(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）、および
（ｉｉ）スクロース
を含む凍結乾燥医薬調製物。
【請求項２】
スクロースの量が、前記メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）の１０〜１００重量％である、請求項１に記載の凍結乾燥医薬調製物。
【請求項３】
有機溶媒を含んでいない、または実質的に含んでいない、請求項１または２に記載の凍結乾燥医薬調製物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の凍結乾燥医薬調製物と生理学的に許容される溶液からなり、生理学的に許容される前記溶液がグルコース溶液である、医薬組成物。
【請求項５】
医薬として使用するための、請求項１〜３の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬調製物。
【請求項６】
がんの治療および／または予防に使用するための、請求項１〜３の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬調製物。
【請求項７】
前記がんが、卵巣がん、肺がん、膀胱がん、中皮腫、多発性骨髄腫、乳がん、または血液のがんの何れか１つである、請求項６に記載の凍結乾燥医薬調製物。
【請求項８】
ａ．メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）を有機溶媒に溶解し、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）溶液を得ること、
ｂ．前記メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）溶液に水を加えて、０．２〜３．０ｍｇ／ｍｌの濃度のメルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）水溶液を得ること、
ｃ．スクロースを、前記メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）溶液に加えること、及び
ｄ．スクロースを含有する前記メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）水溶液を凍結乾燥に付すこと
による、請求項１〜３の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬調製物の調製方法。
【請求項９】
ａ．メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）を有機溶媒に溶解すること、
ｂ．ステップａ）において得られた溶液に水を加えて、０．２〜３．０ｍｇ／ｍｌの濃度の、前記メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）の溶液を得ること、
ｃ．スクロースを、ステップｂ）で得られた溶液に加えること、及び
ｄ．ステップｃ）で得られた溶液を凍結乾燥に付すこと
による、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記有機溶媒が、エタノール、酸含有エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジオキサン、酢酸、乳酸、プロピオン酸、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、メタノール、およびエタノールと水との混合物の何れか１種から選択される、請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】
水性溶媒中で再構成する際に、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）の凍結乾燥調製物の再構成時間を短縮するための、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）の凍結乾燥調製物における、スクロースの使用。
【請求項１２】
前記メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）が、エタノールに溶解された後に、前記メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）が前記スクロースにさらされる、請求項１１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞毒性ジペプチドまたは薬学的に許容されるその塩を含む凍結乾燥医薬調製物、それらの調製方法、凍結乾燥医薬調製物を含む組成物、ならびにがんの治療におけるそれらの使用を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
がんは、治療が難しく、致死性となり得る疾患である。したがって、がんの新しい治療を開発する努力が研究界において常に進行中である。がんの大部分は、固形腫瘍、例えば、肺がん、乳がん、前立腺がんとして存在している一方、その他には、血液およびリンパの悪性腫瘍、例えば白血病およびリンパ腫がある。
【０００３】
化学療法は、疾患を治療するまたは軽減するために、しばしば使用されている。がん細胞は通常迅速に分裂するので、化学療法は通常、迅速に分裂する細胞を死滅することにより作用する。広義では、ほとんどの化学療法用薬剤は、有糸分裂（すなわち、細胞分裂）を阻害することにより、すなわち迅速に分裂している細胞を効果的に標的とすることにより働く。これらの薬剤は細胞に損傷を引き起こすので、細胞毒性と称される。一部の薬剤は、細胞にアポトーシス（いわゆる、「プログラム細胞死」）を引き起こす。抗腫瘍効果の最適化、副作用の最小化、および耐性発現の予防のために、異なる作用機序を有する２種以上の薬剤を一緒に使用する併用化学療法が使用されることが多い。化学療法により得られる結果は、腫瘍のタイプに応じて変わる。一部の腫瘍は非常に感受性が高く、治療は治癒に至る可能性が高い。
【０００４】
化学療法用薬剤は、一般に、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、植物アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、および他の抗腫瘍剤に分類することができる。薬剤は、細胞分裂またはＤＮＡ合成に影響を及ぼす。
【０００５】
アルキル化剤、例えばナイトロジェンマスタード、すなわちビス（２−クロロエチル）アミン誘導体に由来する薬剤が、広範囲の新生物疾患の治療において、化学療法用薬剤として使用されている。アルキル化剤は、細胞内の電気陰性部位にアルキル基を共有結合する能力を有する。したがって、これらの薬剤は、ＲＮＡ、ＤＮＡおよびタンパク質のような生物学上重要な分子内のヘテロ原子との共有結合形成により細胞機能に損傷を与えることによって作用する。アルキル化剤の例には、細胞のＤＮＡを化学修飾する、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブチル、イホスファミド、テモゾロマイド、およびメルファランがある。
【０００６】
ＷＯ０１／９６３６７は、ジおよびトリペプチド、ならびに１つまたは２つのさらなるアミノ酸もしくはアミノ酸誘導体のアルキル化を開示している。これらの誘導体は、様々なタイプの腫瘍に対する有効性が改善されることが実証された。
【０００７】
メルファラン、すなわちｐ−［ビス−（２−クロロエチル）アミノ］フェニルアラニンは、ナイトロジェンマスタードとアミノ酸であるフェニルアラニンとの結合体であり、１９５０年代中頃に合成された（米国特許第３，０３２，５８４号）。この古典的なアルキル化物質は、化学療法分野においてすぐに有益な薬剤になり、例えば、骨髄腫の治療では依然として重要なものである。しかし、末期の固形腫瘍の治療では、メルファランの臨床使用には効果が限定される。したがって、悪性細胞に対してより選択的に作用させる研究において、メルファランアナログが合成された。
【０００８】
Ｌａｒｉｏｎｏｖ  Ｌ．Ｆ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（１９６１年）、２１巻、９９〜１０４頁は、様々なメルファラン関連誘導体を開示している。
【０００９】
ＳＴＮ登録ファイルの、ＲＮ：１０６０６３３−９５−５、ＲＮ：８８  ７６０９−２８−１、ＲＮ：７９０６５０−８９−４、ＲＮ：７８１６０６−３９−１、ＲＮ：７７３０４６−９８−３、ＲＮ：７６７６２１−５８−９、ＲＮ：７６０１６５−５８−０およびＲＮ：７５７９４１−６１−０は、様々なメルファラン関連誘導体を開示している。
【００１０】
Ｋｏｌｔｕｎ，ＭらのＢｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ＆Ｄｒｕｇ  ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ（２１０）、３１巻、４５０〜４５４頁は、メルファランの形態を開示している。
【００１１】
Ｍａ  Ｄ  ＱらのＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（１９９９年）、１８９巻、２２７〜２３４頁は、メルファランの形態を開示している。
【００１２】
Ｍｕｒａｖ’ｅｖ  ＩらのＦａｒｍａｔｓｉｙａ（１９７８年）、２７巻、（２号）、１３〜１５頁（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ番号、１９７８：４１２０６６におけるアブストラクト）は、メルファラン関連誘導体を開示している。
【００１３】
凍結乾燥または冷凍乾燥（freeze-drying）とは、安定性を維持または向上する、あるいは分解を停止するために使用する、試料の脱水方法のことである。凍結乾燥製品の水分含有量が低い（通常、約１〜４％）ために、微生物および酵素の作用が阻害されており、それにより、製品寿命が向上する。凍結乾燥では、凍結乾燥する試料を水溶液に溶解し、次に、凍結し、その後周囲圧を低下する。次に、固相から気相に凍結水を直接昇華させるため、その試料は、場合により加熱を適用することにより、昇華に付される。製品中の最終水分含有量は、通常、約１％〜４％と、非常に低い。凍結乾燥は、医薬製品の保管寿命期間を向上するため、製薬分野では一般に使用されているものである。
【発明の概要】
【００１４】
一般に、親油性ジペプチドエステル誘導体は、水溶液には溶解性に乏しい。したがって、こうしたジペプチドを溶解するために、有機溶媒、例えばＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）の使用が必要である。しかし、有機溶媒は、多くの場合、有毒であり、また対象、例えばがん患者へのジペプチド投与に使用する医療用具の破壊を引き起こす恐れがある。したがって、有機溶媒への細胞毒性ジペプチドの溶解および供給に伴う問題を克服するために、生理学的に許容される溶液に十分な溶解度を有する、細胞毒性ジペプチドの代替医薬調製物が必要とされている。
【００１５】
本発明は、メルファラニル−Ｌ−ｐ−フルオロフェニルアラニンエチルエステル（メルファランフルフェンアミドとしても知られている）および薬学的に許容されるその塩、特にメルファラニル−Ｌ−ｐ−フルオロフェニルアラニンエチルエステル塩酸塩（メルファランフルフェンアミド塩酸塩としても知られている）またはＪ１を含む凍結乾燥調製物に関する。
【００１６】
本発明の一側面は、
（ｉ）メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩、および
（ｉｉ）ポリソルベート、ポリエチレングリコール、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、およびアミノ酸、
を含む群から選択される少なくとも１種の賦形剤
を含む凍結乾燥医薬調製物を対象とする。
【００１７】
本発明のさらなる側面は、水溶液に可溶な凍結乾燥医薬調製物である。
【００１８】
本発明のさらなる側面は、
ａ．メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩を有機溶媒に溶解して、メルファランフルフェンアミド溶液を得て、
ｂ．メルファランフルフェンアミド溶液に水を加えて、約０．２〜３．０ｍｇ／ｍｌの濃度のメルファランフルフェンアミド水溶液を得、
ｃ．ポリソルベート、ポリエチレングリコール、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、およびアミノ酸を含む群から選択される少なくとも１種の賦形剤を、メルファランフルフェンアミド溶液に加え、
ｄ．賦形剤（複数可）を含有しているメルファランフルフェンアミド水溶液を凍結乾燥に付す
ことによる、本明細書に記載されている凍結乾燥医薬調製物を調製する方法である。
【００１９】
本発明のさらなる側面は、本明細書で定義した通りの凍結乾燥医薬調製物を含む第１の容器、および生理学的に許容される溶液を含む第２の容器を含む構成要素のキットである。
【００２０】
本発明のさらなる側面は、医薬として使用するための、本明細書に記載されている凍結乾燥医薬調製物である。
【００２１】
本発明のさらなる側面は、医薬として使用するための、本明細書に記載されている構成要素のキットである。
【００２２】
本発明の一側面は、がん、例えば卵巣がん、肺がん、膀胱がん、中皮腫、多発性骨髄腫、乳がん、および／または任意の固形もしくは血液のがんの治療および／または予防に使用するための、本明細書に記載されている凍結乾燥医薬調製物である。
【００２３】
本発明のさらなる側面は、がん、例えば卵巣がん、肺がん、膀胱がん、中皮腫、多発性骨髄腫、乳がん、および／または任意の固形もしくは血液のがんの治療および／または予防に使用するための、本明細書に記載されている構成要素のキットである。
【００２４】
本発明のさらなる側面は、がん、例えば卵巣がん、肺がん、膀胱がん、中皮腫、多発性骨髄腫、乳がん、および／または任意の固形もしくは血液のがんの治療および／または予防のための方法であり、これにより、本明細書に記載されている凍結乾燥医薬調製物が、それを必要としている対象に治療有効用量で投与される。
【００２５】
別段に定義されない場合、本明細書で使用される技術用語および科学用語はすべて、本発明が関係する当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載したものと類似の、または等価な方法および材料は、本発明の実施または試験において使用することができるが、適切な方法および材料は以下に記載されている。本明細書で言及したすべての刊行物、特許出願、特許、および他の参照文献は、参照によりその全体に組み込まれている。矛盾する場合、定義を含めた本明細書が優先されることになる。さらに、材料、方法、および例は、単に例示であり、限定を意図するものではない。
【００２６】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明、図面、例、および特許請求の範囲から明白になろう。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１Ａ】例２による方法Ａによって賦形剤なしで凍結乾燥したメルファランフルフェンアミドの４回の繰り返し溶解速度測定のグラフの１つ。試料を指定の時間点に取り出し、メルファランフルフェンアミドの溶解量をＨＰＬＣにより測定した。ｙ軸は、ｍｇ／ｍｌでのメルファランフルフェンアミドの量を示している。
【図１Ｂ】例２による方法Ａによって賦形剤なしで凍結乾燥したメルファランフルフェンアミドの４回の繰り返し溶解速度測定のグラフの１つ。試料を指定の時間点に取り出し、メルファランフルフェンアミドの溶解量をＨＰＬＣにより測定した。ｙ軸は、ｍｇ／ｍｌでのメルファランフルフェンアミドの量を示している。
【図１Ｃ】例２による方法Ａによって賦形剤なしで凍結乾燥したメルファランフルフェンアミドの４回の繰り返し溶解速度測定のグラフの１つ。試料を指定の時間点に取り出し、メルファランフルフェンアミドの溶解量をＨＰＬＣにより測定した。ｙ軸は、ｍｇ／ｍｌでのメルファランフルフェンアミドの量を示している。
【図１Ｄ】例２による方法Ａによって賦形剤なしで凍結乾燥したメルファランフルフェンアミドの４回の繰り返し溶解速度測定のグラフの１つ。試料を指定の時間点に取り出し、メルファランフルフェンアミドの溶解量をＨＰＬＣにより測定した。ｙ軸は、ｍｇ／ｍｌでのメルファランフルフェンアミドの量を示している。
【図２Ａ】例２による方法Ａによって、図中に示されている賦形剤存在下での、凍結乾燥したメルファランフルフェンアミドの溶解速度測定のグラフ。試料を指定の時間点に取り出し、メルファランフルフェンアミドの溶解量をＨＰＬＣにより測定した。ｙ軸は、ｍｇ／ｍｌでのメルファランフルフェンアミドの量を示している。
【図２Ｂ】例２による方法Ａによって、図中に示されている賦形剤存在下での、凍結乾燥したメルファランフルフェンアミドの溶解速度測定のグラフ。試料を指定の時間点に取り出し、メルファランフルフェンアミドの溶解量をＨＰＬＣにより測定した。ｙ軸は、ｍｇ／ｍｌでのメルファランフルフェンアミドの量を示している。
【図２Ｃ】例２による方法Ａによって、図中に示されている賦形剤存在下での、凍結乾燥したメルファランフルフェンアミドの溶解速度測定のグラフ。試料を指定の時間点に取り出し、メルファランフルフェンアミドの溶解量をＨＰＬＣにより測定した。ｙ軸は、ｍｇ／ｍｌでのメルファランフルフェンアミドの量を示している。
【図２Ｄ】例２による方法Ａによって、図中に示されている賦形剤存在下での、凍結乾燥したメルファランフルフェンアミドの溶解速度測定のグラフ。試料を指定の時間点に取り出し、メルファランフルフェンアミドの溶解量をＨＰＬＣにより測定した。ｙ軸は、ｍｇ／ｍｌでのメルファランフルフェンアミドの量を示している。
【図２Ｅ】例２による方法Ａによって、図中に示されている賦形剤存在下での、凍結乾燥したメルファランフルフェンアミドの溶解速度測定のグラフ。試料を指定の時間点に取り出し、メルファランフルフェンアミドの溶解量をＨＰＬＣにより測定した。ｙ軸は、ｍｇ／ｍｌでのメルファランフルフェンアミドの量を示している。
【図３】例２による方法Ｂによって、賦形剤を含まないメルファランフルフェンアミドの溶解速度測定のグラフ。試料を指定の時間点に取り出し、メルファランフルフェンアミドの溶解量をＨＰＬＣにより測定した。ｙ軸は、ｍｇ／ｍｌでのメルファランフルフェンアミドの量を示している。
【図４Ａ】方法Ｂによって、図中に示されている賦形剤存在下での、凍結乾燥したメルファランフルフェンアミドの溶解速度測定のグラフ。試料を指定の時間点に取り出し、メルファランフルフェンアミドの溶解量をＨＰＬＣにより測定した。ｙ軸は、ｍｇ／ｍｌでのメルファランフルフェンアミドの量を示している。
【図４Ｂ】方法Ｂによって、図中に示されている賦形剤存在下での、凍結乾燥したメルファランフルフェンアミドの溶解速度測定のグラフ。試料を指定の時間点に取り出し、メルファランフルフェンアミドの溶解量をＨＰＬＣにより測定した。ｙ軸は、ｍｇ／ｍｌでのメルファランフルフェンアミドの量を示している。
【図４Ｃ】方法Ｂによって、図中に示されている賦形剤存在下での、凍結乾燥したメルファランフルフェンアミドの溶解速度測定のグラフ。試料を指定の時間点に取り出し、メルファランフルフェンアミドの溶解量をＨＰＬＣにより測定した。ｙ軸は、ｍｇ／ｍｌでのメルファランフルフェンアミドの量を示している。
【図４Ｄ】方法Ｂによって、図中に示されている賦形剤存在下での、凍結乾燥したメルファランフルフェンアミドの溶解速度測定のグラフ。試料を指定の時間点に取り出し、メルファランフルフェンアミドの溶解量をＨＰＬＣにより測定した。ｙ軸は、ｍｇ／ｍｌでのメルファランフルフェンアミドの量を示している。
【図４Ｅ】方法Ｂによって、図中に示されている賦形剤存在下での、凍結乾燥したメルファランフルフェンアミドの溶解速度測定のグラフ。試料を指定の時間点に取り出し、メルファランフルフェンアミドの溶解量をＨＰＬＣにより測定した。ｙ軸は、ｍｇ／ｍｌでのメルファランフルフェンアミドの量を示している。
【図５Ａ】以下の通りの溶解速度測定のグラフ。Ａ：ポリソルベート８０なしで凍結乾燥したメルファランフルフェンアミド。量は、対メルファランフルフェンアミドである。ｙ軸は、ＨＰＬＣを使用して測定した、内部標準に対する溶解メルファランフルフェンアミド量を示している。
【図５Ｂ】以下の通りの溶解速度測定のグラフ。Ｂ  １０％のポリソルベート８０存在下で凍結乾燥したメルファランフルフェンアミド。量は、対メルファランフルフェンアミドである。ｙ軸は、ＨＰＬＣを使用して測定した、内部標準に対する溶解メルファランフルフェンアミド量を示している。
【図５Ｃ】以下の通りの溶解速度測定のグラフ。Ｃ  ５０％のポリソルベート８０存在下で凍結乾燥したメルファランフルフェンアミド。量は、対メルファランフルフェンアミドである。ｙ軸は、ＨＰＬＣを使用して測定した、内部標準に対する溶解メルファランフルフェンアミド量を示している。
【図５Ｄ】以下の通りの溶解速度測定のグラフ。Ｄ  １００％のポリソルベート８０存在下で凍結乾燥したメルファランフルフェンアミド。量は、対メルファランフルフェンアミドである。ｙ軸は、ＨＰＬＣを使用して測定した、内部標準に対する溶解メルファランフルフェンアミド量を示している。
【図６】５０％（ｍｏｌ）のポリソルベート８０（左）を含有している、およびポリソルベート８０を含有していない（右）、５％グルコース溶液中に１ｍｇ／ｍｌの濃度で凍結乾燥後のメルファランフルフェンアミド（Ｊ１）が溶解しているガラス管の写真。
【図７】メルファランフルフェンアミド（Ｌ−メルファラニル−Ｌ−ｐ−フルオロフェニルアラニンエチルエステル）、Ｌ−メルファラニル−Ｌ−ｐ−フルオロフェニルアラニンイソプロピルエステル（ＪＶ２８）、Ｌ−プロリニル−Ｌ−メルファラニル−Ｌ−ｐ−フルオロフェニルアラニンエチルエステル（Ｊ３）の構造式を含む図。
【発明の詳細な説明】
【００２８】
非凍結乾燥細胞毒性ジペプチドまたは薬学的に許容されるその塩は、水溶液には低い溶解度を有することがあり、前記ジペプチドまたは薬学的に許容されるその塩を溶解するために、有機溶媒、例えばＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）の使用を必要とすることがある。したがって、細胞毒性ジペプチドを患者に投与することになる場合、この物質は、最初に、有機溶媒、例えばＤＭＡに溶解して、その後、患者への投与前に、注入用溶液に希釈されなければならない。患者は、この方法により有機溶媒に暴露され、有機溶媒への暴露は患者にとって危険となり得る。また、有機溶媒は、対象、例えばがん患者にメルファランフルフェンアミドを投与するのに使用される医療用具も破壊する恐れがある。
【００２９】
本発明者らは、ある種の細胞毒性ジピプチド（dipiptide）または薬学的に許容されるその塩を賦形剤存在下で凍結乾燥すると、得られる凍結乾燥医薬調製物が、生理学的に許容される溶液中さらに高い溶解度を有し得ることを、驚くべきことに今や見出した。実際、溶解度は非常に高く、有機溶媒中に細胞毒性ジペプチドまたは薬学的に許容されるその塩を溶解するステップを省略することができ、該細胞毒性ジペプチドは、生理学的に許容される水溶液に直接溶解して、患者に投与することができる。好ましくは、前記細胞毒性ジペプチドは、メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩である。
【００３０】
以前の調製では、メルファランフルフェンアミドは、結晶形態の白色粉末として合成から得られていた。この結晶形態は、酸性の高い水溶液にしか溶解することができず、このため、実用的生産目的には不可能である。賦形剤そのままの存在により、溶解度が十分に改善されることはなかった。したがって、その代わりに、以前は、メルファランフルフェンアミドは、グルコース溶液中において、ＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）に溶解されていた。その調製は実現可能であるが、不安定である。すなわち、７％分解／時である。さらに、二量化が起こり、溶液が鮮黄色に変わる。しかし、この調製は信頼性が低く、また重合速度が許容できない程に変動する。
【００３１】
したがって、安定性の向上による、可溶性のメルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩を含む調製物を実現する代替的方法を特定する必要性がある。さらに、該調製物は、患者に提供される製品中に有機溶媒（例えば、ＤＭＡ）を有するという負の問題を回避するために、水溶性であるべきである。
【００３２】
本発明の一側面は、
（ｉ）メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩、および
（ｉｉ）ポリソルベート、ポリエチレングリコール、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、およびアミノ酸を含む群から選択される少なくとも１種の賦形剤
を含む凍結乾燥医薬調製物である。
【００３３】
この側面の一態様では、前記賦形剤は、ポリソルベート８０、ＰＥＧ４００、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、ＰＥＧ３００、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、およびヒスチジンを含む群から選択される。
【００３４】
この側面の別の態様では、前記メルファランフルフェンアミドは、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）である。
【００３５】
本発明の別の側面では、
（ｉ）メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）、および
（ｉｉ）ポリソルベート、ポリエチレングリコール、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、およびアミノ酸
を含む群から選択される少なくとも１種の賦形剤
を含む医薬調製物が提供される。
【００３６】
この側面の一態様では、前記少なくとも１種の賦形剤は、ポリソルベートまたはポリエチレングリコールである。
【００３７】
この側面の別の態様では、前記少なくとも１種の賦形剤は、ポリソルベート８０である。
【００３８】
この側面の別の態様では、前記少なくとも１種の賦形剤は、界面活性特性を有する。こうした特性は、凍結乾燥医薬調製物の安定性を向上させると思われる。前記界面活性特性を有する少なくとも１種の賦形剤は、ポリソルベートまたはポリエチレングリコール、例えばポリソルベート８０もしくはＰＥＧ４００とすることができる。
【００３９】
この側面の別の態様では、本調製物は、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）および、賦形剤のポリソルベート８０を含む。賦形剤のポリソルベート８０の存在により、凍結乾燥医薬調製物の安定性が向上すると思われる。さらに、最終調製物は、有機溶媒を含まない、または本質的に含まず、したがって、有毒性がより低い。
【００４０】
本発明は、乾燥形態で安定しておりかつ有機溶媒の非存在下で水溶液に可溶な凍結乾燥調製物を提供する。メルファランフルフェンアミド単独で凍結乾燥調製物を調製することは以前には可能であったが、この調製物は、分解時間に比較して、水溶液にはあまりにもゆっくりと溶解した。凍結乾燥メルファランフルフェンアミド調製物中に賦形剤を配合すると（有機溶媒への初めの溶解を経て）、再構成時間がかなり改善されるが、再構成されたメルファランフルフェンアミドの安定性を顕著に変えることはない。その結果、再構成されるメルファランフルフェンアミドの猶予期間（time window）は広がり、これにより、例えば、必要とする場所でより低量の注入が可能になることにより、患者の治療が改善する。「有機溶媒非存在下」での調製は、微量の有機溶媒、通常０．５％未満（ｗ／ｗ）を含むことができる。
【００４１】
本明細書に記載のメルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩の凍結乾燥医薬調製物は、非凍結乾燥メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩とは対照的に飛散性白色粉末であり、非凍結乾燥品は濃厚で、わずかに黄色い粉末形態となり得る。
【００４２】
通常、凍結乾燥は４つのステップ、すなわち、前処理、凍結、一次乾燥、および二次乾燥を含む。前処理ステップでは、許容可能な結果を得るために、例えば所望の濃度を有する溶液を調製するまたは物質をさらなる成分と混合することによる、凍結乾燥されることになる物質に凍結乾燥の準備がなされる。凍結ステップは、例えば、機械的な冷却、ドライアイスおよびメタノール、または液体窒素によって冷却された浴中の冷凍乾燥用フラスコ内で行うことができる。冷凍乾燥用機器は、より大規模の凍結乾燥に利用可能である。通常、凍結温度は、−５０℃〜−８０℃である。
【００４３】
一次乾燥ステップでは、圧力を数ミリバールの範囲に低下させ、かつ材料から水を昇華させるために熱が供給されてもよい。必要な熱量は、昇華する分子の昇華潜熱を使用して計算することができる。この期間は依存性のものであるが、材料構造を維持するために何日間続けてもよい。
【００４４】
最終の二次乾燥ステップの目的は、任意の未凍結水分子を除去することである。このフェーズでは、温度は０℃よりも高くして、水分子と凍結材料の間で形成される任意の物理化学的相互作用を破壊することができる。
【００４５】
本発明の文脈では、メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩が、凍結乾燥されると理解されたい。したがって、用語「メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩の凍結乾燥医薬調製物」とは、メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩が凍結乾燥されることを意味すると理解される。
【００４６】
本発明のさらなる側面は、凍結乾燥メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩、こうしたメルファランフルフェンアミドを含む構成要素のキット、こうしたメルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩の調製方法、こうした凍結乾燥メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩を含む組成物、ならびにその使用を提供する。
【００４７】
「凍結乾燥」、「凍結乾燥した」などは、本文脈では、「冷凍乾燥」、「冷凍乾燥した」などと互換的に使用することができる。
【００４８】
本明細書に記載されている凍結乾燥することができる細胞毒性ジペプチドの例は、ＷＯ０１／９６３６７において記載されている。分子のＮ末端は、好ましくは、アミドまたはカルバメートとして保護されているべきではない。これは、該化合物の保護形態は、一般に対応する遊離形態よりも細胞毒性活性が低いので、上記明細書中の式Ｉ中のＲ4が、好ましくは、保護基、例えばホルミル、アセチルもしくはプロピオニル、またはベンゾイルであるべきではないことを意味する。天然アミノ酸とは、有機生命体において通常存在している、およびその機能を発揮するアミノ酸のことを指す。修飾アミノ酸とは、ある方法で、天然アミノ酸とは異なる化学構造および化学組成に修飾されているアミノ酸のことを指す。天然環式アミノ酸の一例は、プロリンである。芳香族アミノ酸の例は、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンおよびヒスチジンである。
【００４９】
細胞毒性ジペプチド、例えばメルファランフルフェンアミドはまた、１個以上の原子において、非天然の比率の原子同位体を含有していてもよい。例えば、該化合物は、放射性同位元素、例えばトリチウム（3Ｈ）、ジュウテリウム（2Ｈ）、ヨウ素−１２５（125Ｉ）または炭素−１４（14Ｃ）により放射能標識されていてもよい。
【００５０】
細胞毒性ジペプチドであるメルファランフルフェンアミドは、メルファランとは明確に異なる。
【００５１】
・構造の違い（メルファランフルフェンアミドは、メルファランのカルボン酸の代わりにＣ末端がエチルエステルである。そのために、メルファランは双性イオンであるが、メルファランフルフェンアミドはそうではない）。
【００５２】
・サイズの違い（メルファランフルフェンアミドはジペプチド、すなわちメルファランのおよそ２倍のサイズである）。
【００５３】
・脂溶性の違い（この場合、メルファランフルフェンアミドは明らかにより親油性である）。
【００５４】
・水溶液中での安定性の違い。メルファランは、Ｊ１と比較すると、水溶液において１００００倍安定している。Ｊ１は、水中で速やかに加水分解される。
【００５５】
・分解経路の違い。メルファランフルフェンアミドにおける主な分解経路は、エチルエステルの加水分解が関与している一方、メルファランの主な分解は、（クロロ）アルキル基の反応性と関係がある。
【００５６】
上の違いに基づくと、以下に限定されないが、メルファラン、特にその調製物および製剤に関する教示は、メルファランフルフェンアミドおよびその調製物ならびに製剤には当てはまらないことは明白である。
【００５７】
少なくとも１種の賦形剤（例えば、界面活性特性を有するポリソルベート８０）の含有により、分解速度と比較すると、そのままで安定性があり、有機溶媒の非存在下でも十分な速度で水に可溶であり、これにより治療に有用で一層有毒性が低い凍結乾燥調製物が提供される。
【００５８】
本発明による凍結乾燥医薬調製物は、メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩、あるいはメルファランフルフェンアミドと１種以上の異なる細胞毒性ジペプチドまたは薬学的に許容されるその塩との混合物しか含有し得ない。さらに、本凍結乾燥医薬調製物は、２種以上の異なる薬学的に許容される塩の混合物を含有することができる。
【００５９】
本発明の一側面は、
（ｉ）メルファランフルフェンアミド、および
（ｉｉ）ポリソルベート、ポリエチレングリコール、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、およびアミノ酸を含む群から選択される２種以上の賦形剤の組合せ
を含む、凍結乾燥医薬調製物である。
【００６０】
本発明のさらなる側面は、
（ｉ）メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）、および
（ｉｉ）ポリソルベート、ポリエチレングリコール、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、およびアミノ酸を含む群から選択される２種以上の賦形剤の組合せ
を含む凍結乾燥医薬調製物である。
【００６１】
この側面の一態様では、前記賦形剤の組合せは、ポリソルベート８０およびＰＥＧ４００の混合物である。
【００６２】
本発明のすべての側面のための薬学的に許容される塩は、例えば、塩基性が十分にある本明細書に記載の化合物の酸付加塩、例えば無機酸または有機酸、例えば、塩化水素酸、臭化水素酸、硝酸、メタンスルホン酸、硫酸、リン酸、トリフルオロ酢酸、パラ−トルエンスルホン酸、２−メシチレンスルホン酸、クエン酸、酢酸、酒石酸、フマル酸、乳酸、コハク酸、リンゴ酸、マロン酸、マレイン酸、１，２−エタンジスルホン酸、アジピン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、エタンスルホン酸、またはニコチン酸との例えば酸付加塩とすることができる。
【００６３】
本明細書では、用語「メルファランフルフェンアミド」が使用される場合、これが明示的に明記されなくとも、薬学的に許容されるその塩（複数可）を包含することも意図される。
【００６４】
本明細書の上で述べたように、メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩が、薬学的に許容される賦形剤、例えばポリソルベート、ポリエチレングリコール、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、およびアミノ酸から選択される任意のものの存在下で凍結乾燥されると、該凍結乾燥医薬調製物の予期されぬほど高度に向上した溶解度を得ることができ、これにより、水溶液、例えば生理学的に許容される溶液に、凍結乾燥メルファランフルフェンアミドを直接溶解することが可能になる。これは、水溶液中に直接溶解することができないが、最初に有機溶媒に溶解して、その後に水溶液中に希釈しなければならない、非凍結乾燥メルファランフルフェンアミドとは対照的である。したがって、本明細書では、メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩を含む凍結乾燥医薬調製物であって、メルファランフルフェンアミドが賦形剤存在下で凍結乾燥される、調製物が提供される。好ましくは、前記賦形剤は、ポリソルベートまたはポリエチレングリコール、例えばポリソルベート８０もしくはＰＥＧ４００から選択される。
【００６５】
メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩は、１種以上の賦形剤（例えば、１種、２種、３種、４種、５種以上の賦形剤）の存在下で凍結乾燥することができる。本明細書で記述された通りに使用することができる賦形剤の例には、非限定的に、ポリソルベート、例えばポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０およびポリソルベート８０、ポリエチレングリコール、例えばＰＥＧ４００およびＰＥＧ３００、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、ならびにアミノ酸、例えばヒスチジンが含まれる。
【００６６】
本発明の一側面では、賦形剤は、ポリソルベート８０、ＰＥＧ４００、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、ＰＥＧ３００、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロースおよびヒスチジンの何れか１つから選択される。
【００６７】
本発明の一側面では、賦形剤は、ポリソルベート８０、ＰＥＧ４００、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、ＰＥＧ３００、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロースおよびヒスチジン、または前記賦形剤の２種以上の組合せから選択される。
【００６８】
この側面の一態様では、賦形剤は、ポリソルベート８０およびＰＥＧ４００、または前記２種の賦形剤の組合せから選択される。
【００６９】
賦形剤、例えばポリソルベート８０、ＰＥＧ４００またはβ−シクロデキストリンの量は、通常、メルファランフルフェンアミドの量の約１０〜１００重量％（例えば、メルファランフルフェンアミドの量の１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０または１０重量％）である。
【００７０】
本発明のさらなる側面では、賦形剤、例えばポリソルベート８０、ＰＥＧ４００またはβ−シクロデキストリンの量は、通常、メルファランフルフェンアミドの量の約１０〜５０重量％（例えば、メルファランフルフェンアミドの量の１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０または１０重量％）である。
【００７１】
この側面の一態様では、賦形剤はポリソルベート８０またはＰＥＧ４００を表し、その量は、通常、メルファランフルフェンアミドの量の約１０〜５０重量％（例えば、メルファランフルフェンアミドの量の１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０または１０重量％）である。
【００７２】
本発明のさらなる側面は、
（ｉ）メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩、および
（ｉｉ）ポリソルベート８０、ＰＥＧ４００、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、ＰＥＧ３００、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロースおよびヒスチジン
を含む群から選択される少なくとも１種の賦形剤
を含み、
賦形剤の量が、メルファランフルフェンアミドの約１０〜１００重量％である、
凍結乾燥医薬調製物である。
【００７３】
この側面の一態様では、ポリソルベート８０およびＰＥＧ４００から選択される少なくとも１種の賦形剤。
【００７４】
この側面の別の態様では、メルファランフルフェンアミドは、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）によって表される。
【００７５】
本発明のさらなる側面は、
（ｉ）メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩、および
（ｉｉ）ポリソルベート８０、ＰＥＧ４００、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、ＰＥＧ３００、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロースおよびヒスチジン
を含む群から選択される少なくとも１種の賦形剤
を含み、
賦形剤の量が、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）の約１０〜５０重量％である、
凍結乾燥医薬調製物である。
【００７６】
この側面の一態様では、ポリソルベート８０およびＰＥＧ４００から選択される少なくとも１種の賦形剤。
【００７７】
この側面の別の態様では、メルファランフルフェンアミドは、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）によって表される。
【００７８】
本発明のさらなる側面は、
（ｉ）メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）、および
（ｉｉ）ポリソルベート８０、ＰＥＧ４００、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、ＰＥＧ３００、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロースおよびヒスチジン
を含む群から選択される少なくとも１種の賦形剤
を含み、
賦形剤の量が、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）の約１０〜１００重量％である、
凍結乾燥医薬調製物である。
【００７９】
この側面の一態様では、ポリソルベート８０およびＰＥＧ４００から選択される少なくとも１種の賦形剤。
【００８０】
本発明のさらなる側面は、
（ｉ）メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）、および
（ｉｉ）ポリソルベート８０、ＰＥＧ４００、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、ＰＥＧ３００、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロースおよびヒスチジンを含む群から選択される少なくとも１種の賦形剤
を含み、
賦形剤の量が、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）の約１０〜５０重量％である、
凍結乾燥医薬調製物である。
【００８１】
この側面の一態様では、ポリソルベート８０およびＰＥＧ４００から選択される少なくとも１種の賦形剤。
【００８２】
本発明の一態様では、賦形剤、例えばポリソルベート８０またはＰＥＧ４００の量は、臨床的に許容される量までとすることができる。
【００８３】
本発明の一態様では、賦形剤、例えばポリソルベート８０またはＰＥＧ４００の量は、臨床的に許容される量までとすることができる。
【００８４】
賦形剤が１種だけ使用される場合、ポリソルベート８０またはＰＥＧ４００の量は、例えばメルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）の量の約５０重量％である。
【００８５】
本発明の一側面は、賦形剤であるポリソルベート８０およびＰＥＧ４００の組合せである。
【００８６】
本発明の一側面は、賦形剤のポリソルベート８０、ＰＥＧ４００およびβ−シクロデキストリン、例えばメルファランフルフェンアミドの量の８０重量％のポリソルベート８０、８０重量％のＰＥＧ４００、および５０重量％のβ−シクロデキストリンの組合せである。メルファラン誘導体または薬学的に許容されるその塩の凍結乾燥医薬調製物は、本発明により、１種以上のメルファラン誘導体または薬学的に許容されるその塩、ならびに本明細書で定義した１種以上の賦形剤を含むことができる。
【００８７】
本明細書の上で述べたように、凍結乾燥中に賦形剤が存在している効果の１つは、メルファランフルフェンアミドを含んで得られる凍結乾燥医薬調製物が、本明細書に記載されている賦形剤なしでメルファランフルフェンアミドを凍結乾燥させた場合と比較して、水溶液、例えば生理学的に許容される溶液への溶解度が向上していることである。特に、非凍結乾燥製品の溶解度と比べて、賦形剤（複数可）の存在下で凍結乾燥した場合、メルファランフルフェンアミドの水溶液への溶解度はより高い。患者へのメルファランフルフェンアミドの投与について言えば、非凍結乾燥製品と比べて、特に本明細書で記載されている賦形剤の存在下で凍結乾燥した場合、このメルファランフルフェンアミドの溶解度の向上には、実質的な利点がある。
【００８８】
患者に薬剤を投与するために使用される生理学的に許容される水溶液に、非凍結乾燥メルファランフルフェンアミドの溶解度が低いために、最初にこの非凍結乾燥メルファランフルフェンアミドを有機溶媒、例えばＤＭＡに溶解する必要がある。したがって、メルファランフルフェンアミドは、ＤＭＡに溶解されて保管されることが多い。水溶液にメルファランフルフェンアミドを直接溶解することは以前には不可能であったが、有機溶媒を使用しなければならなかった。有機溶媒に一旦溶解すると、このメルファランフルフェンアミドと有機溶媒の溶液は、対象への投与のための生理学的に許容される溶液に溶解することができる。
【００８９】
メルファランフルフェンアミドは、非常に有毒性が高いので、こうした薬剤の医療従事者への暴露を最小限にするために、有機溶媒に溶解した後の薬剤を投与用の溶液に移注するための特殊な用具が使用される。これらの移注用具は、多くの場合、ポリカーボネートを含むプラスチック製チューブである。しかし、こうしたチューブは、有機溶媒、例えばＤＭＡに敏感であり、またそれにより破壊される恐れがある。したがって、投与される薬剤が、こうした有機溶媒に溶解される場合、移注用具を使用するのが不可能となることがあり、代わりに、溶解した薬剤は、患者への投与時間の直前に、投与に使用するための生理学的に許容される溶液に直接添加されなければならない。これは、医療従事者には危険になる可能性があり、毒性薬剤に暴露されるというリスクがある。
【００９０】
上記のように、メルファランフルフェンアミドの凍結乾燥により、生理学的に許容される溶液へのその溶解度が向上する。この向上は、メルファランフルフェンアミドを、１種以上の賦形剤存在下で凍結乾燥する場合、より一層顕著になり得る。本明細書に記載した通り、メルファランフルフェンアミドを本明細書に開示した賦形剤の存在下で凍結乾燥すると、非凍結乾燥メルファランフルフェンアミドと比較して、メルファランフルフェンアミドの溶解度が向上し得る。メルファランフルフェンアミドを最初に溶解するための、有機溶媒、例えばＤＭＡの使用を回避することができる。
【００９１】
少なくとも１種の賦形剤（例えば、例えば、ポリソルベート８０とすることができるポリソルベート、例えば、ＰＥＧ４００またはＰＥＧ３００とすることができるポリエチレングリコール、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、またはアミノ酸、例えばヒスチジン、あるいはこれらの賦形剤の２種以上の組合せ）の存在下で凍結乾燥したメルファランフルフェンアミドは、生理学的に許容される溶液（例えば、約４．５〜５．５ｗｔ％、例えば約５％グルコース溶液、またはＮａＣｌ水溶液（例えば、ＮａＣｌ約０．９ｗｔ％））に、直接溶解することができる。それにより、医療従事者が薬剤に暴露されるリスクを最小化して、ポリカーボネートを含む用具、およびメルファランフルフェンアミドの投与に使用される用具を使用することが可能となる。また、この方法では、患者への有毒なＤＭＡの投与が回避される。これにより、患者への投与に適した濃度で、メルファランフルフェンアミドを含む溶液を直接調製することが可能になる。あるいは、生理学的に許容される溶液中でメルファランフルフェンアミドの凍結乾燥医薬調製物を含む濃縮溶液を最初に調製し、次いで、一般に使用される移注用具を用いて、注入用バッグに移注することができる。
【００９２】
また、メルファランフルフェンアミドをＤＭＡに溶解する場合、メルファランフルフェンアミドとＤＭＡとの間の付加物が形成する恐れがある。本発明により提供される凍結乾燥医薬調製物を使用することにより、生理学的に許容される溶液に凍結乾燥メルファランフルフェンアミドを直接溶解することができ、最初に、ＤＭＡ中にメルファランフルフェンアミドを溶解することが回避される。それにより、ＤＭＡ−メルファランフルフェンアミドの付加物の形成を避けることができ、該付加物もＤＭＡのどちらも患者に投与しなくてもよい。
【００９３】
本明細書で定義したメルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩の凍結乾燥医薬調製物（場合により本明細書に開示した、こうした凍結乾燥調製物を調製する方法により得られる）を含む医薬組成物も提供される。こうした医薬組成物は、生理学的に許容される溶液、例えばＮａＣｌ水溶液（例えば、約０．９ｗｔ％）またはグルコース水溶液（例えば、約４．５〜５．５ｗｔ％、例えば約５ｗｔ％グルコース）をさらに含んでもよい。この医薬組成物は、対象への投与前に希釈するように意図されている濃縮溶液とすることもでき、または患者への直接投与可能な溶液とすることもできる。
【００９４】
本明細書に記載した１種以上の賦形剤の存在下で凍結乾燥した後のメルファランフルフェンアミドは溶解度が向上しているので、溶解済みメルファランフルフェンアミド、例えばメルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩を含む医薬組成物を調製することが可能であり、この溶液は、ＤＭＡ、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、ジエチルエーテル、有機溶媒、例えば酢酸、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、メタノール、エタノールおよび酢酸を実質的に含有していない。「実質的に含有していない」とは、本明細書では、本医薬組成物が、有機溶媒を微量、例えば合計約０．１ｗｔ％未満の有機溶媒しか含んでいないことを意味する。一側面では、本凍結乾燥調製物または本医薬組成物は、測定可能な量の有機溶媒を含有していない。こうした調製物はより有毒性が低く、したがって、患者によって一層耐容される、すなわち、副作用、例えば注入時の嘔吐、嘔気、または他の一般的な症状をより少なくすると思われる。
【００９５】
本発明の一側面では、有機溶媒を含有していない、または実質的に含有していない、本明細書に記載された凍結乾燥医薬調製物が提供される。
【００９６】
本医薬組成物は、メルファランフルフェンアミドまたはその製薬上の塩を含む、本明細書に開示されている凍結乾燥医薬調製物、および生理学的に許容される溶液、例えばグルコース溶液からなることができる。上で開示された通り、メルファラン誘導体は、メルファランフルフェンアミド、またはメルファランフルフェンアミドと１種以上の異なる細胞毒性ジペプチドとの混合物（一緒にまたは個別の何れかで凍結乾燥される）とすることができる。
【００９７】
本医薬組成物は、生理学的に許容される溶液に、メルファランフルフェンアミドまたはその製薬上の塩を溶解することによって入手可能とすることができる。したがって、メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩を含む凍結乾燥医薬調製物を、生理学的に許容される溶液に溶解するステップを含む医薬組成物を調製する方法もまた、本明細書で提供される。
【００９８】
本明細書で定義される「生理学的に許容される溶液」という言い回しは、水溶液、例えばＮａＣｌ溶液（例えば、約０．９ｗｔ％ＮａＣｌ）もしくは約４．５〜５．５ｗｔ％グルコース（例えば、約５ｗｔ％）のグルコース溶液、または他の生理学的に許容される溶液である。こうした溶液はいずれも、場合により緩衝させることができる。
【００９９】
対象への直接投与のための凍結乾燥メルファランフルフェンアミドおよび生理学的に許容される溶液を含む医薬組成物は、一般に約１ｍｇ／ｍｌ以下、例えば約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度で、メルファランフルフェンアミドを含む。しかし、本医薬組成物は、患者への投与前に生理学的に許容される溶液中に希釈するために、最大約４ｍｇ／ｍｌの濃度でメルファランフルフェンアミドを含んでもよい。
【０１００】
本発明の一側面は、
ａ）メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩を有機溶媒に溶解し、メルファランフルフェンアミド溶液を得て、
ｂ）メルファランフルフェンアミド溶液に水を加えて、約０．２〜３．０ｍｇ／ｍｌの濃度のメルファランフルフェンアミド水溶液を得、
ｃ）ポリソルベート、ポリエチレングリコール、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、およびアミノ酸を含む群から選択される少なくとも１種の賦形剤を、メルファランフルフェンアミド溶液に加え、
ｄ）賦形剤（複数可）を含有しているメルファランフルフェンアミド水溶液を凍結乾燥に付す
ことによる、凍結乾燥医薬調製物の調製方法を提供する。
【０１０１】
この側面の一態様では、
ａ）メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩を有機溶媒に溶解し、
ｂ）ステップａ）において得られた溶液に水を加えて、約０．２〜３．０ｍｇ／ｍｌの濃度の、前記メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩の溶液を得、
ｃ）ポリソルベート、ポリエチレングリコール、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、およびアミノ酸を含む群から選択される少なくとも１種の賦形剤を、ステップｂ）で得られた溶液に加え、
ｄ）ステップｃ）で得られた溶液を、凍結乾燥に付す
ことによる方法が提供される。
【０１０２】
有機溶媒は、エタノール、酸含有エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジオキサン、酢酸、乳酸、プロピオン酸、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、メタノール、およびエタノールと水との混合物の何れか１種から選択することができる。好ましくは、前記有機溶媒は、エタノールである。
【０１０３】
賦形剤は、ポリソルベート８０、ＰＥＧ４００、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、ＰＥＧ３００、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロースおよびヒスチジンを含む群から選択することができる。好ましくは、前記賦形剤は、ポリソルベート８０およびＰＥＧ４００から選択される。
【０１０４】
前記方法におけるメルファランフルフェンアミドは、好ましくはメルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）である。
【０１０５】
本発明の一側面は、
ａ）メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩を有機溶媒に溶解し、
ｂ）ステップａ）において得られた溶液に水を加えて、約０．２〜３．０ｍｇ／ｍｌの濃度の、前記メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩の溶液を得、
ｃ）本明細書で定義した少なくとも１種の賦形剤を、ステップｂ）で得られた溶液に加え、
ｄ）ステップｃ）で得られた溶液を凍結乾燥に付す
ことによる、本明細書に記載された凍結乾燥医薬調製物の調製方法である。
【０１０６】
好ましくは、前記有機溶媒は、エタノールである。
【０１０７】
本発明の一側面は、
ａ）メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）を有機溶媒に溶解し、
ｂ）ステップａ）において得られた溶液に水を加えて、約０．２〜３．０ｍｇ／ｍｌの濃度の、前記メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）または薬学的に許容されるその塩の溶液を得、
ｃ）本明細書で定義した少なくとも１種の賦形剤を、ステップｂ）で得られた溶液に加え、
ｄ）ステップｃ）で得られた溶液を凍結乾燥に付す
ことによる、本明細書に記載された凍結乾燥医薬調製物の調製方法である。
【０１０８】
メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩をステップａ）において溶解するのに有用な有機溶媒の例は、エタノール、酸含有エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジオキサン、酢酸、乳酸、プロピオン酸、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、メタノール、およびエタノールと水との混合物から選択される何れか１種とすることができる。
【０１０９】
本発明の一側面は、
ａ）メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩を、エタノール、酸含有エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジオキサン、酢酸、乳酸、プロピオン酸、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、メタノール、およびエタノールと水との混合物の何れか１種から選択される有機溶媒に溶解し、
ｂ）ステップａ）において得られた溶液に水を加えて、約０．２〜３．０ｍｇ／ｍｌの濃度の、前記メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩の溶液を得、
ｃ）本明細書で定義した少なくとも１種の賦形剤を、ステップｂ）で得られた溶液に加え、
ｄ）ステップｃ）で得られた溶液を凍結乾燥に付す
ことによる、本明細書に記載された凍結乾燥医薬調製物の調製方法である。
【０１１０】
本発明の一側面は、
ａ）メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）を、エタノール、酸含有エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジオキサン、酢酸、乳酸、プロピオン酸、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、メタノール、およびエタノールと水との混合物の何れか１種から選択される有機溶媒に溶解し、
ｂ）ステップａ）において得られた溶液に水を加えて、約０．２〜３．０ｍｇ／ｍｌの濃度の、前記メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）または薬学的に許容されるその塩の溶液を得、
ｃ）本明細書で定義した少なくとも１種の賦形剤を、ステップｂ）で得られた溶液に加え、
ｄ）ステップｃ）で得られた溶液を凍結乾燥に付す
ことによる、本明細書に記載された凍結乾燥医薬調製物の調製方法である。
【０１１１】
本発明の一側面は、
ａ）メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）を有機溶媒に溶解し、
ｂ）ステップａ）において得られた溶液に水を加えて、約０．２〜３．０ｍｇ／ｍｌの濃度の、前記メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）の溶液を得、
ｃ）本明細書で定義した少なくとも１種の賦形剤を、ステップｂ）で得られた溶液に加え、
ｄ）ステップｃ）で得られた溶液を凍結乾燥に付す
ことによる、本明細書に記載された凍結乾燥医薬調製物の調製方法であって、
前記少なくとも１種の賦形剤が、ポリソルベート８０およびＰＥＧ４００から選択される、
方法である。
【０１１２】
上記の方法のステップａ）において、メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩を溶解するために酸含有エタノールを使用する場合、該酸は、例えば５〜２０ｍＭの濃度のＨＣｌとすることができ、または、ＨＣｌ濃度は、例えばエタノール中１０ｍＭとすることができる。
【０１１３】
メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩が、エタノールと水に溶解される場合、エタノールの濃度は、約１０〜１００体積％、例えば１０〜９０体積％、５０〜９０体積％、または約７０体積％とすることができる。
【０１１４】
本発明により凍結乾燥医薬調製物の試料を溶解するおよび／または希釈するために使用される水は、無菌または純水あるいは注射用水（ＷＦＩ）である。
【０１１５】
メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩を溶解するためにエタノールを使用する場合、ステップａ）において得られた溶液は、ステップｂ）において、エタノールの濃度が、約２〜１００体積％、例えば、約２、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００％、または、例えば５〜１５％、すなわち、例えば５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５％となるように希釈される。通常、希釈ステップｂ）後のエタノール濃度は、約９％である。
【０１１６】
ステップｂ）で得られた溶液は、凍結乾燥ステップｃ）の前に、無菌ろ過してもよい。
【０１１７】
凍結乾燥ステップｃ）は、本明細書に記載した通常の凍結ステップ、ならびに一次および二次乾燥ステップを含む。凍結乾燥をどのように行うかに関する情報は、例えば、Ｒｅｙ，Ｌ．およびＭａｙ，Ｊ．のＦｒｅｅｚｅ  Ｄｒｙｉｎｇ／Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、（２０１０年）、ＩＳＢＮ９７８−１４３９Ｂ２５７５−４に見出すことができる。凍結ステップでは、試料は、例えば、約−７０℃〜−９０℃、例えば約−７０℃、−７５℃、−７８℃、−８０℃、−８２℃、−８５℃、−８８℃または−９０℃の温度のドライアイス−アセトン浴中、例えば、１０分間〜１２０分間凍結される。
【０１１８】
あるいは、試料は、約−１４℃〜−２５℃、例えば−１４℃、−１６℃、−１８℃、−２０℃、−２２℃または−２５℃の温度で、例えば、約１０分〜２４時間、冷凍庫中で凍結されてもよい。液体窒素中で試料を凍結することも可能である。
【０１１９】
ステップｃ）は、凍結乾燥用の従来的な技法を適用することにより行うことができ、例えば、Ｒｅｙ，Ｌ．およびＭａｙ，Ｊ．のＦｒｅｅｚｅ  Ｄｒｙｉｎｇ／Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、（２０１０年）、ＩＳＢＮ９７８−１４３９Ｂ２５７５−４を参照されたい。
【０１２０】
例えば、一次乾燥ステップにおいて、圧力を約０．１ｍｂａｒ〜５０ｍｂａｒ、例えば１ｍｂａｒ〜１０ｍｂａｒに低下させることができる。温度は通常、０℃未満、例えば−５０℃〜０℃または−２０℃〜−１℃（例えば、−５０℃、−４０℃、−３０℃、−２０℃、−１０℃または−５℃）である。このフェーズは、例えば４時間〜４８時間（例えば、１２時間〜２４時間）継続することができる。
【０１２１】
最終の二次乾燥ステップでは、ほとんどの水が蒸発した場合、温度は、一次乾燥ステップにおける場合と同様、または０℃超とすることができる。
【０１２２】
本明細書で定義した１種以上の賦形剤が、凍結乾燥中に存在することになる場合、賦形剤は、ステップａ）において得られた溶液の希釈前またはその後、および凍結乾燥を行う前の、ステップｂ）において加えることができる。賦形剤は、粉末形態で加えてもよいが、一般には、水溶液として加えられる。したがって、賦形剤は、凍結乾燥中に存在することができる。
【０１２３】
本発明はまた、上で開示された方法によって得ることができる、本明細書で定義した凍結乾燥医薬調製物も対象とする。
【０１２４】
本明細書では、
（ｉ）本明細書に記載されているメルファランフルフェンアミドを含む凍結乾燥医薬調製物を含む第１の容器、および
（ｉｉ）生理学的に許容される溶液、例えばＮａＣｌ溶液（例えば、ＮａＣｌ約０．９ｗｔ％）またはグルコース溶液（例えば、グルコース溶液約４．５〜５．５ｗｔ％、例えばグルコース溶液約５ｗｔ％）、または他の生理学的に許容される溶液を含む第２の容器
を含む構成要素のキットも提供される。
【０１２５】
こうしたキットはまた、上記２つの容器の内容物を互いに混合するための用具、および／または得られた混合物を患者へ投与するために、グルコース溶液を含む用具、例えばバッグに移注するための用具も含むことができる。
【０１２６】
こうしたキットは、本明細書に記載されているメルファランフルフェンアミドを含む凍結乾燥医薬調製物を含む第１の容器、および生理学的に許容される溶液を含む第２の容器からなることができる。該キット中のメルファランフルフェンアミドはまた、薬学的に許容される担体および／または賦形剤を有する混合物中に存在していてもよい。一例は、例えば１％のアルブミンまたは他のタンパク質または化合物を含む、５％グルコースである。生理学的に許容される溶液の量は、メルファランフルフェンアミドを含む凍結乾燥医薬調製物の濃縮溶液を調製するために少量であってもよく、または患者へ投与するための所望の濃度を有する溶液を調製することができるように多量であってもよい。あるいは、本キットは、凍結乾燥医薬調製物の濃縮溶液を調製するための生理学的に許容される溶液を含む容器と、対象への投与向けにもっと希釈した溶液を調製するための生理学的に許容される溶液をより多量に含む第２の容器、例えば注入用バッグの両方を含んでもよい。
【０１２７】
本明細書で提供される凍結乾燥医薬調製物、医薬組成物またはキットは、抗腫瘍剤として、メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩だけを含むことができる。しかし、メルファランフルフェンアミドはまた、１種以上の抗腫瘍剤、例えば他の抗腫瘍性物質、例えばゲムシタビン、エトポシド、ドキソルビシンもしくはタキサンまたは他の治療上有効な物質と併用してもよい。他の抗腫瘍剤と併用する場合、これらは、凍結乾燥前に、メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩と混合して、その結果、メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩と一緒に凍結乾燥されるか、あるいは凍結乾燥後に、凍結乾燥メルファランフルフェンアミドもしくは薬学的に許容されるその塩と、例えばキットまたは医薬組成物中で一緒にしてもよい。凍結乾燥メルファランフルフェンアミドはまた、メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩の凍結乾燥後に、乾燥形態（凍結乾燥されていなくとも）の１種以上の抗腫瘍性物質と一緒に混合されてもよい。
【０１２８】
本明細書で提供されるメルファランフルフェンアミドは細胞毒性活性を有しており、したがって、他の所（例えば、ＷＯ０１／９６３６７を参照されたい）に記載されている通りがんの予防および／または治療に使用することができる。これらの化合物の腫瘍細胞生存率の低下は、ＷＯ０１／９６３６７において、様々な血液の腫瘍および／または固形腫瘍、例えば、肺がん、骨髄腫、リンパ腫、白血病、乳がん、および卵巣がんに対して実証された。さらに、これらの化合物は、ＷＯ０１／９６３６７においてメルファラン耐性を阻止することが実証された。したがって、これらの化合物は、がんの予防および／または治療に使用され、腫瘍増殖を低減する、および／または腫瘍細胞を死滅することができる。こうして、本化合物は、がん疾患に罹患している患者を治療する、および／または生存を延長するために使用することができる。
【０１２９】
同様に、本明細書では、医薬として使用するための、本明細書で開示および特許請求されている、凍結乾燥医薬調製物、キットまたは医薬組成物も提供される。本発明はまた、がん、例えば卵巣がん、肺がん、膀胱がん、中皮腫、多発性骨髄腫、乳がん、および／または他の任意の固形もしくは血液のがんの治療ならびに／あるいは予防に使用するための、こうした凍結乾燥医薬調製物、キットまたは医薬組成物を対象とする。
【０１３０】
本発明の一側面は、がん、例えば卵巣がん、肺がん、膀胱がん、中皮腫、多発性骨髄腫、乳がん、および／または他の任意の固形もしくは血液のがんの治療ならびに／あるいは予防のための医薬を調製するための、本明細書で開示および特許請求されている凍結乾燥医薬調製物、キットまたは医薬組成物の使用である。
【０１３１】
本発明のさらなる側面は、がん、例えば卵巣がん、肺がん、膀胱がん、中皮腫、多発性骨髄腫、乳がん、および／または他の任意の固形もしくは血液のがんの治療ならびに／あるいは予防に使用するための、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）をがんの治療に有用な他の薬剤と組み合わせて含む、凍結乾燥医薬調製物、キットまたは医薬組成物を提供する。
【０１３２】
本発明のさらなる側面は、がん、例えば卵巣がん、肺がん、膀胱がん、中皮腫、多発性骨髄腫、乳がん、および／または他の任意の固形もしくは血液のがんを治療ならびに／あるいは予防する方法である。本方法は、本明細書で提供される凍結乾燥医薬調製物、キットまたは医薬組成物を、治療有効用量で、それを必要としている対象に投与することを含むことができる。対象は、通常ヒトまたは家庭内動物である。
【０１３３】
本発明のさらなる側面は、がん、例えば卵巣がん、肺がん、膀胱がん、中皮腫、多発性骨髄腫、乳がん、および／または他の任意の固形もしくは血液のがんを治療ならびに／あるいは予防する方法であって、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）を含む凍結乾燥医薬調製物、キットまたは医薬組成物が、がんの治療に有用な別の薬剤と組み合わされて、治療有効用量でそれを必要としている対象に供給される、方法である。対象は、通常ヒトまたは家庭内動物である。
【０１３４】
凍結乾燥医薬調製物、キットまたは医薬組成物の、それを必要としている対象への投与は、静脈内注射により行うことができる。凍結乾燥メルファランフルフェンアミドまたはこうした凍結乾燥メルファランフルフェンアミドを含む医薬組成物は、体腔、例えば膀胱内、または腹膜もしくは胸膜腔内への滴注に投与することも可能である。
【０１３５】
メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩は、投与１回当たりのメルファランフルフェンアミドの総量が、約２０〜３０ｍｇ、例えば３０〜７５ｍｇ（例えば５０ｍｇ）の量で投与することができる。したがって、メルファランフルフェンアミドを含む本明細書で提供される医薬組成物またはキットは、上記の量を投与することができるような、凍結乾燥メルファランフルフェンアミドの量を有することができる。
【０１３６】
凍結乾燥メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩は、治療すべき対象およびがんの形態に応じて、毎日、２日または３日おき、毎週、２週、３週または４週おき、あるいは単回の高用量（例えば、移植前）としてでも投与することができる。
【０１３７】
「予防」という言い回しは、本明細書で使用する場合、本明細書で記載した任意のがん形態に対して化学療法が施されている患者、および前記がんから起こる任意の転移を予防する目的で継続的な治療を受けている患者における治療を含むことが意図される。
【０１３８】
本発明のさらなる側面は、水性溶媒中で再構成する際に、メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩の凍結乾燥調製物の再構成時間を短縮するための、メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩の凍結乾燥調製物における、ポリソルベート８０、ＰＥＧ４００、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、ＰＥＧ３００、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロースおよびヒスチジンを含む群から選択される賦形剤の使用を提供する。
【０１３９】
前記メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩は、好ましくはメルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）である。
【０１４０】
前記賦形剤は、好ましくは、ポリソルベート８０およびＰＥＧ４００から選択される。
【０１４１】
前記メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩は、好ましくはエタノールに溶解した後、前記メルファランフルフェンアミドが前記賦形剤にさらされる。
【０１４２】
本明細書では、「凍結乾燥」、「冷凍乾燥」、「凍結乾燥した」、「冷凍乾燥した」などは、互換的に使用することができる。
【０１４３】
ポリソルベート８０（ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノオレートという化学名を有し、ＣＡＳ登録番号は９００５−６５−６である）は、例えば、Ｆｌｕｋａ社またはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から市販されている。
【０１４４】
ＰＥＧ４００は、実験式ＨＯＣＨ2（ＣＨ2ＯＣＨ2）mＣＨ2ＯＨを有しており、ｍは８．７であり、平均分子量は３８０〜４２０であり、例えばＦｌｕｋａ社またはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から市販されている。
【０１４５】
ＰＥＧ３００は、実験式ＨＯＣＨ2（ＣＨ2ＯＣＨ2）mＣＨ2ＯＨを有しており、ｍは６．４であり、平均分子量は２８５〜３１５であり、例えばＦｌｕｋａ社またはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社から市販されている。
【０１４６】
Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（登録商標）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社により販売されている商標であり、ＣＡＳ登録番号６１７９１−１２−６を有するポリオキシエチレンヒマシ油である。
【０１４７】
本明細書に記載されている通りに使用することができる例示的な細胞毒性ジペプチドは、ＷＯ０１／９６３６７においても開示されており、式Ｖ
【化１】
0006042412.tif 000002
【０１４８】
（式中、
Ｒ1は、アルキルオキシ、シクロアルキルオキシ、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、ＮＨ2、アルキルアミノ、シクロアルキルアミノまたはアリールアミノであり、
Ｒ3は、ＮＨ2、ＯＨ、Ｏ−アルキル、Ｎ−アルキル、Ｏ−アシル、ＮＨ−アシル、Ｎ（ＣＨ2ＣＨ2Ｃｌ）2、ＮＯ2、Ｆ、ＣＦ3またはＨであり、
Ｒ4は、天然アミノ酸、もしくは修飾環式アミノ酸、または芳香族アミノ酸、またはＨである）、および薬学的に許容されるその塩を有することができる。
【０１４９】
また、本明細書に記載されている通りに使用することができる細胞毒性ペプチドは、Ｒ3はＦである式Ｉまたは式Ｖのペプチドを含む。ジペプチドは、Ｒ1がアルキルオキシであり、Ｒ3が、Ｆ、ＣＦ3、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アルキル、ＮＯ2、Ｎ（ＣＨ2ＣＨ2Ｃｌ）2、ＮＨ−アシルまたはＮＨ2であり、Ｒ4がＨである式Ｉまたは式Ｖのペプチドが例である。
【０１５０】
トリペプチドは、Ｒ1がアルキルオキシであり、Ｒ3が、Ｆ、ＣＦ3、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−アルキル、ＮＨ−アシル、ＮＯ2、Ｎ（ＣＨ2ＣＨ2Ｃｌ）2またはＮＨ2であり、Ｒ4が天然アミノ酸、または修飾環式アミノ酸、あるいは芳香族アミノ酸である式Ｉまたは式Ｖのペプチドが例である。
【０１５１】
メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩は、ＷＯ０１／９６３６７に開示される通りに調製することができ、この開示は、参照により組み込まれている。ＷＯ０１／９６３６７の実施例１は、メルファランフルフェンアミド（Ｌ−メルファラニル−Ｌ−ｐ−フルオロフェニルアラニンエチルエステル）、およびその塩酸塩であるメルファランフルフェンアミド塩酸塩Ｊ１（Ｌ−メルファラニル−Ｌ−ｐ−フルオロフェニルアラニンエチルエステル、化合物Ｊ１）を作製するための合成手順を開示しており、その開示は本明細書に組み込まれている。
【０１５２】
ＷＯ０１／９６３６７に開示されているジペプチド誘導体は、その明細書に開示されている、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護メルファランから合成することができ、本明細書に記載されている通り、凍結乾燥して使用することができる。同様に、ＷＯ０１／９６３６７はトリペプチド誘導体の調製を開示しており、この場合、Ｂｏｃ保護アミノ酸が、カップリング試薬としてＥＤＣ／ＮＭＭ／ＨＯＢｔを使用してジペプチド誘導体を含有するメルファランに結合される（ＥＤＣは、トリエチルアミンまたは１−［３−ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド塩酸塩であり、ＮＭＭは、Ｎ−メチルモルホリンであり、ＨＯＢｔは１−ヒドロキシベンゾトリアゾールである）。こうしたトリペプチド誘導体は、本明細書に記載した通りに、凍結乾燥して使用することができる。
【０１５３】
すべての側面において、本明細書で記載した通りに凍結乾燥して使用することができるメルファラン誘導体の例には、非限定的に、メルファランフルフェンアミド、Ｌ−メルファラニル−Ｌ−ｐ−フルオロフェニルアラニンイソプロピルエステル（ＪＶ２８）、Ｌ−プロリニル−Ｌ−メルファラニル−Ｌ−ｐ−フルオロフェニルアラニンエチルエステル（Ｊ３）（図７）および薬学的に許容されるそれらの塩が含まれる。これらの化合物は、ＷＯ０１／９６３６７において既に開示されており、この文献はそれらの調製方法もやはり提供している。メルファランフルフェンアミド、ＪＶ２８およびＪ３は、生体中でメルファランに転換され得る。ＷＯ０１／９６３６７では、これらの誘導体は、メルファランより低い濃度で使用される場合でさえも、腫瘍に対する細胞死滅活性が向上していることが実証された。さらに、メルファラン耐性も阻止し得る。
【０１５４】
本発明は、以下の例によりさらに説明されるが、本発明の範囲を限定するものではない。
【０１５５】
［実験項］
例１：様々な条件下でのメルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）の凍結乾燥
この実験では、様々な条件下で、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）の凍結乾燥を試験した。
【０１５６】
例１Ａ
秤量したＪ１を、超音波浴中、わずかに加熱しながら様々な量の脱イオン水に溶解し、透明な溶液を得た。試料は、ドライアイス−アセトン浴（−７８℃、試料Ａ１〜Ａ３）または−１６℃の冷凍庫（試料Ｂ１〜Ｂ３）中で凍結した。次に、乾燥用フラスコとポンプの間のドライアイス−アセトン（−７８℃）トラップを用いて、室温、１ｍｂａｒの圧力で１６時間、冷凍乾燥を実施した。
【０１５７】
乾燥後の視覚による外観は表１にまとめた通りであった。
【表１】
0006042412.tif 000003
【０１５８】
例１Ｂ
乾燥した化合物の試料は、５０％水性アセトニトリルに溶解し、ＨＰＬＣ（ＡＣＥカラム、Ｃ８、５０ｘ３ｍｍ、１０〜９７％のＣＨ3ＣＮで３分、１ｍＬ／分）により分析した。１つの場合（Ｊ１Ａ１）において、冷凍乾燥前（Ｊ１Ａ１−スタート）に、水溶液をＨＰＬＣにより分析した。乾燥後の純度は表２にまとめた通りであった。
【表２】
0006042412.tif 000004
【０１５９】
例１Ｃ
次に、水（中性またはわずかに酸性）の添加前に、溶解速度を向上する、または最初にＪ１をエタノールに溶解させるかの何れかのために、弱酸性の水（例えば０．０１％ＨＣｌ）を使用した試験を行った。
【０１６０】
７０％水性エタノール（０．５ｍＬ）にメルファランフルフェンアミド（約３ｍｇ）を溶解することにより、Ｊ１の３つの試料を調製した。この溶液を５ｍＭのＨＣｌにより希釈して、濃度０．４ｍｇ／ｍＬを得た。メルファランフルフェンアミドは水性エタノールに速やかに溶解したので、透明な溶液を得るのに、超音波浴または加熱を使用する必要はなかった。次に、乾燥用フラスコとポンプの間のドライアイス−アセトン（−７８℃）トラップの浴中で、溶液を凍結した。乾燥後の目視による外観は表３にまとめた通りであった。
【表３】
0006042412.tif 000005
【０１６１】
例１Ｄ
各試料について、ＨＰＬＣの実施を２回行った。１回はフラスコから除去することができた固体化合物由来のものであり、１回はフラスコ内の化合物中の残留物を溶解することによるものである（表４）。
【表４】
0006042412.tif 000006
【０１６２】
結論として、７０％エタノールにＪ１を溶解して５ｍＭのＨＣｌにより希釈し、冷凍乾燥することにより、純度＞９５％を有する３つの試料が得られた。
【０１６３】
例１Ｅ
次に、酸を省略し、その代わりに、エタノールを脱イオン水により希釈する試験を行った。室温で、７０％水性エタノール（０．５ｍＬ）にＪ１（約３ｍｇ）を溶解することにより、Ｊ１の試料３つを調製した。溶液を脱イオン水により希釈して、濃度０．４ｍｇ／ｍＬを得た。次に、この溶液をドライアイス−アセトン（−７８℃）浴中で凍結した。次に、乾燥用フラスコとポンプの間のドライアイス−アセトン（−７８℃）トラップを用いて、室温、１ｍｂａｒの圧力で１６時間かけて冷凍乾燥を実施した。乾燥後の目視による外観は表５に、および純度は表６にまとめた通りであった。
【表５】
0006042412.tif 000007
【表６】
0006042412.tif 000008
【０１６４】
７０％エタノールにＪ１を溶解して水により希釈し、冷凍乾燥することにより、３つの複製試料は、出発材料と同じ純度で得られた。
【０１６５】
例２：凍結乾燥メルファランフルフェンアミドの溶解速度に対する賦形剤の効果
この実験では、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）の冷凍乾燥過程に賦形剤を添加することによる、溶解速度に対する効果を試験した。以下の賦形剤を使用し、これらはすべて、ＦＤＡ（米国食品医薬品局）により一般に安全と認められた（ＧＲＡＳ）一般的な製剤化剤である。
【０１６６】
−  Ｄ−マンニトール、トレハロースおよびスクロース
−  トリズマ塩酸塩およびＬ−ヒスチジン
−  ポリソルベート８０、β−シクロデキストリン
Ｊ１は、すべての試験で使用した。
【０１６７】
Ｄ−マンニトール（３３４４０番）は、Ｓｉｇｍａ社から購入した。
【０１６８】
Ｄ−（＋）−トレハロース二水和物（Ｔ９４４９番−２５ｇ）は、Ｓｉｇｍａ社から購入した。
【０１６９】
トリズマ塩酸塩（Ｔ３２５３番−１００ｇ）は、Ｓｉｇｍａ社から購入した。
【０１７０】
β−シクロデキストリン水和物（８５６０８８番−５ｇ）は、Ｓｉｇｍａ社から購入した。
【０１７１】
ポリソルベート８０（５９９２４−１００ｇ）は、Ｆｌｕｋａ社から購入した。
【０１７２】
冷凍乾燥は、Ｌｅｙｂｏｌｄ社製のＬｙｏｖａｃ  ＧＴ２装置で行った。ＬＣＭＳ（液体クロマトグラフィー−質量分析）は、溶離液として水中アセトニトリル−０．１％トリフルオロ酢酸を使用したＨＰ１１００−システムで行った。ＡＣＥ−カラムＣ８、５０×３ｍｍおよび３分で１０〜９７％アセトニトリルのグラジエントを使用した。フィルターバイアルは、Ｗｈａｔｍａｎ社からのＭｉｎｉ−ＵｎｉＰｒｅｐ、０．４５μｍであった。
【０１７３】
（ｉ）方法Ａ、冷凍乾燥
メルファランフルフェンアミド（３０．１ｍｇ）を、１ｍＭのＨＣｌを含む７０％エタノール５ｍＬに溶解したところ、１８〜１９℃で１２分以内にすべて溶解した。この溶液を、水（７０ｍＬ）で希釈し、賦形剤（例えば、β−シクロデキストリン９ｍｇ）を含むまたは含まない２５０ｍＬ丸底フラスコに分配した（１０ｍＬ）。すべての材料が溶解した場合、この溶液を−７８℃のドライアイス／アセトン浴中に浸すことにより凍結させた。次に、凍結した溶液を＜０．１ｍｂａｒおよび室温で一晩凍結乾燥し、蒸発により、乾燥するまで試料の凍結が維持された。
【０１７４】
（ｉｉ）方法Ａ、溶解速度の測定
５％グルコース溶液（１０ｍＬ）を、１８．５〜１９℃で、冷凍乾燥材料に一度に加えて、磁気撹拌した。様々な時間で、１ｍＬシリンジにより一定分量（約０．３ｍＬ）を採取し、フィルターバイアル（０．４５□ｍ）によりろ過した。ろ液（８□Ｌ）を、ＨＰＬＣにより分析した。
【０１７５】
（ｉｉｉ）方法Ｂ、冷凍乾燥
メルファランフルフェンアミド（１０．２ｍｇ）を、５ｍＭのＨＣｌを含む７０％エタノール１．６７ｍＬに溶解したところ、２５℃で５分以内にすべて溶解した。この溶液を、水（２３．３ｍＬ）で希釈し、賦形剤（例えば、β−シクロデキストリン９ｍｇ）を含むまたは含まないフラスコに分配した（１０ｍＬ）。Ｊ１および賦形剤の溶液を、装着取付型０．４５μｍフィルターを有するプラスチック製バイアルに分注（各バイアルに０．２５ｍＬ）した。これらのバイアルを、−７８℃のドライアイス／アセトン浴中に浸すことによって凍結させ、次に、バイアル取付けラック中、一晩−２０℃で保管した。凍結したバイアルは、相互汚染を防止するためにアルミニウム箔によって覆い、デシケーター内のラックを一晩＜０．１ｍｂａｒに暴露させながら、−２０℃に事前冷却したラック中に保管し、蒸発により、乾燥するまで試料の凍結が維持された。
【０１７６】
（ｉｖ）方法Ｂ、溶解速度の測定
内部標準（３−メトキシ安息香酸、０．０８ｍｇ／ｍＬ）を含有する５％グルコース溶液（０．５ｍＬ）を加えた。様々な時間（１５秒〜１２分）の後に、バイアルの内容物をろ過し、ろ液に不溶材料が漏れるのを防ぐために、ろ液をガラス製バイアルに直接移注し、ろ液８μＬをＬＣＭＳに注入した。
【０１７７】
溶解速度の測定
最初の手法の方法Ａでは、様々な添加物を有するＪ１の水溶液を、丸底フラスコ中で冷凍乾燥した。撹拌を制御しながら、凍結乾燥した各化合物にグルコース溶液を加えた。少量の一定分量をシリンジにより特定の時間で抜き取り、０．４５μｍのＧＨＰシリンジフィルターによりろ過した。次に、ろ液中のＪ１の溶解の程度を、ＨＰＬＣにより測定した。この方法は、冷凍乾燥メルファランフルフェンアミド単独、およびＤ−マンニトール、トレハロース、スクロース、ポリソルベート８０およびβ−シクロデキストリンと一緒のものに使用した。これらの試験の結果は、賦形剤に関わらず、Ｊ１は２〜４分以内に完全に溶解したことを示した（賦形剤がない場合は図１を、賦形剤を有する場合は図２を参照されたい。表７も参照されたい）。実際、賦形剤を含んで凍結乾燥したＪ１に関する溶解速度は、この方法を使用して測定することができるよりも、実際に速かった。
【表７】
0006042412.tif 000009
【０１７８】
精度を改善して、より短い時間間隔で溶解を測定することができるように、方法Ｂを開発した。この方法では、メルファランフルフェンアミドおよび賦形剤（表２を参照されたい）の水溶液を２ｍＬのプラスチック製バイアルに加え、冷凍乾燥した。次に、撹拌しないで、内部標準である３−メトキシ安息香酸を含むグルコース溶液を加えた。様々な時間（１５秒〜６分）の後に、バイアルの内容物を０．４５μｍのＧＨＰ装着型バイアルによりろ過し、ろ液をガラス製バイアルに移注し、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）の溶解の程度を、内部標準によるＨＰＬＣにより測定した。撹拌がないことにより、より遅い溶解過程が可能になり、臨床的により適切となり、速度の測定もより容易になった。
【０１７９】
この方法により、冷凍乾燥したＪ１の溶解速度を追跡することができ、３〜４分後には完全溶解した（賦形剤を含まない場合は図３、賦形剤を含む場合は図４を参照されたい。表８も参照されたい）。
【表８】
0006042412.tif 000010
【０１８０】
方法Ａおよび方法Ｂにより測定した、添加物を含むおよび含まないＪ１の溶解速度を、表９にまとめている。
【表９】
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【０１８１】
Ｊ１の純度および回収
メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）の試料を、５０％水性アセトニトリルに溶解し、直ちにＬＣＭＳ（液体クロマトグラフィー−質量分析）により分析したところ、１本のピークだけを示した（＞９９％）。１ｍＭのＨＣｌまたは５ｍＭのＨＣｌを含有する７０％エタノールに溶解直後のＪ１の純度は約９７％であると分かり、約３％という少量の副生物を伴った。この溶液を室温に放置した場合、この副生物の量は増加した。
【０１８２】
この結果は、撹拌しながらのグルコース溶液への冷凍乾燥Ｊ１の溶解速度は、測定することができるよりも速く（方法Ａ）、賦形剤の添加効果を観測することができないということを実証している。撹拌をしない、臨床的により適切な方法Ｂの使用により、グルコース溶液への冷凍乾燥メルファランフルフェンアミドの溶解を、３〜４分後の完全溶解（completeness）まで追跡することができた。賦形剤のβ−シクロデキストリン、ポリソルベート８０、マンニトールおよびトレハロースの、メルファランフルフェンアミド溶液への冷凍乾燥前の添加はすべて、１分未満の完全な溶解をもたらした。最速の溶解は、ポリソルベート８０の添加によりもたらされ、最初の時間点である１５秒時には完全溶解した。
【０１８３】
例３：メルファランフルフェンアミドの溶解速度に対する賦形剤ポリソルベート８０の濃度効果の試験
以下に、メルファランフルフェンアミドの冷凍乾燥過程において添加される賦形剤のポリソルベート８０の量を試験して、５％グルコース溶液への溶解速度を最大化することを実施した。メルファランフルフェンアミドに対して、ポリソルベート８０を０、１０、５０および１００重量％で使用した。この実験は二回で実施した。
【０１８４】
メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）をすべての実験に使用した。使用したポリソルベート８０（５９９２４−１００ｇ）は、Ｆｌｕｋａ社から購入した。
【０１８５】
冷凍乾燥は、Ｌｅｙｂｏｌｄ社製のＬｙｏｖａｃ  ＧＴ２装置で行った。ＬＣＭＳは、溶離液として水中アセトニトリル−０．１％トリフルオロ酢酸を使用したＨＰ１１００−システムで行った。ＡＣＥ−カラムＣ８、５０×３ｍｍおよび３分で１０〜９７％アセトニトリルのグラジエントを使用した。フィルターバイアルは、Ｗｈａｔｍａｎ社からのＭｉｎｉ−ＵｎｉＰｒｅｐ、０．４５μｍであった。
【０１８６】
冷凍乾燥前の、メルファランフルフェンアミドの２ｍｇ／ｍＬストック溶液の一般的な調製を以下の通りに行った。
【０１８７】
メルファランフルフェンアミド１１．０ｍｇを、無水ＥｔＯＨ（０．５ｍＬ）中のＨＣｌの１０ｍＭ溶液に懸濁した。この混合物を３０分間撹拌した後、水０．２ｍＬを加えた。この混合物を室温で１０分間撹拌した後（透明溶液）、この混合物を０℃の水溶液（４．８ｍＬ）に加えた。溶液０．２５ｍＬを、１０重量％、５０重量％または１００％重量のポリソルベート８０を含有するプラスチック製バイアルに移注した。このバイアルを振とう、冷却、および冷凍乾燥した。
【０１８８】
内部標準の３−メトキシ安息香酸を含む５％グルコース溶液を、水（１５ｍＬ）に３−メトキシ安息香酸（１．２ｍｇ）を溶解することにより調製した。この混合物を１時間撹拌した後、グルコース７５０ｍｇを撹拌しながら加えた。５％グルコース溶液０．５ｍＬを、各冷凍乾燥したプラスチック製バイアルに加え、上記混合物を様々な時間点でろ過して、ガラス製バイアルに移注し、Ｊ１の溶解をＨＰＬＣにより測定した。
【０１８９】
溶解速度の測定
Ｊ１（１１ｍｇ）をＥｔＯＨ（０．５ｍＬ）に懸濁し、室温で３０分間撹拌した後、水（５ｍＬ）を加えた。この溶液を、ポリソルベート８０を０重量％、１０重量％、５０重量％または１００重量％（対Ｊ１）含有している４個の異なるフラスコに分割した。この溶液を２ｍＬプラスチック製バイアルに移注し、一晩冷凍乾燥した。
【０１９０】
撹拌しないで、内部標準の３−メトキシ安息香酸を含む５％グルコース溶液を各バイアルに加え、この混合物を様々な時間点（２秒〜３００秒）において、０．４５μｍ  ＧＨＰ装着型バイアルによりろ過した。不溶材料からの漏れを防ぐため、このろ液を直ちにガラス製バイアルに移注した。内部標準に対するＪ１の溶解量を、ＨＰＬＣを使用して測定した。
【０１９１】
結果
ポリソルベート８０を含む、および含まないＪ１（５％グルコース溶液中、１ｍｇ／ｍＬ）の溶解速度を表１０にまとめ、また図５に示している。
【表１０】
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【０１９２】
表１０は、冷凍乾燥Ｊ１および賦形剤のポリソルベート８０を含有している試料はすべて、賦形剤の非存在下で冷凍乾燥したＪ１よりも、かなり迅速に溶解することを示している。ポリソルベート８０を１０％含有している試料に特別の注意をはらい、本実験における時間点は、
ろ過直後、２秒、１５秒、３０秒および５分とした。試料を直ちにろ過した最初の時間点では、およそ４０％が溶解し、２秒後におよそ７０％が溶解した。３０〜６０秒後に全溶解に達した。
【０１９３】
５％グルコース溶液中、様々な量のポリソルベート８０を含有している１ｍｇ／ｍＬの冷凍乾燥Ｊ１の溶解速度は、すべての試料について１分未満であった。迅速な溶解に必要な最低量のポリソルベート８０は、１０〜５０重量％であった。
【０１９４】
例４：メルファランフルフェンアミドの溶解速度に対する賦形剤ポリソルベート８０、ＰＥＧ４００およびβ−シクロデキストリンの濃度効果の試験
この例は、保管に安定し、投与向けに調製が容易な凍結乾燥材料を開発するという長期目標に向けて、５％グルコース溶液への溶解度および溶解速度を最大化するために、メルファランフルフェンアミドの冷凍乾燥過程において添加される賦形剤のポリソルベート８０、ＰＥＧ４００およびβ−シクロデキストリンの様々な濃度効果を検討するために実施した。
【０１９５】
メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）をすべての実験に使用した。
【０１９６】
使用したポリソルベート８０（５９９２４−１００ｇ）は、Ｆｌｕｋａ社から、β−シクロデキストリン（８５６０８８）はＡｌｄｒｉｃｈ社から、ＰＥＧ４００（１００３１６）はＣｌａｒｉａｎｔ社から購入した。
【０１９７】
冷凍乾燥は、Ｌｅｙｂｏｌｄ社製のＬｙｏｖａｃ  ＧＴ２装置で行った。ＬＣＭＳは、溶離液として水中アセトニトリル−０．１％トリフルオロ酢酸を使用したＨＰ１１００−システムで行った。ＡＣＥ−カラムＣ８、５０×３ｍｍおよび３分で１０〜９７％アセトニトリルのグラジエントを使用した。フィルターバイアルは、Ｗｈａｔｍａｎ社からのＭｉｎｉ−ＵｎｉＰｒｅｐ、０．４５μｍであった。
【０１９８】
冷凍乾燥のためのメルファランフルフェンアミドの２ｍｇ／ｍＬストック溶液の一般調製
メルファランフルフェンアミド１１．１ｍｇを無水ＥｔＯＨ（０．５ｍＬ）中の１０ｍＭのＨＣｌ溶液に懸濁した。この混合物を３０分間撹拌した後、水０．２ｍＬを加えた。この混合物を室温で１０分間撹拌した後（透明溶液）、この混合物を０℃の水溶液（４．８ｍＬ）に滴下して加えた。この溶液０．２５ｍＬまたは０．５ｍＬを、賦形剤を含有するプラスチック製バイアルに移注した。このバイアルを振とう、冷却、および冷凍乾燥した。
【０１９９】
溶解度実験
内部標準を含む５％グルコース溶液を、水（１５ｍＬ）に３−メトキシ安息香酸（１．２ｍｇ）を溶解することにより調製した。この混合物を１時間撹拌した後、グルコース７５０ｍｇを撹拌しながら加えた。冷凍乾燥した各プラスチック製バイアルに、５％グルコース溶液０．２ｍＬを加え、この混合物を１０〜１５秒間振とうし、５分後にろ過した。ろ液をガラス製バイアルに移注し、メルファランフルフェンアミドの溶解度を、ＨＰＬＣおよび検量線により測定した。
【０２００】
溶解度の測定
先の実験の通り、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）の２ｍｇ／ｍＬストック溶液を使用した。
【０２０１】
５％グルコース溶液への２．５ｍｇ／ｍＬのＪ１の溶解度については、ストック溶液０．２５ｍＬを、実験計画によって決定した賦形剤混合物を含有する２ｍＬプラスチック製バイアルに分注し、この混合物を直ちに冷却して冷凍乾燥した。
【０２０２】
各賦形剤（メルファランフルフェンアミドに対する重量％）の高／低レベルは、以下の通りであった：ポリソルベート８０（８％〜８０％）、ＰＥＧ４００（８０％〜４００％）およびβ−シクロデキストリン（１０％〜５０％）。各賦形剤の最高量は、ＦＤＡによる登録済みＩＶ投与用医薬品の医薬品添加物データベースから決定した。β−シクロデキストリンは、ＦＤＡのＧＲＡＳ（一般に安全と認められた）リストに掲載されているが、発明者らの認識している限り、静脈内注射用途では推奨がなされておらず、このため、かなり慎重に高レベルを設定することになった。メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）（重量）に対する各賦形剤の重量％を表１１に示している。
【表１１】
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【０２０３】
本明細書の他の実験において実証されたように、Ｊ１の溶解速度は、凍結乾燥過程において、ポリソルベート８０を添加することにより著しく向上した。５ｍｇ／ｍＬの溶解度を実現するために、３つの試験を行った。Ｊ１のストック溶液を、ポリソルベート８０（メルファランフルフェンアミドに対して１０重量％、５０重量％および１００重量％）を含有している３つの別のプラスチック製バイアル（実験１２、１３および１４）に加えた。この混合物を直ちに冷却して冷凍乾燥した。
【０２０４】
内部標準（３−メトキシ安息香酸）を含む５％グルコース溶液を各バイアルに加え、バイアルを振とうして５分間放置した。この混合物を０．４５μｍ  ＧＨＰフィルターバイアルによりろ過し、不溶材料からの漏れを防ぐために、ろ液を直ちにガラス製バイアルに移注した。Ｊ１の溶解量を、ＨＰＬＣおよび検量線を使用して測定した。
【０２０５】
結果
賦形剤のポリソルベート８０、ＰＥＧ４００およびβ−シクロデキストリンの高／低レベルによる、Ｊ１の溶解度（ｍｇ／ｍＬ）を表１２にまとめている。
【表１２】
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【０２０６】
表１２に提示されている結果は、賦形剤を含有しているすべての実験において、Ｊ１の溶解度は、非冷凍乾燥Ｊ１（エントリー１５および１６）に比べて向上していることを実証している。エントリー１５は白色微粉末の懸濁液である一方、エントリー１６はより大きな塊で、溶解速度がより遅く、それ故に、５分でのＪ１の溶解度がより低いので、非冷凍乾燥Ｊ１の溶解度における大きな不一致は、恐らくバッチの粒子サイズが異なるためである。分析精度は、同一の賦形剤濃度による中央実験９〜１１（１．９、１．８および１．７）で示されている。賦形剤としてポリソルベート８０を含む（１０、５０および１００％）３つの試料は、それぞれ１．０、１．２および１．４ｍｇ／ｍＬの溶解度を示した。
【０２０７】
賦形剤のポリソルベート８０、Ｐｅｇ４００およびβ−シクロデキストリンの混合物を有するエントリーは、溶解度を２．０ｍｇ／ｍＬまたはその付近に有する、いくつかの組合せを示した。測定された最高の溶解度２．０（エントリー３、５および７）は、高レベルのＰＥＧ４００を用いてのみ達成でき、冷凍乾燥後、液体または半固体を与えた。
【０２０８】
より低量のＰＥＧ４００（エントリー２、４、６および８）を有する試料は、冷凍乾燥後に飛散性の白色粉末が形成し、エントリー８において１．９ｍｇ／ｍＬと測定された最高の溶解度であった。これにより、ＰＥＧ４００の量を低下し、かつβ−シクロデキストリンの量を増加することにより、一層高い溶解度を得ることができるかどうかの試験に進んだ。追加サンプル（表１２の行１７）は、ポリソルベート８０を５０％、ＰＥＧ４００を８０％、およびβ−シクロデキストリンを１００％含有している冷凍乾燥品であった。この賦形剤混合物を含むＪ１の溶解度は、１．２ｍｇ／ｍＬであった。
【０２０９】
これらの結果は、賦形剤の組合せによるＪ１の最大溶解度は、２ｍｇ／ｍＬに近いことを実証している。
【０２１０】
実験１３により、ポリソルベートを５０％単独で含むＪ１の溶液は、およそ１．２ｍｇ／ｍＬの溶解度を与え、１．０ｍｇ／ｍＬ製剤には十分であり、ＰＥＧ４００およびβ−シクロデキストリンは排除できた。
【０２１１】
目視確認実験
より臨床的に適切な設定での溶解を確認するために、プラスチック製バイアルの代わりに透明ガラス製バイアル中で、より大きなスケールの実験を行った。バイアル１は、４．８ｍｇのメルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）および２．４ｍｇのポリソルベート８０の溶液を含有した。対照として、バイアル２はメルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）４．８ｍｇを含有し、ポリソルベート８０は不含であった。これらのバイアルを一晩冷凍乾燥した。
【０２１２】
飛散性の白色物質として冷凍乾燥メルファランＪ１を含有している各バイアルに、５％グルコース溶液４．７０ｍＬを加え、１．０２ｍｇ／ｍＬの濃度のＪ１を得た。この混合物を１０〜１５秒間振とうしたところ、Ｊ１およびポリソルベート８０を５０％含有している試験管は、１５秒後には透明溶液を示した。図６の左のバイアルを参照されたい。ポリソルベート不含の、冷凍乾燥Ｊ１を含む参照管は、小さな粒子を示しており、３０分後でも完全には溶解しなかった。図６の右のバイアルを参照されたい。ＬＣ−ＭＳ分析は、３０分後のメルファランフルフェンアミドの純度が、両バイアルとも＞９５％であることを示した。
【０２１３】
本明細書で提示したこの結果は、５％グルコース溶液へのＪ１の溶解度は、賦形剤にポリソルベート８０、Ｐｅｇ４００およびβ−シクロデキストリンの混合物を使用して、１．９ｍｇ／ｍＬまで向上することができることを実証している。賦形剤とＪ１とのこうした混合物は、凍結乾燥すると飛散性の白色固体をもたらした。
【０２１４】
５０重量％のポリソルベート８０を含有するＪ１の凍結乾燥により、５％グルコース溶液に迅速に溶解する、飛散性の白色固体がもたらされた。飽和濃度１．２ｍｇ／ｍＬは、臨床設定において、１．０ｍｇ／ｍＬの投与用調製物に使用するのに十分である。
【０２１５】
例５：安定性試験
本検討の第１部の目的は、５％グルコース溶液中におけるメルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）（ポリソルベート８０と一緒に冷凍乾燥した）の溶解速度を研究することであった。
【０２１６】
ポリソルベート８０を含有している５％グルコース溶液へのＪ１（冷凍乾燥した）の溶解速度は別の実験で測定する。
【０２１７】
最後に、ポリソルベート８０を含有している５％グルコース溶液への非冷凍乾燥Ｊ１の溶解速度を測定する。
【０２１８】
第２部は、高温における２つの異なる調製物におけるＪ１の分解検討である。第１の調製物は、ポリソルベート８０を含有している冷凍乾燥固体であり、第２の調製物は、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）中、２５ｍｇ／ｍｌのＪ１溶液であった。２つの調製物を使用して、＋４０℃で１か月間分解を追跡した。
【０２１９】
（ｉ）溶解速度の測定
５％グルコース溶液を、Ｊ１を含有している各プラスチック製バイアルに加えた。これらのバイアルを振とうし、様々な時間点でろ過した。ろ液をガラス製バイアルに移注し、Ｊ１の溶解量をＨＰＬＣにより測定した。
【０２２０】
（ｉｉ）加速安定性試験の設計
冷凍乾燥Ｊ１およびポリソルベート８０を有する１０個のバイアル、ならびにＤＭＡのＪ１溶液の１０個のバイアルを、１か月間、４０℃で保管した。冷凍乾燥材料のバイアル２個（以下の表において、冷凍乾燥品１および２と称する）およびＤＭＡ溶液のバイアル１個（以下の表１においてＤＭＡと称する）を４０℃のチャンバから取り出して−２０℃で保管し、同時にＪ１のアッセイおよび純度を分析した。採取時間は、０、１、３、１０および３０日とした。各冷凍乾燥したバイアルは、０．２５ｍｇのＪ１を含有した。ＤＭＡ中の２５ｍｇ／ｍｌ溶液は、オンコペプチド（Oncopeptide）由来のものであった。
【０２２１】
（ｉｉｉ）分析および結果
冷凍乾燥試料は、Ｗｈａｔｍａｎ社の０．４５μｍフィルターバイアルで、ＤＭＡ５００μｌに溶解した。試料を短時間ボルテックスした後、バイアルから２部を一緒に押し圧し（pressing）、こうして試料をろ過した。２５ｍｇ／ｍｌの溶液試料をＨＰＬＣ用バイアルに２０μｌに等分し、ＤＭＡ９８０μｌを用いて希釈することにより、ＤＭＡで希釈した。４μｌをクロマトグラフィー系に注入した。
【０２２２】
冷凍乾燥したバイアル中のＪ１の量にはわずかにばらつき（variation）があったので、安定性は相対純度として評価した。相対純度の使用により、各試料はその試料自体に対して標準化されており、変動するＪ１量の、安定性結果に対する影響が最小化される。
【０２２３】
ＰＳ存在下での５％グルコース中のＪ１の溶解速度は、表１３にまとめられている。
【表１３】
0006042412.tif 000015
【０２２４】
安定性試験結果
【表１４】
0006042412.tif 000016
【０２２５】
表１４の結果は、冷凍乾燥材料は、試験期間中、本質的に不変であることを示している。わずかな純度変化だけを観察することができた。また、５％グルコース溶液の１ｍｇ／ｍＬの冷凍乾燥Ｊ１の溶解速度は、ポリソルベート８０の存在下では、１分未満であった。ポリソルベート８０を含有する５％グルコース溶液の１ｍｇ／ｍＬの非冷凍乾燥Ｊ１の溶解速度は、１〜２分と見積もられた。
【０２２６】
ＤＭＡ溶液中のＪ１は、１か月間＋４０℃での保管中に著しく分解した。相対量は約９６．８％から８６．９％まで低下した。冷凍乾燥固体として保管したＪ１は、同じ期間中、９８．７％から９８．３％までと、わずかな分解を示しただけであった。
【０２２７】
他の態様
本発明は、その詳細な説明と組み合わせて記載されているが、上記説明は本発明の範囲を例示する意図のものであり、限定するものではなく、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって規定されることを理解されたい。他の側面、利点、および変形は、以下の特許請求の範囲内である。
以下に、当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］
（ｉ）メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩、および
（ｉｉ）ポリソルベート、ポリエチレングリコール、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、およびアミノ酸を含む群から選択される少なくとも１種の賦形剤
を含む凍結乾燥医薬調製物。
［２］
前記賦形剤が、ポリソルベート８０、ＰＥＧ４００、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、ＰＥＧ３００、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、およびヒスチジンを含む群から選択される、［１］に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［３］
前記メルファランフルフェンアミドが、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）である、［１］または［２］に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［４］
前記少なくとも１種の賦形剤が、界面活性特性を有する、［１］〜［３］の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［５］
前記少なくとも１種の賦形剤が、ポリソルベートまたはポリエチレングリコールである、［１］〜［４］の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［６］
前記少なくとも１種の賦形剤が、ポリソルベート８０である、［５］に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［７］
前記少なくとも１種の賦形剤が、ＰＥＧ４００である、［５］に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［８］
メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）および前記賦形剤のポリソルベート８０を含む、［１］に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［９］
（ｉ）メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩、および
（ｉｉ）ポリソルベート、ポリエチレングリコール、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、およびアミノ酸から選択される２種以上の賦形剤の組合せ
を含む、［１］に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［１０］
前記賦形剤の組合せが、ポリソルベート８０とＰＥＧ４００との混合物である、［９］に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［１１］
前記メルファランフルフェンアミドが、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）である、［９］または［１０］に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［１２］
賦形剤の量が、前記メルファランフルフェンアミドの約１０〜１００重量％である、［１］〜［１１］の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［１３］
前記賦形剤の量が、前記メルファランフルフェンアミドの１０〜５０重量％である、［１２］に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［１４］
生理学的に許容される溶液をさらに含む、［１］〜［１３］の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［１５］
前記生理学的に許容される溶液がグルコース溶液である、［１４］に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［１６］
グルコースの量が、凍結乾燥調製物の４．５〜５．５重量％である、［１５］に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［１７］
２５ｍｇのメルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）および１２．５ｍｇのポリソルベート８０を含む、［１］〜［１６］の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［１８］
有機溶媒を含んでいない、または実質的に含んでいない、［１］〜［１７］の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［１９］
前記賦形剤が界面活性特性を有する、［１］〜［１８］の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［２０］
（ｉ）［１］〜［１９］の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬調製物、および
（ｉｉ）生理学的に許容される溶液
を含む構成要素の組合せのキット。
［２１］
前記生理学的に許容される溶液がグルコース溶液である、［２０］に記載の構成要素の組み合わせのキット。
［２２］
グルコースの量が４．５〜５．５重量％である、［２１］に記載の構成要素の組み合わせのキット。
［２３］
医薬として使用するための、［１］〜［１９］の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［２４］
がんの治療および／または予防に使用するための、［１］〜［１９］の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［２５］
前記がんが、卵巣がん、肺がん、膀胱がん、中皮腫、多発性骨髄腫、乳がん、または血液のがんの何れか１つである、［２４］に記載の凍結乾燥医薬調製物。
［２６］
がんの治療に使用するための、［２０］〜［２２］の何れか１項に記載の構成要素の組み合わせのキット。
［２７］
前記がんが、卵巣がん、肺がん、膀胱がん、中皮腫、多発性骨髄腫、乳がん、または血液のがんの何れか１つである、［２６］に記載の構成要素の組み合わせのキット。
［２８］
［１］〜［１９］の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬調製物が、こうした治療を必要とする対象に投与されることによる、がんの治療および／または予防方法。
［２９］
前記がんが、卵巣がん、肺がん、膀胱がん、中皮腫、多発性骨髄腫、乳がん、または血液のがんの何れか１つである、［２８］に記載の方法。
［３０］
ａ．メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩を有機溶媒に溶解し、メルファランフルフェンアミド溶液を得て、
ｂ．メルファランフルフェンアミド溶液に水を加えて、約０．２〜３．０ｍｇ／ｍｌの濃度のメルファランフルフェンアミド水溶液を得、
ｃ．ポリソルベート、ポリエチレングリコール、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、およびアミノ酸を含む群から選択される少なくとも１種の賦形剤を、前記メルファランフルフェンアミド溶液に加え、
ｄ．賦形剤を含有するメルファランフルフェンアミド水溶液を凍結乾燥に付す
ことによる、［１］〜［１９］の何れか１項に記載の凍結乾燥医薬調製物の調製方法。
［３１］
ａ．メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩を有機溶媒に溶解し、
ｂ．ステップａ）において得られた溶液に水を加えて、約０．２〜３．０ｍｇ／ｍｌの濃度の、前記メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩の溶液を得、
ｃ．ポリソルベート、ポリエチレングリコール、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロース、およびアミノ酸を含む群から選択される少なくとも１種の賦形剤を、ステップｂ）で得られた溶液に加え、
ｄ．ステップｃ）で得られた溶液を凍結乾燥に付す
ことによる、［３０］に記載の方法。
［３２］
前記有機溶媒が、エタノール、酸含有エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、プロピレングリコール、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジオキサン、酢酸、乳酸、プロピオン酸、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、メタノール、およびエタノールと水との混合物の何れか１種から選択される、［３０］または［３１］に記載の方法。
［３３］
前記賦形剤が、ポリソルベート８０、ＰＥＧ４００、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、ＰＥＧ３００、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロースおよびヒスチジンを含む群から選択される、［３０］〜［３２］の何れか１項に記載の方法。
［３４］
前記メルファランフルフェンアミドが、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）である、［３０］〜［３３］の何れか１項に記載の方法。
［３５］
前記有機溶媒がエタノールである、［３０］〜［３４］の何れか１項に記載の方法。
［３６］
前記賦形剤が、ポリソルベート８０およびＰＥＧ４００から選択される、［３０］〜［３５］の何れか１項に記載の方法。
［３７］
水性溶媒中で再構成する際に、メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩の凍結乾燥調製物の再構成時間を短縮するための、メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩の凍結乾燥調製物における、ポリソルベート８０、ＰＥＧ４００、β−シクロデキストリン、α−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、スルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン、ラクトース、ベンジルアルコール、コハク酸二ナトリウム、プロピレングリコール、ＰＥＧ３００、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ、ジメチルスルホキシド、Ｄ−マンニトール、トレハロース、スクロースおよびヒスチジンを含む群から選択される賦形剤の使用。
［３８］
前記メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩が、メルファランフルフェンアミド塩酸塩（Ｊ１）である、［３７］に記載の使用。
［３９］
前記賦形剤がポリソルベート８０およびＰＥＧ４００から選択される、［３７］または［３８］に記載の使用。
［４０］
前記メルファランフルフェンアミドまたは薬学的に許容されるその塩が、エタノールに溶解された後に、前記メルファランフルフェンアミドが前記賦形剤にさらされる、［３７］〜［３９］の何れか１項に記載の使用。
【図１Ａ】
0006042412.tif 000017
【図１Ｂ】
0006042412.tif 000018
【図１Ｃ】
0006042412.tif 000019
【図１Ｄ】
0006042412.tif 000020
【図２Ａ】
0006042412.tif 000021
【図２Ｂ】
0006042412.tif 000022
【図２Ｃ】
0006042412.tif 000023
【図２Ｄ】
0006042412.tif 000024
【図２Ｅ】
0006042412.tif 000025
【図３】
0006042412.tif 000026
【図４Ａ】
0006042412.tif 000027
【図４Ｂ】
0006042412.tif 000028
【図４Ｃ】
0006042412.tif 000029
【図４Ｄ】
0006042412.tif 000030
【図４Ｅ】
0006042412.tif 000031
【図５Ａ】
0006042412.tif 000032
【図５Ｂ】
0006042412.tif 000033
【図５Ｃ】
0006042412.tif 000034
【図５Ｄ】
0006042412.tif 000035
【図７】
0006042412.tif 000036
【図６】
0006042412.tif 000037