(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
近赤外領域に吸収波長を有するインドシアニングリーン色素、フタロシアニン色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素及びジインモニウム色素からなる群より選択される光吸収化合物に結合したリポソーム膜構成物質を含み、かつ、リポソーム内に薬剤を含む、リポソーム複合体であって、光線温熱療法及び／又は光線力学療法で用いられる、リポソーム複合体。
【請求項２】
近赤外領域に吸収波長を有するインドシアニングリーン色素、フタロシアニン色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素及びジインモニウム色素からなる群より選択される光吸収化合物に結合したリポソーム膜構成物質を含み、かつ、リポソーム内に薬剤を含む、リポソーム複合体であって、当該リポソーム複合体を投与後、患部を光照射する腫瘍の治療方法で用いられる、リポソーム複合体。
【請求項３】
近赤外領域に吸収波長を有するインドシアニングリーン色素、フタロシアニン色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素及びジインモニウム色素からなる群より選択される光吸収化合物に結合したリポソーム膜構成物質を含み、かつ、リポソーム内に薬剤を含む、リポソーム複合体であって、当該リポソーム複合体を投与後、患部を光照射して一重項酸素を発生させる腫瘍の治療方法で用いられる、リポソーム複合体。
【請求項４】
当該リポソーム複合体を投与後、患部を光照射する腫瘍の治療方法で用いられる、請求項１に記載のリポソーム複合体。
【請求項５】
当該リポソーム複合体を投与後、患部を光照射して一重項酸素を発生させる腫瘍の治療方法で用いられる、請求項１に記載のリポソーム複合体。
【請求項６】
前記リポソーム膜構成物質が脂質からなる、請求項１〜５のいずれか１項に記載のリポソーム複合体。
【請求項７】
前記光吸収化合物に結合したリポソーム膜構成物質が、下記式（Ｉ）：
Ａ−（ＣＨ２）ａ−Ｂ１−（ＣＨ２）ｂ−Ｂ２−Ｄ−Ｅ１    （Ｉ）
［式中、
Ａは、光吸収化合物であり； 
Ｂ１及びＢ２は、それぞれ独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＨ−、−ＮＨＳＯ２−、−ＰＯ４Ｍ−（Ｍはアルカリ金属イオンである）又は−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｃ−（ｃは１〜１０の整数である）であり；
Ｄは、−ＣＨＥ２−、−ＮＥ２−、−Ｃ６Ｈ４Ｅ２−、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＣＯＥ２）−ＣＨ２ＯＣＯ−又は−ＣＨＥ２−ＣＨ２ＯＣＯ−であり；
Ｅ１は、炭素数８〜１８の置換又は非置換の炭化水素基であり；
Ｅ２は、水素又は炭素数８〜１８の置換もしくは非置換の炭化水素基であり；
ａは０〜４の整数であり、ｂは０〜６の整数である］
で示される、請求項１〜６のいずれか１項に記載のリポソーム複合体。
【請求項８】
Ｂ１及びＢ２が、それぞれ独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｏ−又は−Ｓ−であり；
Ｄが−ＣＨＥ２−（Ｅ２は請求項７に記載した通りである）である、
請求項７に記載のリポソーム複合体。
【請求項９】
Ｂ１及びＢ２が−ＣＨ２−である、請求項８に記載のリポソーム複合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬物送達系等に利用できる、光吸収化合物に結合したリポソーム膜構成物質及び薬剤を含むリポソーム複合体に関する。
【背景技術】
【０００２】
薬物送達系（ドラッグデリバリーシステム：ＤＤＳ）は、標的とする患部（臓器や組織、細胞、病原体等）に、薬物を効果的かつ局所的に送達する技術である。腫瘍組織では、正常組織に比べ血管透過性が著しく亢進しているため、高分子や微粒子が血管より流出しやすい。また、リンパ系が発達していないため、腫瘍組織に到達した物質は蓄積する。このような特性をＥＰＲ効果といい、癌細胞に対して受動的ターゲティングを行う上で重要な因子となっている。しかし、ＥＰＲ効果により、血管内に投与した薬物キャリアーを癌組織選択的に送達・集積させることは可能になったものの、キャリアーに内包した薬剤を効果的に徐放させることは依然として問題となっている。
一方、近年、赤外領域に吸収波長をもつ色素の発熱作用や活性酸素を発生する作用（ＰＤＴ効果）を利用した、温熱化学療法や光線力学療法が注目されている。これは、生体内における近赤外光の透過性及び近赤外光を吸収する化合物を利用したもので、例えば、特許文献１（特開２０１０−６９００１号公報）では、光感受性色素剤としてインドシアニングリーン（ＩＣＧ）を用いて、その発熱作用及び活性酸素発生作用を利用した光線力学的温熱化学療法が開示されている。本文献には、動物の腫瘍組織患部にシスプラチン及びＩＣＧを注入し光照射することで、治療後１年経過しても腫瘍の再発・転移が確認されなかったことが記載されている。
また、特許文献２（ＷＯ  ００／４１７２６）には、ＩＣＧ等の光感作薬剤を用いた経皮的光力学治療が開示されている。本文献の発明では、光感作性薬剤送達系は、光感作性薬剤からなるリポソーム送達系を含む。このリポソーム送達系は、光感作性薬剤をリポソーム処方物として投与する形態を採用している（即ち、光感作性薬剤をリポソームに内包させて使用している）。但し、本文献では、腫瘍組織に対する光感作性薬剤の使用が記載されているのみで、抗癌剤の同時投与等の態様については開示されていない。
特許文献３（特開２００７−２７７２１８号公報）には、リポソームの親水層に内包される親水性薬物と、前記リポソームの脂質二重層に内包される疎水性の光感受性物質とを備えたリポソーム組成物において、前記リポソームは光源の照射下で、光線力学的な作用によって前記疎水性薬物の放出を誘導するリポソーム組成物が開示されている。しかしながら、上記光感受性物質として開示されてい
0005979385.tif 000002
紅斑、水疱）等の過敏症；嘔気、胃腸障害、下痢、胃痛、腹部異和感等の消化器症状；その他、色素沈着、心悸亢進、熱感、身体違和感、顔面潮紅、黒色便等の副作用がある。
特許文献４（特開２０１０−２６６２９５号公報）には、リン脂質と、インドシアニングリーン等の近赤外蛍光色素とが複合して形成されたベシクルを親水性溶媒に内包させ、乳化剤により複数のカプセルを形成、凝集させたベシクルクラスターを有する蛍光組織マーカーが開示されている。しかしながら、蛍光組織マーカーとして用いるものであり、光線力学的温熱療法への適用やリポソーム内に薬剤を包含させることを意図していない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１０−６９００１号公報
【特許文献２】ＷＯ  ００／４１７２６
【特許文献３】特開２００７−２７７２１８号公報
【特許文献４】特開２０１０−２６６２９５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
このように従来の方法では、ＩＣＧ等の光増感剤を患部に直接作用させることを目的とするのみで、依然として薬剤徐放の制御が問題となっている。そこで、本発明では、薬物を非侵襲的に任意の時点で徐放することができる薬物送達系を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、前記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、近赤外吸収色素を脂質二重膜に有するリポソームに薬剤を内包させ、光照射することで任意の時間に非侵襲的に薬剤を患部に徐放できることを見い出し、本発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下の発明を包含する。
［１］  近赤外領域に吸収波長を有するインドシアニングリーン色素、フタロシアニン色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素及びジインモニウム色素からなる群より選択される光吸収化合物に結合したリポソーム膜構成物質を含み、かつ、リポソーム内に薬剤を含む、リポソーム複合体。
［２］  前記リポソーム膜構成物質が脂質からなる、前記［１］に記載のリポソーム複合体。
［３］  前記光吸収化合物に結合したリポソーム膜構成物質が、下記式（Ｉ）：
Ａ−（ＣＨ２）ａ−Ｂ１−（ＣＨ２）ｂ−Ｂ２−Ｄ−Ｅ１    （Ｉ）
［式中、
Ａは、光吸収化合物であり；
Ｂ１及びＢ２は、それぞれ独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＳＯ２−、−ＳＯ２ＮＨ−、−ＮＨＳＯ２−、−ＰＯ４Ｍ−（Ｍはアルカリ金属イオンである）又は−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｃ−（ｃは１〜１０の整数である）であり；
Ｄは、−ＣＨＥ２−、−ＮＥ２−、−Ｃ６Ｈ４Ｅ２−、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＣＯＥ２）−ＣＨ２ＯＣＯ−又は−ＣＨＥ２−ＣＨ２ＯＣＯ−であり；
Ｅ１は、炭素数８〜１８の置換又は非置換の炭化水素基であり；
Ｅ２は、水素又は炭素数８〜１８の置換もしくは非置換の炭化水素基であり；
ａは０〜４の整数であり、ｂは０〜６の整数である］
で示される、前記［１］に記載のリポソーム複合体。
［４］  Ｂ１及びＢ２が、それぞれ独立して、−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｏ−又は−Ｓ−であり；
Ｄが−ＣＨＥ２−（Ｅ２は前記［３］に記載した通りである）である、
前記［３］に記載のリポソーム複合体。
［５］  Ｂ１及びＢ２が−ＣＨ２−である、前記［４］に記載のリポソーム複合体。
［６］  光線温熱療法及び／又は光線力学療法で用いられる、前記［１］〜［５］のいずれかに記載のリポソーム複合体。
［７］  蛍光イメージングで用いられる、前記［１］〜［６］のいずれかに記載のリポソーム複合体。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、所望する薬剤を非侵襲的に任意の時点で患部に作用させることができる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
図１は、本発明のリポソーム複合体の模式図である。
図２は、ＩＣＧ−８を脂質二重膜に有するリポソーム分散液（ＬＰ−ＩＣＧ−８、以下同様）及びＩＣＧを内包するリポソーム分散液（ＩＣＧ）の蛍光特性を示す。
図３は、ＬＰ−ＩＣＧ−８又はＩＣＧ水溶液を静脈投与した患部を蛍光観察した写真である。
図４は、ラット皮下腫瘍モデルにおける光線力学療法／光線温熱療法の概要を示す。
図５は、ＬＰ−ＩＣＧ−８又はＩＣＧ水溶液を腫瘍内投与した直後及び４８時間後の腫瘍の写真である。
図６は、図５の腫瘍組織切片をヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）染色した写真である。
図７は、本発明のリポソーム複合体の薬物徐放能を説明する図である。
図８は、ＩＣＧ及びシスプラチン（ＣＤＤＰ）を含む水溶液（ＩＣＧ＋ＣＤＤＰ）、又はＩＣＧ−８を脂質二重膜に有するリポソームに、シスプラチンを内包させたリポソーム複合体を含む水溶液（ＬＰ−ＩＣＧ−８＿ＣＤＤＰ）を、腫瘍内投与した直後及び４８時間後の腫瘍の写真である。
図９は、図８の腫瘍組織切片をＨＥ染色した写真である。
図１０は、ＩＣＧ−８の一重項酸素測定の結果を示す。
図１１は、ＩＣＧ−１１の蛍光スペクトル特性を極性溶媒であるメタノール中（ａ）及び非極性溶媒であるクロロホルム中（ｂ）でＩＣＧと比較した結果を示す。
図１２は、ＩＣＧ−１１の一重項酸素測定の結果を示す。
図１３は、ＩＣＧ−１１の熱発生能力測定の結果を示す。
図１４は、ＩＣＧ−１１とＩＣＧのリポソーム搭載量測定の結果を示す。
図１５は、ＩＣＧ−１１含有量の違いによる粒子径分布を示す。
図１６は、ＩＣＧ−１１を脂質二重膜中に有するリポソーム分散液のＵＶスペクトル特性を示す。
図１７は、ＩＣＧ−１１を脂質二重膜中に有するリポソーム分散液の蛍光スペクトル特性を示す。
図１８は、ＬＰ−ＩＣＧ−１１の熱発生能力を試験管内で測定した結果を示す。
図１９は、ＬＰ−ＩＣＧ−１１の熱発生能力を生体内で測定した結果を示す。
図２０は、ＬＰ−ＩＣＧ−１１の体内分布変化を腫瘍と体表とで比較した結果を示す。
図２１は、ＬＰ−ＩＣＧ−１１の体内分布変化を腫瘍と各臓器とで比較した結果を示す。
図２２は、脳腫瘍のＭＲＩ画像（左）及び脳腫瘍の近赤外線蛍光画像（右）を示す。
図２３は、治療後の脳腫瘍体積変化を示す。
図２４は、猫（アポクリン腺癌、肺及び結腸転移）のレントゲン写真（上；治療前、下；２クール目）を示す。
図２５は、犬（肛門周囲腺癌・リンパ節転移）のレントゲン写真（上；治療前、下；１クール目８日目）を示す。
図２６は、犬（肛門周囲腺癌・リンパ節転移）のレントゲン写真（左；治療前、下；２クール目終了２週間後）を示す。
図２７は、猫（鼻腔内リンパ腫）ＣＴ写真（治療前）を示す。
図２８は、猫（鼻腔内リンパ腫）ＣＴ写真（１クール目７日目）を示す。
図２９は、猫（鼻腔内リンパ腫）ＣＴ写真（２クール目７日目）を示す。
図３０は、猫（鼻腔内リンパ腫）ＣＴ写真（２クール目終了５日目）を示す。
図３１は、腎臓腫瘍のエコー画像（上；治療前、下；４クール目）を示す。
図３２は、犬の軟部組織肉腫の治療経過（左；４クール目の小腫瘤、中；５クール目前半の潰瘍化した腫瘤、右；５クール目の後半の壊死した腫瘤）を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のリポソーム複合体は、近赤外領域に吸収波長を有するインドシアニングリーン色素、フタロシアニン色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素及びジインモニウム色素からなる群より選択される光吸収化合物に結合したリポソーム膜構成物質を含み、かつ、リポソーム内に薬剤を含む。
本明細書において、「光吸収化合物」とは、近赤外領域の光を吸収してリポソームを開裂させるのに十分な熱を発生する化合物であり、好ましくはさらに、一重項酸素を発生させ、かつ／又は腫瘍細胞を死滅させるのに十分な熱を発生させる。「近赤外領域の吸収波長」とは、光吸収化合物の最大吸収波長として、７００〜１４００ｎｍ、好ましくは８００〜１０００ｎｍ、特に好ましくは８００〜９００ｎｍを表す。
本明細書において、「リポソーム膜構成物質」とは、脂質二重膜の形成を阻害しない限り特に限定されるものではなく、例えば、脂質、膜安定化剤、抗酸化剤、荷電物質、膜タンパク質等が挙げられる。
脂質としては、例えば、リン脂質、糖脂質、ステロール、飽和又は不飽和の脂肪酸等が挙げられる。
リン脂質としては、例えば、ホスファチジルコリン（例えば、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジラウロイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン等）、ホスファチジルグリセロール（例えば、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、ジラウロイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジグリセロール等）、ホスファチジルエタノールアミン（例えば、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、ジラウロイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジエタノールアミン等）、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、カルジオリピン、スフィンゴミエリン、卵黄レシチン、大豆レシチン、これらの水素添加物等が挙げられる。
糖脂質としては、例えば、グリセロ糖脂質（例えば、スルホキシリボシルグリセリド、ジグリコシルジグリセリド、ジガラクトシルジグリセリド、ガラクトシルジグリセリド、グリコシルジグリセリド）、スフィンゴ糖脂質（例えば、ガラクトシルセレブロシド、ラクトシルセレブロシド、ガングリオシド）等が挙げられる。
ステロールとしては、例えば、動物由来のステロール（例えば、コレステロール、コレステロールコハク酸、ラノステロール、ジヒドロラノステロール、デスモステロール、ジヒドロコレステロール）、植物由来のステロール（フィトステロール）（例えば、スチグマステロール、シトステロール、カンペステロール、ブラシカステロール）、微生物由来のステロール（例えば、チモステロール、エルゴステロール）等が挙げられる。
飽和又は不飽和の脂肪酸としては、例えば、パルミチン酸、オレイン酸、ステアリン酸、アラキドン酸、ミリスチン酸等の炭素数１２〜２０の飽和又は不飽和の脂肪酸が挙げられる。
膜安定化剤は、リポソーム膜を物理的又は化学的に安定させたり、リポソーム膜の流動性を調節したりするために添加できる任意のリポソーム膜成分である。膜安定化剤としては、例えば、ステロール、グリセリン又はその脂肪酸エステル等が挙げられる。
ステロールとしては、上記と同様の具体例が挙げられ、グリセリンの脂肪酸エステルとしては、例えば、トリオレイン、トリオクタノイン等が挙げられる。
抗酸化剤は、リポソーム膜の酸化を防止するために添加できる任意のリポソーム膜成分であり、例えば、トコフェロール、没食子酸プロピル、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシトルエン等が挙げられる。
荷電物質は、リポソーム膜に正荷電又は負荷電を付与するために添加できる任意のリポソーム膜成分であり、正荷電を付与する荷電物質としては、例えば、ステアリルアミン、オレイルアミン等の飽和又は不飽和脂肪族アミン；ジオレオイルトリメチルアンモニウムプロパン等の飽和又は不飽和カチオン性合成脂質等が挙げられ、負電荷を付与する荷電物質としては、例えば、ジセチルホスフェート、コレステリルヘミスクシネート、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸等が挙げられる。
膜タンパク質は、リポソーム膜の構造を維持したり、リポソーム膜に機能性を付与したりするために添加できる任意のリポソーム膜成分であり、例えば、膜表在性タンパク質、膜内在性タンパク質等が挙げられる。
「光吸収化合物に結合した」リポソーム膜構成物質とは、リポソーム膜構成物質と光吸収化合物とが共有結合されている化合物を表し、「光吸収化合物に結合したリポソーム膜構成物質」としては、好ましくは、前記式（Ｉ）で示されるものが挙げられる。
前記式（Ｉ）において、Ｍで表されるアルカリ金属イオンとしては、例えば、ナトリウムイオン、カリウムイオン等が挙げられる。
前記式（Ｉ）において、Ｅ１又はＥ２で表される炭素数８〜１８の炭化水素基としては、例えば、炭素数８〜１８、好ましくは炭素数１２〜１８のアルカン、アルケン（好ましくは二重結合は２つ以下）、アルキン（好ましくは三重結合は２つ以下）が挙げられ、より好ましくは炭素数１４〜１８のアルカン、アルケン又はアルキンである。これらの炭化水素基は、例えばハロゲン原子、Ｃ１−６アルコキシ等で置換されていてもよい。
前記式（Ｉ）において、ａは０〜４、好ましくは０〜２の整数である。また、ｂは０〜６、好ましくは０〜２の整数である。また、ｃは１〜１０、好ましくは１〜４、より好ましくは１〜２の整数である。
前記式（Ｉ）において、Ｂ１及びＢ２として前記のものを採用することにより、本分子そのものをリポソーム表面のリン酸基と親和させて安定化させることができる。また、Ｄとして前記のものを採用することにより、リポソームの疎水性領域へのアンカーリングが可能になる。また、Ｅ１及びＥ２として前記のものを採用することにより、室温から体温程度で膜流動性を低下させずに、温度上昇に伴って、膜流動性を急激に増大もしくは減少させることができる。また、ａ及びｂを前記の範囲にすることにより、色素が側鎖構造から数Å離れ、リポソーム表面の電気的な化学状態の一重項酸素発生への影響を減らすことができる。
本発明の「リポソーム複合体」は、前記の光吸収化合物に結合したリポソーム膜構成物質を、脂質二重膜を構成する物質の総配合量として、通常０．０１〜５０％（モル比）、好ましくは０．１〜５％（モル比）、より好ましくは０．１〜１％（モル比）含む。脂質二重膜を構成する物質として、脂質は必須成分であり、その配合量は、脂質二重膜を構成する物質の総配合量として、通常２０〜９９．９％（モル比）、好ましくは５０〜９９％（モル比）、より好ましくは８０〜９５％（モル比）含む。さらに、脂質膜を安定化させるために、コレステロール等を加えることが好ましい。コレステロール等は、本発明の目的を損なわない範囲の配合量で用いることができる。
また、リポソームを生体内で安定化させるために、リポソームの外表面を親水性ポリマーで修飾することができる。このような親水性ポリマーの例としては、ポリエチレングリコール、ポリメチルエチレングリコール、ポリヒドロキシプロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリメチルプロピレングリコール、ポリヒドロキシプロピレンオキシド等が挙げられる。特に好ましいものはポリエチレングリコールである。その配合量は、脂質二重膜を構成する物質の総配合量として、通常０．０１〜１０％（モル比）、好ましくは０．１〜１％（モル比）含む。
また、リポソーム複合体を標的部位に送達させるために、細胞膜の表面上に存在する受容体又は抗原と結合できる物質（細胞膜結合性物質）に結合したリポソーム膜構成物質を、リポソームの脂質二重膜の構成成分としてもよく、細胞膜結合性物質としては、例えば、トランスフェリン、インシュリン、葉酸、ヒアルロン酸、抗体又はその断片、糖鎖、成長因子、アポリポタンパク質等が挙げられる。
本発明のリポソーム複合体は、リポソーム内に薬剤を包含する。薬剤は、特に限定されず、例えば、抗癌剤等の薬剤や、タンパク質、ペプチド、核酸等を用いることができる。抗癌剤としては、当業者に公知のものを用いることができ、例えば、以下の化合物が挙げられる：アルキル化剤、例えばシクロホスファミド、メルファラン、ラニムスチン、イホスファミド、塩酸ナイトロジェンマスタード−Ｎ−オキシド等；代謝拮抗剤、例えば６−メルカプトプリン、リボシド、エノシタビン、カルモフール、シタラビン、シタラビンオクホスフェホート、テガフール、５−フルオロウラシル、ドキシフルウリジン、ドキシフルリジン、ヒドロキシカルバミド、メトトレキサート、メルカプトプリン等；抗腫瘍性抗生物質製剤、例えばアクチノマイシンＤ、塩酸アクラルビシン、塩酸エピルビシン、塩酸イダルビシン、塩酸ドキソルビシン、塩酸ダウノルビシン、塩酸ピラルビシン、ジノスタチンスチマラマー、硫酸ブレオマイシン、塩酸ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、ネオカルチノスタチン、硫酸ペプロマイシン等；抗腫瘍性植物成分製剤、例えばエトポシド、塩酸イリノテカン、ドセタキセル水和物、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンデシン、硫酸ビンブラスチン、パクリタキセル、その他、アセグラトン、ウベニメクス、シスプラチン、シゾフィラン、ソブゾキサン、クレスチン、クエン酸トレミフェン、酢酸メドロキシプロゲステロン、クエン酸タモキシフェン、カルボプラチン、塩酸ファドロゾール水和物、塩酸プロカルバジン、塩酸ミトキサントロン、Ｌ−アスパラギナーゼ、トレチノイン、ネダブラチン、ピシバニール、フルタミド、ペントスタチン、ポルフィマーナトリウム、レンチナン等。
前記インドシアニングリーン色素としては、例えば下記式（ＩＩ−１）：
0005979385.tif 000003
［式中、Ｘ１及びＸ２は、−Ｃ（ＣＨ３）２−、Ｏ又はＳであり、Ｙ１及びＹ３は、水素又はＯＣＨ３であり、Ｙ２及びＹ４は水素であり、又は、Ｙ１とＹ２、及びＹ３とＹ４は、それぞれ一緒になって、これらが結合している環と縮合したベンゼン環を形成してもよく、Ｑ１及びＱ２は、水素又は、これらが結合して６員環を形成してもよく、Ｒ１〜Ｒ３のいずれか１つが、−（ＣＨ２）ａ−Ｂ１−（ＣＨ２）ｂ−Ｂ２−Ｄ−Ｅ１［式中の記号は前記式（Ｉ）と同義である］であり、Ｐ１は１価の陰イオンである塩化物イオン、臭化物イオン又はヨウ化物イオンであり、Ｒ１〜Ｒ３は、以下の基：
0005979385.tif 000004
0005979385.tif 000005
からなる群より選択される基であり、ここで、Ｚ１又はＺ２は、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＳＯ２ＮＨ−、−ＮＨＳＯ２−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−Ｃ６Ｈ４−であり、Ｐ２は１価の陽イオンである水素イオン、リチウムイオン、ナトリウムイオン又はカリウムイオンであり、Ｍは１価の陽イオンである水素イオン、リチウムイオン、ナトリウムイオン又はカリウムイオンであり、Ｒ４は、炭素数が１〜１８、好ましくは４〜１０のアルカン、アルケン又はアルキンであり、ｎ又はｍは０〜２２、好ましくは０〜４の整数であり、ｌは１〜２２、好ましくは１〜４の整数であり、ｐは０〜１７、好ましくは０〜２の整数であり、ｘは２〜２０００、好ましくは２〜１５０の整数である］
で表される化合物が挙げられる。
前記フタロシアニン色素としては、下記式（ＩＩ−２）：
0005979385.tif 000006
［式中、Ｒ１〜Ｒ１６は、以下の基：
0005979385.tif 000007
0005979385.tif 000008
であり、但し、Ｒ１〜Ｒ１６のうち少なくとも１つが、−（ＣＨ２）ａ−Ｂ１−（ＣＨ２）ｂ−Ｂ２−Ｄ−Ｅ１［式中の記号は前記式（Ｉ）と同義である］であり、ここで、Ｚ１又はＺ２は、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＳＯ２ＮＨ−、−ＮＨＳＯ２−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−Ｃ６Ｈ４−であり、ここで、Ｒ１７は炭素数が１〜２４、好ましくは６〜１８のアルカン、アルケン又はアルキンであり、Ｐ１は１価の陰イオンである塩化物イオン、臭化物イオン又はヨウ化物イオンであり、Ｍ１は水素（２原子）又は、陽イオンである亜鉛イオン、銅イオン、鉄イオン、マグネシウムイオン、コバルトイオン、錫イオン、チタンイオン、又はニッケルイオンであり、Ｍは１価の陽イオンである水素イオン、リチウムイオン、ナトリウムイオン又はカリウムイオンであり、Ｐ２は１価の陽イオンである水素イオン、リチウムイオン、ナトリウムイオン又はカリウムイオンであり、ｎ又はｍは０〜２２、好ましくは０〜４の整数であり、ｌは１〜２２、好ましくは０〜４の整数であり、ｐは０〜１７、好ましくは０〜２の整数であり、ｘは２〜２０００、好ましくは２〜１５０の整数である］
で表される化合物が挙げられる。
前記スクアリリウム色素としては、下記式（ＩＩ−３）：
0005979385.tif 000009
［式中、Ｒ１〜Ｒ８は、以下の基：
0005979385.tif 000010
0005979385.tif 000011
であり、但し、Ｒ１〜Ｒ８のうち少なくとも１つが−（ＣＨ２）ａ−Ｂ１−（ＣＨ２）ｂ−Ｂ２−Ｄ−Ｅ１［式中の記号は前記式（Ｉ）と同義である］であり、ここで、Ｚ１又はＺ２は、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＳＯ２ＮＨ−、−ＮＨＳＯ２−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−Ｃ６Ｈ４−であり、ここで、Ｒ９は炭素数が１〜２４、好ましくは６〜１８のアルカン、アルケン又はアルキンであり、Ｍは１価の陽イオンである水素イオン、リチウムイオン、ナトリウムイオン又はカリウムイオンであり、Ｐ２は１価の陽イオンである水素イオン、リチウムイオン、ナトリウムイオン又はカリウムイオンであり、ｎ又はｍは０〜２２、好ましくは０〜４の整数であり、ｌは１〜２２、好ましくは１〜４の整数であり、ｐは０〜１７、好ましくは０〜２の整数であり、ｘは２〜２０００、好ましくは２〜１５０の整数である］
で表される化合物が挙げられる。
前記クロコニウム色素としては、下記式（ＩＩ−４）：
0005979385.tif 000012
［式中、Ｒ１〜Ｒ６は、以下の基：
0005979385.tif 000013
0005979385.tif 000014
であり、但し、Ｒ１〜Ｒ６のうち少なくとも１つが、−（ＣＨ２）ａ−Ｂ１−（ＣＨ２）ｂ−Ｂ２−Ｄ−Ｅ１［式中の記号は前記式（Ｉ）と同義である］であり、ここで、Ｚ１又はＺ２は、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＳＯ２ＮＨ−、−ＮＨＳＯ２−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−Ｃ６Ｈ４−であり、ここで、Ｒ７は炭素数が１〜２４、好ましくは６〜１８のアルカン、アルケン又はアルキンであり、Ｍは１価の陽イオンである水素イオン、リチウムイオン、ナトリウムイオン又はカリウムイオンであり、Ｐ２は１価の陽イオンである水素イオン、リチウムイオン、ナトリウムイオン又はカリウムイオンであり、ｎ又はｍは０〜２２、好ましくは０〜４の整数であり、ｌは１〜２２、好ましくは１〜４の整数であり、ｐは０〜１７、好ましくは０〜２の整数であり、ｘは２〜２０００、好ましくは２〜１５０の整数である］
で表される化合物が挙げられる。
前記ジインモニウム色素としては、下記式（ＩＩ−５）：
0005979385.tif 000015
［式中、Ｒ１〜Ｒ６は、以下の基：
0005979385.tif 000016
0005979385.tif 000017
であり、但し、Ｒ１〜Ｒ６のうち少なくとも１つが、−（ＣＨ２）ａ−Ｂ１−（ＣＨ２）ｂ−Ｂ２−Ｄ−Ｅ１［式中の記号は前記式（Ｉ）と同義である］であり、ここで、Ｚ１又はＺ２は、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＳＯ２ＮＨ−、−ＮＨＳＯ２−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−Ｃ６Ｈ４−であり、ここで、Ｒ７は炭素数が１〜２４、好ましくは６〜１８のアルカン、アルケン又はアルキンであり、Ｐ１は１価の陰イオンである塩化物イオン、臭化物イオン又はヨウ化物イオンであり、Ｍは１価の陽イオンである水素イオン、リチウムイオン、ナトリウムイオン又はカリウムイオンであり、Ｐ２は１価の陽イオンである水素イオン、リチウムイオン、ナトリウムイオン又はカリウムイオンであり、ｎ又はｍは０〜２２、好ましくは０〜４の整数であり、ｌは１〜２２、好ましくは１〜４の整数であり、ｐは０〜１７、好ましくは０〜２の整数であり、ｘは２〜２０００、好ましくは２〜１５０の整数である］
で表される化合物が挙げられる。
前記式（ＩＩ−１）で示されるインドシアニングリーン色素は、例えば、ＷＯ２０１１／１５２０４６号パンフレット、ＷＯ１９９５／００７８８８号パンフレット、特開平９−１２４５９９号公報、特開平３−１７１１３６号公報、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）６０，２３９１等に記載の公知の方法に従って合成することができる。
具体的には、下記のスキームに従って合成することができる。
0005979385.tif 000018
［式中の記号は前記式（ＩＩ−１）と同義である］。
インドール誘導体（例えば、２，３，３−トリメチル−４，５−ベンゾ−３Ｈ−インドール）を臭素化合物（Ｂｒ−Ｒ１）でアルキル化してＮ−Ｒ１置換インドール誘導体とした後、グルタコンアルデヒドジアニル類と反応させて、ヘキサトリエン鎖に連結し、次いで、Ｎ−Ｒ２置換インドール誘導体をカップリングさせることにより、目的とするインドシアニングリーン色素を得ることができる。
前記式（ＩＩ−２）で示されるフタロシアニン色素は、例えば、特開２００４−１８５６１号公報等に記載の公知の方法に従って合成することができる。
前記式（ＩＩ−３）で示されるスクアリリウム色素は、例えば、特開２０１１−６９８４６号公報等に記載の公知の方法に従って合成することができる。
前記式（ＩＩ−４）で示されるクロコニウム色素は、例えば、特開２００７−３１６４４号公報等に記載の公知の方法に従って合成することができる。
前記式（ＩＩ−５）で示されるジインモニウム色素は、例えば、Ｒｅｐｏｒｔｓ  Ｒｅｓ．Ｌａｂ．Ａｓａｈｉ  Ｇｌａｓｓ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．（２００５）５５，６７−７１「１１．ジイモニウム系化合物を用いた近赤外線吸収フィルムの耐久性向上」等に記載の公知の方法に従って合成することができる。
本発明のリポソーム複合体は、当該技術分野において知られる任意の方法を用いて製造することができ、例えば、光吸収化合物に結合したリポソーム膜構成物質とリン脂質と薬剤とを適当な有機溶媒中に溶解し、これを乾燥後に水性溶液中に分散させて、フィルターに繰り返し通過させることにより製造することができる。あるいは、当技術分野において知られるように、超音波処理又は逆相蒸発法により製造してもよい。
一例として、光吸収化合物に結合したリポソーム膜構成物質、リン脂質（例えばホスファチジルコリンを含む卵黄レシチン）、脂質（例えばコレステロール）、親水性ポリマーのリン脂質誘導体（例えばポリエチレングリコール修飾リン脂質）を適当な有機溶媒中に溶解し、有機溶媒を除去して薄膜を形成させた後に、薬剤を含む水溶液を加える。水溶液としては、生理学的に許容しうる緩衝液であれば、任意のものを用いることができる。生体内でリポソーム複合体を安定化させるために、アルブミンを含む緩衝液を用いることもできる。
次に、緩衝液中にリン脂質が分散している懸濁液を孔径０．１〜０．２μｍのフィルターに約１０〜３０回通すと、リポソーム複合体を形成することができる。リポソーム複合体の粒子径は、用いるリン脂質、脂質及び／又は修飾リン脂質の種類、濃度、フィルターの孔サイズ、フィルターの材質、さらにフィルターを通過させる回数等を変化させることにより、適宜調節することができる。必要であれば、形成されたリポソームをサイズ分画して、所望の直径を有するリポソームを調製することもできる。例えば、腫瘍組織に長時間繋留させるためには、リポソームの粒子径は２０〜２５０ｎｍ、より好ましくは５０〜２００ｎｍの範囲であることが好ましい。
本発明のリポソーム複合体を用いた光線温熱療法及び／又は光線力学療法は、例えば、本発明のリポソーム複合体を所定濃度含んだ生理食塩水を静脈投与又は腫瘍内投与し、一定時間後、近赤外光を照射可能な装置により患部を光照射することによって行うことができる。リポソーム複合体の濃度や光照射時間等は、所望する治療効果を考慮して適宜設定することができる。
本発明のリポソーム複合体を用いた光線温熱療法及び／又は光線力学療法は、各種の腫瘍、例えば脳腫瘍、インスリノーマ、鼻腔癌、口腔癌、腎臓癌、肺癌、大腸癌、軟部肉腫、転移癌（胸膜転移、腹膜転移）等に対し、治療効果を示す。
本発明のリポソーム複合体を蛍光イメージングで用いる場合は、本発明のリポソーム複合体単独で、あるいは、リポソーム複合体の脂質二重膜の構成成分として、近赤外蛍光色素に結合したリポソーム膜構成物質をさらに含むリポソーム複合体、又は近赤外蛍光色素をリポソーム内に包含させたリポソーム複合体を適宜用いることができる。場合により、本発明のリポソーム複合体と、近赤外蛍光色素に結合したリポソーム膜構成物質を含むリポソーム複合体及び／又はリポソーム内に近赤外蛍光色素を包含したリポソームとを適宜組み合わせることもできる。
本明細書は、本願の優先権の基礎である特願２０１１−２２３２７３の明細書及び／又は図面に記載される内容を包含する。
【実施例】
【０００９】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。
［実施例１］インドシアニングリーン色素ＩＣＧ−８の合成
本発明のインドシアニングリーン色素であるＩＣＧ−８は、下記のスキームに従って合成した。
0005979385.tif 000019
［２，３，３−トリメチル−１−（４−スルホブチル）−４，５−ベンゾインドリウム内塩（２）］
２５ｍｌ四つ口フラスコに２，３，３−トリメチル−４，５−ベンゾ−３Ｈ−インドール（１）（３．１ｇ，１５ｍｍｏｌ）と，４−ブタンスルトン（２．１ｇ，１５ｍｍｏｌ）を混合し、容器内を窒素置換した。８０℃で４時間攪拌した後、室温まで放冷し、アセトンを加えて反応混合物を析出させた。しばらく攪拌してから結晶をろ別し、アセトン１０ｍｌで洗浄した後、風乾させて灰色結晶（２）（１．１７ｇ，２３％）を得た。
［２−（６−アセトアニリド−１，３，５−ヘキサトリエニル）−３，３−ジメチル−１−（スルホブチル）−４，５−ベンゾ［ｅ］インドリウム内塩（３）］
２５ｍｌ四つ口フラスコにインドリウム塩（２）（１．０４ｇ，３．０ｍｍｏｌ）とグルタコンアルデヒドジアニル塩酸塩（０．９４ｇ，３．３ｍｍｏｌ）とを混合し、１２０℃で１時間攪拌した。室温まで放冷し、１時間攪拌後、結晶をろ別した。得られた結晶をアセトンでけん洗し、ろ別した後、風乾させて暗紫色結晶状の目的物（３）（０．９１ｇ，５８％）を得た。
［ヨウ化１−オクタデシル−２，３，３−トリメチル−４，５−ベンゾ［ｅ］インドリウム（４）］
１００ｍｌ四つ口フラスコに２，３，３−トリメチル−４，５−ベンゾ−３Ｈ−インドール（８．４ｇ，４０ｍｍｏｌ）、１−ヨードオクタデカン（１６．８ｇ，４４ｍｍｏｌ）及び２−ブタノン（３０ｍｌ）を混合し、７０℃で１８時間攪拌した後、室温まで放冷し、酢酸エチル（４０ｍｌ）を加えて結晶をろ別した。得られた結晶を酢酸エチルでけん洗（２回）し、ろ別した後、風乾させて灰色結晶状の目的物（４）（４．４ｇ，１９％）を得た。
［４−（２−（（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−（１，１−ジメチル−３−オクタデシル−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−２（３Ｈ）−イリデン）ヘプタ−１，３，５−トリエニル）−１，１−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドリウム−３−イル）ブタン−１−スルホン酸（５）］
５０ｍｌ三つ口フラスコに化合物（３）（１．５８ｇ，３．０ｍｍｏｌ）、インドリウム塩（４）（１．７７ｇ，３．０ｍｍｏｌ）及びピリジン１６ｍｌを混合して溶解させ、これを窒素雰囲気下、５０℃で１時間反応させた。反応後、水（４０ｍｌ）に排出して析出した結晶をろ別した。得られた粗結晶を酢酸エチルで解した後、ろ別し得られた結晶をクロロホルム／酢酸エチル（１／１）４０ｍｌで再結晶させて、濃緑色の結晶状目的物（５）（１．３９ｇ，５３％）を得た。
ＬＣ−ＭＳの主な分子イオンピークはｍ／ｚ＝８６７（ｎｅｇａｔｉｖｅ）であった。また、エタノール中における極大吸収波長、モル吸光係数は、それぞれ、λｍａｘ＝７８７ｎｍ、ε＝２．３０×１０５であった。
［実施例２］
（１）蛍光スペクトル
・ＩＣＧを内包するリポソーム分散液（ＩＣＧ）
卵黄由来ホスファチジルコリンを１０．０ｍＭ及びＩＣＧ（ジアグノグリーン注、第一三共）を３．２×１０−２ｍＭとしたクロロホルム／メタノール（９：１、ｖ／ｖ）溶液を調製し、そのうち３ｍＬを減圧下で溶媒留去し、生成した薄膜に生理食塩水３ｍＬを添加し、０．２２μｍ孔径のフィルターで処理してリポソームを得た。
・ＩＣＧ−８を脂質二重膜に有するリポソーム分散液（ＬＰ−ＩＣＧ−８）
卵黄由来ホスファチジルコリンを１０．０ｍＭ及びＩＣＧ−８を３．２×１０−２ｍＭとしたクロロホルム／メタノール（９：１、ｖ／ｖ）溶液を調製し、そのうち３ｍＬを減圧下で溶媒留去し、生成した薄膜に生理食塩水３ｍＬを添加し、０．２２μｍ孔径のフィルターで処理してリポソームを得た。
前記のリポソーム分散液それぞれについて、蛍光スペクトルを測定したところ（日本分光ＦＰ−６６００）、励起波長７３６ｎｍとして図２に示す蛍光スペクトルを得た。ＩＣＧの蛍光最大波長は８５２ｎｍであり、ＩＣＧ−８の蛍光最大波長は８５４ｎｍであった。
（２）静脈投与後の近赤外線カメラ映像
・ＩＣＧ水溶液（ＩＣＧ）
ＩＣＧを３．２ｍＭとなるよう純水に溶解し、生理食塩水で１００倍希釈した。
・ＩＣＧ−８を脂質二重膜に有するリポソーム分散液（ＬＰ−ＩＣＧ−８）
卵黄由来ホスファチジルコリン（１０．０ｍＭ）、コレステロール（１．０ｍＭ）、ポリエチレングリコール修飾型ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）（５．０×１０−１ｍＭ）、ＩＣＧ−８（３．２×１０−２ｍＭ）を含むクロロホルム／メタノール（９：１，ｖ／ｖ）溶液を調製し、５ｍＬを減圧下にて留去し、生成した薄膜に生理食塩水５ｍＬを添加し、０．２２μｍ孔径のフィルターで処理した後、０．０５μｍ孔径のフィルターでさらに処理してリポソームを得た。
・ラット
試験には、Ｆ３４４／Ｊｃ１  ３４−３６  ｗｅｅｋｓ  ９Ｌのラットを用いた。これは、脳腫瘍細胞９Ｌを用いて皮膚下に担癌（グリオーマ）させたラットである。腫瘍組織は、腫瘍径約３０ｍｍのものを用いた。腫瘍箇所の毛を刈り上げた後に、ＩＣＧ水溶液又はＬＰ−ＩＣＧ−８を、頸静脈からそれぞれ５００μＬ投与した。投与５分後に蛍光観察（瑞穂医科工業，Ｈｙｐｅｒ  Ｅｙｅ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍ，励起波長７６０〜７８０ｎｍ，蛍光波長＞７８０ｎｍ）を行った（図３）。ラットとカメラヘッドとの距離は５０ｃｍとした。
図３より、ＩＣＧ水溶液（ＩＣＧ）を用いた場合では、色素が拡散してしまい腫瘍組織にＩＣＧが蓄積しなかったが、ＬＰ−ＩＣＧ−８を用いた場合では、ＩＣＧ−８を脂質二重膜に含むリポソーム（ＬＰ−ＩＣＧ−８）が腫瘍組織に蓄積したことが理解される。
（３）光線力学療法／光線温熱療法
・ＩＣＧ水溶液（ＩＣＧ）（２．５ｍｇ／ｍＬ）
ＩＣＧを２．５ｍｇ／ｍＬとなるよう純水に溶解させた。
・ＩＣＧ−８を脂質二重膜に有するリポソーム分散液（ＬＰ−ＩＣＧ−８）
卵黄由来ホスファチジルコリン（１０．０ｍ）、コレステロール（１．０ｍＭ）、ポリエチレングリコール修飾型ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）（５．０×１０−１ｍＭ）、ＩＣＧ−８（３．２×１０−２ｍＭ）を含むクロロホルム／メタノール（９：１，ｖ／ｖ）溶液を調製し、１０ｍＬを減圧下にて留去し、生成した薄膜にＩＣＧ水溶液（２．５ｍｇ／ｍｌ）１０ｍＬを添加し、０．２２μｍ孔径のフィルターで処理した後、０．０５μｍ孔径のフィルターでさらに処理してリポソームを得た。
・ラット
Ｆ３４４／Ｊｃ１  ３４−３６  ｗｅｅｋｓ  ９Ｌラットにおいて、腫瘍径約３０ｍｍの腫瘍組織を用いた。腫瘍箇所の毛を刈り上げた後に、２ｍＬの各溶液を腫瘍内投与した。投与直後、光照射装置（東京医研、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）により、６００〜１６００ｎｍの波長、５Ｗ出力で２０分間光照射した。その際、腫瘍内部へ温度計を挿入し皮膚表面温度の測定を行って、皮膚表面が４５℃になった場合はエタノールを表面にかけて、皮膚のやけどを防止した。ラット皮下腫瘍モデルにおける光線力学療法／光線温熱療法の概要を図４に、ＬＰ−ＩＣＧ−８又はＩＣＧ水溶液を腫瘍内投与した直後及び４８時間後の腫瘍の写真を図５に、当業者に公知の方法でヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）染色したそれぞれの組織切片の写真を図６に示す。図５より、ＬＰ−ＩＣＧ−８を用いた場合では、ＩＣＧ水溶液を用いた場合に比べ、有意に腫瘍が退縮しており、また、図６より、死細胞が全細胞に占める割合が増大したことが理解される。
（４）近赤外光による内包薬剤の放出制御の確認
ＩＣＧ−８（３．２×１０−２ｍＭ）、卵黄由来ホスファチジルコリン（１０．０ｍＭ）を含むクロロホルム／メタノール（９／１，ｖ／ｖ）溶液を調製し、そのうち３ｍＬをとって減圧下で溶媒留去した。生成した薄膜に対し、フルオレセイン水溶液（５．０×１０−２ｍＭ）を１．５ｍＬ添加して薄膜を膨潤させた後、蛍光消光剤として塩化コバルト水溶液（２．０ｍＭ）を１．５ｍＬ添加した。分光蛍光光度計（日本分光ＦＰ−６６００）により、励起波長４９６ｎｍとして蛍光スペクトルを得た。その後、約１Ｗの８０８ｎｍレーザーの１分間照射を５回繰り返し、同様に蛍光スペクトルを測定した（図７）。図７より、光照射後の蛍光強度が低下していることから、本発明のリポソーム複合体に内包されたフルオレセインが、光照射によるリポソームの開裂により徐放されたことが確認される。
（５）近赤外光によるシスプラチン（ＣＤＤＰ）の放出制御
・ＩＣＧ及びシスプラチン（ＣＤＤＰ）を含む水溶液（ＩＣＧ＋ＣＤＤＰ）
生理食塩水９ｍｌに、３．２ｍＭとなるように２５ｍｇのＩＣＧを溶解させ、１ｍｌのシスプラチン（ランダ注，日本化薬）と混合した。
・ＩＣＧ−８を脂質二重膜に有するリポソームに、シスプラチンを内包させたリポソーム複合体を含む水溶液（ＬＰ−ＩＣＧ−８＿ＣＤＤＰ）
１ｍＬのＣＤＤＰ、及びＩＣＧ−８（３．２ｍＭ）を含む生理食塩水９ｍＬを混合した水溶液を調製した。一方、卵黄由来ホスファチジルコリン（１０．０ｍＭ）、コレステロール（１．０ｍＭ）、ポリエチレングリコール修飾型ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）（５．０×１０−１ｍＭ）、ＩＣＧ−８（３．２×１０−１ｍＭ）としたクロロホルム／メタノール（９：１，ｖ／ｖ）溶液を調製し、そのうち１０ｍＬを減圧下にて留去し、薄膜を生成した。この薄膜に、シスプラチンを含むＩＣＧ溶液１０ｍＬを添加し、０．２２μｍ孔径のフィルターで処理した後、０．０５μｍ孔径のフィルターでさらに処理してリポソーム複合体を得た。
・ラット
Ｆ３４４／Ｊｃ１  ３４−３６  ｗｅｅｋｓ  ９Ｌのラットにおいて、腫瘍径約３０ｍｍの腫瘍組織を用いた。腫瘍箇所の毛を刈り上げた後に、２ｍＬの各溶液を腫瘍内投与した。投与直後、光照射装置（東京医研、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）により、６００〜１６００ｎｍの波長、５Ｗ出力で２０分間光照射した。その際、腫瘍内部へ温度計を挿入し皮膚表面温度の測定を行い、皮膚表面が４５℃になった場合は、エタノールを表面にかけて、皮膚のやけどを防止した。図８に、ＩＣＧ＋ＣＤＤＰ又はＬＰ−ＩＣＧ−８＿ＣＤＤＰを腫瘍内投与した直後及び４８時間後の腫瘍の写真を、また、図９に、ＨＥ染色によるそれぞれの組織薄膜の写真を示す。
図８より、ＬＰ−ＩＣＧ−８＿ＣＤＤＰを用いた場合では、ＩＣＧ＋ＣＤＤＰを用いた場合に比べ、有意に腫瘍が退縮しており、また、図９より、死細胞が全細胞に占める割合が増大したことが理解される。
［実施例３］ＩＣＧ−８の一重項酸素測定
ＩＣＧ−８が一重項酸素産生能力を有していることを以下の測定により確認した。その結果、ＩＣＧ−８は、光線力学療法を行うために必須である一重項酸素産生能力を有していることが判明した。
測定条件は以下のとおりである。
励起波長６９０ｎｍ、平均出力２０ｍＷ、繰返し３０Ｈｚ、パルス幅約１０ｎｍ、ＤＣＭを用いた色素レーザーで励起した。
検出は、−８０℃に冷却したゲート付近赤外イメージインテンシファイア（ＮＩＲ−ＰＩＩ）を用いて分光器（焦点距離２５０ｍｍ、グレーティング６００Ｌ／ｍｍ）で分光し、励起３０μ秒後から２００μ秒間計測した。
結果を図１０に示す。図１０において、赤線はＩＣＧ−８に由来する一重項酸素（１２７０ｎｍ）の発生を示し、青線はβ−カロチン（濃度；４μＭ）による一重項酸素の補足を示す。
［実施例４］インドシアニングリーン色素ＩＣＧ−１１の合成
本発明のインドシアニングリーン色素であるＩＣＧ−１１は、下記のスキームに従って合成した。
0005979385.tif 000020
［臭化２，３，３−トリメチル−１−（２−カルボキシエチル）−４，５−ベンゾインドリウム（６）］
２５ｍｌ四つ口フラスコに２，３，３−トリメチル−４，５−ベンゾ−３Ｈ−インドール（１）（２．３ｇ，１１ｍｍｏｌ）、３−ブロモ−１−プロピオン酸（１．５ｇ，９．８ｍｍｏｌ）及びアセトニトリル（１０ｍｌ）を混合し、６５℃で１６時間攪拌した後、室温まで放冷し、酢酸エチル（５０ｍｌ）に排出した。結晶をろ別して、得られた結晶をアセトンでけん洗し、ろ別した後、風乾させて灰色結晶状の目的物（６）（１．６８ｇ，４７％）を得た。
［４−（２−（（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−（３−（２−カルボキシエチル）−１，１−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−２（３Ｈ）−イリデン）ヘプタ−１，３，５−トリエニル）−１，１−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドリウム−３−イル）ブタン−１−スルホン酸（７）（ＩＣＧ−６）］
２５ｍｌ四つ口フラスコに化合物（６）（０．５５ｇ，１．５ｍｍｏｌ）、実施例１に記載の化合物（３）（０．８０ｇ，１．５ｍｍｏｌ）及びピリジン（８ｍｌ）を混合し、５０℃で４５分攪拌した後、室温まで放冷した。反応液を減圧下濃縮し、残渣に水（２０ｍｌ）を加え攪拌し、次いで１０％塩酸を少しずつ加えてしばらく攪拌した（ｐＨ３〜４）。結晶をろ別後、風乾させて粗生成物（１．１２ｇ）を得た。得られた結晶にメタノール／クロロホルム（５／１）２０ｍｌを加え加熱攪拌し、放冷後結晶をろ別した。得られた結晶をメタノール／クロロホルムで再結晶させて、ろ別後、風乾させて深緑色結晶状のＩＣＧ−６（０．３８ｇ，３７％）を得た。
ＬＣ−ＭＳの主な分子イオンピークはｍ／ｚ＝６８７（ｎｅｇａｔｉｖｅ）であった。また、エタノール中における極大吸収波長、モル吸光係数は、それぞれλｍａｘ＝７８６ｎｍ、ε＝１．８６×１０５であった。
［４−（２−（（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−（３−（２−（１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミノカルボニル）エチル）−１，１−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−２（３Ｈ）−イリデン）ヘプタ−１，３，５−トリエニル）−１，１−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドリウム−３−イル）ブタン−１−スルホン酸（８）（ＩＣＧ−１１）］
２５ｍＬ四つ口フラスコにＩＣＧ−６（７）（０．５ｇ，０．７３ｍｍｏｌ），Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）（０．１７ｇ，１．５ｍｍｏｌ），アセトニトリル（３ｍＬ）とクロロホルム（１０ｍＬ）を仕込み、容器内を窒素置換した。２℃に保ちながらＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（０．３０ｇ，１．５ｍｍｏｌ）とクロロホルム（２ｍＬ）の混合液を１０分かけて滴下した。ゆっくり室温まで昇温し、３０分攪拌した後、反応液をろ過した。ろ液を２５℃以下に保ちながら減圧濃縮し、残渣を酢酸エチルでほぐして結晶をろ集後、アセトンで懸洗することでＩＣＧ−１１前駆体（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル）の粗結晶（０．６６ｇ）を得た。続いて、得られた結晶（０．６６ｇ，ｃａ．０．７３ｇ）とクロロホルム（１０ｍＬ）を２５ｍＬ四つ口フラスコに仕込み、窒素雰囲気下で１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ；ＮＯＦ  ＣＯＲＰＯＲＡＴＩＯＮ製ＣＯＡＴＳＯＭＥ  ＭＥ−８１８１）（０．５４ｇ，０．７３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．１０ｇ，１．０ｍｍｏｌ）及びクロロホルム（５ｍＬ）の混合液を２０分かけて滴下した。室温下で２．５時間撹拌、反応液をろ過後、ろ液を濃縮し、残渣をフラッシュカラム（ＳｉＯ２，ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝４／１〜３／１）で精製することでＩＣＧ−１１（８）（０．３７ｇ，３６％）を得た。
［実施例５］
（１）ＩＣＧ−１１の蛍光スペクトル特性
ＩＣＧ−１１の物性を極性の異なる水溶液中において、ＩＣＧと検討した。その結果、ＩＣＧ−１１は、ＩＣＧよりも強い蛍光を発することが判明した。
（ａ）極性溶媒であるメタノール中での比較
ＩＣＧ−１１は、ＩＣＧと比較して、１．５倍の強さの蛍光を発することが判明した。
（ｂ）非極性溶媒であるクロロホルム中での比較
ＩＣＧ−１１は、ＩＣＧが蛍光を発しないのとは、対照的に十分な強さの蛍光を発することが判明した。
結果を図１１に示す。図１１において、黒線及び赤線は、それぞれＩＣＧ−１１（濃度；１μＭ）及びＩＣＧ（濃度；１μＭ）についての結果を示す。
（２）ＩＣＧ−１１の一重項酸素測定
ＩＣＧ−１１が一重項酸素産生能力を有していることを以下の測定により確認した。その結果、ＩＣＧ−１１は、光線力学療法を行うために必須である一重項酸素産生能力を有していることが判明した。
測定条件は以下のとおりである。
励起波長６９０ｎｍ、平均出力２０ｍＷ、繰返し３０Ｈｚ、パルス幅約１０ｎｍ、ＤＣＭを用いた色素レーザーで励起した。
検出は、−８０℃に冷却したゲート付近赤外イメージインテンシファイア（ＮＩＲ−ＰＩＩ）を用いて分光器（焦点距離２５０ｍｍ、グレーティング６００Ｌ／ｍｍ）で分光し、励起３０μ秒後から２００μ秒間計測した。
結果を図１２に示す。図１２において、赤線はＩＣＧ−１１に由来する一重項酸素（１２７０ｎｍ）の発生を示し、青線はβ−カロチン（濃度；６μＭ）による一重項酸素の補足を示す。
（３）ＩＣＧ−１１の熱発生能力
ＩＣＧ−１１が有する熱発生能力を以下の条件により測定した。その結果、ＩＣＧ−１１は、温熱療法を行うために必須である熱発生能力（３７℃から４３℃への組織温度の上昇）を有していることが判明した。
測定条件は以下のとおりである。
励起波長８０８ｎｍ、出力０．５Ｗ／ｍ２で励起した。温度は、１秒間隔で測定した。
結果を図１３に示す。図１３において、黒線、赤線、青線及び緑線は、それぞれＩＣＧ−１１濃度が０μＭ、１μＭ、２μＭ及び４μＭのときの結果を示す。
（４）ＩＣＧ−１１を脂質二重膜中に有するリポソーム分散液（ＬＰ−ＩＣＧ−１１）の作成法
（４−ａ）成形方法
ＩＣＧ−１１と脂質二重膜の主成分であるジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）との混合比を変えることにより、リポソームへのＩＣＧ−１１の搭載可能量を検討した。比較検討のために、ＩＣＧの搭載可能量を検討した。
ＤＯＰＣ（１０ｍＭ）、コレステロール（５ｍＭ）、ポリエチレングリコール修飾型ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ，０．５ｍＭ）、及びＩＣＧ−１１（０〜５ｍＭ）又はＩＣＧ（０〜０．５ｍＭ）をクロロホルム／メタノール（９：１，ｖ／ｖ）溶液により溶解し、一部を減圧乾燥し、生成した薄膜に生理食塩水を添加し、孔径１００ｎｍのフィルターで処理してリポソーム分散液を得た。
（４−ｂ）搭載量
ＩＣＧ−１１がリポソームを形成する際の、脂質二重膜への組み込み量を以下の条件により測定した。
ＩＣＧ−１１又はＩＣＧが組み込まれたリポソームと脂質二重膜に組み込まれずリポソーム分散液中に遊離するＩＣＧ−１１又はＩＣＧをゲル濾過カラム（ＰＤ−１０、ＧＥ社製）により、分離定量した（図１４）。
その結果、ＩＣＧ−１１は、脂質二重膜の主成分であるＤＯＰＣと最大でＩＣＧ−１１：ＤＯＰＣ＝１：２の割合まで組み込み可能であることが判明した（図１４ａ）。
一方、ＩＣＧは、脂質二重膜の主成分であるＤＯＰＣと最大でＩＣＧ：ＤＯＰＣ＝１：１００の割合まで組み込み可能であることが判明した（図１４ｂ−（１））。
ＩＣＧ：ＤＯＰＣ＝１：４０（図１４ｂ−（２））、ＩＣＧ：ＤＯＰＣ＝１：２０（図１４ｂ−（３））の割合でリポソームを形成した際は、脂質二重膜に組み込まれなかったＩＣＧが分散液中で増加していることが確認された。
（４−ｃ）粒子径
ＩＣＧ−１１がリポソームを形成する際の、脂質二重膜への組み込み量と粒子径との関係を以下の条件により測定した。
リポソームに様々な割合でＩＣＧ−１１を組込み、脂質二重膜への各含有量（０．０、０．５、１．０、５．０、１０．０％）における粒子径を、動的光散乱測定装置ＳＺ−１００を用いて測定した。
その結果、ＩＣＧ−１１の含有量の増加に伴い、リポソームの粒子径分布（図１５）がブロードになると共に、算術平均径（表１）も増加したが、いずれの場合もＥＰＲ効果の条件を満たす範囲内であることが確認された。
【表１】
0005979385.tif 000021
（４−ｄ）ゼータ電位
ＩＣＧ−１１がリポソームを形成する際の、脂質二重膜への組み込み量とゼータ電位との関係を以下の条件により測定した。
リポソームに様々な割合でＩＣＧ−１１を組込み、脂質二重膜への各含有量（０．０、３．１、６．３、１２．５、２５．０％）におけるゼータ電位を、動的光散乱測定装置ＳＺ−１００を用いて測定した。
その結果、ＩＣＧ−１１の含有量の増加に伴い、リポソームのゼータ電位の絶対値が増加し（表２）、安定なリポソームを形成していることが確認された。
【表２】
0005979385.tif 000022
（５）ＩＣＧ−１１を脂質二重膜中に有するリポソーム分散液（ＬＰ−ＩＣＧ−１１）のＵＶスペクトル特性
ＩＣＧ−１１を脂質二重膜中に組み込んだリポソーム分散液（ＬＰ−ＩＣＧ−１１）が有するＵＶスペクトル特性に関し、ＩＣＧと検討した。その結果、ＩＣＧ−１１は、脂質二重膜中に組み込まれることにより、ＩＣＧよりも長波長側に吸収スペクトルが変化することが判明した。
結果を図１６に示す。図１６において、黒線及び赤線は、それぞれＬＰ−ＩＣＧ−１１（濃度；１０μＭ）及びＩＣＧ（濃度；１０μＭ）についての測定結果を示す。
（６）ＩＣＧ−１１を脂質二重膜中に有するリポソーム分散液（ＬＰ−ＩＣＧ−１１）の蛍光スペクトル特性
ＩＣＧ−１１を脂質二重膜中に組み込んだリポソーム分散液（ＬＰ−ＩＣＧ−１１）が有する、蛍光スペクトル特性に関し、ＩＣＧと検討した。その結果、ＩＣＧ−１１は、脂質二重膜中に組み込まれることにより、ＩＣＧよりも長波長側に蛍光スペクトルが変化すると共に、発光強度の上昇が認められた。
結果を図１７に示す。図１７において、黒線及び赤線は、それぞれＬＰ−ＩＣＧ−１１（濃度；１μＭ）及びＩＣＧ（濃度；１μＭ）についての測定結果を示す。
（７）ＩＣＧ−１１を脂質二重膜中に有するリポソーム分散液（ＬＰ−ＩＣＧ−１１）の熱発生能力
ＬＰ−ＩＣＧ−１１が有する熱発生能力を以下の条件により測定した。その結果、ＬＰ−ＩＣＧ−１１は、温熱療法を行うために必須である熱発生能力（３７℃から４３℃への組織温度の上昇）を有していることが判明した。
（７−ａ）試験管内
測定条件
試験管内に１．５ｍＬの溶液を充填し、励起波長８０８ｎｍ、出力０．５Ｗ／ｍ２で励起した。温度は、１秒間隔で測定した。
結果を図１８に示す。図１８において、黒線、赤線及び青線は、それぞれＬＰ−ＩＣＧ−１１、ＩＣＧ及びコントロール（生理食塩水）についての測定結果を示す。
（７−ｂ）生体内
測定条件
ＬＰ−ＩＣＧ−１１又は生理食塩水をヌードマウスの尾静脈より投与し、その３日後に励起波長８００ｎｍ、出力０．２２Ｗ／ｍ２で励起した。温度は、１秒間隔で測定した。
結果を図１９に示す。図１９において、黒線及び青線は、それぞれＬＰ−ＩＣＧ−１１及びコントロール（生理食塩水）についての測定結果を示す。
（８）ＩＣＧ−１１を脂質二重膜中に有するリポソーム分散液（ＬＰ−ＩＣＧ−１１）の体内分布変化
（８−ａ）腫瘍と体表との比較
ＬＰ−ＩＣＧ−１１が有する腫瘍特異的集積能力を、時間変化を追って体表と比較することにより検討した。ＬＰ−ＩＣＧ−１１は、ヌードマウスの尾静脈より投与し、１時間後、１日後、２日後、３日後に分布状況を測定した。その結果、投与１日後より、腫瘍への特異的集積が観測され、時間の経緯と共に、特異的集積が顕著となってきた。
結果を図２０に示す。
（８−ｂ）腫瘍と各臓器との比較
ＬＰ−ＩＣＧ−１１が有する腫瘍特異的集積能力を、時間変化を追って他の臓器と比較することにより検討した。ＬＰ−ＩＣＧ−１１は、ヌードマウスの尾静脈より投与し、１時間後、１日後、２日後、３日後に分布状況を測定した。その結果、投与１日後より、腫瘍への特異的集積が観測され、時間の経緯と共に、特異的集積が顕著となってきた。
結果を図２１に示す。
（９）ＩＣＧ−１１を脂質二重膜中に有するリポソーム分散液（ＬＰ−ＩＣＧ−１１）の治療効果
（９−ａ）ラット；脳腫瘍
ＬＰ−ＩＣＧ−１１が有する抗癌効果をラット（Ｆ３４４／Ｊｃ１）の脳腫瘍モデルにより検討した。
治療方法
ＬＰ−ＩＣＧ−１１（１７．５ｍｇ含有）を尾静脈注射により投与し、以下のプロトコールで治療を行った。
１クール／２週間での治療計画
１日目（月曜日）；ＬＰ−ＩＣＧ−１１投与
１日目（月曜日）；近赤外光照射（８００ｎｍ  ＬＥＤライト、０．２５Ｗ／ｍ２、２０分間）
２日目（火曜日）；近赤外光照射（８００ｎｍ  ＬＥＤライト、０．２５Ｗ／ｍ２、２０分間）
３日目（水曜日）；近赤外光照射（８００ｎｍ  ＬＥＤライト、０．２５Ｗ／ｍ２、２０分間）
５日目（金曜日）；ＭＲＩによる腫瘍測定
１２日目（金曜日）；ＭＲＩによる腫瘍測定
治療経過
治療終了後のラットの脳を摘出し、ＬＰ−ＩＣＧ−１１の腫瘍組織への特異的集積を近赤外線蛍光観測装置により確認したところ、図２２に示すように、腫瘍組織のみにＬＰ−ＩＣＧ−１１が集積していることを確認することができた。
治療結果
ＬＰ−ＩＣＧ−１１の抗癌効果により、通常、４週間で致死するところを、７週間以上の延命効果がもたらされた（図２３）。完治には至っていないものの、有効な治療効果がもたらされた。図２３において、青線、赤線及び紫線は、それぞれコントロール、近赤外線照射、ＬＰ−ＩＣＧ−１１・近赤外線照射を示す。
（９−ｂ）猫；アポクリン腺癌、肺及び結腸転移
ＬＰ−ＩＣＧ−１１が有する抗癌効果をアポクリン腺癌・肺及び結腸転移の猫（猫種；雑、年齢；１８歳齢）により検討した。
既往歴
アポクリン腺癌を原発巣とする肺及び結腸転移癌を併発。
治療方法
ＬＰ−ＩＣＧ−１１（１７．５ｍｇ含有）を静脈注射により投与し、以下のプロトコールで治療を行った。
１クール／２週間での治療計画
１日目（月曜日）；ＬＰ−ＩＣＧ−１１投与
１日目（月曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
３日目（水曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
５日目（金曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
８日目（月曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
１０日目（水曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
１２日目（金曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
治療経過（図２４）
１クール目；小康状態を維持（ＳＤ；Ｓｔａｂｌｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ）。血便量は減少。
２クール目；肺転移腫瘍の一部消失を確認（図２４、下）。
３クール目；小康状態を維持（ＳＤ；Ｓｔａｂｌｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ）。
４クール目；小康状態を維持。自宅で死亡。
治療結果
ＬＰ−ＩＣＧ−１１の抗癌効果により、肺転移腫瘍の一部消失及び結腸からの出血の減少が確認されると共に、小康状態を長期に渡り維持可能であることが判明した。
緩和医療における有効性を示唆する結果が得られた。
（９−ｃ）犬；肛門周囲腺癌・リンパ節転移
ＬＰ−ＩＣＧ−１１が有する抗癌効果を肛門周囲腺癌・リンパ節転移の犬（犬種；パピヨン、年齢；１１歳齢）により検討した。
既往歴
肛門周囲腺癌を原発巣とする腰下リンパ節転移を併発。
治療方法
ＬＰ−ＩＣＧ−１１（１７．５ｍｇ含有）を静脈注射により投与し、以下のプロトコールで治療を行った。
１クール／２週間での治療計画
１日目（月曜日）；ＬＰ−ＩＣＧ−１１投与
１日目（月曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
３日目（水曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
５日目（金曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
８日目（月曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
１０日目（水曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
１２日目（金曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
治療経過（図２５及び２６）
１クール目；自力排便が可能になる（ＰＲ；Ｐａｒｔｉａｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）（図２５）。
２クール目；小康状態を維持（ＳＤ；Ｓｔａｂｌｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ）（図２６）
飼い主との協議により、手術によるリンパ節腫瘍の減容積を行ったが、翌日、死亡。
治療結果
ＬＰ−ＩＣＧ−１１の抗癌効果により、腫瘍が縮小することにより自力排便が可能となり、ＱＯＬの向上がもたらされると共に、小康状態を長期に渡り維持可能であることが判明した。
ＱＯＬの向上と緩和医療における有効性を示唆する結果が得られた。
（９−ｄ）猫；鼻腔・眼窩腫瘍（リンパ腫）
ＬＰ−ＩＣＧ−１１が有する抗癌効果を鼻腔・眼窩腫瘍の猫（猫種；雑種、年齢；１５歳齢）により検討した。
治療方法
ＬＰ−ＩＣＧ−１１（１７．５ｍｇ含有）を静脈注射により投与し、以下のプロトコールで治療を行った。
１クール／２週間での治療計画
１日目（月曜日）；ＬＰ−ＩＣＧ−１１投与
１日目（月曜日）；近赤外光照射（飛鳥メディカル社製、ＤＶＬ−３０Ｄ）
３日目（水曜日）；近赤外光照射（飛鳥メディカル社製、ＤＶＬ−３０Ｄ）
５日目（金曜日）；近赤外光照射（飛鳥メディカル社製、ＤＶＬ−３０Ｄ）
８日目（月曜日）；近赤外光照射（飛鳥メディカル社製、ＤＶＬ−３０Ｄ）
１０日目（水曜日）；近赤外光照射（飛鳥メディカル社製、ＤＶＬ−３０Ｄ）
１２日目（金曜日）；近赤外光照射（飛鳥メディカル社製、ＤＶＬ−３０Ｄ）
治療経過（図２７〜３０）
１クール目；病状が進行（ＰＤ；Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ）。
２クール目；小康状態を維持（ＳＤ；Ｓｔａｂｌｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ）。
３クール目；治療効果が認められた（ＰＲ；Ｐａｒｔｉａｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）。
治療結果
１クール目より、高濃度ビタミンＣ療法、丸山ワクチン療法、オゾン療法を併用することにより、ＬＰ−ＩＣＧ−１１の抗癌効果が顕著になり、有効な治療効果がもたらされた。
（９−ｅ）犬；腎臓腫瘍
ＬＰ−ＩＣＧ−１１が有する抗癌効果を腎臓腫瘍の犬（犬種；チワワ、年齢；５歳齢）により検討した。
治療方法
ＬＰ−ＩＣＧ−１１（１７．５ｍｇ含有）を静脈注射により投与し、以下のプロトコールで治療を行った。
１クール／２週間での治療計画
１日目（月曜日）；ＬＰ−ＩＣＧ−１１投与
２日目（火曜日）；近赤外光照射（８００ｎｍ  ＬＥＤライト、０．２５Ｗ／ｍ２、２０分間）
５日目（金曜日）；近赤外光照射（８００ｎｍ  ＬＥＤライト、０．２５Ｗ／ｍ２、２０分間）
９日目（火曜日）；近赤外光照射（８００ｎｍ  ＬＥＤライト、０．２５Ｗ／ｍ２、２０分間）
１２日目（金曜日）；近赤外光照射（８００ｎｍ  ＬＥＤライト、０．２５Ｗ／ｍ２、２０分間）
治療経過
１クール目；小康状態を維持（ＳＤ；Ｓｔａｂｌｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ）。
２クール目；小康状態を維持（ＳＤ；Ｓｔａｂｌｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ）。
３クール目；小康状態を維持（ＳＤ；Ｓｔａｂｌｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ）。
４クール目；低エコー領域が拡大し、治療効果が現れてきたことが確認された（図３１）。また、血液検査の結果（表３）からも症状の改善が診られた（ＰＲ；Ｐａｒｔｉａｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）。
治療結果
ＬＰ−ＩＣＧ−１１の抗癌効果により、腎臓腫瘍の縮小が認められると共に、健康状況が改善された。完治には至っていないものの、有効な治療効果がもたらされた。
【表３】
0005979385.tif 000023
（９−ｆ）犬；軟部組織肉腫
ＬＰ−ＩＣＧ−１１が有する抗癌効果を右前腕部・軟部組織肉腫の犬（犬種；雑種、年齢；６歳齢）により検討した。
既往歴
右の前腕部の軟部組織肉腫の摘出手術実施。
ＩＣＧ局注による光線温熱療法週１回２カ月、２週に１回２カ月、次のクールを実施しようとしたところ再発したため、再度、摘出手術実施（不完全摘出）。
治療方法
ＬＰ−ＩＣＧ−１１（１７．５ｍｇ含有）を静脈注射により投与し、以下のプロトコールで治療を行った。
１クール／２週間での治療計画
１日目（月曜日）；ＬＰ−ＩＣＧ−１１投与
１日目（月曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
３日目（水曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
５日目（金曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
８日目（月曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
１０日目（水曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
１２日目（金曜日）；近赤外光照射（東京医研社製、スーパーライザー、Ｈｙｐｅｒ５０００）
治療経過（図３２）
１クール目；小康状態を維持（ＳＤ；Ｓｔａｂｌｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ）。
２クール目；小康状態を維持（ＳＤ；Ｓｔａｂｌｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ）。
３クール目；小康状態を維持（ＳＤ；Ｓｔａｂｌｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ）。
４クール目；再手術した近位の縫合線状の皮膚に小腫瘤ができ、徐々に肥大化（ＰＤ；Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ）
５クール目；小腫瘤は潰瘍化し、さらに肥大化した後、壊死した（ＰＲ；Ｐａｒｔｉａｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）。
治療結果
ＬＰ−ＩＣＧ−１１の抗癌効果により、軟部組織肉腫に壊死が誘導され、完治には至っていないものの、有効な治療効果がもたらされた。
本明細書中で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願をそのまま参考として本明細書中にとり入れるものとする。
【産業上の利用可能性】
【００１０】
本発明によれば、薬物を非侵襲的に任意の時点で徐放することができる薬物送達系を提供することができる。
【図１】
0005979385.tif 000024
【図２】
0005979385.tif 000025
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
0005979385.tif 000030
【図８】
0005979385.tif 000031
【図９】
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【図１０】
0005979385.tif 000033
【図１１】
0005979385.tif 000034
【図１２】
0005979385.tif 000035
【図１３】
0005979385.tif 000036
【図１４】
0005979385.tif 000037
【図１５】
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【図１６】
0005979385.tif 000039
【図１７】
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【図１８】
0005979385.tif 000041
【図１９】
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【図２０】
0005979385.tif 000043
【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
0005979385.tif 000049
【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
0005979385.tif 000053
【図３１】
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【図３２】
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