(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
創傷の感染を予防および／または処置するためのデポーの製造における、バンコマイシン、ゲンタマイシン、それらの薬学的に受容可能な塩およびそれらの混合物からなる群より選択される少なくとも一つの親水性かつ水溶性の薬学的に活性な薬剤、水、リン脂質、油、ｐＨ調節剤、ならびにエタノール、イソプロパノールおよびそれらの混合物からなる群より選択される粘度改変剤の使用であって、ここで、該デポーは該創傷に投与されることを特徴とし、該デポー中に存在する該水は、該デポーの総重量に対して２重量％以下であり、そして該デポーのｐＨは３〜５であり；そして
該デポーは、以下の工程：
（１）乳化、（２）微小流動化（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚａｔｉｏｎ）／ホモジナイゼーション、（３）凍結乾燥、（４）エタノール希釈、（５）プレろ過、（６）粘度改変剤の除去および（７）ろ過
を含む複数工程プロセスにより製造される、使用。
【請求項２】
前記創傷が、慢性創傷、急性創傷、外科的創傷、整形外科的創傷、外傷性創傷、戦闘による創傷およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記整形外科的創傷が、筋骨格系に対する傷害、骨盤を含む四肢に対する傷害、脊椎および関連する構造に対する傷害ならびにそれらの任意の組み合わせに対する傷害である、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記外傷性創傷が、頭、顔、胸、腹、骨盤を含む四肢および／または外側に対する開放創、ならびに／あるいは裂傷、擦過傷、刺創、貫通創のような、外来性物質および／または生育不能な組織断片が存在する、裂けてかつ不規則な縁を有する傷害、ならびにそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項２に記載の使用。
【請求項５】
前記戦闘による創傷が、爆発装置および／または武器によって負わされた傷害、銃創およびそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項２に記載の使用。
【請求項６】
前記創傷が清浄されて、外来性物質および／または生育不能な組織が実質的に除去され；そして該創傷が閉鎖されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
縫合糸、金属クリップ、ステープル、または接着ストリップを用いて前記創傷が閉鎖されることを特徴とする、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記デポーが、創傷に投与されるものであり、そして陰圧創傷閉鎖システムが該創傷に使用されるものであることにより該デポーが特徴付けられる、請求項１〜請求項７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記創傷が清浄されて、外来性物質および／または生育不能な組織が実質的に除去され；陰圧創傷閉鎖システムが該創傷に使用され；前記デポーが創傷に導入されるものであり；そして該創傷が閉鎖されることにより該デポーが特徴付けられる、請求項１〜請求項８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
縫合糸、金属クリップ、ステープル、包帯剤、包帯、および／または接着ストリップ／テープを用いて、前記創傷の閉鎖の前、その間、またはその後のいずれかに前記デポーが投与されることを特徴とする、請求項１〜請求項９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
創傷感染を予防および／または処置するための透明デポーであって、該デポーは、バンコマイシンの薬学的に受容可能な塩、ゲンタマイシンの薬学的に受容可能な塩およびそれらの混合物からなる群より選択される親水性かつ水溶性の薬学的に活性な薬剤、水、リン脂質、油、ｐＨ調節剤、ならびにエタノール、イソプロパノールおよびそれらの混合物からなる群より選択される粘度改変剤を含み、該粘性デポーに存在する該水は、該デポーの総重量に対して２重量％以下であり、
該デポーのｐＨは３〜５であり；そして
該デポーは、以下の工程：
（１）乳化、（２）微小流動化（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚａｔｉｏｎ）／ホモジナイゼーション、（３）凍結乾燥、（４）エタノール希釈、（５）プレろ過、（６）粘度改変剤の除去および（７）ろ過
を含む複数工程プロセスにより調製される、透明デポー。
【請求項１２】
前記創傷が、慢性創傷、急性創傷、外科的創傷、整形外科的創傷、外傷性創傷、戦闘による創傷およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項１１に記載のデポー。
【請求項１３】
前記整形外科的創傷が、筋骨格系に対する傷害、骨盤を含む四肢に対する傷害、脊椎および関連する構造に対する傷害ならびにそれらの任意の組み合わせに対する傷害である、請求項１２に記載のデポー。
【請求項１４】
前記外傷性創傷が、頭、顔、胸、腹、骨盤を含む四肢および／または外側に対する開放創、ならびに／あるいは裂傷、擦過傷、刺創、貫通創のような、外来性物質および／または生育不能な組織断片が存在する、裂けてかつ不規則な縁を有する傷害、ならびにそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１２に記載のデポー。
【請求項１５】
前記戦闘による創傷が、爆発装置および／または武器によって負わされた傷害および／または銃創ならびにそれらの任意の組み合わせから選択される、請求項１２に記載のデポー。
【請求項１６】
前記創傷を清浄して、外来性物質および／または生育不能な組織が実質的に除去され；そして該創傷が閉鎖されることにより該デポーが特徴付けられる、請求項１１に記載のデポー。
【請求項１７】
縫合糸、金属クリップ、ステープル、または接着ストリップを用いて前記創傷が閉鎖されることを特徴とする、請求項１６に記載のデポー。
【請求項１８】
前記デポーが創傷に投与され、そして陰圧創傷閉鎖システムが該創傷に使用されることを特徴とする、請求項１１〜１７のいずれか一項に記載のデポー。
【請求項１９】
前記創傷が清浄されて、外来性物質および／または生育不能な組織が実質的に除去され；陰圧創傷閉鎖システムが該創傷に使用され；前記デポーが創傷に導入され；そして該創傷が閉鎖されることを特徴とする、請求項１１〜１８のいずれか一項に記載のデポー。
【請求項２０】
前記デポーが、縫合糸、金属クリップ、ステープル、包帯剤、包帯、および／または接着ストリップ／テープを用いた前記創傷の閉鎖の前、その間、またはその後のいずれかに投与されることを特徴とする、請求項１１〜１９のいずれか一項に記載のデポー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、２０１０年１０月２２日に出願された米国仮出願第６１／４０５，７１５号の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
創傷は、暴力、事故、または手術からのような、身体への傷害であり、それは典型的には膜の断裂または破壊、そして通常下にある組織、および／または骨への損傷を含む。Ｍｅｒｒｉａｍ−Ｗｅｂｓｔｅｒ’ｓ  Ｃｏｌｌｅｇｉａｔｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ、第１１版、２００４。
【０００３】
創傷の処置は、創傷の型、原因、位置、および深さおよび皮膚の他にどの他の構造が関与するかに依存する。しかし、一般的にその処置は、清浄、抗生物質による処置、流体を吸収し、そしてさらなる汚染を予防するためにガーゼドレッシングパッド（ｇａｕｚｅ  ｄｒｅｓｓｉｎｇ  ｐａｄ）で覆うことによる創傷の保護、および／またはさらなる汚染を予防するための創傷の閉鎖を含む。創傷の閉鎖は、典型的には縫合糸、金属クリップ、ステープル、および接着ストリップ（ａｄｈｅｓｉｖｅ  ｓｔｒｉｐ）を用いることを含む。
【０００４】
一般的に、創傷における感染のリスクを、創傷に抗生物質を適用する前に、あらゆる外来性物質および生育不能な組織を除去することによる、適切な創傷の清浄および／またはデブリードマンによって低減する。
【０００５】
創傷の流体および生育不能な組織を除去する、創傷における細菌のレベルを減少させる、創傷ベッドおよび周囲組織の血流を改善する、および／または創傷の縁を引き合わせ、そして細胞増殖を刺激するために、創傷の表面に大気圧より低い圧力（ｓｕｂ−ａｔｍｏｓｐｈｅｒｉｃ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ）を持続的にまたは間欠的に適用する創傷閉鎖システムである、陰圧創傷閉鎖システム（ｖａｃｕｕｍ−ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｗｏｕｎｄ  ｃｌｏｓｕｒｅ  ｓｙｓｔｅｍ）を使用し得る。そのような陰圧創傷閉鎖システムは、例えば、特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６、およびＧｅｓｔｒｉｎｇ、Ｎｅｇａｔｉｖｅ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｗｏｕｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，ＵｐＴｏＤａｔｅ、２０１０年５月において記載されており、その開示は、参考文献に組み込まれ、そのコピーを添付する。
【０００６】
デポーは、抗生物質のような活性成分を、全身または局所作用のために患者の体に投与する方法である。それを一般的に、皮下または筋肉内注射、または他の身体組織、血管または腔への点滴注入によって投与する。デポーをまた、止血、縫合、包帯または他の方法で閉鎖する前に、創傷に適用し得る。除去可能なデポーと異なり、生分解性デポーは、典型的には捕捉された活性な薬学的成分が送達された後に、あらかじめ決められた時間内に崩壊または分解する。他の構築物において、その生分解性注射用デポーは、そのゆっくりした分解とほぼ同時に、またはその関数として、活性な薬学的成分を放出する。ある生分解性送達デポーの重要な利点は、意図される作用部位に直接薬物を送達して、全身性レベルと比較した場合に高い薬物局所濃度を提供するその能力である。
【０００７】
デポーはまた、様々な放出プロファイルを可能にするために、薬物の送達を調節し得る。その放出プロファイルは、即時放出（バースト）に続く定常状態であり得る、中でも「ゼロ次」または一定速度の送達であり得る、定常状態への遅い上昇を提供し得る、または遅延放出さえ提供し得る。それに加えて、デポーは、単回の投与で、長時間にわたる放出を可能にする利点を有する。血液レベルは、例えば患者のコンプライアンスの問題によって損なわれない。
【０００８】
デポーは、マイクロスフィアに基づくデポーおよびナノスフィアに基づくデポーのような、粒子系（ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ  ｓｙｓｔｅｍ）から成り得る、または典型的には可溶性のマトリックス形成剤（ポリマー、脂質、炭水化物）、および有機溶媒または水混和性および非混和性溶媒の混合物のいずれかから出来る生分解性ゲルから成り得る。
【０００９】
親油性の薬理学的活性薬剤を含むデポーを調製するために、リン脂質を使用した。リン脂質は、油または有機溶媒に可溶性であるが、水に不溶性である。デポーを形成するために、多くの場合高濃度のデポー形成リン脂質が必要である。これは、できたデポーの体積および粘度に影響を与え得、そして、よって、現在入手可能なリン脂質デポーは、従来の針またはシリンジによって注射するのが非常に困難であり得る。リン脂質に基づく処方物を説明する参考文献は、ＷＯ８９／０００７７、ＷＯ０２／３２３９５、ＥＰ０２８２４０５、および米国特許第５，８６３，５４９号、同第４，２５２，７９３号、同第５，６６０，８５４号、同第５，６９３，３３７号およびＷａｎｇら、Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｗａｔｅｒ−Ｉｎ−Ｏｉｌ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ  Ｔｏ  Ｐｒｅｐａｒｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ−Ｂａｓｅｄ  Ａｎｈｙｄｒｏｕｓ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｍｉｃｅｌｌｅｓ  Ｆｏｒ  Ｏｒａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、３９  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、３７３−７９（２０１０）を含む。
【００１０】
バンコマイシンは、グラム陽性細菌によって引き起こされる感染の予防および処置に使用される、糖ペプチド抗生物質である。それは一般的に、薬剤アレルギーまたは耐性のために、βラクタムを使用できない場合に、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、コアグラーゼ陰性ブドウ球菌、肺炎連鎖球菌（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｓｅ）、β溶血性連鎖球菌、コリネバクテリウムグループＪＫ、ヴィリダンス型連鎖球菌、または腸球菌によって引き起こされる、重症の感染および心内膜炎のために選択される薬剤である。とりわけ、メチシリン耐性コアグラーゼ陰性ブドウ球菌人工弁心内膜炎、および腸球菌心内膜炎を処置する場合に、バンコマイシンを他の抗菌薬と組み合わせ得る。それをまた、ペニシリン感受性の低下した菌株によって引き起こされる肺炎球菌髄膜炎の代替薬剤として使用している。バンコマイシンを、術後感染を予防するために、心臓および血管手術において使用する。Ｒｙｂａｋら、Ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ：  Ａ  Ｓｕｍｍａｒｙ  ｏｆ  Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎ  Ｆｒｏｍ  Ｔｈｅ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，  Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ−Ｓｙｓｔｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔｓ，ａｎｄ  Ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｐｈａｒｍａｃｉｓｔｓ、ＣＩＤ２００９：４９（８月１日）、３２５頁を参照のこと。
【００１１】
ゲンタマイシンは、多くの型の細菌感染、特にグラム陰性細菌によって引き起こされるものを処置するために使用される、アミノグリコシド抗生物質である。それは嫌気性菌および腸球菌のような病原体に対して作用するので、手術の環境で使用する。ゲンタマイシンを、他の手術の適用（例えば整形外科の環境）で使用し、そして現在、生分解性コラーゲンインプラントにおいて使用されている。
【００１２】
バンコマイシンおよびゲンタマイシンはどちらも、その現在利用可能であり、そして通常使用される塩形態、例えば塩酸バンコマイシンおよび硫酸ゲンタマイシンにおいて、非常に親水性の抗生物質である。これらの抗生物質は、特にその塩形態において、リン脂質または油に自由に溶解しないので、リン脂質または他の高い油相含有処方物に基づく注射用デポーに処方することも困難である。
【００１３】
それに加えて、一連の安定性試験を行うことによって、バンコマイシンおよびゲンタマイシンは異なるメカニズムによって分解することが見出された。バンコマイシンは、加水分解によってその安定性を失い、そしてゲンタマイシンは酸化または付加物の形成のために分解する。よって、いずれか１つの活性成分を含む処方物は、一般的にこれらの条件に感受性である。さらに、バンコマイシンおよびゲンタマイシンはどちらも、熱感受性であり、そしてオートクレービングまたはガンマ照射のように、熱を用いることによって滅菌できない。
【００１４】
よって、リン脂質および油と共にバンコマイシン塩、ゲンタマイシン塩、またはそれらの両方を含むデポーを処方する試みは、多くの実際的な困難を提供する。１つのそのような性状は、処方物が、高い粘度を特徴とすべきではないことを含む。なぜなら、処方物が、約０．２２ミクロンまたはそれ未満の孔を有するもののような、滅菌膜を通してろ過することによって滅菌しなければならないからである。また依然として二分する問題が存在する。例えば、これらの活性成分はまた、リン脂質との適合性問題を有し、それは、粘度と同様、リン脂質含有量を低く維持する必要を示唆する。しかし、密着し、かつ粘着性のゲルの形成および適切な放出の特徴に関する必要性は、全く反対を示唆する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】米国特許第４，９４９，８８０号明細書
【特許文献２】米国特許第５，１００，３９６号明細書
【特許文献３】米国特許第５，２６１，８９３号明細書
【特許文献４】米国特許第５，５２７，２９３号明細書
【特許文献５】米国特許第６，０７１，２６７号明細書
【特許文献６】米国特許第７，７９９，００４号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
よって、創傷の感染を処置および／または予防するために、皮下または筋肉内注射によって、または創傷または他の身体組織、血管、または腔への注射または点滴注入によって投与し得る、バンコマイシン、ゲンタマイシン、その薬学的な塩、またはそれらの混合物を含む、保存に安定した粘性リン脂質デポーに関して、満たされない必要性が依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明の１つの局面は、親水性かつ水溶性の薬学的に活性な薬剤を含むデポーを作製するための方法を提供し、この方法は：（１）バンコマイシン、ゲンタマイシン、またはそれらの混合物の親水性形態を、水中に溶解する工程；（２）リン脂質、油、およびバンコマイシン、ゲンタマイシン、またはそれらの混合物を含む水溶液を含む、水中油型エマルジョン（「エマルジョン」）を形成する工程；（３）ＭＩＣＲＯＦＬＵＩＤＩＺＥＲのような高圧ホモジナイザーを用いて、そのエマルジョンをホモジナイズして、「単相溶液」を得る工程；（４）必要に応じてｐＨを調整することによって、そのエマルジョンおよび／または単相溶液のｐＨが、約３から約６の間、約３から約５までの範囲、または約３から約４までの範囲であることを確実にする工程；（５）ｐＨを調整した溶液を凍結乾燥する工程；（６）望ましい粘度を得るために十分な量で、粘度改変剤を加える工程、（７）粘度を調節した溶液をプレろ過（ｐｒｅｆｉｌｔｅｒ）して、透明な溶液を得る工程、（８）その透明な溶液から一部の量の粘度改変剤を除去して、デポーの総重量に対して約５．５重量％から約７．５重量％の粘度改変剤を有するデポーを得る工程、（９）そのデポーを加熱することなく、そのデポーを滅菌する工程を包含する。別の実施態様において、プレろ過する工程および粘度改変剤を除去する工程は、任意の工程である。親水性であるか、または親水性にされ得る任意の形態のバンコマイシンおよび／またはゲンタマイシンを使用し得る。いくつかの実施態様において、その薬学的に活性な薬剤は、バンコマイシンまたはゲンタマイシンの薬学的に受容可能な塩である。いくつかの実施態様において、その薬学的に受容可能な薬剤は、バンコマイシンおよびゲンタマイシンの薬学的に受容可能な塩の混合物である。この方法または他の方法によって産生されたかどうかに関わらず、バンコマイシン、ゲンタマイシン、またはそれらの混合物の親水性形態を含むデポーも企図される。
【００１８】
実施態様において、その方法はさらに、そのデポーを保存する、および／または処置部位または創傷に送達し得る、シリンジ、バイアル、または任意の他の適当なデバイスに、粘性デポーを無菌的に充填する工程を含む。
【００１９】
本発明の別の局面によって、薬学的に受容可能な成分と共に、任意で安定化剤を水中に溶解する。その安定化剤の例は、ＥＤＴＡ二ナトリウム、グリシン、Ｌ−ヒスチジン、クエン酸、メチオニン（ｍｉｔｈｉｏｎｉｎｅ）、アスコルビン酸、Ｌ−システイン、アルファ−トコフェロール、およびそれらの混合物を含むが、これらに限定されない。本発明のさらに別の局面において、そのデポーは安定化剤を含まない。
【００２０】
さらに別の実施態様において、エマルジョンをホモジナイズする工程を行い、それは最初のエマルジョンを生じ、ここで脂質／油不連続相は、約２００ｎｍ未満、約１００ｎｍ未満、または約８０ｎｍ未満の平均直径を有する。
【００２１】
脂質滴（ｌｉｐｉｄ  ｄｒｏｐｌｅｔ）の平均直径の低減は、制限無しに、できた単相溶液の粘度を低減し、バンコマイシンおよび／またはゲンタマイシンの安定性に影響を与え得る、オートクレービングまたはガンマ線照射滅菌によるような、熱に基づく滅菌システムを使用することによらず、フィルターによる滅菌を可能にすると考えられる。
【００２２】
ホモジナイゼーション工程の前に、そのエマルジョンは一般的に、白色、不透明、濃厚なヨーグルト様の塊である。ホモジナイゼーション後、できた単相溶液は一般的に、透明、半透明、および粘度および流動特性において水様である。
【００２３】
本発明は、いかなる特定の操作の理論によっても制限されないが、バンコマイシン、ゲンタマイシン、またはそれらの混合物の非常に親水性の形態をリン脂質と処方して、望ましい特性を有する保存に安定した粘性デポーを生じる、本明細書中で規定されたような単相溶液を形成し得ると考えられる。関与し得る他の因子の中で、ホモジナイゼーションの間に生じる極めて小さい脂質滴が、産生されるデポーの最終的な特性において役立ち得ると考えられる。
【００２４】
本発明の別の実施態様によって、その単相溶液のｐＨは、約３から約６、約３から約５の範囲、または本発明の他の実施態様において約３から約４の範囲である。
【００２５】
本発明のさらに別の実施態様によって、最終的な産物である、その粘性デポーのｐＨは、約３から約６、約３から約５の範囲、または約３から約４の範囲である。
【００２６】
本発明の別の局面は、バンコマイシンの薬学的に受容可能な塩、ゲンタマイシンの薬学的に受容可能な塩、およびそれらの混合物からなる群より選択される少なくとも１つの親水性かつ水溶性の薬学的に活性な薬剤、水、リン脂質、ならびに油、ｐＨ調節剤および粘度改変剤のうちの１つ以上を含むデポーを提供し、ここでデポー中に存在する水は、デポーの総重量に対して、約４重量％以下、約２％以下、少なくとも１％以下、または約０．５重量％以下の水である。別の実施態様において、そのデポーは注射可能である。
【００２７】
本発明の１つ実施態様において、そのデポーは、バンコマイシンおよびゲンタマイシンの１つまたは両方の、親水性形態を含む。別の実施態様において、そのデポーは、バンコマイシンおよびゲンタマイシンの１つまたは両方の、薬学的な塩を含む。別の実施態様において、そのデポーは、バンコマイシンまたはゲンタマイシンいずれかの、薬学的に受容可能な塩を含む。さらに別の実施態様において、そのデポーは、バンコマイシンまたはゲンタマイシンいずれかの薬学的な塩を含む。
【００２８】
本発明によるデポーは、１つの実施態様において、「透明」である。これは、捕捉された空気、異物等を見ることができ、それらの身体内への意図しない導入を防止し得るという利点を提供する。興味深いことに、バンコマイシンおよびゲンタマイシン両方の薬学的に受容可能な塩がデポー中に存在する場合、本発明のデポーは、バンコマイシンまたはゲンタマイシンいずれかの薬学的に受容可能な塩を単独で含む場合よりも透明であることも発見された。バンコマイシンおよびゲンタマイシン両方の薬学的に受容可能な塩がデポー中に存在する、そのような実施態様において、そのようなデポーの清澄性は、本明細書中で定義される場合、「超透明（ｕｌｔｒａ  ｃｌｅａｒ）」である。デポーがバンコマイシンまたはゲンタマイシンいずれかの薬学的に受容可能な塩を含む実施態様において、そのようなデポーの清澄性は、本明細書中で定義される場合、「半透明」または「透明」である。
【００２９】
別の実施態様において、その粘度改変剤はエタノールであり、ここでデポー中に存在するエタノールの量は、その組成物の総重量に対して、約３重量％から約２５．０重量％、約４重量％から約１０重量％、または約５重量％から約６．５重量％である。
【００３０】
さらに別の実施態様において、デポー中に存在するリン脂質の量は、その組成物の総重量に対して、約５重量％から約９５重量％、約２５重量％から約７５重量％、または約３５重量％から約６０重量％である。
【００３１】
本発明の別の実施態様によって、デポー中に存在する油の量は、その組成物の総重量に対して、約５重量％から約９５重量％、約２５重量％から約７５重量％、または約３５重量％から約６０重量％である。
【００３２】
本発明の実施態様によって、媒体として５００ｍｌの脱イオン水を用いたＵＳＰ方法Ｉによって測定した場合、２時間で約８０％以下、約５０％以下、または約２０％以下のバンコマイシンおよび／またはゲンタマイシンが放出される。
【００３３】
本発明の別の局面によって、そのデポーは、任意で、バンコマイシン、ゲンタマイシン、または両方の安定性を改善するために安定化剤を含む。安定化剤の例は、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、エデト酸二ナトリウム、グリシン、Ｌ−ヒスチジン、クエン酸、メチオニン、アスコルビン酸、Ｌ−システイン、アルファ−トコフェロール、およびそれらの混合物を含むがこれらに限定されない。本発明のさらに別の局面によって、その粘性デポーは、安定化剤を含まない。さらに別の実施態様において、使用する安定化剤の量は、もしあるなら、デポー中の各活性物質、バンコマイシンまたはゲンタマイシンの安定性に負の影響を与えない。
【００３４】
本発明の別の局面において、粘性デポーは、アプリケーター、シリンジ、バイアル、またはそのデポーを保存、および／または処置部位、蓄積部位、または創傷に送達し得る任意の他のデバイス中で提供される。
【００３５】
本発明の別の局面は、バンコマイシンの薬学的に受容可能な塩、ゲンタマイシンの薬学的に受容可能な塩、またはそれらの混合物、水、リン脂質、油、ｐＨ調節剤および粘度改変剤を含む、本発明の粘性デポーを、皮内、筋肉内、皮下、点滴注入または局所的に投与する方法である。
【００３６】
本発明のさらに別の局面は、本発明のデポーを導入することによって、術後感染を予防および／または処置する方法である。
【００３７】
本発明の一局面は、本発明のデポーを創傷に導入することによって、創傷の感染を予防および／または処置する方法である。本発明の一実施態様において、その創傷は、外科的創傷、整形外科的創傷、外傷性創傷、戦闘による創傷およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。
【００３８】
本発明の局面によって、その外科的創傷は、鋭利な器具による滑らかな切り口である、切創を含むがこれらに限定されない。
【００３９】
本発明の別の局面において、その整形外科的創傷は、筋骨格系、骨盤を含む四肢、脊椎および関連する構造、およびそれらの任意の組み合わせに対する傷害を含むがこれらに限定されない。
【００４０】
本発明のさらに別の局面において、その外傷性創傷は、頭、顔、胸、腹、四肢（骨盤を含む）、および／または外側（ｅｘｔｅｒｎａｌ）に対する開放創、ならびに／あるいは、裂傷、擦過傷、刺創、貫通創（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｗｏｕｎｄ）のような、外来性物質および／または生育不能な組織断片が存在する、裂けてかつ不規則な縁を有する傷害ならびにそれらの任意の組み合わせを含むがこれらに限定されない。
【００４１】
本発明の別の局面において、戦闘による創傷は、爆発装置（ｅｘｐｌｏｓｉｖｅ  ｄｅｖｉｃｅ）および／または武器によって負わされた傷害、銃創、上記で述べた外傷性創傷のいずれか、ならびにそれらの任意の組み合わせを含むがこれらに限定されない。
本発明の好ましい実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
創傷の感染を予防および／または処置する方法であって、該方法は：
該創傷に、バンコマイシンの薬学的に受容可能な塩、ゲンタマイシンの薬学的に受容可能な塩およびそれらの混合物からなる群より選択される親水性かつ水溶性の薬学的に活性な薬剤、水、リン脂質、油、ｐＨ調節剤、ならびにエタノール、イソプロパノールおよびそれらの混合物からなる群より選択される粘度改変剤を含む透明デポーを投与する工程を包含し、ここで、該粘性デポー中に存在する該水は、該デポーの総重量に対して約２重量％以下である、方法。
（項目２）
前記創傷が、慢性創傷、急性創傷、外科的創傷、整形外科的創傷、外傷性創傷、戦闘による創傷およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記整形外科的創傷が、筋骨格系に対する傷害、骨盤を含む四肢に対する傷害、脊椎および関連する構造に対する傷害ならびにそれらの任意の組み合わせに対する傷害である、項目２に記載の方法。
（項目４）
前記外傷性創傷が、頭、顔、胸、腹、骨盤を含む四肢および／または外側に対する開放創、ならびに／あるいは裂傷、擦過傷、刺創、貫通創のような、外来性物質および／または生育不能な組織断片が存在する、裂けてかつ不規則な縁を有する傷害、ならびにそれらの任意の組み合わせから選択される、項目２に記載の方法。
（項目５）
前記戦闘による創傷が、爆発装置および／または武器によって負わされた傷害および／または銃創およびそれらの任意の組み合わせから選択される、項目２に記載の方法。
（項目６）
前記創傷を清浄して、外来性物質および／または生育不能な組織を実質的に除去する工程；ならびに該創傷を閉鎖する工程をさらに包含する、項目１に記載の方法。
（項目７）
前記創傷を閉鎖する工程が、縫合糸、金属クリップ、ステープル、または接着ストリップを用いて行われる、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記デポーを創傷に投与する工程および陰圧創傷閉鎖システムを該創傷に対して使用する工程を包含する、項目１〜項目７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
前記創傷を清浄して、外来性物質および／または生育不能な組織を実質的に除去する工程；陰圧創傷閉鎖システムを該創傷に対して使用する工程；前記デポーを創傷に導入する工程；ならびに該創傷を閉鎖する工程を包含する、項目１〜項目８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記デポーを、縫合糸、金属クリップ、ステープル、包帯剤、包帯、および／または接着ストリップ／テープを用いた前記創傷の閉鎖の前、その間、またはその後のいずれかに投与する工程を包含する、項目１〜項目９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
創傷を予防および／または処置するための透明デポーであって、該デポーは、バンコマイシンの薬学的に受容可能な塩、ゲンタマイシンの薬学的に受容可能な塩およびそれらの混合物からなる群より選択される親水性かつ水溶性の薬学的に活性な薬剤、水、リン脂質、油、ｐＨ調節剤、ならびにエタノール、イソプロパノールおよびそれらの混合物からなる群より選択される粘度改変剤を含み、該粘性デポーに存在する該水は、該デポーの総重量に対して約２重量％以下である、透明デポー。
（項目１２）
前記創傷が、慢性創傷、急性創傷、外科的創傷、整形外科的創傷、外傷性創傷、戦闘による創傷およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、項目１１に記載のデポー。
（項目１３）
前記整形外科的創傷が、筋骨格系に対する傷害、骨盤を含む四肢に対する傷害、脊椎および関連する構造に対する傷害ならびにそれらの任意の組み合わせに対する傷害である、項目１２に記載のデポー。
（項目１４）
前記外傷性創傷が、頭、顔、胸、腹、骨盤を含む四肢および／または外側に対する開放創、ならびに／あるいは裂傷、擦過傷、刺創、貫通創のような、外来性物質および／または生育不能な組織断片が存在する、裂けてかつ不規則な縁を有する傷害、ならびにそれらの任意の組み合わせから選択される、項目１２に記載のデポー。
（項目１５）
前記戦闘による創傷が、爆発装置および／または武器によって負わされた傷害および／または銃創ならびにそれらの任意の組み合わせから選択される、項目１２に記載のデポー。
（項目１６）
前記創傷を清浄して、外来性物質および／または生育不能な組織を実質的に除去する工程；ならびに該創傷を閉鎖する工程をさらに包含する、項目１１に記載のデポー。
（項目１７）
前記創傷を閉鎖する工程が、縫合糸、金属クリップ、ステープル、または接着ストリップを用いて行われる、項目１６に記載のデポー。
（項目１８）
前記デポーを創傷に投与する工程および陰圧創傷閉鎖システムを該創傷に対して使用する工程を包含する、項目１１〜１７のいずれか一項に記載のデポー。
（項目１９）
前記創傷を清浄して、外来性物質および／または生育不能な組織を実質的に除去する工程；陰圧創傷閉鎖システムを該創傷に対して使用する工程；前記デポーを創傷に導入する工程；ならびに該創傷を閉鎖する工程を包含する、項目１１〜１８のいずれか一項に記載のデポー。
（項目２０）
前記デポーを、縫合糸、金属クリップ、ステープル、包帯剤、包帯、および／または接着ストリップ／テープを用いた前記創傷の閉鎖の前、その間、またはその後のいずれかに投与する工程を包含する、項目１１〜１９のいずれか一項に記載のデポー。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】図１は、本発明の局面による、発明組成物を作製する方法の実施態様の、工程フローダイアグラムである。
【図２】図２は、オートクレーブ処理後の、実施例１の処方物のバンコマイシンおよびゲンタマイシンのアッセイ回収率を示す。
【図３】図３は、ＵＳＰ方法Ｉを用いた実施例６の処方物のゲンタマイシンおよびバンコマイシンのインビトロにおける放出プロファイルである。
【図４】図４は、ウサギにおける実施例１の処方物のバンコマイシンの血漿中濃度を示す。
【図５】図５は、ウサギにおける実施例１の処方物のバンコマイシンの組織中濃度を示す。
【図６】図６は、ウサギにおける実施例１の処方物のゲンタマイシンの血漿中濃度を示す。
【図７】図７は、ウサギにおける実施例１の処方物のゲンタマイシンの組織中濃度を示す。
【図８】図８は、実施例６の処方物の、単回ＳＣ創傷点滴注入後の、ウサギにおける平均バンコマイシン血漿中濃度を示す。
【図９】図９は、ウサギにおける実施例６の処方物のバンコマイシンの、平均全血漿中濃度を示す。
【発明を実施するための形態】
【００４３】
本発明を、下記でより詳細に説明する。
【００４４】
明細書は、本発明を具体的に指し、そして明確に請求する特許請求の範囲で終わるが、本発明は以下の説明からより良く理解されると考えられる。本明細書中で使用される全てのパーセンテージおよび比率は、組成物全体の重量によるものであり、そして行われた全ての測定は、他に示さなければ２５℃および正常圧であった。全ての温度は、他に特定しなければ摂氏である。本発明は、本発明の構成要素および本明細書中で記載された他の成分または要素を含み得る（無制限）または実質的にそれらから成り得る。本明細書中で使用する場合、「含む」は、引用された要素、または構造または機能におけるその同等物、それに加えて引用されていないあらゆる他の要素または複数の要素を意味する。「有する」、「含む」、および「から構成される」という用語はまた、文脈が他を示唆しなければ、無制限に解釈される。本明細書中で使用する場合、「実質的に〜から成る」は、本発明は、特許請求の範囲で引用されたものに加えて成分を含み得るが、そのさらなる成分が、請求される発明の基本的および新規の特徴を実質的に変化させない時に限る。一般的に、そのような添加物は、全く存在しないか、または微量のみ存在し得る。しかし、その化合物の有用性が維持される限り（有用性の程度に対して）、本発明の基本的および新規の特徴を実質的に変化させ得る物質を、重量の約１０％まで含むことが可能であり得る。２つの値の「間」の範囲を引用するものを含め、本明細書中で引用される全ての範囲は、終点を含む。「約」、「一般的に」、「実質的に」等のような用語は、用語または値を、それが絶対的なものではないように修飾すると解釈される。そのような用語は、環境およびそれらが修飾する用語によって、それらの用語が当業者によって理解されるように規定される。これは、少なくとも、値を測定するために使用される所定の技術に関する、予測される実験誤差、技術的エラーおよび装置のエラーの程度を含む。
【００４５】
明細書および特許請求の範囲は、例えばデポー、または、例えば中間状態でのｐＨを含む本発明の他の剤形のような最終産物を言及し得るが、その引用が満たされる最終的な剤形を知ることは困難であり得る。しかし、最終的な産生の前に使用した材料が、その引用を満たすなら、そのような引用は満たされ得る。同様に、例えばエマルジョンに導入される成分の量は、もし重量によると記載されるなら、最終的なデポーにおけるような、産生の他の段階における産物の重量と比べて変化し得、それはより重くまたは軽くあり得る。その重量パーセンテージが、産生のいずれかの工程において、および／またはいずれかの中間体において正確であったならば十分である。実際、剤形から直接確認できない、最終産物のあらゆる特性または特徴に関して、もしその特性が、最終的な産生工程のすぐ前に引用される成分に存在するならば十分である。
【００４６】
本明細書中で使用する「エマルジョン」という用語は、２つの混合しない液相の系である。２つの相の１つ（内相、不連続相、または離散相）は、２つ目の相（外部または連続相）中に、滴／小球として分布する。本明細書中で使用する場合、エマルジョンは、通常油と呼ばれる、より極性の低い液体が内相にある、水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルジョン；および水性または他の比較的極性の液体が内相にある、油中水型（Ｗ／Ｏ）エマルジョンを含む。
【００４７】
「単相溶液」および「ナノエマルジョン」という用語を、本明細書中で交換可能に使用する。「単相溶液」中の「溶液」という用語は、２つまたはそれ以上の物質の均一な混合物であることを意味せず、ＭＩＣＲＯＦＬＵＩＤＩＺＥＲのような高圧ホモジナイザーを用いたホモジナイゼーション工程の結果できた産物であることを意味する。
【００４８】
「単相」、「一相」および「一相様」という用語は、できた産物が、Ｈｅｒａｅｕｓ、Ｍｏｄｅｌ  Ｂｉｏｆｕｇｅ  Ｆｒｅｓｃｏによって製造された遠心分離機、または任意の同等物を用いた、１ｇのサンプル量、２５℃における、６０００ｇで１０分間の遠心分離後でさえ、相の分離も沈殿もなく１つの相のままであることを意味して使用する。
【００４９】
本明細書中で使用する「粘性」という用語は、その組成物の粘度が、約１センチポイズから約５０００センチポイズ、約１０センチポイズから約２０００センチポイズ、または１００センチポイズから１５００センチポイズであることを意味する。
【００５０】
本明細書中で使用する「注射可能」という用語は、その組成物を、シリンジまたはカテーテルで投与し得る、またはバイアルからシリンジへ吸引し得ることを意味し得る。しかし、具体的な記載もなく文脈がその意味を示唆しなければ、それは本発明の組成物が、実際にシリンジ中になければならない、またはシリンジを用いて投与しなければならないことを意味するわけではない。
【００５１】
「半透明」および「透明」という用語は、本発明の組成物が、濁っていない、または不透明でないこと、およびそれは視覚的に懸濁した粒子を含まないことを意味して、本明細書中で交換可能に使用される。それはまた、泡も含まない。さらに、半透明によって、そのデポーは視覚的に懸濁粒子を含まず、かつまた泡を含まないことを意味する。さらに、「半透明」または「透明」によって、本発明のデポーが、Ｐｈａｒｍａｃｉａによって製造された、Ｍｏｄｅｌ  ＵｌｔｒｏｓｐｅｃＩＩＩのような、紫外可視分光光度計によって測定する場合、１ｃｍの経路の石英キュベットおよびブランクとしてのアルコールにおいて、８００ｎｍで測定した（Ｔ８００）、約９０％より高い光透過率を有することも意味する。
【００５２】
「濁った」または「不透明」によって、そのデポーのＴ８００値が約９０％未満であることを意味する。
【００５３】
「超透明」によって、そのデポーのＴ８００値が、約９２％または９５％より高いことを意味する。
【００５４】
本明細書中で使用する「安定な」という用語は、（１）その処方物が、少なくとも１年間、２５℃で透明なままである、または（２）その処方物が、１週間４０℃に曝露された場合に、透明なままであり、そして遠心分離後、分離も沈殿もしないことを意味する。
【００５５】
「ゲル」および「デポー」という用語は、本明細書中で交換可能に使用される。
【００５６】
本発明の１つの局面は、バンコマイシン、ゲンタマイシン、その薬学的に受容可能な塩、およびそれらの混合物からなる群より選択される、親水性かつ水溶性の薬学的に活性な薬剤、水、リン脂質、油、ｐＨ調節剤、ならびに粘度改変剤を含む粘性デポーを提供し、ここでその粘性デポーに存在する水は、そのデポーの総重量に対して、約４重量％以下、約２重量％以下、または約０．５重量％以下の水である。
【００５７】
本発明の別の局面によって、その粘性デポーは任意で、バンコマイシン、ゲンタマイシン、または両方の安定性を改善するために安定化剤を含む。本発明の別の局面において、この粘性デポーは、シリンジ、バイアル、またはそのデポーを処置部位、蓄積部位、または創傷に送達し得る任意の他のデバイスにおいて提供される。
【００５８】
薬学的に活性な成分
本発明による薬学的に活性な成分は、バンコマイシン、ゲンタマイシン、またはそれらの混合物の親水性形態である。これは、その遊離塩基、塩および溶媒和物のような、バンコマイシンおよびゲンタマイシンの形態であり得、それらは、その公知の塩のいくつかと同様に親水性である。これはまた、遊離塩基のように、それ自体親水性ではないが、例えば複合体形成によって、デポーの処方の前、その間、またはその後に親水性にする形態を含む。１つの実施態様において、本発明による薬学的に活性な成分は、塩酸バンコマイシン、硫酸ゲンタマイシン、またはそれらの混合物である。別の実施態様において、本発明による薬学的に活性な成分は、塩酸バンコマイシンおよび硫酸ゲンタマイシンである。さらに別の実施態様において、本発明による薬学的に活性な成分は、塩酸バンコマイシンまたは硫酸ゲンタマイシンのいずれかである。
【００５９】
薬学的に受容可能な塩の例は、酢酸、塩酸、臭化水素酸、クエン酸、ギ酸、乳酸、コハク酸、硫酸のような、バンコマイシンまたはゲンタマイシンのいずれかと塩を形成し得るあらゆる酸を含むがこれらに限定されない。
【００６０】
その粘性デポー中に存在し得る、薬学的に活性な成分の量は、意図される全用量のサイズ、投与の期間、デポーのサイズ、およびどこおよびどのようにそれを投与するか、投与する活性成分の型、投与のパターン（例えば連続的、遅延、等）等を含む、多くのパラメーターによって変化し得る。しかし、一般的に、薬学的に活性な成分の全量は、その粘性デポーの総重量に対して、約０．００１重量％から約５０重量％、約０．０１重量％から約１０重量％、または約０．１重量％から約５重量％であり得る。
【００６１】
油
本発明による油は、例えば植物油、動物油、ビタミンＥ、ビタミンＥエステル等のような天然油、および／または合成油または半合成油、またはそれらの混合物であり得る。
【００６２】
植物油は、植物の種子または堅果由来の油を指す。植物油の例は、アーモンド油、ボラージオイル（ｂｏｒａｇｅ  ｏｉｌ）、クロスグリ種子油（ｂｌａｃｋ  ｃｕｒｒａｎｔ  ｓｅｅｄ  ｏｉｌ）、ヒマシ油、ベニバナ油、ダイズ油、ゴマ油、綿実油、グレープシードオイル、ヒマワリ油、キャノーラ油、ココナッツ油、パーム油、オレンジ油、コーン油、オリーブ油等を含むがこれらに限定されない。
【００６３】
動物油は、動物供給源由来のトリグリセリド油を指す。動物油の例は、魚油、または獣脂、ラード等のような、他の供給源由来のものであり得る。
【００６４】
合成油または半合成油の例は、酸成分がＣ６からＣ２０飽和および／または不飽和脂肪酸であるモノ−、ジ−、またはトリグリセリド、ＣＡＰＴＥＸ（登録商標）（様々なグレードの、プロピレングリコールジデカノアートのようなプロピレングリコールエスエル、およびトリカプリル酸／カプリン酸グリセリルのようなグリセロールエステル）；ＭＩＧＬＹＯＬ（登録商標）（カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド；またはカプリル酸／カプリン酸／リノール酸トリグリセリド；またはカプリル酸／カプリン酸／コハク酸トリグリセリド；またはカプリル酸／カプリン酸のプロピレングリコールジエステルおよび他の薬剤との混合物）；ＣＡＰＭＵＬ（登録商標）（異なるグレードで入手可能、例えばＣａｐｍｕｌＭＣＭ）である。それは主にモノオレイン酸グリセリルおよびモノカプリル酸プロピレングリコールのような、グリセロールおよびプロピレングリコールのモノおよびジエステルである。別のグレードは、ポリエチレングリコールモノステアリン酸グリセリルから成る。１つの実施態様において、本発明によって使用する油はゴマ油である。
【００６５】
その粘性デポーに存在し得る油の量は、その粘性デポーの総重量に対して、約５重量％から約９５重量％、約２５重量％から約７５重量％、または約３５重量％から約６０重量％であり得る。
【００６６】
ある実施態様において、その粘性デポーにおける油対リン脂質の比は、重量で、約２０：１から約１：２０、約３：１から約１：３、または約１：２から約１：１の範囲であり得る。
【００６７】
リン脂質
本発明によるリン脂質は、グリセロール（ホスホグリセリド、グリセロリン脂質）またはスフィンゴシン（ｓｐｉｎｇｏｓｉｎｅ）（スフィンゴ脂質）のいずれか由来のものを含む、１つまたはそれより多いリン酸基を含む脂質分子を指す。
【００６８】
いくつかの実施態様において、リン脂質は、１つの脂肪酸がリン酸基およびいくつかの窒素含有分子の１つによって置換されたトリグリセリド誘導体である。その脂肪酸鎖は疎水性であり、そしてリン酸基およびアミノ基の電荷が、分子のその部分を親水性にする。その結果は、両親媒性分子である。
【００６９】
米国薬局方（ＵＳＰ）によって、レシチンは、アセトン不溶性リン脂質の複雑な混合物を説明する一般名であり、それは、様々な量の、トリグリセリド、脂肪酸、および炭水化物のような他の物質と組み合わせて、主にホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、およびホスファチジルイノシトールから構成される。レシチンの組成、および従ってその物理的特性は、そのレシチンの供給源およびリン脂質の組成、例えばホスファチジルコリン含有量等に依存して変動する。
【００７０】
本発明の実施態様によって、本明細書中で使用するレシチンは、卵またはダイズ由来の医薬品グレードのレシチンであり、それは非経口製品に使用され、そして実質的に刺激性、アレルギー性、炎症性作用物質、または他の有害な生物学的反応を引き起こす作用物質を含まない。
【００７１】
本発明の実施によって、粘性デポーを調製するためのリン脂質の選択を、そのリン脂質の（１）バンコマイシンの薬学的に受容可能な塩、ゲンタマイシンの薬学的に受容可能な塩、およびそれらの混合物からなる群より選択される、親水性かつ水溶性の薬学的に活性な薬剤と化学的に適合性である、（２）単相溶液を形成し、そして製造過程および保存の間小さい滴のサイズを維持する、および（３）望ましいデポーを提供し、そしてその薬学的に活性な薬剤の望ましい放出を提供する能力に基づいて決定する。
【００７２】
リン脂質の例は、スフィンゴシンおよび誘導体の形式のスフィンゴ脂質（ダイズ、卵、脳および乳から得る）、ガングリオシド、およびフィトスフィンゴシンおよび誘導体（酵母から得る）を含むがこれらに限定されない。
【００７３】
リン脂質をまた合成し得、そして一般的な合成リン脂質の例は、１，２−ジラウロイル（ｄｉａｕｒｏｙｌ）−ｓｎ−グリセロール（ＤＬＧ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＭＧ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＰＧ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＳＧ）のようなジグリセロール；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸、ナトリウム塩（ＤＭＰＡ、Ｎａ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸、ナトリウム塩（ＤＰＰＡ、Ｎａ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸、ナトリウム塩（ＤＳＰＡ、Ｎａ）のようなホスファチジン酸；１，２−ジデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＤＰＣ）、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＯＰＣ）、１，２−ジエルコイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＥＰＣ）、１，２−ジエイコサペンタエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＥＰＡ−ＰＡ）、１，２−ジドコサヘキサエニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＨＡ−ＰＡ）、１−ミリストイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＭＰＰＣ）、１−ミリストイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＭＳＰＣ）、１−パルミトイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＭＰＣ）、１−パルミトイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＳＰＣ）、１−ステアロイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＳＭＰＣ）、１−ステアロイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＳＰＰＣ）、１−ミリストイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＭＯＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１−ステアロイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）のようなホスホコリン；水素化ダイズホスホエタノールアミン（ＨＳＰＥ）、非水素化卵ホスホエタノールアミン（ＥＰＥ）、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２−ジリノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＬｏＰＥ）、１，２−ジエルコイル（ｄｉｅｒｕｃｙｌ）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＥＰＥ）、１，２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＥ）のようなホスホエタノールアミン；水素化ダイズホスファチジルグリセロール、ナトリウム塩（ＨＳＰＧ、Ｎａ）、非水素化卵ホスファチジルグリセロール、ナトリウム塩（ＥＰＧ、Ｎａ）、１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＤＬＰＧ、Ｎａ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＤＭＰＧ、Ｎａ）、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｓｎ−１−グリセロール、アンモニウム塩（ＤＭＰ−ｓｎ−１−Ｇ、ＮＨ４）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＤＰＰＧ、Ｎａ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＤＳＰＧ、Ｎａ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｓｎ−１−グリセロール、ナトリウム塩（ＤＳＰ−ｓｎ−１Ｇ、Ｎａ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＤＯＰＧ、Ｎａ）、１，２−ジエルコイル（ｄｉｅｒｕｃｙｌ）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＤＥＰＧ、Ｎａ）、１，２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、ナトリウム塩（ＰＯＰＧ、Ｎａ）のようなホスホグリセロール；１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ｓｉｎｅ）、ナトリウム塩（ＤＭＰＳ、Ｎａ）、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ｓｉｎｅ）、ナトリウム塩（ＤＰＰＳ、Ｎａ）、１，２−ジステアリル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ｓｉｎｅ）、ナトリウム塩（ＤＳＰＳ、Ｎａ）、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ｓｉｎｅ）、ナトリウム塩（ＤＯＰＳ、Ｎａ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ｓｉｎｅ）、ナトリウム塩（ＰＯＰＳ、Ｎａ）のような、ホスファチジルセリン；１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ｐｈｏｓｐｏｇｌｙｃｅｒｏｌ）、ナトリウム塩（ＰＯＰＧ、Ｎａ）、１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール、アンモニウム塩（ＰＯＰＧ、ＮＨ４）のような、混合鎖（ｍｉｘｅｄ  ｃｈａｉｎ）リン脂質；１−ミリストイル−２−リゾ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｓ−ｌｙｓｏ−ＰＣ）、１−パルミトイル−２−リゾ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｐ−ｌｙｓｏ−ＰＣ）、１−ステアロイル−２−リゾ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｓ−ｌｙｓｏ−ＰＣ）のようなリゾリン脂質；およびＮ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−ＭＰＥＧ−２０００−ＤＰＰＥ、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ナトリウム塩、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール５０００）−ＭＰＥＧ−５０００−ＤＳＰＥ、１，２−���ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ナトリウム塩、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール５０００）−ＭＰＥＧ−５０００−ＤＰＰＥ、１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ナトリウム塩、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール７５０）−ＭＰＥＧ−７５０−ＤＳＰＥ、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ナトリウム塩、Ｎ−（カルボニル−メトキシポリエチレングリコール２０００）−ＭＰＥＧ−２０００−ＤＳＰＥ、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン、ナトリウム塩のような、ペグ化リン脂質を含むがこれらに限定されない。
【００７４】
その粘性デポーに存在し得るリン脂質の量は、最終的な処方物の粘度、投与期間、デポーのサイズ、およびどこにおよびどのようにそれを投与するか、投与する活性成分の型、投与のパターン（例えば連続的、遅延、等）等を含む、多くのパラメーターによって変動し得る。しかし、一般的に、その粘性デポーに存在し得るリン脂質の量は、その組成物の総重量に対して約５％から約９５％、またはその組成物の総重量に対して約３５％から約６０％であり得る。
【００７５】
水
本発明によって使用し得る水は、蒸留水および脱イオン水、または親水性かつ水溶性のバンコマイシンおよび／またはゲンタマイシンを溶解し得、そして凍結乾燥工程の間に昇華／蒸発し得るあらゆる他の液体を含むがこれらに限定されない。
【００７６】
ＭＩＣＲＯＦＬＵＩＤＩＺＥＲのような高圧ホモジナイザーを用いて、単相溶液を産生するために、ＭＩＣＲＯＦＬＵＩＤＩＺＥＲのようなホモジナイザー中で加工するのに望ましい流動特性を有するために、その水中油型エマルジョンは、その水中油型エマルジョンの総重量に対して約１０％から約８０％の水、約３０％から約８０％の水、または約６０％から約８０％の水を含まなければならない。
【００７７】
しかし、一旦その単相溶液を得たら、ほとんどの水を、例えば凍結乾燥、昇華、および／または蒸発によって除去し得る。
【００７８】
バンコマイシンは加水分解のために分解し、そして最終的な粘性デポーに残留する水の量が、バンコマイシンの長期安定性に影響を与える。バンコマイシンが沈殿する場合、その粘性デポーは半透明から濁った状態になるか、または本明細書中の実施例２で示すように、２相に分離する。
【００７９】
よって、本発明によって、保存中バンコマイシンを安定に維持するために、残留する水の量を、その粘性の透明なデポーの総重量に対して、約４重量％より低い、約２重量％より低い、または約０．５重量％より低い水に維持しなければならない。
【００８０】
ｐＨ調節剤
本発明によるｐＨ調節剤は、あらゆる無毒性の酸、塩基、または塩である。ｐＨ調節剤の例は、塩酸、酢酸、硫酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、リジン、アルギニン等を含むがこれらに限定されない。
【００８１】
上記で述べたように、ゲンタマイシンは酸化または付加物の形成によって分解する。下記の実施例４において示すように、ｐＨはゲンタマイシンの長期安定性に影響を与え、そしてゲンタマイシンが沈殿する場合、その粘性デポーは半透明から濁った状態に変化する。
【００８２】
よって、その粘性デポーのｐＨは、約３から約６、約３から約５の範囲、または約３から約４の範囲であり得る。
【００８３】
安定化剤
本発明による安定化剤は、酸化、加水分解、または他の分解反応に対する金属イオンの触媒効果を低減する、および／または親水性かつ水溶性の薬学的に活性な薬剤の安定性を増大させる物質である。そのような安定化剤の例は、ＥＤＴＡ（エチレン−ジアミン四酢酸）、エデト酸二ナトリウム、グリシン、Ｌ−ヒスチジン、クエン酸、メチオニン、アスコルビン酸、Ｌ−システイン、アルファ−トコフェロール、およびそれらの混合物を含むがこれらに限定されない。ある実施態様において、その粘性デポーに存在する安定化剤の量は、その組成物の総重量に対して約０．００１％から約５．０％、またはその組成物の総重量に対して約０．０１％から約１．０％である。別の実施態様において、その粘性デポーは、安定化剤を含まない。
【００８４】
粘度改変剤
本発明による粘度改変剤は、凍結乾燥、昇華、および／または蒸発後に形成される乾燥ペーストを溶解し得る、水性または非水性（混入物レベルの水を含む以外）の液体である。
【００８５】
粘度改変剤の例は、制限無しに、エタノール、イソプロパノール、およびそれらの混合物を含む。１つの実施態様において、その粘度改変剤は、実質的に非水性である。別の実施態様において、その粘度改変剤はエタノールである。
【００８６】
その粘度改変剤を、乾燥ペーストが完全にその薬剤中に溶解するまで、乾燥ペーストに加える。できた粘度修飾溶液はまた「濁り」得る。１つの実施態様において、その粘度改変剤およびその乾燥ペーストを、約１０℃から約８０℃の温度で、または約５０℃から約７０℃の範囲で、または約２５℃から約６０℃の範囲で混合する。
【００８７】
粘度改変剤の量が、できた溶液の総重量に対して、約１０重量％、２０重量％、２５重量％、または３０重量％になるまで、その粘度改変剤を乾燥ペーストに加える。そのできた溶液の粘度は、約１０から約２００センチポイズ、１５から１００センチポイズ、または約２０センチポイズから約５０センチポイズであり得る。
【００８８】
粘度を、ＳＰ−４０スピンドルを有するＢｒｏｏｋｆｉｅｌｄデジタルプログラム可能レオメーターまたは任意の他の同等のレオメーターを用いて決定し得る。より具体的には、レオメーターの開始ＲＰＭは０．１から１．０であり得、次いでＲＰＭを３０秒ごとに０．１  ＲＰＭきざみ（ｉｎｃｒｅｍｅｎｔ）で０．１に低減する。粘度の測定値を、約３０℃の周囲温度で、０．８  ＲＰＭで記録し得る。
【００８９】
続いて、乾燥ペーストを溶解するために使用した粘度改変剤の一部の量を除去し得る。粘性デポーに存在し得る粘度改変剤の残りの量が、その粘性デポーの総重量に対して約１％から約２０％、約２％から約１８％、または約５．０％から約６．５％になるまで、その粘度改変剤の除去を行い得る。もし過剰に乾燥したら、その粘度改変剤を必要に応じて加えて戻し得る。
【００９０】
本発明によるできた粘性デポーの粘度は、約１センチポイズから約５０００センチポイズ、約１０センチポイズから約２０００センチポイズ、または１００センチポイズから１５００センチポイズである。
【００９１】
方法の説明
図１に示すように、本発明の１つの局面は、バンコマイシン、ゲンタマイシン、およびそれらの混合物からなる群より選択される、親水性かつ水溶性の薬学的に活性な薬剤を含む粘性デポーを作製する方法を提供し、この方法は：（１）バンコマイシンの薬学的に受容可能な塩またはゲンタマイシンの薬学的に受容可能な塩またはそれらの混合物を水に溶解して水溶液を形成する工程；（２）リン脂質、油、およびバンコマイシンの薬学的に受容可能な塩、ゲンタマイシンの薬学的に受容可能な塩、またはそれらの混合物を含む水溶液を含むエマルジョンを形成する工程；（３）ＭＩＣＲＯＦＬＵＩＤＩＺＥＲのような高圧ホモジナイザーを用いてエマルジョンをホモジナイズして、単相溶液を得る工程；（４）そのエマルジョンおよび／または単相溶液のｐＨが約３から約６までの間、約３から約５までの範囲、または約３から約４までの範囲であることを確実にする工程；（５）その単相溶液を凍結乾燥して乾燥ペーストを形成する工程；（６）粘度改変剤を、望ましい粘度を得るために十分な量で加える工程；（７）その粘度修飾溶液をプレろ過して透明な溶液を得る工程；（８）その透明な溶液から一部の量の粘度改変剤を除去して、その粘性デポーの総重量に対して約１重量％から約２０重量％、約２重量％から約１８重量％、または約５．５重量％から約７．５重量％の粘度改変剤を有する粘性デポーを得る工程；および（９）その粘性デポーを加熱せずに滅菌する工程を包含する。別の実施態様において、プレろ過する工程および粘度改変剤を除去する工程は、任意の工程である。さらに別の実施態様において、その薬学的に活性な薬剤は、バンコマイシン、ゲンタマイシン、その薬学的に受容可能な塩、その薬学的に受容可能な溶媒和物および／または混合物の親水性形態である。
【００９２】
バンコマイシンおよび／またはゲンタマイシンの塩を水中に溶解する工程
まず、塩酸バンコマイシン、硫酸ゲンタマイシン、または両方を、水に溶解して水溶液を形成する。
【００９３】
水中の塩酸バンコマイシンの最初の薬物濃度は、約１ｍｇ／ｍｌから約５０ｍｇ／ｍｌ、または約２０ｍｇ／ｍｌから約３０ｍｇ／ｍｌであり、そして水中の硫酸ゲンタマイシンの最初の薬物濃度は、約１ｍｇ／ｍｌから約７５ｍｇ／ｍｌ、または約１０ｍｇ／ｍｌから約３０ｍｇ／ｍｌである。
【００９４】
水中油型エマルジョンを形成する工程
次いでバンコマイシンおよび／またはゲンタマイシンの薬学的に受容可能な塩の水溶液、リン脂質、油、任意でｐＨ調節剤および任意で安定化剤を混合して、水中油型エマルジョンを形成する
ホモジナイズして単相溶液を得る工程
続いて、そのエマルジョンを、高せん断ミキサー（ｈｉｇｈ  ｓｈｅａｒ  ｍｉｘｅｒ）および／またはＭＩＣＲＯＦＬＵＩＤＩＺＥＲのような高圧ホモジナイザーを用いてホモジナイズして、主なエマルジョン脂質サイズを、２００ｎｍ未満、１００ｎｍ未満、および／または８０ｎｍ未満の平均直径まで低減して単相溶液を形成し得る。
【００９５】
ＭＩＣＲＯＦＬＵＩＤＩＺＥＲのようなホモジナイザーで処理するために望ましい流動特性を有するために、そのような単相溶液を産生するためにその水中油型エマルジョンは、その水中油型エマルジョンの総重量に対して、約１０％から約８０％の水、約３０％から約８０％の水、または約６０％から約８０％の水を有利に含む。
【００９６】
ｐＨを調節する工程
ホモジナイゼーション工程の前および／または後にｐＨ調節剤を加えることによって、その組成物のｐＨが約３から約６、約３から約５までの範囲、または約３から約４までの範囲であるように、ｐＨを調節し得る。
【００９７】
別の実施態様において、この工程を、適当な量のｐＨ調節剤をエマルジョンに加え、続いて高せん断混合を約１分間行うことによって行う。次いで、ホモジナイゼーション工程の後に、その組成物のｐＨをチェックし、そしてもし必要なら再び調節し得る。
【００９８】
凍結乾燥、昇華、または蒸発
水を除去することによって、ゲンタマイシンおよび／またはバンコマイシンの薬学的に受容可能な塩は、リン脂質／油ビヒクル中に均一に分散するようになる。次いで凍結乾燥、昇華、および／または蒸発によって、できた乾燥ペーストまたは最終的な注射可能な透明なデポーに残留する水の量が、その乾燥ペーストまたは粘性透明デポーの総重量に対して、約４重量％より低い、約２重量％より低い、または約０．５重量％より低い水になるように、水を単相溶液から除去する。別の実施態様において、そのエマルジョンを、トレイ凍結乾燥機を用いて凍結乾燥する。
【００９９】
粘度改変剤の添加
その乾燥ペーストが完全に溶解し、そして濁った溶液が形成されるまで、粘度改変剤を乾燥ペーストに加える。粘度改変剤の量がその濁った溶液の総重量に対して、約７５重量％、約５０重量％、約３０重量％、または約２５重量％になるまで、その粘度改変剤を乾燥ペーストに加え得る。１つの実施態様において、その粘度改変剤および乾燥ペーストを、約１０℃から８０℃、または約２５℃から６０℃の温度で混合し得る。
【０１００】
プレろ過
次いでその濁った溶液を、例えば０．６５ミクロンのフィルターを用いてろ過して、透明な溶液を形成する。そのプレろ過工程によって除去される濁った成分は、バンコマイシン（約２％標的アッセイ）およびゲンタマイシン（３−４％標的アッセイ）の小画分から成る。この喪失を、最初の投入量（ｌｏａｄ）を調節する、またはアッセイの標的を下げることによって代償し得る。これは任意の工程であり、そして本発明のある実施態様では必要ない。
【０１０１】
粘度改変剤の除去
続いて、乾燥ペーストを溶解するために加えた粘度改変剤を除去する。粘性デポーに存在し得る残留粘度改変剤の量が、粘性デポーの総重量に対して、約１％から約５０％、約２％から約１８％、または約５％から約６．５％になるまで、粘度改変剤の除去を行い得る。
【０１０２】
もし過剰乾燥したら、その粘度改変剤を、必要に応じて戻して加え得る。粘度改変剤の除去を、回転エバポレータ−を用いて、または窒素ガスまたは空気を吹き付けることによって行い得る。熱重量分析（ＴＧＡ）を用いて、粘性デポーを形成するために透明な溶液から除去された粘度改変剤の量を測定し得る。
【０１０３】
本発明によってできた粘性デポーの粘度は、約１センチポイズから約５０００センチポイズ、約１０センチポイズから約２０００センチポイズ、または約１００センチポイズから約１５００センチポイズである。粘度の測定を、Ｍｏｄｅｌ  Ｎｏ．ＤＶ−ＩＩＩの、スピンドルＮｏ．ＳＰ−４０を有する、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ  Ｒｈｅｏｍｅｔｅｒの使用を含む、あらゆる従来の方法を用いて行い得る。これは任意の工程であり、そして本発明のある実施態様には必要ない。
【０１０４】
滅菌ろ過
次いでその粘性デポーを、約０．２２ミクロンまたはそれより小さい孔を有するもののような、滅菌膜を通したろ過によって滅菌する。
【０１０５】
本発明の別の局面は、バンコマイシンの薬学的に受容可能な塩、ゲンタマイシンの薬学的に受容可能な塩、またはそれらの混合物、水、リン脂質、油、ｐＨ調節剤および粘度改変剤を含むその粘性デポーを、皮内、筋肉内、皮下、点滴注入または局所的に投与する方法である。
【０１０６】
創傷の感染の処置および／または予防
本発明の一局面は、本発明のデポーを創傷に投与することによって、創傷の感染を予防および／または処置する方法である。別の実施態様において、本発明のデポーを創傷に投与することによって、限局組織が病原性微生物を維持できないようにする方法が提供される。
【０１０７】
創傷は、慢性創傷、急性創傷、外科的創傷、整形外科的創傷、外傷性創傷、戦闘による創傷およびそれらの任意の組み合わせを含むがこれらに限定されない。
【０１０８】
整形外科的創傷は、筋骨格系、骨盤を含む四肢、脊椎および関連する構造、およびそれらの任意の組み合わせに対する傷害を含むがこれらに限定されない。
【０１０９】
その外傷性創傷は、頭、顔、胸、腹、四肢（骨盤を含む）、および／または外側に対する開放創、ならびに／あるいは、裂傷、擦過傷、刺創、貫通創のような、外来性物質および／または生育不能な組織断片が存在する、裂けてかつ不規則な縁を有する傷害ならびにそれらの任意の組み合わせを含むがこれらに限定されない。
【０１１０】
戦闘による創傷は、爆発装置（ｅｘｐｌｏｓｉｖｅ  ｄｅｖｉｃｅ）および／または武器によって負わされた傷害、銃創、上記で述べた外傷性創傷のいずれか、ならびにそれらの任意の組み合わせを含むがこれらに限定されない。
【０１１１】
本発明の別の局面において、その方法はさらに、創傷を清浄して、外来性物質および／または生育不能な組織を実質的に除去する工程；およびその創傷を閉鎖する工程を含む。
【０１１２】
本発明の実施態様において、その創傷を閉鎖する工程を、縫合糸、金属クリップ、ステープル、または接着ストリップを用いて行う。
【０１１３】
本発明の別の局面において、その方法は、本発明のデポーを創傷に投与する工程、およびその創傷に対して陰圧創傷閉鎖システムを用いる工程を含む。
【０１１４】
本発明のさらに別の局面において、その方法は、その創傷を清浄して、外来性物質および／または生育不能な組織を実質的に除去する工程；創傷に対して陰圧創傷閉鎖システムを用いる工程；本発明のデポーを創傷に導入する工程；および創傷を閉鎖する工程を含む。
【０１１５】
本発明のデポーを用いて創傷を閉鎖する方法も、本発明によって企図される。その方法は、本発明のデポーを、例えば縫合糸、金属クリップ、ステープル、包帯剤、包帯、および／または接着ストリップ／テープを用いた創傷の閉鎖の前、その間、またはその後のいずれかに投与する工程を含む。
【実施例】
【０１１６】
実施例１：本発明による処方物およびその処方物を作製する方法
【０１１７】
【表１】
0005877843.tif 000002
【０１１８】
１００グラムの本発明による処方物を、以下のように調製した：まず、５００ｍＬのビーカーに０．３６ｇの硫酸ゲンタマイシン、０．２４ｇの塩酸バンコマイシン、５３．３ｇのＰＬ９０Ｇ、４０ｇのゴマ油、および０．１ｇのＬ−ヒスチジンを入れた。次いで、これに注射用水（ＷＦＩ）（ｍＬ）を加え、そしてそれらの混合物を、高せん断ミキサーで、５０００ＲＰＭで１５分間ホモジナイズした。できた単相溶液を凍結乾燥して、０．２％未満の残留水分まで水を除去して、乾燥ペーストを得た。この乾燥ペーストを水および／またはエタノールと混合して処方物を形成し、そして下記で述べるような実施例２から実施例５を含む、いくつかの研究において使用した。
【０１１９】
実施例２：実施例１の処方物の外見に対する水含有量の影響
様々な量の水（１．１重量％から４．１重量％）およびエタノール（６重量％）を、実施例１の乾燥ペーストに加えて、実施例１の処方物のいくつかのサンプルを産生した。サンプルを、ＢｅａｄＢｅａｔｅｒミキサーによってよく混合し、遠心して気泡を除去し、そして次いで最初の外見に関して観察した（「最初のサンプル」）。また、サンプルを０．４５μｍのフィルターに通し、そしてろ液をさらなる外見の観察のために２〜８℃で保存した（「ろ過サンプル」）。表２は、処方物の外見に対する水含有量の影響を示す。水含有量は、処方物の外見に有意に影響を与えることが見出された：
【０１２０】
【表２】
0005877843.tif 000003
【０１２１】
実施例３：ゲンタマイシンおよびバンコマイシンの安定性に対する水含有量の影響
実施例１の処方物のゲンタマイシンおよびバンコマイシンの安定性に対する残留水含有量の影響を、６０分のオートクレーブ処理によって評価した。下記の表３にまとめるように、より高い残留水レベルにおいて、回収または純度に関して、バンコマイシンの安定性は低下することが見出された。同じ範囲において、ゲンタマイシンの安定性に対する水の有意な影響は観察されなかった。
【０１２２】
【表３】
0005877843.tif 000004
【０１２３】
実施例４：実施例１の処方物におけるゲンタマイシンおよびバンコマイシンのｐＨ−安定性およびｐＨ−溶解度プロファイル
実施例１のｐＨ調節処方物（水を加えずに）を、外見の試験のために２〜８℃に置いた。（下記の表４を参照のこと。）
【０１２４】
【表４】
0005877843.tif 000005
【０１２５】
６０分のオートクレーブ処理によってサンプルを加熱して、ｐＨ安定性プロファイルを産生した。（下記の表５を参照のこと。）
【０１２６】
【表５】
0005877843.tif 000006
【０１２７】
その結果は、以下のことを示した：
（１）ｐＨは、実施例１の処方物の外見に影響を与えた。処方物はｐＨ３．２において透明であった；
（２）ｐＨは、処方物中のゲンタマイシンの安定性に影響を与えた。ゲンタマイシンの安定性のために、低いｐＨ（例えば３から４のｐＨ）が好ましい；および
（３）ｐＨは、バンコマイシンの安定性に有意に影響を与えなかった。
【０１２８】
実施例５：３．０から５．５の間のｐＨにおける実施例１の処方物中のゲンタマイシンのｐＨ安定性プロファイル
３．０〜５．５の範囲内の３つの異なるｐＨレベルにおける実施例１の処方物のサンプル（水を加えずに）を調製した。それに加えて、Ｌ−ヒスチジンを含む処方物を、Ｌ−ヒスチジンを含まないものと比較して、実施例１の処方物の安定性に対するＬ−ヒスチジンの影響も試験した。ゲンタマイシンおよびバンコマイシンの安定性を、実施例３で述べたのと同じ方法で評価した。以下のことが見出された：
（１）処方物中のゲンタマイシンの安定性は、ｐＨ依存性である（ゲンタマイシンは低いｐＨ（例えば３から４のｐＨ）が好ましい））；
（２）処方物中のバンコマイシンの安定性は、試験したｐＨの範囲では、ｐＨ感受性がより低い；
（３）Ｌ−ヒスチジンは、試験したｐＨの範囲でゲンタマイシンの安定性を増加させた；および
（４）Ｌ−ヒスチジンは、試験したｐＨの範囲でバンコマイシンの安定性を減少させた。
【０１２９】
図２は、オートクレーブ処理後のアッセイ回収率を示す。
【０１３０】
実施例６：本発明による別の処方物およびその処方物を産生する方法
【０１３１】
【表６】
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【０１３２】
３．３のｐＨを有する、０．５重量％未満の残留水を含む、透明な黄色滅菌粘性デポー（バッチサイズ：１５００ｇ）を、以下の工程に従う、多工程プロセスによって調製した：（１）乳化、（２）微小流動化（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚａｔｉｏｎ）／ホモジナイゼーション、（３）凍結乾燥、（４）エタノール希釈、（５）プレろ過、（６）エタノール除去および（７）ろ過。上記で列挙した全ての成分を単純に混合するだけでは、それはまだ透明なデポーを形成しないので、本発明による処方物を形成できない。
【０１３３】
上記で述べた工程それぞれの詳細な手順は、以下の通りである：まず、水を硫酸ゲンタマイシン、塩酸バンコマイシンに加えて、硫酸ゲンタマイシンおよび塩酸バンコマイシンを完全に溶解させる。次いで、ＰＨＯＳＰＨＯＬＩＰＯＮ（登録商標）９０Ｇ（Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ  ＧｍｂＨより）、およびゴマ油を加え、続いて、５０００ｒｐｍで６０分間高せん断混合して、均一なエマルジョンを得た。次いでそのエマルジョンのｐＨを、１ＮのＨＣｌを加えることによって３．３±０．２に調節した。これを、適当な量の１ＮのＨＣｌをエマルジョンに加え、続いて１分間高せん断混合することによって行った。次いで、そのエマルジョンが３．３±０．２のｐＨを有することを確実にするために、ｐＨの測定を行った。
【０１３４】
続いて、そのエマルジョンをＭＩＣＲＯＦＬＵＩＤＩＺＥＲに入れて、単相溶液を産生した。そのエマルジョンの平均滴サイズを、レーザー光散乱デバイスを用いて測定した。
【０１３５】
次いで、そのエマルジョンを凍結乾燥して水を除去し、０．５％未満の残留水を有する乾燥ペーストを得た。次いで、その乾燥ペーストを、無水アルコールと混合した。次いでそれらの混合物を、６０−７０℃の水浴中で、透明な溶液が得られるまで超音波処理した。次いでその溶液を室温まで冷却し、そして０．６５ミクロンの滅菌フィルターを通してプレろ過した。
【０１３６】
次いで、エタノールの残留量が６．５重量％−７重量％になるまで窒素ガスを噴射することによって、溶液からアルコールを除去して、粘性でかつ透明なゲルを得た。もしそれを過剰に乾燥したら、無水アルコールを必要に応じて戻し加えた。
【０１３７】
バイオセイフティーフードにおいて、アルゴンガスを４０ｐｓｉで適用して、その粘性デポーを、０．２ミクロンのフィルターを通してろ過して、その処方物を滅菌した。次いで、バイオセイフティーフードにおいて、ろ過した粘性デポーを、ガラスバイアルに充填した。
【０１３８】
実施例７：インビトロ放出プロファイル
ゲンタマイシンおよびバンコマイシンを含む、実施例６の処方物のインビトロ放出プロファイルを、バスケット装置（ｂａｓｋｅｔ  ａｐｐａｒａｔｕｓ）を用いて、ＵＳＰ方法Ｉを用いて測定した（３７℃で１００ｒｐｍ）。１．３６ｇの実施例６の処方物を、０００サイズのカプセルに充填し、そしてその充填したカプセルを、バッフルを有する４０メッシュのバスケットに入れた。図３は、ＵＳＰ方法Ｉを用いた、実施例６の処方物のゲンタマイシンおよびバンコマイシンのインビトロ放出プロファイルを示す。
【０１３９】
実施例８：ウサギにおける薬物動態学的研究
本発明によって作製された処方物の送達を評価するための薬物動態学的（「ＰＫ」）研究を行うために、Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ白色ウサギを使用した。実施例１および実施例６においてそれぞれ述べたような手順によって２つの処方物を作製し、そして外科的創傷または皮下ポケットに投与した。下記の表７は、ウサギＰＫ研究デザインをより詳細に示す。
【０１４０】
【表７】
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【０１４１】
最初の実験において、２羽のＮｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ白色ウサギを試験した。実施例１の処方物を創傷に点滴注入した後、バンコマイシンおよびゲンタマイシンは迅速に吸収され、血漿Ｔｍａｘは１〜２時間であった。血漿Ｃｍａｘ濃度は、マウスにおいて観察されたものと同様であった。血漿中濃度は、３６時間までに定量限界（ｌｉｍｉｔ  ｔｏ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ）近くまで減少した。バンコマイシンの組織濃度は、図４および５に示すように、７２時間でピークに達し、そして１６８時間にわたり最少発育阻止濃度（ＭＩＣ）より高かった。
【０１４２】
ゲンタマイシンの組織濃度は、図６および７に示すように、７２時間でピークに達し、そして１６８時間にわたりＭＩＣまたはそれより下であった。
【０１４３】
液体クロマトグラフィー／質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）分析によって血漿および組織分析を行い、そして実施例１の処方物の薬物動態学的（ＰＫ）結果を、下記の表８および９にそれぞれまとめる。
【０１４４】
【表８】
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【０１４５】
【表９】
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【０１４６】
２番目の実験において、６羽のＮｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄウサギ（グループＩ）を、１２．６ｍｇ／ｋｇのバンコマイシンおよび１１．４６ｍｇ／ｋｇのゲンタマイシンの用量を含む、実施例６の処方物を創傷に点滴注入することによって試験した；および６羽のさらなるＮｅｗ  Ｚｅｗｌａｎｄウサギ（グループＩＩ）を、２５．２ｍｇ／ｋｇのバンコマイシンおよび２２．９ｍｇ／ｋｇのゲンタマイシンの用量を含む、実施例６の処方物を創傷に点滴注入することによって試験した。
【０１４７】
より低い濃度の（グループＩ）ゲルは、創傷部位において、全部でバンコマイシンおよびゲンタマイシンの両方に関して平均４μｇ／ｇであり、一方より高い濃度のゲル（グループＩＩ）は、バンコマイシンおよびゲンタマイシンに関してそれぞれ平均２６および１９４μｇ／ｇであり、それはＭＩＣ（最少発育阻止濃度）値の４倍より高い。実施例６の処方物のＭＰＩ研究からの、バンコマイシンおよびゲンタマイシンの血漿中濃度は、両方の用量において、４００より高いバンコマイシンＡＵＣ／ＭＩＣ（濃度曲線下面積／最少発育阻止濃度）比、および両方の用量において、８００より高いゲンタマイシンＣｍａｘ／ＭＩＣ（最高濃度／最少発育阻止濃度）比を示した。
【０１４８】
図８は、単回皮下（ＳＣ）創傷点滴注入後のウサギにおける平均バンコマイシン血漿中濃度を示し、そして図９は、ウサギにおける平均全ゲンタマイシン血漿中濃度を示す。
【０１４９】
血漿および組織分析を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析によって行い、そして実施例６の処方物のＰＫ結果を、下記の表１０にまとめる：
【０１５０】
【表１０】
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【０１５１】
実施例６の処方物（高強度）および実施例１の処方物（低強度）の間の重要な差異は、実施例１の処方物の組織濃度は、より早くＭＩＣの４倍の値より下に低下し、従ってＭＩＣの４倍の費やした時間／面積に関してより小さな濃度曲線下面積（ＡＵＣ）を説明するので、これら２つの処方の、マウスのような小動物におけるＰＫプロファイルは同様であったが、ウサギのようなより大きな動物で試験した場合、パフォーマンスにより大きな差が存在したことである。
【０１５２】
【表１１】
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【０１５３】
比較例１を、ホモジナイゼーション、エタノール除去および／またはプレろ過工程を実施しなかった以外は、実施例１または６と同じ方法を用いて産生した。
【０１５４】
比較例１は、凍結乾燥後、不透明な硬いペーストを形成し、そしてエタノールを加えた後でさえ、注射に適していなかった。
【０１５５】
実施例９：ラットにおける創傷処置研究
成体オスＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、この研究で使用した。この研究を、Ａｎｉｍａｌ  Ｗｅｌｆａｒｅ  Ａｃｔ、ｔｈｅ  ｉｍｐｌｅｍｅｎｔｉｎｇ  Ａｎｉｍａｌ  Ｗｅｌｆａｒｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓに従った、およびＧｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ｏｆ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙの原則によったプロトコール下で行った。それぞれ１０匹の動物を含む３つの研究グループが存在した。最初のグループには処置を行わず、そして創傷を洗浄の後閉鎖した。２番目のグループは、約２８ｍｇのバンコマイシンおよび３２ｍｇのトブラマイシンを含む４つの３ｍｍ  ＰＭＭＡビーズを受容し、それを洗浄の後でかつ閉鎖の前に創傷へ置いた。３番目のグループは、約１７ｍｇのバンコマイシンおよび１９ｍｇのゲンタマイシンを含む、実施例１によって調製した１ｍｌの処方物を受容し、それを洗浄の後でかつ閉鎖の前に創傷に置いた。
【０１５６】
以下の技術を用いて、汚染した開放大腿欠損を作製した：成体オスＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、イソフルランで麻酔し、そして手術のための準備をした；その右大腿骨幹を曝露し、そして特注のポリオキシメチレンプレートで安定化し、６本のＫ−ワイヤーを通して固定した。次いで網状のこぎり（ｒｅｔｉｃｕｌａｔｉｎｇ  ｓａｗ）で中幹部（ｍｉｄ−ｓｈａｆｔ）に６ｍｍの欠損を作製し、生理食塩水で冷却した。その欠損を、０．５ｍｌの生理食塩水中１×１０５コロニー形成単位（ＣＦＵ）のＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓに浸した３０ｍｇの滅菌ウシコラーゲンで汚染した。使用したＳ．ａｕｒｅｕｓの（Ｘｅｎｏｇｅｎ３６）株は、もともと敗血症ヒト患者由来のＡＴＣＣ４９５２５由来であった（Ｃａｌｉｐｅｒ  ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ、ＣＡ  ＵＳＡ）。
【０１５７】
創傷を層状に閉鎖し、そして動物を回復させた。最初の「傷害」の６時間後、動物を再び麻酔し、その創傷を開き、全ての汚染を注意深く除去して創面切除（ｄｅｂｒｉｄｅ）し、そして低圧で送達される６０ｍｌの滅菌生理食塩水で洗浄した。その創傷を再び層状に閉鎖した。動物を回復させ、そして十分な移動性、食物、および水を許可した。
【０１５８】
傷害の１４日後、動物を安楽死させた。大腿骨および金物を軟部組織から剥がし、そして分離した。骨組織を液体窒素中で急速凍結し、そして粉砕した。次いで骨およびインプラントサンプルを、別々に、標準的な定量的微生物学的分析に送った。簡単には、粉砕した骨サンプルを、撹拌器中で１０ｍｌの生理食塩水でホモジナイズし、同様に、インプラント標本を、撹拌器中で１０ｍｌの生理食塩水ですすいだ；次いで個々の標本からのアリコートを連続的に希釈し、そしてＴｒｙｐｔｉｃ−Ｓｏｙ−Ａｇａｒプレートに広げた。３７℃で一晩インキュベートした後、細菌のコロニーを数えた；検出能の閾値は３０ＣＦＵ／ｇであった。
【０１５９】
抗生物質ＰＭＭＡビーズを、ＰａｌａｃｏｓＲ（Ｚｉｍｍｅｒ、Ｄｏｖｅｒ  ＯＨ）関節形成セメントを用いて、滅菌条件下で製造した。４０ｇのＭＭＡコポリマー粉末を、２．０ｇのバンコマイシンおよび２．４ｇのトブラマイシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）とブレンドし、次いで２０ｍｌのＭＭＡモノマー液と混合した。次いで３ｍｍの型を使用して、約２００ｍｇの重さであり、そして７ｍｇのバンコマイシンおよび８ｍｇのトブラマイシンをそれぞれ含むビーズを作製した。従って、４つのビーズは、２８ｍｇのバンコマイシンおよび３２ｍｇのトブラマイシンの用量を示した。
【０１６０】
抗生物質を受容しなかったコントロールグループ（研究グループ１）の全ての動物には細菌が存在し、一方実施例１によって調製した処方物で処置した動物の半分のみが、検出可能な細菌を有していた（研究グループ３）。実施例１によって調製した処方物（研究グループ３）は、骨またはインプラントのいずれかにおいて、検出可能な細菌を有する動物の数を低減することに関して、抗生物質ビーズ（研究グループ２）より有意に優れていた。細菌の定量は、抗生物質ビーズ（研究グループ２）と比較して、実施例１によって調製した処方物（研究グループ３）の優位性を示した。抗生物質ビーズで処置した動物（研究グループ２）および処置を受けなかったもの（研究グループ１）の間で、細菌の計測数は非常に類似していた。
【０１６１】
本発明書中で、本発明は、特定の実施態様に関して説明されたが、これらの実施態様は、本発明の原理および適用の単なる説明であることが理解される。従って、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の意図および範囲から逸脱することなく、説明的な実施態様に対して多くの修飾を行い得ること、および他のアレンジメントを考え得ることが理解される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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