(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
９〜１４歳のヒトにおけるヒトパピローマウィルス関連疾患または感染を予防するためのワクチンであって、ＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８ウィルス様粒子（ＶＬＰ）と共に薬学的に許容可能な賦形剤を含んでなり、第１用量および第２用量からなる２回用法による投与のために該ヒトに処方される、ワクチン。
【請求項２】
第２用量が、第１用量後２または３ヶ月で投与するためのものである、請求項１に記載のワクチン。
【請求項３】
第２用量が、第１用量後２ヶ月を越えて投与するためのものである、請求項１に記載のワクチン。
【請求項４】
第２用量が、第１用量後６ヶ月目で投与するためのものである、請求項３に記載のワクチン。
【請求項５】
ワクチンがアジュバントをさらに含んでなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項６】
アジュバントがアルミニウム塩である、請求項５に記載のワクチン。
【請求項７】
アジュバントが水酸化アルミニウムである、請求項６に記載のワクチン。
【請求項８】
アジュバントがリピドＡ誘導体を含んでなる、請求項５に記載のワクチン。
【請求項９】
アジュバントが３Ｄ−ＭＰＬを含んでなる、請求項８に記載のワクチン。
【請求項１０】
アジュバントが３Ｄ−ＭＰＬおよび水酸化アルミニウムを含んでなる、請求項９に記載のワクチン。
【請求項１１】
前記２つの用量が各々、ＨＰＶ１６ＶＬＰおよびＨＰＶ１８ＶＬＰをそれぞれ２０μｇまたは４０μｇ含んでなる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項１２】
前記２つの用量が各々、ＨＰＶ１６ＶＬＰおよびＨＰＶ１８ＶＬＰをそれぞれ２０μｇ含んでなる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項１３】
前記２つの用量が各々、ＨＰＶ１６ＶＬＰおよびＨＰＶ１８ＶＬＰをそれぞれ２０μｇを超えて含んでなる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項１４】
ＶＬＰがＬ１を含んでなる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項１５】
ＶＬＰが切断型のＬ１タンパク質を含んでなる、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項１６】
ＶＬＰがＬ１のみのＶＬＰである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項１７】
ＨＰＶ６型および１１型のＶＬＰがワクチン中に存在する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項１８】
ＨＰＶ１６型および１８型のＶＬＰのみがワクチン中に存在する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のワクチン。
【請求項１９】
前記ワクチンが、９〜１４歳の女性におけるヒトパピローマウィルス関連疾患および感染を予防するためのものである、請求項１〜１８のいずれか一項に記載のワクチン。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトパピローマウィルス（ＨＰＶ）ワクチンに関する。
【背景技術】
【０００２】
Gardasil（商標）（Merck & Co Inc）は、ＨＰＶ６Ｌ１タンパク質からなるＨＰＶ６ウィルス様粒子（virus-like particle：ＶＬＰ）、ＨＰＶ１１Ｌ１タンパク質からなるＨＰＶ１１ＶＬＰ、ＨＰＶ１６Ｌ１タンパク質からなるＨＰＶ１６ＶＬＰ、およびＨＰＶ１８Ｌ１タンパク質からなるＨＰＶ１８ＶＬＰ、ならびにアルミニウムアジュバントを含んでなるＨＰＶワクチンである。用量あたりのＶＬＰの量は、それぞれ２０μｇ、４０μｇ、４０μｇ、および２０μｇである。ワクチンは、０、２、６ヶ月のスケジュールによる３回用法で投与される。
【０００３】
Cervarix（商標）（GlaxoSmithKline）は、ＨＰＶ１６Ｌ１タンパク質からなるＨＰＶ１６ＶＬＰ、およびＨＰＶ１８Ｌ１タンパク質からなるＨＰＶ１８ＶＬＰ、ならびに水酸化アルミニウムおよび３Ｄ−ＭＰＬとも称される３−デスアシル−４’−モノホスホリルリピドＡを含むアジュバントを含んでなるＨＰＶワクチンである。用量あたりのＶＬＰの量は、各２０μｇである。用量あたりの３Ｄ−ＭＰＬの量は５０μｇである。このワクチンもまた、０、１、６ヶ月のスケジュールによる３回用法で投与される。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、２回用法での投与の際に有効な改良ＨＰＶワクチンである。
【０００５】
従って、本発明は、ヒトパピローマウィルス関連疾患および感染を予防するためのワクチンの製造における、薬学的に許容可能なアジュバントと共の、ＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８ウィルス様粒子（virus like particle：ＶＬＰ）使用に関し、ワクチンは第１用量および第２用量からなる２回用法による投与のために処方される。
【０００６】
本発明はさらに、ヒトパピローマウィルス関連疾患および感染を予防するためのワクチンにおける、薬学的に許容可能なアジュバントと共の、ＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８ウィルス様粒子（ＶＬＰ）の使用に関し、ワクチンは第１用量および第２用量からなる２回用法による投与のために処方される。
【０００７】
本発明はさらに、ヒトパピローマウィルス関連疾患および感染を予防する方法であって、それを必要とする個体へ、ＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８ウィルス様粒子（ＶＬＰ）を薬学的に許容可能なアジュバントと共に含んでなるワクチンを送達することを含んでなり、ワクチンは第１用量および第２用量からなる２つの連続する用量で送達される方法に関する。
【０００８】
本発明はさらに、ヒトパピローマウィルス関連疾患および感染を予防するためのワクチンに関し、ここでワクチンのヒトへの各用量は、それぞれが２０μｇを超える濃度であるＨＰＶ１６ＶＬＰおよびＨＰＶ１８ＶＬＰを含んでなる。ワクチンのヒトへの各用量は、例えば各３０μｇのＶＬＰ、または各４０μｇのＶＬＰ、または各６０μｇのＶＬＰをアジュバントと共に含んでよい。
【０００９】
本発明はまたワクチン製造方法にも関し、該方法は、ａ）ワクチンを形成するためにＨＰＶ１６ＶＬＰ、ＨＰＶ１８ＶＬＰ、およびアジュバントを組み合わせ、かつ、ｂ）２０μｇを超えるＨＰＶ１６ＶＬＰおよび２０μｇを超えるＨＰＶ１８ＶＬＰを含んでなるワクチンのヒトへの用量で、貯蔵容器または送達容器を満たすことを含んでなる。
【００１０】
本発明はさらにワクチン製造方法を提供し、該方法は、ａ）ワクチンを形成するためにＨＰＶ１６ＶＬＰ、ＨＰＶ１８ＶＬＰ、およびアジュバントを組み合わせ、かつ、ｂ）３０μｇのＨＰＶ１６ＶＬＰおよび３０μｇのＨＰＶ１８ＶＬＰを含んでなるワクチンのヒトへの用量で、貯蔵容器または送達容器を満たすことを含んでなる。
【００１１】
本発明はさらにワクチン製造方法を提供し、該方法は、ａ）ワクチンを形成するためにＨＰＶ１６ＶＬＰ、ＨＰＶ１８ＶＬＰ、およびアジュバントを組み合わせ、かつ、ｂ）４０μｇのＨＰＶ１６ＶＬＰおよび４０μｇのＨＰＶ１８ＶＬＰを含んでなるワクチンのヒトへの用量で、貯蔵容器または送達容器を満たすことを含んでなる。
【００１２】
本発明はさらにワクチン製造方法を提供し、該方法は、ａ）ワクチンを形成するためにＨＰＶ１６ＶＬＰ、ＨＰＶ１８ＶＬＰ、およびアジュバントを組み合わせ、かつ、ｂ）６０μｇのＨＰＶ１６ＶＬＰおよび６０μｇのＨＰＶ１８ＶＬＰを含んでなるワクチンのヒトへの用量で、貯蔵容器または送達容器を満たすことを含んでなる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】実施例２に記載されるように、ＨＰＶワクチンの最終投与から１ヶ月後に２用量のワクチンを接種された被験者の、抗ＨＰＶ１６抗体価に対する幾何平均力価(giometric mean titres)を示した図である。
【図２】実施例２に記載されるように、ＨＰＶワクチンの最終投与から１ヶ月後に２用量のワクチンを接種された被験者の、抗ＨＰＶ１８抗体価に対する幾何平均力価を示した図である。
【００１４】
本発明は、２用量のＨＰＶワクチン、および２用量のＨＰＶワクチンの投与によるヒトパピローマウィルス関連疾患または感染を予防する方法について初めて記載する。この方法は、それを必要とする個体へＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８ウィルス様粒子（ＶＬＰ）を薬学的に許容可能なアジュバントと共に含んでなるワクチンを送達することを含んでなり、ここで該ワクチンは第１用量および第２用量からなる２つの連続する用量で送達される。
【００１５】
３回用法に比べて、２回用法の使用により、患者の服薬尊守が改善される可能性、およびＨＰＶワクチンの接種をその他の思春期におけるワクチンスケジュールへさらに適合させる可能性が提供される。また、医師の元への２回の来院は、３回の来院よりも保健医療に有利である。
【００１６】
一態様によればワクチンは２用量で投与され、ここでワクチンの各用量は、それぞれが２０μｇを超える濃度であるＨＰＶ１６ＶＬＰおよびＨＰＶ１８ＶＬＰを含んでなる。ワクチンの各用量は、例えば各３０μｇのＶＬＰ、または各４０μｇのＶＬＰ、または各６０μｇのＶＬＰをアジュバントと共に含んでよい。
【００１７】
別の態様によれば、ワクチンは２用量で投与され、ここでワクチンの各用量は、それぞれが２０μｇの濃度であるＨＰＶ１６ＶＬＰおよびＨＰＶ１８ＶＬＰを含んでなる。
【００１８】
別の態様によれば、ワクチンは２用量で投与され、ここでワクチンの各用量は、それぞれ４０μｇおよび２０μｇの濃度であるＨＰＶ１６ＶＬＰおよびＨＰＶ１８ＶＬＰを含んでなる。
【００１９】
ワクチン投与はいずれの２用量スケジュール、例えば０、１ヶ月スケジュール、０、２ヶ月スケジュール、０、３ヶ月スケジュール、０、４ヶ月スケジュール、０、５ヶ月スケジュール、または０、６ヶ月スケジュールに従ってよい。例えば、第２用量は第１用量の投与後２週間ないし８ヶ月の間、例えば第１用量後１ないし６ヶ月の間、または第１用量後３ないし８ヶ月の間に投与される。従って第２用量は、例えば第１用量後１ヶ月、または２ヶ月、または３ヶ月、または４ヶ月、または５ヶ月、または６ヶ月に投与されてよい。
【００２０】
一態様によれば、ワクチンの第２用量は第１用量後２ヶ月を越えて、例えば第１用量後３ヶ月以上、または４ヶ月以上、または５ヶ月以上、または６ヶ月以上で投与され、ここでそれぞれの場合の上限は第１用量後８ヶ月であり得る。
【００２１】
ワクチン、使用または方法には、それぞれの量がヒトへの用量あたり２０μｇを超える、例えば用量あたり３０μｇ、または用量あたり３０μｇを超える、例えば用量あたり４０μｇ、もしくは用量あたり６０μｇ、もしくは用量あたり８０μｇのＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８ＶＬＰが用いられてよい。用量あたりのＨＰＶ１６および１８ＶＬＰの量は、同じかまたは異なってよい。ＨＰＶ１６および１８ＶＬＰの量は、それぞれ独立して用量あたり２５ないし８５μｇ、用量あたり３０ないし５０μｇ、または適切には用量あたり３５ないし４５μｇの範囲であってよい。
【００２２】
本明細書で用いられる「ワクチン」との語は、ヒトのような個体において免疫反応を誘発できる免疫原性の成分を含んでなる組成物を指し、ここで該組成物は任意にアジュバントを含む。ＨＰＶに対するワクチンは、偶発的感染、または持続的感染、またはＡＳＣＵＳ、ＣＩＮ１、ＣＩＮ２、ＣＩＮ３のような細胞学的異常、または１以上のＨＰＶの型によって起こる子宮頸癌に対する防御的免疫反応を適切に誘発する。
【００２３】
「ヒトへの用量」との語は、ヒトへの使用に適した量である用量を意味する。一般にこれは０．３ないし１．５ｍｌ量の液体である。一態様によれば、ヒトへの用量は０．５ｍｌである。さらなる態様によれば、ヒトへの用量は０．５ｍｌよりも多く、例えば０．６、０．７、０．８、０．９、または１ｍｌである。さらなる態様によれば、ヒトへの用量は１ｍｌないし１．５ｍｌである。
【００２４】
ワクチン、使用および方法は、ＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８に追加したＨＰＶ型由来のＶＬＰをさらに含んでなってよい。特に、ワクチン、使用および方法に含まれてよいその他のＨＰＶ型由来のその他のＶＬＰは、ＨＰＶ３１、３３、３５、３９、４５、５１、５６、５８、５９、６６、および６８のような１以上の発癌性ＨＰＶ型由来のＶＬＰを含む。本明細書に記載されるワクチン、使用または方法に含まれてよいその他のＨＰＶ型由来のその他のＶＬＰは、ＨＰＶ６およびＨＰＶ１１のような非発癌性ＨＰＶ型由来のＶＬＰを含む。
【００２５】
一態様によれば、ワクチン、使用または方法はＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８ＶＬＰのみを使用する。
【００２６】
別の態様によれば、ワクチン、使用または方法は、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８、ＨＰＶ６、およびＨＰＶ１１ＶＬＰを、単独、または１以上のその他の発癌性ＨＰＶ型のＶＬＰと組み合わせて使用する。
【００２７】
別の態様によれば、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８、ＨＰＶ６、およびＨＰＶ１１ＶＬＰのみが使用され、ワクチンの各用量は、それぞれ４０μｇ、２０μｇ、２０μｇ、４０μｇの濃度のＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８、ＨＰＶ６、およびＨＰＶ１１ＶＬＰを含んでなる。
【００２８】
ＨＰＶ  ＶＬＰ、およびＶＬＰ産生のための方法は当該技術分野において公知である。ＶＬＰは、典型的にはウィルスのＨＰＶ  Ｌ１および任意にＬ２構造タンパク質から構築される。例えば、国際公開第９４２０１３７号、米国特許第５９８５６１０号、国際公開第９６１１２７２号、米国特許第６５９９５０８Ｂ１号、米国特許第６３６１７７８Ｂ１号、欧州特許第５９５９３５号を参照されたい。Ｌ１のみのＶＬＰ、またはＬ１およびＬ２タンパク質を含んでなるＶＬＰのような、いずれの適切なＨＰＶ  ＶＬＰも使用されてよい。
【００２９】
ＶＬＰは、Ｌ１タンパク質もしくはその免疫原性断片のみから構成されてよいか、または、Ｌ１もしくはその免疫原性断片およびＬ２もしくはその免疫原性断片の両方から構成されてよい。
【００３０】
本明細書に記載されるいずれの態様によれば、ＨＰＶ  ＶＬＰは、ＨＰＶ  Ｌ１タンパク質またはその免疫原性断片を含んでなってよい。ＶＬＰは、別のＨＰＶタンパク質由来のペプチドをさらに含んでなってよい。
【００３１】
ＶＬＰは、Ｌ１またはその免疫原性断片から構成される、Ｌ１のみのＶＬＰであってよい。
【００３２】
Ｌ１の免疫原性断片が使用される場合、ＨＰＶ  Ｌ１の適切な免疫原性断片は、Ｌ１の切断、欠失、置換、または挿入変異体を含む。このような免疫原性断片は免疫反応を起こすことができ、前記免疫反応は、そのＬ１タンパク質が由来したＨＰＶ型からの、ウィルス粒子またはＶＬＰの形であるＬ１のようなＬ１タンパク質を認識できる。
【００３３】
使用できる免疫原性Ｌ１断片は、切断型のＬ１タンパク質を含む。一態様によれば、切断によって核移行シグナルが除かれ、また任意にＬ１  Ｃ末端領域のＤＮＡ結合パターンも除かれる。別の態様によれば、切断はＣ末端の切断である。さらなる態様によれば、Ｃ末端の切断によって５０よりも少ないアミノ酸、例えば４０よりも少ないアミノ酸が除かれる。Ｌ１がＨＰＶ１６由来である場合、別の態様によれば、Ｃ末端の切断によってＨＰＶ１６  Ｌ１のカルボキシ末端から３４アミノ酸が除かれる。Ｌ１がＨＰＶ１８由来である場合、さらなる態様によれば、Ｃ末端の切断によってＨＰＶ１８  Ｌ１のカルボキシ末端から３５アミノ酸が除かれる。従って切断型のＬ１タンパク質は、例えば該タンパク質のＣ末端から５０よりも少ないかまたは４０よりも少ないアミノ酸を除くことによって、核移行シグナルおよび任意にＤＮＡ結合パターンもまた除かれるように、野生型Ｌ１に比較してＣ末端を切断されてよい。ＨＰＶ１６および１８由来のＬ１に対するこのような切断型タンパク質の例を、配列番号１および２として以下に示す。切断型のＬ１タンパク質については、引用することにより本明細書の一部とされる米国特許第６，０６０，３２４号、米国特許第６，３６１，７７８号、および米国特許第６，５９９，５０８号にも記載される。
【００３４】
一態様によれば、ＨＰＶ１６  Ｌ１アミノ酸配列は以下の配列である（配列番号１）。
【化１】
0006022159.tif 000002
【００３５】
ＨＰＶ１６  Ｌ１配列は、例えば適切に切断された、国際公開第９４／０５７９２号または米国特許第６，６４９，１６７号に開示されるものであってもよい。適切な切断は、配列比較により評価され、かつ本明細書に開示される基準を用いた、上記と等しい位置において切断される。
【００３６】
一態様によれば、ＨＰＶ１８  Ｌ１アミノ酸配列は以下の配列である（配列番号２）。
【化２】
0006022159.tif 000003
【００３７】
代替のＨＰＶ１８  Ｌ１配列が国際公開第９６／２９４１３号に開示されており、これは適切に切断できる。適切な切断は、配列比較により評価され、かつ本明細書に開示される基準を用いた、上記と等しい位置において切断される。
【００３８】
その他のＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８  Ｌ１配列が当該技術分野において公知であり、本発明での使用に適し得る。
【００３９】
ワクチン、使用および方法は、ＨＰＶ初期抗原、例えばＨＰＶ  Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、Ｅ７、またはＥ８からなる群より選択される抗原をさらに含んでなってよい。
【００４０】
一態様によれば、ＨＰＶ  ＶＬＰおよび／または抗原の組み合わせおよび量は、いずれの一ＨＰＶ  ＶＬＰまたは抗原、特にＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８ＶＬＰの免疫原性に有意な影響を与えない。一態様によれば、組み合わせて使用されるＨＰＶ  ＶＬＰと抗原の間に生物学的に関連する干渉はなく、ＶＬＰと、異なるＨＰＶ型からの抗原との組み合わせの使用によって適切な免疫反応が誘導され、ワクチンで表される各ＨＰＶ遺伝子型により引き起こされる感染または疾病に対する有効な防御が提供される。
【００４１】
一態様によれば、組み合わせにおける所定のＨＰＶ型に対する免疫反応は、個別に測定した際の、その同じＨＰＶ型に対する免疫反応の少なくとも５０％、または１００％もしくは実質的に１００％である。ＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８への反応に対し、本発明の組み合わせによるワクチンは、ＨＰＶ１６／ＨＰＶ１８ワクチンの組み合わせにより提供される免疫反応の少なくとも５０％の免疫反応を好ましく刺激する。一態様によれば、ワクチンにより生じる免疫反応は、各ＨＰＶ型の防御効果がなお見られるレベルである。免疫反応は、例えば前臨床またはヒトによる実験のいずれかにおける抗体反応により測定できる。抗体反応の測定は当該技術分野において公知であり、例えば国際公開第０３／０７７９４２号に開示される。
【００４２】
ＶＬＰは酵母細胞または昆虫細胞のようないずれの適切な細胞基質において、例えば昆虫細胞内でバキュロウィルスシステムを用いて作製でき、かつＶＬＰ調製の技術は、引用することにより全内容が本明細書の一部とされる、国際公開第９９１３０５６号、米国特許第６４１６９４５Ｂ１号、米国特許第６２６１７６５Ｂ１号、および米国特許第６２４５５６８号、ならびにそれらの参考文献のように、当該技術分野において公知である。
【００４３】
ＶＬＰは、解離および再構成技術により作ることができる。例えばMcCarthy et al, 1998 "Quantitative Disassembly and Reassembly of Human Papillomavirus Type 11 Virus like Particles in Vitro" J. Virology 72(1):33-41には、ＶＬＰの均一な調製品を得るための、昆虫細胞から精製された組み換えＬ１  ＨＰＶ１１ＶＬＰの解離および再構成について記載される。国際公開第９９／１３０５６号および米国特許第６２４５５６８号にもまた、ＨＰＶ  ＶＬＰ作製のための解離／再構成過程について記載される。
【００４４】
一態様によればＨＰＶ  ＶＬＰは、国際公開第９９／１３０５６号および米国特許第６２４５５６８号に記載されるように作られる。
【００４５】
あるいはＶＬＰは、Ｌ１タンパク質または免疫原性断片を発現させること、これを産生システムまたは細胞基質から抽出すること、およびタンパク質を、それが主にＬ１単量体または五量体（カプソメア）の形である間に精製すること、ならびに精製したタンパク質からＶＬＰを形成することにより作ることができる。一態様によれば、抽出および／または精製工程は、ＶＬＰ形成を阻止するためにβ−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）のような還元剤の存在下で行われる。一態様によれば、この過程は、ＶＬＰを自然に形成させるためにＢＭＥのような還元剤を除去する工程を含んでなる。
【００４６】
ＶＬＰの形成は、例えば電子顕微鏡および動的レーザー光散乱のような標準的技術によって評価できる。
【００４７】
所望により、ワクチンはその他の非ＨＰＶ抗原と共に処方または共投与することもできる。これらの非ＨＰＶ抗原により、その他の疾病、例えば単純ヘルペスウィルスのような性感染症を適切に防御することができる。例えば、ワクチンはＨＳＶ由来のｇＤまたはその切断型を含んでなってよい。この方法では、ワクチンによってＨＰＶおよびＨＳＶの両方が防御される。
【００４８】
一態様によればワクチンは液体ワクチン製剤として供給されるが、ワクチンは凍結乾燥され、投与前に再構成されてよい。
【００４９】
本明細書に記載されるワクチン、使用および方法は、アジュバントまたは複数のアジュバントの混合物とＶＬＰとの組み合わせを含んでなってよい。ＶＬＰはアルミニウムと組み合わせて使用でき、アルミニウムアジュバント上に吸着させるか、または部分的に吸着させることができる。使用できるその他のアジュバントは、リポ多糖のようなＴｈ１型の反応を刺激するアジュバント、例えばモノホスホリルリピドＡ、またはさらに詳細には３−Ｏ−デスアシル−４’−モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ−ＭＰＬ）のような、リピドＡの無毒性誘導体である。アジュバントは適切にはアルミニウム塩であり、好ましくは３Ｄ−ＭＰＬのようなリポ多糖との組み合わせである。
【００５０】
一態様によれば、アジュバントは水酸化アルミニウム、または水酸化アルミニウムと３Ｄ−ＭＰＬとの組み合わせである。
【００５１】
アルミニウムを含むアジュバント上にＶＬＰを吸着させる場合、ＶＬＰは、最終ワクチン製品を形成するためのＶＬＰの混合前にアルミニウムアジュバント上に吸着させてよい。
【００５２】
３Ｄ−ＭＰＬは、ＭＰＬの名称でGlaxoSmithKline Biologicals N.A.により市販されており、これは本明細書を通してＭＰＬまたは３Ｄ−ＭＰＬと称される。例えば米国特許第４，４３６，７２７号；第４，８７７，６１１号；第４，８６６，０３４号、および第４，９１２，０９４号を参照されたい。３Ｄ−ＭＰＬは、主にＩＦＮ−ｇ（Ｔｈ１）表現型のＣＤ４＋Ｔ細胞反応を促進する。３Ｄ−ＭＰＬは、英国特許第２  ２２０  ２１１  Ａ号または米国特許第４，９１２，０９４号に開示される方法に従って産生できる。これは化学的には、３、４、５、または６のアシル化鎖（acylated chains）を持つ３−脱アシル化モノホスホリルリピドＡの混合物である。一態様によれば、小粒子３Ｄ−ＭＰＬが使用される。小粒子３Ｄ−ＭＰＬは、０．２２μｍフィルターを通して濾過滅菌され得るような粒径を有する。このような調製は国際公開第９４／２１２９２号に記載される。
【００５３】
ワクチンの各用量における３Ｄ−ＭＰＬの量は、ヒトにおいて抗原に対する免疫反応を適切に増強することができる。特に適切な３Ｄ−ＭＰＬの量は、アジュバントを含まない組成物に比較して、またはＭＰＬの別の量によるアジュバントを含む組成物に比較して、組成物の免疫学的潜在力を改善し、一方で反応特性からは許容可能な量である。
【００５４】
ワクチンの各用量における３Ｄ−ＭＰＬの量は、例えば１〜２００μｇ、または１０〜１００μｇ、または２０〜８０μｇ、例えば用量あたり２５μｇ、または４０〜６０μｇ、例えば用量あたり５０μｇであってよい。
【００５５】
本明細書に記載される組成物に処方される細菌性リポ多糖由来のアジュバントは、細菌性の源から精製および処理されるか、または代わりに合成できる。例えば、精製モノホスホリルリピドＡはRibi et al 1986（上記）に記載され、サルモネラ菌種由来の３−Ｏ−デスアシル化（desacylated）モノホスホリルまたはジホスホリルリピドＡは、英国特許第２２２０２１１号および米国特許第４９１２０９４号に記載される。その他の精製および合成リポ多糖について記載されている（Hilgers et al., 1986, Int.Arch.Allergy.Immunol., 79(4):392-6; Hilgers et al., 1987, Immunology, 60(1):141-6; and EP 0 549 074 B1）。
【００５６】
ワクチンはまた、安定剤としてアルミニウムまたはアルミニウム化合物も含んでなってよい。
【００５７】
本明細書に記載されるワクチンは、経口、局所、皮下、粘膜（典型的には膣内）、静脈内、筋肉内、鼻腔内、舌下、皮内のようないずれの様々な経路により、および坐薬を通して投与できる。筋肉内および皮内送達が好ましい。
【００５８】
本明細書に記載されるワクチンは、ワクチンが免疫原性であることを確認するため、例えば標準の前臨床モデルにおける標準的技術を用いて試験できる。
【００５９】
本明細書に記載される全てのワクチンに対して、一態様によれば、ワクチンは９歳以上、例えば１０〜１３歳のような、１０〜１５歳の思春期の少女へのワクチン接種に用いられる。しかしながら、１５歳を越える、年齢がより上の少女および成人女性にもワクチン接種されてよい。同様に、ワクチンは２〜１２歳のようなより若い年齢群にも投与されてよい。ワクチンはまた、異常なパップスメアを伴う、もしくはＨＰＶによる病変部の除去のための外科手術後の女性、またはＨＰＶ癌型に対して血清反応陰性およびＤＮＡ陰性の者にも投与されてよい。
【００６０】
一態様によれば、本明細書に記載されるワクチンおよび方法は、以下の年齢区分：９〜２５歳、１０〜２５歳、９〜１９歳、１０〜１９歳、９〜１４歳、１０〜１４歳、１５〜１９歳、２０〜２５歳、１４歳以下、１９歳以下、２５歳以下の１以上である女性に使用される。
【００６１】
本明細書に記載されるワクチンおよび方法は、男性または少年に使用できる。
【００６２】
本出願中の特許出願および付与された特許を含む全ての参考文献による教示は、引用することにより本明細書の一部とされる。
【実施例】
【００６３】
実施例１
ＨＰＶ１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰの調製
ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８、ＨＰＶ３３、およびＨＰＶ５８  Ｌ１  ＶＬＰの産生は、標準的なプロトコルを用いて行われた。例えば国際出願第９９１３０５６号を参照されたい。
【００６４】
各Ｌ１タンパク質をコードするＨＰＶ  Ｌ１遺伝子は、各Ｌ１タンパク質のＣ末端に最初に存在する核移行およびＤＮＡ結合パターンを除去するため、バキュロウィルス発現ベクター内へのクローニング前にその３’末端を欠失させた。標準的な遺伝子操作により、Ｃ末端切断型遺伝子がクローニングされた（ＨＰＶ１６および１８それぞれに対し、３４および３５アミノ酸のＣ末端欠失）。本明細書で用いるＨＰＶ１６および１８  Ｌ１切断のアミノ酸配列が記載される（それぞれ配列番号１および２として）。
【００６５】
ＨＰＶ１６および１８切断型Ｌ１タンパク質は、興味あるＨＰＶ１６／１８Ｌ１遺伝子をコードする組み換えバキュロウィルスを感染させた（ＭＯＩは０．５）イラクサギンウワバ（High Five（商標））細胞に発現させた（密度は〜２  ０００  ０００細胞／ｍｌ）。細胞は、感染後おおよそ７２〜９６時間で回収した。
【００６６】
細胞の回収／抗原の抽出
濃縮、抽出、浄化の３工程による過程で、Ｈｉ５細胞から抗原（Ｌ１−１６／１８）を抽出した。濃縮工程により培地の９０％までが除去され、これは遠心分離により行われた。抽出工程は低張緩衝液（トリス２０ｍＭ、ｐＨ８．５）を用いて行われた。抽出を行うために、培養量に等しい量が用いられた。円滑な撹拌下で、最低でも３０分間接触させた。浄化は接線流濾過により行われた。
【００６７】
精製
精製過程は室温にて行った。ＶＬＰ形成を阻止するため、抽出物にβ−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）（４％ｗ／ｗ）を加えた。
【００６８】
使用したすべての緩衝液は０．２２μｍのフィルターにより濾過した。各精製を行う前にゲルマトリックスを消毒し、サンプルを負荷する前に適切な緩衝液で平衡化した。
【００６９】
精製の型は、ＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８からの別々のＬ１精製に対して示される。これらのスキームは大まかには同様であり、以下の工程：
陰イオン交換クロマトグラフィー（ジメチルアミノエチル−ＤＭＡＥ）、
陰イオン交換クロマトグラフィー（トリメチルアミノエチル−ＴＭＡＥ）、
ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、
ナノ濾過（Planova)、
限外濾過、
ＨＰＶ１８に対しては疎水性相互作用クロマトグラフィー（オクチルセファロースを使用）、またＨＰＶ１６に対しては陰イオン交換クロマトグラフィー（ＤＥＡＥ）；および
濾過滅菌
を含む。
【００７０】
Ｌ１−１８抗原の精製
陰イオン交換クロマトグラフィー  ＤＭＡＥ
浄化した抽出物（〜１５０μｇ／ｍｌのＬ１タンパク質を含む、〜１ｍｇ／ｍｌ濃度のタンパク質）を陰イオン交換カラム（ジメチルアミノエチル）へ加えた。溶出を緩衝液（トリス２０ｍＭ｜ＮａＣｌ  ２００ｍＭ｜４％β−メルカプトエタノール  ＢＭＥ）、ｐＨ７．９±０．２により行った。抗原を約５カラム容積で溶出し、溶出特性を２８０ｎｍでモニターした。
【００７１】
陰イオン交換クロマトグラフィー  ＴＭＡＥ
第１工程の溶出液を１容積のＨ２Ｏ／ＢＭＥ  ４％により希釈した。希釈した溶出液を、次に第２の陰イオン交換カラム（トリメチルアミノエチル）へ加えた。
【００７２】
溶出を緩衝液（２０ｍＭトリス｜ＮａＣｌ  ２００ｍＭ｜４％ＢＭＥ）、ｐＨ７．９±０．２により行った。抗原を約４カラム容積で溶出し、溶出特性を２８０ｎｍでモニターした。
【００７３】
ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー
ＴＭＡＥ工程の溶出液をヒドロキシアパタイト（ＨＡ）カラムに加えた。
【００７４】
サンプルを加えた後、ゲルを約２．５カラム容積の緩衝液（ＮａＨ２ＰＯ４  １００ｍＭ｜ＮａＣｌ  ３０ｍＭ｜４％ＢＭＥ）、ｐＨ６．０±０．２により溶出した。
【００７５】
ナノ濾過（Planova)
ＨＡ溶出液を、以下の条件：緩衝液（ＮａＨ２ＰＯ４  ２５ｍＭ｜ＮａＣｌ  １０ｍＭ｜４％ＢＭＥ）、ｐＨ７．５±０．２、になるように希釈した。
【００７６】
次にこれを、０．２μｍプレフィルターおよび０．１２ｍ２  Planova 15Nフィルターにより連続的に濾過した。濾過を２００ｍｂａｒ±２０ｍｂａｒの定圧にて行った。
【００７７】
限外濾過
限外濾過は、ポリエーテルスルホン膜（Centramateカセット  ０．１ｍ２、１００ｋＤ）を備えた接線流限外濾過システムにより行った。
【００７８】
Planova溶出液を、以下の条件：緩衝液（ＮａＨ２ＰＯ４  １００ｍＭ｜ＮａＣｌ  ３０ｍＭ｜４％ＢＭＥ）、ｐＨ６．０±０．２、になるように処理し；次にこれをシステムに負荷し、５倍に濃縮して、出発容積が〜１０の緩衝液（ＮａＨ２ＰＯ４  ２０ｍＭ｜ＮａＣｌ  ５００ｍＭ）、ｐＨ６．０±０．２の持続的注入により透析濾過した。
【００７９】
疎水性相互作用クロマトグラフィー（オクチルセファロース）
限外濾過透過液をオクチルセファロースカラムに加えた。
【００８０】
このクロマトグラフィー工程は、約５カラム容積の緩衝液（Ｎａ３ＰＯ４  ２０ｍＭ｜ＮａＣｌ  ５００ｍＭ）、ｐＨ６．０±０．２によるネガティブモードにて行った。
【００８１】
濾過滅菌
精製されたＬ１−１８抗原溶液を、０．２２μｍ膜を用いる濾過により滅菌した。
【００８２】
Ｌ１−１６抗原の精製
陰イオン交換クロマトグラフィー  ＤＭＡＥ
浄化した抽出物を陰イオン交換カラム（ジメチルアミノエチル）へ加えた。
【００８３】
溶出を緩衝液（トリス２０ｍＭ｜ＮａＣｌ  １８０ｍＭ｜４％ＢＭＥ）、ｐＨ７．９±０．２により行った。抗原を約４カラム容積で溶出し、溶出特性を２８０ｎｍでモニターした。
【００８４】
陰イオン交換クロマトグラフィー  ＴＭＡＥ
第１工程の溶出液を１容積のＨ２Ｏ／ＢＭＥ  ４％により希釈した。希釈した溶出液を、次に第２の陰イオン交換カラム（トリメチルアミノエチル）へ加えた。
【００８５】
溶出を緩衝液（２０ｍＭトリス｜ＮａＣｌ  １８０ｍＭ｜４％ＢＭＥ）、ｐＨ７．９±０．２により行った。抗原を約５カラム容積で溶出し、溶出特性を２８０ｎｍでモニターした。
【００８６】
ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー（ＨＡ）
ＴＭＡＥ工程の溶出液をＨＡカラムに加えた。
【００８７】
サンプルを加えた後、ゲルを約３カラム容積の緩衝液（ＮａＨ２ＰＯ４  １００ｍＭ｜ＮａＣｌ  ３０ｍＭ｜４％ＢＭＥ）、ｐＨ６．０±０．２により溶出した。
【００８８】
ナノ濾過（Planova)
ＨＡ溶出液を、以下の条件：緩衝液（ＮａＨ２ＰＯ４  ２５ｍＭ｜ＮａＣｌ  １０ｍＭ｜４％ＢＭＥ）、ｐＨ７．５±０．２、になるように希釈した。
【００８９】
次にこれを、０．２μｍプレフィルターおよび０．１２ｍ２  Planova 15Nフィルターにより連続的に濾過した。濾過を２００ｍｂａｒ±２０ｍｂａｒの定圧にて行った。
【００９０】
限外濾過
限外濾過は、ポリエーテルスルホン膜（Centramateカセット  ０．１ｍ２、１００ｋＤ）を備えた接線流限外濾過システムにより行った。
【００９１】
Planova溶出液を、以下の条件：緩衝液（ＮａＨ２ＰＯ４  １００ｍＭ｜ＮａＣｌ  ３０ｍＭ｜４％ＢＭＥ）、ｐＨ６．０±０．２、になるように処理し；次にこれをシステムに負荷し、５倍に濃縮して、出発容積が〜１０の緩衝液（ＮａＨ２ＰＯ４  ２０ｍＭ｜ＮａＣｌ  ５００ｍＭ）、ｐＨ６．０±０．２の持続的注入により透析濾過した。
【００９２】
陰イオン交換クロマトグラフィー  ＤＥＡＥ
限外濾過溶出液を、平衡緩衝液（Ｎａ３ＰＯ４  ２０ｍＭ｜ＮａＣｌ  ２５０ｍＭ）、ｐＨ６．０±０．２の伝導率に調節し、陰イオン交換カラム（ジエチルアミノエチル）へ加えた。
【００９３】
溶出を緩衝液（ＮａＨ２ＰＯ４  ２０ｍＭ｜ＮａＣｌ  ５００ｍＭ）、ｐＨ６．０±０．２により行った。抗原を約３カラム容積で溶出し、溶出特性を２８０ｎｍでモニターした。
【００９４】
濾過滅菌
精製されたＬ１−１６抗原溶液を、０．２２μｍ膜を用いる濾過により滅菌した。
【００９５】
実施例２−２用量スケジュール（０．２ヶ月または０．６ヶ月）により筋肉内投与されたＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの安全性および免疫原性を、標準的な３用量スケジュールによるGlaxoSmithKline BiologicalのＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンと比較して評価するための、９〜２５歳の健常女性における第１相／第２相の、部分的盲検の、無作為化された、多施設の、年齢層別化された、用量範囲治験。
【００９６】
主要目的（免疫原性）：
免疫原性
・異なる投薬量（各ＨＰＶ抗原の２０または４０μｇ）および異なるスケジュール（０．２または０．６ヶ月）により投与された最後の用量から１ヶ月後のＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの免疫原性を、３用量スケジュール（０、１、６ヶ月）により投与された標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンに比較して評価する。
【００９７】
副次目的（免疫原性）：
以下の３目的について評価した：
・免疫原性に対する最初の副次目的は：
異なる投薬量（各ＨＰＶ抗原の２０または４０μｇ）および異なるスケジュール（０．２および０．６ヶ月）により９〜１４歳の年齢層に投与されたＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの２用量スケジュールに対する抗体反応の非劣性を、１５〜２５歳（有効性が実証されている年齢群）の被験者における標準的な３用量スケジュールに比較して、ワクチンの最後の用量から１ヶ月後に実証することであった。
【００９８】
非劣性に用いられる基準：
非劣性は、１５〜２５歳の被験者におけるＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの標準的な３用量スケジュールと９〜１４歳の年齢層における２用量スケジュールの間で、幾何平均力価（ＧＭＴ）比の９５％信頼区間（ＣＩ）の上限が２未満である場合に実証された。
【００９９】
・評価される次の副次目的：
異なる投薬量（各ＨＰＶ抗原の２０または４０μｇ）および異なるスケジュール（０．２または０．６ヶ月）により１５〜１９歳の年齢層に投与されたＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの２用量スケジュールに対する抗体反応の非劣性を、１５〜２５歳の被験者における標準的な３用量スケジュールに比較して、ワクチンの最後の用量から１ヶ月後に実証すること。
【０１００】
非劣性に用いられる基準：
非劣性は、１５〜２５歳の被験者におけるＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの標準的な３用量スケジュールと１５〜１９歳の年齢層における２用量スケジュールの間で、ＧＭＴ比の９５％ＣＩの上限が２未満である場合に実証された。
【０１０１】
・評価される第３の副次目的：
異なる投薬量（各ＨＰＶ抗原の２０または４０μｇ）および異なるスケジュール（０．２または０．６ヶ月）により２０〜２５歳の年齢層に投与されたＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの２用量スケジュールに対する抗体反応の非劣性を、１５〜２５歳の被験者における標準的な３用量スケジュールに比較して、ワクチンの最後の用量から１ヶ月後に実証すること。
【０１０２】
非劣性に用いられる基準：
非劣性は、１５〜２５歳の被験者におけるＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの標準的な３用量スケジュールと２０〜２５歳の年齢層における２用量スケジュールの間で、ＧＭＴ比の９５％ＣＩの上限が２未満である場合に実証された。
【０１０３】
・免疫原性に対する上記副次目的のいずれも実証されない場合、以下の目的について評価される：
ワクチンの最後の用量から１ヶ月後に各年齢層内で、各２用量スケジュール群および標準的な３用量スケジュールの間での抗体反応の対比較を試験すること。
【０１０４】
延長された追跡期間（１２ヶ月、１８ヶ月、および２４ヶ月目）に、各年齢層において、全ての用量スケジュールおよびＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの投薬量に対する抗体反応を評価すること。
【０１０５】
治験計画
・実験計画：第１相／第２相の、部分的盲検の、対照の、無作為化された、年齢層別化された、平行する４群による試験。各群は３年齢層：９〜１４、１５〜１９、および２０〜２５歳へ層別化した。
【０１０６】
・処置群：４群はＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４を、異なる投薬量（各ＨＰＶ抗原の２０μｇまたは４０μｇ）および異なるスケジュール（０，２ヶ月、０，６ヶ月、または０，１，６ヶ月）により投与された：
【０１０７】
【表１】
0006022159.tif 000004
【０１０８】
・試験は、２用量スケジュール群（４０／４０  Ｍ０，２；４０／４０  Ｍ０，６、および２０／２０  Ｍ０，６）では観察者盲検であり、標準的な３用量スケジュール群（２０／２０  Ｍ０，１，６）ではオープンであった。
【０１０９】
・ワクチン接種スケジュール：
・４０／４０  Ｍ０，２群：ＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ（４０μｇ／４０μｇ）ＡＳ０４ワクチンの２用量を０および２ヶ月目に投与＊。
・４０／４０  Ｍ０，６および２０／２０  Ｍ０，６群：ＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ（４０μｇ／４０μｇまたは２０μｇ／２０μｇ）ＡＳ０４ワクチンの２用量を０および６ヶ月目に投与＊。
＊これらの群における盲検のため、６ヶ月（４０／４０  Ｍ０，２群）または２ヶ月（４０／４０  Ｍ０，６および２０／２０  Ｍ０，６群）目にプラセボ［Ａｌ（ＯＨ）３］投与が必要とされた。
・２０／２０  Ｍ０，１，６群：ＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ（２０μｇ／２０μｇ）ＡＳ０４ワクチンの３用量を０、１、および６ヶ月目に投与。
【０１１０】
・治験来院：被験者が割り当てられた群により、一被験者あたり７（３用量スケジュール群）または８（２用量スケジュール群）回来院した。
・２用量スケジュール群：血液サンプルが来院１（０ヶ月）、来院３（３ヶ月）、および来院５（７ヶ月）で採取され、来院６（１２ヶ月）、来院７（１８ヶ月）、および来院８（２４ヶ月）で採取され得る。
・３用量スケジュール群：血液サンプルが来院１（０ヶ月）および来院４（７ヶ月）で採取され、来院５（１２ヶ月）、来院６（１８ヶ月）、および来院７（２４ヶ月）で採取され得る。
【０１１１】
・コントロール：１５〜２５歳の被験者（１５〜１９および２０〜２５歳の年齢層のプール）へ、GSK BiologicalのＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンを０ヶ月、１ヶ月、および６ヶ月目に投与した。
【０１１２】
被験者数：
計画：約９６０被験者：一群あたり約２４０被験者、および一年齢層あたり約８０被験者。
登録：９６１被験者が治験に登録された。
完了：９２２被験者（４０／４０  Ｍ０，２、４０／４０  Ｍ０，６、２０／２０  Ｍ０，６、および標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチン群において、それぞれ２３１、２２８、２２９、および２３４被験者）が、治験の有効な相を完了した。
安全性：ワクチン接種されたコホートの総数：９６０被験者（４０／４０  Ｍ０，２、４０／４０  Ｍ０，６、２０／２０  Ｍ０，６、および標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチン群において、それぞれ２４０、２４１、２４０、および２３９被験者）。
免疫原性：ＡＴＰコホート：８４３被験者（４０／４０  Ｍ０，２、４０／４０  Ｍ０，６、２０／２０  Ｍ０，６、および標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチン群において、それぞれ２２４、２０６、２０５、および２０８被験者）。
【０１１３】
包含の判断および基準：
・彼らおよび／または彼らの両親がプロトコルの要求に従うことができ、かつ従うであろうと治験責任医師が考えた被験者。
・最初のワクチン接種時に９ないし２５歳である女性被験者。
・登録前に被験者から文書によるインフォームドコンセント／アセントを得たこと。
・病歴および病歴志向性の臨床検査により確立された健常被験者。
被験者には出産の可能性が無いことを条件とした。
【０１１４】
治験ワクチン
ワクチン接種スケジュール／部位：
・ワクチンは筋肉内（ＩＭ）投与された。
【０１１５】
ワクチン組成物／用量：
・４０／４０  Ｍ０，２およびＭ０，６群：注射のための各用量（０，５ｍＬ）は、４０μｇ  ＨＰＶ−１６  Ｌ１タンパク質、４０μｇ  ＨＰＶ−１８  Ｌ１タンパク質、５０μｇ  ３−Ｏ−デスアシル−４’−モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、５００μｇ  水酸化アルミニウム［Ａｌ（ＯＨ）３］、１８０ｍＭ  ＮａＣｌ、８ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ、および全量０．５ｍＬとするための水を含んだ。
・２０／２０  Ｍ０，６群：注射のための各用量（０，５ｍＬ）は、２０μｇ  ＨＰＶ−１６  Ｌ１タンパク質、２０μｇ  ＨＰＶ−１８  Ｌ１タンパク質、５０μｇ  ＭＰＬ、５００μｇ  Ａｌ（ＯＨ）３、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、８ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ、全量０．５ｍＬとするための水を含んだ。
・プラセボ：各用量（０．５ｍＬ）は、５００μｇ  Ａｌ（ＯＨ）３、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、８ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ、全量０．５ｍＬとするための水を含んだ。
【０１１６】
参照ワクチン：
ワクチン接種スケジュール／部位：
・２０／２０  Ｍ０，１，６群：３用量のＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ（２０μｇ／２０μｇ）ＡＳ０４ワクチンを、０、１、および６ヶ月目に投与した。
【０１１７】
ワクチン組成物／用量：
・２０／２０  Ｍ０，１，６群：ＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの注射のための各用量（０，５ｍＬ）は、２０μｇ  ＨＰＶ−１６  Ｌ１  ＶＬＰ、２０μｇ  ＨＰＶ−１８  Ｌ１  ＶＬＰ、５０μｇ  ＭＰＬ、５００μｇ  Ａｌ（ＯＨ）３、４．４ｍｇ  ＮａＣｌ、０．６２４ｍｇ  ＮａＨ２ＰＯ４・２Ｈ２Ｏ、および水を含んだ。
【０１１８】
評価基準
共同主要評価項目：
免疫原性：異なる投薬量（各ＨＰＶ型の２０または４０μｇ）および異なるスケジュール（０，２、または０，６、または０，１，６ヶ月）により投与されたワクチンの最後の用量から１ヶ月後に、ＨＰＶ−１６およびＨＰＶ−１８抗体価（ＥＬＩＳＡによる）を評価した。
【０１１９】
安全性：それぞれの、およびいずれのワクチン接種から７日以内（０〜６日）の、応答型の局所および全身症状の発生、強度、およびワクチン接種に対する因果関係。
【０１２０】
副次的評価項目：
免疫原性
・全ての治験群および全ての年齢層において、ワクチンまたはプラセボの最後の用量から１ヶ月後（７ヶ月目）に、ＨＰＶ−１６およびＨＰＶ−１８抗体価（ＥＬＩＳＡによる）を評価した。
・２用量スケジュール群において、ワクチンまたはプラセボの第２用量から１ヶ月後（３ヶ月目）に、ＨＰＶ−１６およびＨＰＶ−１８抗体価（ＥＬＩＳＡによる）を評価した。
・延長された追跡期間（１２ヶ月、１８ヶ月、および２４ヶ月目）に、ＨＰＶ−１６およびＨＰＶ−１８抗体価（ＥＬＩＳＡによる）および血清転換状態を評価した。
【０１２１】
免疫原性の分析：
免疫原性の第１の分析はＡＴＰコホートに基づいた。
血液サンプルの結果が入手可能であった各時点における各群に対して：
・前ワクチン接種状態あたりの抗ＨＰＶ−１６および抗ＨＰＶ−１８の血清陽性率（正確な９５％ＣＩによる）を算出した。
・前ワクチン接種状態あたりの、９５％ＣＩによる抗ＨＰＶ−１６および抗ＨＰＶ−１８のＧＭＴおよび抗体価の範囲を表にした。
・有効なワクチンの最後の用量から１ヶ月後の抗ＨＰＶ−１６および抗ＨＰＶ−１８抗体価の分布を、最初に血清陰性であった被験者のサブコホートに対する逆累積分布曲線を用いて表示した。
【０１２２】
主要目的の分析：
対数１０による力価を反応変数として用い、抗ＨＰＶ−１６および抗ＨＰＶ−１８に対して別々に二元配置ＡＮＯＶＡモデルを適用した。このモデルは固定因子として年齢、群、および年齢による群化の交互作用を含んだ。交互作用項（年齢による群化）は１０％において試験した。年齢による群化の交互作用項が１０％において有意ではなかった場合、全ての年齢層にわたってさらなる推定を導いた。Dunnettの多重比較を行った。交互作用が１０％において有意であった場合、年齢層による２用量スケジュール群と３用量標準スケジュール群それぞれの間で対比較を行った。
【０１２３】
対数１０による力価を反応変数として用い、年齢層により抗ＨＰＶ−１６および抗ＨＰＶ−１８に対して別々に一元配置ＡＮＯＶＡモデルを適用した。このモデルは固定因子として群を含み、Dunnettの多重比較を行った。
【０１２４】
副次目的の分析
以下の目的を連続的に評価した：
異なる投薬量（各ＨＰＶ抗原の２０または４０μｇ）および異なるスケジュール（０．２および０．６ヶ月）により９〜１４歳の年齢層に投与されたＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの２用量スケジュールに対する抗体反応の非劣性が、１５〜２５歳の被験者における標準的な３用量スケジュールに比較して、ワクチンの最後の用量から１ヶ月後に、１５〜２５歳の被験者におけるＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの標準的な３用量スケジュールと９〜１４歳の年齢層における２用量スケジュールの間でＧＭＴ比の９５％ＣＩの上限が２未満である場合に実証された。
【０１２５】
第２の副次目的、すなわち異なる投薬量（各ＨＰＶ抗原の２０または４０μｇ）および異なるスケジュール（０．２または０．６ヶ月）により１５〜１９歳の年齢層に投与されたＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの２用量スケジュールに対する抗体反応の非劣性が、１５〜２５歳の被験者における標準的な３用量スケジュールに比較して、ワクチンの最後の用量から１ヶ月後に、１５〜２５歳の被験者におけるＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの標準的な３用量スケジュールと１５〜１９歳の年齢層における２用量スケジュールの間でＧＭＴ比の９５％ＣＩの上限が２未満である場合に実証された。
【０１２６】
第３の副次目的、すなわち異なる投薬量（各ＨＰＶ抗原の２０または４０μｇ）および異なるスケジュール（０．２または０．６ヶ月）により２０〜２５歳の年齢層に投与されたＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの２用量スケジュールに対する抗体反応の非劣性が、１５〜２５歳の被験者における標準的な３用量スケジュールに比較して、ワクチンの最後の用量から１ヶ月後に、１５〜２５歳の被験者におけるＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの標準的な３用量スケジュールと２０〜２５歳の年齢層における２用量スケジュールの間でＧＭＴ比の９５％ＣＩの上限が２未満である場合に実証された。
【０１２７】
免疫原性に対する上記副次目的のいずれも実証されない場合、ワクチンの最後の用量から１ヶ月後に各年齢層内で、各２用量スケジュール群および標準的な３用量スケジュールの間での抗体反応の対比較がDunnett法を用いて試験された。
【０１２８】
結果
免疫原性
免疫原性の主要分析をＡＴＰ（according to protocol：プロトコル尊守）コホートについて行った。ＡＴＰ分析を補うため、全ワクチン接種コホートについて副次的分析を行った。
【０１２９】
プロトコル尊守の分析
概して７３０（８６．６％）および７３４（８７．１％）被験者が、ＨＰＶ−１６およびＨＰＶ−１８それぞれに対するベースラインの血清陰性であった。
【０１３０】
ベースラインの血清状態および群別の、ＨＰＶ−１６抗体価に対する血清陽性率ならびにＧＭＴを表２に見出すことができる。年齢層別化されたデータを表３に示す。全ての群における全ての被験者がワクチン接種コースの１ヶ月後に血清陽性であった（３ヶ月目［４０／４０  Ｍ０，２群における、用量ＩＩ後１ヶ月］および７ヶ月目［４０／４０  Ｍ０，６および２０／２０  Ｍ０，６群における、用量ＩＩ後１ヶ月、ならびに標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチン群における用量ＩＩＩ後１ヶ月］）。全ての被験者は、３ヶ月後（４０／４０  Ｍ０，６および２０／２０  Ｍ０，６群における、用量Ｉ後１ヶ月）にもまた血清陽性であった。２０／２０  Ｍ０，６および４０／４０  Ｍ０，６群において、７ヶ月目に最初は血清陰性であった被験者、および３ヶ月目に最初は血清陽性であった被験者における、抗ＨＰＶ−１６のより高い力価について測定した。
【０１３１】
【表２】
0006022159.tif 000005
【０１３２】
Ｖ４０＿０２＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，２ヶ月
Ｖ４０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
Ｖ２０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
ＨＰＶ＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，１，６ヶ月
ＧＭＴ＝全ての被験者について算出された幾何平均抗体価
Ｎ＝前ワクチン接種の結果が入手可能な被験者の数
ｎ／％＝特定範囲内の力価を示す被験者の数／パーセンテージ
９５％ＣＩ＝９５％信頼区間；ＬＬ＝下限、ＵＬ＝上限
ＭＩＮ／ＭＡＸ＝最小／最大
ＰＲＥ＝前ワクチン接種
【０１３３】
【表３】
0006022159.tif 000006
【０１３４】
Ｖ４０＿０２＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，２ヶ月
Ｖ４０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
Ｖ２０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
ＨＰＶ＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，１，６ヶ月
９−１４＝９ないし１４歳
１５−１９＝１５ないし１９歳
２０−２５＝２０ないし２５歳
ＧＭＴ＝全ての被験者について算出された幾何平均抗体価
Ｎ＝前ワクチン接種の結果が入手可能な被験者の数
ｎ／％＝特定範囲内の力価を示す被験者の数／パーセンテージ
９５％ＣＩ＝９５％信頼区間；ＬＬ＝下限、ＵＬ＝上限
ＭＩＮ／ＭＡＸ＝最小／最大
ＰＲＥ＝前ワクチン接種
【０１３５】
【表４】
0006022159.tif 000007
【０１３６】
Ｖ４０＿０２＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，２ヶ月
Ｖ４０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
Ｖ２０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
ＨＰＶ＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，１，６ヶ月
Ｎ＝前ワクチン接種の結果が入手可能な被験者の数
ｎ／％＝特定範囲内の力価を示す被験者の数／パーセンテージ
９５％ＣＩ＝９５％信頼区間；ＬＬ＝下限、ＵＬ＝上限
ＭＩＮ／ＭＡＸ＝最小／最大
ＰＲＥ＝前ワクチン接種
【０１３７】
【表５】
0006022159.tif 000008
【０１３８】
Ｖ４０＿０２＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，２ヶ月
Ｖ４０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
Ｖ２０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
ＨＰＶ＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，１，６ヶ月
９−１４＝９ないし１４歳
１５−１９＝１５ないし１９歳
２０−２５＝２０ないし２５歳
ＧＭＴ＝全ての被験者について算出された幾何平均抗体価
Ｎ＝前ワクチン接種の結果が入手可能な被験者の数
ｎ／％＝特定範囲内の力価を示す被験者の数／パーセンテージ
９５％ＣＩ＝９５％信頼区間；ＬＬ＝下限、ＵＬ＝上限
ＭＩＮ／ＭＡＸ＝最小／最大
ＰＲＥ＝前ワクチン接種
【０１３９】
図１および図２に、ＨＰＶワクチンの最後の用量から１ヶ月後の抗ＨＰＶ−１６および抗ＨＰＶ−１８抗体価に対するＧＭＴを、ワクチン接種前に血清陰性であった被験者について年齢層別および群別に図示する。両抗原に対して年齢の関数としてのＧＭＴの減少がみられ、これはＨＰＶ−１６よりもＨＰＶ−１８であまり顕著ではなかった。
【０１４０】
推論分析
１．主要な免疫原性の目的
この治験の主要目的は、異なる投薬量（各ＨＰＶ抗原の２０または４０μｇ）および異なるスケジュール（０．２または０．６ヶ月）により投与された最後の用量から１ヶ月後のＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの免疫原性を、３用量スケジュール（０、１、６ヶ月）により投与された標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンに比較して評価することであった。
【０１４１】
ＨＰＶ−１６
反応変数として力価（対数１０）を用いて適用された二元配置ＡＮＯＶＡモデルにより、年齢による群化の交互作用は統計的に有意ではない（ｐ＝０．１９５）ことが明らかとなった。群および年齢の効果は有意であった（ｐ＜０．０００１）。
【０１４２】
各２用量スケジュール群および標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの間で、Dunnett試験を用いて対比較を行った。９５％ＣＩの下限が０．５（２倍の相違）よりも下である場合、標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンは２用量製剤／スケジュールに対して優位であると考えられた。標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンは４０／４０  Ｍ０，２に対して優位であるが、４０／４０  Ｍ０，６、および２０／２０  Ｍ０，６に対してはそうではないことが見出された（表６）。
【０１４３】
各２用量スケジュール群および標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチン群の間の幾何平均比は表７に見出すことができる。
【０１４４】
【表６】
0006022159.tif 000009
【０１４５】
Ｖ４０＿０２＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，２ヶ月
Ｖ４０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
Ｖ２０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
ＨＰＶ＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，１，６ヶ月
ＧＭＲ＝幾何平均比
ＬＬ／ＵＬ＝９５％信頼区間の下限および上限
調節後のＧＭＴ＝年齢層において調節されたＧＭＴ
【０１４６】
【表７】
0006022159.tif 000010
Ｖ４０＿０２＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，２ヶ月
Ｖ４０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
Ｖ２０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
ＨＰＶ＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，１，６ヶ月
ＧＭＲ＝幾何平均比
ＬＬ／ＵＬ＝９５％信頼区間の下限および上限
【０１４７】
ＨＰＶ−１８
反応変数として力価（対数１０）を用いて適用された二元配置ＡＮＯＶＡモデルにより、年齢による群化の交互作用は統計的に有意ではない（ｐ＝０．４３５）ことが明らかとなった。群および年齢の効果は有意であった（ｐ＜０．０００１）。
【０１４８】
各２用量スケジュール群および標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンの間で、Dunnett試験を用いて対比較を行った。９５％ＣＩの下限が０．５（２倍の相違）よりも下である場合、標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンは２用量製剤／スケジュールに対して優位であると考えられた。標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンは、３つの２用量群のいずれに対しても優位であることは見出されなかった（表８）。
【０１４９】
各２用量スケジュール群および標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチン群の間の幾何平均比は表９に見出すことができる。
【０１５０】
【表８】
0006022159.tif 000011
【０１５１】
Ｖ４０＿０２＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，２ヶ月
Ｖ４０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
Ｖ２０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
ＨＰＶ＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，１，６ヶ月
ＧＭＲ＝幾何平均比
ＬＬ／ＵＬ＝９５％信頼区間の下限および上限
調節後のＧＭＴ＝年齢層において調節されたＧＭＴ
【０１５２】
【表９】
0006022159.tif 000012
【０１５３】
Ｖ４０＿０２＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，２ヶ月
Ｖ４０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
Ｖ２０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
ＨＰＶ＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，１，６ヶ月
ＧＭＲ＝幾何平均比
ＬＬ／ＵＬ＝９５％信頼区間の下限および上限
【０１５４】
２．免疫原性についての副次目的
ＨＰＶ−１６
９〜１４歳層に関して、４０／４０  Ｍ０，２群は、１５〜２５歳の被験者における標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンに対して非劣性であった。１５〜２５歳の被験者における標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンに比較した、４０／４０  Ｍ０，２群における１５〜１９歳および２０〜２５歳層に関する非劣性についての証拠は見出されなかった。
【０１５５】
各年齢層に関して、４０／４０  Ｍ０，６群は、１５〜２５歳の被験者における標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンに対して非劣性であった。
【０１５６】
２０ないし２５歳の被験者を除いた各年齢層に関して、２０／２０  Ｍ０，６は、１５〜２５歳の被験者における標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンに対して非劣性であった（表１０ないし表１２）。
【０１５７】
【表１０】
0006022159.tif 000013
【０１５８】
Ｖ４０＿０２＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，２ヶ月
Ｖ４０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
Ｖ２０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
ＨＰＶ＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，１，６ヶ月
ＧＭＴ＝幾何平均抗体価
Ｎ＝前ワクチン接種の結果が入手可能な被験者の数
９５％ＣＩ＝ＧＭＴ比に対する９５％信頼区間（ＡＮＯＶＡモデル−合併分散）；
ＬＬ＝下限、ＵＬ＝上限
【０１５９】
【表１１】
0006022159.tif 000014
【０１６０】
Ｖ４０＿０２＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，２ヶ月
Ｖ４０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
Ｖ２０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
ＨＰＶ＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，１，６ヶ月
ＧＭＴ＝幾何平均抗体価
Ｎ＝前ワクチン接種の結果が入手可能な被験者の数
９５％ＣＩ＝ＧＭＴ比に対する９５％信頼区間（ＡＮＯＶＡモデル−合併分散）
ＬＬ＝下限、ＵＬ＝上限
【０１６１】
【表１２】
0006022159.tif 000015
【０１６２】
Ｖ４０＿０２＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，２ヶ月
Ｖ４０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
Ｖ２０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
ＨＰＶ＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，１，６ヶ月
ＧＭＴ＝幾何平均抗体価
Ｎ＝前ワクチン接種の結果が入手可能な被験者の数
９５％ＣＩ＝ＧＭＴ比に対する９５％信頼区間（ＡＮＯＶＡモデル−合併分散）
ＬＬ＝下限、ＵＬ＝上限
【０１６３】
ＨＰＶ−１８
各年齢層に関して、各２用量製剤／スケジュール群は、１５〜２５歳の被験者における標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンに対して非劣性であったが、非劣性についての証拠が見出されなかった２０〜２５歳の被験者における４０／４０  Ｍ０，２群は除外される（表１３ないし表１５）。
【０１６４】
【表１３】
0006022159.tif 000016
【０１６５】
Ｖ４０＿０２＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，２ヶ月
Ｖ４０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
Ｖ２０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
ＨＰＶ＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，１，６ヶ月
ＧＭＴ＝幾何平均抗体価
Ｎ＝前ワクチン接種の結果が入手可能な被験者の数
９５％ＣＩ＝ＧＭＴ比に対する９５％信頼区間（ＡＮＯＶＡモデル−合併分散）
ＬＬ＝下限、ＵＬ＝上限
【０１６６】
【表１４】
0006022159.tif 000017
【０１６７】
Ｖ４０＿０２＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，２ヶ月
Ｖ４０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
Ｖ２０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
ＨＰＶ＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，１，６ヶ月
ＧＭＴ＝幾何平均抗体価
Ｎ＝前ワクチン接種の結果が入手可能な被験者の数
９５％ＣＩ＝ＧＭＴ比に対する９５％信頼区間（ＡＮＯＶＡモデル−合併分散）
ＬＬ＝下限、ＵＬ＝上限
【０１６８】
【表１５】
0006022159.tif 000018
【０１６９】
Ｖ４０＿０２＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，２ヶ月
Ｖ４０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（４０，４０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
Ｖ２０＿０６＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，６ヶ月
ＨＰＶ＝ＨＰＶ−１６／１８（２０，２０）ＡＳ０４  ０，１，６ヶ月
ＧＭＴ＝幾何平均抗体価
Ｎ＝前ワクチン接種の結果が入手可能な被験者の数
９５％ＣＩ＝ＧＭＴ比に対する９５％信頼区間（ＡＮＯＶＡモデル−合併分散）
ＬＬ＝下限、ＵＬ＝上限
【０１７０】
全般的結論
この治験において、総数９６０の被験者にワクチン接種が行われた（４０／４０  Ｍ０，２群において２４０被験者、４０／４０  Ｍ０，６群において２４１被験者、２０／２０  Ｍ０，６群において２４０被験者、および標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４群において２３９被験者）。被験者らは平均１７．２±４．３歳（平均±ＳＤ）であった。被験者の大多数は白人／ヨーロッパの遺伝形質（９６．７％）であった。
【０１７１】
全ての群における全ての被験者が完全なワクチン接種コースの１ヶ月後に血清陽性であった（３ヶ月目［４０／４０  Ｍ０，２群における、用量ＩＩ後１ヶ月］および７ヶ月目［４０／４０  Ｍ０，６および２０／２０  Ｍ０，６群における、用量ＩＩ後１ヶ月、ならびにＨＰＶ群における用量ＩＩＩ後１ヶ月］）。全ての被験者は、３ヶ月後（４０／４０  Ｍ０，６および２０／２０  Ｍ０，６群における、用量Ｉ後１ヶ月）にもまた血清陽性であった。
【０１７２】
両方の抗原に関して、ＡＴＰコホートにおける年齢−群の交互作用は統計的に有意ではなかった。ＨＰＶ−１６に関して、標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンは４０／４０  Ｍ０，２に対して優位であるが、４０／４０  Ｍ０，６、および２０／２０  Ｍ０，６に対してはそうではなかった。ＨＰＶ−１８に関して、標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンは、３つの２用量群のいずれに対しても優位ではなかった。
【０１７３】
ＨＰＶ−１６の反応に関し：
・各年齢層に関して、４０／４０  Ｍ０，６群は、１５〜２５歳の被験者における標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンに対して非劣性であった。
・各年齢層に関して、２０／２０  Ｍ０，６群は、１５〜２５歳の被験者における標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンに対して非劣性であったが、２０ないし２５歳の被験者は除外される。
・９〜１４歳層に関してのみ、４０／４０  Ｍ０，２群は、１５〜２５歳の被験者における標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンに対して非劣性であった；１５〜２５歳の被験者における標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンに比較した、４０／４０  Ｍ０，２群における１５〜１９歳および２０〜２５歳層に関する非劣性についての証拠は見出されなかった。
【０１７４】
ＨＰＶ−１８の反応に関し：各年齢層に関して、各２用量スケジュール群は、１５〜２５歳の被験者における標準的なＨＰＶ−１６／１８  Ｌ１  ＶＬＰ  ＡＳ０４ワクチンに対して非劣性であったが、非劣性についての証拠が見出されなかった２０〜２５歳の被験者における４０／４０  Ｍ０，２群は除外される。
【０１７５】
実施例３−Cervarix（商標）（GlaxoSmithKlineグループ会社の商標）およびGardasil（Merck & Co Incの登録商標）の免疫原性の比較
最近、２つの予防的ＨＰＶワクチンが多くの国で認可された。両方とも、ＨＰＶ−１６および−１８による子宮頚部の前癌病変および癌を予防するため、個々のＨＰＶ型の組み換えＬ１カプシドタンパク質のウィルス様粒子（virus-like particle：ＶＬＰ）を使用している。Cervarix（商標）は、バキュロウィルス発現ベクターシステムを用いてイラクサギンウワバＲｉｘ４４４６細胞基質内で産生されたＨＰＶ−１６および−１８ＶＬＰを含み、独自の免疫賦活性Adjuvant System 04（ＡＳ０４；３−Ｏ−デスアシル−４’−モノホスホリルリピドＡ［ＭＰＬ］および水酸化アルミニウム塩を含んでなる）と共に処方される。Gardasil（登録商標）は、出芽酵母内で産生されたＨＰＶ−１６および−１８ＶＬＰを含み、非晶質のヒドロキシリン酸アルミニウム硫酸塩と共に処方される。加えて、Gardasil（登録商標）は、性器疣贅の７５〜９０％に関与する非発癌型のＨＰＶ−６および−１１由来のＶＬＰを含む。両方のワクチンに関しては、発癌型ＨＰＶ−１６および−１８による感染ならびに付随する前癌病変に対する防御が無作為化臨床試験において実証されてきた。防御は、Cervarix（商標）についてはワクチン接種後少なくとも６．４年間、Gardasil（登録商標）については少なくとも５年間実証されている。
【０１７６】
この無作為の、観察者盲検である治験により、単一のよく限定された１８〜４５歳の健常女性集団において、免疫原性および安全性評価に同一の方法論を用いて２つのワクチンを比較した。Cervarix（商標）およびGardasil（登録商標）を、それらに推奨される３用量ワクチン接種スケジュール（それぞれ０，１，６ヶ月および０，２，６ヶ月）に従って投与した。ワクチン接種に対する免疫反応を十分に評価可能にするため、１８〜４５歳の年齢範囲を選択した。ワクチン接種に対する免疫反応は年齢の上昇と共に低下することから、この年齢範囲により２つのワクチンを比較するための厳密な条件も提供される。公平なアッセイを用いて機能的免疫反応を客観的に比較するため、２つのワクチンにより誘導された中和抗体濃度を、偽ウィルスに基づく中和アッセイ（pseudovirus-based neutralization assay：ＰＢＮＡ）（Harper et al. Lancet 2004; 364(9447):1757-65およびHarper et al. Lancet 2006; 367(9518):1247-55を参照）を用いて評価した。
【０１７７】
各群５５３人である、総数１１０６人の女性が登録し、ワクチン接種された。ワクチンおよび投与スケジュールを表１７に示す。
【０１７８】
ワクチン接種前に分析下でＨＰＶ抗原について血清陰性かつデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）陰性であった女性における免疫原性に関し、ＰＢＮＡにより測定されたＨＰＶ−１６およびＨＰＶ−１８抗体の血清陽性率および幾何平均力価（ＧＭＴ）を年齢層別化して表１６に示す。３用量ワクチン接種コース完了後１ヶ月（７ヶ月目）に、ＨＰＶ−１８に対して血清転換しなかったGardasil（登録商標）における２７〜３５歳の２人の女性を除き、両方のワクチン群における全ての女性は、ＨＰＶ−１６およびＨＰＶ−１８に対して血清転換した。表１６には、６ヶ月目、すなわちワクチンの第２用量後の結果も示す。
【０１７９】
組み合わされた全ての年齢群に関し、自然感染が消失した（すなわち０ヶ月目に、分析下でＨＰＶ抗原に対し血清陽性かつＤＮＡ陰性）全ワクチン接種コホート内の女性におけるＰＢＮＡにより測定された中和抗体ＧＭＴは、ＨＰＶ−１６に関しては１８０．１  ＥＤ５０（５０％の反応を生じる有効用量）［９５％信頼区間（ＣＩ）：１５３．３，２１１．４］、およびＨＰＶ−１８に関しては１３７．３  ＥＤ５０  ９５％ＣＩ：１１２．２，１６８．０］であった。両方のワクチンに関し、ワクチン接種前に分析下でＨＰＶ抗原について血清陰性かつデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）陰性であった免疫原性に関するＡＴＰコホート内の女性における７ヶ月目の中和抗体ＧＭＴ（表１６）は、自然感染によるものを十分に上回っていた。Cervarix（商標）対Gardasil（登録商標）のＨＰＶ−１６および−１８免疫反応の非劣性を、３つの全ての年齢群においてＨＰＶ−１６およびＨＰＶ−１８の両方について示した（表１６）。１８〜２６歳の女性において、Cervarix（商標）群はGardasil（登録商標）よりも、７ヶ月目における抗ＨＰＶ−１６および−１８中和抗体ＧＭＴがそれぞれ３．７−および７．３−倍高かった（表１６）。Cervarix（商標）による抗ＨＰＶ−１６および−１８ＧＭＴは、Gardasil（登録商標）によるものに比較して、それぞれ２７〜３５歳の女性において４．８−および９．１−倍高く、３６〜４５歳の女性において２．３−および６．８−倍高かった（表１６）。
【０１８０】
用量３（６ヶ月目）に先立つ抗体動態の分析により、Cervarix（商標）群ではGardasil（登録商標）群よりも、抗ＨＰＶ−１８抗体濃度がワクチンの２用量後に既に高かったことが示された；全ての年齢群において、ＧＭＴ比に対する両側９７．６％ＣＩの下限は＞１であった（表１６）。用量３の前に、２つのワクチン群の間で抗ＨＰＶ−１６ＧＭＴに違いは見られなかった（表１６）。
【０１８１】
ワクチン接種された全てのコホート（ワクチン接種前のＨＰＶ血清状態およびＨＰＶ  ＤＮＡ状態に関わりなく）について行われた優位性試験により、Cervarix（商標）によって誘導された中和抗体濃度は、Gardasil（登録商標）により誘導されたものよりも、全ての年齢群の各抗原に関して有意に高いことが確認された（ｐ＜０．０００１）。
【０１８２】
【表１６−１】
0006022159.tif 000019
【表１６−２】
0006022159.tif 000020
【表１６−３】
0006022159.tif 000021
【０１８３】
ＧＭＴ，幾何平均抗体価；ＳＰ，血清陽性（中和抗体価＞４０ＥＤ５０として定義される）
ＧＭＴ比＝各年齢コホート内での力価のｌｏｇ１０変換についてのＡＮＯＶＡモデルを用いて計算された、６および７ヶ月目のGardasil（登録商標）ＧＭＴで割ったCervarix（商標）ＧＭＴ
【０１８４】
【表１７】
0006022159.tif 000022
【図１】
0006022159.tif 000023
【図２】
0006022159.tif 000024
【配列表】
0006022159000001.app