(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
クロレラ・ピレノイドサの細胞壁破砕物を含有してなる脾臓交感神経、白色脂肪組織交感神経、副腎交感神経又は皮膚動脈交感神経用の交感神経抑制剤。
【請求項２】
脾臓交感神経を抑制するためのものである請求項１記載の交感神経抑制剤。
【請求項３】
白色脂肪組織交感神経を抑制するためのものである請求項１記載の交感神経抑制剤。
【請求項４】
副腎交感神経を抑制するためのものである請求項１記載の交感神経抑制剤。
【請求項５】
皮膚動脈交感神経を抑制するためのものである請求項１記載の交感神経抑制剤。
【請求項６】
経口投与剤である請求項１乃至５の何れか１項に記載の交感神経抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脾臓交感神経等の交感神経を抑制するための交感神経抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
特開２００８−２１４２７３号公報には、オーレオバシジウム属(Aureobasidium sp.)に属する微生物に由来する特定のβ-１,３-１,６-Ｄ-グルカンを含むストレス緩和剤及び交感神経抑制剤、並びに、そのストレス緩和剤又は交感神経抑制剤を含む健康食品又は機能性食品の発明が開示されている。
【０００３】
この発明は、近年の社会環境下において常習性ストレス者が増加し、肉体的・精神的な疲労を訴える人が増加していることに鑑み、天然素材からなり、安全で、経口投与に適するストレス緩和剤及び交感神経抑制剤、並びに、そのストレス緩和剤又は交感神経抑制剤を含む健康食品又は機能性食品を提供するために行われたものとされている。
【０００４】
このような安全で経口投与に適する交感神経抑制剤に対する要望は、益々増大しつつある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００８−２１４２７３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、上記のような点に鑑み行われたものであって、その目的とするところは、長期に亙って安全且つ簡便に投与し得る交感神経抑制剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的を達成する本発明の交感神経抑制剤は、クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるものである。
【０００８】
本発明の交感神経抑制剤は、脾臓交感神経を抑制するためのものとすることができる。
【０００９】
また本発明の交感神経抑制剤は、白色脂肪組織交感神経を抑制するためのものとすることができる。
【００１０】
また本発明の交感神経抑制剤は、副腎交感神経を抑制するためのものとすることができる。
【００１１】
また本発明の交感神経抑制剤は、皮膚動脈交感神経を抑制するためのものとすることができる。
【００１２】
また本発明の交感神経抑制剤におけるクロレラは、クロレラ・ピレノイドサであるものとすることができる。
【００１３】
また本発明の交感神経抑制剤は、経口投与剤であるものとすることができる。
【発明の効果】
【００２０】
本発明の交感神経抑制剤は、長期に亙って安全且つ簡便に投与し得、交感神経を効果的に抑制し得る。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】クロレラ細胞壁破砕物の十二指腸投与が脾臓交感神経の活動に与える効果についての試験結果である。
【図２】クロレラ細胞壁破砕物の十二指腸投与が白色脂肪組織交感神経の活動に与える効果についての試験結果である。
【図３】クロレラ細胞壁破砕物の十二指腸投与が副腎交感神経の活動に与える効果についての試験結果である。
【図４】クロレラ細胞壁破砕物の十二指腸投与が皮膚動脈交感神経の活動に与える効果についての試験結果である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明におけるクロレラとは、クロレラ属(Chlorella) に属する単細胞緑藻類であって、例えば、Chlorella pyrenoidosa、Chlorella ellipsoidea 、Chlorella vulgaris 、Chlorella regularis 等を挙げることができる。本発明に最も適しているのは、クロレラ・ピレノイドサ（Chlorella pyrenoidosa）である。
【００２３】
本発明の交感神経抑制剤におけるクロレラの細胞壁破砕物は、例えば次のようにして得ることができる。すなわち、先ずクロレラ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ粉体・水懸濁液を１０℃以下に調整する。次にこの懸濁液を、下記のような連続湿式微粉砕機に送入し、破砕直後のスラリーが４０℃以下になるよう微粉砕する。次いで、このようにして得られたクロレラスラリーを、直ちに１０℃以下に冷却することにより、細胞壁が破砕されたクロレラを、品質劣化を生じさせることなく得ることができる。
【００２４】
上記連続湿式微粉砕機は、冷却外套を持つ密閉シリンダー中に多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入されたものである。そのグラスビーズ容量は密閉シリンダー容量の８０乃至８５％であり、グラスビーズを流入液体と混和・回転することにより、流入液体中の物質を摩砕するものである。
【００２５】
このようにして細胞壁が破砕されたクロレラは、そのまま用いることもできるが、例えば、真空乾燥後粉砕を行う等の適宜の処理を施した後に使用してもよい。
【００２６】
本発明の交感神経抑制剤は、クロレラの細胞壁破砕物を含有してなるものであって、経口投与に適し、成人に対する投与量は、１日当り１ｍｇ乃至３５ｇ程度が適当である。但し、クロレラ・ピレノイドサ等のクロレラの細胞壁破砕物は人体に対する毒性を有しないため、これに限定されるものではない。
【００２７】
本発明の交感神経抑制剤における経口投与の形態に特に限定はないが、例えば、粉末、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤とすることができる。
【００２８】
また種々の形態を形成する上で、各種賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、可塑剤等を適宜用いることができる。
【００２９】
賦形剤の例としては、糖類（乳糖，白糖，ブドウ糖，マンニトール），デンプン（バレイショ，コムギ，トウモロコシ），無機物（炭酸カルシウム，硫酸カルシウム，炭酸水素ナトリウム，塩化ナトリウム），結晶セルロース，植物末（カンゾウ末，ゲンチアナ末）等を挙げることができる。
【００３０】
結合剤の例としては、デンプンのり液，アラビアゴム，ゼラチン，アルギン酸ナトリウム，メチ／レセルロース（ＭＣ），エチルセルロース（ＥＣ），ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ），ポリビニルアルコール（ＰＶＡ），ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ），カルポキシメチルセルロース（ＣＭＣ）等を挙げることができる。
【００３１】
崩壊剤の例としては、デンプン，寒天，ゼラチン末，結晶セルロース，ＣＭＣ・Ｎａ，ＣＭＣ・Ｃａ，炭酸カルシウム，炭酸水素ナトリウム，アルギン酸ナトリウム等を挙げることができる。
【００３２】
滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム，タルク，水素添加植物油，マクロゴール，シリコーン油等を挙げることができる。
【００３３】
コーティング剤の例としては、糖衣（白糖，ＨＰＣ，セラック），膠衣（ゼラチン，グリセリン，ソルビトール），フイルムコーティング〔ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ），ＥＣ，ＨＰＣ，ＰＶＰ〕，腸溶性コーティング〔ヒドロキシプロビルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ），セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）〕等を挙げることができる。
【００３４】
着色剤の例としては、水溶性食用色素，レーキ色素）等を挙げることができる。矯味剤の例としては、乳糖，白糖，ブドウ糖，マンニトール）等を挙げることができる。矯臭剤の例としては、芳香性精油類），光線遮断剤（酸化チタン）等を挙げることができる。可塑剤の例としては、フタル酸エステル類，植物油，ポリエチレングリコール）等を挙げることができる。
【００３６】
このような交感神経抑制剤は、長期に亙って安全且つ簡便に投与し得、脾臓交感神経、白色脂肪組織交感神経、副腎交感神経及び皮膚動脈交感神経等の交感神経を効果的に抑制し得、免疫賦活作用を有すると共に、白色脂肪組織交感神経の抑制による白色脂肪組織での脂肪分解抑制効果、副腎交感神経神経の抑制によるアドレナリン分泌抑制及びそれによる癒しの効果、並びに皮膚動脈交感神経の抑制による皮膚血流増加効果・皮膚保湿度を高める効果・創傷治癒促進効果及び育毛促進効果等を発揮し得る。
【実施例】
【００３７】
クロレラ細胞壁破砕物の十二指腸投与が脾臓交感神経、白色脂肪組織交感神経、副腎交感神経及び皮膚動脈交感神経の活動に与える効果についての試験を行った。
【００３８】
１．被験物質の製造
【００３９】
被験物質である細胞壁を破砕したクロレラ・ピレノイドサ（Chlorella pyrenoidosa）の乾燥粉末（以下、単に「クロレラ」とも言う。）を、次のように製造した。
【００４０】
冷却外套を持つ密閉シリンダー中にその密閉シリンダー容量の８０乃至８５％の容量の多数の直径０．５乃至１．５mmのグラスビーズが封入されており、そのグラスビーズを流入液体と混和・回転することにより流入液体中の物質を摩砕する連続湿式微粉砕機（商品名：ダイノーミル［KD型］  WAB, Inc.製）に、１０℃以下に調整されたクロレラ・ピレノイドサ濃度１０乃至２５重量％のクロレラ・ピレノイドサ粉体・水懸濁液を送入して、破砕直後のスラリーが４０℃以下になるよう微粉砕し、次いで、このようにして得られたクロレラ・ピレノイドサスラリーを、直ちに１０℃以下に冷却し、真空乾燥後、粉砕することにより、被験物質である細胞壁破砕クロレラ・ピレノイドサ乾燥粉末（株式会社サン・クロレラ製の細胞壁破砕クロレラ粉末）が得られた。
【００４１】
２．脾臓交感神経活動について
【００４２】
(1) 試験方法
【００４３】
被験物質０．３ｍｇ、３ｍｇ、３０ｍｇ及び３００ｍｇをそれぞれ２５０ｍｌの水に懸濁した４種の被験物質懸濁液を用意した。
【００４４】
体重約３００ｇのWistar系雄ラット（約9週齢）を供試動物として使用した。
【００４５】
３時間絶食させた供試動物にウレタン麻酔を施し、十二指腸投与用のカニューレを挿入した。
【００４６】
その後、脾臓交感神経の遠心枝を銀電極で吊り上げて、脾臓交感神経の電気活動を測定した。測定は、Shen J, et al. Neurosci. Lett. 383188-193, 2005、及び、Tanida M, et al., Neurosci. Lett. 389: 109-114, 2005に記載の方法に従って行った。なお、供試動物の体温（ラット直腸温）は、体温維持装置にて35.0±0.5℃に維持した。
【００４７】
脾臓交感神経活動の測定値が落ち着いた時期に、前記４種のうち何れかの被験物質懸濁液１ｍｌを、前記カニューレを使用して十二指腸投与し、それにより生じる脾臓交感神経活動（Splenic-SNA）の変化を電気生理学的方法により測定した。
【００４８】
(2) 結果
【００４９】
被験物質を十二指腸に投与した後の脾臓交感神経活動（Splenic-SNA）の変化を、図１に、被験物質投与前値（０分値）を１００％とした百分率で示す。
【００５０】
(1) ０．３ｍｇ／２５０ｍｌの被験物質懸濁液１ｍｌの十二指腸投与によるSplenic-SNA変化
【００５１】
投与から３５分後までは１００％であったが、その後上昇し、投与５５分後１１５．５％の最高値に増加した。
【００５２】
(2) ３ｍｇ／２５０ｍｌの被験物質懸濁液１ｍｌの十二指腸投与によるSplenic-SNA変化
【００５３】
Splenic-SNAは、投与直後やや低下し、投与から１５分後以降は著明に低下し、投与から５５分後には５５．０％にまで減少した。
【００５４】
(3) ３０ｍｇ／２５０ｍｌの被験物質懸濁液１ｍｌの十二指腸投与によるSplenic-SNA変化
【００５５】
Splenic-SNAは、投与直後やや上昇し、投与から１０分後以降は徐々に低下し、投与から５５分後には５８．１％に減少した。
【００５６】
(4) ３００ｍｇ／２５０ｍｌの被験物質懸濁液１ｍｌの十二指腸投与によるSplenic-SNA変化
【００５７】
Splenic-SNAは、投与から２０分後以降徐々に低下し、投与から６０分後には６４．８％に減少した。
【００５８】
以上の結果より、被験物質が脾臓交感神経抑制作用を発揮することが明らかとなった。
【００５９】
なお、投与前（０分）のSplenic-SNAの神経活動の絶対値は、それぞれ、２３８．０  ｓｐｉｋｅｓ／５ｓ（０．３ｍｇ／２５０ｍ被験物質懸濁液投与時）、２８９．７  ｓｐｉｋｅｓ／５ｓ（３ｍｇ／２５０ｍ被験物質懸濁液投与時）、２７３．４  ｓｐｉｋｅｓ／５ｓ（３０ｍｇ／２５０ｍ被験物質懸濁液投与時）及び２６９．６  ｓｐｉｋｅｓ／５ｓ（３００ｍｇ／２５０ｍ被験物質懸濁液投与時）であった。
【００６０】
３．白色脂肪組織交感神経活動、副腎交感神経活動及び皮膚動脈交感神経活動について
【００６１】
(1) 試験方法
【００６２】
被験物質３０ｍｇを２５０ｍｌの水に懸濁した被験物質懸濁液をそれぞれの交感神経活動の試験について用意し、体重約３００ｇのWistar系雄ラット（約9週齢）を供試動物として使用した。
【００６３】
３時間絶食させた供試動物にウレタン麻酔を施し、十二指腸投与用のカニューレを挿入した。
【００６４】
その後、それぞれの試験に応じ、副睾丸白色脂肪組織を神経支配する交感神経の遠心枝、副腎を神経支配する交感神経の遠心枝、及び大腿皮膚動脈を神経支配する交感神経の遠心枝を銀電極で吊り上げ、各自律神経の電気活動を測定した。測定は、Shen J, et al. Neurosci. Lett. 383188-193, 2005、及び、Tanida M, et al., Neurosci. Lett. 389: 109-114, 2005に記載の方法に従って行った。なお、供試動物の体温（ラット直腸温）は、体温維持装置にて35.0±0.5℃に維持した。
【００６５】
各自律神経活動の測定値が落ち着いた時期に、被験物質懸濁液１ｍｌを、前記カニューレを使用して十二指腸投与し、それにより生じる各交感神経活動の変化を電気生理学的方法により測定した。
【００６６】
(2) 白色脂肪組織交感神経活動に関する結果
【００６７】
被験物質懸濁液１ｍｌを十二指腸に投与した後の白色脂肪組織交感神経活動（WAT-SNA）の変化を、図２に、百分率で示す。図２においては、十二指腸投与前５分間のWAT-SNAの平均値（０分値）を１００％とした。
【００６８】
水１ｍｌを十二指腸投与して対照実験を行ったところ、WAT-SNAは、投与後若干低下し、その後やや上昇し、投与４０分後に１１７．６％となった後、やや低下した。
【００６９】
一方、３０ｍｇ／２５０ｍｌのクロレラ水懸濁液１ｍｌを十二指腸投与した場合は、WAT-SNAは徐々に低下し、投与５５分後には７７．５％となった。
【００７０】
３０ｍｇ／２５０ｍｌのクロレラ水懸濁液投与群と水投与群の投与５分後から６０分後までのWAT-SNAの値の間の有意差を分散分析法(ANOVA)により検定したところ、クロレラ水懸濁液投与群のWAT-SNA値は対照水投与群のWAT-SNA値よりも有意に低い（P<0.0005, F=35.5）ことが明らかになった。
【００７１】
表１に、これら２群の十二指腸投与前（０分）のWAT-SNAの絶対値を示すが、２群の前値（０分値）の間にはMann-Whitney U-testによる有意差は認められなかった。
【００７２】
【表１】
0005877773.tif 000002
【００７３】
以上の結果より、被験物質が白色脂肪組織交感神経抑制作用を発揮することが明らかとなった。
【００７４】
(3) 副腎交感神経活動に関する結果
【００７５】
被験物質懸濁液１ｍｌを十二指腸に投与した後の副腎交感神経活動（ASNA）の変化を、図３に、百分率で示す。図３においては、十二指腸投与前５分間のASNAの平均値（０分値）を１００％とした。
【００７６】
水１ｍｌを十二指腸投与して対照実験を行ったところ、ASNAは投与後殆ど変化しなかった。すなわち、ASNAは、投与２５分後には最高値１０７．１％となり、投与５０分後には最低値９７．８％となったが、実験期間を通じて両者の間の値に留まった。
【００７７】
一方、３０ｍｇ／２５０ｍｌのクロレラ水懸濁液１ｍｌを十二指腸投与した場合は、ASNAは一時やや上昇し、投与２５分後には１０６．２％に増加したが、その後低下し、投与６０分後には８９．８％となった。
【００７８】
３０ｍｇ／２５０ｍｌのクロレラ水懸濁液投与群と水投与群の投与5分後から６０分後までのASNAの値の間の有意差を分散分析法(ANOVA)により検定したところ、クロレラ水懸濁液投与群のASNA値は対照水投与群のASNA値よりも有意に低い（P<0.01, F=7.73）ことが明らかになった。
【００７９】
表２に、これら２群の十二指腸投与前（０分）のASNAの絶対値を示すが、２群の前値（０分値）の間にはMann-Whitney U-testによる有意差は認められなかった。
【００８０】
【表２】
0005877773.tif 000003
【００８１】
以上の結果より、被験物質が副腎交感神経抑制作用を発揮することが明らかとなった。
【００８２】
(4) 皮膚動脈交感神経活動に関する結果
【００８３】
被験物質懸濁液１ｍｌを十二指腸に投与した後の皮膚動脈交感神経（CASNA）の変化を、図４に、百分率で示す。図４においては、十二指腸投与前５分間のCASNAの平均値（０分値）を１００％とした。
【００８４】
水１ｍｌを十二指腸投与して対照実験を行ったところ、CASNAは、投与後若干低下し、投与１５分後には９８．１％となったが、その後徐々に上昇して投与６０分後には１２２．４％となった。
【００８５】
一方、３０ｍｇ／２５０ｍｌのクロレラ水懸濁液１ｍｌを十二指腸投与した場合は、CASNAは徐々に低下し続け、投与４５分後には６１．２％となり、その後、その付近の値が持続した。
【００８６】
３０ｍｇ／２５０ｍｌのクロレラ水懸濁液投与群と水投与群の投与5分後から６０分後までのCASNAの値の間の有意差を分散分析法(ANOVA)により検定したところ、クロレラ水懸濁液投与群のCASNA値は対照水投与群のCASNA値よりも有意に低い（P<0.0005, F=233）ことが明らかになった。
【００８７】
表３に、これら２群の十二指腸投与前（０分）のCASNAの絶対値を示すが、２群の前値（０分値）の間にはMann-Whitney U-testによる有意差は認められなかった。
【００８８】
【表３】
0005877773.tif 000004
【００８９】
以上の結果より、被験物質が皮膚動脈交感神経抑制作用を発揮することが明らかとなった。
【図１】
0005877773.tif 000005
【図２】
0005877773.tif 000006
【図３】
0005877773.tif 000007
【図４】
0005877773.tif 000008