(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
重量平均分子量２０万超〜９０万以下のアルギン酸又はその塩を有効成分とする食後ペプチドＹＹ分泌促進剤。
【請求項２】
アルギン酸又はその塩の重量平均分子量が２５万以上５０万以下である請求項１記載の剤。
【請求項３】
アルギン酸の塩がアルギン酸カリウムである請求項１又は２記載の剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、消化管ホルモン分泌調節剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
消化管ホルモンは、消化管粘膜内に散在する特定の内分泌細胞から産生され、消化管、肝、胆、膵等へ作用してその分泌と運動を調節することが知られているホルモンである。
【０００３】
Ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ−１（ＧＬＰ−１）は、インクレチン（ｉｎｃｒｅｔｉｎ：  Ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ  Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  Ｉｎｓｕｌｉｎ）作用を備えたホルモンであり、膵β細胞からのインスリン分泌を促進させ、あるいは膵臓からのグルカゴン分泌を抑制することにより、血糖値を低下させる。ＧＬＰ−１による血糖値低下作用は、低血糖によるグルカゴン分泌と拮抗せず、またインスリン濃度に依存しないことが報告されていることから、糖尿病患者の血糖値制御に有用である。ＧＬＰ−１投与により１型糖尿病患者及び２型糖尿病患者で共にインスリン量が減少したことが報告されている（非特許文献１）。
他のＧＬＰ−１の作用としては、膵β細胞の増殖促進、胃排泄や胃酸分泌の抑制、食欲と摂食の抑制等が知られている（非特許文献２）。また、中枢神経系を介した記憶学習能力向上作用や、神経突起伸長促進作用、神経傷害によるアポトーシスからの保護作用があることが知られており（非特許文献３〜４）、認知症等の神経変性疾患や糖尿病に伴う神経障害の改善に有用であると考えられている。
従って、ＧＬＰ−１の効果を高めることは、肥満、糖尿病等の生活習慣病の改善に有用である。近年では、ＧＬＰ−１補充療法やＧＬＰ−１受容体（ＧＬＰ−１Ｒ）アゴニストを利用した糖尿病治療法の開発も進められている。しかし、通常ＧＬＰ−１は非常に分解され易く、生体内での半減期は非常に短いため、体外からＧＬＰ−１を投与しても、その血中濃度を一定に保つのは非常に難しい。従って、生体内でのＧＬＰ−１濃度を長時間にわたって高めるためには、外からの投与よりも内因性ＧＬＰ−１の分泌を促進することが望ましい。
【０００４】
Ｇａｓｔｒｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ（ＧＩＰ）は、胃酸分泌抑制作用や胃運動抑制作用を有することが知られている。また、ＧＩＰは、膵β細胞からのインスリン分泌を促進し、インスリン存在下でのグルコースの脂肪細胞への取り込みを亢進することが知られている。そのため、ＧＩＰの作用が肥満の一要因になっているとも考えられ、事実、ＧＩＰの機能を阻害すると、肥満が抑制されるとの報告がある（非特許文献５）。そのため、ＧＩＰの上昇抑制は、食後の消化促進や胃もたれの改善、又は肥満の予防・改善等に有効であると考えられる。
【０００５】
ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）は１９６８年にブタの小腸より単離されたペプチドで、ニューロペプチドＹ（ＮＰＹ）、膵ポリペプチド（ＰＰ）とともに一つのペプチドファミリーを形成している。ＰＹＹは、主に下部消化管（回腸および結腸）の粘膜層内細胞から食後分泌される。ＰＹＹの末梢投与は膵外分泌および腸運動を抑制させることが知られている。
【０００６】
これまでの研究では、ＧＬＰ−１の分泌を促進する物質として、パルミチン酸、オレイン酸、肉加水分解物（ＭＨ）、ガストリン放出ペプチド（ＧＲＰ）、カルバコール、フォルスコリン、イオノマイシン、酢酸ミリスチン酸ホルボール（ＰＭＡ）、必須アミノ酸（ＥＡＡ）、ロイシン、イソロイシン、スキムミルク、カゼイン、レプチン、ムスカリン性受容体Ｍ１、Ｍ２が報告されている。
また、ＧＩＰの機能を阻害する物質として、３−ブロモ−５−メチル−２−フェニルピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンー７−オール（ＢＭＰＰ）が知られ、食後ＧＩＰの分泌を抑制するものとして、グアガム等が知られている。
また、ＰＹＹの分泌を促進するものとして、レジスタントスターチ、ラクチトール及びβ−グルカンが知られている。
【０００７】
また特許出願人は、これまでに、平均分子量２０万以下、好ましくは１０万以下のアルギン酸やその塩にＧＩＰ分泌抑制作用があることを見出し、特許出願している（特許文献１）。さらに特許出願人は、平均分子量１〜６万のアルギン酸カリウムにＧＩＰ分泌抑制作用（特許文献２）及び肥満予防改善作用（特許文献３）があること、ならびに平均分子量１〜１０万のアルギン酸又はその塩にペプチドＹＹ分泌促進作用があること（特許文献４）を見出し、特許出願している。
しかし、これらのアルギン酸又はその塩は、いずれも平均分子量２０万以下、特に１０万以下という比較的低分子量のものであった。さらに、特許出願２〜４では、平均分子量が２０万超アルギン酸又はその塩は、粘度が高いため、喉ごし、嚥下のしやすさ等の観点から好ましくないものとされていた。
【０００８】
他方、平均分子量が２０万超のアルギン酸又はその塩は、食品の増粘剤や歯科印象剤のゲル化剤として広く使用されている。例えば、特許文献５及び６には、タンパク質とｐＨ２から４の間で変性または加水分解しないバイオポリマー増粘剤とを配合し、胃内でゲルを形成して胃の膨張を導くことで促進された満腹効果を有する食品組成物が開示され、バイオポリマー増粘剤として好ましい分子量範囲が２０万〜４０万のアルギン酸塩が例示されている。しかし、これらの平均分子量が２０万超のアルギン酸又はその塩については、消化管ホルモン分泌調節を有することは知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００６−３４２０８５号公報
【特許文献２】特開２００９−１４９６２１号公報
【特許文献３】特開２０１１−０２１０１２号公報
【特許文献４】特開２０１１−１２１８８５号公報
【特許文献５】米国特許公開公報２００５/０２３３０４５
【特許文献６】米国特許公開公報２００５/００８４５９２
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】医学のあゆみ, 2009, 231(7):755-758
【非特許文献２】Eur J Pharmacol, 2002, 440(2-3):269-279
【非特許文献３】Nat Med, 2003, 9:1173-1179
【非特許文献４】J. Pharmacol. Exp. Ther., 2002, 302(3):881-888
【非特許文献５】Miyawaki Kら、NAT Med., 2002, Jul；8(7)：738-42
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、医薬又は食品として有用な消化管ホルモン分泌調節剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、アルギン酸又はその塩の消化管ホルモン分泌に対する作用について詳細に検討し、平均分子量２０万超〜９０万のアルギン酸又はその塩が、ＧＩＰ分泌抑制及びＰＹＹ分泌促進作用を有するとともに、ＧＬＰ−１分泌促進作用を更に有しており、消化管ホルモン分泌調節に優れた作用を発揮し得ることを見出した。
【００１３】
すなわち、本発明は以下を提供する。
（１）重量平均分子量２０万超〜９０万以下のアルギン酸又はその塩を有効成分とする消化管ホルモン分泌調節剤。
（２）消化管ホルモン分泌調節が食後ＧＬＰ−１分泌促進である、（１）の調節剤。
（３）消化管ホルモン分泌調節が食後ＧＩＰ分泌抑制である、（１）の調節剤。
（４）消化管ホルモン分泌調節が食後ペプチドＹＹ分泌促進である、（１）の調節剤。
（５）重量平均分子量２０万超〜９０万以下のアルギン酸又はその塩を有効成分とする肥満予防及び／又は改善剤。
（６）重量平均分子量２０万超〜９０万以下のアルギン酸又はその塩を有効成分とする内臓脂肪蓄積抑制剤。
（７）重量平均分子量が２５万以上５０万以下である（１）〜（６）のいずれか１に記載の剤。
（８）アルギン酸の塩がアルギン酸カリウムである（１）〜（７）のいずれか１項に記載の剤。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の消化管ホルモン分泌調節剤は、食後におけるＧＬＰ−１、ＧＩＰ、及びペプチドＹＹの分泌を調節することができ、また内臓脂肪蓄積抑制や肥満予防及び／又は改善に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】食後最大血中ＧＩＰ値（平均±Ｓ．Ｅ．）。グラフ中のＰ値はコントロール群と比較したＦｉｓｈｅｒ’ｓ  ＰＬＳＤ検定の結果を示す。
【図２】食後の血中ＧＩＰ経時変化（平均±Ｓ．Ｅ．）。＊：P<0.05、＊＊：P<0.01（vs.対照、paired t-test）。＃：P<0.05（アルギン酸Ｋ（平均分子量41万）vs.アルギン酸Ｋ（平均分子量5万）、paired t-test）。
【図３】食後の血中ＧＬＰ−１経時変化（平均±Ｓ．Ｅ．）。＊：P<0.05（vs.対照、paired t-test）。＃：P<0.05（アルギン酸Ｋ（平均分子量41万）vs.アルギン酸Ｋ（平均分子量5万）、paired t-test）。
【図４】食後の血中ＰＹＹ経時変化（平均±Ｓ．Ｅ．）。＊：P<0.05、＊＊：P<0.01（vs.対照、paired t-test）。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本明細書において、「ＧＬＰ−１分泌促進」とは食事を摂取することで引き起こされる生体内でのＧＬＰ−１分泌を促進することを意味する。あるいは、「ＧＬＰ−１分泌促進」とは、主として食後に生じる生体内でのＧＬＰ−１分泌に伴う血中ＧＬＰ−１濃度上昇を増強するか、上昇した血中ＧＬＰ−１濃度を維持するか、又は上昇した血中ＧＬＰ−１濃度の低下を抑制することをいう。
【００１７】
本明細書において、「ＧＩＰ分泌抑制」とは、食事を摂取することで引き起こされる生体内でのＧＩＰ分泌を抑制することを意味する。あるいは、「ＧＩＰ分泌抑制」とは、主として食後に生じる生体内でのＧＩＰ分泌に伴う血中ＧＩＰ濃度の上昇を抑制するか、又は上昇した血中ＧＩＰ濃度の低下を促進することをいう。
【００１８】
本明細書において、「ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）分泌促進」とは、主として食後に生じる生体内でのペプチドＹＹ分泌を促進することを意味する。あるいは、「ペプチドＹＹ（ＰＹＹ）分泌促進」とは、生体内でのペプチドＹＹ分泌に伴う血中ペプチドＹＹ濃度上昇を増強するか、上昇した血中ペプチドＹＹ濃度を維持するか、又は上昇した血中ペプチドＹＹ濃度の低下を抑制することをいう。
【００１９】
本発明における「食後」とは摂取した食事中の炭水化物がおおむね吸収されるまでの時間を指し、食事の摂取後の直後（０分）から６時間後まで、好ましくは５時間後まで、より好ましくは４時間後まで、さらに好ましくは３時間後までの時間を指す（Ｄｉａｂｅｔｅ  Ｃａｒｅ，２００１，２４（４）：７７５−７７８）。
【００２０】
本明細書において、「非治療的」とは、医療行為、すなわち治療による人体への処置行為を含まない概念である。
【００２１】
本明細書において、「改善」とは、疾患、症状又は状態の好転、疾患、症状又は状態の悪化の防止又は遅延、あるいは疾患又は症状の進行の逆転、防止又は遅延をいう。
【００２２】
本明細書において、「予防」とは、個体における疾患若しくは症状の発症の防止又は遅延、あるいは個体の疾患若しくは症状の発症の危険性を低下させることをいう。
【００２３】
アルギン酸は、全ての褐藻類に細胞壁間物質として分布するウロン酸（β−Ｄ−マンヌロン酸とα−Ｌ−グルロン酸）を主要構成糖とする高分子酸性多糖であり、１構成単位に１つのカルボキシル基を持つ。本発明に用いるアルギン酸又はその塩において、β−Ｄ−マンヌロン酸とα−Ｌ−グルロン酸の割合や配列順序は特に制限されない。したがって、本発明においては、β−Ｄ−マンヌロン酸のみからなるブロック、α−Ｌ−グルロン酸のみからなるブロック、両者が混合しているブロックの全てを有するアルギン酸又はその塩を使用してもよいし、そのいずれか１種又は２種からなるアルギン酸又はその塩を使用してもよいが、このうち、アルギン酸の塩を使用することが好ましい。
【００２４】
本発明に用いるアルギン酸の塩としては、アルギン酸の金属塩が好ましく、アルギン酸の一価の金属イオンの塩がより好ましく、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウムがさらに好ましく、アルギン酸カリウムがなお好ましい。本発明に用いるアルギン酸塩は、一価の金属イオンの塩を１０質量％以上含み、好ましくはカリウム塩を１４質量％以上含み得る。また、本発明に用いるアルギン酸塩を構成する金属イオンは、異なる種類の金属イオンを含んでいてもよいが、好ましくは、該金属イオン中の８０％以上は一価の金属イオンであり、より好ましくはカリウムイオンである。
【００２５】
本発明において用いられるアルギン酸又はその塩は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法で測定した重量平均分子量は、肥満予防及び／又は改善効果の点から、２０万超が好ましく、２１万以上がより好ましく、２５万以上がさらに好ましく、２７万以上がなお好ましい。また、配合時の取り扱いなどの点から重量平均分子量は９０万以下が好ましく、６０万以下がより好ましく、５０万以下がさらに好ましく、４５万以下がなお好ましく、４１万以下がさらになお好ましい。
【００２６】
よって、本発明において用いられるアルギン又はその塩の分子量は、２０万超〜９０万以下であればよいが、好ましい実施形態においては、２０万超〜６０万以下、より好ましくは２０万超〜５０万以下、さらに好ましくは２０万超〜４５万以下、なお好ましくは２０万超〜４１万以下、さらになお好ましくは２０万超〜３５万以下である。より好ましい実施形態においては、２１万以上９０万以下、好ましくは２１万以上６０万以下、より好ましくは２１万以上５０万以下、さらに好ましくは２１万以上４５万以下、なお好ましくは２１万以上４１万以下、さらになお好ましくは２１万超〜３５万以下である。さらに好ましい実施形態においては、２５万以上６０万以下、好ましくは２５万以上５０万以下、より好ましくは２５万以上４５万以下、さらに好ましくは２５万以上４１万以下である。なお好ましい実施形態においては、２７万以上６０万以下、好ましくは２７万以上５０万以下、より好ましくは２７万以上４５万以下、さらに好ましくは２７万以上４１万以下である。また、これら好ましい重量平均分子量範囲を有するアルギン酸カリウムを使用することがことさら好ましい。
【００２７】
本発明のアルギン酸又はその塩は、加圧加熱分解（特開平６−７０９３号公報）、または酵素分解（特開平２−３０３４６８号公報、特開平３−９４６７５号公報、特開平４−１６９１８９号公報、特開平６−２４５７６７号公報、特開平６−２１７７７４号公報）等の方法により製造することができる。すなわち、例えば、原料となる高分子量アルギン酸塩や高分子量アルギン酸を、加圧加熱分解、常圧加熱分解、酵素分解等によって所望の分子量に低分子化し、必要に応じて中和、脱水、凍結乾燥することにより得ることができる。分子量の調整は、例えば、加熱分解では、反応ｐＨ、反応温度、反応時間等を制御することにより行うことができる。
【００２８】
後記実施例に示すように、平均分子量が２０万超のアルギン酸又はその塩は、糖質、脂質、蛋白質を同時摂取した後に、血中ＧＬＰ−１及びＰＹＹを上昇させ、他方血中ＧＩＰ上昇を低下させる作用を有する。しかもそれらの作用は、従来知られていた低分子量アルギン酸又はその塩の作用と比べてはるかに優れている。
【００２９】
したがって、重量平均分子量２０万超〜９０万以下のアルギン酸又はその塩（以下、本発明のアルギン酸又はその塩とも称する）は、食後におけるＧＬＰ−１分泌促進、ＧＩＰ分泌抑制、ＰＹＹ分泌促進等の、消化管ホルモン分泌調節のために使用することができ、且つこれらの作用を介して、内臓脂肪蓄積抑制、肥満予防及び／又は改善等のために使用することができる。上記使用は、ヒト若しくは非ヒト動物、又はそれらに由来する検体における使用であり得、また治療的使用であっても非治療的使用であってもよい。
また本発明のアルギン酸又はその塩は、食後におけるＧＬＰ−１分泌促進剤、ＧＩＰ分泌抑制剤、ＰＹＹ分泌促進剤等の消化管ホルモン分泌調節剤を製造するため、ならびに内臓脂肪蓄積抑制剤や肥満予防及び／又は改善剤を製造するために使用することができる。
【００３０】
すなわち、一態様において、本発明は、重量平均分子量２０万超〜９０万以下のアルギン酸又はその塩を有効成分とする消化管ホルモン分泌調節剤を提供し得る。一実施形態において、該消化管ホルモン分泌調節は、食後ＧＬＰ−１分泌促進、食後ＧＩＰ分泌抑制、又は食後ペプチドＹＹ分泌促進であり得る。別の態様において、本発明は、重量平均分子量２０万超〜９０万以下のアルギン酸又はその塩を有効成分とする内臓脂肪蓄積抑制剤、ならびに肥満予防及び／又は改善剤を提供し得る。
上記本発明の剤は、本質的に重量平均分子量２０万超〜９０万以下のアルギン酸又はその塩から構成されていてもよい。
【００３１】
また、本発明のアルギン酸又はその塩は、食後におけるＧＬＰ−１分泌促進、ＧＩＰ分泌抑制、ＰＹＹ分泌促進等の消化管ホルモン分泌調節のため、あるいは内臓脂肪蓄積抑制や肥満予防及び／又は改善のための組成物、医薬、医薬部外品、飲食品若しくはその原料、又は飼料若しくはその原料に素材として配合することができ、あるいはその製造のために使用することができる。
【００３２】
上記組成物、医薬、医薬部外品、飲食品、飼料、又は飲食品若しくは飼料の原料は、ヒト又は非ヒト動物用として製造され、又は使用され得る。本発明のアルギン酸又はその塩は、当該組成物、医薬、医薬部外品、飲食品、飼料、又は飲食品若しくは飼料の原料に素材として配合され、食後におけるＧＬＰ−１分泌促進、ＧＩＰ分泌抑制、ＰＹＹ分泌促進等の消化管ホルモン分泌調節のため、あるいは内臓脂肪蓄積抑制や肥満予防及び／又は改善のための有効成分であり得る。
【００３３】
上記医薬又は医薬部外品は、本発明のアルギン酸又はその塩を有効成分として含有する。当該医薬又は医薬部外品は、経口投与及び非経口投与を含む任意の投与形態で投与され得るが、好ましくは経口投与され得る。上記医薬や医薬部外品は、本発明のアルギン酸又はその塩を単独で含有していてもよく、又は薬学的に許容される担体と組み合わせて含有していてもよい。また、当該医薬や医薬部外品は、本発明のアルギン酸又はその塩の消化管ホルモン分泌調節作用が失われない限り、他の有効成分や薬理成分を含有していてもよい。
【００３４】
上記医薬又は医薬部外品は、本発明のアルギン酸又はその塩から、あるいは必要に応じて担体、他の有効成分や薬理成分を組みあわせて、常法により製造することができる。例えば、経口用固形製剤を調製する場合には、本発明のアルギン酸又はその塩に、賦形剤、必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。また、経口用液体製剤を調製する場合は、矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯味剤等を加えて常法により内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。
【００３５】
上記医薬又は医薬部外品における本発明のアルギン酸又はその塩の含有量は、０．０１〜１００質量％であればよいが、好ましくは０．１〜８０質量％であり得る。より好ましくは、固形製剤とする場合には１〜５０質量％であり得、液体製剤とする場合には０．１〜２０質量％であり得る。
【００３６】
上記飲食品や飼料は、食後におけるＧＬＰ−１分泌促進、ＧＩＰ分泌抑制、ＰＹＹ分泌促進等の消化管ホルモン分泌調節機能、あるいは内臓脂肪蓄積抑制機能や、肥満予防及び／又は改善機能を有し、且つ当該機能を必要に応じて表示した飲食品、機能性飲食品、病者用飲食品、特定保健用飲食品、ペットフード等であり得る。飲食品や機能性飲食品、病者用飲食品、特定保健用飲食品としては固形の食品、ゼリーの様な常温で半固形の食品、アイスクリームや氷菓のように低温で固形又は半固形の食品、飲料の形態が含まれる。
【００３７】
また、上記飲食品は、内臓脂肪蓄積抑制機能や、肥満予防及び／又は改善機能を有する飲食品として、肥満を改善したい者に摂取され得る。より好ましくは、肥満を改善したい者の中でも、胃もたれや消化不良等の症状を有する者に摂取され得る。
【００３８】
二価の金属イオンは、アルギン酸又はその塩の粘度やゲル強度に影響を与え得るため、上記飲食品中の二価の金属イオンの含有量は、当該飲食品に含まれるアルギン酸又はその塩が極端に増粘されない程度に少ない量であることが好ましい。例えば、上記飲食品中の二価の金属イオンの含有量は、該飲食品中のアルギン酸又はその塩の総量に対して、好ましくは２質量％未満であり、より好ましくは１．５質量％以下であり、さらに好ましくは１質量％以下であり、さらにより好ましくは０．５質量％以下であり、なお好ましくは０．２質量％以下であり、さらになお好ましくは０．１質量％以下であり、さらになお好ましくは０．０５質量％以下であり、さらになお好ましくは０．０１質量％以下であり得る。二価の金属イオンとしては、リン酸カルシウム及び炭酸カルシウムのような水に不溶性で胃内にて可溶性になる二価の金属イオン、乳酸カルシウムのような水溶性の二価の金属イオン、ならびに塩化カルシウム、水酸化カルシウム、クエン酸カルシウム、乳酸発酵カルシウム、貝殻焼成カルシウム、グルタミン酸カルシウムなどが挙げられる。
【００３９】
上記飲食品若しくは飼料、又はそれらの原料は、本発明のアルギン酸又はその塩を単独で含有していてもよく、又は他の食材や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等の添加剤を組み合わせて含有していてもよい。当該飲食品若しくは飼料中の本発明のアルギン酸又はその塩の含有量は、０．０１〜３０質量％とするのが好ましく、０．１〜１０質量％とするのがより好ましく、１〜５質量％とするのがさらに好ましい。
【００４０】
あるいは、本発明のアルギン酸又はその塩は、食後におけるＧＬＰ−１分泌促進、ＧＩＰ分泌抑制、ＰＹＹ分泌促進等の消化管ホルモン分泌調節のため、あるいは内臓脂肪蓄積抑制や、肥満予防及び／又は改善のため、それらを必要とする対象に有効量で投与されるか又は摂取され得る。
【００４１】
本発明のアルギン酸又はその塩を投与又は摂取する対象としては、食後におけるＧＬＰ−１分泌促進、ＧＩＰ分泌抑制、ＰＹＹ分泌促進等の消化管ホルモン分泌調節を必要とする動物、あるいは内臓脂肪蓄積抑制や、肥満予防及び／又は改善を必要とする動物であり得る。動物は、好ましくはヒト又は非ヒト哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。対象動物がヒトの場合、肥満や生活習慣病を予防又は改善したい者も対象者に含まれる。生活習慣病を予防又は改善したい者としては、糖尿病を予防又は改善したい者、糖尿病に伴う神経障害を予防又は改善したい者が含まれる。上記肥満を改善したい者の中でも、胃もたれや消化不良等の症状を有する者を対象者とすることがより好ましい。また、肥満や糖尿病等の生活習慣病に罹患していない者で胃もたれや消化不良等の症状を有する者も対象者とすることができる。一態様において、上記投与又は摂取は、美容目的で、又は健康改善等を意図して非治療的に行われ得る。
【００４２】
本発明のアルギン酸又はその塩の好ましい投与又は摂取量は、対象の種、体重、性別、年齢、状態又はその他の要因に従って変動し得る。投与の用量、経路、間隔、及び摂取の量や間隔は、当業者によって適宜決定され得る。例えば、ヒトに経口投与又は摂取させる場合、投与又は摂取量は、アルギン酸として、一日当り、０．００１ｇ／ｋｇ体重以上が好ましく、０．０１〜１．０ｇ／ｋｇ体重とするのがより好ましい。
【００４３】
本発明のアルギン酸又はその塩を内臓脂肪蓄積抑制や、肥満予防及び／又は改善のためヒトに投与又は摂取する場合の期間は、内臓脂肪蓄積抑制のためには、７日以上が好ましく、１０日以上がより好ましく、２週間以上がさらに好ましく、８週間以上がさらにより好ましい。肥満予防及び／又は改善のためには２週間以上が好ましく、４週間以上がより好ましく、８週以上がさらに好ましい。好ましい投与又は摂取の形態は、上記投与または摂取の期間に食事と同時又は食事の前後に摂取することが好ましく、食事の前後としては食事の前後１時間以内が好ましく、前後３０分以内がより好ましく、前後１０分以内がさらに好ましい。
【００４４】
本発明のアルギン酸又はその塩を食後におけるＧＬＰ−１分泌促進、ＧＩＰ分泌抑制、ＰＹＹ分泌促進等の消化管ホルモン分泌調節のためにヒトに投与または摂取する場合は、単回の投与又は摂取でも継続して投与又は摂取してもよい。継続して投与又は摂取する場合の期間は前述の内臓脂肪蓄積抑制の為の期間でも肥満予防及び／又は改善のための期間でも良い。好ましい投与又は摂取の形態は、上記単回投与又は摂取のとき、または上記継続投与又は摂取の期間に、食事と同時又は食事の前後に摂取することが好ましく、食事の前後としては食事の前後１時間以内が好ましく、前後３０分以内がより好ましく、前後１０分以内がさらに好ましい。
【００４５】
上述した本発明の別の実施形態として、さらに以下の組成物、製造方法、あるいは用途を本明細書に開示する。
【００４６】
＜１＞消化管ホルモン分泌調節のために使用される重量平均分子量２０万超〜９０万以下のアルギン酸又はその塩。
【００４７】
＜２＞消化管ホルモン分泌調節が食後ＧＬＰ−１分泌促進である＜１＞のアルギン酸又はその塩。
【００４８】
＜３＞消化管ホルモン分泌調節が食後ＧＩＰ分泌抑制である＜１＞のアルギン酸又はその塩。
【００４９】
＜４＞消化管ホルモン分泌調節が食後ペプチドＹＹ分泌促進である＜１＞のアルギン酸又はその塩。
【００５０】
＜５＞肥満予防及び／又は改善のために使用される重量平均分子量２０万超〜９０万以下のアルギン酸又はその塩。
【００５１】
＜６＞内臓脂肪蓄積抑制のために使用される重量平均分子量２０万超〜９０万以下のアルギン酸又はその塩。
【００５２】
＜７＞重量平均分子量が、２０万超〜６０万以下、好ましくは２０万超〜５０万以下、より好ましくは２０万超〜４５万以下、さらに好ましくは２０万超〜４１万以下、なお好ましくは２０万超〜３５万以下である＜１＞〜＜６＞のいずれか１に記載のアルギン酸又はその塩。
【００５３】
＜８＞重量平均分子量が、２１万以上６０万以下、好ましくは２１万以上５０万以下、より好ましくは２１万以上４５万以下、さらに好ましくは２１万以上４１万以下、なお好ましくは２１万超〜３５万以下である＜１＞〜＜６＞のいずれか１に記載のアルギン酸又はその塩。
【００５４】
＜９＞重量平均分子量が２５万以上６０万以下、好ましくは２５万以上５０万以下、より好ましくは２５万以上４５万以下、さらに好ましくは２５万以上４１万以下である＜１＞〜＜６＞のいずれか１に記載のアルギン酸又はその塩。
【００５５】
＜１０＞重量平均分子量が２７万以上６０万以下、好ましくは２７万以上５０万以下、より好ましくは２７万以上４５万以下、さらに好ましくは２７万以上４１万以下である＜１＞〜＜６＞のいずれか１に記載のアルギン酸又はその塩。
【００５６】
＜１１＞アルギン酸の塩がアルギン酸カリウムである＜１＞〜＜１０＞のいずれか１に記載のアルギン酸又はその塩。
【００５７】
＜１２＞アルギン酸又はその塩が飲料又は半固形形態の食品に配合され、当該飲料又は半固形形態の食品中の二価の金属イオンの濃度が、アルギン酸又はその塩の総量に対して、好ましくは２％質量未満、より好ましくは１．５％質量以下、さらに好ましくは１％質量以下、さらにより好ましくは０．５質量％以下、なお好ましくは０．２質量％以下、さらになお好ましくは０．１質量％以下、さらになお好ましくは０．０５質量％以下、さらになお好ましくは０．０１質量％以下である、＜１＞〜＜１１＞のいずれか１に記載のアルギン酸又はその塩。
【００５８】
＜１３＞二価の金属イオンが乳酸カルシウム、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、水酸化カルシウム、クエン酸カルシウム、乳酸発酵カルシウム、貝殻焼成カルシウム及びグルタミン酸カルシウムからなる群より選択される＜１２＞に記載のアルギン酸又はその塩。
【００５９】
＜１４＞重量平均分子量２０万超〜９０万以下のアルギン酸又はその塩の消化管ホルモン分泌調整剤の製造のための使用。
【００６０】
＜１５＞消化管ホルモン分泌調節剤が食後ＧＬＰ−１分泌促進剤である＜１４＞のアルギン酸又はその塩の消化管ホルモン分泌調整剤の製造のための使用。
【００６１】
＜１６＞消化管ホルモン分泌調節剤が食後ＧＩＰ分泌抑制剤である＜１４＞のアルギン酸又はその塩の消化管ホルモン分泌調整剤の製造のための使用。
【００６２】
＜１７＞消化管ホルモン分泌調節剤が食後ペプチドＹＹ分泌促進である＜１４＞のアルギン酸又はその塩の消化管ホルモン分泌調整剤の製造のための使用。
【００６３】
＜１８＞重量平均分子量２０万超〜９０万以下のアルギン酸又はその塩の肥満予防及び/又は改善剤の製造のための使用。
【００６４】
＜１９＞重量平均分子量２０万超〜９０万以下のアルギン酸又はその塩の内臓脂肪蓄積抑制剤の製造のための使用。
【００６５】
＜２０＞重量平均分子量が、２０万超〜６０万以下、好ましくは２０万超〜５０万以下、より好ましくは２０万超〜４５万以下、さらに好ましくは２０万超〜４１万以下、なお好ましくは２０万超〜３５万以下である＜１４＞〜＜１９＞のいずれか１に記載のアルギン酸又はその塩の消化管ホルモン分泌調節剤、肥満予防及び／又は改善剤、または内臓脂肪蓄積抑制剤の製造のための使用。
【００６６】
＜２１＞重量平均分子量が、２１万以上６０万以下、好ましくは２１万以上５０万以下、より好ましくは２１万以上４５万以下、さらに好ましくは２１万以上４１万以下、なお好ましくは２１万以上〜３５万以下である＜１４＞〜＜１９＞のいずれか１に記載のアルギン酸又はその塩の消化管ホルモン分泌調節剤、肥満予防及び／又は改善剤、または内臓脂肪蓄積抑制剤の製造のための使用。
【００６７】
＜２２＞重量平均分子量が２５万以上６０万以下、好ましくは２５万以上５０万以下、より好ましくは２５万以上４５万以下、さらに好ましくは２５万以上４１万以下である＜１４＞〜＜１９＞のいずれか１に記載のアルギン酸又はその塩の消化管ホルモン分泌調節剤、肥満予防及び／又は改善剤、または内臓脂肪蓄積抑制剤の製造のための使用。
【００６８】
＜２３＞重量平均分子量が２７万以上６０万以下、好ましくは２７万以上５０万以下、より好ましくは２７万以上４５万以下、さらに好ましくは２７万以上４１万以下である＜１４＞〜＜１９＞のいずれか１に記載のアルギン酸又はその塩の消化管ホルモン分泌調節剤、肥満予防及び／又は改善剤、または内臓脂肪蓄積抑制剤の製造のための使用。
【００６９】
＜２４＞アルギン酸の塩がアルギン酸カリウムである＜１４＞〜＜２３＞のいずれか１に記載のアルギン酸又はその塩の消化管ホルモン分泌調節剤、肥満予防及び／又は改善剤、または内臓脂肪蓄積抑制剤の製造のための使用。
【００７０】
＜２５＞消化管ホルモン分泌調節剤、肥満予防及び／又は改善剤、または内臓脂肪蓄積抑制剤が飲料又は半固形形態の食品の形態であり、当該飲料又は半固形形態の食品中の二価の金属イオンの濃度が、アルギン酸又はその塩の総量に対して、好ましくは２％質量未満、より好ましくは１．５％質量以下、さらに好ましくは１％質量以下、さらにより好ましくは０．５質量％以下、なお好ましくは０．２質量％以下、さらになお好ましくは０．１質量％以下、さらになお好ましくは０．０５質量％以下、さらになお好ましくは０．０１質量％以下である、＜１４＞〜＜２４＞のいずれか１に記載のアルギン酸又はその塩の消化管ホルモン分泌調節剤、肥満予防及び／又は改善剤、または内臓脂肪蓄積抑制剤の製造のための使用。
【００７１】
＜２６＞二価の金属イオンが乳酸カルシウム、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、水酸化カルシウム、クエン酸カルシウム、乳酸発酵カルシウム、貝殻焼成カルシウム及びグルタミン酸カルシウムからなる群より選択される＜２５＞に記載のアルギン酸又はその塩の消化管ホルモン分泌調節剤、肥満予防及び／又は改善剤、または内臓脂肪蓄積抑制剤の製造のための使用。
【実施例】
【００７２】
製造例１  アルギン酸カリウム（重量平均分子量約２１万）の調製
アルギン酸（ダックアシッドＡ  Ｌｏｔ．Ｘ−２７０２）：株式会社フードケミファ）を２％溶液に調整し、水酸化カリウムを加えてｐＨ７になるように中和した。次いで、８０％エタノール溶液になるようにエタノールを加えて、アルギン酸塩を沈殿させた。その後、遠心分離（３０００ｒｐｍ，１０ｍｉｎ）により沈殿物を回収後、乾燥して、アルギン酸カリウムを調製した。得られたアルギン酸カリウムの重量平均分子量を後述の方法にて計測をしたところ、約２１万（２０７，６０５）であった。
【００７３】
製造例２  アルギン酸カリウム（重量平均分子量約２．５万）の調製
アルギン酸（ダックアシッドＡ、Ｌｏｔ．Ｘ−２７０２：株式会社紀文フードケミファ）を５％溶液に調整し、１００℃、１２０分間加熱分解した。次いで、水酸化カリウムを加えてｐＨ７になるように中和し、その後、８０％エタノール溶液になるようにエタノールを加えて、アルギン酸塩を沈殿させた。その後、遠心分離（３０００ｒｐｍ，１０ｍｉｎ）により沈殿物を回収後、乾燥して、アルギン酸カリウムを調製した。得られたアルギン酸カリウムの重量平均分子量を後述の方法にて計測をしたところ、約２．５万（２５，８０１）であった。
【００７４】
製造例３  アルギン酸カリウム（重量平均分子量約５．２万）の調製
アルギン酸（ダックアシッドＡ、Ｌｏｔ．Ｘ−２７０２：株式会社紀文フードケミファ）を５％溶液に調整し、１００℃、４５分間加熱分解した。次いで、水酸化カリウムを加えてｐＨ７になるように中和し、その後、８０％エタノール溶液になるようにエタノールを加えて、アルギン酸塩を沈殿させた。その後、遠心分離（３０００ｒｐｍ，１０ｍｉｎ）により沈殿物を回収後、乾燥して、アルギン酸カリウムを調製した。得られたアルギン酸カリウムの重量平均分子量を後述の方法にて計測をしたところ、約５．２万（５２，１６３）であった。
【００７５】
アルギン酸の平均分子量の測定（重量平均分子量測定法）
アルギン酸の重量平均分子量は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて測定した。アルギン酸（塩）を０．１ｇ取り、蒸留水で０．１％溶液になるように定容して得られたものをＨＰＬＣ用分析試料とした。
ＨＰＬＣ操作条件は以下の通りであった。分子量算出用の検量線には、標準プルラン（昭和電工（株）製  Ｓｈｏｄｅｘ  ＳＴＡＮＤＡＲＤ  Ｐ−８２）を用いた。ＨＰＬＣ用分析試料をＨＰＬＣに１００μＬ注入し、得られたクロマトチャートより、試料中のアルギン酸の重量平均分子量を算出した。
＜ＨＰＬＣ操作条件＞
カラム：
（１）Super AW-L（ガードカラム）：東ソー（株）製
（２）TSK-GEL Super AW4000（GPC用カラム）：排除限界分子量4×105 PEO/DMF、
長さ15cm，内径6mm、東ソー（株）製
（３）TSK-GEL Super AW2500（GPC用カラム）：排除限界分子量2×103 PEO/DMF、
長さ15cm，内径6mm、東ソー（株）製
上記カラムはAW-L，AW4000，AW2500の順で連結する。
カラム温度：40℃
検出器：示差屈折計
移動相：0.2 mol/L硝酸ナトリウム水溶液
流速：0.6 mL/min
注入量：100 μL
【００７６】
実施例１  アルギン酸カリウム（重量平均分子量約２１万）の食後ＧＩＰ分泌抑制効果
（１−１  試験試料）
試験試料として、重量平均分子量約２１万のアルギン酸カリウム（製造例１）（以下、「アルギン酸Ｋ（平均分子量２１万）」と記載する）、又は重量平均分子量約２．５万のアルギン酸カリウム（製造例２）（以下、「アルギン酸Ｋ（平均分子量２．５万）」と記載する）を用いた。
（１−２  試験動物）
１０〜１１週齢の雄性マウスＣ５７ＢＬ／６Ｊ  Ｊｃｌ（日本クレア）を用いた。各群Ｎ＝６とした。
（１−３  経口投与サンプルの調製と投与量）
トリオレイン（Ｇｌｙｃｅｒｙｌ  ｔｒｉｏｌｅａｔｅ：Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製）をレシチン（卵製）（和光純薬）とアルブミン（ウシ血清由来）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製）を用いて乳化し、乳液を調製した。この乳液に、上述の試験試料を添加し、最終濃度が試験試料５（ｗ／ｗ）％、トリオレイン５（ｗ／ｗ）％、乳化剤（レシチン０．２（ｗ／ｗ）％、アルブミン１．０（ｗ／ｗ）％）となるよう、経口投与試験サンプルを調製した。なお、コントロールは、試験試料を添加しない乳液のみとした。動物に対する経口投与量は下表１のとおりである。
【００７７】
【表１】
0005925569.tif 000002
【００７８】
（１−４  経口投与試験）
一晩絶食させたマウスをジエチルエーテル麻酔下、眼窩静脈よりヘパリン処理ヘマトクリット毛細管（ＶＩＴＲＥＸ製）を用い、初期採血を行った。その後、経口投与サンプルを経口ゾンデ針にて胃内投与し、１０分、３０分、１、２時間後にジエチルエーテル麻酔下、眼窩静脈より採血を行った。
ヘパリン処理ヘマトクリット毛細管で採取した血液は血漿分離まで氷冷下で保存後、１１０００ｒｐｍにて５分間遠心し、血漿を得た。得られた血漿からＲａｔ／Ｍｏｕｓｅ  ＧＩＰ（ｔｏｔａｌ）ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ｃｏ．製）を用いて血中ＧＩＰ濃度を測定した。
（１−５  データ解析および統計学的検定法）
サンプル投与後２時間後までの血中ＧＩＰについて、個体ごとの最大値（個体によって１０分または３０分）を求め、平均±標準誤差（Ｓ．Ｅ．）を算出した。群間の統計学的有意差については、分散分析によって有意性（Ｐ＜０．０５）が認められた場合、多重比較検定（Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ  ＰＬＳＤ法）を実施した。
【００７９】
（１−６  結果）
サンプル投与後の最大血中ＧＩＰ値を図１に示す。アルギン酸Ｋ（平均分子量２．５万）及びアルギン酸Ｋ（平均分子量２１万）は、いずれもコントロール群に比べて食後の最大血中ＧＩＰ値が有意に低く、血中ＧＩＰ分泌抑制効果が認められた。さらにアルギン酸Ｋ（平均分子量２１万）とアルギン酸Ｋ（平均分子量２．５万）とを比較すると、アルギン酸Ｋ（平均分子量２１万）の方が最大血中ＧＩＰ値が低かった。この結果から、アルギン酸Ｋ（平均分子量２１万）はアルギン酸Ｋ（平均分子量２．５万）に比べ、食後血中ＧＩＰ分泌抑制効果に優れることが明らかとなった。
【００８０】
実施例２  アルギン酸カリウム（重量平均分子量約４１万）のヒトに対する食後消化管ホルモン分泌調節効果
（２−１  試験試料）
試験試料として、重量平均分子量約４１万（４１０，０００）のアルギン酸カリウム（キミカアルギンＫＬ−１（（株）キミカ製、Ｌｏｔ．０Ｌ０８００２）（以下、「アルギン酸Ｋ（平均分子量４１万）」と記載する））、又は重量平均分子量約５万のアルギン酸カリウム（キミカアルギンＫ試作品（（株）キミカ製、Ｌｏｔ．７Ｅ２８０４１）（本実施例において、以下「アルギン酸Ｋ（平均分子量５万）」と記載する））を用いた。
（２−２  対象）
健常成人男性１０名（平均年齢３６．８歳）
（２−３  試験飲料）
（１）対照飲料（試験試料未含有の市販麦茶１００ｇ）
（２）アルギン酸Ｋ（平均分子量４１万）含有飲料（市販麦茶９７ｇ中に試験試料３ｇ含有）
（３）アルギン酸Ｋ（平均分子量５万）含有飲料（市販麦茶９７ｇ中に試験試料３ｇ含有）
（２−４  方法）
１人の試験参加者に対し、対照飲料、アルギン酸Ｋ（平均分子量４１万）含有飲料、およびアルギン酸Ｋ（平均分子量５万）含有飲料の単回摂取試験を実施する３群のクロスオーバー試験を行った。試験参加者の試験順序はランダムに割り付け、それぞれの単回摂取試験は５日間以上の間隔をあけて実施した。
試験参加者は、試験前日、夕食として指定した食事（約９００ｋｃａｌ／食、脂質約２５ｇ）を試験１３時間前に摂取した。試験当日、試験参加者は試験飲料を飲んだ直後にカレーライスおよびサラダ（８００ｋｃａｌ／食、エネルギー比率Ｐ：Ｆ：Ｃ＝１４：２６：６０％）を摂取し、経時的に６時間後まで採血を行った。血液採取用採血管にはＢＤ安定化剤入り採血管Ｐ７００（ＤＰＰ−ＩＶ阻害剤、ＥＤＴＡ２Ｋ入り、日本ベクトン・ディッキンソン（株）製）を用い、採血後すみやかにプロテアーゼ阻害剤（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製）、セリンプロテアーゼ阻害剤（ロシュ・ダイアグノスティックス（株）製）を添加した。定法により得られた血漿についてＧＩＰ（ｔｏｔａｌ）、ＰＹＹ（ｔｏｔａｌ）、ＧＬＰ−１（ａｃｔｉｖｅ）をそれぞれＨｕｍａｎ  ＧＩＰ（ｔｏｔａｌ）ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ製）、ＭＩＬＬＩＰＬＥＸ  ＭＡＰ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｈｏｒｍｏｎｅ  Ｐａｎｅ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ製、測定機器：ＢｉｏＰｌｅｘ２００システム（Ｂｉｏ  Ｒａｄ製））、Ｇｌｕｃａｇｏｎ−Ｌｉｋｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ−１（ａｃｔｉｖｅ）ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ製）を用いて測定した。
（２−５  データ解析および統計学的検定法）
各測定について、平均±標準誤差（Ｓ．Ｅ．）を算出した。群間の統計学的有意差については、対応のあるｔ検定を行い、有意水準５％未満の場合にはＰ値を表記した。
【００８１】
（２−６  結果）
血中ＧＩＰ、ＧＬＰ−１、ＰＹＹの経時変化を図２〜４に示した。
アルギン酸Ｋ（平均分子量５万）を食事（８００ｋｃａｌ）の直前に摂取した場合、対照飲料に比べ、食後３０分後の血中ＧＩＰが有意に低く、食後血中ＧＩＰ分泌の抑制が確認された。一方、アルギン酸Ｋ（平均分子量４１万）を食事（８００ｋｃａｌ）の直前に摂取した場合、対照飲料に比べ、食後１時間および２時間後の血中ＧＩＰが有意に低く、食後血中ＧＩＰ分泌の抑制が確認された。さらに、アルギン酸Ｋ（平均分子量５万）とアルギン酸Ｋ（平均分子量４１万）を比較すると、アルギン酸Ｋ（平均分子量４１万）の方が食後１時間後の食後血中ＧＩＰが有意に低く、食後ＧＩＰ上昇抑制に優れることが確認された（図２）。
さらに、摂取後の血中ＧＬＰ−１は、摂取６時間までの経時変化および最大血中濃度（以下、Ｃｍａｘ）のいずれもアルギン酸Ｋ（平均分子量５万）は対照飲料と差がないのに対し、アルギン酸Ｋ（平均分子量４１万）を摂取した場合、食後３０分後およびＣｍａｘが有意高く、食後のＧＬＰ−１分泌亢進が認められた（図３）。
また、摂取後の血中ＰＹＹは、摂取６時間までの経時変化は食後３０分後でアルギン酸Ｋ（平均分子量４１万）のみ対照飲料より有意に高かった。血中ＰＹＹのＣｍａｘのいずは対照飲料に比べアルギン酸Ｋ（平均分子量５万）が高かったが、さらにアルギン酸Ｋ（平均分子量４１万）の方が有意に高かった（図４）。
【００８２】
実施例３  アルギン酸カリウム（重量平均分子量約２１万）の抗肥満効果
（３−１  試験試料）
試験試料として、製造例１のアルギン酸Ｋ（平均分子量２１万）、又は重量平均分子量約５．２万のアルギン酸カリウム（製造例３）（本実施例において、以下「アルギン酸Ｋ（平均分子量５．２万）」と記載する）を用いた。
（３−２  試験群）
試験群１〜４（各群Ｎ＝１２）は、以下の表２に記載の４つの試験食で実施した。試験食中のコーン油、ラード、カゼイン、セルロース、ＡＩＮ７６ミネラル混合、ＡＩＮ７６ビタミン混合、α化ポテト澱粉は、オリエンタル酵母工業（株）製、蔗糖は和光純薬（株）製スクロース細粒（特級）を使用した。
【００８３】
【表２】
0005925569.tif 000003
【００８４】
（３−３  試験動物および飼育条件）
７週齢雄性マウスＣ５７ＢＬ／６Ｊ  Ｊｃｌ（日本クレア）を１週間通常食（ＣＥ−２：ｍｏｉｓｔｕｒｅ ９．３％、ｃｒｕｄｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ ２５．１％、ｃｒｕｄｅ  ｆａｔ ４．８％、ｃｒｕｄｅ  ｆｉｂｅｒ ４．２％、ｃｒｕｄｅ  ａｓｈ ６．７％、ＮＦＥ ５０．０％：日本クレア製）で飼育後、８週齢時に初期体重がほぼ一定になるように４つの試験群に群分けした。群分け後、表２に示した試験食を用いて試験を開始し、８週後まで試験を実施した。給餌はローデンカフェを用いた自由摂食、給水は自由飲水とした。
（３−４  体重および内臓脂肪重量の測定）
体重測定は試験開始後、週１回測定した。試験最終日は解剖直前まで自由摂食、自由飲水とした。マウスをイソフルラン吸入麻酔下で開腹し、腹部大静脈より採血を行い安楽死させた。その後、内臓脂肪（副睾丸周囲脂肪、腎周囲脂肪、後腹膜脂肪、腸間膜脂肪）を採取し、重量を測定し、その合計値を内臓脂肪量とした。
（３−５  データ解析および統計学的検定法）
各測定について、平均±標準誤差（Ｓ．Ｅ．）を算出した。群間の統計学的有意差については、分散分析によって有意性（Ｐ＜０．０５）が認められた場合、多重比較検定（Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ  ＰＬＳＤ法）を実施した。
【００８５】
（３−６  結果）
（１）体重
試験前、試験開始４週後及び８週後の体重を下表３に示した。試験開始４週後と８週後の体重は、いずれも分散分析のＰ値が５％未満であった（いずれもＰ＜０．００１）。Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ  ＰＬＳＤ検定は、高脂肪食群（試験群２）と比較し、有意水準５％未満の場合にはＰ値、５％以上の場合にはＮ．Ｓ．（not significant）を表記した。高脂肪食群（試験群２）は、低脂肪食群（試験群１）に比べて試験開始４週及び８週後の体重が有意に高く、高脂肪食摂取による肥満が認められた。アルギン酸Ｋ（平均分子量５．２万）摂取群（試験群３）では、４週及び８週後の体重はいずれも高脂肪食群（試験群２）と有意な差がなく、８週後までに明確な肥満抑制効果は認められなかった。一方、アルギン酸Ｋ（平均分子量２１万）摂取群（試験群４）では、８週後の体重が高脂肪食群（試験群２）に比べて有意に低く、肥満抑制効果が認められた。
【００８６】
【表３】
0005925569.tif 000004
【００８７】
（２）内臓脂肪量
各群の試験開始８週後の内臓脂肪量を下表４に示した。内臓脂肪量の分散分析のＰ値は５％未満（Ｐ＜０．０１）であった。Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ  ＰＬＳＤ検定は、高脂肪食群（試験群２）と比較し有意水準５％未満の場合にはＰ値、５％以上の場合にはＮ．Ｓ．（not significant）を表記した。
高脂肪食群（試験群２）は、低脂肪食群（試験群１）に比べて内臓脂肪量が有意に多く、高脂肪食摂取による内臓脂肪蓄積が確認された。アルギン酸Ｋ（平均分子量５．２万）摂取群（試験群３）では、内臓脂肪量は高脂肪食群（試験群２）と差がなく、８週後の時点ではアルギン酸Ｋ摂取による内臓脂肪蓄積抑制作用は明確には認められなかった。一方、アルギン酸Ｋ（平均分子量２１万）摂取群（試験群４）では、内臓脂肪重は高脂肪食群（試験群２）に比べて有意に低く、８週間摂取での内臓脂肪蓄積抑制効果が認められた。
【００８８】
【表４】
0005925569.tif 000005
【００８９】
以上の結果から、アルギン酸Ｋ（平均分子量２１万）は、アルギン酸Ｋ（平均分子量５．２万）に比べて高脂肪食による体重増加や内臓脂肪蓄積を抑制する作用に優れ、より短期間で体重増加抑制効果や内臓脂肪蓄積抑制効果を発揮することが明らかとなった。
【００９０】
実施例４  アルギン酸カリウム（重量平均分子量約４１万）の抗肥満効果
（４−１  試験試料）
試験試料として、実施例２で用いたものと同じアルギン酸Ｋ（平均分子量４１万）又はアルギン酸Ｋ（平均分子量５万）を用いた。
（４−２  試験群）
試験群１〜４（各群Ｎ＝１２）は、以下の表５に記載の４つの試験食で実施した。試験食中のコーン油、ラード、カゼイン、セルロース、ＡＩＮ７６ミネラル混合、ＡＩＮ７６ビタミン混合、α化ポテト澱粉は、オリエンタル酵母工業（株）製、蔗糖は和光純薬（株）製スクロース細粒（特級）を使用した。
【００９１】
【表５】
0005925569.tif 000006
【００９２】
（４−３  試験動物および飼育条件）
７週齢雄性マウスＣ５７ＢＬ／６Ｊ  Ｊｃｌ（日本クレア）を１週間通常食（ＣＥ−２：ｍｏｉｓｔｕｒｅ ９．３％、ｃｒｕｄｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ ２５．１％、ｃｒｕｄｅ  ｆａｔ ４．８％、ｃｒｕｄｅ  ｆｉｂｅｒ ４．２％、ｃｒｕｄｅ  ａｓｈ ６．７％、ＮＦＥ ５０．０％：日本クレア製）で飼育後、８週齢時に初期体重がほぼ一定になるように４つの試験群に群分けした。群分け後、表５に示した試験食を用いて試験を開始し、２週後まで試験を実施した。給餌はローデンカフェを用いた自由摂食、給水は自由飲水とした。
（４−４  体重および内臓脂肪重量の測定）
体重測定は試験開始後、週１回測定した。試験最終日は解剖直前まで自由摂食、自由飲水とした。マウスをイソフルラン吸入麻酔下で開腹し、腹部大静脈より採血を行い安楽死させた。その後、内臓脂肪（副睾丸周囲脂肪、腎周囲脂肪、後腹膜脂肪、腸間膜脂肪）を採取し、重量を測定し、その合計値を内臓脂肪量とした。
（４−５  データ解析および統計学的検定法）
各測定について、平均±標準誤差（Ｓ．Ｅ．）を算出した。群間の統計学的有意差については、分散分析によって有意性（Ｐ＜０．０５）が認められた場合、多重比較検定（Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ  ＰＬＳＤ法）を実施した。
【００９３】
（４−６  結果）
（１）体重
試験前、試験開始２週後の体重を下表６に示した。試験開始２週後の体重の分散分析のＰ値は５％未満であった（Ｐ＜０．０５）。Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ  ＰＬＳＤ検定は、高脂肪食群（試験群２）と比較し、有意水準５％未満の場合にはＰ値、５％以上の場合にはＮ．Ｓ．（not significant）を表記した。
高脂肪食群（試験群２）は、低脂肪食群（試験群１）に比べて試験開始２週後の体重が有意に高く、高脂肪食摂取による肥満が認められた。アルギン酸Ｋ（平均分子量５万）摂取群（試験群３）の２週後の体重は高脂肪食群（試験群２）と有意な差がなく明確な肥満抑制効果は認められなかった。一方、アルギン酸Ｋ（平均分子量４１万）摂取群（試験群４）では、２週後の体重が高脂肪食群（試験群２）に比べて有意に低く、肥満抑制効果が認められた。
【００９４】
【表６】
0005925569.tif 000007
【００９５】
（２）内臓脂肪量
各群の試験開始２週後の内臓脂肪量を上表７に示した。内臓脂肪量の分散分析のＰ値は５％未満（Ｐ＜０．０００１）であった。Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ  ＰＬＳＤ検定は、高脂肪食群（試験群２）またはアルギン酸Ｋ（平均分子量５万）（試験群３）と比較し有意水準５％未満の場合にはＰ値、５％以上の場合にはＮ．Ｓ．（not significant）を表記した。
高脂肪食群（試験群２）は、低脂肪食群（試験群１）に比べて内臓脂肪量が有意に多く、高脂肪食摂取による内臓脂肪蓄積が確認された。アルギン酸Ｋ（平均分子量５万）摂取群（試験群３）の内臓脂肪量は高脂肪食群（試験群２）より少なく、内臓脂肪蓄積抑制作用が認められた。一方、アルギン酸Ｋ（平均分子量４１万）摂取群（試験群４）の内臓脂肪重は高脂肪食群（試験群２）に比べて有意に少なく、さらに、アルギン酸Ｋ（平均分子量５万）に比べ有意に少なかった。
【００９６】
【表７】
0005925569.tif 000008
【００９７】
以上の結果から、アルギン酸Ｋ（平均分子量４１万）は、アルギン酸Ｋ（平均分子量５万）に比べて高脂肪食による体重増加や内臓脂肪蓄積を抑制する作用に優れ、より短期間で体重増加抑制効果や内臓脂肪蓄積抑制効果を発揮することが明らかとなった。
【００９８】
以上、本発明の実施形態を説明したが、これが、本発明を、説明した特定の実施形態に限定することを意図するものではないことを理解すべきである。本発明の範囲内にある様々な他の変更及び修正は当業者には明白である。
本明細書に引用されている文献及び特許出願は、あたかもそれが本明細書に完全に記載されているかのように参考として援用される。
【図１】
0005925569.tif 000009
【図２】
0005925569.tif 000010
【図３】
0005925569.tif 000011
【図４】
0005925569.tif 000012