(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式（２）で表されるポルフィリン誘導体を、ウイルスエンベロープおよび／またはリポソームと融合させることによる、前記のポルフィリン誘導体と、ウイルスエンベロープおよび／またはリポソームの融合物の製造方法。
【化１】
0005995207.tif 000017
［式中、Ｒ１、Ｒ２は同一または異なって置換されていてもよいアルキル基、ビニル基のいずれかを示す。但しＲ１、Ｒ２の少なくとも１つは炭素数が８以上であるアルコキシ基によって置換されたアルキル基である。Ｒ１３、Ｒ１４は同一または異なってアルコキシ基、水酸基のいずれかを示す。］
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２の少なくとも１つは炭素数が１０以上であるアルコキシ基によって置換されたアルキル基である請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
下記の一般式（２）で表されるポルフィリン誘導体を、ウイルスエンベロープおよび／またはリポソームと融合させることによる、前記のポルフィリン誘導体の、ウイルスエンベロープおよび／またはリポソームとの融合物を製造するための使用。
【化２】
0005995207.tif 000018
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１３、Ｒ１４は請求項１と同義である。］
【請求項４】
下記の一般式（２）で表されるポルフィリン誘導体を、ウイルスエンベロープおよび／またはリポソームと融合させることによる、前記のポルフィリン誘導体を有効成分とする光線力学療法剤の製造方法。
【化３】
0005995207.tif 000019
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１３、Ｒ１４は請求項１と同義である。］
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光線力学療法やホウ素中性子捕捉療法の有効成分として有用な含ホウ素ポルフィリン誘導体に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポルフィリン骨格を有する化合物は、腫瘍細胞親和性と光感受性を有し、レーザー光照射により励起三重項状態の分子となり、（１）他の分子への電子移動や他の分子からの水素引き抜きによるラジカル反応を起こし、最終的には過酸化物を生成せしめて腫瘍細胞を傷害する経路、および、（２）周囲に存在する酸素分子への電子移動によって励起一重項酸素分子を生成せしめ、腫瘍細胞を酸化して傷害する経路により、腫瘍細胞を壊死させることができることから、光線力学療法（ＰＤＴ：Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ  Ｔｈｅｒａｐｙ）の有効成分として有用であり、ポルフィリン誘導体の１つであるレザフィリンは、２００３年に我が国において認可され、早期肺がん患者の治療に用いられている。
【０００３】
近年、ポルフィリン骨格を有する化合物にホウ素を導入することで水溶性を高めた含ホウ素ポルフィリン誘導体が開発されている。中でもＫａｈｌらによって開発された下記の構造式で表されるＢＯＰＰ（非特許文献１）は、Ｃ６グリオーマＸｅｎｏｇｒａｆｔモデルマウスに対して１００ｍｇ／ｋｇの用量でｉ．ｐ．投与およびｉ．ｖ．投与した場合、９０ｐｐｍも腫瘍に蓄積することから臨床応用が期待されたが、臨床第１相試験において血小板減少などの副作用により開発が断念された。
【化１】
0005995207.tif 000002
【０００４】
一方、放射性アイソトープを利用した新しいがんの治療方法として、ホウ素中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ：Ｂｏｒｏｎ  Ｎｅｕｔｒｏｎ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ）が注目されている。ホウ素中性子捕捉療法は、ホウ素１０同位体（１０Ｂ）を含むホウ素化合物を腫瘍細胞に取り込ませ、低エネルギーの中性子線（例えば熱中性子）を照射することで、細胞内で起こる核反応により局所的に腫瘍細胞を破壊する治療方法である。この治療方法では、１０Ｂを含むホウ素化合物を腫瘍に選択的に蓄積させることが、治療効果を高める上で重要であるため、含ホウ素ポルフィリン誘導体はそのような性質を有するホウ素化合物として期待されている。
【０００５】
以上のような背景のもと、腫瘍細胞親和性に優れ、かつ、毒性が低いことで高用量の投与が可能である、光線力学療法やホウ素中性子捕捉療法の有効成分として有用な含ホウ素ポルフィリン誘導体が望まれており、既にそのような化合物の提案もあるが（特許文献１）、より優れた含ホウ素ポルフィリン誘導体が望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００１−２３３８８３号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｋａｈｌ，Ｓ．Ｂ．Ｋｏｏ，Ｍ．−Ｓ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７６９−１７７１（１９９０）．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
そこで本発明は、腫瘍細胞親和性に優れ、かつ、毒性が低いことで高用量の投与が可能である、光線力学療法やホウ素中性子捕捉療法の有効成分として有用な含ホウ素ポルフィリン誘導体を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、上記の点に鑑みて鋭意研究を重ねた結果、プロトポルフィリンが有する２つのカルボキシエチル基のうちの少なくとも１つのカルボキシル基に、ＢＳＨ（ｍｅｒｃａｐｔｏｕｎｄｅｃａｈｙｄｒｏｄｏｄｅｃａｂｏｒａｔｅ：Ｂ１２Ｈ１１ＳＨ）などのカゴ状のホウ素イオンクラスターを結合した化合物は、腫瘍細胞親和性に優れるとともに低毒性であり、光線力学療法やホウ素中性子捕捉療法の有効成分として有用であること、さらに、２つのビニル基のうちの少なくとも１つを化学変換して当該部分の脂溶性（疎水性）を高めると、ホウ素イオンクラスターを結合させたカルボキシエチル基が結合したピロール環のサイドが有する親水性と相俟って分子が両親媒性を示し、その結果、ウイルスエンベロープやリポソームなどのナノ粒子（直径が１〜１００ｎｍ程度の粒子）との融合性や自己集合性を有するようになることを知見した。
【００１０】
上記の知見に基づいてなされた本発明は、請求項１記載の通り、下記の一般式（２）で表されるポルフィリン誘導体を、ウイルスエンベロープおよび／またはリポソームと融合させることによる、前記のポルフィリン誘導体と、ウイルスエンベロープおよび／またはリポソームの融合物の製造方法である。
【化２】
0005995207.tif 000003
［式中、Ｒ１、Ｒ２は同一または異なって置換されていてもよいアルキル基、ビニル基のいずれかを示す。但しＲ１、Ｒ２の少なくとも１つは炭素数が８以上であるアルコキシ基によって置換されたアルキル基である。Ｒ１３、Ｒ１４は同一または異なってアルコキシ基、水酸基のいずれかを示す。］
また、請求項２記載の製造方法は、請求項１記載の製造方法において、Ｒ１、Ｒ２の少なくとも１つは炭素数が１０以上であるアルコキシ基によって置換されたアルキル基である。
また、本発明は、請求項３記載の通り、下記の一般式（２）で表されるポルフィリン誘導体を、ウイルスエンベロープおよび／またはリポソームと融合させることによる、前記のポルフィリン誘導体の、ウイルスエンベロープおよび／またはリポソームとの融合物を製造するための使用である。
【化３】
0005995207.tif 000004
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１３、Ｒ１４は請求項１と同義である。］
また、本発明は、請求項４記載の通り、上記の一般式（２）で表されるポルフィリン誘導体を、ウイルスエンベロープおよび／またはリポソームと融合させることによる、前記のポルフィリン誘導体を有効成分とする光線力学療法剤の製造方法である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、腫瘍細胞親和性に優れ、かつ、毒性が低いことで高用量の投与が可能である、光線力学療法やホウ素中性子捕捉療法の有効成分として有用な含ホウ素ポルフィリン誘導体を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】試験例２における、本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体のＨｅＬａ細胞に対する取り込み性を評価した結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体は、下記の一般式（１）で表されるアニオン化合物の塩であることを特徴とするものである。
【化４】
0005995207.tif 000005
［式中、Ｒ１、Ｒ２は同一または異なって置換されていてもよいアルキル基、ビニル基のいずれかを示す。Ｒ３はＸＢ１２Ｈ１１２−で表される基（ＸはＯ，Ｓ，ＮＨのいずれかを示す）、ＮＨ２Ｂ１２Ｈ１１−で表される基のいずれかを示す。Ｒ４は水酸基、ＸＢ１２Ｈ１１２−で表される基（Ｘは前記と同義である）、ＮＨ２Ｂ１２Ｈ１１−で表される基のいずれかを示す。］
【００１４】
上記の一般式（１）において、Ｒ１、Ｒ２における置換されていてもよいアルキル基のアルキル基としては、炭素数１〜２０の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基が例示され、具体的にはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉｓｏ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、オクチル基、デカニル基、ドデカニル基、テトラデカニル基、ヘキサデカニル基、オクタデカニル基、イコサニル基などが挙げられる。アルキル基が有していてもよい置換基としては、水酸基、ハロゲン原子（塩素原子や臭素原子など）、アルコキシ基（メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉｓｏ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ペンチルオキシ基、ヘキシルオキシ基、オクチルオキシ基、デカニルオキシ基、ドデカニルオキシ基、テトラデカニルオキシ基、ヘキサデカニルオキシ基、オクタデカニルオキシ基、イコサニルオキシ基などの例えば炭素数１〜２０の直鎖状または分岐鎖状のもの）などが挙げられる。
【００１５】
上記の一般式（１）で表されるアニオン化合物の塩としては、ナトリウム塩やカリウム塩などのアルカリ金属塩、マグネシウム塩やカルシウム塩などのアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩の他、テトラメチルアンモニウム塩やメチルトリフェニルフォスフォニウム塩などが挙げられるが、水溶性に優れるとともに毒性が低いアルカリ金属塩やアルカリ土類金属塩を好適に採用することができる。
【００１６】
上記の一般式（１）で表されるアニオン化合物の塩である本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体の合成ルートの一例を以下に示す。
【化５】
0005995207.tif 000006
［式中、Ｒ１、Ｒ２は前記と同義である。但しＲ１、Ｒ２の少なくとも１つは置換されていてもよいアルキル基を示す。Ｒ３、Ｒ４は前記と同義である。］
【００１７】
本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体のうち、Ｒ１、Ｒ２のいずれもがビニル基である化合物（本発明化合物Ａ）は、例えば、プロトポルフィリンとＢ１２Ｈ１１ＸＨ（Ｘは前記と同義である）の塩（テトラメチルアンモニウム塩やメチルトリフェニルフォスフォニウム塩など）を反応させることで合成することができる。Ｒ１、Ｒ２の少なくとも１つが置換されていてもよいアルキル基である化合物（本発明化合物Ｂ）は、例えば、プロトポルフィリンが有する２つのビニル基のうちの少なくとも１つを置換されていてもよいアルキル基に化学変換した後（中間体Ｃ）、Ｂ１２Ｈ１１ＸＨの塩を反応させることで合成することができる。なお、各工程においては、カルボキシル基の活性化のためのクロロカルボニル基への変換、保護基の導入とその脱保護などの自体公知の有機化学的手法を用いることができる。
【００１８】
上記の本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体の合成ルートに従えば、下記の一般式（２）で表されるポルフィリン誘導体は、Ｒ１、Ｒ２の少なくとも１つが置換されていてもよいアルキル基である本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体の合成中間体として有用である。
【化６】
0005995207.tif 000007
［式中、Ｒ１、Ｒ２は前記と同義である。但しＲ１、Ｒ２の少なくとも１つは置換されていてもよいアルキル基を示す。Ｒ１３、Ｒ１４は同一または異なってアルコキシ基、水酸基のいずれかを示す。］
【００１９】
上記の一般式（２）において、Ｒ１３、Ｒ１４におけるアルコキシ基としては、炭素数１〜２０の直鎖状または分岐鎖状のアルコキシ基が例示され、具体的にはメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、ｉｓｏ−プロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ペンチルオキシ基、ヘキシルオキシ基、オクチルオキシ基、デカニルオキシ基、ドデカニルオキシ基、テトラデカニルオキシ基、ヘキサデカニルオキシ基、オクタデカニルオキシ基、イコサニルオキシ基などが挙げられる。
【００２０】
本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体は、腫瘍細胞親和性に優れるとともに低毒性であるので、光線力学療法の有効成分として有用である。また、分子中のホウ素原子の少なくとも１つを１０Ｂとすることで、ホウ素中性子捕捉療法の有効成分となる。さらに、ガドリニウムやマンガンなどの遷移金属と錯体を形成させることで、腫瘍細胞の検出や診断のためのＭＲＩ造影剤として用いることもできる。特筆すべきは、例えば、Ｒ１、Ｒ２の少なくとも１つをアルコキシ基によって置換されたアルキル基（１−アルコキシエチル基など）とし、アルコキシ基の炭素数を多くすることによって当該部分の脂溶性を高めると（炭素数は５以上が望ましく１０以上がより望ましい）、一般式（１）で表されるアニオン化合物を上下に２分して見た場合の上側半分が疎水性、下側半分が親水性となり、分子が両親媒性を示すことで、ウイルスエンベロープやリポソームなどのナノ粒子との融合性や自己集合性を有するようになることである。従って、このような化合物デザインが行われた本発明の含ホウ素ポリフィリン誘導体は、これらのナノ粒子に融合させたり自己集合させたりすることで、腫瘍細胞親和性や腫瘍細胞に対する取り込み性などの向上を図ることができるので、結果として、がん治療効果の改善や副作用としての光毒性の軽減などが可能となる。具体例を挙げると、例えば、本発明の含ホウ素ポリフィリン誘導体をセンダイウイルスエンベロープ（ＨＶＪ）と融合させることで、ＨＶＪが有する強い細胞膜融合能を利用して本発明の含ホウ素ポリフィリン誘導体の腫瘍細胞に対する取り込み性の向上を図ることができるとともに、ＨＶＪが持つ免疫賦活作用をがん治療効果に寄与させることができる。また、本発明の含ホウ素ポリフィリン誘導体をリポソームと融合させたり、自己集合させたりすることで、腫瘍細胞親和性の向上を図ることができる。ＢＯＰＰをはじめとするこれまでに知られている含ホウ素ポルフィリン誘導体で、このような化合物デザインが行われたものは、本発明者が知る限りにおいて存在しない。
【００２１】
本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体の医薬品製剤化は、例えば、本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体を蒸留水や生理食塩水に溶解することで行うことができる。製剤中には自体公知のｐＨ調節剤や防腐剤などを添加してもよい。その用法・用量は、例えばレザフィリンの用法・用量に準じることができる。
【実施例】
【００２２】
以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。
【００２３】
実施例１：
以下の化学反応式に従って本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体１ａ，１ｂ，２ａ，２ｂを合成した。
【化７】
0005995207.tif 000008
【００２４】
（１）化合物1aの合成
プロトポルフィリンIX (0.16 mmol)を塩化メチレン(10 mL)に溶かし、オギザリルクロリド(0.7 mL)を加えた。反応混合物を室温で20分攪拌後、過剰量のオギザリルクロリドを含む塩化メチレン溶媒を減圧下で除いた。残さをアセトニトリル(15 mL)に溶かし、B12H11SHのテトラメチルアンモニウム塩(0.25 mmol, 80 mg)を加え、続いてピリジン(0.3 mL)を加え、室温で72時間攪拌した。減圧下で溶媒を溜去した後、粗生成物を薄層クロマトグラフ(メタノール30%/塩化メチレン70%)で精製し、化合物1aを紫色の固体として71mg, 51%の収率で得た。
IR νmax(KBr disc)/cm-1 3587s, 3375s, 3228s (OH/NH), 3025w (CH), 2495s (BH), 1725, 1685s (C=O), 1618s (C=C), 1605s (NH), 1410s (CH3), 1152s (CN), 1050s (B-B); UV/Vis(CH3CN): λmax: 417, 526, 535, 592, 637 nm; 11B NMR (96.3 MHz; CD3CN) δ -15.37, -11.97, -9.78, -5.49; 1H NMR (300 MHz; CD3CN) δ 10.29, 10.22, 10.2, 10.15 (4H, m, meso H), 8.49 (2H, q, CH=CH2), 6.45 (2H, d, J = 16.0 Hz, CH=CH2), 6.17 (2H, d, J = 12.0 Hz, CH=CH2), 4.32 (4H, m, porphyrin-CH2), 3.77, 3.73, 3.66, 3.64 (12H, s, CH3), 3.24 (4H, m, CH2COOH), 3.08 (24H, s, N(CH3)4), 0.55-1.82 (11H, bs, B12H11), -3.85 (s, 2H, NH); 13C NMR (75 MHz; CD3CN) δ 176.43, 176.69 (2C, CO), 145.39, 143.54, 142.37, 137.03, 136.85, 136.74, 130.61, 126.77 (16C, C pyrrole), 97.92-97.14 (4C, meso-C), 56.73, 56.6 (4C, CH=CH2), 54.59 (8C, N(CH3)4), 31.27, 30.56 (2C, CH2COOH), 23.28, 22.67 (2C, CH2CH2COOH), 13.45, 12.57, 11.56, 11.28 (4C, CH3); MS(ESI, negative): m/z(%): 359.22 (100) [M-/2]; elemental analysis calcd(%) for C42H68N6B12O3S (868.62): C 58.20, H 7.91, N 9.70; found: C 58.05, H 7.73, N 9.49.
【００２５】
（２）化合物1bの合成
プロトポルフィリンIX (0.16 mmol)を塩化メチレン(10 mL)に溶かし、オギザリルクロリド(1.5 mL)を加えた。反応混合物を室温で20分攪拌後、過剰量のオギザリルクロリドを含む塩化メチレン溶媒を減圧下で除いた。残さをアセトニトリル(15 mL)に溶かし、B12H11SHのテトラメチルアンモニウム塩(0.5 mmol, 0.16 g)を加え、続いてピリジン(0.5 mL)を加え、室温で72時間攪拌した。減圧下で溶媒を溜去した後、粗生成物を薄層クロマトグラフ(メタノール30%/塩化メチレン70%)で精製し、化合物1bを紫色の固体として140mg, 74%の収率で得た。
IR νmax(KBr disc)/cm-1 3254s (NH), 3026w (CH), 2499s (BH), 1682s (C=O), 1620s (C=C), 1609s (NH), 1416s (CH3), 1160s (CN), 1053s (B-B); UV/Vis(CH3CN): λmax: 415, 523, 536, 595, 639 nm; 11B NMR (96.3 MHz; CD3CN) δ -15.35, -11.94, -9.71, -5.53; 1H NMR (300 MHz; CD3CN) δ 10.45, 10.39, 10.26, 10.35 (4H, m, meso H), 8.59 (2H, q, CH=CH2), 6.39 (2H, d, J = 14.0 Hz, CH=CH2), 6.21 (2H, d, J = 9.0 Hz, CH=CH2), 4.35 (4H, m, porphyrin-CH2), 3.75, 3.70, 3.65, 3.60 (12H, s, CH3), 3.26 (4H, m, CH2COOH), 3.07 (24H, s, N(CH3)4), 0.51-1.85 (11H, bs, B12H11), -3.89 (s, 2H, NH); 13C NMR (75 MHz; CD3CN) δ 202.13 (2C, CO), 146.56, 145.17, 143.25, 137.14, 136.92, 135.56, 131.66, 127.72 (16C, C pyrrole), 98.19-97.05 (4C, meso-C), 56.96, 56.62 (4C, CH=CH2), 55.07 (8C, N(CH3)4), 31.45, 29.99 (2C, CH2COOH), 23.65, 23.02 (2C, CH2CH2COOH), 13.59, 12.59, 11.49, 11.74 (4C, CH3); MS(ESI, negative): m/z(%): 436.65 (100) [M-/2]; elemental analysis calcd(%) for C50H102N8B24O2S2 (1170.99): C 51.28, H 8.78, N 9.57; found: C 51.12, H 8.75, N 9.38.
【００２６】
（３）化合物2aの合成
化合物1a (0.081 mmol)をアセトニトリル/水(1:1)に溶かし、アンバーライト120R Na+ formを加え、一晩攪拌した後、アンバーライトをろ過し、減圧下で溶媒を溜去し、化合物2aを紫色の固体として20mg, 32%の収率で得た。
UV/Vis(H2O): λmax: 411, 515, 535, 583, 637 nm; 11B NMR (96.3 MHz; d6-DMSO) δ -15.24, -11.85, -9.95, -5.65; 1H NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 10.44, 10.34, 10.28, 10.25 (4H, m, meso H), 8.52 (2H, m, CH=CH2), 6.44 (2H, d, J = 18.0 Hz, CH=CH2), 6.21 (2H, d, J = 9.0 Hz, CH=CH2), 4.25 (4H, m, porphyrin-CH2), 3.74, 3.71, 3.65, 3.62 (12H, s, CH3), 3.13 (4H, m, CH2COOH), 0.55-1.81 (11H, bs, B12H11), -3.84 (s, 2H, NH); 13C NMR (75 MHz; d6-DMSO) δ 176.43, 176.69 (2C, CO), 145.39, 143.54, 142.37, 137.03, 136.85, 136.74, 130.61, 126.77 (16C, C pyrrole), 97.92-97.14 (4C, meso-C), 56.73, 56.6 (4C, CH=CH2), 31.27, 30.56 (2C, CH2COOH), 23.28, 22.67 (2C, CH2CH2COOH), 13.45, 12.57, 11.56, 11.28 (4C, CH3).
【００２７】
（４）化合物2bの合成
化合物1b (0.12 mmol)をアセトニトリル/水(1:1)に溶かし、アンバーライト120R Na+ formを加え、一晩攪拌した後、アンバーライトをろ過し、減圧下で溶媒を溜去し、化合物2bを紫色の固体として100mg, 65%の収率で得た。
UV/Vis(H2O): λmax: 415, 522, 536, 591, 639 nm; 11B NMR (96.3 MHz; d6-DMSO) δ -15.21, -11.89, -10.05, -5.72; 1H NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 10.37, 10.27, 10.15, 10.01 (4H, m, meso H), 8.52 (2H, m, CH=CH2), 6.46 (2H, d, J = 18.0 Hz, CH=CH2), 6.14 (2H, d, J = 18.0 Hz, CH=CH2), 4.34 (4H, m, porphyrin-CH2), 3.73, 3.71, 3.60, 3.57 (12H, s, CH3), 3.15 (4H, m, CH2COOH), 0.19-1.65 (11H, bs, B12H11), -3.81 (s, 2H, NH); 13C NMR (75 MHz; d6-DMSO) δ 179.79 (2C, CO), 146.41, 144.64, 142.47, 136.98, 136.52, 136.12, 130.3, 127.07 (16C, C pyrrole), 97.95-97.33 (4C, meso-C), 56.79, 56.65 (4C, CH=CH2), 32.25, 31.02 (2C, CH2COOH), 23.19, 22.87 (2C, CH2CH2COOH), 14.05, 12.97, 11.59, 11.56 (4C, CH3).
【００２８】
実施例２：
以下の化学反応式に従って本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体５ａ，５ｂ，６ａ，６ｂを合成した。
【化８】
0005995207.tif 000009
【００２９】
（１）化合物3の合成
プロトポルフィリン・ジメチルエステル(1.0 mmol, 0.59 g)を過剰量の臭化水素を含む酢酸(10 mL)中に加え、2時間室温で攪拌した。酢酸を減圧下で溜去した後、得られた緑色の残さ(臭素化プロトポルフィリン・ジメチルエステル)を塩化メチレン(10 mL)に溶かし、炭酸カリウム(1 g)と1-ペンタノールまたは1-ドデカノール(2.2 mmol)を加え、室温で1時間攪拌した。反応混合物をろ過した後、ろ液を減圧下で濃縮し、化合物3を粗生成物として得た。
化合物3a: 収率92%, IR νmax(KBr disc)/cm-1 3310w (CH), 2989s, 2927s (NH), 1755s (C=O), 1710s (C=C), 1605s (NH), 1415s (CH3), 11495s (CN), 2965m, 2895m, 1475m, 1442m, 1409m, 1169m, 1098s, 752m (δ, γ of CH2-groups); UV/Vis(CH3CN): λmax: 415, 523, 537, 594, 635 nm; 1H NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 10.58-10.36 (4H, s, meso H), 6.12 (2H, m, α-CH), 4.28 (4H, m, porphyrin-CH2), 3.89, 3.82 (6H, s, COOMe), 3.71, 3.69, 3.68, 3.62 (12H, s, CH3), 3.48 (4H, t, CH2COOH), 3.12 (4H, m, OCH2), 2.22 (6H, d, J = 7.0 Hz, CH3), 1.75, 1.41, 1.21 (12H, m, CH2), 0.78 (6H, t, CH3), -3.95 (s, 2H, NH); 13C NMR (75 MHz; d6-DMSO) δ 177.08 (2C, CO), 145.2, 144.98, 144.05, 143.87, 139.15, 136.85, 136.18, 125.03 (16C, C pyrrole), 98.54, 98.02, 97.98, 97.74 (4C, meso-C), 75.14, 73.16 (2C, O-CH), 61.27, 57.19 (2C, OCH2), 47.86 (2C, COOMe), 31.98, 30.79 (2C, CH2COOH), 28.56, 28.06, 27.47, 27.17, 26.25, 25.74 (6C, -CH2-), 23.21, 23.25 (2C, CH2CH2COOH), 21.57, 21.65, 14.02, 13.63, 11.36, 11.86 (8C, CH3); MS(ESI, positive): m/z(%) 767 (100) [M+]; elemental analysis calcd (%) for C46H62N4O6 (767.01): C 72.03, H 8.15, N 7.30; found: C 71.96, H 8.12, N 7.27.
化合物3b: 収率97%, IR νmax(KBr disc)/cm-1 3310w (CH), 3300s, 2950s (NH), 1755s (C=O), 1681s (C=C), 1609s (NH), 1417s (CH3), 1152s (CN), 2965m, 2866m, 1479s, 1454s, 1412m, 1316m, 1168m, 1100s, 885m, 715m (CH2-groups); UV/Vis(CH3CN): λmax: 419, 526, 538, 595, 639 nm; 1H NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 10.65, 10.57, 10.35, 10.12 (4H, s, meso H), 6.08 (2H, m, α-CH), 4.34 (4H, m, porphyrin-CH2), 3.85, 3.79 (6H, s, COOMe), 3.67, 3.64, 3.59, 3.50 (12H, s, CH3), 3.01 (4H, m, CH2COOH), 2.56 (4H, m, OCH2), 2.13 (6H, d, J = 6.0 Hz, CH3), 1.71-1.17 (20H, m, CH2), 0.83 (6H, t, CH3), -3.95 (s, 2H, NH); 13C NMR (75 MHz; d6-DMSO) δ 179.02 (2C, CO), 147.26, 147.05, 146.23, 145.14, 141.15, 134.65, 133.92, 124.95 (16C, C pyrrole), 99.21, 98.25, 97.65, 97.47 (4C, meso-C), 75.03 (2C, O-CH), 57.07 (2C, OCH2), 48.35 (2C, COOMe), 31.47, 30.13 (2C, CH2COOH), 29.01-25.36 (20C, -CH2-), 24.99, 24.12 (2C, CH2CH2COOH), 23.16, 22.06, 14.95, 13.14, 11.36, 11.43 (8C, CH3); MS(ESI, positive): m/z (%): 963 (100) [M+]; elemental analysis calcd(%) for C60H90N4O6 (963.38): C 74.8, H 9.42, N 5.82; Found: C 74.69, H 9.38, N 5.77.
【００３０】
（２）化合物4の合成
化合物3 (1 mmol)をTHF (15 mL)に溶かし、メタノール/水(1:1)の混合溶媒に溶かした水酸化リチウム(0.092 g)を加え、室温で6時間攪拌した。反応混合物をろ過した後、ろ液を減圧下で濃縮した。粗生成物を薄層クロマトグラフ(メタノール10%/塩化メチレン90%)で精製し、化合物4を濃紫色の固体として得た。
化合物4a: 収率87%, IR νmax(KBr disc)/cm-1 3309w (CH), 2987s, 2927s, 2860s (OH/NH), 1745s (C=O), 1706s (C=C), 1600s (NH), 1410s (CH3), 1145s (CN), 2961m, 2889m, 1471m, 1439m, 1405m, 1165m, 1093s, 749m (δ, γ of CH2-groups); UV/Vis(CH3CN): λmax: 415, 520, 539, 595, 639 nm; 1H NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 10.65-10.43 (4H, s, meso H), 6.14 (2H, m, α-CH), 4.33 (4H, m, porphyrin-CH2), 3.69, 3.67, 3.65, 3.63 (12H, s, CH3), 3.54 (4H, t, CH2COOH), 3.08 (4H, m, OCH2), 2.17 (6H, d, J = 8.0 Hz, CH3), 1.73, 1.35, 1.16 (12H, m, CH2), 0.7 (6H, t, CH3), -3.96 (s, 2H, NH); 13C NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 175.11 (2C, CO), 147.2, 146.51, 145.79, 145.78, 140.02, 136.92, 136.28, 124.88 (16C, C pyrrole), 98.39, 97.97, 97.72, 97.36 (4C, meso-C), 74.05, 72.47 (2C, O-CH), 60.67, 56.61 (2C, OCH2), 32.18, 30.4 (2C, CH2COOH), 29.4, 29.21, 28.12, 27.7, 25.25, 25.08 (6C, -CH2-), 22.32, 22.22 (2C, CH2CH2COOH), 21.99, 21.88, 13.92, 13.73, 11.2, 11.56 (8C, CH3); MS(ESI, positive): m/z (%): 739 (100) [M+]; elemental analysis calcd (%) for C44H58N4O6 (738.95): C 71.52, H 7.91, N 7.58; found: C 71.33, H 7.81, N 7.49.
化合物4b: 収率90%, IR νmax(KBr disc)/cm-1 3310w (CH), 3197s, 2927s, 2856s (OH/NH), 1745s (C=O), 1675s (C=C), 1605s (NH), 1415s (CH3), 1150s (CN), 2965m, 2856m, 1475s, 1452s, 1405m, 1313m, 1165m, 1100s, 883m, 705m (CH2-groups); UV/Vis(CH3CN): λmax: 415, 523, 537, 593, 638 nm; 1H NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 10.59, 10.5, 10.47, 10.15 (4H, s, meso H), 6.07 (2H, m, α-CH), 4.37 (4H, m, porphyrin-CH2), 3.71, 3.68, 3.65, 3.63 (12H, s, CH3), 2.95 (4H, m, CH2COOH), 2.61 (4H, m, OCH2), 2.18 (6H, d, J = 6.0 Hz, CH3), 1.85-0.81 (20H, m, CH2), 0.72 (6H, t, CH3), -3.92 (s, 2H, NH); 13C NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 177.82 (2C, CO), 148.78, 147.35, 146.33, 145.6, 141.12, 134.76, 133.73, 125.14 (16C, C pyrrole), 98.39, 97.97, 97.72, 97.36 (4C, meso-C), 74.72 (2C, O-CH), 56.17 (2C, OCH2), 31.27, 30.56 (2C, CH2COOH), 29.5-25.95 (20C, -CH2-), 25.57, 24.29 (2C, CH2CH2COOH), 24.26, 22.06, 16.65, 13.92, 11.65, 11.54 (8C, CH3); MS(ESI, positive): m/z(%): 936 (100) [M++1]; elemental analysis calcd(%) for C58H86N4O6 (935.33): C 74.48, H 9.27, N 5.99; found: C 74.37, H 9.01, N 5.82.
【００３１】
（３）化合物5の合成
化合物4 (0.16 mmol)を塩化メチレン(10 mL)に溶かし、オギザリルクロリド(0.7 mL)を加えた。反応混合物を室温で1時間攪拌後、過剰量のオギザリルクロリドを含む塩化メチレン溶媒を減圧下で除いた。残さをアセトニトリル(15 mL)に溶かし、B12H11SHのテトラメチルアンモニウム塩(0.25 mmol, 80 mg)を加え、続いてピリジン(0.3 mL)を加え、室温で72時間攪拌した。減圧下で溶媒を溜去した後、粗生成物を薄層クロマトグラフ(メタノール30%/塩化メチレン70%)で精製し、化合物5を赤紫色の固体として得た。
化合物5a: 収率55%, IR νmax(KBr disc)/cm-1 3568s, 3421s (OH/NH), 3311w (CH), 2500s (BH), 1722, 1685s (C=O), 1620s (C=C), 1608s (NH), 1386s (CH3), 1157s (CN), 1080s (B-B), 2986m, 2864m, 1471m, 1440m, 1400m, 1185m, 1093s, 721m (δ, γ of CH2-groups); UV/Vis(CH3CN): λmax: 414, 522, 538, 592, 635 nm; 11B NMR (300 MHz; CD3CN) δ -14.39, -10.91, -9.58, -5.89; 1H NMR (300 MHz; CD3CN) δ 10.65, 10.56, 10.49, 10.12 (4H, s, meso H), 6.16 (2H, m, α-CH), 4.37 (4H, m, porphyrin-CH2), 3.74, 3.69, 3.66, 3.65 (12H, s, CH3), 3.3 (4H, t, CH2COOH), 3.0 (4H, t, OCH2), 2.98 (24H, s, N(CH3)4), 2.42 (6H, s, CH3), 1.75, 1.39, 1.21 (12H, m, CH2), 0.75 (6H, t, CH3), -0.48 (s, 2H, NH); 13C NMR (300 MHz; CD3CN) δ 210.86, 178.47 (2C, CO), 149.19, 148.67, 147.45, 146.77, 142.06, 141.08, 138.11, 118.2 (16C, C pyrrole), 100.17, 99.38, 98.29, 97.61 (4C, meso-C), 74.12, 73.85 (2C, O-CH), 60.67 (2C, OCH2), 50.7 (8C, N(CH3)4), 30.8, 30.54 (2C, CH2COOH), 29.37, 29.33, 25.68, 25.46 (6C, -CH2-), 23.95, 23.71 (2C, CH2CH2COOH), 22.31, 23.05, 14.13, 14.1, 11.98, 11.92, 11.8, 11.65 (8C, CH3); elemental analysis calcd (%) for C52H92N6B12O3S (1011.12): C 61.77, H 9.17, N 8.31; found: C 61.49, H 8.96, N 8.19.
化合物5b: 収率57%, IR νmax(KBr disc)/cm-1 3568s, 3423s (OH/NH), 3305w (CH), 1735s, 1689 (C=O), 1635s (C=C), 1611s (NH), 1458s (CH3), 1125s (CN), 1080s (B-B), 2995m, 2854m, 1475s, 1458s, 1410m, 1282m, 1165m, 1058s, 885m, 721m (CH2-groups); UV/Vis(CH3CN): λmax: 412, 520, 535, 591, 634 nm; 11B NMR (300 MHz; CD3CN) δ -15.35, -11.98, -9.75, -5.45; 1H NMR (300 MHz; CD3CN) δ 10.55, 10.42, 10.12, 10.0 (4H, s, meso H), 5.94 (2H, m, α-CH), 4.25 (4H, m, porphyrin-CH2), 3.69, 3.67, 3.63, 3.6 (12H, s, CH3), 3.37 (4H, m, CH2COOH), 3.15 (24H, s, N(CH3)4), 2.61 (4H, m, OCH2), 2.2 (6H, d, J = 6.0 Hz, CH3), 1.74-0.75 (20H, m, CH2), 0.71 (6H, t, CH3), -0.69 (s, 2H, NH); 13C NMR (300 MHz; CD3CN) δ 213.41, 213.08 (2C, CO), 149.19, 148.60, 147.51, 146.76, 142.06, 141.95, 138.73, 138.19 (16C, C pyrrole), 99.78, 99.61, 98.36, 97.41 (4C, meso-C), 73.99, 69.61 (2C, O-CH), 50.73 (2C, OCH2), 34.96, 32.33 (2C, CH2COOH), 29.94-26.99 (20C, -CH2-), 25.66, 24.26 (2C, CH2CH2COOH), 24.26, 23.11, 16.65, 14.21, 11.93, 11.65 (8C, CH3); MS(ESI, negative): m/z(%): 936 (100) [M++2]; elemental analysis calcd (%) for C66H120N6B12O3S (1207.49): C 65.65, H 10.02, N 6.96; found: C 65.34, H 9.83, N 6.7.
【００３２】
（４）化合物6の合成
化合物5をアセトニトリル/水(1:1)に溶かし、アンバーライト120R Na+ formを加え、一晩攪拌した後、アンバーライトをろ過し、減圧下で溶媒を溜去し、化合物6を濃赤色の固体として得た。
化合物6a: 収率37%, UV/Vis(H2O): λmax: 410, 517, 536, 585, 635 nm; 11B NMR (300 MHz; CD3CN) δ -14.39, -10.91, -9.58, -5.89; 1H NMR (300 MHz; CD3CN) δ 12.05 (1H, s, COOH), 10.73, 10.64, 10.52, 10.24 (4H, m, meso H), 6.17 (2H, m, α-CH), 4.32 (4H, m, porphyrin-CH2), 3.72, 3.66, 3.64, 3.62 (12H, s, CH3), 3.35 (4H, t, CH2COOH), 2.97 (4H, t, OCH2), 2.35 (6H, s, CH3), 1.7, 1.35, 1.25 (12H, m, CH2), 0.7 (6H, t, CH3), -3.91 (s, 2H, NH); 13C NMR (300 MHz; CD3CN) δ 208.93, 177.47  (2C, CO), 148.15, 147.14, 146.21, 146.77, 142.06, 141.08, 138.11, 118.45 (16C, C pyrrole), 98.29, 97.61 (4C, meso-C), 73.78, 72.46 (2C, O-CH), 68.47 (2C, OCH2), 30.82 (2C, CH2COOH), 29.32, 29.27, 25.46, 25.19 (6C, -CH2-), 22.98, 22.64 (2C, CH2CH2COOH), 22.05, 21.97, 14.17, 14.09, 11.96, 11.91, 11.76, 11.68 (8C, CH3).
化合物6b: 収率35%, UV/Vis(H2O): λmax: 412, 520, 535, 591, 634 nm; 11B NMR (300 MHz; CD3CN) δ -15.40, -11.95, -9.85, -5.42; 1H NMR (300 MHz; CD3CN) δ 10.57, 10.45, 10.21, 10.12 (4H, s, meso H), 6.11 (2H, m, α-CH), 4.34 (4H, m, porphyrin-CH2), 3.68, 3.66, 3.64, 3.61 (12H, s, CH3), 3.35 (4H, m, CH2COOH), 2.85 (4H, m, OCH2), 2.18 (6H, d, J = 6.0 Hz, CH3), 1.85-0.81 (20H, m, CH2), 0.76 (6H, t, CH3), -3.92 (s, 2H, NH); 13C NMR (300 MHz; CD3CN) δ 207.41, 168.42 (2C, CO), 149.19, 148.60, 147.51, 146.76, 142.06, 141.95, 138.73, 118.25 (16C, C pyrrole), 98.56, 98.05, 96.85, 96.54 (4C, meso-C), 72.85, 71.65 (2C, O-CH), 52.65 (2C, OCH2), 31.86, 28.89 (2C, CH2COOH), 27.86-22.74 (20C, -CH2-), 25.66, 24.26 (2C, CH2CH2COOH), 22.54, 21.19, 15.75, 12.41, 11.52 (8C, CH3).
【００３３】
実施例３：
以下の化学反応式に従って本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体７ａ，７ｂ，８ａ，８ｂを合成した。
【化９】
0005995207.tif 000010
【００３４】
（１）化合物7の合成
化合物4 (0.16 mmol)を塩化メチレン(10 mL)に溶かし、オギザリルクロリド(1.5 mL)を加えた。反応混合物を室温で20分攪拌後、過剰量のオギザリルクロリドを含む塩化メチレン溶媒を減圧下で除いた。残さをアセトニトリル(15 mL)に溶かし、B12H11SHのテトラメチルアンモニウム塩(0.5 mmol, 0.16 g)を加え、続いてピリジン(0.5 mL)を加え、室温で72時間攪拌した。減圧下で溶媒を溜去した後、粗生成物を薄層クロマトグラフ(メタノール30%/塩化メチレン70%)で精製し、化合物7を赤紫色の固体として得た。
化合物7a: 収率39%, 11B NMR (300 MHz; CD3CN) δ -5.71, -10.74; 1H NMR (300 MHz; CD3CN) δ 10.18 (d, 4H, meso-H), 8.43 (m, 2H, CH=CH2), 6.38, 6.14 (d, 4H, CH=CH2), 4.37, 4.29 (m, 4H, CH2), 3.72 (t, 4H, CH2-CO), 3.6 (s, 12H, CH3), 2.35 (s, 48H, N(CH3)4), 1.55-0.88 (bs, BHs), 0.08 (s, 2H, NH).
化合物7b: 収率38%, 11B NMR (300 MHz; CD3CN) δ -6.54, -10.92; 1H NMR (300 MHz; CD3CN) δ 10.66, 10.08 (m, 4H, meso-H), 6.15, 5.83 (m, 2H, CH), 4.33 (t, 8H, CH2), 3.7 (m, 12H, CH3), 3.64 (m, 4H, CH2), 2.27 (s, 48H, N(CH3)4), 1.89 (t, 6H, CH3), 1.73 (bs, 4H, CH2), 1.7-0.75 (bs, BHs), 0.75 (s, 2H, NH).
【００３５】
（２）化合物8の合成
化合物7をアセトニトリル/水(1:1)に溶かし、アンバーライト120R Na+ formを加え、一晩攪拌した後、アンバーライトをろ過し、減圧下で溶媒を溜去し、化合物8を赤紫色の固体として得た。
化合物8a: 収率33%, 11B NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ -6.67, -10.90; 1H NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 10.26-10.03 (m, 4H, meso-H), 6.16 (m, 2H, CH), 4.19 (t, 8H, CH2), 3.69 (m, 4H, CH2), 3.63 (m, 12H, CH3), 2.07 (s, 4H, CH2), 1.69 (t, 6H, CH3), 1.55 (bs, 4H, CH2), 1.35-0.25 (bs, BHs), 0.65 (s, 2H, NH); 13C NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 205.32 (2C, CO), 147.58-140.49 (8C, C-N pyrrole), 136.6, 136.49 (8C, C-pyrrole), 96.96, 95.0 (4C, meso-C), 72.8 (2C, O-CH), 68.41 (2C, OCH), 47.49, 46.86 (2C, O-CH2), 29.48, 28.18 (6C, CH2), 25.38, 21.93 (6C, CH3), 13.88, 11.33 (2C, CH3).
化合物8b: 収率37%, 11B NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ -6.54, -10.92; 1H NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 10.26, 10.5, 10.03 (m, 4H, meso-H), 6.16 (m, 2H, CH), 4.19 (t, 8H, CH2), 3.65 (m, 12H, CH3), 3.64 (m, 4H, CH2), 2.16 (s, 6H, CH3), 2.07 (bs, 4H, CH2), 1.69-0.74 (m, other CH2), 1.35-0.25 (bs, BHs), -0.57 (s, 2H, NH); 13C NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 205.44 (2C, CO), 166.9, 147.68, 147.6, 146.63, 145.83, 145.35, 145.33, 140.56, 140.49, 140.42, 136.6, 136.58, 136.53, 136.46, 131.70, 128.64 (16C, C pyrrole), 98.46, 98.09, 96.9, 96.63 (4C, meso-C), 74.5, 70.18 (2C, O-CH), 67.4, 62.48 (2C, OCH2), 52.22, 47.55, 40.33, 29.79, 28.35, 25.43 (other CH2), 23.24, 23.04, 22.37, 13.85, 11.67, 11.61, 11.34, 10.87 (8C, CH3).
【００３６】
実施例４：
下記の構造式で表される化合物9および化合物10を、実施例1における化合物1aおよび化合物2aの合成のために用いたB12H11SHのテトラメチルアンモニウム塩の代わりにB12H11OHのメチルトリフェニルフォスフォニウム塩を用い、同様の方法によってそれぞれ赤紫色の固体として得た。
【化１０】
0005995207.tif 000011
化合物9: 収率70%, IR νmax(KBr disc)/cm-1 3567s, 3431s (OH/NH), 2998w (CH), 2484s (BH), 1725s, 1690s (C=O), 1675s (C=C), 1615s (NH), 1377s (CH3), 1153s (CN), 1065s (B-B); UV/Vis(CH3CN): λmax: 415, 522, 536, 595, 639 nm; 11B NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ -6.41, -14.78, -17.55, -23.46; 1H NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 9.48, 9.26, 8.84 (4H, s, meso CH), 7.63 (2H, m, CH=CH2), 7.83-7.53 (30H, m, Ph3P), 6.1 (4H, m, CH=CH2), 4.12 (4H, m, porphyrin-CH2), 3.74, 3.65, 3.64, 3.61 (12H, s, CH3), 3.35 (4H, m, CH2COOH), 3.1 (6H, s, CH3P), 0.4-1.69 (11H, bs, B12H11), -2.05 (s, 2H, NH); 13C NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 177.26, 175.08 (2C, CO), 148.33, 148.45, 140.9, 137.12, 136.52, 133.21, 133.07, 130.18 (16C, C pyrrole), 130.13, 129.96, 121.29, 121.23, 121.20, 119.24 (36C, Ph3P), 97.92-97.14 (4C, meso-C), 54.78 (2C, CH=CH2), 36.62 (2C, CH3P), 31.35, 30.76 (2C, CH2COOH), 23.15, 22.97 (2C, CH2CH2COOH), 13.05, 12.31, 12.01, 11.74 (4C, CH3); MS(ESI, negative): m/z(%): 358 (65) [M-/2]; elemental analysis calcd (%) for C72H80N4B12O4P2 (1257.11): C 68.79, H 6.41, N 4.46; found: C 68.52, H 6.19, N 4.16.
化合物10: 収率58%, UV/Vis(H2O): λmax: 415, 525, 535, 595, 639 nm; 11B NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ -6.51, -14.9, -17.63, -23.73; 1H NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 10.3, 10.25, 10.19, 10.13 (4H, s, meso CH), 8.5 (2H, q, CH=CH2), 6.46 (2H, d, J = 16 Hz, CH=CH2), 6.14 (2H, d, J = 12 Hz, CH=CH2), 4.34 (4H, m, porphyrin-CH2), 3.73-3.60 (12H, s, β-CH3), 3.21 (4H, m, CH2COOH), 0.21-1.55 (11H, bs, B12H11), -3.81 (s, 2H, NH); 13C NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 176.43, 176.69 (2C, CO), 145.39, 143.54, 142.37, 137.03, 136.85, 136.74, 130.61, 126.77 (16C, C pyrrole), 97.92-97.14 (4C, meso-C), 56.73, 56.6 (2C, CH=CH2), 31.27, 30.56 (2C, CH2COOH), 23.28, 22.67 (2C, CH2CH2COOH), 13.45, 12.57, 11.56, 11.28 (4C, CH3).
【００３７】
実施例５：
下記の構造式で表される化合物11および化合物12を以下のようにして合成した。
【化１１】
0005995207.tif 000012
プロトポルフィリンIX (0.16 mmol)を塩化メチレン(10 mL)に溶かし、オギザリルクロリド(0.7 mL)を加えた。反応混合物を室温で30分攪拌後、過剰量のオギザリルクロリドを含む塩化メチレン溶媒を減圧下で除いた。残さをジメチルホルムアミド(10 mL)に溶かし、B12H11NH3のテトラメチルアンモニウム塩(0.5 mmol, 0.11 g)を加え、さらに水素化ナトリウム(1 mmol, 70 mg)を加えて室温で30分攪拌した後、続いてピリジン(0.3 mL)を加え、室温で72時間攪拌した。減圧下で溶媒を溜去した後、粗生成物を薄層クロマトグラフ(メタノール20%/塩化メチレン80%)で精製し、化合物11を赤紫色の固体として得た。次に、化合物11をアセトニトリル/水(1:1)に溶かし、アンバーライト120R Na+ formを加え、一晩攪拌した後、アンバーライトをろ過し、減圧下で溶媒を溜去し、化合物12を赤紫色の固体として得た。
化合物11: 収率65%, IR νmax(KBr disc)/cm-1 3565s, 3382s, 3246s (OH/NH), 2985w (CH), 2493s (BH), 1710s, 1675s (C=O), 1616s (C=C), 1605s (NH), 1406s (CH3), 1165s (CN), 1065s (B-B); UV/Vis(CH3CN): λmax: 415, 524, 536, 595, 639 nm; 11B NMR (96.3 MHz; CD3CN) δ -15.37, -11.97, -9.78, -5.49; 1H NMR (300 MHz; CD3CN) δ 9.59, 9.28, 10.12 (4H, m, meso H), 8.02 (2H, m, CH=CH2), 6.11 (4H, m, CH=CH2), 4.74 (2H, s, NH2), 4.28 (4H, m, porphyrin-CH2), 4.07, 3.88 (12H, m, β-CH3), 3.48, 3.27 (4H, m, CH2COOH), 2.88 (12H, s, N(CH3)4), 0.45-1.7 (11H, bs, B12H11), -3.77 (s, 2H, NH); 13C NMR (75 MHz; CD3CN) δ 176.89, 176.21 (2C, CO), 145.42, 143.93, 141.73, 140.34, 136.63, 136.33, 135.85, 130.14 (16C, C pyrrole), 97.46-97.04 (4C, meso-C), 54.35, 56.6 (2C, CH=CH2), 54.31 (4C, N(CH3)4), 33.0, 30.56 (2C, CH2COOH), 23.28, 23.0 (2C, CH2CH2COOH), 13.45, 12.57, 11.56, 11.28 (4C, CH3); (ESI): m/z(%) 701.6 (100) [M]; elemental analysis calcd(%) for C38H56N6B12O3 (776.64): C 58.77, H 7.53, N 10.82; Found: C 58.47, H 7.26, N 10.67.
化合物12: 収率49%, UV/Vis(H2O): λmax: 415, 525, 535, 595, 639 nm; 11B NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ -15.25, -11.80, -9.95, -5.65; 1H NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 10.39, 10.3, 10.26, 10.22 (4H, s, meso H), 8.47 (2H, m, CH=CH2), 6.46 (2H, d, J = 15 Hz, CH=CH2), 6.22 (2H, d, J = 12 Hz, CH=CH2), 5.57 (2H, s, NH2), 4.28 (4H, m, porphyrin-CH2), 3.71-3.61 (12H, s, β-CH3), 2.93 (4H, m, CH2COOH), 0.27-1.89 (11H, bs, B12H11), -3.82 (s, 2H, NH); 13C NMR (300 MHz; d6-DMSO) δ 176.55, 175.04 (2C, CO), 146.38, 145.41, 143.38, 140.12, 137.65, 136.96, 133.14 (16C, C pyrrole), 97.99-97.41 (4C, meso-C), 56.64, 56.23 (2C, CH=CH2), 33.17, 30.87 (2C, CH2COOH), 22.98, 22.05 (2C, CH2CH2COOH), 14.12, 13.57, 11.36, 11.05 (4C, CH3), (ESI): m/z(%) 702.6 (100) [M].
【００３８】
試験例１：本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体のがん細胞に対する細胞増殖阻害試験
５種類の本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体の各種濃度の存在下、種々のがん細胞を９６穴プレート上で３７℃で７２時間培養した後（５×１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ，培地：ＲＰＭＩ−１６４０）、生存細胞をＭＴＴ法によって検出し、それぞれの化合物のＧＩ５０（５０％細胞増殖阻害濃度、以下同じ）を求めた。結果をＢＯＰＰのＧＩ５０とともに表１に示す。表１から明らかなように、５種類の化合物のうち、化合物２ａ，１０，１２は、いずれのがん細胞に対してもＧＩ５０がＢＯＰＰよりも大きかった（但し化合物１０のＣ６細胞に対するＧＩ５０は除く）。また、化合物６ａ，６ｂも、ＨｅｐＧ２細胞に対してはＧＩ５０がＢＯＰＰよりも大きく、化合物６ａは、ＨｅＬａ細胞に対してもＧＩ５０がＢＯＰＰよりも大きかった。以上の結果と、化合物２ｂ，８ａ，８ｂについての別途の同様の試験の結果から、本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体は、総じてＢＯＰＰよりも毒性が低いことがわかった。
【００３９】
【表１】
0005995207.tif 000013
【００４０】
試験例２：本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体のがん細胞に対する取り込み試験
５種類の本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体のホウ素濃度が１０ｐｐｍまたは１００ｐｐｍの存在下、ＨｅＬａ細胞を３７℃で３時間培養した後（１×１０６ｃｅｌｌｓ，培地：ＲＰＭＩ−１６４０）、過塩素酸／過酸化水素で細胞を灰化し、誘導結合プラズマ発光分光法（ＩＣＰ−ＡＥＳ）によって灰化液に含まれるホウ素量を測定することで、本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体のＨｅＬａ細胞に対する取り込み性を評価した。結果をＢＯＰＰの結果とともに図１に示す。図１から明らかなように、５種類の化合物のうち、化合物２ａ，６ａはＢＯＰＰと同じ程度に、化合物６ｂ，１０，１２はＢＯＰＰの約４倍、濃度依存的にＨｅＬａ細胞に取り込まれたことから、本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体は、腫瘍細胞親和性に優れ、腫瘍に選択的に蓄積することがわかった。
【００４１】
試験例３：本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体を用いたがん細胞の蛍光イメージング試験
本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体（化合物１２）またはＢＯＰＰの１００μＭの存在下、ＨｅＬａ細胞を３７℃で３時間培養した後（１×１０３ｃｅｌｌｓ，培地：ＲＰＭＩ−１６４０）、４％のパラホルムアルデヒドを用いて細胞を固定してから４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で細胞を染色し、蛍光顕微鏡観察を行った。その結果、化合物１２またはＢＯＰＰの単独造影，ＤＡＰＩの単独造影，化合物１２またはＢＯＰＰとＤＡＰＩの混合造影を比較することで、化合物１２とＢＯＰＰは、主に細胞質ゾルに蓄積することがわかった。
【００４２】
試験例４：本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体の光線力学療法への適用試験
５種類の本発明の含ホウ素ポルフィリン誘導体の各種濃度の存在下、ＨｅＬａ細胞を３７℃で３時間培養した後（１×１０４ｃｅｌｌｓ，培地：ＲＰＭＩ−１６４０）、キセノンランプを用いて平均２．４ｍＷ／ｃｍ２のレーザー光（波長：４００〜８００ｎｍ）を５分間細胞に照射し、さらに１２時間培養した後の生存細胞をＭＴＴ法によって検出し、それぞれの化合物のＧＩ５０を求めた。結果をＢＯＰＰのＧＩ５０とともに表２に示す。表２から明らかなように、５種類の化合物のうち、化合物１０，１２のＧＩ５０は、ＢＯＰＰよりもはるかに小さく、レーザー光の照射による細胞傷害効果が非常に強いことがわかったが、試験例２の結果を考慮すれば、この効果は、これらの化合物のＨｅＬａ細胞に対する取り込み性の高さが寄与していると考えられた。
【００４３】
【表２】
0005995207.tif 000014
【００４４】
実施例６：
下記の構造式で表される化合物13を、実施例2における化合物4aの合成のために用いた1-ペンタノールの代わりに1-ヘプタデカノールを用い、同様の方法によって赤紫色の固体として得た。
【化１２】
0005995207.tif 000015
化合物13: 収率95%, IR νmax(KBr disc)/cm-1 3313w (CH), 3197s, 2925s, 2854s (OH/NH), 1715s (C=O), 1654s (C=C), 1568s (NH), 1410s (CH3), 1150s (CN), 2965m, 2856m, 1475s, 1452s, 1400m, 1340m, 1165m, 1100m, 831m, 705m (CH2-groups); UV/Vis(CH3OH): λmax: 414, 525, 539, 595, 639 nm; 1H NMR (300 MHz; CD3OD) δ 10.66, 10.58, 10.23, 10.12 (4H, s, meso H), 6.03 (2H, m, α-CH), 4.37 (4H, m, porphyrin-CH2), 3.62 (12H, s, β-CH3), 3.49 (4H, m, OCH2), 3.07 (4H, m, CH2COOH), 2.09 (6H, s, CH3), 1.33 (4H, s, CH2), 1.11 (56H, s, CH2), 0.73 (6H, d, J = 7 Hz, CH3), 0.55 (s, 2H, NH); (ESI): m/z(%) 1076 (100) [M++2].
【００４５】
試験例５：本発明のポルフィリン誘導体のウイルスエンベロープとの融合試験
化合物１３（０．５ｍｇ／４３．５μＬ）とセンダイウイルスエンベロープ（５０００ＨＡＵ／６５０μＬ）を４℃で混合し、遠心分離を４℃で１３２００ｒｐｍで１０分間行った。得られた沈殿物を１００μＬのＰＢＳ溶液に懸濁し、再び遠心分離を同じ条件で行い、化合物１３とセンダイウイルスエンベロープの融合物を赤紫色の沈殿物として得た。この化合物１３とセンダイウイルスエンベロープの融合物（化合物１３の濃度：３０μＭ）の存在下、ＨｅＬａ細胞を３７℃で１時間培養した後（５×１０３ｃｅｌｌｓ，培地：ＲＰＭＩ−１６４０）、４％のパラホルムアルデヒドを用いて細胞を固定してから蛍光顕微鏡観察を行ったところ、化合物１３単独を同じ濃度でＨｅＬａ細胞に接触させた場合に比較して細胞からの蛍光強度が強かった。従って、化合物１３をセンダイウイルスエンベロープと融合させることで、ＨｅＬａ細胞に対する取り込み性の向上を図ることができることがわかった。この結果は、化合物１３を用いて合成された本発明の含ホウ素ポリフィリン誘導体でも同様であった。以上の結果から、本発明のポルフィリン誘導体は、本発明の含ホウ素ポリフィリン誘導体の合成中間体として有用であるのみならず、それ自体も光線力学療法の有効成分として有用であることがわかった（化合物４ａ，４ｂ，１３の種々のがん細胞に対するＧＩ５０を表３に示す）。
【００４６】
【表３】
0005995207.tif 000016
【産業上の利用可能性】
【００４７】
本発明は、腫瘍細胞親和性に優れ、かつ、毒性が低いことで高用量の投与が可能である、光線力学療法やホウ素中性子捕捉療法の有効成分として有用な含ホウ素ポルフィリン誘導体を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。
【図１】
0005995207.tif 000020