(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
注射可能な水溶液の形態にある組成物であって、ｐＨが６．０ないし８．０であり、少なくとも、
ａ）等電点ｐＩが５．８ないし８．５である基礎インスリン；
ｂ）式Ｉ：
【化１】
0005950477.tif 000028
［式中、
Ｒは、−ＯＨであるか、又は基：−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎ；−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍからなる群より選択され、
ここで、Ｄは、少なくとも８個の炭素原子を有する少なくとも１種のアルキル鎖を有し；
ｎは、−ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨによるグルコシド単位の置換度を表し、０．１≦ｎ≦２であり；
ｍは、−ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］によるグルコシド単位の置換度を表し、０＜ｍ≦０．５であり；
ｑは、グルコシド単位としての重合度、即ち、多糖鎖当りのグルコシド単位の平均数を表し、３≦ｑ≦５０であり；
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎについて、
−Ａ−は、１ないし４個の炭素原子を有する直鎖基又は枝分れ基であって、前記−Ａ−基は、エーテル、エステル及びカルバメート官能基からなる群より選択される官能基ｆを介してグルコシド単位に結合しており；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍについて、
−Ｂ−は、１ないし４個の炭素原子を有する直鎖状の又は枝分れ状の少なくとも２価の基であって；前記−Ｂ−基は、エーテル、エステル及びカルバメート官能基からなる群より選択される官能基ｇを介してグルコシド単位に結合しており；官能基ｋを介して−Ｄ基に結合しており；ｋは、エステル、アミド及びカルバメート官能基からなる群より選択され；前記Ｄ基は、−Ｘ（−ｌ−Ｙ）ｐ基（式中、Ｘは、カルボキシル又はアミン官能基を有していてもよく、及び／又は、アミノ酸、ジアルコール、ジアミン又はモノ−若しくはポリエチレングリコールモノ−若しくはジアミン由来であってもよい、Ｃ、Ｎ及びＯ原子からなる群より選択される１ないし１２個の原子を有する少なくとも２価の基を表し；Ｙは、１個以上の炭素原子数１ないし３のアルキル基により置換されていてもよい、炭素原子数８ないし３０の直鎖状又は環状アルキル基、アルキルアリール基又はアリールアルキル基を表し；ｐ≧１であり、及び、ｌは、エステル、アミド及びカルバメート官能基からなる群より選択される官能基を表す）を表し；
ｆ、ｇ及びｋは、同一又は異なっており；
前記遊離酸官能基は、Ｎａ＋及びＫ＋からなる群より選択されるアルカリ金属カチオン塩の形態にあり；及び
ｐ＝１である場合、Ｙが炭素原子数８ないし１４のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧２であり、Ｙが炭素原子数１５のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧２であり；及び、Ｙが炭素原子数１６ないし２０のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧１であり；及び
ｐ≧２である場合、Ｙが炭素原子数８又は９のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧２であり、及び、Ｙが炭素原子数１０ないし１６のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧０．２である］又は
式ＩＩ：
【化２】
0005950477.tif 000029
［式中、
Ｒは、−ＯＨ又は−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎ基
（式中、−Ａ−は、１ないし４個の炭素原子を有する直鎖基又は枝分れ基を表し；前記基−Ａ−は、エーテル、エステル又はカルバメート官能基からなる群より選択される官能基ｆを介してグルコシド単位に結合しており；ｎは、−ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨによるグルコシド単位の置換度を表し、０．１≦ｎ≦２である）
を表し；
Ｒ’は、基−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−［Ｅ］−（ｏ−［Ｆ］）ｔ；−ＣＨ２Ｎ（Ｌ）ｚ−［Ｅ］−（о−［Ｆ］）ｔ
｛式中、ｚは１又は２の正の整数であり、Ｌは、−Ｈ（即ち、ｚが１である場合）、−［Ａ］−ＣＯＯＨ（即ち、ｚが１又は２であり、ｆがエーテル官能基である場合）、−ＣＯ−［Ａ］−ＣＯＯＨ（即ち、ｚが１であり、ｆがエステル官能基である場合）及び−ＣＯ−ＮＨ−［Ａ］−ＣＯＯＨ（即ち、ｚが１であり、ｆがカルバメート官能基である場合）からなる群より選択される｝からなる群より選択され；
−［Ｅ］−（о−［Ｆ］）ｔについて、
−Ｅ−は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群より選択されるヘテロ原子を有していてもよい１ないし８個の炭素原子を有する、直鎖状の又は枝分れ状の少なくとも２価の基を表し；
−Ｆ−は、１個以上の炭素原子数１ないし３のアルキル基により置換されていてもよい炭素原子数１２ないし３０の直鎖状又は環状アルキル基、アルキルアリール基又はアリールアルキル基を表し；
оは、エーテル、エステル、アミド及びカルバメート官能基からなる群より選択される官能基を表し；
ｔは、１又は２の正の整数であり；
ｑは、グルコシド単位としての重合度、即ち、多糖鎖当りのグルコシド単位の平均数を表し、３≦ｑ≦５０であり；
遊離酸官能基は、Ｎａ＋及びＫ＋からなる群より選択されるアルカリ金属カチオンの塩の形態にあり；
ｚ＝２である場合、窒素原子は４級アンモニウムの形態にある］
で表される、カルボキシレート電荷を有する基及び疎水基により置換されたデキストラン
を含有する、組成物。
【請求項２】
前記カルボキシレート電荷を有する基及び疎水基により置換されたデキストランは、前記式Ｉで表されるデキストランより選択されることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記カルボキシレート電荷を有する基及び疎水基により置換されたデキストランは、式中の−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎ基が、下記配列：
【化３】
0005950477.tif 000030
（式中、ｆは上記意味を有する）
からなる群より選択される、式Ｉで表されるデキストランより選択されることを特徴とする、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記カルボキシレート電荷を有する基及び疎水基により置換されたデキストランは、式中の−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍ基が、下記配列：
【化４】
0005950477.tif 000031
（式中、ｇ、ｋ及びＤは上記意味を有する）
からなる群より選択される、式Ｉで表されるデキストランより選択されることを特徴とする、請求項１、２又は３のうちいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記カルボキシレート電荷を有する基及び疎水基により置換されたデキストランは、式中の−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍ基が、−Ｂ−が１個の炭素原子を有する基であり；前記−Ｂ−がエーテル官能基ｇを介してグルコシド単位に結合しているものであり、及び、Ｘがアミノ酸由来の基である、式Ｉで表されるデキストランより選択されることを特徴とする、請求項１乃至４のうちいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記カルボキシレート電荷を有する基及び疎水基により置換されたデキストランは、式中のＸ基が、グリシン、ロイシン、フェニルアラニン、リジン、イソロイシン、アラニン、バリン、アスパラギン酸及びグルタミン酸からなる群より選択されるアミノ酸由来の少なくとも２価の基である、式Ｉで表されるデキストランより選択されることを特徴とする、請求項１乃至５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記カルボキシレート電荷を有する基及び疎水基により置換されたデキストランは、式中のＹ基が、疎水性アルコール、疎水性酸、ステロール及びトコフェロールからなる群より選択される、式Ｉで表されるデキストランより選択されることを特徴とする、請求項１乃至６のうちいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記カルボキシレート電荷を有する基及び疎水基により置換されたデキストランは、式中のＹ基が、コレステロール誘導体より選択されたステロールである、式Ｉで表されるデキストランより選択されることを特徴とする、請求項１乃至７のうちいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記カルボキシレート電荷を有する基及び疎水基により置換されたデキストランは、式Ｉで表される下記デキストラン：
オクチルグリシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
セチルグリシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
オクチルフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
３，７−ジメチル−１−オクチルフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
ジオクチルアスパルテートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
ジデシルアスパルテートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
ジラウリルアスパルテートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
Ｎ−（２−アミノエチル）ドデカンアミドにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
ラウリルグリシネートにより変性されたナトリウムデキストランスクシネート、
ジオクチルアスパルテートにより変性されたＮ−（ナトリウムメチルカルボキシレート）デキストランカルバメート、
２−（２−アミノエトキシ）エチルドデカノエートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
２−［２−｛２−（ドデカノイルアミノ）エトキシ｝エトキシ］エチルアミンにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
２−［２−｛２−（ヘキサデカノイルアミノ）エトキシ｝エトキシ］エチルアミンにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
コレステリルロイシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
コレステリル１−エチレンジアミンカルボキシレートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
コレステリルロイシネートにより変性されたＮ−（ナトリウムメチルカルボキシレート）デキストランカルバメート
からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１乃至８のうちいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンは、インスリングラルギンであることを特徴とする、請求項１乃至９のうちいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの４０ＩＵ／ｍＬないし５００ＩＵ／ｍＬを含有することを特徴とする、請求項１乃至１０のうちいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
食事インスリンをさらに含有することを特徴とする、請求項１乃至１１のうちいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
全量で４０ないし８００ＩＵ／ｍＬのインスリンを含有する、請求項１乃至１２のうちいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
食事インスリンに対して、前記等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンを、パーセンテージとして、２５／７５、３０／７０、４０／６０、５０／５０、６０／４０、７０／３０、８０／２０及び９０／１０の割合で含有することを特徴とする、請求項１２又は１３に記載の組成物。
【請求項１５】
ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１類似体又はＧＬＰ−１誘導体をさらに含有することを特徴とする、請求項１乃至１１のうちいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
０ないし５０００μＭの濃度で亜鉛塩をさらに含有することを特徴とする、請求項１乃至１５のうちいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記食事インスリンは、ヒトインスリン、インスリングルリシン、インスリンリスプロ及びインスリンアスパルトからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１２乃至１４のうちいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１８】
請求項１乃至１４、１６及び１７のうちいずれか１項に記載の組成物、及び食事インスリンを含有する、ｐＨ６．６ないし７．８の単回投与製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖尿病を治療するためのインスリン（類）の注射による治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
インスリンを注射することによるインスリン治療、又は糖尿病治療は、とりわけ、膵臓の生理活性のより良好なシミュレーションを可能とする、患者の血糖を修正せしめる新規インスリンの開発によって、ここ数年間に著しい進歩を遂げてきた。
【０００３】
毎日のインスリンの必要性を補うために、現在のところ、糖尿病患者は、補完作用を有する概略的に２種のインスリン、即ち食事インスリン（又は速効性インスリン）及び基礎インスリン（又は遅効性インスリン）を利用できる。
【０００４】
食事インスリンは、食事及び間食により与えられるグルコースの迅速な管理（代謝及び／又は貯蔵）を可能とする。患者は、各々の食品摂取前に、食事インスリンを注射、即ち、１日当りおよそ２、３回の注射をしなければならない。最も一般に用いられている食事インスリンは、組換え体ヒトインスリンであるノボログ（ＮｏｖｏＬｏｇ（登録商標））（ノボ  ノルディスク（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）からのインスリンアスパルト）、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））（エリ  リリー（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）からのインスリンリスプロ）及びアピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））（サノフィ−アベンチス（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）からのインスリングルリシン）である。
【０００５】
基礎インスリンは、食品摂取期間外で、患者の血糖恒常性を維持している。それらは本質的に、グルコース（肝臓グルコース）の体内生産を防止することにより、作用している。基礎インスリンの毎日の投与量は、概して、毎日のインスリンの全必要量の４０ないし５０％に相当する。用いられる基礎インスリンに応じて、この投与量は、１日を通して定期的に分配される、１又は２回の注射に分配される。最も一般に用いられている基礎インスリンは、レベミル（Ｌｅｖｅｍｉｒ（登録商標））（ノボ  ノルディスクからのインスリンデテミル）及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（サノフィ−アベンチスからのインスリングラルギン）である。
【０００６】
完全を期すならば、ＮＰＨ（ＮＰＨインスリン、即ちニュートラル  プロタミン  ハゲドン（Ｎｅｕｔｒａｌ  Ｐｒｏｔａｍｉｎｅ  Ｈａｇｅｄｏｒｎ）；フムリンＮＰＨ（Ｈｕｍｕｌｉｎｅ  ＮＰＨ（登録商標））、インスラタード（Ｉｎｓｕｌａｔａｒｄ（登録商標）））が最も古い基礎インスリンであることが留意される。この製剤は、カチオン性タンパク質であるプロタミンを用いたヒトインスリン（中性ｐＨにてアニオン性である）の沈澱の結果物である。これら微結晶は、水性懸濁液中に分散され、そして皮下注射後にゆっくりと溶解する。このゆっくりとした溶解が、インスリンの持続的な放出を確実にする。しかしながら、この放出は、インスリン濃度を経時的に一定にすることを確実にするものではない。放出プロファイルは釣鐘状であり、且つ、１２ないし１６時間しか持続しない。このため、１日に２回注射される。このＮＰＨ基礎インスリンは、現代の基礎インスリンであるレベミル（Ｌｅｖｅｍｉｒ（登録商標））及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））よりも効果がずっと低い。ＮＰＨは中間的な作用をする基礎インスリンである。
【０００７】
速効性インスリン類似体の出現とともにＮＰＨの本質が変化し、速効作用と中間作用の両方を与える“プレミックス（Ｐｒｅｍｉｘ）”製品を与えた。ノボログ  ミックス（ＮｏｖｏＬｏｇ  Ｍｉｘ（登録商標））（ノボログ  ノルディスク）及びヒューマログ  ミックス（Ｈｕｍａｌｏｇ  Ｍｉｘ（登録商標））（エリ  リリー）は、部分的にプロタミンと複合している速効性インスリン類似体である、ノボログ（Ｎｏｖｏｌｏｇ（登録商標））及びヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））を含有する製剤である。従ってこれら製剤は、作用が中間的であると言われるインスリンの微結晶、且つ、溶解し続け、作用が速効である割合のインスリンを含有している。これら製剤は、実際のところ、速効性インスリンの利点を与えているが、それらはまた、ＮＰＨの欠点、即ち作用期間が１２ないし１６時間に制限され、且つ釣鐘状のインシュリン放出である、という欠点をも有している。しかしながら、これら製品によって、患者が中間性の基礎インスリンと速効性の食事インスリンの１回注射をすることが可能となっている。実際に、多くの患者が注射の回数を減らすことを望んでいる。
【０００８】
目下のところ、基礎インスリンは市販され、そして臨床開発の下で、持続作用を得るための技術的解決の機能として分類され得、そして現時点で２つの方法が用いられている。
【０００９】
第一に、インスリンデテミルのそれは、生体内でアルブミンに結合している。インスリンデテミルは、生体内で当該インスリンがアルブミンに結合することを可能とする、Ｂ２９位に結合した脂肪酸（テトラデカノイル）側鎖を有する、ｐＨ７で可溶性の類似体である。その持続作用は、主として、皮下注射後のアルブミンに対するこの親和性によるものである。
【００１０】
しかしながら、その薬物動態プロファイルは、丸１日に及ぶことを可能とするものではなく、このことは、大抵、１日に２回の注射を必要とすることを意味する。
【００１１】
デグルデック（Ｄｅｇｌｕｄｅｃ（登録商標））のようなｐＨ７で可溶性である他の基礎インスリンが、目下のところ開発下にある。デグルデック（Ｄｅｇｌｕｄｅｃ（登録商標））もまた、インスリンに結合した脂肪酸側鎖（ヘキサデカンジオイル−Ｙ−Ｌ−Ｇｌｕ）を有している。
【００１２】
第二に、インスリングラルギンのそれは、生理的ｐＨにて沈澱する。このことは、２個のアルギニン残基によるヒトインスリンのＢ鎖のＣ−末端部分の伸長により、且つ、グリシン残基によるアスパラギン残基Ａ２１の置換により得られたヒトインスリンの類似体である（特許文献１）。２個のアルギニン残基の付加は、生理的ｐＨでのインスリングラルギンのｐＩ（等電点）を調節することが着想され、そしてこのことが当該インスリン類似体を生理的媒体中で不溶性としている。
【００１３】
インスリングラルギンを酸性ｐＨで安定化させ、そしてこれによって、酸性ｐＨの注射溶液の形態にそれを製剤化せしめるために、Ａ２１の置換が着想される。皮下注射の間、酸性ｐＨ（ｐＨ４ないし４．５）から生理的ｐＨ（中性ｐＨ）までのインスリングラルギンの移動は、皮下においてその沈澱を引き起こす。インスリングラルギン微粒子のゆっくりした再溶解が、ゆっくりとした、且つ持続的な作用を確実にする。
【００１４】
インスリングラルギンの低血糖効果は、２４時間の期間を超えて実質的に一定であり、このことが、大部分の患者が１日に１回の注射に限定することを可能にしている。
【００１５】
インスリングラルギンは今や、市販される最良の基礎インスリンとして考えられている。
【００１６】
しかしながら、インスリングラルギン型の、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリン製剤の酸性ｐＨが、他のタンパク質、及び特に食事インスリンとのいかなる医薬的な組合せをも、後者は酸性ｐＨで不安定であるために、妨げている。
【００１７】
しかしながら、誰もこれまで、インスリングラルギン型の、等電点が５．８ないし８．５であるこれら基礎インスリンを、中性ｐＨで溶解させる一方で、当該ｐＨとは別に、生体外媒体（それを含有する）と生体内媒体（皮下）との間の溶解度の差を維持することを探索してこなかった。
【００１８】
とりわけ、それらは酸性ｐＨで可溶性であり、そして生理的ｐＨで沈澱する、という上記概説したインスリングラルギン型の基礎インスリンの作用本質が、インスリングラルギン型のインスリンがｐＨ６ないし８で溶解する一方で、皮下媒体中で沈澱するというその不可欠な特徴を維持するいかなる解決策をも当業者にためらわせていた。
【００１９】
さらには、酸性ｐＨで食事インスリンを製剤化する困難さは、食事インスリンがこれらの条件下にてＡ２１位で脱アミノ副反応を受け、このことが米国薬局方の要件、つまり、３０℃で４週間後に副生成物が５％未満であるという要件を満たすことを不可能にしている、という事実から生じている。
【００２０】
さらには、インスリングラルギン型の、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリン製剤の酸性ｐＨが、中性ｐＨでの食事インスリンとのいかなる偶発的な組合せをも妨げている。
【００２１】
６９ｔｈ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｓｅｓｓｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，ニューオーリンズ，ルイジアナ州，２００９年６月５〜９日において発表された最近の臨床研究が、インスリングラルギンの使用のこの限界を証明した。インスリングラルギンの投与量及び食事インスリン（適切には、インスリンリスプロ）の投与量が、注射直前に一緒に混合された（非特許文献１）。この実験は、食後高血糖及び夜間低血糖を生じてしまう、食事インスリンの薬物動態学的及び薬理学的プロファイルにおける有意な遅延を示すことを可能にした。この研究は、実際に、現在市販されている速効性インスリンとのインスリングラルギンの不適合性を裏付けている。
【００２２】
さらには、サノフィ−アベンチス社からのインスリングラルギンをベースとした市販品のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の使用についての取扱説明書は、ユーザーに対して、インスリングラルギンの及び／又は混合した食事インスリンの薬物動態及び薬理を改変する深刻な危険性のため、食事インスリン溶液と混合すべきではないことを、明確に指摘している。
【００２３】
しかしながら、治療の観点から、２０１０年の米国糖尿病協会（ＡＤＡ）の第７０回科学総会、アブストラクツ２１６３−ＰＯ及びアブストラクツ番号０００１−ＬＢ中に公表された臨床研究が、特にサノフィ−アベンチス社により行われた研究において、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））、インスリングラルギン及び食事インスリンを組み合わせた治療が、“プレミックス”、ノボログミックス（Ｎｏｖｏｌｏｇ  Ｍｉｘ（登録商標））又はヒューマログミックス（Ｈｕｍａｌｏｇ  Ｍｉｘ（登録商標））型の製品をベースとした治療よりもずっと効果的であることを示した。
【００２４】
インスリングラルギン及び速効性インスリンの組合せに関して、バイオデル（Ｂｉｏｄｅｌ）社は、特許文献２において、キレート剤及びポリ酸の存在下の、３．０ないし４．２のｐＨでの基礎インスリン及び食事インスリンを含有する組成物について、顕著に記載した。当該特許文献は、食事インスリンを、インスリングラルギン型のインスリンの存在中、酸性ｐＨにて、如何にして適合させるかを教示している。中性ｐＨにで、インスリングラルギン型のインスリン及び食事インスリンの組合せを如何にして調製するかを教示していない。
【００２５】
公知文献及び特許文献に記載された組成物の解析から、インスリングラルギン型の基礎インスリンのｐＨ７での不溶性が、その遅効作用を有することの要件であることが明らかとなっている。結果として、それらを食事インスリンのような他の製品と組み合わせるために提案された全ての解決法は、酸性ｐＨでの食事インスリンの溶解又は安定化の試験を根拠としている（例えば、特許文献３及び特許文献４を参照のこと）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２６】
【特許文献１】米国特許第５６５６７２２号明細書
【特許文献２】米国特許第７７１８６０９号明細書
【特許文献３】国際公開第２００７／１２１２５６号公報
【特許文献４】国際公開第２００９／０２１９５５号公報
【非特許文献】
【００２７】
【非特許文献１】Ｅ．Ｃｅｎｇｉｚ他．，２０１０年，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ，３３（５），１００９−１２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２８】
驚くことに、本発明に従う組成物が、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンを、ｐＨ７にて溶解させ得る。
驚くことに、本発明に従う組成物が、注射前のｐＨ７でのその溶解性にもかかわらず、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの血糖降下活性の期間の維持を可能とした。この注目に値する特性が、本発明組成物中でｐＨ７にて溶解しているインスリングラルギン型のインスリンが、皮下媒体の組成の変化によって当該媒体中に沈澱するという事実から生ずる。インスリングラルギン型のインスリンの沈澱を引き起こす要因は、もはやｐＨ改変ではなく、生理的媒体中への医薬組成物の注入の間の環境の組成の改変である。
【課題を解決するための手段】
【００２９】
ｐＨ７における溶解性のこの問題を解決することにより、本発明は、
米国薬局方及び欧州薬局方の要件を満足する前記組成物のため、
−等電点が５．８ないし８．５であり、ｐＨ７にて均質溶液の形態にある、基礎インスリンを含有する一方で、その生理活性及びその作用プロファイルを保持する、糖尿病の治療を目的とした注射用組成物を提供すること；
−ｐＨ６ないし８にて溶解性であり、且つ酸性ｐＨにて不安定性である一方で、基礎インスリンに固有の基礎作用プロファイルを維持する食事インスリンの活性プロファイルの改変をすることなく、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンと食事インスリンとの組合せを含有する製剤の形態にある組成物を提供すること； 
−等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンと、ＧＬＰ−１又は“グルカゴン様ペプチド−１”のような胃腸ホルモンの誘導体又は類似体との組合せをさらに含有する、糖尿病の治療を目的とした注射用組成物を提供すること；
−患者のために注射の回数を減らすこと；
を可能にする。
【００３０】
驚くことに、本発明の主題事項である、インスリングラルギン型と食事インスリンとのインスリン組合せにおいて、皮下媒体中のインスリングラルギン型のインスリンの沈澱を可能とするにもかかわらず、食事インスリンの速効作用が保持される。
【００３１】
本発明は、注射可能な水溶液の形態にある組成物であって、ｐＨが６．０ないし８．０であり、少なくとも、
ａ）等電点ｐＩが５．８ないし８．５である基礎インスリン；
ｂ）式Ｉ：
【化１】
0005950477.tif 000002
［式中、
Ｒは、−ＯＨであるか、又は基：−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎ；−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍからなる群より選択され、
ここで、Ｄは、少なくとも８個の炭素原子を有する少なくとも１種のアルキル鎖を有し；
ｎは、−ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨによるグルコシド単位の置換度を表し、０．１≦ｎ≦２であり；
ｍは、−ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］によるグルコシド単位の置換度を表し、０＜ｍ≦０．５であり；
ｑは、グルコシド単位としての重合度、即ち、多糖鎖当りのグルコシド単位の平均数を表し、３≦ｑ≦５０であり；
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎについて、
−Ａ−は、１ないし４個の炭素原子を有する直鎖基又は枝分れ基であって、前記−Ａ−基は、エーテル、エステル及びカルバメート官能基からなる群より選択される官能基ｆを介してグルコシド単位に結合しており；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍについて、
−Ｂ−は、１ないし４個の炭素原子を有する直鎖状の又は枝分れ状の少なくとも２価の基であって；前記−Ｂ−基は、エーテル、エステル及びカルバメート官能基からなる群より選択される官能基ｇを介してグルコシド単位に結合しており；官能基ｋを介して−Ｄ基に結合しており；ｋは、エステル、アミド及びカルバメート官能基からなる群より選択され；前記Ｄ基は、−Ｘ（−ｌ−Ｙ）ｐ基（式中、Ｘは、カルボキシル又はアミン官能基を有していてもよく、及び／又は、アミノ酸、ジアルコール、ジアミン又はモノ−若しくはポリエチレングリコールモノ−若しくはジアミン由来であってもよい、Ｃ、Ｎ及びＯ原子からなる群より選択される１ないし１２個の原子を有する少なくとも２価の基を表し；Ｙは、１個以上の炭素原子数１ないし３のアルキル基により置換されていてもよい、炭素原子数８ないし３０の直鎖状又は環状アルキル基、アルキルアリール基又はアリールアルキル基を表し；ｐ≧１であり、及び、ｌは、エステル、アミド及びカルバメート官能基からなる群より選択される官能基を表す）を表し；
ｆ、ｇ及びｋは、同一又は異なっており；
前記遊離酸官能基は、Ｎａ＋及びＫ＋からなる群より選択されるアルカリ金属カチオン塩の形態にあり；及び
ｐ＝１である場合、Ｙが炭素原子数８ないし１４のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧２であり、Ｙが炭素原子数１５のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧２であり；及び、Ｙが炭素原子数１６ないし２０のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧１であり；及び
ｐ≧２である場合、Ｙが炭素原子数８又は９のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧２であり、及び、Ｙが炭素原子数１０ないし１６のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧０．２である］又は
式ＩＩ：
【化２】
0005950477.tif 000003
［式中、
Ｒは、−ＯＨ又は−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎ基
（式中、−Ａ−は、１ないし４個の炭素原子を有する直鎖基又は枝分れ基を表し；前記基−Ａ−は、エーテル、エステル又はカルバメート官能基からなる群より選択される官能基ｆを介してグルコシド単位に結合しており；ｎは、−ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨによるグルコシド単位の置換度を表し、０．１≦ｎ≦２である）
を表し；
Ｒ’は、基−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−［Ｅ］−（ｏ−［Ｆ］）ｔ；−ＣＨ２Ｎ（Ｌ）ｚ−［Ｅ］−（о−［Ｆ］）ｔ
｛式中、ｚは１又は２の正の整数であり、Ｌは、−Ｈ（即ち、ｚが１である場合）、−［Ａ］−ＣＯＯＨ（即ち、ｚが１又は２であり、ｆがエーテル官能基である場合）、−ＣＯ−［Ａ］−ＣＯＯＨ（即ち、ｚが１であり、ｆがエステル官能基である場合）及び−ＣＯ−ＮＨ−［Ａ］−ＣＯＯＨ（即ち、ｚが１であり、ｆがカルバメート官能基である場合）からなる群より選択される｝からなる群より選択され；
−［Ｅ］−（о−［Ｆ］）ｔについて、
−Ｅ−は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群より選択されるヘテロ原子を有していてもよい１ないし８個の炭素原子を有する、直鎖状の又は枝分れ状の少なくとも２価の基を表し；
−Ｆ−は、１個以上の炭素原子数１ないし３のアルキル基により置換されていてもよい炭素原子数１２ないし３０の直鎖状又は環状アルキル基、アルキルアリール基又はアリールアルキル基を表し；
оは、エーテル、エステル、アミド及びカルバメート官能基からなる群より選択される官能基を表し；
ｔは、１又は２の正の整数であり；
ｑは、グルコシド単位としての重合度、即ち、多糖鎖当りのグルコシド単位の平均数を表し、３≦ｑ≦５０であり；
遊離酸官能基は、Ｎａ＋及びＫ＋からなる群より選択されるアルカリ金属カチオンの塩の形態にあり；
ｚ＝２である場合、窒素原子は４級アンモニウムの形態にある］
で表される、カルボキシレート電荷を有する基及び疎水基により置換されたデキストラン
を含有する、組成物
に関する。
【００３２】
一の態様において、ｐ＝１である場合、Ｙが炭素原子数２１ないし３０の基であるならば、ｑ＊ｍ≧１である。
【００３３】
一の態様において、ｐ＝１である場合、Ｙが炭素原子数２１ないし３０の基であるならば、ｑ＊ｍ≧０．１である。
【００３４】
一の態様において、−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎ基は、−Ａ−が１個の炭素原子を有する基であって、前記−Ａ−基は、エーテル官能基ｆを介してグルコシド単位に結合しているものである。
【００３５】
一の態様において、−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍ基は、−Ｂ−が１個の炭素原子を有する基であって、前記−Ｂ−基はエーテル官能基ｇを介してグルコシド単位に結合しており、及びＸはアミノ酸由来の基であるものである。
【００３６】
一の態様において、−（ｆ−［Ａ］ＣＯＯＨ）ｎ基は、−Ａ−が１個の炭素原子を有する基であって、前記−Ａ−基がエーテル官能基ｆを介してグルコシド単位に結合しており、及び−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍ基は、−Ｂ−が１個の炭素原子を有する基であって、前記−Ｂ−基がエーテル官能基ｇを介してグルコシド単位に結合しており、及びＸはアミノ酸由来の基であり、ｋはアミド官能基であるものである。
【００３７】
一の態様において、カルボキシレート電荷を有する基及び疎水基により置換されたデキストランは、式ＩＩＩ：
【化３】
0005950477.tif 000004
［式中、
Ｒは、−ＯＨであるか、又は基：−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎ；−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍからなる群より選択され、
ここで、Ｄは、少なくとも８個の炭素原子を有する少なくとも１種のアルキル鎖を有し；
ｎは、−ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨによるグルコシド単位の置換度を表し、０．１≦ｎ≦２であり；
ｍは、−ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］によるグルコシド単位の置換度を表し、０＜ｍ≦０．５であり；
ｑは、グルコシド単位としての重合度、即ち、多糖鎖当りのグルコシド単位の平均数を表し、３≦ｑ≦５０であり；
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎについて、
−Ａ−は、１ないし４個の炭素原子を有する直鎖基又は枝分れ基であって、前記−Ａ−基は、エーテル、エステル及びカルバメート官能基からなる群より選択される官能基ｆを介してグルコシド単位に結合しており；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍについて、
−Ｂ−は、１ないし４個の炭素原子を有する直鎖状の又は枝分れ状の少なくとも２価の基であって；前記−Ｂ−基は、エーテル、エステル及びカルバメート官能基からなる群より選択される官能基ｇを介してグルコシド単位に結合しており；官能基ｋを介して−Ｄ基に結合しており；ｋは、エステル、アミド及びカルバメート官能基からなる群より選択され；前記Ｄ基は、−Ｘ（−ｌ−Ｙ）ｐ基（式中、Ｘは、カルボキシル又はアミン官能基を有していてもよく、及び／又は、アミノ酸、ジアルコール、ジアミン又はモノ−若しくはポリエチレングリコールモノ−若しくはジアミン由来であってもよい、Ｃ、Ｎ及びＯ原子からなる群より選択される１ないし１２個の原子を有する少なくとも２価の基を表し；Ｙは、１個以上の炭素原子数１ないし３のアルキル基により置換されていてもよい、炭素原子数８ないし２０の直鎖状又は環状アルキル基、アルキルアリール基又はアリールアルキル基を表し；ｐ≧１であり、及び、ｌは、エステル、アミド及びカルバメート官能基からなる群より選択される官能基を表す）を表し；
ｆ、ｇ及びｋは、同一又は異なっており；
前記遊離酸官能基は、Ｎａ＋及びＫ＋からなる群より選択されるアルカリ金属カチオン塩の形態にあり；及び
ｐ＝１である場合、Ｙが炭素原子数８ないし１４のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧２であり、Ｙが炭素原子数１５のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧２であり；及び、Ｙが炭素原子数１６ないし２０のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧１であり；及び
ｐ≧２である場合、Ｙが炭素原子数８ないし１１のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧２であり、及び、Ｙが炭素原子数１２ないし１６のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧０．３である］
で表されるものである。
【００３８】
一の態様において、カルボキシレート電荷を有する基及び疎水基により置換されたデキストランは、式ＩＶ：
【化４】
0005950477.tif 000005
［式中、
Ｒは、−ＯＨであるか、又は基：−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎ；−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍからなる群より選択され、
ここで、Ｄは、少なくとも８個の炭素原子を有する少なくとも１種のアルキル鎖を有し；
ｎは、グルコシド単位当りの−ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨによるヒドロキシル官能基−ＯＨの置換度を表し、０．１≦ｎ≦２であり；
ｍは、グルコシド単位当りの−ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］によるヒドロキシル官能基−ＯＨの置換度を表し、０＜ｍ≦０．５であり；
ｑは、グルコシド単位としての重合度、即ち、多糖鎖当りのグルコシド単位の平均数を表し、３≦ｑ≦５０であり；
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎについて、
−Ａ−は、１ないし４個の炭素原子を有する直鎖基又は枝分れ基であって、前記−Ａ−基は、エーテル、エステル及びカルバメート官能基からなる群より選択される官能基ｆを介してグルコシド単位に結合しており；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍについて、
−Ｂ−は、１ないし４個の炭素原子を有する直鎖状の又は枝分れ状の少なくとも２価の基であって；前記−Ｂ−基は、エーテル、エステル及びカルバメート官能基からなる群より選択される官能基ｇを介してグルコシド単位に結合しており；官能基ｋを介して−Ｄ基に結合しており；ｋは、エステル、アミド及びカルバメート官能基からなる群より選択され；前記Ｄ基は、−Ｘ（−ｌ−Ｙ）ｐ基（式中、Ｘは、カルボキシル又はアミン官能基を有していてもよく、及び／又は、アミノ酸、ジアルコール、ジアミン又はモノ−若しくはポリエチレングリコールモノ−若しくはジアミン由来であってもよい、Ｃ、Ｎ及びＯ原子からなる群より選択される１ないし１２個の原子を有する少なくとも２価の基を表し；Ｙは、１個以上の炭素原子数１ないし３のアルキル基により置換されていてもよい、炭素原子数８ないし３０の直鎖状又は環状アルキル基、アルキルアリール基又はアリールアルキル基を表し；ｐ≧１であり、及び、ｌは、エステル、アミド及びカルバメート官能基からなる群より選択される官能基を表す）を表し；
ｆ、ｇ及びｋは、同一又は異なっており；
前記遊離酸官能基は、Ｎａ＋及びＫ＋からなる群より選択されるアルカリ金属カチオン塩の形態にあり；及び
ｐ＝１である場合、Ｙが炭素原子数８ないし１４のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧２であり、Ｙが炭素原子数１５のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧２であり；及び、Ｙが炭素原子数１６ないし３０のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧１であり；及び
ｐ≧２である場合、Ｙが炭素原子数８又は９のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧２であり、及び、Ｙが炭素原子数１０ないし１６のアルキルであるならば、ｑ＊ｍ≧０．２である］
で表されるものである。
【００３９】
描かれている構造は、グルコシド単位間の大部分が（１，６）結合からなる多糖であるデキストランを表すのに共通して用いられる表現に対応しており、採用された表現である。デキストランはまた、意図して表されないが、もちろん本発明の目的内で包含される、概しておよそ５％の（１，３）結合をも有する。
【００４０】
用語の、等電点が５．８ないし８．５である“基礎インスリン”とは、ｐＨ７にて不溶性であって、且つ糖尿病の標準モデルにおいて８ないし２４時間以上の作用期間を有するインスリンを意味するものと理解される。
【００４１】
これら等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンは、その第一構造が、主としてアルギニン又はリジンのような基礎アミノ酸の導入により変性されている、組換え体インスリンである。例えば、下記の特許文献、特許出願又は特許公開公報：国際公開第２００３／０５３３３９号公報、国際公開第２００４／０９６８５４号公報、特許文献１及び米国特許第６１００３７６号明細書において記載されている。
【００４２】
一の態様において、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンは、インスリングラルギンである。
【００４３】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５の基礎インスリンの１００ＩＵ／ｍＬ（即ち、およそ３．６ｍｇ／ｍＬ）を含有する。
【００４４】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５の基礎インスリンの４０ＩＵ／ｍＬを含有する。
【００４５】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５の基礎インスリンの２００ＩＵ／ｍＬを含有する。
【００４６】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５の基礎インスリンの３００ＩＵ／ｍＬを含有する。
【００４７】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５の基礎インスリンの４００ＩＵ／ｍＬを含有する。
【００４８】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５の基礎インスリンの５００ＩＵ／ｍＬを含有する。
【００４９】
一の態様において、置換されたデキストランに対する、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの質量比、即ち、置換されたデキストラン／基礎インスリンは、０．２ないし５である。
【００５０】
一の態様において、置換されたデキストランに対する、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの質量比、即ち、置換されたデキストラン／基礎インスリンは、０．２ないし４である。
【００５１】
一の態様において、置換されたデキストランに対する、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの質量比、即ち、置換されたデキストラン／基礎インスリンは、０．２ないし３である。
【００５２】
一の態様において、置換されたデキストランに対する、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの質量比、即ち、置換されたデキストラン／基礎インスリンは、０．５ないし３である。
【００５３】
一の態様において、置換されたデキストランに対する、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの質量比、即ち、置換されたデキストラン／基礎インスリンは、０．８ないし３である。
【００５４】
一の態様において、置換されたデキストランに対する、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの質量比、即ち、置換されたデキストラン／基礎インスリンは、１ないし３である。
【００５５】
一の態様において、置換されたデキストランの濃度は、１ないし１００ｍｇ／ｍＬである。
【００５６】
一の態様において、置換されたデキストランの濃度は、１ないし８０ｍｇ／ｍＬである。
【００５７】
一の態様において、置換されたデキストランの濃度は、１ないし６０ｍｇ／ｍＬである。
【００５８】
一の態様において、置換されたデキストランの濃度は、１ないし５０ｍｇ／ｍＬである。
【００５９】
一の態様において、置換されたデキストランの濃度は、１ないし３０ｍｇ／ｍＬである。
【００６０】
一の態様において、置換されたデキストランの濃度は、１ないし２０ｍｇ／ｍＬである。
【００６１】
一の態様において、置換されたデキストランの濃度は、１ないし１０ｍｇ／ｍＬである。
【００６２】
一の態様において、多糖類の濃度は、５ないし２０ｍｇ／ｍＬである。
【００６３】
一の態様において、多糖類の濃度は、５ないし１０ｍｇ／ｍＬである。
【００６４】
一の態様において、本発明に従う組成物は、食事インスリンをさらに含有する。食事インスリンは、ｐＨ７にて可溶性である。
【００６５】
用語“食事インスリン”とは、“速効性”又は“中間性”インスリンを意味するものと理解される。
【００６６】
“速効性”の食事インスリンは、食事中のタンパク質及び炭水化物の消化により引き起こされる要件に合致しなければならない、即ち、３０分未満で作用しなければならないインスリンである。
【００６７】
一の態様において、“中間性”食事インスリンとは、ヒュームリン（Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標））（ヒトインスリン）及びノボリン（Ｎｏｖｏｌｉｎ（登録商標））（ヒトインスリン）からなる群より選択される。
【００６８】
“速効性”食事インスリンとは、その作用時間を減らすために、遺伝子組換えにより得られ、且つ変性されたインスリンである。
【００６９】
一の態様において、“速効性”食事インスリンは、インスリンリスプロ（ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）））、インスリングルリシン（アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標）））及びインスリンアスパルト（ノボログ（Ｎｏｖｏｌｏｇ（登録商標）））からなる群より選択される。
【００７０】
一の態様において、本発明に従う組成物は、食事インスリンと等電点が５．８ないし８．５の基礎インスリンとの組合せを、インスリンの全量で１００ＩＵ／ｍＬ（即ち、およそ３．６ｍｇ／ｍＬ）を含有する。
【００７１】
一の態様において、本発明に従う組成物は、食事インスリンと等電点が５．８ないし８．５の基礎インスリンとの組合せを、インスリンの全量で４０ＩＵ／ｍＬを含有する。
【００７２】
一の態様において、本発明に従う組成物は、食事インスリンと等電点が５．８ないし８．５の基礎インスリンとの組合せを、インスリンの全量で２００ＩＵ／ｍＬを含有する。
【００７３】
一の態様において、本発明に従う組成物は、食事インスリンと等電点が５．８ないし８．５の基礎インスリンとの組合せを、インスリンの全量で３００ＩＵ／ｍＬを含有する。
【００７４】
一の態様において、本発明に従う組成物は、食事インスリンと等電点が５．８ないし８．５の基礎インスリンとの組合せを、インスリンの全量で４００ＩＵ／ｍＬを含有する。
【００７５】
一の態様において、本発明に従う組成物は、食事インスリンと等電点が５．８ないし８．５の基礎インスリンとの組合せを、インスリンの全量で５００ＩＵ／ｍＬを含有する。
【００７６】
一の態様において、本発明に従う組成物は、食事インスリンと等電点が５．８ないし８．５の基礎インスリンとの組合せを、インスリンの全量で６００ＩＵ／ｍＬを含有する。
【００７７】
一の態様において、本発明に従う組成物は、食事インスリンと等電点が５．８ないし８．５の基礎インスリンとの組合せを、インスリンの全量で７００ＩＵ／ｍＬを含有する。
【００７８】
一の態様において、本発明に従う組成物は、食事インスリンと等電点が５．８ないし８．５の基礎インスリンとの組合せを、インスリンの全量で８００ＩＵ／ｍＬを含有する。
【００７９】
上記４０ないし８００ＩＵ／ｍＬの製剤について、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンと食事インスリンとの間の割合は、インスリンの全量に関するパーセンテージとして表すと、例えば、２５／７５、３０／７０、４０／６０、５０／５０、６０／４０、７０／３０、８０／２０及び９０／１０である。しかしながら、如何なる他の割合でも製造され得る。
【００８０】
全量で１００ＩＵ／ｍＬのインスリンを含有する製剤について、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンと食事インスリンとの間の割合は、例えば、ＩＵ／ｍＬにて、２５／７５、３０／７０、４０／６０、５０／５０、６０／４０、７０／３０、８０／２０又は９０／１０である。しかしながら、如何なる他の割合でも製造され得る。
【００８１】
一の態様において、本発明に従う組成物は、ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１類似体又はＧＬＰ−１誘導体をさらに含有する。
【００８２】
一の態様において、ＧＬＰ−１類似体又は誘導体は、エリ  リリー  アンド  コ社（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ＆  Ｃｏ）及び  アミリン  ファーマスーティカルズ社（Ａｍｙｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｒｉｃａｌｓ）により開発されたエクセナチド（ｅｘｅｎａｔｉｄｅ）即ちビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））、ノボ  ノルディスク社（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）により開発されたリラグルチド（ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）即ちビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））及びサノフィ社（Ｓａｎｏｆｉ）により開発されたリクシセナチド（ｌｉｘｉｓｅｎａｔｉｄｅ）即ちリクスミア（Ｌｙｘｕｍｉａ（登録商標））、それらの類似体又は誘導体及びそれらの医薬的に許容され得る塩からなる群より選択される。
【００８３】
一の態様において、ＧＬＰ−１類似体又は誘導体は、エクセナチド即ちビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））、その類似体又は誘導体及びそれらの医薬的に許容され得る塩である。
【００８４】
一の態様において、ＧＬＰ−１類似体又は誘導体は、リラグルチド即ちビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））、その類似体又は誘導体及びそれらの医薬的に許容され得る塩である。
【００８５】
一の態様において、ＧＬＰ−１類似体又は誘導体は、リクシセナチド即ちリクスミア（Ｌｙｘｕｍｉａ（登録商標））、その類似体又は誘導体及びそれらの医薬的に許容され得る塩である。
【００８６】
用語“類似体”とは、それがペプチド又はタンパク質に関して用いられる場合に、１以上の構成アミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換された、及び／又は１以上の構成アミノ酸残基が除かれた、及び／又は１以上の構成アミノ酸残基が付加された、ペプチド又はタンパク質を意味するものと理解される。類似体の定義について許容される同一性のパーセンテージは、５０％である。
【００８７】
用語“誘導体”とは、それがペプチド又はタンパク質に関して用いられる場合に、参照ペプチド又はタンパク質又は類似体には存在していない置換基により化学的に変性されたペプチド又はタンパク質又は類似体、即ち置換基を導入するために共有結合の形成により変性されたペプチド又はタンパク質を意味するものと理解される。
【００８８】
一の態様において、ＧＬＰ−１の、ＧＬＰ−１類似体の又はＧＬＰ−１誘導体の濃度は、０．０１ないし１０ｍｇ／ｍＬの範囲内である。
【００８９】
一の態様において、エクセナチド、その類似体又は誘導体及びそれらの医薬的に許容され得る塩の濃度は、０．０５ないし０．５ｍｇ／ｍＬである。
【００９０】
一の態様において、リラグルチド、その類似体又は誘導体及びそれらの医薬的に許容され得る塩の濃度は、１ないし１０ｍｇ／ｍＬである。
【００９１】
一の態様において、リクシセナチド、その類似体又は誘導体及びそれらの医薬的に許容され得る塩の濃度は、０．０１ないし１ｍｇ／ｍＬである。
【００９２】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの市販溶液と、ＧＬＰ−１の、ＧＬＰ−１類似体の、又はＧＬＰ−１誘導体の市販溶液とを、１０／９０ないし９０／１０の範囲内の容量比で混合することによって製造される。
【００９３】
一の態様において、本発明に従う組成物は、基礎インスリンの１日投与量及びＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１類似体又はＧＬＰ−１誘導体の１日投与量を含有する。
【００９４】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの５００ＩＵ／ｍＬ及びエクセナチドの０．０５ないし０．５ｍｇ／ｍＬを含有する。
【００９５】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの５００ＩＵ／ｍＬ及びリラグルチドの１ないし１０ｍｇ／ｍＬを含有する。
【００９６】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの５００ＩＵ／ｍＬ及びリクシセナチドの０．０５ないし０．５ｍｇ／ｍＬを含有する。
【００９７】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの１００ＩＵ／ｍＬ及びエクセナチドの０．０５ないし０．５ｍｇ／ｍＬを含有する。
【００９８】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの１００ＩＵ／ｍＬ及びリラグルチドの１ないし１０ｍｇ／ｍＬを含有する。
【００９９】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの１００ＩＵ／ｍＬ及びリクシセナチドの０．０５ないし０．５ｍｇ／ｍＬを含有する。
【０１００】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの４０ＩＵ／ｍＬ及びエクセナチドの０．０５ないし０．５ｍｇ／ｍＬを含有する。
【０１０１】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの４０ＩＵ／ｍＬ及びリラグルチドの１ないし１０ｍｇ／ｍＬを含有する。
【０１０２】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの４０ＩＵ／ｍＬ及びリクシセナチドの０．０５ないし０．５ｍｇ／ｍＬを含有する。
【０１０３】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの２００ＩＵ／ｍＬ及びエクセナチドの０．０５ないし０．５ｍｇ／ｍＬを含有する。
【０１０４】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの２００ＩＵ／ｍＬ及びリラグルチドの１ないし１０ｍｇ／ｍＬを含有する。
【０１０５】
一の態様において、本発明に従う組成物は、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの２００ＩＵ／ｍＬ及びリクシセナチドの０．０５ないし０．５ｍｇ／ｍＬを含有する。
【０１０６】
一の態様において、本発明に従う組成物は、０ないし５０００μＭの濃度で亜鉛塩をさらに含有する。
【０１０７】
一の態様において、本発明に従う組成物は、５０ないし４０００μＭの濃度で亜鉛塩をさらに含有する。
【０１０８】
一の態様において、本発明に従う組成物は、２００ないし３０００μＭの濃度で亜鉛塩をさらに含有する。
【０１０９】
一の態様において、本発明に従う組成物は、０ないし１０００μＭの濃度で亜鉛塩をさらに含有する。
【０１１０】
一の態様において、本発明に従う組成物は、２０ないし６００μＭの濃度で亜鉛塩をさらに含有する。
【０１１１】
一の態様において、本発明に従う組成物は、５０ないし５００μＭの濃度で亜鉛塩をさらに含有する。
【０１１２】
一の態様において、本発明に従う組成物は、０ないし１００ｍＭ、好ましくは０ないし５０ｍＭ又は１５ないし５０ｍＭの濃度で、トリス、クエン酸塩及びリン酸塩からなる群より選択される緩衝液を含有する。
【０１１３】
一の態様において、本発明に従う組成物は、保存剤をさらに含有する。
【０１１４】
一の態様において、保存剤は、ｍ−クレゾール及びフェノールの単独又は混合物からなる群より選択される。
【０１１５】
一の態様において、保存剤の濃度は、１０ないし５０ｍＭである。
【０１１６】
一の態様において、保存剤の濃度は、１０ないし４０ｍＭである。
【０１１７】
本発明に従う組成物は、添加剤、例えば、グリセロール、ＮａＣｌ、マンニトール及びグリシンのような等張化剤を含有し得る。
【０１１８】
本発明に従う組成物は、界面活性剤、例えばポリソルベートのような、薬局方に従う添加剤をさらに含有し得る。
【０１１９】
本発明に従う組成物は、使用濃度で用いられるインスリンと相溶性のある、薬局方に従う全ての賦形剤をさらに含有し得る。
【０１２０】
一の態様において、０．３≦ｎ≦１．７である。
一の態様において、０．７≦ｎ≦１．５である。
一の態様において、０．９≦ｎ≦１．２である。
【０１２１】
一の態様において、０．０１≦ｍ≦０．５である。
一の態様において、０．０２≦ｍ≦０．４である。
一の態様において、０．０３≦ｍ≦０．３である。
一の態様において、０．０５≦ｍ≦０．２である。
【０１２２】
一の態様において、３≦ｑ≦５０である。
一の態様において、３≦ｑ≦４０である。
一の態様において、３≦ｑ≦３０である。
一の態様において、３≦ｑ≦２０である。
一の態様において、３≦ｑ≦１０である。
【０１２３】
一の態様において、−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎ基は、下記配列：
【化５】
0005950477.tif 000006
からなる群より選択され、ｆは上記意味を有する。
【０１２４】
一の態様において、−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍ基は、下記配列：
【化６】
0005950477.tif 000007
からなる群より選択され、ｇ、ｋ及びＤは上記意味を有する。
【０１２５】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がアミノ酸由来の少なくとも２価の基であるものである。
【０１２６】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基が、グリシン、ロイシン、フェニルアラニン、リジン、イソロイシン、アラニン、バリン、アスパラギン酸及びグルタミン酸からなる群より選択されるアミノ酸由来の少なくとも２価の基であるものである。
【０１２７】
アミノ酸由来の基は、左旋性又は右旋性のいずれかであり得る。
【０１２８】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がモノ−又はポリエチレングリコール由来の少なくとも２価の基であるものである。
【０１２９】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がエチレングリコール由来の少なくとも２価の基であるものである。
【０１３０】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基が、ジエチレングリコール及びトリエチレングリコールからなる群より選択されるポリエチレングリコール由来の少なくとも２価の基であるものである。
【０１３１】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がモノ−又はポリエチレングリコールアミン由来の少なくとも２価の基であるものである。
【０１３２】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基が、エタノールアミン、ジエチレングリコールアミン及びトリエチレングリコールアミンからなる群より選択されるモノ−又はポリエチレングリコールアミン由来の少なくとも２価の基であるものである。
【０１３３】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がモノ−又はポリエチレングリコールジアミン由来の少なくとも２価の基であるものである。
【０１３４】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がエチレンジアミン由来の少なくとも２価の基であるものである。
【０１３５】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基が、ジエチレングリコールジアミン及びトリエチレングリコールジアミンからなる群より選択されるモノ−又はポリエチレングリコールジアミン由来の少なくとも２価の基であるものである。
【０１３６】
一の態様において、Ｄは、Ｙ基が疎水性アルコール由来のアルキル基であるものである。
【０１３７】
一の態様において、Ｄは、Ｙ基が、オクタノール（カプリルアルコール）、３，７−ジメチルオクタン−１−オール、デカノール（デシルアルコール）、ドデカノール（ラウリルアルコール）、テトラデカノール（ミリスチルアルコール）及びヘキサデカノール（セチルアルコール）からなる群より選択される疎水性アルコール由来のアルキル基であるものである。
【０１３８】
一の態様において、Ｄは、Ｙ基が疎水性酸由来のアルキル基であるものである。
【０１３９】
一の態様において、Ｄは、Ｙ基が、デカン酸、ドデカン酸、テトラデカン酸及びヘキサデカン酸からなる群より選択される疎水性酸由来のアルキル基であるものである。
【０１４０】
一の態様において、Ｄは、Ｙ基がステロール由来の基であるものである。
【０１４１】
一の態様において、Ｄは、Ｙ基が、コレステロール及びその誘導体からなる群より選択されるステロール由来の基であるものである。
【０１４２】
一の態様において、Ｄは、Ｙ基がトコフェロール由来の基であるものである。
【０１４３】
一の態様において、Ｄは、Ｙ基が、α−トコフェロールのラセミ体、Ｌ異性体又はＤ異性体より選択されるトコフェロール誘導体由来の基であるものである。
【０１４４】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がグリシンを由来とし、ｐ＝１であり、Ｙ基がオクタノールを由来とし、且つ、官能基ｌがエステル官能基であるものである。
【０１４５】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がグリシンを由来とし、ｐ＝１であり、Ｙ基がドデカノールを由来とし、且つ、官能基ｌがエステル官能基であるものである。
【０１４６】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がグリシンを由来とし、ｐ＝１であり、Ｙ基がヘキサデカノールを由来とし、且つ、官能基ｌがエステル官能基であるものである。
【０１４７】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がフェニルアラニンを由来とし、ｐ＝１であり、Ｙ基がオクタノールを由来とし、且つ、官能基ｌがエステル官能基であるものである。
【０１４８】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がフェニルアラニンを由来とし、ｐ＝１であり、Ｙ基が３，７−ジメチルオクタン−１−オールを由来とし、且つ、官能基ｌがエステル官能基であるものである。
【０１４９】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がアスパラギン酸を由来とし、ｐ＝２であり、Ｙ基がオクタノールを由来とし、且つ、官能基ｌがエステル官能基であるものである。
【０１５０】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がアスパラギン酸を由来とし、ｐ＝２であり、Ｙ基がデカノールを由来とし、且つ、官能基ｌがエステル官能基であるものである。
【０１５１】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がアスパラギン酸を由来とし、ｐ＝２であり、Ｙ基がドデカノールを由来とし、且つ、官能基ｌがエステル官能基であるものである。
【０１５２】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がエチレンジアミンを由来とし、Ｙ基がドデカン酸を由来とし、且つ、官能基ｌがアミド官能基であるものである。
【０１５３】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がジエチレングリコールアミンを由来とし、ｐ＝１であり、Ｙ基がドデカン酸を由来とし、且つ、官能基ｌがエステル官能基であるものである。
【０１５４】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がトリエチレングリコールジアミンを由来とし、ｐ＝１であり、Ｙ基がドデカン酸を由来とし、且つ、官能基ｌがアミド官能基であるものである。
【０１５５】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がトリエチレングリコールジアミンを由来とし、ｐ＝１であり、Ｙ基がヘキサデカン酸を由来とし、且つ、官能基ｌがアミド官能基であるものである。
【０１５６】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がロイシンを由来とし、ｐ＝１であり、Ｙ基がコレステロールを由来とし、且つ、官能基ｌがエステル官能基であるものである。
【０１５７】
一の態様において、Ｄは、Ｘ基がエチレンジアミンを由来とし、ｐ＝１であり、Ｙ基がコレステロールを由来とし、且つ、官能基ｌがカルバメート官能基であるものである。
【０１５８】
一の態様において、Ｅ基は、グリシン、ロイシン、フェニルアラニン、リジン、イソロイシン、アラニン、バリン、セリン、スレオニン、アスパラギン酸及びグルタミン酸からなる群より選択されるアミノ酸由来の少なくとも２価の基である。
【０１５９】
アミノ酸由来の基は、左旋性又は右旋性のいずれかであり得る。
【０１６０】
一の態様において、Ｅ基は、モノ−又はポリエチレングリコールアミン由来の少なくとも２価の基である。
【０１６１】
一の態様において、Ｅ基は、エタノールアミン、ジエチレングリコールアミン及びトリエチレングリコールアミンからなる群より選択されるモノ−又はポリエチレングリコールアミン由来の少なくとも２価の基である。
【０１６２】
一の態様において、Ｅ基は、モノ−又はポリエチレングリコールジアミン由来の少なくとも２価の基である。
【０１６３】
一の態様において、Ｅ基は、エチレンジアミン由来の少なくとも２価の基である。
【０１６４】
一の態様において、Ｅ基は、ジエチレングリコールジアミン及びトリエチレングリコールジアミンからなる群より選択されるモノ−又はポリエチレングリコールジアミン由来の少なくとも２価の基である。
【０１６５】
一の態様において、Ｆ基は、疎水性アルコール由来のアルキル基である。
【０１６６】
一の態様において、Ｆ基は、ドデカノール（ラウリルアルコール）、テトラデカノール（ミリスチルアルコール）及びヘキサデカノール（セチルアルコール）からなる群より選択される疎水性アルコール由来の基である。
【０１６７】
一の態様において、Ｆ基は、疎水性酸由来の基である。
【０１６８】
一の態様において、Ｆ基は、ドデカン酸、テトラデカン酸及びヘキサデカン酸からなる群より選択される疎水性酸由来の基である。
【０１６９】
一の態様において、Ｆ基は、ステロール由来の基である。
【０１７０】
一の態様において、Ｆ基は、コレステロール及びその誘導体からなる群より選択されるステロール由来の基である。
【０１７１】
一の態様において、Ｆ基は、トコフェロール由来の基である。
【０１７２】
一の態様において、Ｆ基は、α−トコフェロールのラセミ体、Ｌ異性体又はＤ異性体より選択されるトコフェロール誘導体由来の基である。
【０１７３】
一の態様において、Ｅ基はエチレンジアミン由来のものであり、ｔ＝１であり、ｏはカルバメート官能基であり、且つ、Ｆ基はコレステロール由来のものである。
【０１７４】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがグリシン由来のものであり、ｌがエステル官能基であり及びＹがオクタノール由来のものであり；
ｑ＝３８であり、ｎ＝０．９であり、及びｍ＝０．２である。
【０１７５】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがグリシン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがヘキサデカノール由来のものであり；
ｑ＝１９であり、ｎ＝１．０であり、及びｍ＝０．１である。
【０１７６】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがフェニルアラニン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがオクタノール由来のものであり；
ｑ＝３８であり、ｎ＝１．０であり、及びｍ＝０．１である。
【０１７７】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがフェニルアラニン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがオクタノール由来のものであり；
ｑ＝１９であり、ｎ＝１．０であり、及びｍ＝０．２である。
【０１７８】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがフェニルアラニン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがエステル官能基であり及びＹが３，７−ジメチルオクタン−１−オール由来のものであり；
ｑ＝３８であり、ｎ＝１．０であり、及びｍ＝０．１である。
【０１７９】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがアスパラギン酸由来のものであり、ｐ＝２であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがオクタノール由来のものであり；
ｑ＝３８であり、ｎ＝１．０５であり、及びｍ＝０．０５である。
【０１８０】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがアスパラギン酸由来のものであり、ｐ＝２であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがデカノール由来のものであり；
ｑ＝３８であり、ｎ＝１．０５であり、及びｍ＝０．０５である。
【０１８１】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがアスパラギン酸由来のものであり、ｐ＝２であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがドデカノール由来のものであり；
ｑ＝１９であり、ｎ＝１．０５であり、及びｍ＝０．０５である。
【０１８２】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがエチレンジアミン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがアミド官能基であり及びＹがドデカン酸由来のものであり；
ｑ＝３８であり、ｎ＝１．０であり、及びｍ＝０．１である。
【０１８３】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエステル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエステル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがグリシン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがドデカノール由来のものであり；
ｑ＝３８であり、ｎ＝１．３であり、及びｍ＝０．１である。
【０１８４】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがカルバメート官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがカルバメート官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがアスパラギン酸由来のものであり、ｐ＝２であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがオクタノール由来のものであり；
ｑ＝３８であり、ｎ＝１．３であり、及びｍ＝０．１である。
【０１８５】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがアスパラギン酸由来のものであり、ｐ＝２であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがドデカノール由来のものであり；
ｑ＝４であり、ｎ＝０．９６であり、及びｍ＝０．０７である。
【０１８６】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがジエチレングリコールアミン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがドデカン酸由来のものであり；
ｑ＝３８であり、ｎ＝１．０であり、及びｍ＝０．１である。
【０１８７】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがトリエチレングリコールジアミン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがアミド官能基であり及びＹがドデカン酸由来のものであり；
ｑ＝３８であり、ｎ＝１．０であり、及びｍ＝０．１である。
【０１８８】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがトリエチレングリコールジアミン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがアミド官能基であり及びＹがヘキサデカン酸由来のものであり；
ｑ＝３８であり、ｎ＝１．０５であり、及びｍ＝０．０５である。
【０１８９】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがグリシン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがヘキサデカノール由来のものであり；
ｑ＝１９であり、ｎ＝１．０５であり、及びｍ＝０．０５である。
【０１９０】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがグリシン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがヘキサデカノール由来のものであり；
ｑ＝３８であり、ｎ＝０．３７であり、及びｍ＝０．０５である。
【０１９１】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがロイシン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがコレステロール由来のものであり；
ｑ＝１９であり、ｎ＝１．６１であり、及びｍ＝０．０４である。
【０１９２】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがロイシン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがコレステロール由来のものであり；
ｑ＝１９であり、ｎ＝１．０６であり、及びｍ＝０．０４である。
【０１９３】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがロイシン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがコレステロール由来のものであり；
ｑ＝１９であり、ｎ＝０．６６であり、及びｍ＝０．０４である。
【０１９４】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがロイシン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがコレステロール由来のものであり；
ｑ＝１９であり、ｎ＝０．４６であり、及びｍ＝０．０４である。
【０１９５】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがロイシン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがコレステロール由来のものであり；
ｑ＝４であり、ｎ＝１．６１であり、及びｍ＝０．０５である。
【０１９６】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがエチレンジアミン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがカルバメート官能基であり及びＹがコレステロール由来のものであり；
ｑ＝１９であり、ｎ＝１．６１であり、及びｍ＝０．０４である。
【０１９７】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがカルバメート官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがカルバメート官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがロイシン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがコレステロール由来のものであり；
ｑ＝１９であり、ｎ＝１．９６であり、及びｍ＝０．０４である。
【０１９８】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−［Ｅ］−（ｏ−［Ｆ］）ｔは、Ｅがエチレンジアミン由来のものであり、ｏがカルバメート官能基であり、及び、Ｆがコレステロール由来のものであり；
ｑ＝１９であり、及びｎ＝１．６５である。
【０１９９】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがロイシン由来のものであり、ｐ＝１であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがコレステロール由来のものであり；
ｑ＝３８であり、ｎ＝０．９９であり、及びｍ＝０．０５である。
【０２００】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがアスパラギン酸由来のものであり、ｐ＝２であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがドデカノール由来のものであり；
ｑ＝４であり、ｎ＝１．４１であり、及びｍ＝０．１６である。
【０２０１】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがアスパラギン酸由来のものであり、ｐ＝２であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがドデカノール由来のものであり；
ｑ＝４であり、ｎ＝１．５０であり、及びｍ＝０．０７である。
【０２０２】
一の態様において、
−（ｆ−［Ａ］−ＣＯＯＨ）ｎは、Ａが−ＣＨ２−基であり、及び、ｆがエーテル官能基であるものであり；
−（ｇ−［Ｂ］−ｋ−［Ｄ］）ｍは、ｇがエーテル官能基であり、Ｂが−ＣＨ２−基であり、ｋがアミド官能基であり、及び、Ｄが、Ｘがアスパラギン酸由来のものであり、ｐ＝２であり、ｌがエステル官能基であり及びＹがデカノール由来のものであり；
ｑ＝４であり、ｎ＝１．０５であり、及びｍ＝０．０５である。
【０２０３】
一の態様において、本発明に従う組成物は、式Ｉ、ＩＩＩ又はＩＶで表される下記デキストラン：
オクチルグリシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
セチルグリシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
オクチルフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
３，７−ジメチル−１−オクチルフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
ジオクチルアスパルテートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
ジデシルアスパルテートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
ジラウリルアスパルテートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
Ｎ−（２−アミノエチル）ドデカンアミドにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
ラウリルグリシネートにより変性されたナトリウムデキストランスクシネート、
ジオクチルアスパルテートにより変性されたＮ−（ナトリウムメチルカルボキシレート）デキストランカルバメート、
ジラウリルアスパルテートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
２−（２−アミノエトキシ）エチルドデカノエートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
２−［２−｛２−（ドデカノイルアミノ）エトキシ｝エトキシ］エチルアミンにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
２−［２−｛２−（ヘキサデカノイルアミノ）エトキシ｝エトキシ］エチルアミンにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
コレステリルロイシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
コレステリル１−エチレンジアミンカルボキシレートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート、
コレステリルロイシネートにより変性されたＮ−（ナトリウムメチルカルボキシレート）デキストランカルバメート
からなる群より選択されるデキストランを含有する。
【０２０４】
一の態様において、本発明に従う組成物は、下記の式ＩＩで表されるデキストラン：
還元鎖末端への還元的アミノ化によりグラフトされたコレステリル１−エチレンジアミンカルボキシレートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレート
からなる群より選択されるデキストランを含有する。
【０２０５】
本発明はまた、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリン及び食事インスリンを含有する、ｐＨ６．６ないし７．８の単回投与製剤にも関する。
【０２０６】
本発明はまた、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリン及び食事インスリンを含有する、ｐＨ７ないし７．８の単回投与製剤にも関する。
【０２０７】
一の態様において、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンは、インスリングラルギンである。
【０２０８】
一の態様において、食事インスリンは、ヒュームリン（Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標））（ヒトインスリン）及びノボリン（Ｎｏｖｏｌｉｎ（登録商標））（ヒトインスリン）からなる群より選択される。
【０２０９】
一の態様において、食事インスリンは、インスリンリスプロ（ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））、インスリングルリシン（アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））及びインスリンアスパルト（ノボログ（Ｎｏｖｏｌｏｇ（登録商標））からなる群より選択される。
【０２１０】
ｐＨ６．６ないし７．８での、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶで表される多糖類による、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの溶解は、溶液の外観の変化により、裸眼で容易に観察及び制御され得る。
【０２１１】
ｐＨ７ないし７．８での、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶで表される多糖類による、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの溶解は、溶液の外観の変化により、裸眼で容易に観察及び制御され得る。
【０２１２】
さらには、且つまさに重要なことには、出願人会社は、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶで表される多糖類の存在中で溶解された等電点が５．８ないし８．５の基礎インスリンがその遅効的なインスリン作用を全く失わないということを確認し得ている。
【０２１３】
本発明に従う組成物の製造は、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの水溶液、食事インスリンの溶液及び水溶液の又は凍結乾燥の形態にある式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶで表される多糖類の容易な混合により為され得る、という利点を示す。必要であれば、製造のｐＨは、ｐＨ７に調節される。
【０２１４】
本発明に従う組成物の製造は、等電点が５．８ないし８．５である基礎インスリンの水溶液、水溶液の又は凍結乾燥の形態にある式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ又はＩＶで表される多糖類、及び水溶液の又は凍結乾燥の形態にある食事インスリンの容易な混合により為され得る、という利点を示す。
【０２１５】
一の態様において、食事インスリンと多糖類との混合物は、水溶液の又は凍結乾燥の形態にある食事インスリンとの混合前に、限外濾過により濃縮される。
【０２１６】
必要であれば、混合物の組成は、グリセロール、ｍ−クレゾール、塩化亜鉛及びツイーンのような賦形剤の濃縮液の混合物への添加によって、調節される。必要であれば、製剤のｐＨは７に調節される。
【０２１７】
図面の記載：
図１ないし６は、グルコースについての薬力学曲線の形態で得られた結果を与えている。縦軸は、注射後時間（分）の関数としてＤグルコース（ｍＭ）を表す。
【図面の簡単な説明】
【０２１８】
【図１】図１は、アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（□）と、本発明に従う組成物である多糖類４／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））（７５／２５）（■）の連続投与についての平均曲線の平均値＋標準偏差を示す図である。
【図２】図２は、アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））個別曲線（６頭のブタで試験した）を示す図である。
【図３】図３は、多糖類４／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））個別曲線（６頭のブタで試験した）を示す図である。
【図４】図４は、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（□）と、本発明に従う組成物である多糖類４／ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（■）の連続投与についての平均曲線の平均値＋標準偏差を示す図である。
【図５】図５は、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））個別曲線（６頭のブタで試験した）を示す図である。
【図６】図６は、多糖類４／ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））個別曲線（６頭のブタで試験した）を示す図である。
【図７】図７ないし１２は、グルコースについての薬力学曲線の形態で得られた結果を与えている。縦軸は、注射後時間（時間）の関数としてＤグルコース（ｍＭ）を表す。  図７は、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．１３ＩＵ／ｋｇ）及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．４ＩＵ／ｋｇ）（・・■・・）と、実施例Ｂ２８に記載された本発明に従う組成物（０．５３ＩＵ／ｋｇ）（−■−）の連続投与についての平均曲線の平均値＋標準偏差を示す図である。
【図８】図８は、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．１３ＩＵ／ｋｇ）及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．４ＩＵ／ｋｇ）（・・■・・）と、実施例Ｂ２７に記載された本発明に従う組成物（０．４７ＩＵ／ｋｇ）（−■−）の連続投与についての平均曲線の平均値＋標準偏差を示す図である。
【図９】図９は、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．１３ＩＵ／ｋｇ）及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．４ＩＵ／ｋｇ）（・・■・・）と、実施例Ｂ２９に記載された本発明に従う組成物（０．５３ＩＵ／ｋｇ）（−■−）の連続投与についての平均曲線の平均値＋標準偏差を示す図である。
【図１０】図１０は、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．１３ＩＵ／ｋｇ）及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．４ＩＵ／ｋｇ）（・・■・・）と、実施例Ｂ３１に記載された本発明に従う組成物（０．４８ＩＵ／ｋｇ）（−■−）の連続投与についての平均曲線の平均値＋標準偏差を示す図である。
【図１１】図１１は、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．１３ＩＵ／ｋｇ）及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．４ＩＵ／ｋｇ）（・・■・・）と、実施例Ｂ３０に記載された本発明に従う組成物（０．６４ＩＵ／ｋｇ）（−■−）の連続投与についての平均曲線の平均値＋標準偏差を示す図である。
【図１２】図１２は、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．１３ＩＵ／ｋｇ）及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．４ＩＵ／ｋｇ）（・・■・・）と、実施例Ｂ３２に記載された本発明に従う組成物（０．５３ＩＵ／ｋｇ）（−■−）の連続投与についての平均曲線の平均値＋標準偏差を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０２１９】
実施例
第Ａ部：多糖類
下記表１は、限定されない方法で、本発明に従う組成物において用いられる多糖類の例を与える。
【表１】
0005950477.tif 000008
【表２】
0005950477.tif 000009
【表３】
0005950477.tif 000010
【表４】
0005950477.tif 000011
【表５】
0005950477.tif 000012
【０２２０】
実施例Ａ１：多糖類１の製造
およそ１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝３８，ファルマコスモス（Ｐｈａｒｍａｃｏｓｍｏｓ））の１６ｇ（即ち、ヒドロキシル基の２９６ｍｍｏｌ）を、水中に溶解して、４２０ｇ／Ｌとした。１０Ｎ  ＮａＯＨの３０ｍＬ（２９６ｍｍｏｌ）を、当該溶液に添加した。混合液を３５℃まで上げ、そしてその後、クロロ酢酸ナトリウムの４６ｇ（３９６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物の温度を、０．５℃／分で６０℃まで上げ、そしてその後、６０℃にて１００分間維持した。反応媒体を、２００ｍＬの水で希釈し、酢酸を用いて中和し、そして水の６倍容量に対する５ｋＤａのＰＥＳメンブランを通した限外濾過により精製した。最終溶液を、乾燥抽出物によりアッセイして、多糖類の濃度を決定し、そしてその後、５０／５０（Ｖ／Ｖ）の水／アセトン中の酸／塩基滴定によりアッセイして、グルコシド単位当りのメチルカルボキシレートの平均数を決定した。
【０２２１】
乾燥抽出物に従うと：［多糖類］＝３１．５ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：グルコシド単位当りのメチルカルボキシレート単位の平均数は１．１であった。
【０２２２】
デキストランメチルカルボン酸を得るために、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレート溶液をプロライト（Ｐｕｒｏｌｉｔｅ）樹脂（アニオン性）に通し、その後それを１８時間で凍結乾燥した。
【０２２３】
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載される方法に従い、オクチルグリシネートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
【０２２４】
デキストランメチルカルボン酸の１０ｇ（メチルカルボン酸の４４．８６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中に溶解して６０ｇ／Ｌとし、そしてその後、０℃まで冷却した。オクチルグリシネートパラトルエンスルホン酸塩の３．２３ｇ（８．９７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ中に懸濁して１００ｇ／Ｌとした。その後、トリエタノールアミンの０．９１ｇ（８．９７ｍｍｏｌ）を当該懸濁液に添加した。一旦、多糖類溶液を０℃とし、その後、ＤＭＦ中のＮＭＭ（５．２４ｇ，５１．８ｍｍｏｌ）の溶液（５３０ｇ／Ｌ）及びＥｔＯＣＯＣｌの５．６２ｇ（５１．８ｍｍｏｌ）を添加した。１０分間の反応後、オクチルグリシネート懸濁液を添加した。その後、当該媒体を１０℃にて４５分間維持した。その後、当該媒体を３０℃まで加熱した。イミダゾールの溶液（水１７ｍＬ中の１０．３８ｇ）及び水の５２ｍＬを、反応媒体に添加した。多糖類溶液を、０．９％ＮａＣｌ溶液の１５倍容量及び水の５倍容量に対する１０ｋＤａのＰＥＳメンブランに通して限外濾過した。当該多糖類溶液の濃度を、乾燥抽出物により決定した。溶液の画分を凍結乾燥し、そしてメチルカルボキシレートの置換度を決定してグルコシド単位当りのオクチルグリシネートを与えるために、Ｄ２Ｏ中の１Ｈ  ＮＭＲにより、解析した。
【０２２５】
乾燥抽出物に従うと：［多糖類１］＝３６．４ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝０．９であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．２であった。
【０２２６】
実施例Ａ２：多糖類２の製造
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、セチルグリシネートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
およそ５ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝１９，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、セチルグリシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類２］＝１５．１ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．０５であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０５であった。
【０２２７】
実施例Ａ３：多糖類３の製造
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、オクチルフェニルアラニネートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
およそ１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝３８，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、オクチルフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類３］＝２７．４ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．０であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．１であった。
【０２２８】
実施例Ａ４：多糖類４の製造
およそ５ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝１９，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ３に記載されているのと類似の方法により、オクチルフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類４］＝２１．８ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．０であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．２であった。
【０２２９】
実施例Ａ５：多糖類５の製造
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、３，７−ジメチル−１−オクチルフェニルアラニネートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
およそ１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝３８，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、３，７−ジメチル−１−オクチルフェニルアラニネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類５］＝２４．３ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．０であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．１であった。
【０２３０】
実施例Ａ６：多糖類６の製造
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、ジオクチルアスパルテートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
およそ１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝３８，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、ジオクチルアスパルテートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類６］＝２２．２ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．０５であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０５であった。
【０２３１】
実施例Ａ７：多糖類７の製造
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、ジデシルアスパルテートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
およそ１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝３８，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、ジデシルアスパルテートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類７］＝１９．８ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．０５であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０５であった。
【０２３２】
実施例Ａ８：多糖類８の製造
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、ジラウリルアスパルテートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
およそ５ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝１９，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、ジラウリルアスパルテートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類８］＝２２．８ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．０５であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０５であった。
【０２３３】
実施例Ａ９：多糖類９の製造
米国特許第２３８７２０１号明細書に記載されている方法に従い、ドデカン酸のメチルエステル（シグマ（Ｓｉｇｍａ））及びエチレンジアミン（ロス（Ｒｏｔｈ））から、Ｎ−（２−アミノエチル）ドデカンアミドを得た。
およそ１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝３８，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、Ｎ−（２−アミノエチル）ドデカンアミドにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類９］＝２３．８ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．０であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．１であった。
【０２３４】
実施例Ａ１０：多糖類１０の製造
Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｃｈａｖｅｓ他，１９９８年（Ｍａｎｕｅｌ他，Ｐｏｌｙｍｅｒ，１９９８年，３９（１３），第２７５１頁−第２７５７頁による文献に記載されている方法に従い、およそ１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝３８，ファルマコスモス）から、ナトリウムデキストランスクシネートを得た。Ｄ２Ｏ／ＮａＯＤ中の１Ｈ  ＮＭＲに従うと、グルコシド単位当りのスクシネート基の平均数は、１．４であった。
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、ラウリルグリシネートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、ラウリルグリシネートにより変性されたナトリウムデキストランスクシネートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類１０］＝１６．１ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．３であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．１であった。
【０２３５】
実施例Ａ１１：多糖類１１の製造
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、ジオクチルアスパルテートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
およそ１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝３８，ファルマコスモス）の１２ｇ（即ち、ヒドロキシル基の０．２２ｍｏｌ）を、ＤＭＦ／ＤＭＳＯ混合物中に溶解した。当該混合物を撹拌しながら８０℃とした。１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタンの３．３２ｇ（０．０３ｍｏｌ）及びその後にエチルイソシアナートアセテートの１４．３５ｇ（０．１１ｍｏｌ）を段階的に導入した。５時間反応させた後、当該媒体を水中に希釈し、そして、０．１Ｎ  ＮａＯＨ、０．９％ＮａＣｌ及び水に対する５ｋＤａのＰＥＳメンブランに通してダイアフィルトレーション（ｄｉａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）により精製した。乾燥抽出物により最終溶液をアッセイして、多糖類の濃度を決定し；そしてその後、５０／５０（Ｖ／Ｖ）の水／アセトン中の酸／塩基滴定によりアッセイして、グルコシド単位当りのＮ−メチルカルボキシレートカルバメートの平均数を決定した。
【０２３６】
乾燥抽出物に従うと：［多糖類］＝３０．５ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：グルコシド単位当りのＮ−メチルカルボキシレートカルバメートの平均数は、１．４であった。
【０２３７】
実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法に従い、ジオクチルアスパルテートにより変性されたＮ−（ナトリウムメチルカルボキシレート）デキストランカルバメートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類１１］＝１７．８ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．３であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．１であった。
【０２３８】
実施例Ａ１２：多糖類１２の製造
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、ジラウリルアスパルテートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
およそ１ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝４，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、ジラウリルアスパルテートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類１２］＝１２．３ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝０．９６であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０７であった。
【０２３９】
実施例Ａ１３：多糖類１３の製造
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、２−（２−アミノエトキシ）エチルドデカノエートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
およそ１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝３８，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、２−（２−アミノエトキシ）エチルドデカノエートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類１３］＝２５．６ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．０であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．１であった。
【０２４０】
実施例Ａ１４：多糖類１４の製造
米国特許第２３８７２０１号明細書に記載されている方法に従い、ドデカン酸のメチルエステル（シグマ）及びトリエチレングリコールジアミン（ハンツマン（Ｈｕｎｔｓｍａｎ））から、２−［２−｛２−（ドデカノイルアミノ）エトキシ｝エトキシ］エチルアミンを得た。
およそ１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝３８，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、２−［２−｛２−（ドデカノイルアミノ）エトキシ｝エトキシ］エチルアミンにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類１４］＝２４．９ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．０であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．１であった。
【０２４１】
実施例Ａ１５：多糖類１５の製造
米国特許第２３８７２０１号明細書に記載されている方法に従い、パルミチン酸のメチルエステル（シグマ）及びトリエチレングリコールジアミン（ハンツマン）から、２−［２−｛２−（ヘキサデカノイルアミノ）エトキシ｝エトキシ］エチルアミンを得た。
およそ１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝３８，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、２−［２−｛２−（ヘキサデカノイルアミノ）エトキシ｝エトキシ］エチルアミンにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類１５］＝２２．２ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．０５であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０５であった。
【０２４２】
実施例Ａ１６：多糖類１６の製造
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、セチルグリシネートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
およそ５ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝１９，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、セチルグリシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類１３］＝２３ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．０５であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０５であった。
【０２４３】
実施例Ａ１７：多糖類１７の製造
およそ１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝３８，ファルマコスモス）の１０ｇ（即ち、ヒドロキシル基の１８５ｍｍｏｌ）を、水中に溶解して４２０ｇ／Ｌとした。１０Ｎ  ＮａＯＨの１９ｍＬ（１８５ｍｍｏｌ）を当該反応液に添加した。当該混合物を３５℃とし、そしてその後、クロロ酢酸ナトリウムの８．６ｇ（７４ｍｍｏｌ）を添加した。当該反応混合物の温度を０．５℃／分で６０℃とし、そしてその後、６０℃にて１００分間維持した。当該反応混合物を水２００ｍＬで希釈し、酢酸を用いて中和し、そして、６倍容量の水に対する５ｋＤａのＰＥＳメンブランに通した限外濾過により、精製した。乾燥抽出物により最終溶液をアッセイして、多糖類の濃度を決定し、そしてその後、５０／５０（Ｖ／Ｖ）の水／アセトン中の酸／塩基滴定によりアッセイして、グルコシド単位当りのメチルカルボキシレート単位の平均数を決定した。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類］＝３５．１ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：グルコシド単位当りのメチルカルボキシレート単位の平均数は、０．４２であった。
【０２４４】
デキストランメチルカルボン酸を得るために、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレート溶液をプロライト樹脂（アニオン性）に通し、その後それを１８時間で凍結乾燥した。
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、セチルグリシネートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、セチルグリシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類１７］＝１８ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝０．３７であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０５であった。
【０２４５】
実施例Ａ１８：多糖類１８の製造
多糖類１について記載されているのと類似の方法に従い、５ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝１９，ファルマコスモス）から、グルコシド単位当り１．１０のメチルカルボキシレートの置換度を特徴とするナトリウムデキストランメチルカルボキシレートの１０ｇを合成し、そしてその後、凍結乾燥した。
グルコシド単位当り１．０５のメチルカルボキシレートの置換度を特徴とするナトリウムデキストランメチルカルボキシレートの８ｇ（即ち、ヒドロキシル基の６４ｍｍｏｌ）を水中に溶解して、１０００ｇ／Ｌとした。１０Ｎ  ＮａＯＨの６ｍL（６４ｍｍｏｌ）を添加した。当該混合物を３５℃に加熱し、そして、クロロ酢酸ナトリウムの７．６ｇ（６５ｍｍｏｌ）を添加した。当該混合物を、段階的に６０℃の温度とし、そして当該温度にてさらに１００分間維持した。当該混合物を水で希釈し、酢酸を用いて中和し、そしてその後、水に対する５ｋＤａのＰＥＳメンブランに通した限外濾過により精製した。乾燥抽出物により最終溶液をアッセイして、多糖類の濃度を決定し、そしてその後、５０／５０（Ｖ／Ｖ）の水／アセトン中の酸／塩基滴定によりアッセイして、グルコシド単位当りのメチルカルボキシレート単位の平均数を決定した。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類］＝４５．８ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：グルコシド単位当りのメチルカルボキシレート単位の平均数は、１．６５であった。
【０２４６】
デキストランメチルカルボン酸を得るために、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレート溶液をプロライト樹脂（アニオン性）に通し、その後それを１８時間で凍結乾燥した。
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、コレステリルロイシネートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、コレステリルロイシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類１８］＝２１ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．６１であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０４であった。
【０２４７】
実施例Ａ１９：多糖類１９の製造
およそ５ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝１９，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、コレステリルロイシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類１９］＝１９．４ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．０６であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０４であった。
【０２４８】
実施例Ａ２０：多糖類２０の製造
およそ５ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝１９，ファルマコスモス）の１６ｇ（即ち、ヒドロキシル基の２９６ｍｍｏｌ）を、水中に溶解して４２０ｇ／Ｌとした。１０Ｎ  ＮａＯＨの３０ｍＬ（２９６ｍｍｏｌ）を当該反応液に添加した。当該混合物を３５℃とし、そしてその後、クロロ酢酸ナトリウムの２６ｇ（２２２ｍｍｏｌ）を添加した。当該反応媒体の温度を段階的に６０℃とし、そしてその後、６０℃にて１００分間維持した。当該反応媒体を水２００ｍＬで希釈し、酢酸を用いて中和し、そして、水に対する５ｋＤａのＰＥＳメンブランに通した限外濾過により、精製した。乾燥抽出物により最終溶液をアッセイして、多糖類の濃度を決定し、そしてその後、５０／５０（Ｖ／Ｖ）の水／アセトン中の酸／塩基滴定によりアッセイして、グルコシド単位当りのメチルカルボキシレート単位の平均数を決定した。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類］＝３３．１ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：グルコシド単位当りのメチルカルボキシレート単位の平均数は、０．７０であった。
【０２４９】
デキストランメチルカルボン酸を得るために、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレート溶液をプロライト樹脂（アニオン性）に通し、その後それを１８時間で凍結乾燥した。
実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、コレステリルロイシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類２０］＝１８．９ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝０．６６であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０４であった。
【０２５０】
実施例Ａ２１：多糖類２１の製造
およそ５ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝１９，ファルマコスモス）の１６ｇ（即ち、ヒドロキシル基の２９６ｍｍｏｌ）を、水中に溶解して４２０ｇ／Ｌとした。１０Ｎ  ＮａＯＨの３０ｍＬ（２９６ｍｍｏｌ）を当該反応液に添加した。当該混合物を３５℃とし、そしてその後、クロロ酢酸ナトリウムの１８ｇ（１５８ｍｍｏｌ）を添加した。当該反応媒体の温度を段階的に６０℃とし、そしてその後、６０℃にて１００分間維持した。当該反応媒体を水で希釈し、酢酸を用いて中和し、そして、水に対する１ｋＤａのＰＥＳメンブランに通した限外濾過により、精製した。乾燥抽出物により最終溶液をアッセイして、多糖類の濃度を決定し、そしてその後、５０／５０（Ｖ／Ｖ）の水／アセトン中の酸／塩基滴定によりアッセイして、グルコシド単位当りのメチルカルボキシレート単位の平均数を決定した。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類］＝５２．６ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：グルコシド単位当りのメチルカルボキシレート単位の平均数は、０．５０であった。
【０２５１】
デキストランメチルカルボン酸を得るために、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレート溶液をプロライト樹脂（アニオン性）に通し、その後それを１８時間で凍結乾燥した。
実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、コレステリルロイシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類２１］＝１８．９ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝０．４６であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０４であった。
【０２５２】
実施例Ａ２２：多糖類２２の製造
およそ１ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝４，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１８に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１８に記載されているのと類似の方法により、コレステリルロイシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類２２］＝２０．２ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．６１であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０４であった。
【０２５３】
実施例Ａ２３：多糖類２３の製造
特許文献（秋吉他，国際公開第２０１０／０５３１４０号公報）に記載されている方法に従い、コレステリル１−エチレンジアミンカルボキシレートヒドロクロリドを得た。
およそ５ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝１９，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１８に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１８に記載されているのと類似の方法により、コレステリル１−エチレンジアミンカルボキシレートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類２３］＝２０．１ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．６１であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０４であった。
【０２５４】
実施例Ａ２４：多糖類２４の製造
およそ５ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝１９，ファルマコスモス）の１２ｇ（即ち、ヒドロキシル基の０．２２ｍｏｌ）を、ＤＭＦ／ＤＭＳＯ混合物中に溶解した。当該混合物を撹拌しながら８０℃とした。１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタンの３．３２ｇ（０．０３ｍｏｌ）及びその後にエチルイソシアナートアセテートの２６．８ｇ（０．２１ｍｏｌ）を段階的に導入した。５時間の反応後、当該媒体を水中に希釈し、そして０．１Ｎ  ＮａＯＨ、０．９％ＮａＣｌ及び水に対する５ｋＤａのＰＥＳメンブランに通したダイアフィルトレーションにより、精製した。乾燥抽出物により最終溶液をアッセイして、多糖類の濃度を決定し；そしてその後、５０／５０（Ｖ／Ｖ）の水／アセトン中の酸／塩基滴定によりアッセイして、グルコシド単位当りのＮ−メチルカルボキシレートカルバメート単位の平均数を決定した。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類］＝３０．１ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：グルコシド単位当りのＮ−メチルカルボキシレートカルバメート単位の平均数は、２．０であった。
【０２５５】
実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、コレステリルロイシネートにより変性されたＮ−（ナトリウムメチルカルボキシレート）デキストランカルバメートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類２４］＝１７．９ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．９６であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０４であった。
【０２５６】
実施例Ａ２５：多糖類２５の製造
特許文献（秋吉他，国際公開第２０１０／０５３１４０号公報）に記載されている方法に従い、コレステリル１−エチレンジアミンカルボキシレートヒドロクロリドを得た。
およそ５ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝１９，ファルマコスモス，構造鎖末端の３．２ｍｍｏｌ）の１０ｇを、８０℃のＤＭＳＯに溶解した。コレステリル１−エチレンジアミンカルボキシレートヒドロクロリドの４．８ｇ（９．５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミンの０．９６ｇ（９．５ｍｍｏｌ）及びナトリウムシアノボロハイドライドの２．０ｇ（３２ｍｍｏｌ）を、反応媒体に添加し、それを８０℃にて２４時間撹拌した。冷却後、当該混合物を、ジクロロメタンそしてその後にアセトンから沈澱させ、そして真空下に乾燥した。１Ｈ  ＮＭＲに従い、コレステリル１−エチレンジアミンカルボキシレートにより構造鎖末端で変性されたデキストランを得た。当該コレステリル１−エチレンジアミンカルボキシレートにより構造鎖末端で変性されたデキストランを用いて、実施例Ａ１８に記載されているのと類似の方法により、グルコシド単位当り１．６５のメチルカルボキシレートの置換度を特徴とし、且つコレステリル１−エチレンジアミンカルボキシレートにより構造鎖末端で変性された、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成した。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類２５］＝１３．７ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．６５であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：各々のポリマー鎖は、還元鎖末端にグラフトされたコレステリル１−エチレンジアミンカルボキシレート基を有していた。
【０２５７】
実施例Ａ２６：多糖類２６の製造
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、コレステリルロイシネートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
およそ１０ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝３８，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、コレステリルロイシネートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類２６］＝２６．６ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝０．９９であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０５であった。
【０２５８】
実施例Ａ２７：多糖類２７の製造
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、ジラウリルアスパルテートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
およそ１ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝４，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１８に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、ジラウリルアスパルテートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類２７］＝１６．７ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．４１であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．１６であった。
【０２５９】
実施例Ａ２８：多糖類２８の製造
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、ジラウリルアスパルテートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
およそ１ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝４，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１８に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、ジラウリルアスパルテートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類２８］＝２５ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．５０であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０７であった。
【０２６０】
実施例Ａ２９：多糖類２９の製造
米国特許第４８２６８１８号明細書に記載されている方法に従い、ジデシルアスパルテートパラトルエンスルホン酸塩を得た。
およそ１ｋｇ／ｍｏｌの質量平均分子量を有するデキストラン（ｑ＝４，ファルマコスモス）を用いて、実施例Ａ１８に記載されている方法に従い、ナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを合成し、実施例Ａ１に記載されているのと類似の方法により、ジデシルアスパルテートにより変性されたナトリウムデキストランメチルカルボキシレートを得た。
乾燥抽出物に従うと：［多糖類２９］＝１５ｍｇ／ｇであった。
酸／塩基滴定に従うと：ｎ＝１．０５であった。
１Ｈ  ＮＭＲに従うと：ｍ＝０．０５であった。
【０２６１】
実施例
第Ｂ部：本発明に従う組成物の特性の証明
【０２６２】
実施例Ｂ１：１００ＩＵ／ｍＬの速効性インスリン類似体の溶液（ノボログ（ＮｏｖｏＬｏｇ（登録商標）））
当該溶液は、米国においてノボログ（ＮｏｖｏＬｏｇ（登録商標））の名称の下で、そして欧州においてノボラピッド（Ｎｏｖｏｒａｐｉｄ（登録商標））の名称の下で、ノボ  ノルディスク社により販売されている、市販のインスリンアスパルトの溶液である。当該製品は、速効性インスリン類似体である。
【０２６３】
実施例Ｂ２：１００ＩＵ／ｍＬの速効性インスリン類似体の溶液（ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標）））
当該溶液は、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））の名称の下で、エリ  リリー社により販売されている、市販のインスリンリスプロの溶液である。当該製品は、速効性インスリン類似体である。
【０２６４】
実施例Ｂ３：１００ＩＵ／ｍＬの速効性インスリン類似体の溶液（アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標）））
当該溶液は、アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））の名称の下で、サノフィ−アベンチス社により販売されている、市販のインスリングルリシンの溶液である。当該製品は、速効性インスリン類似体である。
【０２６５】
実施例Ｂ４：１００ＩＵ／ｍＬの遅効性インスリン類似体の溶液（ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標）））
当該溶液は、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の名称の下で、サノフィ−アベンチス社により販売されている、市販のインスリングラルギンの溶液である。当該製品は、遅効性インスリン類似体である。
【０２６６】
実施例Ｂ５：１００ＩＵ／ｍＬのヒトインスリンの溶液（アクトラピッド（ＡｃｔＲａｐｉｄ（登録商標）））
当該溶液は、アクトラピッド（ＡｃｔＲａｐｉｄ（登録商標））の名称の下の、ノボ  ノルディスク社からの市販の溶液である。当該製品はヒトインスリンである。
【０２６７】
実施例Ｂ６：置換されたデキストランを用いた、１００ＩＵ／ｍＬでの及びｐＨ７でのランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の溶解
実施例Ａ４に記載されている多糖類４の２０ｍｇを正確に秤量した。当該凍結乾燥物を、市販製剤のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の２ｍＬ中に溶解させた。一時的な沈澱が現れたが、およそ３０分後には当該溶液は清澄となった。当該溶液のｐＨは６．３であった。０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨを７に調節した。当該清澄な溶液を、０．２２μｍフィルターにより濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【０２６８】
実施例Ｂ７：ｐＨ７での、置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））の７５／２５組成物の製造
ｐＨ７の組成物の１ｍＬを作製するために、アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））（市販製剤）の０．２５ｍＬを、実施例Ｂ６において製造された多糖類４／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））溶液の０．７５ｍＬに添加した。当該組成物は清澄であり、これら配合条件下において、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））及びアピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））の良好な溶解性を証明した。当該清澄な溶液を、０．２２μｍフィルターにより濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【０２６９】
実施例Ｂ８：ｐＨ７での、置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））の７５／２５組成物の製造
ｐＨ７の組成物の１ｍＬを作製するために、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））（市販製剤）の０．２５ｍＬを、実施例Ｂ６において製造された多糖類４／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））溶液の０．７５ｍＬに添加した。当該組成物は清澄であり、これら配合条件下において、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））及びヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））の良好な溶解性を証明した。当該清澄な溶液を、０．２２μｍフィルターにより濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【０２７０】
実施例Ｂ９：ｐＨ７での、置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ノボログ（ＮｏｖｏＬｏｇ（登録商標））の７５／２５組成物の製造
ｐＨ７の組成物の１ｍＬを作製するために、ノボログ（ＮｏｖｏＬｏｇ（登録商標））（市販製剤）の０．２５ｍＬを、実施例Ｂ６において製造された多糖類４／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））溶液の０．７５ｍＬに添加した。当該組成物は清澄であり、これら配合条件下において、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））及びノボログ（ＮｏｖｏＬｏｇ（登録商標））の良好な溶解性を証明した。当該清澄な溶液を、０．２２μｍフィルターにより濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【０２７１】
実施例Ｂ１０：ｐＨ７での、置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／アクトラピッド（ＡｃｔＲａｐｉｄ（登録商標））の７５／２５組成物の製造
ｐＨ７の組成物の１ｍＬを作製するために、アクトラピッド（ＡｃｔＲａｐｉｄ（登録商標））（市販製剤）の０．２５ｍＬを、実施例Ｂ６において製造された多糖類４／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））溶液の０．７５ｍＬに添加した。当該組成物は清澄であり、これら配合条件下において、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））及びアクトラピッド（ＡｃｔＲａｐｉｄ（登録商標））の良好な溶解性を証明した。当該清澄な溶液を、０．２２μｍフィルターにより濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【０２７２】
実施例Ｂ１１：ｐＨ７での、置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））の６０／４０組成物の製造
ｐＨ７の組成物の１ｍＬを作製するために、アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））（市販製剤）の０．４ｍＬを、実施例Ｂ６において製造された多糖類４／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））溶液の０．６ｍＬに添加した。当該組成物は清澄であり、これら配合条件下において、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））及びアピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））の良好な溶解性を証明した。当該清澄な溶液を、０．２２μｍフィルターにより濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【０２７３】
実施例Ｂ１２：ｐＨ７での、置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））の４０／６０組成物の製造
ｐＨ７の組成物の１ｍＬを作製するために、アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））（市販製剤）の０．６ｍＬを、実施例Ｂ６において製造された多糖類４／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））溶液の０．４ｍＬに添加した。当該組成物は清澄であり、これら配合条件下において、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））及びアピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））の良好な溶解性を証明した。当該清澄な溶液を、０．２２μｍフィルターにより濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【０２７４】
実施例Ｂ１３：ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の沈澱
ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の１ｍＬを、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）の２０ｍｇ／ｍＬを含有するＰＢＳ溶液の２ｍＬに添加した。当該ＰＢＳ／ＢＳＡ混合物が、皮下媒体の組成をシミュレートしている。ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の挙動の機構に良く合致する沈澱が現れた（ｐＨの上昇による注射剤の沈澱）。
上澄みから沈殿物を分離するために、４０００回転／分で遠心分離を行った。その後、上澄み中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））をアッセイした。この結果、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の８６％が沈澱形態で見出された。
【０２７５】
実施例Ｂ１４：置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））組成物の沈澱
実施例Ｂ６で製造した多糖類４／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））溶液の１ｍＬを、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）の２０ｍｇ／ｍＬを含有するＰＢＳ溶液の２ｍＬに添加した。当該ＰＢＳ／ＢＳＡ混合物が、皮下媒体の組成をシミュレートしている。沈澱が現れた。
上澄みから沈殿物を分離するために、４０００回転／分で遠心分離を行った。その後、上澄み中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））をアッセイした。この結果、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の８６％が沈澱形態で見出された。ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の沈殿のパーセンテージは、実施例Ｂ１３に記載される対照について得られたものと同一であった。
【０２７６】
ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の１００ＩＵ／ｍＬ当りの多糖類の１０ｍｇ／ｍＬの同様の濃度での他のデキストランについて、実施例Ｂ６及びＢ１４に記載されているのと同一の溶解及び沈澱試験を行った。凍結乾燥形態にある多糖類の２０ｍｇを正確に秤量した。当該凍結乾燥物を、市販製剤のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の２ｍＬ中に溶解させた。一時的な沈澱が現れたが、およそ３０分から２、３時間後には当該溶液は清澄となった（多糖類の性質による）。当該溶液のｐＨは６．３であった。０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨを７に調節した。当該清澄な溶液を、０．２２μｍフィルターにより濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。結果を表２に並べた。
【表６】
0005950477.tif 000013
【０２７７】
実施例Ｂ１５：ｐＨ７での、置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））の７５／２５組成物の沈澱
実施例Ｂ７において製造された置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））の７５／２５組成物の１ｍＬ（多糖類の７．５ｍｇ／ｍＬ、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の７５ＩＵ／ｍＬ及びアピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））の２５ＩＵ／ｍＬを含有）を、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）の２０ｍｇ／ｍＬを含有するＰＢＳ溶液の２ｍＬに添加した。当該ＰＢＳ／ＢＳＡ混合物が、皮下媒体の組成をシミュレートしている。沈澱が現れた。
上澄みから沈殿物を分離するために、４０００回転／分で遠心分離を行った。その後、上澄み中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））をアッセイした。ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の沈殿のパーセンテージは、実施例Ｂ１３に記載される対照について得られたものと同一であった。
【０２７８】
実施例Ｂ１６：種々の組成物の沈澱、種々の置換されたデキストランの性質
他の置換されたデキストランの存在中で、実施例Ｂ１５の同様の条件下、他の試験を行った。
【０２７９】
結果を下記表３にまとめ、そしてランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の溶解及び沈澱が保持されていたことが観察された。
【表７】
0005950477.tif 000014
【０２８０】
実施例Ｂ１７：種々の組成物の沈澱、種々の食事インスリンの性質
置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／食事インスリン組成物の１ｍＬ（多糖類の７．５ｍｇ／ｍＬ）、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の７５ＩＵ／ｍＬ及び食事インスリンの２５ＩＵ／ｍＬ含有）を作製するために、実施例Ｂ６において製造した多糖類４／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））溶液の０．７５ｍＬを食事インスリンの０．２５ｍＬと混合することにより、組成物を製造した。
当該組成物を、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）の２０ｍｇ／ｍＬを含有するＰＢＳ溶液の２ｍＬに添加した。当該ＰＢＳ／ＢＳＡ混合物が、皮下媒体の組成をシミュレートしている。沈澱が現れた。
上澄みから沈殿物を分離するために、４０００回転／分で遠心分離を行った。その後、上澄み中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））をアッセイした。試験された４種の食事インスリンの存在中において、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））は、およそ９０％まで沈澱した。このランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の沈澱のパーセンテージは、実施例Ｂ１３に記載されている対照と類似していた。結果を表４に並べた。
【表８】
0005950477.tif 000015
【０２８１】
実施例Ｂ１８：遅効性インスリン類似体（グラルギン）の濃縮溶液の製造
ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の名称の下でサノフィ−アベンチス（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）社により販売されている、インスリングラルギンの市販溶液を、再生セルロースから作られた３ｋＤａメンブラン（ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）社により販売されているアミコン（Ａｍｉｃｏｎ（登録商標））ウルトラ（Ｕｌｔｒａ）−１５）に通した限外濾過によって濃縮した。当該限外濾過段階の結びにおいて、逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）により保留物中のインスリングラルギンの濃度をアッセイした。その後、所望の最終濃度を得るために、市販の１００ＩＵ／ｍＬグラルギン溶液の添加により、インスリングラルギンの最終濃度を調節した。当該方法によって、１００ＩＵ／ｍＬを超える種々の濃度（Ｃｇｌａｒｇｉｎｅで示される）、例えば、Ｃｇｌａｒｇｉｎｅ＝２００、２５０、３００及び３３３ＩＵ／ｍＬのグラルギン濃縮溶液を得ることができた。当該濃縮溶液を、０．２２μｍフィルターにより濾過し、そしてその後、＋４℃で保存した。
【０２８２】
実施例Ｂ１９：速効性インスリン類似体（リスプロ）の市販溶液の透析
ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））の名称の下でリリー社により販売されている、インスリンリスプロの市販溶液を、再生セルロースから作られた３ｋＤａメンブラン（ミリポア社により販売されているアミコン（Ａｍｉｃｏｎ（登録商標））ウルトラ（Ｕｌｔｒａ）−１５）に通した限外濾過によって透析した。当該透析は、ｐＨ７の１ｍＭリン酸緩衝液中で行った。当該透析段階の結びにおいて、逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）により、保留物中のリスプロの濃度Ｃｄｉａｌｙｓｅｄ  Ｈｕｍａｌｏｇを決定した。当該透析された溶液を、−８０℃の冷凍庫中で保存した。
【０２８３】
実施例Ｂ２０：市販の形態にある速効性インスリン類似体（リスプロ）の溶液の凍結乾燥
市販の形態にある１００ＩＵ／ｍＬの濃度の速効性インスリンリスプロの溶液の容量ＶＨｕｍａｌｏｇを、予めオートクレーブ中で滅菌したリオガード（Ｌｙｏｇｕａｒｄ（登録商標））内に置いた。リオガード（Ｌｙｏｇｕａｒｄ（登録商標））を、およそ１時間、−８０℃の冷凍庫内に置いた後、２０℃の温度且つ０．３１ｍｂａｒの圧力にて、一晩凍結乾燥にかけた。
こうして得られた滅菌凍結乾燥物を、周囲温度で保存した。
【０２８４】
実施例Ｂ２１：速効性インスリン類似体（リスプロ）の透析された市販溶液の凍結乾燥
Ｃｄｉａｌｙｓｅｄ  Ｈｕｍａｌｏｇの濃度の実施例Ｂ１９に従い得られた速効性インスリンリスプロの溶液の容量ＶＨｕｍａｌｏｇを、予めオートクレーブ中で滅菌したリオガード（Ｌｙｏｇｕａｒｄ（登録商標））内に置いた。リオガード（Ｌｙｏｇｕａｒｄ（登録商標））を、およそ１時間、−８０℃の冷凍庫内に置いた後、２０℃の温度且つ０．３１ｍｂａｒの圧力にて、一晩凍結乾燥にかけた。
こうして得られた滅菌凍結乾燥物を、周囲温度で保存した。
【０２８５】
実施例Ｂ２２：液体形態（溶液形態）にあるグラルギン及び固体形態（凍結乾燥）にある多糖類を用いた方法に従った、置換されたデキストランを用いたｐＨ７の置換されたデキストラン／グラルギン組成物の製造
多糖類１８の質量Ｗｐｏｌｙｓ．を正確に秤量した。当該凍結乾燥物を、実施例Ｂ１８に従い製造したグラルギンの濃縮溶液の容量Ｖｇｌａｒｇｉｎｅ中に溶解させ、多糖類の濃度Ｃｐｏｌｙｓ．（ｍｇ／ｍＬ）＝Ｗｐｏｌｙｓ．／Ｖｇｌａｒｇｉｎｅ及びグラルギンの濃度Ｃｇｌａｒｇｉｎｅ（ＩＵ／ｍＬ）を示す組成物を得た。当該溶液は乳白色であった。当該溶液のｐＨはおよそ６．３であった。濃縮ＮａＯＨの添加によって、ｐＨを７に調節し、そしてその後、当該溶液を、３７℃のオーブン内でおよそ１時間、静止状態に置いた。当該視覚的に清澄な溶液の容量Ｖｐｏｌｙｓ．／ｇｌａｒｇｉｎｅを、＋４℃に置いた。
【０２８６】
実施例Ｂ２３：液体形態（溶液形態）にあるグラルギン及び液体形態（溶液）にある多糖類を用いた方法に従った、置換されたデキストランを用いたｐＨ７の置換されたデキストラン／グラルギン組成物の製造
ｍ−クレゾール、グリセロール及びツイーン２０の濃縮溶液を、濃度Ｃｐｏｌｙｓ．ｍｏｔｈｅｒを示すｐＨ７の多糖類２０の母液に添加して、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の市販溶液の１０ｍＬ容器に記載されているのと等しい含有量の賦形剤の存在中の、濃度Ｃｐｏｌｙｓ．ｍｏｔｈｅｒ／ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（ｍｇ／ｍＬ）を有する多糖類溶液を得た。
１００ＩＵ／ｍＬの濃度のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の名称の下で販売されている、遅効性インスリングラルギンの市販溶液の容量ＶＬａｎｔｕｓを、滅菌フラスコ内の濃度Ｃｐｏｌｙｓ．ｍｏｔｈｅｒ／ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（ｍｇ／ｍＬ）の多糖類溶液の容量Ｖｐｏｌｙｓ．ｍｏｔｈｅｒ／ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓに添加した。混濁した外観であった。１Ｍ  ＮａＯＨの添加によってｐＨをｐＨ７に調節し、そして、当該溶液を、３７℃のオーブン内でおよそ１時間、静止状態に置いた。当該視覚的に清澄な溶液を、＋４℃に置いた。
【０２８７】
実施例Ｂ２４：希釈した組成物の濃度についての方法に従った、置換されたデキストランを用いた、ｐＨ＝７の、濃縮された多糖類／グラルギン組成物の製造
実施例Ｂ２３に記載されるｐＨ７の希釈した多糖類２０／グラルギン組成物を、再生セルロースから作られた３ｋＤａメンブラン（ミリポア社により販売されているアミコン（Ａｍｉｃｏｎ（登録商標））ウルトラ（Ｕｌｔｒａ）−１５）に通した限外濾過によって濃縮した。当該限外濾過段階の結びにおいて、保留物は清澄であり、且つ、組成物中のインスリングラルギンの濃度を、逆相クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によりアッセイした。必要に応じ、その後、組成物中のインスリングラルギンの濃度を、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））市販溶液の１０ｍＬ容器に記載されているのと等しい濃度を各々について示すｍ−クレゾール／グリセロール／ツイーン２０賦形剤の溶液中に希釈することによって、所望の数値に調節した。ｐＨ７の当該溶液は視覚的に清澄であり、グラルギン濃度Ｃｇｌａｒｇｉｎｅ（ＩＵ／ｍＬ）を示し、且つ、多糖類濃度Ｃｐｏｌｙｓ．（ｍｇ／ｍＬ）を示す該溶液を＋４℃に置いた。
【０２８８】
実施例Ｂ２５：市販形態にある、速効性インスリンリスプロから出発した、ｐＨ７の、置換されたデキストラン／グラルギン／リスプロ組成物の製造
実施例Ｂ２２に従い製造した、グラルギン濃度Ｃｇｌａｒｇｉｎｅ（ＩＵ／ｍＬ）及び多糖類１８濃度ＣＰｏｌｙｓ．（ｍｇ／ｍＬ）を示す、ｐＨ７の、多糖類／グラルギン溶液の容量ｐｏｌｙｓａｃｈ．／ｇｌａｒｇｉｎｅを、比Ｖｐｏｌｙｓａｃｈ．／ｇｌａｒｇｉｎｅ／Ｖｌｉｓｐｒｏ＝１００／Ｃｌｉｓｐｒｏ｛式中、Ｃｌｉｓｐｒｏは、当該組成物中の標的とされたリスプロの濃度（ＩＵ／ｍＬ）を表す｝となるように、製造方法が実施例Ｂ１９に記載されている、容量Ｖｌｉｓｐｒｏの凍結乾燥により得られたインスリンリスプロ凍結乾燥物に添加した。当該溶液は清澄であった。当該製剤の亜鉛含有量を、濃縮塩化亜鉛溶液の添加によって、所望の濃度Ｃｚｉｎｃ（μＭ）に調節した。最終的なｐＨを、濃縮ＮａＯＨ又はＨＣｌの添加によって、７に調節した。
当該製剤は、これらの製剤条件下においてグラルギン及びリスプロの良好な溶解性を証明する、清澄であった。当該溶液を０．２２μｍのフィルターにより濾過し、そして＋４℃に置いた。
【０２８９】
実施例２６：市販の溶液の透析により得られた速効性インスリンリスプロから出発した、ｐＨ７の、置換されたデキストラン／グラルギン／リスプロ組成物の製造
実施例Ｂ２４に従い製造した、グラルギン濃度Ｃｇｌａｒｇｉｎｅ（ＩＵ／ｍＬ）及び多糖類２０濃度ＣＰｏｌｙｓ．（ｍｇ／ｍＬ）を示す、ｐＨ７の、多糖類／グラルギン溶液の容量ｐｏｌｙｓａｃｈ．／ｇｌａｒｇｉｎｅを、比Ｖｐｏｌｙｓａｃｈ．／ｇｌａｒｇｉｎｅ／Ｖｄｉａｌｙｚｅｄ  ｈｕｍａｌｏｇ＝Ｃｄｉａｌｙｚｅｄ  ｈｕｍａｌｏｇ／Ｃｌｉｓｐｒｏ｛式中、Ｃｄｉａｌｙｚｅｄ  ｈｕｍａｌｏｇは、段階が実施例Ｂ１９に記載されている、当該市販溶液の透析の結びにおいて得られた、リスプロの濃度（ＩＵ／ｍＬ）を表し、及び、Ｃｌｉｓｐｒｏは、当該組成物中の標的とされたリスプロの濃度（ＩＵ／ｍＬ）を表す｝となるように、製造方法が実施例Ｂ２１に記載されている、容量Ｖｄｉａｌｙｚｅｄ  ｈｕｍａｌｏｇの凍結乾燥により得られたインスリンリスプロ凍結乾燥物に添加した。当該溶液は清澄であった。当該製剤の亜鉛含有量を、濃縮塩化亜鉛溶液の添加によって、所望の濃度Ｃｚｉｎｃ（μＭ）に調節した。最終的なｐＨを、濃縮ＮａＯＨ又はＨＣｌの添加によって、７に調節した。
当該製剤は、これらの製剤条件下においてグラルギン及びリスプロの良好な溶解性を証明する、清澄であった。当該溶液を０．２２μｍのフィルターにより濾過し、そして＋４℃に置いた。
【０２９０】
実施例Ｂ２７：２００ＩＵ／ｍＬのグラルギン濃度及び３３ＩＵ／ｍＬのリスプロ濃度を示す、ｐＨ７の置換されたデキストラン／グラルギン／リスプロ組成物（インスリンのパーセンテージ割合：グラルギン／リスプロとして８５／１５）の製造
濃縮した２００ＩＵ／ｍＬグラルギン溶液を、実施例Ｂ１８に従い製造した。ｐＨ７の、多糖類１８（１３ｍｇ／ｍＬ）／グラルギンの３００ＩＵ／ｍＬ組成物を、実施例Ｂ２２に記載の製造方法に従い、多糖類１８から製造した。当該多糖類１８／グラルギンの２００ＩＵ／ｍＬ組成物を、実施例Ｂ２５に記載の製造方法に従い、市販形態にある速効性類似体の溶液の凍結乾燥により得られた、インスリンリスプロ凍結乾燥物に添加した。当該溶液は清澄であった。当該製剤の亜鉛含有量を、濃縮塩化亜鉛溶液の添加によって、濃度Ｃｚｉｎｃ（μＭ）＝７５０μＭに調節した。最終的なｐＨを、濃縮ＮａＯＨ又はＨＣｌの添加によって、７に調節した。
当該組成を表５に記載する。
【０２９１】
実施例Ｂ２８：２００ＩＵ／ｍＬのグラルギン濃度及び６６ＩＵ／ｍＬのリスプロ濃度を示す、ｐＨ７の置換されたデキストラン／グラルギン／リスプロ組成物（インスリンのパーセンテージ割合：グラルギン／リスプロとして７５／２５）の製造
濃縮した２００ＩＵ／ｍＬグラルギン溶液を、実施例Ｂ１８に従い製造した。ｐＨ７の、多糖類１８（１３ｍｇ／ｍＬ）／グラルギンの３００ＩＵ／ｍＬ組成物を、実施例Ｂ２２に記載の製造方法に従い、多糖類１８から製造した。当該多糖類１８／グラルギンの２００ＩＵ／ｍＬ組成物を、実施例Ｂ２５に記載の製造方法に従い、市販形態にある速効性類似体の溶液の凍結乾燥により得られた、インスリンリスプロ凍結乾燥物に添加した。当該溶液は清澄であった。当該製剤の亜鉛含有量を、濃縮塩化亜鉛溶液の添加によって、濃度Ｃｚｉｎｃ（μＭ）＝１５００μＭに調節した。最終的なｐＨを、濃縮ＮａＯＨ又はＨＣｌの添加によって、７に調節した。
当該製剤は、これらの製剤条件下においてグラルギン及びリスプロの良好な溶解性を証明する、清澄であった。当該溶液を０．２２μｍのフィルターにより濾過し、そして＋４℃に置いた。
当該組成を表５に記載する。
【０２９２】
実施例Ｂ２９：３００ＩＵ／ｍＬのグラルギン濃度及び１００ＩＵ／ｍＬのリスプロ濃度を示す、ｐＨ７の置換されたデキストラン／グラルギン／リスプロ組成物（インスリンのパーセンテージ割合：グラルギン／リスプロとして７５／２５）の製造
濃縮した３００ＩＵ／ｍＬグラルギン溶液を、実施例Ｂ１８に従い製造した。ｐＨ７の、多糖類１８（２３ｍｇ／ｍＬ）／グラルギンの３００ＩＵ／ｍＬ組成物を、実施例Ｂ２２に記載の製造方法に従い、多糖類１８から製造した。当該多糖類１８／グラルギンの３００ＩＵ／ｍＬ組成物を、実施例Ｂ２５に記載の製造方法に従い、市販形態にある速効性類似体の溶液の凍結乾燥により得られた、インスリンリスプロ凍結乾燥物に添加した。当該溶液は清澄であった。当該製剤の亜鉛含有量を、濃縮塩化亜鉛溶液の添加によって、濃度Ｃｚｉｎｃ（μＭ）＝２０００μＭに調節した。最終的なｐＨを、濃縮ＮａＯＨ又はＨＣｌの添加によって、７に調節した。
当該製剤は、これらの製剤条件下においてグラルギン及びリスプロの良好な溶解性を証明する、清澄であった。当該溶液を０．２２μｍのフィルターにより濾過し、そして＋４℃に置いた。
当該組成を表５に記載する。
【０２９３】
実施例Ｂ３０：２５０ＩＵ／ｍＬのグラルギン濃度及び１５０ＩＵ／ｍＬのリスプロ濃度を示す、ｐＨ７の置換されたデキストラン／グラルギン／リスプロ組成物（インスリンのパーセンテージ割合：グラルギン／リスプロとして６３／３７）の製造
濃縮した３００ＩＵ／ｍＬグラルギン溶液を、実施例Ｂ１８に従い製造した。ｐＨ７の、多糖類１８（１９ｍｇ／ｍＬ）／グラルギンの３００ＩＵ／ｍＬ組成物を、実施例Ｂ２２に記載の製造方法に従い、多糖類１８から製造した。当該多糖類１８／グラルギンの２５０ＩＵ／ｍＬ組成物を、実施例Ｂ２５に記載の製造方法に従い、市販形態にある速効性類似体の溶液の凍結乾燥により得られた、インスリンリスプロ凍結乾燥物に添加した。当該溶液は清澄であった。当該製剤の亜鉛含有量を、濃縮塩化亜鉛溶液の添加によって、濃度Ｃｚｉｎｃ（μＭ）＝１５００μＭに調節した。最終的なｐＨを、濃縮ＮａＯＨ又はＨＣｌの添加によって、７に調節した。
当該製剤は、これらの製剤条件下においてグラルギン及びリスプロの良好な溶解性を証明する、清澄であった。当該溶液を０．２２μｍのフィルターにより濾過し、そして＋４℃に置いた。
当該組成を表５に記載する。
【０２９４】
実施例Ｂ３１：３３３ＩＵ／ｍＬのグラルギン濃度及び６７ＩＵ／ｍＬのリスプロ濃度を示す、ｐＨ７の置換されたデキストラン／グラルギン／リスプロ組成物（インスリンのパーセンテージ割合：グラルギン／リスプロとして８３／１７）の製造
濃縮した３３３ＩＵ／ｍＬグラルギン溶液を、実施例Ｂ１８に従い製造した。ｐＨ７の、多糖類１８（２０ｍｇ／ｍＬ）／グラルギンの３００ＩＵ／ｍＬ組成物を、実施例Ｂ２２に記載の製造方法に従い、多糖類１８から製造した。当該多糖類１８／グラルギンの３３３ＩＵ／ｍＬ組成物を、実施例Ｂ２５に記載の製造方法に従い、市販形態にある速効性類似体の溶液の凍結乾燥により得られた、インスリンリスプロ凍結乾燥物に添加した。当該溶液は清澄であった。当該製剤の亜鉛含有量を、濃縮塩化亜鉛溶液の添加によって、濃度Ｃｚｉｎｃ（μＭ）＝２０００μＭに調節した。最終的なｐＨを、濃縮ＮａＯＨ又はＨＣｌの添加によって、７に調節した。
当該製剤は、これらの製剤条件下においてグラルギン及びリスプロの良好な溶解性を証明する、清澄であった。当該溶液を０．２２μｍのフィルターにより濾過し、そして＋４℃に置いた。
当該組成を表５に記載する。
【０２９５】
実施例Ｂ３２：３００ＩＵ／ｍＬのグラルギン濃度及び１００ＩＵ／ｍＬのリスプロ濃度を示す、ｐＨ７の置換されたデキストラン／グラルギン／リスプロ組成物（インスリンのパーセンテージ割合：グラルギン／リスプロとして７５／２５）の製造
濃縮した３００ＩＵ／ｍＬグラルギン溶液を、実施例Ｂ１８に従い製造した。ｐＨ７の、多糖類１９（２３ｍｇ／ｍＬ）／グラルギンの３００ＩＵ／ｍＬ組成物を、実施例Ｂ２２に記載の製造方法に従い、多糖類１９から製造した。当該多糖類１９／グラルギンの３００ＩＵ／ｍＬ組成物を、実施例Ｂ２６に記載の製造方法に従い、透析した形態にある速効性類似体の溶液の凍結乾燥により得られた、インスリンリスプロ凍結乾燥物に添加した。当該溶液は清澄であった。当該製剤の亜鉛含有量を、濃縮塩化亜鉛溶液の添加によって、濃度Ｃｚｉｎｃ（μＭ）＝３０００μＭに調節した。最終的なｐＨを、濃縮ＮａＯＨ又はＨＣｌの添加によって、７に調節した。
当該製剤は、これらの製剤条件下においてグラルギン及びリスプロの良好な溶解性を証明する、清澄であった。当該溶液を０．２２μｍのフィルターにより濾過し、そして＋４℃に置いた。
当該組成を表５に記載する。
【０２９６】
実施例Ｂ３３：３００ＩＵ／ｍＬのグラルギン濃度及び１００ＩＵ／ｍＬのリスプロ濃度を示す、ｐＨ７の置換されたデキストラン／グラルギン／リスプロ組成物（インスリンのパーセンテージ割合：グラルギン／リスプロとして７５／２５）の製造
ｐＨ７の、多糖類２０（２３ｍｇ／ｍＬ）／グラルギンの３００ＩＵ／ｍＬ組成物を、実施例Ｂ２３に記載の製造方法に従い、多糖類２０から製造した。当該多糖類２０／グラルギンの３００ＩＵ／ｍＬ組成物を、実施例Ｂ２６に記載の製造方法に従い、市販溶液の透析由来の速効性類似体の溶液の凍結乾燥により得られた、インスリンリスプロ凍結乾燥物に添加した。当該溶液は清澄であった。当該製剤の亜鉛含有量を、濃縮塩化亜鉛溶液の添加によって、濃度Ｃｚｉｎｃ（μＭ）＝１５００μＭに調節した。最終的なｐＨを、濃縮ＮａＯＨ又はＨＣｌの添加によって、７に調節した。
当該製剤は、これらの製剤条件下においてグラルギン及びリスプロの良好な溶解性を証明する、清澄であった。当該溶液を０．２２μｍのフィルターにより濾過し、そして＋４℃に置いた。
当該組成を表５に記載する。
【０２９７】
【表９】
0005950477.tif 000016
【０２９８】
実施例Ｂ３４：インスリングラルギン及びインスリンリスプロの種々の濃度並びに当該２種のインスリンの種々の組成比を示す、ｐＨ７の種々の置換されたデキストラン／グラルギン／リスプロ組成物の沈澱
実施例Ｂ２７ないしＢ３３において製造された置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））組成物の１ｍＬを、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）の２０ｍｇ／ｍＬを含有するＰＢＳ溶液の２ｍＬに添加した。当該ＰＢＳ／ＢＳＡ混合物が、皮下媒体の組成をシミュレートしている。沈澱が現れた。
上澄みから沈殿物を分離するために、４０００回転／分で遠心分離を行った。その後、上澄み中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））をアッセイした。この結果、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の沈澱のパーセンテージは、実施例Ｂ１３に記載される対照と類似であった。結果を表６に概略する。
【０２９９】
【表１０】
0005950477.tif 000017
【０３００】
実施例Ｂ３５：組成物の化学的安定性
実施例Ｂ７、Ｂ２７、Ｂ２８及びＢ２９に記載される置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／食事インスリン組成物並びに対応する対照群を、３０℃にて４週間置いた。法規によって、３０℃での４週間後に、そのままの（分解されていない）インスリンの９５％が要求される。
４週間後、実験された製剤は、法規に定義される仕様に合致していた。結果を表７にまとめる。
【表１１】
0005950477.tif 000018
このように、どの製剤について実験されても、法規の要請に従う、９５％を超えるそのままのインスリンのパーセンテージが得られた。
【０３０１】
実施例Ｂ３６：溶液の注射適性
製造された全ての組成物は、インスリンの注射についての通常のシステムにより注射し得た。実施例Ｂ７ないしＢ１２に記載される溶液及び実施例Ｂ２７ないしＢ３３に記載される組成物は、３１本の測定用ニードル付きのインスリンシリンジ及びノボペン（Ｎｏｖｏｐｅｎ（登録商標））の名称の下で販売されている、ノボ  ノルディスクからの３１本の測定用ニードル付きインスリンペンの両方を用いても、いかなる困難もなく注射された。
【０３０２】
実施例Ｂ３７：インスリン溶液の薬力学の測定用プロトコル
本発明に従う２種の組成物：
実施例Ｂ７に記載される、多糖類４（６ｍｇ／ｍＬ）を用いて配合された、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））（７５／２５）及び
実施例Ｂ８に記載される、多糖類４（６ｍｇ／ｍＬ）を用いて配合された、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））（７５／２５）を評価する目的で、臨床前実験をブタについて行った。
【０３０３】
これら組成物の血糖低下作用を、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（ｐＨ４）のそしてその後の食事インスリンであるアピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））又はヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））の同時ではあるが別々の注射によって行った注射に関して比較した。
【０３０４】
予め頸静脈にカテーテル挿入したおよそ５０ｋｇの目方の６頭の家畜ブタに、実験の開始前の２ないし３時間、餌を断った。インスリンの注射前の時間において、基礎グルコース濃度を決定するために、３種の血液試料を採取した。
【０３０５】
３１本のニードル付きのノボペン（Ｎｏｖｏｐｅｎ（登録商標））インスリンペンを用いて、当該動物の耳下の首への皮下注射によって、０．４ＩＵ／ｋｇの投与量でのインスリンの注射を行った。
【０３０６】
その後、４、８、１２、１６、２０、３０、４０、５０、６０、９０、１２０、２４０、３６０、４８０、６００、６６０及び７２０分後に血液試料を採取した。各々の試料を採取した後、カテーテルを希釈ヘパリン溶液で洗浄した。
【０３０７】
１滴の血液を採取して、グルコース測定器を用いて血糖値を決定した。その後、グルコースの薬力学曲線をプロットした。
【０３０８】
得られた結果は、図１ないし６に表されるグルコースについての薬力学曲線の形態で与えられる。
【０３０９】
多糖類４（６ｍｇ／ｍＬ）を用いて配合したランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））（７５／２５）。
【０３１０】
図１：アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））と、本発明に従う組成物である多糖類４／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））（７５／２５）の、連続投与についての平均値曲線の平均値＋標準偏差である。
【０３１１】
図２：アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））個別曲線である。
【０３１２】
図３：多糖類４／アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））個別曲線である。
【０３１３】
図１は、各々の製剤について試験したブタについての血糖値低下の平均値曲線及び平均値の標準偏差を与えている。最初の３０分における血糖値の低下は、多糖類の存在が、アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））の速効作用を阻害しなかったことを示す、当該２種の製剤について類似であった。
【０３１４】
他方で、９０分ないし１０時間（６００分）の間において、アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の連続投与は、３頭のブタに関して均一の安定応答、及び、他の３頭のブタに関して不均一の応答を有する、不均一のグルコース低下が生じた（図２）。対照的に、多糖類４／アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））製剤を用いて試験された６頭のブタは、均一の応答を示した（図３）。このことは、アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））対照について平均５４％（２１％と１１３％の間）であり、及び多糖類４／アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））について１２％（５％と２５％の間）であった、６０分と１０時間の間の変動係数（ＣＶ）の解析によって反映されている。
【０３１５】
多糖類４（６ｍｇ／ｍＬ）を用いて配合したランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））（７５／２５）。
【０３１６】
図４：ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の連続投与と、本発明に従う組成物である多糖類４／ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の投与についての、平均値曲線の平均値＋標準偏差である。
【０３１７】
図５：ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標）個別曲線である。
【０３１８】
図６：多糖類４／ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））個別曲線である。
【０３１９】
図４は、各々の製剤について試験したブタについての血糖値低下の平均値曲線及び平均値の標準偏差を与えている。最初の３０分における血糖値の低下は、多糖類４の存在が、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））の速効作用を阻害しなかったことを示す、当該２種の製剤について類似であった。他方で、６０分ないし８時間（４８０分）の間において、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の連続投与は、４頭のブタに関して均一の安定応答、及び、他の２頭のブタに関して不均一の応答を有する、不均一のグルコース低下が生じた（図５）。対照的に、多糖類４／ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））製剤を用いて試験された５頭のブタは、均一の応答を示した（図６）。このことは、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））対照について平均５４％（３１％と７２％の間）であり、及び多糖類４／ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））について１５％（６％と２８％の間）であった、６０分と８時間の間の血糖値低下についてのデータに関する変動係数（ＣＶ）の解析によって反映されている。このように、多糖類４の存在は、血糖値低下に関してランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の変動性を大きく低減させた。
【０３２０】
実施例Ｂ３８：インスリン溶液の薬力学の測定のプロトコル
本発明に従う６種の組成物を評価する目的で、臨床前実験をイヌについて行った。
【０３２１】
これら組成物の血糖低下作用を、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（ｐＨ４）のそしてその後の食事インスリンであるヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））の１００ＩＵ／ｍＬの同時ではあるが別々の注射によって行った注射に関して比較した。
【０３２２】
およそ１２ｋｇの目方の１０頭の家畜イヌに、実験開始前の１８時間の間餌を断った。インスリンの注射前の時間において、基礎グルコース濃度を決定するために、３種の血液試料を採取した。
【０３２３】
３１本のニードル付きのノボペン（Ｎｏｖｏｐｅｎ（登録商標））インスリンペンを用いて、当該動物の首への皮下注射によって、０．５３ＩＵ／ｋｇ（下記実施例に記載がない限り）の投与量でのインスリンの注射を行った。
【０３２４】
その後、１０、２０、３０、４０、５０、６０、９０、１２０、１８０、２４０、３００、３６０、４２０、４８０、５４０、６００、６６０、７２０、７８０、８４０、９００及び９６０分後に血液試料を採取した。カテーテルを用いて最初の試料を採取し（１８０分まで）、そしてその後は、頸静脈から直接採取した。各々の試料を採取した後、カテーテルを希釈ヘパリン溶液で洗浄した。
【０３２５】
１滴の血液を採取して、グルコース測定器を用いて血糖値を決定した。その後、グルコースの薬力学曲線をプロットした。
【０３２６】
得られた結果は、図７ないし１２に表されるグルコースについての薬力学曲線の形態で与えられる。
【０３２７】
実施例Ｂ２８の溶液
図７：ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．１３ＩＵ／ｋｇ）及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．４ＩＵ／ｋｇ）と、実施例Ｂ２８に記載の本発明に従う組成物（０．５３ＩＵ／ｋｇ）の、連続投与についての平均値曲線の平均値＋標準偏差である。
【０３２８】
図７は、各々の製剤について試験したイヌについての血糖値低下の平均値曲線及び平均値の標準偏差を与えている。当該２つの曲線は、多糖類がヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））の速効作用を阻害しなかったことを示す、血糖値の急速な低下、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））によるピークとグラルギンによる安定期との間の著しい湾曲、及び、グラルギンの基礎作用が良好に保持されることを示す、１２時間までのグラルギンのその後の安定期について、１２時間までは類似であった。
【０３２９】
実施例Ｂ２７の溶液
図８：ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．１３ＩＵ／ｋｇ）及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．４ＩＵ／ｋｇ）と、実施例Ｂ２７に記載の本発明に従う組成物（０．４７ＩＵ／ｋｇ）の、連続投与についての平均値曲線の平均値＋標準偏差である。
【０３３０】
図８は、各々の製剤について試験したイヌについての血糖値低下の平均値曲線及び平均値の標準偏差を与えている。この比較において、基礎インスリン（ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標）））の投与量は同一としたが、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））の投与量は、本発明組成物については対照に比して半分とした。対照は２倍のヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））を含有していたが、グルコース低下は、当該対照と比較して製剤Ｂ２７の場合がより大きかった。他方、安定期の期間は、当該対照と比較して組合せの場合がより短かった。このことは、本組成物において、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の一部が注射において沈澱せず、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））と共に作用したことを示している。
【０３３１】
実施例Ｂ２９の溶液
図９：ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．１３ＩＵ／ｋｇ）及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．４ＩＵ／ｋｇ）と、実施例Ｂ２９に記載の本発明に従う組成物（０．５３ＩＵ／ｋｇ）の、連続投与についての平均値曲線の平均値＋標準偏差である。
【０３３２】
図９は、各々の製剤について試験したイヌについての血糖値低下の平均値曲線及び平均値の標準偏差を与えている。当該２つの曲線は、多糖類がヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））の速効作用を阻害しなかったことを示す、血糖値の急速な低下、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））によるピークとランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））による安定期との間の著しい湾曲、及び、グラルギンの基礎作用が良好に保持されることを示す、１３時間までのランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））のその後の安定期について、類似であった。
【０３３３】
実施例Ｂ３１の溶液
図１０：ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．１３ＩＵ／ｋｇ）及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．４ＩＵ／ｋｇ）と、実施例Ｂ３１に記載の本発明に従う組成物（０．４８ＩＵ／ｋｇ）の、連続投与についての平均値曲線の平均値＋標準偏差である。
【０３３４】
図１０は、各々の製剤について試験したイヌについての血糖値低下の平均値曲線及び平均値の標準偏差を与えている。この比較において、基礎インスリン（ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標）））の投与量は同一としたが、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））の投与量は、本発明組成物については対照に比して半分とした。グルコース低下は、実施例Ｂ３１に関する組合せと比較して対照の場合がより大きかった。この応答は、対照のヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））の濃度の半分であったという、当該組合せ中のそれの観点において、予期された。さらには、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の安定期の期間は、当該対照と組合せの場合とは同一であった。このことは、本組成物において、且つ、実施例Ｂ２９に記載の組成物との比較により（図９）、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の基礎作用を変えることなく、当該組合せ中のヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））の量を調節し得ることを、示している。
【０３３５】
実施例Ｂ３０の溶液
図１１：ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．２４ＩＵ／ｋｇ）及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．４ＩＵ／ｋｇ）と、実施例Ｂ３０に記載の本発明に従う組成物（０．６４ＩＵ／ｋｇ）の、連続投与についての平均値曲線の平均値＋標準偏差である。
【０３３６】
図１１は、各々の製剤について試験したイヌについての血糖値低下の平均値曲線及び平均値の標準偏差を与えている。当該２つの曲線は、多糖類がヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））の速効作用を阻害しなかったことを示す、血糖値の急速な低下、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））によるピークとランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））による安定期との間の著しい湾曲、及び、グラルギンの基礎作用が良好に保持されることを示す、１０時間までのランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））のその後の安定期について、類似であった。
【０３３７】
実施例Ｂ３２の溶液
図１２：ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．１３ＩＵ／ｋｇ）及びランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））（１００ＩＵ／ｍＬ，０．４ＩＵ／ｋｇ）と、実施例Ｂ３２に記載の本発明に従う組成物（０．５３ＩＵ／ｋｇ）の、連続投与についての平均値曲線の平均値＋標準偏差である。
【０３３８】
図１２は、各々の製剤について試験したイヌについての血糖値低下の平均値曲線及び平均値の標準偏差を与えている。当該２つの曲線は、多糖類がヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））の速効作用を阻害しなかったことを示す、血糖値の急速な低下、ヒューマログ（Ｈｕｍａｌｏｇ（登録商標））によるピークとランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））による安定期との間の著しい湾曲、及び、グラルギンの基礎作用が１０時間まで保持されることを示す、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））のその後の安定期について、１０時間まで類似であった。
【０３３９】
結論として、図７ないし１２は、多糖類の組成並びにリスプロ及びグラルギンの濃度を調節することによって、異なった割合の速効性インスリン及び基礎インスリンを用いた２回の注射と同一のプロファイルを得ることが可能であることを、示している。速効性インスリンを損なうことなく基礎インスリンの期間を調節し、又は、基礎インスリンの作用を損なうことなく速効性インスリンの量を調節することもまた、可能である。
【０３４０】
実施例
第Ｃ部：本発明に従うＧＬＰ−１類似体又は誘導体を含有する組成物の特性の証明
【０３４１】
実施例Ｃ１：ＧＬＰ−１類似体のエクセナチド（ｅｘｅｎａｔｉｄｅ）（ビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標）））の０．２５ｍｇ／ｍＬ溶液
当該溶液は、ビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））の名称の下で、エリ  リリー  アンド  カンパニー社により販売されている、エクセナチド溶液である。
【０３４２】
実施例Ｃ２：ＧＬＰ−１誘導体のリラグルチド（ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）（ビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標）））の６ｍｇ／ｍＬ溶液
当該溶液は、ビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））の名称の下で、ノボ  ノルディスク社により販売されている、リラグルチド溶液である。
【０３４３】
実施例Ｃ３：１０ｍｇ／ｍＬの濃度の置換されたデキストランを用いた、１００ＩＵ／ｍＬの及びｐＨ７のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の溶解
表１に記載のものより選択した置換されたデキストランの２０ｍｇを正確に秤量した。当該凍結乾燥物を、実施例Ｂ４のインスリングラルギン溶液の２ｍＬ中に溶解して、多糖類濃度が１０ｍｇ／ｍＬに等しい溶液を得た。周囲温度にてロール上で機械的に撹拌した後、当該溶液は清澄になった。当該溶液のｐＨは６．３であった。０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いて、ｐＨを７に調節した。当該清澄な溶液を、メンブラン（０．２２μｍ）フィルターを用いて濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【０３４４】
概論：実施例Ｃ３に記載されているのと同様プロトコルにより、２０及び４０ｍｇ／ｍＬの置換されたデキストランの濃縮物を用いて、１００ＩＵ／ｍＬの及びｐＨ７の清澄なランタスの溶液をも得た。表１に記載されているもののうち、凍結乾燥した多糖類の質量を、正確に秤量した。当該凍結乾燥物を、実施例Ｂ４のインスリングラルギン溶液中に溶解して、表８に記載されるとおり、置換されたデキストランの濃度が２０又は４０ｍｇ／ｍＬである溶液を得た。周囲温度でのロール上の機械的撹拌後、当該溶液は清澄となった。当該溶液のｐＨは７未満であった。その後、０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いて、ｐＨを７に調節した。当該清澄な最終溶液を、メンブラン（０．２２μｍ）フィルターを用いて濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【０３４５】
【表１２】
0005950477.tif 000019
【０３４６】
実施例Ｃ４：ｐＨ７．５のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））の７０／３０組成物の製造
実施例Ｃ１のエクセナチド溶液の０．０９ｍＬを、実施例Ｂ４のインスリングラルギン溶液の０．２１ｍＬに添加して、混合してｐＨが４．５である組成物の０．３ｍＬを得た。ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の７０ＩＵ／ｍＬ及びビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））の０．０７５ｍｇ／ｍＬを含有する当該組成物は、これら製剤条件下（ｐＨ４．５）におけるランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））及びビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））の良好な溶解性を証明する、清澄であった。その後、０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨを７．５に調節した。その後、当該組成物は、ｐＨ７．５のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））組成物の難溶解性を証明する、混濁であった。
【０３４７】
実施例Ｃ４に記載されているのと類似のプロトコルに従い、ｐＨ４．５、５．５、６．５、８．５及び９．５の７０／３０のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））組成物をも製造した。これら組成物の各々について、実施例Ｃ１のエクセナチド溶液の０．０９ｍＬを、実施例Ｂ４のインスリングラルギン溶液の０．２１ｍＬに添加して、混合してｐＨが４．５である組成物の０．３ｍＬを得た。当該組成物は、これら製剤条件下（ｐＨ４．５）におけるランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））及びビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））の良好な溶解性を証明する、清澄であった。０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いて、ｐＨを５．５又は６．５又は８．５又は９．５に調節した。
ｐＨを調節した後、５．５での組成物は僅かに混濁しており、６．５ないし７．５及び８．５の組成物は非常に混濁しており、そしてｐＨ９．５の組成物は清澄であった。これら組成物を＋４℃にて４８時間置いた。＋４℃にて４８時間後、ｐＨ４．５の組成物のみが清澄のままであった。それぞれのｐＨ値の７０／３０のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））組成物の４８時間後の外観を、表９に概略した。
【０３４８】
【表１３】
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【０３４９】
実施例Ｃ５：ｐＨ７．５のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））の７０／３０組成物の製造
実施例Ｃ２のリラグルチド溶液の０．０９ｍＬを、実施例Ｂ４のインスリングラルギン溶液の０．２１ｍＬに添加して、混合してｐＨが７である組成物の０．３ｍＬを得た。グラルギンの７０ＩＵ／ｍＬ及びエクセナチドの１．８ｍｇ／ｍＬを含有する当該組成物は、これら製剤条件下におけるランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））組成物の難溶解性を証明する、混濁であった。０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨを７．５に調節した。当該ｐＨの調製した後も、当該組成物は混濁したままであった。当該組成物を＋４℃にて４８時間置いた。
【０３５０】
実施例Ｃ５に記載されているのと類似のプロトコルに従い、ｐＨ４．５−５．５−６．５−８．５及び９．５の７０／３０のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））組成物をも製造した。これら組成物の各々について、実施例Ｃ１のリラグルチド溶液の０．０９ｍＬを、実施例Ｂ４のインスリングラルギン溶液の０．２１ｍＬに添加して、ｐＨが７である組成物の０．３ｍＬを得た。当該組成物は、これら製剤条件下（ｐＨ７）におけるランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））組成物の難溶解性を証明する、混濁であった。０．１Ｎ塩酸溶液を用いて、ｐＨを４．５若しくは５．５若しくは６．５に調節し、又は、０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いて、ｐＨ９．５に調節した。ｐＨを調節した後、ｐＨ４．５ないし５．５及び６．５の組成物は、これら製剤条件下におけるランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））組成物の難溶解性を証明する、混濁であった。これら組成物を＋４℃にて４８時間置いた。＋４℃にて４８時間後、ｐＨ９．５の組成物のみが清澄のままであった。それぞれのｐＨ値の７０／３０のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））組成物の４８時間後の外観を、表１０に概略した。
【０３５１】
【表１４】
0005950477.tif 000021
【０３５２】
実施例Ｃ６：ｐＨ７の置換されたデキストラン−７０／３０のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））組成物の製造
実施例Ｃ１のエクセナチド溶液の０．０９ｍＬを、実施例Ｃ３において製造された置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））溶液の０．２１ｍＬに添加して、ｐＨが５．３である組成物の０．３ｍＬを得た。０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨを７に調節した。多糖類の７ｍｇ／ｍＬ、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の７０ＩＵ／ｍＬ及びビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））の０．０７５ｍｇ／ｍＬを含有する当該組成物は、ｐＨ７の置換されたデキストラン存在中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））及びビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））の良好な溶解性を証明する、清澄であった。当該清澄な溶液を＋４℃に置いた。
【０３５３】
概論：実施例Ｃ６に記載されているのと同様のプロトコルに従い、９０／１０、５０／５０、３０／７０及び１０／９０の容量比ＶＬａｎｔｕｓ／ＶＢｙｅｔｔａの、ｐＨ７の、置換されたデキストラン−ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））組成物をも製造した。そして、実施例Ｃ１のエクセナチド溶液の容量ＶＢｙｅｔｔａを、実施例Ｃ３で製造された置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））溶液の容量ＶＬａｎｔｕｓに添加して、０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨを７に調節した組成物を得た。得られた組成物（表１１を参照）は、ｐＨ７の置換されたデキストラン存在中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））及びビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））の良好な溶解性を証明する、清澄であった。これら清澄な溶液を＋４℃に置いた。
【０３５４】
実施例Ｃ７：ｐＨ７の置換されたデキストラン−１００／５０ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））組成物の製造
実施例Ｃ１のエクセナチド溶液の０．１５０ｍＬを凍結乾燥し、そしてその後、実施例Ｃ３において製造された置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））溶液の０．３ｍＬを当該凍結乾燥物に添加して、０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨを７に調節した組成物を得た。多糖類の１０ｍｇ／ｍＬ、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の１００ＩＵ／ｍＬ及びビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））の０．１２５ｍｇ／ｍＬを含有する当該組成物は、ｐＨ７の置換されたデキストラン存在中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））及びビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））の良好な溶解性を証明する、清澄であった。当該清澄な溶液を＋４℃に置いた。
【０３５５】
【表１５】
0005950477.tif 000022
【０３５６】
実施例Ｃ８：ｐＨ７の置換されたデキストラン−７０／３０ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））組成物の製造
実施例Ｃ２のリラグルチド溶液の０．０９ｍＬを、実施例Ｃ３において製造された置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））溶液の０．２１ｍＬに添加して、ｐＨが７．６である組成物の０．３ｍＬを得た。０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨを７に調節した。多糖類の７ｍｇ／ｍＬ、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の７０ＩＵ／ｍＬ及びビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））の１．８ｍｇ／ｍＬを含有する当該組成物は、ｐＨ７の置換されたデキストラン存在中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））及びビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））の良好な溶解性を証明する、清澄であった。当該清澄な溶液を＋４℃に置いた。
【０３５７】
概論：実施例Ｃ６に記載されているのと同様のプロトコルに従い、９０／１０、５０／５０、３０／７０及び９０／１０の容量比ＶＬａｎｔｕｓ／ＶＶｉｃｔｏｚａの、ｐＨ７の、置換されたデキストラン−ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））組成物をも製造した。そして、実施例Ｃ２のリラグルチド溶液の容量ＶＶｉｃｔｏｚａを、実施例Ｂ３で製造された置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））溶液の容量ＶＬａｎｔｕｓに添加して、０．１Ｎ塩酸溶液を用いてｐＨを７に調節した組成物を得た。
得られた組成物（表１２を参照）は、ｐＨ７の置換されたデキストラン存在中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））及びビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））の良好な溶解性を証明する、清澄であった。これら清澄な溶液を＋４℃に置いた。
【０３５８】
実施例Ｃ９：ｐＨ７の置換されたデキストラン−１００／５０ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））組成物の製造
実施例Ｃ２のリラグルチド溶液の０．１５０ｍＬを凍結乾燥し、そしてその後、実施例Ｃ３において製造された置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））溶液の０．３ｍＬを当該凍結乾燥物に添加して、０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨを７に調節した組成物を得た。多糖類の１０ｍｇ／ｍＬ、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の１００ＩＵ／ｍＬ及びビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））の０．１２５ｍｇ／ｍＬを含有する当該組成物は、ｐＨ７の置換されたデキストラン存在中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））及びビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））の良好な溶解性を証明する、清澄であった。当該清澄な溶液を＋４℃に置いた。
【０３５９】
【表１６】
0005950477.tif 000023
【０３６０】
実施例Ｃ１０：ｐＨ７の置換されたデキストラン−６０／２０／２０ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））／ビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））組成物の製造
実施例Ａ３に記載される凍結乾燥した多糖類４の２０ｍｇを正確に秤量した。当該凍結乾燥物を、実施例Ｂ４のインスリングラルギン溶液の２ｍＬ中に溶解した。周囲温度でのロール上の機械的撹拌後、当該溶液は清澄となった。当該溶液のｐＨは６．３であった。０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液を用いて、ｐＨを７に調節した。実施例Ｃ１のエクセナチド溶液の０．２ｍＬ及び実施例Ｂ３のインスリングルリシン溶液の０．２ｍＬを、上記製造した置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））溶液の０．６ｍＬに添加して、ｐＨ７の組成物の１ｍＬを得た。多糖類の６ｍｇ／ｍＬ、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の６０ＩＵ／ｍＬ、アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））の２０ＩＵ／ｍＬ及びビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））の０．０５ｍｇ／ｍＬを含有する当該組成物は、ｐＨ７の置換されたデキストラン存在中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））、アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））及びビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））の良好な溶解性を証明する、清澄であった。当該清澄な溶液を、メンブラン（０．２２μｍ）により濾過し、そしてその後、＋４℃に置いた。
【０３６１】
実施例Ｃ１１：ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の沈澱
ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の０．２５ｍＬを、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）の２０ｍｇ／ｍＬを含有するＰＢＳ（リン酸緩衝溶液）溶液の０．５ｍＬに添加した。当該ＰＢＳ／ＢＳＡ混合物が、皮下媒体の組成をシミュレートしている。
ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の挙動の機構に良く合致する沈澱が現れた（ｐＨの上昇による注射剤の沈澱）。
上澄みから沈殿物を分離するために、４０００回転／分で遠心分離を行った。その後、上澄み中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））をアッセイした。この結果、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の９０％が沈澱形態で見出された。
【０３６２】
実施例Ｃ１２：置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））組成物の沈澱
実施例Ｃ３において製造された置換されたデキストラン／ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））溶液の０．２５０ｍＬを、ＢＳＡの２０ｍｇ／ｍＬを含有するＰＢＳ溶液の０．５ｍＬに添加した。当該ＰＢＳ／ＢＳＡ混合物が、皮下媒体の組成をシミュレートしている。沈澱が現れた。
上澄みから沈殿物を分離するために、４０００回転／分で遠心分離を行った。その後、上澄み中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））をアッセイした。この結果、ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の９０％が沈澱形態で見出された。ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の沈澱のパーセンテージは、実施例Ｃ１１に記載されている対照について得られたものと同一であった。
【０３６３】
実施例Ｃ１３：置換されたデキストラン−ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））組成物の沈澱
実施例Ｃ６において製造された置換されたデキストラン−ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））組成物の０．２５０ｍＬを、ＢＳＡの２０ｍｇ／ｍＬを含有するＰＢＳ溶液の０．５ｍＬに添加した。当該ＰＢＳ／ＢＳＡ混合物が、皮下媒体の組成をシミュレートしている。沈澱が現れた。
上澄みから沈殿物を分離するために、４０００回転／分で遠心分離を行った。その後、上澄み中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））及びビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））をアッセイした。ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の沈澱のパーセンテージは、実施例Ｃ１１に記載されている対照と類似であった。
【０３６４】
実施例Ｃ１４：置換されたデキストラン−７０／３０ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））組成物の沈澱
実施例Ｃ８において製造された置換されたデキストラン−ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））組成物の０．２５０ｍＬを、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）の２０ｍｇ／ｍＬを含有するＰＢＳ溶液の０．５ｍＬに添加した。当該ＰＢＳ／ＢＳＡ混合物が、皮下媒体の組成をシミュレートしている。沈澱が現れた。
上澄みから沈殿物を分離するために、４０００回転／分で遠心分離を行った。その後、上澄み中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））及びビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））をアッセイした。ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の沈澱のパーセンテージは、実施例Ｃ１１に記載されている対照と類似であった。
【０３６５】
実施例Ｃ１５：種々の組成物の沈澱、種々の置換されたデキストランの特性
実施例Ｃ１３及びＣ１４と同様の条件下にて、他のデキストランの存在中で、他の試験を行った。
置換されたデキストランの最大で２０ｍｇ／ｍＬ及び７０／３０ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））組成物についての結果を、下記表１３にまとめた。ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の溶解及び沈澱が保持されたことが観察された。
【表１７】
0005950477.tif 000024
【０３６６】
置換されたデキストランの最大で２０ｍｇ／ｍＬ及び種々のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））組成物についての結果を、下記表１４にまとめた。ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の溶解及び沈澱が保持されたことが観察された。
【表１８】
0005950477.tif 000025
【０３６７】
置換されたデキストランの最大で４０ｍｇ／ｍＬ及び７０／３０ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））組成物についての結果を、下記表１５にまとめた。ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の溶解及び沈澱が保持されたことが観察された。
【表１９】
0005950477.tif 000026
【０３６８】
置換されたデキストランの最大で２０ｍｇ／ｍＬ及び種々のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／ビクトザ（Ｖｉｃｔｏｚａ（登録商標））組成物についての結果を、下記表１６にまとめた。ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の溶解及び沈澱が保持されたことが観察された。
【表２０】
0005950477.tif 000027
【０３６９】
実施例Ｃ１６：ｐＨ７の置換されたデキストラン−６０／２０／２０ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））／ビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））組成物の沈澱
実施例Ｃ１０において製造された置換されたデキストラン−ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））／アピドラ（Ａｐｉｄｒａ（登録商標））／ビエッタ（Ｂｙｅｔｔａ（登録商標））組成物の０．２５０ｍＬを、ＢＳＡの２０ｍｇ／ｍＬを含有するＰＢＳ溶液の０．５ｍＬに添加した。当該ＰＢＳ／ＢＳＡ混合物が、皮下媒体の組成をシミュレートしている。沈澱が現れた。
上澄みから沈殿物を分離するために、４０００回転／分で遠心分離を行った。その後、上澄み中のランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））をアッセイした。ランタス（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））の沈澱のパーセンテージは、実施例Ｃ１１に記載されている対照と類似であった。
【図１】
0005950477.tif 000032
【図２】
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【図３】
0005950477.tif 000034
【図４】
0005950477.tif 000035
【図５】
0005950477.tif 000036
【図６】
0005950477.tif 000037
【図７】
0005950477.tif 000038
【図８】
0005950477.tif 000039
【図９】
0005950477.tif 000040
【図１０】
0005950477.tif 000041
【図１１】
0005950477.tif 000042
【図１２】
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