(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物
【化１】
0005877847.tif 000048
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、Ｃ１−Ｃ３アルコキシカルボニルオキシメチル、Ｃ１−Ｃ５アルキルカルボニルオキシメチルまたはＣ３−６シクロアルキルカルボニルオキシメチルであり；
Ｒ３は、独立して各存在において、メチル、フルオロまたはクロロであり；
Ｒ４は、ヒドロキシル、アミノ、メチルカルボニルアミノまたは１，２，４−トリアゾリルチオであり；
ｎは、１または２である］
またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２が各々水素である、請求項１記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
Ｒ１およびＲ２が、同じでありかつ水素以外である、請求項１記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
ｎが２であり、Ｒ３基がフェニルの３および４位に存在する、請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸である請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６】
ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートである請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項７】
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−｛［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸である請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項８】
ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−｛［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートである請求項１記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項９】
少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、賦形剤または希釈剤とともに、請求項１から８のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む、医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１から８のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む、うつ病性障害を処置するための医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｍＧｌｕＲ２／３アンタゴニストとしての４−置換−３−フェニルスルファニルメチル−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルタメートは、脳内の主要な興奮性神経伝達物質であり、１１個もの異なる受容体（各々がそれ独自の薬理学を有する）によって媒介される多種多様の生理学的プロセスに関わっている。代謝調節型グルタミン酸受容体サブタイプ２および３（ｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３として知られる）は、それらの配列相同性、類似のセカンドメッセンジャー結合および類似の薬理学的特徴に基づいて、ＩＩ群ｍＧｌｕ受容体として一緒に分類されることが多い。ｍＧｌｕ２／３受容体のアンタゴニストは、うつ病性障害および過剰な眠気に関する障害に対する動物モデルにおいて有意な薬理学的作用を示した。同様に、ｍＧｌｕ２／３アンタゴニストは、うつ病性障害（例えば、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、単極性うつ病、気分変調および／または循環気質）の処置において有用である、および／または過剰な眠気に関する障害（例えば、日中の過剰な眠気（ＥＤＳ）、閉塞性睡眠時無呼吸またはナルコレプシーに関連する過眠、概日リズム睡眠障害（交代勤務睡眠障害、時差ぼけ障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害および非２４時間睡眠覚醒症候群を含むがこれらに限定されない）、特発性過眠症（ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  ｈｙｐｅｒｓｏｍｎｏｌａｎｃｅ）および／または非回復性睡眠（ＮＲＳ）に関連する過剰な眠気）の処置において有用であると考えられる。
【０００３】
特許文献１は、抗うつ剤をはじめとした、種々の障害の処置に有用な代謝調節型グルタミン酸受容体調節因子として、ある特定の３−一置換ビシクロ［３．１．０］ヘキサン化合物を記載している。特許文献２は、うつ症状をはじめとした様々な障害の処置において使用するためのＩＩ群ｍＧｌｕ受容体アンタゴニストとして様々な３−一置換ビシクロ［３．１．０］ヘキサン化合物を記載している。特許文献３は、うつをはじめとした様々な障害の処置において使用するためのＩＩ群ｍＧｌｕ受容体アンタゴニストおよびそのプロドラッグとして様々な３−一置換ビシクロ［３．１．０］ヘキサン化合物を記載している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許第５，９１６，９２０号
【特許文献２】米国特許第７，１５７，５９４号
【特許文献３】米国特許出願公開第２００７／００２１３９４（Ａ１）号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、ｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３受容体に対して高いアンタゴニスト効力を有する４−置換−３−フェニルスルファニルメチル−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン化合物のファミリーを提供する。本発明の化合物はまた、特に他のｍＧｌｕ受容体と比べて、ｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３受容体に対して選択的である。ある特定の化合物はまた、本発明の化合物が、うつ病性障害（これは、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、単極性うつ病、気分変調および／または循環気質を含み得る）および過剰な眠気に関する障害（これは、日中の過剰な眠気（ＥＤＳ）、閉塞性睡眠時無呼吸またはナルコレプシーに関連する過眠、概日リズム睡眠障害（交代勤務睡眠障害、時差ぼけ障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害および非２４時間睡眠覚醒症候群を含むがこれらに限定されない）、特発性過眠症および／または非回復性睡眠（ＮＲＳ）に関連する過剰な眠気を含み得る）の処置に有用であり得ることを動物モデルによって証明している。この機構の抗うつ様作用および覚醒促進作用は、別途、既存の抗うつ薬で処置することが困難な、疲労などのうつ病性障害の症状に対する効果も予測する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、式Ｉの化合物：
【化１】
0005877847.tif 000002
［式中、Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、水素、Ｃ１−Ｃ３アルコキシカルボニルオキシメチル、Ｃ１−Ｃ５アルキルカルボニルオキシメチルまたはＣ３−６シクロアルキルカルボニルオキシメチルであり；
Ｒ３は、独立して各存在において、メチル、フルオロまたはクロロであり；
Ｒ４は、ヒドロキシル、アミノ、メチルカルボニルアミノまたは１，２，４−トリアゾリルチオであり；
ｎは、１または２である］
またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【０００７】
本発明の特徴は、Ｒ１およびＲ２の両方が水素である式Ｉの化合物（二酸化合物）がインビボにおいて治療的に活性な化合物であるのに対し、Ｒ１もしくはＲ２またはその両方が水素以外である化合物は、それらの治療的に活性な二酸アナログのプロドラッグであることである。Ｒ１もしくはＲ２またはその両方が水素以外である化合物は、インビボで加水分解されることにより、治療的に活性な二酸アナログを提供する。そのプロドラッグ化合物（特に、ジエステルプロドラッグ）は、経口的に投与されたとき、二酸化合物（Ｒ１およびＲ２の両方が水素）の経口投与と比べて、二酸代謝産物の改善されたバイオアベイラビリティを提供するが、その二酸化合物は、静脈内、筋肉内または皮下に投与されたとき、より良好な活性を提供する。
【０００８】
本発明の別の態様において、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とともに式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物が提供される。さらに、本発明のこの態様は、うつ病性障害（例えば、大うつ病性障害、単極性うつ病、気分変調および／または循環気質のような）の処置に適合した医薬組成物を提供し、その医薬組成物は、その１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤、担体または希釈剤とともに式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む。
【０００９】
本発明のこの態様のさらなる実施形態は、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、賦形剤または希釈剤および必要に応じて他の治療用成分とともに式Ｉに記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む医薬組成物を提供する。本発明のこの態様のなおもさらなる実施形態において、その医薬組成物は、うつ病性障害の処置に有用な薬物である第２の治療薬（例えば、セロトニン再取り込み阻害剤、例えば、フルオキセチンおよび／またはシタロプラムのような）をさらに含む。
【００１０】
本発明のこの態様のなおも別の実施形態において、過剰な眠気に関する障害（例えば、日中の過剰な眠気（ＥＤＳ）、閉塞性睡眠時無呼吸またはナルコレプシーに関連する過眠、概日リズム睡眠障害（交代勤務睡眠障害、時差ぼけ障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害および非２４時間睡眠覚醒症候群を含むがこれらに限定されない）、特発性過眠症および／または非回復性睡眠（ＮＲＳ）に関連する過剰な眠気のような）の処置に適合した医薬組成物が提供され、その医薬組成物は、その１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤、担体または希釈剤とともに式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む。
【００１１】
本発明はまた、哺乳動物においてうつ病性障害（例えば、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、単極性うつ病、気分変調および／または循環気質のような）を処置する方法も提供し、その方法は、そのような処置を必要とする哺乳動物に、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与する工程を含む。本発明のこの態様の別の実施形態において、その方法はさらに、うつ病性障害の処置において有用な薬物である第２の治療薬（例えば、セロトニン再取り込み阻害剤、例えば、フルオキセチンおよび／またはシタロプラムのような）を同時の、別個のまたは連続的な併用で投与する工程を含む。
【００１２】
本発明の他の実施形態は、過剰な眠気に関する障害を処置する方法を提供し、その方法は、そのような処置を必要とする哺乳動物に有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を投与する工程を含む。本発明のこの態様の他の実施形態において、過剰な眠気は、以下のうちのいずれか１つ以上に起因する：日中の過剰な眠気（ＥＤＳ）、閉塞性睡眠時無呼吸またはナルコレプシーに関連する過眠、概日リズム睡眠障害（交代勤務睡眠障害、時差ぼけ障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害および非２４時間睡眠覚醒症候群を含むがこれらに限定されない）、特発性過眠症または非回復性睡眠（ＮＲＳ）に関連する過剰な眠気。
【００１３】
これらの処置方法の１つの特定の実施形態において、哺乳動物は、ヒトである。
【００１４】
本発明はまた、治療において使用するための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩も提供する。この態様の範囲内において、本発明は、うつ病性障害の処置において使用するための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。さらなる実施形態において、そのうつ病性障害は、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、単極性うつ病、気分変調および／または循環気質のうちのいずれか１つである。本発明のこの態様の別の実施形態において、本発明は、うつ病性障害の処置において、セロトニン再取り込み阻害剤（例えば、フルオキセチンおよび／またはシタロプラムのような）と同時の、別個のまたは連続的な併用で使用するための、式Ｉに記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩を提供する。
【００１５】
さらに、本発明のこの態様は、過剰な眠気に関する障害の処置において使用するための式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩を含む。本発明のこの態様の特定の実施形態において、過剰な眠気は、以下のうちのいずれか１つ以上に起因する：日中の過剰な眠気（ＥＤＳ）、閉塞性睡眠時無呼吸またはナルコレプシーに関連する過眠、概日リズム睡眠障害（交代勤務睡眠障害、時差ぼけ障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害および非２４時間睡眠覚醒症候群を含むがこれらに限定されない）、特発性過眠症または非回復性睡眠（ＮＲＳ）に関連する過剰な眠気。
【００１６】
本発明のこの態様の１つの特定の実施形態において、その使用は、哺乳動物、特にヒトにおける使用である。
【００１７】
本発明の別の態様は、うつ病性障害（例えば、大うつ病性障害（ＭＤＤ）、単極性うつ病、気分変調および／または循環気質のような）を処置するための医薬の製造における式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明のこの態様の別の実施形態は、うつ病性障害を処置するための医薬の製造における、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩およびうつ病性障害の処置において有用な第２の治療薬（例えば、セロトニン再取り込み阻害剤、例えば、フルオキセチンおよび／またはシタロプラムのような）の使用を提供する。本発明の別の実施形態は、過剰な眠気に関する障害を処置するための医薬の製造における式Ｉの化合物またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。本発明のこの態様の特定の実施形態において、その医薬は、以下のうちのいずれか１つ以上の処置のための医薬である：日中の過剰な眠気（ＥＤＳ）、閉塞性睡眠時無呼吸またはナルコレプシーに関連する過眠、概日リズム睡眠障害（交代勤務睡眠障害、時差ぼけ障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害および非２４時間睡眠覚醒症候群を含むがこれらに限定されない）、特発性過眠症または非回復性睡眠（ＮＲＳ）に関連する過剰な眠気。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の化合物は、塩基性部分および酸性部分を有し、それゆえ、いくつかの有機酸および無機酸ならびに有機塩基および無機塩基と反応して、薬学的に許容可能な塩を形成する。本発明の各化合物の薬学的に許容可能な塩は、本願の範囲内であると企図される。用語「薬学的に許容可能な塩」は、本明細書中で使用されるとき、生存している生物にとって実質的に無毒性である本発明の化合物の任意の塩のことを指す。そのような塩としては、当業者に公知の、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２−１９（１９７７）に列挙されている塩が挙げられる。
【００１９】
本発明の化合物の好ましいクラスは：
１）Ｒ１およびＲ２の両方が、水素である；
２）Ｒ１もしくはＲ２またはその両方が、水素以外である；
３）Ｒ１およびＲ２の両方が、水素以外である；
４）Ｒ１およびＲ２が、同じであり、かつ水素以外である；
５）Ｒ１およびＲ２が各々、イソプロポキシカルボニルオキシメチルである；
６）ｎが、２である；
７）Ｒ３が、独立して各存在において、フルオロまたはクロロである；
８）ｎが、２であり、かつＲ３基が、フェニルの３および４位に存在する；
９）ｎが、２であり、かつＲ３基の各々が独立して、フルオロまたはクロロであり、かつフェニルの３および４位に存在する；
１０）ｎが、２であり、両方のＲ３基が、フルオロであり、かつそのフルオロ基が、フェニルの３および４位に存在する；
１１）ｎが、２であり、かつＲ３基が、それらが結合しているフェニル部分と一体となって３−クロロ−４−フルオロフェニルを形成する；
１２）Ｒ４が、ヒドロキシルである、
化合物である。
【００２０】
さらなる好ましい化合物は、所与の置換基に対する上記の好ましい選択と他の置換基の好ましい選択とが組み合わされている化合物であることが理解されるだろう。そのような組み合わせの例としては、以下の好ましいクラスの化合物が挙げられるが、これらに限定されない：
１３）ｎが２であり、両方のＲ３基がフルオロであり、かつそのフルオロ基がフェニルの３および４位に存在する（パラグラフ１０）、パラグラフ１〜５のうちのいずれか１つの好ましい化合物（Ｒ１およびＲ２に対する好ましい選択）；
１４）ｎが２であり、かつＲ３基がそれらが結合しているフェニル部分と一体となって３−クロロ−４−フルオロフェニルを形成する（パラグラフ１１）、パラグラフ１〜５のうちのいずれか１つの好ましい化合物（Ｒ１およびＲ２に対する好ましい選択）；
１５）Ｒ４がヒドロキシルである（パラグラフ１２）、パラグラフ１〜５のうちのいずれか１つの好ましい化合物（Ｒ１およびＲ２に対する好ましい選択）；
１６）Ｒ４がヒドロキシルである（パラグラフ１２）、パラグラフ１３〜１４のうちのいずれか１つの好ましい化合物。
【００２１】
特に好ましい化合物は、実施例に記載される化合物である（それらの遊離塩基およびその薬学的に許容可能な塩を含む）。
【００２２】
ある特定の好ましい化合物は：
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその薬学的に許容可能な塩；
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−｛［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸またはその薬学的に許容可能な塩；
ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート；またはその薬学的に許容可能な塩；および
ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−｛［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートまたはその薬学的に許容可能な塩
（すなわち、実施例１、２、１２、２２および３２の化合物ならびにそれらの代替の薬学的に許容可能な塩）である。
【００２３】
本明細書中で使用される省略形は、以下のとおり定義される：
「ＢＳＡ」は、ウシ血清アルブミンを意味する。
「ＤＣＧ  ＩＶ」は、（２Ｓ，２’Ｒ，３’Ｒ）−２−（２’，３’−ジカルボキシシクロプロピル）グリシンを意味する。
「ＤＭＥＭは、ダルベッコ最小イーグル培地を意味する。
「ＤＭＳＯ」は、ジメチルスルホキシドを意味する。
「ＤＰＢＳ」は、ダルベッコリン酸緩衝食塩水を意味する。
「ＥＤＴＡ」は、エチレンジアミン四酢酸を意味する。
「ＧＴＰ」は、グアノシン三リン酸を意味する。
「ＨＢＳＳ」は、ハンクス緩衝塩溶液を意味する。
「ＨＥＰＥＳ」は、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸を意味する。
「ＨＰＬＣ」は、高圧液体クロマトグラフィを意味する。
「ＩＢＭＸ」は、３−イソブチル−１−メチルキサンチンを意味する。
「ＩＣ５０」は、最大阻害の５０％が達成される濃度を意味する。
「ｉ．ｖ．」は、静脈内のまたは静脈内に、を意味する。
「ｉ．ｐ．」は、腹腔内を意味する。
「Ｌ−ＡＰ−４」は、Ｌ−（＋）−２−アミノ−４−ホスホノ酪酸を意味する。
「ＬＣ／ＭＳ」は、液体クロマトグラフィに続く質量分析を意味する。
「ｍＦＳＴ」は、マウス強制水泳試験；抗うつ活性に対する動物モデルを意味する。
「ＭＳ」は、質量分析を意味する。
「ＭＳ（ＥＳ＋）」は、エレクトロスプレーイオン化を用いた質量分析を意味する。
「ＮＭＲ」は、核磁気共鳴を意味する。
「ｐ．ｏ．」は、口による経口的を意味する。
「ｔＢｕ」は、第三級ブチル部分を意味する。
【００２４】
一般化学
本発明の化合物は、当該分野において周知であり認められている方法による以下の合成スキームに従って調製され得る。これらのスキームの工程に適した反応条件は、当該分野で周知であり、溶媒および補助試薬（ｃｏ−ｒｅａｇｅｎｔｓ）の適切な置換は、当該分野の技術範囲内である。同様に、合成中間体が、必要に応じまたは所望であれば、様々な周知の手法によって単離され得るおよび／または精製され得ること、ならびにしばしば、様々な中間体をほとんどまたは全く精製せずに直接その後の合成工程において使用することが可能であり得ることも当業者に認識されるだろう。さらに、当業者は、いくつかの状況では、部分が導入される順序が重大な意味を持たないことを認識するだろう。本発明の化合物を生成するために必要な特定の工程の順序は、合成される特定の化合物、出発化合物、および熟練の化学者が十分に認識しているような、置換部分の相対的な傾向に依存する。別段示されない限り、すべての置換基が、先に定義されたとおりであり、すべての試薬が、当該分野において周知でありかつ認識されているものである。
【００２５】
プロドラッグ化合物１は、スキームＩに図示されるように調製され得る（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびｎが、先に定義されたとおりであり、Ｒ１およびＲ２の両方が水素でない）。
スキームＩ
【化２】
0005877847.tif 000003
化合物４を、当業者に周知の条件下でジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートなどのアミノ保護試薬と反応させることにより、化合物３が得られる。Ｒ１およびＲ２基が、化合物２において同一であるときは、化合物３を、十分量の適切なクロロメチルアルキルカーボネートおよび適切な試薬（例えば、ヨウ化ナトリウムおよび炭酸セシウム）と、ジメチルホルムアミドなどの好適な溶媒中で反応させることにより、同じＲ１およびＲ２を有する所望のジエステル化合物２が得られる。Ｒ１およびＲ２が、化合物２において異なるときは、第１のクロロメチルアルキルカーボネートの量を約１当量に調節することによって、はじめに、５員環上のカルボン酸をＲ２モノエステルに変換し得る。そのＲ２モノエステル化合物を、１当量の異なるクロロメチルアルキルカーボネートとさらに反応させ得る。次いで、３員環上の遊離カルボン酸基をＲ１エステルに変換することにより、異なるＲ１およびＲ２を有する所望のジエステルを得ることができる。化合物２の５員環上にＲ２モノエステルを生成するために、化合物３を、約１当量の適切なクロロメチルアルキルカーボネートおよび適切な試薬（例えば、ヨウ化ナトリウムおよび炭酸セシウム）と、ジメチルホルムアミドなどの好適な溶媒中で反応させることにより、所望のＲ２モノエステル化合物２（式中、Ｒ１は水素である）が得られる。５員環上のカルボン酸基は、塩基性条件下でより反応性であるので、３員環上にＲ１モノエステルを生成するために、その５員環上のカルボン酸基が、初めに保護されるべきである。より詳細には、化合物３における５員環上のカルボン酸基を、アルファ−クロロ−４−メトキシトルエン、ヨウ化ナトリウムおよび炭酸水素ナトリウムと、ジメチルホルムアミドなどの好適な溶媒中で反応させることにより、４−メトキシルベンジルモノエステルを得ることができる。次いで、保護された４−メトキシルベンジルモノエステル化合物の３員環上の遊離カルボン酸基を、適切なクロロメチルアルキルカーボネートと反応させることにより、３員環上に所望のＲ１エステルがもたらされる。そのジエステルを、トリフルオロ酢酸などの適切な酸で処理することにより、４−メトキシルベンジルおよびＮ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基を脱保護することにより、所望のＲ１モノエステル化合物１（式中、Ｒ２は水素である）が得られる。次いで、同じまたは異なるＲ１およびＲ２を有するＲ２モノエステルおよびジエステルを含む化合物２を、ジオキサン中で塩酸などの適切な酸で脱保護することにより、所望の化合物１または薬学的に許容可能な塩が得られる。
【００２６】
スキームＩＩ
【化３】
0005877847.tif 000004
【００２７】
Ｒ４がヒドロキシル基ではない活性な親化合物４は、スキームＩＩに図示されているように調製され得る。
【００２８】
化合物７を、塩化メタンスルホニルおよび適切な塩基（例えば、ピリジン）と反応させることにより、メシレート化合物６が得られる。化合物６を、１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオールなどのチオール複素環および炭酸セシウムなどの好適な塩基と、ジメチルホルムアミドなどの溶媒中で反応させることにより、Ｒ４が所望のチオ連結された複素環である所望の化合物５を得ることができる。また、化合物６をアジ化ナトリウムと反応させることによりアジド中間体を得て、次いで、それを１，３−プロパンジチオールなどの還元試薬とメタノールなどの好適な溶媒中で反応させることにより、Ｒ４がアミノ基である化合物５が得られる。得られたアミンが、当業者に周知の方法を用いてさらにアミドを形成することにより、Ｒ４が所望のアミドである化合物５を得ることができる。次いで、化合物５を、塩酸または酢酸などの適切な酸で脱保護することにより、化合物４が得られる。
【００２９】
スキームＩＩＩ
【化４】
0005877847.tif 000005
【００３０】
Ｒ４がヒドロキシル基である活性な親化合物８およびＲ４がヒドロキシル基以外の基である重要な中間体化合物７は、スキームＩＩＩに図示されているように調製され得る。
【００３１】
化合物１２（合成の詳細についてはＷＯ０３／１０４２１７／Ａ２を参照のこと）を、トルエン中のｔｅｒｔ−ブトキシビス（ジメチルアミノ）メタンと反応させることにより、化合物１１が得られる。テトラヒドロフランなどの好適な溶媒中の化合物１１を、低温下において、トリエチルアミンなどの適切な塩基および水素化ジイソブチルアルミニウムなどの適切な還元試薬で処理することにより、化合物１０が得られる。次いで、化合物１０を、トリエチルアミンおよび３，４−ジフルオロベンゼンチオールなどの適切な置換ベンゼンチオールと、トルエンなどの好適な溶媒中で反応させることにより、化合物９が得られる。化合物９のケトン基は、（Ｒ）−メチルオキサザボロリジンまたは（Ｓ）−メチルオキサザボロリジンを使用することによって、それぞれ所望の（Ｓ）ヒドロキシルまたは（Ｒ）ヒドロキシル化合物に選択的に還元され得る。その（Ｓ）ヒドロキシル中間体を、ジオキサンなどの溶媒中において、塩酸などの適切な酸で脱保護することにより、Ｒ４が（Ｓ）ヒドロキシル基である所望の活性な親化合物８が得られる。その（Ｒ）ヒドロキシル中間体７は、スキームＩＩに図示された方法を用いて、所望の生成物に変換され得る。
【００３２】
調製例１：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（ジメチルアミノメチレン）−４−オキソ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化５】
0005877847.tif 000006
トルエン（９０．９０ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−オキソビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１５．１５ｇ，３６．８２ｍｍｏｌ，合成の詳細についてはＷＯ０３／１０４２１７／Ａ２を参照のこと）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブトキシビス（ジメチルアミノ）メタン（１２．８３ｇ，７３．６３ｍｍｏｌ）を加える。次いで、この混合物を１時間、８０℃に加熱し、次いで、外界温度に冷却する。溶媒の体積を約３５ｍｌまで減少させる。ジエチルエーテルおよびヘキサンを加えて沈殿物を形成させつつ、その混合物を撹拌する。その固体を濾過により回収し、ヘキサン類で洗浄し、風乾することにより、表題化合物を得る（１６．７ｇ，３５．７９ｍｍｏｌ，９７．２％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４６７．２（Ｍ＋Ｈ）．
【００３３】
調製例２：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−メチリデン−４オキソビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化６】
0005877847.tif 000007
テトラヒドロフラン（３４０ｍｌ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（ジメチルアミノメチレン）−４−オキソ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１５．７ｇ，３３．８ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（６．６ｍＬ，４７．３２ｍｍｏｌ）を加える。その混合物を−７８℃に冷却する。水素化ジイソブチルアルミニウム（トルエン中１Ｎ，５０ｍＬ，５０ｍｍｏｌ）を１時間にわたって加える。その混合物をさらに２時間撹拌する。次いで、３０ｍＬの飽和塩化アンモニウム水溶液を加える。その混合物を外界温度に温める。その混合物を分液漏斗に移し、ブラインで洗浄する。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮することにより、残渣を得る。その残渣をフラッシュクロマトグラフィ（０〜５０％酢酸エチル／ヘキサン類）で精製することにより、表題化合物を得る（１２ｇ，３３．３４ｍｍｏｌ，８３．８％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４２２（Ｍ−Ｈ）．
【００３４】
調製例３：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化７】
0005877847.tif 000008
ジエチルエーテル（１００ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−メチリデン−４−オキソビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１．０３ｇ，２．４３ｍｍｏｌ）に１０分間、窒素ガスを通す。３，４−ジフルオロベンゼンチオール（０．３６ｇ，２．４３ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．０１ｍＬ，０．０５μｍｏｌ）を加える。その混合物を４０℃に温め、１５分間撹拌する。次いで、その混合物を外界温度に冷却し、分液漏斗に移し、ヘキサン（４０ｍＬ）で希釈し、２Ｎ  ＫＯＨ水溶液（１×３０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮することにより、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−オキソビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１．３５ｇ，２．３７ｍｍｏｌ）を得る：ＭＳ（ｍ／ｚ）：５６７．８（Ｍ−Ｈ）。この材料を、１２０ｍＬのジエチルエーテルに溶かし、Ｒ−（＋）−２−メチル−ＣＢＳ−オキサザボロリジン（９８１．７２ｍｇ，３．５４ｍｍｏｌ）およびボラン−メチルスルフィド錯体（テトラヒドロフラン中２Ｍ，５．０２ｍＬ，１０．０４ｍｍｏｌ）を含む−１０℃の２００ｍＬのエーテル溶液に２時間にわたってゆっくり加える。ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−オキソビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレートの最後の添加の後、その混合物をさらに１時間撹拌する。シリカゲル（３０ｇ）を３０分間にわたって加え、その反応混合物を外界温度まで徐々に温める。その懸濁液を濾過し、３００ｍＬのジエチルエーテルで洗浄する。溶媒を減圧下で濃縮することにより、残渣を得る。その残渣を、（０〜１５％酢酸エチル／ヘキサン類）で溶出するフラッシュクロマトグラフィで精製することにより、表題化合物を得る（０．８４４ｇ，１．４８ｍｍｏｌ，６０．７％収率）：ＭＳ（ｍ／ｚ）：５６９．８（Ｍ−Ｈ）．
【００３５】
以下の化合物は、本質的に調製例３の方法によって調製される：
【００３６】
【表１】
0005877847.tif 000009
【００３７】
調製例１０：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（４−フルオロ−３−メチル−フェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化８】
0005877847.tif 000010
ジエチルエーテル（８０ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−メチレン−４−オキソ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（８ｇ，１８．９ｍｍｏｌ）に１０分間、窒素ガスを通す。４−フルオロ−３−メチル−ベンゼンチオール（２．７ｇ，１８．９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．２６ｍＬ，１．８９ｍｍｏｌ）を加える。その混合物を４０℃に温め、１５分間撹拌する。次いで、その混合物を外界温度に冷却し、滴下漏斗に移し、Ｓ−（−）−２−メチル−ＣＢＳ−オキサザボロリジン（テトラヒドロフラン中１Ｍ）（５．６７ｍＬ，５．６７ｍｍｏｌ）およびボラン−メチルスルフィド錯体（テトラヒドロフラン中２Ｍ，８．５ｍＬ，１７ｍｍｏｌ）を含む−１０℃の２００ｍｌのエーテル溶液に２時間にわたってゆっくり加える。最後の添加の後、その混合物をさらに１時間撹拌する。シリカゲル（４０ｇ）を３０分間にわたって加え、その反応混合物を外界温度まで徐々に温める。その懸濁液を濾過し、３００ｍｌのジエチルエーテルで洗浄する。溶媒を減圧下で濃縮することにより、残渣を得る。その残渣を、（０〜２５％酢酸エチル／ヘキサン類）で溶出するフラッシュクロマトグラフィで精製することにより、表題化合物を得る（９．８ｇ，１７．３ｍｍｏｌ，９１．５％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５６５．８（Ｍ−Ｈ）．
【００３８】
調製例１１：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（４−フルオロ−３−メチル−フェニル）スルファニルメチル］−４−メチルスルホニルオキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化９】
0005877847.tif 000011
ピリジン（６０ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（４−フルオロ−３−メチル−フェニル）スルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（４．６ｇ，８．１０ｍｍｏｌ）を０℃に冷却する。この混合物に、塩化メタンスルホニル（１．８８ｍｌ，２４．３１ｍｍｏｌ）を加える。その混合物を４０℃に温め、１時間撹拌し、外界温度まで冷却し、１８時間撹拌する。その混合物を減圧下で濃縮することにより、残渣を得る。その残渣を、酢酸エチルと１Ｎ  ＨＣｌ水溶液（２×５０ｍＬ）とに分ける。有機層を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮することにより、表題化合物を得る（５．２ｇ，８．０５ｍｍｏｌ，９９．４％収率）：ＭＳ（ｍ／ｚ）：６４３．６（Ｍ−Ｈ）．
【００３９】
調製例１２：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（４−フルオロ−３−メチル−フェニル）スルファニルメチル］−４−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イルスルファニル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１０】
0005877847.tif 000012
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（４−フルオロ−３−メチル−フェニル）スルファニルメチル］−４−メチルスルホニルオキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（５．３ｇ，８．２１ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）に溶解する。この混合物に、炭酸セシウム（５．４０ｇ，１６．４１ｍｍｏｌ）、１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−チオール（３．４２ｇ，３２．８３ｍｍｏｌ）およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（９０６ｍｇ，４．１０ｍｍｏｌ）を加える。その混合物を４０℃で７２時間撹拌する。その反応物を、冷却し、水およびＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチする。その混合物を分液漏斗に移し、ジエチルエーテルで抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮することにより、残渣を得る。その残渣をフラッシュクロマトグラフィ（０〜５０％酢酸エチル／ヘキサン類）で精製することにより、表題化合物を得る（０．８８ｇ，１．３５ｍｍｏｌ，１６．５％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６５１（Ｍ＋Ｈ）．
【００４０】
調製例１３：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−アジド−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（４−フルオロ−３−メチル−フェニル）スルファニルメチル］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１１】
0005877847.tif 000013
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（４−フルオロ−３−メチル−フェニル）スルファニルメチル］−４−メチルスルホニルオキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（５．９ｇ，９．１４ｍｍｏｌ）をジメチルスルホキシド（３０ｍＬ）に溶解する。この混合物に、アジ化ナトリウム（２．５ｇ，３８．３７ｍｍｏｌ）を加える。その混合物を１００℃で１８時間撹拌する。溶媒を減圧下で除去することにより、残渣を得る。その残渣を、ジエチルエーテル（１００ｍｌ）に懸濁し、濾過する。有機層を分液漏斗に移し、水およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮することにより、残渣を得る。その残渣をフラッシュクロマトグラフィ（０〜１５％酢酸エチル／ヘキサン類）で精製することにより、表題化合物を得る（３．１４ｇ，５．３０ｍｍｏｌ，５８％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５９１（Ｍ−Ｈ）．
【００４１】
調製例１４：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（４−フルオロ−３−メチル−フェニル）スルファニルメチル］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１２】
0005877847.tif 000014
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−アジド−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（４−フルオロ−３−メチル−フェニル）スルファニルメチル］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１．８８ｇ，３．１７ｍｍｏｌ）をメタノール（１５．８６ｍＬ）に溶解する。この混合物に、トリエチルアミン（１．７７ｍＬ，１２．７ｍｍｏｌ）および１，３−プロパンジチオール（１．２８ｍＬ，１２．６９ｍｍｏｌ）を加える。その混合物を外界温度で１８時間撹拌する。その混合物を水に注ぎ込み、酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮することにより、残渣を得る。その残渣をフラッシュクロマトグラフィ（５０〜１００％酢酸エチル／ヘキサン類）で精製することにより、表題化合物を得る（１．２ｇ，２．１２ｍｍｏｌ，６６．７６％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５６７．２（Ｍ＋１）．
【００４２】
調製例１５：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−アセトアミド−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（４−フルオロ−３−メチル−フェニル）スルファニルメチル］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１３】
0005877847.tif 000015
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４−アミノ−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（４−フルオロ−３−メチル−フェニル）スルファニルメチル］ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（０．１５ｇ，２６４．６７μｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解する。この混合物に、トリエチルアミン（５５．３４μＬ，３９７．０１μｍｏｌ）および塩化アセチル（２８．２５μＬ，３９７．０１μｍｏｌ）を加える。その混合物を外界温度で１０分間撹拌する。溶媒を減圧下で除去することにより、残渣を得る。その残渣をフラッシュクロマトグラフィ（１０％〜１００％酢酸エチル／ヘキサン類）で精製することにより、表題化合物を得る（１００ｍｇ，１６４．２７μｍｏｌ、６２．０６％収率）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３Ｃｌ）δ  １．４４（ｔ，２７Ｈ），１．９５（ｓ，３Ｈ），２．１６（ｍ，１Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），２．６０（ｄｄ，１Ｈ），２．７８（ｂｓ，１Ｈ），３．１０（ｄｄ，１Ｈ），４．５９（ｍ，１Ｈ），５．５０（ｄ，１Ｈ），６．９２（ｔ，１Ｈ），７．０６（ｍ，１Ｈ），７．１１（ｄ，１Ｈ）．
【００４３】
調製例１６：（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化１４】
0005877847.tif 000016
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（４．１１ｇ，７．１９ｍｍｏｌ）を、撹拌子とともに１リットル丸底に量り入れる。塩化水素（ジオキサン中４Ｎ，１２０ｍＬ，４８０．０ｍｍｏｌ）を加える。その混合物を２時間、７０℃に温め、次いで、外界温度に冷却する。溶媒を減圧下で除去することにより、残渣を得る。その残渣を、ジクロロメタン（２００ｍＬ）に溶解し、溶媒を減圧下で除去することにより、残渣を得る。これをさらに２回繰り返すことにより、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩を得る。この材料を懸濁液としてテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）に溶かす。この懸濁液に、トリエチルアミン（４０．０８ｍＬ，２８７．５７ｍｍｏｌ）を加える。その懸濁液を１０分間撹拌し、次いで、メタノール（５０ｍｌ）を加える。その反応物に、ジ−ｔ−ブチルジカーボネート（４．７１ｇ，２１．５７ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を２時間、８０℃に加熱する。その混合物を外界温度にして、溶媒を減圧下で除去することにより、残渣を得る。その残渣を、アセトニトリル（５０ｍｌ）に溶解し、分液漏斗に移し、ヘキサン類で洗浄する。アセトニトリル層を分離し、減圧下で除去することにより、残渣を得る。その残渣を、ジエチルエーテルに懸濁し、分液漏斗に移し、１Ｎ  ＨＣｌ水溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮することにより、表題化合物を得る（３ｇ，６．５３ｍｍｏｌ，９０．８２％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４５７．８（Ｍ−Ｈ）．
【００４４】
以下の化合物は、本質的に調製例１６の方法によって調製される：
【００４５】
【表２】
0005877847.tif 000017
【００４６】
調製例２１：ビス（クロロメチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（４−フルオロ−３−メチル−フェニル）スルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１５】
0005877847.tif 000018
ジクロロメタン（１３．２ｍＬ）および水（１３．２ｍＬ）中の、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（４−フルオロ−３−メチル−フェニル）スルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（２．４ｇ，５．２７ｍｍｏｌ）と、テトラ（ｎ−ブチル）アンモニウムビスルフェート（１７８．９０ｍｇ，５２６．８９μｍｏｌ）と、炭酸水素ナトリウム（３．５４ｇ，４２．１５ｍｍｏｌ）との撹拌混合物に、クロロ硫酸クロロメチル（１．２０ｍＬ，１１．５９ｍｍｏｌ）を加える。その混合物を外界温度で１８時間撹拌する。その反応物を水に注ぎ込み、ジクロロメタンで抽出する。合わせた有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮することにより、残渣を得る。その残渣をフラッシュクロマトグラフィ（２０〜３５％酢酸エチル／ヘキサン）で精製することにより、表題化合物を得る（１．３７ｇ，２．４８ｍｍｏｌ，４７％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５７４．０（Ｍ＋Ｎａ）．
【００４７】
以下の化合物は、本質的に調製例２１の方法によって調製される：
【００４８】
【表３】
0005877847.tif 000019
【００４９】
調製例２４：ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１６】
0005877847.tif 000020
炭酸カリウム（６６８．４３ｍｇ，４．７９ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム（７５．０３ｍｇ，５００．５８μｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド（１３．０６ｍＬ）中の（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（１ｇ，２．１８ｍｍｏｌ）に加える。その混合物を外界温度で１０分間撹拌する。炭酸イソプロピルクロロメチル（１ｇ，６．５３ｍｍｏｌ）を加える。その混合物を外界温度で１８時間撹拌する。酢酸（４ｍｌ）を加え、その混合物を１０分間撹拌する。溶媒の体積を減圧下で約１０ｍｌ減少させることにより、粘稠性の残渣を得る。その残渣を、ジエチルエーテルで希釈し、１０分間撹拌する。その溶液をフィルターに通し、溶媒を減圧下で除去することにより、残渣を得る。その残渣を高真空下で１時間放置する。その残渣を、（０〜３５％テトラヒドロフラン／ヘキサン類）で溶出するフラッシュクロマトグラフィで精製することにより、表題化合物を得る（０．８８ｇ，１．２７ｍｍｏｌ，５８．５％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：７１４．２（Ｍ＋Ｎａ）．
【００５０】
以下の化合物は、本質的に調製例２４の方法によって調製される：
【００５１】
【表４−１】
0005877847.tif 000021
【表４−２】
0005877847.tif 000022
【００５２】
調製例３５：ビス｛［（２−メチルプロパノイル）オキシ］メチル｝（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（４−フルオロ−３−メチルフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化１７】
0005877847.tif 000023
イソ酪酸（０．２１ｇ，２．４２ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解する。この溶液に、炭酸カリウム（０．５４ｇ，３．８７ｍｍｏｌ）を加える。その混合物を５０℃で３時間撹拌し、次いで、室温に冷却する。その混合物に、ビス（クロロメチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−［（４−フルオロ−３−メチル−フェニル）スルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（５３５ｍｇ，０．９７ｍｍｏｌ）を加える。その混合物を外界温度で１８時間撹拌する。その混合物を酢酸エチルで希釈し、分液漏斗に移し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で濃縮することにより、残渣を得る。その残渣をフラッシュクロマトグラフィ（１０〜４０％酢酸エチル／ヘキサン類）で精製することにより、表題化合物を得る（２３０ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ，３７％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：６７８．２（Ｍ＋Ｎａ）．
【００５３】
以下の化合物は、本質的に調製例３５の方法によって調製される：
【００５４】
【表５−１】
0005877847.tif 000024
【表５−２】
0005877847.tif 000025
【実施例】
【００５５】
実施例１：（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸塩酸塩
【化１８】
0005877847.tif 000026
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（０．５８ｇ，７．１９ｍｍｏｌ）を、撹拌子とともに１００ｍＬ丸底に量り入れる。塩化水素（ジオキサン中４Ｎ，３３ｍＬ，１３２．０ｍｍｏｌ）を加える。その混合物を２時間、７０℃に温め、次いで、外界温度に冷却する。溶媒を減圧下で除去することにより、残渣を得る。その残渣を、ジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解し、溶媒を減圧下で除去することにより、残渣を得る。これをさらに３回行うことにより、表題化合物を得る（５６７ｍｇ，１．４３ｍｍｏｌ，９７％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６０．０（Ｍ＋１）．
【００５６】
以下の化合物は、本質的に実施例１の方法によって調製される：
【００５７】
【表６】
0005877847.tif 000027
【００５８】
実施例８：（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−４−ヒドロキシ−３−｛［（４−メチルフェニル）スルファニル］メチル｝ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化１９】
0005877847.tif 000028
ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−ヒドロキシ−３−（ｐ−トリルスルファニルメチル）ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（３００ｍｇ，５４５．７３μｍｏｌ）をマイクロ波用バイアルに入れる。そのバイアルに、水（２ｍＬ，１１０ｍｍｏｌ）および酢酸（２ｍＬ，３４．９ｍｍｏｌ）を加える。その混合物をマイクロ波で２０分間、１４０℃に加熱する。溶媒を減圧下で除去することにより、表題化合物を得る（１６５ｍｇ，４８９．０４μｍｏｌ，８９．６％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３３８．０（Ｍ＋Ｈ）．
【００５９】
以下の化合物は、本質的に実施例８の方法によって調製される：
【００６０】
【表７】
0005877847.tif 000029
【００６１】
実施例１２：ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩
【化２０】
0005877847.tif 000030
ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（０．８８ｇ，１．２７ｍｍｏｌ）を塩化水素（ジオキサン中４Ｎ，３０ｍＬ，１２０．００ｍｍｏｌ）に溶解し、外界温度で１．５時間撹拌する。溶媒を減圧下で除去することにより、残渣を得る。その残渣を、ジクロロメタンに溶解し、溶媒を減圧下で除去する。このプロセスを８回繰り返す。その残渣を、高真空下に一晩放置することにより、表題化合物を得る（０．６９２ｇ，１．１０ｍｍｏｌ，８６．６１％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５９１．８（Ｍ＋Ｈ）．
【００６２】
以下の化合物は、本質的に実施例１２の方法によって調製される：
【００６３】
【表８−１】
0005877847.tif 000031
【表８−２】
0005877847.tif 000032
【表８−３】
0005877847.tif 000033
【表８−４】
0005877847.tif 000034
【００６４】
実施例３２：ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩
【化２１】
0005877847.tif 000035
工程１：ジｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（ジメチルアミノメチレン）−４−オキソ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化２２】
0005877847.tif 000036
Ｔｅｒｔ−ブトキシビス（ジメチルアミノ）メタン（４８１．１ｍｌ，２．３３ｍｏｌ）を、乾燥トルエン（３．６Ｌ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−オキソビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（６００ｇ，１．４６ｍｏｌ）の懸濁液に、窒素下、室温において加える。その混合物を８０℃で３時間４５分間加熱し、次いで、室温に冷却し、一晩撹拌する。反応体積を真空中で減少させ、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１．８Ｌ）およびヘキサン（１．８Ｌ）で希釈し、１５℃で３時間撹拌する。３時間後、得られた固体を濾過により回収し、冷ヘキサン（２×１．８Ｌ）で洗浄し、真空下で乾燥することにより、表題化合物を得る（６２０．４ｇ，９１％収率）。ＨＰＬＣ−ＭＳ：９８％．
【００６５】
工程２：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−メチリデン−４−オキソビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化２３】
0005877847.tif 000037
乾燥テトラヒドロフラン（１２Ｌ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−（ジメチルアミノメチレン）−４−オキソ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（６２０．４ｇ，１．３３ｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（２７７．３ｍｌ，１．９９ｍｏｌ）を窒素下、室温において加える。その混合物を−４７℃に冷却し、水素化ジイソブチルアルミニウム（ヘキサン中１Ｍ，２．０６Ｌ，２．０６ｍｏｌ）を２時間にわたって滴下する。得られた混合物を−４７℃で撹拌する。１時間１５分後、酢酸（１１８ｍｌ，２．０６ｍｏｌ）を−４７℃で滴下し、室温に温め、次いで、一晩撹拌する。２０％Ｈ３ＰＯ４水溶液をｐＨ＝２になるまで加える。有機相を分離し、酢酸エチル（２×１．７Ｌ）を用いて水相を抽出する。合わせた有機相を１０％ＨＣｌ水溶液（１．５Ｌ）、水（１．５Ｌ）およびブライン（１．５Ｌ）で続けて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮することにより、固体を得る。得られた固体を、水（３．２Ｌ）を用いて粉末化し、濾過により回収し、次いで、乾燥することにより、表題化合物を得る（５５８．２ｇ，９９％収率）。ＨＰＬＣ−ＭＳ：９７．４％．
【００６６】
工程３：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−オキソビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化２４】
0005877847.tif 000038
トルエン（２．９５Ｌ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−メチリデン−４−オキソビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（３５０．００ｇ，８２６．４３ｍｍｏｌ）の懸濁液を、２５℃において、３，４−ジフルオロベンゼンチオール（１７２．４９ｇ，１．１８ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２０５．６１ｍＬ，１４９．２８ｇ，１．４８ｍｏｌ）で処理する。その混合物を８０℃で撹拌する。１２時間後、その反応物を室温に冷却し、２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（ｐＨ＝１０）および１Ｎ  ＨＣｌ水溶液（ｐＨ＝４）で続けて洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空中で濃縮することにより、残渣を得た。その残渣を、ヘキサン（１Ｌ）を用いて粉末化し、溶媒を除去することにより、表題化合物を得た（６６４ｇ，１００％収率）。
【００６７】
工程４：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化２５】
0005877847.tif 000039
トルエン（２２８．２１ｍＬ）中の１Ｎ  （Ｒ）−メチルオキサザボロリジンおよび無水メチルｔ−ブチルエーテル（４．５６Ｌ）中のボラン−メチルスルフィド錯体（８６．６８ｇ，１０１．９８ｍＬ，１．１４ｍｏｌ）の溶液を−４０℃に冷却する。この溶液に、メチルｔ−ブチルエーテル（３．４２Ｌ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−オキソビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（６５０．００ｇ，１．１４ｍｏｌ）を滴下漏斗によって２時間にわたって加え、そこでその反応物を０℃に温める。１時間後、メタノール（４６１．８０ｍＬ，１１．４１ｍｏｌ）を加え、内部温度を１５℃未満で維持する。その反応物を、２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（２Ｌ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空中で濃縮することにより、残渣を得る。その残渣を、シリカゲルクロマトグラフィ（８：１〜１：１ヘキサン／酢酸エチル）で精製することにより、表題化合物を得る（５８０ｇ，８９％収率）。
【００６８】
工程５：（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化２６】
0005877847.tif 000040
水（１．１０Ｌ）および１２．１８Ｍ塩化水素水溶液（７８９．８８ｍＬ，９．６２ｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（１９２．４１ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（５５０．００ｇ，９６２．０７ｍｍｏｌ）の溶液に加える。得られたスラリーを１００℃で撹拌する。１２時間後、その反応物を、２５℃に冷却し、１２時間撹拌し、次いで、ＮａＯＨ（５０％ｗｔ／ｗｔ）でｐＨ＝２．６５まで塩基性化する。得られた混合物を１０℃で３０分間撹拌し、そこで、沈殿物を濾過により回収し、水（１Ｌ）およびメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１Ｌ）で洗浄し、２５℃で２時間、次いで、一定の重量になるまでオーブンにおいて６０℃で乾燥することにより、表題化合物を得る（３００ｇ，８７％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６０（Ｍ＋１）．
【００６９】
工程６：（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸
【化２７】
0005877847.tif 000041
トリエチルアミン（４０７．２７ｍＬ，２．９２ｍｏｌ）および［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルオキシイミノ）−２−フェニルアセトニトリル］（３０８．３９ｇ，１．２５ｍｏｌ）を、１，４−ジオキサン（５００．９ｍＬ）および水（５００．９ｍＬ）中の（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（３００．００ｇ，８３４．８４ｍｍｏｌ）の懸濁液に２５℃で加える。その混合物を５０℃に温める。１２時間後、その反応物を２５℃に冷却し、水（２．５Ｌ）で希釈し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（６×１Ｌ）で洗浄する。その水相を、ｐＨ＝２になるまで１Ｎ  ＨＣｌ水溶液で塩基性化し、酢酸エチルで抽出する（３×２Ｌ）。合わせた酢酸エチル抽出物をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空中で濃縮することにより、表題化合物を得る（２５０ｇ，６５％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：３６０（Ｍ＋−Ｂｏｃ）．
【００７０】
工程７：ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート
【化２８】
0005877847.tif 000042
ジメチルホルムアミド（３．３８Ｌ）中の（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボン酸（１５０．００ｇ，３２６．４６ｍｍｏｌ）の溶液を、炭酸カリウム（ｌ１８０．４８ｇ，１．３１ｍｏｌ）、炭酸イソプロピルクロロメチル（１４９．４３ｇ，９７９．３９ｍｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウム（９．７９ｇ，６５．２９ｍｍｏｌ）で続けて処理し、その混合物を窒素下、２５℃で撹拌する。１２時間後、その混合物に水（１．５Ｌ）を加え、固体を濾過して除去し、濾液をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで抽出する（３×１．５Ｌ）。合わせた有機相を水、ブラインで続けて洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空中で濃縮する。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィ（２：１〜１：１ヘキサン／酢酸エチル）で精製することにより、表題化合物を得る（２２５ｇ，７０％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５９２（Ｍ＋−Ｂｏｃ）．
【００７１】
工程８：ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−アミノ−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート塩酸塩
【化２９】
0005877847.tif 000043
ビス（｛［（１−メチルエトキシ）カルボニル］オキシ｝メチル）（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−｛［（３，４−ジフルオロフェニル）スルファニル］メチル｝−４−ヒドロキシビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２，６−ジカルボキシレート（１２４．９ｇ，１８０．５７ｍｍｏｌ）を、２５℃において１，４−ジオキサン（１．１２Ｌ，４．５０ｍｏｌ）中の４Ｎ塩化水素で処理する。９０分後、溶媒を真空中で除去し、残渣を３０分間、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１Ｌ）中でスラリーにする。得られた沈殿物を濾過により回収し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（５００ｍＬ）で洗浄し、１６時間、オーブンにおいて４５℃で乾燥する。得られた塩をジクロロメタンおよび水に溶解し、次いで、トリエチルアミンで中和する。有機相を分離し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、真空中で濃縮することにより、残渣を得る。その残渣を、シリカゲルクロマトグラフィ（３：１〜１：１ヘキサン／酢酸エチル）で精製することにより、遊離塩基を得て、それを２５℃において１，４−ジオキサン（９５０ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌで処理する。１５分後、溶媒を真空中で蒸発させ、残渣をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１Ｌ）およびヘキサン類（２５０ｍＬ）中でスラリーにする。得られた固体を濾過し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（５００ｍＬ）で洗浄し、一定の重量になるまで４５℃、真空中で乾燥することにより、表題化合物を得る（９８．５ｇ，８７％収率）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：５９２（Ｍ＋１）．
【００７２】
文献データ（Ｗｉｔｋｉｎ，Ｊｅｆｆｒｅｙ  Ｍ．，ａｎｄ  Ｅｉｌｅｒ，Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｊ．Ａ．（２００６），Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ  ｏｆ  Ｍｅｔａｂｏｔｒｏｐｉｃ  Ｇｌｕｔａｍａｔｅ  Ｇｒｏｕｐ  ＩＩ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｖｏｌ  ６７，ｐｇ．７５７−７６９；およびＹａｓｕｈａｒａ，Ａｋｉｔｏ  ａｎｄ  Ｃｈａｋｉ，Ｓｈｉｇｅｙｕｋｉ，（２０１０）Ｍｅｔａｂｏｔｒｏｐｉｃ  Ｇｌｕｔａｍａｔｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｔｈｅ  Ｏｐｅｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ，ｖｏｌ．４，ｐｇ．２０−３６）および非臨床動物試験において生成されたデータは、うつ病性障害および過剰な眠気に関する障害の処置におけるｍＧｌｕ２／３アンタゴニストに対する役割を支持する。具体的には、ｍＧｌｕ２／３受容体アンタゴニストが、うつ病性障害のげっ歯類モデルにおいて有効であり、ＥＥＧでモニターされるげっ歯類を用いたとき、過剰なもしくは臨床的に関連性のある活動亢進または極度の代償的な傾眠過剰なしに、覚醒状態を促進することが見出されている。警戒の増大は、注意力の増大、認知能力の改善および疲労減少の可能性として現れる。先に記載された障害は、共存する共通の臨床症状を示すので、ｍＧｌｕ２／３受容体アンタゴニストは、特定の患者集団（例えば、大うつ病性障害、処置抵抗性うつ病、単極性うつ病、気分変調および／もしくは循環気質（ｃｙｃｌｏｔｈｉｍｉａ）または過剰な眠気に関する任意の障害を有する患者）において特に有効であり得る。過剰な眠気に関する障害としては、日中の過剰な眠気（ＥＤＳ）、閉塞性睡眠時無呼吸またはナルコレプシーに関連する過眠、概日リズム睡眠障害（交代勤務睡眠障害、時差ぼけ障害、睡眠相後退障害、睡眠相前進障害および非２４時間睡眠覚醒症候群を含むがこれらに限定されない）、特発性過眠症および非回復性睡眠（ＮＲＳ）に関連する過剰な眠気が挙げられ得るが、これらに限定されない。
【００７３】
本化合物の特徴をさらに証明するために、代表的な化合物が、以下のインビトロおよびインビボアッセイにおいて実験され得る。
【００７４】
ｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３受容体ｃＡＭＰアンタゴニストアッセイ
アンタゴニスト活性は、ヒトｍＧｌｕ２またはｍＧｌｕ３受容体およびラットグルタミン酸トランスポーターＥＡＡＴ１（興奮性アミノ酸トランスポーター１）を安定的に発現する組換えＡＶ１２細胞においてアッセイされる。その細胞株は、５％透析ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび１ｍＭ  Ｌ−グルタミンが補充された、高グルコースおよび塩酸ピリドキシンを含むＤＭＥＭ中で培養することによって維持される；ジェネテシンおよびハイグロマイシンＢが、選択抗生物質として使用される。コンフルエントな培養物を、６．５％ＣＯ２を含む雰囲気中、３７℃で生育し、２週間に１回継代する。０．２５％トリプシンを用いて細胞を回収し、凍結培地（１０％ＤＭＳＯを含むＦＢＳ）に１０７細胞／ｍｌで懸濁し、アリコートを液体窒素中で凍結する。アッセイの２４時間前に、細胞を、組織培養処理済９６ウェルハーフエリア黒色プレート（Ｃｏｓｔａｒ３８７５）において、５％透析ＦＢＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１００μｇ／ｍｌアンピシリンおよび２５０μＭ（ｍＧｌｕ２）または１２５μＭ（ｍＧｌｕ３）のＬ−グルタミンが補充された高グルコースおよび塩酸ピリドキシンを含む５０μｌのＤＭＥＭ中、８，０００〜１０，０００細胞／ウェルの密度でプレーティングする。
【００７５】
被験化合物による、フォルスコリンで刺激されたｃＡＭＰ産生の阻害の逆転を、均一時間分解蛍光技術（ＨＴＲＦ；Ｃｉｓｂｉｏ  ｃａｔ  ＃６２ＡＭ４ＰＥＢ）を用いて測定する。培地を除去し、細胞を、１００μｌのｃＡＭＰ刺激緩衝液（ＳＴＩＭ）と３７℃で３０分間インキュベートする。（ＳＴＩＭ緩衝液は、５００ｍｌのＨＢＳＳ、１０００ｍｌのＤＰＢＳ、０．０３４％ＢＳＡ、１．６７ｍＭ  ＨＥＰＥＳおよび５００μＭ  ＩＢＭＸ（Ｓｉｇｍａ  Ｉ５８７９）を含む。）ＳＴＩＭ緩衝液への３×段階希釈に続くさらなる４０倍希釈を用いる１０点濃度反応曲線において、化合物を試験する。ＤＣＧ  ＩＶ（Ｔｏｃｒｉｓ０９７５）は、参照アゴニストとして機能する。最終的な反応混合物は、１μＭ（ｍＧｌｕ２の場合）または３μＭ（ｍＧｌｕ３の場合）のフォルスコリン（Ｓｉｇｍａ  Ｆ６８８６）、そのＥＣ９０のＤＣＧ  ＩＶおよび最高２５μＭの被験化合物を含む。細胞を３７℃で２０分間インキュベートする。ｃＡＭＰレベルを測定するために、溶解緩衝液中のｃＡＭＰ−ｄ２結合体および抗ｃＡＭＰ−クリプテート結合体を、処理された細胞と室温で１時間（ｍＧｌｕ２）または１．５時間（ｍＧｌｕ３）インキュベートする。ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）を用いてＨＴＲＦシグナルを検出して、６６５と６２０ｎＭとの蛍光比を計算する。各実験に対して作成されたｃＡＭＰ検量線を用いて、生データをｃＡＭＰの量（ｐｍｏｌ／ウェル）に変換する。４パラメータロジスティック曲線フィッティングプログラム（ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅ  ｖ５．３．１．２２）を用いて、相対的なＩＣ５０値を濃度反応曲線の上から下までの範囲から計算する。
【００７６】
ｍＧｌｕ受容体の選択性についてのＦＬＩＰＲおよびｃＡＭＰアッセイ
他のヒトｍＧｌｕ受容体に対する本発明の化合物の相対的なアンタゴニスト効力は、ｃＡＭＰアッセイまたは蛍光定量的なカルシウム反応アッセイを用いて評価され得る（例えば、Ｆｅｌｌら、ＪＰＥＴ（印刷中）を参照のこと）。簡潔には、ラットＥＡＡＴ１グルタミン酸トランスポーターを含み、かつヒトｍＧｌｕ１、２、３、４、５、６および８受容体を安定的に発現する個別のＡＶ１２細胞株が、本研究のために使用される。ｍＧｌｕ１および５受容体は、Ｇｑ共役型であるので、それらは、天然には、ホスホリパーゼＣを介してシグナル伝達し、Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（ＦＬＩＰＲ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて受容体の活性化を測定するために使用され得るカルシウム流動反応を生じる。ｍＧｌｕ２、３、４および８受容体を発現する細胞株は、Ｇα１５サブユニットを発現するように設計され、これらのＧｉ共役型受容体は、ｍＧｌｕ１および５受容体を発現する細胞株と同様のカルシウム流動反応をもたらすことになる。ｍＧｌｕ６受容体は、上記のｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３に対して開発された方法と類似の方法を用いて、ｃＡＭＰ形式で試験される。これらの細胞株は、Ｌ−グルタミンの量および選択薬剤（ジェネテシン、ハイグロマイシンＢ、ゼオシンおよびブラストサイジン）が細胞株に応じて変化し得ることを除いて、先に記載されたように維持される。コンフルエントな培養物が、２週間に１回継代される。
【００７７】
細胞内カルシウムレベルは、細胞株に応じて、被験化合物およびＦｌｕｏ−３  ＡＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）またはＣａｌｃｉｕｍ  ４（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）色素の添加の前後に、ＦＬＩＰＲを用いてモニターされる。細胞は、細胞株に応じて様々な濃度のグルタミンおよび様々な１ウェルあたりの細胞密度において、アッセイの２４時間前にプレーティングされる。培地を除去し、細胞を、８μＭの色素（５０μｌ／ウェル）と２５℃で９０または１２０分間（細胞株に応じて）インキュベートする。そのアゴニストグルタメートに対する１１点濃度反応曲線を生成する単一添加ＦＬＩＰＲアッセイを各実験の前に行うことにより、細胞の適切な感度を確かめる。結果を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ｖ４．０３を用いて解析することにより、ＥＣ９０応答（アンタゴニストアッセイ）およびＥＣ１０応答（増強物質アッセイ）を誘導するのに必要なグルタメートの濃度が計算される。
【００７８】
アゴニストアッセイの場合は２５μＭ、ならびに増強物質アッセイおよびアンタゴニストアッセイの場合は１２．５μＭという最終濃度から出発する１０点濃度反応プロファイルを用いる２添加（２−ａｄｄｉｔｉｏｎ）ＦＬＩＰＲアッセイにおいて、各ｍＧｌｕ受容体において化合物を試験する。最初の添加は、任意のアゴニスト活性を検出し、第２の添加は、ＥＣ１０またはＥＣ９０グルタメート応答をもたらすアッセイ緩衝液中の１００μｌの選択濃度（細胞株に応じて）のグルタメートからなる。アゴニスト効果は、最大グルタメート反応に対する、化合物のみによって誘導されたパーセント刺激として定量される。アンタゴニスト効果は、その化合物によって引き起こされたＥＣ９０グルタメート応答のパーセント阻害を計算することによって定量される。増強効果は、ＥＣｍａｘ反応に対するグルタメートにおけるＥＣ１０反応の存在下のパーセント増加として定量される。すべてのデータが、４パラメータロジスティック曲線フィッティングプログラム（ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅ  ｖ５．３．１．２２）を用いて相対的なＩＣ５０またはＥＣ５０値として計算される。
【００７９】
ｍＧｌｕ６細胞におけるアンタゴニスト活性は、参照アゴニストがＬ−ＡＰ４（Ｔｏｃｒｉｓ）だったことを除いて、ｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３活性に対して上に記載された方法と類似の方法において、ｃＡＭＰを用いて測定される。ｍＧｌｕ６アゴニスト活性を測定するために、フォルスコリンで刺激されたｃＡＭＰ産生を化合物が阻害する程度が計算される。相対的なＩＣ５０およびＥＣ５０値は、４パラメータロジスティック曲線フィッティングプログラム（ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅ  ｖ５．３．１．２２）を用いて、濃度反応曲線の上から下までの範囲から計算される。
【００８０】
Ｒ１およびＲ２の両方が水素である例示化合物は、本質的には上に記載されたように試験され、ｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３受容体に対して高いアンタゴニスト効力を有すると見出される。Ｒ１およびＲ２の両方が水素である例示化合物は、他のｍＧｌｕ受容体サブタイプと比べてｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３受容体の選択的アンタゴニストであるとも見出される。Ｒ１およびＲ２の両方が水素である例示化合物のｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３受容体に対するＩＣ５０は、それぞれ７０ｎＭおよび１４０ｎＭ未満であると見出されるが、試験される他のｍＧｌｕ受容体に対するＩＣ５０は、有意に高いと見出される。実施例１および２の化合物は、本質的には上に記載されたように試験され、表１に示されるような活性プロファイルを有すると見出される。
【００８１】
【表９】
0005877847.tif 000044
【００８２】
さらに、本発明のある特定の化合物は、他の生理的に重要な受容体（例えば、ｈＥＲＧチャネル、セロトニン受容体（具体的には５−ＨＴ２Ａおよび５−ＨＴ２Ｂ）、ムスカリン受容体（具体的にはＭ２）およびｉＧｌｕＲ受容体（具体的にはｉＧｌｕＲ５）であるがこれらに限定されない）における有意な活性の欠如を示す。実施例１の化合物は、公知のアッセイ方法を用いて試験され、これらの受容体においてかなりの活性を有しないと見出される。
【００８３】
ゆえに、生理的に関連性のある用量の本発明の化合物は、他のｍＧｌｕ受容体または他の生理的に関連性のある受容体と実質的に相互作用せずに、インビボにおいてｍＧｌｕ２およびｍＧｌｕ３受容体の実質的な阻害をもたらすと予想され、ゆえに、オフターゲット活性に関連する望まれない作用を回避しつつ、所望の薬理学を提供すると予想される。
【００８４】
マウスにおける強制水泳試験（ｍＦＳＴ）
ｍＦＳＴは、抗うつ活性に対して確立されたインビボアッセイである（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．３１９（１）：２５４−９，２００６．）。公知の臨床的に有効な抗うつ薬（選択的セロトニン再取り込み阻害薬および／または三環系抗うつ薬）で処置されたマウスは、水槽に入れられた後に、不動で過ごす行動（絶望状態に関連する行動）の時間の短縮を示す。本質的には以前に公開された方法（例えば、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．３１９（１）：２５４−９，２００６を参照のこと）に記載されているように、新規ｍＧｌｕ２／３アンタゴニストの潜在的な抗うつ様活性を評価するためにｍＦＳＴを使用した。簡潔には、体重が２５〜３０ｇの雄ＮＩＨ−Ｓｗｉｓｓマウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を使用する。群で収容されている動物を、動物飼育施設から取り出して、それ専用のケージ内の試験エリアに移し、試験の前に少なくとも１時間、新しい環境に適応させる。Ｒ１およびＲ２の両方が水素である化合物を、溶解のために最小量のＮａＯＨが加えられた水に溶解し、ｉ．ｐ．投与する。Ｒ１および／またはＲ２が水素以外である化合物は、使用当日に、２．０〜２．５％Ｎ−メチル−ピロリジノン中に調製され、次いで、１％ＨＥＣ、０．２５％Ｔｗｅｅｎ８０および０．０５％Ｄｏｗ消泡剤に懸濁し、経口的に投与される。マウスを、６ｃｍの水（２２〜２５℃）で満たされた筒（直径：１０ｃｍ；高さ：２５ｃｍ）に６分間入れる。その試験時間の６分間のうちの最後の４分間における不動の時間をスコア付けした。マウスは、動かずに浮いているかまたは頭部を水より上で維持するのに必要な動きだけをするとき、不動と記録される。
【００８５】
代表的な化合物は、本質的には上に記載されたように試験され、野生型マウスにおいて不動時間を有意に減少させると見出される。Ｒ１およびＲ２の両方が水素である例示化合物は、本質的には上に記載されたようにアッセイされ、３０ｍｇ／ｋｇ  ｉ．ｐ．未満のＥＤ６０を有すると見出される（不動時間の少なくとも２５％の最大減少）。実施例１、２、１２／３２および２２の化合物は、本質的には上に記載されたようにアッセイされ、表２に示されるような活性を有すると見出される。ゆえに、本発明の化合物は、インビボにおいて抗うつ活性を有すると予想される。
【００８６】
【表１０】
0005877847.tif 000045
【００８７】
他の実験では、受容体が欠失したマウス（ｍＧｌｕ２ノックアウトマウス）が研究される；これらのマウスは、ヘテロ接合体×ヘテロ接合体交配によって繁殖され、−／−および＋／＋マウス比較のための同腹仔として使用される（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ）。実施例１および２の化合物（１０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．，３０分前）は、ｍＧｌｕ２＋／＋マウスにおいて不動時間を有意に減少させるが、ｍＧｌｕ２−／−マウスでは減少させないと見出される。同様に、実施例１２／３２の化合物（３０ｍｇ／ｋｇ，ｐｏ，１２０分前）は、ｍＧｌｕ２＋／＋マウスにおいて不動時間を減少させるが、ｍＧｌｕ２−／−マウスでは減少させないと見出される。これらの知見は、ｍＧｌｕ２受容体が、本発明の化合物の抗うつ様作用に関与することをさらに証明する。
【００８８】
本発明の化合物はまた、例えばＳＳＲＩのような、うつ病性障害の処置に有用な他の化合物と併用して、そのいずれかの化合物単独の作用に対して抗うつ様作用を増強する能力について試験され得る。実施例１２の化合物（１０ｍｇ／ｋｇ  ｐ．ｏ．）は、マウス強制水泳試験だけで、およびフルオキセチン（１０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）またはシタロプラム（１ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）のいずれかと併用して試験され、下記の表３に示されるように、いずれかの化合物単独の作用に対して抗うつ様作用を有意に増加させると見出される。さらに、実施例１２の化合物（すなわち、実施例１の遊離塩基と同じ化合物）の活性な二酸部分の脳内濃度および血漿中濃度、ならびにフルオキセチンおよびシタロプラムの血漿中濃度に関する試験は、曝露濃度を上昇させないことを示すことから、抗うつ様活性の増加が、その化合物への中枢の曝露の増加だけに起因しなかったという知見が支持される。
【００８９】
【表１１】
0005877847.tif 000046
【００９０】
ラットにおける覚醒状態および行動のモニタリング：望まれない作用（例えば、レム睡眠の阻害、覚醒中の運動障害（ｗａｋｉｎｇ  ｍｏｔｏｒ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ）（自発運動の過剰な亢進または抑制）および／または反跳性過眠）なしに、覚醒状態の時間の長さを増加させる能力について、本発明の代表的な化合物をラットにおいて試験する。被験動物を、脳電図（ＥＥＧ）、筋電図（ＥＭＧ）、ならびに累積覚醒時間を判定する運動、反跳性過眠および覚醒状態における運動活性強度によって連続的にモニターする。そのような研究のための方法は、当該分野で公知である（例えば、Ｅｄｇａｒ  ＤＭ，Ｓｅｉｄｅｌ  ＷＦ．Ｍｏｄａｆｉｎｉｌ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｗａｋｅｆｕｌｎｅｓｓ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｉｎｔｅｎｓｉｆｙｉｎｇ  ｍｏｔｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｒ  ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ  ｒｅｂｏｕｎｄ  ｈｙｐｅｒｓｏｍｎｏｌｅｎｃｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  １９９７；２８３：７５７−７６９；ｖａｎ  Ｇｅｌｄｅｒ  ＲＮ，Ｅｄｇａｒ  ＤＭ，Ｄｅｍｅｎｔ  ＷＣ．Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｓｌｅｅｐ  ｓｃｏｒｉｎｇ：ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｍｉｃｒｏｃｏｍｐｕｔｅｒ−ｂａｓｅｄ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｍｉｃｅ．Ｓｌｅｅｐ  １９９１，１４：４８−５５；およびＧｒｏｓｓ  ＢＡ，Ｗａｌｓｈ  ＣＭ，Ｔｕｒａｋｈｉａ  ＡＡ，Ｂｏｏｔｈ  Ｖ，Ｍａｓｈｏｕｒ  ＧＡ，Ｐｏｅ  ＧＲ．Ｏｐｅｎ−ｓｏｕｒｃｅ  ｌｏｇｉｃ−ｂａｓｅｄ  ａｕｔｏｍａｔｅｄ  ｓｌｅｅｐ  ｓｃｏｒｉｎｇ  ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｕｓｉｎｇ  ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｃｏｒｄｉｎｇｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００９；１８４（１）：１０−８に記載されている方法を参照のこと）。研究は、以下のとおり行われる：
【００９１】
動物の準備。ＥＥＧ、ＥＭＧ、体温および運動を長期間記録するために、以下のとおり外科的に成体の雄Ｗｉｓｔａｒラット（手術時におよそ２７０〜３００ｇ）に取り付ける：ＥＥＧ記録用の４本のステンレス鋼ネジ（前頭部に２つ［ブレグマから３．９ｍｍ腹側かつ内外方向に±２．０ｍｍ］および後頭部に２つ［ブレグマから６．４ｍｍ背側、内外方向に±５．５ｍｍ］）からなる頭蓋インプラント、およびＥＭＧ記録用の２本のテフロンコーティングされたステンレス鋼ワイヤ（項部の台形の筋肉の下に配置する）を用いて、ラットを外科的に準備する。すべての導線が、手術前に微小コネクター（Ｍｉｃｒｏｔｅｃｈ，Ｂｏｏｔｈｗｙｎ，ＰＡ）とはんだづけされる。そのインプラント組立品は、ステンレス鋼ＥＥＧ記録ネジ、インプラントコネクタと頭蓋との間に適用されるシアノアクリレート、および歯科用アクリルの組み合わせによって、頭蓋に取り付けられる。腹部に外科的に配置された微小トランスミッタ（Ｍｉｎｉｍｉｔｔｅｒ  ＰＤＴ４０００Ｇ，Ｐｈｉｌｉｐｓ  Ｒｅｓｐｉｒｏｎｉｃｓ，Ｂｅｎｄ，ＯＲ）を介して、体温および運動活性をモニターする。回復のために少なくとも３週間を見越しておく。
【００９２】
記録環境。各ラットを、より垂直方向の上部空間を設けるために挿入されたポリカーボネート製フィルタートップライザー（ｆｉｌｔｅｒ−ｔｏｐ  ｒｉｓｅｒ）を用いて改造されたマイクロアイソレーターケージ内に個別に収容する。動きを最小に制限する可撓性ケーブルの一方の端をケージの上部に取り付けられたコミュテータに、他方の端を動物の頭蓋インプラントに接続する。各ケージは、ステンレス鋼睡眠覚醒記録チャンバの換気された別々の区画内に配置される。食料および水は、自由に入手可能であり、外界温度は、約２３±１℃で維持される。蛍光灯を用いた２４時間の明暗サイクル（ＬＤ１２：１２）を、本研究全体を通して維持する。相対湿度は平均しておよそ５０％である。動物を、各処置の前後の少なくとも３０時間、平静にする。
【００９３】
研究デザインおよび投薬。Ｒ１およびＲ２の両方が水素である化合物を、溶解のために最小量のＮａＯＨが加えられた水に溶解し、１．０ｍＬ／ｋｇ体重の体積でｉ．ｐ投与する。Ｒ１および／またはＲ２が水素以外である化合物を、２つの代替のビヒクル：ｉ）ヒドロキシエチルセルロース中の２．５％Ｎ−メチル−２−ピロリジノン；またはｉｉ）水に０．０５％Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ（登録商標）Ａｎｔｉｆｏａｍを含む１０％アカシアのうちの１つにおける２ｍＬ／ｋｇ体重の体積でｐ．ｏ．投与する。ラットが同じ処置を２回受けないように、かつラットが任意の１つの研究において８つの処置のうち２つより多く受けないように、ビヒクルまたは化合物用量レベルのうちの１つが、偽無作為的に投与される。各ラットは、計量および処置のために、約１分間そのケージから取り出される。各処置の前後に少なくとも６日間の「休薬」期間を設ける。
【００９４】
データ収集。睡眠と覚醒状態の区別は、自動化され得る（例えば、Ｖａｎ  Ｇｅｌｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９１；Ｅｄｇａｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９７，Ｗｉｎｒｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０；Ｇｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。ＥＥＧを増幅してフィルターにかけ（Ｘ１０，０００，帯域１〜３０Ｈｚ）、ＥＭＧを増幅して統合し（帯域１０〜１００Ｈｚ，ＲＭＳ統合）、同時に非特異的な運動活性（ＬＭＡ）をモニターする。覚醒状態を、１０秒間のエポックにおいて、ノンレム睡眠、レム睡眠、覚醒状態またはシータ波優勢覚醒状態として分類する。運動活性（ＬＭＡ）を、１分あたりの回数として記録し、商業的に入手可能な遠隔測定レシーバ（ＥＲ４０００，Ｍｉｎｉｍｉｔｔｅｒ，Ｂｅｎｄ，ＯＲ）によって検出する。
【００９５】
統計解析。齢および体重を、処置群別に平均値、最小値および最大値で要約する。少なくとも１つの結果を有するすべての動物を要約結果に含める（例えば、本発明者らは、遠隔測定データが使用可能であるがＥＥＧデータが使用可能でない動物処置からの適切なデータを含める）。処置後の観察期間を投薬後の２つの間隔（最初の７時間および最初の１９時間）に分け、ここで、投薬時間を開始時間＝０と定義する。１時間ごとの平均値または各期間全体の累積値のいずれかを算出することによって、各期間において結果を要約する。各期間における各結果を、因子として処置群および処置日、ならびに共変量として２４時間前の対応する前処置期間を使用して、共分散分析によって解析する。調整平均、ならびにビヒクル平均およびそれらの対応する標準誤差からの変化を、各処置群について要約する。調整されたダネットの多重比較Ｐ値を、各期間における各結果に対して示す。表１に示されるように、すべての結果がすべての期間において解析されるわけでなく、ゆえに、結果は、実験あたりの第１種過誤率に影響する。したがって、多重試験に対してさらなる調整は行われない。
【００９６】
有効性の判定。有効な閾値用量は、累積覚醒時間が、処置後の最初の７時間にわたって、ビヒクルコントロールと比べて５０分を超える最低用量と推定される。その有効な用量付近のより近い一定間隔で設定された用量の研究をその後行うことによってより洗練された判定がなされ得る。
【００９７】
望まれない作用の測定。２つの潜在的に望まれない作用が特に評価される：反跳性傾眠過剰および運動活性の増大（Ｅｄｇａｒ  ＤＭ，Ｓｅｉｄｅｌ  ＷＦ，１９９７）。
（ｉ）反跳性傾眠過剰は、有効な処置が施された後の８〜１９時間における覚醒状態のレベルの低下として判定され得る。生物学的に有意な低下は、最初の７時間における５０パーセントを超える累積的増加と定義される。したがって、覚醒状態が、最初の７時間において１００分増加した場合、ビヒクルコントロールと比べて処置後の８〜１９時間において累積覚醒状態が５０分以上減少することが、生物学的に有意であると見なされる。表２に示される群平均値の変化は、反跳性傾眠過剰が無いことを示す。
（ｉｉ）運動活性の増大は、ビヒクルコントロールと比べたとき、有効性閾値用量においてＥＥＧによって定義される覚醒状態の１分あたり５回のＬＭＡを超え、かつその作用が用量関連性である、平均値の増加と定義される。表２における群平均値の増加はすべて、覚醒状態１分あたり５回を下回り、用量依存的でない。
【００９８】
例示化合物は、本質的には記載されるように試験され、有意な反跳性過眠または運動活性の増大なしに覚醒状態を促進すると見出される。Ｒ１およびＲ２の両方が水素である例示化合物（ｉ．ｐ．投与される）は、本質的には記載されるように試験され、１０ｍｇ／ｋｇ以下の用量で有効であると見出される。実施例１２の化合物は、本質的には記載されるように試験され、表４に示されるような累積覚醒時間プロファイルおよび運動活性強度を有すると見出される。
【００９９】
【表１２】
0005877847.tif 000047
【０１００】
結果の統計学：平均値は、ビヒクルコントロールとの差異を表す。ＳＥ＝平均値の標準誤差；Ｐ＝有効性変数に対する複数の対比に対して調整されたＰ値。非調整のＰ値は、「望まれない作用」の尺度に対して示される（累積覚醒時間８〜１９時間および運動活性強度）。累積覚醒時間は、分の単位で与えられている。注１．運動活性（ＬＭＡ）強度＝処置後の最初の７時間にわたって平均された、ＥＥＧで定義された覚醒状態の１分あたりのＬＭＡの回数。
【０１０１】
さらに、３つの別個の実験において、単一のｍＧｌｕ２（−／−）、単一のｍＧｌｕ３（−／−）または二重のｍＧｌｕ２（−／−）ｍＧｌｕ３（−／−）受容体の欠失を有するマウスが研究される。これらのマウスは、ヘテロ接合体×ヘテロ接合体交配によって繁殖され、−／−および＋／＋マウス比較のための同腹仔として使用される（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ）。実施例１の化合物（１０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）は、低レベルではあるが、野生型マウス、単一ノックアウトｍＧｌｕ３（−／−）マウスおよび単一ノックアウトｍＧｌｕ２（−／−）マウスにおいて覚醒状態を有意に増加させると見出される。対照的に、実施例１の化合物は、二重ノックアウトｍＧｌｕ２（−／−）ｍＧｌｕ３（−／−）マウスにおいて覚醒状態を有意に増加させないと見出される。これらの知見は、ｍＧｌｕ２受容体とｍＧｌｕ３受容体の両方が、本発明の化合物の覚醒促進作用に関与することを証明する。
【０１０２】
本発明の方法において使用される化合物を、いかなる製剤化も行わずに直接投与することが可能であるが、それらの化合物は、通常、活性成分として式Ｉの少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容可能な塩、ならびに少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体、希釈剤および／または賦形剤を含む医薬組成物の形態で投与される。これらの組成物は、種々の経路（経口、舌下、経鼻、皮下、静脈内および筋肉内を含む）によって投与され得る。そのような医薬組成物およびそれらを調製するためのプロセスは、当該分野で周知である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ｅｄ．，２１ｓｔ  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｃｏ．，２００５）を参照のこと。Ｒ１もしくはＲ２またはその両方が水素以外である式Ｉの化合物は、バイオアベイラビリティを改善する経口投与が好ましいのに対し、Ｒ１およびＲ２の両方が水素である式Ｉの化合物は、ｉ．ｖ．、ｉ．ｐ．または筋肉内投与が好ましい。
【０１０３】
上記組成物は、好ましくは、単位剤形として製剤化され、その各投与量は、約１〜約６００ｍｇ、より通常は約３０〜約３００ｍｇ、例えば、約５０〜約２５０ｍｇの活性成分を含む。用語「単位剤形」とは、ヒト被験体および他の哺乳動物に対する単位投与量として好適な物理的に別個の単位のことを指し、その各単位は、少なくとも１つの好適な薬学的に許容可能な担体、希釈剤および／または賦形剤とともに、所望の治療効果をもたらすと計算された所定量の活性な材料を含む。
【０１０４】
式Ｉの化合物は、概して、広範な投与量の範囲にわたって有効である。例えば、１日あたりの投与量は、通常、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ、より通常は約０．３〜５．０ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．５〜３．０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内に入る。ある場合には、前述の範囲の下限より低い投与量レベルがより適切であることがあり、他の場合では、さらにより高い用量が、いかなる有害な副作用も引き起こすことなく使用されることがあり、ゆえに上記の投与量の範囲は、決して本発明の範囲を限定すると意図されない。実際に投与される化合物の量が、処置される状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物、個別の患者の年齢、体重および応答、ならびにその患者の症状の重症度をはじめとした関連する状況に鑑みて医師によって決定されることが理解されるだろう。