(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物の循環リンパ球または脾臓CD4＋T細胞の割合を低減する医薬を製造するための、スフィンゴシン−１−リン酸に結合し、前記スフィンゴシン−１−リン酸の有効濃度を低下させるマウスモノクローナル抗体ＬＴ１００２またはヒト化モノクローナル抗体ＬＴ１００９の使用。
【請求項２】
動物の多発性硬化症治療用医薬を製造するための、スフィンゴシン−１−リン酸に結合し、前記スフィンゴシン−１−リン酸の有効濃度を低下させるマウスモノクローナル抗体ＬＴ１００２またはヒト化モノクローナル抗体ＬＴ１００９の使用。
【請求項３】
脱髄を軽減するか、又は、脱髄疾患若しくは脱髄症状を有するか若しくは有すると考えられる動物の麻痺、運動失調、四肢麻痺、若しくは軸索損傷を軽減する医薬を製造するための、スフィンゴシン−１−リン酸に結合し、前記スフィンゴシン−１−リン酸の有効濃度を低下させるマウスモノクローナル抗体ＬＴ１００２またはヒト化モノクローナル抗体ＬＴ１００９の使用。
【請求項４】
前記動物がヒトである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記ヒトが、多発性硬化症を罹患している、または罹患していると考えられる、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
スフィンゴシン−１−リン酸に結合するマウスモノクローナル抗体ＬＴ１００２またはヒト化モノクローナル抗体ＬＴ１００９が、多発性硬化症またはその症状の治療のために投与される治療薬と併用投与される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記治療薬が、多発性硬化症治療のための疾患調節薬、副腎皮質ステロイドまたは多発性硬化症の一次または二次症状の治療のために投与される治療薬である、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
多発性硬化症治療のための疾患調節薬が、免疫調節薬または免疫抑制薬であり、前記免疫調節薬がβインターフェロン１ｂ、βインターフェロン１ａ、グラチラマー酢酸塩またはナタリズマブであり、また前記免疫抑制薬がミトキサントロンまたはＦＴＹ７２０である、請求項７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生理活性脂質分子に結合する薬剤を用いて免疫応答を低減し、したがって、それらの生理活性脂質分子の有効濃度を低下させる方法に関する。これらの生理活性脂質は、ヒトおよび／または動物の疾患において、シグナル伝達分子としての役割を果たす。本発明に従って選考される生理活性シグナル伝達脂質の１つのクラスは、リゾ脂質である。シグナル伝達リゾ脂質の例は、スフィンゴシン−１−リン酸（Ｓ１Ｐ）および様々なリゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）である。シグナル伝達脂質、およびその誘導体と変異体に結合して、該脂質の有効濃度を低下させる抗体およびその他の薬剤は、免疫応答を低減させるために使用でき、また、過剰な、異常なまたは望ましくない免疫応答によって特徴づけられる疾患と状態の治療および／または予防において、そのような抗体を含む医薬品組成物を単独で、またはその他の治療薬および／または療法と併用して送達することで、使用できる。自己免疫疾患、同種移植片拒絶および移植片対宿主病は、本発明による方法に従って治療し得る疾患および状態の例である。不適切または異常なリンパ球浸潤によって特徴づけられる疾患はまた、過剰な、異常なまたは望ましくない免疫応答によって特徴づけられる疾患と見なされ、したがって、本発明による方法に従って治療できる可能性がある。
【背景技術】
【０００２】
（Ｉ．序文）
以下に記載の説明は、本発明を理解するために役に立ち得る情報を含む。かかる情報が従来の技術である、または現在申請する発明に関連すると認めるものではなく、あるいは明示的または暗示的に引用される出版物が従来の技術、ましてや現在申請する発明に関連すると認めるものではない。
【０００３】
（ＩＩ．背景）
本発明は、自己免疫応答を含む、異常な、過剰なまたは望ましくない免疫応答を低減または減弱する方法に関する。これらのプロセスは、単独に、または合わせて、多数の疾患と状態に関与している。これらの疾患または状態は、全身性またはどちらかと言えば、例えば、赤血球、血管、結合組織、神経系、主要臓器、甲状腺または膵臓のような内分泌腺、筋肉、関節あるいは皮膚のような局所性である可能性がある。
【０００４】
（Ａ．異常な、過剰なまたは望ましくない免疫応答によって特徴づけられる疾患および状態）
免疫系は、微生物、毒素、ガン細胞、および他人または他種からの外来性血液または細胞のような、場合によっては有害な物質から身体を保護する。これらの抗原は、抗体および、特定の抗原を認識して破壊する特化された白血球である感作リンパ球の産生を含む、免疫応答によって破壊される。
【０００５】
（１．自己免疫疾患および状態）
自己免疫疾患は、免疫系が通常は無視する正常な身体組織を破壊する場合に発症する。通常、免疫系は、自己と非自己組織を鑑別することが可能である。いくつかのリンパ球は、自己組織細胞に対して感作されるが、この応答は、通常、その他のリンパ球によって制御または抑制される。自己免疫疾患は、この正常な制御プロセスが乱された場合に発症する。通常、自己抗原を認識するほとんどのＴ細胞は、その起始部位である胸腺で排除され、決して体循環に入ることはない。正常Ｔ細胞は、自己抗原に応答することなく、リンパ節と血液を介して循環する。ところが、自己免疫疾患を罹患する患者は、自己抗原によって活性化されうるＴ細胞を有しているとされる。いったん活性化されると、このＴ細胞は分裂して、活性化抗原を攻撃する多数のエフェクター細胞を産生する。抗原が、異種抗原というよりはむしろ自己抗原である場合、重篤かつ場合によっては致命的な結果が生じる。自己免疫応答はまた、正常な体細胞が変化して、自己として認識されなくなる場合に発症する。
【０００６】
自己免疫疾患は、１種類以上の体組織の破壊、臓器の異常増殖、または臓器機能の変化を起こす可能性がある。この疾患は、活性化抗原のアイデンティティーによっては、１つの臓器または組織タイプのみを影響することもあれば、多数の臓器と組織を影響することもある。自己免疫疾患によって影響を受ける臓器と組織は通常、赤血球などの血液成分、血管、結合組織、神経系、主要臓器、甲状腺または膵臓のような内分泌腺、筋肉、関節、および皮膚を含む。人は、同時に複数の自己免疫疾患を発症し得る。
【０００７】
自己免疫疾患および状態と確証された、またはそれと疑われる例には、１型糖尿病、乾癬、自己免疫性糸球体腎炎、自己免疫性溶血性貧血、急性散在性脳脊髄炎、アジソン病、全身性脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、自己免疫性卵巣炎、自己免疫性精巣炎、多腺性自己免疫症候群、ベーチェット病、ベルジェ病、ビュルガー病、水疱性類天疱瘡、セリアックスプルー、シャーガス病、グレーブス病、グッドパスチャー症候群、ギラン−バレー症候群、橋本甲状腺炎、慢性活動性肝炎、慢性疲労症候群、慢性進行性肝炎、特発性血小板減少性紫斑病、ヨブ症候群、乾癬性関節炎、関節リウマチ、川崎病、多発性硬化症、重症筋無力症、類天疱瘡、天疱瘡、紅斑性天疱瘡、落葉状天疱瘡、尋常性天疱瘡、リウマチ性多発筋痛症、肺線維症、ライター症候群、リーデル甲状腺炎、リウマチ熱、サルコイドーシス、セザリー症候群、強皮症、潰瘍性大腸炎、自己免疫性溶血性貧血、フェルティ症候群、全身性エリテマトーデス、円板状エリテマトーデス、自己免疫結節性多発動脈炎、カプラン症候群、クローン病、自律神経障害、子宮内膜症、化膿性汗腺炎、間質性膀胱炎、ライム病、体位性起立性頻拍症候群、眼球クローヌス・ミオクローヌス症候群、乾癬、シェーグレン症候群、クレスト症候群、ウイルス性心筋炎、ウェゲナー肉芽腫症、ウィスコット・アルドリッチ症候群などがあるが、特にこれらに限定されない。これら疾患のあるものは、自己抗体の存在によって、自己免疫疾患であることが確証されている。
【０００８】
ａ．多発性硬化症（ＭＳ）
ＭＳは、ＣＮＳの炎症性疾患であり、２０歳から４０歳の間に発症し、米国では３５万人がＭＳに罹患している。ＭＳの経過は一般的に、神経性症状の急性増悪とその後の一連の再発と寛解によって特徴づけられる。これらの増悪はしばしば、永久的な神経障害を起因する。ＭＳは致命的な疾患ではないが、疾患の進行はしばしば、結果として機能的な身体障害とクオリティ・オブ・ライフ（生活の質）の低下をもたらす。本疾患の初期症状は、眼球運動障害、振戦、運動失調、痙直、疲労、感覚障害、疼痛症候群、膀胱または腸管機能不全、および精神障害を含むことがある。これに引き続く症状は、より顕著な上位運動ニューロン障害、即ち、痙直の増加、不全対麻痺または四肢不全麻痺の増加、を含む。また、めまい、協調不能、抑うつ、情緒不安定、歩行異常、疲労および疼痛もよく見られる。
【０００９】
ＭＳの正確な病因はまだわかっていないが、末梢循環中に存在するＴ細胞が、未知の抗原によって活性化され、血液脳関門を横切ってＣＮＳ中に入ると考えられている。ＣＮＳ中でＴ細胞は、脱髄に引き続いて神経機能障害を起因する、炎症誘発性サイトカインの産生を刺激する。特に、ＣＤ４＋Ｔ細胞とマクロファージは、中枢神経系（ＣＮＳ）中で軸索ミエリン鞘を合成かつ維持するオリゴデンドロサイトを破壊する。
【００１０】
ＭＳ患者の治療には、疾患コースの改変、増悪（発作、再発、再燃とも呼ばれる）の治療、症状管理（一次および二次の両方）、ならびに機能と安全性の改善、情緒的支援など、さまざまな形態がある。（新しいミエリン損傷に由来する機能喪失の発症である）増悪の治療は、しばしば炎症を抑えるための高用量の副腎皮質ステロイドによって達成される。プレドニゾンのような一部のステロイドは一般的に、経口投与される。メチルプレドニゾロンおよびデキサメサゾンのようなその他のステロイドは静脈内投与される。
【００１１】
運動麻痺と脱力感に加えて、ＭＳを罹患する人々に影響を及ぼす多数の一次および二次症状がある。これらは、疲労、めまい、吐き気／嘔吐、便秘、勃起機能障害、発作性掻痒症、尿路感染症、抑うつ、神経因性疼痛／知覚異常、痙直、頻尿、膀胱機能障害および振戦などを含む。１つ以上のこれらの症状を管理するために一般的に使用される症状管理のための治療薬は、めまいと吐き気／嘔吐にはメクリジン、尿路感染症には抗生物質と抗菌剤、尿路感染症の症状緩和にはフェナゾピリジン（ｐｈｅｎａｚｏｐｙｒｉｄｉｎｅ）、発作性掻痒症にはヒドロキシジン、勃起機能障害にはパパベリン、シルデナフィル、アルプロスタジル、バルデナフィルまたはタダラフィル、便秘にはドクサート（ｄｏｃｕｓａｔｅ）、サイリウム繊維、グリセリン坐薬、浣腸、水酸化マグネシウム、リン酸ナトリウムまたはビサコジル、抑うつまたは神経因性疼痛には塩酸デュロキセチン（ｄｕｌｏｘｅｔｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、痙直にはダントロレン、頻尿または膀胱機能障害にはデモプレッシン、オキシブチニン、テラゾシン、プラゾシン、ダリフェナシン（ｄａｒｉｆｅｎａｃｉｎ）、タムスロシン、オキシブチニン、塩化トロスピウム（ｔｒｏｓｐｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、イミプラミン、臭化プロパンテリン、コハク酸ソリフェナシンまたはトルテロジン（ｔｏｌｔｅｒｏｄｉｎｅ）、知覚異常にはフェニトインまたはガバペンチン、抑うつにはフルオキセチン、ベンラファキシン（ｖｅｎｌａｆａｘｉｎｅ）、セルトラリン、ブプロピオンまたはパロキセチン、錯感覚にはアミトリプチリン（ａｍｉｔｒｙｐｔｙｌｉｎｅ）、尿路感染症予防にはメテナミン（ｍｅｔｈｅｎａｍｉｎｅ）、痙直にはチザニジン、ジアゼパム、バクロフェン、振戦、疼痛または痙直にはクロナゼパム、振戦にはイソニアジド、錯感覚にはノルトリプチリン、疲労にはモダフィニルまたはフルオキセチン、三叉神経痛にはカルバマゼピン、そして疼痛にはイミプラミンを含む。
【００１２】
ＭＳ治療においては、治癒的治療が究極の目標だが、基礎疾患メカニズムが未知であり、疾患症状が不均一であるため、その実現は困難である。Ｎａｔｉｏｎａｌ  ＭＳ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（米国ＭＳ学会）のＭｅｄｉｃａｌ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｂｏａｒｄ（医学諮問委員会）の執行委員会は、免疫調節薬（登録商標）（Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標）、βインターフェロン１ｂ）、アボネックス（登録商標）（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）、βインターフェロン１ａ）、レビフ（登録商標）（Ｒｅｂｉｆ（登録商標）、βインターフェロン１ａ）、コパクソン（登録商標）（Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標）、酢酸グラチラマー［ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ  ａｃｅｔａｔｅ］）、タイサブリ（登録商標）（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標）、ナタリズマブ［ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ］）、免疫抑制薬ノバントロン（登録商標）（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標）ミトキサントロン［ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ］）などのような、現在のＭＳ疾患修飾薬の使用に関して以下のような推奨事項を採択した。この推奨事項によれば、再発経過を伴うＭＳの診断後できるだけ早く免疫調節薬による治療を開始するべきである。免疫抑制薬（ミトキサントロン）は、特定の悪化および／または再発患者への使用を考慮するとよい。治療のメリットが明らかに欠如していたり、耐えられないような副作用、新規データまたはより優れた治療法がある場合を除いては、治療は無期限に継続すべきである。したがって、ＭＳ患者のより優れた治療へのニーズは未だ満たされていない。
【００１３】
新しい治療は、軸索損傷に対して保護し、再ミエリン化を促進するための戦略と同様に、異なる免疫病理学的メカニズムを考慮に入れる。
免疫抑制薬フィンゴリモド（ｆｉｎｇｏｌｉｍｏｄ）（ＦＴＹ７２０または２−アミノ−２−（２−［４−オクチルフェニル］エチル）−１，３−プロパンジオール塩酸塩）は、再発型多発性硬化症患者に関する治験で、かなりの治療効果を発揮することが示されている。経口フィンゴリモドを１日１回服用した患者では、疾患活動度が急速に低下し、再発頻度とＣＮＳ病巣数の顕著な減少がみられた。ＦＴＹ７２０はまた、Ｔ細胞の遊走を妨害し、リンパ球がリンパ節とその他の組織から離脱することを防ぐ。Ｔリンパ球およびＢリンパ球をリンパ組織に隔離することによって、血液からリンパ球がほぼ完全に消失し、このプロセスには可逆性があることから、フィンゴリモドはリンパ球を殺さないことが示されている。ＦＴＹ７２０は、血流中に入ると迅速にリン酸化される。リン酸化ＦＴＹ７２０は、Ｓ１Ｐ２を除く全てのＳＩＰレセプターに結合する。リンパ球に発現される主要Ｓ１ＰレセプターであるＳ１Ｐ１は、リンパ球遊走の主要な制御因子であり、血管外リンパ球が組織から遊出するために必要とされる。脳において、Ｔ細胞は再活性化され、有害な炎症反応を誘導する。ＦＴＹ７２０を０．１ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の高用量で経口投与すると、ＬＥＷラットにおいてミエリン塩基性タンパク質によって誘発された実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の麻痺がほぼ完全に防止される。ＦＴＹ７２０による治療は、ＳＪＬマウスにおいて、ミエリンプロテオリピドタンパク質免疫によって誘発されたＥＡＥの再発を抑制する。Ｗｅｂｂ，  Ｍら（２００４）  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｉｍｍ．  １５３：１０８：１２１。
【００１４】
−ＣＮＳにおいて血液由来の脳炎惹起性Ｔ細胞とマクロファージの微小血管へのα４・１インテグリン依存性接着を遮断するモノクローナル抗体であるナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ.Ｒ）は、Ｔ細胞の遊走を阻止する。多発性硬化症患者の末梢リンパ節において、自己反応性ＣＤ４＋Ｔ細胞は、抗原提示樹状細胞に遭遇して、エフェクター細胞に分化すると考えられている。脳炎惹起性Ｔ細胞は、末梢リンパ節を離れて、血流中へのアクセスを得て、ＣＮＳにおいて上皮細胞に接着するが、このステップがナタリズマブによって遮断される。
【００１５】
出願人によるマウスモノクローナル抗Ｓ１Ｐ抗体であるＬＴ１００２は、マウスにおいてリンパ球レベルの調節を実証した。このデータは、ＬＴ１００２が自己免疫疾患に有効な治療薬である可能性と、ＭＳ治療のための新しい免疫療法戦略を提供することを示唆している。
【００１６】
２．異常な、過剰なまたは望ましくない免疫応答によって特徴づけられるその他の状態
本発明による方法はまた、免疫応答を低減または減弱することが望ましい、自己免疫状態以外の状態または疾患の治療に有効であると考えられる。そのような状態は、過剰な、異常なまたは望ましくない免疫応答によって特徴づけられる可能性がある。特に限定はされないが、そのような例は、同種移植片拒絶および移植片対宿主病を含む。同種移植は、遺伝的に同一ではない同種メンバー中への、臓器または組織（例えば、腎臓、心臓、肺、角膜、皮膚、骨髄、膵臓またはその他の組織や臓器）の移植である。したがって、ほとんどのヒトの臓器および組織移植片は、同種移植片である（残る移植片のほとんどは、一卵性双生児からの移植片である）。同種移植片拒絶は、移植片レシピエントの免疫系が、同種移植片を異物と認識して、破壊し始めるときに発症する。これによって最終的には、移植臓器が破壊され、二度目の移植が必要な結果になり得る。したがって、必ずしも予測されないというわけではないが、同種移植片拒絶は、望ましくない免疫応答の一例である。
【００１７】
移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）は、骨髄移植と幹細胞移植の合併症である。骨髄または幹細胞同種移植後、移植されたドナー細胞（例えば、Ｔ細胞）が、患者（宿主）の身体を攻撃することがある。ＧＶＨＤは、慢性または急性として生じることがあり、制御されない場合は生命に危険を及ぼす可能性がある。したがって、ＧＶＨＤは、望ましくないおよび／または異常な免疫応答の一例である。
【００１８】
リンパ球浸潤は、ガン、血管損傷、脊椎損傷、アレルギーおよび喘息を含む多くの疾患および状態において発症する。ＳｃｈｏｔｔｅｎｆｅｌｄとＢｅｅｂｅ−Ｄｉｍｍｅｒ  （２００６）  ＣＡ  ５６：  ６９．  Ｚｈｕら（２００２）  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ．  ２２：  ４５０、（２００２）  Ｊｏｎｅｓら  （２００２）  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２２：  ２６９０、  Ｇａｇａら，  （１９９１）  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４７：８１６−２２、Ｂｏｕｓｈｅｙ  ＨＡ  ａｎｄ  ＪＶ  Ｆａｈｙ  （１９９５）  Ｅｎｖｉｒｏｎ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．  １０３  Ｓｕｐｐｌ  ６：２２９−２３３．不適切または異常なリンパ球浸潤によって特徴づけられる疾患はまた、過剰な、異常なまたは望ましくない免疫応答によって特徴づけられる疾患であると見なされ、したがって、本発明による方法に従って治療され得る。多発性骨髄腫、Ｂ細胞と血漿細胞の悪性病変のようなある種の血液ガンでは、治療法はしばしば、抗ガン（例えば、細胞毒性）薬と、異常な免疫応答（即ち、Ｂ細胞増殖）を低減するために、デキサメサゾンのような免疫抑制薬の両方を含む。高い親和性と特異性でＳ１Ｐに結合するモノクローナル抗体が、いくつかのヒトガンの動物モデルにおいて、腫瘍の進行と腫瘍に付随する血管形成を遅延させることが示されている。Ｖｉｓｅｎｔｉｎら，（２００６）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ９：  ２２５−２３８．本出願人は、抗Ｓ１Ｐ抗体は、その抗腫瘍形成作用のみならず、免疫抑制薬となり得る効果によって、抗ガン薬として有効な可能性があると確信する。これは、多発性骨髄腫およびリンパ球とその産物の異常なまたは望ましくない関与、浸潤または増殖によって特徴づけられるその他の血液学的悪性病変の治療に特に有効であると考えられる。
【００１９】
Ｂ．生理活性シグナル伝達脂質
脂質とそれらの誘導体は現在、単に細胞膜中の１つの構造エレメントまたはβ酸化、解糖などの代謝プロセスの源としてではなく、医学研究のための重要なターゲットとして認識されている。特に、ある種の生理活性脂質は、動物およびヒト疾患において重要なシグナル伝達メディエーターとして機能する。原形質膜に由来する脂質のほとんどは、構造的役割のみを果たしているにも係わらず、それらの小部分は、細胞外刺激の細胞中への取り次ぎに関与している。これらの脂質は、「生理活性脂質」または、一方では、「生理活性シグナル伝達脂質」と呼ばれている。「脂質シグナル伝達」とは、細胞膜脂質を第二のメッセンジャーとして使用するいくつかの細胞シグナル伝達経路のいずれかを意味し、ならびに脂質シグナル伝達分子とその特異的レセプターとの直接的相互作用を意味する。脂質シグナル伝達経路は、増殖因子から炎症性サイトカインに至る様々な細胞外刺激によって活性化され、アポトーシス、分化および増殖のような細胞運命の決定を制御する。生理活性脂質シグナル伝達の研究は、益々多数の生理活性脂質が同定され、その作用が特徴づけられているために、精力的に科学的研究が推し進められている分野である。
【００２０】
生理活性脂質の例は、エイコサノイド（カンナビノイド、ロイコトリエン、プロスタグランジン、リポキシン（ｌｉｐｏｘｉｎｓ）、エポキシエイコサトリエン酸（ｅｐｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄｓ）、およびイソエイコサノイドを含む）、非エイコサノイドカンナビノイドメディエーター、リン脂質およびホスファチジン酸（ＰＡ）およびホスファチジルグリセロール（ＰＧ）のようなそれらの誘導体、血小板活性化因子（ＰＡＦ）およびカルジオリピン、ならびにリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）および種々のリゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）のようなリゾリン脂質を含む。生理活性シグナル伝達脂質はまた、スフィンゴミエリン、セラミド、セラミド−１−リン酸、スフィンゴシン、スフィンゴシルホスホリルコリン、スフィンガニン、スフィンガニン−１−リン酸（ジヒドロ−Ｓ１Ｐ）およびスフィンゴシン−１−リン酸のようなスフィンゴ脂質を含む。スフィンゴ脂質およびそれらの誘導体は、重要な細胞プロセスに多面発現効果を持つ細胞外および細胞内シグナル伝達分子のグループを代表する。生理活性シグナル伝達脂質のその他の例は、ホスホチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＡ）、ジアシルグリセリド（ＤＧ）、スルファチド、ガングリオシド、およびセレブロシドを含む。
【００２１】
１．リゾ脂質
リゾリン脂質（ＬＰＬ）は、リゾ脂質としても知られており、１つの炭化水素主鎖と１つのリン酸基を含む１つの極性頭基を含む、低分子量（一般的には約５００ダルトン以下）脂質である。リゾ脂質のあるものは、生理活性シグナル伝達脂質である。医学的に重要な生理活性リゾ脂質の２つの特有な例は、ＬＰＡ（グリセロール主鎖）とＳ１Ｐ（スフィンゴイド主鎖）である。特定のＬＰＡ、Ｓ１Ｐ、およびジヒドロＳ１Ｐの構造を以下に示す。
【化１】
0005885923.tif 000002
【００２２】
ＬＰＡは、単一分子実体ではなく、様々に異なる長さと飽和度からなる脂肪酸を有する内在性構造変異体を集めた総称である。Ｆｕｊｉｗａｒａら（２００５），  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，  ２８０：  ３５０３８−３５０５０．  ＬＰＡの構造主鎖は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）またはホスファチジン酸（ＰＡ）のようなグリセロールベースのリン脂質に由来する。Ｓ１Ｐのようなリゾスフィンゴ脂質の場合は、セラミド主鎖の脂肪酸が欠損している。Ｓ１Ｐ、ジヒドロＳ１Ｐ（ＤＨＳ１Ｐ）、およびスフィンゴシルホスホリルコリン（ＳＰＣ）の構造主鎖は、スフィンゴミエリン由来のスフィンゴシンをベースにしている。
【００２３】
ＬＰＡとＳ１Ｐは、同一クラスの複数の膜貫通ドメインＧタンパク質共役型レセプター（ＧＰＣＲ）に結合することによって、様々な細胞シグナル伝達経路を制御する。Ｃｈｕｎ  Ｊ，  Ｒｏｓｅｎ  Ｈ  （２００６），  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ，  １２：  １６１−１７１  ａｎｄ  Ｍｏｏｌｅｎａａｒ  ＷＨ  （１９９９），  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ２５３：  ２３０−２３８．  Ｓ１Ｐレセプターは、Ｓ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ２、Ｓ１Ｐ３、Ｓ１Ｐ４およびＳ１Ｐ５（かつてはＥＤＧ−１、ＥＤＧ−５／ＡＧＲ１６、ＥＤＧ−３、ＥＤＧ−６およびＥＤＧ−８）と呼ばれ、ＬＰＡレセプターは、ＬＰＡ１、ＬＰＡ２、ＬＰＡ３（かつてはＥＤＧ−２、ＥＤＧ−４、およびＥＤＧ−７）と呼ばれる。このファミリーの第４のＬＰＡレセプターは、ＬＰＡ（ＬＰＡ４）として識別されており、これらのリゾリン脂質のその他の推定レセプターもまた報告されている。
【００２４】
ＬＰＡとＳ１Ｐは、Ｔリンパ球およびＢリンパ球のような免疫関連細胞の調節を介して、免疫応答に役割を果たしていることが示されている。これらの脂質は、免疫応答部位へのＴ細胞遊走を促進し、Ｔ細胞の増殖ならびに様々なサイトカインの分泌を制御している。Ｃｈｕｎ  ＪおよびＲｏｓｅｎ  Ｈ，  （２００６）  Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．  １２：１６１−１７１、  Ｈｕａｎｇ  ら，  （２００２）  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ａｃｔａ  １５８２：１６１−１６７、  Ｒｏｓｅｎ  ＨおよびＥＪ  Ｇｏｅｔｚｌ  （２００５）  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  （２００５）  ５：５６０−７０．  特に、Ｓ１Ｐは、末梢循環中へのリンパ球の放出を制御すると考えられている。したがって、ＬＰＡとＳ１Ｐに結合する薬剤は、望ましくない、過剰なまたは異常な免疫応答を低減するための方法、ならびに、ある種の血液ガン、およびリンパ球の望ましくない、過剰なまたは異常な関与および／または異常な免疫応答に関連する自己免疫疾患を含む、疾患および状態の治療に有効であると考えられる。
【００２５】
（ａ．スフィンゴシン−１−リン酸）
Ｓ１Ｐは、細胞増殖のメディエーターであり、生存経路の活性化を介してアポトーシスから保護する。Ｍａｃｅｙｋａら  （２００２），  Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ，  １５８５：  １９２−２０１、Ｓｐｉｅｇｅｌ  Ｓ．  ら（２００３），  Ｎａｔ  Ｒｅｖｓ  Ｍｏｌｅｃ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ，  ４：  ３９７−４０７．セラミド／スフィンゴシン（ＣＥＲ／ＳＰＨ）濃度とＳ１Ｐ間の釣り合いが、細胞が死経路に導かれるか、あるいはアポトーシスから保護されるかを決定するレオスタット・メカニズムをもたらすことが提言されている。レオスタット・メカニズムの主要な制御酵素は、スフィンゴシンリン酸化酵素（ＳＰＨＫ）であり、その役割は、死を促進する生理活性シグナル伝達脂質（ＣＥＲ／ＳＰＨ）を増殖促進Ｓ１Ｐに変換することである。Ｓ１Ｐには２つの運命がある：Ｓ１Ｐは、Ｓ１Ｐを切断してホスホエタノールアミンとヘキサデカナールを生じるＳ１Ｐ脱離酵素によって分解されるか、または、あまり一般的ではないが、Ｓ１Ｐ脱リン酸酵素によって加水分解されてＳＰＨになり得る。
【００２６】
Ｓ１Ｐは、大量に生成され、高濃度のＳＰＨＫを含み、Ｓ１Ｐを分解する酵素を欠如する、血小板に貯蔵される。血小板が活性化されると、Ｓ１Ｐが分泌される。さらに、その他の細胞タイプ（例えば、肥満細胞）もまた、Ｓ１Ｐの分泌能力があると考えられている。いったん分泌されると、Ｓ１Ｐは、血清アルブミンおよびリポタンパク質のような担体タンパク質に高濃度で結合されると考えられている。Ｓ１Ｐは、血漿中に高濃度で見いだされ、その濃度範囲は、０．５−５ｕＭと報告されている。細胞外が主要ではあるが、Ｓ１Ｐの細胞内作用もまた示唆されている（例えば、Ｓｐｉｅｇｅｌ  Ｓ，  Ｋｏｌｅｓｎｉｃｋ  Ｒ  （２００２），  Ｌｅｕｋｅｍｉａ，  １６：１５９６−６０２、  Ｓｕｏｍａｌａｉｎｅｎら  （２００５），  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ，  １６６：  ７７３−８１を参照）。
【００２７】
細胞表面Ｓ１Ｐレセプターの広範な発現は、Ｓ１Ｐが、増殖、接着、収縮、運動性、形態形成、分化および生存を含む多様な領域の細胞応答に影響を及ぼすことを可能にする。この応答領域は、細胞および組織系内でのＳ１Ｐレセプターの重複または独自の発現パターンに依存するように思われる。さらに、Ｓ１Ｐと血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、血管上皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）および塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）を含む増殖因子シグナル伝達経路間のクロストークが最近実証された（例えば、Ｂａｕｄｈｕｉｎら（２００４），  ＦＡＳＥＢ  Ｊ，  １８：  ３４１−３を参照）。Ｓ１Ｐを含む様々な細胞プロセスの制御は、中でも神経シグナル伝達、血管緊張、創傷治癒、免疫細胞輸送、生殖、および心臓血管系機能に特に強いインパクトがあるため、これらの系内でのＳ１Ｐの内生レベルの変更は、有害な影響を有し、ガン、心不全、眼病および感染症および自己免疫疾患を含む、いくつかの病態生理学的状態を惹起する可能性がある。我々は、自己免疫疾患を治療するために場合によっては効果的な戦略は、Ｓ１Ｐの生物学的に利用可能な細胞外濃度を低下することであることを提起する。本出願人は、Ｓ１Ｐに特異的であるマウスモノクローナル抗体を開発した。これは、生理活性シグナル伝達スフィンゴ脂質ターゲットに対して始めて作成に成功したモノクローナル抗体である。この抗体は、細胞外液からＳ１Ｐを選択的に吸収するための分子スポンジとして作用し、Ｓ１Ｐの有効濃度を低下させる。これは、生体基質中で、ピコモル親和度で選択的にＳ１Ｐに結合して中和する。Ｖｉｓｅｎｔｉｎら，（２００６）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ９：２２５−２３８．  興味深いことに、Ｓ１Ｐは、多くのタンパク質性薬剤ターゲットとは異なり、種をこえて保存されている。ヒトＳ１Ｐは、例えば、マウスおよびサルＳ１Ｐと同一である。
【００２８】
本明細書中に使用する場合、「スフィンゴシン−１−リン酸」またはＳ１Ｐとは、スフィンゴシン−１−リン酸［スフィンジン−１−リン酸（ｓｐｈｉｎｇｅｎｅ−１−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、Ｄ−エリスロ−スフィンゴシン−１−リン酸、スフィンゲ−４−エニン−１−リン酸（ｓｐｈｉｎｇ−４−ｅｎｉｎｅ−１−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、（Ｅ，２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシ−オクタデカ−４−エノキシ］ホスホン酸、Ｃａｓ  ２６９９３−３０−６］およびその変異体、Ｓ１ＰおよびＤＨＳ１Ｐ（ジヒドロスフィンゴシン−１−リン酸［スフィンガニン−１−リン酸、［（２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−３−ヒドロキシ−オクタデコキシ］ホスホン酸、Ｄ−エリスロ−ジヒドロ−Ｄ−スフィンゴシン−１−リン酸、ＣＡＳ  １９７９４−９７−９］およびスフィンゴシルホスホリルコリンを意味する。Ｓ１ＰおよびＬＰＡの変異体は、本明細書中で使用する場合は、それぞれＳ１ＰおよびＬＰＡの類似体および誘導体を含み、これらは、母体分子と同様に機能するか、同様に機能すると予測され得る。
【００２９】
Ｓ１Ｐシグナル伝達の抑制は、有効な免疫抑制と自己免疫疾患の寛解を生じる：
小分子スフィンゴシン類似体であるＦＴＹ７２０  （ＦＴＹ、フィンゴリモド、２−アミノ−２−（２−［４−オクチルペンチル］エチル）−１，３−プロパンジオール塩酸塩）は、リンパ球輸送を変化させることによって作用する新しい免疫抑制薬であり、末梢血管リンパ球減少症とリンパ節におけるリンパ球数の増加を起因する。ＦＴＹは、リンパ球上に発現するＳ１Ｐレセプターのあるものに結合することによって、免疫調節効果を媒介する。Ｂｏｈｌｅｒ  Ｔら（２００５），  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，  ７９：  ４９２−５。
【００３０】
ＦＴＹは、Ｓ１ＰレセプターであるＳ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ３、Ｓ１Ｐ４およびＳ１Ｐ５（しかしＳ１Ｐ２ではない）との相互作用によって作用すると考えられる。最初にＦＴＹはＳ１Ｐレセプターを活性化し、Ｓ１Ｐアゴニストとして作用すると考えられる。次に、ＦＴＹは、これらのレセプターの異常な内部移行を起こして、それらを原形質膜から取り除くことによって不活性化する。したがって、最初にはＳ１Ｐレセプターのアゴニストとして作用し得るが、その長期的な効果は、機能的なアンタゴニストである。Ｍａｓｓｂｅｒｇ，  ＳおよびＵ．  ｖｏｎ  Ａｎｄｒｉａｎ  （２００６）  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３５５：１０８８−１０９１．この薬は、経口投与され、単回経口投与は、末梢リンパ球数を３０〜７０％減少した。ＦＴＹは、Ｔ細胞サブセットであるＣＤ４（＋）細胞をＣＤ８（＋）細胞よりも減少した。Ｂｏｈｌｅｒら  （２００４），  Ｎｅｐｈｒｏｌ  Ｄｉａｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，  １９：７０２−１３．ＦＴＹ投与マウスは、経口投与された場合、同所性角膜移植片生存の有意な延長を示した。Ｚｈａｎｇら（２００３），Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，７６：１５１１−３．ＦＴＹ経口投与はまた、ラットからマウスへの角膜の異種移植モデルにおいて、拒絶を有意に遅延し、かつその重症度を低減した。Ｓｅｄｌａｋｏｖａら（２００５），Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，７９，２９７−３０３．同種移植片拒絶の既知の原因に、Ｓ１Ｐシグナル伝達の影響を調節することが移植片生存を好転し得ることを示唆するこれらのデータを組み合わせると、生理活性脂質に結合し、それによってその有効濃度を低下させる抗体を含む薬剤はまた、同種移植片拒絶および、異常な、望ましくないまたは過剰な免疫応答によって特徴づけられるその他の状態の治療に有効であろう。
【００３１】
Ｓ１Ｐ１は、リンパ球輸送に関与し、免疫応答開始部位である、胸腺および二次リンパ器官（脾臓、リンパ節およびアデノイド、扁桃腺、盲腸およびパイエル板のような粘膜関連リンパ組織）からのリンパ球の放出に必要とされる。リンパ球は、血液からリンパ節そしてリンパ中へと循環する。リンパからのリンパ球の放出（循環に戻る）は、胸管を経由する。リンパ球はまた、脾臓を経由して再循環する。Ｓ１Ｐ１阻害薬であるＦＴＹは、著しく（数時間の間に１０〜１００倍低下）、リンパにおけるリンパ球減少を伴う、急速なリンパ球減少症（血中リンパ球の減少）を起因する。二次リンパ器官と胸腺におけるリンパ球の増加が観察され得る。したがって、ＦＴＹの免疫抑制効果は、これらの器官から免疫応答部位にリンパ球を送達する循環中へのＳ１Ｐ１媒介によるリンパ球放出の遮断に起因すると考えられる。総説には、Ｃｙｓｔｅｒ，  Ｊ．，  （２００５）  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２３：１２７−１５９を参照。リンパ球放出のこの遮断はまた、リンパ球隔離とも呼ばれ、移植および自己免疫疾患の動物モデルにおけるＦＴＹの有効性の理由を説明すると考えられる。
【００３２】
Ｓ１Ｐに結合してそのレセプターの補体とのリガンド相互反応を阻止する薬剤と抗体は、ＦＴＹに対して同様な効果を有する可能性があるが、異なるメカニズムによる。特定の理論に限定されることなく、本出願人は、抗Ｓ１Ｐ抗体のような薬剤は、Ｓ１Ｐが、リンパ球およびリンパ球輸送に関与するその他の細胞上にあるＳ１Ｐのレセプターの補体に結合することを阻止することによって作用し得ると考える。抗Ｓ１Ｐモノクローナル抗体によるレセプターのサイレンシング（発現停止）は、細胞の表面膜上に存在するレセプターを下方制御するＦＴＹの能力と同様な効果を有するであろう。さらに、Ｓ１Ｐの有効濃度を低下することにより、この抗Ｓ１Ｐモノクローナル抗体は、リンパ組織と血液間のＳ１Ｐ勾配を低下するように作用する。この勾配は、リンパ球放出にとって不可欠であり、リンパ球表面上のレセプターのＳ１Ｐ活性化と連動して作用する可能性がある。
【００３３】
脾臓周辺帯は、脾臓の非リンパ系赤脾髄とリンパ系白脾髄の間に位置する。その結果、周辺帯にあるＢリンパ球細胞は、絶え間なく血液（また血液と共に抗原）に曝露される。Ｂ細胞をこの周辺帯に誘導する因子については、よく理解されていない。ＦＴＹ投与は、周辺帯からリンパ濾胞へのＢ細胞の転置を起因し、それによってＳ１Ｐ１が周辺帯Ｂ細胞の脾臓周辺帯への限局化を促進するという結論を導く。Ｃｉｎａｍｏｎら，（２００４）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ５：７１３−７２０．  したがって、リンパ球放出におけるその役割に加えて、Ｓ１Ｐシグナル伝達はまた、リンパ系組織の区画化にも役割を果たしている。
【００３４】
本明細書に記載の以下の実施例１に示すように、抗Ｓ１Ｐモノクローナル抗体は、Ｌｐａｔｈ，  Ｉｎｃ．によって開発され、マウスにおいてリンパ球減少症を起因する。分子スポンジとしてＳ１Ｐの有効濃度を低下するように作用することによって、この抗体は、それらのリガンドのＳ１Ｐレセプターを欠乏させ、リンパ組織と末梢循環の間のＳ１Ｐ勾配を低下させることが可能であると主張することができる。そうであるならば、リンパ管と脾臓から放出されるリンパ球は、遅延または減少され得る。
多発性硬化症（ＭＳ）は、オリゴデンドロサイトに向かう免疫応答が、中枢神経系（ＣＮＳ）のミエリン鞘に対する限局的な損傷を起因する自己免疫疾患の１つである。これは、重篤な、通常進行性の、神経機能障害および身体障害を起因する。ＦＴＹ７２０の小規模な、プラセボ対照治験が、再発型ＭＳ患者を対象として実施された。ＦＴＹまたはプラセボが１日１回、６ヵ月間経口投与され、ＦＴＹの投与を受けた患者は、再発率の有意な低下によって測定されるように、疾患活動性の急速な低下を示した。ＭＲＩによって測定されたガドリニウム増強ＣＮＳ病巣数の減少もまた実証された。スイッチング試験では、プラセボを開始した患者が、ＦＴＹに転換したときに改善を示した。Ｋａｐｐｏｓら，（２００６）  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３５５：１１２４−１１４０、およびＭａｓｓｂｅｒｇ  Ｓとｖｏｎ  Ａｎｄｒｉａｎ，  Ｕ．による総説（２００６）Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３５５：  １０８８−１０９１。
ＦＴＹ（ＦＴＹまたはＦＴＹ−Ｐ）は、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘発性大腸炎とＣＤ４＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞トランスファー大腸炎の発症を減弱することが示されている。ＦＴＹは、両モデルにおいて、体重減少防止に効果があり、疾患活動性指標と組織学的大腸炎スコアは、ＦＴＹ投与マウスにおいて、非投与マウスよりも有意に低かった。両大腸炎モデルにおいて、ＦＴＹは、炎症性の大腸固有層へのＣＤ４＋  Ｔ細胞の浸潤を阻止し、その理由で、著者らは、ＦＴＹを炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の臨床治療薬候補として示唆する。Ｄｅｇｕｃｈｉら，（２００６）  Ｏｎｃｏｌ  Ｒｅｐ．  １６：６９９−７０３。
【００３５】
ＦＴＹは、Ｓ１Ｐレセプターに結合することによって、Ｓ１Ｐシグナル伝達を妨害すると考えられる。同様な影響が、Ｓ１Ｐに直接結合し、それによってＳ１Ｐの有効濃度を低下させる、Ｌｐａｔｈ社の抗Ｓ１Ｐモノクローナル抗体のような薬剤の使用によって得られると考えられる。これはまた、Ｓ１Ｐの中和とも呼ばれる。そのような薬剤の例は、免疫由来部分（例えば、抗体および抗体フラグメント）、小分子、アプタマー、Ｓ１Ｐレセプターフラグメントなどである。したがって、そのような薬剤は、自己免疫疾患および異常な、過剰なまたは望ましくない免疫応答によって特徴づけられるその他の疾患に対して有効であると考えられる。
【００３６】
米国特許第６，０９８，６３１号（Ｈｏｌｏｓｈｉｔｚら）は、増殖を抑制し、アポトーシスを誘発する化合物を使用して、自己免疫疾患を治療ならびに診断する方法と組成物を開示しており、これはスフィンゴミエリンシグナル伝達経路の阻害薬である化合物を含む。
【００３７】
（ｂ．リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ））
ＬＰＡは、真核および原核細胞の両方におけるリン脂質の生合成の前駆物質として長い間知られてきたが、ＬＰＡは、最近になって、活性化細胞、特に血小板によって迅速に産生かつ遊離され、特異的な表面レセプターに作用することによってターゲット細胞に影響を及ぼすシグナル伝達分子として知られるようになった（例えば、Ｍｏｏｌｅｎａａｒら（２００４），ＢｉｏＥｓｓａｙｓ，  ２６：８７０−８８１およびｖａｎ  Ｌｅｅｗｅｎら（２００３），Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ，３１：１２０９−１２１２を参照）．小胞体で合成され、さらに複雑なリン脂質にプロセスされる以外に、ＬＰＡは、細胞活性化後に既存のリン脂質の加水分解によって生成されることが可能であり、例えば、ｓｎ−２位は、脱アシル化のために、通常は脂肪酸残基を欠如し、脂肪酸にエステル結合されたｓｎ−３位ヒドロキシル基のみが残る。さらに、ＬＰＡ産生における主要な酵素であるオートタキシン（リゾＰＬＤ／ＮＰＰ２）は、多数の腫瘍の種類がａｕｔｏｔｏｘｉｎ（自家毒素）を上方制御するため、ガン遺伝子の生成物であり得る。Ｂｒｉｎｄｌｅｙ  （２００４），  Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，  ９２：９００−１２．ヒトの血漿と血清中のＬＰＡ濃度は報告されており、感受性が高く、特異性のあるＬＣ／ＭＳ法を使用した算出を含む。Ｂａｋｅｒら（２００１），  Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，  ２９２：２８７−２９５。例えば、１時間２５℃で放置された新鮮ヒト血清中のＬＰＡ濃度は、約１．２ｍＭと推定され、ＬＰＡ類似体１６：０、１８：１、１８：２、および２０：４が主要な種である。同様に、１時間２５℃で放置された新鮮ヒト血漿中のＬＰＡ濃度は、約０．７ｍＭと推定され、１８：１および１８：２ＬＰＡが主要な種である。
【００３８】
ＬＰＡは、細胞増殖の誘導、細胞遊走の刺激および神経突起の退縮、ギャップ結合の閉鎖、および粘菌の走化性に至るまで、広範な生物学的応答に影響を及ぼす。Ｇｏｅｔｚｌら（２００２），  Ｓｃｉｅｎｔ  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ，  ２：  ３２４−３３８．ＬＰＡの生物学に関する知識体系は、より多くの細胞系がＬＰＡ応答性について試験されるため、さらに増え続けている。
【００３９】
例：創傷治癒：細胞の成長と増殖を刺激することに加えて、ＬＰＡは、創傷の修復と再生における重要な現象である、細胞張力と細胞表面のフィブロネクチン結合を促進することが現在知られている。Ｍｏｏｌｅｎａａｒら（２００４），  ＢｉｏＥｓｓａｙｓ，  ２６：８７０−８８１。
【００４０】
アポトーシス：最近では抗アポトーシス活性もまたＬＰＡに帰するとされ、ペルオキシソーム増殖レセプターガンマは、ＬＰＡのレセプター／ターゲットであることが最近になって報告された。Ｓｉｍｏｎら（２００５），  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，  ２８０：１４６５６−１４６６２。
【００４１】
血管の成熟：ＬＰＡ産生の役割を担う分泌型リゾホスホリパーゼＤである、オートタキシンは、発生中の血管形成に必須である。ｖａｎ  Ｍｅｅｔｅｒｅｎら  （２００６），  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ，  ２６：５０１５−２２．さらに、不飽和ＬＰＡは、血管平滑筋細胞脱分化の誘導に主要な役割を担うことが明らかにされた。Ｈａｙａｓｈｉら（２００１），  Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ，  ８９：２５１−８。
【００４２】
浮腫と血管透過性：ＬＰＡは、マウスにおいて、血漿浸出とヒスタミンの遊離を誘導する。Ｈａｓｈｉｍｏｔｏら（２００６），  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ，  １００：８２−７。
【００４３】
炎症：ＬＰＡは、ヒト角膜上皮細胞において炎症メディエーターとして作用する。Ｚｈａｎｇら（２００６），  Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ，  Ｊｕｎｅ  ７．ＬＰＡは、角膜の創傷治癒に関与し［Ｌｉｌｉｏｍ  Ｋら（１９９８），  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ，  ２７４：Ｃ１０６５−Ｃ１０７４］、水晶体組織におけるＲＯＳの遊離を刺激する［Ｒａｏら  （２００４），  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｖｉｓｉｏｎｓ，  １０：１１２−１２１］。ＬＰＡはまた、ウサギ角膜においてＨＳＶ−１を再活性化し得る。Ｍａｒｔｉｎら（１９９９），  Ｍｏｌｅｃ  Ｖｉｓ，  ５：３６−４２。
【００４４】
線維症および瘢痕形成：ＬＰＡは、真皮線維芽細胞におけるＥＲＫ依存経路を介して、Ｉ型コラーゲンｍＲＮＡのＴＧＦ媒介による刺激を抑制する。Ｓａｔｏら（２００４），
Ｍａｔｒｉｘ  Ｂｉｏｌ，  ２３：３５３−６１．さらに、ＬＰＡは、コラーゲン遺伝子発現と線維芽細胞の増殖を刺激することによって、いくらかの直接的な線維形成効果を有する。Ｃｈｅｎら（２００６）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ５８０：４７３７−４５。
【００４５】
免疫応答：ＬＰＡは、Ｓ１Ｐのように、免疫関連細胞の調節を通して、免疫応答に役割を果たすことが示されている。これらの脂質は、免疫応答部位へのＴ細胞遊走を促進し、Ｔ細胞の増殖ならびに様々なサイトカインの分泌を制御している。Ｃｈｕｎ  ＪおよびＲｏｓｅｎ  Ｈ，  （２００６）  Ｃｕｒｒ．  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．  １２：１６１−１７１、Ｈｕａｎｇら，（２００２）  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｂｉｏｃｈｉｍ．  Ａｃｔａ  １５８２：１６１−１６７、Ｒｏｓｅｎ  ＨおよびＥＪ  Ｇｏｅｔｚｌ  （２００５）  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  （２００５）  ５：５６０−７０．最近の論文（Ｋａｎｄａら，（２００８）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍ．  ９，  ４１５−４２３）は、ＬＰＡと自家毒素をさらにリンパ球輸送に関連づけている。したがって、Ｌｐａｔｈ社の抗ＬＰＡモノクローナル抗体のような、ＬＰＡの有効濃度を低下させる薬剤は、望ましくない、過剰なまたは異常な免疫応答を減少させるための方法、ならびに望ましくない、過剰なまたは異常な免疫応答に関連する自己免疫疾患を含む疾患および状態の治療方法に有効であると考えられる。
【００４６】
最近、本出願人は、ＬＰＡに対するいくつかのモノクローナル抗体を開発した。抗Ｓ１Ｐ抗体のように、抗ＬＰＡ抗体は、様々なＬＰＡを中和し、それらの生物学的ならびに薬学的作用を緩和する。抗ＬＰＡ抗体は、したがって、免疫関連疾患と状態の予防および／または治療に有効であると考えられる。
（ＩＩＩ．定義）
【００４７】
本発明を詳細に説明する前に、本発明のコンテキストで使用されるいくつかの用語について定義を行う。これらの用語に加えて、他の用語も本明細書の他の箇所で、必要に応じて定義している。本明細書に特に定義しない限り、本明細書に使用する技術用語は、それらの技術分野において認識されている意味を有する。
【００４８】
「免疫由来部分」とは、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体または抗体フラグメント、変異体、あるいは誘導体を意味する。
【００４９】
「抗Ｓ１Ｐ抗体」または「Ｓ１Ｐに対して反応性のある免疫由来部分」とは、Ｓ１Ｐに結合する抗体または抗体由来分子全てを意味する。
【００５０】
「抗ＬＰＡ抗体」または「ＬＰＡに対して反応性のある免疫由来部分」とは、全ての、または１つ以上のＬＰＡに結合する抗体または抗体由来分子を意味する。
【００５１】
「生理活性脂質」とは、脂質シグナル伝達分子を意味する。一般的に、生理活性脂質は、そのシグナル伝達効果を発揮するときは生体膜中に存在しないが、これは言ってみれば、そのような脂質種は、ある時点では生体膜（例えば、細胞膜、細胞小器官の膜など）中に存在する可能性があり、生体膜に関与しているときは、生理活性脂質ではなく、「構造脂質」分子である。生理活性脂質は、細胞外および／または細胞内シグナル伝達を媒介し、したがって、分化、遊走、増殖、分泌、生存、およびその他のプロセスを調節することによって、多数の種類の細胞の機能の制御に関与するということにおいて、構造脂質（例えば、膜結合リン脂質）と区別される。インビボでは、生理活性脂質は、細胞外液中に発見され、その他の分子、例えば、アルブミンおよびリポタンパク質のような血清タンパク質と複合体を形成するか、「遊離」型、即ち、その他の分子種と複合体を形成しない状態で存在し得る。細胞外メディエーターとして、生理活性脂質のあるものは、膜結合イオンチャネルまたはＧタンパク質共役レセプターを活性化することにより細胞シグナル伝達を変化させ、その結果として、複雑なシグナル伝達系を活性化し、細胞機能または生存の変化を起因する。細胞内メディエーターとして、生理活性脂質は、酵素およびイオンチャネルのような細胞内コンポーネントと直接相互作用することによって、それらの作用を発揮させる。生理活性脂質の代表例は、ＬＰＡおよびＳ１Ｐを含む。
【００５２】
スフィンゴシン−１−リン酸のような生理活性脂質の「有効濃度」とは、生物学的プロセスにおいて利用可能かつ有効な前記の生理活性脂質の量を意味する。生理活性脂質の有効濃度は様々な方法によって低下させることが可能であり、それらの方法は、（例えば、脂質産生の低下または分解の増加によって）脂質の実際の濃度を低下させること、（例えば、その他の分子との複合体化または結合によって）遊離している利用可能な脂質を減少させること、あるいは（例えば、１つ以上のレセプターに結合する生理活性脂質の能力を妨害することによって）脂質の活性を低下させることを含む。生理活性脂質の有効濃度を低下させることは、生理活性脂質を「中和させること」と呼ばれる。それを示す例としては、Ｓ１Ｐに結合して、その生物学的機能（例えば、シグナル伝達）を遮断または妨害する抗体は、その抗体の結合が利用可能なＳ１Ｐの有効濃度を低下させるように働き、そのシグナル伝達機能の遂行を妨げるため、Ｓ１Ｐを中和すると言うことができる。
【００５３】
「治療薬」という用語は、免疫応答、特に、自己免疫応答を含む、望ましくない、過剰なまたは異常な免疫応答を調節する薬剤を意味する。
【００５４】
「併用療法」という用語は、必要な治療効果を達成するために、少なくとも２つの異なる療法の供与を含む、治療法を意味する。例えば、併用療法は、２つ以上の化学的に異なる活性成分（例えば、抗ＬＰＡ抗体と抗Ｓ１Ｐ抗体）の投与を含み得る。一方、併用療法は、生理活性脂質に対して反応性のある免疫由来部分の投与および１つ以上のその他の化学療法薬または薬物の投与を含み得る。併用療法は、一方、抗脂質抗体を、放射線療法および／または外科手術のような、その他の治療法の送達と合わせて投与することを含み得る。さらに、併用療法は、抗脂質抗体を、１つ以上のその他の生物剤（例えば、抗ＶＥＧＦ、ＴＧＦ、ＰＤＧＦ、またはｂＦＧＦ薬）、化学療法薬および放射線および／または外科手術のようなその他の治療法と合わせて投与することを含み得る。２つ以上の化学的に異なる活性成分を用いる併用療法を意味する場合、その活性成分は、同一組成物の一部または異なる組成物として投与することができると理解される。別々の組成物として投与される場合、異なる活性成分を含む組成物は、同時または異なる時に、同一または異なる経路で、同一または異なる投与計画を用いて、特定の状況が必要とする全て、ならびに担当医師によって決定されるように、投与され得る。同様にして、１つ以上の抗脂質抗体種（例えば、抗ＬＰＡ抗体）が、単独であるいは１つ以上の化学療法薬と併用して、例えば、放射線および／または外科手術と組み合わされる場合、その薬は、外科手術または放射線療法の前または後で送達されてよい。
【００５５】
「単独療法」とは、単回用量またはある期間にわたって数回の用量として投与する如何に係わらず、１つの治療効果のある化合物の送達に基づく治療法を意味する。
【００５６】
本発明による「特許性のある」組成物、プロセス、機械、または製造品とは、特許法の保護対象は、鑑定実施時に全ての特許性の法定要件を満たすと意味する。例えば、新規性、非自明性などに関して、後の審査によって、１つ以上のクレームが、新規性、非自明性などを打ち消す１つ以上の実施態様を含むことが分かれば、クレームは、定義上、特許性のある実施態様に限定されるので、特許性のない実施態様を明確に除外する。さらに、添付されたクレームは、最も広範で妥当な適用範囲を定めかつそれらの正当性を保つと解釈されるものである。さらに、本出願申請時または特許登録時から、１つ以上の付属クレームの有効性が疑問視されるまでの間に、１つ以上の特許性の法定要件が補正される場合、またはある特許性の法定要件を満たすか否かを評価するための基準が変更された場合、クレームは、（１）有効性を保ち、（２）その条件において最も広範で妥当な解釈を得るように解釈されるものである。
【００５７】
「薬剤として許容される塩」という用語は、本発明による薬剤および化合物の生物学的有効性と特性を保有し、生物学上などの問題がない塩を意味する。多くの場合、本発明による薬剤と化合物は、荷電基（例えば、荷電アミノおよび／またはカルボキシル基またはそれらの類似基）によって酸および／または塩基塩を形成することができる。薬剤として許容される酸付加塩は、無機および有機酸から調製することができ、一方、薬剤として認容できる塩基付加塩は、無機および有機塩から調製できる。薬剤として許容される塩についての総説については、Ｂｅｒｇｅら（１９７７）  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．，  ６６，  １−１９を参照。
【００５８】
「分離された」、「精製された」、「単離された」およびそれに同様な用語は、サンプルを収容する容器内に含まれるサンプルの１つ以上のコンポーネントが、容器内に存在する１つ以上のその他のサンプルコンポーネントの存在下で、物理的に除去されたり、または希釈される、またはされていることを意味する。分離または精製ステップ中に除去または希釈され得るサンプルコンポーネントは、化学反応生成物、反応しなかった化学物質、タンパク質、炭水化物、脂質、および非結合分子を含む。
【００５９】
本明細書で使用する「種」という用語は、例えば、化学療法薬の特定の種というように、様々なコンテキストで使用される。それぞれのコンテキストにおいて、この用語は、特定のコンテキストで言及されるような、化学的には互いに区別できない分子集団を意味する。
【００６０】
「特異的に関連する」および「特異的関連」ならびにそれに同様な用語は、２つの分子間の特定の非ランダムな相互作用を意味し、このような相互作用は、これらの分子間に適切な化学的または分子的な相互作用を可能にする構造上の、疎水性／親水性、および／または静電気的な特色の存在に依存する。
【００６１】
本明細書における、「安定な」とは、２分子間の相互作用（例えば、抗ＬＰＡまたは抗Ｓ１Ｐ抗体のそのターゲット生理活性脂質に対する結合）が十分に強く、したがって、それらの分子の相互作用が所望する目的または操作のために維持できることを意味する。
【００６２】
「治療対象」または「患者」とは、本発明の分子によって治療効果を得ることができる動物を意味する。この動物は、本発明による組成物および／または方法によって治療され得る疾患または状態のリスクに曝される可能性がある、あるいは、リスクに曝された、またはリスクに曝されると考えられ得る。本発明に従って治療され得る動物は、ウシ、イヌ、ウマ、ネコ、ヒツジ、ブタおよび特に好ましい例である霊長類（ヒトおよび非ヒト霊長類を含む）などの哺乳類を含む、脊椎動物を含む。
【００６３】
「治療有効量」（または「有効量」）とは、治療対象または患者に投与された際に治療を有効にするために十分な有効成分（例えば、本発明による薬）の量を意味する。したがって、何をもって本発明による組成物の治療有効量とするかは、当業者の１人によって容易に決定され得る。自己免疫またはその他の免疫関連疾患に対する治療の場合、治療有効量とは、免疫応答に関連する１つ以上のパラメータにおいて客観的に測定された変化を引き起こす量である。特に限定はされないが、そのようなパラメータは以下を含む：循環Ｔ細胞またはリンパ球の数、リンパ組織内でのＴ細胞隔離（例えば、蓄積）、およびリンパ球活性化レベル。
【００６４】
勿論、治療有効量は、個々の治療対象と治療される状態、治療対象の体重および年齢、疾患状態の重症度、選択された特定の化合物、使用される投与計画、投与時期、投与方法などによって変化するが、これら全ては、当業者の１人によって容易に決定され得る。併用療法の場合は、何をもって特定の有効成分の治療有効量とするかは、単独療法（即ち、有効成分として１つの化学的実体のみを用いる治療法）として投与されるときの治療有効量とは異なる可能性がある。
【００６５】
疾患または疾病の「治療」または「治療すること」という用語は、疾患または疾病から保護または予防すること（即ち、臨床症状が発症しないようにすること）、疾患または疾病を抑制すること（即ち、臨床症状の発症を停止または抑止すること）、および／または疾患または疾病を緩和すること（即ち、臨床症状を退行させること）を含む。認識されているように、疾患または疾病の予防と抑止を区別するのは、究極的に誘導する現象またはいくつかの現象は未知であり潜在的である可能性があるため、いつでも可能であるとは限らない。したがって、「予防法」という用語は、予防と抑止の両方を包括する治療タイプを意味すると理解される。治療という用語はしたがって、予防を含む。
【００６６】
「治療法」という用語は、化学療法薬、放射線療法、外科手術、遺伝子療法、ＤＮＡワクチンと療法、ｓｉＲＮＡ療法を含むアンチセンスに基づく療法、抗血管新生療法、免疫療法、骨髄移植、アプタマーおよび抗体と抗体変異体、レセプターデコイおよびその他のタンパク質に基づく薬物療法などその他の生物製剤を用いる、疾患または疾病の治療全てを意味する。
【発明の概要】
【００６７】
本発明に従って、ヒトを含む動物において、免疫応答を低減するための方法が提供されるが、その方法は、生理活性脂質に結合して、その生理活性脂質の有効濃度を低下させるする薬剤を動物に投与すること含む。この免疫応答は一般的に、異常な、過剰なまたは望ましくない免疫応答であり、自己免疫応答であり得る。
【００６８】
また、異常な、過剰なまたは望ましくない免疫応答によって特徴づけられる疾患または状態を治療するための方法が提供されるが、この方法は、生理活性脂質に結合して、前記生理活性脂質の有効濃度を低下させる薬剤を投与することを含む。この疾患または状態は、自己免疫疾患または状態、あるいは望ましくない組織拒絶反応であり得る。不適切または異常なリンパ球浸潤によって特徴づけられる疾患はまた、過剰な、異常なまたは望ましくない免疫応答によって特徴づけられる疾患と見なされ、したがって、本発明による方法に従って治療され得る。
【００６９】
これらの方法のいくつかの実施態様において、この生理活性脂質は、スフィンゴ脂質またはスフィンゴ脂質代謝物、あるいはリゾ脂質またはリゾ脂質代謝物であり、Ｓ１Ｐ、ＬＰＡまたはそれらの変異体を含み得る。いくつかの実施態様において、生理活性脂質に結合する薬剤は、モノクローナル抗体のような抗体であり、ヒト化モノクローナル抗体であり得る。この薬剤は、抗体フラグメントまたは本明細書の以下に記載されるような他のタイプの薬剤であり得る。
【００７０】
本発明のこれらおよびその他の側面および実施態様は、以下のセクションに詳細にわたって論述される。
【００７１】
本文書は、少なくとも１つのカラーを使った図面を含む。カラーの図面を伴う本文書のコピーは、要請と必要料金の支払いに応じて提供される。以下に各図面の簡単な概要を示す。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】図１は、ＥＡＥ誘導後の日数に対して平均ＥＡＥスコア値をプロットしたグラフである。
【図２】図２は、ＬＴ１００９抗体１１ｍｇ／ｍＬを含む様々な製剤サンプルの％純度を示す４枚のグラフを含む。グラフにプロットされたデータは、ＳＥ−ＨＰＬＣによって求めたもので、試験された製剤の０、０．５ヵ月、１ヵ月、および２ヵ月の結果である。各グラフにおいて、横座標は、各表示データポイントの％純度を示す。下から、各グラフの縦座標の最初の６ポイントはｐＨ６．０の結果であり、ポイント７〜１２はｐＨ６．５の結果、そしてポイント１３〜１８はｐＨ７．０の結果を示す。同様にして、下から最初の３つのポイントは、ｐＨ６．０での２００ｐｐｍポリソルベート−８０の結果を示し、次の３つのポイント（４〜６）は、ｐＨ６．０での５００ｐｐｍポリソルベート−８０の結果を示し、次の３つのポイント（７〜９）は、ｐＨ６．５での２００ｐｐｍポリソルベート−８０の結果などを示す。塩条件の影響は、３ポイントのグループについて表示されている。下から各グループの最初のポイントは１４８ｍＭ  ＮａＣｌ条件を示し、次のポイント（２）は３００ｍＭＮａＣｌ条件、そして下から３番目のポイントは４５０ｍＭＮａＣｌ条件などを示す。
【発明を実施するための形態】
【００７３】
〔発明の詳細な説明〕
【００７４】
望ましくない生理活性シグナル伝達脂質の量をコントロールするための１つの方法は、１つ以上のそれらの脂質に結合する組成物を供給することによる。本発明は、免疫応答を低減するため、ならびに異常な、望ましくないまたは過剰な免疫応答に関連する状態を治療するための方法を説明する。これらの方法は、生理活性シグナル伝達脂質に結合し、その生理活性脂質の有効濃度を低下させる薬剤を投与することを含む。生理活性シグナル伝達脂質に結合する抗体およびその他の化合物は、脂質の有効濃度を低下させる治療スポンジとして使用され得る。化合物が遊離状態にある場合は、その化合物は、どんな方法においても、制限されることなく、それが望ましくない影響を作用させる部位または複数部位に到達できる。典型的には、遊離化合物は、心臓血管系またはリンパ管中に存在し、そのいずれも遊離化合物の作用部位であるか、あるいは作用部位を含んでおり、またはそこから化合物は自由に作用部位に遊走し得る。遊離化合物はまた、その化合物を望ましくない化合物に変換する酵素によって作用を受けるために利用され得る。
【００７５】
（Ｉ．本発明に有用な薬剤）
（Ａ．免疫由来部分）
いくつかの抗体は最近、食品医薬品局によって、ヒトにおける治療用途として認可された。Ｋｌｉｎｇ（１９９９）Ｍｏｄ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．  ２：３３  ４５．脂質ベースの治療の１つの局面では、生理活性シグナル伝達脂質に結合する抗体は、治療に使用するために、例えば、薬剤組成物、医療デバイス、およびそれらと同様なものの中に組み込むことによって、患者に送達することができる。そのような方法は、例えば、組織または体液中のターゲットである生理活性脂質の有効濃度を調節したり、インビボまたはエクスビボで血液からターゲット脂質を取り除くことによって機能し得る。
【００７６】
「免疫由来部分」という用語は、抗体（Ａｂ）または免疫グロブリン（Ｉｇ）を含み、免疫グロブリン遺伝子由来の、免疫グロブリン遺伝子にならって作成された、または免疫グロブリン遺伝子によってコードされた、ペプチド、ポリペプチド、あるいは抗原またはエピトープに結合可能であるそのようなペプチドまたはポリペプチドのフラグメントの全ての形態を意味する［例えば、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（免疫生物学）、５版、Ｊａｎｅｗａｙ，  Ｔｒａｖｅｒｓ，  Ｗａｌｐｏｒｔ，  Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋｅｄ  （編集），  Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  （２００１）を参照］。本発明において、抗原は生理活性脂質分子である。抗体分子または免疫グロブリンは、分子量がおよそ１５０ｋＤａの大きな糖タンパク質分子であり、通常は、２つの異なる種類のポリペプチド鎖からなる。「重」鎖（Ｈ）と呼ばれる１本のポリペプチド鎖は、約５０ｋＤａである。「軽」鎖（Ｌ）と呼ばれる、もう１本のポリペプチド鎖は、約２５ｋＤａである。各免疫グロブリン分子は、普通は２本の重鎖と２本の軽鎖からなる。２本の重鎖は、ジスルフィド結合によって互いに連鎖しており、その数は異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に連結されている。どんな所定の自然発生抗体分子においても、２本の重鎖と２本の軽鎖は同一であり、２つの同一の抗原結合部位を内部に持っており、したがって、二価、即ち、２つの同一分子に同時に結合する能力を有する、と言える。
【００７７】
全ての脊椎動物種からの抗体分子の軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、２つの明らかに異なるタイプ、カッパ（κ）とラムダ（λ）、のうち１つに割り当てられ得る。軽鎖の２つのタイプの比率は、種によって異なる。一例を取ってみると、マウスにおける平均κ：λの比率は２０：１であるが、ヒトでは２：１、そしてウシでは１：２０である。
【００７８】
全ての脊椎動物種からの抗体分子の重鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、アイソタイプと呼ばれる５つの明らかに異なるタイプのうち１つに割り当てられ得る。アイソタイプのあるものは、いくつかのサブタイプを有する。免疫グロブリンの５つの主要なクラスは、免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）、免疫グロブリンＤ（ＩｇＤ）、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）、および免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）である。ＩｇＧは、最も豊富なアイソタイプであり、いくつかのサブクラス（ヒトにおいてはＩｇＧ１、２、３、および４）を有する。Ｆｃフラグメントおよびヒンジ領域は、異なるアイソタイプの抗体によって異なり、したがって、それらの機能的特性を決定する。ただし、このドメインの全体的な機構は、全てのアイソタイプで同様である。
【００７９】
「可変領域」という用語は、抗体分子またはそれらのフラグメントのＮ末端部分を意味する。一般的に、４つの鎖のそれぞれは、そのアミノ末端部分に、抗原結合部位に寄与する可変（Ｖ）領域、ならびにアイソタイプを決定する定常（Ｃ）領域を要する。軽鎖は、多数の非共有相互作用とジスルフィド結合によって重鎖に結合され、重鎖と軽鎖のＶ領域は、抗体分子の各アームで対をなし、２つの同一な抗原結合部位を作成する。いくつかのアミノ酸残基は、軽鎖と重鎖の可変領域間に界面を形成すると考えられる［Ｋａｂａｔら（１９９１），  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（免疫学的利益に関するタンパク質の配列）、第５版、国立保健研究所、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．  およびＣｌｏｔｈｉａら（１９８５），  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ，  ｖｏｌ．  １８６：６５１を参照］。
【００８０】
注目に値することに、可変性は、抗体の可変領域を通して均一に分布されておらず、軽鎖と重鎖両方の可変領域にある、「相補性決定領域」（ＣＤＲ）または「高頻度可変領域」と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変領域のさらに高度に保存されている部分は、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれる。非変性の重鎖と軽鎖の可変領域はそれぞれ、３つのＣＤＲによって連結されている４つのＦＲ領域からなる。各鎖のＣＤＲは、ＦＲ領域よって合わせて近接に保たれており、他の鎖からのＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位を形成する［Ｋａｂａｔら  （１９９１），  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（免疫学的利益に関するタンパク質の配列）、第５版、国立保健研究所、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，  Ｍｄ．を参照］。これらの６つのＣＤＲは、共同して、抗体分子の抗原に対する結合特性に寄与する。ただし、たった１つの可変領域（または、抗原に対して特異的な３つのＣＤＲのみを含む、Ｆｖの半分）でも、抗原を認識して結合する能力を有する［Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  （１９９４）、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（モノクローナル抗体の薬理学），  ｖｏｌ．  １１３，  ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編集、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐｐ．  ２６９−３１５を参照］。
【００８１】
「定常ドメイン」という用語は、抗体の重鎖または軽鎖のＣ末端領域を意味する。一般的に、定常ドメインは、抗体分子の抗原に対する結合特性に直接関与しないが、抗体依存性細胞毒性における抗体の関与のような、様々なエフェクター機能を提示する。ここでは、エフェクター機能は、Ｆｃドメインと免疫系のタンパク質間の分子相互作用による免疫細胞の動員によって媒介される、抗体の異なる生理学的作用（例えば、オプソニン作用、細胞溶解、肥満細胞、好塩基球および好酸球脱顆粒、およびその他のプロセス）を意味する。重鎖のアイソタイプは、抗体の機能的特性を決定する。それらの独特な機能的特性は、軽鎖と結合しない、重鎖のカルボキシ末端部分によって供与される。
【００８２】
本明細書に使用する場合、「抗体フラグメント」とは、抗原結合部位またはインタクト（無傷）な抗体の可変領域を含む、インタクトな抗体の一部分を意味し、この部分は、インタクトな抗体のＦｃ領域の定常重鎖ドメイン（例えば、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４）を含まなくてよい。一方、定常重鎖ドメイン部分（例えば、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４）は、抗体フラグメントに含まれ得る。抗体フラグメントの例は、抗原結合を保有するフラグメントであり、Ｆａｂ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆｄ、およびＦｖフラグメント、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、三重特異性抗体（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）、単鎖抗体分子（Ｓｃ−Ｆｖ）、抗体フラグメントから形成されるミニボディー（ｍｉｎｉｂｏｄｉｅｓ）、ナノボディー（ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ）、および多選択性抗体である。一例として、Ｆａｂフラグメントはまた、軽鎖の定常ドメインと重鎖の第一定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。
【００８３】
「変異体」という用語は、少なくとも１つのアミノ酸残基または修飾によって、抗体の天然アミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を意味する。「天然」または「親」または「野生型」アミノ酸配列は、天然に発見される抗体のアミノ酸配列を意味する。抗体分子の変異体は、高頻度可変性またはＣＤＲ領域、Ｆｃ領域、Ｆａｂ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、およびヒンジ領域を含む、軽鎖および／または重鎖の可変領域または定常領域内の変化を含むが、それらに限定はされない。
【００８４】
「特異的」という用語は、抗体のそのターゲットエピトープに対する選択的な結合を意味する。抗体分子は、所望する抗原に対するその抗体の結合を、所定の一連の条件下で、非関連抗原または類似抗原または抗原混合物に対するその抗体の結合と比較することによって、結合特異性を試験することができる。好ましくは、本発明による抗体は、非関連抗原、またはターゲット抗原の類似体にさえ顕著な結合を欠如する。ここで、「抗原」という用語は、抗体分子または抗原に結合する免疫由来部分によって認識かつ結合される分子を意味する。抗体によって結合される抗原の特定な部分は、「エピトープ」と呼ばれる。「ハプテン」とは、ほとんどの状況下で、例えば、タンパク質、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、コロイド金、シリコンビーズなどの担体分子に付着したときのみ、免疫応答を誘導する（即ち、抗原として作用する）ことができる小分子を意味する。担体は、それ自体では免疫応答を誘導できないものであり得る。
【００８５】
「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、モノクローナル、ポリクローナル、多選択性（例えば、二特異性、抗体の各アームが異なるエピトープまたは同一または異なる抗原に反応する場合）、ミニボディ、ヘテロ抱合体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、キメラ抗体、および合成抗体、ならびに所望する結合特性および／または生物活性を有する抗原に特異的に結合する抗体フラグメントを包含する。
【００８６】
「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）という用語は、実質的に均質な抗体からなる集団から得られた抗体、または類似抗体の集団を意味し、特定の方法による抗体産生を要するとは解釈されない。例えば、モノクローナル抗体は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ  ［（１９７５）、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５−４９７］によって最初に説明されたハイブリドーマ法、あるいは組換えＤＮＡ法によって作成できる。
【００８７】
「キメラ抗体」（または、「キメラ免疫グロブリン」）という用語は、特定種に由来するまたは特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一または相同である１本の重鎖および／または軽鎖を含み、それと同時に残りの鎖は他種に由来するまたは他の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列に同一または相同である分子であり、ならびにそれらが所望する生物活性を提示する限りにおいては、そのような抗体のフラグメントを意味する。Ｃａｂｉｌｌｙら（１９８４），  ｉｎｆｒａ、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８１：６８５１。
【００８８】
「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト（例えば、マウス）抗体とヒト抗体に由来する配列を含む抗体の形態を意味する。ヒト化抗体は、その結合および／または生物学的活性を有意に変化しない、同種または異種からの保存的アミノ酸置換または非天然残基を含み得る。そのような抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望する特性を有するマウス、ラット、ラクダ、ウシ、ヤギ、またはウサギのような非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基で置換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体または移入されたＣＤＲやフレームワーク配列のいずれにも見られない残基を含んでいてもよい。これらの修飾は、抗体の性能をさらに精製かつ最大化するために行われる。したがって、一般的には、ヒト化抗体は、全て、または全ての高頻度可変ループが非ヒト免疫グロブリンのそれに対応し、そして全てまたは実質的に全てのＦＲ領域がヒト免疫グロブリン配列のそれである、少なくとも１つの可変ドメイン全体、および１つの局面では、２つの可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、任意に免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、またはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分を含む。例えば、Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号、Ｃａｂｉｌｌｙら欧州特許第０，１２５，０２３  Ｂ１号、Ｂｏｓｓら、米国特許第４，８１６，３９７号、Ｂｏｓｓら、欧州特許第０，１２０，６９４  Ｂ１号、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，  Ｍ．Ｓ．ら、ＷＯ８６／０１５３３、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，  Ｍ．Ｓ．ら、欧州特許第０，１９４，２７６  Ｂ１号、Ｗｉｎｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号、Ｗｉｎｔｅｒ、欧州特許第０，２３９，４００  Ｂ１号、Ｐａｄｌａｎ，  Ｅ．Ａ．ら、欧州特許出願第０，５１９，５９６  Ａ１号、Ｑｕｅｅｎら（１９８９）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ｖｏｌ  ８６：１００２９−１００３３）。
【００８９】
「二特異性抗体」という用語は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特性を有する、抗体、またはモノクローナル抗体を意味し得る。１つの実施態様では、エピトープは、同一抗原に由来する。他の実施態様では、エピトープは、２つの異なる抗原に由来する。二特異性抗体の作成方法は、当該分野で公知である。例えば、二特異性抗体は、２対の免疫グロブリン重鎖／軽鎖の同時発現を用いて、組換えによって作製することができる。他方、二特異性抗体は、化学結合を用いて調整することができる。二特異性抗体は、二特異性抗体フラグメントを含む。
【００９０】
「ヘテロ抱合体抗体」という用語は、共有結合で連結された２つの抗体を意味し得る。そのような抗体は、架橋剤の使用を含む、合成タンパク質化学における公知の方法を用いて調製することができる。本明細書で使用する場合、「抱合体」という用語は、１つ以上の抗体フラグメントまたは結合部分が１つ以上のポリマー分子に共有結合することによって形成される分子を意味する。
【００９１】
「生物学的活性」という用語は、所望するエピトープに結合可能であり、かつ何らかの方法で生物学的作用を発現できる抗体または抗体フラグメントを意味する。生物学的作用は、以下に限定はされないが、成長シグナルの調節、抗アポトーシスシグナルの調節、アポトーシスシグナルの調節、エフェクター機能カスケードの調節、およびその他のリガンド相互作用の調節を含む。
【００９２】
「組換えＤＮＡ」という用語は、人間によって工作、創製、または改変された核酸とそれから発現される遺伝子産物を意味する。組換えポリペプチドまたはタンパク質は、組換えＤＮＡ技術によって産生されたポリペプチドまたはタンパク質であり、例えば、所望するポリペプチドまたはタンパク質をコードする外来性ＤＮＡコンストラクトによって形質転換された細胞に由来する、ポリペプチドまたはタンパク質である。合成ポリペプチドまたはタンパク質は、化学合成によって調製されたものである。
【００９３】
「発現カセット」という用語は、構造遺伝子（即ち、抗体のようなタンパク質コード配列）の発現に、そのような配列に適合性のある宿主内において、引き起こすことのできるヌクレオチド分子を意味する。発現カセットは、ポリペプチドをコードする配列と作用できる状態で結合した（ｏｐｅｒａｂｌｙ  ｌｉｎｋｅｄ）少なくとも１つのプロモーター、ならびに任意に、例えば、転写終止シグナルのような、その他の配列を含む。発現を影響するために必要または役に立つその他の制御エレメント（例えば、エンハンサー）を使用してもよい。したがって、発現カセットは、プラズミド、発現ベクター、組換えウイルス、組換え型裸のＤＮＡベクターなどを含む。
【００９４】
（１．  Ｓ１Ｐ抗体）
Ｖｉｓｅｎｔｉｎらは、極めて高い親和性と特異性でＳ１Ｐに結合するマウスモノクローナル抗体について説明している。この抗体は、ヒトガンのいくつかの動物モデルにおいて、腫瘍の進行とそれに付随する血管形成を遅延することが示された。Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  （２００６）  ９：２２５−２３８。
【００９５】
ヒト化モノクローナル抗体（ＬＴ１００９）は、マウス抗Ｓ１Ｐ抗体（ＬＴ１００２）に由来している。この抗体が由来するマウス抗Ｓ１Ｐ抗体と比較すると、ヒト化型は、ピコモルの範囲でのＳ１Ｐ結合親和性、ならびに優れた安定性とインビボ有効性を提示する。この抗体の構築、合成、精製、および試験については、米国特許出願第６０／８５４，９７１号および１１／９２４，８９０号［代理人整理番号は、それぞれＬＰＴ−３０１０−ＰＶおよびＬＰＴ−３０１０−ＵＴ、それぞれ２００６年１０月２７日および２００７年１０月２６日に申請、各タイトルともに、「Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ−１−Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（スフィンゴシン−１−リン酸結合のための組成物と方法）」］に記載されているが、本発明と共同所有され、本明細書では、全文を参考文献として編入している。一般的に、ヒト治療対象への投与には、マウス抗体やその他の非ヒト由来抗体よりも、ヒト化モノクローナル抗体の方が好ましい。
【００９６】
（２．  ＬＰＡ抗体）
ＬＰＡに対するモノクローナル抗体が開発された。この抗体の構築、合成、精製、および試験については、米国特許出願第１１／７５５，７２１号（代理人整理番号  ＬＰＴ−３１００−ＵＴ４）に記載されているが、本発明と共同所有され、本明細書では、全ての目的のために、全文を参考文献として編入している。
【００９７】
（３．抗体および抗体フラグメントおよび変異体の調製方法）
本発明による抗体および抗体フラグメントは、いずれかの適切な方法、例えば、インビボ（ポリクローナルおよび単一特異抗体の場合）、細胞培養（典型的には、モノクローナル抗体の場合で、所望する抗体を発現するハイブリドーマ細胞が適切な条件下で培養される）、インビトロ翻訳反応、および組換えＤＮＡ発現系によって作製され得る（Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚ．２０３：８８−９８，  １９９１）．抗体および抗体フラグメントならびに変異体は、多様な動物細胞、好ましくは、哺乳類細胞、特に好ましくは、マウスおよびヒト細胞から作製され得る。非天然発生抗体および抗体の抗原結合部位によって付与される所望の抗原ターゲット能力のみを保有するＴ細胞レセプター変異体を含む抗体は、公知の細胞培養技術および組換えＤＮＡ発現系によって作製され得る（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２０３：８８−９８，  １９９１、Ｍｏｌｌｏｙら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３２：７３−８１，  １９９８、Ｓｃｈｏｄｉｎら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２００  ６９−７７，  １９９７を参照）。組換えＤＮＡ発現系は、典型的には、例えば、二特異性抗体およびｓＦｖ分子のような抗体変異体またはフラグメントの作製に使用される。好ましい組換えＤＮＡ発現系は、宿主細胞と特定のタンパク質を高レベルで産生するように工作された発現コンストラクトを使用する系を含む。好ましい宿主細胞と発現コンストラクトは、プラズミドまたはウイルス（バクテリオファージ）に由来する発現コンストラクトを内部に持つＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、エピソームまたは染色体に組み込まれた発現コンストラクトを内部に持つＳａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉｅａｅまたはＦｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒａｓのような酵母菌、Ｓｆ９細胞およびバキュロウイルスのような昆虫細胞およびウイルス、およびエピソームまたは染色体に組み込まれた（例えば、レトロウイルスの）発現コンストラクトを内部に持つ哺乳類細胞を含む（総説としては、Ｖｅｒｍａら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２１６：１６５−１８１，  １９９８を参照）。抗体はまた、植物（米国特許第６，０４６，０３７号、Ｍａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６８：７１６−７１９，  １９９５）、またはファージディスプレイ技術（Ｗｉｎｔｅｒら、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２：４３３−４５５，  １９９４）によっても作製することができる。
【００９８】
ゼノマウス系統は、マウスＩｇＨとＩｇＫの遺伝子座が酵母菌人工ＹＡＣ導入遺伝子上のＩｇに対応する遺伝子座によって機能的に置換されている、遺伝子改変マウスである。これらのヒトＩｇ導入遺伝子は、ヒト可変レパートリーのほとんどを担っており、ＩｇＭからＩｇＧアイソタイプへのクラス転換を受けることが可能である。ゼノマウスの免疫系は、投与されたヒト抗原を異物として認識して、強い液性応答を引き起こす。ゼノマウスと確立したハイブリドーマ技術の併用の結果として、ヒト抗体に対してサブナノモルの親和性を有する完全にヒトのＩｇＧモノクローナル抗体が得られた。「Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｎｏｎ−ｈｕｍａｎ  ａｎｉｍａｌｓ  ｃａｐａｂｌｅ  ｏｆ  ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（異種抗体産生可能なトランスジェニック非ヒト動物）」と題する米国特許第５，７７０，４２９号、「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｘｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（異種抗体の生成）と題する米国特許第６，１６２，９６３号、「Ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ  ＸｅｎｏＭｉｃｅ（免疫ゼノマウス由来のヒト抗体）」と題する米国特許第６，１５０，５８４号、「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｘｅｎｏｇｅｎｅｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（異種抗体の生成）」と題する米国特許第６，１１４，５９８号、および「Ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ  Ｘｅｎｏｍｉｃｅ（免疫ゼノマウス由来のヒト抗体）」と題する米国特許第Ｎｏ．６，０７５，１８１号を参照、総説については、Ｇｒｅｅｎ，  （１９９９）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１１−２３、Ｗｅｌｌｓ，  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  （２０００）  ７：Ｒ１８５−６、Ｄａｖｉｓら、（１９９９）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ、１８：４２１−５を参照」。
【００９９】
（Ｂ．レセプターフラグメントとイオンチャネルフラグメント）
膜結合、典型的には疎水性の、生理活性脂質レセプター由来であり、レセプターの脂質結合能力を保有している、可溶性ポリペプチドはまた、生理活性脂質および脂質代謝物を結合するために使用され得る。例えば、Ｅｄｇ（Ｓ１ＰおよびＬＰＡ）レセプターの場合は、時には、特定のアミノ酸残基が、スフィンゴ脂質結合の特異性、即ち、どのスフィンゴ脂質が特定のレセプターによって結合されるかを決定するアミノ酸に関与し得る。Ｐａｒｒｉｌｌら、（２０００）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７５：３９３７９−３９３８４、Ｗａｎｇら、（２００１）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７６：４９２１３−４９２２０。そのような情報は、関心対象であるレセプター残基、即ち、スフィンゴ脂質に結合するアミノ酸伸長を含む可溶性レセプターフラグメントを供給するために使用し得る。天然可溶性ＴＮＦαレセプター由来の可溶性レセプターフラグメントが調製されており、それらの少なくとも１つであるＥＮＢＲＥＬ（Ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）は、関節炎治療薬として開発中である。さらに、そのような残基の修飾は、当業者が可溶性レセプターフラグメントの結合特異性および／または親和性を調整することを可能にし得る。
【０１００】
特に関心の対象となる可溶性レセプターフラグメントは、Ｅｄｇ−１、Ｅｄｇ−３、Ｅｄｇ−５、Ｅｄｇ−６およびＥｄｇ−８のフラグメントを含み、その全てが望ましくないスフィンゴ脂質であるスフィンゴシン−１−リン酸（Ｓ−１−Ｐ）に結合する。Ｅｄｇ−１、Ｅｄｇ−３、Ｅｄｇ−５レセプターは特定の関心対象である。
【０１０１】
可溶性レセプターフラグメントは、限定はされないが、細胞またはレセプターを含む細胞膜調製物のタンパク質分解性消化［Ｂａｒｔｆｅｌｄら、（１９７９）  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．  ８９：５１２−９、Ｂｏｒｈａｎｉら、（１９９１）  Ｊ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１８：６８５−９］、組換えＤＮＡ技術［Ｍａｒｌｏｖｉｔｓら、（１９９８（Ｊ  Ｍｏｌ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．  １１：４９−５１、Ｈｕａｎｇら，  （１９９２）  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  ８：１３７−４４）、またはオリゴペプチドのインビトロ合成を含む、様々な方法によって調製され得る。
【０１０２】
生理活性脂質および脂質代謝物を結合するために使用し得るその他の薬剤は、１つ以上のＳ１Ｐ結合部位（例えば、ＴＲＰチャネル）を有するイオンチャネルのフラグメントを含む。Ｓ１Ｐ結合部位を保有するチャネルフラグメントは、本発明による方法における使用に有用な薬剤である。
【０１０３】
（Ｃ．核酸）
従来より、ターゲット分子を検出かつ精製するための技術は、そのようなターゲットに特異的に結合する、抗体のようなポリペプチドを使用してきた。核酸が他の核酸（例えば、相補配列を有するもの）、アプタマー（即ち、非核酸系ターゲット分子に結合する核酸）に特異的に結合することは長い間知られている。例えば、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９０）２５０：１１０４−１１１０、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９０）２５０：１１４９−１１５２、Ｔｕｅｒｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９０）２４９：５０５−５１０、Ｊｏｙｃｅ，  （１９８９）Ｇｅｎｅ  ８２：８３−８７、および「Ａｐｔａｍｅｒ  ａｎａｌｏｇｓ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｆｏｒ  ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（生体分子特異的アプタマー類似体）」と題する米国特許第５，８４０，８６７号。
【０１０４】
アプタマーに適用するように、「結合」という用語は、ＤＮＡ二重ラセンに従来より関連するワトソンークリック型結合相互作用（即ち、Ａ：ＴおよびＧ：Ｃ塩基対形成）は、はっきり限定して除外する。「アプタマー」という用語は、従って、ターゲット分子に特異的に結合する核酸または核酸誘導体を意味し、ここでこのターゲット分子は、（ｉ）核
酸ではない、または（ｉｉ）核酸または二重または三重型塩基対形成以外のメカニズムによ
って結合されるその構造エレメントである。そのような分子は、本明細書では非核酸系分子と呼ぶ。
【０１０５】
（核酸の構造）
「核酸」とは、本明細書で使用する場合は、天然源から分離される、ＰＣＲ増幅または化学合成のような技術を用いてインビトロで調製される、例えば、組換えＤＮＡ技術を介してインビボで調製される、またはいずれかの適切な方法によって調製される核酸を意味する。核酸は、どのような形（直線、環状など）、または形態（一本鎖、二重鎖、高次コイルなど）であってもよい。「核酸」という用語はまた、ペプチド核酸（ＰＮＡ）およびポリペプチド−核酸抱合体のような核酸誘導体、少なくとも１つの化学的に修飾された糖残基、主鎖、ヌクレオチド間結合、塩基、ヌクレオシド、またはヌクレオチド類似体を有する核酸、ならびに化学的に修飾された５'および／または３'末端を有する核酸、そして２つ以上のそのような修飾を有する核酸も含むがそれらに限定はされない。核酸中に存在する全ての結合が同一である必要はない。
【０１０６】
アプタマーである核酸はしばしば、（しかしその必要はないが）オリゴヌクレオチドとして調製される。オリゴヌクレオチドは、全ての、最小長が２、４、６、８、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５ヌクレオチドで、最大長が約１００、７５、５０、４０、２５、２０または１５以上のヌクレオチドである配列を有するＲＮＡ、ＤＮＡおよび混合ＲＮＡ−ＤＮＡ分子を含むがそれらに限定はされない。一般的に、特異的結合を生じるためには、最小６ヌクレオチド、好ましくは、１０ヌクレオチド、より好ましくは、１４〜２０ヌクレオチドが必要である。
【０１０７】
一般的に、オリゴヌクレオチドは、一本鎖（ｓｓ）または二重鎖（ｄｓ）ＤＮＡまたはＲＮＡ、あるいは抱合体（例えば、５'および３'ＤＮＡクランプを有するＲＮＡ分子）またはハイブリッド（例えば、ＲＮＡ：ＤＮＡ対分子）、または誘導体（それらの化学的に修飾された形）であり得る。ただし、ＤＮＡは多くの場合ＲＮＡよりも不安定でないため、一本鎖ＤＮＡが好ましい。同様に、アプタマーの特異性または安定性を強化する化学的修飾が好ましい。
【０１０８】
（核酸の化学的修飾）
アプタマーおよびその他の核酸に組み込むことができる化学的修飾は、限定または拝外することなく、塩基修飾、糖修飾、および主鎖修飾を含む。
【０１０９】
塩基修飾：アプタマーの塩基性残基は、天然由来塩基（例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ、Ｕ、５ＭＣなど）以外であってもよい。プリンおよびピリミジンの誘導体は当該分野に公知である。列挙的であって包括的ではないリストは、アジリジニルシトシン、４−アセチルシトシン、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルアデニン、１−メチルプソイドウラシル、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン（５ＭＣ）、Ｎ６−メチルアデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルクエオシン、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ−６−イソペンテニラデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、プソイドウラシル、クエオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸、および２，６−ジアミノプリンを含む。１つ以上のそのような塩基誘導体を組み込む核酸に加えて、プリンまたはピリミジン塩基を欠くヌクレオチド残基を有する核酸もまた、アプタマーに含むことができる。
【０１１０】
糖修飾：アプタマー中の糖残基は、通常のリボースおよびデオキシリボース残基以外であり得る。限定はされないがその一例は、フラノース残基の２'位での置換は、ヌクレアーゼの安定性を増強する。列挙的であって包括的ではない修飾糖残基のリストは、２'−Ｏ−メチル、２'−Ｏ−アルキル、２'−Ｏ−アリル、２'−Ｓ−アルキル、２'−Ｓ−アリル、２'−フルオロ−、２'−ハロ、または２'−アジド−リボースのような２'置換糖、炭素環式糖類似体、α−アノマー糖、アラビノース、キシロースまたはリキソースのようなエピマ糖、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体およびメチルリボシド、エチルリボシドまたはプロピルリボシドのような脱塩基ヌクレオシド類似体を含む。
【０１１１】
主鎖修飾：化学的修飾を受けた主鎖の例は、限定はされないが、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、３'−アルキレンホスホン酸塩およびキラルホスホン酸塩を含むメチルおよびその他のアルキルホスホン酸塩、ホスフィン酸塩、３'−アミノホスホロアミダートおよびアミノアルキルホスホロアミダートを含むホスホロアミダート、チオノホスホロアミダート、チオノアルキルホスホン酸塩、チオノアルキルホスホトリエステル、通常の３'−５'結合を有するボラノリン酸、それらの２'−５'連結類似体、およびヌクレオシドユニットの隣接対が、３'−５'から５'−３'または２'−５'から５'−２'に連結している逆極性を有するものを含む。化学修飾を受けているが、リン原子を含まない主鎖は、短鎖アルキルまたは環式アルキルヌクレオシド間結合、混合型ヘテロ原子およびアルキルまたは環式アルキルヌクレオシド間結合、または１つ以上の短鎖ヘテロ原子または複素環式ヌクレオシド間結合によって形成される主鎖を有し、モルホリノ結合、シロキサン主鎖、スルフィド、スルホキシドおよびスルホン主鎖、ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル主鎖、メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル主鎖、アルケン含有主鎖、スルファマート主鎖、メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ主鎖、スルホン酸塩およびスルホンアミド主鎖、およびアミド主鎖を含むがそれらに限定はされない。
【０１１２】
（アプタマーの調製および同定）
一般的に、アプタマーを同定する技術は、予め選択した非核酸ターゲット分子を、アプタマー候補である異なる核酸の混合物（２〜５０メンバー）、プール（５０〜５，０００メンバー）またはライブラリー（５０以上のメンバー）と共に、ターゲット分子がアプタマーと複合体を形成することを可能にする条件下で、インキュベートする。「異なる核酸」によって、各アプタマー候補のヌクレオチド配列が、その他のメンバーと異なること、即ち、アプタマー候補の配列は、それぞれについてランダムであることを意味する。ランダム性は様々な方法によって導入でき、その例は、核酸を内部に持つ細胞を変異原性薬剤に曝露することによってインビボで、核酸の化学的処理によってインビトロで、または複製プロセスの忠実度を低下させる条件下で故意に進行させる生化学的複製（例えば、ＰＣＲ）によってインビトロで実行することができる突然変異誘発、配列内の少なくとも１つの位置に関してランダムである予め選択された１つの配列を有する複数の核酸を合成することによるランダム化化学合成である。「予め選択された配列の１つの位置でランダム」という表現は、通常、例えば、できるだけ１００％Ａに近く（例えば、５'−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ａ−Ｇ−Ｔ−３'）合成される配列の１つの位置は、その位置（５'−Ｃ−Ｔ−Ｔ−Ｎ−Ｇ−Ｔ−３'、ここでＮは、ランダム化位置を示し、例えば、合成反応は、Ａ、Ｔ、Ｃ、およびＣを各２５％含むか、またはＡをｘ％、Ｔをｗ％、Ｃをｙ％、およびＧをｚ％含み、ここでｘ＋ｗ＋ｙ＋ｚ＝１００）においてランダムに合成されることが可能であることを意味する。このプロセスの後の段階では、配列のランダム化は益々少なくなり、共通配列が出現する。そのような場合、独自のヌクレオチド配列を有するアプタマーを最終的に得ることが好ましい。
【０１１３】
アプタマーとアプタマーのプールは、インビトロ合成、組換えＤＮＡ技術、ＰＣＲ増幅などを使用する技術を含む、適切な技術によって、調製、同定、特徴づけ、および／または精製される。形成後、ターゲット：アプタマー複合体は次に、核酸混合物の非複合メンバーから分離され、この複合体から調製できる核酸がアプタマー候補である（本技術の初期段階では、アプタマーは、一般的には、ターゲットに対する異なる度合いの特異性を有する多数のヌクレオチド配列の集団である）。結果的に生じるアプタマー（混合物またはプール）は次に、この一連のステップを繰り返し反復する間に開始アプタマー（ライブラリーまたはプール）に置換される。限られた数の十分な特異性を有する核酸（例えば、プールまたは混合物、好ましくは、メンバーが１０以下の混合物、最も好ましくは、メンバー数が１のもの）が得られた場合、アプタマーは配列決定され、特徴づけられる。所定のアプタマーの純正調製物は、適切な技術（例えば、ＰＣＲ増幅、インビトロ化学合成など）によって生成される。
【０１１４】
例えば、ＴｕｅｒｋおよびＧｏｌｄ［Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９０）  ２４９：５０５−５１０］は、試験管内人工進化法（ＳＥＬＥＸ）と呼ばれる方法の用途を開示する。この方法では、特定の位置でランダム化された核酸分子のプールが、核酸結合タンパク質に対する結合について選択を受ける（例えば、国際公開第ＷＯ９１／１９８１３号および米国特許第５，２７０，１６３号を参照）。そのようにして獲得されたオリゴヌクレオチドが配列決定され、さもなければ特徴づけられる。Ｋｉｎｚｌｅｒらは、同様な技術を使用して、ＤＮＡ結合ポリペプチドによって特異的に結合される合成二重鎖ＤＮＡ分子を同定した。Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  （１９８９）  １７：３６４５−３６５３．  Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎらは、多数のランダム配列ＲＮＡ分子の生成、ならびにシバクロンブルーのような特殊な色素に対して特異的に結合するものの選択かつ同定を開示する。Ｎａｔｕｒｅ  （１９９０）  ３４６：８１８−８２２。
【０１１５】
非核酸ターゲット分子に結合する核酸を同定するその他の技術は、ランダム化フラグメントの合成的非ランダム化として公知のＥｃｋｅｒ，  Ｄ．  Ｊ．ら［Ｎｕｃ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２１，  １８５３  （１９９３）］によって開示されたオリゴヌクレオチドコンビナトリアル技術であり、この技術は、オリゴヌクレオチド類似ライブラリー、プールおよび混合物の加速的に簡略化されたセットの反復合成とスクリーニングに基づく［Ｔｕｅｒｋ，  Ｃ．およびＧｏｌｄ，  Ｌ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９，  ５０５  （１９９０）］。開始ライブラリーは、各プールの１つの位置に公知の類似体を含み、残りの位置には全てのその他の類似体の等モル混合物を含む、決まった長さのオリゴヌクレオチド類似体からなる。合成と選択の各ラウンドで、最適化された核酸リガンドのアプタマーの配列が発見されるまで、オリゴマーの少なくとも１つの位置のアイデンティティーが決定される。
【０１１６】
いったんＳＵＲＦ、ＳＥＬＥＸまたはその他のいずれかの技術によって、特定のアプタマー候補が同定されると、そのヌクレオチド配列を（当該分野で公知のように）決定することができ、その三次元分子構造を核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって検討することができる。これらの技術は、Ｐａｄｍａｎａｂｈａｎ，  Ｋ．  ら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２４，  １７６５１  （１９９３）、Ｗａｎｇ，  Ｋ．  Ｙ．  ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３２，  １８９９  （１９９３）、およびＭａｃａｙａ，  Ｒ．  Ｆ．ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０，  ３７４５  （１９９３）において、トロンビンに結合する核酸リガンドの三次元構造の決定に関連して説明される。選択されたアプタマーは、１つ以上の修飾塩基、糖または主鎖結合を用いて、再合成され得る。アプタマーは、本質的に、結合特異性を供与するために必要な核酸の最小配列からなるが、５'末端、３'末端、またはその両方に延長してもよく、あるいはその他の誘導体化または抱合体化されてもよい。
【０１１７】
（Ｄ．小分子）
「小分子」という用語は、生物学的プロセスに影響を及ぼすように作用できるポリペプチドおよび核酸以外の化学物質またはその他の部分を含む。小分子は、現在公知でかつ使用されている治療薬をいくつでも含むことができ、生物学的機能のスクリーニング目的のためのそのような分子のライブラリーにおいて合成される小分子であり得る。小分子は、大きさによって巨大分子から区別される。本発明による小分子は、通常約５，０００ダルトン（Ｄａ）以下、好ましくは約２，５００Ｄａ以下、より好ましくは１，０００Ｄａ以下、最も好ましくは約５００Ｄａ以下の分子量を有する。
【０１１８】
小分子は、有機化合物、ペプチド模倣体およびそれらの抱合体を含むが、それらに限定はされない。本明細書に使用する場合、「有機化合物」という用語は、核酸およびポリペプチドのような巨大分子以外の全ての炭素ベースの化合物を意味する。炭素以外に、有機化合物は、カルシウム、塩素、フッ素、銅、水素、鉄、カリウム、窒素、酸素、硫黄およびその他の元素を含み得る。有機化合物は、芳香族または脂肪族の形であり得る。有機化合物の例は、限定はされないが、アセトン、アルコール、アニリン、炭水化物、単糖、オリゴ糖、多糖、アミノ酸、ヌクレオシド、ヌクレオチド、脂質、レチノイド、ステロイド、プロテオグリカン、ケトン、アルデヒド、飽和、不飽和および多価不飽和脂肪、油とワックス、アルケン、エステル、エーテル、チオール、硫化物、環式化合物、複素環式化合物、イミダゾールおよびフェノールを含む。本明細書で使用される場合の有機化合物はまた、ニトロ化有機化合物およびハロゲン化（例えば、塩素付加）有機化合物を含む。ペプチド模倣体調製方法を以下に説明する。小分子のコレクション、および本発明に従って同定される小分子は、加速器質量分析法（ＡＭＳ、Ｔｕｒｔｅｌｔａｕｂら、（２０００）  Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ  ６：９９１−１００７、およびＥｎｊａｌｂａｌら、（２０００）  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ  Ｒｅｖ  １９：１３９−６１を参照。）などの技術によって特徴づけられる。
【０１１９】
好ましい小分子は、比較的簡単に、コストをかけずに製造、製剤化または調製される。好ましい小分子は、様々な保存条件下で安定である。好ましい小分子は、巨大分子と強く会合して、生物学的に活性があり、改善された医薬品としての特性を有する分子を形成する。改善された医薬品としての特性は、所望する生物活性のために好ましい循環時間、分布、代謝、修飾、排泄、分泌、排出、および安定性の変化を含む。改善された医薬品としての特性は、化合物実体の毒性学的および有効性特性の変化を含む。
【０１２０】
（Ｅ．ペプチド模倣体）
一般的に、「ポリペプチド模倣体」（「ペプチド模倣体」）は、ポリペプチドの生物活性を模倣する分子であるが、化学的性質ではペプチド性ではない。ある実施態様では、ペプチド模倣体は、ペプチド結合（即ち、アミノ酸間のアミド結合）を含まない分子であるが、ペプチド模倣体と言う用語は、プソイドペプチド、セミペプチドおよびペプトイドのように、完全にペプチド性ではない分子を含み得る。広範な定義によるいくつかのペプチド模倣体の例（例えば、ポリペプチドの一部が、ペプチド結合を欠如する構造によって置換されている）を以下に説明する。完全にまたは部分的に非ペプチド特性である如何に係わらず、本発明に従うペプチド模倣体は、ポリペプチドの活性基の三次元配置によく似た反応性化学部分の空間配置を備えている。このよく似た活性部位ジオメトリの結果、このペプチド模倣体は、ポリペプチドの生物活性によく似た生物学的効果を提示し得る。
【０１２１】
ポリペプチド自体よりも所定のポリペプチドの模倣体を使用することには、いくつかの利点の可能性がある。例えば、ポリペプチドは、２つの望ましくない特質、即ち、バイオアベイラビリティ（生物学的利用度）の乏しさと作用時間が短いことを提示することがある。ペプチド模倣体はしばしば、経口活性であり、かつ長期間作用を持続するのに十分に小さい。また、ポリペプチドには、ペプチド模倣体では避けることが可能な安定性、保存および免疫反応性に関連する問題がある。
【０１２２】
所望する生物活性を有するリードまたはその他のポリペプチド候補は、よく似た生物活性を持つペプチド模倣体の開発に使用することができる。ポリペプチドからペプチド模倣体を開発する技術は公知である。ペプチド結合は、非ペプチド結合に置換されることが可能であり、それによってペプチド模倣体は、本来のポリペプチドと同様な構造、従って生物活性を採り入れることができる。アミノ酸の化学基をよく似た構造、形状または反応性を持つその他の化学基に置換することによって、更なる修飾をまた作成することができる。ペプチド模倣体の開発は、ＮＭＲ分光学、結晶学および／またはコンピュータ支援分子モデリングによって、本来のポリペプチド（遊離型またはリガンド結合型どちらか）の三次構造を決定することによって促進することができる。これらの技術は、本来のポリペプチドよりも高い力価および／または優れたバイオアベイラビリティおよび／または優れた安定性を持つ新しい組成物の開発を支援する。Ｄｅａｎ  （１９９４），  ＢｉｏＥｓｓａｙｓ，  １６：  ６８３−６８７、ＣｏｈｅｎおよびＳｈａｔｚｍｉｌｌｅｒ  （１９９３），  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｇｒａｐｈ，  １１：  １６６−１７３、ＷｉｌｅｙおよびＲｉｃｈ  （１９９３），  Ｍｅｄ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ，  １３：  ３２７−３８４、Ｍｏｏｒｅ  （１９９４），  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ，  １５：  １２４−１２９、Ｈｒｕｂｙ  （１９９３），  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，  ３３：１０７３−１０８２、Ｂｕｇｇら（１９９３），  Ｓｃｉ  Ａｍ，  ２６９：９２−９８，  全て参考文献として本明細書中に編入されている。
【０１２３】
ペプチド模倣体の特定例は米国特許第７，１６９，３９０号に開示されているが、これは同一出願人によるものであって、本明細書では、その全体を包含している。これらの例は例示であり、その他のまたはさらなる変形を限定するものではない。
【０１２４】
（Ｆ．ポリペプチドおよびポリペプチド誘導体）
ポリペプチドおよびそれらの誘導体の例は、米国特許第７，１６９，３９０号に開示されているが、これは同一出願人によるものであって、本明細書では、その全体を包含している。これらの例は例示であり、その他のまたはさらなる変形を限定するものではない。
【０１２５】
（ＩＩ．適用）
本発明は、１つ以上の生理活性脂質、またはその前駆物質または代謝物の活性または濃度を変化する１つ以上の治療薬を用いて、自己免疫疾患および状態を治療または予防するための方法を導く。本発明による治療法と組成物は、「有効濃度」、即ち、生理活性脂質の絶対的、相対的、有効および／または利用可能な濃度および／または活性を変化することによって作用する。生理活性脂質の有効濃度を低下させることは、下流効果を含む、ターゲット脂質またはその望ましくない影響を中和すると言うことができる。
【０１２６】
特定の理論に拘束されることを望むものではないが、Ｓ１Ｐおよび／またはＬＰＡ、および／またはそれらの代謝物または下流エフェクターを含む、生理活性シグナル伝達脂質は、異常な、望ましくないまたは過剰な免疫応答によって特徴づけられる様々な疾患および疾病の発症を起因したり、発症に寄与する可能性があると考えられる。したがって、この組成物と方法は、特に、特定のターゲット脂質（例えば、Ｓ１ＰまたはＬＰＡ）の有効インビボ濃度を低下させることにより、これらの免疫関連疾患と疾病の治療に使用することができる。特に、本発明による組成物と方法は、定義によって、少なくとも部分的には、異常な、過剰なまたは望ましくない免疫応答によって特徴づけられる、自己免疫疾患の治療に有効であると考えられる。本明細書において、「望ましくない」とは、疾患プロセスに関与するために望ましくない免疫応答（例えば、自己免疫応答）、または、移植片拒絶や、不適切なリンパ球浸潤によって特徴づけられる疾患の症例のように、過剰に存在する場合に疾患の一因となるその他の正常な免疫応答を意味する。
【０１２７】
本発明に従って治療し得る免疫応答関連疾患のいくつかのクラスの例を以下に述べる。多くの疾患および状態が、少なくとも部分的には、複数の病態プロセスによって特徴づけられ、本明細書が提供する分類は、説明上の便宜のためであり、本発明を限定するものではないことが理解されることであろう。
【０１２８】
（Ａ．多発性硬化症治療のために生理活性脂質の有効濃度を低下）
本明細書に前述したように、スフィンゴシン類似体ＦＴＹ７２０は、自己免疫疾患である多発性硬化症を罹患する患者の再発とＣＮＳ病巣の減少に有効であることが示されている。ＦＴＹは、Ｓ１Ｐレセプターアンタゴニストであり、従ってＳ１Ｐシグナル伝達を遮断するため、リゾ脂質Ｓ１ＰおよびＬＰＡのような生理活性シグナル伝達脂質に結合し、それらの有効濃度を低下させる薬剤はまた、ＭＳおよびその他の自己免疫疾患および状態の治療に有効性を実証するはずであると考えられている。これは、ＭＳの標準動物モデルとして広く使用されている、急性実験自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデルを含む、動物モデルを使用して実証されている。ラットＥＡＥモデルでＦＴＹは、ＥＡＥ疾患の発症に対してほぼ完全な保護を与え、Ｔ細胞の脊髄への浸潤の減少を伴った。通常は、ＥＡＥでは、ミエリン塩基性タンパク質特異性Ｔリンパ球がＣＮＳの有髄組織を攻撃する。ＣＮＳの炎症病巣はまた、ＦＴＹ投与動物には存在しないが、コントロール動物には存在する。Ｆｕｊｉｎｏら、（２００３）  Ｐｈａｒｍ  ａｎｄ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒａｐ．  ３０５：７０−７７。
【０１２９】
（Ｂ．関節炎治療のために生理活性脂質の有効濃度を低下）
関節リウマチ（ＲＡ）は、関節の炎症と壊変に起因する疼痛と身体障害を生じる自己免疫疾患である。関節リウマチの２つの動物モデルで、ラットアジュバント誘発性関節炎（ＡＡ）およびコラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）モデルにおいて、ＦＴＹが、抗リウマチ化合物であるミゾリビンとプレドニゾロンと比較された。ある用量でのＦＴＹ７２０の効力は、ＡＡおよびＣＩＡモデルの両方において、ミゾリビンとプレドニゾロンと比較してほとんど等しいか、またはより高かった。他の化合物ではなく、ＦＴＹが、投与動物において、循環リンパ球量を有意に減少した。ＦＴＹはまた、異常な副作用を提示しなかったため、著者らは、有害事象を示した他の２つの化合物よりも高い安全性範囲を有すると結論するに至った。Ｍａｔｓｕｕｒａ，  Ｍ．ら、（２０００），  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．，  ２２：３２３−３３１．ＦＴＹは、Ｓ１Ｐレセプターアンタゴニストであり、従ってＳ１Ｐシグナル伝達を遮断するため、リゾ脂質Ｓ１ＰおよびＬＰＡのような生理活性シグナル伝達脂質に結合し、それらの有効濃度を低下させる薬剤はまた、ＲＡおよびその他の自己免疫疾患および状態の治療に有効性を実証するではずであると考えられている。
【０１３０】
（Ｃ．糖尿病治療のために生理活性脂質の有効濃度を低下）
１型糖尿病は、免疫系が、膵臓のランゲルハンス島のβ細胞を損傷および／または破壊して、インスリン産生ができなくなる、自己免疫疾患である。他の自己免疫状態および同種移植片拒絶の防止におけるＦＴＹ７２０の有効性に基づき、非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスにおける自己免疫性糖尿病の発症に対するこの化合物の影響が検討された。４週齢から動物にＦＴＹの経口投与を開始した。ほとんどの非投与ＮＯＤマウスは、３５週齢までに糖尿病になったが、ＦＴＹを毎日投与した場合は、ほとんど全ての投与マウスにおいて糖尿病の発症を防止した。３５週齢時にＦＴＹ投与を停止すると、５匹のマウスでは２週間以内に糖尿病が発症したが、残りのマウスは最高４４週齢まで非糖尿病状態を維持した。投与期間を通じて薬の副作用は見られなかった。ＦＴＹ７２０はまた、ＮＯＤマウスマウスにおいて、シクロホスファミド誘発性糖尿病を防止した。これによって、著者らは、ＦＴＹは安全かつ有効な治療薬であり、また前糖尿病の人々の長期療法に有効であり得ると結論した。Ｍａｋｉ  Ｔ．ら（２００２）  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，  ７４：１６８４−６．明らかに糖尿病のＮＯＤマウスにおけるＦＴＹ７２０の連続経口投与はまた、糖尿病の完全な逆転を導くことが示された。Ｍａｋｉ，  Ｔ．ら、（２００５）  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，  ７９：１０５１−５．  ＦＴＹは、Ｓ１Ｐレセプターアンタゴニストであり、従ってＳ１Ｐシグナル伝達を遮断するため、リゾ脂質Ｓ１ＰおよびＬＰＡのような生理活性シグナル伝達脂質に結合し、それらの有効濃度を低下させる薬剤はまた、１型糖尿病およびその他の自己免疫疾患および状態の治療に有効性を実証するはずであると考えられている。
【０１３１】
（Ｄ．強皮症治療のために生理活性脂質の有効濃度を低下）
強皮症は、皮膚の瘢痕または肥厚を起因する自己免疫疾患であり、ときには、肺、心臓および／または腎臓を含む、身体の他の部分にも併発する。強皮症は、身体の皮膚および臓器における瘢痕組織（線維症）の形成によって特徴づけられ、これは、罹患領域の肥厚と硬化を招き、その結果として機能の低下に繋がる可能性がある。強皮症財団によれば、現在強皮症を罹患している米国人はおよそ３０万人にのぼる。罹患している人々の三分の一以下が広汎性疾患を患い、残りの三分の二は、主に皮膚症状を有する。この疾患が肺に影響を及ぼして瘢痕を生じると、肺はもはや本来あるべきように拡大できないために、呼吸が制限されるようになる可能性がある。呼吸能力を測定するために、医師は、努力肺活量（ＦＶＣ）を評価する装置を使用する。ＦＶＣが推定読み取り値の５０％以下の人々では、強皮症関連肺疾患による１０年死亡率がおよそ４２％である。死亡率がこれほど高い１つの理由は、現在有効な治療法がないためである。
【０１３２】
本出願の実施例に記載のように、Ｓ１ＰとＬＰＡは、線維芽細胞活性化、増殖、およびそれに起因して不適応な瘢痕とリモデリングに関連する線維芽細胞活性の増加の一因となり得る向線維化（ｐｒｏ−ｆｉｂｒｏｔｉｃ）増殖因子であることが既存の証拠によって明示されている。さらに、皮膚および線維芽細胞のその他のタイプの活動においてＳ１ＰとＬＰＡが役割を果たしている可能性が実証されている。例えば、ＬＰＡは、マウス皮膚線維芽細胞の遊走を刺激すること［Ｈａｍａら、（２００４）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７９：１７６３４−９］、ならびにヒト皮膚線維芽細胞は、いくつかのＳ１Ｐレセプターサブタイプを発現すること［Ｚｈａｎｇら、（１９９９）  Ｂｌｏｏｄ  ９３：２９８４−９０］が示されている。線維芽細胞活性に対するＳ１Ｐの直接的影響に加えて、Ｓ１Ｐはまた、線維芽細胞活性に対する多数の間接的影響を有する可能性がある。例えば、Ｓ１Ｐは、ＴＧＦ−βおよび血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）のようなよく知られているその他の向線維化因子の作用を促進し得る。ＴＧＦ−βは、最も広く研究されており、線維症の原因であることが認められている。Ｄｅｓｍｏｕｌｉｅｒｅら、  （１９９３）  Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １２２：１０３−１１１．ＴＧＦ−βは、ＳｐｈＫ１の発現と活性を上方制御し、これはＥＣＭ分解を抑制するタンパク質である、メタロプロテイナーゼ１（ＴＩＭＰ−１）の組織阻害物質の発現増加を招く。Ｙａｍａｎａｋａら、（２００４）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７９：  ５３９９４−５４００１．ＴＩＭＰ−１の発現増加は、心不全患者における間質性線維症と弛緩性機能障害に関連している。Ｈｅｙｍａｎｓら、（２００５）  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  １６６：  １５−２５．反面、Ｓ１Ｐは、ＴＧＦ−βの発現と遊離を刺激する。Ｎｏｒａｔａら、（２００５）  Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １１１：  ２８０５−２８１１．また、Ｓ１ＰとＰＤＧＦ間のクロストークの明確な証拠もある。Ｓ１ＰはＰＤＧＦの発現を直接刺激する。Ｕｓｕｉら、（２００４）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７９：  １２３００−１２３１１．さらに、Ｓ１Ｐ１レセプターとＰＤＧＦレセプターは互いに結合し、その連関が、様々な細胞タイプの増殖と遊走に寄与する下流シグナル伝達についてのＰＤＧＦ活性化のために必要である。Ｌｏｎｇら、（２００４）  Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  Ｏｔｈｅｒ  Ｌｉｐｉｄ  Ｍｅｄｉａｔ  ８０：  ７４−８０、Ｂａｕｄｈｕｉｎら、（２００４）  Ｆａｓｅｂ  Ｊ  １８：  ３４１−３４３．したがって、線維症に対するＴＧＦ−βとＰＤＧＦの影響は、部分的には、Ｓ１Ｐシグナル伝達経路とのクロストークに起因している可能性がある。そのため、本発明による組成物と方法は、特に、特定のターゲット脂質（例えば、Ｓ１ＰまたはＬＰＡ）の有効インビボ濃度を低下させることにより、強皮症の治療に使用することができる。
【０１３３】
全身性強皮症は、ＰＤＧＦレセプターに対する刺激性自己抗体によって増悪されると考えられており［Ｂａｒｏｎｉら、（２００６）  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．  ３５４：２６６７−７６］、ＰＤＧＦレセプターは、ＴＧＦ−βにに応答して、強皮症線維芽細胞を上方制御する。Ｙａｍａｋａｇｅら、（１９９２）  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．  １７５：１２２７−３４．Ｓ１Ｐ、ＰＤＧＦおよびＴＧＦ−βシグナル伝達系間の実質的なクロストークのために、Ｓ１Ｐ生理活性を抗Ｓ１Ｐ薬（例えば、抗Ｓ１Ｐ抗体）で遮断することによって、ＰＤＧＦとＴＧＦ−βの向硬化作用を間接的に緩和することが可能であろう。さらに、そのような抗Ｓ１Ｐ薬による治療は、疾患進行の原因となる皮膚および線維芽細胞のその他の形態における線維症を含む、Ｓ１Ｐの直接的な影響を緩和することにより、強皮症患者に恩恵をもたらすことが可能であろう。したがって、リゾ脂質Ｓ１ＰおよびＬＰＡのような生理活性シグナル伝達脂質に結合し、それらの有効濃度を低下させる薬剤はまた、強皮症ならびにその他の自己免疫疾患および状態、特に線維性コンポーネントを有するものの治療に有効性を実証するはずであると考えられている。このことによって、線維症または免疫応答どちらかのみを調節する治療薬と比較して、これらの薬は明確に優位となる。「炎症性瘢痕」とは、本来は慢性腎臓病との関連において、炎症と線維症の併発に対して与えられた名称である。解説については、Ｐｅｔｅｒｓら、（２００４），  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｌ．  ６６：１４３４−１４４３を参照。生理活性シグナル伝達脂質の有効濃度を低下させる薬剤は、瘢痕形成と自己免疫および／または炎症性コンポーネントの両方によって特徴づけられる状態に特に有効なはずであると考えられる。
【０１３４】
（Ｅ．自己移植片拒絶の防止と治療のために生理活性脂質の有効濃度を低下）
角膜移植の動物モデルにおいて、ＦＴＹ７２０投与マウスは、経口投与した場合に、同所性角膜移植片生存の顕著な延長を示した。Ｚｈａｎｇら（２００３），  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，  ｖｏｌ  ７６：  １５１１−３．ＦＴＹ経口投与はまた、ラットからマウスへの角膜の異種移植モデルにおいて、拒絶を有意に遅延し、かつその重症度を低減した。Ｓｅｄｌａｋｏｖａら、（２００５），  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，  ｖｏｌ  ７９，  ２９７−３０３．同種移植片拒絶についての既知の病因に、Ｓ１Ｐシグナル伝達の影響を調節することは移植片生存を好転し得ることを示唆するこれらのデータを組み合わせると、生理活性脂質に結合し、それによってその有効濃度を低下させる薬剤はまた、異常な、望ましくないまたは過剰な免疫応答によって特徴づけられる同種移植片拒絶、移植片対宿主病およびその他の状態の治療に有効なはずであると考えられている。
【０１３５】
ＦＴＹ７２０は、心臓、小腸、腎臓および肝臓同種移植の動物モデル（ラット、イヌ）において、移植片拒絶を防止し、長期間の移植片生着を促進することが示されている。安定した腎臓移植患者を対象としたＦＴＹのヒト治験において、ＦＴＹは、忍容性が良好であり、予測されていた可逆性のリンパ球減少症を起因した。Ｂｕｄｄｅ，  Ｋ．ら、（２００２）  Ｊ．  Ａｍ．  Ｓｏｃ．  Ｎｅｐｈｒｏｌ．  １３：１０７３−１０８３．デノボ（新生）腎臓移植におけるＦＴＹの有効性と安全性を評価するための第２ａ相治験では、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）との併用において、ＦＴＹは、腎臓移植後の急性拒絶防止のために、シクロスポリンとＭＭＦの併用と同様に有効であり、忍容性が良好であった。Ｔｅｄｅｓｃｏ−Ｓｉｌｖａ  Ｈ．ら、（２００５）  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，  ７９：１５５３−６０。
【０１３６】
ＦＴＹは、Ｓ１Ｐレセプターアンタゴニストであり、従ってＳ１Ｐシグナル伝達を遮断するため、リゾ脂質Ｓ１ＰおよびＬＰＡのような生理活性シグナル伝達脂質に結合し、それらの有効濃度を低下させる薬剤はまた、少なくとも部分的には、異常な、過剰なまたは望ましくない免疫応答によって特徴づけられる、同種移植拒絶、移植片対宿主病およびその他の状態の治療においても有効性を実証するはずであると考えられている。
【０１３７】
（Ｆ．糸球体腎炎の防止と治療のために生理活性脂質の有効濃度を低下）
糸球体腎炎のような糸球体の免疫疾患は、末期腎臓病の主要な原因に数えられる。これらの疾患は共通して、尿細管間質性コンパートメントの線維症と炎症によって特徴づけられる進行過程をたどる。「炎症性瘢痕」とは、本来は慢性腎臓病との関連において、炎症と線維症の併発に対して与えられた名称である。解説については、Ｐｅｔｅｒｓら、（２００４），  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｌ．  ６６：１４３４−１４４３を参照。生理活性シグナル伝達脂質の有効濃度を低下させる薬剤は、瘢痕形成と免疫および／または炎症性コンポーネントの両方によって特徴づけられる状態に特に有効なはずであると考えられる。
【０１３８】
糸球体腎炎のラットモデルにおいて、ＦＴＹ７２０投与は、循環リンパ球数ならびに腎臓のリンパ球浸潤を減少した。疾患進行の過程は、有意に遅延された。Ｐｅｔｅｒｓら、前出。．ＦＴＹは、Ｓ１Ｐレセプターアンタゴニストであり、従ってＳ１Ｐシグナル伝達を遮断するため、リゾ脂質Ｓ１ＰおよびＬＰＡのような生理活性シグナル伝達脂質に結合し、それらの有効濃度を低下させる薬剤はまた、少なくとも部分的には、異常な、過剰なまたは望ましくない免疫応答によって特徴づけられる、糸球体腎炎、その他の免疫に基づく腎臓病およびその他の状態の治療においても有効性を実証するはずであると考えられている。
【０１３９】
（ＩＩＩ．投与方法）
上記の例のような疾患および状態の治療は、異なる製剤とデバイスを用いる様々なルートで投与することができる。適切な薬剤として許容される希釈剤、担体、および賦形剤は、当該分野に公知である。
【０１４０】
当業者には、いかなる特定の治療プロトコルの投与量も容易に決定し得ることが理解されるであろう。適量は、１０μｇ／用量〜１０ｇ／用量の範囲内であり、好ましくは、１０ｍｇ／用量〜１ｇ／用量の範囲内に入ることが予測され得る。
【０１４１】
原薬は、限定はされないが、吸入、および局所投与を含む、全身、皮下、真皮内、粘膜投与を含む、当該分野に公知の技術によって投与され得る。粘膜とは、身体の内腔を覆う上皮組織を意味する。例えば、粘膜は、口、食道、胃、腸、および肛門を含む消化管、鼻道、気管、気管支、および肺を含む気道、および生殖器を含む。本明細書の目的では、粘膜はまた、眼の外表面、即ち、角膜および結膜も含む。（全身投与に対しての）局所投与は、全身的副作用が生じる可能性を限定し得るが、治療効果を得るため、有利であり得る。
【０１４２】
本発明で使用する医薬品組成物は、限定はされないが、溶液、エマルジョン、およびリポソーム含有製剤を含む。これらの組成物は、限定はされないが、調製済み液体、自己乳化型固体と自己乳化型半固体を含む様々な成分から生成され得る。
【０１４３】
本発明で使用する医薬品製剤は、製薬業界で公知の従来の技術に従って調製され得る。そのような技術は、有効成分を薬剤担体または賦形剤と組み合わせるステップを含む。好ましい担体は、特に、組成物がヒトへの治療用途を意図する場合、薬剤として許容されるものを含む。非ヒト治療への応用には（例えば、ペット、家畜、サカナ、または家禽）、獣医学的に許容される担体を使用すればよい。一般的には、製剤は、有効成分を液性担体、または微細に分割した固体担体、あるいはその両方と均一かつ均質に組み合わせ、次に、必要に応じて、製品を成形することによって調製される。
【０１４４】
本発明による組成物は、限定はされないが、錠剤、カプセル、液体シロップ、ソフトジェル、坐薬、および浣腸のような多数の実現可能な剤形に製剤化することができる。本発明による組成物はまた、水性、非水性または混合メディア中の懸濁液として製剤化することもできる。水性懸濁液はさらに、懸濁液の粘度を増加する物質、例えば、カルボキシメチルセルロース、ソルビトール、および／またはデキストランを含んでもよい。懸濁液はまた、安定剤を含んでもよい。
【０１４５】
１つの実施態様では、医薬品組成物は、フォーム（泡剤）として製剤化して使用することができる。医薬品泡剤は、限定はされないが、エマルジョン、マイクロエマルジョン、クリーム、ゼリーおよびリポソームのような製剤を含む。
【０１４６】
本質的には天然にある場合と同様に、これらの製剤は、その成分と最終製品の一貫性において異なるものとなる。そのような組成物と製剤の調製に関するノウハウは、一般的には製薬および製剤分野の当業者には公知であり、本発明による組成物の製剤に適用できる。
【０１４７】
治療法のパーフォーマンスを向上し、治療に都合がよいようにしたり、または製剤化された抗体がその意図され、認容される目的のためにのみ使用されることを保証するために、様々な賦形剤をまた、製剤化された抗体に添加することもできる。賦形剤の例は、ｐＨをコントロールする化学物質、抗菌剤、抗体力価の損失防止のための保存剤、例えば、特定の投与ルートのみについて製剤を識別するための色素、製剤中の抗体濃度を増加するための可溶剤、浸透増強剤および等張性および／または粘性を調節するための薬剤の使用を含む。抗体の半減期を延長するために、例えば、プロテアーゼの阻害剤を添加することができるであろう。
【０１４８】
抗体はまた、前述した製剤またはデバイスの１つの中に投与されるプロドラッグを産生するために、化学的に修飾され得る。活性型抗体は次に、内在性酵素の作用によって遊離される。本出願で考慮されている眼の酵素候補は、様々なチトクロームｐ４５０、アルデヒド還元酵素、ケトン還元酵素、エステル分解酵素またはＮ−アセチル−β−グルコサミダーゼである。抗体に対するその他の化学的修飾は、その分子量を増加し、その結果として、眼の中での抗体の存在時間を増加できる。そのような化学的修飾の例は、一般的またはジスルフィド［Ｓｈａｕｎａｋら（２００６），  Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ  、２：３１２−３］またはチオール［Ｄｏｈｅｒｔｙら（２００５），  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ、１６：１２９１−８］のような官能基に特異的なプロセスであるペグ化である。
【実施例】
【０１４９】
本発明はさらに、以下の詳細な実施例を参照することによって説明される。これらの実施例は、本発明の範囲を限定するものとは見なされない。
【０１５０】
（実施例１：生理活性脂質の有効濃度を低下させる薬剤のリンパ球減少症に対する効果）
表１と２に要約するように、マウスモノクローナル抗体ＬＴ１００２（ＳＰＨＩＮＧＯＭＡＢ）に関する２８日間毒性試験を、０、３０、７５、および２００ｍｇ／ｋｇの用量で実施した。下のデータ表１〜７に示すように、全ての用量レベルで、用量に関連するリンパ球の減少と高用量では好塩基球の減少が見られた。この減少は、％好中球、％単球および％網状赤血球の増加、ならびに％リンパ球の並列減少に反映された。循環好中球のこの減少は、リンパ球輸送を変更し、その結果末梢血液リンパ減少症を生じることによって作用する新しい免疫抑制薬である小分子スフィンゴシン類似体のＦＴＹ７２０で見られる効果に並行した。
表１―２８日間一般毒性試験デザイン
【表１】
0005885923.tif 000003
表２−所見の概要
【表２】
0005885923.tif 000004
【０１５１】
（実施例２：抗Ｓ１Ｐモノクローナル抗体を与えたマウスにおける２８日間毒性試験−脾臓に対する影響）
マウスにおけるＬＴ１００２の２８日間試験は、ＬＡＢ前臨床（試験１００５−２６１５）によって実施され、４０の臓器と注射部位（尾）が、全てのコントロールおよび高用量レベル（グループ４、２００ｍｇ／ｋｇ／日）動物において、総体的な病態について評価された。ＬＴ１００２は、ＬＴ１００９のマウス型で、Ｌｐａｔｈ社の抗Ｓ１Ｐモノクローナル抗体である。
【０１５２】
評価された臓器は、副腎、大動脈（胸部）、脳（大脳皮質、中脳、小脳および髄質）、盲腸、大腸、精巣上体、食道、眼、骨髄を伴う大腿、胆嚢、心臓、腎臓、肝臓（２葉）、気管支を伴う肺、（下顎および腸間膜の）リンパ節、乳腺（鼠径部）、視覚神経、卵巣、膵臓、下垂体、前立腺、直腸、（下顎の）唾液腺、坐骨神経、精嚢、骨格筋（大腿）、皮膚／皮下組織（鼠径部）、小腸（十二指腸、回腸および空腸）、脊髄（頚部、腰部および胸部）、脾臓、髄を伴う胸骨、胃、精巣、胸腺、副甲状腺を伴う甲状腺、舌、気管、膀胱、子宮（子宮角、子宮体、子宮頸）および膣を含んだ。
【０１５３】
以下の予備組織病理学的変化は、ＬＡＢ病理学者によって、グループ４（２００ｍｇ／ｋｇ／日）の動物について指摘された。「白脾髄の濾泡性辺縁帯のサイズに軽度から中等度の減少が、グループ４の１０匹中６匹のオス、および１０匹中５匹のメスに見られた。この所見は、脾臓リンパ系毒性を示唆したわけではないが、ＬＴ１００２関連の変化と見なすことを除外することはできなかった。脾臓濾泡性辺縁帯のサイズの減少は、リンパ系マントル（即ち、辺縁帯）の可変の狭小化、白髄のリンパ濾泡のカフ化によって特徴づけられた。
グループ４の１０匹中３匹のオスおよび１０匹中５匹のメスに見られた赤脾髄の延髄外血球新生の軽度から著明な増加、ならびにグループ３（７５ｍｇ／ｋｇ／日）の１匹のオスと１匹のメスに見られた軽度な赤脾髄の延髄外血球新生の増加（グループ３マウスで検査された脾臓はこれらのみ）は、ＬＴ１００２関連の可能性があると考えられたが、毒性学的な有意性はなかった。」
【０１５４】
グループ２（３０ｍｇ／ｋｇ／日）およびグループ３（７５ｍｇ／ｋｇ／日）からの全マウスの脾臓の組織病理学的検査、ならびに全プレターミナルステージのマウスの総合的な組織病理学的評価は現在進行中である。ＬＡＢは、グループ４（２００ｍｇ／ｋｇ／日）の動物からの組織の組織病理学的検査からはその他の所見は報告していない。プロトコルに従って、２００ｍｇ／ｋｇ／日以外のその他の用量グループの動物および生理食塩水投与の動物からの組織については、肉眼的な異常（即ち、注射部位の局所過敏症）を呈している動物の組織以外は調査されなかった。
【０１５５】
Ｓ１Ｐの１つ以上のＧＰＣＲレセプターの小分子スーパーアゴニスト／機能的アンタゴニストであるＦＴＹ７２０は、再発寛解型多発性硬化症の治療のための後期臨床開発段階にある。ＦＴＹ７２０は、動物と人間において、リンパ球輸送／ホーミングパターンを変更することによって作用すると考えられる。ＦＴＹはまた、ヒトガンの動物モデルにおいて保護作用を示す。ＦＴＹ７２０の長期的効果は、正常メスＣ５７ＢＬまたはＣ３Ｈマウスに１ｍｇ／ｋｇ／日を２週間経口投与後、全身性リンパ減少症およびＴ細胞応答の減少を含む。末梢血、末梢リンパ節、腸間膜リンパ節、パイエル板、および脾臓中のリンパ球は全て減少した。マウスにおけるＦＴＹ７２０の長期的効果はまた、正常メスＣ５７ＢＬまたはＣ３Ｈマウスに１ｍｇ／ｋｇ／日を２週間経口投与後、脾臓重量の６５％減少をも含む。
【０１５６】
本研究において、２００ｍｇ／ｋｇ／日のＬＴ１００２投与を受けた動物におけるＬＡＢ試験１００５−２６１５で観察された脾臓重量の減少は、ＦＴＹ７２０の連日投与で報告された同一の所見に一致している。ＦＴＹ７２０とＬＴ１００２は、異なるメカニズムにも係わらず、同一セットの細胞レセプターに影響を与え、この２つの化合物は、重複する薬理学的プロファイルを有するため、ＬＴ１００２を使った本研究における脾臓重量と脾臓形態の減少は、予期されないことではなかった。
【０１５７】
（実施例３：生理活性脂質の有効濃度を低下させる薬剤のリンパ球輸送に対する効果）
Ｓ１Ｐシグナル伝達阻害薬ＦＴＹ７２０は、リンパ球輸送／ホーミングのパターンおよびリンパ球ホーミングの加速を変更することにより、免疫抑制の様式で作用すると考えられる。Ｃｈｉｂａら、（１９９８）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６０：５０３７．抗Ｓ１Ｐ抗体のリンパ球輸送に対する影響もまた、基本的に以下に発表された方法として、試験されている。Ｓｃｈｗａｂら、（２００５）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０９：  １７３５−１７３９。
【０１５８】
マウスは、マウスＳ１Ｐモノクローナル抗体またはコントロールのモノクローナル抗体に適合するアイソタイプの投与を受けた。投与は、普通の生理食塩水２００〜３００μＬ中に希釈した抗体の静脈内注射からなる。抗体投与後、動物を異なる時間に殺す。リンパ球カウントは、リンパ節、脾臓、胸腺、血液およびリンパ液を使って行った。Ｓ１Ｐの抗体抑制は、ＦＴＹ投与後に見られるように、循環リンパ球の減少（即ち、リンパ球減少症）、ならびにこれに対応するリンパ系臓器におけるリンパ球の増加を起因する。
【０１５９】
（実施例４：生理活性脂質の有効濃度を低下させる薬剤の免疫攻撃試験における有効性）
［51Ｃｒ遊離ＣＴＬアッセイ］
一次エクスビボ細胞毒性リンパ球（ＣＴＬ）アッセイを、免疫優性ペプチドの存在／非存在下でインキュベートした51Ｃｒ標識ＭＣ−５７細胞を標的として使って、Ｍｕｒａｌｉ−Ｋｒｉｓｈｎａ，  Ｋ．ら、（１９９８）  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ８（２）：１７７−８７に説明するように、実施した。結果は、以下の式を適用して、結果に１００％を掛けることによって算出する。
【数１】
0005885923.tif 000005
【０１６０】
［細胞内サイトカイン染色（ＩＣＣＳ）］
脾細胞（４ｘ１０6）を、１０％ＦＢＳおよびＧｏｌｇｉ  Ｓｔｏｐ  （Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を含む２５０μＬのＲＰＭＩ−１６４０中で、２μｇ／ｍＬの免疫優性Ｈ−２b制限ＣＤ８＋Ｔ細胞エピトープペプチドの存在下で１２時間インキュベートする。負のコントロールは、ペプチドを加えずにインキュベートする。刺激後、製造元（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）によって指定されるように、細胞をＣＤ８と細胞内ＩＦＮ−γについて染色する。染色後、ＦＡＣＳｃａｎまたはＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒを使ってフローサイトメトリで細胞を分析し、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ（商品名）ソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を使ってＣＤ８とＩＦＮ−γの発現についてデータ解析を行った。ＣＤ８＋Ｔ細胞のペプチド特異的活性化のパーセントは、ＩＦＮ−γを発現するＣＤ８＋Ｔ細胞数をＣＤ８＋Ｔ細胞の合計数で割ることによって計算される。ＩＦＮ−γを産生するＴ細胞誘導の正のコントロールとして、ナイーブコントロール動物からの同数の脾細胞を、染色前に、２０ｎｇ／ｍＬのホルボール−１２−ミスチリン酸−１３−アセテート（ＰＭＡ、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）および３μＭのイオノマイシン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）の存在下、６時間インキュベートする。
【０１６１】
（実施例５：生理活性脂質の有効濃度を低下させる薬剤の多発性硬化症の実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）マウスモデルに対する有効性）
ＥＡＥは、中枢神経系（ＣＮＳ）の実験的自己免疫疾患であり（Ｚａｍｖｉｌら、（１９９０）  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，  ８：５７９）、ヒト自己免疫状態である多発性硬化症（ＭＳ）の疾患モデルである［Ａｌｖｏｒｄら、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｌｌｅｒｇｉｃ  Ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ（多発性硬化症の実験的アレルギーモデル），  ＮＹ  ５１１  （１９８４）］。ＥＡＥは、ＣＮＳから精製されたミエリン塩基性タンパク質（例えば、モルモットまたはウシ脊柱のエマルジョン）または脳炎惹起性プロテオリピド（ＰＬＰ）またはミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ35-55）のペプチドフラグメントで免疫することによって、哺乳類種［例えば、ＳＪＬ／Ｊマウスはマウス（Ｈ−２S）の感受性系統である］において容易に誘発される。白質の注射によって誘発された、マウスにおける実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、ＣＮＳ炎症の有用なモデルであり、多発性硬化症の研究に使用されている（Ｓｐａｈｎら１９９９、また、Ｈｏｗａｒｄ  ＷｅｉｎｅｒによるＥＡＥの様々なマウスモデルに関する４０を上回る論文を参照）。
【０１６２】
ＥＡＥを罹患する動物は、急性麻痺性疾患を発症し、急性細胞浸潤がＣＮＳ内において確認できる。したがって、ＭＳの標準モデルの役目を果たす以外に、このモデルはまた、ＣＮＳ中へのＴ細胞浸潤を測定するためにも使用されている。Ｔリンパ球は、正常なＣＮＳではめったに見らないが、ＭＳ、ＨＩＶ誘発性脳脊髄炎またはその他のＣＮＳ炎症状態の間には、これらの細胞が存在する。観察される症状は、筋肉の脱力、麻痺、および協調の欠如を含む。
【０１６３】
実験プロトコル−以下の実験は、Ｌｐａｔｈ，  Ｉｎｃ．と共同してＤｒ．  Ｈｏｗａｒｄ  Ｗｅｉｎｅｒの実験室で実施された。
【０１６４】
マウスにおいて実験的ＥＡＥを生じさせるために、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ35-55、ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ）が使用される。Ｍｅｎｄｅｌ，  Ｉ．ら、Ａ  ｍｙｅｌｉｎ  ｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｔｙｐｉｃａｌ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ  ｉｎ  Ｈ−２ｂ  ｍｉｃｅ：  ｆｉｎｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｖ  ｂｅｔａ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｏｇｅｎｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ（ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質はＨ−２ｂマウスにおいて典型的な慢性実験的自己免疫性脳脊髄炎を誘発する：詳細な特異性および脳炎惹起性Ｔ細胞のＴ細胞レセプターＶβ発現）、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １９９５  Ｊｕｌ、２５（７）：１９５１−９。
【０１６５】
慢性実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を誘発するために、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチド（ＭＯＧ35-55）のアミノ酸３５〜５５に対応するペプチドで免疫することによって、マウスにおいてＥＡＥが誘発された。ＭＯＧ35-55で免疫後、マウスは、ＥＡＥを急性発症し、その後進行性多発性硬化症のいくつかの特徴を模倣すると考えられる進行性疾患を徐々に発症する。マウスにＳ１Ｐに対する抗体を投与し、投与されたマウスについて、ＥＡＥのこの急性モデルの臨床徴候に対するＳ１Ｐ特異抗体の影響についてのフォローアップ調査を実施した。実験の最後に、投与マウスはまた、免疫応答に対する抗Ｓ１Ｐ投与の影響について分析するために使用された。
【０１６６】
最初のセットの実験では、平均体重が２０グラムのマウスをグループ当たり１０匹使って、０日目と２日目に、ＣＦＡ（完全フロイドアジュバント）中に加えた１５０ｕｇ／マウスのＭＯＧ35-55を１５０ｐｇ／マウスの百日咳毒素と共に投与してＣ５７ＢＬ／６ＪマウスにＥＡＥを誘発した。抗Ｓ１Ｐ抗体ＬＴ１００２（Ｓｐｈｉｎｇｏｍａｂ（商品名））は、−１日目に７５ｍｇ／Ｋｇの用量で静脈内投与し、その後２日ごとに２５ｍｇ／Ｋｇの用量で腹腔内投与した。ＥＡＥのこの急性モデルの臨床徴候に対するＳ１Ｐ特異抗体の影響を調べるために、投与マウスを２５日間追跡観察した。疾患の臨床徴候は、尾の弛緩、および四肢麻痺を含み、臨床症状の客観的評価を行うためにこれらのスコアを記録することができる。ＥＡＥにおける疾患重症度の標準的評価は、臨床行動を０〜６のスケールで測定する：０）正常、１）尾の弛緩、２）歩行の異常、後肢の脱力、３）部分的麻痺、重篤な運動失調、４）疼痛刺激後の後肢の動きが最小限、５）後肢に動きがない、６）ほとんどまたは全く動きがなく瀕死の状態。臨床スコアおよび体重増加に対する投与の効果を判定するために、グループ間で平均値を比較した。生物統計分析を使って、臨床スコアと体重についての統計的有意さを解いた。
【０１６７】
１７日目に、２匹の代表的なマウスを殺して、細胞性免疫応答（増殖とサイトカイン）を調査して、ＣＮＳ病態を分析した。脊髄を解剖して、切片を作成した。炎症細胞を明らかにするためにはヘマトキシリンとエオシン（Ｈ＆Ｅ）で、ミエリンを可視化するにはルキソールで、軸索を可視化するには銀染色を用いて、切片を染色した。ＣＤ４＋ＦｏｘＰ３＋Ｔreg細胞の合計レベルは、１７日目に尾から採取した血液サンプルのＦＡＣＳ分析によって評価した。２５日目には、免疫応答に対する抗Ｓ１Ｐ投与の影響を調べるために投与マウスを分析した。
【０１６８】
抗Ｓ１Ｐ抗体（ＬＴ１００２、Ｓｐｈｉｎｇｏｍａｂ（商品名））の投与は、ＥＡＥ発症の有意な抑制につながることが発見された（ｐ＜０．００１）。これは、上記に説明するようにスコアを記録したＥＡＥ症状の減少によって見ることができ、これを図１に示す。抗体投与後、ＥＡＥスコアは、疾患重症度スケールのほぼ２（歩行の異常、後肢の脱力）で安定したが、未投与のコントロール動物は、ほぼ３（部分的麻痺、重篤な運動失調）のＥＡＥ重症度スコアを示した。この臨床効果は、脱髄の定量的減少（抗体投与動物では脱髄は１％以下であるのに対して、ＥＡＥを罹患する未投与のコントロールでは脱髄は９％であり、投与後約９２％の低下を示した）、軸索欠損の減少（抗体投与マウスでは軸索欠損は２％以下であるのに対して、ＥＡＥを罹患する未投与のコントロール動物では軸索欠損が１８％であり、投与後約９１％の低下を示した）、ならびにＥＡＥを罹患する未投与のコントロールと比較する抗体投与動物の脊髄における炎症細胞／ｍｍ2数の約８５％の減少によって、組織学的に確認された。
【０１６９】
さらに、抗Ｓ１Ｐ投与は、循環リンパ球および脾臓ＣＤ４＋Ｔ細胞の数の減少につながった）。循環リンパ球の合計は、抗体投与動物では約１０％であり、ＥＡＥを罹患するコントロール動物では約１３．５％であった。この減少は有意であり、抗体投与後の循環リンパ球は約２６％の減少を示している。脾臓ＣＤ４＋Ｔ細胞の合計は、コントロール動物では約１１．７％のリンパ球であったのに比較して、抗体投与動物の脾臓ではリンパ球は約７．６％であった。この減少もまた有意であり、抗体投与後約３５％の減少を示した。
【０１７０】
エフェクターＴ細胞の増殖と活性化を抑制する特化Ｔ細胞のクラスは、サプレッサーまたは制御性Ｔ細胞（Ｔregs）として知られている。.Ｔregsの主要クラスは、ＣＤ４+ＣＤ２５+Ｔ細胞であり、自己寛容の維持に役割を果たしている。マウスにおいてＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔregが枯渇すると、その結果として全身性自己免疫疾患の発症をきたし、そのような状況では、マウスＥＡＥは重症度を増し、したがって、Ｔreg細胞の機能障害が疾患の一因となっている可能性があると考えられる。Ｋｕｍａｒら、（２００６）  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｉｍｍ．  １７８：１８４、Ｓａｋａｇｕｃｈｉら、（１９８５）およびＳｔｅｐｈｅｎｓら、（２００５），どちらもＫｕｍａｒらに引用されている。Ｋｕｍａｒらはまた、ＭＳ患者由来のＴreg細胞の抑制活性の低減または欠失を発見した。
【０１７１】
ＣＤ４+ＣＤ２５+Ｔregsは、転写因子Ｆｏｘｐ３遺伝子を比較的高レベルで発現する。ＣＤ２５＋およびＦＯＸＰ３＋は、共にＴreg細胞の特異的マーカーである。ＥＡＥを罹患するマウスに対する抗Ｓ１Ｐ投与は、脾臓におけるＣＤ４+ＣＤ２５+Ｆｏｘｐ３+Ｔregの顕著な増加、ならびに循環ＣＤ４+ＣＤ２５+Ｆｏｘｐ３+Ｔreg細胞の同様であるが統計的有意ではない増加に関連することが発見されている。これらの結果は、抗体投与後にＴreg細胞が増加することを示す。
【０１７２】
合成ＭＯＧペプチド（ＭＯＧ35-55と呼ばれる、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質のアミノ酸３５〜５５）の注射は、マウスに、神経症状の他に、顕著な特異的Ｔ細胞応答の発症を起因する。Ｓｐａｈｎら、（１９９９）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９：４０６０−４０７１．抗Ｓ１Ｐ投与は、ＭＯＧ35-55に対するこの増殖性リコール応答の有意な減少に関連した。マウスは、ＭＯＧペプチドの注射によって予備刺激された。脾臓を除去してホモジナイズして、脾細胞を、異なる量のＭＯＧペプチドで瞬間標識した。次に、細胞を放射線標識で予備標識して、細胞を回収する前にインキュベートして、シンチレーション測定によって標識の取り込みを評価した。ＭＯＧで予備刺激したＴ細胞は、Ｓ１Ｐ抗体投与後に減少することが見いだされた。ｃｐｍで測定されるように、リコール増殖応答は、抗Ｓ１Ｐ抗体投与後（それぞれ、４ｕｇ／ｍｌ、２０ｕｇ／ｍｌ、および１００ｕｇ／ｍｌのＭＯＧ35-55）、約３６％、３８％および２２％低下した。Ｓ１Ｐ抗体によるこのリンパ球増殖遮断は、これらのマウスにおいて、この抗体は、ＭＯＧに対する自己免疫応答を遮断できることを示唆する。
【０１７３】
抗Ｓ１Ｐ投与マウスに由来する脾細胞は、ＭＯＧ35-55による刺激を受けると低レベルのＩＬ−１７およびＩＦＮγ、ならびに高レベルのＩＬ−１０を分泌した。基本的にＳｐａｈｎら（１９９９）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２９：４０６０−４０７１に記載の方法を用いると、有害サイトカインは減少するが、保護サイトカインＩＬ−１０は、未投与動物に由来するコントロール脾細胞と比較して、抗体投与によって増加した。
【０１７４】
したがって、Ｓ１Ｐに対する抗体による治療は、ＭＳの広く認められている動物モデルであるＥＡＥの症状を軽減する。麻痺や脱力は軽減し、これは神経変性、脱髄およびＣＮＳの炎症を示す組織学的所見によって裏付けられている。抗Ｓ１Ｐ投与はまた、循環リンパ球数および脾臓ＣＤ４＋Ｔ細胞の顕著な減少を導き、この抗体のリンパ球輸送に対する影響を明示した。抗Ｓ１Ｐ投与はまた、制御性Ｔ細胞の顕著な増加に関連した。したがって、抗Ｓ１Ｐ抗体は、いくつかのメカニズムを通して作用し、その全てがＭＳのこのモデルの疾患指標の低減に有効であると考えられる。
【０１７５】
抗Ｓ１Ｐ抗体（ＬＴ１００２、Ｓｐｈｉｎｇｏｍａｂ（商品名））はまた、ＭＳのＳＪＬ／ＰＬＰ（再発−寛解）介入性モデルにおいても有効であると予測される。ＥＡＥは、プロテオリピドタンパク質の１３９〜１５１アミノ酸領域（ＰＬＰ１３９〜１５１）に対応するペプチドで免疫することによって、ＳＪＬ／Ｊマウス（１０匹マウス／グループ）で誘発される。Ｗｅｂｂら（２００４）  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．  １５３：１０８−１２１を参照。ＰＬＰ１３９−１５１で免疫後、ＳＪＬ／Ｊマウスは、多発性硬化症のいくつかの特徴を模倣すると思われる疾患を発症する。抗体投与は、神経学的症状が発症した後で実施される。抗Ｓ１Ｐ抗体（ＬＴ１００２）の同一用量が上記の実験と同様に使用される：１７日目（疾患のピーク）に７５ｍｇ／ｋｇを静脈内投与の後、２日ごとに２５ｍｇ／ｋｇの用量を投与。
【０１７６】
（実施例６：生理活性脂質の有効濃度を低下させる薬剤の関節リウマチのコラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）モデルにおける有効性）
コラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）は、ヒト自己免疫疾患である関節リウマチ（ＲＡ）の動物モデルである。Ｔｒｅｎｔｈｏｒｎら、（１９７７）Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，  １４６：８５７．この疾患は、異種性ＩＩ型コラーゲンの投与によって、多くの種におい
て誘発でき［Ｃｏｕｒｔｅｎａｙら、（１９８０）  Ｎａｔｕｒｅ，  ２８３：６６５、Ｃａｔｈｃａｒｔら，（１９８６）  Ｌａｂ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  ５４：２６］、これはこの疾患研究のために認容されているモデルである。
【０１７７】
マウスにおけるコラーゲン誘発性関節炎（ＣＩＡ）は、感受性マウス系統を非変性ＩＩ
コラーゲンで免疫することによって誘発される。肉眼的に明白な関節炎は、免疫後２８〜３５日目の間に発症し、数ヶ月間持続して関節が強直する。ＣＩＡは、単核細胞浸潤および骨と軟骨破壊を伴う滑膜細胞過形成を含むＲＡに共通するいくつかの組織病理学的特徴を有する。ＲＡとＣＩＡの両方において、疾患感受性は、ＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子によって限定され、自己反応性Ｔ細胞は、関節に目立って存在する。これらの類似性のために、ＣＩＡはＲＡの実験モデルとして広く使用されている。典型的に、ＣＩＡは、６〜７週齢オスマウスにおいて１日目に、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中に乳化したＭ．  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（結核菌）２．０ｍｇ／ｍｌを補充したウシまたはニワトリのコラーゲンＩＩ（ＣＩＩ）を尾の付け根真皮内に注射することによって誘発される。２１日目に、マウスは、尾の付け根真皮内に、不完全フロイントアジュバントに加えたＣＩＩの投与を受ける。疾患の臨床重症度を４日ごとに評価する。各足の炎症スコアを０〜４スケールで記録する：０，正常、１，紅斑および足首、または足根、または個々の指に限局する軽度の腫れ、２、中等度の紅斑および足根と足首の腫れ、３，重篤な紅斑および足首、足根ならびに指の軽度な腫れ、４，重篤な紅斑および足首、足根ならびに指の重篤な腫れ。それぞれのマウスについての毎日の合計スコアは、４つの足全部のスコアを加算することによって求める。６０日目にマウスを安楽死させて、前肢の重量を計測する。組織検査のために、足を１０％ホルマリンで固定し、Ｄｅｃａｌ（Ｆｉｓｈｅｒ）で脱灰し、パラフィンに包埋して、５μｍ切片をヘマトキシリン／エオシンで染色する。
【０１７８】
コラーゲン誘発性関節炎およびアジュバント誘発性関節炎（ＡＡ）は、新しい抗関節炎薬評価のために広く使用されている動物モデルである。これらのモデルの疾患発症はまた、ヒト関節リウマチのＴ細胞依存性カウンターパートとしても認められている。例えば、抗ＣＤ４抗体は、ＡＡおよびＣＩＡの疾患発症を抑制し、ＣＤ４＋陽性Ｔ細胞がＡＡとＣＩＡ誘発に主要な役割を果たしていることを明示する。
【０１７９】
他に認められている関節炎のマウスモデルは、ＴＮＦトランスジーンモデルである。改変されたヒトＴＮＦ−α導入遺伝子を発現するトランスジェニックマウスは、慢性多発関節炎を自然発症し、ＴＮＦがヒトＲＡの病因に直接関与している更なる証拠を与える。ヒトグロビン遺伝子由来の改変３'領域を有するヒトＴＮＦ導入遺伝子を担うマウスは、調節解除されたヒトＴＮＦ発現を示し、その結果、関節および様々な他の臓器におけるＴＮＦ発現は低レベルとなる。対照的に、野生型ヒトＴＮＦ導入遺伝子を担うマウスは、適正に制御されたＴＮＦ発現を示す。調節排除されたＴＮＦ発現を有するマウスは、ヒトＲＡと類似する組織学的特徴を持つ慢性対称性多発関節炎を発症した。このプロセスは、ターゲットマウスにおいて特定の遺伝的背景を必要としない。その他の広く認められているＲＡの動物モデルは、Ｋａｎｎａｎ，  Ｋ．ら、（２００５），Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  １２：１６７−１８１に総説されている。
【０１８０】
抗Ｓ１Ｐモノクローナル抗体の有効性が、関節リウマチのＣＩＡ動物モデルにおいて評価される。６〜８週齢のオスＤＢＡ１／ＪマウスをＪａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  （Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｍａｉｎｅ）から購入する。マウスは、高脂肪を含むマウス用固形飼料（Ｐｕｒｉｎａ  ｍｏｕｓｅ  ｃｈｏｗ  ５０１５）および脱イオン水を自由に与えて飼育する。
【０１８１】
動物は、体重に基づいて、投与グループ（１０匹マウス／グループ）に無作為に割り付ける。動物は、２１日目から溶媒（生理食塩水）、抗Ｓ１Ｐモノクローナル抗体または正のコントロール（デキサメサゾン）の投与を受ける。投与は、皮下投与されるデキサメサゾン以外は、経口投与される。抗体の３つの用量グループ（低用量、中用量および高用量）が使用される。ＬＰＳの混入は、疾患進行に刺激効果がある可能性があり、薬効評価の妨げになる可能性があるため、全ての試験薬は、内毒素の存在下で試験を行う。重症度スコア／足の重量を、２１日目から開始して４２日目まで継続して、１週間あたり３回測定する。
【０１８２】
関節炎を誘発するために、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中に混入したニワトリＩＩ型コラーゲン（１：１で混合）を、１日目には、尾からの真皮内ルートで全動物に投与し、２１日目に不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中のＩＩ型コラーゲンをブースト投与する。２１日目から開始して４２日目まで継続して、臨床重症度スコアと足の重量を２つの後肢について、１週間当たり３回測定する。足の厚さは、較正済みのカリパーを用いて測定する。体重は、週ごとにチェックする。少なくとも１日に１回は、ケージ中の動物の一般状態のチェックを行う。剖検時には、両後肢を回収して、１０％緩衝ホルマリン中に保存する。剖検時に回収した後肢は、Ｆａｘｉｔｒｏｎ社製機器を使ってマイクロラジオグラフィー（ミクロ放射線透過写真法）に付する。
【０１８３】
足／足首は、放射線透過性になるまでギ酸中で脱灰する。４μｍの切片を作製し、サファリンＯおよび酒石酸耐性酸性ホスファターゼで染色する。組織検査用切片は、炎症、関節軟骨の損傷、骨の吸収および破壊、ならびに滑膜組織の変化について、定性的評価を行う。
【０１８４】
（実施例７：生理活性脂質の有効濃度を低下させる薬剤の１型糖尿病のマウスモデルにおける有効性）
非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスへのＦＴＹ７２０の投与は、糖尿病の発症を防止することが示されている。また、明らかに糖尿病のＮＯＤマウスにおいてＦＴＹ７２０を連続経口投与した結果、糖尿病の逆転を生じることができる。Ｍａｋｉら前出を参照。生理活性脂質の有効濃度を低下させる、抗Ｓ１Ｐ抗体のような薬剤は、糖尿病に対して同様な効果があるはずであると考えられている。これは、標準方法を用いて、標準ＮＯＤマウスモデルで試験する。
【０１８５】
（実施例８：生理活性脂質の有効濃度を低下させる薬剤のマウス強皮症モデルにおける有効性）
身体を衰弱させるような後天性結合組織の疾患である強皮症は、特に皮膚と肺の線維症によって特徴づけられる。強皮症についてのマウスの強皮症移植片対宿主疾患（Ｓｃｌ  ＧＶＨＤ）モデルが、線維性疾患とＧＶＨＤを起こす免疫学的メカニズムそのものを研究するために開発された。このモデルは、皮膚の肥厚、肺線維症、および単球浸潤およびＴＧＦ−１ｍＲＮＡの上方制御に先行される皮膚コラーゲンｍＲＮＡの上方制御を含む強皮症の重要な特徴を再現する。ＭｃＣｏｒｍｉｃｋ，  Ｌ．Ｌ．  （１９９９）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６３：  ５６９３−５６９９．簡単に説明するならば、レシピエントマウスを致死量放射線照射してから、同種間ドナーの脾臓と骨髄細胞懸濁液を注射する。皮膚の強皮症性肥厚が、ＢＭＴ後２１日目に、一般組織病理切片の画像分析によって検出される。強皮症のその他の動物モデルについては、Ｖａｒｇａ：    Ｌａｋｏｓ  Ｇ，  Ｔａｋａｇａｗａ  Ｓ，  Ｖａｒｇａ  Ｊ．  （２００４）  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．１０２：３７７−９３による総説において考察されている。
【０１８６】
抗Ｓ１Ｐ抗体または生理活性脂質に結合してその有効濃度を低下させる薬剤は、１日目に尾静脈内注射によって投与され、骨髄移植後６日目に再び投与される。２１日目にマウスを殺して、皮膚およびその他の組織を回収し、肥厚を測定し、コラーゲンおよび免疫細胞について分析を行う。
【０１８７】
（実施例９：生理活性脂質の有効濃度を低下させる薬剤の動物同種移植モデルにおける有効性）
心臓の同種移植：
抗Ｓ１Ｐ抗体および生理活性脂質の有効濃度を低下させるその他の薬剤の同種移植片拒絶における治療効果を判定するために、マウス血管新生異所性心臓移植モデルにおいて、これらの化合物の活性を試験する。Ｂａｌｂ／ｃマウス由来の心臓を、基本的にＩｓｏｂｅら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １９９１，  ８４，  １２４６−１２５５によって説明されるように、血管新生した一次移植片として、Ｃ３Ｈマウスの腹腔内に移植する。試験化合物を、尾静脈内注射、または連続ポンプによって投与し、同種移植片生存時間を、二次心拍の検出によってモニターする。同種移植片の平均生存時間は、抗Ｓ１Ｐ抗体または生理活性脂質の有効濃度を低下させるその他の薬剤によって増加することが予測される。
腎臓の同種移植：
【０１８８】
腎臓移植における慢性拒絶を調査するための定評あるモデルは、Ｆ３４４からＬＥＷラットへの移植モデルである。Ｆ３４４移植片のＬＥＷレシピエント全てが、ほぼ３０日目に急性拒絶を発症し、５０％の移植片を喪失する結果となる。生存動物は、５０日目から、組織病理学的および機能的なＣＲの特徴を呈する。Ｊｏｏｓｔｅｎ，  Ｓ．Ａ．  ら、（２００２）  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  １６０：１３０１−１３１０。抗Ｓ１Ｐモノクローナル抗体および生理活性脂質の有効濃度を低下させるその他の薬剤の同種移植片拒絶防止における治療効果を判定するために、基本的にＪｏｏｓｔｅｎら（前出）によって説明されている、Ｆ３４４からＬＥＷへの移植モデルにおいて、これらの化合物の活性を試験する。
角膜の同種移植：
【０１８９】
角膜移植（全層角膜移植術［ＰＫ］）は、ヒトにおいて最も成功をおさめている組織移植法であるが、角膜同種移植片の拒絶は、未だに角膜移植片生着不全の主な原因である。［Ｉｎｇ  ＪＪら（１９９８），  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，  ｖｏｌ  １０５：１８５５−１８６５］。最近、ＣＤ４（＋）Ｔ細胞が、角膜同種移植の拒絶において、ヘルパー細胞としてではなく、エフェクター細胞として直接的に機能することが発見された。［Ｈｅｇｄｅ  Ｓら（２００５），  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，  ｖｏｌ  ７９：  ２３−３１］。マウスによる試験によって、拒絶を受けている角膜のストローマ中の好中球、マクロファージおよび肥満細胞の数が増加することが示された。Ｙａｍａｇａｍｉ  Ｓら（２００５），  Ｍｏｌ  Ｖｉｓ，  ｖｏｌ  １１，  ６３２−４０。
【０１９０】
ＦＴＹ７２０は、リンパ球輸送を変更することによって作用する免疫抑制薬であり、その免疫調節効果は、リンパ球上に発現されるＳ１Ｐレセプターのあるものへの結合によって媒介される。［Ｂｏｈｌｅｒ  Ｔら（２００５），  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，  ｖｏｌ  ７９：  ４９２−５］．ＦＴＹ投与マウスは、経口投与された場合、同所性角膜移植片生存の有意な延長を示した。［Ｚｈａｎｇら（２００３），  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，  ７６：  １５１１−３］。ＦＴＹ経口投与はまた、ラットからマウスへの角膜の異種移植モデルにおいて、拒絶を有意に遅延し、かつその重症度を低減した［Ｓｅｄｌａｋｏｖａら（２００５），  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，７９：２９７−３０３］。同種移植拒絶の既知の原因とＳ１Ｐシグナル伝達の効果の調節によって角膜移植片生存を改善することを示唆するデータを組み合わせるならば、生理活性脂質の有効濃度を低下させる薬剤（例えば、抗Ｓ１Ｐモノクローナル抗体またはその他の抗体）はまた、同種移植拒絶のような免疫状態の治療に、（例えば、免疫応答を緩和させることによって）角膜移植片の生存を改善する可能性があるため、有用なはずである。これらの薬剤は、尾静脈への注射によって投与されるか、眼の中に直接投与することによって、移植片の生存を延長させると予測される。
【０１９１】
（実施例１０：生理活性脂質の有効濃度を低下させる薬剤の糸球体腎炎の動物モデルにおける有効性）
糸球体腎炎のような糸球体の免疫疾患は、末期腎臓病の主要な原因に数えられる。これらの疾患は共通して、尿細管間質性コンパートメントの線維症と炎症によって特徴づけられる進行過程をたどる。解説については、Ｐｅｔｅｒｓら、（２００４），  Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｌ．  ６６：  １４３４−１４４３を参照。抗Ｓ１Ｐ抗体またはその他の生理活性シグナル伝達脂質の有効濃度を低下させる薬剤などは、瘢痕形成と自己免疫および／または炎症性コンポーネントの両方によって特徴づけられる状態に特に有効なはずであると考えられる。
【０１９２】
糸球体腎炎のラットモデルにおいて、ＦＴＹ７２０投与は、循環リンパ球数ならびに腎臓のリンパ球浸潤を減少した。疾患進行の過程は、有意に遅延された。Ｐｅｔｅｒｓら前出。ＦＴＹは、Ｓ１Ｐレセプターアンタゴニストであり、従ってＳ１Ｐシグナル伝達を遮断するため、リゾ脂質Ｓ１ＰおよびＬＰＡのような生理活性シグナル伝達脂質に結合し、それらの有効濃度を低下させる薬剤はまた、少なくとも一部は、異常な、過剰なまたは望ましくない免疫応答によって特徴づけられる、糸球体腎炎、その他の免疫に基づく腎臓病およびその他の状態の治療においても有効性を実証するはずであると考えられている。
【０１９３】
糸球体腎炎のモデルシステムである、糸球体硬化症のマウスモデルが存在する。Ｇａｏら（２００４）  Ｍｏｌｅｃ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２４：  ９８９９．  腎臓線維症および炎症に対する抗Ｓ１Ｐモノクローナル抗体の効果が、基本的にＧａｏに従う糸球体硬化症のマウスモデルで試験されている。免疫応答および線維症両方に対するその効果のために、抗Ｓ１Ｐモノクローナル抗体および生理活性脂質の有効濃度を低下させるその他の薬剤は、腎臓の自己免疫疾患の進行遅延に特に有効であることが予測される。
【０１９４】
（実施例１１：製剤安定性試験）
（１．  イントロダクション）
本実施例は、生理活性シグナル伝達脂質スフィンゴシン１−リン酸（Ｓ１Ｐ）に対して反応性のある、ヒト化モノクローナル抗体ＬＴ１００９を含有するいくつかの製剤の安定性を評価する実験を説明する。ＬＴ１００９は、２本の同一な軽鎖と２本の同一な重鎖を含む工学設計された完全長のＩｇＧ１Ｋアイソタイプ抗体であり、１５０ｋＤａの総分子量を有する。軽鎖と重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、Ｓ１Ｐに対して産生されたマウスモノクローナル抗体に由来し、さらにＣＤＲの１つにＣｙｓからＡｌａへの置換を含んでいる。ＬＴ１００９では、ヒトフレームワーク領域が、高い親和性と特異性でＳ１Ｐに結合する、この抗体の総アミノ酸配列の約９５％を占めている。
【０１９５】
本実施例に記載の試験の目的は、ＬＴ１００９の安定性と生理活性を長期間維持可能であり、全身投与に適する好ましい製剤を１つ以上開発することであった。公知のように、分子の高次構造の維持、従って安定性は、少なくとも部分的にはタンパク質の分子環境および保存条件に依存する。好ましい製剤は、抗体を安定させるのみならず、注射された際に患者によって忍容されなければならない。したがって、この試験では、試験された様々な製剤は、１１ｍｇ／ｍＬまたは４２ｍｇ／ｍＬのＬＴ１００９、さらに異なるｐＨ、塩、および非イオン系界面活性剤濃度を含んだ。さらに、３つの異なる保存温度（５℃、２５℃、および４０℃）もまた調査された（それぞれ、実際の条件、加温された条件、および温度ストレス条件）。安定性は、５つの異なる時点で、様々な製剤から得た代表的サンプルを用いて評価された：試験開始時および２週間後、１ヵ月後、２ヵ月後、および３ヵ月後。各時点において、試験は、目視検査、注射器適性（３０ゲージ注射針を通して吸入した場合）、およびサイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）を含んだ。また、ある一定の温度以上では、タンパク質は変性を受け、いくらかの凝集体形成が生じるため、タンパク質の安定性を評価するために、円二色性（ＣＤ）分光測定法が使用された。観察された遷移は、見かけの変性または「融解」温度（Ｔm）と呼ばれ、タンパク質の総体的安定性を示す。
【０１９６】
（２．材料と方法）
（ａ．ＬＴ１００９）
製剤サンプル（各〜０．６ｍＬ）は、２４ｍＭリン酸ナトリウム、１４８ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ６．５中にＬＴ１００９を４２ｍｇ／ｍＬ含有する水性ストック溶液から生成した。２４ｍＭリン酸ナトリウム、１４８ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ６．５溶液を使って、水性ストック溶液を所望する濃度に希釈することによって、ＬＴ１００９を１１ｍｇ／ｍＬ含有するサンプルを調製した。異なるｐＨ値を有するサンプルを調製するには、ＬＴ１００９（１１ｍｇ／ｍＬおよび４２ｍｇ／ｍＬ）の各濃度のｐＨを、０．１Ｍ  ＨＣｌまたは０．１Ｍ  ＮａＯＨをそれぞれ使用して、当初の６．５の値から、６．０または７．０に調整した。異なるＮａＣｌ濃度を有するサンプルを調製するには、塩濃度を、当初の１４８ｍＭから３００ｍＭまたは４５０ｍＭに上げるために、５Ｍ  ＮａＣｌをサンプルに添加した。異なる非イオン系界面活性剤濃度を有するサンプルを調製するには、最終濃度が、２００ｐｐｍまたは５００ｐｐｍになるように、ポリソルベート−８０をサンプルに添加した。サンプルは全て、０．２２μｍのＰＶＤＦ膜シリンジフィルターを通して、滅菌済みの発熱物質を取り除いた１０ｍＬの血清バイアル中に無菌的に濾過した。バイアルはそれぞれ、次に低剥離性のＰＴＦＥで裏打ちされたストッパーで密封して、汚染物から保護し固定するようにキャップをクリンピングした。安定性チェンバーに置く前に、バイアルを短時間２〜８℃で保管し、その後、３つの特定した保存条件に合わせて調節した安定性チェンバー内に垂直に置いた。４０℃（±２℃）／７５％（±５％）相対湿度（ＲＨ）、２５℃（±２℃）／６０％（±５％）ＲＨ、または５℃（±３℃）／大気ＲＨ。試験された製剤の変量の概要を以下の表３に示す。
表３．製剤の概要
【表３】
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【０１９７】
（ｂ．サンプルの取り出し）
各製剤のサンプルを、以下の表４に記載のスケジュールに従って分析した。全時点について、各保存条件についてバイアル１瓶を使用した。サンプルが取り出される日に、バイアルを各安定性チェンバーから取り出して、各サンプルの１５０μＬをそれぞれ対応するラベルがついた別個のバイアル中に移して、試験前に１時間ベンチの上に静置した。試験するアリコートを抜き取った後、元のバイアルは、すぐに定められた安定性チェンバーに戻した。
表４．医薬品製剤試験安定性マトリックス
【表４】
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【０１９８】
（ｃ．分析法）
所定の時点について、各サンプルからのアリコートを使って、目視観察、注射器適性、ｐＨ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（還元および非還元条件）、ＳＥ−ＨＰＬＣ、およびＩＥＦを含む一連の標準分析を実施した。タンパク質濃度は、ＵＶ分光測定法によって測定した（ＯＤ−２８０）。円二色性（ＣＤ）試験も実施した。
【０１９９】
円二色性分光測定法は、製剤試験とは別に行った。Ａｖｉｖ  ２０２  ＣＤ分光高度計を使用してこれらの分析を実施した。近紫外部ＣＤスペクトルは、４００〜２５０ｎｍの範囲で収集した。この領域では、ジスルフィドおよび芳香族側鎖が、ＣＤシグナルに寄与する。遠紫外波長領域（２５０−１９０ｎｍ）において、スペクトルは、ペプチド主鎖が優位で他を圧している。βシートタンパク質に通常使用される波長である、２０５ｎｍで観察することによって、温度変性曲線を作成した。２５℃〜８５℃まで加熱しながら、サンプル０．１ｍｇ／ｍｌを使って、データを収集した。データは、１℃のインクリメントで求めた。そのような変性スキャンに要する合計時間は、７０〜９０分であった。平均時間は２秒であった。
【０２００】
（３．結果と考察）
分析した全サンプルについて、目視による外観に経時的な変化はなかった。同様に、注射適性検査で、サンプルは、３０ゲージ注射針を備えたシリンジに問題なく吸入されることが実証された。様々な分析検査の結果は一貫しており、ＳＥ−ＨＰＬＣは、ＬＴ１００９の優れた安全性評価法であることが明らかになった。これらの結果は、塩濃度が上昇すると、凝集物の生成と小さな非凝集不純物の生成のどちらも減少することを示した。また、ｐＨを低下すると、凝集物と不純物形成を低下することも発見された。さらに、ポリソルベート−８０濃度を２００ｐｐｍ以上に上昇させると、それ以上ＬＴ１００９を安定化しないことが明らかになった。図Ｘは、ＬＴ１００９を１１ｍｇ／ｍＬ含有するサンプルで実施されたＳＥ−ＨＰＬＣ実験結果を示す。ＬＴ１００９を４２ｍｇ／ｍＬ含有するサンプルについても類似の結果が得られたが、ＬＴ１００９濃度が低い方が、高濃度と比較して凝集物形成の可能性が低いことを示し、これは抗体が、高濃度で試験した全ての条件下では、僅かに安定性が低いことを示している。
【０２０１】
円二色性試験から、ＬＴ１００９は、水溶液中では、ＴｙｒおよびＴｒｐ両残基周辺が秩序正しい環境である、明確な三次構造をとることが発見された。また、抗体分子中の少なくともいくつかのジスルフィドは、幾分かの結合の歪みを生じているが、これは鎖内および鎖間ジスルフィドが存在する場合には、稀なことではない。ＬＴ１００９の二次構造は、これと言って目立ったところはなく、βシート構造に一貫する遠紫外ＣＤスペクトルを提示することが発見された。観察された遷移は、見かけの変性または「融解」温度（Ｔm）と呼ばれる。加熱に際しては、ＬＴ１００９は、ｐＨ７．２では、約７３℃の見かけＴmを示した。見かけのＴmは、ｐＨ６．０では約７７℃まで上昇した。これらの結果は、僅かに酸性のｐＨは、ＬＴ１００９の水性製剤の長期的安定性を増強することを示す。ＮａＣｌおよび／またはポリソルベート−８０の添加はまた、更なる安定性を与えた。
【０２０２】
合わせて、これらの実験からのデータは、ＬＴ１００９は、抗体濃度とは無関係に、ｐＨ６および４５０ｍＭ  ＮａＣｌ周辺で最も安定性があることを示す。確かに、ＳＥ−ＨＰＬＣ試験は、ポリソルベート−８０濃度を２００ｐｐｍに維持しながら、塩濃度を４５０ｍＭまで増加し、ｐＨを６．０まで下げると、ＬＴ１００９の安定性に極めて有益な効果があることを示した。ポリソルベート−８０を２００ｐｐｍ以上含んでも、凝集体形成に対する更なる緩和効果がなかったが、これは多分２００ｐｐｍで既に臨界ミセル濃度を超えていたためである。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、ＬＴ１００９における凝集体形成が試験条件下では塩濃度の上昇に伴って低下した事実は、凝集体形成は少なくとも部分的には、疎水的相互作用よりはむしろ分子間のイオン相互作用により深く基づいていることを示している可能性がある。ｐＨを７から６に下げることは凝集体形成をも減少するという観察は、低ｐＨにおけるアミノ酸ヒスチジンの疎水性の低下によって説明できるであろう。最後に、ＬＴ１１００９濃度上昇時に観察された凝集体形成の傾向の増大は、分子が適切な場所で、適切な時間に互いにぶつかり合う機会が増えて凝集体を形成することによって簡単に説明され得る。
【０２０３】
これらの実験を考慮すると、好ましい水性ＬＴ１００９製剤は、２４ｍＭリン酸、４５０ｍＭ  ＮａＣｌ、２００ｐｍポリソルベート−８０、ｐＨ６．１を有するものである。本製剤の比較的高い浸透圧は、この医薬品は、患者に投与する前に、おそらく多量のＰＢＳを含む輸液バッグ中に注入することによって希釈されるため、全身投与について問題をもたらすことはないであろう。
【０２０４】
本明細書に引用するそれぞれおよび全ての特許、特許出願、および出版物の開示は、その全体を参考文献として本明細書に編入される。
【０２０５】
本発明は、特定の実施態様を参照することによって開示されているが、本発明の他の実施態様および変形は、本発明の趣旨および範囲を逸脱することなく、他の当業者によって考案され得ることは明確である。最後に追加する請求は、全てのそのような実施態様および同等の変形を含むと解釈されるものとする。
【図１】
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【図２】
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