(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ブロモドメイン精巣特異的タンパク質（ＢＲＤＴ）を阻害する化合物またはその塩を含んでなる、男性被験体において精子形成を低下または抑制するための医薬組成物であって、該化合物が、以下の構造式：
【化１】
0006022442.tif 000063
で表される化合物のいずれかまたはその薬学的に許容可能な塩である、医薬組成物。
【請求項２】
該化合物が、
【化２】
0006022442.tif 000064
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
該化合物が、
【化３】
0006022442.tif 000065
またはその薬学的に許容可能な塩である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項４】
ＢＲＤＴを阻害する化合物またはその塩を含んでなる、被験体において男性の妊性率を低下させるための医薬組成物であって、該化合物が、請求項１〜３いずれかに規定される化合物またはその薬学的に許容可能な塩である、医薬組成物。
【請求項５】
前記化合物またはその塩が、精子数を低下させおよび／または精子運動性を低下させるのに十分な量で投与される、請求項１〜３いずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記化合物またはその塩が、無精子症、精子減少症、および／または精子無力症を誘導するのに十分な量で投与される、請求項１〜３いずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記化合物またはその塩が、前記被験体において避妊効果を誘導する、請求項１〜３いずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記化合物またはその塩を経口的に、経皮的に、または注射によって前記被験体に投与する、請求項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記化合物またはその塩が錠剤またはカプセルの形態で投与される、請求項１〜３いずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記化合物またはその塩が、非経口注射、筋肉内注射、静脈内注射、皮下移植、皮下注射、または経皮製剤によって投与される、請求項１〜３いずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記化合物またはその塩が、薬学的に許容できるキャリア、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて投与される、請求項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記被験体がヒトである、請求項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１〜３のいずれかに規定される化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含んでなる、男性の妊性を低下させるためのキット。
【請求項１４】
前記化合物またはその塩を使用するための使用説明書をさらに含んでなる、被験体において男性の妊性率を低下させるための請求項１３に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１０年５月１４日に出願された米国仮特許出願第６１／３３４，９９１号明細書；２０１０年８月４日に出願された米国仮特許出願第６１／３７０，７４５号明細書；２０１０年８月２２日に出願された米国仮特許出願第６１／３７５，８６３号明細書；２０１１年３月２４日に出願された米国仮特許出願第６１／４６７，３７６号明細書；および２０１１年３月２４日に出願された米国仮特許出願第６１／４６７，２９９号明細書の優先権を主張する。これらの特許出願の内容は、その全体を参照によって本明細書に援用する。
【０００２】
連邦により支援された研究開発の下でなされた発明の権利への宣言
この研究は、国立衛生研究所からの補助金番号Ｋ０８ＣＡ１２８９７２によって支援された（Ｂｒａｄｎｅｒ）。米国政府は、本発明に一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
哺乳類ゲノムの約４％は、精子形成中に雄生殖細胞中で発現される遺伝子をコードするが、男性用避妊薬については依然として分かりにくい。今までに臨床試験された唯一の薬剤は、内在性アンドロゲン産生を変化させるテストステロンアナログである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
この男性用避妊代替案の欠如は、特に十代の若者における高率の計画外妊娠、および関連する妊産婦死亡率と、妊娠中絶および未婚の母の分娩に付随する、倫理的、社会的、経済的コストの原因の一部である。この男性用避妊代替案の欠乏に取り組むために、哺乳類において精子形成および妊性の双方に必須であることが示されている、精子形成特異的タンパク質を標的とし得る小分子を開発することが望ましい。このような１つの避妊薬標的は、ブロモドメイン精巣特異的タンパク質、ＢＲＤＴである。
【０００５】
ＢＲＤＴは、パキテン期精母細胞、ディプロテン期精母細胞、および円形精子細胞中で発現される、組織限局的クロマチン再構築タンパク質である。減数分裂後の成熟中に、ＢＲＤＴは核に局在化し、ツインアセチルリジン認識モジュール、またはブロモドメインを通じて、高アセチル化ヒストンを再編成する。精子形成におけるＢＲＤＴの重要な役割は、ヒストン４（Ｈ４Ｋａｃ４）のテトラアセチル化アミノ末端尾部に中程度の力（２０μＭ）で結合する、第１のブロモドメイン（ＢＲＤＴ（１））によって媒介される。マウスＢＲＤＴの構造的研究は、ＢＲＤＴ（１）が、その他のブロモドメイン活性化補助因子タンパク質の精子研究に類似して、保存されたアスパラギンを通じて、ある程度ジアセチル化ヒストン４ペプチド（Ｈ４Ｋ５ａｃ８ａｃ）に結合することを実証した。ＢＲＤＴの遺伝的研究は、ＢＲＤＴ（１）コード領域の選択的欠失が、同型接合性オスマウスに不妊をもたらすのに十分であることを実証し、最近公開された特発性男性不妊症のゲノム規模関連研究は、ＢＲＤＴの単一ヌクレオチド多形性が、ヨーロッパ人男性における精子減少症または無精子症と顕著に関連付けられることを同定した。これらの見識は、避妊効果のためにＢＲＤＴを標的にすることの説得力のある理論的根拠を確立する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
下述するように、本発明は、男性避妊をもたらす新規化合物と組成物を提供する。本発明はまた、男性対象においてこのような化合物および組成物を使用する方法も提供する。
【０００７】
一態様では、本発明は、男性対象において精子形成を低下させまたは抑制する方法を提供する。実施形態では、方法は、ブロモドメイン精巣特異的タンパク質（ＢＲＤＴ）を阻害する化合物またはその塩の有効量を男性対象に投与するステップを伴う。
【０００８】
一態様では、本発明は、対象において男性の妊性率を低下させる方法を提供する。実施形態では、方法は、ＢＲＤＴを阻害する化合物またはその塩の有効量を男性対象に投与するステップを伴う。
【０００９】
上の態様では、方法は、精子数を低下させおよび／または精子運動性を低下させるのに十分な量で、化合物またはその塩を投与するステップを伴う。
【００１０】
上の態様では、方法は、無精子症、精子減少症および／または精子無力症を誘導するのに十分な量で、化合物またはその塩を投与するステップを伴う。実施形態では、方法は、対象において避妊効果を誘導する。
【００１１】
本発明の態様では、本発明は、ＢＲＤＴを阻害する化合物またはその薬学的に許容可能な塩またはプロドラッグを有する、医薬組成物を提供する。実施形態では、化合物またはその塩は、男性対象において精子形成を低下させまたは抑制するのに効果的な量で存在する。
【００１２】
実施形態では、化合物またはその塩は、精子数を低下させおよび／または精子運動性を低下させるのに効果的な量で存在する。
【００１３】
実施形態では、化合物またはその塩は、無精子症、精子減少症および／または精子無力症を誘導するのに効果的な量で存在する。関連実施形態では、化合物またはその塩は、対象において避妊効果を誘導するのに効果的な量で存在する。
【００１４】
上のいずれかの態様では、化合物またはその塩は、本明細書に記載されるいずれかの投与量および／または投与経路を使用して、対象に投与される。実施形態では、化合物またはその塩は経口的に、経皮的に、または注射によって、対象に投与される。関連実施形態では、化合物またはその塩は、錠剤またはカプセルの形態で投与される。関連実施形態では、化合物またはその塩は、非経口注射、筋肉内注射、静脈内注射、皮下移植、皮下注射、または経皮製剤によって投与される。
【００１５】
上のいずれかの態様では、化合物またはその塩は、薬学的に許容できるキャリア、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて投与される。
【００１６】
上のいずれかの態様では、化合物またはその塩の投与は、精巣上体精子数を対照中に存在する精子数の少なくとも約２５％に低下させる。実施形態では、化合物またはその塩の投与は、精巣上体精子数を対照中に存在する精子数の少なくとも約１０％に低下させる。関連実施形態では、化合物またはその塩の投与後に、残留する精子の約５％のみが進行性運動を示す。
【００１７】
上のいずれかの態様では、化合物またはその塩の投与は、精子濃度を３００万個／ｍＬ、２００万個／ｍＬ、１００万個／ｍＬ、５０万個／ｍＬ、２５万個／ｍＬ、または１０万個／ｍＬ以下に低下させる。関連実施形態では、化合物またはその塩の投与は、精子濃度を１０万個／ｍＬ以下に低下させる。
【００１８】
一態様では、本発明は、男性の妊性を低下させるキットを提供する。実施形態では、キットは、ＢＲＤＴを阻害する化合物またはその薬学的に許容可能な塩またはプロドラッグの有効量を含有する。実施形態では、キットは、本明細書に記載される方法のいずれかで、阻害剤を使用するための使用説明を包含する。
【００１９】
上のいずれかの態様では、化合物は、ＪＱ１または式Ｉ〜ＸＸＩＩのいずれかの化合物、または本明細書で開示されるいずれかの化合物、またはその誘導体または塩である。実施形態では、化合物は、ＪＱ１またはその薬学的に許容可能な塩またはプロドラッグである。
【００２０】
上のいずれかの態様では、化合物またはその塩は、少なくとも１つの追加的な男性避妊薬または器具と組み合わせて投与される。実施形態では、追加的な男性避妊具はコンドームである。実施形態では、追加的な男性避妊薬は、テストステロン産生、アンドロゲン受容体機能または安定性の調節因子である。
【００２１】
本発明の追加的な目的および利点は、一部は続く説明に記載され、一部は説明から明らかになり、または本発明の実施によって習得されてもよい。本発明の目的および利点は、添付の特許請求の範囲で指摘されるものを含めて、本明細書で開示される要素および組み合わせの手段によって実現され、達成されるであろう。前述の概要および以下の詳細な説明のどちらも例示的であり、説明のみを意図し、特許請求される発明を制限するものではないことが理解される。組み込まれて本明細書の一部を構成する添付図は、説明と共に本発明のいくつかの実施形態を例証し、本発明の原理を説明するのに役立つ。
【００２２】
定義
本発明の理解を容易にするために、いくつかの用語および語句を下で定義する。
【００２３】
「精子排出の低下または抑制」という用語は、男性対象からの精液放出中に、精液中に存在する精子量を低下させることを指す。精液中の精子レベルの低下または抑制は、精子形成の抑制、無精子症の誘導、および精子減少症などの誘導によって達成され得る。したがって、本発明の文脈で、「精子排出の低下または抑制」は、放出された精液が女性対象からの卵子と接触する場合の受精率を抑制しおよび／または低下させる効果を有する。
【００２４】
「精子形成」は、男性における配偶子形成の全過程を指す。精子形成は精細管内で起きて、精細管周辺、特にセルトリ細胞上の濾胞刺激ホルモンとアンドロゲンのレベルによって、直接調節される。
【００２５】
「無精子症」という用語は、精子形成抑制の結果である、精子含量レベルゼロに近づく、１ｍＬの精液あたり１００万個未満の精子含量を指す。
【００２６】
「精子減少症」という用語は、精子形成レベルの抑制の結果である、１ｍＬの精液あたり２０００万〜１００万個（ｍｉｌｌ／ｍＬ）の精子含量を指す。
【００２７】
「ブロモドメイン」は、アセチル化リジン残基を認識するポリペプチド部分を意味する。一実施形態では、ＢＥＴファミリーメンバーポリペプチドのブロモドメインは、およそ１１０個のアミノ酸を含んでなり、クロマチンと相互作用する多様なループ領域によって結合する、４本のαらせんの左巻きの束を含んでなる、保存された折り畳みを共有する。
【００２８】
「ＢＥＴファミリーポリペプチド」は、２つのブロモドメインと、末端外（ｅｘｔｒａｔｅｒｍｉｎａｌ）（ＥＴ）ドメインまたはその断片とを含んでなり、転写調節因子活性またはアセチル化リジン結合活性を有するポリペプチドを意味する。例示的なＢＥＴファミリーメンバーとしては、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴが挙げられる。
【００２９】
「ＢＲＤ２ポリペプチド」は、ＮＰ＿００５０９５と少なくとも８５％の同一性を有し、クロマチン結合または転写調節ができる、タンパク質またはその断片を意味する。
【００３０】
例示的なＢＲＤ２ポリペプチドの配列を下に示す。
ＭＬＱＮＶＴＰＨＮＫＬＰＧＥＧＮＡＧＬＬＧＬＧＰＥＡＡＡＰＧＫＲＩＲＫＰＳＬＬＹＥＧＦＥＳＰＴＭＡＳＶＰＡＬＱＬＴＰＡＮＰＰＰＰＥＶＳＮＰＫＫＰＧＲＶＴＮＱＬＱＹＬＨＫＶＶＭＫＡＬＷＫＨＱＦＡＷＰＦＲＱＰＶＤＡＶＫＬＧＬＰＤＹＨＫＩＩＫＱＰＭＤＭＧＴＩＫＲＲＬＥＮＮＹＹＷＡＡＳＥＣＭＱＤＦＮＴＭＦＴＮＣＹＩＹＮＫＰＴＤＤＩＶＬＭＡＱＴＬＥＫＩＦＬＱＫＶＡＳＭＰＱＥＥＱＥＬＶＶＴＩＰＫＮＳＨＫＫＧＡＫＬＡＡＬＱＧＳＶＴＳＡＨＱＶＰＡＶＳＳＶＳＨＴＡＬＹＴＰＰＰＥＩＰＴＴＶＬＮＩＰＨＰＳＶＩＳＳＰＬＬＫＳＬＨＳＡＧＰＰＬＬＡＶＴＡＡＰＰＡＱＰＬＡＫＫＫＧＶＫＲＫＡＤＴＴＴＰＴＰＴＡＩＬＡＰＧＳＰＡＳＰＰＧＳＬＥＰＫＡＡＲＬＰＰＭＲＲＥＳＧＲＰＩＫＰＰＲＫＤＬＰＤＳＱＱＱＨＱＳＳＫＫＧＫＬＳＥＱＬＫＨＣＮＧＩＬＫＥＬＬＳＫＫＨＡＡＹＡＷＰＦＹＫＰＶＤＡＳＡＬＧＬＨＤＹＨＤＩＩＫＨＰＭＤＬＳＴＶＫＲＫＭＥＮＲＤＹＲＤＡＱＥＦＡＡＤＶＲＬＭＦＳＮＣＹＫＹＮＰＰＤＨＤＶＶＡＭＡＲＫＬＱＤＶＦＥＦＲＹＡＫＭＰＤＥＰＬＥＰＧＰＬＰＶＳＴＡＭＰＰＧＬＡＫＳＳＳＥＳＳＳＥＥＳＳＳＥＳＳＳＥＥＥＥＥＥＤＥＥＤＥＥＥＥＥＳＥＳＳＤＳＥＥＥＲＡＨＲＬＡＥＬＱＥＱＬＲＡＶＨＥＱＬＡＡＬＳＱＧＰＩＳＫＰＫＲＫＲＥＫＫＥＫＫＫＫＲＫＡＥＫＨＲＧＲＡＧＡＤＥＤＤＫＧＰＲＡＰＲＰＰＱＰＫＫＳＫＫＡＳＧＳＧＧＧＳＡＡＬＧＰＳＧＦＧＰＳＧＧＳＧＴＫＬＰＫＫＡＴＫＴＡＰＰＡＬＰＴＧＹＤＳＥＥＥＥＥＳＲＰＭＳＹＤＥＫＲＱＬＳＬＤＩＮＫＬＰＧＥＫＬＧＲＶＶＨＩＩＱＡＲＥＰＳＬＲＤＳＮＰＥＥＩＥＩＤＦＥＴＬＫＰＳＴＬＲＥＬＥＲＹＶＬＳＣＬＲＫＫＰＲＫＰＹＴＩＫＫＰＶＧＫＴＫＥＥＬＡＬＥＫＫＲＥＬＥＫＲＬＱＤＶＳＧＱＬＮＳＴＫＫＰＰＫＫＡＮＥＫＴＥＳＳＳＡＱＱＶＡＶＳＲＬＳＡＳＳＳＳＳＤＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳＤＴＳＤＳＤＳＧ
【００３１】
「ＢＲＤ２核酸分子」は、ＢＲＤ２ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。
【００３２】
「ＢＲＤ３ポリペプチド」は、ＮＰ＿０３１３９７．１と少なくとも８５％の同一性を有し、クロマチン結合または転写調節ができる、タンパク質またはその断片を意味する。
【００３３】
例示的なＢＲＤ３ポリペプチドの配列を下に示す。
【化１】
0006022442.tif 000002
【００３４】
「Ｂｒｄ３核酸分子」は、ＢＲＤ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。
【００３５】
「ＢＲＤ４ポリペプチド」は、ＮＰ＿０５５１１４と少なくとも８５％の同一性を有して、クロマチン結合または転写調節ができる、タンパク質またはその断片を意味する。
【化２】
0006022442.tif 000003
７２１ｐａ
【００３６】
「Ｂｒｄ４核酸分子」は、ＢＲＤ４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。
【００３７】
「ＢＲＤＴポリペプチド」は、ＮＰ＿００１７１７と少なくとも８５％の同一性を有して、クロマチン結合または転写調節ができる、タンパク質またはその断片を意味する。
【化３】
0006022442.tif 000004
【００３８】
「ＢＲＤＴ核酸分子」は、ＢＲＤＴポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。
【００３９】
「投与する」は、本明細書で、対象の身体内に作用物質をもたらす様式で、対象に作用物質を提供する手段と定義される。このような投与は、制限なしに、経口、経皮、粘膜（例えば、膣、直腸、経口、または鼻粘膜）、注射によって（例えば、皮下、静脈内、非経口的、腹腔内、くも膜下腔内）、または吸入によって（例えば、経口または経鼻）を含む、任意の手段によることができる。医薬品は、所望の投与経路に適する形態で提示される。
【００４０】
「化合物」または「作用物質」は、任意の小分子化合物、抗体、核酸分子、またはポリペプチド、またはその断片を意味する。
【００４１】
「改善する」は、疾患の発症または進行を低下させ、抑制し、減衰させ、縮小させ、停止させ、または安定化することを意味する。
【００４２】
「変更」は、本明細書に記載されるような当該技術分野において公知の標準的な方法によって検出される、遺伝子またはポリペプチドの発現レベルまたは活性の変化（増大または低下）を意味する。本明細書の用法では、変更としては、発現レベルの１０％の変化、好ましくは発現レベルの２５％の変化、より好ましくは４０％の変化、最も好ましくは５０％以上の変化が挙げられる。
【００４３】
「アナログ」は、同一ではないが、類似した機能的または構造的特徴を有する分子を意味する。例えばポリペプチドアナログは、天然ポリペプチドと比較してアナログの機能を高める特定の生化学的修飾を有しながら、対応する天然ポリペプチドの少なくともいくらかの生物学的活性を保つ。このような生化学的修飾は、例えばリガンド結合を変更することなく、アナログのプロテアーゼ耐性、メンブラン透過度、または半減期を増大させ得る。アナログとしては、非天然アミノ酸が挙げられる。
【００４４】
本明細書の用法では、「アルキル」という用語は、典型的に１〜１０個の炭素原子を有する、飽和直鎖または分枝非環式炭化水素を意味する。代表的な飽和直鎖アルキルとしてはメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、およびｎ−デシルが挙げられ；一方、飽和分枝アルキルとしては、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチル、２−メチルヘキシル、３−メチルヘキシル、４−メチルヘキシル、５−メチルヘキシル、２，３−ジメチルブチル、２，３−ジメチルペンチル、２，４−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルヘキシル、２，４−ジメチルヘキシル、２，５−ジメチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、２，２−ジメチルヘキシル、３，３−ジメチルペンチル、３，３−ジメチルヘキシル、４，４−ジメチルヘキシル、２−エチルペンチル、３−エチルペンチル、２−エチルヘキシル、３−エチルヘキシル、４−エチルヘキシル、２−メチル−２−エチルペンチル、２−メチル−３−エチルペンチル、２−メチル−４−エチルペンチル、２−メチル−２−エチルヘキシル、２−メチル−３−エチルヘキシル、２−メチル−４−エチルヘキシル、２，２−ジエチルペンチル、３，３−ジエチルヘキシル、２，２−ジエチルヘキシル、３，３−ジエチルヘキシルなどが挙げられる。本発明の化合物に含まれるアルキル基は、非置換であってもよく、またはアミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルコキシ、アルキルチオ、オキソ、ハロ、アシル、ニトロ、ヒドロキシル、シアノ、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、カルボシクリル、カルボシクリルオキシ、カルボシクリルチオ、カルボシクリルアミノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、ヘテロシクリルアミノ、ヘテロシクリルチオなどの１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されていてもよい。本発明の化合物では、低級アルキルが典型的に好まれる。
【００４５】
本明細書の用法では、「芳香族環」または「アリール」という用語は、炭素および水素原子を含んでなる単環または多環式芳香族環または環遊離基を意味する。適切なアリール基の例としては、フェニル、トリル、アントラセニル、フルオレニル、インデニル、アズレニル、およびナフチル、ならびに５，６，７，８−テトラヒドロナフチルなどのベンゾ融合炭素環式部分が挙げられるが、これに限定されるものではない。アリール基は非置換であってもよく、または例えば本明細書でアルキル基について記載される置換基（制限なしにアルキル（好ましくは低級アルキルまたは１つまたは複数のハロ置換アルキル）、ヒドロキシ、アルコキシ（好ましくは低級アルコキシ）、アルキルチオ、シアノ、ハロ、アミノ、ボロン酸（−Ｂ（ＯＨ）２、およびニトロを含む）などの１つまたは複数の置換基で、任意選択的に置換されてもよい。特定の実施形態では、アリール基は単環であり、環は６個の炭素原子を含んでなる。
【００４６】
「ジアステレオマー」という用語は、２つ以上の不斉中心があり、その分子が互いに鏡像でない立体異性体を指す。
【００４７】
「鏡像異性体」という用語は、互いに重ね合わせることができない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を指す。２つの鏡像異性体の等モル混合物は、「ラセミ混合物」または「ラセミ体」と称される。
【００４８】
「ハロゲン」という用語は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉを指す。
【００４９】
「ハロアルキル」という用語は、例えばフルオロメチルおよびトリフルオロメチルなどのハロゲンで一置換、二置換または多置換された、上で定義されるアルキル基を含むことが意図される。
【００５０】
「ヒドロキシル」という用語は、−ＯＨを意味する。
【００５１】
「ヘテロ原子」という用語は、本明細書の用法では、炭素または水素以外の任意の元素の原子を意味する。好ましいヘテロ原子は、窒素、酸素、イオウ、およびリンである。
【００５２】
「ヘテロアリール」という用語は、単環系の場合は１〜４環ヘテロ原子、二環系の場合は１〜６個のヘテロ原子、三環系の場合は１〜９個のヘテロ原子を有する、芳香族５〜８員環単環系、８〜１２員環二環系、または１１〜１４員環三環系を指し、前記ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、またはＳから選択され、残りの環原子は炭素である。ヘテロアリール基は、例えば本明細書でアリール基について記載される置換基などの１つまたは複数の置換基によって、任意選択的に置換されていてもよい。ヘテロアリール基の例としては、ピリジル、フラニル、ベンゾジオキソリル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソオキサゾリル、キノリニル、ピラゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、トリアゾリル、チアジアゾリル、イソキノリニル、インダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾフリル、インドリジニル、イミダゾピリジル、テトラゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、およびインドリルが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００５３】
「複素環式」という用語は、本明細書の用法では、炭素以外の少なくとも少なくとも１つの原子（例えばＳ、Ｏ、Ｎ）を環構造内に含有する有機化合物を指す。これらの有機化合物中の環構造は、芳香族であってもよく、または特定の実施形態では非芳香族であってもよい。複素環式部分のいくつかの例としては、ピリジン、ピリミジン、ピロリジン、フラン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、およびジオキサンが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００５４】
「異性体」または「立体異性体」という用語は、同一化学構成を有するが、空間内の原子または基の配置が異なる化合物を指す。
【００５５】
「同位体誘導体」という用語は、その中で化合物中の１つまたは複数の原子が、原子の対応する同位体で置換されている、化合物の誘導体を含む。例えば、炭素原子（Ｃ１２）を含有する化合物の同位体誘導体は、その中で化合物の炭素原子がＣ１３同位体で置換されているものである。
【００５６】
「コンピュータによるモデル化」は、以下の１つまたは複数を求めるための計算プログラムの応用を意味する：結合部分に対するリガンドの位置および結合近接性、結合リガンドの占有空間、結合部分とリガンド間の相補的接触面積、結合部分への所与のリガンドの結合の変形エネルギー、および水素結合強度のある程度の推定、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、および／またはリガンドと結合部分間の静電相互作用エネルギー。コンピュータモデル化はまた、モデル系と候補化合物の特徴間の比較を提供し得る。例えばコンピュータによるモデル化実験は、本発明のファーマコフォアモデルを候補化合物と比較して、候補化合物とモデルの適合を評価し得る。
【００５７】
「コンピューターシステム」は、原子の座標データ分析のために使用される、ハードウェア手段、ソフトウェア手段、およびデータ記憶手段を意味する。本発明のコンピュータベースシステムの最小ハードウェア手段は、中央演算処理装置（ＣＰＵ）、入力手段、出力手段、およびデータ記憶手段を含んでなる。望ましくは、構造データを視覚化するモニターが提供される。データ記憶手段は、ＲＡＭ、または本発明のコンピュータ可読媒体にアクセスする手段であってもよい。このようなシステムの例は、Ｕｎｉｘベース、Ｗｉｎｄｏｗｓ  ＮＴまたはＩＢＭ  ＯＳ／２オペレーティングシステムが作動する、Ｓｉｌｉｃｏｎ  Ｇｒａｐｈｉｃｓ  ＩｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄおよびＳｕｎ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓから入手できる、マイクロコンピュータワークステーションである。
【００５８】
「コンピュータ可読媒体」は、媒体が上述のコンピューターシステムで使用するのに適するように、例えばコンピュータによって直接読み取られアクセスされ得る任意の媒体を意味する。媒体としては、フロッピーディスク、ハードディスク記憶媒体、および磁気テープなどの磁気記憶媒体；光ディスクまたはＣＤ−ＲＯＭなどの光学式記憶媒体；ＲＡＭおよびＲＯＭなどの電気記憶媒体；および磁気／光学式記憶媒体などのこれらのカテゴリーのハイブリッドが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００５９】
本開示では、「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ（含んでなる）」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含んでなる）」、「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ（含有する）」、および「ｈａｖｉｎｇ（有する）」などは、米国特許法でそれらに帰するとされる意味を有し得て、「ｉｎｃｌｕｄｅｓ（含む）」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」などを意味し得る；同様に「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ（から本質的になる）」または「ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ（本質的になる）」は、米国特許法で帰するとされる意味を有し、用語には制約がなく、列挙事項を超える存在によって、列挙事項の基礎的または新規特性が無変化でありさえすれば、列挙事項を超える存在を許すが、先行技術実施形態は除外される。
【００６０】
「検出」は、検出される分析物の存在、不在または量を同定することを指す。
【００６１】
「検出可能な標識」は、対象分子に結合した際に、関心のある分子を分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、または化学的手段を介して検出可能にする、組成物を意味する。例えば有用な標識としては、放射性同位体、磁気ビーズ、金属ビーズ、コロイド粒子、蛍光染料、高電子密度試薬、酵素（例えばＥＬＩＳＡで通常使用されるものなど）、ビオチン、ジゴキシゲニン、またはハプテンが挙げられる。
【００６２】
「有効量」とは、さもなければ生殖力のある男性に避妊を提供するのに必要な作用物質の量を意味する。疾患治療のために本発明を実施するのに使用される活性化合物の有効量は、投与様式、対象の年齢、体重、および総体的な健康に応じて変動する。究極的には、主治医または獣医が、適切な量および投薬計画を決定する。このような量は、「有効」量と称される。
【００６３】
「鏡像異性体」という用語は、互いに重ね合わせることができない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を指す。２つの鏡像異性体の等モル混合物は、「ラセミ混合物」または「ラセミ体」と称される。
【００６４】
「ハロゲン」という用語は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉを指す。
【００６５】
「ハロアルキル」という用語は、例えばフルオロメチルおよびトリフルオロメチルなどのハロゲンで一置換、二置換または多置換された、上で定義されるアルキル基を含むことが意図される。
【００６６】
「ヒドロキシル」という用語は、−ＯＨを意味する。
【００６７】
「ヘテロ原子」という用語は、本明細書の用法では、炭素または水素以外の任意の元素の原子を意味する。好ましいヘテロ原子は、窒素、酸素、イオウ、およびリンである。
【００６８】
「ヘテロアリール」という用語は、単環系の場合は１〜４環ヘテロ原子、二環系の場合は１〜６個のヘテロ原子、三環系の場合は１〜９個のヘテロ原子を有する、芳香族５〜８員環単環系、８〜１２員環二環系、または１１〜１４員環三環系を指し、前記ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、またはＳから選択され、残りの環原子は炭素である。ヘテロアリール基は、１つまたは複数の置換基によって任意選択的に置換されてもよい。ヘテロアリール基の例としては、ピリジル、フラニル、ベンゾジオキソリル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イミダゾリルチアゾリル、イソオキサゾリル、キノリニル、ピラゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、トリアゾリル、チアジアゾリル、イソキノリニル、インダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾフリル、インドリジニル、イミダゾピリジル、テトラゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、およびインドリルが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００６９】
「複素環式」という用語は、本明細書の用法では、炭素以外の少なくとも少なくとも１つの原子（例えばＳ、Ｏ、Ｎ）を環構造内に含有する有機化合物を指す。これらの有機化合物中の環構造は、芳香族または非芳香族のどちらかであり得る。複素環式部分のいくつかの例としては、ピリジン、ピリミジン、ピロリジン、フラン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、およびジオキサンが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００７０】
「異性体」または「立体異性体」という用語は、同一化学構成を有するが、空間内の原子または基の配置が異なる化合物を指す。
【００７１】
「同位体誘導体」という用語は、その中で化合物中の１つまたは複数の原子が、原子の対応する同位体で置換されている、化合物の誘導体を含む。例えば、炭素原子（Ｃ１２）を含有する化合物の同位体誘導体は、その中で化合物の炭素原子がＣ１３同位体で置換されているものである。
【００７２】
本発明は、男性対象において妊性を低下させる、高度に特異的な薬剤の開発に有用ないくつかの標的を提供する。これに加えて、本発明の方法は、男性対象にとって安全なその他の避妊療法を同定する容易な手段を提供する。これに加えて、本発明の方法は、大容量スループット、高感度、および低複雑度で、本明細書に記載される疾患に対する影響について、実質的にいくつもの化合物を分析する手段を提供する。
【００７３】
「適合」は、自動または半自動手段によって、作用物質分子の１つまたは複数の原子と、ＢＥＴファミリーメンバーの１つまたは複数の原子または結合部位（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴのブロモドメイン）の間の相互作用を測定し、このような相互作用が安定である度合いを判定することを意味する。適合のための様々なコンピュータベースの方法については、本明細書でさらに記載される。
【００７４】
「断片」は、ポリペプチドまたは核酸分子の部分を意味する。この部分は、好ましくは、参照核酸分子またはポリペプチドの全長の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％を含有する。断片は、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００個のヌクレオチドまたはアミノ酸を含有してもよい。
【００７５】
「ハイブリダイゼーション」は水素結合を意味し、それは相補的核酸塩基間における、ワトソン・クリック、フーグスティーンまたは逆フーグスティーン水素結合であってもよい。例えばアデニンとチミンは、水素結合の形成を通じて対合する、相補的核酸塩基である。
【００７６】
「単離ポリヌクレオチド」は、本発明の核酸分子が由来する生物の天然ゲノム中で遺伝子側面に位置する遺伝子が含まれない核酸（例えばＤＮＡ）を意味する。したがって本用語は、例えば、ベクター中に、自己複製プラスミドまたはウイルス中に、または原核生物または真核生物のゲノムＤＮＡ中に組み込まれた組換えＤＮＡ；またはその他の配列から独立して別個の分子（例えばｃＤＮＡまたはＰＣＲまたは制限エンドヌクレアーゼ消化によって生成されるゲノムまたはｃＤＮＡ断片）として存在する組換えＤＮＡを含む。これに加えて、本用語は、ＤＮＡ分子から転写されるＲＮＡ分子を含み、ならびに追加的ポリペプチド配列をコードするハイブリッド遺伝子の一部である組換えＤＮＡを含む。
【００７７】
「単離ポリペプチド」は、天然でそれに付随する構成要素から分離された、本発明のポリペプチドを意味する。典型的に、ポリペプチドは、それが少なくとも６０重量％であり、それが天然に結合するタンパク質および天然有機分子が不在であれば、単離されている。好ましくは、調製品は、少なくとも７５重量％、より好適には少なくとも９０重量％、最も好適には少なくとも９９重量％が、本発明のポリペプチドである。本発明の単離ポリペプチドは、例えば天然原料からの抽出によって；このようなポリペプチドをコードする組換え核酸の発現によって；またはタンパク質の化学的合成によって、得られてもよい。純度は、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはＨＰＬＣ分析などの任意の適切な方法によって測定し得る。
【００７８】
「マーカー」は、疾患または障害と関連付けられている発現レベルまたは活性が変更されている、任意のタンパク質またはポリヌクレオチドを意味する。
【００７９】
本明細書の用法では、「作用物質を得る」に見られるような「得る」は、作用物質を合成し、購入し、または別の方法で入手することを含む。
【００８０】
「化合物を得る」に見られるような「得る」という用語は、化合物を購入すること、合成することまたは別の方法で入手することを含むことが意図される。
【００８１】
本明細書の用法では、「光学異性体」という用語は、キラル分子としてもまた知られている分子を含み、これらは互いに重ね合わせることができない正確な鏡像である。
【００８２】
「非経口投与」および「非経口的に投与される」という語句は、本明細書の用法では、制限なしに、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、および胸骨内注射および輸液を含む、通常は注射による、経腸投与および局所投与以外の投与様式を意味する。
【００８３】
「薬学的に許容可能」は、連邦または州政府の監督官庁によって認可されまたは認可可能であり、または米国薬局方、またはヒトを含む動物で使用されるその他の一般に妥当と認められた薬局方に収載されていることを指す。
【００８４】
「薬学的に許容可能な賦形剤、キャリアまたはアジュバント」は、例えば、本明細書に記載される化合物のいずれかなどの作用物質と一緒に対象に投与し得て、その薬理学的活性を破壊せず、治療量の作用物質を送達するのに十分な用量で投与した際に、無毒である賦形剤、キャリアまたはアジュバントを指す。
【００８５】
「ポリシクリル」または「多環式基」という用語は、二環式以上の遊離基（例えばシクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリールおよび／またはヘテロシクリル）を指し、その中では２つ以上の炭素が２つの隣接する環で共有され、例えば環は「融合環」である。非隣接原子を通じて結合する環は、「架橋」環と称される。多環式環の各環は、例えば、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アルコキシル、ホスフェート、ホスホナト、ホスフィナト、シアノ、アミノ（アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、およびアルキルアリールアミノを含む）、アシルアミノ（アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイル、およびウレイドを含む）、アミジノ、イミノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシラート、スルフェート、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、トリフルオロメチル、シアノ、アジド、ヘテロシクリル、アルキル、アルキルアリール、または芳香族もしくはヘテロ芳香族部分などの上述の置換基で置換されていてもよい。
【００８６】
「多形体」という用語は、本明細書の用法では、本発明の化合物の固体結晶形態またはその複合体を指す。同じ化合物の異なる多形体は、異なる物理的、化学的および／または分光学的特性を呈示し得る。異なる物理的特性としては、安定性（例えば熱または光に対する）、圧縮率および密度（製剤および製品製造で重要）、および溶出速度（生物学的利用能に影響し得る）が挙げられるが、これに限定されるものではない。安定性の差異は、化学反応性変化（例えば剤形が１つの多形体からなる場合、別の多形体からなる場合よりも迅速に変色するような差異的酸化）または機械的特性変化（例えば動力学的に好まれる多形体が熱力学的により安定した多形体に転換するにつれて、錠剤が貯蔵中に崩壊する）または双方（例えば高湿では、１つの多形体の錠剤は破壊をより被りやすい）から帰結し得る。多形体の異なる物理的特性は、それらの加工に影響を及ぼし得る。
【００８７】
「プロドラッグ」という用語は、生体内で代謝され得る部分がある化合物を含む。一般に、プロドラッグは生体内でエステラーゼによって、またはその他の機構によって活性薬剤に代謝される。プロドラッグの例およびそれらの使用は、当該技術分野で周知である（例えばＢｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照されたい）。プロドラッグは、化合物の最終的な単離および精製中に原位置で調製し得て、または精製化合物の遊離酸形態またはヒドロキシルを個別に適切なエステル化剤と反応させることにより調製し得る。ヒドロキシル基は、カルボン酸による処理を介してエステルに転換し得る。プロドラッグ部分の例としては、置換および非置換の、分枝または非分枝の低級アルキルエステル部分（例えばプロピオン酸エステル）、低級アルケニルエステル、ジ低級アルキルアミノ低級アルキルエステル（例えばジメチルアミノエチルエステル）、アシルアミノ低級アルキルエステルが挙げられる（例えばアセチルオキシメチルエステル）、アシルオキシ低級アルキルエステル（例えばピバロイルオキシメチルエステル）、アリールエステル（フェニルエステル）、アリール低級アルキルエステル（例えばベンジルエステル）、置換（例えばメチル、ハロ、またはメトキシ置換基による）アリールおよびアリール低級アルキルエステル、アミド、低級アルキルアミド、ジ低級アルキルアミド、およびヒドロキシアミドが挙げられる。好ましいプロドラッグ部分は、プロピオン酸エステルおよびアシルエステルである。生体内でその他の機構を通じて活性形態に転換されるプロドラッグもまた、含まれる。
【００８８】
さらに炭素−炭素二重結合全体の立体化学の指標もまた、一般化学分野と対立し、その中で「Ｚ」は「ｃｉｓ」（同側）コンフォメーションと称されることが多いものを指す一方、「Ｅ」は「ｔｒａｎｓ」（反対側）コンフォメーションと称されることが多いものを指す。ｃｉｓ／ｔｒａｎｓおよび／またはＺ／Ｅのどちらの立体配置も、本発明の化合物に包含される。
【００８９】
キラル中心の命名法に関して、「ｄ」および「ｌ」立体配置という用語は、ＩＵＰＡＣ勧告によって定義される通りである。ジアステレオマー、ラセミ体、エピマー、および鏡像異性体という用語の使用については、これらは調製品の立体化学について記述するそれらの通常の文脈で使用される。
【００９０】
「低下させる」とは、少なくとも１０％、２５％、５０％、７５％、または１００％の負の変化を意味する。
【００９１】
「参照」は、標準または対照条件を意味する。
【００９２】
「参照配列」は、配列比較の基礎として使用される定義された配列である。参照配列は、例えば、完全長ｃＤＮＡまたは遺伝子配列の断片、または完全ｃＤＮＡまたは遺伝子配列など、指定された配列のサブセットまたは全体であってもよい。ポリペプチドについては、参照ポリペプチド配列の長さは、一般に少なくとも約１６個のアミノ酸、好ましくは少なくとも約２０個のアミノ酸、より好適には少なくとも約２５個のアミノ酸、そしてなおもより好ましくは約３５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、または約１００個のアミノ酸である。核酸については、参照核酸配列の長さは、一般に少なくとも約５０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約６０ヌクレオチド、より好適には少なくとも約７５ヌクレオチド、そしてなおもより好ましくは約１００ヌクレオチドまたは約３００ヌクレオチドであり、またはそれらの前後またはそれらの間の任意の整数である。
【００９３】
「特異的に結合する」は、本発明のポリペプチドを認識して結合するが、例えば本発明のポリペプチドを天然に含む生物学的サンプルなどのサンプル中で、その他の分子を実質的に認識せず結合しない、化合物または抗体を意味する。
【００９４】
本発明の方法で有用な核酸分子としては、本発明のポリペプチドまたはその断片をコードする、任意の核酸分子が挙げられる。このような核酸分子は、内在性核酸配列と１００％同一でなくてもよいが、典型的にかなりの同一性を呈示する。内在性配列と「かなりの同一性」を有するポリヌクレオチドは、典型的に、二本鎖核酸分子の少なくとも１本の鎖とハイブリダイズできる。本発明の方法で有用な核酸分子としては、本発明のポリペプチドまたはその断片をコードする、任意の核酸分子が挙げられる。このような核酸分子は、内在性核酸配列と１００％同一でなくてもよいが、典型的にかなりの同一性を呈示する。内在性配列と「かなりの同一性」を有するポリヌクレオチドは、典型的に、二本鎖核酸分子の少なくとも１本の鎖とハイブリダイズできる。「ハイブリダイズ」は、様々なストリンジェンシー条件下で、相補的ポリヌクレオチド配列（例えば本明細書に記載される遺伝子）またはその部分間で二本鎖分子を形成する対合を意味する。（例えばＷａｈｌ，Ｇ．Ｍ．ａｎｄ  Ｓ．Ｌ．Ｂｅｒｇｅｒ（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：３９９；Ｋｉｍｍｅｌ，Ａ．Ｒ．（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：５０７を参照されたい）。
【００９５】
例えば、ストリンジェントな塩濃度は、通常、約７５０ｍＭのＮａＣｌおよび７５ｍＭのクエン酸三ナトリウムを下回り、好ましくは約５００ｍＭのＮａＣｌおよび５０ｍＭのクエン酸三ナトリウムを下回り、より好適には約２５０ｍＭのＮａＣｌおよび２５ｍＭのクエン酸三ナトリウムを下回る。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーションが、例えばホルムアミドなどの有機溶剤不在下で得られるのに対し、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、少なくとも約３５％のホルムアミド、より好適には少なくとも約５０％のホルムアミドの存在下で得られる。ストリンジェントな温度条件としては、通常、少なくとも約３０℃、より好適には少なくとも約３７℃、最も好適には少なくとも約４２℃の温度が挙げられる。ハイブリダイゼーション時間、例えばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などの洗剤の濃度、およびキャリアＤＮＡの包含または排除などの追加的なパラメータを変化させることは、当業者に周知である。必要に応じてこれらの様々な条件を組み合わせることで、様々なストリンジェンシーレベルが達成される。好ましい実施形態では、ハイブリダイゼーションは、３０℃で、７５０ｍＭのＮａＣｌ、７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および１％のＳＤＳ中で起きる。より好ましい実施形態では、ハイブリダイゼーションは、３７℃で、５００ｍＭのＮａＣｌ、２５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のＳＤＳ、３５％のホルムアミド、および１００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）中で起きる。最も好ましい実施形態では、ハイブリダイゼーションは、４２℃で、２５０ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のＳＤＳ、５０％のホルムアミド、および２００μｇ／ｍｌのｓｓＤＮＡ中で起きる。これらの条件の有用な変動は、当業者には容易に分かる。
【００９６】
ほとんどの用途では、ハイブリダイゼーションに続く洗浄ステップもまた、ストリンジェンシーが変化する。洗浄ストリンジェンシー条件は、塩濃度と温度によって規定され得る。上と同様、塩濃度の低下または温度の上昇によって、洗浄ストリンジェンシーを増大させ得る。例えば、洗浄ステップのためのストリンジェントな塩濃度は、好ましくは約３０ｍＭのＮａＣｌおよび３ｍＭのクエン酸三ナトリウムを下回り、最も好適には約１５ｍＭのＮａＣｌおよび１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウムを下回る。洗浄ステップのためのストリンジェントな温度条件としては、通常、少なくとも約２５℃、より好適には少なくとも約４２℃、なおもより好ましくは少なくとも約６８℃の温度が挙げられる。好ましい実施形態では、洗浄ステップは、２５℃で、３０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中で起きる。より好ましい実施形態では、洗浄ステップは、４２Ｃで、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中で起きる。より好ましい実施形態では、洗浄ステップは、６８℃で、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中で起きる。これらの条件の追加的な変動は、当業者には容易に分かる。ハイブリダイゼーション技術は当業者に周知であり、例えば、Ｂｅｎｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｓ（Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９６：１８０，１９７７）；Ｇｒｕｎｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｈｏｇｎｅｓｓ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ７２：３９６１，１９７５）；Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１）；Ｂｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｋｉｍｍｅｌ（Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９８７，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；およびＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに記載される。
【００９７】
「実質的に同一」とは、参照アミノ酸配列（例えば本明細書に記載されるアミノ酸配列のいずれ１つか）、または核酸配列（例えば本明細書に記載される核酸配列のいずれか１つ）と、少なくとも８５％の同一性を呈示するポリペプチドまたは核酸分子を意味する。好ましくは、このような配列は、比較のために使用される配列に対して、アミノ酸または核酸レベルで、少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％または１００％同一である。
【００９８】
配列同一性は、典型的に、配列分析ソフトウェアを使用して測定される。（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｅｎｔｅｒ，１７１０  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ａｖｅｎｕｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＧＡＰ、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）。このようなソフトウェアは、様々な置換、欠失、および／またはその他の修飾に相同性の程度を割り当てることで、同一または類似配列をマッチさせる。保存的置換としては、典型的に、グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、スレオニン；リジン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシングループ内の置換が挙げられる。同一性の程度を判定する例示的なアプローチでは、ＢＬＡＳＴプログラムを使用してもよく、ｅ．ｓｕｐ．−３とｅ．ｓｕｐ．−１００の間の確率スコアは、近縁関係にある配列を示唆する。
【００９９】
「低下させる」または「増大させる」は、参照と比較して、それぞれ少なくとも約１０％、２５％、５０％、７５％、または１００％のマイナスまたはプラスの変化を意味する。
【０１００】
「根平均二乗偏差」は、平均からの偏差の平方の算術平均の平方根を意味する。
【０１０１】
「細胞生存を低下させる」は、参照細胞と比較して、細胞生存を阻害し、または細胞死を誘導することを意味する。
【０１０２】
「参照」は、標準または対照条件を意味する。
【０１０３】
「参照配列」は、配列比較の基礎として使用される定義された配列である。参照配列は、例えば、完全長ｃＤＮＡまたは遺伝子配列の断片、または完全ｃＤＮＡまたは遺伝子配列など、指定された配列のサブセットまたは全体であってもよい。ポリペプチドについては、参照ポリペプチド配列の長さは、一般に少なくとも約１６個のアミノ酸、好ましくは少なくとも約２０個のアミノ酸、より好適には少なくとも約２５個のアミノ酸、そしてなおもより好ましくは約３５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、または約１００個のアミノ酸である。核酸については、照核酸配列の長さは、一般に少なくとも約５０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約６０ヌクレオチド、より好適には少なくとも約７５ヌクレオチド、そしてなおもより好ましくは約１００ヌクレオチドまたは約３００ヌクレオチドであり、またはそれらの前後またはそれらの間の任意の整数である。
【０１０４】
「対象」は、ヒト、またはウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ、またはネコなどの非ヒト哺乳類を含むが、これに限定されるものではない、哺乳類を意味する。
【０１０５】
「特異的に結合する」は、本発明のポリペプチドを認識して結合するが、例えば本発明のポリペプチドを天然に含む生物学的サンプルなどのサンプル中で、その他の分子を実質的に認識せず結合しない、化合物または抗体を意味する。
【０１０６】
「スルフヒドリル」または「チオール」という用語は、−ＳＨを意味する。
【０１０７】
本明細書の用法では、「互変異性体」という用語は、互変異性化によって容易に相互転換する有機分子の異性体を指し、その中では、水素互変異性体原子またはプロトンが反応中に移動して、場合によっては、単結合と隣接する二重結合との交替が伴う。
【０１０８】
本明細書の用法では「ｔｒｅａｔ（治療する）」、「ｔｒｅａｔｉｎｇ（治療する）」、「ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（治療）」などの用語は、障害および／またはそれに伴う症状を低下させまたは改善することを指す。「改善する」は、疾患の発症または進行を低下させ、抑制し、減衰させ、縮小させ、停止させ、または安定化することを意味する。除外はされないもの、障害または病状を治療することは、障害とそれに伴う症状または病状を完全に排除することを要さないことが理解されるであろう。
【０１０９】
本明細書の用法では、「ｐｒｅｖｅｎｔ（予防する）」、「ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ（予防する）」、「ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ（予防）」「ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（予防的治療）」などの用語は、障害または病状を有さないが、リスクがあるまたは発症しやすい対象において、障害または病状が発症する確率を低下させることを指す。
【０１１０】
「有効量」は、治療対象に避妊効果をもたらす化合物の量を指す。効果は、客観的（すなわちある種の試験またはマーカーで測定可能）または主観的（すなわち対象に効果の徴候があり、または対照が効果を感じる）であってもよい。本明細書に記載される化合物の有効量は、約１ｍｇ／Ｋｇ〜約５０００ｍｇ／Ｋｇ体重の範囲であってもよい。有効量はまた、投与経路、ならびにその他の作用物質の同時使用可能性に応じて変動する。本発明の実施形態では、作用物質または組成物の「有効量」は、避妊をもたらすのに十分な量である。
【０１１１】
本明細書で提供される範囲は、範囲内の全ての値で省略表現であることが理解される。例えば、１〜５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または部分的範囲を含むものと理解される。
【０１１２】
特に断りのない限り、または文脈から明らかな場合を除き、本明細書の用法では、「または」という用語は包括的であると理解される。特に断りのない限り、または文脈から明らかな場合を除き、本明細書の用法では、冠詞「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」という用語は、単数または複数であると理解される。
【０１１３】
「含む」という用語は、本明細書で、「含むが、これに限定されるものではない）」という語句を意味し、それと同義的に使用される。
【０１１４】
特に断りのない限り、または文脈から明らかな場合を除き、本明細書の用法では、「約」という用語は、例えば平均の２標準偏差以内など、当該技術分野の通常の許容差の範囲内と理解される。約は、記載値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、または０．０１％以内と理解され得る。文脈から明らかである場合を除き、本明細書で提供される全ての数値は、ａｂｏｕｔ（約）という用語によって修飾される。
【０１１５】
本明細書の任意の変数の定義における化学基一覧の列挙は、任意の単一群または列挙された群の組み合わせとしての変数の定義を含む。本明細書の変数または態様に関する実施形態の列挙は、任意の単一実施形態としてのその実施形態、または任意のその他の実施形態またはその部分と組み合わさったその実施形態を含む。
【０１１６】
本明細書で提供されるいずれかの化合物、組成物または方法は、本明細書で提供されるその他の化合物、組成物、および方法のいずれかの１つまたは複数と組み合わせ得る。
【図面の簡単な説明】
【０１１７】
【図１】ヒトＢＲＤＴ（１）と、ヒトＢＲＤ４（１）およびマウスＢＲＤＴ（１）との配列比較である。タンパク質配列アラインメントは、相同的ドメインとオルソロガスドメイン間の高度な配列同一性を明らかにする。同一（赤）および類似（黄色）残基が、強調表示される。残基配列上に描写されるのは、主要な螺旋要素の略図である。（＋）−ＪＱ１とＢＲＤＴ（１）の間の接触は、黒星で描写される。保存されたアスパラギン仲介アセチルリジン認識は、青星で描写される。
【図２】図２Ａ〜２Ｃｈａ，（＋）−ＪＱ１によるＢＲＤＴ阻害を示す。図２Ａは、活性（＋）−ＪＱ１鏡像異性体の構造である。図２Ｂは、近接検出アッセイを使用した、（＋）−ＪＱ１（ＩＣ５０：１１ｎＭ）による、合成ビオチン化Ｈ４Ｋａｃ４に対するＢＲＤＴ結合の競合的阻害を示すプロットである。図２Ｃは、５００ｎＭの示される化合物によるアッセイの結果を示す、グラフを含む。誤差棒は、標準偏差を示す。
【図３−１】ヒトＢＲＤＴとヒトＢＲＤ４のＭＡＦＦＴ配列比較である。
【図３−２】ヒトＢＲＤＴとヒトＢＲＤ４のＭＡＦＦＴ配列比較である。
【図３−３】ヒトＢＲＤＴとヒトＢＲＤ４のＭＡＦＦＴ配列比較である。
【図３−４】ヒトＢＲＤＴとヒトＢＲＤ４のＭＡＦＦＴ配列比較である。
【図４−１】ヒトＢＲＤＴとマウスＢＲＤＴのＭＡＦＦＴ配列比較である。
【図４−２】ヒトＢＲＤＴとマウスＢＲＤＴのＭＡＦＦＴ配列比較である。
【図４−３】ヒトＢＲＤＴとマウスＢＲＤＴのＭＡＦＦＴ配列比較である。
【図５−１】図５Ａ〜５Ｈは、ＪＱ１またはビヒクル対照で処理したマウスからの精巣の肉眼的および組織学的分析を示す。図５Ａは、対照またはＪＱ１を注射した９週齢マウスからの精巣の肉眼分析を提供する、画像を含む。図５Ｂは、３〜６週、６〜９週、または６〜１２週齢にわたり、対照またはＪＱ１で処理したマウスからの精巣重量（ｍｇ）のグラフ表示を含む。データは平均±標準誤差（ＳＥＭ）を表し、両側ｔ試験から得られたＰ値によって注釈される（＊はＰ＜０．０５での有意を示す）。
【図５−２】図５Ｃ〜５Ｆは、３〜６週齢にかけて対照（図５Ｃ）またはＪＱ１（図５Ｄ）で処理した６週齢マウス、６〜１２週齢にかけて対照（図５Ｅ）または（図５Ｆ）ＪＱ１で処理した１２週齢マウスの精巣の組織学を示す、組織学的染色を含む。ライディッヒ細胞の管間島（ｉｎｔｅｒｔｕｂｕｌａｒ  ｉｓｌａｎｄｓ）は、図５Ｃ〜５Ｆ中において矢印で描写される。セルトリ細胞空胞化（Ｖ）が、図５Ｆ中のいくつかの精細管中で強調表示される。
【図５−３】図５Ｃ〜５Ｆは、３〜６週齢にかけて対照（図５Ｃ）またはＪＱ１（図５Ｄ）で処理した６週齢マウス、６〜１２週齢にかけて対照（図５Ｅ）または（図５Ｆ）ＪＱ１で処理した１２週齢マウスの精巣の組織学を示す、組織学的染色を含む。ライディッヒ細胞の管間島（ｉｎｔｅｒｔｕｂｕｌａｒ  ｉｓｌａｎｄｓ）は、図５Ｃ〜５Ｆ中において矢印で描写される。セルトリ細胞空胞化（Ｖ）が、図５Ｆ中のいくつかの精細管中で強調表示される。
【図５−４】図５Ｇおよび５Ｈは、６〜１２週齢にかけて対照（図５Ｇ）または（図５Ｈ）ＪＱ１で処理したオスからの精巣上体の組織学を示す、組織学的染色を含む。成熟精子がぎっしりと詰まった対照精巣上体管腔（図５Ｇ）と比較して、ＪＱ１処理マウス（図５Ｈ）の精巣上体管腔内では、より少ない精子と複数の大型有核細胞（黒矢印）が観察される。図５Ｃ〜５Ｈは、同倍率で撮影された。
【図６】図６Ａおよび６Ｂは、精巣上体精子数と受精可能性を示す。図６Ａは、６〜９週齢にかけてＪＱ１または対照で処理されたオスの精巣上体全体から、または６〜１２週齢にかけて処理されたオスの精巣上体尾部（ｃａｕｄａ）から得られた、精子数のグラフ表示である。図６Ｂは、５週間にわたり対照またはＪＱ１で処理されたオスと交尾した、過剰排卵メスから得られた卵母細胞の生体外発生可能性を示す、グラフを含む。全てのデータは平均±ＳＥＭを表し、両側ｔ試験から得られたＰ値によって注釈される（＊はＰ＜０．０５での有意を示す）。
【図７−１】図７Ａ〜７Ｃは、ＪＱ１または対照で処理されたマウスの精巣の分子分析を示す。図７Ａは、６〜１２週齢にかけてＪＱ１または対照溶液で処理された、オスの定量的ＲＴ−ＰＣＲ結果を示す、グラフを含む。試験されたマウス遺伝子は、Ｐｌｚｆ（前骨髄球性白血病ジンクフィンガーまたはＺｂｔｂ１６）、Ｓｔｒａ８（レチノイン酸遺伝子８によって刺激された）、Ｂｒｄｔ（ブロモドメイン、精巣特異的）、Ｃｃｎａ１（サイクリンＡ１）、Ｈｉｓｔ１ｈ１ｔ（ヒストンクラスター１、ヒストン１、精巣特異的）、Ｐａｐｏｌｂ（ポリ（Ａ）ポリメラーゼβまたはＴｐａｐ）、Ｋｌｆ１７（クルッペル様因子１７またはＺｆｐ３９３）、およびＰｒｍ１（プロタミン１）であった。データは平均±ＳＥＭを表し、両側ｔ試験から得られたＰ値によって注釈される（＊はＰ＜０．０５での有意を示す；Ｐｒｍ１のＰ値は０．０６である）。
【図７−２】図７Ｂおよび７Ｃは、対照処理（図７Ｂ）およびＪＱ１処理（図７Ｃ）精巣中のＴＮＰ２の免疫組織化学染色画像を含む。
【図８−１】図８Ａ〜８Ｃは、精子数および精巣質量に対するＪＱ１の効果を示す。反復研究において、Ｃ５７Ｂ６マウスをＪＱ１（５０ｍｐｋ×８週間）で処理した。図８Ａは、試験マウス中の精子数を示すグラフを含む。図８Ｂは、試験マウス中の精巣重量を示すグラフを含む。
【図８−２】図８Ｃは、試験マウスからの精子の位相差画像を含む。
【図９−１】図９Ａ〜９Ｃは、ＪＱ１の除去に際して、効果が逆転することを示す。図９Ａは、ＪＱ１処理終結の２ヶ月および４ヶ月後における試験マウス中の精子運動性レベルを示す、グラフを含む。図９Ｂは、ＪＱ１処理終結の２ヶ月および４ヶ月後における試験マウス中の精巣重量を示す、グラフを含む。
【図９−２】図９Ｃは、ＪＱ１処理終結の２ヶ月および４ヶ月後における試験マウス中の精子数を示す、グラフを含む。
【発明を実施するための形態】
【０１１８】
本発明は、エピジェネティックなリーダータンパク質のブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）サブファミリーの小分子阻害剤（ＪＱ１）が、精子完成中のクロマチン再構築に必須であるという発見に少なくとも部分的に基づく。生化学的分析は、ＪＱ１によるＢＲＤＴアセチルリジン結合ポケットの占有が、アセチル化ヒストンＨ４の認識を妨げることを立証する。本発明は、またＪＱ１によるマウスの処理が、精子数および運動性、ならびに精巣サイズを低下させるという発見に基づく。ＪＱ１処理オスは正常に交尾するが、精母細胞段階において明白なＪＱ１の阻害効果は、受精卵母細胞の劇的な低下と、オスにおける可逆的避妊効果を引き起こす。したがって、本発明は、血液：精巣境界を越えて、精子形成中にブロモドメイン活性を阻害し得る、新規タイプの男性避妊薬を対象とする。
【０１１９】
ブロモドメイン含有タンパク質
遺伝子制御は、基本的に、可逆的な高分子の非共有結合アセンブリーによって支配される。ＲＮＡポリメラーゼへの情報伝達は、クロマチンの翻訳後修飾状態を解釈できるアセンブリー要素によって空間的に制御される、より高次のタンパク質複合体を必要とする。エピジェネティックなリーダーは、ヒストンタンパク質またはＤＮＡの共有結合修飾を認識する、１つまたは複数の進化的に保存されたエフェクターモジュールをそれぞれが保有する、構造的に多様なタンパク質である。ヒストン尾部上のリジン残基（Ｋａｃ）のε−Ｎ−アセチル化は、オープンクロマチン構造および転写活性化と関連付けられている３。アセチルリジンのコンテクスト特異的分子認識は、主にブロモドメインによって媒介される。
【０１２０】
ブロモドメイン含有タンパク質は、転写因子複合体（ＴＡＦ１、ＰＣＡＦ、Ｇｃｎ５、およびＣＢＰ）およびエピジェネティックメモリー決定因子の構成要素として、非常に高い生物学的関心が持たれている４。合計で５７個の多様なブロモドメインを含有する、４１個のヒトタンパク質がある。大きな配列多様性にも関わらず、全てのブロモドメインは、基質特異性を決定する多様なループ領域（ＺＡおよびＢＣループ）によって結合する、４本のαらせん（αＺ、αＡ、αＢ、αＣ）の左巻きの束を含んでなる、保存された折り畳みを共有する。ペプチド性基質との共結晶構造は、アセチルリジンが中心疎水性窩によって認識され、ほとんどのブロモドメイン中に存在するアスパラギン残基との水素結合によってアンカーされることを示した５。ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）ファミリー（ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴ）は、高レベルの配列保存を呈示する２つのＮ末端ブロモドメインを含んでなる共通ドメイン構造と、より多岐にわたるＣ−末端動員ドメインとを共有する６。
【０１２１】
本発明は、ヒトブロモドメインタンパク質を阻害するのに有用な組成物および方法を特徴とする。
【０１２２】
発明の化合物
本発明は、ＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤＴ、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４）の第１のブロモドメインのａｐｏ結晶構造の結合ポケット中に結合する化合物（例えば、ＪＱ１、および本明細書で記述される式の化合物）を提供する。理論による拘束は望まないが、これらの化合物は、特に男性の妊性を低下させるのに効果的である。１つのアプローチでは、男性の妊性を低下させるのに有用な化合物は、ブロモドメイン構造結合ポケットに結合することが予測される化合物を同定する、分子ドッキングプログラムを使用して選択される。特定の実施形態では、本発明の化合物は、例えばブロモドメインａｐｏ結合ポケット中の結合部位に結合することにより、ＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤＴ）の生物学的活性を少なくとも１０％、２５％、５０％、７５％、または１００％妨げ、阻害し、または妨害し、または低下させて、および／またはこのようなタンパク質の細胞内局在化を妨害し得る。
【０１２３】
特定の実施形態では、本発明の化合物は、約１０００ダルトン未満、８００未満、６００未満、５００未満、４００未満、または約３００ダルトン未満の分子量を有する小分子である。本発明の化合物の例としては、ＢＥＴファミリーメンバーの第１のブロモドメイン（例えばＢＲＤ４（以下、ＢＲＤ４（１）と称される；ＰＤＢ  ＩＤ  ２ＯＳＳ）のａｐｏ結晶構造の結合ポケットに結合する、ＪＱ１およびその他の化合物が挙げられる。ＪＱ１は、新規チエノ−トリアゾロ−１，４−ジアゼピンである。本発明は、このような化合物の薬学的に許容可能な塩をさらに提供する。
【０１２４】
一態様では、本化合物は、式Ｉ、
【化４】
0006022442.tif 000005
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に縮合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０〜３であり、ＬはＨ、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールである）であり；
Ｒ２はＨ、Ｄ（重水素）、ハロゲン、または任意選択的に置換されるアルキルであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６
からなる群から選択され；
各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ４およびＲ６はそれにそれらが付着する炭素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただし
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒがフェニルまたは置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは１であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であれば、次にＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒にならずモルホリノ環を形成せず；
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは１であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であり、Ｒ３およびＲ４の一方がＨであれば、次にＲ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルでなく；
（ｃ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは１であり、Ｌは−ＣＯＯ−Ｒ３である）であれば、次にＲ３はメチルでもエチルでもない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０１２５】
特定の実施形態では、Ｒはそれぞれが任意選択的に置換される、アリールまたはヘテロアリールである。
【０１２６】
特定の実施形態では、ＬはＨ、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ３または任意選択的に置換されるアリールである。特定の実施形態では、各Ｒ３は独立して、Ｈ；Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される０、１、２、または３個のヘテロ原子を含有する−Ｃ１〜Ｃ８アルキル；またはＮＨ２；Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６からなる群から選択される。
【０１２７】
特定の実施形態では、Ｒ２はＨ、Ｄ、ハロゲンまたはメチルである。
【０１２８】
特定の実施形態では、ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換されるアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、またはアルコキシである。
【０１２９】
特定の実施形態では、ＲＢはメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、またはＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０１３０】
特定の実施形態では、環Ａは５または６員環アリールまたはヘテロアリールである。特定の実施形態では、環Ａはチオフラニル、フェニル、ナフチル、ビフェニル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ピリジル、フラニル、インドリル、ピリミジニル、ピリジジニル、ピラジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チエニル、チアゾリル、トリアゾリル、イソオキサゾリル、キノリニル、ピロリル、ピラゾリル、または５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリニルである。
【０１３１】
特定の実施形態では、環Ａはフェニルまたはチエニルである。
【０１３２】
特定の実施形態では、ｍは１または２であり、ＲＡの少なくとも１つの存在はメチルである。
【０１３３】
特定の実施形態では、各ＲＡは独立して、Ｈ、任意選択的に置換されるアルキルであり、または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒にアリールを形成し得る。
【０１３４】
別の態様では、本化合物は、式ＩＩ、
【化５】
0006022442.tif 000006
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に縮合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
Ｒ’１はＨ、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニルからなる群から選択され；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただしＲ’１が−ＣＯＯ−Ｒ３であり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、ＲＢがメチルであれば、次にＲ３はメチルでもエチルでもない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０１３５】
特定の実施形態では、Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アリールまたはヘテロアリールである。特定の実施形態では、Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、フェニルまたはピリジルである。特定の実施形態では、Ｒは、ｐ−Ｃｌ−フェニル、ｏ−Ｃｌ−フェニル、ｍ−Ｃｌ−フェニル、ｐ−Ｆ−フェニル、ｏ−Ｆ−フェニル、ｍ−Ｆ−フェニルまたはピリジニルである。
【０１３６】
特定の実施形態では、Ｒ’１は−ＣＯＯ−Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；Ｒ３はＯ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子を含有して任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ１〜Ｃ８アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ’１は−ＣＯＯ−Ｒ３であり、Ｒ３はメチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔ−ブチルであり；またはＲ’１は、Ｈまたは任意選択的に置換されるフェニルである。
【０１３７】
特定の実施形態では、ＲＢはメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０１３８】
特定の実施形態では、ＲＢはメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、またはＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０１３９】
特定の実施形態では、各ＲＡは独立して、任意選択的に置換されるアルキルであり、または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールを形成し得る。
【０１４０】
特定の実施形態では、各ＲＡはメチルである。
【０１４１】
別の態様では、本化合物は、式ＩＩＩ、
【化６】
0006022442.tif 000007
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に縮合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６
からなる群から選択され；
各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ４およびＲ６はそれにそれらが付着する炭素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただし
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒがフェニルまたは置換フェニルであり、ＲＢがメチルであれば、次にＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒にならずモルホリノ環を形成せず；
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ３およびＲ４の一方がＨであれば、次にＲ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルでない、そして
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０１４２】
特定の実施形態では、Ｒはそれぞれが任意選択的に置換される、アリールまたはヘテロアリールである。特定の実施形態では、Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、フェニルまたはピリジルである。
【０１４３】
特定の実施形態では、Ｒはｐ−Ｃｌ−フェニル、ｏ−Ｃｌ−フェニル、ｍ−Ｃｌ−フェニル、ｐ−Ｆ−フェニル、ｏ−Ｆ−フェニル、ｍ−Ｆ−フェニルまたはピリジニルである。特定の実施形態では、Ｒ３はＨ、ＮＨ２、またはＮ＝ＣＲ４Ｒ６である。
【０１４４】
特定の実施形態では、各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールである。
【０１４５】
特定の実施形態では、Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールである。
【０１４６】
別の態様では、本化合物は、式ＩＶ、
【化７】
0006022442.tif 000008
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に縮合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０〜３であり、ＬはＨ、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールである）であり；
Ｒ２はＨ、Ｄ、ハロゲン、または任意選択的に置換されるアルキルであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６
からなる群から選択され；
各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ４およびＲ６はそれにそれらが付着する炭素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただし
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であれば、次にＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒にならずモルホリノ環を形成せず；
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であれば、Ｒ３およびＲ４の一方はＨであり、次にＲ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルでなく；
（ｃ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０であり、Ｌは−ＣＯＯ−Ｒ３である）であれば、次にＲ３はメチルでもエチルでもない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０１４７】
特定の実施形態では、Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０〜３であり、Ｌは−ＣＯＯ−Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールである）であり；Ｒ３はＯ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子を含有して任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ１〜Ｃ８アルキルである。特定の実施形態では、ｎは１または２であり、Ｌはアルキルまたは−ＣＯＯ−Ｒ３、およびＲ３はメチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔ−ブチルであり；またはｎは１または２であり、ＬはＨまたは任意選択的に置換されるフェニルである。
【０１４８】
特定の実施形態では、Ｒ２はＨまたはメチルである。
【０１４９】
特定の実施形態では、ＲＢはメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０１５０】
特定の実施形態では、環Ａはフェニル、ナフチル、ビフェニル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ピリジル、フラニル、インドリル、ピリミジニル、ピリジジニル、ピラジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チエニル、チアゾリル、トリアゾリル、イソオキサゾリル、キノリニル、ピロリル、ピラゾリル、または５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリニルである。
【０１５１】
特定の実施形態では、各ＲＡは独立して、任意選択的に置換されるアルキルであり、または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒にアリールを形成し得る。
【０１５２】
本発明の方法はまた、式Ｖ〜ＸＸＩＩの化合物、および本明細書に記載されるいずれかの化合物に関する。
【０１５３】
別の態様では、化合物は、式、
【化８】
0006022442.tif 000009
によって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１５４】
特定の実施形態では、化合物は（＋）−ＪＱ１、
【化９】
0006022442.tif 000010
またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１５５】
別の態様では、化合物は、式、
【化１０】
0006022442.tif 000011
または
【化１１】
0006022442.tif 000012
によって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１５６】
別の態様では、化合物は、式、
【化１２】
0006022442.tif 000013
または
【化１３】
0006022442.tif 000014
によって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１５７】
別の態様では、化合物は、式、
【化１４】
0006022442.tif 000015
によって表される化合物のいずれか１つ、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１５８】
別の態様では、化合物は、式、
【化１５】
0006022442.tif 000016
によって表される化合物のいずれか１つ、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１５９】
別の態様では、本化合物は、
【化１６】
0006022442.tif 000017
【化１７】
0006022442.tif 000018
【化１８】
0006022442.tif 000019
【化１９】
0006022442.tif 000020
【化２０】
0006022442.tif 000021
【化２１】
0006022442.tif 000022
【化２２】
0006022442.tif 000023
の構造のいずれか１つによって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０１６０】
特定の実施形態では、本発明の化合物は、
【化２３】
0006022442.tif 000024
【化２４】
0006022442.tif 000025
【化２５】
0006022442.tif 000026
【化２６】
0006022442.tif 000027
【化２７】
0006022442.tif 000028
の構造の１つによって表され、またはその塩、溶媒和化合物または水和物であり得る。
【０１６１】
一実施形態では、化合物は、構造
【化２８】
0006022442.tif 000029
によって表され、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１６２】
別の実施形態では、化合物は、構造
【化２９】
0006022442.tif 000030
によって表され、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１６３】
別の実施形態では、化合物は、構造
【化３０】
0006022442.tif 000031
によって表され、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１６４】
特定の実施形態では、本発明の化合物は、本明細書に示される任意の化合物の逆のキラリティーを有し得る。
【０１６５】
特定の実施形態では、本化合物は、式（Ｖ）、（ＶＩ）、または（ＶＩＩ）によって表される化合物、
【化３１】
0006022442.tif 000032
（式中、Ｒ、Ｒ１、およびＲ２およびＲＢは式（Ｉ）中と同じ意味を有し；ＹはＯ、Ｎ、Ｓ、またはＣＲ５であり、Ｒ５は式（Ｉ）中と同じ意味を有し；ｎは０または１であり；式（ＶＩＩ）中の破線の円は芳香族または非芳香族環を示す）、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０１６６】
式Ｉ〜ＩＶおよびＶＩ（または本明細書の任意の式）のいずれかの特定の実施形態では、Ｒ６は、下の表Ａで示されるアルデヒドの非カルボニル部分に相当する（すなわち式Ｒ６ＣＨＯのアルデヒドでは、Ｒ６はアルデヒドの非カルボニル部分である）。特定の実施形態では、Ｒ４およびＲ６は、組み合わさって、表Ａで示されるケトンの非カルボニル部分に相当する（すなわち式Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｒ４のケトンでは、Ｒ４およびＲ６はケトンの非カルボニル部分である）。
【０１６７】
【表１】
0006022442.tif 000033
【０１６８】
【表２】
0006022442.tif 000034
【０１６９】
【表３】
0006022442.tif 000035
【０１７０】
【表４】
0006022442.tif 000036
【０１７１】
一実施形態では、本化合物は、式、
【化３２】
0006022442.tif 000037
によって表され、またはその塩、溶媒和化合物、または水和物である。
【０１７２】
特定の実施形態では、化合物は（ラセミ）ＪＱ１であり；特定の実施形態では、化合物は（＋）−ＪＱ１である。特定の実施形態では、化合物は、
【化３３】
0006022442.tif 000038
および
【化３４】
0006022442.tif 000039
からなる群から選択される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０１７３】
化合物追の加的な例としては、式、
【化３５】
0006022442.tif 000040
【化３６】
0006022442.tif 000041
のいずれかに記載の化合物が挙げられる。
【０１７４】
式ＩＸ〜ＸＸＩＩ中では、ＲおよびＲ’は、例えば、それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニルであり得る。式ＸＩＶ中では、Ｘは、本明細書に記載されるようなアリール基のための任意の置換基であり得る。
【０１７５】
本発明の化合物は、そのいくつかが当該技術分野で公知の多様な方法によって調製し得る。例えば、下で提供される化学物質の例は、化合物ＪＱ１（ラセミ体として）および鏡像異性体（＋）−ＪＱ１および（−）−ＪＱ１（スキームＳ１およびＳ２を参照されたい）を調製するための合成スキームを提供する。式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）の多様な化合物は、適切な出発原料の置換により、類似法によって調製し得る。
【０１７６】
例えば、ＪＱ１から出発して、下のスキーム１に示されるようにして、類似アミンを調製し得る。
【化３７】
0006022442.tif 000042
スキーム１
【０１７７】
スキーム１に示されるように、ＪＱ１のｔ−ブチルエステルの加水分解は、カルボン酸を与え、それはジフェニルリン酸アジド（ＤＰＰＡ）で処理されて、クルチウス転位条件にさらされてＣｂｚ保護アミンを提供し、次にそれは脱保護されてアミンをもたらす。例えば還元的アミノ化による引き続くアミン基の合成は第二級アミンをもたらし、それをらにアルキル化して三級アミンを提供し得る。
【化３８】
0006022442.tif 000043
スキーム２
【０１７８】
スキーム２は、例えば、（例えば式Ｉの環Ａを異なる芳香族環で置換することで）その中で融合環コアが修飾される、式Ｉの本発明の化合物のさらなる実施例の合成を示す。（例えば後述のスキームＳ１中のアミノジアリールケトンＳ２に代えて）適切な官能性を有するアミノジアリールケトンを使用することで、多様な融合環コアおよび／または付属アリール基（式Ｉの基Ｒに対応する）を有する新しい化合物を提供する。このようなアミノジアリールケトンは市販され、またはそのいくつかが当該技術分野で公知の多様な方法によって調製され得る。
【０１７９】
スキーム３は、さらなる本発明の化合物を調製するための追加的な例示的合成スキームを提供する。
【化３９】
0006022442.tif 000044
スキーム３
【０１８０】
スキーム３で示されるように、融合二環式前駆体（この化合物の合成については後述のスキームＳ１を参照されたい）を部分Ｒ（ＤＡＭ＝ジメチルアミノメチレン保護基）で官能化し、次にヒドラジドとの反応によって合成して、三環式融合コアを形成する。置換基Ｒｘは、適切なヒドラジドの選択によって変化させ得る。
【０１８１】
（本明細書に記載される方法によって調製し得る）本発明の化合物の追加的な実施例としては、以下が挙げられる。
【０１８２】
アミド
アミドは、例えば対応するカルボン酸またはエステルの調製と、それに続く標準条件を使用した適切なアミンでのアミド化によって、調製し得る。特定の実施形態では、アミドは、末端末端窒素含有環（例えばピリジル、ピペリジル、ピペラジニル、イミダゾリル（Ｎ−メチル−イミダゾリルを含む）、モルホリニルなどとの二炭素「リンカー」を提供する。例示的なアミド構造としては、
【化４０】
0006022442.tif 000045
が挙げられる。
【０１８３】
アミド部分と末端窒素含有環の間の二炭素リンカーの使用が好ましい。
【０１８４】
「逆方向アミド」
【化４１】
0006022442.tif 000046
【０１８５】
第二級アミン
【化４２】
0006022442.tif 000047
【０１８６】
ボロン酸
【化４３】
0006022442.tif 000048
【０１８７】
特定の実施形態では、少なくとも１つのキラル中心を有する化合物が、ラセミ形態で存在する。特定の実施形態では、少なくとも１つのキラル中心を有する化合物が、鏡像異性的に濃縮され、すなわち少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、９９％または１００％の鏡像体過剰率（ｅ．ｅ．）を有する。特定の実施形態では、化合物は、本明細書に記載される化合物（＋）−ＪＱ１（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾール［４，３−ａ］［１，４］ジアゼパム−６−イル）アセテート）と同一の絶対配置を有する。
【０１８８】
本明細書で開示される式のいずれかの特定の実施形態では、化合物は以下の構造によって表されない。
【化４４】
0006022442.tif 000049
式中、
Ｒ’１はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ’２は水素、ハロゲン、またはハロゲン原子またはヒドロキシル基で任意選択的に置換されるＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ’３はハロゲン原子、任意選択的にハロゲン原子によって置換されるフェニル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、またはシアノ；−ＮＲ５−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６（式中、Ｒ５は水素原子またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、ｍは０〜４の整数であり、Ｒ６は任意選択的にハロゲン原子によって置換されるフェニルまたはピリジルである）；または−ＮＲ７−ＣＯ−−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ８（式中、Ｒ７は水素原子またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、ｎは０〜２の整数であり、Ｒ８は任意選択的にハロゲン原子によって置換されるフェニルまたはピリジルである）であり；
Ｒ’４は−（ＣＨ２）ａ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ９（式中、ａは１〜４の整数であり、Ｒ９は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルである）；Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル；Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ；または任意選択的にＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、アミノまたはヒドロキシル基または−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯＯＲ１０（式中、ｂは１〜４の整数であり、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ４アルキルである）によって置換されるフェニルまたはピリジルである。
【０１８９】
「薬学的に許容可能な塩」という用語はまた、本明細書で開示される化合物（例えばＪＱ１、式Ｉ〜ＸＸＩＩの化合物）または本明細書で記述される任意のその他の化合物から調製されて、カルボン酸官能基などの酸性官能基、および薬学的に許容可能な無機または有機塩基を有する塩を指す。適切な塩基としては、ナトリウム、カリウム、およびリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムおよび亜鉛などのその他の金属の水酸化物；アンモニア、および非置換またはヒドロキシ置換モノ−、ジ−、またはトリアルキルアミンなどの有機アミン；ジシクロヘキシルアミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ−メチル，Ｎ−エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ−、ビス−、またはトリス−（２−ヒドロキシエチル）−アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、またはトリス−（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどのモノ−、ビス−、またはトリス−（２−ヒドロキシ−低級アルキルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−アミンなどのＮ、Ｎ，−ジ−低級アルキル−Ｎ−（ヒドロキシ低級アルキル）−アミン、またはトリ−（２−ヒドロキシエチル）アミン）；Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン；およびアルギニン、リジンなどのアミノ酸が挙げられるが、これに限定されるものではない。「薬学的に許容できる塩」という用語は、本明細書で開示される化合物または本明細書で記述される任意のその他の化合物から調製されて、アミノ官能基などの塩基性官能基、および薬学的に許容可能な無機または有機酸を有する塩も指す。適切な酸としては、硫酸水素、クエン酸、酢酸、シュウ酸、塩酸、臭化水素、ヨウ化水素、硝酸、リン酸、イソニコチン酸、乳酸、サリチル酸、酒石酸、アスコルビン酸、コハク酸、マレイン酸、ベシル酸、フマル酸、グルコン酸、グルカロン酸、糖酸、ギ酸、安息香酸、グルタミン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびｐ−トルエンスルホン酸が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１９０】
発明の方法
本発明はまた、本明細書に記載される新規化合物、ならびにその他のＢＲＤＴ阻害剤の男性避妊薬としての使用にも関する。このような化合物は当該技術分野で公知であり、例えば、国際公開第２００９０８４６９３号パンフレットまたは対応する米国特許出願公開第２０１０２８６１２７号明細書に記載される。
【０１９１】
したがって、一態様では、本発明は、ＢＲＤＴ阻害剤の有効量を男性対象に投与するステップを伴う、精子排出を低下させまたは抑制する方法を提供する。実施形態では、阻害剤は、本明細書に記述される式を有する化合物、その誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩またはプロドラッグである。
【０１９２】
実施形態では、方法は、精子形成を抑制するのに十分な量で、阻害剤を投与するステップを伴う。
【０１９３】
実施形態では、方法は、無精子症または精子減少症を誘導するのに十分な量で、阻害剤を投与するステップを伴う。
【０１９４】
実施形態では、方法は、精子濃度を３００万個／ｍＬ、２００万個／ｍＬ、１００万個／ｍＬ、５０万個／ｍＬ、２５万個／ｍＬ、または１０万個／ｍＬ以下に低下させるのに十分な量で、阻害剤を投与するステップを伴う。関連実施形態では、方法は、精子濃度を１０万個／ｍＬ以下に低下させるのに十分な量で、阻害剤を投与するステップを伴う。
【０１９５】
実施形態では、阻害剤は、薬学的に許容できるキャリア、賦形剤、または希釈剤と組み合わせて投与される。
【０１９６】
実施形態では、阻害剤は、経口的に、経皮的に、または注射によって、対象に投与される。関連実施形態では、阻害剤は、錠剤またはカプセルの形態で投与される。関連実施形態では、阻害剤は、非経口注射、筋肉内注射、静脈内注射、皮下移植、皮下注射、または経皮製剤によって投与される。
【０１９７】
実施形態では、阻害剤は、少なくとも１つの追加的な男性避妊薬または器具と組み合わせて使用される。関連実施形態では、追加的な男性避妊具はコンドームである。その他の関連実施形態では、追加的な男性避妊薬は、テストステロン産生、アンドロゲン受容体機能または安定性の調節因子である。
【０１９８】
医薬組成物
本発明は、本明細書に記載される化合物、その誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩またはプロドラッグの１つまたは複数を活性成分として含有する、医薬組成物を特徴とする。医薬組成物は、組成物を投与される対象に、それ自体が有害な免疫応答生成を誘導せず、過度の毒性なしに投与されてもよい任意の医薬品を含む、薬学的に許容できるキャリア、賦形剤、または希釈剤を含有する。本明細書の用法では、「薬学的に許容可能」という用語は、連邦または州政府の監督官庁によって認可され、または米国薬局方、欧州薬局方に収載され、または動物、より具体的にはヒトで使用されるその他の一般に妥当と認められた薬局方に収載されていることを意味する。これらの組成物は、男性避妊薬として有用たり得る。
【０１９９】
薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤、およびその他の賦形剤の完全な考察は、参照によって本明細書に援用する、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１７ｔｈｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ）およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（２１ｓｔ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ）に提示される。医薬組成物の処方は、投与様式に適していなくてはならない。実施形態では、医薬組成物はヒトへの投与に適し、無菌、非微粒子および／または非発熱性であり得る。
【０２００】
薬学的に許容可能なキャリア、賦形剤、または希釈剤としては、生理食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、無菌等張水性緩衝液、およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２０１】
ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムなどの湿潤剤、乳化剤、および潤滑剤；ならびに着色剤、剥離剤、コーティング作用物質、甘味剤、着香料および芳香剤、保存料、および抗酸化剤もまた、組成物中に存在し得る。
【０２０２】
薬理的に許容可能な抗酸化剤の例としては、が挙げられるが、これに限定されるものではない：（１）アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなどの水溶性抗酸化剤；（２）パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロールなどの油溶性抗酸化剤；および（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などの金属キレート剤。
【０２０３】
実施形態では、医薬組成物は、水戻しに適した凍結乾燥粉末などの固体形態、溶液、懸濁液、エマルション、錠剤、丸薬、カプセル、徐放性製剤、または粉末で提供される。
【０２０４】
実施形態では、医薬組成物は、例えば、医薬組成物中の活性成分の量および濃度を表示する密封容器内に、液体形態で提供される。関連実施形態では、医薬組成物の液体形態は、気密封止容器内に提供される。
【０２０５】
本発明の医薬組成物を配合する方法は従来法であり、当該技術分野で周知である（ＲｅｍｉｎｇｔｏｎおよびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ参照）。当業者は、所望の特性（例えば、投与経路、バイオセーフティー、および放出プロフィール）を有する医薬組成物を容易に調合し得る。
【０２０６】
医薬組成物を調製する方法は、活性成分を薬学的に許容できるキャリア、そして任意選択的に１つまたは複数の副成分に組み合わせるステップを含む。医薬組成物は、活性成分を液体キャリア、または超微粒子固体キャリア、または双方と、均一かつ密接に組み合わせ、次に、必要ならば、製品に整形することで調製し得る。多層投薬形態の調製品を含む医薬組成物を調製するための追加的な技法は、参照によって本明細書に援用する、Ａｎｓｅｌ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（９ｔｈｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ）に記載される。
【０２０７】
送達方法
本発明の医薬組成物は、経口および非経口手段によって（例えば、局所的に、経皮的に、または注射によって）対象に投与し得る。このような投与様式およびその中で使用するのに適した医薬組成物を調製する方法は、参照によって本明細書に援用する、Ｇｉｂａｌｄｉ’ｓ  ＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃａｒｅ（１ｓｔｅｄ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ−Ｓｙｓｔｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔｓ）に記載される。
【０２０８】
実施形態では、医薬組成物は固体形態で経口的に投与される。
【０２０９】
経口投与に適した医薬組成物は、活性成分として、それぞれ本明細書に記載される化合物、その誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩またはプロドラッグの所定量を含有する、カプセル、カシェ剤、丸薬、錠剤、ロゼンジ（通常スクロースおよびアカシアまたはトラガカントであるフレーバー基礎原料を使用する）、粉末、顆粒、または水性または非水性液中の溶液または懸濁液、または水中油または油中水型液体エマルション、またはエリキシル剤またはシロップ、または香錠（ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシアなどの不活性ベースを使用する）および／または口内洗浄液などの形態であり得る。活性成分はまた、ボーラス、舐剤、またはペーストとして投与し得る。
【０２１０】
経口投与のための固体剤形（例えば、カプセル、錠剤、丸薬、糖衣丸、粉末、顆粒など）では、活性成分は、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムなどの１つまたは複数の薬学的に許容可能なキャリア、賦形剤、または希釈剤、および／または以下のいずれかと混合される：（１）デンプン類、乳糖、スクロース、グルコース、マンニトール、および／またはケイ酸などの増量剤（ｆｉｌｌｅｒｓ）または増量剤（ｅｘｔｅｎｄｅｒｓ）；（２）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアカシアなどのバインダー；（３）グリセロールなどの湿潤剤；（４）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウムなどの崩壊剤；（５）パラフィンなどの溶液遅延材；（６）四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤；（７）例えば、アセチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセリンなどの湿潤剤；（８）カオリンおよびベントナイト粘土などの吸収剤；（９）滑石、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびその混合物などの潤滑剤；および（１０）着色剤。カプセル、錠剤、および丸薬の場合、医薬組成物はまた、緩衝剤を含んでなり得る。類似タイプの固体組成物もまた、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル内の充填剤、および乳糖（ｌａｃｔｏｓｅ）または乳糖（ｍｉｌｋ  ｓｕｇａｒｓ）などの賦形剤、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどを使用して調製し得る。
【０２１１】
錠剤は、任意選択的に１つまたは複数の副成分と共に圧搾または成形して作成し得る。圧縮錠剤は、バインダー（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、保存料、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウムまたは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、表面活性種、および／または分散剤を使用して調製し得る。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末活性成分の混合物を適切な機械中で成形することで作成し得る。
【０２１２】
錠剤や、糖衣丸、カプセル、丸薬、および顆粒などのその他の固体剤形は、任意選択的に刻みをつけて、または腸溶コーティングおよび当該技術分野で周知のその他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて、調製し得る。
【０２１３】
医薬組成物はまた、例えば、所望の放出プロフィールを提供する様々な割合のヒドロキシプロピルメチルセルロース、その他のポリマーマトリックス、リポソームおよび／または微小球を使用して、その中の活性成分の緩慢な、長期の、または制御された放出を提供するように調合し得る。医薬組成物はまた、不透明剤を任意選択的に含有し得て、胃腸管の特定部分において、任意選択的に遅延様式で活性成分のみを放出し、またはそれを優先的に放出する組成であってもよい。包埋組成物の例としては、ポリマー物質およびワックスが挙げられる。活性成分はまた、適切ならば、当該技術分野で周知の１つまたは複数の薬学的に許容可能なキャリア、賦形剤、または希釈剤を含んだ、微小カプセル化形態であり得る（例えば、ＲｅｍｉｎｇｔｏｎおよびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ参照）。
【０２１４】
医薬組成物は、例えば、細菌保持フィルターを通した濾過によって、または使用直前に滅菌水、またはその他の無菌注射用媒体に溶解し得る無菌固体組成物の形態の滅菌剤を組み込むことで、滅菌し得る。
【０２１５】
実施形態では、医薬組成物は液体形態で経口的に投与される。
【０２１６】
活性成分の経口投与のための液体投薬形態としては、薬学的に許容可能なエマルション、微小エマルション、溶液、懸濁液、シロップ、およびエリキシル剤が挙げられる。活性成分に加えて、液体投薬形態は、例えば水またはエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実、ラッカセイ、コーン、胚芽、オリーブ、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフランアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、およびその混合物などのその他の溶媒、可溶化剤および乳化剤などの当該技術分野で通常使用される不活性希釈剤を含有し得る。不活性希釈剤に加えて、液体医薬組成物は、湿潤剤、乳化および懸濁剤、甘味剤、着香料、着色料、芳香剤、および防腐剤などのアジュバントを含み得る。
【０２１７】
懸濁液は、活性成分に加えて、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、およびトラガカント、およびその混合物などであるが、これに限定されるものではない、懸濁剤を含有し得る。
【０２１８】
実施形態では、医薬組成物は、局所塗布、経皮投与、注射などにより、非経口手段によって投与される。関連実施形態では、医薬組成物は、注射、輸液、または移植（例えば、静脈内、筋肉内、関節内、皮下など）によって、非経口的に投与される。
【０２１９】
非経口用の組成物は、例えばその中に適切な保存料が添加されていても良い、数回の用量を含有するアンプル内またはバイアル内の単位投与量形態で提供され得る。このような組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、輸液用器具、、埋め込み用送達デバイスの形態であってもよく、またはそれは、使用前に水または別の適切なビヒクルで戻される乾燥粉末として提供され得る。エタノールなどの１つまたは複数の補助ビヒクルもまた、用い得る。活性成分の他に、組成物は、適切な非経口的に許容可能なキャリアおよび／または賦形剤を含有し得て、または活性成分は、放出制御のために、微小球、マイクロカプセル、ナノ粒子、リポソームなどに組み込み得る。さらに、組成物は、懸濁剤、可溶化剤、安定化剤、ｐＨ調節剤、および／または分散剤もまた含有し得る。
【０２２０】
医薬組成物は、無菌注射の形態であり得る。このような組成物を調製するために、活性成分を非経口的に許容可能な液体ビヒクルに溶解または懸濁する。例示的なビヒクルおよび溶剤としては、水、適量の塩酸または水酸化ナトリウムまたは適切な緩衝液の添加によって適切なｐＨに調節された水、１，３−ブタンジオール、リンゲル液、および等張塩化ナトリウム溶液が挙げられるが、これに限定されるものではない。医薬組成物は、例えば、メチル、エチルまたはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエートなどの１つまたは複数の保存料もまた含有し得る。溶解度を改善するために、溶解促進剤または可溶化剤を添加し得て、または溶媒は、１０〜６０％ｗ／ｗのプロピレングリコールなどを含有し得る。
【０２２１】
医薬組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容可能な無菌等張水性または非水性溶液、分散体、懸濁液またはエマルション、または使用直前に戻して無菌注射液または分散体にし得る無菌粉末を含有し得る。このような医薬組成物は、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、製剤を意図される受容者の血液と等張にする溶質、懸濁剤、増粘剤、保存料などを含有し得る。
【０２２２】
本発明の医薬組成物で用い得る適切な水性および非水性キャリアの例としては、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルが挙げられる。例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散体の場合は必要な粒度の維持によって、および界面活性剤の使用によって、適切な流動性を維持し得る。
【０２２３】
いくつかの実施形態では、活性成分の効果を延長させるために、皮下または筋肉内注射からの化合物の吸収を遅くすることが望ましい。これは、水溶性に劣る結晶性または非晶質材料の液体懸濁液の使用によって達成し得る。次に、活性成分の吸収速度はその溶出速度に左右され、次に、それは結晶サイズおよび結晶形に左右され得る。代案としては、非経口投与された活性成分の遅延吸収は、化合物を油ビヒクルに溶解または懸濁することで達成される。これに加えて、注射用医薬品形態の持続的吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる、作用物質の包含によってもたらし得る。
【０２２４】
放出制御非経口組成物は、水性懸濁液、微小球、マイクロカプセル、磁性微小球、油剤、油懸濁液、エマルションの形態であってもよく、または活性成分は、生体適合性キャリア、リポソーム、ナノ粒子、インプラントまたは輸液用器具に組み込んでもよい。
【０２２５】
微小球および／またはマイクロカプセル調製品で使用される材料としては、ポリグラクチン、ポリ−（イソブチルシアノアクリレート）、ポリ（２−ヒドロキシエチル−Ｌ−グルタミン）、およびポリ（乳酸）などの生分解性／生体内分解性のポリマーが挙げられる。
【０２２６】
放出制御非経口製剤を調合する際に時に使用し得る、生体適合性キャリアとしては、デキストランなどの炭水化物、アルブミンなどのタンパク質、リポタンパクまたは抗体が挙げられる。
【０２２７】
インプラントで使用される材料は、例えばポリジメチルシロキサンなどのように非生分解性、または例えばポリ（カプロラクタム）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）またはポリ（オルトエステル）などのように生分解性であり得る。
【０２２８】
実施形態では、活性成分は煙霧剤によって投与される。これは、化合物を含有する、水性煙霧剤、リポソーム調製品、または固体粒子を調製することで達成される。非水性（例えば、フルオロカーボン噴霧剤）懸濁液を使用し得る。医薬組成物はまた、化合物分解をもたらし得る剪断への作用物質の曝露を最小化する、超音波式ネブライザーを使用して投与し得る。
【０２２９】
通常、水性煙霧剤は、従来の製薬慣行で許容可能なキャリアおよび安定剤と一緒に、活性成分の水溶液または懸濁液を調合することで作成される。キャリアおよび安定剤は、特定化合物の要件によって変動するが、典型的に非イオン性界面活性剤（Ｔｗｅｅｎｓ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、またはポリエチレングリコール）、血清アルブミンのような無害のタンパク質、ソルビタンエステル、オレイン酸、レシチン、グリシンなどのアミノ酸、緩衝液、塩、糖類または糖アルコールを含む。煙霧剤は、一般に等張溶液から調製される。
【０２３０】
活性成分の局所または経皮投与のための投薬形態としては、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチ、および吸入剤が挙げられる。活性成分は、薬学的に許容できるキャリアと共に、そして必要に応じて任意の保存料、緩衝液、または噴霧剤と共に、無菌条件下で混合し得る。
【０２３１】
本発明で使用するのに適した経皮パッチは、参照によって本明細書に援用する、Ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｉｓｓｕｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅｓ（Ｍａｒｃｅｌ  ＤｅｋｋｅｒＩｎｃ．，１９８９）および米国特許第４，７４３，２４９号明細書、米国特許第４，９０６，１６９号明細書、米国特許第５，１９８，２２３号明細書、米国特許第４，８１６，５４０号明細書、米国特許第５，４２２，１１９号明細書、米国特許第５，０２３，０８４号明細書で開示される。経皮パッチはまた、経陰嚢パッチを含む、当該技術分野で公知の任意の経皮パッチであり得る。このような経皮パッチ中の医薬組成物は、当該技術分野で周知の１つまたは複数の吸収促進剤または皮膚透過促進剤を含有し得る（例えば参照によって本明細書に援用する、米国特許第４，３７９，４５４号明細書および米国特許第４，９７３，４６８号明細書を参照されたい）。本発明で使用される経皮吸収治療システムは、イオン注入、拡散、またはこれらの２つの効果の組み合わせに基づき得る。
【０２３２】
経皮パッチは、身体への活性成分の制御送達を提供する、追加的利点を有する。このような投薬形態は、活性成分を適切な媒体に溶解または分散することで作成し得る。吸収促進剤もまた使用して、皮膚を通過する活性成分の流動を増大させ得る。このような流動速度は、速度制御メンブランの提供、またはポリマーマトリックスまたはゲル中への活性成分の分散のどちらかによって制御し得る。
【０２３３】
このような医薬組成物は、クリーム、軟膏、ローション、リニメント剤、ゲル、ハイドロゲル、溶液、懸濁液、スティック、スプレー、ペースト、プラスター、およびその他の種類の経皮薬物送達系の形態であり得る。組成物は、乳化剤、抗酸化剤、緩衝剤、保存料、湿潤剤、浸透促進剤、キレート剤、ゲル形成剤、軟膏基剤、香水、および皮膚保護作用物質などの薬学的に許容可能なキャリアまたは賦形剤もまた含み得る。
【０２３４】
乳化剤の例としては、例えばアカシアガムまたはトラガカントガムなどの天然ガム、例えば大豆レシチンなどの天然リン脂質、およびソルビタンモノオレエート誘導体が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２３５】
抗酸化剤の例としては、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、アスコルビン酸とその誘導体、トコフェロールとその誘導体、およびシステインが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２３６】
保存料の例としては、メチルまたはプロピルｐ−ヒドロキシベンゾエートおよび塩化ベンザルコニウムなどのパラベンが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２３７】
湿潤剤の例としては、グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトールおよび尿素が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２３８】
浸透促進剤の例としては、プロピレングリコール、ＤＭＳＯ、トリエタノールアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、２−ピロリドンとその誘導体、テトラヒドロフルフリルアルコール、プロピレングリコール、プロピレングリコールモノラウレートまたはラウリン酸メチルとのジエチレングリコールモノエチルまたはモノメチルエーテル、ユーカリプトール、レシチン、Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ（登録商標）、およびＡｚｏｎｅ（登録商標）が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２３９】
キレート剤の例としては、ナトリウムＥＤＴＡ、クエン酸、およびリン酸が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２４０】
ゲル形成剤の例としては、カルボポル、セルロース誘導体、ベントナイト、アルギン酸塩、ゼラチン、およびポリビニルピロリドンが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２４１】
活性成分に加えて、本発明の軟膏、ペースト、クリーム、およびゲルは、動物および植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、滑石、および酸化亜鉛、またはその混合物などの賦形剤を含有し得る。
【０２４２】
粉末およびスプレーは、乳糖、滑石、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、およびポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物などの賦形剤を含有し得る。スプレーは、クロロフルオロヒドロ炭素、およびブタンおよびプロパンなどの揮発性非置換炭化水素などの通例の噴霧剤をさらに含有し得る。
【０２４３】
注射用貯蔵形成は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中で、本発明の化合物の微小カプセル化マトリックスを形成することにより作成される。化合物とポリマーの比率、および用いられる特定ポリマーの性質に応じて、化合物放出速度を制御し得る。その他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が挙げられる。体組織と適合性のリポソームまたは微小エマルションに薬剤を閉じ込めることによっても、蓄積注射用製剤が調製される。
【０２４４】
皮下インプラントは当該技術分野で周知であり、本発明で使用するのに適する。皮下移植法は、好ましくは非刺激性で機械的弾性がある。インプラントは、マトリックス型、レザバー型、またはそれらのハイブリッドであり得る。マトリックス型装置では、担体材料は多孔性または非多孔性で、固形または半固体で、１つまたは複数の活性化合物に対して透過性または不透過性であり得る。担体材料は生分解性であってもよく、または投与後に緩慢に浸食されてもよい。場合によっては、マトリックスは非分解性であるが、その代わりに担体材料を分解させる、マトリックスを通じた活性化合物拡散に依存する。代案の皮下インプラント法は、例えば、活性化合物または化合物が、構成要素濃度と無関係であるメンブラン（ゼロ次速度式を有する）などの速度制御メンブランで取り囲まれるレザバー装置を利用する。速度制御メンブランで取り囲まれるマトリックスからなる装置もまた、使用するのに適する。
【０２４５】
レザバー型およびマトリックス型装置は、どちらもＳｉｌａｓｔｉｃ（商標）などのポリジメチルシロキサン、またはその他のシリコーンゴムなどの材料を含有し得る。マトリックス材料は、不溶性ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、酢酸エチルビニル、ポリスチレンおよびポリメタクリレート、ならびにパルミトステアリン酸グリセリンのグリセロールエステル、ステアリン酸グリセロール、およびベヘン酸グリセロールタイプであり得る。材料は、疎水性ポリマーまたは親水性ポリマーとすることができ、可溶化剤を任意選択的に含有する。
【０２４６】
皮下インプラント装置は、例えば、参照によって本明細書に援用する、米国特許第５，０３５，８９１明細書および米国特許第４，２１０，６４４号明細書に記載されるような、任意の適切なポリマーから作られた徐放カプセルであり得る。
【０２４７】
一般に、薬剤化合物の放出および経皮透過に対する速度制御を提供するために、少なくとも４つの異なるアプローチが適用できる。これらのアプローチは、メンブラン仲介システム、接着剤拡散制御システム、マトリックス分散型システム、およびミクロレザバーシステムである。放出制御経皮および／または局所組成物は、これらのアプローチの適切な混合物を使用して得られるものと理解される。
【０２４８】
メンブラン仲介システムでは、活性成分は、金属プラスチックラミネートなどの薬剤不透過性ラミネートから、および例えばエチレン−酢酸ビニル共重合体のような微孔性または非多孔性ポリマーメンブランなどの速度制御ポリマーメンブランから成形された、浅い区画中で完全にカプセル化された、レザバー内に存在する。活性成分は、速度制御ポリマーメンブランを通じて放出される。薬剤レザバー内では、活性成分は、固体ポリマーマトリックスに分散され、またはシリコーン流体などの浸出しない粘稠な液状媒体に懸濁され得る。ポリマーメンブランの外面には、接着性ポリマーの薄層が塗布されて経皮システムの皮膚表面との密着を達成する。接着性ポリマーは、好ましくは低アレルギー性で活性原薬と適合性のポリマーである。
【０２４９】
接着剤拡散制御システムでは、接着性ポリマー中に活性成分を直接分散させて、次に、例えば溶液流延によって、活性成分含有接着剤を実質的に薬剤不透過性の金属プラスチック裏材のフラットシート上に拡散させて、薄い薬剤レザバー層を形成することで、活性成分のレザバーが形成される。
【０２５０】
マトリックス分散型システムは、親水性または親油性ポリマーマトリックス中に、活性成分が実質的に均質に分散されて、活性成分レザバーが形成されることを特徴とする。次に薬剤含有ポリマーは、実質的に明確に定義される表面積と制御される厚みのディスクに成形される。接着性ポリマーは、外周に沿って延展され、ディスクの周囲に接着剤ストリップを形成する。
【０２５１】
ミクロレザバーシステムは、レザバーおよびマトリックス分散型システムの組み合わせと見なし得る。この場合、最初に薬剤固形分を水溶性ポリマーの水溶液に懸濁し、次に薬剤懸濁液を親油性ポリマーに分散して、薬剤レザバーの複数の浸出しない微小球体を形成することで、活性物質のレザバーが形成される。
【０２５２】
上に記載される放出制御、持続放出、および徐放組成物のいずれでも、約３０分間〜約１週間、約３０分間〜約７２時間、約３０分間〜２４時間、約３０分間〜１２時間、約３０分間〜６時間、約３０分間〜４時間、および約３時間〜１０時間で活性成分を放出するように調合し得る。実施形態では、活性成分の有効濃度は、医薬組成物の対象への投与後、対象中で４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１６時間、２４時間、４８時間、７２時間以上持続する。
【０２５３】
送達方法
本発明の化合物を医薬品としてヒトおよび動物に投与する際、それ自体を投与し、または薬学的に許容できるキャリア、賦形剤、または希釈剤と組み合わさった活性成分を含有する医薬組成物として投与し得る。
【０２５４】
本発明の医薬組成物中の活性成分の投与の実際の投与量レベルおよび経時変化は、患者に対して毒性でなく、特定の患者、組成物、および投与様式に所望される治療反応を達成するのに効果的な活性成分量が得られるように、変動させ得る。一般に、本発明の化合物または医薬組成物は、男性対象中で、精子排出を低下させまたは抑制する有効量、または十分な量で投与される。実施形態では、化合物または医薬組成物の投与は、精子形成を抑制し、無精子症を誘導し、または精子減少症を誘導する。
【０２５５】
例示的な用量範囲としては、１日あたり０．０１ｍｇ〜２５０ｍｇ、１日あたり０．０１ｍｇ〜１００ｍｇ、１日あたり１ｍｇ〜１００ｍｇ、１日あたり１０ｍｇ〜１００ｍｇ、１日あたり１ｍｇ〜１０ｍｇ、および１日あたり０．０１ｍｇ〜１０ｍｇが挙げられる。本発明の化合物の好ましい用量は、患者が耐え得て、重篤なまたは許容できない副作用を発症しない最大量である。実施形態では、本発明の化合物は、１日あたり体重１キログラムあたり約１０μｇ〜約１００ｍｇ、１日あたり約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇ、または１日あたり約１．０ｍｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重の濃度で投与される。
【０２５６】
実施形態では、医薬組成物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍｇなどの１〜１０ｍｇの範囲にわたる量で、本発明の化合物を含んでなる。
【０２５７】
実施形態では、治療的有効投与量は、約０．１ｎｇ／ｍｌから約５０〜１００μｇ／ｍｌの化合物の血清濃度を生じる。医薬組成物は、典型的に、１日あたり体重１キログラムあたり約０．００１ｍｇ〜約２０００ｍｇの化合物の投与量で提供されなくてはならない。例えば、ヒト患者への全身投与の投与量は、１〜１０μｇ／ｋｇ、２０〜８０μｇ／ｋｇ、５〜５０μｇ／ｋｇ、７５〜１５０μｇ／ｋｇ、１００〜５００μｇ／ｋｇ、２５０〜７５０μｇ／ｋｇ、５００〜１０００μｇ／ｋｇ、１〜１０ｍｇ／ｋｇ、５〜５０ｍｇ／ｋｇ、２５〜７５ｍｇ／ｋｇ、５０〜１００ｍｇ／ｋｇ、１００〜２５０ｍｇ／ｋｇ、５０〜１００ｍｇ／ｋｇ、２５０〜５００ｍｇ／ｋｇ、５００〜７５０ｍｇ／ｋｇ、７５０〜１０００ｍｇ／ｋｇ、１０００〜１５００ｍｇ／ｋｇ、１５００〜２０００ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ、１５００ｍｇ／ｋｇ、または２０００ｍｇ／ｋｇに及び得る。医薬品投薬単位形態は、投薬単位形態あたり、例えば約１００〜約２５００ｍｇなど、約１ｍｇ〜約５０００ｍｇの化合物または必須成分組み合わせを提供するように調製される。
【０２５８】
実施形態では、医薬組成物は、２００万個／ｍＬ、１００万個／ｍＬ、５０万個／ｍＬ、２５万個／ｍＬ、または１０万個／ｍＬ以下など、３００万個／ｍＬ精液以下に精子濃度を低下させるのに十分な量で、本発明の化合物を含んでなる。関連実施形態では、医薬組成物は、精子濃度を１０万個／ｍＬ以下に低下させるのに十分な量で、本発明の化合物を含んでなる。
【０２５９】
有効量の測定は、特に本明細書で提供される詳細な開示に照らして、十分に当業者の能力範囲内である。一般に、本発明の化合物の効果的または有効量は、最初に低用量の化合物を投与し、次に、最低限または許容可能毒素副作用で、処理された対象において、所望の効果（例えば、精液中の精子レベル低下）が観察されるまで、投与される用量または投与量を徐々に増大させることで判定される。本発明の医薬組成物の投与に適した用量および投与計画を判定するのに適用される方法は、例えば、参照によって本明細書に援用するＧｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｇｏｏｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１１ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  ２００５，およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈおよび２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎｓ，Ｇｅｎｎａｒｏ  ａｎｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｅｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００３および２００５）に記載される。
【０２６０】
キット
本発明は、男性避妊をもたらすためのキットを提供する。実施形態では、キットは、本明細書に記載される化合物または医薬組成物の１つまたは複数を含有する。実施形態では、キットは使用説明を提供する。使用説明は、本明細書に記載される方法のいずれかに関連し得る。関連実施形態では、使用説明は、化合物または医薬組成物を使用して、精子排出を低下または抑制することに関する。実施形態では、キットは、医薬品または生物学的製剤の製造、使用、または販売を規制する行政機関によって規定される書式の注意書きを提供し、その注意書きはヒト投与のためのキットおよびその中の構成要素の製造、使用、または販売の行政機関による認可を反映する。
【０２６１】
本発明は、化合物の量を表示する気密封止容器（例えば、アンプルまたは小袋）内にパッケージされた、化合物または医薬組成物もまた提供する。実施形態では、化合物または医薬組成物は、液体として供給される。別の実施形態では、化合物または医薬組成物は、気密封止容器内の乾燥滅菌凍結乾燥粉末または無水濃縮物として供給され、例えば、対象に投与するための適切な濃度に、水または生理食塩水で戻し得る。
【０２６２】
本発明は、化合物または医薬組成物を含有する経皮パッチもまた提供する。
【０２６３】
実施形態では、キットは、化合物または医薬組成物を２つ以上の投薬単位で提供する。キットは、１〜約１２０以上、１〜約６０、１〜約３０、１〜約１０、または１〜約７投薬単位を含有し得る。化合物または医薬組成物が、２４時間にわたり活性成分の治療的有効量を放出するように適合される場合、キットは、好都合には１、約５、約７、約１０、約１４、または約３０投薬単位を含んでなる。化合物または医薬組成物が、１２時間にわたり活性成分の治療的有効量を提供するように適合される場合、キットは、好都合には１、２、約１０、約１４、約３０、または約６０投薬単位を含んでなる。化合物または医薬組成物が、約３〜約１０時間（例えば、約６または８時間）にわたり活性成分の治療的有効量を提供するように適合される場合、キットは、約１、約４、約４０、約６０または約１２０投薬単位を含んでなる。当業者は、本発明から実質的に逸脱することなく、キットに含め得るその他の投薬単位数を認識する。
【０２６４】
スクリーニング法
本明細書に記載されるように、本発明は、ＪＱ１を含む化合物の特定例、ならびにブロモドメイン結合ポケットに結合し、男性避妊薬として有用なその他の置換化合物を提供する。しかし本発明は、それに限定されない。本発明は、精子形成を抑制できる（核酸、ペプチド、小分子阻害剤、および模倣剤を含む）作用物質を同定する、簡易手段をさらに提供する。このような化合物もまた、男性避妊薬として有用であることが予期される。
【０２６５】
特定の実施形態では、精子形成をアッセイすることにより、化合物またはその他の本発明の作用物質の効果が分析される。精子形成を低下させる発明の作用物質および化合物は、男性避妊薬として有用であると同定される。
【０２６６】
ＢＥＴファミリーメンバーと特異的に結合する、またはＢＥＴファミリーメンバーの生物学的活性を低下させる、実質的にいずれの作用物質を本発明の方法で用いてもよい。本発明の方法は、精子形成を低下させまたは別の方法で抑制する、候補作用物質のハイスループット低コストのスクリーニングのために有用である。次に、ＢＥＴファミリー構成員のブロモドメインに特異的に結合する候補作用物質を単離し、精子形成を抑制する能力の生体外アッセイまたは生体内アッセイで、活性について試験する。当業者は、細胞に対する候補作用物質の効果が、典型的に、候補作用物質に接触させなかった対応する対照細胞と比較されることを理解する。したがって、スクリーニング法は、候補作用物質が接触した精巣中の精子形成と、未処理対照試験に存在する精子形成とを比較するステップを含む。
【０２６７】
ひとたび同定されたら、本発明の作用物質（例えば、ブロモドメインと特異的に結合および／または拮抗する作用物質）は、男性避妊薬として使用されてもよい。潜在的ブロモドメイン拮抗薬としては、有機分子、ペプチド、ペプチド模倣剤、ポリペプチド、核酸リガンド、アプタマー、およびＢＥＴファミリーメンバーブロモドメインに結合してその活性を低下させる抗体が挙げられる。候補作用物質は、精子形成を低下させるそれらの能力について試験してもよい。
【０２６８】
試験化合物および抽出物
特定の実施形態では、ＢＥＴファミリーメンバー拮抗薬（例えばブロモドメインと特異的に結合して活性を低下させる作用物質）は、天然物または合成（または半合成）抽出物の大きなライブラリーから、または化学物質ライブラリーまたはポリペプチドまたは核酸ライブラリーから、当該技術分野で公知の方法に従って同定される。創薬研究開発分野の当業者は、試験抽出物または化合物の正確な起源が、本発明のスクリーニング手順に重要でないことを理解する。本明細書に記載される方法を使用して、実質的にいくつもの未知の化学物質の抽出物または化合物をスクリーニングし得る。このような抽出物または化合物例としては、植物ベース、真菌ベース、原核生物ベースまたは動物ベースの抽出物、発酵ブロス、および合成化合物、ならびに既存ポリペプチドの修飾が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２６９】
細菌、真菌、植物、および動物抽出物の形態の天然ポリペプチドのライブラリーは、Ｂｉｏｔｉｃｓ（Ｓｕｓｓｅｘ，ＵＫ）、Ｘｅｎｏｖａ（Ｓｌｏｕｇｈ，ＵＫ）、Ｈａｒｂｏｒ  Ｂｒａｎｃｈ  Ｏｃｅａｎｇｒａｐｈｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｆｔ．Ｐｉｅｒｃｅ，Ｆｌａ．）、およびＰｈａｒｍａＭａｒ，Ｕ．Ｓ．Ａ．（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）を含む、いくつかの供給元から商業的に入手できる。このようなポリペプチドを当該技術分野で公知の本明細書に記載される方法を使用して修飾し、タンパク質形質導入ドメインを包含させ得る。これに加えて、所望ならば、当該技術分野で公知の方法に従って、例えば標準抽出法および分画法によって、天然のおよび合成的に生成したライブラリーを生成する。分子ライブラリー合成法の例は、例えば、ＤｅＷｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６９０９，１９９３；Ｅｒｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：１１４２２，１９９４；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８，１９９４；Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：１３０３，１９９３；Ｃａｒｒｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９，１９９４；Ｃａｒｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０６１，１９９４；およびＧａｌｌｏｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３，１９９４などのように、当該技術分野に見られる。さらに、所望ならば、任意のライブラリーまたは化合物は、標準化学的、物理的、または生化学的方法を使用して、容易に修飾される。
【０２７０】
糖類ベース、脂質ベース、ペプチドベース、および核酸ベースの化合物を含むが、これに限定されるものではない、いくつものポリペプチド、化合物のランダムまたは指向性合成（例えば半合成または全合成）を生じさせる多数の方法が利用できる。合成化合物ライブラリーは、Ｂｒａｎｄｏｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ，Ｎ．Ｈ．）およびＡｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓ．）から商業的に入手できる。代案としては、候補化合物として使用される化合物は、当業者に知られている標準合成技術および技法を使用して、容易に入手できる出発原料から合成し得る。本明細書に記載される方法で同定される化合物を合成するのに有用な合成化学転換および保護基手法（保護および脱保護）は、当該技術分野で公知であり、例えば、Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）；Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９１）；Ｌ．Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｆｉｅｓｅｒ，Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓＲｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９４）；およびＬ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ，ｅｄ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９５）、およびそれに続く版などで記載されるものが挙げられる。
【０２７１】
化合物ライブラリーは、溶液中（例えばＨｏｕｇｈｔｅｎ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１３：４１２−４２１，１９９２）、またはビーズ上（Ｌａｍ，Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：８２−８４，１９９１）、チップ上（Ｆｏｄｏｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６４：５５５−５５６，１９９３）、細菌上（Ｌａｄｎｅｒ，米国特許第５，２２３，４０９号明細書）、胞子上（Ｌａｄｎｅｒ  米国特許第５，２２３，４０９号明細書）、プラスミド上（Ｃｕｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：１８６５−１８６９，１９９２）またはファージ上（Ｓｃｏｔｔ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３８６−３９０，１９９０；Ｄｅｖｌｉｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：４０４−４０６，１９９０；Ｃｗｉｒｌａ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８７：６３７８−６３８２，１９９０；Ｆｅｌｉｃｉ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１−３１０，１９９１；Ｌａｄｎｅｒ、前出）で提示されてもよい。
【０２７２】
これに加えて、創薬研究開発当業者は、活性が既知である材料の複製または反復の脱複製（例えば分類学的脱複製、生物学的脱複製、および化学的脱複製、または任意のその組み合わせ）または排除を可能ならいつでも用いるべきであることを容易に理解する。
【０２７３】
粗抽出物が、ＢＥＴファミリーメンバーブロモドメイン結合活性を有することが分かった場合、観察された効果の原因である分子成分を単離するために、陽性のリード抽出物のさらなる分画が必要である。したがって、抽出、分画、および精製過程の目標は、粗抽出物中にある、精子形成を低下させる化学実体の注意深い特性解析と同定である。このような不均一抽出物を分画および精製する方法は、当該技術分野で公知である。所望ならば、治療薬として有用なことが示される化合物は、当該技術分野で公知の方法に従って化学的に修飾される。
実施例
【０２７４】
本発明は、ここで記載される実施例によって限定されると解釈すべきでないことを理解すべきであり、むしろ、本発明は、本明細書で提供されるいずれの応用も含むと解釈すべきであり、全ての同等の変動は、当業者の技術範囲内である。
【０２７５】
Ｉ．化学物質実施例−合成および調製法
本発明の化合物は、本明細書の説明を考慮して、本明細書に記載される方法によって、および／または当業者に知られている方法に従って、合成し得る。
【０２７６】
スキームＳ１．ラセミブロモドメイン阻害剤（±）−ＪＱ１の合成
【化４５】
0006022442.tif 000050
【０２７７】
（２−アミノ−４，５−ジメチルチオフェン−３−イル）（４−クロロフェニル）メタノン（Ｓ２）
上に示すスキームに従って、化合物ＪＱ１を調製した。
【０２７８】
２３℃のエタノール（２０ｍｌ、０．３５Ｍ）中の４−クロロベンゾイルアセトニトリルＳ１（１．２４ｇ、６．９ｍｍｏｌ、１等量）、２−ブタノン（０．６２ｍｌ、６．９ｍｍｏｌ、１．００等量）、およびモルホリン（０．６０ｍｌ、６．９ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、イオウ（２２０ｍｇ、６．９ｍｍｏｌ、１．００等量）を固体として添加した２１。次に混合物を７０℃に加熱した。１２時間後、反応混合物を２３℃に冷却し、鹹水（１００ｍｌ）中に注いだ。水層を酢酸エチル（３×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水（５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、４０グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、Ｓ２（１．２８ｇ、７０％）を黄色固体として得た。
【０２７９】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ］カルボニル｝アミノ）−４−｛［３−（４−クロロベンゾイル）−４，５−ジメチルチオフェン−２−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート（Ｓ３）
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍｌ、１．０Ｍ）中の９−フルオレニルメトキシカルボニル−アスパラギン酸β−ｔｅｒｔ−ブチルエステル［Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ］（８６４ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ、２．１０等量）の溶液に、（２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＣＴＵ）（８２７ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ、２．００等量）、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．７２ｍｌ、４．０ｍｍｏｌ、４．００等量）を逐次添加した。次に混合物を２３℃で５分間撹拌した。次にＳ２（２６６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１等量）を固体として添加した。反応混合物を２３℃で撹拌した。１６時間後、酢酸エチル（２０ｍｌ）および鹹水（２０ｍｌ）を添加した。２層が分離し、水層を酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水（３０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、４０グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、Ｓ３（６２５ｍｇ、９０％）を褐色油として得た。
【０２８０】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−アミノ−４−（（３−（４−クロロベンゾイル）−４，５−ジメチルチオフェン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタノエート（Ｓ４）
２３℃のＤＭＦ溶液（４．０ｍｌ、０．２２Ｍ）中の２０％ピペリジンに、化合物Ｓ３（５６０ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ、１等量）を溶解した。３０分後、酢酸エチル（２０ｍｌ）および鹹水（２０ｍｌ）を反応混合物に添加した。２層が分離し、水層を酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水（３×２５ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、２４グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、遊離アミンＳ４（３７０ｍｇ、９０％）を黄色固体として得た。エナンチオマ純度は７５％に下がった（ＡＳ−Ｈカラムを使用して、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）により測定された）。
【０２８１】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（５−（４−クロロフェニル）−６，７−ジメチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［２，３−ｅ］［１，４］ジアゼパム−３−イル）アセテート（Ｓ５）
アミノケトン（Ｓ４）（２８０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）を１０％酢酸エタノール溶液（２１ｍｌ、０．０３Ｍ）に溶解した。反応混合物を８５℃に加熱した。３０分後、全ての溶剤を減圧下で除去した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、１２グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、化合物Ｓ５（２４１ｍｇ、９５％）を白色固体として得た。Ｓ５のエナンチオマ純度は６７％であった（ＡＳ−Ｈカラムを使用して、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）により測定された）。
【０２８２】
ｔｅｒｔ−ブチル２−（５−（４−クロロフェニル）−６，７−ジメチル−２−チオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［２，３−ｅ］［１，４］ジアゼパム−３−イル）アセテート（Ｓ６）
ジグリム（１．２５ｍｌ、０．４Ｍ）中のＳ５（２１０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ、１等量）溶液に、五硫化リン（２２２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、２．００等量）、炭酸水素ナトリウム（１６８ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ、４．００等量）を逐次添加した。反応混合物を９０℃に加熱した。１６時間後、鹹水（２０ｍｌ）および酢酸エチル（３５ｍｌ）を添加した。２層が分離し、水層を酢酸エチル（３×３０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水（２ｘ１５ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、２４グラムシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、回収されたＳ５（７３ｍｇ、３４％）と共に、Ｓ６（１４１ｍｇ、６５％）を褐色固体として得た。
【０２８３】
ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾール［４，３−ａ］［１，４］ジアゼパム−６−イル）アセテート［（±）ＪＱ１］
０℃のＴＨＦ（２．６ｍｌ、０．１４Ｍ）中のＳ６（１５８ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、１等量）溶液に、ヒドラジン（０．０１５ｍｌ、０．４５ｍｍｏｌ、１．２５等量）を添加した。反応混合物を２３℃に加温して、２３℃で１時間撹拌した。全ての溶剤を減圧下で除去した。得られたヒドラジンを精製なしで直接使用した。次にヒドラジンをオルト酢酸トリメチルとトルエンの２：３混合物（６ｍｌ、０．０６Ｍ）に溶解した。反応混合物を１２０℃に加熱した。２時間後、全ての溶剤を減圧下で除去した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、４ｇのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、ＪＱ１（１４０ｍｇ、２段階で８５％）を白色固体として得た。反応条件は、不斉中心をさらにエピマー化して、ラセミ体ＪＱ１がもたらされた。（ＡＳ−Ｈカラムを用いて、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）により測定された）。
【０２８４】
スキームＳ２．鏡像異性的に濃縮された（＋）−ＪＱ１の合成
【化４６】
0006022442.tif 000051
【０２８５】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ］カルボニル｝アミノ）−４−｛［３−（４−クロロベンゾイル）−４，５−ジメチルチオフェン−２−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート（Ｓ３）
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍｌ、１．０Ｍ）中の９−フルオレニルメトキシカルボニル−アスパラギン酸β−ｔｅｒｔ−ブチルエステル［Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ］（４１１ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ、１．０等量）溶液に、（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシル）トリピロリジノホスホニウム（ＰｙＢＯＰ）（４９４ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ、０．９５等量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．５０ｍｌ、２．８ｍｍｏｌ、２．７５等量）を逐次した。次に混合物を２３℃で５分間撹拌した。次にＳ２（２６６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１等量）を固体として添加した。反応混合物を２３℃で撹拌した。４時間後、酢酸エチル（２０ｍｌ）および鹹水（２０ｍｌ）を添加した。２層が分離し、水層を酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、４０グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、Ｓ３（４５２ｍｇ，７２％）を褐色油として得た。
【０２８６】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−アミノ−４−（（３−（４−クロロベンゾイル）−４，５−ジメチルチオフェン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタノエート（Ｓ４）
２３℃のＤＭＦ溶液（２．２ｍｌ、０．２２Ｍ）中の２０％ピペリジンに、化合物Ｓ３（３１０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ、１等量）を溶解した。３０分後、酢酸エチル（２０ｍｌ）および鹹水（２０ｍｌ）を反応混合物に添加した。２層が分離し、水層を酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水（３×２５ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、２４グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、遊離アミンＳ４（１８４ｍｇ、９０％）を黄色固体として得た。エナンチオマ純度は、９１％であった。（ＡＳ−Ｈカラムを使用して、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）によりチェックした）。
【０２８７】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（５−（４−クロロフェニル）−６，７−ジメチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［２，３−ｅ］［１，４］ジアゼパム−３−イル）アセテート（Ｓ５）
アミノケトン（Ｓ４）（１８４ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）をトルエン（１０ｍｌ、０．０４Ｍ）に溶解した。シリカゲル（３００ｍｇ）を添加して、反応混合物を９０℃に加熱した。３時間後、反応混合物を２３℃に冷却した。シリカゲルを濾過して、酢酸エチルで洗浄した。合わせた濾液を濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、１２グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、化合物Ｓ５（１６８ｍｇ、９５％）を白色固体として得た。エナンチオマ純度は９０％であった（ＡＳ−Ｈカラムを使用して、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）により測定された）。
【０２８８】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾール［４，３−ａ］［１，４］ジアゼパム−６−イル）アセテート［（＋）ＪＱ１］
−７８℃のＴＨＦ（１．８ｍｌ、０．１５Ｍ）中のＳ５（１１４ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、１等量）溶液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（ＴＨＦ中の１．０Ｍ溶液、０．３ｍｌ、０．３０ｍｍｏｌ、１．１０等量）を添加した。反応混合物を−１０℃に加温して、２３℃で３０分間撹拌した。反応混合物を−７８℃に冷却した。クロロリン酸ジエチル（０．０４７ｍｌ、０．３２ｍｍｏｌ、１．２０等量）を反応混合物に添加した２２。得られた混合物を−１０℃で４５分間加温した。酢酸ヒドラジド（３０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ、１．５０等量）を反応混合物に添加した。反応混合物を２３℃で撹拌した。１時間後、９０℃に加熱された反応混合物に、１−ブタノール（２．２５ｍｌ）を添加した。１時間後、全ての溶剤を減圧下で除去した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ｓｙｓｔｅｍ、４ｇシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）で精製し、（＋）−ＪＱ１（１１４ｍｇ、９２％）を白色固体として９０％のエナンチオマ純度で得た（ＡＳ−Ｈカラム、８５％ヘキサン−メタノール、２１０ｎｍ、ｔＲ（Ｒ−鏡像異性体）＝１．５９分、ｔＲ（Ｓ−鏡像異性体）＝３．６７分を使用して、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）によって測定した）。キラル分取ＨＰＬＣ（ＯＤ−Ｈカラムを使用したＡｇｉｌｅｎｔ高圧液体クロマトグラフィー）によって生成物をさらに精製し、９９％ｅｅ以上でＳ鏡像異性体を得た。
１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃）δ７．３９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｔ，Ｊ＝６．６ＭＨｚ，１Ｈ），３．５４−３．５２（ｍ，２Ｈ），２．６６（ｓ，３Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ），１．６７（ｓ，３Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ）．
１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃）δ１７１．０，１６３．８，１５５．７，１５０．０，１３６．９，１３１．１，１３０．９，１３０．６，１３０．３，１２８．９，８１．２，５４．１，３８．１，２８．４，１４．６，１３．５，１２．１．
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値Ｃ２１Ｈ２４ＣｌＮ２Ｏ３Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋：４５７．１４６０，実測値４５７．１４５１ｍ／ｚ．
ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）、Ｒｆ：０．３２（ＵＶ）
［α］２２Ｄ＝＋７５（ｃ０．５、ＣＨＣｌ３）
【０２８９】
Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨを出発原料として用いて、同様にして（−）−ＪＱ１を合成し、キラル分取ＨＰＬＣ（ＯＤ−Ｈカラムを使用したＡｇｉｌｅｎｔ高圧液体クロマトグラフィー）によってさらに精製して、９９％ｅｅを超えるＲ鏡像異性体を得た。［α］２２Ｄ＝−７２（ｃ０．５、ＣＨＣｌ３）
【０２９０】
追加的な化合物の合成
スキームＳ３で図示されるようにして、追加的な本発明の化合物を調製した。
【０２９１】
スキームＳ３．ヒドラジン誘導体の合成
【化４７】
0006022442.tif 000052
【０２９２】
スキームＳ３で示されるようにして、（＋）−ＪＱ１のｔ−ブチルエステル（１）を切断して遊離酸（２）をもたらし、それをヒドラジンと結合してヒドラジド（３）をもたらした。４−ヒドロキシベンズアルデヒドとの反応は、ヒドラゾン（４）を生じた。
【０２９３】
ヒドラジド（３）およびヒドラゾン（４）のどちらも、少なくとも１つの生物学的アッセイで活性を示した。
【０２９４】
ヒドラジド（３）と多様なカルボニル含有化合物との反応によって、化合物のライブラリーを調製した（上の表Ａ参照）。
【０２９５】
例えばアッセイ開発のためのプローブとして使用するために、追加的な化合物を調製した。例示的な合成を下のスキームＳ４に示す。
【０２９６】
スキームＳ４．プローブとして有用な誘導体の合成
【化４８】
0006022442.tif 000053
【０２９７】
追加的な化合物を下の表で示すようにして調製した。
【０２９８】
【表５】
0006022442.tif 000054
【０２９９】
【表６】
0006022442.tif 000055
【０３００】
【表７】
0006022442.tif 000056
【０３０１】
【表８】
0006022442.tif 000057
【０３０２】
【表９】
0006022442.tif 000058
【０３０３】
【表１０】
0006022442.tif 000059
【０３０４】
【表１１】
0006022442.tif 000060
【０３０５】
【表１２】
0006022442.tif 000061
【０３０６】
各化合物のスペクトルデータは、割り当てられた構造に一致した。
【０３０７】
ＩＩ．生物学的活性および処理法
実施例１：ＪＱ１はＢＲＤＴの阻害剤である
アセチルリジン競合的小分子による、ヒトブロモドメインの標的指向化の実現可能性が、最近確立された（Ｆｉｌｉｐｐａｋｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４６８：１０６７（２０１０））。指標研究は、がん発病に関係があるとされるＢＥＴファミリー活性化補助因子タンパク質ＢＲＤ４の強力なチエノジアゼピン阻害剤（（＋）−ＪＱ１；図２Ａ；Ｋｄ＝９０ｎＭ）を同定した（Ｆｉｌｉｐｐａｋｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．）。ヒトＢＲＤ４（１）とヒトＢＲＤＴ（１）とのタンパク質配列アラインメントは、（＋）−ＪＱ１に接触することが予測される全ての表面残基を含めて、８１％の同一性および８９％の類似性を明らかにする（図１および３）。これらの見識、および示差走査型蛍光定量法によって確立されたＢＲＤＴ（１）への結合の予備的証拠（Ｆｉｌｉｐｐａｋｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．）に基づいて、ＢＲＤＴ（１）に対する（＋）−ＪＱ１の生化学的および機能的効果を評価した。
【０３０８】
ＢＲＤＴ（１）への競合的結合を評価するために、組換えエピトープ標識ＢＲＤＴ（１）への合成ビオチン化テトラアセチル化ヒストン４ペプチド（Ｈ４Ｋａｃ４、残基１〜２０）の結合を定量できる、均質発光近接アッセイ（ａｌｐｈａ−ｓｃｒｅｅｎ）を用いた。（＋）−ＪＱ１の投与量決定試験は、半数阻害濃度（ＩＣ５０）値１１ｎＭで、Ｈ４Ｋａｃ４結合の強力な阻害を実証した（図２Ｂ）。対照的に、（−）−ＪＱ１立体異性体はＢＲＤＴ（１）に対して不活性であり、立体特異的リガンド競合的結合事象が確立された。
【０３０９】
実施例２：ＪＱ１は精子形成中にＢＲＤＴ活性を阻害する
生体内ＢＲＤＴ機能ブロックの可能な帰結を判定するために、オスマウスに投与されたＪＱ１の精子形成作用を評価した。マウスＢＲＤＴ（１）は、分子認識に影響する全ての表面残基（図４）を含めて、ヒトＢＲＤＴ（１）に対する９０％のアミノ酸配列同一性と９５％の類似性を呈示し、マウスモデル系におけるＪＱ１使用の有効性を支持する。幼若または成体Ｃ５７ＢＬ６／Ｊ／１２９Ｓ５ハイブリッドオスマウスに、３または６週間にわたり、ＪＱ１（５０ｍｇ／ｋｇ／日）またはビヒクル対照を毎日腹腔内注射した。３週間の処理後、マウスを殺処分し、またはＪＱ１投与を継続しながらメスと交尾させた。ＪＱ１処理オスは、対照オスと比較して、大幅により小さな精巣を有することが、普遍的に観察された（図５Ａ）。各時点で、ＪＱ１で処理されたオスは、精巣体積の著しくかつ有意な低下を起こした（図５Ｂ）。３〜６週齢に処理されたオスは対照の７５．４％への低下を示し、６〜９週齢に処理されたオスは対照の５４．７％への低下を示し、ＪＱ１で６週間にわたって（６〜１２週齢）処理されたオスは、最も劇的な対照の４０．６％への低下を示した（図５Ｂ）。精巣体積の低下に一致して、ＪＱ１処理されたオスの精細管はより細く、それらの管腔内に明白で豊富な精子を有する精細管の量と数が低下していた（図５Ｃ〜５Ｆ）。対照マウスからの多数の精細管が、精子に満ちていることが観察された一方で（図５Ｃおよび５Ｅ）、ＪＱ１処理オスでは、精子のある精細管数およびこれらの精細管内の精子量が低下していた（図５Ｄおよび５Ｆ）。精巣重量低下に一致して（図５）、ＪＱ１処理オス（６週間の処理）における最も劇的な知見は、わずかな精細管のみが顕著な数の成熟精子を含有する、精細管変性であった（図５Ｅおよび５Ｇ）。ＪＱ１処理オスの精巣上体の組織学的分析もまた、同様の所見を示し、対照で観察された存在量と比較して、より少ない精子が精巣上体管腔内に観察された（図５Ｇおよび５Ｈ）。これらの結果は、Ｃ５７Ｂ６マウスがＪＱ１で処理された、反復研究からの知見と一致する（図８Ａ〜８Ｃ）。
【０３１０】
これらの欠陥をさらに特性解析するために、３週間の処理（３〜６週齢）後に精子数を測定した。精巣上体精子数が対照の２７．８％に低下した一方で、６週間の処理後には、ＪＱ１処理マウスの精巣上体尾部中の精子は対照の１０．９％であったことが分かった（図６Ａ）。さらに、対照の精巣上体尾部からの精子の８５％が進行性運動を示したのに対して、ＪＱ１処理は、精子の５％のみに進行性運動をもたらした。したがって、ＪＱ１処理は、精子数を定量的に低下させ、精子運動性を定性的に低下させる。これらの知見は、ＢＲＤＴ（１）欠乏マウスで観察されたものを表現型模写する（Ｓｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １３４：３５０７（２００７））。さらに、ＪＱ１処理オスの精巣のテストステロン産生管間ライディッヒ細胞は、組織学的に正常なようであり（図６）、ＪＱ１処理オスのテストステロン応答性精嚢は極めて正常であったので、これらのマウスにおいてアンドロゲン作用に欠陥はないようであった。最後に、ＪＱ１は精細管区画に対して著しい影響を及ぼしたので、それは血液：精巣境界を効果的に越えて、精子形成を変更させることができるはずである。
【０３１１】
実施例３：ＪＱ１はＢＲＤＴ活性の可逆的阻害剤である
男性の妊性および受精可能性に対するＪＱ１の帰結をさらに評価するために、対照（ｎ＝２）および３週間処理されたＪＱ１処理（ｎ＝３）オスをそれぞれ２匹のメスと共に収容して、さらに３週間の処理を施した。対照オスが４匹のメスを全て妊娠させたのに対し、ＪＱ１はオスに対する避妊効果を有した（１匹は２匹のメスを妊娠させられなかった一方、他の２つの各ケージでは、２匹のメスの内１匹のみが妊娠した）。５週間の処理後に、これらの同じオスを過剰排卵メス（ケージ毎に２匹のメス）に試験繁殖させた時、全てのメスは膣栓を実証し、ＪＱ１が交尾挙動を変更させなかったことが示唆され、これらのオスにおける正常テストステロン応答性組織に一致した。これらのメスからの卵母細胞をそれらの卵管膨大部から採取して２日間培養し、それらの交尾後発生能を判定した（図６Ｂ）。対照と交尾させたメスからの卵母細胞の大部分が、２細胞（７２．８％）および４細胞（７０．１％）胚に発達したのに対し、ＪＱ１オスと交尾させたメスからの卵母細胞は少数だけが２細胞（１０．１％）または４細胞（６．６％）胚に発達し、それらのより低い精子数、運動性低下、および妊性欠陥に一致する。重要なことには、男性の妊性に対するＪＱ１の効果は、可逆的であることが発見された。ＪＱ１の休止に続いて、６匹中６匹のＪＱ１処理成体オスマウスが、翌１ヶ月以内に２腹の子孫（１腹あたり７．２５＋／−０．５８仔）の雄親となった。これらの結果は、オスマウスの精子運動性、精巣重量、および精子数が、ＪＱ１処理休止後に正常レベルに戻るという知見に一致する（図９Ａ〜９Ｃ）。
【０３１２】
実施例４：ＪＱ１媒介ＢＲＤＴ阻害の分子分析
ＪＱ１がそこで機能する、精子形成段階を分子的に定義するために、ＪＱ１処理マウスおよび対照から単離された精巣上で、定量的ＲＴ−ＰＣＲを実施した（図７Ａ）。精原幹細胞および初期分割精原細胞のマーカーである、Ｐｌｚｆなどの精子形成の初期に発現される遺伝子（Ｂｕａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３６：６４７（２００４）；およびＣｏｓｔｏｙａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３６：６５３（２００４））、および主に分化精原細胞および前細糸期精母細胞内で発現されるＳｔｒａ８（Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．７９：３５（２００８））は、対照オスと比較して、ＪＱ１処理マウス精巣中でそれぞれ２．０倍および１．３倍に濃縮された。しかし、Ｂｒｄｔ（中期から後期精母細胞中で発現される）（Ｓｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒ．Ｐａｔｔｅｒｎｓ４：５１３（２００４））、Ｃｃｎａ１（パキテン期精母細胞中で発現される）（Ｓｗｅｅｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １２２：５３（１９９６））、Ｐａｐｏｌｂ（ステップ１〜７の円形精子細胞中で発現される）（Ｋａｓｈｉｗａｂａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２２８：１０６（２０００））、Ｋｌｆ１７（ステップ４〜７の精子細胞内で発現される）（Ｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｃｈ．Ｄｅｖ．１１８：２３３（２００２））、およびＰｒｍ１（ステップ７〜１６の精子細胞内で発現される）（Ｋｌｅｅｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１０５：７１（１９８４））を含む、減数分裂または精子完成中に発現される遺伝子は、対照と対比して、ＪＱ１処理マウス精巣中で２．１倍〜４．０倍より低い。その中でパキテン期精母細胞発現遺伝子であるＨｉｓｔ１ｈ１ｔが上方制御されるＢｒｄｔノックアウト研究（Ｓｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１３４：３５０７（２００７））とは異なり、ＪＱ１処理は、Ｃｃｎａ１抑制に一致して、この遺伝子に２．６倍の下方制御をもたらす。上で述べたこれらのｍＲＮＡ知見および組織学的分析に一致して、ＪＱ１処理は、ステップ１０〜１５の精子細胞核内で発現される遷移タンパク質１（ＴＮＰ１）に対して陽性の精子細胞数を低下させる（図７Ｂおよび７Ｃ）（Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．７１：１０１６（２００４））。
【０３１３】
男性避妊薬に対する薬理学的アプローチは、依然として医学における積年の課題のままである。本明細書に記載される結果は、高度に強力かつ選択的化学プローブを使用して、男性避妊薬標的としてのＢＲＤＴのアミノ末端ブロモドメインの薬理学的検証を提供する。ＪＱ１は、哺乳類において、血液：精巣境界を越えて、精子形成中にブロモドメイン活性を阻害し、精子発生と運動性を損ない、受精卵母細胞数を低下させ、可逆的避妊効果を生じ得る新薬物群のためのリード化合物となる。ヒトおよびマウスＢＲＤＴタンパク質は高度に保存されており、本構造予測に基づいてほぼ同一のブロモドメインポケットを有するので、これらの発見は男性に完全に置き換え得て、男性避妊薬の新規かつ有効なストラテジーを提供する。
【０３１４】
本明細書で報告される結果は、以下の方法と材料を使用して得られた。
【０３１５】
（＋）−ＪＱ１
先に記載されたようにして（Ｆｉｌｉｐｐａｋｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４６８：１０６７（２０１０））、直接作用型小分子ブロモドメイン阻害剤を調製した。
【０３１６】
タンパク質のクローニング、発現、および精製
先に記載されたようにして（Ｆｉｌｉｐｐａｋｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．）、ヒトＢＲＤＴのＮ末端領域をクローンし、大腸菌（Ｅ−Ｃｏｌｉ）中で発現させて精製した。
【０３１７】
ＢＲＤＴ近接アッセイ
製造会社のプロトコル（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，ＵＳＡ）をわずかに修正して、アッセイを実施した。全ての試薬は、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１％ｗ／ｖのＢＳＡ、０．０１％ｗ／ｖのＴｗｅｅｎ２０、ｐＨ７．５の中で希釈して、プレートへの添加前に室温に平衡化させた。原液へのαビーズの添加後、全ての後続ステップは弱光条件で実施した。最終濃度が８０ｎＭのＢＲＤＴ、２５μｇ／ｍｌのＮｉ被覆アクセプタビーズ、および８０ｎＭのビオチン化Ｈ４テトラアセチルである、構成要素の２×溶液を１０μＬの３８４ウェルプレート（ＡｌｐｈａＰｌａｔｅ−３８４、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，ＵＳＡ）内に添加した。ＣＥＭ  Ｌｉｂｅｒｔｙ  ９００８００５マイクロ波ペプチド合成装置上で、ＢＲＤＴのためのビオチン化ペプチドを研究所内で合成した：Ｈ４テトラアセチル、ビオチン−ＰＥＧ２−ＳＧＲＧＫａｃＧＧＫａｃＧＬＧＫａｃＧＧＡＫａｃＲＨＲＫ−ＣＯＯＨ。マルチチャネルピペット（最適化実験のため）またはＢｉｏｔｅｋ  ＥＬ４０６液体ハンドラーのどちらかによって、ウェルへの添加を実施した。１分間の１０００ｒｐｍ遠心沈殿後、Ｊａｎｕｓ  Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，ＵＳＡ）を使用して、ピン移動によって、貯蔵プレートからの１００ｎｌの化合物を添加した。ストレプトアビジン被覆ドナービーズ（２５μｇ／ｍｌ最終濃度）を先の溶液同様に、２×、１０μｌ容積で添加した。この添加に続いてプレートをホイルで密封し、遮光して蒸発を防止した。この場合もやはりプレートを１０００ｒｐｍで１分間遠心沈殿した。次に、アッセイの読み取りに先だって、プレートリーダーで（温度平衡のため）、プレートを室内で１．５時間インキュベートした。Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  ２１０４（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，ＵＳＡ）上で、製造会社のプロトコルを利用してＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ測定を実施した。
【０３１８】
配列アラインメント
完全長ブロモドメイン含有タンパク質のアミノ酸配列は、米国心臓、肺、血液研究所（ＵＳ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ  ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（ヒトＢＲＤＴ受入番号Ｑ５８Ｆ２１；ヒトＢＲＤ４受入番号Ｏ６０８８５；マウスＢＲＤＴ受入番号Ｑ９１Ｙ４４）から得られた。ＭＡＦＦＴ（ｖ６．２４０）を使用して、完全長ＢＲＤＴおよびＢＲＤ４の多配列アラインメントを作成した。（Ｋａｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３３：５１１（２００５）；Ｋａｔｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３０：３０５９（２００２）；およびＫａｔｏｈ  ａｎｄ  Ｔｏｈ，Ｂｒｉｅｆ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍ．９：２８６（２００８））。潜在的に大きなアラインメント不能領域を含有する適切な配列としてＥ−ＩＮＳ−ｉアルゴリズムを選択し、適切な高度に進化的に保存された配列としてＢＬＯＳＵＭ６２重み行列を使用した。Ｇａｐ  ｏｐｅｎｉｎｇ  ｐｅｎａｌｔｙおよびｏｆｆｓｅｔ値は、デフォルトパラメータに設定した。
【０３１９】
マウス研究
（＋）−ＪＱ１をＤＭＳＯに５０ｍｇ／ｍｌで溶解し、次に（２−ヒドロキシプロピル）−β−シクロデキストリン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）中で１：１０に希釈した。引き続く混合物をマウス体重の１％（最終量は５０ｍｇ／ｋｇ／日）で、オスマウスに腹腔内注射した。対照は、（２−ヒドロキシプロピル）−β−シクロデキストリンに１：１０に溶解されたＤＭＳＯであり、同様に注射された。これらの研究のための幼若または成体Ｃ５７ＢＬ６／Ｊ／１２９Ｓ５ハイブリッドマウスは、注射前に毎日秤量して、自由給餌した。これらの研究は、ベイラー医科大学（Ｂａｙｌｏｒ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）のＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｖｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅによって認可され、全ての実験は、ＮＩＨの実験動物の管理と使用に関する指針（ＮＩＨ  ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ）に従って行われた。
【０３２０】
組織学的分析
ブアン固定精巣および精巣上体の組織学的分析は、過ヨウ素酸シッフおよびヘマトキシリンを使用して、先に記載されたようにして（Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５：２０１（１９９７））実施した。ブアン固定精巣を使用して、記載されたようにして（Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．７１：１０１６（２００４）、ウサギ抗ＴＮＰ２（１：６００）染色およびヘマトキシリン対比染色を実施した。
【０３２１】
精巣上体精子数
記載されたようにして（Ｒｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＦａｓｅｂＪ．２１：１０１３（２００７））、精巣上体全体から、または成体マウスの精巣上体尾部から単離された精子の計数を実施した。手短に述べると、精巣上体を解剖してあらかじめ暖めたＭ２培地に入れて刻み、計数に先立ってＣＯ２インキュベーター内で３７℃でインキュベートした。
【０３２２】
受精および胎芽発育可能性
雌と交尾して卵母細胞を受精させる、処理マウスの精子能力を評価するために、２１日齢のＣ５７ＢＬ６／Ｊ／１２９Ｓ５ハイブリッドメスに５ＩＵの妊馬血清ゴナドトロピン（ＰＭＳＧ；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，ＥＭＤ，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）、それに続いて４８時間後に５ＩＵのヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，ＥＭＤ，Ｇｉｂｂｓｔｏｗｎ，ＮＪ）を注射して、処理されたオスと交尾させた。記載されたようにして（Ａｎｄｒｅｕ−Ｖｉｅｙｒａ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｂｉｏｌ．８：ｅ１０００４５３（２０１０）；およびＢｕｒｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ３００：６３３（２００３））、膣栓のあるメスの卵管膨大部から卵母細胞を単離して計数し、Ｍ１６培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）中で、２４時間（２細胞胚の計数）および４８時間（４細胞胚の計数）培養した。
【０３２３】
定量的ＲＴ−ＰＣＲ分析
ＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して、マウス精巣から全ＲＮＡを単離した。次にＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩＩ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して、全ＲＮＡを逆転写した。ＳＹＢＲ  ｇｒｅｅｎ  ｍａｓｔｅｒ  ｍｉｘおよびカスタマイズされたプライマーを使用して、定量的ＰＣＲを実施した（表１）。
【０３２４】
【表１３】
0006022442.tif 000062
【０３２５】
全ての定量的ＰＣＲアッセイは、各サンプルについて二連で行った。Ｇａｐｄｈを定量化のための内部対照として使用した。
【０３２６】
その他の実施形態
前述の説明から、本明細書に記載される発明に変更および修正を加えて、様々な用途と条件に適合させてもよいことは明らかである。このような実施形態もまた、以下の請求項の範囲内である。
【０３２７】
本明細書の任意の変数の定義における要素一覧の列挙は、任意の単一要素または列挙された要素の組み合わせ（またはサブコンビネーション）としての変数の定義を含む。本明細書の実施形態の列挙は、任意の単一実施形態としての、または任意のその他の実施形態またはその部分と組み合わさった、その実施形態を含む。
【０３２８】
本明細書で言及される全ての特許および刊行物は、具体的にあらゆる目的のために特許および刊行物がそれぞれが独立して個々に援用されたかのように、参照によって本明細書に援用する。本明細書に記載される主題は、米国仮特許出願第６１／３３４，９９１号明細書、米国仮特許出願第６１／３７０，７４５号明細書、および米国仮特許出願第６１／３７５，６６３号明細書の主題に関連してもよく、そのそれぞれを参照によって本明細書に組み込む。
【図１】
0006022442.tif 000066
【図２】
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【図３−１】
0006022442.tif 000068
【図３−２】
0006022442.tif 000069
【図３−３】
0006022442.tif 000070
【図３−４】
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【図４−１】
0006022442.tif 000072
【図４−２】
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【図４−３】
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【図５−１】
0006022442.tif 000075
【図５−２】
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【図５−３】
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【図５−４】
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【図６】
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【図７−１】
0006022442.tif 000080
【図７−２】
0006022442.tif 000081
【図８−１】
0006022442.tif 000082
【図８−２】
0006022442.tif 000083
【図９−１】
0006022442.tif 000084
【図９−２】
0006022442.tif 000085
【配列表】
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