(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ガレート型カテキン及び植物由来リブロース１，５−ビスリン酸カルボキシラーゼ／オキシゲナーゼ又は分解物を含有し、
前記分解物がパパインで酵素処理された分解物であり、
前記ガレート型カテキンと前記植物由来リブロース１，５−ビスリン酸カルボキシラーゼ／オキシゲナーゼ又はその分解物との重量比率が１：２〜１：１０であることを特徴とするリパーゼ阻害剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リパーゼ阻害剤組成物に関する。また、本発明は、脂肪吸収抑制剤組成物及び抗肥満剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在の社会生活において、過剰なストレスや食物摂取、運動不足が蔓延している。これらが原因となるメタボリックシンドロームが大きな社会問題になっている。メタボリックシンドロームとは、内蔵脂肪型肥満に加えて高血糖、高血圧、脂質異常のうち二つ以上を併せ持った状態であり、動脈硬化のリスクが高くなる。脂質異常症は、血液中に含まれる脂質が過剰もくしは不足している状態を指し、これまで高脂血症と呼ばれていた疾患である。脂質異常症が発症すると、血中のＬＤＬコレステロール濃度の増加（高コレステロール血症）、ＨＤＬコレステロール濃度の低下（低コレステロール血症）、中性脂肪などの脂質の増加（高トリグリセリド血症）により、動脈硬化のリスクが高くなることが知られている。また、血中の中性脂肪が高濃度になると、体への脂肪蓄積が促進され肥満の原因となる。
【０００３】
高トリグリセリド血症を予防するためには、食事によって摂取される脂質量を抑えることが有効である。また、運動による脂質代謝の活性化も有効である。しかし、欧米化した現在の食生活においては、脂質摂取量を抑えることは現実的に難しい。また生活スタイルが不規則な現代においては、運動を行うのも困難であることもある。
【０００４】
このような現状において、高トリグリセリド血症を予防する方法として脂質吸収抑制作用を有する薬や機能性食品を使用する方法がある。脂肪の吸収は腸管内に分泌される胆汁中に含まれるリパーゼの作用によって分解・吸収されることが知られている。脂肪吸収抑制作用はこのリパーゼ活性阻害作用によるものであり、この作用を有する様々な医薬品・機能性食品が市販されている。例えば、医薬品としてはオルリスタットが挙げられる。機能性食品としては、サポニンやポリフェノールといった天然物のほか、グロビン蛋白分解物を用いたものなどが多く市販されている。
【０００５】
一方、緑茶に多く含まれるカテキン類には、コレステロール上昇抑制作用（特許文献１）、アミラーゼ活性阻害作用（特許文献２）などの生理活性が報告されている。また、カテキン類は動物試験の結果より、血中トリグリセリド濃度を低減させる効果があることが知られている（非特許文献１）。カテキン類の中でもガレート型カテキンが優れたリパーゼ活性阻害作用を有することが報告されていることから（非特許文献２）、脂肪吸収抑制効果がリパーゼ阻害作用に起因することが示唆されている。
【０００６】
ガレート型カテキンと蛋白質の２成分を含有する組成物は、新しい機能性食品素材として期待されている。ガレート型カテキンと蛋白質は混合すると複合体を形成することが知られている。この複合体はガレート型カテキンと蛋白質の両方の機能を兼ね備える、又は相乗効果を示すことが期待されている。例えば、コレステロール吸収抑制作用を有する大豆ペプチドとカテキンの複合体を摂取させたマウスでは、大豆ペプチド単体を摂取させたものよりもコレステロール吸収抑制作用が増大することが報告されている（非特許文献３）しかしながら、同報告ではカテキン単体との比較がなされておらず複合体のカテキンに対する優位性は示されていない。また、先行技術として以下のような報告もなされている。例えば、ポリフェノールと蛋白質の複合体を有効成分とする細胞接着抑制剤及び免疫寛容剤（特許文献３）、ポリフェノールと乳蛋白質の複合体を有効成分とする生活習慣病改善剤（特許文献４）などが報告されているが、いずれも脂肪吸収抑制作用への言及はなされていない。
【０００７】
リブロース１，５−ビスリン酸カルボキシラーゼ／オキシゲナーゼ（Ｒｉｂｒｏｓｅ  １，５‐Ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｃａｒｂｏｘｉｌａｓｅ／Ｏｘｙｇｅｎａｓｅ；Ｒｕｂｉｓｃｏ）は植物中にて炭酸固定をになう非常に重要な酵素である。また、地球上でもっとも多く存在している蛋白質でもある。しかしながら、これまでＲｕｂｉｓｃｏは機能性食材としては注目されず、わずかに、ゲル化や乳化作用、ホイップやフォーミング機能についての報告（非特許文献４）やオピオイド活性を有するペプチド配列を有する（特許文献５）ことに留まり、植物に存在するＲｕｂｉｓｃｏと動物における脂肪吸収抑制とにかかわる報告は知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特許第１６２０９４３号公報
【特許文献２】特許第３０１８０１３号公報
【特許文献３】特開２００２−２５５８１１号公報
【特許文献４】特開２００７−８９２０号公報
【特許文献５】特許第４４２４８０５号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】日本食品科学工学会誌，５２（４），１６７−１７１（２００５）
【非特許文献２】Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，１３５，１５５−１５９（２００５）
【非特許文献３】日本食品化学会誌，１１（２），６０−６６（２００４）
【非特許文献４】Ｆｏｏｄ  Ｒｅｖｅｉｗｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，４（１），９３−１２７（１９８８）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、ガレード型カテキン単独よりも顕著に優れたリパーゼ阻害活性を有し、かつ安全性に優れているリパーゼ阻害剤組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、前記目的を達成するために、鋭意研究を行った結果、驚くべきことにガレート型カテキンと植物由来リブロース１，５−ビスリン酸カルボキシラーゼ／オキシゲナーゼ又はその分解物とを含有する組成物がガレート型カテキンよりも優れたリパーゼ活性阻害作用を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
すなわち本発明の要旨は、ガレート型カテキン及び植物由来リブロース１，５−ビスリン酸カルボキシラーゼ／オキシゲナーゼ又はその分解物を含有し、
前記分解物がパパインで酵素処理された分解物であり、
前記ガレート型カテキンと前記植物由来リブロース１，５−ビスリン酸カルボキシラーゼ／オキシゲナーゼ又はその分解物との重量比率が１：２〜１：１０であることを特徴とするリパーゼ阻害剤組成物、に関する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明のリパーゼ阻害剤組成物は、ガレート型カテキンよりも優れたリパーゼ阻害作用を有し、かつ安全性に優れていることから、新しいリパーゼ阻害剤として有用である。さらに、原料として、地球上で最も存在量の多い蛋白質であり、且つ植物が光合成を行い続ける限り供給が可能な再生可能資源を使用することで、より安価に安定的にリパーゼ阻害剤を提供することが可能である。また、ガレート型カテキンの含有量がより低濃度で効果を発揮することから、ガレート型カテキン単独で期待される効果をより少ないガレート型カテキンの添加量で達成することが可能となり、渋味の原因となるガレート型カテキンの添加量を抑えた、より呈味性が向上した製品や、同程度のガレート型カテキン含有量の場合はガレート型カテキン単独より効果の高い製品を提供することが可能である。加えて、植物において葉、茎中に普遍的に存在する蛋白質を使用していることから、哺乳類や鳥類、魚類などに由来する蛋白質に見られるような不快な臭いや呈味はなく、これらの蛋白質を利用したものよりも、より良好な風味の製品を提供することが可能である。さらに、植物由来蛋白質を利用することから動物由来蛋白質を利用した場合問題となるような、宗教上、信条上の制約を受けない製品の提供が可能であり、且つ動物由来蛋白質を使用した場合に問題となるウイルスやプリオン蛋白質などの混入の心配のない、より安全性に優れた商品の提供が可能となる。また、本発明のリパーゼ阻害剤組成物は、前記のように優れたリパーゼ阻害作用を有することから、新しい脂肪吸収抑制剤及び抗肥満剤としても有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、実施例５において行った、植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏとガレート型カテキンの混合濃度比率を変化させた場合のリパーゼ活性阻害率の違いの結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００１６】
本発明において、「リパーゼ阻害剤組成物」とは、脂肪吸収作用があるリパーゼの作用を阻害する薬剤組成物をいう。脂肪は腸管内のリパーゼによって分解され、脂肪酸の形態で体内に吸収される。このリパーゼ阻害作用は、具体的には、後述の実施例に記載の方法により測定し、公知の阻害剤の作用と対比することで確認することができる。
【００１７】
また、前記のように、腸管内のリパーゼを阻害することで脂肪吸収を抑制できること、さらには脂肪吸収を抑制して肥満を抑制できることは公知の事実である。
したがって、本発明において、「脂肪吸収阻害剤組成物」とは、リパーゼ阻害活性により、体内への脂肪吸収を阻害する薬剤組成物をいう。
また、「抗肥満剤組成物」とは、リパーゼ阻害活性により、体内への脂肪吸収を阻害して、肥満を抑制する薬剤組成物をいう。
【００１８】
本発明のリパーゼ阻害剤組成物、脂肪吸収阻害剤組成物及び抗肥満剤組成物は、いずれも同一の構成を有するものであることから、以下、本発明の組成物と略して説明する。
【００１９】
本発明の組成物は、ガレート型カテキン及び植物由来リブロース１，５−ビスリン酸カルボキシラーゼ／オキシゲナーゼ（以下「植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏ」）を含有することを特徴とする。
前記の特徴を有する本発明の組成物では、ガレート型カテキンのリパーゼ阻害作用が、植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏと併用することで、大幅に向上するという効果が奏される。この効果のメカニズムについての詳細はまだ不明ではあるが、ガレート型カテキンが植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏと複合体を形成することで、ガレート型カテキンを超えるリパーゼ阻害作用が発揮されると考えられる。
【００２０】
カテキンとは、緑茶、紅茶あるいはウーロン茶などの茶に多く含まれているポリフェノールの一種であり、主にエピカテキン（ＥＣ）、エピカテキンガレート（ＥＣｇ）、エピガロカテキン（ＥＧＣ）、エピガロカテキンガレート（ＥＧＣｇ）、カテキン（Ｃ）などのフラバン−３−オール類の総称であるが、本発明において「ガレート型カテキン」とは、分子内にガロイル基を有するカテキンであり、具体的には、ＥＣｇ、ＥＧＣｇなどを指す。これらは、精製品の他、粗製品でも良く、これらを含有する天然物もしくはその加工品でも良い。たとえば、茶葉などより抽出した茶抽出物やサンフェノンＥＧＣｇ（太陽化学株式会社社製）などが挙げられる。
【００２１】
本発明においてリブロース１，５−ビスリン酸カルボキシラーゼ／オキシゲナーゼ分解物とは、植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏを酵素処理して得られる分解物（以下「Ｒｕｂｉｓｃｏ分解物」という）である。
【００２２】
Ｒｕｂｉｓｃｏ分解物は種々の分子量のペプチド又はペプチド塩を含む混合物である。このようなＲｕｂｉｓｃｏ分解物は、パパインなどのプロテアーゼを用いて常法に従って、例えば約３７℃にて１時間から３日間、植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏを加水分解する酵素処理を施して得られる分解物であればよい。前記酵素処理は、生産効率の観点から、１〜２４時間加水分解したものであることが好ましい。
なお、前記Ｒｕｂｉｓｃｏ分解物中のプロテアーゼなどの酵素は、ガレート型カテキンとの複合体形成を阻害しないことから、酵素処理後加熱などで失活させても、失活させなくてもどちらでもよい。
【００２３】
本発明の組成物中における前記ガレート型カテキンと植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏ又はＲｕｂｉｓｃｏ分解物との重量比率は、リパーゼ阻害作用に優れる観点から、１：１〜１：１０の範囲に調整することが好ましい。
【００２４】
本発明の組成物は、前記ガレート型カテキンと、植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏ又はＲｕｂｉｓｃｏ分解物とから構成されていてもよいが、例えば、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、細粒剤、顆粒剤等の固形製剤、水剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、ゲル剤等に配合される場合にはそれぞれの剤形に応じた任意成分をさらに含有してもよい。また、錠剤、丸剤、顆粒剤、顆粒を含有するカプセル剤の顆粒は、必要により、ショ糖等の糖類、マルチトール等の糖アルコールで糖衣を施したり、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等でコーティングを施したりすることもできる。また、胃溶性又は腸溶性物質のフィルムで被覆してもよい。常法に基づいて、注射剤、点滴剤に本発明の組成物を配合して使用してもよい。
【００２５】
また、本発明の組成物は分散液であってもよい。この場合、前記ガレート型カテキンの水溶液と前記植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏ又はＲｕｂｉｓｃｏ分解物との水溶液とを混合することで、白濁状の分散液が得られる。
また、前記分散液を、例えば、凍結乾燥やスプレードライなど公知の乾燥法によって、水分を除去して乾燥粉末の形態にしてもよい。
【００２６】
本発明の組成物が乾燥粉末状である場合、本発明の組成物におけるガレート型カテキンの含有量は、リパーゼ阻害作用を十分に発揮する観点から、１０〜５０重量％であることが好ましい。
また、本発明の組成物における植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏ又はＲｕｂｉｓｃｏ分解物の含有量は、ガレート型カテキンと複合体を形成させる観点から、５０〜９０重量％であることが好ましい。
【００２７】
また、本発明の組成物が分散液の状態である場合、本発明の組成物中におけるガレート型ガレート型カテキンの含有量は、リパーゼ阻害作用が十分に発揮する観点から、０．００６重量％以上であることが好ましい。
また、本発明の組成物における植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏ又はＲｕｂｉｓｃｏ分解物の含有量は、ガレート型カテキンと複合体を形成させる観点から、０．００６重量％以上であることが好ましい。
【００２８】
本発明の組成物を使用する場合、例えば、前記組成物の摂取量は、所望の効果が得られるような量であれば特に制限されず、通常その態様、患者の年齢、性別、体質その他の条件、疾患の種類並びにその程度等に応じて適宜選択される。前記ガレート型カテキン含有組成物の固形分値で、１日当たり約０．１ｍｇ〜１，０００ｍｇ程度とするのがよく、これを１日に１〜４回に分けて摂取することができる。
【００２９】
本発明の組成物は、ガレート型カテキンと植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏ又はＲｕｂｉｓｃｏ分解物を別々に調製してもよいが、ガレート型カテキンを含む植物、例えば、生茶葉を粉砕し可溶化部分を回収することでガレート型カテキンと植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏとの混合物の状態で取得したものを使用しても良い。
【００３０】
また、本発明の組成物は、安全性に優れたものであるので、ヒトに対してだけでなく、例えば、非ヒト動物、例えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジー等の哺乳類、鳥類、両生類、爬虫類等の治療剤又は飼料に配合してもよい。飼料としては、例えばヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ニワトリ等に用いる家畜用飼料、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、ウナギ、タイ、ハマチ、エビ等に用いる魚介類用飼料、イヌ、ネコ、小鳥、リス等に用いるペットフードが挙げられる。
【００３１】
次に、本発明を実施例に基いて詳細に説明するが、本発明はかかる実施例にのみ限定されるものではない。
【実施例】
【００３２】
（実施例１  植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏ粗精製物の調製）
市販のホウレンソウを、凍結後、ミルサーにて粉砕した。粉砕物を２０ｍＭリン酸緩衝液に混合した後、遠心分離（１２０００×ｇ、３０分間、４℃、以下の場合も同じ）を行い、上清を回収した。回収した上清を５５℃、３０分間加温したのち再度遠心分離を行い、上清を回収した。回収した上清に対し硫酸アンモニウムを飽和濃度の４０％加え、Ｒｕｂｉｓｃｏを塩析した。析出したＲｕｂｉｓｃｏを遠心分離により回収し、植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏの粗精製物として以後の実験に使用した。
なお、前記粗精製物を常法に従ってポリアクリルアミドゲル電気泳動して染色したところ、約５５ｋＤａ付近に主要なバンドが確認され、他のバンドがほとんど見られなかったことから、前記粗精製物中の植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏ含有量は約９０重量％と換算して以後の実験で使用した。
【００３３】
（実施例２  植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏとガレート型カテキンによる複合体組成物１の調製）
実施例１で得られた植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏの粗精製物を適当量の水に溶解し、０．３５％Ｒｕｂｉｓｃｏ水溶液を得た。Ｒｕｂｉｓｃｏ水溶液に対し、ＥＧＣｇ（商品名：サンフェノンＥＧＣｇ、太陽化学株式会社製）を終濃度０．０７％となるように添加・混合して、コロイド状白色液体を得た。このコロイド状白色液体を、複合体組成物１として以後の実験に使用した。なお、複合体組成物１中におけるガレート型カテキンと植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏとの重量比率は１：５であった。
【００３４】
（実施例３  Ｒｕｂｉｓｃｏ分解物とガレート型カテキンによる複合体組成物２の調製）
実施例１で得られた植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏの粗精製物に対し、終濃度１ｍｇ／ｍＬパパインを３７℃で２時間反応させ、Ｒｕｂｉｓｃｏ分解物を得た。このＲｕｂｉｓｃｏ分解物の分子量分布は、５００００Ｄａ以上が２３％；２００００〜５００００Ｄａが７％；１００００〜２００００Ｄａが２７％；５０００〜１００００Ｄａが２５％；５０００Ｄａ以下が１８％を示した。ホウレンソウ由来のＲｕｂｉｓｃｏの分子量は、約５５０ｋＤａであることから、完全に分解されていることがわかった。
なお、Ｒｕｂｉｓｃｏ分解物の分子量に関する情報は、ＨＰＬＣ及びゲルろ過法等のすでに公知の手法を使用し取得した。Ｒｕｂｉｓｃｏ分解物に対し、ＥＧＣｇを終濃度０．０７％となるように添加、混合して、コロイド状白色液体を得た。このコロイド状白色液体を、複合体組成物２として以後の実験に使用した。なお、複合体組成物２中におけるガレート型カテキンとＲｕｂｉｓｃｏ分解物との重量比率は１：５であった。
【００３５】
（実施例４  複合体組成物１、２のリパーゼ阻害作用評価）
リパーゼに対する阻害作用を見るため、ラット腸由来リパーゼを用いての阻害作用試験を行った。
リパーゼは、ラット腸アセトンパウダー（シグマアルドリッチジャパン（株）製）１００ｍｇを１００ｍＭクエン酸バッファー（ｐＨ６．０）１ｍｌに懸濁して４℃で１時間撹拌し、これを遠心分離（１８０００×ｇ、４５分間、４℃）した上清を１０００倍希釈したものをリパーゼ溶液として使用した。
【００３６】
試料は、サンフェノンＥＧＣｇと、実施例２、３で得られた本発明品である複合体組成物１、２、及び比較対象として、実施例２の植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏ粗精製物をウシ由来アルブミンに置き換えた複合体組成物３の４種類を用いた。試料調製については、サンフェノンＥＧＣｇは０．０７％になるように調製した水溶液を使用した。必要に応じ、各々のサンプルを蒸留水で希釈したものを試験に使用した。
【００３７】
活性測定には「リパーゼキットＳ」（商品名、大日本製薬（株）製）を使用した。まず、リパーゼキットＳのカタログに記載の調製法に従い発色液を調製した。発色液を６０μＬ、ＤＭＳＯを１０μＬ、エステラーゼ阻害剤を２μＬ、リパーゼ溶液を１０μＬ、試料を１０μＬ混合した反応液を調製し、３０℃で５分間プレインキュベートした後に基質溶液を８μＬ添加して反応を開始した。３０分間の反応後、リパーゼキットＳのカタログに記載の調製法に従い調製した反応停止液を１５０μＬ添加して反応を停止した。これを測定波長４１５ｎｍの吸光度測定をおこなった。試料の溶媒である蒸留水のみを添加した反応液をポジティブコントロールとし、リパーゼ溶液の代わりに１００ｍＭクエン酸バッファー（ｐＨ６．０）１０μＬを添加したものをネガティブコントロールとした。これらから得られたデータを基に算出したリパーゼ阻害率と各組成物濃度の関係から、リパーゼ活性を５０％阻害するために必要なガレート型カテキン濃度（μｇ／ｍＬ）を算出した（表１）。
【００３８】
これらの結果から実施例２，３で得られた複合体組成物１、２にはより低いガレート型カテキン濃度においても高いリパーゼ阻害活性が認められた。この効果はサンフェノンＥＧＣｇ単独の場合と比較すると８倍程度、ウシ由来アルブミンを用いた複合体組成物３と比較すると６．５倍程度高い活性を有していることから本発明品の有意性が強く示唆された。
【００３９】
【表１】
0005978656.tif 000002
【００４０】
（実施例５  ガレート型カテキンと植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏの混合濃度比の違いによるリパーゼ阻害作用評価）
ガレート型カテキンと植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏとの混合濃度比の違いによるリパーゼ阻害作用を比較した。リパーゼの活性測定は実施例４と同様の方法で行い、サンフェノンＥＧＣＧ終濃度を７μｇ／ｍＬ一定とし、混合する植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏの終濃度（前記粗精製物から換算した濃度）を１．４〜７０μｇ／ｍＬ（濃度比で１：０．２〜１：１０）と変化させ比較を行った。その結果を図１に示す。
【００４１】
この結果からガレート型カテキンと植物由来Ｒｕｂｉｓｃｏとの混合濃度比は、リパーゼ阻害作用に優れる観点から、１：１〜１：１０の範囲に調整することが好ましいことが示された。
【００４２】
また、以上のように、本発明の組成物は、ガレート型カテキンの含有量がガレート型カテキン単独で使用した場合より低濃度で効果を発揮することから、ガレート型カテキン単独で期待される効果をより少ないガレート型カテキンの添加量で達成することが可能となり、渋みの原因となるガレート型カテキンの添加量を抑えたより呈味性が向上した製品や、同程度ガレート型カテキンの含有量の場合はより効果の高い製品を提供することが可能である。加えて、植物において葉、茎中に普遍的に存在する蛋白質を使用していることから、哺乳類や鳥類、魚類などに由来する蛋白質に見られるような不快な臭いや呈味はなく、これらの蛋白質を利用したものよりも、より良好な風味の製品を提供することが可能である。さらに、植物由来蛋白質を利用することから動物由来蛋白質を利用した場合問題となるような、宗教上、信条上の制約を受けない製品の提供が可能となる。また、優れたリパーゼ阻害作用を有することから、脂肪吸収抑制剤組成物又は抗肥満剤組成物としても有用であることがわかる。
【図１】
0005978656.tif 000003