(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ホスファプラチン類を合成するためのプロセスであって、以下の工程：
６〜８．５のｐＨを有する飽和ピロホスフェート溶液を提供すること；
飽和ピロホスフェート溶液に白金錯体を添加すること；
このように得られた反応混合物を撹拌すること；
反応混合物のｐＨを２まで下げ、温度を０〜５℃まで下げることにより、反応混合物からホスファプラチン類を沈殿させ、ろ別すること；
反応混合物の温度を４０℃に上げることにより二量体およびオリゴマー副産物を沈殿させ、ろ別すること；
ｐＨを６〜８．５に再調整すること；および
反応混合物中の未反応のピロホスフェート配位子および白金錯体をその後のホスファプラチン類の合成反応において用いることを含む、前記プロセス。
【請求項２】
反応混合物を２０℃〜６０℃の温度で維持する、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
反応混合物を２０℃〜５０℃の温度で維持する、請求項１に記載のプロセス。
【請求項４】
反応混合物がHNa3P2O7を含む、請求項１に記載のプロセス。
【請求項５】
ホスファプラチン類が一般式（Ｉ）を有するホスファプラチン類の１つまたはあらゆる組み合わせであり、
【化１】
0006027619.tif 000003
ここでＲ１およびＲ２はアミン配位子であり、かつＲ３およびＲ４はアミンまたは他の単座配位子のどちらかである、請求項１に記載のプロセス。
【請求項６】
ホスファプラチン類がシス−、トランス−、ラセミ形態を含む、請求項５に記載のプロセス。
【請求項７】
白金錯体を飽和ピロホスフェート溶液に添加する工程が、該白金錯体の全部が反応混合物中に溶解することを確実にする速度においてである、請求項１に記載のプロセス。
【請求項８】
反応混合物を撹拌する工程が、白金錯体の添加後に反応混合物を６〜１５時間攪拌することを含む、請求項７に記載のプロセス。
【請求項９】
ホスファプラチン類を合成するためのプロセスであって、以下の工程：
２０〜６０℃の温度並びに６〜８．５のｐＨを有する飽和ピロホスフェート溶液を提供すること；
飽和ピロホスフェート溶液に式ＰｔＡ２Ｘ２（式中、Ａは、不活性な単座配位子であるか、またはＡ２は、二座配位子であり、Ｘは置き換え可能な配位子である）の白金錯体を添加すること；
このように得られた反応混合物を撹拌すること；および
反応混合物のｐＨを２まで下げ、温度を０〜５℃まで下げることにより、ホスファプラチン類を沈殿させること、
ここで、合成されたホスファプラチン類は下記式： 
【化２】
0006027619.tif 000004
式中、Ｒ１およびＲ２はアミン配位子であり、かつＲ３およびＲ４はアミンまたは他の単座配位子のどちらかである
を有する；
を含む、前記プロセス。
【請求項１０】
反応混合物を２０℃〜５０℃の温度で維持する、請求項９に記載のプロセス。
【請求項１１】
反応混合物がHNa3P2O7を含む、請求項９に記載のプロセス。
【請求項１２】
ホスファプラチン類がシス−、トランス−、ラセミ形態を含む、請求項９に記載のプロセス。
【請求項１３】
さらに反応混合物を白金錯体の添加後に６〜１５時間攪拌することを含む、請求項９に記載のプロセス。
【請求項１４】
さらに温度を４０℃に上げることにより反応混合物から二量体およびオリゴマー副産物を沈殿させることを含む、請求項１に記載のプロセス。
【請求項１５】
さらに反応混合物中の未反応のピロホスフェート配位子および白金錯体をその後のホスファプラチン類の合成において用いることを含む、請求項９に記載のプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
[0001]  この出願は２０１２年１０月５日に出願された米国特許出願第１３／９２２，９１７号および２０１１年１０月５日に出願された米国仮出願第６１／５４３，５４０号に対する優先権を主張し、その両方を参照によりそのまま本明細書に援用する。
【０００２】
政府の資金提供
[0002]  該当なし
[0003]  本発明は、大規模産業生産に適用できるホスファプラチン（ｐｈｏｓｐｈａｐｌａｔｉｎ）系抗腫瘍剤の生産のための効率的な合成および反応管理プロセスに関する。
【背景技術】
【０００３】
[0004]  ホスファプラチン類は、不活性なアミン配位子を含有するピロホスフェート配位白金（ＩＩ）および白金（ＩＶ）錯体である(R. J. Mishur, et al., Synthesis and X-ray crystallographic Characterization of Monomeric Platinum(II)- and Platinum(IV)- Pyrophosphato Complexes, Inorg. Chem., 2008, 47, 7972-7982)。これらの化合物は、インビトロ（R. N. Bose, et al., Non-DNA Binding Platinum Anticancer Agents: Remarkable Cytotoxic Activities of Platinum-phosphato Complexes Towards Human Ovarian Cancer Cells, Proc. Natl. Acad. Sci., 2008, 105, 18314-18419）ならびにＳｃｉｄおよびヌードマウスを用いたインビボの実験（S. Moghaddas, et al., Superior Efficacy of Phosphaplatins: Novel Non-DNA-Binding Platinum Drugs for Human Ovarian Cancer, FASEB J., 2010, 24:527; S. Moghaddas, et al., Phosphaplatins, Next Generation Platinum Antitumor Agents: A Paradigm Shift in Designing and Defining Molecular Targets, Inorg. Chim. Acta., DOI, 10.1016/j.ica.2012.05.040, ISSN 0020-1693）の両方により実証されたように、様々なヒトの癌に対する優秀な抗腫瘍活性を示す。さらに、これらの化合物は他の白金系化学療法薬と比較して低減した毒性を示す。
【０００４】
[0005]   ホスファプラチン類を合成するための現在の方法は、その内容を参照によりそのまま本明細書に援用する公開された論文(R. J. Mishur, et al., Synthesis and X-ray crystallographic Characterization of Monomeric Platinum(II)- and Platinum(IV)- Pyrophosphato Complexes, Inorg. Chem., 2008, 47, 7972-7982)において、ならびに発行された、および係属中の特許出願（米国特許第７，７００，６４９号；米国特許第８，０３４，９６４号；国際公開第２０１１／０５３３６５号）において記述されているように、少量の生成物を生成するために大きな反応体積を必要とする。これらの確立された方法は、出発する白金反応物の可溶性により制限されている。例えば、５０〜７０ｍｇの量の（トランス−１，２−シクロヘキサンジアミン）（二水素ピロホスファト）白金（ＩＩ）錯体を生成するために、２５０ｍＬの水溶液の出発体積が必要とされる。さらに、同じ量の化合物を沈殿させるために、元の体積を２５０ｍＬから５ｍＬまで低減する必要がある。従って、その合成を１キログラムのその化合物へとスケールアップするために、５０００リットルの出発体積が必要である。また、その生成物を沈殿させるためにそのような大きい体積を５０００Ｌから１００Ｌまで低減するための費用はかなり大きい。第２に、報告された方法論は未反応の白金出発試薬および過剰なピロホスフェートを使用のために再利用しない。最後に、その確立された大量合成は、長い反応時間、通常は５０〜７０ｍｇの材料の処理単位に関して１２〜２４時間を必要とする。従って、当技術において、かなり大きな量の化合物が必要であろう癌患者の処置および他の適用のための大量のホスファプラチン類を合成し、かつ最大収率のためにその反応物を最適に使用し、かつ反応時間を低減するプロセスに関する必要性が存在する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第７，７００，６４９号
【特許文献２】米国特許第８，０３４，９６４号
【特許文献３】国際公開第２０１１／０５３３６５号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】R. J. Mishur, et al., Synthesis and X-ray crystallographic Characterization of Monomeric Platinum(II)- and Platinum(IV)- Pyrophosphato Complexes, Inorg. Chem., 2008, 47, 7972-7982
【非特許文献２】R. N. Bose, et al., Non-DNA Binding Platinum Anticancer Agents: Remarkable Cytotoxic Activities of Platinum-phosphato Complexes Towards Human Ovarian Cancer Cells, Proc. Natl. Acad. Sci., 2008, 105, 18314-18419
【非特許文献３】S. Moghaddas, et al., Superior Efficacy of Phosphaplatins: Novel Non-DNA-Binding Platinum Drugs for Human Ovarian Cancer, FASEB J., 2010, 24:527
【非特許文献４】S. Moghaddas, et al., Phosphaplatins, Next Generation Platinum Antitumor Agents: A Paradigm Shift in Designing and Defining Molecular Targets, Inorg. Chim. Acta., DOI, 10.1016/j.ica.2012.05.040, ISSN 0020-1693
【非特許文献５】R. J. Mishur, et al., Synthesis and X-ray crystallographic Characterization of Monomeric Platinum(II)- and Platinum(IV)- Pyrophosphato Complexes, Inorg. Chem., 2008, 47, 7972-7982
【発明の概要】
【０００７】
[0006]  本発明の１態様において、ホスファプラチン類を大規模で合成するためのプロセスを開示する。そのプロセスは、低体積の反応混合物中でのそれらの出発物質の可溶性を増大させることにより、大きな体積の出発物質を用いる必要性を排除する。さらに、そのプロセスは、所望のホスファプラチン類の沈殿の間の濃縮手順を用いる必要性を排除する。最後に、そのプロセスは反応時間を著しく低減する。
【０００８】
[0007]  １態様において、白金錯体を濃縮されたピロホスフェートを含有する反応混合物に約６．０〜８．５のｐＨにおいてゆっくりと添加する。攪拌後、その温度およびｐＨを下げて望むホスファプラチン類を沈殿させる。
【０００９】
[0008]  本発明の別の態様において、未反応の白金錯体およびピロホスフェートをホスファプラチン類の最初の合成後に再利用するためのプロセスを開示する。最初の合成後に、不用な生成物を反応混合物から濾過し、適切な出発物質を添加してさらなるホスファプラチン類を生成する。
【００１０】
[0009]  前記の概要ならびに以下の詳細な記述は、添付された図面と合わせて読まれた場合によりよく理解されるであろう。説明の目的のため、図面において本開示の特定の態様を示す。しかし、本発明は示した正確な配置および手段（ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｌｉｔｉｅｓ）に限定されないことは理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】[00010]  図１はホスファプラチン抗腫瘍剤の一般式（Ｉ）を示し、ここでＲ１およびＲ２はアミン配位子であり、Ｒ３およびＲ４はアミンまたは他の単座配位子のどちらかである。
【図２】[00011]  図２は、キラルアミン配位子である１，２−ジアミンシクロヘキサンを用いる白金（ＩＩ）錯体に関して式（ＩＩＩ）〜（Ｖ）において、および白金（ＩＶ）錯体に関して式（ＶＩ）〜（ＶＩＩＩ）において例示されるような、一般式（Ｉ）のシス−、トランス−および光学異性体の例を示す。
【図３】[00012]  図３は、ホスファプラチン類の大規模生産の略図を示す。
【図４Ａ】[00013]  図４Ａは、本発明の態様から生成された反応混合物のリン−３１  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４Ｂ】図４Ｂは、本発明の態様から生成された反応混合物のリン−３１  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４Ｃ】図４Ｃは、本発明の態様から生成された反応混合物のリン−３１  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図５Ａ】[00014]  図５Ａは、本発明の態様に従うプロセスを実施した後に回収された生成物に関するＥＳＩ-ＭＳスペクトルを示す。
【図５Ｂ】図５Ｂは、本発明の態様に従うプロセスを実施した後に回収された生成物に関するＨＰＬＣデータを示す。
【図５Ｃ】図５Ｃは、本発明の態様に従うプロセスを実施した後に回収された生成物に関するリン−３１  ＮＭＲスペクトルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
[00015]  本発明の少なくとも１個の態様を詳細に説明する前に、本発明はその適用において以下の記述で述べられる、または図面において図説される構成の詳細および構成要素の配置に限定されないことは理解されるべきである。本発明は他の態様が可能であり、様々な方法で実行および実施することができる。また、本明細書において用いられる用語（ｐｈｒａｓｅｏｌｏｇｙ）および用語法（ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ）は記述を目的としたものであり、限定とみなされるべきでないことは理解されるべきである。本発明の特徴のどの１つも他の特徴と別々に、または組み合わせて用いられてよいことは理解されるべきである。本発明の他の系、方法、特徴、および利点は、その図面および詳細な記述を吟味すれば、当業者には明らかである、または明らかになるであろう。全てのそのような追加の系、方法、特徴、および利点は、この記述の範囲内に含まれ、本発明の範囲内であり、そして添付の特許請求の範囲により保護されることが意図されている。
【００１３】
[00016]  本発明は、大きい体積の出発反応混合物を排除し、かつ沈殿のための濃縮プロセスを軽減し、かつ反応時間を低減する、大量のホスファプラチン類を作製するための新規プロセスを記述する。本発明のホスファプラチン類は図１において示される一般式（Ｉ）により記述することができ、ここでＲ１およびＲ２はアミン配位子であり、Ｒ３およびＲ４はアミンまたは他の単座配位子のどちらかである。これらのホスファプラチン構造の多くの化学的変形も特に興味深く、それにはそのアミン配位子がキラル中心を含有するシス−、トランス−、ラセミおよび高光学純度の（ｅｎａｎｔｉｏ−ｐｕｒｅ）形態が含まれる。そのような一般式（Ｉ）のシス−、トランス−および光学異性体の例を、図２において、キラルアミン配位子である１，２−ジアミンシクロヘキサンを用いる白金（ＩＩ）錯体に関して式（ＩＩＩ）〜（Ｖ）で、および白金（ＩＶ）錯体に関して式（ＶＩ）〜（ＶＩＩＩ）で示す。本発明のプロセスは、トリホスフェートおよびポリホスフェート化合物にも適用可能である。
【００１４】
[00017]  本発明の１態様が限定的でない例として図３において記述されている。このプロセスにおいて、一般式ＰｔＡ２Ｘ２（ここでＡは不活性な単座配位子であり、またはＡ２は二座配位子であり、Ｘは置き換え可能な配位子である）の白金試薬を、ＨｎＮａ４−ｎＰ２Ｏ７の飽和溶液に、約６．５〜８．５、好ましくは約８のｐＨにおいて、約２０℃〜６０℃、好ましくは約２０℃〜５０℃、より好ましくは約４０℃の温度において添加する。次に、その反応物をおおよそ６〜１５時間（反応時間はより高い温度において低減されるため、前に言及したプロセス条件に依存する）攪拌する。攪拌後、そのｐＨを濃ＨＮＯ３を用いて調節し、温度を約０〜５℃に調節する。その反応混合物を氷上に５分間（条件に依存する）置いてホスファプラチン類を沈殿させ、次いでホスファプラチン類を濾別する。その濾液の温度を約４０℃に調節し、次いで約２時間、好ましくは数分間静置して、もしあるならば二量体およびオリゴマーを沈殿させる。最後に、その濾液のｐＨを６．０〜８．５、好ましくはｐＨ８に調節し、適切な量のピロホスフェートおよび出発白金試薬を出発条件を満たすように添加し、次いで上記の工程を繰り返してさらなるホスファプラチン類を生成する。
【００１５】
[00018]  別の態様において、限定的でない例として、ピロリン酸四ナトリウム（約０．４ｇ）の濃縮溶液を、約４０℃の最小体積の水の中で、濃硝酸を用いてｐＨを調節することにより調製する。この限界の最小量は、約ｐＨ８における、および約４０℃におけるピロホスフェートの溶解度に等しい。出発白金化合物（約０．１ｇ）を、そのピロホスフェート溶液に、強い攪拌の下でその白金化合物がその溶液中で完全に溶解するまでゆっくりと添加する。次いでその反応混合物を約４０℃で約１２時間維持する。典型的には、この具体的な例におけるその反応混合物の総体積は、はるかに大きな先行技術の体積、例えば２５０ｍＬの代わりに、約１０ｍＬ程度であることができる。その反応時間の終了時に、所望の濃度の硝酸の分割量（ａｌｉｑｕｏｔｓ）を添加してｐＨを約２まで下げる。硝酸の濃度および体積は、その化合物を沈殿させるための最終的な体積の所望の調節に依存する。その最終的な体積は、未反応のピロホスフェートの過剰量が沈殿しないように、約ｐＨ２および約５℃におけるピロホスフェート部分の溶解度に基づいて計算される。この溶液を短時間冷却すると、所望のホスファプラチン錯体が沈殿する。典型的には、ｐＨ調節後の総体積は約８〜１０ｍＬにすることができる。
【００１６】
[00019]  この向上した方法およびプロセスは、全てのホスファプラチン化合物に適用することができる。そのプロセスは、反応物の濃度を増大させ、それに応じて体積を調節することにより、スケールアップすることができる。例として、１態様において、１キログラムのホスファプラチン錯体を、先行技術において記述されたはるかに大きい５０００リットルの体積の代わりに、１０〜２０Ｌの体積中で合成することができる。
【００１７】
[00020]  開示されたプロセスの別の利点は、ホスファプラチン類の最初の収穫物（ｃｒｏｐ）を集めた後に、未使用の出発白金錯体およびピロホスフェートをその本来備わっている可溶性のために沈殿しなかった生成物と共に含有する母液を再利用するその可能性である。例えば、１態様において、ホスファプラチン類の最初の収穫物を母液から分離した後、その母液の温度を再度４０℃まで上げ、その反応混合物を２時間、好ましくは数分間静置する。次いで、（もしあるならば）二量体性／ポリマー性ピロホスフェート錯体が含まれる望まれない生成物を濾別する。この限定的でない例において、追加のピロホスフェートを、速度論的に制御されたプロセスによりその合成のための白金反応物の量を超えるために必要な濃度で添加する。出発ピロホスフェート配位子の２５％に至るまでがその反応で消費されるため、７５％の未反応の出発ピロホスフェートが未使用である可能性がある。
【００１８】
[00021]  別の態様において、その最初の反応は１０倍過剰量のピロホスフェート配位子を用いて実施される。その後のサイクルにおいて、出発白金錯体は白金：ピロホスフェートのモル比が１：４に達するまで補充しさえすればよい。その段階において、追加のピロホスフェートを、速度論的基準を満たすように、かつ二量体生成物の形成を回避するように添加する。さらに別の代替の態様において、ホスファプラチン類の低体積合成は、出発白金錯体から塩化物またはヨウ化物配位子を除去し、そうして高度に可溶性のジ−アクア−白金（ＩＩ）（ｄｉ−ａｑｕａ−ｐｌａｔｉｎｕｍ（ＩＩ））化合物を作り出し、そしてその化合物をピロホスフェート部分と反応させることにより得られる。そのような条件下では、その反応は主要な単量体性ホスファプラチン錯体に加えていくつかのより少ない生成物を生成する。
【００１９】
[00022]  本明細書で開示されるプロセスの利点は多く、それには大きい体積の出発反応混合物の使用の必要性を最小限にすることが含まれるが、それに限定されない。これは、本明細書で開示される向上したプロセスが６から８．５までのｐＨ範囲におけるピロホスフェート部分の大きな可溶性を利用しているために可能であり、それに続いて出発白金錯体をそれらが溶解するまで添加する。結果として、本明細書で開示されるプロセス全体は出発白金錯体材料の乏しい可溶性（それは先行技術において開示されている他の合成法に対する決定的な制限である）により制限されない。
【００２０】
[00023]  白金（ＩＶ）錯体は、その低体積戦略に従って、ｐＨ６〜８における保温時間の終了時に白金（ＩＩ）錯体を過酸化水素で酸化することによっても合成される（実施例６参照）。従って、本発明は、白金（ＩＩ）および白金（ＩＶ）錯体の低体積合成に等しく適用することができる。
【００２１】
[00024]  加えて、その開示されるプロセスは、その出発白金基質をゆっくりと添加することにより、二量体およびオリゴマー種が含まれる望まれない錯体の形成の排除または最小化をもたらす。この出発白金反応物のゆっくりとした添加は、過剰なピロホスフェート環境の条件を確実にし、それは望まれない二量体性およびオリゴマー性白金錯体の形成を防ぐ。さらに、本明細書で開示されるプロセスにおける急速な沈殿は単に温度を下げることにより成し遂げることができ、その反応混合物を濃縮する必要性を必要としない。一度望まれない二量体性およびオリゴマー性白金生成物を単離したら、最初の量の７５％に至るまでに相当し得る残りの未反応のピロホスフェートを次の処理単位のために再使用することができる。結果として、そのプロセスの全体の費用が著しく減少する。
【００２２】
[00025]  本発明は、癌患者の処置および他の臨床適用に有用である。それはかなり大きな量の化合物が望まれる他の適用においても用いることができる。
[00026]  本明細書で記述される発明は大量のホスファプラチン化合物を作製するための新規プロセスに具体的に焦点を合わせているが、当業者は、この開示の利益により、そのようなアプローチの他の系への拡張を認識するであろう。当業者は、上記で記述された態様に対して、その幅広い発明概念から逸脱することなく変更を行うことができることを認識するであろう。従って、本明細書で開示される発明は開示された特定の態様に限定されず、添付された特許請求の範囲により定義される通りの本発明の精神および範囲内の修正を含むことが意図されていることは理解されている。
【実施例】
【００２３】
[00027]  実施例１．（トランス−１，２−シクロヘキサンジアミン）（二水素ピロホスファト）白金（ＩＩ）（トランス−ｄａｃｈ−２）または（１Ｒ，２Ｒ−シクロヘキサンジアミン）二水素−ピロホスファト−白金（ＩＩ）（ＲＲ−ｄａｃｈ−２）の低体積合成。ピロリン酸ナトリウム十水和物（０．４ｇ）を２５ｍＬの蒸留水中で６０℃において溶解させ、その溶液のｐＨを１Ｍ  ＨＮＯ３を用いて８に調節した。その溶液を６０℃で１５分間保ち、次いで０．１ｇのシス−ジクロロ（トランス−１，２−シクロヘキサンジアミン）白金（ＩＩ）またはシス−ジクロロ−（トランス−１Ｒ，２Ｒ−シクロヘキサンジアミン）白金（ＩＩ）を少量で３０分間の期間をかけて添加した。その反応混合物を６０℃で１５時間の混合時間の間保温した。図４は、６０℃における６および９時間の反応後に記録されたその反応混合物ならびにその反応から単離された最終生成物のリン−３１  ＮＭＲスペクトルの一例を示す。１．９３ｐｐｍにおける低磁場のピークが単量体性ピロホスフェート錯体に関するピークであり、−５．６２におけるピークが過剰な未反応のピロホスフェート配位子に関するピークである。その図において見られるように、６時間の反応時間の後に生成物のピークの相対強度における変化はなく、これはその反応時間をかなり短縮することができることを示している。実際、６０℃において９時間を越える延長された反応時間は生成物のピークを低減するようであった。さらに、その温度をピロホスフェート配位子の分解温度より下の範囲で上げることにより、反応時間を低減することが可能である。その保温期間の後、その溶液を濾過してあらゆる未反応の出発物質を分離し、４８℃における真空下でのロータリーエバポレーションにより５〜７ｍＬまで濃縮した。そのｐＨを１Ｎ  ＨＮＯ３の添加によりおおよそ１．５〜２まで下げ、温度を４℃まで下げると、生成物が淡黄色の粉末として沈殿した。氷上で５分間冷却することにより沈殿を完了させ、その生成物を真空濾過により単離し、氷冷した水およびアセトンで洗浄した（洗浄あたり１０ｍＬで３回）。その最終生成物をデシケーター中で真空下で一夜乾燥させた。［Ｐｔ（Ｃ６Ｈ１４Ｎ２）（Ｈ２Ｐ２Ｏ７）］の収量は０．０６ｇの範囲であった。平均パーセント収率は５０％であった。出発反応混合物の体積をさらに７〜１０ｍＬまで低減させて濃縮工程を削除することができる。しかし、生成物の収率は著しく低下する。下記でさらに詳細に論じるように、得られた生成物をＰｔ元素分析、Ｐ−３１  ＮＭＲ分光法、ＨＰＬＣ、および質量分析により完全に特性付けた。
【００２４】
[00028]  その反応を、温度を４０℃に下げることにより同一の条件下で繰り返した。上記で述べた同一の分析的特徴を特徴とする同じ生成物が得られた。唯一の違いは、その反応時間が延長されたことである。
【００２５】
[00029]  実施例２．ＨＰＬＣによる特性付け。図５（ａ）は、上記の最初の反応サイクル後に回収された生成物の、その生成物（１ｍｇ）を６００μＬのｐＨ７．５の２５ｍＭ重炭酸ナトリウム中で溶解させた直後に記録された高速液体クロマトグラムを示す。その試料の５０μＬの分割量を分離のために注入した。それぞれの分離を３回繰り返した。その高速液体クロマトグラフィー実験は、二重勾配プログラマーおよびフォトダイオードアレイ検出器（Ｗａｔｅｒｓ）を備えたＷａｔｅｒｓ  ＨＰＬＣシステム上で実施された。勾配分離は、Ｃ１８カラム（Ｗａｔｅｒｓ，ＸＴｅｒｒａ  Ｒ１８，４．６×１５０ｍｍカラム、５ミクロン）上で、１０ｍＭ酢酸アンモニウム（ｐＨ５．５）緩衝液（溶媒Ａ）およびアセトニトリル（溶媒Ｂ）からなる移動相を用いることにより実施された。その勾配分離は、最初の３０分間に関して溶媒Ｂの０％から３０％までの線形上昇、続いて次の５分間においてＢの３０から１００％までのより急勾配の上昇からなる。最後に、追加の５分間の均一溶媒での分離を１００％Ａに設定した。流速はその勾配全体を通して室温において０．５ｍｌ／分に設定した。それぞれのピークを、それぞれの溶離ピークの開始において終了まで収集した。図２（ａ）に関して、３．０４および４．２分におけるＨＰＬＣのピークは、それぞれ配位していない（ｄｅｌｉｇａｔｅｄ）ピロホスフェート配位子および所望の単量体性錯体（ホスファプラチン）に対応する。遊離した配位子および二量体化合物はその化合物の酸性溶液中における動的挙動により形成され、それは溶液中に単量体化合物のみが存在する中性ｐＨでは存在しないことが理解されている。
【００２６】
[00030]  実施例３．質量分析による特性付け。最終生成物および最終生成物の収集されたＨＰＬＣ画分の質量分光分析を、ＬＣＱ  ＤＥＣＡ−ＸＰ（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｎｎｉｇａｎｓ）質量分析計上で、５００μＬ注射器（直径２．３０ｍｍ）を用いた８μＬ／分の流速（注入体積３２μＬ）での直接注入により実施した。質量分析計を陽イオン極性（＋ＭＳ）、３５０℃の乾燥温度、キャピラリー電圧３０．２２Ｖ、４９．３６ｌ／分のシースガス流速、およびチューブレンズ電圧１５．０Ｖに設定した。質量電荷比は１５０から２０００まで収集された。その収集された画分は、質量分析によっても同定された。図５（ｂ）に関して、ｍ／ｚ  ４８６．４におけるピークは所望の単量体性錯体（ホスファプラチン）に対応する。ｍ／ｚ  ５０８．１におけるピークはそのナトリウム付加物に対応する。
【００２７】
[00031]  実施例４．ＮＭＲによる特性付け。ＮＭＲ実験を、オートチューン広帯域（ａｕｔｏ−ｔｕｎｅ  ｂｒｏａｄｂａｎｄ）ｎ−１５−Ｐ３１プローブを備えたＪＥＯＬ  ＥＣＡ−５００ＭＨｚ機器上で、ＪＥＯＬ  ｄｅｌｔａ操作ソフトウェア（ｏｐｅｒａｔｉｏｎ’ｓ  ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いて実施した。プロトンデカップリングされたＰ−３１の共鳴を２０２ＭＨｚにおいて記録し、それらの化学シフトを８５％リン酸に関して０．０ｐｐｍにおいて報告した。０．８秒の繰り返し時間を有する４．６マイクロ秒のパルスを用いてフーリエ誘導減衰を生成した。典型的には、５２Ｋのデータ点を３１．７２ＫＨｚの周波数領域内で収集した。１．０Ｈｚの線幅拡大係数をフーリエ変換の前に導入した。図５（ｃ）において示したように、ｐＨ７．０９において、そのＰ−３１  ＮＭＲスペクトルは２．０２ｐｐｍにおいて単一のピークを示した（トランス−ｄａｃｈ−２）。その生成物は２．０２ｐｐｍにおいて単一のＰ−３１  ＮＭＲ共鳴を示した。さらに、ｐＨ７．５において分析した際、そのＰ−３１  ＮＭＲスペクトルは１．９２ｐｐｍにおいて単一のピークを示した（ＲＲ−ｄａｃｈ−２）。
【００２８】
[00032]  実施例５．残りの母液からの未反応の材料の再利用。上記の実施例１における生成物の単離からの母液の残りを、０．１ｇのピロホスフェート配位子を０．１ｇの出発白金錯体と共に補充することにより、合成の第２サイクルのために用いた。実施例１において説明したプロセスと正確に同じプロセスに従って生成物を単離した。再度の生成物の収率は、上記で言及した最初の収穫物と一致していた。実施例２において単離された生成物のＨＰＬＣクロマトグラム、質量スペクトル、およびＰ−３１  ＮＭＲは、実施例１において単離された生成物のＨＰＬＣクロマトグラム、質量スペクトル、およびＰ−３１  ＮＭＲと似ている。
【００２９】
[00033]  実施例６．（トランス−１，２−シクロヘキサンジアミン）−トランス−ジヒドロキソ（二水素ピロホスファト）白金（ＩＶ）の低体積合成。ピロリン酸ナトリウム十水和物（０．４ｇ）を２５ｍＬの蒸留水中で６０℃において溶解させ、その溶液のｐＨを１Ｍ  ＨＮＯ３を用いて８に調節した。その溶液を１５分間６０℃にしておき、０．１ｇの前駆体化合物（すなわちシス−ジクロロ（トランス−１，２−シクロヘキサンジアミン）白金（ＩＩ）を少量で３０分間の期間で添加した。その混合物を６０℃で１２時間保温した。１ミリリットルの３０％過酸化水素をその母液に添加し、６０℃でさらに２時間保温した。その保温期間の後、その溶液を濾過してあらゆる未反応の出発物質を分離し、４８℃における真空下でのロータリーエバポレーションにより５〜７ｍＬまで濃縮した。そのｐＨを１Ｎ  ＨＮＯ３の添加によりおおよそ１．５〜２まで下げ、温度を４℃まで下げると、淡黄色の粉末が沈殿した。氷上で５分間冷却することにより沈殿を完了させ、その生成物を真空濾過により単離し、氷冷した水およびアセトンで洗浄した（洗浄あたり１０ｍＬで３回）。最終生成物をデシケーター中で真空下で１２時間乾燥させた。収量は０．０４８ｇ（３５％）であった。ｐＨ７．７５において記録された３１Ｐ  ＮＭＲスペクトルは、２４．２Ｈｚ離れた２個のサテライトを有する２．５９ｐｐｍにおけるピークを示した。単離された生成物（１ｍｇを６００μＬのｐＨ７．５の２５ｍＭ重炭酸ナトリウム中で溶解させたもの）のＨＰＬＣクロマトグラムは３．６３分における単一のピークを示し、それは実施例２において記述されたようにＣ１８カラム（Ｗａｔｅｒｓ，ＸＴｅｒｒａ  Ｒ１８，４．６×１５０ｍｍカラム、５ミクロン）上で１０ｍＭ酢酸アンモニウム（ｐＨ５．５）緩衝液（溶媒Ａ）およびアセトニトリル（溶媒Ｂ）からなる勾配移動相を用いて溶離された。
本願発明の他の態様は、以下の通りである；
態様１
ホスファプラチン類を合成するためのプロセスであって、以下の工程：
おおよそ６〜８．５のｐＨを有する反応混合物中でピロホスフェート配位子を濃縮すること；及び
白金錯体を該反応混合物に添加すること；
を含む、前記プロセス。
態様２  反応混合物をおおよそ２０℃〜６０℃の温度で維持する、態様１に記載のプロセス。
態様３  反応混合物をおおよそ２０℃〜５０℃の温度で維持する、態様１に記載のプロセス。
態様４  反応混合物がＨｎＮａ４−ｎＰ２Ｏ７を含む、態様１に記載のプロセス。
態様５  ホスファプラチン類が一般式（Ｉ）を有するホスファプラチン類の１つまたはあらゆる組み合わせであり、ここでＲ１およびＲ２はアミン配位子であり、かつＲ３およびＲ４はアミンまたは他の単座配位子のどちらかである、態様１に記載のプロセス。
態様６  ホスファプラチン類がシス−、トランス−、ラセミおよび高光学純度の形態を含む、態様５に記載のプロセス。
態様７  さらに白金錯体を濃縮ピロホスフェート溶液に該白金錯体の全部が反応混合物中に溶解することを確実にする速度でゆっくりと添加することを含む、態様１に記載のプロセス。
態様８  さらに白金錯体の添加後に反応混合物を約６〜１５時間攪拌することを含む、態様７に記載のプロセス。
態様９  さらに反応混合物のｐＨをおおよそ２まで下げ、温度をおおよそ０〜５℃まで下げることによりホスファプラチン類を沈殿させることを含む、態様８に記載のプロセス。
態様１０  さらに温度をおおよそ４０℃に上げることにより二量体およびオリゴマー副産物を沈殿させることを含む、態様９に記載のプロセス。
態様１１  さらに未反応のピロホスフェート配位子および白金錯体をその後のホスファプラチン類の合成において用いることを含む、態様１に記載のプロセス。
態様１２  ホスファプラチン類を合成するためのプロセスであって、以下の工程：
式：
【化１】
0006027619.tif 000002
を有するピロホスフェート配位子をおおよそ２０℃〜６０℃の温度を有する反応混合物中で濃縮すること、ここでＲ１およびＲ２はアミン配位子であり、かつＲ３およびＲ４はアミンまたは他の単座配位子のどちらかである；
該反応混合物に式ＰｔＡ２Ｘ２を有する白金錯体をゆっくりと添加すること、ここでＡは不活性な単座配位子であり、またはＡ２は二座配位子であり、かつＸは置き換え可能な配位子である；
を含む、前記プロセス。
態様１３  反応混合物をおおよそ２０℃〜５０℃の温度で維持する、態様１２に記載のプロセス。
態様１４  反応混合物がＨｎＮａ４−ｎＰ２Ｏ７を含む、態様１２に記載のプロセス。
態様１５  ホスファプラチン類がシス−、トランス−、ラセミおよび高光学純度の形態を含む、態様１２に記載のプロセス。
態様１６  さらに反応混合物を白金錯体の添加後に約６〜１５時間攪拌することを含む、態様１２に記載のプロセス。
態様１７  さらに反応混合物のｐＨをおおよそ２まで下げ、温度をおおよそ０〜５℃まで下げることによりホスファプラチン類を沈殿させることを含む、態様１６に記載のプロセス。
態様１８  さらに温度をおおよそ４０℃に上げることにより二量体およびオリゴマー副産物を沈殿させることを含む、態様１７に記載のプロセス。
態様１９  さらに未反応のピロホスフェート配位子および白金錯体をその後のホスファプラチン類の合成において用いることを含む、態様１２に記載のプロセス。
態様２０  ホスファプラチン類を合成するためのプロセスであって、以下の工程：
ＨｎＮａ４−ｎＰ２Ｏ７を含む反応混合物中でピロホスフェート配位子を濃縮すること；及び
白金錯体を該反応混合物に添加すること；
を含む、前記プロセス。
【図１】
0006027619.tif 000005
【図２】
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【図３】
0006027619.tif 000007
【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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