(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
遊離のＣ５ａポリペプチドに結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、前記遊離のＣ５ａは、配列番号１に示されているアミノ酸配列を有するヒトポリペプチド（ｈＣ５ａ）であり、前記抗体またはその抗原結合性断片は、以下：
Ｉ．
（ａ）軽鎖ポリペプチドであって、（ｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、軽鎖ポリペプチド、および
重鎖ポリペプチドであって、（ｉ）配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号３０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、重鎖ポリペプチド；
（ｂ）軽鎖ポリペプチドであって、（ｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、軽鎖ポリペプチド、および
重鎖ポリペプチドであって、配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号４７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、重鎖ポリペプチド；
（ｃ）軽鎖ポリペプチドであって、（ｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、軽鎖ポリペプチド、および
重鎖ポリペプチドであって、（ｉ）配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号３０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、重鎖ポリペプチド；
（ｄ）軽鎖ポリペプチドであって、（ｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む、軽鎖ポリペプチド、および
重鎖ポリペプチドであって、配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号４７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、重鎖ポリペプチド；あるいは
ＩＩ．
（ａ）配列番号３７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド；
（ｂ）配列番号３６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド；
（ｃ）配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド；
（ｄ）配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号２５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド；
（ｅ）配列番号４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド；
（ｆ）配列番号４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド；
（ｇ）配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド；
（ｈ）配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド；
（ｉ）配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド；
（ｊ）配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド；
（ｋ）配列番号３７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド；または
（ｌ）配列番号３６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド；あるいは
ＩＩＩ．
（ａ）配列番号４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド；
（ｂ）配列番号４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド；または
（ｃ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号４７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、モル過剰の切断されていないネイティブなヒトＣ５の存在下で、遊離のＣ５ａポリペプチドに結合し、かつ前記切断されていないネイティブなヒトＣ５の濃度が、前記遊離のｈＣ５ａの濃度よりも２倍〜２０倍高い、請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、モル過剰の切断されていないネイティブなヒトＣ５の存在下で、遊離のＣ５ａポリペプチドに結合し、かつ前記切断されていないネイティブなヒトＣ５の濃度が、前記遊離のｈＣ５ａの濃度よりも２倍〜１５倍高い、請求項１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４】
前記抗体が、１：１（抗原結合部位：ｈＣ５ａ）のモル比で、ｈＣ５ａ依存性ヒト好中球活性化を少なくとも５０％阻害する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項５】
配列番号２に示されているアミノ酸配列を有する遊離のｈＣ５ａポリペプチドに結合する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、以下：
軽鎖ポリペプチドであって、
（ｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む、軽鎖ポリペプチド、および
重鎖ポリペプチドであって、
（ｉ）配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号３０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む、重鎖ポリペプチド
を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、以下：
軽鎖ポリペプチドであって、
（ｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む、軽鎖ポリペプチド、および
重鎖ポリペプチドであって、
配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号４７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む、重鎖ポリペプチド
を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、以下：
軽鎖ポリペプチドであって、
（ｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む、軽鎖ポリペプチド、および
重鎖ポリペプチドであって、
（ｉ）配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号３０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む、重鎖ポリペプチド
を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項９】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、以下：
軽鎖ポリペプチドであって、
（ｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む、軽鎖ポリペプチド、および
重鎖ポリペプチドであって、
配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号４７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む、重鎖ポリペプチド
を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１０】
配列番号３７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１１】
配列番号３６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１２】
配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１３】
配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号２５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１４】
配列番号４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１５】
配列番号４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１６】
配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１７】
配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１８】
配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項１９】
配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２０】
配列番号３７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２１】
配列番号３６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２２】
配列番号４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２３】
配列番号４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチド
を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２４】
前記単離された抗体またはその抗原結合性断片が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、モル過剰の切断されていないネイティブなヒトＣ５の存在下で、１．２５×１０−９Ｍ未満のＫＤで前記遊離のｈＣ５ａポリペプチドに結合する、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２５】
ｈＣ５ａに７×１０−１０Ｍ未満のＫＤで結合する、請求項２４に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２６】
ｈＣ５ａに５×１０−１０Ｍ未満のＫＤで結合する、請求項２４に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２７】
ｈＣ５ａに２．５×１０−１０Ｍ未満のＫＤで結合する、請求項２４に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２８】
ｈＣ５ａに１．５×１０−１０Ｍ未満のＫＤで結合する、請求項２４に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２９】
ｈＣ５ａに８．０×１０−１１Ｍ未満のＫＤで結合する、請求項２４に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３０】
請求項１〜２９のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体が、１：１（抗原結合部位：Ｃ５ａ）のモル比で、ヒトＣ５ａ依存性ヒト好中球活性化を少なくとも７０％阻害する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３１】
請求項１〜２９のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体が、１：１（抗原結合部位：Ｃ５ａ）のモル比で、ヒトＣ５ａ依存性ヒト好中球活性化を少なくとも９０％阻害する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３２】
Ｃ５ａとＣ５ａ受容体との間の相互作用を阻害する、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３３】
前記Ｃ５ａ受容体がＣ５ａＲ１である、請求項３２に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３４】
前記Ｃ５ａ受容体がＣ５Ｌ２である、請求項３３に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３５】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて補体に媒介される赤血球の溶血を実質的に阻害しない、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項３６】
請求項１〜３５のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片であって、前記抗体がモノクローナル抗体である、単離された抗体または抗原結合性断片。
【請求項３７】
請求項１〜３６のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片であって、前記抗体がヒト化抗体である、単離された抗体または抗原結合性断片。
【請求項３８】
請求項１〜３７のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片であって、前記抗体が完全ヒト抗体である、単離された抗体または抗原結合性断片。
【請求項３９】
請求項１〜３８のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片であって、前記抗体が二重特異性抗体である、単離された抗体または抗原結合性断片。
【請求項４０】
請求項１〜３９のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体が、変更された重鎖定常領域を含み、前記変更された重鎖定常領域のエフェクター機能が、変更されていない形態の重鎖定常領域のエフェクター機能と比較して低下している、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４１】
前記変更された定常領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥからなる群より選択される定常領域の変更された形態である、請求項４０に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４２】
請求項１〜４１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片、および
薬学的に許容できるキャリア
を含む医薬組成物。
【請求項４３】
請求項１〜４２のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片であって、前記抗体または抗原結合性断片が、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、組換え抗体、二重特異性抗体、単鎖抗体、ダイアボディ、イントラボディ、キメラ化またはキメラ抗体、脱免疫化ヒト抗体、Ｆｖ断片、Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、およびＦ（ａｂ’）２断片からなる群より選択される、単離された抗体または抗原結合性断片。
【請求項４４】
Ｃ５ａに７．５×１０−１１Ｍ未満のＫＤで結合する、請求項１のＩ（ｂ）、請求項１のＩＩＩ（ａ）および請求項２２のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項４５】
請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片を含む組成物であって、Ｃ５ａに関連する補体障害を患っているヒトの処置において使用するためのものである、組成物。
【請求項４６】
請求項４５に記載の組成物であって、以下：
（ｉ）前記ヒトに、前記ヒトの体重１ｋｇ当たり少なくとも１ｍｇの前記抗体またはその抗原結合性断片が投与されて、少なくとも１２日間にわたって、ナノグラムレベルの遊離のＣ５ａを部分的または全体的に結合および隔離する、または
（ｉｉ）前記抗体またはその抗原結合性断片が、前記ヒトに、
（ａ）切断されていないｈＣ５の生理的なモル濃度よりも実質的に低いモル濃度Ｃｍａｘ値を実現するため、および
（ｂ）病態生理的レベルの遊離のＣ５ａを部分的または全体的に結合および隔離するため
に十分な量で投与される、ことを特徴とする、組成物。
【請求項４７】
前記Ｃ５ａに関連する補体障害が、非定型溶血性尿毒症症候群、加齢黄斑変性、重篤な熱傷、関節リウマチ、敗血症、ループス腎炎、補体に関連する肺障害、および抗リン脂質症候群からなる群より選択される、請求項４５または４６に記載の組成物。
【請求項４８】
前記補体に関連する肺障害が、喘息または慢性閉塞性肺疾患である、請求項４７に記載の組成物。
【請求項４９】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、前記ヒトに、処置の継続期間にわたって、全身Ｃ５ａ活性の低下したレベルを維持するために有効な量および頻度で投与されることを特徴とする、請求項４５〜４８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５０】
前記組成物が投与された後に、前記ヒトが、前記Ｃ５ａに関連する補体障害の１つまたは複数の症状の改善についてモニターされることをさらに特徴とする、請求項４５〜４９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５１】
前記組成物が、前記ヒトに、１種または複数種の追加的な治療剤とともに投与されることをさらに特徴とする、請求項４５〜５０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５２】
前記組成物が、静脈内投与、肺内投与、眼内投与、皮下投与、または関節内投与によって前記ヒトに送達されることをさらに特徴とする、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；および配列番号４７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項５４】
補体に関連する障害を処置するための組成物であって、前記組成物は、抗体またはその抗原結合性断片を含み、前記抗体またはその抗原結合性断片は、以下：
（ａ）重鎖および軽鎖であって、前記軽鎖は、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含み、前記重鎖は、配列番号２５、３３、４４または４９に示されているアミノ酸配列を含む、重鎖および軽鎖；
（ｂ）重鎖および軽鎖であって、前記軽鎖は、配列番号３６に示されているアミノ酸配列を含み、前記重鎖は、配列番号３３または４９に示されているアミノ酸配列を含む、重鎖および軽鎖；
（ｃ）重鎖および軽鎖であって、前記軽鎖は、配列番号４０に示されているアミノ酸配列を含み、前記重鎖は、配列番号３３または４９に示されているアミノ酸配列を含む、重鎖および軽鎖；
（ｄ）重鎖可変領域および軽鎖可変領域であって、前記軽鎖可変領域は、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号２７または４５に示されているアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域および軽鎖可変領域；
（ｅ）重鎖可変領域および軽鎖可変領域であって、前記軽鎖可変領域は、配列番号３７に示されているアミノ酸配列を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号２７または４５に示されているアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域および軽鎖可変領域；あるいは
（ｆ）重鎖可変領域および軽鎖可変領域であって、前記軽鎖可変領域は、配列番号４２に示されているアミノ酸配列を含み、前記重鎖可変領域は、配列番号２７または４５に示されているアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域および軽鎖可変領域
を含む、組成物。
【請求項５５】
単離された前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項５６】
単離された前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチド、および配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドを含む、請求項４５に記載の組成物。
【請求項５７】
前記補体に関連する障害が、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、非定型溶血性尿毒症症候群、加齢黄斑変性、重篤な熱傷、関節リウマチ、敗血症、ループス腎炎、補体に関連する肺障害、および抗リン脂質症候群からなる群より選択される、請求項４５または５４に記載の組成物。
【請求項５８】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、ｈＣ５ａに８．０×１０−１１Ｍ未満のＫＤで結合する、請求項４５または５４に記載の組成物。
【請求項５９】
前記抗体が、１：１（抗原結合部位：Ｃ５ａ）のモル比で、ヒトＣ５ａ依存性ヒト好中球活性化を少なくとも９０％阻害する、請求項４５または５４に記載の組成物。
【請求項６０】
前記抗体またはその抗原結合性断片が、Ｃ５ａとＣ５ａ受容体との間の相互作用を阻害する、請求項４５または５４に記載の組成物。
【請求項６１】
前記抗体または抗原結合性断片が、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、組換え抗体、二重特異性抗体、単鎖抗体、ダイアボディ、イントラボディ、キメラ化またはキメラ抗体、脱免疫化ヒト抗体、Ｆｖ断片、Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、およびＦ（ａｂ’）２断片からなる群より選択される、請求項４５または５４に記載の組成物。
【請求項６２】
請求項１に記載の抗体または抗原結合性断片をコードする核酸。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
この出願は、２０１０年４月３０日に出願された米国仮特許出願第６１／３３０，２６０号、および２０１１年４月４日に出願された同第６１／４７１，４６５号への優先権、およびその利益を主張する。上記米国仮特許出願の開示は、その全容が参考として本明細書に援用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明の技術分野は、医学、免疫学、分子生物学、およびタンパク質化学である。
【背景技術】
【０００３】
補体系は、体の他の免疫系と併せて、細胞病原体およびウイルス病原体の侵入からの防御のために作用する。少なくとも２５種の補体タンパク質があり、血漿タンパク質と膜補因子の複合体の集団として見いだされる。血漿タンパク質は、脊椎動物の血清中のグロブリンの約１０％を成す。補体成分は、一連の複雑だが正確な酵素による切断および膜結合事象において相互作用することによってそれらの免疫防御機能を実現する。生じた補体カスケードにより、オプソニン機能、免疫制御機能および溶解機能を持つ産物が産生される。補体の活性化に関連する生物活性の簡潔な概要は、例えば、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ、第１６版において提供される。
【０００４】
補体カスケードは、古典経路、第二経路、またはレクチン経路を介して進行する。これらの経路は、多くの構成成分を共有し、それらの最初のステップは異なるが、標的細胞の活性化および破壊に関与する同じ「終末補体」成分（Ｃ５〜Ｃ９）に収束し、それを共有する。
【０００５】
古典経路（ＣＰ）は、一般には、抗体が標的細胞上の抗原部位を認識し、それに結合することによって開始される。第二経路（ＡＰ）は、抗体に依存しない場合があり、病原体の表面上の特定の分子によって開始され得る。さらに、レクチン経路は、一般には、マンノース結合性レクチン（ＭＢＬ）が高マンノース基質に結合することによって開始される。これらの経路は、補体成分Ｃ３が活性なプロテアーゼによって切断されてＣ３ａおよびＣ３ｂがもたらされる点に収束する。補体の攻撃を活性化する他の経路は、一連の事象の後期に作用し、補体機能の種々の態様を導き得る。
【０００６】
Ｃ３ａはアナフィラトキシンである。Ｃ３ｂは、細菌細胞および他の細胞、ならびに特定のウイルスおよび免疫複合体に結合し、それらに、循環から除去するためのタグをつける。（この役割におけるＣ３ｂは、オプソニンとして公知である。）Ｃ３ｂのオプソニン機能は、一般に、補体系の最も重要な抗感染作用とみなされる。Ｃ３ｂ機能を遮断する遺伝子病変を有する患者は、広範な病原生物による感染症を起こしやすいが、一連の補体カスケードの後期に病変を有する患者、すなわち、Ｃ５機能を遮断する病変を有する患者は、ナイセリア感染症のみを起こしやすく、いくらかのみ起こしやすいことが見いだされている。
【０００７】
Ｃ３ｂは、各経路に独特の他の構成成分とも複合体を形成して、古典的Ｃ５転換酵素または第二Ｃ５転換酵素を形成し、それがＣ５をＣ５ａおよびＣ５ｂに切断する。したがって、Ｃ３は、第二経路と古典経路の両方に不可欠であるので、一連の補体反応の中心的なタンパク質であるとみなされる。Ｃ３ｂのこの性質は、Ｃ３ｂに作用してｉＣ３ｂを産生する血清プロテアーゼ因子Ｉによって制御される。ｉＣ３ｂは、依然としてオプソニンとして機能的でありながら、活性なＣ５転換酵素を形成することができない。
【０００８】
Ｃ５は、通常の血清中におよそ７５μｇ／ｍＬ（０．４μＭ）の濃度で見いだされる１９０ｋＤａのベータグロブリンである。Ｃ５はグリコシル化されており、その質量の約１．５〜３パーセントが炭水化物に起因する。成熟Ｃ５は、９９９アミノ酸、１１５ｋＤａのアルファ鎖と６５５アミノ酸、７５ｋＤａのベータ鎖とがジスルフィド連結したヘテロ二量体である。Ｃ５は、単一コピー遺伝子の単鎖の前駆体タンパク質産物として合成される（非特許文献１）。この遺伝子の転写物のｃＤＮＡ配列により、１８アミノ酸のリーダー配列とともに１６５８アミノ酸の分泌型プロＣ５前駆体が予測される（例えば、特許文献１を参照されたい）。
【０００９】
プロＣ５前駆体はアミノ酸６５５および６５９の後ろで切断されて、ベータ鎖がアミノ末端断片（上記の配列のアミノ酸残基＋１〜６５５）として、およびアルファ鎖がカルボキシル末端断片（上記の配列のアミノ酸残基６６０〜１６５８）としてもたらされ、その２つの間の４つのアミノ酸（上記の配列のアミノ酸残基６５６〜６５９）が欠失する。
【００１０】
Ｃ５ａは、Ｃ５のアルファ鎖から、第二Ｃ５転換酵素または古典的Ｃ５転換酵素のいずれかによって、アルファ鎖の最初の７４アミノ酸（すなわち、上記の配列のアミノ酸残基６６０〜７３３）を含むアミノ末端断片として切断される。１１ｋＤａの質量のＣ５ａのおよそ２０パーセントは、炭水化物に起因する。転換酵素作用の切断部位は、上記の配列のアミノ酸残基７３３またはそのすぐ隣である。この切断部位に、またはその付近に結合する化合物は、Ｃ５転換酵素が切断部位に接近することを遮断する潜在性を有し、それにより、補体阻害剤としての機能を果たす。
【００１１】
Ｃ５は、Ｃ５転換酵素活性以外の手段によって活性化することもできる。制限トリプシン消化（Ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｒｙｐｓｉｎ  ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ）（例えば、非特許文献２、および非特許文献３）、トロンビン、ならびに酸処理（非特許文献４、および非特許文献５を参照されたい）によってもＣ５を切断し、活性なＣ５ｂを産生させることができる。
【００１２】
Ｃ５を切断することにより、強力なアナフィラトキシンおよび走化性因子であるＣ５ａ、ならびに一連のタンパク質相互作用を通じて、溶解性の終末補体複合体であるＣ５ｂ−９の形成を導くＣ５ｂが放出される。Ｃ５ａおよびＣ５ｂ−９は、下流の炎症性の因子、例えば、加水分解酵素、反応性酸素種、アラキドン酸代謝産物および種々のサイトカインなどの放出を増幅することによる多面的な細胞活性化性質も有する。
【００１３】
Ｃ５ｂは、Ｃ６、Ｃ７、およびＣ８と相まって、標的細胞の表面でＣ５ｂ−８複合体を形成する。いくつかのＣ９分子に結合すると、膜攻撃複合体（ＭＡＣ、Ｃ５ｂ−９、終末補体複合体−−ＴＣＣ）が形成される。十分な数のＭＡＣが標的細胞の膜に挿入されると、それらによって創出される開口（ＭＡＣポア）により、標的細胞の急速な浸透性の溶解が媒介される。低く、非溶解的な濃度のＭＡＣにより、他の影響が生じる可能性がある。具体的には、少数のＣ５ｂ−９複合体が内皮細胞および血小板の膜に挿入されると、有害な細胞活性化が引き起こされる可能性がある。ある場合では、活性化は細胞溶解よりも先に起こる。
【００１４】
上記の通り、Ｃ３ａおよびＣ５ａはアナフィラトキシンである。これらの活性化補体成分により、好塩基球および肥満細胞からヒスタミンを放出する肥満細胞脱顆粒、ならびに他の炎症のメディエーターが誘発され、その結果、平滑筋収縮、血管透過性の増大、白血球活性化、および細胞過形成を生じる細胞増殖を含めた他の炎症性の現象がもたらされる。Ｃ５ａは、炎症促進性の顆粒球を補体活性化の部位に誘引する働きをする走化性ペプチドとしても機能する。
【００１５】
Ｃ５ａ受容体は、気管支および肺胞の上皮細胞ならびに気管支の平滑筋細胞の表面上に見いだされる。Ｃ５ａ受容体は、好酸球、肥満細胞、単球、好中球、および活性化されたリンパ球においても見いだされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】米国特許第６，３５５，２４５号明細書
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】Ｈａｖｉｌａｎｄら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９１年）１４６巻：３６２〜３６８頁
【非特許文献２】ＭｉｎｔａおよびＭａｎ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９７年）１１９巻：１５９７〜１６０２頁
【非特許文献３】ＷｅｔｓｅｌおよびＫｏｌｂ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９８２年）１２８巻：２２０９〜２２１６頁
【非特許文献４】ＹａｍａｍｏｔｏおよびＧｅｗｕｒｚ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９７８年）１２０巻：２００８頁
【非特許文献５】Ｄａｍｅｒａｕら、Ｍｏｌｅｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９８９年）２６巻：１１３３〜１１４２頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本開示は、とりわけ、本発明者らによる、遊離のＣ５ａタンパク質（すなわち、Ｃ５タンパク質からタンパク質分解で切断されたＣ５ａ）に特異的に結合するが、パラログタンパク質断片である遊離のＣ４ａまたは遊離のＣ３ａには結合しない一連のヒト化モノクローナル抗体の生成に関する［抗体は、本明細書では多くの場合、抗Ｃ５ａ抗体または抗Ｃ５ａネオエピトープ（ｎｅｏｅｐｉｔｏｐｅ）抗体と称される］。本明細書に記載され、実施例において例示されている通り、生成した抗Ｃ５ａ抗体は、遊離のＣ５ａに対して高い親和性を示す。例えば、本明細書に記載のヒト化抗Ｃ５ａ抗体は全て遊離のＣ５ａに１．２５ナノモル未満のＫＤで結合する。抗体の多くは、遊離のＣ５ａ（例えば、遊離のヒトＣ５ａ）に３００ピコモル未満のＫＤで結合し；抗体のいくつかは、遊離のＣ５ａに１００ピコモル未満のＫＤで結合する。さらに、本明細書に記載のヒト化抗Ｃ５ａ抗体は、Ｃ５ａに媒介されるシグナル伝達の阻害もする。本明細書に記載の抗体の別の構造的性質および機能的性質は以下に詳述され、実施例において例示されている。
【００１９】
本発明者らは、関節リウマチ（ＲＡ）の動物モデルおよびヒト化抗体対応物と同様の性質を有する代理抗マウスＣ５ａ抗体を使用して、ＲＡの治療における抗Ｃ５ａ抗体の効力も実証した。実施例には、ヒトＣ５ａ誘導性好中球減少症の動物モデルにおけるヒト化抗Ｃ５ａ抗体の正の治療効果が実証されている実験も示されている。
【００２０】
したがって、本発明者らは、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、Ｃ５ａに媒介されるシグナル伝達が発病の一因となる障害に関する診断方法および治療方法の宿主において有用であると考える。例えば、本発明者らは、本明細書に記載のヒト化抗Ｃ５ａ抗体が、ＲＡ、ならびに、これらに限定されないが、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、敗血症、熱傷（例えば、重篤な熱傷）、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、炎症に関連する疼痛、喘息、ループス腎炎、子宮内胎児発育遅延（ＩＵＧＲ）、ヘルプ症候群（溶血性貧血、肝酵素の上昇および血小板数の低下（Ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ  ａｎｅｍｉａ，  Ｅｌｅｖａｔｅｄ  Ｌｉｖｅｒ  ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｎｄ  Ｌｏｗ  Ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｃｏｕｎｔ））、グッドパスチャー症候群、および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を含めた他の補体に関連する障害を治療または予防するために有用であることを主張する。ヒト化抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を用いて処置するのに特に適している追加的な障害は当技術分野で公知であり、本明細書において列挙されている。
【００２１】
本明細書に記載のヒト化抗Ｃ５ａ抗体は、例えば、全長のＣ５または成熟Ｃ５に結合し、その切断を阻害する作用剤に対するいくつもの利点を特徴とする。そのような作用剤と同様に、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体（およびその抗原結合性断片）は、Ｃ５の断片であるＣ５ａを通じて媒介されるＣ５の活性化のアナフィラトキシン性の下流の影響を阻害することができる。すなわち、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、補体に関連する障害、例えば、これらに限定されないが、敗血症、ＲＡ、および喘息などの発病において不可欠な役割を果たすことが公知のＣ５ａに媒介される炎症反応を阻害することができる。しかし、ヒト血清中のＣ５の濃度はおよそ０．３７μＭであるので（ＲａｗａｌおよびＰａｎｇｂｕｒｎ（２００１年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６巻（４号）：２６３５〜２６４２頁）、多くの場合、ヒトにおいて、Ｃ５を有効に阻害し、それにより、Ｃ５ａに媒介される炎症反応を阻害するためには、抗Ｃ５抗体を高濃度で使用し、かつ／または高頻度で投与することが必要である。Ｃ５とは異なり、Ｃ５ａは血液中にはるかに低い濃度で存在し、多くの場合、局所的な補体活性化の特定の領域、例えば、喘息患者の肺、ＲＡ患者の関節、またはＡＭＤの患者の眼のドルーゼンなどに限られている。したがって、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、例えば、ヒトに、抗Ｃ５抗体よりもはるかに低い用量で、かつ／または少ない頻度で投与（例えば、補体活性化部位に局所投与）し、ヒトにおいて、Ｃ５ａの同じまたはより大きな阻害を有効にもたらすことができる。抗Ｃ５抗体の必要用量と比較して低用量の抗Ｃ５ａ抗体を投与することができることにより、追加的な送達経路、例えば、皮下投与、筋肉内投与、肺内送達、および生物学的に分解できるミクロスフェアを使用することによる投与なども可能になる。また、抗原Ｃ５ａの濃度がＣ５に対して低いことにより、抗原に媒介される抗体クリアランスの寄与が低下するので、抗Ｃ５ａ抗体の半減期が、例えば、終末補体を標的とする治療用抗体の半減期と比較して長くなる。
【００２２】
さらに、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、それらの安全性プロファイルによっても、終末補体を阻害する治療剤（例えばＣ５阻害剤など）と区別することができる。終末補体成分、例えば、Ｃ５、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、またはＣ９などの阻害の注目すべき結果は、普通は終末補体により溶解される、莢膜を有する細菌（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ  ｂａｃｔｅｒｉａ）、例えば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓおよびＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅに対する宿主免疫系による保護の減少である。例えば、Ｈａｅｎｅｙら（１９８０年）Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４０巻：１６〜２４頁およびＢｒｏｄｓｋｙ（２００９年）Ｂｌｏｏｄ  １１３巻（２６号）：６５２２〜６５２７頁を参照されたい。抗Ｃ５ａ抗体はＣ５ａに媒介される炎症反応を阻害するが、莢膜を有する細菌を溶解する終末補体複合体の形成は妨げないので、本明細書に記載の治療的抗Ｃ５ａ抗体を受けている患者は保護的なワクチン接種、例えば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓおよびＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅに対するワクチン接種を必要としない。
【００２３】
したがって、一態様では、本開示は、遊離のＣ５ａに結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片を特徴とする。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ；例えば、配列番号１に示されているアミノ酸配列を含むまたはそれからなるヒトＣ５ａタンパク質）に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、脱アルギニン（ｄｅｓａｒｇｉｎａｔｅｄ）形態の遊離のＣ５ａ、例えば、配列番号２に示されているアミノ酸配列を含むまたはそれからなる脱アルギニン形態のヒトＣ５ａに結合し得る。抗体は、切断されていないＣ５には存在しない、または切断されていないＣ５全体のうちの少数にのみ存在する、遊離のＣ５ａのネオエピトープに結合し得る。
【００２４】
本開示は、決して任意の特定の理論または作用機構に限定されるものではないが、いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は遊離のＣ５ａ（例えば、遊離のｈＣ５ａ）に結合し、試料（例えば、血液試料もしくは血漿試料または組換え型の全長のＣ５を含む試料）中の全長のＣ５の総集団の１０％未満（例えば、９．５％未満、９％未満、８．５％未満、８％未満、７．５％未満、７％未満、６．５％未満、６％未満、５．５％未満、５％未満、４．５％未満、４％未満、３．５％未満、３％未満、２．５％未満、２％未満、１．５％未満、１％未満、０．５％未満、０．４％未満、０．３％未満、０．２％未満、または０．１％未満）を構成する、切断されていないプロセシングされたＣ５（例えば、血漿Ｃ５）の亜集団とも結合し得、その亜集団は、全体的にまたは部分的に、抗Ｃ５ａ抗体または断片に結合する別の遮られたＣ５ａネオエピトープが露出するように変性している。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、遊離のＣ５ａに結合し得るが、９０％以上の切断されていないネイティブな（ｕｎｃｌｅａｖｅｄ，ｎａｔｉｖｅ）Ｃ５集団の切断されていないＣ５タンパク質とは結合し得ない。いくつかの実施形態では、上記の部分的または全体的に変性したＣ５の亜集団は、Ｃ５の活性を検査するために有用な任意の数の適切なアッセイ、例えば、溶血アッセイまたはＣＨ５０ｅｑアッセイにおいて、不活性であるまたは活性が低下している（例えば、完全に機能的な全長のＣ５タンパク質の９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満の活性）（以下を参照されたい）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体に結合し得る少数の亜集団の活性を検査するための適切な方法は当技術分野で公知であり、本明細書に記載されている。
【００２５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片はいずれも、切断されていないＣ５（例えば、切断されていないネイティブなＣ５）に対して少なくとも５倍以上（例えば、５．６倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、１００倍、１１０倍、１２０倍、１３０倍、１４０倍、１５０倍、１６０倍、１７０倍、１８０倍、１９０倍、または２００倍）過剰な抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片の存在下でさえも、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶血アッセイまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＣＨ５０ｅｑアッセイにおいてＣ５の活性を阻害しない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片はいずれも、切断されていないネイティブなＣ５に対して約５倍〜２００倍（例えば、約５倍〜１００倍、約１０倍〜１００倍、約２０倍〜１００倍、または約１０倍〜１５０倍）過剰な抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片の存在下でさえも、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ溶血アッセイまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＣＨ５０ｅｑアッセイにおいてＣ５の活性を阻害しない。例えば、Ｃ５の活性に関する阻害とは、例えば、溶血アッセイまたはＣＨ５０ｅｑアッセイにおいて、同様の条件下、かつ等モル濃度において対照抗体（またはその抗原結合性断片）の効果と比較して、切断されていないネイティブなＣ５の活性が少なくとも５％（例えば、少なくとも６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、または６０％）減少することを含む。実質的な阻害とは、本明細書で使用される場合、所与の活性（例えば、Ｃ５の活性）が少なくとも４０％（例えば、少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％、またはそれ以上）阻害されることを指す。いくつかの実施形態では、Ｃ５は、血漿から得られる（例えば、血漿、例えば、ヒト血漿から精製される、またはその中に存在する）。
【００２６】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、Ｃ５ａタンパク質（例えば、ヒトＣ５ａタンパク質）に２ｎＭ未満のＫＤで結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、Ｃ５ａタンパク質に１ｎＭ未満のＫＤで結合する［本明細書では、「ナノモル以下の親和性」とも称される］。
【００２７】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、モル過剰の切断されていないネイティブなＣ５（例えば、精製されたＣ５および／または組換えＣ５）の存在下で、遊離のＣ５ａにナノモル以下の親和性［例えば、９．９×１０−１０Ｍ以下（例えば、９×１０−１０Ｍ以下、８×１０−１０Ｍ以下、７×１０−１０Ｍ以下、６×１０−１０Ｍ以下、５×１０−１０Ｍ以下、４×１０−１０Ｍ以下、３×１０−１０Ｍ以下、２．５×１０−１０Ｍ以下、２×１０−１０Ｍ以下、１×１０−１０Ｍ以下、８．０×１０−１１Ｍ以下、７．０×１０−１１Ｍ以下、６．０×１０−１１Ｍ以下、５．０×１０−１１Ｍ以下、４．０×１０−１１Ｍ以下、または３．０×１０−１１Ｍ以下）のＫＤ］で結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片はいずれも、遊離のＣ５ａに対して、切断されていないネイティブなＣ５タンパク質に対するよりも少なくとも１００倍（例えば、少なくとも１１０倍、１２０倍、１３０倍、１４０倍、１５０倍、１６０倍、１７０倍、１８０倍、１９０倍、２００倍、２２５倍、２５０倍、２７５倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、１０００倍、２０００倍、３０００倍、４０００倍、５０００倍、６０００倍、７０００倍、８０００倍、９０００倍、または１００００倍）高い親和性（例えば、そのＫＤで表される）を有する。
【００２８】
したがって、別の態様では、本開示は、（ａ）遊離のＣ５ａ（例えば、ｈＣ５ａ）にナノモル以下の親和性で結合し、（ｂ）遊離のＣ５ａに、その対応する、切断されていないネイティブなＣ５タンパク質に対する親和性よりも少なくとも１００倍（例えば、少なくとも１１０倍、１２０倍、１３０倍、１４０倍、１５０倍、１６０倍、１７０倍、１８０倍、１９０倍、２００倍、２２５倍、２５０倍、２７５倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、１０００倍、２０００倍、３０００倍、４０００倍、５０００倍、６０００倍、７０００倍、８０００倍、９０００倍、または１００００倍）高い親和性で結合する抗体またはその抗原結合性断片を特徴とする。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、遊離のｈＣ５ａと１００ｎＭのＫＤで結合し得、切断されていないヒトＣ５タンパク質の少なくとも亜集団と少なくとも１００倍高いＫＤ（例えば、少なくとも１０ｎＭ）で結合し得る。
【００２９】
別の態様では、本開示は、配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する遊離のヒトＣ５ａポリペプチドに結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、ヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）に対してモル過剰（例えば、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、１５０倍、２００倍、３００倍、４００倍、または５００倍のモル過剰）の切断されていないネイティブなヒトＣ５の存在下で、１．２５×１０−９Ｍ未満のＫＤでヒトＣ５ａポリペプチドに結合する抗体またはその抗原結合性断片を特徴とする。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、遊離のｈＣ５ａに対して少なくとも２倍以上のモル過剰であるが、５００倍以下またはそれ未満（例えば、５００倍、４５０倍、４００倍、３５０倍、３００倍、２５０倍、２００倍、１５０倍、１００倍、９０倍、８０倍、７０倍、６０倍、５０倍、４０倍、３０倍、２５倍、２０倍、または１５倍）のモル過剰の切断されていないネイティブなＣ５の存在下で遊離のｈＣ５ａポリペプチドにナノモル以下の親和性（例えば、本明細書において列挙されているナノモル以下のＫＤの親和性のいずれか）で結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、遊離のｈＣ５ａに対して２倍から２０倍の間のモル過剰の切断されていないネイティブなＣ５の存在下で遊離のｈＣ５ａポリペプチドにナノモル以下の親和性（例えば、本明細書において列挙されているナノモル以下のＫＤの親和性のいずれか）で結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、遊離のｈＣ５ａに対して１０倍から２０倍の間のモル過剰の切断されていないネイティブなＣ５の存在下で遊離のｈＣ５ａポリペプチドにナノモル以下の親和性（例えば、本明細書において列挙されているナノモル以下のＫＤの親和性のいずれか）で結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、遊離のｈＣ５ａに対して５倍から１５倍の間のモル過剰の切断されていないネイティブなＣ５の存在下で遊離のｈＣ５ａポリペプチドにナノモル以下の親和性（例えば、本明細書において列挙されているナノモル以下のＫＤの親和性のいずれか）で結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、遊離のｈＣ５ａに対して少なくとも２倍だが２０倍以下のモル過剰の切断されていないネイティブなＣ５の存在下で遊離のｈＣ５ａポリペプチドにナノモルの親和性（例えば、本明細書において列挙されているナノモル以下のＫＤの親和性のいずれか）で結合する。そのような測定は、例えば、標準の親和性決定技法を用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける測定であってよく、その多くは、本明細書において列挙され、かつ／または説明されている。
【００３０】
別の態様では、本開示は、配列番号１に示されているアミノ酸配列を有するヒトＣ５ａポリペプチドに結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、１．２５×１０−９Ｍ未満のＫＤでヒトＣ５ａポリペプチドに結合し、切断されていないネイティブなＣ５に対して１０倍以下のモル過剰の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片の存在下でさえも、等モル量の対照抗体またはその抗原結合性断片と比較して、Ｃ５の活性を実質的に阻害しない抗体またはその抗原結合性断片を特徴とする。
【００３１】
本明細書に記載の任意の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片のいくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、遊離のヒトＣ５ａに結合し、また、少なくとも１種の非ヒト哺乳動物種由来の遊離のＣ５ａに交差反応する。例えば、いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体（またはその抗原結合性断片）は、ヒト由来の遊離のＣ５ａに（例えば、ナノモル以下の親和性で）結合し、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル、アカゲザル、類人猿、ヒヒ、チンパンジー、オランウータン、またはゴリラ）、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、またはウサギ）、ウシ、ヤギ、ロバ、ブタ、イヌ、ネコ、またはウマ由来の遊離のＣ５ａにも結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、９．９×１０−１０Ｍ以下（例えば、９×１０−１０Ｍ以下、８×１０−１０Ｍ以下、７×１０−１０Ｍ以下、６×１０−１０Ｍ以下、５×１０−１０Ｍ以下、４×１０−１０Ｍ以下、３×１０−１０Ｍ以下、２．５×１０−１０Ｍ以下、２×１０−１０Ｍ以下、１×１０−１０Ｍ以下、８．０×１０−１１Ｍ以下、７．０×１０−１１Ｍ以下、６．０×１０−１１Ｍ以下、５．０×１０−１１Ｍ以下、４．０×１０−１１Ｍ以下、または３．０×１０−１１Ｍ以下）のＫＤで遊離のｈＣ５ａに結合し、カニクイザル（または別の非ヒト霊長類種）由来の遊離のＣ５ａにも結合し、ヒトＣ５ａに対する親和性（例えば、そのＫＤで表される）は、カニクイザル（または他の非ヒト霊長類種）Ｃ５ａに対する親和性の５００倍以下（例えば、５倍以下、１０倍以下、２０倍以下、３０倍以下、４０倍以下、５０倍以下、６０倍以下、７０倍以下、８０倍以下、９０倍以下、１００倍以下、１２５倍以下、１５０倍以下、２００倍以下、２５０倍以下、３００倍以下、３５０倍以下、４００倍以下、４５０倍以下、または４７５倍以下）の高さである。例えば、いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体は、対応する、非ヒト霊長類Ｃ５ａに対する抗体の親和性よりも５０倍以下高い親和性で遊離のｈＣ５ａに結合する（例えば、遊離のｈＣ５ａに対して１００ｎＭのＫＤおよび非ヒト霊長類Ｃ５ａに対して５ｎＭ以下のＫＤ）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、９．９×１０−１０Ｍ以下（例えば、９×１０−１０Ｍ以下、８×１０−１０Ｍ以下、７×１０−１０Ｍ以下、６×１０−１０Ｍ以下、５×１０−１０Ｍ以下、４×１０−１０Ｍ以下、３×１０−１０Ｍ以下、２．５×１０−１０Ｍ以下、２×１０−１０Ｍ以下、１×１０−１０Ｍ以下、８．０×１０−１１Ｍ以下、７．０×１０−１１Ｍ以下、６．０×１０−１１Ｍ以下、５．０×１０−１１Ｍ以下、４．０×１０−１１Ｍ以下、または３．０×１０−１１Ｍ以下）のＫＤで遊離のｈＣ５ａに結合し、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、またはウサギ）由来のＣ５ａにも結合し、ヒトＣ５ａに対する親和性（例えば、そのＫＤで表される）は、げっ歯類Ｃ５ａに対する親和性よりも１０００倍以下（例えば、５倍以下、１０倍以下、２０倍以下、３０倍以下、４０倍以下、５０倍以下、６０倍以下、７０倍以下、８０倍以下、９０倍以下、１００倍以下、１２５倍以下、���５０倍以下、２００倍以下、２５０倍以下、３００倍以下、３５０倍以下、４００倍以下、４５０倍以下、４７５倍以下、５００倍以下、５５０倍以下、６００倍以下、６５０倍以下、７００倍以下、７５０倍以下、８００倍以下、８５０倍以下、９００倍以下、９５０倍以下、または９７５倍以下）高い。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣ５ａと非ヒト哺乳動物（例えば、げっ歯類またはカニクイザルなどの非ヒト霊長類）由来のＣ５ａのどちらにもナノモル以下の親和性で結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＣ５ａおよび非ヒト霊長類Ｃ５ａに均等な親和性（例えば、等しいＫＤ）で結合し得る。
【００３２】
例えば、本開示は、遊離のヒトＣ５ａにナノモル以下の親和性［例えば、９．９×１０−１０Ｍ以下（例えば、９×１０−１０Ｍ以下、８×１０−１０Ｍ以下、７×１０−１０Ｍ以下、６×１０−１０Ｍ以下、５×１０−１０Ｍ以下、４×１０−１０Ｍ以下、３×１０−１０Ｍ以下、２．５×１０−１０Ｍ以下、２×１０−１０Ｍ以下、１×１０−１０Ｍ以下、８．０×１０−１１Ｍ以下、７．０×１０−１１Ｍ以下、６．０×１０−１１Ｍ以下、５．０×１０−１１Ｍ以下、４．０×１０−１１Ｍ以下、または３．０×１０−１１Ｍ以下）のＫＤ］で結合し、カニクイザル（または他の非ヒト霊長類）由来の遊離のＣ５ａに交差反応する抗体またはその抗原結合性断片であって、カニクイザル（または他の非ヒト霊長類）Ｃ５ａに１０×１０−９Ｍ未満、９×１０−９Ｍ未満、８×１０−９Ｍ未満、７×１０−９Ｍ未満、６×１０−９Ｍ未満、５×１０−９Ｍ未満、４×１０−９Ｍ未満、３×１０−９Ｍ未満、２×１０−９Ｍ未満、１×１０−９Ｍ未満、９．９×１０−１０Ｍ未満（例えば、９×１０−１０Ｍ未満、８×１０−１０Ｍ未満、７×１０−１０Ｍ未満、６×１０−１０Ｍ未満、５×１０−１０Ｍ未満、４×１０−１０Ｍ未満、３×１０−１０Ｍ未満、２．５×１０−１０Ｍ未満、２×１０−１０Ｍ未満、１×１０−１０Ｍ未満、または８．０×１０−１１Ｍ未満）］のＫＤで結合し、ヒトＣ５ａに対する親和性が、カニクイザル（または非ヒト霊長類）Ｃ５ａに対する親和性よりも５００倍以下（例えば、５倍以下、１０倍以下、２０倍以下、３０倍以下、４０倍以下、５０倍以下、６０倍以下、７０倍以下、８０倍以下、９０倍以下、１００倍以下、１２５倍以下、１５０倍以下、２００倍以下、２５０倍以下、３００倍以下、３５０倍以下、４００倍以下、４５０倍以下、または４７５倍以下）高い（例えば、ヒトＣ５ａに対して１００ｎＭのＫＤおよび非ヒト霊長類Ｃ５ａに対して５０ｎＭ以下のＫＤ）抗体またはその抗原結合性断片を特徴とする。所与の抗原に対する抗体またはその抗原結合性断片の親和性を決定するための適切な方法は当技術分野で公知であり、本明細書において記載され、例示されている。
【００３３】
いくつかの実施形態では、交差反応性抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、それに結合する遊離のｈＣ５ａと非ヒト哺乳動物Ｃ５ａのどちらも機能的に阻害する。例えば、抗体は、１：１（抗原結合部位：Ｃ５ａ）のモル比で、ヒトＣ５ａ依存性ヒト好中球活性化を少なくとも７０％（例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％、またはそれ以上）阻害し、１：１（抗原結合部位：Ｃ５ａ）のモル比で、非ヒト哺乳動物Ｃ５ａ依存性の好中球活性化（好中球は抗体に結合する非ヒト哺乳動物Ｃ５ａと同じ種由来である）を少なくとも７０％（例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％、またはそれ以上）阻害する。
【００３４】
別の態様では、本開示は、配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する遊離のｈＣ５ａポリペプチドに結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片を特徴とし、その抗体またはその抗原結合性断片は、１．２５×１０−９Ｍ未満のＫＤでヒトＣ５ａポリペプチドに結合し、ｈＣ５ａと非ヒト哺乳動物種由来のＣ５ａのどちらとも結合する。非ヒト哺乳動物種は、例えば、カニクイザル、アカゲザル、またはヒヒなどの非ヒト霊長類であってよい。いくつかの実施形態では、非ヒト哺乳動物種は、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、スナネズミ、またはハムスターなどのげっ歯類である。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、対応する非ヒト哺乳動物種由来のＣ５ａに対する親和性の１００倍以下高い親和性でｈＣ５ａに結合する。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、１：１（抗原結合部位：Ｃ５ａ）のモル比で、ヒトＣ５ａ依存性ヒト好中球活性化を少なくとも５０％阻害する。
【００３５】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザルまたはアカゲザル）由来の遊離のＣ５ａに結合し、その遊離のＣ５ａタンパク質は配列番号１７９または配列番号１８０に示されているアミノ酸配列を含むまたはそれからなるアミノ酸配列を有する。
【００３６】
実施例に記載の通り、本発明者らは、遊離のＣ５ａ（この場合、ヒトＣ５ａ）と高い親和性で結合し、切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）とははるかに低い親和性で結合する二価の抗Ｃ５ａ抗体であって、組成物（例えば、水性溶液）中、生理的条件下、平衡状態で、抗体の抗原結合部位のモル量（ｍｏｌａｒ  ａｍｏｕｎｔ）と比較してモル過剰の切断されていないヒトＣ５の存在下で、複数の抗体の少なくとも９５％がそれぞれ１つ以下のｈＣ５分子に結合する二価の抗Ｃ５ａ抗体であるＢＮＪ３８３も発見した。複数の抗体の少なくとも９５％の第２の抗原結合部位は、遊離のＣ５ａに結合するために利用可能な（例えば、実質的に利用可能な）のままである。本開示は、決して特定の理論または作用機構のいずれにも縛られるものではないが、本発明者らは、二価の抗Ｃ５ａ抗体は、切断されていないＣ５と、立体的な障害によって抗Ｃ５ａ抗体の第２の抗原結合部位が第２の切断されていないＣ５タンパク質に結合することが妨げられる、または少なくとも実質的に阻害されるように結合する（例えば、そのようなエピトープにおいて）が、抗体は、２つのｈＣ５ａ分子への結合に容易に適応し得ると考える。したがって、抗体は、モル過剰の切断されていないＣ５の中でさえも、遊離のＣ５ａに高い親和性で結合する能力を保持し、それにより、モル過剰においてさえも、Ｃ５ａの炎症促進活性を阻害する能力を保持する。
【００３７】
当業者は、そのような抗Ｃ５ａ抗体の無数の治療的な利益を容易に、すぐに理解するであろう。例えば、上記の通り、ヒト血清中を循環しているＣ５の濃度は非常に高い。したがって、２つの切断されていないＣ５分子に同時に結合し得る抗Ｃ５ａ抗体を哺乳動物に導入すると、モル過剰のＣ５の中で急速に不活性化され、その後、補体活性化の事象においてもはや遊離のＣ５ａに結合し得なくなる。また、抗Ｃ５抗体と同様に、この種類の抗Ｃ５ａ抗体は、Ｃ５ａが産生される事象においてＣ５ａを有効に阻害するために、高濃度で使用し、かつ／または高頻度で投与することが必要であると思われる。したがって、これと対照的に、モル過剰の切断されていないＣ５の中でさえも遊離のＣ５ａに結合する能力を保持する本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、例えば、抗Ｃ５抗体よりもはるかに低い用量かつ／または少ない頻度でヒトに投与され、ヒトにおいて、同等以上のＣ５ａの阻害を有効にもたらすことができる。
【００３８】
したがって、さらに別の態様では、本開示は、２つの抗原結合部位を含む単離された抗体であって、各抗原結合部位が、独立に、遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得、（ｉ）複数の前記抗体と、（ｉｉ）抗原結合部位のモル量と比較してモル過剰のｈＣ５とを含む水性溶液中、平衡状態で、かつ生理的条件下で、前記複数の抗体の少なくとも９５％（例えば、少なくとも９５．５％、９６％、９６．５％、９７％、９７．５％、または９７．７％）が１つ以下のｈＣ５分子に結合する、すなわち、５％以下の抗体が、平衡状態で、ｈＣ５の２つの分子に結合している、単離された抗体を特徴とする。
【００３９】
別の態様では、本開示は、２つの抗原結合部位を含む単離された抗体であって、各抗原結合部位が、独立に、遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得、平衡状態で、かつ生理的条件下で、（ｉ）複数の前記抗体と、（ｉｉ）抗原結合部位（または抗体）のモル量と比較してモル過剰のｈＣ５とを含む水性溶液中で、前記複数の抗体の少なくとも９５％が、遊離のｈＣ５ａに結合するために利用可能な少なくとも１つの抗原結合部位を保持する、単離された抗体を特徴とする。
【００４０】
別の態様では、本開示は、２つの抗原結合部位を含む単離された抗体であって、各抗原結合部位が、独立に、遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得、平衡状態で、かつ生理的条件下で、（ｉ）複数の前記抗体と、（ｉｉ）抗原結合部位（または抗体）のモル量と比較してモル過剰のｈＣ５とを含む水性溶液中で、前記複数の抗体の５％以下の各抗原結合部位がｈＣ５分子に結合している、単離された抗体を特徴とする。
【００４１】
本明細書に記載の任意の単離された抗体のいくつかの実施形態では、モル過剰とは、少なくとも２倍（例えば、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、またはさらに１０倍）のモル過剰である。
【００４２】
本明細書に記載の任意の単離された抗体のいくつかの実施形態では、生理的条件とは、３．９ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、６．１ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、および１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．０である。
【００４３】
本明細書に記載の任意の単離された抗体のいくつかの実施形態では、各抗原結合部位は、独立に、遊離のｈＣ５ａと１．２５×１０−９Ｍ未満のＫＤで結合し得る。いくつかの実施形態では、各抗原結合部位は、独立に、遊離のｈＣ５ａとナノモル以下の親和性で結合し得る（上記を参照されたい）。
【００４４】
本明細書に記載の任意の単離された抗体のいくつかの実施形態では、単離された抗体は、配列番号４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと配列番号４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む。
【００４５】
本明細書に記載の任意の単離された抗体のいくつかの実施形態では、単離された抗体は、（ｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号４７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【００４６】
いくつかの実施形態では、単離された抗体は、本明細書に記載の軽鎖ＣＤＲセットのいずれか、本明細書に記載の軽鎖可変領域のいずれか（例えば、ヒト化軽鎖可変領域のいずれか）、本明細書に記載の重鎖ＣＤＲセットのいずれか、本明細書に記載の重鎖可変領域のいずれか（例えば、ヒト化重鎖可変領域のいずれか）、または任意の適切なそれらの組み合わせを含んでよい。例えば、表１または２を参照されたい。
【００４７】
別の態様では、本開示は、補体に関連する障害（例えば、Ｃ５ａに関連する補体障害）を患っているヒトを処置するための方法であって、ヒトに、本明細書に記載の任意の単離された抗体を、補体に関連する障害を処置するために十分な量で投与することを含む方法を特徴とする。
【００４８】
別の態様では、本開示は、Ｃ５ａに関連する補体障害を患っているヒトを処置するための方法であって、ヒトに、本明細書に記載の任意の単離された抗体を、ヒトの体重１ｋｇ当たり少なくとも０．６ｍｇ（例えば、少なくとも０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、または１ｍｇ）投与し、それにより、抗体がナノグラムレベルの遊離のＣ５ａに部分的にまたは完全に結合し、それを１２日間超、または１２日間、または少なくとも１２日間（例えば、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、または２５日間）にわたって隔離することを含む方法を特徴とする。
【００４９】
別の態様では、本開示は、Ｃ５ａに関連する補体障害を患っているヒトを処置するための方法であって、ヒトに、本明細書に記載の任意の単離された抗体を、ヒトの体重１ｋｇ当たり少なくとも１０ｍｇ投与し、それにより、抗体がナノグラムレベルの遊離のＣ５ａに部分的にまたは完全に結合し、それを少なくとも２４日間にわたって隔離することを含む方法を特徴とする。
【００５０】
別の態様では、本開示は、Ｃ５ａに関連する補体障害を患っているヒトを処置するための方法であって、ヒトに、本明細書に記載の任意の単離された抗体（または、例えば、本明細書に記載の任意の単離された抗体を含む医薬組成物）を、（ａ）切断されていないｈＣ５の生理的なモル濃度以下のモルＣｍａｘ値を実現するため、および（ｂ）病態生理的レベルの遊離のＣ５ａに部分的または全体的に結合し、それを隔離するために十分な量で投与することを含む方法を特徴とする。
【００５１】
本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態では、抗体を、被験体（例えば、ヒト）に、切断されていないＣ５（例えば、ｈＣ５）の生理的なモル濃度よりも実質的に低いモルＣｍａｘ値を実現するために十分な量で投与する。
【００５２】
本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態では、Ｃｍａｘ値は、例えば、８０ｎＭ（またはおよそ０．６ｍｇ／ｋｇ）以下である。いくつかの実施形態では、Ｃｍａｘレベルは、７０ｎＭ以下（例えば、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、または２０ｎＭ）である。いくつかの実施形態では、Ｃｍａｘ値は、およそ１００ｎＭ以下である。いくつかの実施形態では、モルＣｍａｘ値は、２００ｎＭ以下である。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態では、モルＣｍａｘ値は、例えば、４００ｎＭ（またはおよそ３ｍｇ／ｋｇ）以下である。いくつかの実施形態では、モルＣｍａｘ値は、４００ｎＭ以下（例えば、３５０ｎＭ、３００ｎＭ、２５０ｎＭ、２００ｎＭ、１５０ｎＭ、１００ｎＭ、９０ｎＭ、８０ｎＭ、７０ｎＭ、６０ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭまたは１０ｎＭ）である。
【００５３】
別の態様では、本開示は、Ｃ５ａに関連する補体障害を患っているヒトを処置するための方法であって、ヒトに、本明細書に記載の任意の単離された抗体（または、例えば、本明細書に記載の任意の単離された抗体を含む医薬組成物）を、（ａ）切断されていないｈＣ５の生理的なモル濃度と等しい、それ未満である、またはそれよりも実質的に低いモルＣｍａｘ値を実現するため、および（ｂ）少なくとも１２日間（例えば、少なくとも２４日間）にわたって、ナノグラムレベルの遊離のＣ５ａに部分的または全体的に結合し、それを隔離するために十分な量で投与することを含む方法を特徴とする。適切なＣｍａｘ値は、上記されている。
【００５４】
本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態では、Ｃ５ａに関連する補体障害は、例えば、敗血症、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、敗血症性ショック、抗リン脂質症候群、劇症型抗リン脂質症候群、播種性血管内凝固、ループス腎炎、グッドパスチャー症候群、熱傷または重篤な熱傷、喘息、ヘルプ症候群（溶血性貧血、肝酵素の上昇および血小板数の低下）、炎症に誘導される疼痛、Ｃ５ａに媒介される好中球減少症、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、慢性閉塞性肺疾患、および関節リウマチからなる群より選択される障害であってよい。
【００５５】
さらに別の態様では、本開示は、複数の単離された抗体を含む組成物であって、複数の抗体の各々が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得る２つの抗原結合部位を含み、ヒトＣ５（ｈＣ５）の存在下、かつ生理的条件下で、平衡状態で、複数の抗体の５％以下が、切断されていないｈＣ５に同時に結合した２つの抗原結合部位を含む、組成物を特徴とする。
【００５６】
本明細書に記載の任意の組成物のいくつかの実施形態では、任意の特定の結合立体配置における複数の抗体の百分率を、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して評価することができる。いくつかの実施形態では、抗体を評価する生理的条件は、以下の条件を含む：ｈＣ５（例えば、モル過剰（例えば、２倍のモル過剰）のｈＣ５）を複数の抗体と一緒に、３．９ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、６．１ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、および１５０ｍＭのＮａＣｌを含む、ｐＨ７．０の水性溶液中、４℃で８４時間インキュベートすること。本開示の目的に関して、４℃、８４時間で得られた溶液は、平衡状態にあるとみなされる。
【００５７】
本明細書に記載の任意の組成物のいくつかの実施形態では、生理的条件下、かつ抗体に対して少なくとも２倍のモル過剰のｈＣ５の存在下で、複数の抗体の５％以下が、切断されていないｈＣ５に同時に結合した２つの抗原結合部位を含む。
【００５８】
本明細書に記載の任意の組成物のいくつかの実施形態では、複数の抗体をｈＣ５と一緒に、３．９ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、６．１ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、および１５０ｍＭのＮａＣｌを含む、ｐＨ７．０の水性溶液中、４℃で８４時間インキュベートした後、ＨＰＬＣを使用して評価したところ、複数の抗体の５％以下が、切断されていないｈＣ５分子に同時に結合した２つの抗原結合部位を含む。
【００５９】
別の態様では、本開示は、複数の単離された抗体を含む組成物であって、複数の抗体の各々が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得る２つの抗原結合部位を含み、複数の抗体をｈＣ５と一緒に、３．９ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、６．１ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、および１５０ｍＭのＮａＣｌを含む、ｐＨ７．０の水性溶液中、４℃で８４時間インキュベートした後に評価したところ（例えば、ＨＰＬＣを使用して）、複数の抗体の５％以下が、切断されていないｈＣ５に同時に結合した２つの抗原結合部位を含む組成物を特徴とする。
【００６０】
さらに別の態様では、本開示は、複数の単離された抗体を含む組成物であって、複数の抗体のそれぞれが第１の抗原結合部位および第２の抗原結合部位を含み、各抗原結合部位が、独立に、遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得、独立に、遊離のｈＣ５ａポリペプチドに１．２５×１０−９Ｍ未満のＫＤで結合し得、ヒトＣ５（ｈＣ５）の存在下、生理的条件下で評価したところ（例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して）複数の抗体の少なくとも９５％の２つの抗原結合部位が、切断されていないｈＣ５によって以下の立体配置で占有されている：（ｉ）第１の抗原結合部位は切断されていないｈＣ５に結合しており、第２の抗原結合部位は結合していない；または（ｉｉ）第１の抗原結合部位は結合しておらず、第２の抗原結合部位は切断されていないｈＣ５に結合している組成物を特徴とする。
【００６１】
さらに別の態様では、本開示は、複数の単離された抗体を含む組成物であって、複数の抗体の各々が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得る２つの抗原結合部位を含み、ヒトＣ５（ｈＣ５）の存在下、生理的条件下で評価したところ（例えば、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を使用して）、複数の抗体の少なくとも９５％が、遊離のｈＣ５ａに結合し得る少なくとも１つの抗原結合部位を含む組成物を特徴とする。
【００６２】
本明細書に記載の任意の組成物のいくつかの実施形態では、複数の抗体は、少なくとも２倍のモル過剰のｈＣ５：抗体の存在下で評価する。本明細書に記載の任意の組成物のいくつかの実施形態では、複数の抗体を、少なくとも２倍のモル過剰のｈＣ５：抗原結合部位の存在下で評価する。
【００６３】
さらに別の態様では、本開示は、２つの抗原結合部位を含む単離された抗体であって、遊離のＣ５ａまたは切断されていないＣ５に結合し、抗体の抗原結合部位のうちの１つが、モル過剰（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、１５倍、または、さらには２０倍、または２倍超、５倍超、１０倍超、１５倍超、または、さらには２０倍超のモル過剰）の切断されていないＣ５の存在下で、遊離のＣ５ａに結合するために利用可能のままである、単離された抗体を特徴とする。
【００６４】
いくつかの実施形態では、抗原結合部位は同じ特異性を有する（例えば、２つの抗原結合部位のそれぞれのＣＤＲは、同一のアミノ酸配列を共有する）。いくつかの実施形態では、遊離のＣ５ａはヒトＣ５ａである。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣ５ａと非ヒト哺乳動物種由来のＣ５ａの間で交差反応性である。いくつかの実施形態では、抗体は、遊離のＣ５ａにナノモル以下の親和性で結合し得る。いくつかの実施形態では、抗体は、その対応する、切断されていないＣ５に対する親和性よりも少なくとも１００倍高いＣ５ａに対する親和性を有する。
【００６５】
別の態様では、本開示は、２つの抗原結合部位を含む単離された抗体であって、各抗原結合部位が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し、切断されていないｈＣ５がいかなる濃度であっても（例えば、ｈＣ５ａに対してモル過剰の切断されていないｈＣ５）、抗体の抗原結合部位のうちの少なくとも１つが、遊離のｈＣ５ａに結合するために利用可能なままである（例えば、ヒトの生理的条件下、例えば、ヒトの血液中または血清中で）、単離された抗体を特徴とする。
【００６６】
別の態様では、本開示は、複数の単離された抗体を含む組成物であって、複数の抗体の各々が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得る２つの抗原結合部位を含み、１：１（抗体：ｈＣ５）のモル比で、複数の抗体の５％以下もしくはそれ未満（例えば、４．９％以下もしくはそれ未満、４．８％以下もしくはそれ未満、４．７％以下もしくはそれ未満、４．６％以下もしくはそれ未満、４．５％以下もしくはそれ未満、４．４％以下もしくはそれ未満、４．３％以下もしくはそれ未満、４．２％以下もしくはそれ未満、４．１％以下もしくはそれ未満、４．０％以下もしくはそれ未満、３．９％以下もしくはそれ未満、３．８％以下もしくはそれ未満、３．７％以下もしくはそれ未満、３．６％以下もしくはそれ未満、３．５％以下もしくはそれ未満、３．４％以下もしくはそれ未満、３．３％以下もしくはそれ未満、３．２％以下もしくはそれ未満、３．１％以下もしくはそれ未満、３．０％以下もしくはそれ未満、２．９％以下もしくはそれ未満、２．８％以下もしくはそれ未満、２．７％以下もしくはそれ未満、２．６％以下もしくはそれ未満、２．５％以下もしくはそれ未満、２．４％以下もしくはそれ未満、２．３％以下もしくはそれ未満、２．２％以下もしくはそれ未満、２．１％以下もしくはそれ未満、２．０％以下もしくはそれ未満、１．９％以下もしくはそれ未満、１．８％以下もしくはそれ未満、１．７％以下もしくはそれ未満、１．６％以下もしくはそれ未満、１．５％以下もしくはそれ未満、１．４％以下もしくはそれ未満、１．３％以下もしくはそれ未満、１．２％以下もしくはそれ未満、１．１％以下もしくはそれ未満、または１％以下もしくはそれ未満）が、切断されていないｈＣ５に同時に結合した２つの抗原結合部位を含む、組成物を特徴とする。いくつかの実施形態では、各抗原結合部位は、独立に、遊離のｈＣ５ａと１．２５×１０−９Ｍ未満のＫＤで結合し得る（または、例えば、ナノモル以下の親和性で）。
【００６７】
別の態様では、本開示は、複数の単離された抗体を含む組成物であって、複数の抗体の各々が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得る２つの抗原結合部位を含み、生理的なレベルの切断されていないｈＣ５の存在下で、ヒトに１ｍｇ／ｋｇ以上の用量で投与すると、複数の抗体がナノグラムレベルの遊離のＣ５ａに部分的または全体的に結合し、１２日間超、１２日間、または少なくとも１２日間（例えば、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、または２５日間）にわたってそれを隔離する、組成物を特徴とする。
【００６８】
別の態様では、本開示は、複数の単離された抗体を含む組成物であって、複数の抗体の各々が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得る２つの抗原結合部位を含み、生理的なレベルの切断されていないｈＣ５の存在下で、ヒトに１０ｍｇ／ｋｇ以上の用量で投与すると、複数の抗体がナノグラムレベルの遊離のＣ５ａに部分的または全体的に結合し、１２日間超、１２日間、または少なくとも１２日間（例えば、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、または２５日間）にわたってそれを隔離する、組成物を特徴とする。
【００６９】
別の態様では、本開示は、複数の単離された抗体を含む組成物であって、複数の抗体の各々が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得る２つの抗原結合部位を含み、生理的なレベルの切断されていないｈＣ５の存在下で、切断されていないｈＣ５の生理的なモル濃度よりも実質的に低いモルＣｍａｘ値を実現する用量で投与すると、複数の抗体がナノグラムレベルの遊離のＣ５ａに部分的または全体的に結合し、１２日間超、１２日間、または少なくとも１２日間（例えば、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、２０日間、２１日間、２２日間、２３日間、２４日間、または２５日間）にわたってそれを隔離する、組成物を特徴とする。
【００７０】
別の態様では、本開示は、複数の単離された抗体を含む組成物であって、複数の抗体の各々が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得る２つの抗原結合部位を含み、生理的なレベルの切断されていないｈＣ５の存在下で、切断されていないｈＣ５の生理的なモル濃度よりも実質的に低いモルＣｍａｘ値を実現する用量で投与すると、複数の抗体が病態生理的レベルの遊離のＣ５ａに部分的または全体的に結合し、それを隔離する、組成物を特徴とする。
【００７１】
別の態様では、本開示は、第１の抗原結合部位および第２の抗原結合部位を含む単離された抗体であって、各抗原結合部位が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得、抗原結合部位の両方が完全に占有されている場合（かつ、例えば、ヒトの生理的条件下、例えば、ヒトの血液中または血清中で）、（ｉ）第１の抗原結合部位は遊離のｈＣ５ａに結合しており、第２の抗原結合部位は切断されていないｈＣ５に結合している；（ｉｉ）第１の抗原結合部位は遊離のｈＣ５ａに結合しており、第２の抗原結合部位は遊離のｈＣ５ａに結合している；または（ｉｉｉ）第１の抗原結合部位は切断されていないｈＣ５に結合しており、第２の抗原結合部位は遊離のｈＣ５ａに結合している、という結合立体配置が可能である、単離された抗体を特徴とする。
【００７２】
さらに別の態様では、本開示は、第１の抗原結合部位および第２の抗原結合部位を含む単離された抗体であって、各抗原結合部位が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得、各抗原結合部位が、独立に、遊離のｈＣ５ａと１．２５×１０−９Ｍ未満のＫＤで（または、例えば、ナノモル以下の親和性で）結合し得、複数の抗体を含有する生理的溶液中で、抗体の少なくとも９５％が、（ｉ）第１の抗原結合部位は遊離のｈＣ５ａに結合しており、第２の抗原結合部位は切断されていないｈＣ５に結合している；（ｉｉ）第１の抗原結合部位は遊離のｈＣ５ａに結合しており、第２の抗原結合部位は遊離のｈＣ５ａに結合している；（ｉｉｉ）第１の抗原結合部位は切断されていないｈＣ５に結合しており、第２の抗原結合部位は遊離のｈＣ５ａに結合している；（ｉｖ）第１の抗原結合部位は切断されていないｈＣ５に結合しており、第２の抗原結合部位は結合していない；（ｖ）第１の抗原結合部位はｈＣ５ａに結合しており、第２の抗原結合部位は結合していない；（ｖｉ）第１の抗原結合部位は結合しておらず、第２の抗原結合部位は切断されていないｈＣ５に結合している；（ｖｉｉ）第１の抗原結合部位は結合しておらず、第２の抗原結合部位はｈＣ５ａに結合している；および（ｖｉｉｉ）第１の抗原結合部位は結合しておらず、第２の抗原結合部位も結合していない、という立体配置である、単離された抗体を特徴とする。
【００７３】
別の態様では、本開示は、２つの抗原結合部位を含む単離された抗体であって、各抗原結合部位が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得、ｈＣ５ａに対してモル過剰の切断されていないｈＣ５の中で、１：１（抗原結合部位：ｈＣ５ａ）のモル比で、ｈＣ５ａ依存性ヒト好中球活性化を少なくとも５０％阻害する、単離された抗体を特徴とする。
【００７４】
本明細書に記載の任意の抗体のいくつかの実施形態では、ヒトの生理的条件下で、完全にフォールディングされたネイティブなヒトＣ５ａタンパク質およびＣ５タンパク質を伴う立体配置が可能である。
【００７５】
本明細書に記載の任意の抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、遊離のｈＣ５ａと１．２５×１０−９Ｍ未満のＫＤで（または、例えば、ナノモル以下の親和性で）結合する。
【００７６】
さらに別の態様では、本開示は、（ａ）遊離のＣ５ａ（例えば、ｈＣ５ａ）にナノモル以下の親和性で結合し、（ｂ）遊離のＣ５ａに、その対応する、切断されていないＣ５タンパク質に対する親和性よりも少なくとも１００倍（例えば、少なくとも１１０倍、１２０倍、１３０倍、１４０倍、１５０倍、１６０倍、１７０倍、１８０倍、１９０倍、２００倍、２２５倍、２５０倍、２７５倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、１０００倍、２０００倍、３０００倍、４０００倍、５０００倍、６０００倍、７０００倍、８０００倍、９０００倍、または１００００倍）高い親和性で結合する抗体を特徴とする。複数の抗体を含む生理的組成物中では、少なくとも９５％の抗体について、抗体のただ１つの抗原結合部位が切断されていないＣ５タンパク質に結合しており、第２の抗原結合部位は、遊離のＣ５ａに結合するために利用可能なままである（ｈＣ５ａは、配列番号１に示されているアミノ酸配列を有してよい）。
【００７７】
別の態様では、本開示は、Ｃ５ａに関連する補体障害を患っているヒトを処置するための方法であって、ヒトに、各々が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得る２つの抗原結合部位を含む複数の単離された抗体を含む組成物を投与することを含み、ヒトに、そのヒトの体重１ｋｇ当たり少なくとも１ｍｇの抗体を投与し、抗体を投与することが、ナノグラムレベルの遊離のＣ５ａに部分的または全体的に結合し、それを少なくとも１２日間にわたって隔離するために有効である方法を特徴とする。
【００７８】
別の態様では、本開示は、補体に関連する障害（例えば、Ｃ５ａに関連する補体障害）を患っているヒトを処置するための方法であって、ヒトに、複数の単離された抗体を含む組成物を投与することを含み、複数の抗体の各々が２つの抗原結合部位を含み、各抗原結合部位が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得、ヒトに、そのヒトの体重１ｋｇ当たり少なくとも１０ｍｇの抗体が投与され、抗体を投与することが、ナノグラムレベルの遊離のＣ５ａに部分的または全体的に結合し、それを少なくとも２４日間にわたって隔離するために有効である方法を特徴とする。
【００７９】
別の態様では、本開示は、補体に関連する障害（例えば、Ｃ５ａに関連する補体障害）を患っているヒトを処置するための方法であって、ヒトに、複数の単離された抗体を含む組成物を投与することを含み、複数の抗体の各々が２つの抗原結合部位を含み、各抗原結合部位が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得、抗体が、（ａ）切断されていないｈＣ５の生理的なモル濃度よりも実質的に低いモルＣｍａｘ値を実現するため、および（ｂ）少なくとも１２日間にわたって、ナノグラムレベルの遊離のＣ５ａに部分的または全体的に結合し、それを隔離するために十分な用量で投与される方法を特徴とする。
【００８０】
別の態様では、本開示は、補体に関連する障害（例えば、Ｃ５ａに関連する補体障害）を患っているヒトを処置するための方法であって、ヒトに、複数の単離された抗体を含む組成物を投与することを含み、前記複数の抗体の各々が２つの抗原結合部位を含み、各抗原結合部位が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得、抗体が、（ａ）切断されていないｈＣ５の生理的なモル濃度よりも実質的に低いモルＣｍａｘ値を実現するため、および（ｂ）少なくとも２４日間にわたって、ナノグラムレベルの遊離のＣ５ａに部分的または全体的に結合し、それを隔離するために十分な用量で投与される方法を特徴とする。
【００８１】
別の態様では、本開示は、補体に関連する障害（例えば、Ｃ５ａに関連する補体障害）を患っているヒトを処置するための方法であって、ヒトに、複数の単離された抗体を含む組成物を投与することを含み、複数の抗体の各々が２つの抗原結合部位を含み、各抗原結合部位が、独立に遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得、抗体が、（ａ）切断されていないｈＣ５の生理的なモル濃度よりも実質的に低いモルＣｍａｘ値を実現するため、および（ｂ）病態生理的レベルの遊離のＣ５ａに部分的または全体的に結合し、それを隔離するために十分な用量で投与される方法を特徴とする。
【００８２】
本明細書に記載の組成物（例えば、複数の抗体を含む組成物）または単離された抗体（例えば、Ｃ５またはモル過剰のＣ５の存在下で、遊離のＣ５ａに結合し得る遊離のＦａｂアームを保持する抗体）はいずれも、（ａ）本開示に従って医薬組成物として処方することができる、（ｂ）治療用キット（本明細書に記載の）に含めることができる、または（ｃ）本明細書に記載の充填済みシリンジに含めることができることが理解される。
【００８３】
本明細書において提供される実施例に記載の通り、本発明者らは、遊離のｈＣ５ａと高い親和性（ナノモル以下の親和性）で結合するだけでなく、切断されていないＣ５が過剰な濃度においては、終末補体複合体（ＴＣＣ）形成を用量依存的に阻害する抗体であるＢＮＪ３８３も発見した（以下を参照されたい）。しかし、６．５倍超過剰なＣ５中の抗Ｃ５ａ抗体の濃度においてさえも、ＴＣＣの阻害は完全ではない。本開示は、決して特定の理論または作用機構のいずれにも限定されるものではないが、抗体は、切断されていないＣ５の少なくとも何分の１かに結合することによってＴＣＣの形成を阻害し、その切断を防ぎ得る、かつ／または、別の方法でＣ５と追加的なＴＣＣ構成成分が上手く結びつくことを防ぎ得る。本発明者らは、そのような抗体が、補体に関連する障害、例えば、Ｃ５ａが有意な役割を果たし、Ｃ５ｂ含有ＴＣＣが果たす実質的な役割が小さい障害を処置するために有用であることを認めた。そのような障害としては、例えば、敗血症、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、敗血症性ショック、抗リン脂質症候群、劇症型抗リン脂質症候群、播種性血管内凝固、ループス腎炎、グッドパスチャー症候群、熱傷または重篤な熱傷、喘息、ヘルプ症候群（溶血性貧血、肝酵素の上昇および血小板数の低下）、炎症に誘導される疼痛、Ｃ５ａに媒介される好中球減少症、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、慢性閉塞性肺疾患、および関節リウマチを挙げることができる。
【００８４】
本発明者らは、これらの状態を処置するための、そのような抗Ｃ５ａ抗体の使用は、とりわけ、終末補体阻害性薬物の使用と比較して、さらに有益な安全性プロファイルをもたらすことも認めた。上記の通り、Ｃ５、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、またはＣ９などの終末補体成分などを阻害することの１つの注目すべき結果は、普通は終末補体により溶解される莢膜を有する細菌、例えば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓおよびＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅに対する宿主免疫系による保護が低下することである。本節に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、Ｃ５ａに媒介される炎症反応を阻害するが、莢膜を有する細菌を溶解する終末補体複合体の形成を完全には阻害しないので、本明細書に記載の治療的抗Ｃ５ａ抗体を受けている患者は、保護的なワクチン接種、例えば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓおよびＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅに対するワクチン接種を必要としない可能性がある。ＴＣＣの部分的な阻害により、終末補体の抗微生物性反応は完全には抑止されないが、組織傷害としてのＴＣＣ誘導性炎症を実際に低下させることができる。ＴＣＣの部分的な阻害により、Ｃ５ａの阻害と相まって、抗Ｃ５ａ抗体がさらに強力な抗炎症性化合物になると考えられている。
【００８５】
したがって、別の態様では、本開示は、遊離のＣ５ａに結合する抗体またはその抗原結合性断片であって、前記遊離のＣ５ａが、配列番号１に示されているアミノ酸配列を有するヒトＣ５ａであり、抗体が、Ｃ５ａとＣ５ａ受容体の結合を阻害し、終末補体複合体（ＴＣＣ）の形成を部分的に阻害する、抗体またはその抗原結合性断片を特徴とする。本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片による部分的な阻害とは、例えば、抗体の存在下での補体活性が、抗体またはその抗原結合性断片の非存在下での補体活性の最大８０％、または８０％以下（例えば、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、または２５％）であることであってよい。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、遊離のＣ５ａ（例えば、遊離のｈＣ５ａ）とナノモル以下の親和性で結合する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片の遊離のＣ５ａに対する親和性は、対応する、切断されていないＣ５に対する抗体または抗原結合性断片の親和性よりも少なくとも１００倍高い。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＨ５０ｅｑアッセイを用いて測定したところ、２００μｇ／ｍＬを超える濃度（例えば、２１０μｇ／ｍＬ、２２０μｇ／ｍＬ、２３０μｇ／ｍＬ、２４０μｇ／ｍＬ、２５０μｇ／ｍＬ、２６０μｇ／ｍＬ、２７０μｇ／ｍＬ、２８０μｇ／ｍＬ、２９０μｇ／ｍＬ、３００μｇ／ｍＬ、３２０μｇ／ｍＬ、３４０μｇ／ｍＬ、３６０μｇ／ｍＬ、３８０μｇ／ｍＬ、または４００μｇ／ｍＬまたはそれ以上）において、ＴＣＣの形成を少なくとも５０％阻害する。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、実施例に記載の通りＷｉｅｓｌａｂ（登録商標）古典経路補体キットを使用して測定したところ、２００μｇ／ｍＬを超える濃度（例えば、２１０μｇ／ｍＬ、２２０μｇ／ｍＬ、２３０μｇ／ｍＬ、２４０μｇ／ｍＬ、２５０μｇ／ｍＬ、２６０μｇ／ｍＬ、２７０μｇ／ｍＬ、２８０μｇ／ｍＬ、２９０μｇ／ｍＬ、３００μｇ／ｍＬ、３２０μｇ／ｍＬ、３４０μｇ／ｍＬ、３６０μｇ／ｍＬ、３８０μｇ／ｍＬ、または４００μｇ／ｍＬまたはそれ以上）において、補体活性化の古典経路を少なくとも５０％阻害する。
【００８６】
別の態様では、本開示は、補体に関連する障害（例えば、Ｃ５ａに関連する補体障害または補体に関連する炎症性障害）を患っているヒトを処置するための方法を特徴とする。この方法は、ヒトに、Ｃ５ａとＣ５ａ受容体の結合を阻害する、抗体またはその抗原結合性断片を有効量で投与することを含み、抗体は、終末補体複合体（ＴＣＣ）の形成を部分的に阻害する。上記を参照されたい。障害は、当技術分野で公知または本明細書に記載の障害のいずれであってもよい。
【００８７】
別の態様では、本開示は、配列番号１に示されているアミノ酸配列を有するヒトＣ５ａポリペプチドに結合するが、切断されていないネイティブなＣ５のアルファ鎖とは結合しない単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、前記ヒトＣ５ａポリペプチドと１．２５×１０−９Ｍ未満のＫＤで結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片を特徴とする。
【００８８】
別の態様では、本開示は、配列番号１に示されているアミノ酸配列を有するヒトＣ５ａポリペプチドに結合するが、切断されていないネイティブなＣ５のアルファ鎖とは結合しない単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、抗体が、１：１（抗原結合部位：Ｃ５ａ）のモル比で、ヒトＣ５ａ依存性ヒト好中球活性化を少なくとも５０％阻害する、単離された抗体またはその抗原結合性断片を特徴とする。いくつかの実施形態では、抗体は、実施例５に記載の通り、０．４ｎＭの抗体を使用して２ｎＭのヒトＣ５ａの好中球活性化活性を阻害するアッセイにおいて、ヒトＣ５ａ依存性のヒト好中球の遊走を少なくとも５０％阻害する。いくつかの実施形態では、抗体は、表１に示されている例示的なＣＤＲ対３を含まない。いくつかの実施形態では、抗体は、ＢＮＪ３７１ではない。
【００８９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するヒトＣ５ａポリペプチドに結合する。
【００９０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを含む軽鎖ポリペプチドを含む。
【００９１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号３８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを含む軽鎖ポリペプチドを含む。
【００９２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号２９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号３０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを含む重鎖ポリペプチドを含む。
【００９３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号６７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号３０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを含む重鎖ポリペプチドを含む。
【００９４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号４７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを含む重鎖ポリペプチドを含む。
【００９５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３７または配列番号３６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含む。
【００９６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２７または配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドを含む。
【００９７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む。
【００９８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む。
【００９９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１９または配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含む。
【０１００】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２７または配列番号２５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドを含む。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号２５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４２または配列番号４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含む。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２７または配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドを含む。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４５、配列番号４４または配列番号４９のいずれか１つに示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドを含む。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３７または配列番号３６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含む。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４５または配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドを含む。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４２または配列番号４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含む。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４５または配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドを含む。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む。
【０１１９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、ｈＣ５ａと７×１０−１０Ｍ未満のＫＤで結合する。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、ｈＣ５ａと５×１０−１０Ｍ未満のＫＤで結合する。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、ｈＣ５ａと３×１０−１０Ｍ未満のＫＤで結合する。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、ｈＣ５ａと２．５×１０−１０Ｍ未満のＫＤで結合する。
【０１２４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、ｈＣ５ａと１．５×１０−１０Ｍ未満のＫＤで結合する。
【０１２５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、ｈＣ５ａと１．０×１０−１０Ｍ未満のＫＤで結合する。
【０１２６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、ｈＣ５ａと８．０×１０−１１Ｍ未満のＫＤで結合する。
【０１２７】
いくつかの実施形態では、抗体は、１：１（抗原結合部位：Ｃ５ａ）のモル比で、ヒトＣ５ａ依存性ヒト好中球活性化を少なくとも７０％（例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％、またはそれ以上）阻害する。いくつかの実施形態では、抗体は、表１に示されている例示的なＣＤＲ対３を含まない。いくつかの実施形態では、抗体は、ＢＮＪ３７１ではない。
【０１２８】
さらに別の態様では、本開示は、表３または表７に記載の軽鎖ＣＤＲセットを含む単離された抗体またはその抗原結合性断片を特徴とする。例えば、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号１４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｉｉ）配列番号１５６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１５８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｉｉｉ）配列番号１６４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１６５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１６６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１７２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１７３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１７４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｖ）配列番号８４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号８６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｖｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号９３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｖｉｉ）配列番号８８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号９０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｖｉｉｉ）配列番号９５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号９７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｉｘ）配列番号９９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１００に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１０１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｘ）配列番号８４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１０３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｘｉ）配列番号１０５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１０６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１０７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｘｉｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１０８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｘｉｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１１０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；または（ｘｉｖ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチドを含んでよい。いくつかの実施形態では、軽鎖ＣＤＲセットを含む抗体またはその抗原結合性断片は、表８に記載の重鎖ＣＤＲセットのいずれか１つを含む重鎖ポリペプチドも含む。
【０１２９】
別の態様では、本開示は、表３または表８に記載の重鎖ＣＤＲセットを含む単離された抗体またはその抗原結合性断片を特徴とする。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｉｉ）配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号３０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｉｉｉ）配列番号１６０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１６１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１６２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１６８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１６９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１７０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｖ）配列番号１７６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１７７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１７８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｖｉ）配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１１６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｖｉｉ）配列番号１１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１２１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｖｉｉｉ）配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｉｘ）配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｘ）配列番号１１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｘｉ）配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｘｉｉ）配列番号１３１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｘｉｉｉ）配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号４７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；または（ｘｉｖ）配列番号１３６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１３８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、重鎖ＣＤＲセットを含む抗体またはその抗原結合性断片は、表７に記載の軽鎖ＣＤＲセットのいずれか１つを含む軽鎖ポリペプチドも含む。
【０１３０】
別の態様では、本開示は、表７の軽鎖ＣＤＲセットおよび表８に記載のその同族の重鎖ＣＤＲセットを含む抗体またはその抗原結合性断片を特徴とする。別の態様では、本開示は、表３または表９に記載の軽鎖ＣＤＲセットと重鎖ＣＤＲセットの対を含む単離された抗体またはその抗原結合性断片を特徴とする。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号１４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号３０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｉｉｉ）配列番号１５６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１５８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１６０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１６１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１６２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１６４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１６５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１６６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１６８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１６９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１７０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｖ）配列番号１７２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１７３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１７４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１７６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１７７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１７８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｖｉ）配列番号８８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１２１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｖｉｉ）配列番号１０５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１０６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１０７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｖｉｉｉ）配列番号８４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号８６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１１６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｉｘ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１１０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１１１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１３６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１３８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｘ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１１３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号４７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｘｉ）配列番号９９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１００に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１０１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｘｉｉ）配列番号９５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｘｉｉｉ）配列番号１４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｘｉｖ）配列番号１０５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１０６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１０７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｘｖ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１０８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｘｖｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｘｖｉｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｘｖｉｉｉ）配列番号８４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１０３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｘｉｘ）配列番号９５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；（ｘｘ）配列番号８４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１０３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；または（ｘｘｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１１３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１３１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、表３に記載の軽鎖ＣＤＲセットと重鎖ＣＤＲセットの対を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、表２に記載の軽鎖ＣＤＲセットと重鎖ＣＤＲセットの対を含む。例えば、本開示は、（ｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号４７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む抗体を特徴とする。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、表２に記載の軽鎖可変領域を含み、その軽鎖は、表２に記載の重鎖可変領域のいずれか１つと対をなす。例えば、本開示は、（ａ）配列番号４２に示されているアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含み、（ｂ）配列番号４５に示されているアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含む抗体（またはその抗原結合性断片）を特徴とする。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片は、（ｉ）配列番号６８または配列番号６９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域フレームワーク領域１と、（ｉｉ）配列番号７０または配列番号７１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域フレームワーク領域２と、配列番号７２〜７４のいずれか１つに示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域フレームワーク領域３とを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号７５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域フレームワーク領域４を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号７６〜８０のいずれか１つに示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。抗体重鎖は、本明細書に記載の任意の重鎖ＣＤＲセットを含んでよい。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号１６に示されているアミノ酸配列を含む可変領域ポリペプチドと対をなしてよい。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、非ヒトＣ５ａタンパク質に結合する。例えば、抗体またはその抗原結合性断片は、マウスＣ５ａおよび／または脱アルギニンマウスＣ５ａタンパク質に結合し得る。いくつかの実施形態では、単離された抗体またはその抗原結合性断片は、マウスＣ５ａ（および／または脱アルギニンマウスＣ５ａ）に結合し得、また、（ｉ）配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号５６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号６２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号６３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号６４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗マウスＣ５ａ抗体は、配列番号５９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号６６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含んでよい。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、Ｃ５ａとＣ５ａ受容体との間の相互作用を阻害する。Ｃ５ａ受容体は、例えば、Ｃ５ａＲ１またはＣ５Ｌ２であってよい。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏにおいて補体に媒介される赤血球の溶血を実質的に阻害しない。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、単離された抗体（したがって任意のその抗原結合性断片）は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、または完全ヒト抗体である。
【０１３８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、組換え抗体、単鎖抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、イントラボディ（ｉｎｔｒａｂｏｄｙ）、キメラ化（ｃｈｉｍｅｒｉｚｅｄ）またはキメラ抗体、脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄ）ヒト抗体、Ｆｖ断片、Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、およびＦ（ａｂ’）２断片からなる群より選択される。
【０１３９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、抗体または断片が、少なくとも２つの異なるエピトープに結合するという点で多特異性（例えば、二重特異性）である。２つの異なるエピトープは、例えば、同じタンパク質（例えば、Ｃ５ａ）由来の２つの異なるエピトープであってよい、または、抗体は、第１のタンパク質（例えば、Ｃ５ａ）由来の第１のエピトープおよび第２のタンパク質由来の第２のエピトープに結合し得る。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片は、異種部分を含む。異種部分は、例えば、糖であってよい。例えば、抗体またはその抗原結合性断片はグリコシル化されていてよい。異種部分は、例えば、これらに限定されないが、蛍光標識、発光標識、重金属標識、放射性標識、または酵素標識などの検出可能な標識であってよい。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を、循環中の抗体の安定化および／または保持を改善する部分で修飾する。例えば、修飾は、ペグ化またはＨＥＳ処理（ｈｅｓｙｌａｔｉｏｎ）であってよい。別の実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体は、その対応する変更されていない定常領域のエフェクター機能と比較してエフェクター機能が低下した（またはエフェクター機能がない）、変更された定常領域を含有してよい。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体は、変更されていない定常領域のエフェクター機能の約０％〜約２０％を有する変更された定常領域を含有する。そのようなエフェクター機能が低下した抗体の例示的な実施形態が本明細書に記載されている。
【０１４２】
別の態様では、本開示は、前述の抗体のいずれか１つの結合を交差遮断する（ｃｒｏｓｓｂｌｏｃｋ）単離された抗体またはその抗原結合性断片を特徴とする。
【０１４３】
さらに別の態様では、本開示は、本明細書に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片のうちの任意のうちの１つまたは複数、および薬学的に許容できるキャリア、希釈剤、および／または賦形剤を含む医薬組成物を特徴とする。
【０１４４】
別の態様では、本開示は、（ｉ）本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片の任意のうちの１つまたは複数をコードする核酸；（ｉｉ）その核酸を含むベクター；（ｉｉｉ）その核酸を含む発現ベクター；および／または（ｉｖ）そのベクターまたは発現ベクターを含む細胞を特徴とする。別の態様では、本開示は、ポリペプチド（例えば、本明細書に記載の任意の抗体またはその抗原結合性断片など）を作製するための方法を特徴とする。この方法は、上述の細胞（発現ベクターを含む）を、ベクター内の核酸にコードされる抗体または抗原結合性断片が細胞によって発現されることが可能になるのに十分な条件下で、そのために十分な時間にわたって培養することを含む。この方法は、細胞から、または細胞を培養した培地からから抗体または抗原結合性断片を単離することも含んでよい。
【０１４５】
別の態様では、本開示は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列または本明細書に記載の任意のアミノ酸配列を含むまたはそれからなるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする単離された核酸を特徴とする。核酸は、ベクター、例えば、発現ベクター内に含めることができ、かつ／または細胞内に存在してよい。
【０１４６】
さらに別の態様では、本開示は、（ｉ）本明細書に記載の単離された抗体または抗原結合性断片のうちの１つまたは複数（例えば、本明細書に記載の任意のヒト化抗体またはその抗原結合性断片のうちの１つまたは複数）と、（ｉｉ）抗体または抗原結合性断片を被験体に送達するための手段とを含む治療用キットを特徴とする。手段は、抗体またはその抗原結合性断片を被験体に、例えば、皮下送達、眼内送達、または関節内送達するために適切であり得る。手段は、例えば、シリンジ、２筒シリンジ、または、プッシュプル式で膝液を抜き取る一方で（例えば、分析のために）治療用抗体またはその抗原結合性断片を投与することにおいて使用するために合体させた２つの別々のシリンジであってよい。いくつかの実施形態では、手段は、眼に送達するためのものであり、そのそれぞれが抗体またはその抗原結合性断片を含む、経強膜パッチまたはコンタクトレンズを含む。いくつかの実施形態では、手段は、肺内送達するために適している。例えば、手段は、吸入器またはネブライザーであってよい。いくつかの実施形態では、手段は、ペンデバイスなどの充填済みシリンジである。充填済みシリンジは、例えば、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合性断片のうちの１つまたは複数の少なくとも１つの医薬単位投薬形態を含有してよい。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療用キットは、被験体における補体に関連する障害の処置において使用するための少なくとも１種の追加的な活性薬剤を含有してよい。追加的な活性薬剤は、例えば、本明細書に記載の任意の追加的な作用剤であってよい。
【０１４８】
さらに別の態様では、本開示は、補体に関連する障害を治療または予防するための方法を特徴とする。この方法は、それを必要とするヒトに、本明細書に記載の治療用抗体またはその抗原結合性断片を、ヒトが患っている補体に関連する障害を処置するために十分な量で投与することを含む。この方法は、被験体が補体に関連する障害を有すると同定することも含んでよい。補体に関連する障害は、例えば、補体に関連する炎症性障害、非定型溶血性尿毒症症候群、加齢黄斑変性、関節リウマチ、敗血症、または抗リン脂質症候群であってよい。いくつかの実施形態では、補体に関連する障害は、補体に関連する肺障害である。例えば、補体に関連する肺障害は、例えば、喘息または慢性閉塞性肺疾患であってよい。方法に記載の治療または予防に適した他の補体に関連する障害は本明細書に記載されている。投与形式は、治療しようとする補体に関連する障害の種類に応じて変動し得、例えば、静脈内投与、肺内投与、眼内投与、皮下投与、または関節内投与であってよい。
【０１４９】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、処置の継続期間にわたって全身Ｃ５ａ活性の低下したレベルを維持するために十分な量および頻度でヒトに投与する。いくつかの実施形態では、方法は、投与した後に、ヒトを、補体に関連する障害の１つまたは複数の症状の改善についてモニターすることを含んでよい。
【０１５０】
いくつかの実施形態では、方法は、ヒトに、１種または複数種の追加的な治療剤を投与することを含んでよい。
【０１５１】
さらに別の態様では、本開示は、（ｉ）ラベルを伴う容器と、（ｉｉ）本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片を含む組成物とを含む製造品を特徴とする。ラベルにより、その組成物が、補体に関連する障害を有する、それを有する疑いがある、またはそれが発生する危険性があるヒトに投与するものであることを示すことができる。製造品は、１種または複数種の追加的な活性薬剤も含んでよい。
【０１５２】
本開示全体を通して使用される場合、「抗体」という用語は当技術分野で公知であり、本明細書に記載されている種々の方法のいずれか１つによって生成される全抗体またはインタクトな抗体（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、またはＩｇＥ）分子を指す。「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ化抗体またはキメラ抗体、ヒト化抗体、脱免疫化ヒト抗体、および完全ヒト抗体を包含する。抗体は、種々の種、例えば、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、サル、ヒヒ、またはチンパンジー）、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、スナネズミ、ハムスター、ラット、およびマウスなどの哺乳動物のいずれかにおいて作出することができる、またはそれに由来してよい。抗体は精製された抗体または組換え抗体であってよい。
【０１５３】
本明細書で使用される場合、「抗体断片」、「抗原結合性断片」という用語または同様の用語は、抗原（例えば、Ｃ５ａには存在するが、切断されていないネイティブなＣ５のアルファ鎖タンパク質には存在しないエピトープ）に結合する能力を保持する抗体の断片、例えば、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、またはＦ（ａｂ’）２断片を指す。ｓｃＦｖは、それが由来する抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域の両方を含む単一のポリペプチド鎖である。さらに、ダイアボディ（Ｐｏｌｊａｋ（１９９４年）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２巻（１２号）：１１２１〜１１２３頁；Ｈｕｄｓｏｎら（１９９９年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３巻（１〜２号）：１７７〜１８９頁、どちらの開示もその全体が参照により本明細書に組み込まれる）、小型抗体（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、三機能性抗体（ｔｒｉａｂｏｄｙ）（Ｓｃｈｏｏｎｏｏｇｈｅら（２００９年）ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ９巻：７０頁）、ドメイン抗体（「重鎖免疫グロブリン」またはラクダ科動物としても公知である；Ｈｏｌｔら（２００３年）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２１巻（１１号）：４８４〜４９０頁）；およびイントラボディ（Ｈｕｓｔｏｎら（２００１年）Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  １０巻（３〜４号）：１２７〜１４２頁；Ｗｈｅｅｌｅｒら（２００３年）Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ  ８巻（３号）：３５５〜３６６頁；Ｓｔｏｃｋｓ（２００４年）Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ  ９巻（２２号）：９６０〜９６６頁、そのそれぞれの開示全体が参照により本明細書に組み込まれる）が抗体断片の定義に含まれ、組成物に組み入れることができ、また、本明細書に記載の方法において使用することができる。
【０１５４】
特に定義されていなければ、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が関係する技術分野の当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。矛盾する場合は、定義を含めた本文書が支配する。好ましい方法および材料が下に記載されているが、本明細書に記載のものと同様または同等である方法および材料も、ここで開示されている方法および組成物の実施または試験において使用することができる。本明細書において言及されている全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５５】
本開示の他の特徴および利点、例えば、被験体における補体に関連する障害を処置するための方法は、以下の説明、実施例から、および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
したがって本発明は以下の項目を提供する：
（項目１）
遊離のＣ５ａポリペプチドに結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、該遊離のＣ５ａは、配列番号１に示されているアミノ酸配列を有するヒトポリペプチド（ｈＣ５ａ）であり、該抗体またはその抗原結合性断片は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、モル過剰の切断されていないネイティブなヒトＣ５の存在下で、１．２５×１０−９Ｍ未満のＫＤで該遊離のｈＣ５ａポリペプチドに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２）
上記切断されていないネイティブなヒトＣ５の濃度が、上記遊離のｈＣ５ａの濃度よりも２倍〜２０倍高い、項目１に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３）
上記切断されていないヒトＣ５の濃度が、上記遊離のｈＣ５ａの濃度よりも２倍〜１５倍高い、項目１または２に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目４）
上記切断されていないネイティブなヒトＣ５がヒト血漿由来である、項目１から３のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目５）
遊離のＣ５ａポリペプチドに結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、該遊離のＣ５ａポリペプチドは、配列番号１に示されているアミノ酸配列を有するヒトポリペプチド（ｈＣ５ａ）であり、該抗体またはその抗原結合性断片は、１．２５×１０−９Ｍ未満のＫＤで該ヒトＣ５ａポリペプチドに結合し、該抗体またはその抗原結合性断片は、遊離のｈＣ５ａポリペプチドに、切断されていないヒトＣ５についての対応する親和性よりも少なくとも１００倍高い親和性で結合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目６）
遊離のＣ５ａポリペプチドに結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、該遊離のＣ５ａポリペプチドは、配列番号１に示されているアミノ酸配列を有するヒトポリペプチド（ｈＣ５ａ）であり、該抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、１：１（抗原結合部位：ｈＣ５ａ）のモル比で、ｈＣ５ａ依存性ヒト好中球活性化を少なくとも５０％阻害する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目７）
非ヒト哺乳動物種由来の遊離のＣ５ａに結合する、項目１から６のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目８）
遊離のＣ５ａポリペプチドに結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、該遊離のＣ５ａポリペプチドは、ヒトポリペプチド（ｈＣ５ａ）または非ヒト哺乳動物種Ｃ５ａポリペプチドであり、該抗体またはその抗原結合性断片は、該遊離のｈＣ５ａポリペプチドに１．２５×１０−９Ｍ未満のＫＤで結合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目９）
上記非ヒト哺乳動物種が非ヒト霊長類である、項目７または８に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１０）
上記非ヒト霊長類が、カニクイザル、アカゲザル、またはヒヒである、項目９に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１１）
遊離のｈＣ５ａに、上記非ヒト哺乳動物種由来の遊離のＣ５ａについての対応する親和性の１００倍以下の親和性で結合する、項目７から１０のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１２）
ヒトＣ５ａに、上記非ヒト哺乳動物種由来のＣ５ａについての対応する親和性の５０倍以下の親和性で結合する、項目７から１１のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１３）
項目１から５、または８から１２のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、該抗体が、１：１（抗原結合部位：ｈＣ５ａ）のモル比で、ｈＣ５ａ依存性ヒト好中球活性化を少なくとも５０％阻害する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１４）
配列番号２に示されているアミノ酸配列を有する遊離のｈＣ５ａポリペプチドに結合する、項目１から１３のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１５）
配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを含む軽鎖ポリペプチドを含む、項目１から１４のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１６）
配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号３８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを含む軽鎖ポリペプチドを含む、項目１から１４のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１７）
配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号２９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号３０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを含む重鎖ポリペプチドを含む、項目１から１６のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１８）
配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号４７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを含む重鎖ポリペプチドを含む、項目１から１６のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１９）
配列番号３７または配列番号３６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含む、項目１から５、１４、または１６のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２０）
配列番号２７または配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドを含む、項目１から５、１４、１６または１９のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２１）
配列番号３７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む、項目１９または２０に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２２）
配列番号３６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む、項目１９または２０に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２３）
配列番号１９または配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含む、項目１から１５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２４）
配列番号２７または配列番号２５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドを含む、項目１から１５、または２３のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２５）
配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む、項目２３または２４に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２６）
配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号２５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む、項目２３または２４に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２７）
配列番号４２または配列番号４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含む、項目１から１５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２８）
配列番号２７または配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドを含む、項目１から１５、または２７のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目２９）
配列番号４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む、項目２７または２８に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３０）
配列番号４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む、項目２７または２８に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３１）
配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む、項目１から１５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３２）
配列番号４５、配列番号４４、または配列番号４９のいずれか一つに示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドを含む、項目１から１５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３３）
配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む、項目３２に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３４）
配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む、項目３２に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３５）
配列番号１７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む、項目３２に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３６）
配列番号３７または配列番号３６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含む、項目１から１４、または１６のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３７）
配列番号４５または配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドを含む、項目１から１４、１６、または３６のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３８）
配列番号３７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む、項目３６または３７に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目３９）
配列番号３６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む、項目３６または３７に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目４０）
配列番号４２または配列番号４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドを含む、項目１から１５のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目４１）
配列番号４５または配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドを含む、項目１から１５、または４０のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目４２）
配列番号４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む、項目４０または４１に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目４３）
配列番号４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、配列番号４９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドとを含む、項目４０または４１に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目４４）
ｈＣ５ａに７×１０−１０Ｍ未満のＫＤで結合する、項目１から１８、または２３から４３のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目４５）
ｈＣ５ａに５×１０−１０Ｍ未満のＫＤで結合する、項目１から１８、または２７から４３のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目４６）
ｈＣ５ａに２．５×１０−１０Ｍ未満のＫＤで結合する、項目１から１８、または３１から４３のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目４７）
ｈＣ５ａに１．５×１０−１０Ｍ未満のＫＤで結合する、項目１から１６、３２、３３、または３６から４３のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目４８）
ｈＣ５ａに８．０×１０−１１Ｍ未満のＫＤで結合する、項目１から１６、３２、３３、３５、または４０から４３のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目４９）
項目１から１６、３２、３３、または３５から４３のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、該抗体が、１：１（抗原結合部位：Ｃ５ａ）のモル比で、ヒトＣ５ａ依存性ヒト好中球活性化を少なくとも７０％阻害する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目５０）
項目１から１６、３２、３３、または３５から３９のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、該抗体が、１：１（抗原結合部位：Ｃ５ａ）のモル比で、ヒトＣ５ａ依存性ヒト好中球活性化を少なくとも９０％阻害する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目５１）
Ｃ５ａとＣ５ａ受容体との間の相互作用を阻害する、項目１から５０のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目５２）
上記Ｃ５ａ受容体がＣ５ａＲ１である、項目５１に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目５３）
上記Ｃ５ａ受容体がＣ５Ｌ２である、項目５１に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目５４）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて補体に媒介される赤血球の溶血を実質的に阻害しない、項目１から５３のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目５５）
項目１から５４のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片であって、該抗体がモノクローナル抗体である、単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目５６）
項目１から５５のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片であって、該抗体がヒト化抗体である、単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目５７）
項目１から５６のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片であって、該抗体が完全ヒト抗体である、単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目５８）
組換え抗体、単鎖抗体、ダイアボディ、イントラボディ、キメラ化またはキメラ抗体、脱免疫化ヒト抗体、Ｆｖ断片、Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、およびＦ（ａｂ’）２断片からなる群より選択される、項目１から５７のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目５９）
項目１から５７のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片であって、該抗体が二重特異性抗体である、単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目６０）
異種部分を含む、項目１から５９のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目６１）
上記異種部分が糖である、項目６０に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目６２）
グリコシル化されている、項目６１に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目６３）
上記異種部分が、検出可能な標識である、項目６０に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目６４）
上記検出可能な標識が、蛍光標識、発光標識、重金属標識、放射性標識、または酵素標識である、項目６３に記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
（項目６５）
項目１から６４のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、
（ａ）循環中の該抗体またはその抗原結合性断片の安定化、および
（ｂ）循環中の該抗体またはその抗原結合性断片の保持
のうちの一方または両方を改善する部分で修飾されている、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目６６）
上記修飾がペグ化である、項目６５に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目６７）
項目１から６６のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、該抗体が、変更された重鎖定常領域を含み、該変更された重鎖定常領域のエフェクター機能が、変更されていない形態の重鎖定常領域のエフェクター機能と比較して低下している、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目６８）
上記エフェクター機能が、
（ａ）抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、
（ｂ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、および
（ｃ）１つまたは複数のＦｃ受容体への結合
からなる群より選択される、項目６７に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
（項目６９）
上記変更された定常領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥからなる群より選択される定常領域の変更された形態である、項目６７または６８に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
（項目７０）
上記変更された定常領域が、上記変更されていない定常領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸の置換、挿入、または欠失を含む、項目６７から６９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
（項目７１）
上記変更された定常領域が、
（ｉ）１つまたは複数の糖成分の変化；
（ｉｉ）１つまたは複数の追加的な糖成分の存在；または
（ｉｉｉ）１つまたは複数の糖成分の非存在
のうちの１つまたは複数を含むグリコシル化の変更を含む、項目６７から７０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
（項目７２）
項目１から７１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片の結合を交差遮断する、抗体またはその抗原結合性断片。
（項目７３）
項目１から７２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片、および
薬学的に許容できるキャリア
を含む医薬組成物。
（項目７４）
項目１から７２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする核酸。
（項目７５）
項目７４に記載の核酸を含むベクター。
（項目７６）
項目７４に記載の核酸を含む発現ベクター。
（項目７７）
項目７６に記載の発現ベクターを含む細胞。
（項目７８）
抗体またはその抗原結合性断片を作製するための方法であって、項目７７に記載の細胞を、核酸によってコードされた該抗体または抗原結合性断片の該細胞による発現を可能にするのに十分な条件下で、十分な時間にわたって培養する工程を含む、方法。
（項目７９）
上記抗体またはその抗原結合性断片を単離する工程をさらに含む、項目７８に記載の方法。
（項目８０）
（ｉ）項目１から７２のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片と、
（ｉｉ）該抗体または抗原結合性断片を被験体に送達するための手段と
を含む治療用キット。
（項目８１）
上記手段が、上記抗体またはその抗原結合性断片を上記被験体に皮下送達するために適している、項目８０に記載の治療用キット。
（項目８２）
上記手段が、上記抗体またはその抗原結合性断片を上記被験体に眼内送達するために適している、項目８０に記載の治療用キット。
（項目８３）
上記手段が、上記抗体またはその抗原結合性断片を上記被験体に関節内送達するために適している、項目８０に記載の治療用キット。
（項目８４）
上記手段がシリンジである、項目８０から８３のいずれか一項に記載の治療用キット。
（項目８５）
上記シリンジが２筒シリンジである、項目８４に記載の治療用キット。
（項目８６）
上記手段が、上記抗体またはその抗原結合性断片を含む経強膜パッチまたはコンタクトレンズである、項目８２に記載の治療用キット。
（項目８７）
上記手段が、上記抗体または抗原結合性断片を上記被験体に肺内送達するために適している、項目８０に記載の治療用キット。
（項目８８）
上記手段が、吸入器またはネブライザーである、項目８７に記載の治療用キット。
（項目８９）
被験体における補体に関連する障害の処置に使用するための少なくとも１種の追加的な活性薬剤をさらに含む、項目８０から８８のいずれか一項に記載の治療用キット。
（項目９０）
補体に関連する障害を処置するための方法であって、項目１から７２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片を、補体に関連する障害の処置を必要とするヒトに、該ヒトが患っている補体に関連する障害を処置するために十分な量で投与する工程を含む、方法。
（項目９１）
上記補体に関連する障害が、補体に関連する炎症性障害である、項目９０に記載の方法。
（項目９２）
上記補体に関連する炎症性障害が、非定型溶血性尿毒症症候群、加齢黄斑変性、重篤な熱傷、関節リウマチ、敗血症、ループス腎炎、および抗リン脂質症候群からなる群より選択される、項目９１に記載の方法。
（項目９３）
上記補体に関連する障害が、補体に関連する肺障害である、項目９０に記載の方法。
（項目９４）
上記補体に関連する肺障害が、喘息または慢性閉塞性肺疾患である、項目９３に記載の方法。
（項目９５）
上記抗体またはその抗原結合性断片を上記ヒトに、処置の継続期間にわたって、全身Ｃ５ａ活性の低下したレベルを維持するために有効な量および頻度で投与する、項目９０から９４のいずれか一項に記載の方法。
（項目９６）
上記投与後に、上記ヒトを、上記補体に関連する障害の１つまたは複数の症状の改善についてモニターする工程をさらに含む、項目９０から９５のいずれか一項に記載の方法。
（項目９７）
上記ヒトに、１種または複数種の追加的な治療剤を投与する工程をさらに含む、項目９０から９６のいずれか一項に記載の方法。
（項目９８）
上記抗体またはその抗原結合性断片が、静脈内投与、肺内投与、眼内投与、皮下投与、または関節内投与によって上記被験体に送達される、項目９０に記載の方法。
（項目９９）
ラベルを含む容器と、
項目１から７２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片を含む組成物と
を含む製造品であって、該ラベルは、該組成物が、補体に関連する障害を有するか、該障害を有する疑いがあるか、または該障害を発生する危険性があるヒトに投与されるものであることを示す、製造品。
（項目１００）
１種または複数種の追加的な活性薬剤をさらに含む、項目９９に記載の製造品。
（項目１０１）
マウスＣ５ａに結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、該抗体が、（ｉ）配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号５６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号６２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号６３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号６４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１０２）
項目１０１に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、該抗体が、
配列番号５９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドと、
配列番号６６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドと
を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１０３）
項目１００または１０１に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、該抗体が、脱アルギニン形態のマウスＣ５ａに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１０４）
項目１００から１０３のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合性断片であって、該抗原結合性断片が、ダイアボディ、単鎖抗体、Ｆｖ断片、Ｆｄ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、およびＦ（ａｂ’）２断片からなる群より選択される、抗体または抗原結合性断片。
（項目１０５）
（ｉ）配列番号１４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｉｉ）配列番号１５６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１５８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｉｉｉ）配列番号１６４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１６５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１６６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｉｖ）配列番号１７２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１７３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１７４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｖ）配列番号８４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号８６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｖｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号９３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｖｉｉ）配列番号８８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号９０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｖｉｉｉ）配列番号９５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号９７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｉｘ）配列番号９９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１００に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１０１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｘ）配列番号８４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１０３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｘｉ）配列番号１０５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１０６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１０７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｘｉｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１０８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｘｉｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１１０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；または
（ｘｉｖ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
を含む軽鎖ポリペプチドを含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１０６）
（ｉ）配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｉ）配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号３０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｉｉ）配列番号１６０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１６１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１６２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｖ）配列番号１６８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１６９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１７０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｖ）配列番号１７６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１７７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１７８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｖｉ）配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１１６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｖｉｉ）配列番号１１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１２１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｖｉｉｉ）配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｘ）配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｘ）配列番号１１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｘｉ）配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｘｉｉ）配列番号１３１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｘｉｉｉ）配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号４７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；または
（ｘｉｖ）配列番号１３６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１３８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む重鎖ポリペプチドを含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１０７）
軽鎖ＣＤＲ配列と重鎖ＣＤＲ配列との対のセットであって、表３または表９において対になっている、対のセットを含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１０８）
（ｉ）配列番号１４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号３０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｉｉ）配列番号１５６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１５７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１５８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１６０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１６１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１６２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｖ）配列番号１６４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１６５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１６６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１６８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１６９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１７０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｖ）配列番号１７２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１７３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１７４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１７６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１７７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１７８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｖｉ）配列番号８８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１２１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｖｉｉ）配列番号１０５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１０６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１０７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｖｉｉｉ）配列番号８４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号８６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１１６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｉｘ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１１０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１１１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１３６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１３８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｘ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１１３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号４７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｘｉ）配列番号９９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１００に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１０１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１２７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｘｉｉ）配列番号９５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｘｉｉｉ）配列番号１４０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｘｉｖ）配列番号１０５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１０６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１０７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｘｖ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１０８に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｘｖｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｘｖｉｉ）配列番号９２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８９に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｘｖｉｉｉ）配列番号８４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１０３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｘｉｘ）配列番号９５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号９７に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１２３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；
（ｘｘ）配列番号８４に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号８５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１０３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１１５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１４４に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１１７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３；または
（ｘｘｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、配列番号１１３に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、配列番号１３１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１３２に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、および配列番号１３３に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１０９）
配列番号６８または配列番号６９に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域フレームワーク領域１と、（ｉｉ）配列番号７０または配列番号７１に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域フレームワーク領域２と、配列番号７２〜７４のいずれか１つに示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域フレームワーク領域３とを含む、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１１０）
配列番号７５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域フレームワーク領域４を含む、項目１０９に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１１１）
配列番号７６〜８０のいずれか１つに示されているアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、項目１０９または１１０に記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
（項目１１２）
項目１から７２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片を含む充填済みシリンジ。
（項目１１３）
上記抗体またはその抗原結合性断片が、眼内投与、硝子体内投与、または関節内投与のために処方されている、項目１１２に記載の充填済みシリンジ。
（項目１１４）
上記抗体またはその抗原結合性断片が、筋肉内投与または皮下投与のために処方されている、項目１１２に記載の充填済みシリンジ。
（項目１１５）
上記抗体またはその抗原結合性断片の少なくとも１種の医薬単位投薬形態を含む、項目１１２に記載の充填済みシリンジ。
（項目１１６）
０．０５ｍｇから１０ｍｇの上記抗体またはその抗原結合性断片を含む、項目１１２から１１５のいずれか一項に記載の充填済みシリンジ。
（項目１１７）
約１ｍｇから１００ｍｇの上記抗体またはその抗原結合性断片を含む、項目１１２から１１５のいずれか一項に記載の充填済みシリンジ。
（項目１１８）
医薬単位投薬形態のそれぞれが、０．０２ｍＬから１ｍＬの容積であって、０．０２ｍＬおよび１ｍＬを含む、容積を有する、項目１１５から１１７のいずれか一項に記載の充填済みシリンジ。
（項目１１９）
上記医薬単位投薬形態が０．０５ｍＬ以下の容積を有する、項目１１５から１１７のいずれか一項に記載の充填済みシリンジ。
（項目１２０）
２つの抗原結合部位を含む単離された抗体であって、各抗原結合部位は、独立に、遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得、ここで、
（ｉ）複数の該抗体と、
（ｉｉ）該抗原結合部位のモル量と比較してモル過剰のｈＣ５と
を含む水性溶液中、平衡状態で、かつ生理的条件下で、該複数の抗体の少なくとも９５％は、１つ以下のｈＣ５分子に結合する、単離された抗体。
（項目１２１）
２つの抗原結合部位を含む単離された抗体であって、各抗原結合部位は、独立に、遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得、ここで、
（ｉ）複数の該抗体と、
（ｉｉ）該抗原結合部位のモル量と比較してモル過剰のｈＣ５と
を含む水性溶液中、平衡状態で、かつ生理的条件下で、該複数の抗体の少なくとも９５％は、遊離のｈＣ５ａに結合するために利用可能な少なくとも１つの抗原結合部位を保持する、単離された抗体。
（項目１２２）
２つの抗原結合部位を含む単離された抗体であって、各抗原結合部位は、独立に、遊離のヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）または切断されていないヒトＣ５（ｈＣ５）に結合し得、ここで、
（ｉ）複数の該抗体と、
（ｉｉ）該抗原結合部位のモル量と比較してモル過剰のｈＣ５と
を含む水性溶液中、平衡状態で、かつ生理的条件下で、該複数の抗体の５％以下の該２つの抗原結合部位は、完全にｈＣ５分子によって占有されている、単離された抗体。
（項目１２３）
上記モル過剰が、２倍のモル過剰である、項目１２０から１２２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
（項目１２４）
上記生理的条件が、３．９ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、６．１ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、および１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．０である、項目１２０から１２３のいずれか一項に記載の単離された抗体。
（項目１２５）
各抗原結合部位が、独立に、遊離のｈＣ５ａと１．２５×１０−９Ｍ未満のＫＤで結合し得る、項目１２０から１２４のいずれか一項に記載の単離された抗体。
（項目１２６）
各抗原結合部位が、独立に、遊離のｈＣ５ａとナノモル以下の親和性で結合し得る、項目１２０から１２５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
（項目１２７）
（ｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２１に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号２２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号２８に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号４６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号４７に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含む、項目１２０から１２６のいずれか一項に記載の単離された抗体。
（項目１２８）
配列番号４２に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドおよび配列番号４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドを含む、項目１２０から１２７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
（項目１２９）
補体に関連する障害を患っているヒトを処置するための方法であって、該ヒトに、
項目１から７２のいずれか一項に記載の単離された抗体もしくは抗原結合性断片、または
項目１２０から１２８のいずれか一項に記載の単離された抗体
を、該補体に関連する障害を処置するために十分な量で投与する工程を含む、方法。
（項目１３０）
上記補体に関連する障害がＣ５ａに関連する補体障害である、項目１２９に記載の方法。
（項目１３１）
Ｃ５ａに関連する補体障害を患っているヒトを処置するための方法であって、該ヒトに、項目１２０から１２８のいずれか一項に記載の抗体を、該ヒトの体重１ｋｇ当たり少なくとも１ｍｇ投与して、少なくとも１２日間にわたって、ナノグラムレベルの遊離のＣ５ａを部分的または全体的に結合および隔離する工程を含む、方法。
（項目１３２）
Ｃ５ａに関連する補体障害を患っているヒトを処置するための方法であって、該ヒトに、項目１２０から１２８のいずれか一項に記載の抗体を、該ヒトの体重１ｋｇ当たり少なくとも１０ｍｇ投与して、少なくとも２４日間にわたって、ナノグラムレベルの遊離のＣ５ａを部分的または全体的に結合および隔離する工程を含む、方法。
（項目１３３）
Ｃ５ａに関連する補体障害を患っているヒトを処置するための方法であって、該ヒトに、項目１２０から１２８のいずれか一項に記載の抗体を
（ａ）切断されていないｈＣ５の生理的なモル濃度よりも実質的に低いモルＣｍａｘ値を実現するため、および
（ｂ）病態生理的レベルの遊離のＣ５ａを部分的または全体的に結合および隔離するため
に十分な量で投与する工程を含む、方法。
（項目１３４）
Ｃ５ａに関連する補体障害を患っているヒトを処置するための方法であって、該ヒトに、項目１２０から１２８のいずれか一項に記載の抗体を
（ａ）切断されていないｈＣ５の生理的なモル濃度よりも実質的に低いモルＣｍａｘ値を実現するため、および
（ｂ）少なくとも１２日間にわたって、ナノグラムレベルの遊離のＣ５ａを部分的または全体的に結合および隔離するため
に十分な量で投与する工程を含む、方法。
（項目１３５）
上記抗体のＣｍａｘ値が１００ｎＭ以下である、項目１３４に記載の方法。
（項目１３６）
上記抗体のＣｍａｘ値が８０ｎＭ以下である、項目１３４に記載の方法。
（項目１３７）
上記Ｃ５ａに関連する補体障害が、敗血症、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、敗血症性ショック、抗リン脂質症候群、劇症型抗リン脂質症候群、播種性血管内凝固、ループス腎炎、グッドパスチャー症候群、熱傷または重篤な熱傷、喘息、ヘルプ症候群（溶血性貧血、肝酵素の上昇および血小板数の低下）、炎症に誘導される疼痛、Ｃ５ａに媒介される好中球減少症、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、慢性閉塞性肺疾患、および関節リウマチからなる群より選択される、項目１３０から１３６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３８）
項目１２０から１２８のいずれか一項に記載の抗体を含む充填済みシリンジ。
（項目１３９）
項目１２０から１２８のいずれか一項に記載の抗体および薬学的に許容できるキャリアを含む医薬組成物。
（項目１４０）
項目１２０から１２８のいずれか一項に記載の抗体および補体に関連する障害を患っている被験体に該抗体を送達するための手段を含む治療用キット。
【図面の簡単な説明】
【０１５６】
【図１】図１は、マウス抗ヒトＣ５ａ抗体の選択セット：５ａｎ１０１ＭＥ、５ａｎ１８０ＭＥ、５ａｎ０４８ＭＥ、５ａｎ１７９ＭＥ、および５ａｎ１７８ＭＥが結合したヒトＣ５ａのエピトープのオーバーラップの程度を示すベン図である。
【図２】図２は、好中球活性化アッセイを用いた、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＣ５ａに媒介されるシグナル伝達の拮抗作用を示す線グラフである。Ｙ軸は、発色基質の光学濃度（ＯＤ）測定値を、新鮮単離されたヒト好中球によるミエロペルオキシダーゼの放出に応じて示す。Ｘ軸は、細胞と一緒にインキュベートした抗体の濃度を示す。試験したヒト化抗体−ＢＮＪ３６７、ＢＮＪ３６９、ＢＮＪ３７１、ＢＮＪ３７８、ＢＮＪ３８１、ＢＮＪ３８３、およびヒト化抗Ｃ５抗体が挿入図の説明文において識別されている。
【図３】図３は、関節リウマチのマウスモデルにおける、いくつかの治療用抗体の関節の炎症に対する効果を示す線グラフである。Ｙ軸は、最初に炎症を起こした膝関節の厚さをミリメートル単位で示す。Ｘ軸は、疾患発症後の日数を示す。試験した治療用抗体−５ａｎ１９５ＭＥ（マウス抗マウスＣ５ａ抗体）および抗Ｃ５ａ抗体と同じＦｃ領域を有する対照抗体が挿入図の説明文において識別されている。
【図４】図４は、関節リウマチのマウスモデルにおける、いくつかの治療用抗体の、全体的な疾患の重症度に対する効果を示す線グラフである。Ｙ軸は、関節炎指数を示す。Ｘ軸は、疾患発症後の日数を示す。試験した治療用抗体−５ａｎ１９５ＭＥ（マウス抗マウスＣ５ａ抗体）および抗Ｃ５ａ抗体と同じＦｃ領域を有する対照抗体が挿入図の説明文において識別されている。
【図５】図５は、一連のヒト化重鎖可変領域配列を示す図である。一番上から一番下の順で：ＢＮＪ３４５ヒト化抗Ｃ５ａ抗体の重鎖可変領域（配列番号７６）；ＢＮＪ３４６ヒト化抗Ｃ５ａ抗体の重鎖可変領域（配列番号７７）；ＢＮＪ３４７ヒト化抗Ｃ５ａ抗体の重鎖可変領域（配列番号７８）；ＢＮＪ３５４ヒト化抗Ｃ５ａ抗体の重鎖可変領域（配列番号７９）；およびＢＮＪ３５０ヒト化抗Ｃ５ａ抗体の重鎖可変領域（配列番号８０）。重鎖フレームワーク領域１、２、３、および４ならびに重鎖ＣＤＲ１、２、および３の間の線引きは、当業者には理解されよう。本図には、Ｋａｂａｔら（下記）によって定義される線引きが示されている。「ＨＣ  ＦＲ１」とは、重鎖可変領域フレームワーク領域１を指し、「ＨＣ  ＦＲ２」とは、重鎖可変領域フレームワーク領域２を指し、「ＨＣ  ＦＲ３」とは、重鎖可変領域フレームワーク領域３を指し、「ＨＣ  ＦＲ４」とは、重鎖可変領域フレームワーク領域４を指す。「ＨＣ  ＣＤＲ１」とは、重鎖可変領域相補性決定領域（ＣＤＲ）１を指し、「ＨＣ  ＣＤＲ２」とは、重鎖可変領域ＣＤＲ２を指し、「ＨＣ  ＣＤＲ３」とは、重鎖可変領域ＣＤＲ３を指す。
【図６】図６は、ｈＣ５ａをマウスに投与した後にマウスの血液中を循環している好中球の百分率を示す線グラフである。Ｙ軸上には、好中球数が、時間０における好中球数（または１００％好中球）である「ベースライン」の百分率として表されている。Ｘ軸は、時間を分単位で示している。マウスコホートに、対照抗体［抗炭疽保護性抗原６３、ＩｇＧ２／Ｇ４アイソタイプ］（「対照」；マウス５匹）または抗ヒトＣ５ａ抗体ＢＮＪ３８３を、２４ｍｇ／ｋｇ（マウス５匹）；１２ｍｇ／ｋｇ（マウス５匹）；６ｍｇ／ｋｇ（マウス５匹）；および３ｍｇ／ｋｇ（マウス５匹）のうちの１つの用量で静脈内投与し、その後、ｈＣ５ａを投与した。実施例１３を参照されたい。「偽」のマウス６匹にはヒトＣ５ａを投与しなかった。
【図７】図７は、ヒトＣ５ａをマウスに投与する前、および投与した後のマウスの血漿中のミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）レベルを示す棒グラフである。Ｙ軸は、マウス血漿中のＭＰＯの濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。Ｘ軸は、時間を分単位で示している。マウスコホートに、対照抗体［抗ａｎｔｈｒａｘ保護性抗原６３、ＩｇＧ２／Ｇ４アイソタイプ］（「対照」；マウス８匹）または抗ヒトＣ５ａ抗体ＢＮＪ３８３を２４ｍｇ／ｋｇ（マウス５匹）；１２ｍｇ／ｋｇ（マウス５匹）；６ｍｇ／ｋｇ（マウス５匹）；および３ｍｇ／ｋｇ（マウス５匹）のうちの１つの用量で静脈内投与し、その後、ｈＣ５ａを投与した。「偽」のマウス４匹にはヒトＣ５ａを投与しなかった。
【図８】図８は、異なる濃度の抗ｈＣ５ａ抗体（ＢＮＪ３８３）の存在下または非存在下でのマウスの血漿中のヒトＣ５ａレベル（投与されたヒトＣ５ａ）の変化を示す線グラフである。Ｙ軸は、マウス血漿中のｈＣ５ａの濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。Ｘ軸は、時間を分単位で示している。マウスコホートに、対照抗体［抗ａｎｔｈｒａｘ保護性抗原６３、ＩｇＧ２／Ｇ４アイソタイプ］（「対照」；マウス６匹）または抗ヒトＣ５ａ抗体ＢＮＪ３８３を、２４ｍｇ／ｋｇ（マウス３匹）；１２ｍｇ／ｋｇ（マウス３匹）；６ｍｇ／ｋｇ（マウス３匹）；および３ｍｇ／ｋｇ（マウス３匹）のうちの１つの用量で静脈内投与し、その後、ｈＣ５ａを投与した。「偽」のマウス４匹にはヒトＣ５ａを投与しなかった。
【図９】図９は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるヒトＣ５ａとの結合の競合を示す線グラフである。ルテニウム標識された抗Ｃ５ａ抗体（ＢＮＪ３８３）２５０ｐＭを１ｎＭのビオチン化ｈＣ５ａと一緒に、さまざまな濃度（例えば、４００ｎＭ、１３３ｎＭ、４４．４ｎＭ、１４．８ｎＭ、４．９ｎＭ、１．６ｎＭ、および０．５ｎＭ）の、以下のうちの１つと一緒にインキュベートした：（ａ）リン酸緩衝食塩水中ヒトＣ５ａ  ｄｅｓａｒｇタンパク質、（ｂ）ヒト血漿、（ｃ）カニクイザル血漿、（ｄ）Ｂａｌｂ／Ｃ（マウス）血漿、または（ｅ）ＤＢＡ／２Ｊ（マウス）血漿。血漿構成成分（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、および（ｅ）に関して、濃度とは、インキュベーション混合物中のＣ５抗原のおおよその最終濃度を指す。Ｙ軸は、検出されたルテニウム標識された抗Ｃ５ａ抗体の量に応じた任意の蛍光単位を示す。Ｘ軸は、抗原競合剤の濃度（ｎＭ）を示す。
【図１０】図１０は、いくつかの補体阻害性タンパク質の、補体の第二経路（ＡＰ）に対する効果を示す線グラフである。Ｙ軸は、ＡＰ補体活性のベースライン（ＢＬ；補体阻害剤非存在下の活性のレベル）と比較した百分率を示す。Ｘ軸は、所与の補体阻害剤の濃度（μＭ）を示す。抗Ｃ５抗体と一緒に、抗ｈＣ５ａ抗体であるＢＮＪ３８３のＡＰ活性に対する効果をそれぞれ評価した。
【図１１】図１１は、いくつかの補体阻害性タンパク質の、補体の古典経路（ＣＰ）に対する効果を示す線グラフである。Ｙ軸は、ＣＰ補体活性のベースライン（ＢＬ；補体阻害剤の非存在下における活性のレベル）と比較した百分率を示す。Ｘ軸は、所与の補体阻害剤の濃度（μＭ）を示す。抗Ｃ５抗体と一緒に、抗ｈＣ５ａ抗体であるＢＮＪ３８３のＣＰ活性に対する効果をそれぞれ評価した。
【図１２Ａ】図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、および１２Ｄは、ｈＣ５タンパク質の存在下または非存在下における、抗Ｃ５ａ抗体（ＢＮＪ３８３）および抗ｈＣ５抗体の保持時間を示す一連のクロマトグラフである。全てのパネルについて、Ｘ軸は、保持時間を分単位で示し、Ｙ軸は、２１４ｎｍの波長における吸光単位を示す。各パネルにおいてはめ込まれたサブパネルは、特徴的なピークの拡大図を示す。図１２Ａは、ｈＣ５タンパク質の非存在下におけるＢＮＪ３８３の保持時間を示す。図１２Ｂは、ｈＣ５タンパク質の非存在下における抗Ｃ５抗体の保持時間を示す。図１２Ｃは、ｈＣ５の存在下（ＢＮＪ３８３に対して２．１倍のモル過剰のｈＣ５）におけるＢＮＪ３８３の保持時間を示す。右から左に、列挙されているピークは、（ａ）複合体を形成していないＢＮＪ３８３またはｈＣ５；（ｂ）１つの抗原結合部位が、切断されていないｈＣ５に結合しているＢＮＪ３８３；および（ｃ）切断されていないｈＣ５で二重に占有されたＢＮＪ３８３と一致する小画分を示す。図１２Ｄは、等モル量のｈＣ５の存在下における抗Ｃ５抗体の保持時間を示す。右から左に、列挙されているピークは、（ａ）複合体を形成していない抗Ｃ５抗体またはｈＣ５；（ｂ）１つの抗原結合部位が、切断されていないｈＣ５に結合している抗Ｃ５抗体；および（ｃ）２つの切断されていないＣ５分子に結合した抗Ｃ５抗体を示す。
【図１２Ｂ】図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、および１２Ｄは、ｈＣ５タンパク質の存在下または非存在下における、抗Ｃ５ａ抗体（ＢＮＪ３８３）および抗ｈＣ５抗体の保持時間を示す一連のクロマトグラフである。全てのパネルについて、Ｘ軸は、保持時間を分単位で示し、Ｙ軸は、２１４ｎｍの波長における吸光単位を示す。各パネルにおいてはめ込まれたサブパネルは、特徴的なピークの拡大図を示す。図１２Ａは、ｈＣ５タンパク質の非存在下におけるＢＮＪ３８３の保持時間を示す。図１２Ｂは、ｈＣ５タンパク質の非存在下における抗Ｃ５抗体の保持時間を示す。図１２Ｃは、ｈＣ５の存在下（ＢＮＪ３８３に対して２．１倍のモル過剰のｈＣ５）におけるＢＮＪ３８３の保持時間を示す。右から左に、列挙されているピークは、（ａ）複合体を形成していないＢＮＪ３８３またはｈＣ５；（ｂ）１つの抗原結合部位が、切断されていないｈＣ５に結合しているＢＮＪ３８３；および（ｃ）切断されていないｈＣ５で二重に占有されたＢＮＪ３８３と一致する小画分を示す。図１２Ｄは、等モル量のｈＣ５の存在下における抗Ｃ５抗体の保持時間を示す。右から左に、列挙されているピークは、（ａ）複合体を形成していない抗Ｃ５抗体またはｈＣ５；（ｂ）１つの抗原結合部位が、切断されていないｈＣ５に結合している抗Ｃ５抗体；および（ｃ）２つの切断されていないＣ５分子に結合した抗Ｃ５抗体を示す。
【図１２Ｃ】図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、および１２Ｄは、ｈＣ５タンパク質の存在下または非存在下における、抗Ｃ５ａ抗体（ＢＮＪ３８３）および抗ｈＣ５抗体の保持時間を示す一連のクロマトグラフである。全てのパネルについて、Ｘ軸は、保持時間を分単位で示し、Ｙ軸は、２１４ｎｍの波長における吸光単位を示す。各パネルにおいてはめ込まれたサブパネルは、特徴的なピークの拡大図を示す。図１２Ａは、ｈＣ５タンパク質の非存在下におけるＢＮＪ３８３の保持時間を示す。図１２Ｂは、ｈＣ５タンパク質の非存在下における抗Ｃ５抗体の保持時間を示す。図１２Ｃは、ｈＣ５の存在下（ＢＮＪ３８３に対して２．１倍のモル過剰のｈＣ５）におけるＢＮＪ３８３の保持時間を示す。右から左に、列挙されているピークは、（ａ）複合体を形成していないＢＮＪ３８３またはｈＣ５；（ｂ）１つの抗原結合部位が、切断されていないｈＣ５に結合しているＢＮＪ３８３；および（ｃ）切断されていないｈＣ５で二重に占有されたＢＮＪ３８３と一致する小画分を示す。図１２Ｄは、等モル量のｈＣ５の存在下における抗Ｃ５抗体の保持時間を示す。右から左に、列挙されているピークは、（ａ）複合体を形成していない抗Ｃ５抗体またはｈＣ５；（ｂ）１つの抗原結合部位が、切断されていないｈＣ５に結合している抗Ｃ５抗体；および（ｃ）２つの切断されていないＣ５分子に結合した抗Ｃ５抗体を示す。
【図１２Ｄ】図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｃ、および１２Ｄは、ｈＣ５タンパク質の存在下または非存在下における、抗Ｃ５ａ抗体（ＢＮＪ３８３）および抗ｈＣ５抗体の保持時間を示す一連のクロマトグラフである。全てのパネルについて、Ｘ軸は、保持時間を分単位で示し、Ｙ軸は、２１４ｎｍの波長における吸光単位を示す。各パネルにおいてはめ込まれたサブパネルは、特徴的なピークの拡大図を示す。図１２Ａは、ｈＣ５タンパク質の非存在下におけるＢＮＪ３８３の保持時間を示す。図１２Ｂは、ｈＣ５タンパク質の非存在下における抗Ｃ５抗体の保持時間を示す。図１２Ｃは、ｈＣ５の存在下（ＢＮＪ３８３に対して２．１倍のモル過剰のｈＣ５）におけるＢＮＪ３８３の保持時間を示す。右から左に、列挙されているピークは、（ａ）複合体を形成していないＢＮＪ３８３またはｈＣ５；（ｂ）１つの抗原結合部位が、切断されていないｈＣ５に結合しているＢＮＪ３８３；および（ｃ）切断されていないｈＣ５で二重に占有されたＢＮＪ３８３と一致する小画分を示す。図１２Ｄは、等モル量のｈＣ５の存在下における抗Ｃ５抗体の保持時間を示す。右から左に、列挙されているピークは、（ａ）複合体を形成していない抗Ｃ５抗体またはｈＣ５；（ｂ）１つの抗原結合部位が、切断されていないｈＣ５に結合している抗Ｃ５抗体；および（ｃ）２つの切断されていないＣ５分子に結合した抗Ｃ５抗体を示す。
【図１３】図１３は、ＥＬＩＳＡを用いた、ｈＣ５の存在下における抗Ｃ５ａ抗体ＢＮＪ３８３とｈＣ５ａ  ｄｅｓａｒｇの結合を示す線グラフである。Ｘ軸は、抗体の濃度（ｎｇ／ｍＬ）を示す。Ｙ軸は、４５０ｎｍの波長における光学濃度を示す。
【図１４】図１４は、カニクイザルの血漿中に存在する遊離のＣ５ａ／Ｃ５ａ  ｄｅｓａｒｇの濃度を抗Ｃ５ａ抗体（ＢＮＪ３８３）の血漿中濃度に応じて示す散布図である。Ｙ軸は、ＢＮＪ３８３を、動物の体重１ｋｇ当たり１ｍｇ、１０ｍｇ、１００ｍｇ、２５０ｍｇ、または４００ｍｇで静脈内に単回投与した１日後から３０日後までにわたる時点でカニクイザル由来の血漿試料において検出されたＣ５ａ／Ｃ５ａ  ｄｅｓａｒｇの濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示す。Ｘ軸は、各試料中のＢＮＪ３８３の濃度（μｇ／ｍＬ）を示す。
【図１５Ａ】図１５Ａは、古典経路を介して開始される血清試料における溶血活性のベースライン値に対する百分率（Ｙ軸）を循環中の抗Ｃ５ａ抗体（ＢＮＪ３８３）の濃度（Ｘ軸）に応じて示す散布図である。
【図１５Ｂ】図１５Ｂは、ＣＨ５０ｅｑアッセイによって測定された、血清試料において古典経路を介して開始される終末補体複合体の形成のベースライン値に対する百分率（Ｙ軸）を循環中の抗Ｃ５ａ抗体（ＢＮＪ３８３）の濃度（Ｘ軸）に応じて示す散布図である。
【図１５Ｃ】図１５Ｃは、ＣＣＰアッセイによって測定された、血清試料において古典経路を介して開始される終末補体複合体の形成のベースライン値に対する百分率（Ｙ軸）を循環中の抗Ｃ５ａ抗体（ＢＮＪ３８３）の濃度（Ｘ軸）に応じて示す散布図である。
【発明を実施するための形態】
【０１５７】
本開示は、遊離のＣ５ａ（例えば、遊離のヒトＣ５ａ）に結合する抗体およびその抗原結合性断片、抗体またはそれらの断片を含有する組成物、ならびに、前述のいずれかを、これらに限定されないが、ａＨＵＳ、黄斑変性症（例えば、ＡＭＤ）、ＲＡ、敗血症、抗リン脂質症候群、熱傷（例えば、重篤な熱傷）、グッドパスチャー症候群、ループス腎炎などの補体に関連する障害、または喘息または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの補体に関連する肺障害を治療または予防するために使用する方法を提供する。本開示は、ヒト由来の遊離のＣ５ａと、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザルまたはアカゲザル）などの非ヒト哺乳動物種由来の遊離のＣ５ａとの間で交差反応性である抗Ｃ５ａ抗体（およびその断片）も提供する。決してこれに限定するものではないが、例示的な抗体（および抗原結合性断片）、組成物（例えば、医薬組成物および製剤）、ならびに組成物を使用するための方法は、以下に詳述され、実施例において例示されている。
【０１５８】
抗Ｃ５ａ抗体およびその抗原結合性断片
本開示は、補体成分であるＣ５ａに結合する抗体を提供する。上記の通り、１６７６アミノ酸残基の前駆体タンパク質である前駆形態（ｐｒｏｆｏｒｍ）のＣ５は、一連のタンパク質分解性の切断事象によってプロセシングされる。最初の１８ペプチド（−１８〜−１と番号が付される）は、前駆体タンパク質から切断されるシグナルペプチドを構成する。残りの１６５８アミノ酸のタンパク質は、２箇所で切断されて、アルファ鎖およびベータ鎖を形成する。第１の切断事象はアミノ酸残基６５５と６５６の間で起こる。第２の切断はアミノ酸残基６５９と６６０の間で起こる。２つの切断事象により、３つの別個のポリペプチド断片：（ｉ）アミノ酸１〜６５５を含む断片、ベータ鎖と称される；（ｉｉ）アミノ酸６６０〜１６５８を含む断片、アルファ鎖と称される；および（ｉｉｉ）アミノ酸６５６〜６５９からなるテトラペプチド断片が形成される。アルファ鎖ポリペプチド断片とベータ鎖ポリペプチド断片は、ジスルフィド結合を介して互いにつながり、成熟Ｃ５タンパク質を構成している。ＣＰまたはＡＰのＣ５転換酵素により、アルファ鎖が残基７３３と７３４の間で切断されて、Ｃ５ａ断片（アミノ酸６６０〜７３３）が遊離することによって成熟Ｃ５が活性化される。成熟Ｃ５の残りの部分は断片Ｃ５ｂであり、これは、ベータ鎖とジスルフィド結合したアルファ鎖の残基７３４〜１６５８を含有する。
【０１５９】
ｉｎ  ｖｉｖｏでは、Ｃ５ａは、血清酵素であるカルボキシペプチダーゼＢによって急速に代謝されて、カルボキシ末端のアルギニン残基が失われた、「Ｃ５ａ  ｄｅｓａｒｇ」と称される７３アミノ酸の形態になる。したがって、いくつかの実施形態では、遊離のＣ５ａに結合する抗体は、脱アルギニンＣ５ａとも結合する。いくつかの実施形態では、Ｃ５ａに結合する抗体は、脱アルギニンＣ５ａとは結合しない。
【０１６０】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体は、Ｃ５ａに存在するネオエピトープ、すなわち、成熟Ｃ５のアルファ鎖断片からＣ５ａが遊離すると露出されるエピトープに結合する。すなわち、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、Ｃ５ａおよび／またはＣ５ａ  ｄｅｓａｒｇに結合するが、切断されていないネイティブな（完全にフォールディングされた）Ｃ５とは結合しない。
【０１６１】
上記の通り、いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、試料（例えば、血液試料もしくは血漿試料または組換え型の全長のＣ５を含む試料）中の全長のＣ５の総集団の１０％未満（例えば、９．５％未満、９％未満、８．５％未満、８％未満、７．５％未満、７％未満、６．５％未満、６％未満、５．５％未満、５％未満、４．５％未満、４％未満、３．５％未満、３％未満、２．５％未満、２％未満、１．５％未満、１％未満、０．５％未満、０．４％未満、０．３％未満、０．２％未満、または０．１％未満）を構成する、切断されていないプロセシングされたＣ５（例えば、血漿Ｃ５）の亜集団に結合し得、この亜集団は、別の遮られたＣ５ａネオエピトープが露出するように、その全部または一部が変性している。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、遊離のＣ５ａに結合し得るが、切断されていないネイティブなＣ５集団の９０％以上のＣ５とは結合し得ない。いくつかの実施形態では、部分的または全体的に変性した亜集団は、Ｃ５の活性を試験するために有用な任意の数の適切なアッセイ、例えば、溶血アッセイまたはＣＨ５０ｅｑアッセイにおいて、不活性である、または活性が低下している（例えば、完全に機能的な全長のＣ５タンパク質の活性の９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体が結合し得る少数の亜集団の活性を試験するための適切な方法は当技術分野で公知であり、本明細書に記載されている。
【０１６２】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体は、哺乳動物（例えば、ヒト）のＣ５ａタンパク質に結合する。例えば、抗Ｃ５ａ抗体は、以下のアミノ酸配列を有するヒトＣ５ａタンパク質に結合し得る：
【０１６３】
【化１】
0006022441.tif 000002
いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体は、以下のアミノ酸配列を有する脱アルギニンヒトＣ５ａタンパク質に結合し得る：
【０１６４】
【化２】
0006022441.tif 000003
本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、全長のヒトＣ５ａと脱アルギニンヒトＣ５ａのどちらとも結合し得る。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣ５ａと、アミノ酸配列：
【０１６６】
【化３】
0006022441.tif 000004
を有するタンパク質の構造的な断片内の、またはそれとオーバーラップしているエピトープにおいて結合し得る。例えば、Ｃｏｏｋら（２０１０年）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ  Ｄ６６巻：１９０〜１９７頁を参照されたい。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｃ５ａと、対をなすシステイン残基のうちの少なくとも２つを含むＣ５ａのペプチド断片のアミノ酸配列内の、またはそれとオーバーラップしているエピトープにおいて結合し得る。例えば、抗Ｃ５ａ抗体は、アミノ酸配列：
【０１６７】
【化４】
0006022441.tif 000005
を含むまたはそれからなる断片に結合し得、各ペプチド断片において、最初と最後のシステイン残基は、ジスルフィド結合によって対をなしている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、ヒトＣ５ａタンパク質と、アミノ酸配列：
【０１６８】
【化５】
0006022441.tif 000006
内の、またはそれとオーバーラップしているエピトープにおいて結合し得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣ５ａタンパク質または、配列番号１〜１５のいずれか１つに示されている少なくとも４個（例えば、少なくとも４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、もしくは１７個もしくはそれ以上）の連続したアミノ酸を含有するもしくはそれからなるアミノ酸配列を含有するその断片に結合し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、２つ以上（例えば、少なくとも２つ、３つ、または４つ）のＣ５ａタンパク質の不連続なペプチド領域、例えば、２つ以上の、ジスルフィド結合で互いにつながった不連続なＣ５ａペプチド領域を含む三元のエピトープに結合する。
【０１６９】
特定の抗体（例えば、抗Ｃ５ａ抗体）が結合するエピトープを同定するための方法も当技術分野で公知である。例えば、抗Ｃ５ａ抗体が結合するＣ５ａ（または脱アルギニンＣ５ａ）内の結合性エピトープは、いくつか（例えば、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、または３０個またはそれ以上）の、補体成分であるＣ５ａタンパク質のオーバーラップしているペプチド断片（例えば、配列番号１または配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するヒトＣ５ａタンパク質のいくつかのオーバーラップしている断片）への抗体の結合を測定することによって同定することができる。次いで、種々のオーバーラップしているペプチドのそれぞれを、固体支持体、例えば、多ウェルアッセイプレートの別々のウェル上の独特のアドレスに結合させる。次に、抗Ｃ５ａ抗体を、アッセイプレート内のペプチドのそれぞれと、抗体がそのエピトープに結合することが可能になる時間にわたって、それが可能になる条件下で接触させることによって調べる。結合していない抗Ｃ５ａ抗体を、各ウェルを洗浄することによって除去する。次に、抗Ｃ５ａ抗体がプレートのウェル中に存在すればそれに結合する、検出可能に標識された二次抗体を各ウェルと接触させ、結合していない二次抗体を洗浄ステップによって除去する。ウェルにおいて検出可能に標識された二次抗体によって生じる検出可能なシグナルの存在またはその量は、抗Ｃ５ａ抗体が、そのウェルに結びついた特定のペプチド断片に結合することの指標である。例えば、その開示全体が参照によって組み込まれる、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（上記）、Ｂｅｎｎｙ  Ｋ．  Ｃ．  Ｌｏ（上記）、および米国特許出願公開第２００６０１５３８３６号を参照されたい。抗体が結合する特定のエピトープは、ＢＩＡｃｏｒｅクロマトグラフィー技法を用いて同定することもできる（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＢＩＡｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、「Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ」第６．３．２節（１９９４年５月）；およびＪｏｈｎｅら（１９９３年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １６０巻：２０１９１〜８頁を参照されたい）。
【０１７０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）の特定のセットおよび／または重鎖ＣＤＲの特定のセットを含有する。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１９、３７、または４２のいずれか１つに示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドから得られた軽鎖ＣＤＲセットを含んでよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２７または４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドから得られた重鎖ＣＤＲセットを含んでよい。上述の軽鎖可変領域および重鎖可変領域から得られた例示的な軽鎖ＣＤＲおよび重鎖ＣＤＲセットについては、下により詳細に記載されている（表１参照）。
【０１７１】
ＣＤＲ、およびフレームワーク領域の正確な境界は、異なる方法によって違うように定義されている。いくつかの実施形態では、軽鎖可変ドメインまたは重鎖可変ドメイン内のＣＤＲまたはフレームワーク領域の位置は、Ｋａｂａｔら［（１９９１年）「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ９１−３２４２、Ｕ．Ｓ．  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ］によって定義することができる。そのような場合では、ＣＤＲは、「Ｋａｂａｔ  ＣＤＲ」（例えば、「Ｋａｂａｔ  ＬＣＤＲ２」または「Ｋａｂａｔ  ＨＣＤＲ１」）と称することができる。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域または重鎖可変領域のＣＤＲの位置は、Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２巻：８７７〜８８３頁によって定義することができる。したがって、これらの領域は、「Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ」（例えば、「Ｃｈｏｔｈｉａ  ＬＣＤＲ２」または「Ｃｈｏｔｈｉａ  ＨＣＤＲ３」）と称することができる。いくつかの実施形態では、軽鎖可変領域および重鎖可変領域のＣＤＲの位置は、Ｋａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ定義によって定義することができる。そのような実施形態では、これらの領域は、「Ｋａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせＣＤＲ」と称することができる。いくつかの実施形態では、軽鎖可変ドメインまたは重鎖可変ドメイン内のＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域の位置は、ＨｏｎｎｅｇｇｅｒおよびＰｌｕｅｃｋｔｈｕｎ（２００１年）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３０９巻：６５７〜６７０頁によって定義することができる。上述の定義を用いて軽鎖可変領域または重鎖可変領域内のＣＤＲを同定することは、抗体工学の技術分野で周知である。例えば、Ｔｈｏｍａｓら［（１９９６年）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３３巻（１７／１８号）：１３８９〜１４０１頁］は、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ定義に従った軽鎖ＣＤＲおよび重鎖ＣＤＲの境界の同定を例証している。
【０１７２】
したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔ定義された、Ｃｈｏｔｈｉａ定義された、またはＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ定義された、配列番号１９、３７、または４２のいずれか１つに示されているアミノ酸配列を含む軽鎖ポリペプチドから得られた軽鎖ＣＤＲセットを含んでよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、Ｋａｂａｔ定義された、Ｃｈｏｔｈｉａ定義された、またはＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ定義された、配列番号２７または４５に示されているアミノ酸配列を含む重鎖ポリペプチドから得られた重鎖ＣＤＲセットを含んでよい。
【０１７３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、以下のアミノ酸配列：ＲＡＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２０）を含むまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１；以下のアミノ酸配列：ＲＡＳＮＬＥＳ（配列番号２１）を含むまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２；および以下のアミノ酸配列：ＱＱＳＮＥＤＰＹＴ（配列番号２２）を含むまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数を含有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、以下のアミノ酸配列：ＲＡＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２０）を含むまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１；以下のアミノ酸配列：ＲＡＳＮＬＥＳ（配列番号２１）を含むまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２；および以下のアミノ酸配列：ＱＱＳＮＥＤＰＹＴ（配列番号２２）を含むまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３のそれぞれを含有する軽鎖可変領域を含む。そのような軽鎖可変ドメインを含む例示的な抗Ｃ５ａ抗体としては、例えば、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体であるＢＮＪ３６４、ＢＮＪ３６７、ＢＮＪ３７８、ＢＮＪ３６６、ＢＮＪ３６９、およびＢＮＪ３８３が挙げられる（下記参照；表２）。
【０１７４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、以下のアミノ酸配列：ＲＡＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２０）を含むまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１；以下のアミノ酸配列：ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号３８）を含むまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２；および以下のアミノ酸配列：ＱＱＳＮＥＤＰＹＴ（配列番号２２）を含むまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数を含有する軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、以下のアミノ酸配列：ＲＡＳＥＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２０）を含むまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１；以下のアミノ酸配列：ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号３８）を含むまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２；および以下のアミノ酸配列：ＱＱＳＮＥＤＰＹＴ（配列番号２２）を含むまたはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３のそれぞれを含有する軽鎖可変領域を含む。そのような軽鎖可変ドメインを含む例示的な抗Ｃ５ａ抗体としては、例えば、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体であるＢＮＪ３７１、およびＢＮＪ３８１が挙げられる（下記参照；表２）。
【０１７５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、以下のアミノ酸配列：ＤＹＳＭＤ（配列番号２８）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ１；以下のアミノ酸配列：ＡＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号２９）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ２；および以下のアミノ酸配列：ＳＧＳＹＤＧＹＹＡＭＤＹ（配列番号３０）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数を含有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、以下のアミノ酸配列：ＤＹＳＭＤ（配列番号２８）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ１；以下のアミノ酸配列：ＡＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号２９）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ２；および以下のアミノ酸配列：ＳＧＳＹＤＧＹＹＡＭＤＹ（配列番号３０）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ３のそれぞれを含有する重鎖可変領域を含む。そのような重鎖可変ドメインを含む例示的な抗Ｃ５ａ抗体としては、例えば、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体であるＢＮＪ３６４、ＢＮＪ３６７、ＢＮＪ３７１、およびＢＮＪ３７８が挙げられる（下記参照；表２）。
【０１７６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、以下のアミノ酸配列：ＤＹＳＭＤ（配列番号２８）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ１；以下のアミノ酸配列：ＡＩＨＬＮＴＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号４６）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ２；および以下のアミノ酸配列：ＧＦＹＤＧＹＳＰＭＤＹ（配列番号４７）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数を含有する重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、以下のアミノ酸配列：ＤＹＳＭＤ（配列番号２８）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ１；以下のアミノ酸配列：ＡＩＨＬＮＴＧＹＴＮＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号４６）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ２；および以下のアミノ酸配列：ＧＦＹＤＧＹＳＰＭＤＹ（配列番号４７）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ３のそれぞれを含有する重鎖可変領域を含む。そのような重鎖可変ドメインを含む例示的な抗Ｃ５ａ抗体としては、例えば、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体であるＢＮＪ３６６、ＢＮＪ３６９、ＢＮＪ３８１およびＢＮＪ３８３が挙げられる（下記参照；表２）。
【０１７７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、アミノ酸配列：ＡＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＳＱＫＦＫＤ（配列番号６７）を含む重鎖ＣＤＲ２領域を含有してよい。例えば、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、以下のアミノ酸配列：ＤＹＳＭＤ（配列番号２８）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ１；以下のアミノ酸配列：ＡＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＳＱＫＦＫＤ（配列番号６７）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ２；および以下のアミノ酸配列：ＳＧＳＹＤＧＹＹＡＭＤＹ（配列番号３０）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ３のうちの１つまたは複数を含有する重鎖可変領域を含んでよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、以下のアミノ酸配列：ＤＹＳＭＤ（配列番号２８）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ１；以下のアミノ酸配列：ＡＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＳＱＫＦＫＤ（配列番号６７）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ２；および以下のアミノ酸配列：ＳＧＳＹＤＧＹＹＡＭＤＹ（配列番号３０）を含むまたはそれからなる重鎖ＣＤＲ３のそれぞれを含有する重鎖可変領域を含む。そのような重鎖ポリペプチドを含有し、ヒトＣ５ａと１ｎＭ未満のＫＤで結合する本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体の例は、下記の５ａｎ１０１ＭＥ抗体である。
【０１７８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、表１に示されている例示的な軽鎖ＣＤＲセットと重鎖ＣＤＲセットの対１〜４のうちの１つを含有する。
【０１７９】
【表１】
0006022441.tif 000007
表１の配列番号で表されるアミノ酸配列は、表２に記載されている。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体は、例示的なＣＤＲ対３を含まない。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体は、ＢＮＪ３７１ではない。
【０１８１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体の軽鎖ポリペプチドは、λ軽鎖ポリペプチド（例えば、完全ヒトλ軽鎖ポリペプチドまたはヒト化λ軽鎖ポリペプチド）であってよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体の軽鎖ポリペプチドは、κ軽鎖ポリペプチド（例えば、完全ヒトκ軽鎖ポリペプチドまたはヒト化κ軽鎖ポリペプチド）であってよい。多数の軽鎖ポリペプチド（例えば、多数のヒト軽鎖ポリペプチド）のアミノ酸配列が当技術分野で周知であり、例えば、Ｋａｂａｔら（１９９１年）、上記に記載されている。例示的なκ軽鎖ポリペプチドアミノ酸配列は表２に記載されている。
【０１８２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、軽鎖定常領域を含んでよい。例えば、軽鎖定常領域は、λ軽鎖ポリペプチド定常領域またはκ軽鎖定常領域であってよい。いくつものヒトλ軽鎖定常領域およびヒトκ軽鎖定常領域のアミノ酸配列が当技術分野で公知であり、例えば、Ｋａｂａｔら（１９９１年）、上記に記載されている。例示的なκ軽鎖ポリペプチドアミノ酸配列は表２に記載されている。
【０１８３】
重鎖ポリペプチドは、定常領域（例えば、重鎖定常領域１（ＣＨ１）、重鎖定常領域２（ＣＨ２）、重鎖定常領域３（ＣＨ３）、重鎖定常領域４（ＣＨ４）、またはそれらの任意の組み合わせ）を含んでよい。重鎖ポリペプチドは、免疫グロブリン分子のＦｃ部分を含んでよい。Ｆｃ領域は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、またはＩｇＤ免疫グロブリン分子またはこれらのそれぞれの部分の組み合わせ由来のＦｃ領域であってよい。明確には、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、例えば、ＩｇＧ１アイソタイプ、ＩｇＧ２アイソタイプ、ＩｇＧ３アイソタイプ、ＩｇＧ４アイソタイプ、ＩｇＡアイソタイプ、ＩｇＭアイソタイプ、ＩｇＥアイソタイプ、またはＩｇＤアイソタイプのものであってよい。いくつものヒト重鎖定常領域のアミノ酸配列が当技術分野で公知であり、例えば、Ｋａｂａｔら（１９９１年）、上記に記載されている。
【０１８４】
いくつかの実施形態では、重鎖ポリペプチドは、ハイブリッド定常領域、またはその部分、例えば、Ｇ２／Ｇ４ハイブリッド定常領域などを含んでよい（例えば、Ｂｕｒｔｏｎら（１９９２年）Ａｄｖ  Ｉｍｍｕｎ  ５１巻：１〜１８頁；Ｃａｎｆｉｅｌｄら（１９９１年）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７３巻：１４８３〜１４９１頁；およびＭｕｅｌｌｅｒら（１９９７年）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３４巻（６号）：４４１〜４５２頁を参照されたい）。例えば（およびＫａｂａｔ番号付けに従って）、ＩｇＧ１定常領域およびＩｇＧ４定常領域は、Ｇ２４９Ｇ２５０残基を含み、一方ＩｇＧ２定常領域は、残基２４９を含まないが、Ｇ２５０を含む。２４９〜２５０領域がＧ２配列によってもたらされるＧ２／Ｇ４ハイブリッド定常領域では、定常領域を、２４９位にグリシン残基が導入されるようにさらに改変して、Ｇ２４９／Ｇ２５０を有するＧ２／Ｇ４融合物を作製することができる。Ｇ２４９／Ｇ２５０を含む他の定常ドメインハイブリッドも、本開示に従って遺伝子工学で作り出された抗体の一部であってよい。例示的な重鎖ポリペプチドのアミノ酸配列は表２に記載されている。
【０１８５】
抗Ｃ５ａ抗体は、例えば、実施例において例示されている特定の抗体：ＢＮＪ３６４、ＢＮＪ３６７、ＢＮＪ３７８、ＢＮＪ３６６、ＢＮＪ３６９、ＢＮＪ３８３、ＢＮＪ３７１、またはＢＮＪ３８１のうちの１つであってよい。本明細書に記載の任意の方法と併せて使用することができる、これらの例示されている抗Ｃ５ａ抗体のアミノ酸配列は表２に記載されている。
【０１８６】
【表２−１】
0006022441.tif 000008
【０１８７】
【表２−２】
0006022441.tif 000009
【０１８８】
【表２−３】
0006022441.tif 000010
【０１８９】
【表２−４】
0006022441.tif 000011
【０１９０】
【表２−５】
0006022441.tif 000012
【０１９１】
【表２−６】
0006022441.tif 000013
【０１９２】
【表２−７】
0006022441.tif 000014
【０１９３】
【表２−８】
0006022441.tif 000015
【０１９４】
【表２−９】
0006022441.tif 000016
【０１９５】
【表２−１０】
0006022441.tif 000017
【０１９６】
【表２−１１】
0006022441.tif 000018
【０１９７】
【表２−１２】
0006022441.tif 000019
【０１９８】
【表２−１３】
0006022441.tif 000020
【０１９９】
【表２−１４】
0006022441.tif 000021
【０２００】
【表２−１５】
0006022441.tif 000022
【０２０１】
【表２−１６】
0006022441.tif 000023
【０２０２】
【表２−１７】
0006022441.tif 000024
【０２０３】
【表２−１８】
0006022441.tif 000025
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、表２または３に記載の任意の軽鎖可変領域から得られた、Ｃｈｏｔｈｉａ定義された軽鎖ＣＤＲセットまたはＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ定義された軽鎖ＣＤＲセットを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、表２または３に記載の任意の重鎖可変領域から得られた、Ｃｈｏｔｈｉａ定義された重鎖ＣＤＲセットまたはＫａｂａｔ−Ｃｈｏｔｈｉａ組み合わせ定義された重鎖ＣＤＲセットを含む。
【０２０４】
好ましい実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、Ｃ５ａに結合するが、ネイティブな全長のＣ５とは結合しない。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体は、Ｃ５ａに結合するが、切断されていないネイティブなＣ５のアルファ鎖とは結合しない。本明細書で使用される場合、「切断されていないＣ５」は、ＡＰまたはＣＰのＣ５転換酵素によってＣ５ａ断片およびＣ５ｂ断片に切断されていないＣ５タンパク質を指す。ヒトＣ５アルファ鎖の例示的なアミノ酸配列はＨａｖｉｌａｎｄら（１９９１年）、上記に記載されており、その配列は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２０５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、ヒトＣ５のパラログ、例えば、ヒトＣ３ａまたはヒトＣ４ａなどとは結合しない。
【０２０６】
本開示は、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体の結合を交差遮断する（例えば、ＢＮＪ３６４、ＢＮＪ３６７、ＢＮＪ３７８、ＢＮＪ３６６、ＢＮＪ３６９、ＢＮＪ３７１、ＢＮＪ３８１、またはＢＮＪ３８３のいずれか１つを交差遮断する）抗体も特徴とする。本明細書で使用される場合、「交差遮断性抗体」という用語は、補体成分であるＣ５ａタンパク質上のエピトープへの抗Ｃ５ａ抗体の結合量を、交差遮断性抗体の非存在下におけるエピトープへの抗Ｃ５ａ抗体の結合量と比較して低減させる（または結合を妨げる）抗体を指す。第１の抗体が、エピトープへの第２の抗体の結合を交差遮断するかどうかを決定するための適切な方法は当技術分野で公知である。例えば、交差遮断性抗体は、試験抗体の存在下、および非存在下におけるＢＮＪ３６４モノクローナル抗Ｃ５ａ抗体の結合を比較することによって同定することができる。試験抗体の非存在下におけるＢＮＪ３６４抗体の結合と比較して試験抗体の存在下におけるＢＮＪ３６４抗体の結合が減少することにより、試験抗体が交差遮断性抗体であることが示される。
【０２０７】
いくつかの実施形態では、抗体がＣ５ａに結合することにより、Ｃ５ａの生物活性が阻害され得る。Ｃ５ａ活性を測定するための方法としては、例えば、走化性アッセイ、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、または酵素結合免疫特異性検定法（ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｓｓａｙ）（ＥＬＩＳＡ）が挙げられる（例えば、ＷａｒｄおよびＺｖａｉｆｌｅｒ（１９７１年）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ５０巻（３号）：６０６〜１６頁およびＷｕｒｚｎｅｒら（１９９１年）Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｉｎｆｌａｍｍ  ８巻：３２８〜３４０頁を参照されたい）。いくつかの実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、抗体またはその抗原結合性断片とＣ５ａが結合することにより、Ｃ５ａに媒介される好中球活性化が阻害され得る。ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、抗Ｃ５ａ抗体がＣ５ａに媒介される好中球活性化を阻害するかどうか、または抗体が活性化を阻害する程度を決定するための適切な方法は当技術分野で公知であり、下の実施例において例示されている。例えば、健康なドナーから得られたヒト好中球を単離し、試験抗Ｃ５ａ抗体の存在下または非存在下において、単離されたヒトＣ５ａと接触させることができる。ヒト好中球のＣ５ａ依存性の活性化は、Ｃ５ａの存在下における細胞からのミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）の放出に応じて測定することができる。Ｃ５ａおよび試験抗体の存在下で細胞から放出されるＭＰＯの量が、Ｃ５ａおよび対照抗体の存在下で細胞から放出されるＭＰＯの量と比較して阻害されることにより、試験抗体がＣ５ａに媒介される好中球活性化を阻害することが示される。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、補体成分であるＣ５の活性を、対応する対照抗体またはその抗原結合性断片（すなわち、遊離のＣ５ａまたはＣ５に結合しない抗体）により観察される、阻害のレベル（もしあれば）と比較して、阻害しない（または、実質的に阻害しない）。Ｃ５の活性は、被験体の体液におけるその細胞溶解能力に応じて測定することができる。Ｃ５の細胞溶解能力、またはその低下は、当技術分野で周知の方法、例えば、ＫａｂａｔおよびＭａｙｅｒ（編）、「Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２版」１３５−２４０、Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ、ＩＬ、ＣＣ  Ｔｈｏｍａｓ（１９６１年）、１３５〜１３９頁に記載されている溶血アッセイなどの従来の溶血アッセイ、または例えば、Ｈｉｌｌｍｅｎら（２００４年）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５０巻（６号）：５５２頁に記載のニワトリ赤血球溶血法などのそのアッセイの従来の変形などによって測定することができる。
【０２０９】
いくつかの実施形態では、Ｃ５の活性またはその阻害を、ＣＨ５０ｅｑアッセイを使用して数量化する。ＣＨ５０ｅｑアッセイは、血清における古典的補体活性の全体を測定するための方法である。この試験は、補体の古典経路の活性化因子として抗体で感作した赤血球、および種々の希釈度の試験血清を使用して、５０％溶解（ＣＨ５０）をもたらすために必要な量を決定する溶解アッセイである。溶血の百分率は、例えば、分光光度計を使用して決定することができる。終末補体複合体（ＴＣＣ）自体が、測定される溶血に直接関与するので、ＣＨ５０ｅｑアッセイによりＴＣＣ形成が間接的に測定される。
【０２１０】
アッセイは周知であり、当業者によって一般に実施される。簡単に述べると、補体の古典経路を活性化するために、希釈していない血清試料（例えば、ヒト血清試料）を抗体で感作した赤血球を含有するマイクロアッセイウェルに加えて、それにより、ＴＣＣを生成する。次に、活性化された血清を、捕捉試薬（例えば、ＴＣＣの１種または複数種の構成成分に結合する抗体）でコーティングされたマイクロアッセイウェル中で希釈する。活性化された試料中に存在するＴＣＣは、マイクロアッセイウェルの表面をコーティングしているモノクローナル抗体に結合する。ウェルを洗浄し、各ウェルに、検出可能に標識されており、結合したＴＣＣを認識する検出試薬を加える。検出可能な標識は、例えば、蛍光標識または酵素標識であってよい。アッセイ結果は１ミリリットル当たりのＣＨ５０単位当量で表す（ＣＨ５０  Ｕ  Ｅｑ／ｍＬ）。
【０２１１】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＣ５の活性を検出および／または測定するための追加的な方法は、実施例において記載され、例示されている。
【０２１２】
いくつかの実施形態では、抗体がＣ５ａに結合することにより、Ｃ５ａとＣ５ａＲ１との間の相互作用が阻害され得る。Ｃ５ａとＣ５ａＲ１との間の相互作用を検出および／または測定する（抗体の存在下、および非存在下で）ための適切な方法は当技術分野で公知であり、例えば、ＭａｒｙおよびＢｏｕｌａｙ（１９９３年）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ  ５１巻（５号）：２８２〜２８７頁；Ｋａｎｅｋｏら（１９９５年）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８６巻（１号）：１４９〜１５４頁；Ｇｉａｎｎｉｎｉら（１９９５年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７０巻（３２号）：１９１６６〜１９１７２頁；および米国特許出願公開第２００６０１６０７２６号に記載されている。例えば、検出可能に標識された（例えば、放射標識された）Ｃ５ａとＣ５ａＲ１を発現している末梢血単核細胞の結合を、抗体の存在下および非存在下で評価することができる。抗体の存在下における、Ｃ５ａＲ１に結合する検出可能に標識されたＣ５ａの量が、抗体の非存在下における結合量と比較して減少することにより、その抗体が、Ｃ５ａとＣ５ａＲ１との間の相互作用を阻害することが示される。
【０２１３】
いくつかの実施形態では、抗体がＣ５ａに結合することにより、Ｃ５ａとＣ５Ｌ２との間の相互作用が阻害され得る。Ｃ５ａとＣ５Ｌ２との間の相互作用を検出および／または測定するための方法は当技術分野で公知であり、例えば、Ｗａｒｄ（２００９年）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ  ８７巻（４号）：３７５〜３７８頁およびＣｈｅｎら（２００７年）Ｎａｔｕｒｅ  ４４６巻（７１３２号）：２０３〜２０７頁に記載されている。本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体の生物学的効果を評価するための追加的な方法は、下記の実施例において例示されている。
【０２１４】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体はヒト補体成分であるＣ５ａタンパク質（例えば、配列番号１または配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するヒトＣ５ａタンパク質）に特異的に結合する。「特異的な結合」「特異的に結合する」という用語および同様の文法上の用語は、本明細書で使用される場合、生理的条件下で比較的安定な複合体を形成している２つの分子（例えば、抗体と、補体成分であるＣ５ａタンパク質の複合体）を指す。一般には、結合は、会合定数（ｋａ）が１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合に特異的であるとみなされる。したがって、抗体は、少なくとも１０６Ｍ−１ｓ−１（または１０６Ｍ−１ｓ−１超）（例えば、少なくとも１０７Ｍ−１ｓ−１、１０８Ｍ−１ｓ−１、１０９Ｍ−１ｓ−１、１０１０Ｍ−１ｓ−１、１０１１Ｍ−１ｓ−１、１０１２Ｍ−１ｓ−１、１０１３Ｍ−１ｓ−１、１０１４Ｍ−１ｓ−１、もしくは１０１５Ｍ−１ｓ−１もしくはそれ以上、または１０７Ｍ−１ｓ−１超、１０８Ｍ−１ｓ−１超、１０９Ｍ−１ｓ−１超、１０１０Ｍ−１ｓ−１超、１０１１Ｍ−１ｓ−１超、１０１２Ｍ−１ｓ−１超、１０１３Ｍ−１ｓ−１超、１０１４Ｍ−１ｓ−１超、もしくは１０１５Ｍ−１ｓ−１超もしくはそれ以上）のｋａでＣ５ａタンパク質と特異的に結合し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体の解離定数（ｋｄ）は、１０−３ｓ−１以下（例えば、８×１０−４ｓ−１、５×１０−４ｓ−１、２×１０−４ｓ−１、１０−４ｓ−１、または１０−５ｓ−１）である。
【０２１５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体のＫＤは、１０−８Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、１０−１１Ｍ未満、または１０−１２Ｍ未満である。平衡定数ＫＤは、カイネティクス速度定数の比−ｋｄ／ｋａである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体のＫＤは、１．２５×１０−９Ｍ未満である。１．２５×１０−９Ｍ未満のＫＤを有する、Ｃ５ａに結合する抗Ｃ５ａ抗体の例としては、例えば、ＢＮＪ３６４抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３６７抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３７１抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３７８抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３６６抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３６９抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３８１抗Ｃ５ａ抗体、およびＢＮＪ３８３抗Ｃ５ａ抗体が挙げられる。
【０２１６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体のＫＤは、１×１０−９Ｍ未満である。１０−９Ｍ未満のＫＤを有する、Ｃ５ａに結合する抗Ｃ５ａ抗体の例としては、例えば、ＢＮＪ３６４抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３６７抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３７８抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３６６抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３６９抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３８１抗Ｃ５ａ抗体、およびＢＮＪ３８３抗Ｃ５ａ抗体が挙げられる。
【０２１７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体のＫＤは、５×１０−１０Ｍ未満である。５×１０−１０Ｍ未満のＫＤを有する、Ｃ５ａに結合する抗Ｃ５ａ抗体の例としては、例えば、ＢＮＪ３６７抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３７８抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３６６抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３６９抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３８１抗Ｃ５ａ抗体、およびＢＮＪ３８３抗Ｃ５ａ抗体が挙げられる。
【０２１８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体のＫＤは、２×１０−１０Ｍ未満である。２×１０−１０Ｍ未満のＫＤを有する、Ｃ５ａに結合する抗Ｃ５ａ抗体の例としては、例えば、ＢＮＪ３６７抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３６６抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３６９抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３８１抗Ｃ５ａ抗体、およびＢＮＪ３８３抗Ｃ５ａ抗体が挙げられる。
【０２１９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体のＫＤは、１×１０−１０Ｍ未満である。１×１０−１０Ｍ未満のＫＤを有する、Ｃ５ａに結合する抗Ｃ５ａ抗体の例としては、例えば、ＢＮＪ３６９抗Ｃ５ａ抗体、ＢＮＪ３８１抗Ｃ５ａ抗体、およびＢＮＪ３８３抗Ｃ５ａ抗体が挙げられる。
【０２２０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体のＫＤは、７．５×１０−１１Ｍ未満である。７．５×１０−１１Ｍ未満のＫＤを有する、Ｃ５ａに結合する抗Ｃ５ａ抗体の例としては、例えば、ＢＮＪ３６９抗Ｃ５ａ抗体、およびＢＮＪ３８３抗Ｃ５ａ抗体が挙げられる。
【０２２１】
タンパク質抗原に対する抗体の親和性を決定するための方法は当技術分野で公知である。例えば、タンパク質抗原に対する抗体の親和性は、例えば、これらに限定されないが、ウエスタンブロット、ドットブロット、バイオレイヤー干渉法（Ｂｉｏｌａｙｅｒ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）方法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム；Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ  ａｎｄ  Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）、または酵素結合免疫特異性検定法（ＥＬＩＳＡ）などのさまざまな技法を使用して数量化することができる。例えば、
【０２２２】
【化６】
0006022441.tif 000026
を参照されたい。
【０２２３】
本明細書に記載の任意の軽鎖ＣＤＲセットまたは軽鎖可変領域は、本明細書に記載の任意の重鎖ＣＤＲセットまたは重鎖可変領域と対をなしてよい。例えば、そのような対合によって生成した抗Ｃ５ａ抗体が所望の親和性または活性を保有することを確認（試験）することは、十分に当業者の権限の範囲内である。抗Ｃ５ａ抗体の活性および／または親和性を確認するための適切な方法は、本明細書に記載されている。
【０２２４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、ヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）と非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）などの非ヒト哺乳動物由来のＣ５ａのどちらとも結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、同じ非ヒト哺乳動物種由来のヒトＣ５ａのパラログ、例えば、Ｃ３ａまたはＣ４ａなどとは結合しない。
【０２２５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、遊離のｈＣ５ａ、および以下のアミノ酸配列：
【０２２６】
【化７】
0006022441.tif 000027
を含むまたはそれからなるカニクイザルＣ５ａタンパク質に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、遊離のｈＣ５ａ、および配列番号１７９に示されているアミノ酸配列を含むまたはそれからなるアカゲザルＣ５ａタンパク質に結合する。
【０２２７】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、非ヒト哺乳動物種（例えば、非ヒト霊長類種）由来の脱アルギニン形態のＣ５ａタンパク質に結合し得る。例えば、抗体またはその抗原結合性断片は、カニクイザルまたはアカゲザル由来の遊離のＣ５ａ−ｄｅｓａｒｇタンパク質、以下のアミノ酸配列：
【０２２８】
【化８】
0006022441.tif 000028
を含むまたはそれからなるタンパク質に結合し得る。
【０２２９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、マウスＣ５ａ（すなわち、マウス由来の遊離のＣ５ａ）に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体はマウスＣ５ａに結合するが、ヒトＣ５ａとは結合しない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、切断されていないネイティブな（完全にフォールディングされた）マウスＣ５とは結合しない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、マウスＣ５ａのパラログ、例えば、マウスＣ３ａまたはマウスＣ４ａなどとは結合しない。
【０２３０】
抗マウスＣ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、以下のアミノ酸配列：
【０２３１】
【化９】
0006022441.tif 000029
を含むまたはそれからなるマウスＣ５ａタンパク質に結合し得る。例えば、Ｗｅｔｓｅｌら（１９８７年）Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２６巻：７３７〜７４３頁も参照されたい。いくつかの実施形態では、抗マウスＣ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、以下のアミノ酸配列：
【０２３２】
【化１０】
0006022441.tif 000030
を含むまたはそれからなる、脱アルギニン形態のマウスＣ５ａタンパク質に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗マウスＣ５ａ抗体は、全長のマウスＣ５ａタンパク質と脱アルギニン形態のマウスＣ５ａタンパク質のどちらとも結合する。
【０２３３】
本明細書に記載の抗マウスＣ５ａ抗体は、例えば、以下のアミノ酸配列：
【０２３４】
【化１１】
0006022441.tif 000031
を含む軽鎖可変領域ポリペプチドから得られた軽鎖ＣＤＲセットを含有し得る。例えば、抗マウスＣ５ａ抗体は、（ｉ）以下のアミノ酸配列：ＲＡＳＳＳＶＮＹＩＹ（配列番号５４）を含むまたはそれからなるＫａｂａｔ定義された軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）以下のアミノ酸配列：ＹＴＳＮＬＡＰ（配列番号５５）を含むまたはそれからなるＫａｂａｔ定義された軽鎖ＣＤＲ２；および／または（ｉｉｉ）以下のアミノ酸配列：ＱＱＦＴＳＳＰＬＴ（配列番号５６）を含むまたはそれからなるＫａｂａｔ定義された軽鎖ＣＤＲ３を含有し得る。
【０２３５】
抗マウスＣ５ａ抗体は、軽鎖定常領域、例えば、以下のアミノ酸配列：
【０２３６】
【化１２】
0006022441.tif 000032
を含むまたはそれからなるマウスカッパ軽鎖定常領域を含有し得る。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗マウスＣ５ａ抗体は、アミノ末端シグナルペプチド、例えば、以下のアミノ酸配列：ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳ（配列番号５８）を含むまたはそれからなるシグナルペプチドを含有し得る。
【０２３８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗マウスＣ５ａ抗体は、以下のアミノ酸配列：
【０２３９】
【化１３】
0006022441.tif 000033
を含むまたはそれからなる軽鎖ポリペプチドを含有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗マウスＣ５ａ抗体は、配列番号５９のアミノ酸２〜２１４を含む軽鎖ポリペプチドを含有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗マウスＣ５ａ抗体は、配列番号６０のアミノ酸１〜１９および２１〜２３３を含む軽鎖ポリペプチドを含有する。
【０２４０】
本明細書に記載の抗マウスＣ５ａ抗体は、例えば、以下のアミノ酸配列：
【０２４１】
【化１４】
0006022441.tif 000034
を含む重鎖可変領域ポリペプチドから得られた重鎖ＣＤＲセットを含有し得る。例えば、抗マウスＣ５ａ抗体は、（ｉ）以下のアミノ酸配列：ＤＹＹＹＩＮ（配列番号６２）を含むもしくはそれからなるＫａｂａｔ定義された重鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）以下のアミノ酸配列：ＹＩＹＰＮＤＧＤＴＮＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号６３）を含むもしくはそれからなるＫａｂａｔ定義された重鎖ＣＤＲ２；および／または（ｉｉｉ）以下のアミノ酸配列：ＰＹＹＳＤＹＧＭＤＹ（配列番号６４）を含むもしくはそれからなるＫａｂａｔ定義された重鎖ＣＤＲ３を含有し得る。
【０２４２】
抗マウスＣ５ａ抗体は、重鎖定常領域を含有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗マウスＣ５ａ抗体は、アミノ末端シグナルペプチド、例えば、以下のアミノ酸配列：ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳ（配列番号６５）を含むまたはそれからなるシグナルペプチドを含有し得る。
【０２４３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗マウスＣ５ａ抗体は、以下のアミノ酸配列：
【０２４４】
【化１５】
0006022441.tif 000035
を含むまたはそれからなる重鎖ポリペプチドを含有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗マウスＣ５ａ抗体は、配列番号６６のアミノ酸２〜１２１を含む重鎖ポリペプチドを含有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗マウスＣ５ａ抗体は、配列番号６７のアミノ酸１〜１９および２１〜１４０を含む重鎖ポリペプチドを含有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗マウスＣ５ａ抗体は、上記の配列からの１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む重鎖定常領域ポリペプチドを含有する。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗マウスＣ５ａ抗体は、（ｉ）配列番号５４に示されているアミノ酸配列を含むもしくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号５５に示されているアミノ酸配列を含むもしくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号５６に示されているアミノ酸配列を含むもしくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号６２に示されているアミノ酸配列を含むもしくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号６３に示されているアミノ酸配列を含むもしくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２；および／または（ｖｉ）配列番号６４に示されているアミノ酸配列を含むもしくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖ポリペプチドを含有する。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗マウスＣ５ａ抗体は、配列番号５９に示されているアミノ酸配列を含むまたはそれからなる軽鎖ポリペプチドと、配列番号６６に示されているアミノ酸配列を含むまたはそれからなる重鎖ポリペプチドとを含有する。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、ヒトＣ５ａおよびマウスＣ５ａに結合し得る。
【０２４８】
抗Ｃ５ａ抗体およびその抗原結合性断片を作製するための方法
本開示は、本明細書に記載の任意の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を作製するための方法も特徴とする。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体を調製するための方法は、適切な免疫原を用いて被験体（例えば、非ヒト哺乳動物）を免疫化することを含んでよい。本明細書に記載の任意の抗体を生成するための適切な免疫原は、本明細書に記載されている。例えば、Ｃ５ａに結合する抗体を生成するために、当業者は、適切な被験体（例えば、非ヒト哺乳動物、例えば、ラット、マウス、スナネズミ、ハムスター、イヌ、ネコ、ブタ、ヤギ、ウマ、または非ヒト霊長類など）を、全長のＣ５ａポリペプチド、例えば、配列番号１に示されているアミノ酸配列を含む全長のＣ５ａポリペプチドまたは脱アルギニン形態のＣ５ａ（例えば、配列番号２に示されているアミノ酸配列を含むヒトＣ５ａ  ｄｅｓａｒｇ）などを用いて免疫化することができる。いくつかの実施形態では、非ヒト哺乳動物はＣ５を欠損しており、例えば、Ｃ５欠損マウスは、例えば、
【０２４９】
【化１６】
0006022441.tif 000036
に記載されている。ヒトＣ５ａは、例えば、ＭｃＣａｒｔｈｙおよびＨｅｎｓｏｎ（１９７９年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １２３巻（６号）：２５１１〜２５１７頁およびＭａｎｄｅｒｉｎｏら（１９８２年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ５３巻（１号）：４１〜５０頁に記載の通り、ヒト血清から精製することができる。実施例も参照されたい。ヒトＣ５ａは、例えば、ＶａｌｌｏｔａおよびＭｕｅｌｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒｄ（１９７３年）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １３７巻：１１０９頁に記載の通り、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで生成することもできる。精製されたヒトＣ５ａは、例えば、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（カタログ番号Ａ１４４；Ｔｙｌｅｒ、Ｔｅｘａｓ）から市販もされている。組換えＣ５ａは、当業者が、例えば、Ｔｏｔｈｅら（１９９４年）Ｐｒｏｔ  Ｓｃｉ  ３巻：１１５９〜１１６８頁に記載の通り生成することもできる。
【０２５０】
適切な被験体（例えば、非ヒト哺乳動物）は、適切な抗原を用いて免疫化することができ、その後に哺乳動物による抗体の産生を引き出すために十分な複数回の追加免疫を伴ってよい。免疫原は、アジュバントと一緒に被験体（例えば、非ヒト哺乳動物）に投与することができる。被験体において抗体を産生させるために有用なアジュバントとしては、これらに限定されないが、タンパク質アジュバント；細菌アジュバント、例えば、細菌全体（ＢＣＧ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍまたはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｍｉｎｎｅｓｏｔａ）および細胞壁骨格を含めた細菌構成成分、トレハロースジミコレート、モノホスホリルリピドＡ、ｔｕｂｅｒｃｌｅ  ｂａｃｉｌｌｕｓのメタノールで抽出可能な残基（ＭＥＲ）、完全フロイントアジュバントまたは不完全フロイントアジュバント；ウイルスアジュバント；化学的アジュバント、例えば、水酸化アルミニウム、およびヨード酢酸およびコレステリルヘミスクシナートが挙げられる。免疫応答を誘導するための方法において使用することができる他のアジュバントとしては、例えば、コレラ毒素およびパラボックスウイルスタンパク質が挙げられる。
【０２５１】
【化１７】
0006022441.tif 000037
も参照されたい。
【０２５２】
いくつかの実施形態では、方法は、免疫原に結合するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞系を調製することを含む。例えば、実験用マウスなどの適切な哺乳動物を上記の通りＣ５ａポリペプチドを用いて免疫化する。免疫化された哺乳動物の抗体産生細胞（例えば、脾臓のＢ細胞）を、免疫原を少なくとも１回追加免疫した２〜４日後に単離し、次いで、培養物中で短時間成長させた後、適切な骨髄腫細胞株の細胞と融合することができる。細胞は、例えば、ワクシニアウイルスまたはポリエチレングリコールなどの融合プロモーターの存在下で融合することができる。融合で得られたハイブリッド細胞をクローニングし、所望の抗体を分泌する細胞クローンを選択する。例えば、適切な免疫原を用いて免疫化したＢａｌｂ／ｃマウスの脾臓細胞を、骨髄腫細胞株であるＰＡＩまたは骨髄腫細胞株であるＳｐ２／０−Ａｇ１４の細胞と融合することができる。融合した後、細胞は、通常の骨髄腫細胞が所望のハイブリドーマ細胞を過成長させることを防ぐために、選択培地を補充した適切な培地、例えばＨＡＴ培地中、定期的な間隔で増大させる。次いで、得られたハイブリッド細胞を、所望の抗体、例えば、Ｃ５ａに結合し、Ｃ５ａとＣ５ａ受容体との間の相互作用を阻害する抗体の分泌についてスクリーニングする（例えば、Ｃ５ａＲ１）。
【０２５３】
いくつかの実施形態では、当業者は、例えば、米国特許第６，３００，０６４号（Ｋｎａｐｐｉｋら；Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ  ＡＧ）およびＳｃｈｏｏｎｂｒｏｏｄｔら（２００５年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３３巻（９号）：ｅ８１頁に記載の免疫に偏りのないライブラリーから抗Ｃ５ａ抗体を同定することができる。
【０２５４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、例えば、ファージ提示技術、細菌提示、酵母表面提示、真核生物ウイルス提示、哺乳動物細胞提示、および無細胞（例えば、リボソーム提示）抗体スクリーニング技法を含む、またはそれと併せて使用することができる（例えば、
【０２５５】
【化１８】
0006022441.tif 000038
を参照されたい）。
【０２５６】
種々のファージ提示法を用いて抗体を同定するための方法は、当技術分野で公知である。ファージ提示法では、機能性抗体ドメインが、それをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面上に提示される。そのようなファージを利用して、レパートリーまたはコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒトまたはマウス）から発現された抗体の抗原結合性ドメイン、例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ、またはジスルフィド結合で安定化されたＦｖ抗体断片などを提示することができる。これらの方法において使用されるファージは、一般には、ｆｄおよびＭ１３などの繊維状ファージである。抗原結合性ドメインは、ファージコートタンパク質であるｐＩＩＩ、ｐＶＩＩＩ、またはｐＩＸのいずれかと組換えによって融合したタンパク質として発現される。例えば、Ｓｈｉら（２０１０年）ＪＭＢ  ３９７巻：３８５〜３９６頁を参照されたい。本明細書に記載の免疫グロブリンまたはその断片を作出するために使用することができるファージ提示法の例としては、
【０２５７】
【化１９】
0006022441.tif 000039
に開示されているものが挙げられる。適切な方法は、例えば、米国特許第５，６９８，４２６号；同第５，２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；同第５，５８０，７１７号；同第５，４２７，９０８号；同第５，７５０，７５３号；同第５，８２１，０４７号；同第５，５７１，６９８号；同第５，４２７，９０８号；同第５，５１６，６３７号；同第５，７８０，２２５号；同第５，６５８，７２７号；同第５，７３３，７４３号および同第５，９６９，１０８号にも記載されている。
【０２５８】
いくつかの実施形態では、ファージ提示抗体ライブラリーは、免疫化された哺乳動物由来のＢ細胞から採取したｍＲＮＡを使用して生成することができる。例えば、Ｂ細胞を含む脾細胞試料を、上記の通りＣ５ａポリペプチドを用いて免疫化したマウスから単離することができる。ｍＲＮＡは、細胞から単離し、標準の分子生物学技法を用いてｃＤＮＡに変換することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９年）「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版」Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８年）、上記；Ｂｅｎｎｙ  Ｋ．  Ｃ．  Ｌｏ（２００４年）、上記；およびＢｏｒｒｅｂａｅｋ（１９９５年）、上記を参照されたい。免疫グロブリンの重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの可変領域をコードするｃＤＮＡを使用して、ファージ提示ライブラリーを構築する。そのようなライブラリーを生成するための方法は、例えば、Ｍｅｒｚら（１９９５年）Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６２巻（１〜２号）：２１３〜９頁；Ｄｉ  Ｎｉｒｏら（２００５年）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ  ３８８巻（Ｐｔ３）：８８９〜８９４頁；およびＥｎｇｂｅｒｇら（１９９５年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ５１巻：３５５〜３７６頁に記載されている。
【０２５９】
いくつかの実施形態では、選択およびスクリーニングの組み合わせを使用して、例えば、ハイブリドーマ由来の抗体の集団またはファージ提示抗体ライブラリーから対象の抗体を同定することができる。適切な方法は当技術分野で公知であり、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ（１９９７年）Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １５巻：６２〜７０頁；Ｂｒｉｎｋｍａｎら（１９９５年）、上記；Ａｍｅｓら（１９９５年）、上記；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら（１９９４年）、上記；Ｐｅｒｓｉｃら（１９９７年）、上記；およびＢｕｒｔｏｎら（１９９４年）、上記に記載されている。例えば、それぞれが、バクテリオファージコートタンパク質（例えば、Ｍ１３ファージのｐＩＩＩ、ｐＶＩＩＩ、またはｐＩＸ）と、異なる抗原結合領域（ａｎｔｉｇｅｎ−ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ）との融合タンパク質をコードする複数のファージミドベクターを、標準の分子生物学技法を用いて作製し、次いで、細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）の集団に導入する。いくつかの実施形態では、細菌においてバクテリオファージを発現させるためにヘルパーファージを使用する必要がある。いくつかの実施形態では、ヘルパーファージは必要ない（例えば、Ｃｈａｓｔｅｅｎら（２００６年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３４巻（２１号）：ｅ１４５頁を参照されたい）。細菌から作製したファージを回収し、次いで、例えば、固体支持体に結合させた（それに固定化した）標的抗原と接触させる。ファージを溶液中の抗原と接触させ、その後に複合体を固体支持体に結合させることもできる。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、固定化されたファージが対象のファージである。したがって、結合していないファージを、支持体を洗浄することによって除去する。洗浄ステップの後、結合したファージを固体支持体から、例えば、低ｐＨ緩衝液または遊離の標的抗原競合剤を使用して溶出させ、細菌に感染させることによって回収する。いくつかの実施形態では、固定化されていないファージが対象のファージである。そのような実施形態では、ファージの集団を抗原と２回以上接触させ、支持体に結合するいかなるファージも集団から枯渇させる。次いで、結合していないファージを採取し、その後のスクリーニングステップのために使用する。
【０２６１】
ファージ集団を、標的抗原に対する親和性がより高い抗体を含有するファージ粒子を濃縮する（一方で抗原非特異的に結合し得るファージの割合を低下させる）ために、溶出したファージ（上記）を使用して、細菌宿主細胞の集団に再感染させることができる。次いで、発現されたファージを細菌から単離し、標的抗原と再度接触させる。親和性の高い抗体断片を濃縮するために、接触の間の抗原の濃度、ｐＨ、温度ならびに界面活性剤およびアジュバントを含めることについて調節することができる。結合していないファージを、固体支持体を洗浄することによって除去する。洗浄の間の数またはサイクル、継続期間、ｐＨ、温度および界面活性剤およびアジュバントを含めることについても、親和性の高い抗体断片を濃縮するために調節することができる。洗浄ステップの後、結合したファージを固体支持体から溶出させる。１回から６回までのいずれかの回数の反復的なパニングサイクルを使用して、標的抗原に対する親和性がより高い抗体を含有するファージを濃縮することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意のパニング手法と併せて、選択解除ステップも実施することができる。
【０２６２】
集団の個々のファージを細菌に感染させ、次いで、モノクローナル抗体の形成が可能になる密度で平板培養することによって単離することができる。
【０２６３】
例えば、ファージ提示技法を用いて、Ｃ５ａに結合するがＣ５とは結合しない抗体を同定するために、以下のパニング手法を使用することができる。まず、集団を、結合したネイティブな全長のヒトＣ５を含有する表面と接触させることができる。プロセスは、２回以上繰り返すことができ、毎回結合していないファージを採取する。集団を、表面にＣ４タンパク質および／またはＣ３タンパク質が結合した固体支持体と接触させることもできる。次いで、前述のステップからの結合していないファージを、Ｃ５ａまたは脱アルギニンＣ５ａが結合した表面と接触させる。Ｃ５ａに結合するファージを表面から溶出させ、細菌に感染させることによって回収する。ファージ選択の反復的なラウンドを実施することができる。１〜６ラウンドの選択後、個々の回収されたファージミドを、所望の特異性および親和性を有する抗体断片の発現についてスクリーニングすることができる。
【０２６４】
上記の方法を用いてスクリーニングされた抗体の亜集団を、特定の免疫原（例えば、Ｃ５ａ）に対するそれらの特異性および結合親和性について、当技術分野で公知の任意の免疫学または生化学に基づく方法を用いて特徴付けることができる。例えば、抗体の、ネイティブな全長のＣ５と比較した、Ｃ５ａとの特異的な結合を、例えば、免疫学または生化学に基づく方法、例えば、これらに限定されないが、上記のＥＬＩＳＡアッセイ、ＳＰＲアッセイ、免疫沈降アッセイ、アフィニティークロマトグラフィー、および平衡透析などを用いて決定することができる。抗体の免疫特異的結合および交差反応性を分析するために使用することができる免疫測定法としては、これらに限定されないが、ウエスタンブロット、ＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ（酵素連結免疫吸着検定法）、「サンドイッチ」免疫測定法、免疫沈降アッセイ、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射定量測定法、蛍光免疫測定法、およびプロテインＡ免疫測定法などの技法を用いた競合的なアッセイ系および非競合的なアッセイ系が挙げられる。そのようなアッセイは、常套的であり、当技術分野で周知である。
【０２６５】
抗体は、抗体とＣ５ａの相互作用のカイネティクスパラメータを特徴付けるための当技術分野で公知の任意のＳＰＲに基づくアッセイを用いてアッセイすることもできる。これらに限定されないが、
【０２６６】
【化２０】
0006022441.tif 000040
を含めた任意の市販のＳＰＲ機器を本明細書に記載の方法において用いることができる。例えば、
【０２６７】
【化２１】
0006022441.tif 000041
を参照されたい。
【０２６８】
上記の方法は、例えば、抗Ｃ５ａ抗体が、全長のネイティブなＣ５タンパク質、Ｃ３タンパク質および／またはＣ４タンパク質に結合しないかどうかを決定するためにも使用できることが理解される。上記の方法は、Ｃ５ａに結合する抗体が、Ｃ５ａとＣ５ａ受容体との間の相互作用の阻害もするかどうかを決定するためにも使用することができる。上記の方法は、Ｃ５ａに結合する抗体がＣ５ａの活性の阻害もするかどうかを決定するためにも使用することができる。
【０２６９】
上記の参考文献に記載の通り、ファージ選択した後、ファージ由来の抗体コード領域を単離し、それを用いてヒト抗体を含めた全抗体または任意の所望の断片を生成し、例えば、下に詳細に記載されている哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌を含めた任意の所望の宿主において発現させることができる。例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片およびＦ（ａｂ’）２断片を組換えによって作製する技法も、
【０２７０】
【化２２】
0006022441.tif 000042
に開示されているものなどの当技術分野で公知の方法を用いて使用することができる。単鎖Ｆｖおよび抗体を作製するために使用することができる技法の例としては、
【０２７１】
【化２３】
0006022441.tif 000043
に記載のものが挙げられる。
【０２７２】
ファージ提示技術は、例えば、抗体の、その同族抗原に対する親和性を増加させるためにも使用することができる。親和性成熟化と称される技術は、突然変異誘発またはＣＤＲ  ｗａｌｋｉｎｇおよび再選択を用いて、最初のまたは親の抗体と比較して高い親和性で抗原に結合する抗体を同定することができる。例えば、Ｇｌａｓｅｒら（１９９２年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４９巻：３９０３〜３９１３頁を参照されたい。それぞれが１つまたは複数のアミノ酸置換によって異なる変異体クローンのプールからなるライブラリーを構築することができる。抗原に対する結合親和性が増加した突然変異体は、固定化した突然変異体を標識された抗原と接触させること、または上記の方法の任意の組み合わせによって選択することができる。当技術分野で公知の任意のスクリーニング方法を使用して、抗原に対する親和性が増加した突然変異体抗体を同定することができる（例えば、ＳＰＲ技法またはＥＬＩＳＡ技法）。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、エピトープのマッピングを使用して、例えば、抗体と相互作用するＣ５ａの領域、例えば、Ｃ５ａＲ１に結合するＣ５ａの領域を同定することができる。特定の抗体が結合するエピトープを同定するための方法も当技術分野で公知であり、上記されている。
【０２７４】
本明細書において同定される抗体およびその断片は、「キメラ」であってよい、または「キメラ」にすることができる。キメラ抗体およびその抗原結合性断片は、２種以上の異なる種（例えば、マウスおよびヒト）由来の部分を含む。キメラ抗体は、所望の特異性を有するマウス可変領域とヒト定常ドメインを融合して作製することができる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号）。このように、非ヒト抗体は、それがヒトにおける臨床的な適用（例えば、被験体における補体に媒介される障害を治療または予防するための方法）により適するように改変することができる。
【０２７５】
本開示のモノクローナル抗体は、非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態を包含する。ヒト化ｍＡｂまたはＣＤＲ移植ｍＡｂは、マウス抗体ほど急速には循環から取り除かれず、また、一般には有害な免疫反応を惹起しないので、ヒトに対する治療剤として特に有用である。一般に、ヒト化抗体は、非ヒト供給源から導入された１つまたは複数のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合「移入」残基と称され、一般には、「移入」可変ドメインから取得される。ヒト化抗体を調製する方法は、一般に、当技術分野で周知である。例えば、ヒト化は、基本的に、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法に従って（例えば、Ｊｏｎｅｓら（１９８６年）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１巻：５２２〜５２５頁；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８年）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：３２３〜３２７頁；およびＶｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９巻：１５３４〜１５３６頁を参照されたい）、げっ歯類のフレームワーク配列またはＣＤＲ配列でヒト抗体の対応する配列を置換することによって実施することができる。例えば、Ｓｔａｅｌｅｎｓら（２００６年）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４３巻：１２４３〜１２５７頁も参照されたい。いくつかの実施形態では、非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、所望の特異性、親和性、および結合能を有する非ヒト抗体（例えば、マウス抗体、ラット抗体、ウサギ抗体、または非ヒト霊長類抗体）のＣＤＲ領域アミノ酸残基がヒト抗体のフレームワーク足場に移植されたヒト抗体（レシピエント抗体）である。追加的なヒト化方法は、下の実施例に記載されている。
【０２７６】
ドナー抗体（例えば、非ヒト抗体）由来のＣＤＲ配列をアクセプター抗体（例えば、ヒト抗体）のフレームワーク領域に移植するための方法は、当技術分野で周知であり、例えば、
【０２７７】
【化２４】
0006022441.tif 000044
に記載のオーバーラップ伸長ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技法を用いてアクセプター抗体のフレームワーク領域に移植することができる。
【０２７８】
選択されたＣＤＲアミノ酸配列が短い配列（例えば、１０〜１５アミノ酸未満の長さ）である複数の実施形態では、ＣＤＲをコードする核酸は、例えば、Ｓｈｉｒａｉｓｈｉら（２００７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ５１巻（１号）：１２９〜１３０頁および米国特許第６，９９５，２５９号に記載の通り化学的に合成することができる。アクセプター抗体をコードする所与の核酸配列について、ＣＤＲをコードする核酸配列の領域を、標準の分子生物学技法を用いて化学的に合成された核酸と交換することができる。化学的に合成された核酸の５’末端および３’末端は、核酸をドナー抗体の可変領域をコードする核酸にクローニングすることに使用するための粘着末端制限酵素部位を含むように合成することができる。
【０２７９】
いくつかの場合では、ヒト免疫グロブリンの１つまたは複数のフレームワーク領域アミノ酸残基も、非ヒト抗体の対応するアミノ酸残基と交換する（いわゆる「逆突然変異」）。さらに、ファージ提示ライブラリーを使用して、抗体配列内の選択された位置においてアミノ酸を変異させることができる。ヒト化抗体の性質は、ヒトフレームワークの選択の影響も受ける。さらに、ヒト化抗体およびキメラ化抗体は、例えば親和性またはエフェクター機能などの抗体の性質をさらに改善するために、レシピエント抗体またはドナー抗体においては見いだされない残基を含むように改変することができる。
【０２８０】
本開示では完全ヒト抗体も提供される。「ヒト抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリン配列、好ましくはヒト生殖系列配列に由来する可変領域および定常領域（もしあれば）を有する抗体を包含する。ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列にコードされないアミノ酸残基を含んでよい（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるランダム突然変異誘発または部位特異的突然変異誘発によって、またはｉｎ  ｖｉｖｏにおける体細胞突然変異によって導入された突然変異）。しかし、「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体（すなわち、ヒト化抗体）を包含しない。完全ヒト抗体またはヒト抗体は、ヒト抗体遺伝子（可変（Ｖ）エクソン、多様性（Ｄ）エクソン、連結（Ｊ）エクソン、および定常（Ｃ）エクソンを保有する）を保有するトランスジェニックマウス由来またはヒト細胞由来であってよい。例えば、現在、免疫化すると、内在性の免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の完全なレパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を作製することが可能である。例えば、
【０２８１】
【化２５】
0006022441.tif 000045
を参照されたい。トランスジェニックマウス系は、再配列されていないヒト免疫グロブリン遺伝子由来の遺伝子配列を含有するように遺伝子工学で作り出すことができる。そのようなマウスの１つの例は、内在性のμ鎖遺伝子座およびκ鎖遺伝子座を不活性化する標的突然変異とともに、再配列されていないヒトμ重鎖免疫グロブリン配列およびヒトκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン導入遺伝子ミニ遺伝子座（ｍｉｎｉｌｏｃｕｓ）を含有するＨｕＭＡｂ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．）である。例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇら（１９９４年）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８巻（６４７４号）：８５６〜８５９頁を参照されたい。ＨｕＭＡｂマウスの調製および使用、ならびにそのようなマウスが保有するゲノムの改変は、
【０２８２】
【化２６】
0006022441.tif 000046
にさらに記載されている。ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現させるための代替のトランスジェニックマウス系は、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．）と称され、例えば、米国特許第６，０７５，１８１号；同第６，１１４，５９８号；同第６，１５０，５８４号；および同第６，１６２，９６３号に記載されている。ＨｕＭＡｂ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標）系と同じく、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ系は、内在性のマウス重鎖遺伝子および軽鎖遺伝子を破壊し、マウスのゲノムに、ヒト可変領域配列およびヒト定常領域配列を含有する再配列されていないヒト重鎖免疫グロブリン遺伝子座およびヒト軽鎖免疫グロブリン遺伝子座を保有する導入遺伝子を挿入することを伴う。ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現させるための当技術分野で公知の他の系としては、ＰＣＴ公開第ＷＯ０２／４３４７８号に詳しく記載されているＫＭ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標）系、およびＴｏｍｉｚｕｋａら（２０００年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７巻：７２２〜７２７頁に記載のＴＣマウス系が挙げられる。
【０２８３】
ヒト配列は、ヒト抗体の重鎖と軽鎖の両方をコードし得、マウスにおいて正確に機能し、再配置を受けて、ヒトにおけるものと同様の広い抗体レパートリーもたらす。トランスジェニックマウスを、標的タンパク質免疫原を用いて免疫化して、特異的な抗体およびそれらをコードするＲＮＡの多様なアレイを創出することができる。次いで、そのような抗体の抗体鎖構成成分をコードする核酸を、動物から提示ベクターにクローニングすることができる。一般には、重鎖配列および軽鎖配列をコードする核酸の別々の集団をクローニングし、次いで、別々の集団を、ベクターへの挿入に際して組み直して、ベクターの任意の所与のコピーが重鎖および軽鎖のランダムな組み合わせを受けるようにする。ベクターは、抗体鎖が集合し、ベクターを含有する提示パッケージの外表面上に提示され得るように設計する。例えば、抗体の鎖は、ファージの外面由来のファージコートタンパク質との融合タンパク質として発現させることができる。その後、標的に結合している抗体を提示するために提示パッケージを選択し、スクリーニングすることができる。
【０２８４】
さらに、上記のスクリーニングされるファージ提示ライブラリーは、ヒト抗体を含んでよい（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９２年）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２７巻：３８１頁；Ｍａｒｋｓら（１９９１年）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２２巻：５８１〜５９７頁；およびＶａｕｇｈａｎら（１９９６年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  １４巻：３０９頁）。無作為化された合成ヒト抗体Ｖ領域の組み合わせを使用する合成ファージライブラリーを創出することができる。抗原に対する選択により、Ｖ領域が本質的に非常にヒト様である完全ヒト抗体を作出することができる。例えば、そのそれぞれの内容について、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，７９４，１３２号；同第６，６８０，２０９号；同第４，６３４，６６６号；およびＯｓｔｂｅｒｇら（１９８３年）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ２巻：３６１〜３６７頁を参照されたい。
【０２８５】
ヒト抗体の生成については、その開示全体が参照により本明細書に組み込まれるＭｅｎｄｅｚら（１９９８年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  １５巻：１４６〜１５６頁およびＧｒｅｅｎおよびＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ（１９９８年）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８８巻：４８３〜４９５頁も参照されたい。ヒト抗体は、米国特許第５，９３９，５９８号；同第６，６７３，９８６号；同第６，１１４，５９８号；同第６，０７５，１８１号；同第６，１６２，９６３号；同第６，１５０，５８４号；同第６，７１３，６１０号；および同第６，６５７，１０３号ならびに米国特許公開第２００３０２２９９０５Ａ１号、同第２００４００１０８１０Ａ１号、同第２００４００９３６２２Ａ１号、同第２００６００４０３６３Ａ１号、同第２００５００５４０５５Ａ１号、同第２００５００７６３９５Ａ１号、および同第２００５０２８７６３０Ａ１号においてさらに考察され、詳述されている。国際公開第ＷＯ９４／０２６０２号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、および同第ＷＯ９８／２４８９３号、および欧州特許第ＥＰ０４６３１５１Ｂ１号も参照されたい。上で引用された特許、特許出願および参考文献のそれぞれの開示全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２８６】
代替の手法では、ＧｅｎＰｈａｒｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．を含めた他者が、「ミニ遺伝子座」手法を利用している。ミニ遺伝子座手法では、Ｉｇ遺伝子座由来の小片（個々の遺伝子）を含めることによって外因性のＩｇ遺伝子座を模倣する。したがって、１つまたは複数のＶＨ遺伝子、１つまたは複数のＤＨ遺伝子、１つまたは複数のＪＨ遺伝子、ｍｕ定常領域、および第２の定常領域（ガンマ定常領域であることが好ましい）を、動物に挿入するための構築物中に形成する。この手法は、例えば、その開示全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，６２５，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６６１，０１６号；同第５，７７０，４２９号；同第５，７８９，６５０号；および同第５，８１４，３１８号；同第５，５９１，６６９号；同第５，６１２，２０５号；同第５，７２１，３６７号；同第５，７８９，２１５号；同第５，６４３，７６３号；同第５，５６９，８２５号；同第５，８７７，３９７号；同第６，３００，１２９号；同第５，８７４，２９９号；同第６，２５５，４５８号；および同第７，０４１，８７１号に記載されている。そのそれぞれの開示全体が参照により本明細書に組み込まれる、欧州特許第０５４６０７３Ｂ１号、国際特許公開第ＷＯ９２／０３９１８号、同第ＷＯ９２／２２６４５号、同第ＷＯ９２／２２６４７号、同第ＷＯ９２／２２６７０号、同第ＷＯ９３／１２２２７号、同第ＷＯ９４／００５６９号、同第ＷＯ９４／２５５８５号、同第ＷＯ９６／１４４３６号、同第ＷＯ９７／１３８５２号、および同第ＷＯ９８／２４８８４号も参照されたい。さらに、そのそれぞれの開示全体が参照により本明細書に組み込まれる、
【０２８７】
【化２７】
0006022441.tif 000047
を参照されたい。
【０２８８】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の脱免疫化された形態の抗体または抗原結合性断片が提供される。脱免疫化された抗体またはその抗原結合性断片は、抗体またはその抗原結合性断片に、所与の種に対する非免疫原性または低い免疫原性を与えるように改変された抗体である。脱免疫化は、抗体またはその抗原結合性断片を、当業者に公知のさまざまな技法のいずれかを利用して改変することによって実現することができる（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ０４／１０８１５８号および同第ＷＯ００／３４３１７号を参照されたい）。例えば、抗体またはその抗原結合性断片は、抗体またはその抗原結合性断片のアミノ酸配列内の潜在的なＴ細胞エピトープおよび／またはＢ細胞エピトープを同定し、その潜在的なＴ細胞エピトープおよび／またはＢ細胞エピトープのうちの１つまたは複数を抗体またはその抗原結合性断片から、例えば、組換え技法を用いて除去することによって脱免疫化することができる。次いで、場合によって、改変された抗体またはその抗原結合性断片を作製し、試験して、１つまたは複数の所望の生物活性、例えば、結合親和性などを保持するが、免疫原性が低下している抗体またはその抗原結合性断片を同定することができる。潜在的なＴ細胞エピトープおよび／またはＢ細胞エピトープを同定するための方法は、当技術分野で公知の技法、例えば、コンピュータによる方法（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ０２／０６９２３２号を参照されたい）、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ技法またはｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ技法、および生物学的アッセイまたは物理的方法（例えば、ペプチドとＭＨＣ分子の結合を決定すること、ペプチド：ＭＨＣ複合体と抗体またはその抗原結合性断片を受けとる種由来のＴ細胞受容体の結合を決定すること、タンパク質またはそのペプチド部分を、抗体またはその抗原結合性断片を受けとる種のＭＨＣ分子とのトランスジェニック動物を用いて試験すること、または抗体またはその抗原結合性断片を受けとる種由来の免疫系細胞を用いて再構成されたトランスジェニック動物を用いて試験することなど）を用いて行うことができる。種々の実施形態では、本明細書に記載の脱免疫化された抗体としては、脱免疫化された抗原結合性断片、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、モノクローナル抗体、マウス抗体、完全ヒト抗体、遺伝子工学で作り出された抗体（例えば、キメラ抗体、単鎖抗体、ＣＤＲ移植抗体、ヒト化抗体、および人工的に選択された抗体など）、合成抗体および半合成抗体が挙げられる。
【０２８９】
本開示の治療的な実施形態では、二重特異性抗体が考えられている。二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有するモノクローナルの、好ましくはヒトまたはヒト化抗体である。本発明の場合、結合特異性の一方はＣ５ａに対するものであり、他方は任意の他の抗原に対するものである。
【０２９０】
二重特異性抗体を作出するための方法は、当業者の権限の範囲内である。伝統的に、二重特異性抗体の組換え作製は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の同時発現に基づき、ここで、２つの重鎖／軽鎖対は異なる特異性を有する（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ（１９８３年）Ｎａｔｕｒｅ  ３０５巻：５３７〜５３９頁）。所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原組み合わせ部位）を、免疫グロブリン定常ドメイン配列と融合することができる。重鎖可変領域の融合は、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含めた免疫グロブリン重鎖定常ドメインとのものであることが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合物をコードするＤＮＡ、および、所望であれば、免疫グロブリン軽鎖を別々の発現ベクターに挿入し、適切な宿主生物体に同時トランスフェクトする。二重特異性抗体を生成するための例示的な現在公知の方法のさらなる詳細については、例えば、
【０２９１】
【化２８】
0006022441.tif 000048
を参照されたい。二重特異性抗体は、架橋した抗体またはヘテロコンジュゲート抗体も包含する。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の都合のよい架橋方法を用いて作出することができる。適切な架橋剤は当技術分野で周知であり、いくつもの架橋技法と一緒に米国特許第４，６７６，９８０号に開示されている。
【０２９２】
二重特異性抗体断片を組換え細胞の培養物から直接作出し、単離するための種々の技法も記載されている。例えば、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体が作製されている。例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら（１９９２年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８巻（５号）：１５４７〜１５５３頁を参照されたい。Ｆｏｓタンパク質およびＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドを２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に遺伝子融合によって連結することができる。抗体ホモ二量体をヒンジ領域において還元して単量体を形成し、次いで、再酸化して抗体ヘテロ二量体を形成することができる。この方法は、抗体ホモ二量体を作製するためにも利用することができる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０巻：６４４４〜６４４８頁に記載されている「ダイアボディ」技術により、二重特異性抗体断片を作出するための代替の機構が提供されている。断片は、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーによってつながった重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。したがって、一方の断片のＶＨドメインおよびＶＬドメインは、他方の断片の相補的なＶＬドメインおよびＶＨドメインと強制的に対を成し、それにより、２つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体を使用することによって二重特異性抗体断片を作出するための別の戦略も報告されている。例えば、Ｇｒｕｂｅｒら（１９９４年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５２巻：５３６８頁を参照されたい。あるいは、抗体は、例えば、Ｚａｐａｔａら（１９９５年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  ８巻（１０号）：１０５７〜１０６２頁に記載の「直線状抗体」であってよい。簡単に述べると、これらの抗体は、抗原結合領域の対を形成するタンデムなＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）の対を含む。直線状抗体は、二重特異性または単一特異性であってよい。
【０２９３】
３つ以上の原子価を有する抗体（例えば、三重特異性抗体）が考えられており、例えば、Ｔｕｔｔら（１９９１年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４７巻：６０頁に記載されている。
【０２９４】
本開示は、多特異性抗体の変異形態、例えば、Ｗｕら（２００７年）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ２５巻（１１号）：１２９０〜１２９７頁に記載の二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）分子なども包含する。ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、２つの異なる親抗体由来の２つの異なる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、組換えＤＮＡ技法によって直接または短いリンカーを介してタンデムに連結され、その後に軽鎖定常ドメインが続くように設計される。同様に、重鎖は、タンデムに連結した２つの異なる重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、その後に続く定常ドメインＣＨ１およびＦｃ領域を含む。２つの親抗体からＤＶＤ−Ｉｇ分子を作出するための方法は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ０８／０２４１８８号および同第ＷＯ０７／０２４７１５号にさらに記載されている。
【０２９５】
本開示は、ラクダ科動物抗体またはヒトコブラクダ抗体（例えば、Ｃａｍｅｌｕｓ  ｂａｃｔｒｉａｎｕｓ、Ｃａｌｅｌｕｓ  ｄｒｏｍａｄｅｒｉｕｓ、またはｌａｍａ  ｐａｃｃｏｓに由来する抗体）も提供する。そのような抗体は、大部分の哺乳動物由来の典型的な二本鎖（断片）または四本鎖（全抗体）の抗体とは異なり、一般に軽鎖を欠く。米国特許第５，７５９，８０８号；Ｓｔｉｊｌｅｍａｎｓら（２００４年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７９巻：１２５６〜１２６１頁；Ｄｕｍｏｕｌｉｎら（２００３年）Ｎａｔｕｒｅ  ４２４巻：７８３〜７８８頁；およびＰｌｅｓｃｈｂｅｒｇｅｒら（２００３年）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  １４巻：４４０〜４４８頁を参照されたい。遺伝子工学で作り出されたラクダ科動物抗体および抗体断片のライブラリーは、例えば、Ａｂｌｙｎｘ（Ｇｈｅｎｔ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）から市販されている。非ヒト起源の他の抗体と同様に、ラクダ科動物抗体のアミノ酸配列は、ヒト配列によりよく似た配列を得るために、組換えによって変更することができる、すなわち、ナノ抗体（ｎａｎｏｂｏｄｙ）を「ヒト化」し、それにより、抗体の潜在的な免疫原性をさらに低下させることができる。
【０２９６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、その対応する変更されていない定常領域と比較してエフェクター機能が低下した（またはエフェクター機能がない）変更された重鎖定常領域を含む。抗Ｃ５ａ抗体の定常領域に伴うエフェクター機能は、定常領域またはＦｃ領域の性質を変化させることによって調節することができる。エフェクター機能の変更としては、例えば、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、アポトーシス、１つまたは複数のＦｃ受容体との結合、および炎症促進性の反応のうちの１つまたは複数の活性の調節が挙げられる。調節とは、変更された定常領域を含有する対象抗体により、変更されていない形態の定常領域の活性と比較してエフェクター機能活性の増加、減少、または排除が示されることを指す。特定の実施形態では、調節は、活性が消失した状況または活性が完全にない状況を包含する。
【０２９７】
変更されたＦｃＲ結合親和性および／またはＡＤＣＣ活性および／または変更されたＣＤＣ活性を有する変更された定常領域は、変更されていない形態の定常領域と比較して、ＦｃＲ結合活性および／またはＡＤＣＣ活性および／またはＣＤＣ活性が増強している、または減弱しているポリペプチドである。ＦｃＲとの結合の増加を示す変更された定常領域は、少なくとも１つのＦｃＲと、変更されていないポリペプチドよりも高い親和性で結合する。ＦｃＲとの結合の減少を示す変更された定常領域は、少なくとも１つのＦｃＲと、変更されていない形態の定常領域よりも低い親和性で結合する。ＦｃＲとの結合の減少を示すそのような変異体は、評価できるＦｃＲとの結合をわずかに保有する、または全く保有しない可能性があり、例えば、ＦｃＲとの結合は、ネイティブな配列の免疫グロブリンの定常領域またはＦｃ領域のＦｃＲとの結合のレベルと比較して、０〜５０％（例えば、５０％未満、４９％未満、４８％未満、４７％未満、４６％未満、４５％未満、４４％未満、４３％未満、４２％未満、４１％未満、４０％未満、３９％未満、３８％未満、３７％未満、３６％未満、３５％未満、３４％未満、３３％未満、３２％未満、３１％未満、３０％未満、２９％未満、２８％未満、２７％未満、２６％未満、２５％未満、２４％未満、２３％未満、２２％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満）である。同様に、ＡＤＣＣ活性および／またはＣＤＣ活性が調節された変更された定常領域は、変更されていない定常領域と比較して、ＡＤＣＣ活性および／またはＣＤＣ活性の増加または低下を示し得る。例えば、いくつかの実施形態では、変更された定常領域を含む抗Ｃ５ａ抗体は、変更されていない形態の定常領域のＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性のおよそ０〜５０％（例えば、５０％未満、４９％未満、４８％未満、４７％未満、４６％未満、４５％未満、４４％未満、４３％未満、４２％未満、４１％未満、４０％未満、３９％未満、３８％未満、３７％未満、３６％未満、３５％未満、３４％未満、３３％未満、３２％未満、３１％未満、３０％未満、２９％未満、２８％未満、２７％未満、２６％未満、２５％未満、２４％未満、２３％未満、２２％未満、２１％未満、２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満、または１％未満）の活性を示す可能性がある。ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣの低下を示す変更された定常領域を含む本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、本明細書において例示されているＡＤＣＣ活性および／またはＣＤＣ活性の低下を示す、またはＡＤＣＣ活性および／またはＣＤＣ活性がない可能性がある。
【０２９８】
ある特定の実施形態では、変更された定常領域は、ネイティブな配列の定常領域または変更されていない定常領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸の置換、挿入、および／または欠失、例えば、ネイティブな配列の定常領域または親ポリペプチドの定常領域における約１個から約１００個までのアミノ酸の置換、挿入、および／または欠失を有する。いくつかの実施形態では、本明細書の変更された定常領域は、変更されていない定常領域に対して少なくとも約７０％の相同性（類似性）または同一性を保有し、いくつかの場合では、それに対して少なくとも約７５％、他の場合では、それに対して少なくとも約８０％の相同性または同一性を保有し、他の実施形態では、それに対して少なくとも約８５％、９０％または９５％の相同性または同一性を保有する。変更された定常領域は、１つまたは複数のアミノ酸の欠失または挿入も含有してよい。さらに、変更された定常領域は、例えば、グリコシル化パターンの変更（例えば、変更されていない定常領域と比較して、１つまたは複数の糖成分の付加、１つまたは複数の糖成分の喪失、または１つまたは複数の糖成分の組成の変化）を含めた翻訳後修飾の変更をもたらす１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠失、または挿入を含有し得る。
【０２９９】
エフェクター機能が変更された、またはエフェクター機能がない抗体は、変異した定常領域、Ｆｃ領域、または重鎖領域を有する抗体を遺伝子工学で作り出すこと、または作製することによって生成することができ；組換えＤＮＡ技術および／または細胞培養条件および発現条件を使用して、機能および／または活性が変更された抗体を作製することができる。例えば、組換えＤＮＡ技術を使用して、エフェクター機能を含めた抗体機能に影響を及ぼす領域（例えば、Ｆｃ領域または定常領域など）に１つまたは複数のアミノ酸の置換、欠失、または挿入を遺伝子工学で作り出すことができる。あるいは、抗体を産生させる細胞培養条件および発現条件を操作することによって、例えばグリコシル化パターンなどの翻訳後修飾の変化を実現することができる。抗体のＦｃ領域に１つまたは複数の置換、付加、または欠失を導入するための適切な方法は、当技術分野で周知であり、それらとしては、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９年）「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版」Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８年）、上記；Ｂｏｒｒｅｂａｅｋ（１９９２年）、上記；Ｊｏｈｎｅら（１９９３年）、上記；ＰＣＴ公開第ＷＯ０６／５３３０１号；および米国特許第７，７０４，４９７号に記載の標準のＤＮＡ突然変異誘発技法が挙げられる。
【０３００】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、エフェクター機能が低下している、またはエフェクター機能を有さない。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体は、Ｇ２／Ｇ４ハイブリッド定常領域などのハイブリッド定常領域、またはその部分を含む（例えば、Ｂｕｒｔｏｎら（１９９２年）Ａｄｖ  Ｉｍｍｕｎ  ５１巻：１〜１８頁；Ｃａｎｆｉｅｌｄら（１９９１年）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７３巻：１４８３〜１４９１頁；およびＭｕｅｌｌｅｒら（１９９７年）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３４巻（６号）：４４１〜４５２頁を参照されたい）。上記を参照されたい。
【０３０１】
上記のＧ２／Ｇ４構築物を使用することに加えて、本明細書に記載のエフェクター機能が低下している抗Ｃ５ａ抗体は、抗体の特定の領域のアミノ酸配列に他の種類の変化を導入することによって作製することができる。そのようなアミノ酸配列の変化としては、これらに限らないが、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９４／２８０２７号および同第ＷＯ９８／４７５３１号；およびＸｕら（２０００年）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００巻：１６〜２６頁に記載されているＡｌａ−Ａｌａ突然変異が挙げられる。したがって、いくつかの実施形態では、定常領域内にＡｌａ−Ａｌａ突然変異を含めた１つまたは複数の突然変異を有する抗Ｃ５ａ抗体は、エフェクター機能が低下している、またはエフェクター機能を有さない。これらの実施形態によると、抗体の定常領域は、２３４位におけるアラニンへの置換または２３５位におけるアラニンへの突然変異を含み得る。さらに、変更された定常領域は、２重の突然変異：２３４位におけるアラニンへの突然変異および２３５位におけるアラニンへの第２の突然変異を含有し得る。一実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体は、ＩｇＧ４フレームワークを含み、Ａｌａ−Ａｌａ突然変異は、２３４位におけるフェニルアラニンからアラニンへの突然変異（複数可）および／または２３５位におけるロイシンからアラニンへの突然変異を示す。別の実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体は、ＩｇＧ１フレームワークを含み、Ａｌａ−Ａｌａ突然変異は、２３４位におけるロイシンからアラニンへの突然変異（複数可）および／または２３５位におけるロイシンからアラニンへの突然変異を示す。その代わりにまたはそれに加えて、抗Ｃ５ａ抗体は、ＣＨ２ドメインにおける点突然変異Ｋ３２２Ａを含めた他の突然変異を保有する（Ｈｅｚａｒｅｈら（２００１年）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ７５巻：１２１６１〜１２１６８頁）。定常領域に前記突然変異（複数可）を有する抗体は、さらに、遮断抗体または非遮断抗体であってよい。
【０３０２】
重鎖定常領域に導入されると、エフェクター機能の減少をもたらす追加的な置換は、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００１年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６巻（９号）：６５９１〜６６０４頁に記載されている。特に、その開示全体が参照により本明細書に組み込まれるＳｈｉｅｌｄｓらの表１（「Ｂｉｎｄｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  ｖａｒｉａｎｔｓ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ＦｃＲｎ  ａｎｄ  ＦｃγＲ」）を参照されたい。ライブラリーの各抗体が重鎖定常領域における１つまたは複数の置換によって異なる抗ＩｇＥ抗体のライブラリーを、Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、およびＦｃγＲＩＩＩＡを含める）のパネルとの結合についてスクリーニングすることにより、著者らは、特異的なＦｃ−Ｆｃ受容体相互作用を調節するいくつもの置換を同定した。例えば、ＣＨ２ドメインにＤ２６５Ａ置換（Ｋａｂａｔら（上記）による重鎖アミノ酸の番号付け）を含有する変異型ＩｇＧ２ａ重鎖定常領域により、変異型定常領域とＩｇＧ  Ｆｃ受容体であるＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩ、ＦｃγＲＩ、およびＦｃγＲＩＶとの間の相互作用の完全な損失がもたらされる。Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００１年）、６５９５頁、表１。Ｂａｕｄｉｎｏら（２００８年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８１巻：６６６４〜６６６９頁（上記）も参照されたい。
【０３０３】
ヒンジ領域内の変化も、エフェクター機能に影響を及ぼす。例えば、ヒンジ領域の欠失により、Ｆｃ受容体に対する親和性が低下する可能性があり、また、補体活性化が低下する可能性がある（Ｋｌｅｉｎら（１９８１年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８巻：５２４〜５２８頁）。したがって、本開示は、ヒンジ領域における変更を伴う抗体にも関する。
【０３０４】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の増強または低下を示す変更された定常領域を含有し得る。ＣＤＣ活性の調節は、抗体のＦｃ領域に１つまたは複数のアミノ酸の置換、挿入または欠失を導入することによって実現することができる。例えば、米国特許第６，１９４，５５１号を参照されたい。その代わりにまたはそれに加えて、Ｆｃ領域にシステイン残基（複数可）を導入し、それにより、この領域において鎖間のジスルフィド結合の形成を可能にすることができる。こうして生成したホモ二量体の抗体は、内部移行能が改善されるまたは低下する、かつ／または補体に媒介される細胞死が増加または減少する可能性がある。例えば、Ｃａｒｏｎら（１９９２年）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７６巻：１１９１〜１１９５頁およびＳｈｏｐｅｓ（１９９２年）Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８巻：２９１８〜２９２２頁；ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／５１６４２号および同第ＷＯ９４／２９３５１号；ＤｕｎｃａｎおよびＷｉｎｔｅｒ（１９８８年）Ｎａｔｕｒｅ  ３２２巻：７３８〜４０頁；および米国特許第５，６４８，２６０号および同第５，６２４，８２１号を参照されたい。
【０３０５】
抗体のエフェクター機能を調節するための別の潜在的な手段としては、グリコシル化の変化が挙げられ、それは、例えばＲａｊｕ（２００３年）ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  １巻（４号）：４４〜５３頁に要約されている。ＷｒｉｇｈｔおよびＭｏｒｒｉｓｏｎによると、ヒトＩｇＧオリゴ糖の微小不均一性は、ＣＤＣおよびＡＤＣＣ、種々のＦｃ受容体への結合、およびＣｌｑタンパク質への結合などの生物学的機能に影響を及ぼし得る（１９９７年）ＴＩＢＴＥＣＨ  １５巻：２６〜３２頁。抗体のグリコシル化パターンは、産生細胞および細胞培養条件に応じて異なり得る（Ｒａｊｕ、上記）。そのような差異により、エフェクター機能と薬物動態の両方に変化が導かれ得る。例えば、Ｉｓｒａｅｌら（１９９６年）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８９巻（４号）：５７３〜５７８頁；Ｎｅｗｋｉｒｋら（１９９６年）Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０６巻（２号）：２５９〜２６４頁を参照されたい。エフェクター機能の差異は、ＩｇＧの、エフェクター細胞上のＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）に結合する能力に関連し得る。Ｓｈｉｅｌｄｓらにより、ＦｃγＲに対する結合性が改善された、アミノ酸配列の変更を伴うＩｇＧは、ヒトエフェクター細胞を用いると１００％に至るまでのＡＤＣＣ増強を示す可能性があることが示された。（２００１年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６巻（９号）：６５９１〜６６０４頁。これらの変更は結合の境界面では見いだされないアミノ酸の変化を含むが、糖成分の本質ならびにその構造パターンの両方が、観察される差異の一因となり得る。さらに、ＩｇＧのオリゴ糖成分にフコースが存在するか存在しないかにより、結合性およびＡＤＣＣが改善され得る。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００２年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７巻（３０号）：２６７３３〜２６７４０頁を参照されたい。Ａｓｎ２９７に連結したフコシル化された炭水化物を欠くＩｇＧは、ＦｃγＲＩ受容体に対して通常の受容体結合性を示した。対照的に、ＦｃγＲＩＩＩＡ受容体に対する結合性は、５０倍に改善され、特に低抗体濃度で、ＡＤＣＣの増強を伴った。
【０３０６】
Ｓｈｉｎｋａｗａらは、ラットハイブリドーマにおいて産生された、ヒトＩＬ−５受容体に対する抗体は、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）において産生された抗体と比較して、５０％超高いＡＤＣＣを示すことを実証した（Ｓｈｉｎｋａｗａら（２００３年）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８巻（５号）：３４６６〜７３頁）。単糖組成およびオリゴ糖のプロファイリングにより、ラットハイブリドーマが、ＣＨＯが産生するタンパク質よりもフコースの含有量が少ないＩｇＧを産生することが示された。著者らは、ＩｇＧ１がフコシル化されないことが、ＡＤＣＣ活性の増強において決定的な役割を有すると結論づけた。
【０３０７】
Ｕｍａｎａらは異なる手法を取り、キメラＩｇＧ１抗神経芽細胞種抗体であるｃｈＣＥ７のグリコシル化パターンを変化させた。（１９９９年）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １７巻（２号）：１７６〜１８０頁）。彼らは、テトラサイクリンを使用して、ＡＤＣＣ活性に関係づけられているオリゴ糖を二分するグリコシルトランスフェラーゼ酵素（ＧｎＴＩＩＩ）の活性を制御した。親抗体のＡＤＣＣ活性は、かろうじてバックラウンドを超えるレベルであった。異なるテトラサイクリンレベルで産生されたｃｈＣＥ７のＡＤＣＣ活性の測定値は、ｃｈＣＥ７のｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＡＤＣＣ活性が最大になるために最適な範囲のＧｎＴＩＩＩ発現を示した。この活性は、定常領域と結びついた、二分された複合体オリゴ糖のレベルと相関した。新たに最適化された変異体は、実質的なＡＤＣＣ活性を示した。同様に、ＷｒｉｇｈｔおよびＭｏｒｒｉｓｏｎは、グリコシル化が欠損したＣＨＯ細胞系において抗体を産生させ、この細胞株において産生された抗体が補体に媒介される細胞溶解をすることができないことを示した。（１９９４年）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８０巻：１０８７〜１０９６頁。したがって、エフェクター機能に影響を及ぼすことが公知の変更がグリコシル化パターンの改変またはグリコシル化される残基数の変化を含むので、本開示は、グリコシル化を変更してＡＤＣＣおよびＣＤＣを含めたエフェクター機能（複数可）を増強または減少させた抗Ｃ５ａ抗体に関する。グリコシル化の変更としては、グリコシル化される残基数の減少または増加、ならびにグリコシル化される残基のパターンまたは場所の変化が挙げられる。
【０３０８】
抗体のエフェクター機能を変化させるためのさらに他の手法がある。例えば、抗体産生細胞は、高変異原性（ｈｙｐｅｒｍｕｔａｇｅｎｉｃ）であってよく、それにより、抗体分子全体を通して無作為に変更されたポリペプチド残基を伴う抗体が生成する。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ０５／０１１７３５号を参照されたい。高変異原性宿主細胞としては、ＤＮＡミスマッチ修復を欠損した細胞が挙げられる。このように産生された抗体は抗原性が低く、かつ／または有益な薬物動態的性質を有する。さらに、そのような抗体を、エフェクター機能（複数可）の増強または減少などの性質について選択することができる。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片を調製するために有用な分子生物学技法の追加的な詳細は以下に記載されている。
【０３０９】
組換え抗体の発現および精製
本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片は、分子生物学およびタンパク質化学の技術分野で公知のさまざまな技法を用いて作製することができる。例えば、抗体の重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの一方または両方をコードする核酸を、例えば、プロモーター配列、リボソーム結合部位、転写開始配列および転写終止配列、翻訳開始配列および転写終止配列、転写ターミネーターシグナル、ポリアデニル化シグナル、およびエンハンサーまたはアクチベーター配列を含めた転写制御配列および翻訳制御配列を含有する発現ベクターに挿入することができる。制御配列はプロモーターおよび転写開始配列および転写終止配列を含む。さらに、発現ベクターは２つ以上の複製系を含んでよく、それにより２つの異なる生物体、例えば、哺乳動物細胞または昆虫細胞において発現させるために、および原核生物宿主においてクローニングおよび増幅するために維持され得る。
【０３１０】
核酸からクローニングされた重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドを哺乳動物細胞において発現させるために、いくつかの可能性のあるベクター系が利用可能である。ベクターの１つのクラスは、所望の遺伝子配列を宿主細胞のゲノムに組み込むことに依拠する。安定に組み込まれたＤＮＡを有する細胞は、薬物耐性遺伝子、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ  ｇｐｔ（ＭｕｌｌｉｇａｎおよびＢｅｒｇ（１９８１年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８巻：２０７２頁）またはＴｎ５  ｎｅｏ（ＳｏｕｔｈｅｒｎおよびＢｅｒｇ（１９８２年）Ｍｏｌ  Ａｐｐｌ  Ｇｅｎｅｔ  １巻：３２７頁）などを同時に導入することによって選択することができる。選択マーカー遺伝子は、発現させようとするＤＮＡ遺伝子配列に連結するか、または同時トランスフェクションによって同じ細胞に導入することができる（Ｗｉｇｌｅｒら（１９７９年）Ｃｅｌｌ  １６巻：７７頁）。ベクターの第２のクラスは、染色体外のプラスミドに自己複製能を付与するＤＮＡエレメントを利用する。これらのベクターは、動物ウイルス、例えば、ウシパピローマウイルス（Ｓａｒｖｅｒら（１９８２年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、７９巻：７１４７頁）、サイトメガロウイルス、ポリオーマウイルス（Ｄｅａｎｓら（１９８４年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８１巻：１２９２頁）、またはＳＶ４０ウイルス（ＬｕｓｋｙおよびＢｏｔｃｈａｎ（１９８１年）Ｎａｔｕｒｅ  ２９３巻：７９頁）などから得ることができる。
【０３１１】
発現ベクターは、その後に核酸を発現させるために適した様式で細胞に導入することができる。導入方法は、大部分は以下に考察する標的細胞型によって規定される。典型的な方法としては、ＣａＰＯ４沈殿、リポソーム融合、カチオン性リポソーム、電気穿孔、ウイルス感染、デキストラン媒介性トランスフェクション、ポリブレン媒介性トランスフェクション、プロトプラスト融合、および直接マイクロインジェクションが挙げられる。
【０３１２】
抗体またはその抗原結合性断片を発現させるために適した宿主細胞としては、酵母、細菌、昆虫、植物、および哺乳動物細胞が挙げられる。特に興味深いものは、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅおよびＰｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓなどの真菌、ＳＦ９などの昆虫細胞、哺乳動物細胞株（例えば、ヒト細胞株）、ならびに初代細胞株である。
【０３１３】
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、トランスジェニック動物（例えば、トランスジェニック哺乳動物）において発現させ、それから精製することができる。例えば、
【０３１４】
【化２９】
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に記載の通り、抗体をトランスジェニック非ヒト哺乳動物（例えば、げっ歯類）において産生させ、乳から単離することができる。
【０３１５】
抗体およびその断片は、抗体または断片をコードする核酸を含有する発現ベクターで形質転換した宿主細胞を、タンパク質の発現を可能にするために十分な条件下で、そのために十分な時間にわたって培養することによって細胞に産生させる。タンパク質を発現させるためのそのような条件は、発現ベクターおよび宿主細胞の選択によって変動し、当業者は常套的な実験によって容易に突きとめることができる。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現された抗体は、封入体から再び折りたたまれ得る（例えば、Ｈｏｕら（１９９８年）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  １０巻：３１９〜３０頁を参照されたい）。細菌の発現系およびそれらを使用するための方法は当技術分野で周知である（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、およびＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ−−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ−−第３版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（２００１年）を参照されたい）。コドン、適切な発現ベクターおよび適切な宿主細胞の選択は、いくつもの因子に応じて変動し、必要に応じて容易に最適化することができる。本明細書に記載の抗体（またはその断片）は、哺乳動物細胞、または、これらに限定されないが、酵母、バキュロウイルスを含めた他の発現系、およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現系において発現させることができる（例えば、Ｋａｓｚｕｂｓｋａら（２０００年）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  １８巻：２１３〜２２０頁を参照されたい）。
【０３１６】
発現後に、抗体およびその断片を単離することができる。「精製された」または「単離された」という用語は、本明細書に記載の任意のタンパク質（抗体または断片）に適用される場合、天然ではそれに付随する構成成分（例えば、タンパク質または他の天然に存在する生物学的分子または有機分子）、例えば、当該タンパク質を発現している原核生物の他のタンパク質、脂質および核酸から分離または精製されたポリペプチドを指す。一般には、ポリペプチドは、それが試料中の総タンパク質の少なくとも６０重量％（例えば、少なくとも６５重量％、７０重量％、７５重量％、８０重量％、８５重量％、９０重量％、９２重量％、９５重量％、９７重量％、または９９重量％）を構成する場合に精製されている。
【０３１７】
抗体またはその断片は、他にどんな構成成分が試料中に存在するかに応じて、当業者に公知のさまざまなやり方で単離または精製することができる。標準の精製方法としては、電気泳動的技法、分子技法、免疫学的技法、およびイオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、および逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーを含めたクロマトグラフィー技法が挙げられる。例えば、抗体は、標準の抗抗体カラム（例えば、プロテインＡカラムまたはプロテインＧカラム）を使用して精製することができる。タンパク質の濃縮と併せた限外濾過およびダイアフィルタレーション技法も有用である。例えば、Ｓｃｏｐｅｓ（１９９４年）「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ、第３版」Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｃｉｔｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。必要な精製の程度は、所望の使用に応じて変動する。いくつかの場合では、発現された抗体またはその断片の精製は必要ない。
【０３１８】
精製された抗体またはその断片の収量または純度を決定するための方法は当技術分野で公知であり、それらとしては、例えば、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ、ＵＶ分光法、Ｂｉｕｒｅｔタンパク質アッセイ、Ｌｏｗｒｙタンパク質アッセイ、アミドブラックタンパク質アッセイ、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、質量分析（ＭＳ）、およびゲル電気泳動による方法（例えば、クーマシーブルーなどのタンパク質染料またはコロイド銀染色を使用する）が挙げられる。
【０３１９】
いくつかの実施形態では、抗体または断片から内毒素を除去することができる。タンパク質試料から内毒素を除去するための方法は当技術分野で公知であり、実施例において例示されている。例えば、内毒素は、これらに限定することなく、ＰｒｏｔｅｏＳｐｉｎ（商標）Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  Ｒｅｍｏｖａｌ  Ｋｉｔｓ（Ｎｏｒｇｅｎ  Ｂｉｏｔｅｋ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、Ｄｅｔｏｘｉ−Ｇｅｌ  Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  Ｒｅｍｏｖａｌ  Ｇｅｌ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、ＭｉｒａＣＬＥＡＮ（登録商標）  Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ  Ｒｅｍｏｖａｌ  Ｋｉｔ（Ｍｉｒｕｓ）、またはＡｃｒｏｄｉｓｃ（商標）−Ｍｕｓｔａｎｇ（登録商標）  Ｅ  ｍｅｍｂｒａｎｅ（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を含めた種々の市販の試薬を使用してタンパク質試料から除去することができる。
【０３２０】
試料中に存在する内毒素の量を検出および／または測定するための方法（精製前と精製後の両方）は当技術分野で公知であり、市販のキットが利用可能である。例えば、タンパク質試料中の内毒素の濃度は、ＱＣＬ−１０００  Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃキット（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）、リムラスアメーバ細胞溶解物（ＬＡＬ）に基づく  キット、例えば、Ｐｙｒｏｔｅｌｌ（登録商標）、Ｐｙｒｏｔｅｌｌ（登録商標）−Ｔ、Ｐｙｒｏｃｈｒｏｍｅ（登録商標）、Ｃｈｒｏｍｏ−ＬＡＬなど、およびＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ  ｏｆ  Ｃａｐｅ  Ｃｏｄ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄから入手可能なＣＳＥキットを使用して決定することができる。
【０３２１】
決してこれに限定するものではないが、本明細書に記載の抗体を生成するための例示的な方法は、実施例に記載されている。
【０３２２】
抗体またはその抗原結合性断片の修飾
抗体またはその抗原結合性断片は、それらを発現させ、精製した後に修飾することができる。修飾は、共有結合性の修飾または非共有結合性の修飾であってよい。そのような修飾は、例えば、ポリペプチドの標的アミノ酸残基と、選択された側鎖または末端残基と反応することができる有機誘導体化剤を反応させることによって抗体または断片に導入することができる。修飾するために適した部位は、例えば、抗体または断片の構造解析またはアミノ酸配列分析を含めた種々の判断基準のいずれかを用いて選択することができる。
【０３２３】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、異種部分とコンジュゲートすることができる。異種部分は、例えば、異種ポリペプチド、治療剤（例えば、毒素または薬物）、または、例えば、これらに限定されないが、放射性標識、酵素標識、蛍光標識、重金属標識、発光標識、またはビオチンもしくはストレプトアビジンなどのアフィニティータグなどの検出可能な標識であってよい。適切な異種ポリペプチドとしては、例えば、抗体または断片の精製において使用するための抗原性タグ（例えば、ＦＬＡＧ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号５０））、ポリヒスチジン（６−Ｈｉｓ；ＨＨＨＨＨＨ（配列番号８１）、赤血球凝集素（ＨＡ；ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号８２））、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、またはマルトース結合性タンパク質（ＭＢＰ）が挙げられる。異種ポリペプチドは、診断用マーカーまたは検出可能なマーカーとして有用なポリペプチド（例えば、酵素）、例えば、ルシフェラーゼ、蛍光タンパク質（例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ））、またはクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）も包含する。適切な放射性標識としては、例えば、３２Ｐ、３３Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、および３Ｈが挙げられる。適切な蛍光標識としては、これらに限定することなく、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ＤｙＬｉｇｈｔ（商標）４８８、フィコエリトリン（ＰＥ）、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、ＰｅｒＣＰ、ＰＥ−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）７００、Ｃｙ５、アロフィコシアニン、およびＣｙ７が挙げられる。発光標識としては、例えば、種々の発光ランタニド（例えば、ユウロピウムまたはテルビウム）キレートのいずれかが挙げられる。例えば、適切なユウロピウムキレートとしては、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはテトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）のユウロピウムキレートが挙げられる。酵素標識としては、例えば、アルカリホスファターゼ、ＣＡＴ、ルシフェラーゼ、および西洋ワサビペルオキシダーゼが挙げられる。
【０３２４】
２つのタンパク質（例えば、抗体および異種部分）を、いくつもの公知の化学的な架橋剤のいずれかを使用して架橋することができる。そのような架橋剤の例は、「妨害された」ジスルフィド結合を含む連結を介して２つのアミノ酸残基を連結するものである。これらの連結では、架橋単位内のジスルフィド結合は（ジスルフィド結合のいずれかの側面上の妨害基によって）、例えば、還元型グルタチオンまたは酵素ジスルフィド還元酵素の作用が低下することから保護される。１つの適切な試薬である４−スクシンイミジルオキシカルボニル−α−メチル−α（２−ピリジルジチオ）トルエン（ＳＭＰＴ）は、タンパク質の一方の末端リジンおよび他方の末端システインを利用して２つのタンパク質間の連結を形成する。タンパク質のそれぞれの異なるカップリング部分によって架橋結合するヘテロ二機能性試薬も使用することができる。他の有用な架橋剤としては、これに限定することなく、２つのアミノ基を連結する試薬（例えば、Ｎ−５−アジド−２−ニトロベンゾイルオキシスクシニミド）、２つのスルフヒドリル基を連結する試薬（例えば、１，４−ビス−マレイミドブタン）、アミノ基とスルフヒドリル基を連結する試薬（例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、アミノ基とカルボキシル基を連結する試薬（例えば、４−［ｐ−アジドサリチルアミド］ブチルアミン）、およびアルギニンの側鎖に存在するアミノ基とグアニジウム基を連結する試薬（例えば、ｐ−アジドフェニルグリオキサール・水和物）が挙げられる。
【０３２５】
いくつかの実施形態では、放射性標識と抗体のアミノ酸骨格を直接コンジュゲートすることができる。あるいは、放射性標識は、より大きな分子の一部として含めることができる（例えば、遊離のアミノ基に結合して、関連するタンパク質のメタ−ヨードフェニル（ｍＩＰ）誘導体を形成するメタ−［１２５Ｉ］ヨードフェニル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（［１２５Ｉ］ｍＩＰＮＨＳ）内の１２５Ｉ（例えば、Ｒｏｇｅｒｓら（１９９７年）Ｊ  Ｎｕｃｌ  Ｍｅｄ  ３８巻：１２２１〜１２２９頁を参照されたい）または、今度はタンパク質骨格に結合するキレート（例えば、ＤＯＴＡまたはＤＴＰＡに対する）。放射性標識またはそれを含有するより大きな分子／キレートを本明細書に記載の抗体または抗原結合性断片とコンジュゲートする方法は、当技術分野で公知である。そのような方法は、タンパク質を放射性標識と一緒に、放射性標識またはキレートとタンパク質が結合することが容易になる条件下で（例えば、ｐＨ、塩濃度、および／または温度）インキュベートすることを伴う（例えば、米国特許第６，００１，３２９号を参照されたい）。
【０３２６】
蛍光標識（時には「フルオロフォア」と称される）とタンパク質（例えば、抗体）をコンジュゲートするための方法は、タンパク質化学の技術分野で公知である。例えば、フルオロフォアは、フルオロフォアと付着させたスクシンイミジル（ＮＨＳ）エステル部分またはテトラフルオロフェニル（ＴＦＰ）エステル部分を使用して、タンパク質の遊離のアミノ基（例えば、リシンの）またはスルフヒドリル基（例えば、システイン）とコンジュゲートすることができる。いくつかの実施形態では、フルオロフォアは、スルホ−ＳＭＣＣなどのヘテロ二機能性架橋剤部分とコンジュゲートすることができる。適切なコンジュゲーション方法は、抗体タンパク質またはその断片を、フルオロフォアと一緒に、フルオロフォアとタンパク質の結合が容易になる条件下でインキュベートすることを伴う。例えば、ＷｅｌｃｈおよびＲｅｄｖａｎｌｙ（２００３年）「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ：Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（ＩＳＢＮ  ０４７１４９５６０３）を参照されたい。
【０３２７】
いくつかの実施形態では、抗体または断片は、例えば、循環中、例えば、血液中、血清中、または他の組織中の抗体の安定化および／または保持を改善する部分を用いて修飾することができる。例えば、抗体または断片は、例えば、Ｌｅｅら（１９９９年）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  １０巻（６号）：９７３〜８頁；Ｋｉｎｓｔｌｅｒら（２００２年）Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｉｅｓ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ５４巻：４７７〜４８５頁；およびＲｏｂｅｒｔｓら（２００２年）Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ５４巻：４５９〜４７６頁またはＨＥＳｙｌａｔｅｄ（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ  Ｋａｂｉ、Ｇｅｒｍａｎｙに記載の通りペグ化することができる；例えば、Ｐａｖｉｓｉｃら（２０１０年）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  ３８７巻（１〜２号）：１１０〜１１９頁）を参照されたい。安定化部分により、抗体（または断片）の安定性または保持を、少なくとも１．５倍（例えば、少なくとも２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、４０倍、または５０倍、またはそれ以上）改善することができる。
【０３２８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片をグリコシル化することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片は、酵素的処理または化学的処理に供すことができる、または細胞に、抗体または断片のグリコシル化が低下する、またはグリコシル化が存在しないように作製することができる。グリコシル化が低下している抗体を作製するための方法は当技術分野で公知であり、例えば、米国特許第６，９３３，３６８号；Ｗｒｉｇｈｔら（１９９１年）ＥＭＢＯ  Ｊ  １０巻（１０号）：２７１７〜２７２３頁；およびＣｏら（１９９３年）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３０巻：１３６１頁に記載されている。
【０３２９】
医薬組成物
本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片を含有する組成物は、例えば、補体に関連する障害を治療または予防するために被験体に投与するための医薬組成物として処方することができる。医薬組成物は、一般に、薬学的に許容されるキャリアを含む。「薬学的に許容されるキャリア」とは、本明細書で使用される場合、生理的に適合する任意のかつ全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃ  ａｇｅｎｔ）および吸収遅延剤などを指し、それを包含する。組成物は、薬学的に許容される塩、例えば、酸付加塩または塩基付加塩を含んでよい（例えば、Ｂｅｒｇｅら（１９７７年）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ６６巻：１〜１９頁）。
【０３３０】
組成物は、標準の方法に従って処方することができる。医薬製剤は、よく確立された技術であり、例えば、
【０３３１】
【化３０】
0006022441.tif 000050
にさらに記載されている。いくつかの実施形態では、組成物は、例えば、適切な濃度の、２〜８℃（例えば、４℃）で保管するために適した緩衝溶液として処方することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、０℃を下回る温度（例えば、−２０℃または−８０℃）で保管するために処方することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、最大２年（例えば、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１年、１年半、または２年）にわたって２〜８℃（例えば、４℃）で保管するために処方することができる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、少なくとも１年にわたって２〜８℃（例えば、４℃）で保管することにおいて安定である。
【０３３２】
医薬組成物は、種々の形態であってよい。これらの形態としては、例えば、液体投薬形態、半固体投薬形態および固体投薬形態、例えば、溶液（例えば、注射用溶液および注入用溶液）、分散剤または懸濁剤、錠剤、丸剤、散剤、リポソームおよび坐剤などが挙げられる。好ましい形態は、ある程度は、意図された投与形式および治療への適用に左右される。例えば、全身送達または局所送達するための抗体または断片を含有する組成物は、注射用溶液または注入用溶液の形態であってよい。したがって、組成物は、非経口的な形式（例えば、静脈内注射、皮下注射、腹腔内注射、または筋肉内注射）によって投与するために処方することができる。「非経口投与」、「非経口的に投与する」および他の文法上等しい句は、本明細書で使用される場合、経腸投与および局部投与以外の投与形式、通常は注射による投与形式を指し、これらに限定することなく、静脈内、鼻腔内、眼内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、脳内、頭蓋内、頸動脈内および胸骨内の注射および注入が挙げられる。
【０３３３】
組成物は、溶液、マイクロエマルション、分散剤、リポソーム、または高濃度で安定に保管するために適した他の規則構造として配合することができる。滅菌注射用溶液は、本明細書に記載の抗体（または抗体の断片）を、上に列挙されている成分のうちの１つ、または成分の組み合わせを伴う適切な溶媒に必要量で組み入れ、必要に応じて、その後に濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散液は、本明細書に記載の抗体または断片を、基本的な分散媒および上に列挙されているものからの他の必要な成分を含有する滅菌ビヒクルに組み入れることによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌粉末の場合では、調製するための方法は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片と、それに加えて任意の追加的な所望の成分（以下を参照されたい）の散剤を、予め滅菌濾過したその溶液からもたらす真空乾燥および凍結乾燥を含む。溶液の妥当な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散の場合では必要な粒子サイズを維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持することができる。注射用組成物の持続的な吸収は、組成物中に吸収を遅延させる試薬、例えば、モノステアリン酸塩、およびゼラチンを含めることによってもたらすことができる。
【０３３４】
本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、免疫リポソーム（ｉｍｍｕｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅ）組成物に処方することもできる。抗体を含有するリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎら（１９８５年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８２巻：３６８８頁；Ｈｗａｎｇら（１９８０年）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７７巻：４０３０頁；ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載の方法などの当技術分野で公知の方法によって調製することができる。循環時間が増強されたリポソームは、例えば、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。
【０３３５】
ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、化合物を、急速に放出されることから保護するキャリア、例えば、埋め込み物およびマイクロカプセル封入送達系を含めた制御放出製剤などを用いて調製することができる。生分解性の生体適合性ポリマー、例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などを用いることができる。そのような製剤を調製するための多くの方法は、当技術分野で公知である。例えば、Ｊ．Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ（１９７８年）「Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい。
【０３３６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体または抗原結合性断片は、ヒトなどの哺乳動物に肺内投与するため（例えば、ネブライザーを介して投与するため；以下を参照されたい）に適した組成物に処方することができる。そのような組成物を調製するための方法は当技術分野で周知であり、例えば、そのそれぞれの開示全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２００８０２０２５１３号；米国特許第７，１１２，３４１号および同第６，０１９，９６８号；およびＰＣＴ出願公開第ＷＯ００／０６１１７８号および同第ＷＯ０６／１２２２５７号に記載されている。乾燥粉末吸入器の処方および製剤を投与するために適した系は、例えば、米国特許出願公開第２００７０２３５０２９号、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／６９８８７号；および米国特許第５，９９７，８４８号に記載されている。
【０３３７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、眼に送達するために適した組成物に処方することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体（またはその抗原結合性断片）のうちの１つまたは複数を、局所的に、例えば、局部塗布または硝子体内注射によって投与することができる。例えば、いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体は、点眼剤として投与するために処方することができる。
【０３３８】
眼を処置するための治療用調製物は、抗Ｃ５ａ抗体のうちの１つまたは複数を、薬学的に許容される溶液、懸濁剤または軟膏剤中約０．０１重量％から約１重量％まで、好ましくは約０．０５重量％から約０．５％までの濃度で含有してよい。調製物は、例えば、これらに限定されないが、保存料、緩衝液、等張化剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ  ａｇｅｎｔ）、抗酸化剤および安定剤、非イオン性の湿潤剤または清澄剤、および増粘剤（ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ−ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）などの追加的な成分を含有する滅菌水性溶液の形態であることが好ましい。
【０３３９】
そのような溶液において使用するための適切な保存料としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、クロロブタノール、チメロサールなどが挙げられる。適切な緩衝液としては、例えば、ｐＨを約ｐＨ６からｐＨ８の間、好ましくは、約ｐＨ７からｐＨ７．５の間に維持するために十分な量のホウ酸、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、ホウ酸ナトリウム、ホウ酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、酢酸ナトリウム、およびリン酸二水素ナトリウム・二水和物（ｓｏｄｉｕｍ  ｂｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ）が挙げられる。適切な等張化剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ  ａｇｅｎｔ）は、デキストラン４０、デキストラン７０、ブドウ糖、グリセリン、塩化カリウム、プロピレングリコール、および塩化ナトリウムである。
【０３４０】
適切な抗酸化剤および安定剤としては、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｔｈｉｏｓｕｌｆｉｔｅ）、およびチオ尿素が挙げられる。適切な湿潤剤および清澄剤としては、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロキサマー２８２およびチロキサポールが挙げられる。適切な増粘剤としては、デキストラン４０、デキストラン７０、ゼラチン、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルプロプルセルロース、ラノリン、メチルセルロース、ワセリン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、およびカルボキシメチルセルロースが挙げられる。調製物は、治療を必要とする被験体（例えば、ＡＭＤを患っている被験体）の眼に、従来の方法によって、例えば、滴剤の形態で、または１つまたは複数の抗Ｃ５ａ抗体を含有する治療用溶液に眼をつけることによって、局部的に投与することができる。
【０３４１】
さらに、薬物を眼の硝子体腔（ｖｉｔｒｅａｌ  ｃａｖｉｔｙ）に導入するための種々のデバイスが開発されてきた。例えば、米国特許出願公開第２００２００２６１７６号には、医薬を硝子体腔内（ｖｉｔｒｅｏｕｓ  ｃａｖｉｔｙ）に送達するために強膜を通じて硝子体腔（ｖｉｔｒｅｏｕｓ  ｃａｖｉｔｙ）に突き出すように挿入することができる薬剤含有プラグが記載されている。別の例では、米国特許第５，４４３，５０５号に、薬物を眼の内部に持続放出するために脈絡膜上腔または無血管領域に導入するための埋め込み型デバイスが記載されている。米国特許第５，７７３，０１９号および同第６，００１，３８６号のそれぞれには、眼の強膜の表面に付着させることができる埋め込み型の薬物送達デバイスが開示されている。デバイスは、低溶解性作用剤に対して浸透性の非生物侵食性（ｎｏｎ−ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）ポリマーで覆われた、有効量の低溶解性作用剤を含有する内部コアを含む。操作の間に、デバイスの外に持続放出させるために低溶解性作用剤を生物侵食性（ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）ポリマーの覆いに浸透させる。治療剤を眼に送達するための追加的な方法およびデバイス（例えば、経強膜パッチおよびコンタクトレンズを介した送達）は、例えば、その開示全体が参照により本明細書に組み込まれる、
【０３４２】
【化３１】
0006022441.tif 000051
に記載されている。
【０３４３】
抗体（またはその抗原結合性断片）をコードする核酸を遺伝子構築物に組み入れて、作用剤を細胞内で発現させ、産生させるために使用することができる核酸を送達するための遺伝子療法プロトコールの一部として使用することができる（以下を参照されたい）。そのような構成成分の発現構築物は、任意の治療的に有効なキャリア、例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏで構成成分遺伝子を細胞に有効に送達することができる任意の製剤または組成物に含めて投与することができる。手法は、対象遺伝子を、組換え型のレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、および単純ヘルペスウイルス−１（ＨＳＶ−１）を含めたウイルスベクター、または組換え型の細菌プラスミドまたは真核生物のプラスミドに挿入することを含む。ウイルスベクターは細胞に直接トランスフェクトすることができる；プラスミドＤＮＡは、例えば、カチオン性リポソーム（リポフェクチン）または誘導体化された（例えば、抗体とコンジュゲートした）ポリリシンコンジュゲート、グラミシジンＳ、人工的なウイルス外被または他のそのような細胞内のキャリア、ならびにｉｎ  ｖｉｖｏで行う遺伝子構築物の直接的な注射またはＣａＰＯ４沈殿（例えば、ＷＯ０４／０６０４０７を参照されたい）を利用して送達することができる。（下の「ｅｘ  ｖｉｖｏにおける手法」も参照されたい。）適切なレトロウイルスの例としては、ｐＬＪ、ｐＺＩＰ、ｐＷＥおよびｐＥＭが挙げられ、これらは当業者に公知である（例えば、
【０３４４】
【化３２】
0006022441.tif 000052
を参照されたい）。別のウイルスによる遺伝子送達系は、アデノウイルス由来のベクターを利用する（例えば、Ｂｅｒｋｎｅｒら（１９８８年）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６巻：６１６頁；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら（１９９１年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５２巻：４３１〜４３４頁；およびＲｏｓｅｎｆｅｌｄら（１９９２年）Ｃｅｌｌ  ６８巻：１４３〜１５５頁を参照されたい）。アデノウイルス株Ａｄ型５ｄｌ３２４またはアデノウイルスの他の株に由来する適切なアデノウイルスベクター（例えば、Ａｄ２、Ａｄ３、Ａｄ７など）が当業者に公知である。対象遺伝子を送達するために有用なさらに別のウイルスベクター系は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である。例えば、Ｆｌｏｔｔｅら（１９９２年）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ７巻：３４９〜３５６頁；Ｓａｍｕｌｓｋｉら（１９８９年）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ６３巻：３８２２〜３８２８頁；およびＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら（１９８９年）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ６２巻：１９６３〜１９７３頁を参照されたい。
【０３４５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片は、被験体における補体に関連する障害を治療または予防するために有用な１種または複数種の追加的な活性薬剤を用いて処方することができる。被験体における補体に関連する障害を処置するための追加的な作用剤は、特定の治療されている障害に応じて変動するが、これらに限定することなく、降圧薬（例えば、アンジオテンシン変換酵素阻害薬）、抗凝固薬、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）、または免疫抑制薬（例えば、ビンクリスチンまたはシクロスポリンＡ）を含んでよい。抗凝固薬の例としては、例えば、ワルファリン（クマジン）、ヘパリン、フェニンジオン、フォンダパリヌクス、イドラパリナックス、およびトロンビン阻害剤（例えば、アルガトロバン、レピルジン、ビバリルジン、またはダビガトラン）が挙げられる。本明細書に記載の抗体またはその断片は、補体に媒介される障害を処置するために線維素溶解薬（例えば、アンクロッド、ε−アミノカプロン酸、抗プラスミン薬−ａ１、プロスタサイクリン、およびデフィブロタイド）と一緒に処方することもできる。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒドロキシメチルグルタリルＣｏＡ  還元酵素の阻害薬などの高脂血症薬と一緒に処方することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（商標）；Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）などの抗ＣＤ２０作用剤と一緒に処方することができる、またはそれと一緒に使用することができる。いくつかの実施形態、例えば、ＲＡを処置するための実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）；Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，Ｉｎｃ．）およびメトトレキサート（Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（登録商標）、Ｔｒｅｘａｌｌ（登録商標））の一方または両方と一緒に処方することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）と一緒に処方することができる。多くの異なるＮＳＡＩＤＳが利用可能であり、イブプロフェン（Ａｄｖｉｌ（登録商標）、Ｍｏｔｒｉｎ（登録商標）、Ｎｕｐｒｉｎ（登録商標））およびナプロキセン（Ａｌｌｅｖｅ（登録商標））を含めたいくつかは処方箋なく購入でき、メロキシカム（Ｍｏｂｉｃ（登録商標））、エトドラク（Ｌｏｄｉｎｅ（登録商標））、ナブメトン（Ｒｅｌａｆｅｎ（登録商標））、スリンダク（Ｃｌｉｎｏｒｉｌ（登録商標））、トルメチン（ｔｏｌｅｍｅｎｔｉｎ）（Ｔｏｌｅｃｔｉｎ（登録商標））、サリチル酸コリンマグネシウム（Ｔｒｉｌａｓａｔｅ（登録商標））、ジクロフェナク（Ｃａｔａｆｌａｍ（登録商標）、Ｖｏｌｔａｒｅｎ（登録商標）、Ａｒｔｈｒｏｔｅｃ（登録商標））、ジフルシナル（Ｄｉｆｌｕｓｉｎａｌ）（Ｄｏｌｏｂｉｄ（登録商標））、インドメタシン（ｉｎｄｏｍｅｔｈｉｃｉｎ）（Ｉｎｄｏｃｉｎ（登録商標））、ケトプロフェン（Ｏｒｕｄｉｓ（登録商標）、Ｏｒｕｖａｉｌ（登録商標））、オキサプロジン（Ｄａｙｐｒｏ（登録商標））、およびピロキシカム（Ｆｅｌｄｅｎｅ（登録商標））を含めた多くの他のものは処方によって利用可能である。いくつかの実施形態では、抗体またはその断片は、抗高血圧薬、抗けいれん薬（例えば、硫酸マグネシウム）、または抗血栓薬と一緒に使用するために処方することができる。抗高血圧薬としては、例えば、ラベタロール、ヒドララジン、ニフェジピン、カルシウムチャネルアンタゴニスト、ニトログリセリン、またはニトロフェリシアン化ナトリウムが挙げられる。例えば、Ｍｉｈｕら（２００７年）Ｊ  Ｇａｓｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓ  １６巻（４号）：４１９〜４２４頁を参照されたい。抗血栓薬としては、例えば、ヘパリン、アンチトロンビン、プロスタサイクリン、または低用量アスピリンが挙げられる。
【０３４６】
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、静脈内ガンマグロブリン療法（ＩＶＩＧ）、血漿分離交換法、または血漿交換法と一緒に被験体に投与するために処方することができる。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、腎移植の前、その間、またはその後に使用するために処方することができる。
【０３４７】
抗体またはその抗原結合性断片を第２の活性薬剤と組み合わせて使用しようとする場合、作用剤は、別々にまたは一緒に処方することができる。例えば、それぞれの医薬組成物を、例えば投与の直前に混合し、一緒に投与することができる、または、例えば、同じ時間もしくは違う時間に別々に投与することができる（以下を参照されたい）。
【０３４８】
上記の通り、組成物は、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を治療有効量で含むように処方することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、治療量以下の抗体（または断片）および治療量以下の１種または複数種の追加的な活性薬剤を含み、したがって構成成分全体で、補体に関連する障害を治療または予防するために治療的に有効になるように処方することができる。治療用抗体などの作用剤の治療有効用量を決定するための方法は当技術分野で公知であり、本明細書に記載されている。
【０３４９】
適用
抗体、その抗原結合性断片、コンジュゲート、およびそれらのいずれかの組成物は、いくつもの診断への適用および治療への適用において用いることができる。例えば、検出可能に標識された抗Ｃ５ａ抗体（例えば、抗ヒトＣ５ａ抗体または抗マウスＣ５ａ抗体）は、生体試料中に存在するＣ５ａの存在または量を検出するためのアッセイにおいて用いることができる。試料中、例えば患者の血液試料中のＣ５ａの量を決定することは、試料中の補体活性化のレベルを評価するために有用であり得る。診断アッセイにおいて抗体を使用するための適切な方法は当技術分野で公知であり、それらとしては、これに限定することなく、ＥＬＩＳＡ、蛍光共鳴エネルギー転移の応用、ウエスタンブロット、およびドットブロット技法が挙げられる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、上記およびＡｕｓｕｂｅｌら、上記を参照されたい。
【０３５０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体および抗原結合性断片は、補体に媒介される障害を処置するための追加的な新規の化合物を同定するために設計されたアッセイにおいて陽性対照として使用することができる。例えば、Ｃ５ａ活性を阻害する抗Ｃ５ａ抗体を、Ｃ５ａまたはＣ５ａ依存性のＣ５ａ受容体のシグナル伝達を阻害する追加的な化合物（例えば、小分子、アプタマー、または抗体）を同定するためのアッセイにおいて陽性対照として使用することができる。
【０３５１】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の交差反応性抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片（例えば、ヒトＣ５ａと、例えば、カニクイザルＣ５ａとに交差反応性の）は、非ヒト哺乳動物における前臨床試験、例えば、非ヒト霊長類における薬物動態試験または薬力学試験のために使用することができる。したがって、被験体の補体に関連する障害（例えば、ＲＡまたは敗血症）の治療における抗Ｃ５ａ抗体の効力を評価することを望む研究者は、本明細書に記載の交差反応性抗Ｃ５ａ抗体を、疾患の適切な非ヒト霊長類モデルにおいて使用することができる。研究者が、例えば、非ヒト霊長類モデルにおける抗体の効力を確立すれば、それらの結果により、ヒトにおける治療において抗体を使用するための規制当局の認可に十分な概念実証の裏付けがもたらされ得る。その代わりに、またはそれに加えて、研究者は、交差反応性抗体を非ヒト霊長類に投与して、例えば、抗体クリアランスおよび／または薬力学的性質を試験することができる。そのような交差反応性抗体を使用した試験に基づいて、研究者は、ヒト疾患を処置するために必要な用量をよりよく概算することができる。
【０３５２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗マウスＣ５ａ抗体またはその抗原結合性断片、ならびにヒトＣ５ａとマウスＣ５ａとに交差反応する抗体を、ヒト疾患のマウスモデルにおいて代理抗体として使用することができる。これは、ヒト化抗ヒトＣ５ａ抗体が、マウスＣ５ａと交差反応せず、かつ／またはヒト化抗体を投与するマウスにおいて抗ヒト抗体応答を引き起こす可能性がある場合に特に有用であり得る。したがって、疾患（例えば、虚血再灌流障害）の治療における抗Ｃ５ａ抗体の効果を試験することを望む研究者は、本明細書に記載の抗マウスＣ５ａ抗体を適切な疾患のマウスモデルにおいて使用することができる。研究者が、疾患のマウスモデルにおいて抗マウスＣ５ａ抗体を用いて効力を確立することができれば、その結果により、ヒトにおける疾患の治療において抗ヒトＣ５ａ抗体を使用することの概念実証が確立される。実施例は、ＲＡのマウスモデルにおいて抗マウスＣ５ａ抗体代理を使用する例示的な試験を開示しており、男性におけるＲＡを処置するために抗ヒトＣ５ａ抗体を使用することについての概念実証を確立している。
【０３５３】
本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体は、Ｃ５ａを試料（例えば、生体試料）から精製するための方法においても使用することができる。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体は、当技術分野で周知の方法を用いて固相支持体上に固定化することができる。精製しようとする抗原、この場合はＣ５ａを含有する試料を、抗原と抗体が結合するために十分な条件下で、そのために十分な時間にわたって、固体支持体上の抗体と接触させる。次いで、固体支持体を、適切な緩衝液で１回または複数回洗浄して、結合していない材料を除去する。次いで、固体支持体を、抗原を抗体から放出させる第２の緩衝液と接触させることができる。次いで、当技術分野で周知の方法を用いて放出された抗原を採取し、特徴付ける（例えば、純度および活性について）。
【０３５４】
本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体およびその抗原結合性断片は、下で詳述されている治療方法においても使用することができる。
【０３５５】
治療方法
上記の組成物は、とりわけ、被験体における種々の補体関連障害を治療または予防するための方法において有用である。組成物は、被験体、例えば、ヒト被験体に、ある程度投与経路に左右される種々の方法を用いて投与することができる。経路は、例えば、静脈内注射または注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、腹腔内（ＩＰ）注射、または筋肉内注射（ＩＭ）であってよい。
【０３５６】
投与は、例えば、局所的な注入、注射によって、または埋め込みによって実現することができる。埋め込みは、シラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜などの膜、または繊維を含めた多孔質材料、非多孔質材料、またはゼラチン質材料の埋め込みであってよい。埋め込みは、組成物を対象に、持続的または定期的に放出するために形づくることができる。例えば、そのそれぞれの開示全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２００８０２４１２２３号；米国特許第５，５０１，８５６号；同第４，８６３，４５７号；および同第３，７１０，７９５号；ＥＰ４８８４０１；およびＥＰ４３０５３９を参照されたい。組成物は、被験体に、例えば、拡散性の系、浸食可能な系、または対流性の系、例えば、浸透性ポンプ、生分解性埋め込み物、電気拡散系、電気浸透系、蒸気圧ポンプ、電解質ポンプ、発泡性ポンプ、圧電性ポンプ、浸食に基づく系、または電気機械的な系に基づく埋め込み型デバイスとして送達することができる。
【０３５７】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を、被験体に、局所投与として治療的に送達する。本明細書で使用される場合、「局所投与」または「局所送達」は、組成物または作用剤を、その意図された標的組織または部位に、脈管系を介して輸送することに依拠しない送達を指す。例えば、組成物は、組成物もしくは作用剤を注射することもしくは埋め込むことによって、または組成物もしくは作用剤を含有するデバイスを注射することもしくは埋め込むことによって送達することができる。標的組織または標的部位の付近に局所投与された後、組成物または作用剤、または１つまたは複数のその構成成分は、意図された標的組織または標的部位に拡散し得る。
【０３５８】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、関節（例えば、関節接合部）に局所投与することができる。例えば、補体に関連する障害が関節炎である複数の実施形態では、補体阻害剤を関節に直接（例えば、関節腔内に）または関節付近に投与することができる。抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を局所投与することができる関節内接合部の例としては、例えば、股関節、膝関節、肘関節、手関節、胸鎖関節、側頭下顎関節、手根関節、足根関節、足関節、および任意の他の、関節炎の状態にさらされている関節が挙げられる。抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、包、例えば、肩峰包、二頭筋橈骨包、肘橈骨包、三角筋包、膝蓋下包、坐骨包、および医学の技術分野で公知の任意の他の包に投与することもできる。
【０３５９】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、眼に局所投与することができる。本明細書で使用される場合、「眼」という用語は、任意のかつ全ての眼に関連する解剖学的な組織および構造を指す。眼は、３つの別個の層：外側の強膜、中間の脈絡膜層、および内側の網膜で構成される壁を有する。水晶体の後ろの房は硝子体液と称されるゼラチン質の体液で満たされている。眼底には光を検出する網膜がある。角膜は、画像を眼底に運ぶ光学的に透明な組織である。角膜は、薬物が眼に浸透する１つの経路を含む。眼に関連する他の解剖学的な組織構造としては、涙液の排液系が挙げられ、これは、分泌系、分配系および排泄系を含む。分泌系は、まばたきおよび涙の蒸発による温度変化によって刺激される分泌腺ならびに物理的または感情的な刺激に反応して涙を供給し、分泌する遠心性副交感神経を有する反射分泌腺を含む。分配系は、まばたきによって涙を眼の表面に拡散させ、したがって、乾燥した領域の発生を低下させる眼瞼および開いた眼の眼瞼の端の涙のメニスカスを含む。
【０３６０】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を後眼房に投与する。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を硝子体内に投与する。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を経強膜投与する。
【０３６１】
いくつかの実施形態では、例えば、ＣＯＰＤまたは喘息などの補体に関連する肺障害を治療または予防するための複数の実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、被験体に肺経由で投与することもできる。肺の薬物送達は、吸入によって実現することができ、吸入による投与は、本明細書では、経口投与および／または経鼻投与であってよい。肺内送達するための薬剤デバイスの例としては、定量噴霧式吸入器、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、およびネブライザーが挙げられる。例えば、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、被験体の肺に、乾燥粉末吸入器によって投与することができる。これらの吸入器は、分散可能かつ安定な乾燥粉末製剤を肺送達する、噴霧剤を含まないデバイスである。乾燥粉末吸入器は医薬の技術分野で周知であり、それらとしては、これに限定することなく、：ＴｕｒｂｏＨａｌｅｒ（登録商標）（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；Ｌｏｎｄｏｎ、Ｅｎｇｌａｎｄ）ＡＩＲ（登録商標）吸入器（Ａｌｋｅｒｍｅｓ（登録商標）；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）；Ｒｏｔａｈａｌｅｒ（登録商標）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ；Ｌｏｎｄｏｎ、Ｅｎｇｌａｎｄ）；およびＥｃｌｉｐｓｅ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ；Ｐａｒｉｓ、Ｆｒａｎｃｅ）が挙げられる。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ０４／０２６３８０号、同第ＷＯ０４／０２４１５６号、および同第ＷＯ０１／７８６９３号も参照されたい。インスリンおよび成長ホルモンなどのポリペプチドを肺内投与するために、ＤＰＩデバイスが使用されている。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、定量噴霧式吸入器によって肺内に投与することができる。これらの吸入器は、噴霧剤に依拠して、化合物の別個の用量を肺に送達する。定量噴霧式吸入器によって投与される化合物の例としては、例えば、Ａｓｔｏｖｅｎｔ（登録商標）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ；Ｒｉｄｇｅｆｉｅｌｄ、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ）およびＦｌｏｖｅｎｔ（登録商標）（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）が挙げられる。例えば、米国特許第６，１７０，７１７号；同第５，４４７，１５０号；および同第６，０９５，１４１号も参照されたい。
【０３６２】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、ネブライザーによって被験体の肺に投与することができる。ネブライザーは、圧縮空気を用いて、化合物を液化されたエアロゾルまたはミストとして送達する。ネブライザーは、例えば、ジェットネブライザー（例えば、空気または液体−ジェットネブライザー）または超音波ネブライザーであってよい。追加的なデバイスおよび肺内投与方法は、例えば、そのそれぞれの開示全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２００５０２７１６６０号および同第２００９０１１０６７９号に記載されている。
【０３６３】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、自己投与するために特に適切であり得る単位投薬形態で存在する。本開示の処方された製品は、容器、一般には、例えば、バイアル、カートリッジ、充填済みシリンジまたは使い捨てのペンの中に含めることができる。米国特許第６，３０２，８５５号に記載の投与デバイスなどの投与器（ｄｏｓｅｒ）も、例えば、本開示の注射系と一緒に用いることができる。
【０３６４】
本開示の注射系では、米国特許第５，３０８，３４１号に記載の送達ペンを使用することができる。糖尿病の患者がインスリンを自己送達するために最も一般的に使用されるペンデバイスは当技術分野で周知である。そのようなデバイスは、少なくとも１つの注射針（例えば、長さ約５〜８ｍｍの３１ゲージの針）を含んでよく、一般には、１つまたは複数の治療的な単位用量の治療用溶液が充填済みであり、その溶液を被験体に、痛みをできるだけ少なく急速に送達するために有用である。
【０３６５】
１つの医薬品送達ペンは、インスリンまたは他の薬物療法のバイアルを受けることができるバイアルホルダーを含む。バイアルホルダーは、基端および先端を有する細長い、一般に管状構造である。バイアルホルダーの先端は、両頭の針カニューレをはめるための取り付け手段を含む。基端も同様に、ドライバーおよび用量設定装置を含むペン本体をはめるための取り付け手段を包含する。先行技術のバイアルホルダーと一緒に使用するための、医薬品（例えば、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片の高濃度溶液）を含有する使い捨てのバイアルは、両頭の針カニューレの一端で穴をあけることができるエラストマーの隔膜を有する先端を含む。このバイアルの基端は、バイアルの円柱状の壁にしっかりはまった、流体にスライドできるように配置された止め栓を含む。この医薬品送達ペンは、医薬品のバイアルをバイアルホルダーに挿入することによって使用する。次いで、ペン本体をバイアルホルダーの基端に接続する。ペン本体は、ペンによって送達する医薬品の用量を指定するための用量設定装置、およびバイアルの止め栓を選択された用量に対応する距離で先端に向かって動かすための駆動装置を含む。ペンの使用者は、両頭の針カニューレをバイアルホルダーの先端に取り付け、針カニューレの基点によってバイアルの隔膜に穴が開くようにする。次いで、患者は用量を選択し、ペンを操作して、止め栓を先端に向かって動かして選択された用量を送達する。選択された用量が注射されると用量選択装置はゼロに戻る。次いで、患者は、針カニューレを取り外して廃棄し、医薬品送達ペンを次の所要の医薬品投与のために都合のよい場所に置いておく。バイアル内の医薬品は、医薬品を何回かそのように投与した後に使い尽くされる。次いで、患者はバイアルホルダーをペン本体から分離する。次いで、空のバイアルを取り出して廃棄する。バイアルホルダーに新しいバイアルを挿入することができ、バイアルホルダーおよびペン本体は、上の説明の通りに再度組み立て、使用することができる。したがって、医薬品送達ペンは、一般に、正確な投薬を駆動する機構および使いやすさを有する。
【０３６６】
回転可能なノブなどの投薬機構により、使用者が、包装済みの医薬品のバイアルからペンによって注射する医薬品の量を正確に調整することが可能になる。医薬品の用量を注射するために、使用者は、針を皮下に挿入し、ノブを、それが押し下がるまで１回押し下げる。ペンは、完全に機械的なデバイスであってよい、または、使用者に注射する医薬品の投与量を正確に設定および／または指示する電子回路網と組み合わせることができる。米国特許第６，１９２，８９１号を参照されたい。
【０３６７】
いくつかの実施形態では、ペンデバイスの針は、使い捨てであってよく、キットは１つまたは複数の使い捨ての交換針を含む。ここで特徴付けられた抗体またはその抗原結合性断片のいずれか１つを送達するために適したペンデバイスは、例えば、そのそれぞれの開示全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，２７７，０９９号；同第６，２００，２９６号；および同第６，１４６，３６１号にも記載されている。マイクロ針に基づくペンデバイスは、例えば、その開示全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，５５６，６１５号に記載されている。Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｌｔｄ製造のＰｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｐｅｎ  Ｉｎｊｅｃｔｏｒ（ＰＰＩ）デバイス、Ｍｏｌｌｙ（商標）も参照されたい。
【０３６８】
本開示は、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片などの医薬品を長期にわたって、かつ／または自己投与するために適した制御放出製剤または延長放出（ｅｘｔｅｎｄｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ）製剤も提示する。種々の製剤を医薬品と一緒に、ボーラスとしてまたはある期間にわたる連続的な注入によって、治療を必要とする患者に投与することができる。
【０３６９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の高濃度の抗Ｃ５ａ抗体（またはその抗原結合性断片）を、持続放出（ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ）投与、延長放出（ｅｘｔｅｎｄｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ）投与、定期放出（ｔｉｍｅｄ−ｒｅｌｅａｓｅ）投与、制御放出投与、または連続放出投与するために処方する。いくつかの実施形態では、抗体を、デポ製剤を使用してそれを必要とする被験体に投与する。この方法では、抗体を、何時間または何日にもわたって活性薬剤の段階的な放出をもたらす１種または複数種のキャリアと一緒に処方する。そのような製剤は、多くの場合、体内に徐々に分散して活性薬剤を放出するマトリックスの分解に基づく。
【０３７０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体のＣ５ａ結合性断片（例えば、単鎖抗体、ダイアボディ、またはＦａｂ’断片）を、それを必要とする被験体に肺内投与によって投与する。例えば、本明細書に記載の任意の抗Ｃ５ａ抗体の単鎖抗体形態は、ネブライザーまたは吸入器によって、喘息またはＣＯＰＤなどの補体に関連する肺障害を患っている被験体（例えば、ヒト）に送達することができる。
【０３７１】
本明細書に記載の抗体またはその断片の、被験体における補体に関連する障害を治療または予防することができる適切な用量は、例えば、治療される被験体の年齢、性別、および体重ならびに使用される特定の阻害化合物を含めた種々の因子に左右され得る。例えば、ＲＡの被験体を処置するために、同じ被験体を処置するために必要なＣ５ａ結合性Ｆａｂ’抗体断片の用量と比較して、異なる用量の全抗Ｃ５ａ抗体が必要になる場合がある。被験体に投与される用量に影響を及ぼす他の因子としては、例えば、補体に媒介される障害の種類または重症度が挙げられる。例えば、ＲＡを有する被験体には、ＡＭＤの被験体とは異なる投与量の抗Ｃ５ａ抗体を投与することが必要になる場合がある。他の因子としては、例えば、被験体に同時に影響を及ぼしているまたは以前影響を及ぼした他の医学的障害、被験体の全体的な健康、被験体の遺伝的素因、食事、投与時間、排出速度、複合薬、および被験体に投与される任意の他の追加的な治療薬を挙げることができる。任意の特定の被験体に対する特異的な投与量および治療レジメンは、治療にあたっている医療実践者（例えば、医師または看護師）の判断にも左右されることも理解されるべきである。
【０３７２】
本明細書に記載の抗体は、固定用量で、または１キログラム当たりのミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）用量で投与することができる。いくつかの実施形態では、用量は、組成物中の活性な抗体のうちの１つまたは複数に対する抗体の産生または他の宿主の免疫応答を低下させるまたは回避するように選択することができる。決してこれに限定するものではないが、抗Ｃ５ａ抗体などの抗体の例示的な投与量としては、例えば、１〜１０００μｇ／ｋｇ、１〜１００μｇ／ｋｇ、０．５〜５０μｇ／ｋｇ、０．１〜１００μｇ／ｋｇ、０．５〜２５μｇ／ｋｇ、１〜２０μｇ／ｋｇ、および１〜１０μｇ／ｋｇ、１〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜２５ｍｇ／ｋｇ、１〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．１００ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、および１〜１０ｍｇ／ｋｇが挙げられる。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性断片の例示的な投与量としては、これに限定することなく、０．１μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１．０μｇ／ｋｇ、２．０μｇ／ｋｇ、４μｇ／ｋｇ、および８μｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、および２０ｍｇ／ｋｇが挙げられる。
【０３７３】
医薬組成物は、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を治療有効量で含んでよい。そのような有効量は、投与される抗体の効果、または、２種以上の作用剤を使用する場合は抗体と１種または複数種の追加的な活性薬剤の組み合わせ効果に一部基づいて当業者が容易に決定することができる。本明細書に記載の抗体またはその断片の治療有効量は、個体の病態、年齢、性別、および体重、ならびに抗体（および１種または複数種の追加的な活性薬剤）の、個体における所望の応答、例えば、少なくとも１つの状態パラメータの回復、例えば、補体に媒介される障害の少なくとも１つの症状の回復を引き出す能力などの因子によって変動し得る。例えば、抗Ｃ５ａ抗体の治療有効量により、当技術分野で公知または本明細書に記載の特定の障害および／または特定の障害の症状のいずれか１つが阻害され（重症度が和らぐ、または出現が排除される）、かつ／または予防され得る。治療有効量は、組成物の任意の毒性の影響または有害な影響よりも治療的に有益な影響が上回る量でもある。
【０３７４】
本明細書に記載の任意の抗体またはその断片の適切なヒト用量は、例えば、第Ｉ相用量漸増試験においてさらに評価することができる。例えば、
【０３７５】
【化３３】
0006022441.tif 000053
を参照されたい。
【０３７６】
「治療有効量」または「治療有効用量」という用語または同様の用語は、本明細書で使用される場合、所望の生物学的または医学的な反応（例えば、補体に関連する障害の１つまたは複数の症状の改善）を引き出す作用剤（例えば、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片）の量を意味することが意図されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、Ｃ５ａに存在するネオエピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を治療有効量で含有する。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の任意の抗体またはその抗原結合性断片、および１種または複数種の（例えば、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、または１１種またはそれ以上の）追加的な治療剤を含有し、したがって、組成物は全体で治療的に有効になる。例えば、組成物は、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体および免疫抑制薬を、それぞれが、組み合わされると、被験体における補体に関連する障害（例えば、ＣＯＰＤ、喘息、敗血症、またはＲＡなどの補体に関連する炎症性障害）を治療または予防するために治療的に有効になる濃度で含有してよい。
【０３７７】
そのような組成物の毒性および治療効果は、細胞培養物または実験動物（例えば、本明細書に記載の任意の補体に媒介される障害の動物モデル）において、公知の薬学的手順によって決定することができる。ＲＡの動物モデルにおける抗Ｃ５ａ抗体の使用は、実施例において例示されている。これらの手順は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）を決定するために用いることができる。毒性効果と治療効果との間の用量比は治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０比として表すことができる。高い治療指数を示す抗体またはその抗原結合性断片が好ましい。毒性の副作用を示す組成物を用いることができるが、そのような化合物を患部組織の部位にターゲティングし、正常な細胞に対する潜在的な損傷を最小限にし、それにより、副作用を低下させるための送達系を設計するために注意を払うべきである。
【０３７８】
ヒトにおいて使用するためのさまざまな投与量の処方において、細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータを用いることができる。そのような抗体またはその抗原結合性断片の投与量は、一般に、毒性をほとんど伴わず、または毒性を伴わずＥＤ５０を含む抗体または断片の循環濃度の範囲内にある。投与量は、使用される投薬形態および利用される投与経路に応じて、この範囲内で変動してよい。本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体について、細胞培養アッセイから最初に治療有効用量を推定することができる。用量は、動物モデルにおいて、細胞培養物において決定したところＩＣ５０（すなわち、症状の最大半量の阻害が実現される抗体の濃度）を含む循環血漿濃度の範囲が実現されるように処方することができる。そのような情報を使用して、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定することができる。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定することができる。いくつかの実施形態、例えば、局所投与（例えば、眼または関節への）が望まれる場合では、細胞培養物または動物モデルを使用して、局所的な部位内で治療的に有効な濃度を実現するために必要な用量を決定することができる。
【０３７９】
いくつかの実施形態では、方法は、補体関連障害に対する他の療法と併せて実施することができる。例えば、組成物は、被験体に、血漿分離交換法、ＩＶＩＧ療法、または血漿交換法と同時に、それよりも前に、またはそれよりも後に投与することができる。例えば、Ａｐｐｅｌら（２００５年）Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  １６巻：１３９２〜１４０４頁を参照されたい。いくつかの実施形態では、組成物は、被験体に、腎移植と同時に、それよりも前に、またはそれよりも後に投与することができる。
【０３８０】
「被験体」とは、本明細書で使用される場合、任意の哺乳動物であってよい。例えば、被験体は、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、サル、ヒヒ、またはチンパンジー）、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、ウサギ、モルモット、スナネズミ、ハムスター、ラット、またはマウスであってよい。いくつかの実施形態では、被験体は、乳児（例えば、ヒト乳児）である。
【０３８１】
本明細書で使用される場合、「予防を必要とする」「治療を必要とする」または「それを必要とする」被験体とは、適切な医療実践者（例えば、ヒトの場合では医師、看護師、または看護実践者；非ヒト哺乳動物の場合では獣医師）の判断により、合理的に、所与の治療（例えば、抗Ｃ５ａ抗体を含む組成物を用いた治療など）が有益である被験体を指す。
【０３８２】
「予防すること」という用語は、当技術分野で理解されており、状態に関して使用される場合、当技術分野ではよく理解され、組成物を受けとらない被験体と比較して、被験体における医学的状態の症状の頻度を低下させる、またはその発症を遅延させる組成物を投与することを包含する。したがって、喘息などの補体に関連する障害の予防は、例えば、統計学的かつ／または臨床的に有意な量で、予防的治療を受けている患者の集団において、無処置の対照集団と比較して咳嗽、喘鳴、または胸痛の程度または頻度を低下させること、および／または治療された集団において、無処置の対照集団に対して、咳嗽または喘鳴の出現を遅延させることを含む。
【０３８３】
上記の通り、本明細書に記載の抗体および生物学的に活性な断片を使用して、例えば、これらに限定されないが、関節リウマチ（ＲＡ）；ループス腎炎；虚血再灌流障害；非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）；定型溶血性尿毒症症候群または感染性溶血性尿毒症症候群（ｔＨＵＳ）；デンスデポジット病（ＤＤＤ）；発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）；多発性硬化症（ＭＳ）；黄斑変性症（例えば、加齢黄斑変性（ＡＭＤ））；溶血、肝酵素の上昇、および低血小板（ＨＥＬＬＰ）症候群；敗血症；皮膚筋炎；糖尿病性網膜症；血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）；自然胎児死亡；低免疫性血管炎（Ｐａｕｃｉ−ｉｍｍｕｎｅ  ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）；表皮水疱症；再発性胎児死亡；多発性硬化症（ＭＳ）；および外傷性脳損傷などの種々の補体関連障害を処置することができる。例えば、Ｈｏｌｅｒｓ（２００８年）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２２３巻：３００〜３１６頁およびＨｏｌｅｒｓおよびＴｈｕｒｍａｎ（２００４年）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４１巻：１４７〜１５２頁を参照されたい。いくつかの実施形態では、補体に媒介される障害は、例えば、これらに限定されないが、心血管障害、心筋炎、脳血管障害、末梢血管（例えば、筋骨格血管）障害、腎血管障害、腸間膜／腸血管障害、移植および／または再移植に対する血管再生、血管炎、ヘノッホ−シェーンライン紫斑病性腎炎、全身性エリテマトーデス関連血管炎、関節リウマチに付随する血管炎、免疫複合体血管炎、高安病、毛細血管漏出症候群、拡張型心筋症、糖尿病性血管障害、胸腹部体動脈瘤、川崎病（動脈炎）、静脈ガス塞栓症（ｖｅｎｏｕｓ  ｇａｓ  ｅｍｂｏｌｕｓ）（ＶＧＥ）、およびステント設置後の再狭窄、回転式粥腫切除術、および経皮経管冠状動脈形成術（ＰＴＣＡ）などの補体に媒介される血管の障害である（例えば、米国特許出願公開第２００７０１７２４８３号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、補体に関連する障害は、重症筋無力症、寒冷凝集素症（ＣＡＤ）、発作性寒冷ヘモグロビン尿症（ＰＣＨ）、皮膚筋炎、強皮症、温式自己免疫性溶血性貧血、グレーブス病、橋本甲状腺炎、１型糖尿病、乾癬、天疱瘡、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、グッドパスチャー症候群、抗リン脂質症候群（ＡＰＳ）、デゴス病、および劇症型ＡＰＳ（ＣＡＰＳ）である。
【０３８４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、これらに限定されないが、ＲＡ（上記）、炎症性腸疾患、敗血症（上記）、敗血症性ショック、急性肺傷害、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）、またはクローン病などの炎症性障害を処置するために、単独で、または第２の抗炎症作用剤と組み合わせて使用することができる。いくつかの実施形態では、第２の抗炎症作用剤は、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、メトトレキサート、ヒドロキシクロロキン、抗ＴＮＦ薬、例えば、エタネルセプトおよびインフリキシマブなど、Ｂ細胞枯渇薬（Ｂ  ｃｅｌｌ  ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、例えば、リツキシマブなど、インターロイキン−１アンタゴニスト、またはＴ細胞共刺激遮断薬、例えば、アバタセプトなどからなる群より選択されるものであってよい。
【０３８５】
いくつかの実施形態では、補体に関連する障害は、例えば、これらに限定されないが、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、脳傷害、アルツハイマー病、および慢性炎症性脱髄性ニューロパチーなどの補体に関連する神経性障害である。
【０３８６】
補体関連障害は、例えば、これらに限定されないが、喘息、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患、α−１抗トリプシン欠乏症、肺気腫、気管支拡張症、閉塞性細気管支炎、肺胞炎、サルコイドーシス、肺線維症、および膠原血管障害などの補体に関連する肺障害も包含する。
【０３８７】
ＰＮＨ、ＣＡＤ、およびＰＣＨなどの補体に関連する溶血性障害の場合では、Ｃ５の断片であるＣ５ｂ（終末補体複合体として公知である）が有意にこれらの障害の発病の一因となることが医療実践者には理解されよう。例えば、
【０３８８】
【化３４】
0006022441.tif 000054
を参照されたい。したがって、医療実践者は、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体のうちの１つまたは複数を、溶血性障害に対する１種または複数種の追加的な療法、例えば、Ｃ５ｂ−９終末補体複合体の形成を妨げる補体阻害剤などと併せて投与することを選択することができる。本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、補体に関連する障害は、補体に関連する溶血性障害ではない。いくつかの実施形態では、被験体における補体に関連する炎症反応の少なくとも１つの症状（例えば、補体に関連する障害の補体に関連する炎症反応の状況）を処置する、予防する、またはそれから回復させるために抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を被験体に投与する。例えば、移植片拒絶／移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、再潅流傷害（例えば、心肺バイパスまたは組織の移植後）、および他の形態の外傷性傷害、例えば、熱傷（例えば、重篤な熱傷）、鈍的外傷、脊髄損傷、または凍傷などの後の組織傷害などの補体に関連する炎症反応に付随する１つまたは複数の症状を処置する、予防する、かつ／またはそれから回復させるために、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体を使用することができる。例えば、
【０３８９】
【化３５】
0006022441.tif 000055
を参照されたい。
【０３９０】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、被験体に単独療法として投与することができる。あるいは、上記の通り、抗体またはその断片は、被験体に、別の治療、例えば、補体に関連する障害または補体に関連する炎症反応に対する別の治療との併用療法として投与することができる。例えば、併用療法は、被験体（例えば、ヒト患者）に、敗血症を有する、またはそれを発症する危険性がある被験体に治療的な利益をもたらす１種または複数種の追加的な作用剤（例えば、抗凝固薬、抗高血圧薬、または抗炎症薬（例えば、ステロイド））を投与することを含んでよい。別の例では、併用療法は、被験体に、ＣＯＰＤまたは喘息などの補体に関連する肺障害を有する、発症する危険性がある、またはそれを有する疑いがある被験体に治療的な利益をもたらす１種または複数種の追加的な作用剤（例えば、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ−４抗体、抗ＩＬ−５抗体、または抗ヒスタミン薬）を投与することを含んでよい。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体および１種または複数種の追加的な活性薬剤を同時に投与する。他の実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体を時間的に最初に投与し、１種または複数種の追加的な活性薬剤を時間的に２番目に投与する。いくつかの実施形態では、１種または複数種の追加的な活性薬剤を時間的に最初に投与し、抗Ｃ５ａ抗体を時間的に２番目に投与する。
【０３９１】
本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片は、以前施した療法または現在施されている療法と置き換えること、またはそれを増強することができる。例えば、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を用いた治療に際して、１種または複数種の追加的な活性薬剤の投与を止めるまたは減らす、例えば、より低いレベルで投与することができる。いくつかの実施形態では、以前の療法の施行を維持することができる。いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体のレベルが、治療効果をもたらすために十分なレベルに到達するまで以前の療法を維持する。２つの療法を組み合わせて施すことができる。
【０３９２】
本明細書で定義されている、被験体（例えば、ヒト患者）を、補体に関連する障害（例えば、敗血症、重篤な熱傷、ＲＡ、ループス腎炎、グッドパスチャー症候群、または喘息）の改善についてモニターすることとは、被験体を、疾患パラメータ、例えば、所与の障害の１つまたは複数の症状の改善における変化について評価することを意味する。補体に関連する障害の症状は医薬の技術分野で周知である。いくつかの実施形態では、評価は、投与の少なくとも１時間後、例えば、少なくとも２時間後、４時間後、６時間後、８時間後、１２時間後、２４時間後、または４８時間後、または少なくとも１日後、２日後、４日後、１０日後、１３日後、２０日後、もしくはそれ以上後、または少なくとも１週間後、２週間後、４週間後、１０週間後、１３週間後、２０週間後、もしくはそれ以上後に実施する。被験体を、以下のうちの１つまたは複数の期間において評価することができる：治療を始める前；治療中；または治療の１つまたは複数の要素が投与された後。評価は、別の治療の必要性を評価すること、例えば、治療に関して投与量、投与の頻度、または継続期間を変更するべきかどうかを評価することを含んでよい。評価は、選択された治療的なモダリティを加える必要性または中断する必要性、例えば、本明細書に記載の補体に関連する障害に対する治療のいずれかを加える必要性または中断する必要性を評価することも含んでよい。
【０３９３】
治療用キットおよび診断用キット
本開示は、とりわけ、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体、および／またはその抗原結合性断片のうちの１つまたは複数を含有する治療用キットおよび診断用キットも特徴とする。治療用キットは、例えば、抗体または抗原結合性断片を被験体に送達するために適した手段を含有し得る。いくつかの実施形態では、手段は、抗体またはその抗原結合性断片を被験体に、皮下送達するために適している。手段は、例えば、シリンジまたは浸透性ポンプであってよい。すなわち、本明細書に記載の治療用キットは、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を充填済みのシリンジ（例えば、抗体または断片を含有するペンデバイス）を含有し得る、またはキットは、ポンプ（例えば、浸透性ポンプ）およびそのポンプと一緒に使用するために形づくられた、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を充填済み（例えば、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を含有する水性溶液を充填済み）のうちの１つまたは複数の使い捨てのカセットを含有し得る。別の例では、キットは、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を含有する溶液を充填済み（または別の方法で含有する）の経強膜送達デバイスまたは埋め込み型送達デバイス（例えば、プラグ）を含有し得る。
【０３９４】
いくつかの実施形態では、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を送達するための手段は、薬物送達用ペンデバイスである。
【０３９５】
いくつかの実施形態では、手段は、抗体またはその抗原結合性断片を被験体に肺内送達するため、例えば、これらに限定されないが、ＣＯＰＤまたは喘息などの補体に関連する肺障害の処置または予防において使用するために適している。したがって、手段は、例えば、経口吸入器または経鼻吸入器であってよい（上記を参照されたい）。吸入器は、例えば、定量噴霧式吸入器（ＭＤＩ）、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、またはネブライザーであってよい。そのようなキットは、場合によって、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を被験体に投与（例えば、自己投与）するための説明書も含んでよい。
【０３９６】
治療用キットは、例えば、補体に関連する障害を治療または予防するため、および／またはその症状から回復させる１種または複数種の追加的な活性薬剤を含んでよい。例えば、補体に関連する肺障害の処置または予防において使用するために設計された治療用キットは、これらに限定されないが、別の抗体治療薬（例えば、抗ＩｇＥ抗体、抗ＩＬ−４抗体、または抗ＩＬ−５抗体）、小分子抗ＩｇＥ阻害薬（例えば、モンテルカストナトリウム）、交感神経模倣薬（例えば、アルブテロール）、抗生物質（例えば、トブラマイシン）、デオキシリボヌクレアーゼ（例えば、パルモザイム）、抗コリン薬（例えば、臭化イプラトロピウム）、コルチコステロイド（例えば、デキサメタゾン）、β−アドレナリン受容体アゴニスト、ロイコトリエン阻害薬（例えば、ジレウトン）、５−リポキシゲナーゼ阻害薬、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤、ＣＤ２３アンタゴニスト、ＩＬ−１３アンタゴニスト、サイトカイン放出阻害剤、ヒスタミンＨ１受容体アンタゴニスト、抗ヒスタミン薬、抗炎症薬（例えば、クロモリンナトリウムまたは当技術分野で公知のまたは本明細書に記載の任意の他の抗炎症薬）、またはヒスタミン放出阻害剤を含めた１種または複数種の追加的な活性薬剤を含んでよい。
【０３９７】
いくつかの実施形態では、手段は、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を、それを必要とする被験体、例えば、ＡＭＤまたは任意の他の補体に関連する眼の障害を患っている被験体に眼内投与するために適切であり得る。手段は、例えば、抗体または断片を含有するシリンジ、経強膜パッチ、またはコンタクトレンズでさえあってよい。いくつかの実施形態では、手段は点眼器であってよく、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片はそのような投与のために処方される。そのような治療用キットは、例えば、補体に関連する眼障害の処置において使用するための１種または複数種の追加的な治療剤も含んでよい。治療剤は、例えば、ベバシズマブまたはベバシズマブのＦａｂ断片、ラニビズマブ（ｒａｎｉｂｉｚｉｍａｂ）であってよく、どちらもＲｏｃｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．が販売している、またはペガプタニブナトリウム（Ｍｕｃｏｇｅｎ（登録商標）；Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．）であってよい。そのようなキットは、場合によって、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を被験体に投与するための説明書も含んでよい。
【０３９８】
いくつかの実施形態では、手段は、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を、それを必要とする被験体、例えば、ＲＡを患っている被験体に関節内投与するために適切であり得る。手段は、例えば、シリンジまたは２筒シリンジであってよい。例えば、米国特許第６，０６５，６４５号および同第６，６９８，６２２号を参照されたい。２筒シリンジは、関節に、２つの異なる組成物をただ１回の注射で投与するために有用である。プッシュプル式で治療薬を投与すると同時に分析のために膝液を抜き取ること（穿刺）に使用するために２つの別々のシリンジを組み入れることができる。２筒シリンジと併せて抗Ｃ５ａ抗体または断片と一緒に投与することができる、または別の方法で一般に本明細書に記載の治療用キットに含めることができる追加的な治療剤としては、例えば、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、メトトレキサート、ヒドロキシクロロキン、抗ＴＮＦ薬、例えば、エタネルセプトおよびインフリキシマブなど、Ｂ細胞枯渇薬、例えばリツキシマブなど、インターロイキン−１アンタゴニスト、またはＴ細胞共刺激遮断薬、例えばアバタセプトなどが挙げられる。そのようなキットは、場合によって、抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を被験体に投与するための説明書も含んでよい。本開示は本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体のうちの１つまたは複数、およびＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド、メトトレキサート、ヒドロキシクロロキン、抗ＴＮＦ薬、例えば、エタネルセプトおよびインフリキシマブなど、Ｂ細胞枯渇薬、例えばリツキシマブなど、インターロイキン−１アンタゴニスト、またはＴ細胞共刺激遮断薬、例えばアバタセプトなどからなる群より選択される１つまたは複数の抗炎症性作用剤を含むキットを包含することが理解されよう。抗体および作用剤は、例えば、別々にまたは一緒に処方することができる。炎症性の状態、例えば、ＲＡ、クローン病、炎症性腸疾患、または当技術分野で公知のまたは本明細書において列挙されている任意の他の炎症性障害などを処置するためにキットを使用することができる。
【０３９９】
本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体またはその抗原結合性断片を含有する診断用キットも特徴とされる。例えば、キットは、生体試料中のＣ５ａの量を検出または定量化することにおいて使用するための、本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体（例えば、抗Ｃ５ａ抗体または抗マウスＣ５ａ抗体）の検出可能に標識された形態を含有し得る。いくつかの実施形態では、キットは、単離されたＣ５ａタンパク質（例えば、ヒトＣ５ａタンパク質およびマウスＣ５ａタンパク質の一方または両方）および／またはヒトＣ５ａタンパク質およびマウスＣ５ａタンパク質の一方または両方を含む対照試料を含有し得る。いくつかの実施形態では、キットは、第１の特異性を有する第１の抗Ｃ５ａ抗体でコーティングされた多ウェルプレートを含有する。キットは、第２の特異性を有する第２の抗Ｃ５ａ抗体（例えば、検出可能に標識された第２の抗Ｃ５ａ抗体）も含有する。そのようなキットは、プレートと接触させた試料（例えば、生体試料）中のＣ５ａタンパク質（例えば、ヒトＣ５ａタンパク質）を、プレートに結合した第１の抗体を用いて捕捉し、次いで、捕捉されたＣ５ａタンパク質を、第２の抗体を使用して検出することに使用するために設計される。いくつかの実施形態では、診断用キットは、本明細書に記載の抗マウスＣ５ａ抗体と抗ヒトＣ５ａ抗体をどちらも含む。いくつかの実施形態では、診断用キットは、マウスＣ５ａおよびヒトＣ５ａのどちらとも結合する抗Ｃ５ａ抗体を含む。
【０４００】
以下の実施例は、本発明を例示するものであり、それを限定するものではない。
【実施例】
【０４０１】
（実施例１）
免疫化方法
ここに記載されている抗Ｃ５ａ抗体は、以下の免疫化プロトコールの下で生成されたマウス抗体のヒト化形態である。ＤＢＡ／２Ｊ系統のマウス２匹およびＡ／Ｊ系統のマウス２匹を含めたマウス４匹において、ヒト脱アルギニンＣ５ａに対する抗体を生じさせるために免疫化を実施した。これらの系統は、内在性のＣ５を欠損させる対立遺伝子Ｈｃ０を保有するので選択した。全ての免疫化を１４日間隔で繰り返して、合計３回免疫化した。全ての動物に、最後の免疫化のおよそ１４日後および採取の５〜７日前に、アジュバントエマルション２００μＬ中およそ５０μｇの精製したＣ５ａを皮下に追加免疫した。ＥＬＩＳＡアッセイを用いて免疫したマウス由来の血清の力価を決定することにより、マウスがヒト脱アルギニンＣ５ａ免疫原に対して強い抗体応答を示すことが示された。
【０４０２】
（実施例２）
マウス抗体のヒトＣ５ａに対する特異性の決定
ネオエピトープ選択的なＦａｂを表した５種のマウス抗ヒトＣ５ａ  Ｆａｂのサブセットを、５ａｎ０４８ＭＥ、５ａｎ１０１ＭＥ、５ａｎ１７８ＭＥ、５ａｎ１７９ＭＥ、および５ａｎ１８０ＭＥと称される全長のマウスＩｇＧ２ａ抗体に変換した。これらの抗体を、Ｏｃｔｅｔ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｉｎｃ．）においてバイオレイヤー干渉法を用いて特異性について評価した（Ｋａｂａｔによって定義される各抗体の軽鎖ＣＤＲおよび重鎖ＣＤＲセットのアミノ酸配列は、表３に記載されている）。簡単に述べると、ヒトＣ５ａ、ヒトＣ５ａ  ｄｅｓ  Ａｒｇ、ヒト全長のＣ５、またはＣ５ａパラログであるヒトＣ３ａおよびヒトＣ４ａを、ストイキオメトリー＜１（ビオチン）：１（抗体）で、アミン基を通じてビオチンとコンジュゲートし、ストレプトアビジンチップに固定化した。次いで、ローディングされたチップを、２０ｎＭの抗Ｃ５ａ  ＩｇＧ抗体を含有する溶液に曝露させた。抗体のそれぞれが、Ｃ５ａおよび脱アルギニンＣ５ａに結合した。Ｃ３ａまたはＣ４ａに結合した抗Ｃ５ａ  ＩｇＧ抗体はなかった。しかし、５ａｎ１７８ＭＥおよび５ａｎ１７９ＭＥは、それぞれ、全長のヒトＣ５に結合した。５ａｎ０４８ＭＥと全長のヒトＣ５との間に少量の結合が観察された。しかし、５ａｎ０４８ＭＥとＣ５の結合は、Ｃ５ａに対して観察された結合よりもかなり少なかった。
【０４０３】
これらの結果により、マウス抗ヒトＣ５ａ抗体−５ａｎ０４８ＭＥ、５ａｎ１０１ＭＥ、および５ａｎ１８０ＭＥがネイティブな全長のＣ５に遮られたまたはＣ５がＣ５ａ断片とＣ５ｂ断片に切断された後に生成されたＣ５ａ上のネオエピトープに結合したことが確認された。この結果により、この３種の抗体が、パラログであるＣ３ａまたはＣ４ａと比較して、ヒトＣ５ａに対して選択的であることも示された。
【０４０４】
【表３−１】
0006022441.tif 000056
【０４０５】
【表３−２】
0006022441.tif 000057
マウス抗ヒトＣ５ａ  ＩｇＧ２ａ抗体の選択されたサブセットに対して一連のサンドイッチアッセイをＯｃｔｅｔによって実施して、５種の代表的なＩｇＧ２ａ抗体のそれぞれに対するＣ５ａエピトープのオーバーラップの程度を決定した。簡単に述べると、まず抗体をビオチン化し、Ｏｃｔｅｔプラットフォーム上のストレプトアビジンでコーティングされたチップに固定化した。次に、ヒトＣ５ａを、固定化抗体上の２０ｎＭ溶液から捕捉した。次いで、抗体−Ｃ５ａ複合体を保有するチップを２０ｎＭの標識されていない第２の抗Ｃ５ａ  ＩｇＧ抗体を含有する溶液に曝露させた。センサーグラムにおいて追加的な関連プロファイルが引き出されることにより、２種の抗体とＣ５ａが同時に結合して三元複合体の状態であること、および２種の抗体に対する結合性エピトープがオーバーラップしていないことが示される。第２の抗体を加えた際に第２の関連プロファイルを得ることができないことにより、２種の抗体がＣ５ａと競合的に結合したこと、すなわち、第２の抗体が結合するＣ５ａ上のエピトープが、第１の抗体が結合した後に遮られたことが示され得る。非競合的な結合と対照的に、競合的な結合は、第１の抗体と第２の抗体が同じまたはさらにはオーバーラップしているヒトＣ５ａ上のエピトープを認識したことを必ずしも示すものではない。この手法を用いて、５種の代表的な抗Ｃ５ａ抗体の結合部位をヒトＣ５ａ上の４種の別個のエピトープに割り当てた（図１）。抗体５ａｎ０４８ＭＥ、５ａｎ１８０ＭＥ、および５ａｎ１０１ＭＥは、互いに競合した。５ａｎ０４８および５ａｎ１８０は非ネオエピトープ選択的な５ａｎ１７９ＭＥとも競合したが、５ａｎ１０１ＭＥはそれと競合せず、これにより、５ａｎ０４８ＭＥおよび５ａｎ１８０ＭＥが、５ａｎ１０１ＭＥによって認識されるエピトープとは異なるネオエピトープを認識することが示された。さらに、非ネオエピトープ選択的な抗体５ａｎ１７８ＭＥは非ネオエピトープ選択的な５ａｎ１７９ＭＥと競合したが、後者のみが、５ａｎ１８０ＭＥおよび５ａｎ０４８ＭＥと競合し、これは、５ａｎ１７９ＭＥおよび５ａｎ１７８ＭＥが、Ｃ５とＣ５ａの両方における接近できる異なるエピトープに結合することを示している。結果は、抗体のいくつかの組み合わせを、試料中のＣ５ａの量を検出し、かつ／または数量化するためのサンドイッチに基づくアッセイにおいて使用することができることも示している。
【０４０６】
（実施例３）
選択マウス抗ヒトＣ５ａ抗体のヒト化
２種の関連するマウス抗ヒトＣ５ａ抗体−５ａｎ１０１ＭＥおよび５ａｎ１８５ＭＥ−の可変領域を、全長のＩｇＧ抗体としてヒト化するために選択した。軽鎖可変領域および重鎖可変領域のヒト化は、元のマウス親抗体に対して高い程度の配列同一性を有するヒト抗体由来の個々のフレームワーク領域（生殖系列ｖ−遺伝子を優先した）同定することに基づいた。適切な候補フレームワーク領域を同定するための方法は、ＲｏｔｈｅｒおよびＷｕの米国特許第７，３９３，６４８号に記載されている。フレームワーク（ＦＷ）および相補性決定領域（ＣＤＲ）の定義は、Ｋａｂａｔ、ＣｈｏｔｈｉａおよびＩＭＧＴ（登録商標）（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍｍｕｎｏＧｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ；Ｆｒａｎｃｅ）に記載されている方法に従って行った。簡単に述べると、軽鎖可変領域と重鎖可変領域の両方に、ＦＷ１〜ＦＷ４由来のインタクトなマウス可変領域、ＣＤＲを除いたインタクトなマウス可変領域、および隣接しているＣＤＲを伴うまたは伴わない１つ、２つまたは３つのフレームワークを含めた全ての可能性のあるマウス可変領域の断片を含めた種々の抗体断片を用いて、データベースクエリをそれぞれ独立に実施した。この候補プールから、元のマウス抗体およびその断片に対するそれらの全体的な配列同一性に基づいてヒトフレームワークを選択した。常套的な分子生物学的方法を使用して、マウスＣＤＲの各セットが全ての可能性のある選択されたヒトフレームワークの組み合わせと隣接する、１０３メンバー未満の小さなコンビナトリアルライブラリーを組み立てた。これらのヒト化抗体を、可溶性のＦａｂとして発現させ、脱アルギニンＣ５ａとの結合について、ＥＬＩＳＡを用いて評価した。次いで、Ｃ５ａに結合したＦａｂをＤＮＡ配列解析に供した。
【０４０７】
これらの結合体から、６種のヒト化Ｆａｂのサブセットを全長のＩｇＧ（ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ２／Ｇ４）として再編成した。２種の抗体（ＢＮＪ３７１およびＢＮＪ３８１）において、軽鎖のＣＤＲ２内のマウス残基をそれらの対応するヒト生殖系列アミノ酸と交換することにより追加的なヒト化を実施した。ヒト化抗Ｃ５ａ抗体−ＢＮＪ３６４、ＢＮＪ３６７、ＢＮＪ３７１、ＢＮＪ３７８、ＢＮＪ３６６、ＢＮＪ３６９、ＢＮＪ３８１、およびＢＮＪ３８３−のアミノ酸配列は上の表２に記載されている。
【０４０８】
（実施例４）
ヒト化抗ヒトＣ５ａ抗体のＣ５ａに対する親和性の決定
ヒト化抗体を、それらのそれぞれのヒトＣ５ａに対する親和性を数量化するためにＢＩＡｃｏｒｅ解析に供した。例えば、ＫａｒｌｓｓｏｎおよびＬａｒｓｓｏｎ（２００４年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２４８巻：３８９〜４１５頁を参照されたい。簡単に述べると、ヒト化抗体のそれぞれを、キャプチャー法を用いて、３〜４濃度のヒトＣ５ａ（抗原）を用いてスクリーニングした。抗体をＣＭ５センサーチップ上に直接固定化した抗Ｆｃ（ヒト）によって捕捉し、０．６ｎＭ〜５．９ｎＭの範囲のさまざまな濃度のヒトＣ５ａを、センサーチップ表面を通過させた。表面を、各サイクル後に２０ｍＭのＨＣｌ、０．０２％のＰ２０を用いて再生させて、結合した抗体と抗原を除去した。データを、ＢｉａｃｏｒｅＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用し、１：１Ｌａｎｇｍｕｉｒ  Ｍｏｄｅｌ  Ｆｉｔ（Ｒｍａｘ：Ｇｌｏｂａｌ  Ｆｉｔ；ＲＩ：Ｌｏｃａｌ  Ｆｉｔ）を用いて評価した。カイネティクス情報、例えば、（ｋａ：会合速度定数）、（ｋｄ：解離速度定数）およびＫＤ（平衡解離定数）などを、フィッティングから得た。解析の結果は、表４に記載されている。これらの実験は、最小数のアナライト濃度（３〜４）を用いて１回の反復実験でスクリーニングするためのものであった。したがって、おおよそのカイネティクス値が表４において報告されている。
【０４０９】
【表４】
0006022441.tif 000058
ヒト化抗体の全てが、ヒトＣ５ａと１．２０ナノモル未満のＫＤで特異的に結合した。ＢＮＪ３７１以外の全ての抗体が、ヒトＣ５ａと１ナノモル未満のＫＤで結合した。３種の抗体、ＢＮＪ３６９、ＢＮＪ３８１、およびＢＮＪ３８３はヒトＣ５ａと１００ピコモル未満のＫＤで結合した。
【０４１０】
（実施例５）
抗Ｃ５ａ抗体はｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＣ５ａに媒介されるシグナル伝達を阻害する
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ好中球活性化アッセイを使用して、ヒト化抗体の活性を評価した。アッセイは、一般に、例えば、Ｐａｃｚｋｏｗｓｋｉら（１９９９年）Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １２８巻（７号）：１４６１〜１４６６頁に記載されており、好中球によって産生されるミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）の量を、好中球活性化の測定値として定量化するために役立つ。簡単に述べると、その大多数が好中球である多形核細胞を、密度遠心分離（モノ−ポリ分離溶液、カタログ番号：９１６９８０４９；ＭＰ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ；Ｓｏｌｏｎ、Ｏｈｉｏ）を使用して、健康なドナー由来の全血から単離した。細胞を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で１回洗浄し、赤血球（ＲＢＣ）を、低張液（ＡＣＫ溶解緩衝液、カタログ番号１０−５４８Ｅ；Ｌｏｎｚａ）に溶解させることによって細胞集団から取り出した。ＰＢＳを用いてさらに２回洗浄した後、ＲＢＣを含まない細胞を、カルシウムおよびマグネシウムを補充し、さらに０．１％のゼラチン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ；Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）を補充したハンクス液（ＨＢＳＳ；Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、カタログ番号：２１−０２３−ＣＶ）［以下アッセイ緩衝液］に１ｍＬ当たり細胞４×１０６個の濃度で再懸濁させた。
【０４１１】
細胞懸濁液に、Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ  Ｂ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を、濃度を１０μｇ／ｍＬに達するのに十分な量で加えた。次いで、懸濁液を３７℃で１０分間インキュベートした。細胞１００μＬをＵ底９６ウェルプレートのウェルに加えた。プレートのウェルをいくつかの異なるセットにグループ分けした。ウェルの異なるセットのいくつかはそれぞれ、抗Ｃ５ａ抗体を含有し：セット１の各ウェルは、切断されていないネイティブなＣ５に結合するが、遊離のＣ５ａには結合しないヒト化抗体を含有し；セット２の各ウェルは、ＢＮＪ３６７ヒト化抗Ｃ５ａ抗体を含有し；セット３の各ウェルは、ＢＮＪ３６９ヒト化抗Ｃ５ａ抗体を含有し；セット４の各ウェルは、ＢＮＪ３７１ヒト化抗Ｃ５ａ抗体を含有し；セット５の各ウェルは、ＢＮＪ３７８ヒト化抗Ｃ５ａ抗体を含有し；セット６の各ウェルは、ＢＮＪ３８１ヒト化抗Ｃ５ａ抗体を含有し；セット７の各ウェルは、ＢＮＪ３８３ヒト化抗Ｃ５ａ抗体を含有した。ウェルの第８のセットの各ウェルは抗体を含有しなかった。ウェルの各セットにおいて、抗体０．０８ｎＭ、０．４ｎＭ、２ｎＭ、および１０ｎＭの濃度を含めたさまざまな抗体濃度を評価した。
【０４１２】
Ｃ５ａ（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．から入手）を、２ｎＭの濃度で評価した。上述のアッセイ緩衝液中で２０ｎＭの１０×作用濃度を調製し、２０μＬを各ウェルに加えた。Ｃ５ａをウェルに加えた後、プレートを３７℃で１０分間インキュベートした。インキュベートした後、６０μＬのＰＢＳをプレートの各ウェルに加えた。プレートを、室温、１２００ｒｐｍ（およそ３３５×ｇ）で１０分間遠心分離に供した。各ウェルからの上清１００μＬを、対応する第２のプレートのウェルに移した。基質（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｔ０４４０）２５μＬを第２のプレートの各ウェルに加え、およそ２〜５分間ペルオキシダーゼ反応を発生させた。反応を、１ＮのＨＣｌを２５μＬ加えることによって終結させた。４５０ｎＭにおけるＯＤを記録した。
【０４１３】
図２に示されているように、ヒト化抗Ｃ５ａ抗体の全てが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで好中球活性化を阻害した。これらの結果は、本明細書に記載のヒト化抗Ｃ５ａ抗体が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＣ５ａに媒介されるシグナル伝達の強力な阻害剤であることを示し、この抗体が、ヒトにおける種々の補体関連障害（例えば、補体に関連する炎症性障害）を処置するために有用であるという出願人らの結論を裏付ける。
【０４１４】
（実施例６）
代理マウス抗マウスＣ５ａ抗体の特徴付け
選択されたマウス抗マウスＣ５ａ  ＩｇＧ抗体−５ａｎ１９５ＭＥ−に対して一連のサンドイッチアッセイを実施して、Ｃ５ａに対する抗体の特異性を決定した。簡単に述べると、アッセイプレートのウェルを、５ａｎ１９５ＭＥ抗体でコーティングした。プレートを徹底的に洗浄して結合していない抗体を除去した。次に、５ａｎ１９５ＭＥを含有するウェルとマウスＣ５ａを、抗原と抗体が結合することを可能にするために十分な時間にわたって、そのために十分な条件下で接触させた。結合していないタンパク質を、洗浄することで除去した。洗浄ステップの後、ウェルをさらに、第２の、ビオチン化した抗Ｃ５ａ抗体を含有する溶液と接触させた。ウェルを再度洗浄して、いかなる結合していない第２の抗体も除去した。第２の抗体のウェルへの結合量を、ストレプトアビジンとコンジュゲートした西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）を使用して数量化した。第２の抗体の結合量は、Ｃ５ａと５ａｎ１９５ＭＥの結合に応じた。
【０４１５】
平行した実験では、５ａｎ１９５ＭＥのセットでコーティングされたウェルを、Ｃ５ａではなく全長のマウスＣ５タンパク質と一緒にインキュベートした。洗浄ステップの後、ウェルを、第２の抗体：ビオチン化した抗マウスＣ５抗体を含有する溶液と接触させた。５ａｎ１９５ＭＥが結合したＣ５の量に応じた第２の抗体の結合量を、ストレプトアビジンとコンジュゲートしたＨＲＰ構築物を使用して数量化した。第２の抗体が結合しないことにより、５ａｎ１９５ＭＥが全長のマウスＣ５に結合しないことが示される。
【０４１６】
このアッセイを用いると、５ａｎ１９５ＭＥはＣ５ａと用量依存的に結合したが、この抗体と全長のマウスＣ５の結合は検出されなかった。これらの結果は、５ａｎ１９５ＭＥがＣ５ａに存在するネオエピトープに結合することを示している。
【０４１７】
マウスＣ５ａに対する５ａｎ１９５ＭＥの相対的な結合親和性を、ＢＩＡｃｏｒｅを用いてさらに数量化した。５ａｎ１９５ＭＥのカイネティクスを、キャプチャー法を用いて測定した。抗体を、ＣＭ５センサーチップ上に直接固定化した抗Ｆｃ（マウス）によって捕捉し、０．４ｎＭから２５ｎＭ（両端を含む）のさまざまな濃度のマウスＣ５ａを、センサーチップ表面を通過させた。各濃度の反復実験も行った。各サイクル後に、チップの表面を１０ｍＭのグリシンＨＣｌ、ｐＨ１．７を用いて再生させて、結合した抗体と抗原を除去した。データを、ＢｉａｃｏｒｅＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用し、１：１Ｌａｎｇｍｕｉｒ  Ｍｏｄｅｌ  Ｆｉｔ（Ｒｍａｘ：Ｇｌｏｂａｌ  Ｆｉｔ；ＲＩ：Ｌｏｃａｌ  Ｆｉｔ）を用いて評価した。フィッティングから、カイネティクス情報、例えば、ｋａ（会合速度定数）、ｋｄ（解離速度定数）およびＫＤ（平衡解離定数）などを得た。カイネティクス解析の結果は表５に示されている。
【０４１８】
【表５】
0006022441.tif 000059
これらの結果は、マウス抗マウスＣ５ａ抗体が、全長のマウスＣ５と比較してＣ５ａに特異的であることだけでなく、この抗体が、マウスＣ５ａと高い親和性で結合することも示している。
【０４１９】
（実施例７）
ＲＡ動物モデルにおける代理抗マウスＣ５ａ抗体５ａｎ１９５ＭＥの使用
５ａｎ１９５ＭＥ抗マウスＣ５ａ抗体を、コラーゲン誘導関節炎のマウスモデルにおいて評価した。雄のＤＢＡ／１ＬａｃＪマウス（９〜１２週齢）を、等体積のフロイント完全アジュバントを用いて乳化したウシのＩＩ型コラーゲン３００μｇを尾の基部に皮内注射することによって免疫化した。最初の免疫化の２週間後にこの手順を繰り返した。最初の膝関節における炎症を同定するために、マウスを毎日検査した。最初の炎症が同定されたら、マウスに、５ａｎ１９５ＭＥ抗マウスＣ５ａ抗体（４０ｍｇ／ｋｇ）または対照抗体（４０ｍｇ／ｋｇ）を週３回、腹腔内投与した。最初に炎症を起こした関節の厚さ（ｍｍ単位）を、１２日目まで毎日測定した。
【０４２０】
図３に示されているように、５ａｎ１９５ＭＥは、膝関節の厚さを対照抗体と比較して低下させた。５ａｎ１９５ＭＥは、膝関節の厚さを４．５ｍｍ未満に維持する利益をもたらすと思われた。
【０４２１】
５ａｎ１９５ＭＥ抗体の、最初に炎症を起こした膝関節の腫脹を低下させる能力を評価することに加えて、５ａｎ１９５ＭＥ抗Ｃ５ａ抗体の、炎症が新しい関節に移動することを予防する能力についても評価した。新たに動員された関節の数を１日目から１２日目まで毎日測定した。この実験の結果は、表６に記載されている。
【０４２２】
【表６】
0006022441.tif 000060
表６に示されているように、５ａｎ１９５ＭＥで処置したマウスは、対照Ａｂで処置した動物と比較して、１２日目までに新たに炎症を起こした関節が著しく少なかった。５ａｎ１９５ＭＥで処置したマウスの新たに炎症を起こした関節も平均して著しく少なかった。
【０４２３】
マウスにおける関節炎を、臨床スコア／関節炎指数を用いてもモニターし、定義した。各肢を、確立されたスコアリングシステム（０、正常な関節；１、穏やかな／中程度の可視の紅斑症および腫脹；２、足全体または関節に影響を及ぼしている重篤な紅斑症および腫脹；３、関節強直を伴う足または関節の変形）に従って毎日採点し、最大のスコアは動物当たり２４であった。例えば、Ｗａｎｇら（２０００年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４巻：４３４０〜４３４７頁を参照されたい。図４に示されているように、試験の間に、抗マウスＣ５ａ抗体５ａｎ１９５ＭＥで処置したマウスは、対照抗体で処置したマウス（平均スコア６超）と比較して、臨床スコアの顕著な低下を示した（平均スコア１未満）。
【０４２４】
要約すると、これらの結果は、代理抗マウスＣ５ａが、疾患のマウスモデルにおいて、ＲＡの治療において、最初の関節および二次的な関節への炎症の移動のどちらにおいても有効であることを示している。この結果は、治療的な抗ヒトＣ５ａ抗体、例えば、本明細書に記載の任意のヒト化抗Ｃ５ａ抗体などが、ＲＡのヒトを処置するために有用であることも強力に示唆している。
【０４２５】
（実施例８）
関節リウマチを処置するための抗Ｃ５ａ抗体の使用
医療実践者により、ヒト患者が、単一の関節接合部において関節リウマチを有すると同定される。その後すぐに、患者に、本明細書に記載のヒト化抗Ｃ５ａ抗体を含有する組成物を、Ｃ５ａに媒介されるＣ５ａＲ１シグナル伝達を関節腔で局所的に低下させるために十分な量で関節内投与または腹腔内投与する。患者および医療実践者は、治療後に、関節リウマチの少なくとも２つの公知の症状の実質的な改善を観察する。症状の再発を予防するため、単一の関節におけるＲＡの進行を予防するため、または、ＲＡの症状が第２の関節に移動することを予防するために、患者に毎月「維持用量」の抗体を静脈内投与する。
【０４２６】
（実施例９）
敗血症を処置するための抗Ｃ５ａ抗体の使用
医療実践者により、ヒト患者が、敗血症を有すると同定される。その後すぐに、患者に、本明細書に記載のヒト化抗Ｃ５ａ抗体を含有する組成物をおよそ６００〜９００ｍｇの用量で、静脈内注入によって投与する。治療の間、患者および医療実践者は、敗血症の少なくとも２つの公知の症状の実質的な改善を観察する。患者が退院するまで、患者に、２週間ごとに「維持用量」の抗体を静脈内投与する。
【０４２７】
（実施例１０）
補体に関連する肺の炎症性障害を処置するための抗Ｃ５ａ抗体の使用
医療実践者により、ヒト患者が、重篤な形態のＣＯＰＤを有すると同定される。２週間ごとに１回、４週間にわたり、患者にヒト化抗Ｃ５ａ抗体を含有する組成物をおよそ６００ｍｇ〜９００ｍｇの用量で静脈内注入によって投与する。最初の治療の間、患者および医療実践者は、ＣＯＰＤの少なくとも２つの公知の症状の実質的な改善を観察する。例えば、抗Ｃ５ａ抗体を受けた患者は、ＣＯＰＤに関連する増悪の頻度および／または重症度が低下する。ＣＯＰＤに関連する増悪の頻度および／または重症度の低下を維持するために、患者に、２週間ごとに「維持用量」の抗体を静脈内投与し続ける。
【０４２８】
医療実践者により、ヒト患者が、重篤な形態の喘息を有すると同定される。患者に、吸入器によって投与する治療的なヒト化抗Ｃ５ａ抗体を処方する。次の気管支痙攣の発作の間に、患者は、自身の肺におけるＣ５ａに媒介される炎症反応を低下させるために十分な量の抗Ｃ５ａ抗体を自己投与する。患者は、喘息の発作の重症度を予防または低減するために、必要に応じて吸入器を使用し続ける。
【０４２９】
（実施例１１）
免疫したマウスから同定された追加的な抗Ｃ５ａ抗体
免疫したマウス（実施例１を参照されたい）からいくつかの追加的な抗体を得、それを、ＥＬＩＳＡにより、ヒトＣ５ａに結合し得るとさらに同定した。追加的な抗体は、１５種の独特の軽鎖ＣＤＲセット（表７に記載）および１４種の独特の重鎖ＣＤＲセット（表８に記載）を含む。
【０４３０】
【表７−１】
0006022441.tif 000061
【０４３１】
【表７−２】
0006022441.tif 000062
【０４３２】
【表８−１】
0006022441.tif 000063
【０４３３】
【表８−２】
0006022441.tif 000064
５ａｎ１７７ＭＥ抗体、５ａｎ０５４ＭＥ抗体、５ａｎ１１０ＭＥ抗体、５ａｎ１８８ＭＥ抗体、５ａｎ１８５ＭＥ抗体、および５ａｎ１０７ＭＥ抗体に対して生じるＶＬとＶＨの対は、表７および８から明らかである。重鎖可変領域および軽鎖可変領域および／またはＣＤＲセットの追加的な例示的な対は、以下の表９に記載されている。
【０４３４】
【表９−１】
0006022441.tif 000065
【０４３５】
【表９−２】
0006022441.tif 000066
【０４３６】
【表９−３】
0006022441.tif 000067
【０４３７】
【表９−４】
0006022441.tif 000068
（実施例１２）
追加的なヒト化抗ヒトＣ５ａ抗体
いくつかの追加的なヒト化抗Ｃ５ａ抗体重鎖可変領域を生成し、共通の軽鎖可変領域（番号１６に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖）と対をなす場合、その全てが、Ｂｉａｃｏｒｅ解析（方法体系については上記を参照されたい）によって決定された通り、ヒトＣ５ａと１ｎＭ未満のＫＤで結合した。Ｏｃｔｅｔ解析（方法体系については上記を参照されたい）によって決定された通り、これらの追加的なヒト化抗体は全て、ヒトＣ５ａと特異的に結合したが、ネイティブな完全にフォールディングされたヒトＣ５、Ｃ４ａ、またはＣ３ａとは結合しなかった。追加的なヒト化抗体は、（ｉ）以下のアミノ酸配列：
【０４３８】
【化３６】
0006022441.tif 000069
のうちの１つを含有する重鎖可変領域フレームワーク領域１；（ｉｉ）以下のアミノ酸配列：
【０４３９】
【化３７】
0006022441.tif 000070
のうちの１つを含有する重鎖可変領域フレームワーク領域２；（ｉｉｉ）以下のアミノ酸配列：
【０４４０】
【化３８】
0006022441.tif 000071
のうちの１つを含有する重鎖可変領域フレームワーク領域３；および以下のアミノ酸配列：ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７５）を含有する重鎖可変領域フレームワーク領域４を含有した。本節に記載の追加的なヒト化フレームワークセットのうちの１つまたは複数を含む例示的な追加的なヒト化重鎖可変領域は、図５に記載されている。
【０４４１】
（実施例１３）
マウス好中球減少症モデルにおける抗ヒトＣ５ａ抗体の使用
Ｃ５ａ−好中球減少症のマウスモデルを利用して、遊離の抗ヒトＣ５ａ抗体のｉｎ  ｖｉｖｏにおける効力を評価した。好中球減少症を誘導するために、精製されたネイティブなヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）を、Ｂａｌｂ／ｃマウスに尾静脈への静脈内注射によって投与した。循環している好中球の数を、ｈＣ５ａを投与した５分間後に至るまで評価した。
【０４４２】
３００μｇ／ｋｇのｈＣ５ａを投与することにより、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）放出アッセイによって測定したところ、好中球活性化（上記の細胞培養物の上清と比較して血清と一緒に使用することについては、実施例５を参照されたい）および好中球減少症（循環している好中球の数の減少）が誘導されることが一貫して見いだされた。さらに、薬力学的反応（以下を参照されたい）を確立するために、ｈＣ５ａおよびヒト抗Ｃ５ａ抗体ＢＮＪ３８３（マウスに投与した場合、下記）の血漿レベルも測定した。
【０４４３】
ｈＣ５ａまたはビヒクル対照を用いて攻撃する前に末梢血の好中球数を検査した。偽処置した対照マウス（１．３７±０．０９×１０６／ｍＬ）と比較して、遊離の抗ヒトＣ５ａ抗体で処置したマウスにおける好中球数（２４ｍｇ／ｋｇで、１ｍＬ当たり１．３２±０．１３×１０６個；Ｐ＞０．０５）またはアイソタイプ対照ｍＡｂで処置したマウスにおける好中球数（２４ｍｇ／ｋｇで、１ｍＬ当たり１．３１±０．１０×１０６個；Ｐ＞０．０５）は、変わらなかった。これらの結果により、抗体単独では、循環している好中球数の変化が誘導されないことが示された。
【０４４４】
マウスにおけるｈＣ５ａ誘導性好中球減少症を阻害する抗Ｃ５ａ抗体の効力を評価するために、異なる投与量（２４ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、および３ｍｇ／ｋｇ）の抗ヒトＣ５ａ抗体ＢＮＪ３８３を、Ｂａｌｂ／ｃマウスに、ｈＣ５ａを注射する２４時間前に投与した。ｈＣ５ａの２４時間前に抗Ｃ５ａ抗体を投与することにより、マウスからの抗体排除のβ相の間に抗体の薬力学的性質を試験することが可能になった。
【０４４５】
図６に示されているように、処置後の好中球数は「ベースライン」（１００％と等しい時間０における数）に対する百分率として表されている。偽処置した対照マウスでは、好中球数は、ｈＣ５ａを投与した１分後、３分後および５分後に、それぞれベースラインの７９．０２±５．７１％、６７．４２±３．２３％、および５９．５４±２．１１％であった。アイソタイプ対照抗体で処置したマウスでは、好中球数の著しい減少（Ｐ＜０．０１）が実証され、ｈＣ５ａを静脈内注射した１分後に６．７６±０．８１％、３分後に６．６８±０．８１％、および５分後に８．２９±０．７９％であった。抗Ｃ５ａ抗体は、ｈＣ５ａ誘導性好中球減少症に対して用量依存的な効果を示した。２４ｍｇ／ｋｇの最高用量で、抗Ｃ５ａ抗体によって好中球減少症が完全に遮断された。好中球数は、１分時点で７０．３５±８．６４％、３分時点で６３．３５±６．０８％、および５分時点で５９．６５±６．５１％であり、これは、同時点における偽処置した対照の動物の好中球レベルに匹敵した。これよりも低い用量である１２ｍｇ／ｋｇまたは６ｍｇ／ｋｇの抗Ｃ５ａ抗体によっても、ｈＣ５ａを投与した後、アイソタイプ対照抗体群（１分時点で６．７６±０．８１％、３分時点で６．６８±０．８１％、および５分時点で８．２９±０．７９％）と比較して、好中球の枯渇が有意に阻害された（１分時点で１２ｍｇ／ｋｇ：４２．６１±５．１２％、３分時点で４５．３３±８．２９％、および５分時点で４１．０２±７．０８％、Ｐ＜０．０１；１分時点で６ｍｇ／ｋｇ：１８．００±３．８、３分時点で２６．２０±４．４４％、および５分時点で２８．０３±４．５１％、Ｐ＜０．０５）。アイソタイプ対照抗体は炭疽保護性抗原６３に結合し、ヒトＩｇＧ２／４アイソタイプＦｃ領域を含有する抗体である。最低用量の抗Ｃ５ａ抗体（３ｍｇ／ｋｇ）を投与することにより、好中球減少症は有意に低下しなかった（１分時点で６．２８±０．８８％、３分時点で６．７１±２．１４％、および５分時点で８．７５±２．９８％、Ｐ＞０．０５）。図６を参照されたい。
【０４４６】
抗ヒトＣ５ａ抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてｈＣ５ａ誘導性ＭＰＯ放出を阻害する
上記の通り、ヒトＣ５ａは、マウスＣ５ａ受容体と交差反応的に結合することにより好中球を活性化する。ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）放出は、Ｃ５ａとＣ５ａＲが結合することによる好中球活性化の結果である。Ｄａｒｒｅｎら（２００４年）Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍ  ６５巻（４号）：８６８〜８７９頁を参照されたい。組換えヒトＣ５ａをマウスに静脈内注射することにより、好中球減少症を誘導し、循環中の好中球を活性化することができる。遊離の抗ヒトＣ５ａ抗体の、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて好中球活性化によってＭＰＯ放出を阻害する能力を、遊離のｈＣ５ａに結合させ、マウスＣ５ａＲとの結合を妨げるために抗Ｃ５ａ抗体を用いて評価した。
【０４４７】
ｉｎ  ｖｉｖｏ実験（ヒトＣ５ａをマウスに投与する）を上記の通り実施した。偽処置した対照群では時間０における血漿ＭＰＯのレベルは７９．２５±２２．８８ｎｇ／ｍＬであった。ビヒクル緩衝液を静脈内注射した５分後、ＭＰＯレベルは有意に変化しなかった（７７．４６±２１．２１ｎｇ／ｍＬ、Ｐ＞０．０５）。ｈＣ５ａを静脈内注射する前には、アイソタイプ対照抗体で処置した動物におけるＭＰＯレベル（７５．１７±１４．６６ｎｇ／ｍＬ）または抗Ｃ５ａ抗体で処置した動物におけるＭＰＯレベル（８７．５７±１４．８６ｎｇ／ｍＬ）は、偽処置した対照の動物において観察されたレベルと同程度であった。ｈＣ５ａを静脈内注射した後には、全てのＣ５ａの用量でＭＰＯレベルが上昇し、５分の時点で有意に高いレベルのままであった（図７）。
【０４４８】
アイソタイプ対照抗体で処置した動物（２２１．００±５１．０２ｎｇ／ｍＬ）と比較して、抗ｈＣ５ａ抗体で処置した動物は、ＭＰＯレベルの用量依存的な低下を示した（２４ｍｇ／ｋｇコホートにおいて１１４．８３±２３．２６ｎｇ／ｍＬ、Ｐ＜０．０５；１２ｍｇ／ｋｇコホートにおいて１０４．８０±２９．８３ｎｇ／ｍＬ、Ｐ＜０．０５；および６ｍｇ／ｋｇコホートにおいて１２６．９０±３６．４０ｎｇ／ｍＬ、Ｐ＝０．０８）。低用量（３ｍｇ／ｋｇ）抗Ｃ５ａ抗体で処置した動物のＭＰＯレベル（１７６．５５±２３．０５ｎｇ／ｍＬ）は、アイソタイプ対照抗体で処置した動物と有意に異ならなかった（Ｐ＞０．０５）。
【０４４９】
マウスにおいて、抗Ｃ５ａ抗体により、循環しているｈＣ５ａレベルが低下する
上記の通り、Ｃ５ａは、いくつかの生物学的機能を有する強力な炎症性ペプチドである。これら上記の試験により、組換えヒトＣ５ａを静脈内注射することにより、好中球減少症を誘導することができるので、ヒトＣ５ａが好中球上のマウスＣ５ａＲと交差反応することが実証された。本開示は、決していかなる特定の理論または作用機構によっても限定されるものではないが、抗Ｃ５ａ抗体は、ｈＣ５ａと複合体を形成し、ｈＣ５ａが細胞表面上で発現されるマウスＣ５ａＲに結合することを妨げることにより、ヒトＣ５ａ誘導性好中球減少症を阻害し得る。ｈＣ５ａを静脈内投与する前、およびｈＣ５ａを静脈内投与した１分後、３分後および５分後にマウスの血漿中のｈＣ５ａレベルを測定して、抗ｈＣ５ａ抗体のｉｎ  ｖｉｖｏにおける効果が、それがｈＣ５ａを結合依存的に阻害することに起因することを確認した。
【０４５０】
上記の通り、マウスのｈＣ５ａ誘導性好中球減少症モデルを用いて実験を実施した。時間０においてｈＣ５ａを投与する前には、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）を用いると、いずれのマウス群においても血漿においてｈＣ５ａは検出されなかった。しかし、ｈＣ５ａを静脈内注射した（アイソタイプ対照ｍＡｂで処置したマウスにおいて）後の血漿中のｈＣ５ａのレベルは１分におけるピーク（７７８３．５０±３２７．７３ｎｇ／ｍＬ）まで上昇し、その後、３分の時点で４７８８．３８±２６０．５１ｎｇ／ｍＬまで低下し、その後、５分の時点で３８５５．７５±２９８．９９ｎｇ／ｍＬまで低下した。対照抗体で処置したマウスと比較して、２４ｍｇ／ｋｇの抗Ｃ５ａ抗体で処置したマウスにおけるｈＣ５ａのレベルは、１分の時点（１７８．４±１４．１４ｎｇ／ｍＬ）、３分の時点（１５８．４±１０．４３ｎｇ／ｍＬ）、および５分の時点（１６７．２±１５．６１ｎｇ／ｍＬ）で、それぞれ４３分の１、３０分の１、および２３分の１の減退を示した。１２ｍｇ／ｋｇコホート由来の血漿中のｈＣ５ａのレベルおよび６ｍｇ／ｋｇコホート血漿中のｈＣ５ａのレベルは、それぞれ、１分の時点で２３５．００±２２．３３および６０９．２０±７８．７５ｎｇ／ｍＬ、３分の時点で２１０．８０±１９．５９および５２７．６０±５２．２５ｎｇ／ｍＬ、５分の時点で１９２．２０±７．４０および５０５．００±４５．９６ｎｇ／ｍＬであった。抗Ｃ５ａで処置したマウスが示したｈＣ５ａレベルは、ｈＣ５ａを静脈内注射したした後の好中球減少症の間に用量依存的に有意に低下した（Ｐ＜０．００１）。最低用量の抗Ｃ５ａ抗体（３ｍｇ／ｋｇ）を受けたマウスはｈＣ５ａ誘導性好中球減少症から免れなかったが、それにもかかわらず、そのマウスの血漿ｈＣ５ａは、アイソタイプ対照抗体で処置したマウスにおいて見いだされた血漿ｈＣ５ａレベルと比較して著しく低下した（１分の時点で３１３０．４０±４３３．５８ｎｇ／ｍＬ；３分の時点で１９３２．００±２６８．９２ｎｇ／ｍＬ；５分の時点で１５９３．００±１６９．６８ｎｇ／ｍＬ）（Ｐ＜０．０５）。図８を参照されたい。これらのデータにより、抗Ｃ５ａ抗体をマウスに投与することにより、血漿中の遊離のｈＣ５ａの濃度が有意に低下し、それにより、ｈＣ５ａ誘導性好中球減少症が著しく改善されることが示された。
【０４５１】
総合すると、本節に示されているこれらの結果により、本明細書に記載の抗ヒトＣ５ａ抗体により、ｉｎ  ｖｉｖｏの疾患の環境におけるヒトＣ５ａの生物学的効果が阻害され得ることが示され、抗体（およびその抗原結合性断片）が、とりわけ、本明細書において列挙されている任意の補体に関連する障害などの補体に関連する障害を治療または予防することにおいて有用であることの強力な証拠がもたらされる。
【０４５２】
（実施例１４）
抗ヒトＣ５ａ抗体は非ヒト霊長類由来のＣ５ａと交差反応する
いくつかのヒト化抗ｈＣ５ａ抗体を、それらの、１つまたは複数の非ヒト哺乳動物種由来のＣ５ａと交差反応する能力について試験した。上記の通り、そのような抗Ｃ５ａ抗体の利益は、例えば、研究者または医療実践者が、抗体をヒトに投与する前に、非ヒト疾患モデルにおいて治療的な抗Ｃ５ａ抗体の効力をモデリングすることができることなど数多くある。非ヒト哺乳動物において試験することにより、ヒトにおける効力のために必要な抗Ｃ５ａ抗体の適切な投与量を決定または概算することも可能になる。
【０４５３】
簡単に述べると、ＢＮＪ３６９、ＢＮＪ３６６、ＢＮＪ３６４、およびＢＮＪ３８３（上記）を評価して、それらが、ヒヒ、アカゲザル、およびカニクイザルを含めたいくつかの非ヒト霊長類由来の活性化された血清中のＣ５ａタンパク質を免疫共沈降させることができるかどうかを決定した。ザイモサンを加えることによって血清を活性化した。各抗体を、活性化された血清と一緒に一晩インキュベートした後、プロテインＡとコンジュゲートしたアガロースビーズを使用して抗体を液相から分離した。ビーズを徹底的に洗浄し、次いで、β−メルカプトエタノールを含有するドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）試料バッファー中で煮沸した。次いで、煮沸した試料をＳＤＳ−ＰＡＧＥに供した。市販の抗Ｃ５ａネオエピトープ抗体♯２９４２（Ａｂｃａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）を使用してウエスタンブロットによって非ヒト霊長類Ｃ５ａを検出した。試験した抗体のそれぞれが、ヒヒ、アカゲザル、およびカニクイザル由来のＣ５ａ（またはＣ５ａ  ｄｅｓａｒｇ）を免疫沈降させることができ、これは、抗体がこれらの種由来のＣ５ａならびにヒトＣ５ａと交差反応することを示している。
【０４５４】
カニクイザルＣ５ａに対する結合親和性パラメータの決定を、上記の通り決定した。簡単に述べると、ＢＮＪ３８３抗体を、３〜４濃度の組換えカニクイザルＣ５ａ（抗原）に対して、上記の通りキャプチャー法を用いてスクリーニングした。抗体をＣＭ５センサーチップ上に直接固定化した抗Ｆｃ（ヒト）によって捕捉し、０．６ｎＭ〜５．９ｎＭの範囲のさまざまな濃度のカニクイザルのＣ５ａを、センサーチップ表面を通過させた。各サイクル後に、表面を２０ｍＭのＨＣｌ、０．０２％の界面活性物質Ｐ２０（Ｂｉａｃｏｒｅ）を用いて再生させて、結合した抗体と抗原を除去した。データを、ＢｉａｃｏｒｅＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用し、１：１Ｌａｎｇｍｕｉｒ  Ｍｏｄｅｌ  Ｆｉｔ（Ｒｍａｘ：Ｇｌｏｂａｌ  Ｆｉｔ；ＲＩ：Ｌｏｃａｌ  Ｆｉｔ）を用いて評価した。これらの実験は、最小数のアナライト濃度（３〜４）を用いて１回の反復実験でスクリーニングするためのものであった。抗体のカニクイザルＣ５ａに対するおおよそのＫＤは３．３ｎＭである。表１０を参照されたい。
【０４５５】
【表１０】
0006022441.tif 000072
ＢＮＪ３８３抗体を、３〜４濃度の組換えマウスＣ５ａ（抗原）についても、上記の通りキャプチャー法を用いてスクリーニングして、マウスタンパク質に対する親和性を決定した。抗体を、上記の通り、ＣＭ５センサーチップ上に直接固定化した抗Ｆｃ（ヒト）によって捕捉し、０．６ｎＭ〜５．９ｎＭの範囲のさまざまな濃度のマウスＣ５ａを、センサーチップ表面を通過させた。表面を、各サイクル後に２０ｍＭのＨＣｌ、０．０２％のＰ２０を用いて再生させて、結合した抗体と抗原を除去した。データを、ＢｉａｃｏｒｅＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用し、１：１Ｌａｎｇｍｕｉｒ  Ｍｏｄｅｌ  Ｆｉｔ（Ｒｍａｘ：Ｇｌｏｂａｌ  Ｆｉｔ；ＲＩ：Ｌｏｃａｌ  Ｆｉｔ）を用いて評価した。
【０４５６】
上記結果により、本明細書に記載のヒト化抗ｈＣ５ａ抗体のいくつかが、カニクイザル、アカゲザル、およびヒヒを含めたいくつかの非ヒト霊長類種由来のＣ５ａと交差反応することが示された。ＢＮＪ３８３抗体は、例えば、マウスＣ５ａとも交差反応する。さらに、本節に記載の結果により、ＢＮＪ３８３などの抗ヒトＣ５ａ抗体が、補体関連障害を処置するための臨床的な適用においてのみならず、ヒトにおける臨床的な使用の認可に必要である、またはその裏付けとなる非ヒト哺乳動物における種々の前臨床的な適用のためにも有用であることが示されている。
【０４５７】
（実施例１５）
Ｃ５ａとの結合に対する競合
本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体であるＢＮＪ３８３の、潜在的に競合的な抗原の存在下での結合を評価するために実験を実施した。簡単に述べると、ルテニウム標識したＢＮＪ３８３（２５０ｐＭ）を１ｎＭのビオチン化Ｃ５ａと一緒に、さまざまな濃度（例えば、４００ｎＭ、１３３ｎＭ、４４．４ｎＭ、１４．８ｎＭ、４．９ｎＭ、１．６ｎＭ、および０．５ｎＭ）の（ａ）リン酸緩衝食塩水中ヒトＣ５ａ  ｄｅｓａｒｇタンパク質、（ｂ）ヒト血漿、（ｃ）カニクイザル血漿、（ｄ）Ｂａｌｂ／Ｃ（マウス）血漿、または（ｅ）ＤＢＡ／２Ｊ（マウス）血漿のうちの１つと一緒に、室温で２時間インキュベートした。血漿構成成分（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、および（ｅ）に関して、濃度とは、インキュベーション混合物中のＣ５抗原のおおよその最終濃度を指す。
【０４５８】
インキュベート期間の後、試料を、ストレプトアビジンでコーティングしたアッセイプレートの個々のウェルのそれぞれと、プレートのウェル中のビオチン化したＣ５ａとストレプトアビジンの結合が可能になる条件下で接触させた。ウェルを徹底的に洗浄して、結合していない材料を除去した。競合剤の存在下でのＢＮＪ３８３とＣ５ａの結合量を、検出可能なルテニウム標識から生じるシグナルの量を検出することによって決定した。結果が図９に示されている。
【０４５９】
ヒトＣ５ａ  ｄｅｓａｒｇは有効な競合剤であるが、マウス血清の存在下で実質的に競合は観察されなかった（Ｂａｌｂ／Ｃマウス血漿由来のＣ５対ビオチン化したヒトＣ５ａの比およそ４００：１で検出可能なシグナルの１７％の低下が観察され、ＤＢＡ２／Ｊ血漿由来のＣ５対ビオチン化したヒトＣ５ａの比およそ４００：１で検出可能なシグナルの２５％の低下が観察された）。ＢＮＪ３８３とビオチン化したヒトＣ５ａの結合のレベルには、ヒトまたはカニクイザルの血漿由来のＣ５対ビオチン化したヒトＣ５ａの比およそ１５：１に至るまで変化は観察されなかった。
【０４６０】
上記の通り、本開示は、決して任意の特定の理論または作用機構に限定されるものではないが、本発明者らは、抗Ｃ５ａ抗体は、試料（例えば、血漿試料）中の全長のＣ５の総集団の１０％未満で構成される切断されていないプロセシングされたＣ５（例えば、血漿Ｃ５）の亜集団に結合し得、その亜集団は、全体的にまたは部分的に抗Ｃ５ａ抗体または断片に結合する別の遮られたＣ５ａネオエピトープが露出するように変性していると仮定する。したがって、抗体は、完全に機能的なＣ５および／または完全に機能的なＣ５の種には結合せず、したがって切断されていないネイティブなＣ５と真には結合しないと考えられる。ヒト血漿は、ビオチン化したＣ５ａへの結合について、ヒトＣ５ａ  ｄｅｓａｒｇよりも少なくともおよそ３０〜１００分の１弱い競合剤である。
【０４６１】
これらの考察にもかかわらず、これらの結果は、ＢＮＪ３８３などの本明細書に記載の抗ヒトＣ５ａ抗体が、およそ２０倍に至るまでの過剰な、切断されていないが必ずしも完全にネイティブではない血漿由来のヒトＣ５タンパク質の存在下でさえも、遊離のヒトＣ５ａと優先的に結合することをさらに示している。
【０４６２】
（実施例１６）
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける抗Ｃ５ａ抗体のＡＰ活性およびＣＰ活性に対する効果
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体（ＢＮＪ３８３）の第二経路（ＡＰ）補体活性に対する効果を評価するために、プールされた通常のヒト血清（ＰＮＨＳ）を使用して実験を実施した。この実験では、Ｗｉｅｓｌａｂ（登録商標）Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｋｉｔ（Ｗｉｅｓｌａｂ（登録商標）ＣＯＭＰＬ  ＡＰ３３０、Ｅｕｒｏ−Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を利用し、十分に当業者の権限の範囲内である常套的な最適化のみを伴って、関連するプロトコールに従った。簡単に述べると、ＰＮＨＳの一定分量を、リポ多糖でコーティングしたプレートのウェル中で１時間（３７℃）、さまざまな濃度（０．７７８μＭ、０．３８９μＭ、０．１９４μＭ、０．０９７μＭ、０．０４９μＭ、０．０２４μＭ、０．０１２μＭ、０．００６μＭ、０．００３μＭ、および０．００２μＭ）の抗ｈＣ５抗体または抗ｈＣ５ａ抗体（ＢＮＪ３８３）と一緒にインキュベートした。抗Ｃ５抗体は、ヒトＣ５のＣ５ａ断片およびＣ５ｂ断片への切断を阻害する。陰性対照として、いくつかのウェルを、ＰＮＨＳと一緒に、同じ条件だが、抗ｈＣ５抗体または抗ｈＣ５ａ抗体の非存在下でインキュベートした。
【０４６３】
インキュベートした後、ウェルをキットに同梱されている１×洗浄緩衝液で徹底的に洗浄した。第二経路補体活性化のレベルを、各ウェルをキットに同梱されている酵素コンジュゲート（アルカリホスファターゼとコンジュゲートした抗Ｃ５ｂ−９抗体）および蛍光発生基質（酵素が作用する）と接触させ、室温で３０分インキュベートした後の４０５ｎｍにおける吸収によって測定した。結果が図１０に示されている。
【０４６４】
抗Ｃ５抗体は、０．１μＭを超える濃度で第二経路補体活性を完全に阻害したが、抗ｈＣ５ａ抗体は、試験した最高濃度においてさえも補体活性を有意に阻害しなかった。
【０４６５】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける本明細書に記載の抗Ｃ５ａ抗体（ＢＮＪ３８３）の古典経路（ＣＰ）補体活性に対する効果を評価するために、ＰＮＨＳを使用して実験を実施した。この実験では、Ｗｉｅｓｌａｂ（登録商標）Ｃｌａｓｓｉｃａｌ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｋｉｔ（Ｗｉｅｓｌａｂ（登録商標）ＣＯＭＰＬ  ＣＰ３１０、Ｅｕｒｏ−Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を利用し、十分に当業者の権限の範囲内である常套的な最適化のみを伴って、関連するプロトコールに従った。簡単に述べると、ＰＮＨＳの一定分量を、ヒトＩｇＭ抗体でコーティングしたプレートのウェル中で１時間（３７℃）、さまざまな濃度（７．２μＭ、３．６μＭ、１．８μＭ、０．９μＭ、０．４５μＭ、０．２μＭ、０．１μＭ、０．０５μＭ、０．０２μＭ、または０．０１μＭ）の抗ｈＣ５抗体または抗ｈＣ５ａ抗体（ＢＮＪ３８３）と一緒にインキュベートした。抗Ｃ５抗体は、ヒトＣ５のＣ５ａ断片およびＣ５ｂ断片への切断を阻害する。対照として、いくつかのウェルを、ＰＮＨＳと一緒に、同じ条件だが、抗ｈＣ５抗体または抗ｈＣ５ａ抗体の非存在下でインキュベートした。
【０４６６】
インキュベートした後、ウェルをキットに同梱されている１×洗浄緩衝液で徹底的に洗浄した。第二経路補体活性化のレベルを、各ウェルをキットに同梱されている酵素コンジュゲート（アルカリホスファターゼとコンジュゲートした抗Ｃ５ｂ−９抗体）および蛍光発生基質（酵素が作用する）と接触させ、室温で３０分インキュベートした後の４０５ｎｍにおける吸収によって測定した。結果が図１１に示されている。
【０４６７】
抗Ｃ５抗体は、０．１μＭを超える濃度で古典経路補体活性を完全に阻害したが、抗ｈＣ５ａ抗体は、試験した最高濃度においてさえも補体活性を有意に阻害しなかった。
【０４６８】
総合すると、これらの結果は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、抗ｈＣ５ａ抗体であるＢＮＪ３８３は、補体の古典経路または第二経路のいずれかによって駆動されるＣ５ｂ−９の生成（終末補体の活性化）に有意に影響を及ぼさないことを示しており、したがって、本明細書に記載の抗ｈＣ５ａ抗体が、補体活性化の遊離のＣ５ａアナフィラトキシンアームを特異的に標的とすることのさらなる証拠をもたらしている。
【０４６９】
（実施例１７）
抗Ｃ５ａ抗体は、モル過剰のｈＣ５の存在下でさえも、Ｃ５ａとの結合に利用可能な占有されていない抗原結合部位を保持する
抗Ｃ５ａ抗体ＢＮＪ３８３（上記）を、２．１倍のモル過剰のヒトＣ５（ｈＣ５）の存在下、４℃で８４時間インキュベートして、完全な抗体：Ｃ５複合体を形成させた。２：１のストイキオメトリーでヒトＣ５に結合する抗体（以下、抗Ｃ５抗体）を使用して平行実験を実施した。抗体：Ｃ５複合体を、Ｗａｔｅｒｓ（商標）Ｗ２４８７二重波長検出器を伴うＷａｔｅｒｓ（商標）２６９０／５  ＨＰＬＣシステムを用いたＴＳＫ（商標）Ｇ４０００  ＳＷ  サイズ排除カラム（Ｔｏｓｏｈ、Ｔｏｋｙｏ）で分離して、結合部位の占有率を決定した。２１４ｎｍ波長においてピークをモニターした。ＨＰＬＣ分析の移動相は、以下の緩衝液組成を含有した：３．９ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、６．１ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、および１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．０。流速は毎分１．０ｍｌであり、実行時間は２０分であった。データを獲得し、Ｗａｔｅｒｓ  Ｅｍｐｏｗｅｒ（商標）２クロマトグラフィーソフトウェアを用いて解析した。
【０４７０】
図１２に示されている通り、ＢＮＪ３８３単独（図１２Ａ）およびｈＣ５単独（図１２Ｂ）は、それぞれ、１０．２分付近に集中した単一のピークとして分離し、抗Ｃ５ａ抗体：ｈＣ５複合体の＞９５％は、９．２分付近に集中した単一のピークとして分離する（図１２Ｃ）。対照的に、ｈＣ５と抗Ｃ５抗体の複合体は、８．６分（３９％）および９．２分（６１％）に集中した２つのピークに分離する（図１２Ｄ）。したがって、モル過剰のｈＣ５の中でさえも、ＢＮＪ３８３の９５．２％が、ヒトＣ５ａに結合し得る遊離のＦａｂアームを有する。
【０４７１】
これらの試料をさらに検査して、ＢＮＪ３８３抗体が、飽和濃度のＣ５の存在下でＣ５ａに結合する能力を保持するかどうかを決定した。遊離の抗体または抗体：Ｃ５複合体を、ビオチンコンジュゲートしたｈＣ５ａを固定化した、ストレプトアビジンでコーティングしたプレートにおいて、５００ｎｇ／ｍＬから０．５ｎｇ／ｍＬまでで力価を決定した。捕捉された抗体を、西洋ワサビペルオキシダーゼとコンジュゲートした抗ヒトＦｃ抗体を用いて検出した。図１３に示されている結果は、ｈＣ５と複合体を形成したＢＮＪ３８３でさえも、Ｃ５ａに結合し得ること、およびＣ５ａの結合に利用可能な抗体の濃度は、飽和しているＣ５の存在下で検出可能に減らないことを実証している。したがって、本明細書に記載の結果は、抗体が、モル過剰の切断されていないＣ５の存在下でさえも、遊離のＣ５ａに高い親和性で結合する能力を保持し、それにより、モル過剰においてさえも、Ｃ５ａの炎症促進活性を阻害する能力を保持することを示している。
【０４７２】
（実施例１８）
ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、ＢＮＪ３８３は、Ｃ５ａの強力なアンタゴニストであるが、終末補体複合体の形成の不完全／部分的なアンタゴニストである
カニクイザルに、ＢＮＪ３８３抗Ｃ５ａ抗体を１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇまたは４００ｍｇ／ｋｇで静脈内に単回投与した。抗体を投与した１日後から３０日後までにわたる時点で血漿試料をマカクから採取した。血漿中のＣ５ａ／Ｃ５ａ  ｄｅｓａｒｇのレベルを、Ｃ５ａ／Ｃ５ａ  ｄｅｓａｒｇ上のネオエピトープに特異的な抗体でコーティングしたマイクロタイタープレートにおいて遊離のＣ５ａ／Ｃ５ａ  ｄｅｓａｒｇを捕捉し、ＥＣＬ部分を含有するルテニウム酸塩とコンジュゲートした非競合的なＣ５ａ抗体を用いて検出し、ＳＥＣＴＯＲ２４００（商標）プレートリーダー（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）で読み取る電気化学発光（ＥＣＬ）アッセイによって決定した。循環している抗体濃度を、ヒトＣ５ａ  ｄｅｓａｒｇでコーティングしたマイクロタイタープレートにおいて遊離の抗体（ＢＮＪ３８３）を捕捉し、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートしたマウス抗ヒト抗体を用いて検出する酵素連結免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定した。
【０４７３】
図１４に示されているように、実施例１３に記載の結果と同様に、カニクイザルにおいて、１０μｇ／ｍＬにすぎないＢＮＪ３８３の循環濃度で、血漿Ｃ５ａ／Ｃ５ａ  ｄｅｓａｒｇレベルが検出可能限界を下回るまで枯渇する。これらの結果によっても、抗体が、モル過剰の切断されていないＣ５の存在下でさえも、遊離のＣ５ａに高い親和性で結合する能力を保持し、それにより、モル過剰においてさえも、Ｃ５ａの炎症促進活性を阻害する能力を保持することが強調される。
【０４７４】
ＢＮＪ３８３が、マカク血清の溶血活性に対する効果を有するかどうかを決定するために、当該抗体をｉｎ  ｖｉｔｒｏ赤血球溶血アッセイにおいて評価した。
【０４７５】
赤血球溶血アッセイは、一般に、例えば、Ｒｉｎｄｅｒら（１９９５年）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ９６巻：１５６４〜１５７２頁において詳しく記載されている。簡単に述べると、ＢＮＪ３８３を投与された（上記の通り）マカクから得られた血清試料を、９６ウェルアッセイプレートの多数のウェルに、各ウェルの血清の濃度がおよそ１０％になるように加えた。血清試料は、それが得られた時点に基づいて、さまざまな濃度のＢＮＪ３８３抗体を含有した。ＢＮＪ３８３を受けていないマカク由来の血清の溶血活性は、陰性対照およびベースラインの溶血活性レベルとしての機能を果たした。
【０４７６】
ニワトリ赤血球（Ｌａｍｐｉｒｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐｉｐｅｒｖｉｌｌｅ、ＰＡ）を洗浄し、緩衝液に、１ｍＬ当たり細胞５×１０７個の最終濃度で再懸濁させた。細胞を抗ニワトリ赤血球ポリクローナル抗体組成物と一緒にインキュベートすることによって赤血球を感作して溶解させた。感作された赤血球を、９６ウェルプレートのウェルに加え、プレートを３７℃で３０分インキュベートした。ヘモグロビンの放出を、マイクロプレートリーダーを使用して４１５ｎｍにおける見かけの吸収によって測定した。
【０４７７】
図１５Ａに示されているように、ＢＮＪ３８３は高濃度であってさえ、これらのｅｘ  ｖｉｖｏ溶血アッセイ実験条件下で赤血球の溶血を実質的に阻害しなかった。
【０４７８】
ＢＮＪ３８３抗体を、マカク血清の補体活性化に対する効果を有するかどうかを決定するためにも、ｅｘ  ｖｉｖｏ  ＣＨ５０ｅｑアッセイを用いて評価した。ＣＨ５０ｅｑアッセイは、血清における古典的補体活性の全体を測定するための方法である。この試験は、補体の古典経路の活性化因子としてヒトガンマグロブリンおよびマウスモノクローナル抗体を使用し、生成された終末補体複合体（ＴＣＣ）を、ＴＣＣネオエピトープ特異的抗体でコーティングしたマイクロタイターウェルにおいて捕捉する酵素連結免疫吸着検定法である。捕捉されたＴＣＣは、西洋ワサビペルオキシダーゼとコンジュゲートしたヤギ抗ＴＣＣ抗体を用いて検出する。ＣＨ５０ｅｑアッセイにより、終末補体複合体（ＴＣＣ）形成の直接的な測定値がもたらされる。
【０４７９】
図１５Ｂに示されているように、マカク血清中に存在する高濃度のＢＮＪ３８３は、これらのｅｘ  ｖｉｖｏ条件下でＴＣＣの形成を実質的に阻害することができた。これらの結果は、ＢＮＪ３８３抗体が、遊離のＣ５ａに結合し、それを隔離することができるだけでなく、濃度に応じてＴＣＣの形成を部分的にまたは実質的に阻害することができることを示している。
【０４８０】
ＢＮＪ３８３の古典経路（ＣＰ）補体活性に対する効果を評価するために、上記のマカク血清試料を使用してｅｘ  ｖｉｖｏ実験も実施した。この実験では、Ｗｉｅｓｌａｂ（登録商標）Ｃｌａｓｓｉｃａｌ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ  Ｋｉｔ（Ｗｉｅｓｌａｂ（登録商標）ＣＯＭＰＬ  ＣＰ３１０、Ｅｕｒｏ−Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を利用し、十分に当業者の権限の範囲内である常套的な最適化のみを伴って、関連するプロトコールに従った。簡単に述べると、マカク血清試料の一定分量をヒトＩｇＭ抗体でコーティングしたプレートのウェル中で１時間インキュベートした。対照として、いくつかのウェルを同じ条件で、ＢＮＪ３８３抗体を投与されていないマカク由来の血清と一緒にインキュベートした。
【０４８１】
インキュベートした後、ウェルをキットに同梱されている１×洗浄緩衝液で徹底的に洗浄した。第二経路補体活性化のレベルを、各ウェルをキットに同梱されている酵素コンジュゲート（アルカリホスファターゼとコンジュゲートした抗Ｃ５ｂ−９抗体）および蛍光発生基質（酵素が作用する）と接触させ、室温で３０分インキュベートした後の４０５ｎｍにおける吸収によって測定した。結果が図１５Ｃに示されている。
【０４８２】
抗ｈＣ５ａ抗体は、補体活性を、完全にではないが有意に、用量依存的に阻害した。総合すると、本明細書に記載の結果は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、ＢＮＪ３８３がＣ５ａの強力なアンタゴニストであるだけでなく、終末補体複合体形成の不完全／部分的なアンタゴニストでもあることを示している。したがって、その性質を共有する１種または複数種の抗体は、Ｃ５ａに媒介される炎症が有害な病理学的影響の主要な一因であり、ＴＣＣが病態においてあまり重要でないまたは有益でさえある役割を果たす種々の補体関連障害を処置するために有用である。
【０４８３】
本開示は、その特定の実施形態を参照して記載されているが、当業者は、本開示の真の主旨および範囲から逸脱することなく、種々の変化を行うことができ、また等価物で代用することができることが理解されるべきである。さらに、特定の状況、材料、組成物、方法、方法の１つまたは複数のステップを本開示の目的、主旨および範囲に適合させるために多くの改変を行うことができる。そのような改変は全て、本開示の範囲内であるものとする。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【配列表】
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