(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
- ペプチド、それは7-17の隣接したアミノ酸からなり、六量体TX1EX2X3E(式中X1、X2およびX3はいかなる天然か非天然のアミノ酸になりえる、を含んでなり、ここで、ペプチドはTNFレセプター結合活性を有さず、環化されており、および
- ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤、
を含んでなる組成物であって、
環化されたペプチドが、QRETPEGAEAKPWY、PKDTPEGAEALKPWY、CGQRETPEGAEAKPWYC、CGPKDTPEGAELKPWYCからなるグループから選択された連続するアミノ酸のシーケンスからなり、
ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤が、シアル酸の類縁体である組成物。
【請求項２】
ペプチドがアミノ酸シーケンスCGQRETPEGAEAKPWYCからなる、請求項1に記載の組成物。
【請求項３】
ペプチドがC-残基を介して環化している、請求項2に記載の組成物。
【請求項４】
ペプチドが前記C-残基間のジスルフィド架橋経由で環化される、請求項1〜3のうちのいずれか1つに記載の組成物。
【請求項５】
ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤がザナミビルまたはオセルタミビルである、請求項1〜4のうちのいずれか1つに記載の組成物。
【請求項６】
薬学的に許容できる担体を含有し、ヒトへの投与に許容できる医薬組成物として調製されている、請求項1〜5のうちのいずれか1つに記載の組成物。
【請求項７】
水、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、シトレート、グリシン、グリシルグリシン、ヒスチジン、リシン、アルギニン、TRIS、クエン酸ナトリウム、リンゲル液、ブドウ糖、マンニトール、トレハロース、サッカロース、ソルバイト、フルクトース、マルトース、乳糖またはデキストラン、ハンク溶液、固定油、オレイン酸エチル、物質(それらは等張性及び化学的安定性を改善する)、安定化剤、薬学的に許容できるタンパク質、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、重合体のアミノ酸およびアミノ酸共重合体から選択される薬学的に許容できる担体を含有する、請求項1〜6のうちのいずれか1つに記載の組成物。
【請求項８】
水が、注射用蒸留水である、請求項7に記載の組成物。
【請求項９】
- 1μgから10gまでの、好ましくは10μgから1gまでの、特に1mgから100mgまでの量のペプチド、および、
- 1μgから10gまでの、好ましくは100μgから1gまでの、特に1mgから200mgまでの量のウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤を、
互いとは独立に含有する、請求項1〜8のうちのいずれか1つに記載の組成物。
【請求項１０】
液体形態であり、
- 1μgから10gまでの、または10μgから1gまでの、または1mgから100mgまでの量のペプチド、および、
- 1μgから10gまでの、または100μgから1gまでの、または1mgから200mgまでの量のウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤を、互いとは独立に含有し、及び、
0.5〜10mlの体積で、または1〜5mlの体積で提供される、
請求項1から9のうちのいずれか1つに記載の組成物。
【請求項１１】
前記ペプチドおよび/または、ウイルス・ノイラミニダーゼの前記阻害剤が霧状にすることができる粉末配合物、又は霧状にすることができる液剤で提供される、請求項1〜10のうちのいずれか1つに記載の組成物。
【請求項１２】
それぞれ、個別の包装容器で提供された下記成分:
- ペプチド、そのペプチドは7-17の隣接したアミノ酸からなり、六量体TX1EX2X3Eを含有し、ここで、X1、X2およびX3は任意の天然か非天然のアミノ酸あってよく、ここで、ペプチドはTNF受容体結合活性を有しておらず、環化されており、及び
- ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤、を含有するセットであって、
環化されたペプチドが、QRETPEGAEAKPWY、PKDTPEGAEALKPWY、CGQRETPEGAEAKPWYC、CGPKDTPEGAELKPWYCからなるグループから選択された連続するアミノ酸のシーケンスからなり、
ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤が、シアル酸の類縁体であるセット。
【請求項１３】
前記成分は、各々が個別の包装容器で提供され、請求項1〜11のうちのいずれか1つでクレームされるように規定される、請求項12に記載のセット。
【請求項１４】
- ペプチド、そのペプチドは7-17の隣接したアミノ酸からなり、六量体TX1EX2X3Eを含有し、ここで、X1、X2およびX3は任意の天然か非天然のアミノ酸あってよく、ここで、ペプチドはTNF受容体結合活性を有しておらず、環化されており、及び
- ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤、を含有する、
インフルエンザの予防または治療用組成物であって、
環化されたペプチドが、QRETPEGAEAKPWY、PKDTPEGAEALKPWY、CGQRETPEGAEAKPWYC、CGPKDTPEGAELKPWYCからなるグループから選択された連続するアミノ酸のシーケンスからなり、
ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤が、シアル酸の類縁体である組成物。
【請求項１５】
- ペプチド、そのペプチドは7-17の隣接したアミノ酸からなり、六量体TX1EX2X3Eを含有し、ここで、X1、X2およびX3は任意の天然か非天然のアミノ酸であってよく、ここで、ペプチドはTNF受容体結合活性を有しておらず、環化されており、及び
-ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤、を含有する、
肺性炎症(それはインフルエンザによって引き起こされる)の予防または治療用組成物であって、
環化されたペプチドが、QRETPEGAEAKPWY、PKDTPEGAEALKPWY、CGQRETPEGAEAKPWYC、CGPKDTPEGAELKPWYCからなるグループから選択された連続するアミノ酸のシーケンスからなり、
ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤が、シアル酸の類縁体である組成物
【請求項１６】
各々、個別の包装容器で提供される下記成分:
- ペプチド、そのペプチドは7-17の隣接したアミノ酸からなり、六量体TX1EX2X3Eを含有し、ここで、X1、X2およびX3は任意の天然か非天然のアミノ酸あってよく、ここで、ペプチドはTNF受容体結合活性を有しておらず、環化されており、及び
-ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤、を含有する、
インフルエンザの予防または治療用セットであって、
環化されたペプチドが、QRETPEGAEAKPWY、PKDTPEGAEALKPWY、CGQRETPEGAEAKPWYC、CGPKDTPEGAELKPWYCからなるグループから選択された連続するアミノ酸のシーケンスからなり、
ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤が、シアル酸の類縁体であるセット。
【請求項１７】
ペプチドがアミノ酸シーケンスCGQRETPEGAEAKPWYCからなる、請求項12、13および16のうちのいずれか1つに記載のセット。
【請求項１８】
ペプチドがアミノ酸シーケンスCGQRETPEGAEAKPWYCからなる、請求項14または15に記載の組成物。
【請求項１９】
ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤が、ラニナミビル、そのプロドラッグであるCS-8958、ザナミビル、ペラミビル、リン酸オセルタミビル、オセルタミビルカルボキシラート、オセルタミビル、ならびにそのラセミ化合物、光学上純粋体、遊離塩、塩、エナンチオマーまたはジアステレオマー形態からなるグループから選択される、請求項12、13、16および17のうちのいずれか1つに記載のセット。
【請求項２０】
ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤が、ラニナミビル、そのプロドラッグであるCS-8958、ザナミビル、ペラミビル、リン酸オセルタミビル、オセルタミビルカルボキシラート、オセルタミビル、ならびにそのラセミ化合物、光学上純粋体、遊離塩、塩、エナンチオマーまたはジアステレオマー形態からなるグループから選択される、請求項1〜11、14、15および18のうちのいずれか1つに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はインフルエンザの治療としての医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトにおいて、インフルエンザは、呼吸管、および全体組織の重篤な疾患であり、インフルエンザウイルスによって引き起こされる。インフルエンザウイルスはオルトミクソウイルスファミリーに属し、マイナス鎖定位の分節性RNAゲノムによって特徴付けられる。ヒトに関連するタイプはインフルエンザA及びBのウイルスであり、その内、サブタイプAは、特に、高発熱性の呼吸器病の病原体として知られている。獣医学的重要性に加えて、すべてのインフルエンザウイルスは人畜共通伝染性の可能性を有している、即ち、鶏又は豚から人間まで伝染の可能性がある。
【０００３】
インフルエンザは、東南アジア(South East Asia)および中国にほとんどの場合その起源を有しており、世界的にそこから広がる世界的流行病として周期的に出現する。インフルエンザウイルスの世界的流行病は、高齢者だけでなく若年性の多くの死亡に関係している。WHOによれば、毎年の季節性インフルエンザは、重篤な疾患の3〜500万ケースの世界的な割合に帰着し、250,000〜500,000の死亡率を伴う。最も頻繁な死因は結果として生じる肺不全を有するインフルエンザ肺炎である。しかし、心血管系損傷(心筋炎(心筋炎症)又は心膜炎(心膜の炎症))が、同様に生じ得る。さらに、やや頻繁な死因は、脳又は髄膜の炎症(髄膜脳炎)又は他の臓器系の損傷(特に腎臓)になりえる。
【０００４】
通常は、潜伏期は4〜5日である。しかし、より短いかもしれない。その病気は、頭痛、シバリング、悪寒および咳の突然発症で始まる。41℃までの高熱、筋肉痛、食欲不振および衰弱の一般的な感覚がこれに続く。この状態は約3日間続き、それに続いて熱は低下し、ほとんどの場合、6日目から正常値に沈静する。それはウイルスが身体から除去されたことを意味する。咳は数週間続くかもしれない。
【０００５】
上記に記述された徴候に続いて、もし初期のウイルス性の間質性(多くの場合に出血性)肺炎症が進行しているなら、重症の生命に危険のあるインフルエンザが生じるかも知れない。弱められた人に加えて、それが、同様に健康な人またはあらかじめ損傷されなかった人のおよそ25%で生じて、2週以内続くかもしれない。そのような肺炎症は肺重量の増加の測定により検知することができる。
【０００６】
肺炎は、同様にバクテリアの重複感染(特に肺炎連鎖球菌、黄色ブドウ球菌およびインフルエンザ菌による)によって二次的に進行するかもしれない。これらの合併症に寄与するさらなる要因は、特に他の肺疾患(例えば喘息)、免疫不全、年齢(幼児および高齢者)、糖尿病、肺損傷、喫煙である。したがって、これらの合併症を持っている人は予防接種のための第一のターゲットグループである。
【０００７】
インフルエンザウイルスは飛沫感染によって生物体に達して、HAタンパク質を口・鼻および咽頭粘膜の上皮細胞上の末端ノイラミン酸残留物に結び付けることによって感染する。そこから、ウイルスは下気道へ広がる。細胞の破壊は線毛上皮、および呼吸器官のすべてのエリアの粘液分泌の表面薄層中に観察することができる。第1期の間質性肺性炎症が進行している場合、ウイルスは肺実質の細胞へ移される。肺胞壁の強い腫脹が観察され、その皮膜組織はしばしば細胞破壊によって完全に除去されるようになる。肺組織のそのような腫脹は肺重量の増加を測定することで検知することができる。
【０００８】
予防的および治療的両方の処置があり、インフルエンザA型およびB型感染の両方に対するワクチン剤が利用可能である。これらは、鶏卵および(または)細胞培養で育てられた、死んだウイルスから成る。ワクチンによって提供される保護は、予防接種のおよそ2週間後にその十分な有効性に達した。しかしながら、インフルエンザウイルスの高い変異性により、ワクチン剤は、目下広まっているウイルスサブタイプまたはサブタイプの変種に毎年適合しなければならない。
【０００９】
さらに、宿主細胞からの新しく複製されたウイルス粒子のリリースを防ぐ、ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤(ザナミビル、オセルタミビル)が適用されている。それらは、初期の感染段階におけるウイルスの蔓延を抑制するために、発生し検知されたインフルエンザウイルス感染の直後に好ましくは使用される(2003/026567のWO A2)。
【００１０】
しかしながら、ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤は、単にウイルスの増殖に邪魔をするが、身体の中に既にあるウイルスを不活性化することができない。ノイラミニダーゼ阻害剤は疾病の期間を単に最小に(平均してヒトで1日)短くすることに寄与するかもしれない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
ウイルス増殖のそのような阻害剤の治療効果を著しく増加させることが、本発明のゴールである。本発明はインフルエンザウイルス感染の治療のために改善された医薬品組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
従って、本発明は、
-ペプチド、それは7-17の隣接したアミノ酸からなり、六量体TX1EX2X3E(式中X1、X2およびX3はいかなる天然か非天然のアミノ酸であってよい)を含んでなり、ここで、ペプチドはTNFレセプター結合活性を有さず、環化されており、および
- ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤、
を含んでなる、特にインフルエンザを予防および治療する適用のための組成物に関する。
【発明の効果】
【００１３】
インフルエンザ感染の治療のためのノイラミニダーゼ阻害剤と組合せて、上に定義されるようなペプチドを使用することにより、ノイラミニダーゼ阻害剤の影響が驚くほど改善される場合があることが、本発明によって今や発見された。発明による化合物の予防的な使用もそれによって示される。本発明は、インフルエンザウイルスによって引き起こされる肺性炎症の治療において特に効率的であると分かった。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図1は、インフルエンザA型による感染、又は(コントロールとして)感染なし、に引き続く3、5、7および9日目のC57BL/6マウスの相対的な肺重量を示す。
【図２】図2は、インフルエンザA型による感染、並びにオセルタミビルでの治療、本発明組成物による治療、および治療なし(コントロールのためのPBSでの処置)、に引き続く5、7および9日目のC57BL/6マウスの相対的な肺重量を示す。
【図３】図3は、インフルエンザA型による感染、並びにザナミビルでの治療、発明組成物による治療、および治療なし(コントロールのためのPBSでの)、に引き続く、7および9日目のC57BL/6マウスの相対的な肺重量を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
発明によって使用されるペプチドは、例えば、ヨーロッパ特許EP1264599B1から(または米国2007/299003A、WO94/18325A1またはWO2008/148545A1から)知られ、流動性の堆積(肺水腫)を治療するための先行技術、特にこれらの流動性の蓄積の再吸収のために使用された。驚くべきことに、これらのペプチドは、同様に肺の皮膜組織の中への毛細管の内皮によって逆方向での流体の流れに影響を及ぼすのに適切で、上皮細胞および内皮細胞の超透過性を同様に予防し治療するために使用することができる(WO2010/099556A)。
【００１６】
これらのペプチド(それらはそれ自身知られており、発明によるノイラミニダーゼ阻害剤と一緒に使用される)は、TNFレセプター結合活性を示さず、環化される(Hribar et al., Eur. J. Immunol. 1999; Elia et al., AJRCCM 2003；同様に下記の実施例部分を参照せよ。)。これらのペプチドの好ましい変種は、7-17の隣接したアミノ酸からなり、六量体TPEGAE(SEQ識別番号4)を含んでいる。
【００１７】
しかしながら、WO2010/099556A1およびEP1264599A1が、ある病原体による疾病の予防および治療にではなく、肺中のある病理学的徴候の治療に対してターゲットとされている一方、本発明による適用は完全に異なる適用である。
【００１８】
本発明に関する研究の間に示されたように、請求項(a.o. WO2010/099556A1の請求項)に係るペプチドは、相乗効果的に発明のコンビネーション調合品でノイラミニダーゼ阻害剤の効果をサポートする。本発明による適用は、この様に、インフルエンザウイルスによる感染を直接のターゲットし、いくつかの異なる病原体によって引き起こされたかもしれない全身症状 (例えば、WO2010/099556A1またはEP1264599A1での場合のように) に対してではない。
【００１９】
当業者の視点から見て、ノイラミニダーゼ阻害剤は、単にインフルエンザウイルスの増殖を抑制することができるが、しかしながら、それによって既に存在するウイルスを縮小することができないことは明らかである;しかしながら、本発明によるノイラミニダーゼ阻害剤およびペプチドの組合せが、インフルエンザの制御における本質的な改良を与えることは、実に驚くべきことであって、先行技術によっては示されていない。これに反して、先行技術は当業者へのこの組合せの示唆を与えない:
【００２０】
WO 2003/026567 A2中には、同様に、インフルエンザの治療に使用されたノイラミニダーゼ阻害剤が、細菌感染と関連したいかなるインフルエンザも予防するのに適切であることが記述されている。当業者はいずれにしても、なぜ、さらに添加物をノイラミニダーゼ阻害剤(それらは抗ウイルス性効率またはインフルエンザ治療の有効性を改善することができる)に追加するかの理由をこの文献に基づいて知覚することはできない。本発明の特に好ましい実施態様において、本発明による組成物は環化されたペプチドで構成され、該ペプチドは連続するアミノ酸のシーケンス中にあり、該アミノ酸は:
- QRETPEGAEAKPWY(SEQ識別番号5)
- PKDTPEGAELKPWY(SEQ識別番号6)
- CGQRETPEGAEAKPWYC(SEQ識別番号1)および、
- CGPKDTPEGAELKPWYC(SEQ識別番号7)
並びに、その少なくとも7つのアミノ酸の断片(それらの断片は六量体TPEGAEを含む) からなる群から選択される。
【００２１】
好ましくは、組成物におけるペプチドはアミノ酸配列シーケンスCGQRETPEGAEAKPWYC(SEQ識別番号1)で構成され、C-残基によって環化される。したがって、この特に好ましいペプチドには次のアミノ酸配列シーケンス(SEQ識別番号1)(NH2)-Cys-Gly-Gln-Arg-Glu-Thr-Pro-Glu-Gly-Ala-Glu-Ala-Lys-Pro-Trp-Tyr-Cys-(COOH)がある。このペプチドは「AP301」とも呼ばれる。
【００２２】
それによって、本発明によるペプチドの環化は、例えば、NおよびC末端で2つのC残基間のジスルフィド架橋経由の直接環化によって、または担体物質に両方のシステインによってペプチドを連結することによって達成することができる。本発明によるペプチドにおいて、システイン残基は、好ましくは分子の始めおよび終わりで提供される。他の官能基(それらはペプチドの環化を達成することができる)は同様に使用されてもよい;
これによって、例えば、酸性基は、アミンまたはアルコールを持ったアミドまたはエステルの閉環を遂行することができる(例えば、アミノ酸アスパラギン酸およびグルタミニン酸は、セリン、トレオニン、チロシン、アスパラギン、グルタミンまたはリジンによりむしろ分子内で環化することができる)。ペプチドの環化は、好ましくは、ペプチドのC-残基間のジスルフィド架橋(もし存在するとすれば)によって達成される。
【００２３】
したがって、本発明による追加の好ましいペプチドは、例えばCGQKETPEGAEAKPWYC(SEQ識別番号8)、CGQRETPEGAEARPWYC(SEQ識別番号9)、CGQRETPEGAEAKPC(SEQ識別番号10)、CQRETPEGAEAKPWYC(SEQ識別番号11)またはCGQRETPEGAEAKFWYC(SEQ識別番号12)である。
【００２４】
しかしながら、環化はまた、ペプチドを担体物質に結合することにより遂行することができる。この種の環化のための担体物質として、慣習的な薬学的に適用可能な物質はすべて適格であり、その物質は、例えばシステインのSH基に(または他の天然に存在する、または人為的に導入された、ペプチドの化学的な反応性基に)共有結合で結合することができる；これによって、通常の担体蛋白質(キーホールカサガイヘモシアニン(KLH)、破傷風毒素など)が、特に好まれる。担体上の隣接した二官能性の残基も思い描くことができる(例えばアミンまたはアルコール類の隣の酸性基)。この文脈において、用語「環化」が、分子内の閉環および担体への結合形成の両方を含んでなると理解することは重要である(担体から境界ペプチドは外に突き出ており(ペプチドのNおよびC末端によって担体に結合している))；これによって、この様に環化したペプチドは環式の空間構造を示しており、適切に安定化される。
【００２５】
ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤は知られており、既にインフルエンザの予防および治療でそれら自身を実証した。そのようなウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤(例えば、ザナミビル、オセルタミビル、ラニナミビル、ペラミビルのような)は、宿主細胞からの新しく複製されたウイルス粒子の遊離を予防する。特に、インフルエンザウイルスで生じ及び検知された感染直後のウイルスの蔓延は、感染の初期でそれらによって抑制することができる。
【００２６】
しかしながら、これらのノイラミニダーゼ阻害剤は、単にウイルスの増殖に邪魔をするが、身体の中に既にあるウイルスを不活性化することはできない。したがって、多くの場合において、最小に短くすることができるのは単にその病気の期間である(平均して成人において1日だけ)。しかしながら、何にもまして、インフルエンザ、特に肺炎の症状(それはほとんどの場合特別の合併症に結びつく)は、概して、十分に効率的に戦って予防することができない。
【００２７】
ノイラミニダーゼはインフルエンザウイルスの再生産のための必須の酵素である。また、それは、ウイルスの遊離の原因である「分子はさみ」と記述されている。
【００２８】
ノイラミニダーゼ阻害剤はシアル酸の類縁体で構成される。それは、インフルエンザA型およびBウイルスに対する効能を示す抗ウイルス物質の新しいクラスの第二世代を表わす。本発明によるノイラミニダーゼ阻害剤は、例えば米国2008/0063722 A1に要約されるように、そのために従来示唆されたすべての化合物であり得る(そのような物質の好ましい医薬製剤と同様に)。これらの物質は、A型またはB型インフルエンザビリオン毒性株のノイラミニダーゼタンパク質の少なくとも1つの酵素活性を抑制することができる。そのような物質は、インフルエンザの予防および治療の両方ために使用することができる；しかしながら、本発明による上記で定義されたペプチドと組合せて、この結果は著しく改善されるのである。
【００２９】
ノイラミニダーゼ阻害剤の例(それらは本組成物で使用されてもよい)は、例えば、米国特許番号5,453,533、5,763,483、5,952,375、5,958,973、5,512,596、5,886,213、5,602,277、6,410,594、5,360,817、5,866,601、6,340,702、6,451,766、6,455,571、6,593,314、6,509,359、6,518,305及び6,831,096に記述されている。物質、それらはヒトに既に使用されており、または少なくとも臨床試験を経験している物質、したがって、特に好ましい物質は、例えばCS-8958(RI 18958; US 2008/0063722 A1)、ザナミビル(GG167、RELENZATM)、ペラミビル(RWJ-270201、BCX-1812)、リン酸オセルタミビル(Ro64-0796、GS4104)、オセルタミビルカルボキシラート(Ro64-0802、GS4071)またはオセルタミビル(GS4104、TAMIFLUTM)である。もちろん、ノイラミニダーゼ阻害剤の有効な化学形はすべて本発明によって含まれる、すなわち、塩類、ラセミ化合物、光学上純粋でかつ、または塩フリーの型(同様にエナンチオマーまたは例えばジアステレオマーの型で)。
【００３０】
好ましくは、ウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤はザナミビルまたはオセルタミビルである；それらがヒトの治療で既に特に成功裡に使用されたことから、これらの物質が好ましい。
【００３１】
好ましくは、本発明による組成物は薬学的に許容できる担体を含んでなり、ヒトへの投与に適している医薬品組成物の形で調製される。
【００３２】
表現「医薬品組成物」は、ノイラミニダーゼ阻害剤および上に定義されるようなペプチドで構成されるあらゆる組成物を指し、もちろんそのような物質の混合物を充当すること(すなわち、互いに否定的に邪魔をせずに充当すること)もまた指し、その組成物は本明細書に記述された症状を予防するか、改善するか、治療する。表現「医薬品組成物」は、特に、上述されたようなノイラミニダーゼ阻害剤およびペプチド、並びに、薬学的に許容できる担体または賦形剤(両方の表現は互換的に使用されてもよい)で構成される組成物を指す。担体または賦形剤(それらは当業者に知られている)の好適例は、水、等張液、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、シトラート、グリシン、グリシルグリシン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、TRIS、およびクエン酸ナトリウムまたは、それらの混合物である。もちろん、リンゲル液、デキストロース溶液または非還元性糖の溶液も、同様に使用することができる；従って、マンニトール、トレハロース、蔗糖、ソルバイト、果糖、マルトース、ラクトーゼまたはデキストラン、ハンク溶液、固定油、オレイン酸エチル、等張液中5%のデキストロース、等張性および化学的安定性を改善する物質、バッファーおよび安定化剤は、同様にその様な担体として適切である。他の適切な担体は、個体に有害であろう抗体の産生を独力で引き起こさないあらゆるその様なものを含み、組成物は、タンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、重合体のアミノ酸およびアミノ酸共重合体のように投与されるものである。本発明に従って組成物を処方する際に、もちろん適切なガイドライン(例えば(ヨーロッパまたは米国)薬局方)に従わなければならない。それによって、本発明による組成物で提供されるペプチドも直接の共有結合によってこれらの担体に環化することができる。
【００３３】
本発明による医薬品組成物は当業者に知られている如何なる適切な方法によっても(薬として)投与することができる。また、特に、本発明に従って使用されるペプチドまたは本発明による組成物を肺へ投与することが望ましい。インフルエンザはまた、動物である役割を果たし、本発明による組成物は、勿論、動物の防止および予防で同様に使用することができるが、本発明の焦点がヒトの、すなわち、既にインフルエンザに感染したか、このウイルス(特にインフルエンザの流行病または大流行の病気で)に感染する危険に瀕しているヒトの、予防および治療にある。好ましい投与経路は吸入(エアゾール剤による)であり、静脈内投与、点滴注入、経口投与またはその組合せが後続する。吸入、非経口または経口投与において、本発明の薬は溶液、懸濁液または乳剤としてユニット剤形で調剤され、上記で定義された薬学的に許容できる賦形剤と組み合わされる。個々の場合において、用法・用量形態はもちろんそれぞれの個体に依存することができる。
【００３４】
したがって、各場合に要求される有効な量が、投与を必要とする個体に投与される。「有効量」は、意図した治療的または予防的な結果を提供するほどの有効な量として理解される、例えばその病気のさらなる蔓延を予防するまたは有効にそれを治療する程度の量である。ほとんどの場合、平均的な患者がこのための基礎と考えられる；しかしながら、組成物中の成分の実際の有効量は、その病気の程度および進行と同様に投与形、患者の年齢、体重、症状も考慮に入れる方法(例えば適切な従来の薬学的プロトコル経由の方法)で調剤することができる。
【００３５】
好ましくは、本発明による組成物における薬学的に許容できる担体は、水(特に好ましくは: 注射用蒸留水)、塩化ナトリウム、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、シトラート、グリシン、グリシルグリシン、ヒスチジン、リジン、アルギニン、TRIS、クエン酸ナトリウム、リンゲル液、デキストロース、マンニトール、トレハロース、蔗糖、ソルバイト、果糖、マルトース、ラクトーゼまたは、デキストラン、ハンク溶液、固定油、オレイン酸エチル、物質(それらは等張性および化学的安定性を改善する)、安定化剤、薬学的に許容できるタンパク質、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、重合体のアミノ酸およびアミノ酸共重合体から選択される。
【００３６】
本発明による組成物は、空間に分離された形態で(それはセット(それは少なくともノイラミニダーゼ阻害剤およびペプチド(各々は個別の包装容器で提供される)で構成される)の形をしている)、上記のように2つの活性成分(すなわちノイラミニダーゼ阻害剤、ペプチド)を整えることにより提供されたほうがよい。従って、本発明は同様にセットに関連し、それは少なくともノイラミニダーゼ阻害剤およびペプチドで構成される(各々は個別の包装容器で提供される)。ペプチドおよび阻害剤の個別の投与(空間的に一時的に)(それはこれによって可能になる)は、主として本発明による2つの活性成分の異なる投与経路がそれぞれの患者について望まれる時に好ましい。例えばオセルタミビルは殆どの場合経口で与えられる。しかし、本発明により使用されるペプチドは主として吸入的に与えられる。多くの場合において、しかしながら、同時的な投与が望まれる；ザナミビルは、例えば、同様に吸入的に投与される。もちろん、吸入薬として経口阻害剤を全身に提供することが示されてもよい。ある場合には、本発明により使用されるペプチドはノイラミニダーゼ阻害剤と混合することができる。しかしながら、例えば、阻害剤が静注で又は経口的に投与され、及びペプチドが吸入的に投与される場合、困難を伴うだけかもしれない。
多くの場合において、しかしながら、阻害剤及びペプチドは、混合で吸入的に投与することができる。それによって阻害剤は直接肺および恐らく肺を通して血液に達する(インフルエンザウイルスは、最初は肺組織に存在する)。
【００３７】
ノイラミニダーゼ及びペプチドの成分を別々に含有する本発明によるそのようなセットにおいて、ここに記述した特徴は、そして、混合組成物のための好ましい実施形態は、もちろん、当業者に認知可能なすべての種類の組み合わせで提供することができる。
【００３８】
本発明による薬物は、例えば、1μg/kg及び10mg/kgの間の、より好ましくは、10μg/kg及び5mg/kgの間の、最も好ましくは0.1〜2mg/kgの間の用量で本発明のペプチドを与えることにより投与されてもよい。好ましくは、それは注射として与えられる。同様に、持続吸入又は注入、又は反復の投与計画が採用されてもよい。
【００３９】
特に、本発明による好ましい組成物は、互いに独立に、
- 1μgから10gまでの、好ましくは10μgから1gまでの、特に1mgから100mgまでの量のペプチド、および、
-1μgから10gまでの, 好ましくは100μgから1gまでの, 特に1mgから200mgまでの量のウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤、を含有する。
特に、本発明による好ましい液体形態にある組成物は、互いに独立に、
- 1μgから10gまでの、好ましくは10μgから1gまでの、特に1mgから100mgまでの量のペプチド、および、
- 1μg〜10gまでの、好ましくは100μg〜1gまでの、特に1mg〜200mgまでの量の、及び0.5〜10mlの体積で、特に、1〜5mlの体積で提供されるウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤、を含有する。
【００４０】
本発明による組成物は、好ましくは粉末吸入器を介して乾燥形態で投与することができる。そのような粉末吸入器の例は(それらは本発明で採用されてもよい)、米国特許番号4,995,385および4,069,819に記載されている；既に確立している製品はSPINHALERTM、ROTAHALERTM、FLOWCAPSTM、INHALATORTM、DISKHALERTMおよびAEROLIZERTMである。
【００４１】
本発明による組成物は、好ましくは流動性の噴霧器によるエアロゾルとして同様に投与することができる。そのような流動性の噴霧器の例は確立している製品(AeronebTMおよびPariTMである。
【００４２】
好ましい実施形態によれば、本発明による組成物は、霧状にすることができる粉末配合物、又は霧状にすることができる流体製剤で提供されるペプチドおよび/またはウイルス・ノイラミニダーゼ阻害剤によって特徴付けられる。
【００４３】
本発明による組成物は、好ましくはインフルエンザウイルスA型およびB型、特にA型による感染の治療および予防に使用される。原則として、しかしながら、組成物はインフルエンザウイルスの任意の可能な菌株によって感染症を予防するか治療するのに適切であり、そのウイルスは動物、又はヒトにこの疾患を引き起こすかもしれない。様々なインフルエンザ型に関する情報にとって適切なデータベースは当業者に周知である；特に、A型の多くの分離された菌株が記述されるか、又は配列さえ決定されている。
【００４４】
本発明は、勿論、非限定的な、以下の実施例および図面としてより詳細に説明される。
【実施例】
【００４５】
本実施例は、認可された試験マウスモデルにおいて、インフルエンザウイルスで感染したマウスにノイラミニダーゼ阻害剤、又はノイラミニダーゼ阻害剤および合成ペプチドAP301(SEQ識別番号1)の組み合わせを投与して、本発明のゴールが達成されたことを示すために提示される。
【００４６】
実施例 1
インフルエンザウイルスによる感染は、肺性炎症の進行を引き起こす。
【００４７】
実験用マウス(血統C57BL/6(8週齢))を、服量150PFUでインフルエンザ菌株A(PR8/34)により経鼻感染させた。感染に引き続く3、5、7および9日において、8匹のマウスからそれぞれ肺を取り出した。そして、相対的な肺重量を肺性炎症の基準として決定した。
【００４８】
検査の結果、マウスのインフルエンザウイルスによる感染に引き続く時間の増加する長さで、肺重量がコントロール肺と比較して、強く増加したことを示した。
結果は、図1にグラフ式に示される。
【００４９】
実施例 2
ノイラミニダーゼ阻害剤の投与又はノイラミニダーゼ阻害剤およびペプチドAP301の組み合わせの投与による肺性炎症の治療。
【００５０】
実験用マウス(血統C57BL/6(8週齢))を、服量150PFUでインフルエンザ菌株A(PR8/34)で経鼻感染させた。続いて、試験動物はそれぞれ、10mg/kgのオセルタミビル(ノイラミニダーゼ阻害剤)の経口投与、およびペプチドAP301の10μg/試験動物の気管内投与を受けた。その治療を試験2日および4日で繰り返した。
【００５１】
感染に引き続く、5、7および9日において、30匹のマウスからそれぞれ肺を取り出した。そして、相対的な肺重量を肺性炎症の基準として決定した。結果は、図2にグラフ式に示される。
【００５２】
検査の結果、肺重量によって測定されるように、ノイラミニダーゼ阻害剤が単なる肺性炎症の軽減に対する適度な効果を現したことを示した。しかしながら、ノイラミニダーゼ阻害剤に加えてペプチドAP301が、インフルエンザウイルスによって感染したマウスに投与された場合、肺性炎症は本質的に、より軽減された。
【００５３】
実施例 3
ヒト全血中のAP301ペプチドの炎症誘発性特性の生体外評価。
【００５４】
ヒト全血中のAP301ペプチドに関する生体外の安全性薬理学的試験は、新鮮なヒト全血から炎症誘発性のマーカーインターロイキン6(IL-6)の放出に、AP301ペプチドが起因するかどうか(即ち、APN 301はTNFに特有の炎症性の活性(即ちTNF受容体結合活性)を現すか)を評価するために行なわれた。この試験において、新鮮なヒト全血が炎症反応インビボのアセスメントのための認可された予測モデルシステムを表わすので、新鮮なヒト全血が使用された。
【００５５】
方法の要約
ペプチドAP301の炎症誘発性の情報伝達性能を決定することは、この試験のゴールであった。全血培養が使用され、及び、インターロイキン6(IL-6)(炎症誘発性刺激のための非常に敏感なマーカー)の分泌が、ELISAによって定量された。
【００５６】
試験システム
試験システム：  5人の健常ボランティア(HV)から新鮮に採取された25mlのヘパリン添加血液を、試験で使用した。
試験項目
同定:  AP301ペプチド(服用量: 1ng/ml〜10μg/ml;溶液での単回投与)
特徴:  白色粉体、純度96%
【００５７】
全血培養
全血(WB)培養は、24-ウェルプレートのウエルへ1mlのWBをピペットで移すことにより行なわれる。各実験には、刺激されていないコントロール刺激された培養が含まれていた。
【００５８】
できれば、被験物質および刺激剤は常に同一の体積で、所与の実験の各ウエルに添加された。それは、ウエルに含まれていた全体積の10%以上ではない。刺激されていないコントロールはPBSを添加された。異なる治療のための体積調節および希釈もPBSで行った。
【００５９】
各ウエルの内容物を混合し、そして、プレートは37℃および5%のCO2で24時間培養した。培養の後、各ウエルの内容物を新鮮な1.5mlマイクロチューブに転送し、8,000〜9,000 x gで15分間遠心分離機にかけた。各サンプルの上澄液を、2つの1.5mlマイクロチューブに個々に転送し、使用まで-20℃で維持した。
【００６０】
インターロイキン6の検出
インターロイキン6は、捕獲抗体として抗ヒトIL-6抗体を採用する、特別のELISA(Human IL-6 ELISA Set, BD Biosciences, Cat. No. 555220)、ビオチニル化抗ヒトIL-6検出抗体、酵素試薬としてのアビジンホースラディシュ・ペルオキシダーゼ接合体および標準として組み替え体IL-6によって定量した。吸光度測定はPackard FusionReaderを使用して、450nmで行なった。
【００６１】
データ分析
各プレートの結果はFusionDataAnalysisソフトウェアを使用して、格納し評価した。
【００６２】
試験結果の要約
AP301ペプチドの炎症誘発性の情報伝達性能を決定することが、この試験のゴールであった。全血培養が使用され、及び、IL-6(炎症誘発性刺激のための非常に敏感なマーカー)の分泌が、ELISAによって定量された。
【００６３】
5つの健常ボランティアの全血サンプルは、未刺激のまま残されたか(陰性対照)、またはLPS(陽性対照)の高位および低位投薬量で刺激されたか、あるいは、10μg/mlから1ナノグラム/mlにわたる9つの半対数希釈のペプチドで培養された。結果は以下の表で示される:
【００６４】
表：ペプチドAP301およびLPSの添加による新鮮なヒト全血からのインターロイキン6の放出
AP301ペプチド    陽性対照(LPS)
濃度          IL-6の濃度(pg/ml、n=5)
0(負の対照)    0.5未満          0.5未満
10mg/mL        0.5未満          195.640
1mg/mL         0.5未満          108.370
3ng/mL         0.5未満           34.867
1ng/mL         0.5未満          決定されず
【００６５】
結果は、AP301ペプチドが、テストされた濃度のうちのいずれでも、任意の検知できるレベルのIL-6分泌を誘発しなかったことを明白に示す。陽性対照(LPS)はIL-6分泌の強い誘導に帰着した。
【００６６】
議論
実験は、AP301ペプチドが炎症誘発性のカスケードの誘導を媒介するかどうか評価するために行なった。読み出しパラメーターは、5人の健康なドナーからの全血培養中のIL-6の誘発された分泌であった。結果は、AP301ペプチドが任意のドナーの培養中の任意の検知できるレベルのIL-6を誘発しなかったことを明白に示した。したがって、AP301ペプチドが選択された生体外のモデル中で炎症誘発性の応答を誘発せず、したがって、TNF受容体結合活性を現さないことが実証される。
【００６７】
実施例 4
ノイラミニダーゼ阻害剤(ザナミビル)の投与、又は、ノイラミニダーゼ阻害剤(ザナミビル)およびペプチドAP301の組み合わせの投与による肺炎症の治療。
【００６８】
実験用マウス(血統C57BL/6(8週齢))を、服量150PFUでインフルエンザ菌株A(PR8/34)にて経鼻感染させた。続いて、試験動物はそれぞれ、1.5mg/kgのザナミビル(ノイラミニダーゼ阻害剤)の鼻腔投与、およびペプチドAP301の50μg/試験動物の気管内投与を受けた。その治療を試験2日および4日で繰り返した。
【００６９】
感染に引き続く7および9日において、20匹のマウスからそれぞれ肺を取り出した。そして、相対的な肺重量を肺性炎症の基準として決定した。結果をグラフとして図３に示す。
【００７０】
検査の結果、肺重量によって測定されるように、ノイラミニダーゼ阻害剤(ザナミビル)が肺性炎症の軽減に対する丁度適度な効果を現したことを示した。しかしながら、ノイラミニダーゼ阻害剤に加えてペプチドAP301が、インフルエンザウイルスに感染したマウスに投与された場合、肺性炎症は本質的に、より軽減された。
【００７１】
纏め
本発明によるペプチドは、ノイラミニダーゼ阻害剤と共同してインフルエンザ感染の治療に相乗効果を現す。
【００７２】
WO 2010/099556 A1において、言及したように、様々な肺症状の治療が記録されており、それはそのような肺疾患における上皮細胞および内皮細胞の過剰浸透性にターゲットとされる。WO 2010/099556 A1によれば、クレームされたペプチドは、これらの症状の予防および処理に優れて適していることが示されている。WO 2010/099556 A1によれば、インフルエンザウイルスでの(この感染で進展する肺炎という文脈の中での)感染の場合に、上皮細胞及び内皮細胞の過剰浸透性を治療することができるが、勿論、本発明はこれによって示唆されるものではない。このペプチドを含有する組み合わせ製剤で、全般的にインフルエンザを治療することの可能性は、無条件的に出現するインフルエンザの症状を治療するためのペプチドの適用可能性に関して完全に新しく創造性のある教示である。
【００７３】
基本的な相違も、WO 2010/099556 A1による詳細な実験への見解から誘導されるかもしれない：WO 2010/099556 A1の実施例において、肺組織のペプチドが：
i) 活性酸素の内容に影響を及ぼす、
ii) 細菌グラム陽性菌毒素、「リステリロリシン」および「ニューモリシン」の効果は、a.o. 燐酸化されたミオシンL鎖のレベル、白血球の浸潤、活性化されたプロテインキナーゼC、の調整によって過剰浸透性にも影響を及ぼす、
iii) インフルエンザ感染の後に体重に影響を及ぼす、
iv) インフルエンザ感染の後に体温に影響を及ぼす、
v) インフルエンザ感染の後に試験動物の生存率に影響を及ぼす
と云うことが実験的に実証されている。
【００７４】
しかしながら、WO 2010/099556 A1の全体にわたって、相対的な肺重量の変質に導くインフルエンザウイルスを有する試験動物の感染に関する、およびペプチドの投与によるそのような方法を停止させ及び治療することに関する実験のヒントはない。今や、本発明によって、インフルエンザウイルスを持った試験動物の肺の感染が、相対的な肺重量において実質的増加に導くことが示される。
【００７５】
肺は、すべての中で最も重要な器官の1つを構成する。相対的な肺重量の増加は、他の器官によっても補うことができない肺機能の損傷につながる。できるだけ多くの空気で充満したスペース(肺胞)を含むことは、健康な肺の特性である。相対的な肺重量の増加においては、肺の機能を制限する、即ち、空気が充満した肺胞のシェアがひどく減退すると強く仮定されなければならない。したがって、相対的な肺重量は、インフルエンザの治療の本質的な因子を構成する。本出願の実験の部に示された結果は、したがって、非常に重大で適切なパラメーターに基づいて、本発明による組み合わせ製剤の相乗効果を印象深く実証する。
【００７６】
ノイラミニダーゼ阻害剤がインフルエンザウイルスの増殖を抑えるかもしれないことは、従来、ノイラミニダーゼ阻害剤から分かっていた。ノイラミニダーゼ阻害剤は、生きているインフルエンザウイルスの減少を引き起こさない。今まで、インフルエンザウイルスが相対的な肺重量の増加へと導くことは、技術水準に示すことができなかった。驚くべきことには、本発明でのみ、インフルエンザ感染の後に、ノイラミニダーゼ阻害剤の投与が肺重量の相対的な重量増加を減じることが示された。本発明によって、インフルエンザウイルスで感染した試験動物を、WO 2010/099556 A1によるノイラミニダーゼ阻害剤およびペプチドを用い、それを組み合わせて同時に治療することで、相対的な肺重量上の重要で予知できない相乗効果に帰着すると云うことを、初めて示すことができた。ノイラミニダーゼ阻害剤が、既に生きているウイルスを減じずに、インフルエンザウイルスの増殖を抑制する一方、本発明による、ノイラミニダーゼ阻害剤およびペプチドの相乗効果の組み合わせは、明らかにインフルエンザ治療の著しい改良に導く。個々に投与された薬物(本発明によるノイラミニダーゼ阻害剤およびペプチド)のどれも、単独では本発明によって示された効力に導かない。
【００７７】
したがって、如何にしても、WO 2010/099556 A1の開示した結果によって本発明を自明であるとすることはできない。
【００７８】
配列のまとめ:
SEQ識別番号1: CGQRETPEGAEAKPWYC
SEQ識別番号2: KSPGGQRETPEGAEAKPWYE
SEQ識別番号3: CGQREAPAGAAAKPWYC
SEQ識別番号4: TPEGAE
SEQ識別番号5: QRETPEGAEAKPWY
SEQ識別番号6: PKDTPEGAELKPWY
SEQ識別番号7: CGPKDTPEGAELKPWYC
SEQ識別番号8: CGQKETPEGAEAKPWYC
SEQ識別番号9: CGQRETPEGAEARPWYC
SEQ識別番号10: CGQRETPEGAEAKPC
SEQ識別番号11: CQRETPEGAEAKPWYC
SEQ識別番号12: CGQRETPEGAEAKFWYC
【図１】
0005970465.tif 000002
【図２】
0005970465.tif 000003
【図３】
0005970465.tif 000004
【配列表】
0005970465000001.app