(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
結合基で細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体または薬学的に許容可能なその塩の調製方法であって、４〜９のｐＨで修飾型細胞傷害性化合物を修飾型ＣＢＡと反応させることを含む前記方法であり、
（ａ）前記修飾型ＣＢＡが前記ＣＢＡに結合した二官能性架橋剤の残基を含み、そして、前記残基が前記の結合基とチオール反応性基を含み；そして、
（ｂ）前記修飾型細胞傷害性化合物がチオール基を含み、そして以下の式：
【化１】
0006049642.tif 000195
または薬学的に許容可能なその塩、の前記チオール基を担持するイミン含有細胞傷害性化合物をイミン反応性試薬と反応混合物中で反応させることにより作製されるものであり；
式中、
Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２またはハロゲンであり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され、
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、存在するときは、チオール基を含むか、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、前記のアルキル、アルケニル、フェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換されており；そして
当該イミン反応性試薬が、サルファイト（Ｈ２ＳＯ３、Ｈ２ＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ、ジ、トリおよびテトラ−チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ３、ＰＯＳ３Ｈ３、ＰＳ４Ｈ３、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳＨ、ＲｉＳＯＨ、ＲｉＳＯ２Ｈ、ＲｉＳＯ３Ｈ）、様々なアミン（ヒドロキシルアミン（例えば、ＮＨ２ＯＨ）、ヒドラジン（例えば、ＮＨ２ＮＨ２）、ＮＨ２Ｏ−Ｒｉ、Ｒｉ’ＮＨ−Ｒｉ、ＮＨ２−Ｒｉ）、ＮＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ２−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２’チオスルファート（Ｈ２Ｓ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（Ｈ２Ｓ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ）（ＳＨ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（ＲｋＣ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ヒドラジド（ＲｋＣＯＮＨＮＨ２）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２Ｈ、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、グリケート化ヌクレオチド（例えば、ＧＤＰ−マンノース）、フルダラビン、またはそれらの混合物、からなる群より選択され、式中、ＲｉとＲｉ’それぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換されており；ＲｉとＲｉ’は、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；そして、Ｒｋは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである；前記方法。
【請求項２】
結合基を有する細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法であって、イミン含有細胞傷害性化合物、イミン反応性試薬、および前記の結合基を含む二官能性架橋剤と前記のＣＢＡを反応させて前記の複合体を形成することを含み、
ここで当該イミン含有細胞障害性化合物が、以下の式：
【化２】
0006049642.tif 000196
のうちのいずれか１つ、または薬学的に許容可能なその塩で表され、
式中、Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’および前記の結合基からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２またはハロゲンであり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され、
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、存在するときは、チオール基を含み、そして、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、前記のアルキル、アルケニル、フェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換されており；そして
当該イミン反応性試薬が、サルファイト（Ｈ２ＳＯ３、Ｈ２ＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ、ジ、トリおよびテトラ−チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ３、ＰＯＳ３Ｈ３、ＰＳ４Ｈ３、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳＨ、ＲｉＳＯＨ、ＲｉＳＯ２Ｈ、ＲｉＳＯ３Ｈ）、様々なアミン（ヒドロキシルアミン（例えば、ＮＨ２ＯＨ）、ヒドラジン（例えば、ＮＨ２ＮＨ２）、ＮＨ２Ｏ−Ｒｉ、Ｒｉ’ＮＨ−Ｒｉ、ＮＨ２−Ｒｉ）、ＮＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ２−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２’チオスルファート（Ｈ２Ｓ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（Ｈ２Ｓ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ）（ＳＨ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（ＲｋＣ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ヒドラジド（ＲｋＣＯＮＨＮＨ２）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２Ｈ、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、グリケート化ヌクレオチド（例えば、ＧＤＰ−マンノース）、フルダラビン、またはそれらの混合物、からなる群より選択され、式中、ＲｉとＲｉ’それぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換されており；ＲｉとＲｉ’は、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；そして、Ｒｋは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである；
前記方法。
【請求項３】
結合基を有する細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法であって、  （ａ）細胞傷害性化合物を、前記結合基、前記ＣＢＡと反応する基（チオール基、マレイミド基、ハロアセタミド基またはアミン基など）および前記修飾型細胞傷害性化合物と反応する基を含む二官能性架橋剤と反応させて、前記の結合基、および前記ＣＢＡと反応する前記の基を含む前記二官能性架橋剤の残基に共有結合した第２の修飾型細胞傷害性化合物を形成することであって、前記修飾型細胞傷害性化合物は、以下の式：【化３】
0006049642.tif 000197または薬学的に許容可能なその塩、の前記チオール基を担持するイミン含有細胞傷害性化合物をイミン反応性試薬と反応混合物中で反応させることにより作製されるものであり；式中、   Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；    Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；    Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルであり；    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’からなる群より独立して選択され；    Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；    Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；    ｎは１から２４までの整数であ��；    ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；    Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２またはハロゲンであり；    ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；    ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；    Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；    Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；    ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され、    Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；    ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；    Ｌは存在しないか、存在するときは、チオール基を含むか、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、前記のアルキル、アルケニル、フェニルもしくは複素環もしくはヘテロアリール環が任意に置換されており；そして    当該イミン反応性試薬が、サルファイト（Ｈ２ＳＯ３、Ｈ２ＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ、ジ、トリおよびテトラ−チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ３、ＰＯＳ３Ｈ３、ＰＳ４Ｈ３、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳＨ、ＲｉＳＯＨ、ＲｉＳＯ２Ｈ、ＲｉＳＯ３Ｈ）、様々なアミン（ヒドロキシルアミン（例えば、ＮＨ２ＯＨ）、ヒドラジン（例えば、ＮＨ２ＮＨ２）、ＮＨ２Ｏ−Ｒｉ、Ｒｉ’ＮＨ−Ｒｉ、ＮＨ２−Ｒｉ）、ＮＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ２−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２’チオスルファート（Ｈ２Ｓ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（Ｈ２Ｓ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ）（ＳＨ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（ＲｋＣ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ヒドラジド（ＲｋＣＯＮＨＮＨ２）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２Ｈ、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、グリケート化ヌクレオチド（例えば、ＧＤＰ−マンノース）、フルダラビン、またはそれらの混合物、からなる群より選択され、式中、ＲｉとＲｉ’それぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換されており；ＲｉとＲｉ’は、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；そして、Ｒｋは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである；ことと、ならびに、  （ｂ）４〜９のｐＨで前記ＣＢＡと反応する前記の基を介して前記ＣＢＡと前記第２修飾型細胞傷害性化合物を反応させて前記複合体を形成することを含む、方法。
【請求項４】
前記イミン含有細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化４】
0006049642.tif 000198
または
【化５】
0006049642.tif 000199
のうちのいずれか１つによって表され、
式中、Ｌ’、Ｌ’’およびＬ’’’は同一または異なっており、そして、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３Ｍ、スルファート−ＯＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’から独立して選択され；
Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンであり；そして
Ｇが−ＣＨ−または−Ｎ−から選択される、
請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記イミン含有細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化６】
0006049642.tif 000200
または
【化７】
0006049642.tif 000201
のうちのいずれか１つによって表され、
式中、Ｗ’は存在しないか、存在するときは、−ＣＲｅＲｅ’−、−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−、−ＳＳ−または−Ｃ（＝Ｏ）−、またはアミノ酸、または２〜８つのアミノ酸を有するペプチドから選択され；
Ｒｘは存在しないか、存在するときは、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、６〜１０個の炭素原子を担持するアリール、またはＯ、ＮもしくはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を担持する３員〜８員の複素環であり；
ＲｅとＲｅ’は同一または異なっており、そして、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋから選択され、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；好ましくは、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；
ｎは１から２４までの整数である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
Ｙは−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍまたは−ＯＳＯ３Ｍから選択され；
Ｍは−Ｈ、またはＮａ＋もしくはＫ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンであり；
Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、およびアミン保護基からなる群より選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され；
ＡとＡ’は−Ｏ−および−Ｓ−から選択され；
Ｗ’は存在しないか、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−Ｓ−または−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−から選択され；
Ｒｘは存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルから選択され；
Ｒｅは、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
Ｇが−ＣＨ−または−Ｎ−から選択される、
請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記二官能性架橋剤が、
Ｎ‐スクシンイミジル４‐（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシラート（ＳＭＣＣ）、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（Ｎ‐マレイミドメチル）‐シクロヘキサン‐１‐カルボキシ‐（６‐アミドカプロエート）（ＬＣ‐ＳＭＣＣ）、κ‐マレイミドウンデカノイン酸Ｎ‐スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ‐マレイミド酪酸Ｎ‐スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε‐マレイミドカプロン酸Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ‐マレイミドベンゾイル‐Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ‐（α‐マレイミドアセトキシ）‐スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル‐６‐（β‐マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ‐スクシンイミジル４‐（ｐ‐マレイミドフェニル）‐ブチレート（ＳＭＰＢ）、Ｎ‐（ｐ‐マレイミドフェニル）イソシアネート（ＰＭＰＩ）、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（４‐ニトロピリジル‐２‐ジチオ）ブタノエート、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（ヨードアセチル）‐アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ‐スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ‐スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）およびＮ‐スクシンイミジル３‐（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、ビス‐マレイミドポリエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、ＢＭ（ＰＥＯ）２、ＢＭ（ＰＥＯ）３、Ｎ‐（β‐マレイミドプロピルオキシ）スクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、５‐マレイミド吉草酸ＮＨＳ、ＨＢＶＳ、４‐（４‐Ｎ‐マレイミドフェニル）‐酪酸ヒドラジド塩酸塩（ＭＰＢＨ）、スクシンイミジル‐（４‐ビニルスルホニル）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）、ジチオビス‐マレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４‐ビス‐マレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４‐ビスマレイミジル‐２，３‐ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビス‐マレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビス‐マレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、スルフォスクシンイミジル４‐（Ｎ‐マレイミド‐メチル）シクロヘキサン‐１‐カルボキシラート（スルフォ‐ＳＭＣＣ）、スルフォスクシンイミジル（４‐ヨード‐アセチル）アミノベンゾエート（スルフォ‐ＳＩＡＢ）、ｍ‐マレイミドベンゾイル‐Ｎ‐ヒドロキシスルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＭＢＳ）、Ｎ‐（γ‐マレイミドブトリルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＧＭＢＳ）、Ｎ‐（ε‐マレイミドカプロイルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＥＭＣＳ）、Ｎ‐（κ‐マレイミドウンデカノイルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＫＭＵＳ）、スルフォスクシンイミジル４‐（ｐ‐マレイミドフェニル）ブチレート（スルフォ‐ＳＭＰＢ）、ＣＸ１‐１、スルフォ‐Ｍａｌ、ＰＥＧｎ‐Ｍａｌ、Ｎ−スクシンイミジル−４−（４−ニトロピリジル−２−ジチオ）ブタノエート、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）、およびＮ−スクシンイミジル−４−（２−ピジリルジチオ）２−スルフォブタノエート（スルフォ−ＳＰＤＰ）である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
結合基で細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法であって、４〜９のｐＨで前記ＣＢＡと第２の修飾型細胞傷害性化合物を反応させることを含み、前記の第２修飾型細胞傷害性化合物が、反応性エステルおよびチオール反応性基から選択される反応性基と前記の結合基を含む、前記細胞傷害性化合物に結合した二官能性架橋剤の残基を含み、そしてそれはイミン反応性試薬と当該結合基及び当該反応性基を担持するイミン含有細胞傷害性化合物を反応させることにより作製され、そしてここで当該イミン含有細胞傷害性化合物は以下の式：
【化８】
0006049642.tif 000202
または
【化９】
0006049642.tif 000203
または薬学的に許容可能なその塩、の一つにより表され；
式中、
Ｘ’は−Ｈ、アミン保護基、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は−Ｈ、オキソ基、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキル、またはそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’、およびそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、ハロゲンまたはそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−ＮＲ５および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され；
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基で前記のアルキルまたはアルケニルが任意に置換されており；フェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換されることができ、前記の置換基は、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり得る；そして
当該イミン反応性試薬が、サルファイト（Ｈ２ＳＯ３、Ｈ２ＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ、ジ、トリおよびテトラ−チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ３、ＰＯＳ３Ｈ３、ＰＳ４Ｈ３、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳＨ、ＲｉＳＯＨ、ＲｉＳＯ２Ｈ、ＲｉＳＯ３Ｈ）、様々なアミン（ヒドロキシルアミン（例えば、ＮＨ２ＯＨ）、ヒドラジン（例えば、ＮＨ２ＮＨ２）、ＮＨ２Ｏ−Ｒｉ、Ｒｉ’ＮＨ−Ｒｉ、ＮＨ２−Ｒｉ）、ＮＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ２−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２’チオスルファート（Ｈ２Ｓ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（Ｈ２Ｓ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ）（ＳＨ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（ＲｋＣ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ヒドラジド（ＲｋＣＯＮＨＮＨ２）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２Ｈ、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、グリケート化ヌクレオチド（例えば、ＧＤＰ−マンノース）、フルダラビン、またはそれらの混合物、からなる群より選択され、式中、ＲｉとＲｉ’それぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換されており；ＲｉとＲｉ’は、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；そして、Ｒｋは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである；前記方法。
【請求項９】
前記第２の修飾型細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化１０】
0006049642.tif 000204
または
【化１１】
0006049642.tif 000205
のうちのいずれか１つによって表され、
式中、Ｙは−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍまたは−ＯＳＯ３Ｍから選択され；
Ｍは−Ｈ、またはＮａ＋もしくはＫ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンであり；
Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、およびアミン保護基からなる群より選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され；
ＡとＡ’は−Ｏ−および−Ｓ−から選択され；
Ｗ’は存在しないか、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−Ｓ−または−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−から選択され；
Ｒｘは存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルから選択され；
Ｒｅは、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
Ｇは−ＣＨ−または−Ｎ−から選択され；
Ｚｓは−Ｈであるか、以下の式：
【化１２】
0006049642.tif 000206
【化１３】
0006049642.tif 000207
のうちのいずれか１つから選択され、
式中、ｑは１から５までの整数であり；好ましくは、ｑは２であり；
ｎは２から６までの整数であり；好ましくは、ｎは４であり；
Ｄは−Ｈまたは−ＳＯ３Ｍであり；
Ｍが−Ｈ、またはＮａ＋もしくはＫ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンである、
請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記複合体が、
【化１４】
0006049642.tif 000208
であって、式中、ｒは１から１０までの整数であり、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり、そして、Ｍが−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記複合体が、
【化１５】
0006049642.tif 000209
であって、式中、ｒは１から１０までの整数であり、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり、そしてＭが−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞結合剤が抗体、単鎖抗体、前記標的細胞に特異的に結合する抗体断片、モノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、または標的細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体断片、キメラ抗体、前記標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体断片、ドメイン抗体、前記標的細胞に特異的に結合するドメイン抗体断片、リンホカイン、ホルモン、ビタミン、成長因子、コロニー刺激因子または栄養輸送分子である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞結合剤が抗体である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
請求項１に記載の方法であって、当該方法は、次の式：
【化１６】
0006049642.tif 000210
の複合体を調製するための方法であり、そして当該方法は、イミン反応性試薬を以下の式：
【化１７】
0006049642.tif 000211
のイミン含有化合物と反応させることにより作製された修飾型細胞傷害性化合物を４〜９のｐＨで次の式
【化１８】
0006049642.tif 000212
の修飾型ＣＢＡとそれぞれ反応させることを含み、
式中、ｒは１から１０までの整数であり；そして
ここで、前記複合体中の−Ｃ（Ｙ）−Ｎ（Ｈ）−モチーフは、イミン反応性試薬をイミン含有細胞傷害性化合物と反応させたことの結果により生じる、
前記方法。
【請求項１５】
請求項２に記載の方法であって、当該方法は次の式：
【化１９】
0006049642.tif 000213
の複合体を調製するための方法であり、そして当該方法は、イミン含有細胞傷害性化合物、イミン反応性試薬、および前記結合基を含む二官能性架橋剤と前記ＣＢＡを反応させて前記複合体を形成することを含み、前記イミン含有細胞傷害性化合物が、
【化２０】
0006049642.tif 000214
であり、前記二官能性架橋剤が、それぞれ、
【化２１】
0006049642.tif 000215
であり、そして、
ここで、前記複合体中の−Ｃ（Ｙ）−Ｎ（Ｈ）−モチーフは、イミン反応性試薬をイミン含有細胞傷害性化合物と反応させたことの結果により生じる、
前記方法。
【請求項１６】
前記抗体がｈｕＭｙ９−６である、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記イミン反応性試薬が、サルファイト、メタバイサルファイト、またはチオスルファートである、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記イミン反応性試薬が、ＮａＨＳＯ３またはＫＨＳＯ３である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の参照
本願は、２０１１年２月１５日に出願された米国特許仮出願第６１／４４３，０６２号、２０１１年５月６日に出願された米国特許仮出願第６１／４８３，４９９号、および２０１１年２月１５日に出願された米国特許仮出願第６１／４４３，０９２号の、出願日に関しての利益を米国特許法第１１９条（ｅ）の下で主張するものである。なお、図面、式、明細書および特許請求の範囲の全てを含む、これらの内容の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明の分野
本発明は、１つ以上のイミン官能基を含有するＤＮＡ結合性細胞傷害薬との細胞結合剤の複合体を調製するためのイミン反応性試薬の使用法について説明する。
【背景技術】
【０００３】
癌に対する治療薬としてモノクローナル抗体が益々探究されている。非ホジキンリンパ腫にはリツキシマブ、乳腺癌にはトラスツズマブ、頭部頸部癌および大腸直腸癌にはセツキシマブ、大腸直腸癌にはセツキシマブ、パニツムマブおよびベバシズマブ、ならびに慢性リンパ性白血病にはアレムツズマブ（Ｓｔｒｏｍｅ，  Ｓ．Ｅ．，  Ｓａｕｓｖｉｌｌｅ，  Ｅ．Ａ．，  ａｎｄ  Ｍａｎｎ，  Ｄ．，２００７年，  Ｔｈｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ，第１２巻，１０８４〜１０９５頁）など、癌細胞の表面抗原に対するモノクローナル抗体がいくつか既に癌の治療用に承認されている。しかしながら、「裸の」抗体の細胞傷害性活性は、受容体機能の阻害、補体依存的細胞傷害（ＣＤＣ）、および抗体依存的細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）といった機序に限定され得る。
【０００４】
標的癌細胞に対する抗体の細胞傷害性活性を増強する一つのアプローチは、抗体を細胞傷害性エフェクターと連結するものである（Ａ．Ｄ．  Ｒｉｃａｒｔ，  ａｎｄ  Ａ．Ｗ．  Ｔｏｌｃｈｅｒ，２００７年，  Ｎａｔ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐｒａｃｔ．  Ｏｎｃｏｌ．第４巻，２４５〜２５５頁；  Ｌａｍｂｅｒｔ，  Ｊ．，  ２０１０年，  Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ  第３５巻，４７１〜４８０頁）。抗体‐細胞傷害性薬複合体（ＡＤＣ）は癌細胞に特異的に結合し、続いて、複合体の取込と分解が起こり、その結果、傷害性薬品の細胞内での放出と最終的に癌細胞の死が起こる。抗体との結合に使用されている細胞傷害性薬にはメイタンシノイド類やオーリスタチン類などの抗チューブリン薬、配列特異的二本鎖ＤＮＡ切断を引き起こすカリケアマイシンなどのＤＮＡ結合性薬品が含まれる。別の種類のＤＮＡ結合性細胞傷害薬にはＮ‐２‐イミダゾリルアルキル置換１，２，５‐ベンゾチアジアゼピン‐１，１‐ジオキシド（米国特許第６，１５６，７４６号）、ベンゾピリドジアゼピンまたはジピリドチアジアゼピン（国際公開第２００４／０６９８４３号）、ピロロ［１，２‐ｂ］［１，２，５］ベンゾチアジアゼピン類およびピロール［１，２‐ｂ］［１，２，５］ベンゾジアゼピン誘導体（国際公開第２００７／０１５２８０号）、トメイマイシン誘導体（例えば、国際公開第００／１２５０８号，国際公開第２００５／０８５２６０号，国際公開第２００７／０８５９３０号，欧州特許公開第ＥＰ２０１９１０４号および米国特許第６，１５６，７４６号に記載されるものなどのピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン類）などのイミン含有ピロロベンゾジアゼピン類（ＰＢＤ）が含まれる。他のＤＮＡ結合性ベンゾジアゼピン薬は米国特許出願公開第２０１０／０２０３００７Ａ１号に記載される。イミン結合を含有するこれらのベンゾジアゼピン薬は、ＤＮＡの副溝に結合し、そして、ＤＮＡ機能に干渉して、細胞死を引き起こす。
【０００５】
細胞結合剤とイミン基を担持する細胞傷害性薬の複合体を調製するための新規方法が必要である。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、イミン含有薬を処理するためのイミン反応性試薬の使用法について説明するものであるが、その使用法は、予期しなかったことに、抗体などの細胞結合剤（ＣＢＡ）との複合体化反応を改善することになった。その試薬は、薬品の細胞殺滅特性が消失せず、そして、ＣＢＡ（抗体）の完全性が十分に維持されるようなものである。
【０００７】
１つの実施形態では、本発明は、結合基で細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法を対象とし、その方法は、約４〜約９のｐＨで修飾型ＣＢＡと細胞傷害性化合物を反応させることを含み、
（ａ）その修飾型ＣＢＡが、そのＣＢＡに結合した二官能性架橋剤の残基を含み、そして、その残基が前記の結合基とチオール反応性基を含み、
（ｂ）その細胞傷害性化合物がチオール基、ならびに、
【化１】
0006049642.tif 000002
で表される基を含み、ここで、
Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ、ジ、トリおよびテトラチオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され、Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ、Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり、Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはアリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである。
【０００８】
ある特定の実施形態では、前記の細胞傷害性化合物を、チオール基を担持するイミン含有細胞傷害性化合物をイミン反応性試薬と反応させて作製する。
【０００９】
別の実施形態では、本発明は、結合基で細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法を対象とし、その方法は、イミン含有細胞傷害性化合物、イミン反応性試薬、および前記の結合基を含む二官能性架橋剤と前記のＣＢＡを反応させて前記の複合体を形成することを含む。
【００１０】
別の実施形態では、本発明は、結合基で細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法を対象とし、その方法は、
（ａ）細胞傷害性化合物を、前記結合基、ＣＢＡと反応性がある基（チオール基、マレイミド基、ハロアセタミド基またはアミン基など）および前記細胞傷害性化合物と反応性がある基を含む二官能性架橋剤と反応させて、前記架橋剤の残基に共有結合した修飾型細胞傷害性化合物を形成することであって、前記残基は前記結合基と前記ＣＢＡと反応性がある基を含み、
ここで、前記細胞傷害性化合物は、以下の式のうちの１つ、またはそれらの薬学的に許容可能な塩によって表され：
【化２】
0006049642.tif 000003
、
【化３】
0006049642.tif 000004
ここでＹは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ、ジ、トリおよびテトラチオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはアリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；
Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２またはハロゲンであり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され、
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、存在するときは、チオール基を含むか、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、またはフェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、前記のアルキル、アルケニル、フェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換されている、ことと、
ならびに
（ｂ）ＣＢＡと反応する基を介して約４〜約９のｐＨでＣＢＡと修飾型細胞傷害性化合物を反応させて前記の複合体を形成すること、
を含む。
【００１１】
上記の実施形態のいずれにおいても、前記イミン含有細胞傷害性化合物または薬学的に許容可能なその塩は、以下の式のうちのいずれか１つで表され得：
【化４】
0006049642.tif 000005
、
【化５】
0006049642.tif 000006
式中、
Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’および前記の結合基からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２またはハロゲンであり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され、
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、存在するときは、チオール基を含み、そして、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、前記のアルキル、アルケニル、フェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換されている。
【００１２】
さらに別の実施形態では、本発明は、結合基で細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法を対象とし、その方法は、以下を含む修飾型細胞傷害性化合物を約４〜約９のｐＨで前記のＣＢＡと反応させることを含む：
（ａ）反応性エステルおよびチオール反応性基から選択される反応性基と前記の結合基を含む、その細胞傷害性化合物に結合した二官能性架橋剤の残基、ならびに、
（ｂ）
【化６】
0006049642.tif 000007
で表される基であり、
式中、
Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである、
基。
【００１３】
ある特定の実施形態では、前記修飾型細胞傷害性化合物が、前記結合基と前記反応性基を担持するイミン含有細胞傷害性化合物とイミン反応性試薬を反応させることによって、作製される。
【００１４】
上記の実施形態のいずれにおいても、前記修飾型細胞傷害性化合物は、以下の式のうちのいずれか１つ、または薬学的に許容可能なその塩で表され：
【化７】
0006049642.tif 000008
、
【化８】
0006049642.tif 000009
式中、
Ｙはサルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；
Ｘ’は−Ｈ、アミン保護基、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は−Ｈ、オキソ基、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキル、またはそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’、およびそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、ハロゲンまたは、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−ＮＲ５および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され；
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基で前記のアルキルまたはアルケニルが任意に置換されており；それに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり得る置換基で、フェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換され得る。
【００１５】
上記の実施形態のいずれにおいても、前記の細胞傷害性化合物および前記複合体の結合基は、以下の式または薬学的に許容可能なその塩によって表され：
【化９】
0006049642.tif 000010
、
【化１０】
0006049642.tif 000011
式中、
Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３ｖまたは陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；
Ｘ’は−Ｈ、アミン保護基、前記結合基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は−Ｈ、オキソ基、前記結合基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキル、または前記結合基であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’および前記の結合基からなる群より独立して選択され；
Ｍは−Ｈ、またはＮａ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンであり；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、ハロゲンまたは前記結合基であり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され、
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、前記結合基、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、前記のアルキルまたはアルケニルは前記結合基によって任意に置換されており；前記結合基を含み得る置換基でフェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換され得る。
【００１６】
本発明の方法のいずれかに従って作製され得るいくつかの好ましい複合体には、以下が含まれ：
【化１１】
0006049642.tif 000012
、
式中、ＣＢＡは抗体などの細胞結合剤であり、そして、ｒは１と２０の間の整数、好ましくは、１と１０の間または１と５の間の整数である。
。
【００１７】
本明細書で使用される場合、基（例えば、Ｒｃ、Ｌ、Ｘ’など）への言及が結合基またはそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基「である」（または「ではない」）とき、その基は結合基またはそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基を「含む」（または「含まない」）ことを意味する。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１Ａ】それぞれ、（Ａ）１．４のＤＡＲと（Ｂ）３．１のＤＡＲを含む、バイサルファイトを使用せずに、および、バイサルファイトを使用して調製した脱グリコシル化ｈｕＭｙ９−６−２複合体のマススペクトルを示す。ＤＡＲは薬品抗体比である。
【図１Ｂ】それぞれ、（Ａ）１．４のＤＡＲと（Ｂ）３．１のＤＡＲを含む、バイサルファイトを使用せずに、および、バイサルファイトを使用して調製した脱グリコシル化ｈｕＭｙ９−６−２複合体のマススペクトルを示す。ＤＡＲは薬品抗体比である。
【図２】亜硫酸水素ナトリウムを使用せずに、および、使用して調製したＨｕＭｙ９−６−薬品２複合体のＣＤ３３抗原を発現するＨＬ６０細胞に対する類似のインビトロ細胞傷害性を示す。
【図３】亜硫酸水素ナトリウムを使用せずに、および、使用して調製した抗ＣＤ２２抗体‐薬品２複合体のＣＤ２２抗原を発現するＢＪＡＢ細胞に対する類似のインビトロ細胞傷害性を示す。
【図４】薬品２と亜硫酸水素ナトリウム処理薬品２の逆相ＨＰＬＣ分析を示す。
【図５】抗体当たり７モル当量の薬品１を用い、亜硫酸水素ナトリウムを使用して、および、使用せずに調製した脱グリコシル化ｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−薬品１のＭＳ分析を示す。（Ａ）亜硫酸水素ナトリウムを使用せず、平均１．４の薬品１／抗体比を用いて調製した複合体であって、最大３分子の薬品１が結合した抗体種。（Ｂ）亜硫酸水素ナトリウムを使用し、平均２．５の薬品１／抗体比を用いて調製した複合体であって、最大７分子の薬品１が結合した抗体種。
【図６】薬品１の亜硫酸水素ナトリウム複合体化反応の付加が抗体の断片化を引き起こさなかったことを示す（非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；ゲルチップ分析）。
【図７】細胞結合剤‐薬品複合体を調製するための本発明の例示的方法を示す。
【図８】同上
【図９】同上
【図１０】同上
【図１１】同上
【図１２】抗体のリシンに直接的にＮＨＳエステル含有化合物１を複合体化することによって（一段階試薬方法）、または、ジチオピリジン修飾化抗体に化合物１ｄを複合体化することによって（二段階方法）作製された脱グリコシル化Ｍｙ９−６−ＳＰＤＢ−１のマススペクトロメトリー（ＭＳ）分析を示す。
【図１３】様々なｐＨ条件下で二段階方法を用いて作製されたＭｙ９−６−スルフォ−ＳＰＤＢ−１のＭＳデータを示す。反応時間の増加は、１μＭの非複合体化ｈｕＭｙ９−６で前処理したＨＬ６０‐ＱＣ細胞で測定したＣＤ３３抗原依存的インビトロ細胞傷害性の上昇と相関しているようである。全ての複合体の抗原依存的殺滅は同様に活性が高かった（約４ｐＭのＩＣ５０）。抗体の断片化とＭｙ９−６−スルフォ−ＳＰＤＢ−１のインビトロでの非特異的細胞殺滅を最小化するためには短い反応時間（１〜３時間）が好ましい。
【図１４】様々な化合物１ｄ／リンカー比で二段階方法を用いて作製されたｃｈＫＴＩ−スルフォ−ＳＰＤＢ−１のＭＳデータを示す。
【図１５】抗体‐薬品複合体の規格（モノマーの割合（％）および薬品付加の割合（％））を改善する、共有結合性イミン反応物質の使用を示す。
【図１６】代表的な抗体‐薬品複合体の二段階合成スキームを示す。
【図１７】ｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−１ｆ複合体の様々な細胞株に対するインビトロ細胞傷害性と特異性を示す。その複合体の作製のために亜硫酸水素ナトリウムが複合体化反応に添加されたことに留意されたい。
【図１８】二量体の複合体化が抗体の結合親和性を低下させないことを示す。その複合体の作製のために亜硫酸水素ナトリウムが複合体化反応に添加されたことに留意されたい。
【図１９】ｈｕＭｙ９−６複合体のインビボ抗腫瘍活性を示す。その複合体の作製のために亜硫酸水素ナトリウムが複合体化反応に添加されたことに留意されたい。
【図２０】ｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−１ｆ複合体の抗原陽性細胞に対するインビトロ細胞傷害性を示す。その複合体の作製のために亜硫酸水素ナトリウムが複合体化反応に添加されたことに留意されたい。
【図２１】抗原結合部位のブロッキングを施した、および、施していない（Ａ）ｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−１ｆ、（Ｂ）ｈｕＭｙ９−６−スルフォＳＰＤＢ−１ｆおよび（Ｃ）ｈｕＭｙ９−６−ＢＭＰＳ−１ｆのＨＬ６０／ＱＣ（抗原＋）細胞に対するインビトロ細胞傷害性を示す。３つの実験全て（３４Ａ、３４Ｂおよび３４Ｃ）で、その複合体の作製のために亜硫酸水素ナトリウムが複合体化反応に添加されたことに留意されたい。
【図２２】（Ａ）ｃｈＢ３８．１−ＳＰＤＢ−１ｆと（Ｂ）ｃｈＢ３８．１−スルフォＳＰＤＢ−１ｆのＣＯＬＯ２０５（抗原＋）細胞に対するインビトロ細胞傷害性を示す。両方の実験で、その複合体の作製のために亜硫酸水素ナトリウムが複合体化反応に添加されたことに留意されたい。
【図２３】ＨＬ６０／ＱＣ担持マウスでのｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−１ｆのインビボ有効性を示す。亜硫酸水素ナトリウムが複合体化反応に添加されたことに留意されたい。
【図２４−１】抗原結合部位のブロッキングを施した、および、施していない（Ａ）ｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−１ｆ、（Ｂ）ｈｕＭｙ９−６−スルフォＳＰＤＢ−１ｆおよび（Ｃ）ｈｕＭｙ９−６−ＢＭＰＳ−１ｆのＯＣＩ−ＡＭＬ３（抗原＋）細胞に対する抗増殖活性の比較を示す。３つの実験全てで、その複合体の作製のために亜硫酸水素ナトリウムが複合体化反応に添加されたことに留意されたい。
【図２４−２】抗原結合部位のブロッキングを施した、および、施していない（Ａ）ｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−１ｆ、（Ｂ）ｈｕＭｙ９−６−スルフォＳＰＤＢ−１ｆおよび（Ｃ）ｈｕＭｙ９−６−ＢＭＰＳ−１ｆのＯＣＩ−ＡＭＬ３（抗原＋）細胞に対する抗増殖活性の比較を示す。３つの実験全てで、その複合体の作製のために亜硫酸水素ナトリウムが複合体化反応に添加されたことに留意されたい。
【図２５】ＭＯＬＭ−１３腫瘍担持マウスでのｈｕＭｙ９−６−ＢＭＰＳ−１ｆのインビボ有効性を示す。その複合体の作製のために亜硫酸水素ナトリウムが複合体化反応に添加されたことに留意されたい。
【図２６】スルホン化葉酸／細胞傷害性化合物複合体の代表的合成スキームを示す。その複合体の作製のために亜硫酸水素ナトリウムが複合体化反応に添加されたことに留意されたい。
【図２７】ＭＯＬＭ−１３腫瘍担持マウスでのｈｕＭｙ９−６−薬品２のインビボ有効性を示す。その複合体の作製のために亜硫酸水素ナトリウムが複合体化反応に添加されたことに留意されたい。
【図２８】非常に反応性が高い４−ニトロＰｙ−スルフォ−ＳＰＤＢリンカーを使用するｈｕＭｙ９−６−スルフォ−ＳＰＤＢ−１ｄの調製を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明の詳細な説明
次に、本発明のある特定の実施形態を詳細に参照するが、その例は添付の構造および式において例示説明される。本発明は列挙される実施形態と一体となって記述されるが、それらは本発明をそれらの実施形態に限定することを意図していないものと理解される。逆に、本発明は、特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に含まれ得るあらゆる代替、改変および同等物を包含することを意図する。当業者は、本発明の実施において使用され得る、本明細書に記載されるものと類似または同等の多くの方法と材料を認識する。
【００２０】
明白に否認されない限り、または、明白に妥当ではないかぎり、本発明の様々な態様の下で記載されるもの（例えば、化合物、化合物−リンカー分子、複合体、組成物、作製法および使用法）および明細書の様々な部分の下で記載されるもの（実施例においてのみ記載される実施形態を含む）を含む、本明細書に記載される実施形態のいずれをも本発明の１つ以上の他の実施形態と組み合わせることができることが理解されなければならない。実施形態の組合せは、多項従属形式のクレームによって請求される特定の組合せに限定されない。
【００２１】
定義
「直鎖または分岐アルキル」は、本明細書で使用される場合、１〜２０個の炭素原子からなる飽和型の直鎖または分岐鎖一価炭化水素ラジカルを意味する。アルキルの例には、メチル、エチル、１‐プロピル、２‐プロピル、１‐ブチル、２‐メチル‐１‐プロピル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２‐ブチル、２‐メチル‐２‐プロピル、１‐ペンチル、２‐ペンチル、３‐ペンチル、２‐メチル‐２‐ブチル、３‐メチル‐２‐ブチル、３‐メチル‐１‐ブチル、２‐メチル‐１‐ブチル、１‐ヘキシル）、２‐ヘキシル、３‐ヘキシル、２‐メチル‐２‐ペンチル、３‐メチル‐２‐ペンチル、４‐メチル‐２‐ペンチル、３‐メチル‐３‐ペンチル、２‐メチル‐３‐ペンチル、２，３‐ジメチル‐２‐ブチル、３，３‐ジメチル‐２‐ブチル、１‐ヘプチル、１‐オクチルなどが含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、このアルキルは１〜１０個の炭素原子を有する。より好ましくは、このアルキルは１〜４個の炭素原子を有する。
【００２２】
「直鎖または分岐アルケニル」は、少なくとも一か所の不飽和部位、すなわち、炭素間二重結合を有する、２〜２０個の炭素原子からなる直鎖または分岐鎖一価炭化水素ラジカルであって、「ｃｉｓ」配座および「ｔｒａｎｓ」配座、または代わりに、「Ｅ」配座および「Ｚ」配座を有するラジカルを含むアルケニルラジカルを意味する。例にはエチレニルまたはビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、などが含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、このアルケニルは２〜１０個の炭素原子を有する。より好ましくは、このアルキルは２〜４個の炭素原子を有する。
【００２３】
「直鎖または分岐アルキニル」は、少なくとも一か所の不飽和部位、すなわち、炭素間三重結合を有する、２〜２０個の炭素原子からなる直鎖または分岐一価炭化水素ラジカルを意味する。例にはエチニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、ヘキシニルなどが含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、このアルキニルは２〜１０個の炭素原子を有する。より好ましくは、このアルキニルは２〜４個の炭素原子を有する。
【００２４】
「炭素環式化合物」、「カルボシクリール（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｙｌ）」および「炭素環」という用語は、単環式環として３〜１２個の炭素原子を有する、または、二環式環として７〜１２個の炭素原子を有する、一価非芳香族飽和環または部分的不飽和環を意味する。７〜１２個の原子を有する二環式炭素環式化合物は、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系として配置されることができ、そして、９個または１０個の環原子を有する二環式炭素環式化合物はビシクロ［５，６］もしくは［６，６］系として、またはビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタンおよびビシクロ［３．２．２］ノナンなどの架橋系として配置されることができる。単環式炭素環式化合物の例にはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペンテ−１−ニル、１−シクロペンテ−２−ニル、１−シクロペンテ−３−ニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキセ−１−ニル、１−シクロヘキセ−２−ニル、１−シクロヘキセ−３−ニル、シクロヘキサジニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、シクロウンデシル、シクロドデシルなどが含まれるが、これらに限定されない。
【００２５】
「環状アルキル」および「シクロアルキル」という用語は互換的に使用され得る。それらは一価の飽和炭素環ラジカルを意味する。好ましくは、この環状アルキルは３〜７員の単環式環ラジカルである。より好ましくは、この環状アルキルはシクロヘキシルである。
【００２６】
「環状アルケニル」という用語は、環構造内に少なくとも１つの二重結合を有する炭素環ラジカルを意味する。
【００２７】
「環状アルキニル」という用語は、環構造内に少なくとも１つの三重結合を有する炭素環ラジカルを意味する。
【００２８】
「アリール」は、親芳香族環系の単一の炭素原子から水素原子を１つ除去することによって得られる、６〜１８個の炭素原子からなる一価の芳香族炭化水素ラジカルを意味する。いくつかのアリール基は「Ａｒ」という例示的な構造で表される。アリールには、飽和環、部分的不飽和環または芳香族炭素環式環または複素環に融合した芳香族環を含む二環式ラジカルが含まれる。典型的なアリール基には、ベンゼン（フェニル）、置換ベンゼン類、ナフタレン、アントラセン、インデニル、インダニル、１、２−ジヒドロナフタレン、１、２、３、４−テトラヒドロナフチルなどから得られるラジカルが含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、アリールはフェニル基である。
【００２９】
「ヘテロ環」、「ヘテロシクリール」および「複素環」という用語は、本明細書で互換的に使用され、そして、少なくとも１つの環原子が窒素、酸素、リンおよびイオウから選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子がＣであり、１つ以上の環原子が下記に記載される１つ以上の置換基により任意に独立して置換されている、３〜１８個の環原子からなる、飽和または部分的不飽和（すなわち、環内に１つ以上の二重結合および／または三重結合を有する）炭素環ラジカルを意味する。ヘテロ環は３〜７個の環員（２〜６個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、ＰおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子）を有する単環または７〜１０個の環員（４〜９個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、ＰおよびＳから選択される１〜６個のヘテロ原子）を有する二環、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］または［６，６］系であり得る。ヘテロ環はＰａｑｕｅｔｔｅ，  Ｌｅｏ  Ａ．；  「Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（Ｗ．Ａ．  Ｂｅｎｊａｍｉｎ、ニューヨーク、１９６８年）、特に第１、３、４、６、７および９章；「Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、ニューヨーク、１９５０年〜現在）、特に第１３、１４、１６、１９および２８巻；ならびにＪ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．（１９６０年）第８２巻：頁５５６６に記載されている。「ヘテロシクリール」には、飽和環、部分的不飽和環、または芳香族炭素環または複素環と融合したヘテロ環ラジカルであるラジカルも含まれる。複素環の例には、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、２−ピロリニル、３−ピロリニル、インドリニル、２Ｈ−ピラニル、４Ｈ−ピラニル、ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニルイミダゾリニル、イミダゾリジニル、３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、３−アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニルおよびアザビシクロ［２．２．２］ヘキサニルが含まれるが、これらに限定されない。スピロ部分もこの定義の範囲内に含まれる。環原子がオキソ（＝Ｏ）部分で置換されている複素環基の例はピリミジノニルおよび１，１−ジオキソ−チオモルホリニルである。
【００３０】
「ヘテロアリール」という用語は、５員または６員の環の一価の芳香族ラジカルを意味し、そして、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する、５〜１８個の原子からなる縮合環系（そのうちの少なくとも１つが芳香族である）を包含する。ヘテロアリール基の例はピリジニル（例えば、２−ヒドロキシピリジニルを含む）、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、ピリミジニル（例えば、４−ヒドロキシピリミジニルを含む）、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フラタジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニルおよびフロピリジニルである。
【００３１】
ヘテロ環基またはヘテロアリール基は、可能である場合、炭素（炭素結合型）または窒素（窒素結合型）で結合し得る。限定するものではないが、例を挙げると、炭素結合ヘテロ環またはヘテロアリールは、ピリジンの２、３、４、５もしくは６位、ピリダジンの３、４、５もしくは６位、ピリミジンの２、４、５もしくは６、ピラジンの２、３、５もしくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロールもしくはテトラヒドロピロールの２、３、４もしくは５位、オキサゾール、イミダゾールもしくはチアゾールの２、４もしくは５位、イソオキサゾール、ピラゾールもしくはイソチアゾールの３、４もしくは５位、アジリジンの２もしくは３位、アゼチジンの２、３もしくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７もしくは８位、またはイソキノリンの１、３、４、５、６、７もしくは８位で結合される。
【００３２】
限定するものではないが、例を挙げると、窒素結合ヘテロ環またはヘテロアリールは、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ−インダゾールの１位、イソインドールまたはイソインドリンの２位、モルホリンの４位、およびカルバゾールまたはＯ‐カルボリンの９位で結合される。
【００３３】
ヘテロアリールまたはヘテロ環に存在するヘテロ原子にはＮＯ、ＳＯおよびＳＯ２などの酸化型が含まれる。
【００３４】
「ハロ」または「ハロゲン」という用語はＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを指す。
【００３５】
上で記載されたアルキル、アルケニル、アルキニル、環状アルキル、環状アルケニル、環状アルキニル、カルボシクリール（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｙｌ）、アリール、ヘテロシクリールおよびヘテロアリールはもう１つ（例えば、２、３、４、５、６またはそれ以上）の置換基で任意に置換され得る。
【００３６】
置換基が「置換されている」と記述される場合、置換基の炭素、酸素、イオウまたは窒素に水素置換基の代わりに非水素置換基が存在する。したがって、例えば、置換アルキル置換基は、アルキル置換基の水素置換基の位置に少なくとも１つの非水素置換基が存在するアルキル置換基である。説明すると、モノフルオロアルキルはフルオロ置換基で置換されたアルキルであり、そして、ジフルオロアルキルは２つのフルオロ置換基で置換されたアルキルである。置換基に１つより多くの置換がある場合、各非水素置換基は（別段の記述がない限り）同一でも異なっていてもよいことが理解されるべきである。
【００３７】
置換基が「任意に置換され」ていると記述される場合、その置換基は（１）置換されていない、または（２）置換されている、のどちらかであり得る。置換基の炭素が置換基のリストのうちの１つ以上で任意に置換されていると記述される場合、その炭素に結合する水素のうちの１つ以上（水素がある範囲で）が独立して選択された任意的な置換基で、別々および／または共に、置換され得る。置換基の窒素が置換基のリストのうちの１つ以上で任意に置換されていると記述される場合、その窒素に結合する水素のうちの１つ以上（水素がある範囲で）がそれぞれ、独立して選択された任意的な置換基で置換され得る。１つの例となる置換基は−ＮＲ’Ｒ’’として示され得るが、式中、Ｒ’とＲ’’は、それらが結合する窒素原子と共に複素環を形成し得る。Ｒ’とＲ’’が結合する窒素原子と共にＲ’とＲ’’から形成された複素環は部分的または完全に飽和され得る。１つの実施形態では、複素環は３〜７個の原子からなる。別の実施形態では、複素環はピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、イソオキサゾリル、ピリジルおよびチアゾリルからなる群より選択される。
【００３８】
本明細書は「置換基」、「ラジカル」および「基」という用語を互換的に使用する。
【００３９】
一群の置換基が置換基のリストのうちの１つ以上によって任意に置換されていると集合的に記述される場合、その基には（１）非置換可能置換基、（２）任意的な置換基で置換されていない置換可能置換基、および／または（３）任意的な置換基のうちの１つ以上で置換される置換可能置換基が含まれ得る。
【００４０】
置換基が最大で特定の数の非水素置換基で任意に置換されていると記述される場合、その置換基は（１）置換されていないか、または（２）最大でその特定の数もしくはその置換基の置換可能な位置の最大の数までのどちらか少ない方の数の非水素置換基で置換されているかのどちらかであり得る。したがって、例えば、置換基が最大で３つの非水素置換基で任意に置換されているヘテロアリールと記述される場合、３つ未満の置換可能位置を有する任意のヘテロアリールは、最大で、そのヘテロアリールが有する置換可能な位置の数だけの非水素置換基によって任意に置換されるであろう。そのような置換基は、非限定的な例では、１個から１０個までの炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ環、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ１００、ＮＲ１０１Ｒ１０２、−ＮＯ２、−ＮＲ１０１ＣＯＲ１０２、−ＳＲ１００、−ＳＯＲ１０１で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ１０１で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３Ｍ、スルファート−ＯＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２ＮＲ１０１Ｒ１０２で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ１０１、−ＯＣＯＲ１０１、−ＯＣＯＮＲ１０１Ｒ１０２およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＲ１０１から選択され得るが、式中、ＭはＨまたは薬学的に許容可能な陽イオン（Ｎａ＋またはＫ＋など）であり；Ｒ１０１、Ｒ１０２およびＲ１０３はそれぞれ、Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ｎが１から２４までの整数であるポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒ１０４、６個から１０個までの炭素原子を有するアリール、３個から１０個までの炭素原子を有する複素環および５〜１０個の炭素原子を有するヘテロアリールから独立して選択され；そして、Ｒ１０４はＨ、または１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキルであり、Ｒ１００、Ｒ１０１、Ｒ１０２、Ｒ１０３およびＲ１０４で表される前記の基のアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリールおよびヘテロ環は、ハロゲン、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２および１〜４個の炭素原子を有する非置換型の直鎖または分岐アルキルから独立して選択される１つ以上（例えば、２、３、４、５、６またはそれ以上）の置換基で任意に置換される。好ましくは、上で記載された任意に置換されたアルキル、アルケニル、アルキニル、環状アルキル、環状アルケニル、環状アルキニル、カルボシクリール（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｙｌ）、アリール、ヘテロシクリールおよびヘテロアリールの置換基にはハロゲン、−ＣＮ、−ＮＲ１０２Ｒ１０３、−ＣＦ３、−ＯＲ１０１、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリール、−ＳＲ１０１、−ＳＯＲ１０１、−ＳＯ２Ｒ１０１および−ＳＯ３Ｍが含まれる。
【００４１】
「化合物」または「細胞傷害性化合物」、「細胞傷害性二量体」および「細胞傷害性二量体化合物」という用語が互換的に使用される。それらは、それらの構造もしくは式もしくは生物学的に活性が有る任意のその誘導体が本発明で開示されている、または、それらの構造もしくは式もしくは任意のその誘導体が参照により組み込まれている、化合物を含むことが意図されている。その用語はまた、本発明で開示される全ての式の化合物の立体異性体、幾何異性体、互変異性体、溶媒和化合物、代謝物、塩（例えば、薬学的に許容可能な塩）およびプロドラッグおよびプロドラッグの塩を含む。その用語はまた、任意の溶媒和化合物、水和物、および前述のいずの多形体をも含む。本願で説明される発明のある態様における「立体異性体」、「幾何異性体」、「互変異性体」、「溶媒和化合物」、「代謝物」、「塩」「プロドラッグ」、「プロドラッグの塩」、「複合体」、「複合体の塩」、「溶媒和化合物」、「水和物」、または「多形体」の特定の列挙は、「化合物」という用語が、これらの他の形態が列挙されることなく使用される場合、本発明の他の態様におけるこれらの形態の排除を意図するものであると解釈されないものとする。１つの実施形態では、細胞傷害性化合物は結合基またはそれに結合した反応性基を有する結合基を含む。あるいは、細胞傷害性化合物は結合基またはそれに結合した反応性基を有する結合基を含まない。
【００４２】
「複合体」という用語は、本明細書で使用される場合、細胞結合剤に結合した本明細書に記載される化合物またはその誘導体を指す。
【００４３】
「細胞結合剤に結合可能な」という用語は本明細書で使用される場合、本明細書に記載される化合物もしくはその誘導体であって、それらの化合物もしくはその誘導体を細胞結合剤に結合させるのに適切な少なくとも１つの結合基またはその前駆体結合基を含むものを指す。
【００４４】
所与の基の「前駆体」という用語は、任意の脱保護化、化学修飾またはカップリング反応によってその基になることができる任意の基を意味する。
【００４５】
「細胞結合剤に結合した」という用語は、適切な結合基またはその前駆体を介して細胞結合剤に結合した、本明細書に記載される化合物（例えば、本明細書に記載される化合物および薬品‐リンカー化合物）またはそれらの誘導体のうちの少なくとも１つを含む複合体分子を意味する。
【００４６】
「キラル」という用語は、鏡像のパートナーの重ね合わせができない特質を有する分子を指すが、「アキラル」という用語は、鏡像のパートナーに重ね合わせることができる分子を指す。
【００４７】
「立体異性体」という用語は、同一の化学的構成と連結性を有するが、それらの原子の方向が空間的に異なり、単一の結合での回転によって相互変換されることができない化合物を指す。
【００４８】
「ジアステレオマー」は、２つ以上のキラリティーの中心を持ち、そして、その分子が互いの鏡像ではない立体異性体を指す。ジアステレオマーは異なる物性、例えば、融点、沸点、分光特性および反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は結晶化、電気泳動およびクロマトグラフィーなどの高分解能の分析法で分離し得る。
【００４９】
「エナンチオマー」は、重ね合わさることができない互いの鏡像である、化合物の２つの立体異性体を指す。
【００５０】
本明細書で使用される立体化学的な定義と約束事は全般的に、Ｓ．Ｐ．  Ｐａｒｋｅｒ編，  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ  （１９８４年）  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ，ニューヨーク；およびＥｌｉｅｌ，  Ｅ．  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｎ，  Ｓ．，「Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ」，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．、ニューヨーク、１９９４年に従う。本発明の化合物は不斉中心またはキラル中心を含むことができ、したがって、異なる立体異性形態で存在することができる。ジアステレオマー、エナンチオマーおよびアトロプ異性体、ならびにラセミ混合物などのそれらの混合物を含むが、これらに限定されないあらゆる立体異性形態の本発明の化合物が本発明の部分を形成することが意図される。多くの有機化合物が、光学活性が有る形態で存在する、すなわち、それらは平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性が有る化合物の記述では、ＤおよびＬ、またはＲおよびＳという接頭辞を使用して、その分子のキラル中心についてのその分子の絶対配置を表す。ｄおよびｌ、または（＋）および（−）という接頭辞を使用して、平面偏光の化合物による回転の徴候を明示し、（−）またはｌはその化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄという接頭辞を有する化合物は右旋性である。所与の化学構造について、これらの立体異性体は、それらが互いに鏡像であることを除いて、同一である。特定の立体異性体はエナンチオマーとも称され得るが、そのような異性体の混合物は、しばしば、エナンチオマー混合物と呼ばれる。エナンチオマーの５０：５０の混合物はラセミ混合物またはラセミ体と称され、化学反応またはプロセスで立体選択または立体特異性が無かった場合に生じうるものである。「ラセミ混合物」および「ラセミ体」という用語は、光学活性が無い２つのエナンチオマーの等モルの混合物を指す。
【００５１】
「互変異性体」または「互変異性体形態」という用語は、低エネルギー障壁を介して相互変換可能である、様々なエネルギーの構造異性体を指す。例えば、（プロトトロピー互変異性体としても知られる）プロトン互変異性体はケト‐エノール異性体化およびイミン‐エナミン異性体化など、プロトンの移動を介した相互変換を含む。原子価互変異性体は結合電子のいくつかの再編成による相互変換を含む。
【００５２】
「プロドラッグ」という用語は、本願で使用される場合、酵素処理によって、または加水分解によってさらに活性が有る親型に活性化される、または変換されることが可能である、本発明の化合物の前駆体または誘導体型を指す。例えば、Ｗｉｌｍａｎ，  「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ」  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，第１４巻、頁３７５〜３８２，  ６１５ｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｂｅｌｆａｓｔ（１９８６年）およびＳｔｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：  Ａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」，  Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，  Ｂｏｒｃｈａｒｄｔら（編）頁２４７〜２６７，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（１９８５年）を参照のこと。本発明のプロドラッグには、より活性が有る細胞傷害性有利薬品に変換され得る、エステル含有プロドラッグ、ホスフェート含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、スルファート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸修飾化プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、β‐ラクタム含有プロドラッグ、任意に置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグ、任意に置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、５−フルオロシトシンおよび他の５−フルオロウリジンプロドラッグが含まれるが、これらに限定されない。本発明で使用するためのプロドラッグ形態に誘導体化され得る細胞傷害性薬の例には、本発明の化合物および上で記載されたような化学療法剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００５３】
「プロドラッグ」という用語は、生物学的条件下（インビトロまたはインビボ）で加水分解し、酸化し、または別の方法で反応して本発明の化合物を提供することができる化合物の誘導体を包含することも意味する。プロドラッグは、生物学的条件下でそのような反応が起きた時にだけ活性型になってよく、または、それらの未反応型で活性を有していてもよい。本発明で企図されるプロドラッグの例には、生物による加水分解が可能なアミド、生物による加水分解が可能なエステル、生物による加水分解が可能なカルバメート、生物による加水分解が可能なカーボナート、生物による加水分解が可能なウレイド、および生物による加水分解が可能なホスフェート類似体などの生物による加水分解が可能な部分を含む、本明細書で開示される式のいずれか１つの化合物の類似体または誘導体が含まれるが、これらに限定されない。プロドラッグの他の例には、−ＮＯ、−ＮＯ２、−ＯＮＯまたは−ＯＮＯ２部分を含む、本明細書で開示される式のいずれか１つの化合物の誘導体が含まれる。プロドラッグは通常、Ｂｕｒｇｅｒ’ｓ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（１９９５年）頁１７２〜１７８、頁９４９〜９８２（Ｍａｎｆｒｅｄ  Ｅ．  Ｗｏｌｆｆ編、第５版）によって記載されるような方法など、周知の方法を用いて調製され得る。Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  ＧｉｌｍａｎのＴｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第８版、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，  Ｉｎｔ．編、１９９２年の「Ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ」も参照のこと。
【００５４】
本発明のプロドラッグの１つの好ましい形態は、本発明の化合物／複合体のイミン結合とイミン反応性試薬の間で形成される付加物を含む、本発明の化合物（任意のリンカー基を含む、または含まない）および複合体を包含する。
【００５５】
「イミン反応性試薬」という用語は、イミン基と反応することができる試薬を意味する。イミン反応性試薬の例にはサルファイト（Ｈ２ＳＯ３、Ｈ２ＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ、ジ、トリおよびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ３、ＰＯＳ３Ｈ３、ＰＳ４Ｈ３、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳＨ、ＲｉＳＯＨ、ＲｉＳＯ２Ｈ、ＲｉＳＯ３Ｈ）、様々なアミン（ヒドロキシルアミン（例えば、ＮＨ２ＯＨ）、ヒドラジン（例えば、ＮＨ２ＮＨ２）、ＮＨ２Ｏ−Ｒｉ、Ｒｉ’ＮＨ−Ｒｉ、ＮＨ２−Ｒｉ）、ＮＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ２−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２、チオスルファート（Ｈ２Ｓ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（Ｈ２Ｓ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ）（ＳＨ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（ＲｋＣ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ヒドラジド（ＲｋＣＯＮＨＮＨ２）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２Ｈ、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、グリケート化ヌクレオチド（例えば、ＧＤＰ‐マンノース）、フルダラビン、またはそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されず、式中、ＲｉとＲｉ’はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換されており；ＲｉとＲｉ’は、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；そして、Ｒｋは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである（好ましくは、Ｒｋは、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；より好ましくは、Ｒｋはメチル、エチルまたはプロピルである）。好ましくは、その陽イオンは、Ｎａ＋またはＫ＋などの一価陽イオンである。好ましくは、前記のイミン反応性試薬はサルファイト、ヒドロキシルアミン、尿素およびヒドラジンから選択される。より好ましくは、前記のイミン反応性試薬はＮａＨＳＯ３またはＫＨＳＯ３である。
【００５６】
本明細書において使用される場合、そして、別段の指示がない限り、「生物による加水分解が可能なアミド」、「生物による加水分解が可能なエステル」、「生物による加水分解が可能なカルバメート」、「生物による加水分解が可能なカーボナート」、「生物による加水分解が可能なウレイド」および「生物による加水分解が可能なホスフェート類似体」という用語は、それぞれ、（１）化合物の生物活性を損なわず、そして、その化合物にインビボで有利な特質、例えば、取込、作用期間または作用の発現を付与するか、または（２）それ自体は生物学的に不活性であるが、生物学的に活性が有る化合物にインビボで変換されかのどちらかであるアミド、エステル、カルバメート、カーボナート、ウレイドまたはホスフェート類似体を意味する。生物による加水分解が可能なアミドの例には低級アルキルアミド、α‐アミノ酸アミド、アルコキシアシルアミドおよびアルキルアミノアルキルカルボニルアミドが含まれるが、これらに限定されない。生物による加水分解が可能なエステルの例には低級アルキルエステル、アルコキシアシルオキシエステル、アルキルアシルアミノアルキルエステルおよびコリンエステルが含まれるが、これらに限定されない。生物による加水分解が可能なカルバメートの例には低級アルキルアミン、置換エチレンジアミン、アミノ酸、ヒドロキシアルキルアミン、複素環アミンおよび複素芳香族アミン、およびポリエーテールアミンが含まれるが、これらに限定されない。特に好ましいプロドラッグとプロドラッグの塩は、そのような化合物が哺乳類に投与されると、本発明の化合物の生物利用能を増大させるプロドラッグとプロドラッグの塩である。
【００５７】
「薬学的に許容可能な塩」という句は、本明細書で使用される場合、本発明の化合物の薬学的に許容可能な有機塩または無機塩を指す。例示的な塩には硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物塩、臭化物塩、ヨウ化物塩、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩「メシル酸塩」、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パモ酸（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート））の塩、アルカリ金属（例えば、ナトリウムおよびカリウム）の塩、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）の塩、およびアンモニウム塩が含まれるが、これらに限定されない。薬学的に許容可能な塩は、酢酸イオン、コハク酸イオンまたは他の対イオンなどの別の分子の包含を伴い得る。対イオンは親化合物の電荷を安定化させる任意の有機または無機部分であり得る。さらに、薬学的に許容可能な塩はその構造に１つより多くの荷電した原子を有し得る。複数の荷電原子が薬学的に許容可能な塩の一部である例は、複数の対イオンを有し得る。したがって、薬学的に許容可能な塩は１つ以上の荷電原子および／または１つ以上の対イオンを有し得る。
【００５８】
本発明の化合物が塩基である場合、所望の薬学的に許容可能な塩を、当技術分野で利用可能な任意の適切な方法、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、リン酸などの無機酸、または酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、グルクロン酸もしくはガラクツロン酸のようなピラノシジル酸、クエン酸もしくは酒石酸のようなαヒドロキシ酸、アスパラギン酸もしくはグルタミン酸のようなアミノ酸、安息香酸もしくはケイ皮酸のような芳香族酸、ｐ−トルエンスルホン酸もしくはエタンスルホン酸のようなスルホン酸などのような有機酸で遊離塩基を処理することによって、調製することができる。
【００５９】
本発明の化合物が酸である場合、所望の薬学的に許容可能な塩を、任意の適切な方法、例えば、アミン（第一級、第二級または第三級）、水酸化アルカリ金属もしくは水酸化アルカリ土類金属などのような無機塩基または有機塩基で遊離酸を処理することによって、調製することができる。適切な塩の代表的な例にはグリシンおよびアルギニンのようなアミノ酸、アンモニア、ピペリジン、モルホリンおよびピペラジンのような第一級、第二級および第三級アミンおよび環状アミンから得られる有機塩、ならびにナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、アルミニウムおよびリチウムから得られる無機塩が含まれるが、これらに限定されない。
【００６０】
本明細書で使用される場合、「溶媒和化合物」という用語は、非共有結合性分子間力によって結合した、化学量論的または非化学量論的な量の溶媒、例えば、水、イソプロパノール、アセトン、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、酢酸およびエタノールアミン、ジクロロメタン、２−プロパノールなどをさらに含む化合物を意味する。本化合物の溶媒和化合物または水和物は、少なくとも１モル当量のヒドロキシル溶媒、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノールまたは水を化合物に添加してイミン部分の溶媒和または水和を引き起こすことによって、容易に調製される。
【００６１】
「代謝物」は、特定の化合物、その誘導体、またはその複合体、またはその塩の身体における代謝を通して作製される産物である。化合物、その誘導体、またはその複合体の代謝物は当技術分野において公知の日常的な技術を用いて特定され得、本明細書に記載される試験のような試験を用いてそれらの活性が決定される。そのような産物は、例えば、投与された化合物の酸化、ヒドロキシル化、還元、加水分解、アミド化、脱アミド化、エステル化、脱エステル化、酵素切断などから生じ得る。したがって、本発明は、本発明の化合物、その誘導体、またはその複合体の代謝物を包含し、本発明の化合物、その誘導体、またはその複合体を、それらの代謝産物を生じるのに十分な期間、哺乳類と接触させることを含む処理によって作製される化合物、その誘導体、またはその複合体を包含する。
【００６２】
「薬学的に許容可能な」という句は、その物質または組成物が、製剤を含む他の成分、および／または、それで処理される哺乳類と化学的および／または毒物学的に適合性を持たなくてはならないということを示す。
【００６３】
「保護基」または「保護部分」という用語は、他の官能基が化合物、その誘導体またはその複合体に対して反応している間に特定の官能基をブロックまたは保護するために一般に使用される置換基を指す。例えば、「アミン保護基」または「アミノ保護部分」は、化合物のアミノ官能基をブロックまたは保護する、アミノ基に結合した置換基である。そのような基は当技術分野において周知であり（例えば、Ｐ．  Ｗｕｔｓ  ａｎｄ  Ｔ．  Ｇｒｅｅｎｅ，２００７年、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第７章、Ｊ．  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ニュージャージー）、そして、メチルカルバメートおよびエチルカルバメートなどのカルバメート、ＦＭＯＣ、置換エチルカルバメート、１，６−β−脱離で切断されるカルバメート（「自己犠牲型」とも称される）、尿素、アミド、ペプチド、アルキルおよびアリール誘導体によって代表される。適切なアミノ保護基にはアセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）および９−フルオレニルメチレノキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が含まれる。保護基の一般的な説明とそれらの使用については、Ｐ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ  ＆  Ｔ．Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ニューヨーク、２００７年を参照のこと。
【００６４】
「脱離基」という用語は、置換または転置の間に分離する荷電部分または非荷電部分を指す。そのような脱離基は当技術分野において周知であり、そして、ハロゲン、エステル、アルコキシ、ヒドロキシル、トシレート、トリフラート、メシレート、ニトリル、アジド、カルバメート、ジスルフィド、チオエステル、チオエーテルおよびジアゾニウム化合物を含むが、これらに限定されない。
【００６５】
「二官能性架橋剤」、「二官能性リンカー」または「架橋剤」という用語は、「結合基」に連結される２つの反応性基を有し；そのうちの１つが細胞結合剤と反応することができ、他方が細胞傷害性化合物と反応して２つの部分を一つに連結する修飾剤を指す。そのような二官能性架橋剤は当技術分野において周知である（例えば、Ｉｓａｌｍ  ａｎｄ  Ｄｅｎｔ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  第５章、頁２１８〜３６３，Ｇｒｏｖｅｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．、ニューヨーク、１９９９年を参照のこと）。例えば、チオエーテル結合を介する連結を可能にする二官能性架橋剤にはマレイミド基を導入するためのＮ‐スクシンイミジル‐４‐（Ｎ‐マレイミドメチル）‐シクロヘキサン‐１‐カルボキシラート（ＳＭＣＣ）、またはヨードアセチル基を導入するためのＮ‐スクシンイミジル‐４‐（ヨードアセチル）‐アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）が含まれる。マレイミド基またはハロアセチル基を細胞結合剤に導入する他の二官能性架橋剤は当技術分野において周知であり（米国特許出願第２００８／００５０３１０号、同第２００５０１６９９３３号を参照のこと。米国イリノイ州６１１０５の私書箱１１７、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．から入手可能である）、そして、ビス‐マレイミドポリエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、ＢＭ（ＰＥＯ）２、ＢＭ（ＰＥＯ）３、Ｎ‐（β‐マレイミドプロピルオキシ）スクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、γ‐マレイミド酪酸Ｎ‐スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε‐マレイミドカプロン酸Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、５‐マレイミド吉草酸ＮＨＳ、ＨＢＶＳ、ＳＭＣＣの「長鎖」類似体（ＬＣ‐ＳＭＣＣ）であるＮ‐スクシンイミジル‐４‐（Ｎ‐マレイミドメチル）‐シクロヘキサン‐１‐カルボキシ‐（６‐アミドカプロエート）、ｍ‐マレイミドベンゾイル‐Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、４‐（４‐Ｎ‐マレイミドフェニル）‐酪酸ヒドラジドまたは塩酸塩（ＭＰＢＨ）、Ｎ‐スクシンイミジル３‐（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、Ｎ‐スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、κ‐マレイミドウンデカノイン酸Ｎ‐スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、Ｎ‐スクシンイミジル４‐（ｐ‐マレイミドフェニル）‐ブチレート（ＳＭＰＢ）、スクシンイミジル‐６‐（β‐マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、スクシンイミジル‐（４‐ビニルスルホニル）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）、ジチオビス‐マレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４‐ビス‐マレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４ビスマレイミジル‐２，３‐ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビス‐マレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビス‐マレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、スルフォスクシンイミジル４‐（Ｎ‐マレイミド‐メチル）シクロヘキサン‐１‐カルボキシラート（スルフォ‐ＳＭＣＣ）、スルフォスクシンイミジル（４‐ヨード‐アセチル）アミノベンゾエート（スルフォ‐ＳＩＡＢ）、ｍ‐マレイミドベンゾイル‐Ｎ‐ヒドロキシスルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＭＢＳ）、Ｎ‐（γ‐マレイミドブトリルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＧＭＢＳ）、Ｎ‐（ε‐マレイミドカプロイルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＥＭＣＳ）、Ｎ‐（κ‐マレイミドウンデカノイルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＫＭＵＳ）、およびスルフォスクシンイミジル４‐（ｐ‐マレイミドフェニル）ブチレート（スルフォ‐ＳＭＰＢ）を含むが、これらに限定されない。
【００６６】
ヘテロ二官能性架橋剤は、２つの異なる反応性基を有する二官能性架橋剤である。アミン反応性Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミド基（ＮＨＳ基）およびカルボニル‐反応性ヒドラジン基の両方を含有するヘテロ二官能性架橋剤はまた本明細書に記載される細胞傷害性化合物を細胞結合剤（例えば、抗体）と連結するために使用され得る。そのような市販されているヘテロ二官能性架橋剤の例にはスクシンイミジル６‐ヒドラジノニコチンアミドアセトンヒドラゾン（ＳＡＮＨ）、スクシンイミジル４‐ヒドラジドテレフタレートヒドロクロリド（ＳＨＴＨ）およびスクシンイミジルヒドラジニウムニコチネートヒドロクロリド（ＳＨＮＨ）が含まれる。酸不安定性結合を担持する複合体も本発明のヒドラジン担持ベンゾジアゼピン誘導体を用いて調製され得る。使用することができる二官能性架橋剤の例にはスクシンイミジル‐ｐ‐ホルミルベンゾエート（ＳＦＢ）およびスクシンイミジル‐ｐ‐ホルミルフェノキシアセテート（ＳＦＰＡ）が含まれる。
【００６７】
ジスルフィド結合を介した細胞結合剤の細胞傷害性化合物との結合を可能にする二官能性架橋剤にはＮ‐スクシンイミジル‐４‐（４‐ニトロピリジル‐２‐ジチオ）ブタノエート、およびジチオピリジル基を導入するためのＮ‐スクシンイミジル‐３‐（２‐ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（２‐ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（２‐ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（２‐ピリジルジチオ）２‐スルフォブタノエート（スルフォ‐ＳＰＤＢ）を含む当技術分野において公知の他の薬剤が含まれる。ジスルフィド基を導入するために使用され得る他の二官能性架橋剤は、当技術分野において公知であり、そして、米国特許第６，９１３，７４８号、同第６，７１６，８２１号および米国特許出願公開第２００９０２７４７１３号および同第２０１００１２９３１４号に記載される。それらの全てが参照により本明細書に組み込まれる。あるいは、チオール基を導入する、２‐イミノチオラン、ホモシステインチオラクトンまたはＳ‐アセチルコハク酸無水物などの架橋剤もまた使用され得る。
【００６８】
本明細書で定義されるような「リンカー」、「リンカー部分」、または「結合基」は、細胞結合剤および細胞傷害性化合物などの２つの部分を一つに連結する部分を指す。二官能性架橋剤は、１つの反応性基がまず細胞傷害性化合物と反応してリンカー部分と２つ目の反応性基を担持する化合物をもたらすことができ、次にその２つ目の反応性基が細胞結合剤と反応することができるように、リンカー部分の各末端に１つずつ、２つの反応性基を含み得る。あるいは、二官能性架橋剤の１つの末端がまず細胞結合剤と反応してリンカー部分と２つ目の反応性基を担持する細胞結合剤をもたらすことができ、次にその２つ目の反応性基が細胞傷害性化合物と反応することができる。結合部分は、特定の部位での細胞傷害性部分の放出を可能にする化学結合を含有し得る。適切な化学結合は当技術分野において周知であり、ジスルフィド結合、チオエーテル結合、酸不安定性結合、光不安定性結合、ペプチダーゼ不安定性結合およびエステラーゼ不安定性結合を含む（例えば、米国特許第５，２０８，０２０号；第５，４７５，０９２号；第６，４４１，１６３号；第６，７１６，８２１号；第６，９１３，７４８号；第７，２７６，４９７号；第７，２７６，４９９号；第７，３６８，５６５号；第７，３８８，０２６号および第７，４１４，０７３号を参照のこと）。スルフィド結合、チオエーテル結合およびペプチダーゼ不安定性結合が好ましい。本発明で使用することができる他のリンカーには、米国特許出願公開第２００５０１６９９３３号に詳細が記載されているもののような非切断可能リンカー、または荷電リンカーまたは親水性リンカーが含まれ、そして、荷電リンカーまたは親水性リンカーは米国特許出願公開第２００９／０２７４７１３号、米国特許出願公開第２０１０／０１２９３１４０号および国際公開第２００９／１３４９７６号に記載される。それらのそれぞれが参照により本明細書に明白に組み込まれる。
【００６９】
１つの実施形態では、１つの末端に１つの反応性エステルなどの反応性基を有する結合基は下記の「リスト１」から選択される：
−Ｏ（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−Ｏ（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ＣＲ２６＝ＣＲ２７）ｍ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−Ｏ（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（アルキニル）ｎ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−Ｏ（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ピペラジノ）ｔ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−Ｏ（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ピロロ）ｔ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−Ｏ（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍＡ”ｍ”（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−Ｓ（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−Ｓ（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ＣＲ２６＝ＣＲ２７）ｍ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−Ｓ（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（アルキニル）ｎ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−Ｓ（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ピペラジノ）ｔ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−Ｓ（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ピロロ）ｔ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−Ｓ（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍＡ”ｍ”（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−ＮＲ３３（Ｃ＝Ｏ）ｐ”（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−ＮＲ３３（Ｃ＝Ｏ）ｐ”（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ＣＲ２６＝ＣＲ２７）ｍ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−ＮＲ３３（Ｃ＝Ｏ）ｐ”（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（アルキニル）ｎ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ−（ＣＯ）ｔＸ’’、
−ＮＲ３３（Ｃ＝Ｏ）ｐ”（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ピペラジノ）ｔ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−ＮＲ３３（Ｃ＝Ｏ）ｐ”（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ピロロ）ｔ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ−（ＣＯ）ｔＸ’’、
−ＮＲ３３（Ｃ＝Ｏ）ｐ”（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍＡ”ｍ”（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ＣＲ２６＝ＣＲ２７）ｍ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（アルキニル）ｎ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ピペラジノ）ｔ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍＡ”ｍ”（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ＣＲ２９＝Ｎ−ＮＲ３０）ｎ”（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ＣＲ２９＝Ｎ−ＮＲ３０）ｎ”（ＣＲ２６＝ＣＲ２７）ｍ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ＣＲ２９＝Ｎ−ＮＲ３０）ｎ”（アルキニル）ｎ’（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
−（ＣＲ２０Ｒ２１）ｍ（ＣＲ２９＝Ｎ−ＮＲ３０）ｎ”Ａ”ｍ”（ＣＲ２２Ｒ２３）ｎ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ（ＣＲ４０Ｒ４１）ｐ”Ｙ’’（ＣＲ２４Ｒ２５）ｑ（ＣＯ）ｔＸ’’、
式中、
ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｍ’、ｎ’、ｔ’は１から１０までの整数、または任意に０であり；
ｔ、ｍ”、ｎ”およびｐ”は０または１であり；
Ｘ”はＯＲ３６、ＳＲ３７、ＮＲ３８Ｒ３９から選択され、式中、Ｒ３６、Ｒ３７、Ｒ３８、Ｒ３９はＨ、または１個から２０個までの炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、および／またはポリエチレングリコール単位-（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎであり、Ｒ３７は、ｔ＝１のとき、任意にチオール保護基であり、ＣＯＸ’’は、Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ‐ヒドロキシフタルイミドエステル、Ｎ‐ヒドロキシスルフォ‐スクシンイミドエステル、パラ‐ニトロフェニルエステル、ジニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステルおよびそれらの誘導体から選択される反応性エステルを形成し、前記誘導体はアミド結合形成を促進し；
Ｙ’’は存在しないか、Ｏ、Ｓ、Ｓ−ＳもしくはＮＲ３２から選択され、式中、Ｒ３２はＲについて上で与えられたものと同じ定義を有し、または
Ｙ”がＳ−Ｓではなく、そして、ｔ＝０のとき、Ｘ”はマレイミド基、ハロアセチル基またはＳＲ３７から選択され、式中、Ｒ３７は上記と同じ定義を有し；
Ａ”はグリシン、アラニン、ロイシン、バリン、リシン、シトルリンおよびグルタミン酸から選択されるアミノ酸であるか、または、２と２０の間のアミノ酸単位を含有するポリペプチドであり；
Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、Ｒ２４、Ｒ２５、Ｒ２６、およびＲ２７は同一または異なっており、そして、Ｈ、または１個から５個までの炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキルであり；
Ｒ２９とＲ３０は同一または異なっており、そして、Ｈ、または１個から５個までの炭素原子を有するアルキルであり；
Ｒ３３はＨ、もしくは１個から１２個までの炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位-（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎであり、または、Ｒ３３は−ＣＯＲ３４、−ＣＳＲ３４、−ＳＯＲ３４、もしくは−ＳＯ２Ｒ３４であり、式中、Ｒ３４はＨ、または１個から２０個までの炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはポリエチレングリコール単位-（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎであり；ならびに
Ｒ４０とＲ４１の一方が、任意に、負に荷電した、または正に荷電した官能基であり、そして、他方がＨ、または１〜４個の炭素原子を有するアルキル、アルケニル、アルキニルである。
【００７０】
「アミノ酸」という用語は、ＲａａとＲａａ’がそれぞれ独立して、Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリールである、ＮＨ２−Ｃ（Ｒａａ’Ｒａａ）−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで表される天然のアミノ酸または非天然のアミノ酸を指す。「アミノ酸」という用語は、アミノ酸のアミノ末端および／またはカルボキシ末端から１つの水素原子が除去されたときに対応する残基、例えば、−ＮＨ−Ｃ（Ｒａａ’Ｒａａ）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−も指す。
【００７１】
「陽イオン」という用語は、正の荷電を有するイオンを指す。陽イオンは一価（例えば、Ｎａ＋、Ｋ＋など）、二価（例えば、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋など）または多価（例えば、Ａｌ３＋など）であり得る。好ましくは、陽イオンは一価である。
【００７２】
「治療上有効量」という用語は、対象で所望の生物学的反応を誘発する、活性化合物または複合体の量を意味する。そのような反応には、治療されている疾患もしくは障害の症状の緩和、疾患の症状もしくは疾患自体の防止、抑制もしくは再発の遅延化、治療が無いときと比較した対象の寿命の増加、または疾患の症状もしくは疾患自体の進行の防止、抑制もしくは遅延化が含まれる。有効量の決定は、特に本明細書で提供される詳細な開示に照らして、十分に当業者の能力の範囲内である。化合物Ｉの毒性と治療効力は、細胞培養と実験動物の標準薬学的手順によって決定され得る。対象に投与される本発明の化合物もしくは複合体または他の治療薬の有効量は、多発性骨髄腫のステージ、分類および状態、ならびに一般健康状態、年齢、性別、体重および薬品耐性などの対象の特徴に依存する。投与される本発明の化合物もしくは複合体または他の治療薬の有効量は投与経路および剤形にも依存する。投与量および投与間隔は個々に調節されて、所望の治療効果を維持するのに十分な活性化合物の血漿中レベルをもたらすことができる。
【００７３】
「チオール反応性基」という用語は、チオール部分と反応する官能基を指す。チオール反応性基の例にはマレイミド、ビニルピリジン、ビニルスルホン、ビニルスルホンアミド、ハロアセチル系基（例えば、ハロアセトアミド）またはジスルフィド（例えば、Ｒｄが、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキル、フェニル、ニトロフェニル、ジニトロフェニル、カルボキシニトロフェニル、ピリジル、２‐ニトロピリジル、４‐ニトロピリジルまたは３‐カルボキシ‐４‐ニトロピリジルである、−ＳＳＲｄ）が含まれるが、これらに限定されない。
【００７４】
「反応性エステル」という用語は、アミン基またはヒドロキシル基で容易に転置される脱離基を含有するエステルを指す。反応性エステルの例にはＮ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ‐ヒドロキシスルフォスクシンイミドエステル、ニトロフェニルエステル、ジニトロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、スルフォ‐テトラフルロフェニルエステル、およびペンタフルオロフェニルエステルが含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、前記の反応性エステルはＮ‐ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルである。
【００７５】
「イミン含有薬」または「イミン含有細胞傷害性化合物」という用語は、少なくとも１つのイミン官能基を有する、本明細書に記載される（リンカー基を持たない）化合物を指す。好ましくは、前記のイミン含有薬は１つのイミン官能基を含有する。
【００７６】
本発明の方法
第１の態様において、本発明は、結合基で細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法であって、約４〜約９のｐＨで修飾型ＣＢＡと細胞傷害性化合物を反応させることを含む方法を対象とし、
（ａ）その修飾型ＣＢＡが、そのＣＢＡに結合した二官能性架橋剤の残基を含み、そして、その残基が前記の結合基とチオール反応性基を含み；そして
（ｂ）その細胞傷害性化合物が、チオール基、ならびに、
【化１２】
0006049642.tif 000013
で表される基を含み、
式中、
Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである、
【００７７】
ある特定の実施形態では、前記の細胞傷害性化合物は、チオール基を担持するイミン含有細胞傷害性化合物をイミン反応性試薬と反応させて作製する。
【００７８】
ある特定の実施形態では、前記の方法は修飾型ＣＢＡとの反応の前に細胞傷害性化合物を精製することをさらに含み得る。
【００７９】
ある特定の実施形態では、
（１）イミン含有細胞傷害性化合物は、以下の式のうちの１つ、または薬学的に許容可能なその塩によって表され：
【化１３】
0006049642.tif 000014
【化１４】
0006049642.tif 000015
（２）細胞傷害性化合物は、以下の式のうちの１つ、または薬学的に許容可能なその塩によって表され：
【化１５】
0006049642.tif 000016
【化１６】
0006049642.tif 000017
（３）複合体の細胞傷害性化合物と結合基部分は、以下の式のうちの１つによって表され：
【化１７】
0006049642.tif 000018
【化１８】
0006049642.tif 000019
式中、
Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２またはハロゲンであり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され、
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、存在するときは、チオール基を含むか、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、前記のアルキル、アルケニル、フェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換されており；
式中、Ｘ’、Ｙ’、Ｒ６、Ｒｃ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’、Ｒ４’、Ｌのうちの少なくとも１つが（例えば、任意に置換された基を介して）式（Ｉｂ’）または（ＩＩｂ’）の結合基に結合する。
【００８０】
ある特定の実施形態では、修飾型ＣＢＡは、両方とも結合基に結合しているチオール反応性基、およびＣＢＡと反応する基を含む二官能性架橋剤とＣＢＡを反応させることにより調製される。
【００８１】
ある特定の実施形態では、ＣＢＡと反応する基はＣＢＡのアミノ基（例えば、Ｌｙｓ側鎖のアミノ基）、またはＣＢＡのチオール基（例えば、Ｃｙｓ側鎖のチオール基）と反応する。
【００８２】
ある特定の実施形態では、チオール反応性基は、マレイミド、ビニルピリジン、ビニルスルホン、ビニルスルホンアミド、ハロアセチル系基およびジスルフィド基からなる群より選択される。
【００８３】
あるいは、チオール反応性基はマレイミド、ハロアセトアミドまたは、Ｒｄが１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキル、フェニル、ニトロフェニル、ジニトロフェニル、カルボキシニトロフェニル、ピリジル、２‐ニトロピリジル、４‐ニトロピリジル、または３‐カルボキシ‐４‐ニトロピリジルである、−ＳＳＲｄであり得る。
【００８４】
ある特定の実施形態では、修飾型ＣＢＡは、
【化１９】
0006049642.tif 000020
である。
【００８５】
図８に例示的な反応スキームが示されているが、その中で、「ステップ１」では、イミン反応性試薬（反応スキームでは求核試薬（Ｎｕｃ）として示される）がチオールを含有する薬品に添加されて反応し、そして、チオール基を担持する修飾型薬品を形成する。任意に、修飾型薬品を精製して過剰なイミン反応性試薬を除去する。「ステップ２」では、チオール反応性基Ｘ（マレイミド、ＳＳＰｙ、ビニルスルホンなど）を含有するリンカーを用いて抗体を修飾し、そして、チオール基を担持する修飾型薬品とｐＨ６〜９で反応させて、その薬品とその抗体の間に安定なジスルフィド結合またはチオエーテル結合を生成する。「ステップ３」では、副生成物（例えば、過剰なイミン反応性試薬、抗体と反応しない修飾型薬品など）を除去し、そして、複合体を製剤する。抗体と複合体化した薬品分子の数はｎに等しく、それは、例えば、１〜１０であり得る。
【００８６】
図１６に二段階複合体化方法の代表的な例が説明されているが、そこでは、抗体がまず二官能性架橋剤で修飾されて、遊離チオール部分を有する二量体化合物との反応に適切な所望の数のリンカーを所有する抗体をもたらす。この例では、抗体ｈｕＭｙ９−６をまずＳＰＤＢで修飾して、ジチオピリジル部分を含有するリンカーを有する抗体を生じた。次に、修飾型抗体を２ａなどの遊離チオールに曝して、所望の複合体ｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−２ａを生成した。類似の反応で使用され得る追加の適切なチオール反応性リンカーは図１６に挙げられている。
【００８７】
イミン反応性試薬は、有機溶媒（例えば、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルフオキシド、アセトニトリル、エタノール、メタノール、塩化メチレン、クロロホルム、ジオキサン、またはそれらの混合物）または水（例えば、脱イオン水）と１つ以上の有機溶媒の混合物の中でチオール基を担持する薬品と混合することができる。有機溶媒のみが使用されるとき、前記薬品とイミン反応性試薬を、室温で３０分以上（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約１０時間、約２４時間または反応が完了するまで）混合することができる。好ましくは、インキュベーション／反応時間は約０〜４時間または１〜３時間である。約４〜約９のｐＨ、好ましくは約６〜約９のｐＨで緩衝して、チオール反応性基で修飾された細胞結合剤（例えば、抗体）と反応させるため、生じた混合物を直ちに使用することができる。あるいは、混合物を、例えば、−２０℃または−８０℃で凍結および保存し、混合物の細胞結合剤（例えば、抗体）との反応性を維持しつつ、後で使用することができる。混和可能な共溶媒系として水と有機溶媒の混合物（例えば、水とジメチルアセトアミド）が使用される場合、チオール反応性基を担持する細胞結合剤と反応させるため、前記薬品とイミン反応性試薬の反応混合物を直ちに使用するか、または、混合の後に使用まで凍結保存する。混和できない共溶媒系として水と有機溶媒の混合物（例えば、水と塩化メチレン）が使用される場合、１０分以上（例えば、約３０分、約１時間、約２時間、約５時間、約１０時間、約２４時間または反応が完了するまで）の間、前記薬品とイミン反応性試薬を混合し、そして、水層が回収され、（例えば、ＵＶ分光法、およびＤＴＮＢ（５，５’‐ジチオビス‐（２‐ニトロ安息香酸））試薬を用いるエルマン測定によって）前記薬品と反応性チオールについて定量され、そして、約４〜約９のｐＨ、好ましくは約６〜約９のｐＨで緩衝して、チオール反応性基を担持する細胞結合剤（例えば、抗体）に添加される。
【００８８】
第２の態様において、本発明は、結合基で細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法であって、前記ＣＢＡをイミン含有細胞傷害性化合物、イミン反応性試薬、および前記結合基を含む二官能性架橋剤と反応させて前記の複合体を形成することを含む方法を提供する。
【００８９】
ある特定の実施形態では、細胞結合剤（例えば、抗体）を薬品（例えば、イミン含有細胞傷害性化合物）およびイミン反応性試薬と接触させて第１混合物を形成し、そして、次にその第１混合物を二官能性架橋剤と接触させて細胞結合剤‐薬品複合体を形成する。好ましくは、第１混合物の形成後直ちに二官能性架橋剤を第１混合物と接触させる。あるいは、二官能性架橋剤と接触させる前に、第１混合物をある期間（例えば、約１〜１０分、約１０〜３０分、約３０分〜１時間、約１〜５時間、約５〜２４時間、または約１〜２日）保持した。
【００９０】
ある特定の実施形態では、前記の方法は複合体の精製をさらに含み得る。
【００９１】
図１０に例となる反応スキームが示されているが、その中で、「ステップ１」では、イミン反応性試薬（反応スキームでは求核試薬（Ｎｕｃ）として示される）がＣＢＡ（例えば、抗体）、チオールを含有する薬品、チオール反応性基Ｘ（マレイミド、ＳＳＰｙ、ビニルスルホンなど）と反応性エステル基の両方を含有する二官能性架橋剤に添加され、そして、反応がｐＨ６〜９で進み、安定な薬品‐抗体複合体を生成する。「ステップ２」では、副生成物（例えば、過剰なイミン反応性試薬、抗体と反応しない修飾型薬品など）を除去し、そして、複合体を製剤する。抗体と複合体化した薬品分子の数はｎに等しく、それは、例えば、１〜１０であり得る。
【００９２】
第３の態様において、本発明は、結合基を有する細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法を提供し、その方法は以下を含む：
（ａ）細胞傷害性化合物を、結合基、ＣＢＡと反応する基（チオール基、マレイミド基、ハロアセタミド基またはアミン基など）およびその細胞傷害性化合物と反応する基を含む二官能性架橋剤と反応させて、その二官能性架橋剤の残基に共有結合した修飾型細胞傷害性化合物を形成して、その残基は前記結合基、および前記ＣＢＡと反応する基を含み、
前記細胞傷害性化合物は、以下の式のうちの１つ、またはその薬学的に許容可能な塩によって表され：
【化２０】
0006049642.tif 000021
【化２１】
0006049642.tif 000022
式中、
Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；
Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２またはハロゲンであり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され、
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、存在するときは、チオール基を含むか、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、前記のアルキル、アルケニル、フェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換されている、ことと、ならびに、
（ｂ）前記の修飾型細胞傷害性化合物を、前記のＣＢＡと反応する基を介して約４〜約９のｐＨで前記ＣＢＡと反応させて複合体を形成すること。
【００９３】
ある特定の実施形態では、前記の細胞傷害性化合物は、チオール基を担持する、以下の式：
【化２２】
0006049642.tif 000023
、
【化２３】
0006049642.tif 000024
のイミン含有細胞傷害性化合物をイミン反応性試薬と反応混合物中で反応させることによって、作製される。
【００９４】
ある特定の実施形態では、前記方法は、ステップ（ａ）の前に細胞傷害性化合物を精製することをさらに含み得る。
【００９５】
ある特定の実施形態では、前記方法は、ステップ（ｂ）の前に修飾型細胞傷害性化合物を精製することをさらに含み得る。
【００９６】
ある特定の実施形態では、反応混合物を凍結保存した後に、その凍結した混合物が融かされ、そして、ステップ（ａ）が実施される。
【００９７】
ある特定の実施形態では、前記方法は、融解する前およびステップ（ｂ）を実施する前にステップ（ａ）の反応混合物を凍結して保存することをさらに含み得る。
【００９８】
ある特定の実施形態では、二官能性架橋剤はビス‐マレイミドヘキサンまたはＢＭＰＥＯである。
【００９９】
図１１に例示的な反応スキームが示されているが、その中で、「ステップ１」では、イミン反応性試薬（反応スキームでは求核試薬（Ｎｕｃ）として示される）がチオールを含有する細胞傷害性化合物に添加される。生じた細胞傷害性化合物を任意に精製した後に、「ステップ２」でその細胞傷害性化合物を二官能性架橋剤（例えば、ビスマレイミドヘキサンまたはＢＭＰＥＯ）と反応させて、チオール反応性基を担持する第２の修飾型薬品を作製する。次に、「ステップ３」では、チオール含有ＣＢＡ（例えば、抗体）が添加され、反応を進行させて（ｐＨ６〜９で）安定な薬品‐抗体複合体を生成する。「ステップ４」では、副生成物（例えば、過剰なイミン反応性試薬、抗体と反応しない修飾型薬品など）を除去し、そして、複合体を製剤する。抗体と複合体化した薬品分子の数はｎに等しく、それは、例えば、１〜１０であり得る。
【０１００】
イミン反応性試薬を、有機溶媒（例えば、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルフオキシド、アセトニトリル、エタノール、メタノール、塩化メチレン、クロロホルム、ジオキサン、またはそれらの混合物）または水（例えば、脱イオン水）と１つ以上の有機溶媒の混合物の中でチオール反応性基を担持する薬品と混合することができる。有機溶媒のみが使用されるとき、イミン反応性試薬を、室温で３０分以上（例えば、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約１０時間、約２４時間または反応が完了するまで）の間、前記薬品と混合することができる。好ましくは、インキュベーション／反応時間は約０〜４時間または１〜３時間である。約４〜約９のｐＨ、好ましくは約６〜約９のｐＨで緩衝して、チオール反応性基で修飾された細胞結合剤（例えば、抗体）と反応させるため、生じた混合物を直ちに使用することができる。あるいは、混合物を、例えば、−２０℃または−８０℃で凍結および保存し、混合物の細胞結合剤（例えば、抗体）との反応性を維持しつつ、後で使用することができる。混和可能な共溶媒系として水と有機溶媒の混合物（例えば、水とジメチルアセトアミド）が使用される場合、チオール反応性基を担持する細胞結合剤と反応させるため、前記薬品とイミン反応性試薬の反応混合物を混合後直ちに使用するか、または、使用まで凍結保存する。混和できない共溶媒系として水と有機溶媒の混合物（例えば、水と塩化メチレン）が使用される場合、１０分以上（例えば、約３０分、約１時間、約２時間、約５時間、約１０時間、約２４時間または反応が完了するまで）の間、前記薬品とイミン反応性試薬を混合し、そして、水層が回収され、（例えば、ＵＶ分光法によって）前記薬品について定量され、そして、約４〜約９のｐＨ、好ましくは約６〜約９のｐＨで緩衝して、チオール基を担持する細胞結合剤（例えば、抗体）に添加される。
【０１０１】
第４の態様において、本発明は、結合基で細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法であって、修飾型細胞傷害性化合物をＣＢＡと約４〜約９のｐＨで反応させることを含む、方法を対象とし、その修飾型細胞傷害性化合物は、以下を含む：
（ａ）前記の結合基と、反応性エステルおよびチオール反応性基から選択される反応性基とを含む、前記細胞傷害性化合物に結合した二官能性架橋剤の残基、ならびに、
（ｂ）
【化２４】
0006049642.tif 000025
で表される基であって、
式中、
Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである、基。
【０１０２】
ある特定の実施形態では、前記修飾型細胞傷害性化合物は、前記結合基と前記反応性基を担持するイミン含有細胞傷害性化合物とイミン反応性試薬を反応させることによって作製する。
【０１０３】
ある特定の実施形態では、前記方法は、ＣＢＡとの反応の前に修飾型細胞傷害性化合物を精製することをさらに含み得る。
【０１０４】
ある特定の実施形態では、反応性エステルは、Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ‐ヒドロキシスルフォスクシンイミドエステル、ニトロフェニルエステル、ジニトロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、スルフォ‐テトラフルロフェニルエステルおよびペンタフルオロフェニルエステルからなる群より選択され得る。好ましくは、前記の反応性エステルはＮ‐ヒドロキシスクシンイミドエステルである。
【０１０５】
ある特定の実施形態では、チオール反応性基は、マレイミド、ビニルピリジン、ビニルスルホン、ビニルスルホンアミド、ハロアセチル系基およびジスルフィド基からなる群より選択され得る。
【０１０６】
ある特定の実施形態では、チオール反応性基は、マレイミド、ハロアセトアミド、または、Ｒｄが１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキル、フェニル、ニトロフェニル、ジニトロフェニル、カルボキシニトロフェニル、ピリジル、２‐ニトロピリジル、４‐ニトロピリジル、または３‐カルボキシ‐４‐ニトロピリジルである、−ＳＳＲｄであり得る。
【０１０７】
図７に例示的な反応スキームが示されているが、その中で、「ステップ１」では、イミン反応性試薬（反応スキームでは求核試薬（Ｎｕｃ）として示される）が、反応性エステル（１ｃ）を含有する薬品に添加され、そして、反応して修飾型薬品を形成する。任意に、修飾型薬品を精製して過剰なイミン反応性試薬を除去することができる。「ステップ２」では、反応性エステルを有する修飾型薬品をｐＨ６〜９で緩衝して、抗体と反応させる。「ステップ３」では、副生成物（例えば、過剰なイミン反応性試薬、抗体と反応しない修飾型薬品など）を除去し、そして、複合体を製剤する。抗体と複合体化した薬品分子の数はｎに等しく、それは、例えば、１から１０までであり得る。
【０１０８】
図９に、本発明の例となる方法を示す別の反応スキームが示されている。「ステップ１」では、イミン反応性試薬が、チオール反応性基を含有する薬品（式中、Ｒはマレイミド基、ＳＳＰｙなどである）に添加され、そして、反応し、そして、修飾型薬品を形成する。任意に、修飾型薬品を精製して過剰なイミン反応性試薬を除去する。「ステップ２」では、修飾型薬品が、反応性チオールを含有する抗体と反応して、安定なジスルフィド結合またはチオエーテル結合を介して薬品に共有結合した抗体を有する抗体‐薬品複合体を形成する。本明細書に記載される方法、例えば、鎖間ジスルフィドを還元すること、システインを遺伝的にコードすること、またはチオールもしくは化学的にマスクしたチオールを含有するリンカーで抗体を修飾することによって、反応性チオール基を有する抗体を生成することができる。「ステップ３」では、抗体と反応しない薬品を除去し、そして、複合体を製剤する。抗体と複合体化した薬品分子の数はｎに等しく、それは、例えば、１〜１０であり得る。
【０１０９】
イミン反応性試薬を、有機溶媒（例えば、ジメチルアセトアミド、エタノール、塩化メチレン、クロロホルム、ジオキサン、またはそれらの混合物）、または水（例えば、脱イオン水）と１つ以上の有機溶媒の混合物の中で活性化エステル（例えば、Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミジルエステル、ペンタフルオロフェノールエステル、スルフォＮ‐ヒドロキシスクシンイミジルエステル）を担持する薬品と混合することができる。有機溶媒のみが使用されるとき、０〜１００℃の温度、好ましくは０〜３０℃の温度、より好ましくは室温で５分以上（例えば、約３０分、１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約１０時間、約２４時間または反応が完了するまで）の間、前記薬品とイミン反応性試薬を混合することができる。好ましくは、インキュベーション／反応時間は約０〜４時間または１〜３時間である。約４〜約９のｐＨ、好ましくは約６〜約９のｐＨで緩衝して、細胞結合剤（例えば、抗体）と反応させるために、生じた反応混合物を直ちに使用することができる。あるいは、抗体との反応性を維持しつつ、反応混合物を、例えば、約−２０℃または−８０℃で凍結および保存し、後で使用することができる。好ましくは、中間産物の精製は必要ではない。混和可能な共溶媒系として水と有機溶媒の混合物（例えば、水およびジメチルアセトアミド）が使用されるとき、細胞結合剤（例えば、抗体）と反応させるため、混合の後に前記薬品とイミン反応混合物を直ちに使用するか、または、使用まで凍結保存する。混和できない共溶媒系として水と有機溶媒の混合物（例えば、水と塩化メチレン）が使用されるとき、１０分以上の間、前記薬品とイミン反応性試薬が混合され、そして、水層が回収され、前記薬品について定量され、そして、ｐＨ約４〜約９のｐＨ、好ましくは約６〜約９のｐＨで緩衝して、細胞結合剤（例えば、抗体）に添加される。
【０１１０】
上記の態様のいずれにおいても、適切な量のイミン反応性試薬を使用することができる。例えば、前記薬品に対して約０．１〜約３０モル当量のイミン反応性試薬を使用することができる。好ましくは、約１〜約１０モル当量、より好ましくは、約１〜約５モル当量、およびさらにより好ましくは約３〜約５モル当量のイミン反応性試薬使用することができる。
【０１１１】
この一般的な方法を用いるとき、上記の態様のいずれにおいても、以下のイミン反応性試薬のいずれかを使用することができる：サルファイト（Ｈ２ＳＯ３、Ｈ２ＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ、ジ、トリおよびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ３、ＰＯＳ３Ｈ３、ＰＳ４Ｈ３、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳＨ、ＲｉＳＯＨ、ＲｉＳＯ２Ｈ、ＲｉＳＯ３Ｈ）、様々なアミン（ヒドロキシルアミン（例えば、ＮＨ２ＯＨ）、ヒドラジン（例えば、ＮＨ２ＮＨ２）、ＮＨ２Ｏ−Ｒｉ、Ｒｉ’ＮＨ−Ｒｉ、ＮＨ２−Ｒｉ）、ＮＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ２−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２、チオスルファート（Ｈ２Ｓ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（Ｈ２Ｓ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ）（ＳＨ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（ＲｋＣ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ヒドラジド（ＲｋＣＯＮＨＮＨ２）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２Ｈ、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、グリケート化ヌクレオチド（例えば、ＧＤＰ‐マンノース）、フルダラビン、またはそれらの混合物、式中、ＲｉとＲｉ’はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；ＲｉとＲｉ’は、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；そして、Ｒｋは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである（好ましくは、Ｒｋは、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；より好ましくは、Ｒｋはメチル、エチルまたはプロピルである）。好ましくは、前記の陽イオンはＮａ＋またはＫ＋などの一価陽イオンである。
【０１１２】
好ましくは、前記のイミン反応性試薬はサルファイト（例えば、ＮａＨＳＯ３またはＫＨＳＯ３）、ヒドロキシルアミン、ヒドラジンおよび尿素から選択される。より好ましくは、前記のイミン反応性試薬はＮａＨＳＯ３またはＫＨＳＯ３である。
【０１１３】
１つの実施形態では、上記の態様のいずれに記載される修飾型薬品も、細胞結合剤と反応する前に精製される。修飾型薬品を精製するために、当技術分野において公知の、任意の適切な方法を用いることができる。例えば、カラムクロマトグラフィー（例えば、シリカゲルクロマトグラフィー）またはＨＰＬＣによって修飾型薬品を精製することができる。
【０１１４】
別の実施形態では、上記の態様のいずれかによって調製された細胞結合剤−薬品複合体を、接線流濾過、吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、選択的沈殿、非吸着濾過、またはそれらの組合せによって精製する。好ましくは、複合体の精製のために、接線流濾過（ＴＦＦ、直交流濾過、限外濾過および透析濾過としても知られる）および／または吸着クロマトグラフィー樹脂を使用する。
【０１１５】
Ｐｅｌｌｉｃｏｎタイプシステム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ビレリカ、マサチューセッツ）、Ｓａｒｔｏｃｏｎカセットシステム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  ＡＧ、エッジウッド、ニューヨーク）およびＣｅｎｔｒａｓｅｔｔｅタイプシステム（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐ．、イーストヒルズ、ニューヨーク）を含む、任意の適切なＴＦＦシステムを利用することができる。
【０１１６】
いかなる適切な吸着クロマトグラフィー樹脂をも利用することができる。好ましい吸着クロマトグラフィー樹脂にはハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性電荷誘導クロマトグラフィー（ＨＣＩＣ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、イオン交換クロマトグラフィー、ミックスモードイオン交換クロマトグラフィー、固定化金属親和性クロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、色素リガンドクロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、およびそれらの組合せのための樹脂が含まれる。適切なハイドロキシアパタイト樹脂の例にはセラミックハイドロキシアパタイト（ＣＨＴタイプＩおよびタイプＩＩ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ハーキュリーズ、カリフォルニア）、ＨＡウルトロゲル・ハイドロキシアパタイト（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐ．、イーストヒルズ、ニューヨーク）、およびセラミック・フルオロアパタイト（ＣＦＴタイプＩおよびタイプＩＩ、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ハーキュリーズ、カリフォルニア）が含まれる。適切なＨＣＩＣ樹脂の例はＭＥＰハイパーセル樹脂（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐ．、イーストヒルズ、ニューヨーク）である。適切なＨＩＣ樹脂の例にはブチル‐セファロース樹脂、ヘキシル‐セファロース樹脂、フェニル‐セファロース樹脂、およびオクチルセファロース樹脂（すべて、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅより、ピスカタウェイ、ニュージャージー）、ならびにマクロ‐プレップＭエチル樹脂およびマクロ‐プレップｔ−ブチル樹脂（Ｂｉｏｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ハーキュリーズ、カリフォルニア）が含まれる。適切なイオン交換樹脂の例にはＳＰ‐セファロース樹脂、ＣＭ‐セファロース樹脂、およびＱ‐セファロース樹脂（すべて、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅより、ピスカタウェイ、ニュージャージー）、ならびにＵｎｏｓｐｈｅｒｅ  Ｓ樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ハーキュリーズ、カリフォルニア）が含まれる。適切なミックスモードイオン交換体の例にはベーカーボンドＡＢｘ樹脂（ＪＴ  Ｂａｋｅｒ、フィリップスバーグ、ニュージャージー）が含まれる。適切なＩＭＡＣ樹脂の例にはキレーティング・セファロース樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ピスカタウェイ、ニュージャージー）およびＰｒｏｆｉｎｉｔｙ  ＩＭＡＣ樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ハーキュリーズ、カリフォルニア）が含まれる。適切な色素リガンド樹脂の例にはブルー・セファロース樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ピスカタウェイ、ニュージャージー）およびＡｆｆｉ−ｇｅｌブルー樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ハーキュリーズ、カリフォルニア）が含まれる。適切な親和性樹脂には細胞結合剤が抗体である、プロテインＡセファロース樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ピスカタウェイ、ニュージャージー）および、細胞結合剤が適切なレクチン結合部位を担持する、レクチン親和性樹脂、例えば、レンティル・レクチン・セファロース樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ピスカタウェイ、ニュージャージー）が含まれる。別法として、細胞結合剤に特異的な抗体を使用することができる。��のような抗体を、例えば、セファロース４ファースト・フロー樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ピスカタウェイ、ニュージャージー）に固定化することができる。適切な逆相樹脂の例にはＣ４樹脂、Ｃ８樹脂およびＣ１８樹脂（Ｇｒａｃｅ  Ｖｙｄａｃ、ヘスペリア、  カリフォルニア）が含まれる。
【０１１７】
本発明の方法で、あらゆる適切な非吸着クロマトグラフィー樹脂を使用することができる。適切なクロマトグラフィー樹脂の例にはセファデックス（商標）Ｇ‐２５、Ｇ‐５０、Ｇ‐１００、セファクリル（商標）樹脂（例えば、Ｓ‐２００およびＳ‐３００）、スーパーデックス（商標）樹脂（例えば、スーパーデックス（商標）７５およびスーパーデックスＳ（商標）２００）、ＢＩＯ‐ＧＥＬ（登録商標）樹脂（例えば、Ｐ‐６、Ｐ‐１０、Ｐ‐３０、Ｐ‐６０およびＰ‐１００）、および当業者に公知の他のものが含まれるが、これらに限定されない。
【０１１８】
連結部分を担持する薬品
本方法で使用することができる薬品には、その全てが参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１０／０３１６６５６号、同第２０１０／００３６４１号、同第２０１０／０２０３００７号に記載される化合物が含まれる。
【０１１９】
ある特定の他の実施形態では、結合基を介して細胞結合剤と複合体化することができる細胞傷害性化合物はその結合基を含まない。その代わり、リンカー基を介してリンカーの無い細胞傷害性化合物をＣＢＡと複合体化するために、（前記の結合基を含む）二官能性架橋試薬が必要とされ得る。
【０１２０】
したがって、第１の特定の実施形態では、それに結合した反応性基を有する結合基に共有結合した薬品は、本発明の方法（例えば、上記の本発明の第４の態様において記載されるような一段階試薬方法）において使用することができ、または、本発明の方法（例えば、本発明の第３の態様に記載される方法）の中間産物であり得るが、それは反応性エステルまたはチオール反応性基（集合的に「反応性基」）などの反応性基を担持する細胞傷害性化合物であり、それに結合した前記反応性基を有する結合基を含み、前記細胞傷害性化合物をＣＢＡに共有結合することが可能であり、前記細胞傷害性化合物または薬学的に許容可能なその塩は、以下の式：
【化２５】
0006049642.tif 000026
または
【化２６】
0006049642.tif 000027
のうちのいずれか１つによって表される。イミン反応性試薬と反応すると、前記細胞傷害性化合物は以下の式：
【化２７】
0006049642.tif 000028
または
【化２８】
0006049642.tif 000029
のうちのいずれか１つによって表され得るが、
式中、Ｙはサルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；
Ｘ’は−Ｈ、−ＯＨ、アミン保護基、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は−Ｈ、オキソ基、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキル、またはそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’、およびそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、ハロゲンまたはそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−ＮＲ５および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され；
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基で前記のアルキルまたはアルケニルが任意に置換されており；それに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり得る置換基で、フェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換され得る。
好ましくは、Ｌは存在しないか、任意に置換されたフェニル基および任意に置換されたピリジル基から選択され、前記フェニル基と前記ピリジル基が、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基を担持するか、または、Ｌは、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基を担持するアミン基（すなわち、−Ｎ（結合基）−）であるか、または、Ｌは、１〜６個の炭素原子を有し、そして、それに結合した前記反応性基を有する結合基を担持する直鎖、分岐もしくは環状アルキルもしくはアルケニルである。
【０１２１】
式（Ｉａ’）および（ＩＩａ’）のいくつかの代表的な化合物が以下に記載される。
【化２９】
0006049642.tif 000030
【０１２２】
ある特定の実施形態では、
Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、およびアミン保護基からなる群より選択される。好ましくは、Ｘ’は−Ｈ、−ＯＨ、−Ｍｅ、または、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基である。より好ましくは、Ｘ’は−Ｈであり；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択される。好ましくは、Ｙ’は−Ｈまたはオキソから選択される。より好ましくは、Ｙ’は−Ｈであり；
ＷはＣ＝Ｏであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、−ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ’（Ｃ＝Ｏ）Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＯ２および、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基から独立して選択される。好ましくは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ２’およびＲ３’のうちの１つはそれに結合した前記反応性基を有する結合基であり、そして、残りは−Ｈであり；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはフェニルからなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ”は同一または異なっており、そして、独立して−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはフェニルから選択され；
Ｒ６は、Ｒｃが−Ｈ、１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキルである、−ＯＲｃまたは−ＳＲｃである。好ましくは、Ｒ６は−ＯＭｅまたは−ＳＭｅである。さらにより好ましくは、Ｒ６は−ＯＭｅであり；
ＺとＺ’は−ＣＨ２−であり；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５およびオキソ（Ｃ＝Ｏ）から選択される。好ましくは、ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−および−Ｓ−から選択される。より好ましくは、ＡとＡ’は−Ｏ−であり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、ｎが１から２４までの整数であるポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、または１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニルから独立して選択され、前記のアルキル、アルケニルおよびアルキニルは、ハロゲン、−ＯＲ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲおよび−ＣＯＲ’からなる群より独立して選択される１つ以上の（例えば、２、３、４、５、６またはそれ以上）置換基で任意に置換され；
好ましくは、ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルから独立して選択される。より好ましくは、ＤとＤ’は１〜４個の炭素原子を担持する直鎖または分岐アルキルである。さらにより好ましくは、ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、１〜４個の炭素原子を有する直鎖アルキルから選択され；
Ｌは存在しないか、任意に置換されたフェニル基および任意に置換されたピリジル基から選択され、前記フェニル基と前記ピリジル基が、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基を担持するか、または、Ｌは、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基を担持するアミン基（すなわち、−Ｎ（結合基）−）であるか、または、Ｌは、１〜６個の炭素原子を有し、そして、それに結合した前記反応性基を有する結合基を担持する直鎖、分岐もしくは環状アルキルもしくはアルケニルである。
【０１２３】
第２の特定の実施形態では、細胞傷害性二量体（Ｉａ）または（ＩＩａ）について、可変項目は以下のとおりである：
ＷはＣ＝Ｏであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ４およびＲ４’は−Ｈであり；
Ｒ３またはＲ３’の一方が任意に、それに結合した前記反応性基を有する結合基であり、そして、他方が−Ｈであり；
Ｒ６は−ＯＭｅであり；
ＺとＺ’は−ＣＨ２−であり；
Ｘ’は−Ｈであり；
Ｙ’は−Ｈであり；
ＡとＡ’は−Ｏ−であり；そして、可変項目の残りのものは第１の特定の実施形態に記載されたとおりである。
【０１２４】
第３の特定の実施形態では、式（Ｉａ’）および（ＩＩａ’）の（それに結合した前記反応性基を有する結合基に結合した）細胞傷害性二量体は以下の式によって表され：
【化３０】
0006049642.tif 000031
;
【化３１】
0006049642.tif 000032
式中、Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、およびアミン保護基からなる群より選択される。好ましくは、Ｘ’は−Ｈ、−ＯＨまたは−Ｍｅである。より好ましくは、Ｘ’は−Ｈであり；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択される。好ましくは、Ｙ’は−Ｈまたは−Ｍｅから選択される。より好ましくは、Ｙ’は−Ｈであり；
Ｌ’、Ｌ’’およびＬ’’’は同一または異なっており、そして、Ｌ’、Ｌ’’およびＬ’’’のうちの１つだけが、それに結合した前記反応性基を有する結合基であることを条件に、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３＋Ｍ−、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’、およびそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基から独立して選択される。好ましくは、Ｌ’は、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基である。あるいは、Ｌ’、Ｌ’’またはＬ”’のうちの１つが、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり、残りが−Ｈである。より好ましくは、Ｌ’は、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり、そしてＬ’’とＬ’’’が−Ｈであり；
Ｒ６は、Ｒｃが１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキルである、−ＯＲｃまたは−ＳＲｃである。好ましくは、Ｒ６は−ＯＭｅまたは−ＳＭｅである。さらにより好ましくは、Ｒ６は−ＯＭｅであり；
ＡとＡ’は−Ｏ−および−Ｓ−から選択される。好ましくは、ＡとＡ’は−Ｏ−であり；
Ｒは−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはＰＥＧ基（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃであり；
ｎは１から２４までの整数であり；そして
Ｒｃは１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；
Ｒ’とＲ”は同一または異なっており、そして、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＲＲｇ’、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから選択された１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環、ＰＥＧ基−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃから選択され、式中、ｎは１から２４までの整数であり、好ましくは、ｎは２、４または８であり；そして、Ｒｇ’は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはＰＥＧ基（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃであり；
Ｇは−ＣＨ−または−Ｎ−から選択され；そして、可変項目の残りのものは第１の特定の実施形態に記載されたとおりである。
【０１２５】
第４の特定の実施形態では、式（ＩＡａ’）または（ＩＩＡａ’）の細胞傷害性二量体について、Ｌ’は式：
−Ｗ’−Ｒｘ−Ｖ−Ｒｙ−Ｊ
で表され、
式中、Ｗ’とＶは同一または異なっており、そして、それぞれ独立して、存在しないか、−ＣＲｅＲｅ’−、−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−、−ＳＳ−または−Ｃ（＝Ｏ）−、またはアミノ酸、または２〜８つのアミノ酸を有するペプチドから選択され；
ＲｘとＲｙは同一または異なっており、そして、それぞれ独立して、存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、６〜１０個の炭素原子を担持するアリール、またはＯ、ＮもしくはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を担持する３員〜８員の複素環であり；
ＲｅとＲｅ’は同一または異なっており、そして、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋから選択され、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；好ましくは、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；
ｎは１から２４までの整数であり；そして
Ｊは、それに結合した前記反応性基を含み、そして、マレイミド、ハロアセトアミド、−ＳＨ、−ＳＳＲｄ、−ＣＨ２ＳＨ、−ＣＨ（Ｍｅ）ＳＨ、−Ｃ（Ｍｅ）２ＳＨおよび−ＣＯＥから選択され、式中、−ＣＯＥは、Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ‐ヒドロキシスルフォスクシンイミドエステル、ニトロフェニル（例えば、２または４‐ニトロフェニル）エステル、ジニトロフェニル（例えば、２，４‐ジニトロフェニル）エステル、スルフォ‐テトラフルロフェニル（例えば、４‐スルフォ‐２，３，５，６‐テトラフルオロフェニル）エステルおよびペンタフルオロフェニルエステルから選択されるが、これらに限定されない反応性エステルを表し、そして、式中、Ｒｃ１は−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルであり、ならびに
Ｒｄはフェニル、ニトロフェニル（例えば、２または４‐ニトロフェニル）、ジニトロフェニル（例えば、２または４‐ニトロフェニル）、カルボキシニトロフェニル（例えば、３‐カルボキシ‐４‐ニトロフェニル）、ピリジルまたはニトロピリジル（例えば、４‐ニトロピリジル）から選択される。
【０１２６】
好ましくは、Ｊは−ＳＨ、−ＳＳＲｄ、マレイミドまたはＮ‐ヒドロキシスクシンイミドエステルである。
【０１２７】
好ましくは、Ｒｅ’は−Ｈまたは−Ｍｅであり；Ｒｅは１〜６個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり；ｎは２から８までの整数であり；好ましくは、Ｒｋは−Ｈ、−Ｍｅまたは−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＭｅ２であり、そして、可変項目の残りのものは第３の特定の実施形態で先に記載されたとおりである。
【０１２８】
別の好ましい実施形態では、Ｖはアミノ酸または２〜８つのアミノ酸を有するペプチドである。より好ましくは、Ｖはバリン‐シトルリン、グリシン‐グリシン‐グリシン、またはアラニン‐ロイシン‐アラニン‐ロイシンである。
【０１２９】
別の好ましい実施形態では、Ｗ’は−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−または−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−であり；Ｒｅは−Ｈ、１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり；Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｖは存在しないか、−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｓ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−であり；Ｒｙは存在しないか、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；そして、Ｊは−ＳＨ、−ＳＳＲｄまたは−ＣＯＥ（好ましくは、Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル）である。可変項目の残りのものは第４の特定の実施形態に記載されたとおりである。
【０１３０】
別の好ましい実施形態では、Ｗ’は−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−または−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−であり；ＲｅはＨ、−Ｍｅ、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｍｅであり；ｎは２から６までの整数であり；Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を担持する直鎖または分岐アルキルであり；ＶとＲｙは存在せず；そして、Ｊは−ＣＯＥ、好ましくはＮ‐ヒドロキシスクシンイミドエステルである。
【０１３１】
第５の特定の実施形態では、Ｌ’は以下の式：
−Ｗ’−［ＣＲ１’’Ｒ２’’］ａ−Ｖ−［Ｃｙ］０〜１−［ＣＲ３’’Ｒ４’’］ｂ−ＣＯＥ
によって表され、
式中、Ｒ１’’、Ｒ２’’、およびＲ３’’はそれぞれ独立して−Ｈまたは−Ｍｅであり；
Ｒ４’’は、−Ｈ、−Ｍｅ、−ＳＯ３Ｈ、または−ＳＯ３−Ｍ＋であって、Ｍ＋は薬学的に許容可能な陽イオンであり；
ａは０〜２の整数であり、ｂは０〜３の整数であり；そして、
Ｃｙは、Ｎヘテロ原子を担持する、任意に置換された５員の複素環であり、好ましくは、Ｃｙは
【化３２】
0006049642.tif 000033
である。
【０１３２】
ある特定の実施形態では、例えば、第４または第５の特定の実施形態では、Ｗ’は−Ｎ（Ｒｅ）−である。
【０１３３】
ある特定の実施形態では、例えば、第４または第５の特定の実施形態では、Ｒｅは−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）２〜６−Ｒｋであり、式中、Ｒｋが、−Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキルである。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、例えば、第４または第５の特定の実施形態では、Ｖは−Ｓ−または−ＳＳ−である。
【０１３５】
第６の特定の実施形態では、例えば、第４または第５の特定の実施形態では、Ｌ’は以下の式：
−ＮＲｅ−［ＣＲ１’’Ｒ２’’］ａ−Ｓ−［ＣＲ３’’Ｒ４’’］ｂ−ＣＯＥ
によって表される。
【０１３６】
ある特定の実施形態では、第４、第５および第６の特定の実施形態におけるように、それに結合した前記反応性基を有する結合基に結合した細胞傷害性化合物は、
【化３３】
0006049642.tif 000034
または
【化３４】
0006049642.tif 000035
であり、式中、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり、そして、Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである。
【０１３７】
第７の特定の実施形態では、例えば、第４、第５または第６の特定の実施形態では、Ｌ’は以下の式：
−ＮＲｅ−［ＣＲ１’’Ｒ２’’］ａ−Ｓ−Ｃｙ−［ＣＲ３’’Ｒ４’’］ｂ−ＣＯＥ
によって表される。
【０１３８】
ある特定の実施形態では、第４、第５および第７の特定の実施形態におけるように、それに結合した前記反応性基を有する結合基に結合した細胞傷害性化合物は
【化３５】
0006049642.tif 000036
または
【化３６】
0006049642.tif 000037
であり、式中、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり、そして、Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである。
【０１３９】
第８の特定の実施形態では、式（Ｉａ）および（ＩＩａ）の細胞傷害性化合物は以下の式：
【化３７】
0006049642.tif 000038
、
【化３８】
0006049642.tif 000039
によって表され、
式中、Ｗ’は存在しないか、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−Ｓ−または−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−から選択され；
Ｒｘは存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルから選択され；
Ｒｅは、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルである。好ましくは、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；
Ｚｓは−Ｈ、−ＳＲｍであり；
ＲｍはＲｄであるか、Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ‐ヒドロキシフタルイミドエステル、Ｎ‐ヒドロキシスルフォ‐スクシンイミドエステル、パラ‐ニトロフェニルエステル、ジニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステルから選択される反応性エステルを担持し、１〜４個の炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖または分岐アルキルであり；
Ｒｄはフェニル、ニトロフェニル、ジニトロフェニル、カルボキシニトロフェニル、ピリジルまたはニトロピリジルから選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；そして、可変項目の残りのものは第４の特定の実施形態に先に記載されたとおりである。
【０１４０】
好ましくは、Ｒｋは−Ｈまたは−Ｍｅであり、そして、ｎは２から８までの整数である。好ましくは、Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；ならびに、可変項目の残りのものは第５の特定の実施形態に先に記載されたとおりである。
【０１４１】
ある特定の実施形態では、第８の特定の実施形態に記載される式（ＩＢａ）および（ＩＩＢａ）の化合物について、可変項目は以下のとおりである。
Ｘ’とＹ’は共に−Ｈであり；
ＡとＡ’は共に‐Ｏ‐であり；
Ｒ６は−ＯＭｅであり；
Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；そして、可変項目の残りのものは第８の特定の実施形態に先に記載されたとおりである。
【０１４２】
好ましくは、Ｒｘは−（ＣＨ２）ｐ−（ＣＲｆＲｇ）−であり、式中、ＲｆとＲｇはそれぞれ、Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキルから独立して選択され；ｐは０、１、２または３である。より好ましくは、ＲｆとＲｇは同一または異なっており、そして、−Ｈおよび−Ｍｅから選択され、そして、ｐは１である。
【０１４３】
第９の特定の実施形態では、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基に結合した細胞傷害性化合物は以下の式：
【化３９】
0006049642.tif 000040
または
【化４０】
0006049642.tif 000041
のうちのいずれか１つによって表され、
式中、Ｙは−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍまたは−ＯＳＯ３Ｍから選択され；
Ｍは−Ｈ、またはＮａ＋もしくはＫ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンであり；
Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、およびアミン保護基からなる群より選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され；
ＡとＡ’は−Ｏ−および−Ｓ−から選択され；
Ｗ’は存在しないか、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−Ｓ−または−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−から選択され；
Ｒｘは存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルから選択され；
Ｒｅは、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
Ｇは−ＣＨ−または−Ｎ−から選択され；
Ｚｓは−Ｈであるか、以下の式のうちのいずれか１つから選択され：
【化４１】
0006049642.tif 000042
、式中、ｑは１から５までの整数であり；好ましくは、ｑは２であり；
ｎは２から６までの整数であり；好ましくは、ｎは４であり；
Ｄは−Ｈまたは−ＳＯ３Ｍであり；
Ｍは−Ｈ、またはＮａ＋もしくはＫ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンである。
【０１４４】
ある特定の実施形態では、Ｚｓは、以下の式：
【化４２】
0006049642.tif 000043
のうちのいずれか１つによって表される。
【０１４５】
ある特定の実施形態、例えば、第９の特定の実施形態では、Ｗ’は−Ｎ（Ｒｅ）−である。
【０１４６】
ある特定の実施形態では、Ｒｅは−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは−Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキルである。
【０１４７】
ある特定の実施形態では、Ｒｋは−Ｈまたは−Ｍｅであり、ｎは４であり、そして、ｑは２である。
【０１４８】
ある特定の実施形態では、Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルである。
【０１４９】
ある特定の実施形態では、Ｒｘは−（ＣＨ２）ｐ−（ＣＲｆＲｇ）−であり、式中、ＲｆとＲｇはそれぞれ、−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキルから独立して選択され；そして、ｐは０、１、２または３である。
【０１５０】
ある特定の実施形態では、ＲｆとＲｇは同一または異なっており、そして、−Ｈおよび−Ｍｅから選択され；そして、ｐは１である。
【０１５１】
第１０の特定の実施形態では、第９の特定の実施形態の可変項目は以下に表される。Ｙは−ＳＯ３Ｍであり；Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオン（例えば、Ｎａ＋）であり；Ｘ’とＹ’は共に−Ｈであり；ＡとＡ’は共に−Ｏ−であり；Ｒ６は−ＯＭｅであり；そして、Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルである。
【０１５２】
上記の実施形態、例えば、第１から第９の特定の実施形態のいずれでも、Ｙは−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍおよびスルファート−ＯＳＯ３Ｍから選択される。好ましくは、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり、式中、Ｍは、好ましくは、−Ｈ、Ｎａ＋またはＫ＋である。
【０１５３】
上記の実施形態、例えば、第１から第１０の特定の実施形態のいずれでも、Ｗは、存在するときは、Ｃ＝Ｏである。
【０１５４】
上記の実施形態、例えば、第１から第１０の特定の実施形態のいずれでも、ＺとＺ’は、存在するときは、−ＣＨ２−である。
【０１５５】
上記の実施形態、例えば、第１から第１０の特定の実施形態のいずれでも、Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、およびアミン保護基からなる群より選択される。好ましくは、Ｘ’は−Ｈ、−ＯＨ、−Ｍｅ、または、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基である。より好ましくは、Ｘ’は−Ｈである。
【０１５６】
上記の実施形態、例えば、第１から第１０の特定の実施形態のいずれでも、Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択される。好ましくは、Ｙ’は−Ｈまたはオキソである。より好ましくは、Ｙ’は−Ｈである。
【０１５７】
上記の実施形態、例えば、第１から第１０の特定の実施形態のいずれでも、ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５−、およびオキソ−（Ｃ＝Ｏ）−から選択される。好ましくは、ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−および−Ｓ−から選択される。より好ましくは、ＡとＡ’は−Ｏ−である。
【０１５８】
上記の実施形態、例えば、第１から第１０の特定の実施形態のいずれでも、ＤとＤ’は、存在するときは、同一または異なっており、そして、独立して、ｎが１から２４までの整数であるポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、または１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニルから選択され、前記のアルキル、アルケニルおよびアルキニルは、ハロゲン、−ＯＲ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲおよび−ＣＯＲ’からなる群より独立して選択される１つ以上の置換基で任意に置換される。好ましくは、ＤとＤ’は１〜４個の炭素原子を担持する直鎖または分岐アルキルである。
【０１５９】
第１１の特定の実施形態では、第１、第３および第９の特定の実施形態の細胞傷害性化合物の様々な基が以下に表される。ＷはＣ＝Ｏであり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ４およびＲ４’は−Ｈであり；Ｒ３またはＲ３’の一方が、任意に、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり、そして、他方が−Ｈであり；Ｒ６は−ＯＭｅであり；ＺとＺ’は−ＣＨ２−であり；Ｘ’は−Ｈであり；Ｙ’は−Ｈであり；そして、ＡとＡ’は−Ｏ−である。
【０１６０】
別の実施形態では、上記の特定の実施形態のいずれかにおけるような、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基は、リスト１に記載されたもののうちのいずれか１つである。
【０１６１】
別の実施形態では、それに結合したリンカー部分（例えば、上記のリンカー部分）を有さない細胞傷害性二量体は、本発明の方法で使用するために（例えば、細胞結合剤とさらに反応させて薬品‐ＣＢＡ複合体を形成するために）、二官能性架橋試薬とさらに反応して、それに結合した反応性基を有する結合部分を担持する薬品を形成することができる。あるいは、それに結合したリンカー部分（例えば、上記のリンカー部分）を有さない細胞傷害性二量体は、一段階反応で二官能性架橋試薬および細胞結合試薬とさらに反応させて薬品‐ＣＢＡ複合体を直接形成することができる。どちらの場合でも、薬品‐ＣＢＡ複合体を生成する反応の前に、イミン反応性試薬を反応混合物に添加して薬品‐イミン反応性試薬付加物（例えば、バイサルファイト付加物）を形成することができる。好ましくは、まず、それに結合したリンカー部分（例えば、上記のリンカー部分）を有さない細胞傷害性二量体をイミン反応性試薬とプレインキュベーションして付加物を形成し、その後、次の反応で反応混合物を使用して薬品‐ＣＢＡ複合体を形成することができる。
【０１６２】
したがって、第１２の特定の実施形態では、イミン含有細胞傷害性化合物は、以下の式：
【化４３】
0006049642.tif 000044
、
【化４４】
0006049642.tif 000045
のうちのいずれか１つに、または薬学的に許容可能なその塩によって表され、そして、
イミン反応性試薬と反応した後は、前記の細胞傷害性化合物は、以下の式：
【化４５】
0006049642.tif 000046
、
【化４６】
0006049642.tif 000047
、または薬学的に許容可能なその塩によって表され、
式中、Ｙはサルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；好ましくは、Ｙはバイサルファイト、ハイドロサルファイトもしくはメタバイサルファイトの付加物、またはそれらの塩（例えば、ナトリウム塩）であり；
Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、アミン保護基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール（例えば、フェニル）、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より選択される。好ましくは、Ｘ’は−Ｈ、−ＯＨまたは−Ｍｅである。より好ましくは、Ｘ’は−Ｈであり；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より選択される。好ましくは、Ｙ’は−Ｈまたはオキソから選択される。より好ましくは、Ｙ’は−Ｈであり；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、および−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’からなる群より独立して選択される。好ましくは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ２’とＲ３’のうちの１つ、２つ、３つ、または全てが−Ｈであり；
Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンであり；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ”は同一または異なっており、そして、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、ハロゲン、−ＯＲｃまたは−ＳＲｃであり；好ましくは、Ｒ６は−ＯＭｅまたは−ＳＭｅである。さらにより好ましくは、Ｒ６は−ＯＭｅであり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択される。好ましくは、ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−および−Ｓ−から選択される。より好ましくは、ＡとＡ’は−Ｏ−であり；
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、存在するときは、チオール基を含み、そして、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、前記のアルキル、アルケニル、フェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換されている。
【０１６３】
そのようなイミン含有細胞傷害性化合物の代表的な構造が表１５に示されている。化合物１、３、４、５および１ｄを参照のこと。
【０１６４】
ある特定の実施形態では、
ＷはＣ＝Ｏであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’は−Ｈであり；
ＺとＺ’は−ＣＨ２−であり；
ＡとＡ’は共に−Ｏ−であり；
Ｗは−（Ｃ＝Ｏ）−であり；
Ｇは−ＣＨ−であり；
Ｒ６は、−Ｈ、または任意に置換されたＣ１〜Ｃ１０直鎖、Ｃ１〜Ｃ１０分岐もしくはＣ３〜Ｃ７環状アルキル、−Ｏ−アルキル、または−Ｏ−ハロ−アルキル、例えば、−ＯＭｅであり；
Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、およびアミン保護基からなる群より選択され；ならびに
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択される。
【０１６５】
好ましくは、Ｙは−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍまたは−ＯＳＯ３Ｍから選択され、そして、式中、Ｍは−Ｈ、またはＮａ＋もしくはＫ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンである。
【０１６６】
好ましくは、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり；Ｍは−ＨまたはＮａ＋である。
【０１６７】
ある特定の実施形態では、イミン含有細胞傷害性化合物は、以下の式：
【化４７】
0006049642.tif 000048
または
【化４８】
0006049642.tif 000049
のうちのいずれか１つによって表され、
式中、Ｌ’、Ｌ’’およびＬ’’’は同一または異なっており、そして、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３Ｍ、スルファート−ＯＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’から独立して選択され；
Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンであり；ならびに
Ｇは−ＣＨ−または−Ｎ−から選択される。
【０１６８】
ある特定の実施形態では、細胞傷害性化合物は、存在するときは、以下の式：
【化４９】
0006049642.tif 000050
または
【化５０】
0006049642.tif 000051
のうちの１つ、または薬学的に許容可能なその塩によって表される。
【０１６９】
ある特定の実施形態では、Ｌ’、Ｌ’’またはＬ’’’のうちの１つがチオール基を担持し、残りが−Ｈである。好ましくは、Ｌ’がチオール基を担持し、そして、Ｌ’’とＬ’’’は−Ｈである。
【０１７０】
ある特定の実施形態では、ＡとＡ’は共に−Ｏ−であり；Ｒ６は−ＯＭｅであり；そして、Ｇは−ＣＨ−である。
【０１７１】
ある特定の実施形態では、前記イミン含有細胞傷害性化合物は、以下の式：
【化５１】
0006049642.tif 000052
または
【化５２】
0006049642.tif 000053
のうちのいずれか１つによって表され得るが、
式中、Ｗ’は存在しないか、存在するときは、−ＣＲｅＲｅ’−、−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−、−ＳＳ−または−Ｃ（＝Ｏ）−、またはアミノ酸、または２〜８つのアミノ酸を有するペプチドから選択され；
Ｒｘは存在しないか、存在するときは、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、６〜１０個の炭素原子を担持するアリール、またはＯ、ＮもしくはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を担持する３員〜８員の複素環であり；
ＲｅとＲｅ’は同一または異なっており、そして、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋから選択され、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；好ましくは、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；
ｎは１から２４までの整数である。
【０１７２】
ある特定の実施形態では、細胞傷害性化合物は、存在するときは、以下の式：
【化５３】
0006049642.tif 000054
または
【化５４】
0006049642.tif 000055
のうちの１つ、または薬学的に許容可能なその塩によって表され得る。
【０１７３】
ある特定の実施形態では、
Ｙは−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍまたは−ＯＳＯ３Ｍから選択され；
Ｍは−Ｈ、またはＮａ＋もしくはＫ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンであり；
Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、およびアミン保護基からなる群より選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され；
ＡとＡ’は−Ｏ−および−Ｓ−から選択され；
Ｗ’は存在しないか、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−Ｓ−または−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−から選択され；
Ｒｘは存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルから選択され；
Ｒｅは、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
Ｇは−ＣＨ−または−Ｎ−から選択される。
【０１７４】
ある特定の実施形態では、Ｗ’は−Ｎ（Ｒｅ）−である。
【０１７５】
ある特定の実施形態では、Ｒｅは−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは−Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキルである。
【０１７６】
ある特定の実施形態では、Ｒｋは−Ｈまたは−Ｍｅであり、ｎは４であり、そして、ｑは２である。
【０１７７】
ある特定の実施形態では、Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルである。
【０１７８】
ある特定の実施形態では、Ｒｘは−（ＣＨ２）ｐ−（ＣＲｆＲｇ）−であり、式中、ＲｆとＲｇはそれぞれ、−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキルから独立して選択され；そして、ｐは０、１、２または３である。
【０１７９】
ある特定の実施形態では、ＲｆとＲｇは同一または異なっており、そして、−Ｈおよび−Ｍｅから選択され；そして、ｐは１である。
【０１８０】
ある特定の実施形態では、
Ｙは−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍまたはスルファート−ＯＳＯ３Ｍであり；好ましくは−ＳＯ３Ｍであり；
Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオン（例えば、Ｎａ＋）であり；
Ｘ’とＹ’は共に−Ｈであり；
ＡとＡ’は共に−Ｏ−であり；
Ｒ６は−ＯＭｅであり；そして、
Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルである。
【０１８１】
ある特定の実施形態では、二官能性架橋剤は、Ｎ‐スクシンイミジル４‐（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシラート（ＳＭＣＣ）、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（Ｎ‐マレイミドメチル）‐シクロヘキサン‐１‐カルボキシ‐（６‐アミドカプロエート）（ＬＣ‐ＳＭＣＣ）、κ‐マレイミドウンデカノイン酸Ｎ‐スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ‐マレイミド酪酸Ｎ‐スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε‐マレイミドカプロン酸Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ‐マレイミドベンゾイル‐Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ‐（α‐マレイミドアセトキシ）‐スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル‐６‐（β‐マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ‐スクシンイミジル４‐（ｐ‐マレイミドフェニル）‐ブチレート（ＳＭＰＢ）、Ｎ‐（ｐ‐マレイミドフェニル）イソシアネート（ＰＭＰＩ）、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（４‐ニトロピリジル‐２‐ジチオ）ブタノエートから選択されるマレイミド系部分；または、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（ヨードアセチル）‐アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ‐スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ‐スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）およびＮ‐スクシンイミジル３‐（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）から選択されるハロアセチル系部分、ビス‐マレイミドポリエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、ＢＭ（ＰＥＯ）２、ＢＭ（ＰＥＯ）３、Ｎ‐（β‐マレイミドプロピルオキシ）スクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、５‐マレイミド吉草酸ＮＨＳ、ＨＢＶＳ、４‐（４‐Ｎ‐マレイミドフェニル）‐酪酸ヒドラジド塩酸塩（ＭＰＢＨ）、スクシンイミジル‐（４‐ビニルスルホニル）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）、ジチオビス‐マレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４‐ビス‐マレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４‐ビスマレイミジル‐２，３‐ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビス‐マレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビス‐マレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、スルフォスクシンイミジル４‐（Ｎ‐マレイミド‐メチル）シクロヘキサン‐１‐カルボキシラート（スルフォ‐ＳＭＣＣ）、スルフォスクシンイミジル（４‐ヨード‐アセチル）アミノベンゾエート（スルフォ‐ＳＩＡＢ）、ｍ‐マレイミドベンゾイル‐Ｎ‐ヒドロキシスルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＭＢＳ）、Ｎ‐（γ‐マレイミドブトリルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＧＭＢＳ）、Ｎ‐（ε‐マレイミドカプロイルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＥＭＣＳ）、Ｎ‐（κ‐マレイミドウンデカノイルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＫＭＵＳ）、スルフォスクシンイミジル４‐（ｐ‐マレイミドフェニル）ブチレート（スルフォ‐ＳＭＰＢ）、ＣＸ１‐１、スルフォ‐ＭａｌおよびＰＥＧｎ‐Ｍａｌである。
【０１８２】
ある特定の実施形態では、前記二官能性架橋剤は、ＳＭＣＣ、スルフォ‐ＳＭＣＣ、ＢＭＰＳ、ＧＭＢＳ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（４‐ニトロピリジル‐２‐ジチオ）ブタノエート、ビス‐マレイミドヘキサンまたはＢＭＰＥＯからなる群より選択される。
【０１８３】
ある特定の実施形態では、修飾型ＣＢＡは、存在するときは、
【化５５】
0006049642.tif 000056
である。
【０１８４】
第１３の特定の実施形態では、イミン含有細胞傷害性化合物は
【化５６】
0006049642.tif 000057
である。
【０１８５】
二官能性架橋剤は、当技術分野において公知の任意の二官能性リンカーであり得る。例えば、薬品‐リンカー化合物の作製に使用することができる二官能性リンカーは、細胞傷害性化合物とジスルフィド結合、チオエーテル結合、酸不安定性結合、光不安定性結合、ペプチダーゼ不安定性結合およびエステラーゼ不安定性結合を形成するものである（例えば、それらの全てが参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，２０８，０２０号；同第５，４７５，０９２号；同第６，４４１，１６３号；同第６，７１６，８２１号；同第６，９１３，７４８号；同第７，２７６，４９７号；同第７，２７６，４９９号；同第７，３６８，５６５号；同第７，３８８，０２６号および同第７，４１４，０７３号を参照のこと）。好ましくは、前記の二官能性架橋剤は、細胞傷害性化合物とジスルフィド結合、チオエーテル結合およびペプチダーゼ不安定性結合を形成するものである。本発明で使用することができる他の二官能性架橋剤には、米国特許出願公開第２００５／０１６９９３３号に記載されているもののような非切断可能リンカー、または荷電リンカーまたは親水性リンカーが含まれ、そして、荷電リンカーまたは親水性リンカーは米国特許出願公開第２００９／０２７４７１３号、米国特許出願公開第２０１０／０１２９３１４０号および国際公開第２００９／１３４９７６号に記載される。それらのそれぞれが参照により本明細書に明白に組み込まれる。本発明の薬品‐リンカー化合物の作製に使用することができる二官能性架橋剤には、その教示の全体が参照により本明細書に組み込まれる、サーモサイエンティフィック・ピアース・架橋技術ハンドブック（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ）に記載されるものも含まれる。
【０１８６】
別の好ましい実施形態では、本発明で使用することができる（それに結合した反応性基を有するリンカー基を含む、または、含まない）薬品は、表１〜７に示される化合物のうちのいずれか１つである。別の好ましい実施形態では、本発明によって作製され得る細胞結合剤‐薬品複合体は、表８に示される複合体のうちのいずれか１つである。
【表１】
0006049642.tif 000058
【表２】
0006049642.tif 000059
【表３】
0006049642.tif 000060
【表４】
0006049642.tif 000061
【表５】
0006049642.tif 000062
【表６】
0006049642.tif 000063
【表７】
0006049642.tif 000064
【表８】
0006049642.tif 000065
【０１８７】
表１〜８において先に記載した化合物または複合体のいずれかでは、イミン二重結合は、バイサルファイト付加物を含む付加物を形成するために、本発明の方法によるイミン反応性試薬（例えば、本明細書に記載されるもの）のいずれかと反応することができる／反応している。表１〜７の化合物内のそのようなイミン‐保護化付加物は、本発明の複合体を作製するための本発明の方法に従うさらなる反応において使用され得る。同様に、イミン保護化付加物を含む化合物は、表８の複合体を作製するために使用され得る。
【０１８８】
別の実施形態では、本発明の方法で使用することができる結合部分（例えば、それに結合した反応性基を有するリンカー基）を任意に担持する薬品は、式（Ａ１）または（Ａ２）：
【化５７】
0006049642.tif 000066
、
【化５８】
0006049642.tif 000067
によって表され、
式中、ＮとＣの間の二重線
【化５９】
0006049642.tif 000068
は、ＮとＣの間の
【化６０】
0006049642.tif 000069
のうちの少なくとも１つが二重結合を表すことを条件に、単結合または二重結合を表し、そして、それが二重結合であるとき、Ｘは存在せず、Ｙは−Ｈであり、そして、それが単結合であるとき、Ｘは−Ｈであるか、化合物をプロドラッグに変換する、アミン保護部分であり；好ましくは、それが二重結合であるとき、Ｘは存在せず、Ｙは−Ｈであり、そして、二重結合が本発明のイミン反応性試薬と反応して付加物（例えば、バイサルファイト付加物）を形成し、その後に、薬品‐ＣＢＡ複合体を作製するために、本発明の方法においてその付加物を使用することができ；
Ｙは−Ｈ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ’によって表されるエステル、−ＯＣＯＯＲ’によって表されるカーボナート、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’によって表されるカルバメート、−ＮＲ’Ｒ’’によって表されるアミンもしくはヒドロキシルアミン、−ＮＲＣＯＲ’によって表されるアミド、Ｐがアミノ酸もしくは２から２０アミノ酸単位の間を含むポリペプチドである−ＮＲＣＯＰによって表されるペプチド、−ＳＲ’で表されるチオエーテル、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、サルファイト−ＳＯ３、バイサルファイト−ＯＳＯ３、−ＳＯ２Ｍ、−ＳＯ３Ｍ、−ＯＳＯ３Ｍ、ハロゲン、シアノ、アジド、またはチオールから選択され；式中、Ｍは−Ｈもしくは薬学的に許容可能な陽イオン（例えば、Ｎａ＋）であり；または、
Ｙはサルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ、Ｒ’およびＲ’’は同一または異なっており、そして、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する、置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ｎが１から２０００まで（好ましくは１〜２００、または１〜２０）の整数であるポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する５員または６員のヘテロアリール環、環のうちの少なくとも１つが、芳香族であり、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する５員〜１８員の縮合環系、６〜１８個の炭素原子を有するアリール、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環から選択され、式中、置換基はハロゲン、−ＯＲ７、−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＯ２、−ＮＲＣＯＲ’、−ＳＲ１０、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、サルファイト−ＳＯ３、バイサルファイト−ＯＳＯ３、−ＳＯ２ＮＲＲ’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ１１、−ＯＣＯＲ１１または−ＯＣＯＮＲ１１Ｒ１２から選択され；
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ｎが１から２０００まで（好ましくは１〜２００、または１〜２０）の整数であるポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する５員または６員のヘテロアリール環、環のうちの少なくとも１つが、芳香族であり、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する５員〜１８員の縮合環系、６〜１８個の炭素原子を有するアリール、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環を有する３員〜１０員の複素環から独立して選択され、そして、Ｒ１０は、任意に、ＳＲ１３またはＣＯＲ１３であり；
Ｒ１３は１個から１０個までの炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する５員または６員のヘテロアリール環、環のうちの少なくとも１つが、芳香族であり、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する５員〜１８員の縮合環系、６〜１８個の炭素原子を有するアリール、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環から選択され、任意に、Ｒ１１はＯＲ１４であり、式中、Ｒ１４はＲと同じ定義を有し、任意に、Ｒ’’は−ＯＨであり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯまたはＳＯ２であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する、置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ｎが１から２０００まで（好ましくは１〜２００、または１〜２０）の整数であるポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、から独立して選択されるか、またはハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ７、−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＯ２、−ＮＲＣＯＲ’、−ＳＲ１０、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、サルファイト−ＳＯ３、バイサルファイト−ＯＳＯ３、−ＳＯ２ＮＲＲ’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ１１、−ＯＣＯＲ１１もしくは−ＯＣＯＮＲ１１Ｒ１２から選択される置換基であり、式中、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は上で定義したとおりであり、任意に、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’またはＲ４’のいずれか１つがそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり（存在する場合）、それは、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基を任意に担持する、ポリピロロ、ポリ−インドリル、ポリ−イミダゾリル、ポリピロロ−イミダゾリル、ポリ−ピロロ−インドリルまたはポリイミダゾロ−インドリル単位から選択され得；
Ｚは、ｎが１、２もしくは３である−（ＣＨ２）ｎ−、−ＣＲ１５Ｒ１６、−ＮＲ１７、−Ｏ−または−Ｓ−から選択され、式中、Ｒ１５、Ｒ１６およびＲ１７はそれぞれ、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、ｎが１から２０００まで（好ましくは１〜２００、または１〜２０）の整数であるポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎから独立して選択され；
Ｒ６は−ＯＲ、−ＳＲまたは−ＮＲＲ’であり、式中、ＲとＲ’は上で与えられたのと同じ定義を有し、任意に、Ｒ６はそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基（存在する場合）であり；
Ｘ’は−ＣＨ２、−ＮＲ、−ＣＯ、−ＢＨ、−ＳＯまたは−ＳＯ２から選択され、式中、Ｒは上で与えられたのと同じ定義を有し；
Ｙ’は−Ｏ−、−ＣＨ２−、−ＮＲまたは-Ｓであり、式中、Ｒは上で与えられたのと同じ定義を有し；
Ｚ’は、Ｘ’、Ｙ’およびＺ’が全て同時にＣＨ２ではないことを条件に、−ＣＨ２または、ｎが２、３もしくは４である−（ＣＨ２）ｎであり；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、−ＣＲＲ’Ｏ、Ｓ、−ＣＲＲ’Ｓ、−ＮＲ１５または−ＣＲＲ’ＮＨＲ１５から選択され、式中、ＲとＲ’は上で与えられたのと同じ定義を有し、式中、Ｒ１５はＲと同じ定義を有し；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、ハロゲン、−ＯＲ７、−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＯ２、−ＮＲＣＯＲ’、−ＳＲ１０、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、サルファイト−ＳＯ３、バイサルファイト−ＯＳＯ３、−ＳＯ２ＮＲＲ’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ１１、−ＯＣＯＲ１１もしくは−ＯＣＯＮＲ１１Ｒ１２のいずれか１つによって任意に置換された１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニルであって、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２の定義は上で定義した通りであるか、またはｎが１から２０００まで（好ましくは１〜２００、または１〜２０）の整数であるポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎから独立して選択され；
Ｌは、任意に置換された、任意的なフェニル基、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環であり、前記の置換基は、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基（存在する場合）であるか、ハロゲン、−ＯＲ７、−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＯ２、−ＮＲＣＯＲ’、−ＳＲ１０、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、サルファイト−ＳＯ３、バイサルファイト−ＯＳＯ３、−ＳＯ２ＮＲＲ’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ１１、ＯＣＯＲ１１またはＯＣＯＮＲ１１Ｒ１２のうちのいずれか１つで任意に置換された１個から１０個までの炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであって、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２が上で与えられたのと同じ定義を有するか、ｎが１から２０００まで（好ましくは１〜２００、または１〜２０）の整数であるポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎから選択され；任意に、Ｌ自体が、化合物が１つ以下のそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基を有することを条件として、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり；または、それらの薬学的に許容可能な溶媒和化合物、塩、水和物または水和化塩、それらの光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、エナンチオマーまたはこれらの化合物の多形性結晶質構造である。
【０１８９】
１つの好ましい実施形態では、式（Ａ１）または（Ａ２）の薬品について：
ＮとＣの間の二重線
【化６１】
0006049642.tif 000070
は、単結合または二重結合を表し、それが二重結合であるとき、Ｘは存在せず、Ｙは−Ｈであり、そして、それが単結合であるとき、Ｘは−Ｈであるか、化合物をプロドラッグに変換するアミン保護基であることを条件とし；
Ｙは−Ｈ、−ＯＲ、ＮＲ’Ｒ”、サルファイト−ＳＯ３Ｍ、またはバイサルファイト−ＯＳＯ３Ｍから選択され、式中、Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオン（例えば、Ｎａ＋）であり；
Ｒは−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ｎが１から２０００まで（好ましくは１〜２００または１〜２０）の整数であるポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、６個から１０個の炭素原子を有するアリール、３個から１０個の炭素原子を有する複素環から選択され；
ＷはＣ＝Ｏ、ＣＨ２またはＳＯ２であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、−ＮＯ２、またはそれに結合した反応性基を有する前記結合基（存在する場合）から独立して選択され；
Ｒ６は−ＯＲ１８であり、式中、Ｒ１８はＲと同じ定義を有し；
Ｚは、ｎが１、２または３である−（ＣＨ２）ｎ、−ＣＲ１５Ｒ１６、−ＮＲ１７、−Ｏ−または−Ｓ−から選択され、式中、Ｒ１５、Ｒ１６およびＲ１７はそれぞれ、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、ｎが１から２０００まで（好ましくは１〜２００または１〜２０）の整数であるポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、から独立して選択され；
Ｘ’は−ＣＨ２、またはＣ＝Ｏから選択され；
Ｙ’は−Ｏ−、−ＮＲまたは-Ｓであり、式中、Ｒは上記のとおりに定義され；
Ｚ’は−ＣＨ２−または−（ＣＨ２）２−であり；
ＡとＡ’はそれぞれ−Ｏ−であり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルから独立して選択され；
Ｌは、任意に置換された任意的なフェニル基または３個から１０個の炭素原子を有するヘテロ環であり、前記の置換基は、それに結合した反応性基を有する前記結合基（存在する場合）であるか、ハロゲン、−ＯＲ７、−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＯ２、−ＮＲＣＯＲ’、−ＳＲ１０、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、サルファイト−ＳＯ３、バイサルファイト−ＯＳＯ３、−ＳＯ２ＮＲＲ’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ１１、−ＯＣＯＲ１１または−ＯＣＯＮＲ１１Ｒ１２のいずれか１つで任意に置換された１個から１０個までの炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ｎが１から２０００まで（好ましくは１〜２００または１〜２０）の整数であるポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎから選択され；任意に、Ｌ自体は、それに結合した反応性基を有する前記結合基；またはそれらの薬学的に許容可能な溶媒和化合物、塩、水和物または水和化塩、それらの光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、エナンチオマーまたはこれらの化合物の多形性結晶質構造である。
【０１９０】
別の好ましい実施形態では、式（Ａ１）または（Ａ２）の薬品は、式（Ａ４）または（Ａ５）：
【化６２】
0006049642.tif 000071
、
【化６３】
0006049642.tif 000072
の化合物によって表され、
式中、ＮとＣの間の二重線
【化６４】
0006049642.tif 000073
は、単結合または二重結合を表し、それが二重結合であるとき、Ｘは存在せず、Ｙは−Ｈであり、そして、それが単結合であるとき、Ｘは−Ｈであるか、化合物をプロドラッグに変換するアミン保護基であることを条件とし；
Ｙは−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲによって表されるエーテル、−ＮＲ’Ｒ”、サルファイト−ＳＯ３Ｍ、またはバイサルファイト−ＯＳＯ３Ｍから選択され；
Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオン（例えば、Ｎａ＋）であり；
Ｒ、Ｒ’およびＲ”は、１個から１０個までの炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルから選択され；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ２’およびＲ３’のうちの１つが、それに結合した反応性基を有する前記結合基（存在する場合）であり、そして、残りのものが−Ｈ、−ＮＲＣＯＲ’または−ＮＯ２であり；
Ｒ６は-ＯＲであり、式中、Ｒは上記と同じ定義を有し；
Ｚは−ＣＨ２−または-ＮＲであり、式中、Ｒは上記と同じ定義を有し；
Ａは−Ｏ−または−ＮＲ１５であり；
Ｌは、ｎｎが０または１と５の間の整数である−（ＣＨ２）ｎｎ−、または２個から４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型のアルキルもしくはアルケニルであり、前記の置換基はハロゲン、−ＯＲ７、−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＯ２、−ＮＲＣＯＲ’、−ＳＲ１０、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、サルファイト−ＳＯ３、バイサルファイト−ＯＳＯ３、−ＳＯ２ＮＲＲ’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ１１、−ＯＣＯＲ１１、または−ＯＣＯＮＲ１１Ｒ１２から選択され；
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１５は上で与えられたのと同じ定義を有し；
任意に、Ｌ自体は、それに結合した反応性基を有する前記結合基（存在する場合）であり；
Ｌ’、Ｌ’’またはＬ”’のうちの１つが、それに結合した反応性基を有する前記結合基（存在する場合）であり、残りのものが−Ｈであり；好ましくは、Ｌ’は、それに結合した反応性基を有する前記結合基（存在する場合）であり；そして、
Ｇは−ＣＨ−または−Ｎ−、またはそれらの薬学的に許容可能な溶媒和化合物、塩、水和物または水和化塩、それらの光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、エナンチオマーまたはこれらの化合物の多形性結晶質構造である。
【０１９１】
さらに別の好ましい実施形態では、式（Ａ１）または（Ａ２）の化合物は、式（Ａ６）または（Ａ７）：
【化６５】
0006049642.tif 000074
、
【化６６】
0006049642.tif 000075
からの式の化合物によって表され、
式中、ＮとＣの間の二重線
【化６７】
0006049642.tif 000076
は、単結合または二重結合を表し、それが二重結合であるとき、Ｘは存在せず、Ｙは−Ｈであり、そして、それが単結合であるとき、Ｘは−Ｈであるか、化合物をプロドラッグに変換するアミン保護基であることを条件とし；
Ｙは−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲによって表されるエーテル、サルファイト−ＳＯ３、またはバイサルファイト−ＯＳＯ３から選択され；
Ｒは１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルから選択され；
ｎｎは０であるか、１から５までの整数であり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ２’およびＲ３’のうちの１つが、それに結合した反応性基を有する前記結合基（存在する場合）であり、そして、残りのものが−Ｈ、−ＮＲＣＯＲ’または−ＮＯ２であり；
Ｌ’、Ｌ’’またはＬ”’のうちの１つが、それに結合した反応性基を有する前記結合基であり、残りのものが−Ｈである（例えば、Ｌ’が、それに結合した反応性基を有する前記結合基である場合、Ｌ’’とＬ”’は−Ｈである）ことを条件に、Ｌ’、Ｌ’’またはＬ”’のうちの１つが、それに結合した反応性基を有する前記結合基（存在する場合）であり；
Ｇは−ＣＨ−または−Ｎ−、またはそれらの薬学的に許容可能な溶媒和化合物、塩、水和物または水和化塩、それらの光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、エナンチオマーまたはこれらの化合物の多形性結晶質構造である。
【０１９２】
別の特定の実施形態では、式（Ａ４）および（Ａ６）のＲ２、Ｒ３、Ｒ２’およびＲ３’のうちの１つは、それに結合した反応性基を有する前記結合基（存在する場合）であり、式−Ｗ’−Ｒｘ−Ｖ−Ｒｙ−Ｊによって表され、そして、残りのものが−Ｈであり；式（Ａ５）および（Ａ７）のＬ’’とＬ’’’は−Ｈであり、そして、Ｌ’は、それに結合した反応性基を有する前記結合基（存在する場合）であり、式
−Ｗ’−Ｒｘ−Ｖ−Ｒｙ−Ｊ
によって表され、
式中、Ｗ’は存在しないか、−ＣＲｃＲｅ−、−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり；
Ｒｘは存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
Ｖは存在しないか、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−、−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｓ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）−、アミノ酸、または２〜８つのアミノ酸を有するペプチドであり；
Ｒｙは存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルであり；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキルであり；
Ｒｅは、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｃであり、
ｎは１から２４までの整数であり； そして、
Ｊは、第４の特定の実施形態に先に記載されたとおりである。
【０１９３】
好ましくは、Ｒｃは−Ｈまたは−Ｍｅであり；Ｒｅは１〜６個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｃであり；ｎは２から８までの整数であり；そして、可変項目の残りのものは第４の特定の実施形態に先に記載されたとおりである。
【０１９４】
別の好ましい実施形態では、Ｖはアミノ酸または２〜８つのアミノ酸を有するペプチドである。より好ましくは、Ｖはバリン‐シトルリン、グリシン‐グリシン‐グリシン、またはアラニン‐ロイシン‐アラニン‐ロイシンである。
【０１９５】
好ましくは、Ｊは、上述のとおりの−ＳＨ、−ＳＳＲｄまたは−ＣＯＥである。
【０１９６】
別の特定の実施形態では、式（Ａ４）および（Ａ６）のＲ２、Ｒ３、Ｒ２’およびＲ３’のうちの１つが、それに結合した反応性基を有する前記結合基（存在する場合）であり、式−Ｗ’−Ｒｘ−Ｓ−Ｚｓによって表され；式（Ａ５）および（Ａ７）のＬ’’とＬ’’’は−Ｈであり、そして、Ｌ’は−Ｗ’−Ｒｘ−Ｓ−Ｚｓによって表され、可変項目は第８および第９の特定の実施形態に記載されるとおりである。
【０１９７】
別の実施形態では、式（Ａ１）〜（Ａ７）の化合物（イミン反応性試薬とのプレインキュベーションを含む、または含まない）は、それに結合した反応性基を有する前記結合基が未だ存在しない場合、上述した二官能性架橋試薬とさらに反応させて、本発明の方法において使用することができる、それに結合した反応性基を有する前記結合基を担持するイミン含有薬を形成することができる。
【０１９８】
ある特定の実施形態では、本発明の方法において使用することができる、それに結合した反応性基を有する前記結合基を担持するイミン含有薬は、以下の式：
【化６８】
0006049642.tif 000077
のうちのいずれか１つによって表され、
式中、「リンカー」は、上述の（第９の特定の実施形態における）式（ａ１）、（ａ２）、（ａ３）、（ａ４）、（ａ５）、（ａ６）、（ａ７）または（ａ８）によって表され；
ｑは１から５までの整数であり；
ｎは２から６までの整数であり；
Ｄは−Ｈまたは−ＳＯ３Ｍであり；
Ｍは−Ｈ、またはＮａ＋もしくはＫ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンであり；そして、可変項目の残りのものは、第８または第９の特定の実施形態に記載されるとおりである。
【０１９９】
好ましくは、ｑは２であり、そして、ｎは４である。
【０２００】
好ましい実施形態では、リンカーは、上述の式（ａ１）、（ａ４）、（ａ５）、（ａ９）または（ａ１０）によって表される。
【０２０１】
ある特定の実施形態では、直ぐ上に記載される式（Ａ８）の化合物について、可変項目は以下のとおりである。
Ｗ’は−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（ＣＯＲｅ）−、−Ｓ−または−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｒｘは存在しないか、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルから選択され；
Ｒｅは、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは−Ｈ、第一級、第二級もしくは第三級アミノ基を任意に担持する１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり；
ｎは１から２４までの整数であり；そして、可変項目の残りのものは直ぐ上の実施形態に先に記載されたとおりである。
【０２０２】
好ましくは、Ｒｋは−Ｈまたは−Ｍｅであり、そして、ｎは２から８までの整数である。好ましくは、Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルである。
【０２０３】
別の好ましい実施形態では、上で示された式（ａ１）、（ａ４）、（ａ５）、（ａ１０）および（ａ１１）から選択されるいずれか１つの式によってリンカーが表され；そして、可変項目の残りのものは第９の特定の実施形態に先に記載されたとおりである。
【０２０４】
ある特定の実施形態では、上の実施形態に記載される式（Ａ８）の化合物について、可変項目は以下のとおりである。
Ｘ’とＹ’は共に−Ｈであり；
ＡとＡ’は共に−Ｏ−であり；
Ｒ６は−ＯＭｅであり；
Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；そして、可変項目の残りのものは上で記載されたとおりである。
【０２０５】
好ましくは、Ｒｘは−（ＣＨ２）ｐ−（ＣＲｆＲｇ）−であり、式中、ＲｆとＲｇはそれぞれ、−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキルから独立して選択され；ｐは０、１、２または３である。より好ましくは、ＲｆとＲｇは同一または異なっており、そして、−Ｈおよび−Ｍｅから選択され、そして、ｐは１である。
【０２０６】
別の好ましい実施形態では、上で示された式（ａ１）、（ａ４）、（ａ５）、（ａ１０）および（ａ１１）から選択されるいずれか１つの式によってリンカーが表され；そして、可変項目の残りのものは上述のとおりである。
【０２０７】
別の好ましい実施形態では、式（Ａ１）、（Ａ２）または（Ａ３）の薬品は、表１１〜１３に示される化合物のうちのいずれか１つであり、そして、本発明の方法によって作製され得る複合体は表１４に示される複合体のうちのいずれか１つである。
【表９】
0006049642.tif 000078
【表１０】
0006049642.tif 000079
【表１１】
0006049642.tif 000080
【表１２】
0006049642.tif 000081
【０２０８】
表１１〜１３のいずれの化合物および表１４のいずれの複合体も対象イミン反応性試薬と反応したそのイミン結合のうちの少なくとも１つを有し、そうして、バイサルファイト付加物などの付加物を形成することができる。
【０２０９】
１つの実施形態では、結合部分を担持するイミン含有薬は、上述の反応性エステル基、チオールまたはチオール反応性基を有するものである。
【０２１０】
あるいは、上述の薬品は二官能性架橋剤とさらに反応して、結合部分を担持する薬品を形成することができる。記載のいずれの二官能性架橋剤も使用することができる。
【０２１１】
別の好ましい実施形態では、本発明で使用することができる薬品は、表１５の化合物のうちのいずれか１つである。
【表１３】
0006049642.tif 000082
【０２１２】
細胞結合剤
本発明の複合体の治療薬としての有効性は適切な細胞結合剤の注意深い選択に依存する。細胞結合剤は現在公知の、または知られることになるあらゆる種類のものでよく、そして、それにはペプチドと非ペプチドが含まれる。一般に、これらは抗体（特に、モノクローナル抗体）、リンホカイン、ホルモン、成長因子、ビタミン（例えば、それの細胞表面受容体、例えば、葉酸受容体に結合することができる葉酸など）、栄養輸送分子（例えば、トランスフェリン）、または他の任意の細胞結合分子もしくは物質であり得る。
【０２１３】
ある特定の実施形態では、前記細胞結合剤はタンパク質またはポリペプチド、またはタンパク質もしくはポリペプチドを含む化合物である。好ましくは、前記のタンパク質またはポリペプチドは、側鎖−ＮＨ２基を有する１つ以上のリシン残基を含む。あるいは、または、加えて、前記のタンパク質またはポリペプチドは１つ以上のシステイン残基を含む。システイン残基の側鎖−ＳＨ基は完全なものであっても、還元され得るジスルフィド結合中のものであってもよい。好ましくは、ジスルフィド結合の還元は前記のタンパク質またはポリペプチドの細胞結合機能に有意な負の影響を与えない（例えば、抗体またはその抗原結合部分の場合、ジスルフィド結合の還元が軽鎖／重鎖の解離を有意に増加することがない）。
【０２１４】
リシン側鎖−ＮＨ２基および／またはシステイン側鎖−ＳＨ基は前記リンカーに共有結合することができ、それは次に本発明の二量体化合物に結合し、そうして前記細胞結合剤を本発明の二量体化合物に複合体化する。各タンパク質系細胞結合剤は、二官能性架橋剤を介した本発明の化合物の連結に利用できる、複数のリシン側鎖−ＮＨ２基および／またはシステイン側鎖−ＳＨ基を含み得る。
【０２１５】
使用することができる細胞結合剤のより具体的な例には、
ポリクローナル抗体；
モノクローナル抗体；
抗体断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ミニボディ、ジアボディ、トリボディ、テトラボディ（Ｐａｒｈａｍ，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３１：２８９５−２９０２  （１９８３）；  Ｓｐｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １１３：４７０−４７８  （１９７４）；  Ｎｉｓｏｎｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ８９：２３０−２４４  （１９６０），  Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｍｏｌ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．，  ７：  ２４８６−２４９７  （２００８），  Ｃａｒｔｅｒ，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｓ．，  ６：  ３４３−３５７  （２００６））；
インターフェロン（例えば、α、β、γ）；
リンホカイン、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６；
ホルモン、例えば、インスリン、ＴＲＨ（チロトロピン放出ホルモン）、ＭＳＨ（メラニン細胞刺激ホルモン）、アンドロゲンおよびエストロゲンなどのステロイドホルモン；
成長因子およびコロニー刺激因子、例えば、ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＦＧＦ、ＶＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦ（Ｂｕｒｇｅｓｓ，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ５：１５５−１５８  （１９８４））；
トランスフェリン（Ｏ’Ｋｅｅｆｅ  ｅｔ  ａｌ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６０：９３２−９３７  （１９８５））；
ビタミン、例えば、葉酸；
ＩＩＩ型フィブロネクチン（ＦＮ３）リピートのコンセンサス配列に基づく足場タンパク質（セントリンとしても知られる。参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１０／０２５５０５６号を参照のこと）；
デザイナーアンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ；参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００４０１３２０２８号；同第２００９００８２２７４号；同第２０１１０１１８１４６号；同第２０１１０２２４１００号）、参照により本明細書に組み込まれるＣ．Ｚａｈｎｄ  ｅｔ  ａｌ．２０１０，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，７０；１５９５−１６０５）；および
フィブロネクチンドメイン足場タンパク質（Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ：参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００７００８２３６５号；同第２００８０１３９７９１号）
が含まれる。
【０２１６】
モノクローナル抗体技術によって、特定のモノクローナル抗体の形態の非常に特異的な細胞結合剤を作製することが可能になる。目的の抗原、例えば、完全な標的細胞、標的細胞から単離した抗原、ウイルス全体、弱毒化したウイルス全体、およびウイルスコートタンパク質などのウイルスタンパク質を用いてマウス、ラット、ハムスターまたは他の任意の哺乳類動物を免疫することによって産生されるモノクローナル抗体を作製する技術が当技術分野において特によく知られている。鋭敏化ヒト細胞も使用することができる。モノクローナル抗体を作製する別の方法は、ｓｃＦｖ（単鎖可変領域）、具体的には、ヒトｓｃＦｖのファージライブラリーの使用である（例えば、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、米国特許第５，８８５，７９３号および同第５，９６９，１０８号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、国際公開第９２／０１０４７号；Ｌｉｍｉｎｇら、国際公開第９９／０６５８７号を参照のこと）。さらに、キメラ抗体およびヒト化抗体を使用することができるように、米国特許第５，６３９，６４１号に開示される表面付替抗体（ｒｅｓｕｒｆａｃｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）を使用することができる。適切な細胞結合剤の選択は、標的とされる特定の細胞集団に依存する、選択の問題であるが、適切なものが利用できる場合は、一般に、ヒトモノクローナル抗体が好ましい。
【０２１７】
例えば、モノクローナル抗体ＭＹ９はＣＤ３３抗原に特異的に結合するＩｇＧ１抗体であり｛Ｊ．Ｄ．  Ｇｒｉｆｆｉｎ  ｅｔ  ａｌ  ８  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓ．，  ５２１  （１９８４）｝、そして、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の疾患におけるように、標的細胞がＣＤ３３を発現する場合、それを使用することができる。細胞結合剤は、特異的または非特異的に細胞に結合することができる任意の化合物であり得る。一般に、これらは抗体（特に、モノクローナル抗体および抗体断片）、インターフェロン、リンホカイン、ホルモン、成長因子、ビタミン、栄養輸送分子（例えば、トランスフェリン）、または他の任意の細胞結合分子もしくは物質であり得る。
【０２１８】
細胞結合剤が抗体である場合、それは、ポリペプチドであって、成長因子などのリガンドであり得る抗原に結合する。例示的な抗原には、レニン；ヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモンを含む成長ホルモン；成長ホルモン放出因子；副甲状腺ホルモン；甲状腺刺激ホルモン；リポタンパク質；α‐１‐アンチトリプシン；インスリンＡ鎖；インスリンＢ鎖；プロインスリン；濾胞刺激ホルモン；カルシトニン；黄体形成ホルモン；グルカゴン；ｖｍｃ因子、第ＩＸ因子、組織因子（ＴＦ）およびヴォン・ヴィレブランド因子などの凝血因子；プロテインＣ；心房ナトリウム排出増加因子などの抗凝血因子；肺表面活性剤；ウロキナーゼ、またはヒト尿もしくは組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ‐ＰＡ）などのプラスミノーゲン活性化因子；ボンベシン；トロンビン；造血性成長因子；腫瘍壊死因子‐αおよび‐β；エンケファリナーゼ；ＲＡＮＴＥＳ（ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｎｏｒｍａｌｌｙ  Ｔ‐ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ）；ヒトマクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ‐１‐α）；ヒト血清アルブミンなどの血清アルブミン；ミュラー管抑制因子；リラキシンＡ鎖；リラキシンＢ鎖；プロリラキシン；マウスゴナドトロピン‐関連ペプチド；β‐ラクタマーゼなどの微生物性タンパク質；ＤＮａｓｅ；ＩｇＥ；ＣＴＬＡ‐４などの細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ）；インヒビン；アクチビン；血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）；ホルモンまたは成長因子の受容体；プロテインＡまたはＤ；リウマチ因子；骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン‐３、‐４、‐５もしくは‐６（ＮＴ‐３、ＮＴ４、ＮＴ‐５もしくはＮＴ‐６）などの神経栄養因子、またはＮＧＦ‐βなどの神経成長因子；血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）；ａＦＧＦおよびｂＦＧＦなどの線維芽細胞増殖因子；線維芽細胞増殖因子受容体２（ＦＧＦＲ２）；上皮成長因子（ＥＧＦ）；ＴＧＦ‐β１、ＴＧＦ‐β２、ＴＧＦ‐β３、ＴＧＦ‐β４またはＴＧＦ‐β５を含む、ＴＧＦ‐αおよびＴＧＦ‐βなどのトランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）；インスリン様成長因子‐Ｉおよび‐ＩＩ（ＩＧＦ‐ＩおよびＩＧＦ‐ＩＩ）；ｄｅｓ（１‐３）‐ＩＧＦ‐Ｉ（脳ＩＧＦ‐Ｉ）、インスリン様成長因子結合タンパク質、ＥｐＣＡＭ、ＧＤ３、ＦＬＴ３、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＳＴＥＡＰ、ＣＥＡ、ＴＥＮＢ２、ＥｐｈＡ受容体、ＥｐｈＢ受容体、葉酸受容体、ＦＯＬＲ１、メソテリン、ｃｒｉｐｔｏ、αｖβ６、インテグリン、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ、トランスフェリン受容体、ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、ＩＲＴＡ５；ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ１１、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５９、ＣＤ７０、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ１０３、ＣＤ１０５、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤ１５２などのＣＤタンパク質、または米国特許出願公開第２００８０１７１０４０号もしくは米���特許出願公開第２００８０３０５０４４号に記載され、参照によりそれらの全体が組み込まれる、１つ以上の腫瘍関連抗原もしくは細胞表面受容体に結合する抗体；骨誘導因子；免疫毒素；骨形成タンパク質（ＢＭＰ）；インターフェロン‐α、‐β、および‐γなどのインターフェロン；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、Ｍ‐ＣＳＦ、ＧＭ‐ＣＳＦおよびＧ‐ＣＳＦ；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ‐１〜ＩＬ‐１０；スーパーオキサイド・ディスムターゼ；Ｔ細胞受容体；表面膜タンパク質；崩壊促進因子；例えば、ＨＩＶの外被の一部などのウイルス抗原；輸送タンパク質；ホーミング受容体；アドレシン；調節性タンパク質；ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１８、ＩＣＡＭ、ＶＬＡ‐４およびＶＣＡＭなどのインテグリン；ＨＥＲ２、ＨＥＲ３またはＨＥＲ４受容体などの腫瘍関連抗原；エンドグリン、ｃ‐Ｍｅｔ、１ＧＦ１Ｒ、ＰＳＧＲ、ＮＧＥＰ、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＬＧＲ５、Ｂ７Ｈ４、ならびに前述のポリペプチドのいずれかの断片などの分子が含まれる。
【０２１９】
さらに、骨髄細胞に結合するＧＭ‐ＣＳＦを、急性骨髄性白血病による疾患性細胞に対する細胞結合剤として使用することができる。移植片拒絶の防止のため、移植片対宿主病の治療および予防のため、ならびに急性Ｔ細胞白血病の治療のため、活性化Ｔ細胞に結合するＩＬ‐２を使用することができる。黒色腫に対する抗体を使用することができるように、メラニン形成細胞に結合するＭＳＨを黒色腫の治療のために使用することができる。卵巣腫瘍および他の腫瘍で発現する葉酸受容体を標的とするために葉酸を使用することができる。肺および頭部頸部などの扁平癌を標的とするために上皮成長因子を使用することができる。神経芽腫および他の種類の腫瘍を標的とするためのソマトスタチンを使用することができる。
【０２２０】
細胞結合剤として、それぞれ、エストロゲン（もしくはエストロゲン類似体）またはアンドロゲン（もしくはアンドロゲン類似体）を用いて乳腺および精巣の癌を標的とすることに成功することができる。
【０２２１】
１つの実施形態では、前記細胞結合剤はヒト化モノクローナル抗体である。別の実施形態では、前記細胞結合剤は、米国特許第７，３４２，１１０号および同第７，５５７，１８９号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるｈｕＭｙ９‐６、または他の関連抗体である。別の実施形態では、前記細胞結合剤は、米国特許仮出願第６１／３０７，７９７号、同第６１／３４６，５９５号、同第６１／４１３，１７２号および米国特許出願第１３／０３３，７２３号（米国特許出願公開第２０１２‐０００９１８１Ａ１号として公開された）に記載される抗葉酸受容体抗体である。これらの刊行物全ての教示の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０２２２】
ある特定の実施形態では、前記細胞結合剤は、米国特許第７，３４２，１１０号および同第７，５５７，１８９号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるｈｕＭｙ９‐６またはその関連抗体など、本明細書において開示される抗体と抗原結合にとって重要な配列を共有するモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であり得る。これらの派生抗体は、本明細書に記載される抗体と比較して実質的に同じ、または同一の（１）軽鎖および／もしくは重鎖ＣＤＲ３領域；（２）軽鎖および／もしくは重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域；または（３）軽鎖および／もしくは重鎖領域を有し得る。これらの領域内の配列は、ＣＤＲ領域内の置換を含む、保存的アミノ酸置換を含有し得る。好ましくは、１、２、３、４または５つ以下の保存的置換が存在する。ある特定の実施形態では、派生抗体は、本明細書に記載される抗体に少なくとも約９０％、９５％、９９％または１００％同一である軽鎖領域および／または重鎖領域を有する。これらの派生抗体は、本明細書に記載される抗体と比較して実質的に同じ結合特異性および／または標的抗原に対する親和性を有し得る。好ましくは、派生抗体のＫｄ値および／またはｋｏｆｆ値は本明細書に記載される抗体の１０倍以内（高いか低い）、５倍以内（高いか低い）、３倍以内（高いか低い）、または２倍以内（高いか低い）である。これらの派生抗体は完全ヒト抗体、またはヒト化抗体、またはキメラ抗体であり得る。派生抗体は、当技術分野で認められる方法に従って作製され得る。
【０２２３】
１つの実施形態では、抗葉酸受容体抗体は、ヒト葉酸受容体１に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体は（ａ）ＧＹＦＭＮ（配列番号１）を含む重鎖ＣＤＲ１；ＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＸａａ１ＦＸａａ２Ｘａａ３（配列番号２）を含む重鎖ＣＤＲ２；およびＹＤＧＳＲＡＭＤＹ（配列番号３）を含む重鎖ＣＤＲ３；ならびに（ｂ）ＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨ（配列番号４）を含む軽鎖ＣＤＲ１；ＲＡＳＮＬＥＡ（配列番号５）を含む軽鎖ＣＤＲ２；およびＱＱＳＲＥＹＰＹＴ（配列番号６を含む軽鎖ＣＤＲ３を含み；式中、Ｘａａ１はＫ、Ｑ、ＨおよびＲから選択され；Ｘａａ２はＱ、Ｈ、ＮおよびＲから選択され；そして、Ｘａａ３はＧ、Ｅ、Ｔ、Ｓ、ＡおよびＶから選択される。好ましくは、前記の重鎖ＣＤＲ２配列はＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号７）を含む。
【０２２４】
別の実施形態では、抗葉酸受容体抗体は、ヒト葉酸受容体１に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＦＭＮＷＶＫＱＳＰＧＱＳＬＥＷＩＧＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＮＴＡＨＭＥＬＬＳＬＴＳＥＤＦＡＶＹＹＣＴＲＹＤＧＳＲＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号８）
というアミノ酸配列を有する重鎖を含む。
【０２２５】
別の実施形態では、抗葉酸抗体は、２０１０年４月７日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ‐１０７７２およびＰＴＡ‐１０７７３または１０７７４を有するプラスミドＤＮＡによってコードされるヒト化抗体またはその抗原結合断片である。
【０２２６】
別の実施形態では、抗葉酸受容体抗体は、ヒト葉酸受容体１に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、
ＤＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＡＶＳＬＧＱＰＡＩＩＳＣＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨＷＹＨＱＫＰＧＱＱＰＲＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＡＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＫＴＤＦＴＬＮＩＳＰＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＲＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９）、または、ＤＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＡＶＳＬＧＱＰＡＩＩＳＣＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨＷＹＨＱＫＰＧＱＱＰＲＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＡＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＫＴＤＦＴＬＴＩＳＰＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＲＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１０）
というアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【０２２７】
別の実施形態では、抗葉酸受容体抗体は、ヒト葉酸受容体１に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。好ましくは、前記の抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号１０のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む（ｈｕＦＯＬＲ１）。
【０２２８】
別の実施形態では、抗葉酸受容体抗体は、２０１０年４月７日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ‐１０７７２およびＰＴＡ‐１０７７３または１０７７４を有するプラスミドＤＮＡによってコードされるヒト化抗体またはその抗原結合断片である。
【０２２９】
別の実施形態では、抗葉酸受容体抗体は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＦＭＮＷＶＫＱＳＰＧＱＳＬＥＷＩＧＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＮＴＡＨＭＥＬＬＳＬＴＳＥＤＦＡＶＹＹＣＴＲＹＤＧＳＲＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１１）に対して少なくとも約９０％、９５％、９９％または１００％同一である重鎖可変ドメイン、および
ＤＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＡＶＳＬＧＱＰＡＩＩＳＣＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨＷＹＨＱＫＰＧＱＱＰＲＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＡＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＫＴＤＦＴＬＮＩＳＰＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＲＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１２）；または、ＤＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＡＶＳＬＧＱＰＡＩＩＳＣＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨＷＹＨＱＫＰＧＱＱＰＲＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＡＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＫＴＤＦＴＬＴＩＳＰＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＲＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１３）に対して少なくとも約９０％、９５％、９９％または１００％同一である軽鎖可変ドメインを含むヒト化抗体またはその抗原結合断片である。
【０２３０】
細胞結合剤、例えば抗体を、Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミド基（ＮＨＳ基）、チオール反応性マレイミド、ビニルピリジン、ビニルスルホン、ビニルスルホンアミドもしくはハロアセチル系基などのアミン反応性基、またはチオール基を担持するヘテロ二官能性架橋剤を用いて修飾することができる。
【０２３１】
ａ）２‐イミノチオランもしくはホモシステインチオラクトンなどのチオール生成性試薬を用いる抗体の修飾、またはｂ）ＳＰＰ、ＳＰＤＰ、ＳＰＤＢ、スルフォ‐ＳＰＤＢなどのジスルフィド含有ヘテロ二官能性架橋剤との反応とそれに続く、遊離チオールを生成するためのＤＴＴもしくはＴＣＥＰを用いるジスルフィド結合の還元、ｃ）システイン操作抗体（米国特許出願公開第２００７／００９２９４０Ａ１号、米国特許出願公開第２０１０／０００３７６６Ａ１号、米国特許第７７２３４８５Ｂ２号）など、非天然システイン残基を組み込むための突然変異形成、またはｄ）本来のジスルフィド結合の還元（ｄｅｌ  Ｒｏｓａｒｉｏ，  Ｒ．Ｂ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  Ｓｕｐｐｌ．  １９９０，  ５０，  ８０４ｓ−８０８ｓ）を含む、当技術分野において公知の多数の方法によって抗体にチオール残基を導入することができる。
【０２３２】
抗体中のマレイミド、ビニルピリジン、ビニルスルホン、ビニルスルホンアミドまたはハロアセチル系基などのチオール反応性基は、（ＳＰＤＢ、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（４‐ニトロピリジル‐２‐ジチオ）ブタノエート、スルフォ‐ＳＭＣＣ、ＳＭＣＣ、ＬＣ‐ＳＭＣＣ、ＫＭＵＡ、ＢＭＰＳ、ＧＭＢＳ、スルフォ‐ＧＭＢＳ、ＥＭＣＳ、スルフォ‐ＥＭＣＳ、ＡＭＡＳ、ＳＶＳＢ、ＳＰＰ、ｎ＝１〜２４、好ましくは２、４、８、１２および２４であるＮＨＳ‐（ＰＥＧ）ｎ‐ｍａｌを含むが、これらに限定されない）チオール反応性基を担持するヘテロ二官能性架橋剤を用いて抗体を修飾することによって導入され得る。マレイミド系部分を含む架橋剤にはＮ‐スクシンイミジル４‐（マレイミドメチル）シクロヘキサン‐カルボキシラート（ＳＭＣＣ）、ＳＭＣＣの「長鎖」類似体（ＬＣ‐ＳＭＣＣ）であるＮ‐スクシンイミジル‐４‐（Ｎ‐マレイミドメチル）‐シクロヘキサン‐１‐カルボキシ‐（６‐アミドカプロエート）、κ‐マレイミドウンデカノイン酸Ｎ‐スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ‐マレイミド酪酸Ｎ‐スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε‐マレイミドカプロン酸Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ‐マレイミドベンゾイル‐Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ‐（α‐マレイミドアセトキシ）‐スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル‐６‐（β‐マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ‐スクシンイミジル４‐（ｐ‐マレイミドフェニル）‐ブチレート（ＳＭＰＢ）、およびＮ‐（ｐ‐マレイミドフェニル）イソシアネート（ＰＭＰＩ）が含まれる。ビニルピリジンを含有するチオール反応性化合物が記載されている（Ｆｒｉｅｄｍａｎ  Ｍ．  ｅｔ．  Ａｌ．  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．  １９７４，  ６，  １８３−１８５；  Ｍａｋ  Ａ．  ｅｔ．  Ａｌ．  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １９７８，  ８４，  ４３２−４４０）。ビニルスルホン部分を含有するチオール反応性化合物が記載されている（Ｍａｓｒｉ  Ｍ．Ｓ．  Ｊ．  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍ．，  １９８８，  ７，  ４９−５４；  Ｍｏｒｐｕｒｇｏ，  Ｍ．  ｅｔ．  Ａｌ．  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．  １９９６，  ７，  ３６３−３６８）。ハロアセチル系部分を含む架橋試薬にはＮ‐スクシンイミジル‐４‐（ヨードアセチル）‐アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ‐スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ‐スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）、およびＮ‐スクシンイミジル３‐（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）が含まれる。
【０２３３】
当技術分野において公知の任意の適切な方法、例えば、ゲル濾過、ＴＦＦまたはイオン交換クロマトグラフィーまたは親和性クロマトグラフィーによって修飾型抗体を精製することができる。
【０２３４】
本明細書および以下の実施例で引用される全ての参照文献は、それらの全体が参照により明確に組み込まれる。
【０２３５】
細胞結合剤‐薬品複合体
本発明は、ジスルフィドリンカー、チオエーテルリンカー、アミド結合リンカー、ペプチダーゼ不安定性リンカー、酸不安定性リンカー、エステラーゼ不安定性リンカーを含むが、これらに限定されない様々なリンカーを介して本発明の１つ以上の細胞傷害性化合物に結合した細胞結合剤を含む細胞結合剤‐薬品複合体を作製するための改善された方法を提供する。
【０２３６】
本発明の方法を用いて作製され得る代表的な複合体には抗体／細胞傷害性化合物、抗体断片／細胞傷害性化合物、上皮成長因子（ＥＧＦ）／細胞傷害性化合物、メラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）／細胞傷害性化合物、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）／細胞傷害性化合物、ソマトスタチン／細胞傷害性化合物、葉酸／細胞傷害性化合物、エストロゲン／細胞傷害性化合物、エストロゲン類似体／細胞傷害性化合物、アンドロゲン／細胞傷害性化合物およびアンドロゲン類似体／細胞傷害性化合物が含まれる。代表的な葉酸／細胞傷害性化合物複合体は以下に図示されるが、２つの薬品単量体のうちの一方のイミン結合に任意的な−ＳＯ３Ｎａ付加物を有する。この複合体の代表的な合成スキームは図２６に示される。
【化６９】
0006049642.tif 000083
【０２３７】
好ましい実施形態では、本発明は、インドリノベンゾジアゼピン二量体化合物（例えば、式（Ｉｂ’）、（ＩＩｂ’）、（Ｉａｂ’）、（ＩＩＡｂ’）、（ＩＢｂ’）、（ＩＩＢｂ’）、（ＸＩＩＩｂ’）、（Ｘｂ’）など）および共有結合を介して結合した前記細胞結合剤を含む複合体を作製する方法を提供する。多数の方法で腫瘍／望まれない増殖細胞の部位で前記リンカーが切断されて、その標的に細胞傷害性薬剤を送達させることができる。例えば、低ｐＨ（ヒドラゾン）、還元的環境（ジスルフィド）、タンパク質分解（アミド／ペプチド結合）によって、または酵素反応（エステラーゼ／グリコシダーゼ）を介して前記リンカーを切断することができる。
【０２３８】
好ましい態様において、本発明の方法によって作製することができる代表的な細胞傷害性複合体は抗体／インドリノベンゾジアゼピン二量体化合物、抗体断片／インドリノベンゾジアゼピン二量体化合物、上皮成長因子（ＥＧＦ）／インドリノベンゾジアゼピン二量体化合物、メラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）／インドリノベンゾジアゼピン二量体化合物、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）／インドリノベンゾジアゼピン二量体化合物、ソマトスタチン／インドリノベンゾジアゼピン二量体化合物、葉酸／インドリノベンゾジアゼピン二量体化合物、エストロゲン／インドリノベンゾジアゼピン二量体化合物、エストロゲン類似体／インドリノベンゾジアゼピン二量体化合物、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）阻害剤／インドリノベンゾジアゼピン二量体化合物、マトリプテース阻害剤／インドリノベンゾジアゼピン二量体化合物、デザインド・アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）／インドリノベンゾジアゼピン二量体化合物、アンドロゲン／インドリノベンゾジアゼピン二量体化合物、およびアンドロゲン類似体／インドリノベンゾジアゼピン二量体化合物である。
【０２３９】
したがって、第１４の特定の実施形態では、本発明の方法は、細胞傷害性化合物と細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体であって、結合基を介して前記ＣＢＡに前記細胞傷害性化合物が共有結合し、そして、前記複合体の細胞傷害性化合物と結合基部分が以下の式：
【化７０】
0006049642.tif 000084
、
【化７１】
0006049642.tif 000085
のうちのいずれか１つ、または薬学的に許容可能なその塩によって表され、
式中、Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；好ましくは、Ｙはバイサルファイト、ハイドロサルファイトもしくはメタバイサルファイトの付加物、またはそれらの塩（例えば、ナトリウム塩）であり；
Ｘ’は−Ｈ、アミン保護基、前記結合基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は−Ｈ、オキソ基、前記結合基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキル、または前記結合基であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’および前記の結合基からなる群より独立して選択され；
Ｍは−Ｈ、またはＮａ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンであり；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキル、または前記結合基であり；
ｎは１から２４までの整数であり；
Ｗはから選択されＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、ハロゲンまたは前記結合基であり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され、
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、前記結合基、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、前記のアルキルまたはアルケニルは前記結合基によって任意に置換されており；前記結合基を含み得る置換基でフェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換され得る、
前記複合体を作製する。
【０２４０】
代表的な複合体は以下に提示される（「Ａｂ」は抗体などのＣＢＡを表す）。
【化７２】
0006049642.tif 000086
【０２４１】
ある特定の実施形態では、Ｙは−ＳＯ２Ｍ、−ＳＯ３Ｍまたは−ＯＳＯ３Ｍである。
【０２４２】
ある特定の実施形態では、本発明の方法によって合成され得る複合体には以下のもの：
【化７３】
0006049642.tif 000087
【化７４】
0006049642.tif 000088
が含まれ、式中、ＣＢＡは前記細胞結合剤であり、ｒは１から１０までの整数であり、Ｙは−Ｈ、バイサルファイト、ハイドロサルファイト、メタバイサルファイト、もしくはそれらの塩の付加物、または−ＳＯ３Ｍであり、そして、Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである。
【０２４３】
ある特定の実施形態では、Ｌは存在しないか、任意に置換されたフェニル基および任意に置換されたピリジル基から選択され、前記フェニル基と前記ピリジル基は前記結合基を担持し、または、Ｌは前記結合基を担持するアミン基（すなわち、−Ｎ（結合基）−）であるか、または、Ｌは、１〜６個の炭素原子を有し、そして、前記結合基を担持する直鎖、分岐もしくは環状アルキルもしくはアルケニルである。
【０２４４】
第１５の特定の実施形態では、前記結合基に結合した細胞傷害性化合物は以下の式：
【化７５】
0006049642.tif 000089
または
【化７６】
0006049642.tif 000090
のうちのいずれか１つによって表され、
式中、Ｌ’、Ｌ’’およびＬ’’’は同一または異なっており、そして、Ｌ’、Ｌ’’およびＬ’’’のうちの１つだけが前記結合基であることを条件に、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３Ｍ、スルファート−ＯＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’および前記結合基から独立して選択され；そして、Ｇは−ＣＨ−または−Ｎ−から選択される。残りの基は第１４の特定の実施形態に先に記載されるとおりである。
【０２４５】
ある特定の実施形態では、Ｌ’、Ｌ’’またはＬ’’’のうちの１つが前記結合基であり、残りが−Ｈである。好ましくは、Ｌ’は前記結合基であり、そして、Ｌ’’とＬ’’’は−Ｈである。
【０２４６】
ある特定の実施形態では、ＡとＡ’が共に−Ｏ−であり、Ｒ６は−ＯＭｅであり、そして、Ｇは−ＣＨ−である。
【０２４７】
第１６の特定の実施形態では、Ｌ’は以下の式：
−Ｗ’−Ｒｘ−Ｖ−Ｒｙ−Ｊ
によって表され：
式中、Ｗ’とＶは同一または異なっており、そして、それぞれ独立して、存在しないか、−ＣＲｅＲｅ’−、−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−、−ＳＳ−または−Ｃ（＝Ｏ）−、またはアミノ酸、または２〜８つのアミノ酸を有するペプチドから選択され；
ＲｘとＲｙは同一または異なっており、そして、それぞれ独立して、存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、６〜１０個の炭素原子を担持するアリール、またはＯ、ＮもしくはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を担持する３員〜８員の複素環であり；
ＲｅとＲｅ’は同一または異なっており、そして、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋから選択され、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；好ましくは、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；
ｎは１から２４までの整数であり；そして、
Ｊは前記ＣＢＡに共有結合し、そして、スクシンイミド、アセトアミド、−Ｓ−、−ＳＳ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ（Ｍｅ）Ｓ−、−Ｃ（Ｍｅ）２Ｓ−、−ＮＲｃ１−、−ＣＨ２ＮＲｃ１−、−ＮＲｃ１Ｎ−および−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され、式中、Ｒｃ１は−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルである。
【０２４８】
ある特定の実施形態では、Ｊは−Ｓ−、−ＳＳ−、スクシンイミドまたは−Ｃ（＝Ｏ）−である。
【０２４９】
ある特定の実施形態では、Ｒｅ’は−Ｈまたは−Ｍｅであり；Ｒｅは１〜６個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり；ｎは２から８までの整数であり；そして、Ｒｋは−Ｈ、−Ｍｅまたは−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＭｅ２であり、そして、可変項目の残りのものは第１５の特定の実施形態に先に記載されたとおりである。
【０２５０】
ある特定の実施形態では、Ｖはアミノ酸または２〜８つのアミノ酸を有するペプチドである。
【０２５１】
ある特定の実施形態では、Ｖがバリン−シトルリン、グリシン−グリシン−グリシンまたはアラニン‐ロイシン‐アラニン‐ロイシンである。
【０２５２】
ある特定の実施形態では、
Ｗ’は−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−または−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−であり；
ＲｅはＨ、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキル、またはｒ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり；
Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；
Ｖは存在しないか、−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｓ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−であり；
Ｒｙは存在しないか、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；そして、
Ｊは−Ｓ−、−ＳＳ−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、そして、残りの基は第１６の特定の実施形態で定義した通りである。
【０２５３】
ある特定の実施形態では、
Ｗ’は−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−または−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−であり；
Ｒｅは−Ｈ、−Ｍｅまたは−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｍｅであり；
ｎは２から６までの整数であり；
Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を担持する直鎖または分岐アルキルであり；
ＶとＲｙは存在せず；そして、
Ｊは−Ｃ（＝Ｏ）−である。残りの基は第１６の特定の実施形態に記載したとおりである。
【０２５４】
第１７の特定の実施形態では、第１６の特定の実施形態のＬ’は以下の式：
−Ｗ’−［ＣＲ１’’Ｒ２’’］ａ−Ｖ−［Ｃｙ］０〜１−［ＣＲ３’’Ｒ４’’］ｂ−Ｃ（＝Ｏ）−
によって表され、
式中、Ｒ１’’、Ｒ２’’およびＲ３’’はそれぞれ独立して、−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を担持する直鎖もしくは分岐アルキル、好ましくは−Ｍｅであり；
Ｒ４’’は−Ｈ、１〜４個の炭素原子を担持する直鎖もしくは分岐アルキル（好ましくは−Ｍｅ）、−ＳＯ３Ｈ、または−ＳＯ３−Ｍ＋であり、式中、Ｍ＋は薬学的に許容可能な陽イオンであり；
ａは０から５まで（例えば、０から２、３、４または５まで）の整数であり、そして、ｂは０から６まで（例えば、０から３、４、５または６まで）の整数であり；そして、
Ｃｙは、Ｎヘテロ原子を担持する、任意に置換された５員の複素環であり、好ましくは、Ｃｙは
【化７７】
0006049642.tif 000091
である。
【０２５５】
ある特定の実施形態では、例えば、第１６または第１７の特定の実施形態では、Ｗ’は−Ｎ（Ｒｅ）−である。
【０２５６】
ある特定の実施形態では、例えば、第１６または第１７の特定の実施形態では、Ｒｅは−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）２〜６−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルである。
【０２５７】
ある特定の実施形態では、例えば、第１６または第１７の特定の実施形態では、Ｖは−Ｓ−または−ＳＳ−である。
【０２５８】
第１８の特定の実施形態では、第１６または第１７の特定の実施形態のＬ’は以下の式：
−ＮＲｅ−［ＣＲ１’’Ｒ２’’］ａ−Ｓ−［ＣＲ３’’Ｒ４’’］ｂ−Ｃ（＝Ｏ）−
によって表される。
【０２５９】
ある特定の実施形態では、例えば、第１６〜第１７の特定の実施形態では、複合体は：
【化７８】
0006049642.tif 000092
または
【化７９】
0006049642.tif 000093
であり、
式中、ｒは１から１０までの整数であり、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり、そして、Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである。
【０２６０】
ある特定の実施形態では、例えば、第１６〜第１８の特定の実施形態では、前記抗体はｈｕＭｙ９−６である。
【０２６１】
第１９の特定の実施形態では、第１６または第１７の特定の実施形態のＬ’は以下の式：
−ＮＲｅ−［ＣＲ１’’Ｒ２’’］ａ−Ｓ−Ｃｙ−［ＣＲ３’’Ｒ４’’］ｂ−Ｃ（＝Ｏ）−
によって表される。
【０２６２】
ある特定の実施形態では、例えば、第１６、第１７および第１９の特定の実施形態では、前記複合体は：
【化８０】
0006049642.tif 000094
または
【化８１】
0006049642.tif 000095
であり、
式中、ｒは１から１０までの整数であり、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり、そして、Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである。
【０２６３】
ある特定の実施形態では、例えば、第１６、第１７および第１９の特定の実施形態では、前記抗体はｈｕＭｙ９−６である。
【０２６４】
第２０の特定の実施形態では、前記結合基に結合した細胞傷害性化合物は以下の式：
【化８２】
0006049642.tif 000096
、
【化８３】
0006049642.tif 000097
によって表され、
式中、Ｗ’は存在しないか、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−Ｓ−、−ＣＨ２−Ｓ−または−ＣＨ２ＮＲｅ−から選択され；
Ｒｘは存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルから選択され；
Ｒｅは、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
Ｚｓは前記ＣＢＡに結合し、そして、結合または−ＳＲｍ−のどちらかであり；
ＲｍはＲｄであるか、Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ‐ヒドロキシフタルイミドエステル、Ｎ‐ヒドロキシスルフォ‐スクシンイミドエステル、パラ‐ニトロフェニルエステル、ジニトロフェニルエステルおよびペンタフルオロフェニルエステルから選択される反応性エステルを担持する、１〜４個の炭素原子を有する置換型の直鎖または分岐アルキルであり；
Ｒｄはフェニル、ニトロフェニル、ジニトロフェニル、カルボキシニトロフェニル、ピリジルまたはニトロピリジルから選択され；そして、
ｎは１から２４までの整数であり；そして、可変項目の残りのものは第８または第１５の特定の実施形態に先に記載されたとおりである。
【０２６５】
第２１の特定の実施形態では、前記結合基に結合した細胞傷害性化合物は以下の式：
【化８４】
0006049642.tif 000098
、
【化８５】
0006049642.tif 000099
によって表され、
式中、Ｗ’は存在しないか、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−Ｓ−、−ＣＨ２−Ｓ−または−ＣＨ２ＮＲｅ−から選択され；
Ｒｘは存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルから選択され；
Ｒｅは、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
ｎは２から６までの整数であり；
Ｚｓは前記ＣＢＡに結合し、そして、結合：
【化８６】
0006049642.tif 000100
【化８７】
0006049642.tif 000101
から選択され、
式中、ｑは１から５までの整数であり；そして、
Ｍは−Ｈ、またはＮａ＋もしくはＫ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンである。
【０２６６】
ある特定の実施形態では、Ｚｓは以下の式：
【化８８】
0006049642.tif 000102
のうちのいずれか１つによって表される。
【０２６７】
ある特定の実施形態、例えば、第２１の特定の実施形態では、Ｗ’は−Ｎ（Ｒｅ）−である。
【０２６８】
ある特定の実施形態、例えば、第２１の特定の実施形態では、Ｒｅは−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは−Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキルである。
【０２６９】
ある特定の実施形態、例えば、第２１の特定の実施形態では、Ｒｋは−Ｈまたは−Ｍｅであり、ｎは４であり、そして、ｑは２である。
【０２７０】
ある特定の実施形態、例えば、第２１の特定の実施形態では、Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルである。
【０２７１】
ある特定の実施形態、例えば、第２１の特定の実施形態では、Ｒｘは−（ＣＨ２）ｐ−（ＣＲｆＲｇ）−であり、式中、ＲｆとＲｇはそれぞれ、Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキルから独立して選択され；そして、ｐは０、１、２または３である。
【０２７２】
ある特定の実施形態、例えば、第２１の特定の実施形態では、ＲｆとＲｇは同一または異なっており、そして、−Ｈおよび−Ｍｅから選択され；そして、ｐは１である。
【０２７３】
第２２の特定の実施形態では、式（ＶＩＩＩｂ’）および（Ｘｂ’）の複合体は第２１の特定の実施形態に記載され、可変項目は以下のとおりである。
Ｙは−ＳＯ３Ｍであり；
Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオン（例えば、Ｎａ＋）であり；
Ｘ’とＹ’は共に−Ｈであり；
ＡとＡ’は共に−Ｏ−であり；
Ｒ６は−ＯＭｅであり；そして、
Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルである。
【０２７４】
ある特定の実施形態、例えば、第１４〜第２１の特定の実施形態では、Ｙは−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍおよびスルファート−ＯＳＯ３Ｍから選択される。好ましくは、Ｙは−ＳＯ３Ｍである。好ましくは、Ｍは−Ｈ、Ｎａ＋またはＫ＋である。
【０２７５】
ある特定の実施形態、例えば、第１４〜第２２の特定の実施形態では、Ｗは、存在するときは、Ｃ＝Ｏである。
【０２７６】
ある特定の実施形態、例えば、第１４〜第２２の特定の実施形態では、ＺとＺ’は、存在するときは、−ＣＨ２−である。
【０２７７】
ある特定の実施形態、例えば、第１４〜第２２の特定の実施形態では、Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、前記結合基、およびアミン保護基からなる群より選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ’は−Ｈ、−ＯＨ、−Ｍｅまたは前記結合基である。好ましくは、Ｘ’は−Ｈである。
【０２７８】
ある特定の実施形態、例えば、第１４〜第２２の特定の実施形態では、Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択される。好ましくは、Ｙ’は−Ｈまたはオキソである。より好ましくは、Ｙ’は−Ｈである。
【０２７９】
ある特定の実施形態、例えば、第１４〜第２２の特定の実施形態では、ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−およびオキソ（Ｃ＝Ｏ）から選択される。好ましくは、ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−および−Ｓ−から選択される。より好ましくは、ＡとＡ’は−Ｏ−である。
【０２８０】
ある特定の実施形態、例えば、第１４〜第２２の特定の実施形態では、ＤとＤ’は、存在するときは、同一または異なっており、そして、独立して、ｎが１から２４までの整数であるポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、または１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニルから選択され、前記のアルキル、アルケニルおよびアルキニルは、ハロゲン、−ＯＲ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲおよび−ＣＯＲ’からなる群より独立して選択される１つ以上の置換基で任意に置換される。好ましくは、ＤとＤ’は１〜４個の炭素原子を担持する直鎖または分岐アルキルである。
【０２８１】
第２３の特定の実施形態では、第２０の特定の実施形態に記載される式（Ｉｂｂ’）または（ＩＩＢｂ’）の化合物にとって、可変項目は以下のとおりである。
Ｙは−ＳＯ３Ｍであり；
Ｍは−ＨまたはＮａ＋であり；
Ｘ’とＹ’は共に−Ｈであり；
ＡとＡ’は共に−Ｏ−であり；
Ｒ６は−ＯＭｅであり；
Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルである。
【０２８２】
好ましくは、Ｒｘは−（ＣＨ２）ｐ−（ＣＲｆＲｇ）−であり、式中、ＲｆとＲｇはそれぞれ、−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキルから独立して選択され；ｐは０、１、２または３である。より好ましくは、ＲｆとＲｇは同一または異なっており、そして、−Ｈおよび−Ｍｅから選択され；そして、ｐは１である。
【０２８３】
第２４の特定の実施形態では、第１４、第１５または第２１の特定の実施形態に記載されるような本発明の複合体は以下によって表される。
Ｙは、Ｍが−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオン（例えば、Ｎａ＋）である−ＳＯ３Ｍであり；
ＷはＣ＝Ｏであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ４およびＲ４’は−Ｈであり；
Ｒ３またはＲ３’の一方が任意に前記結合基であり、そして、他方が−Ｈであり；
Ｒ６は−ＯＭｅであり；
ＺとＺ’は−ＣＨ２であり；
Ｘ’は−Ｈであり；
Ｙ’は−Ｈであり；そして、
ＡとＡ’は−Ｏ−である。
【０２８４】
上記の本発明の複合体についての特定の実施形態のいずれか、例えば、第１４〜第２４の特定の実施形態では、Ｙは−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍおよびスルファート−ＯＳＯ３Ｍから選択される。好ましくは、Ｙは−ＳＯ３Ｍである。
【０２８５】
ある特定の実施形態、例えば、第１４〜第２４の特定の実施形態では、Ｍは−Ｈ、Ｎａ＋またはＫ＋である。
【０２８６】
上記の本発明の複合体についての特定の実施形態のいずれか、例えば、第１４〜第２４の特定の実施形態では、Ｗは、存在するときは、Ｃ＝Ｏである。
【０２８７】
上記の本発明の複合体についての特定の実施形態のいずれか、例えば、第１４〜第２４の特定の実施形態では、ＺとＺ’は、存在するときは、−ＣＨ２−である。
【０２８８】
上記の本発明の複合体についての特定の実施形態のいずれか、例えば、第１４〜第２４の特定の実施形態では、Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、前記結合基、およびアミン保護基からなる群より選択される。ある特定の実施形態では、Ｘ’は−Ｈ、−ＯＨ、−Ｍｅまたは前記結合基である。ある特定の実施形態では、Ｘ’は−Ｈである。
【０２８９】
上記の本発明の複合体についての特定の実施形態のいずれか、例えば、第１４〜第２４の特定の実施形態では、Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択される。ある特定の実施形態では、Ｙ’は−Ｈまたはオキソである。ある特定の実施形態では、Ｙ’は−Ｈである。
【０２９０】
上記の本発明の複合体についての特定の実施形態のいずれか、例えば、第１４〜第２４の特定の実施形態では、ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−およびオキソ（Ｃ＝Ｏ）から選択される。ある特定の実施形態では、ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−および−Ｓ−から選択される。ある特定の実施形態では、ＡとＡ’は−Ｏ−である。
【０２９１】
上記の本発明の複合体についての特定の実施形態のいずれか、例えば、第１４〜第２４の特定の実施形態では、ＤとＤ’は、存在するときは、同一または異なっており、そして、独立して、ｎが１から２４までの整数であるポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、または１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニルから選択され、前記のアルキル、アルケニルおよびアルキニルは、ハロゲン、−ＯＲ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲおよび−ＣＯＲ’からなる群より独立して選択される１つ以上の置換基で任意に置換される。ある特定の実施形態では、ＤとＤ’は１〜４個の炭素原子を担持する直鎖または分岐アルキルである。
【０２９２】
ある特定の実施形態では、記載された実施形態、例えば、第１４〜第２４の特定の実施形態のうちのいずれか１つの複合体は１〜１０個の細胞傷害性化合物、２〜９個の細胞傷害性化合物、３〜８個の細胞傷害性化合物、４〜７個の細胞傷害性化合物、または５〜６個の細胞傷害性化合物を含むことができ、各細胞傷害性化合物は細胞傷害性化合物をＣＢＡに連結する結合基を含み、そして、複合体上の各細胞傷害性化合物は同じである。
【０２９３】
ある特定の実施形態では、記載された実施形態、例えば、第１４〜第２４の特定の実施形態のうちのいずれか１つの複合体は１〜１０個の細胞傷害性化合物、２〜９個の細胞傷害性化合物、３〜８個の細胞傷害性化合物、４〜７個の細胞傷害性化合物、または５〜６個の細胞傷害性化合物を含むことができ、各細胞傷害性化合物は細胞傷害性化合物をＣＢＡに連結する結合基を含み、そして、複合体上の各細胞傷害性化合物は同じである。
【０２９４】
ある特定の実施形態では、記載された実施形態、例えば、第１４〜第２４の特定の実施形態のうちのいずれか１つの複合体は総計で１〜１０個の細胞傷害性化合物および（非修飾型）イミン含有細胞傷害性化合物、総計で２〜９個の細胞傷害性化合物および（非修飾型）イミン含有細胞傷害性化合物、総計で３〜８個の細胞傷害性化合物および（非修飾型）イミン含有細胞傷害性化合物、総計で４〜７個の細胞傷害性化合物および（非修飾型）イミン含有細胞傷害性化合物、または総計で５〜６個の細胞傷害性化合物および（非修飾型）イミン含有細胞傷害性化合物を含むことができ、細胞傷害性化合物または（非修飾型）イミン含有細胞傷害性化合物はそれぞれ細胞傷害性化合物または（非修飾型）イミン含有細胞傷害性化合物をＣＢＡに連結する結合基を含み、そして、複合体上の細胞傷害性化合物または（非修飾型）イミン含有細胞傷害性化合物のそれぞれは同じである（（バイサルファイト）修飾を除く）。
【０２９５】
複合体の実施形態、例えば、第１４〜第２４の特定の実施形態のいずれにおいても、前記細胞結合剤は、腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、微生物感染細胞、寄生生物感染細胞、自己免疫細胞、活性化細胞、骨髄細胞、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはメラニン形成細胞；ＣＤ４、ＣＤ６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＥｐＣＡＭ、ＣａｎＡｇ、ＣＡＬＬＡ、もしくはＨｅｒ‐２抗原を発現する細胞；Ｈｅｒ‐３抗原を発現する細胞；またはインスリン成長因子受容体、上皮成長因子受容体および葉酸受容体を発現する細胞から選択される標的細胞に結合し得る。
【０２９６】
複合体の実施形態、例えば、第１４〜第２４の特定の実施形態のいずれにおいても、前記細胞結合剤は抗体、単鎖抗体、前記標的細胞に特異的に結合する抗体断片、モノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、または標的細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体断片、キメラ抗体、前記標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体断片、ドメイン抗体、前記標的細胞に特異的に結合するドメイン抗体断片、リンホカイン、ホルモン、ビタミン、成長因子、コロニー刺激因子、または栄養輸送分子であり得る。
【０２９７】
前記抗体は表面付替抗体（ｒｅｓｕｒｆａｃｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、表面付替単鎖抗体、または表面付替抗体断片であり得る。
【０２９８】
前記抗体はモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、またはそのモノクローナル抗体断片であり得る。
【０２９９】
前記抗体はヒト化抗体、ヒト化単鎖抗体、またはヒト化抗体断片であり得る。
【０３００】
本明細書における特定の実施形態、例えば、第１〜第２４の特定の実施形態のいずれか１つでは、前記イミン反応性試薬は、サルファイト（Ｈ２ＳＯ３、Ｈ２ＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ、ジ、トリおよびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ３、ＰＯＳ３Ｈ３、ＰＳ４Ｈ３、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳＨ、ＲｉＳＯＨ、ＲｉＳＯ２Ｈ、ＲｉＳＯ３Ｈ）、様々なアミン（ヒドロキシルアミン（例えば、ＮＨ２ＯＨ）、ヒドラジン（例えば、ＮＨ２ＮＨ２）、ＮＨ２Ｏ−Ｒｉ、Ｒｉ’ＮＨ−Ｒｉ、ＮＨ２−Ｒｉ）、ＮＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ２−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２、チオスルファート（Ｈ２Ｓ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（Ｈ２Ｓ２Ｏ４または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ）（ＳＨ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（ＲｋＣ（＝Ｏ）ＮＨＯＨまたは陽イオンと共に形成される塩）、ヒドラジド（ＲｋＣＯＮＨＮＨ２）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２Ｈ、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、グリケート化ヌクレオチド（例えば、ＧＤＰ‐マンノース）、フルダラビン、またはそれらの混合物からなる群より選択され、式中、ＲｉとＲｉ’はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；ＲｉとＲｉ’は、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである。
【０３０１】
好ましくは、前記のイミン反応性試薬はサルファイト、ヒドロキシルアミン、ヒドラジンおよび尿素から選択される。より好ましくは、前記のイミン反応性試薬はＮａＨＳＯ３またはＫＨＳＯ３である。
【０３０２】
本明細書における特定の実施形態、例えば、第１〜第２４の特定の実施形態のいずれか１つでは、イミン含有細胞傷害性化合物に対して約０．１〜約３０モル当量のイミン反応性試薬を使用する。ある特定の実施形態では、イミン含有細胞傷害性化合物に対して約１〜約１０モル当量のイミン反応性試薬を使用する。ある特定の実施形態では、イミン含有細胞傷害性化合物に対して約３〜約５モル当量のイミン反応性試薬を使用する。
【０３０３】
本明細書における特定の実施形態、例えば、第１〜第２４の特定の実施形態のいずれか１つでは、前記二官能性架橋剤はチオエーテル結合を介して前記細胞結合剤に前記細胞傷害性薬剤を連結するが、マレイミド系部分またはハロアセチル系部分を有することができ、マレイミド系部分を有する二官能性架橋剤はＮ‐スクシンイミジル４‐（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシラート（ＳＭＣＣ）、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（Ｎ‐マレイミドメチル）‐シクロヘキサン‐１‐カルボキシ‐（６‐アミドカプロエート）（ＬＣ‐ＳＭＣＣ）、κ‐マレイミドウンデカノイン酸Ｎ‐スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ‐マレイミド酪酸Ｎ‐スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε‐マレイミドカプロン酸Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ‐マレイミドベンゾイル‐Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ‐（α‐マレイミドアセトキシ）‐スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル‐６‐（β‐マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ‐スクシンイミジル４‐（ｐ‐マレイミドフェニル）‐ブチレート（ＳＭＰＢ）、Ｎ‐（ｐ‐マレイミドフェニル）イソシアネート（ＰＭＰＩ）、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（４‐ニトロピリジル‐２‐ジチオ）ブタノエートから選択され、そして、ハロアセチル系部分を有する二官能性架橋剤はＮ‐スクシンイミジル‐４‐（ヨードアセチル）‐アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ‐スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ‐スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）、およびＮ‐スクシンイミジル３‐（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、ビス‐マレイミドポリエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、ＢＭ（ＰＥＯ）２、ＢＭ（ＰＥＯ）３、Ｎ‐（β‐マレイミドプロピルオキシ）スクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、５‐マレイミド吉草酸ＮＨＳ、ＨＢＶＳ、４‐（４‐Ｎ‐マレイミドフェニル）‐酪酸ヒドラジド塩酸塩（ＭＰＢＨ）、スクシンイミジル‐（４‐ビニルスルホニル）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）、ジチオビス‐マレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４‐ビス‐マレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４‐ビスマレイミジル‐２，３‐ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビス‐マレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビス‐マレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、スルフォスクシンイミジル４‐（Ｎ‐マレイミド‐メチル）シクロヘキサン‐１‐カルボキシラート（スルフォ‐ＳＭＣＣ）、スルフォスクシンイミジル（４‐ヨード‐アセチル）アミノベンゾエート（スルフォ‐ＳＩＡＢ）、ｍ‐マレイミドベンゾイル‐Ｎ‐ヒドロキシスルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＭＢＳ）、Ｎ‐（γ‐マレイミドブトリルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＧＭＢＳ）、Ｎ‐（ε‐マレイミドカプロイルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＥＭＣＳ）、Ｎ‐（κ‐マレイミドウンデカノイルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＫＭＵＳ）、スルフォスクシンイミジル４‐（ｐ‐マレイミドフェニル）ブチレート（スルフォ‐ＳＭＰＢ）、ＣＸ１‐１、スルフォ‐ＭａｌおよびＰＥＧｎ‐Ｍａｌから選択される。
【０３０４】
ある特定の実施形態では、前記二官能性架橋剤は、ＳＭＣＣ、スルフォ‐ＳＭＣＣ、ＢＭＰＳ、ＧＭＢＳ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（４‐ニトロピリジル‐２‐ジチオ）ブタノエート、ビス‐マレイミドヘキサンまたはＢＭＰＥＯからなる群より選択される。
【０３０５】
実施形態、例えば、第１〜第２４の特定の実施形態のいずれでも、接線流濾過、吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、選択的沈殿、非吸着濾過、またはそれらの組合せによって複合体が精製される。好ましくは、接線流濾過および／または吸着クロマトグラフィーによって複合体が精製される。
【０３０６】
ある特定の実施形態、例えば、第１〜第２４の特定の実施形態では、チオール反応性基を担持する細胞結合剤（ＣＢＡ）は：
【化８９】
0006049642.tif 000103
【化９０】
0006049642.tif 000104
である。
【０３０７】
本発明の方法によって作製される化合物または複合体には、具体的には、
【化９１】
0006049642.tif 000105
【化９２】
0006049642.tif 000106
が含まれ、式中、ｒは１から１０までの整数であり、Ｙは−Ｈまたは−ＳＯ３Ｍであり、そして、Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである。
【０３０８】
第２５の特定の実施形態では、本発明は次の式：
【化９３】
0006049642.tif 000107
の複合体を調製する方法であって、次の式：
【化９４】
0006049642.tif 000108
の細胞傷害性化合物を次の式：
【化９５】
0006049642.tif 000109
の修飾型ＣＢＡとそれぞれ約４〜約９のｐＨで反応させることを含み、
式中、ｒは１から１０までの整数であり；
Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；好ましくは、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり；そして、
Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである、
前記方法を提供する。
【０３０９】
ある特定の実施形態では、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり；そして、Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである。
【０３１０】
ある特定の実施形態では、次の式:
【化９６】
0006049642.tif 000110
のイミン含有細胞傷害性化合物とイミン反応性試薬を反応させることによって前記細胞傷害性化合物を作製する。
【０３１１】
ある特定の実施形態では、前記ＣＢＡはｈｕＭｙ９−６である。
【０３１２】
第２６の特定の実施形態では、本発明は、次の式：
【化９７】
0006049642.tif 000111
の複合体を調製する方法であって、
イミン含有細胞傷害性化合物、イミン反応性試薬、および前記結合基を含む二官能性架橋剤と前記ＣＢＡを反応させて複合体を形成することを含み、
前記イミン含有細胞傷害性化合物は
【化９８】
0006049642.tif 000112
であり；前記二官能性架橋剤は、それぞれ、
【化９９】
0006049642.tif 000113
であり、そして、
前記イミン反応性試薬はサルファイト（Ｈ２ＳＯ３、Ｈ２ＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ、ジ、トリおよびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ３、ＰＯＳ３Ｈ３、ＰＳ４Ｈ３、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳＨ、ＲｉＳＯＨ、ＲｉＳＯ２Ｈ、ＲｉＳＯ３Ｈ）、様々なアミン（ヒドロキシルアミン（例えば、ＮＨ２ＯＨ）、ヒドラジン（例えば、ＮＨ２ＮＨ２）、ＮＨ２Ｏ−Ｒｉ、Ｒｉ’ＮＨ−Ｒｉ、ＮＨ２−Ｒｉ）、ＮＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ２−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２、チオスルファート（Ｈ２Ｓ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（Ｈ２Ｓ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ）（ＳＨ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（ＲｋＣ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ヒドラジド（ＲｋＣＯＮＨＮＨ２）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２Ｈ、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、グリケート化ヌクレオチド（例えば、ＧＤＰ‐マンノース）、フルダラビン、またはそれらの混合物から選択され、式中、ＲｉとＲｉ’はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；ＲｉとＲｉ’は、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである、
前記方法を提供する。
【０３１３】
ある特定の実施形態では、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり；そして、Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである。
【０３１４】
ある特定の実施形態では、前記ＣＢＡはｈｕＭｙ９−６である。
【０３１５】
化合物および複合体のインビトロ細胞傷害性
様々な癌細胞株の増殖をインビトロで抑制する、本発明の方法によって作製される細胞傷害性化合物および細胞結合剤‐薬品複合体の能力についてそれらを評価することができる。例えば、これらの化合物および複合体の細胞傷害性の評価にヒト大腸癌株ＣＯＬＯ２０５、横紋筋肉腫細胞株ＲＨ−３０、および多発性骨髄腫細胞株ＭＯＬＰ−８などの細胞株を使用することができる。評価する予定の細胞を化合物または複合体に１〜５日間曝露し、公知の方法による直接的測定法で細胞の生存率を測定することができる。そこで、その測定法の結果からＩＣ５０値を計算することができる。あるいは、または、加えて、本発明の方法によって作製された化合物または複合体での処理に対して感受性を表し得る癌の種類を決定するための基準の１つとして、米国国立癌研究所によって記述されるもの（参照により本明細書に組み込まれるＶｏｓｋｏｇｌｏｕ−Ｎｏｍｉｋｏｓ  ｅｔ  ａｌ．、  ２００３、  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ９：  ４２２２７−４２３９、を参照のこと）などのインビトロ細胞株感受性スクリーニングを用いることができる。
【０３１６】
本発明の方法によって作製される抗体‐細胞傷害性薬剤複合体のインビトロ効力と標的特異性の例は図１７に示されている。複合体の全てが、低ピコモル濃度範囲のＩＣ５０で抗原陽性癌細胞に対して非常に細胞傷害性である。同じ複合体に曝露したとき、抗原陰性細胞株は生存したままであった。インドリノベンゾジアゼピン二量体は、非複合体化抗体ｈｕＭｙ９−６（抗ＣＤ３３）を用いてブロックすると１６０倍効力が低い標的特異的効力を示し（図１７）、そして、非複合体化抗体ＦＯＬＲ１（抗葉酸受容体抗体）を用いてブロックすると４０倍効力が低い標的特異的効力を示した（結果は示さず）。例えば、バイサルファイト付加物を担持するｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−１ｆ複合体は１０．５ｐＭのＩＣ５０値で抗原陽性ＨＬ６０／ＱＣ細胞を殺滅したが、過剰な非複合体化ｈｕＭｙ９−６抗体の添加によりこの細胞傷害性効果が低減し（ＩＣ５０＝１．６９ｎＭ）、これにより抗原特異性を実証された（図１７Ａ）。さらに、ｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−１ｆ複合体はまた、２１ｐＭのＩＣ５０値と１９０ｐＭのＩＣ５０値でＨＬ６０／ＡＴＣＣ細胞株とＮＢ−４細胞株の両方に対しても非常に効力がある（図１７Ｂおよび１７Ｃ）。
【０３１７】
非複合体化ｈｕＭｙ９−６抗体とｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−１ｆ複合体の両方のＨＬ６０／ＱＣ細胞株に対する結合を比較することによって、抗体結合に対する複合体化の効果を測定した（図１８）。裸抗体に対して、複合体の結合能に変化がないことがＦＡＣＳ分析により明らかになったが、このことは、細胞傷害性薬剤の抗体への複合体化によって結合が損なわれていないことを示している。
【０３１８】
一例では、細胞結合剤／細胞傷害性薬剤複合体のインビボ有効性を測定した。ヒトＨＬ６０／ＱＣ腫瘍を担持するヌードマウスをｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−１ｆ複合体で処置し、そして、複数の用量で有意な腫瘍退縮が観察されたが、未処置のマウスでは腫瘍が急速に増殖した（図１９）。最大忍容用量よりも少なくとも３５倍低い、２０μｇ／ｋｇもの低用量で活性が観察された。
【０３１９】
忍容性に対するイミン飽和の効果が表９に示されている。ジ‐イミンｈｕＦＯＬＲ１‐薬品１を複数の用量で試験したが、それらの全てが高い毒性を示すことがわかり、５０μｇ／ｋｇで試験した最低の用量の群でのみ生存マウスが残った。対照的に、部分的に還元したモノ−イミンｈｕＦＯＬＲ１−薬品２とｈｕＦＯＬＲ１−ＳＰＤＢ−ＩＧＮ（ｈｕＦＯＬＲ１−ＳＰＤＢ−１ｆ）複合体は有意に改善された忍容性を有することがわかり、ｈｕＦＯＬＲ１−ＳＰＤＢ−ＩＧＮ（ｈｕＦＯＬＲ１−ＳＰＤＢ−１ｆ）複合体は５６０μｇ／ｋｇという試験した最も高い用量で１００％の動物生存を示した。
【実施例】
【０３２０】
実施例１
１５％ＤＭＡ（体積／体積）を含有するｐＨ７．４の８５％ＰＢＳ中で２ｍｇ／ｍｌのヒト化Ｍｙ９−６抗体を９モル当量の２−ＮＨＳエステル（化合物２）と２５℃で３時間複合体化し、次に、Ｇ２５脱塩カラムでｐＨ７．４のＰＢＳ中に精製して、未反応または加水分解した非複合体化薬品を除去した。１０ｍＭヒスチジン、２５０ｍＭグリシン、ｐＨ６．５の１％ショ糖含有緩衝液に複合体を透析した。２８０ｎｍと３２０ｎｍのＵＶ吸光度と前記の薬品と抗体の２８０ｎｍと３２０ｎｍでの吸光係数を用いる計算に基づいて、複合体の薬品／抗体比（ＤＡＲ）を１．４ＤＡＲと決定した。
【０３２１】
４００ｍＭ過塩素酸ナトリウム、１５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７．０という均一濃度の移動相を１ｍｌ／分の流速で用いるＴＳＫ−ＧｅｌＧ３００ＳＷＸＬカラム（７．８ｍｍ×３００ｍｍ、５μｍの粒径）でのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって、単量体％について複合体を分析した。２８０ｎｍでの全ての抗体種のＵＶ吸光度をモニターし、そして、各抗体ピークの曲線下面積（ＡＵＣ）を測定することによって、単量体のパーセンテージ（単量体％）と凝集体のパーセンテージを決定した。さらに、３２０ｎｍと２８０ｎｍでの全ての抗体種のＵＶ吸光度をモニターし、そして、各抗体ピークのＡＵＣを測定することによって、薬品２の単量体と凝集体の両方についてのパーセンテージ（％）を決定した。１．４ＤＡＲを含むｈｕＭｙ９−６−２複合体の単量体％は９１％であった。単量体上の薬品２の％は８０％であった。
【０３２２】
遊離（非複合体化）薬品測定については、複合体をアセトン抽出してタンパク質を除去し、乾燥し、移動相を加えて元に戻し、そして、ＶＹＤＡＣ２０８ＴＰ  Ｃ８逆相ＨＰＬＣカラム（４．６×２５０ｍｍ、７μｍの粒径）に注入し、全て０．０２５％の酢酸を含む、２０％アセトニトリルおよび８０％の脱イオン化  から最大１００％アセトニトリルまでの線形濃度勾配を１ｍｌ／分の流速で４８分に渡って使用し、そして、薬品‐メチルエステル標準物質と比較した。複合体中の遊離非複合体化薬品のパーセンテージは複合体化薬品の１％未満であった。
【０３２３】
１．４の薬品／抗体比（ＤＡＲ）を有するｈｕＭｙ９−６−２複合体を脱グリコシル化の後にマススペクトロメトリー（ＭＳ）によって分析した（図１Ａ）。複合体のＭＳは非複合体化抗体（Ｄ０）を最大のピークとして、それよりも小さいＤ１ピーク（１つの薬品が結合した抗体）、ならびに、抗体当たり２つ、および３つの薬品が結合したＤ２およびＤ３のずっとより小さいピークを示した。抗体に対して９倍モル過剰な２−ＮＨＳエステルを用いる複合体化の後では、複合体化の効率は１．４という複合体ＤＡＲと低かった。
【０３２４】
実施例２
亜硫酸水素ナトリウムを使用する２−ＮＨＳエステル（化合物２）の複合体化については、６６％ＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）水溶液中で２−ＮＨＳエステル（化合物２）を０．９モル当量の亜硫酸水素ナトリウム（新しく調製した、脱イオン水中のＮａＨＳＯ３）と２５℃で３０分間プレインキュベートした。８５％ＰＢＳ、ｐＨ７．４、１５％ＤＭＡ（体積／体積）中で２ｍｇ／ｍｌのＨｕＭｙ９−６抗体を９モル当量の２−ＮＨＳエステル（ＮａＨＳＯ３を添加して）と２５℃で３時間複合体化し、次に、Ｇ２５脱塩カラムでｐＨ７．４のＰＢＳ中に精製して、未反応または加水分解した非複合体化薬品を除去した。１０ｍＭヒスチジン、２５０ｍＭグリシン、１％ショ糖、ｐＨ６．５の緩衝液に複合体を透析した。
【０３２５】
亜硫酸水素ナトリウムを使用して調製したｈｕＭｙ９−６−２複合体のＤＡＲを２８０ｎｍと３２０ｎｍのＵＶ分光測光により測定し、そして、３．１ＤＡＲであると計算した。複合体の単量体％は９５％であり、単量体上の薬品２の％は９１％であった。脱グリコシル化後の、亜硫酸水素ナトリウムを使用して調製した複合体のＭＳは、１つの薬品が結合したＤ１の最大のピークと抗体当たり２〜６つの薬品が結合したＤ２、Ｄ３、Ｄ４、Ｄ５、Ｄ６ピークも示した（図１Ｂ）。
【０３２６】
亜硫酸水素ナトリウムを使用して調製したｈｕＭｙ９−６−２複合体は、亜硫酸水素ナトリウムを使用せずに調製した１．４ＤＡＲを有する複合体よりもずっと多い、３．１ＤＡＲという薬品取込を示した。亜硫酸水素ナトリウムを使用して調製した３．１ＤＡＲ複合体のＭＳは、１つの薬品が結合したＤ１の最も高いピークを含む、１〜６つの薬品が結合した複合体のピークを示した。対照的に、亜硫酸水素ナトリウムを使用せずに調製した１．４ＤＡＲ複合体のＭＳは非複合体化抗体（Ｄ０）の最も高いピークとずっとより小さいＤ１、Ｄ２およびＤ３の結合型薬品複合体ピークを示した。亜硫酸水素ナトリウムを使用して調製したｈｕＭｙ９−６−２複合体の単量体上の薬品の割合（％）は９１％であったが、それは、亜硫酸水素ナトリウムを使用せずに調製したｈｕＭｙ９−６−２複合体の単量体上の８０％という薬品の割合（％）よりも高かった。亜硫酸水素ナトリウムを使用して調製したｈｕＭｙ９−６−２複合体の全体の複合体の品質は、したがって、亜硫酸水素ナトリウムを使用しない従来の複合体化方法によるものよりもずっと優れていた。
【０３２７】
抗体といくつかの薬品（１、２、３および４）のＮＨＳエステルの複合体化を亜硫酸水素ナトリウム（ＮａＨＳＯ３）の存在下で実行し、そして、ＮａＨＳＯ３を使用しない従来の複合体化方法と比較した。表１６に結果が示されている。全ての事例で、複合体化における亜硫酸水素ナトリウムの添加が、亜硫酸水素ナトリウムを添加することなく調製した複合体よりも高いＤＡＲおよび高い単量体当たりの薬品の割合（％）を示す有意に優れた品質を有する複合体を示した。
【表１４】
0006049642.tif 000114
【０３２８】
亜硫酸水素ナトリウムを使用して調製したｈｕＭｙ９−６−２複合体は、亜硫酸水素ナトリウムを使用せずに調製した複合体と類似のインビトロ細胞傷害性を示した（図２）。したがって、細胞傷害性効力を少しも損なうことなく、亜硫酸水素ナトリウムを使用して、より高いＤＡＲおよびより高い単量体当たりの薬品の割合（％）を示すより優れた品質の複合体が調製された。亜硫酸水素ナトリウムを使用して調製した抗ＣＤ２２抗体−２複合体は、亜硫酸水素ナトリウムを使用せずに調製した複合体と類似のインビトロ細胞傷害性を示した（図３）。
【０３２９】
ゲルチップ分析器を使用する非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、亜硫酸水素ナトリウムを使用して調製したｈｕＭｙ９−６−２複合体を分析した。前記複合体は完全な抗体のバンドのみを示したが、重鎖および軽鎖のバンドは観察されず、亜硫酸水素ナトリウムの添加が前記抗体における本来の鎖間ジスルフィド結合の望まない還元を少しも引き起こすことがなかったという予期せぬ利点を示した。
【０３３０】
６６〜９８％のＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）水溶液中で、薬品３、４、１、および５の２−ＮＨＳエステルまたはＳＰＤＢ−ＮＨＳエステルを０．５〜３モル当量の亜硫酸水素ナトリウム（新しく調製した、脱イオン水中のＮａＨＳＯ３）と２５℃で１５分〜４時間プレインキュベートした。これらの反応のいくつかはまた４℃で一晩保留され、２０時間後に複合体化のために使用された。
【０３３１】
亜硫酸水素ナトリウムで処理された、または、亜硫酸水素ナトリウムを添加しなかったＤＭＡ中の薬品２‐ＮＨＳエステルは、ＶＹＤＡＣ  Ｃ８逆相カラム、および全て０．０２５％の酢酸を含む、２０％アセトニトリルと８０％脱イオン水から１００％アセトニトリルまで上昇する線形濃度勾配を１ｍｌ／分の流速で、４８分に渡って使用するＨＰＬＣによって分析された。図４に示されるように、親薬品２−ＮＨＳエステルは約２３分で溶出した。２５℃、６６％ＤＭＡ水溶液中での０．９モル当量のＮａＨＳＯ３での処理の３０分後、薬品２−ＮＨＳの大部分がスルホン化した、より極性がある形状に転換され、約１４分に溶出した。予期せぬことに、スルホン化、加水分解した薬品２の望ましくないピークは観察されなかった。したがって、ＮＨＳエステルと反応することが無い、イミン結合への添加に対する亜硫酸水素ナトリウムの驚くほど好ましい反応が観察された。
【０３３２】
同様に、薬品ＮＨＳエステルは、抗体との複合体化の前に、亜硫酸水素ナトリウムの他にイミン反応性試薬と処理される。別の複合体化アプローチは薬品‐ＮＨＳエステルと抗体の混合物を亜硫酸水素ナトリウムまたは他のイミン反応性試薬で処理することである。
【０３３３】
実施例３
合成した薬品１−ＳＰＤＢ−ＮＨＳエステル（化合物１ｃ）を使用してジスルフィド連結型抗体‐ＳＰＤＢ‐１複合体を調製した。９６〜９８％ＤＭＡ水溶液中で３モル当量の亜硫酸水素ナトリウムを用いて（新しく調製した、ＮａＨＳＯ３水溶液を用いて）薬品１−ＳＰＤＢ−ＮＨＳエステルを２５℃で４〜５時間前処理した。０．０２５％の酢酸を含む２０％アセトニトリルと８０％脱イオン水の線形濃度勾配を１ｍｌ／分の流速で４８分間使用するＶＹＤＡＣ  Ｃ８逆相−ＨＰＬＣカラムを使用してＤＭＡ中の亜硫酸水素ナトリウム処理薬品１−ＳＰＤＢ−ＮＨＳエステルを分析した。バイサルファイトのＮＨＳエステルとの望ましくない反応が無い、イミン結合へのバイサルファイト添加の所望の反応のみが逆相ＨＰＬＣ分析によって示された。
【０３３４】
複合体化について、１５％Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）を含有する８５％ＰＢＳ、ｐＨ７．４、水性緩衝液中で２ｍｇ／ｍｌのヒト化抗体を５〜７モル当量の（ＮａＨＳＯ３で前処理した）薬品１−ＳＰＤＢ−ＮＨＳエステルと２５℃で６時間反応させ、次に、Ｇ２５ゲル濾過カラムでｐＨ７．４のＰＢＳ中に精製して未反応または加水分解した薬品を除去した。１０ｍＭヒスチジン、２５０ｍＭグリシン、１％ショ糖、ｐＨ６．５緩衝液にヒト化抗体−ＳＰＤＢ−１複合体を透析した。２８０ｎｍと３２０ｎｍでのＵＶ吸光度測定によって、および、２８０ｎｍと３２０ｎｍでの前記の薬品と抗体の吸光係数を用いて、複合体の薬品／抗体比（ＤＡＲ）は２．２〜２．９であると測定された。複合体調製における単量体のパーセンテージはＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）によって９０％であると決定された。ＳＥＣでの単量体ピークのＵＶ吸光度に基づき、単量体複合体ピークは結合した薬品分子を有することも示された。アセトン抽出と逆相ＨＰＬＣによる非複合体化薬品の％は１％未満であることが示された。
【０３３５】
複合体化の前に亜硫酸水素ナトリウムを添加して調製した脱グリコシル化抗体−ＳＰＤＢ−１複合体のＭＳは、亜硫酸水素ナトリウム複合体化を用いずに得た複合体よりもずっと優れた複合体を示した（図５）。亜硫酸水素ナトリウムを使用せずに調製した複合体のＭＳは平均１．４の薬品１／抗体比、および、最大３つの薬品１分子が結合した抗体種を有した（図５Ａ）。対照的に、亜硫酸水素ナトリウムを使用して調製した複合体のＭＳは平均２．５の薬品１／抗体比、および最大７つの薬品１分子が結合した抗体種を示した（図５Ｂ）。
【０３３６】
非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルチップ分析によって、亜硫酸水素ナトリウムを使用して調製したジスルフィド連結型抗体−ＳＰＤＢ−１複合体は完全な抗体のバンドのみを示した。Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎ２３０プロテインチップを使用してゲルチップ測定を実行し、そして、Ａｇｉｌｅｎｔ２３００バイオアナライザーを使用して分析を行った。重鎖および軽鎖のバンドは観察されず、亜硫酸水素ナトリウムの添加が本来の抗体の鎖間ジスルフィド結合の望まない還元を少しも引き起こすことがなかったという予期せぬ利点を示した（図６）。亜硫酸水素ナトリウムを使用して調製した抗体−ＳＰＤＢ−１複合体中で得られる結合した薬品も、その複合体中のジスルフィドリンカーが、添加した亜硫酸水素ナトリウムに対して安定であることを驚くことに示した。
【０３３７】
実施例４
複合体の調製について、９６％ＤＭＡ（ジメチルアセトアミド）水溶液中で１ｆ−ＳＰＤＢ−ＮＨＳエステル（化合物１ｃ、図７）を３モル当量の亜硫酸水素ナトリウム（新しく調製した、脱イオン水中のＮａＨＳＯ３）と２５℃で５時間プレインキュベートし、次に、複合体化に必要になるまで４℃で一晩インキュベートした。５％ＤＭＡ（体積／体積）を含有する９５％の５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ８．５水性緩衝液中、亜硫酸水素ナトリウムの存在下または非存在下で（−／＋ＮａＨＳＯ３）８モル当量の１ｆ−ＳＰＤＢ−ＮＨＳエステルを用いて２〜３ｍｇ／ｍｌのヒト化抗体を２５℃で４時間誘導体化し、次に、両方をＧ２５脱塩カラムでｐＨ７．４のＰＢＳ中に精製して未反応の、加水分解した薬品を除去した。１０ｍＭヒスチジン、２５０ｍＭグリシン、１％ショ糖、ｐＨ６．５緩衝液に複合体を透析した。２８０ｎｍと３２０ｎｍでのＵＶ分光測光によって複合体のＤＡＲを測定した。単量体の割合（％）、および複合体の単量体当たりの薬品の割合（％）をＳＥＣにより決定した。複合体における非複合体化薬品をアセトン抽出の後に逆相ＨＰＬＣにより決定した。いくつかのヒト化抗体を用いてこれらの複合体化を実行した。
【０３３８】
実施例５
抗体に組み込まれた反応性ジスルフィドリンカーと薬品のチオールを複合体化するために、５％ＤＭＡ（体積／体積）を含む９０％ＰＢＳ、ｐＨ７．５、水性緩衝液中で４〜６モル当量のＳＰＤＢヘテロ二官能性リンカーを用いて８ｍｇ／ｍｌのヒト化モノクローナル抗体を２５℃で１．５時間誘導体化し、次に、Ｇ２５脱塩カラムで３５ｍＭクエン酸、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ５．５緩衝液中に精製して未反応、加水分解したリンカーを除去した。（抗体と遊離可能なＳｐｙの全体を測定するために）５０ｍＭのジチオスレイトールを添加せずに、および、添加して、２８０ｎｍおよび３４３ｎｍでのＵＶ吸光度によってＬＡＲ（リンカー抗体比）を測定する。８５〜９０％の５０ｍＭリン酸カリウム、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．５の緩衝液の中でリンカー当たり２モル当量の亜硫酸水素ナトリウム処理薬品チオールと２ｍｇ／ｍｌのＳＰＤＢ‐修飾型抗体を２５℃で２〜２０時間反応させ、次に、Ｇ２５脱塩カラムでｐＨ７．４のＰＢＳ中に精製して未反応、加水分解した薬品を除去する。２８０ｎｍと３２０ｎｍでのＵＶ吸光度によって前記抗体−ＳＰＤＢ−薬品複合体のＤＡＲを測定し、そして、複合体調製における単量体のパーセンテージおよび単量体上の薬品のパーセンテージをＳＥＣにより決定する。
【０３３９】
実施例６  ｈｕＭｙ９−６−スルフォ−ＳＰＤＢ−１の調製（２段階方法）
【化１００】
0006049642.tif 000115
６ｍｇ／ｍＬのｈｕＭｙ９−６抗体と９モル当量のスルフォ−ＳＰＤＢリンカー（ＤＭＡ中の２０ｍＭのストック）を含む反応を５０ｍＭのＥＰＰＳ緩衝液、ｐＨ８中で２５℃、３時間インキュベートした。ＮＡＰ脱塩カラム（ＩｌｌｕｓｔｒａセファデックスＧ２５、ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて未反応のリンカーを除去し、そして、紫外‐可視分光法（２‐チオピリドンについて、ε３４３ｎｍ＝８、０８０ｃｍ−１Ｍ−１）による抗体濃度とＤＴＴ遊離チオピリジン濃度に基づいて、抗体に対するリンカーの比（ＬＡＲ）が３．７と決定された。
【０３４０】
スルフォ−ＳＰＤＢで修飾したｈｕＭｙ９−６を５０ｍＭ  ＥＰＰＳ  ｐＨ８．５、１０％（体積／体積）ＤＭＡ中に２ｍｇ／ｍｌの濃度まで希釈し、そして、リンカーあたり２モル当量の化合物１ｄ（ＤＭＡ中の５ｍＭのストック；抗体あたり７．４当量）と２５℃で３時間反応させた。
【０３４１】
反応後、脱塩カラム（Ｇ２５セファデックス、ファイングレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して複合体を精製し、そして、ｐＨ６．２の２５０ｍＭグリシン、１０ｍＭヒスチジン、１％ショ糖、０．０１％ツイーン２０、５０μＭ亜硫酸水素ナトリウムに緩衝液を交換した。
【０３４２】
精製した複合体は抗体当たり平均２．９の連結した化合物１分子を有し（化合物１についてε３３０ｎｍ＝１５，４８４ｃｍ−１Ｍ−１およびε２８０ｎｍ＝３０，１１５ｃｍ−１Ｍ−１のモル吸光係数、ならびにＭｙ９−６抗体についてε２８０ｎｍ＝２０７，０００ｃｍ−１Ｍ−１のモル吸光係数を用いる紫外‐可視分光法による）、単量体の％は９７．８％であり（サイズ排除クロマトグラフィーによる）、非複合体化化合物１は１％未満であり（アセトン抽出／逆相ＨＰＬＣによる）、使用した抗体の量に基づいて６０％の収率であり、そして、使用した化合物１ｄの量に基づいて１８％の全収率であることが分かった。この方法を用いて作製される複合体を、沈殿させることなく、（撹拌式セルまたはＡｍｉｃｏｎ遠心式フィルター装置により）３ｍｇ／ｍｌよりも高い濃度に濃縮することができた。
【０３４３】
実施例７  ｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−１の調製
【化１０１】
0006049642.tif 000116
方法１（一段階試薬方法）：
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）ｐＨ８．５緩衝液と１０％（体積／体積）ＤＭＡ（Ｎ，Ｎ−Ｄｉメチルアセトアミド）共溶媒中で、２ｍｇ／ｍＬのｈｕＭｙ９−６抗体と（９０：１０（体積／体積）のＤＭＡ：水混合液中の５倍過剰な亜硫酸水素ナトリウムを用いて２５℃で１時間、その後、４℃で一晩前処理した）７モル当量の１−ＳＰＤＢ−ＮＨＳを含む反応物を２５℃で３時間インキュベートさせた。
【０３４４】
反応後、ＮＡＰ脱塩カラム（ＩｌｌｕｓｔｒａセファデックスＧ２５、ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して複合体を精製し、そして、２５０ｍＭグリシン、１０ｍＭヒスチジン、１％ショ糖、０．０１％ツイーン、５０μＭ亜硫酸水素ナトリウムの製剤緩衝液に緩衝液を交換した。Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、２０、０００ＭＷＣＯ）を利用して、同じ緩衝液に室温で４時間透析を行った。
【０３４５】
精製した複合体は抗体当たり平均４．０の連結した化合物１分子を有し（化合物１についてε３３０ｎｍ＝１５，４８４ｃｍ−１Ｍ−１およびε２８０ｎｍ＝３０，１１５ｃｍ−１Ｍ−１のモル吸光係数、ならびにＭｙ９−６抗体についてε２８０ｎｍ＝２０７，０００ｃｍ−１Ｍ−１のモル吸光係数を用いる紫外‐可視分光法による）、単量体の％は９２％であり（サイズ排除クロマトグラフィー、ＴＳＫ３０００、ＴＯＳＯＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓによる）、非複合体化化合物１は１％未満であり（アセトン抽出／逆相ＨＰＬＣによる）、使用した抗体の量に基づいて７２％の収率であり、そして、使用した１−ＳＰＤＢ−ＮＨＳの量に基づいて４０％の全収率であり、そして、最終タンパク質の濃度が１．０ｍｇ／ｍｌであることが分かった。
【０３４６】
方法２（二段階方法）：
４．８ｍｇ／ｍＬのｈｕＭｙ９−６抗体と６モル当量のＳＰＤＢリンカー（エタノール中の１８．５ｍＭのストック）を含む反応物をｐＨ７．４のＰＢＳ中、２５℃で３時間インキュベートした。ＮＡＰ脱塩カラム（ＩｌｌｕｓｔｒａセファデックスＧ２５、ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して未反応のリンカーを除去し、そして、紫外‐可視分光法（２‐チオピリドンについて、ε３４３ｎｍ＝８、０８０ｃｍ−１Ｍ−１）による抗体濃度とＤＴＴ遊離２‐チオピリドン濃度に基づいて、抗体に対するリンカーの比（ＬＡＲ）が４．０と決定された。
【０３４７】
ＳＰＤＢで修飾したｈｕＭｙ９−６を５０ｍＭ  ＥＰＰＳ  ｐＨ８．５、１０％（体積／体積）ＤＭＡ中に２ｍｇ／ｍｌの濃度まで希釈し、そして、リンカーあたり１．７５モル当量の化合物１ｄ（ＤＭＡ中の５ｍＭのストック；抗体あたり７当量）と２５℃で３時間反応させた。
【０３４８】
反応後、脱塩カラム（ＩｌｌｕｓｔｒａセファデックスＧ２５、ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して複合体を精製し、そして、ｐＨ６．２の２５０ｍＭグリシン、１０ｍＭヒスチジン、１％ショ糖、０．０１％ツイーン２０、５０μＭ亜硫酸水素ナトリウムに緩衝液を交換した。
【０３４９】
精製した複合体は抗体当たり平均３．８の連結した化合物１分子を有し（化合物１についてε３３０ｎｍ＝１５，４８４ｃｍ−１Ｍ−１およびε２８０ｎｍ＝３０，１１５ｃｍ−１Ｍ−１のモル吸光係数、ならびにＭｙ９−６抗体についてε２８０ｎｍ＝２０７，０００ｃｍ−１Ｍ−１のモル吸光係数を用いる紫外‐可視分光法による）、単量体の％は９１．６％であり（サイズ排除クロマトグラフィー、ＴＳＫ３０００、ＴＯＳＯＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓによる）、非複合体化化合物１は１％未満であり（アセトン抽出／逆相ＨＰＬＣによる）、使用した抗体の量に基づいて４０％の収率であり、そして、使用した化合物１ｄの量に基づいて２２％の全収率であり、そして、最終タンパク質の濃度が０．５ｍｇ／ｍｌであることが分かった。
【０３５０】
実施例８  ｈｕＭｙ９−６−ＣＸ１−１−１の調製
【化１０２】
0006049642.tif 000117
方法１（インサイチュ一段階試薬方法）：
１．９ｍＭの化合物１ｄ、Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）とマレイミド基を有する１ｍＭのＣＸ１−１ヘテロ二官能性リンカー、および２０ｍＭのジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を含有するＤＭＡ溶液を外界温度で８分間反応させた。その後、過剰な化合物１ｄを反応停止させるために、３ｍＭのマレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）を添加した。１−ＣＸ１−１−ＮＨＳ反応混合物を−８０℃で凍結保存し、そして、後に融解して、２５℃のｈｕＭｙ９−６の緩衝溶液（２ｍｇ／ｍｌ、１００ｍＭ  ＥＰＰＳ、ｐＨ８．０、１０％（体積／体積）ＤＭＡ）に２回に分けて、（リンカーの濃度に基づいて）抗体当たり４．８モル当量、続いて３０分後に４．２モル当量を添加した。２時間の反応後、脱塩カラム（Ｑｕｉｃｋ−ｓｐｉｎプロテイン、Ｇ２５ファインレジン、Ｒｏｃｈｅ）を使用して複合体を精製し、そして、ｐＨ６．２の２５０ｍＭグリシン、１０ｍＭヒスチジン、１％ショ糖、０．０１％ツイーン２０、５０μＭ亜硫酸水素ナトリウムに緩衝液を交換し、透析し、そして、最後に０．２２μｍのフィルターで滅菌濾過した。
【０３５１】
精製した複合体は抗体当たり平均３．３の連結した化合物１分子を有し（化合物１についてε３３０ｎｍ＝１５，４８４ｃｍ−１Ｍ−１およびε２８０ｎｍ＝３０，１１５ｃｍ−１Ｍ−１のモル吸光係数、ならびにＭｙ９−６抗体についてε２８０ｎｍ＝２０７，０００ｃｍ−１Ｍ−１のモル吸光係数を用いる紫外‐可視分光法による）、単量体の％は９５％であり（サイズ排除クロマトグラフィー、ＴＳＫ３０００、ＴＯＳＯＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓによる）、非複合体化化合物１は１％未満であり（アセトン抽出／逆相ＨＰＬＣによる）、使用した抗体の量に基づいて４５％の収率であり、そして、使用した化合物１ｄの量に基づいて１７％の全収率であり、そして、最終タンパク質の濃度が０．７ｍｇ／ｍｌであることが分かった。
【０３５２】
方法２（一段階方法）：
ｈｕＭｙ９−６抗体の緩衝溶液（２ｍｇ／ｍｌ、５０ｍＭ  ＥＰＰＳ、ｐＨ８．５、８％（体積／体積）ＤＭＡ）に１４モル当量の化合物１ｄ（ＤＭＡ中の５ｍＭストック）、引き続いて、７モル当量のＣＸ１−１リンカー（エタノール中の１５ｍＭのストック溶液）を添加し、２５℃で３時間インキュベートした。
【０３５３】
反応後、脱塩カラム（ＩｌｌｕｓｔｒａセファデックスＧ２５、ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して複合体を精製し、そして、ｐＨ６．２の２５０ｍＭグリシン、１０ｍＭヒスチジン、１％ショ糖、０．０１％ツイーン２０、５０μＭ亜硫酸水素ナトリウムに緩衝液を交換し、Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、２０、０００ＭＷＣＯ）での透析を４℃で２回行った。
【０３５４】
精製した複合体は抗体当たり平均３．４の連結した化合物１分子を有し（化合物１についてε３３０ｎｍ＝１５，４８４ｃｍ−１Ｍ−１およびε２８０ｎｍ＝３０，１１５ｃｍ−１Ｍ−１のモル吸光係数、ならびにＭｙ９−６抗体についてε２８０ｎｍ＝２０７，０００ｃｍ−１Ｍ−１のモル吸光係数を用いる紫外‐可視分光法による）、単量体の％は９０％であり（サイズ排除クロマトグラフィー、ＴＳＫ３０００、ＴＯＳＯＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓによる）、非複合体化化合物１は１％未満であり（アセトン抽出／逆相ＨＰＬＣによる）、使用した抗体の量に基づいて４４％の収率であり、そして、使用した化合物１ｄの量に基づいて１１％の全収率であり、そして、最終タンパク質の濃度が１．４８ｍｇ／ｍｌであることが分かった。
【０３５５】
実施例９  脱グリコシル化Ｍｙ９−６−ＳＰＤＢ−１ｆのＭＳ分析
化合物１ｆを含むＮＨＳエステルを抗体のリシンに直接的に複合体化するか（すなわち、上述のような一段階試薬方法）、化合物１ｄをジチオピリジン修飾化抗体に複合体化するか（すなわち、上述のような二段階方法）のどちらかによってＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−１ｆを作製した。脱グリコシル化Ｍｙ９−６−ＳＰＤＢ−１ｆのマススペクトロメトリー（ＭＳ）分析を上記のとおりに実施した。
【０３５６】
一段階試薬方法は、０〜９の化合物１ｆ修飾を有する複合体、非対称性複合体化薬品分布、および著しい量の非複合体化抗体をもたらした。一方、二段階方法によって作製された複合体は、０〜６の化合物１ｆ修飾を有するＭＳプロファイル、対称性複合体化薬品分布、および非常に少ない非複合体化抗体を有した。図１２を参照のこと。両方の複合体は紫外‐可視分光分析によると約４という類似の平均化合物１ｆ／抗体比を有した。
【０３５７】
実施例１０  Ｍｙ９−６−スルフォ−ＳＰＤＢ−１の二段階合成に対するｐＨの効果
様々なｐＨ条件で二段階方法を用いて作製されたＭｙ９−６−スルフォ−ＳＰＤＢ−１ｆのＭＳデータが図１３に示された。簡単に説明すると、ｐＨ６、７、８および８．５で１８時間、リンカー当たり３当量の化合物１ｄ（または抗体当たり約１１．１当量）とＭｙ９−６−スルフォＳＰＤＢ（３．７リンカー／抗体）を反応させた。反応のｐＨが上昇するにつれ、未反応のリンカーが減少する（２６０ａｍｕのサテライトピーク）ことがＭＳデータにより示された。したがって、ｐＨがＭｙ９−６−スルフォ−ＳＰＤＢ−１ｆ複合体の合成における複合体化反応に影響するようであった。具体的には、化合物１ｄが前記抗体上のスルフォ−ＳＰＤＢリンカーと十分に反応するために８より高いｐＨが必要とされる。
【０３５８】
実施例１１  ｃｈＫＴＩ−スルフォ−ＳＰＤＢ−１の二段階合成に対する化合物／リンカー比の効果
図１４は、様々な化合物１ｄ／リンカー比を使用し、二段階方法を用いて作製されたｃｈＫＴＩ−スルフォ−ＳＰＤＢ−１のＭＳデータを示す。リンカー当たり１．１、１．３、１．５または２当量の化合物１ｄとｃｈＫＴＩ−スルフォＳＰＤＢ（３．７リンカー／抗体）をｐＨ８．５、２５℃で３時間反応させた。リンカー当たりの化合物１ｄの当量が上昇するにつれ、未反応のリンカーが減少する（２６０ａｍｕのサテライトピーク）ことがＭＳデータにより示された。この条件では、前記抗体上のスルフォ−ＳＰＤＢリンカーと十分に反応するために１．３より高い化合物１ｄ／リンカー比が必要とされるようであった。リンカー当たりの化合物１ｄの当量が１．５を超えて増加すると抗体の断片化の増加がもたらされたが（１４〜１９％）、化合物１ｄ／リンカー比が１．１〜１．３であると有意な抗体の断片化は引き起こされなかった。
【０３５９】
実施例１２  抗体−ＳＰＤＢ−薬品複合体の調製
９６〜９８％ＤＭＡ水溶液中で化合物１ｃを３モル当量の亜硫酸水素ナトリウム（新しく調製したＮａＨＳＯ３水溶液）と２５℃で４〜５時間前処理した。複合体化について、１０〜１５％Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）を含有する、８５〜９０％のＰＢＳ、ｐＨ７．４の水性緩衝液または５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ８．５の水性緩衝液の中で２ｍｇ／ｍＬのヒト化抗体を５〜７モル当量の（ＮａＨＳＯ３で前処理した）化合物１ｃと２５℃で６時間反応させ、次に、Ｇ２５ゲル濾過カラムでｐＨ７．４のＰＢＳ中に精製して未反応または加水分解した薬品化合物を除去した。１０ｍＭヒスチジン、２５０ｍＭグリシン、１％ショ糖、ｐＨ６．５緩衝液にヒト化抗体−ＳＰＤＢ−薬品複合体を透析した。２８０ｎｍと３２０ｎｍでのＵＶ吸光度測定によって、および、２８０ｎｍ（２１５、０００Ｍ−１ｃｍ−１）と３２０ｎｍ（９１３７Ｍ−１ｃｍ−１）での前記の薬品と抗体の吸光係数を用いて、前記複合体の薬品抗体比（ＤＡＲ）が２．２〜２．９であると測定された。ＴＳＫ−ＧｅｌＧ３００ＳＷＸＬカラム（７．８ｍｍ×３００ｍｍ、５μｍの粒径）を使用するＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）によって、複合体における単量体のパーセンテージが９０％よりも高いと決定された。単量体の複合体ピークが連結した薬品分子を有することも、ＳＥＣにおける単量体ピークのＵＶ吸光度に基づいて示された。遊離（非複合体化）薬品測定については、複合体をアセトン抽出してタンパク質を除去し、乾燥し、移動相を加えて元に戻し、そして、ＶＹＤＡＣ２０８ＴＰ  Ｃ８逆相ＨＰＬＣカラム（４．６×２５０ｍｍ、７μｍの粒径）に注入し、そして、標準物質と比較した。複合体中の遊離薬品化合物のパーセンテージは、複合体化した薬品化合物の０．５％未満と決定された。
【０３６０】
ヒト化抗体‐ＳＰＤＢ−２ａ複合体の調製
５％ＤＭＡ（体積／体積）を含有するｐＨ７．４の９５％ＰＢＳ中で４〜６モル当量のＳＰＤＢヘテロ二官能性リンカーを用いて８ｍｇ／ｍＬのヒト化抗体を２５℃で１．５時間誘導体化し、次に、Ｇ２５脱塩カラムでクエン酸緩衝液（２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有する３５ｍＭクエン酸緩衝液、ｐＨ５．５）中に精製して未反応のリンカーを除去した。（抗体とジチオスレイトールで遊離されるＳｐｙの全体を測定するために）５０ｍＭのジチオスレイトールを添加せずに、および、添加して、２８０ｎｍおよび３４３ｎｍでのＵＶ吸光度を用いてＬＡＲ（リンカー抗体比）を測定し、２．７〜４．１のＬＡＲと決定された。８５％のクエン酸緩衝液、１５％ＤＭＡ（体積／体積）中で連結型ＳＰＤＢ当たり２モル当量の化合物２ａ（塩酸塩）と２ｍｇ／ｍＬのＳＰＤＢ‐修飾型抗体を外界温度で２０時間反応させ、次に、Ｇ２５脱塩カラムでｐＨ７．４のＰＢＳ中に精製して非複合体化薬品化合物を除去した。２８０ｎｍと３５０ｎｍでのＵＶ分光測光によって最終ヒト化抗体−ＳＰＤＢ−２ａ複合体のＤＡＲを測定し、そして、約１．７〜２．１のＤＡＲであると計算された。ＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）カラムを使用するＨＰＬＣによって、複合体における単量体のパーセンテージと単量体上の結合した薬品化合物を決定した。図１６を参照のこと。
【０３６１】
実施例１３  抗体‐薬品複合体の仕様（単量体の％および薬品負荷）を改善するための共有結合性イミン反応物質の使用
ｐＨ７．４の９０％ＤＭＳＯ／１０％ＰＢＳ混合物中でＮＨＳ−ＢＭＰＳ−１に対して５モル当量のイミン反応物質を用いて付加物形成を２５℃で４時間実施した。その後、反応混合物をｈｕＭｙ９−６抗体（４モル当量の薬品、２ｍｇ／ｍｌ、１０％（体積／体積）ＤＭＳＯ、５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ８．５、５時間、２５℃）に添加した。ナトリウムハイドロサルファイト、亜硫酸水素ナトリウム、またはナトリウムメタバイサルファイトを使用して作製された複合体は類似の薬品／抗体比および単量体の割合（％）を有したが、追加の処理無しで作製された複合体では薬品の取込が非常に低減することとなった。
【０３６２】
実施例１４  ｈｕＦＯＬＲ−１複合体のインビボ忍容性試験
メスＣＤ‐１マウスでｈｕＦＯＬＲ−１複合体のインビボ忍容性を試験した。試験開始前に７日間動物を観察し、そして、疾患または病気が無いことがわかった。マウスはバイサルファイト担持複合体の単回静脈内注射を受け、そして、その動物は体重の減少、罹病率または死亡率について毎日モニターされた。表９は、ｈｕＦＯＬＲ１−薬品１について、その複合体は、５０μｇ／ｋｇという試験した最小の用量でのみ忍容されたことを示す。対照的に、モノ−イミン複合体であるｈｕＦＯＬＲ１−薬品２とｈｕＦＯＬＲ１−ＳＰＤＢ−１ｆの両方が、それぞれ、１９８μｇ／ｋｇ未満および５６０μｇ／ｋｇ超という最大忍容用量で十分に認容されることが明らかになった。
【表１５】
0006049642.tif 000118
【表１６】
0006049642.tif 000119
【表１７】
0006049642.tif 000120
【０３６３】
実施例１５  製剤と複合体化におけるプロピレングリコールの効果
この実施例は、共溶媒としてのプロピレングリコールの存在下で実施された対象複合体化反応は複合体の沈殿を示さず、そして、（２％ジメチルアセトアミドの存在下で-データは示さず）結果生じる複合体の単量体の割合（％）を低下させることなく、最大４０％（および、おそらくそれよりも高い濃度の）プロピレングリコールを用いることができることを示す。
【０３６４】
さらに重要なことに、精製中のプロピレングリコールの存在が収率の有意な上昇をもたらす（表１０）。
【０３６５】
いかなる特定の理論に捉われるつもりはないが、申請者らは、対象の複合体の複合体化における問題の主要な原因の１つは、その複合体の分子成分の固有の疎水性である。このことは、対象の複合体化について観察された低い精製収率と、時には、異常な質量分布プロファイルを少なくとも部分的に説明し得る。
【０３６６】
対象複合体のサイズ排除クロマトグラフィー中のイソプロパノールの添加が明白な凝集体集団を著しく低減させることも特筆に値する。この観察は、少量の疎水性共溶媒が本発明の薬品および複合体の溶解性を上昇させ得ることを示唆する。
【０３６７】
したがって、少量の疎水性共溶媒、例えば、プロピレングリコール（例えば、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５％）の存在下で、対象の複合体化反応、反応後の精製ステップおよび／または形成された複合体の製剤を実施することが好ましい。
【０３６８】
３％のＤＭＡを含有する水中でｐＨを８．５に緩衝して３時間、Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミジル（ＮＨＳ）エステル型のスルフォ−ＳＰＤＢを抗体（ｈｕＭｙ９−６）に付加することにより、先に記載した方法に従って抗体‐スルフォ‐ＳＰＤＢを調製した。生じた中間体（抗体−スルフォ−ＳＰＤＢ）をＧ２５セファデックスで精製して過剰なリンカーを除去した。紫外‐可視分光法で、還元剤が無いときに２８０ｎｍでの吸光度を測定し、約５０ｍＭのＤＴＴが存在するときに３４３ｎｍでの吸光度を測定することにより、抗体とリンカーを定量して複合体化したリンカーからの２‐チオピリジンの解放を測定した。
【０３６９】
複合体薬品について、ＥＰＰＳ緩衝液（６０ｍＭの終濃度）でｐＨを８．５に維持しながら、２ｍｇ／ｍＬ抗体の濃度の上で調製した前記抗体−スルフォ−ＳＰＤＢを表記の共溶媒の存在下で２倍モル過剰な化合物１ｄと反応させた。ジメチルアセトアミド（ＳＡＦＣ）とプロピレングリコール（Ａｌｆａ  Ａｅｓａｒ）をさらに精製することなくそのまま使用した。全ての緩衝液は０．２２ミクロンのフィルター（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に通して滅菌し、水は逆浸透圧／脱イオン化により精製した。反応物を２５℃で３時間インキュベートし、次に、使い捨てのＧ２５セファデックスカラム（Ｎａｐ２５、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、ｐＨを６．２に緩衝した１０ｍＭヒスチジン、２５０グリシン、１％ショ糖、０．０１％ポリソルベート２０、５０μＭ亜硫酸水素ナトリウムならびに表記のパーセンテージ（体積／体積）のプロピレングリコールからなる製剤緩衝液中に精製した。
【０３７０】
吸収スペクトル法により反応収率と薬品負荷を決定した。分析サイズ排除 クロマトグラフィーにより、全ての試料で単量体の割合が９６％よりも高いことが示された。
【０３７１】
下記の表１０は、反応混合物または製剤中のプロピレングリコールの関数としての複合体化の収率（％）を示す。化合物１ｄの抗体−スルフォ−ＳＰＤＢ（示されるような非水性成分）とのｐＨ８．５で４時間の反応とその後のＧ２５セファデックスでの精製によって抗体−スルフォ−ＳＰＤＢ−１が調製された。
【表１８】
0006049642.tif 000121
【０３７２】
実施例１６  反応性が高い４−ニトロＰｙ−スルフォ−ＳＰＤＢリンカーを使用するｈｕＭｙ９−６−スルフォ−ＳＰＤＢ−１ｄの調製
６ｍｇ／ｍＬのｈｕＭｙ９−６抗体と５モル当量の反応性が高いＮ‐スクシンイミジル‐４‐（４‐ニトロピリジル‐２‐ジチオ）ブタノエートリンカー（エタノール中の２０ｍＭストック）を含む反応をｐＨ８の５０ｍＭ  ＥＰＰＳ緩衝液中、２５℃で３時間インキュベートした。ＮＡＰ脱塩カラム（ＩｌｌｕｓｔｒａセファデックスＧ２５、ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して未反応のリンカーを除去した。紫外‐可視分光法（２‐チオ‐４‐ニトロピリドンについて、ε３９４ｎｍ＝１４２０５ｃｍ−１Ｍ−１）による抗体濃度とＤＴＴ遊離ニトロピリジン‐２‐チオン濃度に基づいて、抗体に対するリンカーの比（ＬＡＲ）は約２．３と決定された。
【０３７３】
リンカーで修飾したｈｕＭｙ９−６をｐＨ８．５の５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液、１０％（体積／体積）ＤＭＡ中に２ｍｇ／ｍｌの濃度まで希釈し、そして、リンカーあたり２モル当量の化合物１ｄ（ＤＭＡ中の５ｍＭのストック；抗体あたり４．６当量）と２５℃で３０分間反応させた。３９４ｎｍでの吸光度の増加をＵＶによりモニターすることによって、ジスルフィド交換反応の完了を判定した。反応後、脱塩カラム（Ｇ２５セファデックス、ファイングレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して複合体を精製し、そして、ｐＨ６．２の２５０ｍＭグリシン、１０ｍＭヒスチジン、１％ショ糖、０．０１％ツイーン２０、５０μＭ亜硫酸水素ナトリウムに緩衝液を交換した。
【０３７４】
精製した複合体は抗体当たり平均２．１の連結した化合物１ｄ分子を有し（化合物１ｄについてε３３０ｎｍ＝１５，４８４ｃｍ−１Ｍ−１およびε２８０ｎｍ＝３０，１１５ｃｍ−１Ｍ−１のモル吸光係数、ならびにｈｕＭｙ９−６抗体についてε２８０ｎｍ＝２０７，０００ｃｍ−１Ｍ−１のモル吸光係数を用いる紫外‐可視分光法による）、単量体の％は９８％であり（サイズ排除クロマトグラフィーによる）、非複合体化化合物１ｄは１％未満であり（アセトン抽出／逆相ＨＰＬＣによる）、タンパク質に基づく収率は７０％であり、そして、化合物１ｄに基づく全収率は３２％であることが分かった。図２８を参照のこと。
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］
結合基で細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法であって、約４〜約９のｐＨで修飾型細胞傷害性化合物を修飾型ＣＢＡと反応させることを含む前記方法であり、
（ａ）前記修飾型ＣＢＡが前記ＣＢＡに結合した二官能性架橋剤の残基を含み、そして、前記残基が前記の結合基とチオール反応性基を含み；そして、
（ｂ）前記修飾型細胞傷害性化合物が、チオール基および：
【化１ａ】
0006049642.tif 000122
で表される基を含み、
式中、Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである、方法。
［態様２］
前記チオール基を担持するイミン含有細胞傷害性化合物をイミン反応性試薬と反応させることによって、前記修飾型細胞傷害性化合物を作製する、態様１に記載の方法。
［態様３］
前記修飾型ＣＢＡとの反応の前に前記修飾型細胞傷害性化合物を精製することをさらに含む、態様１または２に記載の方法。
［態様４］
（１）前記イミン含有細胞傷害性化合物が以下の式：
【化２ａ】
0006049642.tif 000123
、
【化３ａ】
0006049642.tif 000124
のうちの１つ、または薬学的に許容可能なその塩によって表され、
（２）前記修飾型細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化４ａ】
0006049642.tif 000125
、
【化５ａ】
0006049642.tif 000126
のうちの１つ、または薬学的に許容可能なその塩によって表され、そして、
（３）前記複合体の前記修飾型細胞傷害性化合物と前記結合基部分が以下の式：
【化６ａ】
0006049642.tif 000127
、
【化７ａ】
0006049642.tif 000128
のうちの１つによって表され、
式中、Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２またはハロゲンであり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され、
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、存在するときは、チオール基を含むか、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、前記のアルキル、アルケニル、フェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換されており；
式中、Ｘ’、Ｙ’、Ｒ６、Ｒｃ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’、Ｒ４’、Ｌのうちの少なくとも１つが（例えば、任意に置換された基を介して）式（Ｉｂ’）または（ＩＩｂ’）の前記結合基に結合する、
態様１〜３のいずれか１項に記載の方法。
［態様５］
両方とも前記結合基に結合した、前記チオール反応性基、および前記ＣＢＡと反応する基を含む前記二官能性架橋剤と前記ＣＢＡを反応させることによって、前記修飾型ＣＢＡが調製される、態様１〜４のいずれか１項に記載の方法。
［態様６］
前記ＣＢＡと反応する前記の基が前記ＣＢＡのアミノ基（例えば、Ｌｙｓ側鎖のアミノ基）、または前記ＣＢＡのチオール基（例えば、Ｃｙｓ側鎖のチオール基）と反応する、態様５に記載の方法。
［態様７］
前記チオール反応性基が、マレイミド、ビニルピリジン、ビニルスルホン、ビニルスルホンアミド、ハロアセチル系基およびジスルフィド基からなる群より選択される、態様１〜６のいずれか１項に記載の方法。
［態様８］
前記チオール反応性基がマレイミド、ハロアセトアミドまたは−ＳＳＲｄであり、式中、Ｒｄが１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキル、フェニル、ニトロフェニル、ジニトロフェニル、カルボキシニトロフェニル、ピリジル、２‐ニトロピリジル、４‐ニトロピリジル、または３‐カルボキシ‐４‐ニトロピリジルである、態様１〜６のいずれか１項に記載の方法。
［態様９］
前記修飾型ＣＢＡが
【化８ａ】
0006049642.tif 000129
【化９ａ】
0006049642.tif 000130
である、態様１〜８のいずれか１項に記載の方法。
［態様１０］
結合基を有する細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法であって、イミン含有細胞傷害性化合物、イミン反応性試薬、および前記の結合基を含む二官能性架橋剤と前記のＣＢＡを反応させて前記の複合体を形成することを含
、前記方法。
［態様１１］
前記イミン含有細胞傷害性化合物および前記イミン反応性試薬と前記ＣＢＡを接触させて第１混合物を形成し、次に、前記第１混合物を前記二官能性架橋剤と接触させて前記複合体を形成する、態様１０に記載の方法。
［態様１２］
前記第１混合物の形成後直ちに前記二官能性架橋剤を前記第１混合物と接触させる、請求項１１に記載の方法。
［態様１３］
前記複合体を精製することをさらに含む、態様１０〜１２のいずれか１項に記載の方法。
［態様１４］
結合基を有する細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法であって、
（ａ）細胞傷害性化合物を、前記結合基、前記ＣＢＡと反応する基（チオール基、マレイミド基、ハロアセタミド基またはアミン基など）および前記修飾型細胞傷害性化合物と反応する基を含む二官能性架橋剤と反応させて、前記の結合基、および前記ＣＢＡと反応する前記の基を含む前記二官能性架橋剤の残基に共有結合した第２の修飾型細胞傷害性化合物を形成することであって、
前記修飾型細胞傷害性化合物は、以下の式：
【化１０ａ】
0006049642.tif 000131
、
【化１１ａ】
0006049642.tif 000132
のうちの１つ、または薬学的に許容可能なその塩によって表され、
式中、
Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；
Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２またはハロゲンであり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’
−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２
）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され、
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、存在するときは、チオール基を含むか、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、前記のアルキル、アルケニル、フェニルもしくは複素環もしくはヘテロアリール環が任意に置換されている、ことと；ならびに、
（ｂ）約４〜約９のｐＨで前記ＣＢＡと反応する前記の基を介して前記ＣＢＡと前記第２修飾型細胞傷害性化合物を反応させて前記複合体を形成すること
を含む、方法。
［態様１５］
前記ＣＢＡと反応する前記の基がチオール基、マレイミド基、ハロアセトアミド基、またはアミン基である、態様１４に記載の方法。
［態様１６］
前記修飾型細胞傷害性化合物がチオール基を含み、そして、前記修飾型細胞傷害性化合物と反応する前記の基がチオール反応性基である、態様１４に記載の方法。
［態様１７］
以下の式：
【化１２ａ】
0006049642.tif 000133
、
【化１３ａ】
0006049642.tif 000134
の前記チオール基を担持するイミン含有細胞傷害性化合物をイミン反応性試薬と反応混合物中で反応させることによって、前記修飾型細胞傷害性化合物を作製する、態様１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
［態様１８］
ステップ（ａ）の前に前記修飾型細胞傷害性化合物を精製することをさらに含む、請求項１７に記載の方法。
［態様１９］
ステップ（ｂ）の前に前記第２の修飾型細胞傷害性化合物を精製することをさらに含む、態様１４〜１８のいずれか１項に記載の方法。
［態様２０］
前記反応混合物を凍結保存した後に前記凍結混合物を融解し、そして、ステップ（ａ）を実施する、態様１７〜１９のいずれか１項に記載の方法。
［態様２１］
ステップ（ａ）の前記反応混合物を凍結保存した後に融解し、そして、ステップ（ｂ）を実施することをさらに含む、態様１７〜２０のいずれか１項に記載の方法。
［態様２２］
前記二官能性架橋剤がビス‐マレイミドヘキサンまたはＢＭＰＥＯである、態様１４〜２１のいずれか１項に記載の方法。
［態様２３］
前記イミン含有細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化１４ａ】
0006049642.tif 000135
、
【化１５ａ】
0006049642.tif 000136
のうちのいずれか１つ、または薬学的に許容可能なその塩で表され、
式中、Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’および前記の結合基からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２またはハロゲンであり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され、
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、存在するときは、チオール基を含み、そして、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、前記のアルキル、アルケニル、フェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換されている、
態様２〜２２のいずれか１項に記載の方法。
［態様２４］
前記イミン含有細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化１６ａ】
0006049642.tif 000137
または
【化１７ａ】
0006049642.tif 000138
のうちのいずれか１つによって表され、
式中、Ｌ’、Ｌ’’およびＬ’’’は同一または異なっており、そして、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３Ｍ、スルファート−ＯＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’から独立して選択され；
Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンであり；そして
Ｇが−ＣＨ−または−Ｎ−から選択される、
態様２３に記載の方法。
［態様２５］
存在するときは、前記修飾型細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化１８ａ】
0006049642.tif 000139
または
【化１９ａ】
0006049642.tif 000140
のうちの１つに、または薬学的に許容可能なその塩よって表される、態様２４に記載の方法。
［態様２６］
Ｌ’、Ｌ’’またはＬ’’’のうちの１つが前記チオール基を担持し、残りが−Ｈである、態様２３、２４または２５に記載の方法。
［態様２７］
Ｌ’が前記チオール基を担持し、そして、Ｌ’’とＬ’’’が−Ｈである、態様２６に記載の方法。
［態様２８］
ＡとＡ’が共に−Ｏ−であり、Ｒ６が−ＯＭｅであり、そして、Ｇが−ＣＨ−である、態様２３〜２７のいずれか１項に記載の方法。
［態様２９］
前記イミン含有細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化２０ａ】
0006049642.tif 000141
または
【化２１ａ】
0006049642.tif 000142
のうちのいずれか１つによって表され、
式中、Ｗ’は存在しないか、存在するときは、−ＣＲｅＲｅ’−、−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−、−ＳＳ−または−Ｃ（＝Ｏ）−、またはアミノ酸、または２〜８つのアミノ酸を有するペプチドから選択され；
Ｒｘは存在しないか、存在するときは、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、６〜１０個の炭素原子を担持するアリール、またはＯ、ＮもしくはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を担持する３員〜８員の複素環であり；
ＲｅとＲｅ’は同一または異なっており、そして、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋから選択され、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、
１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；好ましくは、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；
ｎは１から２４までの整数である、態様２３〜２８のいずれか１項に記載の方法。
［態様３０］
存在するときは、前記修飾型細胞傷害性化合物が、以下の式： 
【化２２ａ】
0006049642.tif 000143
または
【化２３ａ】
0006049642.tif 000144
のうちの１つ、または薬学的に許容可能なその塩によって表される、態様２９に記載の方法。
［態様３１］
Ｙは−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍまたは−ＯＳＯ３Ｍから選択され；
Ｍは−Ｈ、またはＮａ＋もしくはＫ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンであり；
Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、およびアミン保護基からなる群より選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され；
ＡとＡ’は−Ｏ−および−Ｓ−から選択され；
Ｗ’は存在しないか、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−Ｓ−または−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−から選択され；
Ｒｘは存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルから選択され；
Ｒｅは、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
Ｇが−ＣＨ−または−Ｎ−から選択される、
態様２９または３０に記載の方法。
［態様３２］
Ｗ’が−Ｎ（Ｒｅ）−である、態様２９〜３１のいずれか１項に記載の方法。
［態様３３］
Ｒｅは−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋが、−Ｈ、１〜６個の炭
素原子を有する直鎖、分岐環状アルキルである、態様３２に記載の方法。
［態様３４］
Ｒｋは−Ｈまたは−Ｍｅであり、ｎは４であり、そして、ｑが２である、態様３３に記載の方法。
［態様３５］
Ｒｘが、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルである、態様３４に記載の方法。
［態様３６］
Ｒｘは−（ＣＨ２）ｐ−（ＣＲｆＲｇ）−であり、式中、ＲｆとＲｇはそれぞれ、−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキルから独立して選択され；
そして、ｐが０、１、２または３である、態様３４に記載の方法。
［態様３７］
ＲｆとＲｇは同一または異なっており、そして、−Ｈおよび−Ｍｅから選択され；そして、ｐが１である、態様３６に記載の方法。
［態様３８］
Ｙは−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍまたはスルファート−ＯＳＯ３Ｍであり；好ましくは−ＳＯ３Ｍであり；
Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオン（例えば、Ｎａ＋）であり；
Ｘ’とＹ’は共に−Ｈであり；
ＡとＡ’は共に−Ｏ−であり；
Ｒ６は−ＯＭｅであり；そして、
Ｒｘが、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルである、
態様２９〜３７のいずれか１項に記載の方法。
［態様３９］
前記二官能性架橋剤が、
Ｎ‐スクシンイミジル４‐（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシラート（ＳＭＣＣ）、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（Ｎ‐マレイミドメチル）‐シクロヘキサン‐１‐カルボキシ‐（６‐アミドカプロエート）（ＬＣ‐ＳＭＣＣ）、κ‐マレイミドウンデカノイン酸Ｎ‐スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ‐マレイミド酪酸Ｎ‐スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε‐マレイミドカプロン酸Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ‐マレイミドベンゾイル‐Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ‐（α‐マレイミドアセトキシ）‐スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル‐６‐（β‐マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ‐スクシンイミジル４‐（ｐ‐マレイミドフェニル）‐ブチレート（ＳＭＰＢ）、Ｎ‐（ｐ‐マレイミドフェニル）イソシアネート（ＰＭＰＩ）、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（４‐ニトロピリジル‐２‐ジチオ）ブタノエートから選択されるマレイミド系部分；または、
Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（ヨードアセチル）‐アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ‐スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ‐スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）およびＮ‐スクシンイミジル３‐（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）から選択されるハロアセチル系部分、ビス‐マレイミドポリエチレングリコー
ル（ＢＭＰＥＯ）、ＢＭ（ＰＥＯ）２、ＢＭ（ＰＥＯ）３、Ｎ‐（β‐マレイミドプロピルオキシ）スクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、５‐マレイミド吉草酸ＮＨＳ、ＨＢＶＳ、４‐（４‐Ｎ‐マレイミドフェニル）‐酪酸ヒドラジド塩酸塩（ＭＰＢＨ）、スクシンイミジル‐（４‐ビニルスルホニル）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）、ジチオビス‐マレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４‐ビス‐マレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４‐ビスマレイミジル‐２，３‐ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビス‐マレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビス‐マレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、スルフォスクシンイミジル４‐（Ｎ‐マレイミド‐メチル）シクロヘキサン‐１‐カルボキシラート（スルフォ‐ＳＭＣＣ）、スルフォスクシンイミジル（４‐ヨード‐アセチル）アミノベンゾエート（スルフォ‐ＳＩＡＢ）、ｍ‐マレイミドベンゾイル‐Ｎ‐ヒドロキシスルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＭＢＳ）、Ｎ‐（γ‐マレイミドブトリルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＧＭＢＳ）、Ｎ‐（ε‐マレイミドカプロイルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＥＭＣＳ）、Ｎ‐（κ‐マレイミドウンデカノイルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＫＭＵＳ）、スルフォスクシンイミジル４‐（ｐ‐マレイミドフェニル）ブチレート（スルフォ‐ＳＭＰＢ）、ＣＸ１‐１、スルフォ‐ＭａｌおよびＰＥＧｎ‐Ｍａｌである、態様１０〜１６および２３〜３８のいずれか１項に記載の方法。
［態様４０］
前記二官能性架橋剤が、ＳＭＣＣ、スルフォ‐ＳＭＣＣ、ＢＭＰＳ、ＧＭＢＳ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（４‐ニトロピリジル‐２‐ジチオ）ブタノエート、ビス‐マレイミドヘキサンまたはＢＭＰＥＯからなる群より選択される、態様２３〜３８のいずれか１項に記載の方法。
［態様４１］
前記修飾型ＣＢＡが、存在するときは、
【化２４ａ】
0006049642.tif 000145
、
【化２５ａ】
0006049642.tif 000146
【化２６ａ】
0006049642.tif 000147
である、態様２３〜４０のいずれか１項に記載の方法。
［態様４２］
結合基で細胞傷害性化合物に複合体化した細胞結合剤（ＣＢＡ）を含む複合体の調製方法であって、約４〜約９のｐＨで前記ＣＢＡと第２の修飾型細胞傷害性化合物を反応させることを含み、前記の第２修飾型細胞傷害性化合物が、
（ａ）反応性エステルおよびチオール反応性基から選択される反応性基と前記の結合基を含む、前記細胞傷害性化合物に結合した二官能性架橋剤の残基、ならびに、
（ｂ）  
【化２７ａ】
0006049642.tif 000148
で表される基であって、
式中、
Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである、基
を含む、方法。
［態様４３］
前記結合基および前記反応性基を担持するイミン含有細胞傷害性化合物とイミン反応性試薬を反応させることによって、前記第２修飾型細胞傷害性化合物が作製される、態様４２に記載の方法。
［態様４４］
前記ＣＢＡと反応させる前に前記第２修飾型細胞傷害性化合物を精製することをさらに含む、態様４２または４３に記載の方法。
［態様４５］
前記反応性エステルが、Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ‐ヒドロキシスルフォスクシンイミドエステル、ニトロフェニルエステル、ジニトロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、スルフォ‐テトラフルロフェニルエステル、およびペンタフルオロフェニルエステルからなる群より選択される、態様４２〜４４のいずれか１項に記載の方法。
［態様４６］
前記反応性エステルがＮ‐ヒドロキシスクシンイミドエステルである、態様４２〜４４のいずれか１項に記載の方法。
［態様４７］
前記チオール反応性基が、マレイミド、ビニルピリジン、ビニルスルホン、ビニルスルホンアミド、ハロアセチル系基およびジスルフィド基からなる群より選択される、態様４２〜４４のいずれか１項に記載の方法。
［態様４８］
前記チオール反応性基がマレイミド、ハロアセトアミドまたは−ＳＳＲｄであり、式中、Ｒｄが１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキル、フェニル、ニトロフェニル、ジニトロフェニル、カルボキシニトロフェニル、ピリジル、２‐ニトロピリジル、４‐ニトロピリジル、または３‐カルボキシ‐４‐ニトロピリジルである、態様４２〜４４のいずれか１項に記載の方法。
［態様４９］
前記第２修飾型細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化２８ａ】
0006049642.tif 000149
、
【化２９ａ】
0006049642.tif 000150
のうちのいずれか１つ、または薬学的に許容可能なその塩によって表され、
式中、Ｙはサルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；
Ｘ’は−Ｈ、アミン保護基、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は−Ｈ、オキソ基、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキル、またはそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’、およびそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基からなる群より独立して選択され；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、ハロゲンまたはそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’
−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２
）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−ＮＲ５および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され；
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有
する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基で前記のアルキルまたはアルケニルが任意に置換されており；フェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換されることができ、前記の置換基は、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり得る、
態様１４〜４８のいずれか１項に記載の方法。
［態様５０］
Ｌは存在しないか、任意に置換されたフェニル基および任意に置換されたピリジル基から選択され、前記フェニル基と前記ピリジル基が、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基を担持するか、または、Ｌは、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基を担持するアミン基（すなわち、−Ｎ（結合基）−）であるか、または、Ｌは、１〜６個の炭素原子を有し、そして、それに結合した前記反応性基を有する結合基を担持する直鎖、分岐もしくは環状アルキルもしくはアルケニルである、態様４９に記載の方法。
［態様５１］
それに結合した前記反応性基を有する前記結合基に結合した前記細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化３０ａ】
0006049642.tif 000151
、
【化３１ａ】
0006049642.tif 000152
のうちのいずれか１つによって表され、
式中、Ｌ’、Ｌ’’およびＬ’’’は同一または異なっており、そして、Ｌ’、Ｌ’’およびＬ’’’のうちの１つだけが、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基であることを条件にして、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３Ｍ、スルファート−ＯＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’、およびそれに結合した前記反応性基を有する前記結合基から独立して選択され；
Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンであり；ならびに
Ｇが−ＣＨ−または−Ｎ−から選択される、
態様４９に記載の方法。
［態様５２］
Ｌ’、Ｌ’’またはＬ’’’のうちの１つが、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり、残りが−Ｈである、態様５１に記載の方法。
［態様５３］
Ｌ’は、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり、そして、Ｌ’’とＬ’’’が−Ｈである、態様５２に記載の方法。
［態様５４］
ＡとＡ’が共に−Ｏ−であり、Ｒ６が−ＯＭｅであり、そして、Ｇが−ＣＨ−である、態様５２または５３に記載の方法。
［態様５５］
Ｌ’が以下の式：
−Ｗ’−Ｒｘ−Ｖ−Ｒｙ−Ｊ
によって表され、
式中、Ｗ’とＶは同一または異なっており、そして、それぞれ独立して、存在しないか、−ＣＲｅＲｅ’−、−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−、−ＳＳ−または−Ｃ（＝Ｏ）−、またはアミノ酸、または２〜８つのアミノ酸を有するペプチドから選択され；
ＲｘとＲｙは同一または異なっており、そして、それぞれ独立して、存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、６〜１０個の炭素原子を担持するアリール、またはＯ、ＮもしくはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を担持する３員〜８員の複素環であり；
ＲｅとＲｅ’は同一または異なっており、そして、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋから選択され、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；好ましくは、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；
ｎは１から２４までの整数であり；
Ｊは、それに結合した前記反応性基を含み、そして、マレイミド、ハロアセトアミド、−ＳＨ、−ＳＳＲｄ、−ＣＨ２ＳＨ、−ＣＨ（Ｍｅ）ＳＨ、−Ｃ（Ｍｅ）２ＳＨおよび−ＣＯＥから選択され、式中、−ＣＯＥは、Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ‐ヒドロキシスルフォスクシンイミドエステル、ニトロフェニル（例えば、２または４‐ニトロフェニル）エステル、ジニトロフェニル（例えば、２，４‐ジニトロフェニル）エステル、スルフォ‐テトラフルロフェニル（例えば、４‐スルフォ‐２，３，５，６‐テトラフルオロフェニル）エステルおよびペンタフルオロフェニルエステルから選択されるが、これらに限定されない反応性エステルを表し、そして、式中、Ｒｃ１は−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルであり、ならびに
Ｒｄがフェニル、ニトロフェニル（例えば、２または４‐ニトロフェニル）、ジニトロフェニル（例えば、２または４‐ニトロフェニル）、カルボキシニトロフェニル（例えば、３‐カルボキシ‐４‐ニトロフェニル）、ピリジルまたはニトロピリジル（例えば、４‐ニトロピリジル）から選択される、
態様５２、５３または５４に記載の方法。
［態様５６］
Ｊが−ＳＨ、−ＳＳＲｄ、マレイミドまたはＮ‐ヒドロキシスクシンイミドエステルである、態様５５に記載の方法。
［態様５７］
Ｒｅ’は−Ｈまたは−Ｍｅであり；
Ｒｅは１〜６個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり；
ｎは２から８までの整数であり；そして、
Ｒｋが−Ｈ、−Ｍｅまたは−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＭｅ２である、
態様５５または５６に記載の方法。
［態様５８］
Ｖがアミノ酸または２〜８つのアミノ酸を有するペプチドである、態様５５〜５７のいずれか１項に記載の方法。
［態様５９］
Ｖがバリン‐シトルリン、グリシン‐グリシン‐グリシンまたはアラニン‐ロイシン‐アラニン‐ロイシンである、態様５８に記載の方法。
［態様６０］
Ｗ’は−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−または−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−であり；
Ｒｅは−Ｈ、１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり；
Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；
Ｖは存在しないか、−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｓ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−であり；
Ｒｙは存在しないか、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；そして、
Ｊが−ＳＨ、−ＳＳＲｄまたは-ＣＯＥである、
態様５５に記載の方法。
［態様６１］
Ｗ’は−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−または−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−であり；
Ｒｅは−Ｈ、−Ｍｅまたは−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｍｅであり；
ｎは２から６までの整数であり；
Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を担持する直鎖または分岐アルキルであり；
ＶとＲｙは存在せず；そして、
Ｊが−ＣＯＥである、
態様５５に記載の方法。
［態様６２］
−ＣＯＥがＮ‐ヒドロキシスクシンイミドエステルである、態様６０または６１に記載の方法。
［態様６３］
Ｌ’が以下の式：
−Ｗ’−［ＣＲ１’’Ｒ２’’］ａ−Ｖ−［Ｃｙ］０〜１−［ＣＲ３’’Ｒ４’’］ｂ−
ＣＯＥ
によって表され、
式中、Ｒ１’’、Ｒ２’’およびＲ３’’はそれぞれ独立して−Ｈまたは−Ｍｅであり；
Ｒ４’’は−Ｈ、−Ｍｅ、−ＳＯ３Ｈ、または、Ｍ＋が薬学的に許容可能な陽イオン
である−ＳＯ３−Ｍ＋であり；
ａは０〜２の整数であり、ｂは０〜３の整数であり；そして、
Ｃｙは、Ｎヘテロ原子を担持する、任意に置換された５員の複素環であり、好ましくはＣｙが
【化３２ａ】
0006049642.tif 000153
である、
態様５５に記載の方法。
［態様６４］
Ｗ’が−Ｎ（Ｒｅ）−である、態様５５または６３に記載の方法。
［態様６５］
Ｒｅは−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）２〜６−Ｒｋであり、式中、Ｒｋが、−Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキルである、態様５５、６３または６４に記載の方法。
［態様６６］
Ｖが−Ｓ−または−ＳＳ−である、態様５５、６３、６４または６５に記載の方法。
［態様６７］
Ｌ’が以下の式：
−ＮＲｅ−［ＣＲ１’’Ｒ２’’］ａ−Ｓ−［ＣＲ３’’Ｒ４’’］ｂ−ＣＯＥ
によって表される、態様５５、６３、６４、６５または６６に記載の方法。
［態様６８］
それに結合した前記反応性基を有する前記結合基に結合した前記細胞傷害性化合物が
【化３３ａ】
0006049642.tif 000154
または
【化３４ａ】
0006049642.tif 000155
であり、式中、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり、そして、ＭはＨまたは薬学的に許容可能な陽イオンである、態様５５、６３、６４、６５、６６または６７に記載の方法。
［態様６９］
Ｌ’が以下の式：
−ＮＲｅ−［ＣＲ１’’Ｒ２’’］ａ−Ｓ−Ｃｙ−［ＣＲ３’’Ｒ４’’］ｂ−ＣＯＥ
によって表される、態様５５、６３、６４、６５または６６に記載の方法。
［態様７０］
それに結合した前記反応性基を有する前記結合基に結合した前記細胞傷害性化合物が
【化３５ａ】
0006049642.tif 000156
または
【化３６ａ】
0006049642.tif 000157
であり、
式中、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり、そして、Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである、態様５５、６３、６４、６５、６６または６８に記載の方法。
［態様７１］
それに結合した前記反応性基を有する前記結合基に結合した前記細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化３７ａ】
0006049642.tif 000158
または
【化３８ａ】
0006049642.tif 000159
のうちのいずれか１つによって表され、
式中、Ｙは−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍまたは−ＯＳＯ３Ｍから選択され；
Ｍは−Ｈ、またはＮａ＋もしくはＫ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンであり；
Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、およびアミン保護基からなる群より選択され；
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され；
ＡとＡ’は−Ｏ−および−Ｓ−から選択され；
Ｗ’は存在しないか、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−Ｓ−または−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−から選択され；
Ｒｘは存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルから選択され；
Ｒｅは、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
Ｇは−ＣＨ−または−Ｎ−から選択され；
Ｚｓは−Ｈであるか、以下の式：
【化３９ａ】
0006049642.tif 000160
のうちのいずれか１つから選択され、
式中、ｑは１から５までの整数であり；好ましくは、ｑは２であり；
ｎは２から６までの整数であり；好ましくは、ｎは４であり；
Ｄは−Ｈまたは−ＳＯ３Ｍであり；
Ｍが−Ｈ、またはＮａ＋もしくはＫ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンである、
態様４９、５１または５５に記載の方法。
［態様７２］
Ｚｓが、以下の式：
【化４０ａ】
0006049642.tif 000161
のうちのいずれか１つによって表される、態様７１に記載の方法。
［態様７３］
Ｗ’が−Ｎ（Ｒｅ）−である、態様７１または７２に記載の方法。
［態様７４］
Ｒｅは−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋが、−Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキルである、態様７３に記載の方法。
［態様７５］
Ｒｋは−Ｈまたは−Ｍｅであり、ｎは４であり、そして、ｑが２である、態様７４に記載の方法。
［態様７６］
Ｒｘが、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルである、態様７５に記載の方法。
［態様７７］
Ｒｘは−（ＣＨ２）ｐ−（ＣＲｆＲｇ）−であり、式中、ＲｆとＲｇはそれぞれ、−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキルから独立して選択され；
そして、ｐが０、１、２または３である、態様７５に記載の方法。
［態様７８］
ＲｆとＲｇは同一または異なっており、そして、−Ｈおよび−Ｍｅから選択され；そして、ｐが１である、態様７７に記載の方法。
［態様７９］
Ｙは−ＳＯ３Ｍであり；
Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオン（例えば、Ｎａ＋）であり；
Ｘ’とＹ’は共に−Ｈであり；
ＡとＡ’は共に−Ｏ−であり；
Ｒ６は−ＯＭｅであり；そして、
Ｒｘが、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルである、
態様７１〜７８のいずれか１項に記載の方法。
［態様８０］
Ｙが−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍおよびスルファート−ＯＳＯ３Ｍから選択される、態様４９〜７８のいずれか１項に記載の方法。
［態様８１］
Ｙが−ＳＯ３Ｍである、態様８０に記載の方法。
［態様８２］
Ｍが−Ｈ、Ｎａ＋またはＫ＋である、態様８０〜８１のいずれか１項に記載の方法。
［態様８３］
Ｗが、存在するときは、Ｃ＝Ｏである、態様４９〜８２のいずれか１項に記載の方法。
［態様８４］
ＺとＺ’が、存在するときは、−ＣＨ２−である、態様４９〜８３のいずれか１項に記載の方法。
［態様８５］
Ｘ’が、−Ｈ、−ＯＨ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基、およびアミン保護基からなる群より選択される、態様４９〜８４のいずれか１項に記載の方法。
［態様８６］
Ｘ’が−Ｈ、−ＯＨ、−Ｍｅ、または、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基である、態様８５に記載の方法。
［態様８７］
Ｘ’が−Ｈである、態様８６に記載の方法。
［態様８８］
Ｙ’が、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択される、態様４９〜８７のいずれか１項に記載の方法。
［態様８９］
Ｙ’が−Ｈまたはオキソである、態様８８に記載の方法。
［態様９０］
Ｙ’が−Ｈである、態様８９に記載の方法。
［態様９１］
ＡとＡ’が同一または異なっており、そして、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５−、およびオキソ−（Ｃ＝Ｏ）−から選択される、態様４９〜９０のいずれか１項に記載の方法。
［態様９２］
ＡとＡ’が同一または異なっており、そして、−Ｏ−および−Ｓ−から選択される、態様９１に記載の方法。
［態様９３］
ＡとＡ’が−Ｏ−である、態様９２に記載の方法。
［態様９４］
ＤとＤ’が、存在するときは、同一または異なっており、そして、独立して、ｎが１から２４までの整数であるポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、または１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニルから選択され、前記のアルキル、アルケニルおよびアルキニルが、ハロゲン、−ＯＲ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲおよび−ＣＯＲ’からなる群より独立して選択される１つ以上の置換基で任意に置換される、態様４９〜９３のいずれか１項に記載の方法。
［態様９５］
ＤとＤ’が１〜４個の炭素原子を担持する直鎖または分岐アルキルである、態様９４に記載の方法。
［態様９６］
ＷはＣ＝Ｏであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ４およびＲ４’は−Ｈであり；
Ｒ３またはＲ３’の一方が、任意に、それに結合した前記反応性基を有する前記結合基であり、そして、他方が−Ｈであり；
Ｒ６は−ＯＭｅであり；
ＺとＺ’は−ＣＨ２−であり；
Ｘ’は−Ｈであり；
Ｙ’は−Ｈであり；そして、
ＡとＡ’が−Ｏ−である、
態様４９、５０、５１または７１に記載の方法。
［態様９７］
それに結合した前記反応性基を有する前記結合基がリスト１中のいずれか１つである、態様４９〜９６のいずれか１項に記載の方法。
［態様９８］
前記複合体の前記細胞傷害性化合物および前記結合基部分が、以下の式：
【化４１ａ】
0006049642.tif 000162
、
【化４２ａ】
0006049642.tif 000163
のうちのいずれか１つ、または薬学的に許容可能なその塩によって表され、
式中、Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；
Ｘ’は−Ｈ、アミン保護基、前記結合基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｙ’は−Ｈ、オキソ基、前記結合基、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意に置換された６員〜１８員のアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３員〜１８員の複素環から選択され；
Ｒｃは−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキル、または前記結合基であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’およびＲ４’はそれぞれ、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３−Ｍ＋、スルファート−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’および前記の結合基からなる群より独立して選択され；
Ｍは−Ｈ、またはＮａ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンであり；
Ｒは、それぞれの出現に関して、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、６〜１８個の炭素原子を有する任意に置換されたアリール、窒素、酸素およびイオウから独立して選択される１個以上のヘテロ原子を含有する任意に置換された５員〜１８員のヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を含有する任意に置換された３員〜１８員の複素環からなる群より独立して選択され；
Ｒ’とＲ’’はそれぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する任意に置換された３〜１８員の複素環から独立して選択され；
ｎは１から２４までの整数であり；
ＷはＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、ＣＨ２、ＢＨ、ＳＯおよびＳＯ２から選択され；
Ｒ６は−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、ハロゲンまたは前記結合基であり；
ＺとＺ’は−（ＣＨ２）ｎ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＣＲ７Ｒ８−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−ＮＲ９−（ＣＨ２）ｎａ’−、−（ＣＨ２）ｎ’−Ｏ−（ＣＨ２）ｎａ’−および−（ＣＨ２）ｎ’−Ｓ−（ＣＨ２）ｎａ’−から独立して選択され；
ｎ’とｎａ’は同一または異なっており、そして、０、１、２および３から選択され；
Ｒ７とＲ８は同一または異なっており、そして、それぞれ、−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド単位、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルから独立して選択され；
Ｒ９は−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立して選択され；
ＡとＡ’は同一または異なっており、そして、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−および−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立して選択され、
Ｒ５は、それぞれの出現に関して独立して、−Ｈ、または１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖もしくは分岐アルキルであり；
ＤとＤ’は同一または異なっており、そして、独立して、存在しないか、または、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、およびポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−からなる群より選択され；
Ｌは存在しないか、前記結合基、ポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキルまたはアルケニル、フェニル基、Ｏ、Ｓ、ＮおよびＰから独立して選択される１〜６個のヘテロ原子を有する３員〜１８員の複素環または５員〜１８員のヘテロアリール環であり、
前記のアルキルまたはアルケニルは前記結合基によって任意に置換されており；前記結合基を含み得る置換基でフェニルまたは複素環またはヘテロアリール環が任意に置換され得る、
態様１〜９７のいずれか１項に記載の方法。
［態様９９］
Ｙが−ＳＯ２Ｍ、−ＳＯ３Ｍまたは−ＯＳＯ３Ｍである、態様９８に記載の方法。
［態様１００］
Ｌは存在しないか、任意に置換されたフェニル基および任意に置換されたピリジル基から選択され、前記フェニル基と前記ピリジル基が前記結合基を担持し、または、Ｌは前記結合基を担持するアミン基（すなわち、−Ｎ（結合基）−）であるか、または、Ｌが、１〜６個の炭素原子を有し、そして、前記結合基を担持する直鎖、分岐もしくは環状アルキルもしくはアルケニルである、態様９８または９９に記載の方法。
［態様１０１］
前記結合基に結合した前記細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化４３ａ】
0006049642.tif 000164
、
【化４４ａ】
0006049642.tif 000165
のうちのいずれか１つによって表され、
式中、Ｌ’、Ｌ’’およびＬ’’’は同一または異なっており、そして、Ｌ’、Ｌ’’およびＬ’’’のうちの１つだけが前記結合基であることを条件に、−Ｈ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’で表されるスルフオキシド、−ＳＯ２Ｒ’で表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３Ｍ、スルファート−ＯＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’で表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’および前記結合基から独立して選択され；ならびに
Ｇが−ＣＨ−または−Ｎ−から選択される、
態様９８または９９に記載の方法。
［態様１０２］
Ｌ’、Ｌ’’またはＬ’’’のうちの１つが前記結合基であり、残りが−Ｈである、態様１０１に記載の方法。
［態様１０３］
Ｌ’が前記結合基であり、そして、Ｌ’’とＬ’’’が−Ｈである、態様１０２に記載の方法。
［態様１０４］
ＡとＡ’が共に−Ｏ−であり、Ｒ６が−ＯＭｅであり、そして、Ｇが−ＣＨ−である、態様１０２または１０３に記載の方法。
［態様１０５］
Ｌ’が以下の式：
−Ｗ’−Ｒｘ−Ｖ−Ｒｙ−Ｊ
によって表され、
式中、Ｗ’とＶは同一または異なっており、そして、それぞれ独立して、存在しないか、−ＣＲｅＲｅ’−、−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−、−ＳＳ−または−Ｃ（＝Ｏ）−、またはアミノ酸、または２〜８つのアミノ酸を有するペプチドから選択され；
ＲｘとＲｙは同一または異なっており、そして、それぞれ独立して、存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、６〜１０個の炭素原子を担持するアリール、またはＯ、ＮもしくはＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を担持する３員〜８員の複素環であり；
ＲｅとＲｅ’は同一または異なっており、そして、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋから選択され、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、
１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；好ましくは、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；
ｎは１から２４までの整数であり；そして、
Ｊは前記ＣＢＡに共有結合し、そして、スクシンイミド、アセトアミド、−Ｓ−、−ＳＳ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ（Ｍｅ）Ｓ−、−Ｃ（Ｍｅ）２Ｓ−、−ＮＲｃ１−、−ＣＨ２ＮＲｃ１−、−ＮＲｃ１Ｎ−および−Ｃ（＝Ｏ）−から選択され、式中、Ｒｃ１は−Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する置換型もしくは非置換型の直鎖もしくは分岐アルキルである、
態様１０２、１０３または１０４に記載の方法。
［態様１０６］
Ｊが−Ｓ−、−ＳＳ−、スクシンイミドまたは−Ｃ（＝Ｏ）−である、態様１０５に記載の方法。
［態様１０７］
Ｒｅ’は−Ｈまたは−Ｍｅであり；
Ｒｅは１〜６個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり；
ｎは２から８までの整数であり；そして、
Ｒｋが−Ｈ、−Ｍｅまたは−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＭｅ２である、
態様１０５または１０６に記載の方法。
［態様１０８］
Ｖがアミノ酸または２〜８つのアミノ酸を有するペプチドである、態様１０５〜１０７のいずれか１項に記載の方法。
［態様１０９］
Ｖがバリン‐シトルリン、グリシン‐グリシン‐グリシンまたはアラニン‐ロイシン‐アラニン‐ロイシンである、態様１０８に記載の方法。
［態様１１０］
Ｗ’は−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−または−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−であり；
Ｒｅは−Ｈ、１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり；
Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；
Ｖは存在しないか、−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、−Ｓ−、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−であり；
Ｒｙは存在しないか、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；そして、
Ｊが−Ｓ−、−ＳＳ−または−Ｃ（＝Ｏ）−である、
態様１０５に記載の方法。
［態様１１１］
Ｗ’は−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−または−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−であり；
Ｒｅは−Ｈ、−Ｍｅまたは−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｍｅであり；
ｎは２から６までの整数であり；
Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を担持する直鎖または分岐アルキルであり；
ＶとＲｙは存在せず；そして、
Ｊが−Ｃ（＝Ｏ）−である、
態様１０５に記載の方法。
［態様１１２］
Ｌ’が以下の式：
−Ｗ’−［ＣＲ１’’Ｒ２’’］ａ−Ｖ−［Ｃｙ］０〜１−［ＣＲ３’’Ｒ４’’］ｂ−
Ｃ（＝Ｏ）−
によって表され、
式中、Ｒ１’’、Ｒ２’’およびＲ３’’はそれぞれ独立して−Ｈまたは−Ｍｅであり；
Ｒ４’’は−Ｈ、−Ｍｅ、−ＳＯ３Ｈ、またはＭ＋が薬学的に許容可能な陽イオンである−ＳＯ３−Ｍ＋であり；
ａは０〜２の整数であり、ｂは０〜３の整数であり；そして、
Ｃｙは、Ｎヘテロ原子を担持する、任意に置換された５員の複素環であり、好ましくはＣｙが
【化４５ａ】
0006049642.tif 000166
である、
態様１０５に記載の方法。
［態様１１３］
Ｗ’が−Ｎ（Ｒｅ）−である、態様１０５または１１２に記載の方法。
［態様１１４］
Ｒｅは−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）２〜６−Ｒｋであり、式中、Ｒｋが、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルである、態様１０５、１１２または１１３に記載の方法。
［態様１１５］
Ｖが−Ｓ−または−ＳＳ−である、態様１０５、１１２、１１３または１１４に記載の方法。
［態様１１６］
Ｌ’が以下の式：
−ＮＲｅ−［ＣＲ１’’Ｒ２’’］ａ−Ｓ−［ＣＲ３’’Ｒ４’’］ｂ−Ｃ（＝Ｏ）−
によって表される、態様１０５、１１２、１１３、１１４または１１５に記載の方法。
［態様１１７］
前記複合体が、
【化４６ａ】
0006049642.tif 000167
または
【化４７ａ】
0006049642.tif 000168
であって、式中、ｒは１から１０までの整数であり、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり、そして、Ｍが−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである、態様１０５、１１２、１１３、１１４または１１５に記載の方法。
［態様１１８］
前記抗体がｈｕＭｙ９−６である、態様１０５、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６または１１７に記載の方法。
［態様１１９］
Ｌ’が以下の式：
−ＮＲｅ−［ＣＲ１’’Ｒ２’’］ａ−Ｓ−Ｃｙ−［ＣＲ３’’Ｒ４’’］ｂ−Ｃ（＝Ｏ）−．
によって表される、態様１０５、１１２、１１３、１１４または１１５に記載の方法。
［態様１２０］
前記複合体が
【化４８ａ】
0006049642.tif 000169
または
【化４９ａ】
0006049642.tif 000170
であって、
式中、ｒは１から１０までの整数であり、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり、そして、Ｍが−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである、態様１０５、１１２、１１３、１１４、１１５または１１９に記載の方法。
［態様１２１］
前記抗体がｈｕＭｙ９−６である、態様１０５、１１２、１１３、１１４、１１５、１１９または１２０に記載の方法。
［態様１２２］
前記結合基に結合した前記細胞傷害性化合物が、以下の式：
【化５０ａ】
0006049642.tif 000171
、
【化５１ａ】
0006049642.tif 000172
によって表され、
式中、Ｗ’は存在しないか、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−Ｓ−、−ＣＨ２−Ｓ−または−ＣＨ２ＮＲｅ−から選択され；
Ｒｘは存在しないか、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキルから選択され；
Ｒｅは、−Ｈ、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋは−Ｈ、第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）基もしくは第三級アミノ（−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を任意に担持する、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５員もしくは６員の窒素含有ヘテロ環であり、式中、Ｒ１０１とＲ１０２はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；
ｎは２から６までの整数であり；
Ｚｓは前記ＣＢＡに結合し、そして、結合、
【化５２ａ】
0006049642.tif 000173
【化５３ａ】
0006049642.tif 000174
から選択され、
式中、ｑは１から５までの整数であり；そして、
Ｍが−Ｈ、またはＮａ＋もしくはＫ＋などの薬学的に許容可能な陽イオンである、態様９８、９９または１０１に記載の方法。
［態様１２３］
Ｚｓが
【化５４ａ】
0006049642.tif 000175
である、態様１２２に記載の方法。
［態様１２４］
Ｗ’が−Ｎ（Ｒｅ）−である、態様１２２または１２３に記載の方法。
［態様１２５］
Ｒｅは−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｎ−Ｒｋであり、式中、Ｒｋが、−Ｈ、１〜６個の炭素原子を有する直鎖、分岐環状アルキルである、態様１２４に記載の方法。
［態様１２６］
Ｒｋは−Ｈまたは−Ｍｅであり、ｎは４であり、そして、ｑが２である、態様１２５に記載の方法。
［態様１２７］
Ｒｘは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルである、態様１２６に記載の方法。
［態様１２８］
Ｒｘは−（ＣＨ２）ｐ−（ＣＲｆＲｇ）−であり、式中、ＲｆとＲｇはそれぞれ、Ｈ、または１〜４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐アルキルから独立して選択され；そして、ｐが０、１、２または３である、態様１２６に記載の方法。
［態様１２９］
ＲｆとＲｇは同一または異なっており、そして、ＨおよびＭｅから選択され；そして、ｐが１である、態様１２８に記載の方法。
［態様１３０］
Ｙは−ＳＯ３Ｍであり；
Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオン（例えば、Ｎａ＋）であり；
Ｘ’とＹ’は共に−Ｈであり；
ＡとＡ’は共に−Ｏ−であり；
Ｒ６は−ＯＭｅであり；そして、
Ｒｘが、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルである、
態様１２２〜１２９のいずれか１項に記載の方法。
［態様１３１］
Ｙが−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍおよびスルファート−ＯＳＯ３Ｍから選択される、態様９８〜１２９のいずれか１項に記載の方法。
［態様１３２］
Ｙが−ＳＯ３Ｍである、態様１３１に記載の方法。
［態様１３３］
Ｍが−Ｈ、Ｎａ＋またはＫ＋である、態様１３１〜１３２のいずれか１項に記載の方法。
［態様１３４］
Ｗが、存在するときは、Ｃ＝Ｏである、態様９８〜１３３のいずれか１項に記載の方法。
［態様１３５］
ＺとＺ’が、存在するときは、−ＣＨ２−である、態様９８〜１３４のいずれか１項に記載の方法。
［態様１３６］
Ｘ’が、−Ｈ、−ＯＨ、１個から１０個までの炭素原子を有する任意に置換された直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、前記結合基およびアミン保護基からなる群より選択される、態様９８〜１３５のいずれか１項に記載の方法。
［態様１３７］
Ｘ’が−Ｈ、−ＯＨ、−Ｍｅまたは前記結合基である、態様１３６に記載の方法。
［態様１３８］
Ｘ’が−Ｈである、態様１３７に記載の方法。
［態様１３９］
Ｙ’が、−Ｈ、オキソ基、１個から１０個までの炭素原子を有する置換型または非置換型の直鎖、分岐または環状アルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択される、態様９８〜１３８のいずれか１項に記載の方法。
［態様１４０］
Ｙ’が−Ｈまたはオキソである、態様１３９に記載の方法。
［態様１４１］
Ｙ’が−Ｈである、態様１４０に記載の方法。
［態様１４２］
ＡとＡ’が同一または異なっており、そして、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ５）−およびオキソ（Ｃ＝Ｏ）から選択される、態様９８〜１４１のいずれか１項に記載の方法。
［態様１４３］
ＡとＡ’が同一または異なっており、そして、−Ｏ−および−Ｓ−から選択される、態様１４２に記載の方法。
［態様１４４］
ＡとＡ’が−Ｏ−である、態様１４３に記載の方法。
［態様１４５］
ＤとＤ’が、存在するときは、同一または異なっており、そして、独立して、ｎが１から２４までの整数であるポリエチレングリコール単位（−ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ、アミノ酸、２〜６つのアミノ酸を担持するペプチド、または１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニルから選択され、前記のアルキル、アルケニルおよびアルキニルが、ハロゲン、−ＯＲ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲおよび−ＣＯＲ’からなる群より独立して選択される１つ以上の置換基で任意に置換される、態様９８〜１４４のいずれか１項に記載の方法。
［態様１４６］
ＤとＤ’が１〜４個の炭素原子を担持する直鎖または分岐アルキルである、態様１４５に記載の方法。
［態様１４７］
Ｙは−ＳＯ３Ｍであり；
Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオン（例えば、Ｎａ＋）であり；
ＷはＣ＝Ｏであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ４およびＲ４’は−Ｈであり；
Ｒ３またはＲ３’の一方が、任意に、前記結合基であり、そして、他方が−Ｈであり；
Ｒ６は−ＯＭｅであり；
ＺとＺ’は−ＣＨ２−であり；
Ｘ’は−Ｈであり；
Ｙ’は−Ｈであり；そして、
ＡとＡ’が−Ｏ−である、
態様９８、９９、１０１または１２２に記載の方法。
［態様１４８］
前記複合体が１〜１０個の細胞傷害性化合物を含み、各細胞傷害性化合物が前記結合基を介して前記ＣＢＡに結合し、そして、前記複合体上の各細胞傷害性化合物が同一である、態様９８〜１４７のいずれか１項に記載の方法。
［態様１４９］
前記複合体が１〜１０個の修飾型細胞傷害性化合物を含み、各修飾型細胞傷害性化合物が前記結合基を介して前記ＣＢＡに結合し、そして、前記複合体上の各修飾型細胞傷害性化合物が同一である、態様１〜９および１４〜２２のいずれか１項に記載の方法。
［態様１５０］
前記細胞結合剤が、腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、微生物感染細胞、寄生生物感染細胞、自己免疫細胞、活性化細胞、骨髄細胞、活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞またはメラニン形成細胞；ＣＤ４、ＣＤ６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＥｐＣＡＭ、ＣａｎＡｇ、ＣＡＬＬＡもしくはＨｅｒ−２抗原を発現する細胞；Ｈｅｒ−３抗原を発現する細胞；またはインスリン成長因子受容体を発現する細胞、上皮成長因子受容体を発現する細胞、および葉酸受容体を発現する細胞から選択される標的細胞に結合する、態様９８〜１４９のいずれか１項に記載の方法。
［態様１５１］
前記細胞結合剤が抗体、単鎖抗体、前記標的細胞に特異的に結合する抗体断片、モノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、または標的細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体断片、キメラ抗体、前記標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体断片、ドメイン抗体、前記標的細胞に特異的に結合するドメイン抗体断片、リンホカイン、ホルモン、ビタミン、成長因子、コロニー刺激因子または栄養輸送分子である、態様１５０に記載の方法。
［態様１５２］
前記抗体が表面付替抗体（ｒｅｓｕｒｆａｃｅｄ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）、表面付替単鎖抗体または表面付替抗体断片である、態様１５１に記載の方法。
［態様１５３］
前記抗体がモノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、またはそのモノクローナル抗体断片である、態様１５１に記載の方法。
［態様１５４］
前記抗体がヒト化抗体、ヒト化単鎖抗体、またはヒト化抗体断片である、態様１５１に記載の方法。
［態様１５５］
前記イミン反応性試薬が、サルファイト（Ｈ２ＳＯ３、Ｈ２ＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ、ジ、トリおよびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ３、ＰＯＳ３Ｈ３、ＰＳ４Ｈ３、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳＨ、ＲｉＳＯＨ、ＲｉＳＯ２Ｈ、ＲｉＳＯ３Ｈ）、様々なアミン（ヒドロキシルアミン（例えば、ＮＨ２ＯＨ）、ヒドラジン（例えば、ＮＨ２ＮＨ２）、ＮＨ２Ｏ−Ｒｉ、Ｒｉ’ＮＨ−Ｒｉ、ＮＨ２−Ｒｉ）、ＮＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ２−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２、チオスルファート（Ｈ２Ｓ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（Ｈ２Ｓ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ）（ＳＨ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（ＲｋＣ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ヒドラジド（ＲｋＣＯＮＨＮＨ２）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２Ｈ、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、グリケート化ヌクレオチド（例えば、ＧＤＰ‐マンノース）、フルダラビン、またはそれらの混合物からなる群より選択され、式中、ＲｉとＲｉ’はそれぞれ独立して、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；ＲｉとＲｉ’は、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールである、態様２〜１５４のいずれか１項に記載の方法。
［態様１５６］
前記イミン反応性試薬がサルファイト、ヒドロキシルアミン、ヒドラジンおよび尿素から選択される、態様２〜１５４のいずれか１項に記載の方法。
［態様１５７］
前記イミン反応性試薬がＮａＨＳＯ３またはＫＨＳＯ３である、態様２〜１５４のいずれか１項に記載の方法。
［態様１５８］
前記イミン含有細胞傷害性化合物に対して約０．１〜約３０モル当量の前記イミン反応性試薬が使用される、態様２〜１５７のいずれか１項に記載の方法。
［態様１５９］
前記イミン含有細胞傷害性化合物に対して約１〜約１０モル当量の前記イミン反応性試薬が使用される、態様２〜１５７のいずれか１項に記載の方法。
［態様１６０］
前記イミン含有細胞傷害性化合物に対して約３〜約５モル当量の前記イミン反応性試薬が使用される、態様２〜１５７のいずれか１項に記載の方法。
［態様１６１］
前記二官能性架橋剤が、Ｎ‐スクシンイミジル４‐（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシラート（ＳＭＣＣ）、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（Ｎ‐マレイミドメチル）‐シクロヘキサン‐１‐カルボキシ‐（６‐アミドカプロエート）（ＬＣ‐ＳＭＣＣ）、κ‐マレイミドウンデカノイン酸Ｎ‐スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ‐マレイミド酪酸Ｎ‐スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε‐マレイミドカプロン酸Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ‐マレイミドベンゾイル‐Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ‐（α‐マレイミドアセトキシ）‐スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル‐６‐（β‐マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ‐スクシンイミジル４‐（ｐ‐マレイミドフェニル）‐ブチレート（ＳＭＰＢ）、Ｎ‐（ｐ‐マレイミドフェニル）イソシアネート（ＰＭＰＩ）、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（４‐ニトロピリジル‐２‐ジチオ）ブタノエートから選択されるマレイミド系部分；または、
Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（ヨードアセチル）‐アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ‐スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ‐スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）およびＮ‐スクシンイミジル３‐（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）から選択されるハロアセチル系部分、ビス‐マレイミドポリエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、ＢＭ（ＰＥＯ）２、ＢＭ（ＰＥＯ）３、Ｎ‐（β‐マレイミドプロピルオキシ）スクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、５‐マレイミド吉草酸ＮＨＳ、ＨＢＶＳ、４‐（４‐Ｎ‐マレイミドフェニル）‐酪酸ヒドラジド塩酸塩（ＭＰＢＨ）、スクシンイミジル‐（４‐ビニルスルホニル）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）、ジチオビス‐マレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４‐ビス‐マレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４‐ビスマレイミジル‐２，３‐ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビス‐マレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビス‐マレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、スルフォスクシンイミジル４‐（Ｎ‐マレイミド‐メチル）シクロヘキサン‐１‐カルボキシラート（スルフォ‐ＳＭＣＣ）、スルフォスクシンイミジル（４‐ヨード‐アセチル）アミノベンゾエート（スルフォ‐ＳＩＡＢ）、ｍ‐マレイミドベンゾイル‐Ｎ‐ヒドロキシスルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＭＢＳ）、Ｎ‐（γ‐マレイミドブトリルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＧＭＢＳ）、Ｎ‐（ε‐マレイミドカプロイルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＥＭＣＳ）、Ｎ‐（κ‐マレイミドウンデカノイルオキシ）スルフォスクシンイミドエステル（スルフォ‐ＫＭＵＳ）、スルフォスクシンイミジル４‐（ｐ‐マレイミドフェニル）ブチレート（スルフォ‐ＳＭＰＢ）、ＣＸ１‐１、スルフォ‐ＭａｌおよびＰＥＧｎ‐Ｍａｌである、態様１〜１６０のいずれか１項に記載
の方法。
［態様１６２］
前記二官能性架橋剤が、ＳＭＣＣ、スルフォ‐ＳＭＣＣ、ＢＭＰＳ、ＧＭＢＳ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、Ｎ‐スクシンイミジル‐４‐（４‐ニトロピリジル‐２‐ジチオ）ブタノエート、ビス‐マレイミドヘキサンまたはＢＭＰＥＯからなる群より選択される、態様１〜１６１のいずれか１項に記載の方法。
［態様１６３］
接線流濾過、吸着クロマトグラフィー、吸着濾過、選択的沈殿、非吸着濾過、またはそれらの組合せによって前記複合体が精製される、態様１〜１６２のいずれか１項に記載の方法。
［態様１６４］
接線流濾過および／または吸着クロマトグラフィーによって前記複合体が精製される、態様１〜１６２のいずれか１項に記載の方法。
［態様１６５］
次の式：
【化５５ａ】
0006049642.tif 000176
、
【化５６ａ】
0006049642.tif 000177
、
【化５７ａ】
0006049642.tif 000178
または
【化５８ａ】
0006049642.tif 000179
の複合体を調製する方法であって、次の式
【化５９ａ】
0006049642.tif 000180
の修飾型細胞傷害性化合物を約４〜約９のｐＨで次の式
【化６０ａ】
0006049642.tif 000181
、
【化６１ａ】
0006049642.tif 000182
、
【化６２ａ】
0006049642.tif 000183
、
【化６３ａ】
0006049642.tif 000184
の修飾型ＣＢＡとそれぞれ反応させることを含み、
式中、ｒは１から１０までの整数であり；
Ｙは脱離基であり、そして、サルファイト（ＨＳＯ３、ＨＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ‐、ジ‐、トリ‐およびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオスルファート（ＨＳ２Ｏ３、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ３２−の塩）、ジチオニト（ＨＳ２Ｏ４、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ）、または陽イオンと共に形成されるその塩）、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ、または陽イオンと共に形成される塩）、ホルムアルデヒドスルホキシラート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−、または陽イオンと共に形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩、例えば、ＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋）、またはそれらの混合物であり、式中、Ｒｉは、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであって、−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈおよび−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１つの置換基で置換され；Ｒｉは、本明細書に記載されるアルキルの置換基で任意にさらに置換されることができ；Ｒｊは、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分岐アルキルであり；Ｒｋ’は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリールまたはヘテロアリールであり；好ましくは、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり；そして
Ｍが−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである、
方法。
［態様１６６］
Ｙが−ＳＯ３Ｍであり；そして、Ｍが−Ｈまたは薬学的に許容可能な陽イオンである、態様１６５に記載の方法。
［態様１６７］
次の式：
【化６４ａ】
0006049642.tif 000185
のイミン含有細胞傷害性化合物とイミン反応性試薬を反応させることによって前記修飾型細胞傷害性化合物を作製する、態様１６５または１６６に記載の方法。
［態様１６８］
前記ＣＢＡがｈｕＭｙ９−６である、態様１６５〜１６７のいずれか１項に記載の方法。
［態様１６９］
次の式：
【化６５ａ】
0006049642.tif 000186
、
【化６６ａ】
0006049642.tif 000187
、
【化６７ａ】
0006049642.tif 000188
、または
【化６８ａ】
0006049642.tif 000189
の複合体を調製する方法であって、イミン含有細胞傷害性化合物、イミン反応性試薬、および前記結合基を含む二官能性架橋剤と前記ＣＢＡを反応させて前記複合体を形成することを含み、前記イミン含有細胞傷害性化合物が、
【化６９ａ】
0006049642.tif 000190
であり、前記二官能性架橋剤が、それぞれ、
【化７０ａ】
0006049642.tif 000191
、
【化７１ａ】
0006049642.tif 000192
【化７２ａ】
0006049642.tif 000193
、または
【化７３ａ】
0006049642.tif 000194
であり、そして、
前記イミン反応性試薬はサルファイト（Ｈ２ＳＯ３、Ｈ２ＳＯ２、または陽イオンと共に形成されるＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタバイサルファイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、または陽イオンと共に形成されるＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ、ジ、トリおよびテトラ‐チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ３、ＰＯＳ３Ｈ３、ＰＳ４Ｈ３、または陽イオンと共に形成されるＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳＨ、ＲｉＳＯＨ、ＲｉＳＯ２Ｈ、ＲｉＳＯ３Ｈ）、様々なアミン（ヒドロキシルアミン（例えば、ＮＨ２ＯＨ）、ヒドラジン（例えば、ＮＨ２ＮＨ２）、ＮＨ２Ｏ−Ｒｉ、Ｒｉ’ＮＨ−Ｒｉ、ＮＨ２−Ｒｉ）、ＮＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ２−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２、チオスルファート（Ｈ２Ｓ２Ｏ３