症活性を、単独で、並びにエタネルセプト(ETN)、シクロスポリンA(CsA)、及びメトトレキサート(MTX)を含む、他の抗リウマチ剤との併用で測定した。化合物Aを、単独及び併用で、コラーゲン抗体誘導性関節炎(CAIA)のマウスモデルで試験した。
【０１６５】
(6.4.1.方法)
健常ドナー(n＝5)由来のヒト末梢血全T細胞を磁気ビーズ上での陰性選択により単離し、1.25×10e6細胞/mLで抗CD3抗体で2日間刺激した。サイトカイン及びケモカインのタンパク質レベルをLuminex 100でのサイトメトリックビーズアレイにより解析した。CAIAモデル:雄のBALB/cマウス(1群当たりn＝10)に、4種のモノクローナル抗体のカクテルを100mg/kgの用量で静脈内注射し、3日後に、LPSを2.5mg/kgで腹腔内注射(IP)した。化合物A及びETNを、1日1回、3〜13日目に投与した。化合物Aは、1、5、又は25mg/kg qdの懸濁液として経口投与した。ETNは、5又は6.25mg/kgでIP注射した。各動物の両後足(左右)を関節炎発症応答の兆候について盲検様式で調べた。関節炎反応をスコア化し、重症度の低い順に0〜4の尺度に従って記録した。後足厚を、Mitutoyo製の電子デジタルキャリパーを用いてmm単位で測定した。両後足を足関節の真上で切り離し、10％中性緩衝ホルマリン中で固定し、組織病理について解析した。
【０１６６】
(6.4.2.結果)
化合物Aは、測定した全てのT細胞サイトカイン及びケモカイン(IL-2、IL-4、IL-13、IFN-γ、TNF-α、CXCL10、CCL3、及びCCL4)の産生を15〜360ng/mLの50％阻害濃度(IC50)で阻害した。CsAも全ての解析物を4.7〜140ng/mLのIC50で阻害した。一方、ETNは、TNF-αを強く阻害し(IC50＝1.5ng/mL)、それには及ばない程度にIL-13及びIP-10を阻害したが(16〜62ng/mL)、他の全ての解析物のIC50は、＞1600ng/mLであった。MTX IC50は、全て＞1600ng/mLであった。相乗的阻害は、化合物A＋ETNの組合せ及び化合物A＋CsAの組合せについて観察された。CAIAモデルにおいて、後足の関節炎反応スコア及び厚さは、5及び25mg/kgの化合物Aによって、及び試験した両方の用量のETNによって有意に低下した(p＜0.01)。高用量では、化合物Aは、滑膜過形成、滑膜絨毛形成、フィブリン沈着、滑膜における炎症性浸潤、パンヌス形成、軟骨破壊、並びに軟骨下骨破壊(破骨細胞による吸収/浸食及び骨の損失に反映される)を阻害した。各々5mg/kgの化合物A＋エタネルセプトの組合せは、関節炎モデルにおいて相加的〜相乗的であった。
【０１６７】
化合物AによるヒトT細胞の処理は、IL-2、IL-4、IL-13、IFN-γ、TNF-α、CXCL10、CCL3、及びCCL4の阻害をもたらした。ETN又はCsAと組み合わせると、化合物Aは、これらのサイトカイン及びケモカインのうちのいくつかを相乗的に阻害した。CAIAモデルにおいて、化合物Aは、足腫脹及び関節炎反応スコアを低下させ、組織病理学的解析により、25mg/kgで、関節炎が事実上存在しなかった。化合物Aとエタネルセプトは、この関節炎モデルで有利に組み合わさった。
【０１６８】
(6.5  実施例5:シクロプロパンカルボン酸{2-[(1S)-1-(3-エトキシ-4-メトキシ-フェニル)-2-メタン-スルホニル-エチル]-3-オキソ-2,3-ジヒドロ-1H-イソインドール-4-イル}-アミド(「化合物B」)の調製)
(6.5.1.メチル2-メチル-6-ニトロベンゾエートの調製)
2-メチル-6-ニトロ安息香酸(300.0g、1.66モル、Acros Organics社、Morris Plains、NJ製)とオルト酢酸トリメチル(298.3g、2.48モル、Aldrich Chemicals社、Milwaukee、WI製)の混合物を窒素下で約20〜25℃で3Lの3つ口フラスコに仕込んだ。反応混合物を徐々に加熱し、反応中に生成した低沸点成分を95〜100℃の内部温度まで留去した。2時間後、反応混合物を1〜2時間かけて20〜25℃に冷却した。ヘプタン(1.50L、Aldrich Chemicals社製)を1.0〜1.5時間かけて反応混合物に仕込んだ後、該反応混合物が混濁してきたときに、それにメチル2-メチル-6-ニトロベンゾエート(0.5g)をシードした。懸濁液を0.5〜1時間かけて0〜5℃に冷却し、0〜5℃でさらに1.5〜2時間保持した。固体を真空下での濾過により収集し、ヘプタン(3×300mL)で洗浄し、100〜120トールの真空下、30〜35℃でトレイ中で一定重量まで乾燥させた。メチル2-メチル-6-ニトロベンゾエートの収量は、300.0gの2-メチル-6-ニトロ安息香酸に基づくと、292.0g(91％)であった。生成物は、面積率に基づいてHPLCにより測定された＞99％の純度、及びカール・フィッシャー滴定により測定された＜0.1％の水含有量を有することが分かった。
【０１６９】
(6.5.2.メチル2-ブロモメチル-6-ニトロベンゾエートの調製)
メチル2-メチル-6-ニトロベンゾエート(200.0g、1.02モル、先に調製したもの)と1,3-ジブロモ-5,5-ジメチルヒダントイン(DBH、162.0g、0.57モル、Aldrich Chemicals社製)と酢酸メチル(1.20L、Aldrich Chemicals社製)の混合物を窒素下で約20〜25℃で3Lの3つ口フラスコに仕込んだ。反応混合物を0.5〜1時間還流させた後、2,2'-アゾビスイソブチロニトリル(AIBN、8.6g、52mmol、Aldrich Chemicals社製)の100mLの酢酸メチル溶液を15〜30分間かけて仕込んだ。未反応の2-メチル-6-ニトロベンゾエートの量が5〜10％未満になるまで、反応混合物を6.5〜8時間還流させた。該反応混合物を15〜18℃に冷却し、15〜18℃で50〜60分間保持した。固体を濾過し、該固体中に残るメチル2-ブロモメチル-6-ニトロベンゾエートが3％未満になるまで、冷たい(すなわち、5〜10℃の)酢酸メチル(2×100mL)で洗浄した。次に、ヘプタン(1.00L)を濾液に仕込んだ後、上層の有機相を、HPLCによる測定によって未反応の5,5-ジメチルヒダントインが0.5％(210nmでの面積率)未満になるまで2％のブライン(2×500mL)及び脱イオン水(1〜2×500mL)で洗浄した。該溶液を減圧下で濃縮して、約1.80〜1.90Lの酢酸メチルを除去した後、メチルtert-ブチルエーテル(MTBE、300mL)を仕込んだ。反応混合物を65〜70℃で10〜15分間還流させた後、溶液を0.5〜1時間かけて50〜55℃に冷却し、500mgのメチル2-ブロモメチル-6-ニトロベンゾエートを45〜50℃でシードした。懸濁液を20〜25℃に冷却し、20〜25℃で2〜3時間保持した。固体を濾過により収集し、5〜10℃の1:2の容量比のヘプタンとMTBEの冷たい混合物(2×100mL)で洗浄し、100〜120トールの真空下で20〜25℃で一定重量まで乾燥させた。メチル2-ブロモメチル-6-ニトロベンゾエートの収量は、200.0gの投入量のメチル2-メチル-6-ニトロベンゾエートに基づくと、185.2g(66％)であった。生成物は、面積率に基づいてHPLCにより測定された＞98％の純度、及びカール・フィッシャー滴定により測定された＜0.1％の水含有量を有することが分かった。
【０１７０】
(6.5.3.(1S)-1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メタンスルホニル-エチルアミンの調製)
(1S)-1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メタンスルホニル-エチルアミンN-アセチル-L-ロイシン塩(1.10kg、2.46モル)と脱イオン水(4.40L)とジクロロメタン(DCM、5.50L)の混合物を反応容器に仕込んだ後、水酸化ナトリウム(196.0g、4.90モル)の1.00Lの脱イオン水溶液を15〜25℃で約5分間かけて該反応容器に仕込んだ。得られた混合物を15〜25℃で少なくとも10分間撹拌し、その後、水相及び有機相を分離させておいた。上部の水相のpHをpH 13〜14に維持又は調整した。該相を分離し、上部の水相をDCM(2×4.4L)で抽出した。抽出の間ずっと、該水相のpHを13〜14に維持した。DCM抽出物を合わせ、該水相のpHが11以下に達するまで脱イオン水(3.3L)で洗浄した。DCMを真空下で35℃未満で除去した。残留固体の水含有量は、カール・フィッシャー滴定で測定したとき、＜0.1％w/wであるものとした。該残留固体をさらなるDCMで共沸乾燥させた。該固体を真空中で30〜35℃で一定重量まで乾燥させると、(1S)-1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メタンスルホニル-エチルアミンが白色の粉末(639.0〜672.0g、95〜100％収率)として得られた。
【０１７１】
(6.5.4.(1S)-7-ニトロ-2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル]イソインドリン-1-オンの調製)
(1S)-7-ニトロ-2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル]イソインドリン-1-オンを以下の手順により調製した。メチル2-ブロモメチル-6-ニトロベンゾエート(100.0g、365mmol、先に実施例6.5.2.で調製したもの)と(1S)-1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メタンスルホニルエチルアミン(104.7g、383mmol、先に実施例6.5.3.で調製したもの)と炭酸水素ナトリウム(67.5g、8.03モル、Aldrich Chemicals社製)とジメチルホルムアミド(500mL)の混合物を窒素下で室温で1Lの3つ口フラスコに仕込んだ。反応混合物を、未反応のメチル2-ブロモメチル-6-ニトロベンゾエートが＜2％未満になるまで、70〜75℃の内部温度まで2時間、徐々に加熱した。該反応混合物を95〜100℃の内部温度まで18時間、徐々に加熱した。該反応混合物を20〜25℃に冷却し、1Lの滴下漏斗に移した。精製水(1500mL)を5Lの3つ口フラスコに仕込んだ後、滴下漏斗中の反応混合物を、内部温度を30℃未満に維持しながら、室温で1〜2時間かけて5Lの3つ口フラスコ中の水に添加した。該反応混合物を室温で2時間撹拌した。固体を真空下で完全に濾過し、水(3×300mL)及びメタノール(2×400mL)で洗浄し、その後、2Lの3つ口フラスコに仕込み、その後、メタノール(1000mL)を仕込んだ。混合物を1時間還流させた。該混合物を室温に冷却した。固体を真空下での濾過により収集し、200mLのメタノール(2 vol)で洗浄し、100〜120トールの真空下で40〜45℃で一定重量まで乾燥させた。(1S)-7-ニトロ-2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル]イソインドリン-1-オンの収量は、100.0gの投入量のメチル2-ブロモメチル-6-ニトロベンゾエートに基づくと、123.0g(78％)であった。生成物は、面積率に基づいてHPLCにより測定された＞99％の純度、及びカール・フィッシャー滴定により測定された＜0.1％の水含有量を有することが分かった。
【０１７２】
(6.5.5.(1S)-7-ニトロ-2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル]イソインドリン-1-オンの別法による調製)
(1S)-7-ニトロ-2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル]イソインドリン-1-オンを以下の手順によっても調製した。メチル2-ブロモメチル-6-ニトロベンゾエート(100.0g、365mmol、先に実施例6.5.2.で調製したもの)と(1S)-1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-メタンスルホニル-エチルアミン(104.7g、383mmol、先に実施例6.5.3.で調製したもの)と炭酸カリウム粉末(100.8g、730mmol、Aldrich Chemicals社製)の混合物を室温でアセトニトリル(500mL)に懸濁させた。反応混合物を、未反応のメチル2-ブロモメチル-6-ニトロベンゾエートが2％未満になるまで81〜83℃で約2時間還流させた。該反応混合物を45〜50℃に冷却した後、メタノール(200mL)を5〜10分間かけて仕込んだ。該混合物を20〜25℃に冷却させておき、2時間撹拌した後、脱イオン水(1.40L)を0.5〜1時間かけて仕込み、20〜25℃で30分間、及び0〜5℃で1〜2時間撹拌した。固体を濾過し、脱イオン水(3×300mL)で洗浄し、カール・フィッシャー滴定で測定したとき＜10％の水含有量になるまで乾燥させた。該固体をメタノール(750mL)に懸濁させ、1〜1.5時間還流させた。懸濁液を1.5〜2時間かけて0〜5℃に冷却し、0〜5℃で1〜1.5時間保持した。固体を濾過し、0〜5℃のメタノール(2×200mL)及びヘプタン(200mL)で洗浄し、その後、真空下で40〜45℃で一定重量まで乾燥させた。(1S)-7-ニトロ-2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル]イソインドリン-1-オンの収量は、100.0gの投入量のメチル2-ブロモメチル-6-ニトロベンゾエートに基づくと、148.0g(93％)であった。生成物は、面積率に基づいてHPLCにより測定された＞99％の純度、及びカール・フィッシャー滴定により測定された＜1.0％の水含有量を有することが分かった。
【０１７３】
(6.5.6.化合物Bの調製)
(1S)-7-ニトロ-2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル]イソインドリン-1-オン(60g、138mmol、先に実施例6.5.5.で調製したもの)と10％Pd/C(50％水分、2.4g、4wt％、Johnson Matthey社、London、UK製)と酢酸エチル(780mL)の混合物を窒素下で室温でParr容器に仕込んだ。該混合物を窒素で3回及び水素で3回パージした後、反応混合物を40℃に加熱し、その後、熱を除去した。該反応混合物を、ヒドロキシルアミン中間体が≦3％になるまで、40〜45psiの圧力で4〜6時間かけて水素とともに撹拌した。該反応混合物を20〜25℃に冷却した。該反応混合物をセライト床(1インチ厚)に通して濾過し、その後、床を酢酸エチル(120mL)で洗浄した。濾液を、50mLの滴下漏斗を備えた3Lの3つ口フラスコに移した。N,N-ジイソプロピルエチルアミン(29mL、165mmol)を該フラスコに仕込んだ後、滴下漏斗にシクロプロピルカルボニルクロリド(13.0mL、145mmol、Aldrich Chemicals社製)を仕込んだ。該シクロプロピルカルボニルクロリドは、室温で1〜2時間かけて、30℃未満の内部温度で添加した。反応混合物を室温で2〜4時間撹拌した。ヘプタン(300mL)を添加した後、反応混合物を4〜6時間撹拌した。固体を真空下での濾過により収集し、2N HCl(2×300mL)、水(2×300mL)、及びその後、ヘプタン(2×300mL)で洗浄した。粗生成物を100〜120トールの真空下で40〜45℃で一定重量まで乾燥させた。粗化合物Bの収量は、60.0gの投入量の(1S)-7-ニトロ-2-[1-(3-エトキシ-4-メトキシフェニル)-2-(メチルスルホニル)エチル]-イソインドリン-1-オンに基づくと、58g(88％)であった。
【０１７４】
(6.5.7.化合物Bの再結晶化)
粗化合物B(95.2g、先に実施例6.5.6.で調製したもの)とテトラヒドロフラン(THF、1.43L)の混合物を窒素下で20〜25℃で3Lのフラスコに仕込んだ。懸濁液を溶解が達成されるまで60〜65℃に加熱した。該懸濁液を45〜50℃で濾過し、固体を、45〜55℃で予め温めておいた95mLのTHFですすいだ。約950〜1150mLのTHFを標準圧力で30〜60分間かけて留去した後、無水エタノール(950mL)を55〜60℃で5〜10分間かけて仕込んだ。約350〜400mLの溶媒を、内部温度が72〜74℃に上昇するまで、標準圧力で除去した。得られた懸濁液を72〜75℃で30〜60分間還流させ、1〜2時間かけて20〜25℃に冷却し、20〜25℃でさらに1〜2時間保持した。固体を真空下での濾過により収集し、無水エタノール(240〜280mL)及びヘプタン(240〜280mL)で洗浄し、その後、130〜140トールの真空中、50〜55℃でトレイ中で一定重量まで乾燥させた。オフホワイト色の結晶性生成物の収量は(88.0〜91.0g、92〜96％)であった。
【０１７５】
本明細書に記載の化合物は、その開示が引用により完全に本明細書中に組み込まれている、米国特許公開第2010/0168475号に記載の方法に従って調製することもできる。
【０１７６】
(6.6.実施例6:刺激したT細胞における関節リウマチ及び乾癬と関連するサイトカイン産生に対するシクロスポリンA、メトトレキサート、及びエタネルセプトと組み合わせたPDE4阻害剤の化合物A及び化合物Bの効果)
(6.6.1.末梢血単核細胞のマルチプレックスアッセイの手順)
ヒト末梢血単核細胞の純化
【０１７７】
50ミリリットル(50mL)のヒトバフィーコートを2つの25mLアリコートに分け、25mLの滅菌ハンクス緩衝塩溶液(HBSS)を含む2本の50mL円錐チューブに入れた。これらのチューブを数回転倒させることによって穏やかに混合した。15ミリリットル(15mL)の室温のFicoll-Paque Plus(Amersham Bioscience社; cat# 17-1440-02)を4本の50mL円錐チューブに分注した。その後、25mLのバフィーコート/HBSS混合物をFicollの最上部に穏やかにかつゆっくりと重層した。これらの試料を450rpm(ローターA-4-81)で35分間遠心分離した(エッペンドルフ遠心分離機5810R)。血漿を含む最上部の層を廃棄した。単核細胞を含む境界部分を2本の50mL円錐チューブに移した。両方の円錐チューブを総容量(50mL)になるまでHBSSで満たし、1200rpmで10分間遠心分離した。これらの細胞をHBSS中で再び洗浄し、1000rpmで10分間遠心分離した。ヒト赤血球溶解バッファー(5mL)(Boston Bioproducts cat# IBB-197)を細胞ペレットに添加し、室温で5分間インキュベートした。リン酸緩衝生理食塩水(PBS;45mL)をこれらの円錐チューブに添加し、1200rpmで10分間遠心分離した。細胞ペレットを合わせて、20mLのロズウェルパーク記念研究所(RPMI)完全培地(RPMI/5％ヒト血清/1×ペニシリン/ストレプトマイシン[pen/strep]/L-グルタミン[L-gln])に再懸濁させ、細胞を計数した。
【０１７８】
ブドウ球菌エンテロトキシンB(SEB)で処理したPBMCについて
【０１７９】
単離したPBMCを96ウェルプレートにプレーティングし、化合物(1600ng/mlから始めて、1:4希釈した)を37℃で1時間添加した。その後、ブドウ球菌エンテロトキシンB(Sigma社)を100ng/mlの最終濃度で添加し、細胞を37℃で18時間インキュベートした。
【０１８０】
その後、luminexアッセイ用に上清を回収した。
【０１８１】
(6.6.2.抗CD3モノクローナル抗体刺激T細胞のマルチプレックスアッセイの手順)
ヒトT細胞の純化及び処理
【０１８２】
組織培養プレート(96ウェル平底)を抗CD3 mAb(2.5μg/mL)でコーティングし、37℃で4時間インキュベートした。これらのプレートを、T細胞を添加する直前に100μl/ウェルの完全培地(10％熱非働化胎仔ウシ血清(FBS)、1％pen/strep/1％L-glnを含むRPMI 1640)で3回洗浄した。末梢血単核細胞(5×108細胞;上記のように調製したもの)を5枚の10cm組織培養ディッシュに播種した(各々10mL)。接着性単球部分を37℃で30〜60分間のインキュベーションにより除去した。これらのディッシュを培地ですすいで、全ての非接着性PBMCを除去した。非接着性PBMCを計数し、2×108細胞を取り出し、1200rpmで10分間遠心分離し、完全培地を用いて容量を4.0mLに調整した。以下の抗体混合物を、ファルコンチューブ(5mL)に入れて、室温(RT)で30分間、シェーカー上で混合することにより調製した:
・ヒツジ抗マウスIgGビーズ(600μl; Dynal Cat. No 110.31)、
・抗CD16(30μl; BD Pharmingen Cat. No. 555404)、
・抗CD33(30μl; BD Pharmingen Cat. No. 555449)、
・抗CD56(30μl; BD Pharmingen Cat. No. 555514)。
【０１８３】
終了後、抗CD19ビーズ(460μl; Dynal Cat. No. 111.43)及び抗CD14ビーズ(112μl; Dynal Cat. No. 111.49)をファルコンチューブ/抗体混合物に添加した。この混合物を、磁石及びピペット吸引を用いて、完全培地で3回洗浄した。非接着性PBMC(4.0mL中、2×108細胞)を添加し、チューブを4℃で30分間回転させた。これらの細胞を陰性選択用の磁石を用いてビーズから分離した。その後、T細胞を収集し、計数し、完全培地に再懸濁させた。T細胞濃度を2.5×105細胞/180μl(1.39×106細胞/mL)に調整し、プレートウェルに添加した(180μl/ウェル)。試験化合物(20μlの10×濃度)をT細胞を含むウェルに直ちに添加した。化合物A、化合物B、シクロスポリンA(Sigma社)、メトトレキサート(Sigma社)、及びEnbrel(処方により得られる)を400ng(1600ng/ml、1:4希釈)から始めて試験した。アッセイで使用される薬物濃度を、RA患者で実施される薬物動態学的研究により決定した(表2)。T細胞プレートを37℃で5％CO2で2日間インキュベートした。その後、各ウェル由来の50μlの上清を3つの新しい丸底96ウェルプレートに移し、Luminex解析用に-20℃で貯蔵した。各試料について二連のウェルで実施した。Foxらの文献、「関節リウマチ患者における経口シクロスポリン及びメトトレキサート組合せ療法は、メトトレキサート単独と比較した場合、メトトレキサートレベルを上昇させ、7-ヒドロキシメトトレキサートレベルを低下させる(Combined oral cyclosporin and methotrexate therapy in patients with rheumatoid arthritis elevates methotrexate levels and reduces 7-hydroxymethotrexate levels when compared with methotrexate alone.)」 Rheumatology(Oxford社). 2003;42(8):989-94を参照されたい。
【表２】
0006022548.tif 000011
【０１８４】
(6.6.3.Luminex解析)
サイトカインのIFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-13、IP-10、MIP-1α、MIP1β、及びTNF-αを、ニートの上清を用いて9プレックスフォーマットで解析した。データ解析をUpstate Beadviewソフトウェアを用いて実施した。データをPrism v5(GraphPad)を用いて％対照(DMSO)としてグラフ化した。まず、潜在的な薬物組合せ相乗作用を、曲線の直線部分に沿うグラフ化したデータの目視検査によって確認した。相乗作用を確認した後、グラフ化したデータをCompusyn Program(Combosyn社)に入力した(表3)。このプログラムは、各データ点についての組合せ指標(CI)を濃度曲線に沿って算出するものである。
【表３】
0006022548.tif 000012
【０１８５】
(6.6.4.抗CD3モノクローナル刺激ヒトT細胞におけるシクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたホスホジエステラーゼ4阻害剤:高サイトカインレベルドナーからの応答)
高いサイトカインレベルを有するドナーに由来する抗CD3 mAb刺激T細胞において、化合物AとCsA又はETCのいずれかとの組合せ効果は、IFN-γ(図3A)、IL-13(図7A)、IP-10(図8A)、MIP-1α(図9A)、MIP-1β(図10A)、及びTNF-α(図11A)産生を、試験濃度の1つの最小値で相乗的に阻害した(表4)。前述のサイトカインについての化合物AとMTXの組合せ阻害効果は、判定不能(ND)であったINF-γを除いて、非相加的であった(表4)。相乗的阻害は、IL-10産生についても、化合物AとCsA又はMTXの組合せで、試験濃度の1つで観察されたが、化合物A/ETCの組合せについてはNDであった(図6及び表4)。最大試験濃度(1600ng/ml)で、化合物A/MTXの組合せは、IL-2産生を相乗的に阻害した;しかしながら、ETC又はCsAと組み合わせた化合物Aは、IL-2産生の阻害について非相加的であった。特に、化合物A/CsAの組合せは、実際には拮抗的であった(図4A及び表4)。IL-4産生の阻害は、化合物AとETC又はMTXの組合せに応答して非相加的であったが、化合物A/CsAの組合せについては相加的であった(図5A及び表4)。
【０１８６】
CsA、ETC、又はMTXと組み合わせた化合物Bは、高サイトカインレベルを有するドナー由来の刺激したT細胞において、試験濃度の1つの最小値でMIP-1α(図9B)産生を相乗的に阻害した(表4)。化合物B/CsAの組合せもまた、IFN-γ(図3B)、IL-4(図5B)、IL-10(図6B)、及びIL-13(図7B)、IP-10(図8B)、MIP-1β(図10B)、及びTNF-α(図11B)産生の阻害について、少なくとも試験濃度の1つで相乗的であったが、この効果は、IL-2産生について非相加的であった(図4B)(表4)。さらに、化合物B/MTXの組合せは、IL-2(図4B)、IL-4(図5B)、及びMIP-1β(図10B)産生を相乗的に阻害したが(表4)、この組合せの効果は、IL-10(図6B)、IL-13(図7B)、IP-10(図8B)、及びTNF-α(図11B)産生について非相加的であるものの、IFN-γ産生についてはNDであった(図3B)(表4)。化合物B/ETCは、MIP-αを除き、本研究でプロファイリングされたサイトカインについて試験されなかった(上記;図9B)(表4)。
【表４】
0006022548.tif 000013
【０１８７】
(6.6.5.抗CD3モノクローナル刺激ヒトT細胞におけるシクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたホスホジエステラーゼ4阻害剤:低サイトカインレベルドナーからの応答
低レベルドナー(n＝5)由来の抗CD3 mAb刺激T細胞において、化合物AとCsAとの組合せ効果は、IFN-γ(図12A)、IL-4(図14A)、IL-10(図15A)、IL-13(図16A)、IP-10(図17A)、MIP-1α(図18A)、MIP-1β(図19A)、及びTNF-α(図20A)産生を、試験濃度の1つの最小値で相乗的に阻害し、IL-2(図13A)産生の阻害について非相加的であった(表5)。ETCと組み合わせた化合物Aもまた、IL-4(図14A)、IL-10(図15A)、IL-13(図16A)、IP-10(図17A)、及びMIP-1α(図18A)産生を、試験濃度の1つの最小値で相乗的に阻害し、IFN-γ(図12A)、IL-2(図13A)、MIP-1β(図19A)、及びTNF-α(図20A)産生の阻害について非相加的であった(表5)。化合物A/MTXの組合せは、プロファイリングされた全てのサイトカインの阻害について非相加的であった(表5)。
【０１８８】
CsA、ETC、又はMTXと組み合わせた化合物Bは、低レベルドナーの刺激したT細胞試料(n＝5)において、試験濃度の1つの最小値で、MIP-1α(図18B)を相乗的に阻害した(表5)。化合物A/CsAの組合せは、IFN-γ(図12B)、IL-2(図13B)、IP-10(図17B)、及びMIP-1β(図19B)産生について、試験濃度の1つで阻害的相乗作用を示した(表5)。非相加的応答が、TNF-α(図20B)産生について、化合物A/CsAの組合せで得られ、IL-4、IL-10、及びIL-13は、試験されなかった。ETCと組み合わせた化合物Bもまた、IFN-γ(図12B)、IL-4(図14B)、IL-10(図15B)、及びIP-10(図17B)産生について、少なくとも試験濃度の1つで相乗的阻害応答を示し(表5)、また、IL-2(図13B)、IL-13(図16B)、MIP-1β(図179B)、及びTNF-α(図20B)産生について非相加的阻害応答を示した(表5)。化合物B/MTXの組合せは、MIP-1αを除き、プロファイリングされたサイトカインの全てについて非相加的阻害応答を示した(上記;表5)。
【表５】
0006022548.tif 000014
【０１８９】
(6.6.6.シクロスポリン、エタネルセプト、又はメトトレキサートと組み合わせたホスホジエステラーゼ4阻害剤:ブドウ球菌エンテロトキシンBで処理した末梢血単核細胞における応答)
SEBで処理したPBMC試料(n＝6)において、CsAと組み合わせた化合物A又は化合物Bは、IL-10(図21A及びB)、IP-10(図22A及びB)、MIP-1α(図23A及びB)、MIP-1β(図24A及びB)、並びにTNF-α(図25A及びB)産生を、少なくとも試験濃度の1つについて相乗的に阻害した(表6)。また、ETCと組み合わせた化合物A又は化合物Bは、少なくとも1つの試験濃度について、IL-10(図21A及びB)、IP-10(図22A及びB)、並びにMIP-1α(図23A及びB)産生を相乗的に阻害し、MIP-1β(図24A及びB)並びにTNF-α(図25A及びB)産生の阻害について非相加的効果を示した(表6)。化合物A/MTXの組合せは、本アッセイでプロファイリングされたサイトカインの全てについて非相加的阻害を示した;しかしながら、化合物B/MTXの組合せは、400ng/mlの濃度で阻害的相乗作用を示したTNF-α産生を除き、プロファイリングされたサイトカインの全てについて非相加的阻害を示した(図25B及び表6)。
【０１９０】
(6.6.7.化合物Aは、T細胞調節性サイトカインIL-7遺伝子の発現を阻害する)
T細胞調節性サイトカインIL-7は、軟骨細胞及び滑膜細胞によって産生され、関節炎などの炎症性関節疾患、及び骨の損傷において役割を果たす。Long, D.の文献、Arthritis Res Ther., 2008, 10(1): R23。特に、IL-7のメッセンジャーリボ核酸(mRNA)及びタンパク質のレベルは、脊椎関節炎及び関節リウマチ(RA)患者の滑液で増大した。Rihl, Mらの文献、Arthritis Rheum., 2008, 58(11): 3430-3435。IL-1、IL-6、及びIL-6受容体(IL-6R)で刺激した正常初代ヒト軟骨細胞において、化合物A(0.1〜10μM)は、IL-7遺伝子発現を用量依存的な様式で相乗的に阻害した。このアッセイにおいて、化合物Aは、それらのそれぞれの最大血漿濃度(Cmax-MTX＝400及びETC＝1600ng/ml)を包含する用量範囲内のメトトレキサート及びエタネルセプトよりも効果的なIL-7遺伝子発現の阻害剤であった。刺激した初代ヒト正常軟骨細胞において、化合物Aは、滑膜組織のバイオマーカーである、細胞間接着分子1(ICAM-1)の発現及びα-v-β-3(αvβ3)インテグリン発現を阻害した。同様に、IL-1、IL-6、及びIL-6Rで刺激した関節リウマチ滑膜線維芽細胞において、化合物A(0.1〜10μM)は、IL-7遺伝子発現を用量依存的な様式で相乗的に阻害したが、MTX及びETCには顕著な効果がなかった。
【表６】
0006022548.tif 000015
【０１９１】
(6.6.8.エタネルセプト、メトトレキサート、及びプレドニゾンと組み合わせた化合物A:T細胞調節性サイトカインIL-7アッセイにおける応答)
IL-7遺伝子発現アッセイ: IL-7産生に対するエタネルセプト、メトトレキサート、及びプレドニゾンと組み合わせた化合物Aの効果を関節リウマチ患者由来の滑膜線維芽細胞で試験した。Asterand社(Detroit, MI)から購入した正常初代ヒト軟骨細胞及び関節リウマチ滑膜線維芽細胞を解凍してT-75フラスコに入れ、コンフルエンシーに達するように2〜3週間培養した。培地は、20％高品質非熱非働化FBS-DMEM/F-12(Invitrogen 11330-032)＋1％pen/strep及び1％L-グルタミンであった。細胞(1.5〜2.0×105細胞)を2mlの完全培地を含む6ウェルプレートにプレーティングした。90％コンフルエンシーに達した後(通常、プレーティングして1〜2日後)、完全培地を2mlの無血清培地と交換することによって、細胞を20時間血清飢餓状態にした。細胞を試験化合物で37℃で1時間処理した(0.25％最終DMSO濃度)。薬物処理の後、細胞を、刺激性サイトカインのIL-1β(10ng/ml)、IL-6(10ng/ml)、及びIL-6R(20ng/ml)とともに、37℃で18時間インキュベートした。その後、細胞を冷PBSで洗浄した。600μlのRLT溶解バッファー(Qiagen RNAEasyキット cat# 74104)を添加し、細胞をQiashredder(Qiagen cat# 23800)に通し、その後、製造業者の指示(Qiagen RNAEasyキット)に従ってRNAを単離することによって、リボ核酸(RNA)を単離した。精製されたRNAを、リアルタイム逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応(RTPCR)解析用に、サーマルサイクラーでcDNAに逆転写した。インターロイキン-7遺伝子発現アッセイを、7500リアルタイムPCRシステムを用いて実施した。GAPDH遺伝子発現アッセイ対照を各試料について実行し、正規化対照として使用した。各遺伝子について、各実験内の試料を0.25％DMSO処理に対して正規化した。
【０１９２】
細胞表面タンパク質発現アッセイ:正常初代ヒト軟骨細胞を解凍してT-75フラスコに入れ、コンフルエンシーに達するように20％高品質非熱非働化FBS-DMEM/F-12(Invitrogen 11330-032)＋1％pen/strep及び1％L-グルタミン中で2〜3週間成長させた。細胞を100×20mm組織培養プレート中にプレーティングした(1.0×106細胞/10mlの完全培地)。翌日、培地を10mlの無血清培地と20分間交換して、細胞を血清飢餓状態にした。化合物A(0.1〜10μM)を37℃で1時間添加した(0.25％最終DMSO)。さらに、サイトカインのIL-1β(10ng/ml)、IL-6(10ng/ml)、及びIL-6R(20ng/ml)を添加し、細胞を37℃で一晩(18時間)インキュベートし続けた。細胞を非酵素的細胞解離溶液(Millipore S-004-B)により回収し、その後、1回、冷たい染色バッファー(BD Pharmigen 554656)で300×gで5分間洗浄した。細胞を再懸濁させ、3本の5ml丸底チューブに分注し、それに加えて、さらに2つのアリコートを対照用とした。細胞を、冷たい染色バッファー中で、300×gで5分間、再洗浄した。細胞をPEマウス抗ヒト:CD54(ICAM-1)(BD Pharmigen 555511)及びインテグリンαVβ3anti(Millipore MAB1976H)で染色した。試料をボルテックス処理し、遮光しながら4℃で30分間インキュベートした。2つのアイソタイプ対照である、PEマウスIgG1 k(BD Pharmigen 555749)及びIgG1(Millipore CBL600P)も、未処理DMSO試料で試験した。これらの試料を、2回、染色バッファー中で、300×gで5分間洗浄した。最後の洗浄の後、500μlの染色バッファーを各試料に添加し、フローサイトメトリーで解析した。
【０１９３】
正常初代ヒト軟骨細胞を解凍し、T-75フラスコ中、20％高品質非熱非働化FBS-DMEM/F-12(Invitrogen 11330-032)＋1％pen/strep及び1％L-グルタミンに入れた。細胞を、それぞれ、100×20mm組織培養プレート又は96ウェルプレート中にプレーティングした(1.0×106細胞/10ml又は5000細胞/100μLの完全培地)。翌日、培地を10ml又は100μlの無血清培地と20分間交換して、細胞を血清飢餓状態にした。化合物Aを37℃で1時間添加した(0.25％最終DMSO)。さらに、サイトカインのIL-1β(10ng/ml)、IL-6(10ng/ml)、及びIL-6R(20ng/ml)を添加し、細胞を37℃で一晩(18時間)インキュベートし続けた。上清を24及び48時間で回収し、-20℃で凍結させた。翌日、ヒトCXCL8/IL-8、ヒトMMP-3、及びプロ-MMP-13の酵素連結免疫吸着アッセイ(ELISA)を実施した。結果を図26〜28に示す。
【０１９４】
まとめると、これらのデータは、PDE4阻害剤である化合物A又は化合物Bのどちらかと、承認された関節リウマチ及び乾癬治療の選択肢であるCsA、ETC、又はMTX、特に、CsA又はETCとを組み合わせると、組合せ濃度によって、相乗作用を含む広範囲の阻害効果があり、さらに、いくつかの炎症性サイトカイン及び疾患関連サイトカインを阻止することを示している。
【０１９５】
(6.6.9.化合物Aは、破骨細胞形成及び骨芽細胞のRANKL産生を阻害する)
ヒト骨髄細胞を、化合物Aで、及び10nMデキサメタゾンと10nMビタミンDで処理して、細胞を破骨細胞に分化させた。新鮮な培地及び化合物Aを3日毎に添加した。7日目で上清を収集し、接着細胞を単離して、RNAを得た。7日目の細胞をTRAP5で染色し、破骨細胞の数を計数した。
【０１９６】
結果:化合物Aは、破骨細胞形成を阻害することが分かった。これは、化合物Aが、骨のコルチコステロイド異化効果に拮抗し得るという証拠を提供するものである。これは、関節リウマチを含む関節炎の治療としての潜在的な利点を提供するものである。
【０１９７】
化合物Aは、骨髄単核細胞のビタミンD及びコルチコステロイド処理によって誘導される破骨細胞形成も相乗的に阻害する。正常ヒト骨芽細胞(nHOST、供給源: Lonza)を6ウェルプレート中にプレーティングし、細胞を付着させるために一晩インキュベートした。細胞を、化合物Aで、及び10nMデキサメタゾンと10nMビタミンDで7日間処理した。化合物及び培地を3〜4日毎に取り替えた。7日目に、ELISAによるRANKL及びOPGのために、上清を収集した。
【０１９８】
結果:化合物Aは、正常ヒト骨芽細胞を1μM及び10μMの化合物Aの濃度で処理した後、sRANKLの顕著な減少を引き起こすことが分かった。化合物Aで処理した後、OPGの増加も観察された。化合物Aは、実際、正常ヒト骨芽細胞におけるRANKL/OPG比を顕著に抑えた。
【０１９９】
上記の実施態様は、単に例示的であることが意図されるのであって、当業者であれば、具体的な化合物、材料、及び手順の多くの等価物を認識するであろうし、又はルーチンの実験だけを用いて、それらを確認することができるであろう。そのような等価物は全て、本発明の範囲内にあるとみなされ、かつ添付の特許請求の範囲によって包含される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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