(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）５００ｐｐｍ未満の葉緑素および乾燥重量で２０％超のトリグリセリド油を含有する、クロレラ属の種から得られる、従属栄養的に製造された藻類細胞であって、前記油の５重量％未満がドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）であり、前記藻類細胞の５０％超が溶解されている、従属栄養的に製造された藻類細胞；
（ｂ）少なくとも１つの追加成分；及び
（ｃ）ガス；
を含む食品組成物であって、前記食品組成物には、連続相、不連続気相が含まれ、さらに、食物体積中のガスが占める割合が１％〜５０％である食品組成物。
【請求項２】
前記食品組成物が含気食品である、請求項１に記載の食品組成物。
【請求項３】
食品が凍っている、請求項１または請求項２に記載の食品組成物。
【請求項４】
前記食品組成物が、アイスクリーム、シャーベットまたはジェラートであり、２０％超の空気含有量を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の食品組成物。
【請求項５】
藻類細胞がクロレラ・プロトセコイデスから得られる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の食品組成物。
【請求項６】
藻類細胞が、これが由来する株と比較して、色素沈着が低減された色彩突然変異体である藻類由来であり、そして／または前記藻類細胞が、緑色色素沈着を欠いていて黄色色素沈着が低減されている、請求項１〜５のいずれか１項に記載の食品組成物。
【請求項７】
組成物が、アイスクリーム、ジェラート、シャーベット（ｓｏｒｂｅｔ）、ムース、フラン、カスタード、メレンゲ、パテ、焼いた食品、ムース、ホイップした乳製品トッピング、フローズンヨーグルト、ホイップした充填物、及びソースから成る群より選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の食品組成物。
【請求項８】
（ａ）５００ｐｐｍ未満の葉緑素および乾燥重量で２０％超のトリグリセリド油を含有する、クロレラ属の種から得られる、従属栄養的に製造された藻類細胞であって、前記油の５重量％未満がドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）であり、前記藻類細胞の５０％超が溶解されている、従属栄養的に製造された藻類細胞、
（ｂ）水及び
（ｃ）少なくとも１つの追加成分
を混ぜ合わせて分散物を作り、前記藻類細胞には０．５〜１０％ｗ／ｗの分散物が含まれる；及び
分散物にガスを注入して、安定した不連続相ガス気泡を形成する；
ことを含む、含気食品の製造法であって、前記食品組成物には、連続相、不連続気相が含まれ、さらに、食物体積中のガスが占める割合が１％〜６０％である、製造法。
【請求項９】
（ａ）挽肉または細切肉；及び
（ｂ）５００ｐｐｍ未満の葉緑素および少なくとも乾燥重量で２０％のトリグリセリド油を含有する、クロレラ属の種から得られる、従属栄養的に製造された少なくとも０．５％ｗ／ｗの藻類細胞であって、前記油の５重量％未満がドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）であり、前記藻類細胞の５０％超が溶解されている、従属栄養的に製造された、少なくとも０．５％ｗ／ｗの藻類細胞
のマトリックス含み、肉と藻類細胞がマトリックス全体にわたって分散している、
肉製品。
【請求項１０】
（ａ）少なくとも１つの乳製品原料；及び
（ｂ）５００ｐｐｍ未満の葉緑素および乾燥重量で少なくとも２０％のトリグリセリド油を含有する、クロレラ属の種から得られる、従属栄養的に製造された藻類細胞であって、前記油の５重量％未満がドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）であり、前記藻類細胞の５０％超が溶解されている、従属栄養的に製造された藻類細胞
を含み、食品中脂肪分の０．１％〜１００％が藻類細胞により提供される、
乳製品組成物。
【請求項１１】
方法が、
（ａ）食品組成物を提供すること；及び
（ｂ）前記食品組成物に、５００ｐｐｍ未満の葉緑素および乾燥重量で２０％超のトリグリセリド油を含有する、クロレラ属の種から得られる、従属栄養的に製造された藻類細胞であって、前記油の５重量％未満がドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）であり、前記藻類細胞の５０％超が溶解されている、従属栄養的に製造された特定量の藻類細胞を加えること
の工程を含む、食品組成物の口当たりを改善する方法。
【請求項１２】
方法が、
（ａ）食品組成物を提供すること；及び
（ｂ）前記食品組成物に、５００ｐｐｍ未満の葉緑素および乾燥重量で２０％超のトリグリセリド油を含有する、クロレラ属の種から得られる、従属栄養的に製造された藻類細胞であって、前記油の５重量％未満がドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）であり、前記藻類細胞の５０％超が溶解されている、従属栄養的に製造された特定量の藻類細胞を加えること
の工程を含む、食品組成物の賞味期間を改善する方法。
【請求項１３】
（ａ）少なくとも１つの非乳製品原料；及び
（ｂ）５００ｐｐｍ未満の葉緑素および乾燥重量で少なくとも２０％のトリグリセリド油を含有する、クロレラ属の種から得られる、従属栄養的に製造された藻類細胞であって、前記油の５重量％未満がドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）であり、前記藻類細胞の５０％超が溶解されている、従属栄養的に製造された藻類細胞
を含み、食品中脂肪分の０．１％〜１００％が藻類細胞により提供され、前記食品組成物が、マーガリン、豆乳、アーモンドミルク、麻ミルク、米ミルク、非乳製フローズンデザート、非乳製クリーマー、非乳製チーズ、及び非乳製ヨーグルトから成る群より選択される、
非乳製品組成物。
【請求項１４】
藻類細胞を含む、クロレラ属の種から得られる、従属栄養的に製造された藻類細胞であって、前記細胞が凝集しており、前記藻類細胞が、５００ｐｐｍ未満の葉緑素および乾燥重量で１０％超のトリグリセリド油を含み、前記油の５重量％未満がドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）であり、前記藻類細胞の５０％超が溶解されており、
前記藻類細胞がさらに、カロテノイド総量として藻類細胞１グラムあたり０μｇ〜１１５μｇのカロテイノド、藻類細胞１００ｇあたり１ｍｇ〜８ｍｇのトコフェロール、トコトリエノール総量として藻類細胞の１グラムあたり０．０５mg〜０．３０ｍｇのトコトリエノール、及び藻類細胞の１グラムあたり０．１ｍｇ〜１０ｍｇのリン脂質から成る群より選択される化合物を含む、
藻類細胞。
【請求項１５】
（ａ）挽肉または細切肉；及び
（ｂ）５００ｐｐｍ未満の葉緑素を含有する、クロレラ属の種から得られる、従属栄養的に製造された、少なくとも０．５％ｗ／ｗの藻類細胞であって、前記藻類細胞が、これが由来する株と比較して、色素沈着が低減された色彩突然変異体である株であり、前記藻類細胞はさらに、少なくとも乾燥重量で２０％のトリグリセリド油を含有し、前記油の５重量％未満がドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）であり、前記藻類細胞の５０％超が溶解されている、少なくとも０．５％ｗ／ｗの藻類細胞
のマトリックス含み；そして、前記肉と藻類細胞がマトリックス全体にわたって分散している、肉製品。
【請求項１６】
（ａ）少なくとも１つの乳製品原料；及び
（ｂ）５００ｐｐｍ未満の葉緑素を含有する、クロレラ属の種から得られる、従属栄養的に製造された藻類細胞であって、前記藻類細胞が、これが由来する株と比較して、色素沈着が低減された色彩突然変異体である株であり、前記藻類細胞はさらに、少なくとも乾燥重量で２０％のトリグリセリド油を含有し、前記油の５重量％未満がドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）であり、前記藻類細胞の５０％超が溶解されている、従属栄養的に製造された藻類細胞
を含み、食品中脂肪分の０．１％〜１００％が藻類細胞により提供される、
乳製品組成物。
【請求項１７】
方法が、
（ａ）食品組成物を提供すること；及び
（ｂ）５００ｐｐｍ未満の葉緑素を含有する、クロレラ属の種から得られる、従属栄養的に製造された藻類細胞であって、前記藻類細胞が、これが由来する株と比較して、色素沈着が低減された色彩突然変異体である株であり、前記藻類細胞はさらに、少なくとも乾燥重量で２０％のトリグリセリド油を含有し、前記油の５重量％未満がドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）であり、前記藻類細胞の５０％超が溶解されている、従属栄養的に製造された特定量の藻類細胞を加えること
の工程を含む、食品組成物の口当たりを改善する方法。
【請求項１８】
方法が、
（ａ）食品組成物を提供すること；及び
（ｂ）５００ｐｐｍ未満の葉緑素を含有する、クロレラ属の種から得られる、従属栄養的に製造された藻類細胞であって、前記藻類細胞が、これが由来する株と比較して、色素沈着が低減された色彩突然変異体である株であり、前記藻類細胞はさらに、少なくとも乾燥重量で２０％のトリグリセリド油を含有し、前記油の５重量％未満がドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）であり、前記藻類細胞の５０％超が溶解されている、従属栄養的に製造された特定量の藻類細胞を加えること
の工程を含む、食品組成物の賞味期間を改善する方法。
【請求項１９】
（ａ）少なくとも１つの非乳製品原料；及び
（ｂ）５００ｐｐｍ未満の葉緑素を含有する、クロレラ属の種から得られる、従属栄養的に製造された藻類細胞であって、前記藻類細胞が、これが由来する株と比較して、色素沈着が低減された色彩突然変異体である株であり、前記藻類細胞はさらに、少なくとも乾燥重量で２０％のトリグリセリド油を含有し、前記油の５重量％未満がドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）であり、前記藻類細胞の５０％超が溶解されている、従属栄養的に製造された藻類細胞
を含み、食品中脂肪分の０．１％〜１００％が藻類細胞により提供され、前記食品組成物が、マーガリン、豆乳、アーモンドミルク、麻ミルク、米ミルク、非乳製フローズンデザート、非乳製クリーマー、非乳製チーズ、及び非乳製ヨーグルトから成る群より選択される、
非乳製品組成物。
【請求項２０】
藻類細胞を含む、クロレラ属の種から得られる、従属栄養的に製造された藻類細胞であって、前記細胞が凝集しており、前記藻類細胞が、５００ｐｐｍ未満の葉緑素を含み、前記藻類細胞が、これが由来する株と比較して、色素沈着が低減された色彩突然変異体である株であり、前記藻類細胞はさらに、少なくとも乾燥重量で１０％超のトリグリセリド油を含み、前記油の５重量％未満がドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）であり、前記藻類細胞の５０％超が溶解されており、
前記藻類細胞がさらに、カロテノイド総量として藻類細胞１グラムあたり０μｇ〜１１５μｇのカロテイノド、藻類細胞１００ｇあたり１ｍｇ〜８ｍｇのトコフェロール、トコトリエノール総量として藻類細胞の１グラムあたり０．０５mg〜０．３０ｍｇのトコトリエノール、及び藻類細胞の１グラムあたり０．１ｍｇ〜１０ｍｇのリン脂質から成る群より選択される化合物を含む、
藻類細胞。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表への言及
本出願には、発明の詳細な説明（本明細書）の最後に添付された、配列表が含まれる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、微生物学、食品調理、および人間と動物の栄養の分野に属する。
【背景技術】
【０００３】
人口が増加し続けるに伴って、更なる食料源（特に、安価に生産できるが、栄養価の高い食料源）に対する必要性が増加している。さらに、多くの主要な食品としての肉類に対する現在の依存は、少なくともほとんどの先進国において、温室効果ガスの放出の大きな原因であり、また、同等に味がよく、栄養価が高いにもかかわらず、生産にあたって環境に対する有害性の低い、新たな食料に対する必要性が生じている。
【０００４】
藻類は、成長するのに「水と日光」しか必要としないため、長年潜在的な食料源であると注視されている。特定の型の藻類、主として海藻類は、人間の消費に重要な食料を実際に提供するが、食料としての藻類の期待は実現されていない。屋外の池またはフォトバイオリアクタに光合成により成長した藻類によって製造する、藻類粉末は、市販されているが、深緑色（クロロフィルによるもの）で、強烈な、不快な味を有する。食品に、または栄養補助食品として配合する場合、これらの藻類粉末は、食品または栄養補助食品に視覚的に魅力のない緑色を与え、不快な魚臭いまたは海藻の風味を有する。
【０００５】
今日、食料に使用される複数種の藻類が存在し、そのほとんどが、ケルプ、アサクサノリ(purple  laver)（アマノリ属(Porphyra)、海苔に使用される）、ダルス（パルマリア・パルメート(Palmaria  palmate)）、およびアオサ（ウルバ・ラクツカ(Ulva  lactuca)）等の大型藻類である。スピルリナ属(Spirulina)（アースロスピラ・プラテンシス(Arthrospira  platensis)）等の微細藻類は、栄養補助食品として、スムージーまたはジュース飲料に少量を導入して（通常０．５％ｗ／ｗ未満）使用するために、開放池（光合成により）で、商用で成長させる。一部の種のクロレラ属(Chlorella)を含む他の微細藻類は、アジア諸国で栄養補助食品として人気がある。
【０００６】
これらの製品に加えて、高いドコサヘキサエン酸(docosahexanoic  acid)（ＤＨＡ）含量を有する藻類油は、乳児用調製粉乳の原料として使用される。ＤＨＡは高度不飽和油である。ＤＨＡは、抗炎症特性を有し、周知の補助食品および食料の製造に使用する添加物である。しかしながら、ＤＨＡは、熱処理で酸化するため、調理食品に適さない。また、ＤＨＡは、酸素に曝露すると、酸化防止剤の存在下で、室温であっても不安定である。ＤＨＡの酸化は、魚の味および不愉快な匂いをもたらす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
藻類から食料（特に、味が良く、かつ栄養価の高い食料）を、大規模に、安価でかつ効率的に生産する方法の必要性が依然として存在する。本発明は、これらおよび他の必要性を満たす。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、例えば、以下を提供する： 
（項目１）
ａ．乾燥重量で約２０％超のトリグリセリド油を含有する藻類粉末；
ｂ．少なくとも１つの追加成分；及び
ｃ．ガス；
を含む食品組成物であって、前記食品組成物には、連続相、不連続気相が含まれ、さらに、食物体積中のガスが占める割合が約１％〜約５０％である食品組成物。
（項目２）
藻類粉末が、乾燥重量で約２０％〜約７０％のトリグリセリド油を含む、項目１に記載の食品組成物。
（項目３）
トリグリセリド油の約６０％〜約７５％が、グリセロ脂質形態の１８：１脂質である、項目１に記載の食品組成物。
（項目４）
トリグリセリド油が、
ａ．約２％未満の１４：０
ｂ．約１３％〜約１６％の１６：０
ｃ．約１％〜約４％の１８：０
ｄ．約６４％〜約７０％の１８：１
ｅ．約１０％〜約１６％の１８：２
ｆ．約０.５％〜約２.５％の18：３、及び
ｇ．約２％未満の炭素鎖長２０以上の油
から成る群より選択される、項目１に記載の食品組成物。
（項目５）
藻類粉末が、乾燥重量で約５％〜約７０％の炭水化物である、項目１に記載の食品組成物。
（項目６）
藻類粉末の炭水化物成分が、乾燥重量で、約２５％〜約７０％の食物繊維及び約２％〜約１０％の遊離糖である、項目５に記載の食品組成物。
（項目７）
食物繊維の単糖成分が、
ａ．約３％〜約１７％のアラビノース；
ｂ．約７％〜約４３％のマンノース；
ｃ．約１８％〜約７７％のガラクトース；及び
ｄ．約１１％〜約６０％のグルコース
から成る群より選択される糖含有量を有する、項目６に記載の食品組成物。
（項目８）
藻類粉末が、総カロテノイド量として、藻類粉末１グラムあたり約０μｇ〜約１１５μｇを含み、前記カロテノイドには約２０μｇ〜約７０μｇのルテインが含まれる、項目１に記載の食品組成物。
（項目９）
藻類粉末が、総カロテノイド量として、カロテノイド全体の藻類粉末１グラムあたり約１０μｇ未満を含む、項目１に記載の食品組成物。
（項目１０）
藻類粉末の葉緑素含有量が約５００ｐｐｍ未満である、項目１に記載の食品組成物。
（項目１１）
藻類粉末が、藻類粉末１００ｇあたり約１ｍｇ〜約８ｍｇのトコフェロールを含み、前記トコフェロールが約２ｍｇ〜約６ｍｇのα−トコフェロールを含む、項目１に記載の食品組成物。
（項目１２）
藻類粉末が、総トコトリエノール量として、藻類粉末１ｇあたり約０．０５ｍｇ〜約０．３０ｍｇを含み、前記トコトリエノールが約０．１ｍｇ〜約０．２５ｍｇのα−トコトリエノールを含む、項目１に記載の食品組成物。
（項目１３）
藻類粉末が、クロレラ属の種である藻類である、項目１に記載の食品組成物。
（項目１４）
藻類がクロレラ・プロトセコイデスである、項目１３に記載の食品組成物。
（項目１５）
藻類粉末が、色彩突然変異体である藻類である、項目１に記載の食品組成物。
（項目１６）
藻類粉末が、優良製造規範（ＧＭＰ）の条件下で培養され、加工された藻類である、項目１に記載の食品組成物。
（項目１７）
追加成分が、砂糖、水、ミルク、クリーム、果汁、果汁濃縮物、全卵、卵白、穀類及び脂肪から成る群より選択される食用原料である、項目１に記載の食品組成物。
（項目１８）
ガスが空気である、項目１に記載の食品組成物。
（項目１９）
組成物が、アイスクリーム、ジェラート、シャーベット（ｓｏｒｂｅｔ）、ムース、フラン、カスタード、メレンゲ、パテ、焼いた食品、ムース、ホイップした乳製品トッピング、フローズンヨーグルト、ホイップした充填物、及びソースから成る群より選択される、項目１に記載の食品組成物。
（項目２０）
食物体積中のガスが占める割合が、約１０％〜約６０％である、項目１に記載の食品組成物。
（項目２１）
食品が凍っている、項目１に記載の食品組成物。
（項目２２）
連続相が、約０重量％〜約３０重量％の糖又は別の甘味料を含む、項目１に記載の食品組成物。
（項目２３）
ａ．藻類粉末、水及び少なくとも１つの他の食用原料を混ぜ合わせて分散物を作り、前記藻類粉末には約０．５〜約１０％ｗ／ｗの分散物が含まれる；及び
ｂ．分散物にガスを注入して、安定した不連続相ガス気泡を形成する；
ことを含む、含気食品の製造法。
（項目２４）
ａ．挽肉または細切肉；及び
ｂ．少なくとも乾燥重量で約２０％のトリグリセリド油を含む少なくとも約０．５％ｗ／ｗの藻類粉末
のマトリックス含み、肉と藻類粉末がマトリックス全体にわたって分散している肉製品。
（項目２５）
肉には、最大１％の動物性脂肪が含まれる、項目２４に記載の肉製品。
（項目２６）
肉には、最大１０％の動物性脂肪が含まれる、項目２５に記載の肉製品。
（項目２７）
肉には、最大３０％の動物性脂肪が含まれる、項目２６に記載の肉製品。
（項目２８）
約０．５％〜約１０％ｗ／ｗの藻類粉末を含む、項目２４に記載の肉製品。
（項目２９）
藻類粉末が、乾燥重量で約２５％〜約７０％の藻類油を含む、項目２４に記載の肉製品。
（項目３０）
藻類粉末がクロレラ属の微細藻類から製造される、項目２４に記載の肉製品。
（項目３１）
藻類粉末がクロレラ・プロトセコイデス種の微細藻類から製造される、項目３０に記載の肉製品。
（項目３２）
粉砕肉である、項目２４に記載の肉製品。
（項目３３）
成型肉である、項目２４に記載の肉製品。
（項目３４）
藻類粉末には目に見える緑色が存在しない、項目２４に記載の肉製品。
（項目３５）
藻類粉末のクロロフィル含量が５００ｐｐｍ未満である、項目２４に記載の肉製品。
（項目３６）
肉が、牛肉、鶏肉、豚肉、ハム及び七面鳥肉から成る群より選択される、請求２４に記載の肉製品。
（項目３７）
ａ．少なくとも１つの乳製品原料；及び
ｂ．乾燥重量で少なくとも２０％のトリグリセリド油を藻類粉末
を含み、食品中脂肪分の約０．１％〜約１００％が藻類粉末により提供される、乳製品組成物。
（項目３８）
チーズ、ミルク、バターミルク、クリーム、バター、スプレッド、及びヨーグルトから成る群より選択される、項目３７に記載の食品組成物。
（項目３９）
方法が、
ａ）食品組成物を提供すること；及び
ｂ）前記食品組成物に、乾燥重量で約２０％超のトリグリセリド油を含有する特定量の藻類粉末を加えること
の工程を含む、食品組成物の口当たりを改善する方法。
（項目４０）
藻類粉末が、約４０重量％超のトリグリセリド油を含有する、項目３９に記載の方法。
（項目４１）
藻類粉末が、前記食品組成物の約０．１％〜約２０％ｗ／ｗを占める、項目３９に記載の方法。
（項目４２）
方法が、
ａ．ミルク、大豆、カゼイン又はホエイを含有する食品組成物を提供すること；及び
ｂ．前記食品組成物に、乾燥重量で約１０％超のトリグリセリド油を含有する特定量の藻類粉末を加えること
の工程を含む、食品組成物の口当たりを改善する方法。
（項目４３）
藻類粉末が約４０重量％超のトリグリセリド油を含有する、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
藻類粉末が、前記食品組成物の約０．１％〜約２０％ｗ／ｗを占める、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
方法が、
ａ．食品組成物を提供すること；及び
ｂ．前記食品組成物に、乾燥重量で約２０％超のトリグリセリド油を含有する特定量の藻類粉末を加えること
の工程を含む、食品組成物の賞味期間を改善する方法。
（項目４６）
藻類粉末が約４０重量％超のトリグリセリド油を含む、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
藻類粉末が、前記食品組成物の約０．１％〜約２０％ｗ／ｗを占める、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
藻類粉末が、総リン脂質として、藻類粉末１ｇあたり約０．２５重量％〜約１．５重量％を含む、項目１に記載の食品組成物。
（項目４９）
ａ．少なくとも１つの非乳製品原料；及び
ｂ．乾燥重量で少なくとも２０％のトリグリセリド油を含有する藻類粉末
を含み、食品中脂肪分の約０．１％〜約１００％が藻類粉末により提供される、非乳製品組成物。
（項目５０）
非乳製品原料が、大豆、アーモンド、麻、米及びオート麦から成る群より選択される、項目４９に記載の非乳製品組成物。
（項目５１）
マーガリン、豆乳、アーモンドミルク、麻ミルク、米ミルク、非乳製フローズンデザート、非乳製クリーマー、非乳製チーズ、及び非乳製ヨーグルトから成る群より選択される、項目５０に記載の非乳製品組成物。
（項目５２）
藻類粉末又は藻類バイオマスがそれぞれ、乾燥重量で約１０％超のトリグリセリド油を含み、前記藻類粉末又は藻類バイオマスがさらに、カロテノイド総量として藻類バイオマス又は藻類粉末１グラムあたり約０μｇ〜約１１５μｇのカロテイノド、藻類粉末または藻類バイオマス１００ｇあたり約１ｍｇ〜約８ｍｇのトコフェロール、トコトリエノール総量として藻類粉末または藻類バイオマスの１グラムあたり約０．０５mg〜約０．３０ｍｇのトコトリエノール、及び藻類粉末または藻類バイオマスの１グラムあたり約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇのリン脂質から成る群より選択される化合物を含む、藻類粉末粒子を含む藻類粉末、又は藻類バイオマス粒子を含む藻類バイオマス。
（項目５３）
藻類バイオマス又は藻類粉末１グラムあたりのカロテノイド総量が１０μｇ未満である、項目５２に記載の藻類粉末又は藻類バイオマス。
（項目５４）
藻類粉末粒子又は藻類バイオマス粒子の平均粒子サイズが１０μＭ未満である、項目５２に記載の藻類粉末又は藻類バイオマス。
（項目５５）
藻類粉末粒子が凝集している、項目５２に記載の藻類粉末又は藻類バイオマス。
（項目５６）
凝集した藻類粉末粒子の平均粒子サイズが約１，０００μＭ未満である、項目５５に記載の藻類粉末又は藻類バイオマス。
（項目５７）
凝集した藻類粉末粒子の平均粒子サイズが約５００μＭ未満である、項目５５に記載の藻類粉末又は藻類バイオマス。
（項目５８）
凝集した藻類粉末粒子の平均粒子サイズが約２５０μＭ未満である、項目５５に記載の藻類粉末又は藻類バイオマス。
（項目５９）
凝集した藻類粉末粒子の平均粒子サイズが約１００μＭ未満である、項目５５に記載の藻類粉末又は藻類バイオマス。
（項目６０）
１グラム当たり１０，０００ＣＦＵ以下の一般生菌総数；１グラム当たり２００ＣＦＵ以下の酵母；１グラム当たり２００ＣＦＵ以下のカビ；１グラム当たり１０ＣＦＵ以下の大腸菌群；１グラム当たり６ＣＦＵ以下の大腸菌(Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）；及び、１グラム当たり２０ＣＦＵ以下のコアグラーゼ陽性ブドウ球菌から成る群より選択される、微細藻類でない汚染菌をさらに含む、項目５２に記載の藻類粉末又は藻類バイオマス。
（項目６１）
乾燥重量で約２０％未満のトリグリセリド油を含む、項目５２に記載の藻類粉末又は藻類バイオマス。
（項目６２）
乾燥重量で約１０％未満のトリグリセリド油を含む、項目５２に記載の藻類粉末又は藻類バイオマス。
高い脂質含量を有する藻類粉末または藻類バイオマスを含む、食品組成物を開示する。また、高い脂質含量または高いタンパク質含量を有する藻類粉末または藻類バイオマスを含む、食品組成物も開示する。さらに、藻類粉末または藻類バイオマスおよび脱脂バイオマスを含む、食品組成物も開示する。
【０００９】
第１の態様において、本発明は、（ａ）藻類粉末（乾燥重量で２０％を超えるトリグリセリド油を含んだ溶解細胞を主に含むか、またはこの溶解細胞をすべて含む、微細藻類バイオマスのホモジェネートである）と、（ｂ）少なくとも１つの付加的な食用原料、および場合により、少なくとも１つの付加的な原料と、（ｃ）ガス（藻類粉末および少なくとも１つの付加的な食用原料は、連続相を含み、ガスは不連続相を含み、かつ食物体積中のガスが占める割合は、１〜５０％である）と、を含む食品組成物に関する。一部の例において、ガスによってもたらされた食品の容積は、約１０％〜約６０％である。一部の例において、ガスは空気である。一部の例において、食物体積中のガスが占める割合は、１０〜５０％である。一部の実施態様において、食品は凍結している。一部の例において、連続相は、約０〜約３０重量％の糖、または他の天然甘味剤もしくは人工甘味剤を含む。
【００１０】
一部の実施態様において、藻類粉末または藻類バイオマスは、乾重量で２０％〜７０％のトリグリセリド油を含む。一部の例において、トリグリセリド油の６０％〜７５％は、グリセロ脂質形態の１８：１脂質である。一部の実施態様において、トリグリセリド油は、（ａ）２％未満の１４：０、（ｂ）１３〜１６％の１６：０、（ｃ）１〜４％の１８：０、（ｄ）６４〜７０％の１８：１、（ｅ）１０〜１６％の１８：２、（ｆ）０．５〜２．５％の１８：３、または（ｇ）２％未満の炭素鎖長２０以上の油である。
【００１１】
一部の実施態様において、藻類粉末または藻類バイオマスは、乾燥重量で５％〜７０％の炭水化物である。一部の例において、藻類粉末または藻類バイオマスは、乾燥重量で２５％〜４０％の炭水化物である。一部の例において、バイオマスの炭水化物成分は、乾燥重量で約２５％〜７０％、場合により２５％〜３５％の食物繊維、および乾燥重量で約２％〜１０％、場合により２％〜８％の遊離糖（スクロースを含む）である。一部の実施態様において、バイオマスの食物繊維成分の単糖組成は、（ａ）３〜１７％のアラビノース、（ｂ）７〜４３％のマンノース、（ｃ）１８〜７７％のガラクトース、および（ｄ）１１〜６０％のグルコースである。一部の実施態様において、バイオマスの食物繊維成分の単糖組成は、（ａ）０．１〜４％のアラビノース、（ｂ）５〜１５％のマンノース、（ｃ）１５〜３５％のガラクトース、および（ｄ）５０〜７０％のグルコースである。一部の例において、バイオマスまたは藻類粉末は、微細藻類バイオマスまたは藻類粉末のグラム当たり約０〜約１１５μｇの総カロテノイドを有し、微細藻類バイオマスまたは藻類粉末のグラム当たり２０〜７０μｇのルテインを含む。一部の例において、バイオマスまたは藻類粉末は、微細藻類バイオマスまたは藻類粉末のグラム当たり１０μｇ未満または２０μｇ未満の総カロテノイドを有する。一部の実施態様において、バイオマスのクロロフィル含量は５００ｐｐｍ未満である。一部の例において、バイオマスまたは藻類粉末内の油は、微細藻類バイオマスまたは藻類粉末１００ｇ当たり１〜８ｍｇの総トコフェロールを有し、微細藻類バイオマスまたは藻類粉末１００ｇ当たり２〜６ｍｇのアルファトコフェロールを含む。一部の例において、バイオマスまたは藻類粉末は、微細藻類バイオマスまたは藻類粉末のグラム当たり約０．０５〜０．３０ｍｇの総トコトリエノールを有し、微細藻類バイオマスまたは藻類粉末のグラム当たり０．１０〜０．２５ｍｇのアルファトコトリエノールを含む。
【００１２】
一部の実施態様において、バイオマスは、クロレラ属(Chlorella)の種である、藻類由来である。一部の例において、藻類は、クロレラ・プロトセコイデス(Chlorella  protothecoides)である。一部の実施態様において、バイオマスは、これが由来する株と比較して、色素沈着が低減された色彩突然変異体である。
【００１３】
一部の実施態様において、藻類バイオマスおよび藻類粉末は、適正製造基準（ＧＭＰ）条件下で培養され加工された藻類に由来する。
【００１４】
一部の例において、少なくとも１つの付加的な食用原料は、糖、水、乳、クリーム、果物ジュース、濃縮果物ジュース、全卵、卵白、穀物、および動物性脂肪または他の脂肪からなる群より選択される。一部の例において、組成物は、アイスクリーム、ジェラート、シャーベット、ムース、フラン、カスタード、メレンゲ、パテ、焼いた食品、ムース、ホイップした乳製品トッピング、フローズンヨーグルト、ホイップした充填物、およびソースからなる群より選択される。
【００１５】
第２の態様において、本発明は、（ａ）藻類粉末または藻類バイオマス、水、および少なくとも１つの他の食用原料を混合して、分散物を作製する工程であって、藻類粉末または藻類バイオマスは、約０．５％から約１０％ｗ／ｗの分散物を含む、工程と、（ｂ）分散物にガスを導入して、安定した不連続相ガス気泡を形成し、これによって、含気食品を製造する工程による、含気食品を製造する方法に関する。藻類粉末または藻類バイオマスは、約０．５％〜約５％、約０．５％〜約２．５％、または約０．５％〜約１％の分散物を含むことができる。
【００１６】
第３の態様において、本発明は、挽肉または細切肉のマトリックスと、少なくとも約０．５％ｗ／ｗの藻類粉末（少なくとも乾燥重量で約２０％のトリグリセリド油を含んだ溶解細胞を主に含むか、またはこの溶解細胞をすべて含む、微細藻類バイオマスのホモジェネートである）と、を含む肉製品であって、肉および藻類粉末は、マトリックス全体にわたって均一に分散する、肉製品に関する。
【００１７】
一部の実施態様において、肉は、最大１０％の動物性脂肪、または最大３０％の動物性脂肪を含む。一部の例において、肉は、最大７％の動物性脂肪を含む。一部の例において、肉は、最大３％の動物性脂肪、または最大約１％の動物性脂肪を含む。一部の実施態様において、肉製品は、約０．５％〜約２．５％ｗ／ｗの藻類粉末、または約０．５％〜約１０％ｗ／ｗの藻類粉末を含む。一部の例において、藻類粉末は、乾燥重量で約２０〜６０％または２５％〜７０％の藻類油を含む。一部の例において、藻類粉末は、クロレラ属(Chlorella)の微細藻類から製造される。一部の例において、藻類粉末は、クロレラ・プロトセコイデス(Chlorella  protothecoides)種の微細藻類から製造される。一部の実施態様において、肉製品は粉砕肉である。一部の例において、肉製品は再成形肉である。一部の実施態様において、藻類粉末は、目に見える緑色または黄色を有しない。一部の例において、藻類粉末は、５００ｐｐｍ未満のクロロフィルを有する。一部の実施態様において、肉は、牛肉、バイソン肉、ラム肉、マトン、羊肉、シカ肉、魚肉、鶏肉、豚肉、ハムおよび七面鳥肉からなる群より選択される。
【００１８】
第４の態様において、本発明は、少なくとも１つの乳製品原料と藻類粉末と、を含む乳製品組成物(dairy  food  composition)であって、藻類粉末は、少なくとも乾燥重量で２０％のトリグリセリド油を含んだ溶解細胞を主に含むか、またはこの溶解細胞をすべて含む、微細藻類バイオマスのホモジェネートであり、約０．１％〜約１００％の、好ましくは、１０％〜１００％、１５％〜９５％、２０％〜９０％、２５％〜８５％、３０％〜８０％の、２５％を超える、３０％を超える、３５％を超える、４０％を超える、４５％を超える、５０％を超える、およそ１０％、およそ２０％、およそ３０％、およそ４０％、およそ５０％、およそ６０％、およそ７０％、およそ８０％、およそ９０％、およびおよそ１００％の、食品中の脂肪は、藻類粉末によって提供される、乳製品組成物に関する。一部の例において、乳製品組成物は、チーズ、ミルク、バターミルク、クリーム、バター、スプレッド、およびヨーグルトからなる群より選択される、乳製品組成物に関する。
【００１９】
更なる態様において、本発明は、少なくとも１つの非乳製原料と、乾燥重量で少なくとも２０％のトリグリセリド油を含んだ藻類粉末または藻類バイオマスと、を含む、非乳製食品組成物であって、１０％〜１００％、１５％〜９５％、２０％〜９０％、２５％〜８５％、３０％〜８０％、２５％を超える、３０％を超える、３５％を超える、４０％を超える、４５％を超える、５０％を超える、およそ１０％、およそ２０％、およそ３０％、およそ４０％、およそ５０％、およそ６０％、およそ７０％、およそ８０％、およそ９０％、およびおよそ１００％の、非乳製食品組成物中の脂肪は、藻類粉末または藻類バイオマスによって提供される、非乳製食品組成物に関する。非乳製原料は、例えば、大豆、ナッツ、マメ科植物、穀物、果実、野菜等を含む、非乳製供給源由来の原料である。一部の例において、食品組成物は、マーガリン、豆乳、アーモンド乳、麻ミルク(hemp  milk)、米ミルク、非乳製冷菓、非乳製クリーマー、タピオカ含有食品、非乳製チーズ、および非乳製ヨーグルトからなる群より選択される。
【００２０】
別の態様において、本発明は、乾燥重量で約１０％を超えるトリグリセリド油を含む、藻類粉末または藻類バイオマスを提供する。藻類粉末および藻類バイオマスは、藻類粉末または藻類バイオマスのグラム当たり約０μｇ〜から約１１５μｇの総カロテノイド、藻類粉末または藻類バイオマス１００ｇ当たり約１ｍｇ〜約８ｍｇのトコフェロール、藻類粉末または藻類バイオマスのグラム当たり約０．０５mg〜約０．３０ｍｇの総トコトリエノール、および藻類粉末または藻類バイオマスのグラム当たり約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇ（好ましくは約０．２５％〜約１．５％）のリン脂質からなる群より選択される化合物を更に含む。
【００２１】
別の態様において、本発明は、食品組成物の口当たりを改善する方法を提供する。食品組成物の口当たりは、食品組成物への藻類粉末または藻類バイオマスの添加によって改善される。藻類粉末または藻類バイオマスは、乾燥重量で約２０％を超えるトリグリセリド油を含む。
【００２２】
一部の例において、食品組成物の口当たりを改善する方法は、次に示すことを含む：ａ）食品組成物を供すること；および、ｂ）前記食品組成物に、乾燥重量で約２０％を超えるトリグリセリド油を含む藻類粉末を、特定量加えること。一部の例において、藻類粉末は、約４０重量％を超えるトリグリセリド油を含む。一部の例において、藻類粉末が、前記食品組成物の約０．１％〜約２０％ｗ／ｗを占める。
【００２３】
別の態様において、本発明は、食品組成物の口当たりを改善する方法を提供する。食品成分組成物の口当たりは、食品組成物への藻類粉末もしくは藻類バイオマス、および乳、カゼイン、ホエイまたは大豆の添加によって改善される。
藻類粉末または藻類バイオマスは、乾燥重量で約２０％を超えるトリグリセリド油を含む。
【００２４】
一部の例において、食品成分組成物の口当たりを改善する方法は、次に示すことを含む：ａ）乳、大豆、カゼインまたはホエイを含む、食品組成物を供すること；および、ｂ）前記食品組成物に、乾燥重量で約１０％を超えるトリグリセリド油を含む藻類粉末を、特定量加えること。一部の例において、藻類粉末は、約４０重量％を超えるトリグリセリド油を含む。一部の例において、藻類粉末は、約０．１％〜約２０％ｗ／ｗの前記食品組成物を含む。
【００２５】
別の態様において、本発明は、食品組成物の賞味期間を増加させる方法を提供する。食品組成物の賞味期間は、食品組成物への藻類粉末または藻類バイオマスの添加によって改善される。藻類粉末または藻類バイオマスは、乾燥重量で約２０％を超えるトリグリセリド油を含む。
【００２６】
一部の例において、食品組成物の賞味期間を改善する方法は、次に示すことを含む：ａ）食品組成物を供すること；および、ｂ）前記食品組成物に、乾燥重量で約２０％を超えるトリグリセリド油を含む藻類粉末を、特定量加えること。一部の例において、藻類粉末は、約４０重量％を超えるトリグリセリド油を含む。一部の例において、藻類粉末は、約０．１％〜約２０％ｗ／ｗの前記食品組成物を含む。
【００２７】
別の態様において、本発明は、（ａ）少なくとも１つの非乳製原料；と、（ｂ）乾燥重量で少なくとも２０％のトリグリセリド油を含む、藻類粉末であって、約０．１％〜約１００％の食品中の脂肪は、藻類粉末によって提供される、藻類粉末とを含む、非乳製食品組成物を提供する。一部の例において、非乳製原料は、大豆、アーモンド、麻、米およびオート麦からなる群より選択される。一部の例において、非乳製食品組成物は、マーガリン、豆乳、アーモンド乳、麻ミルク、米ミルク、非乳製冷菓、非乳製クリーマー、非乳製チーズ、および非乳製ヨーグルトからなる群より選択される。
【００２８】
別の態様において、本発明は、藻類粉末粒子を含む藻類粉末、または藻類バイオマス粒子を含む藻類バイオマスを提供し、前記藻類粉末または藻類バイオマスはそれぞれ、乾燥重量で約１０％を超えるトリグリセリド油を含み、前記藻類粉末および藻類バイオマスは、藻類バイオマスまたは藻類粉末のグラム当たり約０μｇ〜から約１１５μｇの総カロテノイド、藻類粉末または藻類バイオマス１００ｇ当たり約１ｍｇ〜約８ｍｇのトコフェロール、藻類粉末または藻類バイオマスのグラム当たり約０．０５mg〜約０．３０ｍｇの総トコトリエノール、および藻類粉末または藻類バイオマスのグラム当たり約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇのリン脂質からなる群より選択される化合物を更に含む。一部の例において、藻類粉末または藻類バイオマスのグラム当たりの総カロテノイドは、１０μｇ未満である。一部の例において、藻類粉末粒子または藻類バイオマス粒子の平均粒子サイズは、１０μＭ未満である。
【００２９】
一部の実施態様において、藻類粉末粒子は凝集する。一部の例において、凝集した藻類粉末粒子の平均粒子サイズは、約１，０００μＭ未満である。一部の例において、凝集した藻類粉末粒子の平均粒子サイズは、約５００μＭ未満である。一部の例において、凝集した藻類粉末粒子の平均粒子サイズは、約２５０μＭ未満である。一部の例において、凝集した藻類粉末粒子の平均粒子サイズは、約１００μＭ未満である。
【００３０】
一部の例において、藻類粉末または藻類バイオマスは、微細藻類でない汚染菌を更に含む。一部の例において、汚染菌は、次に示すものからなる群より選択される：グラム当たり１０，０００ＣＦＵ以下の好気性菌の全生菌数；グラム当たり２００ＣＦＵ以下の酵母；グラム当たり２００ＣＦＵ以下のカビ；グラム当たり１０ＣＦＵ以下の大腸菌群；グラム当たり６ＣＦＵ以下の大腸菌（エシェリキア・コリ(Escherichia  coli)）；および、グラム当たり２０ＣＦＵ以下のコアグラーゼ陽性ブドウ球菌。一部の例において、藻類粉末または藻類バイオマスは、乾燥重量で約２０％未満のトリグリセリド油を含む。一部の例において、藻類粉末または藻類バイオマスは、乾燥重量で約１０％未満のトリグリセリド油を含む。
【００３１】
本発明のこれらの態様と実施態様、および他の態様と実施態様は、添付した図面、そのすぐ後に続く図面の簡単な説明、および以下の本発明の詳細な説明で説明し、また、以下の例に例示する。上で論じたおよび本出願の全体にわたる特徴のうちのいずれかまたはすべては、本発明の種々の実施態様に組み合わせることができる。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
発明の本詳細な説明
この発明の詳細な説明は、読み手の便宜上、節と小節に分割される。第Ｉ節は、本明細書に使用する種々の用語についての定義を提供する。第ＩＩ節は、パートＡ〜Ｅで、微細藻類バイオマスを調製する方法を説明し、適切な生物体（Ａ）、色素沈着を欠いているか、有意に低減された色素沈着を有する、微細藻類株を作出する方法（Ｂ）、培養条件（Ｃ）、濃縮条件（Ｄ）、および本発明によって生産したバイオマスの化学組成物（Ｅ）を含む。第ＩＩＩ節は、微細藻類バイオマスを、本発明の藻類粉末および脱脂藻類粉末に加工する方法を説明する。第ＩＶ節は、本発明の種々の食品、および微細藻類バイオマスを他の食品原料と組み合わせる方法を説明する。
【００３３】
本明細書に説明する加工のすべては、ＧＭＰまたは同等の規制に従って行うことができる。米国では、人間の食品を製造、包装、保持するためのＧＭＰ規制が、２１Ｃ．Ｆ．Ｒ．１１０で成文化される。これらの条項、ならびにかかる条項で参照される付属条項は、引用によりその全体が全目的で本明細書中に組み込まれる。米国におけるＧＭＰ条件および他の管轄における同等の条件は、食品に混合不純物が混じっているか否か（食品に適さないような条件下で、食品が製造されているか否か）、または不衛生な条件下で、製造、包装、または保持され、その結果、汚染された可能性があるか、もしくは健康に有害な状態にされた可能性があるか否かを決定する際に適用される。ＧＭＰ条件には、次に示すものを管理する規制を厳守することが含まれ得る：疾病管理；清浄度および人材育成；建物と施設の維持管理および衛生運営；適切な衛生施設および宿泊設備の供与；設備と器具の設計、構築、維持管理、および清浄度；あらゆる供給源からの汚染を防止するための適切な衛生原則に従って、すべての適切な予防措置が、食品の受入、検査、輸送、隔離、調製、製造、包装、および保存においてとられたことを確認するための適切な品質管理手順の供与；ならびに、物理的、化学的、または望ましくない微生物汚染に対して、および食品と容器の劣化に対して食品を保護するような条件下での、最終食品の保存および輸送。
【００３４】
Ｉ．定義
以下に別段の定義がない限り、本明細書に使用するすべての専門用語および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般的に理解される意味を有する。本明細書に使用する用語の多くの一般的定義は、Singletonらの文献：Dictionary  of  Microbiology  and  Molecular  Biology（第２版、１９９４年）；The  Cambridge  Dictionary  of  Science  and  Technology（Walker編集、１９８８年）；R．Riegerらの文献：The  Glossary  of  Genetics、第５版、（R．Riegerら編集）、スプリンガースパニエル・ベルラグ(Springer  Verlag)社（１９９１年）；および、HaleとMarhamの文献：The  Harper  Collins  Dictionary  of  Biology（１９９１年）に見出すことができる。
【００３５】
「面積率」とは、試験中に生じたクロマトグラフィのピーク、分光ピーク、および他のピークの面積率の決定をいう。ピークの濃度曲線下面積、および特定のピークの面積率の決定は、当業者によって規定どおりに行う。例えば、試料中の脂肪酸分子が、脂肪酸メチルエステル（ＦＡＭＥ）に変換されるＦＡＭＥ  ＧＣ／ＦＩＤ検出法では、個別のピークは、Ｃ１４：１等の他の脂肪酸と比較して、不飽和のない１４個の炭素原子の脂肪酸（Ｃ１４：０）でみられる。各クラスのＦＡＭＥのピーク面積は、混合物中のその成分パーセントに正比例し、試料中に含まれる全ピークの合計（すなわち、［特定のピーク下面積／全測定ピークの合計面積］×１００）に基づいて算出する。本発明の油および細胞の脂質プロファイルについて言及する場合、「少なくとも４％のＣ８‐Ｃ１４」とは、細胞中または抽出されたグリセロ脂質組成の少なくとも４％の総脂肪酸が、８、１０、１２もしくは１４個の炭素原子を含む鎖長を有することを意味する。
【００３６】
「含気食品」とは、連続相が一般に水溶液で、かつ不連続相が一般にガス（空気）である、連続相と不連続相とからなる食品を意味する。含気食品の連続相は安定性があり、これは、食品内のガス（空気）泡の安定した形成を可能にする。含気食品の非限定的な一例には、ムース、アイスクリーム、およびシャーベットが含まれる。
【００３７】
「無菌」とは、他の生存生物体に汚染されていない、生物体の培養を意味する。
【００３８】
「焼いた食品」とは、一般にパン屋でみられる、オーブンの使用によって調理され、通常、膨張剤を含む食品を意味する。焼いた食品には、ブラウニー、クッキー、パイ、ケーキ、およびペストリーが含まれるが、これらに限定されない。
【００３９】
「バイオリアクタ」および「発酵槽」とは、細胞が、一般に懸濁液中で培養される発酵タンクまたは発酵容器等の密閉容器または部分的密閉容器を意味する。
【００４０】
「パン」とは、小麦粉、液体、および通常膨張剤を含む食品を意味する。パンは、通常、オーブンで焼くことにより調理されるが、他の調理法も可能である。膨張剤は、本質的に、化学的かまたは有機的／生物学的であり得る。一般に、有機的な膨張剤は酵母である。膨張剤が、本質的に化学的である場合（ベーキングパウダーおよび／または重曹等）、これらの食品は、「クイックブレッド」と称される。クラッカーおよび他のクラッカー様製品は、膨張剤を含まないパンの一例である。
【００４１】
「セルロース系物質」とは、セルロースの消化産物で、特に、グルコースおよびキシロースを意味する。セルロース消化は、一般に、二糖類、オリゴ糖、リグニン、フルフラール、および他の化合物等の付加的な化合物を生成する。セルロース系物質の供給源には、例えば、サトウキビバガス、甜菜パルプ、コーンストーバ、木材チップ、おが屑、およびスイッチグラスが含まれるが、これらに限定されない。
【００４２】
「共培養」、そしてその変形である「共栽培」および「共発酵」等とは、培養条件下で同じバイオリアクタ中に２以上の型の細胞が含まれることを意味する。２以上の型の細胞は、本発明の目的のために、一般に、両方とも微生物で、一般に、両方とも微細藻類であるが、一部の例において、微細藻類でない細胞型を１つ含んでもよい。共存培養に適した培養条件には、一部の例において、２以上の細胞型の成長および／または繁殖を促進するもの、および、別の例において、残りの細胞の成長を維持しつつ、２以上の細胞の１つのみ、または１つの部分集合のみの成長および／または増殖を促進するものが含まれる。
【００４３】
「補因子」とは、酵素がその酵素活性を実行するのに必要な、基質以外の分子を意味する。
【００４４】
「粉砕肉」とは、肉片のサイズを低減させることによって形成され、これによって、塩可溶性タンパク質の抽出を促進し、粉砕肉が結合することを可能にする、肉製品を意味する。また、粉砕は、脂肪、筋肉および結合組織の一様な分布も生ずる。粉砕肉の非限定的な一例には、ミートパティ、ソーセージ、およびホットドッグが含まれる。
【００４５】
「再成形肉」は、粉砕肉に関係し、肉を破砕し、細かな粉砕肉を加えるか、またはこれを加えないで、細切肉を「回転する」ことによって形成し、これによって、細切肉の可溶性タンパク質が小片を結合する、肉のカット、スライスまたは肉の一部の外観を有した人工品を有する。チキンナゲットは、再成形肉の非限定的な一例である。
【００４６】
「従来の食品」とは、例えば、人間による消費を意図とした組成物、藻類バイオマスまたは他の藻類成分が不足し、かつ他の食用原料と共に、食品（特に、植物油、動物性脂肪および／または卵）に通常関連する原料を含む、組成物を意味する。従来の食品には、店およびレストランで売られる食品、ならびに家庭で作られる食品が含まれる。従来の食品は、他の食用成分と共に、油、または藻類が供給源でない脂肪、および／または卵の包含物を特定する、従来のレシピに従って作られることが多い。
【００４７】
「調理品」とは、例えば、一定時間オーブンで加熱された食品を意味する。
【００４８】
「クリーム状のサラダドレッシング」とは、安定して分散し、高い粘性および遅い注入速度を有する、サラダドレッシングを意味する。一般に、クリーム状のサラダドレッシングは不透明である。
【００４９】
「栽培」、「培養」、および「発酵」およびその変形とは、培養条件を用いて、１以上の細胞（一般に、微細藻類）の成長および／または繁殖を意図的に促進することを意味する。意図した条件には、本質的に、（直接的な人間の干渉がない）微生物の成長および／または繁殖が除かれる。
【００５０】
「細胞崩壊」とは、低張性環境での細胞の溶解を意味する。細胞崩壊は、浸透現象、または水分過剰の状態の細胞内部への水の移動によるものであり、その結果、細胞は、その内部の水の浸透圧に耐えることができずに破裂する。
【００５１】
「脱脂藻類粉末」とは、藻類粉末に加工され、その後、抽出工程前のバイオマスに比べて少ない油を含む藻類粉末を生産するために、極性および／または無極性の抽出工程またはＣＯ２等のガスを使用して、油抽出工程に供した、藻類バイオマスを意味する。脱脂藻類粉末中の細胞は、主にまたは完全に溶解され、また、脱脂藻類粉末は、食物繊維の形態を含む、炭水化物を含み、タンパク質および少量の残油を含み得る。脱脂藻類粉末は、抽出法に依存して、リン脂質を含むか、またはこれを含まない。一般に、脱脂藻類粉末に残存する脂質の量は、約１重量％〜約１５重量％である。
【００５２】
「食物繊維」とは、微細藻類を含む、細胞壁を含む植物および他の生物体にみられる、非澱粉炭水化物を意味する。食物繊維は、可溶性（水に溶解する）、または不溶性（水に溶解不能である）であり得る。総食物繊維は、可溶性および不溶性の繊維からなる。
【００５３】
「脱脂した食事」または「脱脂藻類の食事／バイオマス」とは、油抽出工程に供され、そのため、油抽出前のバイオマスに比べて、少ない油を含む藻類バイオマスを意味する。脱脂した食事中の細胞は主に溶解している。脱脂した食事には、溶媒（例えば、ヘキサン）抽出された藻類バイオマスが含まれる。
【００５４】
「可消化粗タンパク質」とは、利用可能な、または胃酵素による消化後、遊離窒素（アミノ酸）に変換することができる、タンパク質の一部である。可消化粗タンパク質のインビトロ測定は、ペプシン等の胃酵素を使用し、試料を消化し、および消化後に遊離アミノ酸を測定することによって行われる。可消化粗タンパク質のインビボ測定は、飼料／食品試料中のタンパク質レベルを測定し、試料を動物に与え、および動物の排泄物中で採取した窒素の量を測定することによって行われる。
【００５５】
「分散」とは、少なくとも１つの物質の微粒子が、別の物質の全体にわたって散在する混合物を意味する。分散は、種々の組成物の連続相で散在した粒子を意味する場合があるが、本明細書に使用する分散という用語は、別の物質（通常、液体）の全体にわたって散在するか、または分散する１つの物質の微細固形物を指す。エマルションは、２以上の非混和液の混合物を包含する特別の型の分散である。
【００５６】
「乾燥重量」および「乾燥細胞重量」とは、水を相対的に欠いた状態で決定した重量を意味する。例えば、乾燥重量で規定された割合の特定成分を含むものとしての微細藻類バイオマスについての言及は、水を実質的にすべて除去した後、バイオマスの重量に基づいて、割合を算出することを意味する。
【００５７】
「食用原料」とは、食べることが可能な物質または組成物を意味する。「食用原料」には、穀物、果実、野菜、タンパク質、ハーブ、香辛料、炭水化物、糖および脂肪が含まれるが、これらに限定されない。
【００５８】
本明細書に使用する「原料」という用語は、食品および／または食品組成物に使用する原料を意味する。「原料」には、保存剤、風味剤、食品添加物、食品着色剤、糖代替物、および種々の食品でみられる他の原料が含まれるが、これらに限定されない。
【００５９】
「外因的に提供された」とは、細胞に提供される分子を意味する（培養細胞における培地への提供を含む）。
【００６０】
「脂肪」とは、通常の室温および圧力で一般に固体の、脂質または脂質の混合物を意味する。「脂肪」には、ラードおよびバターが含まれるが、これらに限定されない。
【００６１】
「繊維」とは、多糖の形態の非澱粉炭水化物を意味する。繊維は、水溶性かまたは水不溶性であり得る。微細藻類の多くは、一般に細胞壁に存在する、可溶性および不溶性両方の繊維を産生する。
【００６２】
「最終食品」および「最終食品原料」とは、包装、使用または消費できる状態の食品組成物を意味する。例えば、「最終食品」は、調理されているか、または「最終食品」を含む原料が、混合されているか、それ以外に、互いに統合されていてもよい。「最終食品原料」は、一般に、他の原料と組み合わせて使用し、食品を形成する。
【００６３】
「固定炭素源」とは、外気温で存在し、固体または液体の形態に圧縮される、炭素を含む分子（一般に、有機分子）を意味する。
【００６４】
「食品」、「食品成分」、「食品」および「食料」とは、栄養および／またはカロリー源として人間によって摂取されることが意図されるか、または期待される、組成物を意味する。食品組成物は、主に、炭水化物、脂肪、水および／またはタンパク質で構成され、実質的に人の毎日のカロリー摂取のすべてを占めている。「食品組成物」は、一般的な錠剤またはカプセル剤の重量の少なくとも１０倍の最小重量であり得る（一般的な錠剤／カプセル剤の重量の範囲は、１００ｍｇ以下から最大１５００ｍｇである）。「食品組成物」は、カプセル化されていないか、または錠剤形態ではない。
【００６５】
「グリセロ脂質プロファイル」とは、バイオマスまたは油の特定の試料におけるグリセロ脂質の種々の炭素鎖長、および飽和レベルの分布を意味する。例えば、試料は、グリセロ脂質のおよそ６０％が、Ｃ１８：１で、２０％がＣ１８：０で、１５％がＣ１６：０で、５％がＣ１４：０である、グリセロ脂質のプロファイルを有し得る。炭素の長さが、例えば「Ｃ：１８」のように、一般に参照される場合、かかる言及には、任意の量の飽和を含み得る。例えば、Ｃ：１８として脂質を２０（重量／質量）％含む微細藻類バイオマスは、Ｃ１８：０、Ｃ１８：１、Ｃ１８：２等を、等量または種々の量で、その合計がバイオマスの２０％を構成する量を含み得る。特定の飽和型の割合への言及、例えば「１８：１グリセロ脂質形態で少なくとも５０％が一価不飽和した」とは、グリセロ脂質の脂肪族側鎖の少なくとも５０％が１８：１であるが、トリグリセリドの少なくとも５０％がトリオレイン（３つの１８：１鎖が単一のグリセロール骨格に結合する）であることを必ずしも意味しない。かかるプロファイルには、全側鎖の少なくとも５０％が１８：１である場合、１８：１と他の鎖の混合したグリセロ脂質が含まれ得る。
【００６６】
「適正製造基準」および「ＧＭＰ」とは、２１Ｃ．Ｆ．Ｒ．１１０（人間の食品用）および１１１（健康補助食品用）に示す規制によって制定された条件、または米国外の現地で制定された同等の規制方針を意味する。米国の規制は、連邦食品・医薬品・化粧品法の権力下で、米国食品医薬品局によって公布され、人間の消費用の食品および健康補助食品のメーカー、加工業者、および包装業者を規制する。
【００６７】
「成長」とは、細胞サイズ、全細胞内内容物、および／または細胞集団もしくは個々の細胞の重量の増加を意味し、固定炭素源の細胞内油への変換による細胞重量の増加を含む。
【００６８】
「従属栄養培養」、ならびに「従属栄養培養物」および「従属栄養発酵」等の変形とは、固定炭素源の存在下で、成長（細胞サイズ、細胞内容物、および／または細胞活性の増加）を意図的に促進することをいう。従属栄養培養は、光がない状態で行う。光がない状態における培養とは、細胞が光から有意味な量（すなわち０．１％より多い）のエネルギーを誘導しない、光が完全にない状態、またはほとんど完全にない状態における微生物細胞の培養を意味する。
【００６９】
「従属栄養繁殖」およびその変形とは、固定炭素源の存在下で、繁殖（有糸分裂による細胞数の増加）を意図的に促進することをいう。従属栄養繁殖は、光がない状態で行う。光がない状態における繁殖とは、細胞が光から有意味な量（すなわち０．１％より多い）のエネルギーを誘導しない、光が完全にない状態、またはほとんど完全にない状態における微生物細胞の繁殖を意味する。
【００７０】
「ホモジェネート」とは、物理的に破砕されたバイオマスを意味する。均質化は、粒子または凝集体を小さく、均一なサイズに細分化し、更なる加工に供することができる分散物の形成を含む、流体力学工程である。均質化は、種々の食品および乳製品の加工に用い、安定性、賞味期間、消化、および味を向上させる。
【００７１】
「脂質収率の増加」とは、例えば、培養物１リットル当たりの細胞の乾燥重量の増加、脂質を含む細胞の割合の増加、および／または単位時間ごとの培養物の容積１リットル当たりの脂質の全体量の増加によって達成することができる、微生物培養物の脂質／油生産性の増加を意味する。
【００７２】
「インサイチュ」とは、「定位置」または「当初の位置で」を意味する。例えば、培養物は、触媒を分泌する第１の微細藻類細胞型と、基質を分泌する第２の微生物細胞型とを含んでもよく、第１および第２の細胞型が、物質の更なる分離または処理を必要とせずに、共培養においてインサイチュで発生する特定の化学反応に必要な成分を産生する。
【００７３】
「脂質」とは、無極性溶媒（エーテルおよびヘキサン等）中で溶解可能であり、および水には相対的にまたは完全に不溶である、任意のクラスの分子を意味する。脂質分子の大部分は、本質的に、疎水性の長い炭化水素末端からなるため、脂質分子はこれらの特性を有する。脂質の一例には、脂肪酸（飽和脂肪酸および不飽和脂肪酸）；グリセリドまたはグリセロ脂質（モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドもしくは中性脂肪、およびホスホグリセリドもしくはグリセロリン脂質等）；および、非グリセリド（スフィンゴ脂質、トコフェロール、トコトリエノール、ステロール脂質（コレステロールおよびステロイドホルモンを含む）、プレノール脂質（テルペノイド、脂肪アルコール、ワックス、およびポリケチドを含む）が含まれる。
【００７４】
「溶解物」とは、溶解細胞の内容物を含む、溶液を意味する。
【００７５】
「溶解」とは、原形質膜の破損、および、場合により、少なくとも一部の細胞内容物を放出するのに十分な微生物の細胞壁の破損を意味し、その完全性を損なう機械的メカニズムまたは浸透メカニズムによって達成されることが多い。
【００７６】
「溶解する」とは、細胞膜の破損、および、場合により、少なくとも一部の細胞内容物を放出するのに十分な生物体または細胞の細胞壁の破損を意味する。
【００７７】
「微細藻類」とは、葉緑体を含み、光合成を行うことができるか、またはできない、真核微生物の生物体を意味する。微細藻類には、固定炭素源をエネルギーとして代謝することができない、偏性光合成自己栄養生物、および光合成を行うことができず、固定炭素源単独で生存することができる、従属栄養生物（偏性従属栄養生物を含む）が含まれる。微細藻類には、クラミドモナス(Chlamydomonas)、および、例えば、２つの別個の細胞型の単純な多細胞光合成微生物である、ボルボックス(Volvox)等の微生物等の、細胞分裂直後、姉妹細胞から分離する単細胞生物が含まれる。また、「微細藻類」には、クロレラ属(Chlorella)、パラクロレラ属(Parachlorella)、およびドナリエラ(Dunaliella)も含まれる。
【００７８】
「微細藻類バイオマス」、「藻類バイオマス」、および「バイオマス」とは、微細藻類細胞の成長および／または繁殖によって産生する物質を意味する。バイオマスは、細胞および／または細胞内容物、ならびに細胞外物質を含んでもよい。細胞外物質には、細胞によって分泌される化合物を含むが、これに限定されない。
【００７９】
「微細藻類油」および「藻類油」とは、トリアシルグリセロールを含む、微細藻類によって産生する脂質成分を意味する。
【００８０】
「微細化した」とは、細胞が破壊されたバイオマスを意味する。例えば、少なくとも５０％の粒子サイズ（中央値粒度）が、最長寸法で１０μｍ以下、または同等の容積の球体の径になるように、高圧化、機械的方法、剪断、超音波処理（または同等の処理）を含む、周知の方法によって破砕することができる。一般に、かかる粒子の少なくとも５０％から９０％以上は、最長寸法で５μｍ未満、または同等の容積の球体の径である。いずれの場合においても、微細化したバイオマスの平均粒子サイズは、無処理の微細藻類細胞よりも小さい。言及する粒子サイズは、均質化によって生じるものであり、実際、均質化が生じた後、および乾燥中に生じる粒子の凝集によって発生すると考えられる歪みを回避するため、乾燥前に、すぐに測定することが好ましい。レーザー回析等の粒子サイズを測定する方法の一部は、凝集した粒子（正確にいえば、個々の粒子）のサイズを検出し、また、乾燥後に、大きな見掛けの粒子サイズ（例えば、１〜１００μｍの平均粒子サイズ）を示し得る。粒子は、一般に形状においてほぼ球状であるので、同等の容積の球体の径および粒子の最長寸法は、ほぼ同じである。
【００８１】
「微生物(microorganism)」および「微生物(microbe)」とは、微小の単細胞生物を意味する。
【００８２】
本明細書に使用する「口当たり」とは、口腔における食品組成物の知覚を意味する。口当たりは、当業者によって使用され、理解される用語である。口当たりには、口に入れた場合に、食品組成物の凝集性、密度、収れん性、乾燥、脆さ(fracturability)、粒状性、粘着性、硬度、重さ、吸湿性、水分放出、口腔へのまとわりつき(mouthcoating)、粗さ、滑りやすさ、平滑性、均一性、かみ切った一片の均一性、咀嚼の均一性、粘性、および湿潤性からなる群より選択される、知覚が含まれる。
【００８３】
「栄養補助食品」とは、大量のカロリーとは対照的に、特定の栄養素の提供によって、食生活の補助をすることを意図した組成物を意味する。栄養補助食品は、次に示す原料を１以上含み得る：ビタミン、ミネラル、ハーブ、アミノ酸、必須脂肪酸、および他の物質。栄養補助食品は、一般に、錠剤であるか、またはカプセル化されている。錠剤であるかまたはカプセル化された単一の栄養補助食品は、一般に、１日当たり１５グラム以下のレベルで摂取される。栄養補助食品は、ヨーグルトまたは「スムージー」等の、食品組成物と混合することが可能な、混合用の小袋で提供することができ、通常、１日当たり２５グラム以下のレベルで摂取される。
【００８４】
「油」とは、微細藻類、他の植物、および／または動物を含む、生物体によって産生されるトリアシルグリセリド（またはトリグリセリド油）を意味する。別段の指定がない限り、「油」とは、「脂肪」と区別して、通常の室温および圧力で一般に液体である脂質をいう。しかしながら、ココナッツ油は、一部のヤシ油およびバーム核油と同様に、一般に、室温で固体である。例えば、「油」には、大豆、ナタネ、キャノーラ、ヤシ、パーム核、ココナッツ、トウモロコシ、オリーブ、ヒマワリ、綿実、クフェア、ピーナッツ、ナガミノアマナズナ(camelina  sativa)、カラシナの種子  、カシューナッツ、オート麦、ハウチワマメ、ケナフ、キンセンカ属(calendula)、麻、コーヒー、亜麻仁、ヘーゼルナッツ、トウダイグサ属(euphorbia)、カボチャ種子、コリアンダー、アマナズナ属(camelina)、胡麻、ベニバナ、米、アブラギリ(tung  oil  tree)、ココア、コプラ、ケシ、ヒマ、ペカン、ホホバ、ジャトロファ属(jatropha)、マカダミア、ブラジルナッツ、およびアボカド、ならびにこれらの組合せ由来の油を含むが、これらに限定されない、植物由来の植物油または種子油が含まれる。
【００８５】
「浸透圧衝撃」とは、浸透圧の急激な低下後の溶液における細胞の破裂を意味し、溶液への細胞の細胞成分の放出を誘導することに使用される場合がある。
【００８６】
「低温殺菌」とは、食品中の微生物の増殖を遅くさせることを意図とした、加熱の工程を意味する。一般的に、低温殺菌は、高温（但し、沸点より低い温度）で、短時間行われる。本明細書に説明するように、低温殺菌は、食品中の好ましくない微生物の数を低減させるだけでなく、食品中に含まれる特定の酵素も不活性化することができる。
【００８７】
「多糖類」および「グリカン」とは、単糖類のグリコシド結合によって作製される、炭水化物を意味する。セルロースは、特定の植物の細胞壁を構成する多糖類の一例である。
【００８８】
「ポート」とは、ガス、液体、細胞等の物質の流入または流出を可能にするバイオリアクタの開口部を意味し、ポートは、通常、管に接続される。
【００８９】
「主にカプセル化された」とは、例えば、微細藻類細胞を含み得る、例えば、藻類油の、５０％を超える（一般に、７５％を超えて９０％までの）、前述した成分を、前述した容器に隔離することを意味する。
【００９０】
「主に無処理の細胞」および「主に無処理のバイオマス」とは、５０％を超え、多くの場合、７５、９０、および９８％を超える無処理の細胞を含む、細胞集団を意味する。本文脈において、「無処理」とは、培養物において細胞膜の透過性を超える程度に、細胞の細胞内成分が放出するような様式で、細胞の細胞内成分を密閉する細胞膜および／または細胞壁の物理的連続性が、破壊されていないことを意味する。
【００９１】
「主に溶解された」とは、５０％を超える（一般に、７５％を超えて９０％までの）細胞が、細胞の細胞内成分が細胞膜内に完全に密閉されないまでに破壊された、細胞集団を意味する。
【００９２】
「増殖」とは、成長と繁殖の両方の組合せを意味する。
【００９３】
「繁殖」とは、有糸分裂または他の細胞分裂による細胞数の増加を意味する。
【００９４】
「近似分析」とは、脂肪、窒素／タンパク質、粗繊維（主成分としてセルロースとリグニン）、水分、および灰分の食料分析を意味する。炭水化物（総食物繊維および遊離糖類）は、１００（差の炭水化物）から、近似分析の既知の値の合計を引くことによって算出することができる。
【００９５】
本明細書に使用する「賞味期間」とは、食品組成物を許容することができると考えられる時間の長さを意味する。テクスチャ、口当たり、味、風味、無菌、および他の特性を含む、食品組成物の特性は、経時的に低下する。食品組成物の賞味期間において、食品組成物の特性は低下し得るが、食品組成物は、依然として、食品組成物として許容することができると判断することができる。
【００９６】
「超音波処理」とは、音波エネルギーによる細胞等の生体物質の破壊を意味する。
【００９７】
「フルフラールの化学種」とは、２‐フランカルボキシアルデヒド、および同様の基本的な構造特性を有する、その誘導体を意味する。
【００９８】
「ストーバ」とは、穀粒を作物から収穫した後に残る、作物の乾燥した茎および葉を意味する。
【００９９】
「人間の消費に適した」とは、組成物が人間の健康に悪影響を及ぼすことなく、食事摂取で消費することができ、消化管内での消化物質の取込みによって、有意なカロリー摂取を提供できることを意味する。
【０１００】
「未調理品」とは、加熱されていない組成物を意味するが、以前に加熱された成分が１以上含まれ得る。
【０１０１】
「Ｖ／Ｖ」または「ｖ／ｖ」とは、容積割合に関して、組成物中の１つの物質の容積と組成物の容積の比率を意味する。例えば、微細藻類油を５％ｖ／ｖ含む組成物についての言及は、組成物の容積の５％が微細藻類油からなり（例えば、容積が１００ｍｍ３の組成物は、５ｍｍ３の藻類油を含む）、残部の容積の組成物（例えば、一例では９５ｍｍ３）が他の原料からなることを意味する。
【０１０２】
「Ｗ／Ｗ」または「ｗ／ｗ」とは、重量割合に関して、組成物中の１つの物質の重量と組成物の重量の比率を意味する。例えば、微細バイオマスを５％ｗ／ｗ含む組成物についての言及は、組成物の重量の５％が微細藻類バイオマスからなり（例えば、重量が１００ｍｇの組成物は、５ｍｇの藻類バイオマスを含む）、残部の重量の組成物（例えば、一例では９５ｍｇ）が他の原料からなることを意味する。
【０１０３】
ＩＩ．微細藻類バイオマスを調製する方法
本発明は、脂質および／またはタンパク質成分を含む、人間の消費に適した高栄養の藻類バイオマス、ならびに、藻類バイオマスと、食用原料および藻類バイオマスを含んだ食品組成物とを組み合わせる方法を提供する。本発明は、１つには、藻類バイオマスを、高い油含量および／または優れた機能性で調製することができ、また、得られたバイオマスを食品に導入できるという発見から生じた。さらに、脱脂藻類のバイオマス（脱脂藻類粉末形態において）は、特異的で、驚くべき機能性を付与することができ、食品に導入することができる。また、バイオマスは、藻類由来の食物繊維（可溶性および不溶性の炭水化物の両方）、リン脂質、糖タンパク質、フィトステロール、トコフェロール、トコトリエノール、およびセレン等の、油および／またはタンパク質に加えて、複数の有益な微量養素も提供する。藻類バイオマスは、本明細書に開示するか、または当業者に周知の条件下で、成長、培養、もしくは繁殖した藻類細胞を含む。
【０１０４】
本節は、最初に、本発明の方法で使用するのに適した微細藻類の種類（パートＡ）、色素沈着を欠いているか、有意に低減された色素沈着を有する、微細藻類株を作出する方法（パートＢ）、次いで、バイオマスを繁殖するのに使用する、培養条件（パートＣ）、次いで、バイオマスを更なる処理のために調製するのに使用する、濃縮工程（パートＤ）、および本発明の方法に従って調製したバイオマスの化学組成物の説明（パートＥ）で終わる。
【０１０５】
Ａ．本発明の方法で使用する微細藻類
本発明の方法に従って、適切な油および／または脂質、および／またはタンパク質を産生する、種々の微細藻類種を使用することができるが、高いレベルの適切な油および／または脂質、および／またはタンパク質を自然に産生する微細藻類が好ましい。本発明で使用する微細藻類の選択に影響を及ぼす考慮すべき事項には、食品の製造に適した油、脂質、またはタンパク質の産生に加えて、（１）細胞重量の割合としての高脂質（またはタンパク質）含量、（２）成長の容易性、（３）繁殖の容易性、（４）バイオマス処理の容易性、（５）グリセロ脂質プロファイル、および（６）藻類毒素のないまたはほとんどない（以下の実施例４は、乾燥微細藻類バイオマス、および検出可能な藻類毒素を欠くバイオマスから抽出される、油または脂質を示す）が含まれる。
【０１０６】
一部の実施態様において、微細藻類の細胞壁は、食品加工時に破裂して、機能成分を放出し、また、これらの実施態様において、特に、藻類バイオマスが未調理食品に使用される場合、動物（例えば、人間または他の単胃動物）の消化管で消化されやすい細胞壁を有する微細藻類株が好ましい。
【０１０７】
細胞壁に高いセルロース／ヘミセルロース含量を有する、微細藻類株の消化率は、一般に減少する。消化率は、当業者に公知の標準アッセイ（例えば、ペプシン消化率アッセイ）を用いて、評価することができる。
【０１０８】
特定の実施態様において、微細藻類は、乾燥重量で少なくとも１０％以上の油を含む。別の実施態様において、微細藻類は、乾燥重量で少なくとも２５〜３５％以上の油を含む。一般に、これらの実施態様において、微細藻類中に多くの油が含まれるほど、バイオマスの栄養価は高くなり、そのため、乾燥重量で少なくとも４０％、少なくとも５０％、７５％以上の油を含むように培養することができる微細藻類が特に好ましい。本発明の方法で使用する好ましい微細藻類は、従属栄養により（光がない状態において糖類で）成長することができるか、または偏性従属栄養生物である。すべての型の脂質は、好ましくない味または不快な臭気を有し得る、および不十分な安定性を示すか、または口当たりの悪さを示し得るので、すべての型の脂質が、食品および／または栄養補助食品の使用に好ましいわけではなく、また、これらの考慮すべき事項は、本発明の方法で使用する微細藻類の選択にも影響を及ぼす。
【０１０９】
クロレラ属(Chlorella)の微細藻類は、一般に本発明の方法で有用である。クロレラ属(Chlorella)は、単細胞緑藻類の属であり、緑藻植物門(Chlorophyta)に属する。クロレラ属(Chlorella)の細胞は、一般に、球形で、直径約２〜１０μｍであり、鞭毛を欠く。クロレラ属(Chlorella)の一部の種は、生来従属栄養性である。好ましい実施態様において、本発明の方法で使用する微細藻類は、クロレラ・プロトセコイデス(Chlorella  protothecoides)、クロレラ・エリプソイダ(Chlorella  ellipsoidea)、クロレラ・ミヌティッシマ(Chlorella  minutissima)、クロレラ・ゾフィニエネシ(Chlorella  zofinienesi)、クロレラ・ルテオビリディス(Chlorella  luteoviridis)、クロレラ・ケッセレリ(Chlorella  kessleri)、クロレラ・ソロキニアナ(Chlorella  sorokiniana)、クロレラ・フスカ・ｖａｒ．バクオレタ・クロレラ種(Chlorella  fusca  var.  vacuolata  Chlorella  sp.)、クロレラ・ｃｆ．ミヌチシマ(Chlorella  cf.  minutissima)、またはクロレラ・エマゾーニ(Chlorella  emersonii)である。クロレラ属(Chlorella)、特に、クロレラ・プロトセコイデス(Chlorella  protothecoides)は、その高脂質の組成により、本発明の方法で使用する好ましい微生物である。本発明の方法で使用するクロレラ・プロトセコイデス(Chlorella  protothecoides)の特に好ましい種には、以下の例で例示するものが含まれる。
【０１１０】
本発明の方法で使用するのに適したクロレラ属(Chlorella)の他の種には、アニトラタ(anitrata)、アンタルクティカ(Antarctica)、アウレオビリディス(aureoviridis)、キャンディダ(candida)、キャプスラテ(capsulate)、デシカート(desiccate)、エリプソイダ(ellipsoidea)（ＣＣＡＰ２１１／４２株を含む）、エマゾーニ(emersonii)、フスカ（ｖａｒ．バクオレタ(var.  vacuolata)を含む）、グルコトロファ(glucotropha)、インフシオナム(infusionum)（var・アクトフィラ(var.  actophila)、およびｖａｒ．アウェノフィラ(var.  auxenophila)を含む）、ケッセレリ(kessleri)（ＵＴＥＸ３９７、２２２９、３９８株のいずれかを含む）、ロボフォラ  (lobophora)（ＳＡＧ３７．８８株を含む）、ルテオビリディス(luteoviridis)（ＳＡＧ２２０３株、ならびにｖａｒ．アウレオビリディス(var.  aureoviridis)およびルテスセンス(lutescens)を含む）、ミニアタ(miniata)、ｃｆ．ミヌティッシマ(cf.  minutissima)、ミヌティッシマ(minutissima)（ＵＴＥＸ２３４１株を含む）、ムタビリス(mutabilis)、ノクツルナ(nocturna)、オバァリス(ovalis)、パルバ(parva)、フォトフィリア(photophila)、プリングシェイミー(pringsheimii)、プロトセコイデス(protothecoides)（ＵＴＥＸ１８０６、４１１、２６４、２５６、２５５、２５０、２４９、３１、２９、２５、もしくはＣＣＡＰ２１１／８Ｄ株のいずれか、またはＣＣＡＰ２１１／１７およびｖａｒ．アシジコラ(var.  acidicola)を含む）、レグラリス(regularis)（ｖａｒ．ミニマ(var.  minima)およびウンブリカタ(umbricata)を含む）、レイシグリー(reisiglii)（ＣＣＰ１１／８株を含む）、サッカロフィラ(saccharophila)（ＣＣＡＰ２１１／３１、ＣＣＡＰ２１１／３２株、およびｖａｒ．エリプソイダ(var.  ellipsoidea)を含む）、サリナ(salina)、シンプレックス(simplex)、ソロキニアナ(sorokiniana)（ＳＡＧ２１１．４０Ｂ株を含む）、種（ＵＴＥＸ２０６８株、およびＣＣＡＰ２１１／９２を含む）、スファエリカ(sphaerica)、スティグマトフォラ(stigmatophora)、ツレボウシオイデス(trebouxioides)、バニエリー(vanniellii)、ブルガリス(vulgaris)（ＣＣＡＰ２１１／１１Ｋ、ＣＣＡＰ２１１／８０株、ならびにｆ．テルティア(f.  tertia)およびｖａｒ．アウトトロフィカ(var.  autotrophica)、ヴィリディス(viridis)、ブルガリス(vulgaris)、ブルガリス・f.テルティア(vulgaris  f.  tertia)、およびブルガリス・ｆ．ヴィリディス(vulgaris  f.  viridis)を含む）、シャンセラ(xanthella)、およびゾフィンジエンシス(zofingiensis)からなる群より選択される種が含まれる。
【０１１１】
本発明で使用するクロレラ属(Chlorella)の種（および他の微細藻類属の種）は、これらのゲノムの特定の標的領域と、本明細書で同定される種のこれらの同一領域とを比較することによって、同定することができる。好ましい種は、本明細書で同定される種と同一性を示すか、またはこれと少なくとも非常に高いレベルの相同性を示す種である。例えば、特定のクロレラ属(Chlorella)の種または株の同定は、プライマーおよびゲノムの適切な領域を使用する方法、例えば、Wuらの文献：Bot.  Bull.  Acad.  Sin.  42:  115-121  (2001)に記載する方法を用いて、核および／または葉緑体ＤＮＡの増幅および配列決定によって、達成することができる。クロレラ属(Chlorella)の種の同定は、リボソームＤＮＡ配列を使用して単離する。リボソーム内部転写スペーサー（ＩＴＳ１およびＩＴＳ２ｒＤＮＡ）、２３Ｓ  ＲＮＡ、１８Ｓ  ｒＲＮＡ、および他の保存ゲノム領域の増幅および配列決定等の系統解析の、十分に確立された方法を、当業者が用いて、クロレラ属(Chlorella)の種だけでなく、本明細書に説明する方法で使用するのに適した油および脂質を産生する、他の微細藻類を同定することができる。藻類の同定および分類の方法の一例については、文献：Genetics,  170(4):1601-10  (2005)、およびRNA,  11(4):361-4  (2005)を参照されたい。
【０１１２】
したがって、ゲノムＤＮＡ比較を用いて、本発明に使用するのに適した微細藻類の種を同定することができる。例えば、２３Ｓ  ｒＲＮＡをコードするＤＮＡ等であるが、これに限定されない、保存ゲノムＤＮＡの領域は、例えば、本発明に使用する好ましい微細藻類に分類学的に関連し、これらの好ましい種の対応する領域と比較し得る、微細藻類種から増幅することができる。次いで、高いレベルの類似性を示す種は、本発明の方法で使用するために、選択される。クロレラ属(Chlorella)内の種間でのかかるＤＮＡ配列比較の実例を、以下に示す。一部の例において、本発明で使用するのに好ましい微細藻類は、配列番号１〜２３および２６〜２７に示す配列のうちの少なくとも１つに対して、少なくとも６５％のヌクレオチド同一性を有する２３Ｓ  ｒＲＮＡをコードする、ゲノムＤＮＡ配列を有する。他の例において、本発明で使用するのに好ましい微細藻類は、配列番号１〜２３および２６〜２７に示す配列のうちの少なくとも１つに対して、少なくとも７５％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上のヌクレオチド同一性を有する２３Ｓ  ｒＲＮＡをコードする、ゲノムＤＮＡ配列を有する。また、他の原料と組み合わせて食品組成物を配合する前の、食品組成物および／または藻類バイオマスの遺伝子型解析は、藻類バイオマスが、微細藻類の単一株を超える株からの藻類バイオマスであるか否かを決定する信頼性のある方法でもある。
【０１１３】
ヌクレオチドまたはアミノ酸の同一性の割合を決定するための配列比較において、一般に、１つの配列が、参照配列として作用し、これと試験配列を比較する。配列比較アルゴリズムを適用する際に、試験配列および参照配列をコンピュータに入力し、必要であれば、サブ配列配位を設計し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを設計する。次いで、配列比較アルゴリズムは、設計されたプログラムパラメータに基づき、参照配列に対する試験配列の配列同一性の割合を算出する。比較のために、最適な配列のアラインメントを、例えば、SmithとWatermanの文献：Adv.  Appl.  Math.  2:  482  (1981)の局所的相同性アルゴリズムによって、NeedlemanとWunschの文献：J.  Mol.  Biol.  48:  443  (1970)の相同性アラインメントアルゴリズムによって、PearsonとLipmanの文献：Proc.  Nat’l.  Acad.  Sci.  USA  85:  2444  (1988)の類似性検索法によって、およびこれらのアルゴリズムのコンピュータへの実装（ウィスコンシンジェネティクス・ソフトウェアパッケージ(Wisconsin  Genetics  Software  Package)、遺伝学コンピュータグループ（５７５，サイエンスドクター，マジソン，ウイスコンシン州）でのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）によって、または視覚的検査（Ausubelらの文献、上記参照）によって、実行することができる。配列同一性および配列類似性の割合を決定するのに適した別の例示的アルゴリズムは、ＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、これは、Altschulらの文献：J.  Mol.  Biol.  215:  403-410  (1990)に記載されている。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、全米バイオテクノロジー情報センター（ウェブアドレスwww.ncbi.nlm.nih.gov）を通じて、一般に入手可能である。
【０１１４】
また、クロレラ属(Chlorella)に加えて、他の属の微細藻類も、本発明の方法で使用することができる。好ましい実施態様において、微細藻類は、パラクロレラ・ケッセレリ(Parachlorella  kessleri)、パラクロレラ・ベイエリンキイ(Parachlorella  beijerinckii)、ネオクロリス・オレオアブンダンス(Neochloris  oleabundans)、ブラクテオコッカス・グランディス(Bracteococcus  grandis)、ブラクテオコッカス・シナバリナス(Bracteococcus  cinnabarinas)、およびブラクテオコッカス・エリアス(Bracteococcus  aerius)、ブラクテアコッカス種(Bracteococcus  sp)を含む、ブラクテオコッカス属(Bracteacoccus)、またはセネデスムス・ルベッセンス(Scenedesmus  rebescens)からなる群より選択される種である。微細藻類種の他の非限定的な一例には、アクナンセス・オリエンタイルス(Achnanthes  orientalis)；アグメネルム(Agmenellum)；アンフィプロラ・ヒアリン(Amphiprora  hyaline)；アンフォラ・コフェイフォルミス・リネア(Amphora  coffeiformis  linea)、アンフォラ・コフェイフォルミス・プンクタタ(Amphora  coffeiformis  punctata)、アンフォラ・コフェイフォルミス・タヨロリ(Amphora  coffeiformis  taylori)、アンフォラ・コフェイフォルミス・テヌイス(Amphora  coffeiformis  tenuis)、アンフォラ・コフェイフォルミス・デリカティッシマ(Amphora  coffeiformis  delicatissima)、アンフォラ・コフェイフォルミス・デリカティッシマ・キャピタタ(Amphora  coffeiformis  delicatissima  capitata)を含む、アンフォラ・コフェイフォルミス(Amphora  coffeiformis)を含む、アンフォラ(Amphora)；アナベナ属(Anabaena)；アンキストロデスムス・ファルカタス(Ankistrodesmus  falcatus)を含む、アンキストロデスムス(Ankistrodesmus)；ボエケロヴィア・ホオグランディ(Boekelovia  hooglandii)；ボロディネラ(Borodinella)；ボツリョコッカス・スデティクス(Botryococcus  sudeticus)を含む、ボツリョコッカス・ブラウニイ(Botryococcus  braunii)；ブラクテオコッカス・エリアス(Bracteoccocus  aerius)、ブラクテオコッカス・グランディス(Bracteoccocus  grandis)、ブラクテオコッカス・シナバリナス(Bracteoccocus  cinnabarinas)、ブラクテオコッカス・マイナー(Bracteoccocus  minor)、およびブラクテオコッカス・メディオヌクレタス(Bracteoccocus  medionucleatus)を含む、ブラクテオコッカス(Bracteoccocus)；カルテリア(Carteria)；カエトセロス・グラシリス(Chaetoceros  gracilis)、カエトセロス・ムエレリ(C.  muelleri)、およびカエトセロス・ムエレリ・スブサルスム(Chaetoceros  muelleri  subsalsum)を含む、カエトセロス(Chaetoceros)；クロロコッカム・インフシオナム(Chlorococcum  infusionum)を含む、クロロコッカム(Chlorococcum)；クロロゴニウム(Chlorogonium)；クロオモナス(Chroomonas)；クリソスファエラ(Chrysosphaera)；クリコスファエラ(Cricosphaera)；クリプテコディニウム・コーニィ(Crypthecodinium  cohnii)；クリプトモナス(Cryptomonas)；サイクロテラ・クリプティカ(Cyclotella  cryptica)およびサイクロテラ・メネグヒニアナ(Cyclotella  meneghiniana)を含む、サイクロテラ(Cyclotella)；ドナリエラ・バルダウィル(Dunaliella  bardawil)、ドナリエラ・バイオクラタ(Dunaliella  bioculata)、ドナリエラ・グラヌラテ(Dunaliella  granulate)、ドナリエラ・マリタイム(Dunaliella  maritime)、ドナリエラ・ミヌタ(Dunaliella  minuta)、ドナリエラ・パルバ(Dunaliella  parva)、ドナリエラ・ペイルセイ(Dunaliella  peircei)、ドナリエラ・プリモレクタ(Dunaliella  primolecta)、ドナリエラ・サリナ(Dunaliella  salina)、ドナリエラ・テリコラ(Dunaliella  terricola)、ドナリエラ・テルチオレクタ(Dunaliella  tertiolecta)、およびドナリエラ・ヴィリディス(Dunaliella  viridis)を含む、ドナリエラ(Dunaliella)；エレモスファエラ・ヴィリディス(Eremosphaera  viridis)を含む、エレモスファエラ(Eremosphaera)；エリプソイトドン(Ellipsoidon)；ユーグレナ(Euglena)；フランセイア(Franceia)；フラギラリア・クロトネンシス(Fragilaria  crotonensis)を含む、フラギラリア(Fragilaria)；グレオカプサ(Gleocapsa)；グロエオサムニオン(Gloeothamnion)；ヒメノモナス(Hymenomonas)；イソクリシス・ａｆｆ．ガルバナ(Isochrysis  aff.  galbana)およびイソクリシス・ガルバナ(Isochrysis  galbana)を含む、イソクリシス(Isochrysis)；レポシンクリス(Lepocinclis)；ミクラクチニウム(Micractinium)（ＵＴＥＸ  ＬＢ２６１４を含む）；モノラフィディウム・ミヌツム(Monoraphidium  minutum)を含む、モノラフィディウム(Monoraphidium)；モノラフィディウム(Monoraphidium)；ナンノクロリス(Nannochloris)；ナンノクロロプシス・サリナ(Nannochloropsis  salina)を含む、ナンノクロロプシス(Nannochloropsis)；ナビクラ・アクセプタタ(Navicula  acceptata)、ナビクラ・ビスカンテラエ(Navicula  biskanterae)、ナビクラ・シュードテネロイデス(Navicula  pseudotenelloides)、ナビクラ・ペリクロサ(Navicula  pelliculosa)、およびナビクラ・サプロフィラ(Navicula  saprophila)を含む、ナビクラ(Navicula)；ネオクロリス・オレオアブンダンス(Neochloris  oleabundans)；ネフロクロリス(Nephrochloris)；ネフロセルミス(Nephroselmis)；ニツスチア・コムニス(Nitschia  communis)；ニツスチア・アレクサンドリア(Nitzschia  alexandrina)、ニツスチア・コムニス(Nitzschia  communis)、ニツスチア・デイシパタ(Nitzschia  dissipata)、ニツスチア・フルスツルム(Nitzschia  frustulum)、ニツスチア・ハンツスチアナ(Nitzschia  hantzschiana)、ニツスチア・インコンスピクア(Nitzschia  inconspicua)、ニツスチア・インテルメディア(Nitzschia  intermedia)、ニツスチア・マイクロセファラ(Nitzschia  microcephala)、ニツスチア・プシラ(Nitzschia  pusilla)、ニツスチア・プシラ・エリプティカ(Nitzschia  pusilla  elliptica)、ニツスチア・プシラ・モノエンシス(Nitzschia  pusilla  monoensis)、およびニツスチア・クアヅラングラー(Nitzschia  quadrangular)を含む、ニツスチア(Nitzschia)；オクロモナス(Ochromonas)；オオサイスティス・パルバ(Oocystis  parva)およびオオサイスティス・プシラ(Oocystis  pusilla)を含む、オオサイスティス(Oocystis)；オスシラトリア・リムネティカ(Oscillatoria  limnetica)およびオスシラトリア・スブレヴィス(Oscillatoria  subbrevis)を含む、オスシラトリア(Oscillatoria)；パラクロレラ・ベイエリンキイ(Parachlorella  beijerinckii)（ＳＡＧ２０４６株を含む）およびパラクロレラ・ケッセレリ(Parachlorella  kessleri)（ＳＡＧ１１．８０、１４．８２、２１．１１Ｈ９株のいずれかを含む）を含む、パラクロレラ属(Parachlorella)；パスケリア・アシドフィラ(Pascheria  acidophila)を含む、パスケリア(Pascheria)；パブロバ(Pavlova)；ファガス(Phagus)；フォルミディウム(Phormidium)；プラティモナス(Platymonas)；プレウロクリシス・カーターアエ(Pleurochrysis  carterae)およびプレウロクリシス・デンタテ(Pleurochrysis  dentate)を含む、プレウロクリシス(Pleurochrysis)；プロトテカ・スタグノラ(Prototheca  stagnora)（ＵＴＥＸ３２７株を含む）、プロトテカ・ポルトリセンシス(Prototheca  portoricensis)、およびプロトテカ・モリフォルミス(Prototheca  moriformis)（ＵＴＥＸ１４４１、１���３５、１４３６、１４３７、１４３９株を含む）を含む、プロトテカ(Prototheca)；シュードクロレラ・アクアティカ(Pseudochlorella  aquatica)；ピラミモナス(Pyramimonas)；ピロボツリス(Pyrobotrys)；ロドコッカス・オパクス(Rhodococcus  opacus)；サルシノイド・クリソフィテ(Sarcinoid  chrysophyte)；セネデスムス・アルマタス(Scenedesmus  armatus)およびセネデスムス・ルベッセンス(Scenedesmus  rubescens)を含む、セネデスムス属(Scenedesmus)；シゾシツリウム(Schizochytrium)；スピロギラ(Spirogyra)；スピルリナ・プラテンシス(Spirulina  platensis)；スチココッカス(Stichococcus)；シネココッカス(Synechococcus)；テトラエヅロン(Tetraedron)；テトラセルミス・スエシカ(Tetraselmis  suecica)を含む、テトラセルミス(Tetraselmis)；タラッシオシラ・ウェイッスフロギィ(Thalassiosira  weissflogii)；および、ヴィリデイエラ・フリデリシアナ(Viridiella  fridericiana)からなる種および属の群のこれらの種が含まれる。
【０１１５】
すべての発酵工程は、他の微生物による汚染を受ける。本発明のバイオマスおよび藻類粉末は、汚染を最小化する条件下で、成長させ、処理される。それにもかかわらず、汚染を完全には防ぐことができない。汚染は、微細藻類の培養と繁殖、採取、藻類粉末の製造時、並びに藻類粉末および藻類バイオマスの輸送および保存時を含む、操作段階で生じ得る。汚染菌を同定してもよいし、同定しなくてもよい。
【０１１６】
藻類バイオマスおよび藻類粉末は、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり１０，０００コロニー形成単位（ＣＦＵ）以下の汚染菌、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり７，５００ＣＦＵ以下の汚染菌、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり５，０００ＣＦＵ以下の汚染菌、または藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり２，５００ＣＦＵ以下の汚染菌を含み得る。
【０１１７】
藻類バイオマスおよび藻類粉末は、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり２００ＣＦＵ以下の汚染酵母、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり１５０ＣＦＵ以下の汚染酵母、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり１００ＣＦＵ以下の汚染酵母、または藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり５０ＣＦＵ以下の汚染酵母からなる群より選択される、汚染菌を含み得る。藻類バイオマスおよび藻類粉末は、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり２００ＣＦＵ以下の汚染カビ、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり１５０ＣＦＵ以下の汚染カビ、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり１００ＣＦＵ以下の汚染カビ、または藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり５０ＣＦＵ以下の汚染カビからなる群より選択される、汚染菌を含み得る。藻類バイオマスおよび藻類粉末は、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり１０ＣＦＵ以下の汚染大腸菌群、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり８ＣＦＵ以下の汚染大腸菌群、または藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり５ＣＦＵ以下の汚染大腸菌群からなる群より選択される、汚染菌を含み得る。藻類バイオマスおよび藻類粉末は、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり１０ＣＦＵ以下の汚染大腸菌、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり８ＣＦＵ以下の汚染大腸菌、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり６ＣＦＵ以下の汚染大腸菌、または藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり４ＣＦＵ以下の汚染大腸菌からなる群より選択される、汚染菌を含み得る。藻類バイオマスおよび藻類粉末は、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり２０ＣＦＵ以下の汚染ブドウ球菌、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり１５ＣＦＵ以下の汚染ブドウ球菌、藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり１０ＣＦＵ以下の汚染ブドウ球菌、または藻類バイオマスもしくは藻類粉末のグラム当たり５ＣＦＵ以下の汚染ブドウ球菌からなる群より選択される、汚染菌を含み得る。藻類バイオマスおよび藻類粉末は、汚染菌を含み、汚染サルモネラ属(Salmonella)、緑膿菌（シュードモナス・エルギノサ(Pseudomonas  aeruginosa)）もしくはリステリア(Listeria)は、５０グラムの藻類バイオマスもしくは藻類粉末で検出不能であり、２５グラムの藻類バイオマスもしくは藻類粉末で検出不能であり、２０グラムの藻類バイオマスもしくは藻類粉末で検出不能であり、１５グラムの藻類バイオマスもしくは藻類粉末で検出不能であり、１０グラムの藻類バイオマスおよび藻類粉末で検出不能である。
【０１１８】
汚染菌の量は、当業者に公知の試験によって測定することができる。例えば、好気性菌の全生菌数、大腸菌群と大腸菌、サルモネラ属(Salmonella)、およびリステリア(Listeria)の汚染はそれぞれ、ＡＯＡＣ９６６．２３、９６６．２４、２００４．０３、および９９９．０６によって決定することができる。酵母とカビの汚染は、ＦＤＡ‐ＢＡＭ（第７版）に開示された方法によって測定することができる。また、ブドウ球菌および緑膿菌（シュードモナス・エルギノサ(Pseudomonas  aeruginosa)）の汚染は、ＵＳＰ３１、ＮＦ２６、２００８等によって、測定することができる。
【０１１９】
一部の実施態様において、藻類粉末または藻類バイオマス等の食品組成物および食品原料は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２６、および配列番号２７からなる群より選択される１以上の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の２３Ｓ  ｒＲＮＡゲノム配列同一性を有する、藻類由来である。
【０１２０】
Ｂ．色素沈着を欠いているか、有意に低減された色素沈着を有する、微細藻類株を作出する方法
クロレラ等の微細藻類は、光合成または従属栄養のいずれかにより成長し得る。炭素源が固定炭素源であり、光がない状態で、従属栄養条件下で成長した場合、通常、緑色微細藻類は、黄色い色を有し、緑色色素沈着を欠いているか、または緑色色素沈着が有意に低減する。低減された（または緑色色素沈着を欠いている）緑色色素沈着の微細藻類は、食品原料として好都合であり得る。低減された（または緑色色素沈着を欠いている）緑色色素沈着の微細藻類の１つの利点は、微細藻類が、低減されたクロロフィル風味を有することである。低減された（または緑色色素沈着を欠いている）緑色色素沈着の微細藻類の他の利点は、食品原料として、微細藻類の食料への添加が、消費者にとって魅力のない可能性がある、緑色を付与しないことである。従属栄養条件下で成長した微細藻類の、低減された緑色色素沈着は、一過性である。光合成による成長に切り替えられる場合、光合成および従属栄養により成長可能な微細藻類は、緑色色素沈着が回復する。さらに、低減された緑色色素であっても、従属栄養により成長した微細藻類は、黄色い色であり、これは、消費者が、食料の色が白色または明るい色であることを期待する場合の一部の食品適用に適さない可能性がある。したがって、従属栄養により成長することができ（その結果、緑色色素沈着が低減されているか、または緑色色素沈着を欠いている）、さらに、黄色色素沈着も低減されている（その結果、食品適用のために中間色である）微細藻類株を作出するのに好都合である。
【０１２１】
色素沈着を欠いているか、または有意に低減された色素沈着を有する、かかる微細藻類株を作出するための１つの方法は、変異誘発、次いで所望の表現型のためのスクリーニングによるものである。複数の変異誘発法は、当技術分野で公知であり、実施されている。例えば、Uranoらの文献（Uranoら，J  Bioscience  Bioengineering  (2000)  v.  90(5):  pp.  567-569）は、ＵＶ照射を用いて作出される、クロレラ・エリプソイダ(Chlorella  ellipsoidea)の黄色および白色の色の突然変異株を記載する。Kamiyaの文献（Kamiya，Plant  Cell  Physiol.  (1989)  v.  30(4):  513-521）は、クロレラ・ブルガリス(Chlorella  vulgaris)、１１ｈ（Ｍ１２５）の無色の株を記載する。
【０１２２】
ＵＶ照射による変異誘発に加えて、化学的変異誘発も、低減された色素沈着を有する（または色素沈着を欠いている）微細藻類を作出するために利用することができる。メタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）またはＮ‐メチル‐Ｎ’ニトロ‐Ｎ‐ニトログアニジン（ＮＴＧ）等の化学的変異誘発物質は、酵母、菌類、ミコバクテリウム(mycobacterium)、および微細藻類を含む種々の微生物に対する効果的な化学的変異誘発物質であることが示されている。また、変異誘発は、複数周期で行うこともでき、その場合、微細藻類は、変異誘発物質（ＵＶもしくは化学的変異誘発物質のいずれか、またはこれら両方）に曝露し、次いで、所望の低減された色素沈着表現型のスクリーニングをする。次いで、所望の表現型を有するコロニーを、プレート上で画線を施し、再度単離して、突然変異が、ある作出から次の作出まで安定していること、およびコロニーが純粋で、混合群からなっていないことを確認する。
【０１２３】
特定の例において、クロレラ・プロトセコイデス(Chlorella  protothecoides)を使用して、ＵＶおよび化学的変異誘発の組合せにより、色素沈着を欠いているか、または低減された色素沈着を有する株を作出した。クロレラ・プロトセコイデス(Chlorella  protothecoides)を、ＮＴＧによる化学的変異誘発の周期に曝露し、コロニーを、色彩突然変異株についてのスクリーニングをした。次いで、色彩突然変異を示さないコロニーを、ＵＶ照射の周期に供し、再度色彩突然変異株のスクリーニングをした。一実施態様において、色素沈着を欠いているクロレラ・プロトセコイデス(Chlorella  protothecoides)株を単離し、これは、２００９年１０月１３日付で、ブダペスト条約に基づいて、米国培養菌保存施設(American  Type  Culture  Collection)（１０８０１  ユニバーシティ大通り，マナッサス，バージニア州  ２０１１０‐２２０９））に寄託された、特許寄託名ＰＴＡ‐１０３９７の、クロレラ・プロトセコイデス(Chlorella  protothecoides)３３‐５５である。別の実施態様において、低減された色素沈着を有するクロレラ・プロトセコイデス(Chlorella  protothecoides)株を単離し、これは、２００９年１０月１３日付で、ブダペスト条約に基づいて、米国培養菌保存施設(American  Type  Culture  Collection)（１０８０１  ユニバーシティ大通り，マナッサス，バージニア州  ２０１１０‐２２０９））に寄託された、特許寄託名ＰＴＡ‐１０３９６の、クロレラ・プロトセコイデス(Chlorella  protothecoides)２５‐３２である。
【０１２４】
Ｃ．微細藻類の培地および培養条件
微細藻類を液体培地で培養し、本発明の方法に従ってバイオマスを繁殖させる。本発明の方法では、微細藻類種を、光がない状態で、固定炭素および／または固定窒素源を含有する培地で成長させる。かかる成長は、従属栄養成長として知られている。微細藻類の一部の種において、例えば、窒素制限条件下での、１０〜１５日以上の日数等の長期間の従属栄養成長は、細胞における高脂質含量の蓄積をもたらす。
【０１２５】
微細藻類培養培地は、一般に、固定炭素源（以下で論ずる）、固定窒素源（タンパク質、大豆粕、酵母エキス、コーンスティープリカー、アンモニア（純粋または塩の形態で）、ナイトレート、または硝酸塩等）、微量元素（例えば、亜鉛、ホウ素、コバルト、銅、マンガン、およびモリブデンを、例えば、ＺｎＣｌ２、Ｈ３ＢＯ３、ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、ＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ、および（ＮＨ４）６Ｍｏ７Ｏ２４・４Ｈ２Ｏのそれぞれの形態で）、場合により、ｐＨ維持のための緩衝液、およびホスフェイト（リンの供給源；他のリン酸塩を使用することができる）を含む。他の成分には、特に、海水微細藻類のための、塩化ナトリウム等の塩が含まれる。
【０１２６】
特定の例において、クロレラ・プロトセコイデス(Chlorella  protothecoides)を培養するのに適した培地には、プロテオース培地が含まれる。この培地は、純粋培養に適し、１ｇのプロテオースペプトンを１リットルのブリストル(Bristol)培地に添加することによって、１Ｌ容積の培地（ｐＨ〜６．８）を調製することができる。ブリストル(Bristol)培地は、水溶液中に、２．９４ｍＭ  ＮａＮＯ３、０．１７ｍＭ  ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、０．３ｍＭ  ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．４３ｍＭ、１．２９ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、および１．４３ｍＭ  ＮａＣｌを含む。１．５％寒天培地については、１５ｇの寒天を、１Ｌの溶液に加えることができる。溶液は、蓋をして、加圧滅菌し、次いで、使用前に冷蔵温度で保存する。クロレラ・プロトセコイデス(Chlorella  protothecoides)を、乾燥重量の割合として高い油レベルに成長および繁殖させるための他の方法が記載されている（例えば、MiaoとWuの文献：J.  Biotechnology,  2004,  11:  85-93、およびMiaoとWuの文献：Biosource  Technology  (2006)  97:  841-846（５５％の油乾燥細胞重量を得るための発酵方法を示す）を参照）。高油藻類は、一般に、窒素制限下で過剰の炭素源を提供しながら、発酵時間を延長させることによって生じ得る。
【０１２７】
固体および液体成長培地は、一般に、種々の供給源から入手可能であり、種々の微生物株に適した特定の培地の調製についての指示は、例えば、テキサス大学オースティン校により藻類培養物コレクションについての維持管理されているサイト（ＵＴＥＸ）である、http://www.utex.org/にて、オンラインで見出すことができる。例えば、種々の淡水培地には、１／２、１／３、１／５、１Ｘ、２／３、２Ｘ  ＣＨＥＶ珪藻(Diatom)培地；１：１ＤＹＩＩＩ／ＰＥＡ＋Ｇｒ＋；Ａｇ珪藻(Diatom)培地；アレン(Allen)培地；ＢＧ１１‐１培地；ボールド(Bold)１ＮＶおよび３Ｎ培地；ボツリョコッカス(Botryococcus)培地；ブリストル(Bristol)培地；Chuの培地；ＣＲ１、ＣＲ１‐ＳおよびＣＲ１＋珪藻(Diatom)培地；シアニジウム(Cyanidium)培地；シアノフィシアン(Cyanophycean)培地；デスミド(Desmid)培地；ＤＹＩＩＩ培地；ユーグレナ(Euglena)培地；ＨＥＰＥＳ培地；Ｊ培地；麦芽培地；ＭＥＳ培地；改良ボールド(Bold)３Ｎ培地；改良ＣＯＭＢＯ培地；Ｎ／２０培地；オクロモナス(Ochromonas)培地；Ｐ４９培地；ポリトメラ(Polytomella)培地；プロテオース培地；氷雪藻培地；土壌抽出物培地；土壌水；ＢＡＲ、ＧＲ‐、ＧＲ−／ＮＨ４、ＧＲ＋、ＧＲ＋／ＮＨ４、ＰＥＡ、泥炭およびＶＴ培地；スピルリナ(Spirulina)培地；タップ(tap)培地；トレブキシア(Trebouxia)培地；ボルボカシアン(Volvocacean)培地；ボルボカシアン(Volvocacean)‐３Ｎ培地；ボルボックス(Volvox)培地；ボルボックス(Volvox)‐デキストロース培地；ワリス(Waris)培地；および、ワリス(Waris)＋土壌抽出物培地が含まれる。種々の塩水培地には、次に示すものが含まれる：１％、５％および１Ｘ  Ｆ／２培地；１／２、１Ｘおよび２Ｘ  Erdschreiberの培地；１／２、１／３、１／４、１／５、１Ｘ、５／３および２Ｘ土壌＋海水培地；１／４  ＥＲＤ；２／３濃縮海水培地；２０％アレン(Allen)＋８０％ＥＲＤ；人工海水培地；ＢＧ１１‐１＋．３６％ＮａＣｌ培地；ＢＧ１１‐１＋１％ＮａＣｌ培地；ボールド(Bold)１ＮＶ：Erdshreiber（１：１）および（４：１）；ブリストル(Bristol)‐ＮａＣｌ培地；カサノリ目(Dasycladales)海水培地；ＥＳ／１０、ＥＳ／２およびＥＳ／４を含む、１／２および１Ｘ濃縮海水培地；Ｆ／２＋ＮＨ４；ＬＤＭ培地；改良１Ｘおよび２Ｘ  ＣＨＥＶ；改良２Ｘ  ＣＨＥＶ＋土壌；改良人工海水培地；ポルフィジウム(Porphridium)培地；および、ＳＳ珪藻(Diatom)培地。
【０１２８】
本発明の方法と共に使用する他の好適な培地は、上で特定したＵＲＬを閲覧することによって、またはＳＡＧ、ＣＣＡＰ、またはＣＣＡＬＡ等の微生物培養物を維持管理する他の組織を参考にすることによって、容易に特定することができる。ＳＡＧとは、ゲッティンゲン大学（ゲッティンゲン、ドイツ）の藻類培養物コレクションをいい、ＣＣＡＰとは、スコットランド海洋科学協会(Scottish  Association  for  Marine  Science)（スコットランド、英国）によって管理された藻類および原虫類の培養物コレクションをいい、また、ＣＣＡＬＡとは、植物学研究所の藻類研究室の培養物コレクション（トシェボニュ、チェコ共和国）をいう。
【０１２９】
本発明の方法で用いるのに有用な微生物は、世界中の種々の場所および環境で見出される。他の種からのこれらの単離、およびこれらの生じた進化分岐の結果、特定の種の微生物から、最適な成長、ならびに油および／または脂質、および／またはタンパク質の生成を予測するのは、困難であるかまたは不可能であり得るが、当業者は、本明細書の開示を考慮して、所定の試験により、適切な培地を容易に見出すことができる。一部の例において、特定の種の微生物は、一部の阻害成分の存在のために、または微生物の特定株が必要とする一部の必須栄養所要量の不足のために、特定の成長培地で成長することができない。以下の例は、乾燥細胞重量の割合として高レベルの脂質を蓄積する、種々の微細藻類種を培養する例示的方法を提供する。
【０１３０】
固定炭素源は、培地の主要成分である。本発明の目的に適した固定炭素源には、例えば、グルコース、フルクトース、スクロース、ガラクトース、キシロース、マンノース、ラムノース、アラビノース、Ｎ‐アセチルグルコサミン、グリセロール、フロリドシド、グルクロン酸、および／または酢酸塩が含まれる。本発明により微細藻類を培養するための他の炭素源には、グリセロールとグルコースの混合物、グルコースとキシロースの混合物、フルクトースとグルコースの混合物、ならびにスクロースおよび解重合された甜菜パルプの混合物等の混合物が含まれる。微細藻類培養の使用に適した他の炭素源には、黒液、コーンスターチ、解重合されたセルロース系物質（例えば、コーンストーバ、甜菜パルプ、およびスイッチグラス由来）、ラクトース、乳清、糖蜜、ジャガイモ、米、ソルガム、スクロース、甜菜、サトウキビ、および小麦が含まれる。１以上の炭素源は、少なくとも約５０μＭ、少なくとも約１００μＭ、少なくとも約５００μＭ、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、および少なくとも約５００ｍＭの濃度で供給することができる。
【０１３１】
したがって、種々の実施態様において、成長培地に使用する固定炭素エネルギー源には、グリセロールおよび／またはグルコース、フルクトース、および／またはキシロース等の５‐および／または６‐炭素糖が含まれ、これらは、解重合されたセルロース系物質を含む、スクロースおよび／またはセルロース系物質に由来し得る。クロレラ属(Chlorella)の複数の種および種内の複数の株は、米国特許出願公開第２００９００３５８４２号、第２００９００１１４８０号、第２００９０１４８９１８号にそれぞれ記載されるとおり、スクロース、解重合されたセルロース系物質、およびグリセロールの存在下で成長することができる。また、国際公開公報第２００８／１５１１４９号も参照されたい。これらの各々は、引用により本明細書中に組み込まれる。
【０１３２】
したがって、本発明の一実施態様において、微生物は、原料として解重合されたセルロース質バイオマスを用いて培養する。サトウキビもしくは甜菜からのコーンスターチまたはスクロース等の他の原料とは対照的に、セルロース質バイオマス（解重合されるか、または他の方法による）は、人間の消費に適さず、潜在的に低コストで入手可能であるため、これは、本発明の目的に特に好都合である。微細藻類は、解重合されたセルロース系物質で増殖することができる。セルロース系物質には、一般に、セルロースが乾燥重量で４０〜６０％、ヘミセルロースが乾燥重量で２０〜４０％、およびリグニンが乾燥重量で１０〜３０％含まれる。適切なセルロース系物質には、草本および木質エネルギー作物、ならびに農作物、すなわち、主食または繊維製品と共に田畑から除去されていない、主に茎および葉である植物部位の残留物が含まれる。一例として、サトウキビバガス、もみ殻、トウモロコシ繊維（茎、葉、殻、および穂軸を含む）、麦わら、稲わら、甜菜パルプ、柑橘類の果肉、柑橘類の果皮等の農業廃棄物；硬材および軟材間伐、ならびに材木作業からの硬材および軟材残留物等の林業廃棄物；製材廃棄物（木材チップ、おが屑）、およびパルプ廃棄物等の木材廃棄物；都市ごみの紙片等の都市廃棄物、都市木材廃棄物、および都市の芝生刈り取り等の都市芝生廃棄物；ならびに木材建築廃棄物が挙げられる。更なるセルロース質には、スイッチグラス、雑種ポプラ材およびススキ属(miscanthus)、繊維茎、ならびに繊維ソルガム等の専用のセルロース作物が含まれる。かかる物質から生成する５‐炭素糖には、キシロースが含まれる。例えば、クロレラ・プロトセコイデス(Chlorella  protothecoides)は、コーンストーバおよび甜菜パルプから、セルロース由来の糖類を使用して、従属栄養条件下で、良好に培養することができる。
【０１３３】
一部の微生物は、セルロース系物質を処理し、セルロース系物質を炭素源として直接利用することができる。しかしながら、セルロース系物質は、一般に、利用可能な表面積を増加させるために、またはセルロースを、炭素源としての微生物利用のための調製物として最初に分解させるために、処理する必要がある。酵素消化のためにセルロース系物質を調製または前処理する方法は、当技術分野で周知である。この方法は、２つの主なカテゴリーに分けられる：（１）利用可能な表面積を増加させるために、セルロース系物質を小さな粒子に分解すること；および、（２）セルロース系物質を化学的に処理して、酵素消化に使用可能な基質を作製すること。
【０１３４】
利用可能な表面積を増加させる方法には、水蒸気爆発が含まれ、これは、セルロース系物質を分解するための、高温での蒸気の利用を含む。この処理の高温要件のために、セルロース系物質中の糖類の一部が失われ、そのため、酵素消化のための入手可能な炭素源を減少させ得る（例えば、Chahal,  D.S.らの文献：Proceedings  of  the  2nd  World  Congress  of  Chemical  Engineering;  (1981)、およびKaarらの文献：Biomass  and  Bioenergy  (1998)  14(3):  277-87を参照）。アンモニア爆発は、セルロース系物質の低温での爆発を可能にするが、実施するのにコストが掛かり、また、アンモニアが、その後の酵素消化工程を妨げ得る（例えば、Dale,  B.E.らの文献：Biotechnology  and  Bioengineering  (1982);  12:  31-43を参照）。他の爆発法は、セルロース系物質を小さな断片に分解するための、超臨界二酸化炭素爆発の利用を含む（例えば、Zhengらの文献：Biotechnology  Letters  (1995);  17(8):  845-850を参照）。
【０１３５】
また、セルロース系物質を化学的に処理して、酵素消化に使用可能な基質を作製する方法も、当技術分野で公知である。米国特許第７，４１３，８８２号は、ベータ‐グルコシダーゼを発酵培養液へ分泌する遺伝子操作された微生物の使用、およびセルロース系物質を発酵培養液で処理して、セルロース系物質のグルコースへの加水分解を促進することを記載する。また、セルロース系物質は、強酸および塩基で処理して、その後の酵素消化を支援することもできる。米国特許第３，６１７，４３１号は、セルロース系物質を分解するためのアルカリ消化の使用を記載する。
【０１３６】
クロレラ属(Chlorella)は、解重合されたセルロース系物質等の、キシロースとグルコースの組合せを含有する培地で増殖することができ、驚くべきことに、一部の種は、グルコースまたはキシロースのいずれかのみで培養する場合よりも、グルコースとキシロースの組合せで培養する場合に、高いレベルの生産性を示す。したがって、特定の微細藻類は、炭素源として、セルロース系物質（または前処理されたセルロース系物質）またはグリセロール等の他の食用でない原料を利用し、食用油を産生することができる。これは、通常、人間の食物連鎖の一部ではない、食用でないセルロースおよびグリセロールの、高栄養の食用油への変換を可能にし（トウモロコシグルコース、ならびにサトウキビおよび甜菜からのスクロースとは対照的に）、これによって、毎日の人間の食事の一部として栄養素およびカロリーを提供することが可能になる。したがって、本発明は、食用でない原料を、高栄養の食用油、食品、および食品組成物に変換するための方法を提供する。
【０１３７】
分泌可能なスクロースインベルターゼを発現する生物体と共培養する微細藻類、またはスクロースインベルターゼを含有する培地、もしくは外因性スクロースインベルターゼ遺伝子を発現する（インベルターゼが分泌されているか、また、生物体もスクローストランスポータを発現しているかのいずれかの場合の）培地で培養した微細藻類は、サトウキビからの廃棄糖蜜、または他のスクロース源で増殖することができる。かかる低価値のスクロース含有廃棄物の利用は、食用油の産生において、有意なコスト削減を提供することができる。したがって、スクロース原料で微細藻類を培養し、食品組成物と栄養補助食品を配合する方法は、本明細書に説明するとおり、低栄養のスクロースを高栄養の油（オレイン酸、ＤＨＡ、ＡＲＡ等）、およびかかる油を含有するバイオマスに変換する手段を提供する。
【０１３８】
上で参照された特許公報に詳述するように、複数の異なるクロレラ属(Chlorella)の種および株は、精製試薬グレードのグリセロールだけでなく、バイオディーゼルエステル交換からの酸性および非酸性のグリセロール副産物でも非常によく増殖する。驚くべきことに、一部のクロレラ属(Chlorella)の株は、グルコースの存在下よりも、グリセロールの存在下で、迅速に細胞分裂をする。細胞に、最初に、グリセロールを供して、細胞密度を迅速に増加させ、次いで、グルコースを供して、脂質を蓄積させる、２段階の成長過程は、脂質の産生効率を改善することができる。
【０１３９】
乾燥細胞重量の割合として、脂質を増加させる他の方法は、微細藻類のための原料として、酢酸塩の使用を含む。酢酸塩を、脂肪酸合成（すなわち、アセチル‐ＣｏＡ）を開始する代謝の時点まで直接供し、そのため、培養物中の酢酸塩の提供によって、脂肪酸産生を増加させることができる。一般に、微生物を、十分な量の酢酸塩の存在下で培養して、特に、酢酸塩のない状態での収率と比較して、微生物脂質および／または脂肪酸収率を増加させる。酢酸塩供給は、脂質として、高い割合の乾燥細胞重量を有する微細藻類バイオマスを生成するために、本明細書に提供する方法の有用な構成要素である。
【０１４０】
別の実施態様において、脂質収率は、脂質経路酵素（例えば、脂肪酸合成酵素）のための１以上の補因子の存在下で、脂質を産生する微細藻類を培養することによって、増加する。一般に、補因子の濃度は、補因子がない状態での微生物脂質（例えば、脂肪酸）収率を超えて、微生物脂質収率を増加させるのに十分である。特定の実施態様において、補因子は、補因子を分泌する微生物を培養物中に含めることによって、または補因子を培養培地に加えることによって、培養物に提供される。または、微細藻類は、補因子の合成に関与するタンパク質をコードする外因性遺伝子を発現するように、操作することができる。特定の実施態様において、適切な補因子には、例えば、ビオチンまたはパントテン酸塩等の脂質経路酵素によって必要とされるビタミンが含まれる。
【０１４１】
微細藻類からの高脂質バイオマスは、少ない量の微細藻類バイオマスを添加して、等量の脂質を食品組成物に導入することを可能にするため、低脂質バイオマスと比較して、食品への含有に好都合な物質である。これは、高脂質微細藻類からの健康的な油が、低脂質バイオマスと比較して、テクスチャおよび味等の他の属性を変えずに、食品に添加することができるので、好都合である。本発明の方法によって提供される高脂質バイオマスは、一般に、乾燥細胞重量で少なくとも２５％の脂質を有する。処理条件を調整して、脂質である細胞の重量パーセントを増加することができる。例えば、特定の実施態様において、微細藻類を、グルコース等の過剰の固定炭素源を提供しながら、例えば、窒素、リン、または硫黄等の１以上の栄養素の制限濃度の存在下で培養する。窒素制限は、窒素が過剰に提供される培養物での微生物脂質収率を超えて、微生物脂質収率を増加させる傾向がある。特定の実施態様において、脂質収率の増加は、少なくとも約１０％、５０％、１００％、２００％、または５００％である。微生物は、全培養期間の一部、または期間全体にわたり、制限量の栄養素の存在下で培養することができる。一部の実施態様において、栄養素の濃度は、全培養期間に少なくとも２回、制限濃度と非制限濃度との間で循環させる。
【０１４２】
安定した成長状態で、細胞は油を蓄積するが、細胞分裂をしない。本発明の一実施態様において、成長状態は、固定窒素源を除いて、元の成長培地のすべての成分を細胞に提供し続けることによって、維持される。固定窒素源を除いて、初めに提供されたすべての栄養素を、細胞に長期間供給すること等により、供給することによって、微細藻類細胞を培養することは、乾燥細胞重量で高い割合の脂質を生ずる。
【０１４３】
別の実施態様において、高脂質バイオマスは、すべての固定窒素が、少なくとも１週間または２週間等の長期間にわたって消費された後に、固定炭素源を細胞に供給することによって生成する。一部の実施態様において、細胞は、固定炭素源の存在下および固定窒素源のない状態で、２０日以上にわたって油を蓄積させる。本明細書に説明する条件を用いて、または当技術分野で公知の他の条件で成長した微細藻類は、乾燥重量で少なくとも約２０％の脂質を含み、多くの場合、乾燥重量で３５％、４５％、５５％、６５％、および７５％以上もの脂質を含み得る。したがって、微生物脂質の産生における、脂質としての乾燥細胞重量の割合は、細胞が炭素を消費し、油を蓄積するが、細胞分裂をしない、従属栄養成長状態に細胞を保持することによって、改善することができる。
【０１４４】
藻類からの高タンパク質バイオマスは、食品中への含有に好都合な他の物質である。また、本発明の方法は、タンパク質として、少なくとも３０％の乾燥細胞重量を有するバイオマスも提供し得る。成長条件を調整して、タンパク質である細胞の重量パーセントを増加することができる。好ましい実施態様において、微細藻類は、高窒素環境、およびグルコースまたは上述の他の炭素源等の過剰の固定炭素エネルギーで培養する。窒素が過剰に存在する条件は、窒素が過剰に提供されない培養物での微生物タンパク質収率を超えて、微生物タンパク質収率を増加させる傾向がある。最大のタンパク質産生のために、微生物は、全培養期間にわたって、過剰窒素の存在下で培養するのが好ましい。微細藻類に適切な窒素源は、有機窒素源および／または無機窒素源に由来してもよい。高タンパク質バイオマスの脂質含量は、３０重量％未満、２０重量％未満、または１０重量％未満の脂質である。
【０１４５】
有機窒素源は、１９００年代初め以来、微生物培養に使用されている。コーンスティープリカー等の有機窒素源の使用は、カビからのペニシリンの産生と共に普及した。研究者らは、コーンスティープリカーの培養培地への含有が、微生物の成長を促進し、生成物（ペニシリン等）の収率の増加をもたらすことを見出した。コーンスティープリカーの分析によって、それが、窒素、さらに、Ｂ複合ビタミン、リボフラビン、パントテン酸、ナイアシン、イノシトール等のビタミン、ならびにカルシウム、鉄、マグネシウム、リン、およびカリウム等の無機栄養素が多く含まれる供給源であることが分かった（LiggetとKofflerの文献：Bacteriological  Reviews  (1948);  12(4):  297-311）。コーンスティープリカー等の有機窒素源は、酵母、細菌、菌類、および他の微生物の発酵培地に使用されている。有機窒素源の非限定的な一例は、酵母エキス、ペプトン、コーンスティープリカー、およびコーンスティープパウダーである。好ましい無機窒素源の非限定的な一例には、例えば、（ＮＨ４）２ＳＯ４およびＮＨ４ＯＨが含まれるが、これらに限定されない。一実施態様において、本発明を実施するための培養培地は、無機窒素源のみを含有する。別の実施態様において、本発明を実施するための培養培地は、有機窒素源のみを含有する。さらに別の実施態様において、本発明を実施するための培養培地は、有機窒素源と無機窒素源の混合物を含有する。
【０１４６】
本発明の方法において、バイオリアクタまたは発酵槽は、これらの種々の段階の生理的循環によって微細藻類細胞を培養するのに使用する。一例として、脂質を産生する微細藻類細胞の接種原を、培地に導入する。細胞が繁殖を開始する前に、遅滞期間（遅滞期）が存在する。遅滞期間に続いて、繁殖速度は着実に増加し、対数または指数増殖期に入る。指数増殖期に続き、窒素等の栄養素の減少、有害物質の増加、およびクオラムセンシングメカニズムにより、繁殖が遅延する。この繁殖の遅延後に、繁殖は停止し、細胞は、静止期または安定成長状態に入り、これは、細胞に提供される特定環境に依存する。高タンパク質のバイオマスを得るために、培養物は、一般に、指数増殖期またはその直後に採取する。高脂質のバイオマスを得るために、培養物は、一般に、指数増殖期の後に十分に採取するが、指数増殖期は、窒素または他の主要な栄養素（炭素以外）を枯渇させることによって、早期に終了し、これによって、細胞に、過剰に存在する炭素源を脂質に変換することを強制する。培養物条件パラメータは、全油産生、産生した脂質の種の組合せ、および／または特定の油の産生を最適化するように、操作することができる。
【０１４７】
バイオリアクタには、従属栄養による成長および繁殖方法の使用に多くの長所がある。理解されるように、従属栄養成長において固定炭素源を使用する場合、光合成成長法での細胞に光を利用可能にするようにされた設備は不要であり、繁殖方法は、本明細書に説明されている。食品に使用するバイオマスを生産するために、微細藻類は、好ましくは、一例として、懸濁培養掖等の液体で、大量に発酵させる。スチール発酵槽等のバイオリアクタ（５０００リットル、１０，０００リットル、４０，０００リットル以上を本発明の種々の実施態様で使用する）は、大量の培養物を収容することができる。また、バイオリアクタは、一般に、温度、ｐＨ、酸素圧、および二酸化炭素レベル等の培養条件の制御も可能にする。例えば、バイオリアクタは、一般に、例えば、管に接続したポートを使用して、酸素または窒素等のガス状成分が、液体培養物中で泡立たせるように、構成可能である。
【０１４８】
バイオリアクタは、微細藻類が繁殖し、その数を増加する期間を通じて、培養培地を、バイオリアクタに流入させるように構成することができる。一部の実施態様において、例えば、培地は、接種後であるが、細胞が所望の密度に到達する前に、バイオリアクタに注入することができる。別の例において、バイオリアクタは、培養の初めに培養培地で充填され、培養培地は、培養物接種後には注入されない。換言すると、微細藻類バイオマスは、微細藻類が繁殖し、その数を増加する一定期間に水性培地で培養される。しかしながら、多量の水性培養培地は、この期間を通じてバイオリアクタに流入されない。したがって、一部の実施態様において、水性培養培地は、接種後、バイオリアクタに流入されない。
【０１４９】
加圧ガス注入のための手段である、回転刃および回転翼、揺動機構、撹拌棒等の装置を装備したバイオリアクタを使用して、微細藻類培養物を混合することができる。混合は、連続的または断続的であってもよい。例えば、一部の実施態様において、ガス注入および培地注入の乱流様式は、微細藻類の数の所望の増加が達成されるまで、微細藻類の繁殖のために維持されない。
【０１５０】
上で簡潔に言及したように、バイオリアクタは、多くの場合、例えば、微細藻類培養物のガス含量を操作することを可能にする、種々のポートを装備する。例示すると、バイオリアクタの容積の一部は、液体よりむしろガスであり、バイオリアクタのガス入口は、バイオリアクタへのポンプによるガスの注入を可能にする。バイオリアクタに有益にポンプ注入することができるガスには、空気、空気／ＣＯ２混合物、アルゴン等の希ガス、および他のガスが含まれる。バイオリアクタは、一般に、ユーザが、ガスのバイオリアクタへの注入速度を制御することを可能にするように装備される。上述したとおり、バイオリアクタへのガス流入の増加によって、培養物の混合を増加することができる。
【０１５１】
ガス流入の増加は、培養物の濁度にも影響する。乱流は、ガス注入ポートを、水性培養培地の位置より下に配置することによって達成することができ、その結果、バイオリアクタに入るガスは、培養物の表面の方に泡立つ。１以上のガス出口ポートは、ガスを逃すことを可能にし、これによって、バイオリアクタ中の圧力の増加を防止する。好ましくは、ガス出口ポートは、汚染菌がバイオリアクタに入ること防止する「一方向」弁に通じる。
【０１５２】
本明細書に説明するバイオリアクタ、培養条件、ならびに従属栄養成長および繁殖方法の特定の例は、微生物成長ならびに脂質および／またはタンパク質産生の効率を改善するための好適な方法と組み合わせることができる。
【０１５３】
Ｄ．発酵後の微細藻類の濃縮
上で説明した方法によって生成する微細藻類培養物は、発酵培地で微細藻類バイオマスを産出する。食品組成物として使用するバイオマスを調製するために、バイオマスは、発酵培地から濃縮または採取する。微細藻類バイオマスを発酵培地から採取した時点で、バイオマスは、水性培養培地に懸濁した、主に無処理の細胞を含む。バイオマスを濃縮するために、脱水工程を実施する。脱水または濃縮とは、バイオマスの発酵培養液または他の液体培地からの分離をいい、そのため、これは固液分離である。したがって、脱水時において、培養培地は、バイオマスから除去される（例えば、発酵培養液を、バイオマスを保持するフィルタを通して流出させることによって）か、またはバイオマスが他の方法で、培養培地から除去される。脱水のための一般的な処理には、遠心分離、ろ過、および機械的圧力の使用が含まれる。これらの処理は、個別でまたは任意の組合せで用いることができる。
【０１５４】
遠心分離は、混合物を分離するための遠心力の使用を含む。遠心分離時において、混合物の高密度の成分は、遠心分離機の軸から離れて移動するが、混合物のあまり密度が高くない成分は、軸の方向に移動する。有効重力を増加させることによって（すなわち、遠心分離の速度を増加させることによって）、固形体等の高密度の物質は、液体等のあまり密度が高くない物質から分離し、そのため、密度に従って分離する。バイオマス、および培養液または他の水溶液の遠心分離によって、微細藻類細胞を含む濃縮ペーストが形成する。遠心分離は、有意な量の細胞内水分を除去しない。実際、遠心分離後、バイオマス中に依然として、相当量の表面水分または自由水分が存在し（例えば、７０％を超える）、そのため、遠心分離は、乾燥工程とは考えられない。
【０１５５】
また、ろ過は、脱水のために使用してもよい。本発明に適したろ過の一例としては、クロスフローろ過としても知られている、タンジェント流ろ過（ＴＦＦ）がある。タンジェント流ろ過は、膜システムおよび流れ力を使用して、固体を液体から分離する、分離技術である。例示的な好適ろ過方法については、マックスセル（Ａ／Ｇテクノロジーズ社製）０．４５μＭの中空繊維フィルタの使用について記載する、Gereshの文献：Carb.  Polym.  50;  183-189  (2002)を参照されたい。また、例えば、１００ｋＤ、３００ｋＤ、１０００ｋＤ膜（カタログ番号Ｐ２Ｃ０１ＭＣ０１）、０．１μＭ膜（カタログ番号Ｐ２ＶＶＰＰＶ０１）、０．２２μＭ（カタログ番号Ｐ２ＧＶＰＰＶ０１）、および０．４５μＭ膜（カタログ番号Ｐ２ＨＶＭＰＶ０１）と共に使用する、ミリポアペリコン(Millipore  Pellicon)（登録商標）装置も参照されたい。残余分は、好ましくは、フィルタを有意なレベルで通過せず、また、残余分中の生成物は、好ましくは、フィルタ材に付着しない。また、ＴＦＦは、中空繊維ろ過システムを用いて行うことができる。少なくとも約０．１マイクロメートルの細孔サイズ、例えば、約０．１２、０．１４、０．１６、０．１８、０．２、０．２２、０．４５、または少なくとも約０．６５マイクロメートルの細孔サイズを備える、フィルタが適切である。ＴＦＦの好ましい細孔サイズは、発酵培養液中の溶質および残屑を通過させるが、微生物細胞を通過させない。
【０１５６】
また、脱水は、バイオマスに直接適用した機械的圧力によっても達成され、液体発酵培養液を微生物バイオマスから分離して、バイオマスを十分に脱水することができるが、細胞の主要な溶解を生じない。微生物バイオマスを脱水するための機械的圧力は、例えば、ベルトフィルタプレスを用いて適用することができる。ベルトフィルタプレスは、２つの伸ばしたベルト間で、狭まるロール径の蛇行路を通過するスラリー（例えば、発酵槽またはバイオリアクタから直接得られる微生物バイオマス）に、機械的圧力を適用する、脱水装置である。ベルトフィルタプレスは、実際に３つのゾーンに分割することができる：自由排水／液体が、多孔質ベルトによる重力によって排水される、重力ゾーン；固形物を、圧力適用のために供する、くさびゾーン；および、調節可能な圧力を、重力により排出された固形物に適用する、圧力ゾーン。
【０１５７】
濃縮後、微細藻類バイオマスは、本明細書の以下に説明するように、加工して、真空パックケーキ、藻類フレーク、藻類ホモジェネート、藻類粉、藻類粉末、または藻類油を生産することができる。
【０１５８】
Ｅ．微細藻類バイオマスの化学組成
本明細書に説明する培養方法によって生成する微細藻類バイオマスは、微細藻類油および／またはタンパク質、ならびに微生物によって生成されるか、または発酵時に、培養培地の微生物によって導入される他の成分も含む。
【０１５９】
乾燥重量で高い割合の油／脂質蓄積を有する、微細藻類バイオマスは、当技術分野で公知の方法を含む、種々の培養の方法を用いて生成されている。高い割合の蓄積された油／脂質を有する、微細藻類バイオマスは、本発明によって有用である。高い鉄（Ｆｅ）濃度を用いて、独立栄養条件下で成長した静置培養における乾燥細胞重量（ＤＣＷ）で最大５６．６％の脂質を有する、クロレラ・ブルガリス(Chlorella  vulgaris)培養物が記載されている（Liらの文献：Bioresource  Technology  99(11):4717-22  (2008)。また、フォトバイオリアクタで、窒素飢餓条件下で成長した、ＤＣＷで６０％の脂質およびＤＣＷで３９．８％の脂質をそれぞれ有する、ナンノクロロプシス(Nanochloropsis)種、およびカエトセロス・カリストランス(Chaetoceros  calcitrans)培養物も記載されている（Rodolfiらの文献：Biotechnology  &  Bioengineering  (2008)）。光合成によりおよび低窒素条件下で成長する場合、ＤＣＷでおよそ３０％の脂質を有する、パリエトクロリス・インシサ(Parietochloris  incise)培養物が記載されている（Solovchenkoらの文献：Journal  of  Applied  Phycology  20:245-251  (2008)）。窒素飢餓状態の一定の従属栄養条件下で成長する場合、クロレラ・プロトセコイデス(Chlorella  protothecoides)は、ＤＣＷで最大５５％の脂質を産生することができる（MiaoとWuの文献：Bioresource  Technology  97:841-846  (2006)）。低窒素培地条件下で、撹拌槽反応器で成長する場合、クロレラ・エマゾーニ(Chlorella  emersonii)、クロレラ・ソロキニアナ(Chlorella  sorokiniana)、およびクロレラ・ミヌティッシマ(Chlorella  minutissima)を含む、他のクロレラ属(Chlorella)の種は、ＤＣＷで最大６３％の油を蓄積することが記載されている（Illmanらの文献：Enzyme  and  Microbial  Technology  27:631-635  (2000)）。ＤＣＷでさらに高い割合の脂質が報告されており、これらは、ＮａＣｌを増加させた条件下で成長した、デュマリエラ・ターティオレクタ(Dumaliella  tertiolecta)培養物における７０％の脂質（Takagiらの文献：Journal  of  Bioscience  and  Bioengineering  101(3):  223-226  (2006)）、およびボツリョコッカス・ブラウニイ(Botryococcus  braunii)培養物における７５％の脂質（Banerjeeらの文献：Critical  Reviews  in  Biotechnology  22(3):  245-279  (2002)）を含む。
【０１６０】
従属栄養成長は、比較的低いクロロフィル含量をもたらす（開放池または閉鎖型フォトバイオリアクタ系等の光合成系と比較して）。低減されたクロロフィル含量は、一般に、微細藻類の官能特性を改善し、そのため、多くの藻類バイオマス（または藻類バイオマスから製造した油）を食品に導入することを可能にする。また、従属栄養により成長した微細藻類（例えば、クロレラ属(Chlorella)）中に見出される低減されたクロロフィル含量も、光合成により成長した微細藻類と比較して、バイオマス中の緑色を低減する。したがって、低減されたクロロフィル含量は、光合成により成長した微細藻類を含有する食品に関連する、望ましくないことが多い緑色の着色を回避し、藻類バイオマスの食品への導入、または藻類バイオマスの食品への導入の増加を可能にする。少なくとも一実施態様において、食品は、光合成により成長した微細藻類と比較して、低減されたクロロフィル含量の、従属栄養により成長した微細藻類を含む。一部の実施態様において、微細藻類粉末または藻類バイオマスのクロロフィル含量は、５００ｐｐｍ未満、４００ｐｐｍ未満、３００ｐｐｍ未満、２００ｐｐｍ未満、１００ｐｐｍ未満、５０ｐｐｍ未満、１０ｐｐｍ未満、２ｐｐｍ未満、または１ｐｐｍ未満である。
【０１６１】
本明細書で説明する培養方法によって生成し、本発明によって有用な、高い油含量の微細藻類バイオマスおよび藻類粉末は、ＤＣＷで少なくとも１０％の微細藻類油を含む。一部の実施態様において、微細藻類バイオマスまたは藻類粉末は、ＤＣＷで少なくとも１５％、２５％〜３５％、３０〜５０％、５０〜５５％、５０〜６５％、５４〜６２％、５６〜６０％、少なくとも７５％、または少なくとも９０％の微細藻類油を含む。
【０１６２】
本明細書に説明する（またはバイオマスもしくは藻類粉末から抽出した）バイオマスの微細藻類油は、１以上の特異的な脂肪酸エステル側鎖を有する、グリセロ脂質を含み得る。グリセロ脂質は、１つ、２つ、または３つの脂肪酸分子とエステル結合したグリセロール分子からなり、これは、種々の長さであり、種々の飽和度を有し得る。藻類油の特定の混合物は、藻類の単一種内で、または微細藻類の２以上の種からのバイオマス（または藻類油）と混合することのいずれかによって調製することができる。
【０１６３】
したがって、油組成、すなわち、グリセロ脂質の脂肪酸成分の特性および割合もまた、微細藻類の少なくとも２つの特異的な種からのバイオマス（または油）を組み合わせることによって、操作することができる。一部の実施態様において、微細藻類の少なくとも２つの特異的な種は、種々のグリセロ脂質プロファイルを有する。特異的な種の微細藻類は、本明細書に説明するように、好ましくは従属栄養条件下で、共に、または別個に培養して、それぞれの油を生成することができる。種々の種の微細藻類は、細胞のグリセロ脂質に、種々の割合の特異的な脂肪酸成分を含有し得る。
【０１６４】
一部の実施態様において、微細藻類油は、特にトリグリセリドの形態で、１８：１（オレイン酸）油等の一価不飽和油から主になる。一部の例において、藻類油は、少なくとも２０重量％の一価不飽和油である。種々の実施態様において、藻類油は、少なくとも２５重量％または容量％、５０重量％または容量％、７５重量％または容量％以上の１８：１等の一価不飽和油である。一部の実施態様において、一価不飽和油は、１８：１、１６：１、１４：１、または１２：１である。一部の例において、藻類油は、６０〜７５％、６４〜７０％、または６５〜６９％の１８：１油である。一部の実施態様において、微細藻類油は、少なくとも１０重量％もしくは容量％、２０重量％もしくは容量％、２５重量％もしくは容量％、または５０重量％もしくは容量％以上のエステル化されたオレイン酸またはエステル化されたアルファ‐リノレン酸を含む。少なくとも一実施態様において、藻類油は、１０重量％もしくは容量％未満、５重量％もしくは容量％未満、３重量％もしくは容量％未満、２重量％もしくは容量％未満、または１重量％もしくは容量％未満のエステル化されたドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ（２２：６））（特にトリグリセリドの形態）を含むか、またはエステル化されたドコサヘキサエン酸を実質的に含まない。クリプテコディニウム・コーニィ(Crypthecodinium  cohnii)等の、高ＤＨＡ含有微細藻類の生産の一例については、米国特許第７，２５２，９７９号、第６，８１２，００９号、および第６，３７２，４６０号を参照されたい。一部の実施態様において、微細藻類粉末または藻類バイオマス中の抽出油または油の脂質プロファイルは、２％未満の１４：０；１３〜１６％の１６：０；１〜４％の１８：０；６４〜７０％の１８：１；１０〜１６％の１８：２；０．５〜２．５％の１８：３；および、炭素鎖長２０以上の２％未満の油である。
【０１６５】
また、微細藻類バイオマス（およびバイオマスから抽出した油）は、微細藻類によって産生した、または培養培地からバイオマスに導入した、他の成分も含み得る。これらの他の成分は、使用する培養条件および微細藻類の種（ならびに、該当する場合、微細藻類油をバイオマスから回収するのに用いる抽出方法）に依存して、種々の量で含まれ得る。一般に、高タンパク質微細藻類バイオマス中のクロロフィル含量は、高脂質微細藻類バイオマス中のクロロフィル含量よりも高い。一部の実施態様において、微細藻類バイオマス中のクロロフィル含量は、２００ｐｐｍ未満または１００ｐｐｍ未満である。他の成分には、リン脂質（例えば、藻類レシチン）、炭水化物、可溶性および不溶性繊維、糖タンパク質、フィトステロール（例えば、β‐シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、エルゴステロール、およびブラシカステロール）、トコフェロール、トコトリエノール、カロテノイド（例えば、α‐カロテン、β‐カロテン、およびリコピン）、キサントフィル（例えば、ルテイン、ゼアキサンチン、α‐クリプトキサンチン、およびβ‐クリプトキサンチン）、タンパク質、多糖類（例えば、アラビノース、マンノース、ガラクトース、６‐メチルガラクトース、およびグルコース）、ならびに種々の有機化合物または無機化合物（例えば、セレン）が含まれ得るが、これらに限定されない。
【０１６６】
一部の例において、バイオマスまたは藻類粉末は、少なくとも１０ｐｐｍのセレンを含む。一部の例において、バイオマスまたは藻類粉末は、少なくとも２５％ｗ／ｗの藻類多糖を含む。一部の例において、バイオマスまたは藻類粉末は、少なくとも１５％ｗ／ｗの藻類糖タンパク質を含む。一部の例において、バイオマス、藻類粉末、またはバイオマス由来の油は、藻類バイオマスまたは藻類粉末のグラム当たり０〜２００、０〜１１５、または５０〜１１５ｍｃｇの総カロテノイドを含み、また、特定の実施態様において、総カロテノイドの２０〜７０または５０〜６０ｍｃｇは、ルテインである。一部の例において、バイオマスまたは藻類粉末は、少なくとも０．５％の藻類リン脂質、または藻類粉末または藻類バイオマスのグラム当たり約０．２５％〜約１．５％の総リン脂質を含む。一部の例において、バイオマス、藻類粉末、または藻類バイオマス由来の油は、少なくとも０．１０、０．０２〜０．５、または０．０５〜０．３ｍｇ／ｇの総トコトリエノールを含み、また、特定の実施態様において、０．０５〜０．２５ｍｇ／ｇは、アルファトコトリエノールである。一部の例において、バイオマス、藻類粉末、または藻類バイオマス由来の油は、０．１２５ｍｇ／ｇ〜０．３５ｍｇ／ｇの総トコトリエノールを含む。一部の例において、藻類粉末または藻類バイオマス由来の油は、少なくとも５．０、１〜８、２〜６、または３〜５ｍｇ／１００ｇの総トコフェロールを含み、また、特定の実施態様において、２〜６ｍｇ／１００ｇは、アルファトコフェロールである。一部の例において、藻類粉末または藻類バイオマス由来の油は、５．０ｍｇ／１００ｇ〜１０ｍｇ／１００ｇのトコフェロールを含む。
【０１６７】
一部の例において、高脂質バイオマスと比較して、微細藻類バイオマスの他の成分の組成は、高タンパク質バイオマスでは異なる。特定の実施態様において、高タンパク質バイオマス、藻類粉末、または油は、０．１８〜０．７９ｍｇ／１００ｇの総トコフェロールを含み、また、特定の実施態様において、高タンパク質バイオマス、藻類粉末、または油は、約０．０１〜０．０３ｍｇ／ｇのトコトリエノールを含む。一部の例において、高タンパク質藻類粉末または油バイオマスは、さらに、１〜３ｇ／１００ｇの総ステロールも含み、また、特定の実施態様において、１．２９９〜２．４６ｇ／１００ｇの総ステロールを含む。クロレラ・プロトセコイデス(Chlorella  protothecoides)中のトコトリエノールおよびトコフェロールの組成についての詳細な説明は、以下に示す実施例に含まれる。
【０１６８】
一部の実施態様において、微細藻類バイオマスまたは藻類粉末は、乾燥重量で２０〜４５％の炭水化物を含む。別の実施態様において、バイオマスまたは藻類粉末は、乾燥重量で２５〜４０％または３０〜３５％の炭水化物を含む。炭水化物は、食物繊維、ならびにスクロースおよびグルコース等の遊離糖であり得る。一部の実施態様において、微細藻類バイオマス中の遊離糖は、乾燥重量で１〜１０％、２〜８％、または３〜６％である。特定の実施態様において、遊離糖成分はスクロースを含む。
【０１６９】
一部の例において、微細藻類バイオマスまたは藻類粉末は、少なくとも５％の可溶性繊維を含む。別の実施態様において、微細藻類バイオマスまたは藻類粉末は、少なくとも１０％の可溶性繊維、または少なくとも２０％〜３５％の可溶性繊維を含む。一部の実施態様において、微細藻類バイオマスまたは藻類粉末は、少なくとも５％の不溶性繊維を含む。別の実施態様において、微細藻類バイオマスまたは藻類粉末は、少なくとも５％から少なくとも１０％、または少なくとも１０％〜２５％、または少なくとも２５％〜５０％の不溶性繊維を含む。総食物繊維は、水溶性繊維と不溶性繊維の合計である。一部の実施態様において、微細藻類バイオマスまたは藻類粉末は、少なくとも２０％の総食物繊維を含む。別の実施態様において、微細藻類バイオマスまたは藻類粉末は、少なくとも２５％、５０％、５５％、６０％、７５％の総食物繊維を含む。
【０１７０】
一実施態様において、総繊維の単糖含量（遊離糖を差し引いた総炭水化物）は、１〜２０％のアラビノース；５〜５０％のマンノース；１５〜８０％のガラクトース；および、１０〜７０％のグルコースである。別の実施態様において、総繊維の単糖含量は、約１〜２％のアラビノース；約１０〜１５％のマンノース；約２０〜３０％のガラクトース；および、５５〜６５％のグルコースである。
【０１７１】
ＩＩＩ．微細藻類バイオマスの藻類粉末及び最終食品原料への加工
本発明の方法に従って産生された濃縮微細藻類バイオマスは、それ自体が最終食品原料であり、それ以上修飾することなく、又は最小限の修飾により、食品として利用され得る。代替として、凍結乾燥、すなわち、真空にした冷凍乾燥室でバイオマスを凍らせる「フリーズドライ」加工でバイオマスを乾燥させてもよい。冷凍乾燥室を真空にすることで、バイオマス由来の水が昇華（初乾）及び脱離（再乾）する。しかし、本発明は、本発明の方法を濃縮微細藻類バイオマスに応用する結果もたらされる、強化されたタンパク質を有する、多様な微細藻類由来の最終食品原料を提供する。藻類粉末は、本明細書に開示されている、又は、当業者に周知の状況下で、藻類細胞を生育、培養若しくは繁殖させ、本明細書に開示のように、藻類粉末に加工することを含む。
【０１７２】
微細藻類バイオマスを、主としてインタクト形態で、又は、ホモジェネート形態で乾燥させることで、本明細書に記載の方法及び組成物でのバイオマスの加工又は利用をさらに促進するのに有利となる。乾燥とは、主としてインタクトなバイオマスから湿分／水分を取り除く、又はその表面から取り除く、又はの付着若しくは表面上の湿分／水を取り除くこと、又は同質化（例えば、微粒子化）されたバイオマスのスラリーから表面水分を除去することを指している。藻類のバイオマスを乾燥したかどうか、もし乾燥したなら、どのような乾燥方法を使用したかで、食品に異なるテクスチャ及び風味を付与することができる。本明細書に記載の培養微細藻類から生成されたバイオマスを乾燥させることで、最終食品又は最終食品原料にとって望ましくない成分となり得る水を除去することとなる。いくつかの場合においては、バイオマスを乾燥させることで、微細藻類油抽出過程をより効率的に促進し得る。
【０１７３】
一つの実施形態においては、藻類粉末を産生するため、まず濃縮微細藻類バイオマスを破壊し、それから噴霧又はフラッシュ乾燥（すなわち、空気乾燥過程に晒す）して、主として溶解細胞を含有する粉末を形成する。別の実施形態では、藻類粉末に含まれる油を実質上すべて抽出し、主として炭水化物（食物繊維を含む）、タンパク質及び残油又は脂質から成る脱脂藻類粉末とする。
【０１７４】
いくつかの実施形態で、微細藻類バイオマス又は藻類粉末は、乾燥すると湿分が１５重量％未満、１０重量％未満、５重量％未満、２〜６重量％、又は３〜５重量％となる。
【０１７５】
Ａ．藻類粉末
本発明の藻類粉末は、機械的に溶解及び均質化及びホモジェネート噴霧乾燥又はフラッシュ乾燥で粉末状に（又は別の空気乾燥システムを利用して乾燥）した濃縮微細藻類バイオマスをから調整される。藻類粉末の産生には、油を排出させるために細胞を溶解し、細胞壁及び細胞内成分を微細化するか、又は少なくとも粒子サイズを減少させることが必要となる。ホモジェネーション直後又はその可及的直後に測定する粒子の平均的サイズは、好ましくは、わずか１０μｍ、わずか２５μｍ、又は僅か１００μｍである。いくつかの実施形態で、粒子の平均的サイズは、１〜１０μｍ、１〜１５μｍ、１０〜１００μｍ又は１〜４０μｍである。いくつかの実施形態で、粒子の平均的サイズは、１０μｍより大きく１００μｍまでである。いくつかの実施形態で、粒子の平均的サイズは、０.１μｍ〜１００μｍである。
【０１７６】
クロレラ・プロトセコイデス（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  ｐｒｏｔｏｔｈｅｃｏｉｄｅｓ）細胞の平均的サイズは、約５μｍ〜１５μｍである。本明細書に記載の通り、藻類粉末に調整すると、粒子の平均的サイズは１０μｍ未満となる。実施例８に記載したように、均質化状態にすることで異なる粒子サイズが生じた。  当業者であれば、均質化状態では、サイズの異なる粒子が生じるとの認識を有するであろう。
【０１７７】
バイオマス粒子（藻類バイオマス粒子）又は藻類粉末粒子を含む個々の細胞は、様々なレベルで集塊する。一つの実施形態においては、集塊した藻類粉末粒子又は集塊した藻類バイオマス粒子のサイズは、約１，０００μｍ、７５０μｍ未満、５００μｍ未満、２５０μｍ未満、又は１００μｍ未満である。
【０１７８】
微細化の議論で述べたように、特に、個別の粒子というよりも、塊を測定するレーザー分化等の技術を用いて測定する場合、粒子の平均的サイズは、凝集により粒子サイズの測定がひずむ可能性があるのを回避するため、又は最小限にとどめるため、均質化直後又はその可及的直後に（例えば、２週間以内）測定するのが好ましい。実際、均質化の結果生じた乳濁液であれば、通常は、粒子サイズに物質的変化を伴うことなく、少なくとも２週間冷蔵庫に貯蔵することができる。  レーザー分化等、粒子サイズ測定のいくつかの技術では、個別の粒子というよりも、粒子の塊のサイズを測定する。測定された粒子の塊は、個別の粒子の平均サイズ（例えば、１〜１００ミクロン）よりも大きい。水に分散させた微細藻類粉末の光学顕微鏡検査により、個々の粒子及び粒子の塊の両方を見ることができる。オリジナルの均質化を反復するのではなく、藻類粉末を水の中で十分に混ぜ合わせ(例えば、手動攪拌器）、分散させると、塊が破壊する可能性があり、この場合もまたレーザー識別により、通常は、平均がわずか１０μｍである粒子サイズを検知することができる。電子顕微鏡写真による粒子サイズの自動解析用ソフトウェアが市販されており、粒子サイズの測定に利用することができる。本明細書においては、他の場合と同じように、平均的粒子サイズは、当分野で認められている平均の測定法、例えば、平均値（ｍｅａｎ）、幾何平均（ｇｅｏｍｅｔｒｉｃ  ｍｅａｎ）、中央値（ｍｅｄｉａｎ）又は最頻値（ｍｏｄｅ）等を指し得る。粒子サイズは、粒子の最長寸法又は等体積粒子相当の直径を含む、当分野で認められる測定により測定することができる。典型的な粒子はほぼ球形であるため、これら測定は本質的には同じとなり得る。
【０１７９】
均質化の後に得られた油、水及び微細化粒子は、乾燥前に油が分散して分離しないよう乳化する。例えば、加圧粉砕器を使用して、制限オリフィス弁を通じてスラリーを含む細胞をくみ上げて、細胞を溶解する。高圧（最大１５００バール）をかけると、既存のノズルを介して即座に拡大する。細胞分散は、３つの異なるメカニズムにより達成される。すなわち、弁上での衝突、オリフィスにおける高液体剪断、及び排出に伴う突然の圧力低下により引き起こされる細胞の爆発である。本方法は、細胞内分子を解放する。ニロ（Ｎｉｒｏ）社の（ＧＥＡグループのニロ・ソアビ（Ｎｉｒｏ  Ｓｏａｖｉ）社）のホモジェナイザー（又は、その他任意の高圧ホモジェナイザー）を使用して細胞を、長さがほぼ０．２〜５ミクロンの粒子にすることができる。高圧下（約１０００バー）で、藻類バイオマスを加工すると、典型的には、細胞の９０％超が溶解し、粒子サイズが５ミクロン未満に低下する。
【０１８０】
代替として、ボールミルを使用することもできる。ボールミルでは、ビーズ等の小さな研磨粒子を用いて、懸濁液中で細胞を攪拌する。ビーズの間での摩擦及びビーズとの衝突という剪断力により細胞は壊れる。ビーズは細胞を粉砕し、細胞内の内容物を解放する。一つの実施形態においては、、藻類バイオマスは、Ｄｙｎｏ−ｍｉｌｌ  ＥＣＭ  Ｕｌｔｒａ型ボールミル（ＣＢ  Ｍｉｌｌｓ社）を用いて粉砕され、安定した乳濁液を形成する。また、攪拌機（例えば、高速ブレンダー又はワーリングブレンダー等）、フレンチプレス、又は弱い細胞壁の場合は遠心分離器の利用により、細胞を粉砕することができる。ボールの大きさ及び刃の仕様を含む、好適なボールミルについては、米国特許第５，３３０，９１３号に記載されている。
【０１８１】
均質化により即座に生成される産物は、油及び水に浮遊するオリジナルの細胞よりも小さいサイズの粒子のスラリーである。粒子とは、細胞破片のことである。油と水は、細胞により解放される。均質化前の細胞を含む水性媒体により、追加の水が供給され得る。粒子は、微細化されたホモジェネート形態であることが望ましい。そのままにしておけば、より小さい粒子の一部は結合するかもしれない。しかし、小さい粒子の等分散でさえ、微結晶セルロース等の微結晶安定剤で播種することにより保つことが可能である。
【０１８２】
藻類粉末を形成するために、スラリーを噴霧乾燥又はフラッシュ乾燥させて水分を除去して、細胞破片及び油を含む乾燥パウダー様物質とする。粉末の含油量（すなわち、パウダー様物質である粉砕された細胞）は、乾燥粉末の少なくとも１０重量％、２５重量％又は５０重量％であり得、この粉末は、テクスチャ及び外観上、油ぎっているというよりも乾燥しており（例えば、可視的に油を認めることができない）、また、振るとさらさらと揺れる状態であり得る。多様な流動化剤（沈降シリカ、ヒュームドシリカ、ケイ酸カルシウム、ナトリウムケイ酸アルミニウム等のシリカ由来産生物）もまた、添加可能である。これらの物質を、高脂肪、吸湿性又は粘着性粉末に応用することで、乾燥後及びパッケージ化されたものが凝固するのを防ぎ、乾燥粉末の流動性を促進し、乾燥器表面に物質が粘着し、蓄積して、酸化するのを低減することができる。すべて、ＦＤＡ指定の最大レベルにて食品利用の承認を得ている。乾燥後、粉末の水分又は湿分内容物は、典型的に、１０重量％、５重量％、３重量％％又は１重量％未満である。また、空気乾燥器等、他の乾燥器を使用して藻類粉末を産生することもできる。
【０１８３】
藻類粉末の含油量は、藻類バイオマスに占める油の割合により異なる。藻類粉末は、多様な含油量の藻類バイオマスから産生することができる。ある実施形態では、藻類粉末は、同じ含油量の藻類バイオマスから産生される。他の実施形態では、藻類粉末は、異なる含油量の藻類バイオマスから産生される。後者の場合、多様な含油量の藻類バイオマスを組み合わせて均質化ステップを実施した。他の実施形態では、多様な含油量の藻類粉末をまず産生し、それから、最終的に所望の油量を含む藻類粉末を獲得するために、多様な割合で混ぜ合わせる。さらなる実施形態では、異なる脂質プロフィールの藻類バイオマスを組み合わせ、均質化して藻類粉末を産生する。別の実施形態では、異なる脂質プロフィール藻類粉末をまず産生し、それから、最終的に所望の脂質プロフィールを含む藻類粉末を獲得するために、多様な割合で混ぜ合わせる。
【０１８４】
本発明の藻類粉末又は藻類バイオマスは、幅広い食品の調整に有益である。油量、繊維量、及び微細化粒子のため、藻類粉末又は藻類バイオマスは、多機能食品原料である。
【０１８５】
Ｂ．脱脂藻類粉末
いくつかの場合においては、藻類粉末（又は、任意の粉砕された微細藻類バイオマス）を、油抽出過程にかけて脱脂藻類粉末又は藻類バイオマスを産生することができる。微細藻類の油は、液化により抽出できる（例えば、Ｓａｗａｙａｍａら、Ｂｉｏｍａｓｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｅｒｇｙ、１７：３３−３９（１９９９）及びＩｎｏｕｅら、Ｂｉｏｍａｓｓ  Ｂｉｏｅｎｅｒｇｙ、６（４）：２６９−２７４（１９９３）を参照のこと）；油液化については、（例えば、Ｍｉｎｏｗａら、Ｆｕｅｌ、７４（１２）：１７３５−１７３８（１９９５）を参照のこと）；又は、超臨界ＣＯ２抽出については、（例えば、Ｍｅｎｄｅｓら、Ｉｎｏｒｇａｎｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ、３５６：３２８−３３４（２００３）を参照のこと）。超臨界ＣＯ２抽出を使用して、実質的に全ての油を抽出させた脱脂藻類粉末には、抽出過程の機能としてリン脂質が含まれる。極性溶剤及び非極性溶剤双方の利用を含む、その他の油抽出法では、実質的に微細藻類粉末からすべての油を抽出するのみならず、リン脂質をも抽出する。脱脂藻類粉末は、事前抽出された藻類粉末のタンパク質及び炭水化物を保持する。脱脂藻類粉末に含まれる炭水化物には、食物繊維（不溶性及び可溶性繊維双方）の形式の炭水化物が含まれる。    
【０１８６】
脱脂藻類粉末又は藻類バイオマスは、リン脂質の有無にかかわらず、機能的食品原料として有益である。リン脂質を含有する脱脂藻類粉末又は藻類バイオマスには、高度な乳化能が存在する。リン脂質有り及び無しの脱脂藻類粉末又は藻類バイオマスには、多大な水分保持能が存在し、よって、多様な食品への応用に有益である。脱脂藻類粉末又は藻類バイオマスは、不溶性及び可溶性繊維双方の形式で炭水化物を含有するため、食物繊維の良い資源となり得る。
【０１８７】
ＩＶ．微細藻類バイオマス又はそれから抽出された物質と他の食品原料との混合
一つの態様では、本発明は、少なくとも０．１％ｗ／ｗの藻類バイオマス及び、１又は複数の食用原料を含む１又は複数の他の原料を含む食品組成物であって、前記藻類バイオマスには、乾燥重量で少なくとも１０％の油が含まれ、任意選択的に、少なくとも９０％の油がグリセロ脂質である食品組成物に関する。いくつかの実施形態で、藻類バイオマスには、乾燥重量で少なくとも２５％、４０％、５０％又は６０％の油が含まれる。いくつかの場合においては、藻類バイオマスには、乾燥重量で１０〜９０％、２５〜７５％、４０〜７５％又は５０〜７０％の油が含まれ、任意選択的に、少なくとも９０％の油がグリセロ脂質である。少なくとも一つの実施形態において、油の少なくとも５０重量％が一価不飽和グリセロ脂質油である。いくつかの場合においては、少なくとも５０重量％の油が、グリセロ脂質形態で１８：１脂質である。いくつかの場合においては、５重量％未満の油が、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）（２２：６）である。少なくとも一つの実施形態では、油の１重量％未満がＤＨＡである。低レベルの多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）を有する藻類の脂質量は、バイオマスの化学的安定性を増強するのに好ましい。好ましい実施形態では、藻類バイオマスは、従属栄養の状況下で成長し、緑色素を低下させる。他の実施形態では、微細藻類は、色素欠如又は色素低減の色彩突然変異体である。別の実施形態では、食品組成物には、少なくとも０.１％  ｗ／ｗの藻類バイオマス及び１又は複数の他の食用原料が含まれ、任意選択的に、１又は複数のその他の原料が含まれる。
【０１８８】
別の態様において、本発明は、１又は複数の食用原料を含む、少なくとも０.１％ｗ／ｗの藻類バイオマス及び１又は複数のその他の原料を含む食用組成物であって、藻類バイオマスが、乾燥重量で少なくとも３０％のタンパク質、少なくとも４０％のタンパク質、乾燥重量で少なくとも４５％のタンパク質、乾燥重量で少なくとも５０％のタンパク質、乾燥重量で少なくとも５５％のタンパク質、乾燥重量で少なくとも６０％のタンパク質、又は乾燥重量で少なくとも７５％のタンパク質を含む、食用組成物に関する。いくつかの場合においては、藻類バイオマスは、乾燥重量で３０〜７５％又は４０〜６０重量％のタンパク質を含有する。いくつかの実施形態においては、少なくとも4０％の粗タンパク質消化可能であり、少なくとも５０％の粗タンパク質が消化可能であり、少なくとも６０％の粗タンパク質が消化可能であり、少なくとも７０％の粗タンパク質が消化可能であり、少なくとも８０％の粗タンパク質が消化可能であり、又は少なくとも９０％の粗タンパク質が消化可能である。いくつかの場合においては、藻類バイオマスは、従属栄養の状況下で生育する。少なくとも一つの実施形態では、藻類バイオマスは、窒素充実条件下において生育する。他の実施形態では、微細藻類は、色素が欠乏又は減少する色彩突然変異体である。別の実施形態では、食品組成物には、少なくとも０.１％ｗ／ｗの藻類バイオマス及び１又は複数のその他の食用原料が含まれ、かつ任意選択的に、１又は複数のその他の原料が含まれる。
【０１８９】
いくつかの場合においては、藻類バイオマスは、主としてインタクトな細胞を含む。いくつかの実施形態で、食品組成物は、主として又は完全にバイオマスの細胞内に包含された油を含有する。いくつかの場合においては、食品組成物は、主としてインタクトな微細藻類細胞を含む。いくつかの場合においては、藻類油は、主として、バイオマスの細胞に包含されている。他の場合は、バイオマスは、主として、溶解細胞  （例えば、ホモジェネート）を含む。先に述べたように、当前記ホモジェネートは、スラリー、画分、粉状、又は粉末として提供され得る。
【０１９０】
食品組成物のいくつかの実施形態では、藻類バイオマスはさらに、少なくとも１０ｐｐｍセレンを含む。いくつかの場合においては、バイオマスはさらに、少なくとも１５％ｗ／ｗの藻類多糖類を含む。いくつかの場合においては、バイオマスはさらに、少なくとも５％ｗ／ｗの藻類糖タンパク質を含む。いくつかの場合においては、バイオマスは、カロテノイド総量として、バイオマス１ｇあたり０〜１１５ｍｃｇのカロテノイドを含む。いくつかの場合においては、バイオマスは、少なくとも０.５％ｗ／ｗの藻類リン脂質を含む。全ての場合において、ここで述べたように、これらの成分は真の細胞成分であって、細胞外成分ではない。
【０１９１】
いくつかの場合においては、食品組成物の藻類バイオマスには、抗酸化剤特性を有する成分が含まれる。強力な抗酸化剤特性は、カロテノイド、亜鉛等の必須ミネラル、銅、マグネシウム、カルシウム、及びマンガン含むがこれらに限定されない、藻類バイオマスに存在する複数の抗酸化剤に起因し得る。藻類バイオマスにはまた、トコトリエノールとトコフェロール等の他の抗酸化剤が含がまれることも分かっている。これらビタミンＥ群のメンバーは、重要な抗酸化剤であり、脳卒中誘発性損傷に対する保護効果、動脈閉塞の逆転、乳癌及び前立腺癌細胞の増殖阻害、コレステロール値の低下、II型糖尿病のリスク低減、及び緑内障の損傷に対する保護効果等、その他の健康効果を有する。トコトリエノールとトコフェロールの天然資源は、椰子、ひまわり、トウモロコシ、大豆、及びオリーブ油から生産される油に存在するが、本明細書に記載の組成物は、従来より既知の物質よりもかなり高いトコトリエノール値を有する。
【０１９２】
いくつかの場合においては、本発明の食品組成物は、総量で少なくと５ｍｇ／１００ｇ、少なくとも７ｍｇ／１００ｇ又は少なくとも８ｍｇ／１００ｇのトコトリエノールを含有する藻類油を含む。いくつかの場合においては、本発明の食品組成物は、総量で少なくとも０．１５ｍｇ／ｇ、少なくとも０．２０ｍｇ／ｇ又は少なくとも０．２５ｍｇ／ｇのトコトリエノールを含有する藻類油を含む。
【０１９３】
上記の組成物及び／又は方法の特定の実施形態では、微細藻類は、カロテノイドを産生することができる。いくつかの実施形態では、微細藻類により産生されたカロテノイドは、脂質又は微細藻類で産生された油と共に抽出可能である（すなわち、油又は脂質がカロテノイドを含有する）。いくつかの実施形態では、微細藻類で産生されたカロテノイドは、キサントフィルである。いくつかの実施形態では、微細藻類で産生されたカロテノイドは、カロテンである。いくつかの実施形態では、微細藻類で産生されたカロテノイドは、カロテンとキサントフィルの混合物である。様々な実施形態では、微細藻類で産生されたカロテノイドは、アスタキサンチン、ルテイン、ゼアキサンチン、α-カロテン、トランスβ-カロテン、シス-β-カロテン、リコピン及びそれらの任意の組み合わせから成る群より選択される、少なくとも１つのカロテノイドを含む。クロレラ・プロトセコイデス由来油のカロテノイド特性の非限定的例として、以下の実施例に含まれる。
【０１９４】
食品組成物のいくつかの実施形態では、藻類バイオマスは、優良製造規範（ＧＭＰ）の下で培養及び乾燥させた藻類由来である。いくつかの場合においては、藻類バイオマスは、穀類、果物、野菜、タンパク質、脂質、ハーブ及び／又は香辛料原料を無制限に含む、１又は複数の他の食用原料と組み合わされる。いくつかの場合においては、食品組成物は、サラダドレッシング、卵製品、焼いた食品、パン、バー、パスタ、ソース、スープの飲み物、飲料、冷菓、バターやスプレッドである。特定の実施形態では、食品組成物は、錠形又は粉末ではない。いくつかの場合においては、本発明に従った食品組成物の重さは、少なくとも５０ｇ、又は少なくとも１００ｇである。
【０１９５】
バイオマスは、１又は複数の他の食用原料と合わせて、食品を作ることができる。バイオマスは、単一の藻類資源（例えば、株）又は、複数の資源由来の藻類バイオマス（例えば、異なる株）から作ることができる。バイオマスはまた、異なる組成物特性を有する単一の藻類種から作ることもできる。例えば、製造業者は、含油量の高い微細藻類とタンパク質量の高い微細藻類を混ぜ合わせ、最終食品原料で所望される、厳密な含油量及びタンパク質量に到達できる。その組合せは、市販又は食品サービス利用のための最終食品を作るために、製造業者により行われる。代替として、製造業者は、藻類バイオマスを製品として販売することができ、消費者は、藻類バイオマスを、例えば、従来の調理法にアレンジを加える等により食料品に取り入れることができる。いずれの場合も、藻類バイオマスは、典型的に従来の食品に利用されている油、脂肪、卵等の全て又は一部の代替として利用される。
【０１９６】
一つの態様では、本発明は、少なくとも０.１％ｗ／ｗの藻類バイオマス及び１又は複数の他の食用原料を含む食品組成物であって、前記藻類バイオマスは、乾燥重量で所望の重量％のタンパク質と脂質を得るために、乾燥重量で少なくとも４０％のタンパク質を含有する藻類バイオマスと、乾燥重量で４０％の脂質を含有する藻類バイオマスを混ぜ合わせることにより調整する、食品組成物に関する。いくつかの実施形態では、バイオマスは、藻類の同じ株由来である。代替として、乾燥重量で少なくとも４０重量％の脂質を含有し、そのうちＤＨＡとして１％未満の脂質を含有する藻類バイオマスを、藻類バイオマス乾燥重量で少なくとも２０％の脂質を含有し、そのうちＤＨＡとして少なくとも５％の脂質を含有する藻類バイオマスと混ぜ合わせ、乾燥重量で少なくとも１０％の脂質及び１％のＤＨＡを含む凝集体中に含む乾燥バイオマスの混合物を得る。
【０１９７】
一つの態様では、本発明は、ＧＭＰ状況下で、乾燥重量で少なくとも１５％の油を含有し、前記藻類油の５０％超が一価不飽和脂質である、藻類バイオマスを提供するために、藻類培養物を乾燥させて藻類バイオマスを産生する方法に関する。
【０１９８】
一つの態様では、本発明は、藻類油の５０％超が１８：１脂質である、ＧＭＰ状況下で製造された、乾燥重量で少なくとも１５％油を含有する藻類バイオマスに関する。一つの態様では、本発明は、ＧＭＰ状況下で製造された、乾燥重量で少なくとも４０％の油を含有する藻類バイオマスに関する。一つの態様では、本発明は、ＧＭＰ状況下で製造された、乾燥重量で少なくとも５５％の油を含有する藻類バイオマスに関する。いくつかの場合においては、藻類バイオマスは、単一用量用のバイオマス錠形としてパッケージ化されている。いくつかの場合においては、藻類バイオマスは、藻類バイオマスを他の食用原料と混ぜ合わせるよう指示したラベル付きのパッケージ、さもなければ表示義務のあるラベルを付きでパッケージ化されている。
【０１９９】
一つの態様では、本発明は、食品組成物又は食料品を生成するために、上記の微細藻類及び／又はそれから生成された物質を、下記の少なくとも１つの最終食品原料と混ぜ合わせる方法に関する。様々な実施形態では、本発明により生成される食品組成物には、卵製品（粉末又は液体）、パスタ製品、ドレッシング製品、マヨネーズ製品、ケーキ製品、パン製品、エネルギーバー、乳製品、ジュース製品、スプレッド、又はスムージーが含まれる。いくつかの場合においては、食品組成物は、錠剤又は粉末ではない。様々な実施形態では、食品組成物の重さは、少なくとも１０ｇ、少なくとも２５ｇ、少なくとも５０ｇ、少なくとも１００ｇ、少なくとも２５０ｇ、又は少なくとも５００ｇ又はそれ以上である。いくつかの実施形態で、微細藻類バイオマス及び／又はそれから生成される産物の組合せにより生成される食品組成物は、未調理製品である。他の場合では、食品組成物は調理済製品である。
【０２００】
他の場合では、食品組成物は調理済製品である。いくつかの場合においては、食品組成物は、藻類バイオマスによる油を除いて、２５％未満の油又は脂肪を含有する。飽和トリグリセリド形式の脂肪（ＴＡＧ又はトランス脂肪）は、マーガリン等のスプレッドを製造する時に行われるように、植物油を水素化する際に作られる。藻類バイオマスに含有される脂肪には、トランス脂肪は含まれない。いくつかの場合においては、食品組成物は、バイオマスによる油を除いて、１０重量％未満の油又は脂肪を含む。少なくとも一つの実施形態では、食品組成物は、バイオマスによる油を除いて、油ゼロか又は脂肪ゼロである。いくつかの場合においては、食品組成物は、バイオマスによる油以外の油を含まない。いくつかの場合においては、食品組成物は、卵も卵製品も含まない。
【０２０１】
一つの態様では、本発明は、従来の食品中の脂肪又は油が、完全に又は一部、少なくとも１０重量％の油を含有する藻類バイオマスで置き換えられた食品組成物を製造する方法に関する。一つの実施形態においては、前記方法には、バイオマス中の藻類油の比率を利用した藻類バイオマスの置換量と、従来の食品中の油量又は脂肪量とを決定すること、並びに、藻類バイオマスを、少なくとも１つの他の食用原料と、及び、従来の食品中に含有されるのよりも少ない油量又は脂肪量と組み合わせて食品組成物を形成することが含まれる。いくつかの場合においては、少なくとも１つの他の材料と組み合わされる藻類バイオマスの量は、従来の食品中の油及び／又は脂肪の質量又は体積の１〜４倍である。
【０２０２】
いくつかの実施形態で、上記の方法はさらに、油又は脂肪を混ぜた少なくとも１つの食用原料を含有する従来の食品の調理方法を提供すること、及び、従来の食品の脂肪又は油の質量又は体積の１〜４倍の藻類バイオマスを少なくとも１つの他の食用原料と合わせることを含む。いくつかの場合においては、本方法はさらに、ＧＭＰ状況下で藻類バイオマスを産生することを含む。
【０２０３】
いくつかの場合においては、微細藻類バイオマス及び／又はそれから生成される産物に産生される食品組成物には、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、若しくは少なくとも５０％ｗ／ｗ又はｖ／ｖの微細藻類バイオマス若しくは微細藻類油が含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書の記載に従って産生される食品組成物には、少なくとも２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、若しくは少なくとも９５％ｗ／ｗの微細藻類バイオマス又はそれから生成される産物が含まれる。いくつかの場合においては、食品組成物には、重量濃度若しくは体積濃度で５〜５０％、１０〜４０％、若しくは１５〜３５％の藻類バイオマス又はそれから生成される産物が含まれる。
【０２０４】
上記の通り、微細藻類バイオマスは、従来であれば食品に含まれている他の成分と置き換えることもできる。いくつかの実施形態で、食品組成物には、バイオマスによる微細類油又は微細藻類資源由来の微細類油を除いて、５０重量％未満、４０重量％未満、又は３０重量％未満の油又は脂肪が含まれる。いくつかの場合においては、食品組成物には、バイオマスによる微細類油又は微細藻類資源由来の微細類油を除いて、２５重量％未満、２０重量％未満、１５重量％未満、１０重量％未満、又は５重量％未満の油又は脂肪が含まれる。少なくとも一つの実施形態では、食品組成物には、バイオマスによる微細類油又は微細藻類資源由来の微細類油を除いて、油ゼロ又は脂脂肪ゼロである。いくつかの場合においては、食品組成物には、卵、バター、若しくはその他の脂肪、又は、通常は、それに匹敵する従来食品には含まれている、少なくとも１つの他の成分が含まれない。ある食品には、乳製品（例えば、バター、クリーム及び／又はチーズ）が含まれない。
【０２０５】
食品組成物を調整するために使用される藻類バイオマスの量は、従来食品中の置換対象となる非藻類油、脂肪、卵等の量、及び藻類バイオマス中の油の割合に依る。よって、少なくとも一つの実施形態において、本発明の方法は、バイオマス中の含油量に比して、及び、通常は従来の食品中の少なくとも１つの他の食用原料と組み合わせる油及び／又は脂肪の量に比して、少なくとも１つの他の食用原料と組み合わせる藻類バイオマスの量を決定すること含む。例えば、もし藻類バイオマスの５０％ｗ／ｗが微細藻類油で、従来の調理法における油又は脂肪の完全な代替物となるならば、例えば、２：１の割合で油を置き換えることができる。割合は質量で測定できるが、実用的目的から、しばしば、計量用カップ又はスプーンを用いて体積を測定する方がより簡単であり、置換は体積により行うことができる。一般的な場合、置換対象の油又は脂肪の体積又は質量は、藻類バイオマスの体積又は質量（１００／１００−Ｘ）で置換され、式中、Ｘはバイオマス中の微細藻類油の割合である。一般に、従来の調理法における油及び脂肪は、全体として、藻類バイオマスに置換することが可能である。ただし、全体の置換は必要なく、所望の割合の油及び／又は脂肪を保持しつつ、残りを味及び栄養上の必要に従って置換することができる。藻類バイオマスには、乳化剤として機能するタンパク質及びリン脂質が含まれるため、卵などの品物は、全体として、又は一部として、藻類バイオマスと置き換えることができる。もし、全体として、卵をバイオマス又は藻類粉末と置き換えるなら、時に、追加の乳化剤を加えることで食品組成物中の乳化剤を強化すること、及び／又は、本来なら卵に提供されるはずのこれら成分の喪失を補完するために水分又は他の液体を加えることが望ましい、又は必要である。いくつかの実施形態では、追加の乳化剤を加えることが必要かもしれない。代替として、食品組成物によっては、乳化剤を加える必要がない場合もある。
【０２０６】
簡潔にするために、置換の割合は、バイオマス又は藻類粉末の質量又は体積に対する置換される油、脂肪及び／又は卵の質量又は体積として提供される。いくつかの方法では、従来の調理法における油、脂肪及び／又は卵の質量又は体積は、油、脂肪及び／又は卵の質量又は体積の５〜１５０％、２５〜１００％又は２５〜７５％に置き換えられる。置換の割合は、食品、食品の所望の栄養特性、食品の全体的感触と外観、及びバイオマス又は藻類粉末の含油量などの要因に依る。
【０２０７】
調理済食物においては、割合（すなわち、重量又は体積）は、調理前又は調理後に決定され得る。藻類バイオマス又は藻類粉末の割合は、液体の蒸発のため、調理過程で増加する。一部の藻類バイオマス細胞は、調理過程で溶解する場合があるため、調理済食品において直接藻類バイオマスの量を測定するのは困難である可能性がある。しかし、最終食品の重量又は体積の割合で、生製品に入れられたバイオマスの質量又は体積から間接的に量を決定することは可能であり、また、特定のカロテノイド等、藻類バイオマスによってのみ送達されるゲノム配列又は化合物等、藻類バイオマスに特異的なコンポーネントを解析する手法によっても量を決定できる。
【０２０８】
いくつかの場合においては、藻類バイオマス又は藻類粉末を、少なくとも１つの他の食用原料と、従来の食品中に存在する油、脂肪、又は卵等の成分比を超過する量で組み合わせることが望ましい。例えば、従来の食品中の油及び／又は脂肪の質量又は体積に代えて、０．２５倍、０．５倍、０．７５倍、１倍、２倍、３倍、４倍、又はそれ以上の倍数量の藻類バイオマス又は藻類粉末を使用してもよい。本発明の方法のいくつかの実施形態では、従来の食品調理法の中で、油又は脂肪と組み合わせた少なくとも１つの他の食用原料を含み、かつ従来の食品中の脂肪又は油の質量又は体積の０．２５〜４倍の質量又は体積を有する藻類バイオマス又は藻類粉末を少なくとも１つの他の食用原料と組み合わせることを含む、従来の食品調理法を提供することが含まれる。
【０２０９】
藻類バイオマス又は藻類粉末（主としてインタクト又は均質化された又は微少化された）及び／又は藻類油は、少なくとも１つの他の食用原料と組み合わされて食品を形成する。一部の食品においては、藻類バイオマス及び／又は藻類油は、１〜２０、２〜１０、又は４〜８の他の食用原料と結合する。食用原料は、果物、野菜、豆類、肉、魚、穀物（例えば、小麦、米、麦、コーンミール、大麦）、ハーブ、香辛料、水、野菜スープ、ジュース、ワイン及び酢等を含むが、こられに限定されない、主要な食品群全てから選択することができる。いくつかの食品組成物においては、少なくとも２、３、４、又は５個の食品群が、藻類バイオマス又は藻類油と同様に表される。
【０２１０】
油、脂肪、又は卵等はまた、食品組成物として組み合わせることはできるが、先に述べたように、通常は、低減した量で（例えば、従来の食品と比較して、質量又は体積が５０％未満、２５％未満、又は１０％未満の油、脂肪、又は卵等）で存在する。本発明の一部食品は、藻類バイオマス又は藻類油により提供されるもの以外の油を含まない。一部食品は、藻類バイオマスにより提供されるもの以外の油を含まない。一部食品は、藻類バイオマス又は藻類油により提供される藻類の以外の脂肪を含まない。一部食品は、藻類バイオマスにより提供される以外の脂肪を含まない。一部食品は、藻類バイオマス又は藻類油により提供される以外の油も脂肪も両方ともを含まない。一部食品は、藻類バイオマスにより提供される以外の油も脂肪も両方とも含まない。一部食品は、卵を含まない。いくつかの実施形態では、微細藻類により提供される油は、培養状態又は株の選択により、特定の脂肪酸成分又は脂肪酸値を含むよう設定することは可能である。
【０２１１】
いくつかの場合においては、食品組成物の産生に使用される藻類バイオマス又は藻類粉末は、少なくとも２つの明確に異なる種類の微細藻類の混合を含む。いくつかの場合においては、少なくとも２つの明確に異なる種類の微細藻類は、別々に培養される。少なくとも  一つの実施形態では、少なくとも２つの明確に異なる種類の微細藻類は、異なるリセロ脂質プロフィールを有する。いくつかの場合においては、本明細書に記載の方法はさらに、従属栄養の状況下で藻類粉末類を培養し、藻類からバイオマスを産生することを含む。いくつかの場合においては、少なくとも２つの明確に異なる種類の微細藻類の全ては、乾燥重量で少なくとも１０％、又は少なくとも１５％の油を含有する。いくつかの場合においては、食品組成物は、同種のバイオマスによる２つの明確に異なる調整物を混ぜ合わせたものを含有し、そのうち１つの調整物は、乾燥重量で少なくとも３０％の油を含有し、他方の調整物は、乾燥重量で少なくとも１５％未満の油を含有する。いくつかの場合においては、食品組成物は、同じ種類のバイオマスの２つの明確に異なる調整物を混ぜ合わせたものを含有し、そのうちの１つの調整物は、乾燥重量で少なくとも５０％の油を含有し、他方の調整物は、乾燥重量で少なくとも１５％未満の油を含有し、さらに、その種類がクロレラ・プロトセコイデスである。
【０２１２】
本来なら従来の食品中に存在する油、脂肪、又は卵等の代わりとして藻類バイオマス又は藻類粉末を使用するのと同様に、藻類バイオマス又は藻類粉末を、通常はスムージー等の油を含有する食物の補助食品として使用することができる。油と、主に炭水化物である製品との組み合わせは、炭水化物の血糖インデックスを低下させることにより、油に関連する利点及び油と炭水化物の組み合わせによる利点を有し得る。バイオマスに包含される油を提供することは、油を酸化から保護する点において有利であり、また、味及びスムージーなテクスチャを改良することもできる。
【０２１３】
藻類バイオマス又は藻類粉末から抽出された油は、バイオマスそのものと同じように、すなわち、従来の調理法において油、脂肪、又は卵等の代替として使用することができる。前記油を使用することで、約１：１ｗ／ｗ又はｖ／ｖで、従来の油及び／又は脂肪を置き換えることができる。前記油を使用することで、任意選択的に追加の水及び／又は乳化剤と併せて、卵１個につき小さじ約１さじ分の藻類油に置き換えることにより、卵を置換することができる（平均的な５８ｇの卵は、約１１．２％が脂肪であり、藻類油の濃度は、約０．９１５ｇ／ｍｌで、小さじ１さじの体積は約５ｍｌ=小さじ１.２配分の藻類油／卵）。前記油はまた、ドレッシング、ソース、スープ、マーガリン、クリーマー、ショートニング等に取り込むことができる。前記油は、所望の味、テクスチャ、及び／又は外観を提供するのに油と他の食品原料の組み合わせが必要な場合、特に食品にとって有益である。食品中の、重量又は体積による含油量は、少なくとも５、１０、２５、４０又は５０％であり得る。
【０２１４】
少なくとも一つの実施形態では、藻類バイオマス又は藻類粉末から抽出された油は、また、食品製造業者、レストラン及び／又は消費者により調理用油として使用され得る。係る場合、藻類油は、ベニバナ油、キャノーラ油、オリーブ油、ブドウ種子油、コーン油、ヒマワリ油、ヤシ油、パーム油、または任意の他の従来から使用されてきた食用油等、従来の調理用油の代わりとなり得る。藻類バイオマス又は藻類粉末から得られる油は、他の種類の油と同様、調理用に安定性を向上させるために（例えば、煙点の上昇）さらなる精製にかけられ得る。前記油は、遊離脂肪酸を除去するために苛性ソーダで中和することができる。遊離脂肪酸は、除去可能なソーダ油滓を形成する。油の色は、カーボンブラックと漂白土等の化学薬品で漂白することにより除去することができる。漂白土及び化学薬品は、濾過により油から分離することができる。前記油はまた、蒸気処理により脱臭することもできる。
【０２１５】
主としてインタクトなバイオマス、均質化又は微細化されたバイオマス（スラリー、画分、粉末又は粉）及び精製された藻類油全てを他の食品原料と組み合わせて、他の食品を産生することができる。全ては、好ましい栄養特性（比較的高い一価不飽和含有量）を有する油の資源である。主として、インタクトで、均質化され、微細化されたバイオマスはまた、高品質のタンパク質（バランスのとれたアミノ酸組成物）、炭水化物、繊維及び上記のその他の栄養素を供給する。これら任意の製品を取り込んだ食品は、菜食主義者又はベジタリアン式で産生され得る。タンパク質資源として微細藻類バイオマス又は藻類粉末（主としてインタクトな又は均質化された（若しくは微細化された）又はその両方のいずれか）を使用することのもう一つの有利な点は、大豆、卵又は乳製品等の主要なアレルギー源由来でない菜食主義者／ベジタリアン式タンパク質資源であることである。
【０２１６】
本発明に従って、藻類バイオマス又は藻類粉末及び／又は藻類油と組み合わせるその他の食用原料として、穀物、果物、野菜、タンパク質、肉、ハーブ、香辛料、炭水化物及び脂肪が含まれるが、これらに限定されない。藻類バイオマス又は藻類粉末及び／又は藻類油と組み合わせる他の食用原料は、産生される食品及び食品の所望の味、テクスチャ及びその他の特性に依る。
【０２１７】
一般に、藻類油のこれら資源は任意の食品に使用され得るが、好ましい資源は、一部には、油存在の目的が、食品のテクスチャ、外観又は味のためというよりもむしろ、本質的に栄養又はカロリーのためであるかどうか、又は代替的に、他の食品原料と組み合わされる油が、その食品の栄養面若しくはカロリー面の特性を改善すると同様に又は改善する代わりに、食品の所望の味、食感若しくは外観に寄与することを意図しているかどうかによる。
【０２１８】
食品は、所望の通りに、従来の手順で調理することができる。調理の長さ及び温度次第で、調理過程で一部の細胞壁が破壊され、油が排出され、その結果他の成分と混合される場合がある。しかし、少なくとも一部の藻類細胞は、しばしば、調理によってもそのままである。代替として、食品は、無調理のまま使用することができる。この場合、藻類壁はそのままで、油の酸化を保護する。
【０２１９】
藻類バイオマス又は藻類粉末は、主としてインタクトな細胞の形態で、又はホモジェネート粉末として提供されれば、乾燥材料として提供され、細紛等の他の乾燥材料との混合が促進され得るという点で、油とは異なる。一つの態様では、藻類バイオマス又は藻類粉末は、乾燥重量で２５％〜４０％の油を含む乾燥ホモジェネートとして提供される。バイオマスのホモジェネートはまた、スラリーとしても提供され得る。乾燥材料（及び、もし利用するなら、バイオマスのホモジェネートスラリー）と混ぜ合わせた後、水等の液体を加えることもできる。一部の食品においては、必要な液体の量は、バイオマスの非油成分のため、及び／又は、卵等の他の成分では水が供給されないため、従来の食品においては幾分高めとなる。しかし、従来の調理法においてそうであるように、水の量は容易に決定され得る。
【０２２０】
一つの態様では、本発明は、乾燥重量で少なくとも１０％の藻類油を含有する、少なくとも０.５％ｗ／ｗの藻類バイオマス又は藻類粉末を含み、液体を加えることにより、変換し、再構成される食品原料の組成物に関する。一つの実施形態において、液体は水である。
【０２２１】
均質化又は微細化された高油脂バイオマスは、液体及び／又は、ソース、スープ、飲料、サラダドレッシング、バター、スプレッド等、バイオマスによる油が他の液体と共に乳濁液を形成する乳化食品（油中の水及び水性乳濁液中の油）において特に有利である。ドレッシング、ソース及びスプレッド等のレオロジーを改良することで有利となる製品については、以下の実施例に記載されている。均質化されたバイオマスを利用して、従来の油を使用した従来製品の場合よりも低量の油（重量又は体積により、製品全体として）で、所望のテクスチャ（例えば、食感）、味及び外観（例えば、不透明さ）を形成することは可能であり、よって脂肪増量剤として使用することができる。そのようなものであれば、低カロリー（すなわち、ダイエット）食品に有益である。精製された藻類油はまた、液体及び／又は乳化製品にとっても有利である。均質化又は微細化された高油脂バイオマス及び精製された藻類油の双方とも、従来の油、脂肪、又は卵で作っても類似のものはできるが、栄養特性が改良されている（例えば、より高い一価飽和脂肪油含有量及び／又は、より高いタンパク質含有量若しくはより高品質なタンパク質、及び／又はより高い繊維含有量、及び／又はその他の栄養素）類似製品と似通った又はそれよりも良い味、外観及びテクスチャを達成する焼き製品中の食用原料との組合せはよい。
【０２２２】
主としてインタクトなバイオマスは、食品の栄養特性（例えば、より高い油含有量、異なる油含有量（例えば、一価不飽和脂肪油）、より高いタンパク質含有量、より高カロリー含有量、より高い含有量の栄養素等）を変化又は向上させるのに望ましい状況において特に有益である。係る食品は、例えば、運動選手又は栄養失調症を患う患者にとって有益となり得る。主として、インタクトなバイオマスは、充填剤として使用され得る。例えば、より高価な食品の量を増加させる（例えば、ミートヘルパー等）ため、又はベジタリアン用肉代替品等の疑似食品又は模造食品に使用することができる。疑似食品又は模造食品は、風味や容積に関しては通常、異なる資源により提供されているという点で天然食品とは異なる。例えば、、肉等の天然の食品の風味は、風味を有する充填剤に添加することができる。主として、インタクトなバイオマスは、係る食品の充填剤として使用され得る。主として、インタクトなバイオマスはまた、良好な水結合特性を有し、よってそのような食品の脱水を促進するため、パスタ等の乾燥食品にとって特に有益である。主として、インタクトなバイオマスはまた、例えば、焼き製品中の保存料として有益である。主として、インタクトなバイオマスは、保水力を改善し、よって賞味期間も改善される。
【０２２３】
壊れた又は微少化された藻類バイオマス又は藻類粉末はまた、結合剤若しくは充填剤として、又は食品の栄養特性の変化若しくは向上のために有益である。
壊れた藻類バイオマス又は藻類粉末は、肉、大豆タンパク質、ホエイタンパク質、小麦タンパク質、豆タンパク質、米タンパク質、エンドウタンパク質、乳タンパク質等の別のタンパク質資源と組み合わせることができ、その点においては、藻類バイオマス又は藻類粉末が、結合剤及び／又は充填剤として機能する。粉砕され又は微少化された藻類バイオマス又は藻類粉末はまた、保水力が改善され、よって賞味期間も改善され得る。水分保水力が向上することは、特に、無グルテン焼き製品等、無グルテン食品に望ましい。粉砕された藻類バイオマス又は藻類粉末を利用した無グルテンクッキーの作り方に関する詳細な調理法及び賞味期間に関する研究は、下記の実施例に記載されている。
【０２２４】
いくつかの場合においては、藻類バイオマス又は藻類粉末は、卵の調整物に使用され得る。いくつかの実施形態では、よりクリーミーなスクランブルドエッグを作るために従来の乾燥粉末卵の調整物に添加される藻類バイオマス又は藻類粉末（例えば、藻類粉末）は、藻類バイオマス又は藻類粉末無しで調整された乾燥粉末卵よりも水分を含み、よりよいテクスチャを有する。他の実施形態では、藻類バイオマス又は藻類粉末は、調整される卵のテクスチャ及び水分量を総体的に改善するために、液体卵全体に加えられ、その後スチームテーブルにのせられる。このような調整物の具体的定例として、以下の実施例に記載されている。
【０２２５】
藻類バイオマス又は藻類粉末（主として、インタクト及び／又は均質化若しくは微細化された）及び／又は藻類油は、事実上、任意の食品組成物に組み入れることが可能である。いくつかの例として、ケーキ、ブラウニー、イエローケーキ、ブリオッシュを含むパン、シュガークッキー、ビスケット、及びパイを含むクッキー等の焼き製品が含まれる。他の例として、パスタ又は粉末ドレッシング、乾燥クリーマー、粉砕肉及び肉代替品等、しばしば乾燥状態で提供される製品が含まれる。主として、インタクトなバイオマスを結合剤及び／又は充填剤として係る製品の中に取り込むことで、主としてインタクトなバイオマスの水結合能のため脱水が改善され、収量を向上させることができる。乾燥粉末卵から作られたスクランブルドエッグ等、再脱水した食品のテクスチャ及び栄養特性もまた改善されている可能性がある。他の例として、ソース、スープ、ドレッシング（すぐ食べられる状態の）、熊谷委員リーマ、ミルクドレッシング、ジュース飲料、スムージー、クリーマー等の液体食品が含まれる。その他の液体食品として、食事の代替となる栄養ドリンク、又は藻類ミルクが含まれる。その他の食品として、ショートニング、マーガリン／スプレッド、ナッツバター、及びナチョソース等のチーズ製品を含む、バター又はチーズ等が含まれる。その他の食品として、栄養補助剤、チョコレート菓子−レシチン代替品、食事代替品、グラノーラバータイプの製品が含まれる。別種の食品として、バター及びコーティングがある。食品の周辺に油で層を作ることにより、主として、インタクトなバイオマス又はホモジネートは、調理媒体からの追加の油が食品に浸透させないようにする。よって、食品は、より望ましくない油（例えば、トランス脂肪、飽和脂肪、及び調理用油由来の産物による）を取り込むことなく、高含有量の一価不飽和脂肪油によりコーティングするという利点を保持することができる。バイオマスのコーティングはまた望ましいテクスチャ（例えば、パリパリ感）を食品にもたらし、調理用油及びその副産物の吸収がより少なくなるため、風味が混ざることがより少なくなる。
【０２２６】
未調理食品において、バイオマス中の藻類細胞の多くはインタクトなままである。これは、藻類油の酸化を防ぐのには有利であり、それにより、賞味期間が延長され、他の原料との有害な相互反応を最小化することとなる。食品の特性次第では、細胞が保護することで、冷蔵、真空パック等の必要性が低減されたり、又は回避されたりする可能性がある。細胞インタクトを保持することでまた、油が直接消費者の口に当たるのを防ぐことにもなり、望ましくないと思われる油っぽい食感又はべたつく食感を防ぐこととなる。どちらかと言えば栄養補助として油が使用されている食品においては、そのようなことは、製品の感覚受容特性を改善するのに有利となる。よって、主として、インタクトなバイオマスは、そのような製品における利用に適している。しかし、サラダドレッシング等の未調理製品において、油が所望の食感をもたらす場合（例えば、ビネガー等の水溶液の乳濁液）、精製された藻類油又は微少化されたバイオマスの利用が好ましい。調理済み食品において、オリジナルのインタクトなバイオマスの藻類細胞の一部は溶解するが、他の藻類細胞はインタクトのままであるかもしれない。溶解細胞のインタクト細胞に対する比は、調理過程の温度及び時間に依る。油が均一に他の成分と共に分散していることが、風味、テクスチャ及び／又は外観上好ましい調理済み食品においては（例えば、焼き製品）、微少化されたバイオマス又は精製された藻類油を利用することが好ましい。油及び／又はタンパク質及びその他の栄養素を供給するために藻類バイオマス又は藻類粉末が使用されている調理済み食品においては、それは、テクスチャのためというよりも、主に、栄養価又はカロリー価のためである。
【０２２７】
藻類バイオマス又は藻類粉末はまた、藻類バイオマス又は藻類粉末を使用すれば似通っているが、それらを使用せずに作る従来の製品と関連する食品（例えば、食事代替用飲料又はスムージー）の満腹指数を増加させるのに有益である。満腹指数は、同カロリーの異なる食品が食欲を満足させる度合いを測定するものである。係る指数は、試験食品を与え、その後、定められた間隔で他の食品に対する食欲を測定して計測することができる。その後の他の食品への食欲が少なければ少ないほど、満腹指数は高くなる。満腹指数の値は、白いパンを１００としたスケールで表される。高い満腹指数を有する食品は、ダイエットに有益である。メカニズムの理解に依らないが、藻類バイオマス又は藻類粉末は、所定量のカロリーの食品のタンパク質量及び／又は食物繊維量を増やすことにより、満腹指数を増加させると信じられている。
【０２２８】
藻類バイオマス又は藻類粉末（主として、インタクトかつ均質化又は微細化された）  及び／又は藻類油はまた、栄養補助剤又はダイエット食品に製造することもできる。例えば、藻類油は、魚油に類似の方法で消化可能なカプセルに包むこともできる。そのようなカプセルを瓶詰めにし、毎日摂取する（例えば、１日あたり１〜４個のカプセル又は錠剤として）ことは可能である。カプセルには、単一量の藻類バイオマス又は藻類粉末又は藻類油が含まれる。同様に、バイオマスを、医薬賦形剤又はその他の賦形剤と共に任意選択的に圧縮して錠剤にすることもできる。錠剤は、例えば、瓶又はプラスチックの包みに入れ、例えば、１日あたり１〜４個の錠剤を用量として毎日摂取することもできる。いくつかの場合においては、錠剤又はその他の剤形には、単一用量のバイオマス又は藻類油が含まれる。カプセル及び錠剤及びその他のサプリメントの製造は、米国連邦規則集第２１編第１１１条、又は外国法により確立された相当規則に定められた、栄養補助剤に適切なＧＭＰ状況下で行われることが好ましい。藻類バイオマス又は藻類粉末は、その他の粉末と混ぜ、（例えば、水、ジュース、ミルク又はその他の液体と）混合するための粉末として袋に小分けすることもできる。藻類バイオマス又は藻類粉末はまた、ヨーグルト等の製品と混ぜ合わせることもできる。
【０２２９】
藻類バイオマス又は藻類粉末及び／又は藻類油は、栄養補助剤に取り込むことができるが、上記の機能性食品は、錠剤、カプセル又は粉末の典型的な栄養補助剤とは明確に異なる。そのような食品の提供サイズは、典型的には、重量及び供給されるカロリー双方に関して、栄養補助剤よりははるかに大きい。例えば、１回分の梱包又は消費分において、食品の重量は１００ｇ超及び／又は少なくとも１００カロリーを供給するものであることが多い。典型的には、食品には、タンパク質、炭水化物、又は液体のいずれかである少なくとも１つの原料を含有し、その他にもそのような原料を２つ又は３つ含有することも多い。食品中のタンパク質又は炭水化物は、しばしば、食品カロリーの少なくとも３０％、５０％、又は６０％を供給する。
【０２３０】
上記の藻類バイオマス又は藻類粉末は、製造業者により製造され、レストラン又は個人等の消費者に、商業上又は家庭での利用のために販売される。そのような藻類バイオマス又は藻類粉末は、食品用の優良製造規範（ＧＭＰ）の条件下で製造されることが好ましい。主として、インタクトな状態又は、粉末として均質化若しくは微細化された状態の藻類バイオマス又は藻類粉末は、密封バッグ等の気密容器に梱包された乾燥状態であることが多い。スラリー様式の、均質化又は微細化されたバイオマスは、他の容器の中でもチューブに梱包されるのが便利であり得る。任意選択的に、藻類バイオマス又は藻類粉末は、賞味期間を延長するために真空パッケージすることができる。梱包された藻類バイオマス又は藻類粉末の冷蔵は必要ない。梱包された藻類バイオマス又は藻類粉末には、上記にある通り、従来の調理法における所定量の油、脂肪又は卵の代替として使用するために、どのくらいの量の藻類バイオマス又は藻類粉末を使うべきかを含む使い方説明書が含まれている。簡単に言うと、使い方によると、油又は脂肪は、バイオマスの質量比又は体積比２：１で置き換えられ、卵については、卵１個につきバイオマス１１ｇ又は小さじ１さじ分の藻類油の割合で置き換えられる得る。上記の通り、他の割合でも可能である。例えば、従来の調理法における油及び／又は脂肪及び／又は卵の質量又は体積に対して、バイオマスの質量又は体積で１０〜１７５％の割合でもできる。使い方説明書によると、密封パッケージ開封後は、広く市販されている（例えば、グラッド社製）ような気密容器で、任意選択的に冷蔵して、藻類バイオマス又は藻類粉末を保存するように指示されている。
【０２３１】
藻類バイオマス又は藻類粉末（主として、インタクト又は均質化若しくは微細化された粉末）はまた、他の乾燥材料（例えば、砂糖、小麦粉、乾燥果物、着香料）と混ぜ合わされた状態で梱包され得、最終食品の同一性を保つよう小分けして梱包される。その後、混合物は、消費者又は食品サービス会社により、水又は牛乳等の液体を加え、任意選択的に、油又は脂肪を加えることなく混ぜ合わせ及び／又は調理することにより、一つの食品に変換され得る。いくつかの場合においては、乾燥藻類バイオマス又は藻類粉末組成物を再構成するために液体を加える。任意選択的に、電子レンジ、対流式オーブン、従来のオーブン、又はレンジ台を使って調理を行うことができる。そのような混合物を使用して、ケーキ、パン、パンケーキ、ワッフル、飲料、ソース等を作ることができる。そのような混合物は、消費者にとって便利であり、冷蔵保存することなく長期保存できるという利点を有する。そのような混合物は、典型的には、それを食品に変換するための液体を加えるよう使い方の説明書きのついた密封容器に梱包されている。
【０２３２】
食品原料として利用するための藻類油は、同様に、食品用のＧＭＰ状況下で製造され、梱包されることが好ましい。藻類油は、典型的に、従来使用されている油と類似の方法で、瓶又はその他の容器に梱包される。容器には、食品中の従来の油、脂肪、又は卵の代わりに使用するための使い方説明書付きの貼付ラベルが含まれる。密封容器に梱包されると、油の賞味期間は長くなる（少なくとも１年）が、品質が特に劣化することはない。開封後は、主に一価不飽和脂肪油から成る藻類油が急激に酸化に晒されることはないが、未使用の油については、冷暗所に保存することにより（例えば、食器棚等の閉じられた空間）、酸化も少なく長く保存できる。油に含まれる使い方の指示には、好ましい保存に関する情報も含まれている。
【０２３３】
任意選択的に、藻類バイオマス又は藻類粉末及び／又は藻類油には、カロテノイド（例えば、アスタキサンチン、ルテイン、ゼアキサンチン、α-カロテン、β-カロテン及びリコピン）、リン脂質（例えば、Ｎ−アシルホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルイノシトール及びリゾホスファチジルコリン）、トコフェロール（例えば、αトコフェロール、βトコフェロール、γトコフェロール、及びδトコフェロール）、トコトリエノール（例えば、αトコトリエノール、βトコトリエノール、γトコロリエノール及びδトコトリエノール）、ブチル化ヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、ポリフェノール、ロスマリン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、ソルビン酸、安息香酸、メチルパラベン、レブリン酸、アニス酸、酢酸、クエン酸、及びバイオフラボノイドを含むが、これらに限定されない、賞味期間を最大化するための、食用に承認された保存料／抗酸化剤を含有してもよい。
【０２３４】
ヒトための栄養素として、主としてインタクトなバイオマス、均質化又は微細化されたバイオマス（スラリー、画分、粉末、若しくは細紛）又は藻類油を食品に取り込む記載は、一般に、非ヒト動物のための食品にも適用され得る。
【０２３５】
バイオマスは、高品質な油脂又は高タンパク質又はその両方を、そのような食品に与える。藻類油含有量は、藻類タンパク質含有量と同様に、少なくとも１０又は２０重量％であることが好ましい。主としてインタクトなバイオマス由来の藻類油及び／又はタンパク質の少なくとも一部を獲得することは、時に、競争犬又は競争馬等、競技で高いパフォーマンスを求められる動物の飼料として有利となる。主としてインタクトなバイオマスはまた、保存料としても有益である。藻類バイオマス又は藻類粉末又は藻類油は、動物用飼料に典型的に使用されている他の材料（例えば、肉、肉風味、脂肪酸、野菜、果物、スターチ、ビタミン、ミネラル、抗酸化剤、プロバイオティック）及びそれらの任意の組み合わせと混ぜ合わされる。そのような食物はまた、ペット動物、特に活動的なライフスタイルのペット動物に適している。キャットフードにはタウリンを混入することが推奨される。従来の動物用飼料と同様、提供対象動物に適した一口サイズの粒で提供され得る。
【０２３６】
脱脂食品は、特に藻類バイオマス又は藻類粉末を含有する高タンパク質由来の脱脂食品は、藻類タンパク質濃縮物及び／又は単離物用のフィードストックとして有益である。藻類タンパク質濃縮物及び／又は単離物は、大豆タンパク質濃縮物／単離物を産生するために使用される標準過程を利用して産生され得る。藻類タンパク質濃縮物は、脱脂藻類バイオマス又は藻類粉末又はミール由来の可溶性糖を除去することにより調整されるだろう。残りの成分は、主に、タンパク質及び不溶性多糖類であろう。脱脂ミール由来の可溶性糖を除去することにより。タンパク質含有量が増加し、よって藻類タンパク質濃縮物を作ることとなる。藻類タンパク質濃縮物は、乾燥重量で少なくとも４５％のタンパク質を含有する。好ましくは、藻類タンパク質濃縮物は、乾燥重量で少なくとも５０％〜７５％のタンパク質を含有する。藻類タンパク質単離物もまた、大豆タンパク質単離物を産生するのに使用される標準過程を使用して調整され得る。この過程には通常、温度とＮａＯＨを使用した基本ｐＨ抽出工程が含まれる。抽出工程後、脂質と固体は分離され、タンパク質はＨＣｌを利用して液体画分から沈殿させる。固体画分を再抽出し、残りの液体画分をＨＣｌによる沈殿の前に貯めることができる。その後、タンパク質を中和し、乾燥噴霧して、タンパク質単離物を産生する。藻類タンパク質単離物は、典型的に、乾燥重量で少なくとも９０％のタンパク質を含有する。
【０２３７】
脱脂ミールは、反芻動物、家禽、豚、及び水産養殖等の農場や漁場の生物の飼料に有益である。脱脂ミールは、食物用又はその他の目的のいずれかのために精製された藻類油を調整する過程の副産物である。得られたミールは、油脂含有量は低いが、生物の飼料に適した、高品質のタンパク質、炭水化物、食物繊維、粗灰及びその他の栄養素は依然として含まれている。細胞はほとんど溶解しているため、脱脂ミールはそのような動物にとって容易に消化され得る。脱脂ミールは、任意選択的に、動物用飼料で穀物等の他の材料と組み合わせることができる。脱脂ミールは均一な粉末で、市販の押し出し機や拡大機を使ってペレットに圧縮され得る。
【０２３８】
Ａ．含気食品
含気食品とは、通常デザートに利用される言葉であるが、同じ原則で作られる非デザート食物にも応用される。空気混入デザートは、ムース、アイスクリーム、ホイップ状トッピング、シャーベット等のことを指している。含気食品は、連続相及び不連続相２つの相から成る。不連続相は、フードアイテム中に空気細胞又は空気泡として封入されている空気である。連続相は、水、溶解した固体（ミルク等）、コロイド状固体、タンパク質等を含む水で作られ得る。含気食品は、非連続空気層から成るため、食物内の空気細胞に空気を保つことができるかどうかは、含気食品をうまく形成するのに重要となる。乳化剤は、不連続相に空気細胞を形成するのに役立ち、安定剤は、食物内に空気細胞をそのまま保有するのに役立つ。含気食品の調整中に藻類バイオマス又は藻類粉末（特に、脂質が豊富な微細藻類粉末）を添加することでもたらされる驚くべきかつ予想外の効果は、バイオマスの空気保有能である。藻類バイオマス又は藻類粉末は、特に、脂質が豊富な微細藻類粉末は、優れた空気保有能又は安定能を有する。本発明の微細藻類粉末又は藻類バイオマスまた優れた乳化能を有し、よって、含気食品の利用に適している。
【０２３９】
ケーキ等の焼き製品では、脂質が豊富な微細藻類粉末又は藻類バイオマスによる脂質を含む脂肪は、いくつかの重要な役割を果たす。例えば（１）ケーキ中の膨張剤により形成される小さな気泡を保有し、又は安定化させることで、軽く、ふわふわしたテクスチャが得られるのは、脂肪が一部関係している（パンでも同様である）、（２）脂肪は、細粉タンパク質でコーティングし、グルテンの形成を防ぐことにより、「口の中でとろける」テクスチャ、及びその他の感覚受容特性を作り出す、（３）（高度飽和の）固体脂肪は通常、液体脂肪よりも高い空気保有能又は安定能を有し、その結果、より軽いテクスチャをもたらす、及び（４）乳化剤（モノグリセリド及びジグリセリド）は、バッター（ｂａｔｔｅｒ）中の脂肪分布を支援し、その結果バッター中の空気泡分布がより良くなり、ケーキ又は焼き製品の軽く、ふわふわしたテクスチャをもたらすこととなる。脂質豊富な藻類粉末又は藻類バイオマスには、モノグリセリド及びジグリセリドが含有されるが、（バター／ラード等の固体脂肪と異なり）飽和脂肪は含有されない。よって、脂質豊富な藻類粉末又は藻類バイオマスが、そのような優れた空気保有能／安定能を有し、バター及び／又はエッグヨークの代わりに藻類粉末又は藻類バイオマスのみを使用したときに、焼き製品に同じふわふわ感／軽いテクスチャをもたらすとは期待されない。
【０２４０】
含気食品の別の例として、アイスクリーム（又は、シャーベット及びジェラート）が挙げられる。アイスクリームは、部分的に凍った泡であると定義され、通常は２０％超の空気含有量を有する（不連続相）。連続相には、溶解した及びコロイド状の固体、すなわち、乳状の砂糖、タンパク質、安定剤、脂肪相等が含まれる。電子顕微鏡下では、アイスクリームは、連続相を構成している氷血症の中で脂肪小球によりコーティングされた空気細胞から成るように見える。藻類粉末又は藻類バイオマスの乳化能及び脂質含有量は、アイスクリーム作製の利用に適している。含気食品の非限定的例として他に、（風味がよく甘い）ムース、ホイップトッピング／ムース、及びメレンゲが挙げられる。一部のケーキ、クッキー、パン又はソースに見られる軽さ（例えば、エンジェルフードケーキ）もまた、空気混入による。
【０２４１】
Ｂ．粉砕肉及び成型肉
粉砕肉は、本質的に固体及び液体の分散物から成る２相システムであり、固体は非混和性である。液体は、塩の水溶液であると同時に、肉（固体）の筋肉繊維、脂肪、及び結合組織の不溶性タンパク質（及びその他の成分）が分散し、マトリックスを形成している媒体でもある。この２相システムは、厳密な意味では乳濁液ではないが、構成的にも構造的にも肉の「乳濁液」となる。この肉乳濁液の安定状態は、粉砕肉及び成型肉の統一性に依る。粉砕肉の固相は、細切り又は挽くことにより詰め肉に認められる均一な状態にされた加工肉（他の成分の中に、筋肉繊維、結合組織及び脂肪を含む）から成る。固相は、その後、液相に入れられ、肉乳濁液を形成する。粉砕肉に一般的な例として、ソーセージ、フランクフルト、ボローニャ、肉パティ（例えば、ハンバーガーパティ）及び缶詰肉が挙げられる。
【０２４２】
成型肉とは、機械的に分離され、その後、成型された肉のことを指している。「成型され」ているため、肉製品は、細かく粉砕した肉を加えたり又は加えなかったりして細切り肉を「転がす」ことにより成型され、そのため細切り肉の可溶性タンパク質が小片同士を結合する、粉砕肉のカット、スライス、又はポーションという人工的な外観を呈する。肉を機械的に分離することには、肉を切り刻み、挽き、又はその他の方法でより細片に加工し、よって、筋肉繊維を短くすることが含まれる。オリジナルの肉繊維は破壊されているため、成型された肉製品を一つにまとめるのに、部分肉乳濁液（粉砕肉に類似）の形成が必要である。成型肉製品の非限定的例として、チキンナゲッツ、コールドカット詰め（例えば、ハム、ターキー等）及び魚スティックが挙げられる。
【０２４３】
本発明の藻類バイオマス又は藻類粉末は、粉砕肉及び成型肉において成分として加えることができる。藻類バイオマス又は藻類粉末は、そのような肉製品において多機能的機能を有する。一つの態様は、藻類バイオマス又は藻類粉末を、充填剤又は増量剤となり得る。別の態様は、藻類バイオマス又は藻類粉末由来の脂質、炭水化物及びタンパク質は、粉砕肉／成型肉の他の成分に対して結合剤の働きをする。まったく驚くべきかつ予想外となる別の利点は、藻類バイオマス又は藻類粉末（特に、脂質豊富な藻類粉末）は、特に、低脂肪肉で作られた肉製品の場合、粉砕肉製品及び／又は成型肉製品のテクスチャ及び風味を改善する。低脂肪の牛挽肉（４％脂肪）及び七面鳥挽肉（３％脂肪）は、しっかりとした厚みで、噛み応えがよく、乾燥食感を有し、レバーの様な「非特徴的」肉風味を有する。脂質が豊富な藻類粉末又は藻類バイオマスを加えると、その結果、粉砕肉及び／又は成型肉のテクスチャ及び風味の双方が改善される。そのような場合、低脂肪肉製品は、脂質豊富な藻類粉末又は藻類バイオマスを加えない場合よりも、水分を含んで柔らかいテクスチャを有し、味も豊かでより肉に近い風味を有し、低脂肪肉製品であっても、高脂肪牛挽肉（２０％脂肪）又は高脂肪七面鳥挽肉（１５％脂肪）に類似のテクスチャをもたらす。藻類バイオマス又は藻類粉末を粉砕肉及び／又は成型肉に加えることで、高脂肪肉製品のテクスチャ及び風味を維持しつつ、より健康的な肉製品（低脂肪）を作り出すことができる。
【０２４４】
Ｃ．乳製品の模倣品
藻類粉末又は藻類バイオマスを、乳製品の模倣品又は乳製品の代替品（例として、バターの代わりに藻類粉末を使用することが含まれる）として使用することができる。藻類粉末又は藻類バイオマスはまた、酵素修飾チーズ（チーズ風味又はチーズソースにおいて）と混ぜ合わせるときの増量剤として使用され得る。さらに、藻類粉末又は藻類バイオマスはまた、藻類ミルク等、飲料の製造にも利用され得る。藻類粉末又は藻類バイオマスはまた、マカロニ・アンド・チーズ、大豆ミルク、米ミルク、アーモンドミルク、アイスクリーム、ホイップクリーム等の食品（乳製品を加えることで、クリーミーなテクスチャがもたらされる食物）の滑らかさを向上させることができる。
【０２４５】
脱脂藻類粉末又は藻類バイオマスはまた、乳製品の模倣品として使用され得る。脱脂肪又は脱脂質の藻類粉末又は藻類バイオマスには、抽出後、実質上、油含有量はない。加工法次第では、脱脂藻類粉末又は藻類バイオマスには、藻類バイオマス又は藻類粉末の成分であるリン脂質が含まれる。脱脂藻類粉末又は藻類バイオマスは非乳製品であり、かつ可能性としては超低脂肪である（現在、非乳製品クリーマーに使用されている硬化油含有トランス脂肪と比較して）。コーヒーに加えると、脱脂藻類粉末又は藻類バイオマスは、コーヒーの苦みを低減し、クリーミーな食感（口全体に）を加える。前記製品は、クリーマーとして、又はモカ、ホットチョコレート、フラッペ及びその他のコーヒーベース飲料の利用に適している。
【０２４６】
以下の実施例は、本発明の請求内容をわかりやすく示すためのものであって、これらに限定されない。
【実施例１】
【０２４７】
高油含有量を達成するための微細藻類の培養
乾燥細胞重量ベースで２０％超の油を達成するという目標で、微細藻類の株を振とうフラスコで培養した。使用されたフラスコ培地は以下のとおりであった。Ｋ２ＨＰＯ４：４．２ｇ／Ｌ、ＮａＨ２ＰＯ４：３．１ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ：０．２４ｇ／Ｌ、クエン酸一水和物：０．２５ｇ／Ｌ、ＣａＣｌ２  ２Ｈ２Ｏ：０．０２５ｇ／Ｌ、イースト抽出物：２ｇ／Ｌ、及び２％グルコース。凍結保存された細胞を、室温で解かし、５００ｕｌの細胞を４．５ｍｌの培養液に加え、６ウェルプレートに入れて、７日間２８℃で攪拌した（２００ｒｐｍ）。乾燥細胞重量は、事前に重さを測ったエッペンチューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ  ｔｕｂｅ）に入れて、１ｍｌの培養液を１４，０００ｒｐｍで５分間、遠心分離して決定した。培養液の上清を廃棄し、結果として得られた細胞ペレットを１ｍｌの脱イオン水で洗浄した。培養液を再び遠心分離し、上清を廃棄し、細胞ペレットを−８０℃に置いて凍らせた。それから、サンプルを２４時間凍結乾燥させ、乾燥細胞重量を計算した。培養液中の脂質総量を決定するのに、３ｍｌの培養液を取り、アンコムシステム（Ａｎｋｏｍ  ｓｙｓｔｅｍ）（アンコム社（Ａｎｋｏｍ  Ｉｎｃ．）、ニューヨーク州マセドン）を用い、製造業者のプロトコールに従って解析にかけた。サンプルを、Ａｍｋｏｍ  ＸＴ１０抽出器を用いて、製造業者のプロトコールに従って、溶剤抽出を行った。脂質総量は、酸加水分解し乾燥させたサンプルと溶剤抽出し乾燥させたサンプルとの間の質量の差として決定した。乾燥細胞重量による油の割合の測定を表１に示した。
【０２４８】
【表１】
0005865894.tif 000002
【０２４９】
クロレラ・プロトセコイデスの株を追加で、上記の状況下で生育し、標準的なガスクロマトグラフィ法（ＧＣ／ＦＩＤ）を用いてこれらクロレラ・プロトセコイデス株のそれぞれの脂質プロフィールを決定した。脂質プロフィールの概要は、以下に含まれる。値は、脂質全体の領域割合を示す。ＵＴＥＸ付きのコレクション番号は、テキサス大学オースチン校（１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ａ６７００、オースチン、テキサス州、７８７１２−０１８３）のＵＴＥＸ藻類コレクション由来の藻類株である。ＣＣＡＰ付きのコレクション番号は、藻類原生動物コレクション（ＳＡＭＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｌｔｄ．  Ｓｃｏｔｔｉｓｈ  Ｍａｒｉｎｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ＯＢＡＮ、Ａｒｇｕｌｌ  ＰＡ３７  １ＱＡ、スコットランド、英国）由来の藻類株である。ＳＡＧ付きのコレクション番号は、ゲッチンゲン大学藻類培養コレクション（Ｎｉｋｏｌａｕｓｂｅｒｇｅｒ  Ｗｅｇ  １８、３７０７３、ゲッチンゲン、ドイツ）由来の藻類株である。
【表２】
0005865894.tif 000003
【０２５０】
これらのデータによると、上記の株はすべてクロレラ・プロトセコイデスであるが、一部の株には脂質プロフィールが異なるものが存在することが分かる。
【実施例２】
【０２５１】
高い油含有量の藻類バイオマスを精製することを目標に、３つの異なる培地処方で３つの発酵工程が行われた。第１の処方（培地１）は、Ｗｕら（１９９４、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｉｎ  Ｃｈｉｎａ、ｖｏｌ．３７、Ｎｏ．３、ｐｐ．３２６−３３５）に基づき、１リットルあたり、ＫＨ２ＰＯ４、０．７ｇ；Ｋ２ＨＰＯ４、０．３ｇ；ＭｇＳＯ４−７Ｈ２Ｏ、０．３ｇ；ＦｅＳＯ４−７Ｈ２Ｏ、３ｍｇ；塩酸チアミン、１０μｇ；グルコース、２０ｇ；グリシン、０．１ｇ；Ｈ３ＢＯ３、２．９ｍｇ；ＭｎＣｌ２−４Ｈ２Ｏ、１．８ｍｇ；ＺｎＳＯ４−７Ｈ２Ｏ、２２０μｇ；ＣｕＳＯ４−５Ｈ２Ｏ、８０μｇ；及びＮａＭｏＯ４−２Ｈ２Ｏ、２２．９ｍｇから成る。第２の培地（培地２）は、実施例１に記載のフラスコ培地由来で、１リットルあたり、Ｋ２ＨＰＯ４、４．２ｇ；ＮａＨ２ＰＯ４、３．１ｇ；ＭｇＳＯ４−７Ｈ２Ｏ、０．２４ｇ；クエン酸一水和物、０．２５ｇ；脱水塩化カルシウム、２５ｍｇ；グルコース、２０ｇ；イースト抽出物、２ｇから成る。第３の培地（培地３）はハイブリッドで、１リットルあたり、Ｋ２ＨＰＯ４、４．２ｇ；ＮａＨ２ＰＯ４、３．１ｇ；ＭｇＳＯ４−７Ｈ２Ｏ、０．２４ｇ；クエン酸一水和物、０．２５ｇ；脱水塩化カルシウム、２５ｍｇ；グルコース、２０ｇ；イースト抽出物、２ｇ；Ｈ３ＢＯ３、２．９ｍｇ；ＭｎＣｌ２−４Ｈ２Ｏ、１．８ｍｇ；ＺｎＳＯ４−７Ｈ２Ｏ、２２０μｇ；ＣｕＳＯ４−５Ｈ２Ｏ、８０μｇ；及びＮａＭｏＯ４−２Ｈ２Ｏ、２２．９ｍｇから成る。これら３つすべての培地処方を調整し、研究ラボ用の発酵槽で３０分間、１２１℃でオートクレーブ殺菌した。オートクレーブ殺菌後の冷却に続き、各槽に無菌グルコースを加えた。
【０２５２】
各発酵装置の種菌はクロレラ・プロトセコイデス（ＵＴＥＸ２５０）で、種菌を播種した発酵装置の培地及び温度状況を利用して、２つのフラスコ段階で調整した。各発酵装置に、１０％（ｖ／ｖ）の対数増殖期中期の培養物で播種した。３つの研究ラボ用発酵装置は、実験中２８℃で維持した。培地１における微細藻類細胞の生育も、温度２３℃で評価された。すべての発酵評価のため、ｐＨ６．６〜６．８に維持し、５００ｒｐｍで攪拌し、気流を１ｖｖｍに保った。発酵培養菌は、１１日間培養された。バイオマスの蓄積は、７５０ｎｍにおける光学密度により、乾燥細胞重量で測定した。
【０２５３】
脂質／油濃度は、標準的なガスクロマトグラフィ法による直接エステル転移反応を用いて決定した。簡潔に、バイオマスを有する発酵ブロスのサンプルを吸い取り紙に滲ませ、遠心分離チューブに送り、６５〜７０℃で１時間、真空オーブン中で乾燥した。サンプルを乾燥したとき、メタノール中に２ｍＬの５％Ｈ２ＳＯ４をチューブに加えた。その後、ボルテックスと超音波処理を断続的に行いつつ、チューブを熱ブロック上で、温度６５℃〜７０℃で３．５時間加熱した。その後、２ｍｌのへプタンを加え、チューブを激しく振った。２ｍｌの６％Ｋ２ＣＯ３を追加し、チューブを激しく振って混ぜ合わせ、その後８００ｒｐｍで２時間遠心分離器にかけた。それから、上清を、Ｎａ２ＳＯ４乾燥剤を含むＧＣバイアルに移し、標準的なガスクロマトグラフィ法で操作した。油／脂質の割合は、乾燥細胞重量ベースであった。生育した細胞の乾燥細胞重量は、培地１、２３℃で９．４ｇ／Ｌ；培地１、２８°Ｃで１．０ｇ／Ｌ、培地２、２８°Ｃ２１．２ｇ／Ｌ；及び、培地３２８°Ｃで２１．５ｇ／Ｌであった。生育した細胞の脂質／油濃度は、培地１、２３°Ｃで３ｇ／Ｌ；培地１、２８°Ｃで０．４ｇ／Ｌ；培地２、２８°Ｃで、１８ｇ／Ｌ；及び、培地３、２８°Ｃで１９ｇ／Ｌであった。生育した細胞の乾燥細胞重量ベースの油の割合は、培地１、２３°Ｃで３２％；培地１、２８°Ｃで４０％；培地２、２８°Ｃで８５％；及び、培地３、２８°Ｃで８８％であった。２８℃で、異なる培地処方により産生された藻類バイオマスの脂質プロフィール（内部標準に正規化後の領域％において）は、以下の表２にまとめた。
【０２５４】
【表３】
0005865894.tif 000004
【実施例３】
【０２５５】
食品用バイオマス調整
微細藻類バイオマスを、実施例１〜２のいずれか１つに記載の微細藻類培養により産生した。微細藻類バイオマスは、発酵装置、フラスコ、又はその他のバイオ反応器から収穫した。
【０２５６】
ＧＭＰ手順に従って行われた。健康診断又は上司の観察により、疾患、吹き出物、爛れ、若しくは感染性創傷等の体表の病変、又は、微生物を汚染する資源であって、それにより食物、食物が接触した表面、若しくは食物の梱包材を汚染する合理的な可能性のある、その他の任意な異常な資源を有する、又は有するようである者は誰であれ、状況が改善されるまで、そのような汚染をもたらすと予想され得る任意の作業から除外されるべきである。作業員は、そのような健康状態にある場合、上司に報告するべきである。微細藻類バイオマス、バイオマス接触表面、及びバイオマス梱包材と直接接触する作業員は全員、勤務中は、微細藻類バイオマス汚染を防御するのに必要な程度の衛生規範を遵守する。清浄度を維持する方法には以下が含まれるが、これに限定されない。すなわち、（１）バイオマス、バイオマス接触表面、又はバイオマス梱包剤の汚染を防御するよう、作業に適した防護服を着用する；（２）作業員の清浄さを適切に維持する；（３）作業開始前、作業現場を離れる度に、及び、その他に、手の汚れ又は汚染の可能性のある場合はいかなる時も、適切な手洗い施設で徹底して手を洗浄する（望ましくない微生物による汚染から身を守るため、必要ならば消毒する）；（４）バイオマス、装置、又は容器の中へ落ちる可能性のある、不安定な宝石類やその他の物はすべて取り除き、かつ、手でバイオマスを扱う間、衛生管理が適切に行えない手にはめた宝石も取り除く。もし、手にはめた宝石を取り除くことができない場合は、インタクトで、クリーンかつ衛生的な状態で維持されることが可能であり、かつ、これらの物によりバイオマス、バイオマス接触表面、又はバイオマス梱包材が汚染されるのを効果的に防御する材料で、宝石を覆うのでもよい；（５）バイオマス処理で手袋を使用する場合、手袋をインタクトで、クリーンかつ衛生的な状態で保つこと。手袋は不浸透性の材料で作られたものでなければならない；（６）必要ならば、ヘアネット、ヘッドバンド、帽子、髭を覆うもの、又はそのほか、効果的に毛を隠すものを、効果的に身につける；（７）着衣やその他の作業員の私物は、バイオマスへの暴露の可能性がある場所、又は装置若しくは器具を洗浄する場所以外に保管する；（８）以下について、バイオマスへの暴露の可能性がある場所、又は装置若しくは器具を洗浄する場所以外で行うよう制限する。すなわち、バイオマスを食べる、ガムを噛む、又はたばこを吸うことである；（９）バイオマス、バイオマス接触表面、バイオマス梱包剤が、微生物又は、汗、毛、化粧品、たばこ、化学物質及び皮膚に塗った医薬品等を含むがこれに限定されない異物で汚染されるのを防御するために、その他に必要な任意の予防策を講じる。微細藻類バイオマスは、任意選択的に、ライセートを生成するために細胞粉砕工程にかけ、及び／又は、任意選択的に乾燥させて微細藻類バイオマス組成物を形成することができる。
【実施例４】
【０２５７】
乾燥クロレラ・プロトセコイデス  バイオマスにおける藻類毒素の非存在
クロレラ・プロトセコイデス（ＵＴＥＸ２５０）バイオマスのサンプルを、実施例１に記載の方法を利用して生育し、調整した。乾燥バイオマスを、液体クロマトグラフィ−質量分析法（ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ−ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ／ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ）（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）用いて、藻類毒素及びシアノバクテリア毒素への汚染の存在を解析した。解析では、文献で開示され、国際食品規制で言及されている、あらゆる群の藻類毒素及びシアノバクテリア毒素を網羅した。結果によると、バイオマスサンプルには、試験された藻類毒素及びシアノバクテリア毒素のうち、検出可能な任意のレベルのいかなるものも含まれていなかった。結果の概要を表３にまとめた。
【０２５８】
【表４】
0005865894.tif 000005
【実施例５】
【０２５９】
クロレラ・プロトセコイデスのバイオマスにおけるダイエット食物繊維含有量
実施例１に記載の方法を用いて、ＡＣＯＣインターナショナル公式メソッド（Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  ＡＣＯＣ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）（ＡＯＡＣメソッド９９１．４３）に従って、乾燥クロレラ・プロトセコイデス（ＵＴＥＸ２５０）バイオマスのサンプルに対し、近似分析を行った。両サンプルに対して総脂肪含有量（脂質／油）の酸性加水分解を行ったが、高脂質藻類バイオマスの脂肪含有量は約５０％で、高タンパク質藻類バイオマスの脂肪含有量は１５％であった。粗食物繊維含有量は、高脂質藻類バイオマス及び高タンパク質藻類バイオマス双方とも２％であった。水分量（重量測定で決定）については、高脂質藻類バイオマス及び高タンパク質藻類バイオマス双方とも５％であった。灰含有量については、無機灰のるつぼ燃焼及び分析により決定されるが、高脂質藻類バイオマスでは２％、高タンパク質バイオマスでは４％であった。粗タンパク質については、各バイオマスを焼却するときに排出される窒素量により決定されるが、高脂質バイオマスでは５％、高タンパク質バイオマスでは５０％であった。炭水化物含有量は引き算により、すなわち、上記の既知の脂肪値、粗食物繊維値、水分値、灰値及び粗タンパク質値の総量を１００から引いた値とした。計算によると、高脂質バイオマスの炭水化物含有量は３６％、高タンパク質バイオマスの炭水化物含有量は２４％であった。
【０２６０】
両方の藻類バイオマスの炭水化物含有量をさらに解析すると、サンプル中に約４〜８％（ｗ／ｗ）の遊離糖（主として、スクロース）のあることが分かった。遊離糖に関して、複数のロットの高脂質藻類バイオマスを試験した（果糖、グルコース、スクロース、マルトース及びラクトースのアッセイ）が、スクロース量は２．８３％〜５．７７％の範囲、マルトースは検出不可〜０．６％の範囲、及びグルコースは、検出不可〜０．６％の範囲であった。その他の糖、例えば、果糖、マルトース及びラクトースは、アッセイされた任意のロットにおいて検出不可であった。遊離糖に関して、複数のロットの高タンパク質含有藻類バイオマスを試験したが、スクロースのみ、任意のロットで、６．９３％〜７．９５％の範囲で検出された。
【０２６１】
両方の藻類バイオマスの（藻類バイオマスの炭水化物画分内の）乾燥食物繊維含有量全体の解析を、ＡＣＯＣインターナショナル公式メソッド（ＡＯＡＣメソッド９９１．４３）に従って行った。高脂質バイオマスには、乾燥食物繊維総量２９．４４％に対し、可溶性食物繊維１９．５８％及び不可溶性食物繊維９．８６％が含まれていた。高タンパク質バイオマスには、乾燥食物繊維総量１４．５９％に対し、可溶性食物繊維１０．３１％及び不可溶性食物繊維４．２８％が含まれていた。
【０２６２】
藻類バイオマスの単糖解析
実施例４に記載の方法を用いて生育し、調整した、乾燥細胞重量ベースで約５０％の脂質を有する乾燥クロレラ・プロトセコイデス（ＵＴＥＸ２５０）バイオマスを、酸性メタノリシスによりサンプルから産生された単糖メチルグリコシドの誘導体である、ペル‐Ｏ‐トリメチルシリル（ＴＭＳ）のガスクロマトグラフィと質量分析装置を結合させた装置（ＧＣ／ＭＳ）を利用して、単糖（グリコシル）組成物を解析した。簡潔に、まず、メチルグリコシドを、８０℃で１８〜２２℃、１Ｍ  ＨＣｌ含有メタノール中のメタノリシスにより、乾燥クロレラ・プロトセコイデスサンプルから調整し、次に、メタノール中ピリジン及び無水酢酸で、ｒｅ−Ｎ−アセチル化を行った。次に、サンプルを、Ｔｒｉ−Ｓｉｌ（Ｐｉｅｒｃｅ社）を用いて、８０℃で３０分間処理することにより、ｐｒｅ−Ｏ−トリメチルシリル化した。これらの手順は、先に、Ｍｅｒｋｌｅ及びＰｏｐｐｅ（１９９４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  ２３０：１〜１５；及び、Ｙｏｒｋら（１９８５）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１１８：３〜４０に記載されている。ＴＭＳメチルグリコシドのＧＣ／ＭＳ解析を、Ａｌｌｔｅｃｈ社のＥＣ−１融合シリカキャピラリーカラム（３０ｍ×０．２５ｍｍ  ＩＤ）を用いて、５９７５ｂＭＳＤにインターフェースしたＨＰ６８９０ＧＣ上で行った。単糖は、標準と比較した保有時間により同定され、これら炭水化物の特性は、質量分析により認証された。クロレラ・プロトセコイデスの単糖（グリコシル）成分は、アラビノース１．２モル％、マノース１１．９モル％、ガラクトース２５．２モル％、及びグルコース６１．７モル％であった。これらの結果は、炭水化物総量のモルパーセントとして表した。
【実施例６】
【０２６３】
藻類バイオマスのアミノ酸プロフィール
実施例１に記載の方法を用いて生育し、調整した、乾燥細胞重量ベースで約５０％の脂質を有する、乾燥クロレラ・プロトセコイデス（ＵＴＥＸ２５０）バイオマスのサンプルを、アミノ酸含有量に関して、ＡＣＯＣインターナショナル公式メソッド（トリプトファン解析：ＡＯＡＣメソッド９８８．１５；メチオニン及びシスチン解析：ＡＯＡＣメソッド９８５．２８；及びその他のアミノ酸：ＡＯＡＣメソッド９９４．１２）に従って行った。乾燥藻類バイオマス由来のアミノ酸プロフィール（総タンパク質量の割合として表示）を、乾燥全卵のアミノ酸プロフィール（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆａｃｔｏｒｙ社（ニュージャージー州）の全卵用製品仕様書のプロフィール）と比較し、その結果、これら２つソースが類似のタンパク質栄養価を有していることが分かった。クロレラ・プロトセコイデスのサンプルに関連するアミノ酸プロフィールの結果によると、バイオマスには、メチオニン（（２．２５％）、システイン（１．６９％）、リジン（４．８７％）、フェニルアラニン（４．３１％）、ロイシン（８．４３％）、イソロイシン（３．９３％）、スレオニン（５．６２％）、バリン（６．３７％）、ヒスチジン（２．０６％）、アルギニン（６．７４％）、グリシン（５．９９％）、アスパラギン酸（９．５５％）、セリン（６．１８％）、グルタミン酸（１２．７３％）、プロリン（４．４９％）ヒドロキシプロリン（１．６９％）、アラニン（１０．１１％）、チロシン（１．８７％）、及びトリプトファン（１．１２％）が含有されることが分かった。
【実施例７】
【０２６４】
クロレラ・プロトセコイデス（ＵＴＥＸ２５０）バイオマス、クロレラ・プロトセコイデス藻類粉末、クロレラ・プロトセコイデス色彩突然変異体（株ＢＭ１３２０）及びクロレラ・プロトセコイデス色彩突然変異体（株ＢＭ１３２０）から抽出された油のカロテノイド、リン脂質、トコトリエノール及びトコフェロール成分
実施例４に記載の方法を用いて産生された藻類バイオマスのサンプルを、順相ＨＰＬＣ、ＡＯＣＳメソッドＣｅ８〜８９を利用して、トコトリエノール及びトコフェロール成分含有量に関する解析を行った。バイオマスのトコトリエノール及びトコフェロール含有画分を、ヘキサン又は別の非極性溶剤を利用して抽出した。トコトリエノール及びトコフェロール成分の完全な結果については、表４にその概要を示した。
【０２６５】
【表５】
0005865894.tif 000006
【０２６６】
バイオマスのカロテノイド含有画分を単離し、ＨＰＬＣ法を用いてカロテノイドの分析を行った。（実施例３に記載の方法を用いて産生された）凍結乾燥した藻類バイオマスを、アルミ乳鉢に入れて炭化ケイ素と混ぜ合わせ、乳鉢と乳棒を用いて４回、それぞれ１分間ずつすり砕いて、カロテノイド含有画分を調整した。次に、すり砕いたバイオマス及びケイ素混合物を、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）で濯ぎ、上清を回収した。上清の色がなくなるまでバイオマスの抽出を繰り返し、全抽出のＴＨＦ上清を貯めて、標準的なＨＰＬＣ法を用いて、カロテノイド含有量を解析した。ドラム乾燥器を用いて乾燥させた藻類バイオマスのカロテノイド含有量も、上記の方法を用いて解析した。
【０２６７】
凍結乾燥された藻類バイオマスのカロテノイド含有量は、ルテイン総量（６６．９〜６８．９ｍｃｇ／ｇ；シス−ルテインは１２．４〜１２．７ｍｃｇ／ｇの範囲；及び、トランス−ルテインは、５４．５−５６．２ｍｃｇ／ｇの範囲であった）；トランス−ゼアキサンチン（３１．４２７〜３３．４５１ｍｃｇ／ｇ）；シス−ゼアキサンチン（１．２０１〜１．３１５ｍｃｇ／ｇ）；ｔ−αクリプトキサンチン（３．０９２〜３．７７３ｍｃｇ／ｇ）；ｔ−βクリプトキサンチン（１．０６１〜１．３５４ｍｃｇ／ｇ）；１５−シス−βカロテン  （０．６２５〜．０６７５ｍｃｇ／ｇ）；１３−シス−βカロテン（．０２６９〜．０３７６ｍｃｇ／ｇ）；ｔ−αカロテン（０．２６９〜．０３７６ｍｃｇ／ｇ）；ｃ−αカロテン（０．０４３〜．０１０ｍｃｇ／ｇ）；ｔ−βカロテン（０．６６４〜０．７４１ｍｃｇ／ｇ）；及び９−シス−βカロテン（０．２４１〜０．２６３ｍｃｇ／ｇ）であった。報告されたカロテノイド総量は、１０５．８１９ｍｃｇ／ｇ〜１１０．８１５ｍｃｇ／ｇの範囲であった。
【０２６８】
ドラムで乾燥された藻類バイオマスのカロテノイド含有量は、有意に低かった。ルテイン総量（０．７０９ｍｃｇ／ｇ：トランス−ルテインは、０．０９１ｍｃｇ／ｇ及びシス−ルテインは０．６１８ｍｃｇ／ｇ）；トランス−ゼアキサンチン（０．２５２ｍｃｇ／ｇ）；シス−ゼアキサンチン（０．０３７ｍｃｇ／ｇ）；α−クリプトキサンチン（０．０１０ｍｃｇ／ｇ）；β−クリプトキサンチン（０．０１０ｍｃｇ／ｇ）及びｔ−β−カロテン（０．００８ｍｃｇ／ｇ）であった。報告されたカロテノイド総量は、１．０３ｍｃｇ／ｇであった。これらのデータは、藻類バイオマス乾燥のために使用される方法は、カロテノイド含有量に、有意に影響を及ぼすことを示唆している。
【０２６９】
藻類バイオマスに対して、リン脂質解析も行った。リン脂質含有画分を、Ｆｏｌｃｈ抽出法を用いて抽出し（クロロホルム、メタノール、及び水の混合物）、油のサンプルを、ＡＯＣＳ公式メソッドＪａ  ７ｂ−９１、加水分解したレシチンのＨＰＬＣ定量（国際レシチン・リン脂質協会、１９９９年）、及び、光散乱検出器によるリン脂質のＨＰＬＣ分析（国際レシチン・リン脂質協会、１９９５年）を用いて、リン脂質含有量に関して解析した。リン脂質総量は、重量パーセント（ｗ／ｗ）で１．１８％であった。藻類油のリン脂質プロフィールは、ホスファチジルコリン（６２．７％）、ホスファチジルエタノールアミン（２４．５％）、リソホスファチジルコリン（１．７％）及びホスファチジルイノシトール（１１％）であった。リン脂質含有画分のヘキサン抽出を用いた類似の解析も行った。リン脂質総量は、重量パーセント（ｗ／ｗ）で０．５％であった。リン脂質プロフィールは、ホスファチジルエタノールアミン（４４％）、ホスファチジルコリン（４２％）及びホスファチジルイノシトール（１４％）であった。
【０２７０】
クロレラ・プロトセコイデス藻類粉末のサンプルを、上記のリン脂質含有量に関して試験した。このサンプルの全リン脂質の含有量は、０．８％ｗ／ｗであると判明した。個別のリン脂質の含有量は、重量％ベースで以下の通りである。すなわち、Ｎ−アシルホスファチジルエタノールアミン０．０１％未満、ホスファチジン酸０．０１％未満、ホスファチジルエタノールアミン０．２５％、ホスファチジルコリン０．４８％、ホスファチジルイノシトール０．０７％、及びリソホスファチジルコリン０．０１％未満であった。
【０２７１】
クロレラ・プロトセコイデスの色彩突然変異体（株ＢＭ３２０）から作られた藻類粉末のサンプルを、上記のリン脂質含有量に関して試験した。このサンプルの全リン脂質含有量は、０．６２％ｗ／ｗと判明した。個別のリン脂質含有量は、重量％ベースで以下の通りである。すなわち、Ｎ−アシルホスファチジルエタノールアミン０．０１％未満、ホスファチジン酸０．２１％未満、ホスファチジルエタノールアミン０．３６％、ホスファチジルコリン０．０５％、ホスファチジルイノシトール０．０１％未満、及びリソホスファチジルコリン０．０１％未満であった。
【０２７２】
クロレラ・プロトセコイデスの色彩突然変異体（株ＢＭ３２０）から抽出された油を、多様な成分に関して解析した。油は、溶剤抽出により抽出された（アセトン及び液体ＣＯ２）。油は、精製も、漂白も脱臭もしなかった。油の成分は、重量パーセント（ｗ／ｗ）で、モノグリセリド０．１９％及びジグリセリド５．７７％であった。また、油１００ｇ中に３．２４ｍｇのα−トコフェロール及び油１００ｇ中に０．９５ｍｇのγトコフェロールが含まれていた。また、油１００ｇ中に１９１ｍｇのエルゴステロール、油１００ｇ中に５．７０ｍｇのカンペステロール、油１００ｇ中に１０．３ｍｇのスティグマステロール、油１００ｇ中に５．７１ｍｇのβ−シトステロール、及び油１００ｇ中に２０４ｍｇのその他のステロールが含まれていた。この油の全トコトリエノールは、油１００ｇ中に０．２５ｍｇ（α−トコトリエノール０．２２ｍｇ、β−トコトリエノール０．０１ｍｇ未満、及びΔ−トコトリエノール０．０３ｍｇ）であった。
【実施例８】
【０２７３】
藻類粉末（高脂質）の産生
実施例１に記載の発酵方法及び状況を利用して生育した、高脂質含有クロレラ・プロトセコイデスを、高脂質藻類粉末に加工した。微細藻類バイオマスを加工して藻類粉末にするには、遠心分離法を用いて、収穫されたクロレラ・プロトセコイデスバイオマスを培養培地から分離した。その結果得られた濃縮バイオマスには、水分４０％超が含まれているが、高加圧ホモジェナイザー（（ＧＥＡモデルＮＳ１００１）は、バイオマスの平均粒子サイズが１０μｍ未満となるまで１０００〜１２００バールの圧力で動作）を用いて微少化した。その後、標準的な方法を用いて、藻類ホモジェネートを噴霧乾燥した。その結果得られた藻類粉末（噴霧乾燥されパウダー状にされた、微少藻類細胞）を梱包し、使用時まで貯蔵した。
【０２７４】
高脂質粉のサンプルを、粒子サイズに関して解析した。水分散の藻類粉末を作り、藻類粉末粒子サイズを、Ｈｙｄｒｏ２０００Ｓアタッチメントを使用したＭａｌｖｅｒｎ(R)  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ２０００でのレーザー分化を用いて決定した。優しく混ぜ合わせてコントロール分散物を作り出し、１００バール、３００バール、６００バール及び１０００バールの圧力でその他の分散物を作り出した。その結果、藻類粉末の平均粒子サイズは、より高圧状態では小さいことが分かった（優しく混ぜ合わせた状態では３．０３９μｍで、１０００バール加圧した状態では、２．４８４μｍであった）。粒子サイズの分布は、高圧状態では変化し、より大きなサイズ（１０μｍ超）の粒子が減少し、より小さな粒子（１μｍ未満）が増加した。
【実施例９】
【０２７５】
高脂質（脂質が豊富な）藻類粉末を使用した食品組成物
以下の食品構成には、実施例８に記載の方法を用いて産生され、約５０％の脂質が含有される高脂質藻類粉末が含まれる。
【０２７６】
藻類ミルク／フローズンデザート
藻類ミルクの処方には、高脂質藻類粉末を利用して行われた。藻類ミルクには、以下の材料（重量％で）が含まれる。すなわち、水８８．４％、藻類粉末６．０％、ホエイタンパク質濃縮物３．０％、砂糖１．７％、バニラエキス０．６％、塩０．２％及び安定剤０．１％である。これら材料を合わせ、ハンドサイズのホモジェナイザーを用いて低圧で均質化した。得られた藻類ミルクを凍らせて、試食した。口当たりは全乳のそれに相当し、ほど良い白濁色をしていた。使用された藻類粉末の脂質含有率は約５０％であり、また、得られた藻類ミルクの脂肪含有率は３％であった。バニラ風味の大豆ミルク（Ｓｉｌｋ）と比べて、藻類ミルクは同様に口当たりがよく、白濁食で、大豆のような豆の風味はなかった。
【０２７７】
その後、藻類ミルクにさらに砂糖とバニラエッセンスを加え、２〜４分間、撹拌器で均一になるまで混ぜ合わせた。混合物を予め冷やしたアイスクリームメーカー（クイジナート社製（Ｃｕｉｓｉｎａｒｔ））に、１〜２時間、所望の均一性に到達するまで寝かせた。比較として、従来の製造法によるアイスクリーム、すなわち、ハーフアンドハーフ３２５グラム、２％ミルク２２０グラム、卵黄１個でもアイスクリームを作った。従来の製造法によるアイスクリームは、ソフトアイスクリームと同程度の均一性を有した、芳醇な味とスムーズな食感のアイスクリームであった。藻類ミルクから作ったアイスクリームは、従来の製造法によるアイスクリームと比べて、全体的に、滑らかさや口当たりの良さには欠けるが、均一性及び食感は、芳醇な味のアイスミルクに相当した。全体として、藻類ミルクをフローズンデザートに応用する利用法は、成功であった。製造された藻類ミルクのフローズンデザートは、従来のアイスクリームに対して、低脂肪の代替品となった。
【０２７８】
藻類粉末のパウンドケーキ
焼いた食品において、藻類粉末又は藻類バイオマスの空気保有能及び気泡安定化能を示すために、焼いた食品の処方の一例として、高脂質藻類粉末を使ってパウンドケーキを作った。藻類粉末パウンドケーキの構成は、バニラエッセンス（６．０ｇ）、パウダーシュガー（１２２．０ｇ）、全卵（１２２．０ｇ）、水（１６．０ｇ）、中力粉（１２２ｇ）、塩（１．５ｇ）、キサンタンガム（Ｋｅｌｔｒｏｌ  Ｆ社）（０．２ｇ）、ベーキングパウダー（４ｇ）、高脂質藻類粉末（４５ｇ）であった。卵を、厚く、淡色でクリーミーになるまで泡立てる。それから、バニラエッセンスを加えて混ぜ合わせ、次に藻類粉末を入れ、砂糖／卵の混合物に混ぜ入れる。次に、乾燥材料をよく掻き混ぜ、砂糖／卵の混合物に加え、代替的に水で掻き混ぜる。次に、バッター（ｂａｔｔｅｒ）を、十分なじむまで混ぜ合わせる。次に、紙を敷いたマフィン型にバッターを注ぎ、３２５０Ｆで８〜９分間焼いた。次に、天板を回転させて、さらに８〜１０分焼いた。
【０２７９】
ケーキは、バターで作ったパウンドケーキとまったく同じように、ふっくら焼き上げたパンの構造を持ち、軽くてふわふわしたテクスチャを有していた。バターの代わりに１０％（ｗ／ｗ）の高脂質藻類粉末で作ったパウンドケーキは、焼いた食品内の藻類粉末又は藻類バイオマスの空気保有能又は気泡安定化能を示した。
【０２８０】
マカロニ・アンド・チーズ
高脂質藻類粉末又は藻類バイオマス及び脱脂藻類粉末（高脂質藻類粉末のＣＯ２抽出を通じて産生される）が、乳製品（酵素修飾チーズ（ＥＭＣ）及びバター／ミルク）のチーズ風味と滑らかさを増加する能力があるかどうかを調べるために、マカロニ・アンド・チーズを作った。マカロニ・アンド・チーズの処方は以下の通りである。すなわち、ＥＭＣチーズパウダー（６．３５％）、水（２１．２７％）、塩（０．２１％）、高脂質藻類粉末（３．８１％）、脱脂藻類粉末（０．３２％）、調理済みマカロニ（６７．９５％）、及び５０％の酢酸（０．１０％）を材料とする（最終製品の重量％で表示）。乾燥材料（マカロニ以外）を混ぜ合わせ、乾燥材料に水を加えた。次に、チーズミクスチャーをマカロニに絡めた。
【０２８１】
高脂質藻類粉末及び脱脂藻類粉末で作ったマカロニ・アンド・チーズの味は、ＥＭＣパウダー（箱入りのマカロニ・アンド・チーズ）で作ったマカロニ・アンド・チーズと類似していた。マカロニ・アンド・チーズを含む高脂質藻類粉末／脱脂藻類粉末は、滑らかなテクスチャ及び食感で、箱に記載の作り方（ミルク及びバターを使って）に従って調理したマカロニ・アンド・チーズに類似していた。この実施例は、高脂質藻類粉末又は藻類バイオマス及び脱脂藻類粉末が、バターとミルクの代替品として、クリーミーかつ強いチーズ風味を与えることを示した成功例である。マカロニ・アンド・チーズを含む藻類粉末の総脂肪含有量は、２％未満であった。
【０２８２】
高脂質藻類粉末を有する大豆ミルク
大豆ミルクが滑らかな口当たりと芳醇さを増加させるかどうかを、以下の処方で試験した。すなわち、０.５％、１％又は２％の高脂質藻類粉末（最終製品の重量パーセントとして）を含有する大豆ミルクである。また、藻類粉末を大豆ミルクに加えない場合のネガティブコントロールも試験した。藻類粉末を大豆に混ぜ、ハンドブレンダーを使用して、完全に混ざり合うまで攪拌した。藻類粉末を加えた場合は常に、大豆ミルクが芳醇で、「全脂肪」乳に近いテクスチャであった。さらに、藻類粉末を含む大豆ミルクは、（たとえ最低濃度であっても）、「豆のような」味はあまりしなかった。
【０２８３】
低脂肪肉パティ
高脂質藻類粉末又は藻類バイオマスの牛挽肉パティへの効果を、以下の処方で試験した。すなわち、０、０.５％、１％又は２％の高脂質藻類粉末を含む、９６％脂肪フリー牛挽肉パティ（最終製品の重量パーセントとして）である。８０％脂肪フリー牛挽肉をポジティブコントロールとして使用した。牛挽肉に藻類粉末を入れて十分混ぜ合わせてから、パティに成型した。他の材料は加えなかった。次に、パティを熱したフライパンで十分に調理した。９４％脂肪フリーのネガティブコントロールのパティは水分が少なく、肉／レバーの風味がした。８０％脂肪フリーのポジティブコントロールのパティは、水分を含み、柔らかいテクスチャで、肉／レバーの味はあまりしなかった。０.５％、１％及び２％の高脂質藻類粉末を含む９６％脂肪フリーの牛挽肉は、ネガティブコントロールのパティよりも水分を含み、柔らかいテクスチャであった。２％の高脂質藻類粉末パティのテクスチャは、ポジティブコントロールのそれと類似しており、肉／レバーの味は同じようにあまりしなかった。
【０２８４】
０、０.５％、１％又は２％の高脂質藻類粉末（最終製品の重量パーセントとして）を９９％脂肪フリーの七面鳥挽肉に入れた七面鳥挽肉パティも試験した。ポジティブコントロールとして、９３％脂肪フリー七面鳥挽肉で作られた七面鳥パティも作った。七面鳥挽肉に藻類粉末を入れて十分混ぜ合わせてから、パティに成型した。次に、パティを熱したフライパンで十分に調理した。９７％脂肪フリー七面鳥パティは水分が少なく、硬く、噛み応えがあった。９３％脂肪フリーのポジティブコントロール七面鳥パティは、よりジューシーで、ローストターキーの味がした。０.５％、１％及び２％の高脂質藻類粉末を含むパティは、ネガティブコントロールのパティよりも水分を含み、ジューシーなテクスチャであった。さらに。２％の高脂質藻類粉末パティは、ポジティブコントロールと類似したローストターキーの味がした。
【実施例１０】
【０２８５】
食品利用に適したその他の微細藻類株を同定する遺伝子型同定
藻類の遺伝子型同定
以下の通り、藻類バイオマスからゲノムＤＮＡを単離した。細胞（約２００ｍｇ）を、１４，０００ｘｇで５分間、液体培養液から遠心分離した。その後、細胞を滅菌蒸留水に再懸濁し、１４，０００ｘｇで５分間遠心分離し、上清を廃棄した。直径２ｍｍの単一のガラスビーズをバイオマスに加え、チューブを−８０℃で、少なくとも１５分間置いた。サンプルを採取し、１５０μｌの摩砕緩衝液（サルコシル１％、蔗糖０．２５Ｍ、５０ｍＭのＮａＣｌが、２０ｍＭのＥＤＴＡが、１００ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、０．５ｕｇ／ｕｌのＲナーゼＡ）を加えた。簡単に掻き混ぜ、その後４０μｌの５Ｍ  ＮａＣｌを加えて、ペレットを再懸濁した。サンプルを簡単に掻き混ぜ、さらに６６μｌの５％ＣＴＡＢ（セチルトリメチルアンモニウムブロミド）を加え、最後に簡単に掻き混ぜた。次に、サンプルを６５℃で１０分間インキュベートし、その後、１４，０００ｘｇで１０分間、遠心分離した。上清を新しいチューブに移し、３００μｌのフェノール：クロロホルム：イソアミルアルコールを１２：１２：１で一度抽出し、その後、１４，０００ｘｇで５分間遠心分離した。その結果得られた水相を、０．７ｖｏｌのイソプロパノール（〜１９０μｌ）を含む新しいチューブに移し、反転によって混合し、室温で３０分間又は４℃で一晩インキュベートした。ＤＮＡを、１４，０００ｘｇで１０分間遠心分離により回収した。次に、その結果得られたペレットを７０％エタノールで２度洗浄し、続いて１００％エタノールで最終洗浄を行った。ペレットを室温で２０〜３０分間空気乾燥させ、続いて、５０μｌの１０ｍＭトリス−Ｃｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）で再懸濁した。
【０２８６】
上記の通り調整された５μｌ藻類の全ＤＮＡを、１０ｍＭトリス、ｐＨ８．０で、１:５０に希釈した。最終体積２０μｌでＰＣＲ反応を以下のように設定した。１０μｌの２×ｉＰｒｏｏｆ  ＨＦマスターミックス（ＢＩＯ−ＲＡＤ社）を、０．４μｌのプライマーＳＺ０２６１３（１０ｍＭの貯蔵濃度で、５’−ＴＧＴＴＧＡＡＧＡＡＴＧＡＧＣＣＧＧＣＧＡＣ−３’（配列番号２４））に加えた。このプライマー配列は、GenBankアクセッション番号Ｌ４３３５７のポジション５６７〜５８８であり、高等植物及び藻類のプラスチドゲノムに高度に保存されている。その次に、０．４μｌのプライマーＳＺ０２６１５（１０ｍＭの貯蔵濃度で、５’−ＣＡＧＴＧＡＧＣＴＡＴＴＡＣＧＣＡＣＴＣ−３’（配列番号２５））を加えた。このプライマー配列は、GenBankアクセッション番号L43357のポジション１１１２〜１０９３に相補的であり、高等植物及び藻類のプラスチドゲノムに高度に保存されている。次に、５μｌの希釈された全ＤＮＡ及び３．２μｌのｄＨ２Ｏを加えた。以下の通り、ＰＣＲ反応を行った。すなわち、９８°Ｃ４５秒；９８°Ｃ８秒；５３°Ｃ１２秒；７２°Ｃ２０秒を３５サイクル、続いて、７２℃１分及び２５℃で維持した。ＰＣＲ産物の精製のために、２０μｌの１０ｍＭのトリスｐＨ８．０を各反応に加え、続いて、４０μｌのフェノール：クロロホルム：イソアミルアルコールを１２：１２：１で抽出し、掻き混ぜて、１４，０００ｘｇで５分間遠心分離した。ＰＣＲ反応をＳ−４００カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社）に応用し、３，０００ｘｇで２分間、遠心分離した。精製されたＰＣＲ産物を、その後ＰＣＲ８／ＧＷ／ＴＯＰＯへＴＯＰＯクローニングし、そして、ＬＢ／Ｓｐｅｃプレート上でポジティブクローンを選択した。精製されたプラスミドＤＮＡを、Ｍ１３フォワード及びリバースプライマーを用いて双方向にシークエンスした。配列アラインメント及び進化系統樹を、ジェニアス（Ｇｅｎｅｉｏｕｓ）ＤＮＡ解析ソフトウェアを用いて作成した。株１〜２３（実施例１で指定）の配列を、添付された配列表中に、それぞれ配列番号１〜２３として挙げた（すなわち、株１は配列番号１に相当、株２は配列番号２に相当等）。
【０２８７】
クロレラ・プロトセコイデスの９個の株由来の２３ＳｒＲＮＡのゲノムＤＮＡ解析
クロレラ・プロトセコイデス（ＵＴＥＸ２５、ＵＴＥＸ２４９、ＵＴＥＸ２５０、ＵＴＥＸ２５６、ＵＴＥＸ２６４、ＵＴＥＸ４１１、ＳＡＧ２１１  １０ｄ、ＣＣＡＰ２１１／１７、及びＣＣＡＰ２１１／８ｄ）の８個の株由来のゲノムＤＮＡを単離し、２３ＳｒＲＮＡのゲノムＤＮＡ解析を上記の方法に従って行った。試験されたクロレラ・プロトセコイデスの全株は、ＵＴＥＸ２５以外は、配列において同一であった。８個の株の配列は全て、添付の配列表中に配列番号２６及び２７として挙げられている。
【０２８８】
市販のクロレラサンプルの遺伝子型同定解析
３つの市販のクロレラサンプル、すなわち、クロレラ・レギュラリス（Ｎｅｗ  Ｃｈａｐｔｅｒ社、３９０ｍｇ／軟カプセル）、Ｗｈｏｌｅ  Ｆｏｏｄｓ社の壊れた細胞壁クロレラ（Ｗｈｏｌｅ  Ｆｏｏｄｓ社、５００ｍｇ／圧縮錠剤）及びＮｕｔｒｉＢｉｏｔｉｃ社のＣＧＦクロレラ（ＮｕｔｒｉＢｉｏｔｉｃ社、５００ｍｇ／圧縮錠剤）を、本明細書に記載の方法を用いて、遺伝子型を同定した。各市販のクロレラサンプルを約２００ｍｇをゲノムＤＮＡ単離のために滅菌蒸留水で再懸濁した。
【０２８９】
得られれたＰＣＲ産物を単離し、ベクターへクローニングし、Ｍ１３フォワード及びリバースプライマーを用いて配列した。配列は、ＢＬＡＳＴサーチを用いて、既知の配列と比較した。
【０２９０】
２３ｓｒＲＮＡ  ＤＮＡ配列により、３つの市販のクロレラサンプルのうち２つに、リングビア・アエスツアリイ（Ｗｈｏｌｅ  Ｆｏｏｄｓ社のＢｒｏｋｅｎ  Ｗａｌｌ  Ｃｈｒｏｌｌｅａ及びＮｕｔｒｉＢｉｏｔｉｃ  ＣＧＦ）と一致するＤＮＡ配列が存在することが分かった。リングビア・アエスツアリイは、海洋性シノバクテリアです。結果によると、市販の一部クロレラには、毒を作り出すとして既知のリングビア等の属の生物を含む、その他の汚染微生物種が含まれている。（例えば、Ｔｅｎｅｖａら、ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ、１８（１）１、ｐｐ．９−２０（２００３）；Ｍａｔｔｈｅｗら．、Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．、７１（６）：ｐｐ．１１１３−６（２００８）；及びＣａｒｍｉｃｈａｅｌら．、Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、６３（８）：ｐｐ．３１０４−３１１０（１９９７）を参照のこと）。
【実施例１１】
【０２９１】
食品利用に適した微細藻類バイオマスの色彩突然変異体
色彩突然変異体を生成する化学的突然変異誘発
実施例１に記載の方法及び条件に従って、クロレラ・プロトセコイデス（ＵＴＥＸ２５０）を生育した。Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトログアニジン（ＮＴＧ）を用いて、藻類株に化学的突然変異誘発を起こした。藻類培養を、突然変異源（ＮＴＧ）にさらし、その後、２．０％グルコース寒天平板培地で単離をラウンドを通じて選択した。コロニーをスクリーンして色彩突然変異体を調べた。クロレラ・プロトセコイデス（野生型）は、従属栄養的に生育された場合、金色となるようである。スクリーンは寒天平板培地に白色に見える株を１つ作り出した。この色彩突然変異体は、３３〜３５と名付けられた（２００９年１０月１３日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ  ２０１１０−２２０９）にて、ブダペスト条約に従って寄託された、特許受託番号ＰＴＡ−１０３９７）。別のコロニーも単離し、この突然変異が安定的であることを確認するために単離を３回繰り返した。この突然変異体は、寒天平板培地で、色は明るい黄色であり、２５〜３２と名付けた（２００９年１０月１３日に、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ  ２０１１０−２２０９）にて、ブダペスト条約に従って寄託された、特許受託番号ＰＴＡ−１０３９６）。
【０２９２】
クロレラ・プロトセコイデス３３〜５５の脂質プロフィール
実施例１に記載の方法及び条件に従って、クロレラ・プロトセコイデス３３〜５５及び親クロレラ・プロトセコイデス（ＵＴＥＸ２５０）を生育した。両株について脂質割合（乾燥細胞重量で）を決定した。すなわち、クロレラ・プロトセコイデス３３〜５５の脂質は６８重量％で、親株の脂質は６２重量％であった。両株について脂質プロフィールは以下の通りと判定した（領域％として表示）。クロレラ・プロトセコイデス３３〜５５については、Ｃ１４：０（０．８１）；Ｃ１６：０（１０．３５）；Ｃ１６：１（０．２０）；Ｃ１８：０（４．０９）；Ｃ１８：１（７２．１６）；Ｃ１８：２（１０．６０）；Ｃ１８：３（０．１０）；及びその他（１．６９）；親株については、Ｃ１４：０（０．７７）；Ｃ１６：０（９．６７）；Ｃ１６：１（０．２２）；Ｃ１８：０（４．７３）；Ｃ１８：１（７１．４５）；Ｃ１８：２（１０．９９）；Ｃ１８：３（０．１４）；及びその他（２．０５）。
【実施例１２】
【０２９３】
食品利用に公的な微細藻類バイオマスの培養のためのセルロース系フィードストック
クロレラ・プロトセコイデス（ＵＴＥＸ２５０）が非食品系炭素源を利用できるかどうかを評価するために、セルロース原料（爆砕したコーンストーバ）を、先の実施例に記載の任意の食品応用での利用に適したクロレラ・プロトセコイデスの従属栄養的培養の炭素源として利用するよう調整した。
【０２９４】
湿り気のある、爆砕したコーンストーバは、国立再生可能エネルギー研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｎｅｗａｂｌｅ  Ｅｎｅｒｇｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）（コロラド州ゴールデン）により、１．４％の硫酸溶液でコーンストーバを調理し、その結果生じたスラリーを脱水することにより調整された。Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  Ｍｏｉｓｔｕｒｅ  ａｎａｌｙｚｅｒにより、湿ったコーンストーバ中の乾燥固体は２４％であると判定された。１００ｇの湿ったサンプルを脱イオン水に再懸濁し、最終体積を４２０ｍｌとし、ｐＨは１０Ｎ  ＮａＯＨを使用して４．８とした。ＣｅｌｌｕｃｌａｓｔＴＭ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ社）（セルラーゼ）を最終濃度４％に加え、その結果得られたスラリーを５０℃で７２時間振りながらインキュベートした。次に、この物質のｐＨをＮａＯＨで７．５とし（無視できるほどの体積変化）、０．２２ｕｍフィルターを通じてフィルターを殺菌し、−２０℃で貯蔵した。下記の通り、シグマ（Ｓｉｇｍａ）社のヘキソキナーゼベースのキットを使用してグルコース濃度を判定するのに、サンプルを保存した。
【０２９５】
グルコース濃度の判定に、シグマ社のＧｌｕｃｏｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｒｅａｇｅｎｔ＃Ｇ３２９３を用いた。サンプルは、先にその概要を述べたように、４００倍に希釈し、４０μｌを反応物に加えた。コーンストーバのセルロース調整物には、約２３ｇ／Ｌのグルコースが含まれていると判定された。
【０２９６】
酵素処理及びセルロース、キシロース及びその他の単糖のグルコースへの糖化の後、先に調整された物質を、実施例１に記載の媒体を用いて、クロレラ・プロトセコイデス（ＵＴＥＸ２５０）の生育をフィードストックとして評価した。純粋なグルコースと混ぜ合わされたセルロース糖の多様な濃度を試験した（０、１２．５、２５、５０及び１００％のセルロース糖）。細胞を、暗室の中で、多様な濃度のセルロース糖上で、２８℃で振りながら（３００ｒｐｍ）インキュベートした。ＵＶ分光光度計で、７５０ｎｍの光吸収度を測定することにより、生育度を測った。クロレラ・プロトセコイデス培養菌は、発酵性糖１００％がセルロース由来である培地条件を含む、セルクラスト（Ｃｅｌｌｕｃｌａｓｔ）調整によるコーンストーバ上で生育した。セルロース系フィードストックとして、アセレラーゼ処理の甜菜パルプを使用して、類似の実験を行った。コーンストーバ材料で得られた結果同様、クロレラ・プロトセコイデス培養菌はすべて、セルロース由来の糖を炭素源として利用することができた。
【実施例１３】
【０２９７】
藻類粉末が食品組成物の食感を改善し、テクスチャを向上させる
ショートブレッドクッキー
全脂肪含有量が約２０％の藻類粉末含有ショートブレッドクッキーを、以下の調理法に従って作った。藻類粉末を含まず、全脂肪含有量が約２０％であるショートブレッドクッキーも、以下の調理法を利用して作った（対照として）。藻類粉末で作られたクッキーは、パネルにより、藻類粉末無しで作ったクッキーよりもバターっぽくかつ芳醇な風味であると判定された。
【表６】
0005865894.tif 000007
クッキーは、対流式オーブンで、３２５０Ｆで７分間焼いた。
【０２９８】
チョコレートアイスクリーム
全脂肪含有量が約１０％の藻類粉末含有チョコレートアイスクリームを、以下の調理法に従って作った。藻類粉末を含まない、全脂肪含有量が約１０％であるチョコレートアイスクリームも、以下の調理法に従って作った（対照として）。藻類粉末で作ったチョコレートアイスクリームは、パネルにより、藻類粉末無しで作ったチョコレートアイスクリームよりも芳醇で、滑らかで、クリーミーであると判定された。藻類粉末で作られたアイスクリームは、パネルにより、脂肪がより高いことが認められた。他の材料の痕跡量に関しては、以下に加えた。
【表７】
0005865894.tif 000008
【０２９９】
作り方
１．材料をすべて以下のｏｒｆｅｒに入れた。ペーストリーナイフを用いて、藻類粉末、安定剤及び糖を掻き混ぜた。次にココアを加え、混ぜ合わせた物を脇に置いた。
２．コーンシロップ、スキムミルク及び乳固形分を混ぜ合わせ、上記（１）の乾燥混合物に入れて混ぜ合わせる。最後にクリームを加えた。
３．混ぜ合わせた物を、ガラスボールに入れて蓋をし、電子レンジオーブンで１８０oＦに熱した。２分毎に温度をチェックし、混合物を掻き混ぜた。混合物が１８０oＦに達したら、電子レンジオーブンを消した。代替として、混合物を二重鍋で、温度が１５０oＦになるまで熱することもできる。
４．次に、ＧＥＡグループのＮｉｒｏＳｏａｖｉ社のＰａｎｄａ  Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒを用いて、混合物を１８０／３０バールで均質化した。
５．次に、混合物を、一般的には一晩冷蔵し、風味を加え、アイスクリーム器を動作させた。
【表８】
0005865894.tif 000009
【０３００】
作り方
アイスクリームを、上記の通り、藻類粉末を入れずに作った。
【０３０１】
マヨネーズ
藻類粉末含有マヨネーズを、以下の調理法に従って作った。藻類粉末を含まないマヨネーズも、以下の調理法に従って作った（対照として）。藻類粉末で作ったマヨネーズは、パネルにより、藻類粉末を含まない広く市販されているマヨネーズに類似したクリーミーなテクスチャを有すると判定された。藻類粉末入りマヨネーズのとろける風味及び本体は、むらがなく、藻類粉末無しのマヨネーズよりも長持ちする。
【表９】
0005865894.tif 000010
【０３０２】
作り方
１．藻類粉末を水と混ぜて分散物を形成させ、脇に置いた。
２．残りの乾燥材料を混ぜ（砂糖、乾燥マスタード、塩）、脇に置いた。
３．別のボールで、まず卵黄を打ち、上記ステップ２の乾燥材料と混ぜた。
４．ステップ１の藻類粉末の分散物を、ステップ３の混合物に混ぜた。
５．ビネガー及び５０％レモンジュースをまず別のボールに合わせ、ステップ４の混合物に入れて泡立てた。
６．ステップ５の混合物を混ぜ合わせ、一度に２，３滴、ゆっくりと油を加え、混合物に厚みが加わるまで繰り返した。
７．いったん乳濁液が形成されると、残りの油（約50％）を加え、さらに乳濁液を混ぜ合わせた。次に、残りのレモン汁を加え、乳濁液をさらに混ぜ合わせた。もし乳濁液が厚すぎる場合は、任意選択的に熱水を加えてもよい。
８．マヨネーズを一晩冷蔵した。
【表１０】
0005865894.tif 000011
【０３０３】
作り方
マヨネーズを上記のように作ったが、藻類粉末を加えなかった。
【０３０４】
サラダドレッシング
藻類粉末含有サラダドレッシングを、以下の調理法に従って作った。小売りのドレッシング、１％又は３％の藻類粉末を加えた。藻類粉末を含まない小売りのドレッシングを対照ドレッシングとした。藻類粉末で作ったサラダドレッシングは、パネルにより、藻類粉末無しのサラダドレッシングよりも芳醇かつクリーミーで、風味が増したと判定された。藻類粉末含有サラダドレッシングは、藻類粉末無しのサラダドレッシングよりも脂肪が高いことが認められた。
【表１１】
0005865894.tif 000012
【実施例１４】
【０３０５】
ミルクタンパク質との相互作用
ミルクに含まれるタンパク質はカゼインとホエイである。藻類粉末又は藻類バイオマスは、ミルク及びミルクタンパク質と相互作用し、特定の食品の食感を改善する。
【０３０６】
藻類粉末とホエイを組み合わせて使用すると、実施例９の藻類飲料の口当たりを改善した。実施例９で開示された飲料を以下に記載のとおり修飾した。ホエイを藻類飲料に加えると、飲料の口当たりが改善された。Ｇｏｌｄｅｎ  Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ  Ｈｉｇｈ  ｐｒｏｔｅｉｎ（市販品）等、その他のタンパク質もまた、口当たりの改善を示した。それとは対照的に、大豆タンパク質、豆タンパク質を加えても藻類飲料の口当たりは改善されなかった。
【０３０７】
同様に、藻類粉末又は藻類バイオマスとミルクの相互作用により、ミルク、例えば、クリームベースのスープ、コーヒーや紅茶のクリーマー、乳製品ベース飲料、ヨーグルト、アイスクリーム、シャーベット（ｓｈｅｒｂｅｔ）、シャーベット（ｓｏｒｂｅｔ）等を含む食品の材料の食感を改善する。
【表１２】
0005865894.tif 000013
【０３０８】
作り方
水を容器に加え、残りの材料をリストの順番に従って、掻き混ぜながら加えた。液体を、Ｂａｌｃｈのホモジェナイザーで、１回のパスで３００〜４００バールの圧力で、均質化した。均質化した液体を適切な容器に移し、冷蔵した。
【実施例１５】
【０３０９】
藻類粉末含有食品材料の賞味期限の延長
シュガークッキー
藻類粉末含有シュガークッキーを、以下の調理法に従って作った。藻類粉末を含まないシュガークッキーも、以下の調理法に従って作った。両処方において脂肪総量が同じになるよう、従来のクッキー処方から卵黄を除き、バターの量を減らすことで３％の藻類粉末シュガークッキーの処方を調整した。一定の期間、クッキーをホイル包みで貯蔵し、センサーパネルにより、３日後及び３ヶ月後の評価を行った。藻類粉末を含まないクッキーは、３日後に腐りかけ、粘っこくなっており、３ヶ月後にはまったく食べられない状態になっていた。藻類粉末含有クッキーは、３日後及び３ヶ月後双方とも、もさくさくしたままで、食べられる状態であった。
【表１３】
0005865894.tif 000014
【０３１０】
作り方
１．乾燥材料の小麦粉、塩、ベーキングソーダ及びベーキングパウダーを混ぜて、脇に置いた。
２．藻類粉末と砂糖を、パドルアタッチメント（ｐａｄｄｌｅ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）キッチン・エイド・ミキサー（Ｋｉｔｃｈｅｎ  Ａｉｄ  ｍｉｘｅｒ）にゆっくり加えて、ショートニングを泡立たせた。
３．ゆっくりとしたスピードでミキサーを回し（１又は２）、水とバニラエッセンをゆっくり加えた。水とバニラエッセンス全て加えたら、ミキサーのスピードを上げて中程度にし、２分間混ぜ合わせた。
４．次に、卵を加え、混合物を中程度のスピードで２分間混ぜ合わせた。
５．ステップ１で混ぜた乾燥材料を、ステップ４の混合物にゆっくりと加え、最初は混合スピードを低にし、その後、６〜８に挙げて約２〜３分間掻き混ぜて生地を作った。
６．ベーキングシートに油を噴霧し、ステップ６の生地を流し込んで８ｍｍの厚さとし、３５０oＦで７〜９分間焼いた。
【０３１１】
クラッカー
藻類粉末含有クラッカーは、以下の調理法に従って、アメリカ製パン研究所（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂａｋｉｎｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）により作られた。藻類粉末を含まないクラッカーも、以下の調理法に従って作られた。藻類粉末含有クラッカーを作るにあたり、クラッカーに加えられる脂肪が、藻類粉末を含まない全脂肪対照処方に比べて、約３３％〜５０％減少するよう、ショートニングと藻類粉末の利用値を調整した。生地の特性への影響を評価するために、混合手順を試験した。混合過程において、藻類粉末の生地への添加を遅くすると、その結果、生地に加えられる水分総量が経った。手順を修正して、藻類粉末以外の全ての材料をボールに入れて、スピード１で２分間混ぜ合わせ、材料を一緒に混ぜた。その後、混ぜ合わせるスピードを２に代えて、４分間混ぜ合わせた。次に、藻類粉末を加え、さらに８分間混ぜ合わせた。
【０３１２】
藻類粉末含有クラッカーのテクスチャは、全脂肪の、藻類粉末を含まないクラッカーと同じであった。パネルによると、藻類粉末で作られたクラッカーは、「さくさく感が増し」、藻類粉末無しで作られれたクラッカーよりも好ましい風味とテクスチャであった。
【０３１３】
一定の期間、クラッカーをホイル包みで貯蔵し、パネルにより、３０日後及び４ヶ月後の評価を行った。藻類粉末を含まないクッキーは、３０日後に腐りかけ、粘っこくなっており、４ヶ月後にはまったく食べられない状態になっていた。藻類粉末含有クッキーは、４ヶ月後貯蔵後もさくさくしたままで、食べられる状態であった。
【表１４】
0005865894.tif 000015
【０３１４】
作り方
藻類粉末以外の全ての材料をパドル付きのホバート・フロアー・ミキサー（Ｈｏｂａｒｔ  ｆｌｏｏｒ  ｍｉｘｅｒ）に入れて、２分間スピード１で混ぜ合わせ、生地を作った。ミキサーのスピードをスピード２に挙げ、４分間混ぜ合わせた。次に、藻類粉末を生地に加え、スピード２でさらに８分間混ぜ合わせた。オーブンのメッシュバンド、ゾーン１（トップは４５０℃、ボトムは４３０℃、ダンパーを閉じる／閉じる）、ゾーン２（トップは４２５℃、ボトムは４００℃、ダンパーを開く／開く）、又はゾーン３（トップは４１５℃、ボトムは３７５℃、ダンパーを開く／開く）で、生地が黄金色になるまで焼いた。クラッカーの水分含有量は約３％であった。
【実施例１６】
【０３１５】
藻類粉末を含むスプレッドバター製品及び藻類粉末を含むスプレッドマーガリンを、以下の調理法に従って作った。スプレッドバターは、藻類粉末とバターをミキサーに入れて高速で泡立て、その後で、水をゆっくりと藻類粉末とバターの混合物に、高速で掻き混ぜながら加えた。スプレッドマーガリンを、藻類粉末とヤシ油をミキサーに入れて高速で泡立てた。次に、塩を見ずにとかし、塩水を調整した。その後、塩水をゆっくりと藻類粉末とヤシ油の混合物に、高速で掻き混ぜながら加えた。藻類粉末含有スプレッドのテクスチャ及び風味は、藻類粉末無しの、全脂肪バター及びマーガリンスプレッドと類似していた。
【表１５】
0005865894.tif 000016
【実施例１７】
【０３１６】
藻類油及び脱脂藻類粉末の組み合わせ
以下に示した、藻類粉末を使用した以外のクッキーの処方において、当量の脱脂藻類粉末及び藻類油を使用してクッキーを作った。脱脂藻類粉末及び藻類油で作ったクッキーを藻類粉末で作ったクッキーと比較した。パネルによりクッキーを評価した。藻類粉末で作ったクッキーの方が、味が良く、甘く、噛み応えのある食感で、バター風味が強いことが認められた。さらに、脱脂藻類粉末及び藻類油で作ったクッキーの色は、藻類粉末で作ったクッキーとは異なる色をしていた。非均一な食品においては、脱脂藻類粉末及び藻類油を利用することで、藻類粉末を利用した場合と比べて質の悪い物ができた。
【表１６】
0005865894.tif 000017
【０３１７】
作り方
１．中力粉、塩、ベーキングソーダ、ベーキングパウダー及びエッグステンド（eggstend）を混ぜ、脇に置いた。
２．砂糖及び藻類粉末を泡立て器付きのキッチン・エイド・ミキサー（Ｋｉｔｃｈｅｎ  Ａｉｄ  ｍｉｘｅｒ）で５分間混ぜ合わせた。
３．低スピード（１〜２）のミキサーで、上記２のステップの混合物にゆっくりと水を加えた。
４．低スピード（１〜２）のミキサーで、上記３のステップの混合物にゆっくりとバニラエッセンスを加え、生地を形成した。
５．生地を１時間冷蔵した。代替として、生地をより長い時間冷蔵することもでき、例えば、最大２〜４日冷蔵するか、又は後の利用のために凍らせることもできる。
６．クッキーシートに油を噴霧した。
７．生地をすくって、円盤状に成形し、クッキーシートの上に置いた。各クッキーの重さは約１５グラムであった。
８．クッキーを、約６分から９分、３２５０Ｆで焼いた。約６分間焼いたクッキーは、「柔らかい」テクスチャのクッキーとなった。より長い時間焼いたクッキーは、さくさくして、色が濃くなった。
【０３１８】
実施例９に記載の藻類飲料処方において、藻類粉末を使用する代わりに、当量の脱脂藻類粉末及び藻類油を使用して、均質化した飲料を作った。パネルにより、脱脂藻類粉末及び藻類油で作った飲料は、藻類粉末で作った飲料に相当すると判定された。
【実施例１８】
【０３１９】
非藻類油及び非藻類繊維の組み合わせ
実施例１７に記載のクッキー及び飲料を、キャノーラ油及びオート麦繊維を使用して作った。飲料及びクッキー双方とも、キャノーラ油及びオート麦繊維の組合せは、藻類粉末で作った飲料及びクッキーの結果を再現しなかった。キャノーラ油及びオート麦繊維を使用すると、質の悪い飲料及びクッキーが作られた。
【０３２０】
２００９年１０月１４日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６０６９２号「微細藻類バイオマスの食物組成物」、２０１０年４月１４日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／３１０８８号「新規微細藻類食物組成物」、及び、２０１０年４月１４日米国仮出願第６１／３２４，２８５号「油質酵母の食物組成物」はそれぞれ、あらゆる目的のため、その全てを参照により本明細書に含めるものとする。
【０３２１】
特許文献、特許出願書類、及び刊行物等、本明細書で引用されるすべての文献は、先に具体的に含めたか否かに関わらず、これによって、その全体を引用により含めるものとする。本明細書で言及される刊行物は、本発明に関連して使用される可能性のある試薬、方法及び概念を記載及び開示する目的で引用される。本明細書に記載の何ものも、これらの引用文献が本明細書に記載の発明に関連する先行文献であることを認めるものとして解釈されるべきではない。
【０３２２】
本発明は、その具体的な実施形態と関連して説明されているが、さらなる一部修正が可能であると理解されるべきであろう。本願は、一般に、本発明の原則に従い、本発明が関連する先行技術内で既知の又は慣習的実践内であるような、かつ、これより先に記載された本質的特徴に応用し得るような本開示からの派生を含む、本発明の任意のバリエーション、利用法、又は適応を網羅することを意図している。本明細書に記載の実施例及び実施形態は、説明のみを目的とするものであり、その観点からの多様な部分的修正又は変更は、当業者に対して提示されるものであり、本願及び添付のクレームの精神及び範囲内に含まれるべきものと理解される。
【０３２３】
【表１７−１】
0005865894.tif 000018
【０３２４】
【表１７−２】
0005865894.tif 000019
【０３２５】
【表１７−３】
0005865894.tif 000020
【０３２６】
【表１７−４】
0005865894.tif 000021
【０３２７】
【表１７−５】
0005865894.tif 000022
【０３２８】
【表１７−６】
0005865894.tif 000023
【０３２９】
【表１７−７】
0005865894.tif 000024
【０３３０】
【表１７−８】
0005865894.tif 000025
【０３３１】
【表１７−９】
0005865894.tif 000026
【０３３２】
【表１７−１０】
0005865894.tif 000027
【配列表】
0005865894000001.app