(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
密封容器内の飲料製品において、
２．４から５．６のｐＨを有する飲料であって、
０．１から６ｐｐｍの量で存在するピマリシンと、
シクロデキストリンと、
を含む飲料、および
前記飲料中の成分に対して不活性であるヘッドスペース・ガスであって、その圧力が絶対圧で少なくとも２気圧である、ヘッドスペース・ガス、
を有してなり、
前記ヘッドスペース・ガス中に存在する酸素が８３００ｍｃｇ未満の量であり、
前記ピマリシンが前記シクロデキストリンと錯体を形成する、
ことを特徴とする飲料製品。
【請求項２】
前記シクロデキストリンが、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン、無作為にメチル化されたβ−シクロデキストリン、およびマルトシル／ジマルトシルβ−シクロデキストリンからなる群より選択される、請求項１記載の飲料製品。
【請求項３】
前記錯体におけるピマリシン対シクロデキストリンの比が１：１である、請求項１または２記載の飲料製品。
【請求項４】
前記ヘッドスペース・ガス中に存在する酸素が、５０００ｍｃｇ未満である、請求項１から３いずれか１項記載の飲料製品。
【請求項５】
前記ピマリシンが前記飲料中に０．１から５ｐｐｍの量で存在する、請求項１から４いずれ１項記載の飲料製品。
【請求項６】
前記ヘッドスペース・ガスが、二酸化炭素、窒素、アルゴン、酸化窒素、亜酸化窒素、二酸化硫黄、キセノン、ネオン、ヘリウムおよび一酸化炭素からなる群より選択される、請求項１から５いずれか１項記載の飲料製品。
【請求項７】
前記飲料が２．８から４．４のｐＨを有する、請求項１から６いずれか１項記載の飲料製品。
【請求項８】
前記飲料が炭酸飲料である、請求項１から７いずれか１項記載の飲料製品。
【請求項９】
前記飲料が、室温で貯蔵された場合、少なくとも１６週間の期間に亘り微生物により実質的に腐敗しない、請求項１から８いずれか１項記載の飲料製品。
【請求項１０】
密封容器内の飲料を製造する方法において、
ａ）２．４から５．６のｐＨを有し、シクロデキストリンおよびピマリシンの錯体を含む飲料であって、該ピマリシンが０．１から１ｐｐｍの量で存在する飲料を容器に加える工程、
ｂ）前記飲料中の成分に対して不活性であるヘッドスペース・ガスを十分に加えて、絶対値で少なくとも２気圧の圧力を提供する工程であって、該ヘッドスペース・ガス中に存在する酸素が８３００ｍｃｇ未満の量である工程、および
ｃ）前記容器を密封する工程、
を有してなる方法。
【請求項１１】
前記錯体におけるピマリシン対シクロデキストリンの比が１：１である、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
前記ヘッドスペース・ガス中に存在する酸素が、５０００ｍｃｇ未満である、請求項１０または１１記載の方法。
【請求項１３】
前記ピマリシンが前記飲料中に０．１から５ｐｐｍの量で存在する、請求項１０から１２いずれ１項記載の方法。
【請求項１４】
前記ヘッドスペース・ガスが、二酸化炭素、窒素、アルゴン、酸化窒素、亜酸化窒素、二酸化硫黄、キセノン、ネオン、ヘリウムおよび一酸化炭素からなる群より選択される、請求項１０から１３いずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
前記飲料が２．８から４．４のｐＨを有する、請求項１０から１４いずれか１項記載の方法。
【請求項１６】
前記飲料が炭酸飲料である、請求項１０から１５いずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【優先権】
【０００１】
本出願は、その出願がここに全て引用される、２０１３年１月３１日に出願された、米国仮特許出願第６１／７５８９８８号の優先権を主張するものである。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、飲料用保存料系およびその保存料系を含む飲料製品に関する。特に、本発明は、消費者からの健康的であり環境に優しい成分の要望を満たすのに適した配合を有する飲料用保存料系に関する。
【背景技術】
【０００３】
多くの食品および飲料製品は、腐敗性微生物（例えば、カビ、酵母、細菌）の増殖を阻害することによって、製品の保存寿命を延ばすために化学保存料を含んでいる。しかしながら、現在使用されている保存料のいくつかは、ヒトの健康にとっての有害物、環境にとっての脅威、または安定性が不十分であることのいずれかとして分類されている。したがって、これらの有害な保存料を含まないが、それでも延長された保存寿命を有する食品および飲料製品の需要が市場にある。
【０００４】
例えば、安息香酸とその塩が、保存料として飲料製品に通常使用されている。しかしながら、ビタミンＣおよび比較的高いｐＨを有するいくつかの飲料配合物において、安息香酸とその塩のほんの一部がベンゼンに転化する傾向にある（ｐｐｂの量）。熱と特定の波長の光によりこの反応の速度が増し、よって、安息香酸塩とアスコルビン酸が成分である場合、そのような飲料製品の製造と貯蔵に余計な注意を払う必要がある。飲料水中のベンゼンの摂取は、公衆衛生の懸念でもある。
【０００５】
エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）とその塩も、普通の飲料製品用保存料である。ＥＤＴＡは、金属イオンを封鎖し、いくつの化学反応でもそれらの参加に影響を与え得る。ＥＤＴＡは、高濃度では、細菌から必要な微量元素を欠乏させる働きをすることができる。ＥＤＴＡは、飲料中に典型的に見られるような比較的低濃度では、ソルビン酸および安息香酸などの少なくとも弱酸の保存料の活性を高める。しかしながら、ＥＤＴＡは、生分解性ではなく、従来の廃水処理中に除去されることもない。ＥＤＴＡは、その持続性と強い金属封鎖特性のために、主に環境上の懸念として浮上した。
【０００６】
ポリリン酸塩は、飲料製品用保存料として利用される別のタイプの金属イオン封鎖剤である。しかしながら、ポリリン酸塩は、水溶液中で安定ではなく、周囲温度で急激に分解する。ポリリン酸塩の分解により、酸度の変化などの、飲料製品における不満足な官能問題が生じる。また、飲料製品の保存寿命も、ポリリン酸塩の濃度が低下するにつれて、低下し得る。
【０００７】
有害な健康効果および／または環境効果を有する、または十分な安定性が欠如している保存料系の代用品として、飲料に使用するための新たな保存料系が必要とされている。そのような系は、改善された官能上の影響を提供すべきである。特許文献１は、飲料に使用するためのピマリシン−シクロデキストリン錯体を含有する飲料用保存料系を提供している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１０／０３２３０６５号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本出願の課題は、特に酸性飲料において、ピマリシンおよびピマリシン−シクロデキストリン錯体の安定性および官能特徴を改善することにある。さらに別の目的は、消費者の手頃な価格の選択肢を提供するために、低濃度でのピマリシンの有効性を改善することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明のある態様は、密封容器中の飲料製品に関する。特に、飲料は、０．１から１ｐｐｍの量のピマリシン、およびシクロデキストリン、並びに飲料中の成分に不活性のヘッドスペース・ガスを含み、このヘッドスペース・ガスの圧力は絶対圧で少なくとも２気圧である。この飲料は、２．４から５．６のｐＨを有し、ヘッドスペース・ガス中に存在する酸素は、８３００マイクログラム（「ｍｃｇ」）未満の量である。
【００１１】
密閉容器内で飲料を製造する方法。０．１から１ｐｐｍの量のピマリシン、およびシクロデキストリンを含み、２．４から５．６のｐＨを有する飲料が容器に加えられる。飲料中の成分に不活性であるヘッドスペース・ガスが十分に加えられて、絶対圧で少なくとも２気圧の圧力を提供し、ヘッドスペース・ガス中に存在する酸素は８３００ｍｃｇ未満の量であり、容器を密封する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】低Ｏ2濃度での腐敗性微生物の増殖を示すグラフ
【図２】β−シクロデキストリンがない場合の模擬飲料中のピマリシンの分解速度を示すグラフ
【図３】ＳＴＰでの錯体（モデル化）の存在する場合としない場合のＯ2含有量（ｐｐｂ）の関数としての時間の経過によるピマリシンの損失を示すグラフ
【図４】ピマリシンの分解速度と腐敗の開始を示すグラフ
【図５】飲料が３．７体積のＣＯ2からの圧力に曝された場合の等量のβ−シクロデキストリンの存在下でのピマリシンの分解を示すグラフ
【図６】ＣＯ2からの圧力の所定の存在下で、等量のシクロデキストリンの存在下での非常に低濃度のピマリシン（０．８ｐｐｍ）が、チゴサッカロミセス属(Zygosaccharomyces)およびブレッタノミセス属(Brettanomyces)の腐敗酵母による腐敗からの保護を与えることを示すグラフ
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明は、一般に、酸度の高い飲料における腐敗の原因である菌類に対するピマリシンの活性を低下させない様式で、酸素の分解効果に対する、食品等級の抗真菌薬であるピマリシンの安定化を提供する。本発明では、飲料からの酸素の排除を必要としない。実際に、炭酸飲料の酸素含有量は、典型的に、極めて高く、炭酸の入っていない飲料に見られる酸素のおよそ半分である。意外なことに、製品を保存するのに必要なピマリシンの量は０．５ｐｐｍ（５０ｐｐｂ）ほど少なく、これは、文献に報告されている、または様々な特許に開示されているよりも少なくとも一桁少ない。
【００１４】
本発明は、酸素以外の気体、酸素以外の気体により生じる圧力、およびシクロデキストリンのピマリシンとの錯体の間の相互作用にある。理論により拘束されることを望むものではないが、本発明は、ピマリシン中の原子間の一般に反応性である化学結合が酸素に利用できなくされるような、シクロデキストリン分子のコア内のピマリシンの圧力誘起位置決めを反映しているであろう。様々な研究において実証されるように、本発明は、飲料中の酸素濃度の低減に依存していない。実際に、手持ちの証拠は、シクロデキストリンとの錯体として水性懸濁液中のピマリシンの一般的な安定性は、１６週間の保存寿命の観点からすれば、ピマリシン単独よりもわずかしか改善されていないことを示している。液体からの酸素の低減または除去に依存しないが、本発明は、達成できる飲料中の酸素含有量のどのような低減からもまだ恩恵を受けるであろう。
【００１５】
本発明は、液体およびその液体と接触する気体の相互作用に影響する物理化学との関連で理解することができる。大気と界面を共有する水または任意の水相（９５％超の水）飲料は、大気中に存在するある量の気体を含有する。空気は、７８．０８％の窒素（Ｎ2）、２０．９５％の酸素（Ｏ2）、０．９３％のアルゴンおよびより少量のＣＯ2、ヘリウム、クリプトン、および水素からなる。Ｎ2とＯ2は、空気中に見つかる全気体の９９．０４％を占める。溶液中に入る各種の気体の量は、ヘンリー定数（ＫH）として知られる値の知識とヘンリーの法則を使用することにより、容易に決定される。ヘンリーの法則は、一定温度で、所定のタイプと体積の液体中に溶解した気体の量は、液体と平衡状態にあるその気体の分圧に正比例すると述べている。この関係は、以下のように数学的に表すことができる。
【００１６】
【数１】
0006027271.tif 000002
【００１７】
この方程式は、水相中の気体成分Ｘの濃度は、気体のヘンリー定数と、液体と平衡状態にあるその気体の分圧との積と等しいことを意味すると解釈される。値ｐxは、気体として問題の分子により生じる圧力である。１気圧では、Ｎ2の分圧は０．７８であり、Ｏ2の分圧は０．２０９５である。ヘンリー定数は、公知であり、様々な文献から容易に入手できる。その定数を表現できる形態は様々である。［モル気体／Ｌ＊気圧］と表される場合、２５℃の水中では、Ｎ2のＫHの値は６．４８×１０-4であり、Ｏ2では１．２８×１０-3である。これらの値は、ｐＨ、溶質の存在、および温度の関数としてわずかに変動する。同一圧力で存在する場合、ＫHの値は、窒素が、モル当たりのモルの基準で、水中にそれほど可溶性ではないことを示す。Ｏ2とＮ2に関する分子量の差（それぞれ、３１．９９８８対２８．０１３４）は、リットル当たりのモルの値がリットル当たりのグラムに変換された場合にその差を強調する働きをする。液体中の気体の濃度は、様々な様式で表すことができる。ここでは、１０億分率（ｐｐｂ）を使用するものとする（マイクログラム／ｌ、ｍｃｇ／ｌ、ｐｐｂ）。
【００１８】
少量の水蒸気が、液体の水と接触する気相を占める。気相が２５℃の空気である場合、Ｎ2とＯ2の分圧は、それぞれ、０．７５６６気圧と０．２０３気圧である。ヘンリー定数に適切な値を用いると、水中のＮ2の濃度は１，３７２．８４ｐｐｂであり、水中のＯ2の濃度は８，３２０ｐｐｂであると推測できる。これらの計算値を分析方法で確認することも可能である。
【００１９】
高度と天候パターンに応じて、大気は約１気圧の圧力を生じ、これは、平方インチ当たり１４．７ポンド（ｐｓｉ）（約１０１．４ｋＰａ）と同じである。飲料などの液体が、気体を除去（脱気）するためのプロセスを受ける、または加圧下の気体が注入されることがない限り、容器に密封される際の飲料の気体含有量は、液体が大気に開放されたままになっている場合と違いはない。液体は、先に計算したような、約８，３００ｐｐｂの同様の量のＯ2ガスを含有する。
【００２０】
また、容器への蓋の適用では、一般に、容器を縁まで満たせないことが必要である。液体が占めない空間は、ある量の気体により占められる。一般に、液体が占めない体積は、「ヘッドスペース」と称される。ヘッドスペースが空気以外の気体でフラッシングまたは掃引されない場合、ヘッドスペース内の雰囲気は空気である。２５℃の液体が、充填と容器への密封の時点で空気と平衡状態にある場合、容器のヘッドスペース領域内の空気は、ゼロより高いゲージ圧の示度を生じない。容器内の気体の圧力（絶対圧）は容器の外部の圧力と同じであり、圧力計は、一般に、圧力が絶対圧を超えた場合のみ、示度（ゲージ圧）を与える。
【００２１】
一般に理解されるように、水相飲料は「炭酸」であっても差し支えない。炭酸化は、二酸化炭素が水中に溶解させられる過程である。溶液中に入ることのできる二酸化炭素の量は、空気中に含まれる気体と同じ様式でヘンリーの法則により決定される。ＣＯ2のヘンリー定数は約３．４×１０-2（モル／Ｌ＊気圧）である。同一の分圧を考えると、ＣＯ2は、Ｏ2よりも２６倍可溶性である。特殊設計の容器を利用すると、水に所定の体積のＣＯ2が充填されるような、ほぼ純粋な加圧ＣＯ2の雰囲気に水を曝露することが可能である。科学文献が、液体１リットル当たりの液体のミリリットルを単位として気体の液体による吸収を報告することは一般的なことである。１気圧のＣＯ2の気相と密接に接触している１５．５℃（６０°Ｆ）の１リットルの水は、正確に１ミリリットルのＣＯ2を吸収する。ＣＯ2は１５．５°で１．９６ｇ／ｍｌの密度を有するので、１５．５℃では、水と密接に接触した１気圧のＣＯ2は、１リットル当たり１．９６ｇのＣＯ2濃度を生じることも事実である。気体の圧力は１気圧であるので、気密に密封された容器内に閉じ込められたそのような液体は、０ｐｓｉのゲージ圧（絶対圧で１気圧）を示す。
【００２２】
基本的な気体の法則は、液体と気体の体積および温度が一定に保持された場合、気相中の気体の倍化により、気体の圧力の倍化が生じることを決定する。２気圧（ゲージ圧で１４．７ｐｓｉ（約１０１．４ｋＰａ））で存在するＣＯ2に曝露された１５．５℃（６０°Ｆ）の１リットルの水は、２体積のＣＯ2または２×１．９６グラムのＣＯ2を吸収する。そのような過程により、炭酸飲料が配合される。飲料中の典型的なＣＯ2体積は、２から４．５体積のＣＯ2に及ぶ。典型的に、製品への二酸化炭素（ＣＯ2）の添加（炭酸化）は、飲料の流れを加圧容器の容積内で加圧された気相ＣＯ2に曝露させることによって行われる。
【００２３】
炭酸化の作用は、他の気体を水から除去する働きをしない。水から測定可能な量の酸素を除去するために、水は、脱気として知られるプロセスを受ける必要がある。飲料の製造に利用される水は、脱気を受けていてもいなくてもよい。さらに、脱気の程度または度合いは、製品の部類により様々である。ビールの製造業者は、一般に、パッケージ内のビールの酸素含有量が０．２ｐｐｍ（２００ｐｐｂ）未満となるような非常に強力な脱気プロセスを利用する。炭酸飲料の製造業者は、それほど厳しくはない脱気プロセスを利用する。典型的に、成分または配合飲料は、揮発性香料成分の除去を避けるために、どのようなタイプの脱気も受けない。炭酸飲料を容器に充填する際に、少量のＣＯ2が飲料から失われ、ヘッドスペース領域に入る。その結果、ヘッドスペースを占めていた空気の全てではなくともいくらかが、置き換わる。店舗の棚からの製品の調査データは、缶詰された炭酸飲料の酸素含有量は、５００から４５００ｐｐｂ超に及び得、平均は１２００ｐｐｂに非常に近いことを示している。ガラス中にパッケージされた製品は、様々な製造会社および製造場所からの製品の調査において、７５０〜４５００ｐｐｂに及ぶ高濃度のＯ2の傾向がある。ＰＥＴ容器内の製品は、約１０００〜１５００ｐｐｂのＯ2の初期Ｏ2濃度を含有する。時間の経過により、その濃度は２，５００から３，０００ｐｐｂに増加する。このことは、ＰＥＴがＯ2透過性であること、およびある期間に亘り、Ｏ2濃度が容器に入って大気との平衡（約８３００ｐｐｂ）を達成する傾向にあることを反映している。炭酸飲料中の初期Ｏ2濃度は、数多くの現象を反映している。先に述べたように、生産に利用される水は、一般に、脱気方法により処理される。水は、典型的に、濃縮物と様々な比率で混合される。典型的に、濃縮物は、脱気を受けず、測定可能な量の酸素を含有する。また、充填直後に、ヘッドスペース内のＣＯ2の量は、ある量の空気を置き換える働きをする。
【００２４】
炭酸飲料が測定可能な量の酸素を含有するという事実は、様々な微生物による腐敗に対する安定性に関する２つの重要な理由に関連がある。第一に、ある量の酸素が微生物に利用でき、微生物が発酵または無気呼吸などのそれほど効率的ではないエネルギー収集代謝経路を利用する必要をなくす。代謝経路により収集されるエネルギーは、成長と再生に必要な複雑な分子の組立てに利用される。前記文献における報告は、炭酸飲料を腐敗させることのできるタイプの微生物は、一般に、Ｏ2含有量の制限によって、製品を腐敗させる能力が限定されないことを示している。このことは、少なくとも、初期酸素濃度が２００ｐｐｂを超えている場合に当てはまる。この研究について生成されたデータは、この点を裏付ける働きをする（背景の実施例１、図１）。先に述べたように、ビールを含む大半の炭酸製品は、１０００ｐｐｂを超える初期Ｏ2を有する。第二に、１０００ｐｐｂを超える量の酸素は、空気に開かれて暴露された未処理水中に存在するであろう酸素の量（８，３５０ｐｐｂ）の比較的大きい割合である。
【００２５】
腐敗性微生物の成長に関するＯ2の滋養分に加え、Ｏ2は、反応に酸素の消費を必要としない機構により化合物を分解する作用をできることも本当である。そのような反応は、活性酸素種（ＲＯＳ）の形成の結果であり、このとき、酸素は、ＲＥＤＯＸタイプの反応において電子の移動における中間体として働き、これらの反応により、ピマリシンなどのより複雑な分子が分解されることになる。この点に関して、Ｏ2は触媒と同様に挙動する。触媒を含む多くの反応と同様に、そのような反応を促進するのに必要な酸素の量は、非常に少ない。この点に関して、酸素圧の様々な条件下で溶液中のピマリシンの安定性を評価することは興味深い。明らかに、ピマリシンとβ−シクロデキストリンとの間の錯体の形成が、酸素との反応による分解からピマリシンを安定化させる働きをするか否かを確立することも興味深い。背景実施例２、図２は、溶液中のピマリシンの分解速度を確立することがどのように可能であるかを示している。手短に言えば、ピマリシンは、３つの別個の吸収極大を有する非常に特色のあるＵＶ−可視スペクトルを生じる。ピマリシンが分解するにつれて、ピーク高さが消滅する。分解は、どの単一のピーク極大の消滅しているピーク高さにより、または相対的なピーク高さの変化により、追跡することができる。
【００２６】
ピマリシンの濃度の変化を監視する方法を前提として、ピマリシンが、溶液の初期酸素圧などの変量の関数として異なって分解するか否かを確立することも可能である。背景実施例３、図３は、初期酸素圧およびピマリシンとβ（ベータ）シクロデキストリンとの間の錯体の存在または不在の関数として、数ヶ月の期間に亘るピマリシンの分解の結果を捉えている。この点で、ピマリシンが錯体を形成していないとき、かつ８５００ｐｐｂを超える酸素を含有する水中に存在するときに、ピマリシンは極めて急激に分解するようである。酸素濃度を３５００ｐｐｂに低下させても、分解速度には計れる程度に影響しない。８５００ｐｐｂのＯ2の存在下でピマリシンがβ（ベータ）シクロデキストリンと錯体を形成している場合、分解は遅くなるが、防げない。
【００２７】
ピマリシン（ナタマイシン）は、測定可能なほど酸化しやすい抗真菌薬であるのが明らかである。ピマリシンの分解により、抗真菌活性が失われる。ピマリシンを微生物の懸濁液に添加すると、全ての生菌が瞬間的に抹殺されると推測することは不正確であろう。同様に、全ての微生物が、ほんの数時間または数日間ピマリシンに暴露された後に、破壊されるか、または別の様式で成長を阻害されると推測することは不正確である。この目的のために、最小阻止濃度（ＭＩＣ）または最小致死濃度（ＭＬＣ）などの測定値がいくぶん誤解を招き得ることに留意する必要がある。技術的に、ＭＬＣは、個体群またはサンプル中の微生物の必ずしも全てではないがいくらかの死をもたらす最小濃度である。同様に、ＭＩＣは、個体群における微生物の全てではないが大半で発育速度を低下させる働きをする物質の濃度である。時間が経過すると、個体群中の平均的な微生物よりも耐性である微生物が、正常に近い速度で成長し続けることができる。重要なことだが、抗真菌薬の初期濃度が、実際に、個体群全体にとって阻害するものであった場合、抗真菌薬の分解により、一部の微生物が成長を再開できるような有効濃度の低下を生じる可能性がある。
【００２８】
実際に、これは、炭酸飲料を腐敗させることのできる微生物が、異なる初期濃度のピマリシンを有する飲料中に存在させられた場合に発見された結果である。実施例２の表１は、ある濃度のピマリシンを有する炭酸飲料中に腐敗酵母を接種した研究の開始から数週間後に、腐敗が生じることを示すデータを提供する。
【００２９】
時間の経過による腐敗の開始は、ピマリシンの初期濃度の表れである。その表は、比較的長期間に亘る比較的遅い腐敗の開始を強調しているが、これはまだ、保存寿命の期待の観点から許容できない。重要なことには、２５ｐｐｍのピマリシンを含有したサンプルのみが、保存寿命の期間に亘り腐敗がないままである。
【００３０】
溶液中のピマリシンの安定性についての分析データがない状況で、時間の経過による製品の安定性についてのデータの解釈は、２つの様式の一方で解釈できる。ピマリシンの分解が起こらず、存在するピマリシンの量に耐性があったいくつかの微生物の増殖のために、製品が腐敗したか、もしくは腐敗は、ある臨界濃度より低くピマリシンが分解した結果として微生物が生存し、次いで、増殖した結果として生じたかのいずれかである。後者の説得力のある主張が、背景の実施例４、図４に提示されている。ここでは、ピマリシンの分解が、最初に１３ｐｐｍおよび２５ｐｐｍを含有したサンプルにおける腐敗の既成の発生と並行して、１３ｐｐｍおよび２５ｐｐｍの初期濃度から追跡されている。２５ｐｐｍのピマリシンを含有する製品は、評価されたサンプルの中でいずれも腐敗を被らず、１３ｐｐｍの初期濃度のピマリシンを含有するサンプルは、腐敗の発生が３３％であったが、それは接種から８０日後になってからであったことを思い起こす必要がある。腐敗の進行の時間と、１３ｐｐｍのピマリシンに関する分解プロットとの間の交差は、ピマリシン濃度が１．５〜２ｐｐｍ未満に低下したときに、腐敗が結果として起きることを示す。最初に２５ｐｐｍを含有したサンプル中のピマリシンの濃度が、期待されている保存寿命の過程中にその１．５〜２ｐｐｍの範囲より低く低下せず、したがって、腐敗が生じないことは意外ではない。特に、この試験は、３．６体積のＣＯ2を含有する炭酸飲料において行った。製品は、２０００ｐｐｂを超えるＯ2を含有している。
【００３１】
これらの結果は、２つの理由のために関連性がある。第一に、ピマリシンの濃度を２〜３ｐｐｍに維持することが可能であれば、製品は、その製品に要求される保存寿命と等しい期間に亘り炭酸飲料を腐敗させる傾向にあるタイプの酵母微生物による腐敗から保護できるであろう。これらの結果は、概して意外であり、当業者により、一般に予測されないであろう。一般に、炭酸飲料を腐敗させることのできるタイプの酵母の報告されたＭＩＣ値は、少なくとも＞＞１０ｐｐｍの範囲にある。他の関連点は、ピマリシンを有する製品を保存するどの機会も、最初に２５ｐｐｍものピマリシンの添加に依存するように思われることである。このことは、２５ｐｐｍのピマリシンは、一般に、桁違いの費用がかかり、より重要なことには、規制当局により許可されるであろう値を超えているという点で問題である。規制当局は、大抵、物質が導入される幅広い製品の全てに亘り消費できる物質の総量に制限を与える。ピマリシンについては、一日摂取許容量（ＡＤＩ）は、体重１ｋｇ当たり約０．３ｍｇである。ピマリシンのＡＤＩの非常に多くの割合は、肉製品とチーズ製品の摂取により生じる。規制当局は、成分の初期濃度に基づいてＡＤＩを評価するので、時間経過によるピマリシンの分解には許容量はない。飲料中のピマリシンの制限は、１０ｐｐｍ以下となり、５ｐｐｍほど低いこともあると予測される。
【００３２】
結局、初期濃度が、６ｐｐｍ未満であり、少なくとも２ｐｐｍの濃度で保存寿命（１２０日間）と同等の期間に亘り維持できなければ、ピマリシンを飲料中の保存料として利用することはできない。手元の結果は、炭酸化されていない水性飲料と比べて測定可能に減少したＯ2濃度にもかかわらず、ピマリシンは、炭酸飲料中で十分には安定ではないことを示している。さらに、β−シクロデキストリンと錯体を形成しているピマリシンは、分解から測定可能に保護されていない。β−シクロデキストリンと錯体を形成しているピマリシンは、β−シクロデキストリンの不在下でピマリシンが分解する速度の約６０％の速度で分解する。改善はしているけれども、飲料中のピマリシンの初期濃度は、製品の安定性を補償するためには、１７ｐｐｍと２０ｐｐｍの間である必要がまだあるであろう。
【００３３】
それゆえ、酸素以外のヘッドスペース・ガスからの圧力下にある溶液中にあるときに、β−シクロデキストリンと錯体を形成しているピマリシンが、測定可能に安定であると立証されることを発見することは、予期されず、意外なことである。０．１から５ｐｐｍほど少ないピマリシンの初期濃度で、製品を保存できることも、同様に、意外であり、予期されないことである。０．５ｐｐｍと１ｐｐｍの間の濃度のピマリシンで、製品を保存できることを発見したことは特に意外である。何故ならば、たった１種類の他の物質（ナイシン）しか、そのような濃度で測定可能に生物静力学的(biostatic)であることが知られていないからである。圧力がどのように効能を誘起する働きをするかについて推測することしかできない。同様に、ヘッドスペース・ガスからの圧力がどのように、ピマリシンの分解速度を変える様式でβ−シクロデキストリンと共同して作用できるかは不明である。理論により拘束されることは望まないが、圧力が、シクロデキストリンのコアにより拘束されるピマリシンの部分を、１つ以上の二重結合を圧力勾配がない場合よりも到達できにくくする位置に強いる働きをすることが可能である。
【００３４】
β−シクロデキストリンとの錯体であるピマリシンの分解のパターンは、３．７体積のＣＯ2により生じる圧力（６０°Ｆ（約１６℃）で３２ｐｓｉ（約２２０ｋＰａ））に曝露される溶液中に存在する場合、β−シクロデキストリンを含まないピマリシンに関する分解のパターンとは非常に異なる。何よりもまず、ピーク最大値の相対高さが、時間の経過で維持される。第二に、分解速度は２モードであるようである（背景の実施例５、図５）。全体で、ピマリシンの化学構造は、試験の時間枠中ずっと概して維持され、このことは、０．８ｐｐｍの信じられないくらい低いと認識されている濃度でＭＩＣを示すピマリシンの能力における非常に重要な要因であることは極めて可能性がある。分解の２モードのパターンは、β−シクロデキストリンを含まないピマリシンが、β−シクロデキストリンと結合したピマリシンと異なる速度で分解するという事実を反映すると思われる。実際に、２０ｐｐｍ未満の濃度では、極わずかなピマリシンしか、β−シクロデキストリンと結合されないであろう。ヘッドスペース・ガスからの圧力は、実際に、錯体の形成を誘起するであろう（推量として、たぶん３７％ほど多くのピマリシンが結合している）と思われる。
【００３５】
要約すれば、ピマリシンの酸化の程度と、抗真菌活性の損失との間には、強い相関関係が存在すると理解される。ピマリシンは、二段階プロセスにより酸化に対して安定化できる。ピマリシンの生物活性は、保存されるだけでなく、この二段階プロセスのために、もしかすると向上するかもしれない。
【００３６】
そのプロセスの第一段階において、ピマリシンはβ−シクロデキストリンと錯体を形成させられる。結果として形成された錯体は、包接錯体と知られるタイプである；一成分（宿主）がキャビティを形成し、第二の分子（ゲスト）が、共有結合がない状態でその中に入り込むことができる。錯体の形成により、ピマリシンは、４００ｐｐｍを超える濃度で水溶液中に存在できる。このことは、瓶入り飲み物の調製のために製品をバッチ配合する場合に重要な特徴である。一般に、バッチ配合のための調製における成分は、最終製品中に存在する濃度の少なくとも５倍大きい濃度で存在する必要がある。これは、それらの成分がある濃度で調製され、次いで、濃縮物の４または５倍の希釈となる様式で、水と混ぜ合わされるからである。
【００３７】
２０ｐｐｍ未満のピマリシンの濃度となる希釈により、全てのピマリシンがβ−シクロデキストリンを含まなくなる。しかしながら、今までの証拠は、＜＜２５ｐｐｍであるピマリシンを含有する溶液に施すと、ピマリシンがβ−シクロデキストリンとの錯体に戻るように強いられることを示している。錯体中のピマリシンの量は、ピマリシンが２５ｐｐｍを超える場合の錯体中に存在するよりも、数分の一である。しかしながら、シクロデキストリンと結合したピマリシンは、分解から測定可能に安定である。酸素は、通常、少なくとも２５００ｐｐｂの濃度で飲料中に存在し、５５００ｐｐｂほど高いこともあり得る。分解は起こるが、β−シクロデキストリンの不在下で生じる速度と比べて減少した速度でである。
【００３８】
ピマリシンとβ−シクロデキストリンとの間の配置の性質を認識することは重要である。β−シクロデキストリンの作用は、ピマリシンを「可溶化」することではない。むしろ、β−シクロデキストリンは、ゲスト分子であるピマリシンに対する宿主分子として働く。結果として生じた錯体は、包接錯体として知られるタイプである；一成分（宿主）がキャビティを形成し、第二の分子（ゲスト）が、共有結合がない状態でその中に入り込むことができる。結果として生じた錯体は、包接錯体として知られるタイプである。そのゲスト分子は、都合よいファンデルワールスの相互作用のために、宿主により与えられた空間中に優先的に存在する。クラスレートとして知られる配置とは異なり、ゲスト分子は完全には取り囲まれいないが、その代わりに、ドーナッツ状の穴内に存在する。用語の生化学的な意味において、より小さいゲスト分子は「リガンド」と称されることもある。典型的に、包接の形成は、ゲスト分子の濃度が溶解度の通常限界を超えた場合にだけ起こる。ピマリシンの場合、溶解度の通常限界は、２５℃の温度で酸性ｐＨの飲料において、２０〜２５ｐｐｍの範囲にある。しかしながら、ヘッドスペース・ガスからの圧力の影響下では、ピマリシンの濃度が２０ｐｐｍ未満の場合でさえ、ピマリシンはβ−シクロデキストリンとの錯体を形成するように誘発される。シクロデキストリンとの錯体に入るピマリシンの割合は、ピマリシンに関するシクロデキストリンの結合定数と比べて実際に極めて低いが、結合するピマリシンの量は、炭酸飲料を保存する目的にとって十分である。
【００３９】
本発明において、ゲストリガンドはピマリシン（ナタマイシン）であり、宿主分子はβ−シクロデキストリンである。ピマリシンは、典型的にβ−シクロデキストリンと錯体を形成する多くのリガンドと比べて、測定可能に大きい分子であることに留意する必要がある。その結果、ピマリシンの全体が、シクロデキストリンにより形成されるキャビティ内に存在することは可能ではない。このことは、ピマリシン分子のサイズに対するキャビティの寸法を評価することによって直ぐに確認される。その結果、その分子の一部は、シクロデキストリンの環構造により形成される水平線の上に突き出る。標準大気温度および圧力の条件（２５℃および１気圧）下で、ピマリシンのβ−シクロデキストリンとの包接錯体により、β−シクロデキストリンの不在下で達成できる濃度より明らかに大きい濃度のピマリシンが、水溶液系中に存在することが可能になる。β−シクロデキストリンの不在下では、水溶液中のピマリシンの溶解限界は、約２０〜２５ｍｇ／ｌである。β−シクロデキストリンと錯体を形成した場合、４００ｍｇ／ｌを達成することが可能である。
【００４０】
２．４から５．６の範囲のｐＨを有し、密封容器内に収容され、ヘッドスペース・ガスと直接接触している水溶液飲料であって、溶液中のピマリシンの濃度は５ｐｐｍ以下である飲料。ピマリシンが１ｐｐｍの濃度で存在することが可能である。０．５ｐｐｍの濃度は、それほど好ましくないが、許容できる。ピマリシンとβ−シクロデキストリンの少なくとも１：１の比率を与える量のβ−シクロデキストリンも、存在する必要がある。この比率により、十分な量のピマリシンが１２０日間の期間に亘り保存されるように、十分な量の錯体が形成することができる。ピマリシンの総濃度が２０〜２５ｐｐｍより少ない場合、ピマリシンの一部のみが、β−シクロデキストリンと錯体のままである。その割合は、飲料の液体部分に印加される圧力の表れである。
【００４１】
密封容器内に収容され、ヘッドスペース・ガスと直接接触している水溶液飲料。最終的に、液体中に吸収された気体と、ヘッドスペース中に存在する気体との間で、（時間）平衡が達成される。平衡が達成される際に、液体中とヘッドスペース中に存在する気体の一部は、酸素である。本発明に必然的に、酸素の量は８３００ｍｃｇ未満でなければならない。酸素の量が５０００ｍｃｇ以下であることが優先的である。５００ｍｃｇ未満の酸素含有量が明らかに優先的である。ヘッドスペース内の酸素の総量は、濃度（ｐｐｂ）の単位、または量（マイクログラム）の単位のいずれの単位で表されても差し支えない。ｍｃｇが、ここと、特許請求の範囲で使用されている。何故ならば、ヘッドスペースは、全てのタイプの飲料について一定ではなく、それゆえ、飲料のタイプが公知ではない限り、ｍｃｇがややより正確である。例えば、背景の実施例３では、飲料が公知であり、それゆえ、ｐｐｂは正確である。
【００４２】
酸素は、いくつかの様式で飲料から除去することができる。酸素以外の気体を液体中にに拡散することができ、これにより、液体上の気相に、拡散に利用されたのと同じ気体が充填される限り、溶液からＯ2が置き換えられる。例えば、Ｎ2拡散を利用して、溶液からＯ2を置き換えることが可能であるが、液体の上面の空間は、Ｎ2ガスの流れによって、飲料から放出されたＯ2を掃去する必要がある。
【００４３】
密閉容器中に収容され、ヘッドスペース・ガスと直接接触している水溶液飲料。ヘッドスペース・ガスは、絶対圧で少なくとも３気圧（ゲージ圧で２気圧（絶対圧で４４．０８ｐｓｉ（約３０３．９ｋＰａ）またはゲージ圧で２９．３９ｐｓｉ（約２０２．７ｋＰａ）））と等しい圧力が飲料に印加される量で存在する必要がある。製品の安定性以外の理由のために、気体の圧力は、必要なだけ大きくて差し支えない。例えば、多くの炭酸飲料は、４．５から４．７のＣＯ2体積を有し、これにより、６０℃で４４ｐｓｉ（約３０３．４ｋＰａ）の圧力が生じる。
【００４４】
密封容器内に収容され、ヘッドスペース・ガスと直接接触している水溶液飲料。ヘッドスペース・ガスは、絶対圧で少なくとも３気圧（ゲージ圧で２気圧（絶対圧で４４．０８ｐｓｉ（約３０３．９ｋＰａ）またはゲージ圧で２９．３９ｐｓｉ（約２０２．７ｋＰａ）））と等しい圧力が飲料に印加される量で存在する必要がある。製品の安定性以外の理由のために、気体の圧力は、必要なだけ大きくても差し支えない。例えば、多くの炭酸飲料は、４．５から４．７のＣＯ2体積を有し、これにより、６０℃で４４ｐｓｉ（約３０３．４ｋＰａ）の圧力が生じる。
【００４５】
圧力を提供するために用いられる気体は、酸素以外でなければならない。我々にとって好ましい気体は、二酸化炭素（ＣＯ2）または窒素（Ｎ2）である。しかしながら、他の気体は、その気体が飲料中に含まれる成分に対して不活性である限りにおいて許容される。不活性であると一般に理解されている他のガスとしては、アルゴン（Ａｒ）、酸化窒素としても知られている一酸化窒素（ＮＯ）、亜酸化窒素としても知られており、笑気ガスとしても知られている一酸化二窒素（Ｎ2Ｏ）、二酸化硫黄（ＳＯ2）、キセノン（Ｘｅ）、ネオン（Ｎｅ）またはヘリウム（Ｈｅ）、一酸化炭素（ＣＯ）が挙げられる。一般的に言えば、これらのガスは、２気圧超の圧力を提供するために、Ｎ2またはＣＯ2と同じような量で用いられる。必要とされる気体の各タイプの実際に量は、容易に決定され、あるタイプの気体と別の気体で著しくは異ならない。
【００４６】
気体は、気体を液体に泡立てて通す拡散(sparge)により加えてもよく、または窒素（液体窒素）を添加する場合によくあるように、液化ガスを液滴の形態で添加してもよい。空気に曝露された表面を有する水相液体は、ある量の酸素をその液体中に獲得する。強制的に除去されない限り、酸素は、平衡の際に、ヘッドスペース・ガスの一部となる。液体形態の気体を添加し、次いで、液体の凝固点を超える温度の液体と混合されると気体に戻ることも可能である。気体（空気）の量を測定可能に減少させることも可能である。
【００４７】
本発明は、２．４から少なくとも５．６、特に２．８から４．４のｐＨの範囲に亘り適用できる。このｐＨは、容器内の気体の圧力に測定可能な影響はない。溶液と気体は、密封できる容器により制限される必要があるが、その容器は酸素不透過性である必要はない。しかしながら、容器の本体とシールは、雰囲気からＯ2の進入を測定可能に遅らせる働きをすべきである。容器をＯ2以外の気体で加圧する単純な行為は、一般に、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）などの高分子膜を通るＯ2の侵入を遅らせる働きをする。
【００４８】
ここで、飲料は、糖類、栄養物質（ビタミン、エネルギー補給物など）、香料、色素の形態で１６パーセントもの固形物（屈折計により決定される）を含有する大半が水相の溶液として定義される。本発明は、２．５から５．６の範囲のｐＨを有するどの飲料にも適用できる。例えば、本発明は、典型的に５．５近いｐＨを有する自然醸造されたお茶に利用できる。さらに、本発明は、５．６ほど高いｐＨを有するどの飲料配合物への使用にも適用できる。そのような高いｐＨは、特定のフレーバー・ウォーターまたは電解質代替配合物に生じるであろう。
【００４９】
細菌による腐敗の恐れまたは任意の製品配合物に関する食品由来病原性細菌からの公衆衛生に対する懸念は、目的範囲にあるｐＨにかかわらず、ピマリシン以外の物理的または化学的物質により満たされる必要があるであろう。ピマリシンは、酵母菌およびカビ菌に対してのみ効果的である。細菌の増殖を阻害する手段は様々である。４．５未満のｐＨを達成するために、多くのタイプの飲料に弱い有機酸が加えられる。そうすることによって、その飲料は、「酸性」食品または「酸度の高い食品飲料」の規制状況を達成する。ほとんどの果物に由来する１００％ジュースは、天然に酸性であり、４．５未満のｐＨを有する。そのような製品は、経口伝染病に最も多く関連する全ての公知の病原体の増殖を維持することができない。
【００５０】
病原体の増殖を維持することができないが、そのような製品は、化学的または物理的物質による介在がない状態で、カビ菌、酵母菌、乳酸菌（ＬＡＢ）、アリシクロバチルス属および酢酸菌などの他の微生物の増殖を支援することができる。製品を腐敗させるが、健康の観点から懸念のない有機体は、ここでは、集合的に「腐敗微生物」と称される。大抵、これらの有機体は、細菌の増殖要件を満たすのに必要な濃度の栄養素の利用可能性を打ち消すことによって、飲料中での増殖を阻害することができる。一般的に言えば、細菌は、酵母菌およびカビ菌よりも選好性である。例えば、多くのタイプの腐敗細菌は、飲料中で増殖するために、１種類以上のビタミンの存在を必要とする。
【００５１】
栄養素の剥脱に加え、またはその代わりに、β−シクロデキストリンとピマリシンの錯体は、抗菌活性を有することが知られている他の物質の存在により補完することができる。２種類以上の抗菌物質を１つの配合物に組み合わせることによって、有機体が成長し複製することができない程度まで、多数の代謝過程が阻害される、「多重ハードル効果(multiple hurdle effect)」の可能性を計算に入れる。金属イオン封鎖剤、有機酸およびフェノール化合物、テルペンなどの物質を、ピマリシンと共に利用することができる。β−シクロデキストリンとピマリシンの錯体が他の保存料の濃度を減少させることができる程度まで、費用と官能特性の観点から利点が得られる。その飲料用保存料系は、さらに、ソルビン酸、桂皮酸、それらの塩、ＥＤＴＡ、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジコハク酸（ＥＤＤＳ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジマロン酸（ＥＤＤＭ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジグルタル酸（ＥＤＤＧ）、ヘキサメタリン酸ナトリウム（ＳＨＭＰ）、メタリン酸ナトリウム（ＳＡＭＰ）、ホスホネート、ビス−ホスホネート、Ｎ−ビス−ホスホネートを含んでよい。その飲料用保存料系は、アスコルビン酸などの遊離基捕捉剤（酸化防止剤）をさらに含んでもよい。
【００５２】
一般に、飲料用保存料系は、約１．０ｍＭ以下、例えば、０．５ｍＭから０．７５ｍＭ、約０．５４ｍＭ以下の範囲のクロム、アルミニウム、ニッケル、亜鉛、銅、マンガン、コバルト、カルシウム、マグネシウム、および鉄の陽イオンの濃度への制限を含む。本発明は、必要に応じて、増殖中に微生物により利用されるミネラルの目的濃度を達成するために、金属陽イオンを除去するために処理された製品をバッチ配合するための水の使用を含む。米国特許第６２６８００３号明細書の教示とは反対に、好ましい処理方法は、物理的プロセスの逆浸透および／または電気式脱イオン化による。米国特許第６２６８００３号明細書に教示されたような、化学的手段により処理は、許容されるが、好ましくはない。水の硬度を低下させるために化学的手段を使用すると、大抵、ここに記載された本発明を損なう働きをする特定の一価陽イオン、例えば、カリウム陽イオンの濃度が増加してしまう。特定の例示の実施の形態において、添加水は、逆浸透、電気式脱イオン化またはその両方により処理されて、クロム、アルミニウム、ニッケル、亜鉛、銅、マンガン、コバルト、カルシウム、マグネシウム、および鉄の金属陽イオンの総濃度を約１．０ｍＭ以下に減少させてきた。
【００５３】
当該技術分野において一般に理解されているように、「保存する」、「保存性」および「保存」という用語の定義は、ある物質または配合物が腐敗のないままである期間に関するどの特異性も伝えることはできない。加えて、「保存された」という用語も、微生物腐敗以外の事象がないことも意味し得る。例えば、ある製品が、成分の分解、官能特性の損失または変色から保存されることがある。その結果、保存という用語は、任意の科学的または実際的な関連性を伝えるために、文脈が与えられる必要がある。ここに用いたように、「保存する」、「保存性」および「保存」という独立した用語は、少なくとも１２０日間の期間に亘り酸度の高い腐敗微生物として知られている微生物の一般部類の存在および増殖から生じる腐敗の完全な防止を称する。この文献におけるピマリシンの使用に特有である、「保存」、「保存性」および「保存する」という用語は、酸度の高い飲料を腐敗させることのできる酵母に対する保存を意味することに限られる。ピマリシンが本発明における効果的な保存料である、代表的であるが、非包括的なタイプの酵母は、ブレッタノミセス属、サッカロミセス属、チゴサッカロミセス属、カンジダ属、デバリオミセス属、クロエケラ属、ロドトルラ属、およびトルロプシス属の種である。
【００５４】
製品が腐敗のないままでいなければならない１２０日間の期間は、製造場所から、流通機構を通じて、消費者の手元に飲料製品を輸送するのに要する時間を反映している。腐敗のないことは、腐敗微生物の増殖の証拠（濁り、生菌数、直接鏡検法または計数の他の標準方法）のないこと、および腐敗微生物の代謝に通常起因し得る製品の属性の任意の識別可能な変化のないことにより気付かれる。
【００５５】
ここに用いたように、「阻害する」という用語は、停止を意味するまたは完全に防止することと理解される。
【００５６】
典型的に、製品は、任意の所定の温度への曝露の長さに制限するものではなく、貯蔵、輸送、および陳列の最中に経験する温度の全範囲（例えば、０℃から４０℃、１０℃から３０℃、２０℃から２５℃）を含む周囲条件下で保存される。
【００５７】
ピマリシンは、酵母菌およびカビ菌の増殖を阻害する働きをする天然の生物活性化合物である。ピマリシンの別の一般名はナタマイシンである。ナタマイシンのＩＵＰＡＣ系統名は（１Ｒ、３Ｓ、５Ｒ、７Ｒ、８Ｅ、１２Ｒ、１４Ｅ、１６Ｅ、１８Ｅ、２０Ｅ、２２Ｒ、２４Ｓ、２５Ｒ、２６Ｓ）−｛［（３Ｓ、４Ｓ、５Ｓ、６Ｒ）−４−アミノ−３，５−ジヒドロキシ−６−メチルオキサン−２−イル］オキシ｝−１，３，２６トリヒドロキシ−１２−メチル−１０−オキソ−６，１１，２８−トリオキサトリシクロ［２２．３．１．０5,7］オクタコサ−８，１４，１６，１８，２０ペンタエン−２５−カルボン酸である。ピマリシン（Ｃ33Ｈ47ＮＯ13）のＩＵＰＡＣ名の第２の表現は、２２−［（３アミノ−３，６−ジデオキシ−Ｂ−Ｄ−マンノピラノシル）オキシ］−１，３，２６−トリヒドロキシ−１２−メチル−１０−オキソ−６，１１，２８−トリオキサトリシクロ［２２．３．１．０5,7］オクタコサ−８，１４，１６，１８，２０ペンタエン−２５−カルボン酸である。ピマリシンには、ＣＡＳ番号７６８１−９３−８が割り当てられている。少なくともいくつかの食品における使用が承認されており（例えば、欧州食品添加剤番号は、Ｅ２３５（保存料）およびＥ１２０１（安定剤）である）、推奨されるＡＤＩは体重１ｋｇ当たり０〜０．３ｍｇである。
【００５８】
【化１】
0006027271.tif 000003
【００５９】
ピマリシンは、白色、無味、無臭の化合物である。抗菌活性は、１２０°Ｆ（約５０℃）の少なくとも短時間の曝露に対して安定であり、温度が３５６°Ｆ（約１８０℃）を超えなければ、測定可能な速度で分解しない。残念ながら、ピマリシンは、水溶液中に特別に可溶性ではない。ピマリシンは、純水（２５℃）中にたった０．０５２ｍｇ／ｍｌ（５２ｍｇ／Ｌ）の溶解度を示し、ｐＨは約６．４であると推測される（ピマリシンは、酸性ｐＨ値を担うカルボキシル基を１つ有する）。
【００６０】
「最小阻止濃度」（ＭＩＣ）は、標準期間が通常定義されていないまたは理解されていない別の用語である。医療分野において、ＭＩＣは、物質を含まない陽性対照と比べて、一晩のインキュベーションで１つのタイプの微生物の増殖を阻害する物質の濃度を指定するためにしばしば使用される（Ｗｉｋｉｐｅｄｉａ参照）。しかしながら、残りの科学界では、ＭＩＣという用語を、インキュベーションの期間および阻害の程度の数多くの条件のうちのいずれも意味するために採用している。
【００６１】
医療分野内でさえ、２４時間のインキュベーション期間に亘り生じたＭＩＣ値は、４８時間以上経過した後に生じた値とは同じではないであろうと認識されている。言い換えれば、ある物質は、実験の最初の２４時間中では観測可能なＭＩＣを示すかもしれないが、４８時間後には、陽性対照に対して測定可能なＭＩＣを示さないかもしれない。
【００６２】
本発明による飲料製品は、非炭酸飲料と炭酸飲料の両方を含む。ここで、炭酸飲料という用語は、アルコールフリー液体として摂取されるように作られ、０．２体積以上のＣＯ2の二酸化炭素濃度を有するようにも作られている、水、ジュース、香料および甘味料の任意の組合せを含む。「体積のＣＯ2」という用語は、液体中に吸収される二酸化炭素の量を意味すると理解され、ここで、１体積のＣＯ2は、２５℃での製品１リットル当たり１．９６グラムの二酸化炭素（ＣＯ2）（０．０４５５Ｍ）と等しい。炭酸飲料の非包括的な例としては、ソフトドリンクの様式で炭酸化されている、フレーバー・セルツァ炭酸水、ジュース、コーラ、レモンライム、ジンジャーエール、およびルートビア、並びにビタミン、アミノ酸、タンパク質、炭水化物、脂質、またはそれらの高分子などの代謝的に活性な物質の存在から健康またはウェルネスの恩恵を与える飲料が挙げられる。そのような製品は、牛乳、コーヒー、または紅茶や他の植物固形物を含有するように配合されることもある。そのような飲料を、１種類以上の栄養補助食品を含有するように配合することも可能である。ここで、栄養補助食品は、最低でも、専門雑誌または教科書において実証されたような一般的または特定の健康の恩恵またはウェルネスの意味のいずれかを有することが示された物質である。しかしながら、栄養補助食品は、必ずしも、特定のタイプの医学的状態を治療または予防する働きをする必要はない。
【００６３】
ここで、「非炭酸飲料」という用語は、アルコールフリー液体飲料の様式で摂取されるように作られ、０．２体積以下の二酸化炭素を有する、水と成分の任意の組合せである。非炭酸飲料の非包括的な例としては、フレーバー・ウォーター、紅茶、コーヒー、ネクター、ミネラルドリンク、スポーツ飲料、ビタミン・ウォーター、ジュース含有飲料、パンチまたはこれらの飲料の濃縮形態、並びに少なくとも約４５質量％のジュースを含有する濃縮飲料が挙げられる。そのような飲料に、ビタミン、アミノ酸、タンパク質系物質、炭水化物系物質または脂質系物質を補ってもよい。先に述べたように、本発明は、炭酸または非炭酸の、ジュース含有製品を含む。「ジュース含有飲料」または「ジュース飲料」は、非炭酸または炭酸であるか否かにかかわらず、果物の天然液体分画中に懸濁できるか、または可溶性に作れる果物、野菜またはナッツもしくはそれらの混合物のいくつかまたは全ての成分を含有する製品である。
【００６４】
「野菜」という用語は、ここに用いた場合、塊茎、葉、外皮、および特に表示されていなければ、ジュースまたは飲料の香味料として提供される任意の穀物、ナッツ、豆、および芽などの植物の実と実ではない部分の両方であるが、食用である部分を含む。地方、国または地域の規制当局により示されていない限り、特定の物質（果肉、ペクチンなど）の選択的な除去は、ジュースの粗悪化となるものではない。
【００６５】
例として、ジュース製品およびジュース飲料は、リンゴ、クランベリー、西洋ナシ、モモ、プラム、アプリコット、ネクタリン、ブドウ、チェリー、スグリ、ラズベリー、グーズベリー、ブラックベリー、ブルーベリー、イチゴ、レモン、オレンジ、グレープフルーツ、パッションフルーツ、マンダリン、ミラベルプラム、トマト、レタス、セロリ、ホウレン草、キャベツ、クレソン、タンポポ、ダイオウ、ニンジン、ビート、キュウリ、パイナップル、カスタードアップル、ココナッツ、ザクロ、グアバ、キウイ、マンゴ、パパイヤ、スイカ、ラカンカ、カンタロープ、パイナップル、バナナまたはバナナピューレ、レモン、マンゴ、パパイヤ、ライム、タンジェリン、およびそれらの混合物の果物から得ることができる。好ましいジュースは柑橘類のジュースであり、リンゴ、西洋ナシ、クランベリー、イチゴ、ブドウ、パパイヤ、マンゴおよびチェリーなどの非柑橘類のジュースが最も好ましい。
【００６６】
本発明は、実質的に１００％ジュースである配合物を保存するために使用できるが、その製品は、１００％ジュースを含有するとラベル表示できない。本発明は、濃縮ジュースが１００％未満であるジュース含有製品に使用できる。ジュース濃度を１０％未満に低下させると、典型的に、低濃度の保存料を使用することが好ましくなる。１０％ほど高く濃縮ジュースを含有する配合物は、本発明により保存されことがあり、１０％未満のジュースを含有する飲料は、必ず、本発明により保存されるであろうし、５％以下のジュースを含有する飲料は、本発明により保存されるであろう。本発明の飲料を製造するために、どのジュースも使用できる。濃縮飲料が望ましい場合、果汁は、約１２ブリックス度から約６５ブリックス度に従来の手段により濃縮される。濃縮飲料は、通常、４０ブリックス度以上（約４０％から約７５％の糖類固形物）である。
【００６７】
典型的に、飲料は、指定範囲の酸度を有する。飲料の酸度は、概して、酸味料のタイプ、その濃度、および酸が溶液中に入ったときに酸から解離する酸に関連するプロトンの傾向（ｐＫA）により決まる。０〜１４の間の測定可能なｐＨを有するどの溶液も、測定可能なまたは計算可能な濃度の遊離プロトンに反映されるように、いくらかのプロトンを有している。しかしながら、７未満のｐＨを有する溶液は、一般に、酸性であると理解され、ｐＨ７より高い溶液は、塩基性であると理解される。酸味料は、有機であっても、無機であっても差し支えない。無機酸の非包括的な例は、リン酸である。有機酸の非包括的な例は、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、酒石酸、乳酸、グルコン酸、およびコハク酸である。無機酸の非包括的な例は、リン酸化合物とこれらの酸の一カリウム塩および二カリウム塩である（リン酸の一カリウム塩および二カリウム塩は、酸度に寄与し得るプロトンを少なくとも１つ有している）。
【００６８】
飲料のｐＨまたは緩衝能を指定のｐＨまたはｐＨの範囲に管理するために、様々な酸を同じ酸または異なる酸の塩と組み合わせることができる。本発明は、２．６ほど低いｐＨで機能できるが、本発明は、ｐＨが２．６からｐＨ７．２までに上昇したときに、より良好に機能する。酸度の高い飲料について、本発明は、製品を酸性化するのに利用される酸味料のタイプにより制限されない。食用であり、異臭を与えない限り、事実上、どの有機酸の塩を使用することもできる。塩または塩の混合物の選択は、溶解度および味により決まる。クエン酸塩、リンゴ酸塩およびアスコルビン酸塩は、その香りが、特に、果汁飲料において、極めて満足であると判断される摂取可能な錯体を生じる。酒石酸は、特に、ブドウジュース飲料において、受け入れられ、乳酸もそうである。長鎖脂肪酸を使用してもよいが、香りと水溶性に影響し得る。実質的に全ての目的に関して、リンゴ酸、グルコン酸、クエン酸およびアスコルビン酸部分が十分である。
【００６９】
本発明の飲料製品の特定の例示の実施の形態は、スポーツ（電解質平衡）飲料（炭酸または非炭酸）を含む。典型的なスポーツ飲料は、水、ショ糖シロップ、ブドウ糖果糖液糖、および天然または人工香料を含有する。これらの飲料は、塩化ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸一カリウム、並びに発汗中に失われる電解質の平衡を補給する働きをする他の天然または人工物質も含有することができる。
【００７０】
特定の例示の実施の形態において、本発明は、脂溶性ビタミンが補給された飲料配合物も含む。ビタミンの非包括的な例としては、脂溶性ビタミンＥまたはそのエステル、ビタミンＡまたはそのエステル、ビタミンＫ、およびビタミンＤ３、特に、ビタミンＥおよびビタミンＥ酢酸エステルが挙げられる。栄養補助食品の形態は、粉末、ゲルまたは液体もしくはそれらの組合せであって差し支えない。脂溶性ビタミンは、健康を増進する量で、すなわち、加工中に失われるかまたは不活性化されるかもしれない、ジュースまたは牛乳などの飲料中に天然に存在するビタミンを置き換えるのに十分な量で加えてよい。脂溶性ビタミンは、栄養を補助する量、すなわち、ＲＤＡおよび他のそのような基準に基づいて子供または大人が摂取するのが望ましいと考えられるビタミンの量、好ましくはＲＤＡ（１日当たりの推奨摂取量）の約１から３倍の量で加えてもよい。飲料に添加できる他のビタミンとしては、ビタミンＢナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＢおよびチアミンが挙げられる。これらのビタミンは、ＲＤＡの１０％から３００％のレベルで加えて差し支えない。
【００７１】
栄養補助食品：本発明は、特定のタイプの栄養補助食品の存在により損なわれ得るが、それは絶対的なことではなく、飲料配合物から飲料配合物で異なる。本発明が損なわれる程度は、栄養補助食品の性質および栄養補助食品が存在する結果としての飲料中の特定の金属陽イオンの濃度に依存する。例えば、カルシウム補助食品は、本発明を損ない得るが、クロム補助食品と同じ程度ではない。カルシウム補助食品は、総カルシウム濃度の臨界値を超えない程度まで加えてよい。本発明に適合するカルシウム源としては、カルシウム有機酸錯体が挙げられる。好ましいカルシウム源の中に、Ｎａｋｅｌ等（１９８８年）に発行された米国特許第４７８６５１０号および同第４７８６５１８号の各明細書およびＨｅｃｋｅｒｔ（１９８８年）に発行された米国特許第４７２２８４７号明細書に記載されているような、「クエン酸リンゴ酸カルシウム」がある。本発明に適合する他のカルシウム源としては、酢酸カルシウム、酒石酸カルシウム、乳酸カルシウム、リンゴ酸カルシウム、クエン酸カルシウム、リン酸カルシウム、オロチン酸カルシウム、およびそれらの混合物が挙げられる。塩化カルシウムおよび硫酸カルシウムも含ませることができる；しかしながら、高レベルでは、それらは渋い味がする。
【００７２】
香料成分：本発明による飲料製品は、どのタイプの香料を含有しても差し支えない。本発明の香料成分は、人工香料、天然香料、植物香料、果物香料、およびそれらの混合物から選択される香料を含有する。「植物香料」という用語は、果物以外の植物の部分に由来する；すなわち、豆、ナッツ、樹皮、根および葉に由来する香料を称する。天然源に由来する植物香料をシミュレーションするように製造された人工的に調製された香料も、「植物香料」の用語に含まれる。そのような香料の例としては、ココア、チョコレート、バニラ、コーヒー、コーラ、紅茶などが挙げられる。植物香料は、精油および抽出物などの天然源由来であっても、または人工的に調製されても差し支えない。「果物香料」という用語は、種子植物の食用生殖部分、特に、種子に関連する甘い果肉を有する部分に由来する香料を称する。天然源に由来する果物香料をシミュレーションするように製造された人工的に調製された香料も、「果物香料」の用語に含まれる。
【００７３】
人工香料を使用しても差し支えない。人工香料の非包括的な例としては、チョコレート、イチゴ、バニラ、コーラ、または果物のような味がするようにフレーバーが付けられた非炭酸または炭酸飲料を配合するために使用できる、天然香料に似せた人工香料が挙げられる。本発明の飲料ミックスに風味特徴を与える（「風味強化」）のに効果的な香料成分の特定の量は、選択された香料、望ましい風味の印象、および香料成分の形態に依存し得る。香料成分は、飲料組成物の少なくとも０．００５質量％を占めることができる。
【００７４】
ケースバイケースで、本発明による飲料用保存料系は、水性エキスを含有するように配合された飲料に適合する。ここに用いたように、「水性エキス」という用語は、果汁に由来する、水溶性の芳香およびフレーバー素材を称する。水性エキスは、分別、濃縮または倍化エキスであっても、もしくは添加成分で強化されていても差し支えない。ここに用いたように、「精油」という用語は、ジュースから得られた芳香または香料揮発成分の油または水に不溶性の分画を称する。オレンジ精油は、オレンジ果汁の蒸発により得られた水性エキスから分離される油性分画である。精油は、分別されても、濃縮されても、強化されても差し支えない。ここに用いたように、「果皮油」という用語は、オレンジおよび他の柑橘果実に由来する芳香およびフレーバーを称し、テルペン炭化水素、例えば、脂肪族アルデヒドおよびケトン、酸素化テルペンおよびセスキテルペンから主になる。柑橘風味のジュースには、約０．００２％から約１．０％の水性エキスおよび精油が使用される。
【００７５】
甘味料成分：濃度１００％(single strength)の飲料配合物における本発明の微生物学的保存料の機能は、飲料中に存在する甘味料のタイプに影響を受けない。甘味料は、飲料に一般に利用されるどの甘味料であってもよい。ここに開示された飲料の様々な実施の形態に使用するのに適した甘味料は、栄養性および非栄養性、天然および人工または合成の甘味料を含む。甘味料は、単糖類または二糖類を含んで差し支えない。金属陽イオンによる汚染からある程度の純度が期待される。甘い風味を有するペプチドも許容される。最も一般に利用される糖類としては、ショ糖、果糖、デキストロース、マルトース、およびラクトース並びに転化糖が挙げられる。これらの糖類の混合物を使用して差し支えない。多かれ少なかれ甘さが望ましい場合、他の天然炭水化物を使用しても差し支えない。適切な非栄養性甘味料およびそのような甘味料の組合せは、所望の栄養特徴、飲料の風味プロファイル、口当たりおよび他の官能要因のために選択される。少なくとも特定の例示の実施の形態に適した非栄養性人工甘味料の例としては、ペプチド系甘味料、例えば、アスパルテーム、ネオテーム、およびアリテーム、並びに非ペプチド系甘味料、例えば、サッカリンナトリウム、サッカリンカルシウム、アセスルファムカリウム、シクラミン酸ナトリウム、シクラミン酸カルシウム、ネオヘスペリジンジヒドロカルコン、およびスクラロースが挙げられる。特定の例示の実施の形態において、前記飲料製品は、単独または他の甘味料と共にのいずれかで、甘味料としてアスパルテームを利用する。特定の他の例示の実施の形態において、甘味料はアスパルテームおよびアセスルファムカリウムを含む。少なくとも特定の例示の実施の形態に適した他の非栄養性甘味料の例としては、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、グリシルリジン、Ｄ−タガトース、エリトリトール、メソ・エリトリトール、マルチトール、マルトース、ラクトース、フラクトオリゴ糖、ラカンカ粉末、モグロシドＶ、グリシルリジン、ステビオール配糖体、例えば、レバウディオサイドＡ、レバウディオサイドＢ、レバウディオサイドＣ、レバウディオサイドＤ、レバウディオサイドＥ、ステビオールビオシド、ステビオシド、ズルコシドＡなど、ステビア(Stevia rebaudiana)抽出物、アセスルファム、アスパルテーム、他のジペプチド、チクロ、スクラロース、サッカリン、キシロース、アラビノース、イソマルト、ラクチトール、マルチトール、トレハロース、リボース、並びにタウマチン、モネリン、ブラゼイン、Ｄ−アラニンおよびグリシンなどのタンパク質甘味料、関連する化合物、およびそれらの任意のものの混合物が挙げられる。この開示の恩恵を考えれば、適切な非栄養性および栄養性甘味料並びにそれらの組合せを選択することは、当業者の能力の範囲内である。本発明の飲料ミックス中で効果的な甘味料の量は、使用する特定の甘味料および所望の甘味強度に依存する。
【００７６】
それゆえ、本発明の態様は、密封容器内の飲料製品であって、飲料が、室温で貯蔵された場合、少なくとも１６週間の期間に亘り微生物により実質的に腐敗されない、飲料製品に関する。この飲料は炭酸飲料であってもよい。
【００７７】
この飲料は、０．１から６ｐｐｍ、０．１から５ｐｐｍ、０．１から４ｐｐｍ、０．１から３ｐｐｍ、または０．１から２ｐｐｍの量のピマリシンを含む。この飲料はシクロデキストリンをさらに含有する。この飲料のｐＨは２．４から５．６、特に２．８から４．４である。
【００７８】
前記飲料製品は、飲料中の成分に対して不活性なヘッドスペース・ガスをさらに含み、このヘッドスペース・ガスの圧力は絶対圧で少なくとも２気圧である。このヘッドスペース・ガス中に存在する酸素は、８３００ｍｃｇ未満、５０００ｍｃｇ未満、または５００ｍｃｇ未満の量である。
【００７９】
本発明の態様において、ピマリシンおよびシクロデキストリンは、錯体として飲料に添加される。錯体におけるピマリシンのシクロデキストリンに対する比は１：１である。このシクロデキストリンは、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン、スルホブチルエーテルβ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルβ−シクロデキストリン、無作為にメチル化されたβ−シクロデキストリン、およびマルトシル／ジマルトシルβ−シクロデキストリンであってよい。
【００８０】
さらに別の態様は、上述した飲料を容器に加え；次いで、飲料中の成分に対して不活性な十分なヘッドスペース・ガスを加えて、絶対圧で少なくとも２気圧の圧力を提供し、容器を密封することによって、密封容器内で飲料を製造する方法に関する。上述したように、飲料は、ピマリシンとシクロデキストリンを錯体として飲料に添加することによって、形成されるであろう。
【実施例】
【００８１】
背景の実施例１
酸素濃度は、全てではないがいくつかの腐敗微生物について、増殖制限性であり得る。微生物を、模擬飲料配合物（２〜５％のジュース、１２ブリックス度、ｐＨ３．４）に接種し、１６週間の期間に亘り可視増殖の証拠について評価した。
【００８２】
サンプル中の酸素含有量は、飽和水蒸気シール下で水浴中でのサンプルの加熱により調節した。容器に隔膜シールを使用することにより、サンプルを冷却した後に接種を可能にした。酸素濃度は、試験容器の製品と接触する表面上に置かれたＯＸＹＳＥＮＳＥ（登録商標）センサを使用して確立した。各タイプの微生物について、増殖を支援した（  ）、増殖を支援しなかった（  ）、またはまだ試験していない（  ）のいずれかである、ある範囲の酸素圧を特定した。明らかに、ほとんどの微生物は、１００ｐｐｂほど低い酸素濃度で容易に増殖する。
【００８３】
図１に示されるように、各微生物に関連付けられた棒が、３つの範囲に分類されている：１）増殖が明白なＯ2濃度の範囲、２）評価されていない範囲、および３）Ｏ2が増殖阻害性であることを示された範囲。
【００８４】
背景の実施例２
ピマリシンは、水性懸濁液中にある場合、比較的急激に分解する。図２は、時間の関数としての、飲料（ｐＨ３．４）中のピマリシンのＵＶ−可視スペクトルのピーク１対ピーク２の比のプロットを示している（ａ）。図２に示されるように、分解の速度は、ピマリシンに観察されたＵＶ−可視スペクトルにおける変化により確立することができる（挿入図Ｂ）。水中のピマリシンの新たに調製されたサンプルは、３つのピーク、ピーク１（３２０ｎｍ）、ピーク２（３０４ｎｍ）、およびピーク３（２９１ｎｍ）のスペクトログラムを生じる。挿入図のスペクトルは、各ピークの吸収極大が、あるピークから次のピークへと異なることも明白に示している。これらの差は、ピマリシンの共役ジエン構造の表れである。共役構造の強度が分解に変わるにつれて、相対ピーク高さに変化が起こる。
【００８５】
分解の顕著な特徴は、時間の経過による相対ピーク高さにおける変化である。３７００ｐｐｂのＯ2を含有する炭酸飲料（３．７体積のＣＯ2）中のピマリシンの分解は、ピーク３（２９１ｎｍ）に対するピーク１（３２０ｎｍ）の減少したピーク高さにより確立される。ピーク２の相対ピーク高さをピーク３に対して比較すると、非常に似たプロットが得られる。
【００８６】
背景の実施例３
８３００ｐｐｂのＯ2を含有する水中で、ピマリシンのみが、β−シクロデキストリンとのピマリシンの錯体よりも、わずかに速い速度で分解する。図３に示されるように、３５００ｐｐｂしかＯ2を含有しない水中のピマリシンのみは、８３００ｐｐｍのＯ2を含有する水中のピマリシンとほぼ同じ速度で分解する。錯体中のピマリシンの初期濃度は＞＞４００ｐｐｂであり、それゆえ、ピマリシンは、β−シクロデキストリンと完全に結合している。中性ｐＨおよび２５℃での蒸留水中での測定値。それゆえ、シクロデキストリンとの錯体の存在または不在にかかわらず、ピマリシンは、溶液中にある場合、時間の経過による分解に曝される。
【００８７】
背景の実施例４
構造的に無傷なピマリシンの存在下で、腐敗微生物は増殖が阻害されている。嵩張るピマリシンの完全性が一旦損なわれると、微生物は増殖することができる。初期濃度にかかわらず、３．７体積のＣＯ2の飲料中のピマリシンは、同じ速度で分解する。通常、炭酸飲料は、相当な量の酸素（＞３５００ｐｐｂ）を含有する。図４参照。１３．５ｐｐｍの出発濃度を考えると、ピマリシンの分解は、ピマリシンの濃度が８０日辺りで最小阻害濃度（．．．）未満に低下するようなものである。この時点で、腐敗微生物は、増殖し始め、腐敗を誘発する（χ）。２５ｐｐｍのピマリシンの出発濃度は、測定可能な程度の分解に移行するが（α）、ピマリシンの濃度は、約２ｐｐｍの臨界濃度未満に低下せず、よって、先に接種した微生物の増殖から続いて腐敗を生じることがない。
【００８８】
背景の実施例５
３．７体積のＣＯ2の存在下でβ−シクロデキストリンと錯体を形成したときのピマリシンのＵＶ−可視スペクトルにおける変化は、最初の２０日間に亘る崩壊の均一パターンと、次いで、より遅い崩壊速度へのシフトを示唆している。図５参照。これは、溶液中の全てのピマリシンがβ−シクロデキストリンに結合しているわけではないという事実の表れであろう。
【００８９】
３．７体積のＣＯ2からの圧力下にある場合、シクロデキストリンと共に溶液中にあるピマリシンの分解のパターンは、空気からの１気圧下での水中にピマリシンのみの場合とは異なる。ピーク１およびピーク２の相対ピーク高さ（ｂ）はほぼ一定のままである（ＣＯ2の不在下での異なる分解速度とは対照的に（図２参照））。
【００９０】
ピーク１およびピーク２の両方の時間の経過による吸収極大の同等の損失（Ａ）により明らかなように、それでも分解が生じる。しかしながら、分解は２モードである。ピマリシンの約１／２が２０日間の過程に亘り比較的急激に分解する（Ａ）が、分解速度は、変化し、測定可能により遅い（２０日後）。このパターンは、酸素ラジカル種による攻撃からのピマリシンにおける共役構造のある程度の保護を非常に連想させる。最も単純な説明は、全てではないがいくらかのピマリシンが、ＣＯ2からの圧力のためにシクロデキストリンのキャビティに押し入れられ、これにより、全てではないがいくらかのピマリシンを、分解から保護することができることである。ことによると、シクロデキストリンのキャビティ内のピマリシンの圧力誘発位置決めが生じる。全体で、分解の速度は、ピマリシンがシクロデキストリンと共に溶液中に存在し、ＣＯ2からの圧力があると、著しく遅くなるようである。
【００９１】
実施例１
模擬ブドウ１２ブリックスの２％のブドウジュースの模擬ガラス「ｐｏｎｙ」９．８オンス（約２７４ｇ）ボトルに、１６週間の実験を行った。飲料を、３．７体積および４．５体積に炭酸化させた。各ＣＯ2レベルの５つの容器は、接種せず、陰性対照として働かせた。各ＣＯ2レベルの５つの容器に、１ミリリットル当たり１００の微生物の初期細胞密度が達成されるように、サッカロミセス属、ブレッタノミセス属およびチゴサッカロミセス属の菌株のプール接種材料を接種した。これらのサンプルは、陽性対照として働いた。残りの容器の半分は、同じ接種材料を受け、１．１ｍｇｌ-1（毎リットルｍｇまたはｍｇ／Ｌ）の濃度にピマリシンも添加した。残りの容器には、０．８ｐｐｍのピマリシンの最終濃度を生じる様式で、β−シクロデキストリンとの錯体のピマリシンを添加した。次いで、全てのサンプルを、研究の期間に亘り、２５℃に保持した。研究の過程中、ＵＶ−可視分光法を用いて、サンプル中でピマリシン濃度を確立した。研究の結果が図６に纏められている。
【００９２】
全ての陽性対照サンプル（ピマリシンもシクロデキストリンも含まない）は、３日以内に腐敗した（１＝１００％の発生頻度）。
【００９３】
ベータ−シクロデキストリンを含まないサンプル中のピマリシンの初期濃度は１．１ｐｐｍであり、ピマリシンとベータ−シクロデキストリンの両方を有するサンプルにおいて、初期濃度は０．８ｐｐｍである。ピマリシンを含有するがシクロデキストリンを含まないサンプルについて、腐敗の最初の兆しは２０日目にあり、１００日後に、同様に配合したサンプルの中で腐敗の発生率は０．６（６０％）であった。このことは、３．７体積のＣＯ2（α）および４．５体積のＣＯ2（β）に配合したサンプルについても当てはまった。シクロデキストリンのないピマリシンは、時間の経過により分解することが分かり、約３５日の半減期を示した。３．７（Ｂ）または４．５（Ｘ）体積のＣＯ2いずれかで、ピマリシンおよびベータ−シクロデキストリンを含有するサンプルにおいて、研究期間に亘り増殖は検出されない。β−シクロデキストリンとの錯体にあるピマリシンは、少なくとも１６週間の期間に亘り安定であった。
【００９４】
比較例１
Ｓｉｅｒｒａ  Ｍｉｓｔとして知られている市販の炭酸レモンライム製品に、１６週間の実験を行った。この飲料は、ＰＥＴ容器内で３．６体積のＣＯ2に炭酸化されている。陰性対照容器は、接種を受けなかった。陽性対照サンプルには、チゴサッカロミセス属菌株（９０７、２８、Ｍａｒｉｏｎ、ＨＰ、Ｍｔ．Ｄｅｗ，＆  ＳＭ  Ｓｏｉｌｅｒ）またはブレッタノミセス属菌株（Ｄａｎ、Ｈ2Ｏ2、Ｃｈｅｒｒｙ  ７−ＵＰ、１６０１−１、およびＳＹ−０５）のいずれかを接種した。ピマリシンの有効性は、酸度の高い飲料中の溶解度の限界（２５ｐｐｍ）を少し超える量（３０ｐｐｍ）並びに５および１５ｐｐｍで存在するときに評価した。次いで、研究の期間に亘り、全てのサンプルを２５℃に保持した。研究結果が下記の表１に纏められている。１ｍｌ当たり３０ｍｇのピマリシンの等量を含有するサンプルのいずれも、試験期間中（１４週間、９８日間）腐敗しなかった。１５ｐｐｍを含有するサンプルの３３％が腐敗し、５ｐｐｍのピマリシンを含有するサンプルの１００％が腐敗した。実施例１の結果の観点から、これらの結果を比較のこと。
【００９５】
【表１】
0006027271.tif 000004
【００９６】
添付の特許請求の範囲に定義されるように、経葉の精神および範囲から逸脱せずに、様々な変更および改変を行ってよい。
【図２】
0006027271.tif 000005
【図３】
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【図４】
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【図５】
0006027271.tif 000008
【図６】
0006027271.tif 000009
【図１】
0006027271.tif 000010