(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
水混和性非水性溶媒中に、ドセタキセルまたはパクリタキセルから選択される１種以上のタキサン誘導体、水溶性ポリマー、および、脂肪酸またはその塩とステロールまたはその塩との混合物を含む界面活性剤を含んでなる溶液であって、水性液体ビヒクルによる希釈時にナノ分散体を生じる溶液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タキサン誘導体の「ナノ分散体(nanodispersion)」およびその調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
水溶液に難溶性または不溶性である多数の医薬品がある。そのような薬剤は、低い経口バイオアベイラビリテイを持つ点で、または特に静脈内経路による薬物送達のためにそれらを処方する点で、難題を与える。薬剤が静脈内投与される場合、粒子は、塞栓を起こさずに毛細血管を無事に通るよう十分小さくなくてはならない。静脈内投与では、溶液、エマルション、リポソーム、ナノ分散体などの形態で薬剤を投与するのが安全であると認識されている。特に疎水性薬剤のために薬剤送達系を処方する一方で満たされなければならない他の要件は、製剤が物理的に安定でなくてはならず、室温で所望の期間保存する時に、薬剤の実質的な凝集も結晶化もなく製剤の外観の変化もないことである。
【０００３】
難溶性薬剤の例には、その抗ガン活性のためよく知られているタキサン誘導体がある。タキサン誘導体またはタキソイドは、主にタイヘイヨウイチイ、タキサス・ブレビフォリア(Taxus brevifolia)の樹皮から誘導される複雑なジテルペノイド天然生成物であり、基本的にタキサン骨格を有する。タキサンは、種々の化学療法薬剤の製造に使用されてきた。現在、２種のタキサン誘導体パクリタキセルおよびデセタキセルが、効力のある抗ガン剤として市販されている。
【０００４】
タキサン誘導体は、水および薬剤的に許容できるほとんどの溶媒に対する溶解度が非常に低く、そのため患者への投与が制限される。この望ましくない固有の性質により、市販のパクリタキセル注射液であるTAXOL注射液は、クレモホール（商標）ＥＬ（ポリエトキシ化ヒマシ油）および無水アルコールの非水性溶液として処方される。しかし、クレモホール（商標）ＥＬなどの多量の可溶化剤の使用は、重篤なまたは致死的な過敏反応および昇圧反応、徐脈性不整脈、貧血、好中球減少、および／または末梢神経疾患などの種々の有害作用につながる。したがって、パクリタキセルを投与される患者は全て、ステロイド、抗ヒスタミン剤、およびＨ２受容体拮抗剤を前投与(premedicated)され、次いでパクリタキセルが少なくとも３時間以上かけて非常にゆっくりと注入される。
【０００５】
Taxol製剤に関連するこれらの問題を鑑み、研究者らは、クレモホールＥＬなしにTaxol製剤を調製しようと試みた。
【０００６】
米国特許第６５３７５７９号は、パクリタキセルなどの実質的に水に不溶性の薬理学的に活性な薬剤の組成物を記載しており、その中で、薬理学的に活性のある薬剤はタンパク質（可溶化剤として作用）により被覆された懸濁粒子の形態で存在する。詳細には、生体適合性のある分散媒体中のタンパク質および薬理学的に活性な薬剤は、従来の界面活性剤が全く存在せず、粒子用のポリマー性コア材料も全く存在しない状態で、高剪断にかけられる。この手順は、直径が約１ミクロン未満の粒子を生み出す。前記特許により製造された粒子系は、タンパク質により被覆された水不溶性薬剤のナノ粒子および薬理学的に活性な薬剤の分子が結合している遊離タンパク質を含んでなる再懸濁可能な乾燥粉末に変換できる。
【０００７】
米国特許第６０１７９４８号は、ポリエトキシ化ヒマシ油（クレモホール）が組成物から除外されるという条件で、薬剤的に許容できる水混和性の非水性溶媒（Ｎ−メチルピロリドンのような）中のパクリタキセルの溶液の形態のパクリタキセルを含んでなり、薬剤的に許容できる可溶化剤（トリアセチンなど）をさらに含んでなる組成物に関する。好ましい態様によれば、多量の溶媒、すなわち４０００ｍｇのＮＭＰ（実施例１）または２０００ｍｇのＮＭＰと２０００ｍｇのエタノールの組み合わせ（実施例２）が、穏やかな攪拌下で１０ｍｇのパクリタキセルの可溶化に使用された。治療上有効な量の薬剤をそのような組成物により送達する場合、過剰量のエタノール、非水溶性溶媒、または可溶化剤が体内へ入ることになるだろう。
【０００８】
米国特許第６０４６２３０号は、パクリタキセルおよび２種の可溶化剤、オキシエチレンソルビトールオレアートおよび（オキシエチレングリコール）１５−２０脂肪酸モノエステルを、ポビドンおよびポリエチレングリコールなどの追加の成分と共に含む安定な注射製剤に関する。前記製剤に使用される主な可溶化剤である、パームオレイン誘導オレイン酸のエチレンオキシド付加生成物であるポリエトキシ化ソルビトールオレイン酸ポリエステルは、１０℃未満の温度で凝固する固有の性質があり、単独使用の場合パクリタキセルの可溶化には不適である。しかし、補助的な可溶化剤ポリエチレングリコールモノ脂肪酸エステルと組み合わされると、２種の可溶化剤は共に、水および無水アルコールへの良好な溶解度を示し、低温においても流体相のままである。そのため、２種の可溶化剤を一緒に使用することが必須である。また、必須の条件として、所望の特性を満たす可溶化剤のＨＬＢ値が、１５もの高値であるが１３以上でなければならない。得られる製剤は溶液である。
【０００９】
国際公開第２００６／１３３５１０号は、ドセタキセルまたはその薬学的に許容できる塩；１種以上のグリコールおよび薬剤的に許容できる非水性溶媒系を含んでなる非経口投与用の液体医薬製剤を開示しているが、前記製剤は２．５から７．０の範囲のｐＨ計の示度を有する。前記特許の態様は、毒性の副作用を生じうる非常に多量の界面活性剤（約２５ｖ／ｖ％のポリソルベート８０または３０ｖ／ｖ％のクレモホール）の使用を含む。前記出願は、製剤の効力および毒性プロファイルを開示していない。さらに、前記５１０号出願により開示される製剤は、注入希釈剤（０．９％ＮａＣｌまたは５％ブドウ糖溶液）との混合時に注入溶液を生じる非水性溶媒系に溶けている薬剤の溶液である。新規薬剤送達系またはナノ分散体は、このプロセス中のどこにも形成されていない。また、注入希釈剤による希釈後の製剤溶液の安定性が約４から６時間の非常に短い時間であり、その投与効率を限定することがある。
【００１０】
米国公開特許第２００２／００５８０６０号（以下で、０６０号特許出願と称する）は、疎水性物質および相転移温度の異なる２種のリン脂質およびコレステロールのようなリポソーム形成物質および親水性ポリマー修飾脂質を含むリポソームを開示している。薬剤とリン脂質およびリポソーム形成物質との比を変えて、異なるリポソーム製剤が得られる。０６０号特許出願は、体内への過剰量の脂質の注射がある程度の毒性につながるので、使用する脂質の総量を減らすように、２つの特定の種類のリン脂質の使用により、薬剤：脂質比が高いタキサンのリポソームを処方するいくつかの試みを示している。
【００１１】
このように、タキサン組成物の処方に関連する大きな問題が、以下のようなタキサンの疎水性であることは従来技術から明らかである：
（ａ）可溶化された形態の前記薬剤を含み、所望の期間まで薬剤の実質的な凝集または結晶化も製剤の外観の変化も全くない安定した組成物を処方するのが困難であり、
（ｂ）多量の可溶化剤、リン脂質、および界面活性剤の使用を必要とする。
【００１２】
また、TAXOL（クレモホールおよびアルコール中のパクリタキセルの市販溶液）の毒性試験は、米国特許第６７５３００６号に開示されているとおり、７．５〜１２．０ｍｇ／ｋｇの低いＬＤ５０値を示し、溶液の形態で投与される薬剤の治療指数が非常に低く、中程度の投与量ですら重篤な副作用および中毒反応を示すことがあることを示す。
そのため、以下のようなタキサン誘導体の注射用製剤が必要とされている：
（ａ）多量の賦形剤の使用を回避し、
（ｂ）クレモホールの使用を回避し、
（ｃ）ＬＤ５０値が高く、溶液形態の薬剤の投与に関連する毒性副作用を最低限にする新規送達系により薬剤を送達し、
（ｅ）その疎水性に関連した薬剤の限界を克服し、投与の間および保存の間の所望の期間、薬剤の実質的な凝集または結晶化も製剤の外観の変化もなく安定である。
【００１３】
本発明者らは、水混和性溶媒および水を含んでなるビヒクルに分散され平均サイズが３００ｎｍ未満であり、タキサン誘導体、ポリマー、および非常に少量の界面活性剤を含んでなるナノ粒子を含んでなるナノ分散体を見出した。本発明は、クレモホールの使用を回避し、はるかに低減された量の添加剤（リン脂質）を使用し、ナノ粒子の形態で薬剤を送達し、そのように薬剤の投与に関連した中毒反応および副作用を最低限にする製剤を提供する。本発明の製剤に観察されるＬＤ５０値は、３４２．５ｍｇ／ｋｇであり、米国特許第６７５３００６号に開示される市販のTAXOL（登録商標）溶液の７．５〜１２．０ｍｇ／ｋｇというＬＤ５０値よりはるかに大きい。また、本発明の製剤は安定であり、投与の間および保存の間の所望の期間、薬剤の実質的な凝集または結晶化も製剤の外観の変化も全くない。
【発明の目的】
【００１４】
本発明の目的は、非経口経路による投与の前およびその間の所望の期間安定である、タキサン誘導体のナノ分散体を提供することにある。
【００１５】
本発明の他の目的は、室温で４時間より長く保存する時に凝集の兆候も外観の変化も全く示さないナノ分散体を提供することにある。
【００１６】
本発明のさらなる目的は、化学的に安定で、室温で少なくとも３ヶ月保存する時に凝集の兆候も外観の変化も全く示さず、水性液体ビヒクルによる希釈時に安定なナノ分散体を生じる、タキサン誘導体のプレコンセントレートを提供することにある。
【００１７】
本発明のさらなる目的は、２つの容器を有するキットであって、第１容器が水混和性溶媒中のタキサン誘導体のプレコンセントレートを含んでなり、第２容器が水性液体ビヒクルを含んでなり、第２容器の内容物を第１容器の内容物に加え、またはその逆に加えると、穏やかな攪拌または振盪を加えるのみで静脈内投与に好適な安定なナノ分散体が形成されるキットを提供することにある。
【００１８】
本発明のさらに他の目的は、３つ以上の容器、例えば２つの容器を有するキットであって、第１容器が凍結乾燥された形態のナノ分散体を含んでなり、第２容器が水性液体ビヒクルを含んでなり、第２容器の内容物を第１容器の内容物に加え、またはその逆に加えると、穏やかな攪拌または振盪を加えるのみで静脈内投与に好適な安定なナノ分散体が形成されるキットを提供することにある。
【００１９】
本発明のさらなる目的は、ガンを治療する方法であって、前記ナノ分散組成物をその必要のある患者に投与する工程を含む方法を提供することにある。
【発明の概要】
【００２０】
本発明は、水混和性溶媒および水を含んでなるビヒクル中に分散された平均粒径が３００ｎｍ未満のナノ粒子を含んでなるナノ分散体であって、前記ナノ粒子が１種以上のタキサン誘導体、ポリマー、および、脂肪酸またはその塩とステロールまたはその誘導体またはその塩との混合物を含む界面活性剤を含んでなるナノ分散体を提供する。
【００２１】
本発明は、水混和性溶媒中に、１種以上のタキサン誘導体、ポリマー、および、脂肪酸またはその塩とステロールまたはその誘導体またはその塩との混合物を含む界面活性剤を含んでなる溶液であって、水性液体ビヒクルによる希釈時にナノ分散体を生じる溶液も提供する。
【００２２】
本発明は、１種以上のタキサン誘導体、ステロールまたはその誘導体またはその塩と脂肪酸またはその塩との混合物を含んでなる界面活性剤、および、ポリマーを含む、平均粒径が３００ｎｍ未満のナノ粒子も提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】実施例２７に詳述される試験に従い、対照試料、参照試料（ABRAXANE（登録商標））、および試験試料（本発明の実施例１２ａの組成物）のメスのＢａｌｂ／ｃヌードマウスに移植したヒト乳ガン異種移植片（ＭＸ−１）の時間（日）による腫瘍体積の変化の比較評価である。
【図２】実施例２８に詳述される試験に従い、対照試料、参照試料（ABRAXANE（登録商標））、および試験試料（本発明の実施例９の組成物）のメスの無胸腺ヌードマウスに移植したヒト乳ガン異種移植片（ＭＸ−１）の時間（日）による腫瘍体積の変化の比較評価である。
【図３】実施例２９に詳述される試験に従い、対照試料、試験試料（本発明の実施例９の組成物）、および２種の参照試料（ABRAXANE（登録商標）およびONCOTAXEL（登録商標））のオスの無胸腺ヌードマウスに移植したヒト結腸ガン異種移植片（ＨＴ−２９）の時間（日）による腫瘍体積の変化の比較評価である。
【図４】図４−ａは、開始時の実施例９のナノ分散体の粒径分布を示すヒストグラムであり、図４−ｂは、室温で２４時間保存された実施例９パクリタキセルのナノ分散体の粒径分布を示すヒストグラムである。
【図５】図５−ａは、開始時の実施例２４Ｄのナノ分散体の粒径分布を示すヒストグラムであり、図５−ｂは、室温で８時間保存された実施例２４Ｄのドセタキセルのナノ分散体の粒径分布を示すヒストグラムである。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
本発明は、水混和性溶媒および水を含んでなり水性ビヒクル中に分散された平均粒径が３００ｎｍ未満のナノ粒子を含んでなるナノ分散体であって、前記ナノ粒子がタキサン誘導体、ポリマー、および、脂肪酸またはその塩と、ステロールまたはその誘導体またはその塩との混合物を含む界面活性剤を含むナノ分散体を提供する。
【００２５】
本発明は、水混和性溶媒中に、タキサン誘導体、ポリマー、および、脂肪酸またはその塩と、ステロールまたはその誘導体またはその塩との混合物を含む界面活性剤を含む溶液であって、水性ビヒクルにより希釈するとナノ分散体が得られる溶液も提供する。
【００２６】
本発明は、タキサン誘導体、ステロールまたはその誘導体またはその塩と、脂肪酸またはその塩との混合物を含む界面活性剤、およびポリマーを含む、平均粒径が３００ｎｍ未満のナノ粒子にも関する。本発明のナノ分散体は、クレモホールなどの毒性賦形剤を含まず、タキサン誘導体の安定なナノ分散体の処方に要するはるかに低減された量の添加剤（界面活性剤およびリン脂質など）の使用を含み、それにより関連する中毒反応を最低限にする。
【００２７】
ナノ粒子またはナノサイズの粒子は、それ自体効率よい薬剤送達の点で多くの利点を与える。送達ビヒクル中への薬剤の取込みまたはビヒクルへの薬剤の付着のいずれによっても、薬剤の遊離形態での投与に比べ多くの利点が得ることが可能であることが理解された。ビヒクル中への薬剤の取込みは、組織特異的分布、特に対象とする特定の組織中または疾患部位での優先的な蓄積、特定の細胞型への薬剤の標的化、血液成分との相互作用の減少、早期の分解からの薬剤の保護増大、および循環時間の増加に影響を与えうる。ナノ粒子は、そのような重要な薬物送達ビヒクルの１つである。ナノ粒子は、巧みに調節された特異性を有し、所望の位置または作用標的部位に、高濃度の医薬品を送達できる（Kayser et al, Current Pharmaceutical Biotechnology, 2005, 6, page number 3-5）。標的化薬剤送達は多くの用途で重要であり、特に薬剤が全身に送達される時に薬剤の毒性が問題になる場合に重要である。標的化薬剤送達は、他の有益な特徴の中でも、毒性の副作用を無くすかまたは少なくとも最低限にするのに役立ち、要求される投与量を低くするのに役立つことがある。作用部位に薬剤を標的化する種々の手法がある。非常に単純であるが、その適用性において限定されている手法は、標的部位での直接注射であり、例えば腫瘍組織への注射である。別な手法は、種々の投与経路用の特別なキャリア系（例えば局所送達用のトランスフェロソーム）の使用であり、経口および非経口投与用のミクロスフィアまたはナノ粒子である。非経口経路のうち、静脈内注射が最も利用頻度が高い。静脈内投与されると、粒子は肝臓および脾臓マクロファージにより認識され、選択的に肝臓マクロファージにより取り込まれる。この作用を利用して、薬剤を充填したキャリアを、肝臓および脾臓に、または一般的にマクロファージに標的化し、ＭＰＳ（単核食細胞系）またはＲＥＳ（細網内皮系）の感染症を治療できるが、この標的現象は、「受動的標的化」と呼ばれることが多い。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分またはPoloxamine908などのＰＥＧ鎖含有ポリマーによりキャリアの表面を修飾して、ＭＰＳ／ＲＥＳ認識を逃れることが可能である。これにより、静脈内注射時に、血流中のキャリアの循環期間が延びる。正常で長時間循環するキャリアは、一般的にリガンドと呼ばれる、標的化部分（レシチンまたはモノクローナル抗体またはマンノース／ガラクトースのような糖類）を備えることがある。このようなリガンドは、薬剤含有キャリアを、リガンドの適切な受容体を持つ所望の標的細胞に向ける。標的化リガンドの使用により得られるこの部位特異的送達は、能動的プロセスを含む。そのためそれは「能動的標的化」とも呼ばれる。特定の大きさを持つナノ粒子は、腫瘍生物学の特徴を利用する現象により、固形腫瘍を受動的に標的にできる。腫瘍組織には、血管の漏れ、透過性の増大、およびリンパ排液の低下がある。対照的に、正常組織中の血管内皮細胞は、腫瘍組織に比べ、ナノ粒子の透過性が低い。これにより、ナノキャリアが腫瘍中に蓄積できる。この効果は、血管透過性と滞留性亢進効果(Enhanced Permeability and Retention Effect)すなわちＥＰＲ効果として知られている（Nanoparticle Technology for drug delivery, edited by Ram B. Gupta and Uday B. Kompella, published by Taylor and Francis, 2005, page 539）。また、２００ｎｍ未満のナノ粒子は、細網内皮系を巧みに避け、長時間循環したままである（Naoparticle Technology for drug delivery, edited by Ram B. Gupta and Uday B. Kompella, publishedby Taylor and Francis, 2005, page 540）。
【００２８】
本明細書で使用されるナノ粒子という用語は、ナノメートル程度の制御された寸法を持つ任意の粒子を意味する。本発明で特許請求されるナノ粒子は、ポリマーナノ粒子（薬剤を閉じ込めるポリマーのマトリックス）、および／またはポリマーナノベシクル（薬剤をカプセル化するポリマー安定化ナノサイズベシクル）、および／またはポリマーナノカプセル（コアの薬剤を取り巻くポリマーメンブレン）、および／または界面活性剤により安定化された薬剤のナノサイズ粒子、および平均サイズ３００ｎｍ未満の同様な物でよい。ナノ粒子の粒径は、粒径を測定し表現する従来の方法を利用して測定されるが、マルバーン粒径分析、ふるい分け、光散乱光学顕微鏡測定、画像分析、沈降法、および当業者に公知の他の方法がある。粒径分布の情報は、マルバーン粒径測定から生じるものなど、Ｄ１０、Ｄ５０、およびＤ９０の値から得ることができる。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、出願者らは、平均粒径が３００ｎｍ未満のナノ粒子を含んでなるナノ分散体による薬剤の送達が、標的とする腫瘍組織および細胞中での薬剤の内在化および蓄積を増大させると考えている。そのような増大した内在化レベルは、ガンに関連した腫瘍を治癒するための効力ある治療戦略を与える。
【００２９】
本発明の一態様によれば、ナノ粒子の粒径は１０ｎｍから２７５ｎｍの範囲である。本発明の好ましい態様によれば、粒径は２００ｎｍ未満である。本発明の特に好ましい態様によれば、粒径は１０ｎｍから２００ｎｍの範囲である。
【００３０】
本発明は、水混和性溶媒および水を含んでなるビヒクル中に分散された平均サイズが３００ｎｍ未満のナノ粒子を含んでなるナノ分散体であって、前記ナノ粒子が、１種以上のタキサン誘導体、ポリマー、および、脂肪酸またはその塩とステロールまたはその誘導体またはその塩との混合物を含む界面活性剤を含んでなるナノ分散体を提供する。
【００３１】
本発明は、水混和性溶媒中に、１種以上のタキサン誘導体、ポリマー、および、脂肪酸またはその塩とステロールまたはその誘導体またはその塩との混合物を含んでなる界面活性剤を含む溶液であって、水性液体ビヒクルによる希釈時にナノ分散体を生じる溶液も提供する。
【００３２】
本発明のナノ粒子は、平均粒径が３００ｎｍ未満であり、前記粒子は、１種以上のタキサン誘導体、ステロールまたはその誘導体またはその塩と脂肪酸またはその塩との混合物を含んでなる界面活性剤、およびポリマーを含んでなる。
【００３３】
タキサン誘導体は、本発明の態様に言及されるとおり、基本的にタキサン骨格を有する化合物であり、イチイの木、タキサス・ブレビフォリア(Taxus brevifolia)の樹皮などの天然源から主に誘導される、または細胞培養から、もしくは化学合成された分子から誘導される複雑なジテルペノイド天然生成物である。タキサンクラスの薬剤の主な作用機序は、微小管機能の阻害である。微小管中のＧＤＰ結合チューブリンの安定化により阻害を行う。微小管は細胞分裂には必須であり、したがってタキサンはこれを停止し、「凍結された有糸分裂」(frozen mitosis)と呼ばれる。
【００３４】
本発明の組成物に使用されるこの群の最も有名な代表物には、パクリタキセルおよびデセタキセルおよびそれらの薬学的に許容できる塩、誘導体、アナログ、および異性体があり、例えば、７−エピパクリタキセル、ｔ−アセチルパクリタキセル、１０−デスアセチル−パクリタキセル、１０−デスアセチル−７−エピパクリタキセル、７−キシロシルパクリタキセル、１０−デスアセチル−７−グルタリルパクリタキセル、７−Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシルパクリタキセル、７−Ｌ−アラニルパクリタキセルなどおよびそれらの混合物がある。
【００３５】
パクリタキセルは、抗腫瘍活性のある天然生成物である。パクリタキセルは、タキサス・ブレビフォリア(Taxus brevifolia)および／またはタキサス・バッカータ(Taxus baccata)から半合成プロセスにより得られる。パクリタキセルの化学名は、（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−ベンゾイル−３−フェニルイソセリンの５α，２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン４，１０−ジアセタート２−ベンゾアート１３−エステルである。パクリタキセルは、TAXOL注射液として米国で市販されている。パクリタキセルは、進行性卵巣ガンの治療の第１選択療法および術後療法として指示される。第１選択療法として、パクリタキセルはシスプラチンと組み合わせて指示される。パクリタキセルは、標準的なドキソルビシン含有多剤併用化学療法に続いて投与される、リンパ節転移陽性乳ガンの補助療法にも指示される。パクリタキセルは、転移性疾患の多剤併用療法の失敗または術後補助化学療法６ヶ月以内の再発の後、乳ガンの治療にも指示される。パクリタキセルは、シスプラチンと組み合わされて、治癒の可能性のある手術および／または放射線治療の候補者でない患者の非小細胞肺ガンの第１選択治療にも指示される。パクリタキセルは、ＡＩＤＳ関連カポジ肉腫の第２選択治療にも指示される。
【００３６】
ドセタキセルは、タキソイド類に属する他の抗腫瘍薬である。イチイの木の再生可能な針状葉バイオマスから抽出された前駆体により始まる半合成法により調製される。ドセタキセルの化学名は、５β−２０−エポキシ−１，２α，４，７β，１０β，１３α−ヘキサヒドロキシタクス−１１−エン−９−オン４−アセタート２−ベンゾアートの（２Ｒ，３Ｓ）−Ｎ−カルボキシ−３−フェニルイソセリン、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルエステル、１３−エステル、三水和物である。ドセタキセルは、TAXOTERE（登録商標）注射濃縮液として米国で市販されている。ドセタキセルは、単剤として、先の白金系化学療法が失敗した後の局所的に進行した、または転移性の非小細胞ガンの患者の治療に指示される。ドセタキセルは、シスプラチンと組み合わされて、切除不能か、局所的に進行した、または転移性の非小細胞肺ガンの患者であって、この病態の化学療法を受けていない患者の治療に指示される。ドセタキセルはプレドニゾンと組み合わされて、アンドロゲン非依存性（ホルモン不応性）転移性前立腺ガンの患者の治療に指示される。ドセタキセルはシスプラチンおよびフルオロウラシルと組み合わされて、進行性疾患のための先の化学療法を受けていない、食道胃接合部の腺ガンを含む進行性胃腺ガンの患者の治療に指示される。ドセタキセルはシスプラチンおよびフルオロウラシルと組み合わされて、頭部および頸部の手術不能な局所的に進行した扁平細胞ガンの患者の導入治療に指示される。本発明の態様は、約０．００１ｍｇ／ｍｌから約１５．０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌから約１０．０ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは約１．５ｍｇ／ｍｌから約５．０ｍｇ／ｍｌの量のパクリタキセルを含んでなる。ドセタキセルは、本発明の態様によれば、約０．００１ｍｇ／ｍｌから約１０．０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌから約１．０ｍｇ／ｍｌ、特に好ましくは約０．３ｍｇ／ｍｌから約０．７ｍｇ／ｍｌの量で使用される。
【００３７】
ナノ粒子を含んでなるナノ分散体は、抗炎症剤、抗ヒスタミン剤、５−ＨＴ３拮抗剤、Ｈ２受容体拮抗剤、ビタミン、およびそれらの混合物からなる群から選択される追加の治療上活性な薬剤をさらに含んでなっていてよい。本発明の組成物に使用できる抗炎症剤は、ステロイド性抗炎症剤および非ステロイド性抗炎症剤から選択できる。本発明の態様は、好ましくはグルココルチコイドなどのステロイド性抗炎症剤を含んでなる。本発明の組成物に使用できるグルココルチコイドの例は、コルチゾールまたはヒドロコルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン、ブデゾニド、トリアミシノロンなどおよびそれらの混合物から選択できる。本発明の好ましい態様によれば、デキサメタゾンが抗炎症剤として使用される。本発明の組成物に使用できる抗ヒスタミン剤またはヒスタミン拮抗剤は、エチレンジアミン（メピラミン、アンタゾリン）、エタノールアミン（ジフェンヒドラミン、カルビノキサミン、クレマスチン、ジメンヒドリナート）、アルキルアミン（フェニラミン、クロルフェニラミン、デクスクロルフェニラミン、トリプロリジン）、ピペラジン（シクリジン、クロルシクリジン、ヒドロキシジン、メクリジン）、三環系および四環系（プロメタジン、アリメマジン、シプロヘプタジン、アザタジン、ケトチフェン）などの第一世代抗ヒスタミン剤；アクリバスチン、アステミゾール、セチリジン、ロラチジン、ミゾラスチン、テルフェナジン、アゼラスチン、レボカバスチン、オラパチジン（olapatidine）などの第二世代抗ヒスタミン剤；レボセチリジン、デスロラチジン、フェキソフェナジンなどの第三世代抗ヒスタミン剤、およびそれらの混合物から選択できる。本発明の組成物に使用可能な５−ＨＴ３拮抗剤は、オンダンセトロン、グラニセトロン、ドラセトロン、トロピセトロン、パロノセトロン、アロセトロン、シランセトロンなど、およびそれらの混合物から選択できる。本発明の組成物に使用可能なＨ２受容体拮抗剤またはＨ２拮抗剤は、シメチジン、ラニチジン、ニザチジン、ファモチジン、ロキサチジン、プリマミド、メチアミドなど、およびそれらの混合物から選択できる。本発明の組成物に使用可能なビタミンは、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、およびビタミンＫなどの脂溶性ビタミンおよびビタミンＣおよびビタミンＢ、例えばビタミン（Ｂ１：チアミン；Ｂ２：リボフラビン；Ｂ３：ナイアシン；Ｂ５：パントテン酸；Ｂ７：ビオチン；Ｂ９：葉酸；Ｂ１２：シアノコバラミン）などの水溶性ビタミンおよびそれらの混合物から選択できる。本発明の一態様によれば、使用されるビタミンはビタミンＤである。
【００３８】
本発明のナノ分散体中に存在するナノ粒子は、１種以上のポリマーを含んでなる。本発明のナノ粒子に好適なポリマー（複数可）は、好ましくは水溶性である。水溶性ポリマーの例には、ポリビニルピロリドン、ポロクソマー（poloxomer）、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、アルギン酸ナトリウム、ヒアルロン酸ナトリウム、ジェランガム、カラギーナン、キサンタンガム、硫酸デキストラン、硫酸コンドロイチン、ペクチナート、ヘパリン、メタクリル酸コポリマー、デルマタン硫酸、セルロースポリマー、例えばカルボキシメチルセルロールナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロールなど、およびそれらの混合物があるが、これらに限定されない。
【００３９】
ポリビニルピロリドンは、直線状に配列された１−ビニル−２−ピロリドンのモノマーユニットを有する第三級アミドポリマーであり、以下でＰＶＰと称するが、ポビドンとしても知られる。それは、平均分子量が約１０，０００から約７００，０００の範囲の一連の製品として市販されている。種々の製品が、Ｋ値と呼ばれる平均分子量により市販されており、例えば、GAF Corporationは、以下のＫ値を有するＰＶＰを販売している。
Ｋ値                    平均分子量
１５                    約１０，０００
３０                    約４０，０００
６０                    約１６０，０００
９０                    約３６０，０００
他の供給業者、BASFは、異なる水溶性グレードのポリビニルピロリドンをＫｏｌｌｉｄｏｎとして提供しており、例えば分子量２０００から３０００（Ｋｏｌｌｉｄｏｎ  １２  ＰＦ）、７０００〜１１，０００（Ｋｏｌｌｉｄｏｎ  １７  ＰＦ）、２８，０００〜３４，０００（Ｋｏｌｌｉｄｏｎ  ２５）、１，０００，０００〜１，５００，０００（Ｋｏｌｌｉｄｏｎ  ９０  Ｆ）のグレードがある。態様によれば、ポリビニルピロリドンが水溶性ポリマーとして使用される。本発明に好適なポリビニルピロリドンのグレードには、分子量が約１，０００から約４５，０００のグレード、好ましくは約４，０００から約３０，０００のグレードがある。本発明の一態様によれば、ナノ分散体に使用されるポリマーの量は、約０．００１ｗ／ｖ％から約２０ｗ／ｖ％である。ポリマーは、好ましくは約０．０１ｗ／ｖ％から約５．０ｗ／ｖ％の量で使用される。特に好ましくは、約０．０１ｗ／ｖ％から約１．０ｗ／ｖ％の量で使用される。
【００４０】
本発明のナノ分散体は、１種以上の界面活性剤を含んでなる。界面活性剤という用語は、「界面活性剤」のブレンドである。界面活性剤は、水溶性（親水性）部分と脂溶性（親油性）部分を含む分子である。本発明のナノ分散体に使用される界面活性剤は、脂肪酸またはその塩とステロールまたはその誘導体またはその塩との混合物を含む。
【００４１】
脂肪酸という用語は、動物性または植物性の脂肪、油、または蝋中のエステル化形態から誘導された、またはエステル化形態で含まれている脂肪族（飽和または不飽和）モノカルボン酸を包含する。本発明の組成物に使用可能な脂肪酸またはその塩の例には、約４から約２８の範囲の「ｎ」個の炭素原子を持つ脂肪酸またはその塩があるが、これらに限定されない。脂肪酸は、飽和脂肪酸でも不飽和脂肪酸でも、それらの塩および組み合わせでもよい。飽和脂肪酸およびその塩は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、カプリル酸ナトリウム、ラウリル酸ナトリウム、ミリスチン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウムなどおよび／またはそれらの混合物から選択できる。不飽和脂肪酸およびその塩は、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、リノール酸、αリノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、エルカ酸、ドコサヘキサエン酸、オレイン酸ナトリウム、アラキドン酸ナトリウムなどおよび／またはそれらの混合物から選択できる。
【００４２】
本発明のナノ分散体またはナノ粒子に使用可能なステロールまたはその誘導体またはその塩の例は、ステロールの酸エステルであろう。本発明により好適なステロールには、コレステロール、フィトステロール、エルゴステロール、胆汁酸塩、およびそれらの混合物があるが、これらに限定されない。使用可能なコレステロールの酸塩には、硫酸コレステリル、酢酸コレステロール、クロロ酢酸コレステロール、安息香酸コレステロール、ミリスチン酸コレステロール、ヘミコハク酸コレステロール、リン酸コレステロール、リン酸コレステロール、ホスホン酸、ホウ酸、硝酸、ケイ皮酸コレステロール、クロトン酸コレステロール、酪酸コレステロール、ヘプタン酸コレステロール、ヘキサン酸コレステロール、オクタン酸コレステロール、ノナン酸コレステロール、デカン酸コレステロール、オレイン酸コレステロール、プロピオン酸コレステロール、吉草酸コレステロール、炭酸ジコレステリルなど、およびそれらの混合物があるが、これらに限定されない。本発明の組成物に使用可能なフィトステロールには、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、および、その誘導体、塩、およびそれらの混合物がある。例えば、Sigma USAにより市販されているPhytosterols*は、βシトステロール、カンペステロール、およびジヒドロブラシカステロールを含む。胆汁酸には、コール酸、ケノデオキシコール酸、デオキシコール酸、グリココール酸、タウロコール酸、ウルソデオキシコール酸、および、その誘導体、塩、およびそれらの混合物がある。ステロールは、ヘミコハク酸コレステロールを含むコレステロールのエステルでも、硫酸水素コレステロールおよび硫酸コレステロールを含むコレステロールの塩でも、エルゴステロールでも、ヘミコハク酸エルゴステロールを含むエルゴステロールのエステルでも、硫酸水素エルゴステロールおよび硫酸エルゴステロールを含むエルゴステロールの塩でも、ラノステロールでも、ヘミコハク酸ラノステロールを含むラノステロールのエステルでも、硫酸水素ラノステロールおよび硫酸ラノステロールを含むラノステロールの塩でもよい。
【００４３】
本発明の一態様によれば、ナノ粒子は、ステロールまたはその誘導体またはその塩と脂肪酸またはその塩との混合物である界面活性剤を含んでなる。他の好ましい態様によれば、ナノ粒子は、極性の酸のコレステロールエステルで構成される。好ましい態様によれば、ナノ分散体に使用される界面活性剤は、カプリル酸と硫酸コレステリルとの混合物である。カプリル酸は、オクタン酸としても知られるが、約０．００１ｗ／ｖ％から約５．０ｗ／ｖ％、より好ましくは約０．０１ｗ／ｖ％から約１．０ｗ／ｖ％、特に好ましくは約０．０１ｗ／ｖ％から約０．５ｗ／ｖ％の量で、態様中で使用できる。硫酸コレステリルは、本発明の態様中で、約０．００１ｗ／ｖ％から約５．０ｗ／ｖ％、より好ましくは約０．０１ｗ／ｖ％から約１．０ｗ／ｖ％、特に好ましくは約０．０１ｗ／ｖ％から約０．５ｗ／ｖ％の量で使用される。
【００４４】
界面活性剤のこの特別な混合物が、界面活性剤とタキサン誘導体との比が低い場合ですら６時間より長く安定なままでいる、タキサン誘導体のナノ分散体を生じることが、意外にも見いだされた。本発明のナノ分散体において、界面活性剤とタキサン誘導体との比は、約１：５から約１：１０である。本発明のナノ分散体は少なくとも６時間安定なままであり、特に、パクリタキセルを含んでなるナノ分散体は２４時間安定なままであることが見いだされ、ドセタキセルを含んでなるナノ分散体は８時間安定なままであることが見いだされた。
【００４５】
他の好ましい態様によれば、使用される界面活性剤は、オレイン酸および硫酸コレステリルおよび／またはそれらの混合物から選択される。
【００４６】
本発明の他の態様によれば、使用される界面活性剤は、飽和脂肪酸および胆汁酸または胆汁酸塩および／またはそれらの混合物から選択される。好ましい態様によれば、使用される界面活性剤は、カプリル酸およびグリココール酸ナトリウムまたはウルソデオキシコール酸および／またはそれらの混合物からなる群から選択される。
【００４７】
使用される場合、胆汁酸塩は、約０．００１ｗ／ｖ％から約５．０ｗ／ｖ％、より好ましくは約０．０１ｗ／ｖ％から約１．０ｗ／ｖ％、特に好ましくは約０．０１ｗ／ｖ％から約０．７５ｗ／ｖ％の量で使用される。
【００４８】
本発明の組成物は、少量のレシチン／リン脂質および／またはそれらの誘導体をさらに含んでなることがある。本明細書での「少量」という用語は、リン脂質対タキサン誘導体の比が、約１：４から約１：１０であり、リン脂質が使用される場合でも、それらは非常に定量で使用され、すなわちタキサン誘導体の量に比べ、リン脂質の量は非常に少ないことを意味する。一般的に、リポソームである従来技術の組成物は、薬剤の量に比べて多量のリン脂質を必要とする。
【００４９】
リン脂質が少量使用されるいくつかの態様によれば、そのようなリン脂質の例には、天然で部分的に水素化されているレシチンもしくは水素化されているレシチンまたはスフィンゴリピドがあるが、これらに限定されない。天然レシチンもまた、異なるリン脂質の混合物である。本発明の組成物に使用可能なリン脂質は、ホスファチジルコリン（ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアリロイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジラウリロイルホスファチジルコリン、１−パルミトイル−ホスファチジルコリン、１−ミリストイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン、１−パルミトイル−２−ミリストイルホスファチジルコリン、１−ステアロイル−２−パルミトイルホスファチジルコリン）；ホスファチジルエタノールアミン（ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、リゾファチジルエタノールアミン）；スフィンゴミエリン（脳スフィンゴミエリン、ジパルミトイルスフィンゴミエリン）；リゾレシチン；セレブロシドなど、およびそれらの混合物から選択される。さらに、ポリエチレングリコール−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（PEG-DSPE）、メトキシポリエチレングリコール−ジステアロイルホスファチジルコリンm-PEG-DSPCなど、およびそれらの混合物などの脂質のポリエチレングリコール誘導体も、本発明の組成物に使用できる。好ましくは、本発明の組成物に使用可能なブチレンシド（butylenesids）は、m-PEG-DSPE（メトキシポリエチレングリコール−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン）である。
【００５０】
本発明の一態様によれば、使用されるリン脂質はmPEG-DSPEである。それは、約０．００１ｗ／ｖ％から約１０．０ｗ／ｖ％、より好ましくは約０．０１ｗ／ｖ％から約５．０ｗ／ｖ％、特に好ましくは約０．０３ｗ／ｖ％から約０．５ｗ／ｖ％の量で使用される。
【００５１】
本発明の組成物に使用される非水性溶媒は、タキサン誘導体が比較的可溶性なものである。非水性溶媒は水または水性溶媒と混和性である。本発明に使用されるそのような水混和性溶媒の例には、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノールなどのアルコール；エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、およびその誘導体などのグリコール；ＰＥＧ４００またはＰＥＧ３３５０などのポリエチレングリコール；プロピレングリコールおよびその誘導体、例えばＰＰＧ−１０ブタンジオール、ＰＰＧ−１０メチルグルコースエーテル、ＰＰＧ−２０メチルグルコースエーテル、ＰＰＧ−１５ステアリルエーテル、；グリセロール；グリコフロールなど、およびそれらの混合物があるが、これらに限定されない。
【００５２】
本発明の一態様によれば、非水性溶媒は、アルコール、ポリエチレングリコール、および／またはそれらの混合物からなる群から選択できる。本発明の好ましい態様によれば、エタノールとＰＥＧ（ポリエチレングリコール）との混合物が水混和性溶媒として使用される。エタノールは、約０．００１ｗ／ｖ％から約５ｗ／ｖ％、より好ましくは約０．０５ｗ／ｖ％から約０．５ｗ／ｖ％、特に好ましくは約０．１ｗ／ｖ％から約０．２５ｗ／ｖ％の量で本発明のナノ分散組成物中に使用される。好ましく使用されるポリエチレングリコールにはＰＥＧ−４００およびＰＥＧ−３３５０がある。ＰＥＧ−４００は、本発明の態様に、約０．０１ｗ／ｖ％から約２０．０ｗ／ｖ％、より好ましくは約０．０５ｗ／ｖ％から約５．０ｗ／ｖ％、特に好ましくは約１．０ｗ／ｖ％から約２．５ｗ／ｖ％の量で使用される。ＰＥＧ−３３５０は、本発明の態様に、約０．００１ｗ／ｖ％から約１０．０ｗ／ｖ％、より好ましくは約０．０５ｗ／ｖ％から約５．０ｗ／ｖ％、特に好ましくは約０．１ｗ／ｖ％から約３ｗ／ｖ％の量で使用される。
【００５３】
一般的に、タキサンプレコンセントレート、すなわち、溶液が、水性ビヒクルにより希釈すると少なくとも約４時間安定なままでいるナノ分散体が得られることが望ましい。この時間は、ナノ分散体が、注入の形態で患者に投与される時間である。そのため、本発明のナノ分散体の最低で４時間の安定性を得ることが常に望ましい。ビヒクルは、注射用の水に溶けている約５％から約１０．０ｗ／ｖ％のブドウ糖溶液または他の任意の薬剤的に許容できる静脈用水性液体ビヒクルおよびそれらの混合物をさらに含んでなっていてよい。タキサン誘導体がパクリタキセルである本発明の一態様、水性ビヒクルはこの安定性を向上させるために５％ブドウ糖溶液をさらに含んでなるが、追加の安定剤が水相に存在してもよい。そのような安定剤の例は、ヘタスターチ、デキストラン、ヒアルロン酸ナトリウム、グルタチオン、オルニチン−Ｌ−アスパルテートなどおよびそれらの混合物である。他の態様によれば、５％ブドウ糖溶液中の０．０１％アルギニンの使用が、８時間安定なドセタキセルのナノ分散体を生じるが、５％ブドウ糖溶液中の１％ヒスチジンの使用が５時間安定なドセタキセルのナノ分散体を生み出すことが見出された。ドセタキセルがタキサン誘導体として使用される態様によれば、水性ビヒクルは、ヘタスターチ、デキストラン、ヒアルロン酸ナトリウム、グルタチオン、オルニチン−アスパルテート、ヒスチジン、アルギニンなどのアミノ酸など、およびそれらの混合物をさらに含んでなっていてよい。これらの追加の安定剤は、水性ビヒクルの約０．０２％から約５％の量で存在してよい。好ましい態様によれば、ドセタキセルのナノ分散体用の５％ブドウ糖溶液中の０．５％ヘタスターチの使用が、粒径の点で５時間より長く安定であることが見出された。
【００５４】
本発明のタキサン誘導体のナノ分散体は、典型的には、以下に列挙された方法のいずれか１つにより調製できる。
【００５５】
１）治療上活性な成分（タキサン誘導体および／または他の薬剤）、ポリマー（複数可）、および脂肪酸またはその塩、ステロールまたはその誘導体またはその塩およびそれらの混合物から選択される界面活性剤（複数可）を、エタノールおよび／またはＰＥＧなどの水混和性溶媒中に、攪拌および加熱しながら溶解させ、薬剤の濃縮溶液を得る。このように得られた溶液を、メンブランフィルターで濾過する。この溶液に、水性液体ビヒクル（５％ブドウ糖溶液）をゆっくりと加え、混合物を振盪／攪拌し、本発明のナノ分散体の形成をもたらす。このように形成されたナノ分散体を、任意に均質化および／または超音波処理し、濾過または凍結乾燥する。薬品の凍結乾燥されたパウダーは、水性媒体により再構成でき、患者へ投与する前に本発明のナノ分散体を再び作ることができる。
【００５６】
２）タキサン誘導体、ポリマー（複数可）、および、脂肪酸またはその塩、ステロールまたはその誘導体またはその塩およびそれらの混合物から選択される界面活性剤（複数可）を、エタノールおよび／またはＰＥＧなどの水混和性溶媒中に、攪拌および加熱しながら溶解させ、薬剤の濃縮溶液を得る。このように得られた溶液を、メンブランフィルターで濾過し、水性媒体（５％ブドウ糖溶液）に加え、混合物を振盪／攪拌し、本発明のナノ分散体の形成をもたらす。このように形成されたナノ分散体を、任意に均質化および／または超音波処理し、濾過または凍結乾燥する。薬品の凍結乾燥されたパウダーは、水性媒体により再構成でき、患者へ投与する前に本発明のナノ分散体を再び作ることができる。
【００５７】
３）タキサン誘導体、および、脂肪酸またはその塩とステロールまたはその誘導体またはその塩との混合物を含んでなる界面活性剤（複数可）を、丸底フラスコ中で、４０℃で軽く温めながらエタノールおよび／またはＰＥＧなどの水混和性溶媒に溶解させ、溶媒を蒸発させ、薬剤の薄膜を形成する。ポリマー（複数可）を、要求される量の水性媒体に溶解させ、この溶液を、穏やかに攪拌および振盪しながら３〜４時間前記膜に加え、本発明のナノ分散体の形成をもたらす。このように形成されたナノ分散体を、任意に均質化および／または超音波処理し、濾過または凍結乾燥する。薬品の凍結乾燥されたパウダーは、水性媒体により再構成でき、患者へ投与する前に本発明のナノ分散体を再び作ることができる。
【００５８】
本発明のナノ分散体は、平均サイズが３００ｎｍ未満のナノ粒子を含んでなるタキサン誘導体のコロイド状ナノ分散体であるので、物理的および化学的安定性に関して試験した。粒子が、室温で約８時間から約２４時間保存した時凝集せず、ナノ分散体が外観の変化の兆候を全く示さないことが観察され、ナノ分散体が、投与の前およびその間の所望の時間、安定であることが推測される。
【００５９】
また、水混和性溶媒中のタキサン誘導体および／または他の薬剤の溶液を試験すると、少なくとも３ヶ月溶液が物理的および化学的に安定のままであり、薬剤のアッセイに実質的な変化がなく、実質的な凝集も製剤の外観の変化も全くないことが観察された。これらの観察結果を、次に来る実施例に示す。
【００６０】
本発明のナノ分散体は、２つ以上の容器、例えば２つの容器を有するキットであって、第１容器が、水混和性溶媒中のタキサン誘導体、ポリマー、および、脂肪酸またはその塩とステロールまたはその誘導体またはその塩との混合物を含んでなる界面活性剤の溶液を含み、第２溶液が水性液体ビヒクルを含んでなり、穏やかに攪拌または振盪しながら、第２容器の内容物を第１容器の内容物に加え、またはその逆に加えると、静脈内投与に好適な本発明のナノ分散体が形成されるキットとしても提供できる。追加の容器は、タキサンナノ分散体の形成の前、または前記タキサンのナノ分散体が形成された後に混合するための第３成分を含んでよい。
【００６１】
本発明は、２つの容器を有するキットであって、第１容器が凍結乾燥された形態のナノ分散体を含んでなり、第２容器が水性液体ビヒクルを含んでなり、患者への投与前に、穏やかに攪拌または振盪しながら、第２容器の内容物を第１容器の内容物に加え、またはその逆に加えると、本発明のナノ分散体が形成されるキットも提供する。
【００６２】
本発明のナノ分散体の、その必要のある患者への投与は、当分野に公知の様々な種類のガンを治療する効果的な方法を提供する。
【００６３】
本発明のナノ分散体の効能および毒性を、Abraxane（登録商標）、Oncotaxel（登録商標）などの市販のタキセル製品と比較した。効能は以下のパラメータに基づき評価した。
１．腫瘍評価：日で表す時間に対する腫瘍体積（ｍｍ３）の減少に関して腫瘍を評価した。腫瘍を４２日間評価した。
２．パーセンテージＴ／Ｃ＝（Ｘ日の薬剤治療群の平均腫瘍体積／Ｘ日の薬剤治療群の平均腫瘍体積）×１００
３．腫瘍縮小：実験動物腫瘍モデルにおける腫瘍縮小は、臨床の適切さにおける重要なエンドポイントである。腫瘍縮小は、腫瘍体積が、測定可能な大きさ未満に小さくなることなく、治療開始時の腫瘍体積の５０％未満に小さくなれば部分的（ＰＲ）であると記録され、腫瘍量が手で触って感じられなくなると完全（ＣＲ）であると記録される。
４．特異的な腫瘍成長遅延（ＳＧＤ）は、薬剤治療腫瘍および対照腫瘍がある体積（Ｖ）に達する時間の差と、対照腫瘍が同じ体積（Ｖ）に達する時間の比として定義されるが、Ｖは治療開始時の初期腫瘍体積から２回の体積倍加の後の腫瘍体積であり、Ｔｖは、薬剤治療群または対照群が前記のある体積に達する時間である。Ｖ値値が４５日までに試験群動物または参照群動物で達成されない場合、同じ値＊４５日をその動物のＴｖと考えた。この試験は、ＳＧＤパラメータが１を超える場合、効能があると考えられる。
５．体重変化は、（（Ｘ日の動物の体重−０日の動物の体重）／０日の動物の体重）×１００として計算した。
６．生存分析は、カプランマイヤー法により行った。０．０５未満のＰ値を有意であると考えた。
本発明のナノ分散体の効力を上述のパラメータにより評価したが、他の任意の好適な試験方法および類似の試験方法を採用して、ナノ分散体の効力を測定できる。本発明の試験されたナノ分散体は、実施例２７、２８、および２９に例示されるとおり効力があることが分かった。
【００６４】
本発明のナノ分散体の毒性は、静脈内経路によりＣＤ−１マウスに試験を投与して測定した。最後の注射の後、動物を１時間観察し、投薬後４〜６時間の間観察した。その後、マウスを１日２回、臨床症状および死亡率について１５日間観察した。全生存動物の体重を、投薬後１、７、および１４日に記録した。１５日に、生存動物の剖検を実施し、もしあれば総病理(gross pathology)を記録した。毒性試験の結果を、実施例２５および２６に、それぞれパクリタキセルのナノ分散体およびドセタキセルのナノ分散体について詳細に記載した。
【００６５】
本発明は、上記で全般的に開示されたが、以下の実施例に関連して追加の態様がさらに議論および説明される。しかし、実施例は本発明の説明だけにのみ示され、本発明を限定するとは考えないものとする。
【実施例】
【００６６】
実施例１〜５
本発明のナノ分散体を以下の表１に説明する。
【表１】
0005937180.tif 000002
【００６７】
手順
薬剤、硫酸コレステリル、カプリル酸、およびＰＶＰ  Ｋ−３０をバイアル中に正確に秤量した。
内容物を、攪拌および４５℃で加熱しながら、必要な量の無水エタノールおよびＰＥＧ−４００に溶解させ、溶液を得た。
溶液を、０．２μＰＶＤＦメンブランフィルターに通して濾過した。
次いで、ブドウ糖溶液（５％）を、薬剤の溶液を収容しているバイアルにゆっくりと加え、穏やかに振盪すると、透明から半透明なナノ分散体を得た。
ナノ分散体のｐＨを、ｐＨ計（Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ−ｓｅｖｅｎ  ｅａｓｙ）を使用して確認する。
ナノ分散体の粒径を、粒径分析器（Ｎａｎｏ−ＺＳ、Ｍａｌｖｅｒｎ）により測定する。
観察された組成物の外観、ｐＨ、および粒径を、以下の表２にまとめる。
【００６８】
【表２】
0005937180.tif 000003
【００６９】
本発明のナノ分散体が物理的に安定であり、室温で２４時間保存時に、実質的な凝集も製剤の外観の変化も全くないことが分かった。
【００７０】
これらの実施例のナノ分散組成物は、１５０ｍｇ／１００ｍｌのパクリタキセルを含む。７０ｋｇの人へのおよそ３００ｍｇのパクリタキセルのヒト投与量には、２００ｍｌの各ナノ分散組成物を患者に投与できる。したがって、２０から８０ｍｇの硫酸コレステリル、２５から１００ｍｇのカプリル酸、６５から２５０ｍｇのＰＶＰ、および約３００ｍｇのエタノールが、実施例１から５のパクリタキセル組成物の単一の成人投与量で与えられるであろう。このように、本発明の組成物は、活性薬剤と同時投与される賦形剤の量が非常に少ないナノサイズの粒子を提供する。
【００７１】
以下の実施例６〜７に記載されている医薬組成物は、患者への投与前に本発明のナノ分散体を得るために、希釈剤（５ｗ／ｖ％ブドウ糖溶液）により数倍に希釈する必要のある濃縮溶液である。
【００７２】
本発明は特定の態様および用途の点で記載されてきたが、当業者は、本教示に照らして、特許請求された発明の精神から逸脱せずに、またはその範囲を超えることなく、追加の態様および改良を生み出せる。本発明の上述の態様、特に「好ましい」態様が、単に本発明の実施の可能性のある例に過ぎず、本発明の原理の明確な理解のために述べられているのみであることを強調すべきである。
【００７３】
したがって、本明細書の図面および説明が、本発明の理解を容易にするための例示のために好ましく、その範囲を限定すると解釈すべきでないことが理解できよう。
【００７４】
実施例６〜７
タキサン誘導体の濃縮溶液としての本発明の医薬組成物を、以下の表３に説明する。
【表３】
0005937180.tif 000004
【００７５】
手順
薬剤、硫酸コレステリル、カプリル酸、およびＰＶＰ  Ｋ−３０をガラスバイアル中に正確に秤量した。
内容物を、攪拌および４５℃で加熱しながら、必要な量の無水エタノールおよびＰＥＧ−４００に溶解させ、濃縮薬剤溶液を得た。
溶液を、０．２μＰＶＤＦメンブランフィルターに通して濾過した。
実施例６の溶液をバイアル（６０ｍｇの薬剤を含むバイアルあたり１グラム）に満たし、安定性のために充填した。
安定性試料を、ナノ分散体の形態で分析した。ブドウ糖溶液（５ｗ／ｖ％）（４０ｍｌ）を、薬剤濃縮液（６０ｍｇ薬剤）を収容するバイアルに、穏やかに攪拌しながらゆっくりと加え、１．５ｍｇ／ｍｌの希釈度を有する薬剤の透明から半透明のナノ分散体を得た。ナノ分散体を以下の試験で分析した：以下の表４に記載の外観、薬剤のアッセイ、ｐＨ（Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ−ｓｅｖｅｎ  ｅａｓｙ、ｐＨ計）、および粒径（Ｎａｎｏ−ＺＳ、Ｍａｌｖｅｒｎ粒径分析器）。
【００７６】
【表４】
0005937180.tif 000005
【００７７】
パクリタキセルのアッセイには３ヶ月間全く変化がなく、製剤が化学的に安定であると推定された。また、本発明の組成物が物理的に安定で、保存時の実質的な凝集も組成物の外観の変化も全くないことが分かった。
【００７８】
実施例８
ＰＶＰ  Ｋ−１２を利用する本発明の医薬組成物を、以下の表５に説明する。ナノ分散体の調製手順は、実施例１〜７と同じである。
【００７９】
【表５】
0005937180.tif 000006
【００８０】
組成物の外観、ｐＨ、および粒径を観察し、以下の表６にまとめる。
【表６】
0005937180.tif 000007
【００８１】
本発明の組成物が物理的に安定であり、室温で２４時間保存時に、実質的な凝集も組成物の外観の変化も全くないことが分かる。
【００８２】
実施例９
タキサン誘導体の濃縮溶液としての本発明の組成物を、以下の表７に説明する。
【００８３】
【表７】
0005937180.tif 000008
【００８４】
安定性試料は、以下に記載のとおり分析し、安定性データを以下の表８にまとめる。薬剤のアッセイは、濃縮薬剤溶液で実施した。他の観察には、ブドウ糖溶液（５ｗ／ｖ％）（４０ｍｌ）を、薬剤濃縮液（６０ｍｇの薬剤）を収容しているバイアルに、穏やかに攪拌しながらゆっくりと加え、希釈度１．５ｍｇ／ｍｌの薬剤の透明から半透明のナノ分散体を得た。次いで、ナノ分散体を以下の試験で分析した：外観、ｐＨ（Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ−ｓｅｖｅｎ  ｅａｓｙ、ｐＨ計）、および粒径（Ｎａｎｏ−ＺＳ、Ｍａｌｖｅｒｎ粒径分析器）。
【００８５】
【表８】
0005937180.tif 000009
【００８６】
パクリタキセルのアッセイに３ヶ月間全く変化がなく、製剤が保存時に化学的に安定であることが推定された。また、本発明の組成物が物理的に安定であり、種々の保存条件で保存時に、実質的な凝集も製剤の外観の変化も全くないことが分かる。図４−ａは、初期のナノ分散体の粒径分布を示すヒストグラムであり、図４−ｂは、室温で２４時間保存時のパクリタキセル実施例９のナノ分散体の粒径分布を示すヒストグラムである。前記ヒストグラムは、室温で約２４時間保存した後に、平均粒径がほとんど一定であることを示し、ナノ分散体の安定性を示している。
【００８７】
実施例１０
ＰＥＧ−３３５０を含む本発明の医薬組成物を表９に説明する。
【００８８】
【表９】
0005937180.tif 000010
【００８９】
調製
薬剤、硫酸コレステリル、カプリル酸、ＰＶＰ  Ｋ−３０、およびＰＥＧ−３３５０をバイアル中に正確に秤量した。
バイアルの内容物を、攪拌および４５℃で加熱しながら、必要な量の無水エタノールに、透明な溶液が得られるまで溶解させた。
上記のエタノール溶液を、攪拌しながらブドウ糖溶液（５％）にゆっくりと加え、ナノ分散体を形成した。
ナノ分散体のｐＨを、ｐＨ計（Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ−ｓｅｖｅｎ  ｅａｓｙ）を使用して確認する。
ナノ分散体の粒径を、粒径分析器（Ｎａｎｏ−ＺＳ、Ｍａｌｖｅｒｎ粒径分析器）により確認する。
ナノ分散体を、０．２μメンブランフィルターに通して濾過する。
上記のナノ分散体の２０ｍｌを、バイアルに充填し、凍結乾燥(Vitris)した。
凍結乾燥前のナノ分散体の外観および粒径を、ナノ分散体調製直後および室温で（ＲＴ）２４時間および４８時間保存後に観察した。これらを以下の表１０にまとめる。
【００９０】
【表１０】
0005937180.tif 000011
【００９１】
本発明の組成物が物理的に安定であり、室温で２４から４８時間保存時に、実質的な凝集も製剤の外観の変化も全くないことが分かった。
【００９２】
凍結乾燥ケーキの再構成：凍結乾燥後、バイアル中に得られたケーキを、軽く振盪しながら注射用の水（２０ｍｌ）に注入して分散させ、濃度１．５ｍｇ／ｍｌのパクリタキセルナノ分散体を得た。
【００９３】
バイアル毎の内容物および再構成されたナノ分散体の特性を、それぞれ以下の表１１および１２に示す。
【００９４】
【表１１】
0005937180.tif 000012
【００９５】
各バイアルは、組成物中に３０ｍｇのパクリタキセルを含んでいた。７０ｋｇの人のパクリタキセルのおよそ３００ｍｇのヒト投与量では、上述の組成物の１０個のバイアルを、６０から６００ｍｌの注射用水などの希釈剤に再構成し、０．５から５．０ｍｇ／ｍｌのパクリタキセル注入液を得ることができる。この希釈した組成物は、患者に投与される場合、２０ｍｇの硫酸コレステリル、２５ｍｇのカプリル酸、および１２５ｍｇのＰＶＰを含むだろう。
【００９６】
【表１２】
0005937180.tif 000013
【００９７】
本発明の組成物が物理的に安定であり、室温で２４時間保存時に、実質的な凝集も製剤の外観変化も全くないことが分かった。
【００９８】
実施例１１および比較例１〜３
【表１３】
0005937180.tif 000014
【００９９】
【表１４】
0005937180.tif 000015
【０１００】
実施例１２
本発明の医薬組成物を、表１５にさらに説明し、種々のパラメータの観察結果を表１６に記載する。
【０１０１】
【表１５】
0005937180.tif 000016
【０１０２】
【表１６】
0005937180.tif 000017
【０１０３】
オレイン酸およびステアリン酸を利用して調製した本発明のナノ分散組成物を以下の表１７に説明する。
【表１７】
0005937180.tif 000018
【０１０４】
これらの組成物の調製手順は実施例１〜５に記載のものと同じである。そのように得られるナノ分散体は、ほとんど透明から半透明であり、平均粒径はそれぞれ１３４ｎｍおよび１５５ｎｍであった。
【０１０５】
実施例１５
コレステロールを利用して調製した本発明の医薬組成物を、以下の表１８に説明する。
【表１８】
0005937180.tif 000019
【０１０６】
手順
薬剤、コレステロール、カプリル酸、およびＰＶＰ  Ｋ−３０を、ガラスバイアル中に正確に秤量した。
内容物を、必要な量の無水エタノールおよびＰＥＧ−４００に、攪拌および４５℃で加熱しながら溶解させ、濃縮溶液を得た。
濃縮溶液を、０．２μＰＶＤＦメンブランフィルターを通して濾過した。
ブドウ糖溶液（５ｗ／ｖ％）を、穏やかに振盪しながら、濃縮溶液（１００ｍｇの薬剤）を収容しているバイアルにゆっくりと加え、１．５ｍｇ／ｍｌの希 釈度の透明から半透明のナノ分散体を得た。
ナノ分散体のｐＨを、ｐＨ計（Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ−ｓｅｖｅｎ  ｅａｓｙ）を使用して確認する。
ナノ分散体の粒径を、粒径分析器（Ｎａｎｏ−ＺＳ、Ｍａｌｖｅｒｎ）により確認する。
【０１０７】
この実施例のナノ分散組成物は、ほとんど透明から半透明であり、平均粒径が２１７ｎｍであった。
【０１０８】
実施例１６
胆汁酸／塩（グリココール酸ナトリウムおよびウルソデオキシコール酸）を使用して調製した本発明の医薬組成物を、以下の表１９に説明する。
【０１０９】
【表１９】
0005937180.tif 000020
【０１１０】
手順
薬剤、胆汁酸／塩、カプリル酸、およびＰＶＰ  Ｋ−３０を、ガラスバイアル中に正確に秤量した。
内容物を、必要な量の無水エタノールおよびＰＥＧ−４００に、攪拌および４５℃で加熱しながら溶解させ、濃縮溶液を得た。
濃縮溶液を、０．２μＰＶＤＦメンブランフィルターを通して濾過した。
ブドウ糖溶液（５ｗ／ｖ％）を、穏やかに振盪しながら、濃縮溶液（１００ｍｇの薬剤）を収容しているバイアルにゆっくりと加え、１．５ｍｇ／ｍｌの    希釈度の半透明のナノ分散体を得た。
ナノ分散体のｐＨを、ｐＨ計（Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ−ｓｅｖｅｎ  ｅａｓｙ）を使用して確認する。
ナノ分散体の粒径を、粒径分析器（Ｎａｎｏ−ＺＳ、Ｍａｌｖｅｒｎ）により確認する。
【０１１１】
このように製造されたナノ分散組成物は、ほとんど半透明の外観であり、平均粒径がそれぞれ１９７ｎｍおよび１８０ｎｍであった。
【０１１２】
ＰＶＰ  Ｋ−９０を含む本発明の医薬組成物を、以下の表２０に説明する。
【表２０】
0005937180.tif 000021
【０１１３】
調製の手順は、実施例１〜５に記載のものと同じである。このように製造されたナノ分散組成物は、外観がほとんど透明から半透明であり、平均粒径が２０７ｎｍであった。
【０１１４】
実施例１８
ヒアルロン酸塩を含む本発明の医薬組成物を、表２１に説明する。
【表２１】
0005937180.tif 000022
【０１１５】
手順
薬剤、硫酸コレステリル、およびカプリル酸を、ガラスバイアル中に正確に秤量した。
内容物を、必要な量の無水エタノールおよびＰＥＧ−４００に、攪拌および４５℃で加熱しながら溶解させ、濃縮薬剤溶液を得た。
溶液を、０．２μＰＶＤＦメンブランフィルターを通して濾過した。
ヒアルロン酸ナトリウムをブドウ糖溶液（５ｗ／ｖ％）に溶解させ、濃縮薬剤溶液（３０ｍｇ）を収容しているバイアルにゆっくりと加え、その後残りの５ｗ／ｖ％ブドウ糖溶液を穏やかに振盪しながら加え、１．５ｍｇ／ｍｌの希釈度の半透明のナノ分散体を得た。
ナノ分散体のｐＨを、ｐＨ計（Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ−ｓｅｖｅｎ  ｅａｓｙ）を使用して確認した。
ナノ分散体の粒径を、粒径分析器（Ｎａｎｏ−ＺＳ、Ｍａｌｖｅｒｎ）により確認した。
【０１１６】
このように製造されたナノ分散組成物は、外観がほとんど半透明であり、平均粒径が２６３ｎｍであった。
【０１１７】
実施例１９
ポリグルタミン酸塩を含む本発明の医薬組成物を、表２２に説明する。
【表２２】
0005937180.tif 000023
【０１１８】
ナノ分散体の調製手順は、実施例１８に記載されたものと同じである。そのように製造されたナノ分散組成物は、外観がほとんど半透明であり、平均粒径が２９５ｎｍであった。
【０１１９】
実施例２０
追加の治療薬デキサメタゾンを含む本発明の医薬組成物を、以下の表２３に説明する。
【表２３】
0005937180.tif 000024
【０１２０】
このように製造されたナノ分散組成物は、外観がほとんど半透明であり、平均粒径が１８５ｎｍであった。
【０１２１】
実施例２１
ドセタキセルを含む本発明の医薬組成物を、表２４に説明する。
【表２４】
0005937180.tif 000025
【０１２２】
この実施例のナノ分散体は、実施例１〜５に与えられた手順により調製した。ナノ分散体は、青みがかった色合いのある白色であり、平均粒径は１７２ｎｍであった。
【０１２３】
組成物は１．５０ｍｇ／ｍｌのドセタキセルを含む。７０ｋｇの人へのドセタキセルのおよそ１８０ｍｇのヒト投与量には、１２０ｍｌのナノ分散組成物を患者への投与に使用でき、そのため組成物は１８０ｍｇのデセタキセルを含んでいた。この実施例の組成物が投与される患者は、１２ｍｇの硫酸コレステリル、１５ｍｇのカプリル酸、１５０ｍｇのＰＶＰ、および約１８０ｍｇのエタノールを受け取る。したがって、本発明の組成物は、活性薬剤と同時投与される最低限の量の賦形剤を含むナノサイズ粒子を与える。エタノールは、存在するとしても、非習慣性の量である。
【０１２４】
実施例２２
ドセタキセルを含む本発明の医薬組成物を以下に示す。
【表２５】
0005937180.tif 000026
【０１２５】
表２５に与えられた処方によるドセタキセルのプレコンセントレートを、分子量の異なるポリビニルピロリドンを使用して調製した。
ポリビニルピロリドンの分子量が増加すると、凝集およびナノ分散体が安定なままでいる時間の点で、ナノ分散体の安定性が向上することが分かった。
【０１２６】
実施例２３および比較例４、５、および６
【表２６】
0005937180.tif 000027
【０１２７】
特定量の薬剤、硫酸コレステリル、およびカプリル酸を、ガラスバイアル中に正確に秤量した。
内容物を、必要な量の無水エタノールおよびＰＥＧ−４００に、攪拌および４５℃で加熱しながら溶解させ、濃縮薬剤溶液を得た。
溶液を、０．２μＰＶＤＦメンブランフィルターを通して濾過した。
ブドウ糖溶液（５ｗ／ｖ％）を調製し、濃縮薬剤溶液（３０ｍｇ）を収容しているバイアルにゆっくりと加え、その後残りの５ｗ／ｖ％ブドウ糖溶液を穏やかに振盪しながら加え、１．５ｍｇ／ｍｌの希釈度の半透明のナノ分散体を得た。
ナノ分散体のｐＨを、ｐＨ計（Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ−ｓｅｖｅｎ  ｅａｓｙ）を使用して確認した。
ナノ分散体の粒径を、粒径分析器（Ｎａｎｏ−ＺＳ、Ｍａｌｖｅｒｎ）により確認した。
【０１２８】
【表２７】
0005937180.tif 000028
【０１２９】
実施例２４
【表２８】
0005937180.tif 000029
【０１３０】
特定量のドセタキセル、硫酸コレステリルナトリウム、カプリル酸、およびポリビニルピロリドンを、バイアル中に秤量した。乾燥させた量のアルコールおよびポリエチレングリコールを混合し、４０℃でわずかに加温されている超音波処理槽中で、無色透明なプレコンセントレートが得られるまで溶解させた。プレコンセントレートを、表２９に示す異なる添加剤を含む水性ビヒクルで希釈した。そのように形成されたナノ分散体に、Ｍａｌｖｅｒｎ粒径分析器を利用して平均粒径測定を行った。
【０１３１】
【表２９】
0005937180.tif 000030
【０１３２】
５％ブドウ糖注射液中の０．５％ヒスチジン、０．００１％エデト酸二ナトリウムの実施例の粒径分布の結果を、図５−ａおよび図％−ｂに示す。図５−ａは、初期のナノ分散体に粒径分布（平均粒径＝９８ｎｍ）を示すヒストグラムであり、図５−ｂは、平均粒径が９６．４ｎｍである８時間でのナノ分散体の粒径分布を示すヒストグラムであり、ナノ分散体の安定性を示している。
【０１３３】
実施例２５
ＣＤ−１マウスにおける本発明のパクリタキセルナノ分散体の急性毒性
試験品目
１．実施例１２ａの組成物を、５ｗ／ｖ％ブドウ糖により１０ｍｇ／ｍｌに希釈して、プラセボと共に使用した。
２．実施例９の組成物を、５ｗ／ｖ％ブドウ糖により８ｍｇ／ｍｌに希釈して、プラセボと共に使用した。
３．０．９％塩化ナトリウムにより１０ｍｇ／ｍｌに希釈されるABRAXANE（登録商標）。
【０１３４】
ＣＤ−１マウスを、動物四等分数(animal quarter number)２で、個別換気ケージシステム（ＩＶＣ）の状態に５日間順応させた。獣医学的な健康チェックの後、５匹のオスおよび５匹のメスのマウスを、各投与量群に割り付けた。マウスは、実験期間中、水および餌に自由にアクセスできた。以下の投与量の試験品目およびプラセボを、ビヒクルによる希釈をせずにそのまま、目盛り付きシリンジに結合した２６ゲージの針を利用してマウスの尾部静脈を通して静脈内投与した。注射前に、尾を温水で拭き、血管を拡張させた。１５０、２００、２５０、３００、３５０、および４００ｍｇ／ｋｇの総投与量を、パクリタキセルナノ分散体（実施例１２）で試験し、２５０、３００，および４００ｍｇ／ｋｇの投与量を、プラセボ（実施例１２のプラセボ）で試験し、２００および２５０ｍｇ／ｋｇの投与量をパクリタキセルナノ分散体（実施例９）で試験し、２５０ｍｇ／ｋｇの投与量をプラセボ（実施例９のプラセボ）で試験し、３００ｍｇ／ｋｇの投与量をABRAXANE（登録商標）で試験した。これらの製剤を全て、２回の投与／注射の間に１時間の間隔をおいて３分割された投与量にして、ＣＤ−１マウスに静脈内投与した。最後の注射後、１日２回１時間、投薬後４〜６時間動物を観察した。その後、マウスを１日２回観察し、中毒症状および死亡率がある場合には、最長４５日まで記録した。
【０１３５】
【表３０】
0005937180.tif 000031
【０１３６】
結果は、実施例１２のパクリタキセルナノ分散体が、４００ｍｇ／ｋｇで９０％死亡率を示し、３００ｍｇ／ｋｇの投与量でゼロパーセントの死亡率を示すことを示した。試験された最高投与量（４００ｍｇ／ｋｇ）での実施例１２のプラセボで死亡は見られなかった。パクリタキセルナノ分散体の直線外挿で、得られたＬＤ５０およびＬＤ１０値は、それぞれ３４２．５ｍｇ／ｋｇおよび３１０ｍｇ／ｋｇであった。同様に、実施例９のパクリタキセルナノ分散体は、２５０ｍｇ／ｋｇで２０％の死亡率を示し、パクリタキセルナノ分散体のＬＤ５０は２５０ｍｇ／ｋｇを超えていた。試験された最高投与量（２５０ｍｇ／ｋｇ）での実施例９のプラセボで死亡は見られなかった。市販されているナノ粒子製剤、ABRAXANE（登録商標）は、３００ｍｇ／ｋｇで９０％の毒性を示した。これらのデータは、本発明のナノ分散組成物が、市販されているABRAXANE（登録商標）より毒性が低いであろうことを明らかに示している。また、本発明のナノ分散組成物のＬＤ５０値（３４２．５ｍｇ／ｋｇ）を市販のTAXOL製剤のＬＤ５０値（７．５〜１２．０ｍｇ／ｋｇ：米国特許第６７５３００６号）と比較すると、本発明のパクリタキセルナノ分散体で観察されたＬＤ５０値が、市販TAXOL溶液のＬＤ５０値よりはるかに高いことが明らかである。
【０１３７】
ＳＤラットにおける本発明のパクリタキセルナノ分散体の急性毒性
試験品目
１．実施例９の組成物を、５ｗ／ｖ％ブドウ糖により１０ｍｇ／ｍｌに希釈をして、プラセボと共に使用した。
２．０．９％塩化ナトリウムにより５ｍｇ／ｍｌに希釈されたABRAXANE（登録商標）。
ラットを、動物四等分数３で、個別換気ケージシステム（ＩＶＣ）の状態に５日間順応させた。獣医学的な健康チェックの後、５匹のオスおよび５匹のメスのＳＤラットを、各投与量群に割り付けた。ラットは、実験期間中、水および餌に自由にアクセスできた。以下の投与量の試験品目およびプラセボを、ビヒクルによる希釈をせずにそのまま、目盛り付きシリンジに結合した２６ゲージの針を利用してラットの尾部静脈を通して静脈内投与した。注射前に、尾を温水で拭き、血管を拡張させた。注射後、１日２回１時間、投薬後４〜６時間動物を観察した。その後、ラットを１日２回観察し、中毒症状および死亡率がある場合には最長１４日まで記録した。
【０１３８】
【表３１】
0005937180.tif 000032
【０１３９】
結果は、実施例９の本発明のパクリタキセルナノ分散体が、９０ｍｇ／ｋｇで死亡率４０％を示したことを示す。試験された最高投与量（９０ｍｇ／ｋｇ）での実施例９のプラセボで死亡は見られなかった。本発明のパクリタキセルナノ分散体のＬＤ５０値は、９０ｍｇ／ｋｇを超えていた。市販ナノ粒子製剤ABRAXANE（登録商標）は、７０ｍｇ／ｋｇで１００％の毒性を示した。
【０１４０】
結果は、本発明のナノ分散組成物が薬剤に関連する毒性を最低限にし、薬剤の効果ある投与可能な治療範囲を広げ、ABRAXANE（登録商標）などの既存市販製剤よりも毒性が低いことを明らかに示す。
【０１４１】
実施例２６
実施例２４Ｂの組成物を、５ｗ／ｖ％ブドウ糖により１０ｍｇ／ｍｌに希釈して、プラセボと共に使用し、１０ｍｇ／ｍｌに希釈された市販製剤Taxotere（登録商標）に、ＣＤ−１マウスにおける静脈内経路によるドセタキセルのナノ分散体およびプラセボの急性毒性試験を実施した。マウスを、動物四等分数２で、実験室の状態に６日間順応させた。獣医学的な健康チェックの後、５匹のオスおよび５匹のメスのマウスを、各投与量群にランダムに割り付けた。マウスは、実験期間中、水および餌に自由にアクセスできた。試験品目およびプラセボを、ビヒクルによる希釈をせずにそのまま、目盛り付きシリンジに結合した２６ゲージの針を利用してマウスの尾部静脈を通して静脈内投与した。注射前に、尾を温水で拭き、血管を拡張させた。２００、２５０、および３００ｍｇ／ｋｇの総投与量を、ドセタキセルナノ分散体（実施例２４Ｂ）で試験し、プラセボを最高投与量（実施例２４Ｂのプラセボ）で試験した。これらの製剤を、２回の投与／注射の間に１時間の間隔をおいて３分割された投与量にして、ＣＤ−１マウスに静脈内投与した。最後の注射後、１時間、投薬後４〜６時間動物を観察した。その後、マウスを１日２回観察し、臨床症状および死亡率を１５日間観察した。投薬後１日、７日、および１４日に、生存している動物の体重を記録した。１５日に、生存している動物の剖検を実施し、もしある場合には総病理を記録した。
【０１４２】
【表３２】
0005937180.tif 000033
【０１４３】
結果は、実施例２４Ｂの本発明のドセタキセルのナノ分散体が、３００ｍｇ／ｋｇでの死亡率１０％および投与量２５０ｍｇ／ｋｇでＬＤ０を示したことを示した。試験された最高投与量で（３００ｍｇ／ｋｇ）プラセボによる死亡は見られなかった。市販製剤Taxotere（登録商標）は、１２０ｍｇ／ｋｇで１０％の毒性を示した。本発明のドセタキセルのナノ分散体で観察されたＬＤ１０値が、市販Taxotere（登録商標）溶液製剤のＬＤ１０値よりはるかに高いことは明らかである。Taxotere（登録商標）の報告されているＬＤ１０値は、９５ｍｇ／ｋｇである（参考：SBA-NDA-20449）。
【０１４４】
実施例２７
ＭＸ−１腫瘍異種移植片を移植されたヌードマウスにおけるパクリタキセルナノ分散体（実施例１２ａ）の抗腫瘍効能（腫瘍縮小）
動物：種：マウス、株：Ｂａｌｂ／ｃヌード、性別：メス、年齢：６〜８週齢（１８．９ｇ±１．８ｇ）
ヒト腫瘍異種移植片：ＭＸ−１（乳房）
試験試料：実施例１２ａの組成物、５％ブドウ糖により２ｍｇ／ｍｌに希釈。
参照：市販製剤ABRAXANE（登録商標）、０．９％塩化ナトリウムにより２ｍｇ／ｍｌに再構成。
プラセボ：タキサン誘導体のない試験試料。
投与量：２０ｍｇ／ｋｇ、５日間連続１日１回、静脈内投与経路、１０ｍｌ／体重ｋｇ。
試験デザイン：
１．３０ｍｇから４０ｍｇの断片として、腫瘍を、動物の右脇腹に皮下経路で移植した。
２．治療開始前に、１２５ｍｍ３から１３２ｍｍ３のサイズ中央値に腫瘍を増大させる。
３．腫瘍を持つ動物を、１０匹の動物からなる群に分ける。
４．動物に上述の投与量を与え、腫瘍を以下のとおり評価した。
【０１４５】
結果：腫瘍体積の有意な減少が、対照群と比べ８日より後に試験で見られた。腫瘍は、日で表す時間に対して腫瘍体積（ｍｍ３）で評価した。４２日間のデータを図１にグラフで表す。
中程度の抗腫瘍活性が、２０ｍｇ／ｋｇで（最適％Ｔ／Ｃ＜２０）(optimal T/C)で参照に見られたが、高度に有意な抗腫瘍活性が、２０ｍｇ／体重ｋｇで（最適％Ｔ／Ｃ＜１０）に試験で見られた。試験および参照の最適％Ｔ／Ｃ値は、それぞれ０および１３．３４であった。高度に有意な抗腫瘍活性が、ヌードマウスにおけるＭＸ−１ヒト乳ガン異種移植片における２０ｍｇ／ｋｇで試験により（注射用のパクリタキセルナノ分散体濃縮液）示された。
【０１４６】
実施例２８
ＭＸ−１腫瘍異種移植片を移植されたヌードマウスにおけるパクリタキセルナノ分散体（実施例９の組成物）の抗腫瘍効能（腫瘍縮小）
動物：種：マウス、株：無胸腺ヌード、性別：メス、年齢：６〜８週齢（２０〜２５ｇ）
ヒト腫瘍異種移植片：ＭＸ−１（乳房）
試験試料：実施例９の組成物、５％ブドウ糖により２ｍｇ／ｍｌに希釈。
参照：市販製剤ABRAXANE（登録商標）、０．９ｗ／ｖ％塩化ナトリウムにより２ｍｇ／ｍｌに再構成。
投与量：２０ｍｇ／ｋｇ、５日間連続１日１回、静脈内、１０ｍｌ／体重ｋｇ。
試験デザイン：
１．おおよそ２×２ｍｍの断片として、腫瘍を、動物の右脇腹に皮下経路で移植した。
２．治療開始前に、２００ｍｍ３から２２０ｍｍ３のサイズに腫瘍を増大させた。
３．腫瘍を持つ動物を、１０匹の動物からなる群に分けた。
４．動物に上述の投与量を投与し、腫瘍を以下のとおり評価した。
【０１４７】
腫瘍評価：腫瘍は、日で表す時間に対して腫瘍体積（ｍｍ３）で評価した。４２日間のデータを図２にグラフで表す。
結果：高度に有意な抗腫瘍活性が、試験およびABRAXANE（登録商標）群（最適％Ｔ／Ｃ＜１０）で見られる。２０ｍｇ／ｋｇ投与量での試験およびABRAXANE（登録商標）群の最適％Ｔ／Ｃ値は、それぞれ０．２５および０．００であった。０日と比べて、プラセボ／対照群において、体重の有意な減少は見られなかった。高度に有意な抗腫瘍活性が、ヌードマウスにおけるＭＸ−１ヒト乳ガン異種移植片における２０ｍｇ／ｋｇでの試験により（注射用のパクリタキセルナノ分散体濃縮液）示された。
【０１４８】
実施例２９
ＨＴ−２９ヒト結腸腫瘍異種移植片を移植されたヌードマウスにおけるパクリタキセルナノ分散体（実施例９の組成物）の抗腫瘍効能（腫瘍縮小）
動物：種：マウス、株：無胸腺ヌード、性別：オス、年齢：６〜８週齢（２０〜２５ｇ）
ヒト腫瘍異種移植片：ＨＴ−２９ヒト結腸
試験試料：実施例９の組成物、５％ブドウ糖により２ｍｇ／ｍｌに希釈。
投与量：２０ｍｇ／ｋｇ、５日間連続１日１回、静脈内、１０ｍｌ／体重ｋｇ。
参照：
（ａ）市販製剤ABRAXANE（登録商標）、０．９％塩化ナトリウムにより２ｍｇ／ｍｌに再構成され２ｍｇ／ｍｌに希釈。
投与量：２０ｍｇ／ｋｇ、５日間連続１日１回、静脈内、１０ｍｌ／体重ｋｇ。
（ｂ）市販製剤Oncotaxel（登録商標）
投与量：１３．４ｍｇ／ｋｇ、５日連続１日１回、静脈内
試験デザイン：
１．おおよそ２×２×２ｍｍの断片として、腫瘍を、動物の右脇腹に皮下経路で移植した。
２．治療開始前に、１３０ｍｍ３から１６０ｍｍ３のサイズに腫瘍を増大させた。
３．腫瘍を持つ動物を、１０匹の動物からなる群に分けた。
４．動物に上述の投与量を投与し、腫瘍を以下のとおり評価した。
腫瘍評価：腫瘍は、日で表す時間に対して腫瘍体積（ｍｍ３）の減少で評価する。４９日間のデータを図３にグラフで表す。
結果：高度に有意な抗腫瘍活性が、試験およびOncotaxel（登録商標）100群（最適％Ｔ／Ｃ＜１０）で見られる。２０ｍｇ／ｋｇ投与量での試験および投与量１３．４ｍｇ／ｋｇでのOncotaxel（登録商標）100群の最適％Ｔ／Ｃ値は、それぞれ５．９２および８．７９であったが、中程度の抗腫瘍活性が、最適％Ｔ／Ｃ値２０．３３でABRAXANE（登録商標）により示される。高度に有意な抗腫瘍活性が、ヌードマウスにおけるＨＴ−２９ヒト結腸ガン異種移植片における２０ｍｇ／ｋｇでの試験により（注射用のパクリタキセルナノ分散体濃縮液）示された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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