(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
分離された、遺伝的に改変された、生きている非哺乳類有機体であって、野生型に比べて高められたＨＭＧ−ＣｏＡ−還元酵素活性と、野生型に比べて低められたＣ２４−メチル基転移酵素および／またはデルタ２２−不飽和化酵素活性を持つ有機体において、野生型に比べて高められたデヒドロコレステロール−デルタ７−還元酵素活性を備えており、
前記有機体は、哺乳類の膜タンパク質のためにコード化された遺伝子により、プロモーターの支配下で有機体が追加的に転換されたものであることを特徴とする、有機体。
【請求項２】
前記有機体が追加的に野生型と比べて高いデヒドロコレステロール−デルタ２４−還元酵素活性を備えていることを特徴とする、請求項１に記載の有機体。
【請求項３】
野生型と比べて高められたスクアレン−エポキシダーゼ−および／またはラノステロール−デメチラーゼ活性を備えていることを特徴とする、請求項１または２のいずれか一項に記載の有機体。
【請求項４】
前記有機体が、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ、ＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒおよびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属の細菌から構成されるグループから選ばれた原核有機体、または海藻、酵母、菌類、昆虫細胞、蘚苔類および植物から構成されるグループから選ばれた真核有機体であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の有機体。
【請求項５】
前記酵母が、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｉｔａｌｉｃｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｅｌｌｉｐｓｏｉｄｅｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｋｌｕｙｖｅｒｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｍａｒｘｉａｎｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｍｉｃｒｏｅｌｌｉｐｓｏｉｄｅｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｍｏｎｔａｎｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｎｏｒｂｅｎｓｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｏｌｅａｃｅｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐａｒａｄｏｘｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｒｅｔｏｒｉｅｎｓｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｒｏｓｅｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｒｏｕｘｉｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｕｖａｒｕｍ  および  Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｄｅｓ  ｌｕｄｗｉｇｉｉから構成されたグループ、並びにＫ．  ｌａｃｔｉｓ  Ｋ．  ｍａｒｘｉａｎｕｓ  ｖａｒ．  ｍａｒｘｉａｎｕｓ、Ｋ．  ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓのようなＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属の酵母、並びにＣａｎｄｉｄａ  ｕｔｉｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａおよびＣａｎｄｉｄａ  ｖｅｒｓａｔｉｌｉｓのようなＣａｎｄｉｄａ属の酵母、並びにＰｉｃｈｉａ  ｓｔｉｐｉｄｉｓ、Ｐｉａｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ  および  Ｐｉｃｈｉａ  ｓｏｒｂｉｔｏｐｈｉｌａのようなＰｉｃｈｉａ属の酵母、およびＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｄｅｂａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｃｏｐｓｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｄｅｓ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｗｉｃｋｅｒｈａｍｉａ、Ｄｅｂａｙｏｍｙｃｅｓ、Ｈａｎｓｅｎｉａｓｐｏｒａ、Ｋｌｏｅｃｋｅｒａ、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｏｇａｔａｅａ、Ｋｕｒａｉｓｈｉａ、Ｋｏｍａｇａｔａｅｌｌａ、Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ、Ｗｉｌｌｉｏｐｓｉｓ、Ｎａｋａｚａｗａｅａ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ、Ｂｕｌｌｅｒａ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ、ＷｉｌｌｏｐｓｉｓおよびＳｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓの各属の酵母から構成されるグループから選ばれることを特徴とする、請求項４に記載の有機体。
【請求項６】
前記有機体の形質膜が、野生型と比べて含有量が高められたデスモステロールおよび／またはコレステロールおよび／または７−デヒドロ−コレステロールおよび／またはラトステロールを備えていることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の有機体。
【請求項７】
哺乳類の前記膜タンパク質が、ヒト形質膜タンパク質であり、構成的に活性のプロモーターの支配下で有機体が追加的に転換されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の有機体。
【請求項８】
デスモステロールおよび／またはコレステロールおよび／または７−デヒドロコレステロールを産生するための、請求項１〜７のいずれか一項に記載の有機体の使用において、前記有機体が好気培養されることを特徴とする、有機体の使用。
【請求項９】
哺乳類の膜タンパク質を産生するための、請求項７に記載の有機体の使用において、転換された有機体が培養され、コレステロールおよび／またはデスモステロールを加える、または、加えることなく、所与の培養期間の経過後に、膜タンパク質が培養上清からおよび／または有機体から分離されることを特徴とする、有機体の使用。
【請求項１０】
哺乳類の膜タンパク質に結合する物質スクリーニングのための、請求項７に記載の有機体の使用において、前記有機体または前記有機体の膜抽出物が、有機体の事前の培養後に、所与の物質または所与の物質の混合物と接触させられ、有機体、膜抽出物の変化または性質の変化の不在、および／または物質の膜タンパク質との結合または非結合が測定されること、および変化および／または結合の測定時に物質または物質の混合物が膜タンパク質への結合として段階付けされることを特徴とする、有機体の使用。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法を実行するためのキットであって、請求項１〜６のいずれか一項に記載の有機体を備え、
有機体を転換するために適切な核酸構造体を含み、
哺乳類の膜タンパク質のためにコード化された、活性のプロモーターの支配下にある核酸を含み、
および、含有しているまたは別に提供される核酸構造体を備えた有機体の転換のため、転換前後の有機体の培養のため、有機体と所与の物質または所与の物質の混合物を接触するため、および有機体の性質の変化および／または物質または物質の混合物の膜タンパク質との結合を測定するためのプロセスを説明する、取扱説明書を含んでいる、キット。
【請求項１２】
形質膜抽出物である膜抽出物であって、請求項１〜７のいずれか一項に記載の有機体から、有機体の温浸、および、膜である形質膜の切り離しによって得られる、膜抽出物であって、
前記膜は、デスモステロールおよび／またはコレステロールおよび／または７−デヒドロ−コレステロールおよび／またはラトステロール、および哺乳類の膜タンパク質のためにコード化された遺伝子から得た膜タンパク質から構成される膜抽出物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は分離された、遺伝的に改変された、生きている非哺乳類有機体に関し、この有機体は野生型に比べて高められたＨＭＧ−ＣｏＡ−還元酵素活性と、野生型に比べて低められたＣ２４−メチル基転移酵素および／またはデルタ２２−不飽和化酵素活性を持つ有機体であり、その応用、それを生成するための核酸構造、有機体を含むキット、並びに有機体から得られる膜抽出物である。
【背景技術】
【０００２】
冒頭に挙げた構造の有機体は、特許文献１から公知である。この有機体は、７−デヒドロコレステロールの生合成に適している。この有機体を生成する動機は、ビタミンＤ３の中間生成物、特に７−デヒドロコレステロールを大量に、および経済的な条件下で製造するという必要性に基づいている。
【０００３】
まったく異なった関連性において、膜タンパク質、特にヒト膜タンパク質を機能的に野生型のコンフォメーションで少なくとも分析的に優れて有用な分量を作り出す、またはこのタンパク質を例えばスクリーニングという目的に十分な量を機能的に有効な状態で含んでいるシステムを提供するという需要がある。このために、基本的に例えば微生物を使用した生合成方法が考えられる。しかし、野生型株哺乳類細胞からの膜タンパク質の非相同の発現は、コレステロールが欠けているため、またはエルゴステロールが存在しているためにしばしば困難を伴う。なぜなら発現した膜タンパク質は機能的に制限されているかまたは非活性の場合が多いからである。その理由として、膜タンパク質の正しい折りたたみと活性コンフォメーションの誘導、引いてはその機能性に膜内のステロールが重要な役割を果たす、すなわち酵母中での非相同膜タンパク質の機能性発現のために膜のステロールパターンを膜タンパク質に適合させなければならない、という既知の事実が考えられる。
【０００４】
ステロールは、膜真核細胞の基本的な構成要素である。これは膜の流動性および浸透性の責任を負っている。特に強調すべきであるのは、多数の膜タンパク質の調節へのステロールの関与である。この場合、正しい折りたたみのためのある種の共同因子、膜タンパク質の安定性と活性が重要である。真核細胞内で自由なステロールは形質膜内およびすべての細胞コンパートメントの膜内にある。脂質粒子内では、ステロールはエステル化した形で貯蔵脂質として存在する。酵母内では、自由なステロールの大部分が形質膜内に局在し、その次に分泌小胞にあり、同時にミクロソーム内、液胞内およびミトコンドリア膜内にはわずかしかない。エルゴステロールはステロール生合成経路の最終生成物であり、例えば酵母Ｓ．  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ中にあり、形質膜中および分泌小胞中の主たるステロールである。細胞内コンパートメントの膜には少量のステロールが含まれているが、他のステロール中間体もある。
【０００５】
哺乳類細胞中では、ステロール生合成の最終生成物はコレステロールであり、これは形質膜内の大部分のステロールから作られる。形質膜は細胞コレステロール全体の約６０〜８０％を含んでおり、ステロール合成の場所である小胞体にはわずか０．５〜１％しか含まれていない。
【０００６】
例えば非特許文献１は、酵母のヒト化について書かれている。しかしここでのヒト化の概念は、非相同生成タンパク質の糖鎖付加パターンに関するものであり、これは人に適合され、および本発明に関係するステロールパターンの範囲ではない。最も重要なことは酵素または抗体の合成であって、膜タンパク質ではない。
【０００７】
酵母のエルゴステロール生合成経路は、プレスクアレン経路つまりアセチルＣｏＡ分子からのスクアレンの合成、およびスクアレンからエルゴステロールへの変換が触媒されることによるポストスクアレン経路に分類される。プレスクアレン経路の主要ペースメーカー酵素としてヒドロキシメチルグルタリル−コエンザイムＡ−還元酵素（ＨＭＧ−ＣｏＡ−還元酵素）が確認されている。非常に多くのエネルギーを要するエルゴステロール生合成経路は、特にこの酵素によって調節され、この酵素はそれに対応してエルゴステロールによるフィードバック阻害のようなさまざまな調整メカニスムの影響下にある。プレスクアレン経路およびポストスクアレン経路は、チモステロールの合成まで、酵母と哺乳類細胞で同じ方法で進む。チモステロールからエルゴステロールまたはコレステロールまでのダウンストリームの区別は、以下のように説明されている。酵母細胞では、チモステロールがＣ２４−メチル基転移酵素によってフェコステロールに、続いてデルタ７−デルタ８−異性化酵素によってエピステロールに、デルタ５−不飽和化酵素によってエルゴスタ−５，７，２４（２８）−トリエノールに、デルタ２２−不飽和化酵素によってエルゴスタ−５，７，２２，２４（２８）−テトラエノールに、および最後にデルタ２４−還元酵素によってエルゴステロールに変換される。哺乳類細胞では、チモステロールがデルタ７−デルタ８−異性化酵素によってコレスタ−７，２４−ジエノールに、デルタ５−不飽和化酵素によってコレスタ−５，７，２４−トリエノールに、およびデルタ７−還元酵素によってデスモステロールに、および最後にステロール−デルタ５−不飽和化酵素によってコレステロールに変換される。その際最後に最後に挙げた酵素は、コレスタ−７，２４−ジエノールによってラトステロールへ、およびコレスタ−５，７，２４−トリエノールによって７−デヒドロコレステロールへ反応することができる。他方ラトステロールは、デルタ５−不飽和化酵素によって７−デヒドロコレステロールに反応することができる。それに対して後者はデルタ７−還元酵素によってコレステロールへと反応する。
【０００８】
ヒト膜タンパク質の一例がセロトニントランスポーター（ＳＥＲＴ）である。これはＮａ＋／Ｃｌ−依存性神経伝達物質トランスポーターのファミリーであり、このファミリーはシナプス間隙からの生体アミンをシナプス前の神経終末に再び戻すことに責任を負っている。このファミリーのその他の構成員はノルアドレナリン、ドーパミン、コリン、グリシンおよびγ−アミノ酪酸のためのトランスポーターである。セロトニントランスポーターは、高い臨床重要性を備えた多くの抗うつ剤の薬理学的な標的分子である。ＳＥＲＴを標的として持つ抗うつ剤は、２つの主要グループに区分される：１つはイミプラミン、デシミプラミン、クロミプラミンのような三環系作用物質分子でありもう１つはＳＳＲＩ（選択的セロトニン再取り込み阻害薬）である。後者のグループには、パロキセチン、フルオキセチン、セルトラリンおよびシタロプラムなどの作用物質が入る。
【０００９】
ＳＥＲＴはこれまでヒト、ラット、マウス、ウシおよびキイロショウジョウバエの組織にクローン化されてきた。ＳＥＲＴは、すべての流通しているシステム、つまり大腸菌  および酵母Ｐｉｃｈｉａ  Ｐａｓｔｏｒｉｓ中、昆虫細胞中、さまざまな細胞株、例えばＣＯＳ−Ｉ細胞、ＢＨＫ細胞、Ｈｅｌａ細胞、およびＨＥＫ細胞などで発現する。酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ中でのＳＥＲＴの発現は知られていない。機能的な発現は、これまで哺乳類細胞株中、および昆虫細胞中で成功したが、大腸菌中またはＰｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ中では成功していない。ＳＥＲＴは非相同または過剰発現に関して極めて困難なタンパク質である。この困難さは、セロトニントランスポーターのタンパク質を包囲する膜中のコレステロール依存と、タンパク質の正しい折りたたみにとってのグリコシル化の重要性とによって生じる。セロトニントランスポーターの活性は、コレステロールが膜中に存在する場合にのみ証明できる。おそらくこのステロールは、この活性にとって最適なＳＥＲＴのコンフォメーション状態を誘導する。従来から、コレステロールの膜中での欠如が他のステロールとの置換によって補われることはできないと推測されている。ＳＥＲＴにとってのコレステロールの重要性という理由から、なぜ機能的発現が大腸菌中でこれまで失敗したのかは明らかであると思われる。ウェスタンブロット法による実験で、Ｔａｔｅらが非特許文献２でｒＳＥＲＴがＰｉｃｈｉａ  Ｐａｓｔｏｒｉｓ中でグリコシル化するが、機能的に発現しないことを示している。酵母中のコレステロール欠如がその原因であることが推測される。
【００１０】
非特許文献３および特許文献２は、コレステロールを生成する酵母について記述されている。特許文献３から、他の関連において酵母をベースとしたシステムがスクリーニング方法への使用で公知である。
【００１１】
改変した有機体、例えば酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの株はコレステロールまたは前駆物質を合成する能力を持っており、この前駆物質はコレステロールの欠如をセロトニントランスポーターに関して補償することができ、このタンパク質の非哺乳類中での機能的発現をはじめて可能にするのではないかと思われる。もし機能的に発現するなら、そのような有機体は「バイオアッセイ」開発の基礎として使用することができるであろう。この「バイオアッセイ」を使用して、さまざまな材料グループ、新しい、薬理学的に関連する作用物質をセロトニントランスポーターのために「スクリーニング」することで確認することができるであろう。さらに、そのような酵母株はコレステロールに依存した他の膜タンパク質の機能的発現のために使用することができるだろう。コレステロール依存が証明された、または推測されるヒト膜タンパク質のリストは長く、絶えず増大している。コレステロール依存のタンパク質の発生または推移に伴って生じる病気および感染のリストも、同様に長い。このタンパク質の発現プラットフォームとして適切なシステムは、従って最大限の価値があると考えられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】ＷＯ０３／０６４６５０
【特許文献２】ＷＯ２００５／１２１３１  Ａ
【特許文献３】ＵＳ２００５／００５４１０８Ａ１
【特許文献４】ＷＯ０３／０６４６５０Ａ１
【特許文献５】ＵＳ５，７５９，８０１
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｗｉｌｄｔ，  Ｓ．，  Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，  Ｔ．  Ｕ．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ（２００５）３：１１９〜１２８ページ
【非特許文献２】Ｔａｔｅ，  Ｃ．  Ｇ．，  Ｈａａｓｅ，  Ｊ．，  Ｂａｋｅｒ，  Ｃ．，  Ｂｏｏｒｓｍａ，  Ｍ．，  Ｍａｇｎａｎｉ，  Ｆ．，  Ｖａｌｌｉｓ，  Ｙ．，  及び  Ｗｉｌｌｉａｍｓ，  Ｄ．  Ｃ．  Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ（２００３）１６１０、１４１〜１５３ページ
【非特許文献３】Ｘｕ  ＳＨ，  Ｎｅｓ  ＷＤ，  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．（１９８８）１５５（１）：５０９〜１７ページ
【非特許文献４】Ｊａｃｏｂｓ  ＢＬ，  Ａｚｍｉｔｉａ  ＥＣ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｖ（１９９２）７２，  １６５〜２２９ページ
【非特許文献５】Ｙａｎｉｓｃｈ−Ｐｅｒｒｏｎ，  Ｃ，  Ｖｉｅｉｒａ，  Ｊ．，  Ｍｅｓｓｉｎｇ，  Ｊ．  Ｇｅｎｅ（１９８５）３３（１），  １０３〜１１９ページ
【非特許文献６】Ｃ．  Ｌａｎｇ，  Ａ．Ｃ．  Ｌｏｏｍａｎ．  Ａｐｐｌ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ．（１９９５）４４：１４７〜１５６ページ
【非特許文献７】Ｓｅｒｒａｎｏら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．，  １５７：５３３〜５４４ページ（１９８８）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
従って本発明の根底には、哺乳類膜タンパク質、特にヒト膜タンパク質をその中で効率的で簡単に機能的に発現させることが可能な非哺乳類有機体、特に、微生物を作り出すという技術的問題がある。
【００１５】
本発明の根底にはさらに、簡単で効率的な方法で哺乳類膜タンパク質、特にヒト膜タンパク質のアゴニストまたはアンタゴニストに従って物質または物質ライブラリーをスクリーニングすることを可能にする手段を作り出すという別の技術的問題がある。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
この技術的問題を解決するために、本発明は分離された、遺伝的に改変された、生きている非哺乳類有機体が提示される。この有機体は野生型に比べて高められたＨＭＧ−ＣｏＡ−還元酵素活性と、野生型に比べて低められたＣ２４−メチル基転移酵素および／またはデルタ２２−不飽和化酵素活性を持つ有機体であり、その際この有機体は野生型に比べて高められたデヒドロコレステロール−デルタ７−還元酵素活性を備えている。
【００１７】
本発明は、哺乳類膜タンパク質の機能的発現、すなわち酵素の膜タンパク質活性を促進または初めて可能にする、折りたたみ内での発現のためには、コレステロールの存在が有用であるかまたは必要であるだけでなく、むしろ同じ成果がすでにデスモステロールの存在によって達成可能であるという驚くべき認識に基づいている。加えて、実際はデスモステロールが有機体の（原形質）膜内に局在していることが示される。つまりこれは非哺乳類有機体を作り出し、この有機体は膜中、特に形質膜中で野生型と比べて含有量が高められたデスモステロール、および必要に応じて以下にさらに説明されているように含有量が高められたコレステロールを備えている。本発明により、最終的に哺乳類膜タンパク質、特にヒト膜タンパク質が非哺乳類有機体中、例えば酵母中で、機能的に非相同に発現可能であることが、この有機体が追加的に膜タンパク質を発現するために１つの遺伝子を転換されることで達成される。膜タンパク質は、これによってより多くの量がより簡単に、安価な方法で機能的に産生されることが可能である。このことは、さまざまな方法でさらに利用することができる。製造目的の合成、構造的および／または機能的な研究のためのほかに、本発明による有機体は、例えば（機能的な）膜タンパク質に結合する物質を、例えばスクリーニングによって同定するために使用することができる。本発明による有機体は従って、有用な任意の膜タンパク質、例えばヒトのような哺乳類からの形質膜タンパク質を機能的に合成するための、およびそのような膜タンパク質のアゴニストおよび／またはアンタゴニストを発見するための万能の手段である。本発明は従って製薬に役立つ物質を発見するための手段として特別な意味を持つ。
【００１８】
ＨＭＧ−ＣｏＡ−還元酵素活性が高められるよう有機体の遺伝子が組み換えられることにより、チモステロールの産生が高められる。Ｃ２４−メチル基転移酵素−および／またはデルタ２２−不飽和化酵素活性が、好ましくは両方低められるよう有機体の遺伝子が組み換えられることにより、エルゴステロールの生合成がブロックされるかまたは低減され、およびその代わりにそうでなくとも有機体内に存在するデルタ７−デルタ８−異性化酵素およびデルタ５−不飽和化酵素の活性により、導入されたデルタ７−還元酵素活性と共に、チモステロールの反応がコレスタ−７−２４−ジエノールおよびコレスタ−５，７，２４−トリエノールによってデスモステロールへ触媒される。
【００１９】
本発明の一発展形態では、有機体が追加的に野生型と比べて高められたデヒドロコレステロール−デルタ２４−還元酵素活性を備えていることが企図されてよい。それによってさらに、デスモステロールからコレステロールへの変換だけでなくデスモステロール−前駆体コレスタ−７，２４−ジエノールおよびコレスタ−５，７，２４−トリエノールからコレステロール前駆体ラトステロールおよび７−デヒドロコレステロールへの変換も行われる。
【００２０】
さらに好ましくは、有機体が野生型と比べて高められたスクアレン−エポキシダーゼ−および／またはラノステロール−デメチラーゼ活性を備えている。それによってスクアレンからのチモステロールの生合成が促進され、およびそれゆえにまたデスモステロールまたはコレステロールの産生も促進される。
【００２１】
非哺乳類有機体として、基本的にそれぞれ任意の有機体が考えられる。有機体は特にＢａｃｉｌｌｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ、ＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒおよびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属の細菌から構成されるグループから選ばれた原核有機体、またはＣｒｙｐｔｉｓｔａ、Ｃｈｌｏｒｏｍｏｎａｄｏｐｈｙｃｅａｅ、Ｘａｎｔｈｏｐｈｙｃｅａｅ、Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ、Ｃｈｒｙｓｏｐｈｙｔａ、Ｂａｃｉｌｌａｒｉｏｐｈｙｔａ、Ｐｈａｅｏｐｈｙｔａ、Ｒｈｏｄｏｐｈｙｔａ、Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ、Ｈａｐｔｏｐｈｙｔａ、Ｃｒｙｐｔｉｓｔａ、Ｅｕｇｌｅｎｏｚｏａ、Ｄｉｎｏｚｏａ、Ｃｈｌｏｒａｒａｃｈｎｉｏｐｈｙｔａ属の海藻、酵母、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉ、Ｍａｍｅｓｔｒａ  ｂｒａｓｓｉｃａｅ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａから構成される昆虫細胞、並びにＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ、Ｆｕｓｉｄｉｕｍ、Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ、Ｍｕｃｏｒ、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  属から構成される菌類、または落花生、ナタネ、キャノーラ、ヒマワリ、サフラワー（紅花）、ケシ、マスタード、大麻、トウゴマ、オリーブ、ゴマ、キンセンカ、ザクロ、マツヨイグサ、ウズイカ、アザミ、野バラ、ヘーゼルナッツ、アーモンド、マカダミア、アボカド、月桂樹、カボチャ、アマ、大豆、ピスタチオ、ルリヂサ、樹木（アブラヤシ、ココナッツまたはクルミ）のような植物、またはトウモロコシ、小麦、ライ麦、カラス麦、ライ小麦、稲、大麦、綿、カサバ、胡椒、マンジュギク、ナス科植物（ジャガイモ、タバコ、ナス、およびトマトなど）ソラマメ属、エンドウ、アルファルファまたは低木植物（コーヒー、カカオ、茶）などの農作物、ヤナギ属並びに多年生の草および飼料農作物から構成されるグループから選ばれた真核有機体であってよい。酵母の場合、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｉｔａｌｉｃｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｅｌｌｉｐｓｏｉｄｅｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｋｌｕｙｖｅｒｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｍａｒｘｉａｎｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｍｉｃｒｏｅｌｌｉｐｓｏｉｄｅｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｍｏｎｔａｎｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｎｏｒｂｅｎｓｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｏｌｅａｃｅｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐａｒａｄｏｘｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐａｓｔｏｒｉａｎｕｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｒｅｔｏｒｉｅｎｓｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｒｏｓｅｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｒｏｕｘｉｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｕｖａｒｕｍ  および  Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｄｅｓ  ｌｕｄｗｉｇｉｉから構成されたグループ、並びにＫ．  ｌａｃｔｉｓ  Ｋ．  ｍａｒｘｉａｎｕｓ  ｖａｒ．  ｍａｒｘｉａｎｕｓ、Ｋ．  ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓのようなＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属の酵母、並びにＣａｎｄｉｄａ  ｕｔｉｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ  および  Ｃａｎｄｉｄａ  ｖｅｒｓａｔｉｌｉｓのようなＣａｎｄｉｄａ属の酵母、並びにＰｉｃｈｉａ  ｓｔｉｐｉｄｉｓ、Ｐｉａｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ  および  Ｐｉｃｈｉａ  ｓｏｒｂｉｔｏｐｈｉｌａのようなＰｉｃｈｉａ属の酵母、並びにＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｄｅｂａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｃｏｐｓｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｄｅｓ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｗｉｃｋｅｒｈａｍｉａ、Ｄｅｂａｙｏｍｙｃｅｓ、Ｈａｎｓｅｎｉａｓｐｏｒａ、Ｋｌｏｅｃｋｅｒａ、Ｚｙｇｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｏｇａｔａｅａ、Ｋｕｒａｉｓｈｉａ、Ｋｏｍａｇａｔａｅｌｌａ、Ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｗｉａ、Ｗｉｌｌｉｏｐｓｉｓ、Ｎａｋａｚａｗａｅａ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｔｏｒｕｌａｓｐｏｒａ、Ｂｕｌｌｅｒａ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ、Ｗｉｌｌｏｐｓｉｓ  および  Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓの各属の酵母および  Ｐｈｙｓｃｏｍｉｔｒｅｌｌａ  またはＣｅｒａｔｏｄｏｎのような蘚苔類から構成されるグループから選ばれてよい。
【００２２】
前述の有機体は、追加的に遺伝子が組み換えられた有機体を作るためのベースまたはツールを形成し、この有機体は哺乳類膜タンパク質を機能的に非相同に発現する。それゆえ、哺乳類の膜タンパク質、特にヒト膜タンパク質、好ましくは形質膜タンパク質のためにコード化された遺伝子により、好ましくは構成的に活性のプロモーターの支配下で有機体が追加的に転換される場合、さらに好ましい。膜タンパク質のためにコード化された遺伝子は、その際基本的に任意であり、および好ましくは以下から構成されるグループまたはファミリーから選ばれる：セロトニントランスポーター−遺伝子、ノルアドレナリン−トランスポーター−遺伝子、ドーパミン−トランスポーター−遺伝子、コリン−トランスポーター−遺伝子、グリシン−トランスポーター−遺伝子、γ−アミノ酸−トランスポーター−遺伝子、５−ｈｙｄｒｏｘｙｔｒｙｐｔａｍｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ３  ｓｕｂｕｎｉｔ  Ｃ、Ｍａｓｔ／ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ８  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｏｌｆａｃｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＭＯＲ２３３−１８、ｇｒｅｅｎ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｏｐｓｉｎ、ｇｌｙｃｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｆｒｉｚｚｌｅｄ  ５  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｄｉｍｅｔｈｙｌａｎｉｌｉｎｅ  ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ  ［Ｎ−ｏｘｉｄｅ  ｆｏｒｍｉｎｇ］、ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ  ｇｅｎｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｔｙｐｅ  １  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｍｕｓｃａｒｉｎｉｃ  ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、Ｃ−Ｃ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  ４、Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ、ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｓｕｂｓｔａｎｃｅ−Ｋ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｐｕｔａｔｉｖｅ  ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ＴＲＡＰ２３０、ｆＭｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｇａｍｍａ−ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ−ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ−６  ｓｕｂｕｎｉｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  （ＧＡＢＡ（Ａ）  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、ｇｌｕｃａｇｏｎ−ｌｉｋｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ５６、ＥＭＲ１  ｈｏｒｍｏｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＣＣＫ−Ｂ／ｇａｓｔｒｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ａｌｐｈａ−２Ｃ−ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、Ｄ１ｂｅｔａ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｐｒｏｂａｂｌｅ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＧＰＲ７２  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｒｅｌａｘｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ａ２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １、１８０ｋＤ、ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ＩＩ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ  ｒ��ｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  １、ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ａｌｐｈａ  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−７  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ９  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｕｎｃ５Ｈ１、ＥＲ  ｌｕｍｅｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｔａｉｎｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２、ＦＧＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １、ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  ＩＢ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｐｒｏｌａｃｔｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｓｐａｎｎｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＴＲＣ８  ｍＲＮＡ、ｆｅｌｉｎｅ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｖｉｒｕｓ  ｓｕｂｇｒｏｕｐ  Ｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＦＬＶＣＲ、ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ａｌｐｈａ／ｂｅｔａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ−ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＤ２００、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｌｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ３、ａｔｒｉａｌ  ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｂ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｇｎａｌ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｌｐｈａ、ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ、ｎｏｎ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  ２１、Ｉ−１  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｐｒｏｂａｂｌｅ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＧＰＲ３７  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｖｅｒｙ  ｌａｒｇｅ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １、Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＨＥ６  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｄｅｌｔａ−１  ｓｕｂｕｎｉｔ、ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇａｍｍａ−１、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｏｌｆａｃｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＭＯＲ４２−１、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｃａｌｃｉｕｍ−ｓｅｎｓｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ３、ａｕｔｏｃｒｉｎｅ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｃｌａｓｓ  Ｉ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｎｏｇｏ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、５−ｈｙｄｒｏｘｙｔｒｙｐｔａｍｉｎｅ  ６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒ  ｍｅｍｂｅｒ  １Ｂ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｋｉｄｎｅｙ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｅｇｇ  ｊｅｌｌｙ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｐｕｔａｔｉｖｅ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｓｏｒｔｉｌｉｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ−１  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｃ−ｔｙｐｅ  ｌｅｃｔｉｎ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−２、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｏｌｆａｃｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒ  ｍｅｍｂｅｒ  ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｃａｄｈｅｒｉｎ  ＥＧＦ  ＬＡＧ  ｓｅｖｅｎ−ｐａｓｓ  Ｇ−ｔｙｐｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２、Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ、ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ、Ｗ、ｆｏｌａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｏｌｆａｃｔｏｒｙ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＭＯＲ２１７−１、ｇｕａｎｉｎｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｌｉｋｅ  １、ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒ  ｍｅｍｂｅｒ  ２１  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｎｅｕｒｏｎａｌ  ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ａｌｐｈａ−７  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｃａｔｉｏｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｍａｎｎｏｓｅ−６−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１７  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｇａｍｍａ−ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ  ｔｙｐｅ  Ｂ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｓｕｂｕｎｉｔ  ２  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒ  ｍｅｍｂｅｒ  １８  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、Ｃ、ｇｒｏｕｐ  ５、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＭｒｇＧ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｌｙｍｐｈａｔｉｃ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＬＹＶＥ−１、ｐｕｔａｔｉｖｅ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  ＩＩＩ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｇｏｌｇｉ  ＳＮＡＰ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｍｅｍｂｅｒ  １、ｈｉｇｈ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｅｐｓｉｌｏｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ−ｓｕｂｕｎｉｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−４  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ−２  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−１、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｐ２Ｙ  ｐｕｒｉｎｏｃｅｐｔｏｒ  ３  （Ｐ２Ｙ３）  （Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）、ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒ  ｍｅｍｂｅｒ  １１Ａ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｌｙｍｐｈａｔｉｃ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＬＹＶＥ−１、ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＰＩＬＲｂｅｔａ、ｅｐｈｒｉｎ  ｔｙｐｅ−Ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ７  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｐｒｏｂａｂｌｅ  ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ  Ａ２  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｓｏｆｏｒｍ  ｂｅｔａ  −ｈｕｍａｎ、ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ、ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ、Ｃ、ｉｓｏｆｏｒｍ  ２  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ＡＴＰ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｃａｓｓｅｔｔｅ、ｓｕｂ−  Ｂ、Ｐｕｔａｔｉｖｅ  ＡＴＰ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｃａｓｓｅｔｔｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  Ｃ１３、ＡＴＰ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｃａｓｓｅｔｔｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、ＡＴＰ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｃａｓｓｅｔｔｅ、ｓｕｂ−  Ａ  （ＡＢＣ１）、ＡＴＰ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｃａｓｓｅｔｔｅ、ｓｕｂ  Ｂ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２、ＡＴＰ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｃａｓｓｅｔｔｅ、ｓｕｂ−  Ｄ、ＡＴＰ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｃａｓｓｅｔｔｅ、ｓｕｂ−  Ａ、ＡＴＰ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｃａｓｓｅｔｔｅ、ｓｕｂ−  Ｇ、Ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ２１  （ｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｉｏｎ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ）、ｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｉｏｎ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ３、ｓｏｌｕｔｅ
ｃａｒｒｉｅｒ  ２、（ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｄ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ）、ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ７、（ｃａｔｉｏｎｉｃ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、ｙ＋  Ｓｙｓｔｅｍ）、ＨＣＡＴ−２Ａ、ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ６  （ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、ｇｌｙｃｉｎｅ）、ｓｏｄｉｕｍ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｄｉｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ２６、ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ２１、ＵＤＰ  Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、ｎｅｕｔｒａｌ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  Ｂ（０）、ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ２、ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｄ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ２９  （ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ）、ｍｅｍｂｅｒ  １、ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ２６、ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  １０  （ｓｏｄｉｕｍ／ｂｉｌｅ  ａｃｉｄ  ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ）、Ｈ＋／ｐｅｐｔｉｄｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ９、ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ３０、ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ２５、ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  １９  （ｆｏｌａｔｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ）、ＵＤＰ−ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ／ＵＤＰ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  １６  （ｍｏｎｏｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ）、ｍｅｍｂｅｒ  ４、ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、ｓｏｄｉｕｍ／ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  １、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  ｔｈｙｍｉｃ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｏ−ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ＴＳＣＯＴ  ｍＲＮＡ、ｃｈｒｏｍａｆｆｉｎ  ｇｒａｎｕｌｅ  ａｍｉｎｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、ａｃｅｔｙｌ−ｃｏｅｎｚｙｍｅ  Ａ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、ｈｉｇｈ  ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｃｈｏｌｉｎｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、ｏｒｇａｎｉｃ−ｃａｔｉｏｎ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ｌｉｋｅ、ｍｅｍｂｒａｎｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ｓｕｂｕｎｉｔ  Ｂ０、＋ＡＴ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｎｏｎ−ｇｒｅｅｎ  ｐｌａｓｔｉｄ  ｔｒｉｏｓｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｐｅｐｔｉｄｅ／ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、Ｒｈ  ｔｙｐｅ  Ｂ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ、ｓｏｄｉｕｍ／ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｅｘｃｈａｎｇｅｒ  ６、ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ３９  （ｚｉｎｃ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ）、ｍｅｍｂｅｒ  ４、ｐｅｒｏｘｉｓｏｍａｌ  Ｃａ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ、Ｋ−ＣＬ  ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ４、ａｎｉｏｎ  ｅｘｃｈａｎｇｅｒ、ｓｏｄｉｕｍ／ｉｏｄｉｄｅ  ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、Ｃｈｌｏｒｉｄｅ  ａｎｉｏｎ  ｅｘｃｈａｎｇｅｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｓｏｄｉｕｍ／ｐｏｔａｓｓｉｕｍ／ｃａｌｃｉｕｍ  ｅｘｃｈａｎｇｅｒ  ３  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  （Ｎａ  （＋）  ／Ｋ  （＋）  ／Ｃａ  （２＋）  −ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ３）、ｓｏｄｉｕｍ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ２０  （ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ、ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ８  （ｓｏｄｉｕｍ−ｃａｌｃｉｕｍ  ｅｘｃｈａｎｇｅｒ）、ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  １１  （ｓｏｄｉｕｍ／ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｙｍｐｏｒｔｅｒｓ）、ｗｅａｋｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｍｅｔａｌ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ＡＴＸ２、ｉｒｏｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ＩＲＥＧ１、ｐｒｏｂａｂｌｅ  ｌｏｗ−ａｆｆｉｎｉｔｙ  ｃｏｐｐｅｒ  ｕｐｔａｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ９  （ｓｏｄｉｕｍ／ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｅｘｃｈａｎｇｅｒ）、ｉｓｏｆｏｒｍ  ７、Ｖｏｌｔａｇｅ−ｇａｔｅｄ  ｓｏｄｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ  ａｌｐｈａ  ｓｕｂｕｎｉｔ、ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ  ＴＡＳＫ−４、ｓｍａｌｌ  ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ  ｃａｌｃｉｕｍ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２、ｌｏｎｇ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｃｈａｎｎｅｌ  ２、ｅｔｈｅｒ−ａ−ｇｏ−ｇｏ−ｌｉｋｅ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ  １、ｖｏｌｔａｇｅ−ｇａｔｅｄ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｓｏｄｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ、ｎｏｎｖｏｌｔａｇｅ−ｇａｔｅｄ  １、ｄｅｌｔａ、ｖｏｌｔａｇｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｎ−ｔｙｐｅ  ｃａｌｃｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ、ａｑｕａｐｏｒｉｎ、ｃａｌｃｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ、ｖｏｌｔａｇｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ、ａｌｐｈａ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｃａｔｉｏｎ  Ｃｈａｎｎｅｌ、ｒｙａｎｏｄｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ３、ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｃａｔｉｏｎ  Ｃｈａｎｎｅｌ、ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ  ｓｕｂ  Ｋ、ｃｙｃｌｉｃ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｇａｔｅｄ  Ｃｈａｎｎｅｌ  ａｌｐｈａ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  １  ｍＲＮＡ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｃｈｌｏｒｉｄｅ  Ｃｈａｎｎｅｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ３  （Ｃ１Ｃ−３）、ｃａｌｃｉｕｍ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｃｈｌｏｒｉｄｅ  ｃｈａｎｎｅｌ−２、ｌｅｎｓ  ｆｉｂｅｒ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｓｐｅｒｍ  ｉｏｎ  Ｃｈａｎｎｅｌ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｓｈａｗ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒａｗｌ、ｄｉｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｌ−ｔｙｐｅ、ｃａｌｃｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ  ａｌｐｈａ−２／ｄｅｌｔａ  ｓｕｂｕｎｉｔｓ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｖｏｌｔａｇｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｎｉｏｎ  Ｃｈａｎｎｅｌ  ２、ｍｉｄ−１−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｃｈｌｏｒｉｄｅ  Ｃｈａｎｎｅｌ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ  ｓｕｂｕｎｉｔ  （Ｓｌａｃｋ）、ＡＴＰａｓｅ、Ｃａ＋＋  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ、ｆａｓｔ  ｔｗｉｔｃｈ  １、ｐｌａｓｍａ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｃａｌｃｉｕｍ−ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ、ｖａｃｕｏｌａｒ  ｐｒｏｔｏｎ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｎｇ  ＡＴＰａｓｅ  １１６  ｋＤａ  ｓｕｂｕｎｉｔ  Ａ、ｓｏｄｉｕｍ／ｐｏｔａｓｓｉｕｍ−ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ  ＡＴＰａｓｅ  ａｌｐｈａ−３  ｃｈａｉｎ、ｃｏｐｐｅｒ−ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ  ＡＴＰａｓｅ  １  （Ｃｏｐｐｅｒ  ｐｕｍｐ  １）  （Ｍｅｎｋｅｓ  ｄｉｓｅａｓｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、ｐｒｏｂａｂｌｅ  ｃａｔｉｏｎ−ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ  ＡＴＰａｓｅ  ３  （Ｆｒａｇｍｅｎｔ）、ｖａｃｕｏｌａｒ  ＡＴＰ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｓｕｂｕｎｉｔ  Ｓ１  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ−ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ  ＡＴＰａｓｅ  ＩＤ、ｓｏｄｉｕｍ／ｐｏｔａｓｓｉｕｍ−ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ  ＡＴＰａｓｅ  ｂｅｔａ−３  ｃｈａｉｎ、ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ、ｐｒｏｔｅｉｎ−ｔｙｒｏｓｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ、ｎｏｎ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｐｅ  ５、ｐｕｔａｔｉｖｅ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ＧＴＰａｓｅ  （Ｆｒａｇｍｅｎｔ）、ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  （ｂｅｔａ−ｕｒｏｇａｓｔｒｏｎｅ）、ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ−ｌｉｋｅ  １、ｗｅａｋｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＲＡＳ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １、ｄｉｏｘｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ、ｃＡＭＰ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ３’，５’−ｃｙｃｌｉｃ  Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  ４Ａ、ＭＡＰ−ｋｉｎａｓｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｄｅａｔｈ  ｄｏｍａｉｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｉｓｏｆｏｒｍ  ｇ、ｒａｓ  ｇｕａｎｉｎｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｆａｃｔｏｒ  ２  （Ｆｒａｇｍｅｎｔ）、ＮＡＤＰＨ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＦＭＮ  ａｎｄ  ＦＡＤ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ、ｄｏｌｉｃｈｙｌ−ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ−−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ６３  ｋＤａ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ  ｇｌｙｃａｎ、ｃｌａｓｓ  Ｂ、Ａ  ｋｉｎａｓｅ  （ＰＲＫＡ）  ａｎｃｈｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １３、８５  ｋＤａ  ｃａｌｃｉｕｍ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ａ２、Ａ−Ｒａｆ  ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｐｅｐｔｉｄｙｌｐｒｏｌｙｌ  ｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ａ  （ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ  Ａ）、Ｒａｓ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｇ���Ｐ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ−１−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  １、ＷＮＴ−１０Ａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＡＤＰ−ｒｉｂｏｓｙｌａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ−ｌｉｋｅ  １、ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｇｕａｎｉｎｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｆａｃｔｏｒ、ｐｒｏｔｅｉｎ−ｔｙｒｏｓｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ、ｎｏｎ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ、ｃａｌｃｉｕｍ／ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｔｙｐｅ  ＩＶ  ｃａｔａｌｙｔｉｃ  ｃｈａｉｎ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ−４−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ５−ｋｉｎａｓｅ、ｔｙｐｅ  ＩＩ、ｇａｍｍａ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ５２  ｋＤａ  ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  （ｐ５８ＩＰＫ−ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）  （５８  ｋＤａ  ｉｎｔｅｒｆｅ−ｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ−ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）  （Ｐ５２ｒＩＰＫ）  （Ｄｅａｔｈ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４）、ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ、ＳＨ２  ｄｏｍａｉｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ａｎｃｈｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＲＨＯ−ＧＡＰ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃ１、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ  ３−ｋｉｎａｓｅ  ｄｅｌｔａ  ｃａｔａｌｙｔｉｃ  ｓｕｂｕｎｉｔ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｃａｌｃｉｕｍ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ  １  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  （Ｍａｊｏｒ  ｇａｓｔｒ
ｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＧＡ７３３−２）  （Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｔｉｇｅｎ）  （Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）  （ＥＧＰ）  （Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ）  （ＫＳＡ）  （ＫＳ  １／４  ａｎｔｉｇｅｎ）、ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ＲＯＳ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｍｅｍｂｒａｎｅ−ｂｏｕｎｄ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｉｔｅ  ２  ｐｒｏｔｅａｓｅ、ｉｎｏｓｉｔｏｌ  ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ５−ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ、ｍｉｃｒｏｓｏｍａｌ  ｓｉｇｎａｌ  ｐｅｐｔｉｄａｓｅ  ２５  ｋＤａ  ｓｕｂｕｎｉｔ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＡＭＰ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｇａｍｍａ  ｓｕｂｕｎｉｔ、ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｌｉｇａｎｄ  ｓｕｐｅｒ  ｍｅｍｂｅｒ  ８、ｓｔｅｒｏｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｅｌｅｒａｅｎｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｌｅａｖａｇｅ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅ、ｓｅｒｉｎｅ  ３、ｉｓｏｆｏｒｍ  ３、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｓｅｒ−Ｔｈｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｍｙｏｔｏｎｉｃ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ、ｍｅｍｂｒａｎｅ−ｂｏｕｎｄ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ｓｉｔｅ−１  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ５２  ｋＤａ  ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  （ｐ５８ＩＰＫ−ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）  （５８  ｋＤａ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ−ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）  （Ｐ５２ｒＩＰＫ）  （Ｄｅａｔｈ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４）、ＰＡＳ−ｋｉｎａｓｅ、ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ２Ｂ  ｃａｔａｌｙｔｉｃ  ｓｕｂｕｎｉｔ、ａｌｐｈａ  ｉｓｏｆｏｒｍ、ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＣＢＬ、ｒａｂ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ａ  ２、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｒｈｏ−ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２  （Ｒｈｏ−ｇｕａｎｉｎｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｅｘｃｈａｎｇｅ  ｆａｃｔｏｒ）  （ＲｈｏＧＥＦ）  （ＲＩＰ２）、ｐｒｅ−ｍＲＮＡ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ＡＴＰ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  ｈｅｌｉｃａｓｅ  ＰＲＰ１６、ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ３ｂ、ｓｕｂｕｎｉｔ  １、１５５ｋＤ、ＳＰ１１０  ｎｕｃｌｅａｒ  ｂｏｄｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｉｓｏｆｏｒｍ  ａ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＳＭＣ２  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｏｆ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ  ２−ｌｉｋｅ  １  （ｙｅａｓｔ）、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  （ＤＮＡ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ）、ｔｈ��ｔａ、ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  Ｉ／Ｂ、ｎｕｒｉｍ  （ｎｕｃｌｅａｒ  ｅｎｖｅｌｏｐｅ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｎｕｃｌｅａｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ  ４、ｗｅａｋｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ、ａｒｇｉｎｉｎｅ／ｓｅｒｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ４、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  １−ａｌｐｈａ  １  （ＥＦ−１−ａｌｐｈａ−１）  （Ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  １  Ａ−１）  （ｅＥＦｌＡ−１）  （Ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  Ｔｕ）  （ＥＦ−Ｔｕ）、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ６ＯＳ  ｒｉｂｏｓｏｍａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌ７、ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ  ＩＩ  ａｌｐｈａ  ｐｕｔａｔｉｖｅ、ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ  ｏｆ  ｋａｐｐａ  ｌｉｇｈｔ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｇｅｎｅ  ｅｎｈａｎｃｅｒ  ｉｎ  Ｂ−ｃｅｌｌｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、ｅｐｓｉｌｏｎ、ｓｏｌｕｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ  ２５  （ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｃａｒｒｉｅｒ）、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  ｂ−５６１、ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｓｕｂｕｎｉｔ  Ｉ、ｓｕｃｃｉｎｙｌ−ＣｏＡ  ｌｉｇａｓｅ  ［ＧＤＰ−ｆｏｒｍｉｎｇ］  ｂｅｔａ−ｃｈａｉｎ、ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  （Ｆｒａｇｍｅｎｔ）、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＯＸＡ１、ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  （ＯＸＡ１−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）  （ＯＸＡ１Ｈｓ）、ＮＡＤＨ−Ｕｂｉｑｕｉｎｏｎｅ  Ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  ５、ｔｒｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｅｎｚｙｍｅ  ｂｅｔａ  ｓｕｂｕｎｉｔ、ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｍｅｔｈｙｌｃｒｏｔｏｎｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ｂｅｔａ  ｃｈａｉｎ、ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  ｃ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ＩＩＩ、ｐｕｔａｔｉｖｅ  ＡＴＰ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＣＩｐ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ  ｓｕｂｕｎｉｔ、ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ＮＡＤＨ−ｕｂｉｑｕｉｎｏｎｅ  ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ３９  ｋＤａ  ｓｕｂｕｎｉｔ、ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｅｃｏｎｄ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｏｆ  ｃａｓｐａｓｅ、ｉｓｏｆｏｒｍ  Ｓｍａｃ−ｄｅｌｔａ、ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＮＡＤＨ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ５、ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｉｍｐｏｒｔ  ｉｎｎｅｒ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｓｅ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ＴＩＭ２３、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  ｂ、ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｍｐｏｒｔ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  ｃ  ｏｘｉｄａｓｅ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ＩＩ、ｓｈｏｒｔ  ｃｈａｉｎ  ３−ｈｙｄｒｏｘｙａｃｙｌ−ＣｏＡ  ｄｅｈｙｄ��ｏｇｅｎａｓｅ、ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ６０  ｋＤａ  ｈｅａｔ  ｓｈｏｃｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  （Ｈｓｐ  ６０）、Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  ｃ１、ｈｅｍｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｐｒｏｔｏｈｅｍｅ  ＩＸ  ｆａｒｎｅｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｇｌｙｃｅｒｏｌ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ、ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｈｏｍｅｏｂｏｘ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｈｏｘ−Ａ７、ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ＡＴＲＸ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ＩＩ、ｉ、ｉｓｏｆｏｒｍ  １、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｇｅｎｅｒａｌ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ＩＩＩＣ、Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  １  （ａｌｐｈａ  ｓｕｂｕｎｉｔ、２２０ｋＤ  ）、ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ＳＲＣＡＰ、ｓｔｅｒｏｌ／ｒｅｔｉｎｏｌ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ、ａｌｋａｌｉｎｅ  ｐｈｙｔｏｃｅｒａｍｉｄａｓｅ、ｃａｒｎｉｔｉｎｅ  Ｏ−ｐａｌｍｉｔｏｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  Ｉ、ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｌｉｖｅｒ  ｉｓｏｆｏｒｍ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｂＡ８４Ｎ７．１  （ｎｏｖｅｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｋｉｎａｓｅ  ｅｔａ  （ＤＧＫＨ）  ）、１−ａｃｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏｌ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｅｐｓｉｌｏｎ、ｍａｎｎｏｓｅ−Ｐ−ｄｏｌｉｃｈｏｌ  ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｄｅｆｅｃｔ  １  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｓｔｅｒｏｌ  Ｏ−ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ２、ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｌ１  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ−ｓｔｅｒｏｌ  ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ、ｍｏｄｅｒａｔｅｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃ  ａｃｉｄ  ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｍＲＮＡ、ｗｅａｋｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ａ２  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｓｕｂｕｎｉｔ  Ｂ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ、ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ−ｇｌｙｃａｎ  ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、ｃｌａｓｓ  Ｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｓｅｒｉｎｅ  ｐａｌｍｉｔｏｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  １、ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  Ｉ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  １−ａｃｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏｌ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｇａｍｍａ  （１−ＡＧＰ  ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ３）  （１−ＡＧＰＡＴ  ３）  （Ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｉｃ  ａｃｉｄ  ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ−ｇａｍｍａ）  （ＬＰＡＡＴ−ｇａｍｍａ）  （１−ａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｏ−ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ３）、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｔｒｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｌｉｐａｓｅ、ｇａｓｔｒｉｃ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  （Ｇａｓｔｒｉｃ  ｌｉｐａｓｅ）  （ＧＬ）、３−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ−ｃｏｅｎｚｙｍｅ  Ａ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ、ｃｅｒａｍｉｄｅ  ｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ｄｏｌｉｃｈｙｌ−Ｐ−Ｍａｎ：Ｍａｎ  （５）  ＧＩｃＮＡｃ  （２）  −ＰＰ−ｄｏｌｉｃｈｙｌ  ｍａｎｎｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌ−ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ  ｄｅ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌａｓｅ、ｄｏｌｉｃｈｙｌ−ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ６７  ｋＤａ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｋｉｎａｓｅ、ｚｅｔａ、ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ａｍｉｄｅ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｌｏｎｇ−ｃｈａｉｎ−ｆａｔｔｙ−ａｃｉｄ−ＣｏＡ  ｌｉｇａｓｅ  ６  （ＬＡＣＳ  ６）、ｆａｒｎｅｓｙｌ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  （ＦＰＰ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ）、ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎ  Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  ２、ｎｅｕｔｒａｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  （ｎｅｕｔｒａｌ  ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅ）、ｅｓｔｒａｄｉｏｌ  １７  ｂｅｔａ−ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  ７、ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌ  ｉｎｏｓｉｔｏｌ  ｇｌｙｃａｎ  ｃｌａｓｓ  Ｓ、２４−ｄｅｈｙｄｒｏｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｏｘｙｓｔｅｒｏｌ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １、１−ａｃｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏｌ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｂｅｔａ、ｍｙｏ−ｉｎｏｓｉｔｏｌ−１  （ｏｒ  ４）  −ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ、ｅｓｔｒａｄｉｏｌ  １７  ｂｅｔａ−ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ７、
１−ａｃｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏｌ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｂｅｔａ、ｐｕｔａｔｉｖｅ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｄｅｓａｔｕｒａｓｅ  ＭＬＤ、ＣＤＰ−ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ−ｉｎｏｓｉｔｏｌ  ３−ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ｌｙｓｏｓｏｍａｌ  ａｐｙｒａｓｅ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １、ａｃｙｌ−ｍａｌｏｎｙｌ  ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ、ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ｃｏｎｊｕｇａｔｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ  Ｅ２、ｔｈｙｒｏｉｄ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  （２  ｍｅｍｂｅｒｓ）、ＵＤＰ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ−−ｄｏｌｉｃｈｙｌ−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅｐｈｏｓｐｈｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ−１−ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒ  ａｌｐｈａ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ、３  ｂｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ／ｄｅｌｔａ  ５−−＞４−ｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ｔｙｐｅ  ＩＩ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ａｄｅｎｙｌａｔｅ  ｃｙｃｌａｓｅ  ６、ｉｓｏｆｏｒｍ  ａ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０  ＩＩＤ６、ＧａＩＮＡｃ  ４−ｓｕｌｆｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ＧＰＩ  ｔｒａｎｓａｍｉｄａｓｅ、ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ  ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ／ｋｅｘｉｎ  ｔｙｐｅ  ７、ＮＥＤＤ４−ｌｉｋｅ  ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ  ｌｉｇａｓｅ  １、ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ２、ｋｅｔｏｈｅｘｏｋｉｎａｓ、ｔｅｓｔｉｓ  ｅｃｔｏ−ＡＤＰ−ｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ａｌｋａｌｉｎｅ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ、ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、５，６−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｉｎｄｏｌｅ−２−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｂｉｏｔｉｎ−−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｉｇａｓｅ、ｄｏｌｉｃｈｙｌ−ｄｉｐｈｏｓｐｈｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ｓｑｕａｌｅｎｅ  ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ、ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｐｒｏｔｅａｓｅ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｇｌｙｃｅｒｏｌ  ｋｉｎａｓｅ、ｐｒｏｂａｂｌｅ  ｄｏｌｉｃｈｙｌ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｇｌｃ１Ｍａｎ９Ｇ１ｃＮＡｃ２  ａｌｐｈａ−１，３−ｇｌｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ｇａｍｍａ−ｇｌｕｔａｍｙｌｔｒａｎｓｐｅｐｔｉｄａｓｅ  １  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｅｒｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｌａｓｅ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄａｔｅ  ｃｙｔｉｄｙｌｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ２、ＤＮＡ  ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ＩＩ、ｂｅｔａ  ｉｓｏｚｙｍｅ、ｌｙｓｏｓｏｍａｌ  ａｃｉｄ  Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｍｕｓｃｌｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＤＮａｓｅ  Ｉ−ｌｉｋｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｋｙｎｕｒｅｎｉｎｅ  ３−ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｐｅｐｔｉｄｙｌｇｌｙｃｉｎｅ  ａｌｐｈａ���ａｍｉｄａｔｉｎｇ  ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ、Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｙｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ＧＰＩ１、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｃＧＭＰ−ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ３，５−ｃｙｃｌｉｃ  Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  Ａ  （Ｃｙｃｌｉｃ  ＧＭＰ  ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  Ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  Ａ）  （ＣＧＩ−ＰＤＥ  Ａ）、ｂｅｔａ−１，４  ｍａｎｎｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ｃｈｏｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  １、ｍｏｄｅｒａｔｅｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ  ｔａｒｇｅｔ  ｅｓｔｅｒａｓｅ、ＣＡＡＸ  ｐｒｅｎｙｌ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  １  ｈｏｍｏｌｏｇ、ｐａｎｔｏｔｈｅｎａｔｅ  ｋｉｎａｓｅ  ｌａｌｐｈａ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ＶＩ、Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０  ３９Ａ１、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ  ３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ、ｌｉｖｅｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｂｅｔａ−１，４  Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ＣＡＡＸ  ｐｒｅｎｙｌ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ２、ｂｅｔａ−１，３−ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ−６、ｈｅｘｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ  Ａ、ｃａｒｂｏｎｉｃ  ａｎｈｙｄｒａｓｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｖｉｔａｍｉｎ  Ｋ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｇａｍｍａ−ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ、ｍａｌａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ、ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ、ｍａｎｎｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ｌｏｎｇ  ｆｏｒｍ  ｏｆ  Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ−６−Ｏ−ｓｕｌｆｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ｓｉａｌｉｃ  ａｃｉｄ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｃｅｔｙｌｅｓｔｅｒａｓｅ  ＩＩ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｕｒａｃｉｌ  ＤＮＡ  ｇｌｙｃｏｓｙｌａｓｅ、ｂｅｔａ−ｈｅｘｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ  ｂｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｌ−ｌａｃｔａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  Ｂ  ｃｈａｉｎ  （ＬＤＨ−Ｂ）、ｐｒｏｂａｂｌｅ  ｓｅｒｉｎｅ  ｐｒｏｔｅａｓｅ  ＨＴＲＡ３  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｗｅａｋｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＵＤＰ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ−−ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  １１０  ｋＤａ  ｓｕｂｕｎｉｔ、ｎｅｕｔｒａｌ  ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅ  ＩＩ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｐｕｔａｔｉｖｅ  Ｎ−ａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  Ｃａｍｅｌｌｏ  ２、ｗｅａｋｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＮＡＤＰＨ−ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｐ４５０  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ、ｓｉｒａｉｌａｒ  ｔｏ  ｅｃｔｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ／ｐｈｏｓｐｈｏｄｉｅｓｔｅｒａｓｅ  ５、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ３−ＯＸＯ−５−ａｌｐｈａ−ｓｔｅｒｏｉｄ  ４−ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  ２、ｂｌｏｏｄ  ｐｌａｓｍａ  ｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｃａｒｂｏｘｙｐｅｐｔｉｄａｓｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、���ｙｌｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ＩＩ、ｃａｓｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｉ、ｅｐｓｉｌｏｎ  ｉｓｏｆｏｒｍ、ｓｅｌｅｎｉｄｅ、ｗａｔｅｒ  ｄｉｋｉｎａｓｅ  ２、ｐａｒａｏｘｏｎａｓｅ  ２、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＮＡＤＨ−ｕｂｉｑｕｉｎｏｎｅ  ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ  ＭＬＲＱ  ｓｕｂｕｎｉｔ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＡＤＡＭＴＳ−５  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  （Ａ  ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｎｄ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｗｉｔｈ  ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ  ｍｏｔｉｆｓ  ５）  （ＡＤＡＭ−ＴＳ  ５）  （ＡＤＡＭ−ＴＳ５）  （Ａｇｇｒｅｃａｎａｓｅ−２）  （ＡＤＭＰ−２）  （ＡＤＡＭ−ＴＳ  １１）、ｇａｌａｃｔｏｓｅ−３−Ｏ−ｓｕｌｆｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ｖａｌｙｌ−ｔＲＮＡ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  ２、ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ  Ｈ１、ａｃｅｔｙｌ−ＣｏＡ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ  ２、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ａｌｐｈａ−Ｌ−ｉｄｕｒｏｎｉｄａｓｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＡＤＡＭＴＳ−５  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  （Ａ  ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｎｄ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｗｉｔｈ  ｔｈｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ  ｍｏｔｉｆｓ  ５）  （ＡＤＡＭ−ＴＳ  ５）  （ＡＤＡＭ−ＴＳ５）  （Ａｇｇｒｅｃａｎａｓｅ−２）  （ＡＤＭＰ−２）  （ＡＤＡＭ−ＴＳ  １１）、ｋｕｎｉｔｚ−ｔｙｐｅ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  １  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｐｕｔａｔｉｖｅ  ｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅａｓｅ  ｔｙｐｅ  ２、ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｅｎｚｙｍｅ  Ｅ１  ｈｏｍｏｌｏｇ、ｐｒｅｎｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ  ｌｙａｓｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｄｉｍｅｒｉｃ  ｄｉｈｙｄｒｏｄｉｏｌ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ、ｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ、ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｌｐｈａ−Ｖ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ａｘｏｎｅｒａａｌ  ｄｙｎｅｉｎ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ  （Ｆｒａｇｍｅｎｔ）、ｃｏｐ−ｃｏａｔｅｄ  ｖｅｓｉｃｌｅ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐ２４  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｐｒｏｔｏｃａｄｈｅｒｉｎ  ＡＲＣＡＤＬＩＮ、Ｋｅｒａｔｉｎ、ｔｙｐｅ  Ｉ  ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ、ｎｕｃｌｅａｒ  ｅｎｖｅｌｏｐｅ  ｐｏｒｅ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｇａｍｍａ−ｔｕｂｕｌｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ６、Ｃｌｅｆｔ  ｌｉｐ  ａｎｄ  ｐａｌａｔｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １、Ｓｅｃ６１  ｈｏｍｏｌｏｇ、ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｒｈｏｍｂｏｉｄ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｐｕｔａｔｉｖｅ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ  ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ、ｓｉｇｎａｌ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  （’ｄｏｃｋｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ’）、ＨＬＡ  ｃｌａｓｓ  Ｉ  ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  ａｎｔｉｇｅｎ、Ｂ−８  Ｂ＊０８０１  ａｌｐｈａ  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｗｅａｋｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｐｅｒｅｇｒｉｎｅ、ＨＬＡ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ  ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ  ａｎｔｉｇｅｎ、ｂｅｔａ  ｃｈａ��ｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、Ｋｉｔ  ｌｉｇａｎｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、Ｒｅｔ  ｆｉｎｇｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２、ＡＳＰＰ１  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍ６−ａ、ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｃｏｆａｃｔｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  （ＣＤ４６、ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ｃｒｏｓｓ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ａｎｔｉｇｅｎ）、ｖｅｓｉｃｌｅ  ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１、ｎｅｕｒｅｘｉｎ  ３−ｂｅｔａ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ−３  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ  ２、ＢＣＬ２／ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ  Ｅ１Ｂ  １９−ｋＤａ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２、ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、Ｔ−ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ＣＤ８  ａｌｐｈａ  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｃａｐｉｌｌａｒｙ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｐｒｏｔｅｉｎ−２  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｔｒａｎｓ−ｇｏｌｇｉ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２、ｂａｘ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ−１、ｖａｎｇ−ｌｉｋｅ  １  （ｖａｎ  ｇｏｇｈ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）、ｔｕｂｅｒｏｕｓ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ２  ｉｓｏｆｏｒｍ  ２、Ｐ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｄｏｗｎ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｃｅｌｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｖａｓｃｕｌａｒ  ｃｅｌｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｃｌａｔｈｒｉｎ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｋｅｌｃｈ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２、ｍｙｅｌｏｉｄ／ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｏｒ  ｍｉｘｅｄ−ｌｉｎｅａｇｅ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  （ｔｒｉｔｈｏｒａｘ  ｈｏｍｏｌｏｇ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）、ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ４  ｓｕｐｅｒ、ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ−ａｓｓｏｃｉ
ａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １Ａ、ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ、ｓｙｎａｐｔｏｔａｇｍｉｎ  ＸＩ、ｓｐｉｎｓｔｅｒ−Ｌｉｋｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ、ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ｂｅｔａ  １  ｉｓｏｆｏｒｍ  １Ａ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｗｅａｋｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｐａｔｃｈｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｈｏｍｏｌｏｇ  １、ｐｒｏ−ｎｅｕｒｅｇｕｌｉｎ−２  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｔｕｍｏｒ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ−ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ、ｓｅｌ−１  ｈｏｍｏｌｏｇ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、１５０  ｋＤａ  ｏｘｙｇｅｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｍｕ−ｐｒｏｔｏｃａｄｈｅｒｉｎ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｐｌｉｃｅ  ｖａｒｉａｎｔ、ｗｅａｋｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＰＴＭ１  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｗｅａｋｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｃｏｃｈｌｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＴＲＡＭ  ｐｒｏｔｅｉｎ  （Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｎｇ  ｃｈａｉｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｉｎｇ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、ＣＯＰ９  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ７Ａ、ｃａｌｃｉｕｍ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｔｏｐｙ−ｒｅｌａｔｅｄ  ａｕｔｏａｎｔｉｇｅｎ  １、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｍｅｔａｘｉｎ  １、ｅｎｖｅｌｏｐｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｍｙｃ、ｏｃｕｌａｒ  ａｌｂｉｎｉｓｍ  ｔｙｐｅ  １  ｐｒｏｔｅｉｎ、ＰＬ６  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｕｎｋｎｏｗｎ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｂｕｔ  ｄｅｌｅｔｅｄ  ｉｎ  ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  （Ｆｒａｇｍｅｎｔ）、ｔｕｍｏｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｍａｒｋｅｒ  ５  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｔｕｍｏｒ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＤＣＣ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｍｕｃｉｎ、ｔｕｍｏｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｍａｒｋｅｒ  ７−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｚｉｎｃ  ｆｉｎｇｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １７９、ａｌｐｈａ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ６３、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｓｔｒｏｍａｌ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  １  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ  ｂｙ  Ｔ  ｃｅｌｌ、Ｐ４００  ＳＷＩ２／ＳＮＦ２−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ＮｇＣＡＭ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｃｅｌｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  （Ｆｒａｇｍｅｎｔ）、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ａｌｐｈａ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ａｐｏｂｅｃ−１  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ、ＡＰＯＢＥＣ−１  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ−ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｇｅｎｅ／ｔｕｍｏｒ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ−ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｇｅｎｅ、ｐｕｔａｔｉｖｅ  ｆｅｒｒｉｔｉｎ  （Ｆｒａｇｍｅｎｔ）、ｗｅａｋｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ＤＨＨＣ−ｄｏｍａｉｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｃｙｓｔｅｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍＲＮＡ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ  Ｉ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＨＩＲＡ  ｐｒｏｔｅｉｎ  （ＴＵＰ１  ｌｉｋｅ  ｅｎｈａｎｃｅｒ  ｏｆ  ｓｐｌｉｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １）、ｅｎｖｅｌｏｐｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ７  ｓｕｐｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍｅｍｂｅｒ  ３  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｂｌａｄｄｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｖｅｚａｔｉｎ、ｇｏｌｇｉ  ａｐｐａｒａｔｕｓ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｖａｓｃｕｌａｒ  ｎｏｎ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ２  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｍｙｅｌｏｉｄ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  ＣＤ３３  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＦＨ１／ＦＨ２  ｄｏｍａｉｎｓ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  （Ｆｏｒｍｉｎ  ｈｏｍｏｌｏｇ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｓｐｉｅｅｎ）  （ＦＨＯＳ）、ｐａｔｃｈｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｈｏｍｏｌｏｇ  １、ｐａｎｎｅｘｉｎ  ３、ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｕｔｏａｎｔｉｇｅｎ、ｅｃｏｔｒｏｐｉｃ  ｖｉｒａｌ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ  ｓｉｔｅ  ２Ｂ、ａｌｐｈａ−ｓａｒｃｏｇｌｙｃａｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌ  ａｎｔｉｇｅｎ  ＣＤ３４  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  １１２、ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ  １、ｂａｓｉｇｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｐｒｅｇｎａｎｃｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｌａｓｍａ  ｐｒｅｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎ−Ａ２、ｂａｓｅｍｅｎｔ  ｍｅｍｂｒａｎｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｈｅｐａｒａｎ  ｓｕｌｆａｔｅ  ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ  ｃｏｒｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ  ｈｕｍａｎ  ｐａｐｉｌｌｏｍａ  ｖｉｒｕｓｅｓ  Ｅ６  ｏｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅ６ＴＰ１  ｂｅｔａ、ｈｉｇｈｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ  ｄｂ８３  ｍＲＮＡ、ｔｒａｎｓｄｕｃｉｎ−ｌｉｋｅ  ｅｎｈａｎｃｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２、ｐｒｏｔｏｃａｄｈｅｒｉｎ  ｆａｔ  ２、Ｕｎｃ−９３  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｆａｃｔｏｒ  ６００、ＣＤ４４  ａｎｔｉｇｅｎ  （ｈｏｍｉｎｇ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｎｄｉａｎ  ｂｌｏｏｄ  ｇｒｏｕｐ  Ｓｙｓｔｅｍ）、ｍｅｐｒｉｎ  Ａ  ａｌｐｈａ−ｓｕｂｕｎｉｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｐｏｄｏｃａｌｙｘｉｎ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ  ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １、ｌｅｕｃｉｎｅ−ｒｉｃｈ  ｒｅｐｅａｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＬＲＲＣ３  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ａｎｄ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｓｏｕｒｃｅ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｄｏｍｉｎａｎｔ  ＭＨＣ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ、ｆｉｂｕｌｉｎ  ２  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ＣＤ３Ｚ  ａｎｔｉｇｅｎ、ｚｅｔａ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ、Ｔ−ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ＣＤ３  ｇａｍｍａ  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ  ｇｒａｎｕｌｅ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｍａｊｏｒ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ＧＰ２  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ’  ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ａｍｙｌｏｉｄ  Ａ４  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐＭ５  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｄｙｎｅｉｎ  ｌｉｇｈｔ  ｃｈａｉｎ−Ａ、ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ３  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ａｎｋｙｌｏｓｉｓ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｈｏｍｏｌｏｇ、ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ  ｂａｎｄ  ７  ｉｎｔｅｇｒａｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ＳＹＧ１  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＳＹＮＡＰＳＩＮＳ  ＩＡ  ａｎｄ  ＩＢ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  ２  （ｊｕｖｅｎｉｌｅ）  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ｒｅｇｉｏｎ、ｃａｎｄｉｄａｔｅ  ２、ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｋｉｄｎｅｙ  ｄｉｓｅａｓｅ  １  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｎｉｅｍａｎｎ−Ｐｉｃｋ  Ｃ１  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ＤＮＡＪ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｈｏｍｏｌｏｇ  １、ｔｈｒｏｍｂｏｍｏｄｕｌｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｗｅａｋｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｏｃｃｌｕｄｉｎｇ、Ｏｃｃｌｕｄｉｎ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｒｅｎｎｉｎ、ｊｕｎｃｔｏｐｈｉｌｉｎ  ｔｙｐｅ３、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｈｏｍｅｏｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＣＨｏｘ３  −  ｃｈｉｃｋｅｎ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  （ＧＬＴＰ）、ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｌｐｈａ  ｔｙｐｅ、ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍａｔｒｉｘ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｄｅｌｔａ−ｓａｒｃｏｇｌｙｃａｎ、ｐｒｏｍｉｎｉｎ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｔｒａｎｓｌｏｃｏｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｄｅｌｔａ  ｓｕｂｕｎｉｔ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  １、ｎｅｕｒｏｇｌｙｃａｎ  Ｃ、ＳＨ３  ａｄａｐｔｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＳＰＩＮ９０、Ｍｃｄ４ｐ  ｈｏｍｏｌｏｇ、Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｔｉｇｅｎ  ＣＤ８０  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｃａｌｃｉｕｍ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＣａＢＰ７、ｔｉｇｈｔ  ｊｕｎｃｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＺＯ−１、ｄｙｓｆｅｒｌｉｎ、ｄａｃｈｓｈｕｎｄ  ２、ｂａｒｔｔｉｎ、Ｔ−ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃ���５  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｂｒａｉｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ−ａｎｃｈｏｒｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｈｅａｒｔ  （Ｈ−ＦＡＢＰ）  （Ｍｕｓｃｌｅ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）  （Ｍ−ＦＡＢＰ）  （Ｍａｍｍａｒｙ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）  （ＭＤＧＩ）、ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｆａｃｔｏｒ−１、ｐｅｎｔａｘｉｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＰＴＸ３  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ  ａｎｄ  ｔｏｌｌｏｉｄ  ｌｉｋｅ−１、ｃａｔ  ｅｙｅ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｒｅｇｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ６、ｐｅｐｔｉｄｏｇｌｙｃａｎ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ−Ｉ−ａｌｐｈａ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｇｎａｌ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｅｔａ  ｓｕｂｕｎｉｔ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｒａｌＡ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １、Ｔ−ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔａｃｔｉｌｅ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｔｒａｎｓｍｅｉｔｉｂｒａｎｅ  ｇａｍｍａ−ｃａｒｂｏｘｙｇｌｕｔａｍｉｃ  ａｃｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ４  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ＪＡＷ１−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＭＲＶＩ１Ａ  ｌｏｎｇ  ｉｓｏｆｏｒｍ、ｐｅｒｏｘｉｓｏｍａｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＰＥＸ１３、ｚｏｎａ  ｐｅｌｌｕｃｉｄａ  ｓｐｅｒｍ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  （ｐｒｏｓｏｍｅ、ｍａｃｒｏｐａｉｎ）  ｓｕｂｕｎｉｔ、ｂｅｔａ  ｔｙｐｅ、３、ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ＭＵＣ１８  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｇｏｌｇｉ  ａｕｔｏａｎｔｉｇｅｎ、ｇｏｌｇｉｎ  ｓｕｂ  ａ、２、ＩＳＳ〜ｈｏｍｏｌｏｇ  ｔｏ  ＩＮＨＩＢＩＴＯＲ  ＯＦ  ＣＡＲ
ＢＯＮＩＣ  ＡＮＨＹＤＲＡＳＥ  ＰＲＥＣＵＲＳＯＲ〜ｐｕｔａｔｉｖｅ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ａｌｐｈａ−２  ｃａｔｅｎｉｎ  （Ａｌｐｈａ−ｃａｔｅｎｉｎ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）  （Ａｌｐｈａ  Ｎ−ｃａｔｅｎｉｎ）、ｓｔｅｒｏｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｅｌｅｍｅｎｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−１、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  Ｓ−ＩＩ  （Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  Ａ）、ｐｒｏｔｏｃａｄｈｅｒｉｎ  １５  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｈｏｍｏｌｏｇ  ｏｆ  ＤＲＯＳＯＰＨＩＬＡ  ＨＥＡＤＣＡＳＥ、ｃａｌｍｉｎ、ｏｘｙｓｔｅｒｏｌ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ８、Ｎｅｓｐｒｉｎ−１  ａｌｐｈａ、ＳＯＸ−１３  ｐｒｏｔｅｉｎ、ＤＮＡ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｉ  ｌａｒｇｅｓｔ  ｓｕｂｕｎｉｔ、ＡＮＴＨＲＡＣＹＣＬＩＮＥ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ＡＲＸ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｍａｔｒｉｎ  ３、ｂｌｏｏｄ  ｖｅｓｓｅｌ  ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ、ｗｏｌｆｒａｍｉｎ、ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−４  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｎｏｇｇｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｔｒａｎｓｃｏｂａｌａｍｉｎ  Ｉ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  ｆａｃｔｏｒ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｌａｍｉｎｉｎ  ｂｅｔａ−３  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＣＡＰ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ２、ｃａｌｓｙｎｔｅｎｉｎ−２、ｂｒｏｔｈｅｒ  ｏｆ  ＣＤＯ、ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎ  １３７、ｔｅｓｔｉｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＴＥＸ２８、ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅ−ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  １  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｖｉｔｅｌｌｉｆｏｒｍ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ  （Ｂｅｓｔ  ｄｉｓｅａｓｅ、ｂｅｓｔｒｏｐｈｉｎ）、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｌｐｈａ−２ｂ  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  −  ｈｕｍａｎ、ｍｕｃｉｎ  ２  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｍａｌｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｌｅｔｈａｌ−３  ｈｏｍｏｌｏｇ  １、ｐｒｏｔｏｃａｄｈｅｒｉｎ  Ｆｌａｍｉｎｇｏ  ２、ＳＴＲＡ６  ｉｓｏｆｏｒｍ  １、ｃｙｓｔｉｎｏｓｉｎ、ＥＬＫ４  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｉｓｏｆｏｒｍ  ｂ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｂｃｌ−ｘ  ｉｓｏｆｏｒｍ  −ｈｕｍａｎ、ｅｎｄｏｇｌｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  １  ｂｅｔａ  ｄｙｎｅｉｎ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＷＮＴ−５Ａ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｈ３．３  ｌｉｋｅ  ｈｉｓｔｏｎｅ  ＭＨ３２１  −  ｍｏｕｓｅ、ＭＨＣ  ｃｌａｓｓ  ＩＩ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ  ＲＦＸ１、ｓａｒｃｏｓｐａｎ、ｍａｎｄａｓｅｌｉｎ  ｌｏｎｇ  ｆｏｒｍ、ｍａｔｒｉｌｉｎ−２  ｐｒｅｃｕｒｓ���ｒ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＤＥＳＣ１  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｉｎｔｅｒｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍａｔｒｉｘ  ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ  ２００、ｉｎｈｉｂｉｎ  ａｌｐｈａ  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｉｎｔｅｒｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍａｔｒｉｘ  ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ  ２００、ｍａｌｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｌｅｔｈａｌ−３  ｈｏｍｏｌｏｇ  １、ｎｅｐｈｒｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｍａｔｒｉｌｉｎ−２  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、Ｍ１３０  ａｎｔｉｇｅｎ  ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ  ｖａｒｉａｎｔ  ２  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｃｌｅａｖａｇｅ  ａｎｄ  ｐｏｌｙａｄｅｎｙｌａｔｉｏｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ｆａｃｔｏｒ、１６０  ｋＤａ  ｓｕｂｕｎｉｔ、ｂｌｏｏｄ  ｖｅｓｓｅｌ  ｅｐｉｃａｒｄｉａｌ  ｓｕｂｓｔａｎｃｅ、ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ６  ｓｕｐｅｒ  ｍｅｍｂｅｒ  ２  （Ｆｒａｇｍｅｎｔ）、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｚｉｎｃ  ｆｉｎｇｅｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＨＲＸ  （ＡＬＬ−１）  （Ｔｒｉｔｈｏｒａｘ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ）、ＮｇＣＡＭ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｃｅｌｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  （Ｆｒａｇｍｅｎｔ）、ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｎ−１Ｌ１、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｄｙｎａｍｉｎ−１、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ＯＴＫ２７、ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｂ  ｂｅｔａ  ｃｈａｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ＮＭＤ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｉｎｔｅｒｓｅｃｔｉｎ  ２、ｍａｔｒｉｌｉｎ−２  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ＥＲＧＩＣ−５３  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ｔｒａｎｓｌｏｃｏｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｇａｍｍａ  ｓｕｂｕｎｉｔ、ｗｅａｋｌｙ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｚｉｎｃ／ｃａｄｍｉｕｍ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ、ｑｕｉｅｓｃｉｎ、ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  ｐｒｏｔ  ＧＯＲ、ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｅ−ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  １  ｐｒｏｔｅｉｎ。
【００２３】
適切なＨＭＧ−ＣｏＡ−還元酵素のために、切断された、しかしｔＨＭＧ１のようにまだ機能するＨＭＧ−ＣｏＡ−還元酵素も含めて、例えば遺伝子データベースＴｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の以下のアクセス番号のコード化された遺伝子配列が公知である：ＮＣ＿００１１４５、ＮＭ＿１０６２９９、ＮＣ＿００３４２１．２、ＮＣ＿００９７８４．１、ＮＣ＿００３０２８．３、ＮＣ＿００７３０８．３、および図３（ｔＨＭＧ１）。
【００２４】
抑制型Ｃ２４−メチル基転移酵素のために、例えば遺伝子データベースＴｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の以下のアクセス番号のコード化された遺伝子配列が公知である：ＮＣ＿００１１４５、ＮＣ＿０００９１１．１、ＮＣ＿００３４２３．３。
【００２５】
抑制型デルタ２２−不飽和化酵素のために、例えば遺伝子データベースＴｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の以下のアクセス番号のコード化された遺伝子配列が公知である：ＮＣ  ００３４２４．３、ＮＣ  ００９０４６．１、ＮＣ  ００１１４５．２。
【００２６】
適切なデルタ７−還元酵素のために、例えば遺伝子データベースＴｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の以下のアクセス番号のコード化された遺伝子配列が公知である：ＮＭ＿１０３９２６、ＮＭ＿００１３６０、ＮＭＪＤ０７８５６、ＮＭ＿２０３９０４、ＮＭ＿００１０１４９２７、ＮＭ＿２０１３３０、ＮＭ＿０２２３８９、ＮＭ＿００１１３１７２７、ＮＭ＿００１０８７０８７、ＸＭ＿００１４９７５９８、ＸＭ＿００１１７４１６０、ＸＭ＿００１０９９１０１、ＢＭ４９０４０２、ＣＡ７５３５４５。
【００２７】
適切なデルタ２４−還元酵素のために、例えば遺伝子データベースＴｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の以下のアクセス番号のコード化された遺伝子配列が公知である：ＮＭ＿０１４７６２、ＮＭ＿００１０１６８００、ＮＭ＿００１０９４４５６、ＮＭ＿００１００８６４５、ＮＭ＿００１１０３２７６、ＮＭ＿００１０８０１４８、ＮＭ＿０５３２７２、ＮＭ＿００１０３１２８、ＸＭ＿００１４８８２４７、ＡＢ１２５２０２、ＸＭ＿００１１５３７５１。
【００２８】
適切なデルタ７−デルタ８−異性化酵素のために、例えば遺伝子データベースＴｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の以下のアクセス番号のコード化された遺伝子配列が公知である：Ｍ７４０３７。
【００２９】
適切なデルタ５−不飽和化酵素のために、例えば遺伝子データベースＴｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の以下のアクセス番号のコード化された遺伝子配列が公知である：Ｓ４６１６２、ＮＧ＿００９４４６、ＮＭ＿０５３６４２、ＮＭ＿００１０３５３５６。
【００３０】
適切なスクアレン−エポキシダーゼのために、例えば遺伝子データベースＴｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の以下のアクセス番号のコード化された遺伝子配列が公知である：Ｍ６４９９４。
【００３１】
適切なラノステロール−デメチラーゼのために、例えば遺伝子データベースＴｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の以下のアクセス番号のコード化された遺伝子配列が公知である：ＥＦ０５９１６５。
【００３２】
例として非相同に発現可能な哺乳類膜タンパク質のために、例えば遺伝子データベースＴｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の以下のアクセス番号のコード化された遺伝子配列が公知である：ＮＰ＿５７０１２６、ＮＰ＿００６０１９、ＮＰ＿０００８６０、ＮＰ＿６１９５４２、ＮＰ＿０００７８６、ＮＰ＿０００７８７、ＮＰ＿１５０６４５、ＮＰ＿１５０６４６、ＮＰ＿０５７６５８、ＮＰ＿３８７５１２、ＮＰ＿０００６６９、ＮＰ＿１５０６４７、ＮＰ＿０００６７１、ＮＰ＿３８７５０７、ＮＰ＿３８７５０８、ＮＰ＿３８７５０９、ＮＰ＿０００６７０、ＮＰ＿００１６９０、ＮＰ＿０６８７１３。哺乳類膜タンパク質、特に前述にリストアップした膜タンパク質のためのその他の遺伝子配列は、挙げられた遺伝子データベースを調べることによって容易に識別できる。
【００３３】
適切なプロモーター（それぞれ非相同に発現した酵素および／またはタンパク質のプロモーターは、本発明による有機体中でそれぞれ同じまたは異なっていてよい）のために、例えば遺伝子データベースＴｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）の以下のアクセス番号のコード化された遺伝子配列が公知である：ＮＣ＿００１１４２、ＮＣ＿００１１３９、ＮＣ＿００１１４７、ＮＣ＿００１１３９、ＮＣ＿００１１４８、ＮＣ＿００１１３５、ＮＣ＿００１１３６。
【００３４】
対応する野生型中の同じ活性よりも、活性が少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも１０００％高い場合、酵素の活性は、本発明による有機体中では野生型と比べて高められる。高められるという概念には、ここでは対応する野生型がまったく同じ活性を備えていない場合に、該当する酵素の活性が本発明による有機体中に存在することも含む。
【００３５】
ある酵素がβ−ヒドロキシ−β−メチルグルタリル−コエンザイム−Ａからメバロン酸塩への反応を触媒できる場合、その酵素はＨＭＧ−ＣｏＡ−還元酵素活性を備えている。
【００３６】
ある酵素がチモステロールからフェコステロールへの反応を触媒できる場合、その酵素はＣ２４−メチル基転移酵素活性を備えている。
【００３７】
ある酵素がエルゴスタ−５，７，２４（２８）−トリエノールからエルゴスタ−５，７，２２，２４（２８）−テトラエノールへの反応を触媒できる場合、その酵素はデルタ２２−不飽和化酵素活性を備えている。
【００３８】
ある酵素がコレスタ−５，７，２４−トリエン−３−オールからデスモステロールへの反応を触媒できる場合、その酵素はデヒドロコレステロール−デルタ７−還元酵素（略称：デルタ７−還元酵素）活性を備えている。
【００３９】
ある酵素がコレスタ−７−２４−ジエン−３β−オールからラトステロールへ、コレスタ−５，７，２４−トリエン−３−オールから７−デヒドロコレステロールへ、および／またはデスモステロールからコレステロールへの反応を触媒できる場合、その酵素はデヒドロコレステロール−デルタ２４−還元酵素（略称：デルタ２４−還元酵素）活性を備えている。
【００４０】
ある酵素がスクアレンからスクアレンエポキシダーゼへの反応を触媒できる場合、その酵素はスクアレン−エポキシダーゼ活性を備えている。
【００４１】
ある酵素がラノステロールから４，４−ジメチルコレスタ−８，１４，２４−トリエノールへの反応を触媒できる場合、その酵素はラノステロール−デメチラーゼ活性を備えている。
ある酵素がフェコステロールからエピステロールへ、および／またはチモステロールからコレスタ−７−２４−ジエン−３β−オールへの反応を触媒できる場合、その酵素はデルタ７−デルタ８−異性化酵素活性を備えている。このような酵素は、好ましくはすでに本発明による有機体野生型中で発現される。野生型がこの酵素を発現しない、または十分に発現しない場合は、本発明による有機体が、この酵素のためにコード化された遺伝子により、好ましくは構成的に活性のプロモーターの支配下で有機体が追加的に転換されてよい。
【００４２】
エピステロールからエルゴスタ−５−７−２４（２８）は、コレスタ−７−２４−ジエン−３β−オールからコレスタ−５，７，２４−トリエン−３−オールへ、および／またはラトステロールから７−デヒドロコレステロールへの反応を触媒できる場合、その酵素はデルタ５−不飽和化酵素活性を備えている。このような酵素は、好ましくはすでに本発明による有機体野生型中で発現される。野生型がこの酵素を発現しない、または十分に発現しない場合は、本発明による有機体が、この酵素のためにコード化された遺伝子により、好ましくは構成的に活性のプロモーターの支配下で有機体が追加的に転換されてよい。
【００４３】
一般に、前述の酵素活性は、該当する所与の分量の遊離体に、該当する酵素を所与の分量および必要に応じて別の必要な反応パートナーを所与の分量加えられながら生成物に変換され、および所与の期間内に形成された生成物の量を特定することによって測定される。
【００４４】
ＨＭＧ−ＣｏＡ−還元酵素活性、ラノステロール−デメチラーゼ活性、スクアレン−エポキシダーゼ活性、Ｃ２４−メチル基転移酵素活性、デルタ７−デルタ８−異性化酵素活性、デルタ５−不飽和化酵素活性、デルタ２２−不飽和化酵素活性およびデルタ２４−還元酵素活性の判定は、例えば特許文献４に記述されているように行う。デルタ７−還元酵素活性の判定も同様である。
【００４５】
該当する物質の量が対応する野生型中の同じ活性よりも少なくとも１０％、好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも１０００％高い場合に、デスモステロールおよび／またはコレステロールの含有量は、本発明による有機体の膜中、特に形質膜中では、野生型と比べて高められる。高められるという概念には、ここでは本発明による有機体の対応する野生型の膜中にその物質が検出できない場合に、該当する物質が本発明による有機体中に存在することも含む。その際分量の測定は、実施例中のキーワード「膜ステロールのリコンディショニング」および「ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）のための条件」に述べられているように行う。
【００４６】
本発明はさらに、本発明による有機体をデスモステロールおよび／またはコレステロールを産生するための利用について教示しており、その際有機体は好ましくは好気性で培養される。特定の有機体のための適切な培養条件は、当業者にはいずれも知られている。
【００４７】
本発明による有機体の別の使用は、哺乳類の膜タンパク質、特にヒト膜タンパク質、好ましくは形質膜タンパク質の産生を教示し、および哺乳類の膜タンパク質のためにコード化された遺伝子を使用して、転換された有機体が培養され、好ましくはコレステロールおよび／またはデスモステロールを加えることなくおよび所与の培養期間の経過後に、膜タンパク質が培地培養上清からおよび／または有機体から分離されることを特徴としている。
【００４８】
本発明による有機体の別の使用は、哺乳類の膜タンパク質、特にヒト膜タンパク質、好ましくは形質膜タンパク質と結合する物質のスクリーニングに関し、その際遺伝子によって膜タンパク質のために転換された有機体または転換された有機体の膜抽出物が、必要に応じて有機体の事前の培養後に、所与の物質または所与の物質の混合物と接触させられ、有機体、膜抽出物の変化または性質の変化の不在、および／または物質の膜タンパク質との結合または非結合が測定されること、および変化および／または結合の測定時に物質または物質の混合物が膜タンパク質への結合として段階付けされる。有機体の特定可能な性質には、期待物質または期待物質混合物との接触後所与の時間が経過した後の、生存力、細胞成長の定量的評価および所与の細胞の代謝産物の定量的評価の特定、および特定のパラメータと、接触前の同じパラメータとの比較が含まれる。期待物質の膜タンパク質への結合は、すべての標準的な結合アッセイによって行われる。これに関して、膜タンパク質および／または物質は、物理的なまたは化学的な手段で検出可能なレポーター分子と共有結合していてよい。
【００４９】
本発明はさらに、本発明によるスクリーニング方法を実施するためのキットに関する。キットは、本発明による有機体、随意で有機体を転換するために適切な核酸構造を含んだ状態で哺乳類の膜タンパク質、特にヒト膜タンパク質、好ましくは形質膜タンパク質のためにコード化された、好ましくは構成的に活性のプロモーターの支配下にある核酸、および含有しているまたは別に提供される核酸構造を備えた有機体の転換のため、転換前後の有機体の培養のため、有機体と所与の物質または所与の物質の混合物を接触するため、および有機体の性質の変化および／または物質または物質の混合物の膜タンパク質との結合を測定するための、取扱説明書を含んでいる。
【００５０】
本発明の要旨はまた、核酸構造、特に核外遺伝子またはシャトルベクターでもあり、１つの核酸または複数の核酸を含み、デヒドロコレステロール−デルタ７−還元酵素活性および／またはデヒドロコレステロール−デルタ２４−還元酵素活性を備えたタンパク質のために同じまたは異なってコード化されており、その際１つまたは複数の核酸は（それぞれ）好ましくは構成的に活性のプロモーターの支配下にある。核酸構造はさらに、１つの核酸または複数の核酸を含み、ＨＭＧ−ＣｏＡ−還元酵素−および／またはスクアレン−エポキシダーゼ−および／またはラノステロール−デメチラーゼ活性を備えたタンパク質のために同じまたは異なってコード化されており、その際１つまたは複数の核酸は（それぞれ）好ましくは構成的に活性のプロモーターの支配下にある。
【００５１】
そのような核酸構造は、本発明による有機体を産生するために使用され、その際前駆体有機体が核酸構造によって転換され、その際前駆体有機体が、好ましくは野生型と比べて低められたＣ２４−メチル基転移酵素−および／またはデルタ２２−不飽和化酵素活性を備えた遺伝子が組みかえられた有機体である。
【００５２】
最後に、本発明は膜抽出物、本発明による有機体から、有機体の温浸および膜、特に形質膜の分離によって得られる特に形質膜抽出物に関する。有機体の温浸または膜の切り離しおよび分離の適切な方法は、当業者にはよく知られている。
【００５３】
前述のおよび以下のすべての説明および本発明の観点からの好ましい変形例は、本発明の他の観点においても、本発明のそれぞれの観点での特徴を詳細に繰り返す必要なく適切に使用される。すべての開示された特徴は、どの関連で特徴を具体的に開示しているかに無関係に、任意に本発明のさまざまな観点と組み合わせることができる。
【００５４】
挙げられたすべての文献および資料の内容、特に参照された遺伝子データベースのアクセス番号および活性の評価方法は、内容をここで詳細に繰り返す必要なく、本明細書の構成要素である（「ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ  ｂｙ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ」）。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】ｐＦｌａｔ−ベクター系を図式化した図である。
【図２】［３Ｈ］シタロプラム結合研究の結果を示す図である。
【図３】ｔＨＭＧ１を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
以下では、本発明を例使用して詳しく説明する。
【実施例１】
【００５７】
使用された材料および方法
【００５８】
１．１：プライマー
すべてのプライマーは、Ｍｅｔａｂｉｏｎ社（マルティンスリート）によって合成された。
【００５９】
増幅のためのＰＣＲプライマー。反応酵素ＮｏｔＩおよびＸｈｏＩのための認識配列には下線が引かれている。
【００６０】
【表１】
0005881016.tif 000002
【００６１】
１．２：核外遺伝子
ｐＦｌａｔ−ベクター系（Ｖｅｅｎ，  Ｍ．，  Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ，  ＴＵ−Ｂｅｒｌｉｎ（２００２））
以下の試験では、異なった株の酵母Ｓ．  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅがｐＦｌａｔ−ベクター系のｐＦｌａｔ１−またはｐＦｌａｔ３ベクターによって転換される（非特許文献４）。この大腸菌＜−＞Ｓ．  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ「シャトルベクター」は、ＮｏｔＩおよびＸｈｏＩの制限酵素切断部位を「Ｍｕｌｔｉｂｌｅ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｓｉｔｅ（多重クローニング部位）」内に含んでおり、この部位はクローニングのための本作業で使用される。さらに、この核外遺伝子はＬＥＵ２−（ｐＦｌａｔ３）またはＵＲＡ３−遺伝子（ｐＦｌａｔ１）を持っており、これらは栄養要求性マーカー遺伝子として、核外遺伝子を持つ株を選択するために適切な最少培地上で使用される。
【００６２】
ｐＣｉｓ−ｒＳＥＲＴ
真核の発現ベクターｐＣｉｓは、ラット−セロトニントランスポーターのｃＤＮＡを含み、このトランスポーターは制限酵素切断部位ＸｈｏＩとＨｐａＩの間に挿入された。
【００６３】
１．３：株
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  Ｋ１２  ＪＭ１０９
［ｒｅｃＡＩ  ｅｎｄＡ１  ｇｙｒＡ９６  ｔｈｉ  ｈｓｄＲ１７  ｓｕｐＥ４４  λ−ｒｅｌＡ１  Δ（ｌａｃ−ｐｒｏＡＢ）／Ｆ’  ｔｒａＤ３６  ｐｒｏＡ＋Ｂ＋ｌａｃＩｑｌａｃＺΔＭ１５］
（非特許文献５）
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＧＲＦｕｒａ３
［ＭＡＴａ  ｌｅｕ２−３，  ｌｅｕ２−１１２，  ｈｉｓ４−５１９，  ｃａｎ１，  ｕｒａ３Δ］
（Ｖｅｅｎ，  ２００２，  上記参照）
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＧＲＦｃｏｌ
［ＭＡＴａ  ｔＨＭＧ１−ｌｅｕ２，  ＥＲＧ１−ｅｒｇ５，  ＥＲＧ１１−ｅｒｇ６，  ｈｉｓ３，  ｕｒａ３，  ｃａｎ１  ］
（Ｖｅｅｎ，  ２００２，  上記参照）
【００６４】
１．４：培地
ＬＢ培地
１％トリプトン；０．５％酵母抽出物；０．５％ＮａＣｌ；ｐＨ７．４
ＹＥ培地：
０．５％酵母抽出物；２％グルコース；ｐＨ６．３
ＹＮＢ培地：
０．６７％ＹＮＢ（「ｙｅａｓｔ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ  ｂａｓｅ」、Ｄｉｆｃｏ、アウグスブルク）；２％グルコース
ＷＭＶＩＩＩ：
（ＬａｎｇおよびＬｏｏｍａｎ、上記参照）。１リットルの培地に対して：５０ｇのサッカロース；２５０ｍｇのＮＨ４Ｈ２ＰＯ４；２．８ＮＨ４Ｃｌ；２５０ｍｇのＭｇＣｌ２ｘ６Ｈ２Ｏ；１００ｍｇのＣａＣｌ２ｘ２Ｈ２Ｏ；２ｇのＫＨ２ＰＯ４；５５０ｍｇのＭｇＳＯ４ｘ７Ｈ２Ｏ；７５ｍｇのメソイノシトール；１０ｇのＮａグルタミン酸；１ｍｌの１０００ｘ微量元素溶液；４ｍｌの２５０ｘビタミン溶液
微量元素：
１０００ｘ濃縮：１．７５ｇのＺｎＳＯ４ｘ７Ｈ２Ｏ；０．５ｇのＦｅＳＯ４Ｘ７Ｈ２Ｏ；０．１ｇのＣｕＳＯ４ｘ５Ｈ２Ｏ；０．１ｇのＭｎＣｌ２ｘ４Ｈ２Ｏ；０．１ｇのＮａＭｏＯ４ｘ２Ｈ２Ｏ、１リットルに対して
ビタミン溶液：
２５０ｘ濃縮：２．５ｇのニコチン酸；６．２５ｇのピリドキシン；２．５ｇのチアミン；０．６２５ｇのビオチン；１２．５ｇのＣａ−パントテナート、１リットルに対して
【００６５】
寒天プレート用には、１．５％寒天（Ｓｅｒｖａ、ハイデルベルク）を培地に加えた。
【００６６】
抗生物質：
アンピシリン（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ、マンハイム）５０μｇ／ｍｌ
培地サプリメント：
ロイシン（０．４ｇ／ｌ）；ヒスチジン−ＨＣｌ（２０ｍｇ／ｌ）
【００６７】
１．５：バッファーおよび化学物質
Ｌａｅｍｍｌｉバッファー（４ｘ）：
０．２Ｍのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ６．８；８％のＳＤＳ；０．４％のブロモフェノールブルー；４０％のグリセロール；４００ｍＭのＤＴＴ；４％のトリトン−Ｘ
ＰＢＳ（「Ｐｈｏｓｐｈａｔ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ（リン酸緩衝生理食塩水）」）：
１５０ｍＭのＮａＣｌ；８．４ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４；１．６ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．４
ＰＢＳ−Ｔ：
１ｘＰＢＳ、ｐＨ７．４；０．０５％のツイーン２０
ストッパー溶液（４ｘ）：
６０％（ｗ／ｖ）サッカロース；２０ｍＭのＥＤＴＡ；０．０２５％（ｗ／ｖ）ブロモフェノールブルーＴＡＥバッファー：２０ｍＭの酢酸ナトリウム；４０ｍＭのトリス；２ｍＭのＥＤＴＡ；ｐＨ８．３
ＴＢ−１バッファー：
１００ｍＭのＮａＣｌ；２ｍＭのＫＣｌ；１ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＭｇＣｌ２、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ；ｐＨ７．５
ＴＥバッファー（１０ｘ）：
０．１Ｍのトリス−ＨＣｌ；０．０１ＭのＥＤＴＡ、ｐＨ８．０
ＴＥＤバッファー：
１０ｍＭのトリス−ＨＣＬ、ｐＨ７．６；１ｍＭのＥＤＴＡ；１ｍＭのＤＴＴ
【００６８】
１．６：方法
１．６．１：培養
好気培養
大腸菌の培養は１００ｍｌの三角フラスコ中で３７℃でおよび１６０ｒｐｍで回転式振盪培養機上のＬＢ培地で行った。核外遺伝子を持つ株を選択するために抗生物質アンピシリン（５０μｇ／ｍｌ）が投入された。酵母Ｓ．  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの前培養は、３０℃および１６０ｒｐｍで１００  ｍｌの三角フラスコ中で、および本培養は２５０ｍｌのバッフル付き三角フラスコ中で回転式振盪培養機上で培養された。明確に異なった記述がない限り、酵母Ｓ．  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの培養全体はＷＭＶＩＩＩ培地（非特許文献６）に１ｍｇ／ｍｌのヒスチジンを補足して行っている。
【００６９】
嫌気培養
明確に記載されている場合、Ｓｔａｍｍｅｓ  Ｓ．  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ  ＧＲＦｕｒａ３、ｐＦｌａｔ３−ｒＳＥＲＴまたはｐＦｌａｔ３−ｌｅｅｒの株培養は、厳密な嫌気条件下で、以下のように行われた：２０ｍｌの前培養が、「好気培養」のところに記述されているように、４８時間培養された。本培養は、１％の前培養で植菌され、および２５０ｍｌのバッフル付き三角フラスコ中で５０ｍｌのＷＭＶＩＩＩ培地に１ｍｇ／ｌのヒスチジンおよび４０ｍｇ／ｌのコレステロールを補足して、厳格な嫌気条件下で３０℃および１６０ｒｐｍで回転式振盪培養機上で培養された。これに関して、バッフル付き三角フラスコは、２．５ｌの嫌気性ポット（Ｍｅｒｃｋ、ダルムシュタット）で２つのガスパック（Ａｎａｅｒｏｃｕｌｔ  Ａ，  Ｍｅｒｃｋ、ダルムシュタット）と共にインキュベートされた。コレステロール補足は０．５ｍｌ（培地５０ｍｌ当たり）のコレステロール溶液（２．５ｇのエタノール；２．５ｇのツイーン８０；２０ｍｇのコレステロール）で行われ、その結果終末濃度が１リットルの培地当たり４０ｍｇのコレステロールとなった。
【００７０】
１．６．２：ＤＮＡ分析の方法
制限
ＤＮＡ制限（１〜１０μｇ）は、３０μｌのバッチ中で行い、これはＤＮＡ、３μｌの適切なバッファー、１μｌのＲＳＡ（３ｍｇ／ｍｌ）および１Ｕの酵素（ＮｏｔＩおよびＸｈｏＩ、ＢｉｏＬａｂｓ、シュヴァルバッハ）（投入したＤＮＡ１μｇ当たり）から構成されている。このバッチは、３７℃で２時間インキュベートされた。ＰＣＲ単位複製配列の制限のため、４時間インキュベートされた。
【００７１】
アガロースゲル電気泳動法
アガロースゲル電気泳動法は、Ｍｉｎｉｇｅｌゲル装置（ＢｉｏＲａｄ、ミュンヘン）中で実施された。ゲルはＴＡＥバッファー中の１％のアガロースから構成された。ランニングバッファーとして同様にＴＡＥバッファーが使用された。１０μｌの試料が３μｌのストッパー溶液で処理された。フラグメントの基準として、２ｋｂ〜１３ｋｂの間のλ−ＤＮＡ（ＢｉｏＬａｂｓ、シュヴァルバッハ）が、Ｈｉｎｄｌｌｌ（バンドサイズ：２３．１ｋｂ；９．４ｋｂ；６．６ｋｂ；４．４ｋｂ；２．３ｋｂ；２．０ｋｂおよび０．６ｋｂ）によって制限された。５００ｂｐ〜３ｋｂの間のより小さいフラグメントのためにはマーカーＧｅｎｅＲｕｌｅｒ（ＭＢＩ  Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ、ザンクト・レオン＝ロート）が、および３ｋｂ〜１０ｋｂのフラグメントのためにはマーカー１ｋｂのＤＮＡラダー（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）が使用された。ＤＮＡフラグメントの分離のために、１００Ｖの電圧が３０〜４５分間かけられた。その後でゲルがエチジウムブロマイド溶液（０．４ｍｇ／１ＴＡＥバッファー）で着色され、およびＵＶライト（２５４ｎｍ）照射下で記録された。
【００７２】
ＤＮＡ析出
ＤＮＡは水溶液から、析出を使用して濃縮された。そのためにＤＮＡ溶液が１／１０量の３Ｍの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）および２．５倍量のエタノール（９６％）で処理された。バッチは３０分間２０℃でインキュベートされ、および続いて１４０００ｘｇで遠心分離された。次いでＤＮＡペレットは再度７０％のエタノールで洗浄され、および１４０００ｇで５分間遠心分離された。風乾ペレットは、所望の量のＴＥバッファー中で再懸濁され、および−２０℃で保管された。
【００７３】
核酸連結
Ｔ４−ＤＮＡ−リガーゼは、二重鎖ＤＮＡ中のヌクレオチドの３’−ヒドロキシル基と第二のヌクレオチドの５’−リン酸塩基の間の共有リン酸ジエステル結合の結合を触媒する。核酸連結するべきフラグメントは、ＤＮＡ精製キット（Ｑｉａｇｅｎ、ヒルデン）を使用して、メーカーの指示に従って精製しおよびベクター中で挿入ＤＮＡ比率３：１で統合し、および１７μｌの量で収容された。続いて２μｌのリガーゼバッファー（ＭＢＩ  Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ、ザンクト・レオン＝ロート）および１μｌのＴ４−リガーゼ（１Ｕ／μｌ）を加え、バッチを２時間、「ｓｔｉｃｋｙ−ｅｎｄ−Ｌｉｇａｔｉｏｎ（付着末端ライゲーション）」の場合は１６℃でインキュベートされた。
【００７４】
コンピテント細胞および大腸菌の転換
大腸菌細胞と核外遺伝子ＤＮＡとの転換は、電気穿孔法によって行われる。電気的コンピテント細胞の準備のために、一夜培養物１％が５００ｍｌの新鮮ＬＢ培地に植菌され、および好気的に３７℃で、光学的濃度が０．５〜０．７になるまで培養された。続いて細胞が５０００ｘｇで１０分間遠心分離され、および２００ｍｌの氷温の１０％グリセロールで再懸濁された。さらなる遠心分離段階（５０００ｘｇで１０分間）の後、細胞が１００ｍｌの氷温の１０％グリセロールで再懸濁された。再度５０００ｘｇで１０分間遠心分離され、５０ｍｌの氷温の１０％グリセロールで再懸濁された後、細胞は１０分間５０００ｘｇで遠心分離され、上澄みが捨てられ、およびペレットが逆流したグリセロールで再懸濁され、６５μｌのアリコートに分割され、および−８０℃で凍結された。転換のために、１００〜２００ｎｇの核外遺伝子ＤＮＡが３０μｌのコンピテント細胞と１．５ｍｌのサンプリングチューブ中で混合され、および１分間氷の上でインキュベートされた。続いてバッチが、滅菌されて氷上であらかじめ冷やされた電気穿孔キュベットに移され、および電気穿孔（１．６７ｋＶ、２５μＦ、２００Ω、５ミリ秒）がマルチポレーター（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、ハンブルク）で実施された。パルス付与後、即座に１ｍｌのＹＥ培地が添加され、１．５ｍｌのサンプリングチューブに移された。バッチはここで再生のために１時間、３７℃でインキュベートされ、および続いてＬＢ寒天プレート上でアンピシリンと、選択のためにプレート化された。
【００７５】
核外遺伝子ＤＮＡの大腸菌からの分離（ミニプレップ）
該当する大腸菌株は５ｍｌのＬＢ培地中に５０ｍｇ／ｌのアンピシリンと植菌され、および一晩３７℃で培養された。次に細胞が５０００ｘｇで遠心分離された。上澄みが捨てられ、核外遺伝子ＤＮＡがミニプレップキット（Ｑｉａｇｅｎ、ヒルデン）を使用して、メーカーの指示に従って処理された。
【００７６】
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）
ポリメラーゼ連鎖反応により特殊なプライマーを使用して、分離されたＤＮＡから、または直接完全な大腸菌細胞からＤＮＡフラグメントを増幅することができる。標準的には、ＰＣＲ反応のために１００ｎｇのテンプレートＤＮＡが１μｌのＨ２Ｏに溶かされるか、または１つの大腸菌コロニーが爪楊枝を使用してＰＣＲチューブ内に移され（コロニーＰＣＲ）適用される。テンプレートのほかに、反応バッチは、４μｌのｄＮＴＰ−Ｍｉｘ（２．５ｍＭ）、５μｌの１０ｘ反応バッファー、それぞれ２μｌのプライマー（フォワードおよびリバース）、０．２μｌ（１Ｕ）のＴａｑ−ポリメラーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ、マンハイム）またはＴａｋａｒａ−ポリメラーゼ（Ｔａｋａｒａ、東京、日本）およびＨ２Ｏから構成され、総量が５０μｌである。ＰＣＲはサーモサイクラー（Ｂｉｏｒａｄ、ミュンヘン）中でバッチ毎に実施された。分析のために、１０μｌのＰＣＲバッチがアガロースゲル上で分離されるかまたは別の使用のためにＰＣＲ精製キット（Ｑｉａｇｅｎ、ヒルデン）を使用して精製され、および３０μｌの量に濃縮された。
【００７７】
酵母転換
酵母転換のために前培養が２０ｍｌのＹＥ培地中で一晩培養された。５０ｍｌの本培養が、０．３の光学的濃度ＯＤ６００で植菌されおよび約４時間培養された。０．８〜１．０のＯＤ６００が達成された後、細胞は４０００ｇで１０分間遠心分離され、および細胞ペレットが１０ｍｌの滅菌されたＨ２Ｏで洗浄された。続いて細胞が１．５ｍｌのＨ２Ｏに入れられ、およびサンプリングチューブ内に移された。細胞が遠心分離され、（４０００ｇ、２分間）および１ｍｌの酢酸リチウム溶液（１００ｍＭのＬｉＡｃ、ＴＥバッファー中）で再懸濁され、遠心分離され（４０００ｘｇ、２分間）および再度１ｍｌの酢酸リチウム溶液で洗浄された。続いて細胞が２００μｌの酢酸リチウム溶液に入れられた（コンピテント細胞）。転換バッチのために、４０μｌのコンピテント細胞、１０μｌのニシン精子ＤＮＡ（１０ｍｇ／ｍｌ）、２３０μｌのＰＥＧ溶液（４０％のＰＥＧ４０００を０．１Ｍの酢酸リチウム中、１ｘＴＥ、ｐＨ８．０）および１〜２０μｇの転換するべきＤＮＡが入れられた。このバッチは、３０分間３０℃でインキュベートされ、および続いて熱ショックに４２℃で８分間さらされた。室温まで冷却された後、８００μｌのＨ２Ｏが加えられ、およびバッチが７０００ｘｇで２０秒間遠心分離された。続いて細胞が直接適切が選択培地上に寒天と共にプレート化され、および３〜５日間３０℃でインキュベートされた。４．２．２章に言及された二重転換、つまり２つのベクターによる同時転換は、それぞれのベクターに転換バッチを約３０μｇ含んでいる。それに加えてベクターＤＮＡが沈降され、および１０μｌのＨ２Ｏ中に入れられた。４０μｌのコンピテント細胞が加えられ、およびＰＥＧ溶液およびニシン精子ＤＮＡが加えられる前にこのバッチが３０分間３７℃でインキュベートされた。その後、上述の方法で実施された。
【００７８】
１．６．３：ステロール分析
ステロール分析の培養条件
ステロール分析は酵母培養液で以下のスキームが実施された：２０ｍｌの前培養が５０μｌの凍結培養物で植菌され、および２日間培養された。本培養が２５０ｍｌのバッフル付き三角フラスコ中で５０ｍｌの培地（ＷＭＶＩＩＩ培地、１ｍｇ／ｍｌのヒスチジンを補足）と回転式振盪培養機上で１６０ｒｐｍ、３０℃で１ないし３日間実施された。本培養は１％の前培養で植菌された。
【００７９】
乾燥物質の判定
乾燥物質を判定するために、３×６ｍｌの培養量があらかじめ正確に軽量された１５ｍｌのＧｒｅｉｎｅｒチューブに移された。細胞は３５００ｇで５分間遠心分離され、および１０ｍｌのＨ２Ｏで洗浄された。続いて細胞ペレットは乾燥戸棚で１２時間８０℃で乾燥された。試料は計量される前に乾燥器内で冷まされた。
【００８０】
ステロール全体のリコンディショニング
検査するべき細胞が集められ、および４０ｍｌのＨ２Ｏで洗浄された。次に光学的濃度ＯＤ６００が規定され、および酵母ペレットが、１２５のＯＤ６００に相当する、５ｍｌの０．５ＮのＨＣｌ−溶液に入れられた。それから懸濁液が５０ｍｌのＦａｌｃｏｎチューブ中で２０分間１００℃で煮沸された。このようにして弱体化された細胞が、次に氷上で冷却され、および３ｇのＫＯＨの溶液が加えられた。ＫＯＨの溶解後、０．２５ｇ／ｌメタノールピロガロール溶液が１２．５ｍｌ加えられた。抽出標準として、追加的に１０μｌのコレステロール溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）が加えられた。鹸化混合物は１時間４５分７０℃でインキュベートされた。このバッチが室温まで冷まされた後、ステロールが２ｘ２０ｍｌのｎ−ヘキサンで抽出された。ｎ−ヘキサン−段階と組み合わせて、回転蒸発装置で制限され、および残留物が、内部標準として０．２ｇ／ｌのノナデカンを含む２ｘ１ｍｌのクロロホルムで溶解され、茶色のガラス瓶に移された。ステロール抽出物は分析まで−２０℃で保管された。
【００８１】
膜ステロールのリコンディショニング
膜ステロール分析用の試料を準備するため、まず形質膜が検査するべき酵母Ｓ．  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの株から分離されなければならなかった。これはＳｅｒｒａｎｏの方法（非特許文献７）にいくつかの修正を加えて行われた。この修正は、以下に短く記述される：細胞が集められ、およびＨ２Ｏを使った洗浄工程の後で、１ｍｌの１Ｍのトリス（ｐＨ８）、２００μｌの０．５ＭのＥＤＴＡおよび１００μｌの２００ｍＭのＰＭＳＦ中に入れられた。続いてガラスビーズを使用して温浸が行われた。遠心分離工程の後、上澄みが除去され、ガラスビーズがＴＥＤバッファーと共に洗浄され、および上澄みがＳＳ３４−チューブ中で統合される。より大きな膜小胞および形質膜がここで２００００ｇで３０分間ペレット化され、および４ｍｌの２０％グリセロール中のペレットが、ＴＥＤバッファー中に２００μｌの０．２ＭのＰＭＳＦと共に入れられ、およびダンス型ホモジェナイザーで均質化された。このホモジェネート３ｍｌが、６ｍｌ、５３％（ｗ／ｗ）および３ｍｌ、４３％（ｗ／ｗ）のサッカロースから成り、Ｂｅｃｋｍａｎ社の超遠心分離チューブに入れられて不連続勾配遠心分離器にかけられた。遠心分離は６時間、１００，０００ｇで、Ｂｅｃｋｍａｎ  ＳＷ４１−Ｔｉローターで実施された。浄化された形質膜は、パスツールピペットを使用して中間相から取り出すことができ、およびＨ２Ｏが充填された新しいＢｅｃｋｍａｎ社チューブに移された。形質膜は、続いて８００００ｇで３０分間ペレット化され、およびペレットが２ｍｌのＴＥＤバッファー中で再懸濁されて−２０℃で保管された。ステロールの抽出のために、１ｍｌの形質膜懸濁液を５００μｌのクロロホルムで処理され、１分間ボルテックスされた。続いて相分離が１３０００ｒｐｍで１５分間行われた。４５０μｌの下部有機相がここでＧＣチューブに移され、５０μｌのＮ−メチル−Ｎ−トリメチルシリルトリフルオロアセトアミド（ＭＳＴＦＡ，  Ｓｉｇｍａ、ミュンヘン）が加えられた。ステロールの誘導体化は、１時間、８０℃で行われた。作られた試料はこれでガスクロマトグラフィーで分析できるようになった。
【００８２】
ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）のための条件
ＧＣ分析はＡｇｉｌｅｎｔ  ６８９０Ｎガスクロマトグラフ装置（Ａｇｉｌｅｎｔ、ヴァルトブロン）にＡｕｔｏｓａｍｐｉｅｒ  Ａｇｉｌｅｎｔ  ７６８３Ｂを取りつけたものを使用して行われた。検出器としてＡｇｉｌｅｎｔ  ５９７５  ＶＬ質量分析計が使用された。以下の条件が選択された：カラムとして、３０ｍの長さのＨＰ−５ＭＳカラム（Ｊ＆Ｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、米国）、内径０．２５ｍｍおよびフィルム厚０．２５μｍ、が使用された。ヘリウムが移動相として使用された。ＧＣ／ＭＳシステムが温度プログラム（１００℃０．５分、５０℃／分２７０℃まで、２７０℃１０分間、５℃／分２９０℃まで、２９０℃４分間、５℃／分３２５℃まで、３２５℃２０分間５℃／分３４０℃まで、３４０℃２分間）スプリットレスモードで作動した。インジェクター温度は２８０℃で、検出器の温度は１５０℃であった。より良好に分離するためおよびステロール中間体の揮発性を高めるために、ステロール試料がＭＳＴＦＡと共に１時間８０℃で乾燥戸棚内で誘導体化された。検査ステロール中間体のモル質量の判定、およびイオン化パターンを使用したその同定は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ５９７５  ＶＬ質量分析計によって行われた。試料の注入量は２μｌであった。
【実施例２】
【００８３】
結果
２００２年、コレスタ−５，７，２４−トリエン−３−オールを酵母Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ中で生合成することが確立された（Ｖｅｅｎ，  ２００２，  上記参照）。そのために自由に入手可能な実験室株ＧＲＦ１８が以下のように、遺伝子工学的な方法で変更された。
【００８４】
【表２】
0005881016.tif 000003
【００８５】
見て取れるように、まずＵＲＡ３−遺伝子が除去され、およびｔＨＭＧ１−遺伝子が遺伝子座ＬＥＵ２に挿入された。ｔＨＭＧ１−遺伝子（ｔ＝ｔｒｕｎｃａｔｅｄ、短縮された）は短縮されたＨＭＧ−ＣｏＡ−還元酵素のためにコード化され、これはタンパク質の触媒サブユニットから成り、それゆえにもはやステロール中間体によるフィードバック阻害の影響は受けない。ｔＨＭＧ１遺伝子の転写は構成的にＡＤＨ１−プロモーターの支配下にある。ポストスクアレン生合成経路のすべての遺伝子の、個々のおよびＨＭＧ１調節解除済み株内での組み合わせの、システム化された過剰発現および転写的調節解除の分析により、２つの別の主調整点またはポストスクアレン経路の隘路を同定することができた。この隘路は、スクアレン−エポキシダーゼ（ＥＲＧ１）およびラノステロール−デメチラーゼ（ＥＲＧ１１）の過剰発現によって克服することができた。そのために遺伝子ＥＲＧ１およびＥＲＧ１１が転写的調節解除された形で構成的ＡＤＨ１−プロモーターの支配下で酵母ゲノムに、すなわち相同組換えを使って遺伝子ＥＲＧ５およびＥＲＧ６の遺伝子座に挿入され、これらの遺伝子はそれによって除去された（Ｖｅｅｎ，  ２００２，上記参照）。こうしてわずか３つの転換ステップで５つの遺伝子改変を酵母株にもたらし、それによってエルゴステロール合成経路の隘路を除去し、コレスタ−５，７，２４−トリエン−３−オールの合成成功を確立させた。さらに、結果として生じた酵母株ＧＲＦｔＨ１Ｅ１Ｅ１１ｅ５ｅ６（ＧＲＦｃｏｌ）はポストスクアレン−ステロール中間体を野生型株ＧＲＦｕｒａ３よりもはるかに大量に産生することが示された。
【００８６】
さらなるステップでは、この株でシャトルベクターｐＦｌａｔ１を使用し、本発明に従ってデヒドロコレステロール−デルタ７−還元酵素（特許文献５で公知）を過剰発現させた。
【００８７】
そのためにｃＤＮＡがシロイヌナズナ由来のデヒドロコレステロール−デルタ７−還元酵素（ＤＨＣＲ７）のために、構成的ＡＤＨ１−プロモーターとベクターのトリプトファン−ターミネーター（ＴＲＰ１）との間に挿入されおよび酵母に転換された。結果として生じた酵母株はＧＲＦｃｏｌ  ｐＦｌａｔ１−ＤＨＣＲ７と名づけられた。
【００８８】
ステロール全体組成のガスクロマトグラフィー分析は以下のようになった。表２には、ベクターｐＦＬＡＴｌ−ＤＨＣＲ７による転換後の酵母ＧＲＦｃｏｌ中の主ステロールの組成である。ベクターｐＦＬＡＴｌ−ＤＨＣＲ７はシロイヌナズナ由来のデヒドロコレステロール−Δ７−リクターおよび／またはｐＦｌａｔ３−ＤＨＣＲ２４を含み、これらはツメガエル由来のデヒドロコレステロール−Δ２４−還元酵素を含んでいる。値はＧＣ／ＭＳ分析に基づき、単位はパーセンテージである。ＤＨＣＲ７の過剰発現がコレスタ−５，７，２４−トリエノールからコレスタ−５，２４−ジエノール（デスモステロール）への、直接のコレステロール−前駆物質への部分的な変換をもたらすことが識別できる。このステロールの比率は、酵母のステロール全体比率の約４０〜５０％である。それゆえに、デスモステロールはチモステロールと並んで酵母の主ステロールである。形質膜の検査により、デスモステロールが約６０％の比率で主膜ステロールに含まれていることが判明した（データは示していない）。
【００８９】
挙げられた株中の各ステロールの比率（ステロール全体）
【００９０】
【表３】
0005881016.tif 000004
【００９１】
デスモステロール生合成の確立後、シャトルベクターｐＦｌａｔ３を使用してデヒドロコレステロール−Δ２４−還元酵素が酵母中でＤＨＣＲ７に追加して発現された。そのためにｃＤＮＡがシロイヌナズナ由来のデヒドロコレステロール−Δ２４−還元酵素（ＤＨＣＲ２４）のために、構成的ＡＤＨ１−プロモーターとｐＦｌａｔ３ベクターのトリプトファン−ターミネーター（ＴＲＰｌ）との間に挿入されおよび酵母に入れられた。結果として生じた酵母株はＧＲＦｃｏｌ  ｐＦｌａｔ１−ＤＨＣＲ７  ｐＦｌａｔ３−  ＤＨＣＲ２４と名づけられた。この株のステロール全体組成のガスクロマトグラフィー分析は、ＤＨＣＲ２４の過剰発現がコレステロールおよび７−デヒドロコレステロールの合成をもたらすことを示した。コレステロールおよび７−デヒドロコレステロールの比率は約３．２ないし７．０％である。（表１）
【００９２】
膜タンパク質の非相同発現へのデスモステロールの影響を検査するため、ラット由来のセロトニントランスポーターを株ＧＲＦｃｏｌ  ｐＦｌａｔ１−ＤＨＣＲ７中で過剰発現させた。そのためにｒＳＥＲＴ−ｃＤＮＡが構成的ＡＤＨ１−プロモーター（非特許文献６）とｐＦｌａｔ３−ベクターのトリプトファン−ターミネーター（ＴＲＰ１）間に挿入された。挿入はＮｏｔＩおよびＸｈｏＩ制限酵素切断部位によってこの大腸菌  ／  Ｓ．  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ「シャトルベクター」の「ｍｕｌｔｉｐｌｅ−ｃｌｏｎｉｎｇ−ｓｉｔｅ（多重クローニング部位）」へ行われた。ｐＦｌａｔ−ベクター系は図式化されて図１に示されている。この図は、エピゾ−ム酵母発現核外遺伝子ｐＦｌａｔ１およびｐＦｌａｔ３の模式図である。核外遺伝子ｐＦｌａｔ１はＵＲＡ３−遺伝子を、およびｐＦｌａｔ３はＬＥＵ２−遺伝子を、核外遺伝子を持つ株を選択するために備えている。２つの核外遺伝子は、構成的ＡＤＨ１−プロモーターとＴＲＰ１−ターミネーター、および２μｍのＤＮＡの最大部分を、複製のために含んでいる。制限酵素切断部位ＮｏｔＩおよびＸｈｏＩと多重クローニング部位の間のｒＳＥＲＴ−ｃＤＮＡクローニングが模式的に示されている。
【００９３】
ベクターｐＦｌａｔ３  ｒＳＥＲＴ作成後、株ＧＲＦｃｏｌ  ｐＦｌａｔ１−ＤＨＣＲ７と野生型株ＧＲＦ１８は、核外遺伝子によって転換され、およびセロトニンレセプターが発現のためにもたらされる。検査するべき酵母株中でのｒＳＥＲＴの機能的な発現は、［３Ｈ］シタロプラムをスフェロプラストへ結合させることで検査された。
【００９４】
シタロプラムのようなセロトニン−アンタゴニストは、正確に折りたたまれた活性の、つまり機能的に発現したＳＥＲＴ分子とのみ結合する。シタロプラムは高い親和力で、本来の物質であるセロトニンランスポーターと同じ部位に結合する。その証拠は、シタロプラムが結合部位の最大数に低減されても、ＳＥＲＴに対するセロトニン親和力が低下しないことである。［３Ｈ］シタロプラムは、それを取り巻く膜の中にコレステロールがある場合、ｒＳＥＲＴにのみ結合することが知られている。エルゴステロールは、この研究でコレステロールの代りはできなかった。これがコレステロールと構造が似ているステロールのコレスタ−５，７，２４−トリエノールおよびデスモステロールで成功するかどうかは、実験により調査しなければならない。
【００９５】
検査するべき酵母株の形質膜中のｒＳＥＲＴの機能的な発現は、この株のスフェロプラストとの、［３Ｈ］シタロプラム結合研究によって実施された。図２はこの研究の結果を示している。１０９細胞当たりフェントモルの結合された［３Ｈ］シタロプラムのシンチレーション数が示されている。株ＧＲＦｕｒａ３  ｐＦｌａｔ１−ｌｅｅｒ、ｐＦｌａｔ３−ｒＳＥＲＴ；ＧＲＦｃｏｌ  ｐＦｌａｔ−ｌｅｅｒ、ｐＦｌａｔ３−ｒＳＥＲＴ；ＧＲＦｃｏｌ  ｐＦｌａｔ１−ＤＨＣＲ７、ｐＦｌａｔ３−ｒＳＥＲＴ；ＧＲＦｕｒａ３  ｐＦｌａｔ１−ｌｅｅｒ、ｐＦｌａｔ３−ｒＳＥＲＴのスフェロプラストが、コレステロールを補足されて嫌気培養され、および対応する対照株（非特異的な条件を規定するためにｐＦｌａｔ３−ｌｅｅｒベクターを持つ）が２ｎＭ［３Ｈ］シタロプラムとインキュベートされた。パーセント表示は全体結合に対する特別な結合の割合を示している。バーの高さは、３つの独立した実験の平均値を示している。エラーバーは最大および最小の測定値を示している。
【００９６】
図２は、非特異的結合がＧＲＦｃｏｌ−ＤＨＣＲ７で最大、およびＧＲＦｕｒａ３嫌気＋コレステロールで最少であることを示している。
【００９７】
ＧＲＦｕｒａ３およびＧＲＦｃｏｌの、スフェロプラストへの特異的結合と非特異的なとの間の重大な相違、およびそれによるこれらの株中でのｒＳＥＲＴの機能的な発現は、図２に示された結果かからは明白ではない。しかし驚くべきことに、ＧＲＦｕｒａ３の他に嫌気＋コレステロール、ＧＲＦｃｏｌ−ＤＨＣＲ７でも［３Ｈ］シタロプラムの特異的結合が約２０％検出されている。これは平均で６分子の［３Ｈ］シタロプラムの特異的結合、または６分子のｒＳＥＲＴの機能的な発現（株ＧＲＦｕｒａ３の細胞当たり、嫌気＋コレステロールによる）に相当する。ＧＲＦｃｏｌ−ＤＨＣＲ７ではこれは１１分子に相当する。５分子分の相違は、２つの株のＳＥＲＴの異なった発現レベルによって説明することができる。発現レベルのＷｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔによる分析（データは示していない）は、ＧＲＦｃｏｌ−ＤＨＣＲ７中の発現がＧＲＦｕｒａ３中の嫌気＋コレステロール中よりも大きいことを示している。
【００９８】
特異的結合は、ＧＲＦｕｒａ３の嫌気＋コレステロールでも、ＧＲＦｃｏｌ−ＤＨＣＲ７中でも約２０％である。したがってデスモステロールは、ＳＥＲＴの機能性に関して、コレステロールの欠如を完全に補償しているように見える。スフェロプラストとの結合研究の結果は、ｒＳＥＲＴのＧＲＦｃｏｌ−ＤＨＣＲ７中での機能的な発現を示している。
【００９９】
株ＧＲＦｕｒａ３  ｐＦｌａｔ３−ｒＳＥＲＴ嫌気＋コレステロール株のスフェロプラストにより、［３Ｈ］シタロプラムの特異的結合を証明することができた。これはまたｒＳＥＲＴがこの株中で、この培養条件下で機能的に発現することから出発している。スフェロプラストと一緒に活動するので、形質膜中のｒＳＥＲＴの発現が成功していることを証明される。図２の結果は、エルゴステロールおよびコレスタ−５，７，２４−トリエノールがコレステロールの欠如を補償できず、およびＳＥＲＴの機能的な発現には膜中のコレステロールまたはデスモステロールが必要であることを、はっきりと説明している。
【図３】
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【図１】
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【図２】
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