(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌のアポトーシスを誘導して癌治療するための薬剤の製造におけるデキサナビノール又はその薬学的に許容される塩の使用であって、
該癌治療の対象としての癌細胞は原発性癌たる、前立腺癌、非小細胞肺癌、及び神経膠芽細胞腫のうち１つ以上から選択される、使用。
【請求項２】
デキサナビノール又はその薬学的に許容される塩の治療上効果的な量は癌細胞の腫瘍形成を阻害するのに十分である請求項１に記載の使用。
【請求項３】
デキサナビノール又はその薬学的に許容される塩の治療上効果的な量は癌細胞内において細胞毒性を誘導するのに十分である請求項１に記載の使用。
【請求項４】
患者に投与されるデキサナビノール又はその薬学的に許容される塩の量はデキサナビノールの１０〜２０μＭプラズマ濃度を実現するのに十分である請求項１に記載の使用。
【請求項５】
デキサナビノール又はその薬学的に許容される塩の量は治療薬の１０μＭ以上のプラズマ濃度を実現し、患者内で２時間以上維持されるのに十分である請求項１に記載の使用。
【請求項６】
デキサナビノール又はその薬学的に許容される塩は別の癌治療薬と組み合わされる請求項１に記載の使用。
【請求項７】
前記別の癌治療薬は腫瘍形成の阻害、細胞増殖の阻害、又は細胞毒性の誘導に適している請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記別の癌治療薬は化学療法薬、免疫療法薬、遺伝子治療、又は放射線療法薬である請求項６に記載の使用。
【請求項９】
デキサナビノール又はその薬学的に許容される塩が局所、経皮、皮下、静脈内、又は経口投与される請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
デキサナビノール又はその薬学的に許容される塩が局所投与される請求項９に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は癌の治療のための薬剤及び方法、特に癌細胞をアポトーシスさせる治療法を提供する。更に特に、本発明は黒色腫以外の癌のアポトーシスによる治療のためのデキサナビノール又はその誘導体を提供する。
【背景技術】
【０００２】
デキサナビノールは、特許文献１に開示されている１，１‐ジメチルヘプチル‐（３Ｓ，４Ｓ）‐７‐ヒドロキシ‐Δ6‐テトラヒドロカンナビノールである。デキサナビノールは以前、試験管内で黒色腫細胞を迅速に殺すことが実証された非向精神性のカンナビノールである。
【０００３】
特許文献２は黒色腫癌細胞の処置におけるデキサナビノールの使用を記載している。デキサナビノールのアポトーシス効果が記載されているが、作用機構は開示されておらず、当時、完全には理解されていなかった。従って、黒色腫以外の癌細胞における使用に対するこの薬剤の適用可能性を以前予見できなかった。この以前の特許出願では、デキサナビノールは黒色腫細胞内で核因子κＢ（ＮＦκＢ）を阻害することで作用し、従って、黒色腫の治療を提供することが開示されている。また、黒色腫内でデキサナビノールはアポトーシスを誘導し、かつ細胞増殖を阻害することが示された。
【０００４】
その後、我々は、デキサナビノールの作用機構は単にＮＦκＢへの結合によるより複雑であることを発見した。特許文献２に対する進歩性は、該作用機構の新知識の結果として、デキサナビノールがアポトーシスを誘導する新たな形態の癌を突きとめたという新発見である。他の間接的効果と複雑なプロフィールの結合とが存在する。この事により我々は、デキサナビノールが黒色腫だけより多くの癌において予想外に機能し、また望ましい選択的アポトーシス効果を有することを理解した。驚くことに、デキサナビノールは黒色腫だけでなく幾つかの他の癌にも効果があることを我々は発見した。
【０００５】
デキサナビノールのこれまで開示されていない結合プロフィールと間接的効果とは、デキサナビノールが黒色腫以外の形態の癌においてもアポトーシスを誘導するのに有効であろうことを示す。我々の調査から、その作用方法に関する新知識の結果として、デキサナビノールによるアポトーシス誘導を受け易い癌を我々は突きとめた。これに基づいて、関連する細胞株を試験し、この仮説を確かめた。
【０００６】
特許文献３は癌細胞増殖を低減するのにデキサナビノールを使用することを記載している。また、増殖の減少は炎症関連遺伝子の抑制に関して説明されている。
【０００７】
特許文献３は膵臓腫瘍及び結腸直腸腫瘍に対する可能性の証拠を提供するだけである。実験結果は、「Aspc-1増殖は１５μＭまでデキサナビノールの存在に影響されなかったが、Panc-1細胞増殖はこの同じ濃度で２６％阻害された」事を示す。また、「促進／抗炎症性メディエータの調整を介して作用するデキサナビノールはある種の腫瘍に対して治療上有効である可能性がある」とも述べられている。
【０００８】
従って、癌治療薬としてのデキサナビノールの使用は開示されているが、当業者は細胞増殖の低減は癌の拡がり又は成長を防ぐことで癌による損傷を低減するが、癌自体には致命的ではなく、従って、癌に細胞アポトーシスさせるために、例えば外科手法又は他の化学療法に頼る場合がある事を理解するであろう。
【０００９】
しかし、デキサナビノールは炎症、従って細胞増殖に効果があるが、アポトーシス効果も有していることを示唆するものはない。
【００１０】
特許文献３はデキサナビノールの作用機構が良く分からないことを認めている。実際、ページ１、２４〜２５行目において「にもかかわらず、カンナビノイド誘導体の幾つかの治療上の効果のもととなる機構は不明のままである」と述べている。また、特許文献３はデキサナビノール及び他のカンナビノイドは、脊髄損傷、脳虚血、及び神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病等による神経障害の治療のための魅力的な候補であると記載している。このように、これらのカンナビノイドのアポトーシス効果は望ましくない事は容易に理解されるであろう。
【００１１】
この従来技術はこれらの癌の治療における、アポトーシスの誘導によるのでないデキサナビノールの使用を示唆する。選択的アポトーシスの誘導は最重要であり、この従来技術では予期されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】米国特許第４８７６２７６号明細書
【特許文献２】国際公開第２００９／００７７００号
【特許文献３】国際公開第２００３／０７７８３２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、癌細胞アポトーシスを引き起こす化合物を開示し、細胞増殖を低減する、癌細胞アポトーシスのための特に有利な治療法を提供する。
【００１４】
デキサナビノールは非競合性ＮＭＤＡ受容体遮断薬であると共に、ＮＦκＢを阻害することが示されたと既に開示されている。しかし、驚くことに我々は、デキサナビノールは、これまでデキサナビノールと相互に作用すると知られていなかった複数のタンパク質部位に活発に結合するか、又は間接的に作用する能力があることを突きとめた。
【００１５】
このようなタンパク質部位は、Ｎ‐メチル‐Ｄ‐アスパルテート（ＮＭＤＡ）受容体、シクロオキシゲナーゼ‐２（ＣＯＸ‐２）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ‐α）、及び核因子κＢ（ＮＦκＢ）を含む。デキサナビノールはこれらの部位に活性であることが以前報告されている。しかし、これらの部位での活性に加えて、デキサナビノールは下記の部位にも活性であることは以前報告されていない。即ち、サイクリン依存キナーゼ、例えばＣＤＫ２／Ａ及びＣＤＫ５／ｐ２５、ヒストン・アセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）、及びファルネシルトランスフェラーゼである。
【００１６】
その作用機構を更に調査し、デキサナビノールとその誘導体は多数の癌細胞にアポトーシス効果を有することが分かった。従って、デキサナビノールとその誘導体による黒色腫以外の癌細胞のアポトーシスはそれだけで新規である。
【００１７】
デキサナビノールが癌細胞アポトーシスを引き起こすことの発見は、細胞増殖を低減し細胞アポトーシスを引き起こす特に有利な治療法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
より詳細には、デキサナビノールの既知の直接的標的及び間接的標的は下記のとおりである。
【００１９】
Ｎ‐メチル‐Ｄ‐アスパルテート（ＮＭＤＡ）受容体
デキサナビノールは元は神経保護薬として開発された。その神経保護作用はＮＭＤＡ受容体を遮断する能力によるものである。デキサナビノールは非競合性ＮＭＤＡ受容体拮抗物質の部位に近いが異なり、グルタメート、グリシン、及びポリアミンの認識部位とも異なる部位と相互作用することで、ＮＭＤＡ受容体を立体特異的に遮断する。幾つかの他の非競合性ＮＭＤＡ受容体拮抗物質と異なり、デキサナビノールは向精神性効果を生じず、通常、人間において良好な耐容性がある。
【００２０】
シクロオキシゲナーゼ‐２（ＣＯＸ‐２）
デキサナビノールはＮＭＤＡ受容体を遮断するその能力に関連しない抗炎症性及び抗酸化性を有する。抗炎症活性は酵素シクロオキシゲナーゼ‐２（ＣＯＸ‐２）により生成されるＰＧＥ２の分泌を低減するデキサナビノールの能力に関係する。ＣＯＸ‐２はアラキドン酸（ＡＡ）のプロスタグランジン（ＰＧ）及び他のエイコサノイド（炎症性を示し炎症に係ることが知られている化合物群）への代謝に係るシクロオキシゲナーゼアイソフォームの１つである。最も一般的なＮＳＡＩＤ（非ステロイド抗炎症性薬）は、酵素の活性部位を修飾してＡＡ基質のＰＧＥ２への形質転換を妨げることでＣＯＸ活性を阻害する（Hinz B. et al, J. Pharm. Exp. Ther. 300: 367- 375, 2002）。特許文献３にデキサナビノールが示すＰＧＥ２阻害活性はＣＯＸ‐２酵素活性のレベルではなく遺伝子調節のレベルで起こることが開示さている。
【００２１】
腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ‐α）
デキサナビノールはＴＮＦ‐αの生成又は作用を遮断できることが発見された。この阻害は転写後レベルで最も起こり易い。
【００２２】
国際公開第９７／１１６６８号及び国際公開第０１／９８２８９号に開示されているように、デキサナビノールはＴＮＦ‐αの生成又は作用を遮断することが発見された。頭部損傷のモデルにおいてデキサナビノールはＴＮＦ‐α ｍＲＮＡのレベルに影響しないので、サイトカインの阻害は転写後段階で起こることは自明と思われていた（Shohami E. et al., J. Neuroimmuno. 72: 169-77, 1997）。
【００２３】
人ＴＮＦ‐αは先ず２７ｋｄ膜透過前駆体タンパク質に翻訳されて、これがＴＮＦ‐α転換酵素（ＴＡＣＥ）により分泌１７ｋｄ形に切断される。ＲＴ‐ＰＣＲ実験に基づいて、ShoshanyらはデキサナビノールはＴＮＦ‐α ｍＲＮＡに有意な効果を持たず、一方、ＴＡＣＥ ｍＲＮＡのレベルを有意に減少させたと報告し、この薬剤は分泌阻害のレベルで作用するという仮説を支持した。
【００２４】
核因子κＢ（ＮＦκＢ）
デキサナビノールは、ＩＫＢ２のリン酸化及び分解を間接的に阻害することで核因子κＢ（ＮＦκＢ）を阻害する実験証拠が存在する。
【００２５】
Juttler, E らは２００４年（Neuropharmacology 47(4):580-92.）に、デキサナビノールはＮＦκＢを阻害する証拠を提供した。デキサナビノールは（１）ＮＦκＢ IkappaBalphaの阻害物質のリン酸化及び分解とＮＦκＢの核への転座を阻害し、（２）ＮＦκＢの転写活性と（３）ＮＦκＢ標的遺伝子腫瘍壊死因子アルファ及びインターロイキン‐６（ＴＮＦ‐α及びＩＬ‐６）のｍＲＮＡ蓄積とを低減する。
【００２６】
デキサナビノールの以前知られていなかった標的は下記のとおりである。
【００２７】
サイクリン依存キナーゼ：ＣＤＫ２／Ａ及びＣＤＫ５／ｐ２５
デキサナビノールは直接的に評価した時、ＣＤＫ２及びＣＤＫ５に対して有意な直接的活性を有していなかった。しかし、そのような効果を仲介する細胞内網がより多く残る環境においてＣＤＫは間接的に作用されると我々は信じる。
【００２８】
ヒストン・アセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）
ヒストン・アセチルトランスフェラーゼは既知の癌標的である。デキサナビノールがこの標的に対して活性を有するか否かの分析データはないが、この標的への活性（従って、有益である）が予測されている。
【００２９】
ファルネシルトランスフェラーゼ
ファルネシルトランスフェラーゼは既知の癌標的である。デキサナビノールがこの標的に対して活性を有するか否かの分析データはないが、この標的への活性が予測されている。
【００３０】
本明細書において、デキサナビノールは１つ以上のタンパク質に癌及び癌治療に重要と考えられる効果を有することが記載されている。これらの効果の幾つかは直接的で、他は間接的である。デキサナビノールが多数の標的に効果を有することは非常に重要であり、このため、この化合物はある範囲の癌に有益である。
【００３１】
細胞株データはデキサナビノールが乳癌、結腸癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、及び神経膠芽細胞腫に有効であることを示す。
【００３２】
従って、本発明の第１の態様によれば、タンパク質Ｎ‐メチル‐Ｄ‐アスパルテート（ＮＭＤＡ）、シクロオキシゲナーゼ‐２（ＣＯＸ‐２）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ‐α）、核因子κＢ（ＮＦκＢ）、サイクリン依存キナーゼ、例えばＣＤＫ２／Ａ及びＣＤＫ５／ｐ２５、ヒストン・アセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）、及びファルネシルトランスフェラーゼに同時に、順次、又は別々に作用する能力がある治療薬が提供される。本発明のこの態様は、とりわけ、上記タンパク質に結合する単一の治療薬を提供する点において特に有利である。
【００３３】
本発明の特定の態様は、タンパク質Ｎ‐メチル‐Ｄ‐アスパルテート（ＮＭＤＡ）、シクロオキシゲナーゼ‐２（ＣＯＸ‐２）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ‐α）、核因子κＢ（ＮＦκＢ）、サイクリン依存キナーゼ、例えばＣＤＫ２／Ａ及びＣＤＫ５／ｐ２５、ヒストン・アセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）、及びファルネシルトランスフェラーゼに同時に、順次、又は別々に作用するためのデキサナビノール又はその誘導体を提供することは理解されよう。
【００３４】
従って、本発明の別の態様によれば、タンパク質Ｎ‐メチル‐Ｄ‐アスパルテート（ＮＭＤＡ）、シクロオキシゲナーゼ‐２（ＣＯＸ‐２）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ‐α）、核因子κＢ（ＮＦκＢ）、サイクリン依存キナーゼ、例えばＣＤＫ２／Ａ及びＣＤＫ５／ｐ２５、ヒストン・アセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）、及びファルネシルトランスフェラーゼに同時に、順次、又は別々に作用する能力があり、原発性癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、神経膠芽細胞腫、リンパ腫、中皮腫、肝臓癌、肝内胆管癌、食道癌、膵臓癌、胃癌、喉頭癌、脳腫瘍、卵巣癌、精巣癌、子宮頸癌、口腔癌、咽頭癌、腎臓癌、甲状腺癌、子宮癌、膀胱癌、肝細胞癌、甲状腺癌腫、骨肉腫、小細胞肺癌、白血病、骨髄腫、胃癌腫、及び転移性癌のうち１つ以上から選択される癌細胞のアポトーシスのための治療薬が提供される。
【００３５】
前述したように、デキサナビノールがタンパク質部位に直接的又は間接的効果を有する事実は、デキサナビノールを様々な癌細胞のアポトーシスのための適切な治療薬にする。
【００３６】
本発明の別の態様によれば、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、胃癌腫、食道癌、卵巣癌、腎臓癌、及び甲状腺癌のうち１つ以上から選択される患者の癌のアポトーシスのためのデキサナビノール又はその誘導体を提供する。
【００３７】
本発明の別の態様によれば、原発性癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、神経膠芽細胞腫、リンパ腫、中皮腫、肝臓癌、肝内胆管癌、食道癌、膵臓癌、胃癌、喉頭癌、脳腫瘍、卵巣癌、精巣癌、子宮頸癌、口腔癌、咽頭癌、腎臓癌、甲状腺癌、子宮癌、膀胱癌、肝細胞癌、甲状腺癌腫、骨肉腫、小細胞肺癌、白血病、骨髄腫、胃癌腫、及び転移性癌のうち１つ以上から選択される患者の癌のアポトーシスのためのデキサナビノール又はその誘導体を提供する。
【００３８】
従って、デキサナビノール又はその誘導体は治療上効果的な量である。本発明によれば、治療上効果的な量はアポトーシスに効果的な量である。
【００３９】
アポトーシス効果に加え、デキサナビノール又はその誘導体は特に癌の性質に依り他の癌治療作用、例えば腫瘍形成の阻害、細胞増殖の阻害、細胞毒性の誘導等も提供する場合がある。
【００４０】
デキサナビノール又はその誘導体の作用機構の説明から、本発明に従って様々な癌のアポトーシスによる治療が可能であることが理解されるであろう。列挙できる特定の癌は、これらに限定されないが、乳癌、結腸癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、神経膠芽細胞腫、リンパ腫、中皮腫、肝臓癌、肝内胆管癌、食道癌、膵臓癌、胃癌、喉頭癌、脳腫瘍、卵巣癌、精巣癌、子宮頸癌、口腔癌、咽頭癌、腎臓癌、甲状腺癌、子宮癌、膀胱癌、及び転移性癌を含む。列挙できるより具体的な癌は、膵臓癌、神経膠芽細胞腫、胃癌腫、食道癌、卵巣癌、腎臓癌、及び甲状腺癌のうち１つ以上から選択される癌を含む。列挙できる更に具体的な癌は、原発性癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、神経膠芽細胞腫、リンパ腫、及び転移性癌のうち１つ以上から選択される癌を含む。従って、本発明に係るアポトーシスする癌細胞は前癌状態、転移性、又は多剤耐性、及びこれらの組合せであってもよい。特に、デキサナビノール又はその誘導体は転移性癌細胞のアポトーシスに効果があることを我々は発見した。
【００４１】
本発明の別の態様によれば、患者の癌のアポトーシスのための薬剤の製造におけるデキサナビノール又はその誘導体の使用を提供する。この癌は原発性癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、神経膠芽細胞腫、リンパ腫、中皮腫、肝臓癌、肝内胆管癌、食道癌、膵臓癌、胃癌、喉頭癌、脳腫瘍、卵巣癌、精巣癌、子宮頸癌、口腔癌、咽頭癌、腎臓癌、甲状腺癌、子宮癌、膀胱癌、肝細胞癌、甲状腺癌腫、骨肉腫、小細胞肺癌、白血病、骨髄腫、胃癌腫、及び転移性癌のうち１つ以上から選択される。
【００４２】
本発明の好適な実施形態では、患者の癌のアポトーシスのための薬剤の製造におけるデキサナビノール又はその誘導体の使用を提供する。この癌は膵臓癌、神経膠芽細胞腫、胃癌腫、食道癌、卵巣癌、腎臓癌、及び甲状腺癌のうち１つ以上から選択される。本発明の別の好適な実施形態では、患者の癌のアポトーシスのための薬剤の製造におけるデキサナビノール又はその誘導体の使用を提供する。この癌は原発性癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、神経膠芽細胞腫、リンパ腫、及び転移性癌のうち１つ以上から選択される。
【００４３】
本発明のこの態様によれば、患者に投与されるデキサナビノール又はその誘導体の量はデキサナビノールの１０〜２０μＭプラズマ濃度を実現するのに十分であることを特徴とする前述した使用を提供する。
【００４４】
本発明の別の態様によれば、デキサナビノール又はその誘導体の量は治療薬の１０μＭ以上のプラズマ濃度を実現し、患者内で２時間以上維持されるのに十分であることを特徴とする前述した使用を提供する。
【００４５】
本発明の更に別の態様によれば、患者の癌のアポトーシスを含む癌の治療方法であってアポトーシスに効果的な量のデキサナビノール又はその誘導体を必要な患者に投与することを含む癌治療方法を提供する。この癌は原発性癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、神経膠芽細胞腫、リンパ腫、中皮腫、肝臓癌、肝内胆管癌、食道癌、膵臓癌、胃癌、喉頭癌、脳腫瘍、卵巣癌、精巣癌、子宮頸癌、口腔癌、咽頭癌、腎臓癌、甲状腺癌、子宮癌、膀胱癌、肝細胞癌、甲状腺癌腫、骨肉腫、小細胞肺癌、白血病、骨髄腫、胃癌腫、及び転移性癌のうち１つ以上から選択される。
【００４６】
本発明の好適な実施形態では、前述した癌の治療方法を提供する。この癌は膵臓癌、神経膠芽細胞腫、胃癌腫、食道癌、卵巣癌、腎臓癌、及び甲状腺癌のうち１つ以上から選択される。本発明の別の好適な実施形態では、前述した癌の治療方法を提供する。この癌は原発性癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、非小細胞肺癌、神経膠芽細胞腫、リンパ腫、及び転移性癌のうち１つ以上から選択される。
【００４７】
特に、本発明は、癌のアポトーシスを含む癌の治療方法であって、タンパク質Ｎ‐メチル‐Ｄ‐アスパルテート（ＮＭＤＡ）、シクロオキシゲナーゼ‐２（ＣＯＸ‐２）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ‐α）、核因子κＢ（ＮＦκＢ）、サイクリン依存キナーゼ、例えばＣＤＫ２／Ａ及びＣＤＫ５／ｐ２５、ヒストン・アセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）、及びファルネシルトランスフェラーゼに同時に、順次、又は別々に直接的又は間接的に作用する能力がある薬剤の治療上効果的な量の投与を含む癌治療方法を提供する。本発明のこの態様は、とりわけ、上記タンパク質に作用する単一の治療薬の投与を含む治療方法を提供する点において特に有利である。
【００４８】
より具体的には、本発明のこの態様に係る方法は治療上効果的な量のデキサナビノール又はその誘導体をそのような治療の必要な患者に投与することを含む。
【００４９】
本発明の方法は癌細胞の腫瘍形成を阻害するのに十分な治療上効果的な量のデキサナビノール又はその誘導体の投与を含む。
【００５０】
或いは、又はこれに加えて、本方法は癌細胞内に細胞毒性を誘導するのに十分な治療上効果的な量のデキサナビノール又はその誘導体の投与を含む。
【００５１】
患者に投与してよい治療薬、例えばデキサナビノールの量は、特に癌の性質、癌の重篤さ等に依り変わる可能性がある。従って、例えば患者に投与されるデキサナビノールの治療上効果的な量は、デキサナビノールの１０〜２０μＭプラズマ濃度を実現するのに十分であってよい。
【００５２】
より具体的には、本方法は１０μＭ以上のプラズマ濃度を実現し患者内で２時間以上維持されるのに十分な治療上効果的な量の治療薬、例えばデキサナビノール又はその誘導体の投与を含んでよい。
【００５３】
更に、タンパク質Ｎ‐メチル‐Ｄ‐アスパルテート（ＮＭＤＡ）、シクロオキシゲナーゼ‐２（ＣＯＸ‐２）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ‐α）、核因子κＢ（ＮＦκＢ）、サイクリン依存キナーゼ、例えばＣＤＫ２／Ａ及びＣＤＫ５／ｐ２５、ヒストン・アセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）、及びファルネシルトランスフェラーゼに同時に、順次、又は別々に作用し、治療上効果的な量のデキサナビノール又はその誘導体の投与を含む方法を提供する。
【００５４】
本発明の更に別の態様によれば、デキサナビノールの１０〜２０μＭプラズマ濃度を実現するのに十分な量のデキサナビノール又はその誘導体を含む医薬組成物を提供する。
【００５５】
更に、１０μＭ以上のプラズマ濃度を実現し患者内で２時間以上維持されるのに十分な量のデキサナビノール又はその誘導体を含む医薬組成物を提供する。
【００５６】
本発明は、該癌細胞が前癌状態、悪性、原発性、転移性、又は多剤耐性である場合があることを考慮している。
【００５７】
或いは、癌の治療は、効果的な量のデキサナビノール又はその誘導体と癌細胞を接触させることによる癌細胞の腫瘍形成の阻害を含んでもよい。腫瘍形成の阻害は癌細胞内における細胞毒性及び／又はアポトーシスの誘導を含んでもよい。
【００５８】
また、本発明の方法は、特に現在使用されている化学療法薬に比べて低減された毒性、低減された副作用、及び／又は低減された耐性を示すので有利である。
【００５９】
第２の治療薬をデキサナビノール又はその誘導体と組合せて癌の治療及び／又は防止のために癌細胞に供給することが更に考慮されている。第２の治療薬は化学療法薬、免疫療法薬、遺伝子治療、又は放射線療法薬であってもよい。第２の治療薬が本発明に係る治療に含まれる場合、該第２の治療薬はデキサナビノール又はその誘導体と別々に、同時に、又は順次に投与されてよい。
【００６０】
様々な第２又は追加の治療薬がデキサナビノール又はその誘導体と一緒に使用されてよい。しかし、第２又は追加の治療薬は好ましくは化学療法薬、免疫療法薬、遺伝子治療薬、及び放射線療法薬からなるグループから選択されてよい。
【００６１】
本明細書で使用される用語「誘導体」は特に溶媒和物等のデキサナビノールの従来から既知の誘導体を含む。本明細書に記載した化合物の対応する溶媒和物を調製、精製、及び／又は取り扱うのが便利又は望ましく、これを前記使用／方法のいずれかにおいて使用してよい。用語「溶媒和物」は本明細書で溶質、例えば化合物又は該化合物の塩と、溶媒との複合体を指すために使用される。溶媒が水であれば、溶媒和物は水和物、例えば一水和物、二水和物、三水和物などと基質の１分子当りに存在する水分子の数に依り呼ばれる。用語「誘導体」は特に塩を含む。デキサナビノールの適切な塩は周知で従来技術に記載されている。有機酸又は無機酸と塩基との塩を医薬的に許容される塩を作るのに使用してよい。そのような酸は、これらに限定されないがフッ化水素酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、クエン酸、コハク酸、マレイン酸、及びパルミチン酸を含む。塩基は水酸化ナトリウム及び水酸化アンモニウム等の化合物を含む。当業者はデキサナビノールの医薬的に許容される第四アンモニウム誘導体を作るのに使用できる四級化剤をよく知っている。これらは限定されないがヨウ化メチル、ヨウ化エチル、硫酸メチル、及び硫酸エチルを含む。
【００６２】
デキサナビノールとその誘導体、及び／又はこれらの組合せはそれ自体は既知であり、当業者に既知の方法を使用して調製してもよいし、又は商業上入手可能である。特にデキサナビノールとはその調製方法は特許文献１に開示されている。
【００６３】
本発明の更に別の態様によれば、前述したデキサナビノール又はその誘導体の使用又は方法を提供する。この使用又は方法ではデキサナビノール又はその誘導体は医薬的に許容される補助薬、賦形剤、又は担体と混合して投与される。
【００６４】
デキサナビノール又はその誘導体は特に治療する癌の性質に依り様々な方法で投与されてよい。従って、デキサナビノール又はその誘導体は局所、経皮、皮下、静脈内、又は経口投与されてよい。
【００６５】
我々は特にデキサナビノール又はその誘導体の局所投与を含むデキサナビノール又はその誘導体の使用又は治療方法を提供する。
【００６６】
従って、本発明の使用、方法、及び／又は組成物において、該化合物は錠剤、カプセル、糖衣錠、座薬、懸濁液、液剤、注射薬、例えば静脈内、筋肉内、又は腹膜内、移植、局所、例えば経皮、調製薬、例えばゲル、クリーム、軟膏、エアゾール、ポリマー系、又は吸入剤の形態、例えばエアゾール又は粉末薬として提供されてよい。
【００６７】
経口投与に適切な組成物は錠剤、カプセル、糖衣錠、液体懸濁液、液剤、及びシロップを含む。
【００６８】
皮膚への局所投与に適切な組成物はクリーム、例えば水中油型乳剤、油中水型乳剤、軟膏、ゲル、ローション、軟膏、皮膚軟化剤、コロイド分散系、懸濁液、乳剤、オイル、スプレー、泡、ムースなどを含む。局所塗布に適切な組成物は、例えば脂質又は特別の洗浄剤でできたリポソーム担体を含んでよい。
【００６９】
他の補助薬、賦形剤、又は担体の例は、
錠剤と糖衣錠の場合は、充填剤、例えば乳糖、澱粉、微晶質セルロース、滑石、及びステアリン酸；潤滑剤／流動促進剤、例えばステアリン酸マグネシウム、及びコロイド状二酸化ケイ素；崩壊剤、例えばグリコール酸ナトリウム澱粉、及びカルボキシメチルセルロースナトリウムであり、
カプセルの場合は、α澱粉、又は乳糖であり、
経口、又は注射剤、又は浣腸剤の場合は、水、グリコール、アルコール、グリセリン、植物油であり、
座薬の場合は、天然油、硬化油、又はワックスである。
【００７０】
上述した化合物又はその誘導体及び／又はこれらの組合せ、又は任意の組合せ養生を、経皮的、例えば経皮送達器、又は適切な送達手段、例えば制御された送達のためにパッチに組み込まれてもよい軟膏基剤に入れて投与することが可能である。このような手段は、例えば経口又は静脈内薬剤に比べて長い処置期間を可能にするので有利である。
【００７１】
経皮送達器の例は、患者の皮膚を通して化合物又は物質を放出するのに適合したパッチ、手当用品、包帯又は絆創膏を含む。当業者は化合物又は物質を経皮送達するのに使用されうる材料及び手法をよく知っている。代表的な経皮送達器は英国特許第２１８５１８７号、米国特許第３２４９１０９号、米国特許第３５９８１２２号、米国特許第４１４４３１７号、米国特許第４２６２００３号、及び米国特許第４３０７７１７号に開示されている。
【発明を実施するための形態】
【００７２】
本発明を実施例により例示する。
【実施例１】
【００７３】
細胞株内のデキサナビノールのアポトーシス効果を評価する試験管内分析
方法
分析は３つの黒色腫株（Ａ３７５、Ｇ‐３６１、ＷＭ２６６‐４）、２つの乳癌株（ＭＣＦ７、ＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１）、繊維芽細胞（４６ＢＲ．１Ｇ１）、結腸癌（ＨＣＴ１１６）、前立腺癌（ＰＣ‐３）、神経膠芽細胞腫（Ｕ３７３）、及び非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）（ＤＭＳ‐１１４）に対して２４時間時点で行った。
【００７４】
上記細胞株を３７℃、５％加湿ＣＯ2内で１０％（ｖ／ｖ）熱不活性化ウシ胎児血清（シグマ社、英国）と２ｍＭのＬ‐グルタメートとを含むRPMI 1640培養基（シグマ社、英国）内に維持した。細胞を採取し、洗浄し、成長培地内へ再度懸濁させカウントした（Beckman-Coulter Vi-CELL XR）。細胞を３８４組織培養プレートの中央の２４０ウェルに１．６×１０5〜２．４×１０5細胞／ｍｌで１ウェル当り１２．５μｌに等分した。５０μｌの成長培地を外側のウェルに等分した。１細胞株当たり２プレートを用意した。プレートを３７℃、５％加湿ＣＯ2内で一晩培養した。
【００７５】
デキサナビノールを成長培地内に最終分析濃度の２倍の濃度、１２５、３１．３、７．８１、２．００、０．４９、０．１２、０．０３１、及び０．００８μＭで調製した（ＤＭＳＯ濃度は希釈範囲に亘って一定（０．５％）に保たれた）。
【００７６】
シスプラチンを陽性対照として使用した。最終分析濃度は１０、２．５、０．６３、０．１５６、０．０３９、０．０１０、０．００２、及び０．０００６μｇ／ｍｌであった。１ウェル当り１２．５μｌのデキサナビノール又はシスプラチン希釈液を６自己複製したプレートに加えた。１２．５μｌの成長培地を培地対照ウェルに加えた。これらのプレートを３７℃、５％加湿ＣＯ2内で２４時間培養した。
【００７７】
カスパーゼ‐３／７のレベルをApo-ONE Homogeneous Caspase- 3/7分析キットで評価した。FlexStation（登録商標）II384プレートリーダーを使用してカスパーゼ基質を加えた１、２、３、及び４時間後に蛍光を測定した。４時間後の読取り値を分析に使用した。
【００７８】
CellTiter-Blue（登録商標）（Promega社）試薬を使用して細胞生育力分析を各株について同じプレートに並行して行った。２５μｌのCellTiter-Blue（登録商標）（Promega社）試薬を各ウェルに短時間加えた。プレートを１分間５００ｒｐｍで攪拌した後、３７℃、５％ＣＯ2内で４時間培養した。FlexStation（登録商標）II384プレートリーダー（５７０ｎｍ励起波長、６００ｎｍ放射波長、５９０ｎｍカットオフ）を使用して蛍光を測定した。デキサナビノール及びシスプラチンの細胞毒性効果を示すプロットを同じグラフ上に重ねて示す。
【００７９】
結果
シスプラチン又はデキサナビノールと一緒に２４時間培養後のＡ３７５、Ｇ‐３６１、ＷＭ２６６‐４、ＭＣＦ７、ＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１、４６ＢＲ．１Ｇ１、ＨＣＴ１１６、ＰＣ‐３、Ｕ３７３、及びＤＭＳ‐１１４細胞におけるアポトーシスの誘導をそれぞれ図１〜図１０に示し、表１に要約した。CellTiter-Blue（登録商標）で測定した細胞生育力評価に加えて、細胞毒性を示す評価も示されている。
【００８０】
シスプラチンを陽性対照として使用した。細胞毒性効果へのある程度の耐性を示したＵ３７３ＭＧとＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１を除く全ての細胞株において細胞傷害反応が観察された（近似ＩＣ50値５〜２０μｇ／ｍｌ）。不十分な用量反応がＤＭＳ‐１１４とＰＣ‐３細胞について観察され、従ってＩＣ50値を測定できなかった。アポトーシスの誘導は、不十分な用量曲線（Ｇ‐３６１、ＷＭ２６６‐４、ＰＣ‐３）、又は弱いカスパーゼ‐３／７誘導（ＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１、ＭＣＦ７、ＨＣＴ１１６、ＤＭＳ‐１１４、Ｕ３７３ＭＧ）のためそれ程容易には定量化できなかった。全体では、３つの黒色腫株（Ａ３７５、Ｇ‐３６１、ＷＭ２６６‐４）、結腸癌（ＨＣＴ１１６）、及び繊維芽細胞（４６ＢＲ．１Ｇ１）はシスプラチンの細胞毒性効果に最も感受性が高く、アポトーシスの増加と細胞生育力の減少の両方を誘導した。
【００８１】
デキサナビノールは細胞株の大多数において１０〜２０μＭの範囲のＩＣ50値の細胞傷害反応を誘導した。不十分な用量曲線（Ａ３７５、Ｇ‐３６１、ＰＣ‐３、４６ＢＲ．１Ｇ１、ＤＭＳ‐１１４）、又は無反応の細胞（ＭＣＦ７、ＨＣＴ１１６、Ｕ３７３ＭＧ）のため、細胞株全てについてはアポトーシスの誘導を定量化できなかった。アポトーシスのピーク反応は２．５μＭで起こり、１０μＭの最高濃度で降下した。これは細胞溶解及び喪失のためである可能性がある。全体では、３つの黒色腫細胞株（Ａ３７５、Ｇ‐３６１、ＷＭ２６６‐４）、２つの乳癌株（ＭＣＦ７、ＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１）、及び前立腺癌株（ＰＣ‐３）はデキサナビノールに最も感受性が高く、ＤＭＳ‐１１４、Ｕ３７３が最も低かった。
【００８２】
【表１】
0005930204.tif 000002
ＮＤ−ＥＣ／ＩＣ50は不十分な用量反応曲線のため測定されず
ＮＲ−反応は観察されず
Ｒａｎｋ＊弱いアポトーシスの誘導と増殖の減少（＜３５％）
＊＊中位のアポトーシスの誘導と増殖の減少（３５〜７０％）
＊＊＊良好なアポトーシスの誘導と増殖の減少（＞７０％）
【００８３】
要約
特許文献２で詳述したように以前の研究では、デキサナビノールは黒色腫細胞株（Ａ３７５、Ｍａｌｍｅ‐３Ｍ、ＵＡＣＣ６２）の成長を減少させ、ＩＣ50値は１０〜２０μＭの範囲であった。この研究の目的は、ありうる作用機構を解明するために癌細胞株の一団と人繊維芽細胞株におけるアポトーシスをデキサナビノールが誘導するか否かを検出することであった。アポトーシスに加え、細胞生育力も並行して評価した。
【００８４】
胃癌、神経膠芽細胞腫を含むある範囲の癌を治療するために臨床で使用される標準治療剤であるシスプラチンが陽性対照として使用され、ある程度の耐性を示したＵ３７３ＭＧ、ＤＭＳ‐１１４、ＰＣ３、及びＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１を除く大多数の細胞株において細胞毒性効果を誘導した。シスプラチンに反応したこれらの細胞株においては、ＭＣＦ７を除いてアポトーシスの増加に対応して生育力が減少した。ＭＣＦ７はカスパーゼ‐３が欠乏していることが報告され、従って、アポトーシスはこの細胞株では過小評価される可能性がある。
【００８５】
検査薬であるデキサナビノールはアポトーシスを誘導する効果を示した。この効果はＤＮＡキレート剤であるシスプラチンで見られるのと同様に細胞数へのデキサナビノールの効果と完全に一致する。これらの効果は１０μＭを超える濃度で見られた。
【００８６】
デキサナビノールは１０-5Ｍを超える濃度で全ての細胞株において細胞生育力の用量依存減少を生じさせたが、アポトーシスはこのパターンに常には一致せず、２．５μＭの濃度でピーク反応が生じ、１０μＭで消失した。しかし、これは最高濃度で細胞生育力が１００％喪失しアポトーシスを分析するのに細胞が不足したためであった可能性がある。最も感受性が高い細胞株は
・人黒色腫：ＷＭ３６６‐４、Ｇ‐３６１
・人乳癌：ＭＤＡ‐ＭＢ‐２３１
・人前立腺癌：ＰＣ３
であった。
【実施例２】
【００８７】
ＭＴＴ分析
・デキサナビノール＋陽性対照の評価
・異なる腫瘍種類から選択された複数の細胞株に対する検査。例えば：
癌                            細胞株
急性骨髄性白血病                ＭＶ４‐１１
腎細胞癌                        ７８６‐０
多発性骨髄腫                    ＯＰＭ‐２
膵臓癌                          ＰＡＮＣ‐１
膵臓癌                          ＢｘＰＣ‐３
急性リンパ芽球性白血病          ＭＯＬＴ‐４
卵巣癌                          Ａ２７８０
慢性骨髄性白血病                Ｋ‐５６２
胃癌                            ＭＫＮ‐４５
胃癌                            ＮＣＩ‐Ｎ８７
急性前骨髄球性白血病            ＨＬ‐６０
小細胞肺癌                      ＮＣＩ‐Ｈ６９
小細胞肺癌                      ＮＣＩ‐Ｈ５２６
甲状腺髄様癌                    ＴＴ
食道癌                          ＯＥ３３
骨肉腫                          ＳＪＳＡ‐１
未分化甲状腺癌                  ８５０５Ｃ
神経膠芽細胞腫                  Ｕ８７ＭＧ
神経膠芽細胞腫                  ＳＦ‐２９５
びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫  ＷＳＵ‐ＤＬＣL２
肝細胞癌                        Ｈｅｐ３Ｂ
肝細胞癌                        Ｈｅｐ Ｇ２
【００８８】
特定の目標１：単一薬剤のＩＣ50値測定
人腫瘍細胞を総量９０μｌ／１ウェルで９６ウェル微小培養プレート（Costar white, flat bottom # 3917）に入れる。３７℃、５％ＣＯ2、９５％空気入りの加湿された培養器内で２４時間培養した後、成長培地で１０倍連続希釈された検査薬１０μｌを各ウェルに加える。ＣＯ2培養器内で９６時間培養後、培養された細胞とCell Titer-Glo （Promega #G7571）試薬とを室温にして３０分間平衡させる。１００μｌのCell Titer-Glo（登録商標）試薬を各ウェルに加える。プレートを２分間攪拌した後、１０分間放置して平衡させ、ルミネセンスをTecan GENios微小プレートリーダーで読み取る。
【００８９】
細胞成長の阻害率を未処置の対照ウェルを基準として計算する。全検査を各濃度レベルで２回行う。
【００９０】
検査薬のＩＣ50値をPrism 3.03を使用し、下記の４パラメータロジスティック方程式を使用してデータを曲線適合させることで推定する。
【００９１】
【数１】
0005930204.tif 000003
ここで、Topは最高薬剤濃度における対照吸光度の最大％、Bottomは対照吸光度の最小％、Yは対照吸光度の％、Xは薬剤濃度、ＩＣ50は対照細胞に比べて５０％細胞成長を阻害する薬剤濃度、ｎは曲線の傾きである。
【実施例３】
【００９２】
異種移植分析
細胞：試験管内分析の結果に依存
マウス：無胸腺症の雌マウス、６〜８週齢
腫瘍：１つの脇腹に５００万個の細胞とマトリゲルを移植
薬剤：デキサナビノール、腹腔内（ip）週１回×４週
シスプラチン又はタクソール、腹腔内（ip）週１回×４週
成長曲線：最も似た腫瘍サイズ、約１５０ｍｍ3、を持つマウスを選択
処置グループ：（６マウス／１グループ）
１．賦形剤だけ、ip、週１回×４週
２．デキサナビノール、ip、週１回×４週
３．シスプラチン、ip、週１回×４週
４．デキサナビノール、ip、週１回＋シスプラチン、ip、週１回×４週
腫瘍測定：マウスを屠殺し腫瘍を採取するまで週２回
体重測定：週２回以上