(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧＨＳ受容体のリガンドとして作用する、Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２であるペプチド、又は医薬的に受容可能なその塩を含んでなる透明な溶液、ゲル又は半固体、或いは懸濁液の医薬組成物であって、ここにおいて、前記ペプチドは、患者への皮下又は筋肉内投与後、ｉｎ  ｓｉｔｕのデポーを形成し、前記医薬組成物は更にＰＥＧを含んでなり、前記ペプチドはＰＥＧ２００又はＰＥＧ４００の水溶液中に溶解され、前記ペプチドはパモ酸塩の形態である、前記医薬組成物。
【請求項２】
前記ペプチドが、ＰＥＧ２００又はＰＥＧ４００の水溶液中に溶解され、ここにおいて、ＰＥＧと水の容積対容積比が１：９ないし１：１である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記ペプチドの重量対容量濃度が、０．１ｍｇ／ｍＬないし２０００ｍｇ／ｍＬの間である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記組成物のｐＨが、３．０ないし８．０の間である、請求項１ないし請求項３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２のパモ酸塩が、ＰＥＧ４００／水溶液中に溶解され、ここにおいて、ＰＥＧ４００と水の容量対容量比が１：１であり、そしてここにおいて、前記ペプチドの重量対容量濃度が２００ｍｇ／ｍＬである、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２のパモ酸塩が、ＰＥＧ２００／水溶液中に溶解され、ここにおいて、ＰＥＧ２００と水の容量対容量比が１：１であり、そしてここにおいて、前記ペプチドの重量対容量濃度が２００ｍｇ／ｍＬである、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２のパモ酸塩が、ＰＥＧ４００／ＰＢＳ溶液中に溶解され、ここにおいて、ＰＥＧ４００とＰＢＳの容量対容量比が１：１であり、そしてここにおいて、前記ペプチドの重量対容量濃度が３００ｍｇ／ｍＬである、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２のパモ酸塩が、ＰＥＧ４００生理食塩水溶液中に溶解され、ここにおいて、ＰＥＧ４００と生理食塩水の容量対容量比が１：１であり、そしてここにおいて、前記ペプチドの重量対容量濃度が３００ｍｇ／ｍＬである、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項９】
更に保存剤を含んでなる、請求項１ないし請求項８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記保存剤が、ｍ−クレゾール、フェノール、ベンジルアルコール、及びメチルパラベンからなる群から選択される、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記保存剤が、０．０１ｍｇ／ｍＬないし１００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
更に等張剤を含んでなる、請求項１ないし請求項１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記等張剤が、０．０１ｍｇ／ｍＬないし１００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
更に安定剤を含んでなる、請求項１ないし請求項１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記安定剤が、イミダゾール、アルギニン及びヒスチジンからなる群から選択される、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
更に界面活性剤剤を含んでなる、請求項１ないし請求項１５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
更にキレート化剤を含んでなる、請求項１ないし請求項１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
更に緩衝剤を含んでなる、請求項１ないし請求項１７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記緩衝剤が、Ｔｒｉｓ、酢酸アンモニウム、酢酸ナトリウム、グリシン、アスパラギン酸、及びＢｉｓ−Ｔｒｉｓからなる群から選択される、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
更に二価金属を含んでなる、請求項１ないし請求項１９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記二価金属が、亜鉛である、請求項２０に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、成長ホルモン分泌促進物質（ＧＨＳ）受容体のリガンド、又は医薬的に受容可能なその塩であるペプチドを含有する組成物の改良、このような組成物を調製するための方法、及び哺乳動物を治療するためのこのような組成物の使用の方法に関する。特に、本発明は、ＧＨＳ受容体のリガンドであるＨ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２のパモ酸塩を含んでなる医薬組成物に関し、そしてここにおいて、患者への皮下又は筋肉内投与後、ペプチドは、生理学的ｐＨにおいてｉｎ  ｓｉｔｕのデポーを形成し、これは、ゆっくりと溶解し、そして体液及び血流に放出される。本発明は、更にジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）又は１０００より低い平均分子量を持つポリエチレングリコールのような有機成分を含んでなることができる。
【背景技術】
【０００２】
下垂体の成長ホルモン産生細胞からの成長ホルモンの拍動性の放出は、二つの視床下部ニューロペプチド：成長ホルモン放出ホルモン及び成長ホルモン産生細胞によって調節される。成長ホルモン放出ホルモンは、成長ホルモンの放出を刺激し、一方、成長ホルモン産生細胞は、成長ホルモンの分泌を阻害する（Ｆｒｏｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．１９８６，７，２２３−２５３，及びＳｔｒｏｂｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．１９９４，４６，１−３４）。
【０００３】
下垂体成長ホルモン産生細胞からの成長ホルモンの放出は、更に成長ホルモン放出ペプチド（ＧＨＲＰ）によっても制御される。ヘキサペプチド、Ｈｉｓ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−アミド（ＧＨＲＰ−６）は、ヒトを含む幾つかの種において用量依存性の様式で成長ホルモン産生細胞から成長ホルモンを放出することが見いだされた（Ｂｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １９８４，１１４，１５３７−１５４５）。ＧＨＲＰ−６に対するその後の化学的研究は、ＧＨＲＰ−Ｉ、ＧＨＲＰ−２及びヘキサレリン（ｈｅｘａｒｅｌｉｎ）のような他の強力な成長ホルモン分泌促進物質の確認に導いた（Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １９８９，１２４，２７９１−２７９８，Ｂｏｗｅｒｓ，Ｃ．Ｙ．Ｎｏｖｅｌ  ＧＨ−Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ｉｎ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｅｄ：Ｍｅｌｍｅｄ，Ｓ．；Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ  １９９３，１５３−１５７，及びＤｅｇｈｅｎｇｈｉ  ｅｔ  ａｌ．．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．１９９４，５４，１３２１−１３２８）：
ＧＨＲＰ−Ｉ  Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｄ−（２’）−Ｎａｌ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；  
ＧＨＲＰ−２  Ｄ−Ａｌａ−Ｄ−（２’）−Ｎａｌ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｎａｌ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
ヘキサレリン  Ｈｉｓ−Ｄ−２−ＭｅＴｒｐ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２。
【０００４】
ＧＨＲＰ−Ｉ、ＧＨＲＰ−２、ＧＨＲＰ−６、及びヘキサレリンは、合成の成長ホルモン分泌促進物質（ＧＨＳ）である。ＧＨＳは、成長ホルモン放出ホルモンのそれとは異なった機構によって成長ホルモンの分泌を刺激する（Ｂｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １９８４，１１４，１５３７−１５４５，Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １９８９，１２４，２７９１−２７９８，Ｂｏｗｅｒｓ，Ｃ．Ｙ．Ｎｏｖｅｌ  ＧＨ−Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ｉｎ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｅｄ：Ｍｅｌｍｅｄ，Ｓ．；Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ  １９９３，１５３−１５７，及びＤｅｇｈｅｎｇｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．１９９４，５４，１３２１−１３２８）。
【０００５】
ペプチジル成長ホルモン分泌促進物質の低い経口生体利用率（＜１％）は、下垂体におけるＧＨＲＰ−６の作用を模倣する非ペプチド化合物に対する探求を刺激した。幾つかのベンゾラクタム及びスピロインダンは、各種の動物種及びヒトにおける成長ホルモンの放出を刺激することが報告されている（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９３，２６０，１６４０−１６４３，Ｐａｔｃｈｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．１９９５，９２，７００１−７００５，及びＣｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｏｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１９９６，６，２１６３−２１６９）。小さいスピロインダンの具体的な例は、ＭＫ−０６７７：
【０００６】
【化１】
0005977225.tif 000002
【０００７】
である（Ｐａｔｃｈｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．１９９５，９２，７００１−７００５）。
上述のＧＨＳ（ペプチド及び非ぺプチドの両方）の作用は、特異的成長ホルモン分泌促進物質受容体（ＧＨＳ受容体）によって仲介されるように見受けられる（Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９６，２７３，９７４−９７７，及びＰｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １９９６，１０，５７−６１）。この受容体は、各種の哺乳動物種の下垂体及び視床下部に存在し（ＧＨＳＲ１ａ）、そして成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）受容体と別個である。ＧＨＳ受容体は、更に中枢神経系の他の部位及び末梢組織、例えば副腎及び甲状腺、心臓、肺、腎臓並びに骨格筋において検出された（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１９９６，６，２１６３−２１６９，Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９６，２７３，９７４−９７７，Ｐｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １９９６，１０，５７−６１，Ｇｕａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１９９７，４８，２３−２９，及びＭｃＫｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １９９７，４６，４２６−４３４）。ＧＨＳＲ１ａのトランケートされた型が報告されている（Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９６，２７３，９７４−９７７）。
【０００８】
ＧＨＳ受容体は、Ｇタンパク質共役型受容体である。ＧＨＳ受容体活性化の影響は、カリウムチャンネルの脱分極化及び阻害、イノシトール三リン酸（ＩＰ３）の細胞内濃度の増加、及び細胞内カルシウムの濃度の過渡的増加を含む（Ｐｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １９９６，１０，５７−６１，Ｇｕａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１９９７，４８，２３−２９，及びＭｃＫｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １９９７，４６，４２６−４３４）。
【０００９】
グレリンは、天然に存在するペプチドであり、これは、ＧＨＳ受容体に対する内在性リガンドであると信じられる（Ｋｏｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  １９９９，４０２，６５６−６６０）。幾つかの哺乳動物及び非哺乳動物種の動物からのグレリンの天然の構造は、既知である（Ｋａｉｙａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００１，２７６，４０４４１−４０４４８；国際特許出願ＰＣＴ／ＪＰ００／０４９０７  （ＷＯ０１／０７４７５））。グレリン中に存在する核の領域は、ＧＨＳ受容体における活性を提供することが見いだされた。核領域は、四つのＮ−末端アミノ酸を含んでなり、ここで、３位のセリンは、通常ｎ−オクタン酸で修飾されている。ｎ−オクタン酸によるアシル化に加えて、天然のグレリンは、更にｎ−デカン酸でアシル化されることが観察されている（Ｋａｉｙａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００１，２７６，４０４４１−４０４４８）。グレリン類似体は、各種の異なった治療的使用、並びに研究の手段としての使用を有する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際特許出願ＰＣＴ／ＪＰ００／０４９０７（ＷＯ０１／０７４７５）。
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｆｒｏｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．１９８６，７，２２３−２５３；
【非特許文献２】Ｓｔｒｏｂｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．１９９４，４６，１−３４；
【非特許文献３】Ｂｏｗｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １９８４，１１４，１５３７−１５４５；
【非特許文献４】Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １９８９，１２４，２７９１−２７９８；
【非特許文献５】Ｂｏｗｅｒｓ，Ｃ．Ｙ．Ｎｏｖｅｌ  ＧＨ−Ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ｉｎ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｅｄ：Ｍｅｌｍｅｄ，Ｓ．；Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｉｎｃ．，Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ  １９９３，１５３−１５７；
【非特許文献６】Ｄｅｇｈｅｎｇｈｉ  ｅｔ  ａｌ．．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．１９９４，５４，１３２１−１３２８；
【非特許文献７】Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９３，２６０，１６４０−１６４３；
【非特許文献８】Ｐａｔｃｈｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．１９９５，９２，７００１−７００５；
【非特許文献９】Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｏｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１９９６，６，２１６３−２１６９；
【非特許文献１０】Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９６，２７３，９７４−９７７；
【非特許文献１１】Ｐｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １９９６，１０，５７−６１
【非特許文献１２】Ｇｕａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１９９７，４８，２３−２９；
【非特許文献１３】ＭｃＫｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １９９７，４６，４２６−４３４；
【非特許文献１４】Ｋｏｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  １９９９，４０２，６５６−６６０；
【非特許文献１５】Ｋａｉｙａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００１，２７６，４０４４１−４０４４８。
【発明の概要】
【００１２】
本発明は、ＧＨＳ受容体のリガンドとして作用するペプチドのパモ酸塩を含んでなる医薬組成物の製剤を提供する。特に好ましいものは、ＧＨＳ受容体のリガンドである、本明細書中で以下“実施例１”と呼ばれる次のペプチド：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２であり、ここにおいて、このペプチドは、患者への皮下又は筋肉内投与後、生理学的ｐＨにおいて沈殿物を形成し、これはゆっくりと溶解し、そして体液及び血流中に放出され、これによって減衰された副作用及び改良された効力をもたらす。
【００１３】
本発明は、以下の次の段落、並びに特許請求の範囲中に要約することができる。
（１）一つの側面において、本発明は、ＧＨＳ受容体のリガンドとして作用するペプチド、又は医薬的に受容可能なその塩を含んでなる透明な溶液、ゲル又は半固体、或いは懸濁液の医薬組成物に関し、ここにおいて、このペプチドは、患者への皮下又は筋肉内投与後沈殿物を形成する。
【００１４】
（２）前記透明な溶液中の前記ペプチドが、ｉｎ  ｖｉｖｏで沈殿して、ｉｎ  ｓｉｔｕのデポーを形成し、これはゆっくりと溶解し、そして体液及び血流中に放出され、そしてここにおいて、前記透明な溶液は、純粋に水溶液、純粋に有機溶液、又は有機成分を有する水溶液である、段落１による医薬組成物。
【００１５】
（３）前記ペプチドが、実施例１、即ちＨ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２である、段落１又は段落２による医薬組成物。
（４）前記ペプチドが、パモ酸塩の形態である、先行する段落のいずれか一つによる医薬組成物。
【００１６】
（５）更に、水溶液中の前記ペプチドの溶解性を増加する或いはゲル又は半固体の粘度を減少する有機成分を含んでなる、先行する段落のいずれか一つによる医薬組成物。
（６）前記有機成分が、有機ポリマー、アルコール、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、又はＤＭＡである、段落５による医薬組成物。
【００１７】
（７）前記有機ポリマーが、ＰＥＧである、段落６による医薬組成物。
（８）前記ＰＥＧが、約２００ないし約１０，０００の平均分子量を有する、段落７による医薬組成物。
【００１８】
（９）前記ペプチドが、ＰＥＧ２００又はＰＥＧ４００の水溶液中に溶解され、ここにおいて、ＰＥＧと水の容積対容積比が、約１：９９ないし約９９：１である、段落８による医薬組成物。
【００１９】
（１０）前記ペプチドが、ＰＥＧ２００又はＰＥＧ４００の水溶液中に溶解され、ここにおいて、ＰＥＧと水の容積対容積比が、約１：９ないし約１：１である、段落９による医薬組成物。
【００２０】
（１１）前記アルコールが、エタノール又はイソプロピルアルコールである、段落６による医薬組成物。
（１２）前記ペプチドの重量対容量濃度が、約０．１ｍｇ／ｍＬないし約６００ｍｇ／ｍＬの間である、先行する段落のいずれか一つによる医薬組成物。
【００２１】
（１３）前記組成物のｐＨが、約３．０ないし約８．０の間である、先行する段落のいずれか一つによる医薬組成物。
（１４）前記Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２のパモ酸塩が、ＰＥＧ４００／水溶液中に溶解され、ここにおいて、ＰＥＧ４００と水の容量対容量比が約１：１であり、そしてここにおいて、前記ペプチドの重量対容量濃度が約２００ｍｇ／ｍＬである、段落１３による医薬組成物。
【００２２】
（１５）前記Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２のパモ酸塩が、ＰＥＧ２００／水溶液中に溶解され、ここにおいて、ＰＥＧ２００と水の容量対容量比が約１：１であり、そしてここにおいて、前記ペプチドの重量対容量濃度が約２００ｍｇ／ｍＬである、段落１３による医薬組成物。
【００２３】
（１６）前記Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２のパモ酸塩が、ＰＥＧ４００／ＰＢＳ溶液中に溶解され、ここにおいて、ＰＥＧ４００とＰＢＳの容量対容量比が約１：１であり、そしてここにおいて、前記ペプチドの重量対容量濃度が約３００ｍｇ／ｍＬである、段落１３による医薬組成物。
【００２４】
（１７）前記Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２のパモ酸塩が、ＰＥＧ４００／生理食塩水溶液中に溶解され、ここにおいて、ＰＥＧ４００と生理食塩水の容量対容量比が約１：１であり、そしてここにおいて、前記ペプチドの重量対容量濃度が約３００ｍｇ／ｍＬである、段落１３による医薬組成物。
【００２５】
（１８）更に保存剤を含んでなる、先行する段落のいずれか一つによる医薬組成物。
（１９）前記保存剤が、ｍ−クレゾール、フェノール、ベンジルアルコール、及びメチルパラベンからなる群から選択される、段落１８による医薬組成物。
【００２６】
（２０）前記保存剤が、約０．０１ｍｇ／ｍＬないし約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、段落１９による医薬組成物。
（２１）更に等張剤を含んでなる、先行する段落のいずれか一つによる医薬組成物。
【００２７】
（２２）前記等張剤が、約０．０１ｍｇ／ｍＬないし約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する段落２１による医薬組成物。
（２３）更に安定剤を含んでなる、先行する段落のいずれか一つによる医薬組成物。
【００２８】
（２４）前記安定剤が、イミダゾール、アルギニン及びヒスチジンからなる群から選択される、段落２３による医薬組成物。
（２５）更に界面活性剤剤を含んでなる、先行する段落のいずれか一つによる医薬組成物。
【００２９】
（２６）更にキレート化剤を含んでなる、先行する段落のいずれか一つによる医薬組成物。
（２７）更に緩衝剤を含んでなる、先行する段落のいずれか一つによる医薬組成物。
【００３０】
（２８）前記緩衝剤が、Ｔｒｉｓ、酢酸アンモニウム、酢酸ナトリウム、グリシン、アスパラギン酸、及びＢｉｓ−Ｔｒｉｓからなる群から選択される、段落２７による医薬組成物。
【００３１】
（２９）更に二価金属を含んでなる、先行する段落のいずれか一つによる医薬組成物。
（３０）前記二価金属が、亜鉛である、段落２３による医薬組成物。
本発明の好ましい態様は、ＧＨＳ受容体のリガンドである実施例１、即ちＨ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２に関するが、本発明は、実施例１に如何なる方法ででも制約されるものではない。本発明のペプチドは、例えば、その内容が本明細書中に参考文献としてその全てが援用される、ＷＯ２００４／０１４４１５として公開された本出願人自身の先行する国際特許出願公開中に開示されているとおりのＧＨＳ受容体のリガンドとして作用する全てのペプチドを含む。
【００３２】
これらの公開からの以下の化合物も、本発明の医薬組成物を構成するために好都合に使用することができる：
実施例２：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−３Ｐａｌ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例３：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−４Ｐａｌ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例４：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｏｒｎ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例５：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂｉｐ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例６：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例７：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｆｆ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例８：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−２Ｔｈｉ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例９：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｔａｚ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例１０：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｄｉｐ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例１１：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂｐａ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例１２：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｂｐａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例１３：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−３Ｐａｌ−ＮＨ２；
実施例１４：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−４Ｐａｌ−ＮＨ２；
実施例１５：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−３Ｐａｌ−ＮＨ２；
実施例１６：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂｉｐ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２；
実施例１７：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−ＮＨ２；
実施例１８：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｆｆ−ＮＨ２；
実施例１９：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−２Ｔｈｉ−ＮＨ２；
実施例２０：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｔａｚ−ＮＨ２；
実施例２１：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｄｉｐ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２；
実施例２２：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｄｉｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２；
実施例２３：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２；
実施例２４：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ２；
実施例２５：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−３Ｐａｌ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例２６：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−２Ｔｈｉ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例２７：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例２８：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−２Ｔｈｉ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例２９：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２；
実施例３０：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２；
実施例３１：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例３２：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−２Ｔｈｉ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例３３：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−２Ｔｈｉ−ＮＨ２；
実施例３４：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２；
実施例３５：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｔａｚ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例３６：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｔａｚ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例３７：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｔａｚ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例３８：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｔａｚ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例３９：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−２Ｔｈｉ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例４０：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−２Ｔｈｉ−Ａｐｃ−ＮＨ２；
実施例４１：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−２Ｔｈｉ−Ａｐｃ−ＮＨ２；
実施例４２：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−２Ｔｈｉ−Ａｐｃ−ＮＨ２；
実施例４３：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−２Ｔｈｉ−Ａｐｃ−ＮＨ２；
実施例４４：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例４５：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例４６：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２；
実施例４７：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２；
実施例４８：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２；
実施例４９：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２；
実施例５０：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例５１：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２；
実施例５２：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｐｈｅ−Ａｐｃ−ＮＨ２；
実施例５３：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例５４：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２；
実施例５５：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−２Ｔｈｉ−ＮＨ２；
実施例５６：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２；
実施例５７：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｔａｚ−ＮＨ２；
実施例５８：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−２Ｔｈｉ−ＮＨ２；
実施例５９：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｔａｚ−ＮＨ２；
実施例６０：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−２Ｔｈｉ−ＮＨ２；
実施例６１：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｔａｚ−ＮＨ２；
実施例６２：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｔａｚ−Ａｐｃ−ＮＨ２；
実施例６３：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｔａｚ−Ａｐｃ−ＮＨ２；
実施例６４：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｔａｚ−Ａｐｃ−ＮＨ２；
実施例６５：Ｈ−Ａｐｃ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｔａｚ−Ａｐｃ−ＮＨ２；
実施例６６：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ψ）−Ｐｉｍ；
実施例６７：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−１Ｎａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ψ）−Ｐｉｍ；
実施例６８：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｂａｌ−Ｄ−Ｔｒｐ（Ψ）−Ｐｉｍ；
実施例６９：Ｈ−Ａｉｂ−Ｄ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｔｒｐ（Ψ）−Ｐｉｍ；及び
実施例７０：Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−２Ｎａｌ（Ψ）−Ｐｉｍ。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】図１Ａ及び図１Ｂは、それぞれ通常目盛及び対数目盛の、５０％ＰＥＧ２００及び５０％水（容積／容積）溶媒中に溶解された２００ｍｇ／ｍＬ（２０重量／容量％）の実施例１のパモ酸塩を含んでなる製剤の、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに対する２．５ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で一回皮下投与された後に得られた薬物動態学的特性（中央値）の全時間経過のプロットを示す。
【図２】図２は、皮下注射によって投与された実施例１の異なった製剤の比較のプロットを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本明細書中でペプチドを定義するために使用される命名法は、当技術において典型的に使用されるものであり、ここにおいて、Ｎ−末端のアミノ基は左に現れ、そしてＣ−末端のカルボキシル基は右に現れる。アミノ酸が異性体の形態を有する場合、これは、他に明確に示さない限り、表されるアミノ酸のＬ型である。他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する技術の当業者によって普通に理解されるものと同じ意味を有する。
【００３５】
本明細書中で使用される略語は、以下のように定義される：
Ａｐｃ  アミノピペリジニルカルボン酸、即ち：
【００３６】
【化２】
0005977225.tif 000003
【００３７】
Ｂａｌ  ３−ベンゾチエニルアラニン、即ち：
【００３８】
【化３】
0005977225.tif 000004
【００３９】
Ｂｉｐ  ４，４’−ビフェニルアラニン、即ち：
【００４０】
【化４】
0005977225.tif 000005
【００４１】
Ｂｐａ  ４−ベンゾイルフェニルアラニン、即ち：
【００４２】
【化５】
0005977225.tif 000006
【００４３】
Ｄｉｐ  β，β−ジフェニルアラニン：
【００４４】
【化６】
0005977225.tif 000007
【００４５】
Ｉｎｐ  イソニペコチン（ｉｓｏｎｉｐｅｃｏｔｉｃ）酸、即ち：
【００４６】
【化７】
0005977225.tif 000008
【００４７】
Ｌｙｓ又はＫ  リシン
１Ｎａｌ  β−（１−ナフチル）アラニン：
２Ｎａｌ  β−（２−ナフチル）アラニン；
Ｏｒｎ  オルニチン
３Ｐａｌ  β−（３−ピリジル）−アラニン、即ち：
【００４８】
【化８】
0005977225.tif 000009
【００４９】
４Ｐａｌ  β−（４−ピリジル）−アラニン、即ち：
【００５０】
【化９】
0005977225.tif 000010
【００５１】
Ｐｆｆ  ペンタフルオロフェニルアラニン、即ち：
【００５２】
【化１０】
0005977225.tif 000011
【００５３】
Ｐｈｅ又はＦ  フェニルアラニン
Ｐｉｍ  ２’−（４−フェニル）イミダゾリル、即ち：
【００５４】
【化１１】
0005977225.tif 000012
【００５５】
Ｓｅｒ又はＳ  セリン
Ｔａｚ  β−（４−チアゾリル）アラニン、即ち：
【００５６】
【化１２】
0005977225.tif 000013
【００５７】
２Ｔｈｉ  β−（２−チエニル）アラニン、即ち：
【００５８】
【化１３】
0005977225.tif 000014
【００５９】
Ｔｈｒ又はＴ  トレオニン
Ｔｒｐ又はＷ  トリプトファン。
本明細書中に使用されるある種の他の略語は、以下の通りに定義される：
ＢＳＡ：ウシ血清アルブミン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＨＰＬＣ：高性能液体クロマトグラフィー
パモ酸ナトリウム：以下の構造：
【００６０】
【化１４】
0005977225.tif 000015
【００６１】
を有するパモ酸二ナトリウム塩
ＬＣ−ＭＳ：液体クロマトグラフィー質量分光法
ＬＯＱ：定量化の限界
ＭＲＭ：多重反応モニタリング
ＰＥＧ：以下の構造：
【００６２】
【化１５】
0005977225.tif 000016
【００６３】
を有し、式中、ｎが１ないし２，０００間の整数であるポリ（エチレングリコール）
ＰＥＧ２００：約２００Ｄａの平均分子量を持つポリ（エチレングリコール）
ＰＥＧ４００：約４００Ｄａの平均分子量を持つポリ（エチレングリコール）
Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ：塩酸トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン。
【００６４】
他に現れない限り、本開示中のアミノ酸の略語（例えばＡｌａ）は、−ＮＨ−Ｃ（Ｒ）（Ｒ’）−ＣＯ−の構造を表し、式中、Ｒ及びＲ’のそれぞれは、独立に、水素又はアミノ酸の側鎖（例えば、Ａｌａに対してＲ＝ＣＨ３及びＲ’＝Ｈ）であるか、或いはＲ及びＲ’は、結合して、環系を形成することができる。
【００６５】
非アミノ酸のイミダゾール分子（例えば、先に定義したＰｉｍ）が、本発明の化合物のＣ−末端に存在する場合、イミダゾール分子が偽ペプチド結合によって隣接するアミノ酸に接続し、ここにおいて、結合は、イミダゾール環の２位の炭素及びアミノ酸のアルファ炭素間に形成されることは理解されることである。例えば、隣接するアミノ酸がＤ−トリプトファン（Ｄ−Ｔｒｐ）であり、そしてイミダゾール分子がＰｉｍである場合、ペプチドのＣ−末端は、以下のように見える：
【００６６】
【化１６】
0005977225.tif 000017
【００６７】
明白にするために、このような化合物のために書かれた式において、この結合の存在は、かっこ内の単独のギリシャ文字“Ψ”によって示される。例えば、書かれた式Ｈ−Ｉｎｐ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−２Ｎａｌ（Ψ）−Ｐｉｍは、以下の構造を意味する：
【００６８】
【化１７】
0005977225.tif 000018
【００６９】
合成
本発明のペプチドは、その内容が本明細書中に参考文献としてその全てが援用される、ＷＯ２００４／０１４４１５の３４−４２ページに開示されている技術を使用して調製することができる。更に、核酸の細胞への導入及び核酸の発現を含む生化学的合成のための技術の例は、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，１９８７−１９９８，及びＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９中に提供されている。ポリペプチドの化学的合成のための技術も、更に当技術において公知である（例えば、Ｖｉｎｃｅｎｔ  ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｄｅｋｋｅｒ，１９９０を参照されたい）。例えば、本発明のペプチドは、標準的な固相ペプチド合成によって調製することができる（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，２ｄ  ｅｄ．１９８４））。例示的なペプチドに対する物理的データを表１に与える。
【００７０】
【表１−１】
0005977225.tif 000019
【００７１】
【表１−２】
0005977225.tif 000020
【００７２】
【表１−３】
0005977225.tif 000021
【００７３】
・実施例１のパモ酸塩の調製
実施例１の酢酸塩（２００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌｅ）を１０ｍＬの水中に溶解した。パモ酸ナトリウム（１９０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌｅ）を１０ｍＬの水中に溶解した。二つの溶液を混合し、そして十分に混合した。沈殿物を３０００ｒｐｍで２０分間の遠心によって収集し、水で三回洗浄し、そして凍結乾燥によって乾燥した。
【００７４】
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏの研究
本発明の化合物は、以下の方法によってＧＨＳ受容体のリガンドとしての活性に対して試験することができ、そして試験された。当業者は、本明細書中に記載されるものと同様な方法を、本発明の化合物のメラノコルチン受容体分子への結合活性を分析するために使用することができることを知るものである。
【００７５】
・放射性リガンド結合アッセイ
Ｉｎ  ｖｉｔｒｏの受容体結合アッセイのために使用する細胞膜を、ヒト組換えＧＨＳ受容体を安定して発現している遺伝子組換えＣＨＯ−Ｋ１細胞から得た。ｈＧＨＳ受容体を安定して発現しているＣＨＯ−Ｋ１細胞を、２０ｍｌの氷冷の５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ中で、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  Ｐｏｌｙｔｒｏｎ（Ｗｅｓｔｂｕｒｙ，ＮＹ，ＵＳＡ）と共にホモジナイズした（設定６、１５秒）。ホモジネートを遠心（３９，０００ｇ／１０分）によって二回洗浄し、そして最終のペレットを、２．５ｍＭのＭｇＣｌ２、及び０．１％のＢＳＡを含有する５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ中に再懸濁した。アッセイのために、アリコート（０．４ｍｌ）を、０．０５ｎＭの（１２５Ｉ）グレリン（約２０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）と共に、０．０５ｍｌの本発明の標識されない競合試験化合物を伴って、又は伴わずにインキュベートした。６０分のインキュベーション（４℃）後、結合した（１２５Ｉ）グレリンを、０．５％のポリエチレンイミン／０．１％のＢＳＡ中で前もって浸漬されたＧＦ／Ｃフィルター（Ｂｒａｎｄｅｌ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ，ＵＳＡ）を通す急速濾過によって遊離のものから分離した。次いでフィルターを三回氷冷の５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ及び０．１％のウシ血清アルブミンの５ｍｌのアリコートで洗浄し、そしてフィルターに捕捉された結合した放射能をガンマ分光法（Ｗａｌｌａｃ  ＬＫＢ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ，ＵＳＡ）によって数えた。特異的結合を、１０００ｎＭのグレリン（Ｂａｃｈｅｍ，Ｔｏｒｒｅｎｃｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）の存在中の結合を、全（１２５Ｉ）グレリンから差し引いたものとして定義した。例示的なペプチドに対する特異的結合のデータを、表２に与える。
【００７６】
【表２−１】
0005977225.tif 000022
【００７７】
【表２−２】
0005977225.tif 000023
【００７８】
【表２−３】
0005977225.tif 000024
【００７９】
・溶解性の研究
実施例１のパモ酸塩（５０ｍｇ）を、微量遠心チューブ中に秤量し、そしてその後、１２５μＬのＰＥＧ２００及び１２５μＬの水を加えた。混合物を超音波処理して、溶解を容易にした。透明な溶液を得た。
【００８０】
実施例１のパモ酸塩の溶解性を、水又はＰＢＳ中のペプチドを混合し、続いて上清中の濃度をＨＰＬＣで決定することによって決定し、そして結果を表３に示す。
【００８１】
【表３】
0005977225.tif 000025
【００８２】
・実施例１の製剤の薬物動態学的研究
実施例１の“製剤１”を、実施例１のパモ酸塩を、５０％のＰＥＧ２００及び５０％の水（容量／容量）中に、２００ｍｇ／ｍＬ（２０重量／容量％）の濃度で溶解することによって調製した。
【００８３】
実施例１の“製剤２”を、実施例１の酢酸塩を、生理食塩水／２％の熱失活マウス血清／５％のＤＭＡ／２％のｔｗｅｅｎ−８０溶液中に溶解することによって調製した。
・投与
製剤１に対して、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに、５μＬ／ラット又は１．０ｍｇ／ラットのいずれかの固定した量、或いは概略２．５ｍｇ／ｋｇ体重の変化する量で皮下注射によって投与した。
【００８４】
製剤２に対して、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに、２．１ｍｇ／ｋｇ体重の変化する量で皮下注射によって投与した。
・試料の調製
製剤１及び２に対して、５０μＬの血漿を２．５μＬのギ酸で酸性化し、そして１５０μＬのアセトニトリルで沈殿させた。上清を遠心によって収集した。５０μＬの標本を、ＬＣ−ＭＳ分析のために注射した。
【００８５】
・ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析
製剤１及び２に対して、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析を、Ｔｕｒｂｏ  Ｉｏｎｓｐｒａｙプローブを備えたＡＰＩ４０００質量分光計装置で行った。３９６．５／１１２．３のイオン対を伴う分子イオン検出のＭＲＭモードを使用した。ＨＰＬＣ分離を、０％のＢから８０％のＢへ、０．３ｍＬ／分の流量で１０分で行うＬｕｎａ  Ｃ８（２）２×３０ｍｍの３μカラムで行った。緩衝液Ａは水中の１％ギ酸であり、そして緩衝液Ｂはアセトニトリル中の１％ギ酸であった。ＬＯＱは、５ｎｇ／ｍＬであった。
【００８６】
・結果及び要約
製剤１を投与された実施例１の血漿濃度を、その標準的な較正プロットで計算し、そして結果を表４に示す。
【００８７】
【表４】
0005977225.tif 000026
【００８８】
製剤１の薬物動態学的特性の全時間経過のプロットを、図１Ａに通常目盛で、そして図１Ｂに対数目盛で示す。
製剤１を投与された実施例１の幾つかの薬物動態学的特性を、表５に示す。
【００８９】
【表５】
0005977225.tif 000027
【００９０】
結果は、本明細書中に記載される本発明による実施例１の製剤が、減衰された副作用及び改良された効力をもたらす、改良された薬物動態学的特性及びより平坦な放出特性を持つ受容可能な徐放製剤を提供することを示す。例えば、製剤１は、一回の皮下注射後の２４時間より大きい放出特性を、有意に低いＣｍａｘ及び有意に長いＴｍａｘを伴って有することを示す。更に、実施例１のパモ酸塩製剤、即ち製剤１は、実施例１の酢酸塩製剤、即ち製剤２と比較して有意に増加されたＴ１／２を有することを示す。
【００９１】
本発明の更なる態様は、前述の開示から明白となり、そして本明細書中に完全に記載され、そして以下の特許請求の範囲において定義されるとおりの本発明によって包含されることを意図する。
【図１】
0005977225.tif 000028
【図２】
0005977225.tif 000029