(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体試料中の馬尿酸およびメチル馬尿酸のそれぞれの濃度を測定する方法であって、
（１）生体から採取された生体試料の一定量に、馬尿酸を安息香酸とグリシンとに加水分解し、かつメチル馬尿酸をメチル安息香酸とグリシンとに加水分解する酵素を作用させる工程、
（２）（１）の工程で得た反応液に、
（ａ）Ｄ−アミノ酸およびＤ−アミノ酸オキシダーゼ、または
（ｂ）Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン、グリシン−Ｎ−メチルトランスフェラーゼおよびサルコシンオキシダーゼを
混合し、過酸化水素を発生させる工程、
（３）（２）の工程で発生した過酸化水素の濃度を特定する工程、
（４）（１）〜（３）の工程とは別に、該生体試料の別の一定量に、馬尿酸に対する基質特異性が高く、かつメチル馬尿酸に対する比活性が低い酵素であって、該馬尿酸を安息香酸とグリシンとに加水分解する酵素を作用させて、馬尿酸を安息香酸とグリシンとに加水分解する工程、
（５）（４）の工程で得た反応液に、安息香酸に対する基質特異性が高く、メチル安息香酸に対する比活性が低い酵素を作用させる工程、
（６）（５）の工程で得た反応液中の酵素反応産物の濃度を特定する工程、および
（７）（３）の工程で得た過酸化水素の濃度と、（６）の工程で得た酵素反応産物の濃度とから該生体試料中の馬尿酸およびメチル馬尿酸のそれぞれの濃度を算出する工程
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、馬尿酸およびメチル馬尿酸のそれぞれの濃度を液状試薬にて測定する方法ならびにキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
馬尿酸はトルエンの尿中代謝物として、メチル馬尿酸はキシレンの尿中代謝物として、特殊健康診断での測定項目のひとつになっている。
【０００３】
しかしながら、これらの測定は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によるものであり（例えば、特許文献１および２参照）、測定が煩雑である。また、測定を簡便に行うには、液状試薬にすることが挙げられるが、馬尿酸およびメチル馬尿酸はメチル基の有無しか化学構造の差異がないため、これらを区別して測定することは困難とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開昭６２−２３０７６１号公報
【特許文献２】特開平０６−０４３１５０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、より簡便に馬尿酸およびメチル馬尿酸のそれぞれの濃度を測定するための方法ならびにキットを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、馬尿酸とメチル馬尿酸との間で特定の酵素に対する基質特異性が大きく異なることに着目し、これらの酵素を複数組み合わせて用いることによって、より簡便に馬尿酸およびメチル馬尿酸のそれぞれの濃度を測定できることを見出し、本発明を完成させた。
【０００７】
本発明は、生体試料中の馬尿酸およびメチル馬尿酸のそれぞれの濃度を測定する方法を提供し、該方法は、（１）生体から採取された生体試料の一定量に、馬尿酸を安息香酸とグリシンとに加水分解し、かつメチル馬尿酸をメチル安息香酸とグリシンとに加水分解する酵素を作用させる工程、（２）（１）の工程で得た反応液に、（ａ）Ｄ−アミノ酸およびＤ−アミノ酸オキシダーゼ、または（ｂ）Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン、グリシン−Ｎ−メチルトランスフェラーゼおよびサルコシンオキシダーゼを混合し、過酸化水素を発生させる工程、（３）（２）の工程で発生した過酸化水素の濃度を特定する工程、（４）（１）〜（３）の工程とは別に、該生体試料の別の一定量に、馬尿酸に対する基質特異性が高く、かつメチル馬尿酸に対する比活性が低い酵素を作用させて、馬尿酸を安息香酸とグリシンとに加水分解する工程、（５）（４）の工程で得た反応液に、安息香酸に対する基質特異性が高い酵素を作用させる工程、（６）（５）の工程で得た反応液中の酵素反応産物の濃度を特定する工程、および（７）（３）の工程で得た過酸化水素の濃度と、（６）の工程で得た酵素反応産物の濃度とから該生体試料中の馬尿酸およびメチル馬尿酸のそれぞれの濃度を算出する工程を含む。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、より簡便に馬尿酸とメチル馬尿酸のそれぞれの濃度を測定することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】海産性好熱性細菌由来馬尿酸ヒドロラーゼの基質特異性を示すグラフである。
【図２】バークホルデリア・ゼノボランス由来安息香酸−ＣｏＡリガーゼ（Ｂｘｅ）、鉄還元細菌由来安息香酸−ＣｏＡリガーゼ（Ｇｍｅ）の基質特異性を示すグラフである。
【図３】馬尿酸に馬尿酸ヒドロラーゼおよび安息香酸−ＣｏＡリガーゼを作用させる反応系を示す模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明は、馬尿酸およびメチル馬尿酸のそれぞれの濃度を液状試薬にて測定する方法ならびにキットに関する。
【００１１】
本発明における「馬尿酸」とは、何も修飾されていない馬尿酸そのものをいい、別名でＮ−ベンゾイルグリシンをいう。馬尿酸は、トルエンの代謝産物である。
【００１２】
本発明における「メチル馬尿酸」とは、馬尿酸のベンゼン環構造のｏ−位、ｍ−位、ｐ−位のいずれか１つがメチル基で修飾されたものをいい、別名でＮ−トルオイルグリシンをいう。メチル馬尿酸は、キシレンの代謝産物である。なお、「メチル馬尿酸」は、馬尿酸の不斉炭素がメチル基で修飾されたもの（Ｎ−ベンゾイルアラニン）の別名としても用いられることがあるが、本発明における「メチル馬尿酸」としては、Ｎ−ベンゾイルアラニンは除外される。
【００１３】
本発明における「安息香酸」とは、何も修飾されていない安息香酸そのものをいう。安息香酸は、馬尿酸の分解産物である。
【００１４】
本発明における「メチル安息香酸」とは、安息香酸のベンゼン環構造のｏ−位、ｍ−位、ｐ−位のいずれか１つがメチル基で修飾されたものをいい、別名でトルイル酸をいう。メチル安息香酸は、メチル馬尿酸の分解産物である。
【００１５】
本発明の生体試料中の馬尿酸およびメチル馬尿酸のそれぞれの濃度を測定する方法は、（１）生体から採取された生体試料の一定量に、馬尿酸を安息香酸とグリシンとに加水分解し、かつメチル馬尿酸をメチル安息香酸とグリシンとに加水分解する酵素を作用させる工程、（２）（１）の工程で得た反応液に、（ａ）Ｄ−アミノ酸およびＤ−アミノ酸オキシダーゼ、または（ｂ）Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン、グリシン−Ｎ−メチルトランスフェラーゼおよびサルコシンオキシダーゼを混合し、過酸化水素を発生させる工程、（３）（２）の工程で発生した過酸化水素の濃度を特定する工程、（４）（１）〜（３）の工程とは別に、該生体試料の別の一定量に、馬尿酸に対する基質特異性が高く、かつメチル馬尿酸に対する比活性が低い酵素を作用させて、馬尿酸を安息香酸とグリシンとに加水分解する工程、（５）（４）の工程で得た反応液に、安息香酸に対する基質特異性が高い酵素を作用させる工程、（６）（５）の工程で得た反応液中の酵素反応産物の濃度を特定する工程、および（７）（３）の工程で得た過酸化水素の濃度と、（６）の工程で得た酵素反応産物の濃度とから該生体試料中の馬尿酸およびメチル馬尿酸のそれぞれの濃度を算出する工程を含む。
【００１６】
まず、（１）〜（３）の工程において、生体試料中の馬尿酸およびメチル馬尿酸の総濃度を測定する。次いで、（４）〜（６）の工程において、生体試料中の馬尿酸およびメチル馬尿酸のいずれか一方の濃度を測定する。
【００１７】
（１）生体から採取された生体試料の一定量に、馬尿酸を安息香酸とグリシンとに加水分解し、かつメチル馬尿酸をメチル安息香酸とグリシンとに加水分解する酵素を作用させる工程
生体としては、特に限定されず、例えば、ヒト、動物（イヌ、ネコ、ブタ、ウシなど）が挙げられる。好ましくはヒト、より好ましくは有機溶媒を取り扱うヒトである。本発明の方法は、有機溶媒を取り扱うヒトの特殊健康診断に好適に用いられる。
【００１８】
生体試料としては、特に限定されず、例えば、尿、血液、唾液、骨髄液、細胞間質液が挙げられる。好ましくは尿、より好ましくは有機溶媒を取り扱うヒトの尿である。
【００１９】
「馬尿酸を安息香酸とグリシンとに加水分解し、かつメチル馬尿酸をメチル安息香酸とグリシンとに加水分解する酵素」としては、特に限定されず、例えば、アミノアシラーゼ（ＥＣ３．５．１．１４）、馬尿酸ヒドロラーゼ（ＥＣ３．５．１．３２）、Ｎ―アシル−Ｄ−アミノ酸デアシラーゼ（ＥＣ３．５．１．８１）が挙げられる。好ましくは、アミノアシラーゼである。
【００２０】
アミノアシラーゼとしては、特に限定されず、例えば、市販されているもの、生物から調製されたものが挙げられる。市販されているものとしては、特に限定されず、例えば、Ｄ−アミノアシラーゼ「アマノ」（和光純薬工業株式会社）、アシラーゼ（シグマアルドリッチ社、ブタ腎臓由来）が挙げられる。生物としては、特に限定されず、例えば、アスペルギルス(Aspergillus)属、ブタ腎臓が挙げられる。
【００２１】
（２）（１）の工程で得た反応液に、（ａ）Ｄ−アミノ酸およびＤ−アミノ酸オキシダーゼ、または（ｂ）Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン、グリシン−Ｎ−メチルトランスフェラーゼおよびサルコシンオキシダーゼを混合し、過酸化水素を発生させる工程
この工程では、（ａ）（１）の工程で得た反応液に存在する安息香酸またはメチル安息香酸の量を評価するために、Ｄ−アミノ酸およびＤ−アミノ酸オキシダーゼを混合し、過酸化水素を発生させるか、または（ｂ）（１）の工程で得た反応液に存在するグリシンの量を評価するために、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（ＳＡＭ）、グリシン−Ｎ−メチルトランスフェラーゼおよびサルコシンオキシダーゼを混合し、過酸化水素を発生させる。
【００２２】
（ａ）Ｄ−アミノ酸およびＤ−アミノ酸オキシダーゼを混合し、過酸化水素を発生させる工程
Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ（ＥＣ１．４．３．３）は、補因子としてフラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）を含むペルオキシソーム酵素の一つであり、Ｄ−アミノ酸をイミノ酸に変換し、同時にアンモニアと過酸化水素を合成する。Ｄ−アミノ酸オキシダーゼとしては、特に限定されず、例えば、市販されているもの、動物臓器から調製されたものが挙げられる。市販されているものとしては、特に限定されず、例えば、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ（ＭＰバイオメディカル社）、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ（シグマアルドリッチ社）が挙げられる。
【００２３】
Ｄ−アミノ酸としては、特に限定されず、例えば、α−アミノ酸（アラニン、ロイシン、イソロイシン、リジン、バリン、グルタミン酸、プロリン、チロシンなど）、β−アミノ酸、γ−アミノ酸が挙げられる。純粋なＤ−アミノ酸のみならず、Ｄ−アミノ酸を含むラセミ体であってもよい。好ましくは、安価に入手できる観点から、アラニン（ラセミ体）である。
【００２４】
この工程では、例えば、Ｄ−アミノ酸としてアラニン（ラセミ体）を用いた場合、ピルビン酸、アンモニアおよび過酸化水素が発生する。（１）の工程で得た反応液に安息香酸またはメチル安息香酸が存在する場合、これらの化合物はＤ−アミノ酸オキシダーゼによる反応を阻害する。したがって、発生する過酸化水素の濃度を特定することによって反応液中の安息香酸またはメチル安息香酸の量を知ることができる。
【００２５】
（ｂ）Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン、グリシン−Ｎ−メチルトランスフェラーゼおよびサルコシンオキシダーゼを混合し、過酸化水素を発生させる工程
グリシン−Ｎ−メチルトランスフェラーゼ（ＥＣ２．１．１．２０）は、Ｓ−アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）のメチル基をグリシンに転移してサルコシンとアデノシルホモシテインを合成する。グリシン−Ｎ−メチルトランスフェラーゼとしては、特に限定されず、例えば、市販されているもの、動物臓器（ウサギ肝、ラット肝など）由来のものが挙げられる。市販されているものとしては、特に限定されず、例えば、Recombinant human GNMT Glycine N-methyltransferase (aa 1-295), His-tagged（Acris Antibodies GmbH社）が挙げられる。
【００２６】
サルコシンオキシダーゼ（ＥＣ１．５．３．１）は、サルコシン、水および酸素からグリシン、ホルムアルデヒドおよび過酸化水素を生成する。サルコシンオキシダーゼとしては、特に限定されず、例えば、市販されているもの、微生物から調製されたものが挙げられる。市販されているものとしては、特に限定されず、例えば、サルコシンオキシダーゼ（東洋紡株式会社、SAO−331、微生物由来）、サルコシンオキシダーゼ（ＭＰバイオメディカル社、152047）が挙げられる。微生物としては、特に限定されず、例えば、アリスロバクター（Arthrobactor）属が挙げられる。
【００２７】
この工程では、（１）の工程で得た反応液中のグリシンの量を、発生する過酸化水素の濃度を特定することによって知ることができる。
【００２８】
（３）（２）の工程で発生した過酸化水素の濃度を特定する工程
過酸化水素の濃度を特定する方法としては、特に限定されず、公知の液状試薬を用いた方法を採用することができる。例えば、４−アミノアンチピリン（４−ＡＡ）および／またはＮ−エチル−Ｎ−（３−スルホプロピル）−ｍ−アニシジン（ＡＤＰＳ）を基質とするペルオキシダーゼを用いた酵素発色法、過酸化水素による鉄イオンの酸化に伴う色素の呈色反応を利用する方法が挙げられる。
【００２９】
（４）（１）〜（３）の工程とは別に、該生体試料の別の一定量に、馬尿酸に対する基質特異性が高く、かつメチル馬尿酸に対する比活性が低い酵素を作用させて、馬尿酸を安息香酸とグリシンとに加水分解する工程
「馬尿酸に対する基質特異性が高く、かつメチル馬尿酸に対する比活性が低い酵素」としては、特に限定されないが、好ましくは馬尿酸ヒドロラーゼ（ＥＣ３．５．１．３２）である。馬尿酸ヒドロラーゼ（ＥＣ３．５．１．３２）は、野生型では「馬尿酸に対する基質特異性が高く、かつメチル馬尿酸に対する比活性が低い酵素」であるが、馬尿酸ヒドロラーゼ（ＥＣ３．５．１．３２）に遺伝子組み換え技術により変異を導入して、上述の「馬尿酸を安息香酸とグリシンとに加水分解し、かつメチル馬尿酸をメチル安息香酸とグリシンとに加水分解する酵素」とすることも可能である。野生型の馬尿酸ヒドロラーゼ（ＥＣ３．５．１．３２）は、馬尿酸をほぼ１００％安息香酸とグリシンとに加水分解するが、メチル馬尿酸についてはほとんど加水分解しない。また、馬尿酸のベンゼン環構造のメチル基が付加された位置、すなわちｏ−位、ｍ−位またはｐ−位によって、馬尿酸ヒドロラーゼの加水分解活性が異なる。
【００３０】
馬尿酸ヒドロラーゼとしては、特に限定されず、例えば、市販されているもの、微生物から調製されたものが挙げられる。市販されているものとしては、特に限定されない。微生物としては、特に限定されず、例えば、海産性好熱性細菌（Rhodothermus marinus）が挙げられる。
【００３１】
馬尿酸ヒドロラーゼ（ＥＣ３．５．１．３２）以外にも、アミノアシラーゼ（ＥＣ３．５．１．１４）、Ｎ−アシル−Ｄ−アミノ酸デアシラーゼ（ＥＣ３．５．１．８１）などに遺伝子組換え技術により変異を導入して、「馬尿酸に対する基質特異性が高く、かつメチル馬尿酸に対する比活性が低い酵素」とすることも可能である。
【００３２】
図１は、海産性好熱性細菌由来馬尿酸ヒドロラーゼについて、馬尿酸の分解（安息香酸の生成）を１００％とした場合のメチル馬尿酸の分解（メチル安息香酸の生成）（相対活性；％）を示す。ｏ−メチル馬尿酸およびｍ−メチル馬尿酸は約１０％であり、そしてｐ−メチル馬尿酸は約４０％である。
【００３３】
（５）（４）の工程で得た反応液に、安息香酸に対する基質特異性が高い酵素を作用させる工程
「安息香酸に対する基質特異性が高い酵素」としては、特に限定されず、例えば、安息香酸−ＣｏＡリガーゼ（ＥＣ６．２．１．２５）、安息香酸−４−モノオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１４．１３．１２）、安息香酸−１，２−ジオキシゲナーゼ（ＥＣ１．１４．１２．１０）が挙げられる。
【００３４】
安息香酸−ＣｏＡリガーゼとしては、特に限定されず、例えば、市販されているもの、微生物から調製されたものが挙げられる。市販されているものとしては、特に限定されない。微生物としては、特に限定されず、例えば、バークホルデリア・ゼノボランス（Burkholderia xenovorans）、鉄還元細菌（Geobacter metallireducens）が挙げられる。
【００３５】
安息香酸−４−モノオキシゲナーゼとしては、特に限定されず、例えば、市販されているもの、微生物から調製されたものが挙げられる。市販されているものとしては、特に限定されない。微生物としては、特に限定されず、例えば、アスペルギルス(Aspergillus)属、ロドトルラ(Rhodotorula)属が挙げられる。
【００３６】
安息香酸−１，２−ジオキシゲナーゼとしては、特に限定されず、例えば、市販されているもの、微生物から調製されたものが挙げられる。市販されているものとしては、特に限定されない。微生物としては、特に限定されず、例えば、アシネトバクター(Acinetobacter)属、ロドコッカス(rhodococcus)属が挙げられる。
【００３７】
この工程では、例えば、「安息香酸に対する基質特異性が高い酵素」として安息香酸−ＣｏＡリガーゼを用いた場合、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）を添加すると、安息香酸をほぼ１００％ベンゾイルＣｏＡに代謝してアデノシン一リン酸（ＡＭＰ）を生成するが、メチル安息香酸についてはほとんど代謝しない。また、メチル安息香酸のベンゼン環構造のメチル基が付加された位置、すなわちｏ−位、ｍ−位またはｐ−位によって、安息香酸−ＣｏＡリガーゼの代謝活性が異なる。
【００３８】
図２は、バークホルデリア・ゼノボランス由来安息香酸−ＣｏＡリガーゼ（Ｂｘｅ）、鉄還元細菌由来安息香酸−ＣｏＡリガーゼ（Ｇｍｅ）について、安息香酸の代謝を１００％とした場合のメチル安息香酸の代謝（相対活性；％）を示す。ｏ−メチル馬尿酸およびｍ−メチル馬尿酸は１０〜２０％であり、そしてｐ−メチル馬尿酸はほぼ０％である。
【００３９】
上記のように、馬尿酸の分解（安息香酸の生成）を１００％とした場合のメチル馬尿酸の分解（メチル安息香酸の生成）（相対活性；％）は、ｏ−メチル馬尿酸およびｍ−メチル馬尿酸が約１０％であり、そしてｐ−メチル馬尿酸が約４０％であるから（図１）、安息香酸の代謝を１００％とした場合のメチル安息香酸の代謝（相対活性；％）は、ｏ−メチル馬尿酸およびｍ−メチル馬尿酸が１０％×１０〜２０％＝１〜２％であり、そしてｐ−メチル馬尿酸が４０％×１％＝０．４％である。
【００４０】
このように、（５）の工程と（６）の工程とを経ることによって、生体試料中の馬尿酸はほぼ１００％ベンゾイルＣｏＡまで代謝されるが、生体試料中のメチル馬尿酸はほとんどトルイルＣｏＡまで代謝されない。
【００４１】
（６）（５）の工程で得た反応液中の酵素反応産物の濃度を特定する工程
酵素反応産物の濃度を特定する方法としては、特に限定されず、酵素反応産物に応じて適宜公知の方法を採用することができる。好ましくは、液状試薬を用いた方法である。例えば、（５）の工程で、「安息香酸に対する基質特異性が高い酵素」として安息香酸−ＣｏＡリガーゼを用いた場合、酵素反応産物としては、例えば、図３に示すように、代謝産物のＡＭＰが挙げられる。図３の例では、最終的に生成するＮＡＤ＋の濃度を特定することによって、酵素反応産物の濃度を特定することができる。
【００４２】
（７）（３）の工程で得た過酸化水素の濃度と、（６）の工程で得た酵素反応産物の濃度とから該生体試料中の馬尿酸およびメチル馬尿酸のそれぞれの濃度を算出する工程
（３）の工程で得た過酸化水素の濃度は、馬尿酸およびメチル馬尿酸の総濃度に関連し、一方、（６）の工程で得た酵素反応産物の濃度は、馬尿酸の濃度に関連する。したがって、馬尿酸およびメチル馬尿酸の総濃度から馬尿酸の濃度を差し引くことにより、メチル馬尿酸の濃度も算定することできる。
【００４３】
本発明はまた、上記方法を実施するためのキットを含む。キットは、上記種々の酵素と酵素反応に必要な試薬とを含む。
【実施例】
【００４４】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【００４５】
（実施例１）
（Ａ１）表１に記載の処方により試薬Ｒ１およびＲ２を準備する。ヒトから採取した尿の一定量に、試薬Ｒ１を表１に記載のＳ／Ｒ比に従って添加し、十分反応させた後、試薬Ｒ２を表１に記載のＳ／Ｒ比に従って添加する。
【００４６】
【表１】
0005862373.tif 000002
【００４７】
（Ｂ１）上記（Ａ１）とは別に表２に記載の処方により試薬Ｒ１およびＲ２を準備する。上記尿の別の一定量に、試薬Ｒ１を表２に記載のＳ／Ｒ比に従って添加し、十分反応させた後、試薬Ｒ２を表２に記載のＳ／Ｒ比に従って添加する。
【００４８】
【表２】
0005862373.tif 000003
【００４９】
上記（Ａ１）で求まる上記尿中の過酸化水素の濃度と、上記（Ｂ１）で求まる上記尿中のＮＡＤＰ＋の濃度から上記尿中の馬尿酸およびメチル馬尿酸のそれぞれの濃度を算出する。
【００５０】
（実施例２）
（Ａ２）表３に記載の処方により試薬Ｒ１およびＲ２を準備する。ヒトから採取した尿の一定量に、試薬Ｒ１を表３に記載のＳ／Ｒ比に従って添加し、十分反応させた後、試薬Ｒ２を表３に記載のＳ／Ｒ比に従って添加する。
【００５１】
【表３】
0005862373.tif 000004
【００５２】
（Ｂ２）上記（Ａ２）とは別に表４に記載の処方により試薬Ｒ１およびＲ２を準備する。上記尿の別の一定量に、試薬Ｒ１を表４に記載のＳ／Ｒ比に従って添加し、十分反応させた後、試薬Ｒ２を表４に記載のＳ／Ｒ比に従って添加する。
【００５３】
【表４】
0005862373.tif 000005
【００５４】
上記（Ａ２）で求まる上記尿中の過酸化水素の濃度と、上記（Ｂ２）で求まる上記尿中のＮＡＤ＋の濃度から上記尿中の馬尿酸およびメチル馬尿酸のそれぞれの濃度を算出する。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明は、特殊健康診断の分野において利用され得る。
【図１】
0005862373.tif 000006
【図２】
0005862373.tif 000007
【図３】
0005862373.tif 000008