(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸配列が配列番号２に与えられる軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、およびアミノ酸配列が配列番号４に与えられる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含み、ＶＥＧＦＲ２に結合する、有効量の抗体と組み合わせて、有効量の式の化合物：
【化１】
0005948525.tif 000014
またはその医薬的に許容可能な塩を含み、前記化合物および前記抗体が別々または同時に投与され得る、患者における非小細胞肺癌を治療するための医薬。
【請求項２】
前記化合物が
【化２】
0005948525.tif 000015
である、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
前記抗体が、アミノ酸配列が配列番号６に与えられる軽鎖、およびアミノ酸配列が配列番号８に与えられる重鎖を含み、ＶＥＧＦＲ２に結合する、請求項２に記載の医薬。
【請求項４】
前記抗体がラムシルマブである、請求項３に記載の医薬。
【請求項５】
前記化合物またはその塩が約１００ｍｇ／日〜約４００ｍｇ／日の用量で投与され、ラムシルマブが約６ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの用量で３週間に１回投与される、請求項４に記載の医薬。
【請求項６】
前記化合物またはその塩が経口投与され、ラムシルマブが静脈内投与される、請求項５に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンと、抗ヒトＶＥＧＦＲ２抗体、好ましくはラムシルマブとの組み合わせ、および非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）などの特定の障害を治療するために該組み合わせを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明はＮＳＣＬＣの治療の分野である。肺癌は世界全体で男性および女性の両方における癌による最も一般的な死因の１つとしてランク付けされる。２つの主な種類の肺癌は小細胞肺癌およびＮＳＣＬＣである。非小細胞肺癌は肺癌の症例の約８０％以上を占める。治療は、手術、化学療法、または放射線療法、およびこれらの治療の組み合わせを含み得る。
【０００３】
不幸にも、ＮＳＣＬＣの治癒は依然としてとらえどころがなく、ＮＳＣＬＣを治療するのに有効であると証明できる多くの異なる治療についての必要性が存在している。
【０００４】
［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン（アベマシクリブ（ａｂｅｍａｃｉｃｌｉｂ））はサイクリン依存性キナーゼ４および６（ＣＤＫ４／６）の阻害剤である。アベマシクリブならびにこの化合物を作製および使用する方法（癌の治療およびより具体的にはＮＳＣＬＣの治療を含む）は特許文献１に開示されている。さらに、化合物についての臨床活性はＮＳＣＬＣを有する患者に観察されている。
【０００５】
ラムシルマブは、血管内皮成長因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）に対する完全ヒトモノクローナル抗体である。ラムシルマブおよびこの化合物を作製および使用する方法（固形および非固形腫瘍などの腫瘍性疾患の治療を含む）は特許文献２に開示されている。さらに、ラムシルマブについての臨床活性はまた、ＮＳＣＬＣを有する患者において報告されている（非特許文献１）。２０１４年１２月１６日に、ラムシルマブ（Ｃｙｒａｍｚａ（登録商標））がＮＳＣＬＣを治療するためにＵ．Ｓ．Ｆ．Ｄ．Ａ．により承認された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２０１０／０７５０７４号
【特許文献２】国際公開第２００３／０７５８４０号
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】ＰＲＮｅｗｓｗｉｒｅ「Ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  Ｓｅｃｏｎｄ−Ｌｉｎｅ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｎｏｎ−Ｓｍａｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ」（ＩＮＤＩＡＮＡＰＯＬＩＳ、２０１４年２月１９日
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンおよびラムシルマブの新規組み合わせが本明細書に提供される。ＣＤＫ４／６阻害剤およびＶＥＧＦＲ２の阻害剤の組み合わせが当該分野において意図されているが、本発明者は、本明細書において、いずれかの薬剤単独で提供される治療効果と比較して一部のＮＳＣＬＣ患者においてこれらの治療剤の組み合わせた活性から向上したおよび／または予想されない有益な治療効果を提供する特定の治療レジメンの一部として［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンおよび抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂの新規組み合わせを使用することによってＮＳＣＬＣを治療する方法を開示する。本発明者はまた、いずれかの薬剤単独で提供される治療効果と比較して一部のＮＳＣＬＣ患者においてこれらの治療剤の組み合わせた活性から向上したおよび／または予想されない有益な治療効果を提供する特定の治療レジメンの一部として［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンとラムシルマブの新規の組み合わせ使用することによってＮＳＣＬＣを治療する方法を本明細書に開示する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
したがって、本発明は、有効量の抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂと組み合わせて、有効量の［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩を、そのような治療を必要とするＮＳＣＬＣ患者に投与することを含む、患者におけるＮＳＣＬＣを治療する方法を提供する。本発明はまた、ラムシルマブと組み合わせて、有効量の［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩を、そのような治療を必要とするＮＳＣＬＣ患者に投与することを含む、患者におけるＮＳＣＬＣを治療する方法を提供する。任意選択に、これらの方法は、ペメトレキセド、ゲムシタビン、ドセタキセル、ベバシズマブ、カルボプラチンおよびシスプラチンからなる群から選択される有効量の１種以上の抗腫瘍剤の投与をさらに含む。これらの抗腫瘍剤の有効量は、典型的に、その薬剤レベルで記載される用量である。
【００１０】
本発明はさらに、１種以上の医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂの医薬組成物と組み合わされた、１種以上の医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩を含む医薬組成物を提供する。本発明はまた、１種以上の医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に、ラムシルマブの医薬組成物と組み合わされた、１種以上の医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩を含む医薬組成物を提供する。
【００１１】
さらに、本発明は、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩と、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂとを含む、キットを提供する。本発明はまた、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩と、ラムシルマブとを含む、キットを提供する。本発明はさらに、１種以上の医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩を含む医薬組成物と、１種以上の医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂを含む医薬組成物とを含む、キットを提供する。本発明はまた、１種以上の医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩を含む医薬組成物と、１種以上の医薬的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と共に、ラムシルマブを含む医薬組成物とを含む、キットを提供する。
【００１２】
本発明はさらに、ＮＳＣＬＣの治療において同時、別々または連続的に使用するための、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩と、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂとを含む、組成物を提供する。
【００１３】
本発明はさらに、ＮＳＣＬＣの治療において同時、別々または連続的に使用するための、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩と、ラムシルマブとを含む、組み合わせを提供する。
【００１４】
本発明はさらに、療法における［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩と、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂとの組み合わせの使用を提供する。本発明はさらに、ＮＳＣＬＣを治療するための医薬を製造するための、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩と、抗ＶＥＧＦＲ２との組み合わせの使用を提供する。
【００１５】
本発明はさらに、療法における［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩と、ラムシルマブとの組み合わせの使用を提供する。本発明はさらに、ＮＳＣＬＣを治療するための医薬を製造するための、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩と、ラムシルマブとの組み合わせの使用を提供する。
【００１６】
本発明の別の態様は、患者における非小細胞肺癌を治療する方法であって、治療を必要とする非小細胞肺癌患者に、
ａ）２１日周期の１日目に１０ｍｇ／ｋｇにてラムシルマブ；および
ｂ）２１日周期の１〜２１日に１２時間ごとに５０〜２００ｍｇ  ＰＯにて［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩
を投与することを含む、方法である。
【００１７】
本発明のさらなる態様は、
ａ）ＮＳＣＬＣを治療するための医薬を製造するための、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩の使用；
ｂ）ＮＳＣＬＣを治療するための医薬を製造するためのラムシルマブの使用
を提供し、ここで、ラムシルマブは２１日周期の１日目に１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶにて投与され、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩は、２１日周期の１〜２１日に１２時間ごとに５０〜２００ｍｇ  ＰＯにて投与される。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本明細書に使用される場合、化合物の名称「［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン」は、国際公開第２０１０／０７５０７４号に開示されており、以下の構造：
【化１】
0005948525.tif 000002
を有する化合物を指す。この化合物のＣＡＳ登録番号は１２３１９２９−９７−７である。化合物についての一般名はアベマシクリブである。代替の化合物名は、２−ピリミジンアミン、Ｎ−［５−［（４−エチル−１−ピペラジニル）メチル］−２−ピリジニル］−５−フルオロ−４［４−フルオロ−２−メチル−１−（１−メチルエチル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−６−イル］−、１−［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、およびＮ−（５−（（４−エチルピペラジン−１−イル）メチル）ピリジン−２−イル）−５−フルオロ−４−（４−フルオロ−１−イソプロピル−２−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−イル）ピリミジン−２−アミンを含む。
【００１９】
本明細書に使用される場合、「ＶＥＧＦＲ２」という用語は、アミノ酸配列が配列番号９に与えられるポリペプチドを指す。ＶＥＧＦＲ２はまた、ＫＤＲとして知られている。
【００２０】
本明細書に使用される場合、「抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ」という用語は、アミノ酸配列が配列番号２に与えられる軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、およびアミノ酸配列が配列番号４に与えられる重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む抗体を指し、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂは十分な親和性および特異性でＶＥＧＦＲ２に結合する。いくつかの実施形態において、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂは、アミノ酸配列が配列番号６に与えられる軽鎖、およびアミノ酸配列が配列番号８に与えられる重鎖を含み、十分な親和性および特異性でＶＥＧＦＲ２に結合する抗体である。本発明の他の実施形態において、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂはラムシルマブである。選択される抗体はＶＥＧＦＲ２に対して十分に強い結合親和性を有する。例えば、抗体は一般に約１００ｎＭ〜約１ｐＭのＫｄ値でＶＥＧＦＲ２に結合する。抗体親和性は、表面プラズモン共鳴ベースのアッセイ（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイが、ＰＣＴ出願公開番号ＷＯ２００５／０１２３５９に記載されている）；酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）；および例えば、競合アッセイ（例えば、放射線標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ））によって決定され得る。一実施形態において、Ｋｄは、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ、好ましくはラムシルマブを用いて実施されるＲＩＡによって測定される。
【００２１】
本明細書に使用される場合、「ラムシルマブ」という用語は、Ｃｙｒａｍｚａ（登録商標）、ＩＭＣ−１１２１ｂ、ＣＡＳ登録番号９４７６８７−１３−０としても知られており、各々、アミノ酸配列が配列番号６に与えられる２本の軽鎖、および各々、アミノ酸配列が配列番号８に与えられる２本の重鎖を含む抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂを指す。
【００２２】
他に示されない限り、「抗体」という用語は、ジスルフィド結合によって相互接続される２本の重鎖（ＨＣ）および２本の軽鎖（ＬＣ）を含む免疫グロブリン分子を指す。各鎖のアミノ末端部分は、そこに含まれる相補性決定領域（ＣＤＲ）により主に抗原認識に関与している約１００〜約１１０アミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能に関与している定常領域を規定する。
【００２３】
本明細書に使用される場合、「抗結合断片」という用語は、その抗原に結合する能力を保持する任意の抗体断片を指す。そのような「抗原結合断片」は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ−Ｆｃ断片および二重特異性抗体からなる群から選択され得る。抗体の抗原結合断片は典型的に少なくとも１つの可変領域を含む。好ましくは、抗原結合断片は重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。より好ましくは、本明細書に使用される抗原結合断片は、ＶＥＧＦＲ２（すなわち「ＶＥＧＦＲ２結合断片」）に抗原結合特異性を与えるＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む。
【００２４】
本明細書に使用される場合、「軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）」という用語は、相補性決定領域（ＣＤＲ；すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）、およびフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含む抗体分子の軽鎖の一部を指す。
【００２５】
本明細書に使用される場合、「重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）」という用語は、相補性決定領域（ＣＤＲ；すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）、およびフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含む抗体分子の重鎖の一部を指す。
【００２６】
本明細書に使用される場合、「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」という用語は、抗体またはその抗原結合断片のＬＣおよびＨＣポリペプチドの可変領域内に見出される非隣接抗原結合部位を指す。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔら、Ａｎｎ．ＮＹ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９０：３８２−９３（１９７１）；Ｋａｂａｔら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９−６６１６（１９７７）；Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２（１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）；ＭａｃＣａｌｌｕｍら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２：７３２−７４５（１９９６）；およびＮｏｒｔｈら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、４０６、２２８−２５６（２０１１）を含む他の文献に記載されており、その定義は互いに比較してアミノ酸残基の重複またはサブセットを含む。
【００２７】
ＣＤＲは、フレームワーク領域（「ＦＲ」）と呼ばれる、十分に保存されている領域に散在している。ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲの各々は、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配列される３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる。軽鎖の３つのＣＤＲは「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３」と称され、重鎖の３つのＣＤＲは「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３」と称される。ＣＤＲは抗原と特異的相互作用を形成する大部分の残基を含有する。ＬＣＶＲおよびＨＣＶＲ領域内のＣＤＲアミノ酸残基の番号付けおよび位置付けは公知の慣習法（例えば、Ｋａｂａｔ（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ（１９８７）、および／またはＮｏｒｔｈ（２０１１））に従う。本発明の異なる実施形態において、抗体のＦＲは、ヒト生殖細胞配列と同一であり得るか、または天然もしくは人工に修飾され得る。
【００２８】
本明細書に使用される場合、「ＤＣ１０１」という用語は、マウスにおいて抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ、好ましくはラムシルマブについてのサロゲートとして実験に使用され得るマウスＶＥＧＦＲ２に対するラットモノクローナル抗体を指す。例えば、Ｗｉｔｔｅ  Ｌ．ら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ＶＥＧＦ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−２（Ｆｌｋ１／ＫＤＲ）  ａｓ  ａｎ  ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｓｔｒａｔｅｇｙ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ．、１７：１５５−１６１、１９９８；および／またはＰｒｅｗｅｔｔ  Ｍ．ら、Ａｎｔｉｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ｆｅｔａｌ  ｌｉｖｅｒ  ｋｉｎａｓｅ  １）ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ｓｅｖｅｒａｌ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５９：５２０９−５２１８、１９９９を参照のこと。
【００２９】
特定の実施形態において、本発明の方法のために本明細書に提供される抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂは、抗体がグリコシル化される程度に増加または減少するように変えられる。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製され、または除去されるようにアミノ酸配列を変えることによって簡便に達成され得る。
【００３０】
抗ＶＥＧＦＲ２  ＡｂがＦｃ領域を含む場合、それに結合する炭水化物が変化され得る。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は典型的に、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へＮ結合によって一般に結合される分枝した、二分枝のオリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔら、ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２（１９９７）を参照のこと。オリゴ糖は、種々の炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸、ならびに二分枝オリゴ糖構造の「幹」においてＧｌｃＮＡｃに結合されるフコースを含み得る。いくつかの実施形態において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾は特定の改善された特性を有する抗体バリアントを作製するためになされ得る。
【００３１】
一実施形態において、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ抗体は、Ｆｃ領域に結合されるフコースを（直接または間接的に）欠く糖鎖構造を有して提供される。例えば、このような抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％または２０％〜４０％であってもよい。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって測定される場合、Ａｓｎ２９７に結合される全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッドおよび高マンノース構造）の合計に対して、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域内のおよそ２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指し；しかし、Ａｓｎ２９７はまた、抗体の少しの配列変異に起因して、２９７位の上流または下流のおよそ±３アミノ酸、すなわち２９４位と３００位との間に位置する場合がある。このようなフコシル化バリアントは改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照のこと。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体バリアントに関連する刊行物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；国際公開第２０００／６１７３９号；国際公開第２００１／２９２４６；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号；およびＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら  Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生できる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化を欠損しているＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａら、Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；および国際公開第２００４／０５６３１２Ａ１号、Ａｄａｍｓら）およびアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、９４（４）：６８０−６８８（２００６）；および国際公開第２００３／０８５１０７号を参照のこと）が挙げられる。
【００３２】
本明細書に使用される場合、「キット」という用語は、少なくとも２つの別個の容器を含むパッケージを指し、第１の容器は［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩を含有し、第２の容器は抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂを含有する。本明細書に使用される場合、「キット」という用語はまた、少なくとも２つの別個の容器を含むパッケージを指し、第１の容器は［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩を含有し、第２の容器はラムシルマブを含有する。「キット」はまた、これらの第１および第２の容器の内容物の全てまたは一部を癌患者、好ましくはＮＳＣＬＣ患者に投与するための指示書を含む。
【００３３】
本明細書に使用される場合、「治療する」、「治療すること」または「治療」という用語は、既存の症状、障害、病態、または疾患の進行または重症度の抑性、遅延、停止、低下、または反転を指す。
【００３４】
本明細書に使用される場合、「患者」という用語は、哺乳動物、好ましくはヒトを指す。
【００３５】
本明細書に使用される場合、「癌」および「癌性」という用語は、典型的に、調節されていない細胞増殖により特徴付けられる患者における生理学的状態を指すかまたは示す。良性および悪性癌がこの定義に含まれる。「早期癌」または「早期腫瘍」は、進行していないもしくは転移していないまたはステージ０、Ｉ、もしくはＩＩの癌と分類される癌を意味する。癌の例としては、限定されないが、ＮＳＣＬＣが挙げられる。
【００３６】
本発明の併用療法の主な利点は、著しい毒性または副作用を引き起こさずに患者において生じ、それにより患者は併用治療法全体から利益を受ける顕著な抗癌作用を生じる能力である。本発明の併用治療の効果は、限定されないが、腫瘍退縮、腫瘍質量またはサイズ縮小、進行する時間、全体の生存率、無進行生存、全反応率、反応期間、および生活の質を含む、癌治療を評価するのに一般に使用される種々のエンドポイントによって測定され得る。本発明に使用される治療剤は、原発性腫瘍を縮小せずに転移拡散の阻害を引き起こし得、原発性腫瘍の縮小を誘発し得るか、または単に腫瘍静止（ｔｕｍｏｒｉｓｔａｔｉｃ）効果を与え得る。本発明は特有の抗腫瘍剤の組み合わせの使用に関するので、例えば、血管形成の血漿または尿マーカーの測定および放射線画像化による反応の測定を含む、本発明の任意の特定の併用療法の効果を決定する新規アプローチが任意選択に利用され得る。
【００３７】
本明細書に使用される場合、「完全寛解」（ＣＲ）という用語は、全ての標的病変の消失を指す。任意の病理学的リンパ節（標的かまたは非標的かに関わらず）は、＜１０ｍｍまでの短軸の減少を有さなければならない。
【００３８】
本明細書に使用される場合、「部分的反応」（ＰＲ）という用語は、ベースラインの直径の合計を基準として、標的病変の直径の合計の少なくとも３０％の減少を指す。
【００３９】
本明細書に使用される場合、「進行性疾患」（ＰＤ）という用語は、研究に対する最少の合計（これは、研究に対する最少が存在する場合、ベースラインの合計を示す）を基準として、標的病変の直径の合計の少なくとも２０％の増加を指す。２０％の相対的増加に加えて、合計はまた、少なくとも５ｍｍの絶対的増加を実証しなければならならい（注記：１つ以上の新たな病変の出現もまた、進行とみなされる）。
【００４０】
本明細書に使用される場合、「安定な疾患」（ＳＤ）という用語は、研究の間、最小の直径の合計を基準として、ＰＲになるような縮小も、ＰＤになるように増加もないことを指す。
【００４１】
本明細書に使用される場合、「客観的反応」（ＯＲ）という用語は、ＣＲプラスＰＲの合計を指す。
【００４２】
当業者は、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ、２００９、４５、２２８−２４７に従う定義に対応するＣＲ、ＰＲ、ＰＤ、ＳＤおよびＯＲという用語を理解するであろう。
【００４３】
本明細書に使用される場合、「疾患進行に対する時間」または「ＴＴＰ」という用語は、一般に、最初の治療時間から癌進行または悪化まで週または月で測られる時間を指す。このような進行は当業者によって評価できる。
【００４４】
本明細書に使用される場合、「延長したＴＴＰ」という用語は、特定の併用療法における、ｉ）未処置の患者に対する、またはｉｉ）全てより少ない抗癌剤で治療した患者に対する、治療患者における疾患進行に対する時間の増加を指す。
【００４５】
本明細書に使用される場合、「生存」という用語は、生存している患者を指し、全生存および無進行生存を含む。
【００４６】
本明細書に使用される場合、「全生存」という用語は、診断または治療の時から規定された期間、例えば、１年、５年など、生存している患者を指す。
【００４７】
本明細書に使用される場合、「無進行生存」という用語は、癌進行または悪化をせずに生存している患者を指す。
【００４８】
本明細書で使用される場合、「延長した生存」という用語は、特定の併用療法において、ｉ）未処置の患者、ｉｉ）全てより少ない抗腫瘍剤で治療した患者、またはｉｉｉ）対照治療プロトコルに対する、治療した患者における全体の増加または無進行生存を意味する。生存は、治療の開始後、または最初の癌の診断の後、少なくとも約１カ月、少なくとも約１カ月、少なくとも約２カ月、少なくとも約４カ月、少なくとも約６カ月、少なくとも約９カ月、または少なくとも約１年、または少なくとも約２年、または少なくとも約３年、または少なくとも約４年、または少なくとも約５年、または少なくとも約１０年などの間、モニターされる。
【００４９】
本明細書に使用される場合、「原発性腫瘍」または「原発性癌」という用語は、元の癌を意味し、別の組織、器官に位置するか、または被験体の身体に位置する転移性病変ではない。
【００５０】
本明細書に使用される場合、「有効量」という用語は、患者へ単回または複数回投与すると、診断または治療下の患者に効果的な反応を与える、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩の量または用量、および抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂの量または用量を指す。本明細書に使用される場合、「有効量」という用語はまた、患者へ単回または複数回投与すると、診断または治療下の患者に効果的な反応を与える、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩の量または用量、およびラムシルマブの量または用量を指す。本発明の併用療法は、身体において［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩および抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂの有効なレベルを与える、任意の方法において抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂと一緒に、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩を投与することによって実施されることは理解される。それはまた、本発明の併用療法は、身体において［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩およびラムシルマブの有効なレベルを与える、任意の方法においてラムシルマブと一緒に、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩を投与することによって実施されることは理解される。
【００５１】
本明細書に使用される場合、薬剤の組み合わせによる治療に対する患者の「有効反応」または患者の「反応性」という用語および類似の言葉は、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩および抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂの同時投与により患者に与えられる臨床的または治療的有益性を指す。本明細書に使用される場合、薬剤の組み合わせによる治療に対する患者の「有効反応」または患者の「有効性」という用語および類似の言葉はまた、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩およびラムシルマブの同時投与により患者に与えられる臨床的または治療的有益性を指す。このような有益性は、延長した生存（全生存および無進行生存を含む）；客観的反応が生じること（完全反応または部分的反応を含む）；または癌の兆候もしくは症状の改善などのいずれか１つ以上を含む。
【００５２】
有効量は、公知の技術の使用によって、および類似の状況下で得た結果を観察することによって当業者としての担当診断医によって容易に決定され得る。患者にとっての有効量を決定する際に、限定されないが、患者の種類；その大きさ、年齢および全体的健康；関与する特定の疾患または障害；疾患または障害の改善または重症度の程度；個々の患者の反応；投与される特定の化合物；投与様式；投与される製剤の生物学的利用能；選択される投薬レジメン；併用医薬の使用；および他の関連する状況を含む、多くの要因が担当診断医によって考慮される。
【００５３】
［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩は一般に、本発明の組み合わせにおいて広範囲の投薬量にわたって有効である。例えば、通常、１日当たりの投薬量は、約１００ｍｇ／日〜約４００ｍｇ／日、好ましくは約２００ｍｇ／日〜約４００ｍｇ／日、最も好ましくは約３００ｍｇ／日〜約４００ｍｇ／日の範囲内である。さらに、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ、好ましくはラムシルマブは一般に、本発明の組み合わせにおいて広範囲の投薬量にわたって効果的である。例えば、３週間周期当たりの投薬量は、通常、約６〜１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約８〜約１０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内である。いくつかの場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩および抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ、好ましくはラムシルマブについての上述の範囲の下限未満の投薬量レベルが十分以上であってもよく、一方、他の場合、それより少ないまたは大きい投薬量が許容可能な副作用で利用されてもよく、したがって上記の投薬量範囲は本発明の範囲を限定することを意図しているわけでは決してない。例えば、２１週周期にわたって、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂとの組み合わせで与えられる場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩は、約１００ｍｇ／日〜約４００ｍｇ／日の範囲内で毎日投与され、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ、好ましくはラムシルマブは、約６〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内で１日に１回投与される。例えば、２１日周期にわたって組み合わせて投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩は、約２００ｍｇ／日〜約４００ｍｇ／日の範囲内で毎日投与され、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ、好ましくはラムシルマブは、約８〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内で１日に１回投与される。例えば、２１日周期にわたって組み合わせて投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩は、約３００ｍｇ／日〜約４００ｍｇ／日の範囲内で毎日投与され、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ、好ましくはラムシルマブは、約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内で１日に１回投与される。
【００５４】
遊離塩基である、５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンが好ましい。しかしながら、５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは塩を形成できることは当業者により理解されるであろう。５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、複数の無機および有機酸のいずれかと反応して、医薬的に許容可能な酸付加塩を形成できる。このような医薬的に許容可能な酸付加塩およびそれらを調製するための一般的な方法は当該分野において周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら、ＨＡＮＤＢＯＯＫ  ＯＦ  ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＡＬＴＳ：ＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳ，ＳＥＬＥＣＴＩＯＮ  ＡＮＤ  ＵＳＥ、（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００２）；Ｌ．Ｄ．Ｂｉｇｈｌｅｙ，Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ，Ｄ．Ｃ．Ｍｏｎｋｈｏｕｓｅ、「Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」．Ｅｄｓ．Ｊ．Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ  ａｎｄ  Ｊ．Ｃ．Ｂｏｙｌａｎ，Ｖｏｌ．１３，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｂａｓｅｌ，Ｈｏｎｇ  Ｋｏｎｇ  １９９５、ｐｐ．４５３−４９９；Ｓ．Ｍ．  Ｂｅｒｇｅら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｖｏｌ  ６６、Ｎｏ．１，１９７７年１月を参照のこと。塩酸塩およびメシル酸塩が好ましい塩である。メシル酸塩は特に好ましい塩である。
【００５５】
［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩および抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ、好ましくはラムシルマブは、好ましくは、化合物を生物学的に利用可能にする任意の経路によって投与される医薬組成物として製剤化される。投与経路は、薬物の物理的性質ならびに患者および介護者の利便性によって制限される、任意の方法に変更されてもよい。好ましくは、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンまたはその医薬的に許容可能な塩は経口投与される。好ましくは、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂ、好ましくはラムシルマブ組成物は、静脈または皮下投与などの非経口投与のために製剤化される。さらに、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩は、静脈内または皮下投与を含む、経口または非経口投与のために製剤化される。このような医薬組成物およびそれらを調製するプロセスは当該分野において周知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｄ．Ｂ．Ｔｒｏｙ編、第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、２００６を参照のこと）。
【００５６】
本明細書に使用される場合、「と組み合わせた」という語句は、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂと同時の［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩の投与を指す。本明細書に使用される場合、「と組み合わせた」という語句はまた、任意の順序で連続して、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂと共に、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩の投与を指す。本明細書に使用される場合、「と組み合わせて」という語句はまた、任意の組み合わせにおいて、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂと共に、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩の投与を指す。本明細書に使用される場合、「と組み合わせて」という語句はまた、ラムシルマブと同時の［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩の投与を指す。本明細書に使用される場合、「と組み合わせて」という語句はまた、任意の順序で連続して、ラムシルマブと共に［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩の投与を指す。本明細書に使用される場合、「と組み合わせて」という語句は、任意の組み合わせにおいて、ラムシルマブと共に、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩の投与を指す。［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンおよび抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂは、同じ医薬組成物の一部として、または別々の医薬組成物のいずれかで投与されてもよい。［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンおよびラムシルマブは、同じ医薬組成物の一部として、または別々の医薬組成物のいずれかで投与されても���い。［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂの投与の前に投与されてもよい。［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂと同時に投与されてもよい。［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂの投与の後に投与されてもよい。［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂまたはその任意の組み合わせの投与の前、同時または後に投与されてもよい。［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンはラムシルマブの投与の前に投与されてもよい。［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、ラムシルマブの投与と同時に投与されてもよい。［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンはラムシルマブの投与の後に投与されてもよい。［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、ラムシルマブまたはその任意の組み合わせの投与の前、同時、または後に投与されてもよい。抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂの各投与の前に投与されてもよい。抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリ��ジン−２−イル］−アミンは抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂの各投与と同時に投与されてもよい。抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂの各投与の後に投与されてもよい。抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂまたはそのいくつかの組み合わせの各投与の前、同時または後に投与されてもよい。抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂとの治療に関連して異なる間隔で投与されてもよい。抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、単回または一連の用量で、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂによる治療の過程の前、任意の時間の間、または後に投与されてもよい。抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、単回用量で、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂによる治療の過程の前、任意の時間の間、または後に投与されてもよい。抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、単回用量で、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂによる治療の過程の前に投与されてもよい。抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、単回用量で、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂによる治療の過程の任意の時間の間に投与されてもよい。抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、単回用量で、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂによる治療の過程の後に投与されてもよい。抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、一連の用量で、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂによる治療の過程の前に投与されてもよい。抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、一連の用量で、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂによる治療の過程の後に投与されてもよい。
【００５７】
ラムシルマブが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、ラムシルマブの各投与前に投与されてもよい。ラムシルマブが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、ラムシルマブの各投与と同時に投与されてもよい。ラムシルマブが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、ラムシルマブの各投与後に投与されてもよい。ラムシルマブが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、ラムシルマブまたはいくつかのその組み合わせの各投与の前、同時、または後に投与されてもよい。ラムシルマブが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、ラムシルマブによる治療に関連して異なる間隔で投与されてもよい。ラムシルマブが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、単回用量または一連の用量で、ラムシルマブによる治療の過程の前、任意の時間の間、または後に投与されてもよい。ラムシルマブが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、単回用量で、ラムシルマブによる治療の過程の前、任意の時間の間、または後に投与されてもよい。ラムシルマブが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、単回用量で、ラムシルマブによる治療の過程の前に投与されてもよい。ラムシルマブが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、単回用量で、ラムシルマブによる治療の過程の任意の時間の間に投与されてもよい。ラムシルマブが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、単回用量で、ラムシルマブによる治療の過程の後に投与されてもよい。ラムシルマブが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、一連の用量で、ラムシルマブによる治療の過程の前に投与されてもよい。ラムシルマブが反復間隔（例えば、治療の標準的な過程の間）で投与される場合、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、一連の用量で、ラムシルマブによる治療の過程の後に投与されてもよい。
【００５８】
［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンまたはその医薬的に許容可能な塩は、当該分野において公知の様々な手順によって調製され得る。
【００５９】
以下の調製例および実施例は本発明をさらに例示する。反対に示されない限り、本明細書に例示される化合物は、ＣｈｅｍＤｒａｗ（登録商標）Ｕｌｔｒａ５．０を使用して命名され、番号付けされる。
【実施例】
【００６０】
調製例１
１−（６−ブロモ−ピリジン−３−イルメチル）−４−エチル−ピペラジン
未希釈の１−エチルピペラジン（５．６ｋｇ）を、６−ブロモ−ピリジン−３−カルバルデヒド（８．３ｋｇ）およびジクロロメタン（１８６ｋｇ）の混合物に加える。次いで、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（１０．９ｋｇ）を少しずつ加え、２０〜３０℃にて１２時間撹拌する。ジクロロメタン（３６ｋｇ）と２Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（４６ｋｇ）の混合物中で反応をクエンチする。層を分離し、水層をジクロロメタン（２４×２ｇ）で２回抽出する。有機層を合わせ、ブライン（５０×２）で洗浄し、真空下で溶媒を除去して、１１．５ｋｇの標題化合物を得る。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２８５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６１】
調製例２
５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イルアミン
液体アンモニア（５０．０ｋｇ）を、Ｔ：４０℃にて１−（６−ブロモ−ピリジン−３−イルメチル）−４−エチル−ピペラジン（１４．２ｋｇ）、酸化第一銅（２００ｇ）、およびＭｅＯＨ（５７ｋｇ）の脱気した混合物に加える。混合物を６５〜７５℃にて一晩加熱する。２０〜３０℃に冷やし、セライト（登録商標）パッドで濾過する。濾液を濃縮し、ジクロロメタン（１１３ｋｇ）を加え、ｐＨを２Ｎの水酸化ナトリウム（２３ｋｇ）で１２〜１４に調整し、相を分離し、有機相をジクロロメタン（５８×２）で洗浄し、有機層を合わせる。セライト（登録商標）で混合物を濾過し、濃縮する。残渣をトルエン（９．７ｋｇ）に溶解し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（８．３ｋｇ）を加えることによって結晶化して、６．０ｋｇの標題化合物を得る。トルエン再結晶化によりさらなる精製を得る。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２２１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６２】
調製例３
Ｎ−（４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−フェニル）−Ｎ’−イソプロピル−アセトアミジン
トリエチルアミン（１０．０５ｍＬ）を、トルエン（１５０ｍＬ）中の４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−フェニルアミン（１０．０ｇ）、Ｎ−イソプロピルアセトアミド（９．７３ｇ）、塩化ホスホリル（６．７０ｍＬ）の混合物に加える。混合物を加熱して３時間還流する。混合物を冷やし、真空下で溶媒を除去する。粗製物をジクロロメタンに溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で数回洗浄して、全ての微量の酸を除去する。硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で溶媒を除去して、１４ｇの標題化合物を得る。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６３】
調製例４
６−ブロモ−４−フルオロ−１−イソプロピル−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール
温度をＴ＜３０℃に維持しながら、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（６．９ｋｇ）を、Ｎ−メチルホルムアミド（７６ｋｇ）中のＮ−（４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−フェニル）−Ｎ’−イソプロピル−アセトアミジン（１６．２ｋｇ）の溶液に少しずつ加える。ＨＰＬＣにより完了するまで混合物を７０〜７５℃に加熱する。２０〜３０℃に冷やし、水（２２７ｋｇ）に加えることによってクエンチし、次いでメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３７×４ｋｇ）で抽出する。合わせた有機相をブライン（４９×２ｋｇ）で洗浄し、２５〜３０Ｌに濃縮し、ｎ−ヘキサン（６４ｋｇ）を加え、スラリーを濾過して、１１ｋｇの標題化合物を得る。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２７２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６４】
粗化合物をジクロロメタンに溶解することによってさらなる精製を得、シリカゲルおよびセライト（登録商標）パッドで濾過し、続いて、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル／ヘキサン混合物から単離する。
【００６５】
調製例５
４−フルオロ−１−イソプロピル−２−メチル−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール
６−ブロモ−４−フルオロ−１−イソプロピル−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール（３０．０ｇ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（４２．１５ｇ）、トリシクロヘキシルホスフィン（５．４３ｇ）、酢酸カリウム（３２．５８ｇ）、およびジメチルスルホキシド（２００ｍＬ）の混合物中で窒素を泡立てる。酢酸パラジウム（２．８ｇ）を加え、予熱した油浴中で９０℃にて１時間加熱する。酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈し、セライト（登録商標）パッドで濾過する。混合物をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を真空下で除去する。ヘキサンで粉砕し、固体を濾過して、２７ｇの標題化合物を得る。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝３１９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６６】
調製例６
６−（２−クロロ−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル）−４−フルオロ−１−イソプロピル−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール
２，４−ジクロロ−５−フルオロ−ピリミジン（１２．７ｇ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（４．９ｇ）、水（１０３．７ｍＬ）中の炭酸ナトリウム２Ｍおよび１，２−ジメトキシエタン（１２０ｍＬ）の混合物中で窒素を泡立てる。予熱した油浴中で８０℃にて加熱し、１，２−ジメトキシエタン（２００ｍＬ）中の４−フルオロ−１−イソプロピル−２−メチル−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール（２２ｇ）の溶液を滴下して加える。混合物を８４℃にて１時間撹拌する。室温に冷やし、酢酸エチル（８００ｍＬ）を加え、ブライン（１００ｍＬ）で２回洗浄する。硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空下で溶媒を除去する。アセトニトリルで粉砕して、１４．４ｇの標題化合物を得る。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝３２３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６７】
参照実施例１
［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン
【化２】
0005948525.tif 000003
１，４−ジオキサン（１９７．０６ｍＬ）中の６−（２−クロロ−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル）−４−フルオロ−１−イソプロピル−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール（１５．９ｇ）、５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イルアミン（１０．８５ｇ）、炭酸セシウム（３２．１０ｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（１．８２ｇ）、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（２．３５ｇ）の混合物中で窒素を泡立てる。混合物を予熱した油浴中で１１０℃にて２時間加熱する。室温に冷やし、ジクロロメタンで希釈し、セライト（登録商標）パッドで濾過する。溶媒を真空下で除去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、ジクロロメタン／メタノール（２％）、次いでジクロロメタン／メタノール−ＮＨ３  ２Ｍ２％で溶出して、２２．１１ｇの標題化合物を得る。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６８】
参照実施例１Ａ
［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンメタンスルホネート
メタンスルホン酸（６３．５９ｍＬ）を、ジクロロメタン（１００ｍＬ）とメタノール（１００ｍＬ）の混合物中の［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）ピリミジン−２−イル］−アミン（１７．３ｇ）の溶液に加える。溶液を１時間撹拌し、真空下で溶媒を除去する。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルで粉砕し、固体を濾過して、２０．４ｇの標題化合物を得る。ＭＳ３５（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６９】
参照実施例２
［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン
Ｉ型結晶
１０２．１ｍｇの非晶質［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンを２ｍＬのアセトンと混合する。沈殿した固体を真空濾過によって単離し、淡黄色のケーキが生成し、濾過装置上の所定の位置で３０分間乾燥させ、７２．１ｍｇの固体を得る。固体を１００℃の真空オーブン中に３時間入れる。Ｉ型の代表的なＸＲＤピークを表１に示す。
【００７０】
参照実施例３
［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン
ＩＩＩ型結晶
２０８ｍｇの非晶質［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンを４ｍＬのアセトンと混合する。懸濁液を１０００ｒｐｍにて撹拌しながら６０℃にて２時間スラリーにし、次いで真空濾過により固体を単離し、淡黄色のケーキを生成する。濾過装置上の所定の位置で３０分間乾燥させ、１１２ｍｇの固体（５４％収率）を得る。８０℃の真空オーブン中に３時間入れる。ＩＩＩ型の代表的なＸＲＤピークを表２に示す。外部標準を使用してピーク位置を検証した。
【００７１】
Ｘ線粉末回折
結晶のＸＲＤパターンを、５０ｋＶおよび４０ｍＡで作動する、ＣｕＫα源（λ＝１．５４０５６Å）およびＶａｎｔｅｃ検出器を備えたＢｒｕｋｅｒ  Ｄ８  Ａｄｖａｎｃｅ  Ｘ線粉末回折計で得る。各々の試料を、２θにおいて０．０２°のステップサイズおよび９．０秒／ステップの走査速度で、ならびに１ｍｍ発散スリットおよび受信スリット、および０．１ｍｍの検出器スリットで、２θにおいて４から４０°の間で走査する。乾燥粉末をくぼんでいる上部ロード試料ホルダに充填し、スライドガラスを使用して滑らかな表面を得る。結晶形態回折パターンを周囲温度および相対湿度にて収集する。バックグラウンドはＩ型については除去しないが、ＩＩＩ型の結晶についてのバックグラウンドはピーク取得前に除去する。
【００７２】
結晶学の分野において、任意の所与の結晶形態に関して、回折ピークの相対強度は結晶形態および晶癖などの要因から生じる好ましい配向に起因して変化し得ることは周知である。好ましい配向の効果が存在する場合、ピーク強度は変化するが、多形体の特性ピーク位置は変化しない。例えば、Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ＃２３、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  ＃１８、１８４３−１８４４ページ、１９９５を参照のこと。さらに、結晶学の分野において、任意の所与の結晶形態に関して、角度ピーク位置はわずかに変化し得ることも周知である。例えば、ピーク位置は、試料が分析される温度または湿度の変動、試料の変位、または内部標準の存在もしくは非存在に起因して変化し得る。本発明の場合、２θにおいて±０．１のピーク位置変動性は、示した結晶形態の明確な識別を妨げずにこれらの潜在的な変動を考慮に入れる。
【００７３】
結晶形態の確認は、特徴的なピーク（°２θの単位）、典型的に、より顕著なピークの任意の特有の組み合わせに基づいてなされ得る。したがって、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンＩ型結晶の調製した試料は、ＣｕＫα放射線を使用してＸＲＤパターンによって、０．１度の回折角に対する許容度で、以下の表１に記載されるように回折ピーク（２θ値）を有すると、特に、１３．０９、１６．３１、および１８．８２からなる群から選択されるピークの１つ以上と組み合わせて４．５１におけるピークを有すると、特徴付けられる。
【００７４】
【表１】
0005948525.tif 000004
【００７５】
［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンの調製した試料
ＩＩＩ型結晶は、ＣｕＫα放射線を使用してＸＲＤパターンによって、０．１度の回折角に対する許容度で、以下の表２に記載されるように回折ピーク（２θ値）を有すると、特に、１１．５４、１０．９１、および１２．１３におけるピークの１つ以上と組み合わせて２１．２９におけるピークを有すると、特徴付けられる。
【００７６】
【表２】
0005948525.tif 000005
【００７７】
固体状態１３Ｃ  ＮＭＲ
交差分極／マジック角スピニング（ＣＰ／ＭＡＳ）ＮＭＲ（固体状態ＮＭＲまたはＳＳＮＭＲ）スペクトルを、それぞれ４００．１３１および１００．６２３ＭＨｚの１Ｈおよび１３Ｃ周波数にて作動し、Ｂｒｕｋｅｒ４ｍｍ二重共鳴プローブを使用するＢｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＩＩＩ４００広口径ＮＭＲ分光計で得る。ＭＡＳレートを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＭＡＳ−ＩＩコントローラを使用して５または１０ｋＨｚに設定する；スピニング速度は設定ポイントの２Ｈｚ以内に維持する。１００ｋＨｚのプロトンニューテーション周波数におけるＳＰＩＮＡＬ６４デカップリングを、異核デカップリングのために使用する。スピニングサイドバンドを、５パルスの全サイドバンド抑制法（ｔｏｔａｌ  ｓｉｄｅｂａｎｄ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ）（ＴＯＳＳ）シーケンスにより除去する。プロトンから炭素まで磁化を移動させるためのＣＰ接触時間を４ｍｓに設定し、ＣＰ効率を高めるために９３．５〜４６．９ｋＨｚの線形出力ランプを１Ｈチャネルで使用する。獲得時間を３４ｍｓに設定し、スペクトルを、５ｓのリサイクル遅延で３０ｋＨｚの分光幅にわたって獲得する。試料温度を、試料のスピニングによって生じる摩擦熱を最小化するために２９７±１Ｋに調節する。１３Ｃ化学シフトは、アダマンチン（δ＝２９．５ｐｐｍ）の高磁場共鳴によってニート（液体）のテトラメチルシランのプロトンデカップリングされた１３Ｃピークに対する外部参照（±０．０５ｐｐｍ）である。［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンＩＩＩ型結晶についての化学シフトのピークリストは以下の通りである：
１３Ｃ−ＮＭＲ：ν（Ｆ１）（ｐｐｍ）１１．７，１２．９，２０．５，４８．６，５２．５，５９．４，１０８．９，１１０．０，１１２．７，１２７．３，１２９．４，１３５．５，１３６．４，１４８．８，１５０．１，１５２．２，１５４．５，１５６．３。
【００７８】
参照実施例４
［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン
ＩＩＩ型結晶−経路Ｂ
【化３】
0005948525.tif 000006
ａ．  １−（６−ブロモ−ピリジン−３−イルメチル）−４−エチル−ピペラジン
未希釈の１−エチルピペラジン（５．６ｋｇ）を、６−ブロモ−ピリジン−３−カルバルデヒド（８．３ｋｇ）およびジクロロメタン（１８６ｋｇ）の混合物に加える。次いで、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（１０．９ｋｇ）を少しずつ加え、２０〜３０℃にて１２時間撹拌する。ジクロロメタン（３６ｋｇ）と２Ｎの水酸化ナトリウム水溶液（４６ｋｇ）の混合物中で反応をクエンチする。層を分離し、水層をジクロロメタン（２４×２ｇ）で２回抽出する。有機層を合わせ、ブライン（５０×２）で洗浄し、真空下で溶媒を除去して、１１．５ｋｇの標題化合物を得る。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２８５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７９】
ｂ．  ５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イルアミン
液体アンモニア（５０．０ｋｇ）を、Ｔ：４０℃にて１−（６−ブロモ−ピリジン−３−イルメチル）−４−エチル−ピペラジン（１４．２ｋｇ）、酸化第一銅（２００ｇ）、およびメタノール（５７ｋｇ）の脱気した混合物に加える。混合物を６５〜７５℃にて一晩加熱する。２０〜３０℃に冷やし、セライト（登録商標）パッドで濾過する。濾液を濃縮し、ジクロロメタン（１１３ｋｇ）を加え、ｐＨを２Ｎの水酸化ナトリウム（２３ｋｇ）で１２〜１４に調整し、相を分離し、有機相をジクロロメタン（５８×２）で洗浄し、有機層を合わせる。セライト（登録商標）で混合物を濾過し、濃縮する。残渣をトルエン（９．７ｋｇ）に溶解し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（８．３ｋｇ）を加えることによって結晶化して、６．０ｋｇの標題化合物を得る。トルエン再結晶化によりさらなる精製を得る。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２２１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８０】
ｃ．  Ｎ−イソプロピル−アセトアミド
炭酸カリウム（２８ｋｇ）を、＜２０℃にて酢酸エチル（１０８ｋｇ）中の２−プロパンアミン（１２ｋｇ）の溶液に加える。混合物を５〜０℃に冷やし、約２〜３ｋｇ／時間にて塩化アセチル（１６．７ｋｇ）を加える。ガスクロマトグラフィーにより完了するまで撹拌する。反応を水（０．８ｋｇ）でクエンチし、反応混合物を濾過し、濃縮して１３．４ｋｇの標題化合物を得る。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）４．０６（ｍ，１Ｈ），１．９４（ｓ，３Ｈ），１．１４（ｄ，６Ｈ）。
【００８１】
ｄ．  Ｎ−（４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−フェニル）−Ｎ’−イソプロピル−アセトアミジン
塩化ホスホリル（１６．０ｋｇ）を、＜２０℃にてトルエン（１１５ｋｇ）中の４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−フェニルアミン（１４．５ｋｇ）、Ｎ−イソプロピルアセトアミド（８．５ｋｇ）、トリエチルアミン（１０．６ｋｇ）の混合物に加える。高速液体クロマトグラフィーにより完了するまで１０〜２０℃に撹拌する。真空下で溶媒を除去し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（６４ｋｇ）を加える。１０％炭酸ナトリウム（２５０ｋｇ）水溶液で混合物のｐＨを調整する。混合物を濾過し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１１×２ｋｇ）でケーキをリンスする。相を分離し、水層をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２２×２ｋｇ）で洗浄する。有機層を合わせ、濃縮し、濾過し、シクロヘキサン（０．６ｋｇ）で洗浄し、乾燥させて、１７．２ｋｇの標題化合物を得る。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８２】
ｅ．  ６−ブロモ−４−フルオロ−１−イソプロピル−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール
温度をＴ＜３０℃に維持しながら、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（６．９ｋｇ）を、Ｎ−メチルホルムアミド（７６ｋｇ）中のＮ−（４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−フェニル）−Ｎ’−イソプロピル−アセトアミド（１６．２ｋｇ）の溶液に少しずつ加える。高速液体クロマトグラフィーにより完了するまで混合物を７０〜７５℃に加熱する。２０〜３０℃に冷やし、水（２２７ｋｇ）に加えることによってクエンチし、次いでメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３７×４ｋｇ）で抽出する。合わせた有機相をブライン（４９×２ｋｇ）で洗浄し、２５〜３０Ｌに濃縮し、ｎ−ヘキサン（６４ｋｇ）を加え、スラリーを濾過して、１１ｋｇの標題化合物を得る。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２７２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８３】
粗化合物をジクロロメタンに溶解することによってさらなる精製を得、シリカゲルおよびセライト（登録商標）パッドで濾過し、続いて、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル／ヘキサン混合物から単離する。
【００８４】
ｆ．  ４−フルオロ−１−イソプロピル−２−メチル−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール
６−ブロモ−４−フルオロ−１−イソプロピル−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール（６００ｇ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（８４３ｇ）、トリシクロヘキシルホスフィン（１０６ｇ）、酢酸カリウム（６５２ｇ）、およびジメチルスルホキシド（３．６Ｌ）の混合物中で窒素を泡立てる。酢酸パラジウム（４９ｇ）を加え、高速液体クロマトグラフィーにより完了するまで１００℃に加熱する。反応混合物を冷やし、水（１８Ｌ）で希釈し、次いで濾過して固体を単離する。粗物質を１，２−ジメトキシエタン（４５０ｍＬ）に溶解し、セライト（登録商標）で濾過する。濾液をｇの部分において直接使用する。
【００８５】
ｇ．  ６−（２−クロロ−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル）−４−フルオロ−１−イソプロピル−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール
２，４−ジクロロ−５−フルオロ−ピリミジン（５１７ｇ）、水（１．７ｍＬ）中の炭酸ナトリウム（５８６ｇ）および１，２−ジメトキシエタン（３．４Ｌ）の混合物中で窒素を泡立てる。ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（４．９ｇ）を加え、反応物を８０±３℃に加熱し、ｆの部分からの１，２−ジメトキシエタン中の４−フルオロ−１−イソプロピル−２−メチル−６−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−１Ｈ−ベンゾイミダゾールの溶液（５．１ｌ）を滴下して加える。高速液体クロマトグラフィーにより完了するまで混合物を８０±３℃にて撹拌する。室温に冷やし、冷水（２．１Ｌ、５℃）で希釈する。１時間撹拌し、次いで粗固体を濾過により分離する。イソプロピルアルコールによる粉砕により固体をさらに沈殿して、４７２ｇの標題化合物を得る。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝３２３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８６】
ｈ．  ［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンＩＩＩ型結晶
【化４】
0005948525.tif 000007
ｔ−アミルアルコール（２．３Ｌ）中の６−（２−クロロ−５−フルオロ−ピリミジン−４−イル）−４−フルオロ−１−イソプロピル−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール（４６５ｇ）、５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イルアミン（３２１ｇ）、炭酸セシウム（４０３ｇ）、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテン（１７ｇ）の混合物中で窒素を泡立てる。高速液体クロマトグラフィーにより完了するまでトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（１３．２ｇ）および混合物を１００±５℃にて加熱する。室温に冷やし、ジクロロメタン（１．２Ｌ）で希釈し、セライト（登録商標）パッドで濾過する。濾液を４Ｍ  ＨＣｌ（２．３Ｌ×２）で抽出する。水層を合わせ、炭（３２ｇ）と撹拌する。セライト（登録商標）で濾過し、ジクロロメタン（１．７Ｌ）を加え、ＮａＯＨ（２８％水溶液、１．５Ｌ）でｐＨを調整する。有機層を回収し、水層をジクロロメタン（１．７Ｌ）で洗浄する。有機層を合わせ、ブライン（１Ｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させる。固体支持したＳｉ−チオール処理を使用して残留パラジウムを除去し、溶媒をアセトンに交換する。スラリーを濾過し、乾燥させて６０５ｇの粗生成物をＩ型として得る。６０５ｇのＩ型および４．３Ｌの乾燥アセトンを混合する。懸濁液を５６〜５７℃（還流）にて少なくとも１８時間、次いで周囲温度にて４時間、スラリーにする。真空濾過により固体を単離し、淡黄色のケーキを生成する。５７０ｇの一定重量が得られるまで固体を３５℃にて真空オーブン中で乾燥させる。ＸＲＰＤにより物質を確認して、標題化合物のＩＩＩ型を得る。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５０７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８７】
以下の実施例は、限定されないが、ラムシルマブ、（ラムシルマブについてのマウスにおけるサロゲートとして実験に使用され得るマウスＶＥＧＦＲ２に対するラットモノクローナル抗体による、ＤＣ１０１）を含む、抗ＶＥＧＦＲ２  Ａｂと、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンの組み合わせの予期されない改善を示す。［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンのメシル酸塩形態を特定の以下のアッセイにおいて使用し、化合物Ａと指定する。
【００８８】
実施例１
非小細胞肺癌についてマウス異種移植モデル（ＮＣＩ−Ｈ４４１およびＮＣＩ−Ｈ２１２２）においてＤＣ１０１と組み合わせた化合物Ａの抗腫瘍効果
一般的情報：
腫瘍生着および処置：
ＲＰＭＩ１６４０培地＋１０％ウシ胎仔血清中でヒトＮＳＣＬＣ株ＮＣＩ−Ｈ４４１またはＮＣＩ−Ｈ２１２２を増殖させる。トリプシンによりサブコンフルエント細胞を収集し、血清を含まない増殖培地で２回リンスする。皮下腫瘍のために、各対象動物のひ腹においてハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）およびマトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）の１：１混合物中の５×１０６細胞の皮下注射により増殖を開始する。平均腫瘍体積がほぼ１５０〜２００ｍｍ３のサイズに到達すると、当該分野において周知のランダム化技術により腫瘍サイズおよび体重によって動物をランダム化し、示したように１群当たり複数の動物を用いてそれらのそれぞれの処理群に入れる。
【００８９】
データ収集
Ｗｅｂ  Ｄｉｒｅｃｔｏｒを使用して腫瘍サイズおよび体重を収集する。式：Ｖ＝０．５３６Ｌ×Ｗ２（式中、Ｌ＝測定した直径の大きい方であり、Ｗは垂直直径の小さい方である）を使用することによって腫瘍体積（Ｖ）を推定する。腫瘍体積データをｌｏｇスケールに変換して、時間および処置群にわたる差を均一にする。ＳＡＳソフトウェア（バージョン９．３）におけるＭＩＸＥＤ手順を使用して時間および処置により２元配置反復測定分散分析でｌｏｇ体積データを分析する。反復測定についての相関モデルは空間電力である。各時点において対照群と比較した処置群を比較する。また、各処置群について別々にＭＩＸＥＤ手順を使用して、各時点において調整した平均および標準誤差を算出する。両方の分析は各動物内での自己相関および大きな腫瘍を有する動物を研究の初期から取り除いた場合に発生したデータの損失を考慮している。時間に対して、各処置群について調整した平均および標準誤差をプロットする。化合物Ａによる投薬の最後の日の最も近くに得られた腫瘍体積測定を使用して腫瘍体積の相対変化（％Ｔ／Ｃ）を計算し、一方、ベースライン腫瘍体積は投薬の最初の日または直前に記録された体積である。式
【数１】
0005948525.tif 000008
（式中、
Ｔ＝化合物で処置した群の平均腫瘍体積、
【数２】
0005948525.tif 000009
＝化合物で処置した群の平均腫瘍体積−ベースラインの日の平均腫瘍体積、
Ｃ＝対照（ビヒクル）群の平均腫瘍体積、および
【数３】
0005948525.tif 000010
＝対照群の平均腫瘍体積−ベースラインの日の平均腫瘍体積）
を使用して％Ｔ／Ｃ値を計算する。腫瘍成長阻害がこれらの場合に観察され、％Ｔ／Ｃについて計算した値は１００％未満であり、より多くの阻害が、％Ｔ／Ｃ値がより小さくなると得られる。
【数４】
0005948525.tif 000011
が＜０である場合、腫瘍退縮値を％Ｔ／Ｃの代わりに計算し、これにより
【数５】
0005948525.tif 000012
ここで、Ｔｉｎｉｔｉａｌ＝全ての処置群についての腫瘍体積の総平均である。記載した％Ｔ／Ｃについてのあらゆる負の値は％退縮についての値である。
【００９０】
研究の過程の間、１週間に２回、３次元でのキャリパー測定により腫瘍体積を測定することによってＤＣ１０１および化合物Ａの組み合わせの抗腫瘍効果を評価する。耐容性の一般的指標として、研究の過程の間、１週間に２回体重を測定する。
【００９１】
化合物ＡおよびＤＣ１０１についての製剤：１週間に１回基準で、ｐＨ２にて２５ｍＭリン酸緩衝液（ＰＢ）中の１％ヒドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）中で化合物Ａを配合し、４℃にて保存する。リン酸緩衝食塩水中にＤＣ１０１を溶解し、４℃にて保存する。
【００９２】
対照群：各化合物についてそれぞれ同じスケジュールに従って化合物ＡおよびＤＣ１０１のために使用した両方のビヒクルを対照群の動物に投与する。
【００９３】
単剤療法群について、指示に従って所望の化合物で、および投与されない化合物についてのスケジュールに従って投与されない化合物についてはビヒクルで動物を処置する。
【００９４】
ＮＣＩ−Ｈ４４１異種移植腫瘍
研究１：
単剤療法化合物Ａ
ＮＣＩ−Ｈ４４１異種移植腫瘍を有するメスのＨｓｄ無胸腺ヌードマウス（ｎ＝８）を、０．２ｍＬ／用量を使用して５０または１００ｍｇ／ｋｇの用量にて、２８日間、１日に１回、強制経口投与により化合物Ａで処置する。平均腫瘍体積が、ほぼ１５０〜２００ｍｍ３のサイズ（腫瘍生着の１５日後）に到達した後に開始して化合物Ａを投与し、２８日後（４２日目）に処置を終了する。処置期間の間、１週間に２回、腫瘍体積および体重を測定する。
【００９５】
結果：５０または１００ｍｇ／ｋｇのいずれかの化合物Ａで処置した結果、腫瘍増殖の有意な阻害を生じた。４２日の研究で観察された平均退縮の割合は、５０ｍｇ／ｋｇ用量について−８．１％であり、１００ｍｇ／ｋｇ用量について−２２．８％であった。これらの値は対照と比較して統計的に有意であると決定した（ｐ＜０．００１）。処置期間の終わりに相対的腫瘍体積は、５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ単剤療法による処置が、６／８動物において部分的反応および２／８動物において安定な疾患をもたらしたことを示した。部分的反応が、１００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ単剤療法で処置した全て（８／８）のマウスにおいて観察された。化合物Ａの単剤処置で有意な耐容性の問題は示されなかった：最大の相対的体重損失は１００ｍｇ／ｋｇ用量について４．７％であり、５０ｍｇ／ｋｇ用量について２．７％であった。体重損失は、処置の最後の日（４２日）に対してベースライン（１４日）で記録した平均体重からのパーセンテージの変化として測定した。
【００９６】
単剤療法ＤＣ１０１
ＮＣＩ−Ｈ４４１異種移植腫瘍を有するメスのＨｓｄ無胸腺ヌードマウス（ｎ＝８）を、１０、２０または４０ｍｇ／ｋｇの用量にて、４週間の間、１週間に２回、腹腔内注射によりＤＣ１０１で処置する。平均腫瘍体積がほぼ１５０〜２００ｍｍ３のサイズに到達した後（腫瘍生着から１５日後）に開始してＤＣ１０１を投与し、３９日に終了する。処置の期間の間、１週間に２回、腫瘍体積および体重を測定する。
【００９７】
結果：１０、２０、または４０ｍｇ／ｋｇのＤＣ１０１による処置の結果、腫瘍増殖の有意な阻害が生じた。投与期間（４２日）の終わりに観察された腫瘍体積（％Ｔ／Ｃ）の変化は、１０、２０および４０ｍｇ／ｋｇ用量についてそれぞれ２５．６％、１０．４％および９．０％であった。ビヒクル対照群（ｐ＜０．００１％）と比較してＮＣＩ−Ｈ４４１異種移植腫瘍の統計的に有意（ｐ＜０．００１）な増殖阻害を、ＤＣ１０１で処置した全ての群について観察した。ＤＣ１０１による単剤処置の結果、安定な疾患および部分的反応の頻度に関して用量依存傾向が生じ、それにより安定な疾患および部分的反応についての合わせた頻度は、１０、２０および４０ｍｇ／ｋｇのそれぞれで処置した群において２／８、５／８および６／８であった。ＤＣ１０１による単剤処置のいずれも有意な耐容性の問題はなかった：最大相対的体重損失は１０ｍｇ／ｋｇ用量について１．３％、２０ｍｇ／ｋｇ用量について１．５％、および４０ｍｇ／ｋｇ用量について０．５％であった。体重損失は、処置の最後の日（４２日）に対してベースライン（１４日）で記録した平均体重からのパーセンテージの変化として測定した。
【００９８】
化合物ＡとＤＣ１０１との組み合わせ
ＮＣＩ−Ｈ４４１異種移植腫瘍を有するメスのＨｓｄ無胸腺ヌードマウス（ｎ＝８）を、０．２ｍＬ／用量を使用して５０ｍｇ／ｋｇの用量にて、２８日間、１日に１回、経口強制投与により化合物Ａで処置し、２０ｍｇ／ｋｇの用量にて、１週間に２回、ＤＣ１０１を腹腔内注射する。腫瘍生着から１５日後に開始して両方を投与し、４２日目に化合物Ａの処置および３９日目にＤＣ１０１の処置を終了する。処置期間の間、１週間に２回、腫瘍体積を測定し、体重を測定する。
【００９９】
結果：５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａおよび２０ｍｇ／ｋｇのＤＣ１０１による併用処置の結果、単剤療法の群の各々と比較して抗腫瘍効果の改善が生じた。投与期間の終わり（４２日）における腫瘍体積は、５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａのみで処置した群における８．１％退縮と比較して併用した群において４２．９％退縮（すなわち、％Ｔ／Ｃ＝−４２．９％）を示し、２０ｍｇ／ｋｇのＤＣ１０１のみで処置した群において１０．４％の％Ｔ／Ｃを観察した。併用した群と比較して各単剤療法群の間の抗腫瘍効果の差は統計的に有意であった（ｐ＜０．００１）。併用処置の結果、処置した動物の８／８において部分的反応が生じた。対照的に、２／８のみの動物はＤＣ１０１単剤療法に対して部分的反応を示し、３匹の動物は安定な疾患（３／８）を示し、３匹の動物は進行性疾患を示した（３／８）。６／８の動物は化合物Ａの単剤療法に対して部分的反応を示し、２匹の動物は安定な疾患を示した（２／８）。併用療法に関して、部分的反応動物（８／８）の頻度が増加し、同様に、退縮の大きさが統計的に有意に増加した（ｐ＜０．００１）（併用療法を受けた５／８の動物は、化合物Ａ（５０ｍｇ／ｋｇ）の単剤の群において観察された最適な反応より良好な退縮率を有した）。単剤療法または対照と比較して耐容性の統計的に有意な変化は、併用処置で観察されなかった。特に、併用した群における最大相対的体重損失は、化合物Ａの処置の単剤療法について２．７％およびＤＣ１０１処置の単剤療法について１．５％と比較して３．０％であった。体重損失は、処置の最後の日（４２日）に対して、ベースライン（１４日）で記録した平均体重からのパーセンテージの変化として測定した。
【０１００】
研究２：
単剤療法化合物Ａ
ＮＣＩ−Ｈ４４１異種移植腫瘍を有するメスのＨｓｄ無胸腺ヌードマウス（ｎ＝７）を、０．２ｍＬ／用量を使用して５０または７５ｍｇ／ｋｇの用量にて、２８日間、１日に１回、強制経口投与（ＰＯ）により化合物Ａで処置する。平均腫瘍体積が、ほぼ１５０〜２００ｍｍ３のサイズ（腫瘍生着の３６日後）に到達した後に開始して化合物Ａを投与し、２８日後（６３日目）に処置を終了する。処置期間の間、１週間に２回、腫瘍体積および体重を測定する。
【０１０１】
結果：投与期間の終わり（６７日）に、ＮＣＩ−Ｈ４４１異種移植を５０または７５ｍｇ／ｋｇのいずれかの化合物Ａで処置した結果、腫瘍増殖の有意な阻害を生じた。５０ｍｇ／ｋｇの処置は７．０％の％Ｔ／Ｃを示したのに対して、７５ｍｇ／ｋｇの処置の結果、ビヒクル対照と比較して−４．８％の退縮が生じた。これらの値は対照と比較して統計的に有意であると決定した（ｐ＜０．００１）。処置期間の終わりにおける相対的腫瘍体積は、５０または７５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａによる単剤療法の結果、安定な疾患および部分的反応の頻度に関して用量依存性傾向が示され、それにより安定な疾患および部分的反応の合わせた頻度はそれぞれ４／７および６／７であった。２／７および３／７のマウスは５０ｍｇ／ｋｇおよび７５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの単剤療法について完全な退縮を達成した。最大の相対的体重損失は５０および７５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａの単剤療法それぞれについて５．５％および５．１％であり、対照動物と統計的に異ならなかった。
【０１０２】
単剤療法ＤＣ１０１
ＮＣＩ−Ｈ４４１異種移植腫瘍を有するメスのＨｓｄ無胸腺ヌードマウス（ｎ＝７）を、２０ｍｇ／ｋｇの用量にて、腹腔内注射により、４週間の間、１週間に２回、ＤＣ１０１で処置する。平均腫瘍体積が、ほぼ１５０〜２００ｍｍ３のサイズ（腫瘍生着の３６日後）に到達した後に開始してＤＣ１０１を投与する。処置期間の間、１週間に２回、腫瘍体積および体重を測定する。
【０１０３】
結果：２０ｍｇ／ｋｇのＤＣ１０１による処置の結果も、ビヒクル対照と比較して５．６％の％Ｔ／Ｃで腫瘍増殖の有意な阻害が生じた。これらの価は対照と比較して統計的に有意であると決定した（ｐ＜０．００１）。治療期間の終わりにおける相対的腫瘍体積により、ＤＣ１０１による単剤療法がマウスの２／６において進行性疾患を生じ、２／６において安定な疾患を生じ、マウスの２／６において部分的反応を達成したことが示された。最大の相対的体重損失はＤＣ１０１単剤療法について３．９％であり、対照動物と統計的に異ならなかった。
【０１０４】
化合物ＡおよびＤＣ１０１の組み合わせ
ＮＣＩ−Ｈ４４１異種移植腫瘍を有するメスのＨｓｄ無胸腺ヌードマウス（ｎ＝７）を、０．２ｍＬ／用量を使用して５０ｍｇ／ｋｇまたは７５ｍｇ／ｋｇの用量にて、強制経口投与により、２８日間、１日に１回、化合物Ａで、および２０ｍｇ／ｋｇの用量にて、腹腔内注射により、１週間に２回、ＤＣ１０１で処置する。平均腫瘍体積が、ほぼ１５０〜２００ｍｍ３のサイズ（腫瘍生着の３６日後）に到達した後に開始して両方を投与し、６３日目に処置を終了する。処置期間の間、１週間に２回、腫瘍体積および体重を測定する。
【０１０５】
２０ｍｇ／ｋｇのＤＣ１０１および化合物Ａによる併用処置は単剤療法群のいずれよりも有意に良好であった抗腫瘍効果を示し、５０または７５ｍｇ／ｋｇのいずれかの化合物Ａを含めた併用処置はそれぞれ、−４８．６％および−３８．９％の腫瘍退縮を生じた。腫瘍増殖に対するこれらの効果は、ビヒクル対照群（ｐ＜０．００１）およびそれらの代表的な単剤療法群と比較して統計的に有意であった。特に、ＤＣ１０１単剤療法と比較して、５０または７５ｍｇ／ｋｇとの組み合わせはそれぞれｐ＜０．００１およびｐ＝０．０３３で両方とも統計的に有意であり、それらのそれぞれの化合物Ａの単剤療法群と比較して、５０および７５ｍｇ／ｋｇによる併用処置もまた、それぞれｐ＜０．００１およびｐ＝０．００６で統計的に有意であった。
【０１０６】
処置期間の終わりにおける相対的腫瘍体積測定は、ＤＣ１０１と５０または７５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａとの併用療法が１００％の疾患抑制率をもたらしたことを示し、各群における７／７マウスが安定な疾患を有したか、または部分的反応を達成したかのいずれかであった。これはＤＣ１０１または化合物Ａのいずれかの単剤療法と比較して反応の有意な改善を示し、観察された疾患抑制率（安定な疾患＋部分的反応）は、５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、７５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａ、および２０ｍｇ／ｋｇのＤＣ１０１による単剤療法についてそれぞれ４／７、６／７および４／６であった。
【０１０７】
併用した群における相対的体重の変化は対照または単剤療法群と統計的に異ならなかった。
【０１０８】
ＮＣＩ−Ｈ２１２２異種移植腫瘍
単剤療法化合物Ａ
ＮＣＩ−Ｈ２１２２異種移植腫瘍を有するメスのＨｓｄ無胸腺ヌードマウス（ｎ＝８）を、０．２ｍＬ／用量を使用して５０または７５ｍｇ／ｋｇの用量にて、強制経口投与（ＰＯ）により、２８日間、１日に１回、化合物Ａで処置する。平均腫瘍体積が、ほぼ１５０〜２００ｍｍ３のサイズ（腫瘍生着の１６日後）に到達した後に開始して化合物Ａを投与し、４３日目に処置を終了する。処置期間の間、１週間に２回、腫瘍体積および体重を測定する。
【０１０９】
結果：投与期間の終わり（４５日）に、５０または７５ｍｇ／ｋｇのいずれかの化合物Ａで処置したＮＣＩ−Ｈ２１２２異種移植はそれぞれ、ビヒクル対照と比較して６４．３％および３７．３％の％Ｔ／Ｃで腫瘍増殖の有意な阻害を生じた。これらの値は対照群と比較して統計的に有意であると決定した（ｐ＜０．００１）。化合物Ａを与えた群における相対的体重の変化は対照群と統計的に異ならなかった。
【０１１０】
単剤療法ＤＣ１０１
ＮＣＩ−Ｈ２１２２異種移植腫瘍を有するメスのＨｓｄ無胸腺ヌードマウス（ｎ＝８）を、２０ｍｇ／ｋｇの用量にて、腹腔内注射により、ＤＣ１０１で処置する。平均腫瘍体積が、ほぼ１５０〜２００ｍｍ３のサイズ（腫瘍生着の１６日後）に到達した後に開始してＤＣ１０１を投与し、４週間の間、１週間に２回、継続する。処置期間の間、１週間に２回、腫瘍体積および体重を測定する。
【０１１１】
結果：２０ｍｇ／ｋｇのＤＣ１０１による処置もまた、ビヒクル対照と比較して４５．７％の％Ｔ／Ｃで腫瘍増殖の有意な阻害を生じた。この値は対照と比較して統計的に有意であると決定された（ｐ＜０．００１）。ＤＣ１０１を与えた群における相対的体重の変化は対照群と統計的に異ならなかった。
【０１１２】
化合物ＡとＤＣ１０１との組み合わせ
ＮＣＩ−Ｈ２１２２異種移植腫瘍を有するメスのＨｓｄ無胸腺ヌードマウス（ｎ＝８）を、０．２ｍＬ／用量を使用して５０または７５ｍｇ／ｋｇの用量にて、強制経口投与（ＰＯ）により、２８日間、１日に１回、化合物Ａで、および２０ｍｇ／ｋｇの用量にて、腹腔内注射により、１週間に２回、ＤＣ１０１で処置する。平均腫瘍体積が、ほぼ１５０〜２００ｍｍ３のサイズ（腫瘍生着の１６日後）に到達した後に開始して両方を投与し、４３日目に処置を終了する。処置期間の間、１週間に２回、腫瘍体積および体重を測定する。
【０１１３】
結果：２０ｍｇ／ｋｇのＤＣ１０１および化合物Ａによる併用処置は単剤療法群のいずれよりも有意に良好な抗腫瘍効果を示し、５０または７５ｍｇ／ｋｇのいずれかの化合物Ａを含んだ併用処置がそれぞれ、２０．７％および９．３％の％Ｔ／Ｃを生じた。腫瘍増殖に対するこれらの効果は、ビヒクル対照群（ｐ＜０．００１）と比較して、同様にそれらのそれぞれの化合物Ａ単剤療法群（ｐ＜０．００１）と比較して統計的に有意であった。ＤＣ１０１単剤療法と比較して、５０または７５ｍｇ／ｋｇとの組み合わせはそれぞれ、ｐ＝０．００２およびｐ＜０．００１で、両方とも統計的に有意であった。処置期間の終わりにおける相対的腫瘍体積により、ＤＣ１０１および５０または７５ｍｇ／の化合物Ａによる併用療法は、安定な疾患および部分的反応の頻度に関して用量依存的傾向を生じたことが示され、それにより安定な疾患および部分的反応について合わせた頻度はそれぞれ４／８および７／８であった。併用した群における相対的体重の変化は対照または単剤療法群と統計的に異ならなかった。
【０１１４】
全部で３つの異なる研究において、ＤＣ１０１および化合物Ａの両方による単剤療法後に有意な抗腫瘍効果を、併用療法で得られた効果の統計的に有意な改善と共に観察した。３つの研究の過程の間に得られた体重測定は、併用処置を含む、処置のどれも耐容性に対して有意なマイナスの影響を有さないことが示された。
【０１１５】
実施例２
ラムシルマブと抗ＣＤＫ４／６処置の組み合わせは内皮細胞発芽を減少させる
インビトロ細胞ベースのアッセイによって内皮細胞発芽のインビトロでの減少を測定する。内皮細胞発芽に対する化合物Ａおよびラムシルマブの効果を測定するためにアッセイを使用する。
【０１１６】
ＳＩＮＧＬＥＱＵＯＴＳ（商標）（Ｌｏｎｚａ  ＃ＣＣ−４１７６）および２％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補足したＬｏｎｚａ  ＥＢＭ２（Ｌｏｎｚａ  ＃ＣＣ−３１５６）培地中でＨＵＶＥＣ細胞（Ｌｏｎｚａ  ＃Ｃ２５１９Ａ）を培養する。ＳＩＮＧＬＥＱＵＯＴＳ（商標）（Ｌｏｎｚａ  ＃ＣＣ−４１２６）および１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ  ＃ＳＨ３０６１１．０２）を補足したＬｏｎｚａ線維芽細胞基礎培地（ＦＢＭ）（Ｌｏｎｚａ  ＃ＣＣ−３１３１）培地中で肺癌に関連した線維芽細胞（ＣＡＦ）を培養する。
【０１１７】
室温にて少なくとも３時間、５０ｍＬのＰＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ  ＃ＳＨ３０２６４．０２）中の１グラムのデキストランで被覆したＣｙｔｏｄｅｘ３マイクロビーズ（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｃ３２７５）を水和し、１５分間、ロッカーの上に置く。上清を捨て、ビーズをＰＢＳで３回洗浄し、５０ｍＬのＰＢＳ中で再懸濁する。シリコンで覆ったガラスボトルに入れ、１２０℃にて１５分間オートクレーブし、４℃にて保存する。
【０１１８】
アッセイの日に、ビーズを穏やかに混合し、１．２ｍＬのビーズを５０ｍＬチューブ（Ｆａｌｃｏｎ、＃３５２０９８）に移し、それらをそのまま静置させる。ＰＢＳを吸引し、ビーズを２０ｍＬの予め加温した完全内皮基礎培地−２（ＥＢＭ２）で洗浄する。ビーズを静置させ、培地を穏やかに吸引し、１５ｍＬの完全ＥＢＭ２を加える。
【０１１９】
培養フラスコからＨＵＶＥＣ細胞を収集し、ＰＢＳでリンスし、加え、細胞を集めるとすぐにＴｒｙｐＬＥ（Ｇｉｂｃｏ  ＃１２６０５１−０１０）を吸引する。２０ｍＬの完全培地中でＨＵＶＥＣ細胞を穏やかに再懸濁し、生存細胞数を測定し、２．５×１０７細胞懸濁液をビーズに加え、２４ｍＬの最終体積にする。５％ＣＯ２中で３７℃にて４時間、チューブを横に置き、２０分ごとに数回、穏やかに反転させる。２ｍＬ／フラスコにてビーズおよび細胞懸濁液を１２Ｔ７５フラスコ（Ｎｕｎｃ  ＃１５６４９９）に移す。チューブを２０ｍＬの培地でリンスし、それらを１２個のフラスコに等しく分ける。培地を１０ｍＬにし、５％ＣＯ２中で一晩、３７℃にてフラスコをインキュベートする。
【０１２０】
２Ｔ７５フラスコからＨＵＶＥＣ／ビーズを含有する培地をピペットで取り、数回上下させて、フラスコからＨＵＶＥＣ／ビーズを離す。溶液を５０ｍＬチューブに移し、フラスコを５ｍＬ培地で洗浄し、同じチューブに移す。ビーズを静置させ、１ｍＬピペットを使用して新鮮なＥＢＭ２でさらに２回混合し、必要に応じてビーズを分離する。１８７５μＬの４Ｕ／ｍＬのアプロチニン（０．１５単位／ｍＬ最終濃度）（Ｓｉｇｍａ  ＃Ａ３４２８）を補足した、５０ｍＬの２ｍｇ／ｍＬのフィブリノーゲン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｆ４８８３）からなる、２×１５ｍＬのフィブリノーゲン溶液中にビーズを再懸濁する。０．２２マイクロフィルターで濾過滅菌する。
【０１２１】
Ｔ１５０フラスコからＣＡＦ細胞を収集し、ＰＢＳでリンスし、加え、細胞を集めるとすぐにＴｒｙｐＬＥ（Ｇｉｂｃｏ  ＃１２６０５１−０１０）を吸引する。２ｍＬの完全培地（ＳＩＮＧＬＥＱＵＯＴＳ（商標）および２％ＦＢＳを補足したＥＢＭ２）を加え、生存細胞数を測定し、４×１０４細胞／ｍｌにて細胞をフィブリノーゲン溶液に加える。
【０１２２】
１２μＬのトロンビン（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｔ４３９３−１００単位）を、２４ウェルガラス底プレート（Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＃Ｐ２４−１．５Ｈ−Ｎ）で最終濃度０．６単位／０．５ｍＬの凝固溶液に加える。０．５ｍＬのフィブリノーゲン−ビーズ／ＣＡＦ懸濁液を各ウェルに素早く加え、混合し、気泡形成を防ぐ。プレートを２０分間、フードに置き、乱さないように凝固させ、次いでプレートを２０分間インキュベータ（３７℃、５％ＣＯ２）に入れる。０．５ｍＬの完全培地を各ウェルに滴下して加え、凝固を乱すのを回避する。１０μｇ／ｍＬの濃度にてラムシルマブを各ウェルに加える。ラムシルマブ含有ウェルに、３、１０、３０、１００および５００ｎＭの濃度にて化合物Ａを加える。ジメチルスルホキシド中で化合物を連続希釈し、次いでアッセイにおけるジメチルスルホキシドの最終濃度が０．０５％であるようにアッセイプレートに移す。２％ＣＯ２中で３７℃にてプレートをインキュベートする。処理後４日に、培地を新鮮な培地に置き換え、処置する。
【０１２３】
処理後７日に、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＃１５７１０）中で４℃にて一晩、ウェルを固定する。０．５ｍＬのダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）（ＨｙＣｌｏｎｅ  ＳＨ３０２６４．０１、Ｌｏｔ＃ＡＶＪ７９７９１）でプレートを洗浄し、４℃にて１０分間、０．５％ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ−１００／ＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ＃Ｔ９２８４）で透過処理する。１０〜１５分間、各々、１ｍＬのグリシン／ＤＰＢＳ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ＃１６１−０７１８）でプレートを３回リンスし、１つのウェルにつき、ＤＰＢＳ中の０．１％ＢＳＡ、０．２％ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ−１００、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０からなる０．５ｍＬのＩＦ緩衝液＋１０％ヤギ血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃１６２１０）で一晩ブロックする。緩衝液を除去し、上記の緩衝中の一次抗体、ヒツジ抗ヒトＣＤ３１（１：１００）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ＃ＢＡＦ８０６）および抗α平滑筋アクチン、標識化Ｃｙ３（１：２００）（Ｓｉｇｍａ＃Ｃ６１９８）と共にプレートを４℃にて一晩インキュベートする。穏やかに振盪しながら、室温にて、ＩＦ緩衝液で、各々、２０分間、ウェルを３回リンスする。インキュベーション緩衝液中にＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８ロバ抗ヒツジＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（１：２００）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ＃Ａ−１１０１５）を加え、室温にて１時間インキュベートする。上記のようにウェルをリンスし、室温にて１〜２時間、ＤＰＢＳ中の４’，６−ジアミジノ−２−フェニリンドール（ＤＡＰＩ）（１：１００００）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃Ｄ１３０６）中でインキュベートする。５分間、ＤＰＢＳでウェルをリンスする。０．５ｍＬのＤＰＢＳを加え、２倍の対物レンズを使用してＣＥＬＬＩＮＳＩＧＨＴ（商標）（Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）でプレートを走査する。内皮細胞発芽を画像化し、定量するためにＣＥＬＬＩＮＳＩＧＨＴ（商標）神経突起検出アッセイを使用する。ＪＭＰ９（ＳＡＳ，９．０．３）を使用してデータを統計的に解析する。
【０１２４】
各々の実験は、三連の平均を表し、幾何平均として表し、９５％信頼区間を計算できる。パーセントの減少を式（（ラムシルマブ対照−処置）／（ラムシルマブ対照））＊１００を用いて算出する。
【０１２５】
その結果により、ラムシルマブへの化合物Ａの付加は、ラムシルマブの抗腫瘍効果を用量依存的に付加することが示唆される。ラムシルマブと組み合わせた化合物Ａは、ラムシルマブ処置単独と比較して、３００ｎＭおよび５００ｎＭにてそれぞれ、４２．５％（ｐ＜０．００３４）および５０％（ｐ＜０．０００７）、内皮発芽の長さを減少させる。
【０１２６】
実施例３
ステージＩＶのＮＳＣＬＣを有する患者についてラムシルマブと組み合わせた［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンの研究
研究設計
この研究は、ステージＩＶのＮＳＣＬＣを有する患者について、６０分のＩＶ注入にわたって１０ｍｇ／ｋｇにて投与し、続いて２１日の周期の１日目に１時間の観察期間を行った、ラムシルマブと組み合わせた、２１日周期で１日から２１日の１２（±３）時間ごとの１００ｍｇ、１５０ｍｇ、または２００ｍｇにおける［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンの経口投与の多施設、非無作為化、非盲検、用量増加フェーズ１ｂ研究である。
【０１２７】
研究目的
この研究の第１の目的は、有害事象共通用語基準（Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ）（ＣＴＣＡＥバージョン４．０、ＮＣＩ  ２００９）を使用してステージＩＶのＮＳＣＬＣを有する患者に、ラムシルマブと組み合わせて経口投与した場合の［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンの安全性および耐容性を評価することである。
【０１２８】
この研究の第２の目的は、ラムシルマブと組み合わせて与えた場合の［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンの抗腫瘍活性を実証すること；ラムシルマブと組み合わせて与えた場合の［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンの薬物動態（ＰＫ）を決定すること；ならびにＭＤ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ−Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ（ＭＤＡＳＩ−ＬＣ）により収集された患者により報告された疼痛および疾患関連症状の変化を特性付けることである。
【０１２９】
臨床試験薬
［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンは、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、または２００ｍｇにて経口投与のためのカプセル剤として供給される。
【０１３０】
２１日周期の１〜２１日で１２時間ごとの経口による１００ｍｇへの［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミンの減少についてのコンティンジェンシーが許容される。
【０１３１】
ラムシルマブは、１０ｍｇ／ｋｇ（５００ｍｇ／５０ｍＬバイアル）の濃度にて水溶液中で製剤化されるラムシルマブを注入するための無菌の防腐剤を含まない溶液中で供給される。緩衝液は１０ｍＭヒスチジン、７５ｍＭ塩化ナトリウム、１３３ｍＭグリシン、および０．０１％ポリソルベート８０、ｐＨ６．０を含有する。ラムシルマブは単回使用の５０ｍＬ呼び容積ガラスバイアル中に供給される。
【０１３２】
ラムシルマブの第１の用量は患者のベースライン体重（キログラム）に依存する。ラムシルマブの後の用量は、最後の用量計算から２’１０％の体重の変化（増加または減少）がある場合、再計算されなければならず；後の用量は、最後の用量計算から体重の＜１０％の変化（増加または減少）である場合、再計算されなければならない。
【０１３３】
継続中の臨床試験からの評価可能患者についての予備データを表３に示す。
【０１３４】
【表３】
0005948525.tif 000013
【０１３５】
評価可能な患者についての上記の予備データにより、進行性疾患を有する２人の患者が明らかにされ、さらに、安定な疾患を有する４人の患者および部分的反応を有する２人の患者が明らかにされた。
【０１３６】
配列表
＜配列番号１；ＤＮＡ；ヒト＞
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＴＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＡＴＡＧＧＡＧＡ  ＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＧＴＡＴＴＧＡＣＡＡＣＴＧＧＴＴＡＧ  ＧＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＡＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＡＴ  ＧＣＡＴＣＣＡＡＴＴＴＧＧＡＣＡＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴＧＧＡＴＣ  ＴＧＧＧＡＣＡＴＡＴＴＴＴＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＴＡＧＣＣＴＧＣＡＡＧＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧ
ＣＡＧＴＴＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＣＴＡＡＡＧＣＴＴＴＴＣＣＴＣＣＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡ
ＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＴＣＡＡＡ
＜配列番号２；ＰＲＴ１；ヒト＞
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＩＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＤＮＷＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤ  ＡＳＮＬＤＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＹＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＡＫＡＦＰＰＴＦＧＧ
ＧＴＫＶＤＩＫ
＜配列番号３；ＤＮＡ；ヒト＞
ＧＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣ  ＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＡＧＣＡ  ＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＡＴＣＣ  ＡＴＴＡＧＴＡＧＴＡＧＴＡＧＴＡＧＴＴＡＣＡＴＡＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧ
ＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡ
ＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＴＣＡＣＡ  ＧＡＴＧＣＴＴＴＴＧＡＴＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＡＡＧＣ
＜配列番号４；ＰＲＴ１；ヒト＞
ＥＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳ  ＩＳＳＳＳＳＹＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＴ  ＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
＜配列番号５；ＤＮＡ；ヒト＞
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＴＴＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＡＴＡＧＧＡＧＡ  ＣＡＧＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＣＧＧＧＣＧＡＧＴＣＡＧＧＧＴＡＴＴＧＡＣＡＡＣＴＧＧＴＴＡＧ  ＧＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＧＡＡＡＧＣＣＣＣＴＡＡＡＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＧＡＴ
ＧＣＡＴＣＣＡＡＴＴＴＧＧＡＣＡＣＡＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＡＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＡＡＧＴＧＧＡＴＣ
ＴＧＧＧＡＣＡＴＡＴＴＴＴＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＴＡＧＣＣＴＧＣＡＡＧＣＴＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧ  ＣＡＧＴＴＴＡＴＴＴＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＧＣＴＡＡＡＧＣＴＴＴＴＣＣＴＣＣＣＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡ  ＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＴＣＡＡＡＣＧＡＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴ  ＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＧＴ
ＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧ
ＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡ  ＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧ  ＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＣＣＡＴＣＡＧＧＧＣ  ＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＴ
＜配列番号６；ＰＲＴ１；ヒト＞
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＩＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＤＮＷＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤ  ＡＳＮＬＤＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＹＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＦＡＶＹＦＣＱＱＡＫＡＦＰＰＴＦＧＧ
ＧＴＫＶＤＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶ
ＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧ  ＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
＜配列番号７；ＤＮＡ；ヒト＞
ＧＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＣＣＴＧＧＧＧＧＧＴＣ  ＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＴＡＧＣＴＡＴＡＧＣＡ  ＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＣＴＣＡＴＣＣ  ＡＴＴＡＧＴＡＧＴＡＧＴＡＧＴＡＧＴＴＡＣＡＴＡＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＴＣＡＧＴＧＡＡＧＧＧＣＣＧ
ＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＧＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡ
ＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＴＣＡＣＡ  ＧＡＴＧＣＴＴＴＴＧＡＴＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＧＡＣＡＡＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＡＡＧＣＧＣ  ＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＣＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡ  ＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣ
ＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡ
ＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧ  ＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣ  ＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡ  ＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣ
ＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣ
ＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡ  ＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣ  ＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴ  ＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡ
ＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡ
ＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧ  ＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴ  ＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧ  ＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣ
ＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡ
ＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣ  ＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＧＧＧＴＡＡＡ
＜配列番号８；ＰＲＴ１；ヒト＞
ＥＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＳ  ＩＳＳＳＳＳＹＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＴ  ＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＬＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰ  ＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮ
ＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬ
ＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲ  ＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬ  ＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤ  ＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
＜配列番号９；ＰＲＴ１；ヒト＞
Ａ  ＳＶＧＬＰＳＶＳＬＤ  ＬＰＲＬＳＩＱＫＤＩ  ＬＴＩＫＡＮＴＴＬＱ  ＩＴＣＲＧＱＲＤＬＤ
ＷＬＷＰＮＮＱＳＧＳ  ＥＱＲＶＥＶＴＥＣＳ  ＤＧＬＦＣＫＴＬＴＩ  ＰＫＶＩＧＮＤＴＧＡ  ＹＫＣＦＹＲＥＴＤＬ  ＡＳＶＩＹＶＹＶＱＤ
ＹＲＳＰＦＩＡＳＶＳ  ＤＱＨＧＶＶＹＩＴＥ  ＮＫＮＫＴＶＶＩＰＣ  ＬＧＳＩＳＮＬＮＶＳ  ＬＣＡＲＹＰＥＫＲＦ  ＶＰＤＧＮＲＩＳＷＤ
ＳＫＫＧＦＴＩＰＳＹ  ＭＩＳＹＡＧＭＶＦＣ  ＥＡＫＩＮＤＥＳＹＱ  ＳＩＭＹＩＶＶＶＶＧ  ＹＲＩＹＤＶＶＬＳＰ  ＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥ
ＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴ  ＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷ  ＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫ  ＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱ  ＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳ  ＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳ
ＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳ  ＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴ  ＦＶＲＶＨＥＫＰＦＶ  ＡＦＧＳＧＭＥＳＬＶ  ＥＡＴＶＧＥＲＶＲＩ  ＰＡＫＹＬＧＹＰＰＰ
ＥＩＫＷＹＫＮＧＩＰ  ＬＥＳＮＨＴＩＫＡＧ  ＨＶＬＴＩＭＥＶＳＥ  ＲＤＴＧＮＹＴＶＩＬ  ＴＮＰＩＳＫＥＫＱＳ  ＨＶＶＳＬＶＶＹＶＰ
ＰＱＩＧＥＫＳＬＩＳ  ＰＶＤＳＹＱＹＧＴＴ  ＱＴＬＴＣＴＶＹＡＩ  ＰＰＰＨＨＩＨＷＹＷ  ＱＬＥＥＥＣＡＮＥＰ  ＳＱＡＶＳＶＴＮＰＹ
ＰＣＥＥＷＲＳＶＥＤ  ＦＱＧＧＮＫＩＥＶＮ  ＫＮＱＦＡＬＩＥＧＫ  ＮＫＴＶＳＴＬＶＩＱ  ＡＡＮＶＳＡＬＹＫＣ  ＥＡＶＮＫＶＧＲＧＥ
ＲＶＩＳＦＨＶＴＲＧ  ＰＥＩＴＬＱＰＤＭＱ  ＰＴＥＱＥＳＶＳＬＷ  ＣＴＡＤＲＳＴＦＥＮ  ＬＴＷＹＫＬＧＰＱＰ  ＬＰＩＨＶＧＥＬＰＴ
ＰＶＣＫＮＬＤＴＬＷ  ＫＬＮＡＴＭＦＳＮＳ  ＴＮＤＩＬＩＭＥＬＫ  ＮＡＳＬＱＤＱＧＤＹ  ＶＣＬＡＱＤＲＫＴＫ  ＫＲＨＣＶＶＲＱＬＴ
ＶＬＥＲＶＡＰＴＩＴ  ＧＮＬＥＮＱＴＴＳＩ  ＧＥＳＩＥＶＳＣＴＡ  ＳＧＮＰＰＰＱＩＭＷ  ＦＫＤＮＥＴＬＶＥＤ  ＳＧＩＶＬＫＤＧＮＲ
ＮＬＴＩＲＲＶＲＫＥ  ＤＥＧＬＹＴＣＱＡＣ  ＳＶＬＧＣＡＫＶＥＡ  ＦＦＩＩＥＧＡＱＥＫ  ＴＮＬＥＩＩＩＬＶＧ  ＴＡＶＩＡＭＦＦＷＬ
ＬＬＶＩＩＬＲＴＶＫ  ＲＡＮＧＧＥＬＫＴＧ  ＹＬＳＩＶＭＤＰＤＥ  ＬＰＬＤＥＨＣＥＲＬ  ＰＹＤＡＳＫＷＥＦＰ  ＲＤＲＬＫＬＧＫＰＬ
ＧＲＧＡＦＧＱＶＩＥＡＤＡＦＧＩＤＫＴＡ  ＴＣＲＴＶＡＶＫＭＬ  ＫＥＧＡＴＨＳＥＨＲ  ＡＬＭＳＥＬＫＩＬＩ  ＨＩＧＨＨＬＮＶＶＮ
ＬＬＧＡＣＴＫＰＧＧ  ＰＬＭＶＩＶＥＦＣＫ  ＦＧＮＬＳＴＹＬＲＳ  ＫＲＮＥＦＶＰＹＫＴ  ＫＧＡＲＦＲＱＧＫＤ  ＹＶＧＡＩＰＶＤＬＫ
ＲＲＬＤＳＩＴＳＳＱ  ＳＳＡＳＳＧＦＶＥＥ  ＫＳＬＳＤＶＥＥＥＥ  ＡＰＥＤＬＹＫＤＦＬ  ＴＬＥＨＬＩＣＹＳＦ  ＱＶＡＫＧＭＥＦＬＡ
ＳＲＫＣＩＨＲＤＬＡ  ＡＲＮＩＬＬＳＥＫＮ  ＶＶＫＩＣＤＦＧＬＡ  ＲＤＩＹＫＤＰＤＹＶ  ＲＫＧＤＡＲＬＰＬＫ  ＷＭＡＰＥＴＩＦＤＲ
ＶＹＴＩＱＳＤＶＷＳ  ＦＧＶＬＬＷＥＩＦＳ  ＬＧＡＳＰＹＰＧＶＫ  ＩＤＥＥＦＣＲＲＬＫ  ＥＧＴＲＭＲＡＰＤＹ  ＴＴＰＥＭＹＱＴＭＬ
ＤＣＷＨＧＥＰＳＱＲ  ＰＴＦＳＥＬＶＥＨＬ  ＧＮＬＬＱＡＮＡＱＱ  ＤＧＫＤＹＩＶＬＰＩ  ＳＥＴＬＳＭＥＥＤＳ  ＧＬＳＬＰＴＳＰＶＳ
ＣＭＥＥＥＥＶＣＤＰ  ＫＦＨＹＤＮＴＡＧＩ  ＳＱＹＬＱＮＳＫＲＫ  ＳＲＰＶＳＶＫＴＦＥ  ＤＩＰＬＥＥＰＥＶＫ  ＶＩＰＤＤＮＱＴＤＳ
ＧＭＶＬＡＳＥＥＬＫ  ＴＬＥＤＲＴＫＬＳＰ  ＳＦＧＧＭＶＰＳＫＳ  ＲＥＳＶＡＳＥＧＳＮ  ＱＴＳＧＹＱＳＧＹＨ  ＳＤＤＴＤＴＴＶＹＳ
ＳＥＥＡＥＬＬＫＬＩ  ＥＩＧＶＱＴＧＳＴＡ  ＱＩＬＱＰＤＳＧＴＴ  ＬＳＳＰＰＶ
【要約】
本発明は、本明細書にさらに記載されるように、抗ＶＥＧＦＲ２抗体、好ましくは、ラムシルマブと組み合わされた、［５−（４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル）−ピリジン−２−イル］−［５−フルオロ−４−（７−フルオロ−３−イソプロピル−２−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ピリミジン−２−イル］−アミン、またはその医薬的に許容可能な塩を含む、患者における非小細胞肺癌の治療に使用するための医薬製剤およびそれを治療する方法を提供する。
【選択図】なし【配列表】
0005948525000001.app