(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
評価対象面の第１の領域に捕集面に衝突した微生物を捕集する衝突菌捕集手段を設置する工程と、
前記評価対象面の第１の領域とは異なる第２の領域の表面を清浄にする工程と、
微生物を前記評価対象面上に噴霧する噴霧工程と、
前記衝突菌捕集手段によって捕集した微生物と前記第２の領域の表面から捕集した微生物とをそれぞれ培養して第１及び第２のコロニー群を形成する工程と、
前記第１のコロニー群から前記衝突菌捕集手段によって捕集した微生物数を表面衝突菌数として算出する工程と、
前記第２のコロニー群から前記第２の領域の表面に付着した微生物数を表面付着菌数として算出する工程と、
前記表面付着菌数と前記表面衝突菌数との比率に基づいて前記評価対象面の微生物付着特性を把握する工程と、
を含むことを特徴とする微生物付着特性の把握方法。
【請求項２】
前記噴霧工程において噴霧する微生物として、細菌を用いるか、若しくは芽胞、酵母、カビ、カビ胞子を範疇に含む真菌を用いることを特徴とする請求項１記載の微生物付着特性の把握方法。
【請求項３】
前記衝突菌捕集手段による微生物の捕集に表面付着菌測定用の粘着シート、スタンプ培地、またはペトリフィルムのうち少なくともいずれかを用い、前記第２の領域の表面からの微生物の捕集に表面付着菌測定用の粘着シート、スタンプ培地、ペトリフィルム、または拭き取り法のうち少なくともいずれかを用いることを特徴とする請求項１または請求項２記載の微生物付着特性の把握方法。
【請求項４】
チャンバー内の評価対象面の一部領域に捕集面に衝突した微生物を捕集する衝突菌捕集手段を設置する工程と、
前記チャンバー内において、微生物を噴霧する第１の噴霧工程と、
前記チャンバー内に浮遊する前記微生物の数を測定する第１の測定工程と、
前記チャンバー内に浮遊する前記微生物を捕集して培養し、第１のコロニー群を形成する工程と、
前記評価対象面から前記衝突菌捕集手段を除去すると共に該除去後の一部領域の表面に清浄面を形成する工程と、
前記衝突菌捕集手段が除去された前記チャンバー内において、前記微生物を噴霧する第２の噴霧工程と、
前記衝突菌捕集手段が除去された前記チャンバー内に浮遊する前記微生物の数を測定する第２の測定工程と、
前記衝突菌捕集手段が除去された前記チャンバー内に浮遊する前記微生物を捕集して培養し、第２のコロニー群を形成する工程と、
前記第１のコロニー群の数と前記第１の測定工程で測定された微生物の数との比に基づいて第１のコロニー形成率を算出する工程と、
前記第２のコロニー群の数と前記第２の測定工程で測定された微生物の数との比に基づいて第２のコロニー形成率を算出する工程と、
前記衝突菌捕集手段で捕集した微生物を培養して第３のコロニーを形成する工程と、
前記清浄面から捕集した微生物を培養して第４のコロニーを形成する工程と、
前記第３のコロニー群から前記衝突菌捕集手段によって捕集した微生物数を表面衝突菌数として算出する工程と、
前記第４のコロニー群から前記清浄面に付着した微生物数を表面付着菌数として算出する工程と、
前記表面衝突菌数及び前記表面付着菌数をそれぞれ前記第１及び第２のコロニー形成率で除して補正し、補正後の前記表面衝突菌数と補正後の前記表面付着菌数との比率に基づいて前記評価対象面の微生物付着特性を把握する工程と、
を含むことを特徴とする微生物付着特性の把握方法。
【請求項５】
前記第１と第２の噴霧工程において噴霧する微生物として、細菌を用いるか、若しくは芽胞、酵母、カビ、カビ胞子を範疇に含む真菌を用いることを特徴とする請求項４記載の微生物付着特性の把握方法。
【請求項６】
前記衝突菌捕集手段による微生物の捕集に表面付着菌測定用の粘着シート、スタンプ培地、またはペトリフィルムのうち少なくともいずれかを用い、前記一部領域の清浄面からの微生物の捕集に表面付着菌測定用の粘着シート、スタンプ培地、ペトリフィルム、または拭き取り法のうち少なくともいずれかを用いることを特徴とする請求項４または請求項５記載の微生物付着特性の把握方法。
【請求項７】
前記第１及び第２の測定工程が、単位体積の空気中を浮遊する微生物数を計るパーティクルカウンターを用いて行われ、前記第１及び第２のコロニー群を形成する工程が、培地に微生物のコロニーを形成させるエアサンプラーを用いて行われることを特徴とする請求項４乃至６のいずれかに記載の微生物付着特性の把握方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は微生物付着特性の把握方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
空気中を浮遊する微生物（空中浮遊菌）の量を見積もるための微生物試験は、近年、益々その必要性が高まってきている。このような微生物試験は、例えば、食品工業や病院等の医療の現場では衛生管理面において必要とされ、また、医薬品製造工業では品質管理面から必要とされている。空気中を浮遊する微生物の量を見積もる微生物試験の具体的な方法として、例えば、落下細菌試験法、エアーサンプラー法、インピンジャー法等がある。
【０００３】
このような微生物捕集に使用される微生物検出装置（粘着シート等）の性能や特性を評価するための評価装置も開発されている。このような評価装置では、例えば、チャンバー装置等の閉空間内に評価対象となる微生物検出装置を設置すると共に、該閉空間内に微生物（あるいは微生物懸濁液）を噴霧し、上記微生物検出装置が捕集した微生物の所定量を検査することによって、上記微生物試験の信頼性を評価すると共に上記微生物検出装置の性能を評価している。
【０００４】
例えば、特許文献１には、新規な微生物量測定方法として、特に、空中浮遊微生物を簡便にサンプリングし、計数するための方法を開示している。具体的には、（１）空気中に存在する微生物を粘着シート上に捕集する工程、（２）粘着シートの微生物捕集面を培地表面に接触させ、微生物の分裂増殖を行う工程、及び（３）粘着シート越しに分裂増殖した微生物を観察して計数する工程を含む、空気中を浮遊する微生物の検出方法を開示している。
【０００５】
また、例えば、特許文献２には、空間中を浮遊する微生物の評価をより高精度に実施することのできる環境評価方法を開示している。具体的には、隔離壁により外部空間と隔離された評価室内に、微生物を供給し、微生物を殺菌除去するための除去粒子を供給した後に微生物を採取し、採取された微生物の測定を行う環境評価方法において、微生物の自然消滅を防ぐために微生物として芽胞状態の芽胞形成菌、例えば枯草菌を使用することを特徴とする環境評価方法を開示している。
【０００６】
また、例えば、特許文献３には、空間中を浮遊する微小物質の評価をより高精度に実施することのできる環境評価装置及び環境評価方法を開示している。具体的には、隔離壁により外部空間と隔離された評価室と、評価室内に微生物を供給する微小物質供給手段と、評価室内に微生物を除去するための除去粒子を供給する微小物質除去手段と、評価室内の微生物を採取する微小物質採取手段とを有する環境評価装置であって、隔離壁の少なくとも床面を除くほぼ全面に、多数の空気供給孔が設けられ、該空気供給孔から評価室内に空気が流入することを特徴とする環境評価装置を開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００７−１３５４７６号公報
【特許文献２】特開２００８−０２２７６４号公報
【特許文献３】特開２００８−０２２７６５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、上述した従来の微生物試験環境の評価方法にあっては、評価方法としての微生物試験工程において、バイオエアロゾル試験に用いられるチャンバー装置（以下、「噴霧チャンバー装置」とも称する。）の内壁面に衝突する菌類（例えば、細菌、真菌等の空中浮遊菌）若しくは該内壁面に付着した菌類が試験結果に与える影響を管理していないため、バイオエアロゾル試験環境の安定性、評価結果の正当性（信頼性）や評価精度が確保できないという不具合がある。より具体的には、噴霧チャンバー装置の内壁面への菌類の付着状況が管理されておらず、よって、菌類の該付着状況が、１乃至複数回に渡る評価の実施に対して様々な影響を与え得ることが考慮されていない。
上記特許文献１乃至３に記載の技術も、噴霧チャンバー装置の内壁面への菌類の付着状況を具体的に検査して管理することまでは開示していない。
【０００９】
よって、本発明は、上記従来の問題点に鑑みてなされたものであって、微生物量の測定に使用される噴霧チャンバー装置等の内壁面における微生物の付着特性を定量的に測定することを可能にして、該付着特性が微生物の測定結果に与える影響を考慮して微生物試験環境を評価することができる微生物試験環境の評価方法を提供することを目的としている。
本発明の他の目的は、微生物量の測定に使用される噴霧チャンバー装置等の内壁面における微生物の付着特性を定量的に測定することができる微生物付着特性の把握方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記課題を解決するために、本発明に係る微生物試験環境の評価方法は、評価対象面の第１の領域に捕集面に衝突した微生物を捕集する衝突菌捕集手段を設置する工程と、上記評価対象面の第１の領域とは異なる第２の領域の表面を清浄にする工程と、規定された条件で微生物を上記評価対象面上に噴霧する噴霧工程と、上記衝突菌捕集手段によって捕集した微生物と上記第２の領域の表面から捕集した微生物とをそれぞれ培養して第１及び第２のコロニー群を形成する工程と、上記第１のコロニー群から上記衝突菌捕集手段によって捕集した微生物数を表面衝突菌数として算出する工程と、上記第２のコロニー群から上記第２の領域の表面に付着した微生物数を表面付着菌数として算出する工程と、上記表面付着菌数と上記表面衝突菌数とに基づいて上記評価対象面の微生物付着特性を把握する工程と、上記把握した微生物付着特性に基づいて上記評価対象面を有する微生物試験環境を評価する工程と、を含むことを特徴とする。
【００１１】
かかる構成とすることによって、評価対象表面における微生物付着特性を把握して微生物試験環境の評価を行うことが可能となって好都合である。
【００１２】
また、本発明に係る微生物試験環境の評価方法は、評価対象面の一部領域に捕集面に衝突した微生物を捕集する衝突菌捕集手段を設置する工程と、規定された条件で微生物を上記評価対象面上に噴霧する第１の噴霧工程と、上記第１の噴霧工程で噴霧された微生物の第１のコロニー形成率を推定するための第１のエアサンプリングを行う工程と、上記評価対象面から上記衝突菌捕集手段を除去すると共に該除去後の一部領域の表面に清浄面を形成する工程と、規定された条件で微生物を上記評価対象面上に噴霧する第２の噴霧工程と、上記第２の噴霧工程で噴霧された微生物の第２のコロニー形成率を推定するための第２のエアサンプリングを行う工程と、上記衝突菌捕集手段によって捕集した微生物と上記清浄面から捕集した微生物とをそれぞれ培養して第１及び第２のコロニー群を形成する工程と、上記第１のコロニー群から上記衝突菌捕集手段によって捕集した微生物数を表面衝突菌数として算出する工程と、上記第２のコロニー群から上記清浄面に付着した微生物数を表面付着菌数として算出する工程と、上記表面衝突菌数と上記表面付着菌数とをそれぞれ上記第１及び第２のコロニー形成率で補正し、補正後の上記表面衝突菌数と補正後の上記表面付着菌数あるいはこれ等２つの菌数の比率に基づいて上記評価対象面の微生物付着特性を把握する工程と、上記把握した微生物付着特性に基づいて上記評価対象面を有する微生物試験環境を評価する工程と、を含むことを特徴とする。
【００１３】
かかる構成とすることによって、衝突菌捕集手段を設置する設置領域と付着菌を付着させる清浄面の領域とを同一領域とする手法による微生物試験環境の評価（より精密な評価）が可能となる。
【００１４】
上記第１及び第２のエアサンプリングが単位体積の空気中を浮遊している粒子数（微生物数に相当する）を計るパーティクルカウンターと、上記空気の所定量を培地に吹き付けて培地に微生物のコロニーを形成させるエアサンプラー（単位体積の空気中に浮遊している微生物のうちコロニーを形成する微生物の数を計るためのエアサンプラー）と、を用いて行われ、計測値から微生物がコロニーを形成するコロニー形成率を求める。それにより、微生物の噴霧条件の相違によるコロニー形成率（形成能）の相違を補正して共通する基準で比較することを容易にする。
【００１５】
また、本発明に係る微生物付着特性の把握方法は、評価対象面の第１の領域に捕集面に衝突した微生物を捕集する衝突菌捕集手段を設置する工程と、上記評価対象面の第１の領域とは異なる第２の領域の表面を清浄にする工程と、規定された条件で微生物を上記評価対象面上に噴霧する噴霧工程と、上記衝突菌捕集手段によって捕集した微生物と上記第２の領域の表面から捕集した微生物とをそれぞれ培養して第１及び第２のコロニー群を形成する工程と、上記第１のコロニー群から上記衝突菌捕集手段によって捕集した微生物数を表面衝突菌数として算出する工程と、上記第２のコロニー群から上記第２の領域の表面に付着した微生物数を表面付着菌数として算出する工程と、上記表面付着菌数と上記表面衝突菌数とに基づいて上記評価対象面の微生物付着特性を把握する工程と、を含むことを特徴とする
【００１６】
かかる構成とすることによって、評価対象表面における微生物付着特性を把握することが可能となって好都合である。
【００１７】
さらに、本発明に係る微生物付着特性の把握方法は、評価対象面の一部領域に捕集面に衝突した微生物を捕集する衝突菌捕集手段を設置する工程と、規定された条件で微生物を上記評価対象面上に噴霧する第１の噴霧工程と、上記第１の噴霧工程で噴霧された微生物の第１のコロニー形成率を推定するための第１のエアサンプリングを行う工程と、上記評価対象面から上記衝突菌捕集手段を除去すると共に該除去後の一部領域の表面に清浄面を形成する工程と、規定された条件で微生物を上記評価対象面上に噴霧する第２の噴霧工程と、上記第２の噴霧工程で噴霧された微生物の第２のコロニー形成率を推定するための第２のエアサンプリングを行う工程と、上記衝突菌捕集手段によって捕集した微生物と上記清浄面から捕集した微生物とをそれぞれ培養して第１及び第２のコロニー群を形成する工程と、上記第１のコロニー群から上記衝突菌捕集手段によって捕集した微生物数を表面衝突菌数として算出する工程と、上記第２のコロニー群から上記露出表面に付着した微生物数を表面付着菌数として算出する工程と、上記表面衝突菌数と上記表面付着菌数とをそれぞれ上記第１及び第２のコロニー形成率で補正し、補正後の上記表面衝突菌数と補正後の上記表面付着菌数あるいはこれ等２つの菌数の比率に基づいて上記評価対象面の微生物付着特性を把握する工程と、を含むことを特徴とする。
【００１８】
かかる構成とすることによって、衝突菌捕集手段を設置する設置領域と付着菌を付着させる露出表面の領域とを同一領域とする手法による微生物付着特性の評価（より精密な評価）が可能となる。また、二段階の細菌噴霧における噴霧条件の相違が補正されて具合が良い。
【００１９】
上記衝突菌捕集手段には、表面付着菌測定用の粘着シート、スタンプ培地、またはペトリフィルム（微生物培養シート）などのうち少なくともいずれかを用いることが望ましい。また、上記一部領域の清浄面からの捕集には、表面付着菌測定用の粘着シート、スタンプ培地、ペトリフィルム、または抜き取り法などのうち少なくともいずれかを用いることが望ましい。また、これらと同等の機能を有する他の手段（方法）を用いても良い。
【発明の効果】
【００２０】
本発明の微生物試験環境の評価方法によれば、微生物量の測定において、評価対象である微生物試験環境（例えば噴霧チャンバー装置）の内壁面等が有する微生物付着特性を、定量的に把握するための工程を実施するので、該微生物付着特性が微生物試験に与える影響を考慮した上で、所与の微生物試験環境を評価することができる効果がある。
また、本発明の微生物付着特性の把握方法によれば、微生物量の測定に使用される噴霧チャンバー装置等の内壁面等における微生物の付着特性を、定量的に測定することができる効果がある。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】本発明の第１の実施形態に係る微生物試験環境の評価方法を工程別に示した工程図である。
【図２】本発明の実施形態に係る微生物試験環境の評価方法の評価対象である微生物試験環境の外観を示す説明図である。
【図３】本発明の実施形態に係る微生物試験環境の評価方法における衝突菌捕集手段によって捕集された衝突菌の状態（殆ど跳ね返りがない）を示す説明図である。
【図４】同図（Ａ）は評価表面の菌付着状態（一部付着し、一部跳ね返る）を説明する図、同図（Ｂ）は評価表面の特性に対応して菌が一部付着した状態を説明する図、同図（Ｃ）及び（Ｄ）は、評価表面に付着した菌の捕集を説明する説明図である。
【図５】本発明の他の実施形態に係る微生物試験環境の評価方法を工程別に示した工程図である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明に係る微生物試験環境の評価方法は、微生物（あるいは菌類等）検出装置を正確に評価するには、微生物噴霧時の噴流速度を規定の範囲となるように調整するだけでは十分とは言えず、その他にも、試験環境であるチャンバー装置等の内壁面への微生物の付着状況（付着特性）も考慮する必要があることに着目している。
【００２３】
即ち、チャンバー装置等の内壁面へ細菌が付着すると、噴霧試験の場合、噴霧チャンバー装置内に浮遊する細菌数を減少させる影響を与える。また、このような噴霧試験を複数回連続して実施する場合は、内壁面に付着した細菌が試験回数を重ねるに連れて噴霧チャンバー装置内に浮遊する細菌数を増加させる影響を与える。よって、微生物の噴霧試験の場合は、前述の影響によって噴霧試験の安定性が損なわれないように微生物試験環境を管理する必要がある。特に、特定の細菌検出装置を用いて微生物試験を実施する場合には、初期に実施する時点と、該細菌検出装置を規定期間に渡って実際に使用した後のメンテナンスにおける校正時点とで、試験環境を極力同一に保つ必要が有り、このために、前述の、試験環境の管理によって噴霧試験の安定性を保ち、かつ試験結果の信頼性を向上させることは重要な着眼点である。
【００２４】
本発明に係る微生物試験環境の評価方法では、前述の試験環境を管理する方法を、微生物試験環境の評価方法とするものである。より具体的には、噴霧チャンバー装置内壁面等の評価対象表面で直接採取し得る細菌数Ａ（表面衝突菌数）と、該表面に付着する細菌数Ｂ（表面付着菌数）との比率（＝Ｂ／Ａ）を求め、この比率を数値管理する。なお、この細菌数Ａ（表面衝突菌数）の計測については、公知の方法を使用することができる。この公知の方法として、例えば、細菌の噴霧前に粘着シートの粘着面を露出させて前述の評価対象表面に設置しておき、細菌の噴霧中に採集して計数する方法がある。また、細菌の噴霧前に一般標準培地（スタンプ培地を範疇に含む）の培地面を露出させて前述の評価対象表面に設置しておき、細菌の噴霧中に採集して計数する方法がある。さらに、ペトリフィルムを使用して計数する方法なども使用することができる。いずれにしても、評価対象表面に設置するものは、評価対象表面の形状に可能な限り影響を与えないもの（例えばシート状のもの）が好ましい。
【００２５】
他方、上記の細菌数Ｂ（表面付着菌数）計測については、細菌の噴霧終了後に、表面に付着した細菌を捕集する公知の方法が利用できる。より具体的には、細菌の噴霧後に粘着シートで付着菌を捕集する方法、細菌の噴霧後にスタンプ培地で捕集する方法、拭き取り法で捕集する方法、等が典型的に利用可能な方法である。なお、本発明に係る微生物試験環境の評価方法では、噴霧工程で噴霧するもの（微生物）には、上記の細菌だけではなく、真菌（芽胞、カビやカビの胞子など）も範疇に含まれるものとする。
【００２６】
以下、本発明の微生物試験環境の評価方法及び微生物付着特性の把握方法の実施形態について、図面を参照して詳細に説明する。
図１は、本発明の第１の実施形態に係る微生物試験環境の評価方法を工程別に示した工程図である。同図において、本実施形態の微生物試験環境の評価方法は、評価工程として、衝突菌捕集手段の設置工程（ステップＳ２）と、露出表面の形成工程（ステップＳ４）と、細菌の噴霧工程（ステップＳ６）と、噴霧した細菌を培養する工程（ステップＳ８）と、衝突菌捕集手段による表面衝突菌数（＝Ａ）の計数工程（ステップＳ１０）と、露出表面の付着菌捕集、及び付着菌数（＝Ｂ）の計数工程（ステップＳ１２）と、付着菌数と表面衝突菌数との比率（＝Ｂ／Ａ）の算出工程（ステップＳ１４）と、微生物付着特性を示す付着菌数と表面衝突菌数との比率（＝Ｂ／Ａ）の評価工程（ステップＳ１６）と、微生物試験環境の評価工程、例えば、空気清浄度や空気中の浮遊微粒子等を評価する工程（ステップＳ１８）とを含み、これ等工程（ステップＳ２〜Ｓ１８）はこの順序で実施されることが望ましい。
【００２７】
図２は、本発明の実施形態に係る微生物試験環境の評価方法の評価対象である微生物試験環境の外観を示す説明図である。本実施形態の微生物試験環境の評価方法が評価する微生物試験環境は、同図に示すバイオエアロゾル試験用の噴霧チャンバー装置１である。通常、この噴霧チャンバー装置１を使用した噴霧試験に際しては、噴霧チャンバー装置１内の空間２の中央部に設置された噴霧器（ネブライザー）１１から細菌懸濁液の微粒子１２が上方に噴霧される。その後チャンバー装置１に設置された複数のファン（図示せず）の気流によって微粒子がチャンバー空間２内に均一に拡散する。また、噴霧チャンバー装置１には、図示しない微粒子数を数えるパーティクルカウンターと、浮遊菌を寒天培地表面に捕集するエアーサンプラーが設けられている。捕集された菌は培養され、１つの菌が１つのコロニーに成長する。コロニーの数（コロニー群）から寒天培地に捕集された菌数が算出される。
【００２８】
図３は、本発明の実施形態に係る微生物試験環境の評価方法における衝突菌捕集手段４によって捕集された衝突菌の状態を示す説明図である。ここで、「衝突菌」とは、ネブライザー１１から噴霧されて空中浮遊菌となり、対象表面（捕集面４、評価面５）に衝突した菌である。衝突した菌の一部は当該対象表面で跳ね返り、一部は対象表面に付着する（後述の図４中の３及び３ａ参照）。
図３において、符号２はチャンバー装置空間、符号３はチャンバー装置空間に噴霧されて捕集された噴霧菌、符号４は噴霧菌を捕集する衝突菌捕集手段の捕集面、符号５は衝突菌捕集手段の設置表面及び噴霧菌が付着する付着面を含む評価面を、それぞれ示すものである。
【００２９】
以下、図１乃至図３を参照しながら、本実施形態の微生物試験環境の評価方法について、各工程別に説明する。まず、衝突菌捕集手段の設置工程（ステップＳ２）では、図２に示す噴霧試験用チャンバー装置１の内壁面（評価対象表面）の一部に、衝突菌捕集手段１３（例えば、衝突菌を捕集できる粘着シート、スタンプ培地、またはペトリフィルム（微生物培養シート）など）を、粘着面または培地面を露出させた状態で設置する。この粘着面又は培地面は表面の粘性によって衝突する浮遊菌をほぼ全て付着すると考えられる。衝突菌捕集手段１３の設置位置はチャンバー空間２の正面側内壁面、側面側内壁面、床面等の適宜な場所に選定される（設置位置は特に限定されない）。
次に、付着菌を付着させる露出表面の形成工程（ステップＳ４）では、図２に示す噴霧試験用チャンバー装置１の内壁面（評価対象表面）の、上記衝突菌捕集手段１３とは異なる他の一部の面を他の評価対象表面とするべく清浄で露出している状態に維持する。
【００３０】
次に、細菌の噴霧工程（ステップＳ６）では、規定した条件に従って、噴霧試験用チャンバー装置１内の中央に設置した噴霧器（ネブライザー）１１から細菌懸濁液を噴霧する。
また、捕集培養工程（ステップＳ８）では、上記設置した衝突菌捕集手段（粘着シートまたはスタンプ培地若しくはペトリフィルムなど）１３を回収し、孵卵器で細菌を分裂増殖させてコロニーに成長させる。また、チャンバー装置１内壁面の評価対象表面に表面付着菌測定用の粘着シートまたはスタンプ培地を密着させるか、若しくは拭き取り法などを用いて付着菌を捕集し（一部工程手順を図４で示す）、孵卵器で細菌を分裂増殖させ、捕獲した菌を肉眼で観察可能な大きさのコロニーに成長させる。培養は、例えば、３２℃で１６時間程度とする（これに限定されない。）。
【００３１】
次に、衝突菌捕集手段１３による表面衝突菌数（＝Ａ）の算出工程（ステップＳ１０）では、細菌のコロニーの数を計数し、細菌数Ａを計算する。例えば、１つの細菌が培養されて細胞分裂して１つのコロニーを形成するような条件下で培養すればコロニーの数（コロニー群）が細菌数Ａに対応する。
【００３２】
同様に評価対象面の付着菌数（＝Ｂ）の算出工程（ステップＳ１２）では、前述表面露出状態にした部分の細菌のコロニーの数を計数する。例えば、１つの細菌が培養されて細胞分裂して１つのコロニーを形成するとすればコロニーの数（コロニー群）が付着した細菌数Ｂに対応する。
【００３３】
次に、表面付着菌数と表面衝突菌数との比率（＝Ｂ／Ａ）の算出工程（ステップＳ１４）では、上記の付着菌数（＝Ｂ）を上記の表面衝突菌数（＝Ａ）で除した商（付着特性）を算出する。次に、表面付着菌数と表面衝突菌数との比率（＝Ｂ／Ａ）の評価工程（ステップＳ１６）では、微生物付着特性として、表面衝突菌数及び表面付着菌数を評価する。また、上記の付着菌数（＝Ｂ）を上記の表面衝突菌数（＝Ａ）で除した商（即ち付着特性、あるいは反発係数（Ａ−Ｂ）／Ａ）に対する評価を行う。例えば、この反発係数を所定の定数と比較して強弱を判定することや、この反発係数をその値の大きさに基づいて複数のクラスに分類することを行うことができる。
【００３４】
最後に、微生物試験環境の評価工程（ステップＳ１８）を実施して、噴霧試験用チャンバー装置１を試験環境とする微生物試験環境の評価を行う。この微生物試験環境の評価工程（ステップＳ１８）における評価に際しては、例えば、噴霧試験の場合、上記の反発係数（あるいは付着特性）が、噴霧チャンバー装置内に浮遊する細菌数を減少させる影響を与えることを考慮する。
【００３５】
なお、上記一連の工程ステップＳ２〜Ｓ１８を実施することによる微生物試験環境の評価に際しては、同じ工程による評価を複数回実施し、この間の上記付着特性の変化に注目することも可能である。このように噴霧試験を複数回、連続して実施する場合にも、上記の反発係数（付着特性）が、試験回数を重ねるに連れて噴霧チャンバー装置内に浮遊する細菌数を増加させる影響を与えることを考慮する。この微生物試験環境の評価結果を参照することにより、微生物の噴霧試験の場合は、前述の影響によって噴霧試験の安定性が損なわれないように微生物試験環境を管理することができる。
【００３６】
なお、前述の細菌の噴霧工程（ステップＳ６）においては、噴霧するものは細菌とは限らず、この他に、芽胞、酵母、カビ、カビ胞子等を範疇に含む真菌を噴霧することも可能である。また、上記の微生物試験環境の評価工程（ステップＳ１８）における評価に際しては、別途、パーティクルカウンター等を用いて測定された単位体積の空気中の噴霧粒子数（細菌数）や、エアサンプラーを用いて捕集される単位体積の空気中に浮遊していた微生物のうちコロニーを形成した微生物の数等も併せて試験環境の評価要因（例えば、どのぐらいの微生物が活性化するかを示すコロニー形成率）とすることができる。
【００３７】
図４は、評価対象面からの付着菌捕集工程（ステップＳ８）における付着菌捕集工程を説明する説明図である。同図（Ａ）は、細菌の噴霧工程（ステップＳ６）を実施しているときの噴霧チャンバー装置１のチャンバー空間２の様子を示している。評価対象面５に衝突して付着した噴霧菌３と、評価対象面５に衝突したが跳ね返った噴霧菌３ａが存在する。同図（Ｂ）は、細菌の噴霧工程の直後のチャンバー空間２の様子を示している。同図（Ｃ）は、噴霧チャンバー装置１の内壁面の一部である評価対象面５の上面に対して、表面付着菌測定用の粘着シートまたはスタンプ培地である捕集面４を密着させた様子を示している。さらに、同図（Ｄ）は、噴霧チャンバー装置１の内壁面の一部である評価対象面５の上面から、表面付着菌測定用の粘着シートまたはスタンプ培地である捕集面４を引き剥がし、捕集面４に噴霧菌の一部である表面付着菌３が捕集された様子を示している。
【００３８】
この実施形態に係る微生物試験環境の評価方法によれば、噴霧チャンバー装置１の内壁面である評価面５への細菌の付着菌数を具体的に計数して該評価面の付着特性を評価しているので、評価対象である微生物試験環境を、試験結果の正当性（信頼性）や試験精度まで保証できる形で評価することができる効果がある。環境中の微生物試験は既述した特許文献１等に記載された空中浮遊物微生物測定などの公知のものであるので説明を省略する。
【００３９】
（他の実施形態）
図５は、本発明の他の実施形態に係る微生物試験環境の評価方法を工程別に示した工程図である。本実施形態に係る微生物試験環境の評価方法は、前述の噴霧チャンバー装置１の内壁面において、衝突菌捕集手段を設置する設置領域と、付着菌を付着させる内壁面（評価対象面）の領域とを、同一領域とする評価手法（より精密な評価が可能となる）を行うべき局面に対応したものである。
【００４０】
図５に示す工程では、まず、衝突菌捕集手段の設置工程（ステップＳ２２）では、衝突菌捕集手段（例えば、衝突菌を捕集できる粘着シート、スタンプ培地、またはペトリフィルム（微生物培養シート）など）を、粘着面または培地面を露出させた状態で設置する。次に、予め定めた条件で細菌（微生物）の第一噴霧工程（ステップＳ２４）を実施し、衝突菌捕集手段等の上に細菌を落下させる。この際、第一のエアサンプリングによってこの第一噴霧工程において噴霧されたチャンバー内の浮遊菌の数（あるいは浮遊菌密度）等を計測する。例えば、図示しないパーティクルカンターとエアサンプラー等（公知の計測装置）を使用して計測することができる。パーティクルカンターはチャンバー内の単位体積当たりの空気中の浮遊菌の数を計数する機能を持つ。エアサンプラーはチャンバー内の所定量（体積）の空気を、例えば、直径約９ｃｍの寒天培地に吹き付けて空中浮遊菌を捕集する。その後捕集した菌を培養してコロニーを形成し、単位体積の空気（コロニーとなる菌とならない菌とを含む）から得られたコロニー数（コロニーとなる菌の数に対応する）を算出する。その後、単位体積の空気から得られたコロニー数と、パーティクルカンターによって実測された単位体積当たりの空気に含まれる空中浮遊菌の数（コロニーとなる菌とならない菌を含む）との比から、複数の空中浮遊菌のうちコロニーとなる細菌の比率である細菌のコロニー形成率（コロニー形成能）Ｃ１を計算する（Ｓ２６）。
【００４１】
さらに、評価対象面に清浄面を形成する工程（ステップＳ２８）では、チャンバーから上記衝突菌捕集手段を除去すると共に、該除去後の同じ領域に噴霧菌を付着させるために予め当該領域の表面（評価対象面）を除菌する清浄化処理（評価対象面から菌などを除いて評価対象面表面に何もないようにする処理）を行う（Ｓ２８）。
【００４２】
引き続き、予め定めた条件で細菌の第二の噴霧を行う第二噴霧工程を実施する（ステップＳ３０）。この際、上記第一のエアサンプリング（Ｓ２６）と同様に、第二のエアサンプリングを行う。これによって第二噴霧工程においてチャンバー内に噴霧された浮遊菌の数（あるいは浮遊菌密度）等を、計測し、第二噴霧工程における細菌のコロニー形成率（コロニー形成能）Ｃ２を計算する（Ｓ３２）。
【００４３】
なお、上述した実行手順のステップＳ２２〜Ｓ２６と、ステップＳ２８〜Ｓ３２との順序を入れ替えても良い。
【００４４】
上記衝突菌捕集手段（例えば、粘着シート、スタンプ培地、ペトリフィルムなど）１３を回収し、孵卵器で細菌を分裂増殖させてコロニーに成長させる。また、衝突菌捕集手段を取り除いた跡の同領域の評価対象面に表面付着菌測定用の粘着シート、スタンプ培地、ペトリフィルムなどを密着させるか、または拭き取り法などを用いて付着菌を捕集する。捕集した付着菌を孵卵器で分裂増殖させ、コロニーに成長させる。培養は、例えば、３２℃で１６時間程度とする（Ｓ３４）。
【００４５】
次に、衝突菌捕集手段１３による表面衝突菌数（＝Ａ）の算出工程（ステップＳ３６）では、衝突菌捕集手段１３で捕集して培養した細菌のコロニーの数を計数する。捕集した菌数とコロニーの数が対応するのでコロニーの数で表面衝突菌数Ａが求められる。
【００４６】
同様に露出表面の付着菌数（＝Ｂ）の算出工程（ステップＳ３８）では、評価対象面から捕集し培養した細菌のコロニーの数を計数する。捕集した菌数とコロニーの数が対応するのでコロニーの数で付着菌数Ｂが求められる。
【００４７】
次に、第一噴霧工程と第二噴霧工程における噴霧条件の違いによる細菌の回復率の違いを考慮して算出菌数の補正Ｃを行う（Ｓ４０）。すなわち、表面衝突菌数Ａを第一噴霧工程における細菌のコロニー形成率Ｃ１（ステップＳ２６参照）で補正する。同様に、表面付着菌数Ｂを第二噴霧工程における細菌のコロニー形成率Ｃ２（ステップＳ３２参照）で補正する。
例えば、表面衝突菌数のコロニーのカウント数Ａが細菌を捕集した培地表面で１２．３〔cfu/cm2〕のとき、細菌のコロニー形成率Ｃ１が０．０９８〔CFU/PC〕であると、補正値Ａ’は１２５．５〔cfu/cm2〕となる。また、表面付着菌数のコロニーのカウント数Ｂが細菌を捕集した培地表面で１．６〔cfu/cm2〕のとき、細菌のコロニー形成率Ｃ２が０．１４〔CFU/PC〕であると、補正値Ｂ’は１１．４〔cfu/cm2〕となる。ここで、〔cfu〕はコロニーの数、〔PC〕はパーティクルカウンターの計数値である。
【００４８】
次に、補正された表面付着菌数と表面衝突菌数との比率（＝Ｂ’／Ａ’）を算出する（ステップＳ４２）。更に、次の評価工程（ステップＳ４４）では、微生物付着特性として、表面付着菌数と表面衝突菌数を評価する。また、表面付着菌数と表面衝突菌数との比率（Ｂ’／Ａ’）、即ち付着特性、あるいは反発係数（（Ａ’−Ｂ’）／Ａ’）に対する評価を行う。例えば、この反発係数を所定の定数と比較して強弱を判定することや、この反発係数をその値の大きさに基づいて複数のクラスに分類することを行うことができる。
【００４９】
最後に、微生物試験環境の評価工程を実施して、噴霧試験用チャンバー装置１を試験環境とする微生物試験環境の評価を行う（ステップＳ４６）。この微生物試験環境の評価工程における評価に際しては、例えば、噴霧試験の場合、上記の反発係数（あるいは付着特性）が、噴霧チャンバー装置内に浮遊する細菌数を減少させる影響を与えることを考慮する。
【００５０】
以上説明したように、本発明の実施の形態によれば、噴霧チャンバー装置内壁面等の評価対象表面に衝突する菌（当該表面で跳ね返る菌と跳ね返らないで当該面に付着する菌）の細菌数Ａ（表面衝突菌数）と、該表面に跳ね返らずに付着する細菌数Ｂ（表面付着菌数）との比率（＝Ｂ／Ａ）を求め、この細菌の付着比率を観察することによって付着特性などの微生物試験環境条件が変動しているかどうか等を判断することができる。それにより、試験環境が安定しているかどうか等を知ることができ、具合がよい。なお、反射比率（＝（Ａ−Ｂ）／Ａ）をパラメータとしても良い。
【００５１】
なお、本発明の実施例では噴霧試験チャンバー装置を使用しているが、微生物の噴霧を対象物の面上に適宜に行えればよく、チャンバー装置は必須のものではない。本発明は噴霧試験の安定性を向上するための壁面状態管理の一手法を与えるが、安定性管理対象は壁面または表面であればよく、噴霧試験チャンバー装置の内壁面に限られない。また、表面は平坦面に限られず、噴霧による微生物の付着に影響が少なければ多少の凹凸があっても問題ない。例えば、家具の広い表面の付着特性を知りたいとき、家具をチャンバー装置内に設置し、微生物（好ましくは芽胞菌）を噴霧し、本方法を用いることで広い表面の微生物の付着特性を簡便に調べることができる。
【００５２】
本発明の実施例では微生物を使用することを特徴とする。もし、微生物（好ましくは、コロニーを形成するものであり、環境変化に対しても耐性の高い芽胞菌）でなく、コロニーを形成しない非微生物粒子であったならば粘着シート全体を顕微鏡観察して粒子を計数することになるが、そのような人為的な計数作業は困難である。あるいは高価な観察計数装置が必要となる。また、微粒子を表面から液体に回収して遠心分離機で濃縮する手法を採用する場合にも回収効率にばらつきがあり、更に、濁度計、顕微鏡、液中パーティクルカウンター等の多数の設備が必要である。この点、本実施例のように肉眼で観察可能な微生物のコロニーを計数し、微生物数を算出するようにすれば簡易な設備ですむ利点がある。
【符号の説明】
【００５３】
１  噴霧試験用チャンバー装置、２  チャンバー装置空間、３  噴霧菌、４  捕集面、５  評価対象面、６  表面付着菌、１１  噴霧器（ネブライザー）、１３  衝突菌捕集手段、Ｓ２〜Ｓ１８，Ｓ２２〜Ｓ４６  評価工程
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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