(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｈＢＤ１及びｈＢＤ２デフェンシンのレベル低下に関連する、感染症を含めた、免疫系関連障害の処置又は予防に使用するための組成物であって、内因性ｈＢＤ１及び／又はｈＢＤ２の発現を高めることによって内因性の抗菌防御力を高め、非複製性Ｌ．ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ、Ｌａ１）ＮＣＣ  ５３３（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及び非複製性Ｂ．ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）の組合せを１０：９０〜５：９５の範囲の比で含み、前記免疫系関連障害が、細菌性感染症、ウイルス性感染症、真菌性感染症、寄生生物性感染症、炎症、食細胞欠乏症、上皮関門性欠損症又は免疫系未熟、ＳＩＢＯ並びにこれらの組合せからなる群から選択される、組成物。
【請求項２】
Ｌ．ジョンソニイ（Ｌａ１）ＮＣＣ  ５３３（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及びＢ．ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）を５０：５０〜５：９５の範囲の比で含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
Ｌ．ジョンソニイ（Ｌａ１）ＮＣＣ  ５３３（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及びＢ．ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）を２０：８０〜５：９５の範囲の比で含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
Ｌ．ジョンソニイ（Ｌａ１）ＮＣＣ  ５３３（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及びＢ．ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）を１日用量あたり１０４〜１０１２ｃｆｕに相当する量含有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
Ｌ．ジョンソニイ（Ｌａ１）ＮＣＣ  ５３３（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及びＢ．ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）を、１日用量あたり０．００５ｍｇ〜１０００ｍｇ含有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
食品組成物、ペットフードを含む食品、飲料、完全栄養用製剤、栄養サプリメント、栄養補助食品、食品添加物、医薬組成物、化粧用組成物、局所用組成物及び医薬からなる群から選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
デフェンシンのレベル低下に関連する障害が、嚢胞性線維症、反応性気道疾患、肺感染症及び喫煙、ぜんそく、肺炎、鼻炎、耳炎、副鼻腔炎、結核、クローン病（直腸及び回腸）、潰瘍性大腸炎、セリアック病、腸管未熟、ヘリコバクター・ピロリ感染により誘発される胃炎及び胃潰瘍、感染性下痢、壊死性腸炎、抗生物質関連性下痢、細菌性膣炎、ＨＩＶ、尿路感染症、アトピー性皮膚炎、慢性潰瘍、上皮性悪性腫瘍、アトピー性湿疹、火傷、扁桃炎、歯肉炎、う歯、目の角膜炎からなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に、プロバイオティクスの分野に関し、特に、例えば内因性の抗菌防御力を高めることによる炎症性及び感染性障害の予防及び／又は処置に関する。本発明の一実施形態は、ラクトバチルス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）（Ｌａ１、ＮＣＣ５３３  寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及びビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）（ＮＣＣ２７０５  寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）の組合せを含む組成物である。本組成物は、感染症を含めた、免疫系関連障害の処置又は予防に使用することができる。
【背景技術】
【０００２】
我々の環境は、無数の病原性となる可能性のある微生物によって汚染されている。皮膚角化細胞、消化管、気道、泌尿生殖路を内張り（ｌｉｎｉｎｇ）している上皮細胞はすべて、体内への菌侵入から保護する物理的関門をもたらしている。
【０００３】
さらに、これらの上皮は、細菌及びその他の微生物の侵入を制限するために、抗菌物質を産生して分泌することにより宿主防御に寄与している。こうした抗菌物質分子は、先天性免疫の基本的な防御線の重要な要素を構成している。
【０００４】
デフェンシンは、ヒトにおける抗菌ペプチドの最も重要な部類の１つである。デフェンシンは、肺、皮膚、口腔、泌尿生殖路、気道及び消化管の上皮細胞によって産生される。これらのデフェンシンの中に、デフェンシン１（ｈＢＤ１）及びデフェンシン２（ｈＢＤ２）を含むβ−デフェンシンのファミリーが存在する。
【０００５】
ｈＢＤ１は、口腔粘膜、唾腺、胃、小腸、直腸、肝臓及びすい臟などの様々な粘膜表面で発現する。ｈＢＤ２はまた、消化管の粘膜表面を含む、多数の粘膜表面にある上皮細胞中にも存在している。さらに、これら２種のデフェンシンはまた、唾液及び気道表面の体液中にも存在している（Ｃｕｎｌｉｆｆｅ，Ｒ．Ｎ．及びＭａｈｉｄａ，Ｙ．Ｒ．Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．２００４年、７５巻、４９〜５８頁）。
【０００６】
ｈＢＤ２は、正常組織中に非常に低レベルで存在しており、ｈＢＤ２の発現は細菌及び炎症誘発性サイトカインによって上方調節される。ｈＢＤ２とは反対に、ＨＢＤ１は構成的に発現する。ｈＢＤ１は、細菌又は炎症によって一貫して上方調節されることは一度も示されたことがない（Ｏｕ，Ｇ．ら、Ｓｃａｎｄ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２００９年、６９巻、１５０〜１６１頁）。
【０００７】
プロバイオティクスは、一連の種々な腸管防御力（ｇｕｔ  ｄｅｆｅｎｃｅ）、すなわち免疫排除（ｉｍｍｕｎｅ  ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ）、免疫除去（ｉｍｍｕｎｅ  ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ）及び免疫調節（ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）を強化することができることはよく知られている。プロバイオティクスはまた、微生物性病原体に対する非特異的な宿主抵抗性を刺激し、これにより病原体の根絶を手助けすることも知られている。
【０００８】
しかし、上記にもかかわらず、構成的ｈＢＤ１の発現は、プロバイオティクス細菌（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ  ｂａｃｔｅｒｉａ）によって影響を受けず（Ｏ’Ｎｅｉｌ，Ｄ．Ａ．ら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６３巻、６７１８〜６７２４頁）、共生性（大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ））及び病原性（サルモネラ・ティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ））菌株により非常に緩やかに上方調節されるもの（Ｏｕ，Ｇ．ら、Ｓｃａｎｄ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００９年、６９巻、１５０〜１６１頁）と報告されている。
【０００９】
感染症を含めた、免疫系関連障害の処置又は予防に有用となるように内因性の抗菌防御力を高めるために、β−デフェンシン、特にデフェンシン１（ｈＢＤ１）及びデフェンシン２（ｈＢＤ２）の発現を上方調節するのに使用できる、望ましくない副作用がない有効な天然組成物が入手可能であれば、望ましいと思われる。
【００１０】
理想的には、該天然組成物は、今日、十分に許容されており、消費者によって健康上有益であると認識されているプロバイオティクス培養物を含有すべきである。
【００１１】
β−デフェンシン、特にデフェンシン１（ｈＢＤ１）及びデフェンシン２（ｈＢＤ２）の発現を効果的に刺激することが可能なプロバイオティクスは、健康上の有益性を補助及び／又は改善し、これにより、プロバイオティクスは、例えば、免疫系関連障害の処置又は予防において、特に有効となり得るであろう。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明者らは、上記の必要性に対処してきた。
したがって、本発明の目的は、最新技術を改善すること、並びに、特に内因性の抗菌防御力を高めることによって炎症性及び感染性障害を予防及び／又は処置することができ、さらに上記に挙げた要件を満足する、有効な天然組成物を提供することであった。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、独立請求項の主題によって本発明の目的を達成し得ることが分かって、驚いた。従属請求項は、本発明の好ましい実施形態をさらに規定する。
【００１４】
本発明の主題は、非複製的微生物、例えば熱処理微生物などの微生物を含有する産生物を投与することによって、ほ乳類の内因性の抗菌防御力を強化する。
【００１５】
本発明者らは、Ｌ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）とビフィドバクテリウム・ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）との組合せが、抗菌ペプチド発現の誘発に対する優れた効果を有することを述べる。
【００１６】
例えば、Ｌ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）とビフィドバクテリウム・ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）を組み合わせると、ｈＢＤ１及びｈＢＤ２のｍＲＮＡ発現のどちらの上方調節も効果的に引き起こすことが見出された。注目すべきことに、観察された効果は、個別に試験された２種の細菌菌株によって生じる結果に基づいて予期し得るよりも、有意に顕著であった。
【００１７】
２種のプロバイオティクスを様々に組み合わせると、両菌株を個別に試験することによって誘発される効果よりも高いｈＢＤ１のｍＲＮＡ発現の上方調節を引き起こすことが観察された。
【００１８】
ｈＢＤ２の発現に関して、例えば、高用量のＢ．ロングム（ＮＣＣ２７０５、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）（９０）と低用量のＬ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）（１０）を有する２種のプロバイオティクスを組み合わせると、個々の菌株単独で得られた誘発と比較して、ｈＢＤ２の誘発が増加することを示すことができた。
【００１９】
したがって、本発明者らは、Ｌ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）とビフィドバクテリウム・ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）の組合せは、抗菌ペプチド、例えばｈＢＤ１及び／又はｈＢＤ２の発現の誘発に相乗的に作用することを見出した。
【００２０】
ｈＢＤ１及びｈＢＤ２は、大腸菌及び緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｈ．ピロリ（ｐｙｌｏｒｉ）を含む細菌の広範なスペクトルに対して（Ｎｕｄｉｎｇ，Ｓ．ら、Ｍｉｃｒｏｂｅｓ．Ｉｎｆｅｃｔ．２００９年、１１巻、３８４〜３９３頁）、並びにカンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）などの酵母（Ｏ’Ｎｅｉｌ，Ｄ．Ａ．、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００３年、４０巻、４４５〜４５０頁）及びウイルス（ヒト免疫不全ウイルス）（Ｋｏｔａ，Ｓ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  ２００８年、２８３巻、２２４１７〜２２４２９頁）に対しても抗細菌活性を示す。したがって、これらの抗菌ペプチドは粘膜関門を増強し、その結果、細菌の付着及び侵入を制限することができる。
【００２１】
デフェンシンのレベルが、ある種の病態生理学的状態において低下すること、並びにこの低下は、以下のもの（Ｄｏｓｓ，Ｍ．ら、Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．２０１０年、８７巻、７９〜９２頁、Ｒｉｖａｓ−Ｓａｎｔｉａｇｏ，Ｂ．ら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．２００９年、７７巻、４６９０〜４６９５頁）などの感染性及び炎症性疾患の発病及び合併症におけるリスク要因であることを、ますます多くの証拠が示している。即ち、
気道においては、
嚢胞性線維症、反応性気道疾患、肺感染症及び喫煙、ぜんそく、肺炎、鼻炎、耳炎、副鼻腔炎、結核
消化管においては、
クローン病（直腸及び回腸）、潰瘍性大腸炎、セリアック病、腸管未熟（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｉｍｍａｔｕｒｉｔｙ）、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ）感染により誘発される胃炎及び胃潰瘍、感染性下痢、壊死性腸炎、抗生物質関連性下痢、
泌尿生殖路においては、
細菌性膣炎、ＨＩＶ、尿路感染症、
皮膚においては、
アトピー性皮膚炎、慢性潰瘍、上皮性悪性腫瘍、アトピー性湿疹、火傷、
口腔においては、
ＨＩＶ患者、扁桃炎、歯肉炎、う歯、
目においては角膜炎。
【００２２】
本明細書に示されている結果は、Ｌ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）とビフィドバクテリウム・ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）の組合せは、相乗作用に基づく内因性の抗菌防御力を高める、驚くほど強力な能力を有し、したがってＳＩＢＯ（小腸内細菌過剰繁殖（Ｓｍａｌｌ  Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｏｖｅｒｇｒｏｗｔｈ））、炎症性及び感染性障害の予防並びに処置においてより有効であることを示している。
【００２３】
したがって、本発明の一実施形態は、Ｌ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及びＢ．ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）の組合せを含む組成物に関する。
【００２４】
任意の比のＬ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及びＢ．ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）が使用されてもよい。すべての組合せは、単独で使用される相当量の個々の菌株よりも効果的となろう。
【００２５】
しかし、Ｌ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）とＢ．ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）との組合せは、ある特定の比のＬ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及びＢ．ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）が使用される場合、例えば、内因性β−デフェンシンの発現を高めることにより、例えば、免疫系関連障害の処置又は予防において、特に有効であることが見出された。
【００２６】
したがって、本発明の組成物は、Ｌ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及びＢ．ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）を、約１０：９０〜５：９５、好ましくは約５０：５０〜５：９５、例えば約２０：８０〜５：９５の範囲の比で含むことができる。
【００２７】
例えば、本発明の組成物は、Ｌ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及びＢ．ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）を、約１０：９０の範囲の比で含むことができる。
【００２８】
比は、コロニー形成単位（ｃｆｕ）数を基準に計算することができる。
【００２９】
本発明の組成物は、Ｌ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及びＢ．ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）を、免疫系関連障害及び／又はその障害の合併症を少なくとも部分的に処置するための十分な量で含むことができる。処置を達成するための適量は、「治療有効用量」として定義される。本目的のための有効量は、消費者の疾患の重症度及び体重、並びに一般的な健康状態などの当業者に公知の多くの要因、並びに食品マトリックスの影響に依存することになる。
【００３０】
予防的用途では、本発明による組成物は、免疫系関連障害の発症リスクを少なくとも部分的に低減するために十分な量で、こうした障害に感染しやすい、又はそのリスクがある消費者に投与される。このような量は、「予防有効用量」と定義される。やはり、正確な量は、患者の健康状態及び体重などの患者特有の多くの要因、並びに食品マトリックスの影響に依存する。
【００３１】
当業者であれば、治療有効用量及び／又は予防有効用量を、適切に調節することができよう。
【００３２】
一般に、本発明の組成物は、Ｌａ１を治療有効用量及び／又は予防有効用量で含有する。
【００３３】
通常、治療有効用量及び／又は予防有効用量とは、１日用量あたりＬ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及びＢ．ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）が約０．００５ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲にある。
【００３４】
数量に関して、Ｌ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及びＢ．ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）は、乾燥組成物の１０４〜１０１２当量ｃｆｕ／ｇの間に相当する組合せ量で、組成物中に存在することができる。例えば、本発明による組成物は、１日用量あたり約１０４〜１０１２ｃｆｕに相当する量のＬ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及びＢ．ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）を含有することができる。
【００３５】
本発明の組成物は、１日用量あたりＬ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及びＢ．ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）を約０．００５ｍｇ〜１０００ｍｇ含有することができる。
【００３６】
本発明の組成物は、いかなる種類の組成物であってもよい。本組成物は、例えば、経口的に、吸入により、経腸的に、非経口的（皮下又は筋肉内）に、局所的又は眼内に、直腸内に、膣内に投与されるものとすることができる。
【００３７】
したがって、本発明の組成物は、食品組成物、ペットフードを含む食品、飲料、完全栄養用製剤、栄養サプリメント、栄養補助食品、食品添加物、医薬組成物、化粧用組成物、局所用組成物及び医薬からなる群から選択することができる。
【００３８】
本発明の組成物は、感染症を含めた、免疫系関連障害の処置又は予防に使用するためのものとすることができる。
【００３９】
本発明によれば、内因性β−デフェンシンの発現（例えばｈＢＤ１及び／又はｈＢＤ２の発現）を増加することにより、免疫系関連障害を処置又は予防することができる。
【００４０】
本発明の組成物はまた、β−デフェンシンの発現（例えばｈＢＤ１及び／又はｈＢＤ２の発現）の低下に関係する障害（例えば微生物感染症など）の処置又は予防に使用するためのものとすることもできる。
【００４１】
本発明はまた、免疫系関連障害を処置する又は予防するための組成物の調製における、Ｌ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）及びＢ．ロングム  ＮＣＣ２７０５（寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）の組合せ使用にも関する。
【００４２】
免疫系関連障害は、感染症、特に細菌性、ウイルス性、真菌性及び／又は寄生生物性感染症、炎症、食細胞欠乏症、上皮関門性欠損症又は免疫系未熟、ＳＩＢＯ並びにこれらの組合せからなる群から選択することができる。
【００４３】
一実施形態では、本発明の組成物は、ウイルス性、真菌性及び／又は寄生生物性感染症などの細菌性感染症の処置又は予防に使用するためのものとすることができる。
【００４４】
免疫系関連障害はまた、β−デフェンシン、特にｈＢＤ１及び／又はｈＢＤ２のレベル低下に関係する障害の群から選択することもできる。このような障害は、嚢胞性線維症、反応性気道疾患、喫煙からの肺感染症、ぜんそく、肺炎、鼻炎、耳炎、副鼻腔炎、結核、クローン病（直腸及び回腸）、潰瘍性大腸炎、セリアック病、腸管未熟、上皮関門性欠損症又は免疫系未熟、ＳＩＢＯ、ヘリコバクター・ピロリ感染により誘発される胃炎及び胃潰瘍、感染性下痢、壊死性腸炎、抗生物質関連性下痢、細菌性膣炎、ＨＩＶ、尿路感染症、アトピー性皮膚炎、慢性潰瘍、上皮性悪性腫瘍、アトピー性湿疹、火傷、扁桃炎、歯肉炎、う歯、目の角膜炎並びにそれらの組合せからなる群から選択することができる。
【００４５】
本発明の組成物は、内因性の抗菌防御力を高めるために使用することができる。これは、例えば、内因性ｈＢＤ１及び／又はｈＢＤ２の発現を高めることによって達成することができる。
【００４６】
プレバイオティクスを加えてもよい。プレバイオティクスは、プロバイオティクスの増殖を支援することができる。さらに、プレバイオティクスは、組成物中に存在している生命力のあるプロバイオティクス細菌と共に相乗的に作用することもできる。
【００４７】
当業者であれば、本明細書に記載された本発明のすべての特徴を、開示された本発明の範囲から逸脱することなく、自由に組み合わせることができることが理解されよう。特に、本発明の組成物に関して記載された特徴は、本発明の使用に適用することができ、またその逆も同様である。
【００４８】
本発明のさらなる利点及び特徴は、以下の実施例及び図面から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】ｈＢＤ１のｍＲＮＡ発現に対する、Ｂ．ロングム（ＮＣＣ２７０５  寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）とＬ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）との組合せ効果を示す図である。Ｔ８４細胞を、様々な濃度の両菌株を含有する様々な混合物と共に、４時間インキュベートした。ｈＢＤ１の遺伝子発現を、リアルタイムＰＣＲによって解析した。データは、非刺激細胞の基礎的発現に正規化した平均値±標準誤差を表す。
【図２】ｈＢＤ２のｍＲＮＡ発現に対する、Ｂ．ロングム（ＮＣＣ２７０５  寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）とＬ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３、寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）との組合せ効果を示す図である。Ｔ８４細胞を、様々な濃度の生菌株を含有する様々な混合物と共に、４時間インキュベートした。ｈＢＤ２の遺伝子発現を、リアルタイムＰＣＲによって解析した。データは、非刺激細胞の基礎的発現に正規化した平均値±標準誤差を表す。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
［実施例］
実験プロトコル
継代３０〜４０からのＴ８４細胞を使用し、５％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）（Ａｍｉｎｅｄ  ＢｉｏＣｏｎｃｅｐｔ社）及び２ｍＭグルタミンを含有するダルベッコ改変基本培地／Ｆ−１２（Ｓｉｇｍａ  Ｄ  ６４２１）中で培養した。細胞は、６ウェル培養プレートに２ｘ１０６細胞／ウェルの濃度で播種し、５％ＣＯ２−９５％大気雰囲気中、３７℃で単層として増殖させた。集密（ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｅ）後１週間増殖した細胞を、血清、及び抗生物質不含培地と共に、少なくとも１２時間インキュベートした。この工程は、血清誘発性デフェンシンの発現を排除するため、並びにプロバイオティクス及び細胞免疫応答に対する抗生物質のいかなる影響をも防止するために必要であった。細胞を、プロバイオティクスと共に４時間さらにインキュベートした。インキュベート時間の終了時に細胞をＰＢＳで洗浄し、供給業者のプロトコルに従って、トリピュア（ＴｒｉＰｕｒｅ）（登録商標）アイソレーション試薬（ＴｒｉＰｕｒｅＴＭ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｒｅａｇｅｎｔ）により採取した。そうして処理した細胞中におけるヒトｈＢＤ１及びｈＢＤ２の遺伝子発現を、定量的ＰＣＲによって評価した。
【００５１】
本実験において使用した細菌菌株は、Ｂ．ロングム（ＮＣＣ  ２７０５  寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）及びＬ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３  寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）である。
【００５２】
結果
Ｂ．ロングム（ＮＣＣ  ２７０５  寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−２６１８）及びＬ．ジョンソニイ（Ｌａ１、ＮＣＣ  ５３３  寄託番号  ＣＮＣＭ  Ｉ−１２２５）は、ｈＢＤ２及びｈＢＤ１のｍＲＮＡ発現をそれぞれ特異的に上方調節するので、本発明者らは、腸管の抗菌防御力に対する、これら２種の菌株の組合せ調製物の効果を検討した。本発明者らは、２種のプロバイオティクスを様々に組み合わせると、両菌株を個別に試験することによって誘発される効果よりも高いｈＢＤ１のｍＲＮＡ発現の上方調節を引き起こすことを観察した（図１）。
【００５３】
ｈＢＤ２の発現に関して、データは、例えば、高用量のＢ．ロングム（ＮＣＣ２７０５）（９０）及び低用量のＬａ１（ＮＣＣ５３３）（１０）を有する２種のプロバイオティクスを組み合わせると、個々の菌株単独で得られた誘発と比較して、ｈＢＤ２の誘発が増加することを示した（図２）。
【図１】
0005948323.tif 000002
【図２】
0005948323.tif 000003