(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
還元剤の存在下で、式ＩＩＩ
【化１】
0005977354.tif 000028
の化合物またはその塩を式ＩＶ
【化２】
0005977354.tif 000029
の化合物と反応させることを含む、式ＩＩ
【化３】
0005977354.tif 000030
の化合物またはその塩を形成する方法であって、但し、当該還元剤はシアノ重水素化ホウ素ナトリウムではなく、ここでＰ１は保護基である、方法。
【請求項２】
前記保護基が−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｓｉ（ＣＨ３）３である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記還元剤がシアノ水素化ホウ素ナトリウムおよびトリアセトキシホウ水素化ナトリウムから選択される、請求項１〜２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
前記還元剤がトリアセトキシホウ水素化ナトリウムである、請求項１〜２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
式ＩＩ、ＩＩＩ、およびＩＶの化合物がそれぞれ遊離塩基である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
式ＩＩの化合物またはその前記塩を脱保護し、式Ｉ
【化４】
0005977354.tif 000031
の化合物またはその塩を形成することをさらに含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記脱保護が三フッ化ホウ素エテラートで処理し、次に水性水酸化アンモニウムで処理することを含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記方法が式Ｉの化合物をアジピン酸と反応させ、アジピン酸塩を形成することをさらに含む、請求項６〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、およびＩＶがそれぞれ遊離塩基である、請求項６〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
以下をさらに含む、請求項６〜７のいずれか１項に記載の方法：
（ａ）  メタノール中で式Ｉの化合物を加熱還流して混合物を形成し、
（ｂ）  （ａ）の後、混合物にメチルイソブチルケトンを加え、
（ｃ）  （ｂ）の後、４０℃〜５０℃の内部温度で、蒸留によって溶媒の一部を除去し、濃縮した混合物を形成し、
（ｄ）  （ｃ）の後、濃縮した混合物にメタノールを加え、希釈した混合物を形成し、
（ｅ）  （ｄ）の後、希釈した混合物を加熱還流して混合物を形成し、
（ｆ）  （ｅ）の後、混合物にメチルイソブチルケトンを加え、
（ｇ）  （ｆ）の後、４０℃〜５０℃の内部温度で、蒸留によって溶媒の一部を除去し、濃縮した混合物を形成し、
（ｈ）  （ｇ）の後、濃縮した混合物にアジピン酸およびメタノールを加え、
（ｉ）  （ｈ）の後、混合物を加熱還流し、および
（ｊ）  （ｉ）の後、４０℃〜５０℃の内部温度で、蒸留によって溶媒の一部を除去し、濃縮した混合物を形成し、
（ｋ）  （ｊ）の後、混合物にヘプタンを加え、および
（ｌ）  （ｋ）の後、混合物を室温で撹拌し、式Ｉの化合物のアジピン酸塩を形成する。
【請求項１１】
式ＩＶの化合物またはその塩が、式Ｖ
【化５】
0005977354.tif 000032
の化合物またはその塩を脱保護することを含む方法によって産生される、請求項６〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記脱保護が水性の酸と反応させることを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記酸が塩酸である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、およびＶの化合物のそれぞれが遊離塩基である、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記式Ｖの化合物またはその塩が、カップリング剤の存在下で、式ＶＩ
【化６】
0005977354.tif 000033
の化合物を、式ＶＩＩ
【化７】
0005977354.tif 000034
の化合物と反応させることを含む方法によって産生される、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
カップリング剤がベンゾトリアゾール-１-イルオキシ-トリス（ジメチルアミノ）-ヘキサフルオロリン酸ホスホニウム（ＢＯＰ）である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
式ＩＶ
【化８】
0005977354.tif 000035
の化合物またはその塩を作製する方法であって、式Ｖ
【化９】
0005977354.tif 000036
の化合物またはその塩を脱保護し、式ＩＶの化合物またはその前記塩を形成することを含む方法。
【請求項１８】
前記脱保護が水性の酸と反応させることを含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記酸が塩酸である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
式ＩＶおよびＶの化合物のそれぞれが遊離塩基である、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
カップリング剤の存在下で、式ＶＩ
【化１０】
0005977354.tif 000037
の化合物またはその塩を式ＶＩＩ
【化１１】
0005977354.tif 000038
の化合物またはその塩と反応させ、式Ｖ
【化１２】
0005977354.tif 000039
の化合物またはその前記塩を形成することを含む、式Ｖの化合物またはその塩を作製する方法。
【請求項２２】
カップリング剤がベンゾトリアゾール-１-イルオキシ-トリス（ジメチルアミノ）-ヘキサフルオロリン酸ホスホニウム（ＢＯＰ）である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
式Ｖ
【化１３】
0005977354.tif 000040
の化合物またはその塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１１年９月７日に提出した米国仮出願第６０／５３１，８９６号に基づく優先権を主張するものであり、該仮出願は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は、｛１-｛１-［３-フルオロ-２-（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン-４-イル｝-３-［４-（７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル］アゼチジン-３-イル｝アセトニトリルを作製するための方法および中間体に関するものであり、炎症性障害、自己免疫障害、癌、およびその他の疾患を含むヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）の活性に関連する疾患の治療に役に立つ。
【背景技術】
【０００３】
タンパク質キナーゼ（ＰＫ）は、細胞増殖、生存、分化、臓器形成、形態発生、血管新生、組織修復、再生等を含む様々な生物学的プロセスを調節する。タンパク質キナーゼはまた、癌を含むヒト疾患の宿主に特別な役割を演じている。サイトカイン、低分子量のポリペプチド類または糖タンパク質類は、敗血症への宿主の炎症の反応に関与する多くの経路を調節する。サイトカインは、分子の分化、増殖および活性化に影響を及ぼし、炎症促進性および抗炎症性反応の両方を調整し、宿主が病原に適切に反応するようにする。様々な範囲のサイトカインのシグナリングは、タンパク質チロシンキナーゼのヤヌスキナーゼ（ＪＡＫ）およびシグナル伝達性転写因子（ＳＴＡＴ）を含む。４つの哺乳動物のＪＡＫ：ＪＡＫ１（ヤヌスキナーゼ-１）、ＪＡＫ２、ＪＡＫ３（ヤヌスキナーゼ、白血球としても知られている；ＪＡＫＬ；およびＬ-ＪＡＫ）、およびＴＹＫ２（タンパク質チロシンキナーゼ２）が知られている。
【０００４】
サイトカインが刺激する免疫および炎症性反応は、疾患の病因に寄与し、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）等の病理は、免疫系の抑制から生じ、一方で、活動亢進または不適切な免疫／炎症性反応は、自己免疫疾患（例えば、喘息、全身性エリテマトーデス、甲状腺炎、心筋炎）の病理および強直性脊椎炎およびに骨関節炎（Ｏｒｔｍａｎｎ、Ｒ．Ａ．、Ｔ．Ｃｈｅｎｇ、ら（２０００）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  ２（１）：１６-３２）等の疾患に寄与する。
【０００５】
ＪＡＫの発現を欠くことは多くの疾患状態に関連する。例えば、Ｊａｋ１-／-マウスは生まれたときから発育不良で、育てることができず、周産期に死んでしまう（Ｒｏｄｉｇ、Ｓ．Ｊ．、Ｍ．Ａ．Ｍｅｒａｚ、ら（１９９８）Ｃｅｌｌ  ９３（３）：３７３-８３）。Ｊａｋ２-／-の胎芽は貧血症で、赤血球生成が決定的にないため、交尾後の約１２．５日で死んでしまう。
【０００６】
ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路、および具体的には４つのＪＡＫ全てが、喘息性反応、慢性閉塞性肺疾患、気管支炎、および下気道のその他の関連する炎症性疾患の病因に重要な役割を演じると考えられている。ＪＡＫによってシグナルを伝える複数のサイトカインは、古典的にはアレルギー反応があるかどうかの鼻および洞に影響を与えるもの（例えば、鼻炎および副鼻腔炎）等の上気道の炎症性疾患／病態に結び付いている。ＪＡＫ／ＳＴＡＴ経路は、目および慢性アレルギー反応の炎症性疾患／病態の徴候にもなっている。
【０００７】
癌の場合のＪＡＫ／ＳＴＡＴの活性化は、サイトカイン刺激（例えば、ＩＬ-６またはＧＭ-ＣＳＦ）によって、またはＳＯＣＳ（抑制因子またはサイトカインシグナル送達）またはＰＩＡＳ（活性化ＳＴＡＴのタンパク質抑制因子）等のＪＡＫシグナル送達の内在性抑制因子が減少することによって起こり得る（Ｂｏｕｄｎｙ、Ｖ．、  ａｎｄ  Ｋｏｖａｒｉｋ、Ｊ．、Ｎｅｏｐｌａｓｍ．４９：３４９-３５５、２００２）。ＳＴＡＴシグナル送達の活性化、並びにＪＡＫ（例えばＡｋｔ）のその他の経路の下流は、多くの癌のタイプの予後不良に相互に関連がある（Ｂｏｗｍａｎ、Ｔ．、ら  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９：２４７４-２４８８、２０００）。ＪＡＫ／ＳＴＡＴによってシグナルを伝える循環しているサイトカインのレベルの上昇は、悪液質および／または慢性疲労に原因となる役割を演じる。このように、ＪＡＫの抑制は、強力な抗腫瘍活性を上回って拡張するために、癌患者にとって有益であり得る。
【０００８】
ＪＡＫ２チロシンキナーゼは、骨髄増殖性疾患、例えば真性多血症（ＰＶ）、本態性血小板血症（ＥＴ）、骨髄線維症を伴う骨髄化生（ＭＭＭ）の患者にとって有益になる可能性がある（Ｌｅｖｉｎ、ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ、ｖｏｌ．７、２００５：３８７-３９７）。ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆキナーゼの抑制は、造血細胞の増殖を低下させ、ＰＶ、ＥＴ、およびＭＭＭの患者の薬理学的抑制について強力な標的としてＪＡＫ２を示唆する。
【０００９】
ＪＡＫの抑制は、乾癬、および皮膚感作性等の皮膚の免疫障害を罹患している患者に有益であり得る。乾癬の維持は、様々なケモカインおよび増殖因子（ＪＣＩ、１１３：１６６４-１６７５）の他に、多くの炎症性サイトカインに依存すると考えられ、それらの多くはＪＡＫによってシグナルを伝える（Ａｄｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０００；４７：１１３−７４）。
【００１０】
ＪＡＫ１は多くのサイトカインおよび増殖因子のシグナル経路に中心的な役割を演じ、調節不全になると、疾患状態が生じるまたはそれに寄与する。例えば、ＩＬ-６レベルは、有害な影響を有すると示されている疾患であるリウマチ性関節炎を増加させる（Ｆｏｎｅｓｃａ、Ｊ．Ｅ．ら、Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、８：５３８-４２、２００９）。ＩＬ-６がＪＡＫ１によって少なくとも部分的にシグナルを伝えるため、ＪＡＫ１の抑制によって、直接的または間接的にＩＬ-６を拮抗することが、臨床的利益をもたらすことが期待される（Ｇｕｓｃｈｉｎ、Ｄ．、Ｎ．，ら  Ｅｍｂｏ  Ｊ  １４：１４２１、１９９５；Ｓｍｏｌｅｎ、Ｊ．Ｓ．、らＬａｎｃｅｔ  ３７１：９８７、２００８）。さらに、いくつかの癌では、ＪＡＫ１が変異し、構造的に望ましくない腫瘍増殖および生存をもたらす（Ｍｕｌｌｉｇｈａｎ  ＣＧ、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．１０６：９４１４-８、２００９；Ｆｌｅｘ  Ｅ．、ら  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．２０５：７５１-８、２００８）。その他の自己免疫疾患および癌では、ＪＡＫ１を活性化する炎症性サイトカインの全身のレベルが増加することが、疾患および／または関連の症状に寄与することもあり得る。したがって、当該疾患の患者は、ＪＡＫ１の抑制から恩恵を受けることもあり得る。ＪＡＫ１の選択的抑制剤が、その他のＪＡＫキナーゼを抑制するという必要としないおよび潜在的に望ましくない作用を回避する一方で、有効となり得る。
【００１１】
ＪＡＫ１の選択的抑制剤は、その他のＪＡＫキナーゼに比べて、少ない選択的抑制剤を上回る複数の治療上の長所を持ち得る。ＪＡＫ２に対する選択性に関して、多くの重要なサイトカインおよび増殖因子が、例えば、エリスロポエチン（Ｅｐｏ）およびトロンボポエチン（Ｔｐｏ）を含むＪＡＫ２によってシグナルを伝える（Ｐａｒｇａｎａｓ  Ｅ、ら  Ｃｅｌｌ．９３：３８５-９５、１９９８）。Ｅｐｏは赤血球の産生に主要な増殖因子であり、Ｅｐｏ依存性シグナル送達の不足が、赤血球数の減少および貧血症を起こす可能性がある（Ｋａｕｓｈａｎｓｋｙ  Ｋ、ＮＥＪＭ３５４：２０３４-４５、２００６）。ＪＡＫ２依存性増殖因子の別の例であるＴｐｏは、血小板が産生される巨核球−細胞の増殖および成熟を制御するのに中心的な役割を演じる（Ｋａｕｓｈａｎｓｋｙ  Ｋ、ＮＥＪＭ３５４：２０３４-４５、２００６）。このように、Ｔｐｏのシグナル送達の減少は、巨核球の数を減少させると思われ（巨核球減少）、循環する血小板の数をもっと少なくする（血小板減少）。このことによって、望ましくないおよび／または制御することのできない出血を起こす可能性がある。これらのキナーゼの機能的なバージョンが欠損しているヒトが重症複合免疫不全または高ＩｇＥ症候群等の多くの疾患を罹患していることを示しているため、ＪＡＫ３およびＴｙｋ２等のその他のＪＡＫの抑制を減少させることも望まれる（Ｍｉｎｅｇｉｓｈｉ、Ｙ、ら  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２５：７４５-５５、２００６；Ｍａｃｃｈｉ  Ｐ、ら  Ｎａｔｕｒｅ．３７７：６５-８、１９９５）。したがって、その他のＪＡＫと親和性が低いＪＡＫ１抑制剤は、免疫抑制、貧血症および血小板減少を含む副作用を減少させることに関して、選択性が低い抑制剤を上回る有意な長所を持つと思われる。
【００１２】
ＪＡＫ抑制剤に有用性があるため、ＪＡＫ抑制剤を作製するための新たな方法の開発が必要とされる。本発明はこの必要性およびその他に関する。
【発明の概要】
【００１３】
ＪＡＫ抑制剤は、２０１１年３月９日に提出された米国特許第１３／０４３，９８６，号に記述され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれ、｛１-｛１-［３-フルオロ-２-（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン-４-イル｝-３-［４-（７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル］アゼチジン-３-イル｝アセトニトリルを含み、以下の式Ｉに描写される。
【化１】
0005977354.tif 000002
【００１４】
本発明は、特に、式Ｉの化合物を作製するための方法および中間体を提供する。具体的には、本発明は式ＩＩ
【化２】
0005977354.tif 000003
の化合物またはその塩を作製するための方法であって、
還元剤の存在下で、式ＩＩＩ
【化３】
0005977354.tif 000004
の化合物またはその塩を、式ＩＶ
【化４】
0005977354.tif 000005
の化合物またはその塩と反応させ、化合物ＩＩまたはその当該塩を形成することを含み、ただし、当該還元剤はシアノ重水素化ホウ素ナトリウムでなく、ここで、Ｐ１は保護基である、方法を提供する。
【００１５】
本発明はまた、式ＩＶ
【化５】
0005977354.tif 000006
の化合物またはその塩を作製する方法であって、
式Ｖ
【化６】
0005977354.tif 000007
の化合物またはその塩を脱保護し、式ＩＶの化合物またはその当該塩を形成することを含む、方法を提供する。
【００１６】
本発明は式Ｖ
【化７】
0005977354.tif 000008
の化合物またはその塩を作製する方法であって、
カップリング剤の存在下で、式ＶＩ
【化８】
0005977354.tif 000009
の化合物またはその塩を、式ＶＩＩ
【化９】
0005977354.tif 000010
の化合物と反応させ、式Ｖの化合物またはその当該塩を形成することを含む、方法を提供する。
【００１７】
本発明はさらに、式Ｖ
【化１０】
0005977354.tif 000011
の化合物またはその塩を提供する。
【００１８】
詳細な説明
本発明は化合物ＩＩ
【化１１】
0005977354.tif 000012
の化合物またはその塩の作製方法であって、還元剤の存在下で、化合物ＩＩＩ
【化１２】
0005977354.tif 000013
の化合物またはその塩を、化合物ＩＶ
【化１３】
0005977354.tif 000014
の化合物またはその塩と反応させ、式ＩＩの化合物またはその当該塩を形成することを含み、ただし当該塩がシアノ重水素化ホウ素ナトリウムでなく、ここでＰ１は保護基である、方法を提供する。
【００１９】
いくつかの実施形態では、式ＩＩＩおよびＩＶの化合物は、好ましくは、遊離塩基として使用され、式ＩＩの化合物は、好ましくは、遊離塩基として産生される。「遊離塩基」は、本明細書に使用されるとき、化合物の塩ではない形を意味する。
【００２０】
いくつかの実施形態では、化合物ＩＩＩと化合物ＩＶの反応は、第三級アミン（例えば、トリエチルアミン）の存在下で行われる。いくつかの実施形態では、反応温度は、≦３０℃である。いくつかの実施形態では、反応は適切な溶媒の中で行われる。いくつかの実施形態では、適切な溶媒はジクロロメタンである。
【００２１】
適切なＰ１保護基として、限定されないが、Ｗｕｔｓ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、４ｔｈ  ｅｄ．、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、頁６９６-８８７（具体的には頁８７２-８８７）（２００７）に描写されるアミン類についての保護基があり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、Ｐ１はベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、２，２，２-トリクロロエトキシカルボニル（Ｔｒｏｃ）、２-（トリメチルシリル）エトキシカルボニル（Ｔｅｏｃ）、２-（４-トリフルオロメチルフェニルスルホニル）エトキシカルボニル（Ｔｓｃ）、ｔ-ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、１-アダマンチルオキシカルボニル（Ａｄｏｃ）、２-アダマンチルカルボニル（２-Ａｄｏｃ）、２，４-ジメチルペント-３-イルオキシカルボニル（Ｄｏｃ）、シクロヘキシルオキシカルボニル（Ｈｏｃ）、１，１-ジメチル-２，２，２-トリクロロエトキシカルボニル（ＴｃＢＯＣ）、ビニル、２-クロロエチル、２-フェニルスルホニルエチル、アリル、ベンジル、２-ニトロベンジル、４-ニトロベンジル、ジフェニル-４-ピリジルメチル、Ｎ’，Ｎ’-ジメチルヒドラジニル、メトキシメチル、ｔ-ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）、２-テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、トリ（Ｃ１-４アルキル）シリル（例えば、トリ（イソプロピル）シリル）、１，１-ジエトキシメチル、−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｓｉ（ＣＨ３）３（ＳＥＭ）またはＮ-ピバロイルオキシメチル（ＰＯＭ）がある。いくつかの実施形態では、Ｐ１は−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｓｉ（ＣＨ３）３である。
【００２２】
還元剤は還元的アミノ化に使用するのに適した還元剤であればよく、Ｅｌｌｅｎ  Ｗ．Ｂａｘｔｅｒ  ａｎｄ  Ａｌｌｅｎ  Ｂ．Ｒｅｉｔｚ、Ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ  Ａｍｉｎａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃａｒｂｏｎｙｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｗｉｔｈ  Ｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ  ａｎｄ  Ｂｏｒａｎｅ  Ｒｅｄｕｃｉｎｇ  Ａｇｅｎｔｓ、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、１章、頁１-５７（Ｗｉｌｅｙ、２００２）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）等の、様々な水素化ホウ素およびボラン還元剤が挙げられる。適切な還元剤の非限定的なクラスとして、水素化ホウ素、シアノ水素化ホウ素、トリ（Ｃ１-４アシル）オキシホウ水素化物（例えば、トリアセトキシホウ水素化物誘導体）、９-ボロビシクロ［３．３．１］ノナンヒドリド、トリ（Ｃ１-４アルキル）水素化ホウ素，およびジソピノカンプテイルシアノホウ水素化物誘導体、アミノボラン類、ボラン-ピリジン複合体、およびアルキルアミンボラン類が挙げられる。適切な還元剤の非限定的な例として、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシホウ水素化ナトリウム，シアノ-９-ボロビシクロ［３．３．１］ノナンヒドリドナトリウム、シアノホウ水素化テトラブチルアンモニウム，固体支持体上のシアノ水素化ホウ素、トリアセトキシホウ水素化テトラメチルアンモニウム、トリアセトキシホウ水素化ナトリウム、水素化トリエチルホウ素リチウム、リチウムトリ（ｓｅｃ-ブチル）水素化ホウ素、ジソピノカンプテイルシアノホウ水素化ナトリウム、カテコールボラン、ボランテトラヒドロフラン、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素カリウム、リチウム水素化ホウ素，水素ガス存在下のパラジウム、５-エチル-２-メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）、２-ピコリンボランまたはポリマー補助トリアセトキシホウ水素化物が挙げられる。いくつかの実施形態では、前述の任意のもの、および好ましくは、シアノ水素化ホウ素ナトリウムを、チタニウム（ＩＶ）添加剤、脱水剤、またはハロゲン化亜鉛添加剤と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、還元剤は、テトラ（Ｃ１-４アルキル）アンモニウムシアノ水素化ホウ素またはトリアセトキシホウ水素化物、アルカリ金属シアノ水素化ホウ素またはトリアセトキシホウ水素化物、またはアルカリ土類シアノ水素化ホウ素またはトリアセトキシホウ水素化物である。いくつかの実施形態では、還元剤はアルカリ金属シアノ水素化ホウ素である。いくつかの実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムおよびトリアセトキシホウ水素化ナトリウムから選択される。いくつかの実施形態では、還元剤はトリアセトキシホウ水素化ナトリウムである。チタニウム（ＩＶ）添加剤は、本明細書に使用されるとき、チタニウム（ＩＶ）金属（例えば、四塩化チタン、オルトチタン酸テトライソプロピル、チタニウムエトキシド等）を含むルイス酸である。
【００２３】
いくつかの実施形態では、方法はさらに、式ＩＩの化合物またはその前記塩を脱保護し、式Ｉ
【化１４】
0005977354.tif 000015
の化合物またはその塩を形成することを含む。
【００２４】
いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物が、式ＩＩの化合物の遊離塩基の形態から、遊離塩基として最初に産生される。
【００２５】
いくつかの実施形態では、脱保護は、式ＩＩの化合物を適切な脱保護剤と反応させることを含む。いくつかの実施形態では、脱保護は、三フッ化ホウ素エテラートで処理し、次に水性水酸化アンモニウムで処理する。いくつかの実施形態では、≦３０℃、≦２０℃、≦１０℃、または≦５℃の温度で、適切な溶媒の中で脱保護を行う。いくつかの実施形態では、適切な溶媒はアセトニトリルである。
【００２６】
いくつかの実施形態では、式ＩＩの化合物を脱保護し、式Ｉの化合物を形成する方法はさらに、式Ｉの化合物をアジピン酸と反応させ、アジピン酸塩を形成することを含む。
【００２７】
いくつかの実施形態では、方法はさらに以下を含む。
（ａ）  メタノール中で式Ｉの化合物を加熱還流して混合物を形成し、
（ｂ）  （ａ）の後、混合物にメチルイソブチルケトンを加え、
（ｃ）  （ｂ）の後、４０℃〜５０℃の内部温度で、蒸留によって溶媒の一部を除去し、濃縮した混合物を形成し、
（ｄ）  （ｃ）の後、濃縮した混合物にメタノールを加え、希釈した混合物を形成し、
（ｅ）  （ｄ）の後、希釈した混合物を加熱還流して混合物を形成し、
（ｆ）  （ｅ）の後、混合物にメチルイソブチルケトンを加え、
（ｇ）  （ｆ）の後、４０℃〜５０℃の内部温度で、蒸留によって溶媒の一部を除去し、濃縮した混合物を形成し、
（ｈ）  （ｇ）の後、濃縮した混合物にアジピン酸およびメタノールを加え、
（ｉ）  （ｈ）の後、混合物を加熱還流し、および
（ｊ）  （ｉ）の後、４０℃〜５０℃の内部温度で、蒸留によって溶媒の一部を除去し、濃縮した混合物を形成し、
（ｋ）  （ｊ）の後、混合物にヘプタンを加え、および
（ｌ）  （ｋ）の後、混合物を室温で撹拌し、式Ｉの化合物のアジピン酸塩を形成する。
【００２８】
Ｐ１基を除去するための式ＩＩの化合物の処理は、Ｗｕｔｓ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、４ｔｈ  ｅｄ．、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、頁６９６-８８７（具体的には、頁８７２-８８７）（２００７）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）等の、アミン類についての特定の保護基を除去するために、当業者に周知の方法によって達成される。例えば、いくつかの実施形態では、Ｐ１基は、フッ化物イオン（例えば、テトラブチルアンモニウムフルオリドで処理）、塩酸、ｐ-トルエンスルホン酸ピリジニウム（ＰＰＴＳ）、またはルイス酸（例えば、テトラフルオロホウ酸リチウム））で処理することによって、除去される。いくつかの実施形態では、処理は、テトラフルオロホウ酸リチウムで処理し、次にアンモニウム水酸化物（例えば、Ｐ１が２-（トリメチルシリル）エトキシメチルであるとき）で処理することを含む。いくつかの実施形態では、処理は、塩基（例えば、Ｐ１はＮ-ピバロイルオキシメチルである）で処理することを含む。いくつかの実施形態では、塩基はアルカリ金属水酸化物である。いくつかの実施形態では、塩基は水酸化ナトリウムである。いくつかの実施形態では、処理は、メタノールまたは水等の溶媒中で、水酸化ナトリウムまたはアンモニアで処理することを含む。
【００２９】
いくつかの実施形態では、式ＩＶの化合物またはその塩は、式Ｖ
【化１５】
0005977354.tif 000016
の化合物またはその塩を脱保護することを含む方法によって産生される。
【００３０】
いくつかの実施形態では、式Ｖの化合物は、好ましくは、遊離塩基として使用され、式ＩＶの化合物は、好ましくは、遊離塩基として産生される。
【００３１】
いくつかの実施形態では、脱保護は水性の酸と反応させることを含む。
【００３２】
いくつかの実施形態では、酸は塩酸である。
【００３３】
いくつかの実施形態では、式Ｖの化合物に相対して、過剰量の水性の酸が使用される。いくつかの実施形態では、式Ｖの化合物に相対して、５、６、７、８、９、または１０当量の過剰量の水性の酸が使用される。いくつかの実施形態では、式Ｖの化合物に相対して、６、７、８、９、または１０当量以上の過剰量の水性の酸が使用される。いくつかの実施形態では、式Ｖの化合物に相対して、７、８、９、または１０当量以上の水性の過剰量の酸が使用される。いくつかの実施形態では、式Ｖの化合物に相対して、８、９、または１０当量以上の過剰量の水性の酸が使用される。いくつかの実施形態では、式Ｖの化合物に相対して、９または１０当量以上の過剰量の水性の酸が使用される。いくつかの実施形態では、式Ｖの化合物に相対して、９当量以上の過剰量の水性の酸が使用される。いくつかの実施形態では、脱保護は、≦３０℃、≦２０℃、≦１０℃、または≦５℃の温度で、アセトニトリル溶媒中で行われる。
【００３４】
その他の適切な脱保護条件として、限定されないが、Ｗｕｔｓ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、４ｔｈ  ｅｄ．、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、頁６９６-８８７（具体的には、頁８７２-８８７）（２００７）があり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００３５】
いくつかの実施形態では、式Ｖの化合物は、カップリング剤の存在下で、式ＶＩ
【化１６】
0005977354.tif 000017
の化合物またはその塩を、式ＶＩＩ
【化１７】
0005977354.tif 000018
の化合物またはその塩と反応させることを含む方法によって産生される。
【００３６】
適正なカップリング剤は、アミンと酸をカップリングし、アミンを形成するためによく知られる任意のカップリング剤である。非限定的な例として、カルボジイミド（例えば、Ｎ，Ｎ’-ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’-ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、１-エチル-３-（３-ジメチルアミノプロピル、またはジメチルアミノプロピル）-Ｎ′-エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ塩酸塩））カルボジイミド（ＥＤＣ）、または１，１′-カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ））、１-ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）またはその水和物の存在下のカルボジイミド試薬、ホスホニウムをベーストするカップリング剤（例えば、ベンゾトリアゾール-１-イルオキシ-トリス（ジメチルアミノ）-ヘキサフルオロリン酸ホスホニウム（ＢＯＰ）、（ベンゾトリアゾール-１-イルオキシ）トリピロリジノヘキサフルオロリン酸ホスホニウム（ＰｙＢＯＰ）、（７-アザベンゾトリアゾール-１-イルオキシ）-トリス-ピロリジノヘヘキサフルオロリン酸ホスホニウム（ＰｙＡＯＰ）、ブロモトリピロリジノヘキサフルオロリン酸ホスホニウム（ＰｙＢｒＯＰ）、ビズ（２-オキソ-３-オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（ＢＯＰ-Ｃｌ））、アミニウムをベースとする試薬（例えば、Ｏ-（ベンゾトリアゾール-１-イル）-Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＨＢＴＵ）、Ｏ-（ベンゾトリアゾール-１-イル）-Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（ＴＢＴＵ）、３-（ジエチルホスホリルオキシ）-１，２，３-ベンゾトリアジン-４（３Ｈ）-オン（ＤＥＰＢＴ）、Ｏ-（７-アザベンゾトリアゾール-１-イル）-Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＨＡＴＵ）、Ｏ-（６-クロロベンゾトリアゾール-１-イル）-Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＨＣＴＵ）、およびＯ-（７-アザベンゾトリアゾール-１-イル）-Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（ＴＡＴＵ））、ウロニウムをベーストする試薬（Ｏ-（５-ノルボルネン-２，３-ジカルボキシミド）-Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（ＴＮＴＵ）、およびＯ-（Ｎ-スクシンイミジル）-１，１，３，３-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（ＴＳＴＵ）、Ｏ-（３，４-ジヒドロ-４-オキソ-１，２，３-ベンゾトリアジンｅ-３-イル）-Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（ＴＤＢＴＵ））、Ｏ-（１，２-ジヒドロ-２-オキソ-１-ピリジル-Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（ＴＰＴＵ）、またはＯ-［（エトキシカルボニル）シアノ-メチルエネアミノ］-Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩（ＴＯＴＵ））、限定されないが、３-（ジエチルホスホリルオキシ）-１，２，３-ベンゾトリアジン-４（３Ｈ）-オン（ＤＥＰＢＴ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'-テルタメチルクロロホルムアミジウムヘキサフルオロリン酸塩（ＴＣＦＨ）、または無水プロピルホスホン酸溶液を含むその他の試薬が挙げられる。いくつかの実施形態では、カップリング剤��、ベンゾトリアゾール-１-イルオキシ-トリス（ジメチルアミノ）-ヘキサフルオロリン酸ホスホニウム（ＢＯＰ）である。
【００３７】
いくつかの実施形態では、式Ｖ、ＶＩ、およびＶＩＩの化合物は、好ましくは、塩でない形にある。
【００３８】
いくつかの実施形態では、式ＶＩおよびＶＩＩの化合物の反応は、第三級アミン（例えば、トリエチルアミン）の存在下で行われる。いくつかの実施形態では、反応は、≦３０℃、≦２０℃、または≦１５℃の温度で、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で行われる。いくつかの実施形態では、カップリング剤は、式ＶＩの化合物に相対して、≧１．０５、≧１．１、または≧１．２当量に存在する。
【００３９】
本発明はまた、上述の方法の中の役に立つ中間体である式Ｖ
【化１８】
0005977354.tif 000019
の化合物またはその塩を提供する。
【００４０】
いくつかの実施形態では、式Ｖの化合物は遊離塩基である。
【００４１】
本明細書に記載の方法は、当該技術分野に周知の任意の適切な方法に従い、モニターすることができる。例えば、生成物の構成は、核磁気共鳴スペクトル測定法（例えば、１Ｈまたは１３Ｃ）、赤外線分光法、または分光測光法（またはＵＶ可視）等の分光器の手法によって、または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）若しくは薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）等のクロマトグラフィー、またはそのほかの関連の技術によって、モニターすることができる。
【００４２】
用語「反応させること」は、本明細書に使用されるとき、当該技術分野に周知のように使用され、一般的には、分子レベルでの化学試薬の相互関係によって、化学的または物理的な変換を達成するような様式で、それらの化学試薬をまとめることを意味する。いくつかの実施形態では、反応させることは、２つの試薬が関与し、１つ以上の当量の第二の試薬を、第一の試薬に関して使用される。一定時間および確認される生成物を調製するのに適した条件下で、本明細書に記載される方法の反応ステップを踏むことができる。
【００４３】
化合物の調製は、様々な化学基を保護および脱保護することを含むことができる。保護および脱保護に必要なこと、および適切な保護基を選択することは、当業者によって容易に決めることができる。保護基の化学は、例えば、Ｇｒｅｅｎｅ、ら、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、４ｄ．Ｅｄ．、Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、２００７に認めることができ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。保護基および構成に調節することおよび本明細書に記載の開裂法を、様々な置換基の観点から、必要なだけ調節してもよい。
【００４４】
本明細書に記載の方法の反応は、有機合成の当業者によって容易に選択することのできる適切な溶媒中で行うことができる。適切な溶媒は、反応が行われる温度、例えば、溶媒の凍結温度から、溶媒の沸騰温度にまで及ぶことのできる温度で、出発材料（反応剤）、中間体、または生成物に実質的には非反応性であり得る。所与の反応は１つの溶媒または１つ以上の溶媒の混合物中で行われる。具体的な反応ステップに依存して、具体的な反応ステップのための適切な溶媒を選択することができる。いくつかの実施形態では、反応は、少なくとも１つの試薬が液体または気体であるとき等の溶媒が存在しない状態で行うことができる。
【００４５】
適切な溶媒として、四塩化炭素、ブロモジクロロメタン、ジブロモクロロメタン、ブロモホルム、クロロホルム、ブロモクロロメタン、ジブロモメタン、塩化ブチル、ジクロロメタン、テトラクロルエチレン、トリクロルエチレン、１，１，１-トリクロロエタン、１，１，２-トリクロロエタン、１，１-ジクロロエタン、２-クロロプロパン、Ｉ，Ｉ，Ｉ-トリフルオロトルエン、１，２-ジクロロエタン、１，２-ジブロモエタン、ヘキサフルオロベンゼン、１，２，４-トリクロロベンゼン、１，２-ジクロロベンゼン、クロロベンゼン、フルオロベンゼン、その混合物等のハロゲン化された溶媒を挙げることができる。
【００４６】
適切なエーテル溶媒として、ジメトキシメタン、テトラヒドロフラン、１，３-ジオキサン、１，４-ジオキサン、フラン、ジエチルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル、ジエチレングリコールジメチルエーテル、ジエチレングリコールジエチルエーテル、トリエチレングリコールジメチルエーテル、アニソール、ｔ-ブチルメチルエーテル、その混合物等が挙げられる。
【００４７】
適切なプロトン性溶媒として、例として、および限定することなく、水、メタノール、エタノール、２-ニトロエタノール、２-フルオロエタノール、２，２，２-トリフルオロエタノール、エチレングリコール、１-プロパノール、２-プロパノール、２-メトキシエタノール、１-ブタノール、２-ブタノール、ｉ-ブチルアルコール、ｔ-ブチルアルコール、２-エトキシエタノール、ジエチレングリコール、１-、２-、または３-ペンタノール、ネオペンチルアルコール、ｔ-ペンチルアルコール、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、シクロヘキサノール、ベンジルアルコール、フェノール、またはグリセロールを挙げることができる。
【００４８】
適切な非プロトン性溶媒として、例として、および限定することなく、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ，Ｎ-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ-ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、１，３-ジメチル-３，４，５，６-テトラヒドロ-２（１Ｈ）-ピリミジノン（ＤＭＰＵ）、１，３-ジメチル-２-イミダゾリジノン（ＤＭＩ）、Ｎ-メチルピロリジノン（ＮＭＰ）、ホルムアミド、Ｎ-メチルアセトアミド、Ｎ-メチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、プロピオニトリル、ギ酸エチル、酢酸メチル、ヘキサクロロアセトン、アセトン、エチルメチルケトン、酢酸エチル、スルホラン、Ｎ，Ｎ-ジメチルプロピオンアミド、テトラメチル尿素、ニトロメタン、ニトロベンゼン、またはヘキサメチルリン酸トリアミドを挙げることができる。
【００４９】
適切な炭化水素の溶媒として、ベンゼン、シクロヘキサン、ペンタン、ヘキサン、トルエン、シクロヘプタン、メチルシクロヘキサン、ヘプタン、エチルベンゼン、ｍ-、ｏ-、若しくはｐ-キシレン、オクタン、インダン、ノナン、またはナフタリンが挙げられる。
【００５０】
本明細書に記載の方法の反応は、技術のある当業者によって容易に決めることができる適切な温度で行われる。反応温度は、例えば、試薬および溶媒の溶解点および沸点に依存し、存在するならば、反応の熱力学（例えば、活発に発熱する反応は、低い温度で行う必要があるかもしれない）、および反応の動力学（例えば、高い活性エネルギー障壁は、高温を必要とするかもしれない
）がある。「高温」とは、室温（約２２℃）以上の温度を意味する。
【００５１】
本明細書に記載の方法の反応は、空気または不活性雰囲気下で行うことができる。典型的には、空気と実質的に反応性のある試薬または生成物を含む反応は、技術のある当業者によく知られている空気に感受性のある合成技術を使用して、行うことができる。
【００５２】
いくつかの実施形態では、化合物の調製は、例えば、所望の反応または酸付加塩等の、塩の形態の構成の触媒作用に影響する酸類または塩基類を加えることを含むことができる。
【００５３】
実施例の酸類として、無機または有機酸である可能性がある。無機酸類として、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、および硝酸が挙げられる。有機酸として、ギ酸、酢酸、プロパン酸、ブタン酸、安息香酸、４-ニトロ安息香酸、メタンスルホン酸、ｐトルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、酒石酸、トリフルオロ酢酸、プロピオル酸、酪酸、２-ブチン酸、ビニル酢酸、ペンタン酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸およびデカン酸が挙げられる。
【００５４】
実施例の塩基類として、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、および炭酸カリウムが挙げられる。いくつかの実施例の強塩基類として、限定されないが、水酸化物、アルコキシド、金属アミド、金属水素化物、金属ジアルキルアミドおよびアリールアミン類が挙げられ、アルコキシドとして、リチウム、メチルのナトリウムおよびカリウム塩、エチルおよびｔ-ブチル酸化物が挙げられ；金属アミドとして、ナトリウムアミド、カリウムアミドおよびリチウムアミドが挙げられ；金属水素化物として、水素化ナトリウム、水素化カリウムおよび水素化リチウムが挙げられ；並びに金属ジアルキルアミドとして、メチルのナトリウムおよびカリウム塩、エチル、ｎ-プロピル、ｉ-プロピル、ｎ-ブチル、ｔ-ブチル、トリメチルシリルおよびシクロヘキシル置換アミドが挙げられる。
【００５５】
中間体および生成物はまた、本明細書に開示の化合物の塩を含んでいてもよい。用語「塩」は、本明細書に使用されるとき、許容可能な酸または塩基を本明細書に開示の化合物に加えることによって形成される塩を意味する。いくつかの実施形態では、塩類は、本明細書に開示される化合物の塩を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、フレーズ「薬剤的に許容可能な」は、中毒の観点から、薬剤的な適用に使用するのに許容できる物質を意味し、有効成分に有害に相互作用しない。一および二塩類をふくむ薬剤的に許容可能な塩として、限定されないが、酢酸、乳酸、クエン酸、ケイ皮酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、マロン酸、マンデル酸、リンゴ酸、シュウ酸、プロパン酸、塩化水素、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、グリコール酸、ピルビン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、サリチル酸、安息香酸、および同様に周知の許容可能な酸等の有機および無機酸類に由来するものが挙げられるが、これに限定されない。適切な塩類の列挙は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１７ｔｈ  ｅｄ．、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、１９８５、ｐ．１４１８  およびＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、６６、２（１９７７）に認められ、それらはそれぞれ参照により本明細書に組み込まれる。
【００５６】
本明細書に記載の方法に従い、化合物の調製を実施するとき、濃縮、濾過、抽出、固相の抽出、再結晶化、クロマトグラフィー等の通常の単離および精製の操作を使用して、所望の生成物を単離してもよい。
【００５７】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物およびその塩は、実質的に単離される。「実質的に単離される」とは、化合物が、形成されまたは検出された環境から、少なくとも部分的にまたは実質的に分離されることを意味する。部分的な分離は、例えば、本発明の化合物に豊富にある組成物を含むことができる。実質的な分離は、本発明の化合物またはその塩の重量の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、または少なくとも約９９％を含む組成物を含むことができる。化合物およびそれらの塩類を分離する方法は、当該技術分野に慣例である。
【００５８】
使用
式Ｉの化合物、｛１-｛１-［３-フルオロ-２-（トリフルオロメチル）イソニコチノイル］ピペリジン-４-イル｝-３-［４-（７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル］アゼチジン-３-イル｝アセトニトリルは、ＪＡＫ（例えばＪＡＫ１、ＪＡＫ２）の抑制剤である。ＪＡＫ抑制剤は、様々なＪＡＫが関連する疾患または障害の治療に役に立つ。ＪＡＫが関連する疾患の例として、例えば、臓器移植拒絶（例えば、同種移植拒絶および移植片対宿主病）を含む免疫系が関与する疾患が挙げられる。ＪＡＫが関連する疾患の例としてさらに、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、若年性関節炎、乾癬性関節炎、タイプＩ糖尿病、狼瘡、乾癬、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、重症筋無力症、免疫グロブリン腎症、心筋炎、自己免疫甲状腺疾患、慢性障害肺疾患（ＣＯＰＤ）等の自己免疫疾患が挙げられる。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患は、尋常性天疱瘡（ＰＶ）または水疱性類天疱瘡（ＢＰ）等の自己免疫水疱性皮膚疾患である。
【００５９】
ＪＡＫが関連する疾患の例としてさらに、喘息、食物アレルギー、湿疹性皮膚炎、接触皮膚炎、アトピー皮膚炎（アトピー性湿疹）、および鼻炎等のアレルギー病態が挙げられる。ＪＡＫが関連する疾患の例としてさらに、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ１、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）およびヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）等のウイルス性疾患が挙げられる。
【００６０】
ＪＡＫが関連する疾患の例としてさらに、軟骨ターンオーバーが関連する疾患、例えば、痛風性関節炎、化膿性または感染性関節炎、反応性関節炎、反射性交感神経性ジストロフィー、疼痛性ジストロフィー、ティーツェ症候群、助骨関節症、地方性変形性骨関節炎、Ｍｓｅｌｅｎｉ病、Ｈａｎｄｉｇｏｄｕ病、線維筋痛症から生じる変性、全身性エリテマトーデス、強直性脊椎炎、または共強直性脊椎炎が挙げられる。
【００６１】
ＪＡＫが関連する疾患の例としてさらに、遺伝性軟骨溶解、軟骨異形成、およびｐｓｅｕｄｏｃｈｒｏｎｄｒｏｄｙｓｐｌａｓｉａ（例えば、小耳症、無耳症、および骨幹端軟骨異形成）が挙げられる。
【００６２】
ＪＡＫが関連する疾患または病態の例としてさらに、乾癬（例えば、尋常性乾癬）、アトピー皮膚炎、皮疹、皮膚刺激、皮膚感作性（例えば、接触皮膚炎またはアレルギー性接触性皮膚炎）等の皮膚障害が挙げられる。例えば、局所的に適用されるときに、いくつかの薬剤を含むある物質が、皮膚感作性を起こす可能性がある。いくつかの実施形態では、不必要な感作性を起こす薬剤と一緒に、少なくとも１つの本発明のＪＡＫ抑制剤を、同時投与または逐次投与することによって、このような不必要な感作性または皮膚炎を治療するのに役に立つ可能性がある。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの本発明のＪＡＫ抑制剤を局所投与することによって、皮膚障害は治療される。
【００６３】
ＪＡＫが関連する疾患または病態の例としてさらに、固形腫瘍（例えば、前立腺癌、腎癌、肝癌、膵臓癌、胃癌、乳癌、肺癌、頭頸部癌、甲状腺癌、神経膠芽細胞腫、カポジ肉腫、カストルマン病、子宮平滑筋肉腫、黒色腫）、血液癌（例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または多発性骨髄腫等のリンパ腫、白血病）、並びに皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）および皮膚Ｂ細胞リンパ腫等の皮膚癌を特徴とするものが挙げられる。ＣＴＣＬの例として、セザリー症候群および菌状息肉腫が挙げられる。ＪＡＫが関連する疾患または病態のその他の例として、肺動脈性肺高血圧症がある。
【００６４】
ＪＡＫが関連する疾患または病態のその他の例として、炎症が関連する癌がある。いくつかの実施形態では、癌は炎症性腸疾患に関連する。いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患潰瘍性大腸炎は潰瘍性大腸炎である。いくつかの実施形態では、炎症性腸疾患はクローン病である。いくつかの実施形態では、炎症が関連する癌は、大腸炎が関連する癌である。いくつかの実施形態では、炎症が関連する癌は結腸癌または大腸癌である。いくつかの実施形態では、癌は、胃癌、消化管カルチノイド、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、腺癌、小腸癌、または直腸癌である。
【００６５】
ＪＡＫが関連する疾患としてさらに、仮性キナーゼ領域（例えば、ＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ）に少なくとも１つの変異を有するもの等のＪＡＫ２変異体；仮性キナーゼ領域の外に少なくとも１つの変異を有するもの等のＪＡＫ２変異体；ＪＡＫ１変異体；ＪＡＫ３変異体；エリスロポエチン受容体（ＥＰＯＲ）変異体；またはＣＲＬＦ２の脱調節発現を特徴とするものを挙げることができる。
【００６６】
ＪＡＫが関連する疾患としてさらに、真性多血症（ＰＶ）、本態性血小板血症（ＥＴ）、骨髄化生を伴う骨髄線維症（ＭＭＭ）、原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、過好酸性症候群（ＨＥＳ）、全身性肥満細胞症（ＳＭＣＤ）等の骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、骨髄増殖性疾患は骨髄線維症（例えば、原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）または真性多血症／本態性血小板血症後の骨髄線維症（Ｐｏｓｔ-ＰＶ／Ｐｏｓｔ-ＥＴ  ＭＦ））である。いくつかの実施形態では、骨髄増殖性疾患は血小板血症後の骨髄線維症（Ｐｏｓｔ-ＥＴ  ＭＦ）である。いくつかの実施形態では、骨髄増殖性疾患は真性赤血球増加症の骨髄線維症（Ｐｏｓｔ−ＰＶ  ＭＦ）である。
【００６７】
ＪＡＫが関連する疾患または病態のその他の例は、本発明の化合物を投与することによって、その他の薬剤の皮膚科学的な副作用を寛解させることを含む。例えば、多くの薬剤は、ざ瘡様発疹または関連の皮膚炎として明らかになる可能性のある不必要なアレルギー反応を起こす。望まれない副作用等を有する薬剤の例として、ゲフィチニブ、セツキシマブ、エルロチニブ等の抗癌剤が挙げられる。本発明の化合物は、望まれない皮膚科学的な副作用を有さない薬剤と併用して、全身にまたは局所的（例えば、皮膚炎の周辺に局所的に）に、（例えば、同時にまたは逐次的に）投与することができる。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は１つ以上のその他の薬剤と共に、局所的に投与することができ、ここでその他の薬剤は、本発明の化合物が存在しない状態で局所的に投与すると、接触皮膚炎、アレルギー接触感作性または類似の皮膚障害を起こす。したがって、本発明の組成物は、本発明の化合物および皮膚炎、皮膚障害または関連の副作用を起こす可能性のある薬剤を含む、局所製剤を含む。
【００６８】
ＪＡＫが関連する疾患として、炎症および炎症性疾患が挙げられる。炎症性疾患の例として、サルコイドーシス、目の炎症性疾患（例えば、虹彩炎、ぶどう膜炎、強膜炎、結膜炎、または関連する疾患）、気道の炎症性疾患（例えば、鼻炎または副鼻腔炎等の鼻および洞を含む上気道、または気管支炎、慢性閉塞性肺疾患等を含む下気道）、心筋炎等の炎症性筋疾患、およびその他の炎症性疾患が挙げられる。いくつかの実施形態では、目の炎症疾患は眼瞼炎である。
【００６９】
ＪＡＫが関連する疾患としてさらに、卒中若しくは心停止等の炎症性虚血性イベントに関連する虚血再灌流損傷、疾患若しくは病態、エンドトキシンによる病態（例えば、バイパス手術後の合併症または慢性心不全に寄与する慢性エンドトキシン）、食欲不振、悪液質、癌から生じるまたは関連する疲労、再狭窄、硬化性皮膚炎、繊維症、例えば、糖尿病網膜症、癌、若しくは神経変性等の低酸素症若しくはアストログリオーシスが関連する病態、並びに全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）および敗血症性ショック等のその他の炎症性疾患が挙げられる。
【００７０】
その他のＪＡＫが関連する疾患として、例えば、良性前立腺肥大症または良性前立腺による過形成痛風および前立腺の大きさの増加、並びに骨粗鬆症または骨関節炎等の骨吸収疾患、ホルモンバランスおよび／またはホルモン療法が関連する骨吸収疾患、自己免疫疾患（例えば、骨性サルコイドーシス）、または癌（例えば、骨髄腫）が挙げられる。
【００７１】
ＪＡＫが関連する疾患としてさらに、ドライアイ障害が挙げられる。「ドライアイ障害」とは、本明細書に使用される時、Ｄｒｙ  Ｅｙｅ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ（ＤＥＷＳ）の最近の公式報告書にまとめられた病態を含むことを意図し、そこでは、ドライアイを、「不快感、視覚障害、および眼表面に潜在的な損傷を伴う涙膜の不安定という症状が生じる涙および眼表面の多因子の疾患。涙膜のモル浸透圧濃度の上昇および眼表面の炎症を伴う。」として定義している。Ｌｅｍｐ，“Ｔｈｅ  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｒｙ  Ｅｙｅ  Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｓｕｂｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｙ  Ｅｙｅ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ”、Ｔｈｅ  Ｏｃｕｌａｒ  Ｓｕｒｆａｃｅ、５（２）、７５-９２  Ａｐｒｉｌ  ２００７，参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ドライアイ障害は、涙液欠乏性ドライアイ（ＡＤＤＥ）若しくは蒸発性ドライアイ障害，またはその適当な組み合わせから選択される。いくつかの実施形態では、ドライアイ障害はシェーグレン症候群ドライアイ（ＳＳＤＥ）である。いくつかの実施形態では、ドライアイ障害は非シェーグレン症候群ドライアイ（ＮＳＳＤＥ）である。
【００７２】
ＪＡＫが関連する疾患としてさらに、結膜炎、ぶどう膜炎（慢性ぶどう膜炎を含む）、脈絡膜炎、網膜炎、毛様体炎、強膜炎、上強膜炎、または虹彩炎が挙げられる。その他のＪＡＫが関連する疾患として、インフルエンザおよびＳＡＲＳ等のウイルス感染が関連する呼吸器機能不全（ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ）または不全（ｆａｉｌｕｒｅ）が挙げられる。
【実施例】
【００７３】
具体的な実施例によって本発明をもっと詳細に記述する。以下の実施例は、説明の目的で提供されるものであり、いかなる様式においても本発明を制限することを意図しない。当業者は変化させまたは修正することのできる重要ではない種々の数値を容易に認識し、本質的に同じ結果を生み出す。
【００７４】
実施例１．４-（１Ｈ-ピラゾール-４-イル）-７-（（２-（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン（５）の合成
【化１９】
0005977354.tif 000020
【００７５】
ステップ１．  ４-クロロ-７-（（２-（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン（３）
窒素吸入口、付加ロート、サーモウェル、および攪拌装置（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ｓｔｉｒｒｅｒ）を備えたフラスコに、４-クロロ-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン（１，６００ｇ、３．９１ｍｏｌ）およびＮ，Ｎ-ジメチルアセトイミド（ＤＭＡＣ、９．６Ｌ）を室温で加えた。混合物は氷／鹹水浴に０〜５℃に冷却し、０〜５℃で、固体の水素化ナトリウム（ＮａＨ、６０重量％、１７４ｇ、４．３５ｍｏｌ、１．１当量）を分けて加えた。反応混合液は１５分後に暗い色の溶液に変化した。内部の反応温度が５℃を超えない速度で、付加ロートを経由して、トリメチルシリルエトキシメチルクロリド（２、ＳＥＭ-Ｃｌ、７６３ｍＬ、４．３１ｍｏｌ、１．１当量）をゆっくりと加えた。その後、反応混合物を０〜５℃で３０分間撹拌した。反応が完全にＴＬＣおよびＨＰＬＣによって確認されると、反応混合物を水（１Ｌ）で急冷した。混合物を水（１２Ｌ）およびメチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）（８Ｌ）で希釈した。２つの層に分離し、水層をＭＴＢＥ（８Ｌ）で抽出した。１つにまとめた有機層を水（４Ｌを２回）および鹹水（４Ｌ）で洗浄し、溶媒を１-ブタノールに変えた。１-ブタノール中の粗生成物（３）の溶液は、さらに精製することなく、続いて鈴木カップリング反応に使用した。あるいは、ＭＴＢＥ中の粗生成物（３）の有機溶液を硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去した。その後、残渣をヘプタン（２Ｌ）に溶解し、濾過し、ヘプタン（６Ｌ）、９５％のヘプタン／酢酸エチル（１２Ｌ）、９０％のヘプタン／酢酸エチル（１０Ｌ）、および最終的に８０％のヘプタン／酢酸エチル（１０Ｌ）で溶出しているシリカゲル（ＳｉＯ２、３．５Ｋｇ）カラム上に充填した。純粋な所望の生成物を含む画分を１つにまとめ、減圧下で濃縮し、室温で油性固形に部分的に固まったままの淡黄色の油として、４-クロロ-７-（（２-（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン（３、９８７ｇ、１１０９．８ｇ理論値、８８．９％収率）を得た。３について：１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ-ｄ６、３００ＭＨｚ）δ８．６７（ｓ、１Ｈ）、７．８７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．８Ｈｚ）、６．７１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．６Ｈｚ）、５．６３（ｓ、２Ｈ）、３．５０（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７．９Ｈｚ）、０．８０（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝８．１Ｈｚ）、１．２４（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ-ｄ６、１００ＭＨｚ）δ１５１．３、１５０．８、１５０．７、１３１．５、１１６．９、９９．３、７２．９、６５．８、１７．１、-１．４８ｐｐｍ；Ｃ１２Ｈ１８ＣｌＮ３ＯＳｉ（ＭＷ  ２８３．８３）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ  ２８４／２８６（Ｍ＋＋Ｈ）。
【００７６】
ステップ２．  ４-（１Ｈ-ピラゾール-４-イル）-７-（（２-（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン（５）
オーバーヘッドスターラー（ｏｖｅｒｈｅａｄ  ｓｔｉｒｒｅｒ）、冷却器、サーモウェル、および窒素吸入口を備えた反応器に、室温で、水（Ｈ２Ｏ、９．０Ｌ）、固体の炭酸カリウム（Ｋ２ＣＯ３、４４６１ｇ、３２．２８ｍｏｌ、２．４２当量）、４-クロロ-７-（（２-（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン（３、３５９７ｇ、１２．６７ｍｏｌ）、１-（１-エトキシエチル）-４-（４，４，５，５-テトラメチル-１，３，２-ジオキサボロラン-２-イル）-１Ｈ-ピラゾール（４、３５５０ｇ、１３．３４ｍｏｌ、１．０５当量）、および１-ブタノール（２７Ｌ）を装填した。得られる反応混合物を、窒素で満たしながら３回脱ガスし、室温でテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、４６ｇ、０．０４０ｍｏｌ、０．００３当量）で処理した。得られる反応混合物を１〜４時間、穏やかな還流（約９０℃）に加熱した。反応が完全にＨＰＬＣによって確認されると、反応混合物をゆっくりと室温に冷やし、セライトベッドによって濾過した。セライトベッドを酢酸エチル（２Ｌを２回）で洗浄し、濾過物および洗浄した溶液を１つにまとめた。２つの層に分離し、水層を酢酸エチル（１２Ｌ）で抽出した。１つにまとめた有機層を減圧下で濃縮し、溶媒を除去し、粗の４-（１-（１-エトキシエチル）-１Ｈ-ピラゾール-４-イル）-７-（（２-（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン（６）を、さらに精製することなく、続く酸が促進された脱保護反応のために、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、４．２Ｌ）と共に、反応器に直接戻して装填した。
【００７７】
反応器内のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、４．２Ｌ）中、上述に記述したように作製された粗の４-（１-（１-エトキシエチル）-１Ｈ-ピラゾール-４-イル）-７-（（２-（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン（６）の懸濁液に、室温で、水（Ｈ２Ｏ、２０．８Ｌ）、および１０％のＨＣｌ水溶液（１６．２Ｌ、４５．８９ｍｏｌ、３．４４当量）を装填した。得られる反応混合物を２〜５時間、１６〜３０℃で撹拌した。反応が完全にＨＰＬＣ分析によって確認されると、反応混合物を室温で３０％の水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）水溶液（４Ｌ、５０．４２ｍｏｌ、３．７８当量）で処理した。得られる反応混合物を室温で１〜２時間撹拌した。固形物を濾過によって集め、水（５Ｌを２回）で洗浄した。濡れたケークをアセトニトリル（２１．６Ｌ）と共に反応器に戻して装填し、得られる懸濁液を穏やかな還流で１〜２時間加熱した。その後、澄んだ溶液を、撹拌しながら、ゆっくりと室温に冷やし、冷却しながら、固形物を溶液から沈殿させた。混合物をさらに１〜２時間室温で撹拌した。固形物を濾過によって集め、アセトニトリル（３．５Ｌを２回）で洗浄し、４５〜５５℃で、減圧下で、オーブンの中で恒量に乾燥させ、結晶性の固形物として、４-（１Ｈ-ピラゾール-４-イル）-７-（（２-（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン（５，３２８１．７ｇ、３９９６．８ｇ理論値、８２．１％収率）を得た（９９．５ＨＰＬＣ面積％）。５について：１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ-ｄ６、４００ＭＨｚ）δ１３．４１（ｂｒ．ｓ、１Ｈ）、８．７４（ｓ、１Ｈ）、８．６７（ｂｒ．ｓ、１Ｈ）、８．３５（ｂｒ．ｓ、１Ｈ）、７．７２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．７Ｈｚ）、７．１０（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．７Ｈｚ）、５．６１（ｓ、２Ｈ）、３．５１（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝８．２Ｈｚ）、０．８１（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝８．２Ｈｚ）、０．１３（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ；Ｃ１５Ｈ２１Ｎ５ＯＳｉ（ＭＷ、３１５．４５）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ  ３１６（Ｍ＋＋Ｈ）。
【００７８】
実施例２．ｔｅｒｔ-ブチル３-（シアノメチレン）アゼチジン-１-カルボキシレート（１３）
【化２０】
0005977354.tif 000021
【００７９】
ステップ１．  １-ベンズヒドリルアゼチジン-３-オール塩酸塩（９）
メタノール（ＭｅＯＨ、６Ｌ）中のジフェニルメタンアミン（７，２７３７ｇ、１５．０ｍｏｌ、１．０４当量）の溶液を、室温で、付加ロートからの２-（クロロメチル）オキシラン（８，１３３０ｇ、１４．５ｍｏｌ）で処理した。最初の追加中にわずかな吸熱に気が付いた。得られる反応混合物を室温で３日間撹拌し、さらに３日間、還流に温めた。ＴＬＣによって反応が完了したと思われたら、反応混合物を最初に室温、その後、氷浴に０〜５℃に冷やした。固形物を濾過により集め、アセトン（４Ｌ）で洗浄し、最初の所望の粗生成物を得た（９，１５１６ｇ）。濾過物を減圧下で濃縮し、得られる半固体をアセトン（１Ｌ）で希釈した。その後、固体を濾過により集め、２番目の所望の粗生成物を得た（９，２２１ｇ）。粗生成物である１-ベンズヒドリルアゼチジン-３-オール塩酸塩（９，１７３７ｇ、３９９８．７ｇ理論値、４３．４％収率）を、さらに精製することなく、次の反応に使用するのに十分に純粋であることがわかった。９について：１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ-ｄ６、３００ＭＨｚ）、δ１２．２８（ｂｒ．ｄ、１Ｈ）、７．７（ｍ、５Ｈ）、７．４９（ｍ、５Ｈ）、６．３８（ｄ、１Ｈ）、４．７２（ｂｒ．ｓ、１Ｈ）、４．４６（ｍ、１Ｈ）、４．１２（ｍ、２Ｈ）、３．８５（ｍ、２Ｈ）ｐｐｍ；Ｃ１６Ｈ１８ＣｌＮＯ（９、Ｃ１６Ｈ１７ＮＯ  ＭＷの遊離塩基、２３９．３１）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ  ２４０（Ｍ＋＋Ｈ）。
【００８０】
ステップ２．  ｔｅｒｔ-ブチル３-ヒドロキシアゼチジン-１-カルボキシレート（１０）
水性炭酸ナトリウム（Ｎａ２ＣＯ３、５Ｌ）およびジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２、５Ｌ）の１０％の溶液中、１-ベンズヒドリルアゼチジン-３-オール塩酸塩（９，６２５ｇ、２．２７ｍｏｌ）の懸濁液を、固形物が残らず溶解するまで、室温で撹拌した。２つの層に分離し、水層をジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２、２Ｌ）で抽出した。１つにまとめた有機抽出物を硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥させ、減圧下で濃縮した。その後、この得られる９の粗の遊離塩基をＴＨＦ（６Ｌ）に溶解し、溶液を大きなパールボンブに配置した。ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネート（ＢＯＣ２Ｏ、５４５ｇ、２．５ｍｏｌ、１．１当量）および２０％のパラジウム（Ｐｄ）炭素（１２５ｇ、５０％湿潤）をパールボンブに加えた。容器に水素ガス（Ｈ２）で３０ｐｓｉまで装填し、安定した水素雰囲気下で、室温で１８時間、撹拌した（圧を３０ｐｓｉに保つために容器に３回再装填した）。ＨＰＬＣによって反応が完了したら（水素がこれ以上取り込まれない）、反応混合物をセライトパッドによって濾過し、セライトパッドをＴＨＦ（４Ｌ）で洗浄した。濾過物を減圧下で濃縮し、溶媒を除去し、残渣を、最小量のジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２）と共に、Ｂｉｏｔａｇｅ１５０カラム上に充填した。カラムをヘプタン中の２０〜５０％の酢酸エチルで溶出し、純粋な所望の生成物（１０）を含む画分を集め、１つにまとめた。溶媒を減圧下で除去し、真空中の室温で固まっているままの無色の油として、ｔｅｒｔ-ブチル３-ヒドロキシアゼチジン-１-カルボキシレート（１０，３５７ｇ、３９３．２ｇ理論値、９０．８％収率）を得た。１０について：１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）、δ４．５６（ｍ  １Ｈ）、４．１３（ｍ、２Ｈ）、３．８１（ｍ、２Ｈ）、１．４３（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ。
【００８１】
ステップ３．  ｔｅｒｔ-ブチル３-オキソアゼチジン-１-カルボキシレート（１１）
酢酸エチル（４００ｍＬ）中のｔｅｒｔ-ブチル３-ヒドロキシアゼチジン-１-カルボキシレート（１０、５０ｇ、２８９ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却した。その後、得られる溶液を、０〜５℃で、固体のＴＥＭＰＯ（０．５ｇ、３．２ｍｍｏｌ、０．０１１当量）および水（６０ｍＬ）中の臭化カリウム（ＫＢｒ、３．９ｇ、３３．２ｍｍｏｌ、０．１１５当量）の溶液で処理した。反応温度を０〜５℃の間に保ちながら、飽和水性炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３、４５０ｍＬ）および次亜塩素酸ナトリウム水溶液（ＮａＣｌＯ、１０〜１３％使用可能な塩素、４５０ｍＬ）の溶液を加えた。次亜塩素酸ナトリウムの溶液を一度加えると、反応混合液の色が直ちに変化した。追加量の次亜塩素酸ナトリウム溶液を加えると、反応混合液の色が徐々に失われた。ＴＬＣによって出発材料が残らず消費されたことが示されると、反応混合液の色はこれ以上変化しなかった。その後、反応混合液を酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ、５００ｍＬ）で希釈し、２つの層に分離した。有機層を水（５００ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥させた。その後、溶媒を減圧下で除去し、粗生成物であるｔｅｒｔ-ブチル３-オキソアゼチジン-１-カルボキシレート（１１、４８ｇ、４９．４７ｇ理論値、９７％収率）を得て、十分に純粋であることがわかり、さらに精製することなく、次の反応に直接使用した。粗の１１について：１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）、δ４．６５（ｓ、４Ｈ）、１．４２（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ。
【００８２】
ステップ４．  ｔｅｒｔ-ブチル３-（シアノメチレン）アゼチジン-１-カルボキシレート（１３）
ジエチルシアノメチル酢酸塩（１２、７４５ｇ、４．２０ｍｏｌ、１．２０当量）および無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、９Ｌ）を、室温で、サーモウェル、付加ロートおよび窒素保護管を備えた四ツ口フラスコに加えた。溶液を氷−メタノール浴で−１４℃に冷却し、反応温度を−５℃以下に保ちながら、無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、３．８５Ｌ、３．８５ｍｏｌ、１．１当量）中のカリウムｔｅｒｔ-ブトキシド（ｔ-ＢｕＯＫ）の１．０Ｍの溶液を、２０分間にわたって加えた。得られる反応混合物を−１０℃で３時間撹拌し、内部温度を−５℃以下に保ちながら、無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、２Ｌ）中の１-ｔｅｒｔ-ブトキシカルボニル-３-アゼチジンオンの溶液（１１、６００ｇ、３．５０ｍｏｌ）を２時間にわたって加えた。反応混合物を−５〜−１０℃で１時間にわたって撹拌し、その後、室温にゆっくりと温め、室温で一晩撹拌した。反応混合物を水（４．５Ｌ）および飽和塩化ナトリウム水溶液（ＮａＣｌ、４．５Ｌ）で希釈し、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ、９Ｌを２回）で抽出した。１つにまとめた有機層を鹹水（６Ｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥させた。有機溶媒を減圧下で除去し、残渣をジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２、４Ｌ）で希釈し、シリカゲル（ＳｉＯ２、１．５Ｋｇ）上で吸収した。シリカゲル上で吸収された粗生成物はフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、３．５Ｋｇ、０〜２５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配溶出）によって精製し、白色の固体として、ｔｅｒｔ-ブチル３-（シアノメチレン）アゼチジン-１-カルボキシレート（１３、４１４．７ｇ、６７９．８ｇ理論値、６１％収率）を得た。１３について：１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）、δ５．４０（ｍ、１Ｈ）、４．７０（ｍ、２Ｈ）、４．６１（ｍ、２Ｈ）、１．４６（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ；Ｃ１０Ｈ１４Ｎ２Ｏ２（ＭＷ、１９４．２３）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ  ２１７（Ｍ＋＋Ｎａ）。
【００８３】
実施例３．（３-フルオロ-２-（トリフルオロメチル）ピリジン-４-イル）（１，４-ジオキサ-８-アザスピロ［４，５］デカン-８-イル）メタノン（１７）
【化２１】
0005977354.tif 000022
【００８４】
ステップ１．  １，４-ジオキサ-８-アザスピロ［４．５］デカン（１５）
攪拌装置（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ｓｔｉｒｒｅｒ）、付加ロートおよびセプタムを備えた３０Ｌの反応器に、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ、１．４ｋｇ、３５ｍｏｌ）および水（７Ｌ、３．１３ｋｇ、１７．４３ｍｏｌ）を装填した。得られる溶液に１，４-ジオキサ-８-アザスピロ［４．５］デカン塩酸（１４、３．１３ｋｇ、１７．４３ｍｏｌ）を加えた。混合物を３０分間２５℃で撹拌した。その後、溶液は塩化ナトリウム（１．３ｋｇ）で飽和し、２-メチル-テトラヒドロフラン（７Ｌを３回）で抽出した。１つにまとめた有機層を無水硫酸ナトリウム（１．３ｋｇ）で乾燥させ、濾過し、５０℃の減圧下（７０ｍｍＨｇ）で濃縮した。得られた黄色の油を減圧下（８０ｍｍＨｇ、ｂｐ：１１５℃〜１２０℃）で蒸留し、澄んだ油として、化合物１５（２．３４ｋｇ、１６．３６ｍｏｌ、９３．８％）を得て、次のカップリング反応に直接使用した。
【００８５】
ステップ２．  （３-フルオロ-２-（トリフルオロメチル）ピリジン-４-イル）（１，４-ジオキサ-８-アザスピロ［４，５］デカン-８-イル）メタノン（１７）
攪拌装置（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ｓｔｉｒｒｅｒ）、付加ロート、温度計および真空取出口を備えた１００Ｌの乾燥した反応器に、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１８Ｌ）中、３-フルオロ-２-（トリフルオロメチル）イソニコチン酸（１６、３．０ｋｇ、１４．３５ｍｏｌ）、ベンゾトリアゾール-１-イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ヘキサフルオロリン酸ホスホニウム（ＢＯＰ試薬、７．６ｋｇ、１７．２ｍｏｌ、１．２０当量）を配置した。得られる溶液に、２０分間にわたって撹拌しながら、１，４-ジオキサ-８-アザスピロ［４．５］デカン（１５、２．３４ｋｇ、１６．３６ｍｏｌ、１．１４当量）を加えた。トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ、４Ｌ、２８．６７ｍｏｌ、２．００当量）を１時間にわたって加えた。添加中の温度を５℃〜１０℃の間に保った。茶褐色の溶液を得て、２０℃で１２時間撹拌し、その後、１０℃に冷やした。強く撹拌しながら、１８Ｌの飽和重炭酸ナトリウム溶液および３６Ｌの水を続けて加え、温度を１５℃以下に保った。沈殿物（濾過ケーク）を得て、濾過により集めた。水相を１２ｋｇの固体の塩化ナトリウムで飽和し、ＥｔＯＡｃ（１８Ｌを２回）で抽出した。１つにまとめた有機層を飽和重炭酸ナトリウム溶液（１８Ｌ）および水（１８Ｌを２回）で続けて洗浄した。先の濾過からの濾過ケークを有機相に戻し、溶解した。茶褐色の溶液を得て、１８Ｌの水でそれぞれ２回洗浄し、その後、減圧下（４０〜５０℃、３０ｍｍＨｇ）で濃縮し、粘着性のある茶色の油として、５．０ｋｇの粗生成物を得た。上で得られた粗生成物１７を５０℃でＥｔＯＨ（８．１５Ｌ）に溶解した。水（１６．３Ｌ）を３０分間にわたって加えた。茶色の溶液を蒔き、撹拌しながら３時間にわたって２０℃に冷却し、１２時間、２０℃で撹拌した。形成された沈殿物を濾過し、ＥｔＯＨおよび水（ＥｔＯＨ：Ｈ２Ｏ＝１：２０、２Ｌ）の混合液で洗浄し、２４時間にわたって６０℃で、減圧下（５０ｍｍＨｇ）で乾燥させ、白色の粉末として、（３-フルオロ-２-（トリフルオロメチル）ピリジン-４-イル）（１，４-ジオキサ-８-アザスピロ［４，５］デカン-８-イル）メタノン（１７、３．９８ｋｇ、１１．９２ｍｏｌ、８３．１％）を得た。１７について：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）δ８．６４（ｄ、３ＪＨＨ＝４．６８Ｈｚ、１Ｈ，ピリジン中のＮＣＨ）、７．９２（ｄｄ、３ＪＨＨ＝４．６８Ｈｚ、４ＪＨＦ＝４．６８Ｈｚ、１Ｈ，ピリジン中のＮＣＣＨ）、３．８７-３．９１（ｍ、４Ｈ、ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、３．７０（ｂｒ  ｓ、２Ｈ，ピペリジン環中のＮＣＨ２の１つ，ピペリジン環中の別のＮＣＨ２の１つ、双方とも軸位置にある）、３．２６（ｔ、３ＪＨＨ＝５．８６Ｈｚ、２Ｈ，ピペリジン環中のＮＣＨ２の１つ，ピペリジン環中の別のＮＣＨ２の１つ、双方ともエクアトリアル位にある）、１．６７（ｄ、３ＪＨＨ＝５．８６Ｈｚ、２Ｈ，ピペリジン環中のＮＣＣＨ２の１つ，ピペリジン環の別のＮＣＣＨ２の１つ、双方ともエクアトリアル位にある）、１．５８（ｂｒ  ｓ、２Ｈ，ピペリジン環中のＮＣＣＨ２の１つ，ピペリジン環の別のＮＣＣＨ２の１つ、双方とも軸位置にある）ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）δ１６１．０３（Ｎ-Ｃ＝Ｏ）、１５１．１６（ｄ、１ＪＣＦ＝２６６．０３Ｈｚ、Ｃ-Ｆ）、１４６．８５（ｄ、４ＪＣＦ＝４．３２Ｈｚ、ピリジン中のＮＣＨ）、１３５．２４（ｄ、２ＪＣＦ＝１１．５１Ｈｚ、Ｃ-Ｃ＝Ｏ）、１３５．０２（四重項、２ＪＣＦ＝３４．５７Ｈｚ、ＮＣＣＦ３）、１２８．２４（ｄ、４ＪＣＦ＝７．４８Ｈｚ、ピリジン中のＮＣＣＨ）、１１９．４３（ｄ×四重項、１ＪＣＦ＝２７４．３８Ｈｚ、３ＪＣＦ＝４．８９Ｈｚ、ＣＦ３）、１０６．７４（ＯＣＯ）、６４．６０（ＯＣＣＯ）、４５．３４（ピペリジン環中のＮＣ）、３９．６２（ピペリジン環中のＮＣ）、３４．７９（ピペリジン環中のＮＣＣ）、３４．１０（ピペリジン環中のＮＣＣ）ｐｐｍ；１９Ｆ  ＮＭＲ（２８２ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）δ-６４．６９（ｄ、４ＪＦＦ＝１５．８５Ｈｚ、Ｆ３Ｃ）、-１２９．２６（ｄ×四重項、４ＪＦＦ＝１５．８５Ｈｚ、４ＪＦＨ＝３．９６Ｈｚ、ＦＣ）ｐｐｍ；Ｃ１４Ｈ１４Ｆ４Ｎ２Ｏ３（ＭＷ、３３４．２７）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ  ３３５．１（Ｍ＋＋Ｈ）。
【００８６】
実施例４．（３-フルオロ-２-（トリフルオロメチル）ピリジン-４-イル）（１，４-ジオキサ-８-アザスピロ［４，５］デカン-８-イル）メタノン（１８）
【化２２】
0005977354.tif 000023
攪拌装置（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ｓｔｉｒｒｅｒ）、熱電対、付加ロートおよび窒素吸入口を備えた５Ｌの四ツ口丸底フラスコに、室温で、アセトニトリル（ＡＣＮ、４００ｍＬ）中の（３-フルオロ-２-（トリフルオロメチル）ピリジン-４-イル）（１，４-ジオキサ-８-アザスピロ［４，５］デカン-８-イル）メタノン（１７、１００ｇ、０．２９９ｍｏｌ）を配置した。得られる溶液を１０℃以下に冷却した。内部温度を１０℃以下に保ちながら、反応混合物に６．０Ｎの水性塩酸（ＨＣｌ、４５０ｍＬ、２．７０ｍｏｌ、９．０当量）を加えた。その後、得られる反応混合物を室温に温め、付加ロートを経由して、追加量の６．０Ｎの水性塩酸（ＨＣｌ、１０５０ｍＬ、６．３０ｍｏｌ、２１．０当量）を、室温で、８時間で反応混合物にゆっくりと導入した。反応混合物を０℃に冷却し、内部温度を１０℃以下に保ちながら、３０％の水性水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ、８６０ｍＬ、８．５７ｍｍｏｌ、２８．６当量）で処理した。次に、得られる反応混合物を１時間で室温に温め、固体の炭酸水素ナトリウム（ＮａＨＣＯ３、８５．０ｇ、１．０１ｍｏｌ、３．３７当量）を加えた。その後、混合物をＥｔＯＡｃ（１．２Ｌを２回）で抽出し、１つにまとめた有機相を１６％の塩化ナトリウム水溶液（８００ｍＬを２回）で洗浄し、真空蒸留によって約１．０Ｌに濃縮した。残渣にヘプタン（２．１Ｌ）を加え、得られる混合物を真空蒸留によって１．０Ｌに濃縮した。濃縮した混合物にヘプタン（２．１Ｌ）を加えた。その後、得られる白色のスラリーを真空蒸留によって１．０Ｌに濃縮した。白色のスラリーに、メチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（ＭＴＢＥ、１．９４Ｌ）を加えた。白濁物を４０℃に加熱し、澄んだ溶液を得た。得られる溶液を、真空蒸留によって約１．０Ｌに濃縮した。混合物を１時間、室温で撹拌した。白色の沈殿物を、真空を抜きながら、濾過によって集めた。濾過ケークをヘプタン（４００ｍＬ）で洗浄し、真空を抜きながら、窒素下で、フィルター上で乾燥させ、灰白色の固体として、化合物１８（７８．３ｇ、９０．１％）を得た。１８について：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）δ８．６８（ｄ、３ＪＨＨ＝４．６９Ｈｚ、１Ｈ，ピリジン中のＮＣＨ）、７．９７（ｄｄ、３ＪＨＨ＝４．６９Ｈｚ、４ＪＨＦ＝４．６９Ｈｚ、１Ｈ，ピリジン中のＮＣＣＨ）、３．９２（ｂｒ  ｓ、２Ｈ，ピペリジン環中のＮＣＨ２の１つ，ピペリジン環中の別のＮＣＨ２の１つ、双方とも軸位置にある）、３．５４（ｔ、３ＪＨＨ＝６．１５Ｈｚ、２Ｈ，ピペリジン環中のＮＣＨ２の１つ，ピペリジン環中の別のＮＣＨ２の１つ、双方ともエクアトリアル位にある）、２．４８（ｔ、３ＪＨＨ＝６．４４Ｈｚ、２Ｈ、ＮＣＣＨ２）、２．３４（ｔ、３ＪＨＨ＝６．１５Ｈｚ、２Ｈ、ＮＣＣＨ２）ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）δ２０７．１７（Ｃ＝Ｏ）、１６１．６６（Ｎ-Ｃ＝Ｏ）、１５１．２６（ｄ、１ＪＣＦ＝２６６．８９Ｈｚ、Ｃ-Ｆ）、１４６．９０（ｄ、４ＪＣＦ＝６．０５Ｈｚ，ピリジン中のＮＣＨ）、１３５．５６（Ｃ-Ｃ＝Ｏ）、１３４．７８  -１３５．５６（ｍ、ＮＣＣＦ３）、１２８．２７（ｄ、３ＪＣＦ＝７．１９Ｈｚ，ピリジン中のＮＣ���Ｈ）、１１９．５２（ｄ×四重項、１ＪＣＦ＝２７４．３８Ｈｚ、３ＪＣＦ＝４．８９Ｈｚ、ＣＦ３）、４５．１０（ピペリジン環中のＮＣ）ｐｐｍ，（ＣＤ３）２ＳＯとオーバーラップしたため失う１つの炭素（ピペリジン環中のＮＣＣ）；１９Ｆ  ＮＭＲ（２８２ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）δ-６４．５８（ｄ、４ＪＦＦ＝１５．８５Ｈｚ、Ｆ３Ｃ）、-１２８．９０（ｄ×四重項、４ＪＦＦ＝１  ５．８５Ｈｚ、４ＪＦＨ＝４．０５Ｈｚ、ＦＣ）ｐｐｍ；Ｃ１２Ｈ１０Ｆ４Ｎ２Ｏ２（ＭＷ、２９０．２１）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ  ２９１．１（Ｍ＋＋Ｈ）。
【００８７】
実施例５．３-［４-（７-｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル］アゼチジン-３-イル｝アセトニトリル二塩酸塩（２０）
【化２３】
0005977354.tif 000024
【００８８】
ステップ１．  ｔｅｒｔ-ブチル３-（シアノメチル）-３-（４-（７-（（２-（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル）アゼチジン-１-カルボキシレート（１９）
攪拌装置（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ｓｔｉｒｒｅｒ）、温度計、付加ロートおよび真空取出口を備えた３０Ｌの乾燥した反応器に、２０±５℃で、アセトニトリル（９Ｌ）中の４-（１Ｈ-ピラゾール-４-イル）-７-（（２-（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン（５、４．５０ｋｇ、１４．２８ｍｏｌ）、ｔｅｒｔ-ブチル３-（シアノメチレン）アゼチジン-１-カルボキシレート（１３、３．１２ｋｇ、１６．０８ｍｏｌ、１．１２６当量）を配置した。得られるピンク色の懸濁液に、４０分間にわたって１，８-ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク-７-エン（ＤＢＵ、２２５ｍＬ、１．４８ｍｏｌ、０．１０当量）を加えた。添加中のバッチの温度を１０℃〜２０℃の間に保った。得られる茶色の溶液を３時間、２０℃で撹拌した。反応が完了した後、水（１８Ｌ）を８０分間にわたって、２０℃で撹拌しながら加えた。混合物を蒔き、蒔かれた混合物を１２時間室温で撹拌した。固形物を濾過により集め、濾過ケークをアセトニトリルおよび水（１：２、９Ｌ）の混合液で洗浄し、６０℃で１２時間、窒素パージの真空オーブン内で乾燥させ、淡黄色の粉末として、粗生成物（１９、７．３４ｋｇ）を得た。上述で得られた粗生成物を攪拌装置、温度計、付加ロート、セプタムを備えた５０Ｌの反応器内で、６０℃でメチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（ＭＴＢＥ、２２Ｌ）に溶解した。ヘキサン類（２２Ｌ）を６０℃で１時間にわたって加えた。その後、溶液を蒔き、３時間にわたって２０℃に冷却し、１２時間、２０℃で撹拌した。沈殿物を濾過により集めた。得られるケークをＭＴＢＥおよびヘキサン（１：１５、３Ｌ）の混合液で洗浄し、真空オーブン内で、５０℃で１０時間乾燥させ、白色の粉末として、化合物１９（６．８３ｋｇ、１３．４２ｍｏｌ、９４．０％）を得た。１９について：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ８．８７（ｓ、１Ｈ）、８．４６（ｄ、Ｊ＝０．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．３６（ｄ、Ｊ＝０．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．４４（ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、１Ｈ）、６．８２（ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、１Ｈ）、５．６９（ｓ、２Ｈ）、４．５７（ｄ、Ｊ＝９．６Ｈｚ、２Ｈ）、４．３２（ｄ、Ｊ＝９．５Ｈｚ、２Ｈ）、３．５９-３．４９（ｍ、２Ｈ）、３．３５（ｓ、２Ｈ）、１．４９（ｓ、９Ｈ）、０．９６-０．８７（ｍ、２Ｈ）、-０．０３--０．１０（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５７．２２、１５３．６７、１５３．２４、１５１．６２、１４２．１３、１３０．１６、１２９．６７、１２４．４７、１１６．７２、１１５．７９、１０２．１２、８２．５４、７４．２３、６８．０１、６０．２５、５８．２３、２９．６５、２９．５２、１９．１５、-０．２６ｐｐｍ；Ｃ２５Ｈ３５Ｎ７Ｏ３Ｓｉ（ＭＷ、５０９．６８）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ  ５１０．１（Ｍ＋＋Ｈ）。
【００８９】
ステップ２．  ３-［４-（７-｛［２-（トリメチルシリル）エトキシ］メチル｝-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル］アゼチジン-３-イル｝アセトニトリル二塩酸塩（２０）
攪拌装置（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ｓｔｉｒｒｅｒ）、熱電対、付加ロートおよび窒素吸入口を備えた２Ｌの四ツ口丸底フラスコ内で、化合物１９（５５．０ｇ、０．１０８ｍｏｌ）およびメタノール（ＭｅＯＨ、４４０ｍＬ）を２０±５℃で加えた。得られる白濁物を室温で２０分間撹拌し、淡黄色の溶液を得た。その後、イソプロパノール（５．２５Ｍ、１６５ｍＬ、０．８６６ｍｏｌ、８．０２当量）中の塩酸（ＨＣｌ）の溶液を、５分で、付加ロートを経由して反応混合物に加えた。得られる反応混合物を、加熱マントルによって、４０℃に加熱した。４０℃で２時間後、水（１６５ｍＬ、９．１７ｍｏｌ、８４．８当量）を、付加ロートを経由して反応混合物に加え、淡緑色の溶液を４０℃で得た。メチルｔｅｒｔ-ブチルエーテル（ＭＴＢＥ、４４０ｍＬ）を、４０℃で付加ロートを経由して、得られる混合物に加えた。得られる混合物を１０℃にゆっくりと冷却した。固形物を濾過により集め、ＭＴＢＥ（２２０ｍＬを２回）で洗浄した。白色の固形物を、１８時間、真空を抜きながら、窒素下のフィルター内で乾燥させ、化合物２０（５２．２ｇ、ＫＦ含水率５．４２％、収率９４．９％）を得た。２０について：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）δ  １０．３９（ｂｒｓ、１Ｈ）、１０．１６（ｂｒｓ、１Ｈ）、９．６１（ｓ、１Ｈ）、９．１２（ｓ、１Ｈ）、９．０２（ｓ、１Ｈ）、８．２７-８．２１（ｄ、Ｊ＝３．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．７２-７．６６（ｄ、Ｊ＝３．８Ｈｚ、１Ｈ）、５．８２（ｓ、２Ｈ）、４．８８-４．７７（ｍ、２Ｈ）、４．５３-４．４４（ｍ、２Ｈ）、４．１２（ｓ、２Ｈ）、３．６９-３．６０（ｍ、２Ｈ）、０．９８-０．８９（ｍ、２Ｈ）、０．０１（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）δ１５１．２５、１４６．４５、１４５．０９、１４０．７５、１３３．３８、１３２．４４、１１６．２０、１１６．０９、１１２．７９、１０２．８８、７３．０７、６６．１４、５９．１６、５３．６９、２６．４４、１７．１５、-１．３６ｐｐｍ；Ｃ２０Ｈ２９Ｃｌ２Ｎ７ＯＳｉ（２０の遊離塩基、Ｃ２０Ｈ２７Ｎ７ＯＳｉ、ＭＷ  ４０９．５６）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ  ４１０．２（Ｍ＋＋Ｈ）。
【００９０】
実施例６．２-（１-（１-（３-フルオロ-２-（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン-４-イル）-３-（４-（７-（（２-（トリメチルシリル）エトキシ）メチル）-７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル）アゼチジン-３-イル）アセトニトリル（２１）
【化２４】
0005977354.tif 000025
攪拌装置（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ｓｔｉｒｒｅｒ）、熱電対、冷却器、および窒素吸入口を備えた１００Ｌの乾燥反応器に、（２０、３．２４ｋｇ、６．７１５ｍｏｌ）およびジクロロメタン（３２Ｌ）を２０±５℃で加えた。混合物を室温で１０分間撹拌し、内部温度を１５〜３０℃に保つ添加速度で、トリエチルアミン（ＴＥＡ、１．３６ｋｇ、１３．４４ｍｏｌ、２．００当量）で処理した。化合物１８（２．０１ｋｇ、６．９２６ｍｏｌ、１．０３当量）を反応器に室温で加えた。１０分後、内部温度を１５〜３０℃に保ちながら、トリアセトキシホウ水素化ナトリウム（ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３、２．２８ｋｇ、１０．７５ｍｏｌ、１．６０当量）を、反応器に１時間で一部ずつ加えた。得られる反応混合物をさらに１時間１５〜３０℃で撹拌した。還元的アミノ化反応が完了したと思われたら、反応混合物を４％の炭酸水素ナトリウム水溶液（ＮａＨＣＯ３、３２Ｌ）で処置し、ｐＨを７〜８に調整した。室温で３０分間撹拌した後、２相に分離した。水相をジクロロメタン（２９Ｌ）で抽出した。１つにまとめた有機相を、０．１Ｎの塩酸水溶液（１６Ｌ）、４％の炭酸水素ナトリウム水溶液（１６Ｌ）、８％の塩化ナトリウム水溶液（１６Ｌを２回）で連続して洗浄した。得られる有機相を部分的に濃縮し、濾過した。真空下でアセトニトリル（６５Ｌ）を徐々に加えながら、濾過物を溶媒交換に供した。白色の固体を濾過によって集め、アセトニトリル（１０Ｌ）で洗浄し、窒素パージ付きの真空オーブンで４０〜５０℃で乾燥させ、化合物２１（４．２６ｋｇ、６．２３ｍｏｌ、９２．９％）を得た。２１について：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）δ８．８４（ｓ、１Ｈ）、８．７６（ｓ、１Ｈ）、８．６６（ｄ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、１Ｈ）、８．４３（ｓ、１Ｈ）、７．９０（ｔ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．７８（ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．１７（ｄ、Ｊ＝３．７Ｈｚ、１Ｈ）、５．６３（ｓ、２Ｈ）、４．０７（ｄｔ、Ｊ＝１１．１、４．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．７５（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．５７（ｄｄ、Ｊ＝１０．２、７．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．５５（ｓ、２ｈ）、３．５２（ｄｄ、Ｊ＝８．５、７．４Ｈｚ、２Ｈ）、３．４１（ｄｑ、Ｊ＝１３．３、４．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．２６（ｔ、Ｊ＝１０．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．０７（ｄｄｄ、Ｊ＝１３．１、９．４、３．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．５６（ｄｔ、Ｊ＝８．５、４．７Ｈｚ、１Ｈ）、１．８１-１．７３（ｍ、１Ｈ）、１．６３（ｍ、１Ｈ）、１．２９（ｍ、１Ｈ）、１．２１（ｍ、１Ｈ）、０．８２（ｄｄ、Ｊ＝８．５、７．４Ｈｚ、２Ｈ）、-０．１２（ｓ、９Ｈ）ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）δ１６１．６８，（１５４．９１、１５２．２７）、１５３．０８、１５２．６９、１５１．５３、１４７．６９、１４０．９６，（１３６．１９、１３６．０２），（１３６．４８、１３６．３６、１３６．１３、１３６．０、１３５．７８、１３５．６６、１３５．４３、１３５．３２）、１３１．４３、１３０．８４、１２９．０３，（１２６．１７、１２３．４２、１２０．６９）、１１７．９９、１２２．７７、１１８．７８、１１４．７１、１０２．０２、７３．７３、���７．０４、６２．８６、６１．８８、５８．５１、４５．６３、３０．０３、２９．３０、２８．６０、１８．５２、０．００ｐｐｍ；Ｃ３２Ｈ３７Ｆ４Ｎ９Ｏ２Ｓｉ（ＭＷ、６８３．７７）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ  ６８４．２（Ｍ＋＋Ｈ）。
【００９１】
実施例７．２-（３-（４-（７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル）-１-（１-（３-フルオロ-２-（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン-４-イル）アゼチジン-３-イル）アセトニトリル（２２）
【化２５】
0005977354.tif 000026
攪拌装置（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ｓｔｉｒｒｅｒ）、熱電対、付加ロートおよび窒素吸入口を備えた２５０ｍＬの四ツ口丸底フラスコに、化合物２１（９．２５ｇ、１３．５２ｍｍｏｌ、ＫＦ含水率３．５０％）およびアセトニトリル（７４ｍＬ）を２０±５℃で加えた。得られる白色のスラリーを５℃以下に冷却した。内部温度を５．０℃以下に保ちながら、ある速度で三フッ化ホウ素ジエチルエーテル（ＢＦ３・ＯＥｔ２、６．４６ｍＬ、５１．３７ｍｍｏｌ、３．８０当量）を加えた。その後、反応混合物を２０±５℃に温めた。２０±５℃で１８時間撹拌した後、反応混合物を０〜５℃に冷却し、５．０℃以下で、追加量のＢＦ３・ＯＥｔ２（０．３４ｍＬ、２．７０ｍｍｏｌ、０．２当量）を反応混合物に導入した。得られる反応混合物を２０±５℃に温め、室温でさらに５時間撹拌し続けた。その後、反応混合物を０〜５℃に冷却し、水（１２．１７ｍＬ、０．６７６ｍｏｌ、５０当量）を加えた。水を加えている最中、内部温度を５℃以下に保った。得られる混合物を２０±５℃に温め、室温で２時間撹拌し続けた。その後、反応混合物を０〜５℃に冷却し、水性水酸化アンモニウム（ＮＨ４ＯＨ、５Ｎ、１２１．７ｍｍｏｌ、９．０当量）を加えた。水酸化アンモニウム水溶液を加えている最中、内部温度を５．０℃以下に保った。得られる反応混合物を２０±５℃に温め、室温で２０時間撹拌した。ＳＥＭ脱保護が完了したと思われたら、反応混合物を濾過し、固体をＥｔＯＡｃ（９．２５ｍＬ）で洗浄した。濾過物を１つにまとめ、ＥｔＯＡｃ（７４ｍＬ）で希釈した。希釈された有機溶液を１３％の塩化ナトリウム水溶液（４６．２ｍＬ）で洗浄した。その後、有機相をＥｔＯＡｃ（５５．５ｍＬ）で希釈し、減圧下で最小容量に濃縮した。ＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）を残渣に加え、得られる溶液を２０±５℃で３０分間撹拌した。その後、溶液を７％の炭酸水素ナトリウム水溶液（４６ｍＬを２回）および１３％の炭酸水素ナトリウム水溶液（４６ｍＬ）で洗浄した。得られる有機相をＥｔＯＡｃ（４６ｍＬ）で希釈し、水（６４ｍＬ）で５０±５℃で３０分間、処理した。混合物を２０±５℃に冷却し、２つの相に分離した。有機相を水（６４ｍＬ）で、２回目に５０±５℃で３０分間、処理した。混合物を２０±５℃に冷却し、２つの相に分離した。得られる有機相を濃縮し、粗化合物２２（遊離塩基）を得て、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、３３０ｇ、ＥｔＯＡｃ中の０〜１０％のＭｅＯＨで勾配溶出）によってさらに精製し、灰白色の固体として、分析的に純粋な遊離塩基（２２、７．００ｇ、９３．５％）を得た。２２について：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）δ１２．１７（ｄ、Ｊ＝２．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．８５（ｓ、１Ｈ）、８．７０（ｍ、２Ｈ）、８．４５（ｓ、１Ｈ）、７．９３（ｔ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．６３（ｄｄ、Ｊ＝３．６、２．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．０９（ｄｄ、Ｊ＝３．６、１．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．１０（ｍ、１Ｈ）、３．７８（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、２Ｈ）、３．６１（ｔ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．５８（ｓ、２Ｈ）、３．４６（ｍ、１Ｈ）、３．２８（ｔ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、３．０９（ｄｄｄ、Ｊ＝１３．２、９．５��３．１Ｈｚ、１Ｈ）、２．５８（ｍ、１Ｈ）、１．８３-１．７５（ｍ、１Ｈ）、１．７０-１．６３（ｍ、１Ｈ）、１．３５-１．２１（ｍ、２Ｈ）ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）δ１６０．２８，（１５３．５１、１５０．８６）、１５２．２０、１５０．９４、１４９．６２，（１４６．３０、１４６．２５）、１３９．４８，（１３４．７８、１３４．６１），（１３５．０４、１３４．９２、１３４．７２、１３４．６０、１３４．３８、１３４．２６、１３４．０３、１３３．９２）、１２９．２２、１２７．６２、１２６．８４、１２１．９９、１２２．０４，（１２４．７７、１２２．０２、１１９．１９、１１６．５２）、１１７．３９、１１３．００、９９．９９、６１．４７、６０．４９、５７．０５、４４．２３、２８．６２、２７．８８、２７．１９ｐｐｍ；Ｃ２６Ｈ２３Ｆ４Ｎ９Ｏ（ＭＷ、５５３．５１）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ  ５５４．１（Ｍ＋＋Ｈ）。
【００９２】
実施例８．２-（３-（４-（７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル）-１-（１-（３-フルオロ-２-（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン-４-イル）アゼチジン-３-イル）アセトニトリルアジピン酸（２５）
【化２６】
0005977354.tif 000027
【００９３】
ステップ１．  ２-（３-（４-（７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル）-１-（１-（３-フルオロ-２-（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン-４-イル）アゼチジン-３-イル）アセトニトリルアジピン酸粗製塩（２４）
最終の有機相を真空蒸留によって、最小容量に濃縮し、粗化合物２２を得たことを除き、実施例７の化合物２２の作製方法に従い、単離されていないが、次のアジピン酸塩形成工程に直接使用した。粗化合物２２を含む濃縮された残渣に、メタノール（２００ｍＬ）を室温で加えた。混合物を真空蒸留によって、最小容量に濃縮した。その後、残渣にメタノール（７５ｍＬ）を加え、得られる溶液を還流に２時間加熱した。メチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ、７５ｍＬ）を溶液に加え、得られる混合物を、内部温度を４０〜５０℃に保ちながら、真空下で、約３０ｍＬに蒸留した。メタノール（７５ｍＬ）を加え、得られる混合物を還流に２時間加熱した。ＭＩＢＫ（７５ｍＬ）を溶液に加えた。混合物を再度、内部温度を４０〜５０℃に保ちながら、真空下で、約３０ｍＬに蒸留した。溶液にメタノール（７５ｍＬ）中のアジピン酸（２３、２．１５ｇ、１４．７７ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。その後、得られる溶液を還流に２時間加熱した。ＭＩＢＫ（７５ｍＬ）を加えた。内部温度を４０〜５０℃に保ちながら、混合物を真空下で約６０ｍＬに蒸留した。加熱を止め、ヘプタン（５２．５ｍＬ）を１〜２時間にわたって加えた。得られる混合物を２０±５℃で３〜４時間撹拌した。白色の沈殿物を濾過によって集め、濾過ケークをヘプタン（１５ｍＬを２回）で洗浄した。真空を抜きながら、２０±５℃で１２時間、固体を窒素下のフィルター上で乾燥させ、化合物２４（粗のアジピン酸塩、８．９８ｇ、１２．８４ｍｍｏｌ．、９５．０％）を得た。２４について：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）δ１２．１６（ｓ、１Ｈ）、１２．０５（ｂｒｓ、２Ｈ）、８．８５（ｓ、１Ｈ）、８．７２（ｓ、１Ｈ）、８．６９（ｄ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、１Ｈ）、８．４５（ｓ、１Ｈ）、７．９３（ｔ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．６３（ｄｄ、Ｊ＝３．６、２．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．０９（ｄｄ、Ｊ＝３．６、１．７Ｈｚ、１Ｈ）、δ４．１１（ｄｔ、Ｊ＝１１．０、４．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．７７（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．６０（ｔ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．５８（ｓ、２Ｈ）、３．４４（ｄｔ、Ｊ＝１４．４、４．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．２８（ｔ、Ｊ＝１０．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．０９（ｄｄｄ、Ｊ＝１３．２、９．６、３．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．５８（ｔｔ、Ｊ＝８．６、３．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．２８-２．１７（ｍ、４Ｈ）、１．８３-１．７４（ｍ、１Ｈ）、１．６７（ｄ、Ｊ＝１１．０Ｈｚ、１Ｈ）、１．５９-１．４６（ｍ、４Ｈ）、１．３７-１．２１（ｍ、２Ｈ）ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）δ  １７４．３８、１６０．２９，（１５３．５２、１５０．８７）、１５２．２０、１５０．９４、１４９．６３，（１４６．３０、１４６．２５）、１３９．４８，（１３４．７９、１３４．６２），（１３５．０８、１３４．９７、１３４．７４、１３４．６２、１３４．３８、１３４．２８、１３４．０４、１３３．９３）、１２９．２１、１２７．６２、１２６．８４、１２２．０５，（１２４．７５、１２２．０２、１１９．２９、１１６．５４）、１１７．３９、１１３．０１、９９．９９、６１．４７、６０．５０、５７．０６、４４．２４、���３．４２、３０．７０、２８．６３、２７．８９、２７．２０、２４．０７ｐｐｍ；Ｃ３２Ｈ３３Ｆ４Ｎ９Ｏ５（Ｍｏｌ．Ｗｔ：６９９．６６；２４：Ｃ２６Ｈ２３Ｆ４Ｎ９Ｏ、ＭＷ  ５５３．５１）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ  ５５４．０（Ｍ＋＋Ｈ）。
【００９４】
ステップ２．  ２-（３-（４-（７Ｈ-ピロロ［２，３-ｄ］ピリミジン-４-イル）-１Ｈ-ピラゾール-１-イル）-１-（１-（３-フルオロ-２-（トリフルオロメチル）イソニコチノイル）ピペリジン-４-イル）アゼチジン-３-イル）アセトニトリルアジピン酸（２５）
攪拌装置（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  ｓｔｉｒｒｅｒ）、熱電対、付加ロートおよび窒素吸入口を備えた１００Ｌの乾燥した反応器に、化合物２４（３．４０ｋｇ、４．８６ｍｏｌ）およびアセトン（２３．８Ｌ）を加えた。得られる白濁物を５５〜６０℃に加熱し、澄んだ溶液を得た。得られる溶液を、インラインフィルターに通して、別の１００Ｌの反応器に濾過した。ヘプタン（２３．８Ｌ）を、インラインフィルターに通して、別個の５０Ｌの反応器に濾過した。その後、内部温度を５５〜６０℃に保つ速度で、濾過されたヘプタンを１００Ｌの反応器内のアセトン溶液に装填した。１００Ｌの反応器内の反応混合物を２０±５℃に冷却し、２０±５℃で１６時間撹拌した。白色の沈殿物を濾過によって集め、ケークをヘプタン（５．１Ｌを２回）で洗浄し、真空を抜きながら窒素下で、フィルター上で乾燥させた。固体をさらに窒素パージ付きの真空オーブン内で、５５〜６５℃で乾燥させ、白色ないし灰白色の粉末として化合物２５（３．１１ｋｇ、９２．２％）を得た。２５について：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）δ１２．１６（ｓ、１Ｈ）、１２．０５（ｂｒｓ、２Ｈ）、８．８５（ｓ、１Ｈ）、８．７２（ｓ、１Ｈ）、８．６９（ｄ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、１Ｈ）、８．４５（ｓ、１Ｈ）、７．９３（ｔ、Ｊ＝４．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．６３（ｄｄ、Ｊ＝３．６、２．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．０９（ｄｄ、Ｊ＝３．６、１．７Ｈｚ、１Ｈ）、δ４．１１（ｄｔ、Ｊ＝１１．０、４．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．７７（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．６０（ｔ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、２Ｈ）、３．５８（ｓ、２Ｈ）、３．４４（ｄｔ、Ｊ＝１４．４、４．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．２８（ｔ、Ｊ＝１０．４Ｈｚ、１Ｈ）、３．０９（ｄｄｄ、Ｊ＝１３．２、９．６、３．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．５８（ｔｔ、Ｊ＝８．６、３．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．２８-２．１７（ｍ、４Ｈ）、１．８３-１．７４（ｍ、１Ｈ）、１．６７（ｄ、Ｊ＝１１．０Ｈｚ、１Ｈ）、１．５９-１．４６（ｍ、４Ｈ）、１．３７-１．２１（ｍ、２Ｈ）ｐｐｍ；１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，（ＣＤ３）２ＳＯ）δ１７４．３８、１６０．２９，（１５３．５２、１５０．８７）、１５２．２０、１５０．９４、１４９．６３，（１４６．３０、１４６．２５）、１３９．４８，（１３４．７９、１３４．６２），（１３５．０８、１３４．９７、１３４．７４、１３４．６２、１３４．３８、１３４．２８、１３４．０４、１３３．９３）、１２９．２１、１２７．６２、１２６．８４、１２２．０５，（１２４．７５、１２２．０２、１１９．２９、１１６．５４）、１１７．３９、１１３．０１、９９．９９、６１．４７、６０．５０、５７．０６、４４．２４、３３．４２、３０．７０、２８．６３、２７．８９、２７．２０、２４．０７ｐｐｍ；Ｃ３２Ｈ３３Ｆ４Ｎ９Ｏ５（Ｍｏｌ．Ｗｔ：６９９．６６；遊離塩基：Ｃ２６Ｈ２３Ｆ４Ｎ９Ｏ（ＭＷ、５５３．５１）、ＬＣＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｅ  ５５４．０（Ｍ＋＋Ｈ）。
【００９５】
実施例Ａ：Ｉｎ  ｖｉｔｒｏＪＡＫキナーゼアッセイ
本明細書の式Ｉの化合物に、Ｐａｒｋら、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９９、２６９、９４-１０４に記載されている次のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイに従い、ＪＡＫ標的の抑制活性の試験を行った。Ｎ末端Ｈｉｓタグ付きのヒトＪＡＫ１（ａ．ａ．８３７-１１４２）およびＪＡＫ２（ａ．ａ．８２８-１１３２）の触媒領域を昆虫細胞内のバキュロウイルスを用いて発現させ、精製した。ＪＡＫ１およびＪＡＫ２の触媒活性をビオチニル化ペプチドのリン酸化を測定することによってアッセイした。リン酸化ペプチドをｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ  ｔｉｍｅ  ｒｅｓｏｌｖｅｄ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ（ＨＴＲＦ）によって検出した。化合物のＩＣ５０は、１００ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＤＴＴ、および０．１ｍｇ／ｍＬ（０．０１％）ＢＳＡを含んだ５０ｍＭのトリス（ｐＨ７．８）緩衝液中の酵素、ＡＴＰおよび５００ｎＭのペプチドを含む４０μＬの反応液中の各キナーゼについて測定した。１ｍＭのＩＣ５０測定については、反応液中のＡＴＰ濃度が１ｍＭであった。室温で１時間、反応を実施し、アッセイ緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社、ボストン、マサチューセッツ州）中の２０μＬの４５ｍＭのＥＤＴＡ、３００ｎＭのＳＡ-ＡＰＣ、６ｎＭのＥｕ-Ｐｙ２０で止めた。ユーロピウムで標識された抗体の結合は４０分間発生し、ＨＴＲＦシグナルは、Ｆｕｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社、ボストン、マサチューセッツ州）上で測定した。実施例１の化合物およびアジピン酸塩のＪＡＫ１でのＩＣ５０は、ＪＡＫ２／ＪＡＫ１の比が＞１０（１ｍＭのＡＴＰで測定）で、≦５ｎＭ（１ｍＭのＡＴＰで測定）であった。
【００９６】
実施例Ｂ：細胞アッセイ
サイトカインおよびＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達に依存する癌の細胞株を、ＲＰＭＩ１６４０、１０％のＦＢＳ、および１ｎＧ／ｍＬの適切なサイトカイン内のウェル（９６ウェルプレートフォーマット）あたり細胞６０００個蒔くことができる。ＤＭＳＯ／培地（最終濃度０．２％のＤＭＳＯ）内の細胞に化合物を加えることができ、３７℃、５％のＣＯ２で、７２時間インキュベートすることができる。化合物が細胞生存度に及ぼす影響をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ-Ｇｌｏ細胞発光生存度アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）、次にＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ社、ボストン、マサチューセッツ州）定量化を用いて評価した。化合物の潜在的なオフターゲットの影響を、同アッセイの読み取り付きの非ＪＡＫが駆動する細胞株を用いて、並行して測定した。全実験は典型的に二重に行った。
【００９７】
上の細胞株を用いて、化合物がＪＡＫキナーゼのリン酸化またはＳＴＡＴタンパク質、Ａｋｔ、Ｓｈｐ２、またはＥｒｋ等の潜在的な下流の基質に及ぼす影響を検査することもできる。これらの実験は、一晩中のサイトカイン飢餓に従い行うことができ、次に化合物との短いプレインキュベーション（２時間未満）および約１時間未満のサイトカイン刺激によって行うことができる。タンパク質を細胞から抽出し、リン酸化されたタンパク質と全タンパク質とに分化することのできる抗体を用いて、ウエスタンブロット法またはＥＬＩＳＡを含む当該技術分野の研究者に見慣れた手技によって分析する。これらの実験は、正常または癌細胞を用いて、腫瘍細胞の生存の生物学または炎症性疾患の媒介物上の化合物の活性を調査することができる。後者に関しては、例えば、ＩＬ-６、ＩＬ-１２、ＩＬ-２３、またはＩＦＮ等のサイトカインを用いて、ＪＡＫの活性化を刺激し、ＳＴＡＴタンパク質のリン酸化が生じ、潜在的にはＩＬ-１７等タンパク質の転写プロファイル（アレイまたはｑＰＣＲ技術によって評価される）若しくは酸性および／または分泌が生じる。これらのサイトカインが媒介する影響を抑制する化合物の能力は、当該技術分野の研究者にありふれた手技を用いて、測定することができる。
【００９８】
本明細書の化合物を、変異体ＪＡＫ、例えば、骨髄系増殖障害に認められるＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ変異に対する能力および活性を評価するために設計された細胞モデルで試験することができる。これらの実験は、血液学的な系統のサイトカイン依存細胞（例えばＢａＦ／３）を用いることが多く、そこには野生型または変異体ＪＡＫキナーゼが異所的に発現される（Ｊａｍｅｓ、Ｃ．，ら  Ｎａｔｕｒｅ  ４３４：１１４４-１１４８；Ｓｔａｅｒｋ、Ｊ．、ら  ＪＢＣ  ２８０：４１８９３-４１８９９）。エンドポイントとして、化合物が細胞の生存、増殖、およびリン酸化ＪＡＫ、ＳＴＡＴ、Ａｋｔ、またはＥｒｋタンパク質に及ぼす影響が挙げられる。
【００９９】
本明細書のある化合物のＴ細胞の増殖を抑制する活性について評価することができる。当該アッセイを、第二のサイトカイン（すなわちＪＡＫ）が駆動する増殖アッセイと考えることができ、免疫抑制または免疫活性化の抑制の単純化されたアッセイと考えることもできる。以下はこのような実験の実施の仕方についての短い概略である。ＦｉｃｏｌｌＨｙｐａｑｕｅ分離法を用いて、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）をヒトの全血試料から調製し、Ｔ細胞（画分２０００）を水簸によってＰＢＭＣから得ることができる。新しく単離されたヒトのＴ細胞を、培地（１０％のウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンが補充されたＲＰＭＩ１６４０）に、２ｘ１０６細胞／ｍｌの密度、３７℃で、最大２日間保持することができる。ＩＬ-２刺激細胞増殖分析については、最初に、Ｔ細胞を最終濃度が１０μｇ／ｍＬのフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）で、７２時間処理する。ＰＢＳで１回洗浄した後、６０００細胞／ウェルを９６ウェルのプレートに蒔き、１００Ｕ／ｍＬのヒトＩＬ-２（ＰｒｏＳｐｅｃ-Ｔａｎｙ  ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ社；レホヴォト、イスラエル）の存在下、異なる濃度の化合物で処理をする。プレートを３７℃で７２時間インキュベートし、増殖指数を製造所が指示するプロトコルに従うＣｅｌｌＴｉｔｅｒ-Ｇｌｏ発光試薬を用いて評価する（Ｐｒｏｍｅｇａ社；マディソン、ウィスコンシン州）。
【０１００】
実施例Ｃ：Ｉｎ  ｖｉｖｏ抗腫瘍の効果
免疫が損なわれたマウスのヒト腫瘍異種移植片モデルで、本明細書の化合物を評価することができる。例えば、ＩＮＡ-６形質細胞腫細胞株の腫瘍原性変異体を用いて、ＳＣＩＤマウスに皮下に接種させる（Ｂｕｒｇｅｒ、Ｒ．，らＨｅｍａｔｏｌ  Ｊ．２：４２-５３、２００１）。その後、腫瘍を有する動物を薬剤治療群またはビヒクル治療群に無作為に割り付けることができ、様々な用量の化合物を、経口、腹腔内投与、埋め込み型ポンプを用いた連続注入を含むあらゆる数の通常の経路によって投与することができる。腫瘍の増殖はノギスを使用して経時的に追跡する。さらに、腫瘍の試料は、上述のような分析（実施例Ｂ）についての治療開始後に、いつでも収集し、化合物のＪＡＫ活性および下流のシグナル経路に及ぼす影響を評価することができる。さらに、Ｋ５６２腫瘍モデル等のその他の周知のキナーゼ（例えばＢｃｒ-Ａｂｌ）によって駆動される異種移植腫瘍モデルを用いて、化合物の選択性を評価することができる。
【０１０１】
実施例Ｄ：マウスの皮膚の遅延型過敏症の反応試験
Ｔ細胞が駆動するマウスの遅延型過敏症試験モデルの（ＪＡＫ標的を抑制する）効果について、本明細書の化合物を試験することもできる。マウスの遅延型過敏症（ＤＴＨ）の反応は、臨床的な接触皮膚炎、および乾癬等のその他の皮膚のＴリンパ球媒介免疫不全の有効なモデルとして考えられている（Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ．１９９８  Ｊａｎ；１９（１）：３７-４４）。マウスのＤＴＨは、複数の特徴を乾癬と分かち、免疫の浸潤物、それに伴う炎症性サイトカインの増加、およびケラチン生成細胞の過剰増殖が含まれる。さらに、臨床学での乾癬の治療に効果的な多くのクラスの薬剤は、マウスのＤＴＨの反応の効果的な抑制剤でもある（Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ．１９９３  Ｊａｎ；３８（１-２）：１１６-２１）。
【０１０２】
第０日目および１日目に、抗原２，４，ジニトロ-フルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）を剪毛した腹部に局所適用してＢａｌｂ／ｃマウスを感作する。第５日目に、技術者の測微計を使用して耳の厚さを測定する。この測定値を記録し、ベースラインとして使用する。その後、濃度０．２％で、計２０μＬ（内部の耳介に１０μＬおよび外部の耳介に１０μＬ）のＤＮＦＢを局所適用することによって、動物の両耳は曝露される。曝露から２４〜７２時間後、耳を再度測定する。試験化合物での治療は、感作および曝露フェーズ（第１〜７日目）を通じて、または曝露フェーズ（通常、第４〜７日目の午後）を通じておよび前に投与される。（異なる濃度の）試験化合物の治療は、全身または局所的（耳への治療の局所適用）のいずれかで投与される。試験化合物の効果は、治療なしの状況と比較して、耳の腫脹の減少によって示される。２０％以上の減少を起こす化合物が、効果があると考えられた。いくつかの実験で、マウスは曝露されるが感作されない（陰性の対照）。
【０１０３】
免疫組織学的分析により試験化合物の抑制効果（ＪＡＫ-ＳＴＡＴ経路の抑制活性化）を確認することができる。ＪＡＫ-ＳＴＡＴ経路の活性化によって、機能的転写因子の形成および転座が生じる。さらに、免疫細胞の流入およびケラチノサイトの増加する増殖もまた、検査し定量化することのできる耳に、固有の発現プロファイルをもたらすはずである。ホルマリン固定およびパラフィンを組み入れた耳の切片（ＤＴＨモデルの曝露フェーズ後に収集）を、リン酸化ＳＴＡＴ３（クローン５８Ｅ１２、細胞シグナル伝達技術）と特異的に相互に作用する抗体を使用して、免疫組織学的分析に供した。マウスの耳は、比較するためのＤＴＨモデルにおいて、試験化合物、ビヒクル、またはデキサメタゾン（乾癬の治療に臨床的に効果がある）、または治療なしで治療を受ける。試験化合物もデキサメタゾンも、定性的にも定量的にもほぼ同じ転写変化を生み出すことができ、試験化合物もデキサメタゾンも、浸潤性の細胞の数を減少させることができる。試験化合物の全身投与も局所的投与も、いわゆる浸潤性細胞の数および転写変化の抑制を減少させる抑制効果を生み出すことができる。
【０１０４】
実施例Ｅ：Ｉｎ  ｖｉｖｏ抗炎症性活性
単一または複雑な炎症の奏効を再現するために設計された齧歯動物または非齧歯動物のモデルで、本明細書の化合物を評価することができる。例えば、関節炎の齧歯動物モデルを用いて、予防目的または治療目的で投与される化合物の治療能力を評価することができる。これらのモデルとして、限定されないが、マウスまたはラットのコラーゲン導入関節炎、ラットのアジュバント導入関節炎、およびコラーゲン抗体導入関節炎が挙げられる。以下に限定されないが、多発性硬化症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜網膜炎、甲状腺炎、重症筋無力症、免疫グロブリン腎症、心筋炎、気道の感作（喘息）、狼瘡、または大腸炎を含む自己免疫疾患を使用して、本明細書の化合物の治療能力を評価してもよい。これらのモデルは、研究コミュニティーでよく確立されており、当該技術分野の研究者に見慣れたものである（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ  ３．、Ｃｏｌｉｇａｎ、Ｊ．Ｅ．ら、Ｗｉｌｅｙ  Ｐｒｅｓｓ．；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｖｏｌ．２２５、Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．、Ｗｉｎｙａｒｄ、Ｐ．Ｇ．  ａｎｄ  Ｗｉｌｌｏｕｇｈｂｙ、Ｄ．Ａ．、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、２００３．）。
【０１０５】
実施例Ｆ：ドライアイ、ブドウ膜炎および結膜炎の治療のための動物モデル
以下に限定されないが、ウサギコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）涙腺モデル、スコポラミンマウスモデル（皮下または経皮）、ボツリヌスマウス涙腺モデル、または眼性腺機能不全（例えば、ＮＯＤ-ＳＣＩＤ、ＭＲＬ／ｌｐｒ、またはＮＺＢ／ＮＺＷ）の原因となる多くの自発的齧歯動物自己免疫モデルのいくつかを含む、当該技術分野の研究者に周知の１つ以上のドライアイの前臨床的モデルで、薬剤を評価してもよい（Ｂａｒａｂｉｎｏら、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００４、７９、６１３-６２１およびＳｃｈｒａｄｅｒら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｏｐｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ、Ｋａｒｇｅｒ  ２００８、４１、２９８-３１２、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる）。これらのモデルのエンドポイントとして、眼性腺および目（角膜等）の組織病理学、およびあるいは涙の産生を測定する古典的なシルマー試験またはその修正版（Ｂａｒａｂｉｎｏら）を挙げてもよい。測定可能な疾患が存在する前または後に開始してもよい複数の投与経路（全身または局所）によって投与することによって、活性を評価してもよい。
【０１０６】
当該技術分野の研究者に周知のぶどう膜炎の１つ以上の前臨床的モデルで、薬剤を評価してもよい。これらには、限定されないが、実験的自己免疫ぶどう膜炎（ＥＡＵ）およびエンドトキシン導入ぶどう膜炎（ＥＩＵ）のモデルが挙げられる。ＥＡＵ実験は、ウサギ、ラット、またはマウスに行ってもよく、受動免疫または作動性の免疫を含んでいてもよい。例えば、数々の網膜の抗原を用いて、動物に関連する免疫源に感作させ、その後、目によって同じ抗原に曝露してもよい。ＥＩＵモデルはより正確で、致死量以下の用量のリポ多糖を局所または全身に投与することを含む。ＥＩＵおよびＥＡＵ双方のモデルのエンドポイントとして、眼底検査、組織病理学も含んでいてもよい。これらのモデルはＳｍｉｔｈらによって見直されている（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １９９８、７６、４９７-５１２、参照により本明細書に組み込まれる）。測定可能な疾患が存在する前または後に開始してもよい複数の投与経路（全身または局所）によって投与することによって、活性を評価してもよい。上に挙げるいくつかのモデルは、強膜炎／上強膜炎、脈絡膜炎、毛様体炎、または虹彩炎を発現してもよく、これらの疾患の治療について、化合物の潜在的な活性を検査するのに役に立つ。
【０１０７】
当該技術分野の研究者に周知の１つ以上の結膜炎の前臨床的モデルで、薬剤を評価してもよい。これらには、限定されないが、モルモット、ラットまたはマウスを用いる齧歯動物モデルが挙げられる。モルモットモデルとして、能動または受動免疫および／または卵白アルブミンまたはブタクサ等の抗原との免疫曝露プロトコルを使用するモデルが挙げられる（Ｇｒｏｎｅｂｅｒｇ、Ｄ．Ａ．、ら．、Ａｌｌｅｒｇｙ  ２００３、５８、１１０１-１１１３に概説、参照により本明細書に組み込まれる）。ラットおよびマウスのモデルは、一般的な設計において、モルモットのモデルとほぼ同じである（これもＧｒｏｎｅｂｅｒｇにより概説）。測定可能な疾患が存在する前または後に開始してもよい複数の投与経路（全身または局所）によって投与することによって、活性を評価してもよい。当該試験のエンドポイントとして、例えば、組織学的、免疫学的、生化学的、または結膜等の眼組織の分子の分析が挙げてもよい。
【０１０８】
実施例Ｇ：骨のＩｎ  ｖｉｖｏ保護
当業者に周知の骨減少症、骨粗鬆症、または骨吸収の様々な前臨床的モデルで化合物を評価してもよい。例えば、卵巣切除される齧歯動物を使用して、化合物の能力を評価し、骨リモデリングおよび／または密度のサインおよびマーカーに影響を与える化合物の能力を評価してもよい（Ｗ．Ｓ．Ｓ．Ｊｅｅ  ａｎｄ  Ｗ．Ｙａｏ、Ｊ  Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌ．Ｎｕｅｒｏｎ．Ｉｎｔｅｒａｃｔ．、２００１、１（３）、１９３-２０７、参照により本明細書に組み込まれる）。あるいは、治療モデル（例えばグルココルチコイド）において、骨減少症を誘導された齧歯動物を治療する対照または化合物で、骨密度および骨構造を評価してもよい（Ｙａｏ，ら．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ、２００８、５８（６）、３４８５-３４９７；ａｎｄ  ｉｄ．５８（１１）、１６７４-１６８６、双方とも参照により本明細書に組み込まれる）。さらに、上（実施例Ｅ）に検討した関節炎の齧歯動物で、化合物が骨吸収および骨密度に及ぼす影響を評価することができる。これらの全モデルについてのエンドポイントは様々あってもよいが、組織学的および放射線学的評価、並びに免疫組織学および骨リモデリングの適切な生化学的マーカーを含むことが多い。
【０１０９】
本発明の多くの実施形態を記載してきた。それでも、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、様々な修正がなされてもよいことを理解されたい。したがって、その他の実施形態は、以降の請求項の範囲の内にある。