(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物
【化１】
0005870111.tif 000053
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、Ｃ１−Ｃ３アルコキシカルボニルオキシメチル、Ｃ１−Ｃ３アルキルカルボニルオキシメチルまたはＣ３−６シクロアルキルカルボニルオキシメチルであり；
Ｒ３は、独立して各存在において、メチル、フルオロまたはクロロであり；
Ｒ４は、ヒドロキシル、メチルカルボニルアミノ、ヒドロキシメチルカルボニルアミノ、メトキシカルボニルアミノ、イミダゾール−２−イルスルファニル、チアゾール−２−イルスルファニル、１，２，４−トリアゾリルスルファニル、１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル、または１−メチル−１，２，４−トリアゾール−５−イルスルファニルであり；
ｎは、１または２である］
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２が各々、水素である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
Ｒ１およびＲ２が同じであり、かつ水素以外である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
Ｒ１およびＲ２が各々、イソプロピルオキシカルボニルオキシメチルである、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６】
ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートである、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩と、薬学的に許容可能な担体、賦形剤または希釈剤とを含む、医薬組成物。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む、うつ病性障害を処置するための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｍＧｌｕＲ２／３アンタゴニストとしての４−置換−３−ベンジルオキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルタメートは、脳内の主要な興奮性神経伝達物質であり、１１個もの異なる受容体（各々がそれ独自の薬理学を有する）によって媒介される多種多様の生理学的プロセスに関わっている。代謝調節型グルタミン酸受容体サブタイプ２および３（ｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３として知られる）は、それらの配列相同性、類似のセカンドメッセンジャー結合および類似の薬理学的特徴に基づいて、ＩＩ群ｍＧｌｕ受容体として一緒に分類されることが多い。ｍＧｌｕ２／３受容体のアンタゴニストは、うつ病性障害および過剰な眠気に関する障害に対する動物モデルにおいて有意な薬理学的作用を示した。同様に、ｍＧｌｕ２／３アンタゴニストは、うつ病性障害（例えば、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、単極性うつ病、気分変調および／または循環気質）の処置において有用である、および／または過剰な眠気に関する障害（例えば、日中の過剰な眠気（ＥＤＳ）、閉塞性睡眠時無呼吸またはナルコレプシーに関連する過眠、概日リズム睡眠障害（交代勤務睡眠障害、時差ぼけ障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害および非２４時間睡眠覚醒症候群を含むがこれらに限定されない）、特発性過眠症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｈｙｐｅｒｓｏｍｎｏｌａｎｃｅ）および／または非回復性睡眠（ＮＲＳ）に関連する過剰な眠気）の処置において有用であると考えられる。
【０００３】
特許文献１は、抗うつ剤をはじめとした、種々の障害の処置に有用な代謝調節型グルタミン酸受容体調節因子として、ある特定の３−一置換ビシクロ［３．１．０］ヘキサン化合物を記載している。特許文献２は、うつ症状をはじめとした様々な障害の処置において使用するためのＩＩ群ｍＧｌｕ受容体アンタゴニストとして様々な３−一置換ビシクロ［３．１．０］ヘキサン化合物を記載している。特許文献３は、うつをはじめとした様々な障害の処置において使用するためのＩＩ群ｍＧｌｕ受容体アンタゴニストおよびそのプロドラッグとして様々な３−一置換ビシクロ［３．１．０］ヘキサン化合物を記載している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許第５，９１６，９２０号
【特許文献２】米国特許第７，１５７，５９４号
【特許文献３】米国特許出願公開第２００７／００２１３９４（Ａ１）号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、ｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３受容体に対して高いアンタゴニスト効力を有する４−置換−３−フェニルスルファニルメチル−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン化合物のファミリーを提供する。本発明の化合物はまた、特に他のｍＧｌｕ受容体と比べて、ｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３受容体に対して選択的である。ある特定の化合物はまた、本発明の化合物が、うつ病性障害（これは、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、単極性うつ病、気分変調および／または循環気質を含み得る）および過剰な眠気に関する障害（これは、日中の過剰な眠気（ＥＤＳ）、閉塞性睡眠時無呼吸またはナルコレプシーに関連する過眠、概日リズム睡眠障害（交代勤務睡眠障害、時差ぼけ障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害および非２４時間睡眠覚醒症候群を含むがこれらに限定されない）、特発性過眠症および／または非回復性睡眠（ＮＲＳ）に関連する過剰な眠気を含み得る）の処置に有用であり得ることを動物モデルによって証明している。この機構の抗うつ様作用および覚醒促進作用は、別途、既存の抗うつ薬で処置することが困難な、疲労などのうつ病性障害の症状に対する効果も予測する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、式Ｉの化合物：
【化１】
0005870111.tif 000002
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、Ｃ１−Ｃ３アルコキシカルボニルオキシメチル、Ｃ１−Ｃ３アルキルカルボニルオキシメチルまたはＣ３−６シクロアルキルカルボニルオキシメチルであり；
Ｒ３は、独立して各存在において、メチル、フルオロまたはクロロであり；
Ｒ４は、ヒドロキシル、メチルカルボニルアミノ、ヒドロキシメチルカルボニルアミノ、メトキシカルボニルアミノ、イミダゾール−２−イルスルファニル、チアゾール−２−イルスルファニル、１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル、１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル、または１−メチル−１，２，４−トリアゾール−５−イルスルファニルであり；
ｎは、１または２である］
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【０００７】
本発明の特徴は、Ｒ１およびＲ２の両方が水素である式Ｉの化合物（二酸化合物）がインビボにおいて治療的に活性な化合物であるのに対し、Ｒ１もしくはＲ２またはその両方が水素以外である化合物は、それらの治療的に活性な二酸アナログのプロドラッグであることである。Ｒ１もしくはＲ２またはその両方が水素以外である化合物は、インビボで加水分解されることにより、治療的に活性な二酸アナログを提供する。そのプロドラッグ化合物（特に、ジエステルプロドラッグ）は、経口的に投与されたとき、二酸化合物（Ｒ１およびＲ２の両方が水素）の経口投与と比べて、二酸代謝産物の改善されたバイオアベイラビリティを提供するが、その二酸化合物は、静脈内、筋肉内または皮下に投与されたとき、より良好な活性を提供する。
【０００８】
本発明の別の態様において、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とともに式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物が提供される。さらに、本発明のこの態様は、うつ病性障害（例えば、大うつ病性障害、単極性うつ病、気分変調および／または循環気質のような）の処置に適合した医薬組成物を提供し、その医薬組成物は、その１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤、担体または希釈剤とともに式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む。
【０００９】
本発明のこの態様のさらなる実施形態は、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、賦形剤または希釈剤および必要に応じて他の治療用成分とともに式Ｉに記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を提供する。本発明のこの態様のなおもさらなる実施形態において、その医薬組成物は、うつ病性障害の処置に有用な薬物である第２の治療薬（例えば、セロトニン再取り込み阻害剤、例えば、フルオキセチンおよび／またはシタロプラムのような）をさらに含む。
【００１０】
本発明のこの態様のなおも別の実施形態において、過剰な眠気に関する障害（例えば、日中の過剰な眠気（ＥＤＳ）、閉塞性睡眠時無呼吸またはナルコレプシーに関連する過眠、概日リズム睡眠障害（交代勤務睡眠障害、時差ぼけ障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害および非２４時間睡眠覚醒症候群を含むがこれらに限定されない）、特発性過眠症および／または非回復性睡眠（ＮＲＳ）に関連する過剰な眠気のような）の処置に適合した医薬組成物が提供され、その医薬組成物は、その１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤、担体または希釈剤とともに式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む。
【００１１】
本発明はまた、哺乳動物においてうつ病性障害（例えば、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、単極性うつ病、気分変調および／または循環気質のような）を処置する方法も提供し、その方法は、そのような処置を必要とする哺乳動物に、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与する工程を含む。本発明のこの態様の別の実施形態において、その方法はさらに、うつ病性障害の処置において有用な薬物である第２の治療薬（例えば、セロトニン再取り込み阻害剤、例えば、フルオキセチンおよび／またはシタロプラムのような）を同時の、別個のまたは連続的な併用で投与する工程を含む。
【００１２】
本発明の他の実施形態は、過剰な眠気に関する障害を処置する方法を提供し、その方法は、そのような処置を必要とする哺乳動物に有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与する工程を含む。本発明のこの態様の他の実施形態において、過剰な眠気は、以下のうちのいずれか１つ以上に起因する：日中の過剰な眠気（ＥＤＳ）、閉塞性睡眠時無呼吸またはナルコレプシーに関連する過眠、概日リズム睡眠障害（交代勤務睡眠障害、時差ぼけ障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害および非２４時間睡眠覚醒症候群を含むがこれらに限定されない）、特発性過眠症または非回復性睡眠（ＮＲＳ）に関連する過剰な眠気。
【００１３】
これらの処置方法の１つの特定の実施形態において、哺乳動物は、ヒトである。
【００１４】
本発明はまた、治療において使用するための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩も提供する。この態様の範囲内において、本発明は、うつ病性障害の処置において使用するための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。さらなる実施形態において、そのうつ病性障害は、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、単極性うつ病、気分変調および／または循環気質のうちのいずれか１つである。本発明のこの態様の別の実施形態において、本発明は、うつ病性障害の処置において、セロトニン再取り込み阻害剤（例えば、フルオキセチンおよび／またはシタロプラムのような）と同時の、別個のまたは連続的な併用で使用するための、式Ｉに記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１５】
さらに、本発明のこの態様は、過剰な眠気に関する障害の処置において使用するための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む。本発明のこの態様の特定の実施形態において、過剰な眠気は、以下のうちのいずれか１つ以上に起因する：日中の過剰な眠気（ＥＤＳ）、閉塞性睡眠時無呼吸またはナルコレプシーに関連する過眠、概日リズム睡眠障害（交代勤務睡眠障害、時差ぼけ障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害および非２４時間睡眠覚醒症候群を含むがこれらに限定されない）、特発性過眠症または非回復性睡眠（ＮＲＳ）に関連する過剰な眠気。
【００１６】
本発明のこの態様の１つの特定の実施形態において、その使用は、哺乳動物、特にヒトにおける使用である。
【００１７】
本発明の別の態様は、うつ病性障害（例えば、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、単極性うつ病、気分変調および／または循環気質のような）を処置するための医薬の製造における式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明のこの態様の別の実施形態は、うつ病性障害を処置するための医薬の製造における、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩およびうつ病性障害の処置において有用な第２の治療薬（例えば、セロトニン再取り込み阻害剤、例えば、フルオキセチンおよび／またはシタロプラムのような）の使用を提供する。本発明の別の実施形態は、過剰な眠気に関する障害を処置するための医薬の製造における式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明のこの態様の特定の実施形態において、その医薬は、以下のうちのいずれか１つ以上の処置のための医薬である：日中の過剰な眠気（ＥＤＳ）、閉塞性睡眠時無呼吸またはナルコレプシーに関連する過眠、概日リズム睡眠障害（交代勤務睡眠障害、時差ぼけ障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害および非２４時間睡眠覚醒症候群を含むがこれらに限定されない）、特発性過眠症または非回復性睡眠（ＮＲＳ）に関連する過剰な眠気。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の化合物は、塩基性部分および酸性部分を有し、それゆえ、いくつかの有機酸および無機酸ならびに有機塩基および無機塩基と反応して、薬学的に許容可能な塩を形成する。本発明の各化合物の薬学的に許容可能な塩は、本願の範囲内であると企図される。用語「薬学的に許容可能な塩」は、本明細書中で使用されるとき、生存している生物にとって実質的に無毒性である本発明の化合物の任意の塩のことを指す。そのような塩としては、当業者に公知の、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２−１９（１９７７）に列挙されている塩が挙げられる。
【００１９】
本発明の化合物の好ましいクラスは：
１）Ｒ１およびＲ２の両方が、水素である；
２）Ｒ１もしくはＲ２またはその両方が、水素以外である；
３）Ｒ１およびＲ２の両方が、水素以外である；
４）Ｒ１およびＲ２が、同じであり、かつ水素以外である；
５）Ｒ１およびＲ２が各々、イソプロポキシカルボニルオキシメチルである；
６）ｎが、２である；
７）ｎが、２であり、両方のＲ３基がクロロであり、かつクロロ基がフェニル３位および４位にある；
８）Ｒ４が、ヒドロキシルである、
化合物である。
【００２０】
さらなる好ましい化合物は、所与の置換基についての上記の好ましい選択と、他の置換基の好ましい選択とを組み合わせたものであることは理解されるだろう。このような組み合わせの例としては、限定されないが、以下の化合物の好ましいクラスが挙げられる：
９）ｎが２であり、両方のＲ３基がクロロであり、かつクロロ基がフェニル３位および４位にある（パラグラフ７）、パラグラフ１〜５のいずれか１つの好ましい化合物（Ｒ１およびＲ２についての好ましい選択）；
１０）Ｒ４がヒドロキシルである（パラグラフ８）、パラグラフ１〜５のいずれか１つの好ましい化合物（Ｒ１およびＲ２についての好ましい選択）；
１１）ｎが２であり、両方のＲ３基がクロロであり、かつクロロ基がフェニル３位および４位にあり（パラグラフ７）、Ｒ４がヒドロキシルである（パラグラフ８）、パラグラフ１〜５のいずれか１つの好ましい化合物（Ｒ１およびＲ２についての好ましい選択）。
【００２１】
本発明の特に好ましい化合物は、実施例に記載される化合物である（それらの遊離塩基およびその薬学的に許容可能な塩を含む）。
【００２２】
ある特定の好ましい化合物は：
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその薬学的に許容可能な塩；および
ビス（イソプロポキシカルボニルオキシメチル）（１Ｒ，２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｓ，６Ｒ）−４−アミノ−３−［（３，４−ジクロロフェニル）メトキシ］−２−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−４，６−ジカルボキシレートまたはその薬学的に許容可能な塩（すなわち、実施例１、１０および１５の化合物ならびにそれらの代替の薬学的に許容可能な塩）である。
【００２３】
本明細書中で使用される省略形は、以下のとおり定義される：
「ＢＳＡ」は、ウシ血清アルブミンを意味する。
「ＤＣＧ  ＩＶ」は、（２Ｓ，２’Ｒ，３’Ｒ）−２−（２’，３’−ジカルボキシシクロプロピル）グリシンを意味する。
「ＤＭＥＭ」は、ダルベッコ最小イーグル培地を意味する。
「ＤＭＳＯ」は、ジメチルスルホキシドを意味する。
「ＤＰＢＳ」は、ダルベッコリン酸緩衝食塩水を意味する。
「ＥＤＴＡ」は、エチレンジアミン四酢酸を意味する。
「ＧＴＰ」は、グアノシン三リン酸を意味する。
「ＨＢＳＳ」は、ハンクス緩衝塩溶液を意味する。
「ＨＥＰＥＳ」は、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸を意味する。
「ＨＰＬＣ」は、高圧液体クロマトグラフィーを意味する。
「ＩＢＭＸ」は、３−イソブチル−１−メチルキサンチンを意味する。
「ＩＣ５０」は、最大阻害の５０％が達成される濃度を意味する。
「ｉ．ｖ．」は、静脈内のまたは静脈内にを意味する。
「ｉ．ｐ．」は、腹腔内を意味する。
「Ｌ−ＡＰ−４」は、Ｌ−（＋）−２−アミノ−４−ホスホノ酪酸を意味する。
「ＬＣ／ＭＳ」は、液体クロマトグラフィーに続く質量分析を意味する。
「ｍＦＳＴ」は、マウス強制水泳試験；抗うつ活性に対する動物モデルを意味する。
「ＭＳ」は、質量分析を意味する。
「ＭＳ（ＥＳ＋）」は、エレクトロスプレーイオン化を用いた質量分析を意味する。
「ＮＭＲ」は、核磁気共鳴を意味する。
「ｐ．ｏ．」は、口による経口的を意味する。
「ｔＢｕ」は、第三級ブチル部分を意味する。
【００２４】
一般化学
本発明の化合物は、当該分野において周知であり認められている方法による以下の合成スキームに従って調製され得る。これらのスキームの工程に適した反応条件は、当該分野で周知であり、溶媒および補助試薬（ｃｏ−ｒｅａｇｅｎｔｓ）の適切な置換は、当該分野の技術範囲内である。同様に、合成中間体が、必要に応じまたは所望であれば、様々な周知の手法によって単離され得るおよび／または精製され得ること、ならびにしばしば、様々な中間体をほとんどまたは全く精製せずに直接その後の合成工程において使用することが可能であり得ることも当業者に認識されるだろう。さらに、当業者は、いくつかの状況では、部分が導入される順序が重大な意味を持たないことを認識するだろう。本発明の化合物を生成するために必要な特定の工程の順序は、合成される特定の化合物、出発化合物、および熟練の化学者が十分に認識しているような、置換部分の相対的な傾向に依存する。別段示されない限り、すべての置換基が、先に定義されたとおりであり、すべての試薬が、当該分野において周知でありかつ認識されているものである。
【００２５】
プロドラッグ化合物１は、スキームＩに図示されるように調製され得る（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびｎが、先に定義されたとおりである）。Ｒ１およびＲ２の両方は化合物１において水素ではない。
【化２】
0005870111.tif 000003
化合物１はスキームＩに図示した化学によって作製され得る。化合物４を、当業者に周知の条件下でジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートなどのアミノ保護試薬と反応させることにより、化合物３が得られる。Ｒ１およびＲ２基が、化合物２において同一であるときは、化合物３を、十分量の適切なクロロ−またはヨードメチルアルキルカーボネートおよび適切な試薬（例えば、ヨウ化ナトリウムおよび炭酸セシウム）と、ジメチルホルムアミドなどの好適な溶媒中で反応させることにより、同じＲ１およびＲ２を有する所望のジエステル化合物２が得られる。Ｒ１およびＲ２が、化合物２において異なるときは、第１のクロロメチルアルキルカーボネートの量を約１当量に調節することによって、はじめに、５員環上のカルボン酸をＲ２モノエステルに変換し得る。そのＲ２モノエステル化合物を、１当量の異なるクロロメチルアルキルカーボネートとさらに反応させ得る。次いで、３員環上の遊離カルボン酸基をＲ１エステルに変換することにより、異なるＲ１およびＲ２を有する所望のジエステルを得ることができる。化合物２の５員環上にＲ２モノエステルを生成するために、化合物３を、約１当量の適切なクロロメチルアルキルカーボネートおよび適切な試薬（例えば、ヨウ化ナトリウムおよび炭酸セシウム）と、ジメチルホルムアミドなどの好適な溶媒中で反応させることにより、所望のＲ２モノエステル化合物２（式中、Ｒ１は水素である）が得られる。５員環上のカルボン酸基は、より反応性であるので、３員環上にＲ１モノエステルを生成するために、その５員環上のカルボン酸基が、初めに保護されるべきである。より詳細には、化合物３における５員環上のカルボン酸基を、アルファ−クロロ−４−メトキシトルエン、ヨウ化ナトリウムおよび炭酸水素ナトリウムと、ジメチルホルムアミドなどの好適な溶媒中で反応させることにより、４−メトキシルベンジルモノエステルを得ることができる。次いで、保護された４−メトキシルベンジルモノエステル化合物の３員環上の遊離カルボン酸基を、適切なクロロメチルアルキルカーボネートと反応させることにより、３員環上に所望のＲ１エステルがもたらされる。そのジエステルを、トリフルオロ酢酸などの適切な酸で処理することにより、４−メトキシルベンジルおよびＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基の両方を脱保護することにより、所望のＲ１モノエステル化合物１が得られる。次いで、同じまたは異なるＲ１およびＲ２を有するＲ２モノエステルおよびジエステルを含む化合物２を、ジオキサン中で塩酸などの適切な酸で脱保護することにより、所望の化合物１または薬学的に許容可能な塩が得られる。
【００２６】
【化３】
0005870111.tif 000004
【００２７】
活性な親化合物４は、スキームＩＩに図示されているように調製され得る。
【００２８】
化合物９を、適切な溶媒（テトラヒドロフラン）中で、塩化メタンスルホニルおよび適切な塩基（例えば、トリエチルアミン）と反応させることにより、メシレート化合物６が得られる。化合物６を、１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオールなどのチオール複素環および炭酸セシウムなどの好適な塩基と、ジメチルホルムアミドなどの溶媒中で反応させることにより、Ｒ４が所望のチオ連結された複素環である所望の化合物５を得ることができる。また、化合物６をアジ化ナトリウムと反応させることによりアジド中間体を得て、次いで、それをテトラヒドロフランおよび水中でトリメチルホスフィンで還元することにより、アミンが得られる。得られたアミンが、当業者に周知の方法を用いてさらに所望のアミドまたはカルバメートを形成することにより、Ｒ４が所望のアミドまたはカルバメート基である化合物５を得ることができる。次いで、化合物５を、塩酸または酢酸などの適切な酸で脱保護することにより、化合物４が得られる。Ｒ４が化合物４においてヒドロキシル基であるとき、所望の活性な親化合物４は、ジオキサンなどの適切な溶媒中のＨＣｌなどの適切な酸を用いて全ての保護基を除去することによって化合物７から直接作製され得る。
【００２９】
【化４】
0005870111.tif 000005
【００３０】
２つの主要な中間体７および９はスキームＩＩＩに図示したように調製され得る。
【００３１】
化合物１４（合成の詳細について国際公開第０３／１０４２１７／Ａ２号を参照のこと）を、テトラヒドロフランなどの適切な溶媒中のリチウムトリ（ｓｅｃ−ブチル）ボロヒドリドなどの適切な還元剤を用いて化合物１３に還元する。化合物１３は、テトラヒドロフランなどの適切な溶媒中の塩化メタンスルホニルおよびトリエチルアミンなどの塩基と反応させてメシラート化合物１２を得、それをさらに、テトラヒドロフラン中のフッ化トラブチルアンモニウム（ｔｒａｂｕｔｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ  ｆｌｕｏｒｉｄｅ）またはカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドと反応させて化合物１１を得る。化合物１１を、アセトン中のＯｓＯ４、Ｎ−メチルモルホリン−Ｎ−オキシドおよび水と反応させてジオール化合物１０を得る。次いで化合物１０を、ジメチルホルムアミドなどの適切な溶媒中のテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムヨージドおよび酸化銀を使用して、３，４−ジクロロベンジルブロミドなどの適切に置換されたハロゲン化ベンジルと反応させて化合物９を得る。光延反応条件下で、化合物９を、テトラヒドロフランなどの適切な溶媒中で、４−ニトロ安息香酸、トリフェニルホスフィン、およびジイソプロピルアゾジカルボキシレートと反応させて化合物８を得る。次いで化合物８を、メタノールなどの適切な溶媒中で炭酸カリウムと反応させて化合物７を得る。
【００３２】
調製例１：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化５】
0005870111.tif 000006
テトラヒドロフラン（４２．２７ｍＬ、４２．２７ｍｍｏｌ）中の１Ｍのリチウムトリ（ｓｅｃ−ブチル）ボロヒドリドを、０℃にて攪拌しながら、テトラヒドロフラン（４３１．３５ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−オキソビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（７．１０ｇ、１７．２５ｍｍｏｌ、合成の詳細について国際公開第０３／１０４２１７／Ａ２号を参照のこと）に滴下して加える。９０分後、０℃にて、１Ｍの炭酸水素ナトリウム水溶液（６０．０７ｍＬ、６２．１１ｍｍｏｌ）、続いて過酸化水素（３０％ｗｔ、２．６４ｍＬ、８６．２７ｍｍｏｌ）を注意深く加える。反応物を室温まで加温する。４０分後、反応物を酢酸エチルで抽出し、１０％クエン酸水溶液、続いてブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残留物を得た。ヘキサン中の５〜５０％酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより残留物を精製して標題化合物（６．７０ｇ、１６．２０ｍｍｏｌ、９４％）を得る。
【００３３】
調製例２：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−［（メチルスルホニル）オキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化６】
0005870111.tif 000007
塩化メタンスルホニル（２２４．６１μＬ、２．９０ｍｍｏｌ）を、０℃にて攪拌しながら、テトラヒドロフラン（４．８４ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（４００ｍｇ、９６７μｍｏｌｅ）およびトリエチルアミン（４７２μＬ、３．３９ｍｍｏｌ）に加える。冷却槽を取り除き、反応物を室温まで加温し、一晩攪拌する。水および飽和炭酸水素ナトリウムで希釈し、次いで酢酸エチルで抽出する。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物（６００ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ、１００％）を得る。
【００３４】
調製例３：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサ−３−エン−２，６−ジカルボキシレート
【化７】
0005870111.tif 000008
テトラヒドロフラン（３．８４ｍＬ、３．８４ｍｍｏｌ）中の１Ｍのフッ化テトラブチルアンモニウムを、テトラヒドロフラン（２．０３ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−［（メチルスルホニル）オキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（６００．００ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）に加え、３時間、還流で加熱する。次いで反応物を室温まで冷却し、水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、残留物を得る。残留物を、ヘキサン中の５〜７５％酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（０．２３ｇ、０．５８ｍｍｏｌ、４８％）を得る。
【００３５】
調製例４：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３，４−ジヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化８】
0005870111.tif 000009
２−メチル−２−プロパノール（５．４８ｇ、０．５４ｍｍｏｌ）中のＯｓＯ４（２．５％）を、Ｎ−メチルモルホリン−Ｎ−オキシド（２．４３ｇ、１７．９７ｍｍｏｌ）、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサ−３−エン−２，６−ジカルボキシレート（３．２３ｇ、８．１７ｍｍｏｌ）、アセトン（８０．６６ｇ、１０２．０９ｍＬ、１．３９ｍｏｌｅ）、および水（４０．８３ｍＬ、４０．８３ｇ、２．２７ｍｏｌｅ）に加える。室温にて攪拌する。５時間後、飽和チオ硫酸水溶液（１０ｍＬ）を反応物に加える。減圧下で半分の体積まで濃縮する。濃縮物を水で希釈し、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して残留物を得る。残留物を、ヘキサン中の５〜５０％酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（２．７ｇ、６．３ｍｍｏｌ、７７％）を得る。
【００３６】
調製例５：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化９】
0005870111.tif 000010
３，４−ジクロロベンジルブロミド（１．０２ｍＬ、１．０２ｇ、４．２６ｍｍｏｌ）を、室温にて、ジメチルホルムアミド（１７ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３，４−ジヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１．２２ｇ、２．８４ｍｍｏｌ）、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムヨージド（１．０７ｇ、２．８４ｍｍｏｌ）および酸化銀（９８７．３５ｍｇ、４．２６ｍｍｏｌ）に加える。一晩攪拌する。ジエチルエーテルおよびヘキサン（１：１）で希釈し、セライトで濾過し、次いでエーテルおよびヘキサン（１：１）で洗浄する。濾液を水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して残留物を得る。残留物を、０〜３０％酢酸エチル：ヘキサンで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１．７ｇ、２．８４ｍｍｏｌ、７８％）を得る：ＭＳ（ｍ／ｚ）：６１０／６１２（Ｍ＋Ｎａ）。
【００３７】
調製例６：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−｛［（４−ニトロフェニル）カルボニル］オキシ｝ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１０】
0005870111.tif 000011
トリフェニルホスフィン（１２．６６ｇ、４８．２６ｍｍｏｌ）および４−ニトロ安息香酸（８．１９ｇ、４８．２６ｍｍｏｌ）を、室温にて、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１４．２０ｇ、２４．１３ｍｍｏｌ）およびテトラヒドロフラン（２４１．２８ｍＬ、２．９７ｍｏｌｅ）に加える。氷槽中で混合物を冷却する。テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中のジイソプロピルアゾジカルボキシレート（９．５７ｍＬ、９．７６ｇ、４８．２６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を一晩室温まで徐々に加温する。ジエチルエーテルで希釈し、次いで炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄する。水層をジエチルエーテルで再び抽出する。全てのエーテル抽出物を合わせ、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、残留物を得る。残留物を、ヘキサン中の１０〜１００％酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（９ｇ、１２．２ｍｍｏｌ、５１％）を得る：ＭＳ（ｍ／ｚ）：７５９（Ｍ＋１）。
【００３８】
調製例７：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１１】
0005870111.tif 000012
炭酸カリウム（５．１１ｇ、３６．６０ｍｍｏｌ）を、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−｛［（４−ニトロフェニル）カルボニル］オキシ｝ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（９．００ｇ、１２．２０ｍｍｏｌ）およびメタノール（１２２．０１ｍＬ、３．０１ｍｏｌｅ）の溶液に加え、次いで室温で攪拌する。１時間後、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、水（７５ｍＬ）、ブライン（７５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、残留物を得る。残留物を、１０〜６０％酢酸エチル：ヘキサンで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（５．３ｇ、９．０１ｍｍｏｌ、７４％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６１０／６１２（Ｍ＋１）。
【００３９】
調製例８：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−［（メチルスルホニル）オキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１２】
0005870111.tif 000013
メタンスルホニルクロリド（０．８４１ｍＬ、１．２５ｇ、１０．８７ｍｍｏｌ）を、０℃にて攪拌しながら、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（２．００ｇ、３．４０ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．６６ｍＬ、１．２０ｇ、１１．８９ｍｍｏｌ）、およびテトラヒドロフラン（３３．９８ｍＬ、３０．１１ｇ、４１７．６１ｍｍｏｌ）に加える。反応物を室温まで徐々に加温し、一晩攪拌する。反応物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈し、次いで酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、次いで減圧下で濃縮して残留物を得る。残留物を、ヘキサン中の５〜６０％酢酸エチルでの溶出を用いてフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１．４０ｇ、２．１０ｍｍｏｌ、６２％）を得る。
【００４０】
調製例９：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１３】
0005870111.tif 000014
炭酸カリウム（１．４５ｇ、１０．５０ｍｍｏｌ）を、室温で攪拌しながら、１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール（４２４．７９ｍｇ、４．２０ｍｍｏｌ）およびジメチルホルムアミド（１０．５０ｍＬ、９．９３ｇ、１３５．８０ｍｍｏｌ）に加える。５分後、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−［（メチルスルホニル）オキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１．４０ｇ、２．１０ｍｍｏｌ）を反応物に加え、８５℃で攪拌する。２日後、反応物を室温まで冷やし、飽和炭酸水素ナトリウムで希釈し、次いで酢酸エチル（３×）で抽出する。合わせた有機物を水、ブラインで洗浄し、濾過し、減圧下で濃縮して残留物を得る。残留物を、ヘキサン中の５〜７５％酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して標題化合物（９７８．０ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ、６９％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６７１／６６９（Ｍ−１）。
【００４１】
調製例１０：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−（１，３−チアゾール−２−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１４】
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この化合物は、２−メルカプトチアゾールを使用することにより実質的に調製例９に記載したように調製する。残留物を、順相クロマトグラフィーにより精製して、２９％の標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６５（Ｍ＋１）。
【００４２】
調製例１１：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−［（１−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）スルファニル］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１５】
0005870111.tif 000016
火炎乾燥したフラスコ中の無水テトラヒドロフラン（３．６ｍＬ）に、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（０．６０ｇ、０．８９３ｍｍｏｌ）を溶解し、−７８℃に冷却する。カリウムｔ−ブトキシド（０．８０ｇ、０．８９３ｍｍｏｌ）を加え、１５分間攪拌する。ヨウ化メチル（０．１２７ｇ、０．８９３ｍｍｏｌ、塩基性アルミナでの濾過により前処理した）を加え、−７８℃にて１５分間攪拌させる。混合物を室温まで加温し、次いで室温にて３０分間攪拌する。粗反応混合物を水中に注ぎ、１ＮのＨＣｌ水溶液でｐＨを６に調整し、酢酸エチル中で抽出する。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。逆相フラッシュクロマトグラフィーにより精製する（４５〜９５％アセトニトリル／水（両方において０．１％のトリフルオロ酢酸を含む）で溶出する１００ｇのＣ１８カラム、８９％アセトニトリルで溶出する化合物）。所望の画分を合わせ、水性重炭酸塩で中和する。酢酸エチルで抽出し、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、白色泡状物として標題化合物（０．１６ｇ、０．２３ｍｍｏｌ、２６％）を得る：ＭＳ（ｍ／ｚ）：４７３／４７５／４７７（Ｍ＋１）。
【００４３】
調製例１２：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−アジド−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２．６−ジカルボキシレート
【化１６】
0005870111.tif 000017
アジ化ナトリウム（８．２９ｇ、１２７．４５ｍｍｏｌ）を、８５℃で攪拌しながら、ジメチルホルムアミド（２５４．９０ｍＬ、２４０．９６ｇ、３．３０ｍｏｌｅ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−［（メチルスルホニル）オキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１６．９９ｇ、２５．４９ｍｍｏｌ）および１５−クラウン−５（５０８．５７μＬ、５６１．４６ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）に加える。７日後、反応物を室温まで冷やし、次いで水で希釈し、酢酸エチル（３×）で抽出する。合わせた有機物を水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して残留物を得る。残留物を、ヘキサン中の２〜６０％酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物（１１．２ｇ、１８．３ｍｍｏｌ、７２％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６３５／６３７（Ｍ＋１）。
【００４４】
調製例１３：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−アミノ−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１７】
0005870111.tif 000018
テトラヒドロフラン（１９．５６ｍＬ、１９．５６ｍｍｏｌ）中の１Ｍのトリメチルホスフィン溶液を、室温で、テトラヒドロフラン（４３．４６ｍＬ）および水（１３０．３９ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−アジド−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（８．００ｇ、１３．０４ｍｍｏｌ）に加え、一晩攪拌する。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を反応物に加え、次いで酢酸エチル（３×）で抽出する。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物（７．４２ｇ、１２．６３ｍｍｏｌ、９７％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６０９／６１１（Ｍ＋Ｎａ）。
【００４５】
調製例１４：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−（アセチルアミノ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１８】
0005870111.tif 000019
ジクロロメタン（５ｍＬ）中の塩化アセチル（３３４．３１μＬ、３６８．７５ｍｇ、４．７０ｍｍｏｌ）を、攪拌している、冷却したジクロロメタン（１９．５７ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−アミノ−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（２．３０ｇ、３．９１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（７０９．３２μＬ、５１４．９７ｍｇ、５．０９ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で加え、次いで攪拌する。９０分後、水で希釈し、ジクロロメタン（３×２５ｍＬ）で抽出する。合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、標題化合物（２．４０ｇ、３．８１ｍｍｏｌ、９７％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６５３（Ｍ＋１）。
【００４６】
調製例１５：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−［（メトキシカルボニル）アミノ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１９】
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この化合物は、実質的にクロロギ酸メチルを用いることにより調製例１４に記載したように調製して、８８％の標題化合物を得る。
【００４７】
調製例１６：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（３，４−ジクロロフェニル）メトキシ］−４−［（２−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）スルファニル］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化２０】
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２−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオン（０．１２６ｇ、１．０９ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．３５ｇ、２．５２ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド（１．６８ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−［（メチルスルホニル）オキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（０．８０ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）の溶液に加える。８０℃にて２日間加熱した後、溶液をブラインに注ぎ、酢酸エチルで３回抽出し、合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。１０％酢酸エチル／ＣＨ２Ｃｌ２で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、油状物として標題化合物（０．５７６ｇ、０．８４ｍｍｏｌ、１００％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６８５／６８７／６８９（Ｍ＋１）。
【００４８】
調製例１７：ジｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（３，４−ジクロロフェニル）メトキシ］−４−（１Ｈ−イミダゾール−２−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化２１】
0005870111.tif 000022
この化合物は、実質的にジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−［（メチルスルホニル）オキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートを用いることにより調製例２０に記載したように調製する。３０〜５０％酢酸エチル：ヘキサンで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、３８％の収率で標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６７１／６７３／６７５（Ｍ＋１）。
【００４９】
調製例１８：ジエチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−［（２−アセトキシアセチル）アミノ］−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（３，４−ジクロロフェニル）メトキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化２２】
0005870111.tif 000023
アセトキシアセチルクロリド（０．１１６ｍＬ、１．０８ｍｍｏｌ）を、室温で、ジクロロメタン（９ｍＬ）中のジエチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（３，４−ジクロロフェニル）メトキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（０．４７ｇ、０．８９ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（０．３２ｍＬ、１．８３ｍｍｏｌ）の溶液に加える。２．５時間後、飽和ＮａＨＣＯ３（２×）、ブライン（１×）で溶液を洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。３０分にわたってヘキサン中の０〜１００％酢酸エチルの勾配で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、白色固体として標題化合物（０．４３ｇ、０．６８ｍｍｏｌ、７６％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５３１（Ｍ＋Ｈ−ＢＯＣ）。
【００５０】
調製例１９：（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（３，４−ジクロロフェニル）メトキシ］−４−［（２−ヒドロキシアセチル）アミノ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化２３】
0005870111.tif 000024
１Ｍの水酸化リチウム水溶液（４．０ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を、室温で、テトラヒドロフラン（７．０ｍＬ）中のジエチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−［（２−アセトキシアセチル）アミノ］−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（３，４−ジクロロフェニル）メトキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（０．４２ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）の溶液に加え、一晩攪拌する。反応物を５ＮのＨＣｌ水溶液でほぼｐＨ１に酸性化する。酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。粗反応混合物のＨＰＬＣ分析により、存在している開始物質が示される。１Ｍ水酸化リチウム（４．０ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（７．０ｍＬ）中の粗反応混合物の溶液に加え、５０℃にて加熱する。１７時間後、反応物を５ＮのＨＣｌ水溶液でほぼｐＨ１に酸性化する。酢酸エチル（３×２５ｍＬ）で抽出する。合わせた抽出物を乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮する。４０分にわたって、９５％水（０．０３％ＨＣｌを含む）／５％アセトニトリル〜５％水（０．０３％ＨＣｌを含む）／９５％アセトニトリルの勾配を用いる分取逆相高速液体クロマトグラフィーにより精製して、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（３，４−ジクロロフェニル）メトキシ］−４−［（２−ヒドロキシアセチル）アミノ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（０．１８１ｇ、０．３４ｍｍｏｌ、５１％）を白色固体として得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５３１（Ｍ−Ｈ）。
【００５１】
調製例２０：（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（Ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化２４】
0005870111.tif 000025
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（２ｇ、５．３２ｍｍｏｌ）をジオキサン（１０．６３ｍＬ）に溶解し、次いで飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１０．６３ｍＬ、６．９０ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（５．８０ｇ、２６．５８ｍｍｏｌ）で処理する。室温にて二相混合物を１８日間攪拌し、次いで濃縮して溶媒を除去する。得られた残留物をアセトニトリル（１ＮのＨＣｌで補助する）に溶解し、２回抽出してジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートを除去する。アセトニトリル層を濃縮する。得られた残留物を酢酸エチルに溶解し、次いで１ＮのＨＣｌで２回洗浄し、ブラインで１回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮乾燥し、標題化合物（２．１ｇ、４．４１ｍｍｏｌ、８３％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４７４（Ｍ−１）。
【００５２】
調製例２１：（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−（アセチルアミノ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化２５】
0005870111.tif 000026
この化合物は、実質的に（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−（アセチルアミノ）−２−アミノ−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸を用いて調製例２０に記載したように調製して、７４％の収率で標題化合物を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５１５／５１７（Ｍ−１）。
【００５３】
調製例２２：ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化２６】
0005870111.tif 000027
ジメチルホルムアミド（２３．３ｍＬ）中の（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（１．８９ｇ、３．９６ｍｍｏｌ）の溶液に、クロロメチルイソプロピルカーボネート（１．２７ｇ、８．３３ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム（５９．４ｇ、０．３９６ｍｍｏｌ）、および炭酸セシウム（２．８４ｇ、８．７２ｍｍｏｌ）を加える。窒素下で室温にて混合物を一晩攪拌する。反応混合物を酢酸エチルおよび水で希釈する。層を分離する。水層を酢酸エチルで２回抽出する。合わせた有機層をブラインで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮する。残留物を、ヘキサン中の０〜７５％酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、泡状物として標題化合物（９４０ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ、３３％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：７３２（Ｍ＋Ｎａ）。
【００５４】
調製例２３〜２６の化合物は、実質的に調製例２２に記載したように調製できる：
【００５５】
【表１】
0005870111.tif 000028
【実施例】
【００５６】
実施例１：（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化２７】
0005870111.tif 000029
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（５．３０ｇ、９．０１ｍｍｏｌ）を、水（３０．０２ｍＬ）および酢酸（３０．０２ｍＬ）に加える。出発物質が完全に消費するまで、反応物を還流で加熱する。冷却し、ロータリーエバポレータで濃縮する。濃縮物をジエチルエーテルで粉砕し、沈殿物を回収し、次いで真空オーブン中で乾燥させて、標題化合物（３．３０ｇ、８．７７ｍｍｏｌ、９７％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３７６／３７８（Ｍ＋１）。
【００５７】
実施例２〜３の化合物は、実質的に実施例１に記載したように調製できる：
【００５８】
【表２】
0005870111.tif 000030
【００５９】
実施例４：（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−（アセチルアミノ）−２−アミノ−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化２８】
0005870111.tif 000031
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−（アセチルアミノ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（２．４０ｇ、３．８１ｍｍｏｌ）を、酢酸（７．９９ｇ、７．６２ｍＬ、１３３．０５ｍｍｏｌ）および水（３．８１ｍＬ、３．８１ｇ、２１１．６０ｍｍｏｌ）に加え、１４０℃でマイクロ波中で加熱する。１５分後、室温まで冷やし、水で希釈し、固体を回収するまで濾過する。続いて、水（２×５０ｍＬ）およびジエチルエーテル（２×５０ｍＬ）で固体を洗浄し、次いで真空オーブン中で乾燥させ、標題化合物（１．２３ｇ、２．９５ｍｍｏｌ、７７％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１７／４１９（Ｍ＋１）。
【００６０】
実施例５：（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−アミノ−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−［（メトキシカルボニル）アミノ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化２９】
0005870111.tif 000032
この化合物は、実質的に（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−アミノ−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−［（メトキシカルボニル）アミノ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸を用いることにより実施例４に記載したように調製する。８１％の収率。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３３／４３５（Ｍ＋１）。
【００６１】
実施例６：（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−［（１−メチル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−５−イル）スルファニル］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩
【化３０】
0005870111.tif 000033
酢酸（２．０ｍＬ）および水（２．０ｍＬ）を、マイクロ波容器中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（３，４−ジクロロフェニル）メトキシ］−４−［（２−メチル−１，２，４−トリアゾール−３−イル）スルファニル］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（０．３０５ｇ、０．４４５ｍｍｏｌ）に加え、密閉し、２５分間、１４０℃で混合物を加熱する。混合物を冷却し、乾燥するまで濃縮し、次いで５Ｎの塩酸（２ｍＬ）、アセトニトリル（２ｍＬ）を加え、バイアルに移す。一晩凍結乾燥させて、白色固体として標題化合物（０．２２７ｇ、０．４４５ｍｍｏｌ、９５％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４７３／４７５／４７７（Ｍ＋１）。
【００６２】
実施例７〜８の化合物は、実質的に実施例６に記載したように調製できる：
【００６３】
【表３】
0005870111.tif 000034
【００６４】
実施例９：（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−アミノ−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−［（ヒドロキシアセチル）アミノ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩
【化３１】
0005870111.tif 000035
１，４−ジオキサン中の４Ｎの塩化水素（３．０ｍＬ、１２．０ｍｍｏｌ）を、水（０．３ｍＬ）中の（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（３，４−ジクロロフェニル）メトキシ］−４−［（２−ヒドロキシアセチル）アミノ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（０．０３２ｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の混合物に加える。固体をフリット漏斗上でアセトニトリルおよびジエチルエーテルで洗浄する。続いて固体をアセトニトリルおよびジエチルエーテルで洗浄し、次いでさらに５０℃にて一晩真空オーブン中で乾燥させて、白色固体として標題化合物（０．０１８ｇ、０．０４ｍｍｏｌ、６５％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３３（Ｍ＋Ｈ）。
【００６５】
実施例１０：ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩
【化３２】
0005870111.tif 000036
ジオキサン（１４．４７ｍＬ、５７．８７ｍｍｏｌ）中の４．０Ｍの塩化水素溶液中のビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートを加え、４５分間攪拌する。酢酸エチルを加え、泡状物まで反応混合物を濃縮する。酢酸エチルで泡状物を粉砕して固体を得る。濃縮し、４０℃にて一晩、真空下で乾燥させて、オフホワイトの固体として標題化合物（１．７７ｇ、２．７５ｍｍｏｌ、９５％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６０８（Ｍ＋Ｈ）。
【００６６】
実施例１１〜１４の化合物は、実質的に実施例１０に記載したように調製できる：
【００６７】
【表４】
0005870111.tif 000037
【００６８】
実施例１５：ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩
【化３３】
0005870111.tif 000038
工程１：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化３４】
0005870111.tif 000039
テトラヒドロフラン（２．６７Ｌ、２．６７ｍｏｌ）中の１Ｍのリチウムトリ（ｓｅｃ−ブチル）ボロヒドリドを、０℃にて窒素下で、乾燥テトラヒドロフラン（１０Ｌ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−オキソビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１０００ｇ、２．４３ｍｏｌ）の溶液に滴下して加える。０℃にて２時間後、水（８５０ｇ、８．０２ｍｏｌ）中の２ＭのＮａ２ＣＯ３を、０℃にて２時間にわたって加え、続いて水（３．３Ｌ）中の３５％の過酸化水素水溶液（７４０ｍＬ、８．９９ｍｏｌ）を加える。４０分後、混合物を室温まで加温すると、有機相が分離する。有機相をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３．５Ｌ）で希釈し、層を再び分離する。水相をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３．５Ｌ）で抽出する。全ての合わせた有機相を、１ＭのＮａ２ＳＯ３水溶液（２．６７Ｌ）、水（２．６７Ｌ）、およびブライン（２．６７Ｌ）で連続して洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、３Ｌの体積まで濃縮する。沈殿した固体を濾過し、ヘプタン（１．３Ｌ）で洗浄して、標題化合物（８６４．７６ｇ）を得る。母液を濃縮乾燥し、残留物をヘプタン（５００ｍＬ）で粉砕し、濾過して、さらなる標題化合物（１３０．６４ｇ、全９９５．４ｇ、収率９９％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４３６（Ｍ＋２３）。
【００６９】
工程２：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサ−３−エン−２，６−ジカルボキシレート
【化３５】
0005870111.tif 000040
トリエチルアミン（７３５ｍＬ、５．３０ｍｏｌ）を、４０分にわたってＮ２下で０℃にて、乾燥テトラヒドロフラン（８．４Ｌ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２Ｓ，４Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（９９５．４ｇ、２．４１ｍｏｌ）の溶液に滴下して加える。メタンスルホニルクロリド（３７３ｍＬ、４．８２ｍｏｌ）を５０分にわたって０℃にて加える。反応物を２３℃に加温する。３時間後、反応物を濾過した場合、トリエチルアミン塩酸塩を除去する。濾過ケーキを乾燥テトラヒドロフラン（２×２Ｌ）で洗浄する。濾液（１３Ｌ）を２等分に分ける。濾液の半分の１つに、テトラヒドロフラン（３．６Ｌ、３．６ｍｏｌ）中の１Ｍのカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドを、２時間１５分にわたって１５℃にて、以前の工程で得た溶液（粗生成物、Ｖ＝６．５Ｌ、１．２ｍｏｌ）に滴下して加え、次いで２３℃に加温する。２時間３０分後、反応物を１０％の酢酸水溶液（９５０ｍＬ）に注ぐことによりクエンチする。層を分離し、酢酸エチル（１．７Ｌ）で水層を抽出する。有機層を合わせ、真空中で濃縮して、固体を得、それをアセトン（１．４５Ｌ）に溶解し、水（７．３Ｌ）に加える。得られた懸濁液を２３℃にて一晩攪拌する。沈殿物を濾し取り、水（２×１Ｌ）で洗浄し、真空オーブン中で４０℃にて乾燥させて、標題化合物（４５０．６７ｇ、収率９５％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４１８（Ｍ＋２３）。
【００７０】
工程３：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３，４−ジヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化３６】
0005870111.tif 000041
四酸化オスミウム（水中に４％ｗｔ／ｗｔ、２３１．７８ｍＬ、２４１．０５ｇ、３７．９３ｍｍｏｌ）を、２３℃にて、アセトン（１２．００）および水（１．８０Ｌ）中のＮ−メチルモルホリン−Ｎ−オキシド水和物（１０１．６２ｍＬ、１１４．８３ｇ、４２４．７８ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン−Ｎ−オキシド水和物（１１６．８８ｇ、８６４．７４ｍｍｏｌ）、４−メチルモルホリン−４−オキシド（１９８．８８ｍＬ、１９５．５０ｇ、１．６７ｍｏｌ）、およびジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサ−３−エン−２，６−ジカルボキシレート（６００．００ｇ、１．５２ｍｏｌ）の溶液に加える。混合物を２３℃にて一晩攪拌する。反応混合物の薄層クロマトグラフ（ヘキサン／酢酸エチル３：２；染料：ＰＭＡ）分析により、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］ビシクロ［３．１．０］ヘキサ−３−エン−２，６−ジカルボキシレートの完全な消費が示された。反応物を飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（１Ｌ）でクエンチし、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１５Ｌ）で抽出する。有機相を、３７％のＨＣＬ水溶液（３００ｍＬ）およびブライン（１．２Ｌ）から調製した水溶液（１．５Ｌ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残留物をヘプタン（１．５Ｌ）中でスラリーにし、濾過し、ヘプタン（２×５００ｍＬ）で洗浄し、固体を得る。固体を真空下で乾燥させて、標題化合物（４５０ｇ、６９％収率）を得る。
【００７１】
工程４：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化３７】
0005870111.tif 000042
室温にて、ジクロロメタン（４．５０Ｌ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３，４−ジヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（４５０ｇ、１．０５ｍｏｌ）の溶液に、３，４−ジクロロベンジルブロミド（１４４．７３ｍＬ、２３８．８０ｇ、９９５．３２ｍｍｏｌ）、テトラ−Ｎ−ブチルアンモニウムクロリド（５８．２４ｇ、２０９．５４ｍｍｏｌ）、および５０％ｗｔ／ｗｔの水酸化ナトリウム水溶液（８２９．８０ｍＬ、１５．７２ｍｏｌ）を連続して加える。７時間後、反応物を水（１Ｌ）で希釈し、相を分離する。有機相をブライン（５００ｍＬ）で抽出し、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮する。残留物をクロマトグラフィー（２．５ｋｇのＳｉＯ２；溶離液：ヘキサン／酢酸エチル１２：１〜０：１）により精製して、標題化合物（５３９ｇ、７２％収率）を得る。
【００７２】
工程５：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−｛［（４−ニトロフェニル）カルボニル］オキシ｝ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化３８】
0005870111.tif 000043
テトラヒドロフラン（６．７６Ｌ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（５３９．００ｇ、７５１．００ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフェニルホスフィン（３９３．９６ｇ、１．５０ｍｏｌ）および４−ニトロ安息香酸（２５１．０２ｇ、１．５０ｍｏｌ）を加える。その混合物を１０℃に冷やしてすぐに、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（トルエン中の４０％ｖ／ｖ、７４４．４１ｍＬ、７５９．３０ｇ、１．５０ｍｏｌ）を、１５分にわたって滴下して加え、２３℃に加温する。１８時間後、混合物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２Ｌ）で希釈し、連続して飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×２Ｌ）およびブライン（１Ｌ）で洗浄し、真空中で濃縮する。残留物を４０℃にて３０分間、ヘプタン（５Ｌ）中でスラリーにし、次いで２３℃に冷却する。得られた固体を濾過し、ヘプタン（２×５００ｍＬ）、ヘプタン／メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３×１Ｌ）で連続して洗浄する。合わせた濾液を真空中で濃縮し、残留物を、クロマトグラフィー（２．５ｋｇのＳｉＯ２；溶離液：ヘキサン／酢酸エチル９５：５〜７５：２５）により精製し、続いてヘプタン（１０Ｌ／ｋｇ）中で再結晶化して、白色固体（２７３ｇ、４９％収率）として標題化合物を得る。
【００７３】
工程６：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化３９】
0005870111.tif 000044
炭酸カリウム（１５３．４５ｇ、１．１１ｍｏｌ）を、周囲温度にて、メタノール（３．２８Ｌ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−｛［（４−ニトロフェニル）カルボニル］オキシ｝ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（２７３．００ｇ、３７０．１１ｍｍｏｌ）の懸濁液に加える。１６時間後、反応物を真空中で濃縮する。残留物をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２Ｌ）に溶解し、水（０．８Ｌ）、ブライン（０．８Ｌ）で連続して洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮して、白色固体として標題化合物（２１５ｇ、９８％収率）を得る。
【００７４】
工程７：（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩
【化４０】
0005870111.tif 000045
水（４３０ｍＬ）および水中の３７％のＨＣｌ（２９９．９ｍＬ、３．６５ｍｏｌ）の混合物を、１，４−ジオキサン（７３．１ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（２１５ｇ、３６５．３ｍｍｏｌ）の懸濁液に加える。得られたスラリーを１００℃にて４．５時間攪拌し、２５℃に冷却し、真空中で濃縮して、白色固体を得る。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２Ｌ）およびヘキサン（２Ｌ）で連続して粉砕し、次いで濾過して、固体を回収する。真空下で１６時間乾燥させる。固体をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２×１Ｌ）およびヘキサン（１Ｌ）で再度洗浄し、次いで５０℃にて一晩真空下で乾燥させて、白色固体として標題化合物（１４０．４ｇ、９３％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３７６／３７８（Ｍ＋１）。
【００７５】
工程８：（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化４１】
0005870111.tif 000046
トリエチルアミン（２１２．８０ｍＬ、１５４．４９ｇ、１．５３ｍｏｌ）および２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルオキシイミノ）−２−フェニルアセトニトリル（１２５．３３ｇ、５０８．９０ｍｍｏｌ）を、周囲温度にて、１，４−ジオキサン（２０３．５６ｍＬ）、および水（０．６ｍＬ／ｍｍｏｌ−純粋−ＬＲ、２０３．５６ｍＬ）中の（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩（１４０ｇ、３３９ｍｍｏｌ）の懸濁液に連続して加える。４．５時間後、さらなる２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルオキシイミノ）−２−フェニルアセトニトリル（２５．０７ｇ、１０１．７８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２３．６４ｍＬ、１７．１７ｇ、１６９．６３ｍｍｏｌ）を反応物に加え、５０℃にて一晩攪拌する。２３℃まで冷却し、水（５００ｍＬ）で希釈し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（６×５００ｍＬ）で洗浄する。水相を１０％のＨＣｌ水溶液（３００ｍＬ；最終ｐＨ＝２）で希釈し、酢酸エチル（２×５００ｍＬ）で抽出する。酢酸エチル抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空中で濃縮して、標題化合物（１４８．３ｇ、９２％収率）を得る。
【００７６】
工程９：ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化４２】
0005870111.tif 000047
２３℃にて、ジメチルホルムアミド（２．４９Ｌ）中のビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１４８．３０ｇ、３１１．３５ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（１７２．１２ｇ、１．２５ｍｏｌ）、炭酸クロロメチルイソプロピル（１１８．０３ｍＬ、１３５．７３ｇ、８７１．７９ｍｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウム（９．３３ｇ、６２．２７ｍｍｏｌ）を連続して加える。１８時間攪拌する。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２Ｌ）および水（２Ｌ）で希釈する。層を分離し、有機相を水（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で連続して洗浄する。無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮する。残留物をクロマトグラフィー（２．５ｋｇのＳｉＯ２、溶離液：ヘキサン／酢酸エチル３：１〜１：１）により精製して、標題化合物（１６７ｇ、７６％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６０８／６１０（Ｍ−１００（−ＣＯ２ｔＢｕ））。
【００７７】
工程１０：ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化４３】
0005870111.tif 000048
ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−［（３，４−ジクロロベンジル）オキシ］−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１６５．５０ｇ、２３３．５８ｍｍｏｌ）を、２３℃にて、１，４−ジオキサン（１．１６Ｌ、４．６３ｍｏｌ）中の４ＭのＨＣｌで処理し、２時間攪拌する。揮発性物質を真空下で除去する。得られた残留物を、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１２００ｍＬ）中で一晩スラリーにする。得られた固体を濾過し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２×１００ｍＬ）で洗浄し、１ｍｂａｒ／４５℃にて６時間、真空下で乾燥させて、白色固体として標題化合物（１３４ｇ、８９％収率）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６０８／６１０（Ｍ＋１）。
【００７８】
文献データ（Ｗｉｔｋｉｎ，Ｊｅｆｆｒｅｙ  Ｍ．，ａｎｄ  Ｅｉｌｅｒ，Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｊ．Ａ．（２００６），Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｏｆ  Ｍｅｔａｂｏｔｒｏｐｉｃ  Ｇｌｕｔａｍａｔｅ  Ｇｒｏｕｐ  ＩＩ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｖｏｌ  ６７，ｐｇ．７５７−７６９；およびＹａｓｕｈａｒａ，Ａｋｉｔｏ  ａｎｄ  Ｃｈａｋｉ，Ｓｈｉｇｅｙｕｋｉ，（２０１０）Ｍｅｔａｂｏｔｒｏｐｉｃ  Ｇｌｕｔａｍａｔｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｔｈｅ  Ｏｐｅｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ，ｖｏｌ．４，ｐｇ．２０−３６）および非臨床動物試験において生成されたデータは、うつ病性障害および過剰な眠気に関する障害の処置におけるｍＧｌｕ２／３アンタゴニストに対する役割を支持する。具体的には、ｍＧｌｕ２／３受容体アンタゴニストが、うつ病性障害のげっ歯類モデルにおいて有効であり、ＥＥＧでモニターされるげっ歯類を用いたとき、過剰なもしくは臨床的に関連性のある活動亢進または極度の代償的な傾眠過剰なしに、覚醒状態を促進することが見出されている。警戒の増大は、注意力の増大、認知能力の改善および疲労減少の可能性として現れる。先に記載された障害は、共存する共通の臨床症状を示すので、ｍＧｌｕ２／３受容体アンタゴニストは、特定の患者集団（例えば、大うつ病性障害、処置抵抗性うつ病、単極性うつ病、気分変調および／もしくは循環気質（ｃｙｃｌｏｔｈｉｍｉａ）または過剰な眠気に関する任意の障害を有する患者）において特に有効であり得る。過剰な眠気に関する障害としては、日中の過剰な眠気（ＥＤＳ）、閉塞性睡眠時無呼吸またはナルコレプシーに関連する過眠、概日リズム睡眠障害（交代勤務睡眠障害、時差ぼけ障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害および非２４時間睡眠覚醒症候群を含むがこれらに限定されない）、特発性過眠症および非回復性睡眠（ＮＲＳ）に関連する過剰な眠気が挙げられ得るが、これらに限定されない。
【００７９】
本化合物の特徴をさらに証明するために、代表的な化合物が、以下のインビトロおよびインビボアッセイにおいて実験され得る。
【００８０】
ｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３受容体ｃＡＭＰアンタゴニストアッセイ
アンタゴニスト活性は、ヒトｍＧｌｕ２またはｍＧｌｕ３受容体およびラットグルタミン酸トランスポーターＥＡＡＴ１（興奮性アミノ酸トランスポーター１）を安定的に発現する組換えＡＶ１２細胞においてアッセイされる。その細胞株は、５％透析ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１ｍＭ  Ｌ−グルタミンが補充された、高グルコースおよび塩酸ピリドキシンを含むＤＭＥＭ中で培養することによって維持される；ジェネテシンおよびハイグロマイシンＢが、選択抗生物質として使用される。コンフルエントな培養物を、６．５％ＣＯ２を含む雰囲気中、３７℃で生育し、２週間に１回継代する。０．２５％トリプシンを用いて細胞を回収し、凍結培地（１０％ＤＭＳＯを含むＦＢＳ）に１０７細胞／ｍｌで懸濁し、アリコートを液体窒素中で凍結する。アッセイの２４時間前に、細胞を、組織培養処理済９６ウェルハーフエリア黒色プレート（Ｃｏｓｔａｒ３８７５）において、５％透析ＦＢＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１００μｇ／ｍｌアンピシリンおよび２５０μＭ（ｍＧｌｕ２）または１２５μＭ（ｍＧｌｕ３）のＬ−グルタミンが補充された高グルコースおよび塩酸ピリドキシンを含む５０μｌのＤＭＥＭ中、８，０００〜１０，０００細胞／ウェルの密度でプレーティングする。
【００８１】
被験化合物による、フォルスコリンで刺激されたｃＡＭＰ産生の阻害の逆転を、均一時間分解蛍光技術（ＨＴＲＦ；Ｃｉｓｂｉｏ  ｃａｔ  ＃６２ＡＭ４ＰＥＢ）を用いて測定する。培地を除去し、細胞を、１００μｌのｃＡＭＰ刺激緩衝液（ＳＴＩＭ）と３７℃で３０分間インキュベートする。（ＳＴＩＭ緩衝液は、５００ｍｌのＨＢＳＳ、１０００ｍｌのＤＰＢＳ、０．０３４％ＢＳＡ、１．６７ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび５００μＭ  ＩＢＭＸ（Ｓｉｇｍａ  Ｉ５８７９）を含む。）ＳＴＩＭ緩衝液への３×段階希釈に続くさらなる４０倍希釈を用いる１０点濃度反応曲線において、化合物を試験する。ＤＣＧ  ＩＶ（Ｔｏｃｒｉｓ０９７５）は、参照アゴニストとして機能する。最終的な反応混合物は、１μＭ（ｍＧｌｕ２の場合）または３μＭ（ｍＧｌｕ３の場合）のフォルスコリン（Ｓｉｇｍａ  Ｆ６８８６）、そのＥＣ９０のＤＣＧ  ＩＶおよび最高２５μＭの被験化合物を含む。細胞を３７℃で２０分間インキュベートする。ｃＡＭＰレベルを測定するために、溶解緩衝液中のｃＡＭＰ−ｄ２結合体および抗ｃＡＭＰ−クリプテート結合体を、処理された細胞と室温で１時間（ｍＧｌｕ２）または１．５時間（ｍＧｌｕ３）インキュベートする。ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）を用いてＨＴＲＦシグナルを検出して、６６５と６２０ｎＭとの蛍光比を計算する。各実験に対して作成されたｃＡＭＰ検量線を用いて、生データをｃＡＭＰの量（ｐｍｏｌ／ウェル）に変換する。４パラメータロジスティック曲線フィッティングプログラム（ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅ  ｖ５．３．１．２２）を用いて、相対的なＩＣ５０値を濃度反応曲線の上から下までの範囲から計算する。
【００８２】
ｍＧｌｕ受容体の選択性についてのＦＬＩＰＲおよびｃＡＭＰアッセイ
他のヒトｍＧｌｕ受容体に対する本発明の化合物の相対的なアンタゴニスト効力は、ｃＡＭＰアッセイまたは蛍光定量的なカルシウム反応アッセイを用いて評価され得る（例えば、Ｆｅｌｌら、ＪＰＥＴ（印刷中）を参照のこと）。簡潔には、ラットＥＡＡＴ１グルタミン酸トランスポーターを含み、かつヒトｍＧｌｕ１、２、３、４、５、６および８受容体を安定的に発現する個別のＡＶ１２細胞株が、本研究のために使用される。ｍＧｌｕ１および５受容体は、Ｇｑ共役型であるので、それらは、天然には、ホスホリパーゼＣを介してシグナル伝達し、Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（ＦＬＩＰＲ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて受容体の活性化を測定するために使用され得るカルシウム流動反応を生じる。ｍＧｌｕ２、３、４および８受容体を発現する細胞株は、Ｇα１５サブユニットを発現するように設計され、これらのＧｉ共役型受容体は、ｍＧｌｕ１および５受容体を発現する細胞株と同様のカルシウム流動反応をもたらすことになる。ｍＧｌｕ６受容体は、上記のｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３に対して開発された方法と類似の方法を用いて、ｃＡＭＰ形式で試験される。これらの細胞株は、Ｌ−グルタミンの量および選択薬剤（ジェネテシン、ハイグロマイシンＢ、ゼオシンおよびブラストサイジン）が細胞株に応じて変化し得ることを除いて、先に記載されたように維持される。コンフルエントな培養物が、２週間に１回継代される。
【００８３】
細胞内カルシウムレベルは、細胞株に応じて、被験化合物およびＦｌｕｏ−３  ＡＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）またはＣａｌｃｉｕｍ  ４（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）色素の添加の前後に、ＦＬＩＰＲを用いてモニターされる。細胞は、細胞株に応じて様々な濃度のグルタミンおよび様々な１ウェルあたりの細胞密度において、アッセイの２４時間前にプレーティングされる。培地を除去し、細胞を、８μＭの色素（５０μｌ／ウェル）と２５℃で９０または１２０分間（細胞株に応じて）インキュベートする。そのアゴニストグルタメートに対する１１点濃度反応曲線を生成する単一添加ＦＬＩＰＲアッセイを各実験の前に行うことにより、細胞の適切な感度を確かめる。結果を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖ４．０３を用いて解析することにより、ＥＣ９０応答（アンタゴニストアッセイ）およびＥＣ１０応答（増強物質アッセイ）を誘導するのに必要なグルタメートの濃度が計算される。
【００８４】
アゴニストアッセイの場合は２５μＭ、ならびに増強物質アッセイおよびアンタゴニストアッセイの場合は１２．５μＭという最終濃度から出発する１０点濃度反応プロファイルを用いる２添加（２−ａｄｄｉｔｉｏｎ）ＦＬＩＰＲアッセイにおいて、各ｍＧｌｕ受容体において化合物を試験する。最初の添加は、任意のアゴニスト活性を検出し、第２の添加は、ＥＣ１０またはＥＣ９０グルタメート応答をもたらすアッセイ緩衝液中の１００μｌの選択濃度（細胞株に応じて）のグルタメートからなる。アゴニスト効果は、最大グルタメート反応に対する、化合物のみによって誘導されたパーセント刺激として定量される。アンタゴニスト効果は、その化合物によって引き起こされたＥＣ９０グルタメート応答のパーセント阻害を計算することによって定量される。増強効果は、ＥＣｍａｘ反応に対するグルタメートにおけるＥＣ１０反応の存在下のパーセント増加として定量される。すべてのデータが、４パラメータロジスティック曲線フィッティングプログラム（ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅ  ｖ５．３．１．２２）を用いて相対的なＩＣ５０またはＥＣ５０値として計算される。
【００８５】
ｍＧｌｕ６細胞におけるアンタゴニスト活性は、参照アゴニストがＬ−ＡＰ４（Ｔｏｃｒｉｓ）だったことを除いて、ｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３活性に対して上に記載された方法と類似の方法において、ｃＡＭＰを用いて測定される。ｍＧｌｕ６アゴニスト活性を測定するために、フォルスコリンで刺激されたｃＡＭＰ産生を化合物が阻害する程度が計算される。相対的なＩＣ５０およびＥＣ５０値は、４パラメータロジスティック曲線フィッティングプログラム（ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅ  ｖ５．３．１．２２）を用いて、濃度反応曲線の上から下までの範囲から計算される。
【００８６】
Ｒ１およびＲ２の両方が水素である例示化合物は、本質的には上に記載されたように試験され、ｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３受容体に対して高いアンタゴニスト効力を有すると見出される。Ｒ１およびＲ２の両方が水素である例示化合物は、他のｍＧｌｕ受容体サブタイプと比べてｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３受容体の選択的アンタゴニストであるとも見出され、ｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３受容体についてそれぞれ７０ｎＭおよび５０ｎＭ未満のＩＣ５０を有するのに対して、試験した他のｍＧｌｕ受容体についてのＩＣ５０は顕著に大きくなることが見出される。表１を参照のこと。
【００８７】
【表５】
0005870111.tif 000049
【００８８】
さらに、本発明のある特定の化合物は、他の生理的に重要な受容体（例えば、ｈＥＲＧチャネル、セロトニン受容体（具体的には５−ＨＴ２Ａおよび５−ＨＴ２Ｂ）、ムスカリン受容体（具体的にはＭ２）およびｉＧｌｕＲ受容体（具体的にはｉＧｌｕＲ５）であるがこれらに限定されない）における有意な活性の欠如を示す。実施例１の化合物は、公知のアッセイ方法を用いて試験され、これらの受容体においてかなりの活性を有しないと見出される。
【００８９】
ゆえに、生理的に関連性のある用量の本発明の化合物は、他のｍＧｌｕ受容体または他の生理的に関連性のある受容体と実質的に相互作用せずに、インビボにおいてｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３受容体の実質的な阻害をもたらすと予想され、ゆえに、オフターゲット活性に関連する望まれない作用を回避しつつ、所望の薬理学を提供すると予想される。
【００９０】
マウスにおける強制水泳試験（ｍＦＳＴ）
ｍＦＳＴは、抗うつ活性に対して確立されたインビボアッセイである（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．３１９（１）：２５４−９，２００６．）。公知の臨床的に有効な抗うつ薬（選択的セロトニン再取り込み阻害薬および／または三環系抗うつ薬）で処置されたマウスは、水槽に入れられた後に、不動で過ごす行動（絶望状態に関連する行動）の時間の短縮を示す。本質的には以前に公開された方法（例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．３１９（１）：２５４−９，２００６を参照のこと）に記載されているように、新規ｍＧｌｕ２／３アンタゴニストの潜在的な抗うつ様活性を評価するためにｍＦＳＴを使用した。簡潔には、体重が２５〜３０ｇの雄ＮＩＨ−Ｓｗｉｓｓマウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を使用する。群で収容されている動物を、動物飼育施設から取り出して、それ専用のケージ内の試験エリアに移し、試験の前に少なくとも１時間、新しい環境に適応させる。Ｒ１およびＲ２の両方が水素である化合物を、溶解のために最小量のＮａＯＨが加えられた水に溶解し、ｉ．ｐ．投与する。Ｒ１および／またはＲ２が水素以外である化合物は、使用当日に、２．０〜２．５％Ｎ−メチル−ピロリジノン中に調製され、次いで、１％ＨＥＣ、０．２５％Ｔｗｅｅｎ８０および０．０５％Ｄｏｗ消泡剤に懸濁し、経口的に投与される。マウスを、６ｃｍの水（２２〜２５℃）で満たされた筒（直径：１０ｃｍ；高さ：２５ｃｍ）に６分間入れる。その試験時間の６分間のうちの最後の４分間における不動の時間をスコア付けした。マウスは、動かずに浮いているかまたは頭部を水より上で維持するのに必要な動きだけをするとき、不動と記録される。
【００９１】
代表的な化合物は、本質的には上に記載されたように試験され、野生型マウスにおいて不動時間を有意に減少させると見出される。表２を参照のこと。ゆえに、本発明の化合物は、インビボにおいて抗うつ活性を有すると予想される。
【００９２】
【表６】
0005870111.tif 000050
【００９３】
他の実験では、受容体が欠失したマウス（ｍＧｌｕ２ノックアウトマウス）が研究される；これらのマウスは、ヘテロ接合体×ヘテロ接合体交配によって繁殖され、−／−および＋／＋マウス比較のための同腹仔として使用される（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ）。実施例１の化合物（１０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．，３０分前）は、ｍＧｌｕ２＋／＋マウスにおいて不動時間を有意に減少させるが、ｍＧｌｕ２−／−マウスでは減少させないと見出される。同様に、実施例１０／１５の化合物（３０ｍｇ／ｋｇ，ｐｏ，１２０分前）は、ｍＧｌｕ２＋／＋マウスにおいて不動時間を減少させるが、ｍＧｌｕ２−／−マウスでは減少させないと見出される。これらの知見は、ｍＧｌｕ２受容体が、本発明の化合物の抗うつ様作用に関与することをさらに証明する。
【００９４】
本発明の化合物はまた、例えばＳＳＲＩのような、うつ病性障害の処置に有用な他の化合物と併用して、そのいずれかの化合物単独の作用に対して抗うつ様作用を増強する能力について試験され得る。実施例１０の化合物（１７ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．）は、マウス強制水泳試験だけで、およびフルオキセチン（１０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）と併用して試験され、下記の表３に示されるように、いずれかの化合物単独の作用に対して抗うつ様作用を有意に増加させると見出される。さらに、実施例１０の化合物（すなわち、実施例１の遊離塩基と同じ化合物）の活性な二酸部分の脳内濃度および血漿中濃度に関する試験は、曝露濃度を上昇させないことを示すことから、抗うつ様活性の増加が、その化合物への中枢の曝露の増加だけに起因しなかったという知見が支持される。
【００９５】
【表７】
0005870111.tif 000051
【００９６】
ラットにおける覚醒状態および行動のモニタリング：望まれない作用（例えば、レム睡眠の阻害、覚醒中の運動障害（ｗａｋｉｎｇ  ｍｏｔｏｒ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ）（自発運動の過剰な亢進または抑制）および／または反跳性過眠）なしに、覚醒状態の時間の長さを増加させる能力について、本発明の代表的な化合物をラットにおいて試験する。被験動物を、脳電図（ＥＥＧ）、筋電図（ＥＭＧ）、ならびに累積覚醒時間を判定する運動、反跳性過眠および覚醒状態における運動活性強度によって連続的にモニターする。そのような研究のための方法は、当該分野で公知である（例えば、Ｅｄｇａｒ  ＤＭ，Ｓｅｉｄｅｌ  ＷＦ．Ｍｏｄａｆｉｎｉｌ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｗａｋｅｆｕｌｎｅｓｓ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｉｎｔｅｎｓｉｆｙｉｎｇ  ｍｏｔｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｒ  ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ  ｒｅｂｏｕｎｄ  ｈｙｐｅｒｓｏｍｎｏｌｅｎｃｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  １９９７；２８３：７５７−７６９；ｖａｎ  Ｇｅｌｄｅｒ  ＲＮ，Ｅｄｇａｒ  ＤＭ，Ｄｅｍｅｎｔ  ＷＣ．Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｓｌｅｅｐ  ｓｃｏｒｉｎｇ：ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｍｉｃｒｏｃｏｍｐｕｔｅｒ−ｂａｓｅｄ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｍｉｃｅ．Ｓｌｅｅｐ  １９９１，１４：４８−５５；およびＧｒｏｓｓ  ＢＡ，Ｗａｌｓｈ  ＣＭ，Ｔｕｒａｋｈｉａ  ＡＡ，Ｂｏｏｔｈ  Ｖ，Ｍａｓｈｏｕｒ  ＧＡ，Ｐｏｅ  ＧＲ．Ｏｐｅｎ−ｓｏｕｒｃｅ  ｌｏｇｉｃ−ｂａｓｅｄ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｓｌｅｅｐ  ｓｃｏｒｉｎｇ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｕｓｉｎｇ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｃｏｒｄｉｎｇｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００９；１８４（１）：１０−８に記載されている方法を参照のこと）。研究は、以下のとおり行われる：
【００９７】
動物の準備。ＥＥＧ、ＥＭＧ、体温および運動を長期間記録するために、以下のとおり外科的に成体の雄Ｗｉｓｔａｒラット（手術時におよそ２７０〜３００ｇ）に取り付ける：ＥＥＧ記録用の４本のステンレス鋼ネジ（前頭部に２つ［ブレグマから３．９ｍｍ腹側かつ内外方向に±２．０ｍｍ］および後頭部に２つ［ブレグマから６．４ｍｍ背側、内外方向に±５．５ｍｍ］）からなる頭蓋インプラント、およびＥＭＧ記録用の２本のテフロンコーティングされたステンレス鋼ワイヤ（項部の台形の筋肉の下に配置する）を用いて、ラットを外科的に準備する。すべての導線が、手術前に微小コネクター（Ｍｉｃｒｏｔｅｃｈ，Ｂｏｏｔｈｗｙｎ，ＰＡ）とはんだづけされる。そのインプラント組立品は、ステンレス鋼ＥＥＧ記録ネジ、インプラントコネクタと頭蓋との間に適用されるシアノアクリレート、および歯科用アクリルの組み合わせによって、頭蓋に取り付けられる。腹部に外科的に配置された微小トランスミッタ（Ｍｉｎｉｍｉｔｔｅｒ  ＰＤＴ４０００Ｇ，Ｐｈｉｌｉｐｓ  Ｒｅｓｐｉｒｏｎｉｃｓ，Ｂｅｎｄ，ＯＲ）を介して、体温および運動活性をモニターする。回復のために少なくとも３週間を見越しておく。
【００９８】
記録環境。各ラットを、より垂直方向の上部空間を設けるために挿入されたポリカーボネート製フィルタートップライザー（ｆｉｌｔｅｒ−ｔｏｐ  ｒｉｓｅｒ）を用いて改造されたマイクロアイソレーターケージ内に個別に収容する。動きを最小に制限する可撓性ケーブルの一方の端をケージの上部に取り付けられたコミュテータに、他方の端を動物の頭蓋インプラントに接続する。各ケージは、ステンレス鋼睡眠覚醒記録チャンバの換気された別々の区画内に配置される。食料および水は、自由に入手可能であり、外界温度は、約２３±１℃で維持される。蛍光灯を用いた２４時間の明暗サイクル（ＬＤ１２：１２）を、本研究全体を通して維持する。相対湿度は平均しておよそ５０％である。動物を、各処置の前後の少なくとも３０時間、平静にする。
【００９９】
研究デザインおよび投薬。Ｒ１およびＲ２の両方が水素である化合物を、溶解のために最小量のＮａＯＨが加えられた水に溶解し、１．０ｍＬ／ｋｇ体重の体積でｉ．ｐ投与する。Ｒ１および／またはＲ２が水素以外である化合物を、２つの代替のビヒクル：ｉ）ヒドロキシエチルセルロース中の２．５％Ｎ−メチル−２−ピロリジノン；またはｉｉ）水に０．０５％Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）Ａｎｔｉｆｏａｍを含む１０％アカシアのうちの１つにおける２ｍＬ／ｋｇ体重の体積でｐ．ｏ．投与する。ラットが同じ処置を２回受けないように、かつラットが任意の１つの研究において８つの処置のうち２つより多く受けないように、ビヒクルまたは化合物用量レベルのうちの１つが、偽無作為的に投与される。各ラットは、計量および処置のために、約１分間そのケージから取り出される。各処置の前後に少なくとも６日間の「休薬」期間を設ける。
【０１００】
データ収集。睡眠と覚醒状態の区別は、自動化され得る（例えば、Ｖａｎ  Ｇｅｌｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９１；Ｅｄｇａｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９７，Ｗｉｎｒｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；Ｇｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。ＥＥＧを増幅してフィルターにかけ（Ｘ１０，０００，帯域１〜３０Ｈｚ）、ＥＭＧを増幅して統合し（帯域１０〜１００Ｈｚ，ＲＭＳ統合）、同時に非特異的な運動活性（ＬＭＡ）をモニターする。覚醒状態を、１０秒間のエポックにおいて、ノンレム睡眠、レム睡眠、覚醒状態またはシータ波優勢覚醒状態として分類する。運動活性（ＬＭＡ）を、１分あたりの回数として記録し、商業的に入手可能な遠隔測定レシーバ（ＥＲ４０００，Ｍｉｎｉｍｉｔｔｅｒ，Ｂｅｎｄ，ＯＲ）によって検出する。
【０１０１】
統計解析。齢および体重を、処置群別に平均値、最小値および最大値で要約する。少なくとも１つの結果を有するすべての動物を要約結果に含める（例えば、本発明者らは、遠隔測定データが使用可能であるがＥＥＧデータが使用可能でない動物処置からの適切なデータを含める）。処置後の観察期間を投薬後の２つの間隔（最初の７時間および最初の１９時間）に分け、ここで、投薬時間を開始時間＝０と定義する。１時間ごとの平均値または各期間全体の累積値のいずれかを算出することによって、各期間において結果を要約する。各期間における各結果を、因子として処置群および処置日、ならびに共変量として２４時間前の対応する前処置期間を使用して、共分散分析によって解析する。調整平均、ならびにビヒクル平均およびそれらの対応する標準誤差からの変化を、各処置群について要約する。調整されたダネットの多重比較Ｐ値を、各期間における各結果に対して示す。表１に示されるように、すべての結果がすべての期間において解析されるわけでなく、ゆえに、結果は、実験あたりの第１種過誤率に影響する。したがって、多重試験に対してさらなる調整は行われない。
【０１０２】
有効性の判定。有効な閾値用量は、累積覚醒時間が、処置後の最初の７時間にわたって、ビヒクルコントロールと比べて５０分を超える最低用量と推定される。その有効な用量付近のより近い一定間隔で設定された用量の研究をその後行うことによってより洗練された判定がなされ得る。
【０１０３】
望まれない作用の測定。２つの潜在的に望まれない作用が特に評価される：反跳性傾眠過剰および運動活性の増大（Ｅｄｇａｒ  ＤＭ，Ｓｅｉｄｅｌ  ＷＦ，１９９７）。
（ｉ）反跳性傾眠過剰は、有効な処置が施された後の８〜１９時間における覚醒状態のレベルの低下として判定され得る。生物学的に有意な低下は、最初の７時間における５０パーセントを超える累積的増加と定義される。したがって、覚醒状態が、最初の７時間において１００分増加した場合、ビヒクルコントロールと比べて処置後の８〜１９時間において累積覚醒状態が５０分以上減少することが、生物学的に有意であると見なされる。表２に示される群平均値の変化は、反跳性傾眠過剰が無いことを示す。
（ｉｉ）運動活性の増大は、ビヒクルコントロールと比べたとき、有効性閾値用量においてＥＥＧによって定義される覚醒状態の１分あたり５回のＬＭＡを超え、かつその作用が用量関連性である、平均値の増加と定義される。表２における群平均値の増加はすべて、覚醒状態１分あたり５回を下回り、用量依存的でない。
【０１０４】
例示化合物は、本質的には記載されるように試験され、有意な反跳性過眠または運動活性の増大なしに覚醒状態を促進すると見出される。Ｒ１およびＲ２の両方が水素である例示化合物（ｉ．ｐ．投与される）は、本質的には記載されるように試験され、１０ｍｇ／ｋｇ以下の用量で有効であると見出される。実施例１０の化合物は、本質的には記載されるように試験され、表４に示されるような累積覚醒時間プロファイルおよび運動活性強度を有すると見出される。
【０１０５】
【表８】
0005870111.tif 000052
【０１０６】
結果の統計学：平均値は、ビヒクルコントロールとの差異を表す。ＳＥ＝平均値の標準誤差；Ｐ＝有効性変数に対する複数の対比に対して調整されたＰ値。非調整のＰ値は、「望まれない作用」の尺度に対して示される（累積覚醒時間８〜１９時間および運動活性強度）。累積覚醒時間は、分の単位で与えられている。注１．運動活性（ＬＭＡ）強度＝処置後の最初の７時間にわたって平均された、ＥＥＧで定義された覚醒状態の１分あたりのＬＭＡの回数。注記Ｅ０５７６５−０１４／Ｋｅｌｌｅｔｔ。
【０１０７】
本発明の方法において使用される化合物を、いかなる製剤化も行わずに直接投与することが可能であるが、それらの化合物は、通常、活性成分として式Ｉの少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容可能な塩、ならびに少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、希釈剤および／または賦形剤を含む医薬組成物の形態で投与される。これらの組成物は、種々の経路（経口、皮下、静脈内および筋肉内を含む）によって投与され得る。そのような医薬組成物およびそれらを調製するためのプロセスは、当該分野で周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ｅｄ．，２１ｓｔ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｃｏ．，２００５）を参照のこと。Ｒ１および／またはＲ２が水素以外である式Ｉの化合物は、バイオアベイラビリティを改善する経口投与が好ましいのに対し、Ｒ１およびＲ２の両方が水素である式Ｉの化合物は、ｉ．ｖ．またはｉ．ｐ．投与が好ましい。
【０１０８】
上記組成物は、好ましくは、単位剤形として製剤化され、その各投与量は、約１〜約６００ｍｇ、より通常は約３０〜約３００ｍｇ、例えば、約５０〜約２５０ｍｇの活性成分を含む。用語「単位剤形」とは、ヒト被験体および他の哺乳動物に対する単位投与量として好適な物理的に別個の単位のことを指し、その各単位は、少なくとも１つの好適な薬学的に許容可能な担体、希釈剤および／または賦形剤とともに、所望の治療効果をもたらすと計算された所定量の活性な材料を含む。
【０１０９】
式Ｉの化合物は、概して、広範な投与量の範囲にわたって有効である。例えば、１日あたりの投与量は、通常、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ、より通常は約０．３〜５．０ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．５〜３．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内に入る。ある場合には、前述の範囲の下限より低い投与量レベルがより適切であることがあり、他の場合では、さらにより高い用量が、いかなる有害な副作用も引き起こすことなく使用されることがあり、ゆえに上記の投与量の範囲は、決して本発明の範囲を限定すると意図されない。実際に投与される化合物の量が、処置される状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物、個別の患者の年齢、体重および応答、ならびにその患者の症状の重症度をはじめとした関連する状況に鑑みて医師によって決定されることが理解されるだろう。