(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物が装填されたスパイダーシルク粒子を製造する方法であって、
ｉ）外層表面と内部固体マトリクスからなるスパイダーシルク粒子であって、該マトリクスが、少なくとも２つの同一の反復単位を含むスパイダーシルクポリペプチドを１つ又は複数含む、スパイダーシルク粒子を準備する工程と、
ｉｉ）前記スパイダーシルク粒子を、全体として正の正味電荷を有するか、又はアルカリ性であり、５０Ｄａ〜２０ｋＤａの分子量を有し、水溶性である、少なくとも１つの化合物とインキュベートする工程であって、ここで、該化合物の少なくとも８０％が前記スパイダーシルク粒子に装填されている、
を含む、化合物が装填されたスパイダーシルク粒子を製造する方法。
【請求項２】
工程ｉ）で準備する該スパイダーシルク粒子を、
ａ）少なくとも２つの同一の反復単位を含むスパイダーシルクポリペプチドを１つ又は複数含む水溶液を準備する工程と、
ｂ）該スパイダーシルクポリペプチドの凝集を誘起し、スパイダーシルク粒子を形成する、誘起する工程と、
ｃ）該スパイダーシルク粒子を相分離により分離する工程と、
により作製する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
装填された化合物の少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％が該スパイダーシルク粒子のマトリクス内に位置する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
スパイダーシルク粒子が、０．１μｍ〜５００μｍ、又は０．１μｍ〜１００μｍ、又は０．２μｍ〜２０μｍ、又は０．２μｍ〜１μｍ、又は０．２５μｍ〜０．７μｍのメジアン径を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
少なくとも２つの同一の反復単位は、各々が、
ｉ）ＧＰＧＸＸ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸であり、又はそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱからなる群から選択される）、
ｉｉ）ＧＧＸ（ここでＸは任意のアミノ酸であり、又はそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱからなる群から選択される）、及び
ｉｉｉ）Ａｘ（ここでｘは５〜１０の整数である）
からなる群から選択されるコンセンサス配列を少なくとも１つ含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
スパイダーシルクポリペプチドそれぞれの反復単位が独立して、モジュールＡ（配列番号２０）若しくはその変異体、モジュールＣ（配列番号２１）若しくはその変異体、モジュールＱ（配列番号２２）若しくはその変異体、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）、又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
スパイダーシルクポリペプチドが非反復（ＮＲ）単位を更に少なくとも１つ含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
非反復（ＮＲ）単位が独立して、ＮＲ３（配列番号４１及び配列番号４５）又はその変異体、及びＮＲ４（配列番号４２及び配列番号４６）又はその変異体からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
スパイダーシルクポリペプチドが、ＡＤＦ−３（配列番号１及び配列番号４７）、ＡＤＦ−４（配列番号２及び配列番号４８）、ＭａＳｐ  Ｉ（配列番号４３及び配列番号５３〜配列番号６４）、ＭａＳｐ  ＩＩ（配列番号４４及び配列番号６５〜配列番号７８）、（Ｃ）ｍＮＲｚ、ＮＲｚ（Ｃ）ｍ、（ＡＱ）ｎＮＲｚ、ＮＲｚ（ＡＱ）ｎ、ＮＲｚ（ＱＡＱ）ｏ、（ＱＡＱ）ｏＮＲｚ、（Ｃ）ｍ、（ＡＱ）ｎ、及び（ＱＡＱ）ｏ（ここで、ｍは８〜４８の整数であり、ｎは６〜２４の整数であり、ｏは８〜１６の整数であり、ｚは１〜３の整数である）からなる群から選択される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
スパイダーシルクポリペプチドが、Ｃ１６、Ｃ３２、（ＡＱ）１２、（ＡＱ）２４、Ｃ１６ＮＲ４、Ｃ３２ＮＲ４、（ＡＱ）１２ＮＲ３、又は（ＡＱ）２４ＮＲ３である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
水溶液中の該スパイダーシルクポリペプチドの濃度が、０．１ｗｔ％／ｖｏｌ〜３０ｗｔ％／ｖｏｌ、又は１ｗｔ％／ｖｏｌ〜２０ｗｔ％／ｖｏｌである、請求項２〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
凝集が、ｐＨシフト、イオン交換、せん断力、アルコール若しくはリオトロピック塩の添加により又はそれらの組み合わせにより誘起される、請求項２〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
アルコールがメタノールである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
リオトロピック塩が、硫酸アンモニウム、リン酸ナトリウム及びリン酸カリウムからなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
リオトロピック塩の濃度が約４００ｍＭ〜約３Ｍ、又は約１Ｍ〜約２Ｍ、又は約２Ｍである、請求項１２又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
化合物が、薬学的に活性のある化合物、化粧品物質、農業用物質、化学誘引物質、化学忌避物質、抗真菌物質、抗菌物質、栄養素、健康補助食品、色素、香料、又は止血剤、成長刺激剤、催炎物質、防汚剤、抗微生物剤及びＵＶ保護剤からなる群から選択される作用物質である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
化合物が静電相互作用及び／又は拡散によりスパイダーシルクマトリクスに浸透することが可能である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
方法の工程ｉｉ）を、４℃〜４０℃、又は１０℃〜３０℃、又は２０℃〜２５℃の温度で行う、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
方法の工程ｉｉ）を、１〜９、又は４〜９、又は６〜８のｐＨで行う、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
外層表面と内部固体マトリクスからなるスパイダーシルク粒子であって、該マトリクスは、少なくとも２つの同一の反復単位を含むスパイダーシルクポリペプチドを少なくとも１つ含んでおり、そして、全体として正の正味電荷を有するか、又はアルカリ性であり、５０Ｄａ〜２０ｋＤａの分子量を有し、水溶性である、化合物が少なくとも１つ装填されており、かつ該化合物の少なくとも８０％が前記スパイダーシルク粒子に装填されている、
スパイダーシルク粒子。
【請求項２１】
化合物が、５０Ｄａ〜１０ｋＤａ、又は５０Ｄａ〜６ｋＤａ、又は５０Ｄａ〜４ｋＤａ、又は５０Ｄａ〜１ｋＤａの分子量を有する、請求項２０に記載のスパイダーシルク粒子。
【請求項２２】
装填された化合物の少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％が該スパイダーシルク粒子のマトリクス内に位置する、請求項２０又は２１に記載のスパイダーシルク粒子。
【請求項２３】
粒子のメジアン径が、０．１μｍ〜５００μｍ、又は０．１μｍ〜１００μｍ、又は０．２μｍ〜２０μｍ、又は０．２μｍ〜１μｍ、又は０．２５μｍ〜０．７μｍである、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載のスパイダーシルク粒子。
【請求項２４】
スパイダーシルクポリペプチドが、
ｉ）ＧＰＧＸＸ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸であり、又はそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱからなる群から選択される）、
ｉｉ）ＧＧＸ（ここでＸは任意のアミノ酸であり、又はそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱからなる群から選択される）、及び
ｉｉｉ）Ａｘ（ここでｘは５〜１０の整数である）
からなる群から選択されるコンセンサス配列をそれぞれが少なくとも１つ含む少なくとも２つの同一の反復単位を含む、請求項２０〜２３のいずれか一項に記載のスパイダーシルク粒子。
【請求項２５】
スパイダーシルクポリペプチドの反復単位が独立して、モジュールＡ（配列番号２０）若しくはその変異体、モジュールＣ（配列番号２１）若しくはその変異体、モジュールＱ（配列番号２２）若しくはその変異体、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）、又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択される、請求項２４に記載のスパイダーシルク粒子。
【請求項２６】
スパイダーシルクポリペプチドが非反復（ＮＲ）単位を更に１つ又は複数含む、請求項２５に記載のスパイダーシルク粒子。
【請求項２７】
ＮＲ単位が独立して、ＮＲ３（配列番号４１及び配列番号４５）又はその変異体、及びＮＲ４（配列番号４２及び配列番号４６）又はその変異体からなる群から選択される、請求項２６に記載のスパイダーシルク粒子。
【請求項２８】
スパイダーシルクポリペプチドが、ＡＤＦ−３（配列番号１及び配列番号４７）、ＡＤＦ−４（配列番号２及び配列番号４８）、ＭａＳｐ  Ｉ（配列番号４３及び配列番号５３〜配列番号６４）、ＭａＳｐ  ＩＩ（配列番号４４及び配列番号６５〜配列番号７８）、（Ｃ）ｍＮＲｚ、ＮＲｚ（Ｃ）ｍ、（ＡＱ）ｎＮＲｚ、ＮＲｚ（ＡＱ）ｎ、ＮＲｚ（ＱＡＱ）ｏ、（ＱＡＱ）ｏＮＲｚ、（Ｃ）ｍ、（ＡＱ）ｎ、及び（ＱＡＱ）ｏ（ここで、ｍは８〜４８の整数であり、ｎは６〜２４の整数であり、ｏは８〜１６の整数であり、ｚは１〜３の整数である）からなる群から選択される、請求項２０〜２７のいずれか一項に記載のスパイダーシルク粒子。
【請求項２９】
スパイダーシルクポリペプチドが、Ｃ１６、Ｃ３２、（ＡＱ）１２、（ＡＱ）２４、Ｃ１６ＮＲ４、Ｃ３２ＮＲ４、（ＡＱ）１２ＮＲ３、又は（ＡＱ）２４ＮＲ３である、請求項２８に記載のスパイダーシルク粒子。
【請求項３０】
化合物が、薬学的に活性のある化合物、化粧品物質、農業用物質、化学誘引物質、化学忌避物質、抗真菌物質、抗菌物質、栄養素、健康補助食品、色素、香料、又は止血剤、成長刺激剤、催炎物質、防汚剤、抗微生物剤及びＵＶ保護剤からなる群から選択される作用物質である、請求項２０〜２９のいずれか一項に記載のスパイダーシルク粒子。
【請求項３１】
化合物が静電相互作用及び／又は拡散によりスパイダーシルクマトリクスに浸透することが可能である、請求項２０〜３０のいずれか一項に記載のスパイダーシルク粒子。
【請求項３２】
化合物が生理学的条件への曝露の際に拡散により該スパイダーシルク粒子から放出される、請求項２０〜３１のいずれか一項に記載のスパイダーシルク粒子。
【請求項３３】
化合物の２０％未満、又は１５％未満、又は１０％未満が最初の２４時間以内に放出される、請求項３２に記載のスパイダーシルク粒子。
【請求項３４】
請求項３０〜３３のいずれか一項に記載のスパイダーシルク粒子と、付加的に薬学的に許容可能な緩衝剤、希釈剤及び／又は賦形剤とを含む医薬組成物であって、該医薬組成物が制御送達及び持続送達に有用であり、該化合物が薬学的に活性のある化合物である、医薬組成物。
【請求項３５】
請求項３０〜３３のいずれか一項に記載のスパイダーシルク粒子を含む制御送達及び持続送達のための化粧品組成物であって、該化合物が化粧品化合物である、化粧品組成物。
【請求項３６】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法により取得されたスパイダーシルク粒子であって、
該粒子は外層表面と内部固体マトリクスからなり、化合物が装填されており、かつ少なくとも２つの同一の反復単位を含むスパイダーシルクポリペプチドを１つ又は複数含み、
該化合物が全体として正の正味電荷を有するか、又はアルカリ性であり、５０Ｄａ〜２０ｋＤａの分子量を有し、水溶性であり、ここで、該化合物の少なくとも８０％が前記スパイダーシルク粒子に装填されている、
スパイダーシルク粒子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を製造し、それに化合物を装填する方法に関する。特に本発明は、シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子に、小さい水溶性の化合物を装填するための新規の二段法を提供する。制御送達及び持続送達用途のための担体に非常に適した、少なくとも１つの化合物が装填されたシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子も開示する。さらに本発明は、制御放出及び持続放出のための、上記シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子と、薬学的に活性のある化合物又は化粧品化合物とを含む医薬組成物又は化粧品組成物に関する。本発明は、本発明による方法により取得可能な、化合物が装填されたシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子にも関する。
【背景技術】
【０００２】
過去数年間に、例えば治療中に血漿における一定の薬物レベルを達成するために、物質の制御送達のための高度な薬物貯蔵システムが開発されている。これらのシステムは、細胞取り込み及びバイオアベイラビリティを改善すると同時に、毒性の副作用を低減することにより薬物の投与回数を低減することができるという利点を有する。特にコロイド状のマイクロ粒子担体及びナノ粒子担体は制御薬物送達のためのプラットフォームとして広く研究されている。医薬化合物以外の物質の制御放出を容易にするナノ粒子又はマイクロ粒子を設計する試みも進行中である。一般に、物質の制御放出及び持続放出のための担体として利用される材料は、良好な機械的安定性を示すとともに構造、形態及び機能の制御を与えるものでなくてはならない。
【０００３】
例えば、生分解性ポリマー及び生体適合性ポリマーは、限られた期間、それらの特性を保持した後、可溶性の非毒性分解産物へと段階的に分解され、身体から排出されることができるために好ましい。多くの合成ポリマー（脂肪族ポリエステル、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）等）及び天然ポリマー（多糖類、キチン、キトサン、タンパク質）が、活性化合物のカプセル封入、組込み又は結合のための分解性ビヒクルを作製するのに利用されている（非特許文献１）。
【０００４】
合成ポリマーはカプセル封入した治療剤の数日から最大で数ヶ月の期間にわたる持続放出の特徴を潜在的に有するが、合成ポリマーは通常、加工中に有機溶媒又は比較的厳しい配合条件を要求し、残留する毒性溶媒及び酸性分解産物のために生体適合性が潜在的に限定されている。
【０００５】
当該技術分野における更なる進展は、生体適合性であるという利点を有する天然ポリマーが検討されたことである。しかしながら、現在知られているほとんどのバイオポリマーは大きな欠点を有する、すなわちその親水性のために水性環境に迅速に再可溶化し、それにより急速薬物放出プロファイルが生じる。この問題を避けるために、化学架橋法が検討されている。残念なことに、残存する架橋剤の存在が、毒性の副作用を引き起こし得る。加えて、薬物と架橋剤との望ましくない反応により、毒性誘導体又は不活性化誘導体のいずれかが形成され得る。
【０００６】
持続性の薬物放出のための担体としての疎水性バイオポリマーの使用も当該技術分野で研究されている。例えば、シルクタンパク質が好適なバイオポリマーであるとして検討されている。特に、クモ及び昆虫由来のシルクタンパク質、特にカイコ（Bombyx mori）のフィブロインが、薬物及び他の物質を送達する能力に関して試験されている。
【０００７】
例えば、モデルタンパク質薬物のカプセル封入及び制御放出のための蚕フィブロインからなるシルクミクロスフェアが当該技術分野において説明されている。直径数ミクロンのこれらのシルクフィブロインミクロスフェアは鋳型として脂質小胞を用いる方法により得られる（非特許文献２）。
【０００８】
直径が１００μｍ〜４４０μｍの範囲であり、装填効率が改善したより大きいシルクフィブロイン粒子も当該技術分野で説明されている。しかしながら、これらの粒子を作製する調製技法は非常に高度であり、拡張性に欠く（非特許文献３）。
【０００９】
特許文献１は、スパイダーシルクタンパク質からなるナノカプセル及びマイクロカプセルを製造する方法を説明している。数ミクロンのサイズのこれらのカプセルは、スパイダーシルクタンパク質外殻で構成され、概してタンパク質又は化学反応物等の物質を充填することができる。マイクロカプセルはエマルション液滴のカプセル封入により形成され、これによりスパイダーシルクタンパク質中空殻が得られる。
【００１０】
特許文献２は、化粧品におけるタンパク質マイクロビーズの使用に関する。特に、この国際特許出願は化粧品物質の送達のための合成スパイダーシルクタンパク質で構成されるタンパク質マイクロビーズを説明している（非特許文献４）。同様に、特許文献３は、難水溶性有効物質を配合するためのタンパク質マイクロビーズの使用を説明している。両方の特許出願において、不水溶性有効物質はタンパク質マイクロビーズと結び付けるか又はタンパク質マイクロビーズにカプセル封入することができる。該物質とこれらのビーズとの結び付きは主に、疎水性相互作用によるものである。このカプセル封入戦略は、装填された物質がプロテアーゼの活性によるタンパク質マイクロビーズのタンパク質分解の際にのみ放出されるという基本的な不利点を有し、このことが一定の制御放出を困難にしている。更なる問題は、このシステムが主に不水溶性の物質の配合にしか好適ではないことである。
【００１１】
したがって、質が向上したマイクロ粒子又はサブマイクロ粒子を作製する新規の方法を提供することが当該技術分野で強く必要とされている。特に、生体適合性及び生分解性であるとともに、小さい水溶性の化合物のための安定した担体であるナノスケールの粒子を作製するという試みも依然として進行中である。対象の化合物をシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子に効果的に装填するのに好適な方法を提供することも必要とされている。シルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子は、装填された化合物を制御放出及び持続放出することも可能であるものとする。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】国際公開第２００７／０１４７５５号
【特許文献２】国際公開第２００７／０８２９２３号
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Freiberg, S., Zhu, X. X. Polymer microspheres for controlled drug release.International Journal of Pharmaceutics 2004; 282（1-2）:1-18
【非特許文献２】Wang, X., Silk microspheres for encapsulation and controlled release.Journal of Controlled Release 2007; 117（3）: 360-370
【非特許文献３】Wenk, E., Silk fibroin spheres as a platform for controlled drug delivery.Journal of controlled release 2008; 132（1）:26-34
【非特許文献４】Hummerich, D., Primarystructure elements of spider dragline silks and their contribution to protein solubility.Biochemistry 2004 Oct 26; 43（42）:13604-13612
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
したがって、本発明の目的は、上記の基準を全て考慮した新規の単純な薬物送達システムを提供することである。そのため本発明は、化合物が装填されたシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を作製する新規の方法を提供する。より具体的には、該方法は、少なくとも２つの同一の反復単位を含むシルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドを１つ又は複数含むシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を準備する工程と、上記シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を、水溶性であり、約５０Ｄａ〜約２０ｋＤａの分子量を有する少なくとも１つの化合物とインキュベートする工程とを含む。
【００１５】
驚くべきことに、本発明によるシルク担体システムの主な利点の１つは、これらの粒子を作製し、全水系内に周囲条件下で装填することができることである。このことは不安定な化合物の装填、及び生成物の全体的な生体適合性に関して特に重要である。本発明のシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子は、小さい水溶性の化合物に対する予期せぬ装填効率を示している。驚くべきことに、本発明による方法により得られたシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子は最も有利な放出プロファイルを更に示しており、このことが該シルク粒子を化合物の制御送達及び持続送達に極めて好適にさせる。そのため作製されるシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子は医薬化合物及び化粧品化合物の送達に非常によく適している。生理学的条件下でのそれらのコロイド安定性及び生体適合性のために、本発明による装填されたシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子はｉｎ  ｖｉｖｏ用途に特に好適である。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
第１の態様では、本発明は、化合物が装填されたシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を製造する方法であって、
ｉ）少なくとも２つの同一の反復単位を含むシルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドを１つ又は複数含むシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を準備する工程と、
ｉｉ）上記シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を、水溶性であり、約５０Ｄａ〜約２０ｋＤａの分子量を有する少なくとも１つの化合物とインキュベートする工程と、
を含む、化合物が装填されたシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を製造する方法に関する。
【００１７】
本発明の好ましい実施の形態では、化合物は、５０Ｄａ又は約５０Ｄａ〜１０ｋＤａ又は約１０ｋＤａ、好ましくは５０Ｄａ又は約５０Ｄａ〜６ｋＤａ又は約６ｋＤａ、より好ましくは５０Ｄａ又は約５０Ｄａ〜４ｋＤａ又は約４ｋＤａ、最も好ましくは５０Ｄａ又は約５０Ｄａ〜１ｋＤａ又は約１ｋＤａの分子量を有する。
【００１８】
本発明の好ましい実施の形態では、工程ｉ）で準備する該シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を、
ａ）少なくとも２つの同一の反復単位を含むシルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドを１つ又は複数含む水溶液を準備する工程と、
ｂ）該シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドの凝集を誘起し、シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を形成する、誘起する工程と、
ｃ）該シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を相分離により分離する工程と、
により作製する。
【００１９】
好ましくは、化合物が該シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子のマトリクスに浸透することが可能である。
【００２０】
更に好ましい実施の形態では、装填された化合物の少なくとも４０％、好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％が該シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子のマトリクス内に位置する。
【００２１】
更に好ましい実施の形態では、シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子が、０．１μｍ〜５００μｍ、好ましくは０．１μｍ〜１００μｍ、より好ましくは０．２μｍ〜２０μｍ、更により好ましくは０．２μｍ〜１μｍ、最も好ましくは０．２５μｍ〜０．７μｍのメジアン径を有する。
【００２２】
好ましい実施の形態では、少なくとも２つの同一の反復単位は、各々が、
ｉ）ＧＰＧＸＸ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましいそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱからなる群から選択される）、
ｉｉ）ＧＧＸ（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましいそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱからなる群から選択される）、及び
ｉｉｉ）Ａｘ（ここでｘは５〜１０の整数である）
からなる群から選択されるコンセンサス配列を少なくとも１つ含む。
【００２３】
更に好ましい実施の形態では、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドそれぞれの反復単位（複数も可）が独立して、モジュールＡ（配列番号２０）若しくはその変異体、モジュールＣ（配列番号２１）若しくはその変異体、モジュールＱ（配列番号２２）若しくはその変異体、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）、又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択される。
【００２４】
更に特定の実施の形態では、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドが非反復（ＮＲ）単位を更に少なくとも１つ含む。
【００２５】
より好ましくは、非反復（ＮＲ）単位が独立して、ＮＲ３（配列番号４１及び配列番号４５）又はその変異体、及びＮＲ４（配列番号４２及び配列番号４６）又はその変異体からなる群から選択される。
【００２６】
更に特定の実施の形態では、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドが、ＡＤＦ−３（配列番号１及び配列番号４７）、ＡＤＦ−４（配列番号２及び配列番号４８）、ＭａＳｐ  Ｉ（配列番号４３及び配列番号５３〜配列番号６４）、ＭａＳｐ  ＩＩ（配列番号４４及び配列番号６５〜配列番号７８）、（Ｃ）ｍＮＲｚ、ＮＲｚ（Ｃ）ｍ、（ＡＱ）ｎＮＲｚ、ＮＲｚ（ＡＱ）ｎ、ＮＲｚ（ＱＡＱ）ｏ、（ＱＡＱ）ｏＮＲｚ、（Ｃ）ｍ、（ＡＱ）ｎ、及び（ＱＡＱ）ｏ（ここで、ｍは８〜４８の整数であり、ｎは６〜２４の整数であり、ｏは８〜１６の整数であり、ｚは１〜３の整数である）からなる群から選択される。
【００２７】
より好ましくは、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドが、Ｃ１６、Ｃ３２、（ＡＱ）１２、（ＡＱ）２４、Ｃ１６ＮＲ４、Ｃ３２ＮＲ４、（ＡＱ）１２ＮＲ３、又は（ＡＱ）２４ＮＲ３である。
【００２８】
本発明の更に好ましい実施の形態では、水溶液中の該シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドの濃度が、０．０１ｗｔ％／ｖｏｌ〜３０ｗｔ％／ｖｏｌ、より好ましくは０．１ｗｔ％／ｖｏｌ〜３０ｗｔ％／ｖｏｌ、最も好ましくは１ｗｔ％／ｖｏｌ〜２０ｗｔ％／ｖｏｌである。
【００２９】
更に特定の実施の形態では、凝集が、ｐＨシフト、イオン交換、せん断力、アルコール若しくはリオトロピック塩の添加により又はそれらの組み合わせにより誘起される。より好ましくは、アルコールがメタノールである。
【００３０】
同様に好ましくは、リオトロピック塩が、硫酸アンモニウム、リン酸ナトリウム及びリン酸カリウムからなる群から選択される。
【００３１】
より好ましくは、リオトロピック塩の濃度が約４００ｍＭ〜約３Ｍ、好ましくは約１Ｍ〜約２Ｍ、最も好ましくは約２Ｍである。
【００３２】
本発明の好ましい実施の形態では、化合物が、薬学的に活性のある化合物、化粧品物質、農業用物質、化学誘引物質、化学忌避物質、抗真菌物質、抗菌物質、栄養素、健康補助食品、色素、香料、又は止血剤、成長刺激剤、催炎物質、防汚剤、抗微生物剤及びＵＶ保護剤からなる群から選択される作用物質である。
【００３３】
更に特定の実施の形態では、化合物が全体として正の正味電荷を有する。
【００３４】
更に特定の実施の形態では、化合物が静電相互作用及び／又は拡散によりシルクマトリクス、好ましくはスパイダーシルクマトリクスに浸透することが可能である。好ましい実施の形態では、化合物が中性又はアルカリ性の性質を有する。更に特定の実施の形態では、方法の工程ｉｉ）を、４℃〜４０℃、好ましくは１０℃〜３０℃、より好ましくは２０℃〜２５℃の温度で行う。
【００３５】
更に特定の実施の形態では、方法の工程ｉｉ）を、１〜９、好ましくは４〜９、最も好ましくは６〜８のｐＨで行う。
【００３６】
第２の態様では、本発明は、水溶性であり、約５０Ｄａ〜約２０ｋＤａの分子量を有する化合物が少なくとも１つ装填された、少なくとも２つの同一の反復単位を含むシルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドを少なくとも１つ含むシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子に関する。
【００３７】
本発明の好ましい実施の形態では、化合物は、５０Ｄａ又は約５０Ｄａ〜１０ｋＤａ又は約１０ｋＤａ、好ましくは５０Ｄａ又は約５０Ｄａ〜６ｋＤａ又は約６ｋＤａ、より好ましくは５０Ｄａ又は約５０Ｄａ〜４ｋＤａ又は約４ｋＤａ、最も好ましくは５０Ｄａ又は約５０Ｄａ〜１ｋＤａ又は約１ｋＤａの分子量を有する。
【００３８】
更に好ましい実施の形態では、装填された化合物の少なくとも４０％、好ましくは５０％、６０％、７０％、８０％、９０％若しくは９５％が該シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子のマトリクス内に位置する。
【００３９】
本発明の好ましい実施の形態では、粒子のメジアン径が、０．１μｍ〜５００μｍ、好ましくは０．１μｍ〜１００μｍ、より好ましくは０．２μｍ〜２０μｍ、更により好ましくは０．２μｍ〜１μｍ、最も好ましくは０．２５μｍ〜０．７μｍである。
【００４０】
更に特定の実施の形態では、少なくとも２つの同一の反復単位は、各々が、
ｉ）ＧＰＧＸＸ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱからなる群から選択される）、
ｉｉ）ＧＧＸ（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱからなる群から選択される）、及び
ｉｉｉ）Ａｘ（ここでｘは５〜１０の整数である）
からなる群から選択されるコンセンサス配列を少なくとも１つ含む。
【００４１】
より好ましくは、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドそれぞれの反復単位（複数も可）が独立して、モジュールＡ（配列番号２０）若しくはその変異体、モジュールＣ（配列番号２１）若しくはその変異体、モジュールＱ（配列番号２２）若しくはその変異体、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）、又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択される。
【００４２】
更に特定の実施の形態では、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドが非反復（ＮＲ）単位を更に１つ又は複数含む。
【００４３】
より好ましくは、ＮＲ単位が独立して、ＮＲ３（配列番号４１及び配列番号４５）又はその変異体、及びＮＲ４（配列番号４２及び配列番号４６）又はその変異体からなる群から選択される。
【００４４】
本発明の好ましい実施の形態では、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドが、ＡＤＦ−３（配列番号１及び配列番号４７）、ＡＤＦ−４（配列番号２及び配列番号４８）、ＭａＳｐ  Ｉ（配列番号４３及び配列番号５３〜配列番号６４）、ＭａＳｐ  ＩＩ（配列番号４４及び配列番号６５〜配列番号７８）、（Ｃ）ｍＮＲｚ、ＮＲｚ（Ｃ）ｍ、（ＡＱ）ｎＮＲｚ、ＮＲｚ（ＡＱ）ｎ、ＮＲｚ（ＱＡＱ）ｏ、（ＱＡＱ）ｏＮＲｚ、（Ｃ）ｍ、（ＡＱ）ｎ、及び（ＱＡＱ）ｏ（ここで、ｍは８〜４８の整数であり、ｎは６〜２４の整数であり、ｏは８〜１６の整数であり、ｚは１〜３の整数である）からなる群から選択される。
【００４５】
より好ましくは、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドが、Ｃ１６、Ｃ３２、（ＡＱ）１２、（ＡＱ）２４、Ｃ１６ＮＲ４、Ｃ３２ＮＲ４、（ＡＱ）１２ＮＲ３、又は（ＡＱ）２４ＮＲ３である。
【００４６】
本発明の更に好ましい実施の形態では、化合物が、薬学的に活性のある化合物、化粧品物質、農業用物質、化学誘引物質、化学忌避物質、抗真菌物質、抗菌物質、栄養素、健康補助食品、色素、香料、又は止血剤、成長刺激剤、催炎物質、防汚剤、抗微生物剤及びＵＶ保護剤からなる群から選択される作用物質である。
【００４７】
更に特定の実施の形態では、化合物が全体として正の正味電荷を有する。
【００４８】
更に特定の実施の形態では、化合物が静電相互作用及び／又は拡散によりシルクマトリクス、好ましくはスパイダーシルクマトリクスに浸透することが可能である。
【００４９】
更に好ましい実施の形態では、化合物が中性又はアルカリ性の性質を有する。
【００５０】
本発明の好ましい実施の形態では、化合物が生理学的条件への曝露の際に拡散により該シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子から放出される。
【００５１】
更に好ましい実施の形態では、化合物の２０％未満、好ましくは１５％未満、最も好ましくは１０％未満が最初の２４時間以内に放出される。
【００５２】
第３の態様では、本発明は、本発明によるシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子と、付加的に薬学的に許容可能な緩衝剤、希釈剤及び／又は賦形剤とを含む制御送達及び持続送達のための医薬組成物であって、該化合物が薬学的に活性のある化合物である、本発明によるシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子と、付加的に薬学的に許容可能な緩衝剤、希釈剤及び／又は賦形剤とを含む制御送達及び持続送達のための医薬組成物に関する。
【００５３】
第４の態様では、本発明は、制御送達及び持続送達のための本発明によるシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を含む化粧品組成物であって、該化合物が化粧品化合物である、制御送達及び持続送達のための本発明によるシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を含む化粧品組成物に関する。
【００５４】
第５の態様では、本発明は、化合物が装填されたシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子であって、該化合物が水溶性であり、約５０Ｄａ〜約２０ｋＤａの分子量を有し、全体として正の正味電荷を有し、該シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子が少なくとも２つの同一の反復単位を含むシルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドを１つ又は複数含み、該粒子が本発明による方法により取得可能である、化合物が装填されたシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子に関する。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】ａ：ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子特性評価：レーザー回折分光分析を用いて分析した、得られたｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子のサイズ分布を示す図である。差し込み図は対応するｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の走査型電子顕微鏡写真を示す。該粒子集合体の平均径はｄａｖｇ＝３３２±９５ｎｍであった。            ｂ：ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子特性評価：４００ｎｍでの散乱光の強度で評価したコロイド安定性の調査結果を示す図である。Ｒ２は直線回帰（linear fit）の相関係数である。
【図２】ａ：装填法の特性評価：添加したメチルバイオレットに応じたｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子のゼータ電位を示す図である。比較のために、はめ込み図（inlay）はメチルバイオレットを用いたガラスビーズのゼータ電位を示す。            ｂ：装填法の特性評価：モル比に応じたｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子に対するメチルバイオレットの装填率及び装填効率を示す図である。
【図３】ｌｏｇＤ  ＭＷ−１に対してプロットした、エフェドリン（Ｅｐｈ）、プロカイン（Ｐｒｃ）、プロプラノロール（Ｐｒｐ）、パパベリン（Ｐａｐ）及びテトラカイン（Ｔｅｔ）等の弱アルカリ性のモデル薬物に関する装填効率を示す図である。
【図４】ａ：乳酸エタクリジン及びメチルバイオレットの放出研究：３５日間にわたる両方のモデル薬物の実験放出速度及び理論放出速度を示す図である。            ｂ：乳酸エタクリジン及びメチルバイオレットの放出研究：初期バースト領域における実験放出速度及び理論放出速度を示す図である（放出率＜１１％）。            ｃ：乳酸エタクリジン及びメチルバイオレットの放出研究：図に示されるｐＨに応じた乳酸エタクリジンの放出率を示す図である。（ＰＢＳの緩衝能：ｐＨ５．８〜ｐＨ８；ｐＨ２．０、ｐＨ４．０及びｐＨ８．８に関しては非緩衝条件）            ｄ：乳酸エタクリジン及びメチルバイオレットの放出研究：冪乗則モデルに基づく乳酸エタクリジン及びメチルバイオレットの実験放出データを示す図である。０．９９を超える相関パラメータ（ｒ２）による線形回帰を３つの異なる時間間隔で求めた。１日目〜１３日目の間隔での線形回帰を主プロットに示し、差し込み図は１４日目から２０日目（白色の記号）及び２１日目から３５日目（黒色の記号）それぞれの時間間隔でのデータ及び線形回帰を示す。
【図５】ａ：酵素分解の際のｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の特性評価：図に示される時点での酵素分解の際のｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子のサイズ分布を示す図である。            ｂ：酵素分解の際のｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の特性評価：経時的なｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子分布の平均及び最頻値を示す図である。
【図５−２】ｃ：酵素分解の際のｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の特性評価：図に示される時点でのエラスターゼ（ｃ＝４μｇ／ｍｌ）及びトリプシン（ｃ＝５０μｇ／ｍｌ）による分解後の粒子及びｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の凝集体の百分率を示す図である。            ｄ：酵素分解の際のｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の特性評価：図に示される時点での酵素分解の際のｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子のＦＴＩＲスペクトルの二次導関数を示す図である。
【図６】ａ：ｐＨ７．０／３０ｍＭでのｗ／ｗ比に応じたＣ１６スパイダーシルク粒子に対するリゾチームの装填率及び装填効率を示す図である。装填効率は最大３０％のｗ／ｗ比で９０％超に及び、これは非常に効果的な装填プロセスを示す（添加したリゾチーム全体の９０％超が粒子に結合する／粒子に浸透する）。ｗ／ｗ比が３０％を超えると、装填効率がゆっくりと減少し、溶液中でより大量の非装填リゾチームが生じる。            ｂ：ｐＨ７．０／３０ｍＭで異なる量のリゾチームを装填した後のスパイダーシルク粒子のゼータ電位を示す図である。
【図７】ａ：ｐＨ７．０での異なるイオン強度によるＣ１６スパイダーシルク粒子上へのリゾチームの装填。リゾチームとスパイダーシルク粒子とのｗ／ｗ比に応じたリゾチームの装填率を示す図である。            ｂ：ｐＨ７．０での異なるイオン強度によるＣ１６スパイダーシルク粒子上へのリゾチームの装填。リゾチームとスパイダーシルク粒子とのｗ／ｗ比に応じたリゾチームの装填効率を示す図である。
【図８】リゾチームとスパイダーシルク粒子との異なるｗ／ｗ比で装填されたＣ１６スパイダーシルク粒子の粒径を示す図である。およそ１０％（ｗ／ｗ）のリゾチームが装填されたスパイダーシルク粒子の粒径は非装填スパイダーシルク粒子の粒径とは異ならなかった。「Ｐｄｉ」は多分散指数を意味する。
【発明を実施するための形態】
【００５６】
本発明の主な目的は、化合物の制御送達及び持続送達に関する質が向上したシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子を作製する、単純な穏やかな条件による（mild）有効な方法を見出すことである。別の目的は、シルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子に対象の化合物を装填するための新規の単純な二工程法を提供し、それにより当該技術分野で既知のシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子に装填する従来方法の不利点及び欠点を避けることである。特に、更に別の目的は、小さい水溶性化合物を効果的に装填する方法を提供することである。本発明の別の目的は、有利な担体特質を有するシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子を提供することである。主な利点の１つは、本発明の方法により作製される粒子はサイズが小さく、コロイド安定性であり、生体適合性及び生分解性であり、全体として一定の放出プロファイルを示すことである。本発明の他の目的及び利点は本明細書及び添付の特許請求の範囲を更に読み込むことにより明らかになるであろう。
【００５７】
本発明は、シルクタンパク質、例えばスパイダーシルクタンパク質及び装填する化合物の固有の特性を考慮するとともに利用することにより、従来技術の問題を解決している。驚くべきことに、本発明者らは、特に小さい水溶性化合物を非常に穏やかな条件下でシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子に効果的に装填することができることを発見した。本発明による方法を、任意の有機溶媒又は毒性架橋化学物質を用いることなく実施することができ、これにより比較的厳しい配合条件が避けられることは更に予期せぬ研究結果であった。特に、本発明による方法を全水系プロセスで行うことができることは実に驚くべきことであった。本発明による方法の主な利点の１つは、第１の工程で粒子を作製し、その後第２の工程で粒子に対象の化合物を装填することである。このため当該技術分野の方法とは対照的に、本発明による方法の上記の２つの工程を別々に、すなわち空間的に別々に及び異なる時間で行うことができる。さらに、一度作製すれば、装填した化合物を連続的にかつ制御的に放出することができることも驚くべきことであり、このことにより特に化合物の持続送達が要求される場合、本発明によるシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子は非常に好適な担体システムとなる。その良好な生体適合性及び生分解性のために、これらのシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子は医薬用途及び化粧品用途に非常に好適である。しかしながら、本発明によるシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子は、医療用途及び化粧品用途のみに限定されないことも明らかである。装填した化合物の性質に応じて、本発明による方法により作製されるシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子を、実際にあらゆる種類の物質、例えば栄養素、健康補助食品、染料、香料及び多様な他の作用物質に関する担体システムとして利用することもできる。
【００５８】
使用される用語の幾つかは以下でより詳細に定義される：「含む（comprising）」という用語が本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、他の要素又は工程は排除されない。本発明に関して、「からなる（consisting of）」という用語は「含む」という用語の好ましい実施形態であるとみなされる。以下、或る群が少なくとも或る特定数の実施形態を含むと規定した場合、これは好ましくはこれらの実施形態のみからなる群を開示しているとも理解される。
【００５９】
単数名詞に言及する際に不定冠詞又は定冠詞（例えば「a」、「an」又は「the」）を使用する場合、他に何か具体的に述べられていなければこれにはこの名詞の複数形が含まれる。
【００６０】
本発明との関連では「約」という用語は、当業者が依然として問題となる特徴の技術的効果が確保されると理解する正確性の範囲（interval）を示す。この用語は通常、指定の数値からの±１０％、好ましくは±５％、最も好ましくは±２％の偏差を示す。
【００６１】
２つ以上のポリペプチドにおける残基は、該残基がポリペプチド構造において類似の位置を占める場合、互いに「対応する」といわれる。２つ以上のポリペプチドにおける類似の位置は、アミノ酸配列又は構造類似性に基づきポリペプチド配列をアラインメントすることにより決定することができることが当該技術分野で既知である。かかるアラインメントツールは当業者にとって既知であり、例えば標準的な設定、好ましくはＡｌｉｇｎでは、ＥＭＢＯＳＳ：ｎｅｅｄｌｅ、行列：Ｂｌｏｓｕｍ６２、ギャップ開始（Gap Open）１０．０、ギャップ伸長（Gap Extend）０．５を用いてワールドワイドウェブ上で入手することができる（例えばＣｌｕｓｔａｌＷ（www.ebi.ac.uk/clustalw）又はＡｌｉｇｎ（http://www.ebi.ac.uk/emboss/align/index.html））。
【００６２】
濃度、量、溶解度、及び他の数値データが、本明細書中で範囲の形式で表現又は提示されることがある。かかる範囲の形式は、単に便宜上及び簡潔にするために使用され、このため範囲の限定として明示的に記載される数値を含むだけでなく、各数値及び部分範囲が明示的に記載されているかのように、その範囲内に包含される個々の数値又は部分範囲を全て含むと柔軟に解釈されることが理解される。例示として、「約１〜約５」の数値範囲は約１〜約５の明示的に記載される値のみを含むものと解釈すべきではなく、指定範囲内の個々の値及び部分範囲も含む。このため、２、３及び４等の個々の値と、１〜３、２〜４、及び３〜５等の部分範囲とがこの数値範囲に含まれる。同じ原理が１つの数値のみを挙げる範囲にも適用される。さらに、かかる解釈は記載の範囲幅又は特質にかかわらず適用されるものとする。
【００６３】
本発明との関連内で、「メジアン径」又は「平均径」又は「メジアン粒径」又は「平均粒径」は、区別なく使用することができ、シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子の５０％が規定値より小さく、シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子の５０％が規定値より大きい場合、メジアンシルク粒径、好ましくはスパイダーシルク粒径、すなわちメジアンシルク粒子直径、好ましくはスパイダーシルク粒子直径と定義することができる。通常、これはガウスサイズ分布の最大値に対応する。
【００６４】
以下、特定の実施形態に関して、或る特定の図面を参照して本発明を説明するが、本発明はこれに限定されず、特許請求の範囲にのみ限定される。
【００６５】
第１の態様では、本発明は、化合物が装填されたシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を製造する方法であって、
ｉ）少なくとも２つの同一の反復単位を含むシルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドを１つ又は複数含むシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を準備する工程と、
ｉｉ）上記シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を、好ましくは水溶性であり、及び／又は約５０Ｄａ〜約２０ｋＤａの分子量を有する少なくとも１つの化合物とインキュベートする工程と、
を含む、これから本質的になる、又はこれからなる、化合物が装填されたシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を製造する方法に関する。
【００６６】
本発明による方法は、第１の工程で粒子を作製し、その後第２の工程で粒子に対象の化合物を装填する２つ以上の工程のプロセスであることが理解される。このため、当該技術分野の方法とは対照的に、本発明による方法の上記少なくとも２つの工程を別々に、すなわち空間的に別々に及び異なる時間で行うことができる。本発明の好ましい実施形態によれば、該方法の工程ｉ）及び工程ｉｉ）を別々のプロセスで行う、すなわち工程ｉｉ）は工程ｉ）でのシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子の準備の後に行う。驚くべきことに、最先端技術（例えば特許文献３の形式の）とは対照的に、本発明の第２の工程は主に、シルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子のマトリクスへの化合物の拡散をベースにしており（basedon）、これにより高効率の浸透がもたらされる。
【００６７】
本明細書で使用する場合、「シルク」、例えば「スパイダーシルク」は特別な（extraordinary）物理的特性を示すタンパク質ポリマーである。様々なタイプのシルク、例えばスパイダーシルクの中で、ドラグラインが最も熱心に研究されている。ドラグラインシルクは円網を張るクモ（orb weaving spiders）により、それら網の縦糸及び横糸を構築するのに、並びに恒久的に後ろに引っ張られる命綱として一般的に利用される。これらの目的のために、高い引張強度及び弾性が要求される。かかる特性の組み合わせにより、他のほとんどの既知の材料よりも大きい靭性が生じる。
【００６８】
ドラグラインシルクは一般的に、一次構造が共通の反復構造（repetitive architecture）を共有する２つの主要タンパク質から構成される。例えば、アメリカジョロウグモ（Nephila clavipes）由来のドラグラインの２つの主要タンパク質成分はＭａＳｐ１及びＭａＳｐ２（大瓶状腺スピドロイン（Major ampullate Spidroins））と呼ばれ、ニワオニグモ（Araneus diadematus）由来のドラグラインの２つの主要タンパク質成分はＡＤＦ−３及びＡＤＦ−４（ニワオニグモフィブロイン（Araneus Diadematus Fibroin））と呼ばれる。ドラグラインシルクタンパク質は、分析条件に応じて１８０ｋＤａ〜７２０ｋＤａの見掛けの分子質量を有する。
【００６９】
一般的な細胞タンパク質と比較して、シルクタンパク質、例えばスパイダーシルクタンパク質は非常に異常なアミノ酸組成を示す。特にシルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドは、大量のグリシン又はアラニン等の疎水性アミノ酸を有するが、例えば、全く（又は極めて僅かにしか）トリプトファンを有しない。さらに、シルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドは、特にそれらの大きいコアドメインに、反復性の高いアミノ酸配列又は反復単位を含有する。
【００７０】
ＤＮＡ分析に基づき、全てのシルクポリペプチド、特にスパイダーシルクポリペプチドは、異なるより短いペプチドモチーフの限定組を更に含む反復単位の鎖であることが示された。「より短いペプチドモチーフ」及び「コンセンサス配列」という表現は区別なく使用することができる。一般的に、シルクコンセンサス配列、特にスパイダーシルクのコンセンサス配列を４つの主要なカテゴリー：ＧＰＧＸＸ、ＧＧＸ、Ａｘ又は（ＧＡ）ｎ、及びスペーサーにグループ分けすることができる。シルクポリペプチド、特にスパイダーシルクポリペプチドにおけるペプチドモチーフのこれらのカテゴリーには、構造的役割が割り当てられている。例えば、ＧＰＧＸＸモチーフは弾性を与えるであろうβ−ターンスパイラルに関わることが示唆されている。ＧＧＸモチーフは高グリシン３１−ヘリックスに関与することが知られている。ＧＰＧＸＸモチーフ及びＧＧＸモチーフの両方が結晶領域を接続することにより繊維の弾性をもたらす非晶質マトリクスの形成に関わっていると考えられる。高アラニンモチーフは通常、６個〜９個の残基を含有し、結晶性β−シートを形成することが見出されている。スペーサーは通常、荷電基を含有し、反復ペプチドモチーフをクラスターへと分離させる。
【００７１】
第５のカテゴリーは、多くの場合約１００個のアミノ酸の鎖を表す、タンパク質のアミノ末端及びカルボキシル末端にある非反復（ＮＲ）領域で表される。ＮＲカルボキシ末端はシルク繊維の集合化の際に重要な役割を果たし得ると考えられる。
【００７２】
「シルク粒子」、例えば「スパイダーシルク粒子」という用語は本明細書で使用される場合、或る特定の条件下でタンパク質凝集により形成されるマイクロサイズの又はマイクロサイズ以下の球状構造を表す。好ましくは、シルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子は平滑表面を有し、機械的安定性であり、かつ／又は水溶性ではない。シルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子は、好ましくは明確に視認できる含有物を有しない（例えば電子顕微鏡検査により決定される）均質なマトリクスを有することも好ましい。この点において、上記含有物は空気及びシルクポリペプチドに関連しないポリペプチドである場合があることに留意すべきである。この点において、上記含有物は本発明によるシルク粒子中に装填される、及び／又は本発明によるシルク粒子上に装填される少なくとも１つの化合物を包含しないことに留意すべきである。
【００７３】
本発明によるシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子は、各々が少なくとも２つの同一の反復単位を含むシルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドを１つ又は複数含む。
【００７４】
本明細書で使用される場合、「１つ又は複数のシルクポリペプチド」、例えば「１つ又は複数のスパイダーシルクポリペプチド」という用語は好ましくは、シルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子が、例えばスパイダーシルクに関連しない任意の他の反復タンパク質、例えばエラスチンを付加的に含有しないことを意味する。
【００７５】
本発明によるシルクポリペプチドは、当業者に既知の任意のシルクポリペプチドであり得る。本発明によるシルクポリペプチドは例えば、任意の自然発生的な野生型ポリペプチド配列、例えばスパイダーシルクポリペプチド若しくは昆虫のシルクポリペプチド等の節足動物のシルクポリペプチド、又はイガイ（mussel）のシルクポリペプチドのポリペプチド配列であり得る。
【００７６】
本発明によるシルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドは、合成型又は組換型のシルクポリペプチド、例えば合成型又は組換型のスパイダーシルクポリペプチドであってもよく、この配列は１つ又は複数の真の（authentic）シルクタンパク質配列、例えばスパイダーシルクタンパク質配列から誘導することができる。
【００７７】
好ましくは、シルクポリペプチドは、スパイダーシルクポリペプチド又は昆虫のシルクポリペプチド等の節足動物のシルクポリペプチドから誘導される配列を含む。シルクポリペプチドはイガイのシルクポリペプチドから誘導される配列を含んでいてもよい。
【００７８】
スパイダーシルクポリペプチドは、大瓶状腺（major ampullate gland）ポリペプチド（ＭａＳｐ）、例えばドラグラインスパイダーシルクポリペプチド、小瓶状腺（minor ampullate gland）ポリペプチド（ＭｉＳｐ）、鞭毛状ポリペプチド、凝集スパイダーシルクポリペプチド、小管状スパイダーシルクポリペプチド、房状スパイダーシルクポリペプチド、又は梨状スパイダーシルクポリペプチドから誘導される配列を含むことが好ましい。
【００７９】
昆虫のシルクポリペプチドは、鱗翅目のシルクポリペプチドから誘導される配列を含むことが更に好ましい。より好ましくは、昆虫のシルクポリペプチドは、カイコガ科の、最も好ましくはカイコのシルクポリペプチドから誘導される配列を含む。
【００８０】
本発明の枠組みで有用なスパイダーシルクポリペプチドは文献に、例えばR.V. Lewis（2006）の総説（SpiderSilk: Ancient ideas for new biomaterials, Chem. Rev. 106:3762-3774）に記載されている。本発明に使用することができるスパイダーシルクポリペプチドのアミノ酸配列（及び対応する核酸配列）は当業者に既知のデータベース、例えばＮＣＢＩデータベースにおいても見出すことができる。かかるスパイダーシルクポリペプチド配列の幾つかの例が以下の配列表において配列番号４９〜配列番号９６で与えられる。詳細には、配列番号４９〜配列番号５２はニワオニグモフィブロイン１〜４のスパイダーシルクポリペプチド配列を表し、配列番号５３〜配列番号６４は大瓶状腺スピドロインＩ（ＭａＳｐ  Ｉ）のスパイダーシルクポリペプチド配列を表し、配列番号６５〜配列番号７８は大瓶状腺スピドロインＩＩ（ＭａＳｐ  ＩＩ）のスパイダーシルクポリペプチド配列を表し、配列番号７９〜配列番号８１は小瓶状腺シルクポリペプチドの配列を表し、配列番号８２〜配列番号８９は鞭毛状シルクポリペプチドの配列を表し、配列番号９０は房状スピドロインのスパイダーシルクポリペプチド配列を表し、配列番号９１〜配列番号９６は小管状スピドロインのスパイダーシルクポリペプチド配列を表す。
【００８１】
スパイダーシルクポリペプチド配列は、スパイダーシルクドラグライン（大瓶状腺）、鞭毛状タンパク質、梨状タンパク質、小管状タンパク質、小瓶状腺タンパク質、凝集シルクタンパク質、又は房状タンパク質から誘導されることが特に好ましい。スパイダーシルク配列はコガネグモ科及びコガネグモ上科（Araneoids）等の円網を張るクモから誘導され得る。より好ましくは、スパイダーシルク配列は以下のクモからなる群から誘導することができる：
アラチヌラ・ヒツギンシ（Arachnura higginsi）、アラネウス・サークリスパルサス（Araneuscirculissparsus）、ニワオニグモ、アルギオープ・ピクタ（Argiope picta）、スジコガネグモ（Banded Garden Spider）（アルギオープ・トリファシアタ（Argiopetrifasciata））、マダラジョロウグモ（Batik Golden Web Spider）（ネフィラ・アンチポディアナ（Nephila antipodiana））、ベッカリズテントスパイダー（Beccari'sTent Spider）（シルトホラ・ベッカリ（Cyrtophora beccarii））、オオトリノフンダマシ（Bird-dropping Spider）（セラエニア・エクスカバタ（Celaeniaexcavata））、トゲグモ（Black-and-WhiteSpiny Spider）（ガステラカンタ・クフリイ（Gasteracantha kuhlii））、キマダラコガネグモ（Black-and-yellow Garden Spider）（アルギオープ・アウランチア（Argiope aurantia））、ナゲナワグモ（Bolas Spider）（オルダリウス・フルカツス（Ordgarius furcatus））、イセキグモ（Bolas Spiders -Magnificent Spider）（オルガリウス・マグニフィカス（Ordgarius magnificus））、イエオニグモ（Brown Sailor Spider）（ネオスコナ・ナウチカ（Neosconanautica））、チャアシグモ（Brown-Legged Spider）（ネオスコナ・ルホフェモラタ（Neoscona rufofemorata））、キャップドブラックヘッディドスパイダー（CappedBlack-Headed Spider）（ジギエラ・カリプトラタ（Zygiella calyptrata））、ミツカドオニグモ（Common Garden Spider）（パラウィキア・デハアニ（Parawixia dehaani））、キタドヨウグモ（Common Orb Weaver）（ネオスコナ・オキサンセンシス（Neosconaoxancensis））、クラブライクスパイニーオーブウェーバー（Crab-like Spiny OrbWeaver）（ガステラカンタ・カンクリホルミス（エリプソイデス）（Gasteracanthacancriformis（elipsoides）））、オオナガトゲトゲグモ（Curved Spiny Spider）（ガステラカンタ・アルクアタ（Gasteracanthaarcuata））、シルトホラ・モルセンシス（Cyrtophora moluccensis）、シルトホラ・パルナシア（Cyrtophora parnasia）、ドロホンス・コニフェラ（Dolophonesconifera）、ドロホンス・ツリゲラ（Dolophones turrigera）、ドリアズスパイニースパイダー（Doria's Spiny Spider）（ガステラカンタ・ドリアエ（Gasteracanthadoriae））、チブサトゲグモ（Double-Spotted Spiny Spider）（ガステラカンタ・マモサ（Gasteracantha mammosa））、キヌアミグモ（Double-TailedTent Spider）（シルトホラ・エキサンテマチカ（Cyrtophora exanthematica））、アクレペリア・セロペギア（Aculeperia ceropegia）、エリオホラ・プスツロサ（Eriophorapustulosa）、フラットアネプション（Flat Anepsion）（アネプション・デプレシウム（Anepsion depressium））、フォースパインドジュエルスパイダー（Four-spinedJewel Spider）（ガステラカンタ・クアドリスピノーサ（Gasteracantha quadrispinosa））、ガーデンオーブウェブスパイダー（Garden OrbWeb Spider）（エリオホラ・トランスマリナ（Eriophora transmarina））、ジャイアントライケンオーブウェーバー（Giant Lichen Orbweaver）（アラネウス・ビセンテナリウス（Araneusbicentenarius））、ジョロウグモ（Golden Web Spider）（ネフィラ・マクラタ（Nephila maculata））、ハッセルツスパイニースパイダー（Hasselt'sSpiny Spider）（ガステラカンタ・ハッセルティ（Gasteracantha hasseltii））、テゲナリア・アトリカ（Tegenaria atrica）、ヘウロデス・ツリタ（Heurodes turrita）、アイランドサイクローサスパイダー（IslandCyclosa Spider）（サイクローサ・インスラナ（Cyclosa insulana））、ジュエルスパイダー又はスパイニースパイダー（アストラ���ンタ・マイナックス（Astracantha minax））、キドニーガーデンスパイダー（KidneyGarden Spider）（アラネウス・ミチフィカス（Araneus mitificus））、ラグライジズガーデンスパイダー（Laglaise's Garden Spider）（エリオビキシア・ラグライセイ（Eriovixialaglaisei））、ロングベリードサイクローサスパイダー（Long-Bellied CyclosaSpider）（サイクローサ・ビフィダ（Cyclosa bifida））、マラバルジョロウグモモドキ（Malabar Spider）（ネフィレンギス・マラバレンシス（Nephilengysmalabarensis））、マルチカラードセントアンドリュースクロススパイダー（Multi-ColouredSt Andrew's Cross Spider）（アルギオープ・ベルシカラー（Argiopeversicolor））、ケハイグモ（Ornamental Tree-Trunk Spider）（ヘレンニア・オルナチシマ（Herennia ornatissima））、ナガマルコガネグモ（Oval St.Andrew's Cross Spider）（アルギオープ・アエムラ（Argiope aemula））、ハラビロスズミグモ（Red Tent Spider）（シルトホラ・ウニカラー（Cyrtophoraunicolor））、ロシアンテントスパイダー（Russian Tent Spider）（シルトホラ・ヒルタ（Cyrtophora hirta））、カラフトオニグモ（SaintAndrew's Cross Spider）（アルギオープ・ケイセルリンギ（Argiope keyserlingi））、ハツリグモ（Scarlet Acusilas）（アクシラス・コシネウス（Acusilascoccineus））、ギンコガネグモ（Silver Argiope）（アルギオープ・アルゲンタタ（Argiope argentata））、スパイニーバックドオーブウェーバー（SpinybackedOrbweaver）（ガステラカンタ・カンクリホルミス（Gasteracantha cancriformis））、スポッテドオーブウェーバー（Spotted Orbweaver）（ネオスコナ・ドミシリオルム（Neosconadomiciliorum））、セントアンドリュースクロス（St. Andrews Cross）（アルギオープ・アエテリア（Argiope aetheria））、カラフトオニグモ（アルギオープ・ケイセルリンギ）、ゲホウグモ（Tree-Stump Spider）（ポルチス・イレピヅス（Poltys illepidus））、サンカクグモ（Triangular Spider）（アルキス・クラバツス（Arkys clavatus））、サンカクグモ（アルキス・ランセアリウス（Arkyslancearius））、フタトゲグモ（Two-spinedSpider）（ポエシロパキス・アウストララシア（Poecilopachys australasia））、ジョロウグモ種、例えばアメリカジョロウグモ、アフリカジョロウグモ（Nephila senegalensis）及びマダガスカルジョロウグモ（Nephilamadagascariensis）。スパイダーシルク配列はハイイロゴケグモ（brown widowspiders）（ラトロデクツス・ゲオメトリクス（Latrodectus geometricus））、クロゴケグモ（black widow spiders）又はハイイロゴケグモ（grey widow spiders）等のゴケグモから誘導することもできる。
【００８２】
本明細書で使用される場合、「組換えシルクポリペプチド」、例えば「組換えスパイダーシルクポリペプチド」は、
ａ）１つ又は複数の合成反復シルクタンパク質、例えばスパイダーシルクタンパク質の配列、及び／又は
ｂ）１つ又は複数の真の非反復シルクタンパク質、例えばスパイダーシルクタンパク質の配列
を含み得る。
【００８３】
組換えシルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドは、異なる種、例えばクモ種から誘導される配列を含み得ることも明らかである。例えば、合成反復シルクタンパク質配列を１つの種から誘導することができ、１つ又は複数の非反復シルクタンパク質配列、例えばスパイダーシルクタンパク質配列を別の種から誘導することができる。異なる種、例えばクモ種から誘導される反復配列を１つ又は複数含む組換えシルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドを設計することも可能である。
【００８４】
「合成反復配列」という用語は本明細書で使用される場合、天然のシルクタンパク質配列、例えばスパイダーシルクタンパク質配列ではないにもかかわらず、真のシルクタンパク質、例えばスパイダーシルクタンパク質のコンセンサス配列又はモチーフを含む反復単位から誘導することができる組換えタンパク質配列であると理解される。本発明による組換えシルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドは少なくとも２つの同一の反復単位を含む。反復単位は１つ若しくは複数の単量体配列モジュール、又は１つ若しくは複数の短いペプチドモチーフのいずれかを更に含み得る。
【００８５】
組換えスパイダーシルクタンパク質を作製するためのシステムが国際公開第２００７／０２５７１９号で既に開発され、説明されている。この発現システムでは、単一の構成単位、いわゆるモジュールを自由に組み合わせて、合成スパイダーシルクポリペプチドを得ることができる。このタイプのモジュールは、非特許文献４にも説明されている。スパイダーシルク単量体配列モジュールは更に国際公開第２００７／０２５７１９号で詳細に説明されている。宿主細胞におけるシルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドの配列の発現に好適なベクター及びプラスミドがこれらの参考文献に説明されている。
【００８６】
簡潔に述べると、組換えシルクタンパク質、好ましくはスパイダーシルクタンパク質を好適な核酸又はベクターの発現により宿主において作製することができる。宿主は例えば原核細胞であり得る。好ましい原核生物は大腸菌（E. coli）又は枯草菌（Bacillus subtilis）である。宿主は真核細胞でもあり得る。好ましい真核細胞は哺乳動物細胞、植物細胞、酵母細胞又は昆虫細胞である。好ましい哺乳動物細胞は例えば、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨｅＬａ細胞、２９３Ｔ細胞、ＨＥＨ細胞又はＢＨＫ細胞である。酵母細胞を使用する場合、好ましい生物は、サッカロマイセス・セレヴィシエ（Saccharomyces cerevisiae）、シゾサッカロマイセス・ポンベ（Schizosaccharomyces pombe）、ピキア・パストリス（Pichia pastoris）、カンジダ・アルビカンス（Candidaalbicans）又はハンゼヌラ・ポリモルファ（Hansenula polymorpha）である。好ましい昆虫細胞は鱗翅目の昆虫由来の細胞、より好ましくはヨトウガ（Spodoptera frugiperda）由来及びイラクサギンウワバ（Trichoplusiani）由来の細胞である。最も好ましくは、昆虫細胞はＳｆ０細胞、Ｓｆ２１細胞又はｈｉｇｈ  ｆｉｖｅ細胞である。宿主が植物細胞である場合、細胞はタバコ、ジャガイモ、トウモロコシ及びトマトから誘導されるのが好ましい。
【００８７】
好ましくは、配列モジュールのベースは、ニワオニグモのＡＤＦ−３遺伝子及びＡＤＦ−４遺伝子、並びにアメリカジョロウグモのＦＬＡＧ遺伝子である。ＡＤＦ−３遺伝子及びＡＤＦ−４遺伝子はクモのドラグライン糸を形成するタンパク質をコードする。ＡＤＦ−３タンパク質及びＡＤＦ−４タンパク質の両方がＭａＳｐ  ＩＩタンパク質（大瓶状腺スピドロインＩＩ）の群に属する。ＦＬＡＧ遺伝子は鞭毛状シルクタンパク質をコードする。
【００８８】
合成シルクタンパク質構築物、例えばスパイダーシルクタンパク質構築物の集合化に好適なモジュールは例えば以下のとおりである：
モジュールＡ：ＧＰＹＧＰＧＡＳＡＡ  ＡＡＡＡＧＧＹＧＰＧ  ＳＧＱＱ（配列番号２０）、
モジュールＣ：ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡ  ＡＳＧＰＧＧＹＧＰＥ  ＮＱＧＰＳＧＰＧＧＹ  ＧＰＧＧＰ（配列番号２１）、
モジュールＱ：ＧＰＧＱＱＧＰＧＱＱ  ＧＰＧＱＱＧＰＧＱＱ（配列番号２２）、
モジュールＫ：ＧＰＧＧＡＧＧＰＹＧＰＧＧＡＧＧＰＹＧＰＧＧＡＧＧＰＹ（配列番号２３）、
モジュールｓｐ：ＧＧＴＴＩＩＥＤＬＤ  ＩＴＩＤＧＡＤＧＰＩＴＩＳＥＥＬＴＩ（配列番号２４）、
モジュールＸ：ＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧ  ＧＳＧＧＡＧＧＳ（配列番号２７）及び
モジュールＹ：ＧＰＧＧＡＧＰＧＧＹ  ＧＰＧＧＳＧＰＧＧＹ  ＧＰＧＧＳＧＰＧＧＹ（配列番号２８）。
【００８９】
更なる好適なモジュールは例えば以下のとおりである：
モジュールＡＣ：ＧＰＹＧＰＧＡＳＡＡ  ＡＡＡＡＧＧＹＧＰＧ  ＣＧＱＱ（配列番号２９）、
モジュールＡＫ：ＧＰＹＧＰＧＡＳＡＡ  ＡＡＡＡＧＧＹＧＰＧ  ＫＧＱＱ（配列番号３０）、
モジュールＣＣ：ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡ  ＡＳＧＰＧＧＹＧＰＥ  ＮＱＧＰＣＧＰＧＧＹ  ＧＰＧＧＰ（配列番号３１）、
モジュールＣＫ１：ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡ  ＡＳＧＰＧＧＹＧＰＥ  ＮＱＧＰＫＧＰＧＧ  Ｙ  ＧＰＧＧＰ（配列番号３２）、
モジュールＣＫ２：ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡ  ＡＳＧＰＧＧＹＧＰＫ  ＮＱＧＰＳＧＰＧＧＹ  ＧＰＧＧＰ（配列番号３３）及び
モジュールＣＫＣ：ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡ  ＡＳＧＰＧＧＹＧＰＫ  ＮＱＧＰＣＧＰＧＧＹ  ＧＰＧＧＰ（配列番号３４）。
【００９０】
上記モジュールは以下のアミノ末端及び／又はカルボキシ末端のＴＡＧを更に含み得る：
ＴＡＧＣＹＳ１：ＧＣＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号３５）、
ＴＡＧＣＹＳ２：ＧＣＧＧＧＧＧＧ（配列番号３６）、
ＴＡＧＣＹＳ３：ＧＣＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号３７）、
ＴＡＧＬＹＳ１：ＧＫＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号３８）及び
ＴＡＧＬＹＳ２：ＧＫＧＧＧＧＧＧ（配列番号３９）。
【００９１】
本発明のシルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドに存在し得るまた更なるモジュールが従来技術文献で説明されている。これに関しては、国際特許出願の国際公開第２００８／１５５３０４号に、本明細書中では特に国際公開第２００８／１５５３０４号の配列表における配列番号２（Ｒ１６）及び配列番号４（Ｓ１６）に言及される。
【００９２】
上記のモジュール及びＴＡＧのアミノ酸配列は１つ又は複数のリジン残基及び／又はシステイン残基を含む。そのためモジュール及び／又はＴＡＧは改変されたシルクタンパク質、特にスパイダーシルクタンパク質を生成することが可能である。改変されたシルクタンパク質、特にスパイダーシルクポリペプチドが国際公開第２００７／０２５７１９に詳細に説明されている。化合物はそれらのリジン残基及び／又はシステイン残基を介して改変されたシルクタンパク質、特にスパイダーシルクタンパク質と結び付けることもできることが理解されなければならない。
【００９３】
さらに上記のモジュールを、本発明による好適なシルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドを得るために自由に組み合わせることができる。シルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドのモジュールの数は一般的に制限されない。好ましくは、組換えシルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドは、２個〜５０個のモジュール、より好ましくは１０個〜４０個、最も好ましくは１５個〜３５個のモジュールを含み得る。
【００９４】
例えば、合成反復配列は反復単位として少なくとも２つの組み合わせ（ＡＱ）及び／又は（ＱＡＱ）を含み得る。
【００９５】
合成反復配列がＡＤＦ−４から誘導される場合、該合成反復配列は、各々がモジュールＣのアミノ酸配列（配列番号２１）又はその変異体を含む少なくとも２つの同一の反復単位を含み得る。例えば、得られる配列はＣ１６又はＣ３２であり得る、すなわちそれぞれ１６個又は３２個の反復単位を含み得る。この点において、「ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）」及び「Ｃ１６」という用語は本発明との関連で区別なく（interchangeably）使用され、同じ意味を有することに留意すべきである。
【００９６】
シルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子に効率的に装填するのに適した化合物はサイズが十分に小さいのが好ましい。本発明の好ましい実施形態では、化合物は、５０Ｄａ若しくは約５０Ｄａ〜２０ｋＤａ若しくは約２０ｋＤａ；又は５０Ｄａ若しくは約５０Ｄａ〜１０ｋＤａ若しくは約１０ｋＤａ、好ましくは５０Ｄａ若しくは約５０Ｄａ〜６ｋＤａ若しくは約６ｋＤａ、より好ましくは５０Ｄａ若しくは約５０Ｄａ〜４ｋＤａ若しくは約４ｋＤａ、最も好ましくは５０Ｄａ若しくは約５０Ｄａ〜１ｋＤａ若しくは約１ｋＤａ、例えば５０Ｄａ、１００Ｄａ、１５０Ｄａ、２００Ｄａ、２５０Ｄａ、３００Ｄａ、３５０Ｄａ、４００Ｄａ、４５０Ｄａ、５００Ｄａ、５５０Ｄａ、６００Ｄａ、６５０Ｄａ、７００Ｄａ、７５０Ｄａ、８００Ｄａ、８５０Ｄａ、９００Ｄａ、９５０Ｄａ、１ｋＤａ、１．５ｋＤａ、２ｋＤａ、２．５ｋＤａ、３ｋＤａ、３．５ｋＤａ、４ｋＤａ、４．５ｋＤａ、５ｋＤａ、５．５ｋＤａ、６ｋＤａ、６．５ｋＤａ、７ｋＤａ、７．５ｋＤａ、８ｋＤａ、８．５ｋＤａ、９ｋＤａ、９．５ｋＤａ、１０ｋＤａ、１１ｋＤａ、１２ｋＤａ、１３ｋＤａ、１４ｋＤａ、１５ｋＤａ、１６ｋＤａ、１７ｋＤａ、１８ｋＤａ、１９ｋＤａ、又は２０ｋＤａの分子量を有する。
【００９７】
さらに、シルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子に効率的に装填するのに適した化合物は水溶性であるのが好ましい。
【００９８】
さらに、本発明による好ましい化合物は、好ましくは約５０Ｄａ〜２０ｋＤａ、より好ましくは５０Ｄａ〜１０ｋＤａ又は５０Ｄａ〜６ｋＤａ、最も好ましくは５０Ｄａ〜４ｋＤａ又は５０Ｄａ〜１ｋＤａ（上記を参照されたい）の分子量を有する小さい水溶性化合物である任意の化合物であり得る。
【００９９】
「可溶」という用語は本明細書で使用される場合、溶質と呼ばれる固体、液体又は気体の化学物質が液体溶媒に溶解し、均一溶液を形成することが可能であることを意味する。一般的に、物質の溶解度は使用される溶媒に、並びに温度及び圧力に強く依存する。特定の溶媒への物質の溶解度は、より多くの溶質を添加しても溶液の濃度が増大しない飽和濃度として測定される。
【０１００】
「溶媒」は、溶解される物質と溶解する液体との間の化学反応を起こさずに気体、他の液体又は固形物を溶解することができる液体である。
【０１０１】
「水溶性」化合物は通常、水に溶解することが可能な任意のイオン性化合物（又は塩）である。一般的に基本的な溶媒和は、それぞれ化合物の正電荷及び負電荷と、Ｈ２Ｏ分子の部分負電荷及び部分正電荷との間の引力により起こる。水に溶解する物質又は化合物は「親水性」（「好水性（water-loving）」）とも呼ばれる。水溶液溶解度としても知られる水溶解度（ＳＷ）は所与の温度及び圧力において平衡状態で水に溶解することができる物質の最大量である。一般的には、限定量が溶解度積により与えられる。
【０１０２】
欧州薬局方における溶解度の定義に従うと、「やや難溶性（sparinglysoluble）」は、溶質１グラム当たりのおおよその溶媒体積が３０ミリリットル〜１００ミリリットル（１５℃〜２５℃の温度で）であることを意味する。「やや易溶性」は、溶質１グラム当たりのおおよその溶媒体積が１０ミリリットル〜３０ミリリットル（１５℃〜２５℃の温度で）であることを意味し、「易溶性（freely soluble）」は、溶質１グラム当たりのおおよその溶媒体積が１ミリリットル〜１０ミリリットル（１５℃〜２５℃の温度で）であることを意味する。「極めて易溶性（very soluble）」は、溶質１グラム当たりのおおよその溶媒体積が１ミリリットル未満（１５℃〜２５℃の温度で）であることを意味する。
【０１０３】
したがって本発明との関連で、「水溶性」は水１リットル当たりの化合物の水溶解度が１０ｇ以上であることを意味する。好ましくは、水溶解度は、水１リットル当たり少なくとも２０ｇ、少なくとも３０ｇ、少なくとも４０ｇ、及び少なくとも５０ｇの化合物、より好ましくは水１リットル当たり少なくとも６０ｇ、少なくとも７０ｇ、少なくとも８０ｇ、少なくとも９０ｇ及び少なくとも１００ｇの化合物、最も好ましくは水１リットル当たり少なくとも２００ｇ、少なくとも３００ｇ、少なくとも４００ｇ、少なくとも５００ｇ及び少なくとも８００ｇの化合物である。本発明でも使用することができる極めて水溶性の化合物は１ｇ／ｍｌ以上の水溶解度を有する。
【０１０４】
水溶性の化合物は通常、以下の化学基を含む：金属カチオン、アンモニウムカチオン等のカチオン基、及び／又は酢酸イオン、硝酸イオン、塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオン若しくは硫酸イオン等のアニオン基。
【０１０５】
有機化学及び薬科学に使用される水溶解度の典型的な評価基準は、分配係数（Ｐ）又は分布係数（Ｄ）であり、これらは平衡状態にある２つの非混和性溶媒の混合物の２つの相における化合物の濃度の比を与える。
【０１０６】
例えば、オクタノール−水分配係数（ｌｏｇ  Ｐｏ／ｗ）は通常、物質の水溶解度を評価するのに使用され、二相オクタノール／水系におけるオクタノール相における化合物濃度と、水相における化合物濃度との比と定義される。このため、オクタノール−水分配係数は、化合物の親水性に対する親油性の評価基準を与える。概して、ｌｏｇ  Ｐは、拡張した非極性構造を有する化合物では大きく、親水性の化合物では小さい傾向にある。化合物のｌｏｇ  Ｐ値を決定する方法は例えば、振盪フラスコ（又は試験管）法、ＨＰＬＣ又はＩＴＩＥＳ（２つの非混和性の電解質溶液間の界面（Interfaces between two immiscible electrolyte solutions））等の電気化学的方法である。
【０１０７】
商業的にかつインターネットで自由に入手可能な多くのｌｏｇ  Ｐ計算手段又は予測手段、例えばＣｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｋｉｔ、ＪＯＥＬｉｂ、ＡＣＤ／ＬｏｇＰ−ＤＢ、ＡＣＤ／Ｌｏｇ  Ｐ  Ｆｒｅｅｗａｒｅ、Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ  Ｐｌｕｓ−Ｓ＋ｌｏｇＰ、ＡＬＯＧＰＳ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｙ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒ、ChemAxonのＭａｒｖｉｎ及びＣａｌｃｕｌａｔｏｒ  Ｐｌｕｇｉｎｓを用いた無料のオンラインｌｏｇ  Ｐ算出、ｍｉＬｏｇＰ  ｆｒｅｅ  ｌｏｇ  Ｐ、ＰｒｅＡＤＭＥＴ、ＸＬＯＧＰ３が存在する。
【０１０８】
好ましくは、ｌｏｇ  Ｐ値はＡＣＤｌｏｇＰソフトウェア（Advanced Chemistry Development、ACD/labs、http://www.acdlabs.comで入手可能）を用いて予測することができる。
【０１０９】
本発明との関連で、化合物は好ましくは、全体として親水性を有する。シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子に装填するのに好適な化合物はタンパク質又はペプチド等の両親媒性物質も含む。好ましい実施形態によれば、化合物のｌｏｇ  Ｐ値は、６未満、好ましくは５．５未満、更により好ましくは５未満、最も好ましくは４．５未満、例えば６、５．５、５、４．５、４、３．５、３、２．５、２、１．５、１又は０．５未満である。
【０１１０】
さらに、特定の化合物の２つの異なる種、すなわち未変化型及びプロトン化型の疎水性相と親水性相との間の分布をその見掛けの分布係数（ｌｏｇ  Ｄ）により説明することができ、ｌｏｇ  Ｄは以下の式を用いて算出することができる：
酸に対して：ｌｏｇ  Ｄ＝ｌｏｇ  Ｐ−ｌｏｇ（１＋１０ｐＨ−ｐＫａ）、及び
塩基に対して：ｌｏｇ  Ｄ＝ｌｏｇ  Ｐ−ｌｏｇ（１＋１０ｐＫａ-ｐＨ）。
【０１１１】
本発明との関連では、化合物は、−２を超える、好ましくは−１．５を超える、より好ましくは−１を超える、更により好ましくは−０．５を超える、最も好ましくは０を超える分布係数（ｌｏｇ  Ｄ）を有するのが好ましい。
【０１１２】
本発明の好ましい実施形態では、工程ｉ）で準備する該シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を、
ａ）少なくとも２つの同一の反復単位を含むシルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドを１つ又は複数含む水溶液を準備する工程と、
ｂ）該シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドの凝集を誘起し、シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を形成する、誘起する工程と、
ｃ）該シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を相分離により分離する工程と、
により作製する。
【０１１３】
一般的に、水溶液から開始して、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドの凝集を或る特定の条件下で誘起し、シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を形成することができる。
【０１１４】
「凝集」又は「相分離」は本明細書で使用される場合、特に液−液相分離とみなされ得る塩析機構による粒子形成を意味する。「一相状態（one-phase state）」は、単量体でかつ元々折り畳まれていないタンパク質分子の溶液により示される初期状態である。例えば、コスモトロピックイオンの添加によるイオン強度等の制限（constraints）の変化がシステムの自由エネルギーを変え、高タンパク質相及び高溶媒相への相分離がもたらされる。この相分離状態はエネルギー的に有利であり、「タンパク質相」のタンパク質濃度が臨界レベルまで増大する。核形成の臨界濃度に達すると、幾つかの構造化した核が高タンパク質相に同時に形成される。核が球状に成長し始め、付加的な単量体と相互作用することにより、それらの構造が変換される。高タンパク質相のタンパク質濃度が溶解度の平衡状態を下回ると、球状の成長が停止する。したがって球体のサイズは更に増大しない。このため相分離は高タンパク質相と高溶媒相とが分離することを意味する。理論に束縛されるものではないが、球体のサイズは一般的に、タンパク質濃度及び混合条件に依存する。しかしながら、タンパク質の凝集を誘起するために当該技術分野では様々な他の方法が存在する。
【０１１５】
ミクロスフェア集合化のプロセスは通常、凝集開始後の光散乱によりモニタリングされる。特に、得られる粒子のコロイド安定性は、或る特定の波長での散乱光の強度を測定することにより分析することができる。また平均粒径及びサイズ分布を静的光散乱（ＳＬＳ）とも呼ばれるレーザー回折により決定することができる。一般的に、レーザー回折はMie及びFraunhoferの理論を利用し、光散乱パターンからサイズ分布を決定する。これらはレーザービームが空気中又は液体中の粒子の分散系を通過する際に生じる回折光の「ハロ」の分析に基づく。回折角は粒径が低減するにつれて増大する。質量及び半径の二乗平均平方根、又は幾何学径の評価基準をメガダルトンスケールでこの技法を用いて決定することができる。このためMie理論に従って、順方向での散乱光の強度は粒径が増大するにつれて増大する。このようにして低濃度の分散液中の凝集の開始を順方向での散乱光の強度により検出することができる。
【０１１６】
得られるシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を、走査電子顕微鏡検査（ＳＥＭ）及びフーリエ変換赤外分光法（ＦＴＩＲ）等の方法を用いて分析することもできる。これらの方法の更なる記載を以下の記載に及び実施例に見出すことができる。
【０１１７】
シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子の形態及び構造を分析するために、通常走査電子顕微鏡検査（ＳＥＭ）を利用することができる。走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）は、ラスター走査パターンにおける高エネルギーの電子ビームによりサンプル表面をスキャンすることにより、サンプル表面を画像化するタイプの電子顕微鏡である。電子はサンプルの表面トポグラフィ、組成、及び導電率等の他の特性に関する情報を含有するシグナルを生じるサンプルを構成する原子と相互作用する。
【０１１８】
得られたシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子の二次構造等の更なる特質を、例えば、フーリエ変換赤外分光法（ＦＴＩＲ）により分析することができる。この技法は結合及び結合基が特徴的な周波数で振動することをベースとする。赤外線に曝される分子はこの分子に特徴的な周波数で赤外線エネルギーを吸収する。ＦＴＩＲ分析の間、検体上のスポットが変調ＩＲビームを受ける。異なる周波数での検体の赤外線の透過率及び反射率を逆ピークからなるＩＲ吸収プロットに変換する。それから得られるＦＴＩＲスペクトルパターンを分析し、ＦＴＩＲライブラリで同定した物質の既知のシグナチャ（signatures）に適合させる。例えば、１６４８ｃｍ−１〜１６６０ｃｍ−１、１６２５ｃｍ−１〜１６４０ｃｍ−１及び１６６０ｃｍ−１〜１６６８ｃｍ−１でのピークをそれぞれ、シルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドのα−ヘリックス構造、β−シート構造及びβ−ターン構造に割り当てることができる。
【０１１９】
相分離後、作製される粒子を遠心分離等の常法により分離することができる。続いて、調製した粒子を洗浄し、対象の化合物とインキュベートすることができる。以下で言及されるように、粒子を例えば乾燥形態又は凍結乾燥形態で保存することもできる。
【０１２０】
本発明による粒子は通常、平滑表面と固体マトリクスとからなる。本発明との関連では、「表面」という用語は、周囲空間、すなわち周囲媒体に直接曝される球体部分を含む粒子の外側の球面を規定する。粒子はかなり平滑かつ均一であるように見えるが、超顕微鏡レベルではその表面は不規則な拡散構造を有する薄いマントルを示す。このため表面は、周囲媒体と界面を共有し、そこで化合物分子の接着及び双方向拡散が起こり得る粒子の最外層を示す。
【０１２１】
「マトリクス」という用語は本明細書で使用される場合、表面ではない、すなわち上記の定義に従うと周囲媒体との界面を全く含まないシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子の内側の球面を規定する。マトリクスは、通常粒子の半径及びしたがって体積よりも小さい半径及びしたがって体積を有する固体球であると理解される。
【０１２２】
マトリクスの体積は通常、総体積の５０％を超える、好ましくは６０％、７０％、８０％、９０％を超える、最も好ましくは９５％を超える、例えば５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％又は９５％を超える。
【０１２３】
本発明との関連では「装填」という用語は、シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子の表面への接着を介した、並びにシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子のマトリクスへの拡散及び／又は浸透、並びにその後の接着を介した化合物とシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子との非共有結合であって、装填した化合物の好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％がシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子のマトリクス内に位置する、化合物とシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子との非共有結合を意味する。本明細書で言及される非共有結合は、例えば静電相互作用、親水性相互作用（水素結合）及び／又は疎水性相互作用（ファンデルワールス力）により引き起こされる。
【０１２４】
シルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子の「装填」を判断する幾つかの方法が存在する。例えば、１つの方法はシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子とのインキュベーション期間後に上清中の化合物の残留濃度を求めることである。以下の実施例でより詳細に説明されるように、化合物の残留濃度をＵＶ−Ｖｉｓ分光法を用いて測定することができる。
【０１２５】
シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子のマトリクスに接着した装填した化合物の百分率を決定するために、以下のモデル算出を使用することができる。シルク粒子の理論最大接着能を算出するために、シルク粒子上での化合物の最密（closest/densest）球充填を採る。シルク粒子及び化合物のメジアンにより、シルク粒子及び化合物の表面を決定することができる。表面に対応して、粒子表面に直接接触することができる化合物の最大量を決定することができる。化合物の単層はシルク粒子上での化合物の最密球充填と仮定される。シルク粒子の表面に装填した化合物の２つ以上の層は、例えば２つの正に荷電した化合物間の静電反発力のため起こる可能性が低い。全体に装填した化合物と、シルク粒子の表面に装填した化合物との比に基づいて、マトリクス中に装填した化合物の百分率を決定することができる。
【０１２６】
接着を介した、正に荷電した化合物と、負に荷電した粒子の表面との非共有結合は、拡散及び／又は浸透、並びにその後の接着（これは粒子のゼータ電位をほとんど変えない）を介した、正に荷電した化合物と、負に荷電した粒子のマトリクスとの非共有結合とは対照的に、ゼータ電位の絶対値を低減する。
【０１２７】
溶液中の遊離化合物に対する粒子結合（接着）した化合物の百分率が高いことが、非常に高い装填効率をもたらす。
【０１２８】
接着した化合物はシルク粒子のマトリクス中で保護され、そのため後の使用のために数週間安全に保存することができる。
【０１２９】
不可逆的に／立体的に捕捉された結合した化合物とは対照的に、シルク粒子を分解する必要なく、接着した化合物をシルク粒子から効率的に一定して放出させることもできる。シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子の表面に排他的に接着される化合物の大量放出とは対照的に、化合物を数日から数週間の期間にわたって安定して放出させることができる。
【０１３０】
更に好ましい実施形態では、化合物は、シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子のマトリクスに浸透することが可能である。物理学及び工学における「浸透する」という用語は一般的に、浸透物（permeate）（液体、気体又は蒸気であり得る）の固体への透過を意味し、物質の固有の浸透性に依存する。特に、本発明による化合物の浸透は分子拡散により起こる。分子拡散は定義としてはランダムな分子運動による分子のより高濃度の領域からより低濃度の領域への正味の輸送である。浸透プロセスの間、化合物は、先ずシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子の表面に接着し、それから分子拡散により表面層をシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子のマトリクスに浸透することを理解しなければならない。
【０１３１】
このため本明細書で使用される場合、「シルク粒子に浸透することが可能である」、例えば「スパイダーシルク粒子に浸透することが可能である」という用語は、化合物が分子拡散によりシルクマトリクス、例えばスパイダーシルクマトリクスに浸漬することが可能であることを意味する。化合物がシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子のマトリクスに浸透することが可能であるか否かは、幾つかの方法を用いて決定することができる。
【０１３２】
例えば、１つの方法はシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子とのインキュベーション期間後に上清中の化合物の残留濃度を求めることである。以下の実施例でより詳細に説明されるように、化合物の残留濃度をＵＶ−Ｖｉｓ分光法を用いて測定することができる。
【０１３３】
一般的に、紫外可視分光法又は紫外可視分光光度法（ＵＶ−Ｖｉｓ又はＵＶ／Ｖｉｓ）はＵＶ可視領域における光子の分光を伴う。したがってこの技法は可視範囲及び隣接（近紫外（ＵＶ）及び近赤外（ＮＩＲ））範囲内の光を使用する。この領域の電磁スペクトルにおいて、測定サンプル中の分子は電子遷移を受ける。そのためＵＶ−Ｖｉｓ分光法は一般的に、有機化合物の溶液の定量的決定に使用される。本発明との関連内で、シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子のカプセル封入効率及び装填率を、ＵＶ−Ｖｉｓ分光法を用いて決定し、以下の式に基づき算出することができる：
カプセル封入効率（ｗ／ｗ％）＝（粒子中の化合物の量／最初に添加した化合物）×１００
【０１３４】
例えば、「カプセル封入効率」は以下のデータを用いて６６％と算出される：シルク粒子の表面及びマトリクスと非共有結合した化合物の量：０．１ｇ、最初に添加した化合物の量：０．１５ｇ。
カプセル封入効率＝０．１ｇ／０．１５ｇ＝０．６６＝６６％
【０１３５】
装填率（ｗ／ｗ％）＝（粒子中の化合物の量／粒子の量）×１００
例えば「装填率」は以下のデータを用いて１０％と算出される：シルク粒子の表面及びマトリクスと非共有結合した化合物の量：０．１ｇ、最初に添加した化合物の量：１．０ｇ。
装填率＝０．１ｇ／１．０ｇ＝０．１＝１０％
【０１３６】
「カプセル封入効率」及び「装填効率」という用語は本発明との関連では区別なく使用され、そのため同じ意味を有する。
【０１３７】
好ましい実施形態では、化合物の少なくとも１０％、２０％又は３０％、より好ましくは少なくとも４０％、５０％又は６０％、最も好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％又は９５％、例えば少なくとも１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％又は９５％がシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子に（シルク表面及びマトリクスに）装填される。
【０１３８】
別の好ましい実施形態では、装填した化合物の少なくとも４０％、好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％、例えば少なくとも４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％又は９５％がシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子のマトリクス内に位置する。
【０１３９】
より好ましい実施形態では、化合物の少なくとも１０％、２０％又は３０％、より好ましくは少なくとも４０％、５０％又は６０％、最も好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％又は９５％、例えば少なくとも１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％又は９５％がシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子に（シルク表面及びマトリクスに）装填され、装填した化合物の少なくとも４０％、好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％、例えば少なくとも４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％又は９５％がシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子のマトリクス内に位置する。
【０１４０】
化合物がシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子の内部に浸透することが可能であるか否かの指標を与える更なる基準の１つはゼータ電位である。実施例から明らかであるように、粒子のゼータ電位のモニタリングは特に、化合物が粒子表面で単に結合するのか、又は内部に拡散することが可能であるのかを示すことができる。ゼータ電位の測定値は作製されるシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子が全体として正味電荷を有する場合に特に適用可能である。
【０１４１】
本明細書で使用される場合、「ゼータ電位」又は「ζ電位」は、界面から離れたバルク流体における或る点に対する滑り面の位置での界面二重層（ＤＬ）における電位である。換言すると、ゼータ電位は分散液と分散した粒子に接着した流体の固定層との間の電位差である。
【０１４２】
特に浸透プロセスを、装填中のゼータ電位の観察される変化に基づきモニタリングすることができる。このため、ゼータ電位の変化はシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子のマトリクスへの化合物の浸透の評価基準である。
【０１４３】
このため、本発明による浸透機構は、当該技術分野で説明されているような化合物のカプセル封入等の機構と明らかに区別することができる。例えば、国際公開第２００７／０８２９３６号及び国際公開第２００７／０８２９２３号の特許出願に記載のようなカプセル封入はいずれの場合でも、難水溶性化合物を含むことをベースとしている。しかしながら、化合物分子の粒子の内部への拡散はこれらの従来技術の参考文献には全く説明されていなかった。それどころか、化合物は粒子形成中にスパイダーシルク材料に包まれる。このため、従来技術による粒子形成及び化合物の装填は単一工程で行われなければならない。
【０１４４】
対照的に、本発明の方法では、インキュベーション工程、すなわち化合物の装填を、シルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子を調製する行程中に行うことができるが、好ましくはシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子を調製する行程の後でも行うことができる。しかしながら、これはこれら２つの工程を１つの連続したプロセスで連続して行われなければならないことを意味するものではない。上述のように、本発明の主な利点の一つは、粒子を作製する工程と粒子に装填する工程とを空間的に及び様々な時点で別々に行うことができることである。
【０１４５】
上述のように、作製されるシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子は、乾燥形態で、例えば粉末形態で別々に提供することができる。凍結乾燥等の好適な方法が当該技術分野で知られている。しかしながら、凍結乾燥は粒子に化合物が装填された後に行うこともできる。使用前に、乾燥したシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子を再分散させる、すなわち水性液体又は好適な緩衝剤で水和させる必要がある。
【０１４６】
さらに、本発明の方法により作製されるシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子は概して、数ナノメートルから数百マイクロメートルまでの範囲のメジアン径を有し得る。上述のように、粒径及びサイズ分布を、レーザー回折分光法を用いて決定することができる。
【０１４７】
好ましい実施形態によれば、シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子は、０．１μｍ〜５００μｍ、好ましくは０．１μｍ〜１００μｍ、より好ましくは０．２μｍ〜２０μｍ、更により好ましくは０．２μｍ〜１μｍ、最も好ましくは０．２５μｍ〜０．７μｍ、例えば０．１μｍ、０．１５μｍ、０．２μｍ、０．２５μｍ、０．３μｍ、０．３５μｍ、０．４μｍ、０．４５μｍ、０．５μｍ、０．５５μｍ、０．６μｍ、０．６５μｍ、０．７μｍ、０．７５μｍ、０．８μｍ、０．８５μｍ、０．９μｍ、０．９５μｍ、１μｍ、２μｍ、３μｍ、４μｍ、５μｍ、６μｍ、７μｍ、８μｍ、９μｍ、１０μｍ、１５μｍ、２０μｍ、２５μｍ、３０μｍ、３５μｍ、４０μｍ、４５μｍ、５０μｍ、５５μｍ、６０μｍ、６５μｍ、７０μｍ、７５μｍ、８０μｍ、８５μｍ、９０μｍ、９５μｍ、１００μｍ、１５０μｍ、２００μｍ、２５０μｍ、３００μｍ、３５０μｍ、４００μｍ、４５０μｍ又は５００μｍのメジアン径を有する。
【０１４８】
上述のように、本発明によるシルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドは、任意の自然発生的な野生型ポリペプチド配列、又は任意の合成若しくは組換えシルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチド、又はそれらの混合物のいずれかであり得る。好ましくは、本発明によるシルクポリペプチド、より好ましくはスパイダーシルクポリペプチドは合成又は組換えシルクポリペプチド、より好ましくはスパイダーシルクポリペプチドである。
【０１４９】
「シルクポリペプチド」、例えば「スパイダーシルクポリペプチド」は本発明との関連で使用される場合、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、好ましくは少なくとも９５％、最も好ましくは１００％の１つの同一の反復単位の多重コピー（例えばＡ２、Ｑ６又はＣ１６（ここで２、６又は１６は反復単位の数を表す））、又は２つ以上の異なる反復単位の多重コピー（例えば（ＡＱ）２４又は（ＡＱ）１２Ｃ１６）を含む又はこれからなるアミノ酸配列を有するポリペプチドを表し得る。
【０１５０】
「反復単位」及び「繰り返し単位」という用語は本発明との関連では区別なく使用される。
【０１５１】
本発明との関連では、「反復単位」は、アミノ酸配列において自然発生的なシルクポリペプチド（例えばＭａＳｐＩ、ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４又はＦｌａｇ）内で反復して発生する少なくとも１つのペプチドモチーフ（例えばＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）又はＧＰＧＱＱ（配列番号４））を含む若しくはこれからなる領域に対応する領域（すなわち同一のアミノ酸配列）、又はそれと実質的に類似のアミノ酸配列（すなわち変動アミノ酸配列）を表し得る。この点で、「実質的に類似の」は、好ましくはそれぞれの参照となる自然発生的なアミノ酸配列の全長にわたる少なくとも５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は更には９９．９％のアミノ酸同一性の程度を意味し得る。自然発生的なシルクポリペプチド内の対応するアミノ酸配列と「実質的に類似の」アミノ酸配列を有する「反復単位」（すなわち野生型反復単位）はその機能特性に関しても同様である。例えば「実質的に類似の反復単位」を含むシルクポリペプチドを含むシルク粒子にも化合物を装填することができる。好ましくは、「実質的に類似の反復単位」を含むシルクポリペプチドを含むシルク粒子に、装填した化合物の少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％がシルク粒子のマトリクス内に位置するように化合物を装填することが可能である。当業者は、（例えばＵＶ−Ｖｉｓ分光法を用いて）シルク粒子の「装填率」、特にシルク粒子のマトリクス内に位置する化合物の百分率を容易に決定することができる（例えば実験の項を参照されたい）。
【０１５２】
自然発生的なシルクポリペプチドのアミノ酸配列と「同一の」アミノ酸配列を有する「反復単位」は例えば、ＭａＳｐ  Ｉ（配列番号４３）、ＭａＳｐ  ＩＩ（配列番号４４）、ＡＤＦ−３（配列番号１）及び／又はＡＤＦ−４（配列番号２）の１つ又は複数のペプチド（peptide）モチーフに対応するシルクポリペプチドの一部であり得る。自然発生的なシルクポリペプチドのアミノ酸配列と「実質的に類似の」アミノ酸配列を有する「反復単位」は例えば、ＭａＳｐＩ（配列番号４３）、ＭａＳｐＩＩ（配列番号４４）、ＡＤＦ−３（配列番号１）及び／又はＡＤＦ−４（配列番号２）の１つ又は複数のペプチドモチーフに対応するが、特定のアミノ酸位置に１つ又は複数のアミノ酸置換を有するシルクポリペプチドの一部であり得る。
【０１５３】
「反復単位」は、一般的に自然発生的なシルクポリペプチドのカルボキシル末端に存在すると考えられている非反復の親水性アミノ酸ドメインを含まない。
【０１５４】
本発明による「反復単位」は、３個〜２００個又は５個〜１５０個のアミノ酸長、好ましくは１０個〜１００個又は１５個〜８０個のアミノ酸長、より好ましくは１８個〜６０個又は２０個〜４０個のアミノ酸長のアミノ酸配列を更に表し得る。例えば、本発明による反復単位は、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個、８０個、８１個、８２個、８３個、８４個、８５個、８６個、８７個、８８個、８９個、９０個、９１個、９２個、９３個、９４個、９５個、９６個、９７個、９８個、９９個、１００個、１０５個、１１０個、１１５個、１２０個、１２５個、１３０個、１３５個、１４０個、１４５個、１５０個、１５５個、１６０個、１６５個、１７０個、１７５個、１８０個、１８５個、１９０個、１９５個又は２００個のアミノ酸長を有し得る。最も好ましくは、本発明による反復単位は、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１２個、１５個、１８個、２０個、２４個、２７個、２８個、３０個、３４個、３５個又は３９個のアミノ酸からなる。
【０１５５】
本発明によるシルクポリペプチドは、６個〜１５００個のアミノ酸、又は２００個〜１３００個のアミノ酸、最も好ましくは２５０個〜１２００個のアミノ酸、又は５００個〜１０００個のアミノ酸からなり得る。
【０１５６】
本発明によるシルクポリペプチドは、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位、又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位を含み得るか又はこれからなり得る。例えば、本発明によるシルクポリペプチドは、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位を含み得るか又はこれからなり得る。最も好ましくは、シルクポリペプチドは、４個、８個、１２個、１６個、２４個、３２個又は４８個の反復単位を含む。上述のように、本発明によるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位である。このため、本発明によるシルクポリペプチドは、１つの同一の反復単位の多重コピー（例えばＡ２又はＣ１６（ここで２又は６は反復単位の数を表す））、又は２つ以上の異なる反復単位の多重コピー（例えば（ＡＱ）２４又は（ＱＡＱ）８）を含み得る。例えば、本発明によるシルクポリペプチドに含まれる８０個の反復単位のうち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個が、同一の反復単位であり得る。
【０１５７】
「コンセンサス配列」という用語は本発明との関連で使用する場合、或る特定の位置における発生頻度が高いアミノ酸（例えば「Ｇ」）を含有し、更に決定されていない他のアミノ酸をプレースホルダー「Ｘ」に置き換えたアミノ酸配列を表す。
【０１５８】
好ましい実施形態によれば、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドは、各々が、
ｉ）ＧＰＧＸＸ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱからなる群から選択される）、
ｉｉ）ＧＧＸ（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱからなる群から選択される）、
ｉｉｉ）Ａｘ（ここでｘは５〜１０の整数である）
からなる群から選択されるコンセンサス配列を少なくとも１つ、好ましくは１つ含む、少なくとも２つの同一の反復単位を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。
【０１５９】
シルクポリペプチドが、各々がＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ、好ましくは１つ含む少なくとも２つの同一の反復単位を含む、これから本質的になる、又はこれからなることも好ましい。ＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）（ペプチド）モチーフは、レジリン（国際公開第０８／１５５３０４号）から選択されている。レジリンはほとんどの節足動物（節足動物門）で見られる弾性タンパク質である。レジリンは角皮の特定領域に位置しており、低剛性及び高強度を与える（Elvin et al., Nature（437）: 999-1002, 2005）。
【０１６０】
このため本発明の好ましい実施形態では、シルクポリペプチドは、各々がＧＰＧＡＳ（配列番号５）、ＧＰＧＳＧ（配列番号６）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＰ（配列番号８）、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＧＧ（配列番号１０）、ＧＰＧＱＧ（配列番号４０）及びＧＰＧＧＳ（配列番号１１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ（例えば１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ又は９つ）、好ましくは１つ含む反復単位を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。本発明の別の好ましい実施形態では、シルクポリペプチドは、各々がＧＧＹ、ＧＧＰ、ＧＧＡ、ＧＧＲ、ＧＧＳ、ＧＧＴ、ＧＧＮ及びＧＧＱからなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ（例えば１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ又は８つ）、好ましくは１つ含む反復単位を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。本発明の更に好ましい実施形態では、シルクポリペプチドは、各々がＡＡＡＡＡ（配列番号１２）、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）、ＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１４）、ＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１６）及びＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１７）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ（例えば１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つ）、好ましくは１つ含む反復単位を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。
【０１６１】
本発明の別の好ましい実施形態では、シルクポリペプチドは、各々がＧＰＧＡＳ（配列番号５）、ＧＰＧＳＧ（配列番号６）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＰ（配列番号８）、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＧＧ（配列番号１０）、ＧＰＧＱＧ（配列番号４０）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）、ＧＧＹ、ＧＧＰ、ＧＧＡ、ＧＧＲ、ＧＧＳ、ＧＧＴ、ＧＧＮ、ＧＧＱ、ＡＡＡＡＡ（配列番号１２）、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）、ＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１４）、ＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１６）及びＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１７）、ＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）、並びにＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ（例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個又は２５個）、好ましくは１つ含む反復単位を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。
【０１６２】
最も好ましくは、シルクポリペプチドは、
（ｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＡＳ（配列番号５）、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）、ＧＧＹ及びＧＰＧＳＧ（配列番号６）、
（ｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）及びＧＰＧＧＰ（配列番号８）、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列として、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）及びＧＰＧＱＱ（配列番号４）、
（ｉｖ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＧＰ、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＧＰ、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）及びＧＧＰ、
（ｖ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＱＧ（配列番号４０）及びＧＧＲ、
（ｖｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＧＧ（配列番号１０）、ＧＧＲ、ＧＧＮ及びＧＧＲ、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＧＡ、ＧＧＡ、ＧＧＡ、ＧＧＳ、ＧＧＡ及びＧＧＳ、並びに／又は
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）及びＧＰＧＧＹ（配列番号７）
を含むか又はこれからなる反復単位を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。
【０１６３】
上述のシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位であることに留意すべきである。
【０１６４】
好ましくは、シルクポリペプチドは、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位、又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位を含み、これから本質的になり、又はこれからなり、該反復単位は、各々が、
ｉ）ＧＰＧＸＸ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱからなる群から選択される）、
ｉｉ）ＧＧＸ（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱから選択され、より好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ及びＱから選択される）、及び
ｉｉｉ）Ａｘ（ここでｘは５〜１０の整数である）
からなる群から選択されるコンセンサス配列を少なくとも１つ、好ましくは１つ含む。上で言及されたように、本発明によるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位である。
【０１６５】
シルクポリペプチドが、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位又は４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位（各々がＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ、好ましくは１つ含む）を含む、これから本質的になる、又はこれからなることも好ましい。
【０１６６】
このため、シルクポリペプチドは、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位又は４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位（各々がＧＰＧＡＳ（配列番号５）、ＧＰＧＳＧ（配列番号６）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＰ（配列番号８）、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＱＧ（配列番号４０）、ＧＰＧＧＧ（配列番号１０）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）、ＧＧＹ、ＧＧＰ、ＧＧＡ、ＧＧＲ、ＧＧＳ、ＧＧＴ、ＧＧＮ、ＧＧＱ、ＡＡＡＡＡ（配列番号１２）、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）、ＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１４）、ＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１６）及びＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１７）、ＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）、及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ（例えば１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個又は２５個）、好ましくは１つ含む）を含む、これから本質的になる、又はこれからなるのが好ましい。
【０１６７】
最も好ましくは、シルクポリペプチドは、
（ｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＡＳ（配列番号５）、ＡＡＡＡＡＡ（配列番号１３）、ＧＧＹ及びＧＰＧＳＧ（配列番号６）を含む又はこれからなる反復単位、
（ｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）及びＧＰＧＧＰ（配列番号８）を含む又はこれからなる反復単位、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列として、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）、ＧＰＧＱＱ（配列番号４）及びＧＰＧＱＱ（配列番号４）を含む又はこれからなる反復単位、
（ｉｖ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＧＰ、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＧＰ、ＧＰＧＧＡ（配列番号９）及びＧＧＰを含む又はこれからなる反復単位、
（ｖ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＱＧ（配列番号４０）及びＧＧＲを含む又はこれからなる反復単位、
（ｖｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＡＡＡＡＡＡＡＡ（配列番号１５）、ＧＰＧＧＧ（配列番号１０）、ＧＧＲ、ＧＧＮ及びＧＧＲを含む又はこれからなる反復単位、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＧＡ、ＧＧＡ、ＧＧＡ、ＧＧＳ、ＧＧＡ及びＧＧＳを含む又はこれからなる反復単位、並びに／又は
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列として、好ましくはこの順番でＧＰＧＧＡ（配列番号９）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）、ＧＰＧＧＹ（配列番号７）、ＧＰＧＧＳ（配列番号１１）及びＧＰＧＧＹ（配列番号７）を含む又はこれからなる反復単位
を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。
【０１６８】
上述のシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位であることに留意すべきである。
【０１６９】
好ましくは、シルクポリペプチドは、
（ｉ）反復単位として（ＧＰＧＸＸ）ｎ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱから選択され、ｎは２、３、４、５、６、７、８又は９である）、
ｉｉ）反復単位として（ＧＧＸ）ｎ（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱから選択され、より好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ及びＱから選択され、ｎは２、３、４、５、６、７又は８である）、及び／又は
ｉｉｉ）反復単位として（Ａｘ）ｎ（ここでｘは５〜１０の整数であり、ｎは２、３、４、５、６、７、８、９又は１０である）
を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。上述のように、本発明によるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つは同一の反復単位である。
【０１７０】
反復単位は独立して、モジュールＡ（配列番号２０）、モジュールＣ（配列番号２１）、モジュールＱ（配列番号２２）、モジュールＫ（配列番号２３）、モジュールｓｐ（配列番号２４）、モジュールＳ（配列番号２５）、モジュールＲ（配列番号２６）、モジュールＸ（配列番号２７）若しくはモジュールＹ（配列番号２８）、又はその変異体（すなわちモジュールＡ変異体、モジュールＣ変異体、モジュールＱ変異体、モジュールＫ変異体、モジュールｓｐ変異体、モジュールＳ変異体、モジュールＲ変異体、モジュールＸ変異体又はモジュールＹ変異体）から選択されるのが好ましい。モジュールＡ（配列番号２０）及びモジュールＱ（配列番号２２）はニワオニグモのＡＤＦ−３のアミノ酸配列をベースにしている。モジュールＣ（配列番号２１）はニワオニグモのＡＤＦ−４のアミノ酸配列をベースにしている。モジュールＫ（配列番号２３）、モジュールｓｐ（配列番号２４）、モジュールＸ（配列番号２７）及びモジュールＹ（配列番号２８）はアメリカジョロウグモの鞭毛状タンパク質ＦＬＡＧのアミノ酸配列をベースにしている（国際公開第２００６／００８１６３号）。モジュールＳ（配列番号２５）及びモジュールＲ（配列番号２６）はレジリン（節足動物門）をベースにしている（国際公開第２００８／１５５３０４号）。
【０１７１】
好ましくは、本発明によるシルクポリペプチドは、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位又は４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位（独立して、モジュールＡ（配列番号２０）、モジュールＣ（配列番号２１）、モジュールＱ（配列番号２２）、モジュールＫ（配列番号２３）、モジュールｓｐ（配列番号２４）、モジュールＳ（配列番号２５）、モジュールＲ（配列番号２６）、モジュールＸ（配列番号２７）若しくはモジュールＹ（配列番号２８）、又はその変異体（すなわちモジュールＡ変異体、モジュールＣ変異体、モジュールＱ変異体、モジュールＫ変異体、モジュールｓｐ変異体、モジュールＳ変異体、モジュールＲ変異体、モジュールＸ変異体又はモジュールＹ変異体）から選択される）を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。本発明によるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位（モジュール）であることに留意すべきである。
【０１７２】
このため、本発明によるシルクポリペプチドは、（ｉ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）及び／若しくはモジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｉｉ）モジュールＣからなる反復単位（複数も可）及び／若しくはモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｉｉｉ）モジュールＱからなる反復単位（複数も可）及び／若しくはモジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｉｖ）（ａ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱからなる反復単位（複数も可）、（ｂ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｃ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱからなる反復単位（複数も可）、（ｄ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｖ）（ａ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｂ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｃ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｄ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｖｉ）（ａ）モジュールＣからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱからなる反復単位（複数も可）、（ｂ）モジュールＣからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｃ）モジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱからなる反復単位（複数も可）、（ｄ）モジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）、又は（ｖｉｉ）（ａ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）、モジュールＱからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｂ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）、モジュールＱからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｃ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）、モジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｄ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）、モジュールＱからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｅ）モジュールＡからなる反復単位（複数も可）、モジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｆ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）、モジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣからなる反復単位（複数も可）、（ｇ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）、モジュールＱからなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）、（ｈ）モジュールＡ変異体からなる反復単位（複数も可）、モジュールＱ変異体からなる反復単位（複数も可）及びモジュールＣ変異体からなる反復単位（複数も可）を含む、これから本質的になる、又はこれからなるのが好ましい。
【０１７３】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは少なくとも２つの同一の反復単位を含む又はこれからなるという条件で、モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ若しくはモジュールＹ、又はその変異体（すなわちモジュールＡ変異体、モジュールＣ変異体、モジュールＱ変異体、モジュールＫ変異体、モジュールｓｐ変異体、モジュールＳ変異体、モジュールＲ変異体、モジュールＸ変異体又はモジュールＹ変異体）を各々の任意の組み合わせ及び任意の数で互いに組み合わせることもできる、すなわち例えば、モジュール（反復単位）Ａをモジュール（反復単位）Ｑと組み合わせることができ（すなわち組み合わせＡＱ）、モジュール（反復単位）Ｃをモジュール（反復単位）Ｑと組み合わせることができ（すなわち組み合わせＣＱ）、モジュール（反復単位）Ｑをモジュール（反復単位）Ａ及びモジュール（反復単位）Ｑと組み合わせることができ（すなわち組み合わせＱＡＱ）、モジュール（反復単位）Ａをモジュール（反復単位）Ａ及びモジュール（反復単位）Ｑと組み合わせることができる（すなわち組み合わせＡＡＱ）。例えば、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、Ａｎ、（ＡＡ）ｎ、（ＡＱ）ｎ、（ＱＡ）ｎ、Ｑｎ、（ＱＱ）ｎ、（ＱＡＱ）ｎ、（ＡＱＡ）ｎ、Ｃｎ、（ＣＣ）ｎ、（ＣＣＣ）ｎ、（ＣＱ）ｎ、（ＱＣ）ｎ、（ＱＣＱ）ｎ、（ＣＱＣ）ｎ、（ＡＡ）ｎＱｎ、（ＱＱ）ｎＡｎ、（ＡＡＡ）ｎＱｎ、（ＱＱＱ）ｎＡｎ、（ＡＱＱ）ｎ、（ＱＱＡ）ｎ、Ｋｎ、ｓｐｎ、Ｓｎ、Ｒｎ、Ｘｎ、Ｙｎ、（Ｋｓｐ）ｎ、（ｓｐＫ）ｎ、（ＸＹ）ｎ、（ＹＸ）ｎ、（ＸＸ）ｎ、（ＹＹ）ｎ、（ＸＸＸ）ｎ、（ＹＹＹ）ｎ、（ＡＸ）ｎ、（ＸＡ）ｎ、（ＣＸ）ｎ、（ＸＣ）ｎ、（ＱＸ）ｎ、（ＸＱ）ｎ、（ＹＱ）ｎ、（ＱＹ）ｎ、（ＳＳ）ｎ、（ＳＲ）ｎ、（ＲＳ）ｎ又は（ＲＲ）ｎ（ここでｎは少なくとも２、好ましくは４、８、９、１０、１２、１６、２０、２４又は３２である）を含み得る又はこれからなり得る。シルクポリペプチドが（ＡＱ）１２からなる場合、シルクポリペプチドには、モジュール（反復単位）Ａが１２回存在し、モジュール（反復単位）Ｑも１２回存在し、そのためシルクポリペプチドは２４個のモジュール（反復単位）からなることに留意する。（ＡＱ）１２からなるシルクポリペプチドのモジュール（繰り返し単位）の配置は以下のとおりである：ＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱＡＱ。さらに、シルクポリペプチドのモジュール（繰り返し単位）のシルクポリペプチドが（ＱＡＱ）８からなる場合、シルクポリペプチド（polypeptide）には、モジュール（繰り返し単位）Ａが８回存在し、モジュール（反復単位）Ｑが１６回存在し、そのためシルクポリペプチドは２４個のモジュール（反復単位）からなることに留意する。（ＱＡＱ）８からなるシルクポリペプチドのモジュール（繰り返し単位）の配置は以下のとおりである：ＱＡＱＱＡＱＱＡＱＱＡＱＱＡＱＱＡＱＱＡＱＱＡＱ。
【０１７４】
本発明によるシルクポリペプチドはまた、（Ａ＊Ｑ）ｎ、（ＡＱ＊）ｎ、（Ａ＊Ｑ＊）ｎ、（Ｑ＊Ａ）ｎ、（ＱＡ＊）ｎ、（Ｑ＊Ａ＊）ｎ、（ＱＡＱ＊）ｎ、（ＱＡ＊Ｑ）ｎ、（Ｑ＊ＡＱ）ｎ、（ＱＡ＊Ｑ＊）ｎ、（Ｑ＊Ａ＊Ｑ）ｎ、（Ｑ＊ＡＱ＊）ｎ、（Ｑ＊Ａ＊Ｑ＊）ｎ、（ＡＱＡ＊）ｎ、（ＡＱ＊Ａ）ｎ、（Ａ＊ＱＡ）ｎ、（ＡＱ＊Ａ＊）ｎ、（Ａ＊Ｑ＊Ａ）ｎ、（Ａ＊ＱＡ＊）ｎ、（Ａ＊Ｑ＊Ａ＊）ｎ（ここでｎは少なくとも２、好ましくは４、８、９、１０、１２、１６、２０、２４又は３２であり、＊はモジュール変異体、すなわちモジュールＡ変異体又はモジュールＱ変異体を示す）を含み得る又はこれからなり得る。
【０１７５】
「互いに組み合わせた」又は「互いに連結した」という用語は、本発明との関連では、複数のモジュール（反復単位）が互いに直接組み合わされている若しくは連結されていることを意味し得る、又は本発明との関連では、複数のモジュール（反復単位）が１つ又は複数のスペーサーアミノ酸を介して互いに組み合わされている若しくは連結されていることを意味し得る。好ましい実施形態では、シルクポリペプチドに含まれるモジュール（反復単位）が互いに直接組み合わされている若しくは連結されている。他の好ましい実施形態では、シルクポリペプチドに含まれるモジュール（反復単位）が、１個〜２５個又は１個〜２０個のスペーサーアミノ酸を介して、より好ましくは１個〜１５個又は１個〜１０個のスペーサーアミノ酸を介して、最も好ましくは１個〜５個のスペーサーアミノ酸を介して、すなわち１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個又は２５個のスペーサーアミノ酸を介して互いに組み合わされている又は連結されている。上記スペーサーアミノ酸はタンパク質において自然発生的な任意のアミノ酸であり得る。好ましくは、上記スペーサーアミノ酸はプロリンではない。スペーサーアミノ酸（複数も可）は荷電基を含有するのが好ましい。好ましくは、荷電基を含有するスペーサーアミノ酸（複数も可）は独立して、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン及びリジンからなる群から選択される。上記スペーサーアミノ酸は、シルクポリペプチドを含むシルク粒子の化合物を受け取る能力に負の影響を与えないアミノ酸とする。シルク粒子の化合物を受け取る能力を容易に試験することができる（上記及び実験の項を参照されたい）。さらに、上記スペーサーアミノ酸は、立体障害を引き起こさないアミノ酸、例えばリジン及びシステイン等のサイズが小さいアミノ酸とする。
【０１７６】
反復単位は独立して、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択されることが更に好ましい。モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）及びモジュールＣＫＣ（配列番号３４）は、ニワオニグモのＡＤＦ−３のアミノ酸配列をベースとするモジュールＡ、及びニワオニグモのＡＤＦ−４のアミノ酸配列をベースとするモジュールＣの変異体である（国際公開第２００７／０２５７１９号）。モジュールＡＣ（配列番号２９）では、２１位のアミノ酸Ｓ（セリン）がアミノ酸Ｃ（システイン）に置き換えられており、モジュールＡＫ（配列番号３０）では、２１位のアミノ酸Ｓがアミノ酸Ｋ（リジン）に置き換えられており、モジュールＣＣ（配列番号３１）では、２５位のアミノ酸Ｓがアミノ酸Ｃに置き換えられており、モジュールＣＫ１（配列番号３２）では、２５位のアミノ酸Ｓがアミノ酸Ｋに置き換えられており、モジュールＣＫ２（配列番号３３）では、２０位のアミノ酸Ｅ（グルタミン酸）がアミノ酸Ｋに置き換えられており、モジュールＣＫＣ（配列番号３４）では、２０位のアミノ酸Ｅがアミノ酸Ｋに置き換えられており、２５位のアミノ酸Ｓがアミノ酸Ｃに置き換えられている（国際公開第２００７／０２５７１９号）。
【０１７７】
本発明によるシルクポリペプチドが、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位又は４個〜６０個の反復単位、好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位（独立して、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択される）を含む、これから本質的になる、又はこれからなることも好ましい。本発明によるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位（モジュール）であることに留意すべきである。
【０１７８】
例えば、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、モジュールＣＣ４、モジュールＣＣ８、モジュールＣＣ１６、モジュールＣＣ３２、モジュールＡＣ５、モジュールＡＣ８又はモジュールＡＣ１０を含み得る又はこれからなり得る。
【０１７９】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは少なくとも２つの同一の反復単位を含む又はこれからなるという条件で、モジュールＡＫ、モジュールＣＣ、モジュールＣＫ１、モジュールＣＫ２及びモジュールＣＫＣを互いに組み合わせることもできる、すなわち例えば、モジュール（反復単位）ＡＫをモジュール（反復単位）ＣＣと組み合わせることができ（すなわち組み合わせＡＫＣＣ）、モジュール（反復単位）ＣＫ１をモジュール（反復単位）ＣＫ２及びモジュール（反復単位）ＣＫＣと組み合わせることができる（すなわち組み合わせＣＫ１ＣＫ２ＣＫＣ）。このため、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドはまた、モジュール（ＡＫ）ｎ、モジュール（ＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＫ１）ｎ、モジュール（ＣＫ２）ｎ、モジュール（ＣＫＣ）ｎ、モジュール（ＡＫＡＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＫ１ＣＫ２）ｎ、モジュール（ＣＫ２ＣＫ１）ｎ、モジュール（ＣＫ１ＣＫ２ＣＫ１）ｎ、モジュール（ＣＫ２ＣＫ１ＣＫ２）ｎ、モジュール（ＣＫ１ＣＫ２ＣＫＣ）ｎ、モジュール（ＣＫＣＣＫ２ＣＫＣ）ｎ又はモジュール（ＣＫＣＣＫ２ＣＫ１）ｎ（ここでｎは少なくとも２、好ましくは４、５、６、７、８、１０、１２、１６又は２０である）を含み得る又はこれからなり得る。「互いに組み合わせた」という用語は上で定義される。
【０１８０】
更に好ましい実施形態では、各シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドの反復単位は独立して、モジュールＡ（配列番号２０）若しくはその変異体、モジュールＣ（配列番号２１）若しくはその変異体、モジュールＱ（配列番号２２）若しくはその変異体、モジュールＫ（配列番号２３）若しくはその変異体、モジュールｓｐ（配列番号２４）若しくはその変異体、モジュールＳ（配列番号２５）若しくはその変異体、モジュールＲ（配列番号２６）若しくはその変異体、モジュールＸ（配列番号２７）若しくはその変異体、モジュールＹ（配列番号２８）若しくはその変異体、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）、又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択される。
【０１８１】
より好ましい実施形態では、本発明によるシルクポリペプチドは、２個〜８０個、３個〜８０個の反復単位又は４個〜６０個の反復単位、好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位（独立して、モジュールＡ（配列番号２０）若しくはその変異体、モジュールＣ（配列番号２１）若しくはその変異体、モジュールＱ（配列番号２２）若しくはその変異体、モジュールＫ（配列番号２３）若しくはその変異体、モジュールｓｐ（配列番号２４）若しくはその変異体、モジュールＳ（配列番号２５）若しくはその変異体、モジュールＲ（配列番号２６）若しくはその変異体、モジュールＸ（配列番号２７）若しくはその変異体、モジュールＹ（配列番号２８）若しくはその変異体、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）、又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択される）を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。この場合も、本発明によるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位（モジュール）であることに留意すべきである。
【０１８２】
本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは少なくとも２つの同一の反復単位を含む又はこれからなるという条件で、モジュールＡＫ、モジュールＣＣ、モジュールＣＫ１、モジュールＣＫ２及びモジュールＣＫＣを、モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹと互いに組み合わせることもできる、すなわち例えば、モジュール（反復単位）ＡＫをモジュール（反復単位）Ｃと組み合わせることができ（すなわち組み合わせＡＫＣ）、又はモジュール（反復単位）ＣＣをモジュール（反復単位）Ｃと組み合わせることができる（すなわち組み合わせＣＣＣ）。このため、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドはまた、モジュール（ＡＱＡＫ）ｎ、モジュール（ＱＡＫ）ｎ、モジュール（ＱＡＫＱ）ｎ、モジュール（ＡＫＱＡ）ｎ、モジュール（ＡＫＱＡＫ）ｎ、モジュール（ＣＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＣＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＣＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＱ）ｎ、モジュール（ＱＣＣ）ｎ、モジュール（ＱＣＣＱ）ｎ、モジュール（ＣＣＱＣ）ｎ、モジュール（ＣＱＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＱＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＫ１）ｎ、モジュール（ＣＫ１Ｃ）ｎ、モジュール（ＣＫ１ＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＫ１Ｃ）ｎ、モジュール（ＣＫＣＣＫＣＣ）ｎ、モジュール（ＣＣＫＣＣＫＣ）ｎ、モジュール（ＣＫＣＱ）ｎ、モジュール（ＱＣＫＣ）ｎ、モジュール（ＱＣＫＣＱ）ｎ、モジュール（ＡＫＣＫ１Ｑ）ｎ、モジュール（ＱＣＫ２ＡＫ）ｎ、又はモジュール（ＣＫ１ＣＫ２Ｃ）ｎ（ここでｎは少なくとも２、好ましくは４、５、６、７、８、１０、１２、１６又は２０である）を含み得る又はこれからなり得る。「互いに組み合わせた」という用語は上で定義される。
【０１８３】
例えば、本発明の方法に使用されるシルクポリペプチドは、モジュールＣ１６ＣＣ、モジュールＣＣＣ１６、モジュールＣ８ＣＣＣ８、モジュールＣ８ＣＣ８、モジュールＣＣ８Ｃ８、モジュールＣ４ＣＣ８Ｃ４、モジュールＣＣ４Ｃ８ＣＣ４、モジュールＣＣ（ＡＱ）２４又はモジュール（ＡＱ）２４ＣＣを含む又はこれからなる。
【０１８４】
「独立して選択される」という用語は、本明細書で使用される場合、シルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドが、各々が１つ又は複数の上記のモジュールを含む異なる反復単位を１つ又は複数含み得ることを意味する。上述のように、本発明によるシルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドは少なくとも２つの同一の反復単位を含む。
【０１８５】
「その変異体」という用語は、本明細書で使用される場合、好適なアミノ酸配列は配列番号で与えられるような正確な配列に必ずしも限定されないことを意味する。本明細書に示されるアミノ酸配列の変異体は、１つ又は複数のアミノ酸が挿入、欠失、修飾及び／又は置換された配列も含み得る。
【０１８６】
本明細書に記載されるようなアミノ酸配列の変異体は、同じ特性を有する、すなわち同じ又は類似の二次構造要素を有するポリペプチドを生成することが可能である。好ましくはポリペプチドのアミノ酸全体の１％以下、２％以下、３％以下、４％以下、５％以下、６％以下、７％以下、８％以下、９％以下、１０％以下、１１％以下、１２％以下、１３％以下、１４％以下、１５％以下、１６％以下、１７％以下、１８％以下、１９％以下又は２０％以下、より好ましくは１５％以下、更により好ましくは１０％以下、最も好ましくは５％以下又は２％以下が変化している（すなわち欠失、挿入、修飾及び／又は置換されている）。
【０１８７】
好ましくは、これら全ての実施形態では、配列同一性は、少なくとも約８０％、８５％又は９０％、より好ましくは少なくとも約９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、最も好ましくは少なくとも約９９％である。配列同一性は各配列の全長にわたって決定することができる。
【０１８８】
２つの配列間の同一性（％）の決定は、Karlin and Altschul（1993） Proc. Natl. Acad. Sci USA 90: 5873-5877の数学アルゴリズムを用いて達成するのが好ましい。このようなアルゴリズムをＮＣＢＩ（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/Blast.cge）で入手可能なAltschul et al.（1990） J. Mol. Biol. 215: 403-410のＢＬＡＳＴｎプログラム及びＢＬＡＳＴｐプログラムに組み込む。
【０１８９】
同一性（％）の決定を、ＢＬＡＳＴｎプログラム及びＢＬＡＳＴｐプログラムの標準パラメータを用いて行う。
【０１９０】
ＢＬＡＳＴポリヌクレオチド検索を、ＢＬＡＳＴｎプログラムを用いて行う。
【０１９１】
一般パラメータに関しては、「Ｍａｘ  Ｔａｒｇｅｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」ボックスを１００に設定し、「Ｓｈｏｒｔ  ｑｕｅｒｉｅｓ」ボックスをチェックし、「Ｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ」ボックスを１０に設定し、「Ｗｏｒｄ  Ｓｉｚｅ」ボックスを２８に設定するものとする。スコアリングパラメータに関しては、「Ｍａｔｃｈ／ｍｉｓｍａｔｃｈ  Ｓｃｏｒｅｓ」を１、−２に設定し、「Ｇａｐ  Ｃｏｓｔｓ」ボックスを線形に設定するものとする。フィルターパラメータ及びマスキングパラメータに関しては、「Ｌｏｗ  ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ  ｒｅｇｉｏｎｓ」ボックスはチェックせず、「Ｓｐｅｃｉｅｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｒｅｐｅａｔｓ」ボックスをチェックせず、「Ｍａｓｋ  ｆｏｒ  ｌｏｏｋｕｐ  ｔａｂｌｅ  ｏｎｌｙ」ボックスをチェックせず、「Ｍａｓｋ  ｌｏｗｅｒ  ｃａｓｅ  ｌｅｔｔｅｒｓ」ボックスをチェックしないものとする。
【０１９２】
ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＢＬＡＳＴｐプログラムを用いて実施する。一般パラメータに関しては、「Ｍａｘ  Ｔａｒｇｅｔ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」ボックスを１００に設定し、「Ｓｈｏｒｔ  ｑｕｅｒｉｅｓ」ボックスをチェックし、「Ｅｘｐｅｃｔ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ」ボックスを１０に設定し、「Ｗｏｒｄ  Ｓｉｚｅ」ボックスを「３」に設定するものとする。スコアリングパラメータに関しては、「Ｍａｔｒｉｘ」ボックスは「ＢＬＯＳＵＭ６２」に設定し、「Ｇａｐ  Ｃｏｓｔｓ」ボックスは「Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ：１１  Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ：１」に設定し、「Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔｓ」ボックスは「Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｓｃｏｒｅ  ｍａｔｒｉｘ  ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ」に設定するものとする。フィルターパラメータ及びマスキングパラメータに関しては、「Ｌｏｗ  ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ  ｒｅｇｉｏｎｓ」ボックスをチェックせず、「Ｍａｓｋ  ｆｏｒ  ｌｏｏｋｕｐ  ｔａｂｌｅ  ｏｎｌｙ」ボックスをチェックせず、「Ｍａｓｋ  ｌｏｗｅｒ  ｃａｓｅ  ｌｅｔｔｅｒｓ」ボックスをチェックしないものとする。
【０１９３】
「修飾」は、ポリペプチドのアミノ酸が、例えばグリコシル化、アミド化、リン酸化、ユビキチン化等により化学的又は生物学的に修飾され得ることを意味する。
【０１９４】
「置換」は或るアミノ酸を類似の構造特性及び／又は化学特性を有する別のアミノ酸に置き換えた、すなわち保存的アミノ酸置き換えの結果である。アミノ酸置換は、アミノ酸配列の或る特定の残基の極性、電荷、溶解度、疎水性及び／又は親水性の類似性に基づき行われ得る。好ましい好適なアミノ酸置換の例は以下の表に与えられる：
【０１９５】
【表０】
0005889199.tif 000002
表中の英語：
Original radical：元のラジカル
Examples of substitution：置換の例
【０１９６】
「挿入」又は「欠失」は通常、約１個〜５個のアミノ酸、好ましくは約１個、２個又は３個のアミノ酸の範囲で行われ得る。アミノ酸付加は通常、１００個以下、好ましくは８０個以下、より好ましくは５０個以下、最も好ましくは２０個以下のアミノ酸であり、これらがタンパク質に付加及び／又は挿入される。さらに、タンパク質の所望の特質に負の影響を与えない付加だけが考慮される。
【０１９７】
特に、モジュールＡ変異体、モジュールＣ変異体、モジュールＱ変異体、モジュールＫ変異体、モジュールｓｐ変異体、モジュールＳ変異体、モジュールＲ変異体、モジュールＸ変異体又はモジュールＹ変異体は参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹとは異なり、該変異体はそれらからアミノ酸配列における最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個又は１５個のアミノ酸変化（すなわち置換、付加、挿入、欠失、Ｎ末端切断及び／又はＣ末端切断）により誘導される。代替的に又は付加的に、このようなモジュール変異体は、変異体の誘導元である参照（野生型）モジュールに対する或る特定の程度の配列同一性を特徴とし得る。このため、モジュールＡ変異体、モジュールＣ変異体、モジュールＱ変異体、モジュールＫ変異体、モジュールｓｐ変異体、モジュールＳ変異体、モジュールＲ変異体、モジュールＸ変異体又はモジュールＹ変異体は、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹに対する少なくとも５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は更には９９．９％の配列同一性を有する。好ましくは配列同一性は、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２７個、２８個、３０個、３４個、３５個又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチにわたる、好ましくは全長にわたるものである。
【０１９８】
配列同一性は、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの全長にわたって少なくとも８０％、全長にわたって少なくとも８５％、全長にわたって少なくとも９０％、全長にわたって少なくとも９５％、全長にわたって少なくとも９８％、又は全長にわたって少なくとも９９％であるのが特に好ましい。配列同一性は、各参照（野生型）モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ若しくはモジュールＹのうちの少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８０％、少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８５％、少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９０％、少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９５％、少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９８％、又は少なくとも１０個、１５個、１８個、２０個、２４個、２８個若しくは３０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９９％であるのが更に特に好ましい。
【０１９９】
モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個又は１５個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【０２００】
さらに、モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体又は断片は、変異体又は断片の元となるアミノ酸配列に対する変化がシルクポリペプチドを含むシルク粒子の化合物を装填する能力に負の影響を与えない場合にのみ、本発明との関連内においてモジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体又は断片とみなされる。好ましくは、モジュールＡ、モジュールＣ、モジュールＱ、モジュールＫ、モジュールｓｐ、モジュールＳ、モジュールＲ、モジュールＸ又はモジュールＹの変異体又は断片を含むシルクポリペプチドを含むシルク粒子に、装填した化合物のうちの少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％がシルク粒子のマトリクス内に位置するように化合物を装填することが可能である。当業者は、（例えばＵＶ−Ｖｉｓ分光法を用いて）シルク粒子の「装填率」、特にシルク粒子のマトリクス内に位置する化合物の百分率を容易に決定することができる（例えば実験の項を参照されたい）。
【０２０１】
上述のように、シルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドは、自然界において自然発生する、又は合成により若しくは組み換えにより生成される真のポリペプチドであり得る。組み換えにより生成する場合、上記のモジュール及び配列を組み合わせて、有利な特質を有するシルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドを得ることができる。好ましくは、得られるポリペプチドが少なくとも２つの同一の反復単位を有するように、モジュールを組み合わせることができる。
【０２０２】
特定の実施形態では、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドは、少なくとも１つの非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個、２個、３個、４個、５個、６個又はそれ以上のＮＲ単位、好ましくは１個のＮＲ単位を更に含む。好ましくは、ＮＲ配列は真の配列である。
【０２０３】
本発明との関連では、「非反復（ＮＲ）単位」という用語は、明らかな反復パターンを示さない、自然発生的なシルクポリペプチドに存在するアミノ酸の領域（非反復単位又はＮＲ単位）を表す。
【０２０４】
好ましくは、非反復単位のアミノ酸配列は、自然発生的なドラグラインポリペプチド、好ましくはＡＤＦ−３（配列番号１又は配列番号４７）若しくはＡＤＦ−４（配列番号２又は配列番号４８）の非反復アミノ酸配列に、又はそれと実質的に類似のアミノ酸配列に相当する。
【０２０５】
非反復単位のアミノ酸配列は、自然発生的なドラグラインポリペプチド、好ましくはＡＤＦ−３（配列番号１若しくは配列番号４７）若しくはＡＤＦ−４（配列番号２若しくは配列番号４８）の非反復カルボキシ末端アミノ酸配列に、又はそれと実質的に類似のアミノ酸配列に相当するのが特に好ましい。より好ましくは、非反復単位のアミノ酸配列は、アミノ酸５１３〜アミノ酸６３６を含むＡＤＦ−３（配列番号１）若しくはアミノ酸３０２〜アミノ酸４１０を含むＡＤＦ−４（配列番号２）の非反復カルボキシ末端アミノ酸配列に、又はそれと実質的に類似のアミノ酸配列に相当する。
【０２０６】
この関連で「実質的に類似の」は、好ましくは２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個又はそれ以上のアミノ酸にわたる、より好ましくは自然発生的なドラグラインポリペプチド、好ましくはＡＤＦ−３（配列番号１）又はＡＤＦ−４（配列番号２）の各参照非反復（カルボキシ末端）アミノ酸配列の全長にわたる少なくとも５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は更には９９．９％のアミノ酸同一性の程度を意味する。
【０２０７】
自然発生的なドラグラインポリペプチド（すなわち野生型非反復（カルボキシ末端）単位）内の、好ましくはＡＤＦ−３（配列番号１又は配列番号４７）又はＡＤＦ−４（配列番号２又は配列番号４８）内の対応する非反復（カルボキシ末端）アミノ酸配列と「実質的に類似の」アミノ酸配列を有する「非反復単位」は、その機能特性に関しても同様である。例えば「実質的に類似の非反復単位」を含むシルクポリペプチドを含むシルク粒子にも、化合物を装填することができる。好ましくは、「実質的に類似の非反復単位」を含むシルクポリペプチドを含むシルク粒子に、装填した化合物のうちの少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％がシルク粒子のマトリクス内に位置するように化合物を装填することが可能である。当業者は、（例えばＵＶ−Ｖｉｓ分光法を用いて）シルク粒子の「装填率」、特にシルク粒子のマトリクス内に位置する化合物の百分率を容易に決定することができる（例えば実験の項を参照されたい）。
【０２０８】
より好ましくは、非反復（ＮＲ）単位は独立して、ＮＲ３（配列番号４１及び配列番号４５）又はその変異体、及びＮＲ４（配列番号４２及び配列番号４６）又はその変異体からなる群から選択される。ＮＲ３（配列番号４１）単位はニワオニグモのＡＤＦ−３のアミノ酸配列をベースとしており、ＮＲ４（配列番号４２）単位はニワオニグモのＡＤＦ−４のアミノ酸配列をベースとしている（国際公開第２００６／００８１６３号）。
【０２０９】
ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体は、参照ＮＲ３（配列番号４１又は配列番号４５）単位又はＮＲ４（配列番号４２又は配列番号４６）単位とは異なり、該変異体はそれらからアミノ酸配列における最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２５個又は３０個のアミノ酸変化（すなわち置換（exchanges）、挿入、欠失、Ｎ末端切断及び／又はＣ末端切断）により誘導される。代替的に又は付加的に、このようなＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体は、変異体の誘導元である参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位に対する或る特定の程度の配列同一性を特徴とし得る。このため、ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体は、各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位に対する少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は更には９９．９％の配列同一性を有する。好ましくは配列同一性は、各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の少なくとも１０個、２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチにわたる、好ましくは全長にわたるものである。
【０２１０】
配列同一性は各参照ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の全長にわたって少なくとも８０％、全長にわたって少なくとも８５％、全長にわたって少なくとも９０％、全長にわたって少なくとも９５％、全長にわたって少なくとも９８％、又は全長にわたって少なくとも９９％であるのが特に好ましい。配列同一性は各参照ＮＲ３単位若しくはＮＲ４単位のうちの少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８０％、少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８５％、少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９０％、少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９５％、少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９８％、又は少なくとも２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個若しくは８０個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９９％であるのが更に特に好ましい。
【０２１１】
ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個又は６０個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【０２１２】
さらに、ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片は、変異体又は断片の元となるアミノ酸配列に対する変化がシルクポリペプチドを含むシルク粒子の化合物を装填する能力に負の影響を与えない場合にのみ、本発明との関連内においてＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片とみなされる。好ましくは、ＮＲ３単位又はＮＲ４単位の変異体又は断片を含むシルクポリペプチドを含むシルク粒子に、装填した化合物のうちの少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％がシルク粒子のマトリクス内に位置するように化合物を装填することが可能である。当業者は、（例えばＵＶ−Ｖｉｓ分光法を用いて）シルク粒子の「装填率」、特にシルク粒子のマトリクス内に位置する化合物の百分率を容易に決定することができる（例えば実験の項を参照されたい）。本発明との関連内で、「真の」という用語は各核酸配列が配列自体に実質的な修飾を起こすことなくその自然環境から単離されることを意味する。しかしながら、これは、得られるそれらがコードするアミノ酸配列を変化させることなく、特定の宿主における発現に対して配列を適合させるために核酸配列を修飾することができないことを意味するものではない（コドン使用頻度適合）。
【０２１３】
更なる特定の実施形態では、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドは、ＡＤＦ−３（配列番号１及び配列番号４７）又はその変異体、ＡＤＦ−４（配列番号２及び配列番号４８）又はその変異体、ＭａＳｐ  Ｉ（配列番号４３及び配列番号５３〜配列番号６４）又はその変異体、ＭａＳｐ  ＩＩ（配列番号４４及び配列番号６５〜配列番号７８）又はその変異体、（Ｃ）ｍＮＲｚ、ＮＲｚ（Ｃ）ｍ、（ＡＱ）ｎＮＲｚ、ＮＲｚ（ＡＱ）ｎ、ＮＲｚ（ＱＡＱ）ｏ、（ＱＡＱ）ｏＮＲｚ、（Ｃ）ｍ、（ＡＱ）ｎ、（ＱＡＱ）ｏ、Ｙｐ、Ｘｐ及びＫｐ（ここで、ｍは８〜４８（すなわち８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７又は４８）の整数であり、ｎは６〜２４（すなわち６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３又は２４）の整数であり、ｏは８〜１６（すなわち８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６）の整数であり、ｐは８〜１６（すなわち８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６）の整数であり、ｚは１〜３（すなわち１、２又は３）の整数であり、ＮＲは非反復単位を表す）からなる群から選択される。上述の式は以下のうちの１つにより定義される。
（ｉ）式（Ｃ）ｍでは、配列番号２１によるアミノ酸配列で表される、数「ｍ」のＣモジュール、すなわち８個〜４８個のＣモジュールが互いに組み合わせられ、
（ｉｉ）式（Ｃ）ｍＮＲｚでは、配列番号２１によるアミノ酸配列で表される、数「ｍ」のＣモジュール、すなわち８個〜４８個のＣモジュールが互いに組み合わせられ、上記Ｃモジュールはさらに、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４と組み合わせられ、
（ｉｉｉ）式ＮＲｚ（Ｃ）ｍでは、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４が存在し（ｚ＝１）、又は互いに組み合わせられ（ｚ＝２又は３）、上記非反復（ＮＲ）単位（複数も可）はさらに、配列番号２１によるアミノ酸配列で表される、数「ｍ」のＣモジュール、すなわち８個〜４８個のＣモジュールと組み合わせられ、
（ｉｖ）式（ＡＱ）ｎでは、数「ｎ」のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ、すなわち６個〜２４個のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列により表され、モジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列により表される）が互いに組み合わされ、
（ｖ）式（ＡＱ）ｎＮＲｚでは、数「ｎ」のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ、すなわち６個〜２４個のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列により表され、モジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列により表される）が互いに組み合わされ、上記ＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせはさらに、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４と組み合わせられ、
（ｖｉ）式ＮＲｚ（ＡＱ）ｎでは、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４が存在し（ｚ＝１）、又は互いに組み合わせられ（ｚ＝２又は３）、上記非反復（ＮＲ）単位（複数も可）はさらに、数「ｎ」のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ、すなわち６個〜２４個のＡモジュールとＱモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列により表され、モジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列により表される）と組み合わせられ、
（ｖｉｉ）式（ＱＡＱ）ｏでは、数「ｏ」のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ、すなわち８個〜１６個のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列で表され、モジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列で表される）が互いに組み合わされ、
（ｖｉｉｉ）式（ＱＡＱ）ｏＮＲｚでは、数「ｏ」のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ、すなわち８個〜１６個のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列で表され、モジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列で表される）が互いに組み合わされ、上記Ｑモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせはさらに、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４と組み合わせられ、
（ｉｘ）式ＮＲｚ（ＱＡＱ）ｏでは、数「ｚ」の非反復（ＮＲ）単位、すなわち１個〜３個の非反復（ＮＲ）単位、例えば配列番号４１によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ３又は配列番号４２によるアミノ酸配列で表される非反復（ＮＲ）単位ＮＲ４が存在し（ｚ＝１）、又は互いに組み合わせられ（ｚ＝２又は３）、上記非反復（ＮＲ）単位（複数も可）はさらに、数「ｏ」のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ、すなわち８個〜１６個のＱモジュールと、Ａモジュールと、Ｑモジュールとの組み合わせ（ここでモジュールＱは配列番号２２によるアミノ酸配列で表され、モジュールＡは配列番号２０によるアミノ酸配列で表される）と組み合わせられ、
（ｘ）式Ｙｐでは、配列番号２８によるアミノ酸配列で表される、数「ｐ」のＹモジュール、すなわち８個〜１６個のＹモジュールが互いに組み合わされ、
（ｘｉ）式Ｘｐでは、配列番号２７によるアミノ酸配列で表される、数「ｐ」のＸモジュール、すなわち８個〜１６個のＸモジュールが互いに組み合わされ、
（ｘｉｉ）式Ｋｐでは、配列番号２３によるアミノ酸配列で表される、数「ｐ」のＫモジュール、すなわち８個〜１６個のＫモジュールが互いに組み合わされる。
【０２１４】
より好ましくは、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドは、Ｃ１６、Ｃ３２、（ＡＱ）１２、（ＡＱ）２４、Ｃ１６ＮＲ４、Ｃ３２ＮＲ４、（ＡＱ）１２ＮＲ３、（ＡＱ）２４ＮＲ３、Ｙ８、Ｙ１６、Ｘ８、Ｘ１６、Ｋ８又はＫ１６である。
【０２１５】
ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ  Ｉ又はＭａＳｐ  ＩＩの変異体は、参照（野生型）ＡＤＦ−３（配列番号１又は配列番号４７）、ＡＤＦ−４（配列番号２又は配列番号４８）、ＭａＳｐ  Ｉ（配列番号４３及び配列番号５３〜配列番号６４）、又はＭａＳｐ  ＩＩ（配列番号４４及び配列番号６５〜配列番号７８）のポリペプチドとは異なり、該変異体はそれらからアミノ酸配列における最大１５０個（最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１１０個、１２０個、１３０個、１４０個又は１５０個）のアミノ酸変化（すなわち置換、挿入、欠失、Ｎ末端切断及び／又はＣ末端切断）により誘導される。代替的に又は付加的に、このような変異体は、変異体の誘導元である参照（野生型）ポリペプチドに対する或る特定の程度の配列同一性を特徴とし得る。このため、ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ  Ｉ又はＭａＳｐ  ＩＩの変異体は、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ  Ｉ又はＭａＳｐ  ＩＩのポリペプチドに対する少なくとも５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は更には９９．９％の配列同一性を有する。好ましくは配列同一性は、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ  Ｉ又はＭａＳｐ  ＩＩのポリペプチドの少なくとも２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個、１００個、１２０個、１５０個、１８０個、２００個、２５０個、３００個、３５０個、４００個又はそれ以上のアミノ酸の連続ストレッチにわたる、好ましくは全長にわたるものである。
【０２１６】
配列同一性は、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ  Ｉ又はＭａＳｐ  ＩＩのポリペプチドの全長にわたって少なくとも８０％、全長にわたって少なくとも８５％、全長にわたって少なくとも９０％、全長にわたって少なくとも９５％、全長にわたって少なくとも９８％、又は全長にわたって少なくとも９９％であるのが特に好ましい。さらに配列同一性は、各参照（野生型）ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ  Ｉ又はＭａＳｐ  ＩＩのポリペプチドのうちの少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個又は３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８０％、少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個又は３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも８５％、少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個又は３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９０％、少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個又は３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９５％、少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個又は３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９８％、又は少なくとも２０個、３０個、５０個、１００個、１５０個、２００個、２５０個又は３００個のアミノ酸の連続ストレッチにわたって少なくとも９９％であるのが更に特に好ましい。
【０２１７】
ＡＤＦ−３（配列番号１）ポリペプチドの断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１２０個、１５０個、１７０個、２００個、２２０個、２５０個、２７０個、３００個、３２０個、３５０個、３７０個、４００個、４２０個、４５０個、４７０個、５００個、５２０個、５５０個、５７０個、６００個又は６１０個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【０２１８】
ＡＤＦ−４（配列番号２）ポリペプチドの断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１２０個、１５０個、１７０個、２００個、２２０個、２５０個、２７０個、３００個、３２０個、３３０個、３４０個、３５０個、３６０個、３７０個、３８０個又は３９０個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【０２１９】
ＭａＳｐ  1（配列番号４３）ポリペプチドの断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１５０個、２００個、２５０個、３００個、３５０個、４００個、４５０個、５００個、５５０個、６００個、６２０個、６４０個、６６０個、６７０個、６８０個又は６９０個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【０２２０】
ＭａＳｐ  11（配列番号４４）ポリペプチドの断片（又は欠失変異体）は好ましくは、そのＮ末端に及び／又はそのＣ末端に最大１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１５０個、２００個、２５０個、３００個、３５０個、４００個、４５０個、５００個、５２０個、５４０個、５６０個又は５７０個のアミノ酸の欠失を有する。欠失は内部にあってもよい。
【０２２１】
さらに、ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ  Ｉ又はＭａＳｐ  ＩＩの変異体又は断片は、変異体又は断片の元となるアミノ酸配列に対する変化がシルクポリペプチドを含むシルク粒子の化合物を装填する能力に負の影響を与えない場合にのみ、本発明との関連内においてＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ  Ｉ又はＭａＳｐ  ＩＩの変異体又は断片とみなされる。好ましくは、ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ  Ｉ又はＭａＳｐ  ＩＩの変異体又は断片を含むシルクポリペプチドを含むシルク粒子に、装填した化合物のうちの少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％がシルク粒子のマトリクス内に位置するように化合物を装填することが可能である。当業者は、（例えばＵＶ−Ｖｉｓ分光法を用いて）シルク粒子の「装填率」、特にシルク粒子のマトリクス内に位置する化合物の百分率を容易に決定することができる（例えば実験の項を参照されたい）。
【０２２２】
好ましくは、水溶液中のシルクポリペプチド、より好ましくはスパイダーシルクポリペプチドの濃度は、０．０１ｗｔ％／ｖｏｌ〜３０ｗｔ％／ｖｏｌ、より好ましくは０．１ｗｔ％／ｖｏｌ〜３０ｗｔ％／ｖｏｌ、最も好ましくは１ｗｔ％／ｖｏｌ〜２０ｗｔ％／ｖｏｌ、例えば０．０１ｗｔ％／ｖｏｌ、０．０２ｗｔ％／ｖｏｌ、０．０３ｗｔ％／ｖｏｌ、０．０４ｗｔ％／ｖｏｌ、０．０５ｗｔ％／ｖｏｌ、０．０６ｗｔ％／ｖｏｌ、０．０７ｗｔ％／ｖｏｌ、０．０８ｗｔ％／ｖｏｌ、０．０９ｗｔ％／ｖｏｌ、０．１ｗｔ％／ｖｏｌ、０．２ｗｔ％／ｖｏｌ、０．３ｗｔ％／ｖｏｌ、０．４ｗｔ％／ｖｏｌ、０．５ｗｔ％／ｖｏｌ、０．６ｗｔ％／ｖｏｌ、０．７ｗｔ％／ｖｏｌ、０．８ｗｔ％／ｖｏｌ、０．９ｗｔ％／ｖｏｌ、１ｗｔ％／ｖｏｌ、２ｗｔ％／ｖｏｌ、３ｗｔ％／ｖｏｌ、４ｗｔ％／ｖｏｌ、５ｗｔ％／ｖｏｌ、６ｗｔ％／ｖｏｌ、７ｗｔ％／ｖｏｌ、８ｗｔ％／ｖｏｌ、９ｗｔ％／ｖｏｌ、１０ｗｔ％／ｖｏｌ、１１ｗｔ％／ｖｏｌ、１２ｗｔ％／ｖｏｌ、１３ｗｔ％／ｖｏｌ、１４ｗｔ％／ｖｏｌ、１５ｗｔ％／ｖｏｌ、１６ｗｔ％／ｖｏｌ、１７ｗｔ％／ｖｏｌ、１８ｗｔ％／ｖｏｌ、１９ｗｔ％／ｖｏｌ、２０ｗｔ％／ｖｏｌ、２１ｗｔ％／ｖｏｌ、２２ｗｔ％／ｖｏｌ、２３ｗｔ％／ｖｏｌ、２４ｗｔ％／ｖｏｌ、２５ｗｔ％／ｖｏｌ、２６ｗｔ％／ｖｏｌ、２７ｗｔ％／ｖｏｌ、２８ｗｔ％／ｖｏｌ、２９ｗｔ％／ｖｏｌ又は３０ｗｔ％／ｖｏｌである。
【０２２３】
好ましい実施形態では、凝集はｐＨシフト、イオン交換、せん断力、アルコール若しくはリオトロピック塩の添加により又はそれらの組み合わせにより誘起される。より好ましくは、ｐＨシフトはシルク水溶液、好ましくはスパイダーシルク水溶液のｐＨを低下させることにより達成される。更により好ましくはｐＨは４未満、３未満、２未満、最も好ましくは約１である。凝集を誘起させるのに好ましいアルコールは、メタノール、エタノール及びイソプロパノールからなる群から選択される。好ましい実施形態では、アルコールはメタノールである。好ましくは、凝集はイオンの添加により誘起することができ、一般的にこれによりタンパク質の塩析がもたらされる。特にそれにより、折り畳まれていないタンパク質の構造形成を誘導することができる。概してイオンの塩析性は、ホフマイスターシリーズにより表される。「ホフマイスターシリーズ」又は「リオトロピックシリーズ」は水構造を変化させる能力順でのイオンの分類である。タンパク質の溶解度に対するカチオン及びアニオンの影響を研究したFranz Hofmeisterにより、これらの変化の影響が初めて解明された。その後、アニオンはカチオンよりも大きい影響を有すると考えられ、通常はＦ−≒ＳＯ４２−＞ＨＰＯ４２−＞酢酸イオン＞Ｃｌ−＞ＮＯ３−＞Ｂｒ−＞ＣｌＯ３−＞Ｉ−＞ＣｌＯ４−と順序付けられる。カチオンの順番は通常、ＮＨ４＋＞Ｋ＋＞Ｎａ＋＞Ｌｉ＋＞Ｍｇ２＋＞Ｃａ２＋＞グアニジニウムイオンとして与えられる。一般的に任意のリオトロピック塩を用いて、シルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドの凝集を誘起することができる。凝集を誘起するのに使用することができる好ましいリオトロピック塩は、硫酸アンモニウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、及び炭酸アンモニウム、炭酸ナトリウム又は炭酸カリウム等の炭酸塩からなる群から選択される。更なる好ましい実施形態では、リオトロピック塩は硫酸アンモニウム、リン酸ナトリウム及びリン酸カリウムからなる群から選択される。好ましくは、リオトロピック塩の濃度は、約４００ｍＭ〜約３Ｍ、好ましくは約１Ｍ〜約２Ｍ、最も好ましくは約２Ｍ、例えば４００ｍＭ、５００ｍＭ、６００ｍＭ、７００ｍＭ、８００ｍＭ、９００ｍＭ、１Ｍ、１．５Ｍ、２Ｍ、２．５Ｍ又は３Ｍである。
【０２２４】
本発明の好ましい実施形態では、化合物は、薬学的に活性のある化合物、化粧品物質、農業用物質、化学誘引物質、化学忌避物質、抗真菌物質、抗菌物質、栄養素、健康補助食品、色素、香料、又は止血剤、成長刺激剤、催炎物質（inflammatory agents）、防汚剤、抗微生物剤及びＵＶ保護剤からなる群から選択される作用物質である。
【０２２５】
好ましくは、化合物は全体として正の正味電荷を有する。「正電荷」及び「カチオン性」という用語は区別なく使用することができる。実施例に詳細に示されるように、特に正に荷電した化合物がシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子に装填するのによく適している。本明細書で使用される場合、「正電荷」は化合物が陽子の素電荷を少なくとも１つ有することを意味する。当業者には、水溶性化合物の少なくとも１つの電荷の存在が化合物のｐＫａ値及び水性溶媒のｐＨ等の因子に依存することが既知である。
【０２２６】
本明細書で使用される場合、「ｐＫａ値」（酸性度定数又は酸イオン化定数としても知られる）という用語は溶液中の酸の強度の定量的評価基準である。ｐＫａ値は、酸−塩基反応との関連で解離として知られる化学反応に対する平衡を示す解離定数Ｋａから誘導される。Ｋａ値が何桁にも及ぶことのために、実際には酸解離定数の対数評価基準がより一般的に用いられる。ｐＫａ値が大きくなると、解離の程度が小さくなり、酸の強度が小さくなる。したがってｐＫｂ値は溶液中の塩基の強度を示す。
【０２２７】
水溶液において、ｐＫａ値は化合物が正電荷を有するか否かの指標を与え得る。好ましくは、化合物は装填工程で用いられるｐＨで正の正味電荷を有する。
【０２２８】
化合物の正味電荷を決定又は測定するための様々な他の方法が当業者にとって既知である。例えば、正味電荷は通常、電気泳動法を用いて測定することができる。水溶液中の分子の電荷はＡＣＤ／ＣｈｅｍＳｋｅｔｃｈ（Advanced Chemistry Development, ACD/labs, http://www.acdlabs.comで入手可能）等の好適なソフトウェアを用いて予測することもできる。
【０２２９】
当業者には、どの化合物が装填に好適であるか、すなわち対象の化合物が粒子に装填するのに用いられる水溶液のｐＨで少なくとも１つの正電荷を有するか否かを決定する方法も既知である。
【０２３０】
以下の記載から及び実施例で明らかなように、化合物が本発明によるシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子に装填するのに好適であるか否かを評価するための方法には、滴定方法及び滴定中のゼータ電位の測定が含まれる。
【０２３１】
化合物がペプチド若しくはタンパク質、又は任意の他の両親媒性化合物である場合、全体として正の正味電荷の存在は化合物の等電点（ｐＩ）の値に依存する。等電点（ＩＥＰと略されることもある）は特定の分子又は表面が正味電荷を保有しないｐＨである。例えば、両性分子又は両性イオンは分子に存在する官能基に応じて正電荷及び負電荷の両方を含有する。分子上の正味電荷はそれらの周辺環境のｐＨに影響を受け、陽子の喪失又は獲得により、より正に又は負に荷電することができる。ｐＩは分子が電荷を全く保有しない又は負電荷と正電荷とが等しいｐＨ値である。
【０２３２】
或る特定のｐＨでペプチドが主な正味電荷を有するか否かを決定するための方法が当該技術分野で既知である。例えば、タンパク質又はペプチドのｐＩ値を算出するのに好適なツールは、ＥｘＰａｓｙＰｒｏｔｅｏｍｉｃサーバー（www.expasy.ch）により提供される。「Ｃｏｍｐｕｔｅ  ｐＩ／Ｍｗ」プログラムは、データベースエントリーのリスト（ＵｎｉＰｒｏｔＫｎｏｗｌｅｄｇｅｂａｓｅ（Ｓｗｉｓｓ−ｐｒｏｔ又はＴｒＥＭＢＬ））に対する又はユーザーが入力した配列に対する理論的ｐＩ（等電点）及びＭｗ（分子量）のコンピュータによる計算を可能にするツールである。ｐＩ値の予測は、Bjellqvist et al.（1993） and Gasteider et al.（2005）［Bjellqvist, B., The focusing positions of polypeptides inimmobilized pH gradients can be predicted from their amino acid sequences.Electrophoresis 1993, 14, 1023-1031. Gasteiger E., Protein Identification andAnalysis Tools on the ExPASy Server,（In） John M. Walker（ed）:The Proteomics Protocols Handbook, Humana Press（2005）.］にも記載されている。
【０２３３】
更なる特定の実施形態では、化合物を静電相互作用及び／又は拡散によりシルクマトリクス、好ましくはスパイダーシルクマトリクスに浸透することが可能である。荷電した化合物がシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子の全体として負の正味電荷により引き付けられることを理解されたい。反対の電荷の存在による引力のために、化合物はシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子の表面に接着し、シルクマトリクス、例えばスパイダーシルクマトリクスへと拡散することが可能である。一般的に、コロイド系における電荷の斥力又は引力はゼータ電位により説明することができる。本発明との関連内で、正に荷電した化合物を、シルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子のゼータ電位が本質的に負である場合、静電相互作用によりシルクマトリクス、例えばスパイダーシルクマトリクスに浸透することが可能である。
【０２３４】
自然状態で、シルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子の１つ又は複数のシルクポリペプチド、例えばスパイダーシルクポリペプチドは、カルボキシル末端で少なくとも１つの負電荷を有する。本明細書で使用される場合、「負に荷電した」及び「アニオン性」という用語は区別なく使用することができる。当業者には、全体として負の正味電荷を有するポリペプチドを得るために適切なアミノ酸配列を選択する方法も既知である。例えば、これは負に荷電したアミノ酸を含む配列を選択することにより達成することができる。好適な負に荷電したシルクポリペプチド、特にスパイダーシルクポリペプチドは例えば、モジュールＣ（配列番号２１）又はその変異体の配列の１６個の反復を含むＣ１６である。好ましい実施形態では、化合物は中性又はアルカリ性の性質を有する。
【０２３５】
本明細書で使用される場合、「薬学的に活性のある化合物」、「薬物」、「医薬品」、「治療剤」又は「生体活性化合物／作用物質」という用語は区別なく使用することができ、病態、例えば疾患若しくは障害の治療、治癒、予防法、予防若しくは診断に使用することができる、又はそうでなければ肉体的、精神的若しくは心理的な健康状態を向上させるために使用することができる任意の物理的、化学的又は生物学的な物質を表す。したがって、本発明との関連で想定される薬学的に活性のある化合物には、治療効果又は予防効果を有する任意の化合物が含まれる。例えば、該薬学的に活性のある化合物は、組織成長、細胞成長、細胞分化に影響を与える若しくはこれに関与する化合物、免疫応答等の生体作用を誘発することが可能な化合物、又は１つ又は複数の生体プロセスにおいて任意の他の役割を果たすことができる化合物であり得る。
【０２３６】
治療剤は、抗微生物剤、抗生剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、尿路防腐薬、嫌気性感染症治療薬、結核治療薬、ハンセン病治療薬、アメーバ赤痢治療薬、抗マラリア薬、抗蠕虫病薬、抗痛風薬、トロンビン抑制物質、抗血栓薬、血栓溶解薬、フィブリン溶解酵素物質、血管痙攣阻害剤、血管拡張薬、降圧薬、抗低血圧薬、表面糖タンパク質受容体阻害剤、抗血小板剤、抗有糸分裂薬、アクチン阻害剤、微小管阻害薬、分泌抑制薬、リモデリング抑制剤、代謝抵抗物質、細胞増殖阻害薬（抗血管新生薬を含む）、免疫抑制薬、成長ホルモン拮抗薬、成長因子、ドパミン作用薬、放射線治療薬、細胞外基質構成成分、ＡＣＥ阻害薬、フリーラジカル消去薬、キレート薬、抗酸化薬、抗重合薬、光線力学治療薬、中枢性筋弛緩薬、オピオイド作用薬、非オピオイド性鎮痛薬、非ステロイド抗炎症剤、抗片頭痛薬、Ｃｏｘ−ＩＩ阻害薬、鎮吐薬、β−アドレナリン遮断薬、Ｃａ２＋−チャンネル遮断薬、抗痙攣薬、抗うつ薬、抗がん薬、尿失禁（ＵＩ）治療薬又は尿失禁予防薬、潰瘍治療薬又は潰瘍予防薬、伝染性ファブリキウス&#22218;病（ＩＢＤ）治療薬又は伝染性ファブリキウス&#22218;病予防薬、過敏性大腸症候群（ＩＢＳ）治療薬又は過敏性大腸症候群予防薬、嗜癖障害治療薬、パーキンソン病治療薬及びパーキンソン症候群治療薬、不安治療薬、てんかん治療薬、脳卒中治療薬、発作治療薬、掻痒状態治療薬、精神病治療薬、ハンチントン舞踏病治療薬、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）治療薬、認知障害治療薬、偏頭痛治療薬、嘔吐治療薬、運動機能異常治療薬、又は抑うつ治療薬、食欲抑制剤（anorexic agent）、制酸剤、抗&#30180;瘡薬、抗アレルギー薬、抗狭心症薬、抗不整脈薬、抗喘息薬、抗脱毛症薬、抗コリン作用薬、抗凝血薬及び血液希釈薬、抗大腸炎薬、抗膀胱炎薬、抗糖尿病薬、制瀉薬、抗利尿薬、整腸剤、抗緑内障薬、抗ヒスタミン薬、抗肺炎薬、抗肥満薬、抗乾癬薬、抗精神病薬、解熱剤、抗リウマチ薬、鎮咳薬、骨増強剤（bone densifier）、炭酸脱水酵素阻害薬物、強心薬、避妊薬、鬱血除去薬、利尿薬、ＣＮＳ興奮剤、ドパミン受容体拮抗薬、ＨＭＧ  ＣｏＡ還元酵素阻害剤、ホスホジエステラーゼ阻害剤、ホルモン、ホルモン作用薬、抗貧血薬、免疫調節薬、免疫抑制剤、緩下剤、多発性硬化症治療薬、鎮静剤、セロトニン取り込み阻害剤、及びその混合物であってもよいが、これに限定されない。
【０２３７】
有用な抗微生物剤の例は、アンピシリン、ナフシリン、アモキシシリン、オキサシリン、アズロシリン、ペニシリンＧ、カルベニシリン、ペニシリンＶ、ジクロキサシリン、フェネチシリン、フロキサシリン、ピペラシリン、メシリナム、スルベニシリン、メチシリン、チカルシリン（ticarcillin）、メズロシリン、セファクロル、セファロチン、セファドロキシル、セファピリン、セファマンドル、セフラジン、セファトリジン、セフスロジン（cefsulodin）、セファゾリン、セフタジジム（ceftazidime）、セホラニド、セフトリアキソン、セフォキシチン、セフロキシム、セファセトリル、ラタモキセフ又はセファレキシンのようなセファロスポリン類、アミカシン、ネオマイシン、ジベカシン（dibekacin）、カナマイシン、ゲンタマイシン、ネチルマイシン又はトブラマイシンのようなアミノグリコシド類、アンホテリシンＢ、ノボビオシン、バシトラシン、ナイスタチン、クリンダマイシン、ポリミキシン類、コリスチン、ロバマイシン、エリスロマイシン、スペクチノマイシン、リンコマイシン又はバンコマイシンのようなマクロライド類、クロルテトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、デメクロサイクリン、ロリテトラサイクリン、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、ミノサイクリン、クロラムフェニコール、リファマイシン、リファンピシン及びチアムフェニコールのようなテトラサイクリン類を含む抗生剤の群に属するが、これに限定されない。
【０２３８】
有用な抗真菌剤の例は、アンホテリシンＢ、ケトコナゾール、クロトリマゾール、ミコナゾール、エコナゾール、ナタマイシン、フルシトシン、ナイスタチン（nystatin）及びグリセオフルビンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２３９】
有用な抗ウイルス剤の例は、アシクロビル、イドクスウリジン、アマンタジン（amantadine）、メチサゾン、シタラビン、ビダラビン及びガンシクロビルを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２４０】
有用な尿路防腐薬の例は、メタンアミン、ノルフロキサシン又はシノキサシンのようなキノロン類、ナリジクス酸、及びニトロフラントイン（nitrofurantoin）、ニフルトイノール又はオキソリン酸のようなニトロ化合物を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２４１】
嫌気性感染症治療薬の例は、メトロニダゾールに属するが、これに限定されない。
【０２４２】
有用な結核治療薬の例は、アミノサリチル酸（aminosalicylic acid）、イソニアジド、サイクロセリン、リファンピシン、エタンブトール、チオカルリド、エチオナミド及びバイオマイシンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２４３】
有用なハンセン病治療薬の例は、アミチオゾン、リファンピシン、クロファジミン、スルホキソンナトリウム（sodium sulfoxone）及びジアミノジフェニルスルホン（ＤＤＳ、ダプソン）を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２４４】
有用なアメーバ赤痢の化学治療薬の例は、クロロキン、ヨードキノール、クリオキノール、メトロニダゾール、デヒドロエメチン、パロモマイシン、ジロキサニドフロエート、チニダゾール（diloxanide furoate,tinidazole）及びエメチンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２４５】
有用な抗マラリア薬の例は、クロロキン、ピリメタミン、ヒドロキシクロロキン、キニーネ、メフロキン、スルファドキシン／ピリメタミン、ペンタミジン、ナトリウムスラミン、プリマキン、トリメトプリム及びプログアニルを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２４６】
有用な抗蠕虫病薬の例は、酒石酸アンチモンカリウム、ニリダゾール、ジメルカプトコハク酸アンチモンナトリウム、オキサムニキン、ベフェニウム、ピペラジン、ジクロロフェン、プラジカンテル、ジエチルカルバマジン、ピランテルパモ酸塩、ヒカントン、パモ酸ピルビニウム、レバミソール、スチボフェン、メベンダゾール、テトラミソール、メトリホネート、チアベンダゾール及びニクロサミドを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２４７】
有用な抗痛風薬の例は、コルヒチン及びアロプリノールを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２４８】
有用な局所麻酔薬の例は、アルチカイン、メピバカイン、ブピバカイン、プリロカイン、エチドカイン、プロカイン、リドカイン又はテトラカインを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２４９】
有用な中枢性筋弛緩薬の例は、バクロフェン、カリソプロドール、クロルメザノン、クロルゾキサゾン、シクロベンザプリン、ダントロレン、ジアゼパム、フェバルバメート、メフェノキサロン（mephenoxalone）、メフェネシン、メタキサロン（metaxalone）、メトカルバモール又はトルペリゾンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２５０】
治療に有用な甲状腺薬の例は、レボチロニン及びリオチロニンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２５１】
有用な抗甲状腺薬の例は、カルビマゾール、メチマゾール、メチルチオウラシル及びプロピルチオウラシルを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２５２】
有用なオピオイド作用薬の例は、アルフェンタニル、アリルプロジン、アルファプロジン、アニレリジン、ベンジルモルヒネ、ベジトラミド、ブプレノルフィン、ブトルファノール、クロニタゼン、コデイン、デソモルヒネ、デキストロモラミド、デゾシン、ジアンプロミド、ジアモルフォン（diamorphone）、ジヒドロコデイン、ジヒドロモルヒネ、ジメノキサドール、ジメフェプタノール、ジメチルチアンブテン、ジオキサフェチルブチラート、ジピパノン、エプタゾシン、エトヘプタジン、エチルメチルチアンブテン、エチルモルヒネ、エトニタゼンフェンタニル、ヘロイン、ヒドロコドン、ヒドロモルフォン、ヒドロキシペチジン、イソメタドン、ケトベミドン、レボルファノール、レボフェナシルモルファン、ロフェンタニル、メペリジン、メプタジノール、メタゾシン、メタドン、メトポン、モルヒネ、ミロフィン、ナルブフィン、ナルセイン、ニコモルフィン、ノルレボルファノール、ノルメタドン、ナロルフィン、ノルモルヒネ、ノルピパノン、オピウム、オキシコドン、オキシモルホン、パパベレタム、ペンタゾシン、フェナドキソン、フェノモルファン、フェナゾシン、フェノペリジン、ピミノジン、ピリトラミド、プロヘプタジン、プロメドール、プロペリジン、プロピラム、プロポキシフェン、スフェンタニル、チリジン、トラマドール、薬学的に許容可能なその誘導体、及びその混合物を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２５３】
有用な非オピオイド鎮痛薬の例は、アスピリン、イブプロフェン、ジクロフェナク、ナプロキセン、ベノキサプロフェン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、フロブフェン（flobufen）、ケトプロフェン、インドプロフェン、ピロプロフェン、カルプロフェン、オキサプロジン、プラノプロフェン（pranoprofen）、ムロプロフェン、トリオキサプロフェン、スプロフェン、アミノプロフェン、チアプロフェン酸、フルプロフェン、ブクロクス酸、インドメタシン、スリンダク、トルメチン、ゾメピラク、チオピナク、ジドメタシン、アセメタシン、フェンチアザク、クリダナク、オキシピナク、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、ニフルム酸、トルフェナム酸、ジフルニサル（diflunisal）、フルフェニサル、ピロキシカム、スドキシカム、及びイソキシカムのような非ステロイド性抗炎症薬を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２５４】
他の好適な非オピオイド鎮痛剤の例は、アスピリン、サリチル酸ナトリウム、トリサルチル酸コリンマグネシウム、サルサレート、ジフルニサル、サリチルサリチル酸、スルファサラジン、及びオルサラジンを含むサリチル酸誘導体のような鎮痛剤、解熱剤、非ステロイド性抗炎症薬；アセトアミノフェン及びフェナセチンを含むパラアミノフェノール誘導体；インドメタシン、スリンダク、及びエトドラクを含むインドール酢酸及びインデン酢酸；トルメチン、ジクロフェナク、及びケトロラクを含むヘテロアリール酢酸；メフェナム酸及びメクロフェナム酸を含むアントラニル酸（フェナメート）、オキシカム（ピロキシカム、テノキシカム）、及びピラゾリジンジオン類（フェニルブタゾン、オキシフェンタルタゾン（oxyphenthartazone））を含むエノール酸、並びにナブメトンを含むアルカノンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２５５】
有用なＣＯＸ−ＩＩ阻害薬の例は、ロフェコキシブ及びセレコキシブを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２５６】
有用な抗片頭痛薬の例は、アルピロプリド、ブロモクリプチン、ジヒドロエルゴタミン、ドラセトロン、エルゴコルニン、エルゴコルニニン、エルゴクリプチン、エルゴノビン、バッカク（ergot）、エルゴタミン、酢酸フルメドロキソン、フォナジン、ケタンセリン、リスリド、ロメリジン、メチルエルゴノヴィン、メチセルジド、メトプロロール、ナラトリプタン、オキセトロン、ピゾチリン、プロプラノロール、リスペリドン、リザトリプタン、スマトリプタン、チモロール、トラゾドン、ゾルミトリプタン、及びその混合物を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２５７】
有用な鎮吐薬の例は、メトクロプロミド、ドンペリドン、プロクロルペラジン、プロメタジン、クロルプロマジン、トリメトベンザミド、オンダンセトロン、グラニセトロン、ヒドロキシジン、アセチルロイシンモノエタノールアミン、アリザプリド、アザセトロン、ベンズキナミド、ビエタナチン、ブロモプリド、ブクリジン、クレボプリド、シクリジン、ジメンヒドリナート、ジフェニドール、ドラセトロン、メクリジン、メタラタール、メトピマジン、ナビロン、オキシペルンジル、ピパマジン、スコポラミン、スルピリド、テトラヒドロカンナビノール、チエチルペラジン、チオプロペラジン、トロピセトロン、及びその混合物を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２５８】
有用なβ−アドレナリン遮断薬の例は、アセブトロール、アルプレノロール、アモスラロール（amosulalol）、アロチノロール、アテノロール、ベフノロール、ベタキソロール、ベバントロール、ビソプロロール、ボピンドロール、ブクモロール、ブフェトロール、ブフラロール、ブニトロロール、ブプラノロール、ブチドリン塩酸塩、ブトフィロロール、カラゾロール、カルテオロール、カルベジロール、セリプロロール、セタモロール、クロラノロール、ジレバロール、エパノロール、エスモロール、インデノロール、ラベタロール、レボブノロール、メピンドロール、メチプラノロール、メトプロロール、モプロロール、ナドロール、ナドキソロール、ネビバロール、ニフェナロール、ニプラジロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プラクトロール、プロネタロール、プロプラノロール、ソタロール、スルフィナロール、タリノロール、テルタトロール、チリソロール、チモロール、トリプロロール、及びキシベノロールを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２５９】
有用な抗痙攣薬の例は、アセチルフェネトライド、アルブトイン、アロキシドン、アミノグルテチミド、４−アミノ−３−ヒドロキシ酪酸、アトロラクトアミド、ベクラミド、ブラメート（buramate）、臭化カルシウム、カルバマゼピン、シンロミド、クロメチアゾール、クロナゼパム、デシメミド、ジエタジオン、ジメタジオン、ドキセニトロイン、エテロバルブ、エタジオン、エトスクシミド、エトトイン、フェルバメート、フルオレソン、ガバペンチン、５−ヒドロキシトリプトファン、ラモトリジン、臭化マグネシウム、硫酸マグネシウム、メフェニトイン、メフォバルビタール、メタルビタール、メテトイン、メトスクシミド、５−メチル−５−（３−フェナントリル）ヒダントイン、３−メチル−５−フェニルヒダントイン、ナルコバルビタール、ニメタゼパム、ニトラゼパム、オキスカルバゼピン、パラメタジオン、フェナセミド、フェネタルビタール、フェネツリッド、フェノバルビタール、フェンスクシミド、フェニルメチルバルビツール酸、フェニトイン、フェテニラートナトリウム、臭化カリウム、プレガバリン、プリミドン、プロガビド、臭化ナトリウム、ソラナム（solanum）、臭化ストロンチウム、スクロフェニド、スルチアム、テトラントイン（tetrantoin）、チアガビン、トピラメート、トリメタジオン、バルプロ酸、バルプロミド、ビガバトリン、及びゾニサミドを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２６０】
有用な抗うつ薬の例は、ビネダリン、カロキサゾン、シタロプラム、（Ｓ）−シタロプラム、ジメタザン、フェンカミン、インダルピン、インデロキサジン塩酸塩、ネホパム、ノミフェンシン、オキシトリプタン、オキシペルチン、パロキセチン、セルトラリン、チアゼシン、トラゾドン、ベンモキシン、イプロクロジド、イプロニアジド、イソカルボキサジド、ニアラミド、オクタモキシン（octamoxin）、フェネルジン、コチニン、ロリシプリン、ロリプラム、ロプロチリン、メトラルインドール、ミアンセリン、ミルタゼピン（mirtazepine）、アジナゾラム、アミトリプチリン、アミトリプチリンオキシド、アモキサピン、ブトリプチリン、クロミプラミン、デメキシプチリン、デシプラミン、ジベンゼピン、ジメタクリン、ドチエピン、ドキセピン、フルアシジン、イミプラミン、イミプラミンＮ−オキシド、イプリンドール、ロフェプラミン、メリトラセン、メタプラミン、ノルトリプチリン、ノキシプチリン、オピプラモール、ピゾチリン、プロピゼピン、プロトリプチリン、キヌプラミン、チアネプチン、トリミプラミン、アドラフィニル、ベナクチジン、ブプロピオン、ブタセチン、ジオキサドロール、デュロキセチン、エトペリドン、フェバルバメート、フェモキセチン、フェンペンタジオール、フルオキセチン、フルボキサミン、ヘマトポルフィリン、ヒペリシン、レボファセトペラン、メジホキサミン、ミルナシプラン、ミナプリン、モクロベミド、ネファゾドン、オキサフロザン、ピベラリン、プロリンタン、ピリスクシデアノール（pyrisuccideanol）、リタンセリン、ロキシンドール、塩化ルビジウム、スルピリド、タンドスピロン、ソザリノン（thozalinone）、トフェナシン、トロキサトン、トラニルシプロミン、Ｌ−トリプトファン、ベンラファキシン、ビロキサジン、及びジメルジンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２６１】
有用なＣａ２＋−チャネル遮断薬の例は、ベプリジル、クレンチアゼム、ジルチアゼム、フェンジリン、ガロパミル、ミベフラジル、プレニルアミン、セモチアジル、テロジリン、ベラパミル、アムロジピン、アラニジピン、バルニジピン、ベニジピン、シルニジピン、エホニジピン、エルゴジピン、フェロジピン、イスラジピン、ラシジピン、レルカニジピン、マニジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニルバジピン、ニモジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、シンナリジン、フルナリジン、リドフラジン、ロメリジン、ベンシクラン、エタフェノン、ファントファロン、及びペルヘキシリンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２６２】
有用な抗がん薬の例は、アシビシン、アクラルビシン、アコダゾール塩酸塩、アクロニン、アドゼレシン、アルデスロイキン、アルトレタミン、アムボマイシン（ambomycin）、酢酸アメタントロン、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、アントラマイシン、アスパラギナーゼ、アスペルリン、アザシチジン、アゼテパ、アゾトマイシン、バチマスタット、ベンゾデパ、ビカルタミド、ビサントレン塩酸塩、メシル酸ビスナフィド、ビゼレシン、硫酸ブレオマイシン、ブレキナルナトリウム、ブロピリミン、ブスルファン、カクチノマイシン、カルステロン、カラセミド、カルベチマー、カルボプラチン、カルムスチン、カルビシン塩酸塩、カルゼルシン、セデフィンゴール、クロランブシル、シロレマイシン（cirolemycin）、シスプラチン、クラドリビン、メシル酸クリスナトール、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン塩酸塩、デシタビン、デキソルマプラチン、デザグアニン、メシル酸デザグアニン、ジアジクオン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドキソルビシン塩酸塩、ドロロキシフェン、クエン酸ドロロキシフェン、プロピオン酸ドロモスタノロン、ズアゾマイシン、エダトレキサート、エフロルニチン塩酸塩、エルサミトルシン、エンロプラチン、エンプロメート（enpromate）、エピプロピジン、塩酸エピルビシン、エルブロゾール、エソルビシン塩酸塩、エストラムスチン、リン酸エストラムスチンナトリウム、エタニダゾール、エトポシド、リン酸エトポシド、エトプリン、ファドロゾール塩酸塩、ファザラビン、フェンレチニド、フロキシウリジン、リン酸フルダラビン、フルオロウラシル、フルロシタビン、ホスキドン、フォストリエシンナトリウム、ゲムシタビン、ゲムシタビン塩酸塩、ヒドロキシ尿素、イダルビシン塩酸塩、イホスファミド、イルモホシン、インターロイキンＩＩ（組換えインターロイキンＩＩ又はｒＩＬ２）、インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ｂ、インターフェロンα−ｎ１、インターフェロンα−ｎ３、インターフェロンβ−Iａ、インターフェロンγ−Ｉｂ、イプロプラチン（iproplatin）、塩酸イリノテカン、酢酸ランレオチド、レトロゾール、酢酸リュープロリド、リアゾロール塩酸塩、ロメトレキソールナトリウム、ロムスチン、ロソキサントロン塩酸塩、マソプロコール、メイタンシン、メクロレタミン塩酸塩、酢酸メゲストロール、酢酸メレンゲストロール、メルファラン、メノガリル、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、メトプレン、メツレデパ、ミチンドミド、マイトカルシン（mitocarcin）、マイトクロミン、ミトギリン、ミトマルシン、マイトマイシン、マイトスパー、ミトタン、塩酸ミトキサントロン、ミコフェノール酸、ノコダゾール、ノガラマイシン、オルマプラチン、オキシスラン、パクリタキセル、ペグアスパラガーゼ（pegaspargase）、ペリオマイシン（peliomycin）、ペンタムスチン（pentamustine）、硫酸ペプロマイシン、ペルフォスファミド（perfosfamide）、ピポブロマン、ピポスルファン、ピキサントロン塩酸塩、プリカマイシン、プロメスタン、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニマスチン、プロカルバジン塩酸塩、ピュロマイシン、ピュロマイシン塩酸塩、ピラゾフリン、リボプリン、ログレチミド、サフィンゴール、サフィンゴール塩酸塩、セムスチン、シムトラゼン、スパルホサートナトリウム、スパルソマイシン、スピロゲルマニウム塩酸塩、スピロムスチン、スピロプラチン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、スルフェヌア、タリソマイシン、テコガランナトリウム、テガフール、テロキサントロン塩酸塩、テモポルフィン、テニポシド、テロキシロン、テストラクトン、チアミプリン、チオグアニン、チオテパ、チアゾフリン、チラパザミン、トレミフェンクエン酸塩、酢酸トレストロン、トリシリビンホスファート、トリメトレキサート、グルクロン酸トリメトレキサート、トリプトレリン、ツブロゾール塩酸塩、ウラシルマスタード、ウレデパ、バプレオチド、ベルテポルフィン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、ビンデシン、硫酸ビンデシン、ビネピジンスルフェート、ビングリシナートスルフェート、ビンロイロシンスルフェート、酒石酸ビノレルビン、硫酸ビンロシジン、硫酸ビンゾリジン、ボロゾール、ゼニプラチン、ジノスタチン、ゾルビシン塩酸塩を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２６３】
他の抗がん薬の例は、２０−ｅｐｉ−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３;５−エチニルウラシル；アビラテロン；アクラルビシン；アシルフルベン；アデシペノール；アドゼレシン；アルデスロイキン；ＡＬＬ−ＴＫ拮抗薬；アルトレタミン；アンバムスチン；アミドックス；アミホスチン；アミノレブリン酸；アムルビシン；アムサクリン；アナグレリド；アナストロゾール；アンドログラホリド；血管新生阻害剤；拮抗薬Ｄ；拮抗薬Ｇ；アンタレリクス；抗背側化形態形成タンパク質−１；抗アンドロゲン薬、前立腺癌；抗エストロゲン薬；アンチネオプラストン；アンチセンスオリゴヌクレオチド；アフィジコリングリシナート；アポトーシス遺伝子変調因子；アポトーシス調節因子；アプリン酸；ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ；アスラクリン；アタメスタン；アトリムスチン；アキシナスタチン１；アキシナスタチン２；アキシナスタチン３；アザセトロン；アザトキシン；アザチロシン；バッカチンＩＩＩ誘導体；バラノール；バチマスタット；ＢＣＲ／ＡＢＬ拮抗薬；ベンゾクロリン類；ベンゾイルスタウロスポリン；β−ラクタム誘導体；β−アレチン；βクラマイシンＢ；ベツリン酸；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；ビサントレン；ビスアジリジニルスペルミン；ビスナフィド（bisnafide）；ビストラテンＡ；ビゼレシン；ブレフラート；ブロピリミン；ブドチタン；ブチオニンスルホキシミン；カルシポトリオール；カルホスチンＣ；カンプトテシン誘導体；カナリア痘ＩＬ−２；カペシタビン；カルボキサミド−アミノ−トリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；ＣａＲｅｓｔ  Ｍ３；ＣＡＲＮ  ７００；軟骨由来阻害薬；カルゼルシン；カゼインキナーゼ阻害薬（ＩＣＯＳ）；カスタノスペルミン；セクロピンＢ；セトロレリクス；クロルルンス；クロロキノキサリンスルホンアミド；シカプロスト；ｃｉｓ−ポルフィリン；クラドリビン；クロミフェン類縁体；クロトリマゾール；コリスマイシンＡ；コリスマイシンＢ；コンブレタスタチンＡ４；コンブレタスタチン類縁体；コナゲニン；クランベシジン８１６；クリスナトール；クリプトフィシン８；クリプトフィシンＡ誘導体；クラシンＡ；シクロペンタアントラキノン；シクロプラタム；サイパーマイシン；シタラビンオクフォスファート；細胞溶解因子；サイトスタチン；ダクリキシマブ；デシタビン；デヒドロダイデムニンＢ；デスロレリン；デキサメタゾン；デキシフォスファミド（dexifosamide）；デクスラゾキサン；デクスベラパミル；ジアジクオン；ダイデムニンＢ；ディドクス；ジエチルノルスペルミン；ジヒドロ−５−アザシチジン；９−ジヒドロタキソール；ディオキサマイシン；ジフェニルスピロムスチン；ドセタキセル；ドコサノール；ドラセトロン；ドキシフルリジン；ドロロキシフェン；ドロナビノール；デュオカルマイシンＳＡ；エブセレン；エコムスチン；エデルホシン；エドレコロマブ；エフロルニチン；エレメン；エミテフル；エピルビシン；エプリステリド；エストラムスチン類縁体；エストロゲン作用薬；エストロゲン拮抗薬；エタニダゾール；リン酸エトポシド；エクセメスタン；ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フィルグラスティム；フィナステリド；���ラボピリドール；フレゼラスチン；フルアステロン；フルダラビン；塩酸フルオロダウロルニシン；フォルフェニメクス；ホルメスタン；ホストリエシン；ホテムスチン；ガドリニウムテキサフィリン；硝酸ガリウム；ガロシタビン；ガニレリックス；ゼラチナーゼ阻害薬；ゲムシタビン；グルタチオン阻害薬；ヘプスルファム；ヘレグリン；ヘキサメチレンビスアセタミド；ヒペリシン；イバンドロン酸；イダルビシン；イドキシフェン；イドラマントン；イルモホシン；イロマスタット；イミダゾアクリドン；イミキモド；免疫賦活ペプチド；インスリン様成長因子−１受容体阻害薬；インターフェロン作用薬；インターフェロン類；インターロイキン類；ヨーベングアン；ヨードドキソルビシン；４−イポメアノール；イロプラクト；イルソグラジン；イソベンガゾール；イソホモハリコンドリンＢ；イタセトロン；ジャスプラキノリド；カハラリドＦ；ラメラリン−Ｎ三酢酸塩；ランレオチド；レイナマイシン；レノグラスチム；硫酸レンチナン；レプトルスタチン；レトロゾール；白血病阻害因子;白血球αインターフェロン；ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン；リュープロレリン；レバミゾール；リアロゾール；線状ポリアミン類縁体；親油性ジサッカライドペプチド；親油性プラチナ化合物；リッソクリナミド７；ロバプラチン；ロンブリシン；ロメテレキソール；ロニダミン；ロソキサントロン；ロバスタチン；ロキソリビン；ルートテカン；ルテチウムテキサフィリン；リソフィリン；細胞溶解性ペプチド；マイタンシン；マンノスタチンＡ；マリマスタット；マソプロコール；マスピン；マトリリジン阻害薬；マトリックスメタロプロテアーゼ阻害薬；メノガリル；メルバロン；メテレリン；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；ＭＩＦ阻害薬；ミフェプリストン；ミルテホシン；ミリモスチム；ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ；ミトグアゾン；ミトラクトール；マイトマイシン類縁体；ミトナフィド；マイトトキシン線維芽細胞増殖因子−サポリン；ミトキサントロン；モファロテン；モルグラモスチム；モノクローナル抗体、ヒト絨毛性性ゴナドトロピン；モノホスホリルリピドＡ＋ミオバクテリウム細胞壁ｓｋ；モピダモール；多剤耐性遺伝子阻害薬；多発性腫瘍抑制因子１をベースとした治療；マスタード抗癌薬；ミカペルオキシドＢ；ミコバクテリア細胞壁抽出物；ミリアポロン；Ｎ−アセチルジナリン；Ｎ置換ベンザミド；ナファレリン；ナグレスチップ；ナロキソン＋ペンタゾシン；ナパビン；ナフテルピン；ナルトグラスチム；ネダプラチン；ネモルビシン；ネリドロン酸；中性エンドペプチダーゼ；ニルタミド；ニサマイシン；酸化窒素モジュレータ；ニトロキシド抗酸化剤；ニトルリン；０６−ベンジルグアニン；オクトレオチド；オキセノン；オリゴヌクレオチド；オナプリストン；オンダンセトロン；オンダンセトロン；オラシン；経口サイトカイン誘導物質；オルマプラチン；オサテロン；オキサリプラチン；オキザウノマイシン；パクリタキセル；パクリタキセル類縁体；パクリタキセル誘導体；パラウアミン；パルミトイルリゾキシン；パミドロン酸；パナキシトリオール；パノミフェン；パラバクチン；パゼルリプチン；ペグアスパルガーゼ；ペルデシン；ペントサン多���酸ナトリウム；ペントスタチン；ペントロゾール；ペルフルブロン；ペルフォスファミド；ペリリルアルコール；フェナジノマイシン；フェニルアセテート；ホスファターゼ阻害薬；ピシバニール；ピロカルピン塩酸塩；ピラルビシン；ピリトレキシム；プラセチンＡ；プラセチンＢ；プラスミノーゲン活性化因子阻害薬；プラチナ錯体；プラチナ化合物；プラチナ−トリアミン錯体；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニゾン；プロピルビス−アクリドン；プロスタグランジンＪ２；プロテアソーム阻害薬；プロテインＡに基づく免疫変調成分；プロテインキナーゼＣ阻害薬；プロテインキナーゼＣ阻害薬、小型藻類；タンパク質チロシン脱リン酸化酵素阻害薬；プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害薬；プルプリン；ピラゾロアクリジン；ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレン共役体；ｒａｆ拮抗薬；ラルチトレキセド；ラモセトロン；ｒａｓファルネシルプロテイントランスフェラーゼ阻害薬；ｒａｓ阻害薬；ｒａｓ−ＧＡＰ阻害薬；脱メチル化レテリプチン；エチドロン酸レニウムＲｅ１８６；リゾキシン；リボザイム；ＲＩＩレチナミド；ログレチミド；ロヒツキン；ロムルチド；ロキイニメックッス；ルビギノンＢ１；ルボキシル；サフィンゴール；サイントピン；ＳａｒＣＮＵ；サルコフィトールＡ；サルグラモスチン；Ｓｄｉ  １ミメティック；セムスチン；老化由来阻害薬１；センスオリゴヌクレオチド；シグナル伝達阻害薬；シグナル伝達モジュレーター；単鎖抗原結合タンパク質；シゾフィラン；ソブゾキサン；ボロカプテイトナトリウム；フェニル酢酸ナトリウム；ソルベロール；ソマトメジン結合タンパク質；ソネルミン；スパルフォシン酸；スピカマイシンＤ；スピロムスチン；スプレノペンチン；スポンギスタチン１；スクアラミン；幹細胞阻害薬；幹細胞分裂阻害薬；スチピアミド；ストロメリシン阻害薬；スルフィノシン；過剰活性型血管作用性腸ペプチド拮抗薬；スラジスタ；スラミン；スウェインソニン；合成グリコサミノグリカン；タリムスチン；タモキシフェンメチオジド；タウロムスチン；タザロテン；テコガランナトリウム；テガフール；テルラピリリウム；テロメラーゼ阻害薬；テモポルフィン；テモゾロマイド；テニポシド；テトラクロロデカオキシド；テトラゾミン；タリブラスチン；チオコラリン；トロンボポエチン；トロンボポエチンミメティック；チマルファシン；サイモポイエチン受容体作用薬；チモトリナン；甲状腺刺激ホルモン；スズエチルエチオプルプリン；チラパザミン；二塩化チタノセン；トプセンチン；トレミフェン；全能性幹細胞因子；翻訳阻害薬；トレチノイン；トリアセチルウリジン；トリシリビン；トリメトレキセート；トリプトレリン；トロピセトロン；ツロステリド；チロシンキナーゼ阻害薬；チルホスチン；ＵＢＣ阻害薬；ウベニメクス；尿生殖洞由来成長阻害因子；ウロキナーゼ受容体拮抗薬；バプレオチド；バリオリンＢ；ベクター系、赤血球遺伝子療法；ベラレゾール；ベラミン；ベルジン；ベルテポルフィン；ビノレルビン；ビンキサルチン；バイタクシン；ボロゾール；ザノテロン；ゼニプラチン；ジラスコルブ；及びジノスタチンスチマラマーを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２６４】
ＵＩを治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、プロパンテリン、イミプラミン、ヒヨスチアミン、オキシブチニン、及びジシクロミンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２６５】
潰瘍を治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、水酸化アルミニウム、水酸化マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、及び炭酸カルシウムのような制酸剤；スクラフレート；次サリチル酸ビスマス及び次クエン酸ビスマスのようなビスマス化合物；シメチジン、ラニチジン、ファモチジン、及びニザチジンのようなＨ２拮抗薬；オメプラゾール、ランソプラゾール（lansoprazole）、及びランソプラゾールのようなＨ＋，Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅ阻害薬；カルベノロキソン；ミソプロストール；並びにテトラサイクリン、メトロニダゾール、チミダゾール（timidazole）、クラリスロマイシン、及びアモキシシリンのような抗性剤を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２６６】
ＩＢＤを治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、抗コリン性ドラッグ；ジフェノキシレート；ロペラミド；脱臭アヘンチンキ；コデイン；メトロニダゾールのような広域抗生物質；スルファサラジン；オルサラジン（olsalazine）；メサラミン；プレドニゾン；アザチオプリン；メルカプトプリン；及びメトトレキサートを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２６７】
ＩＢＳを治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、プロパンテリン；ピレンゼピン（pirenzepine）のようなムスカリン受容体拮抗薬（antagonists）、メトクトラミン、イプラトロピウム、チオトロピウム、スコポラミン、メトスコポラミン、ホマトロピン、ホマトロピンメチルブロミド、及びメタンテリン；並びにジフェノキシレート及びロペラミドのような止瀉薬を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２６８】
嗜癖障害を治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、メタドン、デシプラミン、アマンタジン、フルオキセチン、ブプレノルフィン、オピエート作用薬、３−フェノキシピリジン、塩酸レボメサジルアセテート、及びセロトニン拮抗薬を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２６９】
パーキンソン病及びパーキンソン症候群を治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、カルビドパ／レボドパ、ペルゴリド、ブロモクリプチン、ロピニロール、プラミペキソール、エンタカポン、トルカポン、セレギリン、アマンタジン、ジフェンヒドラミン、アポモルヒネ、エトプロパジン、メタンスルホン酸ベンズトロピン、レルゴトリル（lergotrile）、ビペリデン、リスリド、メチキセン、クロルフェノキサミン、オルフェナドリン、サイクリミン、プロシクリジン、デキセチミド、トリヘキシフェニジル、及びトリヘキシフェニジル塩酸塩を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２７０】
不安を治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、アルプラゾラム、ブロチゾラム、クロルジアゼポキシド、クロバザム、クロナゼパム、クロラゼペート、デモキセパム、ジアゼパム、エスタゾラム、フルマゼニル、フルラゼパム、ハラゼパム、ロラゼパム、ミダゾラム、ニトラゼパム、ノルダゼパム、オキサゼパム、プラゼパム、クアゼパム、テマゼパム、及びトリアゾラムのようなベンゾジアゼピン；ブスピロン、ゲピロン、イプサピロン、チオスピロン、ゾルピコン、ゾルピデム、及びザレプロンのような非ベンゾジアゼピン薬；バルビツレート（barbiturates）のような精神安定薬、例えばアモバルビタール、アプロバルビタール、ブタバルビタール、ブタルビタール、メフォバルビタール、メトヘキシタール、ペントバルビタール、フェノバルビタール、セコバルビタール、及びチオペンタール；並びにメプロバメート及びチバメートのようなプロパンジオールカーバメートを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２７１】
てんかんを治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、カルバマゼピン、エトスクシミド、ガバペンチン、ラモトリギン（lamotrigine）、フェノバルビタール、フェニトイン、プリミドン、バルプロ酸、トリメタジオン、ベンゾジアゼピン類、ガバペンチン、ラモトリジン、γ−ビニルＧＡＢＡ、アセタゾールアミド、及びフェルバメートを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２７２】
脳卒中を治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、ヘパリンのような血液凝固阻止剤、ストレプトキナーゼ又は組織プラスミノーゲン活性化因子のような血塊を粉砕する薬、マンニトール又はコルチコステロイド及びアセチルサリチル酸のような腫脹を低減する薬を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２７３】
癲癇発作を治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、カルバマゼピン、エトスクシミド、ガバペンチン、ラモトリグニン、フェノバルビタール、フェニトイン、プリミドン、バルプロ酸、トリメタジオン、ベンゾジアゼピン（benzodiazepines）、ガバペンチン、ラモトリジン、γ−ビニルＧＡＢＡ、アセタゾラミド、及びフェルバメートを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２７４】
掻痒状態を治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、ナルトレキソン；ナルメフェン；ダナゾール；アミトリプチン、イミプラミン、及びドキセピンのような三環性化合物；以下に挙げる抗うつ薬、メントール；カンファー；フェノール；プラモキシン；カプサイシン；タール；ステロイド；並びに抗ヒスタミン剤を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２７５】
精神病を治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、クロルプロマジン塩酸塩、メソリダジンベシル酸塩、及びチオリダジン（thioridazine）塩酸塩のようなフェノチアジン；クロルプロチキセン及びチオチキセン塩酸塩のようなチオキサンテン；クロザピン；リスペリドン；オランザピン；クエチアピン；クエチアピンフマル酸塩；ハロペリドール；ハロペリドールデカン酸塩；ロキサピンコハク酸塩；モリンドン塩酸塩；ピモジド；並びにジプラシドンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２７６】
ハンチントン舞踏病を治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、ハロペリドール及びピモジドを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２７７】
ＡＬＳを治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、バクロフェン、神経栄養因子、リルゾール、チザニジン、クロナゼパム（clonazepam）のようなベンゾジアゼピン類及びダントロレンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２７８】
認知障害を治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、タクリンのような痴呆を治療又は予防する薬；ドネペジル；イブプロフェン；チオリダジン及びハロペリドールのような抗精神病薬；並びに上で挙げたような抗うつ剤を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２７９】
偏頭痛を治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、スマトリプタン；メチセルジド；エルゴタミン；カフェイン；並びにプロプラノロール、ベラパミル、及びジバルプロエクスのようなβ遮断薬を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２８０】
嘔吐を治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、オンダンセトロン、ドラセトロン、グラニセトロン、及びトロピセトロンのような５−ＨＴ３受容体拮抗薬；プロクロルペラジン、チエチルペラジン、クロルプロマジン、メトクロプラミド、及びドンペリドンのようなドパミン受容体拮抗薬；デキサメタゾンのようなグルココルチコイド；並びにロラゼパム及びアルプラゾラムのようなベンゾジアゼピンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２８１】
運動機能異常を治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、レセルピン及びテトラベナジンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２８２】
うつ病を治療又は予防するのに有用な治療剤の例は、アミトリプチリン、アモキサピン、ブプロピオン、クロミプラミン、デシプラミン、ドキセピン、イミプラミン、マプロチリン（maprotiline）、ネファザドン、ノルトリプチリン、プロトリプチリン、トラゾドン、トリミプラミン、及びベンラフラキシンのような三環系抗うつ薬；シタロプラム、（Ｓ）−シタロプラム、フルオキセチン、フルボキサミン、パロキセチン、及びセルトラリンのような選択的セロトニン再取り込み阻害薬；イソカルボキサジド、パルギリン、フェネルジン、及びトラニルシプロミンのようなモノアミン酸化酵素阻害薬；並びにデキストロアンフェタミン及びメチルフェニデートのような神経興奮薬を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２８３】
他の有用な薬学的化合物の例は、コルチゾール、デスオキシコルチコステロン及びフルロヒドロコルチゾンのような鉱質コルチコステロイド、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、コルチゾン、デキサメタゾン、フルオシノロン、フルオシノニド、フルオコルトロン、フルオロメトロン、フルプレドニソロン、フルランドレノリド、ハルシノニド、ヒドロコルチゾン、メドリゾン、メチルプレドニゾロン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン及びトリアムシノロン（アセトナイド）のような副腎皮質ステロイド（glucocorticosteroids）、ダナゾール、フルオキシメステロン、メステロロン、メチルテストステロン、及びテストステロン並びにその塩のような治療に用いられるアンドロゲンステロイド、カルステロン、ナンドロロン及びその塩、ドロモスタノロン、オキサンドロロン、エチルエストレノール、オキシメトロン、メタンドリオール、スタノゾロール、メタンドロステノロン及びテストラクトンのような治療に用いられる蛋白同化ステロイド、酢酸シプロテロンのような抗アンドロゲン物質を含むアンドロゲン、ジエチルスチルベストロール、エストラジオール、エストリオール、エチニルエストラジオール、メストラノール又はキネストロールのような治療に用いられるエストロゲンステロイド、クロロトリアニセン、クロミフェン、エタモキシトリフェトール、ナフォキシジン及びタモキシフェンのような抗エストロゲン物質、アリルエストレノール、デソゲストレル、ジメチステロン、ジドロゲステロン、エチニルエストレノール、エチステロン、二酢酸エチノジオール、エチノジオール、ヒドロキシプロゲステロン、レボノルゲストレル、リネストレノール、メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、ノルエチンドロン、ノルエチステロン、ノルエチノドレル、ノルゲストレル、及びプロゲステロンのようなプロゲスチン類を含むエストロゲンを含むコルチコステロイド群に属することができるが、これに限定されない。
【０２８４】
薬学的に活性のある化合物は、ペプチド又はタンパク質、例えばリゾチーム等の酵素でもあり得る。「ペプチド」、「ポリペプチド」又は「タンパク質」という用語は区別なく使用することができる。ペプチド又はタンパク質が装填するのに好適であるか否か、すなわち水溶性であり、かつ／又は所定のｐＨ値で正味電荷を保有するか否かを決定する方法は当業者にとって既知である、例えばF. Lottspeich/ Z. Zorbas［Lottspeich, F.; Zorbas, H.（Hrsg.）Bioanalytik Spektrum Akademischer Verlag: Heidelberg,. 1998］に記載されている。比較的小さいペプチドは、アミノ酸の数により表すことができる（例えばジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド）。比較的小さい数のアミド結合を有するペプチドは、オリゴペプチド（最大５０個のアミノ酸）と呼ぶこともでき、比較的大きい数のアミド結合を有するペプチド（５０個を超えるアミノ酸）はポリペプチド又はタンパク質と呼ぶことができる。アミノ酸残基のポリマーであることに加えて、或る特定のタンパク質は、必ずしもアミド結合により化学結合していなくてもよいが、静電気力及びファンデルワールス力等の当業者に一般的に知られている力により結合されている多くのポリペプチドの集合体、いわゆる四次構造を更に特徴とし得る。ペプチド、タンパク質又はそれらの混合物という用語は、本明細書で使用される場合、上述の可能性のあるものを全て包含するものとする。通常、タンパク質及び／又はペプチドはその生体活性に基づき選択される。
【０２８５】
本発明によるシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子上に、及び／又は本発明によるシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子中に有利に装填することができる、ペプチド若しくはタンパク質、又はペプチド若しくはタンパク質を含むエンティティの他の例は、以下のものを含む免疫原性ペプチド又は免疫原性タンパク質を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２８６】
有用な毒素の例は、ジフテリア毒素及び破傷風毒素を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２８７】
有用なウイルス表面抗原又はウイルス部分の例は、アデノウイルス、エプスタイン・バーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、インフルエンザウイルス、日本脳炎ウイルス、麻疹ウイルス、パピローマウイルス、パラミクソウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス（RabiesVirus）、風疹ウイルス、ワクシニア（天然痘）ウイルス及び黄熱病ウイルスを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２８８】
有用なタンパク質の例は、ボルデテラ・ペルツッシス（Bordetella pertussis：百日咳菌）、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacterpylori）、クロストリジウム・テタニ（Clostridium tetani：破傷風菌）、コリネバクテリウム・ジフテリア（Corynebacteriumdiphtheria：ジフテリア菌）、大腸菌、ヘモフィルス・インフルエンザ（Haemophilusinfluenza：インフルエンザ菌）、クレブシエラ属、レジオネラ・ニューモフィラ（Legionellapneumophila）、マイコバクテリウム・ボビス（Mycobacterium bovis）、マイコバクテリウム・レプレ（Mycobacterium leprae）、マイコバクテリウム・ツベルクローシス（Mycobacteriumtuberculosis）、ナイセリア・ゴノレエ（Neisseria gonorrhoeae）、ナイセリア・メニンギチジス（Neisseria meningitidis）、プロテウス属、シュードモナス・エルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）、サルモネラ属、赤痢菌属、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Streptococcuspyogenes）、ビブリオ・コレラ（Vibrio cholera）若しくはエルシニア・ペスティス（Yersinia pestis）等の細菌表面抗原又は細菌部分の群に属するが、これに限定されない。
【０２８９】
有用なタンパク質の例は、プラスモディウム・ビバックス（Plasmodium vivax）（マラリア）、プラスモディウム・パルシパルム（Plasmodiumfalciparum：熱帯熱マラリア原虫）（マラリア）、プラスモディウム・オバレ（Plasmodiumovale：卵形マラリア原虫）（マラリア）、プラスモディウム・マラリアエ（Plasmodiummalariae：四日熱マラリア原虫）（マラリア）、リーシュマニア・トロピカ（Leishmaniatropica）（リーシュマニア症）、リーシュマニア・ドノバニ（Leishmania donovani）（リーシュマニア症）、リーシュマニア・ブラジリエンシス（Leishmania branziliensis）（リーシュマニア症）、トリパノソーマ・ローデシエンス（Trypanosoma rhodescense）（睡眠病）、トリパノソーマ・ガンビエンス（Trypanosoma gambiense）（睡眠病）、トリパノソーマ・クルジ（Trypanosomacruzi）（シャガス病）、シストソーマ・マンソニ（Schistosoma mansoni）（住血吸虫症）、シストソーマ・ヘマトビウム（Schistosomahaematobium）（住血吸虫症）、シストソーマ・ジャポニカム（Schistosomajaponicum）（住血吸虫症）、トリチネラ・スピラリス（Trichinella spiralis）（旋毛虫病）、ストロンギロイデス・デュオデナレ（Stronglyloides duodenale）（鉤虫症）、アンシクロストーマ・デュオデナレ（Ancyclostoma duodenale）（鉤虫症）、ネカトール・アメリカヌス（Necatoramericanus）（鉤虫症）、ブケレリア・バンクロフチ（Wuchereria bancrofti）（フィラリア症）、ブルギア・マレー（Brugia malayi）（フィラリア症）、ロア・ロア（Loa loa）（フィラリア症）、ジペタロネーマ・ペルスタリス（Dipetalonemaperstaris）（フィラリア症）、ドラクンクルス・メジネシス（Dracunculus medinensis）（フィラリア症）、若しくはオンコセルカ・ボルブルス（Onchocerca volvulus）（フィラリア症）等の疾患を引き起こす寄生生物の表面抗原又は寄生生物部分の群に属するが、これに限定されない。
【０２９０】
有用なタンパク質の例は、ボツリヌス抗毒素、ジフテリア抗毒素、ガス壊疽抗毒素及び破傷風抗毒素等の抗毒素の群に属するが、これに限定されない。
【０２９１】
有用なタンパク質の例は、口蹄疫に対する免疫応答を誘起する抗原の群に属するが、これに限定されない。
【０２９２】
有用なタンパク質の例は、ホルモン及び成長因子、例えば卵胞刺激ホルモン、プロラクチン、アンギオジェニン、上皮成長因子、カルシトニン、エリスロポイエチン、甲状腺刺激放出ホルモン（thyrotropicreleasing hormone）、インスリン、成長ホルモン、１型及び２型インスリン様成長因子、骨格成長因子、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、黄体形成ホルモン、神経成長因子、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）、バソプレシン、コレシストキニン、及びコルチコトロピン放出ホルモン；サイトカイン、例えばインターフェロン、インターロイキン、コロニー刺激因子及び腫瘍壊死因子；線維素溶解酵素、例えばウロキナーゼ；腎臓プラスミノーゲン活性化因子；並びに凝固因子、例えばプロテインＣ、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第ＶＩＩ因子又は抗トロンビンＩＩＩの群に属するが、これに限定されない。
【０２９３】
他のタンパク質又はペプチドの例は、アルブミン、心房性ナトリウム利尿因子、レニン、スーパーオキシドジスムターゼ、α１−抗トリプシン、肺界面活性剤タンパク質、バシトラシン、ベスタチン、シクロスポリン（cyclosporine）、δ睡眠誘導ペプチド（ＤＳＩＰ）、エンドルフィン、グルカゴン、グラミシジン、メラニン細胞阻害因子、ニューロテンシン、オキシトシン、ソマトスタチン（somatostatin）、テプロチド（teprotide）、血清胸腺因子（serumthymic factor）、サイモシン、ＤＤＡＶＰ、デルモルフィン、Ｍｅｔ−エンケファリン、ペプチドグリカン、サチエチン、チモペンチン、フィブリン分解産物、ｄｅｓ−エンケファリン−α−エンドルフィン、ゴナドトロピン放出ホルモン、ロイプロリド、α−ＭＳＨ又はメトケファミドの群に属するが、これに限定されない。
【０２９４】
好ましい有用な治療剤は、テトラカイン、プロカイン、パパベリン、エフェドリン、プロプラノロール（propranolol）及び乳酸エタクリジン（ethacridinelactate）からなる群から選択される。
【０２９５】
本明細書で使用される場合、「化粧品物質」及び「化粧品化合物」という用語は、区別なく使用することができ、外見若しくは体臭を変えるため、若しくは香りを運ぶためのクリーニング及び個人衛生用のヒトの身体上での又は口腔内への外用が主に意図される物質を示す。特に、化粧品物質は或る特定の予測可能な効果を示す分子であることが意味される。このような効果のある分子は例えば、酵素等のタンパク質性分子、又は色素、顔料、光保護剤、ビタミン、プロビタミン、抗酸化剤、調整剤、若しくは金属イオンを含む化合物等の非タンパク質性分子であり得る。
【０２９６】
タンパク質性分子の中でも、酵素及び抗体が好ましい。有用な酵素の例は、オキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、プロテアーゼ、グルカナーゼ、ムタナーゼ、チロシナーゼ、ラッカーゼ、金属結合酵素、ラクトペルオキシダーゼ、リゾチーム、アミノグリコシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、ホトリアーゼ、Ｔ４エンドヌクレアーゼ、カタラーゼ、チオレドキシン又はチオレドキシン−レダクターゼを含む群に属するが、これに限定されない。
【０２９７】
酵素機構を有しないタンパク質性物質も望ましい。非酵素タンパク質性分子の例は、抗微生物ペプチド、ヒドロホビン、コラーゲン、カロテノイドと結合するタンパク質、重金属と結合するタンパク質、オドラントと結合するタンパク質、セルロースと結合するタンパク質、デンプンと結合するタンパク質、又はケラチンと結合するタンパク質を含む群に属するが、これに限定されない。
【０２９８】
有用なタンパク質性分子の例は、植物起源又は動物起源のタンパク質加水分解物を含む群に属するが、これに限定されない。例えば、タンパク質加水分解物は海洋起源のものであり得る。
【０２９９】
化粧品化合物はさらにＵＶ保護フィルターであり得る。これらは定義によるとＵＶ波長の範囲で特定の波長を吸収することができる有機物質である。その後吸収されたエネルギーをより長波の放射、例えば熱の形で放出することができる。
【０３００】
好適な水溶性ＵＶ保護フィルターの例は、２−フェニル−ベンズイミダゾール−５−スルホン酸及びそのアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、アルカリアンモニウム塩、アルカノールアンモニウム塩及びグルコアンモニウム（glucammonium）塩、ベンゾフェノン（benzophenones）のスルホン酸誘導体、例えば２−ヒドロキシ（hydroxy）−４−メトキシベンゾフェン−５−スルホン酸及びその塩、３−ベンジリデンカンファーのスルホン酸誘導体、例えば４−（２−オキソ−３−ボルニリデン−メチル）ベンゼンスルホン酸及び２−メチル−５−（２−オキソ−３−ボルニリデン）−スルホン酸及びそれらの塩、桂皮酸のエステル、例えば４−メトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、４−メトキシ桂皮酸イソペンチル若しくは２−シアノ−３−フェニル桂皮酸２−エチルヘキシル（オクトクリレン）、ベンゾフェンの誘導体、例えば２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェン（methoxybenzophene）、２−ヒドロキシ−４−メトキシ−４’−メチル−ベンゾフェノン及び２，２’−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、又はプロパン−１，３−ジオン、例えば１−（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）−３−（４’−メトキシフェニル）プロパン−１，３−ジオンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０３０１】
化粧品化合物は皮膚に浸透すると、ＵＶ放射により誘起される光化学反応連鎖を妨げる抗酸化剤タイプの二次的な保護剤も含み得る。代表例は、スーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、トコフェロール（ビタミンＥ）、コエンザイムＱ１０、ユビキナン（ubiquinanes）、キニオン（quiniones）及びアスコルビン酸（ビタミンＣ）を含む群に属するが、これに限定されない。
【０３０２】
化粧品化合物はビタミン、プロビタミン又はそれらの前駆体でもあり得る。これらの例は、β−カロテン（ビタミンＡのプロビタミン）、アスコルビン酸（ビタミンＣ）、トコフェロール、ビタミンＢ群のビタミン、プロビタミン若しくは前駆体又はそれらの誘導体、例えばビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）若しくは立体異性体リキソフラビン、ビタミンＢ３（ニコチン酸又はニコチンアミド）、ビタミンＢ５（パントテン酸及びパンテノール）及びそれらの誘導体、例えばエステル、エーテル及びカチオンにより誘導体化された（cationically derivatized）パンテノール、２−フラノンの誘導体、例えばジヒドロ−３−ヒドロキシ−４，４−ジメチル−２（３Ｈ）−フラノン（パントラクトン）、４−ヒドロキシメチル−γ−ブチロラクトン、３，３−ジメチル−２−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトン及び２，５−ジヒドロ−５−メトキシ−２−フラノン及びその立体異性体、ビタミンＢ６、例えば５−ヒドロキシメチル−２−メチルピリジン−３−オールの誘導体（ピリドキシン、ピリドアサミン（pyridoasamine）又はピリドキサールとしても知られる）、並びにビタミンＢ７（ビオチン）を含む群に属するが、これに限定されない。
【０３０３】
有用な化粧品化合物の例は、チロシン及びシステイン等のアミノ酸、並びにその誘導体と、タンニンとを含む抗酸化剤の群に属するが、これに限定されない。
【０３０４】
有用な化粧品化合物の例は、ピリジン−２−チオール−３−カルボン酸、２−メトキシピリミジノールカルボン酸及び２−ジメチルアミノピリジンカルボン酸を含む過酸化物分解剤の群に属するが、これに限定されない。
【０３０５】
化粧品化合物は、食品色素、半永久的な色素、反応性色素又は酸化色素等の色素も含み得る。有用な色素の例は例えば、Rowe Colour Index, 3rd edition, Society of Dyers andColourists, Bradford, England, 1971に記載されている。
【０３０６】
本明細書で使用される場合、「農業用物質」、「農業用化合物」及び「農業用活性成分」という用語は、区別なく使用することができ、一次産業（primary produce）の製品（農作物（farmed plants）又は動物）に使用される化学物質（獣医用の薬を含む）を意味する。これらの用語は家庭園芸家によっても、並びにネコ及びイヌ等の家畜の健康に関しても使用される。農業用化合物は任意の天然化合物又は合成化合物であってもよく、獣医用の薬、肥料及び農薬等の物質を含み得る。
【０３０７】
農業用活性成分は、殺虫剤、抗線虫剤、抗カビ剤及び除草剤、並びに場合によっては軟体動物駆除剤及び殺鼠剤等の群から選択される農薬であり得る。
【０３０８】
有用な農業用活性成分の例は、有機リン酸エステル、カルバミン酸エステル、ベンズイミダゾール、ジカルボキシアミド、ビピリドール（bipyridols）、ピレスロイド及び塩素化炭化水素を含む群に属するが、これに限定されない。
【０３０９】
有用な有機リン酸エステルの例は、アジンホスメチル、ジメトエート、エチルパラチオン、トリクロルホン、ジブロム、ジメクロン、メビンホス及びモノクロトホスを含む群に属するが、これに限定されない。
【０３１０】
有用なカルバミン酸エステルの例は、メトミル、オキサミル、アルジカルブ、カルボフラン、フェノキシカルブ、カルバリル、エチオノカルブ（ethionocarb）及びフェノキシカルブを含む群に属するが、これに限定されない。
【０３１１】
有用なベンズイミダゾールの例は、ベノミル、カルベンダズ（carbendaz）又はチオファネート−メチルを含む群に属するが、これに限定されない。
【０３１２】
有用なジカルボキシアミドの例は、ビンクロゾリン、イプロジオン、プロシミドン又はキャプタンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０３１３】
有用なビピリドールの例は、パラコート及びジクワットを含む群に属するが、これに限定されない。
【０３１４】
農業用化合物はピレスロイドでもあり得る。有用なピレスロイドの例としては、シペルメトリン、又はＤＤＴ、ジコホール、ヘプタクロル、エンドスルファン、クロルダン、アルドリン、ジエルドリン、エンドリン、マイレックス及びペンタクロロフェノール等の塩素化炭化水素を含む群に属するが、これに限定されない。
【０３１５】
農業用化合物は尿素等の合成有機肥料でもあり得る。
【０３１６】
「化学誘引物質」という用語は、運動性細胞における走化性誘導因子効果を有する有機物質又は無機物質を意味する。化学誘引物質の効果は記載の又は仮定の走化性受容体を介して誘起され、リガンドの化学誘引物質部は標的細胞特異的であり、濃度依存的である。最も頻繁に研究されている化学誘引物質はホルミルペプチド及びケモカインである。
【０３１７】
ケモカインは小さいサイトカイン、すなわち細胞により分泌されるタンパク質のファミリーである。該タンパク質は小さいサイズ（８ｋＤ〜１０ｋＤのサイズ）等の共通の構造的特質、及びそれらの三次元形状を形成するのに重要な保存位置における４つのシステイン残基の存在に従ってケモカインに分類される。
【０３１８】
有用なケモカインの例は、Ｉ−３０９、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＲＡＮＴＥＳ、Ｃ１０（ＭＲＰ−２）、ＭＡＲＣ（ＭＣＰ−３）、ＭＣＰ−２、ＭＲＰ−２、エオタキシン、ＭＣＰ−５、ＭＣＰ−４、ＨＣＣ−１、ロイコタクチン−１、ＬＥＣ（ＮＣＣ−４）、ＴＡＲＣ、ＰＡＲＣ、ＥＬＣ、ＬＡＲＣ、ＳＬＣ、ＭＤＣ、ＭＰＩＦ−１、エオタキシン−２、ＴＥＣＫ、エオタキシン−３、ＣＴＡＣＫ又はＭＥＣ等のＣＣ−ケモカイン（又はβ−ケモカイン）、Ｇｒｏ−α、Ｇｒｏ−β、Ｇｒｏ−γ、ＰＦ−４、ＥＮＡ−７８、ＧＣＰ−２、ＮＡＰ−２、ＩＬ−８、ＭＩＧ、ＩＰ−１０、Ｉ−ＴＡＣ、ＳＤＦ−１、ＢＣＡ−１、ＢＲＡＫ、Ｌｕｎｇｋｉｎｅ、ＳＲＰＤＯＣ又はＶＣＣ−１等のＣＸＣケモカイン（又はα−ケモカイン）、リンホタクチン（lymphotactin）α及びリンホタクチンβ等のＣ−ケモカイン、並びにフラクタルカイン等のＣＸ３Ｃ−ケモカインを含むケモカインファミリー（family）の群に属するが、これに限定されない。
【０３１９】
本明細書で使用される場合、「化学忌避物質」は負の遊走効果を発現する物質である。これらは通常、遊走能を有する原核細胞、すなわち反発刺激（repellant stimulus）から離れて移動することができる細胞に反発する（又は化学反発する）ことが可能な化合物である。
【０３２０】
有用な化学忌避物質の例は、アミノ酸及びＩＬ−８又はＳＤＦ−１等のケモカインを含む群に属するが、これに限定されない。
【０３２１】
「抗真菌物質」又は「殺真菌剤」という用語を区別なく使用することができる。定義によると、殺真菌剤は真菌又は真菌胞子を阻害する化学化合物である。殺真菌剤は農業において、また動物で真菌感染に対抗するための両方で使用される物質（抗真菌薬物）であると意味される。真菌ではない卵菌綱を制御するのに使用される化学物質も、卵菌綱が植物に感染するのに真菌と同じ機構を使用するため、殺真菌剤と称される。
【０３２２】
有用な（useful）抗真菌薬物の例は、ナタマイシン、リモシジン、フィリピン、ナイスタチン、アンホテリシンＢ又はカンジシン等のポリエン殺真菌剤、ミコナゾール、ケトコナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、ビホナゾール、ブトコナゾール（butoconazole）、フェンチコナゾール、イソコナゾール、オキシコナゾール、セルタコナゾール、スルコナゾール、チオコナゾール又はグレソフルイン（gresofluin）等のイミダゾール、フルコナゾール、イトラコナゾール、イサブコナゾール（isavuconazole）、ラブコナゾール、ポサコナゾール、テルコナゾール又はボリコナゾール等のトリアゾール、アバファンギン等のチアゾール、テリナフィン（terinafine）、アモロルフィン、ナフチフィン又はブナフィン（bunafine）等のアリルアミン、アニデュラファンギン、カスポファンギン又はミカファンギン等のエキノカンジンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０３２３】
他の抗真菌薬物の例は、シクロピロクスオラミン、トルナフテート、フルシトシン、グリセオフルビン又はハロプロジンを含む群に属するが、これに限定されない。
【０３２４】
本明細書で使用される場合、「栄養素」は、生物が生存及び成長に必要とする化学物質、又はその環境から摂取しなければならない生物の代謝に使用される物質である。有機栄養素には、炭水化物、脂肪、タンパク質（アミノ酸）及びビタミンが含まれる。無機栄養素はミネラル栄養素、水及び酸素である。好ましい栄養素は炭水化物、アミノ酸又はタンパク質等の主要栄養素及びビタミン等の微量栄養素である。
【０３２５】
有用な炭水化物（carbohydrates）の例は、グリセルアルデヒド、エリトロース、トレオース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトース、タロース、ジヒドロキシアセトン、エリトルロース、リブロース、キシルロース、プシコース、フルクトース、ソルボース、タガトース若しくはそれらの立体異性体等の単糖類、ガラクトサミン、グルコサミン、シアル酸、Ｎ−アセチルグルコサミン等のアミノ糖、スルホキノボース等のスルホ糖、スクロース、ラクツロース、ラクトース、マルトース、トレハロース若しくはマルトビオース等の二糖類、又はフルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）若しくはマンナン−オリゴ糖（ＭＯＳ）等のオリゴ糖の（of）群に属するが、これに限定されない。
【０３２６】
「健康補助食品」、「補助食品（food supplement）」又は「栄養補助食品」という用語は、本明細書で使用される場合、人間の食事において十分な量を欠く又は十分な量摂取されない、ビタミン、ミネラル、繊維、脂肪酸又はアミノ酸等の栄養素を補う（intendended）調製物を表す。国によって、健康補助食品は食品又は薬物のいずれかとして規定される。
【０３２７】
他の健康補助食品の例は、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ），プレグネノロン又はそれらの誘導体等のステロイド、メラトニン等のホルモン、及び硫酸ヒドラジン、カフェイン（１，３，７−トリメチルキサンチン）、カテキン、ダイズイソフラボン、グルコサミン、コエンザイム−Ｑ１０、エフェドリンタイプのアルカロイド（例えばエフェドラ又はエフェドリン）、シネプリン、ノルエフェドリン、又はプソイドエフェドリン（pseudoephedrine）等の他の物質を含む群に属するが、これに限定されない。
【０３２８】
「色素」という用語は、本明細書で使用される場合、適用される基質に対する親和性を有する着色物質を表す。色素は一般的に水溶液で適用される。これに対して、顔料は通常、不溶性であり、基質に対する親和性を有しない。色素及び顔料は両方とも、その特定の波長の光を吸収する能力のために着色されていると考えられる。色素は自然発生的な又は合成の有機色素又は食用色素であり得る。
【０３２９】
有用な色素の例は、アクリジンオレンジ又はアクリジンイエロー等のアクリジン色素、アリザリン、アントラプルプリン、カルミン酸、ディスパースレッド１１、ディスパースレッド９、インダスレンブルーＲＳ、モリンドン、オイルブルー３５、オイルブルーＡ、キニザリングリーンＳＳ、ソルベンバイオレット１３若しくはバットイエロー４等のアントラキノン色素、ジアリールメタン色素オーラミンＯ等のジアリールメタン色素、又はアルミノン、アニリンブルーＷＳ、アウリン、ブリリアントブルーＦＣＦ、ブリリアントグリーン、ブロモクレゾールグリーン、ブロモクレゾールパープル、ブロモフェノールブルー、ブロモチモールブルー、ブロモスルフタレイン、クロロフェノールレッド、クロモキサンシアニンＲ、クマシー、クレゾールレッド、クリスタルバイオレットラクトン、エチルグリーン、ファストグリーンＦＣＦ、フルオラン、フクシン、フクシン酸、グリーンＳ、ライトグリーンＳＦイエロウィッシュ、マラカイトグリーン、メチルバイオレット、メチルブルー、メチルローザニリン、ニューフクシン、パラローザニリン、パテントブルーＶ、フェノールレッド、フェノールフタレイン、ローズベンガル、チモールフタレイン、ビクトリアブルーＢＯ、キシレンシアノール又はキシレノールオレンジ等のトリアリールメタン色素、アリザリンイエローＲ、アルラレッドＡＣ、アマラント、アミドブラック１０Ｂ、アニリンイエロー、アゾルビン、ビエブリッチスカーレット、ビスマルクブラウンＹ、ブラック７９８４、ブリリアントブラックＢＮ、ブラウンＦＫ、ブラウンＨＴ、クリソインレゾルシノール、シトラスレッド２、コンゴレッド、Ｄ＆Ｃレッド３３、ディスパースオレンジ１、エリオクロムブラックＴ、ファストイエローＡＢ、ヒドロキシナフトールブルー、ヤヌスグリーンＢ、リトールルビンＢＫ、リチオールルビンＢＫ、メチルオレンジ、メチルレッド、メチルイエロー、モルダントレッド１９、オイルレッドＯ、オイルイエローＤＥ、オレンジＢ、オレンジＧ、オレンジＧＧＮ、パラレッド、ポンソー２Ｒ、ポンソー４Ｒ、ポンソー６Ｒ、ポンソーＳ、プロントジル、レッド２Ｇ、スカーレットＧＮ、ソルベントレッド１６４、ソルベントレッド２６、ソルベントイエロー１２４、スーダンブラックＢ、スーダンＩ、スーダンＩＩ、スーダンＩＩＩ、スーダンＩＶ、スーダンレッド７Ｂ、スーダンレッドＧ、スーダンイエロー３Ｇ、スーダンイエローＦＣＦ、タートラジン、トロペオリンＯＯ、トロペオリンＯＯＯ又はトリパンブルー等のアゾ色素、アルシアンブルー、ルクソールファストブルー、ダイレクトブルー８６、ダイレクトブルー１９９、フタロシアニンブルーＢＮ又はフタロシアニングリーンＧＮ等のシアニン（cyanine）色素（又はフタロシアニン）、ニュートラルレッド又はサフラニン等のアジン色素、ピクリン酸及びマルティウスイエロー等のニトロ色素、ジクロロフェノールインドフェノール等のインドフェノール（indophenol）色素、ナイルブルー、ナイルレッド、ガロシアニン、ガラミンブルー又はセレスチンブルー等のオキサジン色素、メチレンブルー又はニューメチレンブルー又はトルイジンブルーＯ等のチアジン色素、キサンテン色素若しくはフルオレセインを���むその誘導体、エオシンＹ及びエオシンＢ等のエオシン、及びローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、ローダミン１２３等のローダミン、ピロニンＢ及びピロニンＹ等のピロニン色素、テトラメチルローダミン（ＴＡＭＲＡ）及びそのイソチオシアネート誘導体（ＴＲＩＴＣ）、スルホローダミン１０１及びその塩化スルホニル形態、テキサスレッド及びローダミンレッド、アレクサ色素、例えばアレクサ５４６、アレクサ５５５、アレクサ６３３、若しくはディライト色素、例えばディライト５４９、ディライト６３３等の最新のフルオロフォア、又はそれらの混合物の群に属するが、これに限定されない。
【０３３０】
「香料」、「オドラント」、「アロマ」、「アロマ化合物」又は「香味料」という用語は、区別なく使用することができ、匂い又は香りを有する化学化合物を表す。通常、化学化合物は該化合物が本質的に揮発性である場合に匂い又は香りを有し、揮発することで該化合物が鼻腔の上部にある嗅神経に十分高い濃度で運ばれ、１つ又は複数の嗅覚受容体と相互作用することができる。
【０３３１】
有用なアロマ化合物の例は、ギ酸メチル、酢酸メチル、酪酸メチル、酢酸エチル、酪酸エチル、酢酸イソアミル、酪酸ペンチル、ペンタン酸ペンチル、酢酸オクチル、フラクトン、酢酸ヘキシル（hexyl）又はメチルフェニルグリシド酸エチル等のエステル、ミルセン、ゲラニオール、ネロール、シトラール、シトロネラール、シトロネロール、リナロール又はネロリドール等のテルペン、リモネン、カンファー、テルピネオール、α−イオノン、テルピネオール又はツジョン等の環状テルペン、ベンズアルデヒド、オイゲノール、シンナムアルデヒド、エチルマルトール、バニリン、アニソール、アネトール、エストラゴール又はチモール等の芳香族化合物、トリメチルアミン、プトレッシン、カダベリン、ピリジン、インドール又はスカトール等のアミン、フラネオール、１−ヘキサノール、シス−３−ヘキセン−１−オール又はメントール等のアルコール、アセトアルデヒド、ヘキサナール、シス−３−ヘキセナール又はフルフラール等のアルデヒド、ジヒドロジャスモン、オクタ−１−エン−３−オン、２−アセチル−１−ピロリン又は６−アセチル−２，３，４，５−テトラヒドロピリジン等のケトン、γ−デカラクトン、γ−ノナラクトン、δ−オクタラクトン（octalactone）、ジャスミンラクトン、マッソイアラクトン、ワインラクトン又はソトロン等のラクトン、エタンチオール、ネロリン、テトラヒドロチオフェン、２，４，６−トリクロロアニソール又は置換ピラジン等のチオール、及びそれらの混合物の群に属するが、これに限定されない。
【０３３２】
化合物はスルマリン、カルバゾクロム、エタンシラート、デベシル酸カルシウム、エスクラミン、オキサマリン、オルニプレシン、デスモプレシン、フェリプレッシン、オクトレオチド、ポリグルサム（poliglusam）又はアプロチニン等の止血剤のような任意の他の作用物質でもあり得る。
【０３３３】
有用な他の止血化合物の例は、カリウム硫酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、鉄硫酸アルミニウム、硫酸アンモニウムアルミニウム、塩化鉄、塩化アルミニウム、塩化ナトリウム、塩化亜鉛、フェノール硫酸亜鉛、タンニン酸及びアドレナリン等の様々な好適な水和物を含む群に属するが、これに限定されない。
【０３３４】
他の作用物質は成長刺激剤でもあり得る。「成長刺激剤」、「成長因子」及び「成長ホルモン」という用語は区別なく使用することができ、細胞成長、増殖及び細胞分化を刺激することが可能な物質を表す。通常これらの作用物質はタンパク質又はステロイドホルモンである（are）。成長因子は多様な細胞プロセスを調節するのに重要である。成長因子は通常、細胞間のシグナル伝達分子として作用する。例としては、それらの標的細胞の表面上の特定の受容体と結合するサイトカイン及びホルモンである。
【０３３５】
好適な成長刺激剤の例は、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、エリスロポイエチン（ＥＰＯ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージ刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、成長分化因子−９（ＧＤＦ９）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、肝細胞癌由来の成長因子（ＨＤＧＦ）、インスリン様成長因子（ＨＤＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、ミオスタチン（ＧＤＦ８）、神経成長因子（ＮＧＦ）、血小板由来の成長因子（ＰＤＧＦ）、形質転換成長因子α（ＴＧＦ−α）、形質転換成長因子β（ＴＧＦ−β）及び血管内皮（endothelial）成長因子（ＶＥＧＦ）を含む群に属するが、これに限定されない。
【０３３６】
他の作用物質は防汚剤でもあり得る。「防汚剤」という用語は、本明細書で使用される場合、船底上のフジツボ及び他の海洋生物の成長を阻害する作用物質（防汚塗料又は他のコーティング）を表す。
【０３３７】
有用な防汚剤の例は、イルガロール１０５１、銅ピリチオン又は亜鉛ピリチオン、ジウロン及びシーナイン２１１等のイソチアゾリノン（isothiazolinones）を含む群に属するが、これに限定されない。
【０３３８】
「炎症促進剤」又は「催炎物質」という用語は本明細書中で、炎症の直接的な若しくは間接的な媒介因子である、又は炎症の媒介因子の産生に直接的に若しくは間接的に関わる、動物において産生される任意の物質を表す。多様な炎症促進物質が当業者にとって既知である。
【０３３９】
有用な炎症促進物質の例は、プロスタグランジン、例えばＰＧＥ２及びロイコトリエン、例えばＬＴＢ４等のエイコサノイド、ホスホリパーゼ、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）、ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２等の酵素、並びにインターロイキン（例えばＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２及びＩＬ−１８）、腫瘍壊死因子ファミリーの成員、例えばＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β及びリンホトキシンβ、インターフェロン、例えばＩＦＮ−β及びＩＦＮ−γ、顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）等のサイトカイン、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２及びＴＧＦ−β３等の形質転換成長因子、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、遊走阻害因子（ＭＩＦ）、単球化学誘引物質タンパク質（ＭＣＰ−１）、マクロファージ炎症性タンパク質（例えばＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β及びＭＩＰ−２）、及びＲＡＮＴＥＳを含む群に属するが、これに限定されない。
【０３４０】
炎症促進活性を有する他の好適な物質の例は、リポ多糖（lipopolysaccharide）（ＬＰＳ）、テイコ酸及びリポテイコ酸、ペプチドグリカン、細菌ＤＮＡ（例えばＣｐＧ−モチーフを含有する断片）、細菌タンパク質（例えばエンテロトキシン及びエクソトキシン）、又は溶血素（例えば肺炎球菌溶血素（pneumolysins））等の細菌成分、並びにザイモサン等の酵母細胞の壁成分を含む群に属するが、これに限定されない。
【０３４１】
更なる特定の実施形態では、該方法の工程ｉｉ）を、４℃〜４０℃、好ましくは１０℃〜３０℃、より好ましくは２０℃〜２５℃、例えば４℃、５℃、６℃、７℃、８℃、９℃、１０℃、１１℃、１２℃、１３℃、１４℃、１５℃、１６℃、１７℃、１８℃、１９℃、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃、３５℃、３６℃、３７℃、３８℃、３９℃又は４０℃の温度で行う。
【０３４２】
更なる特定の実施形態では、該方法の工程ｉｉ）を、１〜９、好ましくは４〜９、最も好ましくは６〜８のｐＨ、例えば１、２、３、４、５、６、７、８又は９のｐＨで行う。
【０３４３】
第１の態様による特徴及び特質は全て、以下で記載されるような本発明の更なる態様にも適用される。
【０３４４】
第２の態様では、本発明は、好ましくは水溶性であり、かつ／又は約５０Ｄａ〜約２０ｋＤａの分子量を有する少なくとも１つの化合物が装填された、少なくとも２つの同一の反復単位を含むシルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドを少なくとも１つ含むシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子に関する。
【０３４５】
シルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子に効率的に装填するのによく適した化合物はサイズが十分に小さいのが好ましい。本発明の好ましい実施形態では、化合物は、５０Ｄａ若しくは約５０Ｄａ〜２０ｋＤａ若しくは約２０ｋＤａ；又は５０Ｄａ若しくは約５０Ｄａ〜１０ｋＤａ若しくは約１０ｋＤａ、好ましくは５０Ｄａ若しくは約５０Ｄａ〜６ｋＤａ若しくは約６ｋＤａ、より好ましくは５０Ｄａ若しくは約５０Ｄａ〜４ｋＤａ若しくは約４ｋＤａ、最も好ましくは５０Ｄａ若しくは約５０Ｄａ〜１ｋＤａ若しくは約１ｋＤａ、例えば５０Ｄａ、１００Ｄａ、１５０Ｄａ、２００Ｄａ、２５０Ｄａ、３００Ｄａ、３５０Ｄａ、４００Ｄａ、４５０Ｄａ、５００Ｄａ、５５０Ｄａ、６００Ｄａ、６５０Ｄａ、７００Ｄａ、７５０Ｄａ、８００Ｄａ、８５０Ｄａ、９００Ｄａ、９５０Ｄａ、１ｋＤａ、１．５ｋＤａ、２ｋＤａ、２．５ｋＤａ、３ｋＤａ、３．５ｋＤａ、４ｋＤａ、４．５ｋＤａ、５ｋＤａ、５．５ｋＤａ、６ｋＤａ、６．５ｋＤａ、７ｋＤａ、７．５ｋＤａ、８ｋＤａ、８．５ｋＤａ、９ｋＤａ、９．５ｋＤａ、１０ｋＤａ、１１ｋＤａ、１２ｋＤａ、１３ｋＤａ、１４ｋＤａ、１５ｋＤａ、１６ｋＤａ、１７ｋＤａ、１８ｋＤａ、１９ｋＤａ、又は２０ｋＤａの分子量を有する。
【０３４６】
さらに、シルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子に効率的に装填するのによく適した化合物は水溶性であるのが好ましい。
【０３４７】
さらに、本発明による好ましい化合物は、好ましくは約５０Ｄａ〜２０ｋＤａ、より好ましくは５０Ｄａ〜１０ｋＤａ又は５０Ｄａ〜６ｋＤａ、最も好ましくは５０Ｄａ〜４ｋＤａ又は５０Ｄａ〜１ｋＤａ（上記を参照されたい）の分子量を有する小さい水溶性化合物である任意の化合物であり得る。
【０３４８】
上述のように、化合物をシルクマトリクス、好ましくはスパイダーシルクマトリクスに浸透することが可能である。好ましくは、装填した化合物の少なくとも４０％、より好ましくは５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％、例えば少なくとも４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％又は９５％がシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子のマトリクス内に位置する。
【０３４９】
本発明の好ましい実施形態では、粒子のメジアン径は、０．１μｍ〜５００μｍ、好ましくは０．１μｍ〜１００μｍ、より好ましくは０．２μｍ〜２０μｍ、更により好ましくは０．２μｍ〜１μｍ、最も好ましくは０．２５μｍ〜０．７μｍ、例えば０．１μｍ、０．１５μｍ、０．２μｍ、０．２５μｍ、０．３μｍ、０．３５μｍ、０．４μｍ、０．４５μｍ、０．５μｍ、０．５５μｍ、０．６μｍ、０．６５μｍ、０．７μｍ、０．７５μｍ、０．８μｍ、０．８５μｍ、０．９μｍ、０．９５μｍ、１μｍ、２μｍ、３μｍ、４μｍ、５μｍ、６μｍ、７μｍ、８μｍ、９μｍ、１０μｍ、１５μｍ、２０μｍ、２５μｍ、３０μｍ、３５μｍ、４０μｍ、４５μｍ、５０μｍ、５５μｍ、６０μｍ、６５μｍ、７０μｍ、７５μｍ、８０μｍ、８５μｍ、９０μｍ、９５μｍ、１００μｍ、１５０μｍ、２００μｍ、２５０μｍ、３００μｍ、３５０μｍ、４００μｍ、４５０μｍ又は５００μｍのメジアン径である。
【０３５０】
更なる特定の実施形態では、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドは、各々が、
ｉ）ＧＰＧＸＸ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱからなる群から選択される）、
ｉｉ）ＧＧＸ（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱからなる群から選択される）、
ｉｉｉ）Ａｘ（ここでｘは５〜１０の整数である）
からなる群から選択されるコンセンサス配列を少なくとも１つ、好ましくは１つ含む少なくとも２つの同一の反復単位を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。
【０３５１】
シルクポリペプチドが、各々がＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ、好ましくは１つ含む少なくとも２つの同一の反復単位を含む、これから本質的になる、又はこれからなることも好ましい。ＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）（ペプチド）モチーフは、レジリン（国際公開第０８／１５５３０４号）から選択されている。
【０３５２】
好ましくは、シルクポリペプチドは、各々が、
ｉ）ＧＰＧＸＸ（配列番号３）（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＡ、Ｓ、Ｇ、Ｙ、Ｐ及びＱからなる群から選択される）、
ｉｉ）ＧＧＸ（ここでＸは任意のアミノ酸であり、好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ、Ｒ、Ｓ、Ａ、Ｔ、Ｎ及びＱ、より好ましくはそれぞれの場合で独立してＹ、Ｐ及びＱからなる群から選択される）、及び
ｉｉｉ）Ａｘ（ここでｘは５〜１０の整数である）
からなる群から選択されるコンセンサス配列を少なくとも１つ、好ましくは１つ含む、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位若しくは４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位、又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。
【０３５３】
シルクポリペプチドが、２個〜８０個の反復単位、３個〜８０個の反復単位又は４個〜６０個の反復単位、より好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位（各々がＧＧＲＰＳＤＴＹＧ（配列番号１８）及びＧＧＲＰＳＳＳＹＧ（配列番号１９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を少なくとも１つ、好ましくは１つ含む）を含む、これから本質的になる、又はこれからなることも好ましい。
【０３５４】
本発明によるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位であることに留意すべきである。
【０３５５】
シルクポリペプチドの定義、反復単位の定義、具体的なシルクポリペプチド、具体的なモチーフ及びモチーフの組み合わせに関しては、本発明の第１の態様に言及される。
【０３５６】
反復単位は独立して、モジュールＡ（配列番号２０）、モジュールＣ（配列番号２１）、モジュールＱ（配列番号２２）、モジュールＫ（配列番号２３）、モジュールｓｐ（配列番号２４）、モジュールＳ（配列番号２５）、モジュールＲ（配列番号２６）、モジュールＸ（配列番号２７）若しくはモジュールＹ（配列番号２８）、又はその変異体（すなわちモジュールＡ変異体、モジュールＣ変異体、モジュールＱ変異体、モジュールＫ変異体、モジュールｓｐ変異体、モジュールＳ変異体、モジュールＲ変異体、モジュールＸ変異体又はモジュールＹ変異体）から選択されるのが好ましい。
【０３５７】
反復単位は独立して、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択されるのが更に好ましい。
【０３５８】
シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドの反復単位は独立して、モジュールＡ（配列番号２０）若しくはその変異体、モジュールＣ（配列番号２１）若しくはその変異体、モジュールＱ（配列番号２２）若しくはその変異体、モジュールＫ（配列番号２３）若しくはその変異体、モジュールｓｐ（配列番号２４）若しくはその変異体、モジュールＳ（配列番号２５）若しくはその変異体、モジュールＲ（配列番号２６）若しくはその変異体、モジュールＸ（配列番号２７）若しくはその変異体、モジュールＹ（配列番号２８）若しくはその変異体、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）、又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択されるのが好ましい。
【０３５９】
本発明によるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位であることに留意すべきである。
【０３６０】
より好ましい実施形態では、本発明によるシルクポリペプチドは、２個〜８０個、３個〜８０個の反復単位又は４個〜６０個の反復単位、好ましくは８個〜４８個の反復単位又は１０個〜４０個の反復単位、最も好ましくは１６個〜３２個の反復単位、すなわち２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５１個、５２個、５３個、５４個、５５個、５６個、５７個、５８個、５９個、６０個、６１個、６２個、６３個、６４個、６５個、６６個、６７個、６８個、６９個、７０個、７１個、７２個、７３個、７４個、７５個、７６個、７７個、７８個、７９個又は８０個の反復単位（独立して、モジュールＡ（配列番号２０）若しくはその変異体、モジュールＣ（配列番号２１）若しくはその変異体、モジュールＱ（配列番号２２）若しくはその変異体、モジュールＫ（配列番号２３）若しくはその変異体、モジュールｓｐ（配列番号２４）若しくはその変異体、モジュールＳ（配列番号２５）若しくはその変異体、モジュールＲ（配列番号２６）若しくはその変異体、モジュールＸ（配列番号２７）若しくはその変異体、モジュールＹ（配列番号２８）若しくはその変異体、モジュールＡＣ（配列番号２９）、モジュールＡＫ（配列番号３０）、モジュールＣＣ（配列番号３１）、モジュールＣＫ１（配列番号３２）、モジュールＣＫ２（配列番号３３）、又はモジュールＣＫＣ（配列番号３４）から選択される）を含む、これから本質的になる、又はこれからなる。
【０３６１】
この場合も、本発明によるシルクポリペプチドに含まれる反復単位のうち少なくとも２つが同一の反復単位（モジュール）であることに留意すべきである。
【０３６２】
具体的なモジュールの組み合わせ、及びモジュール変異体又は断片の定義に関しては、本発明の第１の態様に言及される。
【０３６３】
更なる特定の実施形態では、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドは１つ又は複数の非反復（ＮＲ）単位を更に含む。
【０３６４】
より好ましくは、ＮＲ単位は独立して、ＮＲ３（配列番号４１及び配列番号４５）又はその変異体、及びＮＲ４（配列番号４２及び配列番号４６）又はその変異体からなる群から選択される。
【０３６５】
本発明の好ましい実施形態では、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドは、ＡＤＦ−３（配列番号１及び配列番号４７）又はその変異体、ＡＤＦ−４（配列番号２及び配列番号４８）又はその変異体、ＭａＳｐ  Ｉ（配列番号４３及び配列番号５３〜配列番号６４）又はその変異体、ＭａＳｐ  ＩＩ（配列番号４４及び配列番号６５〜配列番号７８）又はその変異体、（Ｃ）ｍＮＲｚ、ＮＲｚ（Ｃ）ｍ、（ＡＱ）ｎＮＲｚ、ＮＲｚ（ＡＱ）ｎ、ＮＲｚ（ＱＡＱ）ｏ、（ＱＡＱ）ｏＮＲｚ、（Ｃ）ｍ、（ＡＱ）ｎ、（ＱＡＱ）ｏ、Ｙｐ、Ｘｐ及びＫｐ（ここで、ｍは８〜４８（すなわち８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７又は４８）の整数であり、ｎは６〜２４（すなわち６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３又は２４）の整数であり、ｏは８〜１６（すなわち８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６）の整数であり、ｐは８〜１６（すなわち８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６）の整数であり、ｚは１〜３（すなわち１、２又は３）の整数であり、ＮＲは非反復単位を表す）からなる群から選択される。
【０３６６】
より好ましくは、シルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドは、Ｃ１６、Ｃ３２、（ＡＱ）１２、（ＡＱ）２４、Ｃ１６ＮＲ４、Ｃ３２ＮＲ４、（ＡＱ）１２ＮＲ３、（ＡＱ）２４ＮＲ３、Ｙ８、Ｙ１６、Ｘ８、Ｘ１６、Ｋ８又はＫ１６である。
【０３６７】
具体的なモジュールの組み合わせ、ＮＲ３、ＮＲ４、ＡＤＦ−３、ＡＤＦ−４、ＭａＳｐ  Ｉ及びＭａＳｐ  ＩＩの変異体又は断片の定義に関しては、本発明の第１の態様に言及される。
【０３６８】
本発明の更に好ましい実施形態では、化合物は、薬学的に活性のある化合物、化粧品物質、農業用物質、化学誘引物質、化学忌避物質、抗真菌物質、抗菌物質、栄養素、健康補助食品、色素、香料、又は止血剤、成長刺激剤、催炎物質、防汚剤、抗微生物剤及びＵＶ保護剤からなる群から選択される作用物質である。
【０３６９】
更なる特定の実施形態では、化合物は全体として正の正味電荷を有する。更なる特定の実施形態では、化合物を静電相互作用及び／又は拡散によりシルクマトリクス、好ましくはスパイダーシルクマトリクスに浸透することが可能である。好ましくは、化合物は全体として正の正味電荷を有するとともに、静電相互作用及び／又は拡散によりシルクマトリクス、好ましくはスパイダーシルクマトリクスに浸透することが可能である。
【０３７０】
更なる好ましい実施形態では、化合物は中性又はアルカリ性の性質を有する。好ましくは、化合物は全体として正の正味電荷を有し、静電相互作用及び／又は拡散によりシルクマトリクス、好ましくはスパイダーシルクマトリクスに浸透することが可能であるとともに、中性又はアルカリ性の性質を有する。
【０３７１】
本発明の好ましい実施形態では、化合物は生理学的条件への曝露の際に拡散によりシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子から放出される。そのため、本発明によるシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子は、カプセル封入された化合物の放出がタンパク質分解に依存する従来技術のシルク粒子、例えばスパイダーシルク粒子と明らかに区別することができる。化合物は、該化合物が装填されたシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を生理学的条件に暴露させる、すなわちシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を緩衝剤又は水溶液に導入することで放出させることが可能である。好ましくは、シルク粒子、より好ましくはスパイダーシルク粒子は装填した化合物の持続放出及び制御放出を示す。持続（又は制御）放出は、一定期間にわたる経時的なシルクマトリクス、好ましくはスパイダーシルクマトリクスからの化合物の徐放を表す。初期バースト相が存在していてもよいが、放出が比較的線形の動態を示し、これにより放出期間にわたる化合物の一定供給が与えられるのが好ましい。放出期間は化合物の特性及びその使用目的に応じて、数時間から数ヶ月の間で変化し得る。例えば、或る特定の治療期間にわたるシルクマトリクス、好ましくはスパイダーシルクマトリクスからの薬学的に活性のある化合物の累積放出は、マトリクスの過剰装填の必要性、及び結果として起こる放出されない薬学的に活性のある作用物質の無駄を避けるために比較的高いことが望まれ得る。
【０３７２】
好ましくは、シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子の放出プロファイルは最初の２４時間以内に小さいバースト放出を有する。更なる好ましい実施形態では、化合物の２０％未満、好ましくは１５％未満、最も好ましくは１０％未満、例えば２０％未満、１９％未満、１８％未満、１７％未満、１６％未満、１５％未満、１４％未満、１３％未満、１２％未満、１１％未満又は１０％未満が、例えば最初の２４時間以内に周囲媒体へと放出される。上記周囲媒体は緩衝溶液、生理学的緩衝溶液、血液、体液、リンパ液、髄液又は水であり得る。
【０３７３】
好ましくは、化合物の最大１００％が、例えば３６時間以内、４８時間以内又は７２時間以内、より好ましくは７日間以内、１４日間以内、２１日間以内、３１日間以内又は３５日間以内、最も好ましくは５週間以内、６週間以内、７週間以内又は８週間以内に周囲媒体へと放出される。実施例８に示されるように、乳酸エタクリジン化合物のほぼ１００％が３５日以内に放出される。
【０３７４】
第３の態様では、本発明は、本発明によるシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子と、付加的に薬学的に許容可能な緩衝剤、希釈剤及び／又は賦形剤とを含む医薬組成物であって、該医薬組成物が制御送達及び持続送達に有用であり、該化合物が薬学的に活性のある化合物である、本発明によるシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子と、付加的に薬学的に許容可能な緩衝剤、希釈剤及び／又は賦形剤とを含む医薬組成物に関する。
【０３７５】
更なる態様では、本発明は、本発明によるシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子と、付加的に１つ又は複数の薬学的に許容可能な緩衝剤、希釈剤及び／又は賦形剤とを含む医薬組成物に関する。好ましくは、医薬組成物は化合物の制御送達及び持続送達用である（送達に有用である）。本発明のシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子は、薬学的に活性のある化合物である化合物を含むのが更に好ましい。
【０３７６】
上述の化合物は上述のような任意の医薬（pharmaceutical）化合物であり得る。本発明の好ましい実施形態では、化合物は、５０Ｄａ若しくは約５０Ｄａ〜２０ｋＤａ若しくは約２０ｋＤａ；又は５０Ｄａ若しくは約５０Ｄａ〜１０ｋＤａ若しくは約１０ｋＤａ、好ましくは５０Ｄａ若しくは約５０Ｄａ〜６ｋＤａ若しくは約６ｋＤａ、より好ましくは５０Ｄａ若しくは約５０Ｄａ〜４ｋＤａ若しくは約４ｋＤａ、最も好ましくは５０Ｄａ若しくは約５０Ｄａ〜１ｋＤａ若しくは約１ｋＤａ、例えば５０Ｄａ、１００Ｄａ、１５０Ｄａ、２００Ｄａ、２５０Ｄａ、３００Ｄａ、３５０Ｄａ、４００Ｄａ、４５０Ｄａ、５００Ｄａ、５５０Ｄａ、６００Ｄａ、６５０Ｄａ、７００Ｄａ、７５０Ｄａ、８００Ｄａ、８５０Ｄａ、９００Ｄａ、９５０Ｄａ、１ｋＤａ、１．５ｋＤａ、２ｋＤａ、２．５ｋＤａ、３ｋＤａ、３．５ｋＤａ、４ｋＤａ、４．５ｋＤａ、５ｋＤａ、５．５ｋＤａ、６ｋＤａ、６．５ｋＤａ、７ｋＤａ、７．５ｋＤａ、８ｋＤａ、８．５ｋＤａ、９ｋＤａ、９．５ｋＤａ、１０ｋＤａ、１１ｋＤａ、１２ｋＤａ、１３ｋＤａ、１４ｋＤａ、１５ｋＤａ、１６ｋＤａ、１７ｋＤａ、１８ｋＤａ、１９ｋＤａ、又は２０ｋＤａの分子量を有する。
【０３７７】
本明細書で使用される場合、「被験体」又は「患者」という用語は、本明細書で挙げられるような組成物の投与又は方法から利益を得ることができる哺乳動物を表すために区別なく使用することができる。ほとんどの場合、被験体又は患者はヒト又は例えばウマ、イヌ若しくはネコ等の他の哺乳動物である。
【０３７８】
「投与」は活性剤又はこのような活性剤を含む組成物を被験体に与える方法を表す。本発明による医薬組成物は幾つかの方法を用いて被験体に投与することができる。
【０３７９】
投与方法には、皮内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、静脈投与、皮下投与、鼻内投与、硬膜外投与、経口投与、舌下投与、脳内投与、膣内投与、経皮投与、直腸投与、吸入による投与、又は特に耳、鼻、眼若しくは皮膚への局所投与が含まれるが、これに限定されない。装填した医薬化合物（pharmaceutically）を数週間の期間にわたって放出することが可能であるシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子の一定放出プロファイルのために、本発明の医薬組成物は非経口投与に特によく適している。しかしながらシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子は胃耐性でもあるので、医薬組成物は経口投与形態にも非常に好適である。貯蔵システムにおいて、薬学的に活性のある化合物が装填されたシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を配合することも可能である。例えば、粒子はフィルム、脂質又はゲル内に埋め込むことができる。
【０３８０】
本発明の医薬組成物は任意選択的に、被験体に適切に投与するための形態を与えるように、好適な量の薬学的に許容可能な賦形剤を含むことができる。このような医薬賦形剤は、水及び油（石油、動物、植物又は合成起源のものを含む）（例えばラッカセイ油、ダイズ油、鉱物油、ゴマ油等）の液体であり得る。医薬賦形剤は生理食塩水、アカシアゴム、ゼラチン、デンプン糊、タルク、ケラチン、コロイドシリカ、尿素等であり得る。加えて、助剤、安定化剤、増粘剤、平滑剤及び着色剤を使用することができる。生理食塩溶液及びデキストロース水溶液及びグリセロール水溶液を液体賦形剤として、特に注射溶液に利用することもできる。好適な医薬賦形剤には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等も含まれる。所望に応じて、本発明の組成物は、微量の湿潤剤若しくは乳化剤も含有することができる、又はｐＨ緩衝剤を含有することができる。本明細書に記載の好適な薬学的に許容可能な賦形剤の更なる例を、"Handbook of Pharmaceutical Excipients”, 2ndEdition,（1994）, Edited by A Wade andPJ Wellerに見ることができる。治療上の使用に許容可能な担体又は希釈剤は医薬分野で既知であり、例えばRemington'sPharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co.（A. RGennaro edit. 1985）に記載されている。好適な担体の例としては、ラクトース、デンプン、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトール等が挙げられる。好適な希釈剤の例としては、エタノール、グリセロール及び水が挙げられる。
【０３８１】
第４の態様では、本発明は、制御送達及び持続送達のための本発明によるシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を含む化粧品組成物であって、該化合物が化粧品化合物である、制御送達及び持続送達のための本発明によるシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子を含む化粧品組成物に関する。
【０３８２】
別の更なる態様では、本発明は、本発明によるシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子と、付加的に１つ又は複数の化粧品として許容可能な緩衝剤、希釈剤及び／又は賦形剤とを含む化粧品組成物に関する。好ましくは、化粧品組成物は化合物の制御送達及び持続送達用である（送達に有用である）。本発明のシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子は、化粧品化合物である化合物を含むのが更に好ましい。
【０３８３】
第５の態様では、本発明は、化合物が装填されたシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子であって、該化合物が水溶性であり、５０Ｄａ〜２０ｋＤａの分子量を有し、かつ／又は全体として正の正味電荷を有し、該シルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子が、少なくとも２つの同一の反復単位を含むシルクポリペプチド、好ましくはスパイダーシルクポリペプチドを１つ又は複数含み、該粒子が本発明によるプロセスにより取得可能である、化合物が装填されたシルク粒子、好ましくはスパイダーシルク粒子に関する。
【０３８４】
更なる実施形態は、本発明の範囲を限定することなくその主な態様の幾つかで本発明を説明する以下の実施例から明らかになるであろう。
【実施例】
【０３８５】
実施例１：組換えスパイダーシルクタンパク質ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）の改変
ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）のアミノ酸配列を、ニワオニグモ由来のＡＤＦ４の天然配列から適合させた。ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）タンパク質を、単一モチーフの組み合わせ及び多量体化によって改変した。得られるｅＡＤＦ４（Ｃ１６）は、アミノ酸配列ＧＳＳＡＡＡＡＡＡＡＡＳＧＰＧＧＹＧＰＥＮＱＧＰＳＧＰＧＧＹＧＰＧＧＰ（配列番号２１）を有するモジュールＣの反復単位を１６個含む。得られるタンパク質は、４８ｋＤａの分子質量を有する。タンパク質を、過去に記載された（Hummerichet al., 2004）ように精製し、９８％を超える純度を有するものとした。そのアミノ酸組成のために、ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）は、３．４８という理論的等電点を有し、生理学的ｐＨ（７．４）で正味の負電荷を示す。
【０３８６】
実施例２：小分子モデル薬物の調製
全ての薬物を、０．２１μｍｏｌ／ｍｌの濃度で水に溶解した。薬物物質及びそれらの特徴的な特性を、表１に示す。主要な選択基準は、水性媒体における溶解度（オクタノール／水分配係数（ｌｏｇ  Ｐ）によって表現される）、酸性解離定数（プロトン化塩基（ＢＨ＋）又は酸（ＨＡ）についてのｐＫａ）、及び得られる水性媒体における正味電荷（優勢な又は永久的な電荷）とした。
【０３８７】
表１：ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）球への装填に使用した小分子量モデル薬物のリスト。分子量、解離定数（ｐＫａ）及び分配係数（ｌｏｇ  Ｐ）についての値は文献から得た。分配係数（ｌｏｇ  Ｐ）は、個々の非プロトン化形態を説明する。吸収波長λＡｂｓは、各物質について実験によって決定した。全ての物質を、Sigma-Aldrich（Deisenhofen, Germany）から購入した。
【表１】
0005889199.tif 000003
表中の英語：
Model  drug:モデル薬物
Molecular  weight:分子量
Dissociation  constant  of  BH+:ＢＨ＋の解離定数
Dissociation  constant  of  HA:ＨＡの解離定数
Predominant  change  at  pH7:ｐＨ７で優勢な電荷
Permanently  charged:永久的に荷電している
Phenol  red:フェノールレッド
Tetracaine  HCl:テトラカインＨＣｌ
Procaine  HCl:プロカインＨＣｌ
Papaverine  HCl:パパベリンＨＣｌ
Ephedrine  HCl:エフェドリンＨＣｌ
Propranol  HCl:プロプラノロールＨＣｌ
Ethacridine  lactate:乳酸エタクリジン
Methyl  violet:メチルバイオレット
negative:負
positive:正
yes:はい
no:いいえ
【０３８８】
実施例３：ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の調製
凍結乾燥されているタンパク質ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）を、６Ｍのグアニジウムチオシアネートに溶解した。透析を、４℃で、６０００Ｄａ〜８０００Ｄａの分子量カットオフ値を有する膜（Spectrum Laboratories、Rancho Dominguez, USA）を使用して、１０ｍＭのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−（Ｔｒｉｓ）／ＨＣｌ（ｐＨ８）に対して行った。ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）溶液の濃度を、２０℃で、Ｃａｒｙ１００分光光度計（Varian Medical Systems、Palo Alto, USA）、及び２７６ｎｍでのｅＡＤＦ４（Ｃ１６）のモル吸光係数（ε＝４６４００Ｍ−１ｃｍ−１）を使用して、ＵＶ−Ｖｉｓ分光分析によって決定した。ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子を、Slotta et al. (2008)にて過去に記載されたような相分離手順を使用して調製した。ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）水溶液（ｃ＝１．０ｍｇ／ｍｌ）を、ピペットを使用して、リン酸カリウム（２Ｍ、ｐＨ８）と１：１０の体積比で混合した。得られた粒子を、１００００×ｇで１０分間遠心分離し、精製水で３回洗浄した。得られた粒子を水に再分散させ、粒子濃度（ｍｇ／ｍｌ単位での粒子数）を重量測定法によって決定した。既知のタンパク質粒子濃度のストック分散液を、全ての実験について使用した。
【０３８９】
実施例４：ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子のコロイド安定性
懸濁液中のｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子のコロイド安定性を、種々の濃度（０Ｍ〜２．０Ｍ）の（ＮＨ４）２ＳＯ４溶液１．０ｍｌに粒子１．０ｍｇを添加し、１５分後に波長４００ｎｍで散乱光の強度を測定することによって研究した。Mie理論に基づくと、順方向での散乱光の強度は、粒径が増大するにつれて増大する。したがって、希釈分散液中での電解質に誘導されるフロキュレーションの開始は、順方向での散乱光の強度の増大によって検出することができる。
【０３９０】
実施例５：ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の特性化
現行の技術水準の以下の方法を使用して、本発明によるスパイダーシルク粒子を特性化することができる：
【０３９１】
ａ）走査電子顕微鏡検査
ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子を、Ｔｈｅｒｍａｎｏｘプラスチックカバースリップ（Nagle Nunc、USA）上に固定化し、室温で乾燥させ、真空下で金スパッタリングし、ＪＳＭ  ５９００  ＬＶ走査電子顕微鏡（JEOL Ltd．、日本）（２０ｋＶで）を用いて分析した。
【０３９２】
ｂ）レーザー回折分光分析
粒径及びサイズ分布を、レーザー回折分光分析（株式会社堀場製作所、Ｐａｒｔｉｃａ  ＬＡ−９５０、日本）を使用して三連で決定した。水について１．３３、及びタンパク質について１．６０という屈折率を、粒径の計算のために採用した。濃度の効果を排除するために、全ての試料を、８２％の透過率をもたらす等濃度で測定した。加えて、各調製物の乾燥標本を、走査電子顕微鏡検査（ＳＥＭ）によって分析して、球の形状及び球のサイズを確認した。
【０３９３】
ｃ）フーリエ変換赤外分光分析（ＦＴＩＲ）
フーリエ変換赤外（ＦＴＩＲ）スペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｅｑｕｉｎｏｘ  ５５  ＦＴＩＲ分光計を使用して収集した。試料を、ＣａＦ２ディスク上にｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子懸濁液の液滴を落とし、その後風乾することによって調製した。吸光スペクトルを、４ｃｍ−１の分解能で非偏光を用いて４００ｃｍ−１〜４０００ｃｍ−１の間で記録した。測定を２５℃及び相対湿度３０％で実施し、各スペクトルを３２回蓄積した。ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の二次構造を、アミドＩバンド（１６００ｃｍ−１〜１７００ｃｍ−１）を使用して分析した。１６４８ｃｍ−１〜１６６０ｃｍ−１、１６２５ｃｍ−１〜１６４０ｃｍ−１及び１６６０ｃｍ−１〜１６６８ｃｍ−１のピークを、それぞれαヘリックス構造、βシート構造及びβターン構造に割り当てることができる。
【０３９４】
ｄ）ＵＶ−Ｖｉｓ分光分析
Ｃａｒｙ１００分光光度計（Varian Medical Systems、Palo Alto, USA）を使用する紫外−可視分光分析を、装填効率及び放出挙動の算出の基礎としての上清中の薬物濃度の決定のために利用した。全てのモデル薬物に関する較正曲線を、全てのストック溶液について５つの異なる濃度を使用することによって取得した。
【０３９５】
ｅ）ゼータ電位分析
モデル薬物によるｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の装填メカニズムを解明及び特性化するために、ゼータ電位測定を、添加したモデル薬物の量に応じて行った。ゼータ電位を、Ｎａｎｏｓｅｒｉｅｓ  Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（Malvern、Worcestershire, UK）を使用して決定した。自動滴定を、Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｍｕｌｔｉｐｕｒｐｏｓｅ  Ｔｉｔｒａｔｏｒ  ＭＰＴ−２を用いて行った。実験を、２５℃で蒸留水（ｐＨ７）中で行った。各測定を、三連で行った。
【０３９６】
得られたｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の形態を特性化し、サイズを決定するために、調製したストック分散液を、ＳＥＭ及びレーザー回折分光分析を使用して検査した。図１ａに示されるように、１７０ｎｍ〜７００ｎｍの直径を有する球形の粒子を取得した。決定された粒子の平均直径は、ｄａｖｇ＝３３２±９５ｎｍであった。塩析による粒子形成の収率は９９％を超えており、残存する可溶性タンパク質は検出限界未満であった。ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子が、０Ｍ  （ＮＨ４）２ＳＯ４から２．０Ｍ  （ＮＨ４）２ＳＯ４までの研究した全濃度範囲内においてコロイド的に安定であることを観察することができた（図１ｂ）。（ＮＨ４）２ＳＯ４の濃度の増大に伴う強度の僅かな線形的減少は、体積当たりの粒子の数の減少をもたらすイオン濃度の線形的増大によって説明することができる。
【０３９７】
実施例６：ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の薬物装填
スパイダーシルク粒子の薬物装填を、以下のとおりに行った：２１ｎｍｏｌのシルクタンパク質を含有する１００μｌのスパイダーシルク粒子懸濁液を、０．２１μｍｏｌのモデル薬物を含有する１．０ｍｌのモデル薬物溶液と混合した。室温で１０分のインキュベーションの後、試料を１００００ｇで１０分間遠心分離し、上清をＵＶ−Ｖｉｓ分光分析を使用して残留薬物濃度に関して分析した。モデル薬物に関する標準的な較正曲線を、薬物の定量化のために使用した。１．０ｍｌのモデル薬物溶液と混合した１００μｌの水のみを含有する試料の対照群を、各実験に対して調製した。対照及び試料の上清由来の薬物濃度を使用して、スパイダーシルク粒子中に取り込まれた薬物の量を算出した。全ての実験を三連で行った。カプセル封入効率及び装填率を、それぞれ式（１）及び式（２）を使用することによって決定した：
（１）カプセル封入効率（ｗ／ｗ％）＝（粒子中のモデル薬物の量／最初に添加したモデル薬物）×１００
（２）装填率（ｗ／ｗ％）＝（粒子中のモデル薬物の量／粒子の量）×１００
【０３９８】
実施例７：装填効率及び装填手順
ｐＨ７でのその負電荷のために、ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）は、静電相互作用に基づき、正に荷電した分子と複合体を形成することができる。小分子が粒子表面に結合するか、又はその内部に浸透することができるかを解明するために、高密度ガラスマトリクス中への薬物分子の浸透プロセスは起こり得ないと仮定して、ガラスビーズの装填効率をｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の装填効率と比較した。ガラスビーズの高い負のゼータ電位（≒−５０ｍＶ）のために、タンパク質マトリクス中への拡散が起こらない場合、ガラスビーズの装填効率は、スパイダーシルク粒子（ゼータ電位≒−２２ｍＶ）の装填効率よりも高いものとする。
【０３９９】
この実験のために、１０：１のＭＶ：ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）のモル比で装填効率が９５％を超えるメチルバイオレット（ＭＶ）を利用した。メチルバイオレット装填時のオンラインゼータ電位測定によって、ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子装填時のゼータ電位の変化が三相プロセスであることが明らかとなった（図２ａ）。先ず、電位はメチルバイオレット溶液の添加後に徐々に変化する。初期の一定の傾斜の後、ゼータ電位曲線は、プラトー相を示し、メチルバイオレット濃度の増大に対して表面装填の更なる変化を示さない。最後に、ゼータ電位は更に減少する。滴定曲線に見られるように、ゼータ電位の低減は、反対の電荷を有する分子とのシルク粒子の相互作用の直接的結果である。表面電荷の初期の低下は、反対の電荷を有するメチルバイオレット分子の添加による電荷補償によって説明することができる。プラトー領域は、固体液体粒子界面での薬物（化合物）の吸着とタンパク質球の疎水性コア中への分子の拡散との平衡状態を示す。上記第２相は粒子のマトリクス中への薬物（化合物）の拡散を主に特徴とし、第１相は粒子の表面への薬物（化合物）の吸着を主に特徴とする。コアマトリクスが飽和した後、メチルバイオレット分子の流入が低減し、最終的に終了する。図２ａの第２の傾斜によって見ることができるように、この時点で、粒子表面への更なる装填によって、ゼータ電位は再び減少を開始する。装填効率が減少するモル比であることが特定された１０：１のＭＶ：ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）のモル比に対応するメチルバイオレット濃度で減少が起こる。図２ｂは、モル比に応じた、ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子を利用して得られた装填率及び装填効率を示す。ＭＶ：ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）≒１０のモル比までは、装填率は、添加したメチルバイオレットの量とともに線形的に増大する。モル比が１０を超えると、装填率はプラトーに達し、装填効率の減少をもたらす。
【０４００】
対照的に、メチルバイオレット添加時のガラス微粒子のゼータ電位は、特段の変化を示さなかった（図２ａの挿入図）。メチルバイオレットはガラス粒子マトリクスに浸透することができないという初期の仮定を、滴定実験の完了後の上清を分析することによって確認した。ガラス粒子の表面電荷はシルク粒子と比較しておよそ２倍の高さであるが、決定された装填効率は僅か０．０３％であった。さらに、装填したメチルバイオレットは、ミリポア水を使用する３回の洗浄工程によってガラス粒子の表面から容易に洗い落とすことができた。
【０４０１】
装填効率に対する分子パラメータの影響を調査するために、本研究では１２個の種々の小分子薬物を使用した（表１を参照されたい）。個々のｅＡＤＦ４（Ｃ１６）分子は両親媒性であり、優勢的な疎水特徴（ヒドロパシー（hydropathy）・インデックス＝−０．４６）を有し、１７個の負電荷（各Ｃモジュールに１個、及びカルボキシ末端に１個）及びアミノ末端に１個の正電荷を示すため、薬物によるｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の装填は、３つのパラメータ（（ｉ）そのプロトン解離定数Ｋａ（ＢＨ＋又はＨＡを説明した）によって決定される薬物分子の電荷、（ｉｉ）モデル薬物の溶解度の指標としてのオクタノール／水分配係数（ｌｏｇ  Ｐｏ／ｗ）、及び（ｉｉｉ）拡散によって駆動される物質輸送プロセスにおいて重要な役割を果たす分子量（ＭＷ））によって主に左右されると結論付けることができる。
【０４０２】
さらに、特定の薬物の２つの異なる種、すなわち未変化型及びプロトン化型の疎水性相と親水性相との間の分布を、それぞれ式（３）及び式（４）を用いて算出することができるその見掛けの分布係数（ｌｏｇ  Ｄ）によって表すことができる。
（３）酸に対して：ｌｏｇ  Ｄ＝ｌｏｇ  Ｐ−ｌｏｇ（１＋１０ｐＨ−ｐＫａ）
（４）塩基に対して：ｌｏｇ  Ｄ＝ｌｏｇ  Ｐ−ｌｏｇ（１＋１０ｐＫａ−ｐＨ）
【０４０３】
ｌｏｇ  Ｄの算出に使用した個々の種のｌｏｇ  Ｐ値及びｐＫａ値を、表１に列挙する。表２は、決定された装填効率、捕捉された薬物の最大量（１００％の装填効率を利用することによって算出される）及び実験量、並びに算出されたｐＨ７での分布係数（ｌｏｇ  Ｄ）をまとめている。
【０４０４】
表２．その化学的性質に従って分類した、利用したモデル薬物のリスト。表は、装填したスパイダーシルク粒子の、モデル薬物の理論的含有量及び実験的含有量（ｗｔ（薬物）／ｗｔ（スパイダーシルクタンパク質粒子）の百分率として表現される）、対応するカプセル封入効率、並びに算出された分布係数（ｌｏｇ  Ｄ）の概略を提示する。
【表２】
0005889199.tif 000004
表中の英語：
Model  drug:モデル薬物
Chemical  nature:化学的性質
Maximal  drug  content:最大薬物含有量
Expeimental  drug  content:実験的薬物含有量
Encapsulation  efficiency:カプセル封入効率
Ephedrine  HCl:エフェドリンＨＣｌ
Procaine  HCl:プロカインＨＣｌ
Propranol  HCl:ププロプラノロールＨＣｌ
Papaverine  HCl:パパベリンＨＣｌ
Tetracaine  HCl:テトラカインＨＣｌ
Ethacridine  lactate:乳酸エタクリジン
Phenol  red:フェノールレッド
Methyl  violet:メチルバイオレット
base:塩基
strong  base:強塩基
strong  acid:強酸
【０４０５】
プロトン化した弱有機塩基を、２０．７％〜５３．０％の範囲の効率で、ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子上に装填することができた。この種類の小分子モデル薬物に関しては、個々の分子の分子質量によって除算したｌｏｇ  Ｄの算出値の商は、得られる装填効率と線形的に相関する（図３を参照されたい）。この線形的な関係は、電荷及び溶解度（見掛けの分布係数ｌｏｇ  Ｄによって表現される）及び拡散係数（分子量の反比例によって表現される）の組み合わせが、ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子上への弱アルカリ性の小分子の効果的な装填に関与する重要な因子であることを明らかに示している。
【０４０６】
永久的な電荷を有する分子の調査によって、正に荷電した分子、例えばメチルバイオレットは最も首尾よく取り込まれ、負に荷電した分子、例えばフェノールレッドはｅＡＤＦ４（Ｃ１６）を使用して取り込まれることができず、僅かに酸性の分子は０．２％〜１７．３％という相対的に低い装填効率を示すことが明らかとなった。強アルカリ性の分子、例えば乳酸エタクリジンは、９８％を超える装填効率を示した。
【０４０７】
実施例８：ｉｎ  ｖｉｔｒｏの放出研究
薬物を装填したｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子を、蒸留水で洗浄し、１ｍｌのＰＢＳ（ｐＨ７．４）に懸濁した後、絶えず振とうしながら３７℃でインキュベーションした。各バイアルは、４．２μｍｏｌのスパイダーシルクタンパク質を含有する２ｍｇの薬物を装填した粒子を含有するものとした。溶媒を、各試料から定期的に取り除き、新たなＰＢＳ（ｐＨ７．４）と交換した。その後、媒体中の薬物含有量を、ＵＶ−Ｖｉｓ分光分析を使用して分析した。累積的なモデル薬物放出の百分率（％ｗ／ｗ）を、インキュベーション時間に応じて調査した。各実験を三連で行った。薬物を装填したｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の放出挙動に対する種々のｐＨ値の効果を研究するために、１ｍｇの薬物を装填したシルク粒子を、５つの異なるｐＨ値（ｐＨ２、ｐＨ４、ｐＨ６、ｐＨ７．４及びｐＨ８．８）の１．０ｍｌのＰＢＳ中で５日間インキュベートした。溶媒を毎日抜き取り、粒子を新たな媒体に再分散させた。抜き取った試料の上清を、ＵＶ−Ｖｉｓ分光分析を用いて、薬物含有量決定のために分析した。
【０４０８】
ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子からのモデル薬物のｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出挙動を、メチルバイオレット及び乳酸エタクリジンを用いて例示的に研究した。累積的放出プロファイルによって、両方の分子が３０日間にわたって放出されることが示された（図４ａ）。最も興味深いことには、ごく小さな薬物バースト、すなわち初期のより高い薬物放出を、インキュベーションの最初の２４時間以内に検出することができた。最初の２４時間以内の乳酸エタクリジン及びメチルバイオレットの放出は、カプセル封入された総量の１１％であった。その後、ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子は、最初の１週間以内において、１日当たり、捕捉された分子のおよそ５％を放出した（図４ａ、図４ｂ）。放出挙動を特性化するために、半経験的な冪乗則の式を使用した（式（５））：
【数１】
0005889199.tif 000005
（式中、Ｍｔ／Ｍ∞は時間ｔで放出された薬物の分割量（fractional amount）であり、ｋは系の特性定数であり、指数ｎは、製剤の幾何形状に関連しており、薬物放出のメカニズムを示す）。半経験的な冪乗則は、薬物輸送の２つの独立したメカニズム、フィック型拡散及びケースＩＩ輸送（マトリクス中の分子の移動に対するポリマーの緩和の影響を反映する）の一般化として理解することができる。球状の系に関しては、純粋なフィック型拡散又は純粋なケースＩＩ輸送が機能する場合、ｎの限界値はそれぞれ０．４３及び０．８５に等しいと決定された［４２］。ｎが０．４３〜０．８５である場合、異常な輸送として知られる両方の輸送プロセスの重ね合せが起こる。薬物放出データに関して直線回帰を得るために、式（５）を修正し、式（６）を得た：
【数２】
0005889199.tif 000006
（式中、ｎは、直線回帰による放出Ｍｔ／Ｍ∞対時間ｔのｌｏｇ−ｌｏｇプロット（図４ｄ）の傾きから算出することができる）。それから、初期バースト領域（＜２４時間）を除いて、異なる優勢的な放出メカニズムを伴う３つの時間間隔を、特定することができた。異なる時間間隔を区別するために、係数ｒ２が個々の直線回帰に関して０．９９を上回る必要があるという基準を利用した。放出指数（ｎ）、相関係数（ｒ２）及び特性定数（ｋ）の値を、表３にまとめる。決定された放出パラメータの有効化のために、実験的放出データを、ｋ及びｎに関して決定された値を利用する半経験的な冪乗則によって得られた理論的データと比較した。初期バースト期後（＞２４時間）から１００％の放出まで非常に良好な一致が得られた（図４ａ）。放出パラメータ（ｋ及びｎ）の算出のために２４時間後の放出データのみを考慮したため、理論的データによって、初期バーストが低く見積もられている（図４ｂ）。
【０４０９】
表３．規定の放出間隔に対するメチルバイオレット及び乳酸エタクリジンに関する薬物放出パラメータ（ｎ：放出指数、ｒ２：相関係数、ｋ：特性定数）。
【表３】
0005889199.tif 000007
表中の英語：
Model  drug:モデル薬物
time(d):時間（日）
Release:放出
Methyl  violet:メチルバイオレット
Ethacridine  lactate:乳酸エタクリジン
【０４１０】
放出から最初の２週間以内においては、乳酸エタクリジン（ＥＬ）及びメチルバイオレット（ＭＶ）に対する指数ｎは、ほぼ同一であり（ｎＥＬ＝０．６７５４、ｎＭＶ＝０．６９２）、異常な拡散放出を示す。１４日目〜２０日目の第２の時間間隔では、放出プロファイルは互いに分岐し、乳酸エタクリジンの放出指数は０．５１に、メチルバイオレットの放出指数はｎ＝０．６１に低下する。この第２の時間間隔では、乳酸エタクリジンについてはフィック型輸送が優勢になり始める。２０日後、メチルバイオレット及び乳酸エタクリジンに関する放出指数（ｎ値）はｎ＝０．４３の限界値未満に低下し、両方についてフィック型放出挙動を示す（表３）。
【０４１１】
次に、薬物放出に対するｐＨの影響を評価した。３７℃及び種々のｐＨ値においてＰＢＳ中でインキュベートした、乳酸エタクリジンを装填したｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子を用いる放出実験によって、酸性環境が薬物放出を加速する、放出率に対するｐＨの強い影響が示された（図４ｃ）。ｐＨ２（非緩衝条件）でインキュベートしたシルク球から、装填された薬物のほぼ８０％が２４時間後に放出された。ｐＨ４（非緩衝条件）でインキュベートしたシルク粒子については、初日のインキュベーション後に、ほぼ４０％の初期放出率が得られた。ｐＨ６でインキュベートした粒子は、区別することができないｐＨ７．４又はｐＨ８．８で見られたものと類似の放出プロファイルによって、２倍の放出を示した。観察された結果は、ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）と薬物分子との間の静電相互作用の重要性の予想を確認するものである。おそらく、バイオポリマー中へのプロトンの流入によって、マトリクスからの薬物分子の排除（displacement）が引き起こされる。加えて、ｐＨの減少が、荷電した種の方向へ平衡を移動させることによって、荷電した薬物種の分布に影響を及ぼす。これらの種はタンパク質の負に荷電した表面の方向へ駆動されるため、これらを溶媒によって容易に洗い流すことができる。
【０４１２】
実施例９：ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの分解
ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）シルク粒子の分解性を分析するために、エラスターゼ及びトリプシン（両方とも、脊椎動物における自然発生的なプロテアーゼ）の混合物を使用した。１．０ｍｇのシルク粒子を、０．８μｇのエラスターゼ及び１２．５μｇのトリプシンの存在下で、１．０ｍｌのＰＢＳ中でインキュベートした。２週間にわたり、試料を、毎日採取し、遠心分離した。レーザー回折分光分析及び走査電子顕微鏡検査を使用するサイズ及び形態の更なる分析のために、ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子を含有するペレットを、蒸留水に再分散させ、３回洗浄した。ブタ膵臓由来のエラスターゼ及びトリプシンは、Sigma Aldrich（St. Louis, USA）によって供給されたものである。
【０４１３】
非分解性システムよりも炎症及び中毒症のリスクが劇的に低くなるため、薬物貯蔵システムの分解性は非常に望ましい特性である。ほとんどのバイオポリマーが酵素分解の能力を特徴とするため、分解研究を、ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）薬物担体の天然様の分解をシミュレートするために脊椎動物において自然発生するプロテアーゼ（トリプシン及びエラスターゼ）を使用して行った。エラスターゼ及びトリプシン、すなわちセリンプロテアーゼは、小さな疎水性アミノ酸、例えばグリシン、アラニン及びバリンのカルボキシ側のペプチド結合を切断することができる。ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）においてグリシン及びアラニンの含有量が相対的に高い（≒総アミノ酸組成の５０％）ために、かかるプロテアーゼは、ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）のアミノ酸骨格における複数部位でペプチド結合を切断し得る。
【０４１４】
ＬＤＳ及びＳＥＭを使用する分解実験から採取した粒子集合体のサイズ及び形態の分析によって、分解の２日後に、粒子がクラスターを形成することが示された（図５ａ）。分布中に最も多く見出される粒径を表す最頻値を、粒子の平均サイズと比較することによって、集合体のより大きな粒子が優先的に分解されるという結論が導かれる（図５ｂ）。
【０４１５】
ｔ＝０では平均値は最頻値より大きく、より大きな粒子に向かう非対称的なサイズ分布を示している。２日間の酵素分解によって、平均値と最頻値とが互いに近づき、より大きな粒子が消失し、粒子分布が対称的となることが示される。粒子分布は、平均値が最頻値未満に低下し、より小さな粒子に向かう非対称的なサイズ分布を示す８日目まで対称的な状態を維持する。
【０４１６】
単一粒子対凝集体の相対的な関係の分析によって、振動性凝集挙動が示される（図５ａ、図５ｃ）。
【０４１７】
ｅＡＤＦ（Ｃ１６）粒子の二次構造の変化は、波数１６４８ｃｍ−１〜１６６０ｃｍ−１及び１６２５ｃｍ−１〜１６４０ｃｍ−１でのＦＴＩＲスペクトルの二次導関数変化によって、最も効果的に検出することができる。結果は、百分率の（percental）βシート及びαヘリックスの含有量の微小な変化のみが起こることを示す（図５ｄ）。ｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の全体的な構造は保存される。これは、生理学的条件でのｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子の長期安定性及び放出挙動に関する重要な結果である、というのは、構造的変化は放出特性を顕著に変化させると考えられるためである。
【０４１８】
実施例１０：タンパク質装填、及びＣ１６スパイダーシルク粒子のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの分解
装填実験のために、以下のタンパク質化合物を選んだ：
（ａ）１１．３５という等電点を有するタンパク質化合物であるリゾチーム。このタンパク質は、調査したｐＨ（７．０）で全体として正の正味電荷を示し、１４．３ｋＤａの分子量を有する。
（ｂ）神経成長因子（ＮＧＦ）は、９．５という等電点及び１３ｋＤａの分子量を有する。ＮＧＦも、調査したｐＨ（７．０）で正に荷電している。
【０４１９】
リゾチームによる装填は、３０ｍＭ、６０ｍＭ及び１００ｍＭの種々のイオン強度（塩化ナトリウムを用いて調整した）で、緩衝液（１０ｍＭリン酸、ｐＨ７．０）中で行った。実施例６において適用されたような装填手順を、以下のように修正して実施した：スパイダーシルク粒子のストック分散液を遠心分離し、装填前に所望の緩衝媒体に再分散させた。リゾチームを含む第２のストック溶液を、同一の緩衝溶液に凍結乾燥リゾチームを溶解することによって調製した。スパイダーシルク粒子懸濁液及びリゾチームストック溶液を混合して、最終的なスパイダーシルク粒子濃度０．５ｍｇ／ｍｌを達成した。穏やかにかき混ぜながら室温で３０分インキュベーションした後、得られた粒子懸濁液２０μｌを、動的光散乱測定に使用した。同時に、試料を遠心分離し、上清を、Ｍｉｃｒｏ  ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Thermo Scientific）を使用して残留タンパク質含有量について分析した。カプセル封入効率及び装填率を、実施例６に従って、それぞれ式（１）及び式（２）を使用することによって決定した。
【０４２０】
リゾチームを、Ｃ１６スパイダー（ｅＡＤＦ４（Ｃ１６））シルク粒子上に大量に装填した（図６Ａを参照されたい）。３０ｍＭのイオン強度で、スパイダーシルク粒子上に３０％［ｗ／ｗ］を超えるリゾチームを装填することが可能であった。関連する装填効率は、６％〜２０％の範囲の３０％のｗ／ｗ比まで、＞９０％が維持されており、リゾチームの非常に効果的な装填が示されている。リゾチームによる粒子の装填が、３０％の装填率までは粒子のゼータ電位の有意な変化を示さないことを示すことができた（図６Ｂを参照されたい）。これは、リゾチームがマトリクス中に拡散し、粒子の表面に主に吸着されないことを主張している。
【０４２１】
リゾチームによる粒子の装填はゼータ電位の有意な増大をもたらさず、このことは、スパイダーシルク粒子の中央値の増大が検出できないことに対応する。したがって、化合物（リゾチーム）がスパイダーシルク粒子中に浸透／拡散すると結論付けることができる。
【０４２２】
ほぼ１０％［ｗ／ｗ］装填したスパイダーシルク粒子２５０μｇを用いたモデル算出によれば、装填した全化合物（４．１ｎｍの流体力学的直径を有するリゾチーム）の最大で僅か１２．５％が、粒子の表面上の単層として理論的に位置し得た。
【０４２３】
算出のために、スパイダーシルク粒子上のリゾチームの最密（closest/densest）球状充填を採用する。スパイダーシルク粒子中への浸透とは対照的に、表面におけるリゾチーム分子の吸着は、粒子の直径を約８０ｎｍ増大させると考えられる。驚くべきことに、ｚ−平均の増大、及びひいては粒径の増大は、検出することができなかった。このことは、粒子のマトリクス中へのリゾチーム分子の浸透／拡散を更に主張する。図８は、非装填の（ｅＡＤＦ４）Ｃ１６スパイダーシルク粒子と比較して、およそ１０％［ｗ／ｗ］のリゾチームを装填した（ｅＡＤＦ４）Ｃ１６スパイダーシルク粒子のサイズの増大がないことを示す。
【０４２４】
装填効率は、３０％までのｗ／ｗ比については９０％超に及び、非常に効果的な装填プロセス（添加した全リゾチームの９０％超が、粒子と結合している／粒子中に浸透している）を表す。３０％を上回るｗ／ｗ比では装填効率はゆっくりと減少し、溶液中に大量の非装填リゾチームをもたらす。
【０４２５】
図７は、スパイダーシルク粒子中へのリゾチームの装填に対するイオン強度の影響を示す。３０ｍＭから１００ｍＭまでのイオン強度の増大によって、装填率及び装填効率の明らかな減少がもたらされる。例えば、３０％のｗ／ｗ比での装填率は、３０ｍＭでの２８％から、６０ｍＭでの２４％及び１００ｍＭでの２０％まで低減する。
【符号の説明】
【０４２６】
図１の英語訳
Quantity  量
Particle size  粒径
Intensity at400 nm  ４００ｎｍでの強度
Concentration  濃度
図２の英語訳
ζ-Potential  ζ電位
Methyl violet  メチルバイオレット
Glass beads  ガラスビーズ
Particles  粒子
Loading  装填率
Molar ratio  モル比
Loadingefficiency  装填効率
図３の英語訳
Loadingefficiency  装填効率
図４の英語訳
Release  放出率
time  時間
Ethacridinelactate  乳酸エタクリジン
Methyl violet  メチルバイオレット
(theo.)  理論
(exp.)  実験
図５の英語訳
time  時間
size  サイズ
mean ofparticle ensemble  粒子集合体の平均
mode ofparticle ensemble  粒子集合体の最頻値
particles  粒子
agglomerations  凝集体
Intensity  強度
wavenumber  波数
control  対照
day  日目
図６の英語訳
loading  装填率
w/w-ratio  ｗ／ｗ比
loadingefficiency  装填効率
zeta-potential  ゼータ電位
blank  ブランク
loaded eADF4（C16） particles at pH 7.0/30mM  ｐＨ７．０／３０ｍＭで装填されたｅＡＤＦ４（Ｃ１６）粒子
図７の英語訳
loading  装填率
w/w-ratio  ｗ／ｗ比
loadingefficiency  装填効率
図８の英語訳
Z-average  Ｚ平均
blank  ブランク
lysozyme  リゾチーム
【配列表フリーテキスト】
【０４２７】
配列表フリーテキスト
配列番号３、２０〜２４、２７〜３４、４５〜９６：

配列番号３      GPGXX; X= A, S, G, Y, P, Q
配列番号２０    モジュールＡ：GPYGPGASAA AAAAGGYGPGSGQQ
配列番号２１    モジュールＣ：GSSAAAAAAA ASGPGGYGPE NQGPSGPGGY GPGGP
配列番号２２    モジュールＱ：GPGQQGPGQQ GPGQQGPGQQ
配列番号２３    モジュールＫ：GPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPY
配列番号２４    モジュールｓｐ：GGTTIIEDLD ITIDGADGPITISEELTI
配列番号２７    モジュールＸ：GGAGGAGGAG GSGGAGGS
配列番号２８    モジュールＹ：GPGGAGPGGY GPGGSGPGGY GPGGSGPGGY
配列番号２９    モジュールＡＣ：GPYGPGASAA AAAAGGYGPG CGQQ
配列番号３０    モジュールＡＫ：GPYGPGASAA AAAAGGYGPG KGQQ
配列番号３１    モジュールＣＣ：GSSAAAAAAA ASGPGGYGPE NQGPCGPGGY GPGGP
配列番号３２    モジュールＣＫ１：GSSAAAAAAA ASGPGGYGPE NQGPKGPGG Y GPGGP
配列番号３３    モジュールＣＫ２：GSSAAAAAAA ASGPGGYGPK NQGPSGPGGY GPGGP
配列番号３４    モジュールＣＫＣ：GSSAAAAAAA ASGPGGYGPK NQGPCGPGGY GPGGP
配列番号４５  −  ＮＲ３（ＡＤＦ−３）：
MASMTGGQQMGRGSMGAASAAVSVGGYGPQSSSAPVASAAASRLSSPAASSRVSSAVSSLVSSGPTNQAALSNTISSVVSQVSASNPGLSGCDVLVQALLEVVSALVSILGSSSIGQINYGASAQYTQMVGQSVAQALAG
配列番号４６  −  ＮＲ４（ＡＤＦ−４）：
MASMTGGQQMGRGSMGAYGPSPSASASVAASRLSSPAASSRVSSAVSSLVSSGPTNGAAVSGALNSLVSQISASNPGLSGCDALVQALLELVSALVALLSSASIGQVNVSSVSQSTQMISQALSG
配列番号４７  −  ＡＤＦ−３：
MASMTGGQQMGRDPNSARAGSGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPYGPGASAAAAAAGGYGPGSGQQGPSQQGPGQQGPGGQGPYGPGASAAAAAAGGYGPGSGQQGPGGQGPYGGSSAAAAAAGGNGPGSGQQGPGQQGPGQQGPGASAAAAAAGGYGPGSGQQGPGQQGPGGQGPYGPGASAAAAAAGGYGPGSGQQGPGQQGPGGQGPYGPGASAAAAAAGGYGPGSGQQGPGQQGPGQQGPGGQGPYGPGASAAAAAAGGYGPGYGQQGPGQQGPGGQGPYGPGASAASAASGGYGPGSGQQGPGQQGPGGQGPYGPGASAAAAAAGGYGPGSGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGGQGPYGPGASAAAAAAGGYGPGSGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGGQGAYGPGASAAAGAAGGYGPGSGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPYGPGASAAAAAAGGYGPGSGQQGPGQQGPGQQGPVGQGPYGPGAASAAVSVGGYGPQSSSAPVASAAASRLSSPAASSRVSSAVSSLVSSGPTNQAALSNTISSVVSQVSASNPGLSGCDVLVQALLEVVSALVSILGSSSIGQINYGASAQYTQMVGQSVAQALA
配列番号４８  −  ＡＤＦ−４：
MASMTGGQQMGRAARAGSSAAAAAAASGSGGYGPENQGPSGPVAYGPGGPVSSAAAAAAAGSGPGGYGPENQGPSGPGGYGPGGSGSSAAAAAAAASGPGGYGPGSQGPSGPGGSGGYGPGSQGPSGPGASSAAAAAAAASGPGGYGPGSQGPSGPGAYGPGGPGSSAAASGPGGYGPGSQGPSGPGGSGGYGPGSQGPSGPGGPGASAAAAAAAAASGPGGYGPGSQGPSGPGAYGPGGPGSSAAASGPGGYGPGSQGPSGPGAYGPGGPGSSAAAAAAAGSGPGGYGPGNQGPSGPGGYGPGGPGSSAAAAAAASGPGGYGPGSQGPSGPGVYGPGGPGSSAAAAAAAGSGPGGYGPGNQGPSGPGGYGPGGSGSSAAAAAAAASGPGGYGPGSQGPSGPGGSGGYGPGSQGPSGPGASSAAAAAAAASGPGGYGPGSQGPSGPGAYGPGGPGSSAAASGPGGYGPGSQGPSGPGAYGPGGPGSSAAAAAAASGPGGYGPGSQGPSGPGGSRGYGPGSQGPGGPGASAAAAAAAAASGPGGYGPGSQGPSGPGYQGPSGPGAYGPSPSASASVAASRLSSPAASSRVSSAVSSLVSSGPTNGAAVSGALNSLVSQISASNPGLSGCDALVQALLELVSALVAILSSASIGQVNVSSVSQSTQMISQALSG
ニワオニグモフィブロイン
配列番号４９：
>gi|1263283|gb|AAC47008.1|フィブロイン−１
HESSYAAAMAASTRNSDFIRNMSYQMGRLLSNAGAITESTASSAASSASSTVTESIRTYGPAAIFSGAGAGAGVGVGGAGGYGQGYGAGAGAGAGAGAGAGGAGGYGQGYGAGAAAAAGAGAGAAGGYGGGSGAGAGGAGGYGQGYGAGSGAGAGAAAAAGASAGAAGGYGGGAGVGAGAGAGAAGGYGQSYGSGAGAGAGAGAAAAAGAGARAAGGYGGGYGAGAGAGAGAAASAGASGGYGGGYGGGAGAGAVAGASAGSYGGAVNRLSSAGAASRVSSNVAAIASAGAAALPNVISNIYSGVLSSGVSSSEALIQALLEVISALIHVLGSASIGNVSSVGVNSALNAVQNAVGAYAG
配列番号５０：
>gi|1263285|gb|AAC47009.1|フィブロイン−２
GSQGAGGAGQGGYGAGGGGAAAAAAAAVGAGGGGQGGLGSGGAGQGYGAGLGGQGGASAAAAAAGGQGGQGGQGGYGGLGSQGAGGAGQLGYGAGQESAAAAAAAAGGAGGGGQGGLGAGGAGQGYGAAGLGGQGGAGQGGGSGAAAAAGGQGGQGGYGGLGPQGAGGAGQGGYGGGSLQYGGQGQAQAAAASAAASRLSSPSAAARVSSAVSLVSNGGPTSPAALSSSISNVVSQISASNPGLSGCDILVQALLEIISALVHILGSANIGPVNSSSAGQ
SASIVGQSVYRALS
配列番号５１：
>gi|1263287|gb|AAC47010.1|フィブロイン−３
ARAGSGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPYGPGASAAAAAAGGYGPGSGQQGPSQQGPGQQGPGGQGPYGPGASAAAAAAGGYGPGSGQQGPGGQGPYGPGSSAAAAAAGGNGPGSGQQGAGQQGPGQQGPGASAAAAAAGGYGPGSGQQGPGQQGPGGQGPYGPGASAAAAAAGGYGPGSGQGPGQQGPGGQGPYGPGASAAAAAAGGYGPGSGQQGPGQQGPGQQGPGGQGPYGPGASAAAAAAGGYGPGYGQQGPGQQGPGGQGPYGPGASAASAASGGYGPGSGQQGPGQQGPGGQGPYGPGASAAAAAAGGYGPGSGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGGQGPYGPGASAAAAAAGGYGPGSGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGGQGAYGPGASAAAGAAGGYGPGSGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPGQQGPYGPGASAAAAAAGGYGPGSG
QQGPGQQGPGQQGPGGQGPYGPGAASAAVSVGGYGPQSSSVPVASAVASRLSSPAASSRVSSAVSSLVSSGPTKHAALSNTISSVVSQVSASNPGLSGCDVLVQALLEVVSALVSILGSSSIGQINYGASAQYTQMVGQSVAQALA
配列番号５２：
>gi|1263289|gb|AAC47011.1|フィブロイン−４
AGSSAAAAAAASGSGGYGPENQGPSGPVAYGPGGPVSSAAAAAAAGSGPGGYGPENQGPSGPGGYGPGGSGSSAAAAAAAASGPGGYGPGSQGPSGPGGSGGYGPGSQGASGPGGPGASAAAAAAAAAASGPGGYGPGSQGPSGPGAYGPGGPGSSAAAAAAAASGPGGYGPGSQGPSGPGVYGPGGPGSSAAAAAAAGSGPGGYGPENQGPSGPGGYGPGGSGSSAAAAAAAASGPGGYGPGSQGPSGPGGSGGYGPGSQGGSGPGASAAAAAAAASGPGGYGPGSQGPSGPGYQGPSGPGAYGPSPSASASVAASVYLRLQPRLEVSSAVSSLVSSGPTNGAAVSGALNSLVSQISASNPGLSGCDALVQALLELVSALVAILSSASIGQVNVSSVSQSTQMISQALS
大瓶状腺スピドロイン１
配列番号５３：
>gi|185179256|gb|ACC77633.1|大瓶状腺スピドロイン１（アメリカジョロウグモ）
AGQGGLGGQGAGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGSQGAGRGGLGGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGGQGAGQGAGQGGYGGLGSQGAGRGGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGGQGVGRGGLGGQGAAAAGGAGQGGYGGVGSGASAASAAASRLSSPQASSRVSSAVSNLVASGPTNSAALSSTISNVVSQIGASNPGLSGCDVLIQALLEVVSALIHILGSSSIGQVNYGSAGQATQIVGQSVYQALG
配列番号５４：
>gi|50363145|gb|AAT75312.1|大瓶状腺スピドロイン１（アメリカジョロウグモ）
GGQGAGRGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGGQGAGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGSQGAGRGGYGGQGAEAAAAAAAGGAAQGGQGLGGQGAAAAAGGAGQGGFGGLGGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGSQGAGRGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGGQGAGRGAGAAAAAAGGAAQGGYGDLGSQGAGAAAAAAGSAGQGGYGGLGGQGAGQGAGAAAAAAGSAGQGGLGGRAGQGAGAASAAAGGAGQGGYGGLGGQGAGQGGYGGVGSGASAASSAASRLSSPEASSRVSSAVSNLVSSGPTNSAALSSTISNVVSQIGASNPGLSGCDVLVQALLEVVSALIHILGSSSIGQVNYGSAGQATQIVGQSIYQALG
配列番号５５：
>gi|50363143|gb|AAT75311.1|大瓶状腺スピドロイン１（アメリカジョロウグモ）
AGAAAAAGSAGQGGYGGQGAGQGGYGGLGSQGAGRGGLGGQGAGAAAAAAAGGAGQGGLGGQGAGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGNQGAGRGGQGAAAAAAGGAGQGGYGGLGSQGAGRGGLGGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGGQGAGQGGYGGLGSQGSGRGGLGGQGAGAAAAAAGGAGQGGLGGQGAGQGAGAAAAAAGGVRQGGYGGLGSQGAGRGGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGGQGVGRGGLGGQGAGAAAAGGAGQGGYGGVGSGASAASAAASRLSSPQASSRVSSAVSNLVASGPTNSAALSSTISNVVSQIGASNPGLSGCDVLIQALLEVVSALIHILGSSSIGQVNYGSAGQATQIVGQSVYQALG
配列番号５６：
>gi|50363141|gb|AAT75310.1|大瓶状腺スピドロイン１（アメリカジョロウグモ）
GGLGIQGSGRGGLGGQGAVAAAAAAAGGAVQVVLGGQGAGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGSQGAGRGGQGAGARTAAAVGAGQGGYGGQGAGQGGYGGLGSQGAGRGGLGGQGAGAAAAAAAGSAEQGLGGQGAGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGSQGAGRGGLGGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGGQGAGQGGYGGLGSQGSGRGGLGGQGAGAAAAAAGGAGQGGLGGQGAGQGAGAAAAAAGGVRQGGYGGLGSQGAGRGGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGGQGVGRGGLGGQGAGAAAAGGAGQGGYGGVGSGASAASAAASRLSSPQASSRVSSAVSNLVASGPTNSAALSSTISNVVSQIGASNPGLSGCDVLIQALLEVVSALIHILGSSSIGQVNYGSAGQATQIVGQSVYQALG
配列番号５７：
>gi|50363139|gb|AAT75309.1|大瓶状腺スピドロイン１（アメリカジョロウグモ）
QGTDAAAAAAGGAGQGGYGGLGGQGAGQGGYGGLGSQGSGRGGLGGQGAGAAAAAAGGAGQGAGQGAGAAAAAAGGVRQGGYGGLGSQGAGRGGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGGQGVGRGGLGGQGAGAAAAGGAGQGGYGGVGSGASAASAAASRLSSPQASSRVSSAVSNLVASGPTNSAALSSTISNVVSQIGSSNPGLSGCDVLIQALLEVVSALIQILGSSSIGQVNYGSAGQATQIVGQSVYQALG
配列番号５８：
>gi|50363137|gb|AAT75308.1|大瓶状腺スピドロイン１（アメリカジョロウグモ）
GQGAGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGNQGAGRGGQGAAAAAAGGAGQGGYGGLGSQGAGRGGLGGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGGQGAGQGAGQGGYGGLGIQGSGRGGLGGQGAGAAAAAAGGAGQGGLGGQGAGQGAGAAAAAAGGVRQGGYGGLGSQGAGRGGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGGQGVGRGGLGGQGAGAAAAGGAGQGGYGGVGSGASAASAAASRLSSPQASSRVSSAVSNLVASGPTNSAALSSTISNVVSQIGASNPGLSGCDVLIQALLEVVSALIQILGSSSIGQVNYGSAGQATQIVGQSVYQALG
配列番号５９：
>gi|13562006|gb|AAK30606.1|AF350277_1  大瓶状腺スピドロイン１（マダガスカルジョロウグモ）
GLGGQGAGQGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGSQGAGRGGYGGQGAGAAAAAAAGGAGQGGYGGLGSQGAGQGGYGGLGGQGAGQGAAAAAAAGGAGQGGYGGLGSQGAGRGGYGGQGAGAAAAATGGAGQGGYGGVGSGASAASAAASRLSSPQASSRVSSAVSNLVASGPTNSAALSSTISNAVSQIGASNPGLSGCDVLIQALLEVVSALIHILGSSSIGQVNYGSAGQATQ
配列番号６０：
>gi|13562022|gb|AAK30614.1|AF350285_1  大瓶状腺スピドロイン１（テトラグナータ・カウアイエンシス（Tetragnathakauaiensis））
SGLGGAGQGAGQGASAAAAAAAXGGLGGGQGAGQGGQQGAGQGGYGSGLGGAGQGASAAAAAAAAGGLGGGQGAGQGGQQGAGQGGYGSGLGGAGQGASAAAAAAAAGGLGGGQGAGQGGQQGAGQGGYGSGLGGAGQGAGQGASAAAAAAAGGLGGGQGGYGSGLGGVGQGGQGALGGSRNSATNAISNSASNAVSLLSSPASNARISSAVSALASGAASGPGYLSSVISNVVSQVSSNSGGLVGCDTLVQALLEAAAALVHVLASSSGGQVNLNTAGYTSQL
配列番号６１：
>gi|13562010|gb|AAK30608.1|AF350279_1  大瓶状腺スピドロイン１（アフリカジョロウグモ）
GLGGQGAGRGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGGQGAGAAAAAAGGAGQGGQGLGGRGAAAAGGAGQGGYGGLGGQGAGRGAGAAAAAAGGAGQGGYGGLGGQGAGAAAAAAAAGGAGQGGYGGLGSQGAGRGGYGGQGAGAAVAAIGGVGQGGYGGVGSGASAASAAASRLSSPEASSRVSSAVSNLVSSGPTNSAALSSTISNVVSQIGASNPGLSGCDVLIQALLEVVSALVHILGSSSIGQVNYGSAGQATQ
配列番号６２：
>gi|13562024|gb|AAK30615.1|AF350286_1  大瓶状腺スピドロイン１（テトラグナータ・ベルシカラー（Tetragnatha versicolor））
SGQGASAAAAAAGGLGGGQGGYGSGLGGAGQGGQQGAGQGAAAAAASAAAGGLGGGQGGQQGAGRGGLQGAGQGGQGALGGSRNSAANAVSRLSSPASNARISSAVSALASGGASSPGYLSSIISNVVSQVSSNNDGLSGCDTVVQALLEVAAALVHVLASSNIGQVNLNTAGYTSQL
配列番号６３：
>gi|13561998|gb|AAK30602.1|AF350273_1  大瓶状腺スピドロイン１（ラトロデクツス・ゲオメトリクス）
AGSGQGGYGQGYGEGGAGQGGAGAAAAAAAAAGGAGQGGQGGYGQGYGQGGAGQGGAGAAAAAAAGGAGQGGYGRGGAGQGAAAAAAAAGSGQGGQGGYGQGYGQGGAGQGGAGAAAAAAAAGGAGQGGYGRGGAGQGGAAAAAAAAGGAGQGGQGGYGQGYGQGGAGQGGAGAAAAAAAAGGAGQGGYGRGGAGQGGSAAAAAAAGGAGQGGYGRGGAGQGGAGSAAAAAAAGGSGQGGQGGYGQGYGQGGAGQGGAAAAASALAAPATSARISSHASTLLSNGPTNPASISNVISNAVSQISSSNPGASSCDVLVQALLELVTALLTIIGSSNVGNVNYDSSGQYAQVVSQSVQNAFV
配列番号６４：
>gi|13561984|gb|AAK30595.1|AF350266_1  大瓶状腺スピドロイン１（アルギオープ・トリファシアタ）
AAAAAAAAAGGQGGQGGYDGLGSQGAGQGGYGQGGAAAAAAAASGAGSAQRGGLGAGGAGQGYGAGSGGQGGAGQGGAAAATAAAAGGQGGQGGYGGLGSQGSGQGGYGQGGAAAAAAAASGDGGAGQEGLGAGGAGQGYGAGLGGQGGAGQGGAAAAAAAAAGGQGGQGGYGGLGSQGAGQGGYGQGGAAAAAAAASGAGGAGQGGLGAAGAGQGYGAGSGGQGGAGQGGAAAAAAAAAGGQGGQGGYGGLGSQGAGQGGYGQGGVAAAAAAASGAGGAGRGGLGAGGAGQEYGAVSGGQGGAGQGGEAAAAAAAAGGQGGQGGYGGLGSQGAGQGGYGQGGAAAAAAAASGAGGARRGGLGAGGAGQGYGAGLGGQGGAGQGSASAAAAAAAGGQGGQGGYGGLGSQGSGQGGYGQGGAAAAAAAASGAGGAGRGSLGAGGAGQGYGAGLGGQGGAGQGGAAAAASAAAGGQGGQGGYGGLGSQGAGQGGYGQGGAAAAAASAGGQGGQGGYGGLGSQGAGQGGYGGGAFSGQQGGAASVATASAAASRLSSPGAASRVSSAVTSLVSSGGPTNSAALSNTISNVVSQISSSNPGLSGCDVLVQALLEIVSALVHILGSANIGQVNSSGVGRSASIVGQSINQAFS
大瓶状腺スピドロイン２
配列番号６５：
>gi|50363155|gb|AAT75317.1|大瓶状腺スピドロイン２（アメリカジョロウグモ）
GGYGPGQQGPGGYGPGQQGPSGSGSAAAAAAAGPGQQGPGGYGPGQQGPGGYGPGQQGPSGPGSAAAAAAAAAGPGGYGPAQQGPSGPGIAASAASAGPGGYGPAQQGPAGYGPGSAVAASAGAGSAGYGPGSQASAAASRLASPDSGARVASAVSNLVSSGPTSSAALSSVISNAVSQIGASNPGLSGCDVLIQALLEIVSACVTILSSSSIGQVNYGAASQFAQVVGQSVLSAF
配列番号６６：
>gi|50363153|gb|AAT75316.1|大瓶状腺スピドロイン２（アメリカジョロウグモ）
PGGYGPGQQGPSGAGSAAAAAAAGPGQQGLGGYGPGQQGPGGYGPGQQGPGGYGPGSASAAAAAAGPGQQGPGGYGPGQQGPSGPGSASAAAAAAAAGPGGYGPGQQGPGGYAPGQQGPSGPGSAAAAAAAAAGPGGYGPAQQGPSGPGIAASAASAGPGGYGPAQQGPAGYGPGSAVAASAGAGSAGYGPGSQASAAASRLASPDSGARVASAVSNLVSSGPTSSAALSSVISNAVSQIGASNPGLSGCDVLIQALLEIVSACVTILSSSSIGQVNYGAASQFAQVVGQSVLSAF
配列番号６７：
>gi|50363147|gb|AAT75313.1|大瓶状腺スピドロイン２（アメリカジョロウグモ）
GPGGYRPGQQGPSGPGSAAAAAAAAAGPGGYGPGQQGPGGYGPGQQGPSGAGSAAAAAAAGPGQQGLGGYGPGQQGPGGYGPGQQGPGGYGPGSASAAAAAAGPGQQGPGGYGPGQQGPSGPGSASAAAAAAGPGGYGPGQQGPGGYAPGQQGPSGPGSAAAAAAAARAGPGGYGPAQQGPSGPGIAASAASAGPGGYGPAQQGPAGYGPGSAVAASAGAGSAGYGPGSQASAAASRLASPDSGARVASAVSNLVSSGPTSSAALSSVISNAVSQIGASNPGLSGCDVLIQALLEIVSACVTILSSSSIGQVNYGAASQFAQVVGQSVLSAF
配列番号６８：
>gi|50363151|gb|AAT75315.1|大瓶状腺スピドロイン２（アメリカジョロウグモ）
GRGAGQQGPGGYGPGQQGPGGYGPGQQGPSGPGSAAAAAAAASGPGQQGPGGYGPGQQGPGGYGPGQQSPSGPGSAAAAAAAAAGPGQQGPGGYGPGQQGPSGPGSASAAAAAAGPGGYGPGQQGPGGYAPGQQGPSGPGSAAAAAAARAGPGGYGPAQQGPSGPGIAASAASAGPGGYGPAQQGPAGYGPGSAVAASAGAGSAGYGPGSQASAAASRLASPDSGARVASAVSNLVSSGPTSSAALSSVISNAVSQIGASNPGLSGCDVLIQALLEIVSACVTILSSSSIGQVNYGAASQFAQVVGQSVLSAF
配列番号６９：
>gi|50363149|gb|AAT75314.1|大瓶状腺スピドロイン２（アメリカジョロウグモ）
SAAAAAAAAAGPGGYGPGQQGPGGYGPGQQGPSGAGSAAAAAGPGQQGLGGYGPGQQGPGGYGPGQQGPGGYGPGSASAAAAAAGPGQQGPGGYGPGQQGPSGPGSASAAAAAAGPGGYGPGQQGPGGYAPGQQGPSGPGSAAAAAAAAAGPGGYGPAQQGPSGPGIAASAASAGPGGYGPAQQGPAGYGPGSAVAASAGAGSAGYGPGSQASAAASRLASPDSGARVASAVSNLVSSGPTSSAALSSVISNAVSQIGASNPGLSGCDVLIQALLEIVSACVTILSSSSIGQVNYGAASQFAQVVGQSVLSAF
配列番号７０：
>gi|13562012|gb|AAK30609.1|AF350280_1  大瓶状腺スピドロイン２（アフリカジョロウグモ）
QGPGGYGPSGPGSAAAASAAAGPGQQGPGAYGPSGPGSAAAAAGPGXYGPGQQGPSGPGAAAAAAGPGQQGPGGYGPGAAAAAAAAAGPGQQGPVAYGPSGPGSAASAAGPGGYGPARYGPSGSAAAAAAAGAGSAGYGPGPQASAAASRLASPDSGARVASAVSNLVSSGPTSSAALSSVIXNAVSQIGASNPGLSGCDVLIXALLEIVSACVTILSSSSIGQVNYGAA
配列番号７１：
>gi|13562008|gb|AAK30607.1|AF350278_1  大瓶状腺スピドロイン２（マダガスカルジョロウグモ）
QGPSGPGSAAAAAAAGPGQQGPGGYGPGQQGPGGYGPGQQGPSGPGSAAAAAAAAAAGPGQQGPGGYGPGPQGPGGYGPGQQGPSGYGPGQQGPSGPGSAASAAAAAGSGQQGPGGYGPGQQGPGGYGPGQQGPSGPGSAAAAAAAGPGQQGPGGYGPGQQGPGGYGPGQQGPSGPGSAAAAAAAAGPGQQGPGGYGPGQQGPGGYGPGQQGPSGPGSAAAAAAAGPGQQGPGGYGPGQQGPGGYGPGQQGPSGPGSAAAAAAAAAGPGQQGPGGYGPGQQGPGQQGPSGPGSAAAAAAAGPGPQGPGGYGPGQQGPGGYGPSGPGSAAAAAAAAGPGQQGPGGYGPGQQRPSGYGPGQQGPSGPGSAAAAAAAGPGQQGPGAYGPSGPGSAAAAAGLGGYGPAQQGPSGAGSAAAAAAAGPGGYGPVQQGPSGPGSAAGPGGYGPAQQGPARYGPGSAAAAAAAAGSAGYGPGPQASAAASRLASPDSGARVASAVSNLVSSGPTSSAALSSVISNAVSQIGASNPGLSGCDVLIQALLEIVSACVTILSSSSIGQVNYGAA
配列番号７２：
>gi|13562002|gb|AAK30604.1|AF350275_1  大瓶状腺スピドロイン２（ラトロデクツス・ゲオメトリクス）
AGPGSYGPSGPGGSGAAAAAAAASGPGGQQGYGPGGPGASAAAAAAAGGSGPGGYGQGPSGYGPSGPGAQQGYGPGGQGGSGAAAAAAAAAGSGPGGYGPGAAGPGNYGPSGPGGSGAAASAAAASGPGGQQGYGPGGSGAAAAAASGGAGPGRQQGYGPGGSGAAAAAAAAXGGSGPGGYGQGPXGYGPGGQGGSGGAAAAAAAASSGPXGYGPGAAGPGNYGPSGPGGSGAAAAAAAASGPGGQQGYGPGGSGASAAAAAGGAGXGRQQAYGPGGSGAAAAAASGSGGYGPAQYGXSSVASSAASAASALSSPTTHARISSHASTLLSSGPTNSAAISNVISNAVSQVSASNPGSSSCDVLVQALLELITALISIVDSSNIGQVNYGSSGQYAQMVG
配列番号７３：
>gi|13561986|gb|AAK30596.1|AF350267_1  大瓶状腺スピドロイン２（アルギオープ・トリファシアタ）
AGPGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQGPGGQGPYGPSAAAAAAAAGPGYGPGAGQQGPGSGGQQGGQGSGQQGPGGAGQGGPRGQGPYGPGAAAAAAAAGGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQGPGSQGPYGPSAAAAAAAAGPGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQGPGGQGPYGPSDAAAAAAAGPGYGPGAGQQGPGSGGQQGGQGSGQQGPGGAGQGGPRGQGPYGPGAAAAAAAAGGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQGPGSQGPYGPSAAAAAAAAGPGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQGPGSQGPYGPSAAAAAAAAGPGYGPGAGQQGPGSQAPVASAAASRLSSPQASSRVSSAVSTLVSSGPTNPASLSNAISSVVSQVSSSNPGLSGCDVLVQALLEIVSALVHILGSSSIGQINYAASSQYAQLVGQSLTQALG
配列番号７４：
>gi|13561978|gb|AAK30592.1|AF350263_1  大瓶状腺スピドロイン２（アルギオープ・アウランチア）
PGGAGQQGPGGQGPYGPGAAAAAAAAGGYGPGAGQQGPXGAGQQGPGSQGPGGAGQQGPGGQGPYGPGAAAAAAAVGGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQGPGGQGPYGPSAAAAAAAAGGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQGPGGLGPYGPSAAAAAAAAGGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQRPGGLGPYGPSAAAAAAAAGGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQRPGGLGPYGPSAAAAAAAAGGYGPGAGQQGPGSQAPVASAAASRLSSPQASSRVSSAVSTLVSSGPTNPAALSNAISSVVSQVSASNPGLSGCDVLVQALLELVSALVHILGSSSIGQINYAAS
配列番号７５：
>gi|70913274|gb|AAZ15372.1|大瓶状腺スピドロイン２（アルギオープ・トリファシアタ）
GQGSGQQRPGGAGQGGLGPYGPGAAAAAAAAAGGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQGPGSRGPYGPSAAAAAAAAGPGYGPGAGQRGPRSQGPGSGGQQGPGGQGPYGPSAAAAAAAAGPGYGPGAGQQGPGSQAPVASAAASRLSSPQASSRVSSAVSTLVSSGPTNPASLSNAISSVVSQVSASNPGLSGCDVLVQALLEIVSALVHILGSSSIGQINYAASSQYAQMVG
配列番号７６：
>gi|70913273|gb|AAZ15371.1|大瓶状腺スピドロイン２（アルギオープ・トリファシアタ）
MNWSIRLALLGFVVLSTQTVFSAGQGATPWENSQLAESFISRFLRFIGQSGAFSPNQLDDMSSIGDTLKTAIEKMAQSRKSSKSKLQALNMAFASSMAEIAVAEQGGLSLEAKTNAIASALSAAFLETTGYVNQQFVNEIKTLIFMIAQASSNEISGSAAAAGGSSGGGGGSGQGGYGQGAYASASAAAAYGSAPQGTGGPASQGPSQQGPVSQPSYGPSATVAVTAVGGRPQGPSAPRQQGPSQQGPGQQGPGGRGPYGPSAAAAAAAAGGYGPGAGQQGQQAGQGSGQQGPGGAGQGGPRGQGPYGPGAATAAAAAAGPGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQGPGSQGPYGPSAAAAAAAAGPGYGPGAGQQGPGSQGPRSGGQQGPGGQGPYGPSAAAAAAAAGPGYGPGAGQQGPGSGGQQGGPGSGQQGPGGAGQGGPRGQGPYGPGAAAAAAAAAGGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQGPGSQGPYGPSAAAAAAAAGPGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQGPGGQGPYGPSAAAAAAAAGPGYGPGAGQQGPGSGGQQGGQGSGQQGPGGAGQGGPRGQGPYGPGAAAAAAAAAGGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQGPGSQGPYGPSAAAAAAAAGPGYGPGAGQQGPGSGGQQ
配列番号７７：
>gi|164709224|gb|ABY67417.1|大瓶状腺スピドロイン２（ラトロデクツス・ゲオメトリクス） 
LRWSSKDNADRFINAFLQAASNSGAFSSDQVDDMSVIGNTLMTAMDNMGGRITPSKLQALDMAFASSVAEIAVADGQNVGGATNAISNALRSAFYQTTGVVNNQFISEISNLINMFAQVSANEVSYASGGSSSAAASAAASAGPAAQQVYAPSAGAPAAATASSGPGAYGPSAPGGPSAAAAAAASGGAGPGRQQSYGPGGSGAAAAAAATGGSGPGGYGQGPASYAPSGPGGQQGYGPGGSGAASAAAAAASSGPGGYGPGASGPGSYGPSGPGGSGAAAAAAAASAPGGQQGYGPGGSGAAAAAAAGGAGPGSQQAYGPGGSGAAAAAAAGPGSGGQQGYGPGGSAAAAAAAAAGGSGPGGYGQGPAGYGPSGPGAQQGYGPGGPG
配列番号７８：
>gi|13561996|gb|AAK30601.1|AF350272_1  大瓶状腺スピドロイン２（ガステラカンタ・マモサ）
GQQGPGSQGPYGPGAAAAAAAAAGGYRPVSGQQGPGQQGPGSGGQQGPGGQRPYGPGAAAAAAAAGGYGPGSGQGGPGQQGPGSGGQQGPGGQGPYGPGAAAAAAAAAGGYGPGSGQGGQQGPGSQGPGSGGQQGPGGQGPYGPSAAAAAAAVGGYGPGAGQQGPGQQGPGSGGQRGPGGQGPYGPGAAAAAAAAAGGYGPASGQQGPGQQGPGSGGQRGPGGQGPYGPGAAAAASAGGYGPGSGGSPASGAASRLSSPQAGARVSSAVSALVASGPTSPAAVSSAISNVASQISASNPGLSGCDVLVQALLEIVSALVSILSSASIGQINYGASGQYAAMI
小瓶状腺シルクタンパク質
配列番号７９：
>gi|2605800|gb|AAC14590.1|小瓶状腺シルクタンパク質（アメリカジョロウグモ）
GAGGYGRGAGAGAAAVAGADAGGYGRNYGAGTTAYAGARAGGAGGYGGQGGYSSGAGAAAASGAGADITSGYGRGVGAGAGAETIGAGGYGGGAGSGARAASASGAGTGYGSSGGYNVGTGISTSSGAASSYSVSAGGYASTGVGIGSTVTSTTSRLSSAEACSRISAAASTLVSGSLNTAALPSVISDLFAQVSASSPGVSGNEVLIQVLLEIVSSLIHILSSSSVGQVDFSSVGSSAAAVGQSMQVVMG
配列番号８０：
>gi|2605802|gb|AAC14591.1|小瓶状腺シルクタンパク質ＭｉＳｐ２（アメリカジョロウグモ）
SYGPSVFYTPTSAGSYGAGAGGFGAGASAGVGAGAGTVAGYGGQGGYGAGSAGGYGRGTGAGAAAGAGAGATAGAGAGAAAGAGAGAGNSGGYSAGVGVGAAAAAAGGGAGTVGGYGRGAGVGAGAAAGFAAGAGGAGGYRRDGGYGAGAGAGAAAA
配列番号８１：
>gi|2605798|gb|AAC14589.1|小瓶状腺シルクタンパク質ＭｉＳｐ１（アメリカジョロウグモ）
RGAASGAGAAAGAGAGAGGAGYGGQIGYGAGAGAGAAAAAGAGAGGAAGYGRGAGAGSGAAAGAGSGAGAGGYGGQAGYGAGAGAGSSAGNAFAQSLSSNLLSSGDFVQMISSTTSTDHAVSVATSVAQNVGSQLGLDANAMNNLLGAVSGYVSTLGNAISDASAYANALSSAIGNVLANSGSISESTASSAASSAASSVTTTLTSYGPAVFYAPSASSGGYGAGAGAVAAAGAAGAGGYGRGAGGYGGQGGYGAGAGAGAAAAAGAGAGGAGGYGRGAGAGAGAAAGAGAGAGGAGYGGQGGYGAGAGAGAAAAAGAGAGGAGGYGRGAGAGAGAAAGAGAGGYGGQGGYGAGAGAGAAAAAAGAGSGGAGGYGRGAGAGAGAAAGAGAGAGSYGGQGGYGAGAGAGAAAAAGAGAGAGGYGRGAGAGAGAGAGAAARAGAGAGGAGYGGQGGYGAGAGAGAAAAAGAGAGGAGGYGRGAGAGAGAAAGAGAGAGGYGGQSGYGAGAGAAAAAGAGAGGAGGYGRGAGAGAGAAAGAGAGAAAGAGAGGYGGQGGYGAGAGAGAAAAAGAGAGGAGGYGRGAGAGAGVAAGAGAGGYGGQGGYGAGAGAGAAAAAATGAGGAGGYGRGAGAGAGAAAGAGAGTGGAGYGGQGGYGAGAGAGAAAAAGAGAGGAGYGRGAGAGAGAAAGAGAGAAAGAGAGAGGYGGQGGYGAGAGAGAAAAAGAGAGGAAGYSRGGRAGAAGAGAGAAAGAGAGAGGYGGQGGYGAGAGAGAAAAAGAGSGGAGGYGRGAGAGAAAGAGAAAGAGAGAGGYGGQGGYGAGAGAAAAAGAGAGRGGYGRGAGAGGYGGQGGYGAGAGAGAAAAAGAGAGGYGDKEIACWSRCRYTVASTTSRLSSAEASSRISSAASTLVSGGYLNTAALPSVISDLFAQVGASSPGVSDSEVLIQVLLEIVSSLIHILSSSSVGQVDFSSVGSSAAAVGQSMQVVMG
鞭毛状シルクタンパク質
配列番号８２：
>gi|2833649|gb|AAC38847.1|鞭毛状シルクタンパク質（アメリカジョロウグモ）
GPGGVGPGGSGPGGYGPGGAGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGYGPGGSGPGGYGPGGTGPGGSGPGGYGPGGSGPGGSGPGGYGPGGSGPGGFGPGGSGPGGYGPGGSGPGGAGPGGVGPGGFGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGGAGGAGGAGGSGGAGGSGGTTIIEDLDITIDGADGPITISEELTISGAGGSGPGGAGPGGVGPGGSGPGGVGPGGSGPGGVGPGGSGPGGVGPGGAGGPYGPGGSGPGGAGGAGGPGGAYGPGGSYGPGGSGGPGGAGGPYGPGGEGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGEGGPYGPGGSYGPGGAGGPYGPGGPYGPGGEGPGGAGGPYGPGGVGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGAGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGSGGAGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGTGPGGTGPGGSGPGGYGPGGSGPGGSGPGGSGPGGYGPSGSGPGGYGPSGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGAGGTGPGGAGGAGGAGGSGGAGGSGGAGGSGGAGGSGGVGGSGGTTITEDLDITIDGADGPITISEELTISGAGGSGPGGAGPGGVGPGGSGPGGVGPGVSGPGGVGPGGSGPGGVGSGGSGPGGVGPGGYGPGGSGSGGVGPGGYGPGGSGGFYGPGGSEGPYGPSGTYGSGGGYGPGGAGGPYGPGSPGGAYGPGSPGGAYYPSSRVPDMVNGIMSAMQGSGFNYQMFGNMLSQYSSGSGTCNPNNVNVLMDALLAALHCLSNHGSSSFAPSPTPAAMSAYSNSVGRMFAY
配列番号８３：
>gi|2833647|gb|AAC38846.1|鞭毛状シルクタンパク質（アメリカジョロウグモ）
MGKGRHDTKAKAKAMQVALASSIAELVIAESSGGDVQRKTNVISNALRNALMSTTGSPNEEFVHEVQDLIQMLSQEQINEVDTSGPGQYYRSSSSGGGGGGQGGPVVTETLTVTVGGSGGGQPSGAGPSGTGGYAPTGYAPSGSGAGGVRPSASGPSGSGPSGGSRPSSSGPSGTRPSPNGASGSSPGGIAPGGSNSGGAGVSGATGGPASSGSYGPGSTGGTYGPSGGSEPFGPGVAGGPYSPGGAGPGGAGGAYGPGGVGTGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGTGPGGYGPGGTGPGGVGPGGAGPGGYGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGYGPGGSGPGGAGPSGAGLGGAGPGGAGLGGAGPGGAGTSGAGPGGAGPGGAGQGDAGPGGAGRGGAGRGGVGRGGAGRGGAGRGGARGAGGAGGAGGAGGSGGTTIVEDLDITIDGADGPITISEELTIGGAGAGGSGPGGAGPGNVGPGRSGPGGVGPGGSGPGGVGPGSFGPGGVGPGGSGPGGVGSGGSGQGGVRPSGSGPGGVGTGGVGPGGAGGPYGPGGSGPGSAGSAGGTYGPGGFGGPGGFGGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGSYGLGGAGGSGGVGPGGSGPGGYGPGGAGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGSGGYGPGGSGPGGSGPGGYGPGGTGPGGSESGGYGPGGSGPGGSGPGGSGPGGSGPGGYGPGGSGPSSFVPGGSGPGGSGPGGAGPGGAGPGGVGLGGAGRGGAGRGGAGSVGAGRGGAGRGGTG
配列番号８４：
>gi|13561982|gb|AAK30594.1|AF350265_1  鞭毛状シルクタンパク質（アルギオープ・トリファシアタ）
GAPGGGPGGAGPGGAGFGPGGGAGFGPGGGAGFGPGGAAGGPGGPGGPGGPGGAGGYGPGGAGGYGPGGVGPGGAGGYGPGGAGGYGPGGSGPGGAGPGGAGGEGPVTVDVDVTVGPEGVGGGPGGAGPGGAGFGPGGGAGFGPGGAPGAPGGPGGPGGPGGPGGPGGVGPGGAGGYGPGGAGGVGPAGTGGFGPGGAGGFGPGGAGGFGPGGAGGFGPGGAGGYGPGGVGPGGAGGFGPGGVGPGGSGPGGAGGEGPVTVDVDVSVGGAPGGGPGGAGPGGAGFGPGGGAGFGPGGGAGFGPGGAAGGPGGPGGPGGPGGAGGYGPGGAGGYGPGGVGPGGAGGYGPGGAGGYGPGGSGPGGAGPGGAGGEGPVTVDVDVTVGPEGVGGGPGGAGPGGAGFGPGGGAGFGPGGAPGAPGGPGGPGGPGGPGGPGGVGPGGAGGYGPGGAGGVGPAGTGGFGPGGAGGFGPGGAGGFGPGGAGGFGPAGAGGYGPGGVGPGGAGGFGPGGVGPGGSGPGGAGGEGPVTVDVDVSVGGAPGGGPGGAGPGGAGFGPGGGAGFGPGGGAGFGPGGAAGGPGGPGGPGGPGGAGGYGPGGAGGYGPGGVGPGGAGGYGPGGAGGYGPGGSGPGGAGPGGAGGEGPVTVDVDVTVGPEGVGGGPGGAGPGGAGFGPGGGAGFGPGGAPGAPGGPGGPGGPGGPGGPGGVGPGGAGGYGPGGAGGFGPGGTGGFGPGGAGGFGPGGAGGFGPGGAGGFGPGGAGGYGPGGVGPGGAGGFGPGGVGPGGSGPGGAGGEGPVTVDVDVSVGGAPGGGPGGAGPGGAGFGPGGGAGFGPGGGAGFGPGGAAGGPSGPGGPGGPGGAGGYGPGGAGGYGPGGVGPGGAGGYGPGGAGGYGPGGSGPGGAGPGGAGGEGPVTVDVDVTVGPEGVGGGPGGAGPGGAGFGPGGGAGFGPGGAPGAPGGPGGPGGPGGPGGPGGVGPGGAGGYGPGGAGGVGPAGTGGFGPGGA
配列番号８５：
>gi|7106229|gb|AAF36092.1|鞭毛状シルクタンパク質（マダガスカルジョロウグモ）
SGGSGGTTVIEDLDITIDGADGPITISEELTISGAGAGGSGPGGAGPGGVGPGGSGPGGVGPGGSGPGGVGPGGAGGPYGPGGSGPGGAGGAGGPGGAYGPGGSGGPGGAGGPYGPGGEGPGGAGGPYGPGGEGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGVGPGGTGPGGYGPGGAGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGFGPGGSGPGGSGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGAGPGGAGPGGVGPGGAGPGGAGPGGVGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGRGGAGPGGAGGAGGAGGSGGAGGSGGTTVIEDLDITIDGADGPITISEELTIGGAGGSGPGGAGGSGPGGAGPGGVGPGGSGPGGLGSGGSGPGGVGPGGSGPGGVGPGGYGPGGSGGLYGPGSYGPGGSGVPYGSSGTYGSGGGYGPGGAGGAYGPGSPGGAYGPGSGGSYYPSSRVPDMVNGIMSAMQGSGFNYQMFGNMLSQYSSGSGSCNPNNVNVLMDALLAALHCLSNHGSSSFAPSPTPAAMSAYSNSVGRMFAY
配列番号８６：
>gi|13561980|gb|AAK30593.1|AF350264_1  鞭毛状シルクタンパク質（アルギオープ・トリファシアタ）
AGGPGAGGAGAGGVGPGGFGGPGGFGGAGGPGGPGGPGGAGGGAGGAGGLYGPGGAGGLYGPGGLYGPGGAGVPGAPGASGRAGGIGGAAGGAGAGGVGPGGVSGGAGGAGGSGVTVVESVSVGGAGGPGAGGVGPGGVGPGGVGPGGIYGPGGAGGLYGPGAGGAFGPGGGAGAPGGPGGPGGPGGPGGLGGGVGGAGTGGGVGPGAGGVGPSGGAGGTGPVSVSSTVSVGGAGGPGAGGPGAGGAGAGGVGPGGFGGPGGFGGAGGPGGPGGPGGAGGGAGGAGGLYGPGGAGGLYGPGGLYGPGGAGVPGAPGASGRAGGIGGAAGAGGVGPGGVSGGAGGSGVSVTESVTVGGAGGAGAGGIGGPSGLGGAGATGGFGGRGGPGGPGGPGGPGRFGGAAGGAGAGGVGPGGVSGGAGGAGGSGVTVVESVSVGGAGGPGAGGVGPGGVGPGGVGPGGIYGPGGAGGLYGPGAGGAFGSGGGAGAPGGPGGPGGPGGPGGLGGGVGGAGTGGGVGPGVGGVGPSGGAGGTGPVSVSSTITVGGGQSSGGVLPSTSYAPTTSGYERLPNLINGIKSSMQGGGFNYQNFGNILSQYATGSGTCNYYDINLLMDALLAALHTLNYQGASYVPSYPSPSEMLSYTENVRRYF
配列番号８７：
>gi|7106228|gb|AAF36091.1|鞭毛状シルクタンパク質（マダガスカルジョロウグモ）
MGKGRHDTKAKAKAMQVALASSIAELVIAESSGGDVQRKTNVISNALRNALMSTTGSPNEEFVHEVQDLIQMLSQEQINEVDTSGPGQYYRSSSSGGGGGGGGGPVITETLTVTVGGSGAGQPSGAGPSGTGGYAPTGYAPSGSGPGGVRPSASGPSGSGPSGSRPSSSGSSGTRPSANAAGGSSPGGIAPGGSSPGGAGVSGATGGPASSGSYGSGTTGGAYGPGGGSEPFGPGAAGGQYGPGGAGPGGAGAYGPGGVGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGSGTGGAGPGGYTPGGAGPGGYGPGGYGPGGSGPGGAGSGGVGPGGYGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPSGAGPGGAGTGGAGTGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGRGGAGRGGAGRGGAGRGGAGRGGAGRGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGAGGSGSTTIIEDLDITIDGADGPITISEELTIGGAGAGGSGPGGAGPGGVGPGRSGPGGVGPGGSGPGSVGPGGSGQGGLGIGRSGPGGVGPGGSGPGSIGPGGSGQGGLGPGGSGQGGLGPGGSGPGGVGSGGVGGPYGPGGSGPGGVGGAGGPYGPGGSGGPGGAGGPYGPGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGPYGPGGAGGPGGGGPGGAGGPYGPGGPGGAGPGGYGPGGYGPGGAGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGSGPGGIGPGGSGPGGYGPGGIGPGGTGPGGAGPGGAGPGGAGPSGAGPGGAGPSGAGRGGSGRGSVGRGGAGRGGAGRGGAGGAGGSGGAGGSGGAGGSGGTTIIEDLDITVDGANGPITISEELTIGGAGAGGVGPGGSGPGGVGPGGSGPGGVGPGGSGPGGVGSGGSGPGGVGPGGSGPGGVGSGGFGPGGIGPGGSGPGGVGPGGVGGPYGPGGSGPGGAGGAGGSYGPGGPYGPGGSGGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGPYGPGGAGGPGGEGPGGAGGPYGPGGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGSGGYGPGGAGPGGYGPGGPGPGGYGPGGAGPGGYGPGGTGPGGSAPGGAGPGGAGPGGYGPGGSGPGGYGPGGGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGVGTGGLGRGGAGRGGAGRGGAGRGGAGRGGAGRGGTGGVGGAGGAGGAGGVGGAGGSGGTTVIEDLDITIDGADGPITISEELTISGAGAGGSGPGGAGPGGVGPGGSGPGGVGPGGSGPGGVGPGGAGGPYRPGGSGPGGAGGAGGPGGAYGPGGSGGPGGAGGPYGPGGEGPGGSGGPYGPGGEGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGEGPGGAGGPYGPGGVGPGGTGPGGYGPGGAGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGFGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGAGPGGYGPGGTGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGVGPGGAGPGGSGPGGAGPGGAGRGGAGRGGAGXGGAGPGGAGGAGGAGGSGGAGGSGGTTVIEDLDITIDGADGPITISEELTINGAGAGGSGPGGAGPGGVGPGGSGPGGVGPGGSGPGGVGPGGAGGPYGPGGSGPGGAGGAGGPGGAYGPGGSGGPGGAGGPYGPGGEGPGGAGGPYGPGGEGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGEGPGGAGGPYGPG
配列番号８８：
>gi|7106224|gb|AAF36090.1|鞭毛状シルクタンパク質（アメリカジョロウグモ）
AGPSGTGGYAPTGYAPSGSGAGGVRPSASGPSGSGPSGGSRPSSSGPSGTRPSPNGASGSSPGGIAPGGSNSGGAGVSGATGGPASSGSYGPGSTGGTYGPSGGSEPFGPGVAGGPYSPGGAGPGGAGGAYGPGGVGTGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGAGPGGYGPGGTGPGGYGPGGTGPGGVGPGGAGPGGYGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGYGPGGSGPGGAGPSGAGLGGAGPGGAGLGGAGPGGAGTSGAGPGGAGPGGAGQGGAGPGGAGRGGAGRGGVGRGGAGRGGAGRGGARGAGGAGGAGGAGGSGGTTIVEDLDITIDGADGPITISEELTIGGAGAGGSGPGGAGPGNVGPGRSGPGGVGPGGSGPGGVGPGSFGPGGVGSGGSGPGGVRPSGSGPGGVGTGGVGPGGAGGPYGPGGSGPGGAGSAGGTYGPGGFGGPGGFGGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGSYGLGGAGGSGGVGPGGSGPGGYGPGGAGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGSGGYGPGGSGPGGSGPGGYGPGGTGPGGSESGGYGPGGSGPGGSGPGGSGPGGSGPGGYGPGGSGPSSFVPGGSGPGGSGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGVGLGGAGRGGAGRGGAGSVGAGRGGAGRGGAGRGGAGRGGAGRGGAGGAGGAGGAGGPGGAGGSGGTTVIEDLDITIDGADGPITISEELTISGAGGSGPGGAGTGGVGPGGSGPGGVGPGGFGPGGVGPGGSGPGGVGPGGAGRPYGPGGSGPGGAGGAGGTGGAYGPGGAYGPGGSGGPGGAGGPGGEGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGEGGPYGPGVSYGPGGAGGPYGPGGPYGPGGEGPGGAGGPYGPGGVGPGGSGPGGYGPGGAGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGYGPGGSGPGGSGPGGSGPGGYGPGGTGPGGSGPGGYGPGGSGPGGSGPGGYGPGGSGPGGFGPGGSGPGGYGPGGSGPGGAGPGGVGPGGFGPGGAGPGGAAPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGGAGGAGGSGGAGGSGGTTIIEDLDITIDGADGPITISEELPISGAGGSGPGGAGPGGVGPGGSGPGGVGPGGSGPGGVGPGGSGPGGVGPGGAGGPYGPGGSGPGGAGGAGGPGGAYGPGGSYGPGGSGGPGGAGGPYGPGGEGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGEGGPYGPGGSYGPGGAGGPYGPGGPYGPGGEGPGGAGGPYGPGGVGPGGGGPGGYGPGGAGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGSGPGGYGPGGSGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGSGPGGYGPGGSGPGGSGPGGYGPGGSGPGGFGPGGFGPGGSGPGGYGPGGSGPGGAGPGGVGPGGFGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGGAGGAGGAGGSGGAGGSGGTTIIEDLDITIDGADGPITISEELTISGAGGSGPGGAGPGGVGPGGSGPGGVGPGGSGPGGVGPGGSGPGGVGPGGAGGPYGPGGSGPGGAGGAGGPGGAYGPGGSYGPGGSGGPGGAGGPYGPGGEGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGEGGPYGPGGSYGPGGAGGPYGPGGPYGPGGEGPGGAGGPYGPGGVGPGGGGPGGYGPGGAGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGSGPGGYGPGGSGPGGFGPGGFGPGGSGPGGYGPGGSGPGGAGPGGVGPGGFGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGPGGAGGAGGAGGAGGSGGAGGSGGTTIIEDLDITIDGADGPITISEELTISGAGGSGPGGAGPGGVGPGGSGPGGVGPGGSGPGGVGPGGSGAGGVGPGGAGGPYGPGGSGPGGAGGAGGPGGAYGPGGSYGPGGSGGPGGAGGPYGPGGEGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGAGGPYGPGGEGGPYGPGGSYGPGGAGGPYGPGGPYGPGGEGPGGAGGPYGPG
配列番号８９：
>gi|7106223|gb|AAF36089.1|鞭毛状シルクタンパク質（アメリカジョロウグモ）
VGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGAGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGSGGAGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGTGPGGTGPGGSGPGGYGPGGSGPGGSGPGGSGPGGYGPSGSGPGGYGPSGSGPGGYGPGGSGPGGYGPGGSGAGGTGPGGAGGAGGAGGSGGAGGSGGAGGSGGAGGSGGVGGSGGTTITEDLDITIDGADGPITISEELTISGAGGSGPGGAGPGGVGPGGSGPGGVGPGVSGPGGVGPGGSGPGGVGSGGSGPGGVGPGGYGPGGSGSGGVGPGGYGPGGSGGFYGPGGSEGPYGPSGPYGSGGGYGPGGAGGPYGPGSPGGAYGPGSPGGAYYPSSRVPDMVNGIMSAMQGSGFNYQMFGNMLSQYSSGSGTCNPNNVNVLMDALLAALHCLSNHGSSSFAPSPTPAAMSAYSN
房状スピドロイン
配列番号９０：
>gi|49871101|gb|AAR83925.1|房状スピドロイン１（アルギオープ・トリファシアタ）
SSALFNAGVLNASNIDTLGSRVLSALLNGVSSAAQGLGINVDSGSVQSDISSSSSFLSTSSSSASYSQASASSTSGAGYTGPSGPSTGPSGYPGPLGGGAPFGQSGFGGSDGPQGGFGATGGASAGLISRVANALANTSTLRTVLRTGVSQQIASSVVQRAAQSLASTLGVDGNNLARFAVQAVSRLPAGSDTSAYAQAFSSALFNAGVLNASNIDTLGSRVLSALLNGVSSAAQGLGINVDSGSVQSDISSSSSFLSTSSSSASYSQASASSTSGAGYTGPSGPSTGPSGYPGLLGGGAPFGQSGFGGSDGPQGGFGATGGASAGLISRVANALANTSTLRTVLRTGVSQQIASSVVQRAAQSLASTLGVDGNNLARFAVQAVSRLPAGSDTSAYAQAFSSALFNAGVLNASNIDTLGSRVLSALLNGVSSAAQGLGINVDSGSVQSDISSSSSFLSTSSSSASYSQASASSTSGAGYTGPSGPSTGPSGYPGPLGGGAPFGQSGFGGSDGPQGGFGATGGASAGLISRVANALANTSTLRTVLRTGVSQQIASSVVQRAAQSLASTLGVDGNNLARFAVQAVSRLPAGSDTSAYAQAFSSALFNAGVLNASNIDTLGSRVLSALLNGVSSAAQGLGINVDSGSVQSDISSSSSFLSTSSSSASYSQASASSTSGAGYTGPSGPSTGPSGYPGPLGGGAPFGQSGFGGSAGPQGGFGATGGASAGLISRVANALANTSTLRTVLRTGVSQQIASSVVQRAAQSLASTLGVDGNNLARFAVQAVSRLPAGSDTSAYAQAFSSALFNAGVLNASNIDTLGSRVLSALLNGVSSAAQGLGINVDSGSVQSDISSSSSFLSTSSSSASYSQASASSTSGAGYTGPSGPSTGPSGYPGPLGGGAPFGQSGFGGSAGPQGGFGATGGASAGLISRVANALANTSTLRTVLRTGVSQQIASSVVQRAAQSLASTLGVDGNNLARFAVQAVSRLPAGSDTSAYAQAFSSALFNAGVLNASNIDTLGSRVLSALLNGVSSAAQGLGINVDSGSVQSDISSSSSFLSTSSSSASYSQASASSTSGTGYTGPSGPSTGPSGYPGPLGGGAPFGQSGFGGSAGPQGGFGATGGASAGLISRVANALANTSTLRTVLRTGVSQQIASSVVQRAAQSLASTLGVDGNNLARFAVQAVSRLPAGSDTSAYAQAFSSALFNAGVLNASNIDTLGSRVLSALLNGVSSAAQGLGINVDSGSVQSDISSSSSFLSTSSSSASYSQASASSTSGAGYTGPSGPSTGPSGYPGPLGGGAPFGQSGFGGSAGPQGGFGATGGASAGLISRVANALANTSTLRTVLRTGVSQQIASSVVQRAAQSLASTLGVDGNNLARFAVQAVSRLPAGSDTSAYAQAFSSALFNAGVLNASNIDTLGSRVLSALLNGVSSAAQGLGINVDSGSVQSDISSSSSFLSTSSSSASYSQASASSTSGAGYTGPSGPSTGPSGYPGPLGGGAPFGQSGFGGSDGPQGGFGATGGASAGLISRVANALANTSTLRTVLRTGVSQQIASSVVQRAAQSLASTLGVDGNNLARFAVQAVSRLPAGSDTSAYAQAFSSALFNAGVLNASNIDTLGSRVLSALLNGVSSAAQGLGINVDSGSVQSDISSSSSFLSTSSSSASYSQASASSTSGAGYTGPSGPSTGPSGYPGPLGGGAPFGQSGFGGSAGPQGGFGATGGASAGLISRVANALANTSTLRTVLRTGVSQQIASSVVQRAAQSLASTLGVDGNNLARFAVQAVSRLPAGSDTSAYAQAFSSALFNAGVLNASNIDTLGSRVLSALLNGVSSAAQGLGINVDSGSVQSDISSSSSFLSTSSSSASYSQASASSTSGAGYTGPSGPSTGPSGYPGPLGGGAPFGQSGFGGSAGPQGGFGATGGASAGLISRVANALANTSTLRTVLRTGVSQQIASSVVQRAAQSLASTLGVDGNNLARFAVQAVSRLPAGSDTSAYAQAFSSALFNAGVLNASNIDTLGSRVLSALLNGVSSAAQGLGINVDSGSVQSDISSSSSFLSTSSSSASYSQASASSTSGAGYTGPSGPSTGPSGYPGPLGGGAPFGQSGFGGSAGPQGGFGATGGASAGLISRVANALANTSTLRTVLRTGVSQQIASSVVQRAAQSLASTLGVDGNNLARFAVQAVSRLPAGSDTSAYAQAFSSALFNAGVLNASNIDTLGSRVLSALLNGVSSAAQGLGINVDSGSVQSDISSSSSFLSTSSSSASYSQASASSTSGAGYTGPSGPSTGPSGYPGPLGGGAPFGQSGFGGSAGPQGGFGATGGASAGLISRVANALANTSTLRTVLRTGVSQQIASSVVQRAAQSLASTLGVDGNNLARFAVQAVSRLPAGSDTSAYAQAFSSALFNAGVLNASNIDTLGSRVLSALLNGVSSAAQGLGINVDSGSVQSDISSSSSFLSTSSSSASYSQALASSTSGAGYTGPSGPSTGPSGYPGPLGGGAPFGQSGFGGSAGPQGGFGATGGASAGLISRVANALANTSTLRTVLRTGVSQQIASSVVQRAAQSLASTLGVDGNNLARFAVQAVSRLPAGSDTSAYAQAFSSALFNAGVLNASNIDTLGSRVLSALLNGVSSAAQGLGINVDSGSVQSDISSSSSFLSTSSSSASYSQASASSTSGAGYTGPSGPSTGPSGYPGPLSGGASFGSGQSSFGQTSAFSASGAGQSAGVSVISSLNSPVGLRSASAASRLSQLTSSITNAVGANGVDANSLARSLQSSFSALRSSGMSSSDAKIEVLLETIVGLLQLLSNTQVRGVNPATASSVANSAARSFELVLA
小管状スピドロイン
配列番号９１：
>gi|63054371|gb|AAY28953.1|小管状スピドロイン１（アルギオープ・アウランチア）
GNAAGLGNALSQAVSSVGVGASSSTYANAVSNAVGQFLAGQGILNXANAGSLASSFASALSASAASVASSAAAQXASQSQAAASAFSRAASQSASQSAARSGAQSSSXTTTTSTSGSQAASQSASSAASQA
配列番号９２：
>gi|61387231|gb|AAX45291.1|小管状スピドロイン（アルギオープ・アウランチア）
TTTSTAGSQAASQFASSAASQASASSFARASSASLAASSSFSSAFSSANSLSALGNVGYQLGFNVANNLGIGNAAGLGNALSQAVSSVGVGASSSSYANAVSNAVGQLLAGQGILNAANAGSLASSFASALSASAASVASSAAAQAASQSQAAASAFSRAASQSASQSAARSGAQSISTTTTTSTAGSQAASQSASSAASQASASSFARASSASLAASSSFSSAFSSANSLSALGNVGYQLGFNVANNLGIGNAAGLGNALSQAVSSVGVGASSSTYANAVSNAVGQFLAGQGILNAANAGSLASSFASALSASAASVASSAAAQAASQSQAAASAFSRAASQSASQSAARSGAQSSSTTTTTSTAGSQAASQFASSAASQASASSFARASSASLAASSSFSSAFSSANSLSALGNVGYQLGFNVANNLGISNAAGLGNALSQAVSSVGVGASSSSYANAVSNAVGQFLAGQGILNAANAGSLASSFASALSASAASVASSAAAQAASQSQAAASAFSRAASQSASQSAARSGAQSSSTTTTTST
配列番号９３：
>gi|61387234|gb|AAX45292.1|小管状スピドロイン（アルギオープ・アウランチア）
STYANAVSNAVGQFLAGQGILNAANAGSLASSFASALSASAASVASSAAAQAASQSQAAASAFSRAASQSASQSAARSGAQSFSTTTTTSTAGSQAASQSASSAASQASASSFARASSASLAASSAFSSAFSSANSLSALGNVAYQLGFNVANTLGIGNAAGLGNALSQAVSSVGVGASSSTYANAVSNAVGQFLAGQGVLNAGNAGSLASSFANALSNSALSVGSRVSSPSYGALSPIAAGPNFISTGLNVGGPFTTLSQSLPTSLQTALAPIVSSSGLGSSAATARVRSLANSIASAISSSGGSLSVPAFLNLLSSVGAQVSSSSSLNSSEVTNEVLLEAIAALLQVINGGSITSVDLRNVPNAQQDLVNALSG
配列番号９４：
>gi|61387237|gb|AAX45293.1|小管状スピドロイン（アラネウス・ゲモイデス（Araneus gemmoides））
ASQSQAASQSQAAASAFRQAASQSASQSASRAGSQSSTKTTSTSTSGSQADSRSASSSASQASASAFAQQSSASLSSSSSFSSAFSSATSISAVGNVGYQLGLKVANSLGLGNAQALASSLSQAVSAVGVGASSNAYANAVSNAVGQVLAGQGILNAANAGSLASSFASALSSSAASVASQSASQSQAASQSQAAASAFRQAASQSASQSASRAGSQSSTKTTSTSTSGSQADSRSASSSASQASASAFAQQSSASLSSSSSFSSAFSSATSISAVGNVGYQLGLKVANSLGLGNAQALASSLSQAVSAVGVGASSNAYANAVSNAVGQVLAGQGILNAANAGSLASSFASALSSSAASVASQSASQSQAASQSQAAASAFRQAASQSASQSDSRAGSQSSTKTTSTSTSGSQADSRSASSSASQASASAFAQQSSASLSSSSSFSSAFSSATSISAVGNVGYQLGLKVANSLGLGNAQALASSLSQAVSAVGVGASSNAYANAVSNAVGQVLAGQGILNAANAGSLASSFASALSSSAASVASQSASQSQAASQSQAAASAFRQAASQSASQSASRAGSQSSTKTTSTSTSGSQADSRSASSSASQASASAFAQQSSASLSSSSSFSSAFSSATSISAVGNVGYQLGLKVANS
配列番号９５：
>gi|61387241|gb|AAX45294.1|小管状スピドロイン（アラネウス・ゲモイデス）
SASQSQAAASAFRQAASQSASQSASRAGSQSSSKTTSTSTSGSQADSRSASSSASQASASAIAQQSSASLSSSSSFSSAFSSATSLSAVGNVGYQLGLKVANSLGLGNAQALASQGILNAANAGSLASSFASALSASAGSVGNRSSAGPSAVGLGGVSAVPGFISATPVVGGPVTVNGQVLPAALQTALAPVVTSSGLASSAASARVSSLAQSIASAISSSGGTLSVPIFLNLLSSAGAQATASSSLSSSQVTSQVLLEGIAALLQVINGAQIRSVNLANVPNVQQALVSALSG
配列番号９６：
>gi|61387244|gb|AAX45295.1|小管状スピドロイン（アメリカジョロウグモ）
ASAASSLAYSIGISAARSLGIADAAGLAGALARAAGALGQGDTAASYGNALSTAAGQFFATAGLLNAGNASALASSFARAFSASAESQSFAQSQAFQQASAFQQAASRSASQSAAEADSTSSSTTTTTSAARSQAASQSASSSYSSAFAQAASSSFAISSALSRAFSSVSSASAASSLAYSIGLSAARSLGIADATGLAGALARAVGALGQGATAASYGNALSTAAAQFFATAGLLNAGNASALASSFARAFSASAESQSFAQSQAFQQASAFQQAASRSASQSAAEAGSTSSSTTTTTSAARSQAASQSASSSYSSAFAQAASSSLATSSALSRAFSSVSSASAASSLAYSIGLSAARSLGIADAAGLAGVLARAAGALGQGATAASYGNALSTAAGQFFAAQGLLNAGNVSSLASALANALSYSAANSAASGNYIGVSQNFGSIAPVAGTAGISVGVPGLLPTSAGTVLAPANAQIIAPGLQTTLAPVFSSSGLSSASANARVSSLAQSFASALSASRGTLSVSTFLTLLSPISSQIRANTSLDGTQATVQVLLEALAALLQVINAAQITEVNVSNVSSANAALVSALAG
【図１】
0005889199.tif 000008
【図２】
0005889199.tif 000009
【図３】
0005889199.tif 000010
【図４】
0005889199.tif 000011
【図５】
0005889199.tif 000012
【図５−２】
0005889199.tif 000013
【図６】
0005889199.tif 000014
【図７】
0005889199.tif 000015
【図８】
0005889199.tif 000016
【配列表】
0005889199000001.app