(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト化モノクローナル抗体又はその断片、及び、少なくとも一つの化学療法剤の、腫瘍の治療のための薬剤の調製のための使用であって、前記抗体又はその断片が、少なくとも一つのマウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）の相補性決定領域、及び、受容体ヒト免疫グロブリンからのフレームワーク領域（ＦＲ）を有するものであり、前記少なくとも一つの化学療法剤は、５−フルオロウラシル、シタラビン、オキサリプラチン、パクリタキセル及びシスプラチンからなる群から選択され、前記ヒト化モノクローナル抗体又はその断片は、化学療法を開始する前又は後の、１〜３０日の間で対象に投与されるものである使用。
【請求項２】
抗体又はその断片が、少なくとも一つのマウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）の相補性決定領域、及び、受容体ヒト免疫グロブリンからのフレームワーク領域（ＦＲ）を有するものである、ヒト化モノクローナル抗体又はその断片の、
少なくとも一つの化学療法剤による化学療法を受ける対象において、５−フルオロウラシル、シタラビン、オキサリプラチン、パクリタキセル及びシスプラチンからなる群から選択される少なくとも一つの化学療法剤に対する許容性を改善するための薬剤を調製するための使用であって、前記ヒト化モノクローナル抗体又はその断片は、化学療法を開始する前又は後の、１〜３０日の間で対象に投与されるものである使用。
【請求項３】
ヒト化モノクローナル抗体又はその断片、及び、少なくとも一つの化学療法剤の、腫瘍を有する対象の生存性を向上させるための薬剤の調製ための使用であって、
前記抗体又はその断片が、少なくとも一つのマウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）の相補性決定領域、及び、受容体ヒト免疫グロブリンからのフレームワーク領域（ＦＲ）を有するものであり、
前記対象は少なくとも一つの５−フルオロウラシル、シタラビン、オキサリプラチン、パクリタキセル及びシスプラチンからなる群から選択される化学療法剤で治療を受けており、前記ヒト化モノクローナル抗体又はその断片は、化学療法を開始する前又は後の、１〜３０日の間で対象に投与されるものである使用。
【請求項４】
前記ヒト化抗体が、ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：１５），ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：１６），ＢＡＴＲＫＣ（配列番号：１７），及びＢＡＴＲＫＤ（配列番号：１８）からなる群から選択される軽鎖可変領域と、ＢＡＴＲＨＡ（配列番号：２０），ＢＡＴＲＨＢ（配列番号：２１），ＢＡＴＲＨＣ（配列番号：２２），ＢＡＴＲＨＤ（配列番号：２３）及びＢＡＴＲＨＥ（配列番号：２４）からなる群から選択される重鎖可変領域とを含むか、あるいは、
前記ヒト化抗体が、ＢＡＴＲＨＡ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２０／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２１／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：２１／配列番号：１６），ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：２２／配列番号：１６），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２１／配列番号：１８），及びＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）からなる群から選択される可変領域を含み、好ましくは、前記ヒト化抗体が、ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）に対応する可変領域を有するものである
請求項１から３のいずれか1項に記載の使用。
【請求項５】
前記ヒト化抗体の断片がＦｖ，Ｆ（ａｂ’），Ｆ（ａｂ’）２及び単鎖抗体からなる群から選択されるか、あるいは、
前記ヒト化抗体又はその断片が、ｍＢＡＴ−１の抗腫瘍活性を保持する
請求項１から３のいずれか1項に記載の使用。
【請求項６】
前記化学療法剤が、５−フルオロウラシル、オキサリプラチン及び、それらの組合せからなる群から選択される請求項１から３のいずれか1項に記載の使用
【請求項７】
前記対象が、放射線による治療を受けている請求項１から３のいずれか1項に記載の使用。
【請求項８】
前記ヒト化抗体又はその断片、及び、前記少なくとも一つの化学療法剤のいずれか一方又は両方の投与が、静脈内、経口、腹腔内、皮下、単離された四肢潅流、器官への持続注入及びそれらの組合せからなる群から選択される経路によって実行される
請求項１から３のいずれか1項に記載の使用。
【請求項９】
前記腫瘍が、結腸直腸癌腫；肺癌腫；乳癌；黒色腫；卵巣悪性腫瘍；子宮頚癌、膵臓癌；多発性骨髄腫；腎細胞癌；非ホジキンリンパ腫；ホジキン病；マントル細胞リンパ腫；カポシ肉腫；扁平上皮癌；基底細胞癌；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）及び慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）からなる群から選択されるものである
請求項１から３のいずれか1項に記載の使用。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍成長を阻害して、腫瘍を有する対象の生存を増加して、哺乳類の腫瘍再
発に対する予防を誘導する方法に関するものである。この方法は、少なくとも一つの化学
療法剤と組み合わせて、ｍＢＡＴ−１と表わされるマウスのモノクローナル抗体から誘導
されるＣＤＲ領域を含むヒト化モノクローナル抗体を投与することを含む。
【背景技術】
【０００２】
免疫調節の分子および細胞基部、特にＴ細胞反応のレベルについて近年における知識の
急速な増加は、腫瘍ワクチンの開発を含む免疫療法の方法の新規な集積を提供する。一定
のモノクローナル抗体は、Ｔ細胞の表面上の関与因子を結合する能力を含む免疫調節性活
性を有することおよび、これらの細胞の増殖、活性化、成熟または分化を誘導することを
示した。
【０００３】
ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１またはＢＡＴ−１とも称する）はバーキット−リンパ種細胞系（
Daudi）の膜標品に対して発生するマウスのモノクローナル抗体であり、それは、様々な
種類の腫瘍に対して抗腫瘍および免疫賦活性の効果を呈することを示した（Hardy et al.
, 2001, Int. J. Oncol. 19:897）。このモノクローナル抗体は、まず最初にHardy等に米
国特許第５，８９７，８６２号で開示された。ＢＡＴ−１は、CNCM Accession No.1-1397
を有するハイブリドーマ細胞線によって分泌される。
【０００４】
マウスＢＡＴのポリヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、Hardy等に、国際公開００／
５８３６３号および米国特許２００３／００２６８００号で開示される。マウスＢＡＴに
基づく多くのヒト化モノクローナル抗体は、米国特許２００８／００２５９８０号で開示
される。それらの開示によれば、ヒト化モノクローナルＢＡＴ抗体は、親マウスのＢＡＴ
抗体によって誘導されるものより大きな抗癌効果を誘導するようである。試験される様々
なモデル系の中で、ＢＡＴ抗腫瘍活性は、ＳＣＩＤ（重症複合免疫不全症）マウス、ＮＫ
細胞が不足しているベージュマウスおよび、Ｔ細胞が不足しているヌードマウスにおいて
研究された(Hardy, B., 1997, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:5756)。全てのマウスは
、肺の腫瘍を後に発病するマウスＢ１６黒色腫を、静脈内に注射された。ＢＡＴは、マウ
スまたはヒトのリンパ球のいずれかを移植されたＳＣＩＤマウスのみが抗癌効果を及ぼし
た。無胸腺ヌードマウスおよびベージュマウスにおいて、この活性が野生型マウスのＢＡ
Ｔの抗腫瘍活性と比較して効果が少なかったにもかかわらず、ＢＡＴは抗腫瘍活性を及ぼ
した。
【０００５】
マウスＢＡＴの免疫調節性効果は、生体外でさらに研究された。マウスＢＡＴは、ＣＤ
４＋Ｔ細胞を活性化して、これらの細胞からＩＦＮ−γの分泌を誘導する(Hardy et al.,
2000, Int. Immunol. 12:1623 and Quaglino E. et al., 2005, Vaccine 9:23(25): 328
0-7, respectively)。さらに、ＢＡＴがＴ細胞の増殖を誘導してそれらの細胞溶解反応を
増加させることを見出した(Hardy, B. et al., 1997, Hum. Antibodies, 8:95)。
【０００６】
Ｂｅｒｇｅｒ等（２００８）は、ヒト化モノクローナル抗体ＣＴ−０１１の投与を開示
して、それは進行した血液学的な悪性病変を伴う患者に対してｍＢＡＴ−１に基づき、薬
物動態学と関連したものである(Berger et al. Clin. Cancer Res. 2008;14(10) May l5,
2008)。
【０００７】
それは、ＢＡＴ抗体が、有益な方法で免疫反応を調整するために、腫瘍細胞それ自身で
はなくむしろ、対象または患者の免疫機能する細胞を対象とすることが予想されないこと
を覚えておくべきである。
【０００８】
癌の治療上の処理で最も広く用いられているうちの１つは、化学療法である。化学療法
剤は、癌細胞内の特定の化学物質でのそれらの効果、薬が妨げる細胞活性もしくは工程、
または薬が影響を及ぼす細胞周期の特定相に基づいて、いくつかの群に分けられる。化学
療法群は、アルキル化剤、ニトロソ尿素化合物、代謝拮抗剤、アントラサイクリン系、ト
ポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害剤、有糸分裂阻害剤およびステロイド阻害剤がある。
【０００９】
化学療法薬が、唯一の治療法として提供することができるが、一つ以上の他の活性薬剤
と組み合わせて使用されることが多い。いくつかの場合では、特定の組合せは、非常に良
好な臨床成績を提供するのに適していた。例えば、代謝拮抗剤のフルオロウラシル（５Ｆ
Ｕ）およびアルキル化剤オキサリプラチンが、結直腸癌の治療のための組合せの処方計画
で、共に用いられる。フルオロウラシル、ロイコボリン（フォリン酸）およびオキサリプ
ラチンの複合治療は、また結直腸癌の治療に適応され、ＦＯＬＦＯＸとして省略された。
シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン(predinisone
)（ＣＨＯＰと略記）の複合治療は、非ホジキンリンパ腫の治療で使用され、ＣＨＯＰお
よびキメラモノクローナル抗体リツキシマブ（Ｒ−ＣＨＯＰと略記）の組合せは、び慢性
大細胞型Ｂ細胞リンパ腫および他の侵略的なＢ細胞非ホジキンリンパ腫の治療で用いられ
る。
【００１０】
放射およびモノクローナル抗体と、ウラシル、５ＦＵまたはウラシルマスタードの複合
治療は、特にＶＥＧＦレセプタの細胞外領域に結合し、米国特許第６，８１１，７７９号
で開示される。この併用療法は、脈管形成を阻害することを目的とする。米国特許第６，
２１７，８６６号は、ヒト腫瘍細胞を有するヒト癌患者に、抗腫瘍薬の有効量およびモノ
クローナル抗体の有効量を投与することを含むヒトＥＧＦレセプタを発現するヒト腫瘍細
胞の成長を阻害する方法において、（ｉ）前記抗体は、前記腫瘍細胞のヒトＥＧＦレセプ
タの細胞外領域に結合し；（ｉｉ）抗体が抗腫瘍薬に接合せず；（ｉｉｉ）抗体がＥＧＦ
レセプタにＥＧＦの結合を阻害する方法である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
背景技術のいずれにも、それは化学療法と組み合わせるヒト化ｍＢＡＴ−１モノクロー
ナル抗体の使用が有利であることを教示または示唆していない。実際には、ＢＡＴおよび
それに基づく抗体は免疫促進(immunomostimulatory)特性を有することが知られていたの
で、細胞毒性または増殖性細胞集団を破壊することによって作用する他の化学療法薬と組
み合わせるこのような抗体は、それ単独で、各々の種類の薬剤より大きな臨床的な有効性
を達成するために用いることができることは、非常に驚くべきであり予想外である。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、腫瘍成長を阻害して、腫瘍体積を減少させて、対象の生存性を増加させて、
および、固形および非固形の腫瘍を負う対象の腫瘍再発からの予防を誘導する方法を提供
する。この方法は、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ−１（ｍＢＡＴ−１）の少なくと
も一つの相補性決定領域（ＣＤＲ）および、受容体のヒト免疫グロブリンから誘導される
フレームワーク領域（ＦＲ）を有するヒト化モノクローナル抗体の使用を含む。このよう
な抗体の例は、ｈＢＡＴ−１である（本願明細書で、ＣＴ−０１１とも称する）。好まし
くは、本願明細書に開示したいくつかの方法は、少なくとも一つの化学療法剤を有する組
合せ療法でのヒト化モノクローナル抗体の使用を含む、一方、本願明細書に開示した他の
方法はそれ自身にヒト化モノクローナル抗体の使用に関するが、一つ以上の化学療法剤と
組み合わせて任意選択で使用することができる。
【００１３】
本発明の原理を、リンパ球培養組織および動物の腫瘍モデル内のｍＢＡＴ−１およびＣ
Ｔ−０１１ならびに、様々な形態の血液学的な腫瘍を有するヒト患者のＣＴ−０１１の両
方を使用して、本願明細書で説明する。
【００１４】
本発明は、一つには、様々な化学療法剤での治療療法に対するＣＴ−０１１の取込みが
、いくつかの有益な抗腫瘍および抗癌効果、例えばいずれかの治療のみによる単一療法と
比較して、腫瘍成長率の減少、腫瘍成長の阻害および生存時間の増加を含む結果となると
いう予想外の発見に基づくものである。さらに、化学療法処方へのＣＴ−０１１のような
ヒト化抗体の取込みが、化学療法剤の用量制限毒性（ＤＬＴ）濃度に対して増加する許容
度の更なる利点を提供することができることを見出した。
【００１５】
本発明はまた、一つには、対象抗体を伴う動物モデルで誘導された腫瘍の治療は、単独
または化学療法剤のいずれかで、「治療」と、同じ腫瘍細胞で次の要求である腫瘍再発に
対する長期保護のための記憶効果との両方を生じる観測に基づくものである。したがって
ヒト化抗体ＣＴ−０１１による治療によって回復する動物は、腫瘍に再発または再暴露に
抵抗するようになった。さらにまた、一定の例において、ＣＴ−０１１で初期臨床試験を
受けるヒト被験者はまた、この抗体一回量の投与および血液からその除去後、長期腫瘍コ
ントロールおよび予防の効果を論証することを開示する。
【００１６】
いかなる理論または作用機構に束縛されることなく、腫瘍再発または再起を防ぐ際のヒ
ト化ＢＡＴモノクローナル抗体の活性は、本願明細書に開示して抗体ＣＴ−０１１によっ
て例証されるように、アポトーシスから作用因子／記憶Ｔ細胞を予防する際にこのような
抗体の活性を伴うことができる。
【００１７】
したがって、様々な態様で、本発明は、累積的または付加的な効果を及ぼすことがこれ
まで知られていない抗腫瘍因子の組合せを提供する。
【００１８】
本発明の一定の原則によって、組合せが少なくとも一種の化学療法剤の投与である１つ
の治療、およびｍＢＡＴ−１に基づいて免疫賦活性のヒト化モノクローナル抗体の投与で
ある他の異なる治療を含む。予想外に、２つの治療は、それ自身を別々または単独で使用
するときより、組み合わせて使用するときに大きな有益な抗癌効果を達成する。本願明細
書および請求項で使われるような複合治療は、多くの異なる組合せ治療のいずれか、例え
ば２つ以上の治療の投与の実質的に重なり合っている期間；２つ以上の治療の同時、経時
的、連続的な投与または時間周期を交互にして２つ以上の治療の計画的投与を含み参照す
ることができる。
【００１９】
第１の態様によれば、本発明は腫瘍を治療する方法において、その方法は（ｉ）それを
必要とする対象にヒト化モノクローナル抗体またはその断片の有効量を投与する工程であ
って、抗体またはその断片は、受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、少なく
ともマウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（Ｆ
Ｒ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有するものを投与する工程と、（ｉｉ）対象に
少なくとも一つの化学療法剤の有効量を投与する工程を含み；このことにより、腫瘍を治
療する。
【００２０】
他に態様によれば、本発明は更に、少なくとも一つの化学療法剤に対する許容度を改善
する方法を提供し、この方法は、それを必要とする対象に、ヒト化モノクローナル抗体ま
たはその断片の有効量を投与することを含み、抗体またはその断片は、受容体ヒト免疫グ
ロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）お
よびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；対象は、少
なくとも一つの化学療法剤による化学療法を受けていて；それによって、前記化学療法剤
に対する許容度を改善する。
【００２１】
本発明の更に別の態様によれば、腫瘍を有している対象における生存性の向上または疾
患進行を阻害する方法を提供し、対象は、少なくとも一つの化学療法剤で治療され、その
方法はヒト化モノクローナル抗体またはその断片の有効量を投与することを含み、抗体ま
たは断片単独は、受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクロー
ナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの
相補性決定領域を有し；それによって、対象の生存性を向上させる。
【００２２】
さらにもう一つの態様によれば、本発明は、腫瘍再発を減少または予防する方法を提供
し、この方法は、それを必要とする対象に、ヒト化モノクローナル抗体の有効量またはそ
の断片を投与することを含み、抗体またはその断片は、受容体ヒト免疫グロブリンまたは
それから修飾物から、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレー
ムワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；それによって、腫瘍再
発を減少または予防する。
【００２３】
一の実施態様によれば、腫瘍再発を減少または予防する方法は、対象に少なくとも一つ
の化学療法剤を投与することを更に含む。
【００２４】
特定の実施態様によれば、対象は、少なくとも一つの化学療法剤による化学療法の過程
を受けているかまたは完了した。
【００２５】
様々な実施態様によれば、ヒト化モノクローナル抗体の軽鎖可変領域は、下記式によっ
て特徴づけられる：
ＦＲＬ１−ＣＤＲＬ１−ＦＲＬ２−ＣＤＲＬ２−ＦＲＬ３−ＣＤＲＬ３−ＦＲＬ４
ここで、各々のＦＲは独立のヒト抗体のフレームワーク領域であり、各々のＣＤＲは独
立のモノクローナルのｍＢＡＴ−１抗体の相補性決定領域である。
【００２６】
様々な実施態様によれば、ヒト化モノクローナル抗体の重鎖可変領域は、下記式によっ
て特徴づけられる：
ＦＲＨ１−ＣＤＲＨ１−ＦＲＨ２−ＣＤＲＨ２−ＦＲＨ３−ＣＤＲＨ３−ＦＲＨ４
各々のＦＲは独立のヒト抗体のフレームワーク領域であり、各々のＣＤＲは独立のモノ
クローナルのｍＢＡＴ−１抗体の相補性決定領域である。
【００２７】
様々な実施態様によれば、ＦＲは、ヒトＴＥＬ９抗体（配列番号：１３０）の軽鎖可変
領域またはその修飾物から誘導される。
【００２８】
様々な実施態様によれば、ヒトＴＥＬ９抗体の軽鎖可変領域から誘導または修飾される
ＦＲアミノ酸配列は、下記からなる群から選択される：ＦＲＬ１，［ＥＩＶＬＴ  ＱＳＰ
ＳＳ  ＬＳＡＳＶ  ＧＤＲＶＴ  ＩＴＣ；配列番号：１］；ＦＲＬ２，［Ｗ（Ｆ  ｏｒ  
Ｙ）ＱＱＫＰＧ  ＫＡＰＫＬ（Ｗ  ｏｒ  Ｌ）ＩＹ；配列番号：２］；ＦＲＬ３，［ＧＶ
ＰＳＲ  ＦＳＧＳＧ  ＳＧＴ（Ｄ  ｏｒ  Ｓ）（Ｙ  ｏｒ  Ｆ）（Ｃ  ｏｒ  Ｔ）ＬＴＩ
ＮＳ  ＬＱＰＥＤ  ＦＡＴＹＹ  Ｃ；配列番号：３］；およびＦＲＬ４，［ＦＧＧＧＴ  
ＫＬＥＩＫ；  配列番号：４］。
【００２９】
様々な実施態様によれば、ＦＲは、ヒトｈｓｉｇｈｖ１２９５抗体（配列番号：１４６
）の重鎖可変領域またはその修飾物から誘導される。
【００３０】
様々な実施態様によれば、ヒトｈｓｉｇｈｖ１２９５抗体の重鎖可変領域から誘導また
は修飾されるＦＲアミノ酸配列は、下記からなる群から選択される：ＦＲＨ１，［Ｑ（Ｉ
ｏｒ  Ｖ）ＱＬＶ  ＱＳＧＳＥ  ＬＫＫＰＧ  ＡＳＶＫＩ  ＳＣＫＡＳ  ＧＹ（Ｔ  ｏ
ｒ  Ｓ）Ｆ（Ｔ  ｏｒ  Ｓ）；配列番号：５］；ＦＲＨ２，［ＷＶ（Ｒ  ＯＲ  Ｋ）ＱＡ
ＰＧＱ  ＧＬ（Ｑ  ｏｒ  Ｋ）ＷＭＧ；配列番号：６］；ＦＲＨ３，［ＲＦ（Ｖ  ｏｒ  
Ａ）ＦＳＬＤＴ  ＳＶ（Ｎ  ｏｒ  Ｓ）ＴＡＹＬＱ  ＩＴＳＬ（Ｔ  ｏｒ  Ｎ）ＡＥＤＴ
Ｇ  ＭＹＦＣ（Ｖ  ｏｒ  Ａ）（Ｒ  ｏｒ  Ｋ）；配列番号：７］；およびＦＲＨ４，［
ＷＧＱＧＴ  ＬＶＴＶＳ  Ｓ；配列番号：８］。
【００３１】
様々な実施態様によれば、軽鎖可変領域は、下記からなる群から選択される少なくとも
一つのアミノ酸配列を含む：ＣＤＲＬ１［ＳＡＲＳＳ  ＶＳＹＭＨ；配列番号：９］；Ｃ
ＤＲＬ２［ＲＴＳＮＬ  ＡＳ；配列番号：１０］；ＣＤＲＬ３［ＱＱＲＳＳ  ＦＰＬＴ；
および配列番号：１１］。ここで、ＣＤＲはマウスのＢＡＴ−１抗体から誘導され、添え
字「Ｌ」および「Ｈ」はそれぞれ、軽鎖および重鎖領域を示す。
【００３２】
様々な実施態様によれば、重鎖可変領域は、下記からなる群から選択される少なくとも
一つのアミノ酸配列を含む：ＣＤＲＨ１［ＮＹＧＭＮ；  配列番号：１２］；ＣＤＲＨ２
［ＷＩＮＴＤ  ＳＧＥＳＴ  ＹＡＥＥＦ  ＫＧ；配列番号：１３］；およびＣＤＲＨ３［
ＶＧＹＤＡ  ＬＤＹ；配列番号：１４］。
【００３３】
様々な実施態様によれば、ヒト化抗体は、
ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：１５），ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：１６），ＢＡＴＲＫＣ（
配列番号：１７），およびＢＡＴＲＫＤ（配列番号：１８）からなる群から選択される軽
鎖可変領域と；
Ａ（配列番号：２０），ＢＡＴＲＨＢ（配列番号：２１），ＢＡＴＲＨＣ（配列番号：
２２），ＢＡＴＲＨＤ（配列番号：２３）およびＢＡＴＲＨＥ（配列番号：２４）からな
る群から選択される重鎖可変部とを含む。
【００３４】
さらに他の実施態様によれば、ヒト化抗体は、下記からなる群から選択される可変領域
を含む：ＢＡＴＲＨＡ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２０／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨ
Ｂ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２１／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＢ（
配列番号：２１／配列番号：１６），ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：２２／配
列番号：１６），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２１／配列番号：１８），お
よびＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）。
【００３５】
様々な好ましい実施態様によれば、ヒト化モノクローナル抗体は、ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡ
ＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）に対応する可変領域を有する。
【００３６】
様々な実施態様によれば、ヒト化抗体または断片単独の抗腫瘍活性は、ｍＢＡＴ−１と
同じまたはそれより大きい。
【００３７】
様々な実施態様によれば、ヒト化抗体の断片は、下記からなる群から選択される：Ｆｖ
，Ｆ（ａｂ’），Ｆ（ａｂ’）２および単鎖抗体。
【００３８】
本発明のヒト化モノクローナル抗体は、組換えＤＮＡ技術、ＣＤＲ移植を利用すること
によって好ましくは発生する。したがって、ヒト化抗体はポリヌクレオチドの発現によっ
て引き起こされ、ポリヌクレオチドは、全てのヒト化抗体、軽鎖可変領域、重鎖可変領域
またはヒト化抗体の両鎖の可変領域をエンコードすることができる。更に、ヒト化抗体は
、重鎖または軽鎖をエンコードするポリヌクレオチドを各々含む特徴的なベクターの共形
質移入に従うか、または軽鎖および重鎖ポリヌクレオチド配列を含む単一ベクター形質移
入によって、宿主細胞を発現する。
【００３９】
様々な実施態様によれば、ヒト化抗体の軽鎖は、下記からなる群から選択されるポリヌ
クレオチド配列によってエンコードされる：配列番号：８７、配列番号：８８および配列
番号：８９。
【００４０】
様々な実施態様によれば、ヒト化抗体の重鎖は、下記からなる群から選択されるポリヌ
クレオチド配列によってエンコードされる：配列番号：９０、配列番号：９１および配列
番号：９２。
【００４１】
様々な実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、下記からなる群から選択さ
れる：代謝拮抗剤、白金に基づく薬剤、有糸分裂阻害剤、アントラサイクリン系抗生物質
、トポイソメラーゼ阻害剤、抗血管形成剤およびそれらの組合せ。
【００４２】
一般的な好ましい実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、化学療法剤と組
み合わせて用いられるときｈＢＡＴ−１がリンパ球の生存を向上させるために選択される
。一般的に、向上または増加した生存性を、以下に例証されるように、生体外で都合よく
評価することができる。
【００４３】
いくつかの実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は代謝拮抗剤であり、それ
はプリン拮抗剤、ピリミジン拮抗剤および葉酸拮抗剤がある。いくつかの実施態様によれ
ば、代謝拮抗剤は、ピリミジン拮抗剤である。いくつかの実施態様によれば、代謝拮抗剤
は、下記からなる群から選択される：５‐フルオロウラシル、ウラシルマスタード、ウラ
シル、カペシタビン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ゲムシタビン、シタラ
ビン、フルダラビンおよびペメトレキセド。
【００４４】
いくつかの実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、５−フルオロウラシル
である。
【００４５】
いくつかの実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、シタラビンである。
【００４６】
いくつかの実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、下記からなる群から選
択される白金に基づく薬剤である：シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチ
ン。
【００４７】
さらに他の実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、下記からなる群から選
択される有糸分裂阻害剤である：パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、ビンブラ
スチン、ビンクリスチンおよびビノレルビン。
【００４８】
さらに他の実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、下記からなる群から選
択されるアントラサイクリン系抗生物質である：ダウノルビシン、レスピノマイシンＤお
よびイダルビシン。
【００４９】
いくつかの実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、下記からなる群から選
択される抗血管形成剤である：ベバシズマブ、ドーパミン、テトラチオモリブデートおよ
びＶＥＧＦの抗血管形成活性の異型。
【００５０】
いくつかの実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、トポイソメラーゼＩ阻
害剤以外である。いくつかの実施態様によれば、少なくとも一つの化学療法剤は、アルキ
ル化剤以外である。
【００５１】
様々な実施態様によれば、ヒト化抗体および、少なくとも１つの化学療法剤の投与は、
実質的に同時、並行、交替、順次または連続して実行される。いくつかの実施態様におい
て、ヒト化抗体および少なくとも一つの化学療法剤は、重なり合う計画に従って投与され
る。
【００５２】
特定の実施態様によれば、ヒト化抗体の投与は、少なくとも一つの化学療法剤の最初の
投与の前に実行される。
【００５３】
他の実施態様によれば、ヒト化抗体および少なくとも１つ化学療法剤のいずれかまたは
両方の投与は、静脈内、経口、腹腔内、皮下、単離された四肢潅流、器官内への持続注入
およびそれらの組合せからなる群から選択される経路によって実行される。
【００５４】
様々な実施態様によれば、その方法は、照射で対象を治療することを更に含む。様々な
実施態様によれば、その方法は、ヒト化抗体の投与、少なくとも一つの化学療法剤の投与
および、対象を照射で治療することの全てを含む。
【００５５】
いくつかの実施態様によれば、ヒト化抗体、少なくとも一つの化学療法剤および放射線
療法は、実質的に同時、並行、交替、連続または重なり合う計画によって投与される。
【００５６】
特定の実施態様において、本発明の方法は、下記の群から選択される少なくとも１つの
パラメーターを評価することを更に含む：腫瘍成長の率、腫瘍体積、転移の数、腫瘍再発
およびそれらの組合せ。
【００５７】
いくつかの実施態様において、腫瘍は、固形または非固形の腫瘍である。いくつかの実
施態様において、非固形腫瘍は、血液学的な悪性腫瘍である。特定の実施態様において、
腫瘍は、結腸直腸癌腫腫瘍からなる群から選択される；非小肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍；小
細胞肺癌（ＳＣＬＣ）腫瘍；乳癌腫瘍；メラノーマ腫瘍；卵巣悪性腫瘍；子宮頚癌腫瘍；
膵臓癌腫瘍；頭頸部癌腫腫瘍；胃腸癌腫腫瘍；食道腫瘍；肝細胞癌腫瘍；多発性骨髄腫；
腎細胞癌腫瘍；前立腺腫瘍；非ホジキンリンパ腫；ホジキン病；マントル細胞リンパ腫；
カポシ肉腫；扁平上皮癌腫瘍；基底細胞癌腫瘍；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；慢性骨髄
性白血病（ＣＭＬ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）および慢性リンパ球性白血病（ＣＬ
Ｌ）。
【００５８】
様々な実施態様によれば、対象は、ヒトまたはヒト以外の哺乳類である。様々な好まし
い実施態様によれば、対象はヒトである。
【００５９】
更なる態様において、本発明は、（ｉ）ヒト化モノクローナル抗体またはその断片の使
用であって、抗体またはその断片は受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マ
ウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の
少なくとも一つの相補性決定領域を有するものと；（ｉｉ）少なくとも一つの化学療法剤
とを；腫瘍を治療するために薬物の製造に関する使用を提供する。
【００６０】
別の態様においては、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片であって、
抗体またはその断片は受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノク
ローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一
つの相補性決定領域を有し；少なくとも一つの化学療法剤を受けている対象における化学
療法の腫瘍の治療で提供する。
【００６１】
更なる態様において、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片の使用であ
って、抗体またはその断片は受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスの
モノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なく
とも一つの相補性決定領域を有し、前記少なくとも一つの化学療法剤で化学療法を受けて
いる対象における少なくとも一つの化学療法剤に対する許容度を向上させる薬物の製造で
の使用を提供する。
【００６２】
更なる態様において、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片であって、
抗体またはその断片は、受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノ
クローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも
一つの相補性決定領域を有し、前記少なくとも一つの化学療法剤で化学療法を受けている
対象における少なくとも一つの化学療法剤に対する許容度の向上を提供する。
【００６３】
他の態様によれば、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片の使用であっ
て、抗体またはその断片は受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモ
ノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくと
も一つの相補性決定領域を有し；腫瘍を有する対象であって、この対象は少なくとも一つ
の化学療法剤で治療されて、生存性の向上または疾患進行を阻害するための薬物の製造に
関する使用を提供する。
【００６４】
他の態様によれば、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片であって、抗
体またはその断片は受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウスのモノクロ
ーナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少なくとも一つ
の相補性決定領域を有し；腫瘍を有する対象であって、この対象は少なくとも一つの化学
療法剤で治療されるものにおける、生存性の向上または疾患進行を阻害するためのヒト化
モノクローナル抗体またはその断片を提供する。
【００６５】
さらにもう一つの態様によれば、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片
の使用であって、抗体またはその断片は受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から
、マウスのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ
）の少なくとも一つの相補性決定領域を有し；腫瘍の再発を減少または予防する薬物の製
造に関する使用を提供する。
【００６６】
さらにもう一つの態様によれば、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片
であって、抗体またはその断片は受容体ヒト免疫グロブリンまたはその修飾物から、マウ
スのモノクローナル抗体ＢＡＴ（ｍＢＡＴ−１）およびフレームワーク領域（ＦＲ）の少
なくとも一つの相補性決定領域を有し；腫瘍の再発を減少または予防するためのヒト化モ
ノクローナル抗体またはその断片を提供する。
【００６７】
特定の実施態様によれば、対象は、少なくとも１つの化学療法剤で化学療法を受けてい
たか、受けているか、または、受ける予定である。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】図１は、賦形剤コントロール（灰色バー）または５ＦＵ（０．５ｍｇ／ｍＬ、白バー）との組み合わせを付随して培養組織に加え７２時間培養されるとき、リンパ球の生存度に基づく分析におけるｈＢＡＴ−１の効果を示す。図１Ａは５ＦＵの非存在または存在下でのｈＢＡＴ−１活性（０．５または０．７５μｇ／ｍＬとして示す）で、細胞生存の差％として表す図である。図１Ｂは５ＦＵの非存在または存在下でのｈＢＡＴ−１（０．７５μｇ／ｍＬ）活性で、用量応答曲線に基づく領域で示す図である（ＡＵＣは％差×μｇ／ｍＬとして示す）。ｈＢＡＴ−１（７２時間）での培養時間を、ｘ軸に示す。図１Ｃは、機能的な分析における５ＦＵまたは賦形剤コントロールでの効果を生存可能な細胞／ｍＬとして示した図である。５ＦＵまたは賦形剤コントロール（７２時間）での培養時間をｘ軸に示す。
【図２】図２は、賦形剤コントロール（灰色バー）または５ＦＵ（０．５ｍｇ／ｍＬ、白バー）を加える前に２４時間培養してから加え、その後７２時間培養したときの、リンパ球の生存度に基づく分析におけるｈＢＡＴ−１の効果を示す。図２Ａは５ＦＵの非存在または存在下でのｈＢＡＴ−１活性（０．５または０．７５μｇ／ｍＬとして示す）を、細胞生存の差％として表す図である。図２Ｂは５ＦＵの非存在または存在下でのｈＢＡＴ−１（０．７５μｇ／ｍＬ）活性を、用量応答曲線に基づく領域で示す図である（ＡＵＣは％差×μｇ／ｍＬとして示す）。ｈＢＡＴ−１（７２時間）での培養時間を、ｘ軸に示す。
【図３】図３は、賦形剤コントロール（灰色バー）またはＳＮ−３８（イリノテカン０．１ｍｇ／ｍＬの活性型、白バー）加え、７２時間培養したとき、リンパ球の生存度に基づく分析におけるｈＢＡＴ−１の効果を示す。図３ＡはＳＮ−３８の非存在または存在下でのｈＢＡＴ−１活性（０．５または０．７５μｇ／ｍＬとして示す）を、細胞生存の％差として表す図である。図３ＢはｈＢＡＴ−１（０．７５μｇ／ｍＬ）活性を、用量応答曲線に基づく領域で示す図である（ＡＵＣは％差×μｇ／ｍＬとして示す）。ｈＢＡＴ−１（７２時間）での培養時間を、ｘ軸に示す。
【図４】図４は、賦形剤コントロール（灰色バー）またはＳＮ−３８（０．５ｍｇ／ｍＬ、白バー）を加える前に２４時間培養してから加え、その後７２時間培養したときの、リンパ球の生存度に基づく分析におけるｈＢＡＴ−１の効果を示す。図４ＡはＳＮ−３８の非存在または存在下でのｈＢＡＴ−１活性（０．５または０．７５μｇ／ｍＬとして示す）を、細胞生存の％差として表す図である。図４ＢはｈＢＡＴ−１（０．７５μｇ／ｍＬ）活性を、用量応答曲線に基づく領域で示す図である（ＡＵＣは％差×μｇ／ｍＬとして示す）。ｈＢＡＴ−１（７２時間）での培養時間を、ｘ軸に示す。
【図５】図５は、賦形剤コントロール（灰色バー）または、示される化学療法剤（白バー）を併用（図５Ａ）または加える前に２４時間培養（図５Ｂ）してから加え、その後７２時間培養したとき、リンパ球の生存度に基づく分析におけるｈＢＡＴ−１の効果を示す図である。Ｃｉｓ（シスプラチン（１０μｇ／ｍＬ））；Ｏｘａ，（オキサリプラチン（１０μｇ／ｍＬ））；Ｔａｘ，（パクリタキセル（０．４３μｇ／ｍＬ））；Ｄａｅ（ダカルバジン（１μｇ／ｍＬ））。ｈＢＡＴ−１（０．７５μｇ／ｍＬ）活性を、用量応答曲線に基づく領域で示す（ＡＵＣは％差×μｇ／ｍＬとして示す）。ｈＢＡＴ−１（７２時間）での培養時間を、ｘ軸に示す。
【図６】図６は、賦形剤コントロール（黒バー）または化学療法剤との組み合わせ（白バー）を加え、７２時間培養したとき、リンパ球の生存度に基づく分析におけるｈＢＡＴ−１（０．５または０．７５μｇ／ｍＬとして示す）の効果を示す図である。使用した化学療法剤は、シタラビン２ｍｇ／ｍＬ（図６Ａ）シクロホスファミド１ｍｇ／ｍＬ（図６Ｂ）およびドキソルビシン０．０３ｍｇ／ｍＬ（図６Ｃ）であった。ｈＢＡＴ−１活性は、細胞生存の％差として示される。
【図７】図７は、賦形剤コントロール（黒バー）または化学療法剤（白バー）を加える前に２４時間（０．７５μｇ／ｍＬで）加えてから、７２時間培養したとき、単離のヒトＣＤ４＋リンパ球の生存度に基づく分析におけるｈＢＡＴ−１の効果を示す図である。使用した化学療法剤は、５ＦＵ１μｇ／ｍＬ（図７Ａ）およびシスプラチン１０μｇ／ｍＬ（図７Ｂ）であった。ｈＢＡＴ−１活性を細胞生存の％差として示す。
【図８】図８は、結腸直腸腺癌（ＣＲＣ）になるマウスの、賦形剤（黒丸）；５ＦＵ（６〜９および１５〜１６日に２０ｍｇ／ｋｇ投与；白い四角）；ｈＢＡＴ−１（１０日に１０μｇ／マウス投与；黒い四角）；ならびにｈＢＡＴ−１（１０日に１０μｇ／マウス投与）および５ＦＵ（６〜９および１５〜１６日に２０ｍｇ／ｋｇ投与）の組合せ処方（白丸）における抗癌効果を示す図である。
【図９】図９は、ＣＲＣになるマウスの、５ＦＵ（６〜９、１５〜１７、２２〜２４および２９〜３１日に２０ｍｇ／ｋｇ投与；白い四角）ならびに、ｈＢＡＴ−１（１０、１８および２５日に１０μｇ／マウス投与）および５ＦＵ（６〜９、１５〜１７、２２〜２４および２９〜３１日に２０ｍｇ／ｋｇ投与）の組合せ処方（白い三角）における抗癌効果を示す図である。
【図１０】図１０は、賦形剤（白丸）；５ＦＵ（６〜９、１５〜１７、２２〜２４、２９〜３１、３６〜３８および４３〜４５日に２０ｍｇ／ｋｇ投与；黒い三角）；  ｈＢＡＴ−１（１０、１８、２５、３２および３９日に１０μｇ／マウス投与；黒い四角）；ならびにｈＢＡＴ−１（１０、１８、２５、３２および３９日に１０μｇ／マウス投与）および５ＦＵ（６〜９、１５〜１７、２２〜２４、２９〜３１、３６〜３８および４３〜４５日に２０ｍｇ／ｋｇ投与）の組合せ処方（黒い菱形）で処理したＣＲＣになるマウスの生存性の割合を示す図である。
【図１１】図１１は、５ＦＵ（１〜４および７〜８日に５０ｍｇ／ｋｇ投与；黒い菱形）またはｈＢＡＴ−１（１０日に１０μｇ／マウス投与）および５ＦＵ（１〜４および７〜８日に５０ｍｇ／ｋｇ投与）の組合せ処方（白い四角）で処理し、Ｂ１６メラノーマ細胞で注射したマウスの生存性の割合を示す図である。
【図１２】図１２はＣＲＣになるマウスの、賦形剤（黒丸）；イリノテカン（７および１５日に１００ｍｇ／ｋｇ投与；黒い四角）；ｈＢＡＴ−１（１０日に１０μｇ／マウス投与；白丸）；ならびにｈＢＡＴ−１（１０日に１０μｇ／マウス投与）およびイリノテカン（７および１５日に１００ｍｇ／ｋｇ投与）の組合せ処方（白い三角）で処理して、平均腫瘍体積によって評価して、抗癌効果を示す図である。
【図１３】図１３は、賦形剤（黒丸）；イリノテカン（７および１５、２２および２９日に１００ｍｇ／ｋｇ投与；黒い三角）；ｈＢＡＴ−１（１０、１８、２５および３２日に１０μｇ／マウス投与；白い四角）；ならびにｈＢＡＴ−１（１０、１８、２５および３２日に１０μｇ／マウス投与）およびイリノテカン（７および１５、２２および２９日に１００ｍｇ／ｋｇ投与）の組合せ処方（黒色菱形）で処理したＣＲＣになるマウスの生存性の割合を示す図である。
【図１４】図１４は、ＣＲＣになるマウスの、賦形剤（黒丸）での治療に；オキサリプラチン（４、７〜１０、１４〜１７および２２〜２３に１ｍｇ／ｋｇ投与；白い四角）；ならびにＣＲＣになるマウスのｈＢＡＴ−１（１１および１８日に１０μｇ／マウス投与）およびオキサリプラチン（４、７〜１０、１４〜１７および２２〜２３日に１ｍｇ／ｋｇ投与）の組合せ処方計画（黒い三角）で処理し、平均腫瘍体積によって評価して、抗癌効果を示す図である。
【図１５】図１５は、ＣＲＣになるマウスの、賦形剤（黒丸）；オキサリプラチン（４、７〜１０、１４〜１７、２２〜２４、２９〜３１日に１ｍｇ／ｋｇ投与；白い四角）；ならびにｈＢＡＴ−１（１１、１８、２５および３２日に１０μｇ／マウス投与）およびオキサリプラチン（４、７〜１０、１４〜１７、２２〜２４、２９〜３１日に１ｍｇ／ｋｇ投与）の組合せ処方（黒い三角）で処理して生存性の割合を示す図である。
【図１６】図１６はｈＢＡＴ−１および腫瘍再発に対して予防する化学療法剤の組合せの効果を、平均腫瘍体積（図１６Ａ）および生存性の割合（図１６Ｂ）によって評価して示す図である。そしてｈＢＡＴ−１およびオキサリプラチンの組合せ処方により、２または５ヵ月間ＣＲＣの治療したマウス（ｎ＝３）を、同じＣＲＣ細胞系で再度試す（白い四角）。さらに、実験に使われていない(naive)マウス（ｎ＝６）を、ＣＲＣで新しく導入した（黒丸）。
【図１７】図１７はｈＢＡＴ−１および腫瘍再発に対して予防する化学療法剤の組合せの効果を、平均腫瘍体積（図１７Ａ）および生存性の割合（図１７Ｂ）によって評価して示す図である。それからｈＢＡＴ−１およびオキサリプラチンの組合せ処方によってＣＲＣをあらかじめ治療したマウス（ｎ＝２）を、同じＣＲＣ細胞系による試みで腫瘍再発の欠如によって示したように、乳癌で再度試す（白い四角）。乳癌での試みを、マウスがＣＲＣ腫瘍再発に対して抵抗を呈した２ヵ月後に実行した。さらに、実験に使われていないマウス（ｎ＝６）を、ＣＲＣで新しく導入した（黒丸）。
【図１８】図１８は、ｈＢＡＴ（１μｇ／ｍＬ）で処理して、その後７２および９６時間培養することによって、ヒトＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋作用因子／記憶Ｔ細胞（黒いバー）および、実験に使われていないＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ−Ｔ細胞（白バー）を使用して、細胞生存率測定においてＣＴ−１１の効果を示す。その結果を、細胞生存の％差として示す図である。
【図１９】図１９は、ヒト化ＢＡＴ−１  ＶＫ領域（配列番号１５〜１８）の様々な実施態様のアミノ酸配列を示す図である。ＢＡＴ−１  ＶＫ領域残基およびヒトＴＥＬ９  ＶＫ領域（配列番号１３０）配列が一致する所を点［．］で示す。アミノ酸が特定の残基位置で存在しない所はダッシュ［−］で示す。ＴＥＬ９  ＦＲｓのアミノ酸がヒト化ＢＡＴ−１  ＶＫ領域において変更される場合には、それを太字体で強調する。ＣＤＲｓを、命名法［＝Ｌ１＝］の使用によって記載する。使用する番号の付け方は、Kabatによるものである(Kabat et al., Sequences of proteins of immunological interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, U.S. Government Printing Office, 1991)。
【図２０】図２０は、ヒト化ＢＡＴ−１  ＶＨ領域（配列番号２０〜２４）の様々な実施態様のアミノ酸配列を示す図である。ＢＡＴ−１  ＶＨ領域残基およびヒトｈｓｉｇｈｖ１２９５  ＶＨ領域（配列番号１４６）配列が一致する所を点［．］で示す。アミノ酸が特定の残基位置で存在しない所はダッシュ［−］で示す。ｈｓｉｇｈｖ１２９５  ＦＲｓのアミノ酸がヒト化ＢＡＴ−１  ＶＨ領域で変更される場合には、それを太字体で強調する。ＣＤＲｓを命名法［＝Ｈ１＝］の使用によって記載し、［−−−−−］はＨ１構造ループの部分を意味する。使用する番号付けは、Ｋａｂａｔによるものである（Kabat et al., ibid）。
【発明を実施するための形態】
【００６９】
定義
用語「抗体」（「免疫グロブリン」とも称する）は、最も広い意味で使用され、それら
が所望の生物活性を示す限り、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）
および抗体断片を特に含む。「抗体断片」は、完全長抗体の部分、一般に抗原結合または
その可変領域を含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断
片；二重特異性抗体；線形抗体；単鎖抗体分子；および、抗体断片から形成した多特異的
抗体を含む。
【００７０】
自然に生じる抗体構造の基本的な単位は約１５０，０００のダルトンのヘテロテトラマ
ーグリコプロテイン錯体であり、２つの同一の軽鎖（Ｌ）および２つの同一の重鎖（Ｈ）
からなり、非共有結合とジスルフィド結合の両方によって共に結合する。各々の重鎖およ
び軽鎖はまた、規則通りに間隔をあけた鎖内のジスルフィド架橋を有する。５つのヒト抗
体類（ＩｇＧ，ＩｇＡ，ＩｇＭ，ＩｇＤおよびＩｇＥ）が存在し、これらの類の範囲内で
、様々なサブクラスを、構造差、例えば単一の抗体分子の免疫グロブリン単位の数、個々
の単位のジスルフィド架橋構造および鎖長および配列の差に基づいて認識する。抗体の類
およびサブクラスは、そのアイソタイプである。
【００７１】
重鎖および軽鎖のアミノ末端領域は、カルボキシ末端領域より多様な配列であり、した
がって、可変領域と呼ばれる。抗体構造のこの部分は、抗体の抗原−結合特異性を付与す
る。重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）は共に単一の抗原結合部位を形成
し、基本的な免疫グロブリン単位は２つの抗原結合部位を有する。特定のアミノ酸残基は
軽鎖および重鎖可変領域の間の界面を形成することが考えられる(Chothia et al., J. Mo
l. Biol. 186, 651-63 (1985); Novotny and Haber, (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. US
A 82 4592-4596)。
【００７２】
重鎖および軽鎖のカルボキシ末端部は、不変領域、すなわちＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、
ＣＬを形成する。これらの領域では相違点がずっと少ない一方、１つの動物種から他の種
までの差異があり、更に、同じ個体内で、いくつかの異なる抗体のアイソタイプがあり、
各々が異なる機能を有する。
【００７３】
用語「フレームワーク領域」または「ＦＲ」は、本願明細書に定められるように、超可
変領域アミノ酸残基以外である抗体の可変領域のアミノ酸残基をいう。本願明細書に使用
するような用語「超可変領域」は抗原結合の役割を果たす抗体の可変領域のアミノ酸残基
をいう。超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基を含む
。ＣＤＲは、主に抗原のエピトープに結合する役割を果たす。ＦＲおよびＣＤＲの範囲は
、正確に定められた（Kabat et al., ibid参照）。
【００７４】
用語「核受容体ヒトイムノブロブリン（ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｂｕｌｉｎ）」は、ヒト化
抗体に対してフレームワークを提供するヒト免疫グロブリンをいう。
【００７５】
本願明細書で使用しているように、用語「ヒト化抗体」は、ヒト抗体からのフレームワ
ーク領域および、ヒト以外（通常マウスまたはラット）の免疫グロブリンからの一つ以上
のＣＤＲを含む抗体を示す。ヒト化免疫グロブリンの部分、多分ＣＤＲ以外は、天然のヒ
ト免疫グロブリン配列の対応する部分と、実質的に同一である。しかしながらいくつかの
場合において、特定のアミノ酸残基、例えばフレームワーク領域を修飾して、ヒト化抗体
の性能を最適化することができる。重要なことに、ヒト化抗体は、ＣＤＲを提供するドナ
ー抗体と同じ抗原に結合することを予想される。詳しくは、例えば、医療審議会（英国）
に譲渡された米国特許第５，２２５，５３９号を参照する。
【００７６】
用語「受容体ヒト免疫グロブリンからのフレームワーク領域」および「受容体ヒトイム
ノブロブリンから誘導されるフレームワーク領域」および類似の文法的な表現を、受容体
ヒトのイムノブロブリンの同じアミノ酸配列を有するフレームワーク領域またはその部分
を示すために本願明細書で交互に用いる。
【００７７】
用語「受容体ヒト免疫グロブリンから修飾されるフレームワーク領域」および類似の文
法的な表現は、そのアミノ酸配列において変えられるフレームワーク領域を示し、例えば
起源の受容体ヒトのイムノブロブリンの配列と比較して、一つ以上のアミノ酸残基の置換
、欠落または化学修飾によるものである。ＦＲ領域の修飾を、構成されているヒト化抗体
の性能を最適化、例えば抗原結合を最適化および立体的衝突を回避するために実行するこ
とができる。ヒト化ＢＡＴ抗体の構造に関する受容体免疫グロブリンのＦＲ領域における
、特定の残基を修飾するための、詳細な説明の基礎および理論は、米国特許出願番号２０
０８／００２５９８０号で提供される。
【００７８】
更に、ＦＲは、一つ以上のアミノ酸残基で、処理することまたは他の翻訳後修飾のよう
な天然の処理または化学的修飾技術によって、化学的に修飾することができる。化学修飾
としては、アセチル化、アシル化、アミド化、ＡＤＰリボシル化、グリコシル化、ＧＰＩ
アンカー形成、液体もしくは脂質の誘導体の共有結合、メチル化、ミリスチル化、ペグ化
、プレニル化、リン酸化、ユビキチン化（ubiqutination）またはいずれか類似した方法
処理も含むが、これに限定されるものではない。
【００７９】
用語「ヒト抗体」は、ヒトまたは対立遺伝子、それの異型もしくはまたは変異体で現実
に生じる遺伝子によってエンコードされる抗体を示す。
【００８０】
本願明細書に使われるように、用語「抗癌効果」は有益な生体影響を示し、それは腫瘍
体積の減少または安定化、腫瘍細胞の数の減少または安定化、腫瘍成長の率の減少または
安定化、転移の数の減少または安定化、腫瘍再発からの予防、腫瘍を有する対象の寿命の
増加もしくは生存性、腫瘍を有する対象の疾患進行なく寿命の増加もしくは生存性または
、癌性状態と関連した様々な生理的症状の改善の一つ以上のいずれかよって現わすことが
できる。「抗癌効果」はまた、第一段階で腫瘍の発生または腫瘍の再発を防ぐ本発明の組
合せの能力によって現わすことができる。その特性を与えることで、本発明の方法を、急
性、潜伏中、制御中または安定化の癌の治療および癌予防で用いることができる。
【００８１】
用語「哺乳類」はイヌおよびネコのようなペットの動物、ブタ、牛、ヒツジおよびヤギ
のような家畜；マウスおよびラットのような実験動物；モンキー、サルおよびチンパンジ
ーのような霊長類；および好ましくはヒトを含むいずれかの哺乳類を意味する。
【００８２】
本発明のヒト化抗体に関する用語「有効量」および（複数の）化学療法剤は、過剰また
は制御不能の有害な副作用を引き起こさずに、治療効果を達成するために必要とする各々
のこれらの活性薬剤の量を意味することを理解すべきである。治療上の結果を達成するた
めに必要とする有効量は、例えば、特定の種類の腫瘍および患者の状態の酷さ、およびそ
の組合せが照射と更に共投与するかどうかを含む多くの要素に依存することができる。活
性薬剤の有効量（用量）は、本発明の状況において、時間とともに対象の有益な治療反応
で効果を与えるのに十分であり、それは腫瘍成長の阻害、腫瘍成長の率の減少、腫瘍およ
び転移成長の防止ならびに改善した生存性の阻害を含む。
【００８３】
本願明細書に用いられるように、用語「改善した生存性」は、対象または患者が本発明
の方法で治療することで生存する持続性の延べ時間を示す。改善した生存性は、特定の治
療の後に癌を患っている個体で、疾患進行がないままの増加する可能性を意味する。それ
はまた、対照群と比較して、疾患が時間の特定された期間の後に安定（進行の徴候を示さ
ない）したままとなる群において、個体の高い割合を説明するために用いる。それはまた
、対照群と比較して、疾患が時間の特定された期間の後に治療（疾患の徴候を示さない）
した群において、個体の高い割合を説明するために用いる。このパラメーターは、特定の
治療の有効性の徴候として用いられる「無進行生存」、「全体的な生存性」および「疾患
のない生存性」として意味される通例の臨床終了点のいずれかによって測定することがで
きる。
【００８４】
用語「化学療法剤に対する許容度」は、一つ以上の化学療法剤での治療と関連した有害
な副作用を許容するために、対象の生理的、物理化学的および、免疫学的な能力を示す。
したがって、用語「化学療法剤に対する改善した許容度」は、このような有害な副作用に
生理的および物理化学的な能力を増加させることを示し、例えば有害な副作用のひどさを
減少および／または、副作用の数を減少したことである。したがって、「化学療法剤に対
する改善した許容度」は、化学療法剤で治療される癌患者の生命の質を改善することで示
すことができる。
【００８５】
用語「腫瘍再発」は、起源の腫瘍の成長が逆転、抑制または阻害された期間によって、
同じ位置または異なる位置のいずれかで同種類の腫瘍の、再現、再発、再成長または増殖
をいう。
【００８６】
本願明細書において用いられる用語「リンパ球生存性を改善または増加」は、一つの治
療のみで同一の細胞群の生存度と比較して、生体外または生体内でリンパ球の生存度を延
長する治療における特定の組合せの能力をいう。例えば、ｈＢＡＴ−１および化学療法剤
の一定の組合せは、本願明細書の実施例１で例証したように、生体外分析法で評価したよ
うな、リンパ球生存性を改善する。
【００８７】
本発明の方法
癌免疫治療学は、概して、腫瘍細胞の死滅およびコントロール腫瘍の成長を誘導または
改善するために免疫系の反応を調整することを目的とする。この方法は、Ｔ細胞上の特定
の関与因子に選択的に結合し、それによって活性化経路を開始または阻害効果を誘導する
いずれかであるモノクローナル抗体を含む様々な免疫修飾物質を用いることを利用する。
【００８８】
一定の本発明の態様によれば、少なくとも一つの抗腫瘍化学療法剤と連携した免疫賦活
性ヒト化抗体の投与は、化学療法剤の抗癌効果を向上およびその逆で作用する。好ましい
実施態様において、少なくとも一つの化学療法剤と免疫賦活性抗体の組合せは、各々の治
療のみに対して重要な方法の臨床結果を改善する。好ましい実施態様において、腫瘍が少
なくとも一つの化学療法剤と連携、任意選択で、照射と更に連携して本発明のヒト化抗体
で治療されるとき、相乗効果がある。
【００８９】
言い換えれば、本発明の一態様によれば、本発明のヒト化抗体の抗癌効果は、少なくと
も一つの化学療法剤と組み合わすとき予想されるものより増加する。相乗効果は、ヒト化
抗体および（複数の）化学療法剤の、各々単独での治療の相加効果から予想されるものよ
り、組み合わせ治療での大きな抗癌効果によって示すことができる。例えば、相乗効果を
、本願明細書の実施例２、３および６で説明し、それは、本発明による組み合わせ治療が
腫瘍体積および担癌マウスの生存性を測定して、抗体または化学療法のみのいずれかの効
果との比較することによって、増加する抗癌効果を及ぼすことを開示する。より詳細には
、腫瘍体積の効果の評価において、図８はｈＢＡＴ−１および５ＦＵの組合せの投与が、
各々の薬剤単独を超える利益があることを示し、図９はｈＢＡＴ−１および５ＦＵの組合
せが５ＦＵ単独を超える相乗作用であることを示す。同様に、生存性の効果の評価におい
て、ｈＢＡＴ−１および５ＦＵの組合せの投与が、各薬剤のみ（図１０）および、５ＦＵ
のみ（図１１）を超える利益があることを説明した。異なる組合せ、すなわち、ｈＢＡＴ
−１およびオキサリプラチンは、生存性を増加させる際のオキサリプラチンを超える利益
があるだけでなくて、さらにいくつかの対象の完全寛解を誘導する（図１５）。相乗効果
をまた、本発明の複合治療で治療した担癌マウスにおける完全寛解および、腫瘍に特有の
記憶領域保護の生成によって、対応する単一療法と比較して説明する（図１０、１５、１
６、１７）。
【００９０】
本発明の組合せによって行われる生体内の効果は、本願明細書の実施例１にて開示した
ように、リンパ球細胞生存の生体外機能的な分析によって裏づけられる。例証したように
、ｈＢＡＴ−１に続いて５ＦＵ（２４時間経過後投与）によるマウスのリンパ球の経時的
な治療は予想外に、約３０％のリンパ球生存性を改善した（図２Ａ）。ｈＢＡＴ−１およ
び５ＦＵのみでリンパ球の併用療法は、ｈＢＡＴ−１のみでの治療と比較して、リンパ球
生存性をわずかに増加させ（図１Ａ）、５ＦＵ単独では細胞生存性を改善しなく（図１Ｃ
）、経時的な予定した治療の機構的な相乗効果を示す。相乗作用の活性をまた、化学療法
剤のシスプラチンおよびヒト化抗体の組合せでの生体外分析法で観察した（図７Ｂ）。し
たがって、一定の化学療法剤と、本発明のヒト化抗体の組み合わせは、生体外および生体
内での相乗効果を生じる。
【００９１】
本願明細書で開示および例証される相乗効果は、ＢＡＴ抗体および化学療法剤が完全に
異なり、反対の作用機構および標的の種類を有することが知られていると仮定すると、全
く予想外である。すなわち、ＢＡＴ抗体は免疫機能細胞を刺激することによって機能（例
えばHardy et al 1994; Hardy et al 1997に記載）し、一方、５ＦＵおよびオキサリプラ
チンのような化学療法剤は免疫機能細胞を含む分裂細胞を急速に死滅させることによって
作用する。
【００９２】
本願明細書に例証されるような、本発明による組合せは、本発明のヒト化抗体と組み合
わせる化学療法剤の使用が、増加または改善したリンパ球細胞の生存性を説明するもので
ある。実施例１および図１〜７にて開示したように、リンパ球細胞の生存性は、生体外分
析を使用して、都合よく評価することができる。
【００９３】
したがって、様々な実施態様で、化学療法剤は、ピリミジン類似体の５‐フルオロウラ
シルまたはシタラビンのような代謝拮抗剤または、オキサリプラチンまたはシスプラチン
のような白金に基づく薬剤から選択することができる。更に、様々な実施態様において、
化学療法剤は、トポイソメラーゼＩ阻害剤（例えばＳＮ−３８）およびアルキル化剤（例
えばシクロホスファミド）から選択される薬剤以外であることができる。本発明の組合せ
によって誘導される抗癌効果は、予防、腫瘍の進行の阻害、腫瘍成長の減少および癌性お
よび非癌性腫瘍を含む腫瘍再発からの保護を含む。腫瘍の進行は、侵入、転移、再発およ
び腫瘍の大きさの増加を含む。腫瘍成長の減少はまた、完全寛解に導く腫瘍の滅失または
除去を含む。
【００９４】
さらに、本発明が、化学療法剤に対する許容度を改善するために効果的であると更に見
出した。従来技術で知られるように、癌化学療法を受ける患者に関する主な障害は、ほと
んどの化学療法剤の強力な毒性による重症および有害な副作用の出現である。本願明細書
の実施例３に例証したように、用量制限毒性（ＤＬＴ）濃度で、５ＦＵと組み合わせてヒ
ト化ＢＡＴ抗体（ＣＴ−０１１）の使用は、経時的な投与計画を用いて、マウスの向上し
た生存性を生じる。これらの観測は、化学療法を受ける患者の化学療法剤に対する許容度
を改善するためのヒト化ＢＡＴ抗体の使用を立証する。
【００９５】
本発明は、更に、腫瘍を有する対象の生存性を向上させる方法を提供し、それは本発明
のヒト化抗体の投与、それ自身または、任意選択で、一つ以上の化学療法剤の更なる投与
と組み合わせることを含む。例えば、ヒト癌患者（実施例８）のＣＴ−０１１によって誘
導される「治癒」効果は、このような抗体単一療法を立証する。本発明の態様は、化学療
法が失敗した場合または患者が化学療法剤を許容することができない場合において、特に
有益である。
【００９６】
本発明は、更に、腫瘍の再発を減少または予防する方法を提供し、それは本発明のヒト
化抗体の投与、それ自身または、任意選択で、一つ以上の化学療法剤の更なる投与と組み
合わせることを含む。本願明細書の実施例６に説明されるように、本発明のヒト化抗体お
よび化学療法剤を用いる実験動物の組合せ治療は、腫瘍再発を起源の腫瘍型による再誘導
で抑制するような「記憶」効果を、明らかに誘導する。
【００９７】
全種類の腫瘍を、本発明の方法によって治療することができる。この腫瘍は、固体また
は非固形であることができる。
【００９８】
本発明の組合せで治療することができる固形腫瘍のいくつかの例は、癌腫、肉腫、芽細
胞腫または膠腫がある。このような腫瘍のいくつかの例は、表皮状腫瘍、頭頸部腫瘍のよ
うな扁平上皮腫瘍、結腸直腸腫瘍、前立腺腫瘍、胸部腫瘍、小細胞および非小細胞肺腫瘍
を含む肺腫瘍、膵臓腫瘍、甲状腺腫瘍、卵巣腫瘍、肝腫瘍、食道腫瘍および胃腫瘍がある
。他の例は、カポシ肉腫、中枢神経系腫瘍、神経芽細胞腫、毛管の血管芽細胞腫、髄膜腫
および脳転移、黒色腫、胃腸および腎臓の癌腫および肉腫、横紋筋肉腫、神経グリア芽細
胞腫、好ましくは多形性神経膠芽腫ならびに平滑筋肉腫がある。血管性皮膚癌の例は、悪
性ケラチン合成細胞、例えばヒト悪性ケラチン合成細胞の成長を抑制することによって治
療することができる扁平上皮癌、基底細胞癌および皮膚癌がある。
【００９９】
非固形腫瘍のいくつかの例は、白血病、多発性骨髄腫およびリンパ腫がある。白血病の
いくつかの例は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リン
パ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、赤血球白血病または単球性白
血病がある。リンパ腫のいくつかの例は、ホジキン病、非ホジキン病またはマントル細胞
リンパ腫を伴うリンパ腫がある。
【０１００】
腫瘍の一般に好ましい種類は、以下の群から選択される：結腸直腸癌腫；非小肺癌（Ｎ
ＳＣＬＣ）および小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）を含む肺癌腫；乳癌；黒色腫；卵巣悪性腫瘍；
子宮頚癌（膵臓癌）；頭頸部癌腫；胃腸の癌腫；食道腫瘍；肝細胞癌；多発性骨髄腫；腎
細胞癌；前立腺腫瘍；非ホジキンリンパ腫；ホジキン病；マントル細胞リンパ腫；カポシ
肉腫；扁平上皮癌；基底細胞癌；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭ
Ｌ）；急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）。
【０１０１】
本発明の教示によれば、本発明のヒト化抗体が化学療法を開始する前、間または後で、
任意選択で放射線療法ならびに、それらのいずれかの組合せ、すなわち、化学療法および
、任意選択で、放射線療法を開始する前、間または後に投与することができる点に留意す
る必要がある。例えば、本発明の抗体を、化学療法を開始する前後の、１〜３０日の間で
投与することができる。この抗体は、化学療法の経過の間で、更に投与されることができ
る。
【０１０２】
本発明の複合治療方法において、抗体を、例えば実質的に同時または並行で、化学療法
と並行して投与することができる。例えば、他の投与計画をまた、例えば重複計画（over
lapping schedule）または、２種類の治療を、交替、順次または連続して投与することを
含むものを用いることができる。
【０１０３】
本発明のヒト化抗体
本願明細書で使用するように、用語「ＢＡＴ」および「ＢＡＴ抗体」は、広義に使われ
、特にｍＢＡＴ−１またはその抗原結合分画として知られるマウスのモノクローナル抗体
と同一またはそれに基づいた抗体に適用される。モノクローナル抗体ｍＢＡＴ−１は、米
国特許第５，８９７，８６２号にて開示したように、Accession No.1-1397の下で、the C
ollection Nationale de Cultures de Microorganismes（ＣＮＣＭ）に寄託されるハイブ
リドーマ細胞線によって分泌される。更に「ＢＡＴ」および「ＢＡＴ抗体」は、ｍＢＡＴ
−１、例えば米国特許出願番号２００３／００２６８００号にて説明したようなキメラ抗
体と同じ抗原エピトープを認識する抗体を指すことができる。ＢＡＴ抗体はまた、国際公
開０３／０９９１９６号および米国特許出願公開番号２００８／００２５９８０号におい
て開示される様々な例のヒト化抗体を含む。用語「ＣＴ−０１１」、「ｈＢＡＴ」および
「ｈＢＡＴ−１」は、本発明による１つのヒト化抗体を指すために、本願明細書で交互に
用いる。
【０１０４】
一般に、ヒト化モノクローナル抗体の軽鎖可変領域は、下記式によって特徴づけられる
：
ＦＲＬ１−ＣＤＲＬ１−ＦＲＬ２−ＣＤＲＬ２−ＦＲＬ３−ＣＤＲＬ３−ＦＲＬ４
ここで、各々のＦＲは独立のヒト抗体のフレームワーク領域であり、各々のＣＤＲは独
立のモノクローナルのｍＢＡＴ−１抗体の相補性決定領域である。
【０１０５】
一般に、ヒト化モノクローナル抗体の重鎖可変領域は、下記式によって特徴づけられる
：
ＦＲＨ１−ＣＤＲＨ１−ＦＲＨ２−ＣＤＲＨ２−ＦＲＨ３−ＣＤＲＨ３−ＦＲＨ４
ここで、各々のＦＲは独立のヒト抗体のフレームワーク領域であり、各々のＣＤＲは独
立のモノクローナルのｍＢＡＴ−１抗体の相補性決定領域である。
【０１０６】
特定の実施態様において、ＦＲｓは、ヒトＴＥＬ９抗体（配列番号：１３０）の軽鎖可
変領域から誘導、または一定のアミノ酸残基でそこから修飾される。
【０１０７】
ヒトＴＥＬ−９抗体は、ワクチン接種を受けていないドナーの末梢血液リンパ球から調
製される重（ＶＨ）および軽（ＶκおよびＶλ）鎖可変（Ｖ）遺伝子の免疫グロブリンの
多様なライブラリで識別された(Marks et al. J Mol Biol. 1991, 222:581-97)。この抗
体は、特に七面鳥卵白リゾチーム（ＴＥＬ）抗原に結合することを示した。ヒトＴＥＬ９
抗体の軽鎖可変領域から誘導または修飾したＦＲアミノ酸配列は、下記からなる群から選
択することができる：ＦＲＬ１，［ＥＩＶＬＴ  ＱＳＰＳＳ  ＬＳＡＳＶ  ＧＤＲＶＴ  
ＩＴＣ；配列番号：１］；ＦＲＬ２，［Ｗ（Ｆ  ｏｒ  Ｙ）ＱＱＫＰＧ  ＫＡＰＫＬ（Ｗ
ｏｒ  Ｌ）ＩＹ；配列番号：２］；ＦＲＬ３，［ＧＶＰＳＲ  ＦＳＧＳＧ  ＳＧＴ（Ｄ
ｏｒ  Ｓ）（Ｙ  ｏｒ  Ｆ）（Ｃ  ｏｒ  Ｔ）ＬＴＩＮＳ  ＬＱＰＥＤ  ＦＡＴＹＹ  
Ｃ；配列番号：３］；およびＦＲＬ４，［ＦＧＧＧＴ  ＫＬＥＩＫ；  配列番号：４］。
【０１０８】
特定の実施態様において、ＦＲｓは、ヒトｈｓｉｇｈｖ１２９５抗体（配列番号：１４
６）の重鎖可変領域から誘導、または一定のアミノ酸残基でそこから修飾される。
【０１０９】
ヒトｈｓｉｇｇｖ１２９５抗体は、慢性関節リウマチを患う３人の患者および、全身性
エリテマトーデスを患う一人の患者の滑液または末梢血液から安定ハイブリドーマおよび
エプスタイン−バール  ウイルス導入Ｂ細胞系から分離した(Fang et al., J Exp Med. 1
994, 179:1445-56)。
【０１１０】
ヒトｈｓｉｇｈｖ１２９５抗体の重鎖可変領域から誘導または修飾したＦＲアミノ酸配
列を、下記からなる群から選択することができる：ＦＲＨ１，［Ｑ（Ｉ  ｏｒ  Ｖ）ＱＬ
Ｖ  ＱＳＧＳＥ  ＬＫＫＰＧ  ＡＳＶＫＩ  ＳＣＫＡＳ  ＧＹ（Ｔ  ｏｒ  Ｓ）Ｆ（Ｔ  
ｏｒ  Ｓ）；配列番号：５］；ＦＲＨ２，［ＷＶ（Ｒ  ＯＲ  Ｋ）ＱＡＰＧＱ  ＧＬ（Ｑ
ｏｒ  Ｋ）ＷＭＧ；配列番号：６］；ＦＲＨ３，［ＲＦ（Ｖ  ｏｒ  Ａ）ＦＳＬＤＴ  
ＳＶ（Ｎ  ｏｒ  Ｓ）ＴＡＹＬＱ  ＩＴＳＬ（Ｔ  ｏｒ  Ｎ）ＡＥＤＴＧ  ＭＹＦＣ（Ｖ
ｏｒ  Ａ）（Ｒ  ｏｒ  Ｋ）；配列番号：７］；およびＦＲＨ４，［ＷＧＱＧＴ  ＬＶ
ＴＶＳ  Ｓ；配列番号：８］
【０１１１】
様々な実施態様によれば、軽鎖可変領域は、下記からなる群から選択される少なくとも
一つのアミノ酸配列を含む：ＣＤＲＬ１［ＳＡＲＳＳ  ＶＳＹＭＨ；配列番号：９］；Ｃ
ＤＲＬ２［ＲＴＳＮＬ  ＡＳ；配列番号：１０］；ＣＤＲＬ３［ＱＱＲＳＳ  ＦＰＬＴ；
および配列番号：１１］。ここで、ＣＤＲはマウスのＢＡＴ−１抗体から誘導され、添え
字「Ｌ」および「Ｈ」はそれぞれ、軽鎖および重鎖領域を示す。
【０１１２】
様々な実施態様によれば、重鎖可変領域は、下記からなる群から選択される少なくとも
一つのアミノ酸配列を含む：ＣＤＲＨ１［ＮＹＧＭＮ；  配列番号：１２］；ＣＤＲＨ２
［ＷＩＮＴＤ  ＳＧＥＳＴ  ＹＡＥＥＦ  ＫＧ；配列番号：１３］；およびＣＤＲＨ３［
ＶＧＹＤＡ  ＬＤＹ；配列番号：１４］。
【０１１３】
様々な実施態様によれば、ヒト化抗体は、
ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：１５），ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：１６），ＢＡＴＲＫＣ（
配列番号：１７），およびＢＡＴＲＫＤ（配列番号：１８）からなる群から選択される軽
鎖可変領域と；
Ａ（配列番号：２０），ＢＡＴＲＨＢ（配列番号：２１），ＢＡＴＲＨＣ（配列番号：
２２），ＢＡＴＲＨＤ（配列番号：２３）およびＢＡＴＲＨＥ（配列番号：２４）からな
る群から選択される重鎖可変部とを含む。
【０１１４】
さらに他の実施態様によれば、ヒト化抗体は、下記からなる群から選択される可変領域
を含む：ＢＡＴＲＨＡ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２０／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨ
Ｂ／ＢＡＴＲＫＡ（配列番号：２１／配列番号：１５），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＢ（
配列番号：２１／配列番号：１６），ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＢ（配列番号：２２／配
列番号：１６），ＢＡＴＲＨＢ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２１／配列番号：１８），お
よびＢＡＴＲＨＣ／ＢＡＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）。
【０１１５】
様々な好ましい実施態様によれば、ヒト化モノクローナル抗体は、ＢＡＴＲＨＣ／ＢＡ
ＴＲＫＤ（配列番号：２２／配列番号：１８）に対応する可変領域を有する。
【０１１６】
一の実施態様において、ヒト化ＢＡＴ抗体は、配列番号：９０に記載したポリヌクレオ
チド配列によってエンコードすることができる配列番号２２に記載したような重鎖可変領
域を有する。
【０１１７】
一の実施態様において、ヒト化抗体は、配列番号：８９に記載したポリヌクレオチド配
列によってエンコードすることができる配列番号１８に記載したような軽鎖可変領域を有
する。本発明に用いられる適切なヒト化抗体のアミノ酸およびヌクレオチド配列は、米国
特許出願番号２００８／００２５９８０号にて開示される。本発明で使用する適切な重鎖
可変領域および軽鎖可変領域のヒト抗体フレームワーク部位は、例えば配列番号：１１１
〜１２８および配列番号：１３０〜１４４をそれぞれ含む。
【０１１８】
化学療法
化学療法剤は、癌細胞によるそれらの効果、薬が妨げる細胞の活性もしくは処理、また
は薬が影響を及ぼす細胞周期の特定相に基づいていくつかの群に分けられる。したがって
、化学療法剤は、以下の区分のうちの１つに分類される：アルキル化剤、ニトロソ尿素化
合物、代謝拮抗剤、アントラサイクリン系、トポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害剤、有糸
分裂阻害剤、なかでも、白金に基づく薬、ステロイドおよび抗血管形成剤。
【０１１９】
代謝拮抗剤（「ヌクレオシド類似体」とも呼ぶ）はＤＮＡ分子の細胞構築物として天然
の物質に置換して、それによって、細胞代謝およびタンパク質合成のために必要な酵素の
機能を変更する。それらが細胞発育のために必要な栄養分を模倣する結果、細胞は結局細
胞溶解を受ける。ヌクレオシドが機能しないヌクレオシド類似体で置換される場合、後者
はＤＮＡおよびＲＮＡに組み込まれ、最後に、ＤＮＡを合成する細胞の能力を阻害するこ
とによって細胞周期停止およびアポトーシスを誘導する。代謝拮抗剤は、それらが新規な
細胞の形成のために新規なＤＮＡ合成を受ける細胞に主に作用するように、特定の細胞周
期および細胞分裂のＳ期の間で最も効果的である。これらの薬と関連する毒性は、急速に
成長して分裂する細胞で見られる。代謝拮抗剤の例は、プリン拮抗剤、ピリミジン拮抗剤
および葉酸拮抗剤を含む。これらの薬剤は、Ｓ期の間、細胞に損傷を与え、白血病、胸部
、卵巣および胃腸管の腫瘍、ならびに他の癌を治療するために共通で使用する。その代謝
拮抗剤の具体的な例としては、５‐フルオロウラシル（５ＦＵとしても知られる）、カペ
シタビン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、ゲムシタビン、シタラビン、フル
ダラビンおよびペメトレキセドがある。
【０１２０】
白金に基づく化学療法薬はいくつかの種々の方法でＤＮＡを架橋して、有糸分裂によっ
て細胞分裂を妨げる。損傷を受けたＤＮＡはＤＮＡ修復機構を誘導し、修復が不可能であ
ると判明すると、次々にアポトーシスを活性化する。ＤＮＡ変化の中で最も顕著なのは、
プリン塩基での１，２−インターストランド架橋である。これらは、ほとんど９０％の付
加物を形成する１，２−インターストランドｄ（ＧｐＧ）付加物および、残りは１，２−
インターストランドｄ（ＡｐＧ）付加物を含む。１，３−インターストランドｄ（ＧｐＸ
ｐＧ）付加物は生じるが、ヌクレオチド除去修復（ＮＥＲ）によって、容易に切除される
。他の付加物は、インターストランド架橋と白金に基づく薬の活性に関与するために仮想
した機能しない付加物とを含む。細胞タンパク質、特にＨＭＧ領域タンパク質との相互作
用はまた、これが多分その主要な方法の作用でないけれども、有糸分裂を妨げる機構とし
て促進された。白金基づく化学療法薬は、シスプラチンを含む（別名シスプラチナム）ま
たはシス-ジアミンジクロリド白金ＩＩ（ＣＤＤＰ）、カルボプラチンおよびオキサリプ
ラチンがある。シスプラチンは、それがアルキル基を全く有しなくアルキル化反応を実行
することができないにもかかわらず、アルキル化剤にしばしば指定される。それはアルキ
ル化剤類似に正確に分類される。白金に基づく化学療法薬は、肉腫、いくつかの癌腫（例
えば小細胞肺癌および卵嚢癌）、リンパ腫および胚細胞腫瘍を含む様々な形の癌を治療す
るために用いられる。
【０１２１】
分裂抑制剤は、細胞分裂に干渉する。この分類で最も既知の化学療法剤は、パクリタキ
セル（別名タキソール（登録商標）、「植物アルカロイド」、「タキサン」および「抗微
小管薬剤」）である。ドセタキセルと共に、それは、タキサンの薬分類を構成する。しか
しながら、他の有糸分裂阻害剤は、エトポシド、ビンブラスチンおよびビンクリスチンを
含むがこれに限定されないものが知られている。パクリタキセルは、細胞分裂の間、正常
微小管成長を妨げてそれらの機能を抑制することによって作用する；それはそれらの構造
を高度に安定化させる。これは、柔軟な方法でその細胞骨格を使用する細胞の能力を無効
にする。詳細には、パクリタキセルはチューブリンのβサブユニット、微小管の「細胞構
築物」に結合し、パクリタキセルの結合は、適所にこれらの細胞構築物を固定する。その
結果として生じる微小管／パクリタキセル錯体は、分解する能力がない。これは、微小管
（動的不安定性と呼ぶ）の短縮および延長が他の細胞構成部分を移送するための機構とし
て、それらの機能が必要であるので、細胞機能に悪影響を与える。例えば、有糸分裂の間
、微小管は、２つの娘細胞核内にそれらの複製および次の分離の間に染色体を配置する。
さらにまた、パクリタキセルは、アポトーシス停止タンパク質Ｂｃｌ−２（Ｂ細胞白血病
２）に結合して、その機能を抑制することによって、癌細胞の予定細胞死（アポトーシス
）を誘導する。
【０１２２】
抗癌の化学療法において広く使用したＤＮＡ相互に作用する薬物の他の群は、アントラ
サイクリン系抗生物質の群であり、なかでも、ダウノルビシン、ドキソルビシン（別名ア
ドリアマイシン（登録商標）および塩酸ドキソルビシン）、レスピノマイシンＤおよびイ
ダルビシンがある。これらの薬は、高分子の生合成の挿入および阻害によってＤＮＡと相
互に作用して、酵素トポイソメラーゼＩＩの進行を阻害して、転写でＤＮＡを巻き戻す。
それらは、それが複製のためのＤＮＡ鎖を破壊した後、トポイソメラーゼＩＩ錯体を安定
化させて、再封止されることからＤＮＡ二重螺旋を妨げ、複製の処理を停止する。それは
、広範囲にわたる癌の治療で共通して用いられる。
【０１２３】
アルキル化抗腫瘍薬は、ＤＮＡを直接攻撃する。それらは、ＤＮＡ二重−螺旋鎖におけ
るＤＮＡの架橋性グアニン核酸塩基にアルキル基を攻撃する。これは、延伸および分離す
ることができない鎖を作成する。これはＤＮＡ合成で必要であるように、細胞はもはや分
裂することができない。これらの薬は、非特異的に作用する。シクロホスファミドはアル
キル化剤であるが、それは非常に強力な免疫抑制物質である。
【０１２４】
トポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害剤はトポイソメラーゼＩおよび２の酵素活性にそれ
ぞれ、干渉して、最終的にはＤＮＡ合成および転写の阻害に導く。トポイソメラーゼＩ阻
害剤の例はトポテカンおよびイリノテカンがある。イリノテカンは、カルボキシエステラ
ーゼ−転換酵素によって生物学的に活性の代謝産物７−エチル−１０−ヒドロキシ−カン
プトテシン（ＳＮ−３８）に変換されるプロドラッグである。その親化合物イリノテカン
より１０００倍強力なＳＮ−３８は、トポイソメラーゼＩとＤＮＡの間の開裂可能な複合
体を安定させることによってトポイソメラーゼＩ活性を阻害し、ＤＮＡ合成を阻害および
アポトーシスの細胞死を誘導するＤＮＡ破壊を生じる。進行中のＤＮＡ合成は、イリノテ
カンがその細胞傷害効果を及ぼすために必要であるので、それはまたＳ期に特有の薬剤と
して分類される。トポイソメラーゼＩＩ阻害剤の例は、エトポシドおよびテニポシドがあ
る。
【０１２５】
血管新生を阻害する薬剤は、新規な血管の生成を妨げ、最終的には腫瘍の「飢餓」に導
く。抗血管形成薬剤の非制限的な例は、モノクローナル抗体のベバシズマブ、ドーパミン
およびテトラチオモリブデートがある。
【０１２６】
脈管内皮の成育因子（ＶＥＧＦ）は、血管拡張作用、増加する血管透過および血管内皮
細胞マイトジェネシスの介在する３２〜４２ｋＤａの二量体のグリコプロテインである。
ＶＥＧＦ遺伝子の差動のエキソンスプライシングは、３つの分泌されたアイソフォームで
コードする３つの主ｍＲＮＡ種を生じる（添え字は、アミノ酸の数を意味する）：ＶＥＧ
Ｆ１８９、ＶＥＧＦ１６５およびＶＥＧＦ１２１。多くの小さいスプライス変異をまた記
載した（ＶＥＧＦ２０６、ＶＥＧＦ１８３、ＶＥＧＦ１４５およびＶＥＧＦ１４８）。Ｖ
ＥＧＦポリペプチドの異型および癌治療でのそれらの用途は、例えば国際公開２００３／
０１２１０５号で開示される。
【０１２７】
照射
本発明のヒト化抗体および（複数の）化学療法剤と組み合わせて使うことができる放射
線は、治療される患者に外部または体内のいずれかである。供与源は患者にとって外部の
とき、治療法は外部的な線治療（ＥＢＲＴ）として知られている。放射線源は患者にとっ
て体内のとき、治療は密封小線源治療（ＢＴ）と呼ばれている。
【０１２８】
照射は、この目的のために製造される標準の装置、例えばＡＥＣＬ  Ｔｈｅｒａｔｒｏ
ｎおよびＶａｒｉａｎ  Ｃｌｉｎａｃを用いてよく知られた標準の技術に従って投与され
る。
【０１２９】
外部放射線の供与源および患者内への進入位置の間の距離は、標的細胞の死滅と副作用
の最小化との間で許容可能な釣合いを示す、いかなる距離であることができる。一般的に
、外部放射線の供与源は、患者内に侵入の位置から、７０〜１００ｃｍの間である。
【０１３０】
密封小線源治療は、通常、患者の線源を配置することによって実行される。一般的に、
放射線源は、治療されている組織から、約０〜３ｃｍで配置される。既知の技術は、間質
、内腔および表面密封小線源治療を含む。放射性シードは、永久的または一時的に埋め込
むことができる。永続的な体内埋め込みで用いられたいくつかの典型的な放射性原子は、
ヨウ素−１２５およびラドンがある。一時的な体内埋め込みで用いられたいくつかの典型
的な放射性原子は、ラジウム、セシウム１３７およびイリジウム−１９２がある。密封小
線源治療で用いられたいくつかの更なる放射性原子は、アメリシウム−２４１および金−
１９８がある。
【０１３１】
照射の量は、従来技術で知られるように非常に多い要素に依存する。このような要素は
、治療されている器官、偶然に悪影響を及ぼすかもしれない照射経路における健康な器官
、放射線療法に関する患者の許容差および治療を必要とする体の領域を含む。この量は、
一般的には１〜１００Ｇｙの間、特に２〜８０Ｇｙの間である。報告された幾つかの量は
、脊髄に対して３５Ｇｙ、腎臓に対して１５Ｇｙ、肝臓に対して２０Ｇｙおよび前立腺に
対して６５〜８０Ｇｙがある。しかしながら、本発明がいかなる特定の用量に限定されな
いことを強調すべきである。この量は、前述の要素を含む所定の状況で特定の要素に従っ
て処理する医師によって測定されるだろう。
【０１３２】
密封小線源治療用の放射線量は、外部の線治療用で上述したものと同様であることがで
きる。外部の線照射治療の量を決定するために上述の要素に加えて、使用される放射性原
子の性質をまた、密封小線源治療の用量を決定する際に考慮する。
【０１３３】
組成物、投与および投与量
本発明の方法ために、ヒト化抗体は、従来技術、特にタンパク質活性薬剤に関して知ら
れるような、医薬品組成物を形成するための一つ以上の薬学的に許容可能なキャリア、安
定剤または添加剤（賦形剤）を用いて従来の方法で調製することができる。（複数の）キ
ャリアは、組成物の他の成分と互換性を持ち、それの受容者に有害でないという意味で“
許容可能”である。適切なキャリアは、一般的に生理食塩水または、グリセリンまたはプ
ロピレングリコールのようなエタノールポリオールがある。
【０１３４】
抗体は中性または塩形態として調製することができる。薬学的に許容可能な塩類は、酸
添加塩（遊離アミノ基が形成）および塩酸もしくはリン酸のような無機酸または、酢酸、
シュウ酸、酒石酸およびマレイン酸のような有機酸で形成されるものを含む。遊離カルボ
キシル基が形成される塩類はまた、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウムま
たは水酸化第二鉄のような無機塩基および、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、２
−エチルアミノエタノール、ヒスチジンおよびプロカインに基づく有機塩基から誘導する
ことができる。
【０１３５】
この組成物は静脈内、筋肉内、皮下または腹膜内の投与で適切に調製することができ、
抗体の滅菌の水溶液を好都合なことに含み、好ましくは受容者の血液と等張である。この
ような製剤を、塩化ナトリウム、グリシンなどのような生理的に互換性を持つ物質を含む
水内で固形の活性成分を溶解し、水溶液を生産する生理学的条件と互換性を持つ緩衝され
たｐＨとし、前記溶液を滅菌することによって一般的に調製される。これらは、単位また
は複数投与用コンテナ、例えば密封アンプルまたはバイアルで調製することができる。
【０１３６】
この組成物は、例えばポリエチレングリコールのような安定剤、タンパク質、糖類（例
えばトレハロース）、アミノ酸、無機酸およびそれらの混合剤を混合することができる。
安定剤を、適当な濃度およびｐＨで水溶液内に用いる。水溶液のｐＨを、５．０〜９．０
の範囲、好ましくは６−８の範囲に調整する。抗体を調製することにおいて、抗吸着剤を
用いることができる。他の適切な賦形剤は、アスコルビン酸のような抗酸化剤を一般的に
含むことができる。
【０１３７】
この組成物は、複合体にポリマーの使用によって達成またはタンパク質を吸収すること
ができる徐放性製剤として調製することができる。徐放製剤用で適当なポリマーは、例え
ばポリエステル、ポリアミノ酸、ポリビニル、ピロリドン、エチレン酢酸ビニルおよびメ
チルセルロースがある。徐放性のために他の可能な方法は、ポリエステル類、ポリアミノ
酸、ヒドロゲル、ポリ（乳酸）またはエチレンビニル酢酸塩コポリマーのような重合物質
の粒子に、抗体を混合することである。あるいは、これらの薬剤を重合粒子に混合する代
わりに、調製したマイクロカプセル内にこれらの原料を混入することが可能であり、例え
ばコアセルベーション技術、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプ
セルおよびポリ（メタクリル酸メチル）のそれぞれのマイクロカプセルの界面重合法、例
えばリポソーム、アルブミンミクロスフィア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノ
カプセルのコロイド薬物送達系、または、マクロエマルジョンである。
【０１３８】
経口薬製剤が望まれるとき、組成物はキャリア、例えばラクトース、スクロース、スタ
ーチ、タルク・ステアリン酸マグネシウム、結晶セルロース、メチルセルロース、カルボ
キシメチルセルロース、グリセリン、アルギン酸ナトリウムまたはアラビアゴムと組み合
わせることができる。
【０１３９】
本発明のヒト化抗体を、好ましくは非経口的、一般に静脈内注入によって投与する。投
与はまた、腹腔内、経口、皮下または筋肉内の経路によることができる。抗体は、通常患
者体重の約０．１〜約２０ｍｇ／ｋｇ、一般に約０．５〜約１０ｍｇ／ｋｇおよび多くは
約１〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲で投与される。この点に関して、循環半減期の少なくとも１
２時間、好ましくは少なくとも４日、より好ましくは最高２１日を有する抗体を用いるこ
とが好ましい。キメラおよびヒト化の抗体は、それぞれ、最高４日および最高１４〜２１
日の循環の半減期を有すると考えられる。いくつかの場合において、多い初回負荷量、そ
の後、治療期間にわたる周期的（例えば、毎週）な維持量を投与することは、有利である
ことができる。抗体をまた、徐放送達系、能動輸送態および、持続注入で他の既知の送達
系によって送達することができる。投与する処方薬は、その薬物動態学に基づいて特定の
抗体の所望の循環濃度を提供するために変化することができる。したがって、用量を、治
療薬の所望の循環濃度を維持するために算出する。
【０１４０】
一般的に、有効量は、治療上の組合せの活性、対象の状態および治療される対象の体重
または表面積で決定されるだろう。服用量の大きさおよび投与処方はまた、特定の対象に
おいて、本発明の組合せで各々の薬剤の投与を伴って起こるいずれかの有害な副作用の影
響の、存在、性質および範囲で決定されるだろう。投与される治療組成物の有効量を決定
するとき、医師は、なかでも、循環する血漿濃度、毒性および疾患の進行を評価する必要
がある。
【０１４１】
本発明の組合せ方法の様々な実施態様において、ヒト化抗体および化学療法剤は多くの
治療計画のいずれかに従って投与することができ、「投薬計画」および「投与処方」とも
いい、投与の頻度および各々の活性の薬剤の投与の順序を参照する。例えば、ヒト化抗体
および化学療法剤は実質的に同時、すなわち同時に、例えば混合性剤形または別々の剤形
を用いて、投与することができる。投与のこの形態はまた、「同時」投与ということがで
きる。併用投与は、同じ一般的な時間内、例えば必ずしも同時でなく例えば同日に、活性
薬剤の投与をいう。例えば、１つの活性薬剤は食物とともに投与を必要とすることができ
る一方、その他は半空腹状態の投与を必要とする。交互投与は、特定の時間の間、例えば
数日または１週の工程にわたって１つの薬剤を投与し、その後、次の同一の期間にその他
の薬剤を投与し、それから、一つ以上の周期のパターンを繰り返すことを含む。経時的ま
たは連続的な投与は、第一の時間の間、一つ以上の服用量を用いて、１つの薬剤を投与し
て、その後、第二の時間の間、一つ以上の服用量を用いて他の薬剤の投与することを含む
。重複計画をまた使用することができ、それは治療期間にわたる異なる日、必ずしも規則
的な順序によるわけではない活性薬剤の投与を含む。これらの一般的なガイドライン上の
変更はまた、用いられる薬剤および対象の状態により、使用することができる。
【０１４２】
いくつかの特定の組合せにおいて、投与の特定の順序、例えばその他より前に１つの薬
剤を用いることは、有利であることができる。例えば、本願明細書（図５）に説明したよ
うに、ダカルバジンはヒト化抗体の２４時間後に加えられるとき以外に同時に与えるとき
、抗体の活性に悪影響を与える。
【０１４３】
ところで本発明を一般に説明したように、同様なことは、実例として提供し、本発明を
限定することを目的としない以下の実施例を参照することにより容易に理解されるだろう
。
【実施例】
【０１４４】
実施例１  生体外の機能的な分析
機能的な分析は、培養組織におけるマウスおよびヒトのリンパ球の生存性を改善するた
めに、ｈＢＡＴ−１の性能に基づく。この実施例において、リンパ球単独の改良された生
存性にｈＢＡＴ−１および化学療法薬と組み合わせる効果を、細胞生存の％差または用量
反応曲線下面積（ＡＵＣを差％×μｇ／ｍＬで表す）によって評価および示した。化学療
法剤を、示した濃度で、ｈＢＡＴ−１治療の２４時間後または併用で適用した。機能的な
分析法で試験される化学療法剤は、５ＦＵ（図１，２および７）、ＳＮ−３８、イリノテ
カンの活性の誘導体（図３および４）、シスプラチン、オキサリプラチン、タキソール（
パクリタキセル）およびダカルバジン（図５および７）、シタラビン、シクロホスファミ
ドおよびドキソルビシン（図６）がある。
【０１４５】
その結果は、特定の薬剤（例えば５ＦＵ、シスプラチン、オキサリプラチン、パクリタ
キセルおよびシタラビン）がマウスのリンパ球におけるｈＢＡＴ−１の活性に悪影響を与
えないことを示す。さらに、（シスプラチン）と併用、または、（５ＦＵおよびパクリタ
キセル）とｈＢＡＴ−１を連続して与えるとき、相乗効果を、活性値（細胞生存およびＡ
ＵＣの％差）の２０％〜３０％向上によって示されることで観測する。化学療法剤単独の
使用は、この機能的な分析におけるリンパ球細胞生存を増加する際の活性が全くない（図
１Ｃ）。相乗作用の結果は単離されたヒトＣＤ４＋リンパ球によって得られ、ｈＢＡＴと
組み合わせて５ＦＵまたはシスプラチンの経時的な治療は、抗体単独の活性より２倍高い
活性（細胞生存の％差）を生じることを示した（図７）。その結果はまた、一定の化学療
法剤（例えばＳＮ−３８；シクロホスファミド）がマウスのリンパ球培養でｈＢＡＴ−１
と組み合わせて与えられるとき、それらが細胞生存を改善しないので、ヒト化ＢＡＴ抗体
との組合せで使用することは適切でない可能性があることを示唆する。さらに、一定の化
学療法剤（例えばダカルバジン）は経時的な投与計画で用いられるときのみ適切である可
能性がある（図３〜５）。
【０１４６】
実施例２  結直腸癌腫瘍に対する複合治療
結腸直腸癌腫腫瘍（ＣＴ２６腫瘍）を、ＣＴ２６細胞（１０６細胞／マウス（ｎ＝６）
）のＳ．Ｃ．注射によって誘導した。注射の日を本願明細書で０日という。５−ＦＵ２０
ｍｇ／ｋｇを、６〜９、１５〜１７、２２〜２４および２９〜３１、３６〜３８および４
３〜４５日にＬＰで投与した。ｈＢＡＴ−１、１０ｍｇ／マウスを、１０、１８、２５、
３２および３９日にＩ．Ｖ．で投与した（図８〜１０）。完全寛解後の再発の場合（複合
治療群のみで観察）には、７３〜７４、７７〜８０、８５〜８７、９２〜９３日に、５Ｆ
Ｕ２０ｍｇ／ｋｇでさらに治療し、ｈＢＡＴ−１を、８１および８８日に１０ｍｇ／マウ
スをＬＶ投与した。
【０１４７】
治療の単一サイクル後の腫瘍大きさの探究研究において、腫瘍体積を、腫瘍接種後４〜
１６日で一日おきに測定した。その結果は、５ＦＵとの併用療法が５ＦＵまたはｈＢＡＴ
−１単独のいずれかでの治療法を超える利点があることを示す（図８）。
【０１４８】
３つの交互の周期治療後に腫瘍の大きさの追跡研究において、腫瘍体積を、４〜２８日
に一日おきで測定した。その結果は、５ＦＵとｈＢＡＴ−１抗体の複合治療が５ＦＵ単一
療法を超える利点があるだけではなく、活性の増加は相乗作用があることを示す（図９）
。
【０１４９】
全体的な生存性の追跡研究において、生存性割合を、２８日以降を観察して、図１０に
示す。その結果は、複合治療で治療されるマウスにおいて、生存性のパーセントはｈＢＡ
Ｔ−１または５ＦＵ単一療法のいずれかで治療されるマウスより非常に高く、約１７％の
マウスの耐久完全寛解に導くことを明らかに示す。
【０１５０】
実施例３  黒色腫に対する複合治療
マウス（ｎ＝７）に、５×１０５細胞／マウスでＢ１６メラノーマ細胞を皮下接種した
。注射の日を本願明細書で０日という。５−ＦＵを、１〜４および７〜８日に５０ｍｇ／
ｋｇで、腹腔内に投与した。複合治療群において、ｈＢＡＴ−１の１０ｍｇ／マウスの一
回量を、１０日に静脈内に注入した。
【０１５１】
生存性割合を、８日に開始で観察した。複合治療で治療されるマウスにおいて、生存性
のパーセントは、５ＦＵの高い投与量で治療されるマウスより非常に高かった（図１１）
。別に述べたように、組合せ治療は、ヒト化抗体を服用量制限毒性（ＤＬＴ）濃度（５０
ｍｇ／ｋｇ／日）で５ＦＵの９日の周期後投与した経時的な投与計画を用いて、実験的な
黒色腫モデルのマウスにおいて改善された生存性を生じた。その結果は、複合治療が５−
ＦＵのＤＬＴ濃度に許容度を改善することを明らかに示唆する。
【０１５２】
実施例４  イリノテカン（１）を用いての複合治療
結腸直腸癌腫腫瘍（ＣＴ２６腫瘍）を、ＣＴ２６細胞、１０６細胞／マウス（ｎ＝６）
のＳ．Ｃ．注射によって誘導した。注射の日を本願明細書で０日という。イリノテカン１
００ｍｇ／ｋｇを、７および１５日にＬＰで投与した。ｈＢＡＴ−１、１０ｍｇ／マウス
を、１０日にＬＶで投与した（図１２）。治療の単一サイクル後の腫瘍大きさの探究研究
において、腫瘍体積を、４〜１８日に毎日測定した。その結果は、イリノテカンとｈＢＡ
Ｔ−１抗体の複合治療がイリノテカンの単一療法と同じく効果的であるが、ｈＢＡＴ−１
単一療法より効果的でないことを示す（図１２）。
【０１５３】
実施例５  イリノテカン（２）を用いての複合治療
結腸直腸癌腫腫瘍（ＣＴ２６腫瘍）を、ＣＴ２６細胞、１０６細胞／マウス（ｎ＝６）
のＳ．Ｃ．注射によって誘導した。注射の日を本願明細書で０日という。イリノテカン１
００ｍｇ／ｋｇを、７および１５日にＬＰで投与した。ｈＢＡＴ−１（１０ｍｇ／マウス
）を、１０日にＬＶで投与した（図１３）。
【０１５４】
生存性割合は、１６日に開始して観察した。その結果は、複合治療で治療されるマウス
において、生存性のパーセントは、イリノテカン単一療法で治療されるマウスのものと同
等であるが、ｈＢＡＴ−１単一療法で治療されるマウスより低いことを示す。
【０１５５】
実施例６  オキサリプラチンを用いての複合治療
結腸直腸癌腫腫瘍（ＣＴ２６腫瘍）を、ＣＴ２６細胞、１０６細胞／マウス（ｎ＝６）
のＳ．Ｃ．注射によって誘導した。注射の日を本願明細書で０日という。オキサリプラチ
ン１ｍｇ／ｋｇを、４、７〜１０、１４〜１７、２２〜２４および２９〜３１日にＬＰで
投与した。ｈＢＡＴ−１、１０ｍｇ／マウスを、１１、１８、２５および３２日にＬＶで
投与した（図１４〜１５）。
【０１５６】
腫瘍大きさの探究研究において、腫瘍体積を、腫瘍接種後４〜２３日に一日おきで測定
した。その結果は、オキサリプラチンとの併用療法がオキサリプラチン単独での治療法を
超える利点があることを示す（図１４）。
【０１５７】
全体的な生存性についての探究において、生存性割合を、１５日に開始して観察した。
その結果は、複合治療で治療されるマウスにおいて、生存性のパーセントがオキサリプラ
チン単一療法で治療されるマウスより非常に高く、マウスの約２０％の耐久完全寛解を導
くことを、明らかに示す（図１５）。
【０１５８】
結腸直腸癌腫腫瘍（ＣＴ２６腫瘍）は、ｈＢＡＴ−１およびオキサリプラチン複合治療
によって、２または５ヵ月間治療されたマウスにおけるＣＴ２６細胞、１０６細胞／マウ
スのＳ．Ｃ．注射によって再誘導した（ｎ＝３）。結腸直腸癌腫腫瘍を、同様の年齢（ｎ
＝６）で、対照の実験に使われていないマウスで新しく誘導した。注射の日を本願明細書
で０日という（図１６）。ＣＲＣの再誘導（再接種）の前に、治療経験があるマウスを、
特定のＥＬＩＳＡによってｈＢＡＴ−１の血清濃度を完全な除去で評価した。
【０１５９】
腫瘍大きさの探究研究において、腫瘍体積を、一日おきに測定して、腫瘍接種後４〜２
３日に探究として示す。その結果は、ｈＢＡＴ−１およびオキサリプラチン複合治療によ
ってあらかじめ治療されるマウスにおいて、腫瘍を２月の探究の間に全く観察されない一
方、対照群において、腫瘍は全てのマウスにおいて数日以内に発現した（図１６Ａ）。
【０１６０】
全体的な生存性の探究研究において、生存性割合を、腫瘍再接種後２１日に開始して観
察した。その結果は、腫瘍（ＣＲＣ）を伴って新しく導入したマウスが３５日以内に死亡
する一方、ｈＢＡＴ−１およびオキサリプラチンの複合治療によってあらかじめ治療され
るマウスは、研究探究の７２日を超える間、腫瘍成長、腫瘍再発および死亡から予防する
ことを明らかに示す（図１６Ｂ）。
【０１６１】
胸部腺癌腫瘍（４Ｔ１腫瘍）はｈＢＡＴおよびオキサリプラチンによってあらかじめ治
療されるマウスにおいて４Ｔ１細胞、１０６細胞／マウスのＳ．Ｃ．注射によって再誘導
し、約３ヵ月の間のＣＲＣの再接種に対して予防する（マウスは図１６に記載、ｎ＝２）
。これらのマウスにおいて、腫瘍は、第１ＣＲＣおよび第２ＣＲＣの注射部位（再接種Ｃ
ＲＣ腫瘍）のものに比べて、異なる部位でＳ．Ｃ．注射した。胸部腺癌腫瘍をまた、同様
の年齢（ｎ＝６）で、実験に使われていないマウスに導入した。注射の日を本願明細書で
０日という（図１７）。
【０１６２】
腫瘍大きさの探究研究において、腫瘍体積を、一日おきに測定して、腫瘍接種後３〜２
１日からを示す。その結果は、胸部腺癌腫瘍が両方のマウス群で向上したことを示す（図
１７Ａ）。これらの結果は、ｈＢＡＴ−１およびオキサリプラチンの複合治療後の結腸直
腸癌腫に対して十分な予防を獲得したマウス（図１６Ａ）が乳癌（図１７Ａ）に対するほ
ど予防しないことを明らかに示す。
【０１６３】
全体的な生存性の探究研究において、生存性割合を、腫瘍再接種後２１日に開始で観察
した。その結果は、両群のマウスが、乳癌から２８〜３５日以内に死亡し、ＣＲＣ再発（
再摂取）に対して長期間保護を呈するマウスが、完全には異なる種類の腫瘍、例えば乳癌
から十分に予防することを示唆することを明らかに示す。あらかじめ処理したマウスの全
てを、本発明の抗体の循環する血清濃度の完全な除去で試験したので、結腸直腸癌腫に対
して得られた腫瘍特異性の予防が活性治療の結果ではなく、むしろ本発明の抗体およびオ
キサリプラチンで先に治療後誘導される免疫記憶反応の結果であるようである。
【０１６４】
全体的に、本発明の抗体および特定の化学療法剤の複合治療、例えば５ＦＵまたはオキ
サリプラチンは、交互計画に従って投与されるとき、腫瘍成長の減少および担癌マウスの
生存性の向上によって評価したように、向上した抗腫瘍活性を生じる。予想外に、複合治
療群のマウスは到達された恒久的完全寛解、オキサリプラチンの場合には特定の腫瘍（Ｃ
ＲＣ）との再接種によって評価したように、すでに獲得した腫瘍再発に対して記憶領域保
護に到達した。
【０１６５】
実施例７  ヒト作用因子／記憶Ｔ細胞でのＣＴ−０１１の効果
ｈＢＡＴ１（ＣＴ−０１１）の活性を、ヒトリンパ球の生存率に基づいて、分析法で評
価した。作用因子／記憶ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋および、実験に使われていないＣＤ４＋
ＣＤ４５ＲＯ−リンパ球を、ｈＢＡＴ  １μｇ／ｍＬによって処理して、その後７２およ
び９６時間培養した。その結果を、細胞生存における％差として示す（図１８）。その結
果は、ＣＴ−０１１が、ヒト作用因子／記憶ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋リンパ球の生存性を
向上する十分な効果を有するが、実験に使われていないＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ−リンパ球
のものは有しないことを、明らかに示す。記憶部前駆細胞の生存率を向上する際のＣＴ−
０１１の証明した活性は、ＣＴ−０１１が腫瘍再発に対して免疫記憶を誘導する活性を有
することを証明する生体内の結果と整合している。
【０１６６】
実施例８  ヒト化モノクローナル抗体ＣＴ−０１１の第１相臨床試験
導入
この研究の目的は、服用量制限毒性（ＤＬＴ）を評価すること、最大耐量（ＭＴＤ）を
決定することおよび高度な血液癌の患者にＣＴ−０１１を投与した一回の薬物動態学を研
究することである。研究の十分な説明が、Berger et al. Clin. Cancer Res. 2008;14(10
) May 15, 2008で提供される。
【０１６７】
患者および方法
研究のための許可基準は、登録患者が以下の血液癌の１つを有しなければならないこと
が必要であった：急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、非ホ
ジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、またはそれらの疾患の進行期お
よび、次の化学療法および／または幹細胞移植（ＳＣＴ）で多発性骨髄腫（ＭＭ）。患者
はそれらがＢｅｒｇｅｒ等に記載したような基準を満たしたと仮定するならば、この研究
で適格だった。
【０１６８】
重要なことに、その基準は下記を含む：幹細胞移植（ＳＣＴ）からの少なくとも４週ま
たはドナーリンパ球持続注入（ＤＬＩ）から１週；寿命＞３ヵ月；免疫の抑制効果を伴う
治療の効果を受けるまたは回復しないいずれかの患者、または自己免疫不全を患った患者
は除外した。これに対する例外はＡＭＬ患者のヒドロキシ尿素治療であり、それは進行す
ることができた。併用する制癌治療（化学療法および免疫療法）の使用を禁止し、それに
応じてＣＴ−０１１投与前に少なくとも４週間停止することになった。
【０１６９】
その研究は、合計１７人の患者を記録した。最も低い服用濃度（０．２ｍｇ／ｋｇ）で
記録した１人の患者は、合計１８の投与治療で例外的治療したように、比較的高い服用濃
度（３．０ｍｇ／ｋｇ）で第１の投与の５ヵ月後に再登録した。ＣＴ−０１１の総量を、
計画的な投薬（ｍｇ／ｋｇ基準）および体重に基づいて決定した。持続注入を、５０ｍＬ
／時間から１００ｍＬ／時間まで率を増加させる段階的方法で実行して、全ての患者は疼
痛寛解薬物（パラセタモール）、コルチコステロイド（ヒドロコルチゾン１００ｍｇ）お
よび抗ヒスタミン剤（フェネルガン）からなる持続注入の前に前投薬を受けた。開始服用
量は０．２ｍｇ／ｋｇであり、それはヒト−当量−服用量（ＨＥＤ）基準でヒト以外の霊
長類およびマウスで行われる毒物学研究において試験される最も高い服用量より、数１０
倍低かった。他の服用量濃度は、０．６ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇお
よび６ｍｇ／ｋｇであった。１つの服用濃度から次への段階的増加は、結局、先の濃度で
全ての患者を、その服用量投与後に少なくとも７日間評価した後に可能であった。
【０１７０】
毒性を、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＣＩ）Ｃｏｍｍｏ
ｎ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ（ＣＴＣＡＥ  Ｖ２）で、その強度（すなわち
、軽度、適度、重度）によって評価した。ＤＬＴを、一人以上の患者でいずれかのグレー
ド３もしくは４の毒性、または少なくとも２／３もしくは３／６の患者におけるいずれか
のグレード２の毒性を誘導する服用量として規定した。ＣＴ−０１１に関連があると判断
されない有害事象を、これらの服用量の段階的増加およびＭＴＤ規則に関する毒性として
考慮しなかった。
【０１７１】
薬剤投与の次に、患者は、２４時間、４８時間ならびに７、１４および２１日に、有害
事象ならびに臨床的および検査上の反応を含む安全性を観察した。
【０１７２】
サンプル採集、臨床効果を評価するために用いられるパラメーター、薬物動態学的分析
、免疫系活性および統計分析はBerger et al,2008に記載されたものである。
【０１７３】
結果
登録患者（ｎ＝１７）の主な特徴を、表１に記載する。患者００３は、０．２ｍｇ／ｋ
ｇで最初に治療して、繰り返し例外的治療を依頼して再度３ｍｇ／ｋｇで治療した。第１
および第２の治療の間に５ヵ月の間隔によって、異なる治療を別々の個体で分析した。従
って、分析で用いたＣＴ−０１１投与の数は１８であった。
【０１７４】
【表１】
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【０１７５】
略語：ＡＬＣＬ、急性リンパ球細胞リンパ腫、ＣＭＭＬ、慢性骨髄単球性白血病、ＤＬ
ＢＣＬ、広範性の大きいＢ細胞リンパ腫、ＦＡＢ分類−フランス人、アメリカ人およびイ
ギリス人：ＦＡＢ分類に従うＭ１、Ｍ２、Ｍ４、ＮＲ：非関連、ＳＣＴ：幹細胞移植。
【０１７６】
ＤＬＴを、この研究で達成しなかった。ＣＴ−０１１が、全く治療関連の毒性なしで安
全および十分に通用するとわかった。一回量のＭＴＤを全く、この研究で分からなかった
。
【０１７７】
研究の間、患者の６１％（１８のうちの１１）は、有害事象（ＡＥ）を報告し、観察さ
れる最も頻繁なＡＥは下痢であったが、ＣＴ−０１１治療と関連しないことを結論とした
。
【０１７８】
４つの重篤な有害事象が生じ、その全ては死に至り、ＡＭＬ患者で発生した。臨床分析
はこれらの患者全員が急性耐性白血病(fulminate resistant leukemia）で死亡し、これ
らの死亡のいずれも研究薬に関連があるとは考慮しなかったと結論した。
【０１７９】
研究の２１日間にわたって、ＡＭＬ患者の末梢血液の芽細胞の平均割合の変化は、１人
のＡＭＬ患者（５０％から５％への末梢芽細胞の減少）を除いて全く観察されなかった。
加えて、２人のＣＬＬ患者、４人のＮＨＬ患者および１人の多発性骨髄腫患者において、
２１日間の研究で、疾患パラメーターは不変であった。
【０１８０】
２１日で全ての患者（ｎ＝１８）の累積的な生存性は、４８％〜９０％の信頼区間９５
％で、７６％あった。服用量群にわたる平均生存時間の差を全く示さなかった。
【０１８１】
患者を、２１日間以上の研究で生存性を追跡調査した。研究の平均生存時間は２５±２
７週であり、１．７から７７週以上まで変動した。この追跡調査は、６人の患者が平均少
なくとも６０週を延長した生存性を伴なう治療への明らかな反応を示したことを示唆した
。６人の「応答者」の患者を、表２に示す。第４の服用濃度３．０ｍｇ／ｋｇを受けた患
者＃０１５に、１つの完全寛解があった。この患者は、横隔膜の上下部に結節を含む段階
ＩＩＩの濾胞性リンパ腫と診断された。患者は、疾患のために全く従来の治療を受けてな
かった。ＣＴ−０１１治療後１０ヵ月定期点検の間に実行されるＣＴスキャンにおいて、
腫瘍腫瘤の完全な除去を観察した。興味深いことに、患者は、ＣＴ−０１１治療および１
０ヵ月の検査の間の経過期間に、全く他の治療を受けてなかった。患者は、ＣＴ−０１１
治療に続いて、６８週、継続した寛解を証明した。１つの最小の反応を、０．２および３
ｍｇ／ｋｇで、ＣＴ−０１１を受けるＡＭＬ患者で観察した。患者は、ＣＴ−０１１を受
けた６１週後に改善した。４人の患者は、安定した疾患を示した：０．６ｍｇ／ｋｇでＣ
Ｔ−０１１を受けるＨＤを伴なう一人は、３５週の間、安定した疾患であった。２人の０
．６ｍｇ／ｋｇおよび１．５ｍｇ／ｋｇで抗体を受けるＣＬＬを伴なう患者は、それぞれ
３６週および７８週以上の間安定していた。６．０ｍｇ／ｋｇでＣＴ−０１１を受けるＭ
Ｍ患者は、６０週以上の間、安定した疾患であった。
【０１８２】
【表２】
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ＣＲ＝完全寛解；ＳＤ＝安定した疾患；ＭＲ＝最小の反応。
【０１８３】
考察および結論
２１日で全ての患者の累積的な生存性は７６％であり、研究の２１日間以上の探究で２
５週の平均生存性がみられた。大部分の患者がそれらの疾患の進行期であったと仮定する
と、６人の患者が、生存平均６０週を延長した臨床利点を示すことを、驚くべきことであ
って予想外に発見した。
【０１８４】
ＣＴ−０１１の中央値ｔ１／２は、ヒトにおける他のモノクローナル抗体との観測と整
合していて、２１７時間から４１０時間（９〜１７日）まで変化した。興味深いことに、
明らかな臨床効果を伴う６人の患者に対する中央値ｔ１／２（表２）は、残りの患者のも
のよりやや高かった。これらの６人の患者の平均６０週での反応の持続期間および大きな
半減期４１０時間を有する抗体の薬物動態学を考慮すると、数人の患者において、腫瘍に
特有の免疫記憶は誘導されて、抗体が血液から除かれたずっと後に、耐久性のある抗腫瘍
免疫応答に導くのが明らかである。
【０１８５】
特定の実施態様の上述の説明は、本発明の一般的な性質をとても十分に現し、その他は
、現在の知識を適用することによって、このような特定の実施態様を、過度の実験するこ
となくおよび上位概念から逸脱することなく、様々な適用で容易に、修飾および／または
適応することができ、従って、このような適用および修飾は、開示した実施態様の意味お
よび均等の範囲内で理解すべきであり、それを意図する。本願明細書に使用される表現ま
たは用語は明細書の目的とするものであり、制限されないことを理解すべきである。様々
な開示された機能を実行するための方法、原料および手段は、本発明から逸脱することな
く、種々の他の形態を取り入れることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【配列表】
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