(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ブドウからポリフェノール類及びオレアノール酸を含む抽出物を得る方法であって、果皮を含むブドウ果実を発酵させた後、発酵物を固液分離して固体を得て、該固体を凍結させ、該凍結した固体を溶媒抽出に供し、抽出物を得ることを含む方法。
【請求項２】
下記の工程を含む、請求項1に記載の方法。
（ａ）ブドウ果実を破砕処理して果皮、果肉、種子および果汁とを含むブドウもろみ果汁を得、該もろみ果汁と酵母とを接触させて発酵させる工程
（ｂ）工程（ａ）によって得た発酵物から固液分離により固形分を回収し、該固形分を凍結させる工程
（ｃ）凍結した固形分に、含水有機溶媒を接触させ、ポリフェノール類およびオレアノール酸を含む抽出物を得る工程。
【請求項３】
発酵させる温度が１０〜４０℃の範囲である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
発酵させる時間が２４時間〜１ヶ月の範囲である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
固液分離して得た固体を冷凍する温度が０℃〜−８０℃の範囲である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
抽出溶媒が、水を１０〜５０質量％含む含水エタノール、含水メタノール、又は含水アセトンである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法によって得た抽出物を使用することを含む、食品の製造方法。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法によって得た抽出物を使用することを含む、化粧料の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ブドウから抽出物を得る方法に関し、さらに詳しくはブドウから有効成分を効率よく抽出する方法に関する。本発明はさらに、上記方法により得られた抽出物の利用に関し、具体的には該抽出物を配合した食品及び化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、植物から抽出物を得る方法として、例えば、水分を含有する動植物の組織を凍結させてから溶媒抽出により抽出液を得ることが提案され（特許文献１参照）、及び、植物やきのこに対して予め加熱した油で処理してから溶媒抽出することが提案されている（特許文献２参照）。一方具体的な植物原料に関して、例えばアントシアニン色素を含む植物原料を乳酸発酵させて得た発酵液からアントシアニン色素を抽出することが提案されている（特許文献３参照）。
【０００３】
抽出原料としてブドウに注目したとき、ブドウを凍結させてから抽出する方法では、植物中に残存する糖類が多く抽出されてくるため、作業性が悪く、抽出物も腐敗しやすい。また、熱した油を使用することも、必ずしも効率的ではない。また、ブドウの発酵液では、トリテルペン類などの脂溶性の有効成分が充分に抽出されてこない。
一方ブドウのジュースやワインの製造時に産出される搾汁粕から抽出物を得ることが提案されている（例えば特許文献４及び５参照）。これらの抽出原料となるワイン圧搾粕に抽出前に熱を加えた場合、ポリフェノール類をはじめとする一部の成分が熱などにより分解されるため、効率的に有効成分を抽出するには最適とはいえない。また、ワイン圧搾粕は常温でも劣化しやすいため、長期保管には適さないという問題がある。
近年、生理活性物質の起源として注目されているブドウを原料として、ポリフェノール類及びトリテルペン類などの有効成分を効率よく抽出することが強く要望される。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平８−１０５０３号公報
【特許文献２】特開２００５−２５３３３０号公報
【特許文献３】特開２００２−１７３９４号公報
【特許文献４】特開平７−２２８８６８号公報
【特許文献５】特開２０００−１３５０７１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、ブドウから抽出物を得る際に、所望する有効成分を効率よく得ることができる方法を提供することを目的とする。本発明はまた、ブドウから得た抽出物を使用して食品や化粧料を製造することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、ブドウから有効成分を効率的に抽出することができる手段を鋭意検討し、その結果、ブドウ果実を発酵させた後、発酵物を固液分離して固体を得て、該固体を冷凍し、該冷凍した固体を溶媒抽出に供することで、有効成分が効率よく抽出されることを見出し、本発明を完成させるに至った。
従って、本発明は、ブドウから抽出物を得る方法であって、ブドウ果実を発酵させた後、発酵物を固液分離して固体を得て、該固体を凍結させ、該凍結した固体を溶媒抽出に供し、抽出物を得ることを含む方法である。
本発明によれば、ブドウからポリフェノール類及びオレアノール酸を効率よく抽出することができる。従って、本発明はまた、ブドウからポリフェノール類及びオレアノール酸を効率よく抽出する方法であって、ブドウ果実を発酵させた後、発酵物を固液分離して固体を得て、該固体を凍結させ、該凍結した固体を溶媒抽出に供し、抽出物を得ることを含む方法である。本発明によれば、特にポリフェノール類を効率よく抽出することができる。従って、本発明はまた、ブドウからポリフェノール類を効率よく抽出する方法であって、ブドウ果実を発酵させた後、発酵物を固液分離して固体を得て、該固体を凍結させ、該凍結した固体を溶媒抽出に供し、抽出物を得ることを含む方法である。
【０００７】
本発明の好ましい実施態様として、発酵させる温度が１０〜４０℃の範囲であり、また発酵させる時間が２４時間〜１ヶ月の範囲である。また、固液分離して得た固体を冷凍する温度として０℃〜−８０℃の範囲が適当である。発酵の具体例としてアルコール発酵が挙げられる。上述の方法において、固液分離によって得られる固体の具体的実施態様として、ワインの醸造過程で産出されるワイン搾汁粕が挙げられる。
上記の方法によりブドウから得られた抽出物は、食品や化粧料の成分として使用することができる。
従って、本発明はまた、ブドウ果実を発酵させた後、発酵物を固液分離して固体を得て、該固体を凍結させ、該凍結した固体を溶媒抽出に供し、抽出物を得て、該抽出物を使用することを含む、食品の製造方法に向けられている。本発明はまた、ブドウ果実を発酵させた後、発酵物を固液分離して固体を得て、該固体を凍結させ、該凍結した固体を溶媒抽出に供し、抽出物を得て、該抽出物を使用することを含む、化粧料の製造方法に向けられている。
【発明の効果】
【０００８】
本発明に従ってブドウから抽出物を得ることによって、発酵を行わずに抽出する方法と比較して、オレアノール酸などのトリテルペン類の抽出効率が高くなる。これは糖類を資化させることにより、脂溶性の成分が抽出されやすくなることによるものと推測できる。また、発酵後、固液分離して得た固体を一度冷凍することにより、冷凍を行わずに抽出する方法と比較して、ポリフェノール類をはじめとする成分を効率よく抽出することができる。
更に本発明によれば、冷凍する工程があることより、溶媒抽出前の原料の長期保管が可能となり、よって抽出原料が有効に利用でき、ひいては、ブドウからの有効成分の抽出が、フレキシブルで、作業性が良く、便利なものとなる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
本発明で使用するブドウの種類は特に限定するものではないが、例えばカベルネ・ソーヴィニヨン、ツヴァイゲルト、ピノ・ノワール、メルロー、カベルネ・フラン、サンジョヴェーゼ、マスカット・ベーリーA、山幸、清見、清舞、リースリング、シャルドネ、ナイアガラ、デラウェア、ミュラー・トゥルガウ、ソーヴィニヨン・ブラン、甲州、ケルナー、及び巨峰などが挙げられる。
本発明において、発酵操作に供するブドウ果実は、できるだけ梗を除いた（除梗、すなわちブドウの粒が付いている枝の部分を除いた）果実が好ましく、さらにこのようなブドウ果実を破砕したものが好ましい。従って発酵に供する原料として、ブドウの果汁、果肉、果皮、種子及び残り得る梗を含む、もろみ状の果汁が、好ましく用いられる。このような除梗および破砕作業は、除梗破砕機で一度に行ってもよいし、除梗機で一旦梗を除いた後に粒を選定し、破砕機に供しても良い。
【００１０】
発酵の例としては、アルコール発酵、クエン酸発酵、グリセロール発酵、乳酸発酵などが挙げられる。
発酵に使用する微生物は人為的な添加によって行ってもよいし、果実表面等に付着している微生物を利用して行ってもよい。人為的に微生物を接触させる場合、その微生物として、ワイン醗酵用酵母（例えば、サッカロマイセス(Saccharomyces)属セレビシアエ(Cerevisiae)種や、サッカロマイセス(Saccharomyces)属のバイヤヌス(bayanus)種の酵母など）、ビール醗酵用酵母、パン用醗酵酵母などの酵母、ラクトバシラス属(Lactobacillus)、ペディオコッカス属(Pediococcus)、オエノコッカス属(Oenococcus)などの乳酸菌、清酒用麹菌、焼酎用麹菌、みそ用麹などのコウジカビ（麹菌）、ゲオトリクム(Geotrichum)属に属する微生物（不完全菌類）などが挙げられる。ゲオトリクム属に属する微生物としては、ゲオトリクム  キャンディダム(Geotrichum candidum)、ゲオトリクム  レクタングラタム(Geotrichum rectangulatum)、ゲオトリクム  クレバニ(Geotrichum klebahnii)、ゲオトリクム  スピーシーズ(Geotrichum sp.)などが例示できる。
中でもアルコール発酵が好ましく用いられる。
【００１１】
使用する酵母の量は、原料、例えばもろみ状果汁量に対して50〜500 ppmの範囲で使用するのが好ましく、更に好ましくは100〜200 ppmの範囲である。
発酵温度は１０℃〜４０℃の範囲で行い、好ましくは１５℃〜３５℃で行う。発酵時間は２４時間〜１ヶ月の範囲であり、好ましくは１週間〜３週間である。
発酵操作は開放タンク、密閉式タンク、回転式タンクなどを用いて行うことができる。
【００１２】
こうして得られた発酵物を固液分離操作に供し、固体を得る。この固液分離操作には濾過、遠心分離、フィルタープレス、デカンテーション、及び圧搾などの適当な手段を用いることができる。中でも水平式圧搾機、垂直式圧搾機、空気圧式圧搾機、連続式圧搾機による圧搾などが好ましく用いられる。
ここで得る固体の水分含量は４０〜７０質量％の範囲が適当であり、好ましくは５０〜６５質量％の範囲である。この水分含量は常法の測定手段により確認することができ、例えば試料を１０５℃で２時間加熱することにより水分減少量を測定し、水分含量を確認、決定することができる。
上述してきたブドウ果実の発酵工程を経て該発酵物を固液分離して得る固体の例として、具体的にはワインの醸造過程で産出されるワイン搾汁粕を用いることができる。
【００１３】
こうして得られた固体（例えばワイン搾汁粕）を冷凍操作に供する。このような固体はそのままで冷凍操作に供してもよいし、又は必要に応じ所望の大きさに破砕した後、冷凍してもよい。この破砕には例えばカッティングミルなどを用いることができる。
冷凍する温度は０℃〜−８０℃の範囲が適当であり、望ましくは−１０℃〜−３０℃の範囲である。
また、冷凍は急速冷凍が好ましい。冷凍が完了すれば、抽出操作を行うことができる。あるいは、冷凍完了後、抽出操作を行うまで、冷凍室で保存することもできる。
【００１４】
冷凍状態にある上記固体を用いて溶媒による抽出を開始する。
抽出に用いる溶媒は水、有機溶媒、または有機溶媒と水との混合物が挙げられる。有機溶媒の例としてヘキサン、メタノール、エタノール、アセトン、ベンゼン、エチルエーテル、プロピレングリコール、１、３-ブチレングリコール及び酢酸エチルなどが挙げられる。抽出溶媒として、有機溶媒と水との混合物が好ましく、特に水を１０〜５０質量％程度含む含水エタノール、含水メタノール、又は含水アセトンが好ましく用いられる。
抽出温度は一般に７０℃以上、好ましくは８０〜１２０℃、特に好ましくは８０℃〜１００℃である。抽出する際の原料（無水物換算）に対する抽出溶媒の量は、特に限定されるものではないが、通常２〜２０倍量(Ｖ/Ｗ)が適当であり、好ましくは３〜１０倍量(Ｖ/Ｗ)である。使用する抽出装置としては、例えば回分式、半連続式、連続式など何れの型式の抽出装置を用いてもよいが、好ましくは何れの型式でも密閉型の装置である。そしてまた必要により耐圧性の装置が用いられる。なお抽出に際しては、所望により内容物を攪拌してもよい。
抽出時間は、通常１０分〜４時間が適当であり、好ましくは１時間〜２時間程度である。
【００１５】
上記のように抽出操作を行った後、固液分離を行って抽出液を得る。固液分離にはカートリッジフィルター、ネル濾布、濾過板、濾紙、濾過助剤を併用したフィルタープレス等の濾過法や遠心分離法などの適当な手段を用いることができる。使用した抽出溶媒によって、例えば、水、エタノール、含水エタノールなどを用いたとき、固液分離して得た抽出液をそのまま抽出物として使用することができる。
抽出液は適当な濃縮手段により、例えば減圧濃縮によって濃縮液とすることもできる。さらに真空乾燥や減圧乾燥を施し、乾固物として抽出物を採取することができる。
上記の抽出液又は濃縮液はまた、凍結乾燥、噴霧乾燥、減圧乾燥などによって乾燥させて粉末状態の抽出物とすることができる。その際に適当な賦形剤を使用して粉末状態にしてもよい。
【００１６】
上記のようにして得られた抽出物には、アントシアニン、カテキンなどのポリフェノール類、オレアノール酸などのトリテルペン類、クロロフィル、ステリルグルコシド、一部の糖類などが含まれている。
該抽出物は食品又は化粧料の成分とすることができ、種々の形態、剤形に調製することができる。種々の形態、剤形に調製する際、該抽出物を単独で用いることもでき、あるいは適当な溶媒に溶解して使用したり、適当な担体などと組み合わせて用いることができる。
【００１７】
該抽出物を配合する食品の形態として、粉末、顆粒、錠剤、固形食品、飲料、液状、ゲル状、ペースト状、及びゼリー状などが挙げられる。食品としては特に限定されるものではなく、例えば健康飲料、健康食品、パン、麺、クッキー、ビスケット、ケーキ、ゼリー、チューインガム、飴、キャンディ、グミキャンディー、タブレット、粉末ジュース、粉末スープなど、各種の食品が挙げられる。該抽出物を配合した食品を製造するとき、所望する食品の製造方法に応じて、適宜の工程で該抽出物を使用することができる。
食品における該抽出物の含有量は、抽出物の乾燥質量に基づいて０．０００１〜１０質量％が適当であって、好ましくは０．０１〜５質量％である。
【００１８】
該抽出物を配合する化粧料の形態として、粉末状、顆粒状、錠剤状、固形状、液状、ゲル状、ペースト状、乳液状、クリーム状、軟膏状、シート状、ムース状などの種々の剤形を挙げることができる。化粧料として具体的に、クリーム、乳液、化粧水、美容液、軟膏、オイル、パック剤、ローション、ジェル剤などの基礎化粧料、アンダーメークアップ、ファンデーションなどのメークアップ料、石鹸、ボディーソープ、洗浄剤、洗顔料、クレンジングクリ−ム、クレンジングローション、クレンジングミルクなどの皮膚洗浄料、シャンプー、リンス、トリートメント、ヘアトニック、育毛剤などの頭髪用化粧料、入浴剤、及び歯磨剤などがある。所望する化粧料の形態に応じて、その製造の適宜の工程で該抽出物を配合することができる。また、所望する化粧料の形態に応じて、慣用の添加剤、例えば油性成分、界面活性剤（合成系、天然系）、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、美白剤、酸化防止剤、アルコール類、色剤、水性成分、水、生理活性成分等を適宜配合することができる。
化粧料における該抽出物の含有量は、抽出物の乾燥質量に基づいて０．０００１〜１０質量％が適当であって、好ましくは０．０１〜５質量％である。
【実施例】
【００１９】
［ブドウ（山幸種）からの抽出材料の調製］
ブドウ（山幸種）から以下の５種の抽出材料を調製した。
(1)未発酵未凍結ブドウ：発酵処理を行わず、凍結処理も行わないブドウ
ブドウを除梗破砕機で除梗したのち、垂直式圧搾機によって破砕・圧搾して得たブドウ圧搾粕。
(2)未発酵凍結ブドウ：発酵処理を行わず、凍結処理したブドウ
上記(1)で得たブドウ圧搾粕を冷凍庫で−２５℃、２週間冷凍したブドウ圧搾粕。
(3)発酵凍結ブドウ：発酵処理及び凍結処理を行ったブドウ（本発明の方法に従った材料）
上記(1)で除梗破砕機によって得られたもろみ果汁に、乾燥酵母（Saccharomyces cerevisiae）を200 ppm添加して、３０℃で１０日間発酵処理を行い、該発酵物から垂直式圧搾機によって圧搾粕を得て、冷凍庫で−２５℃、２週間凍結処理を行ったブドウ圧搾粕。
(4)発酵未凍結ブドウ：発酵処理を行い、凍結処理を行わないブドウ
上記(3)のようにして発酵物から圧搾して得たブドウ圧搾粕。
(5)発酵乾燥ブドウ：発酵処理を行い、凍結処理を行なわず、乾燥処理したブドウ
上記(3)のようにして発酵物から圧搾して得たブドウ圧搾粕を、棚式送風乾燥機で６０℃、４時間乾燥処理を行ったブドウ圧搾粕。
上記の各抽出材料について、１０５℃で２時間加熱して水分減少量を測定し、抽出材料中の水分含量を予め求めておいた。
【００２０】
［実施例１］
上記の各抽出材料を固形分量が同じになるように、以下のように用いて抽出作業を行った。なお、各抽出材料の固形分は、上記のように求めた水分含量から計算した。
(1)未発酵未凍結ブドウ 45.0 g（固形分18.2 g）
(2)未発酵凍結ブドウ 45.0 g（固形分18.2g）
(3)発酵凍結ブドウ 40.5 g(固形分18.2 g)
(4)発酵未凍結ブドウ 40.5 g(固形分18.2 g)
(5)発酵乾燥ブドウ 20.0 g(固形分18.2 g)
【００２１】
抽出溶媒として、各抽出材料に含まれる水分含量を考慮して最終濃度がそれぞれ水30％(v/v)となるよう調製した含水エタノールを以下のように用いた。
抽出材料(1)に対して、エタノール98mLと水15mLの86.7％(v/v)含水エタノール(113mL)
抽出材料(2)に対して、エタノール98mLと水15mLの86.7％(v/v)含水エタノール(113mL)
抽出材料(3)に対して、エタノール98mLと水20mLの83.1％(v/v)含水エタノール(118mL)
抽出材料(4)に対して、エタノール98mLと水20mLの83.1％(v/v)含水エタノール(118mL)
抽出材料(5)に対して、エタノール98mLと水42mLの70％(v/v)含水エタノール（140mL）
【００２２】
加熱還流抽出装置を用いて、82℃で２時間抽出を行った後、吸引濾過を行い、抽出液を得た。この抽出液に、真空ロータリーエバポレーターにて減圧乾燥を行い、乾固物（紫色）を得た。
この乾固物をHPLC-UV法を用い、カラム（GLサイエンス社製、ODS-3、150×2.1mm i.d.）温度 40℃、流量1.0 mL/min、波長210 nmの測定条件によりオレアノール酸含量を測定した。その結果を以下の表に示す。
なお、上記の抽出液を得る濾過及びその後の濃縮における作業性を以下のように評価した。
○・・・べたつきが少なく、ろ過を効率的に行うことができる
△・・・ややべたつきが有り、ろ過性にやや問題がある
×・・・べたつきが多く、ろ過が効率的に行われない
【００２３】
【表１】
0005970672.tif 000002
発酵過程を経たブドウは、発酵過程を経ないブドウよりもオレアノール酸が効率的に抽出されることが明らかとなった。また、凍結処理を行ったブドウは、乾燥処理を行ったものに比べオレアノール酸が効率的に抽出された。以上より、ブドウ中のオレアノール酸を効率的に抽出するには、発酵過程を経たブドウを使用するのが望ましいことが判った。
また、未発酵未凍結ブドウと未発酵凍結ブドウは、糖類が多く抽出されてくるため、ろ過・濃縮が行いにくいという問題がある。よって、発酵工程があることによって、作業性の向上にもつながる。
【００２４】
［実施例２］
上記の抽出材料の(3)発酵凍結ブドウ、(4)発酵未凍結ブドウ、及び(5)発酵乾燥ブドウを以下のように用いて、抽出作業を行った。
(3)発酵凍結ブドウ 40.5 g(固形分18.2 g)
(4)発酵未凍結ブドウ 40.5 g(固形分18.2 g)
(5)発酵乾燥ブドウ 20.0 g(固形分18.2 g)
抽出溶媒として、各抽出材料に含まれる水分含量を考慮して最終濃度がそれぞれ水30％(v/v)となるよう調製した含水エタノールを以下のように用いた。
抽出材料(3)に対して、エタノール98mLと水20mLの83.1％(v/v)含水エタノール(118mL)
抽出材料(4)に対して、エタノール98mLと水20mLの83.1％(v/v)含水エタノール(118mL)
抽出材料(5)に対して、エタノール98mLと水42mLの70％(v/v)含水エタノール（140mL）
【００２５】
加熱還流抽出装置を用いて、82℃で２時間抽出を行った後、吸引濾過を行い、抽出液を得た。この抽出液に、真空ロータリーエバポレーターにて減圧乾燥を行い、乾固物（紫色）を得た。
この乾固物を100 mlのメタノールに溶解させ、Folin-Denis法にて抽出物中の総ポリフェノール量を測定した。その結果を以下の表に示す。
【表２】
0005970672.tif 000003
凍結処理を行ったブドウは、凍結処理を行わないブドウよりもポリフェノール類が効率的に抽出されることが明らかとなった。以上より、ブドウ中のポリフェノール類を効率的に抽出するには、凍結処理を経たブドウを使用するのが望ましいことが判った。
【００２６】
［食品及び化粧料の製造］
上記実施例１で得た、抽出材料(3)発酵凍結ブドウからの抽出物を用いた。
実施例３
下記の組成により、常法に従ってキャンディを製造した（１粒当たり3.8 g）。
配合量(質量％)
発酵凍結ブドウ抽出物             0.5
ガムベース                      20.0
水飴                            11.5
パラチノース                    10.0
キシリトール                    10.0
香料                             1.0
砂糖                            15.0
イソマルトース                  20.0
コーンシロップ                  12.0
【００２７】
実施例４
下記の処方により、歯磨剤製造の常法に従って練歯磨剤を調製した。
配合量(質量％)
発酵凍結ブドウ抽出物                   0.1
炭酸カルシウム                        35.0
ソルビトール                          20.0
カルボキシメチルセルロース             1.0
ラウリル硫酸ナトリウム                 1.0
サッカリンナトリウム                   0.1
香料                                   1.0
塩酸クロルヘキシジン                   0.01
アラントイン                           0.01
グリチルリチン酸ジカリウム             0.01
精製水                                41.77
【００２８】
実施例５
下記の処方により、常法に従って化粧水を製造した。
配合量(質量％)
グリセリン                              6.0
１,３−ブチレングリコール               6.5
ポリオキシエチレンソルビタン            1.2
モノラウリン酸エステル(20E.O.)
エチルアルコール                       10.0
発酵凍結ブドウ抽出物                    1.0
スーパーオキシドジスムターゼ(SOD)       0.5
防腐剤                                  適量
香料                                    適量
精製水                                  残量
合計                                  100