(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａｘｌに結合する単離された抗体であって、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗体。
【請求項２】
（ａ）配列番号１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号１０４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；又は（ｃ）（ａ）のＶＨ配列と（ｂ）のＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
配列番号１０３のＶＨ配列、及び／又は配列番号１０４のＶＬ配列を含む、請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
Ａｘｌ受容体の下方制御を促進し、及び／又は構成的Ａｘｌ活性化を阻害する、請求項１から３の何れか一項に記載の抗体。
【請求項５】
抗体が、次の配列番号１１１を含むか、本質的に配列番号１１１からなるか又は配列番号１１１からなるポリペプチドに結合する、請求項１から４の何れか一項に記載の抗体。
【請求項６】
モノクローナル抗体である、請求項１から５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項７】
全長ＩｇＧ１抗体である、請求項１から６の何れか一項に記載の抗体。
【請求項８】
ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、又はＡｘｌに結合する抗体断片である、請求項１から７の何れか一項に記載の抗体。
【請求項９】
請求項１から８の何れか一項に記載の抗体をコードする単離された核酸。
【請求項１０】
請求項９に記載の核酸を含む宿主細胞。
【請求項１１】
請求項１０の記載の宿主細胞を、抗体が産生されるように培養することを含む、抗体を産生する方法。
【請求項１２】
宿主細胞から抗体を回収することを更に含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１から８の何れか一項に記載の抗体と細胞傷害性薬物を含むイムノコンジュゲート。
【請求項１４】
請求項１から８の何れか一項に記載の抗体と薬学的に許容される担体を含む薬学的製剤。
【請求項１５】
付加的治療薬を更に含む請求項１４に記載の薬学的製剤。
【請求項１６】
付加的治療薬が、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、及び化学療法剤から選択される、請求項１５に記載の薬学的製剤。
【請求項１７】
医薬としての使用のための、請求項１から８の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１８】
癌の治療に使用される、請求項１から８の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１９】
細胞増殖阻害、Ａｘｌ下方制御の促進、転移の阻害、及び／又は血管新生の阻害における使用のための、請求項１から８の何れか一項に記載の抗体。
【請求項２０】
医薬の製造における、請求項１から８の何れか一項に記載の抗体の使用。
【請求項２１】
医薬が、癌を治療するためである、請求項２０の使用。
【請求項２２】
医薬が、細胞増殖の阻害、血管新生の阻害、Ａｘｌ下方制御の促進、及び／又は転移の阻害のためである、請求項２０に記載の使用。
【請求項２３】
請求項１から８の何れか一項に記載の抗体の有効量を含む、癌を有する個体を治療するための医薬。
【請求項２４】
付加的治療薬を更に含む、請求項２３に記載の医薬。
【請求項２５】
付加的治療薬が、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、及び化学療法剤からなる群から選択される、請求項２４の記載の医薬。
【請求項２６】
血管新生を阻害し、細胞増殖を阻害し、Ａｘｌ受容体の下方制御を促進し、又は転移を阻害するために、請求項１から８の何れか一項に記載の抗体の有効量を含む、個体において、血管新生を阻害し、細胞増殖を阻害し、Ａｘｌ受容体の下方制御を促進し又は転移を阻害するための薬剤。
【請求項２７】
構成的Ａｘｌを阻害するために、請求項１から８の何れか一項に記載の抗体の有効量を含む、構成的Ａｘｌ活性化を阻害するための薬剤。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１０年６月１８日に出願された米国仮特許出願第６１／３５６５０８号に対して、米国特許法第１１９条の下で優先権を主張し、その内容はその全体が参照することにより援用される。
【０００２】
配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂ経由でＡＳＣＩＩフォーマットで提出された配列表を含み、その全体が本明細書中で参照することにより援用される。
【技術分野】
【０００３】
発明の分野
本発明は、抗Ａｘｌ抗体及び同じものを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
背景
Ａｘｌは受容体型チロシンキナーゼのＴＡＭ（Ｔｙｒｏ３、Ａｘｌ、及びＭｅｒ）ファミリーのメンバーである（O'Bryan et al, 1991; Lai et al, 1991)。それはもともと血液系腫瘍における形質転換遺伝子として同定された(O'Bryan et al, 1991; Janssen et al, 1991)。Ａｘｌ、又はそのリガンドＧａｓ６の調節不全は、種々のヒト癌の病因に関与している。Ａｘｌの過剰発現は、広範囲のヒトの癌に報告されており(Berclaz et al, 2001; Craven et al, 1995; Shieh et al, 2005; Sun et al, 2004; Ito et al, 1999)、肺癌(Shieh et al, 2005)、前立腺癌(Sainaghi et al, 2005)、乳癌(Meric et al, 2002; Zhang et al, 2008)、胃癌(Wu et al, 2002)、膵臓癌(Koorstra et al, 2009)、腎細胞癌(Chung et al, 2003)、並びに神経膠芽腫(Hutterer et al, 2008)における浸潤及び転移に関連付けられている。最近、リン酸化チロシンシグナル伝達のプロファイリングによって、活性化Ａｘｌタンパク質がＮＳＣＬＣの約５％の原発性腫瘍で検出された(Rikova et al, 2007)。Ａｘｌの発現が標的薬及び化学療法薬によって誘発され、薬剤誘導性Ａｘｌ発現は、急性骨髄性白血病における化学療法に対する耐性、並びに消化管間質腫瘍及び乳癌におけるイマチニブ及びラパチニブ／ハーセプチンに対する耐性をそれぞれ付与する。Ａｘｌ及び抗Ａｘｌ抗体に係る他の出版物としては、国際公開第２００４／０３９９５５号、国際公開第２００９／０６３９６５号；２００９年７月２７日に出願の共同所有の米国出願番号６１／２２８，９１５号；国際公開第２００９／０６２６９０号、国際公開第２００４／００８１４７号；５４６８６３４号が含まれる。
【０００５】
治療薬としての開発において最適な臨床的属性を持つ薬剤についての必要性が引き続き存在することは明らかである。本明細書に記載の本発明は、この必要性を満たし、他の利点を提供する。本明細書に引用される全ての参考文献は、特許出願および刊行物を含み、その全体が参考により援用される。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、抗Ａｘｌ抗体及びそれを使用する方法を提供する。
【０００７】
一態様において、本発明はヒトＡｘｌに結合する単離された抗体を提供し、ここでその抗体はヒトＡｘｌに６００ｐＭ以下の親和性で結合し、その抗体は１ｎＭ以下の親和性でマウスＡｘｌに結合する。幾つかの実施態様において、抗体は、Ａｘｌ受容体の下方制御?を促進する。幾つかの実施態様において、抗体は構成的Ａｘｌ活性化を阻害する。幾つかの実施態様において、以下のアミノ酸を含む、以下のアミノ酸から本質的に成る又は成るポリペプチドに結合する。ＭＡＷＲＣＰＲＭＧＲＶＰＬＡＷＣＬＡＬＣＧＷＡＣＭＡＰＲＧＴＱＡＥＥＳＰＦＶＧＮＰＧＮＩＴＧＡＲＧＬＴＧＴＬＲＣＱＬＱＶＱＧＥＰＰＥＶＨＷＬＲＤＧＱＩＬＥＬＡＤＳＴＱＴＱＶＰＬＧＥＤＥＱＤＤＷＩＶＶＳＱＬＲＩＴＳＬＱＬＳＤＴＧＱＹＱＣＬＶＦＬＧＨＱＴＦＶＳＱＰＧＹＶＧ（配列番号１１１）。
【０００８】
更なる態様では、抗体は、モノクローナル抗体である。幾つかの実施態様において、抗体はヒト、ヒト化、又はキメラ抗体である。幾つかの実施態様において、抗体はＡｘｌに結合する抗体断片である。幾つかの実施態様において、抗体は、ヒト抗体である。
【０００９】
一態様において、本発明は抗Ａｘｌ抗体を提供し、その抗体は、（ａ）ＧＦＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｈを含み、Ｘ１はＳ又はＴ；Ｘ２はＬ，Ｆ又はＶ；Ｘ３はＳ，Ｔ，又はＲ；Ｘ４はＧ又はＳ；Ｘ５はＳ，Ｈ，Ｔ又はＩ；Ｘ６はＷ又はＧ；Ｘ７はＩ又はＬである、ＨＶＲ−Ｈ１（配列番号１１２）、（ｂ）Ｘ１Ｘ２ＩＸ３ＰＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＹＡＤＳＶＫＧを含み、Ｘ１はＧ又はＡ；Ｘ２はＷ又はＧ；Ｘ３はＮ，Ｓ，Ａ又はＰ；Ｘ４はＹ，Ａ又はＶ；Ｘ５はＲ，Ｇ，又はＳ；Ｘ６はＧ,Ｒ又はＳ；Ｘ７はＹ，Ｓ，Ｈ又はＹ；Ｘ８はＡ，Ｔ、又はＰである、ＨＶＲ−Ｈ２（配列番号１１３）、及び／又はＸ１Ｘ２ＩＸ３ＰＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＹＡＤＳＶＫＧ，を含み、Ｘ１はＧ又はＡ；Ｘ２はＷ又はＧ；Ｘ３はＮ，Ｓ，Ａ又はＰ；Ｘ４はＹ，Ａ又はＶ；Ｘ５はＲ，Ｇ，又はＳ；Ｘ６はＧ,Ｒ又はＳ；Ｘ７はＹ，Ｓ，Ｈ又はＹ；Ｘ８はＡ，Ｔ，又はＰ；Ｘ９は任意のアミノ酸又は欠失；Ｘ１０は任意のアミノ酸又は欠失である、ＨＶＲ−Ｈ２（配列番号１６６）；（ｃ）ＡＲＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３ＭＤＹを含み、Ｘ１はＥ又はＷ；Ｘ２はＹ又はＲ；Ｘ３はＳ，Ｎ又はＰ；Ｘ４はＧ，Ｄ，又はＬ；Ｘ５はＷ又はＳ；Ｘ６はＧ，Ｒ，Ａ，又はＳ；Ｘ７はＧ又はＳ；Ｘ８はＳ又は欠失；Ｘ９はＳ，Ｙ又は欠失；Ｘ１０はＶ，Ｉ又は欠失；Ｘ１１はＧ又は欠失；Ｘ１２はＹ又は欠失；Ｘ１３はＡ，Ｅ又は欠失である、ＨＶＲ−Ｈ３（配列番号１１４）；（ｄ）ＲＡＳＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ａを含み、Ｘ１はＤ，Ｉ又はＳ；Ｘ２はＶ又はＩ；Ｘ３はＳ，Ｇ又はＲ；Ｘ４はＴ，Ｉ，Ｎ又はＲ；Ｘ５はＡ又はＳ；Ｘ６はＶ又はＬである、ＨＶＲ−Ｌ１（配列番号１１５）；（ｅ）Ｘ１ＡＳＸ２ＬＸ３Ｓを含み、Ｘ１がＳ，Ａ，又はＶ；Ｘ２はＦ，Ｎ又はＳ；Ｘ３はＹ又はＡである、ＨＶＲ−Ｌ２（配列番号１１６）；（ｆ）ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｔを含み、Ｘ１はＳ又はＡ；Ｘ２はＹ，Ｋ又はＮ；Ｘ３はＴ，Ｓ，Ｙ，Ｍ，Ｒ又はＡ；Ｘ４はＴ，Ｎ，Ｓ，又はＦ；Ｘ５はＰ又はＲ；Ｘ６はＰ，Ｙ，Ｓ又はＬである、ＨＶＲ−Ｌ２３（配列番号１１７）を含む。
【００１０】
その他の態様において、本発明は抗Ａｘｌ抗体を提供し、その抗体は、（ａ）ＧＦＸ１Ｘ２Ｘ３ＧＸ４ＷＩＨを含み、Ｘ１はＴ又はＳ，Ｘ２はＦ又はＬ，Ｘ３はＴ又はＳ，Ｘ４はＨ，Ｓ又はＴである、ＨＶＲ−Ｈ１（配列番号１１８）；（ｂ）ＧＷＩＸ１ＰＹＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＹＹＡＤＳＶＫＧを含み、Ｘ１はＳ，Ｎ又はＡ；Ｘ２はＧ，Ｒ又はＳ；Ｘ３はＧ又はＲ；Ｘ４はＳ，Ｙ又はＨ；Ｘ５はＴ，Ａ又はＰである、ＨＶＲ−Ｈ２（配列番号１１９）；（ｃ）ＡＲＥＹＸ１Ｘ２ＷＸ３Ｘ４ＳＸ５Ｘ６ＧＹＸ７ＭＤＹを含み、Ｘ１はＳ，Ｎ又はＰ；Ｘ２はＧ又はＤ；Ｘ３はＧ，Ｒ，又はＡ；Ｘ４はＧ又はＳ；Ｘ５はＳ又はＹ；Ｘ６はＶ又はＩ；Ｘ７はＡ又はＥである、ＨＶＲ−Ｈ３（配列番号１２０）；及びＱＱＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔを含み、Ｘ１はＴ，Ｓ又はＹ；Ｘ２はＴ，Ｎ，Ｓ又はＦ；Ｘ３はＰ又はＲ；Ｘ４はＰ，Ｙ又はＳである、ＨＶＲ−Ｈ３（配列番号１２１）を含む。
【００１１】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【００１２】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【００１３】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【００１４】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【００１５】
幾つかの実施態様において、抗体は、図３Ａ−Ｂ、４、５、又は６に示す、重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインを更に含む。
【００１６】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１０３のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号１０４のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；又は（ｃ）（ａ）のＶＨ配列及び（ｂ）のＶＬ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。幾つかの実施態様において、抗体は、配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。幾つかの実施態様において、抗体は、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。幾つかの実施態様において、抗体は、配列番号１０３のアミノ酸配列のＶＨ、及び配列番号１０４のアミノ酸配列のＶＬを含む。
【００１７】
幾つかの実施態様において、抗体は完全長ＩｇＧ１抗体である。
【００１８】
本発明はまた、本発明の抗体のいずれかをコードする単離された核酸を提供する。
【００１９】
本発明はまた、本発明の核酸を含む宿主細胞を提供する。
【００２０】
本発明はまた、抗体が産生されるように、本発明の宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法を提供する。幾つかの実施態様において、本方法は、宿主細胞から抗体を回収することを更に含む。
【００２１】
本発明はまた、本発明の抗Ａｘｌ抗体の何れか及び細胞毒性剤を含む、免疫複合体を提供する。
【００２２】
本発明はまた、本発明の抗Ａｘｌ抗体の何れか及び薬学的に許容される担体を含む、薬学的製剤を提供する。幾つかの実施態様において、薬学的製剤は付加的治療薬を更に含む。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、及び化学療法剤から選択される。
【００２３】
本発明はまた、医薬として使用のための、本明細書に記載の抗Ａｘｌ抗体を提供する。幾つかの実施態様において、使用は、癌を治療するためのものである。幾つかの実施態様において、使用は、免疫不全、心血管障害、血栓症又は糖尿病を治療するためのものである。幾つかの実施態様において、使用は、細胞増殖を阻害するためのものである。幾つかの実施態様において、使用は、Ａｘｌの下方制御を促進するためのものである。幾つかの実施態様において、使用は、血管新生を阻害するためのものである。
【００２４】
本発明はまた、医薬の製造において使用のための、本明細書に記載の抗Ａｘｌ抗体の何れかを提供する。幾つかの実施態様において、本医薬は癌の治療のためのものである。幾つかの実施態様において、本医薬は、免疫不全、心血管障害、血栓症又は糖尿病を治療するためのものである。幾つかの実施態様において、本医薬は、細胞増殖を阻害し、血管新生を阻害し、Ａｘｌの下方制御を促進し、転移を抑制し、血管新生を阻害するためのものである。
【００２５】
本発明はまた、本明細書に開示された抗Ａｘｌ抗体の何れかの有効量を個体に投与することを含む、癌を有する個体を治療する方法を提供する。幾つかの実施態様において、本方法は、付加的治療薬を個体へ投与することを更に含む。幾つかの実施態様において、付加的治療薬は、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニスト、及び化学療法剤からなる群から選択される。
【００２６】
本発明はまた、本明細書に開示された抗Ａｘｌ抗体の何れかの有効量を個体に投与することを含む、免疫不全、心血管障害、血栓症又は糖尿病を有する個体を治療する方法を提供する。
【００２７】
また、本発明は、血管新生を阻害し、細胞の増殖を抑制し、Ａｘｌ受容体の下方制御を促進し、又は転移を阻害するために、本明細書に開示される抗Ａｘｌ抗体の何れかの有効量を個体に投与することを含む、個体において、血管新生を阻害し、細胞増殖を阻害し、Ａｘｌ受容体の下方制御を促進し又は転移を抑制する方法を提供する。
【００２８】
本発明はまた、構成的Ａｘｌを阻害するために、本明細書に開示された抗Ａｘｌ抗体の何れかの有効量を個体に投与することを含む、構成的Ａｘｌ活性化を阻害する方法を提供する。
【００２９】
一態様において、ＥＧＦＲ活性化変異又はＥＧＦＲ遺伝子増幅に関連する癌に罹患し、ＥＧＦＲアンタゴニストによる治療に耐性を示している被検体を治療するための方法であって、被検体がＡｘｌ発現、Ａｘｌ活性化変異、又はＡｘｌ遺伝子増幅を有するかどうかを決定し、Ａｘｌ発現、Ａｘｌ活性化変異、又はＡｘｌ遺伝子増幅を有するそれらの被検体にＥＧＦＲアンタゴニスト、及び本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体の何れかを投与することを含む方法を提供する。
【００３０】
一態様において、本発明は、ＥＧＦＲ活性化変異又はＥＧＦＲ遺伝子増幅に関連する癌に罹患した被験体を治療するための方法を提供し、（ｉ）ＥＧＦＲアンタゴニストにより治療される被検体をモニタリングし、被検体がＡｘｌ発現、Ａｘｌ活性化変異、又はＡｘｌ遺伝子増幅を示すかどうかを決定し、かつ（ｉｉ）被検体がＡｘｌ活性化変異、又はＡｘｌ遺伝子増幅を示す場合、ＥＧＦＲアンタゴニストに加えて、本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体の何れかを含めるために被検体の治療レジメンを修正することを含む。
【００３１】
一態様において、本発明は、ＥＧＦＲ活性化変異又はＥＧＦＲ遺伝子増幅に関連する癌に罹患した被験体を治療するための方法を提供し、（ｉ）ＥＧＦＲアンタゴニストにより治療される被検体をモニタリングし、被検体が阻害剤に耐性を示すかどうかを決定し、（ｉｉ）被検体がＡｘｌ発現、Ａｘｌ活性化変異、又はＡｘｌ遺伝子増幅を有するかどうかを決定するために被検体を検査し、かつ（ｉｉｉ）被検体がＡｘｌ活性化変異、又はＡｘｌ遺伝子増幅を示す場合、ＥＧＦＲアンタゴニストに加えて、本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体の何れかを含めるために被検体の治療レジメンを修正することを含む。
【００３２】
一態様において、本発明は、ＥＧＦＲアンタゴニストを評価するための方法を提供し、（ｉ）ＥＧＦＲアンタゴニストにより治療される被検体の集団をモニタリングし、治療薬に耐性を示すそれらの被検体を同定し、（ｉｉ）被検体がＡｘｌ発現、Ａｘｌ活性化変異、又はＡｘｌ遺伝子増幅を有するかどうかを決定するために耐性被検体を検査し、かつ（ｉｉｉ）被検体がＡｘｌ活性化変異、又はＡｘｌ遺伝子増幅を有する場合、ＥＧＦＲアンタゴニストに加えて、本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体の何れかを含めるために被検体の治療レジメンを修正することを含む。
【００３３】
一態様において、本発明は、癌細胞におけるＥＧＦＲリン酸化を減らすための方法であって、そこでは前記癌細胞がＥＧＦＲアンタゴニストへの耐性を獲得し、かつ前記細胞がＡｘｌ活性化変異又はＡｘｌ遺伝子増幅を含み、細胞を、本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体のいずれか又はＥＧＦＲアンタゴニストと接触させる工程を含む方法を提供する。
【００３４】
一態様において、本発明は、癌細胞におけるＰＩ３Ｋ媒介シグナル伝達を減らすための方法であって、そこでは前記癌細胞がＥＧＦＲアンタゴニストへの耐性を獲得し、かつ前記細胞がＡｘｌ発現、Ａｘｌ活性化変異又はＡｘｌ遺伝子増幅を含み、細胞を、本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体のいずれか又はＥＧＦＲアンタゴニストと接触させる工程を含む方法を提供する。
【００３５】
一態様において、本発明は、癌細胞におけるＥＧＦＲ媒介シグナル伝達を減らすための方法であって、そこでは前記癌細胞がＥＧＦＲアンタゴニストへの耐性を獲得し、かつ前記細胞がＡｘｌ発現、Ａｘｌ活性化変異又はＡｘｌ遺伝子増幅を含み、細胞を、本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体のいずれか又はＥＧＦＲアンタゴニストと接触させることを含む方法を提供する。
【００３６】
一態様において、本発明は、ＥＧＦＲアンタゴニストに対する癌細胞の感受性を回復するための方法であって、そこでは前記癌細胞がＥＧＦＲアンタゴニストへの耐性を獲得し、かつ前記細胞がＡｘｌ発現、Ａｘｌ活性化変異又はＡｘｌ遺伝子増幅を含み、細胞を、本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体のいずれか又はＥＧＦＲアンタゴニストと接触させることを含む方法を提供する。
【００３７】
一態様において、本発明は、癌細胞の成長又は増殖を減らすための方法であって、そこでは前記癌細胞がＥＧＦＲアンタゴニストへの耐性を獲得し、かつ前記細胞がＡｘｌ発現、Ａｘｌ活性化変異又はＡｘｌ遺伝子増幅を含み、細胞を、本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体のいずれか又はＥＧＦＲアンタゴニストと接触させる工程を含む方法を提供する。
【００３８】
一態様において、本発明は、癌細胞のアポトーシスを増やすための方法であって、そこでは前記癌細胞がＥＧＦＲアンタゴニストへの耐性を獲得し、かつ前記細胞がＡｘｌ発現、Ａｘｌ活性化変異又はＡｘｌ遺伝子増幅を含み、細胞を、本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体のいずれか又はＥＧＦＲアンタゴニストと接触させる工程を含む方法を提供する。
【００３９】
一態様において、本発明は、癌細胞における後天的ＥＧＦＲアンタゴニスト耐性を治療するための方法であって、そこでは前記細胞が、Ａｘｌ活性化変異又はＡｘｌ遺伝子増幅を含み、細胞を、本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体のいずれか又はＥＧＦＲアンタゴニストと接触させることを含む方法を提供する。
【００４０】
幾つかの実施態様において、癌細胞は任意のＥＧＦＲ駆動型癌である。幾つかの実施態様において、癌細胞はＥＧＦＲ活性化変異を含む。幾つかの実施態様において、癌細胞はＥＧＦＲ遺伝子増幅を含む。幾つかの実施態様において、ＥＧＦＲ遺伝子増幅は少なくとも２倍である。幾つかの実施態様において、Ａｘｌ増幅は少なくとも２倍である。幾つかの実施態様において、癌細胞は、ＥＧＦＲアンタゴニストに対する耐性の増加に関連付けられている、ＥＧＦＲ遺伝子変異を含む。幾つかの実施態様において、ＥＧＦＲアンタゴニストに対する耐性の増加に関連付けられているＥＧＦＲ遺伝子変異は、ＥＧＦＲのＴ７９０Ｍ変異である。幾つかの実施態様において、ＥＧＦＲアンタゴニストは、小分子治療薬、核酸治療剤、又はタンパク質治療薬である。幾つかの実施態様において、ＥＧＦＲアンタゴニストは、抗体、アンチセンス分子、又は小分子キナーゼ阻害剤である。幾つかの実施態様において、ＥＧＦＲアンタゴニストは、ゲフィチニブ、エルロチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ（ｐａｎｔｉｎｕｍｕｍａｂ）からなる群から選択される、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤である。幾つかの実施態様において、ＥＧＦＲアンタゴニストは、セツキシマブ、パニツムマブからなる群から選択される、抗ＥＧＦＲ抗体である。幾つかの実施態様において、核酸治療薬は、ｓｉＲＮＡ分子である。
【００４１】
一態様において、本発明はＥＧＦＲアンタゴニスト及び本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体の何れかによる治療の候補としての被検体を同定する方法であって、ここでは前記被検体がＥＧＦＲアンタゴニストにより治療されており、前記ＥＧＦＲアンタゴニストに対する耐性を獲得した癌を罹患しており、前記患者由来の癌細胞において、Ａｘｌ発現、Ａｘｌ活性化変異又はＡｘｌ遺伝子増幅を検出することを含む方法を提供する。
【００４２】
一態様において、本発明は、ＥＧＦＲアンタゴニストにより治療を受けており、前記ＥＧＦＲアンタゴニストに対する耐性を獲得するリスクにある被検体を同定するための方法であって、前記患者由来の癌細胞において、Ａｘｌ発現、Ａｘｌ活性化変異又はＡｘｌ遺伝子増幅の存在を検出することを含み、前記Ａｘｌ発現、Ａｘｌ活性化変異又はＡｘｌ遺伝子増幅の存在が前記耐性を獲得するリスクを示す方法を提供する。
【００４３】
一態様において、本発明は、ＥＧＦＲアンタゴニストによる治療に耐性である癌に罹患した被検体を治療するための方法であって、ＥＧＦＲアンタゴニスト及び本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体の何れかを被検体に投与することを含む方法を提供する。
【００４４】
一態様において、ＥＧＦＲ活性化変異又はＥＧＦＲ遺伝子増幅に関連する癌に罹患し、ＥＧＦＲアンタゴニストによる治療に耐性を示している被検体を治療するための方法であって、被検体がＡｘｌ発現、例えば、Ａｘｌのレベルの上昇及び／又は活性の上昇を有するかどうかを決定し、Ａｘｌ発現、例えば、Ａｘｌ活性の上昇を有するそれらの被検体にＥＧＦＲアンタゴニスト、及び本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体の何れかを投与することを含む方法を提供する。
【００４５】
一態様において、本発明は、ＥＧＦＲ活性化変異又はＥＧＦＲ遺伝子増幅に関連する癌に罹患した被験体を治療するための方法を提供し、（ｉ）ＥＧＦＲアンタゴニストにより治療される被検体をモニタリングし、被検体がＡｘｌ発現、例えば、Ａｘｌレベルの上昇及び／又はＡｘｌ活性の上昇を示すかどうかを決定し、かつ（ｉｉ）被検体がＡｘｌ発現、例えば、Ａｘｌレベル及び／又は活性の上昇を示す場合、ＥＧＦＲアンタゴニストに加えて、本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体の何れかを含めるために被検体の治療レジメンを修正することを含む。
【００４６】
一態様において、本発明は、ＥＧＦＲ活性化変異又はＥＧＦＲ遺伝子増幅に関連する癌に罹患した被験体を治療するための方法を提供し、（ｉ）ＥＧＦＲアンタゴニストにより治療される被検体をモニタリングし、被検体が阻害剤に耐性を示すかどうかを決定し、（ｉｉ）被検体がＡｘｌ発現、例えば、Ａｘｌレベル及び／又は活性の上昇を有するかどうかを決定するために被検体を検査し、かつ（ｉｉｉ）被検体が、Ａｘｌレベル及び／又は活性の上昇を有する場合、ＥＧＦＲアンタゴニストに加えて、本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体の何れかを含めるために被検体の治療レジメンを修正することを含む。
【００４７】
その他の態様において、本発明は、（ｉ）ＥＧＦＲアンタゴニストに対する癌細胞の感受性を回復し、（ｉｉ）ＥＧＦＲアンタゴニストに対する癌細胞の耐性を減らし、及び／又は（ｉｉｉ）細胞を、ＥＧＦＲアンタゴニスト及び本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体の何れかと接触させることにより、癌細胞における後天的ＥＧＦＲアンタゴニスト耐性を治療するための方法を提供する。例示的な実施態様では、癌細胞は、ＥＧＦＲアンタゴニストへの耐性を獲得し、例えば、Ａｘｌ遺伝子、Ａｘｌ遺伝子増幅、又はＧａｓ６媒介性Ａｘｌ活性化における活性化変異に関連付けられる、Ａｘｌ活性及び／又は発現レベルの上昇を含む。本明細書に開示される方法は、癌細胞の感受性を回復し、耐性を低減し、及び／又は後天的な耐性を治療するために使用することができる。
【００４８】
その他の態様において、本発明は、細胞を、ＥＧＦＲアンタゴニスト及び本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体の何れかと接触させることにより、癌細胞の成長及び／又は増殖を低減するため、又は癌細胞のアポトーシスを増加させる方法を提供する。例示的な実施態様では、癌細胞は、ＥＧＦＲアンタゴニストへの耐性を獲得し、例えば、Ａｘｌ遺伝子、Ａｘｌ遺伝子増幅、又はＧａｓ６媒介性Ａｘｌ活性化における活性化変異に関連付けられる、Ａｘｌ活性及び／又は発現の上昇を含む。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１Ａ−Ｆ】抗ＦＧＦＲ３抗体の重鎖及び軽鎖のＨＶＲループ配列。図は重鎖ＨＶＲ配列、Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３、及び軽鎖ＨＶＲ配列、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３を示す。アミノ酸位置は、本明細書に記載されりカバット番号付けシステムに従って番号付けされる。
【図２】抗Ａｘｌ抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
【図３Ａ−Ｂ】
【図４】次のような配列識別子により本発明を実施する際に使用のための、典型的なアクセプターヒトコンセンサスフレームワーク配列を示す。可変重鎖（ＶＨ）コンセンサスフレームワーク（図３Ａ−Ｂ）カバット（Ｋａｂａｔ）ＣＤＲを差し引いたヒトＶＨサブグループＩコンセンサスフレームワーク（登場順にそれぞれ配列番号１３１−１３３及び１２５）拡張された超可変領域を差し引いたヒトＶＨサブグループＩコンセンサスフレームワーク（登場順にそれぞれ配列番号１３４−１３５，１３３，１２５，１３４−１３６，１２５，１３４−１３５，１３７，及び１２５）カバットＣＤＲを差し引いたヒトＶＨサブグループＩＩのコンセンサスフレームワーク（登場順にそれぞれ配列番号１３８−１４０，及び１２５）拡張された超可変領域を差し引いたヒトＶＨサブグループＩＩコンセンサスフレームワーク（登場順にそれぞれ配列番号：１４１−１４２，１４０，１２５，１４１−１４３，１２５，１４１−１４２，１４４，及び１２５）カバットＣＤＲを差し引いた拡張されたヒトＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークを差し引いたヒトＶＨサブグループＩＩコンセンサスフレームワーク（登場順にそれぞれ配列番号：１４５−１４７及び１２５）拡張された超可変領域を差し引いたヒトＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワーク（登場順にそれぞれ配列番号１２２−１２３，１４７，１２５，１２２−１２３，１４８，１２５,及び１２２−１２５）カバットＣＤＲを差し引いたヒトＶＨアクセプターフレームワーク（登場順にそれぞれ配列番号１４９，１４６，１５０，及び１２５）拡張された超可変領域を差し引いたヒトＶＨアクセプターフレームワーク（登場順にそれぞれ配列番号１２２−１２３，１５０，１２５，１２２−１２３，１５１，及び１２５）カバットＣＤＲを差し引いたヒトＶＨアクセプター２フレームワーク（登場順にそれぞれ配列番号１４９，１４６，１５２，及び１２５）拡張された超可変領域を差し引いたヒトＶＨアクセプター２フレームワーク（登場順にそれぞれ配列番号１２２−１２３，１５２，１２５，１２２−１２３，１５３，１２５，１２２−１２３，１５４，及び１２５）可変軽鎖（ＶＬ）のコンセンサスフレームワーク（図．４）ヒトＶＬカッパサブグループＩコンセンサスフレームワーク（登場順にそれぞれ配列番号１２６−１２９）ヒトＶＬカッパサブグループＩＩコンセンサスフレームワーク（登場順にそれぞれ配列番号１５５−１５７及び１２９）ヒトＶＬカッパサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワーク（登場順にそれぞれ配列番号１５８−１６０及び１２９）ヒトＶＬカッパサブグループＩＶコンセンサスフレームワーク（登場順にそれぞれ配列番号１６１−１６３及び１２９）
【図５】ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８の軽鎖（登場順にそれぞれ配列番号１２６−１２７，１６４，及び１２９）及び重鎖（登場順にそれぞれ配列番号１２２−１２３，１５４，及び１２５）のフレームワーク領域配列を示す。上付き文字／太字の数字は、カバットに記載のアミノ酸位置を示している。
【図６】ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８の軽鎖（登場順にそれぞれ配列番号１２６−１２９）及び重鎖（登場順にそれぞれ配列番号１２２−１２５）のフレームワーク領域配列を示す。上付き文字／太字の数字は、カバットに記載のアミノ酸位置を示している。
【図７Ａ−Ｈ】Ａｘｌ ｍＡｂ ＹＷ３２７．６Ｓ２の特性評価。Ａ−Ｂ．ＢＩＡｃｏｒｅを用いたＹＷ３２７．６Ｓ２の親和性測定会合速度ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は一対一のラングミュア結合モデルを用いて計算した。平衡解離定数（Ｋｄ）はｋｏｎ／ｋｏｆｆ比として算出した。Ｃ．ＹＷ３２７．６Ｓ２の交差反応性ＹＷ３２７．６Ｓ２は、マウス及びカニクイザルのＡｘｌと交差反応するが、Ｔｙｒｏ３又はＭｅｒとは交差反応しない。プレートは、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃでコーティングした後、ヒトＡｘｌ、Ｍｅｒ、Ｔｙｒｏ３ Ｆｃｓ、マウス又はカニクイザルＡｘｌＦｃｓと共にインキュベートした。洗浄後、アイソタイプコントロール抗体又はＹＷ３２７．６Ｓ２が添加され、続いてＨＲＰ結合抗ヒトＩｇＧが添加された。Ｄ−Ｅ．ＹＷ３２７．６Ｓ２は、ＡｘｌへのＧａｓ６結合を遮断する。図７Ｄ：ＥＬＩＳＡプレートは、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃでコーティングし、ヒトＡｘｌ−Ｆｃでインキュベートした。洗浄後、Ｇａｓ６が抗体とともに又は抗体無しで添加された。Ｇａｓ６の結合は、ビオチン化抗ＧＡｓ６抗体及びストレプトアビジン−ＨＲＰコンジュゲートにより検出した。図７Ｅ：ＦＡＣＳ．ＨＵＶＥＣが回収され、ＹＷ３２７．６Ｓ２又はコントロール抗体で処置され、次いで、氷上で３０分間、Ｇａｓ６とともにインキュベートした。細胞表面へのＧａｓ６の結合は、ビオチン化抗ＧＡｓ６抗体及びストレプトアビジン−ＰＥコンジュゲートにより検出した。Ｆ．ＹＷ３２７．６Ｓ２はＡｘｌ発現を下方制御する。Ａ５４９細胞は、１μｇ／ｍｌのＹＷ３２７．６Ｓ２で指示された時間インキュベートされ、細胞表面のＡｘｌ発現がＦＡＣＳにより測定され（上のパネル）、総タンパク質発現はウェスタンブロッティング解析により測定された（下のパネル）。Ｇ．ＹＷ３２７．６Ｓ２はＧａｓ６誘導性Ａｘｌリン酸化及びシグナル伝達を阻害する。Ｈ１２９９細胞は一晩無血清培地で培養し、４時間ＹＷ３２７．６Ｓ２とともにプレインキュベートし、そして３０分間Ｇａｓ６で処理した。リン酸化ＡｘｌはＥＬＩＳＡにより測定し（上のパネル）、リン酸化Ａｋｔはウェスタンブロッティング分析により測定した（下のパネル）。Ｈ．ＹＷ３２７．６Ｓ２はＢａｆ３Ａｘｌ細胞増殖を阻害する。Ｂａｆ３Ａｘｌ細胞は２００ｎｇ／ｍｌのＧａｓ６を含む培地で増殖され、指定された濃度で７２時間、ＹＷ３２７．６Ｓ２で処置された。細胞生存率はＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏアッセイにより測定した。
【図８Ａ−Ｆ】ＹＷ３２７．６Ｓ２は、Ａ５４９異種移植腫瘍の成長を減衰させ、抗ＶＥＧＦの効果を高める。Ａ．腫瘍増殖曲線。平均腫瘍サイズが１００ｍｍ３に達したときに開始して（第０日）、Ａｂを１０ｍｇ／ｋｇ（ＹＷ３２７．６Ｓ２及びアイソタイプコントロール抗体）又は１ｍｇ／ｋｇ（抗ＶＥＧＦ）で、週２回ＩＰ投与した。エラーバーは標準誤差を表す（各実験における各グループにおいてｎ＝１０）。ｐ＝０．０００３（ＹＷ３２７．６Ｓ２対コントロール），ｐ＝１０−１１（ＹＷ３２７．６Ｓ２対組合わせ）．Ｂ．様々な処置群のカプラン・マイヤー曲線マウスは、腫瘍の大きさが８００ｍｍ３に達したときに研究から除外され、各群で残っている動物（％残存）がプロットされた。Ｃ．１２Ａ１１は、抗ＶＥＧＦの効果を高める。１２Ａ１１及び抗ＶＥＧＦは、平均腫瘍サイズが１００ｍｍ３に達したときに開始して（第０日）、それぞれ３０ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇ、週２回、ＩＰ投与された。エラーバーは標準誤差を表す（各実験における各グループにおいてｎ＝１０）。ｐ＝０．００６（１２Ａ１１対コントロール），ｐ＝０．０００１−１１（１２Ａ１１対組合わせ）．Ｄ．ＹＷ３２７．６Ｓ２はＡｘｌ発現を下方制御する。マウスは１０ｍｇ／ｋｇのＹＷ３２７．６Ｓ２で処置され、指定された時点で腫瘍が摘出された。腫瘍からの細胞溶解物をＡｘｌ発現についてのウエスタンブロットにより分析した。Ｅ．ＹＷ３２７．６Ｓ２はアポトーシスを誘導する。コントロール又はＹＷ３２７．６Ｓ２で２週間処置された腫瘍が摘出され、ＣＣ３ ＩＨＣがアポトーシスを測定するために行われた。Ｆ．ＹＷ３２７．６Ｓ２は、腫瘍内血管密度の低減における抗ＶＥＧＦの効果を高める。上記Ｄにおいて処置されたマウス由来の腫瘍が、投与後０時間及び７２時間で摘出され、腫瘍血管はＭＥＣＡ３２免疫組織化学で染色することにより可視化され、画像解析により定量した（平方ミクロンとして表される）。スチューデントｔ検定が各ペアに対して行われた（コントロール対組合わせにおいてｐ＜０．０５）。
【図９Ａ−Ｂ】ＹＷ３２７．６Ｓ２はＡ５４９異種移植モデルでエルロチニブ及び化学療法の抗腫瘍効果を増強する。Ａ．ＹＷ３２７．６Ｓ２はエルロチニブの効果を高める。抗体投与は図２と同じであった。エルロチニブは、１００ｍｇ／ｋｇ／日で経口胃管栄養法によって投与した。各群においてｎ＝１０。ｐ＝１．７Ｘ１０−９（ＹＷ３２７．６Ｓ２対コントロール），ｐ＝２．３Ｘ１０−１０（ＹＷ３２７．６Ｓ２対組合わせ）．Ｂ．ＹＷ３２７．６Ｓ２は、化学療法を増強する。抗体投与は図２と同じであった。パクリタキセル及びカルボプラチンを、６．２５ｍｇ／ｋｇ／日で５日間、及び処置の開始時に（第０日）単回投与で１００ｍｇ／ｋｇ皮下投与した。各群においてｎ＝１０。ｐ＝３Ｘ１０−５（ＹＷ３２７．６Ｓ２対コントロール），ｐ＝１０−９（化学療法対コントロール），ｐ＝１０−５（組合わせ対化学療法のみ）．
【図１０Ａ−Ｇ】ＹＷ３２７．６Ｓ２は腫瘍間質機能を調節することにより、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１異種移植腫瘍の増殖を減衰させる。Ａ＆Ｂ．１２Ａ１１ではなく、ＹＷ３２７．６Ｓ２は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍増殖を減少させ、抗ＶＥＧＦの効果を高める。ｍＡｂは、平均腫瘍サイズが１００ｍｍ３に達したときに開始して（第０日）、２０ｍｇ／ｋｇ（ＹＷ３２７．６Ｓ２及びアイソタイプコントロール抗体）、３０ｍｇ／ｋｇ（１２Ａ１１）及び２ｍｇ／ｋｇ（抗ＶＥＧＦ）で、週２回、ＩＰ投与された。エラーバーは標準誤差を表す（各実験における各グループにおいてｎ＝１０）。ｐ＝８．５Ｘ１０−６（ＹＷ３２７．６Ｓ２対コントロール），ｐ＝２．８Ｘ１０−８（ＹＷ３２７．６Ｓ２対組合わせ），ｐ＝０．０５（１２Ａ１１対コントロール）、ｐ＝０．１４５（抗ＶＥＧＦ対組合わせ）．Ｃ＆Ｄ．ＹＷ３２７．６Ｓ２はＡｘｌ発現を下方制御する。ＭＤＡ−ＭＢ２３１異種移植腫瘍（平均サイズ５００ｍｍ３）を有するマウスを、ｍＡｂを２０ｍｇ／ｋｇで処置し、腫瘍を、指示された時点で摘出した。腫瘍からの細胞溶解物を、Ａｘｌ発現についてのウエスタンブロット分析に用いた。Ｅ．ＹＷ３２７．６Ｓ２は、腫瘍関連血管系の密度を低減する。上記Ｃにおいて処置されたマウス由来の腫瘍が、投与後０時間及び１週間で摘出され、腫瘍血管はＭＥＣＡ３２免疫組織化学で染色することにより可視化され、画像解析により定量した（平方ミクロンとして表される）。スチューデントｔ検定が各ペアに対して行われた（ＹＷ３２７．６Ｓ２対コントロール、抗ＶＥＧＦ対コントロール、及び抗ＶＥＧＦ対組合わせにおいてｐ＜０．０５）。Ｆ．Ａｘｌは原発性ヒト乳癌の浸潤性マクロファージで高度に発現される。免疫組織化学が、７９の原発腫瘍を調べるために使用された。これらの腫瘍の２１％が、浸潤マクロファージにおいて高レベルのＡｘｌを発現する。マクロファージを抗ＣＤ６８で染色することにより同定し、マクロファージ上のＡｘｌの発現を抗Ａｘｌ／ＣＤ６８デュアルＩＨＣにより決定した。連続切片を用いた。Ｇ．ＹＷ３２７．６Ｓ２は、腫瘍関連マクロファージからの炎症性サイトカイン／ケモカイン分泌を阻害する。ＭＤＡ−ＭＢ２３１異種移植腫瘍（平均サイズ５００ｍｍ３）を有するマウスを、コントロール抗体のＹＷ３２７．６Ｓ２又は１２Ａ１１を２０ｍｇ／ｋｇで処置し、処置後１週間で腫瘍を摘出した。腫瘍関連マクロファージを、Ｆ４／８０陽性細胞の並べ替えをすることにより単離し、一晩培養した。培地中に分泌されるサイトカインやケモカインは、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘのマウスサイトカインアッセイキットを用いて測定した。
【図１１Ａ−Ｂ】ＹＷ３２７．６Ｓ２は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞の骨への転移を減少させる。Ａ．腫瘍細胞の尾静脈注射後４週間での生物発光イメージング。マウスは、ＰＢＳ中の２５ｍｇ／ｍｌのＤ−ルシフェリン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の２００μＬを腹腔内（ｉｐ）に注射し、撮像中にノーズコーンを介してイソフルランを使用して麻酔した。生物発光画像が増感電荷結合素子のカメラを有するＰｈｏｔｏｎ Ｉｍａｇｅｒ（Ｂｉｏｓｐａｃｅ Ｌａｂ，Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）上で取得された。Ｂ．脛骨の切片のＨ＆Ｅ染色組織は、実験の最後に回収され、４％ホルムアルデヒド中で固定し、切片化し、Ｈ＆Ｅで染色した。上部パネルにある円は、骨を侵している腫瘍細胞を示す。下のパネルは、骨髄中の腫瘍細胞の詳細を示す。
【図１２】ＲｅｆＳｅｑ ＮＭ＿００１６９９の例示的なヒトＡｘｌ配列（配列番号１６５）．
【発明を実施するための形態】
【００５０】
本発明の実施態様の詳細な記述
Ｉ．定義
本明細書における目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」とは、下記に定義されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークから得られる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含有するフレームワークである。ヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク”に由来する”アクセプターヒトフレームワークは、その同一のアミノ酸配列を含んでもよく、又はそれはアミノ酸配列の変化を含み得る。幾つかの実施態様において、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。幾つかの実施態様において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、Ｖはヒト免疫グロブリンのフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列に、配列が同一である。
【００５１】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を指す。本明細書で使用する場合、特に断らない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映している本質的な結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般的に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載したものを含む、当技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例示であって典型的な実施態様は、以下で説明される。
【００５２】
「親和性成熟」抗体とは、その改変を有していない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性に改良を生じせしめる、その一又は複数の超可変領域（ＨＶＲ）において一又は複数の改変を持つものである。
【００５３】
「血管新生障害」は、非腫瘍性状態及び腫瘍性状態の両方を含む、血管新生の任意の調節不全を指す。腫瘍性状態としては、限定されないが、以下に記載のものを含む（例えば「癌」を参照）。非腫瘍性疾患には、限定するものではないが、望ましくない又は異常な肥大、関節炎、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬、乾癬の斑、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化、アテローム動脈硬化性斑、未熟児の網膜症を含む糖尿病性及び他の増殖性の網膜症、水晶体後繊維増殖、血管新生緑内障、年齢関連性黄斑変性、糖尿病性黄斑浮腫、角膜血管新生、角膜移植片血管新生、角膜移植片拒絶、網膜／脈絡叢血管新生、虹彩(angle)（ルベオーシス）の血管新生、眼性新生血管疾患、脈管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺の過形成（グレーブズ病を含む）、角膜及び他の組織移植、慢性炎症、肺炎症、急性肺損傷／ＡＲＤＳ、敗血症、原発性肺高血圧症、悪性の肺滲出、大脳浮腫（例えば、急性脳卒中／非開放性頭部損傷／外傷と関連している）、滑液炎症、ＲＡのパンヌス形成、筋炎骨化、高親和性骨形成、骨関節炎（ＯＡ）、抵抗性腹水、多嚢胞性卵巣の疾患、子宮内膜症、液体性疾患の第３の間隔(3rd spacing)（膵炎、コンパートメント症候群、熱傷、腸疾患）、子宮類線維腫、早産、慢性炎症、例えばＩＢＤ（クローン病および潰瘍性大腸炎）、腎臓同種異系移植片拒絶反応、炎症性腸疾患、ネフローゼ症候群、望ましくない又は異常な組織塊成長（癌以外）、血友病関節、肥大した瘢痕、体毛成長の抑制、Ｏｓｌｅｒ-Ｗｅｂｅｒ症候群、化膿性肉芽腫水晶体後繊維増殖、強皮症、トラコーマ、脈管粘着力、関節滑膜炎、皮膚炎、子癇前症、腹水、心嚢貯留液（例えば心外膜炎と関連しているもの）および胸水が含まれる。
【００５４】
抗血管新生薬は、血管の発達をブロックするか又はある程度妨げる化合物を指す。抗血管新生剤は、例えば、血管新生の促進に関与する成長因子又は成長因子受容体に結合する小分子または抗体であってもよい。一実施態様において、抗血管新生薬は、ベバシズマブ（アバスチン）などの血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）に結合する抗体である。
【００５５】
用語「抗Ａｘｌ抗体」及び「Ａｘｌに結合する抗体」は、抗体が、Ａｘｌを標的とし、診断薬剤及び／又は治療的薬剤として有用であるように、十分な親和性でＡｘｌに結合することができる抗体を指す。一実施態様において、抗Ａｘｌ抗体の、無関係な、非Ａｘｌタンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、抗体のＡｘｌへの結合の約１０％未満である。所定の実施態様において、Ａｘｌへ結合する抗体は、解離定数（Ｋｄ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ未満、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）．所定の実施態様において、抗Ａｘｌ抗体は、異なる種由来のＡｘｌ間で保存されているＡｘｌのエピトープに結合する。
【００５６】
用語「抗体」は最も広い意味で用いられ、様々な抗体構造を包含し、限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含む。
【００５７】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原を結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨは、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、直鎖状抗体、単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成された多重特異性抗体を含む。
【００５８】
参照抗体として「同一のエピトープに結合する抗体」とは、競合アッセイにおいて５０％以上、参照抗体のその抗原への結合をブロックする抗体、逆に競合アッセイにおいて５０％以上、その抗体のその抗原への結合をブロックするその参照抗体を指す。典型的な競合アッセイが、本明細書において提供される。
【００５９】
特に断らない限り、本明細書で使用する用語「Ａｘｌ」は、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス、ラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物由来の任意の天然型Ａｘｌを指す。その用語は、「完全長」、未処理のＡｘｌ並びに細胞内でのプロセシングから生じた任意の形態のＡｘｌを含む。その用語はまた、天然に存在するＡｘｌの変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体を包含する。典型的なヒトＡｘｌのアミノ酸配列が図１２に示される。
【００６０】
「Ａｘｌの活性化」とはＡｘｌ受容体の、活性化、又はリン酸化を指す。一般に、Ａｘｌ活性化はシグナル伝達を生じる（例えば、Ａｘｌ受容体の細胞内キナーゼドメインにより、Ａｘｌ又は基質ポリペプチドのチロシン残基のリン酸化を引き起こす）。Ａｘｌ活性化は、Ａｘｌリガンド（Ｇａｓ６）の、目的のＡｘｌ受容体への結合により媒介されうる。ＡｘｌのＧａｓ６への結合は、Ａｘｌのキナーゼドメインを活性化する場合があり、それによって、Ａｘｌのチロシン残基のリン酸化及び／又は付加的基質ポリペプチドのチロシン残基のリン酸化を生じる。
【００６１】
用語 「癌」及び「癌性」は、無秩序な細胞成長/細胞増殖を典型的に特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を記述する。癌の例には、限定されないが、癌腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫と非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、及び白血病を含む。そのような癌のより具体的な例は、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺がん、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化器癌、膵臓癌、神経膠腫を含む、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜、子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、白血病、及びその他のリンパ増殖性疾患、及び様々な型の頭頸部癌を包含する。
【００６２】
用語「細胞増殖性障害」及び「増殖性疾患」は、ある程度の異常な細胞増殖に関連する障害を言う。一実施態様において、細胞増殖性疾患は癌である。
【００６３】
「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化合物を指す。化学療法剤の例には、アルキル化剤、例えばチオテパ及びシクロホスファミド(ＣＹＴＯＸＡＮ(登録商標))；スルホン酸アルキル、例えばブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン(piposulfan)；アジリジン類、例えばベンゾドーパ(benzodopa)、カルボコン、メツレドーパ(meturedopa)、及びウレドーパ(uredopa)；アルトレトアミン(altretamine)、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド(triethylenethiophosphaoramide)及びトリメチローロメラミン(trimethylolomelamine)を含むエチレンイミン類及びメチラメラミン類；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；デルタ-９-テトラヒドロカナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標）；βラパチョーネ；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトセシン（合成アナログトポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標）、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）を含む）、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン(scopolectin)及び９-アミノカンプトテシン；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ-１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成アナログを含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸(podophyllinic acid)；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；ドゥオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ-２１８９及びＣＢ１-ＴＭ１を含む）；エロイテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンギスタチン；クロランブシル、クロロナファジン(chlornaphazine)、チョロホスファミド(cholophosphamide)、エストラムスチン、イフォスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン(novembichin)、フェネステリン(phenesterine)、プレドニムスチン(prednimustine)、トロフォスファミド(trofosfamide)、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン(chlorozotocin)、フォテムスチン(fotemustine)、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロスレアス(nitrosureas)；抗生物質、例えばエネジイン抗生物質(例えば、カリケアマイシン(calicheamicin)、特にカリケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンωＩ１（例えばNicolaou et al., Agnew Chem Intl. Ed. Engl. 33:183-186(1994)参照）；ＣＤＰ３２３、経口α−４インテグリン阻害剤；ダイネマイシン(dynemicin)Ａを含むダイネマイシン；エスペラマイシン；並びにネオカルチノスタチン発色団及び関連する色素タンパクエネジイン抗生物質発色団)、アクラシノマイシン類(aclacinomysins)、アクチノマイシン、オースラマイシン(authramycin)、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン(cactinomycin)、カラビシン(carabicin)、カルミノマイシン、カルジノフィリン(carzinophilin)、クロモマイシン類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン(detorbicin)、６-ジアゾ-５-オキソ-Ｌ-ノルロイシン、ドキソルビシン（ADRIAMYCIN(登録商標)、モルホリノ-ドキソルビシン、シアノモルホリノ-ドキソルビシン、２-ピロリノ-ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射剤（ＤＯＸＩＬ（登録商標）、リポソームドキソルビシンＴＬＣＤ-９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標）、及びデオキシドキソルビシンを含む)、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マーセロマイシン(marcellomycin)、マイトマイシンＣのようなマイトマイシン、マイコフェノール酸(mycophenolic acid)、ノガラマイシン(nogalamycin)、オリボマイシン(olivomycins)、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン(potfiromycin)、ピューロマイシン、ケラマイシン(quelamycin)、ロドルビシン(rodorubicin)、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン(tubercidin)、ウベニメクス、ジノスタチン(zinostatin)、ゾルビシン(zorubicin)；代謝拮抗剤、例えばメトトレキセート、ゲムシタビン(gemcitabine) (GEMZAR(登録商標))、テガフル(tegafur) (UFTORAL(登録商標))、カペシタビン(capecitabine) (XELODA(登録商標))、エポチロン(epothilone)、及び５-フルオロウラシル(５-ＦＵ)；葉酸アナログ、例えばデノプテリン(denopterin)、メトトレキセート、プテロプテリン(pteropterin)、トリメトレキセート(trimetrexate)；プリンアナログ、例えばフルダラビン(fludarabine)、６-メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えばアンシタビン、アザシチジン(azacitidine)、６-アザウリジン(azauridine)、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン(enocitabine)、フロキシウリジン(floxuridine)；アンドロゲン類、例えばカルステロン(calusterone)、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン(testolactone)；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸リプレニッシャー(replenisher)、例えばフロリン酸(frolinic acid)；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン(amsacrine)；ベストラブシル(bestrabucil)；ビサントレン(bisantrene)；エダトラキセート(edatraxate)；デフォファミン(defofamine)；デメコルシン(demecolcine)；ジアジコン(diaziquone)；エルフォルニチン(elfornithine)；酢酸エリプチニウム(elliptinium)；エポチロン；エトグルシド(etoglucid)；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン(lonidainine)；メイタンシン(maytansine)及びアンサマイトシン類(ansamitocins)のようなメイタンシノイド類(maytansinoids)；ミトグアゾン(mitoguazone)；ミトキサントロン；モピダンモール(mopidanmol)；ニトラクリン(nitracrine)；ペントスタチン；フェナメット(phenamet)；ピラルビシン；ロソキサントロン(losoxantron)；２-エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ(登録商標)多糖類複合体(JHS Natural Products, Eugene, OR)；ラゾキサン(razoxane)；リゾキシン(rhizoxin)；シゾフィラン；スピロゲルマニウム(spirogermanium)；テニュアゾン酸(tenuazonic acid)；トリアジコン(triaziquone)；２,２',２''-トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン(trichothecenes)(特に、Ｔ-２トキシン、ベラキュリンＡ(verracurin A)、ロリジンＡ(roridin A)及びアングイジン(anguidine))；ウレタン；ビンデシン(ELDISINE(登録商標)、FILDESIN(登録商標))；ダカルバジン；マンノムスチン(mannomustine)；ミトブロニトール；ミトラクトール(mitolactol)；ピポブロマン(pipobroman)；ガシトシン(gacytosine)；アラビノシド(「Ara-C」)；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル(TAXOL(登録商標))、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤(ABRAXANETM)、及びドキセタキセル(ＴＡＸＯＴＥＲＥ(登録商標))；ク��ランブシル；６-チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；プラチナ剤、例えばシスプラチン、オキサリプラチン（例えばＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））及びカルボプラチン；ビンカ類でチューブリン重合の微小管形成を阻害するもの、例えばビンブラスチン(ＶＥＬＢＡＮ(登録商標)、ビンクリスチン(ＯＮＣＯＶＩＮ(登録商標))、ビンデシン(ＥＬＤＩＳＩＮＥ(登録商標)、ＦＩＬＤＥＳＩＮ(登録商標))、及びビノレルビン(ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ(登録商標))；エトポシド(ＶＰ-１６)；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボビン(leucovovin)；ノバントロン(novantrone)；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロナート(ibandronate)；トポイソメラーゼ阻害薬ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン(ＤＭＦＯ)；レチノイン酸などのレチノイド、例えば、ベキサロテン(ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ(登録商標))；ビスホスホネート、例えばクロドロネート(例えばＢＯＮＥＦＯＳ(登録商標)又はＯＳＴＡＣ(登録商標))、エチドロン酸(ＤＩＤＲＯＣＡＬ(登録商標))、ＮＥ-５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート(ＺＯＭＥＴＡ(登録商標))、アレンドロネート(ＦＯＳＡＭＡＸ(登録商標))、パミドロン酸(ＡＲＥＤＩＡ(登録商標))、チルドロン酸(ＳＫＥＬＩＤ(登録商標))、又はリセドロン酸(ＡＣＴＯＮＥＬ(登録商標))；トロキサシタビン(troxacitabine)(１,３-ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体)；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常な細胞増殖に結びつくシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えばＰＫＣ-α、Ｒａｆ、及びＨ-Ｒａｓ、及び上皮増殖因子受容体(ＥＧＦ-Ｒ)；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ(登録商標)ワクチン及び遺伝子治療ワクチン等のワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ(登録商標)ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ(登録商標)ワクチン、及びＶＡＸＩＤ(登録商標)ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害薬(例えばＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ(登録商標))；ｒｍＲＨ(例えばＡＢＡＲＥＬＩＸ(登録商標))；ＢＡＹ４３９００６(ソラフェニブ；Bayer)；ＳＵ-１１２４８(スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ(登録商標)、Pfizer)；ペリフォシン(perifosine)、ＣＯＸ-２阻害剤(例えばセレコキシブ又はエトリコキシブ)、プロテオゾーム阻害剤(例えばＰＳ３４１)；ボルテゾミブ(ＶＥＬＣＡＤＥ(登録商標))；ＣＣＩ-７７９；チピファルニブ(tipifarnib)(Ｒ１１５７７)；オラフィニブ(orafenib)、ＡＢＴ５１０；ＢＣＬ-２阻害剤、例えばオブリメルセンナトリウム(oblimersen sodium)(GENASENSE(登録商標))；ピクサントロン；ＥＧＦＲ阻害剤（以下の定義を参照）；チロシンキナーゼ阻害剤；セリン-スレオニンキナーゼ阻害剤、例えばラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ(登録商標)）；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばロナファーニブ（ＳＣＨ６６３６，ＳＡＲＡＳＡＲＴＭ）；及び上述したものの何れかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体：並びに上記のうち２以上の組合せ、例えば、シクロフォスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニソロンの併用療法の略称であるＣＨＯＰ；及び５−ＦＵ及びロイコボリンとオキサリプラチン(ELOXATINTM)を組合せた治療法の略称であるＦＯＬＦＯＸが含まれる。
【００６４】
ここで定義された化学療法剤には、癌の増殖を促進しうるホルモンの作用を調節、低減、遮断、又は阻害するように働く「抗ホルモン剤」又は「内分泌治療剤」が含まれる。それらはそれ自体がホルモンであってもよく、限定するものではないが、混合アゴニスト／アンタゴニストプロファイルを持つ抗エストロゲン、例えばタモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ(登録商標)）、４-ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ(登録商標)）、イドキシフェン、ドロロキシフェン、ラロキシフェン(raloxifene)（ＥＶＩＳＴＡ(登録商標)）、トリオキシフェン(trioxifene)、ケオキシフェン(keoxifene)、及びＳＥＲＭ３などの選択的なエストロゲン受容体調節因子(ＳＥＲＭ)；アゴニスト特性を有さない純粋な抗エストロゲン類、例えばフルベストラント(ＦＡＳＬＯＤＥＸ(登録商標))、及びＥＭ８００(このような薬剤はエストロゲン受容体(ＥＲ)二量体化をブロックし、ＤＮＡ結合を阻害し、ＥＲ代謝回転を増加させ、及び／又はＥＲレベルを抑制しうる)；アロマターゼインヒビター、例えば、ホルメスタン及びエキセメスタン(ＡＲＯＭＡＳＩＮ(登録商標))などのステロイド系アロマターゼインヒビター、及びアナストロゾール(ＡＲＩＭＩＤＥＸ(登録商標))、レトロゾール(ＦＥＭＡＲＡ(登録商標))及びアミノグルテチミドなどの非ステロイド性アロマターゼインヒビター、及びボロゾール(ＲＩＶＩＳＯＲ(登録商標))、メゲストロールアセテート(ＭＥＧＡＳＥ(登録商標))、ファドロゾール及び４(５)-イミダゾールを含む他のアロマターゼインヒビター；黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト、例えばロイプロリド(ＬＵＰＲＯＮ(登録商標)及びＥＬＩＧＡＲＤ(登録商標))、ゴセレリン、ブセレリン、及びトリプトレリン；性ステロイド、例えばプロゲスチン、例えばメゲストロールアセテート及びメドロキシプロゲステロンアセテート、エストロゲン、例えばジエチルスチルベストロール及びプレマリン、及びアンドロゲン／レチノイド、例えばフルオキシメステロン、全てのトランスレチオニン酸及びフェンレチニド；オナプリストン；抗プロゲステロン；エストロゲン受容体下方制御因子(ＥＲＤ)；抗アンドロゲン類、例えばフルタミド、ニルタミド及びビカルタミド；及び上記の何れかの薬学的に許容可能な塩、酸又は誘導体；並びに、上記のうちの２以上の組合せを含む。
【００６５】
用語「キメラ」抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の起源又は種から由来し、一方重鎖及び／又は軽鎖の残りが異なる起源又は種から由来する抗体を指す。
【００６６】
抗体の「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体の５つの主要なクラスがあり：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ、及びこれらのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２に、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩＧＡ１、及びＩｇＡ２に分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００６７】
本明細書中で用いる「恒常的」なる用語は、例えば受容体型キナーゼ活性に用いられると、リガンド又は他の活性化分子の存在に依存しない受容体の恒常的なシグナル伝達活性を指す。受容体の性質によって、すべての活性が恒常的であってもよいし、受容体の活性が他の分子（例えばリガンド）の結合によってさらに活性化されてもよい。受容体の活性化を引き起こす細胞の現象は当業者に周知である。例えば、活性化には、例えば二量体化、三量体化など高次の受容体複合体への多量体化が含まれる。複合体は、単一種のタンパク質、すなわちホモ複合体を含んでよい。あるいは、複合体は、少なくとも２の異なるタンパク質種、すなわちヘテロ複合体を含んでよい。例えば、複合体形成は、細胞の表面上の受容体の正常型又は変異型の過剰発現によって生じうる。また、複合体形成は、受容体内の特定の突然変異又は複数の突然変異によって生じうる。
【００６８】
用語「細胞分裂阻害剤」とは、インビトロ又はインビボの何れかにおいて、細胞の増殖を停止する化合物又は組成物を指す。従って、細胞分裂阻害剤は、Ｓ期の細胞の割合を有意に減少させるものであってもよい。細胞分裂阻害剤の更なる例は、Ｇ０／Ｇ１停止又はＭ期停止を誘導することによって、細胞周期の進行を遮断する薬剤を含む。ヒト化抗Ｈｅｒ２抗体のトラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））はＧ０／Ｇ１停止を誘導する細胞分裂阻害剤の例である。古典的なＭ期ブロッカーには、ビンカ（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン、及び例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤が含まれる。例えばＤＮＡアルキル化剤、例えばタモキシフェン、プレドニソン、ダカーバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキセート、５-フルオロウラシル、及びａｒａ-ＣがＳ期停止へ波及する。更なる情報は、Murakami等により「細胞分裂周期の調節、オンコジーン、及び抗新生物薬（Cell cycle regulation, oncogene, and antineoplastic drugs）」と題された、癌の分子的基礎（The Molecular Basis of Cancer）、Mendelsohn及びIsrael編、第一章（WB Saunders; Philadelphia, 1995）、特に１３頁に見出すことができる。タキサン（パクリタキセル及びドセタキセル）は、両方ともイチイの木から由来した抗癌剤である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（タキソテール（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセルの半合成アナログ（タキソール（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）である。パクリタキセル及びドセタキセルはチューブリン二量体からの微小管の集合を促進し、脱重合を防止することにより微小管を安定化させ、それは細胞の有糸分裂の阻害をもたらす。
【００６９】
本明細書で用いられる「細胞傷害性薬物」という用語は、細胞の機能を阻害又は阻止し及び／又は細胞破壊を生ずる物質を指す。細胞傷害性薬物は、限定されないが、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体）：化学療法剤又は薬物（例えば、メトトレキセート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他の挿入剤）、成長阻害剤、酵素及びその断片、例えば核酸分解酵素など、抗生物質、小分子毒素などの毒素、又は細菌、真菌、植物又は動物由来の酵素活性毒素（それらの断片及び／又はその変異体を含む）、及び以下に開示される様々な抗腫瘍剤又は抗癌剤を包含する。
【００７０】
「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣＣ）；貪食、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション、及びＢ細胞の活性化を含む。
【００７１】
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」とは、所望の治療的又予防的結果を達成するために必要な用量及び期間での、有効な量を指す。
【００７２】
用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。その用語は、天然配列Ｆｃ領域と変異体Ｆｃ領域を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域はＣｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端まで伸長する。しかし、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は存在しているか、存在していない場合がある。本明細書に明記されていない限り、Ｆｃ領域又は定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載されるように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
【００７３】
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に４つのＦＲのドメイン、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。従って、ＨＶＲ及びＦＲ配列は一般にＶＨ（又はＶＬ）の以下の配列に現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
【００７４】
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」及び「全抗体」は、本明細書中で互換的に使用され、天然型抗体構造と実質的に類似の構造を有するか、又は本明細書で定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【００７５】
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養」は互換的に使用され、外因性の核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫を含める。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換された細胞」を含み、継代の数に関係なく、それに由来する一次形質転換細胞及び子孫が含まれる。子孫は親細胞と核酸含量が完全に同一ではないかもしれないが、突然変異が含まれる場合がある。最初に形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能又は生物活性を有する変異型子孫が本明細書において含まれる。
【００７６】
「ヒト抗体」は、ヒト又はヒト細胞により産生されるか、又はヒト抗体のレパートリー又は他のヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト起源に由来する抗体のそれに対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
【００７７】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的には、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。一般的には、配列のサブグループは、 Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第５版, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), 第1-3巻にあるサブグループである。一実施態様において、ＶＬについて、サブグループは上掲のＫａｂａｔらにあるサブグループカッパＩである。一実施態様において、ＶＨについて、サブグループは上掲のＫａｂａｔらにあるサブグループＩＩＩである。
【００７８】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及びヒトＦＲ由来アミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。所定の実施態様において、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが、非ヒト抗体のものに対応し、全てまたは実質的にＦＲの全てが、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意で、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体の「ヒト化型」、例えば、非ヒト抗体は、ヒト化を遂げた抗体を指す。
【００７９】
本明細書で使用される用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列が超可変であるか、及び／又は構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの各領域を指す。一般的に、天然型４鎖抗体は、ＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）に３つ、及びＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）に３つの６つのＨＶＲＳを含む。ＨＶＲは、一般的に超可変ループ由来及び／又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、最高の配列可変性であり、及び／又は抗原認識に関与している。典型的な超可変ループはアミノ酸残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）、９１−９６（Ｌ３）、２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）、及び９６−１０１（Ｈ３）で生じる。(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))。典型的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の２４−３４、Ｌ２の５０−５６、Ｌ３の８９−９７、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−６５、及びＨ３の９５−１０２に生じる。(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991).)ＶＨのＣＤＲ１の例外を除いて、ＣＤＲは一般的に超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲは、抗原に接触する残基である「特異性決定残基」又は「ＳＤＲ」を含む。ＳＤＲは、略称（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ−）ＣＤＲ、又はａ−ＣＤＲと呼ばれる、ＣＤＲの領域内に含まれている。典型的なａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の３１−３４、Ｌ２の５０−５５、Ｌ３の８９−９６、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−５８、及びＨ３の９５−１０２に生じる。（Almagro and Fransson, Front. Biosci.13:1619-1633(2008)を参照のこと)特に断らない限り、可変ドメイン内のＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、上掲のＫａｂａｔらに従い、本明細書において番号が付けられる。
【００８０】
「イムノコンジュゲート」は、１つ以上の異種分子にコンジュゲートした抗体であり、限定されないが、細胞傷害性薬物を含む。
【００８１】
「個体」又は「被検体」は、哺乳動物である。哺乳動物は、限定されないが、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、ウマ）、霊長類（例えば、ヒト、サルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、げっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含む。所定の実施態様において、個体又は被検体はヒトである。
【００８２】
「細胞の成長及び増殖の阻害」は、細胞の成長及び増殖を少なくとも、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％減少させることを意味し、かつ細胞死を誘導することを含む。
【００８３】
「単離された」抗体は、その自然環境の成分から分離されたものである。幾つかの実施態様において、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）により決定されるように、９５％以上または９９％の純度に精製される。抗体純度の評価法の総説としては、例えばFlatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)を参照のこと。
【００８４】
「単離された」核酸は、その自然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、しかし、その核酸分子は、染色体外又はその自然の染色体上の位置とは異なる染色体位置に存在している。
【００８５】
「抗Ａｘｌ抗体をコードする単離された核酸」は、抗体の重鎖及び軽鎖（又はその断片）をコードする一つ以上の核酸分子を指し、単一のベクター又は別個のベクター内のそのような核酸分子、及び宿主細胞の一以上の位置に存在するそのような核酸分子を含む。
【００８６】
本明細書中で用いる「リガンド非依存性」なる用語は、例えば受容体シグナル伝達活性に用いられる場合、リガンドの存在に依存しないシグナル伝達活性を指す。リガンド非依存的なキナーゼ活性を有する受容体は、キナーゼ活性の他の活性化を起こすために、その受容体へのリガンドの結合を必ずしも妨げるわけでない。
【００８７】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味し、すなわち、例えば、天然に生じる変異を含み、又はモノクローナル抗体製剤の製造時に発生し、一般的に少量で存在している変異体などの、可能性のある変異体抗体を除き、集団を構成する個々の抗体は同一であり、及び／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を一般的に含む、ポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。従って、修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、限定されないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含む様々な技術によって作成され、モノクローナル抗体を作製するためのそのような方法及び他の例示的な方法は、本明細書に記載されている。
【００８８】
「ネイキッド抗体」とは、異種の部分（例えば、細胞傷害性部分）又は放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は薬学的製剤中に存在してもよい。
【００８９】
「天然型抗体」は、天然に生じる様々な構造をとる免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然型ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖と２つの同一の重鎖から成る約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端に、各重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端に、各軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、定常軽鎖（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）とラムダ（λ）と呼ばれる、２つのタイプのいずれかに割り当てることができる。
【００９０】
用語「パッケージ挿入物」は、効能、用法、用量、投与、併用療法、禁忌についての情報、及び／又はそのような治療用製品の使用に関する警告を含む、治療用製品の商用パッケージに慣習的に含まれている指示書を指すために使用される。
【００９１】
参照ポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入した後、如何なる保存的置換も配列同一性の一部と考えないとした、参照ポリペプチドのアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ-２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の完全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインするための適切なパラメータを決定することができる。しかし、ここでの目的のためには、％アミノ酸配列同一性の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ-２を使用することによって生成される。ＡＬＩＧＮ-２配列比較コンピュータプログラムはジェネンテック社によって作製され、ソースコードは米国著作権庁、ワシントンＤ．Ｃ．，２０５５９に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ-２もまた、ジェネンテック社、サウスサンフランシスコ、カリフォルニアから公的に入手可能であり、又はそのソースコードからコンパイルすることができる。ＡＬＩＧＮ-２プログラムは、デジタルＵＮＩＸのＶ４．０Ｄを含む、ＵＮＩＸオペレーティングシステム上での使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ-２プログラムによって設定され変動しない。
【００９２】
アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ−２が用いられる状況では、与えられたアミノ酸配列Ａの、与えられたアミノ酸配列Ｂとの、又はそれに対する％アミノ酸配列同一性（或いは、与えられたアミノ酸配列Ｂと、又はそれに対して所定の％アミノ酸配列同一性を持つ又は含む与えられたアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２により、ＡとＢのそのプログラムのアラインメントにおいて同一と一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なることは理解されるであろう。特に断らない限り、本明細書で使用されるすべての％アミノ酸配列同一性値が、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用し、直前の段落で説明したように、得られる。
【００９３】
用語「薬学的製剤」は、その中に有効で含有される活性成分の生物学的活性を許容するような形態であって、製剤を投与する被検体にとって許容できない毒性である他の成分を含まない調製物を指す。
【００９４】
「薬学的に許容される担体」は、被検体に非毒性であり、有効成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。 薬学的に許容される担体は、限定されないが、緩衝剤、賦形剤、安定剤、又は保存剤を含む。
【００９５】
本明細書で用いられるように、「治療」（及び「治療する（ｔｒｅａｔ）」または 「治療している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」など文法上の変形）は、治療されている個体の自然経過を変えようと試みる臨床的介入を指し、予防のために、または臨床病理の過程においてのいずれかで実行できる。治療の望ましい効果は、限定されないが、疾患の発症又は再発を予防すること、症状の緩和、疾患の直接的または間接的な病理学的帰結の縮小、転移を予防すること、疾患の進行の速度を遅らせること、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善を含む。幾つかの実施態様において、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延させるか又は疾患の進行を遅くするために使用される。
【００９６】
本明細書で用いられる「腫瘍」は、悪性又は良性に関わらず、全ての新生細胞成長及び増殖、及び全ての前癌性及び癌性の細胞及び組織を意味する。「癌」、「癌性」、「細胞増殖性疾患」、「増殖性疾患」及び「腫瘍」という用語はここで意味するように相互排他的ではない。
【００９７】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然型抗体の可変重鎖ドメイン及び軽鎖（それぞれＶＨおよびＶＬ）は、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む各ドメインを持ち、一般的に似たような構造を有する。(例えば、Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., 91頁 (2007)を参照)。単一のＶＨ又はＶＬドメインが、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。更に、特定の抗原に結合する抗体は、相補的なＶＬ又はＶＨドメインのそれぞれのライブラリーをスクリーニングするために、抗原に特異的に結合する抗体由来のＶＨ又はＶＬドメインを用いて単離することができる。例えば、Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)を参照。
【００９８】
本明細書で使用される、用語「ベクター」は、それがリンクされている別の核酸を伝播することができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、並びにそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。ある種のベクターは、それらが動作可能なようにリンクされている核酸の発現を指示することができる。このようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と言う。
【００９９】
「ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワーク」は、Ｋａｂａｔらの可変重鎖サブグループＩＩＩのアミノ酸配列から得られたコンセンサス配列を含む。一実施態様において、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークアミノ酸配列は、以下の配列のそれぞれの少なくとも一部またはすべてを含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号１２２）−Ｈ１−ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（配列番号１２３）−Ｈ２−ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣ（配列番号１２４）−Ｈ３−ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２５）．
【０１００】
「ＶＬサブグループＩコンセンサスフレームワーク」は、Ｋａｂａｔらの可変軽鎖サブグループＩのアミノ酸配列から得られたコンセンサス配列を含む。一実施態様において、ＶＨサブグループＩコンセンサスフレームワークアミノ酸配列は、以下の配列のそれぞれの少なくとも一部またはすべてを含む：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１２６）−Ｌ１−ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１２７）−Ｌ２−ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１２８）−Ｌ３−ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１２９）。
【０１０１】
ＩＩ．組成物及び方法
一態様において、本発明は、様々なＡｘｌ結合剤（例えば、抗体およびその断片など）の同定に、部分的に基づいている。Ａｘｌは重要かつ有利な治療標的を提示し、本発明は、Ａｘｌへの薬剤の結合に基づく組成物及び方法を提供する。本発明のＡｘｌの結合剤は、本明細書に記載のように、Ａｘｌのシグナル伝達経路の発現及び／又は活性に関連する病理的状態を標的にすることに使用するための、重要な治療薬および診断薬を提供する。所定の実施態様において、Ａｘｌに結合する抗体が提供される。本発明の抗体は、例えば、癌の診断又は治療のために、有用である。
【０１０２】
Ａ．典型的な抗Ａｘｌ抗体
一態様において、本発明は、Ａｘｌに結合する単離された抗体を提供する。所定の実施態様において、抗Ａｘｌ抗体は、≦５５０ｐＭの親和性でヒトＡｘｌに結合し、及び幾つかの実施態様において、≦１ｎＭの親和性でマウスＡｘｌに結合する。幾つかの実施態様において、抗Ａｘｌ抗体は、ヒト及びマウスＡｘｌに結合する。
【０１０３】
幾つかの実施態様において、抗Ａｘｌ抗体は、細胞表面上（腫瘍細胞表面など）のＡｘｌ受容体発現の下方制御を誘導する。幾つかの実施態様において、細胞表面のＡｘｌの発現は、Ａｘｌ抗体処置がない場合、Ａｘｌの細胞表面発現の８０％未満へ減少される。幾つかの実施態様において、細胞表面のＡｘｌの発現は、Ａｘｌ抗体処置がない場合、Ａｘｌの細胞表面発現の７０％未満、６０％未満、５０％未満、又は４０％未満へ減少される。幾つかの実施態様において、細胞内（例えば腫瘍細胞）の全Ａｘｌ発現は、Ａｘｌ抗体処置がない場合、全Ａｘｌ発現の８０％未満へ減少される。幾つかの実施態様において、全Ａｘｌ発現は、Ａｘｌ抗体処置がない場合、全Ａｘｌ発現の７０％未満、６０％未満、５０％未満、又は４０％未満へ減少される。幾つかの実施態様において、Ａｘｌ発現の下方制御が迅速に発生し、少なくとも２４時間続く。
【０１０４】
幾つかの実施態様において、抗Ａｘｌ抗体は構成的Ａｘｌ活性を阻害する。
【０１０５】
幾つかの実施態様において、抗Ａｘｌ抗体はＳｋｙ又はＭｅｒと有意に交差反応しない。幾つかの実施態様において、抗Ａｘｌ抗体はＳｋｙ又はＭｅｒに有意には結合せず、ヒト及びマウスＡｘｌに結合する。
【０１０６】
幾つかの実施態様において、抗Ａｘｌ抗体はＡｘｌ活性を阻害する。幾つかの実施態様において、抗Ａｘｌ抗体は細胞、例えばＡ５４９腫瘍細胞などの腫瘍細胞のアポトーシスを促進する。幾つかの実施態様において、抗Ａｘｌ抗体はＡｘｌに結合するＡｘｌリガンド（例えば、Ｇａｓ６）を阻害する。幾つかの実施態様において、抗Ａｘｌ抗体はＡｘｌ下流シグナル伝達を阻害する。幾つかの実施態様において、抗Ａｘｌ抗体はＧａｓ６依存性細胞増殖を阻害する。幾つかの実施態様において、抗Ａｘｌ抗体は、腫瘍関連マクロファージからの炎症性サイトカインの発現を阻害する。幾つかの実施態様において、抗Ａｘｌ抗体は、腫瘍間質機能を調節することによる腫瘍増殖及び／又は転移を阻害する。
【０１０７】
幾つかの実施態様において、以下のアミノ酸を含む、以下のアミノ酸から本質的に成る又は成る抗Ａｘｌ抗体に結合する：ＭＡＷＲＣＰＲＭＧＲＶＰＬＡＷＣＬＡＬＣＧＷＡＣＭＡＰＲＧＴＱＡＥＥＳＰＦＶＧＮＰＧＮＩＴＧＡＲＧＬＴＧＴＬＲＣＱＬＱＶＱＧＥＰＰＥＶＨＷＬＲＤＧＱＩＬＥＬＡＤＳＴＱＴＱＶＰＬＧＥＤＥＱＤＤＷＩＶＶＳＱＬＲＩＴＳＬＱＬＳＤＴＧＱＹＱＣＬＶＦＬＧＨＱＴＦＶＳＱＰＧＹＶＧ（配列番号１１１）。
【０１０８】
幾つかの実施態様において、以下のアミノ酸を含む、以下のアミノ酸から本質的に成る又は成る抗Ａｘｌ抗体に結合する：ＩＴＶＬＰＱＱＰＲＮＬＨＬＶＳＲＱＰＴＥＬＥＶＡＷＴＰＧＬＳＧＩＹＰＬＴＨＣＴＬＱＡＶＬＳＤＤＧＭＧＩＱＡＧＥＰＤＰＰＥＥＰＬＴＳＱＡＳＶＰＰＨＱＬＲＬＧＳＬＨＰＨＴＰＹＨＩＲＶＡＣＴＳＳＱＧＰＳＳＷＴＨＷＬ（配列番号１３０）。
【０１０９】
幾つかの実施態様において、成熟ヒトＡｘｌアミノ酸配列のアミノ酸番号１−１２２を含む、本質的に成る又は成るポリペプチドに結合する。
【０１１０】
幾つかの実施態様において、成熟ヒトＡｘｌアミノ酸配列のアミノ酸番号２２１−２３４を含む、本質的に成る又は成るポリペプチドに結合する。
【０１１１】
幾つかの実施態様において、抗Ａｘｌ抗体は以下の配列と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９８％配列同一性又は類似性を有するアミノ酸配列に結合する：ＭＡＷＲＣＰＲＭＧＲＶＰＬＡＷＣＬＡＬＣＧＷＡＣＭＡＰＲＧＴＱＡＥＥＳＰＦＶＧＮＰＧＮＩＴＧＡＲＧＬＴＧＴＬＲＣＱＬＱＶＱＧＥＰＰＥＶＨＷＬＲＤＧＱＩＬＥＬＡＤＳＴＱＴＱＶＰＬＧＥＤＥＱＤＤＷＩＶＶＳＱＬＲＩＴＳＬＱＬＳＤＴＧＱＹＱＣＬＶＦＬＧＨＱＴＦＶＳＱＰＧＹＶＧ（配列番号１１１）。
【０１１２】
幾つかの実施態様において、抗Ａｘｌ抗体は以下の配列と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９８％配列同一性又は類似性を有するアミノ酸配列に結合する：ＩＴＶＬＰＱＱＰＲＮＬＨＬＶＳＲＱＰＴＥＬＥＶＡＷＴＰＧＬＳＧＩＹＰＬＴＨＣＴＬＱＡＶＬＳＤＤＧＭＧＩＱＡＧＥＰＤＰＰＥＥＰＬＴＳＱＡＳＶＰＰＨＱＬＲＬＧＳＬＨＰＨＴＰＹＨＩＲＶＡＣＴＳＳＱＧＰＳＳＷＴＨＷＬ（配列番号１３０）。
【０１１３】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１１４】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１１５】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１１６】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１１７】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１１８】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１１９】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１２０】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１２１】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１２２】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１２３】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１２４】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１２５】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１２６】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１２７】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１２８】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１２９】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１３０】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１３１】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１３２】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１３３】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１３４】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１３５】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ２；（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１３６】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ１；（ｂ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ２；（ｃ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１３７】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ１；（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ２；（ｃ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１３８】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ１；（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ２；（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１３９】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ１；（ｂ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ２；（ｃ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１４０】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ１；（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ２；（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１４１】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ１；（ｂ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ２；（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１４２】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ１；（ｂ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ２；（ｃ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１４３】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ１；（ｂ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ２；（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１４４】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ１；（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ２；（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１４５】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ１；（ｂ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ２；（ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１４６】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ１；（ｂ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ２；（ｃ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ３から選択される、少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０１４７】
一実施態様において、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１４８】
その他の実施態様において、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４９】
更なる実施態様において、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。
【０１５０】
更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。更なる実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１５１】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１５２】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１５３】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１５４】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１５５】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１５６】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１５７】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１５８】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１５９】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１６０】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１６１】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１６２】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１６３】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１６４】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１６５】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１６６】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１６７】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ１；（ｂ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ２；（ｃ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される、少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。
【０１６８】
一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一実施態様において、抗体は、（ａ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１６９】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１７０】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１７１】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１７２】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１７３】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１７４】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１７５】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１７６】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１７７】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１７８】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１７９】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１８０】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１８１】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１８２】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１８３】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１８４】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１８５】
その他の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも一つのＶＨ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＨ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）（ｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一つのＶＬ ＨＶＲ配列、少なくとも二つのＶＬ ＨＶＲ配列、又は三つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１８６】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１８７】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１８８】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１８９】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１９０】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１９１】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１９２】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１９３】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１９４】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１９５】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１９６】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１９７】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１９８】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１９９】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０２００】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０２０１】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０２０２】
その他の態様において、本発明は、（ａ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０２０３】
所定の実施態様において、上記に提供されるような抗Ａｘｌ抗体の任意の一以上のアミノ酸は、以下のＨＶＲの一で置換されるか又は欠失している：
−ＨＶＲ−Ｈ１（配列番号７）において：位置２，３，４，５，６，７，８，９，及び１０；
−ＨＶＲ−Ｈ２（配列番号８）において：位置１，２，４，６，７，８，９，及び１０；
−ＨＶＲ−Ｈ３（配列番号９）において：位置３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，又は１５；
−ＨＶＲ−Ｌ１（配列番号１０）において：位置５，６，７，８，９，及び１０；
−ＨＶＲ−Ｌ２（配列番号１１）において：位置１，４，及び６；
−ＨＶＲ−Ｌ３（配列番号１２）において：位置３，４，５，６，７，及び８．
【０２０４】
所定の実施態様において、本明細書中に提供されるように、置換は保存的置換である。所定の実施態様において、一以上の以下の置換が任意の組合わせで成される：
−ＨＶＲ−Ｈ１（配列番号７）において．Ｓ２８Ｔ；Ｌ２９Ｆ又はＶ：Ｓ３０Ｔ又はＲ；Ｇ３１Ｓ；Ｓ３２Ｈ，Ｔ又はＩ；Ｗ３３Ｇ；Ｉ３４Ｌ；
−ＨＶＲ−Ｈ２（配列番号８）において：Ｇ４９Ａ；Ｗ５０Ｇ；Ｎ５２Ｓ，Ａ，又はＰ；Ｙ５３Ａ又はＶ；Ｒ５４Ｇ又はＳ；Ｇ５５Ｓ又はＲ；Ｙ５６Ｓ又はＨ；Ａ５７Ｔ又はＰ；
−ＨＶＲ−Ｈ３（配列番号９）において：Ｅ９５Ｗ；Ｙ９６Ｒ；Ｓ９７Ｎ又はＰ；Ｇ９８Ｄ又はＬ；Ｗ９９Ｓ；Ｇ１００Ｒ，Ａ，又はＳ；Ｇ１００ａＳ；Ｓ１００ｂ欠失；Ｓ１００ｃＹ又は欠失；Ｖ１００ｄＩ又は欠失；Ｇ１００ｅ又は欠失；Ｙ１００ｆ又は欠失，Ａ１００ｇＥ又は欠失；
−ＨＶＲ−Ｌ１（配列番号１０）において：Ｄ２８Ｉ又はＳ；Ｖ２９Ｉ；Ｓ３０Ｇ又はＲ；Ｔ３１Ｉ，Ｎ又はＲ；Ａ３２Ｓ；Ｖ３３Ｌ；
−ＨＶＲ−Ｌ２（配列番号１１）：Ｓ５０Ａ又はＶ；Ｆ５３Ｎ又はＳ；Ｙ５５Ａ；
−ＨＶＲ−Ｌ３（配列番号１２）：Ｓ９１Ａ；Ｙ９２Ｋ又はＮ；Ｔ９３Ｓ，Ｙ，Ｍ，Ｒ，又はＡ；Ｔ９４Ｎ，Ｆ，又はＳ；Ｐ９５Ｒ；Ｐ９６Ｙ，Ｓ，又はＬ．
【０２０５】
所定の実施態様において、一以上の以下の置換が任意の組合わせで成される：
−ＨＶＲ−Ｈ１（配列番号７）において．Ｓ２８Ｔ；Ｌ２９Ｆ又はＶ：Ｓ３０Ｔ；Ｇ３１Ｓ；Ｓ３２Ｈ，Ｔ又はＩ；
−ＨＶＲ−Ｈ２（配列番号８）において：Ｎ５２Ｓ，又はＡ；Ｒ５４Ｇ又はＳ；Ｇ５５Ｒ；Ｙ５６Ｓ，又はＨ；Ａ５７Ｔ又はＰ；
−ＨＶＲ−Ｈ３（配列番号９）において：Ｓ９７Ｎ又はＰ；Ｇ９８Ｄ；Ｇ１００Ｓ；
−ＨＶＲ−Ｌ３（配列番号１２）において：Ｔ９３Ｓ，又はＹ；Ｔ９４Ｎ，Ｆ，又はＳ．
【０２０６】
上記の置換可能な全ての組み合わせは、コンセンサス配列によって包含される：
−ＨＶＲ−Ｈ１（配列番号１１２）：ＧＦＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｈ，ここでＸ１はＳ又はＴ；Ｘ２はＬ，Ｆ又はＶ；Ｘ３はＳ，Ｔ，又はＲ；Ｘ４はＧ又はＳ；Ｘ５はＳ，Ｈ，Ｔ又はＩ；Ｘ６はＷ又はＧ；Ｘ７はＩ又はＬである；
−ＨＶＲ−Ｈ２（配列番号１１３）において：Ｘ１Ｘ２ＩＸ３ＰＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８ＹＹＡＤＳＶＫＧ，ここでＸ１はＧ又はＡ；Ｘ２はＷ又はＧ；Ｘ３はＮ，Ｓ，Ａ又はＰ；Ｘ４はＹ，Ａ又はＶ；Ｘ５はＲ，Ｇ，又はＳ；Ｘ６はＧ,Ｒ又はＳ；Ｘ７はＹ，Ｓ，Ｈ又はＹ；Ｘ８はＡ，Ｔ，又はＰである；及び／又は（配列番号１６６）：Ｘ１Ｘ２ＩＸ３ＰＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０ＹＹＡＤＳＶＫＧ，ここでＸ１はＧ又はＡ；Ｘ２はＷ又はＧ；Ｘ３はＮ，Ｓ，Ａ又はＰ；Ｘ４はＹ，Ａ又はＶ；Ｘ５はＲ，Ｇ，又はＳ；Ｘ６はＧ,Ｒ又はＳ；Ｘ７はＹ，Ｓ，Ｈ又はＹ；Ｘ８はＡ，Ｔ，又はＰ；Ｘ９は任意のアミノ酸又は欠失；Ｘ１０は任意のアミノ酸又は欠失；
−ＨＶＲ−Ｈ３（配列番号１１４）において：ＡＲＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３ＭＤＹ，ここでＸ１はＥ又はＷ；Ｘ２はＹ又はＲ；Ｘ３はＳ，Ｎ又はＰ；Ｘ４はＧ，Ｄ，又はＬ；Ｘ５はＷ又はＳ；Ｘ６はＧ，Ｒ，Ａ，又はＳ；Ｘ７はＧ又はＳ；Ｘ８はＳ又は欠失；Ｘ９はＳ，Ｙ又は欠失；Ｘ１０はＶ，Ｉ又は欠失；Ｘ１１はＧ又は欠失；Ｘ１２はＹ又は欠失；Ｘ１３はＡ，Ｅ又は欠失；
−ＨＶＲ−Ｌ１（配列番号１１５）において：ＲＡＳＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ａ，ここでＸ１はＤ，Ｉ又はＳ；Ｘ２はＶ又はＩ；Ｘ３はＳ，Ｇ又はＲ；Ｘ４はＴ，Ｉ，Ｎ又はＲ；Ｘ５はＡ又はＳ；Ｘ６はＶ又はＬ；
−ＨＶＲ−Ｌ２（配列番号１１６）において：Ｘ１ＡＳＸ２ＬＸ３Ｓ，ここでＸ１はＳ，Ａ，又はＶ；Ｘ２はＦ，Ｎ又はＳ；Ｘ３はＹ又はＡ；
−ＨＶＲ−Ｌ３（配列番号１１７）において：ＱＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｔ，ここでＸ１はＳ又はＡ；Ｘ２はＹ，Ｋ又はＮ；Ｘ３はＴ，Ｓ，Ｙ，Ｍ，Ｒ又はＡ；Ｘ４はＴ，Ｎ，Ｓ，又はＦ；Ｘ５はＰ又はＲ；Ｘ６はＰ，Ｙ，Ｓ又はＬ．
【０２０７】
幾つかの実施態様において、以下のコンセンサス配列が提供される。
−ＨＶＲ−Ｈ１（配列番号１１８）において．ＧＦＸ１Ｘ２Ｘ３ＧＸ４ＷＩＨ，ここでＸ１はＴ又はＳ，Ｘ２はＦ又はＬ，Ｘ３はＴ又はＳ，Ｘ４はＨ，Ｓ又はＴ；
−ＨＶＲ−Ｈ２（配列番号１１９）において：ＧＷＩＸ１ＰＹＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＹＹＡＤＳＶＫＧ，ここでＸ１はＳ，Ｎ又はＡ；Ｘ２はＧ，Ｒ又はＳ；Ｘ３はＧ又はＲ；Ｘ４はＳ，Ｙ又はＨ；Ｘ５はＴ，Ａ又はＰ；
−ＨＶＲ−Ｈ３（配列番号１２０）において：ＡＲＥＹＸ１Ｘ２ＷＸ３Ｘ４ＳＸ５Ｘ６ＧＹＸ７ＭＤＹ，ここでＸ１はＳ，Ｎ又はＰ；Ｘ２はＧ又はＤ；Ｘ３はＧ，Ｒ，又はＡ；Ｘ４はＧ又はＳ；Ｘ５はＳ又はＹ；Ｘ６はＶ又はＩ；Ｘ７はＡ又はＥ；
−ＨＶＲ−Ｌ３（配列番号１２１）において：ＱＱＳＹＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｔ，ここでＸ１はＴ，Ｓ又はＹ；Ｘ２はＴ，Ｎ，Ｓ又はＦ；Ｘ３はＰ又はＲ；Ｘ４はＰ，Ｙ又はＳ．
【０２０８】
その他の態様において、抗Ａｘｌ抗体は、配列番号１０３、１０５、１０７、又は１０９のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。所定の実施態様において、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗Ａｘｌ抗体は、Ａｘｌへ結合する能力を保持する。所定の実施態様において、配列番号１０３、１０５、１０７又は１０９において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。所定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意で、抗Ａｘｌ抗体は、配列番号１０３、１０５、１０７又は１０９のＶＨ配列を、その配列の翻訳後修飾を含み、含む。特定の実施態様において、ＶＨは、（ａ）配列番号１、７、１３、１９、２５、３１、３７、４３、４９、５５、６１、６７、７３、７９、８５、９１、または９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２、８、１４、２０、２６、３２、３８、４４、５０、５６、６２、６８、７４、８０、８６、９２、または９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３、９、１５、２１、２７、３３、３９、４５、５１、５７、６３、６９、７５、８１、８７、９３または９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、から選択される一、二、又は三のＨＶＲを含む。特定の実施態様において、ＶＨは、（ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＨ３から選択される一、二、又は三のＨＶＲを含む。
【０２０９】
その他の態様において、配列番号１０４、１０６、１０８、又は１１０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％，９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗Ａｘｌ抗体が提供される。所定の実施態様において、少なくとも９０％，９１％，９２％，９３％，９４％，９５％，９６％，９７％，９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対して置換（例えば保存的置換）、挿入、又は欠失を含むが、その配列を含む抗Ａｘｌ抗体は、ＰＲＯへ結合する能力を保持する。所定の実施態様において、配列番号１０４、１０６、１０８又は１１０において、合計１から１０のアミノ酸が、置換、挿入及び／又は欠失している。所定の実施態様において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。任意で、抗Ａｘｌ抗体は、配列番号１０４、１０６、１０８又は１１０のＶＬ配列を、その配列の翻訳後修飾を含み、含む。特定の実施態様において、ＶＬは、（ａ）配列番号４、１０、１６、２２、２８、３４、４０、４６、５２、５８、６４、７０、７６、８２、８８、９４、または１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号５、１１、１７、２３、２９、３５、４１、４７、５３、５９、６５、７７、８３、８９、９５、または１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６、１２、１８、２４、３０、３６、４２、４８、５４、６０、６６、７２、７８、８４、９０、９６または１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、から選択される一、二、又は三のＨＶＲを含む。特定の実施態様において、ＶＬは、（ａ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲーＬ３から選択される一、二、又は三のＨＶＲを含む。
【０２１０】
その他の態様において、抗体が上記に与えられた実施態様の何れかにあるようなＶＨを含む、抗Ａｘｌ抗体が提供される。幾つかの実施態様において、抗体はＶＬを更に含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１０３のＶＨ配列を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１０５のＶＨ配列を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１０７のＶＨ配列を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１０９のＶＨ配列を含む。
【０２１１】
その他の態様において、抗体が上記に与えられた実施態様の何れかにあるようなＶＬを含む、抗Ａｘｌ抗体が提供される。幾つかの実施態様において、抗体はＶＨを更に含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１０４のＶＬ配列を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１０６のＶＬ配列を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１０８のＶＬ配列を含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１１０のＶＬ配列を含む。  
【０２１２】
その他の態様において、抗体が、上記に与えられた実施態様の何れかにあるＶＨ、及び上記に与えられた実施態様の何れかにあるＶＬを含む、抗Ａｘｌ抗体が提供される。一実施態様において、抗体は、配列番号１０３及び配列番号１０４のそれぞれＶＨとＶＬを、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１０５及び配列番号１０６のそれぞれＶＨとＶＬを、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１０７及び配列番号１０８のそれぞれＶＨとＶＬを、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１０９及び配列番号１１０のそれぞれＶＨとＶＬを、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０２１３】
本発明の抗体は、Ａｘｌへの結合活性が保持されているという条件で、任意の適切なフレームワーク可変ドメイン配列を含むことができる。例えば、幾つかの実施態様において、本発明の抗体はヒトサブグループＩＩＩの重鎖フレームワークコンセンサス配列を含む。これらの抗体の一実施態様において、フレームワークコンセンサス配列は、位置７１、７３、及び／又は７８に置換を含む。これらの抗体の幾つかの実施態様において、位置７１はＡ、７３はＴ及び／又は７８はＡである。一実施態様において、これらの抗体は、ｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８（ハーセプチン（登録商標），Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）（また、米国特許第６４０７２１３号及び第５８２１３３７号、及びLee et al., J. Mol. Biol. (2004）の中に言及される）の重鎖可変ドメインフレームワーク配列を含む。一実施態様において、これらの抗体は、ヒトκＩ軽鎖フレームワークコンセンサス配列を更に含む。特定の実施態様において、これらの抗体は、米国特許第６４０７２１３号及び第５８２１３３７号に記載のｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８の軽鎖ＨＶＲ配列を含む。一実施態様において、これらの抗体はｈｕＭＡｂ４Ｄ５−８（ハーセプチン（登録商標），Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）（また、米国特許第６４０７２１３号及び第５８２１３３７号、及びLee et al., J. Mol. Biol. (2004)の中に言及される）の軽鎖可変ドメイン配列を含む。一実施態様において、抗Ａｘｌ抗体は、上記実施態様の何れかにおけるＨＶＲを含み、更に、図２、３Ａ−Ｂ、４、５または６に示されるＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、又はＦＲ４配列を含むＶＨ及び／又はＶＬを含む。
【０２１４】
更なる態様において、本発明は、本明細書に与えられた抗Ａｘｌ抗体と同一エピトープに結合する抗体を提供する。例えば、所定の実施態様において、配列番号１０３のＶＨ配列及び配列番号１０４のＶＬ配列を含む抗Ａｘｌ抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。所定の実施態様において、配列番号１０７のＶＨ配列及び配列番号１０８のＶＬ配列を含む抗Ａｘｌ抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。所定の実施態様において、アミノ酸ＭＡＷＲＣＰＲＭＧＲＶＰＬＡＷＣＬＡＬＣＧＷＡＣＭＡＰＲＧＴＱＡＥＥＳＰＦＶＧＮＰＧＮＩＴＧＡＲＧＬＴＧＴＬＲＣＱＬＱＶＱＧＥＰＰＥＶＨＷＬＲＤＧＱＩＬＥＬＡＤＳＴＱＴＱＶＰＬＧＥＤＥＱＤＤＷＩＶＶＳＱＬＲＩＴＳＬＱＬＳＤＴＧＱＹＱＣＬＶＦＬＧＨＱＴＦＶＳＱＰＧＹＶＧ（配列番号１１１）からなるＡｘｌの断片内のエピトープに結合する抗体が提供される。所定の実施態様において、アミノ酸ＩＴＶＬＰＱＱＰＲＮＬＨＬＶＳＲＱＰＴＥＬＥＶＡＷＴＰＧＬＳＧＩＹＰＬＴＨＣＴＬＱＡＶＬＳＤＤＧＭＧＩＱＡＧＥＰＤＰＰＥＥＰＬＴＳＱＡＳＶＰＰＨＱＬＲＬＧＳＬＨＰＨＴＰＹＨＩＲＶＡＣＴＳＳＱＧＰＳＳＷＴＨＷＬ（配列番号１３０）からなるＡｘｌの断片内のエピトープに結合する抗体が提供される。
【０２１５】
更なる態様において、配列番号１０３のＶＨ配列及び配列番号１０４のＶＬ配列を含む抗Ａｘｌ抗体と、ヒトＡｘｌへの結合を競合する抗体が提供される。所定の実施態様において、配列番号１０７のＶＨ配列及び配列番号１０８のＶＬ配列を含む抗Ａｘｌ抗体と、ヒトＡｘｌへの結合を競合する抗体が提供される。
【０２１６】
本発明の更なる態様では、上記実施態様のいずれかに記載の抗Ａｘｌ抗体は、キメラ、ヒト化またはヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施態様において、抗Ａｘｌ抗体は、抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。その他の態様において、抗体は、全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ抗体、又は本明細書において定義された他の抗体クラス又はアイソタイプである。
【０２１７】
更なる態様にて、以下のセクション１−７で説明されるように、上記実施態様のいずれかに記載の抗Ａｘｌ抗体は、単独または組み合わせにより、任意の特徴を組み込むことができる：
【０２１８】
１．抗体親和性
所定の実施態様において、本明細書において与えられる抗体は、解離定数（Ｋｄ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ未満、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）。
【０２１９】
一実施態様において、以下のアッセイにより説明されるように、Ｋｄは、目的の抗体のＦａｂ型とその抗原を用いて実施される放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）により測定される。段階的な力価の非標識抗原の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）−標識抗原にてＦａｂを均衡化して、抗Ｆａｂ抗体コートプレートと結合した抗原を捕獲することによって抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性を測定する（例としてChen, et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)を参照)。アッセイの条件を決めるために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を５μｇ／ｍｌの捕獲抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）を含む５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）にて一晩コートして、その後２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳにて室温（およそ２３℃）で２〜５時間、ブロックする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）において、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］抗原を、段階希釈した目的のＦａｂと混合する(例えば、Presta等, (1997) Cancer Res. 57: 4593-4599の抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ-１２の評価と一致する)。ついで目的のＦａｂを一晩インキュベートする；しかし、インキュベーションは平衡状態に達したことを確認するまでに長時間（例えばおよそ６５時間）かかるかもしれない。その後、混合物を捕獲プレートに移し、室温で（例えば１時間）インキュベートする。そして、溶液を取り除き、プレートを０．１％のポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標））を含むＰＢＳにて８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルの閃光物質（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０ＴＭ；Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴＴＭγ計測器（Ｐａｃｋａｒｄ）にて１０分間計測する。最大結合の２０％か又はそれ以下濃度のＦａｂを選択してそれぞれ競合結合測定に用いる。
【０２２０】
他の実施態様に従って、〜１０反応単位（ＲＵ）の固定した抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いる表面プラズモン共鳴アッセイを使用してＫｄを測定する。簡単に言うと、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５，ＢＩＡＣＯＲＥ Ｉｎｃ．）を、提供者の指示書に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシニミド（ＮＨＳ）で活性化した。抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（〜０．２μＭ）に希釈し、結合したタンパク質の反応単位（ＲＵ）がおよそ１０になるように５μｌ／分の流速で注入する。抗原の注入後、反応しない群をブロックするために１Ｍのエタノールアミンを注入する。動力学的な測定のために、Ｆａｂの２倍の段階希釈（０．７８ｎＭから５００ｎＭ）を、２５℃で、およそ２５μｌ／分の流速で、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ２０ＴＭ）界面活性剤（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳに注入した。会合及び解離のセンサーグラムを同時にフィットさせることによる単純一対一ラングミュア結合モデル（ｓｉｍｐｌｅ ｏｎｅ−ｔｏ−ｏｎｅ Ｌａｎｇｍｕｉｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｄｅｌ）（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン３．２）を用いて、会合速度（ｋｏｎ）と解離速度（ｋｏｆｆ）を算出した。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出した。例えば、 Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)を参照。上記の表面プラスモン共鳴アッセイによる結合速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を上回る場合、分光計、例えば、流動停止を備えた分光光度計（ｓｔｏｐ−ｆｌｏｗ ｅｑｕｉｐｐｅｄ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｍｅｔｅｒ）（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯＴＭ分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）で測定される、漸増濃度の抗原の存在下にて、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）、２５℃の、２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；放出＝３４０ｎｍ、帯域通過＝１６ｎｍ）における増加又は減少を測定する蛍光消光技術を用いて結合速度を測定することができる。
【０２２１】
２．抗体断片
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片は、限定されないが、Ｆａｂ，Ｆａｂ’，Ｆａｂ’−ＳＨ，Ｆ（ａｂ’）２，Ｆｖ，及びｓｃＦｖ断片、及び下記の他の断片を含む。所定の抗体断片の総説については、Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)を参照。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)を参照；また、国際公開第９３／１６１８５号；及び米国特許第５５７１８９４号及び第５５８７４５８号も参照。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつインビボ半減期を増加させたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の議論については、米国特許第５８６９０４６号を参照のこと。
【０２２２】
ダイアボディは２価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開第１９９３／０１１６１号; Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 及びHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)を参照。トリアボディ及びテトラボディもまた Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載されている。
【０２２３】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て又は一部、又は軽鎖可変ドメインの全て又は一部を含む抗体断片である。所定の実施態様において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６２４８５１６ Ｂ１号を参照）。
【０２２４】
抗体断片は様々な技術で作成することができ、限定されないが、本明細書に記載するように、インタクトな抗体の分解、並びに組換え宿主細胞（例えば、大腸菌やファージ）による生産を含む。
【０２２５】
３．キメラ及びヒト化抗体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、キメラ抗体である。所定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号、及びMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))に記載されている。一例において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサル等の非ヒト霊長類由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。更なる例において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変更された「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【０２２６】
所定の実施態様において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減するために、親の非ヒト抗体の特異性と親和性を保持したまま、ヒト化されている。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその一部）が、非ヒト抗体から由来し、ＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列に由来する、一以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、任意で、ヒト定常領域の少なくとも一部をも含む。所定の実施態様において、ヒト化抗体の幾つかのＦＲ残基は、抗体特異性又は親和性を回復もしくは改善するめに、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換されている。
【０２２７】
ヒト化抗体およびそれらの製造方法は、例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)に総説され、更に、 Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989); 米国特許第５８２１３３７号，７５２７７９１号，６９８２３２１号，及び７０８７４０９号; Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005) (ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフティングを記述); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991) (「リサーフェシング」を記述); Dall’Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005) (「ＦＲシャッフリング」を記述);及びOsbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 及びKlimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000) (FRのシャッフリングへの「誘導選択」アプローチを記述)に記載されている。
【０２２８】
ヒト化に用いられ得るヒトフレームワーク領域は、限定されないが、「ベストフィット」法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えば、Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)）；軽鎖または重鎖の可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域(例えば、Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992);及びPresta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)を参照); ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域 (例えば、Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)を参照); 及びＦＲライブラリスクリーニング由来のフレームワーク領域 (例えば、Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)及び Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)を参照)を含む。
【０２２９】
４．ヒト抗体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を用いて生産することができる。ヒト抗体は一般的にvan Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001) 及びLonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)に記載されている。
【０２３０】
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を持つ又はインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することにより調製することができる。このような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換するか、又は染色体外に存在するかもしくは動物の染色体にランダムに組み込まれている、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含む。このようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化される。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)を参照。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ技術を記載している、米国特許第６０７５１８１号及び６１５０５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載している米国特許第５７７０４２９号；Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許第７０４１８７０号及び、ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号）を参照。このような動物で生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、更に改変される可能性がある。
【０２３１】
ヒト抗体は、ハイブリドーマベース法によって作成することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス-ヒトヘテロ細胞株が記載されている。(例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987);及びBoerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)を参照)。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体はまた、Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)に記載されている。更なる方法は、例えば、米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している)及びNi, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006) (ヒト-ヒトハイブリドーマを記載している)に記載されたものを含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）もまた、Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 及びVollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)に記載される。
【０２３２】
ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたFvクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成され得る。このような可変ドメイン配列は、次に所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術が、以下に説明される。
【０２３３】
５．ライブラリー由来の抗体
本発明の抗体は、所望の活性または活性（複数）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離することができる。例えば、様々な方法が、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてのライブラリーをスクリーニングするために、当該技術分野で知られている。そのような方法は、例えば、Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)に総説され、更に、例えば、McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 及びLee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)に記載されている。
【０２３４】
所定のファージディスプレイ法において、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーがポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により個別にクローニングされ、ファージライブラリーにランダムに再結合され、その後、Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、通常、抗体断片を、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、またはＦａｂ断片のいずれかとして提示する。免疫された起源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要性なしで免疫原に高親和性抗体を提供する。あるいは、Griffiths et al., EMBO J, 12: 12-734 (1993)に記載されるように、ナイーブなレパートリーを（例えば、ヒトから）クローン化することにより、任意の免疫感作無しで、広範囲の非自己抗原及びまた自己抗原に対して、抗体の単一起源を提供することができる。最後に、ナイーブライブラリはまた、Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)に記載されるように、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再構成を達成するために、幹細胞由来の未再配置のＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用することにより合成することができる。ヒト抗体ファージライブラリーを記述する特許公報は、例えば、米国特許第５７５０３７３号、及び米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、２００５／０１１９４５５号、２００５／０２６６０００号、２００７／０１１７１２６号、２００７／０１６０５９８号、２００７／０２３７７６４号、２００７／０２９２９３６号及び２００９／０００２３６０を含む。
【０２３５】
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体または抗体断片は、本明細書でヒト抗体またはヒト抗体の断片とみなされる。
【０２３６】
６．多重特異性抗体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも二つの異なる部位に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。所定の実施態様において、結合特異性の一つはＡｘｌに対してであり、他は、任意の他の抗原に対してである。所定の実施態様において、二重特異性抗体は、Ａｘｌの２つの異なるエピトープに結合することができる。二重特異性抗体はまたＡｘｌを発現する細胞に細胞傷害性薬物を局在化するために用いることができる。二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
【０２３７】
多重特異性抗体を作製するための技術は、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖-軽鎖対の組換え共発現(Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983))、国際公開第９３／０８８２９号、及びTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)を参照)及び「ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ」エンジニアリング（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照）を含む。多重特異抗体はまた、抗体のＦｃ−ヘテロ２量体分子を作成するための静電ステアリング効果を操作すること（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）、２つ以上の抗体又は断片を架橋すること（例えば米国特許第４６７６９８０号、及びBrennan et al., Science, 229: 81 (1985)を参照)、２重特異性抗体を生成するためにロイシンジッパーを使用すること(例えば、Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)を参照)、二重特異性抗体フラグメントを作製するため、「ダイアボディ」技術を使用すること(例えば、Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)を参照)、単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを使用すること（例えば、Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)を参照)、及び、例えばTutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)に記載されているように、三重特異性抗体を調製することによって作成することができる。
【０２３８】
「オクトパス抗体」を含む、３つ以上の機能性抗原結合部位を持つ改変抗体もまた本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６Ａ１号を参照）。  
【０２３９】
本明細書中の抗体又は断片はまた、Ａｘｌ並びにその他の異なる抗原（例えば米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号参照）に結合する抗原結合部位を含む、「２重作用（Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」を含む。
【０２４０】
７．抗体変異体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望まれ得る。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することにより、またはペプチド合成によって調製することができる。このような改変は、例えば、抗体のアミノ酸配列内における、残基の欠失、及び／又は挿入及び／又は置換を含む。最終コンストラクトが所望の特性、例えば、抗原結合を有していることを条件として、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが、最終コンストラクトに到達させるために作成され得る。
【０２４１】
ａ）置換、挿入、および欠失変異体
所定の実施態様において、一つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換突然変異の対象となる部位は、ＨＶＲとＦＲを含む。保存的置換は、表１の「保存的置換」の見出しの下に示されている。より実質的な変更が、表１の「典型的な置換」の見出しの下に与えられ、アミノ酸側鎖のクラスを参照して以下に更に説明される。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入することができ、その産物は、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の減少、又はＡＤＣＣ又はＣＤＣの改善についてスクリーニングされた。
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【０２４２】
アミノ酸は共通の側鎖特性に基づいてグループに分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン，Ｍｅｔ，Ａｌａ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ｈｉｓ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ，Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ．
【０２４３】
非保存的置換は、これらの分類の一つのメンバーを他の分類に交換することを必要とするであろう。
【０２４４】
置換変異体の一つのタイプは、親抗体（例えば、ヒト化又はヒト抗体など）の一以上の高頻度可変領域残基の置換を含む。一般的には、さらなる研究のために選択され得られた変異体は、親抗体と比較して、特定の生物学的特性の改変（例えば、改善）（例えば、親和性の増加、免疫原性を減少）を有し、及び／又は親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持しているであろう。典型的な置換変異体は、親和性成熟抗体であり、例えば、本明細書に記載されるファージディスプレイベースの親和性成熟技術を用いて、簡便に生成され得る。簡潔に言えば、一つ以上のＨＶＲ残基が変異し、変異体抗体は、ファージ上に表示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０２４５】
変更（例えば、置換）は、例えば抗体の親和性を向上させるために、ＨＶＲで行うことができる。このような変更は、ＨＶＲの「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程中に高頻度で変異を受けるコドンにコードされた残基で (例えばChowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)を参照)、及び／又はＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）で行うことができ、得られた変異体ＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリから構築し選択し直すことによる親和性成熟が、例えばHoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)に記載されている。親和性成熟の幾つかの実施態様において、多様性が、種々の方法（例えば、変異性ＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指定突然変異誘発）のいずれかにより、成熟のために選択された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリーが作成される。次いで、ライブラリーは、所望の親和性を持つ抗体変異体を同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するするもう一つの方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４から６残基）がランダム化されたＨＶＲ指向のアプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えばアラニンスキャニング突然変異誘発、またはモデリングを用いて、特異的に同定され得る。ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３がしばしば標的にされる。
【０２４６】
所定の実施態様において、置換、挿入、または欠失は、そのような改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限りにおいて、一以上のＨＶＲ内で発生する可能性がある。例えば、実質的に結合親和性を低下させない保存的改変（例えば本明細書で与えられる保存的置換）をＨＶＲ内で行うことができる。このような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」又はＳＤＲの外側であってもよい。上記に与えられた変異体ＶＨ又はＶＬ配列の所定の実施態様において、各ＨＶＲは不変であるか、又はわずか１個、２個または３個のアミノ酸置換が含まれているかの何れかである。
【０２４７】
突然変異誘発のために標的とすることができる抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085により説明されるように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基またはグループ（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕなどの荷電残基）が同定され、抗原と抗体との相互作用が影響を受けるかどうかを判断するために、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）に置換される。更なる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入され得る。代わりに、又は更に、抗原抗体複合体の結晶構造が、抗体と抗原との接触点を同定する。そのような接触残基及び隣接残基が、置換の候補として標的とされるか又は排除され得る。変異体はそれらが所望の特性を含むかどうかを決定するためにスクリーニングされ得る。
【０２４８】
アミノ酸配列挿入は、一残基から百以上の残基を含有するポリペプチド長にわたるアミノ及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニン残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異体は、酵素に対する抗体のＮ末端またはＣ末端への融合（例えばＡＤＥＰＴの場合）、または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの融合を含む。
【０２４９】
ｂ）グリコシル化変異体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は抗体がグリコシル化される程度を増加または減少するように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、一以上のグリコシル化部位が作成または削除されるようにアミノ酸配列を変えることによって簡便に達成することができる。
【０２５０】
抗体がＦｃ領域を含む場合には、それに付着する糖を変えることができる。哺乳動物細胞によって生成された天然型抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ−結合により一般的に付着した分岐鎖、二分岐オリゴ糖を含んでいる。例えばWright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)を参照。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、二分岐糖鎖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合した、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、シアル酸、並びにフコースを含み得る。幾つかの実施態様において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の改変は一定の改善された特性を有する抗体変異型を作成するために行われ得る。
【０２５１】
一実施態様において、抗体変異体は、Ｆｃ領域に（直接または間接的に）付着されたフコースを欠いた糖鎖構造を有して提供される。例えば、このような抗体のフコース量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％、または２０％から４０％であり得る。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されるＡｓｎ２９７に付着しているすべての糖構造の合計（例えば、コンプレックス、ハイブリッド及び高マンノース構造）に対して、Ａｓｎ２９７の糖鎖中のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）でおよそ２９７の位置に位置するアスパラギン残基を指し、しかし、Ａｓｎ２９７もまた位置２９７の上流または下流のおよそ±３アミノ酸に、すなわち抗体の軽微な配列変異に起因して、位置２９４と３００の間に配置され得る。このようなフコシル化変異体はＡＤＣＣ機能を改善させた可能性がある。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号(Presta, L.)；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）を参照。「非フコシル化」又は「フコース欠損」抗体変異体に関連する出版物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、国際公開第２０００／６１７３９号、国際公開第２００１／２９２４６号、米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号、米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号、米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号、米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号、米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号、米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号、国際公開第２００３／０８５１１９号、国際公開第２００３／０８４５７０号、国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第２００５／０３５７７８号、国際公開第２００５／０５３７４２号、国際公開第２００２／０３１１４０号、Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)が含まれる。非フコシル化抗体を産生する能力を有する細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損しているＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞(Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８ Ａ１号，Presta, L；及び国際公開第２００４／０５６３１２ Ａ１号，Adams et al., 特に実施例１１）、及びノックアウト細胞株、アルファ−１、６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); 及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照）を含む。
【０２５２】
抗体変異体が、例えば、抗体のFc領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている二分オリゴ糖とともに更に与えられる。このような抗体変異体はフコシル化を減少させ、及び／又はＡＤＣＣ機能を改善している可能性がある。そのような抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号 (Jean-Mairettら);米国特許第6,602,684号 (Umanaら);及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号 (Umanaら)に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内に少なくとも1つのガラクトース残基を持つ抗体変異体も提供される。このような抗体変異体はＣＤＣ機能を改善させた可能性がある。このような抗体変異体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）；国際公開第１９９８／５８９６４号 (Raju, S.); 及び国際公開第１９９９／２２７６４号 (Raju, S.)に記載されている。
【０２５３】
ｃ）Ｆｃ領域変異体
所定の実施態様において、１つまたは複数のアミノ酸改変を、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に導入することができ、それによってＦｃ領域変異体を生成する。Ｆｃ領域の変異体は、１つまたは複数のアミノ酸位置においてアミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域の配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含んでもよい。
【０２５４】
所定の実施態様において、本発明は、インビボにおける抗体の半減期が重要であるが、ある種のエフェクター機能（例えば補体およびＡＤＣＣなど）が不要または有害である用途のための望ましい候補とならしめる、全てではないが一部のエフェクター機能を有する抗体変異体を意図している。インビトロ及び／又はインビボでの細胞毒性アッセイを、ＣＤＣ活性及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／枯渇を確認するために行うことができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合を欠くが（それゆえ、おそらくＡＤＣＣ活性を欠く）、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確認するために行うことができる。ＡＤＣＣ、ＮＫ細胞を媒介する初代細胞は、ＦｃＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃＲＩ、ＦｃＲＩＩ及びＦｃＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の４６４ページの表3に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５５００３６２号 (例えば、Hellstrom, I. et al. Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照) 及びHellstrom, I et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); ５８２１３３７ (Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照)に説明される。あるいは、非放射性アッセイ法を用いることができる（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ （ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ；及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、またはさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656 (1998)に開示されるように、インビボで、例えば動物モデルにおいて評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイはまた、抗体が体Ｃ１ｑを結合することができないこと、したがって、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために行うことができる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003);及びCragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照)。ＦｃＲｎ結合、及びインビボでのクリアランス／半減期の測定もまた、当該分野で公知の方法を用いて行うことができる(例えば、Petkova, S.B. et al., Int’l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照)。
【０２５５】
エフェクター機能が減少した抗体は、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、３２９の一つ以上の置換を有するものが含まれる（米国特許第６７３７０５６号）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７の２以上での置換を有するＦｃ変異体を含む（米国特許第７３３２５８１号）。
【０２５６】
ＦｃＲへの改善又は減少させた結合を持つ特定の抗体変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６７３７０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、及びShields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照)。
【０２５７】
所定の実施態様において、抗体変異体はＡＤＣＣを改善する１つまたは複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、及び／又は３３４における置換（ＥＵの残基番号付け）を含む。
【０２５８】
幾つかの実施態様において、改変された（すなわち改善されたか減少した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を生じる、Ｆｃ領域における改変がなされ、例えば、米国特許第６１９４５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びIdusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)に説明される。
【０２５９】
増加した半減期を持ち、胎仔への母性ＩｇＧの移送を担う、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体 (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 及びKim et al., J. Immunol. 24:249 (1994))が、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４Ａ１号 (Hinton et al.)に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する一つまたは複数の置換を有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃ変異体は、Ｆｃ領域の残基の１以上の置換を有するものが含まれる：２３８，２５６，２６５，２７２，２８６，３０３，３０５，３０７，３１１，３１２，３１７，３４０，３５６，３６０，３６２，３７６，３７８，３８０，３８２，４１３，４２４又は４３４、例えば、Ｆｃ領域の残基４３４の置換（米国特許第７３７１８２６号）。
【０２６０】
Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988); 米国特許第５６４８２６０号；米国特許第５６２４８２１号；及び、Ｆｃ領域の変異体の他の例に関しては国際公開第９４／２９３５１号も参照のこと。
【０２６１】
ｄ）システイン改変抗体変異体
所定の実施態様において、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン改変抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂｓ」を作成することが望まれ得る。特定の実施態様において、置換された残基は、抗体のアクセス可能な部位で起きる。それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は、それによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書中でさらに記載されるように、イムノコンジュゲーを作成するために、例えば薬物部分またはリンカー−薬剤部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートするために使用することができる。所定の実施態様において、一以上の以下の残基がシステインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔの番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン改変抗体は、例えば、米国特許第７５２１５４１号に記載のように生成され得る。
【０２６２】
ｅ）抗体誘導体
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗体は、当技術分野で知られ、容易に入手されている追加の非タンパク質部分を含むように更に改変することができる。抗体の誘導体化に適した部分としては、限定されないが、水溶性ポリマーを含む。水溶性ポリマーの非限定的な例は、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキソラン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリアミノ酸（単独重合体又はランダム共重合体の何れか）及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコール単独重合体、プロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール及びこれらの混合物を包含する。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドはその水中での安定性のために製造上の利点を有し得る。ポリマーは何れかの分子量のものであってよく、そして分枝鎖又は未分枝鎖であってよい。抗体に結合するポリマーの数は変動してよく、そして、一以上の重合体が結合する場合は、それらは同じか又は異なる分子であることができる。一般的に、誘導体化に使用するポリマーの数及び／又は種類は、限定されないが、向上させるべき抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が特定の条件下で治療に使用されるのか等を考慮しながら決定することができる。
【０２６３】
その他の実施態様において、放射線への曝露によって選択的に加熱されてもよい抗体と非タンパク質部分とのコンジュゲートが、提供される。一実施態様において、非タンパク質部分はカーボンナノチューブである(Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005)。放射線は、任意の波長であって良いが、限定されないものの、通常の細胞に害を与えないが、抗体−非タンパク質部分の近位細胞が死滅される温度に非タンパク質部分を加熱する波長が含まれる。
【０２６４】
Ｂ．組換え方法及び組成物
抗体は、例えば米国特許第４８１６５６７号で説明したように、組換えの方法および組成物を用いて製造することができる。一実施態様において、本明細書に記載される抗Ａｘｌ抗体をコードする単離された核酸が提供される。このような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードし得る。更なる実施態様において、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施態様において、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。一実施態様において、宿主細胞は以下を含む（例えば、以下で形質転換される）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第一ベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第ニベクター。一実施態様において、宿主細胞は、真核生物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施態様において、抗Ａｘｌ抗体を作る方法が提供され、その方法は、上記のように、抗体の発現に適した条件下で、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することを含み、および必要に応じて、宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から抗体を回収することを含む。
【０２６５】
抗Ａｘｌ抗体の組換え生産のために、例えば上述したように、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／又は発現のために1つ以上のベクターに挿入される。このような核酸は、容易に単離され、従来の手順を用いて（例えば、抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定することができる。
【０２６６】
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現に適切な宿主細胞は、本明細書に記載の原核細胞又は真核細胞を含む。例えば、特に、グリコシル化およびFcエフェクター機能が必要ない場合には、抗体は、細菌で産生することができる。細菌における抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５６４８２３７号、第５７８９１９９号及び第５８４０５２３号を参照。(また、大腸菌における抗体の発現を説明している、Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), 頁245-254も参照。）発現の後、抗体は可溶性画分において細菌の細胞ペーストから単離され得、更に精製することができる。
【０２６７】
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母菌のような真核微生物は、菌類や酵母菌株を含む抗体をコードするベクターのための、適切なクローニング宿主又は発現宿主であり、そのグリコシル化経路が、「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の生成をもたらす。Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004)、及びLi et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)を参照。
【０２６８】
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物と脊椎動物）から派生している。無脊椎動物細胞の例としては、植物および昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス株が同定され、これらは特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と組み合わせて使用することができる。
【０２６９】
植物細胞培養を宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８号、第６４２０５４８号、第７１２５９７８号及び第６４１７４２９号（トランスジェニック植物における抗体産生に関するＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＴＭ技術を記載)を参照。
【０２７０】
脊椎動物細胞もまた宿主として用いることができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合されている哺乳動物細胞株は有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株 (Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)に記載された293細胞又は293細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスのセルトリ細胞（Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載されるＴＭ４細胞）、サル腎細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頚癌細胞（ＨｅＬａ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（ＨｅｐＧ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、例えばMather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)に記載されるＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、およびＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞(Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、及びＹ０、ＮＳ０およびＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株を含む。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞系の総説については、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), 頁255-268 (2003)を参照。
【０２７１】
Ｃ．アッセイ
本明細書で提供される抗Ａｘｌ抗体は、同定され、当技術分野で公知の様々なアッセイによってその物理的／化学的性質及び／又は生物学的活性についてスクリーニングされ、または特徴づけることができる。
【０２７２】
１．結合アッセイとその他のアッセイ
一態様において、本発明の抗体は、例えばＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット法など公知の方法により、その抗原結合活性について試験される。
【０２７３】
その他の態様において、競合アッセイが、抗体３２７．６，３２７．６．Ｓ２，３２７．６．Ｓ１１，３２７．６．Ｓ５０，３２７．６．Ｓ５２，３２７．６．Ｓ６５，３２７．４２，３２７．４２．Ｓ８，３２７．４２．Ｓ３１，３２７．４２．Ｓ１３，３２７．４２．Ｓ４３，３２７．４２．Ｓ５２，３２７．４２．Ｓ６３，３２７．４２．Ｓ７３，３２７．４２．Ｈ２，３２７．４２．Ｈ４，及び／又は３２７．４２．Ｈ２０の一以上と、Ａｘｌへの結合について競合する抗体を同定するために用いることができる。所定の実施態様において、そうした競合抗体は、３２７．６，３２７．６．Ｓ２，３２７．６．Ｓ１１，３２７．６．Ｓ５０，３２７．６．Ｓ５２，３２７．６．Ｓ６５，３２７．４２，３２７．４２．Ｓ８，３２７．４２．Ｓ３１，３２７．４２．Ｓ１３，３２７．４２．Ｓ４３，３２７．４２．Ｓ５２，３２７．４２．Ｓ６３，３２７．４２．Ｓ７３，３２７．４２．Ｈ２，３２７．４２．Ｈ４，及び／又は３２７．４２．Ｈ２０が結合した同一エピトープ（例えば、直線状又は立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な典型的な方法が、Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols,”in Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)に提供されている。
【０２７４】
典型的な競合アッセイにおいて、固定化Ａｘｌが、Ａｘｌに結合する第一の標識抗体（例えば、３２７．６，３２７．６．Ｓ２，３２７．６．Ｓ１１，３２７．６．Ｓ５０，３２７．６．Ｓ５２，３２７．６．Ｓ６５，３２７．４２，３２７．４２．Ｓ８，３２７．４２．Ｓ３１，３２７．４２．Ｓ１３，３２７．４２．Ｓ４３，３２７．４２．Ｓ５２，３２７．４２．Ｓ６３，３２７．４２．Ｓ７３，３２７．４２．Ｈ２，３２７．４２．Ｈ４，及び／又は３２７．４２．Ｈ２０）、及びＡｘｌへの結合について第一の抗体と競合するその能力について試験されている第二の非標識抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第二抗体はハイブリドーマ上清中に存在してもよい。コントロールとして、固定化Ａｘｌが、第二の未標識の抗体でなく、第一の標識された抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第一の抗体のＡｘｌへの結合を許容する条件下でインキュベートした後、過剰の未結合の抗体が除去され、固定化されたＡｘｌに結合した標識の量が測定される。もし、固定化Ａｘｌに結合した標識の量が、コントロールサンプルと比較して試験サンプル中で実質的に減少している場合、それは、第二抗体が、Ａｘｌへの結合に対して、第一の抗体と競合していることを示している。Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)を参照。
【０２７５】
２．活性のアッセイ
一態様において、アッセイは、生物学的活性を有するそれらの抗Ａｘｌ抗体を同定するために与えられる。生物学的活性は、例えば、ＡｘｌへのＧａｓ６結合の阻害、Ａｘｌ活性化の阻害、Ａｘｌ下流分子シグナル伝達の阻害、Ａｘｌ発現（例えば、Ａｘｌの細胞表面の発現、又は腫瘍細胞などの細胞内の全Ａｘｌ発現）の阻害、炎症性サイトカイン分泌の阻害、アポトーシスの促進（例えば、Ｇａｓ６媒介性アポトーシス阻害を阻害することによる）、腫瘍内血管系の抑制、腫瘍間質性Ａｘｌ活性及び／又は発現の阻害、及び／又は転移の阻害を含み得る。インビボ及び／又はインビトロでこのような生物学的活性を有する抗体もまた提供される。
【０２７６】
所定の実施態様において、本発明の抗体は、そのような生物学的活性について試験される。所定の実施態様において、抗体は、インビトロでアポトーシス（例えば、腫瘍細胞のアポトーシス）を促進するその能力について試験される。細胞の成長及び／又は増殖及び／又はアポトーシス測定するための典型的な方法は、例えば、ＢｒｄＵ取り込みアッセイ、ＭＴＴ、［３Ｈ］−チミジンの取り込み（例えば、ＴｏｐＣｏｕｎｔアッセイ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ））、細胞生存率アッセイ（例えば、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（プロメガ））、ＤＮＡ断片化アッセイ、カスパーゼ活性化アッセイ、トリパンブルー色素排除試験法、クロマチン形態アッセイなどを含む。
【０２７７】
所定の実施態様において、抗体は、例えば、本明細書に記載され例示される方法を用いて、Ａｘｌ発現の阻害について試験される。一実施態様において、抗Ａｘｌ抗体は適切な試験細胞、例えば、ＮＳＣＬＳ細胞Ａ５４９とともにインキュベートされ、適当な時間の後に、細胞溶解物が回収され、全Ａｘｌ量について検査される。ＦＡＣＳ分析もまた、候補の抗Ａｘｌ抗体とのインキュベーション後に、表面のＡｘｌ受容体量を調べるために用いられ得る。一実施態様において、抗Ａｘｌ抗体による処置後に、腫瘍サンプルは、Ａｘｌ発現について調べられる。
【０２７８】
所定の実施態様において、本発明の抗体は、炎症性サイトカイン分泌を阻害するその能力について、例えば、本明細書に記載され例示されるように試験される。
【０２７９】
所定の実施態様において、本発明の抗体は、腫瘍内血管系を縮小させ、及び／又は腫瘍間質性Ａｘｌ活性及び／又は発現を阻害するその能力について、例えば、本明細書に記載されるように試験される。幾つかの実施態様において、腫瘍間質性Ａｘｌ活性は、腫瘍内血管系の転移又は発達である。
【０２８０】
所定の実施態様において、本発明の抗体は、インビトロでの細胞の成長または増殖を阻害するその能力について試験される。細胞の成長や増殖を阻害するためのアッセイは、当該分野で周知である。本明細書中に記載される「細胞の死滅」アッセイによって例示される、細胞増殖についての特定のアッセイは、細胞の生存率を測定する。そのようなアッセイの一つは、プロメガ社（ウィスコンシン州マディソン）から市販されている、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−ＧｌｏＴＭ発光細胞生存率アッセイである。そのアッセイは、代謝活性細胞の指標である存在するＡＴＰの定量に基づき、培養液中で生存細胞の数を決定する。Crouch et al (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88,米国特許第６６０２６７７号を参照。アッセイは、自動化ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）に適するように、９６穴形式又は３８４穴形式で行うことができる。Cree et al (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404を参照。アッセイ法では、直接培養細胞に単一試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を追加することを含む。これにより、細胞溶解とルシフェラーゼ反応により生成した発光シグナルの生成を生じる。発光シグナルは、培養中に存在する生存細胞の数に直接的に比例しているＡＴＰの存在量に比例する。データは、ルミノメーター又はＣＣＤカメラ撮像装置により記録することができる。発光出力は相対光単位（ＲＬＵ）として表される。
【０２８１】
他の細胞増殖アッセイは、「ＭＴＴ」アッセイであり、ミトコンドリア還元酵素による３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物のホルマザンへの酸化を測定する比色アッセイである。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−ＧｌｏＴＭアッセイと同様に、このアッセイは細胞培養中に存在する代謝的に活性な細胞の数を示す。例えばMosmann (1983) J. Immunol. Meth. 65:55-63及びZhang et al. (2005) Cancer Res. 65: 3877-3882を参照のこと。
【０２８２】
インビトロアッセイにおいて、上記のいずれかで使用するための細胞は、自然にＡｘｌを発現するか、又はＡｘｌを発現するように操作されている細胞または細胞株が含まれる。そのような細胞は、同じ組織起源の正常細胞に比較してＡｘｌを過剰発現する腫瘍細胞を含む。そのような細胞はまた、Ａｘｌを発現する細胞株（腫瘍細胞株を含む）、及びＡｘｌを通常発現しないが、核酸をコードするＡｘｌでトランスフェクトされている細胞株を含む。上記の何れかにおいてインビトロアッセイで使用のための本明細書に与えられる典型的な細胞株は、ＮＳＣＬＣ細胞株Ａ５４９、ＮＳＣＬＣ細胞株Ｈ１２９９、及び乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ２３１を含む。
【０２８３】
一態様において、その抗Ａｘｌ抗体は、インビボでの細胞成長又は増殖を阻害するその能力について試験される。所定の実施態様において、その抗Ａｘｌ抗体は、インビボでの腫瘍増殖を阻害するその能力について試験される。インビボのモデル系、例えば異種移植モデルを、そうした試験に使用することができる。例示的な異種移植システムでは、ヒト腫瘍細胞は、適当に免疫が低下した非ヒト動物、例えば、無胸腺「ヌード」マウスに導入される。本発明の抗体は、動物に投与される。腫瘍増殖を阻害または減少させる抗体の能力が測定される。上記の異種移植システムの特定の実施態様では、ヒト腫瘍細胞はヒト患者由来の腫瘍細胞である。このような異種移植モデルはＯｎｃｏｔｅｓｔ社（フライブルク、ドイツ）から市販されている。所定の実施態様において、ヒト腫瘍細胞は、例えばａｓＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞又はＡ５４９非小細胞肺癌細胞などのヒト腫瘍細胞株由来の細胞である。所定の実施態様において、ヒト腫瘍細胞は、乳房脂肪パッドのような適当な部位に皮下注射または移植によって、適切に免疫不全非ヒト動物に導入される。
【０２８４】
上記のアッセイのいずれかが、抗Ａｘｌ抗体の代わりか又はそれに加えて、本発明のイムノコンジュゲートを用いて行われ得ることが理解される。
【０２８５】
上記のアッセイの何れかが、抗Ａｘｌ抗体及び更なる治療薬、例えば、ＶＥＧＦアンタゴニスト及び／又はＥＧＦＲアンタゴニスト及び／又は化学療法剤を用いて行われ得ることが理解される。
【０２８６】
Ｄ．イムノコンジュゲート
本発明はまた、化学療法剤又は薬物、成長抑制剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、または動物起源の酵素活性毒素、又はそれらの断片）、又は放射性同位元素など、１つ以上の細胞傷害性薬物にコンジュゲートした本明細書中の抗Ａｘｌ抗体を含むイムノコンジュゲートを提供する。
【０２８７】
一実施態様において、イムノコンジュゲートは、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であって、そこでは抗体は、限定されないが、メイタンシノイド（米国特許第５２０８０２０号、第５４１６０６４号及び欧州特許ＥＰ０ ４２５２３５ Ｂ１を参照）；モノメチルアウリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）（米国特許第５６３５４８３号及び５７８０５８８号及び７４９８２９８号を参照）などのアウリスタチン；ドラスタチン、カリケアマイシン又はその誘導体（米国特許第５７１２３７４号、５７１４５８６号、５７３９１１６号、５７６７２８５号、５７７０７０１号、５７７０７１０号、５７７３００１号、及び５８７７２９６号を参照;Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993);及びLode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998)); ダウノマイシン又はドキソルビシンなどのアントラサイクリン (Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002);及び米国特許第６６３０５７９号を参照）；メトトレキサート、ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセルなどのタキサン；トリコテセン；及びＣＣ１０６５を含む一つ以上の薬物とコンジュゲートしている。
【０２８８】
その他の実施態様において、イムノコンジュゲートは、酵素的に活性な毒素又はその断片にコンジュゲートした、本明細書に記載の抗体を含み、限定されないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、（緑膿菌からの）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシン(modeccin)Ａ鎖、アルファ-サルシン、アレウリテス・フォーディ(Aleurites fordii)タンパク質、ジアンチン(dianthin)タンパク質、フィトラカ・アメリカーナ(Phytolaca americana)タンパク質（PAPI、PAPII、及びPAP-S）、モモルディカ・チャランチア(momordica charantia)インヒビター、クルシン(curcin)、クロチン(crotin)、サパオナリア・オフィシナリス(sapaonaria oficinalis)インヒビター、ゲロニン(gelonin)、ミトゲリン(mitogellin)、レストリクトシン(restrictocin)、フェノマイシン(phenomycin)、エノマイシン(enomycin)及びトリコテセン(tricothecene)が含まれる。
【０２８９】
その他の実施態様では、イムノコンジュゲートは、放射性コンジュゲートを形成するために放射性原子にコンジュゲートした本明細書に記載されるような抗体を含む。様々な放射性同位体が放射性コンジュゲートの生産のために入手可能である。例としては、Ａｔ２１１，Ｉ１３１，Ｉ１２５，Ｙ９０，Ｒｅ１８６，Ｒｅ１８８，Ｓｍ１５３，Ｂｉ２１２，Ｐ３２，Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体を含む。検出のためにコンジュゲートを使用する場合は、それはシンチグラフィー試験のための放射性原子、例えばｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像化（磁気共鳴画像化ｍｒｉとしても知られている）のためのスピン標識、例えば再び、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含んでよい。
【０２９０】
抗体と細胞傷害性薬物のコンジュゲートは、様々な二官能性タンパク質カップリング剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの２官能性誘導体（例えばジメチルアジピミデートＨＣｌ）、活性エステル（例えばジスクシンイミジルズベレート）、アルデヒド（例えばグルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えばビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビスジアゾニウム誘導体（例えばビス（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えばトルエン２，６−ジイソシアネート）及びビス活性フッ素化合物（例えば１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）など、を使って作成され得る。Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)に記載されるように、例えば、リシンイムノトキシンを調製することができる。カーボン−１４−標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体へのコンジュゲーションのためのキレート剤の例である国際公開第９４／１１０２６号を参照。リンカーは、細胞中に細胞毒性薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であり得る。例えば、酸に不安定なリンカー、ペプチダーゼ過敏性リンカー、光解離性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー（Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992);米国特許第５２０８０２０号）が使用され得る。
【０２９１】
本明細書において、イムノコンジュゲート又はＡＤＣは、限定されないが、市販の(例えばPierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.Aからの)、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＰＢ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ＳＶＳＢ（スクシンイミジル（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）を含むクロスリンカー試薬を用いて調製されるコンジュゲートを特に熟考する。
【０２９２】
Ｅ．診断及び検出のための方法および組成物
所定の実施態様において、本明細書で提供される抗LRP6抗体の何れかは、生物学的サンプル中のＡｘｌの存在を検出するのに有用である。本明細書で使用する「検出」という用語は、定量的または定性的検出を包含する。所定の実施態様において、生物学的サンプルは、乳房、膵臓、食道、肺及び／又は脳などの細胞または組織を含む。
【０２９３】
一実施態様において、診断又は検出の方法に使用される抗Ａｘｌ抗体が提供される。更なる態様において、生物学的サンプル中のＡｘｌの存在を検出する方法が提供される。所定の実施態様において、本方法は、抗Ａｘｌ抗体のＡｘｌへの結合を許容する条件下で、本明細書に記載のように抗Ａｘｌ抗体と生物学的サンプルを接触させること、及び複合体が抗Ａｘｌ抗体とＡｘｌとの間に形成されているかどうかを検出することを含む。そのような方法は、インビトロ又はインビボでの方法であり得る。一実施態様において、例えばＡｘｌが患者の選択のためのバイオマーカーであるなど、抗Ａｘｌ抗体が抗Ａｘｌ抗体による治療にふさわしい被検体を選択するために使用される。
【０２９４】
本発明に抗体を使用して診断され得る典型的な疾患は、癌（例えば、乳房、肺、膵臓、脳、腎臓、卵巣、胃、白血病、子宮内膜、結腸、前立腺、甲状腺、肝臓、骨肉腫、及び／又はメラノーマの癌）を含む。
【０２９５】
所定の実施態様において、標識された抗Axl抗体が与えられる。標識は、限定されるものではないが、（例えば、蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、放射性標識など）直接検出される標識又は部分、並びに、例えば、酵素反応又は分子間相互作用を介して間接的に検出される酵素又はリガンドのような部分が含まれる。このような標識の例には、ラジオアイソトープ３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、フルオロフォア、例えば希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシェフェラーゼ、例えばホタルルシェフェラーゼ及び細菌ルシェフェラーゼ(米国特許第４７３７４５６号)、ルシェフェリン、２,３-ジヒドロフタルジネジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ(ＨＲＰ)、アルカリフォスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース-6-リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘテロサイクリックオキシダーゼ、例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ、色素前駆体、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はマイクロペルオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピンラベル、バクテリオファージラベル、安定な遊離ラジカルなどを酸化する過酸化水素を利用する酵素とカップリングさせたもの、などが含まれる。
【０２９６】
Ｆ．薬学的製剤
本明細書に記載の抗Ａｘｌ抗体の薬学的製剤は、所望の程度の純度を有するその抗体と任意の薬学的に許容される担体(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed.: Williams and Wilkins PA, USA (1980))とを、凍結乾燥製剤または水性溶液の形態で混合することによって調製される。薬学的に許容される担体は、使用される投薬量および濃度でレシピエントに毒性でなく、そしてこれには、限定しないが、リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸のような緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジン；マンノサッカライド、ジサッカライド、およびグルコース、マンノースまたはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はポリエチレングリコール（PEG）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。本明細書における典型的な薬学的に許容される担体は、介在性薬物分散剤、例えば、水溶性の中性アクティブヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質を更に含む。所定の典型的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用法は、ｒＨｕＰＨ２０を含み、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び第２００６／０１０４９６８に開示されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つまたは複数の追加のグルコサミノグリカンと組み合わされる。
【０２９７】
典型的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性の抗体製剤は、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されているものが含まれ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。
【０２９８】
本明細書の製剤はまた、治療を受けている特定の徴候のために必要な一以上の活性成分、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的活性を持つものが含まれる場合がある。例えば、ＥＧＦＲアンタゴニスト（例えば、エルロチニブ）、抗血管新生剤（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体などのＶＥＧＦアンタゴニストなど）、又は化学療法剤（例えばタキソイド又は白金剤）を更に提供することが望まれ得る。このような活性成分は、意図した目的のために有効な量で組み合わされ適切に存在する。
【０２９９】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合法によって、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート(methylmethacylate)）マイクロカプセル）、コロイド薬物送達系（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフィア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロ・エマルジョンなどの調製されたマイクロカプセルに封入されてもよい。このような技術は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示される。
【０３００】
徐放性製剤が調製されてもよい。徐放性製剤の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、そのマトリックスが成形品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形をしている。
【０３０１】
インビボ投与に使用される製剤は、一般的に無菌である。無菌性は、例えば、滅菌濾過膜を通して濾過することにより、達成することができる。
【０３０２】
Ｇ．治療的方法及び組成物
本明細書で提供される抗Ａｘｌ抗体のいずれかを、治療方法で使用することができる。
【０３０３】
一態様では、医薬として使用するための抗Ａｘｌ抗体が提供される。更なる態様において、癌（例えば、乳癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、脳癌、膵臓、脳の癌、腎臓癌、卵巣癌、胃癌、白血病、子宮内膜癌、結腸癌、前立腺癌、甲状腺癌、肝臓癌、骨肉腫、および/またはメラノーマ）の治療に使用する抗Ａｘｌ抗体が提供される。所定の実施態様において、治療の方法に使用される抗Ａｘｌ抗体が提供される。所定の実施態様において、本発明は、個体に抗Ａｘｌ抗体の有効量を投与することを含む、癌を有する個体を治療する方法における使用のための抗Ａｘｌ抗体を提供する。所定の実施態様において、本発明は、抗Ａｘｌ抗体の有効量を個体に投与することを含み、免疫不全（例えば、自己免疫不全）、心血管障害（例えば、アテローム性動脈硬化症、高血圧、血栓症）、感染症（例えば、エボラウイルス、マールブルグウイルス）又は糖尿病を有する個体を治療する方法において使用する抗Ａｘｌ抗体を提供する。一つのそのような実施態様において、本方法は、例えば後述するように、少なくとも１つのさらなる治療薬の有効量を個体に投与することを更に含む。更なる実施態様において、本発明は、血管新生の阻害、細胞増殖の阻害、免疫機能の抑制、炎症性サイトカイン分泌（例えば、腫瘍関連マクロファージから）の阻害、腫瘍血管（例えば、腫瘍内血管系または腫瘍関連血管系）の阻害、及び／又は腫瘍間質機能の阻害に使用するために、抗Ａｘｌ抗体を提供する。
【０３０４】
所定の実施態様において、本発明は、血管新生を阻害、細胞増殖を阻害、免疫機能を抑制、炎症性サイトカイン分泌（例えば、腫瘍関連マクロファージから）を阻害、腫瘍血管（例えば、腫瘍内血管系または腫瘍関連血管系）を阻害、及び／又は腫瘍間質機能を阻害するための抗Ａｘｌ抗体の有効量を個体に投与することを含んでなる、個体における、血管新生を阻害、細胞増殖を阻害、免疫機能を抑制、炎症性サイトカイン分泌（例えば、腫瘍関連マクロファージから）を阻害、腫瘍血管（例えば、腫瘍内血管系または腫瘍関連血管系）を阻害、及び／又は腫瘍間質機能を阻害する方法において使用のための抗Ａｘｌ抗体を提供する。上記実施態様のいずれかに記載の「個体」は、好ましくはヒトである。
【０３０５】
更なる態様にて、本発明は、医薬の製造又は調製における抗Ａｘｌ抗体の使用を提供する。一態様において、本医薬は、癌（幾つかの実施態様において、乳癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、脳癌、膵臓、脳の癌、腎臓癌、卵巣癌、胃癌、白血病、子宮内膜癌、結腸癌、前立腺癌、甲状腺癌、肝臓癌、骨肉腫、及び／又はメラノーマ）の治療用である。更なる実施態様において、本医薬は、癌を有する個体に、医薬の有効量を投与することを含む、癌を治療する方法で使用するためのものである。更なる実施態様において、本医薬は、抗Ａｘｌ抗体の有効量を個体に投与することを含み、免疫不全（例えば、自己免疫不全）、心血管障害（例えば、アテローム性動脈硬化症、高血圧、血栓症）、感染症（例えば、エボラウイルス、マールブルグウイルス）又は糖尿病を治療する方法における使用のためのものである。一つのそのような実施態様において、本方法は、例えば後述するように、少なくとも１つのさらなる治療薬の有効量を個体に投与することを更に含む。更なる実施態様において、本医薬は、血管新生の阻害、細胞増殖の阻害、免疫機能の抑制、炎症性サイトカイン分泌（例えば、腫瘍関連マクロファージから）の阻害、腫瘍血管（例えば、腫瘍内血管系または腫瘍関連血管系）の阻害、及び／又は腫瘍間質機能の阻害のためのものである。更なる実施態様において、本医薬は、血管新生を阻害、細胞増殖を阻害、免疫機能を促進、炎症性サイトカイン分泌（例えば、腫瘍関連マクロファージから）を誘導、腫瘍血管（例えば、腫瘍内血管系または腫瘍関連血管系）を阻害、及び／又は腫瘍間質機能を阻害するための医薬の有効量を個体に投与することを含んでなる、個体における、血管新生を阻害、細胞増殖を阻害、免疫機能を抑制、炎症性サイトカイン分泌（例えば、腫瘍関連マクロファージから）を阻害、腫瘍血管（例えば、腫瘍内血管系または腫瘍関連血管系）を阻害、及び／又は腫瘍間質機能を阻害する方法において使用のためのものである。上記実施態様の何れかに記載の「個体」は、ヒトであり得る。
【０３０６】
更なる態様にて、本発明は、癌を治療する方法を提供する。一実施態様において、本方法は、そうした癌を有する個体に、抗Ａｘｌ抗体の有効量を投与することを含む。一つのそのような実施態様において、この方法は、後述するように、少なくとも１つのさらなる治療薬の有効量を個体に投与することを更に含む。上記実施態様の何れかに記載の「個体」は、ヒトであり得る。
【０３０７】
更なる態様において、本発明は、免疫不全（例えば、自己免疫不全）、心血管障害（例えば、アテローム性動脈硬化症、高血圧、血栓症）、感染症（例えば、エボラウイルス、マールブルグウイルス）または糖尿病を治療するための方法を提供する。一つのそのような実施態様において、この方法は、後述するように、少なくとも１つのさらなる治療薬の有効量を個体に投与することを更に含む。上記実施態様の何れかに記載の「個体」は、ヒトであり得る。
【０３０８】
更なる態様において、本医薬は、個体において、血管新生の阻害、細胞増殖の阻害、免疫機能の抑制、炎症性サイトカイン分泌（例えば、腫瘍関連マクロファージから）の阻害、腫瘍血管（例えば、腫瘍内血管系または腫瘍関連血管系）の阻害、及び／又は腫瘍間質機能の阻害のための方法を提供する。一実施態様において、本方法は、血管新生の阻害、細胞増殖の阻害、免疫機能の促進、炎症性サイトカイン分泌（例えば、腫瘍関連マクロファージから）の誘導、腫瘍血管（例えば、腫瘍内血管系または腫瘍関連血管系）の発達の阻害、及び／又は腫瘍間質機能を阻害する抗Ａｘｌ抗体の有効量を個体に投与することを含む。一実施態様において、「個体」はヒトである。
【０３０９】
更なる態様において、本発明は、例えば、上記の治療法のいずれかに使用される、本明細書で提供される抗Ａｘｌ抗体のいずれかを含む薬学的製剤を提供する。一実施態様において、薬学的製剤は、本明細書で提供される抗Ａｘｌ抗体のいずれか、及び薬学的に許容される担体を含む。その他の実施態様において、薬学的製剤は、本明細書で提供される抗Ａｘｌ抗体のいずれかと、少なくとも１つの更なる治療薬を、例えば後述するように含む。
【０３１０】
本発明の抗体は、治療において、単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の抗体は少なくとも１つの更なる治療薬と同時投与され得る。所定の実施態様において、更なる治療薬は、抗血管新生薬である。所定の実施態様において、更なる治療薬は、ＶＥＧＦアンタゴニストである（幾つかの実施態様において、抗ＶＥＧＦアンタゴニストは、例えば、ベバシズマブである）。所定の実施態様において、更なる治療薬は、ＥＧＦＲアンタゴニスト（幾つかの実施態様において、エルロチニブ ）である。所定の実施態様において、更なる治療薬は、化学療法剤、及び／又は細胞分裂阻害剤である。所定の実施態様において、更なる治療薬は、タキソイド（例えば、パクリタキセル）及び／又は白金剤（例えば、カルボプラチン）である。
【０３１１】
上記のこうした併用療法は、併用投与（２つ以上の治療薬が、同一または別々の製剤に含まれている）、及び、本発明の抗体の投与が、追加の治療薬及び／又はアジュバントの投与の前、同時、及び／又はその後に起きうる分離投与を包含する。本発明の抗体はまた放射線治療と併用して用いることができる。
【０３１２】
本発明の抗体（および任意の追加の治療薬）は、任意の適切な手段によって投与することができ、経口、肺内、および鼻腔内、及び局所治療が所望される場合、病巣内投与が含まれる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が含まれる。投薬は、その投与が短期間か又は長期であるかどうかに部分的に依存し、任意の適切な経路、例えば、静脈内または皮下注射などの注射により行うことができる。限定されないが、様々な時間点にわたる、単一または複数回投与、ボーラス投与、パルス注入を含む様々な投与スケジュールが本明細書で考えられている。
【０３１３】
本発明の抗体は良好な医療行為に合致した方法で処方され、投与され、投薬される。この観点において考慮すべき要因は、治療すべき特定の障害、治療すべき特定の哺乳類、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤送達部位、投与方法、投与日程及び医療従事者が知る他の要因を包含する。抗体は、必要ではないが任意で、問題となる障害の予防又は治療のために、現在使用中の一又は複数の薬剤ともに処方される。そのような他の薬剤の有効量は製剤中に存在する抗体の量、障害又は治療の種類及び上記した他の要因に依存する。これらは一般的には本明細書に記載されるのと同じ用量及び投与経路において、又は、本明細書に記載された用量の１％から９９％で、又は経験的に／臨床的に妥当であると決定された任意の用量及び任意の経路により使用される。
【０３１４】
疾患の予防又は治療のためには、本発明の抗体の適切な用量（単独で使用されるか、又は、一以上の更なる治療的薬剤との組み合わされる場合）は治療すべき疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体を予防又は治療目的のいずれにおいて投与するか、以前の治療、患者の臨床的履歴及び抗体に対する応答性、及び担当医の判断に依存する。抗体は、患者に対して、単回、又は一連の治療にわたって適切に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば一回以上の別個の投与によるか、連続注入によるかに関わらず、抗体約１μｇ／ｋｇから４０ｍｇ／ｋｇが、患者への投与のための初期候補用量となり得る。１つの典型的な一日当たり用量は上記した要因に応じて約１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上の範囲である。数日間以上に渡る反復投与の場合には、状態に応じて、治療は疾患症状の望まれる抑制が起こるまで持続するであろう。このような用量は断続的に、例えば毎週又は３週毎（例えば患者が抗体の約２から約２０投与量、又は例えば約６投与量を受けるように）投与してよい。初期の高負荷用量の後、１つ以上の低用量を投与してよい。しかしながら、他の用量用法も使用してよい。この治療法の進行は従来の手法及び試験により容易にモニタリングされる。
【０３１５】
上記の製剤または治療方法のいずれかが、抗Ａｘｌ抗体の代わりか又は抗Ａｘｌ抗体に加えて、本発明のイムノコンジュゲートを用いて行うことができることが理解される。
【０３１６】
Ｈ．製造品
本発明の他の実施態様において、上述した障害の治療、予防、及び／又は診断に有用な物質を含む製造品が提供される。製造品は、容器とラベルまたは容器上にあるまたは容器に付属するパッケージ挿入物を含む。好適な容器は、例としてボトル、バイアル、シリンジ、IV輸液バッグ 等を含む。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な物質から形成されうる。容器は、疾患の治療、予防、及び／又は診断に有効である、それ自体か、又はその他の組成物と併用される化合物を収容し、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は皮下注射針による穴あきストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも一の活性剤は本発明の抗体である。ラベルまたはパッケージ挿入物は、組成物が特定の症状の治療のために使用されることを示している。更に、製造品は、（ａ）組成物が本発明の抗体を包含する組成物を含む第一の容器；および（ｂ）組成物が更なる細胞障害性又はその他の治療的薬剤を包含する組成物を含む第２の容器を含み得る。本発明の本実施態様における製造品は、組成物が特定の疾患を治療することに用いることができることを示すパッケージ挿入物をさらに含んでいてもよい。別法として、または加えて、製造品は、薬学的に許容されるバッファー、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化塩水、リンガー溶液およびデキストロース溶液を含む第二（または第三）の容器をさらに含んでもよい。これは、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、およびシリンジを含む、商業的およびユーザーの立場から望まれる他の物質のさらに含んでもよい。
【０３１７】
上記の製造品のいずれかは、抗Ａｘｌ抗体の代わりか又はそれに加えて、本発明のイムノコンジュゲートを含み得ることが理解される。
【実施例】
【０３１８】
材料と方法
抗体と細胞株。抗体は次の供給者から得られた：ヒトＡｘｌに対するマウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）（Ａｂｎｏｖａ，Ｔａｉｗａｎ）、リン酸化ＡｋｔマウスｍＡｂ及びＡｋｔポリクローナル抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）。マウス換えＧＡＳ６及びリン酸化Ａｘｌ用ＥＬＩＳＡキットは、Ｒ＆Ｄシステムから購入した。ヒト癌細胞株は、ＡＴＣＣから入手し、１０％ＦＢＳを添加したＰＲＭＩ１６４０培地で培養した。ハイブリドーマ抗ヒトＡｘｌモノクローナル抗体の１２Ａ１１及び３Ｇ９はジェネンテックにより提供された（Ｌｉ（２００９）を参照）。
【０３１９】
ファージ抗ＡＸｌモノクローナル抗体の生成。抗体の生成のため、選択された相補性決定領域（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）において、ヒトＩｇＧレパートリーの天然の多様性を模倣する、合成による多様性を持つヒトファージ抗体ライブラリーがパニングのために使用された。Ｆａｂ断片は、Ｍ１３バクテリオファージ粒子の表面に二価で提示された（Ｌｅｅら、２００４）。ファージ抗体ライブラリーは、代替のラウンドでヒトおよびマウスのAxl ECDに対してパニングした。ヒトＡｘｌ ＥＣＤ−Ｈｉｓ及びマウスＡｘｌ ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質に結合するファージ抗体がＥＬＩＳＡにより同定され、ＤＮＡ配列が決定され、全長ＩｇＧを発現するため、抗体クローンが再フォーマットされた（Ｌｉａｎｇら、２００７）。個々のクローンを哺乳動物細胞で一過性で発現し、プロテインＡカラムを用いて精製した (Carter et al, 1992)。
【０３２０】
ファージクローンは、Ｂａｆ３−ＡＸＬ細胞のＧａｓ６依存性増殖を阻害する能力についてスリーニングされた。Ｂａｆ３Ａｘｌ細胞増殖の阻害で最も高い効力を示した二つのクローンが、親和性成熟のために選ばれた。
【０３２１】
親和性成熟については、Ｍ１３バクテリオファージの表面に一価性Fabを提示するファージミド( Liang et al, 2007)が、ファージＡの軽鎖（ＶＬ）及び重鎖（ＶＨ）可変ドメインを移植するためのライブラリテンプレートとして供された。ソフトランダム化戦略が、 (Liang et al, 2007)に記載のように親和性成熟のために採用され、ハイスループットシングルポイント競争ファージＥＬＩＳＡが、 (Sidhu et al, 2004)に記載されるように高親和性クローンの迅速なスクリーニングのために用いられた。
【０３２２】
抗Ａｘｌ抗体の親和性測定。抗Ａｘｌ抗体の結合親和性の測定については、ＢＩＡｃｏｒｅＴＭ−３０００による表面プラズモン共鳴（ＳＲＰ）が用いられた。抗Ａｘｌ抗体とヒトＡｘｌ ＥＣＤ−Ｈｉｓタンパク質の間の親和性を測定するために、抗ＡｘｌヒトＩｇＧがマウス抗ヒトＩｇＧで被覆されたＣＭ５バイオセンサーチップにより捕獲され、およそ２５０反応単位（ＲＵ）を得た。反応速度測定のため、ヒトＡｘｌ ＥＣＤ−Ｈｉｓの２倍連続希釈（４４０ｎＭ−２８ｎＭ）がＰＢＴ緩衝液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を伴うＰＢＳ）に、２５℃で流速３０μｌ／分で注入された。会合速度ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は単純な一対一のラングミュア結合モデルを用いて計算した（ＢＩＡｃｏｒｅ評価用ソフトウェアのバージョン３．２）。平衡解離定数（ＫＤ）はｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出した。マウスＡｘｌ ＥＣＤ−Ｆｃ融合タンパク質に対する抗Ａｘｌ抗体の親和性を測定するために、Ａｘｌ ＥＣＤヒトＩｇＧ融合タンパク質が、マウス抗ヒトＩｇＧで被覆されたＣＭ５バイオセンサーチップにより捕獲され、およそ１５０反応単位（ＲＵ）を得た。反応速度測定のため、抗Ａｘｌ Ｆａｂ断片の２倍連続希釈（２００ｎＭ−１２ｎＭ）がＰＢＳＴ緩衝液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を伴うＰＢＳ）に、２５℃で流速３０μｌ／分で注入された。
【０３２３】
細胞増殖アッセイ。細胞は、５０００細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播種し、７２時間、様々な濃度でのＡｘｌ ｍＡｂで処置した。細胞増殖は、製造元の指示に従って、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて測定した。
【０３２４】
ＥＬＩＳＡ及び蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）。ＥＬＩＳＡアッセイを以下のように行った：ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃを被覆したプレートが０．５％のＢＳＡ、ＰＢＳ、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ）でブロッキングされた。交差反応アッセイについて、被覆されたプレートを、ヒトＡｘｌ Ｆｃ、マウスＡｘｌ Ｆｃ又はヒトＭｅｒ．Ｆｃ、Ｔｙｒｏ−３．Ｆｃで、１時間室温でインキュベートし、ＰＢＳＴで４回洗浄し、抗Ａｘｌ ｍＡｂ及びＨＲＰ結合抗マウスＩｇでインキュベートした。結合アッセイについて、被覆プレートを、ヒトＡｘｌ．Ｆｃで１時間室温でインキュベートし、ＰＢＳＴで４回洗浄し、ｒｍＧａｓ６及び抗Ａｘｌ ｍＡｂで１時間室温でインキュベートした。プレートは４回ＰＢＳＴで洗浄し、ビオチン化抗ｍＧａｓ６及びストレプトアビジン−ＨＲＰでインキュベートした。分泌Ａｎｇ−２及びＤＫＫ３は、Ｒ＆ＤのＥＬＩＳＡキットを用い、製造業者の指示に従って測定した。細胞表面上のＡｘｌの発現は、標準的な技術を用いてＦＡＣＳによって決定された。簡潔には、細胞が回収され、氷上で、抗Ａｘｌ ｍＡｂ（１２Ａ１１，１０ｕｇ／ｍｌ）で３０分間染色され、ＰＢＳで２回洗浄され、次いで、ＰＥ結合二次抗体で染色した。細胞表面上でＡｘｌへのＧａｓ６の結合をブロッキングする抗体を決定するため、細胞が回収され、抗Ａｘｌ ｍＡｂで３０分間染色し、氷上で３０分間、ｒｍＧａｓ６でインキュベートした。それらはＰＢＳで２回洗浄し、ビオチン化抗Ｇａｓ６及びＰＥ結合ストレプトアビジンで染色した。サンプルはＢＤ ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒフローサイトメーターで解析した。
【０３２５】
異種移植実験。全ての研究は、「実験動物の管理及び使用に関する指針“Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ”」（ＮＩＨ）に準拠して実施され、機関内動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）により承認された。マトリゲル中の総計５×１０６（Ａ５４９）または１０７個の細胞（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）が、それぞれ、ヌード（Ａ５４９）又はＳＣＩＤマウス（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）の右脇腹に皮下移植された。平均腫瘍が１００立方ミリメートルに達したときに、マウスが無作為化され、異なる処理群に分けられた（各群でｎ＝１０）。抗Ａｘｌ又はコントロールＩｇＧ１抗体が、週に２回１０−３０ｍｇ／ｋｇで、抗ＶＥＧＦが１−２ｍｇ／ｋｇで、腹腔内注射を介して投与された。エルロチニブを、１００ｍｇ／ｋｇ／日で強制経口投与した。パクリタキセル及びカルボプラチンを、処置の開始時に、それぞれ、６．２５ｍｇ／ｋｇ／日で５日間、単回投与量で１００ｍｇ／ｋｇ、皮下投与した。統計解析は、異なる治療群における腫瘍増殖の比較のために、２要因の分散分析を用いて実施した。
【０３２６】
薬力学（ＰＤ）試験では、マウスは０、２４時間、７２時間及び１６８時間について、抗体で処置した。各時点で、腫瘍は免疫組織化学的染色及び画像解析のために切除し、処理され、ウェスタンブロット解析のための細胞溶解物を生成するために使用された。
【０３２７】
転移の研究のため、ルシフェラーゼレポーター遺伝子で安定的にトランスフェクトした５×１０５のＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（Ｌｉら、２００９）を尾静脈注射によりＳＣＩＤマウスに移植した。記載されるように（Ｌｉら、２００９）、様々な臓器への腫瘍細胞の転移が、生物発光検出によりモニタリングされた。
【０３２８】
免疫組織化学。異種移植腫瘍サンプルを、１０％の中性緩衝ホルマリンで固定し、処理し、パラフィンに包埋し、４μｍで区分された、次いで、薄い切片が、Ｋｉ６７に対する一次抗体、切断型カスパーゼ３、及びＭＥＣＡ３２で処置され、続いてビオチン化２次抗体及びＤＡＢクロモゲンで処置した。
【０３２９】
原発性ヒト乳癌組織マイクロアレイは、管腺癌および転移性腺癌を含め、Ｃｕｒｅｌｉｎｅ社から入手したものである。Ａｘｌ ＩＨＣは、以前に記述されたＡｘｌモノクローナル抗体を用いて実施され(Li et al, 2009)、マクロファージは、ＣＤ６８を用いて染色した。デュアルＡｘｌ／ＣＤ６８ ＩＨＣについて、Ａｘｌ染色が、ベクターＡＢＣエリートＨＲＰ試薬及びＤＡＢ基質を用いて、２μｇ／ｍｌで最初に実施された。ＣＤ６８染色が、０．５μｇ／ｍｌで、またＡＢＣエリートＨＲＰ試薬を用いて、代わりにベクターＳＧクロモゲン（Ｂｌｕｅ／Ｇｒｅｙ）でなく、順次実行された。第二の標的抗原回復工程が、２つの複合体の間で行われ、２つのマーカーの交差反応性を回避するために、第一の複合体を溶出させた。
【０３３０】
血管密度の測とデータ解析。腫瘍サンプルはＭＥＣＡ３２、パン内皮細胞マーカーで染色した。画像は１００倍最終倍率でＡｒｉｏｌ ＳＬ−５０自動スライドスキャニングプラットフォーム（Ｇｅｎｅｔｉｘ Ｌｔｄ．；Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ，ＵＫ）によって取得される。個々の８ビットの画像として、腫瘍特異的な領域は、Ｍｅｔａｍｏｒｐｈソフトウェアパッケージ（ＭＤＳ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）における分析のためにエクスポートされた。茶色のＤＡＢ特異的染色が、記述されるように(Brey et al, 2003)、青色正規化アルゴリズムを使用して、ヘマトキシリン対比染色から単離された。セグメンテーションアルゴリズムは、血管を同定し、大きさや形状に基づいてノイズを除去した。細胞は、大きさ、形状、ヘマトキシリン染色の密度に基づいて、腫瘍又は非腫瘍のいずれかとして同定された。非腫瘍領域は、腫瘍細胞と非腫瘍細胞の密度によって同定された。分析が完了した後、画像は、血管または腫瘍領域として誤って識別アーチファクトを除去するために、手動で再調査を行った。面積の測定は、各画像における、個々の血管、並びに腫瘍領域と非腫瘍の領域に対して記録された。画像解析に基づいた生の値は、ＪＭＰ８．０ソフトウェア（ＳＡＳ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｉｎｃ．Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ，ＵＳＡ）を用いて分析した。スチューデントｔ検定をｐ＜０．０５で、手法の各ペアを比較するために行った。
【０３３１】
腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の単離、及び分泌されたサイトカインの検出。腫瘍は切開され、小片に細断し、２．５％のＦＢＳ、０．２ユニット／ｍｌのＬｉｂｅｒａｓｅ Ｂｌｅｎｄｚｙｍｅｓ ＩＩ及び５ユニット／ｍｌのＤＮａｓｅＩ（Ｒｏｃｈｅ）を含む、ＲＰＭＩ１６４０培地中でインキュベートした。腫瘍細胞はＭＡＣＳ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いて切り離され、室温で２０分間維持された。ＥＤＴＡ（最終濃度０．００２パーセント）を加えて反応を停止した。単一細胞懸濁液を調製し、赤血球は赤血球溶解バッファー（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて除去した。細胞は、１％ＦＢＳを含むＰＢＳ中に１０７細胞／ｍｌで再懸濁させ、２０ｍｇ／ｍｌ ＦｃＲＩＩ，ＩＩＩ及びＩＶとともに２０分間インキュベートした。抗Ｆ４／８０−ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）及び抗ＣＤ１１ｃ−ＡＰＣ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）（０．２μｇ／１０６細胞）を添加し、氷上で３０分間インキュベートした。Ｆ４／８０及びＣＤ１１ｃ陽性細胞がＦＡＣＳＡｒｉａ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）．により選別された。総計２ｘ１０５Ｆ４／８０及びＣＤ１１ｃ陽性細胞が、９６ウェルプレートに播種され、一晩培養した。培養培地を回収し、サイトカイン及びケモカインのレベルを、製造元の指示に従って、バイオプレックス（Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ）マウスサイトカインアッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて決定した。
【０３３２】
エピトープマッピング
Ａｘｌ−２（ＰＲＫ ＨｕＡｘｌ（１−１３４Ａａ）／ＨｕＩｇＧ１Ｆｃ），Ａｘｌ−３（ＰＲＫ ＨｕＡｘｌ（１−２２１Ａａ）／ＨｕＩｇＧ１Ｆｃ），Ａｘｌ−４（ＰＲＫ ＨｕＡｘｌ（１−３２４Ａａ）／ＨｕＩｇＧ１Ｆｃ），及びＡｘｌ−５（ＰＲＫ ＨｕＡｘｌ（１−４３５Ａａ）／ＨｕＩｇＧ１Ｆｃ）プラスミドコンストラクトが、標準的な分子的技術により作成された。全てのプラスミドは、直接配列決定および／または制限酵素消化により確認した。Ａｘｌの細胞外ドメインの様々な部分（ａａ１−１３４，ａａ１−２２１，ａａ１−３２４，ａａ１−４３５）をコードするプラスミドを、インビトロで転写し、プロメガＬ２０８０ ＴＮＴ ＳＰ６クイック転写／翻訳系キットを使用して翻訳し、ＥＬＩＳＡにて抗原として使用した。これらの実験において使用されたＡｘｌタンパク質：ヒトＡｘｌのアミノ酸１−１３４（ＡｘｌのＩｇ１を含む）：ＭＡＷＲＣＰＲＭＧＲＶＰＬＡＷＣＬＡＬＣＧＷＡＣＭＡＰＲＧＴＱＡＥＥＳＰＦＶＧＮＰＧＮＩＴＧＡＲＧＬＴＧＴＬＲＣＱＬＱＶＱＧＥＰＰＥＶＨＷＬＲＤＧＱＩＬＥＬＡＤＳＴＱＴＱＶＰＬＧＥＤＥＱＤＤＷＩＶＶＳＱＬＲＩＴＳＬＱＬＳＤＴＧＱＹＱＣＬＶＦＬＧＨＱＴＦＶＳＱＰＧＹＶＧ（配列番号１１１），及びヒトＡｘｌのアミノ酸２２１−３２４（Ａｘｌのフィブロネクチンドメインを含む）：ＩＴＶＬＰＱＱＰＲＮＬＨＬＶＳＲＱＰＴＥＬＥＶＡＷＴＰＧＬＳＧＩＹＰＬＴＨＣＴＬＱＡＶＬＳＤＤＧＭＧＩＱＡＧＥＰＤＰＰＥＥＰＬＴＳＱＡＳＶＰＰＨＱＬＲＬＧＳＬＨＰＨＴＰＹＨＩＲＶＡＣＴＳＳＱＧＰＳＳＷＴＨＷＬ（配列番号１３０）。
【０３３３】
抗体競合実験。ファージ抗Ａｘｌ ｍａｂのＹＷ３２７．６又はＹＷ３２７．４２が、バイブリドーマ抗Ａｘｌ ｍＡｂの１２Ａ１１及び３Ｇ９と競合するかを確定するために、Ａ５４９細胞が、抗Ａｘｌファージ抗体（各５０μｇ／ｍｌで）、及びハイブリドーマ抗Ａｘｌ抗体（各１０μｇ／ｍｌで）と３０分間共染色された。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、抗マウスＩｇ−ＰＥで染色した。サンプルは、ＦＡＣＳ分析について上記のように、ＢＤ ＦＡＣＳキャリバーフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で分析した。
【０３３４】
結果
Ａｘｌの機能をブロックするファージ由来のモノクローナル抗体の産生。マウス及びヒトのＡｘｌと交差反応する抗体を同定するために、我々は、ヒトＩｇＧ抗体の天然の多様性を模倣し(Lee et al, 2004)、選択された相補性決定領域における合成の多様性を持つファージディスプレイ抗体ライブラリーを用いた。ヒト及びマウスＡｘｌ ＥＣＤに結合するファージ抗体がＥＬＩＳＡにより同定され、ＤＮＡ配列が決定され、全長ＩｇＧを発現するため、抗体クローンが再フォーマットされた(Liang et al, 2007)。次いで、全長ＩｇＧのパネルが、Ｂａｆ３Ａｘｌ細胞のＧａｓ６依存性増殖を阻害するそれらの能力についてスクリーニングされ(Li et al, 2009)、クローンの一つ、YW327.6が親和性成熟され精製された。
【０３３５】
親和性成熟したＡｘｌのｍＡｂ ＹＷ３２７．６Ｓ２は、ヒト及びマウスＡｘｌの両方に、Ｋｄがそれぞれ約１ｎＭ、５４５ｐＭで、高い親和性で結合する（図７Ａ−Ｂ）。具体的には、Ｋａは１．７Ｘ１０５、ｋｄは１．７Ｘ１０４、及びＫＤは９．９Ｘ１０−１０であった。この抗体はまた、カニクイザルＡｘｌに結合するが、関連する受容体であるＴｙｒｏ３及びＭｅｒとは交差反応しない（図７Ｃ）。ＹＷ３２７．６Ｓ２ は、セルフリーＥＬＩＳＡ及び細胞表面上でＦＡＣＳによる両方で実証されたように、リガンドＧａｓ６のＡｘｌへの結合を、用量依存的にブロックする（図７Ｄ−Ｅ）。
【０３３６】
親和性成熟Ａｘｌ ＭａｂのＹＷ３２７．６Ｓ１１，ＹＷ３２７．４２Ｓ８及びＹＷ３２７．４２Ｓ３１もまた特性評価した。ＹＷ３２７．６Ｓ１１，ＹＷ３２７．４２Ｓ８及びＹＷ３２７．４２Ｓ３１は、ヒト及びマウスＡｘｌの両方に高い親和性で結合する。例えば、ヒトＡｘｌへの抗体結合のビアコア解析は以下をもたらした：
0005940061.tif 000003
【０３３７】
これらの抗体は、Ｔｙｒｏ３及びＭｅｒのと交差反応しない。Ｗ３２７．６Ｓ２（および親抗体ＹＷ３２７．６）は、ＡｘｌへのリガンドＧａｓ６の結合をブロックするが、ＹＷ３２７．４２Ｓ８及びＹＷ３２７．４２Ｓ３１（及び親のＭｓｂのＹＷ３２７．４２）は、ＡｘｌへのリガンドＧａｓ６の結合をブロックしない。
【０３３８】
Ａｘｌのエピトープ解析。ヒトＡｘｌの細胞外ドメインの様々な部分へのＡｘｌ抗体結合をＥＬＩＳＡを用いて解析した。その結果が得られた。
0005940061.tif 000004
【０３３９】
ＹＷ３２７．６はヒトＡｘｌのアミノ酸１ー１３４を含む、Ａｘｌ−Ｆｃ融合物に結合した。これとは対照的に、ＹＷ３２７．４２はヒトＡｘｌのアミノ酸１ー３２４を含むＡＸＬ−Ｆｃ融合物を結合したが、アミノ酸１ー１３４、及び１−２２１を含む、Ａｘｌ Ｆｃ融合物に結合しなかった。従って、ＹＷ３２７．６は、ヒトＡｘｌのアミノ酸１−１３４からなるポリペプチドに結合し、ヒトＡｘｌのアミノ酸２２２−２３４がＹＷ３２７．４２結合に要求されることを結論づけた。アミノ酸１−１３４は、ＡｘｌのＩｇＩドメインを含み、アミノ酸２２２−２３４はＡｘｌのフィブロネクチンドメインを含む。
【０３４０】
抗Ａｘｌのハイブリドーマ抗体を用いた競合実験。我々は、抗体ＹＷ３２６．６及びＹＷ３２７．４２が、抗Ａｘｌハイブリドーマ抗体の１２Ａ１１及び３Ｇ９と、ヒトＡｘｌ結合を競うことができるか否かを確定した（Li,(2009)，２００９年７月２７日に出願された米国特許出願番号第６１／２２８９１５号）。ヒトＡｘｌに対する抗体競合結合実験において、抗体ＹＷ３２７．６はヒトＡｘｌの結合を、ハイブリドーマ抗体の１２Ａ１１又は３Ｇ９の何れとも競合せず、これらの抗体は同じエピトープを認識しないことが実証された。抗体ＹＷ３２７．４２は、ハイブリドーマ抗体１２Ａ１１と、ヒトＡｘｌの結合を競合したが、ハイブリドーマ抗体３Ｇ９とはヒトＡｘｌの結合について競合しなかった。
【０３４１】
ＹＷ３２７．６Ｓ２は、Ａｘｌの発現を下方制御し、その活性化、シグナル伝達及びＧａｓ６依存性Ｂａｆ３Ａｘｌ細胞増殖を阻害する。ＹＷ３２７．６Ｓ２がＡｘｌの生物学的機能に影響を与えるかどうかを試験するために、最初に我々はＡｘｌの発現及びシグナル伝達への影響を評価した。ＮＳＣＬＣ細胞株Ａ５４９のＹＷ３２７．６Ｓ２による処置は、細胞表面上のＡｘｌの発現の迅速な下方制御を生じ（図７Ｆ、上のパネル）、そしてこの下方制御は、２４時間維持される（図７Ｆ、下部パネル）。Ｈ１２９９ ＮＳＣＬＣ細胞のＧａｓ６処置は、細胞がＹＷ３２７．６Ｓ２でプレインキュベートされる場合に阻害された、Ａｘｌのリン酸化を誘導する（図７Ｇ、上のパネル）。その結果、ＹＷ３２７．６Ｓ２によるＨ１２９９細胞のプレインキュベーションは、下流シグナル伝達分子ＡｋｔのＧａｓ６誘導性リン酸化をブロックする（図７Ｇ、下のパネル）。ＹＷ３２７．６Ｓ２によるＡｘｌ発現の下方制御及びそのシグナル伝達の不活性化は、Ｂａｆ３Ａｘｌ細胞のＧａｓ６依存性増殖を、ＩＣ５０が３４０ｎｇ／ｍｌで強力に阻害した（図７Ｈ）。
【０３４２】
ＹＷ３２７．６Ｓ２は、Ａ５４９異種移植片の成長を減少させ、抗ＶＥＧＦの効果を高める。以前の研究において、我々は、ＲＮＡｉまたは抗ヒトＡｘｌのハイブリドーマモノクローナル抗体を用いる処置の何れかによるＡｘｌの阻害が、Ａ５４９ ＮＳＣＬＣ腫瘍の増殖を有意に減弱することを示した(Li et al, 2009)。従って、我々は最初にこのモデルにおける腫瘍増殖に対するＹＷ３２７．６Ｓ２の効果を試験した。ＹＷ３２７．６Ｓ２単独を１０ｍｇ／ｋｇで、週２回の投与レジメンが、Ａ５４９腫瘍増殖を有意に減少させ（図８Ａ）、そしてこの阻害効果は抗ヒトＡｘｌのハイブリドーマ抗体に匹敵する（図８Ｃ）。  
【０３４３】
Ａｘｌは、内皮細胞に発現し、そしてＶＥＧＦ誘導性内皮細管形成を高めている (Li et al, 2009; Holland et al, 2005);我々は、抗Ａｘｌ ｍＡｂは、抗ＶＥＧＦの抗腫瘍増殖性を高めることができるかどうかを試験した(Liang et al, 2006)。抗ＶＥＧＦ抗体単独及びＹＷ３２７．６Ｓ２単独ではＡ５４９腫瘍の増殖において類似した効果があった（図８Ａ）。２つの抗体を一緒に組合わせると、何れの抗体単独と比べ、単剤では３０％の阻害に対し組合わせ処置では６０％の阻害であり、腫瘍増殖阻害の亢進を生じた（図８Ａ）。
【０３４４】
本研究では動物は６０日間週に２回投与され、第８５日まで腫瘍増殖の遅延を調べた（腫瘍のサイズが８００ｍｍ３を超えた場合には動物は研究から除外され、毒性の結果として除外された動物は無かった）。抗ＶＥＧＦと併用するＹＷ３２７．６Ｓ２は、単剤と比較して腫瘍増殖を有意に遅延した（図８Ａ）。最後の投与から実験終了（８５日）までの経過時間中に、組合わせによる処置群において、腫瘍の再増殖は無く、カプラン・マイヤープロットに示すように、実験終了時に、この群内の全ての動物の生存につながった（図８Ｂ）。
【０３４５】
抗ヒトＡｘｌのハイブリドーマモノクローナル抗体１２Ａ１１は、マウスＡｘ１と交差反応せず、Ａ５４９異種移植腫瘍の増殖を有意に減衰させ (Li et al, 2009)、また、図８Ｃに示すように、抗ＶＥＧＦの作用を亢進する。１２Ａ１１は腫瘍細胞増殖を直接阻害し、抗ＶＥＧＦは腫瘍の血管系に影響を与えるため、これは予想されることである。
【０３４６】
ＹＷ３２７．６Ｓ２は、受容体の発現を下方制御し及びＡ５４９腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する。手始めに、腫瘍の増殖を減少させることにおける、ＹＷ３２７．６Ｓ２の作用を媒介するメカニズムを理解するために、我々は薬力学的研究を行った。Ａ５４９担癌マウスをＹＷ３２７．６Ｓ２で処置し、腫瘍は、投与後０時間、２４時間、７２時間、及び１６８時間で切除した。腫瘍溶解物のウェスタンブロット解析は、Ａｘｌの発現は、抗体投与後２４時間下方制御され、１６８時間以上にわたって持続したことを示しており（図８Ｄ）、ＹＷ３２７．６Ｓ２の抗腫瘍増殖効果はＡｘｌ発現の下方制御によって部分的に媒介されることを示唆している。
【０３４７】
ＹＷ３２７．６Ｓ２は、腫瘍細胞増殖及びアポトーシスに直接的な作用を持っているかどうかを判断するため、コントロール又はＹＷ３２７．６Ｓ２で２週間処置したＡ５４９異種移植片腫瘍を切除し、切断型カスパーゼ３（ＣＣ３）及びＫｉ６７のＩＨＣが行われた。ＹＷ３２７．６Ｓ２で処置された腫瘍は、コントロールと比較してＣＣ３の増大を示し（図８Ｅ）、ＹＷ３２７．６Ｓ２が腫瘍細胞のアポトーシスを誘導することを示唆している。コントロール及びＹＷ３２７．６Ｓ２処置腫瘍との間で、Ｋｉ６７陽性核における有意差は認められず、ＹＷ３２７．６Ｓ２は腫瘍細胞の増殖に直接影響を与えないことを示唆している。
【０３４８】
ＹＷ３２７．６Ｓ２が腫瘍関連血管系に影響を与えるかどうかを調べるために、我々は、ＹＷ３２７．６Ｓ単独または抗ＶＥＧＦとの組み合わせにより、Ａ５４９担癌マウスを処置した。腫瘍を切除し、腫瘍内血管密度を調べるために、ＭＥＣＡ３２、パン内皮マーカーで染色した。ＹＷ３２７．６Ｓ２単独では、コントロールと比較して血管密度を有意には減少させなかったが、抗ＶＥＧＦとの組合わせでは、腫瘍関連血管密度の有意な減少をもたらした（図８Ｆ）。これとは対照的に、１２Ａ１１はそれ自体で、又は抗ＶＥＧＦとの組合わせにおいて、腫瘍内血管密度に有意な作用を持たない。
【０３４９】
ＹＷ３２７．６Ｓ２はエルロチニブ及び化学療法の効果を高める。ＹＷ３２７．６Ｓ２がＮＳＣＬＣに対する標準治療の治療指数を高めることができるかどうかを試験するために、我々は、ＥＧＦＲの小分子阻害剤（ＳＭＩ）エルロチニブ及び化学療法とＹＷ３２７．６Ｓ２の併用治療を行った。
【０３５０】
Ａ５４９は野生型ＥＧＦＲを含み、エルロチニブに対して唯一適度に感受性であり(Yauch et al, 2005)；従って、我々は抗Ａｘｌ ｍＡｂは、ＥＧＦＲ ＳＭＩにこれらの細胞を感作することができるかどうかを調べた。単剤として投与したＹＷ３２７．６Ｓ２及びエルロチニブは、腫瘍の増殖に３０％の減少をもたらしたが、併用すると、腫瘍増殖速度を５０％以上減少させ（図９Ａ）、抗Ａｘｌ ｍＡｂはエルロチニブの抗腫瘍増殖効果を高めることが示唆された。
【０３５１】
次いで、我々は、抗Ａｘｌ ｍＡｂはＮＳＣＬＣに対する標準的化学療法の治療指数を高めることができたかどうかを調べた。Ａ５４９異種移植片担持マウスを、パクリタキセル（６．２５ｍｇ／ｋｇ／日、５日）、及び処置の開始時（０日、図９Ｂ）に投与したカルボプラチン（１００ｍｇ／ｋｇ、１用量）からなる一サイクルの化学療法で処置した。化学療法単独では、腫瘍増殖に対して、ＹＷ３２７．６Ｓ２を単独で投与するのと同様の効果があり、２者の組合わせでは腫瘍増殖阻害の増強をもたらした（図９Ｂ）。
【０３５２】
ＹＷ３２７．６Ｓ２は血管密度を低減し、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌異種移植モデルにおける腫瘍関連マクロファージからの炎症性サイトカインの分泌を阻害する。ｓｈＲＮＡによるＡｘｌのノックダウンは、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１異種移植腫瘍の増殖に中程度の効果のみを有し(Li et al, 2009)、我々はＹＷ３２７．６Ｓ２がこのモデルにおいて有効であるかどうかを問うた。ＹＷ３２７．６Ｓ２単独は、腫瘍の増殖を減少することができ（２５％）、及び、このモデルにおいて単剤として用いられた抗ＶＥＧＦと同様の効果を持っていた（図１０Ａ）。併用療法は、腫瘍増殖の５０％の減少をもたらし、ＹＷ３２７．６Ｓ２は、抗ＶＥＧＦの作用を増強することを示唆している（図１０Ａ）。これとは対照的に、マウスＡｘｌと交差反応しない抗Ａｘｌハイブリドーマ抗体１２Ａ１１は、このモデルにおいて単剤として腫瘍増殖に有意な影響を持たず、また抗ＶＥＧＦに影響を与えない（図１０Ｂ）。ウェスタンブロット分析は、ＹＷ３２７．６Ｓ２及び１２Ａ１１両方が腫瘍内でのＡｘｌの発現を下方制御することを示した（図１０Ｃ＆Ｄ）。これらの結果は、ＹＷ３２７．６Ｓ２の抗腫瘍増殖作用は、腫瘍間質機能の調節によって媒介されうることが示唆された。
【０３５３】
ＹＷ３２７．６Ｓ２が腫瘍間質機能を調節し得るかどうかを調べるために、我々は、ＹＷ３２７．６Ｓ単独または抗ＶＥＧＦとの組み合わせにより、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１担癌マウスを処置した。抗体を投与した後の様々な時点で、腫瘍を切除し、ＭＥＣＡ３２で染色して腫瘍内血管密度を調べた。ＹＷ３２７．６Ｓ２及び抗ＶＥＧＦの両方が、コントロールと比較して血管密度を減少させた（図１０Ｅ）。二つの抗体の組み合わせは、腫瘍関連血管密度の更なる減少をもたらした。これらの結果は、ＹＷ３２７．６Ｓ２が血管の機能を変化させることによって、部分的に、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍の増殖を減少させることを示唆している。
【０３５４】
原発性ヒト乳癌標本において、Ａｘｌタンパク質が浸潤性マクロファージにおいて強く発現されていることを見いだし（図１０Ｆ）、そのため、Ａｘｌ ｍＡｂ ＹＷ３２７．６Ｓ２が腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）の機能に影響を及ぼす可能性があるかどうかを尋ねた。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１異種移植腫瘍はＹＷ３２７．６Ｓ２、１２Ａ１１又はコントロール抗体により１週間処置され、ＴＡＭを、Ｆ４／８０陽性細胞について選別することにより単離した。細胞を無血清培地で一晩培養し、上清を回収し、種々のサイトカイン及びケモカインの存在についてアッセイした。ＹＷ３２７．６Ｓ２及び１２Ａ１１で処置した腫瘍由来のＴＡＭは、コントロール抗体で処置したＴＡＭに比べて、遙かに少量の炎症性サイトカイン及びケモカインを生成した（図１０Ｇ）。何れのＡｘｌ−ｍＡｂによる処置も、これらの抗体による腫瘍細胞におけるＡｘｌ発現の下方制御と対照的に、ＴＡＭにおけるＡｘｌの発現量に影響を及ぼしていない（データ非表示）（図１０Ｃ＆Ｄ）。これらの結果は、Ａｘｌ ｍＡｂは、十中八九、ＴＡＭからの炎症性サイトカイン／ケモカインの分泌を、間接的な方法で、恐らくは腫瘍及び間質細胞間のクロストークを遮断することによって調節することを示唆している。
【０３５５】
ＹＷ３２７．６Ｓ２は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞の骨への転移を減少させる。以前の研究において、我々はｓｈＲＮＡによるＡｘｌノックダウンは、同所性モデルにおいて、肺へのＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞の転移を抑制することを示し(Li et al, 2009)、よって、我々はＹＷ３２７．６Ｓ２がこれらの細胞の転移に影響を与えるかどうかを試験した。ルシフェラーゼレポーター遺伝子（２０）を安定に発現するＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、ＳＣＩＤマウスに尾静脈注射した。注射後４週間で、強い発光シグナルが、コントロール抗体処置群の全五匹の動物の頭蓋顔面領域、脛骨および大腿骨で検出された。コントロール群で生物発光によって検出された部位は、各動物において、５、５、４、３及び１で、合計１８である（図１１Ａ）。ＹＷ３２７．６Ｓ２で処置したマウスでは、生物発光により検出された部位は、著しく減少し、各動物において、０、１、２、３、及び１部位で、群全体で合計７である（図１１Ａ）。骨における転移病巣の存在は組織学的分析によって確認した（図１１Ｂ）。これらの結果は、ＹＷ３２７．６Ｓ２が遠隔臓器へのＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞の転移を減少させることができることを示唆している。
【０３５６】
議論
我々は、異種反応性及び腫瘍形成におけるＡｘｌの様々な機能をブロックするヒト抗Ａｘｌモノクローナル抗体（ＹＷ３２７．６Ｓ２）を開発し、特徴づけてきた。最初に報告された、Ａｘｌに対する完全ヒト化遮断抗体であることに加えて、ＹＷ３２７．６Ｓ２は、癌の発生と進行の複数の側面において、Ａｘｌ活性化／シグナル伝達の影響を調査するための強力なツールとして役割を果たすばかりでなく、様々な癌の治療のための潜在的治療を表わしている。
【０３５７】
我々の結果は、Ａｘｌ発現の下方制御、並びにリガンドＧａｓ６の受容体への結合の阻害により、ＹＷ３２７．６Ｓ２はＡｘｌの機能をブロックし、Ａｘｌ及びその下方シグナル伝達の不活性化を生じることを示している（図７）。多くの癌では、構成的に活性化されたＡｘｌを発現し、もはや外因性Ｇａｓ６に応答しないため、癌細胞においてＡｘｌの発現を下方制御するＹＷ３２７．６Ｓ２の能力は、その阻害効果の重要なメカニズムを表している(Li et al, 2009)。
【０３５８】
Ａ５４９ ＮＳＣＬＣモデルでは、ＹＷ３２７．６Ｓ２は、単剤として投与された場合、著しく腫瘍増殖を減衰させた（図８Ａ）。この阻害効果は、このモデルにおける抗Ａｘｌのハイブリドーマ抗体に匹敵する(Li et al (2009); 図８Ｃ)。ＹＷ３２７．６Ｓ２は異種移植でのＡｘｌの発現を急速に下方制御し（図８Ｄ）、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導し（図８Ｅ）、腫瘍増殖に対するその阻害効果を媒介するメカニズムの一つである可能性が高い。Ａｘｌが、ＤＫＫ３及びアンジオポエチン／Ｔｉｅ２経路を調節することにより、血管内皮細胞の機能を調節するという私たちのこれまでの知見(Li et al, 2009)は、抗Ａｘｌ ｍＡｂは腫瘍の増殖を減少させる抗ＶＥＧＦの作用を高めることができるという可能性を高めた。我々の結果（図８Ａ＆Ｆ）は、ＹＷ３２７．６Ｓ２は、抗ＶＥＧＦの作用を高めることにより腫瘍血管系に影響を及ぼして腫瘍内血管密度を減らすという点において、この仮説と一致する。実際に、Ａ５４９モデルにＹＷ３２７．６Ｓ２及び抗ＶＥＧＦを共投与すると、腫瘍うっ滞を生じ、処置終了後少なくとも４週間維持された（図８Ｂ）。ハイブリドーマ抗体１２Ａ１１はまた、このモデルにおける抗ＶＥＧＦの抗腫瘍効果を強化する（図８Ｃ）。しかし、ＹＷ３２７．６Ｓ２と異なり、１２Ａ１１は、腫瘍血管系に直接影響を及ぼさず；むしろ、直接、腫瘍細胞の増殖を阻害し、アポトーシスを誘導する(Li et al. 2009)。腫瘍増殖に対する１２Ａ１１の効果及び腫瘍血管に対する抗ＶＥＧＦは、二つの薬剤が一緒に使用される場合、効果の増大をもたらした。
【０３５９】
エルロチニブなどのＥＧＦＲ小分子阻害剤は、ＥＧＦＲ変異又は増幅を抱えるＮＳＣＬＣ腫瘍の治療に有効である(Lynch et al, 2004; Paez et al, 2004; Eberhard et al, 2005; Giaccone et al, 2005; Tsao et al, 2005)。またＨｅｒ２／ＥＧＦＲ小分子阻害剤のラパチニブ、又は抗Ｈｅｒ２抗体ハーセプチンによる乳癌細胞の治療は、Ａｘｌ発現の誘導を生じ、これらの治療に対する癌細胞の抵抗をもたらすことが知られている (Liu et al, 2009)。我々は最近、Ａｘｌ発現は、耐性細胞においてエルロチニブ及びＡｘｌノックダウンに対する耐性を獲得したＨＣＣ８２７ ＮＳＣＬＣ（ＥＧＦＲ変異又は増幅を抱える細胞株）細胞中で誘導され、エルロチニブへのそれらの感受性を回復させることを見いだしており、ＡｘｌがＮＳＣＬＣにおいてエルロチニブ耐性に役割を果たし得ること示唆している。Ａ５４９は野生型ＥＧＦＲを含み、インビトロでＥＧＦＲ阻害に対して唯一適度に感受性であり(Yauch et al, 2005)、我々は抗Ａｘｌ ｍＡｂは、エルロチニブにこれらの細胞を感作することができるかどうかを問うた。我々の結果は、ＹＷ３２７．６Ｓ２が、腫瘍の増殖を減少させることにおいて、エルロチニブの効果を増強することを示しており（図９Ａ）、抗Ａｘｌ ｍＡｂが、ＥＧＦＲ阻害単独に対して抵抗性である腫瘍における、ＥＧＦＲ阻害剤の有効性を、恐らくは腫瘍細胞のＡｘｌ発現を直接減少させることにより高め得ることを示唆している：
【０３６０】
全身化学療法は、ＮＳＣＬＣの治療パラダイムにおける最大の役割を果たしている。再発又は進行した疾患については、カルボプラチン／パクリタキセルからなる化学療法による治療を受けた患者は、奏効率が１５％及び生存期間の中央値が１０．３ヶ月である (Sandley et al, 2006)。Ａ５４９ ＮＳＣＬＣモデルにおいて我々の結果は、ＹＷ３２７．６Ｓ２は、カルボプラチン／パクリタキセルの抗腫瘍効果を向上させることができ（図９Ｂ）、Ａｘｌの機能をブロックすることは、この疾患における化学療法の治療指数を改善する可能性があることを示唆している。我々の結果は、Ａｘｌ小分子阻害剤が、４Ｔ１乳癌同所性モデルにおいて、肝微小転移を抑制するために、シスプラチンと相乗作用したことを実証する最近の報告と一致している(Holland et al, 2010)。
【０３６１】
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌モデルでは、ＹＷ３２７．６Ｓ２は単独で著しく腫瘍増殖を減衰させることができる（図１０Ａ）。マウスＡｘｌと交差反応せず、腫瘍細胞に影響を及ぼすだけであろう抗Ａｘｌハイブリドーマ抗体は、このモデルの腫瘍増殖に対して有意な効果を持っていない（図１０Ｂ）。これらの結果は、ＹＷ３２７．６Ｓ２が、腫瘍間質への作用を通じてその抗腫瘍効果を発揮する可能性があることを示唆している。我々の結果は、ＹＷ３２７．６Ｓ２が、腫瘍内血管密度を減少させ（図１０Ｅ）、かつ抗ＶＥＧＦの効果を高めることを示している。腫瘍血管系への作用を通じて、ＹＷ３２７．６Ｓ２は腫瘍増殖に影響を与え得る。
【０３６２】
癌の発生及び炎症との関連が長い間認識されている(Balkwill & Mantovani, 2001; Coussens & Werb, 2002)。感染及び炎症に関連する慢性炎症は、ゲノム病変及び腫瘍の開始を助長する環境につながり得る。ＴＡＭが、血管新生及びマトリックスリモデリングの促進を含む腫瘍増殖において因果関係のある役割を持っているとする証拠が増えている(Balkwill et al, 2005; Pollard, 2004)。このことに関与するシグナルは、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）及び多量のケモカインなどの炎症性サイトカインであると考えられている。これらのサイトカイン及びケモカインは、腫瘍増殖を刺激する特定の部位に対して免疫細胞を補充するのみならず、それらの受容体が、腫瘍の増殖及び遊走を増やすことができる腫瘍細胞に発現していることが示されている (Haghnegahdar et al, 2000)。原発性ヒト乳がんでは、Ａｘｌタンパク質は、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）で高レベルで発現される（図１０Ｆ）。我々は、抗Ａｘｌ ｍＡｂが、間接的なメカニズムを介してこれらの細胞の機能を調節する証拠をここに提供する。我々のデータは、ＹＷ３２７．６Ｓ２又は１２Ａ１１（マウスＡｘｌと交差反応せず、従って、ＴＡＭに直接影響を及ぼさない）の何れかによるＭＤＡ−ＭＢ−２３１異種移植片の処置が、ＴＡＭからの炎症性サイトカイン及びケモカインの分泌を抑制することを示した（図１０Ｇ）。Ａｘｌ−ｍＡｂはＴＡＭ上のＡｘｌの発現に有意な効果を有するようには見えないが、腫瘍細胞上の受容体発現を下方制御するため、抗ＡＸＬ−ｍＡｂは、腫瘍及び間質細胞間のクロストークをブロックすることによって、ＴＡＭからのサイトカイン／ケモカイン分泌を調節する可能性がある。これらの結果は、腫瘍細胞が、Ｇａｓ６の発現を誘導するように浸潤性白血球を育てることによって、それらの増殖を促進することができたという最近の報告と一致しており(Loges et al, 2010)；Ａｘｌの小分子阻害剤は、４Ｔ１乳癌細胞においてＧＭ−ＣＳＦ発現を減少させた(Holland et al, 2010)。
【０３６３】
これまでの研究により、腫瘍細胞遊走、浸潤及び転移を促進する上でのＡｘｌの役割を確立している(Zhang et al, 2008; Li et al, 2009; Tai et al, 2008; Vajkoczy et al, 2006; Gjerdrum et al, 2010)。ここに我々は、ＹＷ３２７．６Ｓ２が骨へのＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞の転移を減少させることができることを示した。これらの結果は、乳癌細胞におけるＲＮＡｉによるＡｘｌサイレンシングは同所性モデルにおいて肺への転移を阻害する(Li et al, 2009; Gjerdrum et al, 2010)という我々の以前のデータと一致しており、抗Ａｘｌ抗体が、原発腫瘍の治療だけでなく、転移性疾患においても、治療可能性を有し得ることを示唆している。
【０３６４】
結論として、我々はＡｘｌの機能をブロックするヒトモノクローナル抗体を開発した。この抗Ａｘｌ ｍＡｂは、腫瘍細胞のアポトーシスの誘導、血管新生の制御及び腫瘍関連免疫細胞機能の調節を含む複数のメカニズムを介して、その抗腫瘍効果を発揮する。加えて、この抗Ａｘｌ ｍＡｂは、抗ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＳＭＩ並びに化学療法の抗腫瘍効果を高めるため、これらの治療法が標準的な治療である臨床症状における新規な治療アプローチを表わし得る。
【０３６５】
部分的な参考文献リスト
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前述の発明は、理解を明確にする目的のために例示および実施例によってある程度詳細に説明してきたが、説明や例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。すべての特許および本明細書に引用される科学文献の開示は、参照によりその全体が援用される。
【図１Ａ】
0005940061.tif 000005
【図１Ｂ】
0005940061.tif 000006
【図１Ｃ】
0005940061.tif 000007
【図１Ｄ】
0005940061.tif 000008
【図１Ｅ】
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【図１Ｆ】
0005940061.tif 000010
【図２】
0005940061.tif 000011
【図３】
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【図３Ａ】
0005940061.tif 000013
【図３Ｂ】
0005940061.tif 000014
【図４】
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【図５】
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【図６】
0005940061.tif 000017
【図７Ａ】
0005940061.tif 000018
【図７Ｂ】
0005940061.tif 000019
【図７Ｃ】
0005940061.tif 000020
【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図７Ｈ】
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【図８Ａ】
0005940061.tif 000024
【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｆ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｇ】
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【図１２】
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【図７Ｆ】
0005940061.tif 000034
【図７Ｇ】
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【図８Ｄ】
0005940061.tif 000036
【図８Ｅ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１０Ｆ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【配列表】
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