(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
高分子及びリポソームが複合されたナノサイズの複合体であって、
脂質とアルキル基がグラフトされたアミノ酸系高分子（ｐｏｌｙ（ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）ｓ）とを含み、
前記アルキル基がグラフトされたアミノ酸系高分子は、前記脂質を含む脂質二重層に会合されている構造であり、
前記アミノ酸系高分子は、ポリアスパラギン酸（ｐｏｌｙ（ａｓｐａｒｔｉｃ  ａｃｉｄ））又はポリアスパラギン（ｐｏｌｙ（ａｓｐａｒａｇｉｎｅ））であり、
前記アミノ酸系高分子にグラフトされた前記アルキル基は、脂肪族鎖長が炭素数８以上である、高分子‐リポソームナノ複合体。
【請求項２】
前記高分子‐リポソームナノ複合体は、コレステロールをさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の高分子‐リポソームナノ複合体。
【請求項３】
前記脂質は、炭素数１２個〜２４個の脂肪酸鎖を有するリン脂質又は窒素脂質であることを特徴とする、請求項１に記載の高分子‐リポソームナノ複合体。
【請求項４】
前記脂質は、
卵黄レシチン（ホスファチジルコリン）、大豆レシチン、リゾレシチン（ｌｙｓｏｌｅｃｉｔｈｉｎ）、スフィンゴミエリン（ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎ）、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ジホスファチジルグリセロール、カルジオリピン（ｃａｒｄｉｏｌｉｐｉｎ）及びプラズマローゲンから構成された群より選択される一つ以上の天然リン脂質と、
ジセチルホスフェート、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、エレオステアロイルホスファチジルコリン、エレオステアロイルホスファチジルエタノールアミン及びエレオステアロイルホスファチジルセリンから構成された群より選択される一つ以上の合成脂質と、
前記天然リン脂質又は合成脂質から収得可能な水素添加生成物と、
前記天然リン脂質又は合成脂質の加水分解により収得可能な脂肪酸混合物とから構成された群より選択される１種以上であることを特徴とする、請求項３に記載の高分子‐リポソームナノ複合体。
【請求項５】
前記アミノ酸系高分子の含量は、高分子‐リポソームナノ複合体全体の重量に対して０．５重量％〜５０重量％であることを特徴とする、請求項１に記載の高分子‐リポソームナノ複合体。
【請求項６】
前記アミノ酸系高分子の数平均分子量は、１，０００〜２００，０００（Ｄａｌｔｏｎ）であることを特徴とする、請求項１に記載の高分子‐リポソームナノ複合体。
【請求項７】
前記ナノ複合体のサイズは５０ｎｍ〜３００ｎｍであることを特徴とする、請求項１に記載の高分子‐リポソームナノ複合体。
【請求項８】
請求項１に記載の高分子‐リポソームナノ複合体の製造方法であって、
（ａ）脂質、コレステロール又は脂肪アルコール、及び脂肪酸を有機溶媒に混合溶解した後、溶媒を揮発させて脂質混合物を得るステップと、
（ｂ）前記脂質混合物に、アルキル基がグラフトされたアミノ酸系高分子が溶解した水溶液を添加して混合液を製造するステップと、
（ｃ）前記混合液中に形成された複合体の粒子を微細粒子化するステップとを含む高分子‐リポソームナノ複合体の製造方法。
【請求項９】
前記（ｃ）ステップは、高圧乳化機又は超音波処理を介して行われることを特徴とする、請求項８に記載の高分子‐リポソームナノ複合体の製造方法。
【請求項１０】
前記ナノ複合体は、薬物伝達体用であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の高分子‐リポソームナノ複合体。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の高分子‐リポソームナノ複合体を含む皮膚外用剤組成物。
【請求項１２】
前記高分子‐リポソームナノ複合体は、生理活性成分としてＮ‐ブチルデオキシノジリマイシン（Ｎ‐ｂｕｔｙｌｄｅｏｘｙｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ）、１‐デオキシノジリマイシン、カスタノスペルミン（ｃａｓｔａｎｏｓｐｅｒｍｉｎ）、放線菌培養抽出物（ＳＣＥ）、パンテテインスルホン酸カルシウム（Ｃａｌｃｉｕｍ  ｐａｎｔｅｔｈｅｉｎｅ
ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、アルブチン（ａｒｂｕｔｉｎ）、ビタミンＣ（ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）、エチルアスコルビルエーテル（ｅｔｈｙｌａｓｃｏｒｂｙｌ  ｅｔｈｅｒ）、α‐ケトグルタル酸（α‐ｋｅｔｏｇｌｕｔａｒｉｃ  ａｃｉｄ）、オレアノール酸（ｏｌｅａｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、レチノール（ｒｅｔｉｎｏｌ）及びエピガロカテキンガレート（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  ｇａｌｌａｔｅ、ＥＧＣＧ）から構成された群より選択される１種以上をさらに含むことを特徴とする、請求項１１に記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項１３】
前記組成物は、リポソーム、エマルジョン又は液晶状の剤形であることを特徴とする、請求項１１に記載の皮膚外用剤組成物。
【請求項１４】
前記組成物は、皮膚美白、抗酸化又はシワ改善用であることを特徴とする、請求項１１に記載の皮膚外用剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミノ酸系高分子を含む高分子‐リポソームナノ複合体及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
最近、リポソームを利用した薬物送達システムの有用性が台頭するとともに、多様な脂質成分の混合によって、より効果的な脂質ベースのナノ伝達体を製造しようとする研究が注目されている。特に、リポソーム内相に含入された生理活性成分が生体細胞に高効率で伝達され、活性成分の効能を最大限発揮できるようにするために、リポソームの構成成分を多様にして製造する研究が活発に行われている。
【０００３】
たとえば、細胞内小器官の特異的環境によりリポソームの安定性が低下され、リポソーム内に含入された生理活性成分が細胞内に放出されるように設計したリポソーム等についての研究が進められている。また、ｐＨや温度に敏感な脂質や高分子を一緒に使用して、特定の温度やｐＨ領域において薬物が放出されるようにするシステムが研究された。
【０００４】
リポソームは、様々な種類の脂質分子で構成され得るが、物理的安定性が確保されておらず、リポソームの安定性を確保するための多様な研究が試みられてきた。一部技術は、リポソームに特定の陰イオン界面活性剤を添加して安定性の増加を誘導し、リポソームの構成要素に正電荷脂質を添加したり、ステロール、陰イオン性脂質又はスフィンゴ脂質を導入したりもした。また、高分子乳化剤が溶けている水溶相にリポソームを混合したり、生理活性物質を安定化するためにリポソームをラメラ液晶に添加する方法を提示したりする技術もあった。
【０００５】
このように、リポソーム又はエマルジョン等の安定性向上のための研究が絶えず進められてきたが、前記技術は、物理的安定性が十分でないため、食品、化粧品及び薬学の分野において活用するには限界があった。
【０００６】
一般的に、脂質‐コレステロールベースのリポソームもまた、水相において長期安定度が確保できないものと知られている。特に、生体環境に使用される各種塩（ｓａｌｔ）に対しては非常に脆弱であるものと知られている。こうした組成物が化粧品及び皮膚外用剤等に使用されるためには、剤形内安定性が確保されなければならず、剤形内の各種界面活性剤により、その構造が容易に失われてしまう問題点がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の一実施例の目的は、剤形安定性に優れた高分子‐リポソームナノ複合体を提供することである。
【０００８】
本発明の他の一実施例の目的は、高分子‐リポソームナノ複合体の製造方法を提供することである。
【０００９】
本発明のまた他の一実施例の目的は、剤形安定性に優れたナノ複合体を利用した薬物伝達体及び皮膚外用剤組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
前記目的を達成するために、本発明は、高分子及びリポソームが複合されたナノサイズの複合体であって、脂質及びアミノ酸系高分子（ｐｏｌｙ（ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）ｓ）を含み、前記アミノ酸系高分子は、前記脂質を含む脂質二重層に会合されている構造である高分子‐リポソームナノ複合体を提供する。
【００１１】
また、本発明は、前記高分子‐リポソームナノ複合体を製造する方法を提供する。
【００１２】
また、本発明は、前記高分子‐リポソームナノ複合体を利用した皮膚外用剤組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明に係る高分子‐リポソームナノ複合体は、界面活性剤と塩に対する剤形安定性に優れ、医薬及び化粧品分野等において多様に活用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、本発明の一実施例に係る高分子‐リポソームナノ複合体を概略的に示したものである。
【図２】図２は、リポソームの分解程度を確認するために、添加された界面活性剤の量による吸光度を測定した結果を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の高分子‐リポソームナノ複合体は、高分子及びリポソームが複合されたナノサイズの複合体であって、脂質及びアミノ酸系高分子（ｐｏｌｙ（ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ）ｓ）を含み、前記アミノ酸系高分子は、前記脂質を含む脂質二重層に会合されている構造であることを特徴とする。本発明の例示的な高分子‐リポソームナノ複合体の構造が図１に示されている。
【００１６】
また、本発明の高分子‐リポソームナノ複合体は、コレステロールをさらに含んでもよい。コレステロールの添加は、脂質‐高分子二重層の自己会合力を妨げるが、リポソームの曲率を向上させて安定した球形のリポソームを形成することを促すことになる。
【００１７】
本発明の高分子‐リポソームナノ複合体に使用される脂質は、炭素数１２個〜２４個の脂肪酸鎖を有するリン脂質類又は窒素脂質であってよく、好ましくは、前記脂質はリン脂質であってよい。前記脂質は、たとえば、卵黄レシチン（ホスファチジルコリン）、大豆レシチン、リゾレシチン（ｌｙｓｏｌｅｃｉｔｈｉｎ）、スフィンゴミエリン（ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎ）、ホスファチジン酸、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ジホスファチジルグリセロール、カルジオリピン（ｃａｒｄｉｏｌｉｐｉｎ）及びプラズマローゲンから構成された群より選択される一つ以上の天然リン脂質、ジセチルホスフェート、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、エレオステアロイルホスファチジルコリン、エレオステアロイルホスファチジルエタノールアミン及びエレオステアロイルホスファチジルセリンから構成された群より選択される一つ以上の合成脂質、前記天然リン脂質又は合成脂質から収得可能な水素添加生成物、前記天然リン脂質又は合成脂質の誘導体、及び前記天然リン脂質又は合成脂質の加水分解により収得可能な脂肪酸混合物から構成された群より選択される１種以上であってよい。リン脂質等を含む脂質は、単独で使用してよく、２種以上を併用してもよい。
本発明の高分子‐リポソームナノ複合体に使用されるアミノ酸系高分子は、脂質や脂質／コレステロール二重層と会合するとともに二重層を固く縛り、外壁を保護して水相に存在する各種リポソーム構造を不安定にする要素（例えば、塩（ｓａｌｔ）、界面活性剤）から安定してリポソーム構造を維持させる役割をする。これにより、皮膚外用剤組成物又は化粧料組成物の多様な剤形を安定的に維持できるようになる。一実施例において、前記アミノ酸系高分子は、アスパルト酸、アスパラギン等といったアミノ酸、又はヒドロキシエチルアスパルタミド等といったアミノ酸誘導体をいずれか一つ以上含むランダム共重合体であってよい。一実施例において、前記アミノ酸系高分子は、ポリアスパルト酸（ｐｏｌｙ（ａｓｐａｒｔｉｃ  ａｃｉｄ））又はポリアスパラギン（ｐｏｌｙ（ａｓｐａｒａｇｉｎｅ））であってよい。
【００１８】
また、前記アミノ酸系高分子は、脂質を含むアミノ酸系高分子であってよく、具体的には、アミノ酸又はアミノ酸誘導体に脂質がグラフトされたランダム共重合体であってよい。一実施例において、前記アミノ酸系高分子は、脂質二重層のように会合可能に導入されたｎ‐アルキルアスパラギンであってよく、会合される脂質の種類に応じてアルキル鎖の長さを表すｎの範囲が定められることになる。具体的には、ｎ‐アルキルアスパルト酸は、炭素数が８（オクチル）以上の長さを持っているとき、脂質又は脂質／コレステロール二重層との会合が可能であり、たとえば、炭素数は、１２〜２２の整数であってよい。目的によっては、ｎ‐アルキル鎖の代わりに、コレステロールやフィトスフィンゴシン等の脂質成分を高分子にグラフトさせて脂質二重層に会合させてよい。一実施例において、前記アミノ酸系高分子は、アスパラギンとｎ‐アルキルアスパラギンの共重合体であってよく、たとえば、下記化学式１のように鎖を持つアルキル基がグラフトされた両親媒性ポリアスパラギンであってよい。
【００１９】
【化１】
0005856144.tif 000002
【００２０】
前記式において、
ｎは８以上の整数であり、より好ましくは、１２〜３６の整数であり、
Ｌとｍは、特に限定されないが、高分子１モルに対して、それぞれ１〜１０００程度の範囲を有する。分子量が小さすぎると所望の安定化効果を得ることができず、分子量が大きすぎると高分子が自ら会合構造を作り、脂質との会合リポソームを作りにくいためである。
【００２１】
また、前記脂質がグラフトされたアミノ酸系高分子における脂質は、リン脂質、スフィンゴリピド及びステロール類から構成された群より選択された１種以上を含み、脂肪アルコール又は脂肪酸の脂肪族鎖の長さが炭素数８以上、具体的には、炭素数１２〜３６のすべてのモノマーを総称する意味である。
【００２２】
本発明の高分子‐リポソームナノ複合体において、前記アミノ酸系高分子の含量は、高分子‐リポソームナノ複合体の重量を基準として、０．５重量％〜５０重量％であってよく、好ましくは、１．０重量％〜３０重量％、より好ましくは、５．０重量％〜２０重量％であってよい。アミノ酸系高分子の含量が５０重量％を超えると所望の二重膜構造の高分子‐リポソーム剤形を得ることができなくなり、０．５重量％未満だと高分子のリポソーム安定化効果が阻害され得る。また、本発明の高分子‐リポソームナノ複合体において、アミノ酸系高分子の数平均分子量は、１，０００乃至２００，０００（Ｄａｌｔｏｎ）であってよく、具体的には、５，０００乃至５０，０００であってよい。高分子の分子量が２００，０００を超えるとリポソームとの会合度が劣ることがあり、１，０００未満の場合にはリポソーム安定化効果が低下することができる。
【００２３】
本発明に係る高分子‐リポソームナノ複合体は、ナノサイズの粒子サイズを有してよい。たとえば、前記高分子‐リポソームナノ複合体の粒子サイズは、５０〜３００ｎｍであってよい。これは、安定した構造のリポソームを提供するためのものであり、高分子の組成又は高分子や脂質の濃度に応じて異なることもある。
【００２４】
また、本発明の高分子‐リポソームナノ複合体に使用されるコレステロールは、脂質含量の５０％以下で追加可能である。多すぎる含量においては、リポソームの二重膜構造が作られにくいためである。
【００２５】
また、本発明は、前記高分子‐リポソームナノ複合体の製造方法を提供する。
【００２６】
具体的に、本発明の高分子‐リポソームナノ複合体の製造方法は、
（ａ）脂質、コレステロール又は脂肪アルコール、及び脂肪酸を有機溶媒に混合溶解した後、溶媒を揮発させて脂質混合物を得るステップと、
（ｂ）脂質混合物に、脂質結合されたアミノ酸系高分子が溶解した水溶液を添加して混合液を製造するステップと、
（ｃ）混合液中に形成された複合体の粒子を微細粒子化するステップとを含んでよい。
【００２７】
高分子‐リポソームナノ複合体に使用される脂質成分としては、炭素数１２〜２４個の脂肪酸鎖を有するリン脂質類又は窒素脂質が使用されてよい。一般的に、リン脂質を使用することができる。また、必要に応じて、コレステロールを混合してよい。
【００２８】
また、前記アミノ酸系高分子は、脂質結合されたアミノ酸系高分子であってよい。他の一実施例において、前記アミノ酸高分子は、ｎ‐アルキル鎖がグラフトされたアスパラギンであってよく、会合される脂質の種類によってアルキル鎖の長さを表すｎの範囲が定められることになる。目的によっては、ｎ‐アルキル鎖の代わりに、コレステロールやフィトスフィンゴシン等の脂質成分を導入してよい。また、前記（ｃ）ステップは、特に制限されるものではないが、高圧乳化機又は超音波処理を介して行われてよい。
【００２９】
（ａ）ステップにおいて、溶媒として、エチルアルコールとメチレンクロライド、クロロホルムが使用可能である。
【００３０】
本発明の高分子‐リポソームナノ複合体の例示的な製造方法は、以下のとおりである。
【００３１】
まず、高分子を重合するためにＬ‐アスパルト酸（Ｌ‐ａｓｐａｒｔｉｃ  ａｃｉｄ）と酸触媒であるリン酸（ｐｈｏｓｐｈｏｓｒｉｃ  ａｃｉｄ）を溶媒のメシチレン又はスルホラン（ｍｅｓｉｔｙｌｅｎｅ／ｓｕｌｆｏｌａｎｅ）に入れて、窒素環境下で１８０℃を１０時間程度維持して反応させ、縮重合されたポリスクシンイミド（ｐｏｌｙ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ））を製造する。反応溶媒に応じて、縮重合されたポリスクシンイミドの分子量が異なることもある。縮重合されたポリスクシンイミドは、メタノールと精製水で洗浄（ｗａｓｈｉｎｇ）し、乾燥させてパウダー状の高分子を得る。得られたパウダー状の高分子をジメチルホルムアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ）溶媒にアルキルアミン（ａｌｋｙｌ  ａｍｉｎｅ）とともに混合して、７０℃で２４時間反応させる。その次に、室温で５ノルマル濃度の水酸化アンモニウム（ＮＨ４ＯＨ）水溶液を滴下して加水分解した後、過量のエーテルで沈殿させた後、乾燥してアルキル基がグラフトされた両親媒性ポリアミノ酸高分子を得る。
【００３２】
リポソームの製造は、超音波を利用して薄膜（ｔｈｉｎ  ｆｉｌｍ）法で製造してよい。ジステアロイルホスファチジルコリン（ｄｉｓｔｅａｒｏｙｌｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）といった脂質成分を丸首フラスコ（ｒｏｕｎｄ  ｎｅｃｋ  ｆｌａｓｋ）でクロロホルム（ＣＨＣｌ３）に溶かした後、回転蒸発器で溶媒を除去して、フラスコ壁面に薄い脂質膜を作る。これに両親媒性ポリアミノ酸高分子が溶解した水を添加して水和させた後、超音波処理をして高分子‐リポソームナノ複合体を製造することができる。
【００３３】
また、本発明に係る高分子‐リポソームナノ複合体は、内部に生理活性成分をさらに含んでよい。たとえば、高分子‐リポソームナノ複合体の内部に含有する活性成分が薬理成分である場合には、薬物伝達体としての役割をすることになる。
【００３４】
前記高分子‐リポソームナノ複合体に含まれる生理活性成分は、特に制限されないが、水溶性成分であってよく、美白、抗酸化及び／又はシワ改善に関連する物質が使用されてよい。前記活性成分は、たとえば、美白物質として知られているＮ‐ブチルデオキシノジリマイシン（Ｎ‐ｂｕｔｙｌｄｅｏｘｙｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ）、１‐デオキシノジリマイシン、カスタノスペルミン（ｃａｓｔａｎｏｓｐｅｒｍｉｎ）、放線菌培養抽出物（ＳＣＥ）、パンテテインスルホン酸カルシウム（Ｃａｌｃｉｕｍ  ｐａｎｔｅｔｈｅｉｎｅ  ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、アルブチン（ａｒｂｕｔｉｎ）、ビタミンＣ（ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）、エチルアスコルビルエーテル（ｅｔｈｙｌａｓｃｏｒｂｙｌ  ｅｔｈｅｒ）等のビタミンＣ誘導体や、シワ改善物質として知られているオレアノール酸（ｏｌｅａｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、レチノール（ｒｅｔｉｎｏｌ）、α‐ケトグルタル酸（α‐ｋｅｔｏｇｌｕｔａｒｉｃ  ａｃｉｄ）、エピガロカテキンガレート（ｅｐｉｇａｌｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ  ｇａｌｌａｔｅ，  ＥＧＣＧ）等がある。
【００３５】
また、本発明は、前記高分子‐リポソームナノ複合体を含む皮膚外用剤組成物を提供する。また、皮膚外用剤組成物に使用される高分子‐リポソームナノ複合体は、前記した生理活性成分のうち一つ以上を含有してよく、前記皮膚外用剤組成物は、皮膚美白、抗酸化及び／又はシワ改善用組成物であってよい。また、前記皮膚外用剤組成物の剤形は、特に制限されるものではないが、リポソーム、エマルジョン又は液晶状であってよい。
【００３６】
以下、実施例及び実験例により本発明をより具体的に説明するが、本発明は、これらに例のみに限定されるものではない。
【００３７】
参考例１：両親媒性アミノ酸系高分子の製造
Ｌ‐アスパルト酸（Ｌ‐ａｓｐａｒｔｉｃ  ａｃｉｄ）２５０ｇをリン酸（ｐｈｏｓｐｈｏｓｒｉｃ  ａｃｉｄ，８５％）３ｍｌとスルホラン（ｓｕｌｆｏｌａｎｅ）２５０ｇに入れ、窒素環境下で、１８０℃で１０時間程度維持して反応させた。縮重合されたポリスクシンイミド（ｐｏｌｙ（ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ））は、メタノールと精製水に数回入れ替えながらウォッシング（ｗａｓｈｉｎｇ）し、乾燥させた。これによって得られたパウダー状の高分子１ｇを、ジメチルホルムアミド（ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ）溶媒にアルキルアミン（ａｌｋｙｌａｍｉｎｅ）０．１ｇとともに混合して、７０℃で２４時間反応させた。その次に、常温で５ノルマル濃度の水酸化アンモニウム（ＮＨ４ＯＨ）水溶液を滴下して室温で３時間ミキシングしながら加水分解した後、過量のエチルエーテル（Ｅｔｈｙｌ  ｅｔｈｅｒ）で沈殿させて乾燥して、アルキル基がグラフトされた両親媒性ポリアミノ酸高分子を得る。
【００３８】
実施例１：ドデシル基がグラフトされたアミノ酸系高分子を利用した高分子‐リポソームナノ複合体の製造
１００％水添されたオレオリルパルミトイル／オレオリルステアリルホスファチジルコリン混合物（Ｌｉｐｏｉｄ  Ｓ１００‐３）１ｇを丸首フラスコ（ｒｏｕｎｄ  ｎｅｃｋ  ｆｌａｓｋ）に入れ、クロロホルム（ＣＨＣｌ３）に溶かした後、回転蒸発器で溶媒を除去してフラスコ壁面に薄い脂質膜を作った。これに、参考例１においてアルキルアミンとしてドデシルアミン（ｄｏｄｅｃｙｌ  ａｍｉｎｅ）を使用して製造された両親媒性のポリ（ドデシルアスパラギン）共重合体０．１ｇが溶解された水５０ｍｌを添加して、６５℃で水和させた。その次に、超音波処理をして高分子‐リポソームナノ複合体を製造した。
【００３９】
前記において使用したリン脂質混合物の組成は、下記表１のとおりである。
【００４０】
【表１】
0005856144.tif 000003
【００４１】
実施例２：オクタデシル基がグラフトされたアミノ酸系高分子を用いた高分子‐リポソームナノ複合体の製造
１００％水添されたオレオリルパルミトイル／オレオリルステアリルホスファチジルコリン混合物（Ｌｉｐｏｉｄ  Ｓ１００‐３）１ｇを丸首フラスコ（ｒｏｕｎｄ  ｎｅｃｋ  ｆｌａｓｋ）に入れ、クロロホルム（ＣＨＣｌ３）に溶かした後、回転蒸発器で溶媒を除去してフラスコ壁面に薄い脂質膜を作った。これに、参考例１においてアルキルアミンとしてオクタデシルアミン（ｏｃｔａｄｅｃｙｌ  ａｍｉｎｅ）を使用して製造された両親媒性のポリ（オクタデシルアスパラギン）共重合体０．１ｇが溶解された水５０ｍｌを添加して、７０℃で水和させた。その次に、超音波処理して高分子‐リポソームナノ複合体を製造した。
【００４２】
実施例２において使用したリン脂質混合物の組成は、前記表１のとおりである。
【００４３】
比較例１：単純脂質ベースのリポソームの製造
生分解性高分子を利用した高分子‐リポソーム複合体の構造及び溶液中における性質を脂質ベースの一般リポソームの性質と比較するために、単純脂質ベースのリポソームを製造した。１００％水添されたオレオリルパルミトイル／オレオリルステアリルホスファチジルコリン混合物（Ｌｉｐｏｉｄ  Ｓ１００‐３）１ｇを丸首フラスコ（ｒｏｕｎｄ  ｎｅｃｋ  ｆｌａｓｋ）に入れ、クロロホルム（ＣＨＣｌ３）に溶かした後、回転蒸発器で溶媒を除去してフラスコ壁面に薄い脂質膜を作った。次に、水５０ｍｌを添加して６５℃で水和させた後、超音波処理してリポソームを製造した。
【００４４】
比較例２：脂質‐コレステロール混合リポソームの製造
１００％水添されたオレオリルパルミトイル／オレオリルステアリルホスファチジルコリン化合物（Ｌｉｐｏｉｄ  Ｓ１００‐３）１ｇとコレステロール０．０５ｇを丸首フラスコ（ｒｏｕｎｄ  ｎｅｃｋ  ｆｌａｓｋ）に入れ、クロロホルム（ＣＨＣｌ３）に溶かした後、回転蒸発器で溶媒を除去してフラスコ壁面に薄い脂質膜を作った。次に、水５０ｍｌを添加して６５℃で水和させた後、超音波処理してリポソームを製造した。
【００４５】
比較例３：脂質‐脂肪アルコール混合リポソームの製造
１００％水添されたオレオリルパルミトイル／オレオリルステアリルホスファチジルコリン化合物（Ｌｉｐｏｉｄ  Ｓ１００‐３）１ｇとステアリルアルコール０．１ｇを丸首フラスコ（ｒｏｕｎｄ  ｎｅｃｋ  ｆｌａｓｋ）に入れ、クロロホルム（ＣＨＣｌ３）に溶かした後、回転蒸発器で溶媒を除去してフラスコ壁面に薄い脂質膜を作った。次に、水５０ｍｌを添加して７０℃で水和させた後、超音波処理してリポソームを製造した。
【００４６】
実験例１．アミノ酸系高分子で安定化された脂質ラメラ組成物の安定性実験
前記実施例１〜２及び比較例１〜３において製造したリポソームに対し、界面活性剤による安定性を比較実験した。
【００４７】
前記実施例及び比較例によって製造されたリポソーム溶液に含まれる脂質に対し、０．０１から１００までのモル比で、界面活性剤であるデオキシコール酸（ｄｅｏｘｙｃｈｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）を添加した。次に、４０５ｎｍでの吸光度を測定して、リポソームが分解される度合いを確認した。
【００４８】
図２には、リポソームの分解の程度を確認するために、添加された界面活性剤の量による吸光度を測定した結果を示す。また、リポソーム５０％を分解させるのに必要な界面活性剤の量を、リン脂質のみの溶液に対する界面活性剤の量を１として、下記表２に相対的に表示した。
【００４９】
【表２】
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【００５０】
表２と図２をともに参照すると、実施例１〜２によるリポソームの５０％を分解するためには、比較例に比べ相対的に多くの量の界面活性剤が要求されるということが分かる。特に、実施例２の場合には、比較例１に比べ３倍以上の界面活性剤が要求された。これによって、本発明に係る組成物の界面活性剤に対する安定性が顕著に向上したということが分かる。
【００５１】
実施例１及び２の比較においては、グラフトされたアルキル鎖の長さの長い高分子の使用が、アルキル鎖の短い高分子の添加よりもリポソームの構造を安定化するということが分かる。これは、長いアルキル鎖がリポソーム二重膜との疎水性引力（ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ）が強く、短い鎖のアルキルを使用した場合に比べて、より強く脂質二重膜との物理的な結合をしていることが分かる。
【００５２】
前記実験例によって、本発明に係る高分子‐脂質ナノ複合体組成物は、一般的な脂質ベースのリポソームに比べて、界面活性剤が含有された剤型内における安定度に優れ、このことから、水溶相又は混合物において不安定なために使用することができなかった様々な機能性素材の安定化に多様に適用し得るものと判断される。
【００５３】
実験例２．高分子‐リポソームナノ複合体の安定性評価
実施例１，２及び比較例１、３において製造された高分子‐リポソームナノ複合体と脂質ベースリポソームの塩（ｓａｌｔ）を含んだ水溶液における長期安定度を評価した。具体的には、水の代わりにリン酸ナトリウム緩衝溶液中に製造された溶液の粒子のサイズを時間に沿って測定した。測定結果は、下記の表３に示した。
【００５４】
【表３】
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【００５５】
前記表３から分かるように、高分子‐リポソームナノ複合体の場合、塩が添加された緩衝溶液中に保管しても、粒子のサイズや多分散度において長期的に大きな差を示さない。それに対し、脂質をベースとしたリポソームの場合（比較例１）、リン酸ナトリウム緩衝液には、サイズの増加とともに多分散度が増加し、構造が不安定になることを確認した。また、他の添加剤なしに水添されたレシチンのみから作られたリポソームの場合は、２週間後には構造が崩壊して沈殿となることが観察できる。このことから、高分子‐リポソームナノ複合体が、脂質をベースとしたリポソームよりも、水溶液相のその他塩（ｓａｌｔ）の存在下においてはるかに安定した構造を維持することを知ることができる。
【図１】
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【図２】
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