(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
５−アミノレブリン酸、若しくはそのメチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、ブチルエステル、及びペンチルエステルから選ばれるエステル類、又はそれらの塩を含む組成物であって、波長４８０〜５８０ｎｍの励起光を照射する、皮下性のがんの光線力学的治療、又はセンチネルリンパ節の光線力学的診断のための組成物。
【請求項２】
波長５００〜５３０ｎｍの励起光であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光増感剤又は５−アミノレブリン酸類を用いる光線力学的治療に関し、より詳しくは、光増感剤又は５−アミノレブリン酸類を投与後、波長４８０〜５８０ｎｍの励起光を照射する光線力学的治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
光線力学的療法は、光増感剤を投与し、患部に集積させ、光励起により生成される一重項酸素をはじめとする活性酸素種の殺細胞性を利用した治療法である。この光線力学的療法は、非侵襲的かつ治療痕が残りにくい治療法であるため、近年注目を集めている。また、光増感剤として用いられているものの多くはテトラピロールと呼ばれる構造を持ち、波長４００ｎｍ付近に特徴的に高い吸光度を示す吸光スペクトルのピークや、波長６００〜７００ｎｍ付近に吸光スペクトルのピークをもち、腫瘍組織や新生血管へ特異的に集積することが知られている。光増感剤の吸光スペクトルのピークに対応する光を励起光として、腫瘍組織や新生血管に集積した光増感剤に照射することで生ずる一重項酸素が腫瘍組織や新生血管の細胞を変性・壊死させることができると考えられており、４００ｎｍ付近の短波長の光照射により、にきび等の皮膚表面の疾患の治療が、６００〜７００ｎｍ付近の比較的組織深達性が良い長波長の光照射によりがん治療等が行われている（例えば、特許文献１参照）。【０００３】
他方、５−アミノレブリン酸（以下「ＡＬＡ」ともいう）は動物や植物や菌類に広く存在する、生体内に含まれる天然アミノ酸の一種であるが、ＡＬＡはそれ自体には光感受性はないものの、細胞内でヘム生合成経路の一連の酵素群により代謝活性化されたプロトポルフィリンＩＸ（以下「ＰｐＩＸ」ともいう）が４１０ｎｍ、５４５ｎｍ、５８０ｎｍ、６３０ｎｍ等にピークがある光増感剤として知られており（非特許文献１）、がん細胞内にＰｐＩＸを蓄積させた後に、６００〜７００ｎｍ付近の励起光を照射することにより疾患部位の細胞を変性・壊死させる、５−アミノレブリン酸−光線力学的療法（以下「ＡＬＡ−ＰＤＴ」ともいう）の研究が進められている（例えば、特許文献２〜９参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１１−００１３０７号公報
【特許文献２】特開２０１０−１６３４４５号公報
【特許文献３】特開２００８−２０８０７２号公報
【特許文献４】特開２００７−０１５９３８号公報
【特許文献５】特開２００６−１８２７５３号公報
【特許文献６】特開２００５−３５０４１８号公報
【特許文献７】特開２００５−３４９０２８号公報
【特許文献８】特開２００５−１３２７６６号公報
【特許文献９】特開平１１−０１２１９７号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】マルホ皮膚科セミナー「光線力学療法（ＰＤＴ）」２０１０年２月２５日放送、第２５回日本皮膚悪性腫瘍学会(2)  ワークショップ２より、松本義也
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
光線力学的療法（ＰＤＴ）や光線力学的診断（ＰＤＤ）における励起光の組織深達性を阻害する要因は、主として脂肪、ヘモグロビン、メラニン等であるとされている。一般に、波長４００ｎｍ付近の光は、エネルギーが高いため光増感剤の励起には適しているが、組織深達性は低い。また、例えば、生体における光の深達を阻害するヘモグロビンの吸光スペクトルに関する図１（R.R. Andersonet al. J. invest dermatol 77, 13-19 (1981)）からも明らかなとおり、波長４００ｎｍ付近の光はヘモグロビンによる吸光作用を強く受けるため、光の深達性は、より一層低くなる。したがって、波長４００ｎｍ付近の光は、表層部位の診断や治療においては効率的であるが、血液や脂肪組織を通過することができないため、血液や脂肪に包まれた皮下性のがんやリンパ節等のある程度の深達性が必要な部位の診断や治療に用いることは困難であった。【０００７】
また、同じく図１からも明らかな通り、ヘモグロビンの吸光作用は、６００ｎｍより長波長側の領域において低いことが知られているが、６００ｎｍより長波長側の光は、深達性は比較的高いが、エネルギーが低く、光増感剤の励起という点では効率が悪い。そのためＰＤＴに際しては大きな光パワー密度を有する光を用いても長い光照射時間が必要となり、患者にとって負担となっていた。【０００８】
本発明の課題は、患者の負担を減らすとともに、血管や脂肪に包まれた皮下性のがんやリンパ節等、ある程度の深達度が必要な部位の診断や治療に適したＰＤＴやＰＤＤを提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、前記図１より、ヘモグロビンやビリルビン等の生体由来色素の吸光度が４８０〜５８０ｎｍ付近で低くなっていることに着目し、生体表面を想定したヘモグロビンの遮光を行わない場合と、生体内部を想定したヘモグロビンの遮光を行なった場合とについて、各波長について、がん細胞の殺細胞効果について検討した。ヘモグロビンの遮光を行わない場合は、各波長における光パワー密度の差が生じないのに対し、ヘモグロビンによる遮光を行った場合には、４０２ｎｍの光においては光パワー密度がゼロになり、５０２〜５２９ｎｍの波長においても、６３６ｎｍの光と比較すると顕著に低い値を示した（図３参照）。また、ヘモグロビンの遮光を行わない場合は、６３６ｎｍよりも５０２〜５２９ｎｍ、５０２〜５２９ｎｍよりも４０２ｎｍの光のほうが殺細胞効果は高かったが、驚くべきことに、ヘモグロビンの遮光を行った場合でも、５０２〜５２９ｎｍの波長での殺細胞効果は、６３６ｎｍの光よりも高いかほぼ同じであり、５０２〜５２９ｎｍの波長を用いると、光パワー密度が低くても、治療効果が高いであろうことを見いだした。【００１０】
すなわち、本発明は、（１）５−アミノレブリン酸、若しくはそのメチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、ブチルエステル、及びペンチルエステルから選ばれるエステル類、又はそれらの塩を含む組成物であって、波長４８０〜５８０ｎｍの励起光を照射する、皮下性のがんの光線力学的治療、又はセンチネルリンパ節の光線力学的診断のための組成物や、（２）波長５００〜５３０ｎｍの励起光であることを特徴とする上記（１）記載の組成物に関する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の５００ｎｍ付近の光を用いることにより、６００ｎｍより長波長側の光を用いる場合よりも、光増感剤を効率よく励起することが可能になり、ＰＤＴやＰＤＤの効果向上、治療・診断時間の短縮が可能となるとともに、４００ｎｍの光が深達できない部位におけるＰＤＴやＰＤＤが可能となった。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】生体における光の深達を阻害するヘモグロビンの吸光スペクトルに関する図である。
【図２】ヘモグロビンによる遮光の有無における、波長の相違によるＡＬＡ−ＰＤＴの殺細胞効果の結果を示す図である。
【図３】ヘモグロビンによる遮光の有無における、波長の相違による光パワー密度の測定結果を示す図である。
【図４】マウスにおける、波長の相違によるＡＬＡ−ＰＤＴの殺がん細胞効果に関するヘマトキシリン・エオシン染色の結果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、光増感剤又は５−アミノレブリン酸類を含む組成物であって、波長４８０〜５８０ｎｍ、好ましくは波長５００〜５３０ｎｍの励起光を照射するＰＤＴやＰＤＤのための組成物や、光増感剤又は５−アミノレブリン酸類を投与後、波長４８０〜５８０ｎｍ、好ましくは波長４９０〜５７０ｎｍ、より好ましくは波長５００〜５５０ｎｍ、さらに好ましくは５００〜５３０ｎｍの励起光を照射する光線力学的治療法に関し、ＰＤＴの対象としては、疣、子宮頸部がん、皮膚がん、甲状腺がん、悪性脳腫瘍などの表在性のがんや皮下性のがん、中でも皮下数ｍｍのがんを好適に例示することができ、ＰＤＤの対象としては、センチネルリンパ節を好適に例示することができる。また、ＰＤＤにより摘出前リンパ節転移診断を行うことが可能になる。
【００１５】
可視光を吸収して蛍光を発し、また、活性酸素を発生することができる上記光増感剤としては、ＰＤＴやＰＤＤに使用されている光増感剤であればすべて使用することができるが、中でもテトラピロール系化合物を好適に例示することができ、具体的には、フォトフリン、レザフリン、プロトポルフィリンIX、フォスキャン、クロリン、ウロポルフィリンI、ウロポルフィリンIII、ヘプタカルボキシルポルフィリンI、ヘプタカルボキシルポルフィリンIII、ヘキサカルボキシルポルフィリンI、ヘキサカルボキシルポルフィリンIII、ペンタカルボキシルポルフィリンI、ペンタカルボキシルポルフィリンIII、コプロポルフィリンI、コプロポルフィリンIII、イソコプロポルフィリン、ハルデロポルフィリン、イソハルデロポルフィリン、ヘマトポルフィリン、メソポルフィリン、エチオポルフィリン、ピロポルフィリン、デューテロポルフィリンIX、ペンプトポルフィリン、ＡＴＸｓ−１０等を挙げることができる。また、投与量は可視光でのＰＤＴで推奨される量と同量である。
【００１６】
本発明において５−アミノレブリン酸類（ＡＬＡ類）とは、５−アミノレブリン酸（ＡＬＡ）若しくはその誘導体、又はこれらの塩をいう。ＡＬＡは公知の化合物であり、それ自身は可視光の吸収も弱く光照射で蛍光も活性酸素も発生しないが、投与後体内で光増感物質であるプロトポルフィリンに代謝されるため光増感剤として有利に作用する。ＡＬＡ類を投与した場合のプロトポルフィリンIXの蓄積は、がん、異形成、細菌・真菌感染部位、ウイルス感染細胞などの病変部に特異的であり、また、ＡＬＡ類は安全性も高い化合物であるためもっとも有望な光増感剤として作用する。
【００１７】
ＡＬＡやその誘導体は、下記式（Ｉ）で示される（式中、Ｒ１は、水素原子又はアシル基を表し、Ｒ２は、水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基を表す）。
【化１】
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ＡＬＡ類の中でも式（Ｉ）のＲ１及びＲ２が共に水素原子の場合であるＡＬＡ又はその塩を好適に例示することができる。ＡＬＡは、δ−アミノレブリン酸とも呼ばれるアミノ酸の１種である。また、ＡＬＡ誘導体としては、式（Ｉ）のＲ１が水素原子又はアシル基であり、式（Ｉ）のＲ２が水素原子、直鎖若しくは分岐状アルキル基、シクロアルキル基、アリール基又はアラルキル基である、５−ＡＬＡ以外の化合物を挙げることができる。
【００１８】
式（Ｉ）におけるアシル基としては、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イソバレリル、ピバロイル、ヘキサノイル、オクタノイル、ベンジルカルボニル基等の直鎖又は分岐状の炭素数１〜８のアルカノイル基や、ベンゾイル、１−ナフトイル、２−ナフトイル基等の炭素数７〜１４のアロイル基を挙げることができる。
【００１９】
式（Ｉ）におけるアルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル基等の直鎖又は分岐状の炭素数１〜８のアルキル基を挙げることができる。
【００２０】
式（Ｉ）におけるシクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロドデシル、１−シクロヘキセニル基等の飽和、又は一部不飽和結合が存在してもよい、炭素数３〜８のシクロアルキル基を挙げることができる。
【００２１】
式（Ｉ）におけるアリール基としては、フェニル、ナフチル、アントリル、フェナントリル基等の炭素数６〜１４のアリール基を挙げることができる。
【００２２】
式（Ｉ）におけるアラルキル基としては、アリール部分は上記アリール基と同じ例示ができ、アルキル部分は上記アルキル基と同じ例示ができ、具体的には、ベンジル、フェネチル、フェニルプロピル、フェニルブチル、ベンズヒドリル、トリチル、ナフチルメチル、ナフチルエチル基等の炭素数７〜１５のアラルキル基を挙げることができる。
【００２３】
上記ＡＬＡ誘導体としては、Ｒ１が、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル基等である化合物や、上記Ｒ２が、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル基等である化合物が好ましく、上記Ｒ１とＲ２の組合せが、ホルミルとメチル、アセチルとメチル、プロピオニルとメチル、ブチリルとメチル、ホルミルとエチル、アセチルとエチル、プロピオニルとエチル、ブチリルとエチルの組合せなどを好適に例示することができる。
【００２４】
ＡＬＡ類は、生体内で式（Ｉ）のＡＬＡ又はその誘導体の状態で有効成分として作用すればよく、投与する形態に応じて、溶解性を上げるための各種の塩、エステル、または生体内の酵素で分解されるプロドラッグ（前駆体）として投与することができる。例えば、ＡＬＡ及びその誘導体の塩としては、薬理学的に許容される酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩等を挙げることができる。酸付加塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、リン酸塩、硝酸塩、硫酸塩等の各無機酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、トルエンスルホン酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、グリコール酸塩、メタンスルホン酸塩、酪酸塩、吉草酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩等の各有機酸付加塩を例示することができる。金属塩としては、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等の各アルカリ金属塩、マグネシウム、カルシウム塩等の各アルカリ土類金属塩、アルミニウム、亜鉛等の各金属塩を例示することができる。アンモニウム塩としては、アンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩等のアルキルアンモニウム塩等を例示することができる。有機アミン塩としては、トリエチルアミン塩、ピペリジン塩、モルホリン塩、トルイジン塩等の各塩を例示することができる。なお、これらの塩は使用時において溶液としても用いることができる。
【００２５】
以上のＡＬＡ類のうち、望ましいものは、ＡＬＡ、及びＡＬＡメチルエステル、ＡＬＡエチルエステル、ＡＬＡプロピルエステル、ＡＬＡブチルエステル、ＡＬＡペンチルエステル等の各種エステル類、並びに、これらの塩酸塩、リン酸塩、硫酸塩であり、ＡＬＡ塩酸塩やＡＬＡリン酸塩を特に好適に例示することができる。
【００２６】
以上のＡＬＡ類は、水和物又は溶媒和物を形成していてもよく、またいずれかを単独で又は２種以上を適宜組み合わせて用いることができる。また、ＡＬＡ類は、化学合成、微生物による生産、酵素による生産のいずれの方法によって製造したものも用いることができる。
【００２７】
上記ＡＬＡ類を水溶液として調製する場合には、ＡＬＡ類の分解を防ぐため、水溶液がアルカリ性とならないように留意する必要がある。アルカリ性となってしまう場合は、酸素を除去することによって分解を防ぐことができる。
【００２８】
本発明の組成物には、光増感剤やＡＬＡ類には、安定化剤、分散剤、溶剤、増量剤、栄養剤、賦形剤等の担体が必要に応じて加えられている。配合される担体としては、摂取するために適した有機または無機の固体または液体の、通常は不活性な製薬学的に許容できる担体材料が用いられ、具体的には、担体には例えば結晶性セルロース、ゼラチン、乳糖、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、タルク、植物性および動物性脂肪および油、ガム、ポリアルキレングリコール等を挙げることができる。本発明の組成物を治療剤として用いる場合の剤型としては、注射剤、点滴剤、膀胱内注入剤、錠剤、カプセル剤、細粒剤、シロップ剤、発布剤、座薬等を例示することができる。
【００２９】
上記テトラピロール系の光増感剤の多くは静脈内注射や点滴で投与される。他方、上記ＡＬＡ類は静脈内注射や点滴に限らず、舌下投与も含む経口投与、パップ剤等による経皮投与、座薬、膀胱内注入などの各種の投与形態が適用可能であるが、患者の負担を考えると経口投与が有利である。また、ＡＬＡ類の投与量は、ＡＬＡ塩酸塩換算で、体重１ｋｇあたり、１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは１０ｍｇ〜５０ｍｇ、より好ましくは１５ｍｇ〜２５ｍｇ、さらに望ましくは２０ｍｇである。
【００３０】
他方、通常のＡＬＡ類や光増感剤を用いるＰＤＤの場合、励起効率の高い紫色の可視光を照射して光増感物質のソーレーバンドで吸収し、発生する赤色蛍光で患部を診断する。一般に浅い部位の診断や手術中の切除部位の決定などに使われる技術であるために、光深達度の低い紫色の光でも問題がないように思われるが、実際の手術などでは患部の表層に脂肪組織が存在する場合が多く、紫色可視光は脂肪で吸収されてしまうため、光増感物質を励起することができない。現実には、例えばセンチネルリンパ節のがん転移などをＰＤＤする場合は切除した後切断し、切断面を観察する必要がある。
【００３１】
本発明の光線力学的診断剤を用いたＰＤＤの場合、照射する励起光は波長４８０〜５８０ｎｍの光であるため皮膚や薄い脂肪組織を透過でき、皮膚や脂肪の上からでも十分観察できる。このように切除することなく観察できることはＱＯＬ上の福音となる。
【００３２】
波長４８０〜５８０ｎｍの励起光を照射する光源としては、公知のものを使用することができ、例えばＬＥＤ、好ましくはフラッシュライト型ＬＥＤや、半導体レーザー等のレーザー光を挙げることができるが、装置がコンパクトになり、コスト面や可搬性において有利であるＬＥＤ、中でもフラッシュライト型ＬＥＤを好適に例示することができる。また、４８０〜５８０ｎｍのレーザー光を光ファイバーで導光し、対象部位を高強度励起すると同時にＰｐＩＸが発する蛍光を分光器に導光し、ＰｐＩＸ特有の蛍光スペクトルを検知することでより高感度かつ定量的なＰＤＤが可能となる。
【００３３】
以下に、実施例を挙げてこの発明をさらに具体的に説明するが、この発明の技術的範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００３４】
（波長の相違によるＡＬＡ−ＰＤＴの殺細胞効果の検討）
３５ｍｍディッシュに培養されたＭＫＮ４５細胞（Riken Cell Bankから購入）をＡＬＡ  ０．１６８ｍｇ／ｍＬ存在下で４時間培養した。そして６０ｍｍディッシュにヘモグロビン溶液を５ｍＬ分注し、ＡＬＡ存在下にて培養した前記３５ｍｍディッシュの上に乗せ、光照射を行った。ヘモグロビンは、光線力学的治療において、光の侵達阻害の主な原因とされていることから、生体内部を模擬するために、ヘモグロビンによる遮光を行った。４０２ｎｍ，５０２ｎｍ，５１７ｎｍ，５２９ｎｍおよび６３６ｎｍにピークを有する光を４．５Ｊ／ｃｍ２になるように光照射（５ｍＷ／ｃｍ２，１５ｍｉｎ）した。また対照として、ヘモグロビンによる遮光を行わない場合においては、ヘモグロビン溶液をリン酸緩衝溶液に代えた以外は同様な方法を用いて照射を行った。【００３５】
光照射後の細胞生存率はＭＴＴアッセイ法を用いて測定した。ＭＴＴ試薬(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide)をメタノールに５０ｍｇ／ｍＬになるように溶解させ、使用時に、リン酸緩衝溶液にて１０倍希釈したものを用いた。上記の各励起光を照射後２４時間経過したとき、ＭＴＴ試薬をＭＫＮ４５細胞が培養された３５ｍｍディッシュ１枚（２ｍＬ）あたり２００μＬを添加し、４時間ＣＯ２インキュベーターにて４時間静置した。静置後に、１０％ＳＤＳ溶液を２ｍＬ添加し、再度ＣＯ２インキュベーターに終夜静置した。その後、９６ウェルプレートに２００μＬ分注し、プレートリーダー（Bio-Rad社製）を用いて５７０ｎｍの吸光度を測定した。細胞の培養されていない培地にこの作業を行ったときの吸光度を０％、コントロールとして培養された細胞にこの作業を行ったときの吸光度を１００％として、各サンプルの吸光度から生存率を測定した。この結果を図２に示す。また、ヘモグロビンによる遮光を行ったときの光パワー密度は、パワーメーター（サイエンテックス社製）を用いて測定したときの結果を図３に示す。【００３６】
（結果）  
図２より、ヘモグロビンによる遮光を行わない場合（左側のバーで示す）、ピークを４０２ｎｍ、５０２ｎｍ、５１７ｎｍ、５２９ｎｍ、６３６ｎｍに有する光の順に、ＡＬＡ−ＰＤＴによる殺細胞効果を示した。これは、ＰｐＩＸを励起する効率が高い波長の順番と一致する。したがって、ヘモグロビン遮光を行わない場合は、皮膚表面においてＡＬＡ−ＰＤＴを行った場合に想定されるので、皮膚表面においても同様の効果をもたらすであろうことが推定される。【００３７】
また図２より、ヘモグロビンによる遮光を行った場合（右側のバーで示す）、ピークを５０２ｎｍ、５１７ｎｍ、５２９ｎｍ、６３６ｎｍに有する光はＡＬＡ−ＰＤＴによる殺細胞効果を示したが、４０２ｎｍをピークに有する光は、ＡＬＡ−ＰＤＴによる殺細胞効果を示さなかった。この結果により４００ｎｍ付近の波長ではＰｐＩＸの励起効率は高いが組織深達性が低く、深部の励起ができないため、皮下の治療には不適であることが確認された。【００３８】
図３より、ヘモグロビンによる遮光を行わない場合（左側のバーで示す）、ピークを４０２ｎｍ、５０２ｎｍ、５１７ｎｍ、５２９ｎｍ、６３６ｎｍに有する光では同様な光パワー密度を示したが、ヘモグロビンによる遮光を行った場合（右側のバーで示す）、５０２ｎｍ、５１７ｎｍ、５２９ｎｍの光の透過においては、６３６ｎｍの光のパワー密度と比較したとき、６３６ｎｍよりも光のパワー密度より低くなっていた。【００３９】
以上のことから、ヘモグロビンによる遮光を行った際の殺細胞効果においては、５０２ｎｍ、５１７ｎｍ、５２９ｎｍの光は、６３６ｎｍよりも光のパワー密度が低いものの同等の殺細胞効果を得ることが確認された。したがって、４８０〜５８０ｎｍ付近の波長であれば、光の組織深達性が維持され、６３６ｎｍに比べてＰｐＩＸの励起効率が高いといえる。
【実施例２】
【００４０】
（波長の相違によるＡＬＡ−ＰＤＴのがん治療効果の検討）
マウス番号１〜３の３匹のスキッドマウスにＨｅＬａ細胞５×１０５ｃｅｌｌｓを皮下注射した。ＨｅＬａ細胞５×１０５ｃｅｌｌｓを皮下注射した３匹のスキッドマウスにおける腫瘍の大きさを以下の表１に示す。それぞれ４ｍｍ前後の高さの腫瘍がマウスの皮下内に存在していることが確認された。このように、腫瘍の大きさが表１に記載のようになるまで飼育した後に、マウス番号１及び２のマウスにＡＬＡ７５０ｍｇ／ｋｇｂ.ｗ.を尾静脈注射により投与した。４時間後に、５１７ｎｍにピーク波長をもつＬＥＤ光をマウス番号１のマウスに照射し、６２９ｎｍにピーク波長をもつＬＥＤ光をマウス番号２のマウスに照射した。【００４１】
【表１】
0005885743.tif 000003
【００４２】
上記光照射を行ったスキッドマウスにつき、翌日に麻酔処理を行い、ＨｅＬａ細胞を含む部分を切り出し、ホルムアルデヒドで固定し、エタノール及びキシレンにて脱水処理後パラフィン包埋し、５μｍの厚さで薄切した小片をヘマトキシリン・エオシンで染色し、組織を光学顕微鏡にて観察した。結果を図４に示す。【００４３】
（結果）
光を照射していないマウス番号３の顕微鏡写真では、がん細胞が生存していることを確認することができるが、マウス番号１及び２の細胞は、細胞質の濃縮や核の消失、並びに、水疱が発生したことによる細胞と細胞との間の隙間が観察され、ＡＬＡ−ＰＤＴの効果が示された。また、マウス番号１及び２の細胞を比較すると、５１７ｎｍの光を照射したマウス番号１の細胞のほうが、細胞の密度が低いことから水泡の発生した量が大きいと推定でき、ＡＬＡ−ＰＤＴの効果が高かったことが確認された。したがって、少なくとも深さ方向４ｍｍまでの疾患であれば、５１７ｎｍにピークを有する波長の光は、患部への深達が可能であり、６２９ｎｍにピークを有する波長を用いたＡＬＡ−ＰＤＴより効果があることが示された。
【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明のＰＤＴやＰＤＤは医療の治療・診断分野に有用である。
【図１】
0005885743.tif 000004
【図２】
0005885743.tif 000005
【図３】
0005885743.tif 000006
【図４】
0005885743.tif 000007