(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
メトホルミンとドコサヘキサエン酸との塩、またはメトホルミンとエイコサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸の混合物との塩である、固体化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物、および薬学的に許容可能な担体、ビヒクル、または希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項３】
請求項１に記載の化合物または請求項２に記載の医薬組成物を含む単位剤形、使用のための指示、および前記単位剤形を収容するための少なくとも１つの容器を含むキット。
【請求項４】
糖尿病、トリグリセリドの上昇、前糖尿病、肥満、心不整脈、心筋症または心筋梗塞から選択される哺乳類の症状を治療するための、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ａ）好適なメトホルミン塩からメトホルミンの遊離塩基を新しく調製すること；およびｂ）新しく調製したメトホルミンの遊離塩基を、ドコサヘキサエン酸、またはエイコサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸の混合物と、１℃から６０℃の間の温度で反応させることを含む、請求項１に記載の化合物を製造するための方法。
【請求項６】
治療が必要である被験者の血清トリグリセリドを低下するための、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記被験者が、２００ｍｇ／ｄＬを超える血清トリグリセリド濃度を有する、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記被験者が高トリグリセリド血症である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記被験者が、発展中の糖尿病、前糖尿病状態、肥満、心不整脈、心筋梗塞、および高血清トリグリセリド濃度に起因する脳卒中を示す、またはこれらのリスクを有する被験者からなる群からさらに選択される、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
以下の工程：
アセトニトリル中のメトホルミン遊離塩基の濃縮溶液に、ドコサヘキサエン酸、またはエイコサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸の混合物を室温で滴下して加える工程、
反応混合物を、光から防護された容器中で、１時間室温で撹拌する工程、
前記反応混合物を、１時間、０℃で冷却する工程、および
冷却された前記反応混合物を窒素雰囲気下で濾過し、粉末になるまで乾燥させる工程、
を含む、請求項１に記載の化合物を製造する方法。
【請求項１１】
メトホルミンとエイコサペンタエン酸との塩である、固体化合物。
【請求項１２】
請求項１１に記載の化合物、および薬学的に許容可能な担体、ビヒクル、または希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１１に記載の化合物または請求項１２に記載の医薬組成物を含む単位剤形、使用のための指示、および前記単位剤形を収容するための少なくとも１つの容器を含むキット。
【請求項１４】
糖尿病、トリグリセリドの上昇、前糖尿病、肥満、心不整脈、心筋症または心筋梗塞から選択される哺乳類の症状を治療するための、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
ａ）好適なメトホルミン塩からメトホルミンの遊離塩基を新しく調製すること；およびｂ）新しく調製したメトホルミンの遊離塩基を、エイコサペンタエン酸と１℃から６０℃の間の温度で反応させることを含む、請求項１１に記載の化合物を製造するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、その内容を参照により本明細書に組み込む、２０１１年１月１２日出願の米国仮特許出願第６１／４６１，１１３号および２０１２年１月１１日出願の米国特許出願第１３／３４８，２６５号の優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、ビグアニドとの多価不飽和脂肪酸の塩に関する。
【背景技術】
【０００３】
糖尿病は世界的に広まる流行病になっており、世界保健機構の予測によれば、２０３０年までに糖尿病患者の数は急激に増大すると見られる。これは不吉な予測である。なぜなら、糖尿病の長期の合併症には、腎症、神経症、網膜症、および心血管系の合併症が含まれ、これらを管理するには、公的な医療予算に重大な影響が及ぶからだ。糖尿病の顕著な特徴は血糖値の慢性的な上昇である。血糖値の異常な上昇は、主要な糖尿病組織におけるグルタチオン濃度にも悪影響を及ぼすことも、また、知られている。さらに、酸化的ストレスの増加および反応の早い酸素種の産生の増加も、高血糖状態下では関係する。
【０００４】
インスリンの早期の発見およびそれに続く糖尿病治療でのインスリンの広範な使用、ならびにその後のスルホニル尿素類、およびチアゾリデンジオン類、例えばトログリタゾン（ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）またはピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）などの発見および経口血糖降下薬としてのそれらの使用にも関わらず、糖尿病の治療は満足できないままに留まっている。
【０００５】
インスリンの使用には、通常、自己注射による１日に複数回の投与が必要とされる。インスリンの適正な投与量の決定には、尿または血中の糖の頻繁な概算が必要となる。非インスリン依存型糖尿病(２型糖尿病、ＮＩＤＤＭ）の治療は、通常、食事療法、運動、経口血糖降下薬、例えば、チアゾリデンジオン類、およびより重症な症例では、インスリンの組合せから成る。しかしながら、臨床的に利用できる血糖降下薬は、それらの使用を制限する副作用を有しているか、または薬剤がある患者には有効でない可能性がある。インスリン依存型糖尿病（Ｉ型）では、インスリン投与が、通常、主要な治療過程を構成する。
【０００６】
ビグアニドメトホルミンは、米国食品医薬品局により、糖尿病の治療的処置に対して認可されている既知の化合物である。この化合物ならびにその調製および調整は、例えば、米国特許第３，１７４，９０１号で開示されている。メトホルミンは、２型糖尿病の治療において経口で有効である。メトホルミン（Ｎ，Ｎ−ジメチルイミドジカルボンイミド酸ジアミド）は、その塩酸塩、１，１−ジメチルビグアニド塩酸塩の形式（式１ａ）で米国において、現在、市場に出荷されているビグアニド抗高血糖治療薬である。
【０００７】
【化１】
0005911514.tif 000002
【０００８】
メトホルミン塩酸塩は市販品を購入することができ、さらに、例えば、Ｊ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．、１９２２年、１２１巻、１７９０頁に開示されている要領で調製することもできる。
【０００９】
米国特許第７，９７３，０７３  Ｂ２（Ｍｙｌａｒｉ）は、メトホルミンＲ−（＋）リポ酸塩の使用が糖尿病または糖尿病の合併症の治療に有用であるとして記述している。
【００１０】
米国特許公開第２００５／０１６５１０２号は、輸送成分（脂肪酸が言及されている）を有する薬物（メトホルミンが言及されている）の複合体を使って、使用されている薬物の吸収を高め、その送達を制御することが記述されている。言及された脂肪酸錯化剤の中には、カプリン酸塩、ラウリン酸塩、パルミチン酸塩、およびオレイン酸塩がある。
【００１１】
米国特許公開第２００５／０１８２０２９号は、親油性酸塩（脂肪酸が言及されている）のメトホルミン塩およびそれらの製剤処方、ならびに高血糖の治療のためのメトホルミン塩の投与方法を記述している。
【００１２】
英国の見方による糖尿病試験（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｓｔｕｄｙ：ＵＫＰＤＳ）（Ｃｌａｒｋｅら、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ、２００５年、４８巻、８６８〜８７７頁）によれば、メトホルミン治療は、費用を節約し、質を調整した平均余命を増加する。このＵＫＰＤＳでは、メトホルミンによる初期治療に無作為に割り当てられた体重過多および肥満の患者は、心筋梗塞および糖尿病関連の死亡の顕著な減少を経験した。メトホルミンは、体重増加を促進せず、いくつもの心臓血管系の危険因子に対して有益な効果を有する。したがって、メトホルミンは、２型糖尿病の患者のほとんどにとって選択すべき薬物と広く認識されている。
【００１３】
前糖尿病はシンドロームである。２型糖尿病およびメタボリックシンドロームとして知られる前糖尿病症状を有する患者の多くは、トリグリセリドの上昇を含め、様々な脂質疾患を患う。身体は脂肪を蓄えるためにトリグリセリドを使うが、高い（＞２００ｍｇ／ｄｌ）および非常に高い（＞５００ｍｇ／ｄｌ）濃度のトリグリセリドは、心臓発作および脳卒中の患者リスクを増加するアテローム硬化症を伴う。
【００１４】
耐糖能異常を伴う初期糖尿病は、もう１つの前糖尿病の症状である。全体として、２型糖尿病および耐糖能異常を伴う初期糖尿病は肥満、高トリグリセリド血症を含む脂質異常症、ならびに、不整脈、心筋症、心筋梗塞、脳卒中、および心不全を含む心臓血管系の合併症と密接に関係している。臨床的に、前糖尿病は、血糖値が正常値より高いが、２型糖尿病と分類されるまでにはまだ増加していないことを意味する。しかしながら、介入をしないと、前糖尿病はやがて２型糖尿病になる可能性が高い。
【００１５】
糖尿病患者には、足および下肢の傷の治癒が遅いという現象で現れる、循環障害も起こり、患者は切断のリスクに置かれる。
【００１６】
上昇したトリグリセリドは、食事療法および運動によって低下されることもあり得る、ナイアシンおよび一般に魚油として知られるオメガ３脂肪酸は、高トリグリセリド血症の管理に頻繁に利用される。オメガ３脂肪酸は、メチル末端、３位からの３つの炭素の末端二重結合を有する不飽和カルボン酸である。オメガ３脂肪酸は一般に、サケ、サバおよびメンハーデンから抽出される。イカおよびオキアミなどの他の海洋資源から抽出されることもある。オメガ３脂肪酸は市販されている。魚から最も一般的に抽出されるオメガ３脂肪酸は、エイコサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸である。これらの化合物は、肥満、不整脈および心筋梗塞の治療に有益な効果があることが示されており、以下の構造を有する：
エイコサペンタエン酸：
【００１７】
【化２】
0005911514.tif 000003
【００１８】
ドコサヘキサエン酸：
【００１９】
【化３】
0005911514.tif 000004
【００２０】
レゾルビンは、有力な抗炎症および免疫調節作用を有するポリヒドロキシル化オメガ３脂肪酸の特殊クラスである。レゾルビンのこのような生物学的作用は、心臓血管系および糖尿病症状に顕著な役割を果たすものと考えられている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２１】
【特許文献１】米国特許第３，１７４，９０１号
【特許文献２】米国特許第７，９７３，０７３号
【特許文献３】米国特許公開第２００５／０１６５１０２号
【特許文献４】米国特許公開第２００５／０１８２０２９号
【非特許文献】
【００２２】
【非特許文献１】Ｊ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．、１９２２年、１２１巻、１７９０頁
【非特許文献２】Ｃｌａｒｋｅら、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ、２００５年、４８巻、８６８〜８７７頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
本発明は、式Ｉの化合物を提供する：
【００２４】
【化４】
0005911514.tif 000005
【００２５】
式中、ＨＲは、１〜３のヒドロキシ基によって任意で置換されるオメガ３多価不飽和Ｃ１６〜２４脂肪酸である。
【００２６】
これらの化合物は、通常、ビグアニド成分にプロトンが付加され、酸成分が少なくとも部分的にはイオン形式になっている、メトホルミンとオメガ３多価不飽和脂肪酸（ＲＨ）との塩の形式の化合物である。しかしながら、いくつかの場合、例えば、環境のｐＨによっては、組成物は、ビグアニドと酸成分の混合物の形式となり得る。本発明は、また、式Ｉの組成物と薬学的に許容可能な賦形剤とを含む薬学的組成物も提供する。本発明は、さらに、糖尿病（特に２型糖尿病）、肥満、心不整脈、心筋梗塞およびトリグリセリド値の上昇の治療のための方法を提供する。本発明の化合物および組成物は、好ましくは経口投与により、患者に投与したとき、構造１の化合物の高血中濃度をも提供し得る。
【００２７】
とりわけ有用な化合物は、ＨＲが、４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸、 ５，８，１１，１４−エイコサペンタエン酸およびこれらの酸に由来するレゾルビン、例えば、レゾルビンＥ１として知られる５，１２，１８−トリヒドロキシエイコサペンタエン酸、レゾルビンＥ２として知られる１５，１８−ジヒドロキシエイコサペンタエン酸、レゾルビンＤ１として知られる７，８，１７−トリヒドロキシドコサヘキサエン酸、およびレゾルビンＤ２として知られるその７，１６，１７−トリヒドロキシエピマー、レゾルビンＤ３として知られる４，１１，１７−トリヒドロキシドコサヘキサエン酸、レゾルビンＤ４として知られる４，５，１７−トリヒドロキシドコサヘキサエン酸などの必須オメガ３不飽和結合に加えて、４または５の不飽和結合を有する２０または２２の炭素原子の脂肪酸である化合物である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明は、メトホルミンとオメガ３多価不飽和脂肪酸との塩である、式Ｉの化合物に関し、その任意の多形体、溶媒和物および水和物を含むものとする。
【００２９】
１つの好ましい実施形態において、ＲＨはレゾルビンである。最も好ましい実施形態において、ＲＨはエイコサペンタエン酸またはドコサヘキサエン酸である。
【００３０】
本発明の化合物は、デザイナー二重作用薬（designer dual-acting drugs）とみなすことができ、高度な水溶性の結果として、それらの化合物の成分のバイオアベイラビリティを向上する手段を追加的に有する。
【００３１】
ある実施形態において、本発明は、メトホルミンまたはその薬学的に許容可能な塩（例えば、塩酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩）とオメガ３多価不飽和脂肪酸（ＲＨ）またはそれらの薬学的に許容可能な塩との混合物に関する。１つの好ましい実施形態において、ＲＨはレゾルビンである。最も好ましい実施形態において、ＲＨはエイコサペンタエン酸またはドコサヘキサエン酸である。
【００３２】
本発明は、式Ｉの化合物および薬学的に許容可能な担体、ビヒクルまたは希釈剤を含む、本発明の医薬組成物を提供する。
【００３３】
医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル、丸薬、粉末、持続的放出製剤、液体、懸濁液など、経口投与に好適な形態、無菌液、懸濁液または乳剤など、非経口注射に好適な形態としてよい。このような組成物およびそれらの調製方法は、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、１９版（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９５年）に記載されている。この医薬組成物は、精確な投与量を単回投与するのに適した単位投与量形態としてもよい。この医薬組成物は、従来的な医薬担体または賦形剤および活性化合物を含む。
【００３４】
経口投与に適した製剤は、錠剤、微粒子、液体または粉末を含有するカプセル、ロゼンジ剤（液体を充填したロゼンジ剤も含む）、咀嚼剤などの固形剤、マルチおよびナノ微粒子、ゲル、固溶体、リポソーム、フィルム、腔坐剤（ovule）、スプレー、および液体製剤を含む。
【００３５】
錠剤剤形は、通常、崩壊剤（デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、微結晶性セルロース、低級アルキル置換ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、アルファ化デンプンおよびアルギン酸ナトリウムなど）、結合剤（微結晶性セルロース、ゼラチン、糖、ポリエチレングリコール、天然および合成ガム、ポリビニルピロリドン、アルファ化デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、およびヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、ならびに潤滑剤（ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、フマル酸ステアリルナトリウム、およびステアリン酸マグネシウムとラウリル硫酸ナトリウムとの混合物など）も含有する。ラクトース、マンニトール、キシリトール、デキストロース、スクロース、ソルビトール、微結晶性セルロース、デンプンおよびリン酸水素カルシウム二水和物などの希釈剤も存在し得る。本発明の組成物は、また、例えばゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースで作られたカプセルなどとして投与することもできる
【００３６】
液体製剤は、懸濁液、液体、シロップ、およびエリキシル剤を含む。このような製剤は、軟カプセルまたは硬カプセルに詰めた充填剤として使用することもでき、典型的には、例えば、水、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、メチルセルロース、または適切な油などの担体を含有する。液体製剤は、また、例えば小袋（sachet）からの固体の再構成により調製することもできる。本発明の組成物は、ＬｉａｎｇとＣｈｅｎ（２００１年）による「Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐａｔｅｎｔｓ」、１１（６）、９８１〜９８６頁に記述されたものなど、速やかに溶解し、速やかに崩壊する剤形で使用されることもできる。
【００３７】
その他の製剤は、当業者には明白である。
【００３８】
本発明は、さらに、式Ｉの組成物を治療に有効量投与することによる、治療または糖尿病、特に２型糖尿病、前糖尿病、肥満、不整脈、心筋梗塞および脳卒中などの症状を発現するリスクを低下するための方法を提供する。このような組成物は、また、被験者のトリグリセリド濃度を低下する目的にも使用することができるので、高トリグリセリド濃度によって悪化した糖尿病の治療にも役割を持つ。適切な投与量は従来的な手段によって求められ得る。
【００３９】
本発明の化合物のトリグリセリド低下効能は、Ｓｉｄｉｋａらが記述した手順（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９２年、３３巻、１〜７頁）に従う動物モデルで求めることが可能である。
【００４０】
以下の例は、心臓および心臓組織の虚血後の損傷の治療および予防のための方法に通じる症状を求める目的で使用し得る糖尿病ラットモデルを記述している。
【００４１】
ウースターのマサチューセッツ大学医療センター（ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ）で維持されているコロニー由来の自発症糖尿病のＢｉｏ−Ｂｒｅｄ（ＢＢ／Ｗ）ラットをこの調査では使用した。ＢＢ／Ｗラットは、自己免疫のヒトインスリン依存の糖尿病（ＩＤＤＭ）の有用なモデルと考えられるため、本調査で選ばれた。ヒトのＩＤＤＭと同様に、自然発症性糖尿病は、青年期の間に、体重減少、高血糖症、低インスリン血症、およびケトン尿症を特徴とする臨床的突発を伴って現れる。ヒトの糖尿病の場合におけるように、網膜、心筋、肝臓、腎臓、骨代謝および末梢神経における病変がすべてＢＢラットにおいて十分に立証されており、これはＤｉａｂ． Ｍｅｔａｂ． Ｒｅｖ．、８：９頁（１９９２年）に記載されている。そのＢＢ／Ｗラットは、月齢３〜４ヶ月であり、体重は３００〜３５０ｇの間である。そのＢＢ／Ｗラッ トは、高血糖状態に導くように毎日インスリンを受け、単離心臓灌流検査を実施する前の２４時間はそれを中断した。これらのラットは、急性的に糖尿病になったものであり、毎日２．０２±０．０４単位のインスリンを受け、少なくとも１２±３日間は糖尿病になっていた。これらの糖尿病のラットにおける平均血糖値は、 ３８６±２４ｍｇ／ｄＬだった。年齢をマッチさせた非糖尿病のコントロールは９２±１２ｍｇ／ｄＬの平均血糖値を有する。
【００４２】
単離灌流心臓モデル
この実施例は、本発明の開発に使用した単離したラットの灌流心臓モデルについて記述する。検査は、一定容積の単離したラットの心臓標本を用いて行う。急性的に糖尿病になったオスのＢＢ／Ｗラットと非糖尿病の年齢をマッチさせた（３〜４ヶ月）コントロールとをヘパリン（１０００ｕ；腹腔内）により事前に処置し、続いてペントバルビタールナトリウム（６５ｍｇ／ｋｇ；腹腔内）により処置する。足の反射のないことにより判定される深い麻酔が達成された後、その心臓を速やかに摘出し、氷で冷やした生理食塩水中に入れる。その静止した心臓を、それらの摘出後２分以内に大動脈中の非再循環モデルで逆行灌流させる。最大左心室圧（ＬＶＤＰ）を圧力トランスジューサーに接続されている高圧管を有する左心室内のラテックス製の風船を用いて測定する。灌流圧を灌流ラインから離れた高圧管を用いて監視する。血行動態計測を４チャンネルのＧｏｕｌｄレコーダーに記録する。そのシステムは、灌流媒体を急速に変化させることを可能にする共通の温度制御以外は別々の人工肺、ポンプおよび気泡トラップを備えた２つの平行する灌流ラインを有する。その心臓は、正確なローラーポンプを用いて灌流する。その灌流液は、１１８ｍＭのＮａＣｌ、０．４７ｍＭのＫＣｌ、１２ｍＭのＣａＣｌ２、１２ｍＭのＭｇＣｌ２、２５ｍＭのＮａＨＣＯ３および基質のグルコース１１ｍＭからなる。その灌流装置は、全状況下で心臓温度を３７±０．５℃に維持するために灌流液および灌流管の周りの水ジャケットのために加熱バスを使用して温度を厳重に制御する。室温の容器中の酸素を送り込んだ灌流液を、３７℃の蒸留水で取り巻かれている２５フィートの薄肉のシリコーンチューブを通過させ、９５％酸素を飽和させる。その灌流液は、次に水ジャケットした（３７℃）管に入り、水ジャケットした気泡トラップを通って心臓に至る。この調整は、規定どおり３〜４時間にわたって安定している優れた酸素化を提供する。
【００４３】
ゼロフロー虚血のモデル
この実施例は、糖尿病コントロール心臓、処置した糖尿病の心臓、処置した非糖尿病心臓、およびコントロールの単離した心臓におけるゼロフロー虚血の検査に使用した手順を記述する。糖尿病コントロール（ＤＣ）、処置した糖尿病（ＤＺ）、正常（Ｃ）のコントロールおよび処置した正常（ＣＺ）の心臓を、２０分間の正常酸素圧の灌流、続いての２０分間の灌流液の流れが完全に止められるゼロフローの虚血、続いての６０分間の再灌流にかける。心臓は、１０μＭのメトホルミンエイコサペンタエン酸により処置する。メトホルミンエイコサペンタエンで処置した糖尿病群（ＤＺ）においては、心臓を正常のＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液 による１０分間の正常酸素圧の灌流および１０μＭのメトホルミンエイコサペンタエン酸を含有するＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液による１０ 分間の正常酸素圧の灌流にかける。それらの心臓を、次に、２０分間のゼロフローの虚血に、続いて６０分間の再灌流にかける。再灌流条件のばらつきを避けるために、ＤＣおよびＤＺ心臓は両方とも正常のＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液により再灌流する
【００４４】
低流動性虚血のモデル
この実施例は、糖尿病コントロール心臓、処置した糖尿病の心臓、処置した非糖尿病心臓、および非糖尿病のコントロールの単離した心臓における低流動性虚血の検査のために使用する手順を記述する。糖尿病コントロール心臓（ＤＣ）を、２０分間の流速１２．５ｍＬ／分の正常酸素圧の灌流に、続いて灌流の流れを正常な灌流の約１０％である１．２５ｍＬ／分に減速した３０分間の低流動性虚血に、続いて正常な流速（１２．５ｍＬ／分）における３０分間の再灌流にかける。メトホルミンエイコサペンタエン酸で処置された糖尿病群または非糖尿病群（ＤＺまたはＣＺ）において、心臓を、正常のＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液による１０分間の正常酸素圧の灌流（流速１２．５ｍＬ／分） および１０μＭの メトホルミンエイコサペンタエン酸を含有するＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ緩衝液による１０分間の正常酸素圧の灌流にかける。 それらの心臓を、３０分間の低フローの虚血（流速１２．５ｍＬ／分）および正常な流速（１２．５ｍＬ／分）における３０分間の再灌流にかける。
【００４５】
本明細の化合物の糖尿病および糖尿病性合併症に対する効果を測定するための動物モデルは、Ｔｉｒａｂａｓｓｉらにより、 ＩＬＡＲ   Ｊｏｕｒｎａｌ、 ２００４年、４５巻、２９２〜３０２頁に概説されている。抗糖尿病活性は、また、以下の特許、すなわち米国特許第４，３４０，６０５号、第４，３４２，７７１号、第４，３６７，２３４号、第４，６１７，３１２号、第４，６８７，７７７号および第４，７０３，０５２号に記載されている手順に従って試験することもできる。本出願と関係するさらなる参考文献としては、以下の、フランス特許第２７９６５５１号および米国特許出願公開第２００３０２２０３０１号が挙げられる。
【００４６】
本発明は、以下の非制限的な実施例により裏付けられる。
【実施例】
【００４７】
実施例１
｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝（ジメチルアミノ）メタニミニウム（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−エイコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエノアート）の調製
【００４８】
Ｎ，Ｎ−ジメチルイミドジカルボンイミド・ジアミド。Ｎ，Ｎ−ジメチルイミドジカルボンイミド・ジアミド塩酸塩（４．０１ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）を、１Ｎの水酸化ナトリウム（２４．２ｍＬ、２４．２ｍｍｏｌ）に溶解し、室温で３０分間攪拌した。溶液を真空で濃縮し、残渣にエタノール（８０ｍＬ）を添加した。共沸により水分を除去するために、混合物を注意して濃縮した。得た固体に、ＥｔＯＨ（６０ｍＬ）を添加し、懸濁液を濾過して、 沈殿したＮａＣｌを除去した。濾過物を濃縮し、得た固体を一晩、高真空に置き、白色固体としてメトホルミン３．１８ｇ（１０２％）を生じた。
【００４９】
｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝（ジメチルアミノ）メタニミニウム （５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−エイコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエノアート。メトホルミン遊離塩基（２．６７ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル （１００ｍＬ）に溶解し、得た溶液をメディアムフリット（medium frit）を通して濾過し、沈殿していた少量のＮａＣｌを除去した。濾過物に、室温で（５分の期間をかけて）、（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−エイコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタン酸（５．４０ｇ、１７．８ｍｍｏｌ）を含むアセトニトリル（３０ｍＬ）溶液を滴下した。白色の固体が酸の添加後、直ちに沈殿した。反応フラスコを光から防護するためにホイルで包んだ。混合物を室温で１時間攪拌した後、１時間０ ℃で冷却し、その後、窒素雰囲気下で濾過した。得た固体を５０ｍＬのアセトニトリルで洗浄した後、ホイルで包んだ丸底フラスコに急いで移し、高真空下に置いた。この物質を一晩、高真空下で放置し、淡褐色の固体として、実施例１の表題化合物６．５（８４％）を生じた；融点１２１〜１２４℃（分解あり）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、 ＭｅＯＤ）  ｄ５．３６（ｍ，１０Ｈ）、３．０３（ｓ，６Ｈ）、２．８４（ｍ，８Ｈ）、２．１８（ｍ，２Ｈ）、２．１０（ｍ，４Ｈ）、１．６６（ｍ，２Ｈ）、０．９７（ｔ，Ｊ＝７．５７Ｈｚ，３Ｈ）；Ｃ２０Ｈ２４Ｏ２に対する質量分析（エレクトロスプレーイオン化法）ｍ／ｚ３０１．２（Ｍ−Ｈ）−。
【００５０】
実施例２
｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝(ジメチルアミノ)メタニミニウム （４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサン酸の調製
【００５１】
Ｎ，Ｎ−ジメチルイミドジカルボンイミド・ジアミド。Ｎ，Ｎ−ジメチルイミドジカルボンイミド・ジアミド塩酸塩（４．０６ｇ、２４．５ｍｍｏｌ）を１Ｎの水酸化ナトリウム （２４．５ｍＬ、２４．５ｍｍｏｌ）に溶解し、室温で３０分間攪拌した。溶液を真空で濃縮し、残渣にエタノール（８０ｍＬ）を添加した。 共沸により水分を除去するために、混合物を注意して濃縮した。得た固体に、（６０ｍＬ）を添加し、懸濁液を濾過して、 沈殿した塩化ナトリウムを除去した。濾過物を濃縮し、得た固体を一晩、高真空に置き、白色固体としてＮ，Ｎ−ジメチルイミドジカルボンイミド・ジアミド３．２２ｇ（１０２％）を生じた。
【００５２】
｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝（ジメチルアミノ）メタニミニウム （４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサン酸。 
【００５３】
Ｎ，Ｎ−ジメチルイミドジカルボンイミド・ジアミド（９６８ｍｇ、７．６１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３６ｍＬ）に溶解し、得た溶液をメディアムフリットを通して濾過し、沈殿していた少量の塩化ナトリウムを除去した。濾過物に、室温で（５分の期間をかけて）、（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサン酸（２）（２．００ｇ、６．０９ｍｍｏｌ）を含むアセトニトリル（３５ｍＬ）溶液を滴下した。 白色の固体が酸の添加後、直ちに沈殿した。反応フラスコを光から防護するためにホイルで包んだ。混合物を室温で１時間攪拌した後、１時間０ ℃で冷却し、その後、窒素雰囲気下で濾過した。得た固体を５０ｍＬの氷冷のアセトニトリルで洗浄した後、ホイルで包んだ丸底フラスコに急いで移し、高真空下に置いた。この物質を一晩、高真空下で放置し、淡褐色の固体として、１を２．５４ｇ（９１％）生じた。この物質は空気および光に感応することが判明し、したがって、窒素下で琥珀色のガラス瓶で保管した：融点１２４〜１２７℃（褐色に変色）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、 ＭｅＯＤ）５．３６（ｍ，１２Ｈ）、３．０３（ｓ，６Ｈ）、２．８５（ｍ，１０Ｈ）、２．３７（ｍ，２Ｈ）、２．１９（ｍ，２Ｈ）、２．０９（ｍ，２Ｈ）、０．９７（ｔ，Ｊ＝７．５７Ｈｚ，３Ｈ）；Ｃ２２Ｈ３２Ｏ２に対する質量分析（エレクトロスプレーイオン化法）ｍ／ｚ３２７．３（Ｍ−Ｈ）。
【００５４】
実施例３
｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝（ジメチルアミノ）メタニミニウム （５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−ドコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタ塩酸の調製
【００５５】
Ｎ，Ｎ−ジメチルイミドジカルボンイミド・ジアミド。
【００５６】
メトホルミン塩酸塩 （３３１．２５ｇ、２モル）を攪拌棒を含む４０００ｍＬに測り取った。１ＮのＫＯＨ（１９８０ｍＬ，１．９９８モル）を添加し、ビーカーを覆い、混合物を２時間攪拌した。真空濾過により固体を採取し、濾過物を濃縮して、湿気を帯びた固体にした。イソプロパノール（５００ｍＬ）を添加し、短時間、回旋した後、混合物を濃縮した。残渣の白色固体を真空オーブンで１６時間、乾燥した（収量：２６９．０８ｇ）。
【００５７】
｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝（ジメチルアミノ）メタニミニウム （５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−エイコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエン酸。
【００５８】
メトホルミン遊離塩基 （５０．１０ｇ、０．３６６モル）を攪拌棒を含む４０００ｍＬビーカーに測り取った。ＣＨ３ＣＮ（２０００ｍＬ）を添加し、メトホルミンが溶解するまで、混合物を素早く攪拌した。細かい白色固体を真空濾過により除去した（注１０、１１）。〜３０分後、濁った濾過物を同一の溶媒を通して濾過し、透明な濾過物を５０００ｍＬの三つ口平底フラスコに移し、それに完全な攪拌シャフトアセンブリ、Ｎ２取入れ口および添加漏斗および気泡管を装着した。漏斗にエイコサペンタエン酸 （１００．０１ｇ、０．３２４モル）を含むアセトニトリル （５００ｍＬ）溶液を７０分かけて滴下し、装填した。２時間、攪拌した後、フラスコにＮ２バルーンを装着し、密封し、一晩、冷蔵庫に保管した。灰白白固体を真空濾過で採取し、アセトニトリル（５００ｍＬ）で洗浄した。湿気を帯びた固体をパイレックスの皿に移し、２４時間、真空オーブンの中に保管した。オーブンは窒素ガスで通気し、ベージュ色固体を乳棒を使って、乳鉢の中で粗く粉砕した後、Ｎ２で洗浄しておいた琥珀色の瓶に写し、実施例３の化合物を得た（収量：１３０．４９ｇ）。 
【００５９】
実施例４
実施例１の化合物の水溶性を、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）の水溶性と比較した。   
【００６０】
試験化合物の水溶性の測定は、当業者にはよく知られた方法を使って達成される。具体的には、実施例１の試験化合物の計量した量に対して、透明な溶液が得られるまで少量ずつ蒸留水を添加する。溶液の総容量を測定する。水溶性は、塩の重量（単位：ｍｇ）を溶液の容量（単位：ｍＬ）で除算することにより求められる。上記の手法を使って測定したとき、実施例１の化合物の水溶性は、５０ｍｇ／ｍＬと計算された。同様に、ＥＰＡの水溶性は＜０．２ｍｇ／ｍＬと求められた。したがって、実施例１の化合物の水溶性は、ＥＰＡそのものの水溶性より、少なくとも２５０倍高い。これは本発明の化合物が予期せぬほど高い度合いのバイオアベイラビリティを有するという明確な示唆である。水溶性の高い医薬調製物を経口投与したとき、かかる調製物は、胃腸管から体循環へと効率よく吸収される。かかる調製物は血流に急速に吸収されるので、血中に活性薬剤が高濃度で流れることになる。さらに、水溶性調製物は、非経口投与、例えば、静脈内投与にも特に適している。