(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造式
【化１】
0005937247.tif 000083
により表されるいずれか１つの化合物またはその薬学的に許容し得る塩を含む、被験体の状態を治療するための医薬組成物であって、
該状態は、前立腺がん、腎細胞がん、肝細胞腫、肺がん、乳がん、大腸がん、神経芽細胞腫、多形グリア芽細胞腫、ＮＵＴ再配列を含む扁平上皮細胞がん、およびＮＵＴ正中がんからなる群より選択される、医薬組成物。
【請求項２】
前記化合物は、構造式
【化２】
0005937247.tif 000084
により表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記化合物は、構造式
【化３】
0005937247.tif 000085
により表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記化合物は、構造式
【化４】
0005937247.tif 000086
により表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記化合物は、構造式
【化５】
0005937247.tif 000087
により表される化合物またはその薬学的に許容し得る塩である、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記肺がんは、小細胞肺がんである、請求項１〜５いずれか記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記肺がんは、非小細胞肺がんである、請求項１〜５いずれか記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記状態は、ＮＵＴ正中がんである、請求項１〜５いずれか記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記状態は、前立腺がんである、請求項１〜５いずれか記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記状態は、腎細胞がんである、請求項１〜５いずれか記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記状態は、肝細胞腫である、請求項１〜５いずれか記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新生物、炎症性疾患、およびその他の障害を治療するための組成物および方法に関する。
【０００２】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１０年５月１４日に出願された米国仮特許出願第６１／３３４，９９１号明細書、２０１０年８月４日に出願された米国仮特許出願第６１／３７０，７４５号明細書、２０１０年８月２２日に出願された米国仮特許出願第６１／３７５，８６３号明細書、および２０１１年３月２４日に出願された米国仮特許出願第６１／４６７，３７６号明細書の優先権を主張する。これらの各特許出願の内容は、参照によってその内容全体を本明細書に組み込む。
【０００３】
連邦により支援された研究開発の下でなされた発明の権利への宣言
この研究は、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）からの補助金番号Ｋ０８ＣＡ１２８９７２によって支援された。米国政府は、本発明に一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００４】
ヒストンＮ末端尾部は、クロマチンの安定性を保ち、転写調節と関連付けられている修飾の対象である。これらの修飾の中で最も良く特性解析されているのは、アセチル化、メチル化、およびリン酸化である。各修飾のために、適切な標識を施しあるいはそれを除去する酵素が存在する。これらの修飾は、次に転写機構によって解釈されなくてはならない。アセチルリジン認識は、一般に転写因子複合体の構成要素であるブロモドメインによって、主に媒介される。ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）ファミリー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴ）は、高レベルの配列保存を呈示する２つのＮ末端ブロモドメインを含んでなる共通ドメイン構造と、タンパク質−タンパク質相互作用に関係があるとされるより多岐にわたるＣ末端ドメインとを共有する。ヒストン修飾の異常調節は、遺伝子活性に影響を及ぼして、発がんの一因となり得る。リジン側鎖のアセチル化は、Ｈｓｐ９０、ｐ５３、ＳＴＡＴ転写因子、コルタクチン、βカテニン、およびαチューブリンを含むが、これに限定されるものではない、非ヒストンタンパク質の機能における重要な調節事象である。したがってリジン側鎖認識の調節は、発達および疾患において、重要な表現効果および治療効果を広く発揮するであろうことが予期される。発がんに対するアセチルリジン認識の重要性にもかかわらず、アセチルリジン認識の調節因子は、わずかしか同定されていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｆｒｅｎｃｈ，  Ｃ．  Ａ．，  Ｍｉｙｏｓｈｉ，  Ｉ．，  Ａｓｔｅｒ，  Ｊ．  Ｃ．  ＆  ｅｔ  ａｌ．  ＢＲＤ４  ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎ  ｇｅｎｅ  ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｗｉｔｈ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｔ  （１５；１９）．  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １５９（６），  １９８７−１９９２，  （２００１）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、新生物、炎症性疾患、およびその他の障害を治療するための組成物および方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
下述するように、本発明は、新生物、炎症性疾患、肥満症、脂肪肝（ＮＡＳＨかそうでないもの）、糖尿病、アテローム性動脈硬化、動脈ステント閉塞、心不全、悪液質、移植片対宿主病、ブロモドメインと関連付けられている感染性疾患を治療または予防し、寄生生物、マラリア、トリパノソーマの治療、および男性の妊性を低下させるための組成物および方法を特徴とする。特定の実施形態では、本発明の化合物を使用して、新生物（例えばがんおよび非悪性疾患）の薬剤抵抗性を克服する。本発明の組成物のさらなる用途としては、臓器移植、再生医療のための細胞状態調節（すなわち細胞分化の促進または阻害による）、および多分化能促進における使用が挙げられるが、これに限定されるものではない。より具体的には、本発明は、ブロモドメインを含んでなるＢＥＴファミリーポリペプチドと、アセチルリジンおよび／またはクロマチンとの相互作用を妨害し（例えばブロモドメインと、ヒストンＮ末端尾部上に存在するアセチルリジン修飾との相互作用を妨害し）、発がんを抑制する、組成物および方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、炎症性疾患を予防または治療する。
【０００８】
一態様では、本発明は、式Ｉ、
【化１】
0005937247.tif 000002
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０〜３であり、ＬはＨである）、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；
Ｒ２はＨ、Ｄ、ハロゲン、または任意選択的に置換されるアルキルであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６
からなる群から選択され；
各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ４およびＲ６はそれにそれらが付着する炭素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただし
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒがフェニルまたは置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは１であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であれば、次にＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒にならずモルホリノ環を形成せず；
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは１であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であり、Ｒ３およびＲ４の一方がＨであれば、次にＲ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルでなく；
（ｃ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは１であり、Ｌは−ＣＯＯ−Ｒ３である）であれば、次にＲ３はメチルでもエチルでもない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０００９】
特定の実施形態では、Ｒはそれぞれが任意選択的に置換される、アリールまたはヘテロアリールである。
【００１０】
特定の実施形態では、ＬはＨ、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ３または任意選択的に置換されるアリールである。特定の実施形態では、各Ｒ３は独立して、Ｈ；Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される０、１、２、または３個のヘテロ原子を含有する−Ｃ１〜Ｃ８アルキル；またはＮＨ２；Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６からなる群から選択される。
【００１１】
特定の実施形態では、Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは１であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であり、Ｒ３およびＲ４の片方はＨであり、Ｒ３およびＲ４の他方は（ＣＨ２）ｐ−Ｙであり、ｐは１〜３（例えばｐは２）でＹは（芳香族または非芳香族であってもよい）窒素含有環である。
【００１２】
特定の実施形態では、Ｒ２はＨ、Ｄ、ハロゲンまたはメチルである。
【００１３】
特定の実施形態では、ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換されるアルキル、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、またはアルコキシである。
【００１４】
特定の実施形態では、ＲＢはメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、またはＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【００１５】
特定の実施形態では、環Ａは５または６員環アリールまたはヘテロアリールである。特定の実施形態では、環Ａはチオフラニル、フェニル、ナフチル、ビフェニル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ピリジル、フラニル、インドリル、ピリミジニル、ピリジジニル、ピラジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チエニル、チアゾリル、トリアゾリル、イソオキサゾリル、キノリニル、ピロリル、ピラゾリル、または５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリニルである。
【００１６】
特定の実施形態では、環Ａはフェニルまたはチエニルである。
【００１７】
特定の実施形態では、ｍは１または２であり、ＲＡの少なくとも１つの存在はメチルである。
【００１８】
特定の実施形態では、各ＲＡは独立して、Ｈ、任意選択的に置換されるアルキルであり、または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒にアリールを形成し得る。
【００１９】
別の態様では、本発明は、式ＩＩ、
【化２】
0005937247.tif 000003
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
Ｒ’１はＨ、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニルからなる群から選択され；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただしＲ’１が−ＣＯＯ−Ｒ３であり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、ＲＢがメチルであれば、次にＲ３はメチルでもエチルでもない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【００２０】
特定の実施形態では、Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アリールまたはヘテロアリールである。特定の実施形態では、Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、フェニルまたはピリジルである。特定の実施形態では、Ｒは、ｐ−Ｃｌ−フェニル、ｏ−Ｃｌ−フェニル、ｍ−Ｃｌ−フェニル、ｐ−Ｆ−フェニル、ｏ−Ｆ−フェニル、ｍ−Ｆ−フェニルまたはピリジニルである。
【００２１】
特定の実施形態では、Ｒ’１は−ＣＯＯ−Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；Ｒ３はＯ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子を含有して任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ１〜Ｃ８アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ’１は−ＣＯＯ−Ｒ３であり、Ｒ３はメチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔ−ブチルであり；またはＲ’１は、Ｈまたは任意選択的に置換されるフェニルである。
【００２２】
特定の実施形態では、ＲＢはメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【００２３】
特定の実施形態では、ＲＢはメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、またはＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【００２４】
特定の実施形態では、各ＲＡは独立して、任意選択的に置換されるアルキルであり、または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールを形成し得る。
【００２５】
特定の実施形態では、各ＲＡはメチルである。
【００２６】
別の態様では、本発明は、式ＩＩＩ、
【化３】
0005937247.tif 000004
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６
からなる群から選択され；
各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ４およびＲ６はそれにそれらが付着する炭素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただし
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒがフェニルまたは置換フェニルであり、ＲＢがメチルであれば、次にＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒にならずモルホリノ環を形成せず；
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ３およびＲ４の一方がＨであれば、次にＲ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルでない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【００２７】
特定の実施形態では、Ｒはそれぞれが任意選択的に置換される、アリールまたはヘテロアリールである。特定の実施形態では、Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、フェニルまたはピリジルである。
【００２８】
特定の実施形態では、Ｒはｐ−Ｃｌ−フェニル、ｏ−Ｃｌ−フェニル、ｍ−Ｃｌ−フェニル、ｐ−Ｆ−フェニル、ｏ−Ｆ−フェニル、ｍ−Ｆ−フェニルまたはピリジニルである。特定の実施形態では、Ｒ３はＨ、ＮＨ２、またはＮ＝ＣＲ４Ｒ６である。
【００２９】
特定の実施形態では、各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールである。
【００３０】
特定の実施形態では、Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールである。
【００３１】
特定の実施形態では、Ｒ３およびＲ４の一方はＨであり、Ｒ３およびＲ４の他方は（ＣＨ２）ｐ−Ｙであり、ｐは１〜３（例えばｐは２）であり、Ｙは（芳香族または非芳香族であってもよい）窒素含有環である。
【００３２】
別の態様では、本発明は、式ＩＶ、
【化４】
0005937247.tif 000005
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０〜３であり、ＬはＨである）、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；
Ｒ２はＨ、Ｄ、ハロゲン、または任意選択的に置換されるアルキルであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６
からなる群から選択され；
各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ４およびＲ６はそれにそれらが付着する炭素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただし
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であれば、次にＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒にならずモルホリノ環を形成せず；
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であれば、Ｒ３およびＲ４の一方はＨであり、次にＲ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルでなく；
（ｃ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０であり、Ｌは−ＣＯＯ−Ｒ３である）であれば、次にＲ３はメチルでもエチルでもない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【００３３】
特定の実施形態では、Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０〜３であり、Ｌは−ＣＯＯ−Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールである）であり；Ｒ３はＯ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子を含有して任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ１〜Ｃ８アルキルである。特定の実施形態では、ｎは１または２であり、Ｌはアルキルまたは−ＣＯＯ−Ｒ３、およびＲ３はメチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔ−ブチルであり；またはｎは１または２であり、ＬはＨまたは任意選択的に置換されるフェニルである。
【００３４】
特定の実施形態では、Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であり、Ｒ３およびＲ４の片方はＨであり、Ｒ３およびＲ４の他方は（ＣＨ２）ｐ−Ｙであり、ｐは１〜３（例えばｐは２）であり、Ｙは（芳香族または非芳香族であってもよい）窒素含有環である。
【００３５】
特定の実施形態では、Ｒ２はＨまたはメチルである。
【００３６】
特定の実施形態では、ＲＢはメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【００３７】
特定の実施形態では、環Ａはフェニル、ナフチル、ビフェニル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ピリジル、フラニル、インドリル、ピリミジニル、ピリジジニル、ピラジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チエニル、チアゾリル、トリアゾリル、イソオキサゾリル、キノリニル、ピロリル、ピラゾリル、または５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリニルである。
【００３８】
特定の実施形態では、各ＲＡは独立して、任意選択的に置換されるアルキルであり、または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒にアリールを形成し得る。
【００３９】
本発明はまた、本明細書の式Ｖ〜ＸＸＩＩの化合物、および本明細書に記載される任意の化合物も提供する。
【００４０】
別の態様では、本発明は、式Ｉ〜ＸＸＩＩのいずれかの化合物、または本明細書に記載される任意の化合物の有効量を対象に投与するステップを含んでなる、対象において新生物を治療または予防する方法を提供する。
【００４１】
特定の実施形態では、化合物は式Ｉ〜ＩＶのいずれかの化合物である。
【００４２】
別の態様では、本発明は、細胞を式Ｉ〜ＸＸＩＩの化合物または本明細書に記載される任意の化合物の有効量に接触させるステップと、それによって新生物細胞の成長、増殖または生存を低下させるステップを含んでなる、新生物細胞の成長、増殖または生存を低下させる方法を提供する。
【００４３】
別の態様では、本発明は、細胞を式Ｉ〜ＸＸＩＩのいずれかの化合物または本明細書に記載される任意の化合物に接触させるステップと、それによって新生物細胞中で分化を誘導するステップを含んでなる、新生物細胞中で分化を誘導する方法を提供する。
【００４４】
別の態様では、本発明は、細胞を式Ｉ〜ＸＸＩＩのいずれかの化合物または本明細書に記載される任意の化合物の治療的有効量に接触させるステップと、それによって新生物細胞中で細胞死を誘導するステップを含んでなる、新生物細胞中で細胞死を誘導する方法を提供する。
【００４５】
特定の実施形態では、方法は、ＢＥＴファミリーのブロモドメインに結合する化合物を選択するステップをさらに含んでなる。
【００４６】
特定の実施形態では、方法は、細胞環境内でブロモドメインのクロマチンへの結合を阻害する化合物を選択するステップをさらに含んでなる。
【００４７】
特定の実施形態では、方法は、示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦ）、等温滴定熱量計、および／またはルミネセンス近接ホモジニアスアッセイ（ＡＬＰＨＡ−ｓｃｒｅｅｎ）を使用して、結合特異性について化合物を選択するステップをさらに含んでなる。特定の実施形態では、化合物は前記アッセイ中でブロモドメインの熱安定を増大させる。
【００４８】
方法の特定の実施形態では、ＢＥＴファミリーメンバーは、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４またはＢＲＤＴである。
【００４９】
方法の特定の実施形態では、細胞は対象中にある。
【００５０】
別の態様では、本発明は、式Ｉ〜ＸＸＩＩのいずれかの化合物または本明細書に記載される任意の化合物の有効量をそれを必要とする対象に投与し、それによって対象中で新生物を予防または治療するステップを含んでなる、対象中で新生物を予防または治療する方法を提供する。
【００５１】
特定の実施形態では、対象は哺乳類である。特定の実施形態では、対象はヒト患者である。
【００５２】
特定の実施形態では、方法は、対象中で新生物の成長または増殖を低下させる。
【００５３】
特定の実施形態では、新生物は転写活性化因子によって駆動される。特定の実施形態では、転写活性化因子はｍｙｃである。
【００５４】
特定の実施形態では、対象は、バーキットリンパ腫、小細胞肺がん、乳がん、大腸がん、神経芽細胞腫、多形グリア芽細胞腫、ＭＬＬ駆動白血病、慢性リンパ球性白血病、ＮＵＴ正中がん、扁平上皮がんまたはＮＵＴ再配列と関連付けられている任意のその他のがん腫からなる群から選択される新生物を有する。
【００５５】
別の態様では、本発明は、式Ｉ〜ＸＸＩＩのいずれかの化合物または本明細書に記載される任意の化合物の治療的有効量と、そのための薬学的に許容可能な賦形剤またはキャリアとを含んでなる組成物を提供する。
【００５６】
別の態様では、本発明は、式Ｉ〜ＸＸＩＩのいずれかの化合物または本明細書に記載される任意の化合物の治療的有効量と、化合物投与ための書面での指示を含んでなる包装医薬品を提供する。
【００５７】
別の態様では、本発明は、式Ｉ〜ＸＸＩＩのいずれかの化合物または本明細書に記載される任意の化合物の治療的有効量を対象に投与するステップを含んでなる、対象中で新生物を予防または治療する方法を提供し、化合物はブロモドメインのアセチルリジンへの結合を妨害し、またはさもなければクロマチンからＢＥＴファミリーメンバーを置き換え、それによって前記新生物を予防または治療する。
【００５８】
特定の実施形態では、化合物はヒストンＨ４  ＫａｃペプチドのＢＥＴファミリーメンバーへの結合を阻害する。
【００５９】
特定の実施形態では、ＢＥＴファミリーメンバーは、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４またはＢＲＤＴである。
【００６０】
特定の実施形態では、化合物は、ＢＥＴファミリーブロモドメインのＫａｃ結合部位に結合する。
【００６１】
別の態様では、本発明は、試験化合物をブロモドメインを含んでなるＢＥＴファミリーメンバーに接触させるステップと；ブロモドメインへの特異的結合を検出し、それによって新生物の治療に有用な試験化合物を同定するステップを含んでなる、新生物治療のための化合物を同定する方法を提供する。
【００６２】
特定の実施形態では、結合特異性は、示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦ）を使用してアッセイされる。
【００６３】
特定の実施形態では、結合は、前記ブロモドメインの熱安定を増大させる。
【００６４】
特定の実施形態では、結合は、等温滴定熱量計を使用して検出される。
【００６５】
特定の実施形態では、結合は、ルミネセンス近接ホモジニアスアッセイ（ＡＬＰＨＡ−ｓｃｒｅｅｎ）を使用して検出される。
【００６６】
特定の実施形態では、化合物は、ヒストンＨ４  Ｋａｃペプチドの前記ブロモドメインへの結合を阻害する。
【００６７】
特定の実施形態では、化合物は、前記ブロモドメイン中の進化的に保存されたアスパラギンと水素結合を形成する。
【００６８】
特定の実施形態では、前記ＢＥＴファミリーメンバーはＢＲＤ４またはＢＲＤ２であり、アスパラギンはＢＲＤ４（１）中のＡｓｎ１４０およびＢＲＤ２（２）中のＡｓｎ４２９である。
【００６９】
特定の実施形態では、化合物は、細胞環境内でクロマチンと競合的に結合する。
【００７０】
特定の実施形態では、クロマチンとの競合結合は、フォトブリーチング後蛍光回復（ＦＲＡＰ）を使用して検出される。
【００７１】
特定の実施形態では、方法を生体外の新生物細胞中で実施する。
【００７２】
特定の実施形態では、方法は、細胞増殖低下、細胞死増大、または細胞分化増大を検出するステップをさらに含んでなる。
【００７３】
特定の実施形態では、細胞死はアポトーシス細胞死である。
【００７４】
特定の実施形態では、細胞分化は、サイトケラチン発現の増大を検出することで同定される。
【００７５】
特定の実施形態では、方法は、転写伸長の低下を検出するステップをさらに含んでなる。
【００７６】
別の態様では、本発明は、式Ｉ〜ＸＸＩＩのいずれかの化合物または本明細書に記載される任意の化合物の有効量を前記対象に投与するステップを含んでなる、対象中で新生物を治療または予防する方法を提供し、前記化合物は、ＢＥＴファミリーブロモドメインに結合して、前記ブロモドメインとクロマチンとの相互作用を妨害し、それによって前記がんを予防または治療できる。
【００７７】
特定の実施形態では、方法は、前記対象中の新生物細胞中で、細胞死または分化を誘導する。
【００７８】
別の態様では、本発明は、式Ｉ〜ＸＸＩＩのいずれかの化合物または本明細書に記載される任意の化合物からなる群から選択される化合物の有効量と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含んでなる、新生物を治療または予防するための組成物を提供し、前記化合物は、ヒストンＨ４  ＫａｃペプチドのＢＥＴファミリーブロモドメインへの結合を阻害する。
【００７９】
別の態様では、本発明は、式Ｉ〜ＸＸＩＩのいずれかの化合物または本明細書に記載される任意の化合物の有効量を対象に投与するステップを含んでなる、対象中で炎症を低下させる方法を提供する。
【００８０】
別の態様では、本発明は、式Ｉ〜ＸＸＩＩのいずれかの化合物または本明細書に記載される任意の化合物の有効量をそれを必要とする対象に投与するステップと、それによって対象中で炎症性疾患を予防または治療するステップとを含んでなる、対象中で炎症性疾患を予防または治療する方法を提供する。
【００８１】
特定の実施形態では、対象は哺乳類である。特定の実施形態では、対象はヒト患者である。
【００８２】
特定の実施形態では、方法は、サイトカインレベル、ヒスタミン放出、または免疫応答性細胞の生物学的活性を低下させる
【００８３】
別の態様では、本発明は、試験化合物をブロモドメインを含んでなるＢＥＴファミリーメンバーに接触させるステップと；ブロモドメインへの特異的結合を検出し、それによって炎症の治療に有用な試験化合物を同定するステップを含んでなる、炎症治療のための化合物を同定する方法を提供する。
【００８４】
本発明の他の特徴および利点は、詳細な説明から、および特許請求の範囲から明白になるであろう。
【００８５】
即ち、本発明の要旨は、
〔１〕式Ｉ、
【化５−１】
0005937247.tif 000006
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０〜３であり、ＬはＨである）、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；
Ｒ２はＨ、Ｄ、ハロゲン、または任意選択的に置換されるアルキルであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６
からなる群から選択され；
各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ４およびＲ６はそれにそれらが付着する炭素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただし
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒがフェニルまたは置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは１であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であれば、次にＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒にならずモルホリノ環を形成せず；
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは１であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であり、Ｒ３でＲ４の一方がＨであれば、次にＲ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルでなく；
（ｃ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは１であり、Ｌは−ＣＯＯ−Ｒ３である）であれば、次にＲ３はメチルでもエチルでもない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物、
〔２〕Ｒが、それぞれが任意選択的に置換される、アリールまたはヘテロアリールである、〔１〕に記載の化合物、
〔３〕ＬがＨ、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ３、または任意選択的に置換されるアリールである、〔１〕に記載の化合物、
〔４〕各Ｒ３が独立して、Ｈ；Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される０、１、２、または３個のヘテロ原子を含有する−Ｃ１〜Ｃ８アルキル；またはＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６からなる群から選択される、〔３〕に記載の化合物、
〔５〕Ｒ２がＨ、Ｄ、ハロゲンまたはメチルである、〔１〕に記載の化合物、
〔６〕ＲＢが、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、またはアルコキシである、〔１〕に記載の化合物、
〔７〕ＲＢがメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、またはＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である、〔１〕に記載の化合物、
〔８〕環Ａが５または６員環アリールまたはヘテロアリールである、〔１〕に記載の化合物、
〔９〕環Ａがチオフラニル、フェニル、ナフチル、ビフェニル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ピリジル、フラニル、インドリル、ピリミジニル、ピリジジニル、ピラジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チエニル、チアゾリル、トリアゾリル、イソオキサゾリル、キノリニル、ピロリル、ピラゾリル、または５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリニルである、〔１〕に記載の化合物、
〔１０〕環Ａがフェニルまたはチエニルである、〔１〕に記載の化合物、
〔１１〕ｍが１または２であり、ＲＡの少なくとも１つの存在がメチルである、〔１〕に記載の化合物、
〔１２〕各ＲＡが独立して、Ｈ、任意選択的に置換されるアルキルであり、または任意の２つのＲＡがそれにそれぞれが付着する原子と一緒にアリールを形成し得る、〔１〕に記載の化合物、
〔１３〕式ＩＩ、
【化５−２】
0005937247.tif 000007
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
Ｒ’１はＨ、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル；−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル
からなる群から選択され；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただしＲ’１が−ＣＯＯ−Ｒ３であり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、ＲＢがメチルであれば、次にＲ３はメチルでもエチルでもない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物、
〔１４〕Ｒが、それぞれが任意選択的に置換される、アリールまたはヘテロアリールである、〔１３〕に記載の化合物、
〔１５〕Ｒが、それぞれが任意選択的に置換される、フェニルまたはピリジルである、〔１４〕に記載の化合物、
〔１６〕Ｒがｐ−Ｃｌ−フェニル、ｏ−Ｃｌ−フェニル、ｍ−Ｃｌ−フェニル、ｐ−Ｆ−フェニル、ｏ−Ｆ−フェニル、ｍ−Ｆ−フェニルまたはピリジニルである、〔１５〕に記載の化合物、
〔１７〕Ｒ’１が−ＣＯＯ−Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；Ｒ３が、Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される０、１、２、または３個のヘテロ原子を含有して任意選択的に置換されていてもよい−Ｃ１〜Ｃ８アルキルである、〔１３〕に記載の化合物、
〔１８〕Ｒ’１が−ＣＯＯ−Ｒ３であり、Ｒ３がメチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔ−ブチルであり；またはＲ’１がＨまたは任意選択的に置換されるフェニルである、〔１７〕に記載の化合物、
〔１９〕ＲＢがメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である、〔１３〕に記載の化合物、
〔２０〕ＲＢがメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、またはＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である、〔１３〕に記載の化合物、
〔２１〕各ＲＡが独立して、任意選択的に置換されるアルキルであり、または任意の２つのＲＡが、それぞれが付着する原子と一緒に融合アリールを形成し得る、〔１３〕に記載の化合物、
〔２２〕各ＲＡがメチルである、〔２１〕に記載の化合物、
〔２３〕式ＩＩＩ、
【化５−３】
0005937247.tif 000008
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６
からなる群から選択され；
各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ４およびＲ６はそれにそれらが付着する炭素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただし
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒがフェニルまたは置換フェニルであり、ＲＢがメチルであれば、次にＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒にならず、モルホリノ環を形成せず；
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ３およびＲ４の一方がＨであれば、次にＲ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルでない；および
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物、
〔２４〕Ｒが、それぞれが任意選択的に置換される、アリールまたはヘテロアリールである、〔２３〕に記載の化合物、
〔２５〕Ｒが、それぞれが任意選択的に置換される、フェニルまたはピリジルである、〔２４〕に記載の化合物、
〔２６〕Ｒがｐ−Ｃｌ−フェニル、ｏ−Ｃｌ−フェニル、ｍ−Ｃｌ−フェニル、ｐ−Ｆ−フェニル、ｏ−Ｆ−フェニル、ｍ−Ｆ−フェニルまたはピリジニルである、〔２４〕に記載の化合物、
〔２７〕Ｒ３がＨ、ＮＨ２、またはＮ＝ＣＲ４Ｒ６である、〔２３〕に記載の化合物、
〔２８〕各Ｒ４が独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールである、〔２３〕に記載の化合物、
〔２９〕Ｒ６が、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールである、〔２３〕に記載の化合物、
〔３０〕式ＩＶ、
【化５−４】
0005937247.tif 000009
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０〜３であり、ＬはＨである）、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；
Ｒ２はＨ、Ｄ、ハロゲン、または任意選択的に置換されるアルキルであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６
からなる群から選択され；
各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ４およびＲ６はそれにそれらが付着する炭素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただし
（ｄ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であれば、次にＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒にならずモルホリノ環を形成せず；
（ｅ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であれば、Ｒ３およびＲ４の一方はＨであり、次にＲ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルでなく；
（ｆ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０であり、Ｌは−ＣＯＯ−Ｒ３である）であれば、次にＲ３はメチルでもエチルでもない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物、
〔３１〕Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−（式中、ｎは０〜３であり、Ｌは−ＣＯＯ−Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールである）であり；Ｒ３がＯ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子を含有して任意選択的に置換されていてもよい−Ｃ１〜Ｃ８アルキルである、〔３０〕に記載の化合物、
〔３２〕ｎが１または２であり、Ｌがアルキルまたは−ＣＯＯ−Ｒ３であり、Ｒ３がメチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔ−ブチルである；またはｎが１または２であり、ＬがＨまたは任意選択的に置換されるフェニルである、〔３１〕に記載の化合物、
〔３３〕Ｒ２がＨまたはメチルである、〔３０〕に記載の化合物、
〔３４〕ＲＢがメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である、〔３０〕に記載の化合物、
〔３５〕環Ａがフェニル、ナフチル、ビフェニル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ピリジル、フラニル、インドリル、ピリミジニル、ピリジジニル、ピラジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チエニル、チアゾリル、トリアゾリル、イソオキサゾリル、キノリニル、ピロリル、ピラゾリル、または５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリニルである、〔３０〕に記載の化合物、
〔３６〕各ＲＡが独立して、任意選択的に置換されるアルキルであり、またはそれにそれぞれが付着する原子と一緒にアリールを形成し得る任意の２つのＲＡである、〔３０〕に記載の化合物、
〔３７〕〔１〕〜〔３６〕のいずれか一項に記載の化合物またはその誘導体の有効量を対象に投与するステップを含んでなる、対象中で新生物を治療または予防する方法、
〔３８〕前記化合物が、配合Ｉ〜ＩＶのいずれかの化合物である、〔３７〕に記載の方法、
〔３９〕前記細胞を〔１〕〜〔３６〕のいずれか一項に記載の化合物の有効量に接触させるステップと、それによって新生物細胞の成長、増殖または生存を低下させるステップとを含んでなる、新生物細胞の成長、増殖または生存を低下させる方法、
〔４０〕前記細胞を〔１〕〜〔３６〕のいずれか一項に記載の化合物に接触させるステップと、それによって前記新生物細胞中で分化を誘導するステップとを含んでなる、新生物細胞中で分化を誘導する方法、
〔４１〕前記細胞を〔１〕〜〔３６〕のいずれか一項に記載の化合物の治療的有効量に接触させるステップとそれによって前記新生物細胞中で細胞死を誘導するステップとを含んでなる、新生物細胞中で細胞死を誘導する方法、
〔４２〕ＢＥＴファミリーのブロモドメインに結合する化合物を選択するステップをさらに含んでなる、〔３７〕〜〔４１〕のいずれか一項に記載の方法、
〔４３〕細胞環境内でブロモドメインのクロマチンへの結合を阻害する化合物を選択するステップをさらに含んでなる、〔３７〕〜〔４１〕のいずれか一項に記載の方法、
〔４４〕示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦ）、等温滴定熱量計、および／またはルミネセンス近接ホモジニアスアッセイ（ＡＬＰＨＡ−ｓｃｒｅｅｎ）を使用して、結合特異性について化合物を選択するステップをさらに含んでなる、〔３７〕〜〔４１〕のいずれか一項に記載の方法、
〔４５〕前記アッセイ中で、前記化合物がブロモドメインの熱安定性を増大させる、〔４４〕に記載の方法、
〔４６〕前記ＢＥＴファミリーメンバーが、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４またはＢＲＤＴである、〔４２〕に記載の方法、
〔４７〕前記細胞が前記対象中にある、〔３９〕〜〔４１〕のいずれか一項に記載の方法、
〔４８〕〔１〕〜〔３６〕のいずれか一項に記載の化合物の有効量をそれを必要とする対象に投与するステップと、それによって対象中で新生物を予防または治療するステップを含んでなる、対象中で新生物を予防または治療する方法、
〔４９〕前記対象が哺乳類である、〔４８〕に記載の方法、
〔５０〕前記哺乳類がヒトである、〔４８〕に記載の方法、
〔５１〕対象中で新生物の成長または増殖を低下させる、〔４８〕に記載の方法、
〔５２〕前記新生物が転写活性化因子によって駆動される、〔４８〕に記載の方法、
〔５３〕前記転写活性化因子がｍｙｃである、〔５２〕に記載の方法、
〔５４〕前記対象が、バーキットリンパ腫、小細胞肺がん、乳がん、大腸がん、神経芽細胞腫、多形グリア芽細胞腫、ＭＬＬ駆動白血病、慢性リンパ球性白血病、ＮＵＴ正中がん、扁平上皮がんまたはＮＵＴ再配列と関連付けられている任意のその他のがん腫からなる群から選択される新生物を有する、〔４８〕に記載の方法、
〔５５〕〔１〕〜〔３６〕のいずれか一項に記載の化合物の治療的有効量と、そのための薬学的に許容可能な賦形剤またはキャリアとを含んでなる組成物、
〔５６〕〔１〕〜〔３６〕のいずれか一項に記載の化合物の治療的有効量と、前記化合物の投与のための書面による使用説明とを含んでなる包装医薬品、
〔５７〕〔１〕〜〔３６〕のいずれか一項に記載の化合物の治療的有効量を対象に投与するステップを含んでなり、前記化合物がブロモドメインのアセチルリジンへの結合を妨害し、またはさもなければクロマチンからＢＥＴファミリーメンバーを置き換え、それによって前記新生物を予防または治療する、対象中で新生物を予防または治療する方法、
〔５８〕前記化合物が、ヒストンＨ４  ＫａｃペプチドのＢＥＴファミリーメンバーへの結合を阻害する、〔５７〕に記載の方法、
〔５９〕前記ＢＥＴファミリーメンバーが、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４またはＢＲＤＴである、〔５７〕に記載の方法、
〔６０〕前記化合物が、ＢＥＴファミリーブロモドメインのＫａｃ結合部位に結合する、〔３７〕〜〔３９〕のいずれか一項に記載の方法、
〔６１〕試験化合物をブロモドメインを含んでなるＢＥＴファミリーメンバーに接触させるステップと；前記ブロモドメインへの特異的結合を検出し、それによって前記試験化合物を新生物の治療に有用であると同定するステップを含んでなる、新生物治療のための化合物を同定する方法、
〔６２〕結合特異性が、示差走査型蛍光定量法（ＤＳＦ）を使用してアッセイされる、〔６１〕に記載の方法、
〔６３〕結合が、前記ブロモドメインの熱安定性を増大させる、〔６１〕に記載の方法、
〔６４〕結合が、等温滴定熱量計を使用して検出される、〔６１〕に記載の方法、
〔６５〕結合が、ルミネセンス近接ホモジニアスアッセイ（ＡＬＰＨＡ−ｓｃｒｅｅｎ）を使用して検出される、〔６１〕に記載の方法、
〔６６〕前記化合物が、ヒストンＨ４  Ｋａｃペプチドの前記ブロモドメインへの結合を阻害する、〔６１〕に記載の方法、
〔６７〕前記化合物が、前記ブロモドメイン中の進化的に保存されたアスパラギンと水素結合を形成する、〔６１〕に記載の方法、
〔６８〕前記ＢＥＴファミリーメンバーがＢＲＤ４またはＢＲＤ２であり、前記アスパラギンがＢＲＤ４（１）中のＡｓｎ１４０およびＢＲＤ２（２）中のＡｓｎ４２９である、〔６７〕に記載の方法、
〔６９〕前記化合物が細胞環境内でクロマチンと競合的に結合する、〔６１〕に記載の方法、
〔７０〕クロマチンとの競合結合が、フォトブリーチング後蛍光回復（ＦＲＡＰ）を使用して検出される、〔６９〕に記載の方法、
〔７１〕生体外の新生物細胞中で実施される、〔６９〕に記載の方法、
〔７２〕細胞増殖の低下、細胞死の増大、または細胞分化の増大を検出するステップをさらに含んでなる、〔７１〕に記載の方法、
〔７３〕細胞死がアポトーシス細胞死である、〔７２〕に記載の方法、
〔７４〕細胞分化が、サイトケラチン発現増大の検出によって識別される、〔７１〕に記載の方法、
〔７５〕転写伸長の低下を検出するステップをさらに含んでなる、〔７１〕に記載の方法、
〔７６〕ＢＥＴファミリーブロモドメインに結合して前記ブロモドメインとクロマチンとの相互作用を妨害できる、〔１〕〜〔３６〕のいずれか一項に記載の化合物の有効量を前記対象に投与するステップと、それによって前記がんを予防または治療するステップを含んでなる、対象中で新生物を治療または予防する方法、
〔７７〕前記対象の新生物細胞の細胞死または分化を誘導する、〔７６〕に記載の方法、
〔７８〕ヒストンＨ４ＫａｃペプチドのＢＥＴファミリーブロモドメインへの結合を阻害する、〔１〕〜〔３６〕に記載の化合物からなる群から選択される化合物の有効量と、薬学的に許容可能な賦形剤とを含んでなる、新生物を治療または予防するための組成物、
〔７９〕〔１〕〜〔３６〕のいずれか一項に記載の化合物の有効量を対象に投与するステップを含んでなる、対象中で炎症を低下させる方法、
〔８０〕〔１〕〜〔３６〕のいずれか一項に記載の化合物の有効量をそれを必要とする対象に投与するステップを含んでなる、対象中で炎症性疾患を予防または治療する方法、
〔８１〕前記対象が哺乳類である、〔８０〕に記載の方法、
〔８２〕前記哺乳類がヒト患者である、〔８０〕に記載の方法、
〔８３〕サイトカインレベル、ヒスタミン放出、または免疫応答性細胞の生物学的活性を低下させる、〔８０〕に記載の方法、
〔８４〕試験化合物をブロモドメインを含んでなるＢＥＴファミリーメンバーに接触させるステップと；前記ブロモドメインへの特異的結合を検出し、それによって前記試験化合物を炎症の治療に有用として同定するステップとを含んでなる、炎症治療のための化合物を同定する方法、
〔８５〕式、
【化５−５】
0005937247.tif 000010
によって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物、
〔８６〕化合物が（＋）−ＪＱ１：
【化５−６】
0005937247.tif 000011
である、〔８５〕に記載の化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物、
〔８７〕式、
【化５−７】
0005937247.tif 000012
または
【化５−８】
0005937247.tif 000013
によって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物、
〔８８〕式、
【化５−９】
0005937247.tif 000014
または
【化５−１０】
0005937247.tif 000015
によって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物、
〔８９〕式、
【化５−１１】
0005937247.tif 000016
のいずれか１つによって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物、
〔９０〕式、
【化５−１２】
0005937247.tif 000017
のいずれか１つによって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物、
〔９１〕構造、
【化５−１３】
0005937247.tif 000018
【化５−１４】
0005937247.tif 000019
【化５−１５】
0005937247.tif 000020
【化５−１６】
0005937247.tif 000021
【化５−１７】
0005937247.tif 000022
【化５−１８】
0005937247.tif 000023
のいずれか１つによって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物、
〔９２〕構造、
【化５−１９】
0005937247.tif 000024
によって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物、
〔９３〕構造、
【化５−２０】
0005937247.tif 000025
によって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物、
〔９４〕構造、
【化５−２１】
0005937247.tif 000026
によって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物
に関する。
【発明の効果】
【００８６】
本発明により、新生物、炎症性疾患、およびその他の障害を治療するための組成物および方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】２つのＪＱ１立体異性体の構造を示す。Ｃ６における立体中心は、星印（＊）で示される。
【図２】（−）−ＪＱ１鏡像異性体が、細胞中のＢＲＤ４−ＮＵＴと競合的に結合しないことを示すグラフである。図２Ａは、ＧＦＰ−ＢＲＤ４のフォトブリーチング後蛍光回復（ＦＲＡＰ）が、ビヒクル対照と比較して、（−）−ＪＱ１（２５０ｎＭ、５ｈ）の存在による影響を受けないことを示す。データは、平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝５）を表す。図２Ｂは、併行比較研究において、発現したＧＦＰ−ＢＲＤ４が、（＋）−ＪＱ１（２５０ｎＭ、５ｈ）の存在下で改善された回復を実証することを示す。データは、平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝５）を表す。図２Ｃは、ＦＲＡＰ試験（ａ、ｂ）で観察された、ＧＦＰ−ＢＲＤ４の移動画分の定量比較を提供する。データは平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝５）を表し、リガンド処理サンプルとビヒクル対照を比較する両側ｔ試験から得られたｐ値によって、アノテートされる。
【図３】ＪＱ１が、クロマチンと競合的にＢＲＤ４に結合して、ヒトＮＵＴ正中がん細胞を分化させることを示す。図３Ａは、ＪＱ１存在下で改善された回復を実証する、ＧＦＰ−ＢＲＤ４のフォトブリーチング後蛍光回復（ＦＲＡＰ）を示す。核は、蛍光強度に比例して疑似着色される。白丸は、フォトブリーチング領域を示す。図３Ｂ〜Ｄは、ＪＱ１が、形質移入されたＧＦＰ−ＢＲＤ４（図３Ｂ）およびＧＦＰ−ＢＲＤ４−ＮＵＴ（図３Ｃ）で実施されたＦＲＡＰ実験で蛍光回復を加速するが、核ＧＦＰ−ＮＵＴ（図３Ｄ）の回復には効果がないことを示す。図３Ｅは、ＦＲＡＰ試験（図３Ｂ〜３Ｄ）の時間対最大半量蛍光回復の定量比較を示す。データは平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝５）を表し、両側ｔ試験から得られるｐ値によってアノテートされる。図３Ｆは、ＪＱ１（５００ｎＭ、４８ｈ）は、ＮＵＴの病巣核染色の損失を促す（抗ＮＵＴ；４０×）。図３Ｇは、ＪＱ１（５００ｎＭ、４８ｈ）で処理されたＮＭＣ細胞が、扁平上皮分化の細胞学的徴候を実証することを示す（Ｈ＆Ｅ；４０×）。図３Ｈは、ＪＱ１（５００ｎＭ）によるＮＭＣ細胞の分化が即座で、時間依存性であり、サイトケラチン発現の顕著な増大によって特徴付けられることを示す（ＡＥ１／ＡＥ３；４０×）。図３Ｉ〜Ｊは、ＪＱ１が、生体外で、７９７細胞系（図３Ｉ）およびＰｅｒ４０３ＮＭＣ細胞系（図３Ｊ）の迅速な増殖を減衰させることを示す（Ｋｉ６７；４０×）。
【図４】ＪＱ１が、ＮＵＴ正中がん中で扁平上皮分化を選択的に誘導することを示す、顕微鏡写真である。図４ａは、ＪＱ１（５００ｎＭ）で処理されたＮＭＣ  ７９７細胞が、細胞の紡錘化、扁平化、およびオープンクロマチンの発生によって例示される、扁平上皮分化の時間依存性の細胞学的徴候を実証することを示す（Ｈ＆Ｅ；４０×および１００×で図示される）。図４Ｂは、ＪＱ１（５００ｎＭ、４８ｈ）で処理されたＮＭＣ  Ｐｅｒ４０３細胞が、扁平上皮分化の比較できる徴候を呈示することを示す。細胞紡錘化および細胞質ゾル角質化が、それぞれＨ＆Ｅおよびケラチン染色によって図示される（４０×）。図４Ｃは、非ＮＭＣ扁平上皮がん細胞系ＴＥ１０が、ＪＱ１（５００ｎＭ）に応えて分化できないことをを示し、Ｈ＆Ｅおよびケラチン（ＡＥ１／ＡＥ３）染色（４０×）によって図示される。
【図４Ｄ】ＪＱ１が、ＮＭＣ細胞増殖を損なうことを示す。図４Ｄ−ａは、ＪＱ１が、生体外でＮＭＣ  Ｐｅｒ４０３細胞系の迅速な増殖を減衰することを示す、２枚の顕微鏡写真を含む（Ｋｉ６７；４０×）。画像は、同一倍率で示される。図４Ｄ−ｂは、（４Ｄ−ａ）および図３Ｊで実施されたＩＨＣによって測定された、細胞増殖に対するＪＱ１の効果を示すグラフである（Ｋｉ６７染色および陽性；％）。細胞は、５つの高倍率視野中で、Ｋｉ６７陽性（濃い染色核）または陰性（薄青の染色核）として手動で評点した。データは平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝５）を表し、両側ｔ試験から得られるｐ値によってアノテートされる。
【図４Ｅ】ＪＱ１によるＮＵＴ正中がん細胞中の扁平上皮分化の誘導が、立体特異的で時間依存性であることを示す。図４Ｅ−ａは、（−）−ＪＱ１（１００ｎＭ）によってチャンバースライド内で処理されたＮＭＣ  ７９７細胞が、ビヒクル処理対照と比較して、同等の細胞質ゾル表現型を呈示することを示す、６枚の顕微鏡写真を含む。（＋）−ＪＱ１（１００ｎＭ、４８ｈ）は、細胞の紡錘化、扁平化、およびケラチン発現増大によって呈示される扁平上皮分化を促した。図４Ｅ−ｂは、ＪＱ１鏡像異性体またはビヒクルで処理されたＮＭＣ  ７９７細胞が、遠心分離、固定、薄片され、ケラチン発現について染色されたことを示す（左；ＡＥ１／ＡＥ３、２０×）。染色強度について核をスコア付けできる不偏性マスキングと定量化アルゴリズムを使用して、同時に調製されたスライド上で、画像に基づくケラチン発現分析を実施した（右；２０×）。図４Ｅ−ｃは、定量的免疫組織化学による測定で、（＋）−ＪＱ１（２５０ｎＭ）が、（−）−ＪＱ１（２５０ｎＭ）およびビヒクル対照と比較して、処理されたＮＭＣ  ７９７細胞中でケラチンの迅速な発現を誘導したことを示す。処理条件あたりのパーセント陽性核を提示する。データは平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝３）を表し、両側ｔ試験から得られるｐ値によってアノテートされる。図４Ｅ−ｄは、（＋）−ＪＱ１（２５０ｎＭ）は、（−）−ＪＱ１（２５０ｎＭ）と比較して、処理されたＮＭＣ  ７９７細胞の強力な（３＋）ケラチン染色の時間依存性誘導を引き起こす。処理条件あたりのパーセント陽性核が提示される。データは平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝３）を表し、両側ｔ試験から得られるｐ値によってアノテートされる。グループ分けした画像は、同一倍率で示される。
【図４Ｆ】ＢＲＤ４−ＮＵＴ転座を保有しない扁平上皮がん細胞系は、ＪＱ１による処理に対して感受性がより低いことを示す。消化器扁平上皮がん細胞系（ＴＴおよびＴＥ１０）は、（＋）−ＪＱ１（２５０ｎＭ、赤丸）または（−）−ＪＱ１（２５０ｎＭ、黒丸）存在下で、７２時間培養された。ＪＱ１によって、細胞増殖に対して観察された最小効果は、有糸分裂細胞中の細胞周期進行における妥当と思われる役割に一致する７。データは、平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝３）として提示される。ＩＣ５０値は、ロジスティック退縮によって計算した。
【図４Ｆ−ｃ】ＢＲＤ４−ＮＵＴ転座を保有しない扁平上皮がん細胞系は、ＪＱ１による処理に対して感受性がより低いことを示す。消化器扁平上皮がん細胞系（ＴＴおよびＴＥ１０）は、（＋）−ＪＱ１（２５０ｎＭ、赤丸）または（−）−ＪＱ１（２５０ｎＭ、黒丸）存在下で、７２時間培養された。ＪＱ１によって、細胞増殖に対して観察された最小効果は、有糸分裂細胞中の細胞周期進行における妥当と思われる役割に一致する７。データは、平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝３）として提示される。ＩＣ５０値は、ロジスティック退縮によって計算した。
【図５】ＪＱ１処理が、生体外および生体内で、増殖を阻害し、分化および細胞死を促すことを示す。図５ａは、ＢＲＤ４−ＮＵＴ依存性細胞系に対する、ＢＲＤ４阻害の成長効果を示す。細胞を（＋）−ＪＱ１（赤丸）または（−）−ＪＱ１（黒丸）と共に培養し、７２時間後に増殖をモニターした。（＋）−ＪＱ１は、ＮＭＣ細胞系による増殖をユニークに減衰させた。データは、平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝３）として提示される。ＩＣ５０値は、ロジスティック退縮によって計算した。図５Ｂは、ＮＭＣ  ７９７細胞に対する、（＋）−ＪＱ１の経時的な進行性抗増殖性効果が、１、３、７、および１０日目に実証されたことを示す。データ点は、平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝３）である。図５Ｃは、ＮＭＣ  ７９７細胞中のＤＮＡ含量に対するフローサイトメトリーの結果を示す。（＋）−ＪＱ１（２５０ｎＭ、４８ｈ）は、（−）−ＪＱ１（２５０ｎＭ）およびビヒクル対照と比較して、Ｇ１停止を誘導した。図５Ｄは、表示されるビヒクル、ＪＱ１またはスタウロスポリン（ＳＴＡ）で処理された、ＮＭＣ  ７９７扁平上皮がん細胞のフローサイトメトリー分析の結果を示す。ＰＩ、ヨウ化プロピジウム。ＡＶ、アネクシンＶ。図５Ｅは、マウスＮＭＣ  ７９７異種移植片のＰＥＴ造影の結果を示す。後肢異種移植片中のＦＤＧ取り込みは、５０ｍｇ  ｋｇ−１ＪＱ１処理によって、ビヒクル対照と比較して低下する。図５Ｆは、毎日５０ｍｇ  ｋｇ−１ＪＱ１で処理された確立された疾患（ＮＭＣ  ７９７異種移植片）があるマウス中において、腫瘍体積がビヒクル対照と比較して低下することを示す。１４日目に両側ｔ試験によって、治療法に対する顕著な応答が観察された（ｐ＝０．０３９）。データは、平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝７）を表す。図５Ｇは、ＪＱ１処理動物から摘出されたＮＭＣ  ７９７腫瘍に対する組織病理学分析が、ビヒクル処理動物と比較して、ケラチン発現誘導（ＡＥ１／ＡＥ３、４０×）および増殖低下（Ｋｉ６７、４０×）を明らかにすることを示す（棒目盛は２０μｍ）。補足図１１、１２では、拡大視野が提供される。図５Ｈは、患者由来ＮＭＣ  １１０６０異種移植片の生存度が、ＰＥＴ造影によって確認されたことを示す。図５Ｉは、（＋）−ＪＱ１（４日間にわたり毎日５０ｍｇ  ｋｇ−１）に対する、一次１１０６０  ＮＭＣ異種移植片の治療反応が、ＰＥＴ造影によって実証されたことを示す。図５Ｊは、（＋）−ＪＱ１処理動物から摘出された一次ＮＭＣ  １１０６０腫瘍の組織病理学分析が、ビヒクル処理動物と比較して、ケラチン発現誘導を明らかにすることを示す（ＡＥ１／ＡＥ３、２０×；棒目盛は２０μｍ）。ケラチン誘導の定量的分析は、造影マスキング（図５Ｊ、右パネル）およびピクセル陽性分析を使用して実施された（図５Ｋ）。治療法に対する有意応答は、両側ｔ試験（ｐ＝０．０００１）によって観察される。データは、３つの独立した広視野顕微鏡視野の平均±ｓ．ｄ．を表す。染色された摘出腫瘍および定量マスクの比較画像が、図９に提供される。
【図５Ｌ】ＮＭＣ  ７９７異種移植片を保有するマウスが、抗腫瘍効果を引き起こす、ＪＱ１治療法に耐えることを示すグラフである。図５Ｌ−ａは、ＮＭＣ  ７９７異種移植片保有マウスのＪＱ１による処理（１日あたり５０ｍｇ  ｋｇ−１）が、１４日間の治療中に腫瘍量を低下させたことを示す。データは、平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝７）を表す。図５Ｌ−ｂは、ＪＱ１が、有害症状または体重減少を生じなかったことを示す。データは、平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝７）を表す。
【図５Ｍ】ＪＱ１によるＮＵＴ正中がん細胞中の扁平上皮分化の誘導が、立体特異的で時間依存性であることを示す。図５Ｍ−ａは、（−）−ＪＱ１（１００ｎＭ）によってチャンバースライド中で処理されたＮＭＣ  ７９７細胞が、ビヒクル処理対照と比較して同等の細胞質ゾル表現型を呈示することを示す、顕微鏡写真である。（＋）−ＪＱ１（１００ｎＭ、４８ｈ）は、細胞の紡錘化、扁平化、およびケラチン発現増大によって呈示される扁平上皮分化を促す。図５Ｍ−ｂは、顕微鏡写真である。ＪＱ１鏡像異性体またはビヒクルで処理されたＮＭＣ  ７９７細胞は、遠心分離、固定、薄片され、ケラチン発現について染色された（左；ＡＥ１／ＡＥ３、２０×）。染色強度について核をスコア付けできる不偏性マスキングと定量化アルゴリズムを使用して、同時に調製されたスライド上で、画像に基づくケラチン発現分析を実施した（右；２０×）。図５Ｍ−ｃは、定量的免疫組織化学による測定で、（＋）−ＪＱ１（２５０ｎＭ）が、（−）−ＪＱ１（２５０ｎＭ）およびビヒクル対照と比較して、処理されたＮＭＣ  ７９７細胞中で、ケラチンの迅速な発現を誘導することを示すグラフである。処理条件あたりのパーセント陽性核を提示する。データは平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝３）を表し、両側ｔ試験から得られるｐ値によってアノテートされる。図５Ｍ−ｄは、（＋）−ＪＱ１（２５０ｎＭ）が、（−）−ＪＱ１（２５０ｎＭ）と比較して、処理されたＮＭＣ  ７９７細胞の強力な（３＋）ケラチン染色の時間依存性誘導を引き起こすことを示すグラフである。処理条件あたりのパーセント陽性核を提示する。データは平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝３）を表し、両側ｔ試験から得られるｐ値によってアノテートされる。グループ分けした画像は、同一倍率で示される。
【図６Ａ】ＪＱ１が、ＩＨＣによる測定で、生体内で扁平上皮分化、成長停止、およびアポトーシスを促すことを示す顕微鏡写真を提供する。ＪＱ１処理動物（右パネル）から摘出されたＮＭＣ腫瘍の組織病理学分析は、全てビヒクル処理動物（左パネル）との比較で、扁平上皮分化（Ｈ＆Ｅ、４０×）、核ＮＵＴ病巣の展退（ＮＵＴ、１００×）、増殖低下（Ｋｉ６７、４０×）、ケラチン発現誘導（ＡＥ１／ＡＥ３、４０×）、およびアポトーシス応答（タネル（ＴＵＮＥＬ）、４０×）を明らかにする。
【図６Ｂ】ＪＱ１が、ＩＨＣによる測定で、生体内で扁平上皮分化、成長停止、およびアポトーシスを促すことを示す顕微鏡写真を提供する。ＪＱ１処理動物（右パネル）から摘出されたＮＭＣ腫瘍の組織病理学分析は、全てビヒクル処理動物（左パネル）との比較で、扁平上皮分化（Ｈ＆Ｅ、４０×）、核ＮＵＴ病巣の展退（ＮＵＴ、１００×）、増殖低下（Ｋｉ６７、４０×）、ケラチン発現誘導（ＡＥ１／ＡＥ３、４０×）、およびアポトーシス応答（タネル（ＴＵＮＥＬ）、４０×）を明らかにする。
【図７】ＪＱ１が、ヒト扁平上皮がん細胞系でＮＭＣ中のアポトーシスを選択的に誘導することを示す。図７Ａは、ＦＡＣＳ分析の結果を提供する。ＪＱ１で処理されたＮＭＣ  Ｐｅｒ４０３細胞（５００ｎＭ、２４または４８ｈ）は、フローサイトメトリーで、非ＮＭＣ扁平上皮がん細胞系ＴＥ１０およびＴＴとは対照的に、アポトーシス誘導を呈示する。ＰＩ、ヨウ化プロピジウム；ＡＶ、アネクシンＶ。図７Ｂは、図５ｂおよびａで実施されたフローサイトメトリーによる、アネクシンＶ陽性細胞の定量化および比較を示す。ＪＱ１（５００ｎＭ）は、非ＮＭＣ扁平上皮がん細胞系と比較して、ＮＭＣ細胞系において即座で時間依存性のアポトーシス誘導を呈示した。データは平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝３）を表し、両側ｔ試験から得られるｐ値によってアノテートされる。
【図８】ＮＭＣ患者由来組織が、生体外で（＋）−ＪＱ１の抗増殖性効果に対して、感受性であることを示すグラフである。図８Ａは、患者由来ＮＭＣ  １１０６０細胞の分析からの結果を示す。細胞は廃棄臨床材料から単離され、生体外実験のために短期培養中で培養された。ＮＭＣ  １１０６０細胞に対するＢＲＤ４阻害の抗増殖性効果は、（＋）−ＪＱ１（赤丸）または（−）−ＪＱ１（黒丸）との培養の７２時間後に測定された。ＮＭＣ  １１０６０細胞は、（＋）−ＪＱ１鏡像異性体に対してユニークに感受性である。データは、平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝３）として提示される。ＩＣ５０値は、ロジスティック退縮によって計算した。図８Ｂは、１、３、７、および１０日目に実証された、患者由来ＮＭＣ  １１０６０細胞に対する、（＋）−ＪＱ１の経時的な進行性抗増殖性効果を示す。データ点は、平均±ｓ．ｄ．（ｎ＝３）である。図８Ｃは、ＮＭＣ  １１０６０細胞中のＤＮＡ含量に対するフローサイトメトリーの結果を示す。（＋）−ＪＱ１（２５０ｎＭ、４８ｈ）は、（−）−ＪＱ１（２５０ｎＭ）およびビヒクル対照と比較して、Ｇ１停止を誘導する。
【図９】患者由来ＮＭＣ  １１０６０一次異種移植腫瘍中でｊｑ１によって誘導される、びまん性の強力ケラチン発現の定量化を提供する。図９ａは、薄片され、ケラチン発現について染色された、ビヒクル処理置動物由来の摘出ＮＭＣ  １１０６０一次異種移植片の低倍率（０．８×）画像を示す（ＡＥ１／ＡＥ３；左）。薄片された腫瘍全体を通じて、ケラチンに対する全体的染色は弱い。染色強度（右）について個々のピクセルをスコア付けできる不偏性マスキングと定量化アルゴリズムを使用して、画像に基づくケラチン発現分析を実施した。図９Ｂは、薄片され、ケラチン発現について染色された、（＋）−ＪＱ１−処理動物（毎日５０ｍｇ  ｋｇ−１で４日間）由来の摘出ＮＭＣ  １１０６０一次異種移植片の低倍率（０．８×）画像を示す（ＡＥ１／ＡＥ３；左）。ＪＱ１−処理腫瘍中のケラチン誘導の一様な効果に一致する、びまん性染色が観察される。染色強度について個々のピクセルをスコア付けできる不偏性マスキングと定量化アルゴリズムを使用して、画像に基づくケラチン発現分析を実施した（右）。ピクセル陽性を定量的に評点し、青（０）、黄色（１＋）、オレンジ（２＋）および赤（３＋）で視覚的に報告する。全ての画像対は、同一拡大率で示される。
【図１０】ＪＱ１が、齧歯類中で、優れた経口バイオアベイラビリティと、適切な薬物動態学的曝露を呈示することを示す。（＋）−ＪＱ１の薬物動態学的研究は、ＣＤ１マウス中で、静脈内（図１０Ａ、Ｂ）および経口（図１０Ｂ、Ｃ）投与に続いて実施された。ａ、（＋）−ＪＱ１（５ｍｇ  ｋｇ−１）の静脈内投与後の平均血漿濃度−時間プロフィール。データは、平均およびｓ．ｄ．（ｎ＝３）を表す。図１０Ｂは、優れた薬剤曝露［曲線下面積（ＡＵＣ）＝２０９０ｈｒ＊ｎｇ／ｍＬ］とおよそ１時間の半減期（Ｔ１／２）とを実証する、計算された静脈内（＋）−ＪＱ１の薬物動態学的パラメータを示す。図１０Ｃは、（＋）−ＪＱ１（１０ｍｇ  ｋｇ−１）の経口投与後の平均血漿濃度−時間プロフィールを示す。データは、平均およびｓ．ｄ．（ｎ＝３）を表す。図１０Ｄは、優れた経口バイオアベイラビリティ（Ｆ＝４９％）、ピーク血漿濃度（Ｃｍａｘ＝１１８０ｎｇ／ｍＬ）と薬剤曝露（ＡＵＣ＝２０９０ｈｒ＊ｎｇ／ｍＬ）とを実証する、計算された経口（＋）−ＪＱ１の薬物動態学的パラメータを示す。ＣＬ、クリアランス；Ｖｓｓ、定常状態における容積；ＭＲＴＩＮＦ、無限時間まで外挿した平均滞留時間；Ｔｍａｘ、最大濃度到達時間。
【図１１】ＢＲＤ４．１を阻害するＪＱ１鏡像異性体のＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ結合データを示すグラフである。
【図１２】ＢＲＤ４．２を阻害するＪＱ１鏡像異性体のＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ結合データを示すグラフである。
【図１３】その他のＢＥＴファミリーメンバー（活性）およびＣＢＰ（不活性）に対する、ＪＱ１Ｓのプロファイリングを示すグラフである。
【図１４】ＪＱ１誘導体の重点的ライブラリーの投与量決定試験を示すグラフである。
【図１５Ａ】図１５Ａは、ＪＱ１が、ＮＵＴ正中がん腫のマウス異種移植モデルにおいて、腫瘍量を低下させることを示すグラフである。図１５Ｂは、ＪＱ１で処理されたマウスの体重を示すグラフである。
【図１５Ｂ】図１５Ａは、ＪＱ１が、ＮＵＴ正中がん腫のマウス異種移植モデルにおいて、腫瘍量を低下させることを示すグラフである。図１５Ｂは、ＪＱ１で処理されたマウスの体重を示すグラフである。
【図１６Ａ】ＪＱ１およびその誘導体のＢＲＤ４（１）およびＢＲＤ４（２）結合活性を示すグラフである。
【図１６Ｂ】ＪＱ１およびその誘導体のＢＲＤ４（１）およびＢＲＤ４（２）結合活性を示すグラフである。
【図１６Ｃ】ＪＱ１およびその誘導体のＢＲＤ４（１）およびＢＲＤ４（２）結合活性を示すグラフである。
【図１６Ｄ】ＪＱ１およびその誘導体のＢＲＤ４（１）およびＢＲＤ４（２）結合活性を示すグラフである。
【図１７Ａ】ＮＵＴ正中がん腫（ＮＭＣ）細胞生存度に対する、ＪＱ１およびその誘導体の効果を示すグラフである。
【図１７Ｂ】ＮＵＴ正中がん腫（ＮＭＣ）細胞生存度に対する、ＪＱ１およびその誘導体の効果を示すグラフである。
【図１７Ｃ】ＮＵＴ正中がん腫（ＮＭＣ）細胞生存度に対する、ＪＱ１およびその誘導体の効果を示すグラフである。
【図１７Ｄ】ＮＵＴ正中がん腫（ＮＭＣ）細胞生存度に対する、ＪＱ１およびその誘導体の効果を示すグラフである。
【図１８】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図１９】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図２０】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図２１】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図２２】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図２３】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図２４】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図２５】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図２６】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図２７】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図２８】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図２９】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図３０】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図３１】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図３２】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図３３】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図３４】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図３５】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図３６】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図３７】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図３８】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図３９】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図４０】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図４１】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図４２】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図４３】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図４４】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図４５】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図４６】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図４７】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図４８】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図４９】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図５０】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図５１】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図５２】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図５３】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図５４】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図５５】ＪＱ１およびその誘導体で処理された、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。
【図５６Ａ】リード化合物結合アッセイの結果を示すグラフである。
【図５６Ｂ】リード化合物結合アッセイの結果を示すグラフである。
【図５６Ｃ】リード化合物結合アッセイの結果を示すグラフである。
【図５６Ｄ】リード化合物結合アッセイの結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００８８】
定義
「作用物質」は、任意の小分子化合物、抗体、核酸分子、またはポリペプチド、またはその断片を意味する。
【００８９】
本明細書の用法では、「芳香族環」または「アリール」という用語は、炭素および水素原子を含んでなる単環または多環式芳香族環または環遊離基を意味する。適切なアリール基の例としては、フェニル、トリル、アントラセニル、フルオレニル、インデニル、アズレニル、およびナフチル、ならびに５，６，７，８−テトラヒドロナフチルなどのベンゾ融合炭素環式部分が挙げられるが、これに限定されるものではない。アリール基は非置換であり得て、または例えば本明細書でアルキル基について記載される置換基（制限なしにアルキル（好ましくは低級アルキルまたは１つまたは複数のハロ置換アルキル）、ヒドロキシ、アルコキシ（好ましくは低級アルコキシ）、アルキルチオ、シアノ、ハロ、アミノ、ボロン酸（−Ｂ（ＯＨ）２、およびニトロを含む）などの１つまたは複数の置換基で、任意選択的に置換され得る。特定の実施形態では、アリール基は単環であり、環は６個の炭素原子を含んでなる。
【００９０】
本明細書の用法では、「アルキル」という用語は、典型的に１〜１０個の炭素原子を有する、飽和直鎖または分枝非環式炭化水素を意味する。代表的な飽和直鎖アルキルとしては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、およびｎ−デシルが挙げられ；一方、飽和分枝アルキルとしては、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル、２−メチルブチル、３−メチルブチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチル、２−メチルヘキシル、３−メチルヘキシル、４−メチルヘキシル、５−メチルヘキシル、２，３−ジメチルブチル、２，３−ジメチルペンチル、２，４−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルヘキシル、２，４−ジメチルヘキシル、２，５−ジメチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、２，２−ジメチルヘキシル、３，３−ジメチルペンチル、３，３−ジメチルヘキシル、４，４−ジメチルヘキシル、２−エチルペンチル、３−エチルペンチル、２−エチルヘキシル、３−エチルヘキシル、４−エチルヘキシル、２−メチル−２−エチルペンチル、２−メチル−３−エチルペンチル、２−メチル−４−エチルペンチル、２−メチル−２−エチルヘキシル、２−メチル−３−エチルヘキシル、２−メチル−４−エチルヘキシル、２，２−ジエチルペンチル、３，３−ジエチルヘキシル、２，２−ジエチルヘキシル、３，３−ジエチルヘキシルなどが挙げられる。本発明の化合物に含まれるアルキル基は、非置換であってもよく、またはアミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、アルコキシ、アルキルチオ、オキソ、ハロ、アシル、ニトロ、ヒドロキシル、シアノ、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルキルヘテロアリール、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、カルボシクリル、カルボシクリルオキシ、カルボシクリルチオ、カルボシクリルアミノ、ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、ヘテロシクリルアミノ、ヘテロシクリルチオなどの１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されていてもよい。本発明の化合物では、低級アルキルが典型的に好まれる。
【００９１】
「ブロモドメイン」は、アセチル化リジン残基を認識するポリペプチド部分を意味する。一実施形態では、ＢＥＴファミリーメンバーポリペプチドのブロモドメインはおよそ１１０個のアミノ酸を含んでなり、クロマチンと相互作用する多様なループ領域によって結合する、４本のαらせんの左巻きの束を含んでなる、保存された折り畳みを共有する。
【００９２】
「ＢＥＴファミリーポリペプチド」は、２つのブロモドメインと、転写調節因子活性またはアセチル化リジン結合活性を有する末端外（ｅｘｔｒａｔｅｒｍｉｎａｌ）（ＥＴ）ドメインまたはその断片を含んでなるポリペプチドを意味する。例示的なＢＥＴファミリーメンバーとしては、ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴが挙げられる。
【００９３】
「ＢＲＤ２ポリペプチド」は、ＮＰ＿００５０９５と少なくとも８５％の同一性を有し、クロマチン結合または転写調節ができる、タンパク質またはその断片を意味する。
【００９４】
例示的なＢＲＤ２ポリペプチドの配列を下に示す。
ＭＬＱＮＶＴＰＨＮＫＬＰＧＥＧＮＡＧＬＬＧＬＧＰＥＡＡＡＰＧＫＲＩＲＫＰＳＬＬＹＥＧＦＥＳＰＴＭＡＳＶＰＡＬＱＬＴＰＡＮＰＰＰＰＥＶＳＮＰＫ
ＫＰＧＲＶＴＮＱＬＱＹＬＨＫＶＶＭＫＡＬＷＫＨＱＦＡＷＰＦＲＱＰＶＤＡＶＫＬＧＬＰＤＹＨＫＩＩＫＱＰＭＤＭＧＴＩＫＲＲＬＥＮＮＹＹＷＡＡＳＥ
ＣＭＱＤＦＮＴＭＦＴＮＣＹＩＹＮＫＰＴＤＤＩＶＬＭＡＱＴＬＥＫＩＦＬＱＫＶＡＳＭＰＱＥＥＱＥＬＶＶＴＩＰＫＮＳＨＫＫＧＡＫＬＡＡＬＱＧＳＶＴ
ＳＡＨＱＶＰＡＶＳＳＶＳＨＴＡＬＹＴＰＰＰＥＩＰＴＴＶＬＮＩＰＨＰＳＶＩＳＳＰＬＬＫＳＬＨＳＡＧＰＰＬＬＡＶＴＡＡＰＰＡＱＰＬＡＫＫＫＧＶＫ
ＲＫＡＤＴＴＴＰＴＰＴＡＩＬＡＰＧＳＰＡＳＰＰＧＳＬＥＰＫＡＡＲＬＰＰＭＲＲＥＳＧＲＰＩＫＰＰＲＫＤＬＰＤＳＱＱＱＨＱＳＳＫＫＧＫＬＳＥＱＬ
ＫＨＣＮＧＩＬＫＥＬＬＳＫＫＨＡＡＹＡＷＰＦＹＫＰＶＤＡＳＡＬＧＬＨＤＹＨＤＩＩＫＨＰＭＤＬＳＴＶＫＲＫＭＥＮＲＤＹＲＤＡＱＥＦＡＡＤＶＲＬ
ＭＦＳＮＣＹＫＹＮＰＰＤＨＤＶＶＡＭＡＲＫＬＱＤＶＦＥＦＲＹＡＫＭＰＤＥＰＬＥＰＧＰＬＰＶＳＴＡＭＰＰＧＬＡＫＳＳＳＥＳＳＳＥＥＳＳＳＥＳＳ
ＳＥＥＥＥＥＥＤＥＥＤＥＥＥＥＥＳＥＳＳＤＳＥＥＥＲＡＨＲＬＡＥＬＱＥＱＬＲＡＶＨＥＱＬＡＡＬＳＱＧＰＩＳＫＰＫＲＫＲＥＫＫＥＫＫＫＫＲＫＡ
ＥＫＨＲＧＲＡＧＡＤＥＤＤＫＧＰＲＡＰＲＰＰＱＰＫＫＳＫＫＡＳＧＳＧＧＧＳＡＡＬＧＰＳＧＦＧＰＳＧＧＳＧＴＫＬＰＫＫＡＴＫＴＡＰＰＡＬＰＴＧ
ＹＤＳＥＥＥＥＥＳＲＰＭＳＹＤＥＫＲＱＬＳＬＤＩＮＫＬＰＧＥＫＬＧＲＶＶＨＩＩＱＡＲＥＰＳＬＲＤＳＮＰＥＥＩＥＩＤＦＥＴＬＫＰＳＴＬＲＥＬＥ
ＲＹＶＬＳＣＬＲＫＫＰＲＫＰＹＴＩＫＫＰＶＧＫＴＫＥＥＬＡＬＥＫＫＲＥＬＥＫＲＬＱＤＶＳＧＱＬＮＳＴＫＫＰＰＫＫＡＮＥＫＴＥＳＳＳＡＱＱＶＡ
ＶＳＲＬＳＡＳＳＳＳＳＤＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳＤＴＳＤＳＤＳＧ
【００９５】
「ＢＲＤ２核酸分子」は、ＢＲＤ２ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。
【００９６】
「ＢＲＤ３ポリペプチド」は、クロマチン結合または転写調節ができるＮＰ＿０３１３９７．１と少なくとも８５％の同一性を有する、タンパク質またはその断片を意味する。
【００９７】
例示的なＢＲＤ３ポリペプチドの配列を下に示す。
１  ｍｓｔａｔｔｖａｐａ  ｇｉｐａｔｐｇｐｖｎ  ｐｐｐｐｅｖｓｎｐｓ  ｋｐｇｒｋｔｎｑｌｑ  ｙｍｑｎｖｖｖｋｔｌ  ｗｋｈｑｆａｗｐｆｙ
６１  ｑｐｖｄａｉｋｌｎｌ  ｐｄｙｈｋｉｉｋｎｐ  ｍｄｍｇｔｉｋｋｒｌ  ｅｎｎｙｙｗｓａｓｅ  ｃｍｑｄｆｎｔｍｆｔ  ｎｃｙｉｙｎｋｐｔｄ
１２１  ｄｉｖｌｍａｑａｌｅ  ｋｉｆｌｑｋｖａｑｍ  ｐｑｅｅｖｅｌｌｐｐ  ａｐｋｇｋｇｒｋｐａ  ａｇａｑｓａｇｔｑｑ  ｖａａｖｓｓｖｓｐａ
１８１  ｔｐｆｑｓｖｐｐｔｖ  ｓｑｔｐｖｉａａｔｐ  ｖｐｔｉｔａｎｖｔｓ  ｖｐｖｐｐａａａｐｐ  ｐｐａｔｐｉｖｐｖｖ  ｐｐｔｐｐｖｖｋｋｋ
２４１  ｇｖｋｒｋａｄｔｔｔ  ｐｔｔｓａｉｔａｓｒ  ｓｅｓｐｐｐｌｓｄｐ  ｋｑａｋｖｖａｒｒｅ  ｓｇｇｒｐｉｋｐｐｋ  ｋｄｌｅｄｇｅｖｐｑ
３０１  ｈａｇｋｋｇｋｌｓｅ  ｈｌｒｙｃｄｓｉｌｒ  ｅｍｌｓｋｋｈａａｙ  ａｗｐｆｙｋｐｖｄａ  ｅａｌｅｌｈｄｙｈｄ  ｉｉｋｈｐｍｄｌｓｔ
３６１  ｖｋｒｋｍｄｇｒｅｙ  ｐｄａｑｇｆａａｄｖ  ｒｌｍｆｓｎｃｙｋｙ  ｎｐｐｄｈｅｖｖａｍ  ａｒｋｌｑｄｖｆｅｍ  ｒｆａｋｍｐｄｅｐｖ
４２１  ｅａｐａｌｐａｐａａ  ｐｍｖｓｋｇａｅｓｓ  ｒｓｓｅｅｓｓｓｄｓ  ｇｓｓｄｓｅｅｅｒａ  ｔｒｌａｅｌｑｅｑｌ  ｋａｖｈｅｑｌａａｌ
４８１  ｓｑａｐｖｎｋｐｋｋ  ｋｋｅｋｋｅｋｅｋｋ  ｋｋｄｋｅｋｅｋｅｋ  ｈｋｖｋａｅｅｅｋｋ  ａｋｖａｐｐａｋｑａ  ｑｑｋｋａｐａｋｋａ
５４１  ｎｓｔｔｔａｇｒｑｌ  ｋｋｇｇｋｑａｓａｓ  ｙｄｓｅｅｅｅｅｇｌ  ｐｍｓｙｄｅｋｒｑｌ  ｓｌｄｉｎｒｌｐｇｅ  ｋｌｇｒｖｖｈｉｉｑ
６０１  ｓｒｅｐｓｌｒｄｓｎ  ｐｄｅｉｅｉｄｆｅｔ  ｌｋｐｔｔｌｒｅｌｅ  ｒｙｖｋｓｃｌｑｋｋ  ｑｒｋｐｆｓａｓｇｋ  ｋｑａａｋｓｋｅｅｌ
６６１  ａｑｅｋｋｋｅｌｅｋ  ｒｌｑｄｖｓｇｑｌｓ  ｓｓｋｋｐａｒｋｅｋ  ｐｇｓａｐｓｇｇｐｓ  ｒｌｓｓｓｓｓｓｅｓ  ｇｓｓｓｓｓｇｓｓｓ
７２１  ｄｓｓｄｓｅ
【００９８】
「Ｂｒｄ３核酸分子」は、ＢＲＤ３ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。
【００９９】
「ＢＲＤ４ポリペプチド」は、ＮＰ＿０５５１１４と少なくとも８５％の同一性を有して、クロマチン結合または転写調節ができる、タンパク質またはその断片を意味する。
１  ｍｓａｅｓｇｐｇｔｒ  ｌｒｎｌｐｖｍｇｄｇ  ｌｅｔｓｑｍｓｔｔｑ  ａｑａｑｐｑｐａｎａ  ａｓｔｎｐｐｐｐｅｔ  ｓｎｐｎｋｐｋｒｑｔ
６１  ｎｑｌｑｙｌｌｒｖｖ  ｌｋｔｌｗｋｈｑｆａ  ｗｐｆｑｑｐｖｄａｖ  ｋｌｎｌｐｄｙｙｋｉ  ｉｋｔｐｍｄｍｇｔｉ  ｋｋｒｌｅｎｎｙｙｗ
１２１  ｎａｑｅｃｉｑｄｆｎ  ｔｍｆｔｎｃｙｉｙｎ  ｋｐｇｄｄｉｖｌｍａ  ｅａｌｅｋｌｆｌｑｋ  ｉｎｅｌｐｔｅｅｔｅ  ｉｍｉｖｑａｋｇｒｇ
１８１  ｒｇｒｋｅｔｇｔａｋ  ｐｇｖｓｔｖｐｎｔｔ  ｑａｓｔｐｐｑｔｑｔ  ｐｑｐｎｐｐｐｖｑａ  ｔｐｈｐｆｐａｖｔｐ  ｄｌｉｖｑｔｐｖｍｔ
２４１  ｖｖｐｐｑｐｌｑｔｐ  ｐｐｖｐｐｑｐｑｐｐ  ｐａｐａｐｑｐｖｑｓ  ｈｐｐｉｉａａｔｐｑ  ｐｖｋｔｋｋｇｖｋｒ  ｋａｄｔｔｔｐｔｔｉ
３０１  ｄｐｉｈｅｐｐｓｌｐ  ｐｅｐｋｔｔｋｌｇｑ  ｒｒｅｓｓｒｐｖｋｐ  ｐｋｋｄｖｐｄｓｑｑ  ｈｐａｐｅｋｓｓｋｖ  ｓｅｑｌｋｃｃｓｇｉ
３６１  ｌｋｅｍｆａｋｋｈａ  ａｙａｗｐｆｙｋｐｖ  ｄｖｅａｌｇｌｈｄｙ  ｃｄｉｉｋｈｐｍｄｍ  ｓｔｉｋｓｋｌｅａｒ  ｅｙｒｄａｑｅｆｇａ
４２１  ｄｖｒｌｍｆｓｎｃｙ  ｋｙｎｐｐｄｈｅｖｖ  ａｍａｒｋｌｑｄｖｆ  ｅｍｒｆａｋｍｐｄｅ  ｐｅｅｐｖｖａｖｓｓ  ｐａｖｐｐｐｔｋｖｖ
４８１  ａｐｐｓｓｓｄｓｓｓ  ｄｓｓｓｄｓｄｓｓｔ  ｄｄｓｅｅｅｒａｑｒ  ｌａｅｌｑｅｑｌｋａ  ｖｈｅｑｌａａｌｓｑ  ｐｑｑｎｋｐｋｋｋｅ
５４１  ｋｄｋｋｅｋｋｋｅｋ  ｈｋｒｋｅｅｖｅｅｎ  ｋｋｓｋａｋｅｐｐｐ  ｋｋｔｋｋｎｎｓｓｎ  ｓｎｖｓｋｋｅｐａｐ  ｍｋｓｋｐｐｐｔｙｅ
６０１  ｓｅｅｅｄｋｃｋｐｍ  ｓｙｅｅｋｒｑｌｓｌ  ｄｉｎｋｌｐｇｅｋｌ  ｇｒｖｖｈｉｉｑｓｒ  ｅｐｓｌｋｎｓｎｐｄ  ｅｉｅｉｄｆｅｔｌｋ
６６１  ｐｓｔｌｒｅｌｅｒｙ  ｖｔｓｃｌｒｋｋｒｋ  ｐｑａｅｋｖｄｖｉａ  ｇｓｓｋｍｋｇｆｓｓ  ｓｅｓｅｓｓｓｅｓｓ  ｓｓｄｓｅｄｓｅｔｇ
７２１  ｐａ
【０１００】
「Ｂｒｄ４核酸分子」は、ＢＲＤ４ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。
【０１０１】
「ＢＲＤＴポリペプチド」は、ＮＰ＿００１７１７と少なくとも８５％の同一性を有して、クロマチン結合または転写調節ができる、タンパク質またはその断片を意味する。
１  ｍｓｌｐｓｒｑｔａｉ  ｉｖｎｐｐｐｐｅｙｉ  ｎｔｋｋｎｇｒｌｔｎ  ｑｌｑｙｌｑｋｖｖｌ  ｋｄｌｗｋｈｓｆｓｗ  ｐｆｑｒｐｖｄａｖｋ
６１  ｌｑｌｐｄｙｙｔｉｉ  ｋｎｐｍｄｌｎｔｉｋ  ｋｒｌｅｎｋｙｙａｋ  ａｓｅｃｉｅｄｆｎｔ  ｍｆｓｎｃｙｌｙｎｋ  ｐｇｄｄｉｖｌｍａｑ
１２１  ａｌｅｋｌｆｍｑｋｌ  ｓｑｍｐｑｅｅｑｖｖ  ｇｖｋｅｒｉｋｋｇｔ  ｑｑｎｉａｖｓｓａｋ  ｅｋｓｓｐｓａｔｅｋ  ｖｆｋｑｑｅｉｐｓｖ
１８１  ｆｐｋｔｓｉｓｐｌｎ  ｖｖｑｇａｓｖｎｓｓ  ｓｑｔａａｑｖｔｋｇ  ｖｋｒｋａｄｔｔｔｐ  ａｔｓａｖｋａｓｓｅ  ｆｓｐｔｆｔｅｋｓｖ
２４１  ａｌｐｐｉｋｅｎｍｐ  ｋｎｖｌｐｄｓｑｑｑ  ｙｎｖｖｋｔｖｋｖｔ  ｅｑｌｒｈｃｓｅｉｌ  ｋｅｍｌａｋｋｈｆｓ  ｙａｗｐｆｙｎｐｖｄ
３０１  ｖｎａｌｇｌｈｎｙｙ  ｄｖｖｋｎｐｍｄｌｇ  ｔｉｋｅｋｍｄｎｑｅ  ｙｋｄａｙｋｆａａｄ  ｖｒｌｍｆｍｎｃｙｋ  ｙｎｐｐｄｈｅｖｖｔ
３６１  ｍａｒｍｌｑｄｖｆｅ  ｔｈｆｓｋｉｐｉｅｐ  ｖｅｓｍｐｌｃｙｉｋ  ｔｄｉｔｅｔｔｇｒｅ  ｎｔｎｅａｓｓｅｇｎ  ｓｓｄｄｓｅｄｅｒｖ
４２１  ｋｒｌａｋｌｑｅｑｌ  ｋａｖｈｑｑｌｑｖｌ  ｓｑｖｐｆｒｋｌｎｋ  ｋｋｅｋｓｋｋｅｋｋ  ｋｅｋｖｎｎｓｎｅｎ  ｐｒｋｍｃｅｑｍｒｌ
４８１  ｋｅｋｓｋｒｎｑｐｋ  ｋｒｋｑｑｆｉｇｌｋ  ｓｅｄｅｄｎａｋｐｍ  ｎｙｄｅｋｒｑｌｓｌ  ｎｉｎｋｌｐｇｄｋｌ  ｇｒｖｖｈｉｉｑｓｒ
５４１  ｅｐｓｌｓｎｓｎｐｄ  ｅｉｅｉｄｆｅｔｌｋ  ａｓｔｌｒｅｌｅｋｙ  ｖｓａｃｌｒｋｒｐｌ  ｋｐｐａｋｋｉｍｍｓ  ｋｅｅｌｈｓｑｋｋｑ
６０１  ｅｌｅｋｒｌｌｄｖｎ  ｎｑｌｎｓｒｋｒｑｔ  ｋｓｄｋｔｑｐｓｋａ  ｖｅｎｖｓｒｌｓｅｓ  ｓｓｓｓｓｓｓｓｅｓ  ｅｓｓｓｓｄｌｓｓｓ
６６１  ｄｓｓｄｓｅｓｅｍｆ  ｐｋｆｔｅｖｋｐｎｄ  ｓｐｓｋｅｎｖｋｋｍ  ｋｎｅｃｉｌｐｅｇｒ  ｔｇｖｔｑｉｇｙｃｖ  ｑｄｔｔｓａｎｔｔｌ
７２１  ｖｈｑｔｔｐｓｈｖｍ  ｐｐｎｈｈｑｌａｆｎ  ｙｑｅｌｅｈｌｑｔｖ  ｋｎｉｓｐｌｑｉｌｐ  ｐｓｇｄｓｅｑｌｓｎ  ｇｉｔｖｍｈｐｓｇｄ
７８１  ｓｄｔｔｍｌｅｓｅｃ  ｑａｐｖｑｋｄｉｋｉ  ｋｎａｄｓｗｋｓｌｇ  ｋｐｖｋｐｓｇｖｍｋ  ｓｓｄｅｌｆｎｑｆｒ  ｋａａｉｅｋｅｖｋａ
８４１  ｒｔｑｅｌｉｒｋｈｌ  ｅｑｎｔｋｅｌｋａｓ  ｑｅｎｑｒｄｌｇｎｇ  ｌｔｖｅｓｆｓｎｋｉ  ｑｎｋｃｓｇｅｅｑｋ  ｅｈｑｑｓｓｅａｑｄ
９０１  ｋｓｋｌｗｌｌｋｄｒ  ｄｌａｒｑｋｅｑｅｒ  ｒｒｒｅａｍｖｇｔｉ  ｄｍｔｌｑｓｄｉｍｔ  ｍｆｅｎｎｆｄ
【０１０２】
「ＢＲＤＴ核酸分子」は、ＢＲＤＴポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを意味する。
【０１０３】
「改善する」は、疾患の発症または進行を低下させ、抑制し、減衰させ、縮小させ、停止させ、または安定化することを意味する。
【０１０４】
「変更」は、本明細書に記載されるような当該技術分野において公知の標準的な方法によって検出される、遺伝子またはポリペプチドの発現レベルまたは活性の変化（増大または低下）を意味する。本明細書の用法では、変更としては、発現レベルの１０％の変化、好ましくは２５％の変化、より好ましくは４０％の変化、最も好ましくは発現レベルの５０％以上の変化が挙げられる。
【０１０５】
「アナログ」は、同一でないが、類似した機能的または構造的特徴を有する分子を意味する。例えばポリペプチドアナログは、天然ポリペプチドと比較してアナログの機能高める特定の生化学的修飾を有しながら、対応する天然ポリペプチドの少なくともいくらかの生物学的活性を保つ。このような生化学的修飾は、例えばリガンド結合を変更することなしに、アナログのプロテアーゼ耐性、メンブラン透過度、または半減期を増大させ得る。アナログとしては、非天然アミノ酸が挙げられる。
【０１０６】
「化合物」は、任意の小分子化合物、抗体、核酸分子、またはポリペプチド、またはその断片を意味する。
【０１０７】
「ジアステレオマー」という用語は、２つ以上の不斉中心があり、その分子が互いに鏡像でない立体異性体を指す。
【０１０８】
「鏡像異性体」という用語は、互いに重ね合わせることができない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を指す。２つの鏡像異性体の等モル混合物は、「ラセミ混合物」または「ラセミ体」と称される。
【０１０９】
「ハロゲン」という用語は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉを指す。
【０１１０】
「ハロアルキル」という用語は、例えばフルオロメチルおよびトリフルオロメチルなどのハロゲンで一置換、二置換または多置換された、上で定義されるアルキル基を含むことが意図される。
【０１１１】
「ヒドロキシル」という用語は、−ＯＨを意味する。
【０１１２】
「ヘテロ原子」という用語は、本明細書の用法では、炭素または水素以外の任意の元素の原子を意味する。好ましいヘテロ原子は、窒素、酸素、イオウ、およびリンである。
【０１１３】
「ヘテロアリール」という用語は、単環系の場合は１〜４環ヘテロ原子、二環系の場合は１〜６個のヘテロ原子、三環系の場合は１〜９個のヘテロ原子を有する、芳香族５〜８員環単環系、８〜１２員環二環系、または１１〜１４員環三環系を指し、前記ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、またはＳから選択され、残りの環原子は炭素である。ヘテロアリール基は、アリール基などの１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されていてもよい。ヘテロアリール基の例としては、ピリジル、フラニル、ベンゾジオキソリル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イミダゾリルチアゾリル、イソオキサゾリル、キノリニル、ピラゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、トリアゾリル、チアジアゾリル、イソキノリニル、インダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾフリル、インドリジニル、イミダゾピリジル、テトラゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、およびインドリルが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１１４】
「複素環式」という用語は、本明細書の用法では、炭素以外の少なくとも少なくとも１つの原子（例えばＳ、Ｏ、Ｎ）を環構造内に含有する有機化合物を指す。これらの有機化合物中の環構造は、芳香族または非芳香族のどちらかであり得る。複素環式部分のいくつかの例としては、ピリジン、ピリミジン、ピロリジン、フラン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、およびジオキサンが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１１５】
「異性体」または「立体異性体」という用語は、同一化学構成を有するが、空間内の原子または基の配置が異なる化合物を指す。
【０１１６】
「同位体誘導体」という用語は、その中で化合物中の１つまたは複数の原子が、原子の対応する同位体で置換されている、化合物の誘導体を含む。例えば、炭素原子（Ｃ１２）を含有する化合物の同位体誘導体は、その中で化合物の炭素原子がＣ１３同位体で置換されているものである。
【０１１７】
「新生物」という用語は、自律的増殖能力を有する細胞、すなわち迅速に増殖する細胞成長によって特徴付けられる異常な事態または状態を指す。新生物病態は、病的と分類されてもよく、すなわち病態を特徴付けまたは構成し、または非病的と分類されてもよく、すなわち正常からの逸脱であるが病態と関連付けられていない。本用語は、組織病理学タイプまたは侵襲段階に関わりなく、全種類のがん性増殖または発がんプロセス、転移組織または悪性形質転換細胞、組織、または臓器を含むことが意図される。「病的過剰増殖性」細胞は、悪性腫瘍成長によって特徴付けられる疾患において発生する。非病的過剰増殖性細胞の例としては、創傷修復と関連付けられている細胞増殖が挙げられる。
【０１１８】
本発明の化合物による治療の影響を受けやすい例証的新生物としては、白血病（例えば急性白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単核白血病、急性単球性白血病、急性赤血白血病、混合系統骨髄性白血病、慢性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病）、多発性骨髄腫、真性赤血球増加症、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、リンパ腫（ホジキン病、非ホジキン病）、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、および（例えば線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、大腸がん、結腸直腸がん、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮がん、基底細胞腫、腺がん、汗腺がん、皮脂腺がん、乳頭がん、乳頭腺がん、嚢胞腺がん、髄様がん、気管支原性肺がん、腎細胞がん、肝細胞腫、胆管がん、絨毛がん、セミノーマ、胎生期がん、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、子宮がん、精巣がん、肺がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、膀胱がん、上皮性がん、神経膠腫、膠芽細胞腫、多形性神経膠芽細胞腫、星細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴覚神経腫、神経内分泌腫瘍、希突起神経膠腫、シュワン細胞腫、髄膜腫、メラノーマ、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫などの）肉腫やがん腫などの固形腫瘍が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１１９】
一実施形態では、新生物はｍｙｃなどの主要転写活性化因子によって駆動される。このようながんとしては、バーキットリンパ腫、小細胞肺がん、乳がん、大腸がん、神経芽細胞腫、多形グリア芽細胞腫、ＭＬＬ駆動白血病、慢性リンパ球性白血病、ＮＵＴ転位を伴う扁平上皮がん、ならびにブロモドメイン含有タンパク質またはＮＵＴ転位を伴うその他のがんが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１２０】
新生物の「成長を阻害する」という言語は、その成長および転移の遅延、中断、抑止または停止を含み、新生物の成長の完全な排除を示すことは必須でない。
【０１２１】
「コンピュータによるモデル化」は、以下の１つまたは複数を求めるための計算プログラムの応用を意味する：結合部分に対するリガンドの位置および結合近接性、結合リガンドの占有空間、結合部分とリガンド間の相補的接触面積、結合部分への所与のリガンドの結合の変形エネルギー、および水素結合強度のある程度の推定、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、および／またはリガンドと結合部分間の静電相互作用エネルギー。コンピュータモデル化はまた、モデル系と候補化合物の特徴間の比較を提供し得る。例えばコンピュータによるモデル化実験は、本発明のファーマコフォアモデルを候補化合物と比較して、候補化合物とモデルの適合を評価し得る。
【０１２２】
「コンピューターシステム」は、原子の座標データ分析のために使用される、ハードウェア手段、ソフトウェア手段、およびデータ記憶手段を意味する。本発明のコンピュータベースのシステムの最小ハードウェア手段は、中央演算処理装置（ＣＰＵ）、入力手段、出力手段、およびデータ記憶手段を含んでなる。望ましくは、構造データを視覚化するモニターが提供される。データ記憶手段は、ＲＡＭ、または本発明のコンピュータ可読媒体にアクセスする手段であってもよい。このようなシステムの例は、Ｕｎｉｘベース、Ｗｉｎｄｏｗｓ  ＮＴまたはＩＢＭ  ＯＳ／２オペレーティングシステムが作動する、Ｓｉｌｉｃｏｎ  Ｇｒａｐｈｉｃｓ  ＩｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄおよびＳｕｎ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓから入手できる、マイクロコンピュータワークステーションである。
【０１２３】
「コンピュータ可読媒体」は、例えば上述のコンピューターシステムで使用するのに媒体が適するように、コンピュータによって直接読み取られアクセスされ得る任意の媒体を意味する。媒体としては、フロッピーディスク、ハードディスク記憶媒体、および磁気テープなどの磁気記憶媒体；光ディスクまたはＣＤ−ＲＯＭなどの光学式記憶媒体；ＲＡＭおよびＲＯＭなどの電気記憶媒体；および磁気／光学式記憶媒体などのこれらのカテゴリーのハイブリッドが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１２４】
本開示では、「含んでなる（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含んでなる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」などは、米国特許法でそれらに帰するとされる意味を有し得て、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味し得る；同様に「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」は、米国特許法で帰するとされる意味を有し、用語には制約がなく、列挙事項を超える存在によって、列挙事項の基礎的または新規特性が無変化でありさえすれば、列挙事項を超える存在を許すが、先行技術実施形態は除外する。
【０１２５】
「検出」は、検出される分析物の存在、不在または量を同定することを指す。
【０１２６】
「検出可能な標識」は、対象分子に結合した際に、対象分子を分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、または化学的手段を介して検出可能にする、組成物を意味する。例えば有用な標識としては、放射性同位体、磁気ビーズ、金属ビーズ、コロイド粒子、蛍光染料、高電子密度試薬、酵素（例えばＥＬＩＳＡで通常使用されるものなど）、ビオチン、ジゴキシゲニン、またはハプテンが挙げられる。
【０１２７】
「疾患」は、細胞、組織、または臓器の正常機能を損ないまたは妨げる、任意の病状または障害を意味する。本明細書で記述される化合物による治療に感受性の疾患の例としては、新生物、炎症性疾患、肥満症、脂肪肝（ＮＡＳＨかそうでないもの）、糖尿病、アテローム性動脈硬化、動脈ステント閉塞、心不全、悪液質、移植片対宿主病、ブロモドメインと関連付けられている感染性疾患、寄生生物、マラリア、トリパノソーマの治療、および男性の妊性低下が挙げられる。本発明の組成物のさらなる使用としては、臓器移植、再生医療のための細胞状態調節（すなわち細胞分化の促進または阻害による）、および多分化能促進における使用が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１２８】
「有効量」は、未治療患者と比較して、疾患症状を改善するのに必要な作用物質の量を意味する。疾患治療のために本発明を実施するのに使用される活性化合物の有効量は、投与様式、対象の年齢、体重、および総体的な健康に応じて変動する。究極的に、主治医または獣医が、適切な量および投薬計画を決定する。このような量は、「有効」量と称される。
【０１２９】
「鏡像異性体」という用語は、互いに重ね合わせることができない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を指す。２つの鏡像異性体の等モル混合物は、「ラセミ混合物」または「ラセミ体」と称される。
【０１３０】
「ハロゲン」という用語は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉを指す。
【０１３１】
「ハロアルキル」という用語は、例えばフルオロメチルおよびトリフルオロメチルなどのハロゲンで一置換、二置換または多置換された、上で定義されるアルキル基を含むことが意図される。
【０１３２】
「ヒドロキシル」という用語は、−ＯＨを意味する。
【０１３３】
「ヘテロ原子」という用語は、本明細書の用法では、炭素または水素以外の任意の元素の原子を意味する。好ましいヘテロ原子は、窒素、酸素、イオウ、およびリンである。
【０１３４】
「ヘテロアリール」という用語は、単環系の場合は１〜４環ヘテロ原子、二環系の場合は１〜６個のヘテロ原子、三環系の場合は１〜９個のヘテロ原子を有する、芳香族５〜８員環単環系、８〜１２員環二環系、または１１〜１４員環三環系を指し、前記ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、またはＳから選択され、残りの環原子は炭素である。ヘテロアリール基は、例えば本明細書でアリール基について記載される置換基などの１つまたは複数の置換基によって、任意選択的に置換されていてもよい。ヘテロアリール基の例としては、ピリジル、フラニル、ベンゾジオキソリル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、オキサジアゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、イソオキサゾリル、キノリニル、ピラゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、トリアゾリル、チアジアゾリル、イソキノリニル、インダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾフリル、インドリジニル、イミダゾピリジル、テトラゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、およびインドリルが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１３５】
「複素環式」という用語は、本明細書の用法では、炭素以外の少なくとも少なくとも１つの原子（例えばＳ、Ｏ、Ｎ）を環構造内に含有する有機化合物を指す。これらの有機化合物中の環構造は、芳香族または特定の実施形態では非芳香族のどちらかであり得る。複素環式部分のいくつかの例としては、ピリジン、ピリミジン、ピロリジン、フラン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロチオフェン、およびジオキサンが挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１３６】
「異性体」または「立体異性体」という用語は、同一化学構成を有するが、空間内の原子または基の配置が異なる化合物を指す。
【０１３７】
「同位体誘導体」という用語は、その中で化合物中の１つまたは複数の原子が、原子の対応する同位体で置換されている、化合物の誘導体を含む。例えば、炭素原子（Ｃ１２）を含有する化合物の同位体誘導体は、その中で化合物の炭素原子がＣ１３同位体で置換されているものである。
【０１３８】
本発明は、本明細書で記述される方法によって特性解析される障害を治療するための高度に特異的な薬剤開発に有用な、いくつかの標的を提供する。これに加えて、本発明の方法は、対象にとって安全な治療法を同定する容易な手段を提供する。これに加えて、本発明の方法は、ハイスループット、高感度、および低複雑度で、本明細書に記載される疾患に対する影響について、実質的にいくつもの化合物を分析する手段を提供する。
【０１３９】
「適合」は、自動または半自動手段によって、作用物質分子の１つまたは複数の原子と、ＢＥＴファミリーメンバーの１つまたは複数の原子または結合部位（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴのブロモドメイン）の間の相互作用を測定し、このような相互作用が安定である度合いを判定することを意味する。適合のための様々なコンピュータベースの方法については、本明細書でさらに記載される。
【０１４０】
「断片」は、ポリペプチドまたは核酸分子の部分を意味する。この部分は、好ましくは、参照核酸分子またはポリペプチドの全長の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％を含有する。断片は、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００個のヌクレオチドまたはアミノ酸を含有してもよい。
【０１４１】
「ハイブリダイゼーション」は水素結合を意味し、それは相補的核酸塩基間における、ワトソン・クリック、フーグスティーンまたは逆フーグスティーン水素結合であってもよい。例えばアデニンとチミンは、水素結合の形成を通じて対合する、相補的核酸塩基である。
【０１４２】
「単離ポリヌクレオチド」は、本発明の核酸分子が由来する生物の天然ゲノム中で遺伝子側面に位置する遺伝子が、含まれない核酸（例えばＤＮＡ）を意味する。したがって本用語は、例えば、ベクター中に、自己複製プラスミドまたはウイルス中に、または原核生物または真核生物のゲノムＤＮＡ中に組み込まれた組換えＤＮＡ；またはその他の配列から独立して別個の分子（例えばｃＤＮＡまたはＰＣＲまたは制限エンドヌクレアーゼ消化によって生成されるゲノムまたはｃＤＮＡ断片）として存在する組換えＤＮＡを含む。これに加えて、本用語は、ＤＮＡ分子から転写されるＲＮＡ分子を含み、ならびに追加的ポリペプチド配列をコードするハイブリッド遺伝子の一部である組換えＤＮＡを含む。
【０１４３】
「単離ポリペプチド」は、天然でそれに付随する構成要素から分離された、本発明のポリペプチドを意味する。典型的に、ポリペプチドは、それが少なくとも６０％重量であり、それが天然に結合するタンパク質または天然有機分子が不在であれば、単離されている。好ましくは、調製品は、少なくとも７５重量％、より好適には少なくとも９０重量％、最も好適には少なくとも９９重量％が、本発明のポリペプチドである。本発明の単離ポリペプチドは、例えば天然原料からの抽出によって；このようなポリペプチドをコードする組換え核酸の発現によって；またはタンパク質の化学的合成によって、得られてもよい。純度は、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはＨＰＬＣ分析などの任意の適切な方法によって測定し得る。
【０１４４】
「マーカー」は、疾患または障害と関連付けられている発現レベルまたは活性に変更を有する、任意のタンパク質またはポリヌクレオチドを意味する。
【０１４５】
本明細書の用法では、「作用物質を得る」に見られるような「得る」は、作用物質を合成し、購入し、または別の方法で入手することを含む。
【０１４６】
「新生物」という用語は、自律的増殖能力、すなわち迅速に増殖する細胞成長によって特徴付けられる異常な事態または状態、を有する細胞を指す。新生物病態は、病的と分類されてもよく、すなわち病態を特徴付けまたは構成し、または非病的と分類されてもよく、すなわち正常からの逸脱であるが病態と関連付けられていない。本用語は、組織病理学タイプまたは侵襲段階に関わりなく、全種類のがん性増殖または発がんプロセス、転移組織または悪性形質転換細胞、組織、または臓器を含むことが意図される。「病的過剰増殖性」細胞は、悪性腫瘍成長によって特徴付けられる疾患において発生する。非病的過剰増殖性細胞の例としては、創傷修復と関連付けられている細胞増殖が挙げられる。
【０１４７】
新生物の「成長を阻害する」という言語は、その成長および転移の遅延、中断、抑止または停止を含み、必ずしも新生物の成長の完全な排除を示唆しない。
【０１４８】
「新生物」という用語の通常の医学的意味は、例えば新生物細胞成長に対する正常な成長制御への応答性喪失の結果である、「新しい細胞成長」を指す。「過形成」は、異常に高い成長率を示す細胞を指す。しかし本明細書の用法では、新生物という用語は、一般に、異常な細胞増殖率が認められる細胞を指す。新生物としては「腫瘍」が挙げられ、それは良性、前悪性または悪性のいずれであってもよい。
【０１４９】
「化合物を得る」に見られるような「得る」という用語は、化合物を購入し、合成しまたは別の方法で入手することを含むことが意図される。
【０１５０】
本明細書の用法では、「光学異性体」という用語は、キラル分子としてもまた知られている分子を含み、これらは互いに重ね合わせることができない正確な鏡像である。
【０１５１】
「非経口投与」および「非経口的に投与される」という語句は、本明細書の用法では、制限なしに、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、関節内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、および胸骨内注射および輸液を含む、通常は注射による、経腸投与および局所投与以外の投与様式を意味する。
【０１５２】
「ポリシクリル」または「多環式基」という用語は、二環式以上の遊離基（例えばシクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリールおよび／またはヘテロシクリル）を指し、その中では２つ以上の炭素が２つの隣接する環で共有され、例えば環は「融合環」である。非隣接原子を通じて結合する環は、「架橋」環と称される。多環式環のそれぞれは、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アルコキシル、ホスフェート、ホスホナト、ホスフィナト、シアノ、アミノ（アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、およびアルキルアリールアミノを含む）、アシルアミノ（アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイル、およびウレイドを含む）、アミジノ、イミノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシラート、スルフェート、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、トリフルオロメチル、シアノ、アジド、ヘテロシクリル、アルキル、アルキルアリール、または芳香族もしくはヘテロ芳香族部分を含む。
【０１５３】
「多形体」という用語は、本明細書の用法では、本発明の化合物の固体結晶形態またはその複合体を指す。同じ化合物の異なる多形体は、異なる物理的、化学的および／または分光学的特性を呈示し得る。異なる物理的特性としては、安定性（例えば熱または光に対する）、圧縮率および密度（製剤および製品製造で重要）、および溶出速度（生物学的利用能に影響し得る）が挙げられるが、これに限定されるものではない。安定性の差異は、化学反応性変化（例えば剤形が１つの多形体からなる場合、別の多形体からなる場合よりも迅速に変色するような差異的酸化）または機械的特性変化（例えば動力学的に好まれる多形体が熱力学的により安定した多形体に転換するにつれて、錠剤が貯蔵中に崩壊する）または双方（例えば高湿では、１つの多形体の錠剤は破壊をより被りやすい）から帰結し得る。多形体の異なる物理的特性は、それらの加工に影響を及ぼし得る。
【０１５４】
「プロドラッグ」という用語は、生体内で代謝され得る部分がある化合物を含む。一般に、プロドラッグは生体内でエステラーゼによって、またはその他の機構によって活性薬剤に代謝される。プロドラッグの例およびそれらの使用は、当該技術分野で周知である（例えばＢｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９７７）“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照されたい）。プロドラッグは、化合物の最終的な単離および精製中に原位置で調製し得て、または精製化合物の遊離酸形態またはヒドロキシルを個別に適切なエステル化剤と反応させることにより調製し得る。ヒドロキシル基は、カルボン酸による処理を介してエステルに転換し得る。プロドラッグ部分の例としては、置換および非置換の、分枝または非分枝の低級アルキルエステル部分（例えばプロピオン酸エステル）、低級アルケニルエステル、ジ低級アルキルアミノ低級アルキルエステル（例えばジメチルアミノエチルエステル）、アシルアミノ低級アルキルエステルが挙げられる（例えばアセチルオキシメチルエステル）、アシルオキシ低級アルキルエステル（例えばピバロイルオキシメチルエステル）、アリールエステル（フェニルエステル）、アリール低級アルキルエステル（例えばベンジルエステル）、置換（例えばメチル基、ハロ、またはメトキシ置換基による）アリールおよびアリール低級アルキルエステル、アミド、低級アルキルアミド、ジ低級アルキルアミド、およびヒドロキシアミドが挙げられる。好ましいプロドラッグ部分は、プロピオン酸エステルおよびアシルエステルである。生体内でその他の機構を通じて活性形態に転換されたプロドラッグもまた、含まれる。
【０１５５】
さらに炭素−炭素二重結合全体の立体化学の指標もまた、一般化学分野と対立し、その中で「Ｚ」は「ｃｉｓ」（同側）コンフォメーションと称されることが多いものを指す一方、「Ｅ」は「ｔｒａｎｓ」（反対側）コンフォメーションと称されることが多いものを指す。ｃｉｓ／ｔｒａｎｓおよび／またはＺ／Ｅのどちらの立体配置も、本発明の化合物に包含される。
【０１５６】
キラル中心の命名法に関して、「ｄ」および「ｌ」立体配置という用語は、ＩＵＰＡＣ勧告によって定義される通りである。ジアステレオマー、ラセミ体、エピマー、および鏡像異性体という用語の使用については、これらは調製品の立体化学について記述するそれらの通常の文脈で使用される。
【０１５７】
「低下させる」とは、少なくとも１０％、２５％、５０％、７５％、または１００％の負の変化を意味する。
【０１５８】
「参照」は、標準または対照条件を意味する。
【０１５９】
「参照配列」は、配列比較の基礎として使用される定義された配列である。参照配列は、例えば、完全長ｃＤＮＡまたは遺伝子配列の断片、または完全ｃＤＮＡまたは遺伝子配列など、指定された配列のサブセットまたは全体であってもよい。ポリペプチドについては、参照ポリペプチド配列の長さは、一般に少なくとも約１６個のアミノ酸、好ましくは少なくとも約２０個のアミノ酸、より好適には少なくとも約２５個のアミノ酸、そしてなおもより好ましくは約３５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、または約１００個のアミノ酸である。核酸については、参照核酸配列の長さは、一般に少なくとも約５０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約６０ヌクレオチド、より好適には少なくとも約７５ヌクレオチド、そしてなおもより好ましくは約１００ヌクレオチドまたは約３００ヌクレオチドであり、またはそれらの前後またはそれらの間の任意の整数である。
【０１６０】
「特異的に結合する」は、本発明のポリペプチドを認識して結合するが、例えば本発明のポリペプチドを天然に含む生物学的サンプルなどのサンプル中で、その他の分子を実質的に認識せず結合しない、化合物または抗体を意味する。
【０１６１】
本発明の方法で有用な核酸分子としては、本発明のポリペプチドまたはその断片をコードする、任意の核酸分子が挙げられる。このような核酸分子は、内在性核酸配列と１００％同一でなくてもよいが、典型的にかなりの同一性を呈示する。内在性配列と「かなりの同一性」を有するポリヌクレオチドは、典型的に、二本鎖核酸分子の少なくとも１本の鎖とハイブリダイズできる。本発明の方法で有用な核酸分子としては、本発明のポリペプチドまたはその断片をコードする、任意の核酸分子が挙げられる。このような核酸分子は、内在性核酸配列と１００％同一でなくてもよいが、典型的にかなりの同一性を呈示する。内在性配列と「かなりの同一性」を有するポリヌクレオチドは、典型的に、二本鎖核酸分子の少なくとも１本の鎖とハイブリダイズできる。「ハイブリダイズ」は、様々なストリンジェンシー条件下で、相補的ポリヌクレオチド配列（例えば本明細書に記載される遺伝子）またはその部分間で二本鎖分子を形成する対合、を意味する。（例えばＷａｈｌ，Ｇ．Ｍ．ａｎｄ  Ｓ．Ｌ．Ｂｅｒｇｅｒ（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：３９９；Ｋｉｍｍｅｌ，Ａ．Ｒ．（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５２：５０７を参照されたい）。
【０１６２】
例えば、ストリンジェントな塩濃度は、通常、約７５０ｍＭのＮａＣｌおよび７５ｍＭのクエン酸三ナトリウムを下回り、好ましくは約５００ｍＭのＮａＣｌおよび５０ｍＭのクエン酸三ナトリウムを下回り、より好適には約２５０ｍＭのＮａＣｌおよび２５ｍＭのクエン酸三ナトリウムを下回る。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーションが、例えばホルムアミドなどの有機溶剤不在下で得られるのに対し、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーションは、少なくとも約３５％のホルムアミド、より好適には少なくとも約５０％のホルムアミドの存在下で得られる。ストリンジェントな温度条件としては、通常、少なくとも約３０℃、より好適には少なくとも約３７℃、最も好適には少なくとも約４２℃の温度が挙げられる。ハイブリダイゼーション時間、例えばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）などの洗剤の濃縮、およびキャリアＤＮＡの包含または排除などの追加的なパラメータを変化させることは、当業者に周知である。必要に応じてこれらの様々な条件を組み合わせることで、様々なストリンジェンシーレベルが達成される。好ましい実施形態では、ハイブリダイゼーションは、３０℃で、７５０ｍＭのＮａＣｌ、７５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および１％のＳＤＳ中で起きる。より好ましい実施形態では、ハイブリダイゼーションは、３７℃で、５００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のＳＤＳ、３５％のホルムアミド、および１００μｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）中で起きる。最も好ましい実施形態では、ハイブリダイゼーションは、４２℃で、２５０ｍＭのＮａＣｌ、２５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、１％のＳＤＳ、５０％のホルムアミド、および２００μｇ／ｍｌのｓｓＤＮＡ中で起きる。これらの条件の有用な変動は、当業者には容易に分かる。
【０１６３】
ほとんどの用途では、ハイブリダイゼーションに続く洗浄ステップもまた、ストリンジェンシーが変動する。洗浄ストリンジェンシー条件は、塩濃度と温度によって規定され得る。上と同様、塩濃度の低下または温度の上昇によって、洗浄ストリンジェンシーを増大させ得る。例えば、洗浄ステップのためのストリンジェントな塩濃度は、好ましくは約３０ｍＭのＮａＣｌおよび３ｍＭのクエン酸三ナトリウムを下回り、最も好適には約１５ｍＭのＮａＣｌおよび１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウムを下回る。洗浄ステップのためのストリンジェントな温度条件としては、通常、少なくとも約２５℃、より好適には少なくとも約４２℃、なおもより好ましくは少なくとも約６８℃の温度が挙げられる。好ましい実施形態では、洗浄ステップは、２５℃で、３０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中で起きる。より好ましい実施形態では、洗浄ステップは、４２℃で、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中で起きる。より好ましい実施形態では、洗浄ステップは、６８℃で、１５ｍＭのＮａＣｌ、１．５ｍＭのクエン酸三ナトリウム、および０．１％のＳＤＳ中で起きる。これらの条件の追加的な変動は、当業者には容易に分かる。ハイブリダイゼーション技術は当業者に周知であり、例えばＢｅｎｔｏｎ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｓ（Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９６：１８０，１９７７）；Ｇｒｕｎｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｈｏｇｎｅｓｓ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ７２：３９６１，１９７５）；Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１）；Ｂｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｋｉｍｍｅｌ（Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９８７，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；およびＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに記載される。
【０１６４】
「実質的に同一」とは、参照アミノ酸配列（例えば本明細書に記載されるアミノ酸配列のいずれ１つ）、または核酸配列（例えば本明細書に記載される核酸配列のいずれか１つ）と、少なくとも８５％の同一性を呈示するポリペプチドまたは核酸分子を意味する。好ましくは、このような配列は、比較のために使用される配列に対して、アミノ酸または核酸レベルで、少なくとも８５％、９０％、９５％、９９％または１００％同一である。
【０１６５】
配列同一性は、典型的に、配列分析ソフトウェアを使用して測定される。（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｅｎｔｅｒ，１７１０  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ａｖｅｎｕｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．５３７０５、ＢＬＡＳＴ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＧＡＰ、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）。このようなソフトウェアは、様々な置換、欠失、および／またはその他の修飾に相同性の程度を割り当てることで、同一または類似配列をマッチさせる。保存的置換としては、典型的に、グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、スレオニン；リジン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシン群中の置換が挙げられる。同一性の程度を判定する例示的なアプローチでは、ＢＬＡＳＴプログラムを使用してもよく、ｅ．ｓｕｐ．−３とｅ．ｓｕｐ．−１００の間の確率スコアは、近縁関係にある配列を示唆する。
【０１６６】
「低下させる」または「増大させる」は、参照と比較して、それぞれ少なくとも約１０％、２５％、５０％、７５％、または１００％のマイナスまたはプラスの変化を意味する。
【０１６７】
「平均二乗偏差」は、平均からの偏差の平方の算術平均の平方根を意味する。
【０１６８】
「細胞生存を低下させる」は、参照細胞と比較して、細胞生存を阻害し、または細胞死を誘導することを意味する。
【０１６９】
「参照」は、標準または対照条件を意味する。
【０１７０】
「参照配列」は、配列比較の基礎として使用される定義された配列である。参照配列は、例えば、完全長ｃＤＮＡまたは遺伝子配列の断片、または完全なｃＤＮＡまたは遺伝子配列など、指定された配列のサブセットまたは全体であってもよい。ポリペプチドについては、参照ポリペプチド配列の長さは、一般に少なくとも約１６個のアミノ酸、好ましくは少なくとも約２０個のアミノ酸、より好適には少なくとも約２５個のアミノ酸、そしてなおもより好ましくは約３５個のアミノ酸、約５０個のアミノ酸、または約１００個のアミノ酸である。核酸については、参照核酸配列の長さは、一般に少なくとも約５０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約６０ヌクレオチド、より好適には少なくとも約７５ヌクレオチド、そしてなおもより好ましくは約１００ヌクレオチドまたは約３００ヌクレオチドであり、またはそれらの前後またはそれらの間の任意の整数である。
【０１７１】
「対象」は、ヒト、またはウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ、またはネコなどの非ヒト哺乳類を含むが、これに限定されるものではない、哺乳類を意味する。
【０１７２】
「特異的に結合する」は、本発明のポリペプチドを認識して結合するが、例えば本発明のポリペプチドを天然に含む生物学的サンプルなどのサンプル中で、その他の分子を実質的に認識せず結合しない、化合物または抗体を意味する。
【０１７３】
「スルフヒドリル」または「チオール」という用語は、−ＳＨを意味する。
【０１７４】
本明細書の用法では、「互変異性体」という用語は、互変異性化によって容易に相互転換する有機分子の異性体を指し、その中では、水素原子またはプロトンが反応中に移動して、場合によっては、単結合と隣接する二重結合との交替が伴う。
【０１７５】
本明細書の用法では「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」などの用語は、障害および／またはそれに伴う症状を低下させまたは改善することを指す。「改善する」は、疾患の発症または進行を低下させ、抑制し、減衰させ、縮小させ、停止させ、または安定化することを意味する。排除はされないものの、障害または病状を治療することは、障害とそれに伴う症状または病状を完全に排除することを要さないことが理解されるであろう。
【０１７６】
本明細書の用法では、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」、「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」「予防的治療（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」などの用語は、障害または病状を有さないが、リスクがあるまたは発症しやすい対象中で、障害または病状が発症する確率を低下させることを指す。
【０１７７】
「有効量」は、治療対象に治療効果もたらす化合物の量を指す。治療効果は、客観的（すなわちある種の試験またはマーカーで測定可能）または主観的（すなわち対象に効果の徴候があり、または対照が効果を感じる）であってもよい。本明細書に記載される化合物の有効量は、約１ｍｇ／Ｋｇ〜約５０００ｍｇ／Ｋｇ体重の範囲であってもよい。有効量はまた、投与経路、ならびにその他の作用物質の同時使用可能性に応じて変動する。
【０１７８】
本明細書で提供される範囲は、範囲内の全ての値で省略表現であることが理解される。例えば、１〜５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または部分的範囲を含むものと理解される。
【０１７９】
本明細書の用法では「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」などの用語は、障害および／またはそれに伴う症状を低下させまたは改善することを指す。排除はされないものの、障害または病状を治療することは、障害とそれに伴う症状または病状を完全に排除することを要さないことが理解されるであろう。
【０１８０】
特に断りのない限り、または文脈から明らかな場合を除き、本明細書の用法では、「または」という用語は包括的であると理解される。特に断りのない限り、または文脈から明らかな場合を除き、本明細書の用法では、「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」という用語は、単数または複数であると理解される。
【０１８１】
特に断りのない限り、または文脈から明らかな場合を除き、本明細書の用法では、「約」という用語は、例えば平均の２標準偏差以内など、当該技術分野の通常の許容差の範囲内と理解される。約は、記載値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％、または０．０１％以内と理解され得る。文脈から明らかである場合を除き、本明細書で提供される全ての数値は、約という用語によって修飾される。
【０１８２】
本明細書の任意の変数の定義における化学基一覧の列挙は、任意の単一群または列挙された群の組み合わせとしての変数の定義を含む。本明細書の変数または態様に関する実施形態の列挙は、任意の単一実施形態としてのその実施形態、または任意のその他の実施形態またはその部分と組み合わさったその実施形態を含む。
【０１８３】
本明細書で提供される任意の組成物または方法は、本明細書で提供されるその他の組成物および方法のいずれかの１つまたは複数と組み合わせ得る。
【０１８４】
本発明は、新生物、炎症性疾患、肥満症、脂肪肝（ＮＡＳＨかそうでないもの）、糖尿病、アテローム性動脈硬化、動脈ステント閉塞、心不全、悪液質、移植片対宿主病、ブロモドメインと関連付けられている感染性疾患の治療または予防、寄生生物、マラリア、トリパノソーマの治療、および男性の妊性を低下させるのに有用な組成物および方法を特徴とする。本発明の組成物のさらなる用途としては、臓器移植、再生医療のための細胞状態調節（すなわち細胞分化の促進または阻害による）、および多分化能促進における使用が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０１８５】
本発明は、ブロモドメインのＢＥＴファミリーに対する生化学的選択性がある、細胞透過性の強力小分子阻害剤（ＪＱ１）および関連化合物の発見に少なくとも部分的に基づき、これらの化合物は、核クロマチン上のアセチルリジン残基を認識するブロモドメインを含有するポリペプチドのファミリーである、ブロモドメインファミリーを調節できる。リジンアセチル化は、細胞および疾患生物学に広く関連する、シグナル伝達修飾であることが分かってきた。側鎖のアセチル化を可逆的に媒介する酵素を標的指向化することは、長年にわたって創薬研究の活発な領域である。今まで、成功裏の努力は、核クロマチンの文脈で現れた、共有結合修飾の「ライター」（アセチルトランスフェラーゼ）および「イレーサー」（ヒストンデアセチラーゼ）に限定されてきた。アセチルリジン認識モジュール、またはブロモドメインの強力な阻害剤については、未だに記載されていない。最近のＢＲＤ４の高解像度共結晶構造の特性解析は、アセチルリジン結合窩との優れた形状相補性を明らかにした。ＪＱ１とＢＲＤ４のタンデムブロモドメインとの結合は、アセチルリジン競合的であり、ヒト細胞中のクロマチンからＢＲＤ４を置き換える。ＢＲＤ４の再発性転座は、ヒト扁平上皮がんの不治の遺伝的に定義されたサブタイプで観察される。ＪＱ１のＢＲＤ４融合腫瘍性タンパク質への競合的結合は、患者由来細胞系で、およびＢＲＤ４依存性がん腫のマウスモデルで、即時の扁平上皮分化および特異的抗増殖性効果をもたらす。これらのデータは、エピジェネティックな「リーダー」の標的指向化タンパク質−タンパク質相互作用の実現可能性を確立し、より広くブロモドメインファミリー全体を通じて化学薬品プローブを開発するための用途の広い化学的骨格を報告する。
【０１８６】
ブロモドメイン含有タンパク質
遺伝子制御は、基本的に、可逆的な高分子の非共有結合アセンブリーによって支配される。ＲＮＡポリメラーゼへの情報伝達は、クロマチンの翻訳後修飾状態を解釈できるアセンブリー要素によって空間的に制御される、より高次のタンパク質複合体を必要とする。エピジェネティックなリーダーは、ヒストンタンパク質またはＤＮＡの共有結合修飾を認識する、１つまたは複数の進化的に保存されたエフェクターモジュールをそれぞれが保有する、構造的に多様なタンパク質である。ヒストン尾部上のリジン残基（Ｋａｃ）のε−Ｎ−アセチル化は、オープンクロマチン構造および転写活性化と関連付けられている３。アセチルリジンのコンテクスト特異的分子認識は、主にブロモドメインによって媒介される。
【０１８７】
ブロモドメイン含有タンパク質には、転写因子複合体（ＴＡＦ１、ＰＣＡＦ、Ｇｃｎ５、およびＣＢＰ）、およびエピジェネティックメモリー決定因子の構成要素として、非常に高い生物学的関心が持たれている４。合計で５７の多様なブロモドメインを含有する、４１個のヒトタンパク質がある。大きな配列多様性にも関わらず、全てのブロモドメインは、基質特異性を決定する多様なループ領域（ＺＡおよびＢＣループ）によって結合する、４本のαらせん（αＺ、αＡ、αＢ、αＣ）の左巻きの束を含んでなる、保存された折り畳みを共有する。ペプチド性基質との共結晶構造は、アセチルリジンが、中心疎水性窩によって認識され、ほとんどのブロモドメイン中に存在するアスパラギン残基との水素結合によってアンカーされることを示した５。ブロモドメインおよびエキストラ末端（ＢＥＴ）ファミリー（ＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴ）は、高レベルの配列保存を呈示する２つのＮ末端ブロモドメインを含んでなる一般的ドメイン構造と、より多岐にわたるＣ−末端動員ドメイン（図１Ｅ）とを共有する６。
【０１８８】
ＢＲＤ４
最近の研究は、がんにおいてＢＲＤ４を標的とすることの抗しがたい理論的根拠を確立している。ＢＲＤ４は、細胞周期進行を促進するように機能し、培養がん細胞系中のノックダウンはＧ１停止を促す。ＢＲＤ４は、転写延長の重要な媒介物であり、陽性転写延長因子複合体（Ｐ−ＴＥＦｂ）を動員するように機能する７，８。Ｐ−ＴＥＦｂのコア構成要素であるサイクリン依存性キナーゼ−９は、慢性リンパ球性白血病における検証された標的であり９、最近ではｃ−Ｍｙｃ依存性転写と結びつけられている１０。ＢＲＤ４中に存在するブロモドメインは、Ｐ−ＴＥＦｂを有糸分裂染色体に動員し、成長促進遺伝子の発現増大がもたらされる１１。ＢＲＤ４は、Ｍ／Ｇ１中に発現される遺伝子の転写開始部位に結合したままであるが、細胞周期のより後期に発現される開始部位における存在は発見されていない。増殖細胞中のＢＲＤ４のノックダウンは、有糸分裂進行に重要な遺伝子の発現レベル１３および生存１４を低下させることによって、Ｇ１停止およびアポトーシスをもたらすことが示されている１２。
【０１８９】
最も重要なことには、ＢＲＤ４は、最近、悪性度の高いヒト扁平上皮がんにおいて、再発性ｔ（１５；１９）染色体転座の構成要素として同定されている１５，１６。このような転座は、いわゆるＮＵＴ正中がん腫（ＮＭＣ）を遺伝的に定義するＮＵＴ（睾丸中の核タンパク質）タンパク質とのインフレームキメラとして、ＢＲＤ４のタンデムＮ末端ブロモドメインを発現する。患者由来ＮＭＣ細胞系中の機能検討が、この一様に致命的な悪性病変に特徴的な増殖利点および分化停止の維持における、ＢＲＤ４−ＮＵＴ腫瘍性タンパク質の本質的役割を検証している１７。特に、ＢＲＤ４−ＮＵＴ遺伝子発現のＲＮＡサイレンシングは、サイトケラチン発現の顕著な増大と共に、増殖を停止させ扁平上皮分化を促す。これらの観察は、ヒトブロモドメインタンパク質の直接作用型阻害剤の幅広い効用と、即時治療能力を強調する。
【０１９０】
本発明は、ヒトブロモドメインタンパク質を阻害するのに有用な組成物および方法を特徴とする。
【０１９１】
発明の化合物
本発明は、ＢＥＴファミリーメンバーの第１のブロモドメイン（例えばＢＲＤ４）のａｐｏ結晶構造の結合ポケット中に結合する化合物（例えばＪＱ１および本明細書で記述される式の化合物）を提供する。理論による拘束は望まないが、これらの化合物は、増殖性新生物細胞の成長、増殖、または生存を阻害する上で、またはこのような細胞の分化を誘導する上で、特に効果的であってもよい。１つのアプローチでは、新生物、炎症性疾患、肥満症、脂肪肝（ＮＡＳＨかそうでないもの）、糖尿病、アテローム性動脈硬化、動脈ステント閉塞、心不全、悪液質、移植片対宿主病、ブロモドメインと関連付けられている感染性疾患の治療、寄生生物、マラリア、トリパノソーマの治療、および男性の妊性を低下させるためのまたは臓器移植における使用、再生医療のための細胞状態調節（すなわち細胞分化の促進または阻害による）、および多分化能の促進に有用な化合物は、ブロモドメイン構造的結合ポケットに結合することが予期される化合物を同定する、分子ドッキングプログラムを使用して選択される。特定の実施形態では、本発明の化合物は、ＢＥＴファミリーメンバーに結合して、ＢＥＴファミリーメンバーの生物学的活性を低下させ（例えば延長低下）、および／またはＢＥＴファミリーメンバーの細胞内局在化を妨害し得る（例えばクロマチン結合低下）。
【０１９２】
特定の実施形態では、本発明の化合物は、ＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤＴ）の生物学的活性を少なくとも１０％、２５％、５０％、７５％、または１００％妨げ、阻害し、または妨害し、または低下させて、および／または例えばブロモドメインａｐｏ結合ポケット中の結合部位に結合することにより、このようなタンパク質の細胞内局在化を妨害し得る。
【０１９３】
特定の実施形態では、本発明の化合物は、約１０００ダルトン未満、８００未満、６００未満、５００未満、４００未満、約３００ダルトン未満の分子量を有する小分子である。本発明の化合物の例としては、ＢＥＴファミリーメンバーの第１のブロモドメイン（例えばＢＲＤ４（以下、ＢＲＤ４（１）と称される；ＰＤＢ  ＩＤ  ２ＯＳＳ）のａｐｏ結晶構造の結合ポケットに結合する、ＪＱ１およびその他の化合物が挙げられる。ＪＱ１は、新規チエノ−トリアゾロ−１，４−ジアゼピンである。本発明は、このような化合物の薬学的に許容可能な塩をさらに提供する。
【０１９４】
一態様では、本発明は、式Ｉ、
【化５−２２】
0005937247.tif 000027
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０〜３であり、ＬはＨである）、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；
Ｒ２はＨ、Ｄ（重水素）、ハロゲン、または任意選択的に置換されるアルキルであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６
からなる群から選択され；
各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ４およびＲ６はそれにそれらが付着する炭素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただし
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒがフェニルまたは置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは１であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であれば、次にＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒にならずモルホリノ環を形成せず；
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは１であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であり、Ｒ３でＲ４の一方がＨであれば、次にＲ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルでなく；
（ｃ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは１であり、Ｌは−ＣＯＯ−Ｒ３である）であれば、次にＲ３はメチルでもエチルでもない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０１９５】
特定の実施形態では、Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アリールまたはヘテロアリールである。
【０１９６】
特定の実施形態では、ＬはＨ、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ３または任意選択的に置換されるアリールである。特定の実施形態では、各Ｒ３は独立して、Ｈ；任意選択的に置換されてＯ、Ｓ、またはＮから選択される０、１、２、または３個のヘテロ原子を含有する−Ｃ１〜Ｃ８アルキル；またはＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６からなる群から選択される。
【０１９７】
特定の実施形態では、Ｒ２はＨ、Ｄ、ハロゲンまたはメチルである。
【０１９８】
特定の実施形態では、ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、またはアルコキシである。
【０１９９】
特定の実施形態では、ＲＢはメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、またはＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０２００】
特定の実施形態では、環Ａは５または６員環アリールまたはヘテロアリールである。特定の実施形態では、環Ａはチオフラニル、フェニル、ナフチル、ビフェニル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ピリジル、フラニル、インドリル、ピリミジニル、ピリジジニル、ピラジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チエニル、チアゾリル、トリアゾリル、イソオキサゾリル、キノリニル、ピロリル、ピラゾリル、または５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリニルである。
【０２０１】
特定の実施形態では、環Ａはフェニルまたはチエニルである。
【０２０２】
特定の実施形態では、ｍは１または２であり、ＲＡの少なくとも１つの存在はメチルである。
【０２０３】
特定の実施形態では、各ＲＡは独立して、Ｈ、任意選択的に置換されるアルキルであり、または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒にアリールを形成し得る。
【０２０４】
別の態様では、本発明は、式ＩＩ、
【化６】
0005937247.tif 000028
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
Ｒ’１はＨ、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニルからなる群から選択され；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただしＲ’１が−ＣＯＯ−Ｒ３であり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、ＲＢがメチルであれば、次にＲ３はメチルでもエチルでもない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０２０５】
特定の実施形態では、Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アリールまたはヘテロアリールである。特定の実施形態では、Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、フェニルまたはピリジルである。特定の実施形態では、Ｒはｐ−Ｃｌ−フェニル、ｏ−Ｃｌ−フェニル、ｍ−Ｃｌ−フェニル、ｐ−Ｆ−フェニル、ｏ−Ｆ−フェニル、ｍ−Ｆ−フェニルまたはピリジニルである。
【０２０６】
特定の実施形態では、Ｒ’１は−ＣＯＯ−Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；Ｒ３はＯ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子を含有して任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ１〜Ｃ８アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ’１は−ＣＯＯ−Ｒ３であり、Ｒ３はメチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔ−ブチルであり；またはＲ’１はＨまたは任意選択的に置換されるフェニルである。
【０２０７】
特定の実施形態では、ＲＢはメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０２０８】
特定の実施形態では、ＲＢはメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、またはＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０２０９】
特定の実施形態では、各ＲＡは独立して、任意選択的に置換されるアルキルであり、または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールを形成し得る。
【０２１０】
特定の実施形態では、各ＲＡはメチルである。
【０２１１】
別の態様では、本発明は、式ＩＩＩ、
【化７】
0005937247.tif 000029
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６
からなる群から選択され；
各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ４およびＲ６はそれにそれらが付着する炭素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただし
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒがフェニルまたは置換フェニルであり、ＲＢがメチルであれば、次にＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒にならずモルホリノ環を形成せず；
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒが置換フェニルであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ３およびＲ４の一方がＨであれば、次にＲ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルでない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０２１２】
特定の実施形態では、Ｒはそれぞれが任意選択的に置換される、アリールまたはヘテロアリールである。特定の実施形態では、Ｒは、それぞれが任意選択的に置換される、フェニルまたはピリジルである。
【０２１３】
特定の実施形態では、Ｒはｐ−Ｃｌ−フェニル、ｏ−Ｃｌ−フェニル、ｍ−Ｃｌ−フェニル、ｐ−Ｆ−フェニル、ｏ−Ｆ−フェニル、ｍ−Ｆ−フェニルまたはピリジニルである。特定の実施形態では、Ｒ３はＨ、ＮＨ２、またはＮ＝ＣＲ４Ｒ６である。
【０２１４】
特定の実施形態では、各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールである。
【０２１５】
特定の実施形態では、Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールである。
【０２１６】
別の態様では、本発明は、式ＩＶ、
【化８】
0005937247.tif 000030
式中、
ＸはＮまたはＣＲ５であり；
Ｒ５は、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；
ＲＢは、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、ヒドロキシラルキル、アミノアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、または−ＣＯＯ−Ｒ３であり；
環Ａはアリールまたはヘテロアリールであり；
各ＲＡは独立して、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒に融合アリールまたはヘテロアリール基を形成し得て；
Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０〜３であり、ＬはＨである）、−ＣＯＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｒ３、−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ３、−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ３Ｒ４）、Ｎ（Ｒ４）Ｃ（Ｏ）Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；
Ｒ２はＨ、Ｄ、ハロゲン、または任意選択的に置換されるアルキルであり；
各Ｒ３は独立して、
（ｉ）Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリール；
（ｉｉ）ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキル；
（ｉｉｉ）Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子をそれぞれ含有する、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニルまたは−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル；それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル；および
（ｉｖ）ＮＨ２、Ｎ＝ＣＲ４Ｒ６
からなる群から選択され；
各Ｒ４は独立して、それぞれが任意選択的に置換される、Ｈ、アルキル、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
Ｒ６は、それぞれが任意選択的に置換される、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり；またはＲ４およびＲ６はそれにそれらが付着する炭素原子と一緒になって４〜１０員環を形成し；
ｍは０、１、２、または３であるが；
ただし
（ａ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であれば、次にＲ３およびＲ４はそれにそれらが付着する窒素原子と一緒にならずモルホリノ環を形成せず；
（ｂ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０であり、Ｌは−ＣＯ−Ｎ（Ｒ３Ｒ４）である）であれば、Ｒ３およびＲ４の一方はＨであり、次にＲ３およびＲ４の他方はメチル、ヒドロキシエチル、アルコキシ、フェニル、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルでなく；
（ｃ）環Ａがチエニルであり、ＸがＮであり、Ｒ２がＨであり、ＲＢがメチルであり、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０であり、Ｌは−ＣＯＯ−Ｒ３である）であれば、次にＲ３はメチルでもエチルでもない
化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０２１７】
特定の実施形態では、Ｒ１は−（ＣＨ２）ｎ−Ｌ（式中、ｎは０〜３であり、Ｌは−ＣＯＯ−Ｒ３、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールである）であり；Ｒ３はＯ、Ｓ、またはＮから選択される、０、１、２、または３個のヘテロ原子を含有して任意選択的に置換されていてもよい、−Ｃ１〜Ｃ８アルキルである。特定の実施形態では、ｎは１または２であり、Ｌはアルキルまたは−ＣＯＯ−Ｒ３であり、Ｒ３はメチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、またはｔ−ブチルであり；またはｎは１または２であり、ＬはＨまたは任意選択的に置換されるフェニルである。
【０２１８】
特定の実施形態では、Ｒ２はＨまたはメチルである。
【０２１９】
特定の実施形態では、ＲＢはメチル、エチル、ヒドロキシメチル、メトキシメチル、トリフルオロメチル、ＣＯＯＨ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【０２２０】
特定の実施形態では、環Ａはフェニル、ナフチル、ビフェニル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ピリジル、フラニル、インドリル、ピリミジニル、ピリジジニル、ピラジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チエニル、チアゾリル、トリアゾリル、イソオキサゾリル、キノリニル、ピロリル、ピラゾリル、または５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリニルである。
【０２２１】
特定の実施形態では、各ＲＡは独立して、任意選択的に置換されるアルキルであり、または任意の２つのＲＡはそれにそれぞれが付着する原子と一緒にアリールを形成し得る。
【０２２２】
本発明はまた、式Ｖ〜ＸＸＩＩの化合物および本明細書に記載される任意の化合物も提供する。
【０２２３】
別の態様では、本発明は、式、
【化９】
0005937247.tif 000031
その塩、溶媒和化合物または水和物によって表される化合物を提供する
【０２２４】
特定の実施形態では、化合物は（＋）−ＪＱ１：
【化１０】
0005937247.tif 000032
その塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０２２５】
別の態様では、本発明は、式、
【化１１】
0005937247.tif 000033
または
【化１２】
0005937247.tif 000034
その塩、溶媒和化合物または水和物によって表される化合物を提供する。
【０２２６】
別の態様では、本発明は、式、
【化１３】
0005937247.tif 000035
または
【化１４】
0005937247.tif 000036
によって表される化合物、その塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０２２７】
別の態様では、本発明は、式、
【化１５】
0005937247.tif 000037
のいずれか１つによって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０２２８】
別の態様では、本発明は、式、
【化１６】
0005937247.tif 000038
のいずれか１つによって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０２２９】
別の態様では、本発明は、
【化１７】
0005937247.tif 000039
【化１８】
0005937247.tif 000040
【化１９】
0005937247.tif 000041
【化２０】
0005937247.tif 000042
【化２１】
0005937247.tif 000043
【化２２】
0005937247.tif 000044
の構造のいずれか１つによって表される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０２３０】
特定の実施形態では、本発明の化合物は、
【化２３】
0005937247.tif 000045
【化２４】
0005937247.tif 000046
【化２５】
0005937247.tif 000047
【化２６】
0005937247.tif 000048
【化２７】
0005937247.tif 000049
の構造の１つによって表され、またはその塩、溶媒和化合物または水和物であり得る。
【０２３１】
一実施形態では、化合物は、構造
【化２８】
0005937247.tif 000050
によって表され、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０２３２】
別の実施形態では、化合物は、構造
【化２９】
0005937247.tif 000051
によって表され、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０２３３】
別の実施形態では、化合物は、構造
【化３０】
0005937247.tif 000052
によって表され、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０２３４】
特定の実施形態では、本発明の化合物は、本明細書に示される任意の化合物の逆のキラリティーを有し得る。
【０２３５】
特定の実施形態では、本発明は、式（Ｖ）、（ＶＩ）、または（ＶＩＩ）によって表される化合物、
【化３１】
0005937247.tif 000053
（式中、Ｒ、Ｒ１、およびＲ２およびＲＢは式（Ｉ）中と同じ意味を有し；ＹはＯ、Ｎ、Ｓ、またはＣＲ５であり、Ｒ５は式（Ｉ）中と同じ意味を有し；ｎは０または１であり；式（ＶＩＩ）中の破線の円は芳香族または非芳香族環を示す）、またはその塩、溶媒和化合物または水和物を提供する。
【０２３６】
式Ｉ〜ＩＶおよびＶＩ（または本明細書の任意の式）のいずれかの特定の実施形態では、Ｒ６は、下の表Ａで示されるアルデヒドの非カルボニル部分に相当する（すなわち式Ｒ６ＣＨＯのアルデヒドでは、Ｒ６はアルデヒドの非カルボニル部分である）。特定の実施形態では、Ｒ４およびＲ６は、組み合わさって、表Ａで示されるケトンの非カルボニル部分に相当する（すなわち式Ｒ６Ｃ（Ｏ）Ｒ４のケトンでは、Ｒ４およびＲ６はケトンの非カルボニル部分である）。
【０２３７】
【表１】
0005937247.tif 000054
【０２３８】
【表２】
0005937247.tif 000055
【０２３９】
【表３】
0005937247.tif 000056
【０２４０】
【表４】
0005937247.tif 000057
【０２４１】
一実施形態では、化合物は、式、
【化３２】
0005937247.tif 000058
によって表され、またはその塩、溶媒和化合物、または水和物である。
【０２４２】
特定の実施形態では、化合物は（ラセミ）ＪＱ１であり；特定の実施形態では、化合物は（＋）−ＪＱ１である。特定の実施形態では、化合物は、
【化３３】
0005937247.tif 000059
および
【化３４】
0005937247.tif 000060
からなる群から選択される化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物である。
【０２４３】
追加的な化合物の例としては、式、
【化３５】
0005937247.tif 000061
【化３６】
0005937247.tif 000062
に記載の化合物、またはその塩、溶媒和化合物または水和物が挙げられる。
【０２４４】
式ＩＸ〜ＸＸＩＩ中では、ＲおよびＲ’は、例えば、それぞれが任意選択的に置換されていてもよい、Ｈ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｃ２〜Ｃ８アルケニル、−Ｃ２〜Ｃ８アルキニル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル、−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル、または置換−Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニルであり得る。式ＸＩＶ中では、Ｘは、本明細書に記載されるようなアリール基のための任意の置換基であり得る。
【０２４５】
本発明の化合物は、そのいくつかが当該技術分野で公知の多様な方法によって調製し得る。例えば、下で提供される化学物質の例は、化合物ＪＱ１（ラセミ体として）および鏡像異性体（＋）−ＪＱ１および（−）−ＪＱ１（スキームＳ１およびＳ２を参照されたい）を調製するための合成スキームを提供する。式（Ｉ）〜（ＸＸＩＩ）の多様な化合物は、適切な出発原料の置換により、類似法によって調製し得る。
【０２４６】
例えば、ＪＱ１から出発して、下のスキーム１に示されるようにして、類似アミンを調製し得る。
【化３７】
0005937247.tif 000063
スキーム１
【０２４７】
スキーム１に示されるように、ＪＱ１のｔ−ブチルエステルの加水分解は、カルボン酸を与え、それはジフェニルリン酸アジド（ＤＰＰＡ）で処理されて、クルチウス転位条件にさらされてＣｂｚ保護アミンを提供し、次にそれは脱保護されてアミンをもたらす。例えば還元的アミノ化による引き続くアミン基の合成は第二級アミンをもたらし、それをらにアルキル化して三級アミンを提供し得る。
【化３８】
0005937247.tif 000064
スキーム２
【０２４８】
スキーム２は、例えば、（例えば式Ｉの環Ａを異なる芳香族環で置換することで）その中で融合環コアが修飾される、式Ｉの本発明の化合物のさらなる実施例の合成を示す。（例えば後述のスキームＳ１中のアミノジアリールケトンＳ２に代えて）適切な官能性を有するアミノジアリールケトンを使用することで、多様な融合環コアおよび／または付属アリール基（式Ｉの基Ｒに対応する）を有する新しい化合物を提供する。このようなアミノジアリールケトンは市販され、またはそのいくつかが当該技術分野で公知の多様な方法によって調製され得る。
【０２４９】
スキーム３は、さらなる本発明の化合物を調製するための追加的な例示的合成スキームを提供する。
【化３９】
0005937247.tif 000065
スキーム３
【０２５０】
スキーム３で示されるように、融合二環式前駆体（この化合物の合成については後述のスキームＳ１を参照されたい）を部分Ｒ（ＤＡＭ＝ジメチルアミノメチレン保護基）で官能化し、次にヒドラジドとの反応によって合成して、三環式融合コアを形成する。置換基Ｒｘは、適切なヒドラジドの選択によって変化させ得る。
【０２５１】
（本明細書に記載される方法によって調製し得る）本発明の化合物の追加的な実施例としては、以下が挙げられる。
【０２５２】
アミド
アミドは、例えば対応するカルボン酸またはエステルの調製と、それに続く標準条件を使用した適切なアミンでのアミド化によって、調製し得る。特定の実施形態では、アミドは、末端末端窒素含有環（例えばピリジル、ピペリジル、ピペラジニル、イミダゾリル（Ｎ−メチル−イミダゾリルを含む）、モルホリニルなどとの二炭素「リンカー」を提供する。例示的なアミド構造としては、
【化４０】
0005937247.tif 000066
が挙げられる。
【０２５３】
アミド部分と末端窒素含有環の間の二炭素リンカーの使用が好ましい。
【０２５４】
「逆方向アミド」
【化４１】
0005937247.tif 000067
【０２５５】
第二級アミン
【化４２】
0005937247.tif 000068
【０２５６】
ボロン酸
【化４３】
0005937247.tif 000069
【０２５７】
特定の実施形態では、少なくとも１つのキラル中心を有する化合物が、ラセミ形態で存在する。特定の実施形態では、少なくとも１つのキラル中心を有する化合物が、鏡像異性的に濃縮され、すなわち少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、９９％または１００％の鏡像体過剰率（ｅ．ｅ．）を有する。特定の実施形態では、化合物は、本明細書に記載される化合物（＋）−ＪＱ１（（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾール［４，３−ａ］［１，４］ジアゼパム−６−イル）アセテート）と同一の絶対配置を有する。
【０２５８】
本明細書で開示される式のいずれかの特定の実施形態では、化合物は以下の構造によって表されない。
【化４４】
0005937247.tif 000070
式中、
Ｒ’１はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ’２は水素、ハロゲン、またはハロゲン原子またはヒドロキシル基で任意選択的に置換されるＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ’３はハロゲン原子、任意選択的にハロゲン原子によって置換されるフェニル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、またはシアノ；−ＮＲ５−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６（式中、Ｒ５は水素原子またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、ｍは０〜４の整数であり、Ｒ６は任意選択的にハロゲン原子によって置換されるフェニルまたはピリジルである）；または−ＮＲ７−ＣＯ−−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ８（式中、Ｒ７は水素原子またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、ｎは０〜２の整数であり、Ｒ８は任意選択的にハロゲン原子によって置換されるフェニルまたはピリジルである）であり；
Ｒ’４は−（ＣＨ２）ａ−ＣＯ−ＮＨ−Ｒ９（式中、ａは１〜４の整数であり、Ｒ９は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルである）；Ｃ１〜Ｃ４ヒドロキシアルキル；Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ；または任意選択的にＣ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、アミノまたはヒドロキシル基または−（ＣＨ２）ｂ−ＣＯＯＲ１０（式中、ｂは１〜４の整数であり、Ｒ１０はＣ１〜Ｃ４アルキルである）によって置換されるフェニルまたはピリジルである。
【０２５９】
「薬学的に許容可能な塩」という用語は、本明細書で開示される化合物（例えばＪＱ１、式Ｉ〜ＸＸＩＩの化合物）または本明細書で記述される任意のその他の化合物から調製されて、カルボン酸官能基などの酸性官能基、および薬学的に許容可能な無機または有機塩基を有する塩を指す。適切な塩基としては、ナトリウム、カリウム、およびリチウムなどのアルカリ金属の水酸化物；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属の水酸化物；アルミニウムおよび亜鉛などのその他の金属の水酸化物；アンモニア、および非置換またはヒドロキシ置換モノ−、ジ−、またはトリアルキルアミンなどの有機アミン；ジシクロヘキシルアミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ−メチル，Ｎ−エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ−、ビス−、またはトリス−（２−ヒドロキシエチル）−アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、またはトリス−（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどのモノ−、ビス−、またはトリス−（２−ヒドロキシ−低級アルキルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−アミンなどのＮ、Ｎ，−ジ−低級アルキル−Ｎ−（ヒドロキシ低級アルキル）−アミン、またはトリ−（２−ヒドロキシエチル）アミン）；Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン；およびアルギニン、リジンなどのアミノ酸が挙げられるが、これに限定されるものではない。「薬学的に許容できる塩」という用語は、本明細書で開示される化合物または本明細書で記述される任意のその他の化合物から調製されて、アミノ官能基などの塩基性官能基、および薬学的に許容可能な無機または有機酸を有する塩も指す。適切な酸としては、硫酸水素、クエン酸、酢酸、シュウ酸、塩酸、臭化水素、ヨウ化水素、硝酸、リン酸、イソニコチン酸、乳酸、サリチル酸、酒石酸、アスコルビン酸、コハク酸、マレイン酸、ベシル酸、フマル酸、グルコン酸、グルカロン酸、糖酸、ギ酸、安息香酸、グルタミン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびｐ−トルエンスルホン酸が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２６０】
コンピュータシミュレーションによるスクリーニング法およびシステム
別の態様では、本発明は、本明細書で同定されるＢＥＴファミリーメンバーポリペプチド（例えばＢＲＤ４ドメイン）結合部位の構造座標を含んでなる、機械可読記憶媒体を提供する。これは、提案されるＪＱ１結合部位である。これらのデータをコードする記憶媒体は、コンピュータスクリーンまたは類似視覚装置上に、このような結合部位を含んでなる分子または分子複合体の三次元グラフ表示を示すことができる。
【０２６１】
本発明はまた、前述の結合部位に結合する化合物をデザイン、評価、同定する方法も提供する。このような化合物は、ＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤＴ）の生物学的活性を阻害し、および／またはＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤＴ）の細胞内局在化を妨害することが予期される。本発明は、ａ）結合部位を含んでなる分子または分子複合体の三次元表示；またはｂ）前記アミノ酸の主鎖原子からの平均二乗偏差が約２．０（より好適には１．５）Å以下である結合部位を含んでなる、前記分子または分子複合体のホモログの三次元表示を生成するコンピュータを提供し、前記コンピュータは、
（ｉ）機械可読データによってコードされるデータ記憶物質を含んでなる機械可読データ記憶媒体；
（ｉｉ）前記機械可読データを処理するための命令を保存する作業メモリ；
（ｉｉｉ）前記機械可読データを処理して前記三次元表示にするための前記作業メモリおよび前記機械可読データ記憶媒体と接続している中央処理装置；および
（ｉｖ）前記三次元表示を示すための前記中央処理装置に接続しているディスプレーを含んでなり、前記データは、ブロモドメイン構造結合ポケットまたはその他のＢＥＴファミリーメンバー結合部位中のアミノ酸残基の構造座標を含んでなる。
【０２６２】
したがって、コンピュータは、結合部位を含んでなる、分子または分子複合体の三次元図形構造を生成する。
【０２６３】
別の実施形態では、本発明は、ＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤＴ）のアミノ酸の構造座標によって規定される、分子または分子複合体の三次元表示、または前記アミノ酸の主鎖原子からの平均二乗偏差が２．０（より好適には１．５）Å以下である結合部位を含んでなる、前記分子または分子複合体のホモログの三次元表示を生成するコンピュータを提供する。
【０２６４】
例示的な実施形態では、コンピュータまたはコンピューターシステムは、例えば（参照によって本明細書に援用する）米国特許第５，９７８，７４０号明細書および／または米国特許第６，１８３，１２１号明細書で開示されるような当該技術分野で慣習的な構成要素を含み得る。例えば、コンピューターシステムは、中央演算処理装置（「ＣＰＵ」）、作業メモリ（例えばＲＡＭ（ランダムアクセスメモリ）または「コア」メモリであってもよい）、大容量記憶メモリ（１つまたは複数のディスクドライブまたはＣＤ−ＲＯＭドライブなど）、１つまたは複数のブラウン管（ＣＲＴ）または液晶ディスプレー（ＬＣＤ）表示ターミナル、１つまたは複数のキーボード、１つまたは複数の入力行、および１つまたは複数の出力行を含んでなり、それらの全てが従来のシステムバスによって相互接続する、コンピュータを含み得る。
【０２６５】
本発明の機械可読データは、データ回線によって接続されたモデムまたはモデム群の使用を介して、コンピュータに入力してもよい。代案としては、またはそれに加えて、入力ハードウェアは、ＣＤ−ＲＯＭドライブ、ディスクドライブまたはフラッシュメモリを含んでもよい。ディスプレー端末と併せて、入力装置としてキーボードもまた使用してもよい。
【０２６６】
出力回線によってコンピュータに接続する出力ハードウェアも同様に、従来装置によって実装されてもよい。一例として、出力ハードウェアは、ＱＵＡＮＴＡまたはＰＹＭＯＬなどのプログラムを使用して、本発明の結合ポケットのグラフ表示を示す、ＣＲＴまたはＬＣＤディスプレー端末を含んでもよい。出力ハードウェアは、プリンターまたはディスクドライブもまた含んで、後で使用するためにシステム出力を保存してもよい。
【０２６７】
作動中には、ＣＰＵが様々な入力および出力装置の使用を調整し、大容量記憶装置からのデータアクセスおよび作業メモリへのそして作業メモリからのアクセスを調整し、データ処理段階のシーケンスを決める。市販のソフトウェアを含むいくつかのプログラムを使用して、機械可読データを処理してもよい。
【０２６８】
本発明に従った機械可読データを保存するための磁気記憶媒体は、従来型であり得る。磁気データ記憶媒体は、機械可読データをコードし得て、それは上述のコンピューターシステムなどのシステムによって実施し得る。媒体は、従来型であり得る適切な基材と、片面または両面上のこれもまた従来型であり得る適切なコーティングとを有し、その極性または方向が磁気的に変更され得る磁区を含有する、従来のフロッピーディスケットまたはハードディスクであり得る。媒体はまた、ディスクドライブまたはその他のデータ記憶装置のスピンドルを受け入れるための開口部（図示せず）を有してもよい。
【０２６９】
媒体の磁区は、本明細書に記載されるコンピューターシステムなどのシステムによる実行のために、本明細書に記載されるような機械可読データを従来型であってもよい様式でコードするように、極性化または配向される。
【０２７０】
光学的可読データ記憶媒体もまた使用して、機械可読データ、またはコンピューターシステムによって実施され得る命令セットをコードし得る。媒体は、従来のコンパクトディスク読出し専用メモリ（ＣＤ−ＲＯＭ）、または光学的に読み取り可能で磁気光学的に書き込み可能な光磁気ディスクなどの書換型媒体であり得る。
【０２７１】
ＣＤ−ＲＯＭの場合、周知のように、ディスクコーティングが反射性であり、複数のピットで刻印されて機械可読データをコードする。ピットの配置は、コーティング表面にレーザー光を反射させることで読み取られる。好ましくは実質的に透明である保護コーティングが、反射性コーティングの上面に提供される。
【０２７２】
光磁気ディスクの場合、周知のように、データ記録コーティングはピットを有しないが、レーザーなどで特定温度を超えて加熱した場合に、その極性または配向を磁気的に変化させ得る複数の磁区を有する。磁区の配向は、コーティングから反射したレーザー光の偏光を測定することで読み取り得る。磁区の配置が、上述のデータをコードする。
【０２７３】
構造データは、これらの座標を翻訳して結合ポケットを含んでなる分子または分子複合体の３次元構造にする、ソフトウェアでプログラムされたコンピュータと併せて使用する場合に、創薬などの多様な目的のために使用されてもよい。
【０２７４】
例えば、データによってコードされる構造は、化学実体と結合するその能力について計算的に評価されてもよい。ＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤＴ）の結合部位と結合する化学実体は、新生物細胞の増殖を阻害しまたは分化を誘導し、ＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤＴ）の生物学的活性を阻害し、および／または細胞内局在化を妨害することが予期される。このような化合物は、潜在的な薬剤候補である。代案としては、コンピュータスクリーン上に、データによってコードされる構造を三次元図形表示で示してもよい。これによって構造の目視検査、ならびに構造の化学実体との結合の目視検査が可能になる。
【０２７５】
したがって別の実施形態に従って、本発明は、化学実体が、ａ）本明細書に記載されるようなＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤＴ）の構造座標によって規定される結合部位を含んでなる分子または分子複合体と、またはｂ）前記アミノ酸の主鎖原子からの平均二乗偏差が２．０（より好適には１．５）Å以下である結合ポケットを含んでなる、前記分子または分子複合体のホモログと、結合する可能性を評価する方法に関する。
【０２７６】
この方法は、
ｉ）計算的手段を用いて、化学実体とＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤＴ）ポリペプチドまたはその断片または分子複合体の結合部位の間の適合操作を実行するステップと；
ｉｉ）適合操作の結果を分析して、化学実体と結合ポケットの間の結合を定量化するステップ
を含んでなる。この実施形態は、ＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤＴ）またはその断片の結合部位に会合または結合する化学実体の可能性評価に関する。
【０２７７】
「化学実体」という用語は、本明細書の用法では、化合物、少なくとも２つの化合物の複合体、およびこのような化合物または複合体の断片を指す。
【０２７８】
特定の実施形態では、方法は、化学実体が、本明細書に記載されるようなＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤＴ）のアミノ酸全ての構造座標によって規定される分子または分子複合体と、または前記アミノ酸の主鎖原子からの平均二乗偏差が２．０（より好適には１．５）Å以下である、前記分子または分子複合体のホモログと、結合する可能性を評価する。
【０２７９】
さらなる実施形態では、本明細書に記載される１つの結合部位の構造座標をブロモドメイン結合部位（例えばブロモドメイン構造的結合ポケット）を含んでなる分子の拮抗薬を同定する方法で利用し得る。この方法は、
ａ）ＢＥＴファミリーメンバーの原子座標を使用するステップと；
ｂ）三次元構造を用いて、潜在的作動薬または拮抗薬をデザインまたは選択するステップ
を含んでなる。化合物は、任意の利用可能な手段によって得られてもよい。「得る」は、例えば作動薬または拮抗薬を合成し、購入し、または別の方法で調達することを意味する。所望ならば、方法は、作動薬または拮抗薬をＢＥＴファミリーメンバーポリペプチドまたはその断片に接触させて、分子と相互作用する潜在的作動薬または拮抗薬の能力を判定するステップをさらに伴う。所望ならば、方法また、新生物細胞をブロモドメイン結合化合物に接触させて、細胞毒性を評価し、新生物細胞増殖、細胞死、ＢＥＴファミリーメンバー生物学的活性、または細胞内局在化を評価するステップもさらに伴う。
【０２８０】
別の実施形態では、本発明は、
ａ）ＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤＴ）（例えばブロモドメイン構造的結合ポケット）の原子座標を使用するステップと；
ｂ）三次元構造を用いて、潜在的作動薬または拮抗薬をデザインまたは選択するステップ
を含んでなる、ＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤＴ）の潜在的拮抗薬を同定する方法を提供する。
【０２８１】
本発明者らによる、今まで未同定だったブロモドメイン結合部位の解明は、全部または一部がブロモドメインと相互作用してもよく、ゆえにＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、ＢＲＤＴ）の活性を調節（例えば阻害）してもよい、新しい化学実体および化合物をデザインするのに必要な情報を提供する。
【０２８２】
本発明に従って、ＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴ）の構造的結合ポケット配列に結合して、ブロモドメインの生物学的活性を低下させ、またはＢＥＴファミリーメンバーの細胞内局在化を妨害する化合物のデザインは、一般にいくつかの要素の考察を伴う。一実施形態では、化合物は、物理的および／または構造的に、少なくとも、ブロモドメインの構造的結合ポケット配列中の結合部位などのＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴ）の断片と結合する。この結合中で重要な非共有結合の分子相互作用としては、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、および静電相互作用が挙げられる。望ましくは、化合物は、それがブロモドメイン結合部位と直接結合するようにするコンフォメーションになる。化合物の特定部分はこれらの結合に直接関与しなくてもよいが、実体のこれらの部分は、分子の全体的コンフォメーションになおも影響を与えてもよい。これは次に、化合物の効力に対して顕著な影響を及ぼしてもよい。このようなコンフォメーション要件としては、結合部位の全部または一部に対する化合物の全体的三次元構造および配向、または結合部位またはそのホモログと直接相互作用するいくつかの化合物を含んでなる官能基間の間隔が挙げられる。
【０２８３】
ブロモドメイン結合部位に対する化合物の潜在的阻害または結合効果は、その実際の合成および試験に先だって、コンピュータモデル化技術の使用によって分析してもよい。所与の化合物の理論的構造が、それと標的結合部位間の不十分な相互作用および結合を示唆する場合、化合物の試験は不必要になる。しかし、コンピュータモデル化が強力な相互作用を示唆する場合は、分子を合成してＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴ）の構造的結合ポケット配列と結合する能力について試験し、または例えば、新生物細胞中の細胞毒性をアッセイすることにより、ＢＥＴファミリーメンバーの生物学的活性低下をアッセイすることにより、またはＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴ）の細胞内局在化をアッセイすることにより、その生物学的活性について試験する。候補化合物は、その中で、化学実体または断片が、ブロモドメインの構造的結合ポケットと結合するそれらの能力についてスクリーニングされ選択される、一連のステップの手段によって計算的に評価してもよい。
【０２８４】
当業者は、化合物または断片が、ブロモドメイン結合部位と結合するそれらの能力についてスクリーニングされる、いくつかの方法の１つを使用することもある。このプロセスは、例えば、本明細書に記載されるＢＥＴファミリーメンバーの構造座標、または機械可読記憶媒体から作成される類似形状を画定するその他の座標に基づく、コンピュータスクリーン上での結合部位の目視検査に始まってもよい。次に選択された断片または化合物を多様な配向に配置させ、または前出のように定義された結合部位内にドッキングさせる。ドッキングは、ＱｕａｎｔａおよびＤＯＣＫなどのソフトウェアを使用して達成されてもよく、ＣＨＡＲＭＭおよびＡＭＢＥＲなどの標準分子力学力場によるエネルギー最小化と分子動力学が、それに続く。
【０２８５】
（例えば当該技術分野で公知でありおよび／または市販されおよび／または本明細書に記載されるような）専門コンピュータプログラムもまた、断片または化学実体の選択プロセスを助けてもよい。
【０２８６】
ひとたび適切な化学物質または断片が選択されたら、それらを単一化合物または複合体に組み立て得る。標的結合部位の構造座標に対する、コンピュータスクリーンに示される三次元画像上の断片の相互関係性の目視検査が、アセンブリーに先行してもよい。
【０２８７】
上述のように、断片または化学実体を一度に１つずつの段階的様式で、結合ポケット阻害剤の構築を進める代わりに、空の結合部位を使用して、または任意選択的に既知の阻害剤のいくつかの部分を含めて、阻害性またはその他の結合化合物を全体的にまたは「新規に」デザインしてもよい。当該技術分野で公知の多数の新規リガンドデザイン法があり、そのいくつかは市販される（例えばＴｒｉｐｏｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．から入手できるＬｅａｐＦｒｏｇ）。
【０２８８】
その他の分子モデル化技術もまた、本発明に従って用いてもよい（例えばＮ．Ｃ．Ｃｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３３，ｐｐ．８８３−８９４（１９９０）を参照されたい；Ｍ．Ａ．Ｎａｖｉａ  ａｎｄ  Ｍ．Ａ．Ｍｕｒｃｋｏ，”Ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ”，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２，ｐｐ．２０２−２１０（１９９２）；Ｌ．Ｍ．Ｂａｌｂｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，”Ａ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ−Ａｉｄｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ”，ｉｎ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．５，Ｋ．Ｂ．Ｌｉｐｋｏｗｉｔｚ  ａｎｄ  Ｄ．Ｂ．Ｂｏｙｄ，Ｅｄｓ．，ＶＣＨ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３３７−３８０（１９９４）もまた参照されたい；  Ｗ．Ｃ．Ｇｕｉｄａ，”Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｆｏｒ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｂａｓｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ”，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌｏｇｙ，，４，ｐｐ．７７７−７８１（１９９４）もまた参照されたい）。
【０２８９】
ひとたび化合物をデザインまたは選択したら、計算的評価によって、実体が結合部位に結合してもよい効率を試験し、最適化してもよい。
【０２９０】
化合物の変形エネルギーおよび静電相互作用を評価するための特定コンピュータソフトウェアは、当該技術分野で利用可能である。このような用途向けにデザインされたプログラムの例としては、ＡＭＢＥＲ；ＱＵＡＮＴＡ／ＣＨＡＲＭＭ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）などが挙げられる。これらのプログラムは、例えば市販のグラフィックスワークステーションを使用して実装されてもよい。その他のハードウェアシステムおよびソフトウェアパッケージは、当業者に知られている。
【０２９１】
別の技術は、例えば本明細書に記載されるような化合物の仮想ライブラリーのコンピュータシミュレーションによるスクリーニングを伴う（例えば実施例を参照されたい）。数千の化合物を迅速にスクリーニングし得て、（例えば合成および生体外または生体内試験による）さらなるスクリーニングのために、最良の仮想化合物を選択し得る。小分子データベースは、ＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴ）ブロモドメイン結合部位に、全体がまたは一部が結合し得る化学実体または化合物についてスクリーニングし得る。このスクリーニングでは、形状相補性によって、推定相互作用エネルギーによって、このような実体と結合部位との適合の質を判定してもよい。
【０２９２】
ａ）ブロモドメインの構造的結合ポケット配列中のアミノ酸残基の構造座標によって規定される、ＢＥＴファミリーメンバーの構造的結合ポケットを含んでなる分子または分子複合体の三次元表示；または
ｂ）前記アミノ酸の主鎖原子からの平均二乗偏差が、約２．０（より好適には１．５）Å以下である結合部位を含んでなる、前記分子または分子複合体のホモログの三次元表示を生成するためのコンピュータであって、前記コンピュータは、
（ｉ）、機械可読データによってコードされるデータ記憶物質を含んでなる機械可読データ記憶媒体；
（ｉｉ）前記機械可読データを処理するための命令を保存する作業メモリ；
（ｉｉｉ）前記機械可読データを処理して前記三次元表示にするための前記作業メモリおよび前記機械可読データ記憶媒体と接続している中央処理装置；および
（ｉｖ）前記三次元表示を示す、前記中央処理装置と接続しているディスプレーを含んでなり、前記データは、ＢＥＴファミリーメンバーの構造結合ポケット配列中のアミノ酸残基の構造座標の構造座標を含んでなる。実施例に記載されるように、コンピュータシミュレーションによる方法を使用して同定された化合物は、例えば、下述の「追加的なスクリーニング法」、または任意のその他の当該技術分野で公知の方法を使用して、生体外または生体内で任意選択的に試験してもよい。
【０２９３】
追加的スクリーニング方法
上述したように、本発明は、ブロモドメイン結合ポケットに結合して、新生物細胞中で細胞分化を誘導しまたは細胞増殖を低下させる、ＪＱ１、ならびにその他の置換化合物を含む、化合物の具体例を提供する。しかし本発明は、それに限定されない。本発明は、ＢＥＴファミリーメンバーと結合でき、新生物細胞にとって細胞毒性であり、ＢＥＴファミリーメンバーの生物学的活性を低下させ、またはＢＥＴファミリーメンバーの細胞内局在化を妨害する、（核酸、ペプチド、小分子阻害剤、および模倣剤を含む）作用物質を同定する単純な手段をさらに提供する。このような化合物はまた、新生物、炎症性疾患、肥満症、脂肪肝（ＮＡＳＨかそうでないもの）、糖尿病、アテローム性動脈硬化、動脈ステント閉塞、心不全、悪液質、移植片対宿主病、ブロモドメインと関連付けられている感染性疾患の治療または予防、寄生生物、マラリア、トリパノソーマの治療、および男性の妊性を低下させるのに有用なことが予期される。本発明の組成物のさらなる使用としては、臓器移植、再生医療のための細胞状態調節（すなわち細胞分化の促進または阻害による）、および多分化能促進における使用が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０２９４】
特に、本発明の特定の態様は、ＢＥＴファミリーメンバーポリペプチドの生物学的活性を低下させる作用物質が、新生物、炎症性疾患、肥満症、脂肪肝（ＮＡＳＨかそうでないもの）、糖尿病、アテローム性動脈硬化、動脈ステント閉塞、心不全、悪液質、移植片対宿主病、ブロモドメインと関連付けられている感染性疾患の治療または予防、寄生生物、マラリア、トリパノソーマの治療、および男性の妊性を低下させるための治療薬として恐らく有用であるという発見に、少なくとも部分的に基づく。本発明の組成物のさらなる使用としては、臓器移植、再生医療のための細胞状態調節（すなわち細胞分化の促進または阻害による）、および多分化能促進における使用が挙げられるが、これに限定されるものではない。特定の実施形態では、細胞増殖、細胞生存または細胞死をアッセイすることにより、本発明の化合物またはその他の作用物質の効果を分析する。別のアプローチでは、転写調節または延長に対する効果について、本発明の作用物質および化合物をアッセイする。新生物の成長、増殖、または侵襲性を低下させる本発明の作用物質および化合物は、新生物の治療または予防に有用であると同定される。さらに別の実施形態では、免疫応答性細胞、サイトカインまたはヒスタミン放出、または炎症性疾患の任意のその他のマーカーに対する効果について、本発明の化合物をアッセイする。
【０２９５】
ＢＥＴファミリーメンバーと特異的に結合する、またはＢＥＴファミリーメンバーの生物学的活性を低下させる、実質的に任意の作用物質を本発明の方法で用いてもよい。本発明の方法は、新生物の成長または増殖を低下させ、遅延させ、または安定化する、または炎症性疾患を治療または予防する、候補作用物質のハイスループット低コストスクリーニングに有用である。次にＢＥＴファミリーメンバーのブロモドメインと特異的に結合する候補作用物質を単離して、新生物の細胞増殖を低下させ、分化を誘導し、および／または新生物の細胞死を増大させるその能力に関する生体外アッセイまたは生体内アッセイで、活性について試験する。当業者は、細胞に対する候補作用物質の効果が、典型的に、候補作用物質に接触させなかった対応する対照細胞と比較されることを理解する。したがって、スクリーニング法は、候補作用物質に接触させた新生物細胞の増殖と、未処理対照細胞の増殖とを比較することを含む。
【０２９６】
別の実施形態では、候補作用物質で処理された細胞中のＢＥＴファミリーメンバーの発現または活性と、未処理対照サンプルとを比較して、接触させた細胞中のＢＥＴファミリーメンバーの生物学的活性を低下させる候補化合物を同定する。ポリペプチドの発現または活性は、ウエスタンブロット法、フローサイトメトリー、免疫細胞化学、磁性および／またはブロモドメイン特異的抗体被覆ビーズへの結合、原位置ハイブリダイゼーション、蛍光原位置ハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）、ＥＬＩＳＡ、マイクロアレイ分析、ＲＴ−ＰＣＲ、ノーザンブロット法、またはＢｒａｄｆｏｒｄアッセイやＬｏｗｒｙアッセイのような比色分析アッセイなどの当該技術分野で周知の手順によって比較し得る。
【０２９７】
一実施例では、新生物細胞を含有する培養液に、１つまたは複数の候補作用物質を様々な濃度で添加する。細胞中で発現されるＢＥＴファミリーメンバーの発現を低下させる作用物質は、本発明で有用と見なされ；このような作用物質は、例えば、新生物または炎症性疾患を防止し、遅延させ、改善し、安定化し、または治療する治療薬として使用されてもよい。ひとたび同定されたなら、本発明の作用物質（例えばブロモドメインと特異的に結合および／または拮抗する作用物質）を使用して、新生物、炎症性疾患、肥満症、脂肪肝（ＮＡＳＨかそうでないもの）、糖尿病、アテローム性動脈硬化、動脈ステント閉塞、心不全、悪液質、移植片対宿主病、ブロモドメインと関連付けられている感染性疾患を治療し、寄生生物、マラリア、トリパノソーマの治療、および男性の妊性を低下させてもよい。本発明の組成物のさらなる使用としては、臓器移植、再生医療のための細胞状態調節（すなわち細胞分化の促進または阻害による）、および多分化能促進における使用が挙げられるが、これに限定されるものではない。本発明の方法に従って同定された作用物質は、局所的にまたは全身的に送達されて、新生物、炎症性疾患、肥満症、脂肪肝（ＮＡＳＨまたはさもなければ）、糖尿病、アテローム性動脈硬化、動脈ステント閉塞、心不全、悪液質、移植片対宿主病、ブロモドメインと関連付けられている感染性疾患を治療し、寄生生物、マラリア、トリパノソーマの治療、および男性の妊性を低下させまたは臓器移植、再生医療のための細胞状態調節（すなわち細胞分化の促進または阻害による）での使用、または原位置多分化能を促進する。
【０２９８】
一実施形態では、代案として、候補作用物質の効果は、ウエスタンブロット法または免疫沈降法などと同じ一般的方法と標準免疫学的技術を使用して、ＢＥＴファミリーメンバーに対して特異的な抗体によって、ＢＥＴファミリーメンバーの生成レベルで測定される。例えば、免疫測定法を使用して、新生物細胞中のＢＥＴファミリーメンバーの発現を検出またはモニターしてもよい。一実施形態では、本発明は、ＢＥＴファミリーメンバーに結合して、生物学的活性をブロックしまたは細胞内局在化を阻害できる、（本明細書に記載されるように生成された）ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を同定する。ＢＥＴファミリーメンバーの細胞内局在化を妨害し、または生物学的活性を低下させる化合物は、特に有用と見なされる。ここでも、このような作用物質は、例えば、新生物または炎症性疾患を防止または治療する治療薬として使用されてもよい。
【０２９９】
代案として、またはこれに加えて、実施例に記載されるように、本発明のＢＥＴファミリーメンバー（例えばＢＲＤ２、ＢＲＤ３、ＢＲＤ４、およびＢＲＤＴ）と特異的に結合して拮抗するものを最初にアッセイし、引き続いて新生物細胞に対するそれらの効果を試験することで、候補化合物を同定してもよい。一実施形態では、候補作用物質の有効性は、ＢＥＴファミリーメンバーと相互作用するその能力に左右される。このような相互作用は、いくつもの標準結合技術および機能性アッセイ（例えば前出のＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．に記載されるもの）を使用して容易にアッセイし得る。例えば、候補化合物は、本発明のポリペプチドとの相互作用および結合について生体外で試験して、新生物細胞増殖を調節するその能力を任意の標準アッセイ（例えば本明細書に記載されるもの）によってアッセイしてもよい。一実施形態では、新生物細胞の分裂は、フローサイトメトリー分析を使用して、ＢｒｄＵ組み込みをアッセイすることにより判定される。別の実施形態では、ＢＥＴファミリーメンバーの発現が免疫組織化学的にモニターされる。
【０３００】
潜在的ブロモドメイン拮抗薬としては、有機分子、ペプチド、ペプチド模倣剤、ポリペプチド、核酸リガンド、アプタマー、およびＢＥＴファミリーメンバーブロモドメインに結合してその活性を低下させる抗体が挙げられる。特定の一実施例では、ＢＥＴファミリーメンバーに結合する候補化合物は、クロマトグラフィーベースの技術を使用して同定されてもよい。例えば、本発明の組換えＢＥＴファミリーメンバーポリペプチドは、遺伝子改変されてポリペプチドを発現する細胞から、標準技術によって精製してもよく、またはひとたび精製ペプチドをカラムに固定化したら、化学合成してもよい。次に候補作用物質の溶液をカラムに通過させ、ＢＥＴファミリーメンバーポリペプチドに結合し、カラム上に固定化されるその能力に基づいて、ＢＥＴファミリーメンバーポリペプチドまたはその断片と特異的に結合する作用物質を同定する。作用物質を単離するために、カラムを洗浄して非特異的に結合した分子を除去し、次に対象の作用物質をカラムから遊離させて収集する。この方法（または任意のその他の適切な方法）によって単離された作用物質は、所望ならば、（例えば高速液体クロマトグラフィーによって）さらに精製してもよい。これに加えて、これらの候補作用物質は、新生物細胞の増殖または生存度を低下させるそれらの能力について試験してもよい。このアプローチによって単離される作用物質はまた、例えば、新生物、炎症性疾患、肥満症、脂肪肝（ＮＡＳＨかそうでないもの）、糖尿病、アテローム性動脈硬化、動脈ステント閉塞、心不全、悪液質、移植片対宿主病、ブロモドメインと関連付けられている感染性疾患を治療または防止し、寄生生物、マラリア、トリパノソーマの治療、および男性の妊性を低下させまたは臓器移植における使用、再生医療のための細胞状態調節（すなわち細胞分化の促進または阻害による）、および多分化能を促進する治療薬として使用されてもよい。１ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、１μＭまたは１０μＭ以下の親和定数でＢＥＴファミリーメンバーに結合すると同定される化合物は、本発明で特に有用と見なされる。
【０３０１】
試験化合物および抽出物
特定の実施形態では、ＢＥＴファミリーメンバー拮抗薬（例えばブロモドメインと特異的に結合して活性を低下させる作用物質）は、天然物または合成（または半合成）抽出物の大きなライブラリーから、または化学物質ライブラリーまたはポリペプチドまたは核酸ライブラリーから、当該技術分野で公知の方法に従って同定される。創薬研究開発分野の当業者は、試験抽出物または化合物の正確な起源が、本発明のスクリーニング手順に重要でないことを理解する。スクリーニングで使用される作用物質は、新生物または炎症性疾患の治療薬として知られているものを含んでもよい。代案としては、本明細書に記載される方法を使用して、実質的にいくつもの未知の化学物質の抽出物または化合物をスクリーニングし得る。このような抽出物または化合物例としては、植物ベース、真菌ベース、原核生物ベースまたは動物ベースの抽出物、発酵ブロス、および合成化合物、ならびに既存ポリペプチドの修飾が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０３０２】
細菌、真菌、植物、および動物抽出物の形態の天然ポリペプチドのライブラリーは、Ｂｉｏｔｉｃｓ（Ｓｕｓｓｅｘ，ＵＫ）、Ｘｅｎｏｖａ（Ｓｌｏｕｇｈ，ＵＫ）、Ｈａｒｂｏｒ  Ｂｒａｎｃｈ  Ｏｃｅａｎｇｒａｐｈｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（Ｆｔ．Ｐｉｅｒｃｅ，Ｆｌａ．）、およびＰｈａｒｍａＭａｒ，Ｕ．Ｓ．Ａ．（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）を含む、いくつかの供給元から商業的に入手できる。このようなポリペプチドを当該技術分野で公知の本明細書に記載される方法を使用して修飾し、タンパク質形質導入ドメインを包含させ得る。これに加えて、所望ならば、当該技術分野で公知の方法に従って、例えば標準抽出法および分画法によって、天然のおよび合成的に生成したライブラリーを生成する。分子ライブラリー合成法の例は、例えば、ＤｅＷｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６９０９，１９９３；Ｅｒｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：１１４２２，１９９４；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８，１９９４；Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：１３０３，１９９３；Ｃａｒｒｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９，１９９４；Ｃａｒｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０６１，１９９４；およびＧａｌｌｏｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３，１９９４などのように、当該技術分野に見られる。さらに、所望ならば、任意のライブラリーまたは化合物は、標準化学的、物理的、または生化学的方法を使用して、容易に修飾される。
【０３０３】
糖類ベース、脂質ベース、ペプチドベース、および核酸ベースの化合物を含むが、これに限定されるものではない、いくつものポリペプチド、化合物のランダムまたは指向性合成（例えば半合成または全合成）を生じさせる多数の方法が利用できる。合成化合物ライブラリーは、Ｂｒａｎｄｏｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（Ｍｅｒｒｉｍａｃｋ，Ｎ．Ｈ．）およびＡｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，Ｗｉｓ．）から商業的に入手できる。代案としては、候補化合物として使用される化合物は、当業者に知られている標準合成技術および技法を使用して、容易に入手できる出発原料から合成し得る。本明細書に記載される方法で同定される化合物を合成するのに有用な合成化学転換および保護基手法（保護および脱保護）は、当該技術分野で公知であり、例えば、Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）；Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ  ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９１）；Ｌ．Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｆｉｅｓｅｒ，Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓＲｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９４）；およびＬ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ，ｅｄ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９５）、およびそれに続く版などで記載されるものが挙げられる。
【０３０４】
化合物ライブラリーは、溶液中（例えばＨｏｕｇｈｔｅｎ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ１３：４１２−４２１，１９９２）、またはビーズ上（Ｌａｍ，Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：８２−８４，１９９１）、チップ上（Ｆｏｄｏｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６４：５５５−５５６，１９９３）、細菌上（Ｌａｄｎｅｒ，米国特許第５，２２３，４０９号明細書）、胞子上（Ｌａｄｎｅｒ  米国特許第５，２２３，４０９号明細書）、プラスミド上（Ｃｕｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：１８６５−１８６９，１９９２）またはファージ上（Ｓｃｏｔｔ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３８６−３９０，１９９０；Ｄｅｖｌｉｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：４０４−４０６，１９９０；Ｃｗｉｒｌａ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８７：６３７８−６３８２，１９９０；Ｆｅｌｉｃｉ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１−３１０，１９９１；Ｌａｄｎｅｒ、前出）で提示されてもよい。
【０３０５】
これに加えて、創薬研究開発当業者は、活性が既知である材料の複製または反復の脱複製（例えば分類学的脱複製、生物学的脱複製、および化学的脱複製、または任意のその組み合わせ）または排除を可能ならいつでも用いるべきであることを容易に理解する。粗抽出物が、ＢＥＴファミリーメンバーブロモドメイン結合活性を有することが分かった場合、観察された効果の原因である分子成分を単離するために、陽性のリード抽出物のさらなる分画が必要である。したがって、抽出、分画、および精製過程の目標は、粗抽出物中にある、新生物細胞の増殖または生存度を低下させる化学実体の注意深い特性解析と同定である。このような不均一抽出物を分画および精製する方法は、当該技術分野で公知である。所望ならば、治療薬として有用なことが示される化合物は、当該技術分野で公知の方法に従って化学的に修飾される。
【０３０６】
本発明は、本明細書の式の化合物を含んでなる医薬組成物の治療的有効量を対象（例えばヒトなどの哺乳類）に投与するステップを含んでなる、疾患および／または障害またはその症状を治療する方法を提供する。したがって、一実施形態は、新生物疾患または障害またはその症状を患っている、またはそれに罹りやすい対象を治療する方法である。方法は、疾患または障害が治療されるような条件下において、疾患または障害またはその症状を治療するのに十分な本明細書の化合物の量の治療量を哺乳類に投与するステップを含む。
【０３０７】
本明細書の方法は、このような効果を生じると本明細書に記載される、本明細書に記載される化合物または組成物の有効量を（このような治療を必要とすると同定された対象を含む）対象に投与するステップを含む。このような治療を必要とする対象の同定は、対象または医療従事者が判断し得て、主観的（例えば意見）または客観的であり得る（例えば試験または診断法により測定可能である）。
【０３０８】
本発明の治療法（予防的治療を含む）は、一般に、本明細書の式の化合物などの本明細書の化合物の治療的有効量を哺乳類を含む、特にヒトである、それを必要とする対象（例えば動物、ヒト）に投与するステップを含んでなる。このような治療は、適切には、疾患、障害、またはその症状を患っている、有する、それに罹りやすい、またはそのリスクがある対象、特にヒトに投与される。「リスクがある」対象の判定は、診断試験による、または対象またはヘルスケア提供者の意見（例えば遺伝子試験、酵素またはタンパク質マーカー、Ｍａｒｋｅｒ（本明細書で定義される）、家族歴など）による、任意の客観的または主観的判定によって下し得る。本明細書の化合物は、新生物または炎症が関係しているとされる、任意のその他の障害の治療において使用してもよい。
【０３０９】
一実施形態では、本発明は、治療経過をモニターする方法を提供する。本方法は、診断マーカー（Ｍａｒｋｅｒ）（例えば本明細書の化合物によって調節される本明細書で記述される任意の標的、タンパク質またはその指示薬など）、または新生物と関連付けられている障害またはその症状を患っている、またはそれに罹りやすい対象中における診断測定（例えばスクリーニング、アッセイ）のレベルを測定するステップを含み、疾患またはその症状を治療するのに十分な治療量の本明細書の化合物が、対象に投与される。本方法で測定されるＭａｒｋｅｒのレベルを健態対照者またはその他の患者のどちらかの既知のＭａｒｋｅｒレベルと比較して、対象の疾患状態を確立し得る。好ましい実施形態では、第１のレベル測定よりも後の時点で、対象中のＭａｒｋｅｒの第２のレベルを測定し、２つのレベルを比較して、疾患の経過または治療法の有効性をモニターする。特定の好ましい実施形態では、本発明に従った治療開始に先だって、対象中のマーカーの治療前レベルを測定し；次にこのＭａｒｋｅｒの治療前レベルを治療開始後の対象中のＭａｒｋｅｒレベルと比較して、治療の有効性を判定し得る。
【０３１０】
治療薬
別の実施形態では、本明細書に記載される方法を使用して、薬理効果を有することが発見された作用物質（例えばＪＱ１または本明細書に記述される式の化合物）は、薬剤として、または合理的薬物設計による既存化合物の構造的修飾の情報として有用である。このような方法は、新生物、炎症性疾患、肥満症、脂肪肝（ＮＡＳＨかそうでないもの）、糖尿病、アテローム性動脈硬化、動脈ステント閉塞、心不全、悪液質、移植片対宿主病に対する効果を有し、ブロモドメインと関連付けられている感染性疾患、寄生生物、マラリア、トリパノソーマの治療、および男性の妊性を低下させまたは臓器移植における使用、再生医療のための細胞状態調節（すなわち細胞分化の促進または阻害による）、および多分化能を促進する作用物質をスクリーニングするのに有用である。
【０３１１】
治療用途では、本明細書で開示される方法を使用して同定された組成物または作用物質は、例えば生理的食塩水などの薬学的に許容可能な緩衝液中に配合して、全身投与してもよい。好ましい投与経路としては、例えば、患者中で連続的な持続性薬剤レベルを提供する、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、または皮内注射が挙げられる。ヒト患者またはその他の動物の治療は、生理学的に許容可能なキャリア中の本明細書で同定された治療薬の治療的有効量を使用して実施される。適切なキャリアおよびそれらの処方については、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｂｙ  Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎに記載される。投与される治療薬の量は、投与様式、患者の年齢および体重、新生物、炎症性疾患、肥満症、脂肪肝（ＮＡＳＨかそうでないもの）、糖尿病、アテローム性動脈硬化、動脈ステント閉塞、心不全、悪液質、移植片対宿主病、ブロモドメインと関連付けられている感染性疾患の臨床症状、寄生生物、マラリア、トリパノソーマの治療、および男性の妊性を低下させまたは臓器移植における使用、再生医療のための細胞状態調節（すなわち細胞分化の促進または阻害による）、および多分化能の促進に応じて変動する。一般に、量は、このような疾患または状態と関連付けられているその他の疾患の治療で使用されるその他の作用物質で使用される量の範囲内であるが、場合によっては、化合物の特異性増大のためにより少ない量が必要とされる。化合物は、当業者に知られている方法による判定で、またはＢＥＴファミリーメンバーの発現または生物学的性を測定する任意のアッセイを使用した判定で、新生物細胞に細胞毒性であり、ＢＥＴファミリーメンバーの生物学的活性を低下させ、または新生物細胞の増殖、生存、または侵襲性を低下させる投与量で投与される。別の実施形態では、化合物は、炎症性疾患の炎症または症状を低下させる投与量で投与される。
【０３１２】
炎症性疾患
本明細書で記述される式の化合物を含む本発明の組成物は、炎症を低下させるのに、そして炎症性疾患の治療に有用である。炎症は、通常、感染症または細胞損傷または組織損傷に応えた、免疫系に関与する複雑な一連の分子シグナルの結果である。炎症は、常態では身体の治癒開始を構成する；しかし適切に調節されない場合、炎症は、関節炎などの慢性疾患をもたらし得る。
【０３１３】
「炎症応答」または「免疫応答」は、血流量および免疫細胞流入および分泌の増大の結果として生じる、発赤、温感、腫脹、疼痛、および機能喪失によって特徴付けられる、傷害、感染性または刺激に対する生体組織の反応を意味する。炎症は、侵入感染性微生物に対する身体の反応であり、患部への血流量の増大、白血球細胞を誘引する化学物質の放出、血漿流量の増大、および壊死組織片を片付ける単球の到着をもたらす。炎症応答を刺激する任意のものが、炎症性であると考えられている。
【０３１４】
先天性カスケード、または先天性免疫応答は、傷害または感染部位における走化性シグナル伝達に応えて免疫系によって展開され、白血球、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好酸球、および好塩基球、ならびに好中球などの貪食細胞、マクロファージ、および樹状細胞などの細胞の浸潤によって特徴付けられる非特異的応答である。前述の細胞によって分泌されるヒスタミンや様々なサイトカインなどの分子；および循環タンパク質の補体系が炎症に寄与する。
【０３１５】
疾患は炎症によって特徴付けられ、ヒトの顕著な病因および死因である。
【０３１６】
特定の実施形態では、炎症性疾患はリウマチ様障害である。リウマチ様障害は、本明細書の用法では、結合組織構造、特に関節、靱帯、および腱の炎症、時に変性および／または代謝異常によって特徴付けられる、任意の多様な炎症性疾患を指す。リウマチ様障害は、典型的に疼痛、硬直、および／または運動制限をもたらす。影響を受ける特定の組織または組織は、リウマチ様障害に左右される。例示的なリウマチ様障害としては、関節リウマチ、若年性関節炎、滑液包炎、脊椎炎、痛風、強皮症、スティル病、および脈管炎が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０３１７】
特定の実施形態では、リウマチ様障害は関節リウマチであり、関節リウマチの「治療」としては、１つまたは複数の関節リウマチ症状の重篤性、頻度、および／または出現を低下させることが挙げられる。別の実施形態では、リウマチ様障害は、若年性関節炎、滑液包炎、脊椎炎、痛風、強皮症、スティル病、または脈管炎である。本発明の方法は、これらの病状の１つまたは複数の症状のいずれかの重篤性、頻度、および／または出現を低下させる。
【０３１８】
様々な実施形態では、関節炎またはその他の炎症性疾患の症状としては、発赤、腫脹、炎症、発熱、関節可動域低下、および疼痛が挙げられる。症状の出現または重篤性の低下例としては、腫脹関節数の低下、疼痛関節数の低下、鎮痛剤依存度の低下、患者による疼痛の頻度または重篤性の自己評価の低下、運動の自由度の増大、運動性の増大、発熱の低下、および日課遂行能力の増大が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０３１９】
小膠細胞および星状細胞の活性化と、様々な炎症性メディエータの局所発現とによって特徴付けられる神経炎症は、外傷、脳卒中、感染性、または神経変性によるかどうかに関わらず、脳損傷に対する基礎反応である。この局部組織応答は、修復および回復過程の一部と考えられる。末梢疾患における多数の炎症状態と同様に、神経炎症は、ＣＮＳ障害の病態生理に寄与し得る。
【０３２０】
特定の実施形態では、炎症性疾患は炎症性皮膚疾患である。炎症性皮膚疾患としては、酒さ、アトピー性皮膚炎、座瘡、脂漏症皮膚炎、および蜂巣炎が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０３２１】
別の実施形態では、炎症性疾患は、虚血性または炎症性心血管疾患である。炎症性心血管疾患または障害は、閉塞性疾患または障害、アテローム性動脈硬化、心臓弁疾患、狭窄、再狭窄、ステント内狭窄、心筋梗塞、冠動脈疾患、急性冠動脈症候群、うっ血性心不全、狭心症、心筋虚血、または血栓症であることもあるが、これに限定されるものではない。別の実施形態では、部位は、ＣＮＳまたは腎臓などの虚血性傷害の二次部位である。
【０３２２】
別の実施形態では、炎症性疾患は、虚血性または炎症性腸疾患である。
【０３２３】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、小腸および大腸を冒す原因不明の慢性再発性炎症性疾患を指し、クローン病（ＣＤ）と潰瘍性大腸炎（ＵＣ）の双方が含まれる。クローン病は、腸管の任意の部分に影響し得るが、通常、遠位小腸および／または大腸に影響する。潰瘍性大腸炎は大腸のみに影響し、通常、直腸または遠位大腸に限定される。ＣＤおよびＵＣマウスモデルの研究は、これらの疾患の双方が、粘膜細菌叢中の抗原に対する粘膜の免疫応答調節不全に起因することを強力に示唆する（Ｓａｒｔｏｒ，Ｒ．Ｂ．（１９９５）．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ  ２４，４７５−５０７）（ＳｔｒｏｂｅｒＷ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４９５−５４９）。
【０３２４】
潰瘍性大腸炎または分類不能大腸炎は、その中で、以下の１つまたは複数の組織学的特徴が検出可能である、炎症状態によって特徴付けられる、大腸の病状を指す：上皮細胞損失とパッチ状潰瘍化の存在によって特徴付けられる表在性炎症、ムチン産生杯細胞の明白な枯渇、および管状腺密度の低下。これに加えて、固有層内では、腸管腔内への細胞滲出に付随する、リンパ球および顆粒球（後者は大部分は好中球、そしてより少ない程度に好酸球からなる）からなる混合炎症細胞浸潤物が観察される。また、粘膜下レベルがわずかな炎症細胞と共に顕著な浮腫を示し得る一方で、外面筋肉層内では、当業者は炎症の形跡をほとんどまたは全く見ない。例えばＢｏｉｒｉｖａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １８８：１９２９−１９３９（１９９８）を参照されたい。臨床症状としては、下痢、直腸脱、体重減少、腹痛、および脱水が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０３２５】
クローン病は、消化管の任意の部分を冒す炎症を指すが、ほとんどの場合、小腸末端部および／または隣接する上行結腸が冒される。炎症は、正常粘膜領域と交互する炎症領域からなる「飛び越し病変」によって特徴付けられることが多い。クローン病の腸患部は、紅斑、浮腫、および脆砕性増大を特徴とする；時には、腸は狭窄し、他の腹部臓器にまたは腸壁に付着する。罹患した腸と、皮膚を含む他の構造との間の瘻孔は、稀ではない。クローン病の組織の顕微鏡検査は、上皮びらん、ムチン産生杯細胞の損失、および粘膜全層に影響する広範なリンパ球浸潤を明らかにし；この浸潤は、時折、肉芽腫形成の徴候である巨細胞を含有する。炎症が、長期間（慢性的に）存在する場合、それは時折、瘢痕（線維症）を引き起こし得る。瘢痕組織は、典型的に、健康な組織程に可撓性でない。したがって、腸内に線維症が生じた場合、瘢痕は病変腸区域の通路（管腔）の幅を狭めることもある。これらの締め付けられた領域は、狭窄と称される。狭窄は、狭められた領域を腸内容物が通過するのをどの程度妨害するかに応じて、軽度または重篤であってもよい。クローン病の臨床徴候／症状としては、悪液質、体重減少、成長不全、腹痛、排出瘻孔、直腸脱、および脱水が挙げられ得るが、これに限定されるものではない。
【０３２６】
特定の実施形態では、炎症性肝疾患または障害である。例えば、炎症性肝疾患または障害は、自己免疫肝炎、肝硬変、および胆汁性肝硬変からなる群から選択される。
【０３２７】
医薬組成物の処方
新生物または炎症性疾患を治療するための化合物の投与は、その他の構成要素都の組み合わせで、新生物または炎症性疾患を改善し、低下させ、または安定化するのに効果的な治療薬濃度をもたらす、任意の適切な手段によってもよい。化合物は、任意の適切なキャリア物質中にあらゆ適切な量で含有されてもよく、通常、組成物総重量の１〜９５重量％の量で存在する。組成物は、非経口（例えば皮下、静脈内、筋肉内、または腹腔内）投与経路に適した剤形で提供されてもよい。医薬組成物は、従来の製薬慣行に従って調合してもよい（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（２０ｔｈ  ｅｄ．），ｅｄ．Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００およびＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｅｄｓ．Ｊ．Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ  ａｎｄ  Ｊ．Ｃ．Ｂｏｙｌａｎ，１９８８−１９９９，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照されたい）。
【０３２８】
ヒト投与量は、最初に、マウスで使用される化合物量の外挿によって決定し得て、当業者は認識するように、これは動物モデルと比較してヒトのための投与量を変更する技術分野におけるルーチンである。特定の実施形態では、投与量が、約１μｇ化合物／Ｋｇ体重〜約５０００ｍｇ化合物／Ｋｇ体重；または約５ｍｇ／Ｋｇ体重〜約４０００ｍｇ／Ｋｇ体重または約１０ｍｇ／Ｋｇ体重〜約３０００ｍｇ／Ｋｇ体重；または約５０ｍｇ／Ｋｇ体重〜約２０００ｍｇ／Ｋｇ体重；または約１００ｍｇ／Ｋｇ体重〜約１０００ｍｇ／Ｋｇ体重；または約１５０ｍｇ／Ｋｇ体重〜約５００ｍｇ／Ｋｇ体重の間で変動してもよいことが予期される。別の実施形態では、この用量は、約１、５、１０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１０５０、１１００、１１５０、１２００、１２５０、１３００、１３５０、１４００、１４５０、１５００、１６００、１７００、１８００、１９００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、または５０００ｍｇ／Ｋｇ体重であってもよい。別の実施形態では、用量は、約５ｍｇ化合物／Ｋｇ体重〜約２０ｍｇ化合物／Ｋｇ体重の範囲内であってもよいことが想定される。別の実施形態では、用量は、約８、１０、１２、１４、１６または１８ｍｇ／Ｋｇ体重であってもよい。もちろん、この投与量量は、このような治療プロトコルで慣例的に行われるように、初期臨床試験の結果と特定患者のニーズに応じて、上向きまたは下向きに調節してもよい。
【０３２９】
本発明に従った医薬組成物は、投与時に実質的に即座に、または投与後の任意の所定時間または期間に、活性化合物を放出するように調合してもよい。後者の種類の組成物は、一般に放出制御製剤として知られ、以下が挙げられる（ｉ）体内で長期にわたり実質的に定濃度の薬剤をもたらす製剤；（ｉｉ）所定の遅延時間後に、体内で長期にわたり実質的に定濃度の薬剤をもたらす製剤；（ｉｉｉ）活性物質の血漿レベルのゆらぎ（鋸歯状動態パターン）と関連付けられている望ましくない副作用を同時に最小化しながら、体内で比較的一定した効果的レベルを保つことで、所定期間中に作用を維持する製剤；（ｉｖ）例えば、胸線に隣接または接触する、放出制御組成物の空間配置によって、作用を局在化させる製剤；（ｖ）用量が例えば１週間または２週間毎に投与されるような、便利な投与ができるようにする製剤；および（ｖｉ）治療薬を特定の細胞型（例えば新生物細胞）に送達する、キャリアまたは化学物質誘導体を使用することで、新生物または炎症性疾患を標的とする製剤。いくつの用途では、放出制御製剤は、日中に血漿レベルを治療レベルに保つための頻繁な投与に対する必要性をなくす。
【０３３０】
放出速度が、問題になっている化合物の代謝率を補って余りある、放出制御を得るために、いくつかのストラテジーを追究し得る。一例では、放出制御は、例えば、様々な種類の放出制御組成物およびコーティングを含む、様々な処方パラメータおよび成分の適切な選択によって得られる。したがって、治療薬は、適切な賦形剤と共に医薬組成物に調合され、それは投与時に、治療薬を制御された様式で放出する。実施例としては、一単位または複数単位の錠剤またはカプセル組成物、油剤、懸濁液、エマルション、マイクロカプセル、微小球、分子複合体、ナノ粒子、パッチ、およびリポソームが挙げられる。
【０３３１】
非経口組成物
医薬組成物は、投薬形態または製剤での注射、輸液または移植（皮下、静脈内に、筋肉内、腹腔内、など）によって、または従来の無毒の薬学的に許容可能なキャリアおよびアジュバントを含有する適切な送達デバイスまたはインプラントを介して、非経口的に投与してもよい。このような組成物の処方および調製は、製剤処方当業者に周知である。処方は、前出のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙにある。
【０３３２】
非経口用の組成物は、単位用量形態（例えば単回投与アンプル）で、またはその中に適切な保存料が添加されても良い、数回の用量を含有するバイアルで提供されてもよい（下記参照）。組成物は、溶液、懸濁液、エマルション、輸液用器具、または埋め込み用送達デバイスの形態であってもよく、またはそれは、使用前に水または別の適切なビヒクルで戻される乾燥粉末として提示されてもよい。新生物または炎症性疾患を緩和しまたは改善する活性薬剤の他に、組成物は、適切な非経口的に許容可能なキャリアおよび／または賦形剤を含んでもよい。活性治療薬は、放出制御のために、微小球、マイクロカプセル、ナノ粒子、リポソームなどに組み込まれてもよい。さらに、組成物は、懸濁化剤、可溶化剤、安定化剤、ｐＨ調節剤、浸透圧調節剤、および／または分散剤を含んでもよい。
【０３３３】
上述の通り、本発明に従った医薬組成物は、無菌注射に適した形態であってもよい。このような組成物を調製するために、適切な活性抗新生物治療薬を非経口的に許容可能な液体ビヒクルに溶解または懸濁する。用いてもよい許容可能ビヒクルおよび溶剤は、水、適量の塩酸または水酸化ナトリウムまたは適切な緩衝液の添加によって適切なｐＨに調節された水、１，３−ブタンジオール、リンゲル液、および等張の塩化ナトリウム溶液とデキストロース溶液である。水性製剤は、１つまたは複数の保存料（例えばメチル、エチルまたはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート）もまた含有してもよい。場合によっては、化合物の１つが難溶性またはわずかに水溶性であれば、溶解促進剤または可溶化剤を添加し得て、または溶媒に１０〜６０％ｗ／ｗのプロピレングリコールなどを含めることもできる。
【０３３４】
放出制御非経口組成物
放出制御非経口組成物は、水性懸濁液、微小球、マイクロカプセル、磁性微小球、油剤、油懸濁液、またはエマルションの形態であってもよい。代案としては、活性薬剤は、生体適合性キャリア、リポソーム、ナノ粒子、インプラント、または輸液用器具に組み込まれてもよい。
【０３３５】
微小球および／またはマイクロカプセル調製品で使用するための材料は、例えばポリガラクチン、ポリ−（イソブチルシアノアクリレート）、ポリ（２−ヒドロキシエチル−Ｌ−グルタミン）、およびポリ（乳酸）などの生分解性／生体内分解性のポリマーである。放出制御非経口製剤を処方する際に使用してもよい生体適合性キャリアは、炭水化物（例えばデキストラン）、タンパク質（例えばアルブミン）、リポタンパク、または抗体である。インプラントで使用するための材料は、非生分解性（例えばポリジメチルシロキサン）、または生分解性（例えばポリ（カプロラクタム）、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）またはポリ（オルトエステル）またはその組み合わせ）であり得る。
【０３３６】
経口使用のための固体剤形
経口使用のための製剤としては、無毒の薬学的に許容可能な賦形剤との混合物中の活性成分を含有する錠剤が挙げられる。このような製剤は、当業者に知られている。賦形剤は例えば、不活性希釈剤または増量剤（例えばスクロース、ソルビトール、糖、マンニトール、微結晶セルロース、ジャガイモデンプンを含むデンプン類、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、またはリン酸ナトリウム）；顆粒化剤および崩壊剤（例えば、微結晶セルロースを含むセルロース誘導体、ジャガイモデンプンを含むデンプン、クロスカルメロースナトリウム、アルギン酸塩、またはアルギン酸）；結合剤（例えば、スクロース、グルコース、ソルビトール、アカシア、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、デンプン、α化デンプン、微結晶セルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、またはポリエチレングリコール）；および平滑剤、流動促進剤、および粘着防止剤（例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、水素化植物油、または滑石）であってもよい。その他の薬学的に許容可能な賦形剤は、着色剤、着香剤、可塑剤、湿潤剤、緩衝剤などであり得る。
【０３３７】
錠剤は、未被覆であってもよく、またはそれらは公知の技術によって被覆されて、任意選択的に、胃腸管内における崩壊および吸収を遅延させ、それによってより長期間にわたり持続性作用を提供する。コーティングは、（例えば放出制御製剤を達成するために）所定のパターンで活性薬剤を放出するように適合されてもよく、またはそれは胃通過後まで、活性薬剤を放出しないように適合されてもよい（腸溶コーティング）。コーティングは、糖コーティング、フィルムコーティング（例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アクリレート共重合体、ポリエチレングリコールおよび／またはポリビニルピロリドンベース）、または腸溶コーティング（例えばメタクリル酸共重合体、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、酢酸コハク酸メチルセルロースヒドロキシプロピル、ポリビニルアセテートフタレート、シェラック、および／またはエチルセルロースベース）であってもよい。さらに、例えばモノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリルなどの時間遅延材料もまた用いてもよい。
【０３３８】
固体錠剤組成物は、望まれない化学変化（例えば活性治療剤の放出前の化学分解）から組成物を保護するように適合されたコーティングを含んでもよい。コーティングは、前出のＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙに記載されている様式と同じようにして、固体剤形上に塗布してもよい。
【０３３９】
少なくとも２つの治療薬を錠剤中で一緒に混合してもよく、または分割してもよい。一例では、第２の治療薬のかなりの部分が第１の治療薬の放出前に放出されるように、第１の活性抗新生物治療薬が錠剤内部に、第２の活性治療薬が外側に含有される。
【０３４０】
経口使用のための製剤は、チュアブル錠として、または活性成分が不活性固体希釈剤（例えばジャガイモデンプン、乳糖、微結晶セルロース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリン）と混合される硬質ゼラチンカプセルとして、または活性成分が、例えば、落花生油、流動パラフィン、またはオリーブ油などの水または油媒質と混合される、軟質ゼラチンカプセルとして提示されてもよい。粉末および顆粒は、錠剤およびカプセルについて上述された成分を使用して、例えばミキサー、流動床装置または噴霧乾燥装置を使用して、従来の様式で調製してもよい。
【０３４１】
放出制御経口投薬形態
経口使用のための放出制御組成物は、例えば、活性物質の溶出および／または拡散を制御することで、活性抗新生物または抗炎症性治療薬を放出するように構築されてもよい。溶出または拡散放出制御は、錠剤、カプセル、ペレットの適切なコーティングによって、または化合物の顆粒製剤によって、または化合物を適切なマトリックスに組み込むことによって達成し得る。放出制御コーティングとしては、上述の１つまたは複数のコーティング物質および／または、例えば、シェラック、蜜蝋、グリコワックス、水素化ヒマシ油、カルナウバ蝋、ステアリルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル、パルミトステアリン酸グリセリン、エチルセルロース、アクリル樹脂、ｄｌ−ポリ乳酸、酢酸酪酸セルロース、ポリ塩化ビニル、ポリ酢酸ビニル、ビニルピロリドン、ポリエチレン、ポリメタクリレート、メタクリル酸メチル、２−ヒドロキシメタクリレート、メタクリレートハイドロゲル、１，３ブチレングリコール、エチレングリコールメタクリレート、および／またはポリエチレングリコールが挙げられる。放出制御マトリックス製剤中では、マトリックス材は、例えば、水和メチルセルロース、カルナウバ蝋およびステアリルアルコール、カルボポル９３４、シリコーン、トリステアリン酸グリセリル、アクリル酸メチル−メタクリル酸メチル、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、および／またはハロゲン化フルオロカーボンもまた含んでもよい。
【０３４２】
１つまたは複数の治療用化合物を含有する放出制御組成物はまた、浮揚性錠剤またはカプセル（すなわち、経口投与時に、一定時間胃内容物上部に浮遊する錠剤またはカプセル）の形態であってもよい。化合物の浮揚性錠剤処方は、化合物と賦形剤の混合物をヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、またはヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの２０〜７５％ｗ／ｗの親水コロイドと共に顆粒化することで調製し得る。次に得られた顆粒を錠剤に圧縮し得る。胃液との接触時に、錠剤はその表面周辺に、実質的に不透水性のゲルバリアを形成する。このゲルバリアは、１未満の密度の維持に荷担し、それによって錠剤が胃液中で浮揚性のままであるようにする。
【０３４３】
併用療法
任意選択的に、抗新生物または抗炎症性治療薬は、当該技術分野で公知の任意のその他の標準抗新生物または抗炎症性治療法と組み合わせて投与してもよい；このような方法は当業者に知られており、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｂｙ  Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎに記載される。所望ならば、本発明の作用物質（例えばＪＱ１、本明細書で記述される式の化合物、およびその誘導体）は、外科手術、放射線療法、または化学療法を含むが、これに限定されるものではない任意の従来の抗新生物治療法と組み合わせて投与される。好ましい実施形態では、本発明の化合物は、エピジェネティックなまたは転写調節因子（例えばＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣ阻害剤）、リジンメチルトランスフェラーゼ阻害剤）と組み合わせて、有糸分裂阻害剤（例えばタキサン、ビンカアルカロイド）、ホルモン受容体調節因子（例えばエストロゲン受容体調節因子、アンドロゲン受容体調節因子）、細胞シグナル伝達経路阻害剤（例えばチロシンキナーゼ阻害剤）、タンパク質安定性の調節因子（プロテアソーム阻害剤）、ｈｓｐ９０阻害剤、従来の化学療法薬、グルココルチコイド、全トランス型レチノイン酸または分化を促進するその他の作用物質と組み合わせて、投与される。
【０３４４】
キットまたは医薬品システム
本組成物は、新生物または炎症性疾患の改善に使用されるキットまたは医薬品システムに組み立ててもよい。本発明のこの態様に従ったキットまたは医薬品システムは、その中に、バイアル、チューブ、アンプル、ボトルなどの１つまたは複数の収容手段を厳重に密封して有する、箱、カートン、筒などの運搬手段を含んでなる。本発明のキットまたは医薬品システムは、本発明の作用物質を使用するための付属使用説明もまた含んでなってもよい。
【０３４５】
本発明の実施は、特に断りのない限り、十分に当業者の技量の範囲内である、従来の（組換え技術を含む）分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学技術を用いる。このような技術については、文献“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９）；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｇａｉｔ，１９８４）；“Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ”（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，１９８７）；“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｗｅｉｒ，１９９６）；“Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ”（Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｃａｌｏｓ，１９８７）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ａｕｓｕｂｅｌ，１９８７）；“ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ”，（Ｍｕｌｌｉｓ，１９９４）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｃｏｌｉｇａｎ，１９９１）において詳細に記載される。これらの技術は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの生成に適用でき、したがって本発明の作成および実施で検討し得る。以下の節で、特定の実施形態のために特に有用な技術を考察する。
【０３４６】
以下の実施例は、当業者に、本発明のアッセイ、スクリーニング、および治療法を作成して使用する方法の完全な開示と説明を提供するために提示され、発明者らが彼らの発明と見なす範囲を制限することは意図されない。
【実施例】
【０３４７】
本発明の実施は、特に断りのない限り、十分に当業者の技量の範囲内である、従来の（組換え技術を含む）分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学技術を用いる。このような技術については、文献“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９）；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｇａｉｔ，１９８４）；“Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ”（Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，１９８７）；“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”“Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｗｅｉｒ，１９９６）；“Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ”（Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｃａｌｏｓ，１９８７）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ａｕｓｕｂｅｌ，１９８７）；“ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ”，（Ｍｕｌｌｉｓ，１９９４）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（Ｃｏｌｉｇａｎ，１９９１）において詳細に記載される。これらの技術は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの生成に適用でき、したがって本発明の作成および実施で検討し得る。以下の節で、特定の実施形態のために特に有用な技術を考察する。
【０３４８】
以下の実施例は、当業者に、本発明のアッセイ、スクリーニング、および治療法を作成して使用する方法の完全な開示と説明を提供するために提示され、発明者らが彼らの発明と見なす範囲を制限することは意図されない。
【０３４９】
Ｉ．化学物質実施例−合成および調製法
本発明の化合物は、本明細書の説明を考慮して、本明細書に記載される方法によって、および／または当業者に知られている方法に従って、合成し得る。
【０３５０】
スキームＳ１．ラセミブロモドメイン阻害剤（±）−ＪＱ１の合成
【化４５】
0005937247.tif 000071
【０３５１】
（２−アミノ−４，５−ジメチルチオフェン−３−イル）（４−クロロフェニル）メタノン（Ｓ２）
上に示すスキームに従って、化合物ＪＱ１を調製した。
【０３５２】
２３℃のエタノール（２０ｍｌ、０．３５Ｍ）中の４−クロロベンゾイルアセトニトリルＳ１（１．２４ｇ、６．９ｍｍｏｌ、１等量）、２−ブタノン（０．６２ｍｌ、６．９ｍｍｏｌ、１．００等量）、およびモルホリン（０．６０ｍｌ、６．９ｍｍｏｌ、１．００等量）の溶液に、イオウ（２２０ｍｇ、６．９ｍｍｏｌ、１．００等量）を固体として添加した２１。次に混合物を７０℃に加熱した。１２時間後、反応混合物を２３℃に冷却し、鹹水（１００ｍｌ）中に注いだ。水層を酢酸エチル（３×５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水（５０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、４０グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、Ｓ２（１．２８ｇ、７０％）を黄色固体として得た。
【０３５３】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ］カルボニル｝アミノ）−４−｛［３−（４−クロロベンゾイル）−４，５−ジメチルチオフェン−２−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート（Ｓ３）
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍｌ、１．０Ｍ）中の９−フルオレニルメトキシカルボニル−アスパラギン酸β−ｔｅｒｔ−ブチルエステル［Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ］（８６４ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ、２．１０等量）の溶液に、（２−（６−クロロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルアミニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＣＴＵ）（８２７ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ、２．００等量）、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．７２ｍｌ、４．０ｍｍｏｌ、４．００等量）を逐次添加した。次に混合物を２３℃で５分間撹拌した。次にＳ２（２６６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１等量）を固体として添加した。反応混合物を２３℃で撹拌した。１６時間後、酢酸エチル（２０ｍｌ）および鹹水（２０ｍｌ）を添加した。２層が分離し、水層を酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水（３０ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、４０グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、Ｓ３（６２５ｍｇ、９０％）を褐色油として得た。
【０３５４】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−アミノ−４−（（３−（４−クロロベンゾイル）−４，５−ジメチルチオフェン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタノエート（Ｓ４）
２３℃のＤＭＦ溶液（４．０ｍｌ、０．２２Ｍ）中の２０％ピペリジンに、化合物Ｓ３（５６０ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ、１等量）を溶解した。３０分後、酢酸エチル（２０ｍｌ）および鹹水（２０ｍｌ）を反応混合物に添加した。２層が分離し、水層を酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水（３×２５ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、２４グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、遊離アミンＳ４（３７０ｍｇ、９０％）を黄色固体として得た。エナンチオマ純度は７５％に下がった（ＡＳ−Ｈカラムを使用して、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）により測定された）。
【０３５５】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（５−（４−クロロフェニル）−６，７−ジメチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［２，３−ｅ］［１，４］ジアゼパム−３−イル）アセテート（Ｓ５）
アミノケトン（Ｓ４）（２８０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）を１０％酢酸エタノール溶液（２１ｍｌ、０．０３Ｍ）に溶解した。反応混合物を８５℃に加熱した。３０分後、全ての溶剤を減圧下で除去した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、１２グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、化合物Ｓ５（２４１ｍｇ、９５％）を白色固体として得た。Ｓ５のエナンチオマ純度は６７％であった（ＡＳ−Ｈカラムを使用して、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）により測定された）。
【０３５６】
ｔｅｒｔ−ブチル２−（５−（４−クロロフェニル）−６，７−ジメチル−２−チオキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［２，３−ｅ］［１，４］ジアゼパム−３−イル）アセテート（Ｓ６）
ジグリム（１．２５ｍｌ、０．４Ｍ）中のＳ５（２１０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ、１等量）溶液に、五硫化リン（２２２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、２．００等量）、炭酸水素ナトリウム（１６８ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ、４．００等量）を逐次添加した。反応混合物を９０℃に加熱した。１６時間後、鹹水（２０ｍｌ）および酢酸エチル（３５ｍｌ）を添加した。２層が分離し、水層を酢酸エチル（３×３０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水（２ｘ１５ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、２４グラムシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、回収されたＳ５（７３ｍｇ、３４％）と共に、Ｓ６（１４１ｍｇ、６５％）を褐色固体として得た。
【０３５７】
ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾール［４，３−ａ］［１，４］ジアゼパム−６−イル）アセテート［（±）ＪＱ１］
０℃のＴＨＦ（２．６ｍｌ、０．１４Ｍ）中のＳ６（１５８ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ、１等量）溶液に、ヒドラジン（０．０１５ｍｌ、０．４５ｍｍｏｌ、１．２５等量）を添加した。反応混合物を２３℃に加温して、２３℃で１時間撹拌した。全ての溶剤を減圧下で除去した。得られたヒドラジンを精製なしで直接使用した。次にヒドラジンをオルト酢酸トリメチルとトルエンの２：３混合物（６ｍｌ、０．０６Ｍ）に溶解した。反応混合物を１２０℃に加熱した。２時間後、全ての溶剤を減圧下で除去した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、４ｇのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、ＪＱ１（１４０ｍｇ、２段階で８５％）を白色固体として得た。反応条件は、不斉中心をさらにエピマー化して、ラセミ体ＪＱ１がもたらされた。（ＡＳ−Ｈカラムを用いて、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）により測定された）。
【０３５８】
スキームＳ２．鏡像異性的に濃縮された（＋）−ＪＱ１の合成
【化４６】
0005937247.tif 000072
【０３５９】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（｛［（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ］カルボニル｝アミノ）−４−｛［３−（４−クロロベンゾイル）−４，５−ジメチルチオフェン−２−イル］アミノ｝−４−オキソブタノエート（Ｓ３）
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．０ｍｌ、１．０Ｍ）中の９−フルオレニルメトキシカルボニル−アスパラギン酸β−ｔｅｒｔ−ブチルエステル［Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨ］（４１１ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ、１．０等量）溶液に、（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシル）トリピロリジノホスホニウム（ＰｙＢＯＰ）（４９４ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ、０．９５等量）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．５０ｍｌ、２．８ｍｍｏｌ、２．７５等量）を逐次した。次に混合物を２３℃で５分間撹拌した。次にＳ２（２６６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１等量）を固体として添加した。反応混合物を２３℃で撹拌した。４時間後、酢酸エチル（２０ｍｌ）および鹹水（２０ｍｌ）を添加した。２層が分離し、水層を酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、４０グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、Ｓ３（４５２ｍｇ，７２％）を褐色油として得た。
【０３６０】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル３−アミノ−４−（（３−（４−クロロベンゾイル）−４，５−ジメチルチオフェン−２−イル）アミノ）−４−オキソブタノエート（Ｓ４）
２３℃のＤＭＦ溶液（２．２ｍｌ、０．２２Ｍ）中の２０％ピペリジンに、化合物Ｓ３（３１０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ、１等量）を溶解した。３０分後、酢酸エチル（２０ｍｌ）および鹹水（２０ｍｌ）を反応混合物に添加した。２層が分離し、水層を酢酸エチル（２×２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を鹹水（３×２５ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、２４グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、遊離アミンＳ４（１８４ｍｇ、９０％）を黄色固体として得た。エナンチオマ純度は、９１％であった。（ＡＳ−Ｈカラムを使用して、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）によりチェックした）。
【０３６１】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（５−（４−クロロフェニル）−６，７−ジメチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−チエノ［２，３−ｅ］［１，４］ジアゼパム−３−イル）アセテート（Ｓ５）
アミノケトン（Ｓ４）（１８４ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）をトルエン（１０ｍｌ、０．０４Ｍ）に溶解した。シリカゲル（３００ｍｇ）を添加して、反応混合物を９０℃に加熱した。３時間後、反応混合物を２３℃に冷却した。シリカゲルを濾過して、酢酸エチルで洗浄した。合わせた濾液を濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ＲＦ  ｓｙｓｔｅｍ、１２グラムのシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）によって精製し、化合物Ｓ５（１６８ｍｇ、９５％）を白色固体として得た。エナンチオマ純度は９０％であった（ＡＳ−Ｈカラムを使用して、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）により測定された）。
【０３６２】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−（４−クロロフェニル）−２，３，９−トリメチル−６Ｈ−チエノ［３，２−ｆ］［１，２，４］トリアゾール［４，３−ａ］［１，４］ジアゼパム−６−イル）アセテート［（＋）ＪＱ１］
−７８℃のＴＨＦ（１．８ｍｌ、０．１５Ｍ）中のＳ５（１１４ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、１等量）溶液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（ＴＨＦ中の１．０Ｍ溶液、０．３ｍｌ、０．３０ｍｍｏｌ、１．１０等量）を添加した。反応混合物を−１０℃に加温して、２３℃で３０分間撹拌した。反応混合物を−７８℃に冷却した。クロロリン酸ジエチル（０．０４７ｍｌ、０．３２ｍｍｏｌ、１．２０等量）を反応混合物に添加した２２。得られた混合物を−１０℃で４５分間加温した。酢酸ヒドラジド（３０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ、１．５０等量）を反応混合物に添加した。反応混合物を２３℃で撹拌した。１時間後、９０℃に加熱された反応混合物に、１−ブタノール（２．２５ｍｌ）を添加した。１時間後、全ての溶剤を減圧下で除去した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ  ｓｙｓｔｅｍ、４ｇシリカゲル、勾配０〜１００％酢酸エチル−ヘキサン）で精製し、（＋）−ＪＱ１（１１４ｍｇ、９２％）を白色固体として９０％のエナンチオマ純度で得た（ＡＳ−Ｈカラム、８５％ヘキサン−メタノール、２１０ｎｍ、ｔＲ（Ｒ−鏡像異性体）＝１．５９分、ｔＲ（Ｓ−鏡像異性体）＝３．６７分を使用して、Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）によって測定した）。キラル分取ＨＰＬＣ（ＯＤ−Ｈカラムを使用したＡｇｉｌｅｎｔ高圧液体クロマトグラフィー）によって生成物をさらに精製し、９９％ｅｅ以上でＳ鏡像異性体を得た。
１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃）δ７．３９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｔ，Ｊ＝６．６ＭＨｚ，１Ｈ），３．５４−３．５２（ｍ，２Ｈ），２．６６（ｓ，３Ｈ），２．３９（ｓ，３Ｈ），１．６７（ｓ，３Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ）．
１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，２５℃）δ１７１．０，１６３．８，１５５．７，１５０．０，１３６．９，１３１．１，１３０．９，１３０．６，１３０．３，１２８．９，８１．２，５４．１，３８．１，２８．４，１４．６，１３．５，１２．１．
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値Ｃ２１Ｈ２４ＣｌＮ２Ｏ３Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋：４５７．１４６０，実測値４５７．１４５１ｍ／ｚ．
ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ）、Ｒｆ：０．３２（ＵＶ）
［α］２２Ｄ＝＋７５（ｃ０．５、ＣＨＣｌ３）
【０３６３】
Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｓｐ（Ｏｔ−Ｂｕ）−ＯＨを出発原料として用いて、同様にして（−）−ＪＱ１を合成し、キラル分取ＨＰＬＣ（ＯＤ−Ｈカラムを使用したＡｇｉｌｅｎｔ高圧液体クロマトグラフィー）によってさらに精製して、９９％ｅｅを超えるＲ鏡像異性体を得た。［α］２２Ｄ＝−７２（ｃ０．５、ＣＨＣｌ３）
【０３６４】
追加的な化合物の合成
スキームＳ３で図示されるようにして、追加的な本発明の化合物を調製した。
【０３６５】
スキームＳ３．ヒドラジン誘導体の合成
【化４７】
0005937247.tif 000073
【０３６６】
スキームＳ３で示されるようにして、（＋）−ＪＱ１のｔ−ブチルエステル（１）を切断して遊離酸（２）をもたらし、それをヒドラジンと結合してヒドラジド（３）をもたらした。４−ヒドロキシベンズアルデヒドとの反応は、ヒドラゾン（４）を生じた。
【０３６７】
ヒドラジド（３）およびヒドラゾン（４）のどちらも、少なくとも１つの生物学的アッセイで活性を示した。
【０３６８】
ヒドラジド（３）と多様なカルボニル含有化合物との反応によって、化合物のライブラリーを調製した（上の表Ａ参照）。
【０３６９】
例えばアッセイ開発のためのプローブとして使用するために、追加的な化合物を調製した。例示的な合成を下のスキームＳ４に示す。
【０３７０】
スキームＳ４．プローブとして有用な誘導体の合成
【化４８】
0005937247.tif 000074
【０３７１】
追加的な化合物を下の表Ｂで示すようにして調製した。
【０３７２】
【表５】
0005937247.tif 000075
【０３７３】
【表６】
0005937247.tif 000076
【０３７４】
【表７】
0005937247.tif 000077
【０３７５】
【表８】
0005937247.tif 000078
【０３７６】
【表９】
0005937247.tif 000079
【０３７７】
【表１０】
0005937247.tif 000080
【０３７８】
【表１１】
0005937247.tif 000081
【０３７９】
各化合物のスペクトルデータは、割り当てられた構造に一致した。
【０３８０】
ＩＩ．生物学的活性
実施例１：ＪＱ１
図１はＪＱ１鏡像異性体を示す。
【０３８１】
実施例２：ＪＱ１は細胞中の核クロマチンからＢＲＤ４を置き換える。
ＪＱ１が細胞環境内でクロマチンと競合的にブロモドメインに結合するかどうかを確立するために、ＢＲＤ４上でフォトブリーチング後蛍光回復（ＦＲＡＰ）実験を実施した。以前の研究は、核クロマチンの離散領域の選択的フォトブリーチングに続く、ブロモドメイン含有蛍光性キメラの側方再分配ペースの評価における、ＦＲＡＰの効用を実証した２７。ＧＦＰ−ＢＲＤ４で形質移入されたヒト骨肉腫細胞（Ｕ２ＯＳ）は、蛍光を発する強度の時間依存性回復を呈示する（図２Ａおよび２Ｂ）。ＪＱ１の存在下（５００ｎＭ）では、観察された回復は、置き換えられた核ＢＲＤ４と即時一致する（図３Ａおよび３Ｂ）。細胞ＦＲＡＰ試験は、ＢＲＤ４の移動画分に対する影響が、生化学的活性（＋）−ＪＱ１立体異性体に限定されることを確認した（図２Ａ〜２Ｃ）。
【０３８２】
均質な細胞ベースのアッセイで、ＢＲＤ４への強力な選択的結合を実証したところで、疾患関連ＢＲＤ４依存性細胞表現型に対するＪＱ１の効果を評価した。ＮＭＣ中のｔ（１５；１９）転座から生じた病原性のＢＲＤ４−ＮＵＴ融合タンパク質は、アセチル化クロマチンの離散性病巣と貪欲に結合し、増殖優位性および分化妨害を与える。ＦＲＡＰを使用して、直接、ＢＲＤ４−ＮＵＴ腫瘍性タンパク質を標的とするＪＱ１の能力を評価した。ビヒクル対照と比較して、ＪＱ１（５００ｎＭ）は、ＧＦＰ−ＢＲＤ４−ＮＵＴで形質移入された細胞のフォトブリーチングされた領域内で、蛍光強度の時間−対−回復を顕著に加速した（図３Ｃ、３Ｅ）。重要なことに、ＧＦＰ−ＮＵＴの再分配に対する効果は観察されなかった（図３Ｄ、３Ｅ）。要約すれば、これらのデータは、培養細胞中のＢＲＤ４へのＪＱ１の競合的結合と一致する。
【０３８３】
実施例５：ＪＱ１は、ＢＲＤ４依存性がん腫中で扁平上皮分化および成長停止を誘導する。
再発性発がん性転座から発現された遺伝子産物の直接阻害は、がんにおける検証された治療的アプローチである２８，２９。ＢＲＤ４依存性ＮＵＴ正中がん腫上における、ＢＥＴファミリーブロモドメインの化学的阻害の表現型帰結を探索した。ＢＲＤ４−ＮＵＴクロマチン局在化は、融合タンパク質中のＢＲＤ４の保存されたタンデムブロモドメインに機構的に結び付けられている１７。ＮＭＣの特性は、ＮＵＴ誘導性免疫組織化学（ＩＨＣ）による、ＢＲＤ４−ＮＵＴ腫瘍性タンパク質の離散した核スペックルの出現である３０。ＪＱ１（５００ｎＭ）による患者由来７９７ＮＭＣ細胞系の４８時間の処理は、核病巣を展退させ、ＩＨＣによる拡散した核ＮＵＴ染色を生じさせた（図３ｆ）。
【０３８４】
ＮＭＣ細胞系中のＢＲＤ４−ＮＵＴのノックダウンによって、著しい分化表現型が観察された１７。ＪＱ１は、ＮＭＣ  ７９７およびＰｅｒ４０３細胞中で、細胞拡散および扁平化、オープンクロマチン、および紡錘状形態によって特徴付けられる、同等の用量および時間依存性分化表現型を生じさせた（図３ｇおよび図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ）。分化は迅速であり（＜２４時間）、扁平上皮分化の証明である、顕著に増加したサイトケラチン発現によって特徴付けられた（図３ｈ）。マイクロモル以下のＪＱ１に曝露させた培養中で７日後に、最終分化が観察された。重要なことには、非ＢＲＤ４依存性扁平上皮がん細胞系（ＴＥ１０およびＴＴ）は、ＪＱ１の分化効果を呈示できない（図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ）。ＢＲＤ４依存性ＮＭＣ細胞中では、Ｋｉ６７染色の低下によって証明されるように、分化は当然ながら成長停止に付随して起こる（図３ｉ、ｊ、および４Ｌ−ａ、４Ｌ−ｂ）。さらに標的化作用機序を支持するものとして、分化および成長停止表現型が（＋）−ＪＱ１のみによって促されるのに対し、（−）−ＪＱ１は観察可能な効果を示さない（図４Ｅ−ａ〜４Ｅ−ｄ）。
【０３８５】
特に、ＪＱ１処理は形態学的変化を表現型模写し、ＲＮＡ干渉によるＢＲＤ４−ＮＵＴサイレンシングで観察された、ケラチン発現を増大させた（図４Ｆ−ａ、ｂ）。これらの形態学的およびＩＨＣ研究を裏付けるものとして、ＲＴ−ＰＣＲによる３つのカノニカル扁上皮組織遺伝子の発現分析は、ＮＭＣ  ７９７細胞中における（＋）−ＪＱ１によるケラチン−１４の著しい（３０倍）誘導を同定した（図３ｉ）。ケラチン−１０の中程度の誘導、および表皮トランスグルタミナーゼ（ＴＧＭ１）に対する効果の不在は、それからＮＭＣ  ７９７細胞が誘導された縦隔原発腫瘍に一致する、胸部扁平上皮上皮に向かう進行性分化に一致する２８。ＩＨＣによる、強力な（３＋）ケラチン染色を伴う分化誘導は、定量的ＩＨＣ分析による測定で、７２時間にわたり進行する（図４Ｍ）。標的化作用機序を支持するものとして、分化表現型が（＋）−ＪＱ１によってのみ促されるのに対し、（−）−ＪＱ１は観察可能な効果を示さない。重要なことには、非ＢＲＤ４依存性扁平上皮がん細胞系（ＴＥ１０）は、ＪＱ１処理からの分化効果を呈示できない（図４Ｎ−ｃ）。ＢＲＤ４依存性ＮＭＣ細胞中では、Ｋｉ６７染色の低下によって証明されるように、分化は当然ながら成長停止に付随して起こる（図４Ａ〜４Ｇ）。
【０３８６】
次にＢＲＤ４依存性（７９７およびＰｅｒ４０３）およびＢＲＤ４非依存性（ＴＥ１０およびＴＴ）ヒト扁平上皮がん細胞系において、ＪＱ１鏡像異性体の抗増殖性活性を評価した。図５ａおよび図４Ｆ−ａ〜ｃに示されるように、（＋）−ＪＱ１は、ＢＲＤ４依存性細胞系のみにおいて、細胞成長の用量依存的阻害をユニークに呈示した（７９７  ＩＣ５０＝１４０ｎＭ；Ｐｅｒ４０３  ＩＣ５０＝６０ｎＭ）。ＩＨＣによって観察された強力な抗増殖性効果および不可逆的分化は、細胞死の誘導を示唆する。したがって、フローサイトメトリーによって、アネクシンＶおよびヨウ化プロピジウム染色で、初期および後期アポトーシスを評価した。予期されたように、ＪＱ１は、ＢＲＤ４依存性ヒトがん細胞において即時の進行性アポトーシスを誘導するが、使用される濃度では、ＢＲＤ−ＮＵＴ融合を保有しない細胞系内のアポトーシス細胞の顕著なレベルは検出されなかった（図５ｂおよび図７）。
【０３８７】
実施例６：ＮＭＣのマウスモデルにおけるＪＱ１の生体内有効性および薬力学的効果
ＪＱ１が生体内で単一作用物質として、ＢＲＤ４依存性がん腫の成長を減衰し得るかどうかを確立するために、ＮＭＣ  ７９７細胞系を使用してマウス中で、ＮＭＣのマウス異種移植モデルを開発した。主要エンドポイントとしてＰＥＴ造影を用いて短期処理研究を実施し、ＪＱ１の抗腫瘍活性を実証し得るかどうかを探索し、後に非侵襲造影がそれに続いた。測定可能疾患の確立された同等の負荷があるマウスのマッチコホートは、毎日腹腔内注射によって投与されるＪＱ１（５０ｍｇ  ｋｇ−１）またはビヒクルでの処理について、無作為化された。無作為化に先だってそして４日間の治療後、マウスをＰＥＴ造影によって評価した。ＪＱ１処理によって、ＦＤＧ取り込みに対する顕著な応答が観察されたのに対し、ビヒクル処理動物は明白な進行性疾患を実証した（図５ｅ）。
【０３８８】
並行して、ノギス測定により腫瘍体積に対するＪＱ１の効果について、定量的ＩＨＣにより薬力学的効果について、ＮＭＣ  ７９７腫瘍保有マウスのマッチコホートを研究した。ＮＭＣ  ７９７異種移植片の攻撃的な増殖は、処理の１４日目に研究の終結を促し、その時点で全てのビヒクル処理動物は施設の定める腫瘍サイズ限界（ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  ｔｕｍｏｒ  ｓｉｚｅ  ｌｉｍｉｔｓ）に近づいた。ＪＱ１を投与した動物は、統計的に有意な腫瘍成長の低下を呈示した（図５ｃ、ｐ＝０．０３９；両側ｔ試験）。比較的機構および薬力学データを捕捉するために、全ての動物を殺処分して、組織病理学分析のために腫瘍を外植した。特に、ＪＱ１は、この用量および投与計画では、毒性の有害徴候または明白な体重減少がなく、耐容性が良かった（図５ｄ、５Ｌ）。
【０３８９】
ＪＱ１処理で観察された抗新生物効果が、標的係合に付随することを確認するために、薄片された腫瘍組織をＢＲＤ４−ＮＵＴ腫瘍性タンパク質について検査した。図５ｅおよび図６Ａに提示するように、ＪＱ１処理は、核クロマチンへの競合結合に一致する、ＮＵＴ核スペックルの展退をもたらした。細胞拡散およびケラチン発現増大は、薬力学的扁平上皮分化を立証した。処理動物におけるＫｉ６７の核染色の低下およびタネル染色の増大は、進行中の抗増殖性アポトーシス効果を立証した。総合して、これらのデータは、生体内におけるＢＲＤ４阻害とＪＱ１に対する治療反応の間の機構的関連性を提供する。
【０３９０】
偏りのない様式で腫瘍ケラチン発現の薬力学（ＰＤ）生物マーカーを報告する努力の一環として、定量的ＩＨＣ画像収集および分析についてプロトコルを確立した。標準化プロトコルおよび市販のソフトウェア（ＩｍａｇｅＳｃｏｐｅ；Ａｐｅｒｉｏ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、処理および未処理動物からの対合サンプルを調製し分析した。ＪＱ１は、摘出腫瘍標本において均一に、ＮＭＣ  ７９７異種移植片中で強力な（３＋）ケラチン発現を引き起こした（図６Ｂａ〜ｅ）。
【０３９１】
これらの研究と並行して、縦隔から生じた広範に転移性のＢＲＤ４−ＮＵＴ陽性ＮＭＣがある、２９才の患者が同定された。より臨床的に妥当な疾患モデルを開発する目標で、患者の対症療法胸腔チューブから排出された胸膜液から得られた廃棄臨床材料を使用して、短期培養物を確立した。図８に提示するように、生体外研究は、細胞生存度（ＩＣ５０＝４ｎＭ）、成長、および細胞周期進行に対する（＋）−ＪＱ１の立体選択的な強力な効果を立証した。患者由来腫瘍材料を移植した４匹の動物は、測定可能疾患を発症し、それは強力にＰＥＴ陽性であった（図５ｈ）。動物をビヒクルまたは（＋）−ＪＱ１処理コホートに無作為に割り当てた。処理割り当てに先だってそして４日間の治療後、マウスをＰＥＴ造影によって評価した。ＪＱ１処理によって、ＦＤＧ取り込みに対する顕著な応答が観察されたのに対し、ビヒクル処理動物は明白な進行性疾患を実証した（図５ｉ）。この場合もやはり、定量的ＩＨＣ分析のために腫瘍材料を調製し、それは（＋）−ＪＱ１処理に続いてケラチン発現の誘導を実証した（図５ｊ、ｋ、図９）。総合して、これらのデータは、生体内におけるＢＲＤ４阻害とＪＱ１への治療反応の間の機構的関連性を提供する。
【０３９２】
新興のがんゲノムの複雑な突然変異景観の全域で、再発性染色体再配置は、がんにおける明白な遺伝的標的の説得力のあるサブセットを含んでなる。ＣＭＬ中のＢＣＲ−ＡＢＬを標的にするキナーゼ阻害剤の成功裏の開発によって証明されたように、良好に特性解析されたプローブ化合物３１，３２、高解像度結晶学的データ３３、翻訳研究調査３４、そして利用可能な場合は情報を与えるマウスモデル３５は、リガンド発見および標的検証の最適プラットフォームを提供する。本明細書で報告するように、新規ＢＲＤ４指向小分子阻害剤は、ＮＵＴ−ＢＲＤ４融合に付随する、遺伝的に定義されたヒト扁平上皮がんの治療において有用である可能性が高い。
【０３９３】
ＮＵＴ正中がん腫以外では、ＢＥＴファミリーブロモドメインは、多数のその他の新生物および非新生物疾患に寄与する。ＢＲＤ４は、Ｐ−ＴＥＦｂ複合体を有糸分裂染色体に標的指向して、ｃ−Ｍｙｃなどの成長促進遺伝子１１９および確立されたがん標的オーロラＢ１３の発現がもたらされる。これに加えて、ＢＲＤ４は乳がん中で増幅され３６、乳がん患者における生存予測マーカーである３７。これらの機能の他に、がん生物学では、ＢＥＴファミリーメンバーが、ウイルス複製３８，３９のための、そして炎症応答媒介１４における、必須遺伝子として認識されている。したがって、対合化学プローブとしての（＋）−ＪＱ１および（−）−ＪＱ１の可用性は、広く、転写、発症、および疾患の生物学において、情報を与える研究を促す。ＪＱ１はまた、細胞受容体に対する的外れ効果がわずかであり、４９％の経口バイオアベイラビリティ（図１０）を含む優れた薬物動態学的特性を呈示することも分かり、治療用途のための薬剤様誘導体の開発妥当性を確立する。
【０３９４】
エピジェネティック標的の小分子阻害剤の発見および最適化は、現在の生物医学研究の大きな焦点である。今までの成功裏のアプローチは、クロマチン修飾酵素のためのリガンド同定に限定されている４０。恐らく最も良く研究されたのは、そのために多数の医薬阻害剤が臨床的に開発されている、リジン側鎖の脱アセチル化の調節因子である。本発明は、ブロモドメインのＢＥＴファミリーの初めて完全に特性解析された阻害剤を含む、エピジェネティックなリーダーの強力な選択的阻害剤を開発するための組成物および方法を提供する。この発見を鑑みて、本明細書で概説されるアプローチは、ＢＥＴファミリー中で選択性を有する追加的阻害剤を同定するための、追加的候補を同定するのに有用たり得る。
【０３９５】
実施例７：ＪＱ１鏡像異性体は、ＢＲＤ４．１およびＢＲＤ４．２に結合し阻害する。
図１１および１２は、ＪＱ１鏡像異性体が、ＢＲＤ４．１およびＢＲＤ４．２に結合して阻害することを示す。図１３は、ＪＱ１ＳのＢＥＴファミリーメンバー（活性）およびＣＢＰ（不活性）への結合および阻害の比較を示す。図１４は、ＪＱ１誘導体の集中ライブラリー（化合物構造については上の表Ｂを参照されたい）の用量範囲試験の結果を示す。
【０３９６】
実施例８：ＪＱ１は、ＢＲＤ３−ＮＵＴがんの治療に効果的である
マウスに、ＢＲＤ３−ＮＵＴ細胞を皮下移植した。腫瘍測定データを毎週収集した。腫瘍が触診可能になったら、マウスを２つの処理群（ｎ＝１０）に分けた：ＪＱ１は５０ｍｇ／ｋｇ腹腔内（ＩＰ）７日／週で投与し、ビヒクルはＩＰ７日／週で投与した。注射後２４日目に、各群から５匹のマウスを安楽死させて、腫瘍サンプルを採取して研究室分析に送った。研究の残り期間を通じて、マウス殺処分時に腫瘍サンプルを採取した。全サンプルで、腫瘍の半分は１０％ホルマリン中で固定し、別の半分はドライアイス上で急速冷凍した。処理は、３２日目に終了した。全てのマウスが瀕死になるか、または腫瘍の寸法のいずれかが２ｃｍに達するまで、腫瘍体積および重量を毎週採取した。図１５Ａは、ＪＱ１が、マウス異種移植モデル中で、ＢＲＤ３−ＮＵＴに対する生体内有効性を示すことを示すグラフである。ＪＱ１による処理は、治療時に腫瘍退縮をもたらした。治療休止に際して、腫瘍成長は再開した。腫瘍体積の差は、任意の時点で有意であった（２４日目にｐ＝７．６５２７４Ｅ−０９）。ＪＱ１は、５０ｍｇ／ｋｇで投与された。図１５Ｂは、ＪＱ１で処理されたマウスが穏和な体重減少と、治療休止後の迅速な回復を示すことを示す。
【０３９７】
実施例９：ＪＱ１およびそのアナログは多様ながんに対して効果的である
図１６Ａ〜１６Ｄは、ＪＱ１およびその誘導体が、５μＭのＪＱ１で、Ｂｒｄ４．１およびＢｒｄ４．２結合を阻害することを示す（化合物構造については上の表Ａを参照されたい）。図１７Ａ〜１７Ｄは、ＪＱ１およびその誘導体による２μＭ化合物での処理に続く、ＮＵＴ正中がん腫（ＮＭＣ）細胞生存度を示す（化合物構造については上の表Ａを参照されたい）。図１８〜５５は、多様ながん細胞系の用量応答生存度を示す。これらのデータは、ＪＱ１およびその誘導体が、広範ながんに対して抗がん有効性を示すことを示唆する。
【０３９８】
本明細書で報告される結果は、以下の方法と材料を使用して得られた。
【０３９９】
実施例１０：結合アッセイ結果
結合アッセイの結果を下の表Ｃに示す。
【０４００】
【表１２】
0005937247.tif 000082
【０４０１】
リード化合物のＢＲＤ４部位１との結合活性は、１２点用量応答曲線を用いて、α−アッセイによって決定された（図５６Ａ）。化合物（Ｓ）−ＪＱ１（ＪＱＳ）を陽性対照として使用した。（Ｒ）−ＪＱ１（ＪＱＲ）を陰性対照として使用した。化合物ＪＱ６、ＪＱ８、ＪＱ１３、ＪＱ３３、およびＪＱ３５は、優れた結合活性を呈示した。全てのリード化合物のＢＲＤ４部位２との結合活性の結果もまた、１２点用量応答曲線を用いて、α−アッセイによって決定された（図５６Ｂ）。化合物ＪＱ６、ＪＱ８、ＪＱ１３、ＪＱ３３、およびＪＱ３５は、優れた結合活性を呈示した。
【０４０２】
（患者由来の）７９７細胞系の細胞アッセイにおいて、リード化合物の活性を検査し、ＢＲＤ４−ＮＵＴ依存性細胞系に対する、ＢＲＤ４阻害の成長効果を判定した。細胞を化合物と共に培養し、７２時間後に増殖をモニターした。曲線適合は、ロジスティック退縮により計算した（図５６Ｃ）。患者に直接由来する１０３２６細胞系の細胞アッセイにおいて、全てのリード化合物を検査し、ＢＲＤ４−ＮＵＴ依存性細胞系に対する、ＢＲＤ４阻害の成長効果を判定した（図５６Ｄ）。細胞を化合物と共に培養し、７２時間後に増殖をモニターした。曲線適合は、ロジスティック退縮により計算した。
【０４０３】
試薬
内在性ＢＲＤ４−ＮＵＴ発現中線がん腫細胞系７９７１およびＰＥＲ−４０３２については、既に述べた。非ＮＭＣ  ヒト扁平上皮がん細胞系ＴＥ１０およびＴＴは、Ａｎｉｌ  Ｒｕｓｔｇｉ博士（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）およびＡｄａｍ  Ｂａｓｓ博士（Ｄａｎａ−Ｆａｒｂｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）から得られた。Ｕ２ＯＳ細胞は、ＡＴＣＣから得られた。ＧＦＰ−ＢＲＤ４、ＧＦＰ−ＮＵＴ、およびＧＦＰ−ＢＲＤ４−ＮＵＴのための哺乳類過剰発現コンストラクトについては、以前記載されている３。組織培養のための培地、トリプシン、および抗生物質は、Ｍｅｄｉａｔｅｃｈから購入した。免疫組織化学およびフローサイトメトリーのための抗体および系統は、Ｄａｋｏ（サイトケラチンＡＥ１／ＡＥ３抗体  カタログ番号Ｎ１５９０）、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（タネルカタログ番号Ｓ７１００）、Ｖｅｃｔｏｒ（Ｋｉ６７  カタログ番号ＶＰ−ＲＭ０４）、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ＮＵＴ  カタログ番号３６２５）、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（アネクシンＶ−ＦＩＴＣ  カタログ番号５５６５４７）、およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（ヨウ化プロピジウム  カタログ番号Ｐ３５６６）から得られた。
【０４０４】
アセチル−ヒストン結合アッセイ
製造会社のプロトコル（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，ＵＳＡ）をわずかに修正して、以前記載されているようにして８アッセイを実施した。全ての試薬は、０．０５％ＣＨＡＰＳを添加した５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１％ＢＳＡ、ｐＨ７．４の中で希釈して、プレートへの添加前に室温に平衡化させた。１５０〜０μＭの範囲にわたるリガンドの２４点１：２連続希釈を調製し、４μｌを小容積３８４ウェルプレート（ＰｒｏｘｉＰｌａｔｅ（商標）−３８４  Ｐｌｕｓ，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，ＵＳＡ）に移し、４μｌのＨＩＳ標識タンパク質（ＢＲＤ４／１、２５０ｎＭ、ＢＲＤ４／２およびＣＲＥＢＢＰ、２０００ｎＭ）がそれに続いた。プレートを密封して、タンパク質への等モル濃縮の４μｌのビオチン化ペプチドの添加前に、室温で３０分間インキュベートした［ＢＲＤ４（１）＆ＢＲＤ４（２）用ペプチド：Ｈ４Ｋ５ａｃＫ８ａｃＫ１２ａｃＫ１６ａｃ、Ｈ−ＳＧＲＧＫ（Ａｃ）ＧＧＫ（Ａｃ）ＧＬＧＫ（Ａｃ）ＧＧＡＫ（Ａｃ）ＲＨＲＫ（ビオチン）−ＯＨ；ＣＲＥＢＢＰ用ペプチド：Ｈ３Ｋ３６ａｃ、ビオチン−ＫＳＡＰＡＴＧＧＶＫ（Ａｃ）ＫＰＨＲＹＲＰＧＴ−ＯＨ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，ＵＫ）］。プレートを密封して、４μｌのストレプトアビジン被覆供与体ビーズ（２５μｇ／ｍｌ）と４μｌのニッケルキレート受容体ビーズ（２５μｇ／ｍｌ）を弱光条件下で添加する前に、さらに３０分間インキュベートした。プレートをホイルで密封して遮光し、室温で６０分間インキュベートして、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ  ６８０励起／５７０発光フィルターセットを使用して、ＰＨＥＲＡｓｔａｒ  ＦＳプレートリーダー（ＢＭＧ  Ｌａｂｔｅｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）上で読み取った。ＩＣ５０値は、対応するＤＭＳＯ対照に対する正規化後にＰｒｉｓｍ  ５（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，ＵＳＡ）中で計算され、２０μｌの反応容積中の化合物の最終濃度として提示される。
【０４０５】
配列アラインメント
完全長ヒトブロモドメインのアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ（ＢＲＤ２受け入れ番号ＮＰ＿００５０９５、ＢＲＤ３受け入れ番号ＮＰ＿０３１３９７．１、ＢＲＤ４受け入れ番号ＮＰ＿０５５１１４．１、ＢＲＤ−Ｔ受け入れ番号ＮＰ＿００１７１７．２）から得られた。ＣｌｕｓｔａｌＷ１９を使用して、個々のブロモドメインの多配列比較を実施した。
【０４０６】
フォトブリーチング後蛍光回復（ＦＲＡＰ）
先に記載されたようにして３，２０、ＦＲＡＰ試験をＵ２ＯＳ細胞上で実施した。手短に述べると、ＢＲＤ４、ＮＵＴ、およびＢＲＤ４−ＮＵＴを含むＧＦＰキメラをコードする哺乳類過剰発現コンストラクトで、Ｕ２ＯＳ細胞を形質移入した（リポフェクトアミン；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）。各視野内の１つの細胞中で、５μｍ２の核領域を高レーザー光量でブリーチングし、低レーザー光量および１５０μｍのピンホールで回復を測定した。３７℃加熱チャンバーとＦＲＡＰモジュール装着した、Ｎｉｋｏｎ  Ｃ１プラス共焦点顕微鏡を使用して、９０秒間にわたり同一視野の画像を得た。ブリーチング領域の平均強度をＭｅｔａＭｏｒｐｈ  ｖ７を使用して経時的に測定し、ブリーチング前の対象の独立領域に正規化した。次にデータをＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ  Ｍａｃ  １２．２．４中で分析し、最大半量蛍光回復を評価した。
【０４０７】
分化および増殖免疫組織化学
培養がん細胞系（７９７、Ｐｅｒ４０３、ＴＴ、およびＴＥ１０）をチャンバー（４チャンバースライド）あたり１．０×１０４個の細胞またはチャンバー（８チャンバースライド）あたり５．０×１０３個の細胞で、チャンバースライド内で培養した。細胞をＪＱ１−ラセミ、（＋）−ＪＱ１、（−）−ＪＱ１、またはビヒクル（ＤＭＳＯ）で処理し、様々な時間間隔で培養した。次に培地を除去して、チャンバーを冷ＰＢＳで洗浄した。次に細胞を４℃の４％ホルムアルデヒド中で２０分間固定して、ＰＢＳで洗浄し、下述するように、染色のために、Ｄａｎａ−Ｆａｒｂｅｒ／Ｈａｒｖａｒｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ（ＤＦ／ＨＣＣ）Ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｅａｔ  Ｂｒｉｇｈａｍａｎｄ  Ｗｏｍｅｎ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌに輸送した。最初にＴ−７５フラスコ中でがん細胞系（７９７およびＰｅｒ４０３）を増殖させ、ＪＱ１またはビヒクル（ＤＭＳＯ）のどちらかで４８時間処理して、細胞ペレットの免疫組織化学研究を実施した。次に細胞をトリプシン処理して、２，０００ｒｐｍで１０分間の遠心分離によって細胞ペレットを形成し、１／２容積のＨｉｓｔｏＧｅｌ（Ｒｉｃｈａｒｄ−Ａｌｌｅｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）と１０％ウシ血清アルブミンで安定化させた。細胞ペレットをＰＢＳで洗浄し、４℃の４％ホルムアルデヒド中で２０分間固定した。次に細胞をＰＢＳで洗浄し、下述するように、染色のために、ＤＦ／ＨＣＣ  Ｃｏｒｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｂｒｉｇｈａｍａｎｄ  Ｗｏｍｅｎ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌに輸送した。光学顕微鏡検査によって、実験あたり５つの高倍率（４０×）視野を使用して、Ｋｉ６７染色の定量分析（細胞スコア付け）を実施した。全ての固定材料は、確立された最適化プロトコルを使用して、ＤＦ／ＨＣＣ  Ｃｏｒｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｔ  Ｂｒｉｇｈａｍａｎｄ  Ｗｏｍｅｎ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌにより、包埋、薄片、染色された。Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ４０顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ａｍｅｒｉｃａ，Ｃｅｎｔｅｒ  Ｖａｌｌｅｙ，ＰＡ）およびＭｉｃｒｏｐｕｂｌｉｓｈｅｒ  ３．３  ＲＴＶカラーカメラ（ＱＩｍａｇｉｎｇ，Ｓｕｒｒｅｙ，ＢＣ）を使用して、画像が得られた。
【０４０８】
細胞増殖アッセイ
ウェルあたり全培地容積５０μＬ中の５００個の細胞で、白色３８４ウェルマイクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ）内に細胞を接種した。１％ペニシリン／ストレプトマイシンおよび１０％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ中で、７９７、ＴＴ、およびＴＥ１０細胞を培養した。１％ペニシリン／ストレプトマイシンおよび２０％ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ中で、Ｐｅｒ４０３細胞を培養した。ロボットピン移動（ｒｏｂｏｔｉｃ  ｐｉｎ  ｔｒａｎｓｆｅｒ）（Ｖ＆Ｐ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  １００ｎＬピンツールを装着したＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＪＡＮＵＳ）によって、化合物をマイクロタイターアッセイプレートに送達した。３７℃で４８時間のインキュベーションに続いて細胞を溶解し、市販の増殖アッセイを使用して、総ＡＴＰ含量についてウェルを評価した（Ｃｅｌｌ  ＴｉｔｅｒＧｌｏ；Ｐｒｏｍｅｇａ）。反復測定を用量について分析し、ロジスティック回帰によってＩＣ５０の推定を計算した（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ）。
【０４０９】
フローサイトメトリー
培養ヒトがん細胞（７９７、Ｐｅｒ４０３、ＴＴ、およびＴＥ１０）をウェルあたり出発濃度５．０×１０４細胞で、６ウェル組織培養プレート（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ）内で培養した。細胞は、ＪＱ１（５００ｎＭ）、スタウロスポリン（５０ｎＭ）またはビヒクル（ＤＭＳＯ  ０．０５％）で、２４時間または４８時間処理した。トリプシン処理細胞と、アネクシンＶ−ＦＩＴＣ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、１：５００）およびヨウ化プロピジウム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１：１０００）を含有するアネクシンＶ／ヨウ化プロピジウム緩衝液（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、２．５ｍＭ  ＣａＣｌ２）とを氷上で１：１で混合した。サンプルをＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ上で、即座に分析した。ＦｌｏｗＪｏフローサイトメトリー分析ソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ，Ｉｎｃ．）を使用して、アポトーシス画分の可視化および分析を作成した。
【０４１０】
異種移植片の有効性研究
６週齢メスＮＣｒヌードマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の側腹部に、３０％マトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中の７９７ＮＭＣ細胞（１０７）を注射することで、ＮＭＣ異種移植片を確立した。注射の１２日後、測定可能腫瘍があるマウスを５０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰのＪＱ１またはビヒクル（５％デキストロース中の５％ＤＭＳＯ）で処理されたコホートに分けた。ＪＱ１処理群（ｎ＝８）およびビヒクル群（ｎ＝７）の平均腫瘍サイズは、処理開始時に同様であった（それぞれ６３．８＋／−１７．１および７３．６＋／−１４．４ｍｍ３）。動物を毎日、臨床症状について追跡調査した。ノギス測定によって腫瘍測定値を評価し、式、Ｖｏｌ＝０．５×Ｌ×Ｗ２を使用して体積を計算した。処置の２週間後、全てのマウスを人道的に安楽死させ、組織病理学検査のために腫瘍を１０％ホルマリン中で固定した腫瘍体積の統計的有意性は、両側スチューデントｔ試験によって計算した。全ての動物試験は、ＤＦＣＩのＩＡＣＵＣによって認可された。
【０４１１】
使用機器
陽子および炭素１３核磁気共鳴（１ＨＮＭＲおよび１３ＣＮＭＲ）スペクトルは、Ｈａｒｖａｒｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｈｏｏｌ  Ｅａｓｔ  Ｑｕａｄ  ＮＭＲ  ＦａｃｉｌｉｔｙのＶａｒｉａｎインベルターゼプローブ６００  ＩＮＯＶＡ分光計によって記録した。化学シフトはδスケール上でｐｐｍで記録され、１Ｈ  ＮＭＲではＮＭＲ溶媒中の残留プロチウム（ＣＨＣｌ３：δ７．２４）、１３Ｃ  ＮＭＲでは溶媒の炭素共鳴（ＣＤＣｌ３：δ７７．２）をそれぞれ参照する。データは、次のように報告される：化学シフト［多重度（ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｍ＝多重項、ｂｒ＝ブロード）、カップリング定数（Ｈｚ）、積分］。高解像度質量スペクトル（ＨＲＭＳ）は、Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙにおいて、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＰＥＸ  ４．７  Ｔｅｓｌｅｒ  ＦＴＭＳ分光計上で、エレクトロンスプレイイオン源（ＥＳＩ）を使用して記録した。ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ  ＲＦシステム（Ｔｅｌｅｄｙｎｅ  Ｉｓｃｏ）を用いて、中間体および最終生成物を精製した。有機溶液をＢｕｅｃｈｉ  Ｒ−２０５回転蒸発器上で濃縮した。Ｂｅｒｇｅｒ超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）およびＡＳ−Ｈカラムを用いて、鏡像異性体純度をチェックした。Ａｇｉｌｅｎｔ高圧液体クロマトグラフィーおよびＯＤ−Ｈカラム（Ｂｒｏａｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈａｒｖａｒｄ  ａｎｄ  ＭＩＴ）を用いて、鏡像異性体分取精製を実施した。
【０４１２】
参考文献
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９  Ｐｈｅｌｐｓ，  Ｍ．  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｆｒｏｍ  ａ  ｐｈａｓｅ  １  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ａｎ  ａｃｔｉｖｅ  ｄｏｓｉｎｇ  ｓｃｈｅｄｕｌｅ  ｏｆ  ｆｌａｖｏｐｉｒｉｄｏｌ  ｉｎ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．  Ｂｌｏｏｄ  １１３，  ２６３７−２６４５，  （２００９）．
１０  Ｒａｈｌ，  Ｐ．  Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．  ｃ−Ｍｙｃ  Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  Ｐａｕｓｅ  Ｒｅｌｅａｓｅ．  Ｃｅｌｌ  １４１，  ４３２３−４４４５，  （２０１０）．
１１  Ｙａｎｇ，  Ｚ．，  Ｈｅ，  Ｎ．  ＆  Ｚｈｏｕ，  Ｑ．  Ｂｒｄ４  ｒｅｃｒｕｉｔｓ  Ｐ−ＴＥＦｂ  ｔｏ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ  ａｔ  ｌａｔｅ  ｍｉｔｏｓｉｓ  ｔｏ  ｐｒｏｍｏｔｅ  Ｇ１  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２８，  ９６７−９７６，  （２００８）．
１２  Ｍｏｃｈｉｚｕｋｉ，  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂｒｄ４  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  Ｇ１  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｔｏ  Ｓ  ｐｈａｓｅ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８３，  ９０４０−９０４８，  （２００８）．
１３  Ｙｏｕ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｕｒｏｒａ  Ｂ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂｒｄ４．  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２９，  ５０９４−５１０３，  （２００９）．
１４  Ｈｕａｎｇ，  Ｂ．，  Ｙａｎｇ，  Ｘ．  Ｄ．，  Ｚｈｏｕ，  Ｍ．  Ｍ．，  Ｏｚａｔｏ，  Ｋ．  ＆  Ｃｈｅｎ，  Ｌ．  Ｆ．  Ｂｒｄ４  ｃｏａｃｔｉｖａｔｅｓ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＮＦ−ｋａｐｐａＢ  ｖｉａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ  ＲｅｌＡ．  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ２９，  １３７５−１３８７，  （２００９）．
１５  Ｆｒｅｎｃｈ，  Ｃ．  Ａ．，  Ｍｉｙｏｓｈｉ，  Ｉ．，  Ａｓｔｅｒ，  Ｊ．  Ｃ．  ＆  ｅｔ  ａｌ．  ＢＲＤ４  ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎ  ｇｅｎｅ  ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｗｉｔｈ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ  ｔ  （１５；１９）．  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １５９（６），  １９８７−１９９２，  （２００１）．
１６  Ｆｒｅｎｃｈ，  Ｃ．  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  ＢＲＤ４−ＮＵＴ  ｆｕｓｉｏｎ  ｏｎｃｏｇｅｎｅ：  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｉｎ  ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６３，  ３０４−３０７，  （２００３）．
１７  Ｆｒｅｎｃｈ，  Ｃ．  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．  ＢＲＤ−ＮＵＴ  ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ：  ａ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｃｌｏｓｅｌｙ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｔｈａｔ  ｂｌｏｃｋ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍａｉｎｔａｉｎ  ｔｈｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２７，  ２２３７−２２４２，  （２００８）．
１８  Ｍｉｙｏｓｈｉ，  Ｓ．，  Ｏｏｉｋｅ，  Ｓ．，  Ｉｗａｔａ，  Ｋ．，  Ｈｉｋａｗａ，  Ｈ．  ＆  Ｓｕｇａｒａｈａ，  Ｋ．  ＡＮＴＩＴＵＭＯＲ  ＡＧＥＮＴ．  （２００９）．
１９  Ａｄａｃｈｉ，  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００６）．
２０  Ｓｕｅｏｋａ，  Ｈ．，  Ｋｏｍａｔｓｕ，  Ｈ．，  Ｋｏｂａｙａｓｈｉ，  Ｈ．  ＆  Ｅｈａｒａ，  Ｓ．  Ｔｈｉｅｎｏｔｒｉａｚｏｌｏｄｉａｚｅｐｉｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  ｕｓｅｓ  ｔｈｅｒｅｏｆ．  （１９９８）．
２１  ＶｏｎＶｏｉｇｔｌａｎｄｅｒ，  Ｐ．  Ｆ．  ＆  Ｓｔｒａｗ，  Ｒ．  Ｎ．  Ａｌｐｒａｚｏｌａｍ：  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ，  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｄａｔａ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６，  １−１２，  （１９８５）．
２２  Ｎｉｅｓｅｎ，  Ｆ．  Ｈ．，  Ｂｅｒｇｌｕｎｄ，  Ｈ．  ＆  Ｖｅｄａｄｉ，  Ｍ．  Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｓｃａｎｎｉｎｇ  ｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｙ  ｔｏ  ｄｅｔｅｃｔ  ｌｉｇａｎｄ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｔｈａｔ  ｐｒｏｍｏｔｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ．  Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ  ２，  ２２１２−２２２１，  （２００７）．
２３  Ｆｅｄｏｒｏｖ，  Ｏ．  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｍａｐ  ｏｆ  ｖａｌｉｄａｔｅｄ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｗｉｔｈ  Ｓｅｒ／Ｔｈｒ  ｋｉｎａｓｅｓ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １０４，  ２０５２３−２０５２８，  （２００７）．
２４  Ｂｕｌｌｏｃｋ，  Ａ．  Ｎ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｏｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｐｒｏｖｉｒａｌ  ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ  ｓｉｔｅ  ｉｎ  ｍｏｌｏｎｅｙ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｖｉｒｕｓ  （ＰＩＭ−１）  ｋｉｎａｓｅ．  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４８，  ７６０４−７６１４，  （２００５）．
２５  Ｑｕｉｎｎ，  Ａ．  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ａ  ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ．  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３８，  ｅ１１，  （２０１０）．
２６  Ｖｏｌｌｍｕｔｈ，  Ｆ．，  Ｂｌａｎｋｅｎｆｅｌｄｔ，  Ｗ．  ＆  Ｇｅｙｅｒ，  Ｍ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｕａｌ  ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐ−ＴＥＦｂ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂｒｄ４  ａｔ  ａｔｏｍｉｃ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ．  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８４，  ３６５４７−３６５５６，  （２００９）．
２７  Ｆｒｅｎｃｈ，  Ｃ．  Ａ．  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ＮＵＴ  ｍｉｄｌｉｎｅ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ，  （２００８）．
２８  Ｈｕａｎｇ，  Ｍ．  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｕｓｅ  ｏｆ  ａｌｌ−ｔｒａｎｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．  Ｂｌｏｏｄ  ７２，  ５６７−５７２，  （１９８８）．
２９  Ｄｒｕｋｅｒ，  Ｂ．  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＢＣＲ−ＡＢＬ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ．  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３４４，  １０３１−１０３７，  （２００１）．
３０  Ｈａａｃｋ，  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  ＮＵＴ  Ｍｉｄｌｉｎｅ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  ＮＵＴ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ．  Ａｍ  Ｊ  Ｓｕｒｇ  Ｐａｔｈｏｌ，  （２００９）．
３１  Ｂｕｃｈｄｕｎｇｅｒ，  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｐａｔｈｗａｙ  ｂｙ  ａ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ２−ｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ  ｃｌａｓｓ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ９２，  ２５５８−２５６２，  （１９９５）．
３２  Ｂｕｃｈｄｕｎｇｅｒ，  Ｅ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｂｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｂｙ  ａ  ２−ｐｈｅｎｙｌａｍｉｎｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５６，  １００−１０４，  （１９９６）．
３３  Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ，  Ｔ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｆｏｒ  ＳＴＩ−５７１  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｂｅｌｓｏｎ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８９，  １９３８−１９４２，  （２０００）．
３４  Ｄｒｕｋｅｒ，  Ｂ．  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｂｌ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  Ｂｃｒ−Ａｂｌ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｃｅｌｌｓ．  Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２，  ５６１−５６６，  （１９９６）．
３５  ｌｅ  Ｃｏｕｔｒｅ，  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ＢＣＲ／ＡＢＬ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ａｎ  ＡＢＬ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ．  Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  ９１，  １６３−１６８，  （１９９９）．
３６  Ｋａｄｏｔａ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｇｅｎｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｃｏｅｘｉｓｔｅｎｃｅ  ｏｆ  ｇｅｎｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ａｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＰＩＫ３ＣＡ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６９，  ７３５７−７３６５，  （２００９）．
３７  Ｃｒａｗｆｏｒｄ，  Ｎ．  Ｐ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎ  ４  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｐｒｅｄｉｃｔｓ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｓｕｒｖｉｖａｌ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  １０５，  ６３８０−６３８５，  （２００８）．
３８  Ｙｏｕ，  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｋａｐｏｓｉ’ｓ  ｓａｒｃｏｍａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ  ｌａｔｅｎｃｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｎｕｃｌｅａｒ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｂｒｄ４  ｏｎ  ｈｏｓｔ  ｍｉｔｏｔｉｃ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ．  Ｊ  Ｖｉｒｏｌ  ８０，  ８９０９−８９１９，  （２００６）．
３９  Ａｂｂａｔｅ，  Ｅ．  Ａ．，  Ｖｏｉｔｅｎｌｅｉｔｎｅｒ，  Ｃ．  ＆  Ｂｏｔｃｈａｎ，  Ｍ．  Ｒ．  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ  ＤＮＡ−ｔｅｔｈｅｒｉｎｇ  ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｅ２：Ｂｒｄ４  ａｎｄ  ａ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｔｈａｔ  ａｂｌａｔｅｓ  ＨＰＶ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ．  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  ２４，  ８７７−８８９，  （２００６）．
４０  Ｃｏｌｅ，  Ｐ．  Ａ．  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｐｒｏｂｅｓ  ｆｏｒ  ｈｉｓｔｏｎｅ−ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅｓ．  Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  ４，  ５９０−５９７，  （２００８）．
【０４１３】
その他の実施形態
前述の説明から、本明細書に記載される発明に変更および修正を加えて、様々な用途と条件に適合させてもよいことは明らかである。このような実施形態もまた、以下の請求項の範囲内である。
【０４１４】
本明細書の任意の変数の定義における要素一覧の列挙は、任意の単一要素または列挙された要素の組み合わせとしての変数の定義を含む。本明細書の実施形態の列挙は、任意の単一実施形態としての、または任意のその他の実施形態またはその部分と組み合わさった、その実施形態を含む。
【０４１５】
本出願は、２０１０年５月１４日に出願された米国仮特許出願第６１／３３４，９９１号明細書；２０１０年８月４日に出願された米国仮特許出願第６１／３７０，７４５号明細書；および２０１０年８月２２日に出願された米国仮特許出願第６１／３７５，８６３号明細書に関連する。これらの各出願の内容は、参照によって本明細書に援用する。
【０４１６】
本明細書で言及される全ての特許および刊行物は、具体的に任意の目的のために特許および刊行物がそれぞれが独立して個々に援用されたかのように、参照によって本明細書に援用する。
【図１】
0005937247.tif 000088
【図２】
0005937247.tif 000089
【図３】
0005937247.tif 000090
【図４】
0005937247.tif 000091
【図４Ｄ】
0005937247.tif 000092
【図４Ｅ】
0005937247.tif 000093
【図４Ｆ】
0005937247.tif 000094
【図４Ｆ−ｃ】
0005937247.tif 000095
【図５】
0005937247.tif 000096
【図５Ｌ】
0005937247.tif 000097
【図５Ｍ】
0005937247.tif 000098
【図６Ａ】
0005937247.tif 000099
【図６Ｂ】
0005937247.tif 000100
【図７】
0005937247.tif 000101
【図８】
0005937247.tif 000102
【図９】
0005937247.tif 000103
【図１０】
0005937247.tif 000104
【図１１】
0005937247.tif 000105
【図１２】
0005937247.tif 000106
【図１３】
0005937247.tif 000107
【図１４】
0005937247.tif 000108
【図１５Ａ】
0005937247.tif 000109
【図１５Ｂ】
0005937247.tif 000110
【図１６Ａ】
0005937247.tif 000111
【図１６Ｂ】
0005937247.tif 000112
【図１６Ｃ】
0005937247.tif 000113
【図１６Ｄ】
0005937247.tif 000114
【図１７Ａ】
0005937247.tif 000115
【図１７Ｂ】
0005937247.tif 000116
【図１７Ｃ】
0005937247.tif 000117
【図１７Ｄ】
0005937247.tif 000118
【図１８】
0005937247.tif 000119
【図１９】
0005937247.tif 000120
【図２０】
0005937247.tif 000121
【図２１】
0005937247.tif 000122
【図２２】
0005937247.tif 000123
【図２３】
0005937247.tif 000124
【図２４】
0005937247.tif 000125
【図２５】
0005937247.tif 000126
【図２６】
0005937247.tif 000127
【図２７】
0005937247.tif 000128
【図２８】
0005937247.tif 000129
【図２９】
0005937247.tif 000130
【図３０】
0005937247.tif 000131
【図３１】
0005937247.tif 000132
【図３２】
0005937247.tif 000133
【図３３】
0005937247.tif 000134
【図３４】
0005937247.tif 000135
【図３５】
0005937247.tif 000136
【図３６】
0005937247.tif 000137
【図３７】
0005937247.tif 000138
【図３８】
0005937247.tif 000139
【図３９】
0005937247.tif 000140
【図４０】
0005937247.tif 000141
【図４１】
0005937247.tif 000142
【図４２】
0005937247.tif 000143
【図４３】
0005937247.tif 000144
【図４４】
0005937247.tif 000145
【図４５】
0005937247.tif 000146
【図４６】
0005937247.tif 000147
【図４７】
0005937247.tif 000148
【図４８】
0005937247.tif 000149
【図４９】
0005937247.tif 000150
【図５０】
0005937247.tif 000151
【図５１】
0005937247.tif 000152
【図５２】
0005937247.tif 000153
【図５３】
0005937247.tif 000154
【図５４】
0005937247.tif 000155
【図５５】
0005937247.tif 000156
【図５６Ａ】
0005937247.tif 000157
【図５６Ｂ】
0005937247.tif 000158
【図５６Ｃ】
0005937247.tif 000159
【図５６Ｄ】
0005937247.tif 000160
【配列表】
0005937247000001.app