(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
毛髪ケア製剤を調製するための、アルコール基がリポ酸またはリポ酸およびギ酸で部分的にエステル化されたグリコサミノグリカンエステルの使用。
【請求項２】
多糖のカルボキシル官能基が酸形態で存在するか、またはアルカリ金属で塩化されており、硫酸官能基は、存在する場合、アルカリ金属で塩化されている、請求項１に記載のグリコサミノグリカンエステルの使用。
【請求項３】
エステルの分子量が１０3から１０7ダルトンの範囲である、請求項１に記載のグリコサミノグリカンエステルの使用。
【請求項４】
分子量が１０4から１０6ダルトンの範囲である、請求項３に記載のグリコサミノグリカンエステルの使用。
【請求項５】
ポリマーのヒドロキシルにおけるリポ酸のエステル化度が、０．０１から１*Ｎの範囲（Ｎは、反復単位中に存在する遊離アルコール基の数である）であり、ポリマーのヒドロキシルにおけるギ酸のエステル化度が、０から０．２０*Ｎの範囲である、請求項１から４に記載のグリコサミノグリカンエステルの使用。
【請求項６】
ポリマーのヒドロキシルにおけるリポ酸のエステル化度が、０．０１から０．２*Ｎの範囲（Ｎは、反復単位中に存在する遊離アルコール基の数である）であり、ポリマーのヒドロキシルにおけるギ酸のエステル化度が、０から０．２０*Ｎの範囲である、請求項１に記載のグリコサミノグリカンエステルの使用。
【請求項７】
アルコール基がリポ酸またはリポ酸およびギ酸で部分的にエステル化されたグリコサミノグリカンエステルを含み、また、亜鉛塩および／または銀塩を、０．１〜１０の金属のリポ酸の含量に対するモル比で含有する、毛髪ケア用の局所組成物。
【請求項８】
前記毛髪ケアが、美容用毛髪再生、補強または脱毛予防である、請求項７に記載の局所組成物。
【請求項９】
男性型脱毛症または休止期脱毛状態の治療用の、請求項７に記載の局所組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、毛幹のケラチンの皮膜形成および保護作用、フリーラジカルの攻撃に対する保護作用、ならびに毛嚢の活性化、強化、脱毛予防作用を有する、機能性物質としてのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のリポ酸エステルおよび混合リポ酸−ギ酸エステルの、化粧品および皮膚保護用途の使用を開示する。
【０００２】
本発明は、前記グリコサミノグリカンエステルを含有する、保護、強化および脱毛予防活性を有する局所製剤にも関する。
【０００３】
前記エステル、特にヒアルロン酸（ＨＡ）およびコンドロイチン硫酸（ＣＳ）のエステルの調製は、ＷＯ２００９／０８０２２０に開示されている。
【背景技術】
【０００４】
ヒアルロン酸は、身体の数多くの部位、とりわけ滑液、眼球および真皮の細胞外マトリックスに存在する、遍在する内在性多糖である。ヒアルロン酸の生物活性に関する数多くの研究により、その消炎、組織再生および関節内補充特性(Viscosupplementation properties)ならびに高度の組織水和を維持する能力（細胞外マトリックスにおけるイオン拡散のモジュレーターおよび細胞運動レギュレーターとして機能する）が明らかになった。ラジカルスカベンジャー作用も引用されているが、これはいくつかの反応種に対して見られるだけであり、この点における有効性は限定されている。
【０００５】
完全または部分的置換によって、他の分子をアルコール基に連結する数多くの可能性を有しているヒアルロン酸の拡張構造は、小さな活性分子にとって理想的な輸送系であることが証明された。これらの新規のポリマー化合物は、小さな活性構成成分(constituent)の身体表面への制御放出系として働き、ヒアルロン酸の基本構造は、放出の全段階において付着および総合的な生物学的適合性を保証する。ヒアルロン酸とリポ酸との組合せは、この種類の有効な結びつきの例である。
【０００６】
リポ酸は、炭水化物およびタンパク質の代謝において、ミトコンドリアのレベルのさまざまな多酵素複合体おける必須の補因子であり、ＡＴＰ産生メカニズムに関与している。フリーラジカルおよび酸化ストレスに対抗する作用、金属のキレート化、ならびにグルタチオンならびにビタミンＣおよびＥなどの他の抗酸化分子の再生も、実験的に明らかになった。
【０００７】
５員環中にジスルフィド架橋を有する特別な化学構造のため、そして低いリポエート／ジヒドロリポエート系の酸化還元電位において、α−リポ酸は、活性酸素種（ＲＯＳ）、例えばヒドロキシル、超酸化物、過酸化物、一重項酸素およびフリーラジカル酸化窒素を除去する反応に関わっている。α−リポ酸は、タンパク質構造を分解してラジカル形態を発生させる次亜塩素酸塩またはＨ２Ｏ２などの非ラジカル酸化種とも非常に速く反応する。さらに、リポ酸は、フリーラジカルを生成する反応を触媒する（鉄および銅のような）遷移金属をキレートし、したがって上流の分解作用物質を中和する。
【０００８】
リポ酸は、ダイエット用の栄養補助食品として利用されることが多くなっているが、非現実的ゆえに、化粧品目的ではあまり一般に使用されていない。リポ酸それ自体は水に溶けず、ナトリウム塩の溶解度が、少なくとも７．４でなくてはならないｐＨによって制限されている。現在のリポ酸の局所適用は、皮膚化粧品(dermocosmetic)分野のみにほとんど限定されており、抗老化製剤、皮膚脱色剤ならびに炎症、肥大およびケロイド瘢痕、酒さ、にきびおよびその後の瘢痕の治療用の製剤に関する。
【０００９】
化粧品において、ＨＡの使用は、保湿剤であると主にクレームされており、このクレームは、主な特性が、使用される特定の分子量に関係する未修飾天然分子に関する。毛髪学分野におけるＨＡの適用は、顔／身体のために考案されたものよりもより最近のものである。ＵＳ５３４０５７９は、皮膚および毛髪の病理状態の治療における、グリコサミノグリカンの複合混合物の使用をクレームしている。これらの混合物は、非常に高分子量(２．５〜３．０＊１０６ダルトン)のＨＡ、特に、ヒトの臍帯から抽出したプロテオグリカンも含む。著者は、混合物の作用メカニズムまたは実際の活性成分の性質を明らかにしていないが、臍帯抽出物中に存在する「プロテオヒアルロン酸」のペプチド鎖が、高保湿作用を有する他の成分の経皮吸収増加において重要な役割を果たすことをクレームしている。
【００１０】
ＪＰ２００７１１３９２１(ＥＰ２１６６０２２)(特許文献１)は、第４級アンモニウム基をもつ残基でグルクロン酸カルボキシル基がエステル化されたＨＡに基づく生成物の、毛髪学的使用を開示している。
【００１１】
ＤＥ４４１９７８３は、エラスチン異化の原因となる酵素を阻害する活性剤として、リポ酸およびジヒドロリポ酸のエステルを含有する薬用シャンプーを開示している。さらに、消炎作用は、リポ酸のＲエナンチオマーによるものであり、鎮痛作用はＳエナンチオマーによるものである。
【００１２】
ＪＰ６２−１７５４１７(特許文献２)は、脱毛症の場合における再成長のアクチベーター、脱毛予防作用およびフケ防止活性としての、リポ酸およびその疎水性誘導体の活性を報告している。
【００１３】
ＷＯ２００６／１１７９９５に相当するＪＰ２００８１７４４５３は、テストステロンをジヒドロテストステロンに変換し、結果として細胞増殖を低減させる酵素５α−還元酵素の阻害を含む、金属と複合化したジヒドロリポ酸のさまざまな代謝作用を開示している。脱毛症に対するその治療用途もクレームされている。
【００１４】
ＲＵ２３５７７２２は、リポ酸に、毛嚢における細胞増殖に影響を与え、毛髪の再成長を刺激する能力があると見なしている。
【００１５】
ＪＰ２００９／１３７９２７(特許文献３)は、さまざまな化学的性質のアルコールとのリポ酸エステルの合成および使用を開示しているが、一般的に糖も、特定的にはＧＡＧも引用されていない。
【００１６】
ＷＯ２００６／１２８６１８に相当するＥＰ１８９０６９２は、リポ酸とヒアルロン酸またはその誘導体との物理的混合物を含有する製剤を開示しており、皮膚の再生、紫外線による老化の予防および慢性潰瘍の治療、ならびに、全身に投与される場合、化学的および生物学的原因物質によって引き起こされる神経障害および中毒の治療のための医学的応用をクレームしている。化粧品または毛髪ケア処置におけるその有効性の証拠は、引用されていない。
【００１７】
ＷＯ２００９／０８０２２０は、多糖に対するリポ酸のエステルおよびアミド誘導体の合成および調製方法を記載している。
【００１８】
ＵＳ２００３／１８０３３７は、皮膚または毛髪用の化粧品組成物における、リポ酸のＲエナンチオマーの使用を記載している。
【００１９】
ＷＯ２００７／１０５８５４は、リポ酸およびＰＥＧを含むエステルを記載しており、弾性付与剤、美白剤、抗ラジカル剤、かゆみ防止剤、フケ防止剤および毛髪再成長促進剤としての、化粧品用途におけるそれらの局所適用をクレームしている。言い換えると、リポ酸はその安定性を改善するために「ペグ化される」。同じ著者によると、ＰＥＧ−リポ酸エステルは、リポ酸単独よりもより速く／効果的に（１．６倍）皮膚に吸収され、反対に、多糖リポ酸エステルは、リポ酸の長期滞留を毛幹表面で保証し、そこで外部の酸化剤に対するバリアーが安定化され、ＧＡＧの保湿性による生理学的水和を維持する。特に、ＨＡは、多糖が蓄積する領域に、すなわち毛幹および毛嚢中に、リポ酸を結合させる(Ｎｏｖｏｚｙｍｅ  ｐｏｓｔｅｒ、Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｓ、Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ(ＵＳＡ)、２００５年１２月８〜９日)。脱毛の制限におけるペグ化リポ酸エステルの有効性、または強化／増強作用(reinforcing/fortifying action)の有効性、のいかなる改善も言及されていない。
【００２０】
先行技術のさまざまな文書が、高価で入手が困難である(ＵＳ２００３／１８０３３７における、Ｒ異性体がエナンチオマー過剰である混合物)、または安定でない(ＷＯ２００６／１１７９９５における還元型ジヒドロリポ−ＤＨＬ形態(dihydrolipoic-DHL form))リポ酸形態の使用必要性を明白に強調しており、リポ酸形態は、金属またはポリエチレングリコールと複合化して、その安定性を保証する必要がある。これらの形態のみが有効であると認められており、より安定な形態のラセミ化合物を暗に排除している。
【００２１】
しかしながら、最も一般的で安定な形態のリポ酸ラセミ化合物とヒアルロン酸(ＨＡ)との化学結合は、毛髪の増加および脱毛の減少において非常に効果的であることがわかった。この有効性は、前記先行技術の知見に鑑みて予期されなかった。さらに、ヒアルロン酸との化学結合は、ジヒドロリポ酸(ＤＨＬ)、およびＲ−エナンチオマー過剰な混合物の産業上の利用可能性問題を解決する。
【００２２】
したがって、本発明は、ＨＡリポ酸エステルに基づくローション塗布後に観察される、脱毛を保護および阻止する驚くべき能力の発見に基づく。このエステルの化学構造および調製方法は、この製品の先行特許にすでに記載されている。このエステルの性能は、異なった官能基を有する２つの分子の化学結合から生じる、その物理化学的および生物学的性質に由来する。
【００２３】
ＨＡリポ酸エステルに基づく製剤における、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでの物理化学特性および化粧品官能試験の結果により、本発明による毛髪学的応用が新規および革新的なものとなる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２４】
【特許文献１】特願２００７−１１３９２１号（ＥＰ２１６６０２２）
【特許文献２】特開昭６２−１７５４１７号公報
【特許文献３】特開２００９−１３７９２７号公報
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】濃度１．５％ｗ／ｗのＨＡリポ酸エステル溶液、およびＨＡとＮＡとリポ酸とを同じ濃度で含有する混合物、をＵＶ光曝露した結果を示すグラフである。
【図２】濃度１．５％ｗ／ｗのＨＡリポ酸エステル溶液と、金属イオンフォ添加することにより形成されるゲルとのレオロジー曲線を示すグラフである。
【図３】次亜塩素酸塩イオンの経時的な吸収度を示すグラフである。
【図４】さまざまなポリマー濃度でのスカベンジャーの作用効率を示すグラフである。
【図５】酵素が多糖を加水分解するにつれて粘度が緩やかに変化することを示すグラフである。
【図６】未処置の毛髪(ＳＴＤ)と比較して、処置した房(Ｐ０５、Ｐ０２、Ｐ００)を２４時間で真っ直ぐにすることにおける、平均伸長(ｍｍ)および平均百分率変化を示すグラフである。
【図７】処置前および処置後の毛髪の房で測定したＬ＊の値を示すグラフである。
【図８】さまざまな処置をした房の群：Ｐ０５、Ｐ０２、Ｐ００、ＳＴＤにおける、２４時間の間の毛髪１グラム当たりの平均水損失値（Ｄ１〜Ｄ２４）を示すグラフである。
【図９】各対象の処置前および処置後の脱毛本数を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
発明の説明
本発明は、活性抗酸化剤である、親油性が強く、ケラチンに存在するチオール基に反応する可能性があるリポ酸によって促進されるグリコサミノグリカンの使用をクレームする。ポリマーはまた、すでに身体に存在する構成成分からなるので、非常に生体適合性がある。多糖との化学結合は、リポ酸の皮膚吸収およびその脂肪組織における優先的分布を改変し、皮膚および毛髪の表面層におけるリポ酸の滞留を長引かせる。ポリマー蓄積領域中におけるリポ酸の非常に高い局所濃度は、このようにして得られる。
【００２７】
ヒアルロン酸は、毛嚢中に主に濃縮されていることが知られており(Ｎｏｖｏｚｙｍｅ  ｐｏｓｔｅｒ、Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｓ、Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ(ＵＳＡ)、２００５年１２月８〜９日)、局所ローションに使用される場合、毛幹に付着して残っているポリマー画分はまた、リポ酸の官能基の長期滞留を保証する。
【００２８】
製剤については、多糖を使用してリポ酸分子を運ぶことは、リポ酸の水中分散を促進し、関連工業製品の製造に関与する技術的問題を解決するために利用される戦略の一つである。
【００２９】
本発明による製剤は、０．０５％〜５％ｗ／ｗの範囲の量の多糖誘導体を含有し、クリーム、泡、軟膏、ゲル、親水性液体、シャンプー、水性または水−アルコールローション、および油／水もしくは水／油エマルションを含む。
【００３０】
本発明に従って使用可能なグリコサミノグリカンエステルにおいて、多糖のカルボキシル官能基は、酸形態であってもよく、またはアルカリ金属、特にナトリウムで塩化されてよく、一方、硫酸官能基は、存在する場合アルカリ金属、特にナトリウムで塩化される。
【００３１】
グリコサミノグリカンエステルは、１０３〜１０７ダルトン、好ましくは１０４〜１０６ダルトンの分子量を典型的に有する。
【００３２】
本発明による組成物は、亜鉛塩および／または銀塩を、０．１〜１０の金属のリポ酸含量に対するモル比で含有することもできる。
【００３３】
多糖の各単独モノマーのヒドロキシル基置換度(Ｄ.Ｓ.)は、リポ酸エステルにおいて０．０１〜１*Ｎの範囲(Ｎは、反復単位中に存在する遊離アルコール基の数である)であってよく、一方、ポリマーのヒドロキシルにおけるギ酸のエステル化度は、０〜０．２*Ｎ(すなわち２０％モル／モル以下)である。ギ酸の存在は、合成段階でのホルムアミドの使用によるが、これは誘導体の性能にとって必須ではない。
【００３４】
個々の構成成分のエステル化度を変化させることによって、誘導体の物理化学およびレオロジー特性が変化し、一般に、製剤化能(formulability)は、リポ酸そのものよりも常に良好である。多糖リポ酸エステルおよびギ酸エステルは、水中に容易に分散し、天然ＧＡＧの典型的なものと同程度の粘弾性溶液を形成する。透明の水性または水−アルコール製品の製剤は、したがって、有機溶媒を使用することなく可能である。
【００３５】
第二に、リポ酸およびヒアルロン酸は、まさにそれらの組合せのために、保湿および修復効果の点で同時に毛髪に役立つことができる。毛幹表面、すなわち毛小皮の構造は、ケラチンのアミノ酸側鎖間の水素結合、疎水性相互作用、システイン残基間のジスルフィド架橋、ならびにポリペプチド鎖におけるＣＯおよびＮＨ基間の静電相互作用によって保証される。毛髪中の水分バランスの崩れおよびケラチンタンパク質破壊は同時に起こり、行き過ぎた処置(染色、パーマネントウェーブなど)および環境ストレス(汚染、過度の熱風での毛髪乾燥など)によって引き起こされうる。毛髪の水分バランスおよび構造的完全性を大いに不安定にする、脱色などの極端な処置の例が教示されている。過酸化水素からの酸素の放出は、脱色した毛髪の化学および物理特性の改変を誘発する。酸素は、ケラチンのジスルフィド結合に働きかけ、それらを破壊し、それらを硫黄の酸化化合物に変換し、繊維の機械的性質(延伸抵抗、最終引張強度、弾性、変形)の変更およびそれらの表面特性(電気的性質および多孔性)の変化を引き起こす。酸素は、すすぎ水によって毛髪から除去される水溶性タンパク質画分によって、ケラチン鎖を改変および破壊さえもする。この分解は、脱色操作後でさえもおそらく確実に継続する。それぞれの連続する洗浄は、オリゴペプチドの排除に関与しうる。その結果は、乾燥した毛髪であり、これは、もつれをほぐすのが困難で、弱く(より低い最終引張強度)、より多孔性で、非自己分子および水を吸収しやすくなる。このように、乾燥した毛髪は、大気湿度の変化により敏感になり、乾燥するのにより時間がかかる。最後に、ジスルフィド架橋の酸化に由来するアニオン部位数の増加および内部拡散の容易さによって、毛髪は、カチオン物質をより容易に吸収および保持するが、しばしば不均一である。ケラチンの遊離チオール基に結合することができるα−リポ酸のような物質は、ジスルフィド架橋の減少を弱め、毛細血管繊維の三次元のタンパク質構造および完全性を維持する。ヒアルロン酸は、その優れたハイドロコーディネーティング性(hydrocoordinating properties)により、空気および光を通すことができ、滑らかで、粘着性のない、粘弾性の水和保湿膜を形成し、毛髪表面に、徐々におよび継続的に一定量の水を提供し、毛細血管修復効果のあるα−リポ酸をゆっくりと放出する。
【００３６】
リポ酸の多糖への化学結合のために、ラジカル生成における触媒作用が毛髪にとって通常は有害である金属イオン（Ｃｕ、Ｆｅ）の存在および紫外線放射などの要因が、組み合わさって製品の毛髪への保護バリアーを安定させ、したがってその有効性を改善する。
【００３７】
リポ酸／ジヒドロリポ酸変換は光によって誘発されうることが知られており、このようにしてケラチンのチオール基に結合することができる−ＳＨ官能基が生成される。リポ酸がＨＡに共有結合したままであるにつれて、このメカニズムは、毛幹へのポリマー全体の固定および滞留をさらに改善する。毛髪を覆うポリマー膜は、毛髪を水和し、その表面を固め、その後の酸化種による攻撃から保護する。毛髪を覆うポリマー膜は、微小クラックおよびケラチンの鱗屑間において「接着剤」として働き、毛髪の落屑を減少させる。ケラチンとの結合を形成するスキームを、以下のように記載することができる：
Ａ−Ｓ−Ｓ−Ａ  ＋  Ｒ−ＳＨ    →  Ａ−ＳＨ  ＋  Ｒ−Ｓ−Ｓ−Ａ
式中、「Ａ」はタンパク質構成要素であり、「Ｒ」はＨＡのエステル化ジヒドロリポ酸の残基である。
【００３８】
前記メカニズムは本発明によるエステルのために発生することが実験的に明らかになった。濃度１．５％ｗ／ｗのＨＡリポ酸エステル水溶液(Ｄ.Ｓ.＝０．２７)を、ＵＶ分光光度法のために石英セル内に置き、ＵＶ放射に１時間曝露した(λ＝２５４ｎｍ；電力＝３０ワット；距離２０ｃｍ)。テフロンキャップで封をしたセルを処置の前後に計量し、蒸発の効果を除外した。照射後、粘度が出発溶液のおよそ１０５倍である架橋した透明ゲルが生成した（図１参照）。
【００３９】
比較のために、ＨＡおよびリポ酸をＨＡＬｉｐエステル中に存在するのと同じ濃度で含有する物理的混合物に同じ処置を行った。最小の脱重合のために、ＵＶ照射による粘度の減少はほんのわずかである。
【００４０】
毛幹における物理化学的相互作用および結果的なケラチンへのＨＡＬｉｐ固定の実験的知見は、後述されるカール保持試験において測定される効果に基づく。
【００４１】
金属との相互作用も、観察される活性を説明するのに重要な役割を担う。
【００４２】
すでに考察したように、Ｆｅ、ＣｕおよびＺｎなどの金属イオンは皮膚表面および毛幹に存在しており、鉄および銅は、大気酸素から生じるラジカルの形成を触媒し、分解プロセスを局所的に生じさせることができる。
【００４３】
ＨＡリポ酸エステルはこれらのイオンを封鎖することができ、２つのリポ酸単位間でイオンをキレートする。図２は、リポ酸ＨＡの１．５％水溶液、ならびにエステル化リポ酸と比較して、１Ｆｅ当量、１Ｃｕ当量および１０Ｚｎ当量を添加することによってその水溶液から形成されるゲルのレオロジー曲線を示す。
【００４４】
金属の存在によって誘発されるポリマー鎖間の架橋の事実は、カチオンの複合化におけるリポ酸の２つの単位の関与を明らかにしている。キレート化においてエステルは安定なままなので、保湿および保護作用を一層効果的にする、ポリマー鎖の小型で三次元のメッシュが生成される。
【００４５】
比較のために、ＨＡおよびリポ酸の物理的混合物において、相互作用は、多糖は関与せずに後者と金属との間でのみ発生し、リポ酸−金属複合体は不溶性となり、非晶質塊を生成する。リポ酸は、カルボキシルによって金属もキレートし、ＨＡのエステルから生成される化合物とは異なる化合物を形成する。
【００４６】
リポ酸またはリポ酸とギ酸とによる、グリコサミノグリカンの部分エステルは、次亜塩素酸塩およびＦｅｎｔｏｎ系などの強い酸化剤に対する保護活性も有する。
【００４７】
ヒアルロン酸それ自体の中に、ラジカルおよび酸化種スカベンジャー作用を有するが、この性質はリポ酸との結合において大幅に高められる。
【００４８】
ＨＡＬｉｐｏｉ、ＣＳＬｉｐｏｉ、天然ＨＡまたは天然ＣＳによる次亜塩素酸塩の排除率を、２ｍＭ溶液において測定した。反応速度論に関するグラフを図３に示し、図３は、次亜塩素酸塩イオンの経時的な吸収度を示す。多糖の濃度は反復単位において１ｍＭに達し、ＨＡＬｉｐｏｉにおけるリポ酸の置換度(ＤＳ)は０．２８に達し、ＣＳＬｉｐｏｉのＤＳは０．３４に達する。
【００４９】
再び、酸素ラジカルを生成するＦｅｎｔｏｎ系(Ｈ２Ｏ２／Ｆｅ)に関して、ＨＡおよびＣＳリポ酸エステルは、ラジカルの排除において、対応する多糖よりずっと効果的であると証明された。染料(Ｔｒｙｐａｎブルー)を含有する溶液を、Ｈ２Ｏ２(０．１ｍＭ)およびＦｅ２＋(０．０５ｍＭ)で処理すると、酸素ラジカルは、５８８ｎｍでの吸収度が継時的に急下降する発色団を酸化させた。次いで、ＨＡ、ＣＳ、ＨＡＬｉｐｏｉまたはＣＳＬｉｐｏｉも含有する数多くの類似の溶液を、濃度(ｃｐ)を上昇させながら、調製した。多糖は、ラジカルを排除し、染料を完全なまま保存することができる。図４は、さまざまなポリマー濃度でのスカベンジャーの作用効率を示す。
【００５０】
ラジカルによって染色までに引き起こされる損傷を半減するのに要求されるｃｐは、天然ＨＡにおいては１．５ｍＭに達し、リポ酸中に０．２８モル／モルに達するＤＳを含有するＨＡＬｉｐｏｉにおいては、０．２６ｍＭに下降する。ＣＳは、０．２２ｍＭの濃度およびｃｐ＝０．１１ｍＭのＣＳＬｉｐｏｉでこの結果を生む。
【００５１】
酵素分解に対する保護も評価した。頭皮に分布する多糖は、毛嚢空洞に容易に浸透しそこで生存細胞と接触する。多糖の作用をできるだけ効果的に行うためには、加水分解酵素、とりわけヒアルロニダーゼによって多糖があまりにも急速に分解されないことが重要である。天然ヒアルロン酸と比較した本発明の利点の一つは、リポ酸または混合リポ酸およびギ酸エステル置換基の存在が、酵素分解から保護するということである。以下のレオロジー測定による酵素消化反応速度論によって、前記革新的性質を例示する。
【００５２】
酢酸緩衝液での濃度が１．０％ｗ／ｗである、ＨＡ溶液、および後述する例１において記載するＤ.Ｓ.＝０．３のリポ酸ＨＡ溶液について、研究を行った。１：２００の酵素／ポリマー比を得るために、およそ７０μｌの「内部」ウシ精巣ヒアルロニダーゼの濃縮液(１０６０Ｕ／ｍｇ)を１．５ｍｌのポリマー溶液に添加することによって、それぞれの加水分解反応速度論試験を行った。混合物を３０秒間混合し、レオメータープレートに移して粘度を連続して測定した。混合およびレオメータープレート前の溶液をサーモスタットで３７℃に調温。図５は、酵素が多糖を加水分解するにつれて粘度が緩やかに変化することを示す。エステル誘導体は天然ＨＡより長く酵素作用に抵抗する。
【００５３】
上に述べた要因に基づき、本発明による組成物が、毛髪再生、強化および抗脱毛処置に有用であり、男性型脱毛症および休止期脱毛の状態を治療するのに有用であることが明白である。
【実施例】
【００５４】
以下のヒアルロン酸の混合リポ酸／ギ酸エステルの調製例、対応する化粧品製剤ならびにｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでの活性試験によって、本発明をさらに例示する。
【００５５】
例１：ヒアルロン酸ナトリウム塩のリポ酸およびギ酸エステルの合成
４０ｍｌのＦＡ中２ｇのＨＡ(５％ｗ／ｗ)を１００ｍｌ三つ口フラスコに導入し、ポリマーが完全に溶解するまで、溶液を９０℃で機械撹拌しながらＮ２流下に静置する。次いで、水浴によって温度を室温に調節する。
【００５６】
次いで、リポ酸(７７２．１ｍｇ、０．７５ＨＡ当量ＨＡに等しい)を２ｍｌのＤＭＳＯに別々に溶解する。次いで、固体カルボニルジイミダゾール(ＣＤＩ、６６７．５ｍｇ、１．１リポ酸当量に等しい)を添加し、ＣＯ２が完全に放出されるまで、室温で静置して反応させる。
【００５７】
この時点で、２００ｍｇのＮａ２ＣＯ３を、ＦＡ中ポリマー溶液に導入する。次いで、活性化リポ酸を添加し、溶液を室温で撹拌しながら静置する。溶液は黄色く透明で粘性が高くなる（ｐＨ約１０）。
【００５８】
３０分〜４時間の反応時間の後、２０ｍＬのＨ２Ｏおよび１４ｍＬの０．５ＭのＨＣｌを添加することによって、反応を停止する。最終ｐＨは７．０５である。わずかに粘性で透明で薄黄色の最終溶液を透析によって精製し、凍結乾燥によってポリマーを回収する。
【００５９】
凍結乾燥物のＮＭＲ分析により、０．３５に達するリポ酸エステルの置換度(ＤＳｌｉｐ)および０．０７に達するギ酸エステル(ＤＳｆｏｒｍ)の定量化が可能になる。
【００６０】
例２：コンドロイチン硫酸リポ酸およびギ酸エステルの合成
２０ｍｌのＦＡ中４ｇのコンドロイチン硫酸(ＣＳ)(２０％ｗ／ｗ）を１００ｍｌ三つ口フラスコに導入し、ポリマーが完全に溶解するまで、溶液を９０℃で機械撹拌しながらＮ２流下に静置する。次いで水浴によって温度を室温に調節する。
【００６１】
リポ酸(９８４．２ｍｇ、０．６ＨＡ当量に等しい)を２ｍｌのＤＭＳＯに別々に溶解する。次いで、固体カルボニルジイミダゾール(ＣＤＩ、８５１．３ｍｇ、１．１リポ酸当量に等しい)を添加し、気体が完全に放出されるまで室温で静置して反応させる。
【００６２】
この時点で、３２０ｍｇのＮａ２ＣＯ３をＦＡ中ポリマー溶液に導入する。次いで、活性化リポ酸を添加し、溶液を室温で撹拌しながら静置する。溶液は黄色く透明になり、流体のままである。
【００６３】
３０分〜４時間の反応時間の後、４０ｍＬのＨ２Ｏおよび１４ｍＬの０．５ＭのＨＣｌを添加することによって反応を停止し、ｐＨを７．１５に中和する。わずかに粘性で透明で薄黄色の最終溶液を透析によって精製し、凍結乾燥によってポリマーを回収する。
【００６４】
凍結乾燥物のＮＭＲ分析により、０．２８に達するリポ酸エステルの置換度(ＤＳｌｉｐ)および０．０５に達するギ酸エステル(ＤＳｆｏｒｍ)の定量化が可能になる。
【００６５】
例３：濃度０．２％の強化／増強水−アルコールローションの調製
ＨＡリポ酸／ギ酸エステル（例１）                            ０．２０
水                                                        ７５．０４
変性アルコール                                              ２０．０
エトキシジグリコール                                          １．２
ドイツトウヒ(Ｐｉｃｅａ  ａｂｉｅｓ)抽出物、ペンチレングリコール
１．０
センブリ(Ｓｗｅｒｔｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ)抽出物、ブチレングリコール、水
０．６０
イノシトール                                                ０．５０
ベタイン                                                    ０．５０
ＰＰＧ−２６−ブテス−２６、ＰＥＧ−４０水添ヒマシ油、水    ０．３０
グルタミン酸二酢酸四ナトリウム、水                          ０．３０
香料                                                        ０．１５
カフェイン                                                  ０．１０
乳酸、水                                                    ０．１０
ノルジヒドログアヤレト酸                                    ０．０１。
【００６６】
例４：濃度０．５％の強化／増強水−アルコールローションの調製
ＨＡリポ酸／ギ酸エステル（例１）                            ０．５０
水                                                        ７４．７４
変性アルコール                                              ２０．０
エトキシジグリコール                                          １．２
ドイツトウヒ抽出物、ペンチレングリコール                      １．０
センブリ抽出物、ブチレングリコール、水                      ０．６０
イノシトール                                                ０．５０
ベタイン                                                    ０．５０
ＰＰＧ−２６−ブテス−２６、ＰＥＧ−４０水添ヒマシ油、水    ０．３０
グルタミン酸二酢酸四ナトリウム、水                          ０．３０
香料                                                        ０．１５
カフェイン                                                  ０．１０
乳酸、水                                                    ０．１０
ノルジヒドログアヤレト酸                                    ０．０１。
【００６７】
例５：０．２％ＨＡリポ酸エステルおよび亜鉛に基づく、強化／増強および鎮静水−アルコールローションの調製
ＨＡリポ酸／ギ酸エステル（例１）                            ０．２０
水                                                        ７５．０２
変性アルコール                                              ２０．０
エトキシジグリコール                                          １．２
ドイツトウヒ抽出物、ペンチレングリコール                      １．０
センブリ抽出物、ブチレングリコール、水                      ０．６０
イノシトール                                                ０．５０
ベタイン                                                    ０．５０
ＰＰＧ−２６−ブテス−２６、ＰＥＧ−４０水添ヒマシ油、水    ０．３０
グルタミン酸二酢酸四ナトリウム、水                          ０．３０
香料                                                        ０．１５
カフェイン                                                  ０．１０
乳酸、水                                                    ０．１０
ノルジヒドログアヤレト酸                                    ０．０１
塩化亜鉛                                                    ０．０２。
【００６８】
例６：０．２％コンドロイチン硫酸リポ酸エステルおよび銀に基づく、強化／増強および殺菌水−アルコールローションの調製
ＣＳリポ酸／ギ酸エステル（例２）                            ０．２０
水                                                        ７５．０２
変性アルコール                                              ２０．０
エトキシジグリコール                                          １．２
ドイツトウヒ抽出物、ペンチレングリコール                      １．０
センブリ抽出物、ブチレングリコール、水                      ０．６０
イノシトール                                                ０．５０
ベタイン                                                    ０．５０
ＰＰＧ−２６−ブテス−２６、ＰＥＧ−４０水添ヒマシ油、水    ０．３０
グルタミン酸二酢酸四ナトリウム、水                          ０．３０
香料                                                        ０．１５
カフェイン                                                  ０．１０
乳酸、水                                                    ０．１０
ノルジヒドログアヤレト酸                                    ０．０１
硝酸銀                                                      ０．０２。
【００６９】
例７：Ｏ／Ｗクリームの調製
本発明によるリポ酸エステルの一つを含有するクリーム形態の製剤の調製を、以下に記載する。
【００７０】
Ｏ／Ｗクリーム製剤は、皮膚化粧品に使用される一般的な添加剤、例えば乳化剤、増粘剤、油、保湿剤、ゲル化剤、保存剤等と適切に混合した濃度０．１％の例１に記載した化合物を、機能剤として含有する。
【００７１】
要約すると、このプロセスは以下のようなものである。およそ６００ｍｌの脱塩水(全製剤のおよそ６０重量％に対応する)を、ターボ乳化装置(turboemulsifier)に入れ、事前に融解した脂肪相をおよそ７０℃で撹拌しながら添加する。混合物を乳化し、３５〜４０℃の温度までゆっくりと冷却する。熱不安定性および揮発性構成成分をこの温度で添加し、適切な量の水に溶解した例１に記載したＨＡナトリウム塩リポ酸エステルを添加する。２５〜３０℃の温度に達するまで混合物をゆっくりと撹拌しながら静置し、次いで最終生成物を適切な容器に排出する。
【００７２】
結果は、以下の組成（％Ｗ／Ｗ）を有するクリームである：
ＨＡナトリウムのリポ酸エステル（例１）                        ０．１
油（パルミチン酸／カプリル酸グリセリド−トリグリセリド）    １２．０
非イオン性乳化剤                                              ６．０
セチルアルコール                                              ２．０
ジメチコン                                                    ４．０
ケイ酸ＭｇＡｌ                                                ２．０
グリセリン                                                    ３．０
キシリトール                                                  ２．０
パラベン                                                      ０．７
水                                                  １００までの適量。
【００７３】
例８：ムースの調製
製剤は、皮膚化粧品に使用される一般的な添加剤、例えば乳化剤、増粘剤、油、保湿剤、ゲル化剤、保存剤等と適切に混合した濃度０．１％の例１に記載した化合物を、機能剤として含有する。
【００７４】
結果は、以下の組成（％Ｗ／Ｗ）を有するクリームである：
ＨＡナトリウムのリポ酸エステル（例１）                        ０．１
パンテノール                                                  ０．３
ナイアシンアミド                                            ０．１５
セトリモニウムクロリド                                        ５．０
ポリソルベート８０                                            １．６
酢酸トコフェロール                                          ０．０２
香料                                                          ０．２
加水分解シルクＰＧ−プロピルメチルシランジオール              ３．０
フェノキシエタノール、カプリリルグリコール                    １．５
２，４−ジクロロベンジルアルコール                          ０．１５
水                                              １００．０までの適量。
【００７５】
例９：マスクの調製
Ｏ／Ｗクリーム製剤は、皮膚化粧品に使用される一般的な添加剤、例えば乳化剤、増粘剤、油、保湿剤、ゲル化剤、保存剤等と適切に混合した濃度０．０５％の例１に記載した化合物を、機能剤として含有する。
【００７６】
結果は、以下の組成（％Ｗ／Ｗ）を有するクリームである：
ＨＡナトリウムのリポ酸エステル（例１）                      ０．０５
パンテノール                                                  ０．５
グアーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド                ０．０５
水、セトリモニウムクロリド                                    ６．０
セテアリルアルコール、セテアリルグルコシド                    ４．０
パルミチン酸グリコール                                        ２．０
イソノナン酸イソノニル                                        ３．５
ジメチコン                                                    １．５
ビサボロール                                                  ０．１
酢酸トコフェロール                                            ０．２
フェノキシエタノール、カプリリルグリコール                    １．５
香料                                                          ０．５
シクロペンタシロキサン                                        １．５
水、加水分解シルクＰＧ−プロピルメチルシランジオール          １．０
２，４−ジクロロベンジルアルコール                            ０．１５
水                                                １００．０までの適量。
【００７７】
例１０：シャンプーの調製
濃度０．２％の例１に記載した化合物を機能剤として含有するシャンプー形態の製剤は、以下の組成（％Ｗ／Ｗ）を有する：
ＨＡナトリウムのリポ酸エステル（例１）                        ０．２
パンテノール                                                ０．０５
ＥＤＴＡ二ナトリウム                                        ０．１５
Ｌｏｎｉｃｅｒａ  ｃａｐｒｉｆｏｌｉｕｍ  花抽出物、
Ｌｏｎｉｃｅｒａ  ｊａｐｏｎｉｃａ  花抽出物、水              ０．５
グリセリン                                                    ３．０
ソルビトール、水                                              ０．４
ベタイン                                                      ０．５
キシリチルグルコシド、無水キシリトール、キシリトール          １．０
ココイルグルタミン酸二ナトリウム、水                        １０．０
デシルグルコシド、水                                          ５．０
ココイルリンゴアミノ酸ナトリウム、水                          ３．０
ココアミドプロピルベタイン、水                              １０．０
ココアミドプロピルＰＧ−ジモニウムクロリドホスフェート        １．０
ＰＥＧ−１２０メチルグルコーストリオレート、プロピレングリコール、水
４．０
ＰＥＧ／ＰＰＧ−１２０／１０トリメチルプロパントリオレート、ラウレス−２
０．７
ポリソルベート２０                                            １．０
香料                                                          ０．５
カプリリル／カプリルグルコシド                                ５．０
水                                              １００．０までの適量。
【００７８】
例１１：Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ毛髪学的試験
ポリマー−毛髪相互作用は、例３および４に記載したリポ酸ＨＡに基づくローションで処置した切断した毛幹のいくつかの物理化学パラメーターを測定することによって、明らかにすることができる。この点において最も重要な試験は、切断した毛髪の光沢、カール保持および水和持続性の評価である。
【００７９】
長さ１６ｃｍの真っ直ぐな暗褐色の毛髪からなる「Ｉｔａｌｉａｎ  Ｖｉｒｇｉｎ  Ｈａｉｒ」プレイト(ＬｏＣｕｒｃｉｏ−Ｍａｎｉｆａｔｔｕｒａ  Ｉｔａｌｉａｎａ  Ｃａｐｅｌｌｉ、パレルモ、イタリア)を定量試験に使用した。プレイトを、小数第２位まで正確に量ったおよそ２〜３ｇの重さの試験用の房に分割し、伸縮性のあるコットンで維持した。次いで、毛髪の房を基本的なシャンプー[Ａｃｔｉｖｅ  Ｗａｓｈｉｎｇ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ(ＳＡＬ)＝１５％]で標準的に洗浄し、通常のヘアドライヤー(２０００ワット、最大速度および最大気流加熱レベルで)で乾燥させ、表面を均一にした。
【００８０】
各試験において、３房の毛髪を０．２％の活性成分を含有するローション(Ｐ０２)で処置し、３房の毛髪を０．５％の活性成分を含有するローション(Ｐ０５)で処置し、３房の毛髪を機能性ポリマーを含有しない添加剤のみの溶液(Ｐ００)で処置し、最後に、さらに３房の毛髪を水のみ(ＳＴＤ)で処置する。
【００８１】
カール保持：
毛髪の房の調製手順は、標準的な洗浄、リンス、試験ローションでの処置、ヘアドライヤーでのカールおよび乾燥を伴う。次いで、房をピンと張り、事前に設定した時間の後、カールの伸長を測定すると、毛髪の房の塑性変形と弾力性の反動との組合せが示された。
【００８２】
図６は、未処置の毛髪(ＳＴＤ)と比較して、処置した房(Ｐ０５、Ｐ０２、Ｐ００)を２４時間で真っ直ぐにすることにおける、平均伸長(ｍｍ)および平均百分率変化を示す。ローションで処置したサンプルとプラセボで処置したサンプルとの効果の差異は、統計的に有意なものであった。
【００８３】
ローションＰ０５での毛髪処置は、毛髪の弾力性を改善し、カールした毛髪またはウェーブした毛髪のウェーブの維持を助け、したがって毛髪形状の持続性を上昇させるのに有用であることを証明する。
【００８４】
反対に、約０．２％とポリマー含量がより低いと、同じ処置手順を経るが活性成分を有さない毛髪の房と比較してカール力の統計的に有意な低下を招くため、平滑効果のあるローションが特定される。
【００８５】
光沢：
毛髪の房の光反射力の測定に基づいて、比色法によって光沢を測定した。  
【００８６】
読取りに使用した測定システムは、Ｌ＊ａ＊ｂ＊システム(ＣＩＥＬＡＢ色空間)であった。ここで、
Ｌ＊は、色の輝度に対応する。Ｌ＊の値は、０が黒色、１００が白色に対応する、０〜１００の等級で表される。
【００８７】
ａ＊およびｂ＊は、ａ＊が赤軸を表し、ｂ＊が黄色−青軸を表す、２色の軸を示す。  
【００８８】
この研究は、パラメーターＬ＊を、サンプルの輝度の指標、すなわちその光反射力と見なした。  
【００８９】
図７は、処置前および処置後の毛髪の房で測定したＬ＊の値を示す。  
【００９０】
０．２％〜０．５％のＨＡリポ酸エステルを含有するローションでの毛髪処置は、単回塗布後に、初期値と比較しておよそ＋２．２〜２．４％およびプラセボローションと比較しておよそ＋４．７〜４．５％輝度値Ｌ＊を上昇させる。ローションで処置したサンプルとプラセボで処置したサンプルとの効果の差異は、統計的に有意であった。
【００９１】
保湿
測定方法は、事前に設定した温度および湿度条件下で、毛髪の房が所与の水和レベルを保持する能力に基づく、重量測定であった。  
【００９２】
図８は、さまざまな処置をした房の群：Ｐ０５、Ｐ０２、Ｐ００、ＳＴＤにおける、２４時間の間の毛髪１グラム当たりの平均水損失値（Ｄ１〜Ｄ２４）を示す。  
【００９３】
ＨＡリポ酸エステルを含有するローションでの処置は、プラセボローションおよび標準と比較して規則的なパターンで、活性成分の濃度にかかわらず、始めの４時間の間は一定速度で水の放出を誘発する。ローションで処置したサンプルとプラセボで処置したサンプルとの効果の差異は、統計的に有意であった。
【００９４】
いずれの場合も、ポリマーの添加は、Ｐ０５の場合には最高の範囲まで、毛髪の水分バランスの動態を維持する一助となる。
【００９５】
例１２：ｉｎ  ｖｉｖｏ毛髪学的試験
感覚効果の評価
例３に記載した０．２％ＨＡリポ酸エステルを含有する毛髪ローションの有効性および忍容性を評価するために、４０人のボランティアが１日１回２週間、製品を乾燥した毛髪に任意の量を塗布して使用した。使用期間の終わりに、ボランティアは、アンケートで主観的な意見を述べた。調査員は、ボランティアが使用した製品の平均量を測定するために、試験の始めおよび終わりにボトルの重さを量った。
【００９６】
アンケートによって得られた回答には、以下の知見があった：
８５％のボランティアが、この処置は、毛髪の乾燥を少なくするのにかなりまたは非常に有効であると見なした；
８２．５％の対象が、この処置は、毛髪をソフトにするのにかなりまたは非常に有効であると見なした；
７５％のボランティアが、この処置は、毛髪に光沢を与えるのにかなりまたは非常に有効であると見なした；
６７．５％のボランティアが、この処置は、毛髪を痛みにくくするのにかなりまたは非常に有効であると見なした；
５２．５％のボランティアが、この処置は、枝毛を予防および処置するのにかなりまたは非常に有効であると見なした；
ボランティアは、製品を平均２８．３２ｇ使用し、標準偏差は１３．６ｇであった。
【００９７】
一般に、述べられた意見は、栄養作用、つまり、健康で丈夫な、より強い毛髪の感覚、をローションに起因するものであるとした。
【００９８】
補強／強化作用の評価
軽度の休止期脱毛および男性型脱毛症（Ｌｕｄｗｉｇ段階Ｉ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ段階ＩＩ）を患っている２０人の対象（女性１０人および男性１０人）を、有効性評価のために選出した。ボランティアは、例３において記載した０．２％ＨＡリポ酸エステルを含有する２．５ｍｌのローションを、１日１回２カ月間頭皮に塗布した。処置期間の始めおよび終わりに、引張強度（引っ張り試験）および洗浄中に失われた毛髪本数（洗浄試験）の評価を行った。
【００９９】
引張強度（引っ張り試験）
３箇所（側頭部、前頭部および後頭部領域）で失われた毛髪の合計数に基づいて、以下の半定量的な４点等級について毛髪の引張強度を評価した：
０＝３箇所において合計で６本超の毛髪が失われた。
１＝３箇所において合計で４〜６本の毛髪が失われた。
２＝３箇所において合計で１〜３本の毛髪が失われた。
３＝３箇所において合計で０本の毛髪が失われた。
【０１００】
処置の終わりに、毛髪の引張強度の統計的に有意な上昇がみられた。スコアの平均値を以下の表に示す：
【０１０１】
【表１】
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【０１０２】
脱毛の阻止（洗浄試験）
処置の終わりに、毛髪本数の平均変化は、０時間と比較して−５０．０％であり、統計分析的に高度に有意（ｐ＜０．００１）であることを証明した。
【０１０３】
ベースライン値を示したボランティアは広範囲に分布しており（洗浄中に、３４〜１９０本の毛髪が失われた）、したがって、不均一な事例研究に相当する。図９は、各対象の処置前および処置後の脱毛本数を示す。すべての処置済対象は脱毛の減少を観察し、製品の有効性は、開始状況が最も深刻な場合に最も顕著であった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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