(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
形態Ｂとして特徴付けられる、Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドであって、
該形態Ｂは、Ｘ線粉末回折パターンにおける、６．５から６．９度までの１つのピーク、９．８から１０．２度までの１つのピーク、１１．０から１１．４度までの１つのピーク、１３．２から１３．６度までの１つのピークおよび２３．８から２４．２度までの１つのピークを特徴とするか、あるいは；
該形態Ｂは、単斜晶系、Ｐ２１／ｃ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：
ａ＝１３．５４２９（４）Å、
ｂ＝１３．４５５７（４）Å、
ｃ＝１２．０５９２（４）Å、
α＝９０°、
β＝１０１．１９３°、および
γ＝９０°
を保有することが判明している単結晶を特徴とする、形態Ｂとして特徴付けられる、Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド。
【請求項２】
Ｘ線粉末回折における、６．５から６．９度までの１つのピーク、９．８から１０．２度までの１つのピーク、１１．０から１１．４度までの１つのピーク、１３．２から１３．６度までの１つのピークおよび２３．８から２４．２度までの１つのピークを特徴とする、請求項１に記載の形態Ｂ。
【請求項３】
Ｘ線粉末回折における、６．７度の１つのピーク、１０．０度の１つのピーク、１１．２度の１つのピーク、１３．４度の１つのピークおよび２４．０度の１つのピークを特徴とする、請求項１に記載の形態Ｂ。
【請求項４】
１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルにおける、１６５．３ｐｐｍでの１つのピーク、１４５．９ｐｐｍでの１つのピーク、１３２．９ｐｐｍでの１つのピークおよび１１３．４ｐｐｍでの１つのピークからなる群より選択される１つまたは複数のピークを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
【請求項５】
１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルにおける、１６５．３ｐｐｍでの１つのピーク、１４５．９ｐｐｍでの１つのピーク、１３２．９ｐｐｍでの１つのピークおよび１１３．４ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
【請求項６】
１９Ｆ  ＮＭＲスペクトルにおける、−５６．１ｐｐｍでの１つのピークおよび−６２．１ｐｐｍでの１つのピークからなる群より選択される１つまたは複数のピークを特徴とする、請求項１から５のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
【請求項７】
請求項１から６のいずれか一項に記載の形態Ｂと、薬学的に許容されるアジュバントまたは担体とを含む、医薬組成物。
【請求項８】
患者における疾患の治療またはその重症度の軽減における使用のための組成物であって、前記疾患が、嚢胞性線維症、遺伝性肺気腫、ＣＯＰＤ、およびドライアイ疾患から選択され、前記組成物が、請求項１〜６のいずれか一項に記載の形態Ｂを含む、組成物。
【請求項９】
前記疾患が嚢胞性線維症である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
患者における疾患の治療またはその重症度の軽減における使用のための組成物であって、前記疾患が、ＣＦＴＲをコードする遺伝子における変異または環境要因に起因するＣＦＴＲ機能の低減に関連し、かつ、前記疾患が、嚢胞性線維症、またはドライアイであり、前記組成物が、請求項１〜６のいずれか一項に記載の形態Ｂを含む、組成物。
【請求項１１】
患者における疾患の治療またはその重症度の軽減における使用のための組成物であって、前記疾患が正常なＣＦＴＲ機能に関連し、前記組成物が、請求項１〜６のいずれか一項に記載の形態Ｂを含む、組成物。
【請求項１２】
前記疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）または遺伝性肺気腫である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
生物学的試料におけるＣＦＴＲ活性を調節するインビトロの方法であって、前記ＣＦＴＲを、請求項１〜６のいずれか一項に記載の形態Ｂと接触させるステップを含む方法。
【請求項１４】
前記患者が、ΔＦ５０８変異について同型接合性の患者である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１５】
前記患者が、Ｇ５５１Ｄ変異について同型接合性の患者である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１６】
前記患者が、ΔＦ５０８変異について異型接合性の患者である、請求項９に記載の組成物。
【請求項１７】
前記患者が、Ｇ５５１Ｄ変異について異型接合性の患者である、請求項９に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連する出願への相互参照
本願は、２００９年１０月２３日に出願された米国仮特許出願第６１／２５４，６１４号の利益を主張する。
【０００２】
発明の技術分野
本発明は、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（「ＣＦＴＲ」）のモジュレーターである、Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの固体状態形態、例えば結晶性形態に関する。本発明は、Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの結晶性形態を含む医薬組成物およびそれを用いる方法にも関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ＡＴＰカセット輸送体は、多種多様な薬理作用剤、潜在的に毒性の薬物および生体異物、ならびにアニオンの輸送を制御する膜輸送体タンパク質のファミリーである。該輸送体は、細胞のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を結合し、その特異的活性のために使用する、相同膜タンパク質である。これらの輸送体のいくつかは、悪性がん細胞を化学療法剤から防御する多剤耐性タンパク質（ＭＤＲ１−Ｐ糖タンパク質、または多剤耐性タンパク質、ＭＲＰ１のような）として発見された。これまでに、４８種のそのような輸送体が同定され、それらの配列同一性および機能に基づいて７つのファミリーに分類されている。
【０００４】
一般に疾患と関連するＡＴＰカセット輸送体ファミリーの１つのメンバーは、ｃＡＭＰ／ＡＴＰ媒介性アニオンチャネル、ＣＦＴＲである。ＣＦＴＲは、吸収細胞および分泌上皮細胞を包含する様々な細胞型において発現され、ここで、膜を横断するアニオンフラックス、ならびに他のイオンチャネルおよびタンパク質の活性を制御する。上皮細胞において、ＣＦＴＲの正常機能は、呼吸および消化組織を包含する体全体にわたる電解質輸送の維持のために重大である。ＣＦＴＲは、６つの膜貫通ヘリックスと１つのヌクレオチド結合ドメインとをそれぞれ含有する膜貫通ドメインの縦列反復でできているタンパク質をコードする、およそ１４８０個のアミノ酸から構成される。２つの膜貫通ドメインは、チャネル活性および細胞トラフィッキングを制御する多数のリン酸化部位を持つ大きな極性制御（Ｒ）−ドメインによって連結されている。
【０００５】
ＣＦＴＲをコードする遺伝子が同定され配列決定されている（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３を参照）。この遺伝子における欠損は、ＣＦＴＲにおける変異を引き起こし、ヒトの最も一般的な致死的遺伝病である嚢胞性線維症（「ＣＦ」）をもたらす。米国では、およそ２，５００人に１人の乳幼児が嚢胞性線維症に冒されている。米国の総人口のうち、最大１，０００万人が、明白な病的影響なしに、欠陥遺伝子の単一コピーを有している。対照的に、ＣＦ関連遺伝子の２つのコピーを持つ個体は、慢性肺疾患を包含する、ＣＦの衰弱性の影響および致死的影響を被っている。
【０００６】
嚢胞性線維症患者において、呼吸上皮中に内因的に発現したＣＦＴＲにおける変異は、イオンおよび流体輸送における不均衡を引き起こす頂端アニオン分泌の低減につながる。結果として生じるアニオン輸送の減少は、肺における粘液貯留の強化および付随する微生物感染に寄与し、これが最終的にＣＦ患者の死を引き起こす。ＣＦ患者は、呼吸器疾患に加えて、典型的に、胃腸の問題および治療しないまま放置すると死をもたらす膵機能不全に罹患する。加えて、嚢胞性線維症の男性の大多数は不妊であり、嚢胞性線維症の女性の間では受胎能が低下する。ＣＦ関連遺伝子の２つのコピーの深刻な影響とは対照的に、ＣＦ関連遺伝子の単一コピーを持つ個体は、コレラに対して、および下痢によって生じる脱水症に対して、抵抗性の増大を示す。おそらくこれにより、集団内の比較的高度数のＣＦ遺伝子の説明がつくであろう。
【０００７】
ＣＦ染色体のＣＦＴＲ遺伝子の配列分析は、変異を引き起こす様々な疾患を明らかにした（非特許文献４；非特許文献５；および非特許文献６；非特許文献７）。これまでに、ＣＦ遺伝子において変異を引き起こす１０００を超える疾患が同定されている（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｔ．ｓｉｃｋｋｉｄｓ．ｏｎ．ｃａ／ｃｆｔｒ／ａｐｐ）。最もよく見られる変異は、ＣＦＴＲアミノ酸配列の５０８位におけるフェニルアラニンの欠失であり、一般にΔＦ５０８−ＣＦＴＲと称される。この変異は、嚢胞性線維症の症例のおよそ７０パーセントに生じ、重症疾患に関連する。
【０００８】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲにおける残基５０８の欠失は、新生タンパク質の正しいフォールディングを妨げる。この結果、変異タンパク質はＥＲから出ることができず、原形質膜へ出入りすることができなくなる。結果として、膜中に存在するチャネル数は、野生型ＣＦＴＲを発現している細胞において観察されるものよりもはるかに少ない。変異は、トラフィッキング障害（ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）に加えて、チャネルゲーティングの欠陥をもたらす。それと同時に、膜中のチャネル数の低減およびゲーティングの欠陥は、上皮を横断するアニオン輸送の低減を招き、イオンおよび流体輸送の欠陥につながる（非特許文献８）。しかしながら、研究は、膜中のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ数の低減が、野生型ＣＦＴＲに満たないとはいえ機能的であることを示した（非特許文献９；Ｄｅｎｎｉｎｇら、上記を参照；非特許文献１０）。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲ、Ｒ１１７Ｈ−ＣＦＴＲおよびＧ５５１Ｄ−ＣＦＴＲに加えて、トラフィッキング、合成および／またはチャネルゲーティングの欠陥をもたらすＣＦＴＲにおける変異を引き起こす他の疾患を上方または下方制御して、アニオン分泌を変化させ、疾患の進行および／または重症度を変更することができる場合がある。
【０００９】
ＣＦＴＲはアニオンに加えて様々な分子を輸送するが、この役割（アニオン、クロライドおよび重炭酸塩の輸送）が、上皮を横断してイオンおよび水を輸送する重要な機序における１つの要素を表すことは明瞭である。他の要素は、細胞へのクロライドの取込みを司る、上皮Ｎａ＋チャネル、ＥＮａＣ、Ｎａ＋／２Ｃｌ−／Ｋ＋共輸送体、Ｎａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰアーゼポンプおよび側底膜Ｋ＋チャネルを包含する。
【００１０】
これらの要素が協働して、細胞内におけるそれらの選択的発現および局在により、上皮を横断する指向性輸送を達成する。クロライドの吸収は、頂端膜上に存在するＥＮａＣおよびＣＦＴＲならびに細胞の側底面上で発現されるＮａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰアーゼポンプおよびＣｌ−チャネルの協調活性によって起こる。腔側からのクロライドの二次能動輸送は、細胞内クロライドの蓄積を招き、次いでこれがＣｌ−イオンチャネルを介して細胞から受動的に離れ、ベクトル輸送をもたらし得る。側底面上のＮａ＋／２Ｃｌ−／Ｋ＋共輸送体、Ｎａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰアーゼポンプおよび側底膜Ｋ＋チャネルならびに腔側のＣＦＴＲの配置は、腔側のＣＦＴＲを介するクロライドの分泌を加減する。おそらく水自体が能動的に輸送されることはないため、上皮を横断するその流量は、ナトリウムおよびクロライドのバルク流によって生成される極めて小さな経上皮浸透圧勾配によって決まる。
【００１１】
ＣＦＴＲ中における変異による重炭酸塩輸送の欠陥は、ある特定の分泌機能における欠損を引き起こすと仮定されている。例えば、非特許文献１１を参照されたい。
【００１２】
中等度のＣＦＴＲ機能不全に関連するＣＦＴＲにおける変異は、ある特定の疾患の徴候をＣＦと共有するがＣＦの診断基準に合致しない状態の患者においても顕著である。これらは、精管の先天性両側欠損、特発性慢性膵炎、慢性気管支炎および慢性鼻副鼻腔炎を包含する。変異型ＣＦＴＲが修飾遺伝子または環境要因とともに危険因子であると考えられている他の疾患は、原発性硬化性胆管炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症および喘息を包含する。
【００１３】
タバコの煙、低酸素症、および低酸素シグナル伝達を誘発する環境要因も、ＣＦＴＲ機能を損なうことが実証されており、慢性気管支炎等、ある特定の形態の呼吸器疾患に寄与し得る。ＣＦＴＲ機能の欠陥によるものであり得るがＣＦの診断基準に合致しない疾患は、ＣＦＴＲに関係する疾患として特徴付けられる。
【００１４】
嚢胞性線維症に加えて、分泌性疾患およびＣＦＴＲによって媒介される他のタンパク質フォールディング疾患等、ＣＦＴＲにおける変異によって直接引き起こされるのではない他の疾患に、ＣＦＴＲ活性の調節が有益となり得る。ＣＦＴＲは、多くの細胞の上皮を横断するクロライドおよび重炭酸塩フラックスを制御して、流体運動、タンパク質可溶化、粘液粘度および酵素活性を制御する。ＣＦＴＲにおける欠損は、肝臓および膵臓を包含する多くの臓器において、気道または導管の遮断を引き起こし得る。増強物質は、細胞膜中に存在するＣＦＴＲのゲーティング活性を強化する化合物である。炎症および組織破壊につながる粘液の増粘、体液調節障害、粘液クリアランス障害または導管遮断を伴う任意の疾患は、増強物質の候補となり得る。
【００１５】
これらは、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、喘息、喫煙誘発性ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、ドライアイ疾患およびシェーグレン症候群、胃食道逆流性疾患、胆石、直腸脱、ならびに炎症性腸疾患を包含するがこれらに限定されない。ＣＯＰＤは、進行性であり完全に可逆性ではない気流制限を特徴とする。気流制限は、粘液過分泌、肺気腫および気管支炎によるものである。変異型または野生型ＣＦＴＲの活性化因子は、ＣＯＰＤにおいて一般的である粘液過分泌および粘液線毛クリアランス障害の潜在的治療を提案する。具体的には、ＣＦＴＲを横断するアニオン分泌を増大させることにより、気道表面液体への流体輸送を容易にして、粘液を水和させ、線毛間液の粘度を最適化することができる。これは、粘液線毛クリアランスの強化およびＣＯＰＤに関連する症状の低減につながるであろう。加えて、気道クリアランスの改善により進行中の感染および炎症を予防することによって、ＣＦＴＲモジュレーターは、肺気腫を特徴付ける気道の実質（ｐａｒｅｎｃｈｉｍａｌ）の破壊を予防するかまたは減速させることができ、かつ、気道疾患における粘液過分泌を引き起こす、粘液分泌細胞数およびサイズの増大を低減させるかまたは逆転させることができる。ドライアイ疾患は、涙液産生の減少、ならびに異常な涙膜脂質、タンパク質およびムチンのプロファイルを特徴とする。ドライアイには多くの原因があり、そのいくつかは、年齢、レーシック手術、関節炎、投薬、化学火傷／熱傷、アレルギー、ならびに嚢胞性線維症およびシェーグレン症候群等の疾患を包含する。ＣＦＴＲを介してアニオン分泌を増大させることにより、角膜内皮細胞および目の周囲の分泌腺からの流体輸送が強化されて、角膜水和を増大させるであろう。これは、ドライアイ疾患に関連する症状を軽減するのに役立つであろう。シェーグレン症候群は、免疫系が、目、口、皮膚、呼吸組織、肝臓、膣および消化管を包含する体全体にわたる水分産生腺を攻撃する自己免疫疾患である。症状は、ドライアイ、ドライマウスおよび膣の乾燥、ならびに肺疾患を包含する。該疾患は、関節リウマチ、全身性ループス、全身性硬化症および多発性筋炎／皮膚筋炎にも関連する。タンパク質トラフィッキングの欠陥は、該疾患を引き起こすと考えられており、それに対する治療選択肢は限定されている。ＣＦＴＲ活性のモジュレーターは、該疾患を患っている種々の臓器を水和させることができ、関連症状を軽減するのに役立ち得る。嚢胞性線維症の個体は、腸閉塞の再発エピソード、ならびに直腸脱（ｐｏｌａｐｓｅ）、胆石、胃食道逆流性疾患、ＧＩ悪性腫瘍および炎症性腸疾患の高い発生率を有し、そのような疾患を予防する上でＣＦＴＲ機能が重要な役割を果たし得ることを指示している。
【００１６】
上記で論じた通り、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲにおける残基５０８の欠失は、新生タンパク質が正しくフォールディングするのを妨げ、この変異タンパク質のＥＲからの退出不能および原形質膜への出入り不能をもたらすと考えられている。結果として、不十分な量の成熟タンパク質が原形質膜に存在し、上皮組織内におけるクロライド輸送は有意に低減される。実際に、このＥＲ機構によるＣＦＴＲのＥＲプロセシングの欠陥の細胞現象は、ＣＦ疾患だけではなく、広範な他の孤立性および遺伝性疾患の基礎となることが示された。ＥＲ機構が機能不良となり得る２つの道筋は、分解につながるタンパク質のＥＲ搬出とのカップリング喪失によるもの、またはこれらの欠陥／ミスフォールディングされたタンパク質のＥＲ蓄積によるもののいずれかである［非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５；非特許文献１６］。第一クラスのＥＲ機能不良に関連する疾患は、嚢胞性線維症（上記で論じた通りのミスフォールディングされたΔＦ５０８−ＣＦＴＲによる）、遺伝性肺気腫（ａ１−抗トリプシンによる；非Ｐｉｚ改変体）、遺伝性ヘモクロマトーシス、プロテインＣ欠乏症等の凝固−繊維素溶解欠乏症、１型遺伝性血管浮腫、家族性高コレステロール血症等の脂質プロセシング欠乏症、１型乳び血症、無βリポタンパク質血症、Ｉ細胞疾患／偽性ハーラー症候群等のリソソーム蓄積症、ムコ多糖症（リソソームプロセシング酵素による）、サンドホフ／テイ・サックス病（β−ヘキソサミニダーゼによる）、クリグラー・ナジャーＩＩ型（ＵＤＰ−グルクロニル−シアリック（ｓｉａｌｙｃ）−トランスフェラーゼによる）、多腺性内分泌障害／高インスリン血症、真性糖尿病（インスリン受容体による）、ラロン型小人症（成長ホルモン受容体による）、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能低下症（プレプロ副甲状腺ホルモンによる）、黒色腫（チロシナーゼによる）である。後者のクラスのＥＲ機能不良に関連する疾患は、グリカノーシスＣＤＧ１型、遺伝性肺気腫（α１−抗トリプシン（ＰｉＺ改変体による）、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症（Ｉ、ＩＩ、ＩＶ型プロコラーゲンによる）、遺伝性低フィブリノゲン血症（フィブリノゲンによる）、ＡＣＴ欠損症（α１−抗キモトリプシンによる）、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ（バソプレシンホルモン／Ｖ２受容体による）、腎性ＤＩ（アクアポリンＩＩによる）、シャルコーマリートゥース症候群（末梢性ミエリンタンパク質２２による）、ペリツェーウス‐メルツバッハー病、アルツハイマー病（βＡＰＰおよびプレセニリンによる）、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病等の神経変性疾患、ハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー等の数種のポリグルタミン神経障害、ならびに遺伝性クロイツフェルトヤコブ病（プリオンタンパク質プロセシング欠損による）等の海綿状脳症、ファブリー病（リソソームα−ガラクトシダーゼＡによる）、シュトロイスラー‐シャインカー症候群（Ｐｒｐプロセシング欠損による）、不妊、膵炎、膵機能不全、骨粗しょう症、骨減少症、ゴーラム病、クロライドチャ��ル病、先天性筋強直症（トムゼン型およびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、驚愕過剰症、てんかん、びっくり病、脂肪蓄積症、アンジェルマン症候群、先天性線毛運動不全症（ＰＣＤ）、逆位を伴うＰＣＤ（カルタゲナー症候群としても公知である）、逆位および線毛形成不全を伴わないＰＣＤ、ならびに肝疾患である。
【００１７】
ＣＦＴＲにおける変異が関与する他の疾患は、精管の先天性両側欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊、軽度肺疾患、特発性膵炎およびアレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）を包含する。非特許文献１７（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
【００１８】
ＣＦＴＲ活性の上方制御に加えて、ＣＦＴＲモジュレーターによってアニオン分泌を低減させることは、分泌促進剤によって活性化されたクロライド輸送の結果として上皮の水輸送が劇的に増大している分泌性下痢の治療に有益となり得る。機序は、ｃＡＭＰの上昇およびＣＦＴＲの刺激を伴う。
【００１９】
下痢の原因は多数あるが、過度のクロライド輸送によって生じる下痢性疾患の主要な結末はすべてに共通であり、脱水症、アシドーシス、成長障害および死を包含する。急性および慢性下痢は、世界の多くの地域における主要な医学的問題を代表する。下痢は、栄養失調における有意な要因でもあり、５歳未満の小児における死因の第一位（５，０００，０００人の死／年）でもある。
【００２０】
分泌性下痢はまた、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）および慢性炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の患者において危険な状態である。旅行先の国および地域に応じて下痢の重症度および症例数は変わるが、先進工業国から発展途上国への旅行者１，６００万人が毎年下痢を発症している。
【００２１】
したがって、ヒトＣＦＴＲの野生型および変異型形態の、強力かつ選択的なＣＦＴＲ増強物質が必要である。これらの変異型ＣＦＴＲ形態は、ΔＦ５０８ｄｅｌ、Ｇ５５１Ｄ、Ｒ１１７Ｈ、２７８９＋５Ｇ→Ａを包含するがこれらに限定されない。
【００２２】
哺乳動物の細胞膜におけるＣＦＴＲの活性を調節するために使用され得る、ＣＦＴＲ活性のモジュレーターおよびその組成物も必要である。
【００２３】
そのようなＣＦＴＲ活性のモジュレーターを使用して、ＣＦＴＲにおける変異によって引き起こされる疾患を治療する方法が必要である。
【００２４】
哺乳動物のエクスビボ細胞膜におけるＣＦＴＲ活性を調節する方法が必要である。
【００２５】
加えて、治療薬として使用するのに適切な医薬組成物において容易に使用され得る、前記化合物の安定な固体形態が必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００２６】
【非特許文献１】Ｇｒｅｇｏｒｙ，  Ｒ．  Ｊ．ら（１９９０年）、Ｎａｔｕｒｅ、３４７巻：３８２〜３８６頁
【非特許文献２】Ｒｉｃｈ，  Ｄ．  Ｐ．ら（１９９０年）、Ｎａｔｕｒｅ、３４７巻：３５８〜３６２頁
【非特許文献３】Ｒｉｏｒｄａｎ，  Ｊ．  Ｒ．ら（１９８９年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４５巻：１０６６〜１０７３頁
【非特許文献４】Ｃｕｔｔｉｎｇ，  Ｇ．  Ｒ．ら（１９９０年）、Ｎａｔｕｒｅ、３４６巻：３６６〜３６９頁
【非特許文献５】Ｄｅａｎ，  Ｍ．ら（１９９０年）、Ｃｅｌｌ、６１巻：８６３号：８７０頁
【非特許文献６】Ｋｅｒｅｍ，  Ｂ−Ｓ．ら（１９８９年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４５巻：１０７３〜１０８０頁
【非特許文献７】Ｋｅｒｅｍ，  Ｂ−Ｓ．ら（１９９０年）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８７巻：８４４７〜８４５１頁
【非特許文献８】Ｑｕｉｎｔｏｎ，  Ｐ．  Ｍ．（１９９０年）、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．、４巻：２７０９〜２７２７頁
【非特許文献９】Ｄｏｌｍａｎｓら（１９９１年）、Ｎａｔｕｒｅ  Ｌｏｎｄ．、３５４巻：５２６〜５２８頁
【非特許文献１０】ＰａｓｙｋおよびＦｏｓｋｅｔｔ（１９９５年）、Ｊ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２７０巻：１２３４７〜５０頁
【非特許文献１１】Ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ：  ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｕｃｏｖｉｓｃｉｄｏｓｉｓ」、Ｐａｕｌ  Ｍ．  Ｑｕｉｎｔｏｎ、Ｌａｎｃｅｔ、２００８年、３７２巻：４１５〜４１７頁
【非特許文献１２】Ａｒｉｄｏｒ  Ｍら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．、５巻（７号）、７４５〜７５１頁（１９９９年）
【非特許文献１３】Ｓｈａｓｔｒｙ，  Ｂ．Ｓ．ら、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、４３巻、１〜７頁（２００３年）
【非特許文献１４】Ｒｕｔｉｓｈａｕｓｅｒ，  Ｊ．ら、Ｓｗｉｓｓ  Ｍｅｄ  Ｗｋｌｙ、１３２巻、２１１〜２２２頁（２００２年）
【非特許文献１５】Ｍｏｒｅｌｌｏ，  ＪＰら、ＴＩＰＳ、２１巻、４６６〜４６９頁（２０００年）
【非特許文献１６】Ｂｒｏｓｓ  Ｐ．ら、Ｈｕｍａｎ  Ｍｕｔ．、１４巻、１８６〜１９８頁（１９９９年）
【非特許文献１７】ＣＦＴＲ−ｏｐａｔｈｉｅｓ：  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ」、Ｐｅａｄｅｒ  Ｇ．  ＮｏｏｎｅおよびＭｉｃｈａｅｌ  Ｒ．  Ｋｎｏｗｌｅｓ、Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｒｅｓ．、２００１年、２巻：３２８〜３３２頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２７】
本発明は、以下の構造を有するＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（以後「化合物Ｉ」）：
【００２８】
【化１】
0005877157.tif 000002
の固体形態に関する。
【００２９】
化合物Ｉおよび薬学的に許容されるその組成物は、嚢胞性線維症、喘息、喫煙誘発性ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、膵炎、膵機能不全、精管の先天性両側欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊、軽度肺疾患、特発性膵炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、肝疾患、遺伝性肺気腫、遺伝性ヘモクロマトーシス、プロテインＣ欠乏症等の凝固−繊維素溶解欠乏症、１型遺伝性血管浮腫、家族性高コレステロール血症等の脂質プロセシング欠乏症、１型乳び血症、無βリポタンパク質血症、Ｉ細胞疾患／偽性ハーラー症候群等のリソソーム蓄積症、ムコ多糖症、サンドホフ／テイ・サックス病、クリグラー・ナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血症、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能低下症、黒色腫、グリカノーシス（Ｇｌｙｃａｎｏｓｉｓ）ＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠損症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性（ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｅａｌ）ＤＩ、腎性ＤＩ、シャルコーマリートゥース症候群、ペリツェーウス‐メルツバッハー病、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病等の神経変性疾患、ハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー等の数種のポリグルタミン神経障害、ならびに遺伝性クロイツフェルトヤコブ病（プリオンタンパク質プロセシング欠損による）等の海綿状脳症、ファブリー病、シュトロイスラー‐シャインカー症候群、ＣＯＰＤ、ドライアイ疾患、またはシェーグレン病、骨粗しょう症、骨減少症、骨折治癒機転および骨成長（骨修復、骨再生、骨吸収を低減させることおよび骨沈着を増大させることを包含する）、ゴーラム病、先天性筋強直症（トムゼン型およびベッカー型）等のクロライドチャネル病、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、驚愕過剰症、てんかん、びっくり病、脂肪蓄積症、アンジェルマン症候群、ならびに、逆位を伴うＰＣＤ（カルタゲナー症候群としても公知である）、逆位および線毛形成不全を伴わないＰＣＤを包含する線毛の構造および／または機能の遺伝障害を表す用語である先天性線毛運動不全症（ＰＣＤ）を包含するがこれらに限定されない様々な疾患、障害または状態を治療するまたはその重症度を下げるのに有用である。
【００３０】
一態様において、化合物Ｉは、本明細書において記述され特徴付けられる通り、形態Ｂ、形態Ａ−ＨＣｌまたは形態Ｂ−ＨＣｌと称される実質的に結晶性の形態である。
【００３１】
別の態様において、化合物Ｉは、本明細書において記述され特徴付けられる通り、形態Ａ−ＨＣｌまたは形態Ｂ−ＨＣｌと称される塩酸塩形態である。
【００３２】
別の態様において、化合物Ｉは、本明細書において記述され特徴付けられる通り、形態Ｂ−ＨＣｌと称される塩酸塩形態である。
【００３３】
本明細書において記述される方法を使用して、形態Ｂ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せを含む本発明の組成物を調製することができる。
本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
形態Ａ−ＨＣｌとして特徴付けられる、Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド。
（項目２）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約７．１度の１つのピークを特徴とする、項目１に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目３）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約２１．２度の１つのピークを特徴とする、項目１または２に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目４）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約６．９から約７．３度までの１つのピークを特徴とする、項目１から３のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目５）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約８．０から約８．４度までの１つのピークを特徴とする、項目１から４のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目６）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約１３．９から約１４．３度までの１つのピークを特徴とする、項目１から５のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目７）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約２１．０から約２１．４度までの１つのピークを特徴とする、項目１から６のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目８）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約１４．５から約１４．９度までの１つのピークを特徴とする、項目１から７のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目９）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約１６．２から約１６．６度までの１つのピークを特徴とする、項目１から８のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目１０）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約１８．５から約１８．９度までの１つのピークを特徴とする、項目１から９のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目１１）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約２２．６から約２３．０度までの１つのピークを特徴とする、項目１から１０のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目１２）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約６．９から約７．３度までの１つのピーク、約８．０から約８．４度までの１つのピーク、約１３．９から約１４．３度までの１つのピークおよび約２１．０から約２１．４度までの１つのピークを特徴とする、項目１に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目１３）
図１の回折パターンを特徴とする、項目１から１２のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目１４）
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける、約１６３．７ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目１から１３のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目１５）
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける、約１３７．２ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目１から１４のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目１６）
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける、約１２１．５ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目１から１５のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目１７）
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける、約１６３．７ｐｐｍでの１つのピーク、約１３７．２ｐｐｍでの１つのピークおよび約１２１．５ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目１から１６のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目１８）
図５の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを特徴とする、項目１から１７のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目１９）
１９Ｆ ＮＭＲスペクトルにおける、約−５７．０ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目１から１８のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目２０）
１９Ｆ ＮＭＲスペクトルにおける、約−６０．５ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目１から１９のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目２１）
１９Ｆ ＮＭＲスペクトルにおける、約−５７．０ｐｐｍでの１つのピークおよび約−６０．５ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目１から２０のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目２２）
図６の１９Ｆ ＮＭＲスペクトルを特徴とする、項目１から２１のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目２３）
単斜晶系、Ｐ２１／ｃ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：
ａ＝１３．６１７５（４）Å、
ｂ＝２１．６１４（３）Å、
ｃ＝８．３９４１（４）Å、
α＝９０°、
β＝１１２．３０３°、および
γ＝９０°
を保有することが判明している単結晶を特徴とする、項目１から２２のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ。
（項目２４）
項目１から２３のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌと、薬学的に許容されるアジュバントまたは担体とを含む、医薬組成物。
（項目２５）
形態Ｂとして特徴付けられる、Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド。
（項目２６）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約６．５から約６．９度までの１つのピークを特徴とする、項目２４に記載の形態Ｂ。
（項目２７）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約９．２から約９．６度までの１つのピークを特徴とする、項目２５または２６に記載の形態Ｂ。
（項目２８）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約１１．０から約１１．４度までの１つのピークを特徴とする、項目２５から２７のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目２９）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約１３．２から約１３．６度までの１つのピークを特徴とする、項目２５から２８のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目３０）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約１５．０から約１５．４度までの１つのピークを特徴とする、項目２５から２９のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目３１）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約１７．０から約１７．４度までの１つのピークを特徴とする、項目２５から３０のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目３２）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約１７．６から約１８．０度までの１つのピークを特徴とする、項目２５から３１のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目３３）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約１７．９から約１８．３度までの１つのピークを特徴とする、項目２５から３２のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目３４）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約１９．１から約１９．５度までの１つのピークを特徴とする、項目２５から３３のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目３５）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約１９．９から約２０．３度までの１つのピークを特徴とする、項目２５から３４のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目３６）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約２１．０から約２１．５度までの１つのピークを特徴とする、項目２５から３５のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目３７）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約２１．８から２２．２度までの１つのピークを特徴とする、項目２５から３６のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目３８）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約２３．８から約２４．２度までの１つのピークを特徴とする、項目２５から３７のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目３９）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約２６．０から約２６．４度までの１つのピークを特徴とする、項目２５から３８のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目４０）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約２７．１から約２７．５度までの１つのピークを特徴とする、項目２５から３９のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目４１）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約２７．５から約２７．９度までの１つのピークを特徴とする、項目２５から４０のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目４２）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約２８．７から約２９．１度までの１つのピークを特徴とする、項目２５から４１のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目４３）
Ｘ線粉末回折における、約６．５から約６．９度まで（例えば約６．７度）の１つのピーク、約９．８から約１０．２度まで（例えば約１０．０度）の１つのピーク、約１１．０から約１１．４度まで（例えば約１１．２度）の１つのピーク、約１３．２から約１３．６度まで（例えば約１３．４度）の１つのピークおよび約２３．８から約２４．２度まで（例えば約２４．２度）の１つのピークを特徴とする、項目２５から４２のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目４４）
Ｘ線粉末回折における、約６．７度の１つのピーク、約１０．０度の１つのピーク、約１１．２度の１つのピーク、約１３．４度の１つのピークおよび約２４．２度の１つのピークを特徴とする、項目２５から４３のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目４５）
図７Ａまたは図７Ｂの回折パターンを特徴とする、項目２５から４４のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目４６）
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける、約１６５．３ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目２５から４５のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目４７）
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける、約１４５．９ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目２５から４６のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目４８）
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける、約１３２．９ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目２５から４７のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目４９）
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける、約１１３．４ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目２５から４８のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目５０）
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける、約１６５．３ｐｐｍでの１つのピーク、約１４５．９ｐｐｍでの１つのピーク、約１３２．９ｐｐｍでの１つのピークおよび約１１３．４ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目２５から４９のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目５１）
図１１の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを特徴とする、項目２５から５０のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目５２）
１９Ｆ ＮＭＲスペクトルにおける、約−５６．１ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目２５から５１のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目５３）
１９Ｆ ＮＭＲスペクトルにおける、約−６２．１ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目２５から５２のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目５４）
１９Ｆ ＮＭＲスペクトルにおける、約−５６．１ｐｐｍでの１つのピークおよび約−６２．１ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目２５から５３のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目５５）
図１２の１９Ｆ ＮＭＲスペクトルを特徴とする、項目２５から５４のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目５６）
単斜晶系、Ｐ２１／ｃ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：
ａ＝１３．５４２９（４）Å、
ｂ＝１３．４５５７（４）Å、
ｃ＝１２．０５９２（４）Å、
α＝９０°、
β＝１０１．１９３°、および
γ＝９０°
を保有することが判明している単結晶を特徴とする、項目２５から５５のいずれか一項に記載の形態Ｂ。
（項目５７）
項目２５から５６のいずれか一項に記載の形態Ｂと、薬学的に許容されるアジュバントまたは担体とを含む、医薬組成物。
（項目５８）
形態Ｂ−ＨＣｌとして特徴付けられる、Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド。
（項目５９）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約８．１から約８．５度までの１つのピークを特徴とする、項目５８に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目６０）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約１４．６から約１５．１度までの１つのピークを特徴とする、項目５８または５９に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目６１）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約１６．５から約１６．９度までの１つのピークを特徴とする、項目５８から６０のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目６２）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約１７．６から約１８．４度までの３つのピークを特徴とする、項目５８から６１のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目６３）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約２１．４から約２２．１度までの２つのピークを特徴とする、項目５８から６２のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目６４）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約２２．８から約２３．８度までの２つのピークを特徴とする、項目５８から６３のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目６５）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約２４．７から約２５．４度までの２つのピークを特徴とする、項目５８から６４のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目６６）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約２６．１から約２７．３度までの１つのピークを特徴とする、項目５８から６５のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目６７）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約３０．９から約３１．３度までの１つのピークを特徴とする、項目５８から６６のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目６８）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約３８．２から約３８．７度までの１つのピークを特徴とする、項目５８から６７のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目６９）
図１３のＸ線回折パターンを特徴とする、項目５８から６８のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目７０）
Ｘ線粉末回折パターンにおける、約８．１から約８．５度までの１つのピーク、約１４．６から約１５．１度までの１つのピーク、約１６．５から約１６．９度までの１つのピーク、約１７．６から約１８．４度までの３つのピーク、約２１．４から約２２．１度までの２つのピーク、約２２．８から約２３．８度までの２つのピーク、約２４．７から約２５．４度までの２つのピーク、約２６．１から約２７．３度までの１つのピーク、約３０．９から約３１．３度までの１つのピーク、および約３８．２から約３８．７度までの１つのピークを特徴とする、項目５８から６９のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目７１）
Ｘ線粉末回折における、約８．１から約８．５度までの１つのピーク、約８．８から約９．２度までの１つのピーク、約１２．８から約１３．２度までの１つのピーク、約１７．８から約１８．２度までの１つのピークおよび約２２．８から約２３．２度までの１つのピークを特徴とする、項目５８から７０のいずれかに記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目７２）
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける、約１６８．２ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目５８から７１のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目７３）
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける、約１４８．７ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目５８から７２のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目７４）
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける、約１３８．８ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目５８から７３のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目７５）
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける、約１１９．８ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目５８から７４のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目７６）
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける、約２３．９ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目５８から７５のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目７７）
１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおける、約１６８．２ｐｐｍでの１つのピーク、約１４８．７ｐｐｍでの１つのピーク、約１３８．８ｐｐｍでの１つのピーク、約１１９．８ｐｐｍでの１つのピークおよび約２３．９ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目５８から７６のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目７８）
図１７の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを特徴とする、項目５８から７７のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目７９）
１９Ｆ ＮＭＲスペクトルにおける、約−５５．６ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目５８から７８のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目８０）
１９Ｆ ＮＭＲスペクトルにおける、約−６２．０ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目５８から７９のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目８１）
１９Ｆ ＮＭＲスペクトルにおける、約−５５．６ｐｐｍでの１つのピークおよび約−６２．０ｐｐｍでの１つのピークを特徴とする、項目５８から８０のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目８２）
図１８の１９Ｆ ＮＭＲスペクトルを特徴とする、項目５８から８１のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目８３）
単斜晶系、Ｐ２１／ａ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：
ａ＝１２．５７３３４（５）Å、
ｂ＝１９．６８６３４（５）Å、
ｃ＝８．３９３９９（５）Å、
α＝９０°、
β＝９０．０５５４°、および
γ＝９０°
を保有することが判明している単結晶を特徴とする、項目５８から８２のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌ。
（項目８４）
項目５８から８３のいずれか一項に記載の形態Ｂ−ＨＣｌと、薬学的に許容されるアジュバントまたは担体とを含む、医薬組成物。
（項目８５）
患者における疾患を治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記疾患が、嚢胞性線維症、喘息、喫煙誘発性ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、膵炎、膵機能不全、精管の先天性両側欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊、軽度肺疾患、特発性膵炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、肝疾患、遺伝性肺気腫、遺伝性ヘモクロマトーシス、プロテインＣ欠乏症等の凝固−繊維素溶解欠乏症、１型遺伝性血管浮腫、家族性高コレステロール血症等の脂質プロセシング欠乏症、１型乳び血症、無βリポタンパク質血症、Ｉ細胞疾患／偽性ハーラー症候群等のリソソーム蓄積症、ムコ多糖症、サンドホフ／テイ・サックス病、クリグラー・ナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血症、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能低下症、黒色腫、グリカノーシスＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠損症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ、腎性ＤＩ、シャルコーマリートゥース症候群、ペリツェーウス‐メルツバッハー病、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病等の神経変性疾患、ハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー等の数種のポリグルタミン神経障害、ならびに遺伝性クロイツフェルトヤコブ病（プリオンタンパク質プロセシング欠損に起因する）等の海綿状脳症、ファブリー病、シュトロイスラー‐シャインカー症候群、ＣＯＰＤ、ドライアイ疾患、またはシェーグレン病、骨粗しょう症、骨減少症、骨折治癒機転および骨成長（骨修復、骨再生、骨吸収を低減させることおよび骨沈着を増大させることを包含する）、ゴーラム病、先天性筋強直症（トムゼン型およびベッカー型）等のクロライドチャネル病、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、驚愕過剰症、てんかん、びっくり病、脂肪蓄積症、アンジェルマン症候群、ならびに、逆位を伴うＰＣＤ（カルタゲナー症候群としても公知である）、逆位および線毛形成不全を伴わないＰＣＤを包含する線毛の構造および／または機能の遺伝障害を表す用語である先天性線毛運動不全症（ＰＣＤ）から選択され、前記患者に、有効量の、項目１から８４のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せを投与するステップを含む方法。
（項目８６）
前記疾患が嚢胞性線維症である、項目８５に記載の方法。
（項目８７）
患者における疾患を治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記疾患が、ＣＦＴＲをコードする遺伝子における変異または環境要因に起因するＣＦＴＲ機能の低減に関連し、前記患者に、有効量の項目１から８４のいずれか一項に記載の化合物を投与するステップを含む方法。
（項目８８）
疾患が、嚢胞性線維症、慢性気管支炎、反復性気管支炎、急性気管支炎、精管の先天性両側欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊、子宮および膣の先天性欠損（ＣＡＵＶ）によって引き起こされる女性不妊、特発性慢性膵炎（ＩＣＰ）、特発性再発性膵炎、特発性急性膵炎、慢性鼻副鼻腔炎、原発性硬化性胆管炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、糖尿病、ドライアイ、便秘、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、骨疾患、ならびに喘息である、項目８７に記載の方法。
（項目８９）
患者における疾患を治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記疾患が正常なＣＦＴＲ機能に関連し、前記患者に、有効量の項目１から８４のいずれか一項に記載の化合物を投与するステップを含む方法。
（項目９０）
疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、反復性気管支炎、急性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、慢性膵炎、再発性膵炎および急性膵炎、膵機能不全、精管の先天性両側欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊、軽度肺疾患、特発性膵炎、肝疾患、遺伝性肺気腫、胆石、胃食道逆流性疾患、胃腸悪性腫瘍、炎症性腸疾患、便秘、糖尿病、関節炎、骨粗しょう症、ならびに骨減少症である、項目８９に記載の方法。
（項目９１）
前記疾患が、遺伝性ヘモクロマトーシス、プロテインＣ欠乏症等の凝固−繊維素溶解欠乏症、１型遺伝性血管浮腫、家族性高コレステロール血症等の脂質プロセシング欠乏症、１型乳び血症、無βリポタンパク質血症、Ｉ細胞疾患／偽性ハーラー症候群等のリソソーム蓄積症、ムコ多糖症、サンドホフ／テイ・サックス病、クリグラー・ナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血症、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能低下症、黒色腫、グリカノーシスＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠損症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ、腎性ＤＩ、シャルコーマリートゥース症候群、ペリツェーウス‐メルツバッハー病、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病等の神経変性疾患、ハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー等の数種のポリグルタミン神経障害、ならびに遺伝性クロイツフェルトヤコブ病（プリオンタンパク質プロセシング欠損に起因する）等の海綿状脳症、ファブリー病、シュトロイスラー‐シャインカー症候群、ゴーラム病、クロライドチャネル病、先天性筋強直症（トムゼン型およびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、驚愕過剰症、てんかん、びっくり病、脂肪蓄積症、アンジェルマン症候群、先天性線毛運動不全症（ＰＣＤ）、逆位を伴うＰＣＤ（カルタゲナー症候群としても公知である）、逆位および線毛形成不全を伴わないＰＣＤ、またはシェーグレン病である、項目８９に記載の方法。
（項目９２）
生物学的試料におけるＣＦＴＲまたはその断片の活性をインビトロまたはインビボで測定する際に使用するためのキットであって、
ａ．項目１から８４のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せを含む組成物と、
ｂ．
ｉ．前記組成物を前記生物学的試料と接触させ、
ｉｉ．前記ＣＦＴＲまたはその断片の活性を測定する
ための取扱説明書と
を含む、キット。
（項目９３）
ｉ．追加化合物を前記生物学的試料と接触させ、
ｉｉ．前記追加化合物の存在下で、前記ＣＦＴＲまたはその断片の活性を測定し、
ｉｉｉ．前記追加化合物の存在下での前記ＣＦＴＲの活性を、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せの存在下でのＣＦＴＲの活性と比較する
ための取扱説明書をさらに含む、項目９２に記載のキット。
（項目９４）
前記ＣＦＴＲまたはその断片の活性を比較するステップが、前記ＣＦＴＲまたはその断片の密度の尺度を提供する、項目９３に記載のキット。
（項目９５）
生物学的試料におけるＣＦＴＲ活性を調節する方法であって、前記ＣＦＴＲを、項目１から８４のいずれか一項に記載の形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せと接触させるステップを含む方法。
（項目９６）
前記患者が、同型接合ΔＦ５０８変異を持つ嚢胞性線維症膜貫通受容体（ＣＦＴＲ）を保有する、項目９５に記載の方法。
（項目９７）
前記患者が、同型接合Ｇ５５１Ｄ変異を持つ嚢胞性線維症膜貫通受容体（ＣＦＴＲ）を保有する、項目９５に記載の方法。
（項目９８）
前記患者が、異型接合ΔＦ５０８変異を持つ嚢胞性線維症膜貫通受容体（ＣＦＴＲ）を保有する、項目９５に記載の方法。
（項目９９）
前記患者が、異型接合Ｇ５５１Ｄ変異を持つ嚢胞性線維症膜貫通受容体（ＣＦＴＲ）を保有する、項目９５に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】図１は、形態Ａ−ＨＣｌの例示的試料のＸ線粉末回折パターンである。
【図２】図２は、形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料についてのＤＳＣ曲線である。
【図３】図３は、試料重量を温度の関数として提示する、形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料の熱重量分析によって生成された曲線である。
【図４】図４は、形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料のＦＴＩＲスペクトルである。
【図５】図５は、形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料の固相１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルである。
【図６】図６は、形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料の固相１９Ｆ  ＮＭＲスペクトルである。
【図７Ａ】図７Ａは、機器１を用いて記録された、形態Ｂの代表的試料についてのＸ線粉末回折パターンである。
【図７Ｂ】図７Ｂは、機器２を用いて記録された、形態Ｂの代表的試料についてのＸ線粉末回折パターンである。
【図８】図８は、形態Ｂの代表的試料についてのＤＳＣ曲線である。
【図９】図９は、試料重量を温度の関数として提示する、形態Ｂの代表的試料の熱重量分析によって生成される曲線である。
【図１０】図１０は、形態Ｂの代表的試料のＦＴＩＲスペクトルである。
【図１１】図１１は、形態Ｂの代表的試料の固相１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルである。
【図１２】図１２は、形態Ｂの代表的試料の固相１９Ｆ  ＮＭＲスペクトルである。
【図１３】図１３は、形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料のＸ線粉末回折パターンである。
【図１４】図１４は、形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料についてのＤＳＣ曲線である。
【図１５】図１５は、試料重量を温度の関数として提示する、形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料の熱重量分析によって生成される曲線である。
【図１６】図１６は、形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料のＦＴＩＲスペクトルである。
【図１７】図１７は、形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料の固相１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルである。
【図１８】図１８は、形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料の固相１９Ｆ  ＮＭＲスペクトルである。
【図１９】図１９は、単一Ｘ線分析に基づく形態Ｂの立体配座構造の例示である。
【図２０】図２０は、単一Ｘ線分析に基づく形態Ａ−ＨＣｌの立体配座構造の例示である。
【図２１】図２１は、単一Ｘ線分析に基づく形態Ａ−ＨＣｌの分子充填図表である。
【図２２】図２２は、単一Ｘ線分析に基づく形態Ｂ−ＨＣｌの立体配座構造の例示である。
【図２３】図２３は、単一Ｘ線分析に基づく形態Ｂ−ＨＣｌの分子充填図表である。
【発明を実施するための形態】
【００３５】
発明の詳細な説明
定義
本明細書において使用される場合、別段の指示がない限り、下記の定義が当てはまるものとする。
【００３６】
用語「ＡＢＣ輸送体」は、本明細書において使用される場合、少なくとも１つの結合ドメインを含むＡＢＣ輸送体タンパク質またはその断片を意味し、ここで、前記タンパク質またはその断片は、インビボまたはインビトロで存在する。用語「結合ドメイン」は、本明細書において使用される場合、モジュレーターと結合することができるＡＢＣ輸送体上のドメインを意味する。例えば、Ｈｗａｎｇ，  Ｔ．  Ｃ．ら、Ｊ．  Ｇｅｎ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９９８年）：１１１巻（３号）、４７７〜９０頁を参照されたい。
【００３７】
用語「ＣＦＴＲ」は、本明細書において使用される場合、ΔＦ５０８  ＣＦＴＲ、Ｒ１１７Ｈ  ＣＦＴＲおよびＧ５５１Ｄ  ＣＦＴＲを包含するがこれらに限定されない、制御因子活性の能力がある嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子またはその変異を意味する（例えば、ＣＦＴＲ変異については、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｔ．ｓｉｃｋｋｉｄｓ．ｏｎ．ｃａ／ｃｆｔｒ／ａｐｐを参照されたい）。
【００３８】
用語「調節すること」は、本明細書において使用される場合、測定可能な量だけ増大または減少させることを意味する。
【００３９】
用語「正常なＣＦＴＲ」または「正常なＣＦＴＲ機能」は、本明細書において使用される場合、喫煙、汚染、または肺において炎症を生じさせる何か等の環境要因によるいかなる機能障害もない、野生型様ＣＦＴＲを意味する。
【００４０】
用語「ＣＦＴＲの低減」または「ＣＦＴＲ機能の低減」は、本明細書において使用される場合、正常未満のＣＦＴＲまたは正常未満のＣＦＴＲ機能を意味する。用語「結晶性」は、構造単位が固定された幾何パターンまたは格子状に配置されているため、結晶性固体が厳格な長距離秩序を有する化合物または組成物を指す。結晶構造を構成している構造単位は、原子、分子またはイオンであってよい。結晶性固体は、一定の融点を示す。
【００４１】
用語「実質的に結晶性」は、厳格な長距離秩序を有する固定された幾何パターンまたは格子状に主に配置されている固体材料を指す。例えば、実質的に結晶性の材料は、約８５％超の結晶化度（例えば、約９０％超の結晶化度、約９５％超の結晶化度、または約９９％超の結晶化度）を有する。用語「実質的に結晶性」は、前項において定義されている記述子「結晶性」を包含することにも留意されたい。
【００４２】
本発明の目的のために、化学元素は、Ｐｅｒｉｏｄｉｃ  Ｔａｂｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔｓ、ＣＡＳ版、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｙｓｉｃｓ、第７５版に従って定義されている。加えて、有機化学の一般原理は、「Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、Ｔｈｏｍａｓ  Ｓｏｒｒｅｌｌ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｂｏｏｋｓ、Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９年、ならびに「Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、第５版、Ｓｍｉｔｈ，  Ｍ．Ｂ．およびＭａｒｃｈ，  Ｊ．編、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：２００１年において記述されており、それらの全内容が参照により本明細書に組み込まれる。
【００４３】
別段の規定がない限り、本発明の化合物の互変異性形態はすべて、本発明の範囲内である。
【００４４】
加えて、別段の規定がない限り、本明細書において描写されている構造は、１種または複数種の同位体富化された原子が存在するという点でのみ異なる化合物を包含するようにも意味付けられている。例えば、重水素もしくは三重水素による水素の置換、または１３Ｃ富化炭素もしくは１４Ｃ富化炭素による炭素の置換を除いて本構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。そのような化合物は、例えば、生物学的アッセイにおける分析ツールまたはプローブとして有用である。そのような化合物、特に重水素原子を含有する化合物は、改変された代謝特性を呈し得る。
【００４５】
形態Ａ−ＨＣｌ
一態様において、本発明は、形態Ａ−ＨＣｌとして特徴付けられるＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの形態を取り上げる。
【００４６】
いくつかの実施形態において、形態Ａ−ＨＣｌは、Ｘ線粉末回折パターンにおける、度単位で測定された下記のピーク：Ｃｕ  Ｋアルファ放射線を使用して得たＸ線粉末回折における、約６．９から約７．３度まで（例えば約７．１度）の１つのピーク、約８．０から約８．４度まで（例えば約８．２度）の１つのピーク、約１３．９から約１４．２度まで（例えば約１４．１度）の１つのピーク、および約２１．０から約２１．４度まで（例えば約２１．２度）の１つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００４７】
いくつかの実施形態において、形態Ａ−ＨＣｌは、Ｘ線粉末回折パターンにおける、度で測定された下記のピーク：Ｃｕ  Ｋアルファ放射線を使用して得たＸ線粉末回折における、約６．９から約７．３度まで（例えば約７．１度）の１つのピーク、約８．０から約８．４度まで（例えば約８．２度）の１つのピーク、約１１．９から約１２．３度まで（例えば約１２．１度）の１つのピーク、約１３．５から約１３．９度まで（例えば約１３．７度）の１つのピーク、約１６．２から約１６．６度まで（例えば約１６．４度）の１つのピーク、約１８．５から約１８．９度まで（例えば約１８．７度）の１つのピーク、および約２１．０から約２１．４度まで（例えば約２１．２度）の１つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００４８】
いくつかの実施形態において、形態Ａ−ＨＣｌは、Ｘ線粉末回折パターンにおける、度で測定された下記のピーク：Ｃｕ  Ｋアルファ放射線を使用して得たＸ線粉末回折における、約６．９から約７．２度まで（例えば約７．１度）の１つのピーク、約８．０から約８．４度まで（例えば約８．２度）の１つのピーク、約１３．９から約１４．３度まで（例えば約１４．１度）の１つのピーク、約１４．５から約１４．９度まで（例えば約１４．７度）の１つのピーク、約１６．２から約１６．６度まで（例えば約１６．４度）の１つのピーク、約１８．５から約１８．９度まで（例えば約１８．７度）の１つのピーク、約２１．０から約２２．２度まで（例えば約２１．２度、約２１．７度、約２１．９度のピーク）の３つのピーク、約２２．６から約２３．０度まで（例えば約２２．８度）の１つのピーク、約２４から約２５度まで（例えば約２４．６度および約２５度のピーク）の２つのピーク、および約３５．３度から約３６．０度まで（例えば３５．６度）の２つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００４９】
いくつかの実施形態において、形態Ａ−ＨＣｌは、図１において提供されるＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００５０】
いくつかの実施形態において、形態Ａ−ＨＣｌは、固体状態１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルにおける、百万分率（ｐｐｍ）で測定された下記のピーク：約１６３．５から約１６３．９ｐｐｍまで（例えば約１６３．７ｐｐｍ）の１つのピーク、約１３７．０から約１３７．４ｐｐｍまで（例えば約１３７．２ｐｐｍ）の１つのピーク、および約１２１．３から約１２１．７ｐｐｍまで（例えば約１２１．５ｐｐｍ）の１つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００５１】
いくつかの実施形態において、形態Ａ−ＨＣｌは、固体状態１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルにおける、百万分率（ｐｐｍ）で測定された下記のピーク：約１７５．５から約１７５．９ｐｐｍまで（例えば約１７５．７ｐｐｍ）の１つのピーク、約１６３．５から約１６３．９ｐｐｍまで（例えば約１６３．７ｐｐｍ）の１つのピーク、約１４２．４から約１４２．８ｐｐｍまで（例えば約１４２．６ｐｐｍ）の１つのピーク、約１４０．６から約１４１．０ｐｐｍまで（例えば約１４０．８ｐｐｍ）の１つのピーク、約１３７．０から約１３７．４ｐｐｍまで（例えば約１３７．２ｐｐｍ）の１つのピーク、約１３１．３から約１３１．７ｐｐｍまで（例えば約１３１．５ｐｐｍ）、および約１２１．３から約１２１．７ｐｐｍまで（例えば約１２１．５ｐｐｍ）の１つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００５２】
いくつかの実施形態において、形態Ａ−ＨＣｌは、図５において示される固体状態１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルを特徴とする。
【００５３】
いくつかの実施形態において、形態Ａ−ＨＣｌは、固体状態１９Ｆ  ＮＭＲスペクトルにおける、百万分率（ｐｐｍ）で測定された下記のピーク：約−５６．８から約−５７．２ｐｐｍまで（例えば約−５７．０ｐｐｍ）の１つのピーク、および約−６０．３から約−６０．７ｐｐｍまで（例えば約−６０．５ｐｐｍ）の１つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００５４】
いくつかの実施形態において、形態Ａ−ＨＣｌは、図６において示される固体状態１９Ｆ  ＮＭＲスペクトルを特徴とする。
【００５５】
また他の実施形態において、形態Ａ−ＨＣｌは、図４において提供されるＦＴＩＲスペクトルを特徴とする。
【００５６】
形態Ｂ
一態様において、本発明は、形態Ｂとして特徴付けられるＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの形態を取り上げる。
【００５７】
いくつかの実施形態において、形態Ｂは、Ｘ線粉末回折パターンにおける、度で測定された下記のピーク：Ｃｕ  Ｋアルファ放射線を使用して得たＸ線粉末回折における、約６．５から約６．９度まで（例えば約６．７度）の１つのピーク、約９．８から約１０．２度まで（例えば約１０．０度）の１つのピーク、約１１．０から約１１．４度まで（例えば約１１．２度）の１つのピーク、約１３．２から約１３．６度まで（例えば約１３．４度）の１つのピーク、および約２３．８から約２４．２度まで（例えば約２４．２度）の１つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００５８】
いくつかの実施形態において、形態Ｂは、１つまたは複数のピーク：Ｃｕ  Ｋアルファ放射線を使用して得たＸ線粉末回折における、約６．５から約６．９度まで（例えば約６．７度）の１つのピーク、約９．２から約９．６度まで（例えば約９．４）の１つのピーク、約１１．０から約１１．４度まで（例えば約１１．２度）の１つのピーク、約１３．２から約１３．６度まで（例えば約１３．４度）の１つのピーク、約１５．０から約１５．４度まで（例えば約１５．２度）の１つのピーク、約１７．０から約１７．４度まで（例えば約１７．２度）の１つのピーク、約１７．６から約１８．０度まで（例えば約１７．８度）の１つのピーク、約１７．９から約１８．３度まで（例えば約１８．１度）の１つのピーク、約１９．０から約１９．４度（例えば約１９．２）の１つのピーク、約１９．９から約２０．３度（例えば約２０．１度）の１つのピーク、約２１．０から約２１．５度（例えば約２１．２度）の１つのピーク、約２１．８から約２２．２度（例えば約２２．０度）の１つのピーク、約２３．８から約２４．２度（例えば約２４．０度）の１つのピーク、約２６．０から約２６．４度（例えば約２６．２度）の１つのピーク、約２７．０から約２７．４度（例えば約２７．２度）の１つのピーク、約２７．５から約２７．９度（例えば約２７．７度）の１つのピーク、および約２８．７から約２９．１度まで（例えば約２８．９度）の１つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００５９】
いくつかの実施形態において、形態Ｂは、図７において提供されるＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００６０】
いくつかの実施形態において、形態Ｂは、固体状態１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルにおける、百万分率（ｐｐｍ）で測定された下記のピーク：約１６５．１から約１６５．５ｐｐｍまで（例えば約１６５．３ｐｐｍ）の１つのピーク、約１４５．７から約１４６．１ｐｐｍまで（約１４５．９ｐｐｍ）の１つのピーク、約１３２．７から約１３３．１ｐｐｍまで（例えば約１３２．９ｐｐｍ）の１つのピーク、および約１１３．２から約１１３．６ｐｐｍまで（例えば約１１３．４ｐｐｍ）の１つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００６１】
いくつかの実施形態において、形態Ｂは、固体状態１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルにおける、百万分率（ｐｐｍ）として測定された下記のピーク：約１７５．１から約１７５．５ｐｐｍまで（例えば約１７５．３ｐｐｍ）の１つのピーク、約１６５．１から約１６５．５ｐｐｍまで（例えば約１６５．３ｐｐｍ）の１つのピーク、約１４１．２から約１４１．６ｐｐｍまで（例えば約１４１．４ｐｐｍ）の１つのピーク、約１４５．７から約１４６．１ｐｐｍまで（例えば約１４５．９ｐｐｍ）の１つのピーク、約１３２．７から約１３３．１ｐｐｍまで（例えば約１３２．９ｐｐｍ）の１つのピーク、約１２３．３から約１２３．７ｐｐｍまで（例えば約１２３．５ｐｐｍ）の１つのピーク、約１２６．６から約１２７．０ｐｐｍまで（例えば約１２６．８ｐｐｍ）の１つのピーク、約１１３．２から約１１３．６ｐｐｍまで（例えば約１１３．４ｐｐｍ）の１つのピーク、約１１７．２から約１１７．６ｐｐｍまで（例えば約１１７．４ｐｐｍ）の１つのピーク、約５８．１から約５８．５ｐｐｍまで（例えば約５８．３ｐｐｍ）の１つのピーク、約２６．７から約２７．１ｐｐｍまで（例えば約２６．９ｐｐｍ）の１つのピーク、および約２９．００から約２９．４ｐｐｍまで（例えば約２９．２ｐｐｍ）の１つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００６２】
いくつかの実施形態において、形態Ｂは、図１１において示される固体状態１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルを特徴とする。
【００６３】
いくつかの実施形態において、形態Ｂは、固体状態１９Ｆ  ＮＭＲスペクトルにおける、百万分率（ｐｐｍ）で測定された下記のピーク：約−５５．９から約−５６．３ｐｐｍまで（例えば約−５６．１ｐｐｍ）の１つのピーク、および約−６１．９から約−６２．３ｐｐｍまで（例えば約−６２．１ｐｐｍ）の１つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００６４】
いくつかの実施形態において、形態Ｂは、図１２において示される固体状態１９Ｆ  ＮＭＲスペクトルを特徴とする。
【００６５】
別の実施形態において、本発明は、単斜晶系、Ｐ２１／ｃ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：ａ＝１３．５４２９（４）Å、ｂ＝１３．４５５７（４）Å、ｃ＝１２．０５９２（４）Å、α＝９０°、β＝１０１．１９３°およびγ＝９０°を有する、形態ＢのＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの結晶を取り上げる。
【００６６】
一実施形態において、本発明は、単斜晶系、Ｐ２１／ｃ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：ａ＝１３．５４２９（４）Å、ｂ＝１３．４５５７（４）Å、ｃ＝１２．０５９２（４）Åを有する、形態ＢのＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの結晶を提供する。
【００６７】
また他の実施形態において、形態Ｂは、図１０において提供されるＦＴＩＲスペクトルを特徴とする。
【００６８】
形態Ｂ−ＨＣｌ
一態様において、本発明は、形態Ｂ−ＨＣｌとして特徴付けられるＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの形態を取り上げる。
【００６９】
いくつかの実施形態において、形態Ｂ−ＨＣｌは、Ｘ線粉末回折パターンにおける、度で測定された下記のピーク：Ｃｕ  Ｋアルファ放射線を使用して得たＸ線粉末回折における、約８．１から約８．５度まで（例えば約８．３度）の１つのピーク、約８．８から約９．２度まで（例えば約９．０度）の１つのピーク、約１２．８から約１３．２度まで（例えば約１３．０度）の１つのピーク、約１７．８から約１８．２度まで（例えば約１８．０度）の１つのピーク、および約２２．８から約２３．２度まで（例えば約２３．０度）の１つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００７０】
いくつかの実施形態において、形態Ｂ−ＨＣｌは、Ｘ線粉末回折パターンにおける、度で測定された下記のピーク：Ｃｕ  Ｋアルファ放射線を使用して得たＸ線粉末回折における、約８．１から約８．５度まで（例えば約８．３度）の１つのピーク、約１４．６から約１５．１度まで（例えば約１４．８度）の１つのピーク、約１６．５から約１６．９度まで（例えば約１６．７度）の１つのピーク、約１７．６から約１８．４度まで（例えば約１７．８度、約１８．０度、および約１８．２度）の３つのピーク、約２１．４から約２２．１度まで（例えば約２１．７度および約２２．０度）の２つのピーク、約２２．８から約２３．８度まで（例えば約２３．０度および約２３．６度）の２つのピーク、約２４．７から約２５．４度まで（例えば約２４．９度および約２５．２度）の２つのピーク、約２６．９から約２７．３度まで（例えば約２７．１度）の１つのピーク、約３０．９度から約３１．３度まで（例えば約３１．１度）の１つのピーク、および約３８．２から約３８．７度まで（例えば約３８．５度）の１つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００７１】
いくつかの実施形態において、形態Ｂ−ＨＣｌは、Ｘ線粉末回折パターンにおける、度で測定された下記のピーク：Ｃｕ  Ｋアルファ放射線を使用して得たＸ線粉末回折における、約８．１から約８．５度まで（例えば約８．３度）の１つのピーク、約１３．８から約１４．３度まで（例えば約１４．１度）の１つのピーク、約１４．６から約１５．５度まで（例えば約１４．８度および約１５．２度）の２つのピーク、約１６．５から約１６．９度まで（例えば約１６．７度）の１つのピーク、約１７．６から約１８．４度まで（例えば約１７．８度、約１８．０度および約１８．２度）の３つのピーク、約１９．１から約１９．７度まで（例えば約１９．３度および約１９．５度）の２つのピーク、約２１．４から約２２．１度まで（例えば約２１．７度および約２２．０度）の２つのピーク、約２２．８から約２３．８度まで（例えば約２３．０度および約２３．６度のピーク）の２つのピーク、約２４．５から約２５．９度まで（例えば約２４．７度、約２４．９度、約２５．２度および約２５．７度）の４つのピーク、約２６．９から約２７．３度まで（例えば約２７．１度）の１つのピーク、約２７．７から約２８．３度まで（例えば約２７．９度および約２８．１度）の２つのピーク、約２９．５から約３０．０度まで（例えば約２９．７度および約２９．８度）の２つのピーク、約２９．５から約３０．０度まで（例えば約２９．７度および約２９．８度）の２つのピーク、約３０．９から約３１．３度まで（例えば約３１．１度）の１つのピーク、約３２．１から約３２．５度まで（例えば約３２．３度）の１つのピーク、約３３．２から約３４．１度まで（例えば約３３．４度、約３３．８度および約３３．９度）の３つのピーク、約３５．０から約３５．４度まで（例えば約３５．２度）の１つのピーク、約３６．０から約３６．４度まで（例えば約３６．２度）の１つのピーク、および約３８．３度から約４０．１度まで（例えば約３８．５度、約３８．６度および約３９．９度）の３つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００７２】
いくつかの実施形態において、形態Ｂ−ＨＣｌは、図１３において提供されるＸ線粉末回折パターンを特徴とする。
【００７３】
いくつかの実施形態において、形態Ｂ−ＨＣｌは、固体状態１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルにおける、百万分率（ｐｐｍ）で測定された下記のピーク：約１６８．０から約１６８．４ｐｐｍまで（例えば約１６８．２ｐｐｍ）の１つのピーク、約１４８．５から約１４８．９ｐｐｍまで（例えば約１４８．７ｐｐｍ）の１つのピーク、約１３８．６から約１３９．０ｐｐｍまで（例えば約１３８．８ｐｐｍ）の１つのピーク、約１１９．６から約１２０．０ｐｐｍまで（例えば約１１９．８ｐｐｍ）の１つのピーク、および約２３．７から約２４．１ｐｐｍまで（例えば約２３．９ｐｐｍ）の１つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００７４】
いくつかの実施形態において、形態Ｂ−ＨＣｌは、固体状態１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルにおける、百万分率（ｐｐｍ）で測定された下記のピーク：約１７６．１から約１７６．５ｐｐｍまで（例えば約１７６．３ｐｐｍ）の１つのピーク、約１６８．０から約１６８．４ｐｐｍまで（例えば約１６８．２ｐｐｍ）の１つのピーク、約１４８．５から約１４８．９ｐｐｍまで（例えば約１４８．７ｐｐｍ）の１つのピーク、約１４３．０から約１４３．４ｐｐｍまで（例えば約１４３．２ｐｐｍ）の１つのピーク、約１３８．６から約１３９．０ｐｐｍまで（例えば約１３８．８ｐｐｍ）の１つのピーク、約１１９から約１３４ｐｐｍまで（例えば約１３１．６ｐｐｍ、約１２９．６ｐｐｍ、約１２９．１ｐｐｍ、約１２６．７ｐｐｍ、約１２５．８ｐｐｍ、約１２２．７ｐｐｍおよび約１１９．８ｐｐｍ）の７つのピーク、約１１２．１から約１１２．５ｐｐｍまで（例えば約１１２．３ｐｐｍ）の１つのピーク、約６８．８から約６９．２ｐｐｍまで（例えば約６９．０ｐｐｍ）の１つのピーク、約６６．７から約６７．１ｐｐｍまで（例えば約６６．９ｐｐｍ）の１つのピーク、約２８．１から約２８．５ｐｐｍまで（例えば約２８．３ｐｐｍ）の１つのピーク、および約２３．７から約２４．１ｐｐｍまで（例えば約２３．９ｐｐｍ）の１つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００７５】
いくつかの実施形態において、形態Ｂ−ＨＣｌは、図１７において示される固体状態１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルを特徴とする。
【００７６】
いくつかの実施形態において、形態Ｂ−ＨＣｌは、固体状態１９Ｆ  ＮＭＲスペクトルにおける、百万分率（ｐｐｍ）で測定された下記のピーク：約−５５．４から約−５５．８ｐｐｍまで（例えば約−５５．６ｐｐｍ）の１つのピーク、および約−６１．８から約−６２．２ｐｐｍまで（例えば約−６２．０ｐｐｍ）の１つのピークの１つまたは複数を特徴とする。
【００７７】
いくつかの実施形態において、形態Ｂ−ＨＣｌは、図１８において示される固体状態１９Ｆ  ＮＭＲスペクトルを特徴とする。
【００７８】
また他の実施形態において、形態Ｂ−ＨＣｌは、図１６において提供されるＦＴＩＲスペクトルを特徴とする。
【００７９】
一態様において、本発明は、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはそれらの任意の組合せと、薬学的に許容されるアジュバントまたは担体とを含む、医薬組成物を取り上げる。
【００８０】
一態様において、本発明は、ヒトにおけるＣＦＴＲ媒介性疾患を治療する方法であって、前記ヒトに、有効量の形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはそれらの任意の組合せを投与するステップを含む方法を取り上げる。
【００８１】
いくつかの実施形態において、該方法は、追加の治療剤を投与するステップを含む。
【００８２】
いくつかの実施形態において、疾患は、嚢胞性線維症、膵炎、副鼻腔炎、遺伝性肺気腫、遺伝性ヘモクロマトーシス、プロテインＣ欠乏症等の凝固−繊維素溶解欠乏症、１型遺伝性血管浮腫、家族性高コレステロール血症等の脂質プロセシング欠乏症、１型乳び血症、無βリポタンパク質血症、Ｉ細胞疾患／偽性ハーラー症候群等のリソソーム蓄積症、ムコ多糖症、サンドホフ／テイ・サックス病、クリグラー・ナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血症、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能低下症、黒色腫、グリカノーシスＣＤＧ１型、遺伝性肺気腫、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠損症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ、腎性ＤＩ、シャルコーマリートゥース症候群、ペリツェーウス‐メルツバッハー病、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病等の神経変性疾患、ハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー等の数種のポリグルタミン神経障害、ならびに遺伝性クロイツフェルトヤコブ病等の海綿状脳症、ファブリー病、シュトロイスラー‐シャインカー症候群、ＣＯＰＤ、ドライアイ疾患、膵機能不全、骨粗しょう症、骨減少症、ゴーラム病、クロライドチャネル病、先天性筋強直症（トムゼン型およびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、驚愕過剰症、てんかん、びっくり病、脂肪蓄積症、アンジェルマン症候群、先天性線毛運動不全症（ＰＣＤ）、逆位を伴うＰＣＤ（カルタゲナー症候群としても公知である）、逆位および線毛形成不全を伴わないＰＣＤ、およびシェーグレン病から選択される。
【００８３】
一実施形態において、本発明は、ヒトにおける嚢胞性線維症を治療する方法であって、前記ヒトに、有効量の形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはそれらの任意の組合せを投与するステップを含む方法を提供する。
【００８４】
一態様において、本発明は、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬パックまたはキットを取り上げる。
【００８５】
本発明の他の態様
使用、製剤および投与
薬学的に許容される組成物
本発明の一態様において、薬学的に許容される組成物が提供され、ここで、これらの組成物は、本明細書において記述されている通りの形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂまたは形態Ｂ−ＨＣｌを含み、場合により、薬学的に許容される担体、アジュバントまたはビヒクルを含む。ある特定の実施形態において、これらの組成物は、１種または複数の追加の治療剤をさらに含む。
【００８６】
上述した通り、本発明の薬学的に許容される組成物は、薬学的に許容される担体、アジュバントまたはビヒクルを追加で含み、これは、本明細書において使用される場合、所望される特定の剤形に適するような、ありとあらゆる溶媒、賦形剤または他の液体ビヒクル、分散助剤または懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、保存剤、固体結合剤、滑沢剤等を包含する。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｅ．  Ｗ．  Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、１９８０年）は、薬学的に許容される組成物を製剤化する際に使用される種々の担体およびその調製のための公知の技術を開示している。何らかの望ましくない生物学的効果を生じさせる、または、薬学的に許容される組成物の任意の他の成分（複数可）と有害性の様式で相互作用する等によって、任意の従来の担体媒質が本発明の化合物と配合禁忌でない限り、その使用は本発明の範囲内であることを企図されている。薬学的に許容される担体としての役割を果たすことができる材料のいくつかの例は、イオン交換体；アルミナ；ステアリン酸アルミニウム；レシチン；ヒト血清アルブミン等の血清タンパク質；ホスフェート、グリシン、ソルビン酸またはソルビン酸カリウム等の緩衝物質；植物性飽和脂肪酸の部分グリセリド混合物；水、塩、または、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩等の電解質；コロイド状シリカ；三ケイ酸マグネシウム；ポリビニルピロリドン；ポリアクリレート；蝋；ポリエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマー；羊毛脂；ラクトース、グルコースおよびスクロース等の糖類；コーンスターチおよびジャガイモデンプン等のデンプン類；セルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース等のその誘導体；トラガカント末；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバターおよび坐剤蝋等の添加剤；ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油等の油；プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール等のグリコール類；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル等のエステル類；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム等の緩衝剤；アルギン酸；発熱性物質を含まない水；等張食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；およびリン酸緩衝液；ならびに、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム等の他の非毒性の適合する滑沢剤を包含するがこれらに限定されず、さらに、調合者の判断により、着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および着香剤、保存剤、ならびに酸化防止剤が組成物中に存在してもよい。
【００８７】
化合物および薬学的に許容される組成物の使用
また別の態様において、本発明は、ＣＦＴＲ変異が関与する状態、疾患または障害を治療するまたはその重症度を下げる方法を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、ＣＦＴＲ活性の欠損が関与する状態、疾患または障害を治療する方法であって、本明細書において記述されている通りの形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せを含む組成物を、それを必要としている被験体、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む方法を提供する。
【００８８】
ある特定の実施形態において、ＣＦＴＲをコードする遺伝子における変異または環境要因（例えば煙）によるＣＦＴＲ機能の低減に関連する疾患を治療する方法を提供する。これらの疾患は、嚢胞性線維症、喘息、喫煙誘発性ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、膵炎、膵機能不全、精管の先天性両側欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊、軽度肺疾患、特発性膵炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、肝疾患、遺伝性肺気腫、遺伝性ヘモクロマトーシス、プロテインＣ欠乏症等の凝固−繊維素溶解欠乏症、１型遺伝性血管浮腫、家族性高コレステロール血症等の脂質プロセシング欠乏症、１型乳び血症、無βリポタンパク質血症、Ｉ細胞疾患／偽性ハーラー症候群等のリソソーム蓄積症、ムコ多糖症、サンドホフ／テイ・サックス病、クリグラー・ナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血症、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能低下症、黒色腫、グリカノーシスＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠損症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ、腎性ＤＩ、シャルコーマリートゥース症候群、ペリツェーウス‐メルツバッハー病、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病等の神経変性疾患、ハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー等の数種のポリグルタミン神経障害、ならびに遺伝性クロイツフェルトヤコブ病（プリオンタンパク質プロセシング欠損による）等の海綿状脳症、ファブリー病、シュトロイスラー‐シャインカー症候群、ＣＯＰＤ、ドライアイ疾患、またはシェーグレン病、骨粗しょう症、骨減少症、骨折治癒機転および骨成長（骨修復、骨再生、骨吸収を低減させることおよび骨沈着を増大させることを包含する）、ゴーラム病、先天性筋強直症（トムゼン型およびベッカー型）等のクロライドチャネル病、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、驚愕過剰症、てんかん、びっくり病、脂肪蓄積症、アンジェルマン症候群、ならびに、逆位を伴うＰＣＤ（カルタゲナー症候群としても公知である）、逆位および線毛形成不全を伴わないＰＣＤを包含する線毛の構造および／または機能の遺伝障害を表す用語である先天性線毛運動不全症（ＰＣＤ）を包含する。
【００８９】
いくつかの実施形態において、方法は、患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。ある特定の実施形態において、患者は、ヒトＣＦＴＲの変異型形態を保有する。他の実施形態において、患者は、ヒトＣＦＴＲの下記の変異ΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄの１つまたは複数を保有する。一実施形態において、方法は、ヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、ヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、少なくとも一方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、両方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、少なくとも一方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、両方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。
【００９０】
いくつかの実施形態において、方法は、患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。ある特定の実施形態において、患者は、ヒトＣＦＴＲの変異型形態を保有する。他の実施形態において、患者は、ヒトＣＦＴＲの下記の変異ΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄの１つまたは複数を保有する。一実施形態において、方法は、ヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、ヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、少なくとも一方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、両方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、少なくとも一方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、両方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。
【００９１】
いくつかの態様において、本発明は、患者における骨粗しょう症を治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物Ｉを投与するステップを含む方法を提供する。
【００９２】
ある特定の実施形態において、患者における骨粗しょう症を治療するまたはその重症度を下げる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【００９３】
いくつかの態様において、本発明は、患者における骨減少症を治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物Ｉを投与するステップを含む方法を提供する。
【００９４】
ある特定の実施形態において、患者における骨減少症を治療するまたはその重症度を下げる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【００９５】
いくつかの態様において、本発明は、患者における骨折治癒機転および／または骨修復の方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物Ｉを投与するステップを含む方法を提供する。
【００９６】
ある特定の実施形態において、患者における骨折治癒機転および／または骨修復の方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【００９７】
いくつかの態様において、本発明は、患者における骨吸収を低減させる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物Ｉを投与するステップを含む方法を提供する。
【００９８】
ある特定の実施形態において、患者における骨吸収を低減させる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【００９９】
いくつかの態様において、本発明は、患者における骨沈着を増大させる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物Ｉを投与するステップを含む方法を提供する。
【０１００】
ある特定の実施形態において、患者における骨沈着を増大させる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１０１】
いくつかの態様において、本発明は、患者におけるＣＯＰＤを治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物Ｉを投与するステップを含む方法を提供する。
【０１０２】
ある特定の実施形態において、患者におけるＣＯＰＤを治療するまたはその重症度を下げる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１０３】
いくつかの態様において、本発明は、患者における喫煙誘発性ＣＯＰＤを治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物Ｉを投与するステップを含む方法を提供する。
【０１０４】
ある特定の実施形態において、患者における喫煙誘発性ＣＯＰＤを治療するまたはその重症度を下げる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１０５】
いくつかの態様において、本発明は、患者における慢性気管支炎を治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物Ｉを投与するステップを含む方法を提供する。
【０１０６】
ある特定の実施形態において、患者における慢性気管支炎を治療するまたはその重症度を下げる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１０７】
ある特定の実施形態において、本発明は、正常なＣＦＴＲ機能に関連する疾患を治療するための方法を提供する。これらの疾患は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、反復性気管支炎、急性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、慢性膵炎、再発性膵炎および急性膵炎を包含する膵炎、膵機能不全、精管の先天性両側欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊、軽度肺疾患、特発性膵炎、肝疾患、遺伝性肺気腫、胆石、胃食道逆流性疾患、胃腸悪性腫瘍、炎症性腸疾患、便秘、糖尿病、関節炎、骨粗しょう症、ならびに骨減少症を包含する。
【０１０８】
ある特定の実施形態において、本発明は、遺伝性ヘモクロマトーシス、プロテインＣ欠乏症等の凝固−繊維素溶解欠乏症、１型遺伝性血管浮腫、家族性高コレステロール血症等の脂質プロセシング欠乏症、１型乳び血症、無βリポタンパク質血症、Ｉ細胞疾患／偽性ハーラー症候群等のリソソーム蓄積症、ムコ多糖症、サンドホフ／テイ・サックス病、クリグラー・ナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血症、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能低下症、黒色腫、グリカノーシスＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠損症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ、腎性ＤＩ、シャルコーマリートゥース症候群、ペリツェーウス‐メルツバッハー病、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病等の神経変性疾患、ハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー等の数種のポリグルタミン神経障害、ならびに遺伝性クロイツフェルトヤコブ病（プリオンタンパク質プロセシング欠損による）等の海綿状脳症、ファブリー病、シュトロイスラー‐シャインカー症候群、ゴーラム病、クロライドチャネル病、先天性筋強直症（トムゼン型およびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、驚愕過剰症、てんかん、びっくり病、脂肪蓄積症、アンジェルマン症候群、先天性線毛運動不全症（ＰＣＤ）、逆位を伴うＰＣＤ（カルタゲナー症候群としても公知である）、逆位および線毛形成不全を伴わないＰＣＤ、またはシェーグレン病を包含する正常なＣＦＴＲ機能に関連する疾患を治療するための方法であって、前記哺乳動物に、有効量の本明細書において記述されている通りの形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せを投与するステップを含む方法を提供する。
【０１０９】
代替的な好ましい実施形態によれば、本発明は、前記哺乳動物に組成物を投与するステップを含む嚢胞性線維症を治療する方法であって、前記哺乳動物に、本明細書において記述されている形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せを含む有効量の組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１１０】
本発明によれば、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、これらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物の「有効量」は、上記で列挙した通りの疾患、障害または状態の１つまたは複数を治療するまたはその重症度を下げるために有効な量である。
【０１１１】
形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはこれらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、上記で列挙した通りの疾患、障害または状態の１つまたは複数を治療するまたはその重症度を下げるために有効な任意の量および任意の投与経路を使用して投与され得る。
【０１１２】
ある特定の実施形態において、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、これらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、呼吸および非呼吸上皮の頂端膜中に残留ＣＦＴＲ活性を呈する患者における、嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げるのに有用である。上皮表面における残留ＣＦＴＲ活性の存在は、当技術分野において公知の方法、例えば、標準的な電気生理学的、生化学的または組織化学的技術を使用して容易に検出できる。そのような方法は、インビボもしくはエクスビボ電気生理学的技術、汗もしくは唾液Ｃｌ−濃度の測定、またはエクスビボ生化学的もしくは組織化学的技術を使用してＣＦＴＲ活性を同定し、細胞表面密度をモニターする。そのような方法を使用して、最も一般的な変異ΔＦ５０８が同型接合または異型接合の患者を包含する、様々な異なる変異が異型接合または同型接合の患者において、残留ＣＦＴＲ活性が容易に検出され得る。
【０１１３】
別の実施形態において、本明細書において記述されている形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはこれらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、薬理学的方法または遺伝子療法を使用して、残留ＣＦＴＲ活性が誘発または増進された患者における、嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げるのに有用である。そのような方法は、細胞表面に存在するＣＦＴＲの量を増大させ、それにより、患者においてそれまで存在しなかったＣＦＴＲ活性を誘発する、または患者において残留ＣＦＴＲ活性の既存レベルを増進させる。
【０１１４】
一実施形態において、本明細書において記述されている形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはこれらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、残留ＣＦＴＲ活性を呈するある特定の遺伝子型、例えば、クラスＩＩＩ変異（制御またはゲーティングの障害）、クラスＩＶ変異（コンダクタンスの変化）またはクラスＶ変異（合成の低減）内の患者における、嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げるのに有用である（Ｌｅｅ  Ｒ．  Ｃｈｏｏ−Ｋａｎｇ、Ｐａｍｅｌａ  Ｌ．，  Ｚｅｉｔｌｉｎ、Ｔｙｐｅ  Ｉ，  ＩＩ，  ＩＩＩ，  ＩＶ，  ａｎｄ  Ｖ  ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  Ｔａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  Ｄｅｆｅｃｔｓ  ａｎｄ  Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｙ；  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、６巻：５２１〜５２９頁、２０００年）。残留ＣＦＴＲ活性を呈する他の患者遺伝子型は、これらのクラスの１つが同型接合の、または、クラスＩ変異、クラスＩＩ変異もしくは分類のない変異を包含する、任意の他のクラスの変異と異型接合の患者を包含する。
【０１１５】
一実施形態において、本明細書において記述されている形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはこれらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、ある特定の臨床表現型、例えば、典型的には上皮の頂端膜中の残留ＣＦＴＲ活性の量と相関する中等度から軽度の臨床表現型内の患者における、嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げるのに有用である。そのような表現型は、膵機能不全を呈する患者、または、特発性膵炎および精管の先天性両側欠損、もしくは軽度肺疾患と診断された患者を包含する。
【０１１６】
要求される正確な量は、被験体の種、年齢および全身状態、感染の重症度、特定の作用物質、その投与様式等に応じ、被験体によって変わることになる。本発明の化合物は、好ましくは、投与の容易性および投薬量の均一性のために投薬量単位形態で製剤化される。表現「投薬量単位形態」は、本明細書において使用される場合、治療される患者に適した作用物質の物理的に不連続な単位を指す。しかしながら、本発明の化合物および組成物の１日の総使用量は、妥当な医学的判断の範囲内で、担当医によって決定されることも理解されよう。任意の特定の患者または有機体に対する特異的に有効な用量レベルは、治療されている障害および該障害の重症度；用いられている特定化合物の活性：用いられている特定組成物；患者の年齢、体重、全身の健康状態、性別および食生活；用いられている特定化合物の、投与時間、投与経路および排泄速度；治療の持続時間；用いられている特定化合物と組み合わせて、または同時に使用される薬物；ならびに、医療分野において周知である類似の要因を包含する、様々な要因によって決まることになる。用語「患者」は、本明細書において使用される場合、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。
【０１１７】
本発明の薬学的に許容される組成物は、治療されている感染の重症度に応じて、経口で、直腸内に、非経口で、槽内に、膣内に、腹腔内に、局所的に（散剤、軟膏剤、点滴剤またはパッチ剤によって等）、口腔内に、経口または鼻腔用スプレー等として、ヒトおよび他の動物に投与され得る。ある特定の実施形態において、本発明の化合物は、所望の治療効果を得るために、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇから約５０ｍｇ、好ましくは約０．５ｍｇから約２５ｍｇまでの投薬量レベルで、１日１回または複数回、経口でまたは非経口で投与され得る。
【０１１８】
経口投与用の液体剤形は、薬学的に許容される乳剤、マイクロ乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤を包含するがこれらに限定されない。液体剤形は、活性化合物に加えて、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤、ならびにエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル等の乳化剤、ならびにそれらの混合物等、当技術分野において一般に使用される不活性賦形剤を含有し得る。経口組成物は、不活性賦形剤のほかに、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤等のアジュバント、甘味剤、香味剤、ならびに着香剤も包含し得る。
【０１１９】
注射用調製物、例えば無菌注射用の水性または油性懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤と懸濁化剤とを使用する公知の技術によって製剤化され得る。無菌注射用調製物は、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液等、非毒性で非経口的に許容される賦形剤または溶媒中の無菌注射用の溶液、懸濁液またはエマルションであってもよい。許容されるビヒクルおよび溶媒のうち、用いられ得るのは、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および生理食塩液である。加えて、無菌固定油は、溶媒または懸濁媒として慣行的に用いられる。この目的のために、合成モノグリセリドまたは合成ジグリセリドを包含する任意の無刺激性固定油が用いられ得る。加えて、オレイン酸等の脂肪酸が注射剤の調製において使用される。
【０１２０】
注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通す濾過によって、または、使用前に、滅菌水もしくは他の無菌注射用媒体中に溶解もしくは分散され得る無菌の固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって、滅菌できる。
【０１２１】
本発明の化合物の効果を延長するためには、多くの場合、皮下または筋肉内注射からの化合物の吸収を遅らせることが望ましい。これは、難水溶性である結晶性または非結晶性材料の液体懸濁液を使用することによって実現され得る。その結果、化合物の吸収の速度はその溶解の速度に依存し、この速度は同様に、結晶サイズおよび結晶性形態に依存する場合がある。代替として、非経口投与された化合物形態の遅延吸収は、化合物を油ビヒクルに溶解または懸濁することによって実現される。注射用デポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリド等の生分解性ポリマー中に化合物のマイクロカプセル化マトリクスを形成することによって作製される。化合物とポリマーとの比率および用いられる特定のポリマーの性質に応じて、化合物放出の速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例は、ポリ（オルトエステル）およびポリ（酸無水物）を包含する。デポー注射用製剤は、生体組織に適合するリポソームまたはマイクロエマルションに化合物を封入することによっても調製される。
【０１２２】
直腸または膣内投与用の組成物は、好ましくは、本発明の化合物を、常温では固体だが体温では液体となり、したがって直腸または膣腔内で融解して活性化合物を放出する、ココアバター、ポリエチレングリコールまたは坐剤蝋等の適切な非刺激性の添加剤または担体と混合することによって調製できる、坐剤である。
【０１２３】
経口投与用の固形剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤を包含する。そのような固形剤形において、活性化合物は、少なくとも１種の、不活性で薬学的に許容される、クエン酸ナトリウムまたはリン酸カルシウム等の添加剤または担体、ならびに／あるいは、ａ）デンプン類、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸等の充填剤または増量剤、ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルジネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロースおよびアカシア等の結合剤、ｃ）グリセロール等の保湿剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のシリケート、および炭酸ナトリウム等の崩壊剤、ｅ）パラフィン等の溶液遅延剤、ｆ）第四級アンモニウム化合物等の吸収加速剤、ｇ）例えば、セチルアルコールおよびグリセロールモノステアレート等の湿潤剤、ｈ）カオリンおよびベントナイト粘土等の吸収剤、ならびに、ｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびそれらの混合物等の滑沢剤と混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤の事例において、剤形は緩衝剤も含み得る。
【０１２４】
同様の種類の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖等の添加剤、および高分子量ポリエチレングリコール等を使用して、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル内の充填剤として用いることもできる。錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固形剤形は、腸溶性コーティングおよび医薬製剤分野において周知である他のコーティング等、コーティングおよび外殻（ｓｈｅｌｌ）を伴って調製され得る。それらは、不透明化剤を場合により含有してよく、消化管のある特定の部分において、場合により遅延様式で、有効成分（複数可）のみを、またはそれを優先的に放出する組成物のものであってもよい。使用され得る包埋組成物の例は、ポリマー性物質および蝋を包含する。同様の種類の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖等の添加剤、および高分子量ポリエチレングリコール等を使用して、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル内の充填剤として用いることもできる。
【０１２５】
活性化合物は、１種または複数の上記した通りの添加剤を加えたマイクロカプセル化形態であってもよい。錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固形剤形は、腸溶性コーティング、放出制御コーティング、および医薬製剤分野において周知である他のコーティング等、コーティングおよび外殻を伴って調製され得る。そのような固形剤形において、活性化合物は、スクロース、ラクトースまたはデンプン等、少なくとも１種の不活性賦形剤と混和され得る。そのような剤形は、通常の実務と同様に、不活性賦形剤以外の追加物質、例えば、錠剤化滑沢剤、ならびにステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セルロース等の他の錠剤化助剤も含み得る。カプセル剤、錠剤および丸剤の事例において、剤形は、緩衝剤も含み得る。それらは、不透明化剤を場合により含有してよく、消化管のある特定の部分において、場合により遅延様式で、有効成分（複数可）のみを、またはそれを優先的に放出する組成物のものであってもよい。使用され得る包埋組成物の例は、ポリマー性物質および蝋を包含する。
【０１２６】
本発明の化合物の局所または経皮投与用の剤形は、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、散剤、液剤、スプレー剤、吸入剤またはパッチ剤を包含する。活性成分は、無菌条件下で、薬学的に許容される担体および必要とされる任意の保存剤または緩衝剤と、要求され得る通りに混和される。眼科用製剤、点耳剤および点眼剤も本発明の範囲内であると企図されている。加えて、本発明は、体内への化合物の制御送達を提供するという付加的な利点を有する、経皮パッチ剤の使用を企図している。そのような剤形は、化合物を適正な媒質に溶解または分注することによって調製される。皮膚を横断する化合物のフラックスを増大させるために、吸収エンハンサーを使用してもよい。速度は、速度制御膜を提供すること、または化合物をポリマーマトリクスもしくはゲルに分散させることのいずれかによって制御できる。
【０１２７】
本明細書において記述されている形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物を、併用療法において用いてよいこと、すなわち、本明細書において記述されている形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物を、１種または複数の他の所望の治療薬または医療処置と同時に、その前に、またはその後に投与してよいことも理解されよう。併用レジメンにおいて用いるための療法（治療薬または処置）の特定の組合せでは、所望の治療薬および／または処置と達成される所望の治療効果との適合性を考慮することになる。用いられる療法が、同じ障害について所望の効果を達成し得る（例えば、発明化合物を、同じ障害を治療するために使用される別の作用物質と同時に投与してよい）こと、または該療法が異なる効果を達成し得る（例えば、あらゆる副作用の制御）ことも理解されよう。本明細書において使用される場合、特定の疾患または状態を治療または予防するために通常投与される追加の治療剤は、「治療されている疾患または状態に適している」として公知である。
【０１２８】
一実施形態において、追加の作用物質は、粘液溶解剤、気管支拡張剤、抗生物質、抗感染剤、抗炎症剤、本発明の化合物以外のＣＦＴＲモジュレーター、または栄養剤から選択される。
【０１２９】
一実施形態において、追加の作用物質は抗生物質である。本明細書において有用である例示的な抗生物質は、トブラマイシン吸入パウダー（ＴＩＰ）を包含するトブラマイシン、アジスロマイシン、エアゾール化形態のアズトレオナムを包含するアズトレオナム、アミカシンのリポソーム製剤を包含するアミカシン、吸入による投与に適切なシプロフロキサシンの製剤を包含するシプロフロキサシン、レボフロキサシンのエアゾール化製剤を包含するレボフロキサシン（ｌｅｖｏｆｌａｘａｃｉｎ）、ならびに２種の抗生物質、例えばホスホマイシンおよびトブラマイシンの組合せを包含する。
【０１３０】
別の実施形態において、追加の作用物質は粘液溶解剤（ｍｕｃｏｌｙｔｅ）である。本明細書において有用である例示的な粘液溶解剤は、Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ（登録商標）を包含する。
【０１３１】
別の実施形態において、追加の作用物質は気管支拡張剤である。例示的な気管支拡張剤は、アルブテロール、硫酸メタプロテレノール（ｍｅｔａｐｒｏｔｅｎｅｒｏｌ）、酢酸ピルブテロール、サルメテロールまたは硫酸テルブタリン（ｔｅｔｒａｂｕｌｉｎｅ）を包含する。
【０１３２】
別の実施形態において、追加の作用物質は、肺気道表面の液体を修復する際に有効である。そのような作用物質は、細胞内外での塩の動きを改善し、肺気道中の粘液がより水和され、したがってより簡単に浄化されることを可能にする。例示的なそのような作用物質は、高張食塩水、デヌホソル四ナトリウム（［［（３Ｓ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１−イル）−３−ヒドロキシオキソラン−２−イル］メトキシ−ヒドロキシホスホリル］［［［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシオキソラン−２−イル］メトキシ−ヒドロキシホスホリル］オキシ−ヒドロキシホスホリル］ハイドロジェンホスフェート）、またはブロンキトール（マンニトールの吸入製剤）を包含する。
【０１３３】
別の実施形態において、追加の作用物質は、抗炎症剤、すなわち、肺における炎症を低減させることができる作用物質である。本明細書において有用である例示的なそのような作用物質は、イブプロフェン、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、シルデナフィル、吸入グルタチオン、ピオグリタゾン、ヒドロキシクロロキンまたはシンバスタチンを包含する。
【０１３４】
別の実施形態において、追加の作用物質は、チャネルを遮断することによって直接的に、またはＥＮａＣ活性の増大を招くプロテアーゼ（例えば、セリンプロテアーゼ、チャネル活性化プロテアーゼ）の調節によって間接的にのいずれかで、上皮型ナトリウムチャネル遮断薬（ＥＮａＣ）の活性を低減させる。例示的なそのような作用物質は、カモスタット（トリプシン様プロテアーゼ阻害剤）、ＱＡＵ１４５、５５２−０２、ＧＳ−９４１１、ＩＮＯ−４９９５、エーロライト（Ａｅｒｏｌｙｔｉｃ）およびアミロライドを包含する。上皮型ナトリウムチャネル遮断薬（ＥＮａＣ）の活性を低減させる追加の作用物質は、例えばＰＣＴ公開第ＷＯ２００９／０７４５７５号において見られ、その全内容はその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１３５】
本明細書において記述されている他の疾患の中で、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌおよび形態Ａ−ＨＣｌ等のＣＦＴＲモジュレーターと、ＥＮａＣの活性を低減させる作用物質との組合せは、リドル症候群；嚢胞性線維症、先天性線毛運動不全症、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、喘息、呼吸器感染症、肺癌、口内乾燥および乾性角結膜炎（ｋｅｒａｔｏｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ  ｓｉｒｅ）、呼吸器感染症（急性および慢性；ウイルス性および細菌性）ならびに肺癌を包含する炎症性またはアレルギー性状態を治療するために使用される。
【０１３６】
形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌおよび形態Ａ−ＨＣｌ等のＣＦＴＲモジュレーターと、ＥＮａＣの活性を低減させる作用物質との組合せは、上皮の表面上の表面保護液の生理機能の異常をおそらく伴う、上皮全体にわたる体液調節の異常に関連する呼吸器疾患以外の疾患、例えば、口内乾燥（ドライマウス）または乾性角結膜炎（ドライアイ）も包含する、上皮型ナトリウムチャネルの遮断によって媒介される疾患を治療するのにも有用である。さらに、腎臓における上皮型ナトリウムチャネルの遮断を使用して利尿を促進し、それにより血圧低下作用を誘発することができる。
【０１３７】
喘息は、内因性（非アレルギー性）喘息および外因性（アレルギー性）喘息の両方、軽度喘息、中等度喘息、重度喘息、気管支炎喘息、運動誘発性喘息、職業性喘息および細菌感染後に誘発される喘息を包含する。喘息の治療はまた、例えば、４または５歳未満で、喘鳴症状を呈し、かつ、主要な医学的関心事である確立された患者カテゴリーであり、現在は多くの場合、初期型または早期喘息患者として同定されている、「喘鳴乳幼児」として診断されたまたは診断可能な被験体の治療を包括するものとして理解されている。（便宜上、この特定の喘息状態を「喘鳴乳幼児症候群」と称する。）喘息の治療における予防的効果は、症候性発作の、例えば急性喘息発作もしくは気管支収縮発作の頻度もしくは重症度の低減、肺機能の改善、または気道過敏性の改善によって証明されるであろう。該効果は、他の対症療法、すなわち、症候性発作が発生した際にそれを制限するまたは中断させるための、またはそのように意図された療法、例えば抗炎症（例えばコルチコステロイド）または気管支拡張の必要性が低減することによってさらに証明され得る。喘息における予防的利益は、特に、「モーニングディップ」を起こしやすい被験体において明白となり得る。「モーニングディップ」は、喘息患者のかなりの割合に共通しており、かつ、例えば、午前４時〜６時頃の間、すなわち、通常、先に施したいかなる喘息対症療法からも実質的に離れた時刻における喘息発作を特徴とする、認定された喘息症候群である。
【０１３８】
慢性閉塞性肺疾患は、慢性気管支炎またはそれに関連する呼吸困難、肺気腫、ならびに、他の薬物療法、特に他の吸入薬物療法の結果としての気道過敏性の増悪を包含する。いくつかの実施形態において、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌおよび形態Ａ−ＨＣｌ等のＣＦＴＲモジュレーターと、ＥＮａＣの活性を低減させる作用物質との組合せは、例えば、急性、アラキジン酸性（ａｒａｃｈｉｄｉｃ）、カタル性、クループ性（ｃｒｏｕｐｕｓ）、慢性または結核性気管支炎を包含する、種類または起源を問わない気管支炎の治療に有用である。
【０１３９】
別の実施形態において、追加の作用物質は、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌおよび形態Ａ−ＨＣｌ以外のＣＦＴＲモジュレーター、すなわち、ＣＦＴＲ活性を調節する効果を有する作用物質である。例示的なそのような作用物質は、アタルレン（「ＰＴＣ１２４（登録商標）」；３−［５−（２−フルオロフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］安息香酸）、シナプルチド、ランコブチド（ｌａｎｃｏｖｕｔｉｄｅ）、デペレスタット（ヒト組換え好中球エラスターゼ阻害剤）、コビプロストン（７−｛（２Ｒ，４ａＲ，５Ｒ，７ａＲ）−２−［（３Ｓ）−１，１−ジフルオロ−３−メチルペンチル］−２−ヒドロキシ−６−オキソオクタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピラン−５−イル｝ヘプタン酸）、または（３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸を包含する。別の実施形態において、追加の作用物質は、（３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸である。
【０１４０】
別の実施形態において、追加の作用物質は栄養剤である。例示的なそのような作用物質は、Ｐａｎｃｒｅａｓｅ（登録商標）、Ｐａｎｃｒｅａｃａｒｂ（登録商標）、Ｕｌｔｒａｓｅ（登録商標）もしくはＣｒｅｏｎ（登録商標）を包含するパンクレリパーゼ（パンクレアチン（ｐａｎｃｒｅａｔｉｎｇ）酵素補充）；Ｌｉｐｒｏｔｏｍａｓｅ（登録商標）（旧Ｔｒｉｚｙｔｅｋ（登録商標））、Ａｑｕａｄｅｋｓ（登録商標）、またはグルタチオン吸入を包含する。一実施形態において、追加栄養剤はパンクレリパーゼである。
【０１４１】
一実施形態において、追加の作用物質は、本発明の化合物以外のＣＦＴＲモジュレーターである。
【０１４２】
本発明の組成物中に存在する追加の治療剤の量は、その治療剤を唯一の活性剤として含む組成物中で通常投与されるであろう量以下となる。好ましくは、現在開示されている組成物中における追加の治療剤の量は、その作用物質を唯一の治療活性剤として含む組成物中に通常存在する量の約５０％から１００％までの範囲となる。
【０１４３】
本明細書において記述されている形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、プロテーゼ、人工弁、血管移植片、ステントおよびカテーテル等の移植可能な医療デバイスをコーティングするための組成物に組み込まれてもよい。したがって、本発明は、別の態様において、概して上述した通りの、ならびに本明細書におけるクラスおよびサブクラス内の本発明の化合物と、移植可能なデバイスをコーティングするのに適切な担体とを含む、前記移植可能なデバイスをコーティングするための組成物を包含する。さらに別の態様において、本発明は、概して上述した通りの、ならびに本明細書におけるクラスおよびサブクラス内の本発明の化合物と、移植可能なデバイスをコーティングするのに適切な担体とを含む組成物でコーティングされた、前記移植可能なデバイスを包含する。適切なコーティングおよびコーティングされた移植可能なデバイスの一般的調製は、米国特許第６，０９９，５６２号、同第５，８８６，０２６号および同第５，３０４，１２１号において記述されている。コーティングは、典型的には、ヒドロゲルポリマー、ポリメチルジシロキサン、ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール、ポリ乳酸、エチレン酢酸ビニル、およびそれらの混合物等の生体適合性ポリマー材料である。コーティングは、場合により、組成物において制御放出特徴を付与するために、フルオロシリコーン、多糖、ポリエチレングリコール、リン脂質またはそれらの組合せの適切なトップコートによってさらに被覆され得る。
【０１４４】
本発明の別の態様は、生物学的試料または患者におけるＣＦＴＲ活性を（例えばインビトロまたはインビボで）調節することに関し、その方法は、本明細書において記述されている形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物を、該患者に投与する、または前記生物学的試料と接触させるステップを含む。用語「生物学的試料」は、本明細書において使用される場合、細胞培養物またはその抽出物；哺乳動物から得た生検材料またはその抽出物；および血液、唾液、尿、糞便、精液、涙もしくは他の体液、またはその抽出物を包含するがこれらに限定されない。
【０１４５】
生物学的試料におけるＣＦＴＲの調節は、当業者に公知である様々な目的で有用である。そのような目的の例は、生物学的および病理学的現象におけるＣＦＴＲの研究；ならびにＣＦＴＲの新たなモジュレーターの比較評価を包含するがこれらに限定されない。
【０１４６】
また別の実施形態において、アニオンチャネルの活性をインビトロまたはインビボで調節する方法であって、前記チャネルを、本明細書において記述されている形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物と接触させるステップを含む方法が提供される。好ましい実施形態において、アニオンチャネルは、クロライドチャネルまたは重炭酸塩チャネルである。他の好ましい実施形態において、アニオンチャネルはクロライドチャネルである。
【０１４７】
代替的な実施形態によれば、本発明は、細胞の膜中の機能的ＣＦＴＲの数を増大させる方法であって、前記細胞を、本明細書において記述されている形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物と接触させるステップを含む方法を提供する。
【０１４８】
別の好ましい実施形態によれば、ＣＦＴＲの活性は、膜貫通電位を測定することによって測定される。生物学的試料において膜を横断する電位を測定するための手段は、光学的膜電位アッセイまたは他の電気生理学的方法等、当技術分野において公知の方法のいずれかを用い得る。
【０１４９】
光学的膜電位アッセイでは、ＧｏｎｚａｌｅｚおよびＴｓｉｅｎによって記述されている電圧感受性ＦＲＥＴセンサー（Ｇｏｎｚａｌｅｚ，  Ｊ．  Ｅ．およびＲ．  Ｙ．  Ｔｓｉｅｎ（１９９５年）、「Ｖｏｌｔａｇｅ  ｓｅｎｓｉｎｇ  ｂｙ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｅｎｅｒｇｙ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｉｎ  ｓｉｎｇｌｅ  ｃｅｌｌｓ．」、Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｊ、６９巻（４号）：１２７２〜８０頁、ならびにＧｏｎｚａｌｅｚ，  Ｊ．  Ｅ．およびＲ．  Ｙ．  Ｔｓｉｅｎ（１９９７年）、「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｔｈａｔ  ｕｓｅ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｅｎｅｒｇｙ  ｔｒａｎｓｆｅｒ」、Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ、４巻（４号）：２６９〜７７頁を参照）を、電圧／イオンプローブリーダー（ＶＩＰＲ）等の蛍光変化を測定するための機器使用（Ｇｏｎｚａｌｅｚ，  Ｊ．  Ｅ．、Ｋ．  Ｏａｄｅｓら（１９９９年）、「Ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ  ａｓｓａｙｓ  ａｎｄ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｉｏｎ−ｃｈａｎｎｅｌ  ｔａｒｇｅｔｓ」、Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ、４巻（９号）：４３１〜４３９頁を参照）と組み合わせて利用する。
【０１５０】
これらの電圧感受性アッセイは、膜可溶性の電圧感受性染料ＤｉＳＢＡＣ２（３）と、原形質膜の外葉に付着しており、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）ドナーとして作用する蛍光リン脂質ＣＣ２−ＤＭＰＥとの間のＦＲＥＴにおける変化に基づく。膜電位（Ｖｍ）における変化は、負に帯電したＤｉＳＢＡＣ２（３）を原形質膜全体にわたって再分配させ、それに応じてＣＣ２−ＤＭＰＥからのエネルギー移動の量が変化する。蛍光発光における変化は、９６または３８４ウェルマイクロタイタープレート中で細胞ベースのスクリーニングを行うように設計されて統合された液体ハンドラーおよび蛍光検出器であるＶＩＰＲ（商標）ＩＩを使用してモニターできる。
【０１５１】
別の態様において、本発明は、生物学的試料におけるＣＦＴＲまたはその断片の活性をインビトロまたはインビボで測定する際に使用するためのキットであって、（ｉ）形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または上記実施形態のいずれかを含む組成物と、（ｉｉ）ａ）組成物を生物学的試料と接触させ、ｂ）前記ＣＦＴＲまたはその断片の活性を測定するための取扱説明書とを含むキットを提供する。一実施形態において、キットは、ａ）追加化合物を生物学的試料と接触させ、ｂ）前記追加化合物の存在下で、前記ＣＦＴＲまたはその断片の活性を測定し、ｃ）追加化合物の存在下でのＣＦＴＲの活性を、本明細書において記述されている形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはそれらの任意の組合せの存在下でのＣＦＴＲの活性と比較するための取扱説明書をさらに含む。一実施形態において、前記ＣＦＴＲまたはその断片の活性を比較するステップは、前記ＣＦＴＲまたはその断片の密度の測定を提供する。好ましい実施形態において、キットは、ＣＦＴＲの密度を測定するために使用される。
【０１５２】
一態様において、本発明は、式９ａの化合物
【０１５３】
【化２】
0005877157.tif 000003
または薬学的に許容されるその塩を調製するためのプロセスであって、
ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキサノールをＢｏｃ無水物と接触させて、式Ａの化合物
【０１５４】
【化３】
0005877157.tif 000004
を生じさせるステップと、
式Ａの化合物をメタンスルホン酸と接触させて、式Ｂの化合物
【０１５５】
【化４】
0005877157.tif 000005
を生じさせるステップと、
式Ｂの化合物をトリフルオロ酢酸と接触させて、式Ｃの化合物
【０１５６】
【化５】
0005877157.tif 000006
を生じさせるステップと、
式Ｃの化合物を水酸化物と接触させて、式９ａの化合物を生じさせるステップと
を含むプロセスを包含する。
【０１５７】
別の実施形態において、方法は、式９ａの化合物を塩酸と接触させて、式９の化合物を生じさせるステップをさらに含む。
【０１５８】
【化６】
0005877157.tif 000007
本明細書において記述されている発明をより完全に理解できるように、下記実施例を示す。これらの実施例は、例示のみを目的とし、本発明をいかようにも限定するものとして解釈されるべきではないことを理解すべきである。
【実施例】
【０１５９】
方法および材料
ＸＲＰＤ（Ｘ線粉末回折）
機器１
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）データは、リガク／ＭＳＣミニフレックスデスクトップ粉末Ｘ線回折装置（Ｒｉｇａｋｕ、Ｔｈｅ  Ｗｏｏｄｌａｎｄｓ、ＴＸ）を使用して、室温で記録する。Ｘ線は、Ｋβ抑制フィルターを用い、３０ｋＶおよび１５ｍＡで操作されるＣｕ管を使用して生成する。発散スリットは、それぞれ４．２度およびスリット０．３ｍｍに設定された散乱および受光スリットと共に可変である。スキャンモードは、０．０２度の刻み幅および２．０秒のカウント時間を用いる固定時間（ＦＴ）である。参照標準物質：７５％方ソーダ石（Ｎａ３Ａｌ４Ｓｉ４Ｏ１２Ｃｌ）および２５％シリコン（Ｒｉｇａｋｕ、カタログ番号２１００／ＡＬＳ）を使用して、粉末Ｘ線回折装置を較正する。ゼロバックグラウンド試料ホルダー（ＳＨ−ＬＢＳＩ５１１−ＲＮＤＢ）付きの６試料台を使用する。粉末試料を凹部に置き、スライドガラスで平らにする。
【０１６０】
機器２
代替として、粉末Ｘ線回折測定は、室温で銅放射線（１．５４０６０Ａ）を用いるＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌのエキスパートプロ回折装置を使用して実施した。入射ビーム光学は、試料上および回折ビーム側における一定の照射長を確実にするための可変発散スリットで構成されたものであった。高速線形固体状態検出器は、スキャンモードにおいて測定された２．１２度２θの有効長で使用した。粉末試料をゼロバックグラウンドシリコンホルダーの凹部上に詰め、回転を実施してより良好な統計を達成した。対称スキャンは、０．０１７度の刻みサイズおよび１５．５秒のスキャンステップ時間を用い、４〜４０度２θで測定した。
【０１６１】
機器３
代替として、高分解能データは、ビームラインＩＤ３１（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｓｙｎｃｈｒｏｔｒｏｎ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｆａｃｉｌｉｔｙ、Ｇｒｅｎｏｂｌｅ、フランス）にて室温で収集した。Ｘ線は、３つの１１ｍｍギャップ真空外アンジュレーター（ｅｘ−ｖａｃｕｕｍ  ｕｎｄｕｌａｔｏｒ）によって生じさせる。極低温に冷却した二結晶モノクロメーター（Ｓｉ（１１１）結晶）によってビームを単色化する。水冷式スリットは、モノクロメーターへの入射ビームおよび試料に伝達される単色ビームのサイズを、０．５〜２．５ｍｍ（水平方向）×０．１〜１．５ｍｍ（垂直方向）の範囲内で限定する。実験に使用した波長は１．２９９８４（３）Åであった。回折装置は、回折強度を２θの関数として測定するために垂直にスキャンされる９の検出器の列からなる。各検出器の前にＳｉ（１１１）アナライザー結晶を置き、検出器チャネルはおよそ２°間隔とする。この回折装置は、ピーク幅が０．００３°の狭さである極めて精密な高分解能回折パターンを生じさせることができ、ピーク位置の精度は０．０００１°程度である。マテリアルズスタジオ（Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｓｔｕｄｉｏ）（Ｒｅｆｌｅｘ  ｍｏｄｕｌｅ）を使用して粉末回折データを処理し、インデックスを付けた。マテリアルズスタジオの粉末解析モジュールを使用して構造を解析した。得られた溶液を構造的実現可能性について評定し、その後、リートベルトの精密化手順を使用して精密化した。
【０１６２】
形態Ｂについての実施例において記述されているＸＰＲＤスペクトルは、機器１（図７Ａ）または機器２（図７Ｂ）を上述した設定で使用して記録した。形態Ｂ−ＨＣｌおよび形態Ａ−ＨＣｌについての実施例において記述されているＸＰＲＤスペクトルは、機器２を上述した設定で使用して記録した。形態Ａ−ＨＣｌおよび形態Ｂ−ＨＣｌについての結晶系、空間群および単位格子寸法は、機器３を使用して決定した。
【０１６３】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）は、ＴＡ  ＤＳＣ  Ｑ２０００示差走査熱量計（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｎｅｗ  Ｃａｓｔｌｅ，ＤＥ）を使用して実施した。機器をインジウムで較正した。１つ穴の開いた蓋を使用して圧着された密封皿に、およそ２〜３ｍｇの試料を秤量して入れた。ＤＳＣ試料を、２５℃から３１５℃まで、１０℃／分の加熱速度でスキャンした。Ｔｈｅｒｍａｌ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ  Ｑ  Ｓｅｒｉｅｓ（商標）ソフトウェアによってデータを収集し、ユニバーサルアナリシスソフトウェア（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｎｅｗ  Ｃａｓｔｌｅ、ＤＥ）によって分析した。
【０１６４】
熱重量分析（ＴＧＡ）
熱重量分析（ＴＧＡ）データは、ＴＡ  Ｑ５００熱重量分析器（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｎｅｗ  Ｃａｓｔｌｅ，ＤＥ）で収集した。およそ３〜５ｍｇの重量を持つ試料を、２５℃から３５０℃まで、１０℃／分の加熱速度でスキャンした。Ｔｈｅｒｍａｌ  Ａｄｖａｎｔａｇｅ  Ｑ  Ｓｅｒｉｅｓ（商標）ソフトウェアによってデータを収集し、ユニバーサルアナリシスソフトウェア（ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｎｅｗ  Ｃａｓｔｌｅ、ＤＥ）によって分析した。
【０１６５】
ＦＴＩＲ分光法
ＦＴＩＲスペクトルは、スマートオービットサンプリングコンパートメント（多重反射型減衰全反射アクセサリー）、４５度のダイヤモンド窓を用いて、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ニコレット６７００  ＦＴ−ＩＲ光度計から収集した。データ収集および分析に使用されるソフトウェアは、オムニック７．４である。収集設定は下記の通りであった：
検出器：ＤＴＧＳ  ＫＢｒ、
ビームスプリッター：Ｇｅ／ＫＢｒ、
光源：エバーグローＩＲ、
スキャン範囲：４０００〜４００ｃｍ−１、
ゲイン：８．０、
光学的速度：０．６３２９ｃｍ／秒、
開口：１００、
スキャン数：３２、および
分解能：４ｃｍ−１。
【０１６６】
粉末試料をダイヤモンド結晶に直接置き、圧力を加え、試料の表面をダイヤモンド結晶の表面と一致させた。バックグラウンドスペクトルを収集し、次いで、試料スペクトルを収集した。
【０１６７】
固体状態核磁気分光法
固体状態核磁気分光法（ＳＳＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ４００ＭＨｚプロトン周波数広口径分光計で獲得した。プロトン緩和縦緩和時間（１Ｈ  Ｔ１）は、プロトン検出したプロトン飽和回復データを指数関数に当てはめることによって得た。これらの値を使用して、炭素交差分極マジック角回転実験の最適なリサイクル遅延（１３Ｃ  ＣＰＭＡＳ）を設定し、典型的には、１．２×１Ｈ  Ｔ１から１．５×１Ｈ  Ｔ１の間に設定した。炭素スペクトルは、プロトンチャネル上の線形振幅ランプ（５０％から１００％まで）および１００ｋＨｚ  ＴＰＰＭデカップリングを使用し、２ｍｓの接触時間で獲得した。典型的なマジック角回転（ＭＡＳ）スピードは１５．０ｋＨｚであった。フッ素スペクトルは、プロトンデカップリングした直接分極ＭＡＳ実験を使用して得た。１００ｋＨｚ  ＴＰＰＭデカップリングを使用した。リサイクル遅延は、≧５×１９Ｆ  Ｔ１に設定した。フッ素縦緩和時間（１９Ｆ  Ｔ１）は、フッ素検出しプロトンデカップリングした飽和回復データを指数関数に当てはめることによって得た。２９．５ｐｐｍに設定した固相アダマンタンの高磁場共鳴を使用して、炭素およびフッ素スペクトルを外部参照した。この手順を使用して、炭素スペクトルは０ｐｐｍのテトラメチルシランを間接的に参照し、フッ素スペクトルは０ｐｐｍのニトロメタンを間接的に参照した。
【０１６８】
調製実施例：７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（９）
【０１６９】
【化７】
0005877157.tif 000008
ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサノール（Ａ）の調製、方法１
炭酸ナトリウム（９２０．２ｇ、８．６８２ｍｏｌ、２当量）を反応容器に添加し、続いて水（３．０００Ｌ、６体積）を添加し、撹拌した。ジクロロメタン（ＤＣＭ、４．０００Ｌ、４体積）、続いてｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキサノール（５００．０ｇ、４．３４１ｍｏｌ）を添加して、二相反応混合物を生成し、これを室温で激しく撹拌した。次いで、ＤＣＭ（２体積）中のＢｏｃ２Ｏ（９４７．４ｇ、９９７．３ｍＬ、４．３４１ｍｏｌ、１当量）の溶液を容器に迅速に滴下添加し、得られた反応混合物を室温で終夜撹拌した。次いで、反応混合物を濾過し、フィルターケーキを水（２×８体積）で洗浄した。生成物が圧縮ケーキになるまで真空乾燥させた。次いで、ケーキを真空オーブン中３５℃で２４時間乾燥させて、８３０ｇのｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサノール（Ａ）を結晶性固体として得た。
【０１７０】
ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサノール（Ａ）の調製、方法２
２つの５０Ｌ三つ口丸底フラスコは、それぞれ機械的撹拌器および熱電対を備えたものであった。フラスコを冷却槽に入れ、次いで、各フラスコに水（８．８７Ｌ）およびｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキサノール（１４７９ｇ）を入れた。約１０から３０分後、ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキサノールが溶解し、炭酸カリウム（１７７４．６ｇ）を各フラスコに加えた。約１０から２０分後、炭酸カリウムが溶解し、ＤＣＭ（２．９６Ｌ）を各フラスコに入れた。次いで、温度を２０から３０℃に維持するような速度で、ＤＣＭ（１４７９ｍＬ）中のＢｏｃ無水物（３０８２．６ｇ）を各フラスコに加えた。氷／水浴を使用して、発熱を制御し、添加を加速させ、これにはおよそ１から２時間を要した。添加中に懸濁液が形成され、反応混合物を室温に加温させ、Ｂｏｃ無水物の消失に基づいて反応が完了するまで終夜撹拌した。次いで、ヘプタン（６Ｌ）を各フラスコに入れ、混合物をおよそ０から５℃に冷却した。同じフィルターを使用する濾過によって各フラスコから固体を収集した。合わせた固体を、ヘプタン（６Ｌ）、続いて水（８Ｌ）で洗浄した。機械的撹拌器を備えた適正サイズの鉢に固体を入れた。水（１２Ｌ）およびヘプタン（６Ｌ）を添加し、得られた懸濁液を３０から６０分間機械的に撹拌した。固体を濾過によって収集し、次いで、フィルター上、水（８Ｌ）およびヘプタン（８Ｌ）で洗浄し、フィルター上で３日間風乾させ、その後、３０から３５℃で一定重量に真空乾燥させて、生成物を白色固体として得た。
【０１７１】
ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシルメタンスルホネート（Ｂ）の調製、方法１
１２Ｌフラスコは、窒素流および機械的撹拌器を備えたものであった。ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサノール（７５０ｇ、３．４８４ｍｏｌ）、続いてテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、６．０００Ｌ、８体積）を導入し、混合物を撹拌した。トリエチルアミン（３７０．２ｇ、５０９．９ｍＬ、３．６５８ｍｏｌ、１．０５当量）を添加し、混合物を０℃に冷却した。混合物の温度を５℃未満に保ちながら、塩化メタンスルホニル（４１９．０ｇ、２８３．１ｍＬ、３．６５８ｍｏｌ、１．０５当量）を慎重に滴下添加した。添加後、混合物を０℃で３時間撹拌し、次いで、次第に室温（１７℃）に加温し、終夜（約１５時間）撹拌した。混合物を水（６体積）でクエンチし、１５分間撹拌した。酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ、９．０００Ｌ、１２体積）を添加し、撹拌を１５分間続けた。撹拌を停止し、混合物を１０分間静置させ、水相を除去した。１ＮのＨＣｌ（６体積、４．５Ｌ）を添加し、撹拌を１５分間続けた。撹拌を停止し、水相を除去した。１０％ｗ／ｖのＮａＨＣＯ３（４．５Ｌ、６体積）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。撹拌を停止し、水相を除去した。水（６体積、４．５Ｌ）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。水層を除去し、有機層をポリッシュ濾過し、４体積に濃縮した。ヘプタン（５．５体積、４Ｌ）を添加し、混合物を再度濃縮乾固して、９８８ｇのｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシルメタンスルホネートを結果として生じさせた。
【０１７２】
ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシルメタンスルホネート（Ｂ）の調製、方法２
機械的撹拌器、添加漏斗、窒素入口、熱電対および乾燥管を備えた三つ口丸底フラスコを、冷却槽に入れた。ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサノール（２５９９ｇ、１２．０７ｍｏｌ、１．０当量）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（２０．８Ｌ）およびトリエチルアミン（１４６６ｇ、１４．４９ｍｏｌ、１．２当量）をフラスコに加えた。混合物を氷水浴で冷却し、撹拌した。塩化メタンスルホニル（１４６６ｇ、１２．８０ｍｏｌ、１．０６当量）を、添加漏斗により１時間かけて滴下添加した。添加が完了したら、冷却浴を除去し、出発材料が消費されたことをＴＬＣが示すまで（約３０分）反応混合物を撹拌した。次いで、反応混合物を、塩化水素酸水溶液（６．７Ｌの水中２２３ｍＬのＨＣｌ）およびＥｔＯＡｃ（１０．４Ｌ）でクエンチした。混合物を常温でおよそ１０から２０分間撹拌し、次いで、分液漏斗に移した。層を分離し、水層を廃棄した。有機層を、水（２×４．５Ｌ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１×４．５Ｌ）で洗浄し、５から１０分間撹拌しながら、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、フィルターケーキをＥｔＯＡｃ（２×６００ｍＬ）で洗浄した。合わせた洗浄液および濾液を減圧下４０℃で濃縮すると、白色固体が残った。固体をヘプタン（３Ｌ）に溶かし、氷／メタノール冷却槽中で冷却した。さらなるヘプタン（５Ｌ）を添加し、混合物を０から５℃で１時間以上撹拌した。次いで、固体を濾過によって収集し、冷ヘプタン（０から５℃、２×１．３Ｌ）で洗浄し、４０℃で一定重量に真空乾燥させて、表題化合物を得た。
【０１７３】
注記：冷却槽および氷浴付きの丸底フラスコの代わりにジャケット型反応器を使用してよい。
【０１７４】
ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシルメタンスルホネート（Ｃ）の調製、方法１
ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシルメタンスルホネート（９８５ｇ、３．３５７ｍｏｌ）を、撹拌器を備えた三つ口１２Ｌフラスコに、窒素雰囲気下で換気しながら導入した。ＤＣＭ（１．９７０Ｌ、２体積）を室温で添加し、撹拌を開始した。トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（２．８４４ｋｇ、１．９２２Ｌ、２４．９４ｍｏｌ、２体積）を混合物に、各１Ｌの分量を２回ゆっくり添加した。１回目の添加後、混合物を３０分間撹拌し、続いて２回目の添加をした。混合物を室温で終夜（１５時間）撹拌して、透明溶液を結果として生じさせた。次いで、２−メチルテトラヒドロフラン（４体積）を反応混合物に添加し、これを１時間撹拌した。次いで、混合物をドラフト中で慎重に濾過し、真空乾燥させて、１１００ｇのｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシルメタンスルホネートのＴＦＡ塩を過剰なＴＦＡとともに生成した。
【０１７５】
ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシルメタンスルホネート（Ｃ）の調製、方法２
５０Ｌ三つ口丸底フラスコは、機械的撹拌器、添加漏斗および熱電対を備えたものであり、これを冷却槽に入れた。ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシルメタンスルホネート（３４７４ｇ、１．０当量）およびＤＣＭ（５．９Ｌ）をフラスコに加えた。得られた懸濁液を常温で５から１０分間撹拌し、次いで、添加漏斗を介しトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、５．９Ｌ）を２．５時間かけてゆっくり添加して、結果として生じる発熱およびガス発生速度を制御した。反応混合物を室温で終夜撹拌し、次いで、氷水浴を使用して１５℃から２０℃に冷却した。次いで、添加漏斗を介し、内部温度を２５℃未満に維持する速度で（およそ１．５時間）、２−メチルテトラヒドロフラン（２−ＭｅＴＨＦ、１１．８Ｌ）を添加した。最初の４〜５Ｌの２−ＭｅＴＨＦの添加は発熱性であった。得られた懸濁液を１時間撹拌した。固体を濾過によって収集し、次いで、２−ＭｅＴＨＦ（２×２．２Ｌ）で洗浄し、その後、常温で一定重量に真空乾燥させて、表題化合物を白色固体として得た。
【０１７６】
７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（９）の調製、方法１
ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシルメタンスルホネート（２００ｇ、６５０．９ｍｍｏｌ）のＴＦＡ塩を、３Ｌ三つ口フラスコに導入し、続いて水（２．２００Ｌ、１１体積）を添加した。反応混合物の温度を２５℃未満に保ちながらＮａＯＨ（７８．１１ｇ、１．９５３ｍｏｌ、３当量）をゆっくり添加し、混合物を終夜撹拌した。次いで、ＤＣＭ（１．４Ｌ、７体積）を添加し、混合物を撹拌し、有機層を分離した。次いで、水層をＤＣＭ（１．４Ｌ、７体積）で２回目に抽出し、ＤＣＭ層を合わせた。次いで、ＨＣｌ（１０８．５ｍＬ、１２Ｍ、１．３０２０ｍｏｌ、２当量）を添加し、混合物を３０分間撹拌し、その後、ロータリーエバポレーターで濃縮乾固した。アセトニトリル（１０体積）を添加し、混合物を濃縮した。微量の水がすべて共沸で除去されるまでこれを３回繰り返して、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（９）を得た。粗生成物をアセトニトリル（１０体積）から再結晶させて、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（９）を無色の結晶性固体として得た。１ＨＮＭＲ  （ＤＭＳＯ−ｄ６）  ｐｐｍ  ８．０２−８．０４  （ｄ）；  ７．２３−７．３１  （ｍ）；  ４．５９  （ｓ）；  ３．３１  （ｓ）；  ２．５１−３．３  （ｍ）；  １．６３−１．７５  （ｍ）；  １．４５−１．６２  （ｍ）．
注記として、抽出のためにＤＣＭを添加する代わりに、粗生成物を約９５℃から９７℃で蒸留し、さらに再結晶させてもよい。
【０１７７】
７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（９）の調製、方法２
５０Ｌ三つ口丸底フラスコは、機械的撹拌器、添加漏斗および熱電対を備えたものであり、これを加熱マントルに入れた。トリフルオロアセテート（３０００ｇ、１当量）および水（３０Ｌ）中のｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシルメタンスルホネートをフラスコに加えた。添加が弱発熱性であることから、温度を２５℃未満に維持するような速度で、５０％ＮａＯＨ（２３４３ｇ、２９．２９ｍｏｌ、３当量）を添加漏斗により添加しながら、混合物を撹拌した。ＮａＯＨ添加が完了したら、反応混合物を室温で終夜撹拌した。ヘッド温度を９５から９８℃とし、還流温度（およそ１００℃）での分別蒸留によって生成物を回収した。ＨＣｌを添加することによって各画分のｐＨを２に調整し、減圧下５５℃で濃縮すると、濃厚なペーストが残った。アセトニトリル（ＡＣＮ１．５Ｌ）を添加し、得られた懸濁液を３０分間撹拌し、次いで、０から５℃に１時間冷却した。固体を濾過によって収集し、冷（０から５℃）ＡＣＮ（２×６００ｍＬ）で洗浄し、５０℃で一定重量に真空乾燥させた。
【０１７８】
２２Ｌ三つ口丸底フラスコは、機械的撹拌器、熱電対およびコンデンサーを備えたものであり、これを加熱マントルに入れた。収集した固体（２３８２ｇ）、メタノール（４．７Ｌ）および２−ＭｅＴＨＦ（４．７Ｌ）をフラスコに加えた。得られた懸濁液を撹拌し、加熱還流した（およそ６５℃）。反応フラスコを冷却槽に移し、混合物を撹拌した。次いで、添加漏斗を介し２−ＭｅＴＨＦ（４．７Ｌ）を３０分間かけて添加した。得られた懸濁液を０から５℃に冷却し、この温度で３０分間撹拌した。固体を濾過によって収集し、冷（０から５℃）２−ＭｅＴＨＦ（２×６００ｍＬ）で洗浄し、次いで、５５℃で一定重量に真空乾燥させた。
【０１７９】
機械的撹拌器、熱電対、窒素入口およびコンデンサーを備えた１２Ｌ三つ口丸底フラスコを、加熱マントルに入れた。粗生成物（２０７９ｇ）およびＡＣＮ（６．２Ｌ）をフラスコに加えた。得られた懸濁液を撹拌し、３０分間加熱還流した（およそ８２℃）。フラスコを冷却槽に移し、懸濁液を０から５℃にゆっくり冷却し、この温度で１時間維持した。固体を濾過によって収集し、冷（０から５℃）ＡＣＮ（３×６００ｍＬ）で洗浄し、５５℃で一定重量に真空乾燥させて、表題生成物を提供し得た。
【０１８０】
（実施例１Ａ）
４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（７）の調製
【０１８１】
【化８】
0005877157.tif 000009
ジエチル２−（（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチレン）マロネート（４）の調製
２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）アニリン（２）（２００ｇ、１．０２３ｍｏｌ）、ジエチル２−（エトキシメチレン）マロネート（３）（２７６ｇ、１．３ｍｏｌ）およびトルエン（１００ｍＬ）を、窒素雰囲気下、ディーンスタークコンデンサーを備えた三つ口１Ｌ丸底フラスコ中で合わせた。溶液を撹拌しながら１４０℃に加熱し、その温度を４時間（ｈ）維持した。反応混合物を７０℃に冷却し、ヘキサン（６００ｍＬ）をゆっくり添加した。得られたスラリーを撹拌し、室温に加温させた。固体を濾過によって収集し、ヘキサン中１０％の酢酸エチル（２×４００ｍＬ）で洗浄し、次いで、真空乾燥させて、生成物ジエチル２−（（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチレン）マロネート（４）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １１．２８  （ｄ，  Ｊ  ＝  １３．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ８．６３  （ｄ，  Ｊ  ＝  １３．０  Ｈｚ，  １Ｈ），  ８．１０  （ｓ，  １Ｈ），  ７．８０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．５０  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １．５，  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．２４  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ，  ２Ｈ），  ４．１７  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ，２  Ｈ），１．２７  （ｍ，  ６Ｈ）．
エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（５Ａ）の調製、方法１
三つ口１Ｌフラスコに、Ｄｏｗｔｈｅｒｍ（登録商標）（２００ｍＬ、８ｍＬ／ｇ）を入れ、２００℃で１時間脱気した。溶媒を２６０℃に加熱し、ジエチル２−（（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチレン）マロネート（４）（２５ｇ、０．０７ｍｏｌ）とともに１０分間（ｍｉｎ）かけて小分けにして入れた。得られた混合物を２６０℃で６．５時間撹拌し、得られたエタノール副産物を蒸留によって除去した。混合物を８０℃にゆっくり冷却させた。ヘキサン（１５０ｍＬ）を３０分間かけてゆっくり添加し、続いて追加で２００ｍＬのヘキサンを一度に添加した。スラリーが室温に達するまで撹拌した。固体を濾過し、ヘキサン（３×１５０ｍＬ）で洗浄し、次いで、真空乾燥させて、エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（５Ａ）を黄褐色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １１．９１  （ｓ，  １Ｈ），  ８．３９  （ｓ，  １Ｈ），  ８．０６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．３  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．８１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．２４  （ｑ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ，  ２Ｈ），  １．２９  （ｔ，  Ｊ  ＝  ７．１  Ｈｚ，  ３Ｈ）．
エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（５Ａ）の調製、方法２
化合物４（２０００ｇ、５．４６８ｍｏｌ）を反応器に導入した。Ｄｏｗｔｈｅｒｍ（４．０００Ｌ）を反応器に入れ、窒素パージによって室温で終夜脱気した。次いでこれを撹拌し、２６０℃に加温した。生じたＥｔＯＨを留去した。反応をモニターし、５．５時間後に完了し、反応が実質的に完了した。熱源を除去し、反応混合物を８０℃に冷却し、ヘプタン（２．０００Ｌ）を入れた。混合物を３０分間撹拌した。ヘプタン（６．０００Ｌ）を撹拌混合物に入れ、撹拌を終夜続けた。固体を濾過除去し、ヘプタン（４．０００Ｌ）で洗浄し、真空オーブン中５０℃で乾燥させて、化合物６Ａを得た。
【０１８２】
エチル４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキシレート（６）の調製
三つ口５Ｌフラスコに、エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（５Ａ）（１００ｇ、０．３ｍｏｌ）、エタノール（１２５０ｍＬ、１２．５ｍＬ／ｇ）およびトリエチルアミン（２２０ｍＬ、１．６ｍｏｌ）を入れた。次いで、容器に１０ｇの１０％Ｐｄ／Ｃ（５０％湿式）を５℃で入れた。反応物を水素雰囲気下５℃で２０時間激しく撹拌し、この時間の後、反応混合物をおよそ１５０ｍＬの体積に濃縮した。生成物エチル４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキシレート（６）を、Ｐｄ／Ｃ入りスラリーとして次のステップに直接持ち込んだ。
【０１８３】
４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（７）の調製
エチル４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキシレート（６）（５８ｇ、０．２ｍｏｌ、Ｐｄ／Ｃを含有する粗反応物スラリー）を、還流コンデンサー付きの１Ｌフラスコ中、ＮａＯＨ（８１４ｍＬ、５Ｍ、４．１ｍｏｌ）に懸濁させ、８０℃で１８時間加熱し、続いて１００℃で５時間さらに加熱した。反応物をパックセライトに通して温かいうちに濾過してＰｄ／Ｃを除去し、セライトを１ＮのＮａＯＨですすいだ。濾液をｐＨ約１に酸性化して、濃厚な白色沈殿物を得た。沈殿物を濾過し、次いで、水および冷アセトニトリルですすいだ。次いで、固体を真空乾燥させて、４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（７）を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００．０  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １５．２６  （ｓ，  １Ｈ），  １３．６６  （ｓ，  １Ｈ），  ８．９８  （ｓ，  １Ｈ），  ８．１３  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  １．６，  ７．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ８．０６  −  ７．９９  （ｍ，  ２Ｈ）．
（実施例１Ｂ）
４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（７）の代替的調製
【０１８４】
【化９】
0005877157.tif 000010
８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（５Ｂ）の調製
エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（５Ａ）（１２００ｇ、３．７５４ｍｏｌ）を反応容器に入れ、続いて、２−プロパノール（１．２００Ｌ）および水（７．２００Ｌ）を添加し、撹拌した。水酸化ナトリウム（６００．６ｇ、７．５０８ｍｏｌ）および水（１．２００Ｌ）を混合し、室温に冷却させた。得られた混合物を反応容器に入れ、次いで、３．５時間撹拌しながら８０℃に加熱して、暗色の均質混合物を生成した。さらに１時間後、滴下漏斗を介し４５分間かけて酢酸（９．５９９Ｌ、２０％ｗ／ｖ、３１．９７ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、６℃／時の速度で撹拌しながら２２℃に冷却した。得られた固体を濾過し、水（３Ｌ）で洗浄して、湿ったケーキ（１４３６ｇ）を生成した。濾液を、真空オーブン中、窒素を抜きながらＤｒｉｅｒｉｔｅ（登録商標）で乾燥させて、８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（５Ｂ）を褐色固体（１０６９ｇ）として生成した。８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（５Ｂ）を、１．５Ｌのメタノール中でスラリー化し、６時間撹拌することによって精製した。次いでこれを濾過し、乾燥させて、９６８．８ｇの精製された８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（５Ｂ）を得た。
【０１８５】
４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（７）の調製
８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（５Ｂ）（１８．５ｇ、１．００当量、限定試薬）を反応容器に入れ、ＭｅＯＨ（１１８ｍＬ、６．４体積）を不活性雰囲気下でかき混ぜながら添加した。ナトリウムメトキシド（３．５３ｇ、１．００当量）を１０分間かけて少量ずつ反応器に添加した。すべての固体が溶液中にある状態になるまで（５〜１０分）、混合物を撹拌した。次いで、パラジウム炭素（２．７ｇ、０．０３当量）を反応混合物に添加した。ＭｅＯＨ（６７ｍＬ、３．６体積）に溶解させたギ酸カリウム（１０．７８ｇ、２当量）を、反応混合物に３０分間かけて添加し、常温で約４．５時間撹拌した。８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸が、４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（７）と相対的に１．０％以下となった際に、反応は完了したと判断した。反応が完了したら、混合物をセライトのパッド（使用したセライトの質量は、始めに容器に入れられた８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（５Ｂ）の質量のおよそ２倍）に通して濾過して、固体を除去した。セライトケーキをＭｅＯＨ（３７ｍＬ、２体積）で洗浄した。濾液をきれいな反応容器に入れ、撹拌した。酢酸（７．２２ｍＬ、２当量）を、撹拌溶液に少なくとも４５分間かけて連続的に入れ、得られたスラリーを５〜１６時間の間撹拌した。固体を濾過し、ケーキをＭｅＯＨ（５６ｍＬ、３体積）で洗浄し、真空乾燥させ、次いで真空乾燥させて、生成物を白色／オフホワイトの固体として得た。
【０１８６】
代替として、ギ酸カリウム試薬を水素ガスに置き換えてもよい。
【０１８７】
（実施例２Ａ）
４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（１１Ａ）の調製
【０１８８】
【化１０】
0005877157.tif 000011
７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（１０Ａ）の調製、方法１
７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（９）（４．６ｇ、３４．４３ｍｍｏｌ）を含有するフラスコに、窒素雰囲気下、アセトニトリル（５０ｍＬ）中の４−フルオロ−１−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）ベンゼン（８）（６．０ｇ、２８．６９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（８．７ｇ、１２．００ｍＬ、８６．０７ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応フラスコを、窒素雰囲気下８０℃で１６時間加熱した。次いで、反応混合物を冷却させ、水とジクロロメタンとに分配した。有機層を１ＭのＨＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮乾固した。シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１０％酢酸エチル）による精製により、７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタンを黄色固体として生み出した。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００．０  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ８．０３  （ｄ，  Ｊ  ＝  ９．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．３１  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．２５  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ２．６，  ９．１  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．５９  （ｓ，  ２Ｈ），  １．６９  −  １．６７  （ｍ，  ４Ｈ），  １．５０  （ｄ，  Ｊ  ＝  ７．０  Ｈｚ，  ４Ｈ）．
７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（１０Ａ）の調製、方法２
４−フルオロ−１−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）ベンゼン（８）（９０１ｇ、４．３０９ｍｏｌ）を、３０Ｌジャケット型容器に、窒素雰囲気下、撹拌しながら、炭酸ナトリウム（９５９．１ｇ、９．０４９ｍｏｌ）およびＤＭＳＯ（５Ｌ、５．５体積）とともに導入した。次いで、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（９）（６３３．４ｇ、４．７４０ｍｏｌ）を小分けにして容器に添加し、温度を次第に５５℃に上昇させた。反応をＨＰＬＣによってモニターし、基質が１％未満のＡＵＣとなった際に、反応が完了したとみなした。次いで、混合物を１０体積のＥｔＯＡｃで希釈し、水（５．５体積）で３回洗浄した。次いで、有機層を４体積に濃縮し、シクロヘキサンを添加し、４体積に濃縮した。シクロヘキサンを添加し、得られた溶液を４体積に濃縮する過程を、すべてのＥｔＯＡｃが除去されるまで繰り返し、シクロヘキサンを含有するフラスコ中の総体積を、約４体積とした。反応混合物を、ロータリーエバポレーターで３０分間、６０℃に加熱した。次いで、溶液を撹拌または旋回させながら室温に３時間冷却した。次いで、すべての固体を結晶化させ、濃縮乾固して、７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（１０Ａ）を得た。
【０１８９】
７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（１０Ａ）の調製、方法３
３体積のＤＣＭに溶解させた４−フルオロ−１−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）ベンゼン（８）に、テトラブチルアンモニウムブロミド（０．０５当量）および５０ｗｔ％ＫＯＨ（３．６当量）を添加した。次いで、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（９）を０〜５℃で添加した。反応物を常温に加温した。反応をＨＰＬＣによってモニターし、基質が１％未満のＡＵＣとなった際に、反応が完了したとみなし、層を分離した。有機層を１ＭのＨＣｌで洗浄し、水層を廃棄した。次いで、有機層を水で１回、ブラインで１回洗浄し、蒸発させた。得られた材料を、還流でシクロヘキサンから再結晶させた。固体を濾過し、シクロヘキサンで洗浄し、窒素雰囲気下、真空オーブン中４５℃で乾燥させて、７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタンを得た。
【０１９０】
４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（１１Ａ）の調製
７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（１０Ａ）（７．０７ｇ、２４．７０ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（０．７１ｇ、６．６４ｍｍｏｌ）で満たしたフラスコの空気を抜き、次いで窒素を流した。エタノール（２２ｍＬ）を添加し、反応フラスコに水素バルーンを装着した。１２時間激しく撹拌後、反応混合物を窒素でパージし、Ｐｄ／Ｃを濾過によって除去した。濾液を減圧下で濃縮して暗色油とし、これをシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１５％酢酸エチル）によって精製して、４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（１１Ａ）を紫色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００．０  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ６．９５  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ２．３，  ８．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．７９  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．６  Ｈｚ，  １Ｈ），  ６．７２  （ｄ，  Ｊ  ＝  ８．８  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．８９  （ｓ，  ２Ｈ），  ４．０９  （ｓ，  ２Ｈ），  １．６１  −  １．５９  （ｍ，  ４Ｈ）および１．３５  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．８  Ｈｚ，  ４Ｈ）．
（実施例２Ｂ）
４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（１１Ｂ）塩酸塩の調製
【０１９１】
【化１１】
0005877157.tif 000012
４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン塩酸塩（１１Ｂ）の調製、方法１
パラジウム炭素（１５０ｇ、５％ｗ／ｗ）を、窒素雰囲気下、Ｂｕｅｃｈｉ水素化装置（ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｏｒ）（２０Ｌ容量）に入れ、続いて、上記実施例２Ａ（方法２）において調製した通りの７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（１０Ａ、１５００ｇ）、および２−メチルテトラヒドロフラン（１０．５Ｌ、７体積）を添加した。次いで、水素化装置を水素ガスでパージし、その後、混合物に、大気圧を０．５バール上回る圧力で連続的に入れた。次いで、容器ジャケットを冷却することにより、混合物を１８℃から２３℃の間の温度で撹拌した。水素ガスがそれ以上消費されなくなり、さらなる発熱が起こらなくなったら、容器を減圧にした。次いで、窒素ガスを０．５バールで容器に充填し、再度減圧し、続いて０．５バールの窒素ガスの２回目の充填をした。濾過したアリコートのＨＰＬＣが、７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（１０Ａ）が残っていないことを示したら（例えば≦０．５％）、窒素雰囲気下、セライトフィルターを使用する濾過漏斗を介して、反応混合物を受け入れフラスコ（ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ  ｆｌａｓｋ）に移した。セライトフィルターケーキを２−メチルテトラヒドロフラン（３Ｌ、２体積）で洗浄した。撹拌機構、温度制御および窒素雰囲気を備えた容器に、洗浄液および濾液を入れた。１，４−ジオキサン（１体積）中４ＭのＨＣｌを、２０℃で１時間かけて連続的に容器に添加した。混合物を少なくとも追加で１０時間撹拌し、濾過し、２−メチルテトラヒドロフラン（２体積）で洗浄し、乾燥させて、１５１９ｇの４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（１１Ｂ）の塩酸塩を白色結晶性固体として生成した。
【０１９２】
この実施例において、代替的な溶媒で代用してもよい。例えば、２−ＭｅＴＨＦの代わりにＭｅＯＨおよび／またはＥｔＯＨが使用され得る。
【０１９３】
４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン塩酸塩（１１Ｂ）の調製、方法２
Ｂｕｅｃｈｉ水素化装置（２０Ｌ容量）中に、パラジウム炭素（５％ｗ／ｗ、１５０ｇ）を窒素下で導入し、続いて、７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（１５００ｇ）および２−メチルテトラヒドロフラン（１０．５Ｌ、７体積）を添加した。次いで、水素化装置を水素ガスでパージし、その後、撹拌混合物に、大気圧を０．５バール上回る圧力で連続的に入れた。容器ジャケットを冷却することにより、反応混合物の温度を１８℃から２３℃に維持した。水素ガスがそれ以上消費されなくなり、さらなる発熱が起こらなくなったら、容器を減圧にした。次いで、窒素ガスを容器に充填し、再度減圧にし、続いて０．５バールの窒素ガスを入れた。濾過したアリコートのＨＰＬＣが、７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタンが検出されなかったことを示したら（≦０．５％）、反応が完了したと判定した。次いで、反応混合物をセライトに通して濾過した。残ったスラリーを、窒素ガス下、セライトフィルターを含有する濾過漏斗を介して、受け入れフラスコに移した。セライトケーキを２−メチルテトラヒドロフラン（３Ｌ、２体積）で洗浄した。撹拌機構、温度制御および窒素雰囲気を備えた容器に、濾液および洗浄液を移した。１，４−ジオキサン（１体積）中４ＭのＨＣｌを、２０℃で１時間かけて連続的に容器に添加した。得られた混合物を追加で１０時間撹拌し、濾過し、２−メチルテトラヒドロフラン（２体積）で洗浄し、乾燥させて、１５１９ｇの７−［４−アミノ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（１１Ｂ）を白色結晶性固体として生成した。
【０１９４】
この例において、代替的な溶媒で代用してもよい。例えば、２−ＭｅＴＨＦの代わりにＭｅＯＨおよび／またはＥｔＯＨが使用され得る。
【０１９５】
（実施例３Ａ）
Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（形態Ａ）の調製
【０１９６】
【化１２】
0005877157.tif 000013
２−メチルテトラヒドロフラン（９１．００ｍＬ）中の４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボン酸（７）（９．１ｇ、３５．３９ｍｍｏｌ）および４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（１１Ａ）（９．２ｇ、３５．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、プロピルホスホン酸環状無水物（Ｔ３Ｐ（酢酸エチル中５０％溶液）、５２．６８ｍＬ、８８．４８ｍｍｏｌ）およびピリジン（５．６ｇ、５．７３ｍＬ、７０．７８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応フラスコを、窒素雰囲気下６５℃で１０時間加熱した。室温に冷却後、次いで反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液（５０ｍＬ）でクエンチした。層を分離し、水層を酢酸エチルで２回以上抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して黄褐色固体とした。粗固体を、酢酸エチルおよびジエチルエーテルの２：１混合物中でスラリー化し、減圧濾過によって収集し、酢酸エチル／ジエチルエーテル混合物で２回以上洗浄して、粗生成物を淡黄色結晶性粉末として得た。粉末を温酢酸エチルに溶解させ、セライトに吸着させた。シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０〜５０％酢酸エチル）による精製により、Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物Ｉ）を固体形態Ａの白色結晶性固体として得た。ＬＣ／ＭＳ  ｍ／ｚ  ４９６．０［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間１．４８分（ＲＰ−Ｃ１８、３分間かけて１０〜９９％ＣＨ３ＣＮ／０．０５％ＴＦＡ）。１Ｈ  ＮＭＲ  （４００．０  ＭＨｚ，  ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １３．０８  （ｓ，  １Ｈ），  １２．１６  （ｓ，  １Ｈ），  ８．８８  （ｓ，  １Ｈ），  ８．０４  （ｄｄ，  Ｊ  ＝  ２．１，  ７．４  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．９５  −  ７．８８  （ｍ，  ３Ｈ），  ７．２２  （ｄｄ，  ２．５，  ８．９  Ｈｚ，  １Ｈ），  ７．１６  （ｄ，  Ｊ  ＝  ２．５  Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．３３  （ｓ，  ２Ｈ），  １．６７  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ，  ４Ｈ），  １．４４  （ｄ，  Ｊ  ＝  ６．９  Ｈｚ，  ４Ｈ）．
（実施例３Ｂ）
Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（形態Ａ−ＨＣｌ）の調製
【０１９７】
【化１３】
0005877157.tif 000014
２−メチルテトラヒドロフラン（０．５７Ｌ、１．０体積）を３０Ｌジャケット型反応容器に入れ、続いて、４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（１１Ｂ）の塩酸塩（７９１ｇ、２．６７ｍｏｌ）および４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（７）（５７３ｇ、２．２３ｍｏｌ）、ならびに追加で５．２Ｌ（９．０体積）の２−メチルテトラヒドロフランを添加した。撹拌を開始し、２−メチルテトラヒドロフラン中のＴ３Ｐ（２．８４ｋｇ、４．４６ｍｏｌ）を反応混合物に１５分間かけて添加した。次いで、添加漏斗を介しピリジン（５３４．０ｇ、５４６．０ｍＬ、６．６８ｍｏｌ）を３０分間かけて滴下添加した。混合物を約３０分間かけて４５℃に加温し、１２〜１５時間撹拌した。次いで、混合物を室温に冷却し、２−メチルテトラヒドロフラン（４体積、２．２９Ｌ）、続いて水（６．９体積、４Ｌ）を添加し、その間、温度を３０℃未満に維持した。水層を除去し、有機層をＮａＨＣＯ３飽和水溶液で慎重に２回洗浄した。次いで、有機層を１０％ｗ／ｗクエン酸（５体積）で、最後に水（７体積）で洗浄した。混合物をポリッシュ濾過し、別の乾燥した容器に移した。Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド塩酸塩の種晶（形態Ａ−ＨＣｌ）（３．２８１ｇ、５．５７０ｍｍｏｌ）を添加した。ＨＣｌ（気体）（１０当量）を吹き込んで２時間にわたって泡立たせ、混合物を終夜撹拌した。得られた懸濁液を濾過し、２−メチルテトラヒドロフラン（４体積）で洗浄し、真空乾燥させ、６０℃でオーブン乾燥させて、化合物Ｉを形態Ａ−ＨＣｌとして得た。
【０１９８】
形態Ａ−ＨＣｌの粉末ディフラクトグラム（ｄｉｆｆｒａｃｔｏｇｒａｍ）を図１に示す。
【０１９９】
以下の表１は、形態Ａ−ＨＣｌの代表的なＸＲＰＤピークを提供するものである。
表１．形態Ａ−ＨＣｌ  ＸＰＲＤピーク
【０２００】
【表１−１】
0005877157.tif 000015
【０２０１】
【表１−２】
0005877157.tif 000016
【０２０２】
【表１−３】
0005877157.tif 000017
化合物１形態Ａ−ＨＣｌの単結晶は、単斜晶系、Ｐ２１／ｃ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：ａ＝１３．６１７５（４）Å、ｂ＝２１．６１４（３）Å、ｃ＝８．３９４１（４）Å、α＝９０°、β＝１１２．３０３°およびγ＝９０°を保有することが判明した。
【０２０３】
形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料を、顕微鏡も使用して評価した。
【０２０４】
形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料についてのＤＳＣ曲線を、図２において提供する。
【０２０５】
形態Ａの代表的試料についてのＴＧＡ曲線を、図３において提供する。
【０２０６】
形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料は、図４において提供されるＦＴＩＲスペクトルを表示した。
【０２０７】
表２は、形態Ａ−ＨＣｌの特徴的なＦＴＩＲ吸収を提供するものである。
表２．形態Ａ  ＨＣｌ  ＦＴＩＲ吸収
【０２０８】
【表２−１】
0005877157.tif 000018
【０２０９】
【表２−２】
0005877157.tif 000019
形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料を、固体状態（ＳＳ）１３Ｃおよび１９Ｆ  ＮＭＲも使用して分析した。それぞれのＮＭＲスペクトルを図５および６において提供する。１３Ｃ  ＳＳＮＭＲおよび１９Ｆ  ＳＳＮＭＲスペクトルにおいて見られた数個のピークを、以下の表３および４に記載する。
表３．形態Ａ−ＨＣｌ  １３Ｃ  ＳＳＮＭＲピーク
【０２１０】
【表３】
0005877157.tif 000020
表４：形態Ａ−ＨＣｌ  １９Ｆ  ＳＳＮＭＲピーク
【０２１１】
【表４】
0005877157.tif 000021
（実施例４Ａ）
Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（形態Ｂ）の調製
【０２１２】
【化１４】
0005877157.tif 000022
２−メチルテトラヒドロフラン（１体積）を３０Ｌジャケット型反応容器に入れ、続いて４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（１１Ｂ）の塩酸塩（１．２当量）および４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（７）（５７３ｇ、２．２２８ｍｏｌ）を添加した。追加の２−メチルテトラヒドロフラン（９体積）を容器に入れ、撹拌を開始した。２−メチルテトラヒドロフラン中のＴ３Ｐ（２当量）を反応混合物に１５分間かけて添加した。添加漏斗を使用し、ピリジン（３当量）を滴下して迅速に添加した。次いで、撹拌下で、混合物を約３０分間かけて４５℃に加熱し、この温度を約５時間維持した。混合物を室温に冷却した。２−メチルテトラヒドロフラン（４体積）を添加し、続いて水（６．９体積）をゆっくり添加し、反応物の温度を３０℃未満に保った。水層を除去し、有機層をＮａＨＣＯ３飽和水溶液で２回洗浄した。次いで、有機層を１０％ｗ／ｗクエン酸（５体積）および水（７体積）で慎重に洗浄し、ポリッシュ濾過し、その後、別の乾燥した容器に移した。２−メチルテトラヒドロフラン（１０体積）を添加し、撹拌を開始した。ヘプタン（１０体積）を撹拌しながら滴下して迅速に添加した。混合物を約１２時間にわたって撹拌し、次いで真空濾過した。固体フィルターケーキを別の容器に導入した。水（１５体積）を容器に入れ、懸濁液を４８時間激しく撹拌し、次いで濾過した。固体ケーキを水（５体積）で洗浄し、４５℃で一定重量に乾燥させて、化合物Ｉ、形態Ｂを得た。
【０２１３】
化合物Ｉ、形態Ｂの粉末ディフラクトグラムを、図７Ａおよび７Ｂにおいて示す。
【０２１４】
表５：形態Ｂの代表的なＸＲＰＤピーク
【０２１５】
【表５】
0005877157.tif 000023
形態Ｂの代表的試料についてのＤＳＣ曲線を、図８において提供する。
【０２１６】
形態Ｂの代表的試料についてのＴＧＡ曲線を、図９において提供する。
【０２１７】
形態Ｂの代表的試料は、図１０において提供されるＦＴＩＲスペクトルを表示した。
【０２１８】
表６は、形態Ｂの特徴的なＦＴＩＲ吸収を提供するものである。
表６．形態ＢのＦＴＩＲ吸収
【０２１９】
【表６−１】
0005877157.tif 000024
【０２２０】
【表６−２】
0005877157.tif 000025
形態Ｂの代表的試料を、固体状態１３Ｃおよび１９Ｆ  ＮＭＲも使用して分析した。それぞれのＮＭＲスペクトルを図１１および１２において提供する。１３Ｃ  ＳＳＮＭＲおよび１９Ｆ  ＳＳＮＭＲスペクトルにおいて見られた数個のピークを、以下の表７および８に記載する。
表７．形態Ｂ  １３Ｃ  ＳＳＮＭＲピーク
【０２２１】
【表７】
0005877157.tif 000026
表８．形態Ｂ  １９Ｆ  ＳＳＮＭＲピーク
【０２２２】
【表８】
0005877157.tif 000027
化合物１形態Ｂの単結晶をマイクロマウントループに載置し、密閉した銅Ｘ線管およびアペックスＩＩ  ＣＣＤ検出器を備えたＢｒｏｋｅｒアペックスＩＩ回折装置の中心に据えた。最初に、４０フレームの３セットを収集して、予備的単位格子を決定した。その後、１５スキャンおよび６０８４フレームからなる完全データセットを獲得した。データ収集は室温で実施した。データを統合し、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＸＳ製のアペックスＩＩソフトウェアを使用して測った。統合およびスケーリングは、６１７６の反射をもたらし、このうちの２２５０が固有のものであった。ＳＨＥＬＸＴＬソフトウェアを使用し、空間群Ｐ２１／ｃにおける直接的方法によって構造を解析した。精密化は、同じくＳＨＥＬＸＴＬソフトウェアを使用するＦ２についての完全行列最小二乗法を用いて実施した。３９２全部のパラメーターを精密化に使用して、５．７４の対パラメーター反射比をもたらした。最終精密化指数は、ｗＲ２＝０．０９６２およびＲｌ＝０．０６８２（Ｉ＞２シグマ（Ｉ）である反射についてはｗＲ２＝０．０８５０およびＲｌ＝０．０４１２であった。
【０２２３】
形態ＢのＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの単結晶は、単斜晶系、Ｐ２１／ｃ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：ａ＝１３．５４２９（４）Å、ｂ＝１３．４５５７（４）Å、ｃ＝１２．０５９２（４）Å、α＝９０°、β＝１０１．１９３°およびγ＝９０°を保有することが判明した。
【０２２４】
（実施例４Ｂ）
Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（形態Ｂ−ＨＣｌ）の調製
【０２２５】
【化１５】
0005877157.tif 000028
１００ｍＬの２−メチルテトラヒドロフランを、撹拌器を備えた窒素雰囲気を有する三つ口フラスコに入れた。化合物Ｉ、形態Ａ−ＨＣｌ（５５ｇ、０．１０３ｍｏｌ）、続いて３４９ｍＬの２−メチルテトラヒドロフランをフラスコに加え、撹拌を開始した。２８ｍＬの水をフラスコに加え、フラスコを６０℃の内部温度に加温し、４８時間撹拌した。フラスコを室温に冷却し、１時間撹拌した。フィルターケーキが乾燥するまで、反応混合物を真空濾過した。固体フィルターケーキを２−メチルテトラヒドロフラン（４体積）で２回洗浄した。固体フィルターケーキを約３０分間にわたって減圧吸引したままにしておき、乾燥トレイに移した。フィルターケーキを６０℃で真空乾燥させて、形態Ｂ−ＨＣｌを白色結晶性固体として得た。
【０２２６】
形態Ｂ−ＨＣｌの粉末ディフラクトグラムを、図１３において示す。
【０２２７】
以下の表９は、形態Ｂ−ＨＣｌの代表的なＸＲＰＤピークを提供するものである。
表９．形態Ｂ−ＨＣｌ  ＸＲＰＤピーク
【０２２８】
【表９−１】
0005877157.tif 000029
【０２２９】
【表９−２】
0005877157.tif 000030
【０２３０】
【表９−３】
0005877157.tif 000031
化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの単結晶は、単斜晶系、Ｐ２１／ａ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：ａ＝１２．５７３３４（５）Å、ｂ＝１９．６８６３４（５）Å、ｃ＝８．３９３９９（５）Å、α＝９０°、β＝９０．０５５４°およびγ＝９０°を保有することが判明した。
【０２３１】
形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料を、顕微鏡も使用して評価した。
【０２３２】
形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料についてのＤＳＣ曲線を、図１４において提供する。
【０２３３】
形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料についてのＴＧＡ曲線を、図１５において提供する。
【０２３４】
形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料は、図１６において提供されるＦＴＩＲスペクトルを表示した。
【０２３５】
表１０は、形態Ｂ−ＨＣｌの特徴的なＦＴＩＲ吸収を提供するものである。
表１０．形態Ｂ−ＨＣｌ  ＦＴＩＲ吸収
【０２３６】
【表１０−１】
0005877157.tif 000032
【０２３７】
【表１０−２】
0005877157.tif 000033
形態Ｂ−ＨＣｌを、固体状態１３Ｃおよび１９Ｆ  ＮＭＲも使用して分析した。それぞれのＮＭＲスペクトルを図１７および１８において提供する。１３Ｃ  ＳＳＮＭＲおよび１９Ｆ  ＳＳＮＭＲスペクトルにおいて見られた数個のピークを、表１１および１２に収載する。
表１１．形態Ｂ−ＨＣｌ  １３Ｃ  ＳＳＮＭＲピーク
【０２３８】
【表１１】
0005877157.tif 000034
表１２．形態Ｂ−ＨＣｌ  １９Ｆ  ＳＳＮＭＲピーク
【０２３９】
【表１２】
0005877157.tif 000035
（実施例４Ｃ）
Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（形態Ｂ−ＨＣｌ）の代替的調製
形態Ａ−ＨＣｌ（１４．６３８ｇ、２７．５２ｍｍｏｌ）を１００ｍＬ丸底フラスコに入れた。ＥｔＯＨ（２４８．９ｍＬ）および水（２７．８２ｍＬ）を添加した。白色スラリーを加熱還流した。透明溶液が７７℃で得られた。反応物を４５℃に冷却し、３０分間撹拌し、次いで、２０℃に冷却した。混合物を追加で３時間、２０℃で撹拌した。生成物を濾過し、ケーキをＥｔＯＨで洗浄した。固体を、真空オーブン中４５℃で、窒素を抜きながら乾燥させて、化合物Ｉ、形態Ｂ−ＨＣｌを白色固体として提供した。ＸＲＰＤ分析により、形態Ｂ−ＨＣｌとしての固体の同一性を確認した。
【０２４０】
注記として、この例において記述されている通りのＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏの代わりに、ＭｅＯＨ／Ｈ２ＯおよびＩＰＡ／Ｈ２Ｏ等の他の溶媒組合せを使用してもよい。代替的な溶媒組合せの例を、表１３において提供する。
表１３．形態Ｂ−ＨＣｌを作製するために使用され得る他の溶媒
【０２４１】
【表１３】
0005877157.tif 000036
さらなる注記として、実施例３Ａ、３Ｂおよび４Ａ〜４Ｃにおいて、２−ＭｅＴＨＦの代わりにＥｔＯＡＣが溶媒として使用され得る。
【０２４２】
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強特性を検出および測定するためのアッセイ
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ調節特性を評価するための膜電位光学法
アッセイでは、蛍光電圧感知染料を利用して、ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞における機能的ΔＦ５０８−ＣＦＴＲの増大の読み出しとして蛍光プレートリーダー（例えば、ＦＬＩＰＲ  ＩＩＩ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｉｎｃ．）を使用し、膜電位の変化を測定する。応答のための駆動力は、細胞を先に化合物で処理し、その後電圧感知染料を充填した後の単一液体添加ステップによるチャネル活性化と連動する、クロライドイオン勾配の生成である。
【０２４３】
増強物質化合物の同定
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲの増強物質を同定するために、二重添加ＨＴＳアッセイフォーマットを開発した。このＨＴＳアッセイでは、蛍光電圧感知染料を利用して、温度補正されたΔＦ５０８  ＣＦＴＲ  ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞中におけるΔＦ５０８  ＣＦＴＲのゲーティング（コンダクタンス）の増大の測定として、膜電位の変化をＦＬＩＰＲ  ＩＩＩで測定する。応答のための駆動力は、細胞を先に増強物質化合物（またはＤＭＳＯビヒクル対照）で処理し、その後再分布染料を加えた後の、ＦＬＩＰＲ  ＩＩＩ等の蛍光プレートリーダーを使用する単一液体添加ステップ中のホルスコリンによるチャネル活性化と連動する、Ｃｌ−イオン勾配である。
【０２４４】
溶液
浴溶液番号１：（ｍＭ単位で）ＮａＣｌ  １６０、ＫＣｌ  ４．５、ＣａＣｌ２  ２、ＭｇＣｌ２  １、ＨＥＰＥＳ  １０、そしてＮａＯＨでｐＨ７．４にした。
【０２４５】
浴溶液番号１の代替物は、塩化物塩をグルコン酸塩で代用した浴溶液を包含する。
【０２４６】
細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、膜電位の光学的測定に使用する。１７５ｃｍ２培養フラスコ内、２ｍＭのグルタミン、１０％のウシ胎仔血清、１×ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１×ペニシリン／ストレプトマイシンおよび２５ｍＭのＨＥＰＥＳを補充したダルベッコ変法イーグル培地中、３７℃、５％ＣＯ２および９０％湿度で細胞を維持する。すべての光学的アッセイのために、細胞を３８４ウェルマトリゲルコーティングプレートに約２０，０００／ウェルで播種し、３７℃で２時間培養した後、増強物質アッセイのために２７℃で２４時間培養した。補正アッセイのために、細胞を、２７℃または３７℃、化合物有りおよび無しで１６〜２４時間培養する。
【０２４７】
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ調節特性を評価するための電気生理学的アッセイ
１．ウッシングチャンバーアッセイ
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを発現している分極した気道上皮細胞についてウッシングチャンバー実験を実施して、光学的アッセイにおいて同定されたΔＦ５０８−ＣＦＴＲモジュレーターをさらに特徴付けた。非ＣＦおよびＣＦ気道上皮を気管支組織から単離し、以前に記述されている通りに培養し（Ｇａｌｉｅｔｔａ，  Ｌ．Ｊ．Ｖ．、Ｌａｎｔｅｒｏ，  Ｓ．、Ｇａｚｚｏｌｏ，  Ａ．、Ｓａｃｃｏ，  Ｏ．、Ｒｏｍａｎｏ，  Ｌ．、Ｒｏｓｓｉ，  Ｇ．Ａ．およびＺｅｇａｒｒａ−Ｍｏｒａｎ，  Ｏ．、（１９９８年）、Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｃｅｌｌ．  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．、３４巻、４７８〜４８１頁）、ＮＩＨ３Ｔ３馴化培地でプレコーティングしたＣｏｓｔａｒ（登録商標）Ｓｎａｐｗｅｌｌ（商標）フィルターに平板培養した。４日後、頂端の培地を除去し、細胞を使用前に１４日を超える期間、気液界面で成長させた。これは、気道上皮に特徴的な特色である、線毛のある完全に分化した円柱細胞の単層をもたらした。いかなる公知の肺疾患も有さない非喫煙者から、非ＣＦ  ＨＢＥを単離した。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲが同型接合の患者から、ＣＦ−ＨＢＥを単離した。
【０２４８】
Ｃｏｓｔａｒ（登録商標）Ｓｎａｐｗｅｌｌ（商標）細胞培養インサート上で成長させたＨＢＥを、ウッシングチャンバー（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）内に載置し、電圧クランプシステム（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｉｏｗａ、ＩＡ）を使用して、経上皮抵抗と基底外側から頂端のＣｌ−勾配の存在下での短絡回路電流（ＩＳＣ）とを測定した。手短に述べると、ＨＢＥを電圧クランプ記録条件下（Ｖｈｏｌｄ＝０ｍＶ）３７℃で検査した。基底外側溶液は、（ｍＭ単位で）１４５  ＮａＣｌ、０．８３  Ｋ２ＨＰＯ４、３．３  ＫＨ２ＰＯ４、１．２  ＭｇＣｌ２、１．２  ＣａＣｌ２、１０  グルコース、１０  ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨでｐＨを７．３５に調整した）を含有しており、頂端溶液は、（ｍＭ単位で）１４５  Ｎａグルコネート、１．２  ＭｇＣｌ２、１．２  ＣａＣｌ２、１０  グルコース、１０  ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨでｐＨを７．３５に調整した）を含有していた。
【０２４９】
増強物質化合物の同定
典型的なプロトコールでは、基底外側から頂端膜のＣｌ−濃度勾配を利用した。この勾配を準備するために、側底膜上では通常のリンゲル液を使用したのに対し、頂端ＮａＣｌは等モル濃度のグルコン酸ナトリウム（ＮａＯＨで滴定してｐＨ７．４にした）によって置き換えて、上皮を横断する大きなＣｌ−濃度勾配を得た。ホルスコリン（１０μＭ）およびすべての試験化合物を、細胞培養インサートの頂端側に添加した。推定上のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強物質の効果を、公知の増強物質であるゲニステインの効果と比較した。
【０２５０】
２．パッチクランプ記録
以前に記述されている通りの穿孔パッチ記録コンフィギュレーションを使用して、ΔＦ５０８−ＮＩＨ３Ｔ３細胞における全Ｃｌ−電流をモニターした（Ｒａｅ，  Ｊ．、Ｃｏｏｐｅｒ，  Ｋ．、Ｇａｔｅｓ，  Ｐ．およびＷａｔｓｋｙ，  Ｍ．（１９９１年）、Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ、３７巻、１５〜２６頁）。電圧クランプ記録は、アキソパッチ２００Ｂパッチクランプ増幅器（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を使用し、２２℃で実施した。ピペット溶液は、（ｍＭ単位で）１５０  Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン（ＮＭＤＧ）−Ｃｌ、２  ＭｇＣｌ２、２  ＣａＣｌ２、１０  ＥＧＴＡ、１０  ＨＥＰＥＳおよび２４０μｇ／ｍＬのアンホテリシン−Ｂ（ＨＣｌでｐＨを７．３５に調整した）を含有していた。細胞外培地は、（ｍＭ単位で）１５０  ＮＭＤＧ−Ｃｌ、２  ＭｇＣｌ２、２  ＣａＣｌ２、１０  ＨＥＰＥＳ（ＨＣｌでｐＨを７．３５に調整した）を含有していた。パルス発生、データ獲得および分析は、Ｃｌａｍｐｅｘ  ８（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．）と連動するＤｉｇｉｄａｔａ  １３２０Ａ／Ｄインターフェースを備えたＰＣを使用して実施した。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを活性化するために、１０μＭのホルスコリンおよび２０μＭのゲニステインを浴に添加し、電流電圧関係を３０秒毎にモニターした。
【０２５１】
増強物質化合物の同定
穿孔パッチ記録技術を使用して、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定発現しているＮＩＨ３Ｔ３細胞において巨視的ΔＦ５０８−ＣＦＴＲ  Ｃｌ−電流（ＩΔＦ５０８）を増大させるΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強物質の能力も調査した。光学的アッセイにより同定された増強物質は、ＩΔＦ５０８の用量依存的な増大を誘起し、光学的アッセイで同様の効力および効果が観察された。検査したすべての細胞において、増強物質適用の前および最中の逆転電位は、算出されたＥＣｌ（−２８ｍＶ）である−３０ｍＶ前後であった。
【０２５２】
細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、ホールセル記録に使用する。１７５ｃｍ２培養フラスコ内、２ｍＭのグルタミン、１０％のウシ胎仔血清、１×ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１×ペニシリン／ストレプトマイシンおよび２５ｍＭのＨＥＰＥＳを補充したダルベッコ変法イーグル培地中、３７℃、５％ＣＯ２および９０％湿度で細胞を維持する。ホールセル記録のために、２，５００〜５，０００細胞をポリ−Ｌ−リジンコーティングされたガラスカバースリップ上に播種し、増強物質の活性を試験するために、使用前に２７℃で２４〜２８時間培養し、補正剤（ｃｏｒｒｅｃｔｏｒ）の活性を測定するために、３７℃、補正化合物（ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）有りおよび無しで培養した。
【０２５３】
３．単一チャネル記録
アキソパッチ２００Ｂパッチクランプ増幅器（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．）を使用する、以前に記述されている通りの切除された反転膜パッチ記録（ｅｘｃｉｓｅｄ  ｉｎｓｉｄｅ−ｏｕｔ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐａｔｃｈ  ｒｅｃｏｒｄｉｎｇｓ）（Ｄａｌｅｍａｎｓ，  Ｗ．、Ｂａｒｂｒｙ，  Ｐ．、Ｃｈａｍｐｉｇｎｙ，  Ｇ．、Ｊａｌｌａｔ，  Ｓ．、Ｄｏｔｔ，  Ｋ．、Ｄｒｅｙｅｒ，  Ｄ．、Ｃｒｙｓｔａｌ，  Ｒ．Ｇ．、Ｐａｖｉｒａｎｉ，  Ａ．、Ｌｅｃｏｃｑ，  Ｊ−Ｐ．、Ｌａｚｄｕｎｓｋｉ，  Ｍ．（１９９１年）、Ｎａｔｕｒｅ、３５４巻、５２６〜５２８頁）を使用して、ＮＩＨ３Ｔ３細胞において発現された野生型ＣＦＴＲおよび温度補正されたΔＦ５０８−ＣＦＴＲのゲーティング活性を観察した。ピペットは、（ｍＭ単位で）：１５０  ＮＭＤＧ、１５０  アスパラギン酸、５  ＣａＣｌ２、２  ＭｇＣｌ２および１０  ＨＥＰＥＳ（トリス塩基でｐＨを７．３５に調整した）を含有していた。浴は、（ｍＭ単位で）：１５０  ＮＭＤＧ−Ｃｌ、２  ＭｇＣｌ２、５  ＥＧＴＡ、１０  ＴＥＳおよび１４  トリス塩基（ＨＣｌでｐＨを７．３５に調整した）を含有していた。切除後、１ｍＭのＭｇ−ＡＴＰ、７５ｎＭのｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ触媒サブユニット（ＰＫＡ；Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、および１０ｍＭのＮａＦを添加することにより、野生型およびΔＦ５０８−ＣＦＴＲ両方を活性化させてタンパク質ホスファターゼを阻害し、これによって電流消耗を防止した。ピペット電位は８０ｍＶに維持した。２つ以下の活性チャネルを含有する膜パッチによりチャネル活性を分析した。同時開口の最大数によって、実験経過中の活性チャネル数を決定した。単一チャネル電流振幅を決定するために、１２０秒のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ活性から記録されたデータを１００Ｈｚで「オフライン」フィルター処理し、次いで全点振幅ヒストグラムを構築するために使用し、これを、バイオパッチ分析ソフトウェア（Ｂｉｏ−Ｌｏｇｉｃ  Ｃｏｍｐ．、フランス）を使用して多重ガウス分布関数に当てはめた。総微視的電流および開確率（Ｐｏ）を、１２０秒のチャネル活性から決定した。Ｐｏは、バイオパッチソフトウェアを使用して、または関係式Ｐｏ＝Ｉ／ｉ（Ｎ）［ここで、Ｉ＝平均電流、ｉ＝単一チャネル電流振幅、かつＮ＝パッチ中の活性チャネル数である］から決定した。
【０２５４】
細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、切除膜パッチクランプ記録に使用する。１７５ｃｍ２培養フラスコ内、２ｍＭのグルタミン、１０％のウシ胎仔血清、１×ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１×ペニシリン／ストレプトマイシンおよび２５ｍＭのＨＥＰＥＳを補充したダルベッコ変法イーグル培地中、３７℃、５％ＣＯ２および９０％湿度で細胞を維持する。単一チャネル記録のために、２，５００〜５，０００細胞をポリ−Ｌ−リジンコーティングされたガラスカバースリップ上に播種し、使用前に２７℃で２４〜４８時間培養した。
【０２５５】
化合物Ｉ形態Ａは、ＡＴＰ結合カセット輸送体のモジュレーターとして有用である。化合物Ｉ、形態ＡのＥＣ５０（μｍ）を測定すると、２．０μＭ未満であった。化合物Ｉ、形態Ａの効果は、１００％から２５％までであることが算出された。１００％効果は、４−メチル−２−（５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノールを用いて得られる最大応答であることに留意すべきである。
【図１】
0005877157.tif 000037
【図２】
0005877157.tif 000038
【図３】
0005877157.tif 000039
【図４】
0005877157.tif 000040
【図５】
0005877157.tif 000041
【図６】
0005877157.tif 000042
【図７Ａ】
0005877157.tif 000043
【図７Ｂ】
0005877157.tif 000044
【図８】
0005877157.tif 000045
【図９】
0005877157.tif 000046
【図１０】
0005877157.tif 000047
【図１１】
0005877157.tif 000048
【図１２】
0005877157.tif 000049
【図１３】
0005877157.tif 000050
【図１４】
0005877157.tif 000051
【図１５】
0005877157.tif 000052
【図１６】
0005877157.tif 000053
【図１７】
0005877157.tif 000054
【図１８】
0005877157.tif 000055
【図１９】
0005877157.tif 000056
【図２０】
0005877157.tif 000057
【図２１】
0005877157.tif 000058
【図２２】
0005877157.tif 000059
【図２３】
0005877157.tif 000060