(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の薬物コンジュゲート
Ｄ−Ｌ−Ｐ  （Ｉ）
であって、
式中、Ｄはプレドニゾロンであり、
Ｌは連結であり、
Ｐは植物ステロイド成分である、
薬物コンジュゲート。
【請求項２】
プレドニゾロンスチグマステロールトリエチレングリコールアルコールスクシナート；プレドニゾロンスチグマステロールスクシナート；およびプレドニゾロンスチグマステロールトリエチレングリコールアセタートからなる群から選択される、請求項１に記載の薬物コンジュゲート。
【請求項３】
Ｐがフィトステロールまたはフィトスタノール成分である、請求項１に記載の薬物コンジュゲート。
【請求項４】
Ｐがスチグマステロール、カンペステロール、２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、または５−６−エポキシカンペステロールである、請求項３に記載の薬物コンジュゲート。
【請求項５】
Ｌが結合である、請求項１に記載の薬物コンジュゲート。
【請求項６】
Ｌが、エーテル、アミド、スルホンアミド、およびエステルからなる群から選択される少なくとも１つの化学官能基を含む、請求項１に記載の薬物コンジュゲート。
【請求項７】
Ｌが少なくとも３個の原子を含む、請求項１に記載の薬物コンジュゲート。
【請求項８】
Ｌが少なくとも１０個の原子を含む、請求項７に記載の薬物コンジュゲート。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物ステロールを含む植物ステロイド、より具体的には、薬物送達媒体として植物ステロイドを用いることに関する。
【背景技術】
【０００２】
負の副作用は、腸を通って血流へ吸収され、体全体へ循環する経口薬物への全身性曝露に関連し得る。いくつかの薬物、特に、胃腸管症状に適応される薬物について、または胃腸管系を通して効果を発揮する薬物について、体中を循環するよりむしろ、腸管細胞などの胃腸管組織内に薬物を保持することが望ましい。したがって、当技術分野において、薬物を腸管細胞へ特異的にターゲッティングする方法の必要性がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
植物ステロイドおよび薬物を含む化合物が、本明細書に提供される。植物ステロイドは、薬物に結合することができ、その結合は、共役結合またはアミン結合であり得る。薬物は、抗炎症薬、グルココルチコイド、ＬＸＲアゴニスト、ＴＮＦα阻害剤、ＮＦ−κＢ阻害剤またはアゴニスト、選択的ＣＯＸ−２阻害剤、非選択的非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、メトトレキサート、レフルノミド、メサラミン、バルサラジド、オサラジン、スルファサラジン、アミノサリチラート、シクロスポリン、メルカプトプリン、アザチオプリン、アトロピン、ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質（ＭＴＰ）阻害剤、アシルＣｏＡ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ−２（ＡＣＡＴ２）阻害剤、ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）アゴニスト、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ｄｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ  ａｃｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）（ＤＧＡＴ）阻害剤、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）アゴニスト、回腸型胆汁酸輸送（ＩＢＡＴ）阻害剤、抗生物質、または抗ウイルス剤でもよい。薬物はまたプレドニゾンでもよい。
【０００４】
植物ステロイドは、フィトステロールまたはフィトスタノールでもよい。ステロールは、スチグマステロール、ブラシカステロール、カンプエステノール、またはカンペステロールでもよい。コレステロールもまた、薬物に結合し得る。コレステロールレベルを低下させるための方法であって、それを必要としている哺乳類にオキシフィトスタノールを投与する工程を含み得る方法もまた、本明細書に提供される。
【０００５】
以下の式（Ｉ）の薬物コンジュゲートもまた本明細書に提供される：
Ｄ−Ｌ−Ｐ  （Ｉ）
式中、Ｄは薬物成分であり、Ｌは連結であり、Ｐは植物ステロイド成分である。コレステロールは、植物ステロイド成分の代わりに用いられてもよい。Ｄは上記のような薬物であってもよい。例えば、Ｄは、グルココルチコイドであってもＬＸＲアゴニスト成分であってもよい。グルココルチコイドはブデソニドであってもよく、ＬＸＲアゴニストは、ＧＷ−３９６５であってもＴＯ−９０１３１７であってもよい。Ｐは、フィトステロールであってもフィトスタノール成分であってもよい。Ｐは、スチグマステロール、カンペステロール、２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、または５−６−エポキシカンペステロールであってもよい。Ｌは結合であってもよく、エーテル、アミド、スルホンアミド、またはエステルなどの少なくとも１つの化学官能基を含んでもよい。Ｌは、少なくとも３個の原子を含んでもよく、少なくとも１０個の原子を含んでもよい。
【０００６】
薬物コンジュゲートは、カンペステロール／ブデソニド薬物コンジュゲート、２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール／ブデソニド薬物コンジュゲート、カンペステロール／ＧＷ−３９６５薬物コンジュゲート、カンペステロール／ＴＯ−９０１３１７薬物コンジュゲート、２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール／ＧＷ−３９６５薬物コンジュゲート、または２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール／ＴＯ−９０１３１７薬物コンジュゲートであってもよい。薬物コンジュゲートは、プレドニゾロンスチグマステロールトリエチレングリコールアルコールスクシナート（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ  ｓｔｉｇｍａｓｔｅｒｏｌｔｒｉｓｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌａｌｃｏｈｏｌ  ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、プレドニゾロンスチグマステロールスクシナート、またはプレドニゾロンスチグマステロールトリエチレングリコールアセタート（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ  ｓｔｉｇｍａｓｔｅｒｏｌｔｒｉｓｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ  ａｃｅｔａｔｅ）であってもよい。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
式（Ｉ）の薬物コンジュゲート
Ｄ−Ｌ−Ｐ  （Ｉ）
であって、
式中、Ｄは薬物成分であり、Ｌは連結であり、Ｐは植物ステロイド成分である、薬物コンジュゲート。
（項目２）
Ｄがプレドニゾンである、項目１に記載の化合物。
（項目３）
プレドニゾロンスチグマステロールトリエチレングリコールアルコールスクシナート；プレドニゾロンスチグマステロールスクシナート；およびプレドニゾロンスチグマステロールトリエチレングリコールアセタートからなる群から選択される、項目１に記載の薬物コンジュゲート。
（項目４）
Ｐがフィトステロールまたはフィトスタノール成分である、項目１に記載の薬物コンジュゲート。
（項目５）
Ｐがスチグマステロール、カンペステロール、２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール、または５−６−エポキシカンペステロールである、項目４に記載の薬物コンジュゲート。
（項目６）
Ｄが、抗炎症薬、グルココルチコイド、ＬＸＲアゴニスト、ＴＮＦα阻害剤、ＮＦ−κＢ阻害剤またはアゴニスト、選択的ＣＯＸ−２阻害剤、非選択的非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、メトトレキサート、レフルノミド、メサラミン、バルサラジド、オサラジン、スルファサラジン、アミノサリチラート、シクロスポリン、メルカプトプリン、アザチオプリン、アトロピン、ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質（ＭＴＰ）阻害剤、アシルＣｏＡ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ−２（ＡＣＡＴ２）阻害剤、ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）アゴニスト、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）阻害剤、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）アゴニスト、回腸型胆汁酸輸送（ＩＢＡＴ）阻害剤、抗生物質、および抗ウイルス剤からなる群から選択される、項目１に記載の薬物コンジュゲート。
（項目７）
ＤがグルココルチコイドまたはＬＸＲアゴニスト成分である、項目６に記載の薬物コンジュゲート。
（項目８）
前記グルココルチコイドがブデソニドであり、前記ＬＸＲアゴニストがＧＷ−３９６５またはＴＯ−９０１３１７である、項目７に記載の薬物コンジュゲート。
（項目９）
Ｌが結合である、項目１に記載の薬物コンジュゲート。
（項目１０）
Ｌが、エーテル、アミド、スルホンアミド、およびエステルからなる群から選択される少なくとも１つの化学官能基を含む、項目１に記載の薬物コンジュゲート。
（項目１１）
Ｌが少なくとも３個の原子を含む、項目１に記載の薬物コンジュゲート。
（項目１２）
Ｌが少なくとも１０個の原子を含む、項目１１に記載の薬物コンジュゲート。
（項目１３）
カンペステロール／ブデソニド薬物コンジュゲート；２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール／ブデソニド薬物コンジュゲート；カンペステロール／ＧＷ−３９６５薬物コンジュゲート；  カンペステロール／ＴＯ−９０１３１７薬物コンジュゲート；２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール／ＧＷ−３９６５薬物コンジュゲート；および２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール／ＴＯ−９０１３１７薬物コンジュゲートからなる群から選択される、項目１に記載の薬物コンジュゲート。
（項目１４）
植物ステロイドおよび薬物を含む化合物であって、前記植物ステロイドが前記薬物に結合している、化合物。
（項目１５）
前記結合が共役結合またはアミン結合である、項目１４に記載の化合物。
（項目１６）
前記薬物が、抗炎症薬、グルココルチコイド、ＬＸＲアゴニスト、ＴＮＦα阻害剤、ＮＦ−κＢ阻害剤またはアゴニスト、選択的ＣＯＸ−２阻害剤、非選択的非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、メトトレキサート、レフルノミド、メサラミン、バルサラジド、オサラジン、スルファサラジン、アミノサリチラート、シクロスポリン、メルカプトプリン、アザチオプリン、アトロピン、ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質（ＭＴＰ）阻害剤、アシルＣｏＡ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ−２（ＡＣＡＴ２）阻害剤、ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）アゴニスト、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）阻害剤、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）アゴニスト、回腸型胆汁酸輸送（ＩＢＡＴ）阻害剤、抗生物質、および抗ウイルス剤からなる群から選択される、項目１４に記載の化合物。
（項目１７）
前記薬物がプレドニゾンである、項目１６に記載の化合物。
（項目１８）
前記植物ステロイドが、フィトステロールおよびフィトスタノールからなる群から選択されるステロールである、項目１４に記載の化合物。
（項目１９）
前記ステロールが、スチグマステロール、ブラシカステロール、カンプエステノール、およびカンペステロールからなる群から選択される、項目１８に記載の化合物。
（項目２０）
コレステロールおよび薬物を含む化合物であって、前記コレステロールが前記薬物に結合している、化合物。
（項目２１）
コレステロールレベルを低下させるための方法であって、それを必要としている哺乳類にオキシフィトスタノールを投与する工程を含む、方法。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１は、どのようにして、フィトステロールおよびフィトスタノールを用いて、薬物を腸管細胞へ送達するかを示す。
【図２】図２は、Ｃａｃｏ−２細胞のステロール結合体化プレドニゾンでの処理に関連した遺伝子発現変化のＶｏｌｃａｎｏプロットの例を示す。
【図３Ａ】図３Ａ〜Ｆは、様々なステロール結合体化プレドニゾン化合物で処理されたＣａｃｏ−２細胞における遺伝子発現変化を示す。
【図３Ｂ】図３Ａ〜Ｆは、様々なステロール結合体化プレドニゾン化合物で処理されたＣａｃｏ−２細胞における遺伝子発現変化を示す。
【図３Ｃ】図３Ａ〜Ｆは、様々なステロール結合体化プレドニゾン化合物で処理されたＣａｃｏ−２細胞における遺伝子発現変化を示す。
【図３Ｄ】図３Ａ〜Ｆは、様々なステロール結合体化プレドニゾン化合物で処理されたＣａｃｏ−２細胞における遺伝子発現変化を示す。
【図３Ｅ】図３Ａ〜Ｆは、様々なステロール結合体化プレドニゾン化合物で処理されたＣａｃｏ−２細胞における遺伝子発現変化を示す。
【図３Ｆ】図３Ａ〜Ｆは、様々なステロール結合体化プレドニゾン化合物で処理されたＣａｃｏ−２細胞における遺伝子発現変化を示す。
【図３Ｇ】図３Ａ〜Ｆは、様々なステロール結合体化プレドニゾン化合物で処理されたＣａｃｏ−２細胞における遺伝子発現変化を示す。
【図３Ｈ】図３Ａ〜Ｆは、様々なステロール結合体化プレドニゾン化合物で処理されたＣａｃｏ−２細胞における遺伝子発現変化を示す。
【図４】図４は、２．５μＭのプレドニゾン、ＳＥ−２２−ＩＩ、ＳＥ−２４−ＩＩ、およびＳＥ−４１−ＩＩに対する主要遺伝子ファミリーの遺伝子応答を示す。
【図５】図５は、プレドニゾロン、ＳＥ−２２、ＳＥ−２４、およびＳＥ−４１により影響を及ぼされる核内ホルモン受容体を示す。
【図６】図６は、Ｃａｃｏ−２細胞における核内ホルモン受容体に影響を及ぼす遺伝子応答を示す。
【図７】図７は、古典的およびオーファンホルモン受容体ならびにそれらのリガンドのリストを示す。
【図８】図８は、核内ホルモン受容体の概略図を示す。典型的な核内受容体は、数個の機能性ドメインで構成される。可変ＮＨ２末端領域（Ａ／Ｂ）は、リガンド非依存性ＡＦ−１トランス活性化ドメインを含有する。保存されたＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）または領域Ｃは、特定のＤＮＡ配列の認識に関与する。可変リンカー領域Ｄは、リガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）および二量体形成表面を含有する保存されたＥ／Ｆ領域へＤＢＤを結合する。リガンド非依存性転写活性化ドメインは、Ａ／Ｂ領域内に含有され、リガンド依存性ＡＦ−２コアトランス活性化ドメインは、ＬＢＤのＣＯＯＨ末端部分内に含有される。
【図９Ａ】図９Ａおよび９Ｂは、プレドニゾロン、ＳＥ−２２、ＳＥ−２４、およびＳＥ−４１により影響されるインターロイキン関連遺伝子の参照リストを示す。
【図９Ｂ】図９Ａおよび９Ｂは、プレドニゾロン、ＳＥ−２２、ＳＥ−２４、およびＳＥ−４１により影響されるインターロイキン関連遺伝子の参照リストを示す。
【図１０】図１０は、影響されたインターロイキンおよびインターロイキン受容体の視覚的プロットを示す。
【図１１Ａ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｂ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｃ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｄ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｅ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｆ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｇ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｈ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｉ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｊ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｋ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｌ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｍ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｎ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｏ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｐ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｑ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【図１１Ｒ】図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明者らは、植物ステロイド薬物コンジュゲートを用いて、全身性薬物循環の有害作用なしに、腸の疾患の処置のために腸管細胞を標的とすることができるという、または腸での代謝に影響を及ぼすことができるという驚くべき発見をしている。具体的には、消化に対して一時的、または（いくらか、または完全に）永久的に抵抗性である結合によって、薬物を植物ステロイドに結合させることは、結果として、血流へとほとんど全身性に吸収されることなく、治療薬の腸管細胞への標的化送達をもたらすことができる。
【０００９】
１．定義
他に規定がない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されているのと同じ意味を有する。矛盾する場合、定義を含む本文書が支配するものとする。
【００１０】
本明細書に用いられる用語法は、特定の実施形態のみを記載することを目的とし、限定することを意図するものではない。用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかに他に指図しない限り、単数形および複数形の指示対象を含む。したがって、例えば、「１つの薬物」を送達するための組成物への言及は、１つ、２つ、またはそれより多くの薬物への言及を含む。本明細書で用いられる場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ（ｓ））」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「できる（ｃａｎ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ（ｓ））」、およびそれらの変形は、追加の行為、化合物、または構造の可能性を排除しない、非制限的な移行句、用語、または語であるものとする。本発明はまた、明確に示されていようが示されていまいが、本明細書に提示された実施形態または要素「を含む」、「からなる」、および「から本質的になる」他の実施形態も企図する。
【００１１】
本明細書における数の範囲の列挙について、同じ正確度でそれらの間にあるそれぞれの数は、明確に企図される。例えば、６〜９の範囲について、６および９に加えて、７および８の数が企図され、範囲６．０〜７．０について、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、および７．０の数が明確に企図される。
【００１２】
本明細書で用いられる場合、用語「薬物」、「薬物部分」、「薬物成分」、「治療薬」、「治療剤」、およびそれらの変形は、ターゲットされる細胞または組織への送達を意図される任意の薬物または他の作用物質（ａｇｅｎｔ）を指す。
【００１３】
本明細書で用いられる場合、用語「連結」、「リンカー」、およびそれらの変形は、植物ステロイド成分と薬物成分を結合する任意の部分を指す。連結は、薬物と植物ステロイドを直接、結合する共有結合または化学官能基であり得る。連結は一連の共有結合した原子およびそれらの置換基を含有し得、それらは集合的に連結と呼ばれる。特定の実施形態において、連結は、薬物をリンカーの第１端に結合する第１の共有結合または化学官能基、およびリンカーの第２端を植物ステロイドに結合する第２の共有結合または化学官能基によって特徴づけることができる。
【００１４】
疾患からの動物の保護を指す場合の「処置」または「処置すること」は、疾患を予防すること、抑制すること、抑圧すること、または完全に排除することを意味する。疾患を予防することは、疾患の発症より前に、本発明の組成物を動物に投与することを含む。疾患を抑制することは、疾患の誘発後であるが、それの臨床的出現の前に、本発明の組成物を動物に投与することを含む。疾患を抑圧することは、疾患の臨床的出現の後に本発明の組成物を動物に投与することを包含する。
【００１５】
２．本発明の化合物
標的化薬物送達のための化合物が本明細書に提供される。特に、植物ステロイドおよび薬物を含む作用物質または薬物コンジュゲートが本明細書に提供される。本発明の薬物コンジュゲートは、以下の式（Ｉ）の化合物を含む：
Ｄ−Ｌ−Ｐ  （Ｉ）
式中、Ｄは薬物成分であり、Ｌは連結であり、Ｐは植物ステロイド成分である。
【００１６】
特定の実施形態において、植物ステロイド（Ｐ）は、フィトステロールまたはフィトスタノールであり得る。フィトステロール、およびフィトスタノールと名付けられたそれらの飽和型は、植物に天然で存在する一群のステロイドアルコールである。これらの化合物は、ヒトによって合成され得ず、したがって、常に、食事に由来する。フィトステロールは、腸において吸収されにくいが（０．４〜３．５％）、フィトスタノール吸収はさらに低い（０．０２〜０．３％）。これらの植物に基づいた化合物は、食事の中に豊富にあり、ステロールトランスポータＮＰＣ  １Ｌ１によって腸管細胞へ入る。いったん腸管細胞に入ると、植物ステロールおよびスタノールは、ＬＸＲなどの核内受容体を制御し、他の潜在的代謝的効果を有する。しかしながら、腸コレステロールとは違って、これらの植物ステロールおよびスタノールは、ＡＣＡＴ（リンパへの吸収のためにステロールをオレアートへ変換するのに必要とされる酵素）に対する弱い基質であり、ＡＢＣＧ５およびＡＢＣＧ８によって、腸管細胞から外へ能動的に輸送され、管腔へ戻る。このため、フィトステロールおよびスタノールは、典型的には、血流へほとんど吸収されない。したがって、フィトステロールおよびスタノールは、循環へと全身性に導入することのない、治療薬の腸管細胞への標的化送達に用いるのに適している。
【００１７】
いくつかの実施形態において、生じたステロイド−リンカー−薬物コンジュゲートは、徐々に、または部分的に、その成分の１つまたは複数（ステロイド成分、リンカー成分、薬物成分、ステロイド−リンカー成分、もしくはリンカー−薬物成分、またはそれらの代謝誘導体のいずれか）へ代謝される。特定の実施形態において、この種のコンジュゲートは、初期ＧＩ消化段階を越えての、コンジュゲートにおける活性部分の送達媒体として有用である。いったん下流へ送達されたならば、そのようなコンジュゲートは、代謝されて、標的部位において活性部分を遊離し得る。そのようなコンジュゲートは、プロドラッグの特徴を有し得る。コレステロールは、そのような部分的に安定なコンジュゲートにおける成分として用いられ得るが、被験体においてコレステロールを上昇させるリスクがあるため、フィトステロールが、そのようなコンジュゲートにおける成分として好ましくあり得る。他の実施形態において、生じたステロール−リンカー−薬物のコンジュゲートは、極めて安定であり、身体において、限られた程度まで代謝される。そのような相対的に安定なステロール−リンカー−薬物のコンジュゲートについて、コレステロールを凌ぐフィトステロールの限定的な選択性がある。
【００１８】
植物ステロイド成分として用いるのに適したフィトステロールには、β−シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール（スチグマスタ−５，２２−ジエン−３β−オール）、およびブラシカステロール（エルゴスタ−５，２２−ジエン−３β−オール）が挙げられるが、それらに限定されない。植物ステロイド成分として用いるのに適切なフィトスタノールには、シトスタノール、カンプエスタノール、ブラシカスタノール、およびスチグマスタノールが挙げられるが、それらに限定されない。特定の実施形態において、フィトスタノールは、スタノールエステルを提供するように、エステル化型として存在してもよい。あるいは、植物ステロイド成分は、酸化されている植物ステロールであってもよく、したがって、オキシフィトステロールまたはオキシフィトスタノールであってもよい。
【００１９】
別の実施形態において、植物ステロイド（Ｐ）は、コレステロールで置き換えられてもよい。コレステロールは、本明細書において植物ステロールについて記載されたのと同じリンカー（Ｌ）を介して同じ様式で薬物（Ｄ）に結合し得る。コレステロールもまた、本明細書において植物ステロールについて記載されているように官能化されてもよい。
【００２０】
好ましい実施形態において、薬物コンジュゲートの植物ステロイド成分は、カンペステロールとも呼ばれる、式（１ａ）の化合物である。
【００２１】
【化１】
0006035338.tif 000002
【００２２】
特定の実施形態において、ステロールのアミノ誘導体、イオウ誘導体、および他の誘導体が用いられてもよく、それらには、２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール（式１ｂ）または５−６−エポキシカンペステロールなどの酸化ステロールが挙げられるが、それらに限定されない。
【００２３】
【化２】
0006035338.tif 000003
【００２４】
本発明のいくつかの実施形態において、ステロイドは、薬物に直接、連結してもよい。例として、ステロイド上の−ＯＨ基は、薬物上のカルボキシ基と反応して、エステル結合を形成し得る。他の実施形態において、リンカー分子を用いて、ステロイド成分と薬物成分の間に結合を提供し、それの薬物送達特性または代謝的安定特性を最適化するように調整され、加えて、所望の型の分子の合成を最適化することができる。他の実施形態において、−ＯＨ基は、アミン、イオウ、または他の官能基で置換されてもよい。
【００２５】
本開示の薬物コンジュゲートの薬物成分（Ｄ）として用いるのに適した薬物には、標的とする細胞または組織への送達を意図される任意の薬物または治療剤が挙げられる。特定の実施形態において、治療剤は、腸の疾患を処置するための、または腸での代謝に影響を及ぼす薬物であってもよい。例えば、薬物は、炎症性腸疾患を処置するために用いられてもよく、または腸がんまたは結腸がんなどのがんに対する化学療法剤であってもよい。特定の実施形態において、治療剤は、例えば、グルココルチコイド、ＬＸＲアゴニスト、ＴＮＦα阻害剤、ＮＦ−κＢ阻害剤もしくはアゴニスト、選択的ＣＯＸ−２阻害剤、または非選択的非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）などの抗炎症剤である。治療剤はまた、メトトレキサート、レフルノミド、メサラミン、バルサラジド、オサラジン、スルファサラジン、アミノサリチラート、シクロスポリン、メルカプトプリン、アザチオプリン、アトロピン、ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質（ＭＴＰ）阻害剤、アシルＣｏＡ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ−２（ＡＣＡＴ−２）阻害剤、ファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）アゴニスト、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）阻害剤、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）アゴニスト、回腸型胆汁酸輸送（ＩＢＡＴ）阻害剤、抗生物質、または抗ウイルス剤でもよい。
【００２６】
グルココルチコイドには、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、ピバル酸チキソコルトール、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン（式（１ｃ））、プレドニゾン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンアルコール、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノニド、フルオシノロンアセトニド、ハルシノニド、ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、フルオコルトロン、ヒドロコルチゾン−１７−ブチラート、ヒドロコルチゾン−１７−バレラート、ジプロピオン酸アルクロメタゾン（ａｃｌｏｍｅｔａｓｏｎｅ）、吉草酸ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、プレドニカルバート、クロベタゾン−１７−ブチラート、クロベタゾール−１７−プロピオナート、カプロン酸フルオコルトロン、ピバル酸フルオコルトロン、および酢酸フルプレドニデンが挙げられるが、それらに限定されない。
【００２７】
【化３】
0006035338.tif 000004
【００２８】
肝臓Ｘ受容体アゴニスト（ＬＸＲアゴニスト）には、非限定的に、式（１ｄ）として描かれたＧＷ−３９６５（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、式（１ｅ）として描かれたＴＯ−９０１３１７（Ｔｕｌａｒｉｋ）、ＭＢＸ−１０２（Ｍｅｔａｂｏｌｅｘ）、ＮＯ−１８８６（Ｏｔｓｕｋａ）、およびＧｅｍｃａｂｅｎｅ（Ｐｆｉｚｅｒ）が挙げられる。
【００２９】
【化４】
0006035338.tif 000005
【００３０】
選択的シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤（ＣＯＸ−２阻害剤）には、非限定的に、ロフェコキシブ、商標ＶＩＯＸＸ（商標）（Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．，Ｉｎｃ．  Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ  Ｓｔａｔｉｏｎ、Ｎ．Ｊ．、ＵＳＡ）；セレコキシブ、商標ＣＥＬＥＢＲＥＸ（商標）（Ｐｆｉｚｅｒ）；バルデコキシブ、商標ＢＥＸＴＲＡ（商標）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｃｏｒｐ．、Ｐｅａｐａｃｋ、Ｎ．Ｊ．、ＵＳＡ）；パレコキシブ（ｐａｒａｃｏｘｉｂ）、商標ＤＹＮＡＳＴＡＴ（商標）（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｃｏｒｐ．）；エトリコキシブ、商標ＡＲＣＯＸＩＡ（商標）（Ｍｅｒｃｋ  ＆  Ｃｏ．，Ｉｎｃ．）；およびＮＳ−３９８（（Ｎ−（２−シクロヘキシルオキシ−４−ニトロフェニル）メタンスルホンアミド）が挙げられる。
【００３１】
本発明に従う改変として企図されるＮＳＡＩＤには、アセトアミノフェン（Ｔｙｌｅｎｏｌ、Ｄａｔｒｉｌなど）、アスピリン、イブプロフェン（Ｍｏｔｒｉｎ、Ａｄｖｉｌ、Ｒｕｆｅｎ他）、サリチル酸コリンマグネシウム（Ｔｒｉａｓａｔｅ）、サリチル酸コリン（Ａｎｔｈｒｏｐａｎ）、ジクロフェナク（ｖｏｌｔａｒｅｎ、ｃａｔａｆｌａｍ）、ジフルニサル（ｄｏｌｏｂｉｄ）、エトドラク（ｌｏｄｉｎｅ）、フェノプロフェンカルシウム（ｎａｌｆｏｎ）、フルルビプロフェン（ａｎｓａｉｄ）、インドメタシン（ｉｎｄｏｃｉｎ、ｉｎｄｏｍｅｔｈ、他）、ケトプロフェン（ｏｒｕｄｉｓ、ｏｒｕｖａｉｌ）、カルプロフェン、インドプロフェン、ケトロラクトロメタミン（ｔｏｒａｄｏｌ）、サリチル酸マグネシウム（Ｄｏａｎ’ｓ、ｍａｇａｎ、ｍｏｂｉｄｉｎ、他）、メクロフェナム酸ナトリウム（ｍｅｃｌｏｍｅｎ）、メフェナム酸（ｒｅｌａｆａｎ）、オキサプロジン（ｄａｙｐｒｏ）、ピロキシカム（ｆｅｌｄｅｎｅ）、サリチル酸ナトリウム、スリンダク（ｃｌｉｎｏｒｉｌ）、トルネチン（ｔｏｌｅｃｔｉｎ）、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン、ロルノキシカム（ｌｏｍｏｘｉｃａｍ）、ニメスリド、インドプロフェン、レミフェンゾン、サルサラート、チアプロフェン酸、およびフロスリドなどが挙げられる。本発明の実施に用いられる、現在好ましいＮＳＡＩＤには、ナプロキセン、アスピリン、イブプロフェン、フルルビプロフェン、インドメタシンン、ケトプロフェン、およびカルプロフェンなどが挙げられる。
【００３２】
ＭＴＰ阻害剤には、非限定的に、インプリタピド、ＢＭＳ−２０１０３８、Ｒ−１０３７５７、およびＪＴＴ−１３０などが挙げられる。ＡＣＡＴ−２阻害剤には、非限定的に、脂肪酸アニリド誘導体、尿素由来化合物、ＣＩ９７６、エフルシミベ（Ｆ−１２５１）、ＣＰ１１３，８１８、グリベンクラミド、アバシミベ（ＣＩ−１０１１）、パクチミベ、リモナバント、ＡＭ２５１、ＳＲ１４４５２８、ピリピロペンＡ、ＣＰ１１３、ＰＤ−１３８１４２−１５、ＰＤ−１５６７５９、ＸＤ−７９３−１１、ＡＥＧＲ−７３３、およびＤｕＰ１２８などが挙げられる。ＦＸＲアゴニストには、非限定的に、ＧＷ４０６４、ＩＮＴ−７４７、ＭＦＡ−１、フェキサラミン、ＷＡＹ−３６２４５０、Ｔ０９０１３０７、６−エチルケノデオキシコール酸、ＡＧＮ２９、ＡＧＮ３１、およびググルステロンなどが挙げられる。ＤＧＡＴ阻害剤には、非限定的に、Ｔ８６３、ＬＣＱ−９０８、ＰＦ−０４６２０１１０、Ａ−９２２５００、Ｈ１２８、ＪＴＴ−５５３、ＰＦ−４４１５０６０、およびキサントフモールなどが挙げられる。ＧＬＰ−１アゴニストには、非限定的に、エクセナチド、リラグルチド、タスポグルチド（ｔａｓｐａｇｌｕｔｉｄｅ）、ＡＶＥ−００１０、アルビグルチド、およびＲ１５８３などが挙げられる。ＩＢＡＴ阻害剤には、非限定的に、Ａ３３０９、ＳＣ−４３５、Ｓ−８９２１、２１６４Ｕ９０、およびＢＲＬ  ３９９２４Ａなどが挙げられる。
【００３３】
好ましくは、フィトステロールまたはフィトスタノールなどの植物ステロイド成分は、消化に対して抵抗性の結合（複数可）を通して治療成分に連結される。特定の実施形態において、連結（Ｌ）は、結合でもよく、それにより、薬物成分（Ｄ）を植物ステロイド成分（Ｐ）へ直接、連結する。あるいは、植物ステロイドと治療薬の間の連結は、１個または複数の原子を含む。好ましくは、連結は、特に、薬物成分のステロール／スタノール成分との相対的な近接が、腸管細胞の、その細胞からの除去のためにステロール／スタノール成分を認識／結合する能力に干渉する可能性がある場合、および／またはステロール／スタノール成分の治療薬との相対的な近接が、薬物の治療活性に干渉する可能性がある場合、１０個またはそれより多くの原子を含む。
【００３４】
植物ステロイドと治療薬の間の連結（Ｌ）は、１つまたは複数のエーテル結合、アミド結合、スルホンアミド結合、および／またはエステル結合を含んでもよい。エーテル結合は、生物システムにおいて高度の安定性を有し、したがって、特定の実施形態において好ましい場合がある。アミド結合およびスルホンアミド結合は、エステラーゼおよびプロテアーゼによる典型的消化に抵抗するが、肝臓代謝に抵抗性ではない場合が多い。したがって、特定の実施形態において、アミド結合またはスルホンアミド結合は、薬物コンジュゲートのわずかな程度の吸収が肝臓代謝によって中和され、それゆえに、循環中の蓄積を避けることができるため、エーテル結合と比較して、追加の安全手段を提供する。特定の実施形態において、連結は、相対的に消化に対して安定であり得る、１つまたは複数のエステル結合を含んでもよい。その連結は、トリエチレングリコール（ｔｒｉｓｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）、コハク酸、それらの複数ユニット、または前述の組み合わせを含んでもよい。
【００３５】
植物ステロイドは、以下のような機能性結合（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｌｉｎｋａｇｅ）を用いて薬物に結合体化されてもよい：
【００３６】
【化５】
0006035338.tif 000006
【００３７】
式中、ＸはＯ、Ｓ、Ｎ、ＮＨ、ＳＯ、ＳＯ２、またはＳＯＮＨなどであり、ＲはＨ、または薬物結合体化に適した少なくとも１つの官能基を有する、置換アルキルもしくは置換アラルキルである。上記のステロイド核構造物は、本明細書に記載された任意の植物ステロイド構造物によって置き換えられてもよい。
【００３８】
特定の実施形態において、フィトステロールまたはフィトスタノールは、典型的なフィトステロールまたはフィトスタノールのヒドロキシル基を通して薬物成分に連結することができる。植物ステロイドのヒドロキシル基への結合は、植物ステロイドの吸収性欠如の特徴を犠牲にすることなく、達成することができる。例えば、フィトステロールおよびフィトスタノールの脂肪酸エステルは、ＬＤＬ−コレステロールレベルを低下させるための作用物質として以前、用いられていた。フィトステロールまたはフィトスタノールのヒドロキシル基の脂肪酸エステルへの化学修飾にも関わらず、植物ステロイドの吸収性欠如の特徴は保持される。したがって、典型的なフィトステロールまたはフィトスタノールのヒドロキシル基は、植物ステロイドの薬物成分への結合において化学修飾のターゲットとなり得る。
【００３９】
一実施形態において、植物ステロイド成分は、グルココルチコイドに結合し得る。植物ステロイドは、グルココルチコイドに、例えば、グルココルチコイドのケトン官能基またはヒドロキシル官能基を介して、連結されてもよい。しかしながら、幅広い範囲の天然および合成のグルココルチコイドを比較した場合、遠位（左側）のケトン基（＝Ｏ）および中央のヒドロキシル基（−ＯＨ）は、その範囲にわたって高度に保存されている。例えば、ブデソニドに対応する式（１ｆ）のグルココルチコイドは、遠位（左側）のケトン基（「ａ」と指し示されている）および中央のヒドロキシル基（「ｂ」と指し示されている）を含む。これらの基は、特定のグルココルチコイドを別の成分へ連結するための優れた官能性を提供するが、そのような連結は、抗炎症活性を低下させ得、または消失させる可能性がある。それゆえに、特定の実施形態において、遠位のケトン基および中央のヒドロキシル基は保存され、グルココルチコイド内の他の官能基が、植物ステロイドへの結合のターゲットにされる。
【００４０】
【化６】
0006035338.tif 000007
【００４１】
合成グルココルチコイドのサブグループは、グルココルチコイド分子の反対の遠位側（右側）の典型的なグルココルチコイドのシクロペンタン環に融合した１，３−ジオキソラン（ｄｉｏｘｏａｌａｎｅ）環を含む。式（１ｆ）の化合物、ブデソニドは、遠位（右側）の１，３−ジオキソラン環（「ｃ」と指し示されている）を含む。この１，３−ジオキソラン環は、合成グルココルチコイドのサブグループにわたって結合する置換基においてかなりのバリエーションを示す。したがって、特定の実施形態において、アセトニド環上のこれらの可変部位は、グルココルチコイド薬物成分を植物ステロイド成分へ連結するために用いることができる。
【００４２】
例えば、本明細書で式（１ｇ）として描かれた、本発明の１つの例示的な薬物コンジュゲートは、ブデソニドへ、ブデソニドの１，３−ジオキソラン環を介して連結されたカンペステロールを含み、式中、Ｒは、水素、置換もしくは非置換アルキル、または置換もしくは非置換アラルキルである。式（１ｇ）のカンペステロール／ブデソニド薬物コンジュゲートは、植物ステロイドとグルココルチコイドの間に連結（Ｌ）を含む。連結は、カンペステロールにおけるエステル官能基（「ｅ」と指し示されている）、およびグルココルチコイドにおけるアミン官能基（「ａｍ」と指し示されている）を含む。
【００４３】
【化７】
0006035338.tif 000008
【００４４】
合成グルココルチコイドの全範囲にわたって、グルココルチコイド分子の反対の遠位側（右側）の典型的なシクロペンタン環の北側に結合した亜分子群内にかなりのバリエーションが見出される。これらの亜分子群は、典型的には、グルココルチコイドを植物ステロイド成分に結合させるのに適しているヒドロキシル官能基およびケトン官能基を含有する。例えば、本明細書に式（１ｈ）として描かれた、本発明の１つの例示的な薬物コンジュゲートは、カンペステロールにおけるエーテル官能基、およびグルココルチコイドにおけるエステル官能基を通して連結されたブデソニドおよびカンペステロールを含む。グルココルチコイドは、グルココルチコイドのシクロペンタン環と１，３−ジオキソラン環の縮合環炭素に結合した亜分子群（α−ヒドロキシケトン）を介して、植物ステロイドに連結している。
【００４５】
【化８】
0006035338.tif 000009
【００４６】
別の例において、本明細書で式（１ｉ）として描かれた、本発明の例示的な薬物コンジュゲートは、ブデソニドの近位にあるエーテル官能基、および植物ステロイド成分におけるエステル官能基を介して２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロールに連結されたブデソニドを含む。グルココルチコイドは、グルココルチコイドのシクロペンタン環と１，３−ジオキソラン環の縮合環炭素に結合した亜分子群（α−ヒドロキシケトン）を介して、植物ステロイドに連結している。
【００４７】
【化９】
0006035338.tif 000010
【００４８】
特定の例示的実施形態において、植物ステロイド成分は、ＬＸＲアゴニストに結合してもよい。ＴＯ−９０１３１７またはＧＷ−３９６５などのＬＸＲアゴニストは、植物ステロイド成分への連結を生じるために有用な官能基を含む。例えば、ＧＷ−３９６５はカルボキシ基の官能基を含み、ＴＯ−９０１３１７はヒドロキシル基の官能基を含み、それらの官能基のどちらも、ＬＸＲアゴニストを植物ステロイド成分へ連結するために合成的に修飾することができる。
【００４９】
本明細書で式（１ｊ）として描かれた、本発明の１つの例示的な薬物コンジュゲートには、ＧＷ−３９６５カルボキシ基および植物ステロイドの左側ヒドロキシル基を介して、フィトステロール（ｐｈｙｓｔｏｓｔｅｒｏｌ）またはフィトスタノール成分（一般的に描かれている）に連結したＬＸＲアゴニストＧＷ−３９６５が挙げられる。ＬＸＲアゴニストと植物ステロイドの間の連結は、ＬＸＲアゴニストにおけるエステル官能基および植物ステロイドにおけるアミン官能基を含む。
【００５０】
【化１０】
0006035338.tif 000011
【００５１】
本明細書で式（１ｋ）として描かれた、別の例示的な薬物コンジュゲートには、ＧＷ−３９６５カルボキシ基および植物ステロイドの左側ヒドロキシル基を介して、フィトステロールまたはフィトスタノール成分に連結したＧＷ−３９６５が挙げられ、そのＬＸＲアゴニストと植物ステロイドの間の連結が、ＬＸＲアゴニストにおけるアミド官能基および植物ステロイドにおけるエーテル官能基を含む。
【００５２】
【化１１】
0006035338.tif 000012
【００５３】
本明細書で式（１ｍ）として描かれた、別の例示的な薬物コンジュゲートには、ＴＯ−９０１３１７ヒドロキシル基および植物ステロイドの左側ヒドロキシル基を介して、フィトステロールまたはフィトスタノール成分に連結したＴＯ−９０１３１７が挙げられ、そのＬＸＲアゴニストと植物ステロイドの間の連結が、ＬＸＲアゴニストにおけるエーテル官能基および植物ステロイドにおけるアミド官能基を含む。
【００５４】
【化１２】
0006035338.tif 000013
【００５５】
本明細書で式（１ｎ）として描かれた、別の例示的な薬物コンジュゲートには、ＴＯ−９０１３１７ヒドロキシル基および植物ステロイドの左側ヒドロキシル基を介して、フィトステロールまたはフィトスタノール成分に連結したＴＯ−９０１３１７が挙げられ、そのＬＸＲアゴニストと植物ステロイドの間の連結が、ＬＸＲアゴニストにおけるエーテル官能基および植物ステロイドにおけるアミン官能基を含む。
【００５６】
【化１３】
0006035338.tif 000014
【００５７】
他の例示的な薬物コンジュゲートには、プレドニゾロンスチグマステロールトリエチレングリコールアルコールスクシナート（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ  ｓｔｉｇｍａｓｔｅｒｏｌｔｒｉｓｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌａｌｃｏｈｏｌ  ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）（式（１ｏ））、プレドニゾロンスチグマステロールスクシナート（式（１ｐ））、およびプレドニゾロンスチグマステロールトリエチレングリコールアセタート（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ  ｓｔｉｇｍａｓｔｅｒｏｌｔｒｉｓｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ  ａｃｅｔａｔｅ）（式（１ｑ））が挙げられる。
【００５８】
【化１４】
0006035338.tif 000015
【００５９】
【化１５】
0006035338.tif 000016
【００６０】
３．処置の方法
別の態様において、疾患を処置する方法であって、それを必要としている哺乳類に、本発明による薬物コンジュゲートを投与することによる方法が、本明細書に提供される。薬物コンジュゲートは、図１に示されているように、腸管細胞へ特異的に送達され得る。
【００６１】
植物ステロイドを投与することによりＬＤＬ−Ｃなどのコレステロールレベルを調節する方法もまた本明細書に提供される。調節されるコレステロールは、血清コレステロールまたは血漿コレステロールであり得る。例えば、オキシフィトスタノールは、ＬＸＲに対する強力なリガンドであり得、それは、非酸化植物ステロールおよびスタノールより大きいＬＤＬ−Ｃ低下を生じ、腸管由来ＨＤＬ代謝を有意に増大させ得る。薬物コンジュゲートは、腸がんもしくは結腸がんなどのがん、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、セリアック病、過敏性腸症候群、脂質代謝異常、アテローム性動脈硬化、肥満、高トリグリセリド血症（ｈｙｐｅｒｔｒｉｇｌｙｅｒｃｉｄｅｍｉａ）、糖尿病、または腸感染症を処置するために用いられてもよい。
【００６２】
薬物コンジュゲートはまた、胃腸疾患を処置するために用いられてもよく、その胃腸疾患には、非限定的に、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、過敏性腸疾患、過敏性腸症候群（下痢または便秘のいずれかを伴う）、セリアック病、食物アレルギーまたは自閉症圏障害に関連した胃腸炎症、胃炎（萎縮性、メネトリエ病、胃腸炎）、催吐（悪心および嘔吐）、幽門狭窄、無酸症、胃不全麻痺、門脈圧亢進性胃疾患、胃前庭部毛細血管拡張症、胃のダンピング症候群、ＨＭＦ（Ｈｕｍａｎ  Ｍｕｌｌｕｌａｒ  Ｆｉｂｒｉｌａｔｉｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、腸炎（十二指腸炎、空腸炎、回腸炎）、潰瘍（消化性潰瘍、十二指腸潰瘍、またはカーリング潰瘍）、ドゥルロフォイ病変、吸収障害（シリアック病、熱帯性スプルー、ウィップル病、脂肪便、ミルロイ病が挙げられるが、それらに限定されない）、大腸炎（偽膜性、潰瘍性、虚血性、顕微鏡的、コラーゲン蓄積、リンパ球性）、巨大結腸／中毒性巨大結腸、腸炎、壊死性腸炎、機能性大腸疾患、腸偽閉塞、およびオジルヴィ症候群が挙げられる。
【００６３】
薬物コンジュゲートはまた、炎症状態を処置するために用いられてもよく、その炎症状態には、非限定的に、関節炎、変形性関節症、喘息、ＣＯＰＤ、アレルギー、季節性アレルギー、食物アレルギー、そう痒症（ｐｒｕｒｉｔｉｓ）、蕁麻疹、アトピー性アレルギー、および（アトピー性）皮膚炎が挙げられる。
【００６４】
薬物コンジュゲートはまた、自己免疫疾患を処置するために用いられてもよく、その自己免疫疾患には、非限定的に、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、抗合成酵素症候群、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性心筋症、自己免疫性腸疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ球増殖性症候群、自己免疫性末梢神経障害、自己免疫性膵炎、自己免疫性多内分泌腺症候群、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性ブドウ膜炎、バロー病（バロー同心円性硬化症）、ベーチェット病、バージャー病、ビッカースタッフ型脳炎、ブラウ症候群、水疱性類天疱瘡、キャッスルマン病、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパシー、慢性再発性多巣性骨髄炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、補体成分２欠損症、接触性皮膚炎、頭蓋動脈炎、ＣＲＥＳＴ症候群、クッシング症候群、皮膚白血球破砕性脈管炎、ドゴー病、ダーカム病、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、びまん性皮膚全身性硬化症、ドレスラー症候群、薬剤誘発性ループス、円板状エリテマトーデス、湿疹、子宮内膜症、腱付着部炎関連関節炎、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、後天性表皮水疱症、結節性紅斑、胎児赤芽球症、本態性混合性クリオグロブリン血症、エヴァンス症候群、進行性骨化性線維形成異常症、線維化肺胞炎（または特発性肺線維症）、胃炎、胃腸類天疱瘡、巨細胞性動脈炎、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、橋本脳症、橋本甲状腺炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、妊娠性疱疹（妊娠性類天疱瘡）、化膿性汗腺炎、ヒューズ・ストーヴィン症候群、低ガンマグロブリン血症、特発性炎症性脱髄性疾患、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（自己免疫性血小板減少性紫斑病）、ＩｇＡ腎症、封入体筋炎、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、間質性膀胱炎、若年性特発性関節炎（若年性関節リウマチ）、川崎病、ランバート・イートン筋無力症症候群、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、線状ＩｇＡ病（ＬＡＤ）、ルー・ゲーリック病、ルポイド肝炎（自己免疫性肝炎）、エリテマトーデス、マジード症候群、メニエール病、顕微鏡的多発血管炎、ミラー・フィッシャー症候群（ギラン・バレー症候群）、混合性結合組織疾患、モルフェア、ムッハ・ハーバーマン病（急性痘瘡状苔癬状粃糠疹）、多発性硬化症、重症筋無力症、筋炎、ナルコレプシー、視神経脊髄炎（ドビック病）、ニューロミオトニア、眼瘢痕性類天疱瘡（ｏｃｃｕｌａｒ  ｃｉｃａｔｒｉｃｉａｌ  ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ）、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、オード甲状腺炎、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ（レンサ球菌に関連した小児自己免疫性神経精神障害）、腫瘍随伴性小脳変性症、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンベルク症候群、パーソネージ・ターナー症候群、扁平部炎、尋常性天疱瘡、悪性貧血、静脈周囲脳脊髄炎、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発性動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、多発筋炎、原��性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、進行性炎症性ニューロパチー、乾癬、乾癬性関節炎、壊疽性膿皮症、真性赤血球無形成症、ラスムッセン脳炎、レイノー現象、再発性多発性軟骨炎（ｐｅｌａｐｓｉｎｇ  ｐｏｌｙｃｈｏｎｄｒｉｔｉｓ）、ライター症候群、不穏下肢症候群、後腹膜線維症、関節リウマチ、リウマチ熱、サルコイドーシス、シュミット症候群、シュニッツラー症候群、強膜炎、強皮症、血清病、シェーグレン症候群、脊椎関節症、スチル病、スティッフパーソン症候群、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、スウィート症候群、シデナム舞踏病、交感性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、血小板減少症、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、脊椎関節症、蕁麻疹様血管炎、血管炎、白斑、およびウェゲナー肉芽腫症が挙げられる。
【００６５】
薬物コンジュゲートはまた、脂質代謝異常および心血管疾患を処置するために用いられてもよく、それらの疾患には、非限定的に、高コレステロール血症（原発性および家族性）、高トリグリセリド血症（ｈｙｐｅｒｔｒｙｇｌｙｃｅｒｉｄｅｍｉａ）（高い、および非常に高い）、混合型脂質異常症、フレドリクソンＩ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、ＩＶ型、およびＶ型脂質異常症、アテローム性動脈硬化、冠動脈疾患、冠動脈心疾患、脳血管疾患、末梢動脈疾患が挙げられる。
【００６６】
薬物コンジュゲートはまた、糖尿病および関連状態を処置するために用いられてもよく、それらには、非限定的に、インスリン抵抗性、インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ）、２型糖尿病、および１型糖尿病が挙げられる。
【００６７】
薬物コンジュゲートはまた、細菌感染症、ウイルス感染症、寄生虫感染症、または真菌感染症を処置するために用いられてもよく、それらの感染症には、非限定的に、胃腸感染症、皮膚感染症、眼感染症、呼吸器系感染症、耳感染症、性行為感染症、空気伝搬疾患、昆虫伝播疾患、輸血または移植伝播感染症、および母子間伝播感染症が挙げられる。
【００６８】
薬物コンジュゲートはまた、がんを処置するために用いられてもよく、そのがんには、非限定的に、結腸がん、胃がん、膵臓がん、皮膚がん、肝臓がん、骨髄腫、黒色腫、肉腫、口腔がん、直腸がん、中皮腫、リンパ腫、および他のがんが挙げられる。
【００６９】
本発明は、以下の非限定的実施例によって例証された複数の態様を有する。
【実施例】
【００７０】
（実施例１）
植物ステロイド結合体化化合物を作製する方法
メシル酸スチグマステロール（ＳＥ−０９−ＩＩ）
２５ｍｌの塩化メチレン中のスチグマステロール（式（１ｒ））（１．７８ｇ）の溶液を、約４℃まで冷却し、０．９ｇのトリエチルアミンを加え、続いて、３〜４ｍｌのＴＨＦ中の０．６９ｇの塩化メタンスルホニルを滴下して加えた。反応混合物を４℃で３時間、撹拌し、冷却槽を外し、反応混合物を、外界温度で一晩、撹拌した。反応を水で停止させ、相を分離した。有機相を、５％ＮａＨＣＯ３で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で蒸発させて、そのまま次のステップで用いられる所望の生成物（メシル酸スチグマステロール；式（１ｓ））を得た。
【００７１】
【化１６】
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【００７２】
スチグマステロールトリエチレングリコールエーテル（ＳＥ−１６−ＩＩ）
メシル酸スチグマステロール（３．０ｇ）およびトリエチレングリコール（２１．０ｇ）を、約１５ｍｌの１，４−ジオキサンに溶解し、反応混合物を、還流させながら、窒素下、３〜４時間、加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、真空下で溶媒を除去した。残留物を、塩化メチレンと水の間で分配し、相を分離した。有機相を、飽和ＮａＨＣＯ３、水、および塩水で逐次的に、洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を真空下で除去した。残留物を、カラムクロマトグラフィ（ＭＴＢＥで溶離させるシリカゲル）によって精製した。生じた生成物（スチグマステロールトリエチレングリコールエーテル；式（１ｔ））を次のステップに用いた。
【００７３】
【化１７】
0006035338.tif 000018
【００７４】
スチグマステロールトリエチレングリコールスクシナート一酸（ＳＥ−１９−ＩＩ）
スチグマステロールトリエチレングリコールエーテル（０．５５ｇ）、無水コハク酸（０．１２ｇ）、トリエチルアミン（０．２０ｇ）、およびＤＭＡＰ（２０ｍｇ）を、１５ｍｌのＴＨＦに溶解した。反応混合物を、外界温度で一晩、撹拌し、酢酸エチルおよび水を加えた。相を分離し、有機層を、５％ＨＣｌ、続いて、水で洗浄した。有機層を乾燥させ、溶媒を真空下で除去した。粗生成物（スチグマステロールトリエチレングリコールスクシナート；式（１ｕ））を、そのまま用いた。
【００７５】
【化１８】
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【００７６】
スチグマステロールトリエチレングリコールプレドニゾロンスクシナート（ＳＥ−２２−ＩＩ）
スチグマステロールトリエチレングリコールスクシナート一酸（０．６５ｇ）を、トルエン（１５ｍｌ）に溶解し、０℃まで冷却し、塩化オキサリル（０．５ｍｌ）を滴下して加えた。反応混合物を、外界温度で１時間、６０℃で１時間、撹拌し、外界温度まで冷却し、減圧下で乾燥状態まで蒸発させた。
【００７７】
ＴＨＦおよびＴＥＡの混合物中の０．３６ｇプレドニゾロンの冷却（０〜４℃）した溶液に、上記で調製された粗酸塩化物を加えた。反応混合物を、外界温度で一晩、撹拌し、その後、１〜３時間、還流させた。反応混合物を冷却し、酢酸エチルを加えた。有機相を分離し、水、１％ＮａＨＣＯ３で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥状態まで蒸発させて、粗生成物を得た。塩化メチレン、その後、ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ  ９：１で溶離されるシリカゲルにおけるカラムクロマトグラフィによって、粗生成物を精製した。生じた生成物は、スチグマステロールトリエチレングリコールプレドニゾンスクシナート（ＳＥ−２２−ＩＩ；式（１ｏ））であった。
【００７８】
スチグマステロールトリエチレングリコールオキシ酢酸（ＳＥ−３９−ＩＩ）
ＴＨＦ中のスチグマステロールトリエチレングリコール（１ｇ）に、ミネラルオイル中６０重量％の懸濁液として水素化ナトリウム（０．２６ｇ、無水ベース）および０．５１ｇブロモ酢酸を加え、反応混合物を、外界温度で一晩、撹拌した。０℃まで冷却後、過剰の水素化ナトリウムを、水をゆっくり加えることにより、破壊した。ＴＨＦを、減圧下で蒸発させ、その水溶液を、６Ｎ  ＨＣｌで酸性化し、塩化メチレンで抽出した。塩化メチレン抽出物を、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で乾燥状態まで蒸発させて、蝋様固体を得た。この材料（スチグマステロールトリエチレングリコールオキシ酢酸；式（１ｖ））を、さらに精製することなしに用いた。
【００７９】
【化１９】
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【００８０】
スチグマステロールトリエチレングリコールオキシ酢酸プレドニゾロンエステル（ＳＥ−４１−ＩＩ）
上記のスチグマステロールトリエチレングリコールプレドニゾロンジエステルの合成についての手順を参照されたい。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ  ９：１、８：２およびＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ  ９５：５を用いるシリカゲルのカラムクロマトグラフィによって精製した。
【００８１】
コハク酸スチグマステロール（ＳＥ−２１−ＩＩ）
スチグマステロール（０．８３ｇ）、無水コハク酸（０．３２ｇ）、ピリジン（１．５％）、およびトルエン（１５ｍｌ）の溶液を２４時間、還流し、室温まで冷却した。トルエン溶液を、水、０．５Ｎ  ＨＣｌ、水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で乾燥状態まで蒸発させた。粗生成物をそのまま用いた。
【００８２】
スチグマステロールプレドニゾロンスクシナートジエステル（ＳＥ−２４−ＩＩ）
スチグマステロールプレドニゾロンスクシナートジエステルを、スチグマステロールトリエチレングリコールプレドニゾロンジエステルと同じ様式で、スチグマステロールトリエチレングリコールスクシナート一酸の代わりにスチグマステロールスクシナート一酸に置き換えて、調製した。粗生成物を、ＣＨ２Ｃｌ２、ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ  ９：１、８：２で溶離されるシリカゲルのカラムクロマトグラフィによって精製した。
【００８３】
生成物の構造を確認するスペクトルデータ
図１１Ａ〜Ｌは、ＳＥ−２４−ＩＩ（図１１Ａ〜ＣおよびＪ〜Ｌ）、ＳＥ−２２−ＩＩ（図１１Ｄ〜ＦおよびＭ〜Ｏ）、およびＳＥ−４１−ＩＩ（図１１Ｇ〜ＩおよびＰ〜Ｒ）の構造を確認するスペクトルデータを示す。
【００８４】
（実施例２）
植物ステロイド結合体化プレドニゾンは、非結合体化薬物と類似した様式で遺伝子発現パターンを変化させる
この実施例は、全身性に最小限で吸収される植物ステロイド結合体化薬物が、非結合体化薬物と同じ潜在的治療応答を腸管細胞において誘発し得ることを示している。具体的には、有意な全身性吸収なしに、腸管細胞へ抗炎症効果をもたらすために、最も吸収されにくい植物ステロールの１つであるスチグマステロールに、プレドニゾンを結合体化させた。Ｃａｃｏ−２腸管細胞を用いた。これらの種類の細胞は、薬物の効果を評価するための、細胞に基づいたアッセイとして用いられている。
【００８５】
遺伝子発現プロファイルを、２．５μＭおよび２５μＭ処理のＣａｃｏ−２細胞（ＡＴＣＣ）から作製した。処理は、参照化合物（プレドニゾン）および３つの実験化合物：ＳＥ−２２−ＩＩ、ＳＥ−２４−ＩＩ、およびＳＥ−４１−ＩＩからなった。これらの化合物の活性型は、それぞれ、式１（ｏ）、１（ｐ）、および１（ｑ）を有した。
【００８６】
全ての化合物を個々に、Ｃａｃｏ−２細胞（２５０，０００／ウェル）に適用した。各処理からのＲＮＡを単離後、単離ＲＮＡを個々に、ｃＤＮＡプローブとして標識し、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＨＴ−１２アレイチップに適用した。遺伝子アレイアッセイからの結果により、全ての化合物（参照化合物および試験化合物）が、未処理Ｃａｃｏ−２細胞と比較して、遺伝子発現に影響を及ぼしたことが明らかにされた。統計アルゴリズムおよび可視化アルゴリズムのＩｎｆｏｒｓｅｎｓｅ  Ｓｕｉｔｅ（Ｖｏｌｃａｎｏプロット）を用いて、幅広い数の遺伝子クラスが、化合物処理によって影響されたことが観察された。特に、試験された化合物処理の全部について、＞１倍の遺伝子変化が、統計的に有意な様式で幅広い範囲の遺伝子において認められた。炎症、免疫系応答、細胞表面および核内ホルモンシグナル伝達、脂肪代謝、ならびに細胞周期／細胞分化／増殖に関与するいくつかの遺伝子が影響された。特に、化合物ＳＥ−２２およびＳＥ−２４は、化合物ＳＥ−４１より、プレドニゾンにより類似した遺伝子プロファイルを示した。
【００８７】
遺伝子クラスあたりの影響された主要遺伝子：Ｉｎｆｏｒｓｅｎｓｅ  Ｓｕｉｔｅ  ｏｆ  Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓツール（ＩＤＢＳ）を用いて、合計３６個のＶｏｌｃａｎｏプロットを、３６個の遺伝子アレイアッセイに対して作製した（化合物の未処理および処理あたり３連のアレイアッセイ）。各化合物データセットについてＶｏｌｃａｎｏプロットを作製し、上方制御および下方制御された主要遺伝子を統計的に同定した（図２における例を参照）。各アレイ実験についてのｖｏｌｃａｎｏプロットから、最もはっきりしている上方制御および下方制御された遺伝子を同定した。遺伝子は、ｐ＜０．０５の相関係数における、（図２において灰色で陰影を付けた）ｖｏｌｃａｎｏプロットの両側で同定された。この様式で同定された遺伝子は、２．５μＭの各化合物で処理されたＣａｃｏ−２細胞について図３Ａ〜Ｆにおいて列挙されている。２５μＭ処理が遺伝子発現プロファイルに細胞傷害性効果を示したことも見出された。加えて、プロファイルにおいて影響された、いくつかの主要遺伝子（例えば、ＨＮＦ−４、グリピカン、およびホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ１）を調べると、２．５μＭ処理は、はるかに線形性が高い（用量依存性）応答を示した。
【００８８】
方法
１．細胞培養：化合物セットで処理されたＣａｃｏ−２細胞
ヒト結腸腺癌細胞系Ｃａｃｏ−２を、１％（体積／体積）非必須アミノ酸、１％ピルピン酸ナトリウム、１％ペニシリン／ストレプトマイシン、および１０％（体積／体積）熱失活ウシ胎仔血清（全てＧｉｂｃｏ  ＢＲＬから購入）を補充した、４．５ｇ／ｌ  グルコース、Ｌ−グルタミン、ＮａＨＣＯ３、およびピリドキシンＨＣｌを含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）中で培養した。細胞培養物を、毎週、トリプシン処理によって移し、５％ＣＯ２を含有する加湿インキュベータ内で、３７℃でインキュベートした。４週間の細胞培養後、プレドニゾン、ＳＥ−２２−ＩＩ、ＳＥ−２４−ＩＩ、およびＳＥ−４１−ＩＩをそれぞれ、別々の３連のウェル（２５０，０００細胞／ウェル）に、それぞれ、２．５μＭおよび２５μＭの最終有効濃度で加えた。細胞を、各化合物に、それぞれ、２４時間、曝露させた。
【００８９】
２．細胞収集およびＲＮＡ単離
全ＲＮＡを、ＴＲＩｚｏｌ製造会社の指示（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に従って単離した。ＲＮＡの品質を、２１００  Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ）で評価した。様々な細胞処理からのプールした３連分由来のＲＮＡは、全て、７より大きいＲＮＡ完全性数を有し、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙカラムでさらに精製した。３００ｎｇの全ＲＮＡから、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＴｏｔａｌＰｒｅｐ  ＲＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎキット（Ａｍｂｉｏｎ）を用いて、Ｅｂｅｒｗｉｎｅ手順による逆転写後、増幅ビオチン化ｃＲＮＡを作製した。ｃＲＮＡ（９００ｎｇ）を、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＨＴ−１２  ＢｅａｄＡｒｒａｙに一晩、ハイブリダイズさせ、それを、その後、洗浄し、Ｉｌｌｕｍｉｎａプロトコールに従って、ストレプトアビジン−Ｃｙ３（Ａｍｅｒｓｈａｍ−Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）で染色した。アレイを、ＢｅａｄＡｒｒａｙ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）でスキャンした。
【００９０】
ビオチン化ｃＲＮＡ内の特定の転写産物を、ＨＴ−１２ビーズアレイへの直接的ハイブリダイゼーション後、蛍光イメージングにより測定した。そのＨＴ−１２ビーズアレイは、スライドあたり１２個のアレイを含有し、それぞれは、３７，８４６個のアノテートされた遺伝子および追加の転写産物を測定する４８，８０３個のプローブのそれぞれについて平均１５個のビーズを有した。各ビーズの強度の生測定値が直接、獲得され、下記のように、試料についての「ビーズレベル」として処理された。処理試料および未処理試料の両方について、測定値は、ＧｅｎｏｍｅＳｔｕｄｉｏソフトウェア（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）により「プローブレベル」データとして処理された。ソフトウェアは、プローブが、アレイ上に存在する≧３個のビーズを有することをチェックし（そうでない場合には、そのプローブは欠けているとみなされた）、各ビーズについてローカルバックグラウンド引き算を行い、その後、中央値から＞３の中央値絶対偏差である域外値を除外し、残りの値の平均を再計算することにより、プローブあたりの単一のプローブレベル値へビーズレベルデータを凝縮した。生プローブレベル値を、ソフトウェアから、それの補正または正規化のオプションを用いないが、欠損値を補完する（ｉｍｐｕｔｉｎｇ）ためのそれのオプションを用いて、抽出した。
【００９１】
３．データ解析
ＡＮＯＶＡ統計解析を、全てのＩｌｌｕｍｉｎａ遺伝子発現アレイファイルに実施した。Ｖｏｌｃａｎｏプロットを、Ｉｎｆｏｒｓｅｎｓｅ  ５．１  Ｓｕｉｔｅ（ＩＤＢＳ）を用いて、全てのプールされたビーズアレイデータについて作製した。
【００９２】
４．結果
図４は、２．５μＭのプレドニゾン、ＳＥ−２２−ＩＩ、ＳＥ−２４−ＩＩ、およびＳＥ−４１−ＩＩに対する主要遺伝子ファミリーの遺伝子応答を示す。
【００９３】
５．考察
Ｃａｃｏ−２細胞を、様々な試験化合物（プレドニゾン、ＳＥ−２２−ＩＩ、ＳＥ−２４−ＩＩ、およびＳＥ−４１−ＩＩ）で処理し、結果を、プレドニゾロンで処理された細胞からの結果と比較した。２．５μＭおよび２５μＭの薬物処理後（２４時間後）に、未処理細胞および処理細胞を、それらの遺伝子発現プロファイルについて評価した。Ｃａｃｏ−２細胞は、２５μＭ処理と比較して、各２．５μＭ処理のリプリケート内で一貫した結果を明らかに示した。試験された化合物の全てが、生物活性を示した。１３０個の遺伝子が、統計的に有意な＞１倍の応答を示した（ｐ＜０．００５）。影響された遺伝子の主要なクラスは、炎症、免疫系、核−転写−翻訳、および細胞接着を含んだ。プレドニゾロン曝露に関連した複数の遺伝子の上方制御および下方制御は、影響された遺伝子のプロモータ領域における特定の転写因子および／または転写因子結合モチーフ（ＴＦＢＭ）の存在に依存する可能性がある。特に、最高レベルの遺伝子応答（＞３．０倍の遺伝子発現レベル変化）が、核内ホルモン受容体遺伝子（図５における概略図参照）、サイトカインおよびケモカイン受容体遺伝子、ならびにそれらの対応する受容体について認められた。図６は、Ｃａｃｏ−２細胞における核内ホルモン受容体に影響を及ぼす遺伝子応答を示す。
【００９４】
本明細書に記載された遺伝子プロファイリングアッセイにおいて、特定の核内ホルモン受容体遺伝子が、試験された化合物の全てにわたって影響された。具体的には、このクラスのいくつかの遺伝子（例えば、肝臓受容体ホモログ−１、ＮＲ５Ａ２、エストロゲン様受容体ＮＲ３Ｃ２、肝臓Ｘ受容体様ＮＲ１Ｈ２、ビタミンＤ受容体ＮＲＩ１、ＲＡＲ関連オーファン受容体、ＮＲ１Ｆ２、および肝細胞核因子−４受容体）について、上方制御および下方制御効果が認められた。これらの遺伝子のタンパク質因子は、細胞周期、免疫機能、細胞接着、および代謝に関与する広範な一連の標的遺伝子に幅広い影響を有し得る。
【００９５】
核内ホルモン受容体
核内受容体は、大きなスーパーファミリーへ分類され、進化的に、共通の祖先に由来すると考えられる。古典的ホルモン受容体およびオーファンホルモン受容体ならびにそれらのリガンドのリストは図７に示されている。受容体の進化学的分析により、６つの異なるサブファミリーにおける細分（ｓｕｂｄｉｖｉｓｉｏｎｉｎ）がもたらされている。１つの大きなファミリーは、甲状腺ホルモン受容体（ＴＲ）、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）、ビタミンＤ受容体（ＶＤＲ）、およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）、加えて異なるオーファン受容体によって形成される。これらの受容体の一部についてのリガンドは、最近、同定されている（図７参照）。第２のサブファミリーは、ニワトリ卵白アルブミン上流刺激因子（ＣＯＵＰ）、肝細胞核因子４（ＨＮＦ４）、精巣受容体（ＴＲ２）、および眼の発生に関与する受容体（ＴＬＸおよびＰＮＲ）と共にレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）を含有する。ＲＸＲは、９−シス−レチノイン酸を結合し、ヘテロダイマーとしてＤＮＡに結合する異なる受容体についてのパートナーであるため、核内受容体シグナル伝達において重要な役割を果たす。他の受容体についてのリガンドは同定されていないが、長鎖脂肪酸アシルＣｏＡチオエステルは、ＨＮＦ４についての内因性リガンドである可能性がある。第３のファミリーは、ステロイド受容体、および高度に関連したオーファン受容体、エストロゲン関連受容体（ＥＲＲ）により形成される。第４、第５、および第６のサブファミリーは、それぞれ、オーファン受容体ＮＧＦＩ−Ｂ、ＦＴＺ−１／ＳＦ−１、およびＧＣＮＦを含む。たいていのサブファミリーは、既知のホモログをもたないステロイド受容体を例外として、それらが節足動物ホモログを有することから、古代からであるようである。祖先受容体は、リガンドを結合する能力およびヘテロダイマー化する能力を独立して獲得するように進化した構成的ホモダイマー転写因子であったことが示唆されている。しかしながら、祖先受容体がリガンド依存性であったという可能性、および変異が、進化の間に、リガンド結合特異性を変化させ、またはリガンド結合の喪失をもたらしたという可能性は、排除することはできない。
【００９６】
このクラスの受容体のメンバーは、いくつかの組織型（肝臓、腸、脳）において見出される。核内受容体は、サイトゾルにおいて（クラスＩ）、または核において（クラスＩＩ）、リガンドに結合する。ステロールへの結合の前に、核内ホルモン受容体ファミリーの一部のメンバーは、不活性状態で、他のタンパク質因子（例えば、熱ショックタンパク質（シャペロニン））に結合しているが、いったん、ステロールに結合すると、核内ホルモン受容体は、ホモダイマーまたはヘテロダイマーとして結合することができる。その後、活性化核内ホルモン受容体（ホモダイマーまたはヘテロダイマー）は、標的遺伝子におけるホルモン応答エレメント（ＨＲＥ）に結合する。いったん結合すると、これらの遺伝子は、転写的に、または翻訳的に、上方制御または下方制御され得る。
【００９７】
他の転写制御因子のように、核内受容体は、機能の喪失なしに関連受容体間で交換することができる自律的機能ドメインに対応する異なる領域を有するモジュラー構造を示す。典型的な核内受容体は、可変性ＮＨ２末端領域（Ａ／Ｂ）、保存されたＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）、または領域Ｃ、リンカー領域Ｄ、およびリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）を含有する保存されたＥ領域からなる。いくつかの受容体はまた、未知の機能のＣＯＯＨ末端領域（Ｆ）を含有する。核内受容体の概略図は図８に示されている。受容体はまた、転写活性化に必要とされる領域を含有する。多くの受容体の超可変Ａ／Ｆ領域は、ＡＦ−１と呼ばれる、自律的転写活性化機能を含み、それは、その受容体による構成的リガンド非依存性活性化に寄与する。ＡＦ−２と名付けられた、第２の転写活性化ドメインは、ＬＢＤのＣＯＯＨ末端に位置するが、ＡＦ−１ドメインと違って、ＡＦ−２は、厳密にリガンド依存性であり、かつ核内受容体スーパーファミリーのメンバーの間で保存されている。
【００９８】
インターロイキン
いくつかのインターロイキン受容体およびインターロイキンは、試験された化合物（プレドニゾロン、ＳＥ−２２、ＳＥ−２４、およびＳＥ−４１）の全てによって影響を及ぼされた。インターロイキンは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および造血細胞の発生および分化を促進する。この一連のアッセイにおいて、影響された主要なインターロイキンは下記に示されている。インターロイキンの大部分は、ヘルパーＣＤ４＋  Ｔリンパ球により、加えて単球、マクロファージ、および内皮細胞を通して、合成される。このクラスの影響された標的の参照リストは、図９ＡおよびＢに提示されている。また、影響されたインターロイキンおよびインターロイキン受容体の視覚的プロットは図１０に提示されている。
【００９９】
インターロイキン−１受容体、１型遺伝子によってコードされるタンパク質は、インターロイキン−１受容体ファミリーに属するサイトカイン受容体である。このタンパク質は、インターロイキンα（ＩＬ１Ａ）、インターロイキンβ（ＩＬ１Ｂ）、およびインターロイキン１受容体、Ｉ型（ＩＬ  １Ｒ１／ＩＬ  １ＲＡ）を結合し、それのリガンドの活性を阻害するデコイ受容体として働く。インターロイキン−４（ＩＬ４）は、このサイトカインの発現および放出を誘導することにより、インターロイキン−１の活性をアンタゴナイズすることが報告されている。この遺伝子および３つの他の遺伝子は、染色体２ｑ１２上のサイトカイン受容体遺伝子クラスターを形成する。同じタンパク質をコードする２つの選択的にスプライシングされた転写産物バリアントが報告されている。
【０１００】
インターロイキン−７受容体。インターロイキン−７受容体は、リンパ球と呼ばれる免疫細胞の発生において、具体的には、Ｖ（Ｄ）Ｊ組換えとして知られた過程において、重要な役割を果たすことが示されている。このタンパク質はまた、ＳＴＡＴ５によるＴ細胞受容体γ遺伝子を含むゲノムの領域の到達性（ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ）およびヒストンアセチル化を調節することも見出されている。マウスにおけるノックアウト研究は、アポトーシスをブロックすることが、Ｔリンパ球の分化および活性化中におけるこのタンパク質の本質的機能であることを示唆している。このタンパク質における機能的欠陥は、重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）の病因と関連している可能性がある。
【０１０１】
インターロイキン−１、β（プレドニゾロン、ＳＥ−２２、およびＳＥ−２４において上方制御される；ＳＥ−４１において下方制御される）。この遺伝子によってコードされるタンパク質は、インターロイキン１サイトカインファミリーのメンバーである。このサイトカインは、活性化マクロファージによりプロタンパク質として産生され、そのプロタンパク質は、カスパーゼ１（ＣＡＳＰ１／ＩＣＥ）によりその活性型へタンパク質分解的にプロセシングされる。インターロイキン−１βは、炎症応答の重要なメディエータであり、細胞増殖、分化、およびアポトーシスを含む様々な細胞活性に関与している。中枢神経系（ＣＮＳ）におけるこのサイトカインによるシクロオキシゲナーゼ−２（ＰＴＧＳ２／ＣＯＸ２）の誘導は、炎症痛過敏性に寄与することが見出されている。この遺伝子および８つの他のインターロイキン１ファミリー遺伝子は、２番染色体上にサイトカイン遺伝子クラスターを形成する。
【０１０２】
インターロイキン−７受容体。インターロイキン−７受容体は、リンパ球と呼ばれる免疫細胞の発生において、具体的には、Ｖ（Ｄ）Ｊ組換えとして知られた過程において、重要な役割を果たすことが示されている。このタンパク質はまた、ＳＴＡＴ５によるＴ細胞受容体γ遺伝子を含むゲノムの領域の到達性およびヒストンアセチル化を調節することも見出されている。マウスにおけるノックアウト研究は、アポトーシスをブロックすることが、Ｔリンパ球の分化および活性化中におけるこのタンパク質の本質的機能であることを示唆している。このタンパク質における機能的欠陥は、重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）の病因と関連している可能性がある。
【０１０３】
化合物処理（プレドニゾロン、ＳＥ−２２、ＳＥ−２４、およびＳＥ−４１）による他の主要遺伝子応答
インスリン誘導遺伝子１。インスリン誘導遺伝子１は、細胞におけるコレステロール濃度を制御することに重要な役割を果たす小胞体（ＥＲ）膜タンパク質をコードする。そのタンパク質は、ＳＲＥＢＰ切断−活性化タンパク質（ＳＣＡＰ）およびＨＭＧ  ＣｏＡリダクターゼのステロール感知性ドメインに結合し、その２つのタンパク質のステロール媒介性輸送にとって必須である。別個のアイソフォームをコードする選択的にスプライシングされた転写産物バリアントが観察されている。
【０１０４】
オキシステロール（Ｏｙｓｔｅｒｏｌ）。オキシステロールは、肝臓Ｘ受容体（ＬＸＲ）およびステロール制御エレメント結合タンパク質（ＳＲＥＢＰ）媒介性シグナル伝達経路を通してコレステロール恒常性を制御する。遺伝子プロファイリング実験において、プレドニゾロン、ＳＥ−２２、およびＳＥ−２４は、インスリン誘導遺伝子１（ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｇｅｎｅ  １）を、１０倍を超えて上方制御した。ＳＥ−４１は、１．５倍だけ、上方制御した。
【０１０５】
溶質輸送体ファミリー３６メンバー１。膜輸送タンパク質の溶質輸送体（ＳＬＣ）群は、５１個のファミリーへと組織化される３００個を超えるメンバーを含む。ＳＬＣ群のたいていのメンバーは、細胞膜に位置する。ＳＬＣ遺伝子命名法システムは、最初に、ＨＵＧＯ  Ｇｅｎｅ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＨＧＮＣ）によって提案され、これらのトランスポータをコードする遺伝子の公式のＨＧＮＣ名の基準である。様々なＳＬＣ群メンバーによって輸送される溶質は、並外れて多様であり、それらには、荷電した有機分子と荷電していない有機分子の両方、加えて無機イオンおよび気体アンモニアが挙げられる。
【０１０６】
６．結論
全体的に見て、結果は、その化合物が、生物活性があることを示している。その遺伝子応答は、様々な細胞過程（細胞分化、免疫細胞および／または免疫応答、細胞接着、脂質代謝、核内ホルモン受容体活性化、転写および翻訳の改変）と密接に関係する。
【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１１Ｄ】
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【図１１Ｅ】
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【図１１Ｆ】
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【図１１Ｇ】
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【図１１Ｈ】
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【図１１Ｉ】
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【図１１Ｊ】
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【図１１Ｋ】
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【図１１Ｌ】
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【図１１Ｍ】
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【図１１Ｎ】
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【図１１Ｏ】
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【図１１Ｐ】
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【図１１Ｑ】
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【図１１Ｒ】
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【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図３Ｆ】
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【図３Ｇ】
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【図３Ｈ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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