(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの配列番号２のＦＧＦ−２１（線維芽細胞増殖因子２１）化合物及び少なくとも１つのＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニストを含み、ＦＧＦ−２１化合物及びＧＬＰ−１Ｒアゴニストが１つの製剤中に配合されている医薬組成物。
【請求項２】
組成物が少なくとも１つのさらなる抗糖尿病薬を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
少なくとも１つのさらなる抗糖尿病薬がＤＰＰ−４（ジペプチジルペプチダーゼ-４）阻害剤である請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
組成物がさらに少なくとも１つの追加の抗糖尿病薬を含む、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
少なくとも１つのさらなる抗糖尿病薬が同じ製剤中又は異なる製剤中に含まれる、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項６】
配列番号２のＦＧＦ−２１化合物とＧＬＰ−１Ｒアゴニストを含む製剤とさらなる抗糖尿病薬を含む製剤が、同時投与又は継続投与に適したものである、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストが、生物活性ＧＬＰ−１である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストが、ＧＬＰ−１（７−３７）、ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、エキセンジン−４、リラグルチド、ＣＪＣ−１１３１、アルブゴン、アルビグルチド、エクセナチド、エクセナチド−ＬＡＲ、オキシントモジュリン、リキシセナチド、ゲニプロシド、ＡＶＥ−００１０（配列番号９）からなる群から選択される、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
抗糖尿病薬が、メトホルミン、チアゾリジンジオン、スルホニルウレア、及び／又はインスリンから選択される、請求項２〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ＤＰＰ−４阻害剤が、シタグリプチン、ビルダグリプチン、サクサグリプチン、リナグリプチン、アドグリプチン及び／又はベルベリンから選択される、請求項３〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
少なくとも１つの代謝症候群及び／又はアテローム性硬化症の処置における使用のための、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
代謝症候群が、糖尿病、脂質異常症、肥満及び／又は脂肪過多症から選択される、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
代謝症候群が２型糖尿病である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
患者において少なくとも１つの代謝症候群及び／又はアテローム性硬化症を処置するための医薬の製造のための、請求項１〜１０のいずれか１項において定義される医薬組成物の使用。
【請求項１５】
代謝症候群が、糖尿病、脂質異常症、肥満及び／又は脂肪過多症から選択される、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
代謝症候群が２型糖尿病である、請求項１４に記載の使用。
【請求項１７】
患者が、１型糖尿病患者又は２型糖尿病患者である、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１８】
２型糖尿病患者が食餌療法を受ける２型糖尿病患者、スルホニルウレア処置を受ける２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者及び／又は長期インスリン処置を受ける２型糖尿病患者から選択される、請求項１７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、少なくとも１つのＦＧＦ−２１（線維芽細胞増殖因子２１）化合物、少なくとも１つのＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニスト、並びに場合により少なくとも１つの抗糖尿病薬及び／又は少なくとも１つのＤＰＰ−４（ジペプチジルペプチダーゼ−４）阻害剤を含む、少なくとも１つの代謝症候群及び／又はアテローム性硬化症、特に糖尿病、脂質異常症、肥満及び／又は脂肪過多症の処置のための医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病はその臨床症状により特徴付けられ、すなわち２型糖尿病としても知られる非インスリン依存性又は成人発症型の形態、及び１型糖尿病としても知られるインスリン依存性又は若年発症型の形態である。２型糖尿病及び根底にある肥満の臨床症状の顕在化は、通常４０歳を超えた年齢で現れる。対照的に、１型糖尿病は、通常しばしば３０歳前に疾患の急速な開始を示す。この疾患はヒトにおける代謝障害であり、一般集団において約１パーセントの有病率を有し、これらの四分の一は１型糖尿病であり、そしてこれらの四分の三は２型糖尿病である。２型糖尿病は、循環血糖、インスリン及びコルチコステロイドの高いレベルを特徴とする疾患である。
【０００３】
現在では、２型糖尿病の処置のための様々な薬理学的アプローチがあり、これらは個別に利用されても、組み合わせて利用されてもよく、そして異なる作用様式で作用する：
１）  スルホニルウレアはインスリン分泌を刺激する；
２）  ビグアニド類（メトホルミン）は、グルコース利用を促進し、肝臓のグルコース産生を低減し、そして腸のグルコース排出を減少させることにより作用する；
３）  ｏｃ−グルコシダーゼ阻害剤（アカルボース、ミグリトール）は、炭水化物消化を減速させ、そして結果として腸からの吸収を減速させて食後高血糖を低減する；
４）  チアゾリジンジオン類（トログリタゾン）はインスリン作用を増強し、それ故末梢組織におけるグルコース利用を促進させる；及び
５）  インスリンは組織グルコース利用を刺激し、そして肝臓グルコース排出を抑制する。
【０００４】
しかし、薬物の大部分は限定された有効性を有し、最も重要な問題、低下したβ−細胞機能及び関連する肥満に対応していない。
【０００５】
肥満は、現代社会に非常に多く広まった慢性疾患であり、糖尿病、インスリン抵抗性、高血圧、高コレステロール血症、及び冠動脈心疾患を含む多数の医学的問題に関連している。糖尿病及びインスリン抵抗性とはさらに高度に相関しており、これらのうち後者は、一般的に高インスリン血症又は高血糖、又はその両方を伴う。さらに、２型糖尿病は、冠動脈疾患の２〜４倍の危険性と関連する。
【０００６】
１型糖尿病は、グルカゴンの上昇と共に非常に低いか計れないほどの血漿インスリンを特徴的に示す。β−細胞がインスリンを分泌するので、β−細胞に特異的に向けられた免疫応答は１型糖尿病をもたらす。
【０００７】
１型糖尿病のための現在の治療法は、天然インスリンの欠乏から生じる高血糖を最少にしようとする。
【０００８】
線維芽細胞増殖因子２１（ＦＧＦ２１）は、主に肝臓により産生される新しい代謝調節因子であり、肥満及び２型糖尿病の動物モデルにおいて強力な抗糖尿病及び脂質低下の効果をもたらす。このホルモンは体重調節に寄与し、そしてマウスにおける栄養欠乏に対する応答及びケトン体生成状態に関与する。ＦＧＦ２１の代謝作用の主要部位は脂肪組織、肝臓及び膵臓である。実験研究は、糖尿病のマウス及び霊長類におけるＦＧＦ２１投与後の糖尿病補償及び脂質異常症における改善を示した（Ｄｏｓｔａｌｏｖａら、２００９年）。ＦＧＦ２１は、インスリンの存在下及び存在しない場合にマウス３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞におけるグルコース取り込みを刺激し、そしてｏｂ／ｏｂ及びｄｂ／ｄｂマウス並びに８週齢（ｏｌｆ）ＺＤＦラットにおいて用量依存性の様式で食後及び空腹時の血中グルコース、トリグリセリド、及びグルカゴンのレベルを減少させることが示されており、従って糖尿病及び肥満を処置するための治療としてのＦＧＦ−２１の使用についての基礎を提供する（例えば特許文献１を参照のこと）。
【０００９】
線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）は、発達する組織及び成体組織において広く発現されるポリペプチドである。ＦＧＦファミリーは現在ＦＧＦ−１〜ＦＧＦ−２３の２２のメンバーからなる。ＦＧＦファミリーのメンバーは、脊椎動物種間で遺伝子構造及びアミノ酸配列の両方において高度に保存されている。１８の哺乳動物線維芽細胞増殖因子があり（ＦＧＦ１〜ＦＧＦ１０及びＦＧＦ１６〜ＦＧＦ２３）、これらは配列相同性及び系統発生における差異に基づいて６つのサブファミリーにグループ分けされる。サブファミリーに割り当てられていない番号付けされた「ＦＧＦ」  −  ＦＧＦ相同因子（以前にＦＧＦ１１〜ＦＧＦ１４として知られる）  −  は、ＦＧＦファミリーと高い配列同一性を有するが、ＦＧＦ受容体（ＦＧＦＲ）を活性化せず、従って一般的にはＦＧＦファミリーのメンバーとはみなされない。
【００１０】
大部分のＦＧＦは細胞増殖及び分化の局所的調節因子として作用するが、最近の研究は、ＦＧＦ１５／１９、ＦＧＦ２１及びＦＧＦ２３を含むＦＧＦ１９サブファミリーメンバーが内分泌様式で重要な代謝効果を及ぼすということを示した。ＦＧＦ１９サブファミリーのメンバーは、古典的なＦＧＦにより影響を受けない様々な生理的プロセスを調節する。これらの内分泌因子の多種多様な代謝活性には、胆汁酸、炭水化物及び脂質代謝、さらにはリン酸、カルシウム及びビタミンＤのホメオスタシスの調節が含まれる（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら２００２年、Ｈｏｌｔら２００３年、Ｓｈｉｍａｄａら２００４年、Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖら２００５年、Ｉｎａｇａｋｉら２００５年、Ｌｕｎｄａｓｅｎら２００６年）。
【００１１】
ＦＧＦ２１は最初はマウス胎芽から単離された。ＦＧＦ２１  ｍＲＮＡは肝臓において最も豊富に発現され、そしてより少ない程度で胸腺において発現された（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら２０００年）。ヒトＦＧＦ２１はマウスＦＧＦ２１に対して高度に同一である（約７５％のアミノ酸同一性）。ヒトＦＧＦファミリーメンバーの中で、ＦＧＦ２１はＦＧＦ１９と最も類似している（約３５％のアミノ酸同一性）（Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら２０００年）。ＦＧＦ２１は増殖作用及び腫瘍形成性作用がなく（Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖら２００５年、Ｈｕａｎｇら２００６年、Ｗｅｎｔｅら２００６年）、これはＦＧＦファミリーのメンバーの大部分に典型的である（Ｏｒｎｉｔｚ及びＩｔｏｈ２００１年、Ｎｉｃｈｏｌｅｓら２００２年、Ｅｓｗａｒａｋｕｍａｒら２００５年）。
【００１２】
肥満レプチン欠損ｏｂ／ｏｂマウス及びレプチン受容体欠損ｄｂ／ｄｂマウス並びに肥満ＺＤＦラットへのＦＧＦ２１の投与は、血中グルコース及びトリグリセリドを有意に低下させ、空腹時インスリンレベルを減少させ、そして経口グルコース負荷試験の間のグルコースクリアランスを改善した。ＦＧＦ２１は、２週間の投与の間、糖尿病又は痩せたマウス及びラットの食物摂取にも体重／組成にも影響を及ぼさなかった。重要なことには、ＦＧＦ２１は、糖尿病若しくは健常な動物において、又はトランスジェニックマウスにおいて過剰発現された場合に試験されたいずれの用量でも、分裂促進も、低血糖も、体重増加も誘導しなかった（Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖら２００５年）。ＦＧＦ２１−過剰発現トランスジェニックマウスは食餌誘導肥満に対して抵抗性であった。
【００１３】
糖尿病アカゲザルに対するＦＧＦ２１の６週間の投与は、空腹時血漿グルコース、フルクトサミン、トリグリセリド、インスリン及びグルカゴンのレベルを減少させた。重要なことには、有意なグルコース低下効果にもかかわらず、研究の間に低血糖が観察されなかった。ＦＧＦ２１投与はまた、ＬＤＬ−コレステロールを有意に低下させ、そしてＨＤＬ−コレステロールを増加させ、そしてマウス（Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖら２００５年）と対照的に、わずかではあるが有意に体重を減少させた（Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖら２００７年）。
【００１４】
さらなる情報は以下の参考文献から得ることができる：
１．非特許文献１
２．非特許文献２
３．非特許文献３
４．非特許文献４
５．非特許文献５
６．非特許文献６
７．非特許文献７
８．非特許文献８
９．非特許文献９
１０．非特許文献１０
１１．非特許文献１１
１２．非特許文献１２
１３．非特許文献１３
１４．非特許文献１４
【００１５】
消化管ペプチドのグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）はインクレチンホルモンであり、そして栄養依存性様式で分泌される。これはグルコース依存性インスリン分泌を刺激する。ＧＬＰ−１はまたβ−細胞増殖を促進し、そしてグルコースセンサーに対するさらなる作用、胃排出の抑制、食物摂取及びグルカゴン分泌を介して血糖症を制御する。さらに、ＧＬＰ−１は２型糖尿病を有するヒト被験体においてインスリン分泌を刺激し、そして血中グルコースを減少させる。生理的食後レベルの約３〜４倍に血漿濃度を上昇させる用量での生物活性ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１（７−２７）又はＧＬＰ−１（７−３６アミド）の外因的投与は、２型糖尿病患者における空腹時高血糖を完全に正常化する（非特許文献１５）。ヒトＧＬＰ−１受容体（ＧＬＰ−１Ｒ）は、膵島、腎臓、肺、心臓並びに末梢及び中枢神経系の多数の領域において広く発現される、４６３個のアミノ酸のヘプタヘリカルＧタンパク質共役受容体である。島内で、ＧＬＰ−１Ｒは主に島β−細胞に局在化している。ＧＬＰ−１Ｒシグナル伝達の活性化は、より内分泌様の表現型への分化、特にヒトの島に由来する前駆細胞の機能的β−細胞への分化のプログラムを開始する（非特許文献１６）。
【００１６】
残念ながら、ＦＧＦ−２１及び生物活性ＧＬＰ−１の両方とも、さらには他の公知の薬物は２型糖尿病又は他（othe）の代謝障害において観察され得る複雑で多因子性の代謝機能不全に対してそれ自体では限られた有効性を有する。このことは、上記の化合物自体で血中グルコースレベルを低下させる際の有効性にも当てはまる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】ＷＯ０３／０１１２１３
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】ＤＯＳＴＡＬＯＶＡ  Ｉ．ｅｔ  ａｌ．：Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  ２１：Ａ  Ｎｏｖｅｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  Ｗｉｔｈ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｉｎ  Ｏｂｅｓｉｔｙ／Ｔｙｐｅ  ２  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｌｌｉｔｕｓ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｓ  ５８：１−７，２００９
【非特許文献２】ＥＳＷＡＲＡＫＵＭＡＲ  Ｖ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．：Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｂｙ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ  １６：１３９−１４９，２００５
【非特許文献３】ＨＯＬＴ  Ｊ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．：Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｉｇｎａｌ  ｃａｓｃａｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｂｉｌｅ  ａｃｉｄ  ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ  １７：１５８１−１５９１，２００３
【非特許文献４】ＨＵＡＮＧ  Ｘ．ｅｔ  ａｌ．：Ｆｏｒｃｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ２１  ｄｅｌａｙｓ  ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｍｏｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｇ  ４５：９３４−９４２，２００６
【非特許文献５】ＩＮＡＧＡＫＩ  Ｔ．ｅｔ  ａｌ．：Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆａｓｔｉｎｇ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｂｙ  ＰＰＡＲα−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ２１．Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ  ５：４１５−４２５，２００７
【非特許文献６】ＫＨＡＲＩＴＯＮＥＮＫＯＶ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．：ＦＧＦ−２１  ａｓ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １１５：１６２７−１６３５，２００５
【非特許文献７】ＫＨＡＲＩＴＯＮＥＮＫＯＶ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．：Ｔｈｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｓｔａｔｅ  ｏｆ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｍｏｎｋｅｙｓ  ｉｓ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｂｙ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−２１．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １４８：７７４−７８１，２００７
【非特許文献８】ＬＵＮＤÅＳＥＮ  Ｔ．ｅｔ  ａｌ．：Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  １９  ｈａｓ  ａ  ｐｒｏｎｏｕｎｃｅｄ  ｄｉｕｒｎａｌ  ｖａｒｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｂｉｌｅ  ａｃｉｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｉｎ  ｍａｎ．Ｊ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  ２６０：５３０−５３６，２００６
【非特許文献９】ＮＩＣＨＯＬＥＳ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．：Ａ  ｍｏｕｓｅ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｅｃｔｏｐｉｃ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  １９  ｉｎ  ｓｋｅｌｅｔａｌ  ｍｕｓｃｌｅ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １６０：２２９５−２３０７，２００２
【非特許文献１０】ＮＩＳＨＩＭＵＲＡ  Ｔ．ｅｔ  ａｌ．：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ＦＧＦ，ＦＧＦ−２１，ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｌｉｖｅｒ．Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １４９２：２０３−２０６，２０００
【非特許文献１１】ＯＲＮＩＴＺ  Ｄ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．：Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒｓ．Ｇｅｎｏｍｅ  Ｂｉｏｌ  ２：ＲＥＶＩＥＷＳ３００５，２００１
【非特許文献１２】ＳＨＩＭＡＤＡ  Ｔ．ｅｔ  ａｌ．：ＦＧＦ−２３  ｉｓ  ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｒｅｓ  １９：４２９−４３５，２００４
【非特許文献１３】ＴＯＭＬＩＮＳＯＮ  Ｅ．ｅｔ  ａｌ．：Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−１９  ｄｉｓｐｌａｙ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｒａｔｅ  ａｎｄ  ｄｅｃｒｅａｓｅｄ  ａｄｉｐｏｓｉｔｙ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １４３：１７４１−１７４７，２００２
【非特許文献１４】ＷＥＮＴＥ  Ｗ．ｅｔ  ａｌ．：Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−２１  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｂｅｔａ−ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｂｙ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｋｉｎａｓｅ  １／２  ａｎｄ  Ａｋｔ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ５５：２４７０−２４７８，２００６
【非特許文献１５】Ｎａｕｃｋ，Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｅｘｐ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ，１０５，１８７−１９７
【非特許文献１６】Ｄｒｕｃｋｅｒ，Ｄ．Ｊ．（２００６）  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，３，１５３−１６５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
本発明によれば、驚くべきことに、ＦＧＦ−２１とＧＬＰ−１Ｒアゴニストとの組み合わせが、相乗的様式で血中グルコースレベルを正常血糖レベルまで有意に低下させるということが見出された。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
従って、本発明の一実施態様は、少なくとも１つのＦＧＦ−２１（線維芽細胞増殖因子２１）化合物及び少なくとも１つのＧＬＰ−１Ｒ（グルカゴン様ペプチド−１受容体）アゴニストを含む医薬組成物に関する。
【００２１】
「ＦＧＦ−２１化合物」は、ＦＧＦ−２１活性を示す化合物、特に（ｉ）  ネイティブＦＧＦ−２１、特にヒトＦＧＦ−２１、特に配列番号１で示されるヒトＦＧＦ−２１、又は（ｉｉ）  ＦＧＦ−２１活性を有するＦＧＦ−２１模倣物を含む化合物として定義される。
【００２２】
「ＦＧＦ−２１活性」は、当業者に一般的に知られているＦＧＦ−２１活性アッセイで通常測定される。ＦＧＦ−２１活性アッセイは、例えばＫｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００５），１１５；１６２７，Ｎｏ．６に記載される「グルコース取り込みアッセイ」である。グルコース取り込みアッセイについての例として、脂肪細胞をＤＭＥＭ／０．１％ＢＳＡ中で３時間飢餓状態にし、ＦＧＦ−２１を用いて２４時間刺激し、そしてＫＲＰ緩衝液（１５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１１８ｍＭ  ＮａＣｌ、４．８ｍＭ  ＫＣｌ、１．２ｍＭ  ＭｇＳＯ4、１．３ｍＭ  ＣａＣｌ2、１．２ｍＭ  ＫＨ2ＰＯ4、０．１％ＢＳＡ）で２回洗浄し、そして２−デオキシ−Ｄ−［14Ｃ］グルコース（２−ＤＯＧ）（０．１μＣｉ、１００μＭ）を含有するＫＲＰ緩衝液１００μｌを各ウェルに加える。コントロールウェルは非特異性をモニタリングするために２−ＤＯＧを含むＫＲＰ緩衝液（０．１μＣｉ、１０ｍＭ）１００μｌを含む。取り込み反応を１時間３７℃で行い、サイトカラシンＢ（２０μＭ）を加えて終結させ、そしてＷａｌｌａｃ１４５０  ＭｉｃｒｏＢｅｔａカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、ＵＳＡ）を使用して測定する。
【００２３】
ＦＧＦ−２１模倣物の例は、（ａ）  配列番号１で示されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９６％、特に９９％のアミノ酸配列同一性を有し、かつＦＧＦ−２１活性を有するタンパク質、（ｂ）  ＦＧＦ−２１融合タンパク質、又は（ｃ）  ＦＧＦ−２１接合体、例えばＦＧＦ−２１ムテイン、ＦＧＦ−２１−Ｆｃ融合タンパク質、ＦＧＦ−２１−ＨＳＡ融合タンパク質若しくはＰＥＧ化ＦＧＦ−２１である。
【００２４】
ＦＧＦ−２１ムテインの例は、例えばＷＯ２００５／０６１７１２、ＷＯ２００６／０２８５９５、ＷＯ２００６／０２８７１４、ＷＯ２００６／０６５５８２又はＷＯ２００８／１２１５６３に記載される。例となるムテインは、例えば酵母で発現された場合に、野生型ヒトＦＧＦ−２１と比較してＯ−グリコシル化の減少した能力を有するムテインであり、例えば位置１６７（セリン）に置換を有するヒトＦＧＦ−２１、例えば以下の置換のうち１つを有するヒトＦＧＦ−２１である：Ｓｅｒ１６７Ａｌａ、Ｓｅｒ１６７Ｇｌｕ、Ｓｅｒ１６７Ａｓｐ、Ｓｅｒ１６７Ａｓｎ、Ｓｅｒ１６７Ｇｌｎ、Ｓｅｒ１６７Ｇｌｙ、Ｓｅｒ１６７Ｖａｌ、Ｓｅｒ１６７Ｈｉｓ、Ｓｅｒ１６７Ｌｙｓ又はＳｅｒ１６７Ｔｙｒ。別の例は、野生型ヒトＦＧＦ−２１と比較して減少した脱アミドを示すムテインであり、例えばヒトＦＧＦ−２１の位置１２１（アスパラギン）に置換を有するムテイン、例えばＡｓｎ１２１Ａｌａ、Ａｓｎ１２１Ｖａｌ、Ａｓｎ１２１Ｓｅｒ、Ａｓｎ１２１Ａｓｐ又はＡｓｎ１２１Ｇｌｕである。代替のムテインは、１つ又はそれ以上の天然でコードされないアミノ酸を有するヒトＦＧＦ−２１であり、例えばＷＯ２００８／１２１５６３の請求項２９において一般式で記載されるものである。他のムテインは、例えば極性であるが非荷電のアミノ酸又は荷電したアミノ酸の、それぞれ荷電したアミノ酸（例えばアスパルテート、グルタメート）又は極性であるが非荷電のアミノ酸（例えばセリン、トレオニン、アスパラギン、グルタミン）での置換を含む。例は、Ｌｅｕ１３９Ｇｌｕ、Ａｌａ１４５Ｇｌｕ、Ｌｅｕ１４６Ｇｌｕ、Ｉｌｅ１５２Ｇｌｕ、Ｇｌｎ１５６Ｇｌｕ、Ｓｅｒ１６３Ｇｌｕ、Ｉｌｅ１５２Ｇｌｕ、Ｓｅｒ１６３Ｇｌｕ又はＧｌｎ５４ＧＩｕである。別のムテインは、例えば酵母で発現された場合にヒトＦＧＦ−２１と比較してタンパク質分解に対する減少した感受性を示すムテイン、特にＧＩｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、ＧＩｎ、ＧＩｕ、Ｃｙｓ又はＭｅｔから選択されるアミノ酸でのＬｅｕ１５３の置換を含むヒトＦＧＦ−２１である。好ましいＦＧＦ−２１ムテインは、配列番号２に従う変異ＦＧＦ−２１であり、これはヒトＦＧＦ−２１（配列番号１）のアミノ酸１〜２８の欠失を有し、そしてＮ末端に追加のグリシンを含む。
【００２５】
ＦＧＦ−２１融合タンパク質の例は、例えばＷＯ２００４／１１０４７２又はＷＯ２００５／１１３６０６に記載され、例えばＦＧＦ−２１−Ｆｃ融合タンパク質又はＦＧＦ−２１−ＨＡＳ融合タンパク質である。「Ｆｃ」は免疫グロブリンのＦｃ部分、例えばＩｇＧ４のＦｃ部分を意味する。「ＨＳＡ」はヒト血清アルブミンを意味する。
【００２６】
ＦＧＦ−２１接合体の例は、例えばＷＯ２００５／０９１９４４、ＷＯ２００６／０５０２４７又はＷＯ２００９／０８９３９６に記載され、例えばグリコール連結ＦＧＦ−２１化合物である。このようなグリコール連結ＦＧＦ２１化合物は、通常ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を、例えばシステイン若しくはリジンアミノ酸残基に有するか、又は導入されたＮ連結若しくはＯ連結グリコシル化部位に有する（本明細書では「ＰＥＧ化ＦＧＦ−２１」と呼ぶ）。このようなＰＥＧ化ＦＧＦ−２１化合物は、一般的にヒトＦＧＦ−２１と比較して延長された作用時間を示す。適切なＰＥＧは約２０，０００〜４０，０００ダルトンの分子量を有する。
【００２７】
「ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト」は、ＧＬＰ−１（グルカゴン様ペプチド１）のような、ＧＬＰ−１受容体に結合して活性化する化合物として定義される。ＧＬＰ−１及び／又はＧＬＰ−１Ｒアゴニストの生理学的作用は、例えばＮａｕｃｋ、Ｍ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ、１０５、１８７−１９５に記載される。正常被験体、特にヒトにおけるこれらの生理学的作用としては、例えばインスリン分泌のグルコース依存性刺激、グルカゴン分泌の抑制、（プロ）インスリン生合成の刺激、食物摂取の低減、胃排出の減速、及び／又は不定（ｅｑｕｉｖｏｃａｌ）インスリン感受性が挙げられる。
【００２８】
ＧＬＰ−１Ｒアゴニストを発見するための適切なアッセイは、例えばＴｈｏｒｋｉｌｄｓｅｎ、Ｃｈｒ．ｅｔ  ａｌ．（２００３）、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、３０７、４９０−４９６；Ｋｎｕｄｓｅｎ、Ｌ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）、ＰＮＡＳ、１０４、９３７−９４２、Ｎｏ．３；Ｃｈｅｎ、Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）、ＰＮＡＳ、１０４、９４３−９４８、Ｎｏ．３；又はＵＳ２００６／０００３４１７  Ａ１（例えば実施例８を参照のこと）に記載される。手短には、「受容体結合アッセイ」において、例えばヒト組み換えＧＬＰ−１受容体を含む真核細胞、例えばＣＨＯ、ＢＨＫ又はＨＥＫ２９３細胞の精製された膜画分を、例えば125Ｉ（例えば８０ｋＢｑ／ｐｍｏｌ）で標識したヒトＧＬＰ−１、例えばＧＬＰ−１（７−３６）アミドの存在下で試験化合物（単数又は複数）とともにインキュベートする。通常は様々な濃度の試験化合物（単数又は複数）を使用し、そしてＩＣ50値をヒトＧＬＰ−１の特異的結合を減少させる濃度として決定する。「受容体機能的アッセイ」において、例えばヒトＧＬＰ−１受容体を発現している、上記のような真核細胞から単離された形質膜を用意し、試験化合物とともにインキュベートした。機能的アッセイは試験化合物による刺激に対する応答としてｃＡＭＰを測定することにより行う。「レポーター遺伝子アッセイ」において、ヒトＧＬＰ−１受容体を発現し、例えば多重応答エレメント／ｃＡＭＰ応答エレメント駆動ルシフェラーゼレポータープラスミドを含有する、例えば上記のような真核細胞を、試験化合物の存在下で培養する。ｃＡＭＰ応答エレメント駆動ルシフェラーゼ活性を、試験化合物による刺激に対する応答として測定する。
【００２９】
適切なＧＬＰ−１Ｒアゴニストは、例えばＤｒｕｃｋｅｒ、Ｄ．Ｊ．（２００６）  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、３、１５３−１６５；Ｔｈｏｒｋｉｌｄｓｅｎ、Ｃｈｒ．（２００３；ｓｕｐｒａ）；Ｃｈｅｎ、Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（２００７；ｓｕｐｒａ）；Ｋｎｕｄｓｅｎ、Ｌ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（２００７；ｓｕｐｒａ）；Ｌｉｕ、Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  Ｉｎｔ．、５１、３６１−３６９、Ｎｏ．６−７；Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ、Ｍ．ｅｔ  ａｌ．（２００９）、Ｄｒｕｇｓ、１２、５０３−５１３；Ｍａｉｄａ、Ａ．ｅｔ  ａｌ．（２００８）  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１４９、５６７０−５６７８、Ｎｏ．１１及びＵＳ２００６／０００３４１７に記載されるような、生物活性ＧＬＰ−１、ＧＬＰ−１アナログ又はＧＬＰ−１代用物から選択される。例となる化合物は、ＧＬＰ−１（７−３７）、ＧＬＰ−１（７−３６）アミド、エキセンジン（ｅｘｔｅｎｄｉｎ）−４、リラグルチド、ＣＪＣ−１１３１、アルブゴン（ａｌｂｕｇｏｎ）、アルビグルチド（ａｌｂｉｇｌｕｔｉｄｅ）、エクセナチド、エクセナチド−ＬＡＲ、オキシントモジュリン、リキシセナチド（ｌｉｘｉｓｅｎａｔｉｄｅ）、ゲニプロシド（ｇｅｎｉｐｒｏｓｉｄｅ）、ＡＶＥ−００１０、ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する短鎖ペプチド及び／又はＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する小有機化合物である。
【００３０】
詳細には、ヒトＧＬＰ−１（７−３７）は配列番号３のアミノ酸配列を有する。ヒトＧＬＰ−１（７−３６）アミドは配列番号４のアミノ酸配列を有する。エキセンジン（Ｅｘｔｅｎｄｉｎ）−４は配列番号５のアミノ酸配列を有する。エクセナチドは配列番号６のアミノ酸配列を有し、そしてオキシントモジュリンは配列番号７のアミノ酸配列を有する。リキシセナチドのアミノ酸配列は配列番号８で示される。リキシセナチドの構造は、ＤＰＰ−４（ジペプチジルペプチダーゼ−４）による即時の生理的分解に抵抗するために６つのさらなるリジン残基でＣ末端修飾されたエキセンジン−４（１−３９）に基づく。ＡＶＥ００１０のアミノ酸配列を配列番号９に示す。
【００３１】
リラグルチドの化学構造を図１に示す。リラグルチドは、ＧＬＰ−１（７−３７）のＬｙｓ３４をＡｒｇに置換し、そしてＣ１６脂肪酸を位置２６にγ−グルタミン酸スペーサーを使用して付加することにより得られた。化学名は［Ｎ−エプシロン（ガンマ−Ｌ−グルタモイル（Ｎ−アルファ−ヘキサデカノイル）−Ｌｙｓ26，Ａｒｇ34−ＧＬＰ−１（７−３７）］である。
【００３２】
ＣＪＣ−１１３１の化学構造を図２に示す。アルブミンをＧＬＰ−１のＣ末端での位置８におけるｄ−アラニン置換により付加する。ＣＪＣ−１１３１は安定性及び生物活性の非常に良好な組み合わせを示す。
【００３３】
ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する他のペプチドはＵＳ  ２００６／０００３４１７において例として開示されており、そしてＧＬＰ−１Ｒアゴニスト活性を有する小有機化合物は、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．２００７、ＰＮＡＳ、１０４、９４３−９４８、Ｎｏ．３又はＫｎｕｄｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、２００７、ＰＮＡＳ、１０４、９３７−９４２において例として開示される。
【００３４】
本発明のさらなる実施態様において、医薬組成物は、少なくとも１つの抗糖尿病薬及び／又は少なくとも１つのＤＰＰ−４阻害剤をさらに含む。
【００３５】
例となる抗糖尿病薬は、
ａ）  インスリン、
ｂ）  チアゾリジンジオン、例えばロシグリタゾン又はピオグリタゾン（例えばＷＯ２００５／０７２７６９を参照のこと）、メトホルミン（Ｎ，Ｎ−ジメチルイミドジカルボンイミド−ジアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌｉｍｉｄｏｄｉｃａｒｂｏｎｉｍｉｄｉｃ−ｄｉａｍｉｄｅ））、又は
ｃ）  スルホニルウレア、例えばクロルプロパミド（４−クロロ−Ｎ−（プロピルカルバモイル）−ベンゼンスルホンアミド）、トラザミド（Ｎ−［（アゼパン−１−イルアミノ）カルボニル］−４−メチル−ベンゼンスルホンアミド）、グリクラジド（Ｎ−（ヘキサヒドロシクロペンタ［ｃ］ピロール−２（１Ｈ）−イル−カルバモイル）−４−メチルベンゼンスルホンアミド）、又はグリメピリド（３−エチル−４−メチル−Ｎ−（４−［Ｎ−（（１ｒ，４ｒ）−４−メチルシクロヘキシルカルバモイル）−スルファモイル］フェネチル）−２−オキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−カルボキサミド）である。
【００３６】
本発明によれば、「インスリン」は天然に存在するインスリン、修飾インスリン又はインスリンアナログ、（それらの塩を含む）、及びそれらの組み合わせ、例えば修飾インスリンとインスリンアナログ、例えばアミノ酸交換／欠失／付加、さらにはアシル化又は他の化学的修飾のようなさらなる修飾を有するインスリンとの組み合わせを意味する。この種の化合物の一例はインスリンデテミル、すなわちＬｙｓＢ２９−テトラデカノイル／ｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリンである。別の例は、非天然アミノ酸又は通常は真核生物においてコードされないアミノ酸、例えばＤ−アミノ酸が組み込まれているインスリンであり得る（Ｇｅｉｇｅｒ、Ｒ．ｅｔ  ａｌ．、Ｈｏｐｐｅ  Ｓｅｙｌｅｒｓ  Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９７６）  ３５７、１２６７−１２７０；Ｇｅｉｇｅｒ、Ｒ．ｅｔ  ａｌ．、Ｈｏｐｐｅ  Ｓｅｙｌｅｒｓ  Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９７５）  ３５６、１６３５−１６４９、Ｎｏ．１０；Ｋｒａｉｌ、Ｇ．ｅｔ  ａｌ．、Ｈｏｐｐｅ  Ｓｅｙｌｅｒｓ  Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９７１）３５２、１５９５−１５９８、Ｎｏ．１１）。さらに他の例は、Ａ鎖若しくはＢ鎖のいずれか、又はその両方のＣ末端カルボン酸がアミドで置き換えられているインスリンアナログである。
【００３７】
「修飾インスリン」は、好ましくはインスリン活性を有するアシル化インスリンから選択され、特にインスリンのＡ鎖及び／又はＢ鎖における１つ又はそれ以上のアミノ酸がアシル化されているもの、好ましくは位置Ｂ２９においてアシル化されたヒトインスリンである（Ｔｓａｉ、Ｙ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、８６、１２６４−１２６８、Ｎｏ．１１）。他のアセチル化インスリンはｄｅｓＢ３０ヒトインスリン又はＢ０１ウシインスリンである（Ｔｓａｉ、Ｙ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．、前出）。アシル化インスリンの他の例は、例えばＵＳ５，７５０，４９７及びＵＳ  ６，０１１，００７に開示される。修飾インスリンについての構造活性相関の概説は、Ｍａｙｅｒ、Ｊ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ、８８、６８７−７１３、Ｎｏ．５に提供される。修飾インスリンは、典型的にはインスリン、又は適切なインスリン前駆体、例えばプレプロインスリン、プロインスリン又はそれらの短縮化アナログの化学的及び／又は酵素的操作により製造される。
【００３８】
「インスリンアナログ」は、好ましくは１つ又はそれ以上の変異、置換、欠失及び／又は付加を有するインスリン活性を有するインスリン、特にＡ鎖及び／又はＢ鎖におけるＣ末端／又はＮ末端の短縮又は伸長を有するインスリン、好ましくはｄｅｓ（Ｂ３０）インスリン、ＰｈｅＢ１インスリン、Ｂ１−４インスリン、ＡｓｐＢ２８ヒトインスリン（インスリンアスパルト）、ＬｙｓＢ２８／ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン（インスリンリスプロ）、ＬｙｓＢ０３／ＧｌｕＢ２９ヒトインスリン（インスリングルリジン）又はＧｌｙＡ２１／ＡｒｇＢ３１／ＡｒｇＢ３２ヒトインスリン（インスリングラルギン）から選択される。インスリンアナログの唯一の条件は、それが十分なインスリン活性を有することである。アミノ酸交換、欠失及び／又は付加のうちどれが許容されるかという考察を含む、インスリンアナログについての構造活性相関の概説は、Ｍａｙｅｒ、Ｊ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００７；前出）に提供される。インスリンアナログは、好ましくは天然に存在するアミノ酸残基の１つ又はそれ以上、好ましくはそれらのうち１つ、２つ又は３つが別のアミノ酸残基で置換されているようなものである。インスリンアナログのさらなる例は、Ｃ末端短縮誘導体、例えばｄｅｓ（Ｂ３０）ヒトインスリン；Ｂ鎖Ｎ末端短縮インスリンアナログ、例えばｄｅｓ  ＰｈｅＢ１インスリン又はｄｅｓ  Ｂ１−４インスリン；Ａ鎖及び／又はＢ鎖がＮ末端伸長を有するインスリンアナログ、（Ｂ鎖がＮ末端伸長を有するいわゆる「プレイインスリン」を含む）；並びにＡ鎖及び／又はＢ鎖がＣ末端伸長を有するインスリンアナログである。例えば、１つ又は２つのＡｒｇは位置Ｂ１に付加され得る。インスリンアナログの例は、以下の特許及びそれらの対応物に記載される：ＵＳ５，６１８，９１３、ＥＰ  ０  ２５４  ５１６  Ａ２及びＥＰ  ０  ２８０  ５３４  Ａ２。臨床用途におけるインスリンアナログの概説はＭａｙｅｒ  Ｊ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（２００７、前出）に提供される。インスリンアナログ又はそれらの前駆体は、典型的には当業者に周知の遺伝子工学技術を使用して、典型的には細菌又は酵母において、必要な場合はその後の酵素的又は合成的操作を用いて製造される。あるいは、インスリンアナログは化学的に製造され得る（Ｃａｏ、Ｑ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（１９８６）  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｈｏｐｐｅ  Ｓｅｙｌｅｒ、３６７、１３５−１４０、Ｎｏ．２）。具体的なインスリンアナログの例は、インスリンアスパルト（すなわちＡｓｐＢ２８ヒトインスリン）；インスリンリスプロ（すなわちＬｙｓＢ２８、ＰｒｏＢ２９ヒトインスリン）；インスリングルリジン（すなわちＬｙｓＢ０３、ＧｌｕＢ２９ヒトインスリン）；及びインスリングラルギン（すなわち、ＧｌｙＡ２１、ＡｒｇＢ３１、ＡｒｇＢ３２ヒトインスリン）である。
【００３９】
例となるＤＰＰ−４阻害剤は、
シタグリプチン：（Ｒ）−４−オキソ−４−［３−（トリフルオロメチル）−５，６−ジヒドロ［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］−ピラジン−７（８Ｈ）−イル］−１−（２，４，５−トリフルオロフェニル）ブタン−２−アミン、
ビルダグリプチン：（Ｓ）−１−［Ｎ−（３−ヒドロキシ−１−アダマンチル）グリシル］ピロリジン−２−カルボニトリル、
サクサグリプチン：（１Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）−２−［（２Ｓ）−２−アミノ−２−（３−ヒドロキシ−１−アダマンチル）−アセチル］−２−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサン−３−カルボニトリル、
リナグリプチン（ｌｉｎａｇｌｉｐｔｉｎ）  ８−［（３Ｒ）−３−アミノピペリジン−１−イル］−７−（ブタ−２−イン−１−イル）−３−メチル−１−［（４−メチル−キナゾリン−２−イル）メチル］−３，７−ジヒドロ−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン）アドグリプチン（ａｄｏｇｌｉｐｔｉｎ）（２−（｛６−［（３Ｒ）−３−アミノピペリジン−１−イル］−３−メチル−２，４−ジオキソ−３，４−ジヒドロピリミジン−１（２Ｈ）−イル｝メチル）−ベンゾニトリル、並びに
メギ、ヒドラスチス（Ｈｙｄｒａｓｔｉｓ  ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ）、及びオウレン（Ｃｏｐｔｉｓ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）のような植物の根、地下茎、茎及び樹皮において見られるイソキノリンアルカロイド群由来の第四級アンモニウム塩であるベルベリンである。
【００４０】
本発明の医薬組成物の個々の化合物は、１つの製剤中に配合されても、例えば同時投与又は継続投与、すなわち連続投与、又はそれらの組み合わせのためのいくつかの製剤中に含まれていてもよい。
【００４１】
本発明によれば、少なくとも１つのＦＧＦ−２１化合物及び少なくとも１つのＧＬＰ−１Ｒアゴニストの組み合わせは、驚くべきことに、実施例において動物モデルを用いて示されるように、血漿グルコースレベルを低下させる際に相乗効果を生じた。動物モデルはｏｂ／ｏｂ又は肥満マウス及びｄｂ／ｄｂマウスである。ｏｂ／ｏｂマウスは、食欲を調節するホルモンレプチンを産生することができない変異マウスである。結果として、ｏｂ／ｏｂマウスは過剰に食べて重度の肥満になる。これは高血糖、インスリン抵抗性及び肥満についての標準的な動物モデルである。糖尿病についての別の標準的な動物モデルは、欠損したレプチン受容体活性を有するｄｂ／ｄｂマウスである。またこのマウスも、肥満、高血糖及びインスリン抵抗性を特徴とする。
【００４２】
本発明の医薬組成物は、治療有効量の個々の化合物、及び一般的には、許容される医薬担体、希釈剤、又は添加剤、例えば滅菌水、生理食塩水、静菌性食塩水、すなわち約０．９％ｍｇ／ｍｌベンジルアルコールを含有する食塩水、リン酸緩衝化食塩水、ハンクス液、乳酸リンゲル液、ラクトース、デキストロース、スクロース、トレハロース、ソルビトール、マンニトールなどを含有する。組成物は、一般的に液剤又は懸濁剤である。これは経口、皮下、筋内、肺に、吸入により及び／又は徐放投与により投与され得る。好ましくは、組成物は皮下投与される。
【００４３】
用語「治療有効量」は一般的に、容認できない副作用を引き起こすことなく、望ましい治療効果及び／又は予防効果を生じる化合物の量を意味する。典型的な投薬量範囲は、１日あたり約０．０１ｍｇから１日あたり約１０００ｍｇである。それぞれの治療有効化合物についての好ましい投薬量範囲は、１日あたり約０．１ｍｇから１日あたり約１００ｍｇであり、そして最も好ましい投薬量範囲は、約１．０ｍｇ／日から約１０ｍｇ／日、特に約１〜５ｍｇ／日である。
【００４４】
継続投与の場合、医薬組成物の個々の化合物は、例えば実施例に示されるような、例えば「グルコース負荷試験」においてＦＧＦ−２１化合物及びＧＬＰ−１Ｒアゴニストの相乗効果がまだ測定可能である期間の間に投与される。グルコース負荷試験は、グルコースの投与後に血液からどれだけ速くグルコースが排除されるかを決定する試験である。グルコースは、最も頻繁には経口投与される（「経口グルコース負荷試験」又は「ＯＧＴＴ」）。個々の化合物、特にＦＧＦ−２１化合物及びＧＬＰ−１Ｒアゴニストの継続投与についての期間は、通常は１時間以内であり、好ましくは３０分以内であり、最も好ましくは１５分以内であり、特に５分以内である。
【００４５】
一般に、医薬組成物の患者への適用は、１日あたり１回若しくは数回、又は週に１回若しくは数回、又は場合によってはより長い期間の間である。本発明の医薬組成物の最も好ましい適用は、組み合わせた用量で１日あたり１〜３回の皮下適用である。
【００４６】
本発明の医薬組成物は、血中グルコースレベルを正常血糖レベルまで低下させ、そしてより速くより効率的なグルコース利用によりエネルギー消費を増加させ、従って少なくとも１つの代謝症候群及び／又はアテローム性硬化症、特に１型若しくは２型糖尿病、脂質異常症、肥満及び／又は脂肪過多症、特に２型糖尿病を処置するために有用である。
【００４７】
結果として、本発明はまた、上述の疾患又は障害の少なくとも１つを処置するための医薬の製造のための、記載された医薬組成物の使用、及び患者において上述の疾患の少なくとも１つを処置するための方法に関する。患者は、特に、１型糖尿病患者、２型糖尿病患者、特に食餌療法を受ける２型糖尿病患者、スルホニルウレア処置を受ける２型糖尿病患者、極期２型糖尿病患者及び／又は長期インスリン処置を受ける２型糖尿病患者から選択される。医薬は、当業者に公知の方法により、例えば薬学的に有効な量の化合物（単数又は複数）を、上記のような許容しうる医薬担体、希釈剤又は添加剤と混合することにより製造され得る。
【００４８】
以下の図面及び実施例は、説明の目的のみのためであり、本発明を限定することを意図されない。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】リラグルチドの化学構造を示す。
【図２】ＣＪＣ−１１３１の化学構造を示す。
【図３】ｏｂ／ｏｂマウスにおいてＡＶＥ００１０と共に１０日間ＦＧＦ−２１を皮下注射した後の経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）の結果を示す。
【図４】ｏｂ／ｏｂマウスにおいてＡＶＥ００１０と共にＦＧＦ−２１を皮下注射した後の血漿グルコースレベルを時間とともに示す。
【図５】ｄｂ／ｄｂマウスにおいてＡＶＥ００１０と共にＦＧＦ−２１を２１日間皮下注射した後（ａｆｔｅｒ  ａｆｔｅｒ）のＯＧＴＴの結果を示す。
【図６】ｄｂ／ｄｂマウスにおいてＡＶＥ００１０と共にＦＧＦ−２１を皮下注射した後の血漿グルコースレベルを時間とともに示す。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
〔実施例〕
１．ｏｂ／ｏｂマウスの処置
雌性ｏｂ／ｏｂマウス（Ｂ６．Ｖ−ＬＥＰ  ＯＢ／Ｊ、６週齢）をＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  （Ｓｕｌｚｆｅｌｄ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した。マウスを無作為に処置グループ又はビヒクルグループに割り当て、そして無作為化を体重及び食後血中グルコースレベルによって階層化した。動物を６匹のグループで２３℃にて１２時間の明−暗サイクルで飼育した。全ての実験手順は独国動物保護法（Ｇｅｒｍａｎ  Ａｎｉｍａｌ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  Ｌａｗ）に従って実施した。
【００５１】
Ｏｂ／ｏｂマウスをビヒクル（ＰＢＳ）、０．０５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1  ＡＶＥ００１０（配列番号９）、０．７５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1組み換えヒトＦＧＦ−２１（配列番号２）又はＦＧＦ−２１（配列番号２）及びＡＶＥ００１０（配列番号９）の組み合わせ用量（０．７５＋０．０５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1）で１日に１回皮下で処置した。薬物処置の期間の間、マウスに標準的な齧歯動物飼料を自由に食べさせた。体重を１日おきに記録し、そして食物摂取を研究の間中、週に１回測定した。最初の処置の１日前でかつ研究１０日目に、食後条件下で尾端を出血させることにより血中グルコースを測定した。図４に示されるように、処置されたマウスの血中グルコースレベルは正常血糖になった。研究８日目に、グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）を行った。絶食マウスに２ｇ・ｋｇ-1グルコースを経口負荷した。血中グルコースを示された時点に麻酔なしで尾端出血により測定した。ＯＧＴＴの結果を図３に示す。ＦＧＦ−２１のみ又はＡＶＥ００１０のみの投与と比較して、耐糖能は組み合わせ処置により顕著により強く改善された。組み合わせ処置された肥満動物は、痩せたコントロール動物よりさらに高い耐糖能であった。
【００５２】
２．ｄｂ／ｄｂマウスの処置
雌性ｄｂ／ｄｂマウス（ＢＫＳ．Ｃｇ−ｍ  ＋／＋  Ｌｅｐｒｄｂ／Ｊ、６週齢）を、ビヒクル（ＰＢＳ）、０．０５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1  ＡＶＥ００１０、０．７５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1組み換えヒトＦＧＦ−２１（配列番号２）又はＦＧＦ−２１（配列番号２）及びＡＶＥ００１０（配列番号９）の組み合わせ用量、（０．７５＋０．０５ｍｇ・ｋｇ-1・日-1）で１日に１回皮下で処置した。マウスに自由に食事させた。最初の処置の前に、１週後及び４週後の血中グルコース及びＨｂＡ１ｃを食後条件下で測定した。２１日の処置後に、経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）を開始した。絶食マウスに２ｇ・ｋｇ-1グルコース溶液を経口負荷し、そして血中グルコースを示された時点で測定した。結果を図５及び６に示す。ＦＧＦ２１及びＡＶＥ００１０の組み合わせの投与は、血中グルコースの正常化及びビヒクル処置された肥満コントロールと比較して劇的に改善された耐糖能を生じた。他方では、ＦＧＦ２１又はＡＶＥ００１０の単一処置は、組み合わせと比較して血中グルコースの抑制及び耐糖能のわずかな改善しかもたらさなかった。
【００５３】
配列
ヒトFGF−21 (配列番号１):
MDSDETGFEHSGLWVSVLAGLLLGACQAHPIPDSSPLLQPGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGT
VGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILGVKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQ
SEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPARFLPLPGLPPAPPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRS
PSYAS
変異FGF−21 (G+FGF21 H29−S209；配列番号２):
GHPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTDDAQQTEAHLEIREDGTVGGAADQSPESLLQLKALKPGVIQILG VKTSRFLCQRPDGALYGSLHFDPEACSFRELLLEDGYNVYQSEAHGLPLHLPGNKSPHRDPAPRGPAR FLPLPGLPPAPPEPPGILAPQPPDVGSSDPLSMVGPSQGRSPSYAS
ヒトGLP−1(7−37) (配列番号３):
HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG−NH2
ヒトGLP−1(7−36)NH2 (配列番号４):
HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR−NH2
エキセンジン−4 (配列番号５):
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS−NH2
エクセナチド (配列番号６):
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIETLKNGGPSSGAPPPS−NH2
オキシントモジュリン(配列番号７):
HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTKRNRNNIA−NH2
リキシセナチド(配列番号８)
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKK−NH2
AVE0010 (配列番号９):
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKK−NH2
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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