(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
心不全の処置方法に使用するためのＢリンパ球ターゲティング剤であって、
ここで、ターゲティング剤は抗原に結合するかまたはターゲットし、前記抗原はＣＤ２０であり、心不全は炎症性拡張性心筋症（ＤＣＭｉ）によって起こる、ターゲティング剤。
【請求項２】
方法が、Ｂリンパ球ターゲティング剤を、それを必要とする患者に投与する段階を含む、請求項１記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項３】
患者が、心臓組織がＢリンパ球を含有する患者である、請求項２記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項４】
Ｂリンパ球が、細胞間隙中に存在する、請求項３記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項５】
心不全が、心筋梗塞によって起こる心不全とは異なる、請求項１〜４のいずれか一項記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項６】
Ｂリンパ球を死滅させる能力があるか、またはＢリンパ球の死滅に有用な、請求項１〜５のいずれか一項記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項７】
Ｂリンパ球が抗原ＣＤ２０を担持する、請求項６記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項８】
ネイキッドなＢリンパ球ターゲティング剤である、請求項６〜７のいずれか一項記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項９】
Ｂリンパ球の死滅に有用なさらなる部分を含む、請求項６〜７のいずれか記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項１０】
さらなる部分が、放射性同位体、細胞傷害性薬物および免疫調節剤を含む群より選択される、請求項９記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項１１】
治療的に有用であるか、または治療効果を提供するためなどの量で投与される、請求項１〜１０のいずれか一項記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項１２】
抗体、アプタマー、シュピーゲルマー、抗原結合性ポリペプチドおよびアンチカリンを含む群より選択される、請求項１〜１１のいずれか一項記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項１３】
抗体である、請求項１〜１２のいずれか一項記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項１４】
抗体が、ポリクローナル抗体である、請求項１３記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項１５】
抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１３記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項１６】
抗体が、抗体フラグメントである、請求項１３〜１５のいずれか一項記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項１７】
抗体フラグメントが、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよびｓＦｖを含む群より選択されるものである、請求項１６記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項１８】
抗体が、類人猿抗体、マウスモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である、請求項１３〜１７のいずれか一項記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項１９】
抗体が、補体介在性細胞傷害作用および／または抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用を仲介する、請求項１３〜１８のいずれか一項記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項２０】
抗体が、抗ＣＤ２０抗体である、請求項１３〜１９のいずれか一項記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項２１】
抗体が、リツキシマブである、請求項２０記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項２２】
アプタマー、シュピーゲルマー、抗原結合性ポリペプチドおよびアンチカリンを含む群より選択される、請求項１〜１２のいずれか一項記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項２３】
Ｂリンパ球の死滅に有用なさらなる部分を含む、請求項２２記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項２４】
さらなる部分が、放射性同位体、細胞傷害性薬物および免疫調節剤を含む群より選択される、請求項２３記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項２５】
さらなる部分が、放射性同位体である、請求項２４記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項２６】
放射性同位体が、１９８Ａｕ、３２Ｐ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、６７Ｃｕ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉまたは２２５Ａｃを含む群より選択される、請求項２５記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【請求項２７】
請求項１〜２６のいずれか一項記載のＢリンパ球ターゲティング剤および薬学的に許容されうる担体を含む心不全の処置のための方法における使用のための薬学的組成物であって、心不全は炎症性拡張性心筋症（ＤＣＭｉ）によって起こる、薬学的組成物。
【請求項２８】
心不全を患う患者が、請求項１〜２６のいずれか一項記載のＢリンパ球ターゲティング剤を使用した心不全の処置に感受性であるかどうかを検出するin vitro方法であって、以下の段階：
ｂ）提供された患者の心臓組織試料を請求項１〜２６のいずれか一項記載のＢリンパ球ターゲティング剤と接触させること；および
ｃ）Ｂリンパ球が該試料中に含有されるかどうかを検出すること
を含む方法。
【請求項２９】
試料中に含有されるＢリンパ球がある場合に、患者が、請求項１〜２６のいずれか一項記載のＢリンパ球ターゲティング剤を使用して処置されうる、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
請求項１〜２６のいずれか一項記載のＢリンパ球ターゲティング剤が、ラベルを担持する、請求項２８または２９記載の方法。
【請求項３１】
請求項２８〜３０のいずれか記載の方法に使用するための、請求項１〜２６のいずれか記載のＢリンパ球ターゲティング剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、心不全の処置方法または診断方法に使用するためのＢリンパ球ターゲティング剤に関する。さらに本発明は、そのようなＢリンパ球ターゲティング剤を含む組成物、および心不全を患う患者が、その処置のためのＢリンパ球ターゲティング剤の使用に適するかどうかを判定する方法に関する。
【０００２】
心不全（cardiac insufficiencyまたはheart failure）は、心拍出量が身体の必要性を満たすには不十分な生理学的状態を特徴とする疾患である。
【０００３】
心不全のよくある原因には、心筋梗塞ならびに他の虚血性心疾患、高血圧、心臓弁膜症および心筋症の形態が含まれる。心筋症は、その中心血行動態および肉眼的病理学によって定義されている心筋疾患であり、五つの主要な形態、すなわち拡張型（ＤＣＭ）、肥大型（ＨＣＭ）、拘束型（ＲＣＭ）、右室（ＲＶＣＭ）および分類不能型心筋症（ＮＣＣＭ）に分類されている。炎症性心筋症（ＤＣＭｉ）は、心内膜心筋生検（ＥＭＢ）における心筋内炎症および／またはウイルス感染の証拠によって定義される、ＤＣＭの特定心筋症の一実体である。
【０００４】
心不全は、息切れ（典型的には横になったときの方が苦しく、起座呼吸と呼ばれる）、咳、くるぶし腫脹および運動能力減退などの多種多様な症状を引き起こすことがある。心不全は、広く一般に意見の一致を見た定義の欠如および確定診断の問題が原因で、多くの場合に、診断未確定とされる。処置は、通例、生活習慣の対策（食塩摂取の減量など）および投薬、ならびに時には装置またはさらには外科手術から成る。
【０００５】
心不全は、よく見られ、費用がかかり、身体に障害を引き起こし、そして致命的な状態である。先進国では、成人の約２％が心不全を患うが、年齢６５歳を超える者の間で、この割合は６〜１０％に増加する。心不全は、主に入院コストのせいで高い医療費を伴い、コストはイギリス国民保健サービスの総予算の２％に達し、米国では３５０億ドルよりも大きいと見積もられている。心不全は、身体的および精神的健康の著しい減退を伴い、生活の質の顕著な低下を招く。可逆的状態によって引き起こされた心不全を除いて、状態は、たいてい時間と共に悪化する。一部の患者は何年も生存するが、進行性疾患は全体で１０％の年間死亡率を伴う。
【０００６】
生活習慣療法とは別に、心不全を処置するための現行の薬理学的療法もある。
【０００７】
心不全の処置では、エビデンスと診療との間に、特に、死亡率上の利益を与えることが示されている、ＡＣＥ阻害剤およびβ−ブロッカーならびにアルドステロン拮抗剤の使用不足という著しいギャップがある。心不全の処置は、症状を軽減すること、正常血液量の状態（循環系における正常な体液レベル）を維持すること、および心不全の進行を遅らせて心血管リスクを低下させることにより予後を改善することを目的とする。使用される薬物には：利尿剤、血管拡張剤、陽イオン変力作用薬、ＡＣＥ阻害剤、βブロッカー、およびアルドステロン拮抗剤（例えばスピロノラクトン）が含まれる。陽イオン変力作用薬ミルリノンなどの、心機能を高めるいくつかの薬物は、死亡率の増加へと導くことから禁忌である。
【０００８】
したがって、本出願の基礎になる問題は、第一の局面では、心不全の処置に適した薬剤を提供することである。
【０００９】
第二の局面では、本発明の基礎になる問題は、第一の局面に従って提供される薬剤に基づく治療法に、どの種の患者が適するかを判定するためにふさわしい薬剤を提供することである。
【００１０】
本発明の基礎になる問題は、心不全の処置方法に使用するためのＢリンパ球ターゲティング剤によって解決される。
【００１１】
一態様では、Ｂリンパ球ターゲティング剤は、Ｂリンパ球によって発現される抗原またはＢリンパ球によって発現されるように誘導可能な抗原をターゲティングしている。
【００１２】
一態様では、Ｂリンパ球ターゲティング剤は、Ｂリンパ球によって発現される抗原またはＢリンパ球によって発現されるように誘導可能な抗原に結合性である。
【００１３】
一態様では、抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ２１を含む群より選択される。
【００１４】
一態様では、抗原はＣＤ２０である。
【００１５】
一態様では、方法は、Ｂリンパ球ターゲティング剤を、それを必要とする患者に投与する段階を含む。
【００１６】
一態様では、患者は、心臓組織がＢリンパ球を含有する患者である。
【００１７】
一態様では、Ｂリンパ球は、細胞間隙中に、好ましくは心筋細胞と心血管系の細胞との間の細胞間隙中に存在する。
【００１８】
一態様では、心不全は、心筋または心内膜の炎症によって起こる心不全、心筋または心内膜の変性によって起こる心不全、冠不全によって起こる心不全、心筋梗塞によって起こる心不全および損傷によって起こる心不全より選択されるものである。
【００１９】
一態様では、心不全は、心筋梗塞によって起こる心不全とは異なる。
【００２０】
一態様では、心不全は、心筋または心内膜の炎症によって起こる。
【００２１】
本発明の一態様では、該心不全は、心筋症、好ましくは炎症性心筋症（ＤＣＭｉ）によって起こる。
【００２２】
一態様では、Ｂリンパ球ターゲティング剤は、Ｂリンパ球を死滅させる能力があるか、またはＢリンパ球の死滅に有用である。
【００２３】
一態様では、Ｂリンパ球は、ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ２１を含む群より選択される少なくとも１種の抗原を担持し、好ましくはその抗原はＣＤ２０である。
【００２４】
一態様では、Ｂリンパ球ターゲティング剤は、ネイキッドなＢリンパ球ターゲティング剤である。
【００２５】
一態様では、Ｂリンパ球ターゲティング剤は、Ｂリンパ球の死滅に有用なさらなる部分を含む。
【００２６】
一態様では、さらなる部分は、放射性同位体、細胞傷害性薬物および免疫調節剤を含む群より選択される。
【００２７】
一態様では、Ｂリンパ球ターゲティング剤は、治療的に有効であるか、または治療効果を提供するためなどの量で投与される。
【００２８】
一態様では、Ｂリンパ球ターゲティング剤は、抗体、アプタマー、シュピーゲルマー（spiegelmer）、抗原結合性ポリペプチドおよびアンチカリン（anticaline）を含む群より選択される。
【００２９】
一態様では、Ｂリンパ球ターゲティング剤は、抗体である。
【００３０】
一態様では、抗体は、ポリクローナル抗体である。
【００３１】
一態様では、抗体は、モノクローナル抗体である。
【００３２】
一態様では、抗体は、抗体フラグメント、好ましくは、該当する抗体が結合するのと同じ抗原および／またはエピトープに結合する抗体フラグメントである。
【００３３】
一態様では、抗体フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよびｓＦｖを含む群より選択されるものである。
【００３４】
一態様では、抗体は、類人猿抗体、マウスモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。
【００３５】
一態様では、抗体は、補体介在性細胞傷害作用および／または抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用を仲介する。
【００３６】
一態様では、抗体は、抗ＣＤ２０抗体である。
【００３７】
一態様では、抗体は、リツキシマブである。
【００３８】
一態様では、Ｂリンパ球ターゲティング剤は、アプタマー、シュピーゲルマー、抗原結合性ポリペプチドおよびアンチカリンを含む群より選択される。
【００３９】
一態様では、Ｂリンパ球ターゲティング剤は、Ｂリンパ球の死滅に有用なさらなる部分を含む。
【００４０】
一態様では、さらなる部分は、放射性同位体、細胞傷害性薬物および免疫調節剤を含む群より選択される。
【００４１】
一態様では、さらなる部分は、放射性同位体である。
【００４２】
一態様では、放射性同位体は、１９８Ａｕ、３２Ｐ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、６７Ｃｕ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉまたは２２５Ａｃを含む群より選択される。
【００４３】
本発明の基礎になる問題は、また、上記と同義のＢリンパ球ターゲティング剤および薬学的に許容されうる担体を含む薬学的組成物によっても解決される。
【００４４】
一態様では、薬学的組成物は、心不全、好ましくは上記と同義の心不全の処置方法に使用するためのものである。
【００４５】
本発明の基礎になる問題は、また、心不全、好ましくは上記と同義の心不全を処置する医薬を製造するために上記と同義のＢリンパ球ターゲティング剤を使用することによっても解決される。
【００４６】
本発明の基礎になる問題は、また、心不全を患う患者が、上記と同義のＢリンパ球ターゲティング剤を使用した心不全の処置に感受性であるかどうかを判定するin vitro方法であって、以下の段階を含む方法によっても解決される：
ａ）患者の心臓組織試料を提供すること；
ｂ）その試料を上記と同義のＢリンパ球ターゲティング剤と接触させること；および
ｃ）Ｂリンパ球がその試料中に含まれるかどうかを判定すること。
【００４７】
一態様では、その試料中にＢリンパ球が含まれる場合、患者を、上記と同義のＢリンパ球ターゲティング剤を使用して処置することができる。
【００４８】
本発明の基礎になる問題は、また、心不全を患う患者が、上記と同義のＢリンパ球ターゲティング剤を使用した心不全の処置に感受性であるかどうかを判定する方法であって、以下の段階を含む方法によっても解決される：
ａ）その患者に上記と同義のＢリンパ球ターゲティング剤を投与すること；および
ｂ）上記と同義のＢリンパ球ターゲティング剤によってターゲティングされるＢリンパ球を可視化すること。
【００４９】
一態様では、Ｂリンパ球が心臓中に存在するかどうか、より好ましくはＢリンパ球が細胞間隙中に、好ましくは心筋細胞と心血管系の細胞との間の細胞間隙中に存在するかどうかが判定される。
【００５０】
一態様では、Ｂリンパ球が心臓中に存在する場合、より好ましくは細胞間隙中に、好ましくは心筋細胞と心血管系の細胞との間の細胞間隙中に存在する場合に、患者を、上記と同義のＢリンパ球ターゲティング剤を使用して処置することができる。
【００５１】
一態様では、上記と同義のＢリンパ球ターゲティング剤は、好ましくは試料、組織、器官または生物におけるＢリンパ球ターゲティング剤の検出を可能にするラベルを担持する。
【００５２】
一態様では、Ｂ細胞は、in vivoイメージングによって可視化される。
【００５３】
一態様では、in vivoイメージングは、磁気共鳴イメージング、ポジトロン放出型断層撮影、単光子放出型コンピュータ断層撮影および光学イメージングを含む群より選択される方法である。
【００５４】
本発明の基礎になる問題は、また、上記と同義の（in vitro）方法に使用するための、上記と同義のＢリンパ球ターゲティング剤によっても解決される。
【００５５】
本発明の基礎になる問題は、また、上記と同義の心不全を診断する方法に使用するための、上記と同義のＢリンパ球ターゲティング剤によっても解決される。
【００５６】
本発明の基礎になる問題は、また、好ましくは心不全を診断するための診断剤を製造するための、上記と同義のＢリンパ球ターゲティング剤の使用によっても解決される。
【００５７】
一態様では、心不全は、上記と同義のＢリンパ球ターゲティング剤を使用した処置に適するものである。
【００５８】
別の局面では、本発明は、上記と同義の心不全の処置方法であって、上記と同義のＢリンパ球ターゲティング剤を、それを必要とする患者に投与する段階を含む方法に関する。
【００５９】
本発明者らは、驚くことに、心不全を患う患者の心臓中にＢリンパ球が存在することを見出した。さらに具体的には、本発明者らは、Ｂリンパ球が細胞間隙中に、好ましくは心筋細胞と心血管系の細胞との間の細胞間隙中に存在することを見出した。この種のＢリンパ球は、１種または数種のＢリンパ球ターゲティング剤の使用によって、治療目的および／または診断目的の両方で扱うことができる。この診断アプローチおよび特に治療アプローチの実行可能性についての実験的エビデンスは、また、抗ＣＤ２０抗体のようなＢリンパ球ターゲティング剤を使用した腎疾患処置の成功からも得ることができる。心疾患の場合と同様に、そのような腎疾患は、Ｂリンパ球の存在によって特徴づけられる。
【００６０】
本明細書において好ましく使用されるように、Ｂリンパ球ターゲティング剤は、Ｂリンパ球の抗原をターゲティングする。本明細書において使用されるような、抗原をターゲティングすることは、好ましくは抗原と本発明によるＢリンパ球ターゲティング剤との間の相互作用を確立することを意味する。好ましくはそのような相互作用は、そのような相互作用が起こる試料、組織、器官または生物中に存在している条件などの生理学的条件下で安定である。相互作用の特に好ましい態様は、Ｂリンパ球ターゲティング剤への抗原の結合である。
【００６１】
本明細書において好ましく使用されるように、Ｂリンパ球は、任意のＢリンパ球または形質細胞などの任意の前駆細胞である。好ましい態様では、Ｂリンパ球は、抗原を発現しているか、またはそのような抗原を発現するように誘導することができる。Ｂリンパ球は、Ｂ細胞とも呼ばれる。
【００６２】
そのような抗原は、それがＢリンパ球によって発現されるかどうか、またはそのような抗原を発現するようにＢリンパ球を誘導することができるかどうかに関わらず、好ましくはＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ２１を含む群より選択される。さらに好ましくは、そのような抗原は、本発明の任意の局面においてＣＤ２０である。
【００６３】
ＣＤ２０分子（ヒトＢリンパ球拘束性分化抗原またはＢｐ３５とも呼ばれる）は、プレＢリンパ球および成熟Ｂリンパ球上に局在する約３５kDの分子量を有する疎水性膜貫通タンパク質である（Valentine、M.A., et al. J. Biol. Chem. 264(19) (1989) 11282-11287;およびEinfield, D.A., et al. EMBO J. 7(3) (1988) 711-717）。ＣＤ２０は、末梢血またはリンパ器官由来のＢ細胞の９０％超の表面上から見出され、初期プレＢ細胞の発生時に発現され、形質細胞に分化するまで残留する。ＣＤ２０は、正常Ｂ細胞上および悪性Ｂ細胞上の両方に存在する。特に、ＣＤ２０は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の９０％超に発現するが（Anderson, K.C., et al., Blood 63(6) (1984) 1424-1433）、造血幹細胞、プロＢ細胞、正常形質細胞、または他の正常組織上には見出されない（Tedder, T.F., et al., J, Immunol. 135 (2) (1985) 973- 979）。
【００６４】
ＣＤ２０タンパク質のカルボキシル末端領域の８５個のアミノ酸は、細胞質内に位置する。この領域の長さは、それぞれ３、３、２８、１５、および１６個のアミノ酸の比較的短い細胞質内領域を有するＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＧの重鎖または組織適合抗原クラスＩＩのα鎖もしくはβ鎖のような他のＢ細胞特異的表面構造の長さと対照的である（Komaromy, M., et al., NAR 11 (1983) 6775-6785）。最後の６１個のカルボキシル末端アミノ酸のうち、２１個が酸性基である一方で、２個だけが塩基性であり、これは、この領域が強い正味の負荷電を有することを示している。ヒトＣＤ２０のGenBankアクセッション番号は、ＮＰ＿６９０６０５である。ＣＤ２０は、Ｂ細胞の活性化過程および分化過程の初期段階の調節に関与する可能性があり（Tedder et al., Eur. J. Immunol. 25 Vol. 16 (1986) 881-887）、カルシウムイオンチャネルとして機能しうると考えられている（Tedder, T.F., et al., J. Cell. Biochem. 14D (1990) 195）。
【００６５】
ＣＤ１９は、濾胞樹状細胞およびＢ細胞上に発現される。実際にＣＤ１９は、認識可能になって間もないＢ系列細胞からＢ細胞芽球へと発生する間はＢ細胞上に存在するが、形質細胞に成熟すると失われる。それは、ＣＤ２１およびＣＤ８１と共に主としてＢ細胞補助レセプターとして作用する。活性化すると、ＣＤ１９の細胞質側尾部がリン酸化され、それがＳｒｃファミリーキナーゼによる結合およびＰＩ−３キナーゼの動員へと導く。ＣＤ１９は、Ｂ４とも呼ばれる。ヒトＣＤ１９の配列は、uniprotデータバンクからＰ１５３９１として、またはそのｍＲＮＡ配列についてはＮＭ＿００１７７０から、そしてそのアミノ酸配列についてはＮＰ＿００１７６１から得ることができる。
【００６６】
ＣＲ２またはＣ３ＤＲとも呼ばれるＣＤ２１は、補体系に関与するタンパク質である。それは、ｉＣ３ｂ（Ｃ３ｂの不活性誘導体）、Ｃ３ｄｇ、またはＣ３ｄに結合する。Ｂ細胞は、その表面にＣＤ２１レセプターを有し、補体系がＢ細胞の活性化および成熟に役割を果たせるようにする。成熟Ｂ細胞上のＣＤ２１は、他の２種類の膜タンパク質であるＣＤ１９およびＣＤ８１（＝ＴＡＰＡ−１）と複合体を形成する。ＣＤ２１−ＣＤ１９−ＣＤ８１複合体は、しばしばＢ細胞補助レセプター複合体と呼ばれるが、それは、膜ＩｇＭが抗原に結合するときに、ＣＤ２１が、付属したＣ３ｄ（またはｉＣ３ｂもしくはＣ３ｄｇ）を介して抗原に結合するからである。これは、抗原に対する応答を大きく増強したＢ細胞をもたらす。ヒトＣＤ２１の配列は、uniprotデータバンクからＰ２００２３として、またはそのｍＲＮＡ配列についてはＮＭ＿００１００６６５８から、そしてそのアミノ酸配列についてはＮＰ＿００１００６６５９から得ることができる。
【００６７】
原則として任意の形態の心不全を処置できることが当業者によって了承されている。しかしながら、好ましい態様では、Ｂリンパ球が関与する形態の心不全を処置することができる。好ましく了解され、本明細書において使用されるような関与は、そのようなＢリンパ球が因果関係を持ってか、または因果関係を持たず、心不全に関連する症状の発生または増悪へと導くかのいずれかで心不全と関連することを意味する。
【００６８】
また、好ましくはＢリンパ球の存在という必要条件が課される限り、原則としてそのような心不全が、その疾患の原因とは無関係に本発明に従って処置されうることも、了解されている。
【００６９】
Ｂリンパ球により、直接的または誘導時のいずれかに、発現された抗原に対処するために適した多様なクラスのＢ細胞ターゲティング剤を産生できることが了承されている。そのようなクラスのＢリンパ球ターゲティング剤は、抗体、アプタマー、シュピーゲルマー、抗原結合性ポリペプチドおよびアンチカリンを含む。
【００７０】
Ｂリンパ球の抗原、さらに具体的にはＣＤ２０、ＣＤ１９およびＣＤ２１に特異的な抗体の製造方法は、当業者に公知である。同じことがモノクローナル抗体に当てはまる。一般に、Kohler and Milstein, Nature 256 : 495 (1975); Coligan et al. (eds.), CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY（John Wiley & Sons 1991）を参照されたい。簡潔には、モノクローナル抗体は、例えばＮＣＡ−９０を含む組成物をマウスに注射すること、血清試料を取り出すことによって抗体産生の存在を検証すること、脾臓を取り出してＢリンパ球を得ること、Ｂリンパ球を骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを生成させること、そのハイブリドーマをクローニングすること、所望の抗体を生成する陽性クローンを選択すること、その抗原に対する抗体を生成するクローンを培養すること、およびそのハイブリドーマ培養物から抗体を単離することによって得ることができる。
【００７１】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養物から多様な周知の技法によって単離および精製することができる。そのような単離技法には、プロテインＡセファロースを用いたアフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、およびイオン交換クロマトグラフィーが含まれる。Coligan et al. (eds.), CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY (John Wiley & Sons 1991); Baines et al., pages 79-104, METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY（The Humana Press, Inc. 1992）を参照されたい。
【００７２】
類人猿抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体の産生方法は、当技術分野において等しく公知である。それに関連して、「キメラ抗体」は、好ましくはげっ歯類抗体由来の可変ドメインおよび相補性決定領域を有するが、その抗体分子の残りがヒト抗体由来であるリコンビナントタンパク質であり、「ヒト化抗体」は、好ましくは、モノクローナル抗体のマウス相補性決定領域が、マウス免疫グロブリンの可変重鎖および可変軽鎖からヒト可変ドメインに転移されたリコンビナントタンパク質である。
【００７３】
本明細書において好ましく使用されるように、「抗体フラグメント」は、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ）、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよびｓＦｖなどのような抗体の部分である。その構造に関係なく、抗体フラグメントは、完全なままの抗体によって認識されるのと同一の抗原と結合する。例えば、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体フラグメントは、ＣＤ２０のエピトープと結合する。
【００７４】
本明細書において好ましく使用されるように、「抗体フラグメント」という用語には、また、特異的抗原に結合して複合体を形成することによって抗体のように作用する、任意の合成タンパク質または遺伝子操作されたタンパク質も含まれる。例えば、抗体フラグメントには、軽鎖可変領域から成る単離されたフラグメント、重鎖および軽鎖の可変領域から成る「Ｆｖ」フラグメント、軽鎖および重鎖の可変領域がペプチドリンカーによって結合しているリコンビナント１本鎖ポリペプチド分子（「ｓＦｖタンパク質」）、および超可変領域を模倣するアミノ酸残基から成る最小限の認識ユニットが含まれる。
【００７５】
「ネイキッドな抗体」は、治療剤または診断剤にコンジュゲーションしていない、抗体全体または抗体フラグメントのいずれかである。ネイキッドな抗体には、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方、ならびにキメラ抗体およびヒト化抗体などのある種のリコンビナント抗体が含まれる。
【００７６】
アプタマーは、１本鎖または２本鎖のいずれかのＤ−核酸であって、本明細書に記載されたようなＢリンパ球の抗原などのターゲット分子と特異的に相互作用するＤ−核酸である。アプタマーの製造または選択は、例えば欧州特許EP 0 533 838 B1に記載されている。基本的に以下の段階が実現される。第一に、各核酸が典型的にはいくつかの、好ましくは少なくとも８個の連続するランダムなヌクレオチドのセグメントを含む、核酸の混合物、すなわち潜在的アプタマーが提供される。続いてこの混合物をターゲット分子と接触させるが、それによって核酸が、候補混合物と比較して、ターゲットに対する親和性が増大していること基づいて、またはより大きな力をターゲットに及ぼすなどして、ターゲット分子に結合する。続いて結合性核酸を、混合物の残りから分離する。場合によっては、そのように得られた核酸を、例えばポリメラーゼ連鎖反応を用いて増幅させる。これらの段階を数回繰り返して、ターゲットに特異的に結合する核酸の比が増大した混合物が生じさせて、次に場合によりそこから最終的な結合性核酸を選択してもよい。これらの特異的結合性核酸が、アプタマーと呼ばれる。アプタマーを産生または同定する方法の任意の段階で、個別の核酸の混合物の試料を採取し、標準的な技法を使用してその配列を決定してもよいことは明らかである。例えばアプタマーを産生させる分野の技術者に公知の、所定の化学基を導入することによってアプタマーを安定化できることは、本発明の範囲内である。そのような改変は、例えばヌクレオチドの糖部分の２’位にアミノ基を導入することであってもよい。アプタマーは、現在、治療剤として使用されている。しかしながら、そのように選択または産生されたアプタマーを診断目的に使用できることも、本発明の範囲内である。
【００７７】
本明細書に記載されるようなＢリンパ球の抗原を使用した、本発明に従って使用または産生することのできるシュピーゲルマーの産生または製造も、類似の原理に基づく。シュピーゲルマーの製造は、国際特許出願WO 98/08856 A2に記載されている。シュピーゲルマーはＬ−核酸であって、そのことは、アプタマーのようにＤ−ヌクレオチドから構成されるアプタマーと違って、それらがＬ−ヌクレオチドから構成されることを意味する。シュピーゲルマーは、生体系において非常に高い安定性を有し、アプタマーと同様にそれらが向けられたターゲット分子と特異的に相互作用するという事実によって特徴づけられる。シュピーゲルマーを産生させるために、Ｄ−核酸の異種集団が生み出され、この集団をターゲット分子の光学的対掌体と、この場合は例えば本明細書に記載されたようなＢリンパ球の抗原の天然Ｌ−鏡像体のＤ−鏡像体と接触させる。続いて、ターゲット分子の光学的対掌体と相互作用しないＤ−核酸を分離する。しかしながら、ターゲット分子の光学的対掌体と相互作用するＤ−核酸を分離し、場合により決定および／または配列決定し、続いて対応するＬ−核酸を、そのＤ−核酸から得られた核酸配列情報に基づき合成する。ターゲット分子の光学的対掌体と相互作用する上記Ｄ−核酸と配列が同一なこれらのＬ−核酸は、天然ターゲット分子の光学的対掌体よりはむしろ、その天然ターゲット分子と特異的に相互作用する。アプタマーの産生方法に類似して、様々な段階を数回繰り返すことによって、ターゲット分子の光学的対掌体と特異的に相互作用する核酸を濃縮化することも可能である。
【００７８】
好ましくは、アプタマーおよびシュピーゲルマーの両方は、それぞれアプタマーおよびシュピーゲルマーとターゲット分子との間のワトソン−クリック塩基対形成を介する代わりに、それらが取る三次元構造によってそれらのターゲット分子に結合することを了承されたい。
【００７９】
本明細書に記載されたようなＢリンパ球の抗原を用いて産生されうる、さらなるクラスの医薬および診断剤は、その抗原に結合するペプチドである。そのようなペプチドは、ファージディスプレイ法のような現況技術による方法を使用することによって、産生することができる。基本的に、例えばファージ形態などのペプチドライブラリーを産生し、この種のライブラリーを、ターゲット分子と、今回は例えば本明細書に記載されたようなＢリンパ球の抗原と接触させる。続いてターゲット分子に結合するペプチドを、それぞれの反応物から、好ましくはターゲット分子との複合体として取り出す。結合特性が、塩濃度などの、特に実現された実験設定に少なくともある程度依存することは、当業者に公知である。より高い親和性またはより大きな力でターゲット分子に結合するペプチドをライブラリーの非結合性メンバーから分離した後に、そしてまた場合によりターゲット分子とペプチドとの複合体からターゲット分子を除去した後に、続いてそれぞれのペプチドを特徴づけることができる。場合により特徴づけの前に、例えばペプチドをコードするファージを増殖させることによって増幅段階を実現する。特徴づけは、好ましくはターゲット結合性ペプチドの配列決定を含む。基本的に、ペプチドはその長さに限定されないが、好ましくは約８〜２０個のアミノ酸長を有するペプチドが、好ましくはそれぞれの方法で得られる。ライブラリーのサイズは、約１０２〜１０１８、好ましくは１０８〜１０１５種の異なるペプチドでありうるが、それに限定されない。
【００８０】
特定の形態のターゲット結合性ポリペプチドは、いわゆる「アンチカリン」であって、それは、とりわけドイツ特許出願DE 197 42 706 A1に記載されている。
【００８１】
治療剤として使用される場合、本発明によるＢリンパ球ターゲティング剤は、治療的に有効であるか、または薬学的に関連する効果を達成するためなどの量で投与されることが、当業者によって了解されている。Ｂリンパ球ターゲティング剤は、ターゲティングされたＢリンパ球、好ましくは本明細書にさらに詳細に記載されるような、心臓組織に存在するＢリンパ球を死滅させることが意図されることは、当業者によってさらに了解されている。
【００８２】
本明細書において好ましく使用されるように、「Ｂリンパ球の死滅」という用語は、本発明の様々な態様において以下の一つまたは数個の意味を有しうる：Ｂリンパ球の成長を停止させること、アポトーシス他などの生物学的過程を経由してＢリンパ球の自己破壊を誘導すること、またはＢリンパ球の溶解を直接的もしくは間接的のいずれかで仲介すること。
【００８３】
本明細書に記載されたような任意のＢリンパ球ターゲティング剤の使用によってＢリンパ球に対処することができ、Ｂリンパ球のそのような死滅を引き起こすかまたは仲介する、任意のペイロードを該Ｂリンパ球に送達するためにＢリンパ球ターゲティング剤を使用することができることが了解されている。そのようなペイロードは、当業者に公知のような放射性ラベル、細胞傷害性薬物または任意の適切な免疫調節剤でありうる。そのようなペイロードをＢリンパ球ターゲティング剤に直接的または間接的のいずれかで結合させる方法は、当業者に公知である。
【００８４】
Ｂリンパ球ターゲティング剤が、抗体、さらに具体的にはモノクローナル抗体である場合、細胞死は、補体介在性細胞傷害作用および／または抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用によって仲介されうる。本明細書に記載された任意のＢリンパ球抗原に特異的に結合するこの種の抗体をスクリーニングすることは、当業者の技術の範囲内である。
【００８５】
好ましいＢリンパ球ターゲティング剤は、補体介在性細胞傷害作用および／または抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用を示す抗ＣＤ２０抗体である。従来技術において、この種のＢリンパ球ターゲティング剤の様々な種類が、記載されており、特に好ましいものは、RituxanまたはMabTheraの商品名で市販されているリツキシマブである。
【００８６】
「リツキシマブ」抗体は、一般に、ヒトＣＤ２０抗体に対する、操作されたヒトγ１マウス定常ドメイン含有キメラ化モノクローナル抗体である。このキメラ抗体は、ヒトγ１定常ドメインを有し、１９９８年４月１７日に発行され、IDEC Pharmaceuticals Corporationに譲渡された米国特許第５，７３６，１３７号（Andersen, et. al.）において「Ｃ２Ｂ８」の名で識別される。リツキシマブは、再発または抗療性の低悪性度または濾胞性のＣＤ２０陽性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の患者を処置するために認可されている。in vitro作用機序の研究から、リツキシマブがヒト補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を表すことが示された（Reiff, M.E., et. al, Blood 83(2) 435- 445 (1994)）。追加的に、リツキシマブは、抗体依存性細胞性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を測定するアッセイにおいて著しい活性を示す。
【００８７】
本発明によるＢリンパ球ターゲティング剤の投与方式に関して、それらがこの種の薬剤を投与するために当技術分野で通常に使用される範囲内であり、最適薬用量を日常の実験によって決定できることは、当業者によって了承されている。
【００８８】
本明細書に記載されたようなＢリンパ球ターゲティング剤は、また、その様々な形態の、さらに具体的にはＢリンパ球が本明細書に概略されたように関与する形態の心機能不全の診断にも適することも了承されている。それらを治療応用する場合に類似して、Ｂリンパ球ターゲティング剤は、そのＢリンパ球ターゲティング剤によってターゲティングされるＢリンパ球の検出を可能にするように、直接的または間接的のいずれかでラベルしなければならない。
【００８９】
同様に、本明細書に開示されたような、本明細書に記載されたＢリンパ球ターゲティング剤は、心不全を患うか、または患うリスクのある患者の群を層別化するために、そして該群が本発明に従ってＢリンパ球ターゲティング剤の投与によって処置できるかどうか、もしそうならば該群のどのメンバーを処置できるかを判定するために適する。
【００９０】
in vivoイメージング方法は、当業者に公知であり、例えば欧州特許出願EP 01114110.8に記載されている。
【００９１】
本明細書に使用されるような「駆出分画（ＥＦ）」という用語は、心拍の度に心室からポンプ輸送される血液の分画である。健康な個体は、典型的には５０％と６５％との間の駆出分画を有し、ここで、正常値は駆出分画を計算するために使用される様式にも依存する。心筋梗塞の間または心筋症において持続する損傷のような、心臓の筋肉（心筋）への損傷は、心臓が血液を駆出する能力に障害を与え、従って駆出分画を減少させる。
【００９２】
「左心室拡張終末期径（ＬＶＥＤＤ）」という用語は、拡張期における中隔および後壁厚を含めた左心室断面の直径を意味する。
【００９３】
ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）心機能分類は、心不全の程度を分類する簡便法を提供している。それは、身体活動時に患者がどれほど大きく制限されるかに基づいて、患者を４種類（クラスＩ〜ＩＶ）の一つに位置付ける。制限／症状は、正常な呼吸および様々な程度の息切れおよび／またはアンギナ痛に関する（クラスＩ：通常の身体活動に症状なく、制限もなし、例えば歩行、階段を昇るときなどに息切れ／クラスＩＶ：重大な制限；安静時にも症状；主として寝たきりの患者）。
【００９４】
脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）は、心筋細胞（cardiomyocytes）の過剰伸展に応答して心室によって分泌される３２個のアミノ酸のポリペプチドである。ＢＮＰは、生物学的に不活性な７６個のアミノ酸のＮ−末端フラグメント（ＮＴ ｐｒｏＢＮＰ）と一緒に共分泌される。ＢＮＰおよびＮＴ ｐｒｏＢＮＰの両方が、心不全の診断のために使用される。それらの血漿濃度は、典型的には左心室機能不全を有する患者で増加している。
【００９５】
以下の図を参照する。
【図面の簡単な説明】
【００９６】
【図１】ＣＤ２０抗体（倍率２００×）で染色された、ＤＣＭｉ患者の心内膜心筋生検標本を示す図である。
【図２】＞５０％または＜５０％の駆出分画（ＥＦ）を有する、ＤＣＭｉを患う患者の心内膜心筋生検における１mm2あたりのＣＤ２０陽性細胞数をＤＣＭｉを有さない患者（対照）と比較して示す図である。
【図３】心エコー法によって測定したときの、ＤＣＭｉの７３歳女性患者の２回投与のRituxan（リツキシマブ）処置に対する左心室駆出分画（ＬＶＥＦ、Ａ欄）および左室拡張終末期径（ＬＶＥＤＤ、Ｂ欄）の変化を示す図である。
【図４】ＤＣＭｉの７３歳女性患者の、２回投与のRituxan（リツキシマブ）処置に対するＮＴ ｐｒｏＢＮＰレベル（Ａ欄）および６分間歩行試験の成績（Ｂ欄）の変化を示す図である。
【図５】標準／対照としてホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）を用いた定量ＲＴ−ＰＣＲによって示したときの、ベースラインおよびRituxan処置後（「フォローアップ」）の心内膜心筋生検におけるサイトカインＴＮＦ−α、ＩＬ−４、ＩＬ−１０およびインターフェロンβのｍＲＮＡ発現プロファイルを示す図である。
【００９７】
これから、本発明のさらなる特徴、態様および利点が採用されうる以下の三つの実施例により本発明をさらに例示する。
【００９８】
実施例１：心不全を患う患者におけるＢリンパ球の検出
心内膜心筋生検を、ＲＶ中隔から採取し、液体窒素中で凍結させ、−８０℃で保存した。標本をTissue Tec（登録商標）（SLEE, Mainz, Germany）中に包埋し、直ちに液体窒素中で冷却したメチルブタン中で急速凍結させた。包埋した標本を連続的に切断して厚さ５μmの凍結切片とし、１０％ポリ−Ｌ−リシンで予備コーティングしたスライド上に載せた。冷アセトン中で１０分間固定し、続いて風乾した後に、リン酸緩衝生理食塩水中０．３％ Ｈ２Ｏ２で凍結切片を２０分間インキュベーションすることによって、内因性ペルオキシダーゼ活性を消失させた。
【００９９】
免疫組織染色のために、加湿チャンバー中でマウスＣＤ２０モノクローナル抗体クローン８Ｊ６６２（Fa. Biomol, Hamburg, Germany）を４５分間使用した。加湿チャンバー中で二次抗体としてEnVision（商標）ペルオキシダーゼコンジュゲーション型ウサギ抗マウス抗体（DakoCytomation, Hamburg, Germany）を３０分間使用した。３−アミノ−９−エチルカルバゾール（Merck, Darmstadt, Germany）を使用して免疫組織染色を可視化した。スライドにKaiser gelatin（登録商標）（Merck, Darmstadt, Germany）をマウントした。
【０１００】
処理された切片の視覚分析時に、ＣＤ２０陽性細胞の浸潤を観察することができた（図１参照、ＣＤ２０陽性細胞を黒矢印により示す）。そのような細胞浸潤は、細胞巣を形成しており、その細胞巣は、心筋細胞と心血管系の細胞との間の細胞間隙中に局在した。
【０１０１】
図２に示すように、５０％を超えるまたは下回る駆出分画を有する炎症性拡張性心筋症（ＤＣＭｉ）を患う患者におけるＣＤ２０陽性細胞数は、対照標本に比べて有意に増加していた。
【０１０２】
実施例２：炎症性拡張性心筋症（ＤＣＭｉ）を患う男性患者の処置
ＤＣＭｉ（末期ＤＣＭ、重症ＤＣＭｉ；軽度心炎症、心臓でのウイルス残存なし、心生検種（cardiac biopsy species）においてＣＤ２０陽性、ＮＹＨＡ ＩＩＩ、ＥＦ ２０％；ＬＶＥＤＤ ７１mm）が原因の心不全の病歴を３年間もつ７６歳男性を、Rituxanで、製造業者によって推奨される投薬方式を用いて処置した。Rituxanの最初の単回投与の２４時間後にすでに症状およびＬＶ機能が改善し（ＥＦ ２９％）、プロトコールに従って２回目のRituxan投与後に安定を維持した。負荷心エコー検査によると、Rituxan適用前に行った検査に比べてＬＶ機能予備力の追加的な増加が明らかとなった。
【０１０３】
実施例３：炎症性拡張性心筋症（ＤＣＭｉ）を患う女性患者の処置
患者は、心不全薬物療法および両室ＩＣＤ刺激に関わらず持続し続けた、重症拡張性心筋症（ＥＦ ２４％）が原因の心不全症状（ＮＹＨＡクラスＩＩＩ）の５年の病歴をもつ７３歳女性である。
【０１０４】
この女性患者を、心不全薬物療法および３７５mg/m2体表面積のRituxan(リツキシマブ)の２回セッションで処置した。
【０１０５】
心エコー図から、左室駆出分画（ＬＶＥＦ）がRituxanの初回投与後に有意に増加し、Rituxanの２回目投与後にさらに増加したことが明らかとなった（図３Ａ）。同時に、左室拡張終末期径（ＬＶＥＤＤ）は減少した（図３Ｂ）。個別の測定値を表１に示す。
【０１０６】
ＢＮＰレベルは、Rituxan処置後にかなり低下した（図４Ａ）。
【０１０７】
Rituxan処置は、また、６分以内に歩行した距離を評価する６分間歩行試験における患者の成績も向上させた（図４Ｂ）。
【０１０８】
続く心内膜心筋生検から、Rituxanを使用した処置が原因でＢリンパ球の部分枯渇（データは示さず）、ならびにインターフェロンβなどの抗ウイルス効力を有するサイトカインのｍＲＮＡ発現増加を伴う、ＴＮＦ−α、ＩＬ−４およびＩＬ−１０などの炎症性サイトカインのｍＲＮＡ発現の減少が明らかとなった（図５参照）。
【０１０９】
【表１】
0005863115.tif 000002
【０１１０】
表１：Rituxanで処置後の、ＤＣＭｉを患う７３歳女性のＬＶＥＦ／ＥＦおよびＬＶＥＤＤの個別の測定値（および結果としてのＮＹＨＡクラス）
【０１１１】
明細書、特許請求の範囲および／または図面に開示された本発明の特徴は、個別におよびその任意の組み合わせの両方で、本発明をその様々な形態で実現するための材料となりうる。
【図１】
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【図２】
0005863115.tif 000004
【図３】
0005863115.tif 000005
【図４】
0005863115.tif 000006
【図５】
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