(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロゲストーゲンを糖質コルチコイド感作物質として含む医薬組成物であって、
糖質コルチコイド依存性、抵抗性、非応答性又は不耐性を患う被験者において、糖質コルチコイド感受性を回復し、糖質コルチコイド感受性を亢進し、または糖質コルチコイド非感受性を逆転して、糖質コルチコイド非感受性を治療する方法において使用され、前記方法は、  
前記医薬組成物を、糖質コルチコイド非感受性を発現する前記被験者に投与するステップを有し、
ここにおいて前記プロゲストーゲンは糖質コルチコイド感受性を促進し、前記糖質コルチコイド感受性の促進はインターロイキン−２及び／またはインターロイキン−４の産生により定量化され、
ここにおいて前記被験者は月経周期関連悪化の履歴が無く、また更に、
前記糖質コルチコイド非感受性関連症状は、ぜんそく、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、肺動脈性肺高血圧症、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、ベーチェット症候群、糖尿病、高い炎症レベルの被験者におけるうつ病、心的外傷後ストレス障害、遺伝性糖質コルチコイド抵抗性症候群、感染症発症時の獲得性糖質コルチコイド抵抗性、外用ステロイドに非応答性の眼性炎症性障害、およびブドウ膜炎からなる免疫−炎症性障害／疾病に起因する、
ことを特徴とする医薬組成物。
【請求項２】
プロゲストーゲンを糖質コルチコイド感作物質として含む医薬組成物であって、
糖質コルチコイド非感受性関連疾病、又は障害、又は症状を治療する方法において使用され、
前記糖質コルチコイド非感受性関連疾病、又は障害、又は症状は、前記糖質コルチコイドによる抗炎症性効果のインターロイキン−２及び／またはインターロイキン−４の制御の結果として、前記糖質コルチコイドの抗炎症性効果に対して減少した応答性を有することにより特徴づけられ、
前記方法は、前記医薬組成物を、糖質コルチコイド非感受性関連疾病、又は障害、又は症状を発現する前記被験者に投与するステップを有し、
ここにおいて前記プロゲストーゲンは糖質コルチコイド感受性を促進し、前記糖質コルチコイド感受性の促進はインターロイキン−２及び／またはインターロイキン−４の産生により定量化される、
ことを特徴とする医薬組成物。
【請求項３】
前記医薬組成物が、非経口、静脈内、肺性、経口、直腸、舌下、経皮、経膣送達、局部適用、外用適用、蓄積注射、皮下、腹腔内、動脈内及び筋肉内注射からなるグループから選択される方法により全身に投与され又は局部に送達される、ことを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記プロゲストーゲンは糖質コルチコイドの投与の前、同時、又は後に投与される、ことを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
プロゲストーゲンを糖質コルチコイド感作物質として含む医薬組成物であって、
喫煙誘発糖質コルチコイド抵抗性疾病を治療する方法において使用され、
前記方法は、少なくとも１つの前記医薬組成物を投与するステップを含む、
ことを特徴とする医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
糖質コルチコイド非感受性は、糖質コルチコイドで治療される疾病／症状において治療が効果的でないため重大な管理問題を引き起こす。本発明は、１つ以上の糖質コルチコイド非感受性関連疾病又は症状を治療するため、糖質コルチコイド感作物質としてのプロゲストーゲンを投与して、コルチコステロイド感受性を回復し、又は糖質コルチコイド非感受性を逆転させ、又は糖質コルチコイド感受性を亢進させる方法及びキットに関する。
例えば本発明は、例えば、アトピー性皮膚炎の月経前悪化、又はぜんそくの月経前悪化、及び例えば糖質コルチコイド抵抗性のような、糖質コルチコイド治療に対する相対的又は完全な難治性反応、などの月経前又は月経近くの症状悪化、または自己ホルモン特にプロゲステロンに対するアレルギーの履歴が無い被験者において、糖質コルチコイド非感受性を逆転させる方法に関する。
本発明の方法及びキットは、コルチコステロイド（副腎皮質ホルモン）依存性、又はコルチコイド抵抗性又はコルチコステロイドに対し非応答性又は不耐性の被験者への性ホルモンの投与を提供する。
【背景技術】
【０００２】
（関連出願の参照）
本出願は２０１０年２月８日出願の米国暫定特許出願６１／３０２，３２５に対する優先を主張し、この文献はここに参照として採り入れられる。
【０００３】
糖質コルチコイドは種々の免疫炎症性及びアレルギー性疾病に対し第一線の治療剤である。例えば自己免疫疾病は全米人口の５％が罹患する７０以上の慢性疾病を含み、またシェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性甲状腺疾患（橋本病及びグレーブス病）及び強皮症などの殆ど女性（８０％超）に発症する疾病、又は関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）及び重症筋無力症などの比較的女性に多い（６５−７０％）疾病、；又はサルコイド及び炎症性腸疾患などの男女ほぼ同比率で発症する疾病を含む。
【０００４】
糖質コルチコイド非感受性はステロイドで治療される疾病／症状において重大な管理問題を引き起こし、そして２０−４０％の被験者は疾病の制御に失敗する。糖質コルチコイド非感受性は、糖質コルチコイド治療に対する相対的又は完全な難治性；コルチコステロイドに対する非応答性又は不耐性；コルチコステロイドの適切な１回の誘導用量に対する非応答性；当初はコルチコステロイド対し応答性であるが退薬又は薬量の漸減の後すぐに再発する（コルチコステロイド依存）；コルチコイド抵抗性、例えば高薬量治療を必要とする；又は「治療困難」または重症を呈する。例えば、重症なかつステロイド抵抗性のクローン病の被験者の２０−３０％はステロイド治療に対し応答しない（非特許文献１）。
【０００５】
糖質コルチコイド非感受性に関連する疾病／症状は以下を含む：難治性炎症性腸疾患、例えば難治性潰瘍性大腸炎や小児劇症クローン病、コルチコステロイド難治性ぜんそく、又は糖質コルチコイド抵抗性ぜんそく、又は症候性コルチコステロイド依存性ぜんそく、コルチコステロイド難治性剥離性間質性肺炎、難治性炎症性筋原性疾患、難治性重症筋無力症、難治性尋常性天疱瘡、メトトレキサート難治性関節リウマチ、成人性難治性ネフローゼ症候群、コルチコステロイド依存性全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、初期シェーグレン症候群、全身性血管炎及び多発性筋炎、慢性移植片対宿主病、コルチコステロイド依存性又は難治性多発性硬化症、難治性熱帯性下痢様疾患、ステロイド抵抗性サルコイドーシス、尋常性天疱瘡の難治性粘膜病変、難治性シュニッツラー症候群、頭部及び首部の抵抗性皮膚炎、劇症難治性アトピー性皮膚炎、難治性特発(性)血小板減少性紫斑病、難治性眼窩筋炎、難治性又は再発性リンパ腫、敗血症又は急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）又は副腎機能不全による重篤患者、コルチコステロイド依存性症状（例えば、酒さ、リウマチ性多発筋痛症、巨細胞性動脈炎、多発性筋炎、皮膚筋炎、川崎病症候群、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発性神経障害、多巣性運動神経障害、全身強直症候群、他）。
糖質コルチコイド非感受性は重大な健康的、社会的そして経済的コストを要する。例えばぜんそくの被験者の少数（５−１０％）は、多くの場合応答に失敗する重症なコルチコステロイド難治性症状を有するが、これら被験者は全ぜんそく医療費の５０％超を占める。
【０００６】
糖質コルチコイドは、主として抗炎症遺伝子の活性化と炎症亢進性遺伝子の抑制の両方の結果として炎症を抑制する。抗炎症遺伝子発現の活性化は、糖質コルチコイドが細胞基質の糖質コルチコイド受容体（ＧＲ）と結合することによって始まり、それは活性化し細胞核に移動する。それは、細胞核に入ると糖質コルチコイド応答エレメント（ＧＲＥ）及び転写コアクチベーター分子と結合し、そしてコアヒストンのアセチル化を引き起こし、それは抗炎症遺伝子の発現につながる。炎症性刺激は、サイトカイン、ケモカイン、接着分子、炎症性酵素、及び受容体を核内因子κＢ（ＮＦκＢ）及びアクチベータータンパク質１などの炎症亢進性転写要素を介して符号化する多重の炎症性遺伝子のスイッチを入れ、そしてコリプレッサー分子を動員する。活性化した糖質コルチコイド受容体は細胞核内のコアクチベーターと結合しヒストンアセチル基転移酵素（ＨＡＴ）活性を直接抑制し、そしてヒストン脱アセチル化酵素２（ＨＤＡＣ２）を動員し、このことは活性化した炎症性遺伝子の抑制につながる。
【０００７】
糖質コルチコイド抵抗性の幾つかの可能な分子メカニズムが発見され、それには遺伝的感受性、糖質コルチコイド受容体（ＧＲ）に対する結合の不存在又は欠陥的結合及び転座、ＧＲ発現の減少、コリプレッサー活性の不存在、又は炎症性経路の活性の亢進を含む。例えば糖質コルチコイド受容体は幾つかのキナーゼ（例えば、ｐ３８分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ、ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ端末キナーゼ、及び細胞外シグナル制御キナーゼ）によりリン酸化され、それは欠陥的結合、安定性の変化、細胞核への転位、ＤＮＡへの結合、及び他のタンパク質との相互作用をもたらす。転写因子アクチベータータンパク質１の過剰な活性化は糖質コルチコイド受容体（ＧＲ）の糖質コルチコイド応答エレメント（ＧＲＥ）との結合を防止でき、又は核内因子κＢを抑制する；窒素酸化物（ＮＯ）は糖質コルチコイド受容体（ＧＲ）上のチロシン残渣をニトロ化することができ；糖質コルチコイド受容体（ＧＲ）はまたユビキチン（Ｕｂ）結合可能であり、このことはプロテアソームによるＧＲの分解；ヒストン脱アセチル化酵素２（ＨＤＡＣ２）発現の減少、マクロファージ遊走抑制因子の増加、及びＰ−糖タンパク質−媒介薬物排出をもたらす。（非特許文献２）
【０００８】
ステロイド依存性の臨床的及び生物学的メカニズムはステロイド抵抗性に比べてよく判っていない。ステロイド依存性及びステロイド抵抗性は共通の固有のメカニズムを幾つか共有するが、他のメカニズムは単に臨床的又は薬理学的である。
【０００９】
糖質コルチコイド非感受性の影響を寛解させるために多くの試みがなされた。一般的な方法は、免疫抑制又は免疫調節剤（例えばシクロスポリン、メトトレキサート、金、６−メルカプトプリン、静注用免疫グロブリン及びメポリズマブ（ヒト化抗ＩＬ−５抗体）のような生物由来物質）及びカルシニューリン抑制剤（例えばシクロスポリン、タクロリムス）などの薬効の広い抗炎症性療法を用いることである。糖質コルチコイド抵抗性を逆転するため種々のアプローチが提唱、開発された。それらは、ｐ３８ＭＡＰキナーゼ抑制剤、ＪＮＫ抑制剤（ＡＰ−１減少）、ステロイド抵抗性ぜんそくにおけるビタミンＤ（調節性Ｔ細胞の増加）、遊走阻止因子（ＭＩＦ）抑制剤、ヒストン脱アセチル化酵素２アクチベーター、テオフィリン、ホスホイノシチド−３−キナーゼ−δ抑制剤、抗酸化剤、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）抑制剤、及びＰ−糖タンパク質抑制剤である。糖質コルチコイド非感受性の逆転のためのプロゲストーゲンの使用は今までどこでも議論されず、また発表されていない。そして本発明は従来技術からの重大な驚くべき予想外の優位性を示した。
【００１０】
糖質コルチコイド非感受性の管理の他の方法による成功例は限られる。ある薬はある病状に効果を示すが他の病状には効果を示さない。メトトレキサートはリウマチ性関節炎に薬効があるが、Ｐ−糖タンパク質発現の増加に起因する糖質コルチコイド抵抗性炎症性腸疾病には効果がない。同様に、カルシニューリン抑制剤は糖質コルチコイド抵抗性炎症性腸疾病の被験者の何人かには有用であるが、糖質コルチコイド抵抗性ぜんそくに効果が有ると証明されていない。さらに、これら薬剤の使用はしばしば重大な有害事象を伴う。被験者の大多数（６０−７０％）は副作用のためメトトレキサートによる治療に失敗する。慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）及び炎症性症状に対するホスホジエステラーゼ４抑制剤は、吐き気、下痢、頭痛などの副作用を持ち、それが使用量を制限する。重大な毒性及び副作用によりｐ３８ＭＡＰキナーゼ抑制剤及びＮＦκＢキナーゼの抑制を阻害する選択的抑制剤（ＩＫＫβ）／ＮＦκＢの薬剤開発プログラムが妨げられた。（非特許文献２）
【００１１】
自己免疫性、アレルギー性、及びリンパ球増殖性の疾病の被験者のかなりの割合が糖質コルチコイド治療にたいして難治性であり、かつ多くの異なる炎症性疾病が糖質コルチコイド非感受性において類似の分子メカニズムを共有すると仮定すると、ステロイド非感受性を逆転するための一般的な治療方針を開発する方法に対して、現在まで充足されない要求が存在する。本発明に基づくプロゲストーゲンの使用は、コルチコステロイド非応答又は不耐性又はコルチコステロイド依存性及び抵抗性の疾病／症状を有する被験者を助ける驚異的な、予期せぬかつ実際的な方法を提供することが発見された。
【００１２】
プロゲストーゲン製剤は広範囲の生殖性の疾病／症状に６０年以上広く使用され、そして抗炎症性効果を有することが知られて来た。炎症性応答に関連する大多数の研究が妊娠関連のモデルにおいて行われた。プロゲステロン／ＰＲは抗炎症性作用を介して子宮休止を維持する（非特許文献３）。非特許文献４は非遺伝子的プロゲステロン作用を幅広く研究し、そしてプロゲステロン抗炎症性作用の可能なメカニズムを要約した。それには、プロゲステロンがシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ−２）発現を抑制することにより部分的に、妊娠した子宮内でのプロスタグランジン生成に抵抗すること；Ｇ−タンパク質活性化及びＫ＋チャネル抑制を介したヒトＴ−リンパ球における免疫調整機能；プロゲステロン起因性遮断因子（ＰＩＢＦ）はホスホリパーゼＡ２酵素に作用し、アラキドン酸代謝に干渉し、Ｔｈ２バイアス免疫応答を誘発し、ＮＫ活性を制御することにより抗早産作用を及ぼす。（非特許文献４）
【００１３】
チャリーズ（Ｃｈａｌｌｉｅｓ，２００９）による他の研究（非特許文献５）は他のメカニズムの可能性を示唆している；プロゲステロンがマイトジェン刺激性リンパ球増殖を遮断し、抗体生成を調節し、単球の酸化バーストを減少させ、細菌性製剤に応答してマクロファージにより炎症亢進性サイトカインの生成を減少させ、Ｔ−細胞クローンのサイトカイン分泌を好ＩＬ−１０生成に変化させ、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ−４）発現を増大させ、子宮内組織感染に対するＴＬＲ−２応答を抑制し、早産に関して防御的役割を果たす結果となり、基底及びサイトカイン促進性マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）−１及びＭＭＰ−３の培養脱落膜細胞内での発現を抑制し、それは早産に対する保護を示す（非特許文献５）。糖質コルチコイド非感受性を逆転するためにプロゲストーゲンを使用するという思想は、いままでどこにも開示、教授、示唆、議論、発表されていないため、本発明の発見は従来技術からの重大なかつ予期せぬ進歩を意味する。
【００１４】
一般的病状の月経周期関連の悪化は周知の現象であり、それは偏頭痛、てんかん、ぜんそく、過敏性腸症候群、自己免疫プロゲステロン皮膚炎及び口内炎、および糖尿病を含む。悪化は月経周期のホルモン変化に影響される。これら作用の大部分は月経周期の黄体期と月経期に起こる。例えば、月経前ぜんそくとは、月経直前及び／又は月経中のぜんそく徴候の悪化をいう。徴候の月経カレンダーへの正確な記載は、疾病活性の周期的変化を有する女性の識別を可能にする。女性性ステロイドホルモンは重要な役割を果たすが、正確なメカニズムはいまだ未知である。これらの月経周期関連作用を説明する理論が幾つか存在する。これらの理論は、性ステロイドレベルの増減、免疫システムの周期的変化、気道過敏症の増大、月経前症候群にみられるような、月経前の気分の変化に起因する疾病重篤性の知覚の変化、及び自己ホルモン、特にプロゲステロンに対するアレルギーを含む。月経周期関連の悪化はプロゲステロンの補給によって回復可能でありうる。（非特許文献６−８）。
【００１５】
糖質コルチコイド非感受性はしばしば、糖質コルチコイド治療に対する相対的又は完全な難治性応答に寄与すると信じられている他の要因と関連する。これら要因には、上述の種々のリスク要素、例えば遺伝的易罹患性、糖質コルチコイド受容体遺伝子の異常、ウィルス感染、及び酸化ストレスがある。例えば酸化ＤＮＡ損傷は置換変異プロセスの主要な原因であり、加齢、癌、及び他の疾病の主要原因であることが知られている。その理由は、ＤＮＡを構成し、生命の遺伝子コードを形成する４つの基本ヌクレオチドの一つであるグアニンが、特に酸化ダメージにたいし敏感であり、遺伝子置換変異の多くはグアニンにリンクしているからである。従って従来技術において、これらリスク要素に伴う糖質コルチコイド非感受性関連症状（例えば、難治性ぜんそく、難治性リュウマチ性関節炎、難治性炎症性腸炎、慢性閉塞性肺疾患及び急性呼吸窮迫症候群）の発生を減少させる方法に対するニーズが存在する。
【００１６】
ぜんそくの悪化に対して月経リズムが文書化されており、それは重症性ぜんそくの被験者に対し重要な臨床的関連性を有する可能性が有る。ベイノン（Ｂｅｙｎｏｎ、１９８８）氏他（非特許文献７）は筋肉内プロゲステロンで治療されたぜんそくの重症性月経前悪化の３つのケースを報告している。被験者は高投与量のコルチコステロイド治療を含む従来技術の治療法には応答しなかった。全てのケースでピーク流量の月経前落ち込みがみられた。筋肉内プロゲステロンの追加（２つのケースでは１００ｍｇ／日及び１つのケースで週に２回６００ｍｇ）をレジメンに追加したところピーク流量の月経前下落が無くなり、プレドニゾロンの一日投与量は３人の患者で減少された。この研究及び結果は非特許文献７に記載されている。
【００１７】
他の研究では、ラッセル氏他（Ｒｕｓｓｅｌ）（非特許文献８）が、月経前ぜんそくが自己ホルモン特にプロゲステロンに対するアレルギーを伴うという仮説を、舌下のプロゲステロン希釈液を気管支拡張薬として使用することにより検証した。重症性ぜんそくと過去に診断され、そして噴霧治療依存性の１６人の女性がその研究に選択された。これら被験者には肺活量測定が実施された。研究結果では、１秒間の努力呼気肺活量（ＦＥＶ１）、努力肺活量（ＦＶＣ）及びピーク呼気流量（ＰＥＦ）について３つの時点（１）治療前（２）舌下の通常生理食塩溶液治療後（３）舌下のプロゲステロン治療後で計測した結果に経時変化が見られた。舌下のプロゲステロン治療後では１６人の被検者中１２人（７５％）がＦＥＶ１とＦＶＣのいずれかで気管支拡張薬効果を得た（１２％超の増加）。８人（５０％）がＦＥＶ１とＦＶＣの両方で増加した。８人（５０％）がＰＥＦで２７％以上の増加をえた。この研究及び結果は非特許文献８に記載されている。
【００１８】
マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）の活性化はマイトジェンのシグナル伝達において重大な事象である。ルジッキー（Ｒｕｚｙｃｋｙ  ＡＬ）氏（非特許文献９）は、１７ベータ−エストラジオールとプロゲステロンのマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）の発現及び活性化に対する効果について判定した。ＭＡＰＫ発現及び活性化が、エストラジオール−１７ベータのみ又はエストラジオール−１７ベータ及びプロゲステロンで前処理されたラットからの子宮平滑筋で検査された。ＭＡＰＫ発現は細胞外シグナル制御キナーゼ（ｅｒｋ）−１／２抗体を使用した免疫ブロッティングにより検知された。ＭＡＰＫ活性はミエリン塩基性タンパク質のＭＡＰＫ特異性ペプチド配列のリン酸化の計測により検知された。ステロイド治療は細胞膜及び細胞基質断片において細胞外シグナル制御キナーゼ（ｅｒｋ）−１及び２発現の緩やかな（２０％）減少をもたらした。エストロゲン及びプロゲステロンの両方はＭＡＰＫチロシンのリン酸化及び膜結合性ＭＡＰＫ活性を増大させた。ステロイド治療は細胞基質ＭＡＰＫチロシンのリン酸化を増大させたが、酵素活性は増大させなかった。この研究及び結果は非特許文献９に記載されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１９】
【非特許文献１】Ｍｉｃｈｅｔｔｉ  Ｐ，Ｍｏｔｔｅｔ  Ｃ，Ｊｕｉｌｌｅｒａｔ  Ｐ，Ｆｅｌｌｅｙ  Ｃ，Ｖａｄｅｒ  Ｊ−Ｐ，Ｂｕｒｎａｎｄ  Ｂ，Ｇｏｎｖｅｒｓ  Ｊ−Ｊ，Ｆｒｏｅｈｌｉｃｈ  Ｆ共著：「重症及びステロイド抵抗性クローン病」、Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ  ２００５；７１：１９−２５
【非特許文献２】Ｐｅｔｅｒ  Ｊ  Ｂａｒｎｅｓ，Ｉａｎ  Ｍ  Ａｄｃｏｃｋ共著：「炎症性疾病における糖質コルチコイド抵抗性」、Ｌａｎｃｅｔ  ２００９；３７３：１９０５−１７
【非特許文献３】Ｃａｒｏｌｅ  Ｒ，Ｍｅｎｄｅｌｓｏｎ著：Ｍｉｎｉｒｅｖｉｅｗ「妊娠における胎児母体のホルモン信号及び分娩分子内分泌学」２３：９４７−９５４，２００９
【非特許文献４】Ｇｅｌｌｅｒｓｅｎ  Ｂ他著：「女性生殖における非遺伝子性プロゲステロン作用」、Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｕｐｄａｔｅ，Ｖｏｌ．１５，Ｎｏ．１  ｐｐ．１１９−１３８，２００９
【非特許文献５】Ｃｈａｌｌｉｓ  ＪＲ他著：「炎症及び妊娠」Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ２００９；１６；２０６
【非特許文献６】Ａｌｌｉｓｏｎ  Ｍ．  Ｃａｓｅ及びＲｏｂｅｒｔ  Ｌ．Ｒｅｉｄ共著：「一般的病状に対する月経周期の作用」、Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｉｓｓｕｅ，第２７巻、Ｎｏ１、２００１年３月
【非特許文献７】Ｂｅｙｎｏｎ  ＨＬ．著：「ぜんそくの劇症性月経前悪化：筋肉内プロゲステロン作用」、Ｌａｎｃｅｔ，１９８８年８月１３日、２（８６０７）：３７０−２
【非特許文献８】Ｒｏｂｙ，Ｒｕｓｓｅｌ  Ｒ他著：「女性ぜんそく患者における気管支拡張剤としての舌下プロゲステロン希釈液」、Ｗｏｒｌｄ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ，２００７年１１月、Ｖｏｌｕｍｅ−Ｉｓｓｕｅ−ｐＳ１４８
【非特許文献９】Ｒｕｚｙｃｋｙ  ＡＬ著：「ラット子宮平滑筋における１７ベータ−エストラジオール及びプロゲステロンのマイトジェン活性タンパク質キナーゼ発現及び活性に対する作用」、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９６年４月１１日；３００（３）：２４７−５４
【非特許文献１０】Ｋａｍ，Ｊ．ｃ．他著：「ＩＬ−２及びＩＬ−４の組合せが糖質コルチコイド受容体結合の親和性及び糖質コルチコイドに対するＴ細胞応答を減少させる」、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９３，１５１：３４６０−３４６６
【非特許文献１１】Ｉｒｕｓｅｎ，Ｅ他著：「ｐ３８マイトジェン活性タンパク質キナーゼ誘発糖質コルチコイド受容体のリン酸化はその活性を減少させる：ステロイド非感受性ぜんそくにおける役割」Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００２．１０９：６４９−６５７
【非特許文献１２】Ｃｒｅｅｄ  ＴＪ他著：「デキサメタゾンによるリンパ球増殖の抑制に対するサイトカインの効果」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００９；１８３；１６４−１７１
【発明の概要】
【００２０】
本発明のある実施形態は、コルチコステロイド感受性を回復し、又は糖質コルチコイド非感受性を逆転し、又は糖質コルチコイド感受性を亢進する方法に向けられる。
【００２１】
本発明の他の実施形態は、ステロイドホルモンを含む医薬組成物を月経周期関連の病状悪化の履歴がなく、１つ以上の糖質コルチコイド非感受性関連症状を患う被験者に投与する方法に向けられる。糖質コルチコイド非感受性関連症状は、例えば、コルチコステロイドに対し治療が、効果なく、又は不耐性、又は依存性、又は非応答、又は難治性になった場合に、ステロイドで治療される一定範囲のコルチコイド抵抗性疾病及び免疫性炎症性障害、及びその組合せ、を含む。
【００２２】
ある実施形態では、本発明の方法はステロイドホルモンからなる医薬組成物を月経周期関連悪化の履歴の無い被験者に投与するステップを含み、ここで被験者は酸化ストレスへの暴露に起因して糖質コルチコイド非感受性を発現するリスクがある。
【００２３】
さらに他の実施形態は、コルチコステロイド感受性を回復し、又は糖質コルチコイド非感受性を逆転し、又は糖質コルチコイド感受性を亢進し、そしてコルチコイド抵抗性疾病、コルチコステロイド難治性、コルチコステロイド依存性免疫性炎症性障害、及びそれらの組合せからなるグループから選択される１つ以上の症状を治療することに向けられる。ある例示的な糖質コルチコイド抵抗性症状は、限定されないが、糖質コルチコイド抵抗性ぜんそく、難治性リウマチ性関節炎、難治性炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患、急性呼吸促迫症候群、間質性肺線維症、及び嚢胞性線維症を含む。ある例示的な糖質コルチコイド難治性症状は、限定されないが、難治性潰瘍性大腸炎、小児劇症クローン病、コルチコステロイド難治性ぜんそく、コルチコステロイド難治性剥離性間質性肺炎、難治性炎症性筋原性疾患、難治性重症筋無力症、難治性尋常性天疱瘡、メトトレキサート難治性関節リウマチ（ＲＡ）、難治性ネフローゼ症候群、難治性多発性硬化症、難治性熱帯性下痢様疾患、ステロイド抵抗性サルコイドーシス、尋常性天疱瘡の難治性粘膜病変、難治性シュニッツラー症候群、頭部及び首部の抵抗性皮膚炎、劇症難治性アトピー性皮膚炎、難治性特発性血小板減少性紫斑病、難治性眼窩筋炎、難治性又は再発性リンパ腫、敗血症又は急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）又は相対的副腎機能不全による重篤患者を含む。ある例示的な糖質コルチコイド依存性症状は、限定されないが、酒さ、リウマチ性多発筋痛症、巨細胞性動脈炎、多発性筋炎、皮膚筋炎、川崎病症候群、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発性神経障害、多巣性運動神経障害、全身強直症候群、コルチコステロイド依存性全身性エリテマトーデス、コルチコステロイド依存性多発性硬化症、症候性コルチコステロイド依存性ぜんそく、初期シェーグレン症候群、全身性血管炎、多発性筋炎、臓器移植、移植片対宿主病、及び糖質コルチコイド依存性癌を含む。
【００２４】
本発明のさらなる実施形態は、キットであって、医薬組成物と、前記組成物はステロイドホルモン及び１つ以上の医薬的に受容可能な賦形剤を含み、及び、医薬組成物を月経周期関連悪化の履歴のない被験者に投与するための説明書と、を含み、ここにおいて被験者は１つ以上の糖質コルチコイド非感受性関連症状を発現する、ことを特徴とするキットに向けられる。糖質コルチコイド非感受性関連症状は、例えば、治療がコルチコステロイドに対し非有効又は不耐性又は依存性又は非応答性又は難治性、及びそれらの組合せになった場合に糖質コルチコイドで治療される一定の範囲のコルチコイド抵抗性疾病及び免疫−炎症性障害を含む。
【００２５】
他の実施形態では、本発明のキットは、キットであって、医薬組成物と、前記組成物はステロイドホルモン及び１つ以上の医薬的に受容可能な賦形剤を含み、及び、医薬組成物を月経周期関連悪化の履歴のない被験者に投与するための説明書と、を含み、ここにおいて被験者は１つ以上の糖質コルチコイド非感受性関連症状を発現する、ことを特徴とするキットを含む。
【００２６】
本発明のさらなる実施形態は、キットであって、（ｉ）医薬組成物と、前記組成物はステロイドホルモン、１つ以上の医薬的に受容可能な賦形剤を含み、及び、（ｉｉ）前記医薬組成物を、コルチコステロイド依存性の被験者におけるステロイド節約、コルチコステロイドに対するより良好な応答性または抵抗性、コルチコステロイドの低投与量による有効性の達成、個人が抗原への暴露、感染、運動、又は刺激物に応答して難治性応答、又は抵抗性又は悪化を発現するリスクの防止、ステロイド投与が減量又は退薬された場合、又はコルチコステロイドの連用の後の被験者または患者の最適免疫機能、容易な応答の達成、日和見感染、骨量減少、病的骨折、糖尿病、白内障、及びそれらの合併症のようなコルチコステロイド関連有害事象の発現のリスクの低減、の効果を達成するために、糖質コルチコイド感作物質として投与するための説明書と、を含む、ことを特徴とするキットに向けられる。
【００２７】
上記の実施形態は本発明の代表的な実施形態であり、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきでは決してない。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
図１−１２は本発明の実施形態を示す幾つかの事例の結果のグラフ表現であるが、しかし本発明の範囲を制限するものではない。
【図１】ベースライン、ＰＨＡ刺激後及びデキサメタゾンによる投与量依存ＩＬ−２抑制を示すグラフである。
【図２】ＩＬ−２とＩＬ−４の追加がステロイド抵抗性を誘発することを示すグラフである。
【図３】低投与量デキサメタゾン（１０−１０モル）下での１７ＨＰＣ、Ｐ４、及びＭＰＡを比較した、ステロイド抵抗性の逆転におけるプロゲストーゲン効果（％Ｉｍａｘ）を示すグラフである。
【図４】高投与量デキサメタゾン（１０−６モル）下での１７ＨＰＣ、Ｐ４、及びＭＰＡを比較した、ステロイド抵抗性の逆転におけるプロゲストーゲン効果（％Ｉｍａｘ）を示すグラフである。
【図５】１７ＨＰＣがコルチコステロイド感受性を回復することを示すグラフである。
【図６】１７ＨＰＣがステロイド抵抗性を逆転すること及び個人別応答パターンを示すグラフである。
【図７】１７ＨＰＣの投与後、１１人中９人が最大デキサメタゾン抑制を１０％以上改善したことを示すグラフである。これは図６の結果と一致する。
【図８】１７ＨＰＣに類似の天然プロゲステロンの投与後、８人中６人が最大デキサメタゾン抑制を１０％以上改善したことを示すグラフである。
【図９】ＭＰＡ治療が全く異なる応答パターンである「スプリット」応答を示すことを表わすグラフである。１つのサブグループは５８％までもの大幅な改善を示し、他のサブグループは最大８８％までのコルチコステロイド感受性の低下を示した。
【図１０】喫煙者におけるＩＬ−２抑制により測定された、デキサメタゾン感受性に対する１７ＨＰＣの効果を示すグラフである（表１も同様）。１７ＨＰＣを追加する効果はステロイド感受性の改善であることを示す。
【図１１】１７ＨＰＣの追加により治療応答性が改善することを示すグラフである。デキサメタゾンの最大抗炎症性効果は、１０−６モルにおいてＰＨＡ誘発性ＩＬ−２生成の７８％抑制である。１７ＨＰＣの追加治療は、有意により良好な応答性を生成し、ＰＨＡ誘発ＩＬ−２生成をほぼ１００％抑制する。
【図１２】１７ＨＰＣとデキサメタゾンの組合せがデキサメタゾンの有効性を２５−３７％改善するというシナジー効果を示すグラフである。この組合せは一貫してデキサメタゾンの抗炎症性効果を増大させ、個別に使用した場合より良い結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
ここにはコルチコステロイド依存性又はコルチコイド抵抗性又はコルチコステロイド非応答性又は不耐性の被験者において、コルチコステロイド感受性を回復し、糖質コルチコイド感受性を促進し、及び／又は糖質コルチコイド非感受性を逆転するのに適した本発明に基づく好適な方法、組成物及びキットが記載されている。糖質コルチコイド非感受性関連の症状は、例えば、治療が疾病の制御の獲得に失敗し、または効果なく、又はコルチコステロイドに対し不耐性、又は依存性、又は抵抗性及びその組合せになった場合に、ステロイドで治療されるある範囲の免疫炎症性障害／疾病を含む。詳細には、本発明に基づく好適な方法、組成物及びキットは、コルチコステロイド依存性被験者においてステロイドを節約する糖質コルチコイド感作物質作用、コルチコステロイドに対するより良好な応答性又は耐性、コルチコステロイドの少量使用による有効性の達成、抗原暴露、感染、運動又は刺激物質に応答してコルチコステロイド難治性応答、又は抵抗性、又は悪化を発症するリスクのある個人を防御し、ステロイド投与が漸減し又は休薬される時或いはコルチコステロイドの連用において被験者又は患者にとって最適な免疫機能、より容易な応答を達成し、日和見感染、骨量減少のようなコルチコステロイド関連有害事象の発症リスクの低減、及びそれらの組合せを達成するのに有効である。より詳細には、糖質コルチコイド非感受性関連症状は、糖質コルチコイド抵抗性、糖質コルチコイド難治性応答、コルチコステロイド依存性及びコルチコステロイド不耐性に伴う及び／又は起因する種々の症状／障害を含む。糖質コルチコイド非感受性を発症する主要なリスク因子は酸化ストレスである。
【００３０】
糖質コルチコイド非感受性の重大な結果にも拘わらず、糖質コルチコイド抵抗性、糖質コルチコイド難治性応答、コルチコステロイド依存性及びコルチコステロイド不耐性に伴う及び／又は起因する種々の症状／障害を患う被験者の治療において限定した成功しか得られなかった。カルシニューリン抑制剤及びメトトレキサートは２−３の選択された症状に対して有効であり得るが、他の殆どの糖質コルチコイド非感受性関連症状では効果がなかった。さらに、有意の有害事象がそれらの使用に伴った。有意の細胞毒性及び有害事象によりｐ３８ＭＡＰキナーゼ抑制剤、ＮＫκＢキナーゼの抑制を遮断する選択的抑制剤、及びホスホジエステラーゼ４抑制剤の薬剤開発プログラムが妨げられた。大部分の糖質コルチコイド非感受性疾患は月経周期と関係がなく、そして糖質コルチコイド非感受性疾患を患う被験者の殆どはプロゲステロンに対するアレルギーを含む月経周期関連の症状悪化を経験しない。本発明によれば有利なことに、ここに詳述される方法は、好適には月経周期関連症状悪化の履歴の無い被験者のコルチコステロイド感受性を有意に回復する。本発明の治療と方法は驚くべきことに、糖質コルチコイド抵抗性、糖質コルチコイド難治性応答、コルチコステロイド依存性及びコルチコステロイド不耐性に伴う及び／又は起因する少なくとも１つの症状／障害を患う被験者において糖質コルチコイド非感受性を逆転し、及び／又は糖質コルチコイド感受性を亢進させると判定されて来た。
【００３１】
従って本発明の方法は、コルチコステロイド依存性の被験者におけるステロイド節約、コルチコステロイドに対するより良好な応答性または耐性、コルチコステロイドの低投与量による有効性の達成、個人が抗原への暴露、感染、運動、又は刺激物に応答してコルチコステロイド難治性応答、又は抵抗性又は悪化を発現するリスクの防止、ステロイド投与が減量又は退薬された場合、又はコルチコステロイドの連用の後の被験者または患者の最適免疫機能、容易な応答の達成、日和見感染、骨量減少、及びそれらの合併症のようなコルチコステロイド関連有害事象の発現のリスクの低減、のような糖質コルチコイド感作物質効果を達成するのに適している。好適には、本発明の方法は糖質コルチコイド非感受性に伴う少なくとも１つのリスク要因又は基底をなすメカニズムを有意に無効にするのに適している。従って本発明の種々の実施形態は、好適には月経周期関連症状悪化の履歴が無く、かつ１つ以上の糖質コルチコイド非感受性関連症状を患う被験者において糖質コルチコイド非感受性を逆転する方法に向けられている。これらの、そして他の種々の実施形態において治療される被験者は男性又は女性で年齢は問わない。他の多くの実施形態は、繰り返し疾患攻撃を初めて又は既体験として受ける、月経周期関連の症状悪化のない被験者を治療することに向けられる。
【００３２】
プロゲステロンは抗炎症性効能を有するが、リュウマチ性関節炎などの炎症性疾患に対するプロゲステロンの治験は、一般的に効果的で再現性のある症候制御、又はよりよい臨床結果のための方法を示すのに失敗している。糖質コルチコイド抵抗性又は難治性応答を示す被験者は疾病集団のサブ集団であり、しかし明確に定義された「治療困難」サブ集団である。例えば、重症かつステロイド抵抗性のクローン病被験者の２０％−３０％はステロイド治療に反応しない。本発明の好適な目的の１つは、コルチコステロイド依存性の被験者におけるステロイド節約、コルチコステロイドに対するより良好な応答性または耐性、コルチコステロイドの低投与量による有効性の達成、個人が抗原への暴露、感染、運動、又は刺激物に応答して難治性応答、又は抵抗性又は悪化を発現するリスクの防止、ステロイド投与が減量又は退薬された場合、又はコルチコステロイドの連用の後の被験者または患者の最適免疫機能及び容易な応答の達成、日和見感染、骨量減少のようなコルチコステロイド関連有害事象の発現リスクの低減、及びそれらの組合せ、を達成する、ことで示される、糖質コルチコイド抵抗性又は難治性症状に対するプロゲステロンの使用である。
【００３３】
さらに、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）活性化はコルチコステロイド非感受性につながる極めて重要な事象である。プロゲステロンがＭＡＰＫ活性を増大させることが報告されている（非特許文献９）。特定の理論に縛られることなく、当業者はＭＡＰＫ活性が糖質コルチコイド受容体（ＧＲ）の細胞核転位及び機能の喪失の誘引となり、コルチコステロイド非感受性関連症状の発現につながることを期待すると現在では信じられている。繰り返しになるが、特定の理論に縛られることなく、当業者はプロゲステロンによる増大したＭＡＰＫがコルチコステロイド非感受性を悪化させると予想すると現在では信じられている。しかし本発明によれば、驚くべきことにかつ予期せずに、プロゲステロンによる増大したＭＡＰＫの分子効果は、糖質コルチコイド抵抗性又は難治性症状の治療においてプロゲステロンの有効性を妨げないことが発見された。またさらに驚くべきことにかつ予期せずに、１７アルファ１２カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン（１７−ＨＰＣ）のようなプロゲステロンの、糖質コルチコイド抵抗性又は難治性又はコルチコステロイド依存性症状をもつ被験者への投与は、ステロイド節約のような糖質コルチコイド感作物質効果をもたらすことが発見された。従って本発明により現在では、プロゲステロン（例えば１７−ＨＰＣ）の投与はコルチコステロイド感受性を有意に回復し、糖質コルチコイド感受性を亢進させ及び／又は糖質コルチコイド非感受性を逆転することが可能であると信じられている。
【００３４】
プロゲステロンの抗炎症性効果に対する使用に比較して、本発見は驚くべきことにプロゲストーゲンの新機能及びその使用法、即ちコルチコステロイド非感受性の逆転、を識別し、そして治療から利益をうける被験者集団、即ちコルチコステロイド抵抗性、コルチコステロイド依存性、コルチコステロイド難治性応答及び／又はコルチコステロイド不耐性を発現する、よく定義された被験者集団を明確に識別した。殆どの糖質コルチコイド非感受性関連症状は月経周期関連症状悪化の履歴の無い被験者に起こるため、本発見は従来技術からの大きな進展である。
【００３５】
（定義）
前述のように糖質コルチコイドは種々の免疫／炎症性及びアレルギー性疾病に対し第一線の治療である。しかし３０％の被験者は耐えられる全身薬剤投与量では疾病制御に失敗し、そして臨床的結果が乏しいまま増大する免疫性応答を受け続ける。糖質コルチコイド非感受性は多くの疾病の病理発生と予後において重要な要因である。それは医療サービスに対する大きな管理問題とコスト負荷を引き起こす。
「糖質コルチコイド非感受性」とはここでは、限定されないが、コルチコステロイド抵抗性、コルチコステロイド依存性、コルチコステロイド難治性応答、コルチコステロイド不耐性、及び他のタイプのコルチコステロイド非有効性を意味する。幾つかの明確な分子メカニズムが糖質コルチコイドの抗炎症性効果の減少に寄与していることが判っている。異なる炎症性疾病が類似の分子メカニズムを共有し、そして単一の疾病がメカニズムの異種性を有する可能性が有る。
【００３６】
「コルチコステロイドの抗炎症性効果に対するコルチコステロイド抵抗性」とは、高投与量の糖質コルチコイドによる治療の後に臨床的改善が見られないこととして定義される。
「コルチコステロイド依存性」は、当初コルチコステロイドに応答したが退薬又は投与量が減少すると速やかに再発する症状として定義される。
「コルチコステロイド難治性応答」は、コルチコステロイドの適量の誘発投与量に対して応答しない症状として定義される。それは糖質コルチコイド治療に対する相対的又は完全な難治性応答を含み、そして多くの場合追加的治療による制御が必要となる。
「他のタイプのコルチコステロイド非有効性」には、非常に高投与量の治療の必要性、「治療困難」、「良好な応答なし」又は重症な症例、及び生体外及び生体内応答性障害を含む。
「コルチコステロイド不耐性」は、治療の毒性、及び／又は、日和見感染、骨量減少などのコルチコステロイド関連有害事象を発現するリスクとして定義される。
【００３７】
「糖質コルチコイド感作物質」は、コルチコステロイド感受性の回復、糖質コルチコイド感受性の亢進、糖質コルチコイド非感受性の逆転、糖質コルチコイド感受性の喪失の防止に機能を有する薬剤及び医薬品として定義され、そして糖質コルチコイド非感受性に伴う疾病（例えば、コルチコステロイド依存性又はコルチコイド抵抗性又はコルチコステロイドに対する非応答性又は不耐性）または障害の１つ以上の症候の治療、防止、又は軽減に使用される。糖質コルチコイド感作物質の使用の治療的効果は限定されないが、コルチコステロイド依存性の被験者におけるステロイド節約、コルチコステロイドに対するより良好な応答性または耐性、低投与量のコルチコステロイドによる有効性の達成、個人が抗原への暴露、感染、運動、又は刺激物に応答して難治性応答、又は抵抗性又は悪化を発現するリスクの防止、ステロイド投与が減量又は退薬された場合、又はコルチコステロイドの連用の後の被験者または患者の最適免疫機能及び容易な応答の達成、日和見感染、骨量減少、病的骨折、糖尿病、白内障のようなコルチコステロイド関連有害事象の発現リスクの低減、及びそれらの組合せを含む。
【００３８】
「治療する」又は「治療」とは、例えば、疾病又は障害の発症を抑制又は遅延させ、徴候又は症状の完全又は部分的な減少を達成し、及び／又は疾病又は傷害及び／又は症候を軽減、緩和、減少又は回復させるように設計された応答的及び予防的手段のいずれか又は両方を含む。「治療」はまた糖質コルチコイド非感受性関連疾病又は障害又は症状の治療のための使用のような本発明の組成物の任意の医薬的使用をも含む。本発明の特定の化合物又は医薬組成物の投与による特定の障害の症候の緩和は、その組成物の投与に起因する又は伴う任意の軽減、永久又は一時的な、永続的又は暫定的な軽減を意味する。
「被験者」はここでは動物、典型的にはヒトを含む哺乳類として定義される。「患者」は、ここではヒト及び動物の被験者を含む。
【００３９】
本発明の方法を実施するにあたり、非経口的、経口的、又は静脈注射又は肺性の送達を含む全身送達、又は局部的又は外用に処方される、治療的に有効な濃度の化合物を含む有効な量のプロゲステロン化合物又は組成物は、限定されないが以下の糖質コルチコイド非感受性関連疾病又は障害又は症状の治療に使用可能である：糖質コルチコイド抵抗性症状（例えば、糖質コルチコイド抵抗性ぜんそく、難治性リウマチ性関節炎、難治性炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患、急性呼吸促迫症候群、間質性肺線維症、嚢胞性線維症）；糖質コルチコイド難治性症状（例えば、難治性潰瘍性大腸炎、小児劇症クローン病、コルチコステロイド難治性ぜんそく、コルチコステロイド難治性剥離性間質性肺炎、難治性炎症性筋原性疾患、難治性重症筋無力症、難治性尋常性天疱瘡、メトトレキサート難治性関節リウマチ、難治性ネフローゼ症候群、難治性多発性硬化症、難治性熱帯性下痢様疾患、ステロイド抵抗性サルコイドーシス、尋常性天疱瘡の難治性粘膜病変、難治性シュニッツラー症候群、頭部及び首部の抵抗性皮膚炎、劇症難治性アトピー性皮膚炎、難治性特発(性)血小板減少性紫斑病、難治性眼窩筋炎、難治性又は再発性リンパ腫、敗血症又は急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）又は相対的副腎機能不全による重篤患者）；糖質コルチコイド依存性症状（例えば、酒さ、リウマチ性多発筋痛症、巨細胞性動脈炎、多発性筋炎、皮膚筋炎、川崎病症候群、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発性神経障害、多巣性運動神経障害、全身強直症候群、コルチコステロイド依存性全身性エリテマトーデス、コルチコステロイド依存性多発性硬化症、症候性コルチコステロイド依存性ぜんそく、初期シェーグレン症候群、全身性血管炎、多発性筋炎、臓器移植、及び移植片対宿主病）；及び他の炎症性疾患、自己免疫性疾患、過剰増殖疾患、及び糖質コルチコイド非感受性が関係する場合の他のこれらの病気を含む。これら疾患の事例は、狼瘡、変形性関節炎、副鼻腔炎、結節性多発性動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、巨細胞性動脈炎、アレルギー性鼻炎、じん麻疹, 遺伝性血管浮腫、腱炎、滑液包炎、自己免疫性慢性活動性肝炎、硬変症、移植拒絶反応、乾癬、皮膚炎、悪性腫瘍（例えば、白血病、骨髄腫、リンパ腫）、急性副腎機能不全、リウマチ熱、肉芽腫性疾患、免疫増殖／アポトーシス、視床下部-下垂体-副腎（ＨＰＡ）軸抑制及び調整、高コルチゾール血症、Ｔｈ１／Ｔｈ２サイトカインバランスの調整、慢性腎臓病、脊髄損傷、脳浮腫、血小板減少症、リトル病、アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、ぶどう膜炎、尋常性天疱瘡、鼻ポリープ、敗血症、感染症（例えば、バクテリア、ウィルス、リケッチア、寄生虫による）、ＩＩ型糖尿病、肥満症、メタボリックシンドローム、うつ病、統合失調症、気分障害、クッシング症候群、不安症、不眠症、記憶及び学習増強、又は糖質コルチコイド誘発緑内障、アトピー性皮膚炎、薬物過敏症応答、血清病、ヘルペス状水疱性皮膚炎、接触性皮膚炎、剥脱性紅皮症、菌状息肉腫、天疱瘡、非化膿性甲状腺炎、交感性眼炎、ぶどう膜炎及び外用ステロイドに非応答性の眼性炎症性症状、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、適切な化学療法と同時使用された場合の劇症性又は播種性肺結核症、過敏性間質性肺炎、器質化肺炎を伴う突発性閉塞性細気管支炎、特発性好酸球性肺炎、特発性肺線維症、既に適切な抗生物質による抗ＰＣＰ治療を受けているＨＩＶ（＋）感染者に発症する低酸素血症を伴うニューモシスティスカリニ肺炎（ＰＣＰ）、特発性、又はエリテマトーデスに起因する尿毒症を伴わない腎炎症候群における利尿又はタンパク尿症の寛解、強直性脊椎炎、リウマチ性多発筋痛症、乾癬性関節炎、再発性多発性軟骨炎、神経性又は心筋性合併症のある旋毛虫症、及び結核性髄膜炎。
【００４０】
一般的に本発明に基づきここに記載される糖質コルチコイド非感受性関連疾病又は障害又は症状の治療方法は、ステロイドホルモンからなる医薬組成物の投与から構成される。標準的に、親油性生殖腺ステロイドホルモンはプロゲストーゲンである。プロゲストーゲンは天然型プロゲストーゲン又は合成プロゲストーゲン（即ちプロゲスチン）でよい。本発明に従って使用可能なプロゲストーゲンは以下のカテゴリーに分類される：プロゲステロン、レトロプロゲステロン、プロゲステロン誘導体、１７α−ＯＨプロゲステロン誘導体（プレグナン及びノルプレグナンの両方）、１９−ノルプロゲステロン誘導体、１９−ノルテストステロン誘導体（エストランジェ（ｅｓｔｒａｎｇｅｓ）及びゴナンの両方）、及びスピロノラクトン誘導体。一般的に本発明に従って使用されるプロゲストーゲンはプロゲステロン及びその誘導体又は活性代謝物からなるグループから選択される。本発明の方法及びキットで使用可能なプロゲストーゲンの特定の例は、限定されないが、１７アルファＨＰＣ（カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン）、天然プロゲステロン、ジドロゲステロン、メドロゲストン、メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、酢酸クロルマジノン、酢酸シプロテロン、カプロン酸ゲストノロン、酢酸ノメゲストロール、デメゲストン、プロメゲストン、ネストロン、トリメゲストン、酢酸ノルエチステロン、ノルエチステロン、リネストレノール、２酢酸エチノジオール、ノルゲストレル、レボノルゲストレル、デソゲストレル、エトノゲストレル（３−ケトデソゲストレル）、ゲストデン，ノルゲスチメート，ノルエルゲストロミン（１７−デアセチルノルゲスチメート）、ジエノゲスト、ドロスピレノン、ノルエチノドレル、チボロン、及び１９−ノルプロゲステロンを含む。
【００４１】
本発明の方法及びキットで使用可能な他の薬剤は、例えば、医薬的に受容可能なプロゲストーゲン誘導体、即ち１７アルファＨＰＣ、天然プロゲステロン、ジドロゲステロン、メドロゲストン、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、クロルマジノン、シプロテロン、カプロン酸ゲストノロン、酢酸ノメゲストロール、デメゲストン、プロメゲストン、ネストロン、トリメゲストン、ノルエチステロン、ノルエチステロン、リネストレノール、２酢酸エチノジオール、ノルゲストレル、レボノルゲストレル、デソゲストレル、エトノゲストレル（３−ケトデソゲストレル）、ゲストデン，ノルゲスチメート，ノルエルゲストロミン（１７−デアセチルノルゲスチメート）、ジエノゲスト、ドロスピレノン、ノルエチノドレル、ノルゲストレル、デソゲストレル、エトノゲストレル、１９−ノルテストステロン、ジエノゲスト、ノルエチノドレル、シプロテロン、チボロン、１９−ノルプロゲステロン、及びドロスピレノンの誘導体を含む。
それぞれのプロゲストーゲンはここに記載のように対応する塩、エステル、エノールエーテル又はエステル、酸、塩基、溶媒和化合物、水和物又は製剤前のプロドラッグとして誘導体化可能である。
【００４２】
代表的な医薬的に受容可能な塩は、限定されないが、アミン塩、限定されないが例えば、クロロプロカイン、コリン、アンモニア、ジエタノールアミン及び他のヒドロキシアルキルアミン、エチレンジアミン、Ｎメチルグルカミン、プロカイン、ジエチルアミン及び他のアルキルアミン、ピペラジン及びトリ（ヒドロキシメチル）アミノメタン；アルカリ金属塩、限定されないが例えば、リチウム、カリウム、ナトリウム；アルカリ土金属塩、限定されないが例えば、バリウム、カルシウム及びマグネシウム；遷移金属塩、限定されないが例えば、亜鉛、アルミニウム；及び他の金属塩、限定されないが例えば、リン酸水素ナトリウム、リン酸二ナトリウム；またさらに、鉱酸塩、限定されないが例えば、塩化水素及び硫化水素塩；有機酸塩、限定されないが例えば、酢酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、酪酸塩、吉草酸塩及びフマル酸塩を含む。例えば有機酸の酢酸は多く使用され、例えば、酢酸メゲストロール、酢酸クロルマジノン、酢酸シプロテロン、カプロン酸ゲストノロン、酢酸ノメゲストロール、酢酸シプロテロンである。
【００４３】
本発明の方法及びキットで使用可能な追加の代表的薬剤は、例えば、限定されないが以下のプロゲストーゲン活性代謝物を含む：１７アルファＨＰＣ、天然プロゲステロン、ジドロゲステロン、メドロゲストン、メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、酢酸クロルマジノン、酢酸シプロテロン、カプロン酸ゲストノロン、酢酸ノメゲストロール、デメゲストン、プロメゲストン、ネストロン、トリメゲストン、酢酸ノルエチステロン、ノルエチステロン、リネストレノール、２酢酸エチノジオール、ノルゲストレル、レボノルゲストレル、デソゲストレル、エトノゲストレル（３−ケトデソゲストレル）、ゲストデン，ノルゲスチメート，ノルエルゲストロミン（１７−デアセチルノルゲスチメート）、ジエノゲスト、ドロスピレノン、ノルエチノドレル、ノルゲストレル、デソゲストレル、エトノゲストレル、１９−ノルテストステロン、ジエノゲスト、ノルエチノドレル、酢酸シプロテロン、チボロン、１９−ノルプロゲステロン、及びドロスピレノンの活性代謝物。
例えばプロゲステロン活性代謝物はアロプレグナノロン及び５アルファプレグナン−３，２０−ジオン活性代謝物を含む。１７−ＨＰＣの活性代謝物は、Ｍ１３モノヒドロキシ；Ｍ１２，モノヒドロキシ；Ｍ１９，モノヒドロキシ；Ｍ７，ジヒドロキシ；Ｍ１６，モノヒドロキシ；を含む。
【００４４】
本発明に基づく種々の実施形態において、炎症プロセスを抑制する他の１グループのステロイドホルモン、糖質コルチコイドが天然型ステロイドホルモン、又は合成ステロイドホルモンからなるグループから選択される。糖質コルチコイドの特定の例は限定されないが、ヒドロコルチゾン（コルチゾール）、酢酸コルチゾン、デキサメタゾン、プレドニソン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、ベクロメタゾン、パラメタゾン、フルチカゾン、酢酸フルドロコルチゾン、酢酸デオキシコルチコステロン（ＤＯＣＡ）、フルプレドニゾロン、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、フルニソリド、及びトリアムシノロンアセトニドを含む。
【００４５】
本発明の方法を実施するにあたり、治療的に有効な化合物濃度を含む有効な量の化合物又は組成物が、非経口的、経口的、又は静脈注射又は肺性送達を含む全身送達、又は局部的又は外用処方に対して好適には処方される。例えば医薬組成物は、皮下、静脈内、腹腔内、動脈内又は筋肉内注射；直腸経由；経皮送達；経膣送達；バッカル；又は経口送達により投与可能である。皮下又は筋肉内注射により投与される場合、ステロイドホルモンはステロイドホルモンの長期間の徐放が可能なように蓄積製剤として適切に処方される。膣内送達を含む外用投与された場合、送達は適宜、例えば、溶液、懸濁液,エマルジョン、またはその類似形態をとり、そして好適にはクリーム、ジェル、軟膏、エマルジョン、溶液、エリキシル剤、ローション、懸濁液、チンキ、ペースト、泡、エアロゾル、洗浄、スプレイ、坐薬、絆創膏、皮膚パッチ、又は他の経路に適した製剤として処方される。吸入投薬経路が使用される場合は、送達は好適には、例えば、エアロゾルスプレイ又は圧力容器内の粉との混合又は噴霧器又は吸引器を介する。
【００４６】
投与の頻度に関しては、所望の結果（即ち、コルチコステロイド依存性の被験者におけるステロイド節約、コルチコステロイドに対するより良好な応答性または耐性、低投与量のコルチコステロイドによる有効性の達成、個人が抗原への暴露、感染、運動、又は刺激物に応答して難治性応答、又は抵抗性又は悪化を発現するリスクの防止、ステロイド投与が減量又は退薬された場合、又はコルチコステロイドの連用の後の被験者または患者の最適免疫機能と容易な応答の達成、日和見感染、骨量減少及びそれらの合併症のようなコルチコステロイド関連有害事象の発現のリスクの低減）が得られる任意の頻度が使用可能である。投与の頻度は、好適には少なくとも部分的には、選択されたステロイドホルモン及び／又は投与形態により決定される。種々の実施形態では、医薬組成物は好適には一日一回又は週一回を越える間隔で投与される。例えば、医薬組成物は２週間に一回、月一回、２か月に一回、又は３カ月に一回投与される。他の種々な実施形態では医薬組成物は週一回、又は１週間より短い間隔（例えば毎日又は２日に一度）投与される。例えば、ステロイドホルモンが１７アルファ１２カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン（１７−ＨＰＣ）の場合、毎日、週一回、又は２週間に一回、又は月に一回又は３カ月に一回が適している。本発明で使用される医薬組成物の投与経路及び投与頻度が、特定のステロイドホルモン、送達形態、治療対象組織、治療対象の年齢及び性別、生体外及び生体内データ、および特定の患者の要望に対する専門的判断を含む種々の要因に依存することを当業者は理解しよう。ここに記載される投与頻度は例示目的のためだけであり、製剤の範囲又は実行を制限する意図ではない。
【００４７】
当業者はまた、ステロイドホルモンの適切な投与は選択されたステロイドホルモン、投与経路及び製剤形態、投与頻度、治療対象疾病、代謝安定性とその化合物の作用期間、被験者の種、年齢、体重、一般的健康度、及び食餌、排泄速度、薬剤組合せ、及び特定の症状の重篤度に依存することを理解するであろう。ここに提供されるステロイドホルモンの効果的な投与量は、当業者により決定可能であり、そして哺乳類に対する例示的な投与量である約０．００１−１００ｍｇ／体重Ｋｇの経口投与される活性化合物の一日当りの投与量を含む。例えば、子宮内膜及び抗性腺刺激効果を獲得するため（即ち排卵抑制のための投与）、経口投与で０．１５ｍｇ／日のレボノルゲストレル又はデソゲストレルが好適には望ましい。一方で酢酸メドロキシプロゲステロンでは５−１０ｍｇ／日又はプロゲステロンでは２００−３００ｍｇ／日と必要投与量はそれよりはるかに多い。
【００４８】
当業者はまた、プロゲステロンが性ホルモンであるためステロイドホルモンの適切な投与は性別に依存することを理解するだろう。プロゲステロンは主として卵巣の顆粒膜細胞及び黄体から分泌される。妊娠期間中プロゲステロンの主要な供給は胎盤からも得られる。男性はプロゲステロンを副腎及び精巣で生成する、それはこれがテストステロンの前駆体であるからである。女性では月経周期の排卵前期の間はプロゲステロンのレベルは比較的低く、排卵後立ち上がり、黄体期の間上昇する。プロゲステロンレベルは排卵前で２ｎｇ／ｍｌ未満で、排卵後５ｎｇ／ｍｌ超となる傾向が有る。妊娠した場合プロゲステロンレベルは、最初は黄体期レベルを維持する。プロゲステロン維持の黄体−胎盤移行の始まりと共に、レベルはさらに上昇を始めそしてその期間に１００−２００ｎｇ／ｍｌにも達する。成人男子におけるプロゲステロンレベルの基準範囲は０．１３−０．９７ｎｇ／ｍｌである。成人男子のレベルは月経周期の卵胞期の女性及び閉経後の女性のレベルと類似している。明らかに女性は規則的にプロゲステロン濃度の１７倍の変化を月経周期において経験し、或いは妊娠において１００倍の増加を経験する。
【００４９】
このようにプロゲステロン治療の耐性、又は最大投与量、又は最小有効投与量は男性より女性が高い。例えば、ステロイドホルモンが１７アルファ１２カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン（１７−ＨＰＣ）である場合、女性保健関連指標における使用に対する一般投与量は週１５０−５００ｍｇ注射である。コルチコステロイド感受性の回復に対するプロゲステロンの幾つかの重要な効果が、異なる分子的生物的作用モードを介して非遺伝子的に媒介される（機能がプロゲステロン活性に関係しない）と見做されると仮定すると、このことは薬力学的な可変性をもたらす。男性被験者にはプロゲステロン（例えば１７−ＨＰＣ）の異なる投与量レベルのみならず、これよりはるかに低い又は高い投与量も選択可能である。ここに記載される投与量レベルは例示目的のみであり、ここに提供される処方の範囲と実行を制限することを意図しない。
【００５０】
好適には、本発明の医薬組成物は、１）生理学的に受容可能なキャリア、希釈剤、又は賦形剤、又はそれらの組合せ；及び２）ここに記載された１つ以上のステロイドホルモン、を含む。組成物は単一薬剤投与又は多重薬剤投与として処方される。ステロイドホルモンを０．００５％−１００％の範囲で含み、残余が非毒性キャリアからなる薬剤形態又は組成物が準備されうる。例えば、医薬組成物は１つ以上の希釈剤、１つ以上のキャリア、１つ以上の結合剤、１つ以上のコーティング、１つ以上の潤滑剤、１つ以上の溶剤、１つ以上のバッファ、１つ以上の保存剤、１つ以上の香料、１つ以上の染色剤、及び／又は１つ以上の吸収促進剤、及び／又は１つ以上の生物分解性ポリマーを含んでよい。医薬組成物に含まれる特定の賦形剤は特定のステロイドホルモン及び投与形態に依存し、当業者はステロイドホルモン及び投与形態が選択されると容易に適切な選択をすることが可能である。例えば、経口投与には医薬的に受容可能な非毒性組成物が、通常使用される賦形剤、例えば医薬的グレードのマンニトール、乳糖、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、タルカン、セルロース誘導体、クロスカルメロースナトリウム、グルコース、ショ糖、炭化マグネシウム、又はサッカリンナトリウムの組み入れにより、形成可能である。
【００５１】
このような組成物は好適には、溶液、懸諾液、錠剤、カプセル、粉、及び限定されないがインプラント及びマイクロカプセル化された送達システムのような徐放剤形、及びコラーゲン、エチレンビニルアセテート、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、ポリオルトエステル、ポリ乳酸、他のような生物分解性、生体適合性ポリマーを含む。他の事例では従来技術の注射液が従来技術の形態で、液体溶液又は懸諾液、溶液又は懸諾液に適した注射前の液体内の固形、又はエマルジョンで調製可能である。適合する賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、ブドウ糖、グリセリン、マンニトール、１，３−ブタンジオール、リンゲル液、等張性塩化ナトリウム溶液、またはエタノールである。他の実施形態では、適切な液体キャリア、懸濁化剤、などを使用して注射可能な懸諾液が調製される。ある注射用医薬組成物はユニット投与形態、例えば、アンプル又は多重薬剤コンテナで提供される。ある注射用医薬組成物は油性の又は水性の媒体内の懸諾液、溶液、又はエマルジョンであり、薬剤を懸濁化させ、安定化させ、及び/又は分散させるような製剤化剤を含んでよい。ある注射用医薬組成物に適した溶媒は、限定されないが、親油性溶媒及びゴマ油のような脂肪酸、オレイン酸エチル又はトリグリセリドのような合成脂肪酸エステル、及びリポソームを含む。
【００５２】
本発明の方法は、プロゲストーゲンホルモンの投与に加えて、糖質コルチコイド非感受性関連疾病又は障害又は症状の治療を目標とする１つ以上の追加的治療を含んでもよい。１つ以上の追加的治療は、例えば、糖質コルチコイド（例えば、ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、デキサメタゾン、プレドニソン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、ベクロメタゾン、パラメタゾン、フルチカゾン、酢酸フルドロコルチゾン、酢酸デオキシコルチコステロン、フルプレドニゾロン、プロピオン酸フルチカゾン、ブデソニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、フルニソリド、及びトリアムシノロンアセトニド）、アンドロゲン（例えば、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ））、エストロゲン（例えば、エストラジオール）、免疫抑制又は免疫調節剤（例えばシクロスポリン、メトトレキサート、金、６−メルカプトプリン、インフリキシマブ、エタネルセプト及びアダリムマブのような生物由来物質及び静脈内免疫グロブリン及びメポリズマブ）、及びカルシニューリン抑制剤（例えばシクロスポリン、タクロリムス）、ｐ３８ＭＡＰキナーゼ抑制剤、ＪＮＫ抑制剤（ＡＰ１減少）、ビタミンＤ、ＭＩＦ抑制剤、ヒストン脱アセチル化酵素２アクチベーター、テオフィリン、ホスホイノシチド−３−キナーゼ−δ抑制剤、ロイコトリエン調節剤、長時間作用型β刺激剤、抗酸化剤、ｉＮＯＳ抑制剤、及びＰ−糖タンパク質抑制剤、及びそれらの組合せを含む。上記の他の医薬的薬剤はここに記載された薬剤と組み合わせて使用される場合、例えば医師用添付文書集（ＰＤＲ）に示される量、或いは当業者により決定される量で使用可能である。
【００５３】
非経口経路で使用される薬量は好適には経口薬剤の血清中濃度レベルに対応して又は治療対象被験者の症状の緩和に十分な量の活性化合物を含んで決定される。ここで提供される方法では、このような他の医薬組成物がここに提供される化合物の投与の前、同時又は後に投与されてもよい。糖質コルチコイド感作物質の使用の治療的効果は、限定されないが、同時使用治療医薬の投与量の節約、同時治療医薬にたいする応答性又は耐性の改善、低使用量の同時治療薬剤による有効性の達成、個人が同時治療医薬の難治性応答、又は抵抗性を発現するリスクの防止、同時治療医薬が減量又は退薬された場合、又は同時治療医薬の連用の後の最適免疫機能、容易な応答の達成、医薬関連有害事象の発現リスクの低減、およびそれらの組合せを含む。
【００５４】
実施形態１−２はステロイド感受性及びステロイド抵抗性、即ち、健康な男性喫煙被験者からのヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＰＨＡ誘発性ＩＬ−２形成及びＩＬ−２／４誘発性ステロイド抵抗性を評価する研究モデルの確立を示す。
実施形態３，４及び５は、プロゲストーゲンがステロイド抵抗性症状（即ちＩＬ−２／４誘発性）の下でコルチコステロイド抵抗性を逆転しそしてコルチコステロイド感受性を改善することを示す。
実施形態６，７及び８はプロゲストーゲンが非−ステロイド抵抗性症状（即ちＩＬ−２／４を追加しないＰＨＡ誘発性ＩＬ−２形成）の下でコルチコステロイド感受性を改善することを示す。
【００５５】
本発明によれば、驚くべきことに、糖質コルチコイド感作物質の使用の治療的効果は限定されないが、コルチコステロイド依存性の被験者におけるステロイド節約、コルチコステロイドに対するより良好な応答性または耐性、低投与量のコルチコステロイドによる有効性の達成、個人が抗原への暴露、感染、運動、又は刺激物に応答して難治性応答、又は抵抗性又は悪化を発現するリスクの防止、ステロイド投与が減量又は退薬された場合、又はコルチコステロイドの連用の後の被験者または患者の最適免疫機能と容易な応答の達成、日和見感染、骨量減少、病的骨折、糖尿病、白内障、及びそれらの合併症のようなコルチコステロイド関連有害事象の発現のリスクの低減、を含むことが発見された。
【００５６】
（生体外スクリーニングの材料及び方法）
（概論）
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＩＬ−２／４誘発ステロイド抵抗性は、ステロイド抵抗性及び感受性の潜在的修飾因子を評価する周知の研究モデルである。（非特許文献１０−１２参照）デキサメタゾンによるリンパ球増殖の抑制及びサイトカインアッセイは炎症性疾病の患者のステロイド治療の結果と良く相関する。健康な志願者におけるデキサメタゾンによるサイトカイン分泌抑制はステロイド感受性とステロイド抵抗性の変化を測定するために使用される。生体外において、マイトジェンフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）によるＰＢＭＣ刺激の後、サイトカイン分泌レベルとステロイド抵抗性及びステロイド感受性との間に強い相関性がある。ＩＬ−２、ＩＬ−４及びＴＮＦの追加はステロイド感受性を減少させる。
【００５７】
ある研究の目的は、ＩＬ−２及びＩＬ−４誘発性ステロイド抵抗性モデルにおいて、ＰＨＡ誘発性ＩＬ−２放出を抑制するデキサメタゾンの能力の増大により計測される、コルチコステロイド抵抗性を逆転する化合物の効果を評価することであった。
その化合物の効果は、５０％抑制濃度（ＩＣ５０）の改善、ステロイド節約、低投与量のコルチコステロイドの使用による同様の抗炎症性有効性の達成、応答性の改善、及び末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＰＨＡ誘発ＩＬ−２放出シナジー効果の組合せ、において測定されたコルチコステロイド感受性の改善において評価された。
【００５８】
（物質）
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）分離システム：ＧＥヘルスケアバイオサイエンスＡＢ（ＵＳ）社からのＡｃｃｕｓｐｉｎ  ｓｙｓｔｅｍ−Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ；ＨｙＣｌｏｎｅ（中国、北京）社からのＲＰＭＩ−１６４０培養液、シグマ社（ＵＳ）からのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、シグマ社（ＵＳ）からの１７α−カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン（１７ＨＰＣ）（ＣＡＳ番号：６３０−５６−８）、酢酸メドロキシプロゲステロン（ＭＰＡ）（ＣＡＳ番号：７１−５８−９）、天然プロゲステロン（Ｐ４）（ＣＡＳ番号：５７−８３−０）、デキサメタゾン（ＣＡＳ番号：５０−０２−２）、及びＰＨＡ；ＰｅｐｒｏＴｅｃｈからの遺伝子組換え型ＩＬ−２及びＩＬ−４，ＥｘＣｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（中国、上海）からのＩＬ−２免疫吸着剤検定キット（ＩＬ−２用ＥＬＩＳＡ）；Ｒ＆Ｄシステム（ＵＳ）からの抗ヒト、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８。
【００５９】
（ＰＢＭＣの単離）
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は地域血液センターから提供されたヒト血液バフィーコートより単離された。男性ドナーからの無作為バフィーコート細胞は臨床使用用に処理された血液の副産物であり、喫煙以外の詳細（即ち、個人の識別及び背景）は提供されなかった。殆ど全ての男性ドナーはたばこ喫煙者であった。ＰＢＭＣは多孔性高密度ポリエチレン隔壁（ＧＥヘルスケアバイオサイエンスＡＢ（ＵＳ）社からのＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ）を使用して分離された。各チューブ内の血液サンプルを遠心分離した後（８００ｘｇ、室温（ＲＴ）で３５分間），ＰＢＭＣは集められ、ハンク緩衝生理食塩溶液（ＨＢＳＳ）で２度洗浄された。ＰＢＭＣは１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）及び１５ｍＭグルタミンを含むＲＰＭＩ−１６４０培養液内で再懸濁され、そして細胞は検数され、培養皿に蒔かれた。
【００６０】
（細胞の培養液）
ＰＢＭＣ（２ｘ１０６）はＩＬ−２（１３ｎｇ／ｍｌ）とＩＬ−４（６．５ｎｇ／ｍｌ）を含み又は含まず、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）及び２ｍＭグルタミンを含むＲＰＭＩ−１６４０培養液内で４８時間培養された。ＰＢＭＣは１０７セル／ｍｌで培養皿に再度蒔かれ、その後デキサメタゾンの治療１２時間前に、１７α−カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン（１７ＨＰＣ）、プロゲステロン（Ｐ４）、及び酢酸メドロキシプロゲステロン（ＭＰＡ）を含み又は含まずに刺激された。ＩＬ−２とＩＬ−４に刺激されたＰＢＭＣもまた１０６セル／ｍｌの濃度で９６ウェルの培養皿に蒔かれ、サイトカイン放出のＰＨＡ（１５μｇ／ｍｌ、２４時間）刺激及びＥＬＩＳＡによる検出の準備が完了する。
【００６１】
（サンドイッチＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法））
ＰＢＭＣ細胞（１０６セル／ｍｌ）は９６ウェルの培養皿に蒔かれ、そしてデキサメタゾン（１０−１２Ｍ−１０−５Ｍ）を含み又は含まないで１時間刺激され、その後細胞を９６ウェル培養皿内で３７℃、５％ＣＯ２のもとでＰＨＡを含み又は含まないで２４時間トランスファーさせた。対照標準とＰＢＭＣ上清の段階希釈が酵素結合免疫吸着検定法により計測され、ＩＬ−２がベースライン及び１７ＨＰＣ，Ｐ４及びＭＡＰ治療後のレベルにおいて判定された。光学密度が４５０ｎｍで計測され、５５０ｎｍで補正された。ＩＬ−２の濃度は標準曲線を使用し、そして使用した上清希釈を考慮して計算された。ＩＬ−２の検出限界は４．０ｐｇ／ｍｌである。
【００６２】
（統計的分析）
データは平均値±標準偏差で表現される。医薬治療の有効性は対応のあるt検定で分析された。３つ以上の適合グループの比較には変数の一方向分析が使用され、グループ差異を示すために９５％信頼区間（ＣＩ）が実行された。全てのグラフはＰＨＡ刺激性ＩＬ−２の結果の平均値又は％抑制を示す。５０％抑制濃度（ＩＣ５０）はＳ状結腸モデル（ＢｉｏＤａｔａＦｉｔ）を使用して計算された。０．０５未満のｐ値は統計的に有意であると見做された。
【００６３】
（結果）
（ＰＢＭＣ（１０６セル／ｍｌ）におけるステロイド感受性の同時測定）    
糖質コルチコイド感受性を同時に測定するため、ＰＢＭＣ（１０６セル／ｍｌ）が９６ウェルの培養皿に蒔かれ、そしてデキサメタゾンの段階希釈（１０−１２Ｍ−１０−５Ｍ）を含み又は含まないで１時間刺激され、そしてＰＨＡ（１５μｇ／ｍｌ）で２４時間、３７℃、５％ＣＯ２の下で刺激された。ＩＬ−２レベルがＥＬＩＳＡを使用して定量化された。図１に示す結果は、ベースライン、ＰＨＡ刺激後、及びデキサメタゾンによる投与量依存ＩＬ−２抑制、におけるＩＬ−２レベルを示す。ＰＢＭＣにおけるＩＬ−２レベルは、健康な男性喫煙者（ｎ＝１１）のベースラインで１９±２５ｐｇ／ｍｌ，ＰＨＡ刺激後（ｎ＝２０）で６７７±４４７ｐｇ／ｍｌ、デキサメタゾン１０−１２Ｍ（ｎ＝１１）で３７１±４４７ｐｇ／ｍｌ、デキサメタゾン１０−１０Ｍ（ｎ＝１４）で２８７±３１３ｐｇ／ｍｌ、デキサメタゾン１０−８Ｍ（ｎ＝１７）で２９３±３３８ｐｇ／ｍｌ、そしてデキサメタゾン１０−６Ｍ（ｎ＝１７）で１４４±１５７ｐｇ／ｍｌであった。デキサメタゾン及び１７ＨＰＣ治療はベースラインのＩＬ−２レベルにおいては有意の効果を示さなかった（データ非図示）。図１はこのようにベースライン、ＰＨＡ刺激後のＩＬ−２レベル、及びデキサメタゾンのＰＨＡ刺激性ＩＬ−２生成に対する効果（ｎ＝２０）（ｐ<０．００１）を示す。デキサメタゾンはＩＬ−２生成に対する有意の、投与量応答性抑制を示す（図１）。
【００６４】
（実施形態１：ＩＬ−２及びＩＬ−４の追加が男性喫煙者においてステロイド感受性を減少させ、又はステロイド抵抗性を誘発する）
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）におけるＩＬ−２／４誘発性ステロイド抵抗性は、周知の研究モデルであり、ステロイド抵抗性及び感受性の潜在的修飾因子を評価するのに使用された。健康な喫煙者からＰＢＭＣが採取された。コルチコステロイド非感受性又は抵抗性はＩＬ−２及びＩＬ−４を健康な男性喫煙者（ｎ＝１１）からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に追加することにより誘発された。ＩＬ−２（１３ｎｇ／ｍｌ）及びＩＬ−４（６．５ｎｇ／ｍｌ）を含む又は含まないで刺激されたＰＢＭＣ（１０６セル／ｍｌ）が９６ウェル培養皿内で４８時間培養され、そしてその後デキサメタゾンの段階的希釈（１０−１０Ｍ、１０−８Ｍ、１０−６Ｍ）に１時間晒され、そしてその後ＰＨＡ（１５μｇ／ｍｌ）に２４時間、３７℃、５％ＣＯ２の下で刺激された。ＩＬ−２レベルはＥＬＩＳＡを使用して定量化された。ＰＨＡ性誘発ＩＬ−２生成の抑制％は次の式で計算される；
抑制％＝１−（デキサメタゾンを含むＩＬ−２／デキサメタゾンを含まないＩＬ−２）
【００６５】
結果は図２に示す通り、男性喫煙者においてデキサメタゾンのＰＨＡ誘発性ＩＬ−２生成の抑制能力は、ＩＬ−２及びＩＬ−４の追加により有意に減少した。例えば、抑制％は低投与量デキサメタゾン１０−１０Ｍでは完全に失われた：５２％に対し抑制無しであり、高投与量デキサメタゾン１０−６Ｍでは：８７％に対し２１％であった。ＩＬ−２及びＩＬ−４の追加は男性喫煙者においてステロイド感受性を減少させ、又はステロイド抵抗性を誘発する、有効なステロイド抵抗モデル／症状。
【００６６】
（実施形態２．プロゲストーゲンは男性喫煙者においてコルチコステロイド感受性を改善し、又はコルチコステロイド抵抗性を逆転する）
コルチコステロイド非感受性又は抵抗性は薬理学的に逆転可能である。我々はステロイド抵抗性を逆転する機能について現在まで未知のプロゲストーゲン薬剤クラスの効果を調査し、１７アルファカプロン酸ヒドロキシプロゲステロン（１７−ＨＰＣ）、酢酸メドロキシプロゲステロン（ＭＰＡ）、及び天然プロゲステロン（Ｐ４）のプロゲストーゲン薬剤について、健康な男性喫煙者からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）における糖質コルチコイド感受性を改善する効果を試験した。
【００６７】
ＩＬ−２（１３ｎｇ／ｍｌ）及びＩＬ−４（６．５ｎｇ／ｍｌ）で刺激されたＰＢＭＣ（１０６セル／ｍｌ）が９６ウェル培養皿内で４８時間培養され、そしてその後１７ＨＰＣ（１０−１０Ｍ、１０−７Ｍ、１０−５Ｍ）又はＰ４又はＭＰＡ（１０−１０Ｍ、１０−８Ｍ、１０−５Ｍ）に１２時間刺激され、そしてその後低投与量及び高投与量のデキサメタゾン（１０−１０Ｍ、１０−６Ｍ）を含み又は含まずに１時間晒され、そしてその後ＰＨＡ（１５μｇ／ｍｌ）に２４時間、３７℃、５％ＣＯ２の下で晒された（１７ＨＰＣ＋デキサメタゾンの組合せのグループはｎ＝１１）。ＩＬ−２レベルはＥＬＩＳＡを使用して定量化された。ステロイド抵抗性症状における最大デキサメタゾン抑制（Ｉｍａｘ）の１０％増加は有意の臨床的改善を意味する。（非特許文献１２参照）
【００６８】
図３−４に示す結果は、低投与量のデキサメタゾンが使用された場合、プロゲストーゲンが、全ての３つのプロゲストーゲン薬剤（１７ＨＰＣ、Ｐ４及びＭＰＡ）により一貫して、コルチコステロイド非感受性を改善することを示す。Ｉｍａｘは９％−３３％改善する。
図３はプロゲストーゲンのステロイド抵抗性逆転効果（Ｉｍａx％）を示す：低投与量のデキサメタゾン（１０−１０Ｍ）において１７ＨＰＣ、Ｐ４及びＭＰＡを比較している。
図４はプロゲストーゲンのステロイド抵抗性逆転効果（Ｉｍａx％）を示す：高投与量のデキサメタゾン（１０−６Ｍ）において１７ＨＰＣ、Ｐ４及びＭＰＡを比較している。
【００６９】
コルチコステロイド抵抗性の逆転の効果は高投与量のデキサメタゾンが使用された場合に観察される（図４）。それぞれのプロゲストーゲン薬剤は独自の投与量−応答パターンを持っている。これら３つの薬剤の中で、１７ＨＰＣは最大の治療効果、即ち最高改善率（１８％）を有し、また全ての投与量レベルにおいて一貫性（１６−１８％）を有している。
【００７０】
プロゲストーゲン（例えば、１７ＨＰＣ、Ｐ４及びＭＰＡ）はこのように、喫煙者において糖質コルチコイド抵抗性を逆転し、そして糖質コルチコイド感受性を改善するという驚くべきかつ予期せぬ効果を有する。従ってプロゲストーゲンは、例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）のような既治療喫煙誘発性糖質コルチコイド抵抗性疾病に使用可能である。
【００７１】
（実施形態３．１７ＨＰＣは男性喫煙者においてコルチコステロイド抵抗性を逆転する）
ＩＬ−２（１３ｎｇ／ｍｌ）及びＩＬ−４（６．５ｎｇ／ｍｌ）で刺激されたＰＢＭＣ（１０６セル／ｍｌ）が９６ウェル培養皿内で４８時間培養され、そしてその後１７ＨＰＣ（１０−１０Ｍ、１０−７Ｍ、１０−５Ｍ）に１２時間刺激され、そしてその後３つの投与量のデキサメタゾン（１０−１０Ｍ、１０−８Ｍ、１０−６Ｍ）を含み又は含まずに１時間晒され、そしてその後ＰＨＡ（１５μｇ／ｍｌ）に２４時間、３７℃、５％ＣＯ２の下で晒された（ｎ＝１１）。ＩＬ−２レベルはＥＬＩＳＡを使用して定量化された。
【００７２】
図５に示す結果はＩＬ−２及びＩＬ−４の追加がステロイド感受性を３つのデキサメタゾン濃度全てで有意に減少させたことを示す。ＰＨＡ誘発性ＩＬ−２放出のデキサメタゾン抑制の改善は１７ＨＰＣを追加することにより達成された。１７ＨＰＣは１つの投与量−応答パターンにおいて糖質コルチコイド非感受性を逆転する。１７ＨＰＣは従ってコルチコステロイド感受性を回復する。例えば、１７ＨＰＣが無い場合のデキサメタゾン１０−１０ＭでのＰＨＡ誘発性ＩＬ−２レベルは２３６４ｐｇ／ｍＬであったが、１７ＨＰＣを１０−１０Ｍ、１０−７Ｍ、１０−５Ｍ追加した場合はそれぞれ２１１９，１８０５及び１５９５ｐｇ／ｍＬとなり、サイトカイン抑制を有意に改善した（１７ＨＰＣが１０−７Ｍ、１０−５Ｍのグループにおいて共にｐ<０．０５）。
【００７３】
図６は高投与量のデキサメタゾン１０−６Ｍが投与された場合の１７ＨＰＣ治療前後の個人別応答を示す。１７ＨＰＣ治療後に被験者１１人中１０人が１０％以上の改善（最大デキサメタゾン抑制％で）を示し、そして１人の被験者（＃６）のみが改善を示さなかった（全ての３つの１７ＨＰＣ投与量グループに対しカイ二乗検定でｐ<０．０５）。１７ＨＰＣは従ってステロイド抵抗性及び個々人の応答パターンを逆転する。
【００７４】
（実施形態４．３つのプロゲストーゲン薬剤：１７ＨＰＣ、Ｐ４及びＭＰＡに対する個人の応答パターン）
上記の実施形態３は男性喫煙者においてプロゲストーゲンがコルチコステロイド抵抗性を逆転することを示した。図７−９は３つのプロゲストーゲン薬剤：１７ＨＰＣ、Ｐ４及びＭＰＡに対する個人の応答パターンを同じデキサメタゾン投与量１０−１０Ｍの下で比較した図である。
【００７５】
図７に示す結果は１１人の被験者の内９人が１７ＨＰＣの１回の投与後、最大デキサメタゾン抑制の１０％以上の改善を示し、それは図６の結果と一貫性を有している。
図８に示す結果は８人の被験者の内６人が１７ＨＰＣに類似の天然プロゲステロンの１回の投与後、最大デキサメタゾン抑制の１０％以上の改善を示したことを示す。
図９に示す結果はＭＰＡ治療が全く異なる応答パターン：「スプリット」パターンを示すことを図示する。１つのサブグループは最大５８％の改善を示し、一方他のサブグループはコルチコステロイド感受性の悪化を示し、減少は８８％に達した。
【００７６】
（実施形態５．プロゲストーゲン（例えば１７ＨＰＣ）が非ステロイド抵抗性の症状の下でコルチコステロイド感受性を改善する）
糖質コルチコイド感受性に対する１７ＨＰＣの追加的治療の効果を同時に判定するため、ＰＢＭＣ（１０６セル／ｍｌ）が９６ウェル培養皿内で４８時間培養され、そしてその後１７ＨＰＣ（１０−１１Ｍ−１０−５Ｍ）に１２時間刺激され、そしてその後デキサメタゾンの段階的希釈液（１０−１２−１０−６Ｍ）を含み又は含まずに１時間晒され、そしてその後ＰＨＡ（１５μｇ／ｍｌ）に２４時間、３７℃、５％ＣＯ２の下で晒された。ＩＬ−２レベルはＥＬＩＳＡを使用して定量化された。５０％抑制濃度はＳ状結腸モデル（ＢｉｏＤａｔａＦｉｔ）を使用して計算された。負の対照（即ち、デキサメタゾン又は１７ＨＰＣを含まない細胞＋ＰＨＡ）からの値（ＩＬ−２＝７３４の）は、デキサメタゾン５０％抑制濃度及び１７ＨＰＣ５０％抑制濃度を計算する場合、Ｓ状結腸モデルに適合させるため人為的にデキサメタゾン−１８Ｍ、又は１７ＨＰＣ−１７Ｍ（即ち医薬品濃度がほぼ０Ｍ）と設定された（Ｎ＝１４）。
【００７７】
喫煙者におけるＩＬ−２抑制で測定される、デキサメタゾン感受性に対する１７ＨＰＣの効果は、表１及び図１０に示される。
図１０は１７ＨＰＣの追加的効果がステロイド感受性の改善であることを示す。１７ＨＰＣは、特に低濃度において、デキサメタゾン５０％抑制濃度で測定されたステロイド感受性を有意に亢進し、それは５０％抑制濃度＝７．５（デキサメタゾンのみ）から１０．２−１２．０（デキサメタゾン＋１７ＨＰＣ）まで改善した（分散分析においてｐ＝０．００５２）。１７ＨＰＣの高投与量（１７ＨＰＣ１０−５Ｍ）はごく小さな効果を示し又は全く効果を示さなかった。
【表１】
0005913136.tif 000002
【００７８】
（実施形態６．プロゲストーゲン（例えば１７ＨＰＣ）が有意のステロイド節約効果を有する）
糖質コルチコイド節約に対する１７ＨＰＣの追加的治療の効果を同時に判定するため、ＰＢＭＣ（１０６セル／ｍｌ）が９６ウェル培養皿に蒔かれ、そして１７ＨＰＣ（１０−１１Ｍ−１０−５Ｍ）に１２時間刺激され、そしてその後デキサメタゾンの段階的希釈液（１０−１２−１０−６Ｍ）を含み又は含まずに１時間晒され、そしてその後ＰＨＡ（１５μｇ／ｍｌ）に２４時間、３７℃、５％ＣＯ２の下で晒された。ＩＬ−２レベルはＥＬＩＳＡを使用して定量化された。ＰＢＭＣにおける１７ＨＰＣ及び／又はデキサメタゾンによるＩＬ−２（ｐｇ／ｍＬ）のＰＨＡ刺激の抑制％が計算された。負の対照（即ち、いかなる薬剤治療も無い、細胞＋ＰＨＡ）からの値（ＩＬ−２＝７３４．７）はゼロ％抑制と設定され、そして他の全ての抑制％値が次の計算式から導出された（Ｎ＝１４）：
（１−（治療ＩＬ−２レベル／７１４．５））ｘ１００％
（注：７１４．５ｎｇ／ｍＬ（ＰＨＡ誘発ＩＬ−２）は１４人の被験者からの平均値である。）
【００７９】
１７ＨＰＣの追加は低投与量のコルチコステロイドの使用により同様の有効性を達成する（表２参照）。１０−６Ｍ高投与量デキサメタゾンによるＩＬ−２放出の抑制比率（Ｉｍａｘ）は健常喫煙者で７８％である。１７ＨＰＣの「追加的」治療はデキサメタゾンに対する必要投与量を有意に減少させる。表２は、低投与量１７ＨＰＣ（１０−１１Ｍ又は１０−１０Ｍ）の追加は、デキサメタゾンのみ（１０−６Ｍ）と比較した場合、最初のデキサメタゾン投与量の１／１０００−１／１００，０００を使用することで同様の抗炎症性効果（≧７８％のＩＬ−２抑制）を得られ、したがって有意のステロイド節約効果が得られることを示す。従って１７ＨＰＣの追加は、個人がコルチコステロイドに対する難治性応答又は抵抗性又は悪化又は耐性を発現するリスクを防止し、また安全プロフィールを改善する可能性がある。
【表２】
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【００８０】
（実施形態７．プロゲストーゲン（例えば１７ＨＰＣ）の追加はより良好な治療応答につながり、１７ＨＰＣとデキサメタゾンの組合せはシナジー効果をもたらす）
糖質コルチコイド節約に対する１７ＨＰＣの追加的治療の効果を同時に判定するため、ＰＢＭＣ（１０６セル／ｍｌ）が９６ウェル培養皿に蒔かれ、そして１７ＨＰＣ（１０−１１Ｍ−１０−５Ｍ）に１２時間刺激され、そしてその後デキサメタゾンの段階的希釈液（１０−１２−１０−６Ｍ）を含み又は含まずに１時間晒され、そしてその後ＰＨＡ（１５μｇ／ｍｌ）で２４時間、３７℃、５％ＣＯ２の下で晒された。ＩＬ−２レベルはＥＬＩＳＡを使用して定量化された。ＰＢＭＣにおける１７ＨＰＣ及び／又はデキサメタゾンによるＩＬ−２（ｐｇ／ｍＬ）のＰＨＡ刺激の抑制％が計算された。負の対照（即ち、いかなる薬剤治療も無い細胞＋ＰＨＡ）からの値（ＩＬ−２＝７３４．７）はゼロ％抑制と設定され、そして他の全ての抑制％値が次の計算式から導出された（Ｎ＝１４）：
（１−（治療ＩＬ−２レベル／７１４．５））ｘ１００％
【００８１】
図１１を参照して、デキサメタゾンの最大抗炎症性効果は１０−６ＭにおいてＰＨＡ誘発ＩＬ−２生成の７８％抑制である。１７ＨＰＣの追加治療は有意により良い応答性を生成し、ＰＨＡ誘発ＩＬ−２をほぼ１００％抑制する。図１１は従って１７ＨＰＣ追加によるより良い治療応答を示す。
さらに、１７ＨＰＣとデキサメタゾンの組合せは一貫してデキサメタゾンの抗炎症性効果を増大させ、そしてそれらを個別に使用した場合より良い結果をもたらす。
図１２は、組合せがシナジー効果をもたらし、デキサメタゾン有効性に２５−３７％の改善をもたらすことを示す。図１２は従って１７ＨＰＣとデキサメタゾンの組合せのシナジー効果を示す。
【００８２】
（実施形態８．他のプロゲストーゲン化合物（例えば、Ｐ４及びＭＰＡ）の追加は糖質コルチコイド感受性の亢進において同様の効果を示す）          
糖質コルチコイド節約に対する酢酸メドロキシプロゲステロン（ＭＰＡ）及び天然プロゲステロン（Ｐ４）の追加的治療の効果を同時に判定するため、ＰＢＭＣ（１０６セル／ｍｌ）が９６ウェル培養皿に蒔かれ、そしてＰ４又はＭＰＡ（１０−１０Ｍ、１０−８Ｍ、１０−５Ｍ）に１２時間刺激され、そしてその後デキサメタゾン（１０−１１−１０−８Ｍ）を含み又は含まずに１時間晒され、そしてその後ＰＨＡ（１５μｇ／ｍｌ）で２４時間、３７℃、５％ＣＯ２の下で晒された（Ｐ４又はＭＰＡ＋デキサメタゾンに対しｎ＝６）。ＩＬ−２レベルはＥＬＩＳＡを使用して定量化された。ＰＢＭＣにおけるＰ４又はＭＰＡ及び／又はデキサメタゾンによるＩＬ−２（ｐｇ／ｍＬ）のＰＨＡ刺激の抑制％が計算された。負の対照（即ち、いかなる薬剤治療も無い、細胞＋ＰＨＡ、ｎ＝２５）からの値（ＩＬ−２＝７６５）はゼロ％抑制と設定され、そして他の全ての抑制％値が次の計算式から導出された：
（１−（治療ＩＬ−２レベル／７６５））ｘ１００％
【００８３】
表３及び表４はＰ４とＭＰＡが共に糖質コルチコイド感受性の亢進において、ステロイド節約及び組合せのシナジー効果などの同様の効果を有することを示す。例えば、ＭＰＡ１０−８Ｍが追加された場合１０−８ＭデキサメタゾンによるＩＬ−２放出の抑制％は６７％から９６％に改善される（対応のあるｔ検定でＰ＝０．０３５）。Ｐ４又はＭＰＡの低投与量（１０−１０Ｍ）の追加は、デキサメタゾンのみ（１０−６Ｍ）と比較した場合、即ち最初のデキサメタゾン投与量の１／１００を使用することにより同様の抗炎症性効果をもたらし（≧８６％ＩＬ−２抑制）、有意のステロイド節約効果がある。    
【表３】
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【表４】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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