(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化２２】
0005952898.tif 000030
［式中、
Ｒ１は、ハロゲン−Ｃ２−６−アルケニル、ハロゲン−Ｃ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ２−６−アルキニル、Ｃ２−６−アルケニル−Ｃ１−６−アルコキシおよびＣ２−６−アルキニル−Ｃ１−６−アルコキシから個々に選択される１〜４個の置換基によってそれぞれ置換された、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ２は、ハロゲンであり、
Ｒ３は、Ｃ１−６−アルキルであり、
Ｒ４およびＲ５は両方とも、ハロゲンであり、
Ｒ６は、
ｉ）水素、および
ｉｉ）Ｃ１−６−アルキル
からなる群より選択され、
Ｒ７は、
ｉ）水素、および
ｉｉ）Ｃ１−６−アルキル
からなる群より選択される］で示される化合物
またはその薬学的に許容しうる塩。
【請求項２】
Ｒ１が、ハロゲン−Ｃ２−６−アルケニル、ハロゲン−Ｃ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ２−６−アルキニル、Ｃ２−６−アルケニル−Ｃ１−６−アルコキシまたはＣ２−６−アルキニル−Ｃ１−６−アルコキシによって置換されたヘテロアリールである、請求項１に記載の式Ｉの化合物。
【請求項３】
Ｒ１が、ハロゲン−Ｃ２−６−アルケニル、ハロゲン−Ｃ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ２−６−アルキニル、Ｃ２−６−アルケニル−Ｃ１−６−アルコキシまたはＣ２−６−アルキニル−Ｃ１−６−アルコキシによって置換されたピラジニルである、請求項１〜２のいずれかに記載の式Ｉの化合物。
【請求項４】
Ｒ１がＣ２−６−アルキニル−Ｃ１−６−アルコキシ−ピラジニルである、請求項１〜３のいずれかに記載の式Ｉの化合物。
【請求項５】
Ｒ２がＦである、請求項１〜４のいずれかに記載の式Ｉの化合物。
【請求項６】
Ｒ３がメチルである、請求項１〜５のいずれかに記載の式Ｉの化合物。
【請求項７】
Ｒ４およびＲ５が両方ともＦである、請求項１〜６のいずれかに記載の式Ｉの化合物。
【請求項８】
Ｒ６およびＲ７が両方とも水素である、請求項１〜７のいずれかに記載の式Ｉの化合物。
【請求項９】
Ｒ１が５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジニルである、請求項１〜８のいずれかに記載の式Ｉの化合物。
【請求項１０】
５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）−２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）-４−フルオローフェニル］−アミドである、請求項１〜９のいずれかに記載の式Ｉの化合物。
【請求項１１】
式Ｉａ
【化２３】
0005952898.tif 000031
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が請求項１〜９のいずれかに記載の意味をもつ］のトリチウム−標識化合物である、請求項１〜１０のいずれかに記載の式Ｉの化合物。
【請求項１２】
［３Ｈ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）-４−フルオロ−フェニル］−アミドである、請求項１１に記載の式Ｉａのトリチウム標識化合物。
【請求項１３】
式Ｉａ’
【化２４】
0005952898.tif 000032
［式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が請求項１〜９のいずれかに記載の意味をもつ］の１１Ｃ−標識化合物である、請求項１〜１０のいずれかに記載の式Ｉの化合物。
【請求項１４】
［１１Ｃ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドである、請求項１３に記載の式Ｉａ’の１１Ｃ−標識化合物。
【請求項１５】
ＢＡＣＥ１トレーサーとしての使用のための、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の式Ｉａの化合物。
【請求項１６】
ＢＡＣＥ１結合試験における使用のための、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の式Ｉａの化合物。
【請求項１７】
ＰＥＴトレーサーとしての使用のための、請求項１３〜１４のいずれか一項に記載の式Ｉａの化合物。
【請求項１８】
ホ乳類の脳におけるＢＡＣＥ１の画像診断における使用のための、請求項１１〜１４のいずれか一項に記載の式Ｉの化合物。
【請求項１９】
請求項１１〜１４のいずれか一項に定義したとおりの化合物を含むＢＡＣＥ１酵素の画像診断のための組成物。
【請求項２０】
ホ乳類の脳におけるＢＡＣＥ１の画像診断のための組成物の製造のための、請求項１１〜１４のいずれか一項に定義したとおりの化合物の使用。
【請求項２１】
治療活性物質としての使用のための、請求項１〜１４のいずれかに記載の式Ｉの化合物。
【請求項２２】
ＢＡＣＥ１および／またはＢＡＣＥ２活性の阻害剤としての使用のための、請求項１〜１４のいずれかに記載の式Ｉの化合物。
【請求項２３】
上昇したβ−アミロイドレベルおよび／またはβ−アミロイドオリゴマーおよび／またはβ−アミロイド斑およびさらに沈着によって特徴付けられる疾患および障害、またはアルツハイマー病の治療的および／または予防的処置のための治療活性物質としての使用のための、請求項１〜１４に記載の式Ｉの化合物。
【請求項２４】
糖尿病、または２型糖尿病の治療的および／または予防的処置のための治療活性物質としての使用のための、請求項１〜１４に記載の式Ｉの化合物。
【請求項２５】
請求項１〜１４のいずれかに記載の式Ｉの化合物と薬学的に許容しうる担体および／または薬学的に許容しうる補助物質を含む医薬組成物。
【請求項２６】
ＢＡＣＥ１および／またはＢＡＣＥ２活性の阻害における使用のための医薬の製造のための、請求項１〜１４のいずれかに記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項２７】
上昇したβ−アミロイドレベルおよび／またはβ−アミロイドオリゴマーおよび／またはβ−アミロイド斑およびさらに沈着によって特徴付けられる疾患および障害、またはアルツハイマー病の治療的および／または予防的処置のための医薬の製造のための、請求項１〜１４のいずれかに記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項２８】
糖尿病、または２型糖尿病の治療的および／または予防的処置のための医薬の製造のための、請求項１〜１４のいずれかに記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項２９】
ＢＡＣＥ１および／またはＢＡＣＥ２活性の阻害における使用のための、請求項１〜１４のいずれかに記載の式Ｉの化合物。
【請求項３０】
上昇したβ−アミロイドレベルおよび／またはβ−アミロイドオリゴマーおよび／またはβ−アミロイド斑およびさらに沈着によって特徴付けられる疾患および障害、またはアルツハイマー病の治療的および／または予防的処置における使用のための、請求項１〜１４に記載の式Ｉの化合物。
【請求項３１】
糖尿病、または２型糖尿病の治療的および／または予防的処置における使用のための請求項１〜１４に記載の式Ｉの化合物。
【請求項３２】
ＢＡＣＥ１および／またはＢＡＣＥ２活性の阻害における使用のための、または、上昇したβ−アミロイドレベルおよび／またはβ−アミロイドオリゴマーおよび／またはβ−アミロイド斑およびさらに沈着によって特徴付けられる疾患および障害、アルツハイマー病、糖尿病または２型糖尿病の治療的および／または予防的処置のための、請求項１〜１４のいずれかに記載の式Ｉの化合物を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
要約
本発明は、ＢＡＣＥ１および／またはＢＡＣＥ２阻害活性を有する［１，３］オキサジン、それらの製造、それらを含有する医薬組成物および治療活性物質としてのそれらの使用に関する。本発明は、ＢＡＣＥ１機能性の標識と画像診断のために有用である、ＢＡＣＥ１トレーサーとしての一般式Ｉの放射性−標識化合物をさらに提供する。
【０００２】
背景技術
アルツハイマー病（ＡＤ）は、中枢神経系の神経変性障害であり、そして高齢者人口における進行性認知症の主な原因である。その臨床症状は、記憶、認知、時間および場所の見当識、判断力ならびに論理的思考の機能障害であるが、また重度の情緒障害でもある。現在のところ、この疾患またはその進行を防ぐか、あるいはその臨床症状を安定に回復させることができる処置法は存在しない。ＡＤは、高い平均余命を持つ全ての社会における主要な健康問題になっており、そしてまた、それらの社会の医療制度にとって重大な経済的負担にもなっている。
【０００３】
ＡＤは、中枢神経系（ＣＮＳ）における２つの主要な病理、アミロイド斑の出現および神経原線維変化によって特徴付けられる(Hardy et al., The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics Science. 2002 Jul 19;297(5580):353-6, Selkoe, Cell biology of the amyloid beta-protein precursor and the mechanism of Alzheimer's disease, Annu Rev Cell Biol. 1994;10:373-403)。両病理はまた、ダウン症候群（トリソミー２１）の患者においても一般に観察され、若年期においてＡＤ様症状も発生する。神経原線維変化は、微小管関連タンパク質タウ（ＭＡＰＴ）の細胞内凝集体である。アミロイド斑は、細胞外間隙で生じ、それらの主成分は、Ａβ−ペプチドである。後者は、一連のタンパク質分解的切断段階によるβ−アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）に由来する一群のタンパク質分解断片である。ＡＰＰの幾つかの形態が同定されており、それらのうち最も豊富なものは、６９５、７５１および７７０アミノ酸長のタンパク質である。これら全ては異ったスプライシングにより単一遺伝子から生じる。Ａβ−ペプチドは、ＡＰＰの同じ領域に由来するが、それらのＮ−およびＣ−末端で異なり、主な種では、４０および４２アミノ酸長である。凝集したＡβ−ペプチドは、ＡＤの病理発生に不可欠な分子であることを強く示唆する幾つかの証拠がある：１）Ａβ−ペプチドから形成されたアミロイド斑は、常にＡＤ病理の一部である；２）Ａβ−ペプチドは、ニューロンに有毒である；３）家族性アルツハイマー病（ＦＡＤ）において、疾患遺伝子ＡＰＰ、ＰＳＮ１、ＰＳＮ２の突然変異が、Ａβ−ペプチドのレベル上昇および初期の脳アミロイド症につながる；４）そのようなＦＡＤ遺伝子を発現するトランスジェニックマウスは、ヒトの疾患に対して多くの類似点を有する病理を発生する。Ａβ−ペプチドは、β−およびγ−セクレターゼと称される２つのタンパク質分解酵素の連続作用によってＡＰＰから生成される。β−セクレターゼが最初にＡＰＰの細胞外領域において膜貫通領域（ＴＭ）の外側約２８アミノ酸で切断して、ＴＭ−および細胞質領域を含有するＡＰＰのＣ−末端断片（ＣＴＦβ）を生成する。ＣＴＦβはγ−セクレターゼの基質であり、γ−セクレターゼは、ＴＭ内の幾つかの隣接位置で切断してＡβ−ペプチドおよび細胞質断片を生成する。γ−セクレターゼは、少なくとも４つの異なるタンパク質の複合体であり、その触媒サブユニットは、プレセニリンタンパク質（ＰＳＥＮ１、ＰＳＥＮ２）である可能性が非常に高い。β−セクレターゼ（ＢＡＣＥ１、Ａｓｐ２；ＢＡＣＥは、β−サイトＡＰＰ−切断酵素を表す）は、膜貫通領域によって膜内に固定されているアスパルチルプロテアーゼである（Vassar et al., Beta-secretase cleavage of Alzheimer's amyloid precursor protein by the transmembrane aspartic protease BACE, Science. 1999 Oct 22;286(5440):735）。それは人体の多くの組織において発現されるが、そのレベルはＣＮＳにおいて特に高い。マウスにおけるＢＡＣＥ１遺伝子の遺伝的除去により、その活性が、Ａβ−ペプチドの生成につながるＡＰＰのプロセシングに不可欠であり、ＢＡＣＥ１の非存在下では、Ａβ−ペプチドは産生されないということが明らかに示されている（Luo et al., Mice deficient in BACE1, the Alzheimer's beta-secretase, have normal phenotype and abolished beta-amyloid generation, Nat Neurosci. 2001 Mar;4(3):231-2, Roberds et al., BACE knockout mice are healthy despite lacking the primary beta-secretase activity in brain: implications for Alzheimer's disease therapeutics, Hum Mol Genet. 2001 Jun 1;10(12):1317-24）。ヒトＡＰＰ遺伝子を発現するように遺伝子操作されており、かつ加齢の間に広範なアミロイド斑およびアルツハイマー病様病理を形成するマウスは、βセクレターゼ活性が、ＢＡＣＥ１対立遺伝子のうちの一方の遺伝的除去によって減少されると、それができなくなる（McConlogue et al., Partial reduction of BACE1 has dramatic effects on Alzheimer plaque and synaptic pathology in APP Transgenic Mice. J Biol Chem. 2007 Sep 7;282(36):26326）。したがって、ＢＡＣＥ１活性の阻害剤は、アルツハイマー病（ＡＤ）における治療介入に有用な薬物であり得るということが推測される。
【０００４】
２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）は、インスリン抵抗性および膵臓β−細胞からの不十分なインスリン分泌によって引き起こされ、血糖制御の不良および高血糖をもたらす（M Prentki & CJ Nolan, "Islet beta-cell failure in type 2 diabetes." J. Clin. Investig. 2006, 116(7), 1802-1812）。Ｔ２Ｄの患者は、微小血管および大血管疾患ならびに糖尿病性腎症、網膜症および心血管疾患を含む種々の関連合併症の危険性が高い。２０００年、推計約１億７１００万人がこの病状を有しており、この数字は、２０３０年までに２倍になり（S Wild, G Roglic, A Green, R.Sicree & H King, "Global prevalence of diabetes", Diabetes Care 2004, 27(5), 1047-1053）、この疾患が主要な医療問題になるだろうという予想がなされた。Ｔ２Ｄの有病率の上昇は、世界の人々の座りがちな生活様式および高エネルギー食物摂食の増加と関係している（P Zimmet, KGMM Alberti & J Shaw, "Global and societal implications of the diabetes epidemic" Nature 2001, 414, 782-787）。
【０００５】
β−細胞不全ならびに結果として生ずるインスリン分泌の劇的な減少および高血糖が、Ｔ２Ｄの発症を特徴付ける。最新の処置は、顕性Ｔ２Ｄを特徴付けているβ−細胞量の損失を防ぐものではない。しかしながら、ＧＬＰ−１類縁体、ガストリンおよび他の薬物を用いた最近の開発が、β−細胞の維持および増殖を達成することが可能であり、改善された耐糖能および顕性Ｔ２Ｄへのよりゆっくりとした進行をもたらすことを示している（LL Baggio & DJ Drucker, "Therapeutic approaches to preserve islet mass in type 2 diabetes", Annu. Rev. Med. 2006, 57, 265-281）。
【０００６】
Ｔｍｅｍ２７は、β−細胞増殖（P Akpinar, S Kuwajima, J Krutzfeldt, M Stoffel, "Tmem27: A cleaved and shed plasma membrane protein that stimulates pancreatic βcell proliferation", Cell Metab. 2005, 2, 385-397）およびインスリン分泌（K Fukui, Q Yang, Y Cao, N Takahashi et al., "The HNF-1 target Collectrin controls insulin exocytosis by SNARE complex formation", Cell Metab. 2005, 2, 373-384）を促進するタンパク質として同定されている。Ｔｍｅｍ２７は、完全長細胞Ｔｍｅｍ２７の分解により生じる、β−細胞の表面から構成的に脱落された４２ｋＤａ膜糖タンパク質である。トランスジェニックマウスにおけるＴｍｅｍ２７の過剰発現は、β−細胞量を増加し、そして糖尿病の食事性肥満ＤＩＯモデルにおける糖耐能を改善する。さらに、齧歯類のβ−細胞増殖アッセイ（例えば、ＩＮＳ１ｅ細胞を使用する）において、Ｔｍｅｍ２７のｓｉＲＮＡノックアウトは、増殖速度を低下させ、これはβ−細胞量の制御にＴｍｅｍ２７がある役割を果たすことを示している。
【０００７】
同じ増殖アッセイにおいて、ＢＡＣＥ２阻害剤も、また増殖を増加させる。しかしながら、Ｔｍｅｍ２７  ｓｉＲＮＡノックダウンと組み合わせたＢＡＣＥ２阻害は、低い増殖速度をもたらす。したがって、ＢＡＣＥ２は、Ｔｍｅｍ２７の分解の原因であるプロテアーゼであると結論付けられる。さらに、インビトロにおいて、ＢＡＣＥ２は、Ｔｍｅｍ２７の配列に基づいてペプチドを切断する。密接に関係するプロテアーゼＢＡＣＥ１は、このペプチドを切断せず、そしてＢＡＣＥ１単独の選択的阻害は、β−細胞の増殖を高めない。
【０００８】
近いホモログＢＡＣＥ２は、膜結合型アスパルチルプロテアーゼであり、そしてヒト膵臓β−細胞中に、Ｔｍｅｍ２７と共存する（G Finzi, F Franzi, C Placidi, F Acquati et al., "BACE2 is stored in secretory granules of mouse and rat pancreatic beta cells", Ultrastruct Pathol. 2008, 32(6), 246-251）。それはまた、ＡＰＰ（I Hussain, D Powell, D Howlett, G Chapman et al., "ASP1 (BACE2) cleaves the amyloid precursor protein at the  β- secretase site" Mol Cell Neurosci. 2000, 16, 609-619）、ＩＬ−１Ｒ２（P Kuhn, E Marjaux, A Imhof, B De Strooper et al., "Regulated intramembrane proteolysis of the interleukin-1 receptor II by alpha-, beta-, and gamma-secretase" J. Biol. Chem. 2007, 282(16), 11982-11995）およびＡＣＥ２を分解することができるということが知られている。ＡＣＥ２を分解する能力は、高血圧の制御におけるＢＡＣＥ２の可能な役割を示す。
【０００９】
したがって、ＢＡＣＥ２の阻害は、前糖尿病患者および糖尿病患者において、β−細胞量を維持および回復させ、そしてインスリン分泌を刺激する可能性を有する、Ｔ２Ｄのための処置法として提案される。したがって、選択的ＢＡＣＥ２阻害剤を提供することが、本発明の目的である。このような化合物は、特にＢＡＣＥ２の阻害と関係している疾患の治療および／または予防において、治療活性物質として有用である。
【００１０】
さらに、神経組織（例えば、脳）内、上または周辺のβ−アミロイドペプチドの形成、または形成および沈着は、本化合物によって阻害される、すなわち、ＡＰＰまたはＡＰＰ断片からのＡβ−産生の阻害である。
【００１１】
本発明の目的は、式Ｉの新規化合物、それらの製造、本発明による化合物に基づく医薬およびそれらの生成、ならびにアルツハイマー病および２型糖尿病などの病気の制御または予防における式Ｉの化合物の使用である。
【００１２】
式Ｉの放射性−標識化合物、特に式Ｉの［11Ｃ］−標識化合物は、ＢＡＣＥ１機能性の標識および分子画像診断のためのＰＥＴ（ポジトロン断層法、Positron Emission Tomography）放射性トレーサーとして使用できることが分かっている。分子イメージングは生物学的標的（例えば、受容体、酵素、イオンチャンネル、または分子プローブと結合あるいは保持できる他の細胞構成物）と分子プローブ（例えば、放射性トレーサー）の選択的および特異的相互作用に基づいており、それはＰＥＴ、核磁気共鳴、近赤外または他の方法によって可視化される。ＰＥＴ、核医学イメージング手法は、与えられた臓器における生物学的標的の分布、またはそのような臓器もしくは細胞の代謝活性に、またはそのような臓器に入り生物学的標的に結合および／または生物学的プロセスを修飾するための薬物の能力において、重要な情報を提供する三次元画像を作るために理想的に適している。ＰＥＴは非侵襲的画像法であるので、疾患の病態生理ならびにヒトおよび動物内で与えられた分子標的または細胞内プロセスにおける薬物の作用を調べるために用いることができる。与えられた分子標的に特異的なＰＥＴ放射性トレーサーの利用は薬物開発および薬物の作用機序の理解に役立つことができる。さらに、ＰＥＴ放射性トレーサーは疾患の結果として起る病態生理的変化を実証することによって疾患の診断を容易にすることができる。
【００１３】
ヒトの脳は多数の相互交信する神経からなる複雑な器官である。疾患に関連する異常の理解は効果的診断および新規の治療学の未来の発展の鍵となる。ヒトにおける生化学的異常の研究は急速に薬の発見と開発過程の基本的および不可欠な要素となりつつある。伝統的に、新薬の発見と開発は、ヒトへの投与に先だって生きている動物で後に試される有望な手がかりとなる候補物を選択するためにインビトロの技術に大きな比重をおいて実施されてきた。インビトロ系では生体系の複雑性を部分的にのみ反映し、そしてヒトの疾患のインビボ動物モデルは、しばしば単にヒトの病理の近似であるため、この過程での初期の段階で生きたヒトでの薬物と受容体の相互作用の確固たる理解は、新規治療の効果的かつ時を得た発見と開発をさらに進展するために有力な駆動力となるであろう。近年、病理、疾患プロセスおよび薬物作用を評価するためにヒトの医療画像の使用が増加してきた。これらのイメージング手法はＰＥＴ、ＭＲＩ、ＣＴ、超音波、ＥＥＧ、ＳＰＥＣＴ等を含む（British Medical Bulletin, 2003, 65, 169-177）。
それ故、非侵襲的イメージング手法（例えば、ＰＥＴ）の使用は将来における薬物の開発のための非常に貴重な手段である。非侵襲的核イメージング手法は様々な生体の生理機能および生化学についての基礎および診断情報を得るために使われることができる。これらの技術はそのような生体に投与された放射性トレーサーから放出された放射線を検出することができる洗練されたイメージング機器の使用に依存している。得られた情報は、放射性トレーサーの分布を時間の関数として明らかにする平面および断層の画像を提供するように再構成できる。放射性トレーサーの使用は、構造、機能、および最も重要には、被検体の生理機能および生化学における情報を含む画像を結果として得ることができる。この情報の多くは他の手段では得ることは出来ない。これらの試験において使用される放射性トレーサーは被検体の生理機能または生化学に関する特異情報の測定を可能にするインビボで定義された挙動をもつようにデザインされている。近年、放射性トレーサーは心臓機能、心筋血流、肺血流、肝機能、脳血流、局所脳の糖および酸素代謝に関する有益な情報を得るために利用されている（WO2007/041025）。さらに、ＰＥＴ画像は効率のよい効果的治療法の発見を促進するために薬物の開発の早い段階で、ヒトにおける正常および異常の神経化学についての非侵襲的および定量的測定を提供する。トレーサー量の標識化合物は新規の薬の早い段階での評価：生体分布の試験、薬物投与計画を効率良くするための受容体占有の試験および薬の作用の下流での応答を明らかにすることを可能にする。非侵襲的技術を用いてヒトにおける疾患の機序を理解することは、疾患の診断と処置におけるさらなる開発および新規の治療のさらなる発展と密接に関連している。
【００１４】
ＰＥＴに通常使用される放射性核種は１１Ｃ、１３Ｎ、１５Оおよび１８Ｆを含む。原理的には、すべての薬物同族体をペット核種で標識することは可能であるが、しかし、数種のみがヒトにおいてインビボでイメージング剤として利用可能と見られている。１１Ｃ、１３Ｎ、１５Оおよび１８Ｆの放射活性半減期は、それぞれ、２０，１０，２および１１０分である。これらの短い半減期は、ＰＥＴを用いたインビボでの生物学的プロセスを綿密に調べるためにトレーサーとして、それらの使用に多くの利点を授けている。同日内に同一被検体に反復試験が可能である。ＰＥＴは明確な化合物において薬物−投与量−酵素／受容体の占有関係を決定するための手段として利用が増えてきている。標的受容体または酵素に特異的に結合するＰＥＴ放射性トレーサーの使用は、脳に入り標的部位に結合するための薬物の能力：与えられた量の薬物によって作り出された標的部位での占有の程度、占有の経時変化、および問題となっている薬物の相対的血漿および組織の動態についての情報を提供することができる。
【００１５】
占有試験は、研究下の薬物候補と通常同一でないＰＥＴ放射性トレーサーを用いて行われる（British Medical Bulletin, 2003, 65, 169-177）。
【００１６】
本発明のさらなる目的は、ＢＡＣＥ１機能性の標識と画像診断に有用なＢＡＣＥ１トレーサーとしての一般式Ｉの放射性−標識阻害剤である。
【００１７】
技術分野
本発明は、式Ｉ：
【化１】
0005952898.tif 000002
［式中、置換基と変数は下記および請求項に記載のとおりである］の化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩またはそれらの放射性−標識型を提供する。
【００１８】
本化合物は、Ａｓｐ２（β−セクレターゼ、ＢＡＣＥ１またはメマプシン−２）阻害活性を有しており、そのため上昇したβ−アミロイドレベルおよび／またはβ−アミロイドオリゴマーおよび／またはβ−アミロイド斑およびさらに沈着によって特徴付けられる疾患および障害、特にアルツハイマー病の治療的および／または予防的処置において使用することができる。および／または、本化合物は、ＢＡＣＥ２阻害活性を有しており、そのため２型糖尿病および他の代謝障害などの疾患および障害の治療的および／または予防的処置において使用することができる。本発明はさらに、ＢＡＣＥ１機能性の標識と画像診断に有用な、ＢＡＣＥ１トレーサーとしての一般式Ｉの放射性−標識阻害剤を提供する。
【００１９】
本発明はさらに、ＢＡＣＥ１機能性の標識と画像診断に有用な、ＢＡＣＥ１トレーサーとしての一般式Ｉの放射性−標識化合物を提供する。
【００２０】
発明の詳細な説明
本発明の目的は、式Ｉの化合物およびそれらの薬学的に許容しうる塩、前述の化合物の調製、それらを含有する医薬ならびにそれらの製造であり、加えて、ＢＡＣＥ１および／またはＢＡＣＥ２活性の阻害に関連する疾患および障害、例えばアルツハイマー病および２型糖尿病などの治療および／または予防的処置における前述の化合物の使用である。さらに、神経組織（例えば、脳）内、上または周辺のβ−アミロイド斑の形成、または形成および沈着は、ＡＰＰまたはＡＰＰ断片からのＡβ産生を阻害することによって本化合物により阻害される。
【００２１】
本発明はさらに、ＢＡＣＥ１機能性の標識および画像診断に有用なＢＡＣＥ１トレーサーとしての一般式Ｉの放射性−標識化合物を提供する。
【００２２】
本記載で使用される一般用語の以下の定義は、問題となっている用語が単独または他の基との組合せで現れるかどうかに関係なく適用される。
【００２３】
特記のない限り、明細書および添付の特許請求の範囲を含む本出願に使用される下記の用語は、下記に示す定義を有する。明細書および添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形“ａ”、“ａｎ”および“ｔｈｅ”は、文脈から明白に示される場合を除いて、複数の対象を含むことに注意しなければならない。
【００２４】
用語「Ｃ１−６−アルキル」は、単独でまたは他の基との組合せで、直鎖または分岐（単一もしくは複数の分枝を持つ）炭化水素基で、一般的に１〜６個の炭素原子を含むアルキル基、例えば、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、プロピル、イソプロピル（ｉ−プロピル）、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル（イソ−ブチル）、２−ブチル（sec−ブチル）、ｔ−ブチル（tert−ブチル）等を表す。特にアルキル基は１〜４個の炭素原子を持つ基である。もっとも特にはメチルである。
【００２５】
用語「Ｃ２−６−アルケニル」は、１，２または３個の二重結合を含み、２〜６個の炭素原子（特に、２〜４個の炭素原子）の一価の直鎖または分岐の飽和炭化水素基を示す。アルケニルの例は、エテニル、プロペニルおよびイソ−ブテニルである。
【００２６】
用語「ハロゲン−Ｃ２−６−アルケニル」は、単独でまたは他の基との組合せで、ここに定義したように、１個または複数のハロゲン、特に１個のハロゲン、特にＦによって置換されている、本明細書に定義したとおりのＣ２−６−アルケニルを指す（例えば、フルオロ−エテニル）。
【００２７】
用語「Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ２−６−アルケニル」は、単独でまたは他の基との組合せで、ここで定義したとおりの１個または複数のＣ１−６−アルコキシ、特に１個のＣ１−６−アルコキシで置換されている本明細書で定義したとおりのＣ２−６−アルケニル（例えば、メトキシ−エテニル）を指す。
【００２８】
用語「Ｃ２−６−アルキニル」は、１または２個の三重結合を含み２〜６個の炭素原子（特に２〜４個の炭素原子）の一価の直鎖または分岐の飽和炭化水素基を示す。アルキニルの例は、エチニル、プロピニル、プロパ−２−イニル、ｎ−ブチニルおよびイソ−ブチニルを含む。
【００２９】
用語「ハロゲン−Ｃ２−６−アルキニル」は、単独でまたは他の基との組合せで、ここに定義したように、１個または複数のハロゲン、特に１個のハロゲン、特にＦによって置換されている本明細書に定義したとおりのＣ２−６−アルキニルを指す（例えば、フルオロ−エチニル）。
【００３０】
用語「Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ２−６−アルキニル」は、単独でまたは他の基との組合せで、ここで定義したとおりの１個または複数のＣ１−６−アルコキシ（特に１個のＣ１−６−アルコキシ）で置換されている本明細書で定義したとおりのＣ２−６−アルキニルを指す（例えば、メトキシ−エチニル）。
【００３１】
用語「ハロゲン」は、単独でまたは他の基との組合せで、クロロ（Ｃｌ）、ヨード（Ｉ）、フルオロ（Ｆ）およびブロモ（Ｂｒ）を示す。特別な「ハロゲン」は特にＦである。
【００３２】
用語「ヘテロアリール」は、単独でまたは他の基との組合せで、単一の４〜８員環、または６〜１４個（より特に６〜１０個）の環原子を含む縮合多環を有し、ならびに、Ｎ、ＯおよびＳ（特に２個のＮ）から個々に選択される１、２または３個のヘテロ原子を含有する、芳香族炭素環基（この基において、少なくとも１個の複素環は芳香族である）を指す。「ヘテロアリール」の例は、ベンゾフリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサジニル、ベンゾチアジニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアゾリル、フリル、イミダゾリル、インダゾリル、インドリル、イソキノリニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、オキサゾリル、ピラジニル、ピラゾリル（ピラジル）、ピラゾロ［１，５−ａ］ピリジニル、ピリダジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピロリル、キノリニル、テトラゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル等を含む。特には、ピラジニルである。具体的には、ピラジン−２−イルである。
【００３３】
用語「Ｃ１〜６−アルコキシ」は、単独でまたは他の基との組合せで、直鎖または分岐鎖（単一または複数の分枝を持つ）であってよい、一般的にアルキル基が１〜６個の炭素原子を含む、−Ｏ−低級アルキル基、例えば、メトキシ（ＯＭｅ、ＭｅＯ）、エトキシ（ＯＥｔ）、プロポキシ、イソプロポキシ（ｉ−プロポキシ）、ｎ−ブトキシ、ｉ−ブトキシ（イソ−ブトキシ）、２−ブトキシ（sec−ブトキシ）、ｔ−ブトキシ（tert−ブトキシ）、イソペンチルオキシ（ｉ−ペンチルオキシ）等を表す。特には、１〜４個の炭素原子を有する基である。もっとも特には、メトキシである。
【００３４】
用語「Ｃ２−６−アルケニル−Ｃ１−６−アルコキシ」は、単独でまたは他の基との組合せで、ここで定義したとおりの１個のＣ２−６−アルケニルで置換されている本明細書で定義したとおりのＣ１−６−アルコキシを指す。例は、エテニル−エトキシ、エテニル−メトキシ等である。
【００３５】
用語「Ｃ２−６−アルキニル−Ｃ１−６−アルコキシ」は、単独でまたは他の基との組合せで、ここで定義したとおりの１個のＣ２−６−アルキニルで置換されている本明細書で定義したとおりのＣ１−６−アルコキシを指す。例は、エチニル−エトキシ、エチニル−メトキシ等である。
【００３６】
用語「Ｃ２−６−アルキニル−Ｃ１−６−アルコキシ−ピラジニル」は、単独でまたは他の基との組合せで、ここで定義したとおりの１個のＣ２−６−アルキニル−Ｃ１−６−アルコキシ−基で置換されている、ピラジニル環を指す。特別な例は、５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジニルである。
【００３７】
用語「アリール」は、６〜１０個の炭素環原子を含む一価の芳香族炭素環性単環または二環系を示す。アリル部分の例はフェニルおよびナフチルを含む。具体的には、フェニルである。
【００３８】
用語「薬学的に許容しうる塩」は、ヒトおよび動物の組織と接触させての使用に適する塩を指す。無機酸および有機酸との適切な塩の例は、酢酸、クエン酸、ギ酸、フマル酸、塩酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、硝酸、リン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、コハク酸、硫酸、硫酸、酒石酸、トリフルオロ酢酸等であるが、これらに限定されない。特には、ギ酸、トリフルオロ酢酸および塩酸である。最も特には、塩酸である。
【００３９】
用語「薬学的に許容しうる担体」および「薬学的に許容しうる補助物質」は、処方の他の成分と併用できる、希釈剤または賦形剤などの担体および補助物質を指す。
【００４０】
用語「医薬組成物」は、所定の量または割合の特定の成分を含む製品、ならびに直接または間接的に、特定量で特定の成分を混合することに由来する任意の製品を包含する。特に、これは、１個以上の活性成分、および不活性成分を含むオプションの担体とを含む製品、ならびに直接もしくは間接的に、任意の２個以上の成分の組合せ、複合体もしくは凝集体に由来するか、または１個以上の成分の解離に由来するか、または１個以上の成分の他のタイプの反応もしくは相互作用に由来する任意の製品を包含する。
【００４１】
用語「半最大阻害濃度」（ＩＣ５０）は、インビトロでの生物学的方法の５０％阻害を得るために必要とされる特定化合物の濃度を示す。ＩＣ５０値は、ｐＩＣ５０値（−ｌｏｇ  ＩＣ５０）に対数的に変換することができ、ここで、より高い値は、指数関数的により高い力価を示す。ＩＣ５０値は、絶対値ではなく、実験条件、例えば、利用される濃度などに依存する。ＩＣ５０値は、Cheng-Prusoff式を使用して絶対阻害定数（Ｋｉ）に変換することができる（Biochem. Pharmacol. (1973) 22:3099）。用語「阻害定数」（Ｋｉ）は、特定阻害剤の受容体に対する絶対結合親和性を示す。それは、競合結合アッセイを使用して測定され、かつ、特定阻害剤が、競合リガンド（例えば、放射性リガンド）が存在しない場合、受容体の５０％を占有するであろう濃度に等しい。Ｋｉ値は、ｐＫｉ値（−ｌｏｇ  Ｋｉ）に対数的に変換することができ、ここで、より高い値は、指数関数的により高い力価を示す。
【００４２】
「治療有効量」は、疾患状態を処置するために被検体に投与される場合、疾患状態に対してそのような処置を行うために十分な化合物の量を意味する。「治療有効量」は、化合物、処置される疾患状態、処置される疾患の重篤度、被検体の年齢および相対的な健康状態、投与の経路および形態、診察にあたる医師または獣医の判断ならびに他の要因に応じて変化するであろう。
【００４３】
変形を指す場合、用語「本明細書で定義したとおり」および「本明細書で記載したように」は、言及することにより、変数の広範囲の定義ならびに、もしあるとするならば、特に、より特に、そして最も特にの定義を言及することにより組み込む。
【００４４】
化学反応を指す場合、用語「処理する」、「接触させる」および「反応させる」は、２つ以上の試薬を、適切な条件下で加えるかまたは混合して、表示および／または目的生成物を生成することを意味する。表示および／または目的生成物を生成する反応が、最初に加えられた２つの試薬を組み合わせた直接の結果である必要はないこと、すなわち、混合物中に生成された１つ以上の中間体が存在してよく、最終的にそれが表示および／または目的生成物の形成につながることを理解すべきである。
【００４５】
キラル炭素が、化学構造中に存在するときはいつでも、そのキラル炭素に関連する全ての立体異性体は、その構造によって包含されるということが意図される。
【００４６】
本発明は式Ｉ：
【化２】
0005952898.tif 000003
［式中、
Ｒ１は、ハロゲン−Ｃ２−６−アルケニル、ハロゲン−Ｃ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ２−６−アルキニル、Ｃ２−６−アルケニル−Ｃ１−６−アルコキシおよびＣ２−６−アルキニル−Ｃ１−６−アルコキシから個々に選択される１〜４個の置換基によってそれぞれ置換されたアリール、またはヘテロアリールであり、
Ｒ２は、ハロゲンであり、
Ｒ３は、Ｃ１−６−アルキルであり、
Ｒ４は、
ｉ）水素
ｉｉ）Ｃ１−６−アルキル、および
ｉｉｉ）ハロゲン
からなる群より選択され、
Ｒ５は、
ｉ）水素
ｉｉ）Ｃ１−６−アルキル、および
ｉｉｉ）ハロゲン
からなる群より選択され、
Ｒ６は、
ｉ）水素、および
ｉｉ）Ｃ１−６−アルキル
からなる群より選択され、
Ｒ７は、
ｉ）水素、および
ｉｉ）Ｃ１−６−アルキル
からなる群より選択され、
そしてＲ１がＣ２−６−アルキニル−Ｃ１−６−アルコキシによって置換されたヘテロアリールである場合は、Ｒ４およびＲ５は両方とも水素であるか、両方ともハロゲンである］で示される化合物またはその薬学的に許容しうる塩を提供する。
【００４７】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ１がハロゲン−Ｃ２−６−アルケニル、ハロゲン−Ｃ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ２−６−アルキニル、Ｃ２−６−アルケニル−Ｃ１−６−アルコキシおよびＣ２−６−アルキニル−Ｃ１−６−アルコキシから個々に選択される１〜２個の置換基で置換されているヘテロアリールである］の化合物を提供する。
【００４８】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ１が、ハロゲン−Ｃ２−６−アルケニル、ハロゲン−Ｃ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ２−６−アルキニル、Ｃ２−６−アルケニル−Ｃ１−６−アルコキシまたはＣ２−６−アルキニル−Ｃ１−６−アルコキシによって置換されているヘテロアリールである］の化合物を提供する。
【００４９】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ１が、ハロゲン−Ｃ２−６−アルケニル、ハロゲン−Ｃ２−６−アルキニル、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ２−６−アルケニル、Ｃ１−６−アルコキシ−Ｃ２−６−アルキニル、Ｃ２−６−アルケニル−Ｃ１−６−アルコキシまたはＣ２−６−アルキニル−Ｃ１−６−アルコキシによって置換されているピラジニルである］の化合物を提供する。
【００５０】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ１がＣ２−６−アルキニル−Ｃ１−６−アルコキシ−ピラジニルである］の化合物を提供する。
【００５１】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ１が５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジニルである］の化合物を提供する。
【００５２】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ１が５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−イルである］の化合物を提供する。
【００５３】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ２がＦである］の化合物を提供する。
【００５４】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ３がＣ１−６−アルキルである］の化合物を提供する。
【００５５】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ３がメチルである］の化合物を提供する。
【００５６】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ４およびＲ５が両方とも水素である］の化合物を提供する。
【００５７】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ４およびＲ５が両方ともハロゲンである］の化合物を提供する。
【００５８】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ４およびＲ５が両方ともＦである］の化合物を提供する。
【００５９】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ４が水素である］の化合物を提供する。
【００６０】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ４がハロゲンである］の化合物を提供する。
【００６１】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ４がＦである］の化合物を提供する。
【００６２】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ４がＣ１−６−アルキルである］の化合物を提供する。
【００６３】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ４がメチルである］の化合物を提供する。
【００６４】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ５が水素である］の化合物を提供する。
【００６５】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ５がハロゲンである］の化合物を提供する。
【００６６】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ５がＦである］の化合物を提供する。
【００６７】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ５がＣ１−６−アルキルである］の化合物を提供する。
【００６８】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ５がメチルである］の化合物を提供する。
【００６９】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ６およびＲ７が両方とも水素である］の化合物を提供する。
【００７０】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ６が水素である］の化合物を提供する。
【００７１】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ６がＣ１−６−アルキルである］の化合物を提供する。
【００７２】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ６がメチルである］の化合物を提供する。
【００７３】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ７が水素である］の化合物を提供する。
【００７４】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ７がＣ１−６−アルキルである］の化合物を提供する。
【００７５】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載のとおりの式Ｉ［式中、Ｒ７がメチルである］の化合物を提供する。
【００７６】
本発明のある実施態様は、５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）-４−フルオローフェニル］−アミドである、本明細書で記載のとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【００７７】
本発明のある実施態様は、式Ｉａ：
【化３】
0005952898.tif 000004
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７がここで記載したような意味をもつ］のトリチウム標識化合物である、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【００７８】
本発明のある実施態様は、［３Ｈ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドである、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【００７９】
本発明のある実施態様は、［３Ｈ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）-４−フルオロ−フェニル］−アミドである、本明細書で記載したとおりの式Ｉａのトリチウム標識化合物を提供する。
【００８０】
本発明のある実施態様は、式Ｉａ’：
【化４】
0005952898.tif 000005
［式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７がここで記載したような意味をもつ］の１１Ｃ−標識化合物である、式Ｉの化合物を提供する。
【００８１】
本発明のある実施態様は、［１１Ｃ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドである、式Ｉａ’の１１Ｃ−標識化合物を提供する。
【００８２】
本発明のある実施態様は、［１１Ｃ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）-４−フルオロ−フェニル］−アミドである、式Ｉの１１Ｃ−標識化合物を提供する。
【００８３】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ１トレーサーとしての使用のための、本明細書に記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【００８４】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ１結合試験における使用のための、本明細書に記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【００８５】
本発明のある実施態様は、ＰＥＴトレーサーとしての使用のための、本明細書に記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【００８６】
本発明のある実施態様は、ホ乳類の脳におけるＢＡＣＥ１の画像診断における使用のための、本明細書に記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【００８７】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載した化合物の有効量をホ乳類に投与することを含むＢＡＣＥ１酵素の画像診断のための方法を提供する。
【００８８】
本発明のある実施態様は、ホ乳類の脳における画像診断のための組成物の製造のための、本明細書で記載した化合物の使用を提供する。
【００８９】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ１トレーサーとしての使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉａの化合物を提供する。
【００９０】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ１結合試験における使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉａの化合物を提供する。
【００９１】
本発明のある実施態様は、ＰＥＴトレーサーとしての使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉａの化合物を提供する。
【００９２】
本発明のある実施態様は、ホ乳類の脳におけるＢＡＣＥ１の画像診断における使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉａの化合物を提供する。
【００９３】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載したとおりの式Ｉａの化合物の有効量をホ乳類に投与することを含むＢＡＣＥ１酵素の画像診断のための方法を提供する。
【００９４】
本発明のある実施態様は、ホ乳類の脳におけるＢＡＣＥ１の画像診断のための組成物の製造のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉａの化合物の使用を提供する。
【００９５】
本発明は、また前述の化合物の医薬組成、使用方法、および調製方法を提供する。
【００９６】
本発明のある実施態様は、治療活性物質としての使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【００９７】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ１および／またはＢＡＣＥ２活性の阻害剤としての使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【００９８】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ１活性の阻害剤としての使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【００９９】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ２活性の阻害剤としての使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【０１００】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ１およびＢＡＣＥ２活性の阻害剤としての使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【０１０１】
本発明のある実施態様は、上昇したβ−アミロイドレベルおよび／またはβ−アミロイドオリゴマーおよび／またはβ−アミロイド斑およびさらに沈着によって特徴付けられる疾患および障害、特にアルツハイマー病の治療的および／または予防的処置のための治療活性物質としての使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【０１０２】
本発明のある実施態様は、アルツハイマー病の治療的および／または予防的処置のための治療活性物質としての使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【０１０３】
本発明のある実施態様は、糖尿病、特に２型糖尿病の治療的および／または予防的処置のための治療活性物質としての使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【０１０４】
本発明のある実施態様は、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物ならびに薬学的に許容しうる担体および／または薬学的に許容しうる補助物質を含む医薬組成物を提供する。
【０１０５】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ１および／またはＢＡＣＥ２活性の阻害における使用のための医薬の製造のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物の使用を提供する。
【０１０６】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ１活性の阻害における使用のための医薬の製造のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物の使用を提供する。
【０１０７】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ２活性の阻害における使用のための医薬の製造のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物の使用を提供する。
【０１０８】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ１およびＢＡＣＥ２活性の阻害における使用のための医薬の製造のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物の使用を提供する。
【０１０９】
本発明のある実施態様は、上昇したβ−アミロイドレベルおよび／またはβ−アミロイドオリゴマーおよび／またはβ−アミロイド斑およびさらに沈着によって特徴付けられる疾患および障害、特にアルツハイマー病の治療的および／または予防的処置のための医薬の製造のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物の使用を提供する。
【０１１０】
本発明のある実施態様は、アルツハイマー病の治療的および／または予防的処置のための医薬の製造のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物の使用を提供する。
【０１１１】
本発明のある実施態様は、糖尿病、特に２型糖尿病の治療的および／または予防的処置のための医薬の製造のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物の使用を提供する。
【０１１２】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ１および／またはＢＡＣＥ２活性の阻害における使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【０１１３】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ１活性の阻害における使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【０１１４】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ２活性の阻害における使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【０１１５】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ１およびＢＡＣＥ２活性の阻害における使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【０１１６】
本発明のある実施態様は、上昇したβ−アミロイドレベルおよび／またはβ−アミロイドオリゴマーおよび／またはβ−アミロイド斑およびさらに沈着によって特徴付けられる疾患および障害、特にアルツハイマー病の治療的および／または予防的処置に使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【０１１７】
本発明のある実施態様は、アルツハイマー病の治療的および／または予防的処置に使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【０１１８】
本発明のある実施態様は、糖尿病、特に２型糖尿病の治療的および／または予防的処置に使用のための、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物を提供する。
【０１１９】
本発明のある実施態様は、ＢＡＣＥ１およびＢＡＣＥ２活性の阻害における使用、特に上昇したβ−アミロイドレベルおよび／またはβ−アミロイドオリゴマーおよび／またはβ−アミロイド斑およびさらに沈着によって特徴付けられる疾患および障害、アルツハイマー病、糖尿病または２型糖尿病の治療的および／または予防的処置のための方法であって、本明細書で記載したとおりの式Ｉの化合物をヒトまたは動物に投与することを含む方法を提供する。
【０１２０】
さらに、本発明は、全ての光学異性体、すなわちジアステレオ異性体、ジアステレオマー混合物、ラセミ混合物、それらの対応する全てのエナンチオマーおよび／または互変異性体ならびにそれらの溶媒和物を含む。
【０１２１】
当業者は、式Ｉの化合物は、互変異性型、例えば以下の互変異性型：
【化５】
0005952898.tif 000006
で存在することができるということを認識するであろう。
【０１２２】
全ての互変異性型は、本発明に包含される。
【０１２３】
式Ｉの化合物は、１個以上の不斉中心を含有してよく、したがってラセミ体、ラセミ混合物、単一エナンチオマー、ジアステレオマー混合物および個々のジアステレオマーとして生じることができる。付加的な不斉中心が、分子上の種々の置換基の性質に応じて存在してもよい。このような各不斉中心は、独立して２個の光学異性体を生成するであろうし、そして混合物中および純粋なまたは部分的に精製された化合物としての可能な光学異性体およびジアステレオマーの全ては、本発明の範囲内に含まれるということが意図される。本発明は、これらの化合物のこのような全ての異性体を包含することを意味されている。これらのジアステレオマーの独立した合成法またはそれらのクロマトグラフィー分離法は、本明細書に開示される方法論の適切な変法により、当技術分野において公知のとおり達成することができる。これらの絶対立体化学は、必要ならば、既知の絶対立体配置の不斉中心を含有する試薬で誘導体化された、結晶性生成物または結晶性中間体のＸ線結晶解析により決定することができる。必要に応じて、本化合物のラセミ混合物は、個々のエナンチオマーが単離されるように分離することができる。分離は、例えば、化合物のラセミ混合物をエナンチオマー的に純粋な化合物にカップリングすることによりジアステレオマー混合物を形成し、次いで分別結晶法またはクロマトグラフィー法などの標準法によって個々のジアステレオマーを分離するというような、当技術分野において周知の方法により実施することができる。式Ｉの化合物の異性体の特別な例は、式Ｉｂの化合物または式Ｉｃの化合物：
【化６】
0005952898.tif 000007
［式中、残基は、実施態様のいずれかにおいて記載されているとおりの意味を有する］である。特に式Ｉｃの化合物である。
【０１２４】
光学的に純粋なエナンチオマーが提供される実施態様において、光学的に純粋なエナンチオマーは、化合物が＞９０重量％の所望の異性体、特に＞９５重量％の所望の異性体、またはより特に＞９９重量％の所望の異性体（前記重量％は、化合物の異性体の全重量に基づく）を含有することを意味する。キラル的に純粋またはキラル的に富化された化合物は、キラル選択的合成によるかまたはエナンチオマーの分離によって調製することができる。エナンチオマーの分離は、最終生成物または代替的に適切な中間体に実施することができる。
【０１２５】
式Ｉの化合物は、以下のスキームにより調製することができる。出発物質は、市販されているかまたは既知の方法により調製することができる。先に定義した任意の残基および変数は、特に断りない限り引き続き先に定義した意味を有するであろう。
【０１２６】
一般式Ａ２で示されるスルフィニルイミンは、［T.P. Tang & J.A. Ellman, J. Org. Chem. 1999, 64, 12］と同様にして、エーテルのような溶媒（例えば、ジエチルエーテルまたはより特にテトラヒドロフラン）中、ルイス酸（例えば、チタン（ＩＶ）アルコキシド、より特にチタン（ＩＶ）エトキシドのような）の存在下で、アリールケトンＡ１とスルフィンアミド（例えば、アルキルスルフィンアミド、最も特に（Ｒ）−（＋）−tert−ブチルスルフィンアミド）の縮合によって、調製することができる。
【０１２７】
スルフィニルイミンＡ２のスルフィンアミドエステルＡ３への変換は、Tang & Ellmanによって記載されているように、キラル配向性基（chiral directing group）によって立体選択的に進行する。スルフィニルイミンＡ２は、エーテルのような溶媒（例えば、ジエチルエーテルまたはより特にテトラヒドロフラン）中、低温で、特に−７８℃で、例えば、酢酸アルキルまたはアルキル２−ハロゲン−プロパノアート（特に、酢酸エチルまたは２−フルオロ−プロパノアート、リチウムジイソプロピルアミドおよびクロロトリイソプロポキシチタン）から発生させたチタンエノラートと反応させることができる。あるいは、スルフィンアミドエステルＡ３は、エーテルのような溶媒（例えば、ジエチルエーテルまたはより特にテトラヒドロフラン）中、０〜７０℃の温度で、特に２３℃で、場合によっては塩化銅（Ｉ）の存在下で、ブロモ酢酸エステル誘導体、特にエチル２−ブロモ−２−フルオロアセタートまたは２−ブロモ−２，２−ジフルオロアセタート、および亜鉛粉末のレフォルマトスキー反応によってスルフィニルイミンＡ２から作ることができる。
【０１２８】
式Ａ４のアルコールは、エーテルのような溶媒（例えば、ジエチルエーテルまたはより好ましくはテトラヒドロフラン）中、アルカリ水素化物、特に水素化ホウ素リチウムまたは水素化アルミニウムリチウムを用いた式Ａ３のエチルエステルの還元によって調製することができる。
【０１２９】
式Ａ４のスルフィンアミドアルコール中のキラル配向性基の加水分解により、式Ａ５のアミノアルコールを得ることは、エーテルのような溶媒（例えばジエチルエーテル、テトラヒドロフランまたはより特に１，４−ジオキサン）中、鉱酸（例えば、硫酸または特に塩酸）を用いて達成することができる。
【０１３０】
式Ａ６のアミノオキサジンは、溶媒（アルコール、特にエタノールのような）中、臭化シアンと式Ａ５のアミノアルコールの反応によって調製することができる。
【０１３１】
式Ａ７のニトロ誘導体は、溶媒の使用なしで、無希釈の硫酸および発煙硝酸を含む標準法によって、オキサジンＡ６［式中、Ｑは水素である］のニトロ化によって調製できる。
【０１３２】
式Ａ７の化合物中のニトロ基の還元により、式Ａ８のアニリンを生成することは、アルコール類（特にエタノールまたはメタノール）のようなプロトン性溶媒中、パラジウム坦持炭素のような触媒を用いた水素化によって達成することができる。
【０１３３】
あるいは、式Ａ６［式中、Ｑはニトロ基である］の誘導体の還元により、式Ａ８のアニリンを生成することは、アルコール類（特にエタノールまたはメタノール）のようなプロトン性溶媒中、パラジウム坦持炭素のような触媒を用いた水素化によって達成することができる。
【０１３４】
式Ｉ．１の標的アミドは、メタノールのような溶媒中で、４−（４，６−ジメトキシ［１．３．５］トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴＭＭ）水和物を用いて、式Ａ８のアニリンと式Ｒ１−ＣＯＯＨのカルボン酸の選択的カップリングによって調製できる。
【０１３５】
【化７】
0005952898.tif 000008
スキームＡ：式Ｉ．１で示される化合物の合成
【０１３６】
式Ａ３のスルフィンアミドエステルは、−７８〜７０℃、特に０〜２３℃の間の温度で、エーテルのような溶媒（例えば、ジエチルエーテル、またはさらに特にテトラヒドロフラン）中で、過剰のグリニャールまたは有機リチウム試薬（例えば、メチル−またはエチルマグネシウムハライド、メチルリチウム等）とエチルエステルの反応によって式Ｂ１のアルコールに変換できる。
【０１３７】
式Ｂ１のアルコールのキラル配向性基の加水分解により式Ｂ２のアミノアルコールを得ることは、エーテルのような溶媒（例えば、ジエチルエーテル、またはテトラヒドロフラン、さらに特に１，４−ジオキサン）中、鉱酸（例えば、硫酸、または特に塩酸）を用いて０〜２３℃の温度で達成することができる、。
【０１３８】
式Ｂ３のアミノオキサジンは、溶媒（アルコール、特にエタノールのような）中、臭化シアンと式Ｂ２のアミノアルコールとの反応によって調製することができる。
【０１３９】
式Ｂ４のニトロ誘導体は、溶媒の使用なしで、無希釈の硫酸および発煙硝酸を含む標準法によって、オキサジンＢ３［式中、Ｑは水素である］のニトロ化によって調製できる。
【０１４０】
式Ｂ４の化合物中のニトロ基の還元により、式Ｂ５のアニリンを生成することは、アルコール類（特にエタノールまたはメタノール）のようなプロトン性溶媒中で、触媒（パラジウム坦持炭素のような）を用いる水素化によって達成することができ。
【０１４１】
あるいは、式Ｂ３［式中、Ｑはニトロ基である］の誘導体の還元により、式Ｂ５のアニリンを生成することは、アルコール類（特にエタノールまたはメタノール）のようなプロトン性溶媒（アルコール類、のような）中で、触媒（パラジウム坦持炭素のような）を用いる水素化によって達成することができる。
【０１４２】
【化８】
0005952898.tif 000009
スキームＢ：式Ｂ５のアニリン中間体の合成
【０１４３】
Ｎ−保護中間体を経て式Ａ８／Ｂ５のアニリンの調製のための別の典型的な方法は、スキームＡ．１に図示されている。
【０１４４】
一般式Ａ６．１［式中、Ｑはブロムである］の化合物中のアミノ基の保護により、式Ｃ１の臭化アリールを生成することは、０℃〜周囲温度の間の温度で、ジクロロメタンまたはクロロホルムのような塩素系溶媒中、塩基性条件下（例えば、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンのようなアミンの存在下）で、トリフェニルメチルクロリド（Ｔｒ−Ｃｌ）、ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチルクロリド（ＭＭＴｒ−Ｃｌ）、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチルクロリド（ＤＭＴｒ−Ｃｌ）またはトリ（ｐ−メトキシフェニル）メチルクロリド（ＴＭＴｒ−Ｃｌ）、特にＤＭＴｒ−Ｃｌのようなトリアリールメチルクロリドを用いて実施することができる。
【０１４５】
式Ｃ１の臭化アリールは、８０〜１１０℃の間の温度で、不活性雰囲気（窒素またはアルゴンのような）下で、適切な溶媒（トルエンまたは１，４−ジオキサンのような）中、塩基（ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、リン酸カリウムまたは炭酸セシウムのような）の存在下、適切な遷移金属触媒（ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（０）（（ｄｂａ）２Ｐｄ）またはトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（（ｄｂａ）３Ｐｄ２）のような）および適切なリガンド（ｒａｃ−２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（ｒａｃ−ＢＩＮＡＰ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（Ｘ−ＰＨＯＳ）または２−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（ｔ-ＢｕＸ−ＰＨＯＳ）のような）の存在下、アンモニア等価体（ベンゾフェノンイミンのような）と反応させて、式Ｃ２で示される化合物を生成することができる。
【０１４６】
式Ｃ２の化合物中の両方のアミノ基の脱保護は、まずそれと強有機酸（トリフルオロ酢酸のような）とを、０℃〜周囲温度の間の温度で、無水条件下、塩素系溶媒（ジクロロメタンまたはクロロホルムのような）中で反応させてＰ１−基を切断するワンポット方法によって達成することができる。次に、水を添加してベンゾフェノンイミンを切断し、そして周囲温度で反応させて、式Ａ８／Ｂ５のジアミンを生成する。
【０１４７】
【化９】
0005952898.tif 000010
スキームＣ：式Ａ８／Ｂ５のアニリン中間体の代替的合成
【０１４８】
式Ａ８／Ｂ５のアニリンは、極性溶媒（例えば、酢酸のような）中で、強酸化剤（例えば、過酸化水素のような）と供に、ヨウ化物源としてのヨウ化物（例えば、ヨウ化アンモニウムのような）を用いるヨードニウム供与システムによって、式Ｄ１のヨード誘導体に転換できる（N. Narender et al. in Tetrahedron Letters 48 (2007) 6124-6128に記載されているように）。
【０１４９】
式Ｄ２の中間体トリチウム標識アミンは、当業者に周知の方法によって達成することができる。触媒としてパラジウムの存在下、不活性溶媒（例えば、酢酸エチルのような）中で、式Ｄ１のヨード誘導体をトリチウムガスと処理して、式Ｄ２のトリチウム標識化合物を得る。
【０１５０】
式Ｉａの標的アミドは、メタノールのような溶媒中で、縮合剤として４−（４，６−ジメトキシ［１．３．５］トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴＭＭ）水和物を用いて、式Ｄ２のトリチウム標識アニリンと式Ｒ１−ＣＯＯＨのカルボン酸との選択的カップリングにより調製できる。
【０１５１】
【化１０】
0005952898.tif 000011
スキームＤ：式Ｄ２のアニリン中間体の合成
【０１５２】
式Ｉａ’の標的アミドは、スキームＥで図示されるように、中間体Ａ８／Ｂ５から調製できる。中間体式Ａ８／Ｂ５は、メタノールのような溶媒中で、縮合剤として４−（４，６−ジメトキシ［１．３．５］トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴＭＭ）水和物の存在下、選択的カップリングにより、５−クロロピラジン−２−カルボン酸との反応によって式Ｄ１のアミドに変換できる。
【０１５３】
式Ｄ１の化合物中のアミノ基の保護は、ジクロロメタンのような溶媒中Ｂｏｃ２Оのような試薬と実施することができ、式Ｄ２のカルバマートを生成する。
【０１５４】
式Ｄ２の中間体は、ＤＭＦのような溶媒中でＫОｔＢｕのような塩基の存在下、プロパルギルアルコールとの反応によって、式Ｄ３のプロパルギルエーテルに変換できる。
【０１５５】
式Ｄ３の化合物上の保護基は、ＤＣＭのような溶媒中で、適当な酸（例えば、ＴＦＡのような）と処理して除去することができ、中間体Ｄ４を得る。
【０１５６】
構造Ｄ４の末端アセチレンは、スタニル化されて、式５の化合物を得ることができる。そのような変換のための適切な条件は、例えばｔｒｉ−ｎ−ブチルチンメトキシドの使用および反応混合物の加熱である。
【０１５７】
式Ｉａ’の［１１Ｃ］−標識化合物は、ＤＭＦのような溶媒中、式Ｄ５のトリブチルスタニルアセチレンおよび［１１Ｃ］ヨードメタンの、パラジウム触媒（例えば、［Ｐｄ（ｔＢｕ３）２］）によるカップリングによって得ることが出来る。
【０１５８】
【化１１】
0005952898.tif 000012
スキームＥ：式Ｉａ’の［１１Ｃ］メチルアセチレンの合成
【０１５９】
酸との対応する薬学的に許容しうる塩は、当業者に公知の標準法により、例えば、式Ｉの化合物を適切な溶媒（例えば、ジオキサンまたはＴＨＦのような）に溶解し、そして適量の対応する酸を加えることにより得ることができる。この生成物は通常、濾過によるかまたはクロマトグラフィーにより単離することができる。式Ｉの化合物の、塩基との薬学的に許容しうる塩への変換は、そのような化合物をこのような塩基で処理することにより実施することができる。そのような塩を形成するための１つの可能な方法は、例えば、１／ｎ当量の塩基性塩（例えば、Ｍ（ＯＨ）ｎ［式中、Ｍ＝金属またはアンモニウムカチオンであり、そしてｎ＝水酸化物アニオンの数である］のような）を適切な溶媒（例えば、エタノール、エタノール−水混合物、テトラヒドロフラン−水混合物）中の本化合物の溶液に加え、そして溶媒を蒸発または凍結乾燥により除去することによるものである。
【０１６０】
それらの調製法が本実施例に記載されない限りにおいて、式Ｉの化合物ならびに全ての中間体生成物は、同様の方法によるかまたは本明細書に記載の方法により調製することができる。出発物質は、市販されているか、当技術分野において既知であるか、または当技術分野において公知の方法によるかもしくはそれと同様にして調製することができる。
【０１６１】
当然のことながら、本発明における一般式Ｉの化合物は、官能基で誘導体化して、インビボで親化合物に変換して戻ることができる誘導体を提供することができる。
【０１６２】
薬理学的試験
式Ｉの化合物およびそれらの薬学的に許容しうる塩は、有益な薬理学的特性を持つ。本発明の化合物は、ＢＡＣＥ１および／またはＢＡＣＥ２活性の阻害に関連するということが見出された。本化合物は下記に示す試験にしたがって調査された。
【０１６３】
細胞Ａβ−低下アッセイ：
ａ）ヒトＡＰＰｗｔ遺伝子（ＡＰＰ６９５）のｃＤＮＡを発現するベクターを安定的にトランスフェクトされたヒトＨＥＫ２９３細胞を使用して、細胞アッセイにおける本化合物の力価を評価した。その細胞を細胞培養培地（Iscove、それに加えて１０％（v/v）ウシ胎仔血清、グルタミン、ペニシリン／ストレプトマイシン）の９６−ウェルマイクロタイタープレート中に播種して、約８０％コンフルエンスにし、そして本化合物を、ＦＣＳを含まず８％ＤＭＳＯを含有する培地の１／１０容量中１０×濃度で加えた（ＤＭＳＯの最終濃度を０．８％ v/vで保持した）。加湿インキュベーター内、３７℃、５％ ＣＯ２での１８〜２０時間インキュベーション後、培養上澄を、Ａβ４０濃度の測定のために回収した。９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（例えば、Nunc MaxiSorb）を、Ａβ４０のＣ末端を特異的に認識するモノクローナル抗体でコーティングした（Brockhaus et al., NeuroReport 9, 1481-1486; 1998）。非特異的結合部位の例えば１％ ＢＳＡによるブロッキング、そして洗浄の後、培養上澄を適切な希釈で、西洋わさびペルオキシダーゼ結合Ａβ検出抗体（例えば、抗体４Ｇ８、Senetek, Maryland Heights, MO）と共に加え、そして５〜７時間インキュベートした。続いて、マイクロタイタープレートのウェルを、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０を含有するトリス緩衝食塩水で十分に洗浄し、そしてこのアッセイを、クエン酸緩衝液中のテトラメチルベンジジン／Ｈ２Ｏ２で展開させた。反応を１容量の１Ｎ Ｈ２ＳＯ４を用いて停止させた後、反応を、ＥＬＩＳＡ読取機において４５０nm波長で測定した。培養上澄中のＡβの濃度を、既知量の純粋なＡβペプチドを用いて得た標準曲線から計算した。
【０１６４】
ｂ）あるいは、Ａβ４０αＬＩＳＡアッセイが使用できる。ＨＥＫ２９３ＡＰＰ細胞を９６ウェルマイクロタイタープレート中の細胞培養培地（Iscove、それに加えて１０％（v/v）ウシ胎仔血清、ペニシリン／ストレプトマイシン）に播種して、約８０％コンフルエンスにし、そして本化合物を、培地の１／３容量中３×濃度で加えた（ＤＭＳＯの最終濃度を１％ v/vで保持した）。加湿インキュベーター内、３７℃、５％ ＣＯ２での１８〜２０時間インキュベーション後、培養上澄を、Perkin-Elmer社のヒトアミロイドＡβ１−４０（高特異性）キット（カタログ番号ＡＬ２７５Ｃ）を用いて、Ａβ４０濃度の測定のために回収した。
【０１６５】
Perkin-Elmer White Optiplate-384 (カタログ番号６００７２９０)中に、２μLの培養上澄を２μLの１０Ｘ  αＬＩＳＡ  抗−ｈＡβ  アクセプタービーズ＋ビオチン化抗体  抗−Ａβ１−４０  Ｍｉｘ（５０μg／mL／５nM）と混合した。１時間室温でインキュベーションした後、ストレプトアビジン（ＳＡ）ドナービーズ（２５μg／mL）の１．２５Ｘ調製の１６μLを加え、暗所で３０分間インキュベーションした。次に、EnVision-Alpha Readerを用いて放出光６１５nmで記録した。培養上澄中のＡβ４０濃度は最大シグナル（阻害剤なしで１％ＤＭＳОで処理した細胞）のパーセントとして計算された。ＩＣ５０値はエクセルＸＬＦｉｔソフトウエアを用いて計算した。
【０１６６】
細胞ＴＭＥＭ２７切断を測定することによるＢＡＣＥ阻害についてのアッセイ：
本アッセイは、Ｉｎｓ１ｅラット細胞株における内因性細胞ＢＡＣＥ２によるヒトＴＭＥＭ２７切断および細胞表面から培養培地への脱落の阻害の原理を使用し、続いてＥＬＩＳＡアッセイにおいて検出する。ＢＡＣＥ２の阻害は、用量依存的様式で切断および脱落を防ぐ。
【０１６７】
安定細胞株「ＩＮＳ−ＴＭＥＭ２７」は、ドキシサイクリン依存的様式での完全長ｈＴＭＥＭ２７の誘導性発現を有する（ＴｅｔＯｎ系を使用する）ＩＮＳ１ｅ由来細胞株を表す。この細胞を、実験を通じて、RPMI1640＋Glutamax（Invitrogen）  ペニシリン／ストレプトマイシン、１０％ウシ胎仔血清、１００mM ピルビン酸塩、５mM β−メルカプトエタノール（beta-mercatptoethanol）、１００μg／mL Ｇ４１８、および１００μg／mL ハイグロマイシン中で培養し、そして標準ＣＯ２細胞培養インキュベーター内、３７℃で非接着培養成長させる。
【０１６８】
ＩＮＳ−ＴＭＥＭ２７細胞を、９６ウェルプレート中に播種する。培養２日後、ＢＡＣＥ２阻害剤を、アッセイで必要とされる濃度範囲で加え、そしてさらに２時間後、ドキシサイクリンを、５００ng／mLの最終濃度まで加える。細胞をさらに４６時間インキュベートし、そして上澄を、脱落したＴＭＥＭ２７の検出のために回収する。
【０１６９】
ＥＬＩＳＡアッセイを（ＴＭＥＭ２７の細胞外領域に対して産生された一対のマウス抗ヒトＴＭＥＭ２７抗体を使用して）培養培地中のＴＭＥＭ２７の検出のために使用する。ＢＡＣＥ２阻害についてのＥＣ５０は、Ｅｘｃｅｌ表計算プログラムのためのＸＬＦｉｔのような標準曲線当てはめソフトウェアを用いて各阻害剤濃度についてのＥＬＩＳＡ読み出し情報を使用して計算する。
【０１７０】
例えば、１．１ｎＭのＩＣ５０値は５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドで得られた（ＢＡＣＥ１  細胞作用  Ａβ４０）。
【０１７１】
ラット脳における［３Ｈ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミド（実施例２）を用いるオートラジオグラフィ−試験
【０１７２】
１）インビトロオートラジオグラフィー
［３Ｈ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）−４−フルオローフェニル］−アミド結合部位の分布ならびにＢＡＣＥ１の結合特異性は雄のSprague-Dawleyラットを用いてインビトロオートラジオグラフィ−によって調査された。動物は殺処分して、それらの脳を迅速に取り除きドライアイスパウダー中で凍結した。１０μm−厚さの矢状切片をクライオスタットマイクロトーム（Cryostat microtome）で切出し、そして、付着ガラススライドの上に解凍−マウントした。脳切片はリンゲル緩衝液（ＮａＣｌ  １２０mM、ＫＣｌ  ５mM、ＣａＣｌ２  ２mM、ＭｇＣｌ２  １mM、トリス−ＨＣｌ  ５０mM、ｐＨ７．４）に室温で最初は１０分間インキュベーションし、次に、１ｎＭまたは１０ｎＭの［３Ｈ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）−２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）−４−フルオローフェニル］−アミドを含むリンゲル緩衝液中で６０分間インキュベーションした。非特異的結合（ＮＳＢ）の評価のために、追加系列の切片を放射性トレーサーと参考ＢＡＣＥ１阻害剤（（Ｓ）−３−（３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−７−（２−フルオロピリジン−３−イル）−５’Ｈ−スピロ［クロメノ［２，３−ｃ］ピリジン−５，５’−オキサゾール］−２’−アミン（CAS Nr 1215869-02-5; 実施例 294 、 WO2010030954）を１０μMで含むリンゲル緩衝液でインキュベーションした。インキュベーションの終わりに、切片は氷冷したリンゲル緩衝液中で５分間３回リンスし、次に４℃で蒸留水に迅速に一回浸した。スライドにマウントした脳切片を冷空気下で３時間乾燥し、そして［３Ｈ］−ミクロスケール（microscale）と共にFujiイメージングプレートに５日間感光した。次にイメージングプレートを高解像度のFujiＢＡＳリーダーでスキャンした。関心の脳領域に結合した放射性トレーサーの全量（ＴＢ）はＭＣＩＤ画像分析プログラムを使って測定し、そしてタンパク質mg当りの結合放射性トレーサーのfmol（結合放射性トレーサーのfmol／タンパク質mg）として表わした。ＢＡＣＥ１に特異的に結合した［３Ｈ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）−４−フルオローフェニル］−アミドの量（ＳＢ）は式ＳＢ＝ＴＢ−ＮＳＢによって計算された。得られた結果は、ラット脳内における実施例２の結合部位の広範な分布を示し、これはＢＡＣＥ１ｍＲＮＡの周知の分布と一致した（Brian D. Bennett, Safura Babu-Khan, Richard Loeloff, Jean-Claude Louis, Eileen Curran, Martin Citron, and Robert Vassar, The Journal of Biological Chemistry. 275, 20647-51, 2000）。最も高濃度の実施例２の結合部位は、歯状回ならびに海馬のＣＡ３、小脳、淡蒼球、および黒質領域で観察された。１０μMの特異的ＢＡＣＥ１阻害剤Ａと１nMの実施例２のコインキュベーションはトレーサー結合を８０％より以上減少させ、実施例２がインビトロでＢＡＣＥ１に特異的に結合することを実証した。さら���、トリチウム標識したトレーサー候補物が、インビトロのオートラジオグラフィーによってサルおよびヒトの脳組織切片におけるＢＡＣＥ１との結合を調べて比較するために使用された。実施例２はＢＡＣＥ１に非常によく似た程度で結合することを実証することができ、その事は様々な種におけるＢＡＣＥ１−特異トレーサーとしての実施例２の翻訳性を示唆した。
【０１７３】
２）体外オートラジオグラフィー
ＢＡＣＥ１イメージングのための［３Ｈ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）-４−フルオロ−フェニル］−アミドのインビボでの特性は若い雄のSprague-Dawleyラットを用いて体外オートラジオグラフィーの方法によって分析された。動物に、１mCi／kg［３Ｈ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）-４−フルオロ−フェニル］−アミド（３７．７nmol／kgに相当）を静脈内投与して、注射後様々な時点で殺処理した。インビボでのトレーサー結合の特異性を試験するために、ラットに１０mg／kgの参照ＢＡＣＥ１阻害剤（（Ｓ）−３−（３，６−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−７−（２−フルオロピリジン−３−イル）−５’Ｈ−スピロ［クロメノ［２，３−ｃ］ピリジン−５，５’−オキサゾール］−２’−アミン （CAS Nr 1215869-02-5; 実施例 294 、 WO2010030954）をトレーサー注入の３時間前に前投与した（経口投与）。動物は注射後様々な時点（注射後、５、１５、３０、６０，１２０分）で殺処分し、それらの脳を迅速に取り除きドライアイスパウダー中で凍結した。１０μm−厚さの矢状切片をクライオスタットマイクロトーム（Cryostat microtome）で切出し、そして、付着ガラススライドの上で解凍−マウントした。スライド−マウントした脳切片は冷空気流下で３時間乾燥し、そして［３Ｈ］−ミクロスケール（microscale）と共にFujiイメージングプレートに５日間感光した。次にイメージングプレートを高解像度のFujiＢＡＳリーダーでスキャンした。関心の脳領域に結合した放射性トレーサーの全量（ＴＢ）はＭＣＩＤ画像分析プログラムを使って測定され、そしてタンパク質mg当りの結合放射性トレーサーのfmol（結合放射性トレーサーのfmol／タンパク質mg）として表わされた。ＢＡＣＥ１に特異的に結合した［３Ｈ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）-４−フルオローフェニル］−アミドの量（ＳＢ）は式ＳＢ＝ＴＢ−ＮＳＢに従って計算した。［３Ｈ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）−４−フルオローフェニル］−アミドは、好ましい脳／血漿比率を示してラット脳に入ることが分かった。インビボ結合の観察された分布パターンは、歯状回ならびに海馬のＣＡ３領域、小脳、淡蒼球、および黒質における最も高い集積をもつインビトロ分布に完全に対応した。さらに、結合はＢＡＣＥ１リガンドＡでの前処理によって明らかに減少したので、実施例２のインビボ集積は主にＢＡＣＥ１−特異的であることが分かった。注入後の様々な時点でのトレーサー結合の分析は、典型的ＰＥＴの収集時間の１２０分の間に実施例２の結合の好ましい洗い出し動態を証明した。
【０１７４】
ヒヒにおける［１１Ｃ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）−２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミドを用いたインビボＰＥＴイメージング
【０１７５】
ＰＥＴ実験はオスのヒヒ（アヌビスヒヒ、papio anubis）で実施した。動物はＰＥＴ試験前１２時間絶食にした。ヒヒは、最初に表面レベルの麻酔を得るために５〜７mg／kgの制限量で塩酸ケタミンの筋肉内投与により鎮静させ、次に連続的プロポフォル静脈内注入（０．３〜０．４mg／kg／ｈ）（DIPRIVAN(R)  注入懸濁液）で維持した。循環量は等張生理食塩水の注入によって維持した。大腿動脈カテーテルが血液採取のために挿入された。心拍数、ＥＣＧ、血圧、および酸素飽和度を含む生理的生命徴候は試験中絶えずモニターした。動物はECAT HRRT(R) 脳 PET スキャナー （High Resolution Research Tomograph, CPS Innovations, Inc., Knoxville, TN）に配置した。動物の頭は再現可能な固定のための頭部固定に付属した熱可塑性マスクで覆った。１mCi  Ｃｓ−１３７点線源での６分透過スキャンが減衰補正のために最初に行われた。［１１Ｃ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）-４−フルオローフェニル］−アミド（約１０mCiまたは１μg）が１分間の単回注射として静脈内投与された。ＰＥＴスキャンおよび動脈血採取は放射性トレーサーの投与の開始時に始められ、ＰＥＴイメージは放射性トレーサーの投与後０〜１２０分間集得された。放射型ＰＥＴスキャンは、衰退、放散、および不感時間のために補正する反復オーダースキャンサブセット化による期待値最大化法（ОＳＥＭ）アルゴリズムを用いて再構築された。標準ＶОＩテンプレートはそれぞれ別個の動物のベースラインＰＥＴに移された。領域の時間−活性曲線（ＴＡＣｓ）は連続ＰＥＴフレーム上にＶОＩを適用して得られた。時間ＴでのＶОＩの放射活性は重量平均として計算され、およびmCi／mLで表示された。ＴＡＣｓはまた、スキャン間と異ったトレーサーのスキャン間でＴＡＣｓの概略比較をさせるために次の式を用いて標準化摂取値（ＳＵＶ）によって表わされた。
【０１７６】
ＳＵＶ％＝放射活性（nCi／mL）／１０６／（投与量（mCi）／体重（kg）ｘ１０３）ｘ１００、ここで数字は、ボクセル放射活性と放射活性投与量の間（１０６）および体重とボクセル体積の間（１０３）に当量放射活性のための単位を作るために用いられた。
【０１７７】
ＰＥＴイメージング試験の結果は、投与後１０〜２０分で最高の摂取を示し、そして試験の残りにかけてゆっくりとした減衰を表したＴＡＣｓによって、放射性トレーサーが迅速に複数の脳領域に摂取されたことを示した。放射性トレーサーの普遍的分布は、海馬、淡蒼球、および黒質の歯状回にわずかにより高い集積によって、ＢＡＣＥ１（B. D. Bennett et al., J. Biol Chem. 2000, 275  (27), 20647-20651）の既知の分布を反映した。
【０１７８】
医薬組成物
式Ｉの化合物および薬学的に許容しうる塩は、治療活性物質として、例えば医薬製剤の形態で使用することができる。医薬製剤は、例えば、錠剤、コーティング錠剤、糖衣錠、硬および軟ゼラチンカプセル剤、液剤、乳剤または懸濁剤の剤形で、経口投与することができる。しかしながら、投与は、例えば、坐剤の剤形で直腸内に、または例えば、注射液剤の剤形で非経口的に行うこともできる。
【０１７９】
式Ｉの化合物およびそれらの薬学的に許容しうる塩は、医薬製剤の製造ため、薬学的に不活性な無機または有機担体と共に加工することができる。乳糖、トウモロコシデンプンまたはその誘導体、タルク、ステアリン酸またはその塩等が、例えば、錠剤、コーティング錠剤、糖衣錠および硬ゼラチンカプセル剤のためのそのような担体として使用することができる。軟ゼラチンカプセル剤のための適切な担体は、例えば、植物油、ロウ、脂肪、半固体および液体ポリオール類等である。しかしながら、活性物質の性質に応じて、軟ゼラチンカプセル剤の場合は、通常担体を必要としない。液剤およびシロップ剤の製造に適切な担体は、例えば、水、ポリオール類、グリセリン、植物油等である。坐剤に適切な担体は、例えば、天然または硬化油、ロウ、脂肪、半液体または液体のポリオール等である。
【０１８０】
さらに、医薬製剤は、薬学的に許容しうる補助物質、例えば、保存剤、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色料、着香剤、浸透圧を変化させるための塩、緩衝剤、マスキング剤または抗酸化剤を含有することができる。それらは、その他の治療上有益な物質も更に含有することができる。
【０１８１】
式Ｉの化合物またはその薬学的に許容しうる塩および治療上不活性な担体を含有する医薬もまた、本発明の目的であり、それらの製造方法であって、式Ｉの１個以上の化合物および／またはそれらの薬学的に許容しうる塩、ならびに必要に応じて１個以上の他の治療上有益な物質を、１個以上の治療上不活性な担体と共にガレヌス製剤の投与形態にすることを含む製造方法も、本発明の目的である。
【０１８２】
用量は、広い範囲内で変えることができ、そして当然、各特別な症例における個々の要求に適合させなければならない。経口投与の場合に、成人の用量は、一般式Ｉの化合物の１日当り約０．０１mg〜約１０００mgで、またはその薬学的に許容しうる塩の対応する量の範囲で変化することができる。１日用量を、１回量としてまたは分割した量で投与してよく、そして加えて、必要性が示される場合、上限を超えることもできる。
【０１８３】
下記の実施例は、本発明を限定することなく説明するが、単にその代表として役立つものである。医薬製剤は、好都合には、式Ｉの化合物を約１〜５００mg、特に１〜１００mg含有する。以下は本発明による組成物の例である：
【０１８４】
実施例Ａ
通常の方法で、以下の組成の錠剤を製造する。
【０１８５】
【表１】
0005952898.tif 000013
【０１８６】
製造手順
１．成分１、２、３および４を混合し、そして精製水で顆粒化する。
２．顆粒を５０℃で乾燥させる。
３．顆粒を適切な微粉砕装置に通す。
４．成分５を加え、そして３分間混合し、適切な成形機で圧縮する。
【０１８７】
実施例Ｂ−１
以下の組成のカプセル剤を製造する。
【０１８８】
【表２】
0005952898.tif 000014
【０１８９】
製造手順
１．成分１、２および３を適切なミキサーで３０分間混合する。
２．成分４および５を加え、そして３分間混合する。
３．適切なカプセルに充填する。
【０１９０】
式Ｉの化合物、乳糖およびトウモロコシデンプンを、最初にミキサーで、次に微粉砕機で混合する。混合物をミキサーに戻し；タルクをそれに加え、そして十分に混合する。混合物を、機械により適切なカプセル、例えば硬ゼラチンカプセルに充填する。
【０１９１】
例Ｂ−２
以下の組成の軟ゼラチンカプセル剤を製造する。
【０１９２】
【表３】
0005952898.tif 000015
【０１９３】
【表４】
0005952898.tif 000016
【０１９４】
製造手順
式Ｉの化合物を、他の成分の加温溶融物に溶解し、そして混合物を適切な大きさの軟ゼラチンカプセルに充填する。充填された軟ゼラチンカプセル剤を、通常の手順に従って処理する。
【０１９５】
実施例Ｃ
以下の組成の坐剤を製造する。
【０１９６】
【表５】
0005952898.tif 000017
【０１９７】
製造手順
坐薬用錬剤をガラスまたはスチール容器中で溶解し、十分に混合し、そして４５℃に冷却する。その後、微粉砕した式Ｉの化合物をそれに加え、そしてそれが完全に分散するまで撹拌する。混合物を適切な大きさの坐剤成形型に注ぎ、放置して冷却し；次に坐剤を成形型から取り外し、パラフィン紙または金属箔で個別に包む。
【０１９８】
実施例Ｄ
以下の組成の注射液剤を製造する。
【０１９９】
【表６】
0005952898.tif 000018
【０２００】
製造手順
式Ｉの化合物を、ポリエチレングリコール４００と注射用水（一部）の混合物に溶解する。酢酸によりｐＨを５．０に調整する。残量の水を加えて、容量を１．０mLに調整する。溶液を濾過し、適切な過剰量を使用してバイアルに充填し、そして滅菌する。
【０２０１】
実施例Ｅ
以下の組成のサシェ剤を製造する。
【０２０２】
【表７】
0005952898.tif 000019
【０２０３】
製造手順
式Ｉの化合物を、乳糖、微晶質セルロースおよびナトリウムカルボキシメチルセルロースと混合し、そしてポリビニルピロリドンの水中混合物で顆粒化する。顆粒をステアリン酸マグネシウムおよび香味添加剤と混合し、そしてサッシェに充填する。
【０２０４】
実験の部
以下の実施例は、本発明の例示のため提供される。それらは、本発明の範囲を制限するものと見なされるべきではなく、単に本発明の代表的なものとして見なされるべきである。
【０２０５】
中間体スルフィニルイミンＡ２の合成
一般手順：
テトラヒドロフラン（４００mL）中の（Ｒ）−（＋）−ｔｅｒｔ−ブチルスルフィンアミド（８９．８mmol）の溶液をケトン（９８．７mmol）およびチタニウム（ＩＶ）エトキシド（１７８．４mmol）と順に処理した。溶液は還流温度で３〜１８時間撹拌した。後処理のために、混合溶液を２２℃に冷却し、ブライン（４００mL）で処理した。懸濁液を１０分間撹拌し、そしてダイカライトで濾過した。層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を合わせて、水で洗浄し、乾燥しそして蒸発させた。残渣をヘプタンおよび酢酸エチルの混合物を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、純粋なスルフィニルイミンＡ２得た。
【０２０６】
【化１２】
0005952898.tif 000020
【０２０７】
中間体Ａ２．１（Ｑ＝ＮО２；Ｒ２＝Ｆ；Ｒ３＝Ｍｅ）：１−（２−フルオロ−５−ニトロ−フェニル）−エタノン（８９．７mmol）から出発して、生成物（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィン酸［１−（２−フルオロ−５−ニトロ−フェニル）−（Ｅ）−エチリデン］−アミド（２１．５６ｇ）を淡黄色固体として得た。MS (ISP): m/z = 287.0 [M+H]+。
【０２０８】
中間体スルフィンアミドジフルオロエステルＡ３の合成
一般手順（レフォルマトスキー反応を経て）：
乾燥装置中で、無水ジエチルエーテル（４５mL）中に新しく活性化した亜鉛粉末の懸濁液を不活性雰囲気下で熱して還流した。無水ジエチルエーテル（２５mL）中のスルフィニルイミンＡ２（９．８１mmol）およびエチル２−ブロモ−２，２−ジフルオロアセテート（３．９８ｇ、２．５２ｍＬ、１９．６mmol）の溶液を１５分間以上で滴下して加えて、その間、内部の温度は上昇し還流は増加した。懸濁液をさらに５時間還流した。後処理のために、２３℃に冷まし、セライトで濾過し、そして酢酸エチルで洗浄した。濾液は塩化アンモニウムの飽和溶液（３００mL）に注ぎ、酢酸エチル（２ｘ３００mL）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、４．５９ｇの粗物質を褐色油状物として得て、これをヘプタンおよび酢酸エチルの８：１−混合物を用いたフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、７０ｇ）により精製して、スルフィンアミドジフルオロエステルＡ３を得た。
【０２０９】
【化１３】
0005952898.tif 000021
【０２１０】
中間体Ａ３．１（Ｑ＝ＮО２；Ｒ２＝Ｆ；Ｒ３＝Ｍｅ；Ｒ４＝Ｆ；Ｒ５＝Ｆ）：（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィン酸［１−（２−フルオロ−５−ニトロ−フェニル）−（Ｅ）−エチリデン］−アミド（中間体Ａ２．１）（５．７３ｇ，２０mmol）から出発して、生成物（Ｒ）−２，２−ジフルオロ−３−（２−フルオロ−５−ニトロ−フェニル）−３−（（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィニルアミノ）−酪酸エチルエステル（３．１ｇ）を橙色油状物として得た。MS (ISP): m/z = 411.2 [M+H]+。
【０２１１】
中間体スルフィンアミドアルコールＡ４の合成
無水テトラヒドロフラン（２４mL）中のスルフィンアミドジフルオロエステルＡ３（４．４mmol）の溶液を０℃に冷却し、そして水素化ホウ素リチウム（９．０mmol）で処理した。撹拌を０℃で１５分間続けた。次に反応混合物を室温に温め、そしてさらに２〜１８時間撹拌した。後処理のために、反応に水を加えてクエンチして反応体積を減圧下で減少させ、そして酢酸エチルで希釈した。有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして蒸発させて、残渣を得て、これを溶出剤としてｎ−ヘプタンおよび酢酸エチルの混合物を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、中間体アルコールＡ４を得た。
【０２１２】
【化１４】
0005952898.tif 000022
【０２１３】
中間体Ａ４．１（Ｑ＝ＮО２；Ｒ２＝Ｆ；Ｒ３＝Ｍｅ；Ｒ４＝Ｆ；Ｒ５＝Ｆ；Ｒ６＝Ｈ；Ｒ７＝Ｈ）：（Ｒ）−２，２−ジフルオロ−３−（２−フルオロ−５−ニトロ−フェニル）−３−（（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィニルアミノ）−酪酸エチルエステル（中間体Ａ３．１）（３．７８ｇ，９．２mmol）から出発して、生成物（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィン酸［（Ｒ）−２，２−ジフルオロ−１−（２−フルオロ−５−ニトロ−フェニル）−３−ヒドロキシ−１−メチル−プロピル］−アミド（２．９ｇ）を明黄色固体として得た。MS (ISP): m/z = 369.0 [M+H]+。
【０２１４】
中間体アミノアルコールＡ５の合成
一般手順
メタノールまたはテトラヒドロフラン（３０〜６０mL）中のスルフィンアミドアルコールＡ４（１０．３mmol）の溶液を塩酸溶液（１，４−ジオキサン中に４Ｍ、１０−１３mL）で処理した。撹拌を２３℃で２〜１８時間続けた。その後、混合物は酢酸エチルおよび炭酸ナトリウムの水溶液（２Ｍ）で分配した。有機層は硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そして蒸発させて、残渣を得て、これを溶出剤としてｎ−ヘプタンと酢酸エチルの混合物を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、純粋なアミノアルコールＡ５を得た。
【０２１５】
【化１５】
0005952898.tif 000023
【０２１６】
中間体Ａ５．１（Ｑ＝ＮО２；Ｒ２＝Ｆ；Ｒ３＝Ｍｅ；Ｒ４＝Ｆ；Ｒ５＝Ｆ；Ｒ６＝Ｈ；Ｒ７＝Ｈ）：（Ｒ）−２−メチル−プロパン−２−スルフィン酸［（Ｒ）−２，２−ジフルオロ−１−（２−フルオロ−５−ニトロ−フェニル）−３−ヒドロキシ−１−メチル−プロピル］−アミド（中間体Ａ４．１）（３．７９ｇ，１０．３mmol）から出発して、生成物（Ｒ）−３−アミノ−２，２−ジフルオロ−３−（２−フルオロ−５−ニトロ−フェニル）−ブタン−１−オール（２．５ｇ）を明黄色固体として得た。 MS (ISP): m/z = 265.1 [M+H]+。
【０２１７】
中間体アミノオキサジンＡ６の合成
一般手順
エタノール（４０mL）中のアミノアルコールＡ５（８．４mmol）の溶液をアルゴン下２３℃で臭化シアン（１．３３ｇ、１２．６mmol）で処理した。明黄色反応溶液を密閉管中で、８５℃で２４時間撹拌した。２３℃に冷まし、反応混合物に氷を加え、続いてジクロロメタン、水、および炭酸水素ナトリウムの飽和溶液（ｐＨ＝８）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そして蒸発させて、粗生成物を得て、これをさらに精製することなく次の工程に用いるか、あるいは、溶出剤としてｎ−ヘプタンおよび酢酸エチルの混合物を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、純粋なアミノオキオキサジンＡ６を得た。
【０２１８】
【化１６】
0005952898.tif 000024
【０２１９】
中間体Ａ６．１（Ｑ＝ＮО２；Ｒ２＝Ｆ；Ｒ３＝Ｍｅ；Ｒ４＝Ｆ；Ｒ５＝Ｆ；Ｒ６＝Ｈ；Ｒ７＝Ｈ）：（Ｒ）−３−アミノ−２，２−ジフルオロ−３−（２−フルオロ−５−ニトロ−フェニル）−ブタン−１−オール（中間体Ａ５．１）（１．５ｇ、５．７mmol）から出発して、生成物（Ｒ）−５，５−ジフルオロ−４−（２−フルオロ−５−ニトロ−フェニル）−４−メチル−５，６−ジフルオロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−２−イルアミン（１．３ｇ）を明黄色固体として得た。 MS (ISP): m/z = 290.2 [M+H]+。
【０２２０】
中間体ジアミンＡ８（ニトロ化合物Ａ６から）の合成
一般手順
エタノール（３５mL）中のニトロ化合物Ａ６（４．４７mmol）の溶液を２３℃で不活性雰囲気下で、パラジウム坦持炭素（１０％Ｐｄ／Ｃ、２３８mg、５mol％）で処理して、そして混合物を水素雰囲気下（バルーン）で２３℃で１時間撹拌した。触媒は濾別し、そしてエタノールで２回洗浄した。溶媒は減圧下で取り除いて、さらに精製をせずに用いた粗生成物として中間体ジアミンＡ８を得た。
【０２２１】
【化１７】
0005952898.tif 000025
【０２２２】
中間体Ａ８．１（Ｒ２＝Ｆ；Ｒ３＝Ｍｅ；Ｒ４＝Ｆ；Ｒ５＝Ｆ；Ｒ６＝Ｈ；Ｒ７＝Ｈ）：（Ｒ）−５，５−ジフルオロ−４−（２−フルオロ−５−ニトロ−フェニル）−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−２−イルアミン（中間体Ａ６．１）（１．２９ｇ，４．４７mmol）から出発して、生成物（Ｒ）−４−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−２−イルアミン（１．１４ｇ）を無色泡状物として得た。MS (ISP): m/z = 260.1 [M+H]+。
【０２２３】
中間体ヨウ素誘導体Ｄ１の合成
一般手順
酢酸（９．６mL）中のジアミンＡ８（５００mg、１．９mmol）およびヨウ化アンモニウム（３０８mg、２．１mmol）の溶液を過酸化水素の水溶液（３５％、０．１９mL、２．１mmol）で室温で処理した。一晩撹拌の後に出発物質の５０％が残っていた。同当量のヨウ化アンモニウムおよび過酸化水素を加え、室温で一晩撹拌を続けた。後処理のために、反応混合物は濾過し、濾液をチオ硫酸ナトリウムで処理し、次に酢酸エチルで抽出した（３ｘ）。合わせた有機層を炭酸水素ナトリウムの飽和溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして、減圧下で蒸発させた。残存する酢酸を取り除くために粗生成物はジクロロメタンに溶解し、そして再び炭酸水素ナトリウムの飽和溶液で抽出した。粗生成物
を、溶出剤としてヘプタン／酢酸エチルの勾配を用いたIsoluteフラシュＮＨ２カラムクロマトグラフィーにより精製して、純粋なヨウ素誘導体Ｄ１を得た。
【０２２４】
【化１８】
0005952898.tif 000026
【０２２５】
中間体Ｄ１（Ｒ２＝Ｆ；Ｒ３＝Ｍｅ；Ｒ４＝Ｆ；Ｒ５＝Ｆ；Ｒ６＝Ｈ；Ｒ７＝Ｈ）：（Ｒ）−４−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−２−イルアミン（中間体Ａ８．１）（５００mg、１．９mmol）から出発して、生成物（Ｒ）−４−（５−アミノ−２−フルオロ−４−ヨード−フェニル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−２−イルアミン（４１５mg）を黄色固体として得た。MS (ISP): m/z = 386.0 [M+H]+。
【０２２６】
中間体トリチウム標識アミンＤ２の合成
一般手順
２mLのトリチウム化フラスコ内に、ヨウ素ジアミンＤ１（０．０２６mmol）、パラジウム（炭素上に１０％）（２７．６mg、０．０２６mmol）、およびトリエチルアミン（７．２６μL、０．５２mmol）の混合物を酢酸エチル（１．０mL）中に懸濁した。フラスコはトリチウムマニフォールド（ＲＣ−ＴＲＩＴＥＣ）に固定し、そして凍結−ポンプ−解凍によって脱ガスした。トリチウムガスを導入し、そして反応混合物を７１０ｍｂａｒでトリチウムの雰囲気下で４時間激しく撹拌した。混合物を液体窒素で冷却し、そして反応容器中の過剰のトリチウムガスは廃棄−トリチウムのためのウラニウム−トラップに再吸収させた。溶媒は凍結乾燥除去し、そして不安定なトリチウムはエタノールおよび水の９：１の混合物（３ｘ１mL）との凍結乾燥によって除去した。残った黒色固体はエタノール（１mL）に懸濁し、０．２５μmシリンジフィルターで濾過し、エタノールで洗浄した。Ｄ２を集め、そして２０mLエタノール貯蔵液として保存した。
【０２２７】
【化１９】
0005952898.tif 000027
【０２２８】
中間体Ｄ２（Ｒ２＝Ｆ；Ｒ３＝Ｍｅ；Ｒ４＝Ｆ；Ｒ５＝Ｆ；Ｒ６＝Ｈ；Ｒ７＝Ｈ）：（Ｒ）−４−（５−アミノ−２−フルオロ−４−ヨード−フェニル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−２−イルアミン（中間体Ｄ１）（１０mg、０．０２６mmol）から出発して、生成物［３Ｈ］−（Ｒ）−４−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−２−イルアミン（２３．２GBq、６２７mCi）を得た。ラジオ−ＨＰＬＣ分析により７４％の放射性化学的純度を示した。中間体をさらに精製することなく使用した。
【０２２９】
実施例１
５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）-４−フルオロ−フェニル］−アミド
【化２０】
0005952898.tif 000028
【０２３０】
メタノール（５mL）中の４−（４，６−ジメトキシ［１．３．５］トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド水和物（ＤＭＴＭＭ）（７４mg、０．２５mmol）の溶液を０℃に冷却し、５−（ブタ−２−イニルオキシ）ピラジン−２−カルボン酸（CAS[1221447-98-8]）（４０．８mg、０．２１mmol）で処理した。懸濁液は０℃で３０分間撹拌し、次にメタノール（１mL）中の（Ｒ）-４−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−２−イル-アミン（中間体Ａ８．１）（５０mg、０．１９mmol）の溶液を滴下して加えた。得られた黄色溶液を０℃で４時間撹拌した。後処理のために、反応混合物を減圧下で蒸発させ、そして残渣を炭酸ナトリウムの飽和溶液（１０mL）で処理した。酢酸エチルで抽出し、有機層を合わせて、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させて、そして粗生成物を得た。溶出剤として酢酸エチルを用いたシリカ−ＮＨ２相でのクロマトグラフィーの後に生成物を黄色系油状物として得て、これをイソプロピルエーテル中でトリチュレートした後、５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）-４−フルオロ−フェニル］−アミド（５２mg、６３％収量）を白色固体として得た。MS (ISP): m/z = 434.2 [M+H]+。
【０２３１】
実施例２
［３Ｈ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミド
【化２１】
0005952898.tif 000029
【０２３２】
トリチウムで標識された（Ｒ）−４−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−２−イルアミン（中間体Ｄ２）（５mL；ｃ＝１．１５GBq／mL（３１．４mCi／mL）、５．８１GBq／mL（１５７mCi）、〜１．７mg、０．００６５mmol）のエタノール溶液をアルゴン気流下で濃縮した。残渣はメタノール（７５μL）に溶解し、明褐色溶液を産生し、これを０℃に冷却した（溶液１）。メタノール（９４μL）中の５−（ブタ−２−イニルオキシ）ピラジン−２−カルボン酸（CAS[1221447-98-8]）（２．４mg、０．０１２mmol）を０℃に冷却した。４−（４．６−ジメトキシ［１．３．５］トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド水和物（ＤＭＴＭＭ）（３．７mg、０．０１３mmol）を添加後、混合物は０℃で２時間撹拌した。その後、７５μLの懸濁液を溶液１に加え、そして反応混合物を１５時間撹拌した（その間、温度は１８℃に上がった）。さらに３時間撹拌を室温で続けた。後処理のために、溶媒を窒素気流下で除去し、そして残渣を酢酸エチル（１mL）と炭酸ナトリウムの飽和液（２Ｎ）に分配した。有機層は水（１mL）で洗浄し、そして水相は酢酸エチルで再抽出した（２ｘ１mL）。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、そして減圧下で蒸発させた。溶出剤としてｐＨ９緩衝液、アセトニトリルおよび水の混合物を用いた分取ＨＰＬＣ（XBridge、Ｃ１８．５μm、１０ｘ２５０mm）で精製の後、トリチウム標識５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）-２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）-４−フルオロ−フェニル］−アミドの３．７９GBq（１０３mCi、６６％収量）を得た。ラジオ−ＨＰＬＣ分析は＞９９％の放射化学的純度を示した。特異活性は、ＭＳ−分光法によって、９８０GBq／mmol（２６．５Ci／mmol）であると決定された。
【０２３３】
実施例３
５−クロロピラジン−２−カルボン酸
メチル５−クロロピラジン−２−カルボン酸（CAS [33332-25-1]、１ｇ、５．７９mmol）をＴＨＦ（５０mL）と水（５０mL）の混合物に溶解した。水酸化リチウム一水和物（２４３mg、５．７９mmol）を加え、反応混合物をＲＴで一晩撹拌した。ｐＨを１Ｍ  ＨＣｌで１に調製し、そして生成物をＥｔОＡｃの３部分で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳО４で乾燥させ、そして真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉО２、５０ｇ、ＤＣＭ中０〜２０％ＭｅОＨ）で精製して、標記化合物を白色固体（７４１mg、８１％）として得た。MS (ISP): m/z = 159.0 [M+H]+。
【０２３４】
（Ｒ）-Ｎ−（３−（２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−４−イル）-４−フルオロフェニル）−５−クロロピラジン−２−カルボキサミド
５−クロロピラジン−２−カルボン酸（３６７mg、２．３１mmol）をＭｅОＨ（２５mL）と混合して無色の溶液を得た。４−（４，６−ジメトキシ［１．３．５］トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド水和物（ＤＭＴＭＭ、７０５mg、２．５５mmol）を０℃で加え、そしてその溶液を０℃で３０分間撹拌した。ＭｅОＨ（１０mL）中の（Ｒ）−４−（５−アミノ−２−フルオロ−フェニル）−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−２−イルアミン（中間体Ａ８．１、６００mg、２．３１mmol）の溶液を滴下して加えて、そして反応混合物は０℃で一晩撹拌した。飽和ＮａＨＣО３水溶液を加え、生成物をＡｃОＥｔの３部分で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳО４で乾燥させ、そして真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉО２、５０ｇ、ヘプタン中５０〜１００％ＥｔОＡｃ）で精製した。白色固体（５４０mg、５８％）。MS (ISP): m/z = 400.1 [M+H]+。
【０２３５】
（（Ｒ）−４−｛５−［（５−クロロ−ピラジン−２−カルボニル）−アミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−２−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（Ｒ）-Ｎ−（３−（２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−４−イル）-４−フルオロフェニル）−５−クロロピラジン−２−カルボキサミド（５４０mg、１．３５mmol）をＤＣＭ（１５mL）と混合して無色の溶液を得た。Ｂｏｃ２О（３１０mg、１．４２mmol）を０℃で加え、そして反応混合物をこの温度で一時間撹拌した。ＲＴに温めた後、撹拌を５時間続けた。さらなるＢｏｃ２О（３１０mg、１．４２mmol）を加え、反応温合物を一晩撹拌した。次に、Ｂｏｃ２Оの３度目の部分（３１０mg、１．４２mmol）を加え、もう１日間撹拌した。反応物を飽和ＮａＨＣО３水溶液で希釈した後、生成物をＤＣＭ（３部分）で抽出した。有機層をＮａ２ＳО４で乾燥させ、減圧下で蒸発させた。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉО２、５０ｇ、ヘプタン中０〜１００％ＥｔОＡｃ）で精製した。白色固体（４０５mg、６０％）。MS (ISP): m/z = 500.2 [M+H]+。
【０２３６】
（（Ｒ）−５，５−ジフルオロ−４−｛２−フルオロ−５−［（５−プロパ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボニル）−アミノ］−フェニル｝−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−２−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
（（Ｒ）−４−｛５−［（５−クロロ−ピラジン−２−カルボニル）−アミノ］−２−フルオロ−フェニル｝−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−２−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４００mg、８００μmol）をＤＭＦ（１．２mL）と混合して、無色の溶液を得た。ＫОｔＢｕ（１８０mg、１．６mmol）およびプロパルギルアルコール（４４９mg、４７７μL、８．００mmol）を加えて、そして反応混合物をＲＴで２時間撹拌した。水を注意深く加えて、そして生成物をＥｔОＡｃで抽出した。有機層をＮａ２ＳО４で乾燥させ、そして真空下で濃縮した。粗物質をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉО２、２０ｇ、ヘプタン中０〜５０％ＥｔОＡｃ）で精製した。明黄色固体（３５０mg、８４％）。MS (ISP): m/z = 520.2 [M+H]+。
【０２３７】
（Ｒ）-Ｎ−（３−（２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−４−イル）−４−フルオロフェニル）−５−（プロパ−２−イニルオキシ）ピラジン−２−カルボキサミド
（（Ｒ）−５，５−ジフルオロ−４−｛２−フルオロ−５−［（５−プロパ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボニル）−アミノ］−フェニル｝−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−２−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３５０mg、６７４μmol）をＤＣＭ（５．２mL）と混合し、明黄色溶液を得た。溶液を０℃に冷却し、そしてＴＦＡ（７６８mg、５１９μL、６．７４mmol）を加えた。０℃で３０分撹拌した後、氷浴を取り除いて、そして反応を温めて室温で６時間撹拌した。反応溶液のｐＨを飽和ＮａＨＣО３水溶液を滴下して加えて８に調整し、そして、生成物をＤＣＭで抽出した。有機層をＮａ２ＳО４で乾燥させ、そして真空下で濃縮した。無色の泡状物を得て、それをフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉО２、１０ｇ、ヘプタン中０〜８０％ＥｔОＡｃ）で精製した。無色の泡状物（２３０mg、８１％）。MS (ISP): m/z = 420.1 [M+H]+。
【０２３８】
（Ｒ）-Ｎ−（３−（２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−４−イル）-４−フルオロフェニル）−５−（３−（トリブチルスタニル）プロパ−２−イニルオキシ）ピラジン−２−カルボキサミド
（Ｒ）-Ｎ−（３−（２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−４−イル）-４−フルオロフェニル）−５−（プロパ−２−イニルオキシ）ピラジン−２−カルボキサミド（１７０mg、４０５μmol）をトリ−ｎ−ブチルチンメトキシド（６５１mg、５８６μmol、２．０３mmol）と混合して、そして６０℃で６時間熱した。反応混合物をＲＴに冷まし、フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉО２、２０ｇ、ヘプタン中０〜５０％ＥｔОＡｃ）で精製し、標記化合物（１９５mg、６８％）を無色の油状物として得た。MS (ISP): m/z = 710.2 [M+H]+。
【０２３９】
［１１Ｃ］−５−ブタ−２−イニルオキシ−ピラジン−２−カルボン酸［３−（（Ｒ）−２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−［１，３］オキサジン−４−イル）−４−フルオロ−フェニル］−アミド
セプタムシールしたバイヤル中に［Ｐｄ（ｔＢｕ３）２］（２．０５mg、２．８９μmol）をＤＭＦ（２００μL）に溶解した。［１１Ｃ］ヨードメタン（Larsen, P., Ulin, J., Dahlstrom, K., J. Label. Compds. Radiopharm. 37, 73-75, 1995にしたがって調製した）をカニューレを経てバイヤルの中へヘリウムの流れ（３０mL/分）の中で移行させた。一旦放射活性がプラトーに達したなら、溶液は室温で４分間放置し、その後、ＤＭＦ（１００μL）中の（Ｒ）-Ｎ−（３−（２−アミノ−５，５−ジフルオロ−４−メチル−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−４−イル）-４−フルオロフェニル）−５−（３−（トリブチルスタニル）プロパ−２−イニルオキシ）ピラジン−２−カルボキサミドの２．０３mgの溶液を加え、そして反応を室温でさらに４分間続けた。反応混合物はトリエチルアミン緩衝液（ｐＨ７．２）の１０mL中に希釈し、そしてWater C18 SepPak Plusを通過させた。セプパック（SepPak）をアセトニトリル：トリエチルアミン緩衝液（ｐＨ７．２）（１０：９０）の１０mLで洗浄した。粗生成物は純アセトニトリルの１mLでセプパックから溶出し、トリエチルアミン緩衝液（ｐＨ７．２）の０．５mLと混合し、そして４０％アセトニトリル：６０％トリエチルアミン緩衝液（ｐＨ７．２）とWaters XBridge  Ｃ１８  １０μ（１５０ｘ１０mm）カラムを用いた精製のためにセミ分取ＨＰＬＣに移した。
【０２４０】
イン−ライン放射線測定計で決定した生成物分画を水の貯蔵器に集めた。貯蔵器は、Ｃ１８セプパックに生成物を充填するために加圧された。次に、Ｃ１８セプパックに１０mLの０．９％塩化ナトリウムを注入して洗浄した。最終産物は、４mLの塩化ナトリウム注入で前もって負荷された滅菌発熱性物質除去バイアル内に滅菌０．２２μフィルターを通して、１mLのエタノールでＣ１８セプパックから溶出し、続いて１０mLの０．９％塩化ナトリウムの注入で溶出した。この特別な実験で、最終産物の２４mCiが［１１Ｃ］ヨードメタンの約６００mCiをトラップした後３３分で得られた。合成終結時に計測された特異活性は、１００％の放射化学的純度をもって、マイクロモル当り５９００mCi以上であった。ＨＰＬＣ条件：分析用：Waters Xbridge  ４．６ｘ１００mm、３．５μm、４０／６０  ＭｅＣＮ／ＴＥＡ緩衝液ｐＨ７．２，２mL／分、ＵＶ＠２５４nm。セミ−分取：Waters Xbridge  １０ｘ１５０mm、１０μm、４０／６０  ＭｅＣＮ／ＴＥＡ緩衝液ｐＨ７．２，１０mL／分、ＵＶ＠２５４nm。