(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体のＦｃ領域であって、２８９位に置換を含み、該置換がシステイン、リシン、チロシン、ヒスチジン、セレノシステイン、およびセレノメチオニンから選択されるアミノ酸への置換を含み、異種物質が置換アミノ酸に結合している、前記Ｆｃ領域。
【請求項２】
２３９位、２８２位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される１つ以上の位置の置換をさらに含み、該置換がシステイン、リシン、チロシン、ヒスチジン、セレノシステイン、およびセレノメチオニンから選択されるアミノ酸への置換を含む、請求項１に記載のＦｃ領域。
【請求項３】
前記Ｆｃ領域は、
ａ）２８９および４４０、
ｂ）２８９および３５９、
ｃ）２８９および３３９、ならびに
ｄ）２８９および３３０、
の置換対のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載のＦｃ領域。
【請求項４】
前記Ｆｃ領域は、
ａ）２８９、３３９、および４４２、
ｂ）２８９、３３０、および３３９、ならびに
ｃ）２８９、３３０、および４４２
の置換群のうちの１つ以上を含む、請求項１に記載のＦｃ領域。
【請求項５】
前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプから選択される、請求項１に記載のＦｃ領域。
【請求項６】
前記置換は、システインを含む、請求項１に記載のＦｃ領域。
【請求項７】
前記システインは、チオール基を含む、請求項６に記載のＦｃ領域。
【請求項８】
前記チオール基は、化学的共役が可能である、請求項７に記載のＦｃ領域。
【請求項９】
前記Ｆｃ領域は、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、毒素、放射性核種、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ペプチド核酸、非天然アミノ酸、ペプチド、酵素、蛍光タグ、およびビオチンのうちの１つ以上と共役させられる、請求項８に記載のＦｃ領域。
【請求項１０】
請求項１に記載のＦｃ領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１１】
前記抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、または抗体様分子である、請求項１０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１２】
前記抗体は、前記抗体のＣＨ１ドメインの１３１位、１３２位、１３３位、１３４位、１３５位、１３６位、１３７位、１３８位、および１３９位から選択される１つ以上のアミノ酸の置換をさらに含む、請求項１０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項１３】
請求項１０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物。
【請求項１４】
癌、自己免疫、炎症性または感染性疾患または障害を検出するための薬剤の製造における請求項１０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの使用。
【請求項１５】
癌、自己免疫、炎症性または感染性疾患または障害を治療するための薬剤の製造における請求項１０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントの使用。
【請求項１６】
異種物質が置換アミノ酸に結合している抗体またはその抗原結合フラグメントを産生する方法であって、
（i）抗体またはその抗原結合フラグメントを発現させるために適切な条件下で、請求項１０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を含む宿主細胞をインキュベートするステップ、
（ii）前記抗体またはその抗原結合フラグメントを単離するステップ、および
（iii）異種物質を、前記抗体またはその抗原結合フラグメントのFc領域の置換アミノ酸と結合させるステップ
を含む、上記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．関連出願に対する相互参照
本出願は、２００９年６月２２日に出願された米国仮出願第６１／２１９，２２５号に対する優先権を主張するものであり、当該出願は、参照によりその全体が組み込まれる。
【０００２】
２．配列表の参照
本出願は、２０１０年６月１４日に作成された、「ＭＥＤ０４５５．ＰＣＴ＿ＳＴ２５」と題され、６９キロバイトの大きさを有するテキストファイルとして本出願と共に提出される配列表を、参照することにより組み込む。
【０００３】
３．技術分野
本開示は、共役反応のための基をもたらすＦｃ領域に関する。また、かかるＦｃ領域の設計、修飾、産生、および使用の方法も提供する。
【背景技術】
【０００４】
４．背景技術
４．１  癌および癌療法
毎年１２０万人を超える米国人が癌を発症する。癌は、米国における第２位の死亡原因であり、現在の傾向が続けば、癌は２０１０年までに第１位の死亡原因になると予想される。肺癌および前立腺癌が、米国における男性の最上位の癌死亡原因である。肺癌および乳癌が、米国における女性の最上位の癌死亡原因である。米国の２人に１人の男性が生涯のうちのある時点で癌だと診断される。米国の３人に１人の女性が生涯のうちのある時点で癌だと診断される。手術、化学療法、および放射線治療のような現在の治療選択肢は、しばしば、効果がないか、重大な副作用を示す。
【０００５】
抗転移剤の開発の１つの障害は、これらの薬物を設計し、評価するために使用されるアッセイ系にある。ほとんどの従来の癌療法は、急速に成長する細胞を標的とする。しかしながら、癌細胞は、必ずしも、より急速に成長するわけではなく、むしろ、正常細胞には許容されない条件下で生存し、成長する（Ｌａｗｒｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｅｅｇ，１９９６，Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．Ｕｒｏｌ．１４：１２４−１３０）。正常細胞の挙動と悪性細胞の挙動との間のこれらの基本的相違は、治療標的化のための機会を提供する。微小転移性腫瘍が既に全身に散在しているという実例は、外来および三次元微小環境において、可能性のある化学療法薬を評価する必要性を強調している。多くの標準的な抗癌剤アッセイは、典型的な細胞培養条件下（すなわち、単層成長）で、腫瘍細胞の成長または生存を測定する。しかしながら、二次元アッセイにおける細胞挙動は、しばしば、インビボでの腫瘍細胞挙動を確実に予測するものではない。
【０００６】
現在、癌療法は、患者における腫瘍細胞を根絶させるための手術、化学療法、ホルモン療法、および／または放射線治療を含み得る（例えば、Ｓｔｏｃｋｄａｌｅ，１９９８，“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐａｔｉｅｎｔ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ”，ｉｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ：    Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ．３，Ｒｕｂｅｎｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｆｅｄｅｒｍａｎ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １２，Ｓｅｃｔｉｏｎ  ＩＶを参照）。これらのアプローチのすべては、大きな欠点を患者に課す。手術は、例えば、患者の健康によっては禁忌となることがあり、あるいは患者に受け入れられないことがある。さらに、手術は、腫瘍組織を完全には除去できない可能性がある。放射線療法は、腫瘍組織が正常組織より高い感受性を示す場合に有効となるに過ぎず、放射線療法も、しばしば、重大な副作用を惹起し得る。ホルモン療法は、単剤として投与されることはほとんどなく、有効であり得るものの、他の治療によって癌細胞の大部分が除去された後の癌の再発を予防するか、または遅延させるために使用されることが多い。
【０００７】
化学療法に関しては、癌の治療に利用可能な種々の化学療法剤が存在する。癌化学療法剤の大多数は、ＤＮＡ合成を抑制することにより作用する（例えば、Ｇｉｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｅｉｇｈｔｈ  Ｅｄ．（Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９０）を参照）。したがって、化学療法剤は、本質的に非特異的である。加えて、ほとんどすべての化学療法剤は、毒性であり、化学療法は、重篤な嘔気、骨髄抑制、免疫抑制等を含む、顕著な、そしてしばしば危険な副作用を引き起こす（例えば、Ｓｔｏｃｋｄａｌｅ，１９９８，“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  Ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｐａｔｉｅｎｔ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ”ｉｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ．３，Ｒｕｂｅｎｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｆｅｄｅｒｍａｎ，ｅｄｓ．，ｃｈ．１２，ｓｅｃｔ．１０）。さらに、化学療法剤の組み合わせ投与の場合であっても、多くの腫瘍細胞が該化学療法剤に対して抵抗性であるか、または抵抗性を獲得する。
【０００８】
癌療法は、現在、生物学的療法または免疫療法も含み得る。生物学的療法／免疫療法は、数的に限定され、化学療法剤より特異的であるものの、多くはまだ、健常細胞および癌細胞の両方を標的とする。加えて、このような療法は、発疹または腫脹等の副作用、発熱、悪寒および疲労を含むインフルエンザ様症状、消化管異常、またはアレルギー反応を引き起こし得る。
【０００９】
４．２  癌治療のための抗体
抗体は、特定の抗原に結合する免疫タンパク質である。ヒトおよびマウスを含むほとんどの哺乳動物においては、抗体は、対になった重および軽ポリペプチド鎖から構成される。各鎖は、可変（Ｆｖ）領域および定常（Ｆｃ）領域と称される２つの異なる領域から構成される。軽鎖および重鎖Ｆｖ領域は、該分子の抗原結合決定基を含有し、標的抗原に結合することに関与する。Ｆｃ領域は、抗体（例えば、ＩｇＧ）のクラス（またはアイソタイプ）を定義し、いくつかの天然タンパク質との結合に関与し、重要な生化学的事象を惹起する。
【００１０】
抗体のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体および他のリガンドを含む多数のリガンドと相互作用して、エフェクター機能と称される一連の重要な機能的能力を付与する。ＩｇＧクラスに対する重要なＦｃ受容体ファミリーは、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）である。これらの受容体は、抗体と免疫系の細胞の腕の間と間の連絡を媒介する（Ｒａｇｈａｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  １２：１８１−２２０、Ｒａｖｅｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９：２７５−２９０）。ヒトにおいて、このタンパク質ファミリーは、アイソフォームＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＢ、およびＦｃγＲＩＣを含むＦｃγＲＩ（ＣＩＤ６４）；アイソフォームＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、およびＦｃγＲＩＩＣを含むＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；ならびにアイソフォームＦｃγＲＩＩＩＡおよびＦｃγＲＩＩＢを含むＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）を含む（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ８２：５７−６５）。これらの受容体は、典型的には、Ｆｃへの結合を媒介する細胞外ドメイン、膜伸長領域、および細胞内の一部のシグナル伝達事象を媒介し得る細胞内ドメインを有する。これらの異なるＦｃγＲサブタイプは、異なる細胞型上で発現される（Ｒａｖｅｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９：４５７−４９２に概説される）。例えば、ヒトにおいて、ＦｃγＲＩＩＩＢは、好中球上でのみ見出され、ＦｃγＲＩＩＩＡは、マクロファージ、単球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、およびＴ細胞の小集団上で見出される。
【００１１】
Ｆｃ／ＦｃγＲ複合体の形成は、エフェクター細胞を結合抗原の部位へ動員して、典型的には、該細胞内でのシグナル伝達事象、ならびに炎症メディエーターの放出、Ｂ細胞活性化、エンドサイトーシス、食作用、および細胞傷害性攻撃等の、その後の重要な免疫応答を引き起こす。細胞傷害性および食作用のエフェクター機能を媒介する能力が、抗体が標的細胞を破壊する可能性のある機構である。ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が、標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて、標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）と称される（Ｒａｇｈａｖａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ  １２：１８１−２２０、Ｇｈｅｔｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８：７３９−７６６、Ｒａｖｅｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９：２７５−２９０）。注目すべきことに、ＡＤＣＣを媒介するための一次細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩＡを発現するに過ぎないが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する（Ｒａｖｅｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１、上記を参照）。
【００１２】
別の重要なＦｃリガンドは、補体タンパク質Ｃ１ｑである。Ｃ１ｑへのＦｃ結合は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）と称される過程を媒介する（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２：７７−９４に概説される）。補体カスケードを活性化するためには２つのＩｇＧへの結合で十分であるが、Ｃ１ｑは、６つの抗体に結合することができる。Ｃ１ｑは、Ｃ１ｒおよびＣ１ｓセリンプロテアーゼとの複合体を形成して、補体経路のＣ１複合体を形成する。
【００１３】
標的に対する特異性、免疫エフェクター機構を媒介する能力、および血清中の長い半減期が含まれるが、これらに限定されるものではない、抗体のいくつかの重要な特徴により、抗体および関連免疫グロブリン分子が強力な治療薬となる。多数のモノクローナル抗体が現在開発中であり、あるいは癌を含む種々の症状の治療のために治療用に使用されている。これらの例には、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、乳癌の治療のために承認されているヒト化抗Ｈｅｒ２／ｎｅｕ抗体（例えば、米国特許第５，６７７，１７１号）、ＣＮＴＯ９５（Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）、ヒトインテグリンαｖ抗体（ＰＣＴ公開第０２／１２５０１号）、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（ＩＤＥＣ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）、非ホジキンリンパ腫の治療のために承認されているキメラ抗ＣＤ２０抗体（例えば、米国特許第５，７３６，１３７号）、およびＥｒｂｉｔｕｘ（登録商標）（ＩｍＣｌｏｎｅ）、キメラ抗ＥＧＦＲ抗体（例えば、米国特許第４，９４３，５３３号）が含まれる。
【００１４】
必要とされる成長経路の遮断による抗増殖、アポトーシスを招く細胞内シグナル伝達、受容体の下方調節および／または代謝回転の増強、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、ならびに適応免疫応答の促進を含む、抗体が腫瘍細胞を破壊するいくつかの考えられ得る機構が存在する（Ｃｒａｇｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１：５４１−５４７、Ｇｌｅｎｎｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  ２１：４０３−４１０）。しかしながら、広範な使用にもかかわらず、抗体は、臨床用途にまだ完全には最適化されておらず、多くは、準最適な抗癌効力を有するに過ぎない。したがって、標的癌細胞を破壊する抗体の能力を増強することが大いに必要とされている。
【００１５】
４．３  抗体共役体
細胞傷害性または細胞増殖抑制剤、すなわち、細胞治療において腫瘍細胞を殺すまたは抑制する薬物の局所送達のための、抗体共役体、すなわち、免疫共役体の使用は（Ｌａｍｂｅｒｔ，Ｊ．（２００５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ５：５４３−５４９、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３（９）：１１３７−１１４６、Ｐａｙｎｅ，Ｇ．（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ３：２０７−２１２、Ｓｙｒｉｇｏｓ  ａｎｄ  Ｅｐｅｎｅｔｏｓ（１９９９）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９：６０５−６１４、Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ−Ｄｕｖａｚ  ａｎｄ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（１９９７）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．２６：１５１−１７２、米国特許第４，９７５，２７８号）、腫瘍への薬物部分の標的化送達およびそこにおける細胞内蓄積を可能にすることができ、これらの共役されていない薬剤の全身投与は、排除されるべき腫瘍細胞と同様に、正常細胞に対しても許容されないレベルの毒性を引き起こし得る（Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ（１９８６）Ｌａｎｃｅｔ  ｐｐ．（Ｍａｒ．１５，１９８６）：６０３−０５、Ｔｈｏｒｐｅ，（１９８５）“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ，”ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａ．Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ（ｅｄ．ｓ），ｐｐ．４７５−５０６）。それにより、最小の毒性と共に最大の効力が追求される。抗体コンジュゲートを設計し、精密化するための努力は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の選択性、ならびに薬物連結および薬物放出特性に焦点が当てられている（Ｌａｍｂｅｒｔ，Ｊ．（２００５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ５：５４３−５４９）。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体は共に、これらの戦略において有用であると報告されている（Ｒｏｗｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ（１９８６）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２１：１８３−８７）。これらの方法において使用される薬物には、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキセート、およびビンデシンが含まれる（Ｒｏｗｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ（１９８６））。抗体−毒素共役体において使用される毒素には、ジフテリア毒素等の細菌毒素、リシンおよびゲロニン等の植物毒素、ゲルダナマシン等の小分子毒素（Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｊ．ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２（１９）：１５７３−１５８１、Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １０：１０２５−１０２８、Ｍａｎｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１３：７８６−７９１）、メイタンシノイド（欧州特許第１３９１２１３号、Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３）、ならびにカリケアマイシン（Ｌｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  ���ｅｓ．５８：２９２８、Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２）が含まれる。該毒素は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合、またはトポイソメラーゼ抑制を含む機構により、それらの細胞傷害性および細胞増殖抑制効果をもたらし得る。いくつかの細胞傷害性薬物は、大きな抗体またはタンパク質受容体リガンドに共役されている場合には、不活性であるか、またはそれほど活性でない傾向にある。
【００１６】
いくつかの抗体共役体は、ＦＤＡにより承認されているか、または臨床治験中である。例えば、ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標）（イブリツモマブ・チウキセタン、Ｂｉｏｇｅｎ／Ｉｄｅｃ）は、正常および悪性Ｂリンパ球の表面上に見出されるＣＤ２０抗原に対するマウスＩｇＧ１カッパモノクローナル抗体と、チオ尿素リンカー−キレーターに結合した１１１Ｉｎまたは９０Ｙ放射性同位体とから構成される（Ｗｉｓｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２７（７）：７６６−７７、Ｗｉｓｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｂｌｏｏｄ  ９９（１２）：４３３６−４２、Ｗｉｔｚｉｇ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０（１０）：２４５３−６３、Ｗｉｔｚｉｇ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０（１５）：３２６２−６９）。ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標）は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に対する活性を有するが、投与は、ほとんどの患者において重篤かつ持続的な血球減少症を引き起こす。また、カリケアマイシンに連結されたヒトＣＤ３３抗体から構成される抗体−薬物共役体であるＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標）（ゲンツズマブ・オゾガミシン、Ｗｙｅｔｈ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、注射による急性骨髄球様白血病の治療のために２０００年に承認された（Ｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｕｔｕｒｅ（２０００）２５（７）：６８６、米国特許第４，９７０，１９８号、同第５，０７９，２３３号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６０６，０４０号、同第５，６９３，７６２号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７３，００１号）。
【００１７】
アウリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）ペプチド、アウリスタチンＥ（ＡＥ）、およびモノメチルアウリスタチン（ＭＭＡＥ）、ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）の合成類似体（国際公開第ＷＯ０２／０８８１７２号）は、（ｉ）キメラモノクローナル抗体ｃＢＲ９６（癌腫上のルイス（Ｌｅｗｉｓ）Ｙに特異的）、（ｉｉ）血液悪性腫瘍上のＣＤ３０に特異的であるｃＡＣ１０（Ｋｌｕｓｓｍａｎ，ｅｔ  ａｌ（２００４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １５（４）：７６５−７７３、Ｄｏｒｏｎｉｎａ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２１（７）：７７８−７８４、Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｂｌｏｏｄ  １０２（４）：１４５８−１４６５、米国特許第２００４／００１８１９４号、（ｉｉｉ）抗ＣＤ２０抗体、例えば、ＣＤ２０を発現する癌および免疫障害の治療のためのＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（国際公開第ＷＯ０４／０３２８２８号）、（ｉｖ）結腸直腸癌の治療のための抗ＥｐｈＢ２Ｒ抗体２Ｈ９および抗ＩＬ−８（Ｍａｏ  ｅｔ  ａｌ（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６４（３）：７８１−７８８）、（ｖ）Ｅ−セレクチン抗体（Ｂｈａｓｋａｒ  ｅｔ  ａｌ（２００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６３：６３８７−６３９４、ならびに（ｖｉ）他の抗ＣＤ３０抗体（国際公開第ＷＯ０３／０４３５８３号）に共役されている。アウリスタチンＥの変異体は、米国特許第５，７６７，２３７号および米国特許第６，１２４，４３１号に開示されている。モノクローナル抗体に共役されたモノメチルアウリスタチンＥは、２００４年３月２８日に提示されたＳｅｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｕｍｂｅｒ  ６２３に開示されている。アウリスタチン類似体ＭＭＡＥおよびＭＭＡＦは種々の抗体に共役されている（国際公開第ＷＯ２００５／０８１７１１号）。
【００１８】
薬物部分を抗体に結合、すなわち、共有結合により連結させるための従来の手段は、薬物部分が抗体上の多くの部位で結合する、分子の不均一混合物をもたらし得る。例えば、細胞傷害性薬物は、典型的には、抗体のしばしば多数のリシンまたはシステイン残基を介して抗体に共役されて、不均一な抗体−薬物共役混合物を生じる。反応条件に応じて、この不均一混合物は、典型的には、０〜約８またはそれ以上の結合薬物部分を伴う抗体の分布を含有する。加えて、薬物部分と抗体との特定の整数比を伴う共役の各亜群内に、薬物部分が抗体上の種々の部位で結合する潜在的に不均一な混合物がある。
【００１９】
プロトン化されたおよびｐＨ７付近でそれほど求核性ではないほとんどのアミンとは異なり、システインチオールは、中性ｐＨで反応性である。チオール（Ｒ−ＳＨ、スルフヒドリル）基は、比較的反応性であるため、システイン残基を有するタンパク質は、しばしば、ジスルフィド結合オリゴマーとしてそれらの酸化形態で存在するか、または内部架橋ジスルフィド基を有する。細胞外タンパク質は、一般に、遊離チオールを有さない（Ｇａｒｍａｎ，１９９７，Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ：  Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，ａｔ  ｐａｇｅ  ５５）。タンパク質中の遊離チオールの量は、標準的なエルマンアッセイにより評価することができる。ＩｇＭは、ジスルフィド結合五量体の一例であり、ＩｇＧは、サブユニットを互いに結合させる内部ジスルフィド架橋を有するタンパク質の一例である。このようなタンパク質において、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）またはセレノール（Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３０４：１４７−１５６）、およびトリス−（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）等の試薬でのジスルフィド結合の還元が、反応性チオールを生成させるのに必要であり得る。
【００２０】
抗体システインチオール基は、一般に、求電子共役試薬に対して、抗体アミンまたはヒドロキシル基よりもさらに反応性、すなわち、さらに求核性である。システイン残基は、リガンドとの共有結合を形成させるため、または新たな分子内ジスルフィド結合を形成させるために、遺伝子操作技術によりタンパク質内に導入されている（Ｂｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１３：９６４４−９６５０、Ｂｅｒｎｈａｒｄ  ｅｔ  ａｌ（１９９４）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．５：１２６−１３２、Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ（１９９４）Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １：２４７−２５５、Ｔｕ  ｅｔ  ａｌ（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９６：４８６２−４８６７、Ｋａｎｎｏ  ｅｔ  ａｌ（２０００）Ｊ．ｏｆ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，７６：２０７−２１４、Ｃｈｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９８（１５）：８４８０−８４８４、米国特許第６，２４８，５６４号）。しかしながら、システインアミノ酸へのタンパク質の種々のアミノ酸残基の変異によるシステインチオール基の設計は、不対（遊離Ｃｙｓ）残基の場合または反応もしくは酸化を比較的受けやすい場合に、特に、問題となる可能性がある。タンパク質の濃縮溶液において、大腸菌のペリプラズム、培養上清、または部分的もしくは完全に精製されたタンパク質のいずれの場合でも、該タンパク質の表面上の不対Ｃｙｓ残基は、対形成し、酸化されて、分子間ジスルフィド、ひいてはタンパク質二量体または多量体を形成し得る。ジスルフィド二量体の形成は、新たなＣｙｓを、薬物、リガンド、または他の標識への共役に対して無反応性にする。さらに、タンパク質が、新たに操作されたＣｙｓと既存のＣｙｓ残基との間で分子内ジスルフィド結合を酸化的に形成すると、Ｃｙｓ基は共に、活性部位への関与および相互作用には利用できない。また、タンパク質は、ミスフォールディングまたは三次構造の喪失により、不活性または非特異的にされ得る（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ（２００２）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３１１：１−９）。
【００２１】
システインは、共役のために使用され得る唯一のアミノ酸ではなく、リシン、チロシン、ヒスチジン、セレノシステイン、セレノメチオニン等の他のアミノ酸、および他のアミノ酸も可能である。
【００２２】
共役部位を抗体内に操作することは、既に試みられている。米国特許第５，２１９，９１６号は、Ｓｅｒ１５６またはＴｈｒ１７３等の「表面ポケット」残基の修飾を記載している（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，４ｔｈ  ｅｄ．，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，１９８７による）。関連研究において、研究者らは、「表面ポケット」上の残基のみが、共役部位を操作する試みにおけるシステインの置換を支持することができることを確認した（Ｌｙｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．３：８  ｐｇ  ７０３−７０８）。
【００２３】
したがって、種々の薬剤への共役が可能なチオール基を提供する操作された抗体を含む、種々の薬剤への共役が可能な反応基を提供する安定した操作された抗体を開発する必要がある。
【００２４】
本明細書の参照の引用または考察は、それが本発明の先行技術であると自認するものと解釈してはならない。
【発明の概要】
【００２５】
５．発明の概要
本開示は、種々の薬剤への共役が可能な、非天然に生じる（すなわち、タンパク質中のその位置では通常存在しないもの）アミノ酸残基（天然および／または合成であり得る）を含有するＦｃ領域を提供する。このような置換の１例は、システインの使用であるが、下述されるように、リシン、チロシン、ヒスチジン、セレノシステイン、セレノメチオニン、および他のアミノ酸等の他の置換が可能である。
【００２６】
本開示のＦｃ領域は、１つ以上の非天然に生じるアミノ酸で置換された抗体の重鎖のＦｃ領域からの１つ以上のアミノ酸を含み、それによって、共役が可能な基を提供する。本開示の１つの態様において、置換は、システインを用いたものであり、それによって、置換されたシステインアミノ酸残基は、共役のためにチオール基を提供する。
【００２７】
１つの実施形態において、本開示のＦｃ領域は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれ以上の置換アミノ酸を含む。他の実施形態において、本開示のＦｃ領域は、親もしくは天然抗体の抗体重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれ以上のアミノ酸が、または代替的に、非天然に生じるアミノ酸で置換されるＦｃ領域を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔら（１９９１，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＶＡ、以下「Ｋａｂａｔ」と称する）に記載されるＥＵインデックスのものである。「Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックス」とは、上のＫａｂａｔらに記載されるヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基の付番を指す。
【００２８】
１つの実施形態において、本開示のＦｃ領域は、抗体を含む。
【００２９】
１つの実施形態において、本開示は、配列番号１〜２４のアミノ酸配列を含むＦｃ領域を提供する。別の実施形態において、本開示は、任意の組み合わせで、配列番号１〜２４によって例示される置換のいずれかを含むＦｃ領域を提供する。
【００３０】
１つの実施形態において、本開示は、配列番号１〜２４のアミノ酸配列を含む抗体を提供する。別の実施形態において、本開示は、任意の組み合わせで、配列番号１〜２４によって例示される置換のいずれかを含むＦｃ領域を提供する。
【００３１】
本開示の別の態様は、Ｆｃ領域の生成のための核酸、ベクター、および宿主細胞を提供する。
【００３２】
本開示の別の態様は、Ｆｃ領域共役体、および１つ以上のさらなる物質に結合した本開示のＦｃ領域を含むかかる共役体を作製する方法を提供する。１つの実施形態において、該物質は、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、ペプチド、ペプチド模倣剤、タンパク質スカフォールド、酵素、毒素、放射性核種、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ペプチド核酸、蛍光タグ、またはビオチンから選択される、薬物である。
【００３３】
本開示の別の態様は、細胞表面受容体に結合すると、内在化が可能である本開示のＦｃ領域を含む抗体を提供する。かかる態様において、本開示の抗体は、カーゴ（ｃａｒｇｏ）分子および／または薬剤の細胞内送達に有用である。
【００３４】
本開示の別の態様は、本開示の抗体共役体を用いて、癌、自己免疫、炎症性、または感染性疾患を治療する、検出する、および診断する方法を提供する。
【００３５】
本開示の別の態様は、本開示のＦｃ領域を含む組成物を提供する。
【００３６】
６．図面の簡単な説明
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】Ｆｃ領域表面システイン操作。このパネルは、図式的に表示され、棒状に示される、表面部位特異的変異を有するＩｇＧ１  Ｆｃドメインのリボン表示である。このリボン表示において、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインは、図式的に表示される。糖鎖は、棒表示として示される。２０個のシステイン操作変異ＮＤ２からＮＤ２１は、棒表示として示され、天然抗体を提示するＮＤ１と共に、括弧内にそれぞれのクローン名を用いて図式的に表示される。それらの付番は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスに基づく。
【図２】還元条件下のプロテインＡで精製したＦｃシステイン変異のＳＤＳ−ＰＡＧＥ。すべての変異および野生型タンパク質を、プロテインＡによって精製し、ＰＢＳ  １Ｘ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．２で透析し、還元条件および非還元条件下で１０％均一なＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて分析した。ＳｅｅＢｌｕｅ  Ｐｌｕｓ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）分子量標準（図式的に示されるようにｋＤａで）を使用した。３μｇの各サンプルを充填し、ゲルをＳｉｍｐｌｙＢｌｕｅ（商標）ＳａｆｅＳｔａｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて染色した。サンプルは、図に図式的に表示され、図１に提示されるクローン名に対応する。このＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析は、組換えタンパク質がそれらの予想される分子量を保持することを確認する。
【図３ａ】抗体変異のサイズ排除クロマトグラフィー  すべての変異タンパク質は、プロテインＡによって精製され、ＰＢＳ  １Ｘ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．２で透析し、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにおいて分析した。サンプルの同一性は、図１に提示されるクローン名に対応する。右から左の標準タンパク質（点線で示したクロマトグラム）のピーク位置は、チログロブリン６７０ＫＤａ；２、ウシガンマグロブリン１５８ＫＤａ；３、ニワトリオボアルブミン４４ＫＤａ；４、ウマミオグロビン１７ＫＤａ；５、ビタミンＢ１２  １３．５ＫＤａである。変異抗体保持時間は、約８．６分であり、これは、約１５０ＫＤａの分子量に相当する。また、各変異に対する単量体含有率も示される。この分析は、それらの期待される分子量を保持することに加えて組換えタンパク質が、導入されたシステインにより、ジスルフィド結合ホモ二量体を形成しないことを確認する。
【図３ｂ】同上。
【図３ｃ】同上。
【図３ｄ】同上。
【図４−１】重鎖定常ドメイン配列。図４は、ＮＤ１（天然）の重鎖定常ドメイン配列を示す。
【図４−２ａ】重鎖定常ドメイン配列。図４ａは、変異体ＮＤ２からＮＤ６の配列を示す。
【図４−２ｂ】重鎖定常ドメイン配列。図４ｂは、変異体ＮＤ７からＮＤ１１の配列を示す。
【図４−２ｃ】重鎖定常ドメイン配列。図４ｃは、変異体ＮＤ１２からＮＤ１６の配列を示す。
【図４−２ｄ】重鎖定常ドメイン配列。図４ｄは、変異体ＮＤ１７からＮＤ２１の配列を示す。ＮＤ２からＮＤ２１で導入した点変異を、下線および太字により表す。
【図５】Ｆｃドメイン変異体の発現。Ｆｃシステイン変異体の組換え発現を示す。各変異体は、天然ＮＤ１に匹敵する発現レベルがあった。また、変異体ＮＤ５を除くすべての変異体は、９３％で、または９３％を超えるモノマーで発現した（ＳＥＣ−ＨＰＬＣによって判定される）。
【図６】ＦｃＲｎへのＦｃドメイン変異体の結合。システインＦｃ操作された変異体のＦｃＲｎ結合は、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によって判定された。７０％単量体である変異体ＮＤ５（Ｄ３１２Ｃ）、および非グリコシル化変異体ＮＤ２０（Ｎ２９７Ｃ）を除く、すべての変異体は、天然抗体ＮＤ１と類似のＦｃＲｎへの結合シグナルを保持する。
【図７】示差走査熱量測定（ＤＳＣ）分析。ＮＤ１−２１のＤＳＣ分析を、ｐＨ６．０の２５ｍＭ  Ｈｉｓ緩衝液を用いて、１５℃から１１０℃の範囲で、１℃／分で行った。変異体ＮＤ５（Ｄ３１２Ｃ）、ＮＤ１１（Ｅ３５６Ｃ）、およびＮＤ２０（Ｎ２９７Ｃ）を除く、変異体は天然ＮＤ１に対して類似のＤＳＣプロファイルを有する。
【図８】共役プロトコル。抗体Ｆｃシステインへのビオチン−ＰＥＧ２−マレイミドの共役に対する種々のプロトコルを、１ｍｇスケールでＤ１〜２１に対して示す。別途特定されない限り、モル抗体に関してモル過剰を示す。
【図９】共役プロトコルＤからのサンプルにおけるタンパク質ゲルを還元するためのウエスタンブロット。変異体および天然タンパク質を、プロテインＡによって精製し、ＰＢＳ  １Ｘ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．２で透析した。１〜２１の数字は、それぞれ、ＮＤ１〜２１に相当する。Ｍは、分子量マーカーである。サンプルは、まず、ＮｕＰａｇｅ  １０％ゲル上でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分解された。移動させたタンパク質を有するブロットを、ＴＢＳＴ  ２％ＢＳＡでブロッキングし、アビジン−ＨＲＰでインキュベートし、ＨＲＰに対する発色性基質で可視化した。ＨＣは、抗体重鎖に対応するタンパク質バンドであり、ＬＣは、抗体軽鎖に相当するタンパク質バンドである。いくつかの変異体（特に、ＮＤ２、３、４、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、１９）の重鎖において顕著な共役があるが、ＮＤ１（天然）のＨＣにおいて検出可能な共役はない。ＮＤ１を含む、すべての変異体のＬＣにおいていくつかの共役がある。
【図１０】共役プロトコルＤからのサンプルにおいてクーマシー染色した非還元タンパク質ゲル。変異体および天然タンパク質を、プロテインＡによって精製し、ＰＢＳ  １Ｘ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．２で透析し、非還元条件下で、１０％均一なＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて分析した。ＳｅｅＢｌｕｅ  Ｐｌｕｓ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）分子量標準を使用した。３μｇの各サンプルを充填し、ゲルをＳｉｍｐｌｙＢｌｕｅ（商標）ＳａｆｅＳｔａｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて染色した。１〜２１の数字は、それぞれ、ＮＤ１〜２１に相当する。Ｍは、分子量マーカーである。ほとんどの共役させた変異体は、天然ＮＤ１と類似する電気泳動移動度パターンを示す。いくつかの共役させた変異体は、いくつかの明らかな二量体（ＮＤ３、５、１３、１５、１７、１８、１９）を含有し、ある変異体は、いくつかの明らかな断片化（ＮＤ２０）を示す。
【図１１】プロトコルＤにより共役された、ＮＤ変異体の無傷集団およびペプチドマッピングデータの要約。変異体ＮＤ４、７、１０、１２、１８は、操作されたシステインで、ほぼ９０％または９０％を超え、オリゴマー化がない、またはほとんどないことを示す。ＤＡＲは、共役されたサンプルの薬物対抗体のモル比である。
【図１２】二重変異体。１１個の二重変異体を、選択単一変異体に基づいて設計した。図の左上のグリッドは、二重変異体を生成するために使用される単一変異体の組み合わせを示す。
【図１３】二重変異体の発現。１１個の二重ＮＤ変異体の１セットは、選択単一変異体、ＮＤ４、ＮＤ７、ＮＤ１０、ＮＤ１２、ＮＤ１８に基づいて作製され、別の二重変異体は、ＮＤ１０およびＮＤ１９に基づく。すべての二重変異体は、一過性トランスフェクションによって十分に発現する。これらの二重変異体のうちの４個ＤＭ８、ＤＭ９、ＤＭ１０、ＤＭ１１のみが、発現し、（紫外検出によるサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＵＶ）によって判定される）９３％を超えるモノマーレベルで精製される。
【図１４】非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおける二重ＮＤ変異体の比較。「Ｃ」は、対照として使用された天然ＮＤ１である。「Ｍ」は、分子量標準である。１〜１０の数字は、ＤＭ１〜１０に相当する。ＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果は、ＳＥＣ−ＵＶの結果と一致する。変異体ＤＭ４は、最小量のモノマーを有し、ＤＭ８は、最大パーセントのモノマーを含有する。
【図１５】二重変異体のＤＳＣ分析。４個の大部分が単量体である（９３％超）二重変異体は、天然および単一変異体ＮＤ１０と非常に類似するＤＳＣプロファイルを示す。
【図１６】二重変異体の共役。二重変異体ＤＭ８（ＮＤ４およびＮＤ１０）とＤＭ１１（ＮＤ１０およびＮＤ１９）の共役は、プロトコルＤ（図８を参照）で、１０：１のビオチン−マレイミド：抗体の比および２０：１のビオチン−マレイミド：抗体の比を使用する。ウエスタンブロット法およびクーマシー染色に供された還元ゲルを示す。
【図１７】図１６に記載されるように共役された、二重変異体の無傷集団およびペプチドマッピングデータ。ＤＭ８（ＮＤ４およびＮＤ１０）ならびにＤＭ１１（ＮＤ１０およびＮＤ１９）は、１０：１のビオチン−マレイミド：抗体の比あるいは２０：１のビオチン−マレイミド：抗体の比のいずれかで操作システインで、ほぼ９０％または９０％を超える共役を有する。ＤＡＲは、共役されたサンプルの薬物対抗体のモル比である。
【図１８】単一および二重ＮＤ変異体の共役。ＴＣＥＰ処理後のより広範な一晩透析の使用を除いて、共役プロトコルＤ（図８）を使用し、室温で１時間共役した。薬物：ｍＡｂのモル比は、単一変異体に対して１０：１、二重変異体に対して２０：１であった。ウエスタンブロット法およびクーマシー染色に供された還元ゲル、ならびにクーマシーで染色された非還元ゲルを示す。
【図１９】単一および二重変異体のペプチドマッピング。前の図１８に示される共役されたサンプルをペプチドマッピング分析により分析した。本表は、操作されたシステインでの共役の効率、ならびに全体の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を要約している。ＤＭ９”は、同じ変異を用いたＤＭ９の第２の調製物である。
【図２０】スケールアップ共役実験。（ａ）２．５、（ｂ）５、（ｃ）１０、（ｄ）２０、および（ｅ）４０ｍｇ／ｍｌの抗体で、共役を行った。図１８に記載される共役プロトコルを使用した。薬物：ｍａｂのモル比は、１０：１であった。タンパク質ゲルにおいて、Ｃは、天然ＮＤ１である。ウエスタンブロット法およびクーマシー染色に供した還元ゲル、ならびにクーマシーで染色した非還元ゲルを示す。
【図２１】スケールアップ共役のペプチドマッピング。前の図２０からの共役されたサンプルをペプチドマッピング分析により分析した。共役効率の結果を示す。
【図２２】三重変異体。これは、単一変異体に基づく４つの三重変異体の変異に対して選択された残基を示す。図の左上のグリッドは、三重変異体を生成するために使用された変異体の組み合わせを示す。
【図２３】４つの三重変異体の発現およびモノマーレベル。タンパク質は、０．５Ｌの培養液から精製した。モノマーレベルを、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにおいて判定した。比較のための天然抗体ＮＤ１は、９９％単量体である。
【図２４】ビオチン−マレイミドによる三重変異体の共役。プロトコルＤは、室温で、１時間、１：２０の抗体：薬物のモル比での共役を伴い使用した。Ｔ１の２つの異なるタンパク質製剤を共役させた。共役特異性および効率のための対照として、天然ＮＤ１および二重変異体ＤＭ１１を含んだ。ウエスタンブロット法およびクーマシー染色に供した還元ゲル、ならびにクーマシーで染色した非還元ゲルを示す。
【図２５】三重変異体のペプチドマッピング。前の図２４からの共役された三重変異体サンプルを、ペプチドマッピング分析により分析した。操作システインでの共役の効率を提示する。
【図２６】三重変異体のＤＳＣ分析。Ｔ１は、第１の遷移、ＣＨ２に対して数度低い溶解温度を示す。Ｔ２は、８５℃で、沈殿物の一部を示す。Ｔ３は、高温で沈殿する。Ｔ４は、天然型とほぼ同一である。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
７．詳細な説明
本開示は、抗体のＣＨ２またはＣＨ３ドメインの表面上に存在する残基（図１を参照）が、例えば、システインで天然に生じるアミノ酸の置換に適しており、種々の薬剤への共役が可能な部位を操作するのに有用であるという所見に基づく。
【００３９】
天然および／または非天然アミノ酸を含むシステイン以外の他のアミノ酸を、置換に用いて、種々の薬剤の共役を可能にさせることができる。かかる他のアミノ酸には、リシン（Ｂｅｎｈａｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．５５，３２１−３２６に記載）、チロシン（Ｂｙｅｒｓ  ＆  Ｂａｌｄｗｉｎ，（１９８８）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．６５，３２９−３３５に記載）、ヒスチジン（Ｗａｉｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：８９７−９０１に記載）、セレノシステイン、セレノメチオニン、および／または非天然アミノ酸が含まれる。したがって、１つ以上のシステイン置換が、本明細書に記載される場合、当業者は、任意に、システインの代わりに、これらの天然および／または非天然アミノ酸のうちの１つ以上を使用し得る。当業者はまた、システインおよびリシンによる置換等の置換におけるアミノ酸の任意の組み合わせを使用して、一部の位置でシステインおよび他の位置でリシンを用いて、変異抗体を生成し得る。
【００４０】
本開示のＦｃ領域は、親、天然の、または野生型抗体の抗体重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個またはそれ以上のアミノ酸が、別のアミノ酸（天然および合成アミノ酸を含む）で置換される操作された抗体を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔら（１９９１，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＶＡ、以下、「Ｋａｂａｔ」と称する）に記載されるＥＵインデックスのものである。例えば、システイン残基の単一置換は、ＩｇＧ分子のホモ二量体の性質により、得られた抗体における２つの相当する残基の提示を通常もたらすことに注目すべきである。本開示の得られた操作された抗体は、薬物または化合物への共役のための少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０個またはそれ以上の反応基を提示し得る。一実施形態において、１つ以上の置換は、システイン残基を用いるものであり、得られた操作された抗体は、薬物または化合物への共役のための少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０個またはそれ以上のチオール基を提示し得る。
【００４１】
いくつかの実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される位置において、少なくとも１つの置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔら（上記を参照）に記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも２つの置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも３つの置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも４つの置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも５つの置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも６つの置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも７つの置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも８つの置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも９つの置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも１０の置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも１１の置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも１２の置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも１３の置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも１４の置換を含む。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも１５の置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも１６の置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも１７の置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも１８の置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも１９の置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位のそれぞれで置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。
【００４２】
１つの実施形態において、操作された抗体は、
ａ）２８９および４４０、
ｂ）３３０および４４０、
ｃ）３３９および４４０、
ｄ）３５９および４４０、
ｅ）２８９および３５９、
ｆ）３３０および３５９、
ｇ）３３９および３５９、
ｈ）２８９および３３９、
ｉ）３３０および３３９、
ｊ）２８９および３３０、ならびに
ｋ）３３９および４４２
の置換対を含む。
【００４３】
別の実施形態において、操作された抗体は、
ａ）２８９、３３９、および４４２、
ｂ）２８９、３３０、および３３９、
ｃ）３３０、３３９、および４４２、ならびに
ｄ）２８９、３３０、および４４２
の置換群うちの１つ以上を含む。
【００４４】
上記の置換は、次のように、配列番号１の位置に対応し、本開示を通してＫａｂａｔを参照した数字は、本開示の組成物を説明するために、配列番号１の置換の位置で交換可能に使用され得ることを意図する。
【表１】
0005918129.tif 000002
【００４５】
他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖のＳｅｒ２３９、Ｖａｌ２８２、Ｔｈｒ２８９、Ａｓｎ２９７、Ａｓｐ３１２、Ｓｅｒ３２４、Ａｌａ３３０、Ｔｈｒ３３５、Ｓｅｒ３３７、Ａｌａ３３９、Ｇｌｕ３５６、Ｔｈｒ３５９、Ａｓｎ３６１、Ｓｅｒ３８３、Ａｓｎ３８４、Ｌｅｕ３９８、Ｓｅｒ４００、Ｓｅｒ４４０、Ｖａｌ４２２、およびＳｅｒ４４２から選択される少なくとも１つの天然に生じるアミノ酸の置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。
【００４６】
いくつかの実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖のＳｅｒ２３９、Ｖａｌ２８２、Ｔｈｒ２８９、Ａｓｎ２９７、Ａｓｐ３１２、Ｓｅｒ３２４、Ａｌａ３３０、Ｔｈｒ３３５、Ｓｅｒ３３７、Ａｌａ３３９、Ｇｌｕ３５６、Ｔｈｒ３５９、Ａｓｎ３６１、Ｓｅｒ３８３、Ａｓｎ３８４、Ｌｅｕ３９８、Ｓｅｒ４００、Ｓｅｒ４４０、Ｖａｌ４２２、およびＳｅｒ４４２から選択される位置での置換を含まず、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。
【００４７】
他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、２９７位で天然に生じるアミノ酸の置換を含み、該置換は、２９７位でのグリコシル化を減少させるおよび／または除去する。特定の実施形態において、本開示の抗体は、抗体の重鎖の２９７位でのアスパラギンのシステインによる置換を含む。なお他の実施形態において、本開示は、抗体の重鎖の２９７位でのグリコシル化を欠く抗体を提供する。これらのそれぞれにおいて、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。
【００４８】
１つの実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体の重鎖の２３９、２８２、２８９、２９７、３１２、３２４、３３０、３３５、３３７、３３９、３５６、３５９、３６１、３８３、３８４、３９８、４００、４４０、４２２、および４４２から選択される位置で置換された天然に生じるアミノ酸を有する（例えば、システインを有する）ＩｇＧ１を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４形態に由来する。なお他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２  ＩｇＭ、ＩｇＤ、またはＩｇＥ等の非ＩｇＧ形態に由来する。他の実施形態において、本開示の抗体は、システインおよび／または他のアミノ酸に対する天然に生じる残基の置換によって、ＩｇＧ１分子またはその同等物のＣＨ２および／またはＣＨ３領域の表面残基を操作することを含む。
【００４９】
当業者は、置換に使用する適切なアミノ酸を容易に選択することができる。タンパク質構造への変化を最小限に抑えるために、非天然に生じる残基と同様の残基を選択することが望ましい場合がある。例えば、システイン置換については、システインを天然に生じるアラニンまたはセリンの代わりにすることが望ましい場合がある。
【００５０】
ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４における置換の場合は、当業者は、所望のアイソフォームのどの残基が、抗体の重鎖の２３９、２８２、２８９、２９７、３１２、３２４、３３０、３３５、３３７、３３９、３５６、３５９、３６１、３８３、３８４、３９８、４００、４４０、４２２、および４４２の上記の位置に対応するかを決定するために、ＩｇＧ１との配列アライメントを使用することができ、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４の重鎖定常ドメイン（ＨＣ  Ｆｃ）はそれぞれ、配列番号２２、２３、および２４として本明細書に開示されている。
【００５１】
他の実施形態において、本開示は、操作残基を含む単離されたＦｃ領域の発現を含む。かかる単離されたＦｃ領域は、提示目的のスカフォールドとして、または二量化ドメインを単独で、または別の薬剤と組み合わせた場合、有用であり得る。
【００５２】
他の実施形態において、本開示は、別のタンパク質に融合される、２３９、２８２、２８９、２９７、３１２、３２４、３３０、３３５、３３７、３３９、３５６、３５９、３６１、３８３、３８４、３９８、４００、４４０、４２２、および４４２から選択される位置で少なくとも１つ以上の置換を含むＦｃ領域を含む融合タンパク質を提供し、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。
【００５３】
他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体のＣＨ１ドメインの１３１〜１３９領域内に少なくとも１つ以上の非天然に生じるシステインアミノ酸をさらに含み得る。いくつかの実施形態において、本開示の操作された抗体は、抗体のＣＨ１ドメインの１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、および１３９から選択される位置で少なくとも１つの置換を含み、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。さらなる実施形態は、２００９年１月１６日に出願されたＰＣＴ公開第ＰＣＴ／ＵＳ０９／３１２９４号、および２００８年１月１８日に出願された米国仮出願第６１／０２２，０７３号に相当する「部位特異的共役のためのシステイン操作された抗体」に見出され得、当該出願の各々は、すべての目的のために参照によりその全体が組み込まれる。
【００５４】
本明細書で使用する場合、免疫グロブリンとしても公知である「抗体（単数および複数）」という用語は、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの異なるエピトープ結合フラグメントから形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、キメラ抗体、１本鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、１本鎖抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ′）２フラグメント、所望の生物学的活性を示す抗体フラグメント（例えば、抗原結合部分）、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本発明の抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）、細胞内抗体、ならびに上のいずれのエピトープ結合フラグメントを含むＦｃを含む以下の抗体のいずれかを包含する。特に、抗体は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的活性を有するフラグメント、すなわち、少なくとも１つの抗原結合部位を含有する分子を含む。免疫グロブリン分子は、いかなるアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、サブアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）、またはアロタイプ（例えば、Ｇｍ、例えば、Ｇ１ｍ（ｆ、ｚ、ａ、もしくはｘ）、Ｇ２ｍ（ｎ）、Ｇ３ｍ（ｇ、ｂ、もしくはｃ）、Ａｍ、Ｅｍ、およびＫｍ（１、２、もしくは３））からのものであり得る。抗体は、ヒト、サル、ブタ、ウマ、ウサギ、イヌ、ネコ、マウス等を含むが、それらに限定されないいずれの哺乳動物、またはトリ（例えば、ニワトリ）等の他の動物に由来してもよい。１つの実施形態において、本開示の抗体は、本明細書に開示されているいずれかまたはすべての置換を有する米国特許出願公開第２００９０１４４２７５  Ａ１号に開示されている二重特異性抗体を含む。米国特許出願公開第２００９０１４４２７５  Ａ１号は、参照によりその全体が組み込まれる。
【００５５】
抗体親和性
本開示の操作された抗体は、それらの天然相対物の抗原結合能力を保持する。１つの実施形態において、本開示の操作された抗体は、操作前の抗体と比較して本質的に同じ親和性を示す。別の実施形態において、本開示の操作された抗体は、操作前の抗体と比較して低下した親和性を示す。別の実施形態において、本開示の操作された抗体は、操作前の抗体と比較して増強された親和性を示す。
【００５６】
本開示の抗体は、その同族抗原の１つ以上に対する高い結合親和性を有し得る。例えば、本明細書に記載される抗体は、少なくとも２×１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５×１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５×１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも１０７Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５×１０７Ｍ−１ｓ−１、または少なくとも１０８Ｍ−１ｓ−１の会合定数またはｋｏｎ速度（抗体（Ａｂ）＋抗原−＞Ａｂ−Ａｇ）を有し得る。
【００５７】
別の実施形態において、本開示の抗体は、５×１０−１ｓ−１未満、１０−１ｓ−１未満、５×１０−２ｓ−１未満、１０−２ｓ−１未満、５×１０−３ｓ−１未満、１０−３ｓ−１未満、５×１０−４ｓ−１未満、または１０−４ｓ−１未満のｋｏｆｆ速度（Ａｂ−Ａｇ−＞Ａｂ＋Ａｇ）を有し得る。別の実施形態において、本開示の抗体は、５×１０−５ｓ−１未満、１０−５ｓ−１未満、５×１０−６ｓ−１未満、１０−６ｓ−１未満、５×１０−７ｓ−１未満、１０−７ｓ−１未満、５×１０−８ｓ−１未満、１０−８ｓ−１未満、５×１０−９ｓ−１未満、１０−９ｓ−１未満、または１０−１０ｓ−１未満のｋｏｆｆを有する。
【００５８】
別の実施形態において、本開示の抗体は、少なくとも１０２Ｍ−１、少なくとも５×１０２Ｍ−１、少なくとも１０３Ｍ−１、少なくとも５×１０３Ｍ−１、少なくとも１０４Ｍ−１、少なくとも５×１０４Ｍ−１、少なくとも１０５Ｍ−１、少なくとも５×１０５Ｍ−１、少なくとも１０６Ｍ−１、少なくとも５×１０６Ｍ−１、少なくとも１０７Ｍ−１、少なくとも５×１０７Ｍ−１、少なくとも１０８Ｍ−１、少なくとも５×１０８Ｍ−１、少なくとも１０９Ｍ−１、少なくとも５×１０９Ｍ−１、少なくとも１０１０Ｍ−１、少なくとも５×１０１０Ｍ−１、少なくとも１０１１Ｍ−１、少なくとも５×１０１１Ｍ−１、少なくとも１０１２Ｍ−１、少なくとも５×１０１２Ｍ−１、少なくとも１０１３Ｍ−１、少なくとも５×１０１３Ｍ−１、少なくとも１０１４Ｍ−１、少なくとも５×１０１４Ｍ−１、少なくとも１０１５Ｍ−１、または少なくとも５×１０１５Ｍ−１未満の親和定数またはＫａ（ｋｏｎ／ｋｏｆｆ）を有し得る。なお別の実施形態において、本開示の抗体は、５×１０−２Ｍ未満、１０−２Ｍ未満、５×１０−３Ｍ未満、１０−３Ｍ未満、５×１０−４Ｍ未満、１０−４Ｍ未満、５×１０−５Ｍ未満、１０−５Ｍ未満、５×１０−６Ｍ未満、１０−６Ｍ未満、５×１０−７Ｍ未満、１０−７Ｍ未満、５×１０−８Ｍ未満、１０−８Ｍ未満、５×１０−９Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、５×１０−１０Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、５×１０−１１Ｍ未満、１０−１１Ｍ未満、５×１０−１２Ｍ未満、１０−１２Ｍ未満、５×１０−１３Ｍ未満、１０−１３Ｍ未満、５×１０−１４Ｍ未満、１０−１４Ｍ未満、５×１０−１５Ｍ未満、または１０−１５Ｍ未満の解離定数またはＫｄ（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）を有し得る。
【００５９】
本明細書に記載される方法に従って使用される抗体は、本明細書に記載される方法または当業者に既知の方法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイ、ＥＬＩＳＡ）（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて評価されたとき、３０００ｐＭ未満、２５００ｐＭ未満、２０００ｐＭ未満、１５００ｐＭ未満、１０００ｐＭ未満、７５０ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、２５０ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１５０ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、７５ｐＭ未満の解離定数（Ｋｄ）を有し得る。
【００６０】
抗体特異性
いくつかの実施形態において、本開示の操作された抗体は、アバゴボマブ、アバタセプト（ＯＲＥＮＣＩＡ（登録商標）としても公知である）、アブシキシマブ（ＲＥＯＰＲＯ（登録商標）、ｃ７Ｅ３  Ｆａｂとしても公知である）、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）としても公知である）、アデカツムマブ、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標）、ＭａｂＣａｍｐａｔｈ、またはＣａｍｐａｔｈ−１Ｈとしても公知である）、アルツモマブ、アフェリモマブ（ａｆｅｌｉｍｏｍａｂ）、アナツモマブ・マフェナトックス（ａｎａｔｕｍｏｍａｂ  ｍａｆｅｎａｔｏｘ）、アネツムマブ（ａｎｅｔｕｍｕｍａｂ）、アンルキズマブ（ａｎｒｕｋｉｚｕｍａｂ）、アポリズマブ（ａｐｏｌｉｚｕｍａｂ）、アルシツモマブ（ａｒｃｉｔｕｍｏｍａｂ）、アセリズマブ（ａｓｅｌｉｚｕｍａｂ）、アトリズマブ（ａｔｌｉｚｕｍａｂ）、アトロリムマブ（ａｔｏｒｏｌｉｍｕｍａｂ）、バピネウズマブ（ｂａｐｉｎｅｕｚｕｍａｂ）、バシリキシマブ（ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ）（ＳＩＭＵＬＥＣＴ（登録商標）としても公知である）、バビツキシマブ（ｂａｖｉｔｕｘｉｍａｂ）、ベクツモマブ（ｂｅｃｔｕｍｏｍａｂ）（ＬＹＭＰＨＯＳＣＡＮ（登録商標）としても公知である）、ベリムマブ（ｂｅｌｉｍｕｍａｂ）（ＬＹＭＰＨＯ−ＳＴＡＴ−Ｂ（登録商標）としても公知である）、ベルチリムマブ（ｂｅｒｔｉｌｉｍｕｍａｂ）、ベシレソマブ（ｂｅｓｉｌｅｓｏｍａｂ）、ベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）としても公知である）、ビシロマブ・ブラロバルビタール（ｂｉｃｉｒｏｍａｂ  ｂｒａｌｌｏｂａｒｂｉｔａｌ）、ビバツズマブ・メルタンシン（ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）、カンパス（ｃａｍｐａｔｈ）、カナキヌマブ（ｃａｎａｋｉｎｕｍａｂ）（ＡＣＺ８８５としても公知である）、カンツズマブ・メルタンシン（ｃａｎｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）、カプロマブ（ｃａｐｒｏｍａｂ）（ＰＲＯＳＴＡＳＣＩＮＴ（登録商標）としても公知である）、カツマキソマブ（ｃａｔｕｍａｘｏｍａｂ）（ＲＥＭＯＶＡＢ（登録商標）としても公知である）、セデリズマブ（ｃｅｄｅｌｉｚｕｍａｂ）（ＣＩＭＺＩＡ（登録商標）としても公知である）、セルトリズマブ・ペゴール（ｃｅｒｔｏｌｉｚｕｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）としても公知である）、クレノリキシマブ（ｃｌｅｎｏｌｉｘｉｍａｂ）、ダセツズマブ（ｄａｃｅｔｕｚｕｍａｂ）、ダクリキシマブ（ｄａｃｌｉｘｉｍａｂ）、ダクリズマブ（ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）（ＺＥＮＡＰＡＸ（登録商標）としても公知である）、デノスマブ（ｄｅｎｏｓｕｍａｂ）（ＡＭＧ  １６２としても公知である）、デツモマブ（ｄｅｔｕｍｏｍａｂ）、ドルリモマブ・アリトクス（ｄｏｒｌｉｍｏｍａｂ  ａｒｉｔｏｘ）、ドルリキシズマブ（ｄｏｒｌｉｘｉｚｕｍａｂ）、ダンツムマブ（ｄｕｎｔｕｍｕｍａｂ）、ドゥリムルマブ（ｄｕｒｉｍｕｌｕｍａｂ）、ドゥルムルマブ（ｄｕｒｍｕｌｕｍａｂ）、エクロメキシマブ（ｅｃｒｏｍｅｘｉｍａｂ）、エクリズマブ（ｅｃｕｌｉｚｕｍａｂ）（ＳＯＬＩＲＩ��（登録商標）としても公知である）、エドバコマブ（ｅｄｏｂａｃｏｍａｂ）、エドレコロマブ（ｅｄｒｅｃｏｌｏｍａｂ）（Ｍａｂ１７−１Ａ、ＰＡＮＯＲＥＸ（登録商標）としても公知である）、エファリズマブ（ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ）（ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標）としても公知である）、エフングマブ（ｅｆｕｎｇｕｍａｂ）（ＭＹＣＯＧＲＡＢ（登録商標）としても公知である）、エルシリモマブ（ｅｌｓｉｌｉｍｏｍａｂ）、エンリモマブ・ペゴール（ｅｎｌｉｍｏｍａｂ  ｐｅｇｏｌ）、エピツモマブ・シツキセタン（ｅｐｉｔｕｍｏｍａｂ  ｃｉｔｕｘｅｔａｎ）、エファリズマブ（ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ）、エピツモマブ（ｅｐｉｔｕｍｏｍａｂ）、エプラツズマブ（ｅｐｒａｔｕｚｕｍａｂ）、エルリズマブ（ｅｒｌｉｚｕｍａｂ）、エルツマキソマブ（ｅｒｔｕｍａｘｏｍａｂ）（ＲＥＸＯＭＵＮ（登録商標）としても公知である）、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）としても公知である）、エタラシズマブ（ｅｔａｒａｃｉｚｕｍａｂ）（エタラツズマブ（ｅｔａｒａｔｕｚｕｍａｂ）、ＶＩＴＡＸＩＮ（登録商標）、ＡＢＥＧＲＩＮ（商標）としても公知である）、エクスビビルマブ（ｅｘｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、ファノレソマブ（ｆａｎｏｌｅｓｏｍａｂ）（ＮＥＵＴＲＯＳＰＥＣ（登録商標）としても公知である）、ファラリモマブ（ｆａｒａｌｉｍｏｍａｂ）、フェルビズマブ（ｆｅｌｖｉｚｕｍａｂ）、フォントリズマブ（ｆｏｎｔｏｌｉｚｕｍａｂ）（ＨＵＺＡＦ（登録商標）としても公知である）、ガリキシマブ（ｇａｌｉｘｉｍａｂ）、ガンテネルマブ（ｇａｎｔｅｎｅｒｕｍａｂ）、ガビリモマブ（ｇａｖｉｌｉｍｏｍａｂ）（ＡＢＸ−ＣＢＬ（登録商標）としても公知である）、ゲンツズマブ・オゾガミシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標）としても公知である）、ゴリムマブ（ｇｏｌｉｍｕｍａｂ）（ＣＮＴＯ１４８としても公知である）、ゴミリキシマブ（ｇｏｍｉｌｉｘｉｍａｂ）、イバリズマブ（ｉｂａｌｉｚｕｍａｂ）（ＴＮＸ−３５５としても公知である）、イブリツモマブ・チウキセタン（ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ  ｔｉｕｘｅｔａｎ）（ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標）としても公知である）、イゴボマブ（ｉｇｏｖｏｍａｂ）、インシロマブ（ｉｍｃｉｒｏｍａｂ）、インフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）としても公知である）、イノリモマブ（ｉｎｏｌｉｍｏｍａｂ）、イノツズマブ・オゾガミシン（ｉｎｏｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、イピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）（ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１としても公知である）、イラツムマブ（ｉｒａｔｕｍｕｍａｂ）、ケリキシマブ（ｋｅｌｉｘｉｍａｂ）、ラベツズマブ（ｌａｂｅｔｕｚｕｍａｂ）、レマレソマブ（ｌｅｍａｌｅｓｏｍａｂ）、レブリリズマブ（ｌｅｂｒｉｌｉｚｕｍａｂ）、レルデリムマブ（ｌｅｒｄｅｌｉｍｕｍａｂ）、レキサツムマブ（ｌｅｘａｔｕｍｕｍａｂ）（ＨＧＳ−ＥＴＲ２、ＥＴＲ２−ＳＴ０１としても公知である）、レキシツムマブ（ｌｅｘｉｔｕｍｕｍａｂ）、リビビルマブ（ｌｉｂｉｖｉｒｕｍａｂ）、リンツズマブ（���ｉｎｔｕｚｕｍａｂ）、ルカツムマブ（ｌｕｃａｔｕｍｕｍａｂ）、ルミリキシマブ（ｌｕｍｉｌｉｘｉｍａｂ）、マパツムマブ（ｍａｐａｔｕｍｕｍａｂ）（ＨＧＳ−ＥＴＲ１、ＴＲＭ−１としても公知である）、マスリモマブ（ｍａｓｌｉｍｏｍａｂ）、マツズマブ（ｍａｔｕｚｕｍａｂ）（ＥＭＤ７２０００としても公知である）、メポリズマブ（ｍｅｐｏｌｉｚｕｍａｂ）（ＢＯＳＡＴＲＩＡ（登録商標）としても公知である）、メテリムマブ（ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ）、ミラツズマブ（ｍｉｌａｔｕｚｕｍａｂ）、ミンレツモマブ（ｍｉｎｒｅｔｕｍｏｍａｂ）、ミツモマブ（ｍｉｔｕｍｏｍａｂ）、モロリムマブ（ｍｏｒｏｌｉｍｕｍａｂ）、モタビズマブ（ｍｏｔａｖｉｚｕｍａｂ）（ＮＵＭＡＸ（商標）としても公知である）、ムロモナブ（ｍｕｒｏｍｏｎａｂ）（ＯＫＴ３としても公知である）、ナコロマブ・タフェナトクス（ｎａｃｏｌｏｍａｂ  ｔａｆｅｎａｔｏｘ）、ナプツモマブ・エスタフェナトクス（ｎａｐｔｕｍｏｍａｂ  ｅｓｔａｆｅｎａｔｏｘ）、ナタリズマブ（ｎａｔａｌｉｚｕｍａｂ）（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）、ＡＮＴＥＧＲＥＮ（登録商標）としても公知である）、ネバクマブ（ｎｅｂａｃｕｍａｂ）、ネレリモマブ（ｎｅｒｅｌｉｍｏｍａｂ）、ニモツズマブ（ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ）（ＴＨＥＲＡＣＩＭ  ｈＲ３（登録商標）、ＴＨＥＲＡ−ＣＩＭ−ｈＲ３（登録商標）、ＴＨＥＲＡＬＯＣ（登録商標）としても公知である）、ノフェツモマブ・メルペンタン（ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ  ｍｅｒｐｅｎｔａｎ）（ＶＥＲＬＵＭＡ（登録商標）としても公知である）、オクレリズマブ（ｏｃｒｅｌｉｚｕｍａｂ）、オデュリモマブ（ｏｄｕｌｉｍｏｍａｂ）、オファツムマブ（ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、オマリズマブ（ｏｍａｌｉｚｕｍａｂ）（ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）としても公知である）、オレゴボマブ（ｏｒｅｇｏｖｏｍａｂ）（ＯＶＡＲＥＸ（登録商標）としても公知である）、オテリキシズマブ（ｏｔｅｌｉｘｉｚｕｍａｂ）、パジバキシマブ（ｐａｇｉｂａｘｉｍａｂ）、パリビズマブ（ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）（ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）としても公知である）、パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）（ＡＢＸ−ＥＧＦ、ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）としても公知である）、パスコリズマブ（ｐａｓｃｏｌｉｚｕｍａｂ）、ペンツモマブ（ｐｅｍｔｕｍｏｍａｂ）（ＴＨＥＲＡＧＹＮ（登録商標）としても公知である）、ペルツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）（２Ｃ４、ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標）としても公知である）、ペキセリズマブ（ｐｅｘｅｌｉｚｕｍａｂ）、ピンツモマブ（ｐｉｎｔｕｍｏｍａｂ）、プリリキシマブ（ｐｒｉｌｉｘｉｍａｂ）、プリツムマブ（ｐｒｉｔｕｍｕｍａｂ）、ラニビズマブ（ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ）（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）としても公知である）、、ラキシバクマブ（ｒａｘｉｂａｃｕｍａｂ）、レガビルマブ（ｒｅｇａｖｉｒｕｍａｂ）、レスリズマブ（ｒｅｓｌｉｚｕｍａｂ）、リツキシマブ（ｒｉｔｕｘｉｍａｂ）（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、ＭａｂＴＨＥＲＡ（登録商標）としても公知である）、ロベリズマブ（ｒｏｖｅｌｉｚｕｍａｂ）、ルプリズマブ（ｒｕｐｌｉｚｕｍａｂ��、サツモマブ（ｓａｔｕｍｏｍａｂ）、セビルマブ（ｓｅｖｉｒｕｍａｂ）、シブロツズマブ（ｓｉｂｒｏｔｕｚｕｍａｂ）、シプリズマブ（ｓｉｐｌｉｚｕｍａｂ）（ＭＥＤＩ−５０７としても公知である）、ソンツズマブ（ｓｏｎｔｕｚｕｍａｂ）、スタムルマブ（ｓｔａｍｕｌｕｍａｂ）（（ＭＹＯ−０２９としても公知である）、スレソマブ（ｓｕｌｅｓｏｍａｂ）（ＬＥＵＫＯＳＣＡＮ（登録商標）としても公知である）、タカツズマブ・テトラキセタン（ｔａｃａｔｕｚｕｍａｂ  ｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、タドシズマブ（ｔａｄｏｃｉｚｕｍａｂ）、タリズマブ（ｔａｌｉｚｕｍａｂ）、タプリツモマブ・パプトクス（ｔａｐｌｉｔｕｍｏｍａｂ  ｐａｐｔｏｘ）、テフィバズマブ（ｔｅｆｉｂａｚｕｍａｂ）（ＡＵＲＥＸＩＳ（登録商標）としても公知である）、テリモマブ・アリトクス（ｔｅｌｉｍｏｍａｂ  ａｒｉｔｏｘ）、テネリキシマブ（ｔｅｎｅｌｉｘｉｍａｂ）、テプリズマブ（ｔｅｐｌｉｚｕｍａｂ）、チシリムマブ（ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ）、トシリズマブ（ｔｏｃｉｌｉｚｕｍａｂ）（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標）としても公知である）、トラリズマブ（ｔｏｒａｌｉｚｕｍａｂ）、トシツモマブ（ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）としても公知である）、トレメリムマブ（ｔｒｅｍｅｌｉｍｕｍａｂ）（ＣＰ−６７５，２０６としても公知である）、ツコツズマブ・セルモレウキン（ｔｕｃｏｔｕｚｕｍａｂ  ｃｅｌｍｏｌｅｕｋｉｎ）、ツビルマブ（ｔｕｖｉｒｕｍａｂ）、ウルトキサズマブ（ｕｒｔｏｘａｚｕｍａｂ）、ウステキヌマブ（ｕｓｔｅｋｉｎｕｍａｂ）（ＣＮＴＯ１２７５としても公知である）、バパリキシマブ（ｖａｐａｌｉｘｉｍａｂ）、ベルツズマブ（ｖｅｌｔｕｚｕｍａｂ）、ベパリモマブ（ｖｅｐａｌｉｍｏｍａｂ）、ビシリズマブ（ｖｉｓｉｌｉｚｕｍａｂ）（ＮＵＶＩＯＮ（登録商標）としても公知である）、ボロシキシマブ（ｖｏｌｏｃｉｘｉｍａｂ）（Ｍ２００としても公知である）、ボツムマブ（ｖｏｔｕｍｕｍａｂ）（ＨＵＭＡＳＰＥＣＴ（登録商標）としても公知である）、ザルツムマブ（ｚａｌｕｔｕｍｕｍａｂ）、ザノリムマブ（ｚａｎｏｌｉｍｕｍａｂ）（ＨｕＭＡＸ−ＣＤ４としても公知である）、ジラリムマブ（ｚｉｒａｌｉｍｕｍａｂ）、またはゾリモマブ・アリトクス（ｚｏｌｉｍｏｍａ
ｂ  ａｒｉｔｏｘ）から選択される、エピトープ結合ドメイン（例えば、限定されるものではないが、すべて６つのＣＤＲを有する抗体可変領域、または抗体可変領域と少なくとも９０％同一である同等の領域）を含む抗体を含む。
【００６１】
他の実施形態において、本開示の抗体は、６つのＣＤＲを有する重鎖および軽鎖可変ドメインを含み、前述の表から選択される抗体の結合について競合する。他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、６つのすべてのＣＤＲを有する重鎖および軽鎖可変ドメインを含み、前述の表中の抗体と同一の抗原に結合する。
【００６２】
他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、６つのすべてのＣＤＲを有する重鎖および軽鎖可変ドメインを含み、ＰＤＧＦＲアルファ、ＰＤＧＦＲベータ、ＰＤＧＦ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ＶＥＧＦ−Ｆ、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、ＦＧＦ、ＦＧＦ２、ＨＧＦ、ＫＤＲ、ｆｌｔ−１、ＦＬＫ−１  Ａｎｇ−２、Ａｎｇ−１、ＰＬＧＦ、ＣＥＡ、ＣＸＣＬ１３、Ｂａｆｆ、ＩＬ−２１、ＣＣＬ２１、ＴＮＦアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＳＤＦ−１、ｂＦＧＦ、ＭＡＣ−１、ＩＬ２３ｐ１９、ＦＰＲ、ＩＧＦＢＰ４、ＣＸＣＲ３、ＴＬＲ４、ＣＸＣＲ２、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ４、ＥｐｈｒｉｎＢ２、ＥＧＦＲ（ＥｒｂＢ１）、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２またはｐ１８５ｎｅｕ）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ３）、ＨＥＲ４  ＥｒｂＢ４またはｔｙｒｏ２）、ＳＣ１、ＬＲＰ５、ＬＲＰ６、ＲＡＧＥ、Ｎａｖ１．７、ＧＬＰ１、ＲＳＶ、ＲＳＶ  Ｆタンパク質、インフルエンザＨＡタンパク質、インフルエンザＮＡタンパク質、ＨＭＧＢ１、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ６４、ＣＤ７９、ＣＤ２２、ＩＣＡＭ−１、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＨＤＧＦ、ＥｐｈＢ４、ＧＩＴＲ、β−アミロイド、ｈＭＰＶ、ＰＩＶ−１、ＰＩＶ−２、ＯＸ４０Ｌ、ＩＧＦＢＰ３、ｃＭｅｔ、ＰＤ−１、ＰＬＧＦ、ペプロライシン（Ｎｅｐｒｏｌｙｓｉｎ）、ＣＴＤ、ＩＬ−１８、ＩＬ−６、ＣＸＣＬ−１３、ＩＬ−１Ｒ１、ＩＬ−１５、ＩＬ−４Ｒ、ＩｇＥ、ＰＡＩ−１、ＮＧＦ、ＥｐｈＡ２、ｕＰＡＲｔ、ＤＬＬ−４、αｖβ６、α５β１、Ｉ型およびＩＩ型インターフェロン受容体、ＣＤ１９、ＩＣＯＳ、ＩＬ−１７、因子ＩＩ、Ｈｓｐ９０、ＩＧＦ、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ、ＣＤ１９、ＧＭ−ＣＳＦＲ、ＰＩＶ−３、ＣＭＶ、ＩＬ−１３、ＩＬ−９、およびＥＢＶから選択される抗原に特異的に結合する。
【００６３】
他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、ＴＮＦスーパーファミリーのメンバー（受容体またはリガンド）に特異的に結合する。種々の分子としては、腫瘍壊死因子アルファ（「ＴＮＦアルファ」）、腫瘍壊死因子ベータ（「ＴＮＦベータ」）、リンホトキシンアルファ（「ＬＴアルファ」）、ＣＤ３０リガンド、ＣＤ２７リガンド、ＣＤ４０リガンド、４−１  ＢＢリガンド、Ａｐｏ−１リガンド（ＦａｓリガンドもしくはＣＤ９５リガンドとも称される）、Ａｐｏ−２リガンド（ＴＲＡＩＬとも称される）、Ａｐｏ−３リガンド（ＴＷＥＡＫとも称される）、オステオプロテゲリン（ＯＰＧ）、ＡＰＲＩＬ、ＲＡＮＫリガンド（ＴＲＡＮＣＥとも称される）、ＴＡＬＬ−１（ＢｌｙＳ、ＢＡＦＦ、もしくはＴＨＡＮＫとも称される）、ＤＲ４、ＤＲ５（Ａｐｏ−２、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲ６、Ｔａｎｇｏ−６３、ｈＡＰＯ８、ＴＲＩＣＫ２、もしくはＫＩＬＬＥＲとも称される）、ＤＲ６、ＤｃＲ１、ＤｃＲ２、ＤｃＲ３（ＴＲ６もしくはＭ６８とも称される）、ＣＡＲ１、ＨＶＥＭ（ＡＴＡＲもしくはＴＲ２とも称される）、ＧＩＴＲ、ＺＴＮＦＲ−５、ＮＴＲ−１、ＴＮＦＬ１、ＣＤ３０、ＬＴＢｒ、４−１ＢＢ受容体、およびＴＲ９が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６４】
別の実施形態において、本開示の操作された抗体は、５Ｔ４、ＡＢＬ、ＡＢＣＦｌ、ＡＣＶＲｌ、ＡＣＶＲｌＢ、ＡＣＶＲ２、ＡＣＶＲ２Ｂ、ＡＣＶＲＬｌ、ＡＤＯＲＡ２Ａ、アグレカン（Ａｇｇｒｅｃａｎ）、ＡＧＲ２、ＡＩＣＤＡ、ＡＩＦＩ、ＡＩＧｌ、ＡＫＡＰｌ、ＡＫＡＰ２、ＡＭＨ、ＡＭＨＲ２、ＡＮＧＰＴｌ、ＡＮＧＰＴ２、ＡＮＧＰＴＬ３、ＡＮＧＰＴＬ４、ＡＮＰＥＰ、ＡＰＣ、ＡＰＯＣｌ、ＡＲ、アロマターゼ、ＡＴＸ、ＡＸｌ、ＡＺＧＰｌ（亜鉛−ａ−糖タンパク質）、Ｂ７．１、Ｂ７．２、Ｂ７−Ｈ１、ＢＡＤ、ＢＡＦＦ、ＢＡＧｌ、ＢＡＩｌ、ＢＣＲ、ＢＣＬ２、ＢＣＬ６、ＢＤＮＦ、ＢＬＮＫ、ＢＬＲｌ（ＭＤＲ１５）、ＢＩｙＳ、ＢＭＰｌ、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３Ｂ（ＧＤＦｌＯ）、ＢＭＰ４、ＢＭＰ６、ＢＭＰ８、ＢＭＰＲｌＡ、ＢＭＰＲｌＢ、ＢＭＰＲ２、ＢＰＡＧｌ（プレクチン）、ＢＲＣＡｌ、Ｃ１９ｏｒｆｌＯ（ＩＬ２７ｗ）、Ｃ３、Ｃ４Ａ、Ｃ５、Ｃ５Ｒ１、ＣＡＮＴｌ、ＣＡＳＰｌ、ＣＡＳＰ４、ＣＡＶｌ、ＣＣＢＰ２（Ｄ６／ＪＡＢ６１）、ＣＣＬｌ（１−３０９）、ＣＣＬ１ｌ（エオタキシン）、ＣＣＬ１３（ＭＣＰ−４）、ＣＣＬ１５（ＭＩＰ−Ｉｄ）、ＣＣＬ１６（ＨＣＣ−４）、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）、ＣＣＬ１８（ＰＡＲＣ）、ＣＣＬ１９（ＭＩＰ−３ｂ）、ＣＣＬ２（ＭＣＰ−１）、ＭＣＡＦ、ＣＣＬ２０（ＭＩＰ−３ａ）、ＣＣＬ２１（ＭＥＰ−２）、ＳＬＣ、エキソデュス（ｅｘｏｄｕｓ）−２、ＣＣＬ２２（ＭＤＣ／ＳＴＣ−Ｉ）、ＣＣＬ２３（ＭＰＩＦ−Ｉ）、ＣＣＬ２４（ＭＰＩＦ−２／エオタキシン−２）、ＣＣＬ２５（ＴＥＣＫ）、ＣＣＬ２６（エオタキシン−３）、ＣＣＬ２７（ＣＴＡＣＫ／ＩＬＣ）、ＣＣＬ２８、ＣＣＬ３（ＭＩＰ−Ｉａ）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ−Ｉｂ）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７（ＭＣＰ−３）、ＣＣＬ８（ｍｃｐ−２）、ＣＣＮＡｌ、ＣＣＮＡ２、ＣＣＮＤｌ、ＣＣＮＥｌ、ＣＣＮＥ２、ＣＣＲｌ（ＣＫＲｌ／ＨＭ１４５）、ＣＣＲ２（ｍｃｐ−ｌＲＢ／ＲＡ），ＣＣＲ３（ＣＫＲ３／ＣＭＫＢＲ３）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５（ＣＭＫＢＲ５／ＣｈｅｍＲ１３）、ＣＣＲ６（ＣＭＫＢＲ６／ＣＫＲ−Ｌ３／ＳＴＲＬ２２／ＤＲＹ６）、ＣＣＲ７（ＣＫＲ７／ＥＢＩｌ）、ＣＣＲ８（ＣＭＫＢＲ８／ＴＥＲｌ／ＣＫＲ−Ｌｌ）、ＣＣＲ９（ＧＰＲ−９−６）、ＣＣＲＬｌ（ＶＳＨＫｌ）、ＣＣＲＬ２（Ｌ−ＣＣＲ）、ＣＤ１６４、ＣＤ１９、ＣＤｌＣ、ＣＤ２０、ＣＤ２００、ＣＤ−２２、ＣＤ２４、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３３、ＣＤ３５、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３Ｅ、ＣＤ３Ｇ，ＣＤ３Ｚ、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ４４、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ５２、ＣＤ６９、ＣＤ７２、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＣＤＨｌ（Ｅ−カドヘリン）、ＣＤＨ１Ｏ、ＣＤＨ１２、ＣＤＨ１３、ＣＤＨ１８、ＣＤＨ１９、ＣＤＨ２０、ＣＤＨ５、ＣＤＨ７、ＣＤＨ８、ＣＤＨ９、ＣＤＫ２、ＣＤＫ３、ＣＤＫ４、ＣＤＫ５、ＣＤＫ６、ＣＤＫ７、ＣＤＫ９、ＣＤＫＮｌＡ（ｐ２１Ｗａｐｌ／Ｃｉｐｌ）、ＣＤＫＮｌＢ（ｐ２７Ｋｉｐｌ）、ＣＤＫＮｌＣ、ＣＤＫＮ２Ａ（ｐｌ６ＩＮＫ４ａ）、ＣＤＫＮ２Ｂ、ＣＤＫＮ２Ｃ、ＣＤＫＮ３、ＣＥＢＰＢ、ＣＥＲｌ、ＣＨＧＡ、ＣＨＧＢ、キチナーゼ、ＣＨＳＴｌＯ、ＣＫＬＦＳＦ２、ＣＫＬＦＳＦ３、ＣＫＬＦＳＦ４、ＣＫＬＦＳＦ５、ＣＫＬＦＳＦ６、ＣＫＬＦＳＦ７、ＣＫＬＦＳＦ８、ＣＬＤＮ３、ＣＬＤＮ７（クラウジン（ｃｌａｕｄｉｎ）−７）、ＣＬＮ３、ＣＬＵ（クラステリン）、ＣＭＫＬＲｌ、ＣＭＫＯＲｌ（ＲＤＣｌ）、ＣＮＲｌ、ＣＯＬ１８Ａ１、ＣＯＬｌＡｌ、ＣＯＬ４Ａ３、ＣＯＬ６Ａ１、ＣＲ２、Ｃｒｉｐｔｏ、ＣＲＰ、ＣＳＦｌ（Ｍ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ２（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＣＳＦ３（ＧＣＳＦ）、ＣＴＬＡ４、ＣＴＬ８、ＣＴＮＮＢｌ（ｂ−カテニン）、ＣＴＳＢ（カテプシンＢ）、ＣＸ３ＣＬ１（ＳＣＹＤｌ）、ＣＸ３ＣＲ１（Ｖ２８）、ＣＸＣＬｌ（ＧＲＯｌ）、ＣＸＣＬｌＯ（ＩＰ−ＩＯ）、ＣＸＣＬＩｌ（Ｉ−ＴＡＣ／ＩＰ−９）、ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦｌ）、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１４、ＣＸＣＬ１６、ＣＸＣＬ２（ＧＲＯ２）、ＣＸＣＬ３（ＧＲＯ３）、ＣＸＣＬ５（ＥＮＡ−７８／ＬＩＸ）、ＣＸＣＬ６（ＧＣＰ−２）、ＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＲ３（ＧＰＲ９／ＣＫＲ−Ｌ２）、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ６（ＴＹＭＳＴＲ／ＳＴＲＬ３３／ボンゾ（Ｂｏｎｚｏ））、ＣＹＢ５、ＣＹＣｌ、ＣＹＳＬＴＲｌ、ＤＡＢ２ＩＰ、ＤＥＳ、ＤＫＦＺｐ４５１Ｊ０１１８、ＤＮＣＬｌ、ＤＰＰ４、Ｅ２Ｆ１、ＥＣＧＦｌ、ＥＤＧｌ、ＥＦＮＡｌ、ＥＦＮＡ３、ＥＦＮＢ２、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＥＬＡＣ２、ＥＮＧ、ＥＮＯｌ、ＥＮＯ２、ＥＮＯ３、ＥＰＨＡ１、ＥＰＨＡ２、ＥＰＨＡ３、ＥＰＨＡ４、ＥＰＨＡ５、ＥＰＨＡ６、ＥＰＨＡ７、ＥＰＨＡ８、ＥＰＨＡ９、ＥＰＨＡ１０、ＥＰＨＢ１、ＥＰＨＢ２、ＥＰＨＢ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＨＢ５、ＥＰＨＢ６、ＥＰＨＲＩＮ−Ａ１、ＥＰＨＲＩＮ−Ａ２、ＥＰＨＲＩＮ−Ａ３、ＥＰＨＲＩＮ−Ａ４、ＥＰＨＲＩＮ−Ａ５、ＥＰＨＲＩＮ−Ａ６、ＥＰＨＲＩＮ−Ｂ１、ＥＰＨＲＩＮ−Ｂ２、ＥＰＨＲＩＮ−Ｂ３、ＥＰＨＢ４、ＥＰＧ、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ−２）、ＥＲＥＧ、ＥＲＫ８、エストロゲン受容体、ＥＳＲｌ、ＥＳＲ２、Ｆ３（ＴＦ）、ＦＡＤＤ、ファルネシルトランスフェラーゼ、ＦａｓＬ、ＦＡＳＮｆ、ＦＣＥＲｌＡ、ＦＣＥＲ２、ＦＣＧＲ３Ａ、ＦＧＦ、ＦＧＦｌ（ａＦＧＦ）、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１２Ｂ、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２（ｂＦＧＦ）、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、ＦＧＦ２３、ＦＧＦ３（ｉｎｔ−２）、ＦＧＦ４（ＨＳＴ）、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６（ＨＳＴ−２）、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦＲ３、ＦＩＧＦ（ＶＥＧＦＤ）、ＦＩＬｌ（ＥＰＳＩＬＯＮ）、ＦＢＬｌ（ＺＥＴＡ）、ＦＬＪ１２５８４、ＦＬＪ２５５３０、ＦＬＲＴｌ（フィブロネクチン）、ＦＬＴｌ、ＦＬＴ−３、ＦＯＳ、ＦＯＳＬｌ（ＦＲＡ−Ｉ）、ＦＹ（ＤＡＲＣ）、ＧＡＢＲＰ（ＧＡＢＡａ）、ＧＡＧＥＢｌ、ＧＡＧＥＣｌ、ＧＡＬＮＡＣ４Ｓ−６ＳＴ、ＧＡＴＡ３、ＧＤ２、ＧＤＦ５、ＧＦＩｌ、ＧＧＴｌ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＧＮＡＳｌ、ＧＮＲＨｌ、ＧＰＲ２（ＣＣＲｌＯ）、ＧＰＲ３１、ＧＰＲ４４、ＧＰＲ８１（ＦＫＳＧ８０）、ＧＲＣＣｌＯ（ＣｌＯ）、ＧＲＰ、ＧＳＮ（ゲルゾリン）、ＧＳＴＰｌ、ＨＡＶＣＲ２、ＨＤＡＣ、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ７Ａ、ＨＤＡＣ９、ヘッジホッグ、ＨＧＦ、ＨＩＦｌＡ、ＨＩＰｌ、ヒスタミンおよびヒスタミン受容体、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−ＤＲＡ、ＨＭ７４、ＨＭＯＸｌ、ＨＳＰ９０、ＨＵＭＣＹＴ２Ａ、ＩＣＥＢＥＲＧ、ＩＣＯＳＬ、ＩＤ２、ＩＦＮ−ａ、ＩＦＮＡｌ、ＩＦＮＡ２、ＩＦＮＡ４，ＩＦＮＡ５、ＥＦＮＡ６、ＢＦＮＡ７、ＩＦＮＢｌ、ＩＦＮガンマ、ＩＦＮＷｌ、ＩＧＢＰｌ、ＩＧＦｌ、ＩＧＦｌＲ、ＩＧＦ２、ＩＧＦＢＰ２、ＩＧＦＢＰ３、ＩＧＦＢＰ６、ＤＬ−Ｉ、ＩＬｌＯ、ＩＬｌＯＲＡ、ＩＬｌＯＲＢ、ＩＬ−ｌ、ＩＬ１Ｒ１（ＣＤ１２１ａ）、ＩＬ１Ｒ２（ＣＤ１２１ｂ）、ＩＬ−１ＲＡ、ＩＬ−２、ＩＬ２ＲＡ（ＣＤ２５）、ＩＬ２ＲＢ（ＣＤ１２２）、ＩＬ２ＲＧ（ＣＤ１３２）、ＩＬ−４、ＩＬ−４Ｒ（ＣＤ１２３）、ＩＬ−５、ＩＬ５ＲＡ（ＣＤ１２５）、ＩＬ３ＲＢ（ＣＤ１３１）、ＩＬ−６、ＩＬ６ＲＡ（ＣＤ１２６）、ＩＲ６ＲＢ（ＣＤ１３０）、ＩＬ−７、ＩＬ７ＲＡ（ＣＤ１２７）、ＩＬ−８、ＣＸＣＲ１（ＩＬ８ＲＡ）、ＣＸＣＲ２（ＩＬ８ＲＢ／ＣＤ１２８）、ＩＬ−９、ＩＬ９Ｒ（ＣＤ１２９）、ＩＬ−１０、ＩＬ１０ＲＡ（ＣＤ２１０）、ＩＬ１０ＲＢ（ＣＤＷ２１０Ｂ）、ＩＬ−１１、ＩＬ１１ＲＡ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１２Ａ、ＩＬ−１２Ｂ、ＩＬ−１２ＲＢ１、ＩＬ−１２ＲＢ２、ＩＬ−１３、ＩＬ１３ＲＡ１、ＩＬ１３ＲＡ２、ＩＬ１４、ＩＬ１５、ＩＬ１５ＲＡ、１Ｌ１６、ＩＬ１７、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｂ、ＩＬ１７Ｃ、ＩＬ１７Ｒ、ＩＬ１８、ＩＬ１８ＢＰ、ＩＬ１８Ｒ１、ＩＬ１８ＲＡＰ、ＩＬ１９、ＩＬＩＡ、ＩＬｌＢ、ＩＬ１Ｆ１０、ＩＬ１Ｆ５、ＩＬ１Ｆ６、ＩＬ１Ｆ７、ＩＬ１Ｆ８、ＤＬ１Ｆ９、ＩＬｌＨＹｌ、ＩＬｌＲｌ、ＩＬ１Ｒ２、ＩＬｌＲＡＰ、ＩＬｌＲＡＰＬｌ、ＩＬ１ＲＡＰＬ２、ＩＬ１ＲＬ１、ＩＬ１ＲＬ２、ＩＬｌＲＮ、ＩＬ２、ＩＬ２０、ＩＬ２０ＲＡ、ＩＬ２１Ｒ、ＩＬ２２、ＩＬ２２Ｒ、ＩＬ２２ＲＡ２、ＩＬ２３、ＤＬ２４、ＩＬ２５、ＩＬ２６、ＩＬ２７、ＩＬ２８Ａ、ＩＬ２８Ｂ、ＩＬ２９、ＩＬ２ＲＡ、ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ２ＲＧ、ＩＬ３、ＩＬ３０、ＩＬ３ＲＡ、ＩＬ４、ＩＬ４Ｒ、ＩＬ６ＳＴ（糖タンパク質１３０）、ＩＬＫ、ＩＮＨＡ、ＩＮＨＢＡ、ＩＮＳＬ３、ＩＮＳＬ４、ＩＲＡＫＩ、ＩＲＡＫ２、ＩＴＧＡｌ、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＩＴＧＡ６（α６インテグリン）、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ４（β４インテグリン）、ＪＡＧｌ、ＪＡＫｌ、ＪＡＫ３、ＪＴＢ、ＪＵＮ、Ｋ６ＨＦ、ＫＡＩｌ、ＫＤＲ、ＫＩＴＬＧ、ＫＬＦ５（ＧＣボックスＢＰ）、ＫＬＦ６、ＫＬＫｌＯ、ＫＬＫ１２、ＫＬＫ１３、ＫＬＫ１４、ＫＬＫ１５、ＫＬＫ３、ＫＬＫ４、ＫＬＫ５、ＫＬＫ６、ＫＬＫ９、ＫＲＴｌ、ＫＲＴ１９（ケラチン１９）、ＫＲＴ２Ａ、ＫＲＴＨＢ６（毛特異的ＩＩ型ケラチン）、ＬＡＭＡ５、ＬＥＰ（レプチン）、Ｌｉｎｇｏ−ｐ７５、Ｌｉｎｇｏ−Ｔｒｏｙ、ＬＰＳ、ＬＴＡ（ＴＮＦ−ｂ）、ＬＴＢ、ＬＴＢ４Ｒ（ＧＰＲ１６）、ＬＴＢ４Ｒ２、ＬＴＢＲ、ＭＡＣＭＡＲＣＫＳ、ＭＡＧもしくはＯｍｇｐ、ＭＡＰ２Ｋ７（ｃ−Ｊｕｎ）、ＭＣＰ−１、ＭＤＫ、ＭＩＢｌ、ミドカイン（ｍｉｄｋｉｎｅ）、ＭＩＦ、ＭＩＳＲＩＩ、ＭＪＰ��２、ＭＫ、ＭＫＩ６７（Ｋｉ−６７）、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ＭＳ４Ａ１、ＭＳＭＢ、ＭＴ３（メタロチオネクチン−ＵＩ）、ｍＴＯＲ、ＭＴＳＳｌ、ＭＵＣｌ（ムチン）、ＭＹＣ、ＭＹＤ８８、ＮＣＫ２、ニューロカン（ｎｅｕｒｏｃａｎ）、ＮＦＫＢｌ、ＮＦＫＢ２、ＮＧＦＢ（ＮＧＦ）、ＮＧＦＲ、ＮｇＲ−Ｌｉｎｇｏ、ＮｇＲ−Ｎｏｇｏ６６（ノゴ（Ｎｏｇｏ））、ＮｇＲ−ｐ７５、ＮｇＲ−Ｔｒｏｙ、ＮＭＥｌ（ＮＭ２３Ａ）、ＮＯＴＣＨ、ＮＯＴＣＨ１、ＮＯＸ５、ＮＰＰＢ、ＮＲＯＢｌ、ＮＲ０Ｂ２、ＮＲｌＤｌ、ＮＲ１Ｄ２、ＮＲ１Ｈ２、ＮＲ１Ｈ３、ＮＲ１Ｈ４、ＮＲ１Ｉ２、ＮＲ１Ｉ３、ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２、ＮＲ２Ｅ１、ＮＲ２Ｅ３、ＮＲ２Ｆ１、ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ２Ｆ６、ＮＲ３Ｃ１、ＮＲ３Ｃ２、ＮＲ４Ａ１、ＮＲ４Ａ２、ＮＲ４Ａ３、ＮＲ５Ａ１、ＮＲ５Ａ２、ＮＲ６Ａ１、ＮＲＰｌ、ＮＲＰ２、ＮＴ５Ｅ、ＮＴＮ４、ＯＤＺｌ、ＯＰＲＤｌ、Ｐ２ＲＸ７、ＰＡＰ、ＰＡＲＴｌ、ＰＡＴＥ、ＰＡＷＲ、ＰＣＡ３、ＰＣＤＧＦ、ＰＣＮＡ、ＰＤＧＦＡ、ＰＤＧＦＢ、ＰＤＧＦＲＡ、ＰＤＧＦＲＢ、ＰＥＣＡＭｌ、ｐｅｇ−アスパラギナーゼ、ＰＦ４（ＣＸＣＬ４）、ＰＧＦ、ＰＧＲ、ホスファカン（ｐｈｏｓｐｈａｃａｎ）、ＰＩＡＳ２、ＰＩ３キナーゼ、ＰＩＫ３ＣＧ、ＰＬＡＵ（ｕＰＡ）、ＰＬＧ，ＰＬＸＤＣｌ、ＰＫＣ、ＰＫＣベータ、ＰＰＢＰ（ＣＸＣＬ７）、ＰＰＩＤ、ＰＲｌ、ＰＲＫＣＱ、ＰＲＫＤｌ、ＰＲＬ、ＰＲＯＣ、ＰＲＯＫ２、ＰＳＡＰ、ＰＳＣＡ、ＰＴＡＦＲ、ＰＴＥＮ、ＰＴＧＳ２（ＣＯＸ−２）、ＰＴＮ、ＲＡＣ２（Ｐ２１Ｒａｃ２）、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫリガンド、ＲＡＲＢ、ＲＧＳｌ、ＲＧＳ１３、ＲＧＳ３、ＲＮＦＩｌＯ（ＺＮＦ１４４）、Ｒｏｎ、ＲＯＢＯ２、ＲＸＲ、Ｓ１００Ａ２、ＳＣＧＢ  １Ｄ２（リポフィリンＢ）、ＳＣＧＢ２Ａ１（マンマグロビン２）、ＳＣＧＢ２Ａ２（マンマグロビン１）、ＳＣＹＥｌ（内皮単球活性化サイトカイン）、ＳＤＦ２，ＳＥＲＰＥＮＡ１、ＳＥＲＰＩＮＡ３、ＳＥＲＰＩＮＢ５（マスピン（ｍａｓｐｉｎ））、ＳＥＲＰＩＮＥｌ（ＰＡＩ−Ｉ）、ＳＥＲＰＩＮＦｌ、ＳＨＩＰ−１、ＳＨＩＰ−２、ＳＨＢ１、ＳＨＢ２、ＳＨＢＧ、ＳｆｃＡＺ、ＳＬＣ２Ａ２、ＳＬＣ３３Ａ１、ＳＬＣ４３Ａ１、ＳＬＩＴ２、ＳＰＰｌ、ＳＰＲＲｌＢ（Ｓｐｒｌ）、ＳＴ６ＧＡＬ１、ＳＴＡＢｌ、ＳＴＡＴ６、ＳＴＥＡＰ、ＳＴＥＡＰ２、ＴＢ４Ｒ２、ＴＢＸ２１、ＴＣＰｌＯ、
ＴＤＧＦｌ、ＴＥＫ、ＴＧＦＡ、ＴＧＦＢｌ、ＴＧＦＢｌＩｌ、ＴＧＦＢ２、ＴＧＦＢ３、ＴＧＦＢＩ、ＴＧＦＢＲｌ、ＴＧＦＢＲ２、ＴＧＦＢＲ３、ＴＨｌＬ、ＴＨＢＳｌ（トロンボスポンジン−１）、ＴＨＢＳ２，ＴＨＢＳ４、ＴＨＰＯ、ＴＩＥ（Ｔｉｅ−１）、ＴＩＭＰ３、組織因子、ＴＬＲｌＯ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６，ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＮＦ、ＴＮＦ−ａ、ＴＮＦＡＩＰ２（Ｂ９４）、ＴＮＦＡＩＰ３、ＴＮＦＲＳＦＩｌＡ、ＴＮＦＲＳＦｌＡ、ＴＮＦＲＳＦｌＢ、ＴＮＦＲＳＦ２１、ＴＮＦＲＳＦ５、ＴＮＦＲＳＦ６（Ｆａｓ）、ＴＮＦＲＳＦ７、ＴＮＦＲＳＦ８、ＴＮＦＲＳＦ９、ＴＮＦＳＦ１０（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦＳＦ１１（ＴＲＡＮＣＥ）、ＴＮＦＳＦ１２（ＡＰＯ３Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１３（Ａｐｒｉｌ）、ＴＮＦＳＦ１３Ｂ，ＴＮＦＳＦ１４（ＨＶＥＭ−Ｌ）、ＴＮＦＳＦ１５（ＶＥＧＩ）、ＴＮＦＳＦ１８、ＴＮＦＳＦ４（ＯＸ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ５（ＣＤ４０リガンド）、ＴＮＦＳＦ６（ＦａｓＬ）、ＴＮＦＳＦ７（ＣＤ２７リガンド）、ＴＮＦＳＦ８（ＣＤ３０リガンド）、ＴＮＦＳＦ９（４−１ＢＢリガンド）、ＴＯＬＬＩＰ、Ｔｏｌｌ様受容体、ＴＯＰ２Ａ（トポイソメラーゼＩｉａ）、ＴＰ５３、ＴＰＭｌ、ＴＰＭ２，ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦｌ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、ＴＲＡＦ５、ＴＲＡＦ６、ＴＲＫＡ、ＴＲＥＭｌ、ＴＲＥＭ２、ＴＲＰＣ６、ＴＳＬＰ、ＴＷＥＡＫ、チロシナーゼ、ｕＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＢ、ＶＥＧＦＣ、ベルシカン（ｖｅｒｓｉｃａｎ）、ＶＨＬ  Ｃ５、ＶＬＡ−４、Ｗｎｔ−１、ＸＣＬｌ（リンホタクチン（ｌｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎ））、ＸＣＬ２（ＳＣＭ−Ｉｂ）、ＸＣＲｌ（ＧＰＲ５／ＣＣＸＣＲｌ）、ＹＹｌ、およびＺＦＰＭ２から選択される１つ以上の標的に結合することができる。
【００６５】
Ｆｃ領域のさらなる改変
本開示はまた、上記の変異Ｆｃ領域のいずれかまたはすべてと組み合わせることができるさらに改変されたＦｃ領域を有する操作された抗体を提供する。Ｆｃ領域の変異型（例えば、アミノ酸の置換、挿入、および／または付加、および／または欠失）は、エフェクター機能を増強または軽減させることが公知である（Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ  ３０：４８７−４９０、米国特許第５，６２４，８２１号、同第５，８８５，５７３号、およびＰＣＴ公開第ＷＯ００／４２０７２号、同第ＷＯ９９／５８５７２号、および同第ＷＯ０４／０２９２０７号を参照）。１つの実施形態において、抗体の変異Ｆｃ領域は、天然Ｆｃと比較して、同様のレベルのエフェクター機能の誘導を示す。別の実施形態において、変異Ｆｃ領域は、天然Ｆｃと比較して、より高いエフェクター機能誘導を示す。別の実施形態において、変異Ｆｃ領域は、天然Ｆｃと比較して、より低いエフェクター機能誘導を示す。別の実施形態において、変異Ｆｃ領域は、天然Ｆｃと比較して、より高いＡＤＣＣ誘導を示す。別の実施形態において、変異Ｆｃ領域は、天然Ｆｃと比較して、より低いＡＤＣＣ誘導を示す。別の実施形態において、変異Ｆｃ領域は、天然Ｆｃと比較して、より高いＣＤＣ誘導を示す。別の実施形態において、変異Ｆｃ領域は、天然Ｆｃと比較して、より低いＣＤＣ誘導を示す。変異Ｆｃ領域の特定の実施形態は、以下に詳細される。
【００６６】
また、Ｆｃ領域のグリコシル化は、エフェクター機能を増加または減少させるために、改変され得ることも公知である（例えば、Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ，１９９９，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １７：１７６−１８０、Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ７４：２８８−２９４、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ，２００２，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：２６７３３−２６７４０、Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８：３４６６−３４７３）  米国特許第６，６０２，６８４号、米国特許出願第１０／２７７，３７０号、米国特許出願第１０／１１３，９２９号、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ００／６１７３９Ａ１号、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ０１／２９２２４６Ａ１号、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ０２／３１１１４０Ａ１号、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ０２／３０９５４Ａ１号、Ｐｏｔｉｌｌｅｇｅｎｔ（商標）技術（Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ＧｌｙｃｏＭＡｂ（商標）グリコシル化操作化技術（ＧＬＹＣＡＲＴ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＡＧ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄを参照）。
【００６７】
したがって、一実施形態において、本開示の抗体のＦｃ領域は、アミノ酸残基のグリコシル化の変化を含む。別の実施形態において、アミノ酸残基のグリコシル化の変化は、エフェクター機能の低下をもたらす。別の実施形態において、アミノ酸残基のグリコシル化の変化は、エフェクター機能の増加をもたらす。特定の実施形態において、Ｆｃ領域は、軽減されたフコシル化を有する。別の実施形態において、Ｆｃ領域は、アフコシル化される（例えば、米国特許出願公開第２００５／０２２６８６７号を参照）。
【００６８】
最近の研究は、ＩｇＧ分子上のオリゴ糖へのシアル酸の付加がそれらの抗炎症活性を増強し、それらの細胞傷害性を変化させることを示唆している（Ｋｅｎｅｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１３，６７０−６７３（２００６）、Ｓｃａｌｌｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏ．２００７  Ｍａｒ；４４（７）：１５２４−３４）。したがって、抗体治療薬の有効性は、意図される用途に適している糖形態の選択により最適化され得る。抗体の２つのＣＨ２ドメインの間に介在する２つのオリゴ糖鎖が、Ｆｃ領域のその受容体への結合に関与する。前記の研究は、増加したシアリル化を有するＩｇＧ分子は、抗炎症特性を有し、減少したシアリル化を有するＩｇＧ分子は、増強した免疫刺激特性を有することを示している。したがって、抗体治療薬は、特定の用途のための適当なシアリル化プロファイルを有するよう「特製（ｔａｉｌｏｒ−ｍａｄｅ）」され得る。抗体のシアリル化状態のモジュレーションのための方法が、「Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  Ｗｉｔｈ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ」と題される国際公開第ＷＯ２００７／００５７８６号、および「Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ  Ｗｉｔｈ  Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ａｎｄ  Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ」と題される国際公開第ＷＯ２００７／１１７５０５号（これらのそれぞれは、すべての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に提示されている。
【００６９】
１つの実施形態において、本開示の抗体のＦｃ領域は、基準の未改変Ｆｃ領域と比較して、改変されたシアリル化プロファイルを含む。１つの実施形態において、本開示の抗体のＦｃ領域は、基準の未改変Ｆｃ領域と比較して、増加したシアリル化プロファイルを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体のＦｃ領域は、基準の未改変Ｆｃ領域と比較して、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％またはそれ以上のシアリル化の増加を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体のＦｃ領域は、基準の未改変Ｆｃ領域と比較して、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍またはそれ以上のシアリル化の増加を含む。
【００７０】
別の実施形態において、本開示の抗体のＦｃ領域は、基準の未改変Ｆｃ領域と比較して、減少したシアリル化プロファイルを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体のＦｃ領域は、基準の未改変Ｆｃ領域と比較して、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約６５％、約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％またはそれ以上のシアリル化の減少を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体のＦｃ領域は、基準の未改変Ｆｃ領域と比較して、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍またはそれ以上のシアリル化の減少を含む。
【００７１】
また、Ｆｃ領域を、タンパク質の半減期を増加させるために改変し得ることも公知である。半減期の増加は、患者に投与する薬物の量の減少および投与の頻度の減少を可能にする。したがって、半減期の増加を伴う本開示の抗体は、ＦｃとＦｃＲｎ受容体との間の相互作用に関与するものとして特定されたアミノ酸残基を改変（例えば、置換、欠失、または付加）することにより作製され得る（例えば、ＰＣＴ公開第９７／３４６３１号および同第０２／０６０９１９号を参照されたく、これらのそれぞれは、参照によりその全体が組み込まれる）。加えて、本開示の抗体の半減期は、当技術分野で広く利用されている技術によるＰＥＧまたはアルブミンへの共役により増加され得る。いくつかの実施形態において、本開示の抗体のＦｃ領域は、基準の未改変Ｆｃ領域と比較して、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％またはそれ以上の半減期の増加を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体のＦｃ領域は、基準の未改変Ｆｃ領域と比較して、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍またはそれ以上の半減期の増加を含む。
【００７２】
代替の実施形態において、本開示の抗体のＦｃ領域は、半減期の減少を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体のＦｃ領域は、基準の未改変Ｆｃ領域と比較して、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約１００％、約１２５％、約１５０％またはそれ以上の半減期の減少を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体のＦｃ領域は、基準の未改変Ｆｃ領域と比較して、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍またはそれ以上の半減期の減少を含む。
【００７３】
本開示は、比較され得る分子（例えば、天然Ｆｃ領域を有することを除いて同一のアミノ酸配列を有するタンパク質）と比較して、Ｆｃリガンド（例えば、Ｆｃ受容体、Ｃ１ｑ）に対する変化した結合特性を有するＦｃ変異タンパク質を包含する。結合特性の例としては、結合特異性、平衡解離定数（ＫＤ）、解離率および会合速度（それぞれｋｏｆｆおよびｋｏｎ）、結合親和性、ならびに／または結合力が挙げられるが、これらに限定されない。概して、低いＫＤを有する結合分子（例えば、抗体等のＦｃ変異タンパク質）は、高いＫＤを有する結合分子よりも好ましい可能性があることが理解される。しかしながら、場合によっては、ｋｏｎまたはｋｏｆｆの値が、ＫＤの値よりも関連し得る。当業者は、どの動力学パラメータが、所定の抗体用途に最も重要であるかを決定することができる。
【００７４】
そのリガンドに対するＦｃ領域の親和性および結合特性は、Ｆｃ−ＦｃγＲ相互作用、すなわち、ＦｃγＲへのＦｃ領域の特異的結合を決定するための、当技術分野で既知の多種多様のインビトロ検定法（生化学的または免疫学的ベースの検定）によって決定されてもよく、それには平衡方法（例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、または放射免疫測定法（ＲＩＡ））、または動力学（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析）、ならびに間接結合検定、競合阻害検定、蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）、ゲル電気泳動、およびクロマトグラフィー（例えば、ゲルろ過）等の他の方法が含まれるが、これらに限定されない。これらのおよび他の方法は、検査されている構成成分の１つ以上に対する標識を利用してもよく、および／または色素生成法、蛍光法、発光法、または同位体法を含むが、それらに限定されない多種多様の検出方法を用いてもよい。結合親和性および動力学の詳細な説明は、Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，ｅｄ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９）に見出すことができ、それは抗体−免疫原相互作用に焦点を合わせている。
【００７５】
１つの実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子と比較して、１つ以上のＦｃリガンドへの強化された結合を有する。別の実施形態では、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子の親和性よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも７倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍、または少なくとも３０倍、または少なくとも４０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも６０倍、または少なくとも７０倍、または少なくとも８０倍、または少なくとも９０倍、または少なくとも１００倍、または少なくとも２００倍高い、Ｆｃリガンドに対する親和性を有する。特定の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、Ｆｃ受容体への増強された結合を有する。別の具体的な実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡへの増強された結合を有する。さらなる特定の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＢへの増強された結合を有する。さらに別の特定の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、Ｆｃ受容体ＦｃＲｎへの増強された結合を有する。また別の特定の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子と比較して、Ｃ１ｑへの増強された結合を有する。
【００７６】
ＡＤＣＣによって標的細胞の溶解を媒介する任意の特定のＦｃ変異タンパク質の能力はアッセイすることができる。ＡＤＣＣ活性を評価するために、目的のＦｃ変異タンパク質は、免疫エフェクター細胞と組み合わせて標的細胞に付加され、免疫エフェクター細胞は、抗原抗体複合体によって活性化され、標的細胞の細胞溶解をもたらし得る。細胞溶解は、概して、溶解した細胞からの標識（例えば、放射性基質、蛍光色素、または天然細胞内タンパク質）の放出によって検出される。かかるアッセイのために有用なエフェクター細胞には、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。インビトロＡＤＣＣアッセイの特定の例は、Ｗｉｓｅｃａｒｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５  ７９：２７７−２８２、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １６６：１３５１−１３６１、Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２５８：１８３−１９１、Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：２９−３８に記載されている。目的のＦｃ変異タンパク質のＡＤＣＣ活性はまた、インビボ、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６に開示されているもの等の動物モデルにおいても評価され得る。
【００７７】
１つの実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子と比較して、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。特定の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子のＡＤＣＣ活性よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍高いＡＤＣＣ活性を有する。別の特定の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子と比較して、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡへの増強された結合を有し、増強されたＡＤＣＣ活性を有する。他の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子と比較して、増強されたＡＤＣＣ活性および増加した血清半減期の両方を有する。
【００７８】
１つの実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子と比較して、低減したＡＤＣＣ活性を有する。特定の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子のＡＤＣＣ活性よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍低いＡＤＣＣ活性を有する。別の特定の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子と比較して、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡへの低減した結合を有し、低減したＡＤＣＣ活性を有する。他の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子と比較して、低減したＡＤＣＣ活性および増加した血清半減期の両方を有する。
【００７９】
１つの実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子と比較して、増強されたＣＤＣ活性を有する。特定の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子のＡＤＣＣ活性よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍高いＣＤＣ活性を有する。他の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子と比較して、増強されたＣＤＣ活性および増加した血清半減期の両方を有する。１つの実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子と比較して、１つ以上のＦｃリガンドへの低減した結合を有する。別の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子の親和性よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも７倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍、または少なくとも３０倍、または少なくとも４０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも６０倍、または少なくとも７０倍、または少なくとも８０倍、または少なくとも９０倍、または少なくとも１００倍、または少なくとも２００倍低い、Ｆｃリガンドに対する親和性を有する。特定の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、Ｆｃ受容体への低減した結合を有する。別の特定の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡへの低減した結合を有する。さらなる特定の実施形態において、本明細書に記載されるＦｃ変異体は、同等の分子の親和性よりも少なくとも約５倍低い、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡに対する親和性を有し、該Ｆｃ変異体は、同等の分子の親和性の約２倍以内である、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＢに対する親和性を有する。さらに別の特定の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、Ｆｃ受容体ＦｃＲｎへの低減した結合を有する。また別の特定の実施形態において、Ｆｃ変異タンパク質は、同等の分子と比較して、ＣＩｑへの低減した結合を有する。
【００８０】
１つの実施形態において、本開示は、Ｆｃ変異体を提供し、ここで、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２５１、２５２、２５４、２５５、２５６、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７９、２８０、２８４、２９２、２９６、２９７、２９８、２９９、３０５、３１３、３１６、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３９、３４１、３４３、３７０、３７３、３７８、３９２、４１６、４１９、４２１、４４０、および４４３から選択される１つ以上の位置で、非天然に生じるアミノ酸残基（上記に開示される置換に加えて、またはそれら以外）をさらに含む。任意に、Ｆｃ領域は、当業者に公知のさらなるおよび／または代替的位置に非天然に生じるアミノ酸残基を含み得る（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、同第６，２７７，３７５号、同第６，７３７，０５６号、同第７，２１７，７９７号、米国特許公開第ＵＳ２００７／０１３５６２０号、ＰＣＴ特許公開第ＷＯ０１／５８９５７、同第ＷＯ０２／０６９１９、同第ＷＯ０４／０１６７５０、同第ＷＯ０４／０２９２０７、同第ＷＯ０４／０３５７５２、同第ＷＯ０４／０７４４５５、同第ＷＯ０４／０９９２４９、同第ＷＯ０４／０６３３５１、同第ＷＯ０５／０７０９６３、同第ＷＯ０５／０４０２１７、同第ＷＯ０５／０９２９２５、および同第ＷＯ０６／０２０１１４号を参照されたく、これらのそれぞれは、参照によりその全体が組み込まれる）。
【００８１】
特定の実施形態において、本開示は、Ｆｃ変異体を提供し、ここで、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによって付番されたとき、２３４Ｄ、２３４Ｅ、２３４Ｎ、２３４Ｑ、２３４Ｔ、２３４Ｈ、２３４Ｙ、２３４Ｉ、２３４Ｖ、２３４Ｆ、２３５Ａ、２３５Ｄ、２３５Ｒ、２３５Ｗ、２３５Ｐ、２３５Ｓ、２３５Ｎ、２３５Ｑ、２３５Ｔ、２３５Ｈ、２３５Ｙ、２３５Ｉ、２３５Ｖ、２３５Ｆ、２３６Ｅ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２３９Ｎ、２３９Ｑ、２３９Ｆ、２３９Ｔ、２３９Ｈ、２３９Ｙ、２４０Ｉ、２４０Ａ、２４０Ｔ、２４０Ｍ、２４１Ｗ、２４１Ｌ、２４１Ｙ、２４１Ｅ、２４１Ｒ、２４３Ｗ、２４３Ｌ  ２４３Ｙ、２４３Ｒ、２４３Ｑ、２４４Ｈ、２４５Ａ、２４７Ｌ、２４７Ｖ、２４７Ｇ、２５１Ｆ、２５２Ｙ、２５４Ｔ、２５５Ｌ、２５６Ｅ、２５６Ｍ、２６２Ｉ、２６２Ａ、２６２Ｔ、２６２Ｅ、２６３Ｉ、２６３Ａ、２６３Ｔ、２６３Ｍ、２６４Ｌ、２６４Ｉ、２６４Ｗ、２６４Ｔ、２６４Ｒ、２６４Ｆ、２６４Ｍ、２６４Ｙ、２６４Ｅ、２６５Ｇ、２６５Ｎ、２６５Ｑ、２６５Ｙ、２６５Ｆ、２６５Ｖ、２６５Ｉ、２６５Ｌ、２６５Ｈ、２６５Ｔ、２６６Ｉ、２６６Ａ、２６６Ｔ、２６６Ｍ、２６７Ｑ、２６７Ｌ、２６８Ｅ、２６９Ｈ、２６９Ｙ、２６９Ｆ、２６９Ｒ、２７０Ｅ、２８０Ａ、２８４Ｍ、２９２Ｐ、２９２Ｌ、２９６Ｅ、２９６Ｑ、２９６Ｄ、２９６Ｎ、２９６Ｓ、２９６Ｔ、２９６Ｌ、２９６Ｉ、２９６Ｈ、２６９Ｇ、２９７Ｓ、２９７Ｄ、２９７Ｅ、２９８Ｈ、２９８Ｉ、２９８Ｔ、２９８Ｆ、２９９Ｉ、２９９Ｌ、２９９Ａ、２９９Ｓ、２９９Ｖ、２９９Ｈ、２９９Ｆ、２９９Ｅ、３０５Ｉ、３１３Ｆ、３１６Ｄ、３２５Ｑ、３２５Ｌ、３２５Ｉ、３２５Ｄ、３２５Ｅ、３２５Ａ、３２５Ｔ、３２５Ｖ、３２５Ｈ、３２７Ｇ、３２７Ｗ、３２７Ｎ、３２７Ｌ、３２８Ｓ、３２８Ｍ、３２８Ｄ、３２８Ｅ、３２８Ｎ、３２８Ｑ、３２８Ｆ、３２８Ｉ、３２８Ｖ、３２８Ｔ、３２８Ｈ、３２８Ａ、３２９Ｆ、３２９Ｈ、３２９Ｑ、３３０Ｋ、３３０Ｇ、３３０Ｔ、３３０Ｃ、３３０Ｌ、３３０Ｙ、３３０Ｖ、３３０Ｉ、３３０Ｆ、３３０Ｒ、３３０Ｈ、３３１Ｇ、３３１Ａ、３３１Ｌ、３３１Ｍ、３３１Ｆ、３３１Ｗ、３３１Ｋ、３３１Ｑ、３３１Ｅ、３３１Ｓ、３３１Ｖ、３３１Ｉ、３３１Ｃ、３３１Ｙ、３３１Ｈ、３３１Ｒ、３３１Ｎ、３３１Ｄ、３３１Ｔ、３３２Ｄ、３３２Ｓ、３３２Ｗ、３３２Ｆ、３３２Ｅ、３３２Ｎ、３３２Ｑ、３３２Ｔ、３３２Ｈ、３３２Ｙ、３３２Ａ、３３９Ｔ、３７０Ｅ、３７０Ｎ、３７８Ｄ、３９２Ｔ、３９６Ｌ、４１６Ｇ、４１９Ｈ、４２１Ｋ、４４０Ｙ、および４４３Ｗから選択される少なくとも１つの非天然に生じるアミノ酸残基を含む。任意に、Ｆｃ領域は、当業者に公知のさらなるおよび／または代替的な非天然に生じるアミノ酸残基を含み得る（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、同第６，２７７，３７５号、同第６，７３７，０５６号、ＰＣＴ特許公開第ＷＯ０１／５８９５７号、第ＷＯ０２／０６９１９号、第ＷＯ０４／０１６７５０号、第ＷＯ０４／０２９２０７号、第ＷＯ０４／０３５７５２号、および第ＷＯ０５／０４０２１７号を参照）。
【００８２】
特定の実施形態において、本開示は、Ｆｃ変異抗体を提供し、ここで、Ｆｃ領域は、２３４、２３５、および３３１から選択される１つ以上の位置で、少なくとも１つの改変（例えば、アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、アミノ酸付加）を含む。１つの実施形態において、非天然に生じるアミノ酸は、２３４Ｆ、２３５Ｆ、２３５Ｙ、および３３１Ｓから選択される。別の特定の実施形態において、本開示は、Ｆｃ変異体を提供し、ここで、Ｆｃ領域は、２３９、３３０、および３３２から選択される１つ以上の位置で、少なくとも１つの非天然に生じるアミノ酸を含む。１つの実施形態において、非天然に生じるアミノ酸は、２３９Ｄ、３３０Ｌ、および３３２Ｅから選択される群から選択される。
【００８３】
特定の実施形態において、本開示は、Ｆｃ変異抗体を提供し、ここで、Ｆｃ領域は、２５２、２５４、および２５６から選択される１つ以上の位置で、少なくとも１つの非天然に生じるアミノ酸を含む。１つの実施形態において、非天然に生じるアミノ酸は、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８１，２３５１４−２３５２４（２００６）、および米国特許第７，０８３，７８４号（これらの両方は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるように、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅから選択される群（「ＹＴＥ修飾」とも称される）から選択される。
【００８４】
抗体を産生する方法
本開示の操作された抗体は、抗体の合成のために当技術分野で既知のいずれかの方法により、特に、化学合成、または好ましくは、組換え発現技術により産生され得る。
【００８５】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレイ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む、当技術分野で既知の多種多様の技術を用いて調製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、当技術分野で既知であり、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）（該参照は、参照によりそれらの全体が組み込まれる）に教示されているものを含むハイブリドーマ技術を用いて産生され得る。本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術により産生された抗体には限定されない。「モノクローナル抗体」という用語は、任意の真核性、原核性、またはファージクローンを含む単クローンに由来する抗体を指し、それが産生された方法によらない。
【００８６】
ハイブリドーマ技術を用いて特異的抗体を産生し、それに関してスクリーニングするための方法は、常套的なものであり、当技術分野で公知である。簡潔に言えば、マウスを標的抗原（完全長タンパク質またはそのドメイン、例えば、細胞外ドメインまたはリガンド結合性ドメイン）で免疫化することが可能であり、免疫応答が検出される、例えば、該標的抗原に特異的な抗体が該マウス血清中で検出されると、該マウス脾臓を採取し、脾細胞を単離する。次いで、該脾細胞を、公知の技術により、任意の適当な骨髄腫細胞、例えば、ＡＴＣＣから入手可能な細胞系ＳＰ２０からの細胞に融合させる。ハイブリドーマを選択し、限界希釈によりクローン化する。次いで、ハイブリドーマクローンを、本開示のポリペプチドに結合可能な抗体を分泌する細胞に関して、当技術分野で公知の方法によってアッセイする。高レベルの抗体を一般に含有する腹水は、陽性ハイブリドーマクローンでマウスを免疫化することにより生成することができる。
【００８７】
したがって、モノクローナル抗体は、本開示の抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養することによって生成することができ、好ましくは、該ハイブリドーマは、標的抗原で免疫化されたマウスから単離された脾細胞を骨髄腫細胞と融合させ、次いで、特異的標的抗原に結合可能な抗体を分泌するハイブリドーマクローンに関して、該融合から生じたハイブリドーマをスクリーニングすることにより生成される。
【００８８】
特異的標的抗原エピトープを認識する抗体フラグメントは、当業者に公知のいずれかの技術により生成され得る。例えば、本開示のＦａｂおよびＦ（ａｂ′）２フラグメントは、（Ｆａｂフラグメントを産生するための）パパインまたは（Ｆ（ａｂ′）２フラグメントを産生するための）ペプシン等の酵素を用いて、免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断により産生され得る。Ｆ（ａｂ′）２フラグメントは、可変領域、軽鎖定常領域、および重鎖のＣＨ１ドメインを含有する。さらに、本開示の抗体はまた、当技術分野で公知の種々のファージディスプレイ法を用いて生成することもできる。
【００８９】
ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインは、それらをコードするポリヌクレオチド配列を担持するファージ粒子の表面上に提示される。特に、ＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列を、動物ｃＤＮＡライブラリー（例えば、リンパ組織のヒトまたはマウスｃＤＮＡライブラリー）から増幅させる。ＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡを、ｓｃＦｖリンカーと共にＰＣＲにより組換え、ファジミドベクター（例えば、ｐＣＡＮＴＡＢ  ６またはｐＣｏｍｂ  ３  ＨＳＳ）内にクローン化する。ベクターは、大腸菌中でエレクトロポレーションされ、大腸菌は、ヘルパーファージに感染させる。これらの方法で使用されるファージは、典型的には、ｆｄおよびＭ１３を含む繊維状ファージであり、ＶＨおよびＶＬドメインは、通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに組換え的に融合させる。目的のエピトープに結合する抗原結合ドメインを発現するファージは、抗原、例えば、標識抗原または固体表面もしくはビーズに結合もしくは捕捉された抗原を用いて、選択または特定され得る。本開示の抗体を作製するために使用することができるファージディスプレイ法の例には、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８２：４１−５０、Ａｍｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：１７７、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２−９５８、Ｐｅｒｓｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｇｅｎｅ  １８７：９、Ｂｕｒｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５７：１９１−２８０、国際出願第ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４号、国際公開第ＷＯ９０／０２８０９号、同第ＷＯ９１／１０７３７号、同第ＷＯ９２／０１０４７号、同第ＷＯ９２／１８６１９号、同第ＷＯ９３／１１２３６号、同第ＷＯ９５／１５９８２号、同第ＷＯ９５／２０４０１号、および同第ＷＯ９７／１３８４４、ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号、および同第５，９６９，１０８号（これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されているものが含まれる。
【００９０】
上の参考文献に記載されるように、ファージ選択後、ファージ由来の抗体コード領域を、単離し、それを使用して、ヒト抗体を含む全抗体、または他の任意の所望の抗原結合フラグメントを生成することができ、例えば、下記のように、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌を含む任意の所望の宿主内で発現することができる。また、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、およびＦ（ａｂ′）２フラグメントを組換え的に産生するための技術は、国際公開第ＷＯ９２／２２３２４号、Ｍｕｌｌｉｎａｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １２：８６４、Ｓａｗａｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，ＡＪＲＩ  ３４：２６、およびＢｅｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１（該参照文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれる）等に開示されるもの等の当技術分野で公知の方法を用いて利用することができる。
【００９１】
全抗体を生成するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、および制限部位を保護するためのフランキング配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、ｓｃＦｖクローン中のＶＨまたはＶＬ配列を増幅することができる。当業者に既知のクローン化技術を利用して、ＰＣＲ増幅ＶＨドメインは、ＶＨ定常ドメイン、例えば、ヒトガンマ４定常領域を発現するベクターへとクローン化することができ、ＰＣＲ増幅ＶＬドメインは、ＶＬ定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターへとクローン化することができる。好ましくは、該ＶＨまたはＶＬドメインを発現するためのベクターは、ＥＦ−１αプロモーター、分泌シグナル、可変ドメイン、定常ドメインのためのクローニング部位、およびネオマイシン等の選択マーカーを含む。また、ＶＨおよびＶＬドメインは、必要な定常領域を発現する１つのベクターへとクローン化されてもよい。次いで、重鎖転換ベクターおよび軽鎖転換ベクターは、当業者に既知の技術を用いて、細胞株にコトランスフェクトされて、完全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現する安定または一過性細胞株を生成する。
【００９２】
ヒトにおける抗体のインビボでの使用およびインビトロ検出アッセイを含むいくつかの用途には、ヒトまたはキメラ抗体を使用するのが好ましい場合がある。ヒト対象の治療には完全ヒト抗体が特に望ましい。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列由来の抗体ライブラリーを用いる上記のファージディスプレイ法を含む当技術分野で既知の種々の方法により作製され得る。米国特許第４，４４４，８８７号および同第４，７１６，１１１号、ならびに国際公開第ＷＯ９８／４６６４５号、同第ＷＯ９８／５０４３３号、同第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９８／１６６５４号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、同第ＷＯ９６／３３７３５号、および同第ＷＯ９１／１０７４１号も参照されたく、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００９３】
また、ヒト抗体は、機能的内因性免疫グロブリンを発現できないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用して産生することもできる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体を、ランダムに、または相同組換えにより、マウス胚幹細胞内に導入することが可能である。代替的に、該ヒト重鎖および軽鎖遺伝子に加えて、ヒト可変領域、定常領域、および多様性領域を、マウス胚幹細胞内に導入することが可能である。マウス重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同組換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入とは別にまたは該導入と同時に、非機能性にされ得る。特に、ＪＨ領域のホモ接合欠失は、内因性抗体の産生を妨げる。改変した胚幹細胞を拡大し、胚盤胞内にマイクロインジェクションして、キメラマウスを産出する。次いで、キメラマウスを交配させて、ヒト抗体を発現するホモ接合子孫を生じる。該トランスジェニックマウスを、常法により、選択された抗原、例えば、本開示のポリペプチドのすべてまたはその一部で免疫化する。従来のハイブリドーマ技術を用いて、該免疫化トランスジェニックマウスから該抗原に対するモノクローナル抗体を得ることが可能である。トランスジェニックマウスに保有されるヒト免疫グロブリントランス遺伝子は、Ｂ細胞分化中で再構成され、続いて、クラススイッチおよび体細胞変異を受ける。したがって、このような技術を用いて、治療的に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＥ抗体を産生することが可能である。ヒト抗体を産生するための本技術の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ（１９９５，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３）を参照のこと。ヒト抗体およびモノクローナル抗体を産生するための本技術、ならびにかかる抗体を産生するためのプロトコルの詳細な考察については、例えば、国際公開第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、および同第ＷＯ９６／３３７３５号、ならびに米国特許第５，４１３，９２３号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，５４５，８０６号、同第５，８１４，３１８号、および同第５，９３９，５９８号を参照されたく、これらは、参照によりそれら全体が組み込まれる。加えて、Ｍｅｄａｒｅｘ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）等の企業が、前記と同様の技術を用いて、選択された抗原に対するヒト抗体を提供することに関与し得る。
【００９４】
キメラ抗体は、異なる抗体の部分が、非ヒト抗体およびヒト免疫グロブリン定常領域由来の可変領域を有する抗体等の異なる免疫グロブリン分子由来の分子である。キメラ抗体を産生するための方法は、当技術分野で既知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２、Ｏｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４、Ｇｉｌｌｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２、ならびに米国特許第６，３１１，４１５号、同第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、および同第４，８１６，３９７号を参照されたく、これらは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。非ヒト種由来の１つ以上のＣＤＲおよびヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を含むキメラ抗体は、例えば、ＣＤＲグラフティング（欧州特許第ＥＰ２３９，４００号、国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号、ならびに米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、および同第５，５８５，０８９号）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）またはリサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（欧州特許第ＥＰ５９２，１０６号、同第ＥＰ５１９，５９６号、Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７：８０５、およびＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ  ９１：９６９）、ならびにチェーンシャフリング（ｃｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（米国特許第５，５６５，３３２号）を含む、当技術分野で既知の種々の技術を用いて産生することができる。
【００９５】
しばしば、フレームワーク領域内のフレームワーク残基は、ＣＤＲドナー抗体からの対応する残基で置換して、抗原結合を変化させる、好ましくは改善するであろう。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で公知の方法によって、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を特定するための該ＣＤＲおよびフレームワーク残基の相互作用のモデリング、ならびに特定の位置における異常なフレームワーク残基を特定するための配列比較により特定される（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号、およびＲｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３を参照されたく、これらは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。
【００９６】
ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク領域と、非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するＣＤＲとを含む、所定の抗原に結合可能な抗体またはその変異体またはそのフラグメントである。ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）に対応し、フレームワーク領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである、少なくとも１つ、典型的には、２つの可変ドメインの実質的にすべてを含む。好ましくは、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部も含む。通常、該抗体は、軽鎖、および重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含有する。該抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４領域も含み得る。該ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥを含む免疫グロブリン、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含むいずれかのアイソタイプのいかなるクラスから選択され得る。通常、定常ドメインは、ヒト化抗体が細胞傷害性活性を示す望ましい場合には、補体結合定常ドメインであり、該クラスは、典型的には、ＩｇＧ１である。このような細胞傷害性活性が望ましくない場合には、定常ドメインは、ＩｇＧ２クラスのものであり得る。ヒト化抗体は、１を超えるクラスまたはアイソタイプからの配列を含むことが可能であり、所望のエフェクター機能を最適化するために特定の定常ドメインを選択することは当技術分野の通常の技量の範囲内である。ヒト化抗体のフレームワークおよびＣＤＲ領域は、親配列、例えば、ドナーＣＤＲに厳密に対応する必要はなく、あるいは、コンセンサスフレームワークが少なくとも１つの残基の置換、挿入、または欠失により突然変異誘発されて、その部位のＣＤＲまたはフレームワーク残基がコンセンサスあるいは移入抗体のいずれかに対応しないようにされることが可能である。しかしながら、このような変異は、広範なものではないであろう。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも７５％、より頻繁には９０％、さらには９５％を超える親フレームワーク領域（ＦＲ）およびＣＤＲ配列のものに対応するであろう。
【００９７】
ヒト化抗体は、ＣＤＲグラフティング（欧州特許第ＥＰ２３９，４００号、国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号、および米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、および同第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたはリサーフェシング（欧州特許第ＥＰ５９２，１０６号、同第ＥＰ５１９，５９６号、Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２８（４／５）：４８９−４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４、およびＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ  ９１：９６９−９７３）、チェーンシャフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）、ならびに例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、同第５，７６６，８８６号、同第５，５８５，０８９号、国際公開第ＷＯ９３１７１０５号、Ｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−２５、Ｃａｌｄａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１３：３５３−６０、Ｍｏｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０：２６７−７９、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−８４、Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．９：８９５−９０４、Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５（２３  Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ、Ｃｏｕｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５：１７１７−２２、Ｓａｎｄｈｕ，１９９４，Ｇｅｎｅ  １５０：４０９−１０、Ｐｅｄｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３５：９５９−７３、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３、およびＰｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６が含まれるが、これらに限定されない、当技術分野で公知の種々の技術を用いて産生され得る。しばしば、フレームワーク領域内のフレームワーク残基は、抗原結合を変化させる、好ましくは改善するためにＣＤＲドナー抗体由来の対応する残基で置換されるであろう。これらのフレームワーク置換は、当技術分野で公知の方法によって、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を特定するための該ＣＤＲおよびフレームワーク残基の相互作用のモデリング、ならびに特定の位置における異常なフレームワーク残基を特定するための配列比較により特定される（例えば、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，５８５，０８９号およびＲｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３を参照されたく、これらは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。
【００９８】
さらに、本開示の抗体は、同様に、当業者に公知の技術を用いて、抗イディオタイプ抗体を生成するために利用され得る（例えば、Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ  ＆  Ｂｏｎａ，１９８９，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．７：４３７−４４４、およびＮｉｓｓｉｎｏｆｆ，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：２４２９−２４３８を参照）。本開示は、本開示の抗体またはそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドの使用を利用する方法を提供する。
【００９９】
さらに、種々の刊行物は、ＦｃＲｎ結合ポリペプチドを分子内に導入することによって（国際公開第ＷＯ９７／４３３１６号、米国特許第５，８６９，０４６号、米国特許第５，７４７，０３５号、国際公開第ＷＯ９６／３２４７８号、国際公開第ＷＯ９１／１４４３８号）、あるいはＦｃＲｎ結合親和性は維持されているが、他のＦｃ受容体に対する親和性は著しく低下している抗体と分子とを融合させることによって（国際公開第ＷＯ９９／４３７１３号）、あるいは抗体のＦｃＲｎ結合ドメインと融合させることによって（国際公開第ＷＯ００／０９５６０号、米国特許第４，７０３，０３９号）のいずかで、半減期が修飾される生理的に活性な分子を得るための方法を記載している。生理的に活性な分子の半減期を増加させるための具体的な技術および方法は、２００６年８月１日に付与された「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  Ｈａｌｆ−ｌｉｖｅｓ」と題される米国特許第７，０８３，７８４号に見出され得、これは、すべての目的で参照により本明細書に組み込まれる。特に、本開示の抗体は、アミノ酸残基変異（ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスにより付番される）：  Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６ＥまたはＨ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ／Ｙ４３６Ｈを含むＦｃ領域を含むと企図される。
【０１００】
抗体をコードするポリヌクレオチド
当技術分野で公知のいずれかの方法により、該ポリヌクレオチドは入手することができ、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が判定され得る。抗体のアミノ酸配列は既知であるため、これらの抗体をコードするヌクレオチド配列は、当技術分野で公知の方法を用いて判定することができ、すなわち、特定のアミノ酸をコードすることが知られているヌクレオチドコドンを、本開示の抗体またはそのフラグメントをコードする核酸を生成するような方法で組み立てられる。抗体をコードするこのようなポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから組み立てられてもよく（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １７：２４２に記載される）、簡潔に言えば、抗体をコードする配列の部分を含有する重複オリゴヌクレオチドの合成、それらのオリゴヌクレオチドのアニールおよび連結、次いで、連結されたオリゴヌクレオチドのＰＣＲによる増幅を含む。
【０１０１】
代替的に、抗体をコードするポリヌクレオチドは、適切な供与源に由来する核酸から生成され得る。特定の抗体をコードする核酸を含有するクローンが利用可能でないが、抗体分子の配列が知られている場合、免疫グロブリンをコードする核酸を化学的に合成し、または適切な供与源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリー、または該抗体を発現する任意の組織もしくは細胞から生成されたｃＤＮＡライブラリー、またはそのような組織もしくは細胞から単離され核酸、好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ）から得ることが可能であり、これは、該配列の３′および５′末端とハイブリッド形成可能な合成プライマーを用いるＰＣＲ増幅によって、または特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを用いるクローン化によって行うことが可能であり、それにより、例えば、該抗体をコードするｃＤＮＡライブラリーからのｃＤＮＡクローンを特定することが可能である。次いで、ＰＣＲによって生成された増幅された核酸を、当技術分野で公知のいずれかの方法を用いて、複製可能なクローン化ベクターへとクローン化することが可能である。
【０１０２】
一旦抗体のヌクレオチド配列が決定されると、ヌクレオチド配列の操作のための当技術分野で公知の方法、例えば、組換えＤＮＡ技術、部位特異的突然変異誘発、ＰＣＲ等を用いて（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｄ  Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、およびＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．，１９９８，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹに記載される技術を参照されたく、これらは共に、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）、抗体のヌクレオチド配列を操作して、異なるアミノ酸配列を有する抗体を得、そのようにして、例えば、アミノ酸の置換、欠失、および／もしくは挿入を行うことが可能である。
【０１０３】
特定の実施形態において、通常の組換えＤＮＡ技術を用いて、該ＣＤＲの１つ以上をフレームワーク領域内に挿入する。フレームワーク領域は、天然に生じるまたはコンセンサスフレームワーク領域であることが可能であり、好ましくは、ヒトフレームワーク領域である（例えば、ヒトフレームワーク領域の一覧については、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７８：４５７−４７９を参照）。好ましくは、フレームワーク領域およびＣＤＲの組み合わせにより生成されたポリヌクレオチドは、ＥｐｈＡ２またはＥｐｈＡ４に特異的に結合する抗体をコードする。好ましくは、上記に論じられるように、１つ以上のアミノ酸置換は、該フレームワーク領域内に施され得、好ましくは、アミノ酸置換が抗体のその抗原への結合を改善する。さらに、このような方法を使用して、鎖内ジスルフィド結合に関与する１つ以上の可変領域システイン残基のアミノ酸置換または欠失を施して、１つ以上の鎖内ジスルフィド結合を欠く抗体を生成することが可能である。該ポリヌクレオチドに対する他の変化は、本開示に包含され、当技術分野の技量の範囲内である。
【０１０４】
抗体の組換え発現
本開示の抗体、その誘導体、類似体、またはフラグメントの組換え発現は、抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を要する。一旦本開示の抗体、または抗体の重鎖もしくは軽鎖、またはその一部をコードするポリヌクレオチドが得られると、当技術分野で公知の方法を用いる組換えＤＮＡ技術により、抗体の産生のためのベクターを産生することが可能である。したがって、ヌクレオチド配列をコードする抗体を含有するポリヌクレオチドを発現させることによるタンパク質を調製するための方法が、本明細書に記載されている。当業者に周知である方法を用いて、抗体コード配列ならびに適切な転写および翻訳調節シグナルを含有する発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボ遺伝子組換えが含まれる。
【０１０５】
したがって、本開示は、プロモーターに機能的に連結された、本開示の抗体、抗体の重鎖もしくは軽鎖、抗体の重鎖もしくは軽鎖可変ドメインもしくはその一部、あるいは重鎖もしくは軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターを提供する。このようなベクターは、該抗体の定常ドメインをコードするヌクレオチド配列を含み得（例えば、国際公開第ＷＯ８６／０５８０７号および同第ＷＯ８９／０１０３６号、ならびに米国特許第５，１２２，４６４号を参照）、該抗体の可変ドメインは、全重鎖、全軽鎖、または全重鎖もしくは全軽鎖の両方の発現のために、このようなベクター内にクローン化され得る。
【０１０６】
発現ベクターを、従来の技術によって、宿主細胞に移し、次いで、トランスフェクト細胞を、従来の技術により培養して、本開示の抗体を産生する。したがって、本開示は、異種プロモーターに機能的に連結された、本開示の抗体もしくはそのフラグメント、またはその重鎖もしくは軽鎖、またはそれらの一部、または本開示の１本鎖抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞を含む。２本鎖抗体の発現のためのある実施形態において、重鎖および軽鎖の両方をコードするベクターは、下に詳述する通り、免疫グロブリン分子全体の発現のために宿主細胞中で共発現させてもよい。
【０１０７】
本開示の抗体を発現させるために、種々の宿主発現ベクター系が利用され得る（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号を参照）。このような宿主発現系は、ビヒクルに相当し、これにより、目的のコード配列が産生され、次いで、精製され得るが、適当なヌクレオチドコード配列で形質転換またはトランスフェクトされた場合に、本開示の抗体を原位置（in situ）で発現し得る細胞にも相当する。これらは、抗体コード配列を含有する組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、またはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、大腸菌およびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）等の微生物、抗体コード配列を含有する組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｐｉｃｈｉａ）、抗体コード配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系、抗体コード配列を含有する組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス，ＣａＭＶ；タバコモザイクウイルス，ＴＭＶ）に感染した、もしくは組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系、または哺乳動物細胞のゲノムに由来するプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）もしくは哺乳動物ウイルスに由来するプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含有する組換え発現構築物を保持する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨＫ、２９３、ＮＳ０、および３Ｔ３細胞）が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、大腸菌等の細菌細胞、およびより好ましくは、特に全組換え抗体の発現には真核細胞を、組換え抗体の発現のために使用する。
【０１０８】
例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）等の哺乳動物細胞は、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要前初期遺伝子プロモーターエレメント等のベクターと併せて、抗体のための有効な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６，Ｇｅｎｅ  ４５：１０１およびＣｏｃｋｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８：２）。
【０１０９】
細菌系において、いくつかの発現ベクターは、発現させようとする抗体のために意図される使用に応じて、有利に選択され得る。例えば、抗体の医薬組成物の生成のために、大量のかかるタンパク質が産生されるべきである場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を誘導するベクターが望ましい可能性がある。このようなベクターとしては、融合タンパク質が産生されるように、抗体コード配列を個々にｌａｃＺコード領域とインフレームで該ベクターに連結され得る大腸菌発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，ＥＭＢＯ  １２：１７９１）；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ  ＆  Ｉｎｏｕｙｅ，１９８５，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１３：３１０１−３１０９、Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ  ＆  Ｓｃｈｕｓｔｅｒ，１９８９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３−５５０９）等が含まれるが、これらに限定されない。また、ＰＧＥＸベクターを使用して、グルタチオン５−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として、外来ポリペプチドを発現させることが可能である。概して、かかる融合タンパク質は、可溶性であり、マトリックスグルタチオン−アガロースビーズへの吸着および結合、続いて、遊離グルタチオンの存在下での溶出によって、溶解した細胞から容易に精製することができる。該ｐＧＥＸベクターは、クローン化標的遺伝子産物がＧＳＴ部分から放出され得るように、トロンビンまたはＸａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計される。
【０１１０】
昆虫系においては、外来遺伝子を発現させるためのベクターとして、オートグラファ・カリフォルニカ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）が使用される。該ウイルスは、スポドプテラ・フルギペルダ細胞中で成長する。該抗体コード配列は、該ウイルスの非必須領域内に個々にクローン化され、ＡｃＮＰＶプロモーターの制御下に配置され得る。
【０１１１】
哺乳動物宿主細胞においては、多数のウイルスベースの発現系が利用され得る。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合、目的の抗体コード配列は、アデノウイルス転写／翻訳調節複合体、例えば、後期プロモーターおよび三成分リーダー配列に連結することが可能である。次いで、このキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボ組換えによって、アデノウイルスゲノムに挿入することが可能である。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域Ｅ１またはＥ３）への挿入は、感染宿主内で生存可能で、かつ抗体を発現することができる組換えウイルスをもたらすであろう（例えば、Ｌｏｇａｎ  ＆  Ｓｈｅｎｋ，１９８４，ＰＮＡＳ  ８  １：６３５５−６３５９を参照）。また、挿入された抗体コード配列の効率的な翻訳のために、具体的な開始シグナルが必要とされ得る。これらのシグナルには、ＡＴＧ開始コドンおよび隣接配列が含まれる。さらに、挿入物全体の翻訳を保証するために、該開始コドンは、所望のコード配列のリーディングフレームとフェーズが一致していなければならない。これらの外因性翻訳調節シグナルおよび開始コドンは、天然および合成の両方で、多種多様の起源由来であってもよい。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーター等の組み込みによって増強され得る（例えば、Ｂｉｔｔｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６−５４４を参照）。
【０１１２】
加えて、所望の特定の様態で、挿入された配列の発現を調節する、または該遺伝子産物を修飾およびプロセシングする宿主細胞株が選択され得る。タンパク質産物のかかる修飾（例えば、グリコシル化）およびプロセシング（例えば、切断）は、該タンパク質の機能に重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質および遺伝子産物の翻訳後プロセシングならびに修飾のための、特徴的および特異的機構を有する。適切な細胞株または宿主系を選択して、発現させた外来タンパク質の正しい修飾およびプロセシングを確保することができる。この目的のために、遺伝子産物の適切な一次転写、グリコシル化、およびリン酸化のプロセシングのための細胞機構を有する真核性宿主細胞が使用することが可能である。かかる哺乳動物宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、ＨｅＩａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２Ｏ、ＮＳ１、およびＴ４７Ｄ、ＮＳ０（いかなる免疫グロブリン鎖も内因性で産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ならびにＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１３】
１つの実施形態において、本開示の抗体は、米国特許第７，５２１，５４１号および米国特許公開第１２／３９９，２４１号に開示される方法に従って産生され、これらは、参照によりそれらの全体が組み込まれる。
【０１１４】
組換えタンパク質の長期的な高収率の産生のためには、安定した発現が好ましい。例えば、抗体を安定に発現する細胞株を、操作することが可能である。ウイルス複製起点を含有する発現ベクターを使用する代わりに、適当な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位等）により制御されるＤＮＡ、および選択可能なマーカーで宿主細胞を形質転換することが可能である。外来ＤＮＡの導入に続いて、操作された細胞は、強化培地中で１〜２日間増殖させ、次いで、選択培地に切り替えることが可能である。組換えプラスミド中の選択可能なマーカーは、選択に対する耐性を付与し、プラスミドをそれらの染色体に安定に統合した細胞が増殖し、かつ増殖巣を形成することを可能にし、次いで細胞は、クローン化され、細胞株に拡大され得る。この方法は、該抗体を発現する細胞株を操作するために有利に用いられ得る。このような操作された細胞株は、抗体と直接的または間接的に相互作用する組成物のスクリーニングおよび評価において特に有用であり得る。
【０１１５】
多数の選択系を使用することができ、それには、限定されるものではないが、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９７７，Ｃｅｌｌ  １１：２２３）、グルタミンシンテターゼ、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ  ＆  Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ４８：２０２）、およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｃｅｌｌ  ２２：８−１７）が含まれるが、これらの遺伝子はそれぞれ、ｔｋ−、ｇｓ−、ｈｇｐｒｔ−、またはａｐｒｔ−細胞において使用され得る。また、以下の遺伝子に関する選択の基礎として、抗代謝産物の耐性を使用することができる：メトトレキセートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，ＰＮＡＳ  ７７：３５７；Ｏ’Ｈａｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，ＰＮＡＳ  ７８：１５２７）、ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ＆  Ｂｅｒｇ，１９８１，ＰＮＡＳ  ７８：２０７２）、アミノグリコシドＧ−４１８に対する耐性を付与するｎｅｏ（Ｗｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，１９９１，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７、Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３、Ｍｕｌｌｉｇａｎ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６、およびＭｏｒｇａｎ  ａｎｄ  Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：  １９１、Ｍａｙ，１９９３，ＴＩＢ  ＴＥＣＨ  １１：１５５−）、ならびにハイグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｇｅｎｅ  ３０：１４７）。組換えＤＮＡ技術の技術分野で一般に公知の方法は、所望の組換えクローンを選択するために通常に適用することが可能であり、かかる方法は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）、およびｉｎ  Ｃｈａｐｔｅｒｓ  １２  ａｎｄ  １３，Ｄｒａｃｏｐｏｌｉ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）、Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１に記載され、これらの参考文献は、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。
【０１１６】
抗体の発現レベルは、ベクター増幅によって増加させることができる（概説については、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  ａｎｄ  Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ，Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｇｅｎｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｎｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ＤＮＡ  ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３．（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照）。抗体を発現するベクター系におけるマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養物中に存在する阻害剤レベルの増加は、マーカー遺伝子のコピー数を増加させるであろう。増幅領域は、抗体遺伝子と関連しているため、抗体の産生もまた増加するであろう（Ｃｒｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２５７）。
【０１１７】
宿主細胞は、本開示の２つの発現ベクターでコトランスフェクトされ得、第１のベクターは、重鎖由来ポリペプチドをコードし、第２のベクターは、軽鎖由来ポリペプチドをコードする。これらの２つのベクターは、重鎖および軽鎖ポリペプチドの等しい発現を可能にする同一の選択可能なマーカーを含有し得る。代替的に、重鎖および軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、かつそれらを発現することができる単一のベクターが使用され得る。かかる状況では、軽鎖は、過剰の毒素のない重鎖を回避するために、重鎖の前に配置されるべきである（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：５２およびＫｏｈｌｅｒ，１９８０，ＰＮＡＳ  ７７：２１９７）。重鎖および軽鎖に関するコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含み得る。
【０１１８】
一旦、本開示の操作された抗体が組換え発現によって産生されると、免疫グロブリン分子の精製のための当技術分野で公知の任意の方法、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特に、プロテインＡ後の特異的抗原に対する親和性によって、およびサイズ排除カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度差、またはタンパク質の精製のための任意の他の標準技術によって精製され得る。さらに、本開示の抗体またはそのフラグメントは、精製を促進するために、本明細書に記載される、または当技術分野で既知の異種ポリペプチド配列に融合され得る。
【０１１９】
ａ．操作された抗体の規模改変可能な産生
多量の本開示の操作された抗体を得るために、これらを、規模改変可能な（ｓｃａｌａｂｌｅ）プロセス（以下、「本開示の規模改変可能なプロセス」と称される）により産生し得る。いくつかの実施形態において、操作された抗体は、該タンパク質の機能活性を維持しながら、分析規模バイオリアクター（例えば、５Ｌ、１０Ｌ、１５Ｌ、３０Ｌ、または５０Ｌのバイオリアクターに限定されない）において、本開示のタンパク質を産生するために大規模化できる、研究実験室における本開示の規模改変可能なプロセスにより産生することができる。例えば、１つの実施形態において、本開示の規模改変可能なプロセスによって産生されるタンパク質は、ＨＰＳＥＣまたはｒＣＧＥにより測定されるように、低レベルないし検出不能レベルの凝集、すなわち、５％以下、４％以下、３％以下、２％以下、１％以下、０．５％以下（タンパク質の重量％）の凝集、および／または低レベルないし検出不能レベルの断片化、すなわち、無傷の操作された抗体に相当するピークにおける全ピーク面積の８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上もしくは９９％以上もしくは９９．５％以上を示す。
【０１２０】
他の実施形態において、該操作された抗体は、産生規模バイオリアクター（例えば、７５Ｌ、１００Ｌ、１５０Ｌ、３００Ｌ、または５００Ｌに限定されない）において、本開示のタンパク質を産生するために大規模化できる、研究実験室における本開示の規模改変可能なプロセスにより産生することができる。いくつかの実施形態において、本開示の規模改変可能なプロセスは、研究実験室において行われる産生プロセスと比較して、産生効率をほとんどまたは全く減少させない。他の実施形態において、本開示の規模改変可能なプロセスは、約１０ｍｇ／Ｌ、約２０ｍｇ／Ｌ、約３０ｍｇ／Ｌ、約５０ｍｇ／Ｌ、約７５ｍｇ／Ｌ、約１００ｍｇ／Ｌ、約１２５ｍｇ／Ｌ、約１５０ｍｇ／Ｌ、約１７５ｍｇ／Ｌ、約２００ｍｇ／Ｌ、約２５０ｍｇ／Ｌ、約３００ｍｇ／Ｌまたはそれ以上の産生効率で操作された抗体を産生する。
【０１２１】
他の実施形態において、本開示の規模改変可能なプロセスは、少なくとも約１０ｍｇ／Ｌ、少なくとも約２０ｍｇ／Ｌ、少なくとも約３０ｍｇ／Ｌ、少なくとも約５０ｍｇ／Ｌ、少なくとも約７５ｍｇ／Ｌ、少なくとも約１００ｍｇ／Ｌ、少なくとも約１２５ｍｇ／Ｌ、少なくとも約１５０ｍｇ／Ｌ、少なくとも約１７５ｍｇ／Ｌ、少なくとも約２００ｍｇ／Ｌ、少なくとも約２５０ｍｇ／Ｌ、少なくとも約３００ｍｇ／Ｌまたはそれ以上の産生効率で操作された抗体を産生する。
【０１２２】
他の実施形態において、本開示の規模改変可能なプロセスは、約１０ｍｇ／Ｌ〜約３００ｍｇ／Ｌ、約１０ｍｇ／Ｌ〜約２５０ｍｇ／Ｌ、約１０ｍｇ／Ｌ〜約２００ｍｇ／Ｌ、約１０ｍｇ／Ｌ〜約１７５ｍｇ／Ｌ、約１０ｍｇ／Ｌ〜約１５０ｍｇ／Ｌ、約１０ｍｇ／Ｌ〜約１００ｍｇ／Ｌ、約２０ｍｇ／Ｌ〜約３００ｍｇ／Ｌ、約２０ｍｇ／Ｌ〜約２５０ｍｇ／Ｌ、約２０ｍｇ／Ｌ〜約２００ｍｇ／Ｌ、約２０ｍｇ／Ｌ〜約１７５ｍｇ／Ｌ、約２０ｍｇ／Ｌ〜約１５０ｍｇ／Ｌ、約２０ｍｇ／Ｌ〜約１２５ｍｇ／Ｌ、約２０ｍｇ／Ｌ〜約１００ｍｇ／Ｌ、約３０ｍｇ／Ｌ〜約３００ｍｇ／Ｌ、約３０ｍｇ／Ｌ〜約２５０ｍｇ／Ｌ、約３０ｍｇ／Ｌ〜約２００ｍｇ／Ｌ、約３０ｍｇ／Ｌ〜約１７５ｍｇ／Ｌ、約３０ｍｇ／Ｌ〜約１５０ｍｇ／Ｌ、約３０ｍｇ／Ｌ〜約１２５ｍｇ／Ｌ、約３０ｍｇ／Ｌ〜約１００ｍｇ／Ｌ、約５０ｍｇ／Ｌ〜約３００ｍｇ／Ｌ、約５０ｍｇ／Ｌ〜約２５０ｍｇ／Ｌ、約５０ｍｇ／Ｌ〜約２００ｍｇ／Ｌ、約５０ｍｇ／Ｌ〜約１７５ｍｇ／Ｌ、約５０ｍｇ／Ｌ〜約１５０ｍｇ／Ｌ、約５０ｍｇ／Ｌ〜約１２５ｍｇ／Ｌ、約５０ｍｇ／Ｌ〜約１００ｍｇ／Ｌの産生効率で操作された抗体を産生する。
【０１２３】
本開示の抗体の安定性を確保するために、適当なアッセイが開発されている。１つの実施形態において、本開示のタンパク質の安定性は、当技術分野における公知技術により特徴づけされる。他の実施形態において、本開示のタンパク質の安定性は、凝集および／または断片化速度またはプロファイルにより評価され得る。凝集または断片化のレベルを決定するためには、多くの技術が用いられ得る。１つの実施形態において、凝集および／または断片化プロファイルは、分析用超遠心法（ＡＵＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、高速サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）、融解温度（Ｔｍ）、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）、キャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）、光散乱（ＳＬＳ）、フーリエ変換赤外分光法（ＦＴＩＲ）、円偏光二色性（ＣＤ）、尿素誘発性タンパク質アンフォールディング技術、内在性トリプトファン蛍光、示差走査熱量測定、または１−アニリノ−８−ナフタレンスルホン酸（ＡＮＳ）タンパク質結合技術の使用により評価され得る。別の実施形態において、本開示のタンパク質の安定性は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）分析により特徴づけされる。別の実施形態において、本開示のタンパク質の安定性はサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）プロファイル分析により特徴づけされる。
【０１２４】
抗体共役体および融合タンパク質
本開示は、Ｆｃ領域の使用、操作された抗体の使用を包含し、これらは、異種物質に組換え的に融合されるか、または化学的に共役される（共有結合および非共有結合の両方を含む）。抗体への結合に対して適切な物質としては、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、多糖、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、核酸、ハプテン、薬物、ホルモン、脂質、脂質アセンブリ、合成高分子、高分子微粒子、生体細胞、ウイルス、蛍光色素分子、発色団、染料、毒素、ハプテン、酵素、抗体、抗体フラグメント、放射性同位体、固体マトリックス、半固体マトリックス、およびこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。抗体に別の物質を共役または共有結合するための方法は、当技術分野に公知である。融合または共役は、必ずしも直接的である必要はないが、リンカー配列を介して生じ得る。異種物質に融合されるまたは共役される抗体は、当技術分野で周知の方法を用いて障害の進行を検出する、治療する、管理する、またはモニターするために、インビボで使用され得る。例えば、国際公開第ＷＯ９３／２１２３２号、欧州特許第ＥＰ４３９，０９５号、Ｎａｒａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．３９：９１−９９、米国特許第５，４７４，９８１号、Ｇｉｌｌｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＰＮＡＳ  ８９：１４２８−１４３２、およびＦｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：２４４６−２４５２を参照されたく、これらは参照によりそれらの全体が組み込まれる。いくつかの実施形態において、検出、治療、管理、またはモニターされるべき障害は、自己免疫、炎症性、感染性疾患、または癌に関連する障害である。抗体部分にポリペプチドを融合または共役するための方法は、当技術分野で周知である。例えば、米国特許第５，３３６，６０３号、同第５，６２２，９２９号、同第５，３５９，０４６号、同第５，３４９，０５３号、同第５，４４７，８５１号、および同第５，１１２，９４６号、欧州特許第ＥＰ３０７，４３４号、欧州特許第ＥＰ３６７，１６６号、国際公開第ＷＯ９６／０４３８８号、同第ＷＯ９１／０６５７０号、Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，ＰＮＡＳ  ８８：１０５３５−１０５３９、Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０−５６００、およびＶｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＰＮＡＳ  ８９：１１３３７−１１３４１を参照（該参照文献は、参照によりそれらの全体が組み込まれる）。
【０１２５】
さらなる融合タンパク質は、遺伝子シャフリング、モチーフシャフリング、エキソンシャフリング、および／またはコドンシャフリング（集団的に「ＤＮＡシャフリング」と称される）の技術を通じて生成され得る。ＤＮＡシャフリングは、本開示の操作された抗体（例えば、より高い親和性およびより低い解離速度を有する抗体）の活性を改変するために、用いられ得る。概して、米国特許第５，６０５，７９３号、同第５，８１１，２３８号、同第５，８３０，７２１号、同第５，８３４，２５２号、および同第５，８３７，４５８号、およびＰａｔｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４−３３、Ｈａｒａｙａｍａ，１９９８，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：７６、Ｈａｎｓｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５、およびＬｏｒｅｎｚｏ  ａｎｄ  Ｂｌａｓｃｏ，１９９８，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２４：３０８（これらの特許および刊行物のそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照。抗体もしくはそのフラグメント、またはコード化抗体もしくはそのフラグメントは、エラープローンＰＣＲによるランダム突然変異誘発、ランダムヌクレオチド挿入または他の方法に付すことにより改変され得る。抗体または抗体フラグメントをコードするポリヌクレオチドの部分の１つ以上を、１つ以上の異種物質の１つ以上の成分、モチーフ、部分、ドメイン、フラグメント等と再結合させることが可能である。
【０１２６】
ある実施形態において、本開示の抗体のＦｃ領域は、固体支持体に共役させる。抗体は、スクリーニングおよび／または精製および／または製造プロセスの一部として固体支持体に共役させることが可能である。代替的に、本開示の抗体は、診断方法または組成物の一部として固体支持体に共役させることが可能である。本開示で用いるのに適している固体支持体は、一般に、液相中で実質的に不溶性である。多くの支持体が利用可能であり、当業者に公知である。したがって、固体支持体には、エアロゲルおよびヒドロゲル、樹脂、ビーズ、バイオチップ（薄膜コーティングしたバイオチップを含む）、マイクロ流体チップ、シリコンチップ、マルチウェルプレート（マイクロタイタープレートまたはマイクロプレートとも称する）、膜、伝導性および非伝導性金属、ガラス（顕微鏡用スライドを含む）、ならびに磁気支持体等の固体および半固体マトリックスが含まれる。固体支持体のさらに具体的な例には、シリカゲル、高分子膜、粒子、誘導体化されたプラスチック薄膜、ガラスビーズ、コットン、プラスチックのビーズ、アルミナゲル、セファロース等の多糖体、ポリ（アクリラート）、ポリスチレン、ポリ（アクリルアミド）、ポリオール、アガロース、寒天、セルロース、デキストラン、デンプン、ＦＩＣＯＬＬ、ヘパリン、グリコーゲン、アミロペクチン、マンナン、イヌリン、ニトロセルロース、ジアゾセルロース、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン（ポリ（エチレングリコール）を含む）、ナイロン、ラテックスビーズ、磁気ビーズ、常磁性ビーズ、超常磁性ビーズ、デンプン等が含まれる。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、本開示の抗体を付着させるための固体支持体は、ヒドロキシル、カルボキシル、アミノ、チオール、アルデヒド、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アミド、尿素、カルボナート、カルバメート、イソシアネート、スルホン、スルホナート、スルホンアミド、スルホキシド等が含まれるが、これらに限定されない、反応官能基を含み得る。
【０１２８】
適切な固相支持体は、所望の最終用途および種々の合成プロトコルに対する適合性に基づいて選択することができる。例えば、固体支持体に本開示の抗体を付着させるためにアミド結合形成が望ましい場合、ポリスチレン（例えば、Ｂａｃｈｅｍ  Ｉｎｃ．，Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ等から得られるＰＡＭ樹脂）、ＰＯＬＹＨＩＰＥ（商標）樹脂（Ａｍｉｎｏｔｅｃｈ，Ｃａｎａｄａから得られる）、ポリアミド樹脂（Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得られる）、ポリエチレングリコールでグラフトしたポリスチレン樹脂（ＴｅｎｔａＧｅｌ（商標）、Ｒａｐｐ  Ｐｏｌｙｍｅｒｅ，Ｔｕｂｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ポリジメチル−アクリルアミド樹脂（Ｍｉｌｌｉｇｅｎ／Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから入手可能）、またはＰＥＧＡビーズ（Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得られる）等の、ペプチド合成において一般に有用な樹脂が使用され得る。
【０１２９】
１つの実施形態において、本開示の操作された抗体またはそのフラグメントまたは変異体は、精製を促進するために、ペプチド等のマーカー配列に共役させるか、または融合させる。ある実施形態において、マーカーアミノ酸配列は、とりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，９２５９  Ｅｔｏｎ  Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）において提供されるタグ等のヘキサ−ヒスチジンペプチドであり、これらの多くは、市販されている。Ｇｅｎｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，ＰＮＡＳ  ８６：８２１に記載されるように、例えば、ヘキサ−ヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製を提供する。精製に有用な他のペプチドタグとしては、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質に由来するエピトープに対応するする赤血球凝集素「ＨＡ」タグ（Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ  ３７：７６７）、および「ｆｌａｇ」タグが含まれるが、これらに限定されない。
【０１３０】
他の実施形態において、本開示の抗体は、診断用または検出可能な薬剤に共役させる、または融合させる。このような抗体は、臨床試験手順の一部として、障害（限定されないが、例えば癌）の発生または進行をモニタリングまたは予後診断する、例えば、特定の療法の有効性を決定する等に有用であり得る。
【０１３１】
このような診断および検出は、検出可能な物質に該抗体を融合させる、または共役させることにより達成され得、検出可能な物質には、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ−カラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼ等に限定されない種々の酵素；例えば、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチン等に限定されない補欠分子族；例えば、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリド、またはフィコエリトリン等に限定されない蛍光物質；例えば、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリン等に限定されない生物発光物質等に限定されない発光物質；例えば、ビスマス（２１３Ｂｉ）、炭素（１４Ｃ）、クロム（５１Ｃｒ）、コバルト（５７Ｃｏ）、フッ素（１８Ｆ）、ガドリニウム（１５３Ｇｄ、１５９Ｇｄ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、ゲルマニウム（６８Ｇｅ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１１Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、ランタニウム（１４０Ｌａ）、ルテニウム（１７７Ｌｕ）、マンガン（５４Ｍｎ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、リン（３２Ｐ）、プラセオジム（１４２Ｐｒ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、ルテニウム（９７Ｒｕ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、セレニウム（７５Ｓｅ）、ストロンチウム（８５Ｓｒ）、硫黄（３５Ｓ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、スズ（１１３Ｓｎ、１１７Ｓｎ）、トリチウム（３Ｈ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、イッテルビウム（１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ）、イットリウム（９０Ｙ）、亜鉛（６５Ｚｎ）等に限定されない放射性物質；種々の陽電子放射断層撮影法を用いる陽電子放出性金属、ならびに非放射性常磁性金属イオンが含まれるが、これらに限定されない。
【０１３２】
他の実施形態において、本開示の操作された抗体は、治療剤、例えば、細胞毒素、例えば、細胞増殖抑制剤もしくは細胞破壊剤、治療剤または放射性金属イオン、例えば、アルファ−放射体と共役させられる。細胞毒素または細胞傷害性薬剤には、細胞に有害な任意の薬剤が含まれる。例には、パクリタキセル、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、エピルビシン、およびシクロホスファミド、ならびにそれらの類似体または同族体が含まれる。治療剤としては、抗代謝産物（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）；アルキル化剤（例えば、メクロルエタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシスジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）；アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（元ダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（元アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））；ならびに抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が含まれるが、これらに限定されない。化学的毒素はまた、デュオカルマイシン（米国特許第５，７０３，０８０号、同第４，９２３，９９０号）、メトトレキサート、ドキソルビシン、メルファラン、クロランブシル、ＡＲＡ−Ｃ、ビンデシン、マイトマイシンＣ、シス−プラチナム、エトポシド、ブレオマイシン、および５−フルオロウラシルから選択される群から得ることができる。また、化学療法剤の例としては、アドリアマイシン、ドキソルビシン、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）、シクロホスファミド、チオテパ、タキソテール（ドセタキセル）、ブスルファン、サイトキシン、タキソール、メトトレキサート、シスプラチン、メルファラン、ビンブラスチン、ブレオマイシン、エトポシド、イホスファミド、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、テニポシド、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプテリン、ダクチノマイシン、マイトマイシン、エスペラミシン（米国特許第４，６７５，１８７号）、メルファラン、および他の関連した窒素マスタードも含まれる。
【０１３３】
１つの実施形態において、細胞傷害性薬剤は、エネジイン（ｅｎｅｄｉｙｎｅ）、レキシトロプシン（ｌｅｘｉｔｒｏｐｓｉｎ）、デュオカルマイシン、タキサン、ピューロマイシン、ドラスタチン、メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）、およびビンカアルカロイドから選択される。他の実施形態において、細胞傷害性薬剤は、パクリタキセル、ドセタキセル、ＣＣ−１０６５、ＳＮ−３８、トポテカン、モルホリノ−ドキソルビシン、リゾキシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、ドラスタチン−１０、エキノマイシン、コンブレタスタチン、カリケアマイシン、メイタンシン、ＤＭ−１、アウリスタチン、または他のドラスタチン誘導体、例えば、アウリスタチンＥもしくはアウリスタチンＦ，ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、ＡＥＦＰ、ＭＭＡＥ（モノメチルアウリスタチンＥ）、エリュテロビン、またはネトロプシンである。当技術分野でドラスタチン−１０としても公知である、アウリスタチンＥ、およびその誘導体の合成および構造はまた、米国特許出願公開第２００３／００８３２６３  Ａ１号および同第２００５／０００９７５１  Ａ１号、国際特許公開第ＰＣＴ／ＵＳ０２／１３４３５号、米国特許第６，３２３，３１５号、同第６，２３９，１０４号、同第６，０３４，０６５号、同第５，７８０，５８８号、同第５，６６５，８６０号、同第５，６６３，１４９号、同第５，６３５，４８３号、同第５，５９９，９０２号、同第５，５５４，７２５号、同第５，５３０，０９７号、同第５，５２１，２８４号、同第５，５０４，１９１号、同第５，４１０，０２４号、同第５，１３８，０３６号、同第５，０７６，９７３号、同第４，９８６，９８８号、同第４，９７８，７４４号、同第４，８７９，２７８号、同第４，８１６，４４４号、および同第４，４８６，４１４号に記載されており、これらのすべては、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０１３４】
ある実施形態において、細胞傷害性薬剤は、メイタンシンまたはメイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）、およびその誘導体であり、本開示の抗体（完全長またはフラグメント）は、１つ以上のメイタンシノイド分子と共役させられる。メイタンシノイドは、チューブリン重合を阻害することにより作用する有糸分裂阻害剤である。メイタンシンは、初め東アフリカの低木マイテヌスセーラタ（Ｍａｙｔｅｎｕｓ  ｓｅｒｒａｔａ）から単離された（米国特許第３，８９６，１１１号）。続いて、特定の微生物も、メイタンシノール、およびＣ−３メイタンシノールエステル等のメイタンシノイドを産生することが発見された（米国特許第４，１５１，０４２号）。合成メイタンシノールおよびその誘導体および類似体は、例えば、米国特許第４，１３７，２３０号、同第４，２４８，８７０号、同第４，２５６，７４６号、同第４，２６０，６０８号、同第４，２６５，８１４号、同第４，２９４，７５７号、同第４，３０７，０１６号、同第４，３０８，２６８号、同第４，３０８，２６９号、同第４，３０９，４２８号、同第４，３１３，９４６号、同第４，３１５，９２９号、同第４，３１７，８２１号、同第４，３２２，３４８号、同第４，３３１，５９８号、同第４，３６１，６５０号、同第４，３６４，８６６号、同第４，４２４，２１９号、同第４，４５０，２５４号、同第４，３６２，６６３号、および同第４，３７１，５３３号に開示されている。
【０１３５】
メイタンシンまたはメイタンシノイドの治療指数を改善するために、これらを、腫瘍細胞抗原に特異的に結合する抗体と共役させている。メイタンシノイドを含有する免疫共役体およびそれらの治療上の使用は、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、および欧州特許第ＥＰ０  ４２５  ２３５  Ｂ１号に開示されている。Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３（１９９６）には、ヒト結腸直腸癌に対するモノクローナル抗体Ｃ２４２に連結された、ＤＭ１と称するメイタンシノイドを含む免疫共役体を説明した。この共役体は、培養大腸癌細胞に対して高い細胞傷害性を示すことが見出され、インビボ腫瘍増殖アッセイにおいて抗腫瘍活性を示した。Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１（１９９２）には、ヒト大腸癌細胞株上の抗原に結合するマウス抗体Ａ７、またはＨＥＲ−２／ｎｅｕ癌遺伝子に結合する別のマウスモノクローナル抗体ＴＡ．１にジスルフィドリンカーを介し、メイタンシノイドを共役した免疫共役体が記載されている。インビトロで、１細胞当たり３×１０５のＨＥＲ−２表面抗原を発現するヒト乳癌細胞株ＳＫ−ＢＲ−３について、ＴＡ．１−メイタンシノイド共役体の細胞傷害性を試験した。この薬物共役体は、遊離メイタンシノイド薬物に類似する程度の細胞傷害性に達し、抗体分子当たりのメイタンシノイド分子数を増やすことによって、細胞傷害性を増加させることができた。Ａ７−メイタンシノイド共役体は、マウスにおいて低い全身細胞傷害性を示した。したがって、本開示は、ある癌の治療処置のためのメイタンシノイド剤と共役させる抗体を企図する。
【０１３６】
他の実施形態において、本開示の抗体コンジュゲートの細胞傷害性薬剤は、抗チューブリン剤である。抗チューブリン剤は、十分に確立された癌療法化合物の一群である。抗チューブリン剤の例としては、タキサン（例えば、Ｔａｘｏｌ（登録商標）（パクリタキセル）、ドセタキセル）、Ｔ６７（Ｔｕｌａｒｉｋ）、ビンカス（ｖｉｎｃａｓ）、およびアウリスタチン（例えば、アウリスタチンＥ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、ＡＥＦＰ）が含まれるが、これらに限定されない。この群に含まれる抗チューブリン剤はまた、ビンクリスチンおよびビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビンを含むビンカアルカロイド；タキサン、例えばパクリタキセルおよびドセタキセルおよびバクカチン（ｂａｃｃａｔｉｎ）誘導体、エピチロンＡおよびＢ、ノコダゾール、５−フルオロウラシルおよびコルセミド、エストラムスチン、クリプトフィシン、セマドチン、メイタンシノイド、コンブレタスタチン、ドラスタチン、ディスコデルモリド、およびエリュテロビンである。より特定の実施形態において、細胞傷害性薬剤は、ビンカアルカロイド、ポドフィロトキシン、タキサン、バッカチン誘導体、クリプトフィシン、メイタンシノイド、コンブレタスタチン、およびドラスタチンから選択される。より特定の実施形態において、細胞傷害性薬剤は、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ＶＰ−１６、カンプトテシン、パクリタキセル、ドセタキセル、エピチロンＡ、エピチロンＢ、ノコダゾール、コルヒチン（ｃｏｉｃｈｉｃｉｎｅ）、コルセミド、エストラムスチン、セマドチン、ディスコデルモリド、メイタンシン、ＤＭ−１、アウリスタチン、または他のドラスタチン誘導体、例えばアウリスタチンＥまたはアウリスタチンＦ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ、ＡＥＦＰ、ＭＭＡＥ（モノメチルアウリスタチンＥ）、ＭＭＡＦ（モノメチルアウリスタチンＦ）、エリュテロビン、またはネトロプシンである。
【０１３７】
特定の実施形態において、この薬物は、メイタンシノイドおよび一連の抗チューブリン剤である。さらに特定の実施形態において、この薬物は、メイタンシンである。さらに、特定の実施形態において、細胞傷害性または細胞増殖抑制剤は、ＤＭ−１（ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ，Ｉｎｃ．、Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．１９９２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５２：１２７−１３１も参照）である。天然物であるメイタンシンは、チューブリン重合を阻害して、有糸分裂の遮断および細胞死を招く。したがって、メイタンシンの作用機構は、ビンクリスチンおよびビンブラスチンの作用機構に類似していると思われる。しかしながら、メイタンシンは、これらのビンカアルカロイドより約２００〜１，０００倍細胞傷害性である。別の特定の実施形態において、この薬物は、ＡＥＦＰである。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、該抗体は、例えば、アブリン、ブルシン、シクトキシン、ジフテリア毒素、バトラコトキシン、ボツリヌス毒素、志賀毒素、内毒素、緑膿菌外毒素、緑膿菌内毒素、破傷風毒素、百日咳毒素、炭疽毒素、コレラ毒素、ファルカリノール、フモニシンＢ１、フモニシンＢ２、アルファ毒素、マウロトキシン（ｍａｕｒｏｔｏｘｉｎ）、アジトキシン（ａｇｉｔｏｘｉｎ）、チャリブドトキシン（ｃｈａｒｙｂｄｏｔｏｘｉｎ）、マルガトキシン（ｍａｒｇａｔｏｘｉｎ）、スロトキシン（ｓｌｏｔｏｘｉｎ）、シルラトキシン（ｓｃｙｌｌａｔｏｘｉｎ）、ヘフトキシン（ｈｅｆｕｔｏｘｉｎ）、カルシセプチン（ｃａｌｃｉｓｅｐｔｉｎｅ）、タイカトキシン（ｔａｉｃａｔｏｘｉｎ）カルシクルジン（ｃａｌｃｉｃｌｕｄｉｎｅ）、ゲルダナマイシン、ゲロニン、ロタウストラリン、オクラトキシン（ｏｃｒａｔｏｘｉｎ）Ａ、パツリン（ｐａｔｕｌｉｎ）、リシン、ストリキニーネ、トリコテセン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｅｎｅ）、ゼアーレノン（ｚｅａｒｌｅｎｏｎｅ）、およびテトラドトキシン等があるが、これらに限定されない、他の小分子またはタンパク質毒素に共役または融合され得る。使用することができる酵素的に活性な毒素およびそれらのフラグメントには、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、アレウリテス・フォルディイタンパク質、ジアンシンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、モモルディカ・カランチア阻害剤、クルシン、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、リストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセネスが含まれる。
【０１３９】
毒素、スペーサー、リンカー、ストレッチャー（ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）等のさらなる例およびそれらの構造は、米国特許出願公開第２００６／００７４００８  Ａ１号、同第２００５／０２３８６４９  Ａ１号、同第２００５／０１２３５３６  Ａ１号、同第２００５／０１８０９７２  Ａ１号、同第２００５／０１１３３０８  Ａ１号、同第２００４／０１５７７８２  Ａ１号、米国特許第６，８８４，８６９  Ｂ２号、米国特許第５，６３５，４８３号に見出され得、これらのすべては、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０１４０】
本明細書に論じられるように、本開示の抗体共役体への共役に使用される化合物には、従来の化学療法剤、例えば、ドキソルビシン、パクリタキセル、カルボプラチン、メルファラン、ビンカアルカロイド、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、エトポシド等が含まれ得る。加えて、強力な薬剤、例えば、ＣＣ−１０６５類似体、カリキアマイシン（ｃａｌｉｃｈｉａｍｉｃｉｎ）、メイタンシン、ドラスタチン１０の類似体、リゾキシン、およびパリトキシンを、条件的に安定なリンカーを用いて該抗体に連結して、強力な免疫共役を形成させることが可能である。
【０１４１】
ある実施形態において、細胞傷害性または細胞増殖抑制剤は、ドラスタチンである。さらに特定の実施形態において、ドラスタチンは、アウリスタチンクラスのものである。本開示の特定の実施形態において、細胞傷害性または細胞増殖抑制剤は、ＭＭＡＥである。本開示の別の特定の実施形態において、細胞傷害性または細胞増殖抑制剤は、ＡＥＦＰである。本開示の別の特定の実施形態において、細胞傷害性または細胞増殖抑制剤は、ＭＭＡＦである。
【０１４２】
他の実施形態において、本開示の抗体は、与えられた生物学的応答を修飾する治療剤または薬物部分に共役される。治療剤または薬物部分は、古典的な化学療法剤に限定されると解釈されるべきではない。例えば、該薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質またはポリペプチドであり得る。このようなタンパク質には、例えば、アブリン、リシンＡ、緑膿菌外毒素、コレラ毒素またはジフテリア毒素等の毒素；腫瘍壊死因子、αインターフェロン、βインターフェロン、神経成長因子、血小板由来増殖因子、組織プラスミノーゲンアクチベーター、アポトーシス剤、例えばＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＡＩＭ  Ｉ（国際公開第ＷＯ９７／３３８９９号を参照）、ＡＩＭ  ＩＩ（国際公開第ＷＯ９７／３４９１１号を参照）、Ｆａｓリガンド（Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，６：１５６７）、およびＶＥＧｆ（国際公開第ＷＯ９９／２３１０５号を参照）等のタンパク質、血栓性薬剤または抗血管新生物質、例えばアンジオスタチンもしくはエンドスタチン；あるいは生物応答改変物質、例えばリンホカイン（例えば、インターロイキン１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン４（「ＩＬ−４」）、インターロイキン６（「ＩＬ−６」）、インターロイキン７（「ＩＬ−７」）、インターロイキン９（「ＩＬ−９」）、インターロイキン１５（「ＩＬ−１５」）、インターロイキン１２（「ＩＬ−１２」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、および顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」））、または増殖因子（例えば、成長ホルモン（「ＧＨ」））が含まれ得る。
【０１４３】
他の実施形態において、本開示の抗体は、ポリアルギニンまたはポリリシン残基を含むポリペプチドに共役されるか、または融合される。いくつかの実施形態において、該ポリペプチドは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５個またはそれ以上のアミノ酸残基を含む。いくつかの実施形態において、該ポリアルギニンポリペプチドは、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５個またはそれ以上のアルギニン残基を含み得る。他の実施形態において、該ポリリシンポリペプチドは、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５個またはそれ以上のリシン残基を含み得る。他の実施形態において、該ポリペプチドは、アルギニンおよびリシン残基の任意の組み合わせを含み得る。
【０１４４】
他の実施形態において、本開示の抗体は、放射性金属イオン（放射性物質の例については前記を参照）を共役するのに有用な放射性物質または大環状キレーター等の治療剤と共役させられる。ある実施形態において、該大環状キレーターは、リンカー分子を介して該抗体に付着させることができる１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ′，Ｎ′′，Ｎ′′−四酢酸（ＤＯＴＡ）である。本明細書中で後記においてさらに詳しく説明される、このようなリンカー分子は、当技術分野で一般に公知であり、Ｄｅｎａｒｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４：２４８３−９０、Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１０：５５３、およびＺｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２６：９４３−５０に記載されており、各々は、参照によりその全体が組み込まれる。
【０１４５】
他の実施形態において、本開示の抗体は、核酸と共役させられる。該核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ、ヘアピン、またはペプチド核酸等の核酸模倣体から選択され得る。いくつかの実施形態において、該共役核酸は、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも５００、少なくとも１０００、少なくとも５０００またはそれ以上の塩基対である。いくつかの実施形態において、該共役核酸は、一本鎖である。代替的な実施形態において、該共役核酸は、二重鎖である。
【０１４６】
いくつかの実施形態において、該共役核酸は、オープンリーディングフレームをコードしている。いくつかの実施形態において、該共役核酸によりコードされるオープンリーディングフレームは、アポトーシス誘導性タンパク質、ウイルスタンパク質、酵素、または腫瘍抑制タンパク質に相当する。このような核酸を細胞へ運搬するための技術は、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００５，Ｖｏｌ２３：６  ｐ７０９−７１７、およびまた、米国特許第６，３３３，３９６号にも見出され得、これは、参照によりその全体が組み込まれる。
【０１４７】
治療部分に抗体を共役させるための技術は、公知である。部分は、アルデヒド／シッフ連結、スルフヒドリル連結、酸不安定性連結、シス−アコニチル連結、ヒドラゾン連結、酵素分解性連結が含まれるが、これらに限定されない、当技術分野で公知の任意の方法により抗体と共役させられる。（一般的には、Ｇａｒｎｅｔｔ，２００２，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５３：１７１−２１６を参照）。治療部分を抗体に共役させるための追加的技術は、公知である。例えば、Ａｒｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”  ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３−５６（Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”  ｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ  Ｅｄ．）、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．６２３−５３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）、Ｔｈｏｒｐｅ，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  Ｏｆ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ，”  ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ‘８４：  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐｉｎｃｈｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５−５０６（１９８５）、“Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，Ａｎｄ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，”  ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｂａｌｄｗｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．３０３−１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  １９８５）、およびＴｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８を参照。抗体をポリペプチド部分に融合または共役させるための方法は、当技術分野で公知である。例えば、米国特許第５，３３６，６０３号、同第５，６２２，９２９号、同第５，３５９，０４６号、同第５，３４９，０５３号、同第５，４４７，８５１号、および同第５，１１２，９４６号、欧州特許第ＥＰ３０７，４３４号、欧州特許第ＥＰ３６７，１６６号、国際公開第ＷＯ９６／０４３８８号、同第ＷＯ９１／０６５７０号、Ａｓｈｋｅｎａｚｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，ＰＮＡＳ  ８８：１０５３５−１０５３９、Ｚｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０−５６００、およびＶｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＰＮＡＳ  ８９：１１３３７−１１３４１を参照。このような部分への抗体の融合は、必ずしも直接的である必要はないが、リンカー配列を介して生じ得る。このようなリンカー分子は、当技術分野で一般に公知であり、Ｄｅｎａｒｄｏ  ��ｔ  ａｌ．，１９９８，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４：２４８３−９０、Ｐｅｔｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１０：５５３、Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２６：９４３−５０、Ｇａｒｎｅｔｔ，２００２，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５３：１７１−２１６に記載されており、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１４８】
本開示の抗体共役体により標的化される細胞の外部における薬物活性を最小にするために、２つの例示的なアプローチが考慮され得る。第１に、プロドラッグ変換酵素の作用により産生された薬物を含む薬物が活性化リンパ球等の細胞の細胞表面に集中するように、細胞膜受容体には結合するが可溶性受容体には結合しない抗体が使用され得、第２に、該薬物が加水分解または該抗体から切断されない限り、その活性が低下する様式で該薬物を共役することである。このような方法は、活性化リンパ球の細胞表面における環境（例えば、活性化リンパ球の細胞表面に存在するプロテアーゼの活性）または共役が活性化リンパ球により取り込まれた場合に該共役が遭遇する活性化リンパ球の内部の環境（例えば、エンドソーム内、またはリソソーム環境中、例えばｐＨ感受性もしくはプロテアーゼ感受性により）に対して感受性であるリンカーで該薬物を該抗体に付着させることを用いるものである。本開示において使用することができるリンカーの例は、米国特許出願公開第  ２００５／０１２３５３６  Ａ１号、同第２００５／０１８０９７２  Ａ１号、同第２００５／０１１３３０８  Ａ１号、同第２００４／０１５７７８２  Ａ１号、および米国特許第６，８８４，８６９  Ｂ２号に開示されており、これらのすべては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１４９】
１つの実施形態において、該リンカーは、リソソーム中で加水分解される酸不安定性ヒドラゾンまたはヒドラジド基である（例えば、米国特許第５，６２２，９２９号を参照）。代替的な実施形態において、薬物は、他の酸不安定性リンカー、例えばシス−アコニット酸アミド、オルトエステル、アセタール、およびケタール等を介して抗体と共役させられ得る（Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，１９９９，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３、Ｎｅｖｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１４６５３−１４６６１）。このようなリンカーは、中性ｐＨ条件下、例えば、血中の条件下では比較的安定であるが、リソソームのおおよそのｐＨであるｐＨ５より下では不安定である。
【０１５０】
他の実施形態において、薬物は、細胞内プロテアーゼにより切断されるペプチドスペーサーを用いて、本開示の抗体に付着させる。標的酵素には、カテプシンＢおよびＤならびにプラスミンが含まれ、これらのすべては、ジペプチド薬物誘導体を加水分解して、標的細胞の内部で活性薬物の放出をもたらすことが知られている（Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，１９９９，Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ８３：６７−１２３）。細胞内タンパク質分解薬物放出を用いる利点は、該薬物が、共役されている場合には非常に弱められ、該共役体の血清安定性が非常に高くなり得ることである。
【０１５１】
さらに他の実施形態において、該リンカーは、マロナートリンカー（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５：１３８７−９３）、マレイミドベンゾイルリンカー（Ｌａｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｏｒｇ−Ｍｅｄ−Ｃｈｅｍ．３（１０）：１２９９−１３０４）、または３′−Ｎ−アミド類似体（Ｌａｕ  ｅｔ  ａｌ，１９９５，Ｂｉｏｏｒｇ−Ｍｅｄ−Ｃｈｅｍ．３（１０３：１３０５−１２）である。
【０１５２】
マレイミド基およびスペーサー（ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等）を利用する連結化学は、システイン、リシン、セレノシステイン、およびセレノメチオニン置換に適している。ヒスチジン置換に関しては、共役のために、金属（銅、亜鉛、鉄、ニッケル等）を伴うスペーサーを使用し得る。チロシンに関しては、糖または他のヒドロキシル化合物に存在する官能基と共役させられ得る。これらのおよび他の適した共役技術の詳細は、当業者には公知であり、例えば、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２ｎｄ  ｅｄ．，ｂｙ  Ｇｒｅｇ  Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（２００８）に見出され得る。
【０１５３】
上で論じられるように、抗体共役体は、一般に、リンカーを介して化合物または薬物を抗体に共役させることによって作製される。当技術分野で公知の任意のリンカーは、本開示の共役体、例えば、二官能性薬剤（ジアルデヒドまたはイミドエステル等）または分枝ヒドラゾンリンカー（例えば、米国特許第５，８２４，８０５号を参照されたく、これは、参照によりその全体が本明細書に組み入れる）が使用され得る。
【０１５４】
本開示のある非限定的な実施形態において、共役部分と抗体部分との間のリンカー領域は、ある条件下で切断可能であり、この場合、リンカーの切断または加水分解は、抗体部分からの薬物部分を放出する。いくつかの実施形態において、該リンカーは、細胞内条件下で、切断または加水分解に感受性がある。
【０１５５】
１つの実施形態において、共役部分と抗体部分との間のリンカー領域は、ｐＨがある値で変化するか、ある値を超える場合、切断可能である。本開示の別の実施形態において、該リンカーは、リソソームの環境中、例えば、酸性条件下（すなわち、約５〜５．５またはそれ未満のｐＨ）で切断可能である。他の実施形態において、該リンカーは、リソソームプロテアーゼ酵素、膜結合プロテアーゼ、細胞内プロテアーゼ、またはエンドソームプロテアーゼが含まれるが、これらに限定されない、ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素により切断されるペプチジルリンカーである。典型的には、該リンカーは、少なくとも２アミノ酸長、より典型的には、少なくとも３アミノ酸長である。例えば、癌組織において高度に発現されるチオール依存性プロテアーゼであるカテプシンＢにより切断可能なペプチジルリンカー（例えば、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙリンカー）が使用され得る。他のこのようなリンカーは、例えば、米国特許第６，２１４，３４５号に記載されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１５６】
本開示の他の非相互的排他的な実施形態において、本開示の抗体共役体の抗体および化合物が共役されているリンカーは、細胞内在化（cellular internalization）を促進する。ある実施形態において、該リンカー−薬物部分は、細胞内在化を促進する。ある実施形態において、該リンカーは、抗体共役体全体の構造が細胞内在化を促進するように、選択される。１つの実施形態において、該リンカーは、チオエーテルリンカーである（例えば、Ｗｉｌｌｎｅｒらの米国特許第５，６２２，９２９号を参照されたく、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。別の実施形態において、該リンカーは、ヒドラゾンリンカーである（例えばＧｒｅｅｎｆｉｅｌｄらの米国特許第５，１２２，３６８号およびＫｉｎｇらの同第５，８２４，８０５号を参照されたく、これらは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。
【０１５７】
なお他の実施形態において、該リンカーは、ジスルフィドリンカーである。種々のジスルフィドリンカーが当技術分野で公知であり、それらには、ＳＡＴＡ（Ｎ−スクシンイミジル−Ｓ−アセチルチオアセタート）、ＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート）、ＳＰＤＢ（Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）ブチラート）、およびＳＭＰＴ（Ｎ−スクシンイミジル−オキシカルボニル−アルファ−メチル−アルファ−（２−ピリジル−ジチオ）トルエン）、ＳＰＤＢおよびＳＭＰＴ（例えば、Ｔｈｏｒｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，４７：５９２４−５９３１、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｉｎ  Ｒａｄｉｏｉｍａｇｅｒｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，ｅｄ．Ｃ．Ｗ．Ｖｏｇｅｌ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕ．Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．２８−５５を参照；また、Ｔｈｏｒｐｅらの米国特許第４，８８０，９３５号も参照されたく、これは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を用いて形成され得るものが含まれるが、これらに限定されない。
【０１５８】
本開示の組成物および方法と共に使用され得る種々のリンカーが、米国特許出願公開第ＵＳ２００４／００１８１９４  Ａｌ号に記載されており、これは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。
【０１５９】
本開示のなお他の実施形態において、抗体共役体のリンカー単位は、細胞傷害性または細胞増殖抑制剤（薬物単位；−Ｄ）と抗体単位（−Ａ）とを共役させる。ある実施形態において、該リンカー単位は、以下の一般式を有する：
ｉ．−Ｔａ−Ｗｗ−Ｙｙ−、ここで
ｉｉ．−Ｔ−は、伸長単位であり、
ｉｉｉ．ａは、０または１であり、
ｉｖ．各−Ｗ−は独立して、アミノ酸単位であり、
ｖ．ｗは独立して、２〜１２の範囲の整数であり、
ｖｉ．−Ｙ−は、スペーサー単位であり、
ｖｉｉ．ｙは、０、１、または２である。
【０１６０】
伸長単位（−Ｔ−）は、存在する場合には、該抗体単位をアミノ酸単位（−Ｗ−）に連結する。天然であるいは化学的操作のいずれかにより抗体上に存在し得る有用な官能基としては、スルフヒドリル、アミノ、ヒドロキシル、炭水化物のアノマー性ヒドロキシル基、およびカルボキシルが含まれるが、これらに限定されない。システインが導入されている本開示の操作された抗体は、共役のために少なくとも１つのスルフヒドリル基に存在する。スルフヒドリル基を導入する他の方法には、抗体の分子内ジスルフィド結合の還元が含まれる。代替的に、スルフヒドリル基は、抗体のリシン部分のアミノ基と、２−イミノチオラン（トラウト試薬）または他のスルフヒドリル生成試薬との反応により生成され得る。
【０１６１】
アミノ酸単位（−Ｗ−）は、スペーサー単位が存在する場合には、伸長単位（−Ｔ−）をスペーサー単位（−Ｙ−）に連結し、スペーサー単位が存在しない場合には、伸長単位を細胞傷害性または細胞増殖抑制剤（薬物単位；Ｄ）に連結する。
【０１６２】
いくつかの実施形態において、−Ｗｗ−は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、デカペプチド、ウンデカペプチド、またはドデカペプチド単位である。該リンカー単位のアミノ酸単位は、腫瘍関連プロテアーゼを含むが、これに限定されない酵素により酵素的に切断されて、該薬物単位（−Ｄ−）を遊離させることが可能であり、これは、放出に際してインビボでプロトン化されて細胞傷害性薬物（Ｄ）を提供する。
【０１６３】
１つの実施形態において、該アミノ酸単位は、フェニルアラニン−リシンジペプチド（ｐｈｅ−ｌｙｓまたはＦＫリンカー）である。別の実施形態において、該アミノ酸単位は、バリン−シトルリンジペプチド（ｖａｌ−ｃｉｔまたはＶＣリンカー）である。
【０１６４】
スペーサー単位（−Ｙ−）は、存在する場合には、アミノ酸単位を該薬物単位に連結する。スペーサー単位は、自己犠牲および非自己犠牲の２つの一般的タイプのものである。非自己犠牲スペーサー単位は、該抗体−リンカー−薬物共役体または該薬物−リンカー化合物からアミノ酸単位の酵素切断の後に、該スペーサー単位の一部またはすべてが該薬物部分に結合したままのものである。非自己犠牲スペーサー単位の例としては、（グリシン−グリシン）スペーサー単位およびグリシンスペーサー単位が含まれるが、これらに限定されない。グリシン−グリシンスペーサー単位またはグリシンスペーサー単位を含有する本開示の抗体−リンカー−薬物共役体が腫瘍細胞関連プロテアーゼ、癌細胞関連プロテアーゼ、またはリンパ球関連プロテアーゼによる酵素切断を受けると、グリシン−グリシン−薬物部分またはグリシン−薬物部分がＡ−Ｔ−Ｗｗ−から切断される。該薬物を遊離させるためには、標的細胞内で、該グリシン−薬物単位結合を切断するための独立した加水分解反応が生じるべきである。
【０１６５】
自己犠牲スペーサーの他の例には、ＰＡＢ基と電子的に等価である芳香族化合物、例えば２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（例えば、Ｈａｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９９，９，２２３７を参照）およびオルトまたはパラ−アミノベンジルアセタールが含まれるが、これらに限定されない。アミド結合の加水分解に際して容易な環化を受けるスペーサー、例えば、置換および非置換４−アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９５，２，２２３）、適切に置換された環系（Ｓｔｏｒｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９７２，９４，５８１５）、および２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９０，５５，５８６７）が使用され得る。グリシンのα位において置換されたアミン含有薬物の除去（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９８４，２７，１４４７）も、本開示の抗体−リンカー−薬物共役体に適用され得る自己犠牲スペーサー戦略の例である。
【０１６６】
抗体に異種分子を共役させる方法
本明細書に記載されるもの等の異種分子は、操作されたアミノ酸残基が提供する反応基を介して、本開示の抗体またはＦｃ領域に効率的に共役させ得る。１つの態様において、本開示は、異種分子をシステイン操作された抗体に効率的に共役させるための方法を提供する。１つの実施形態において、異種分子の共役は、Ｆｃ領域または抗体の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも１つの操作残基によって提供される反応基で生じ得、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。さらなる態様において、反応基は、チオールであり、異種分子の共役は、Ｆｃ領域または抗体の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも１つの操作残基によって提供されるチオール基で生じ得、ここで、定常領域の付番体系は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスのものである。
【０１６７】
抗体への非天然に生じるシステイン残基の操作は、ジスフィルド結合の一部であった天然に生じるシステイン残基が遊離され、共役が可能なチオール基を提示するように、重鎖および軽鎖のジスフィルド対を改変し得る。別の実施形態において、抗体のＦｃ領域の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも１つの操作されたシステイン残基によって提供されないチオール基でのシステイン操作された抗体への異種分子の効率的な共役を含む。
【０１６８】
抗体における遊離チオール基の存在は、実施例１に記載されるもの等の当技術分野で受け入れられている種々の技術によって判定され得る。抗体への異種分子の共役の効率は、共役反応後に残留する遊離チオールの存在を評価することによって判定され得る。１つの実施形態において、本開示は、システイン操作された抗体への異種分子を効率的に共役させる方法を提供する。１つの実施形態において、共役効率は、共役反応後に残留する遊離チオール基のレベルによって測定した場合、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれ以上である。
【０１６９】
別の実施形態において、本開示は、抗体またはＦｃ領域への異種分子を共役させる方法を提供し、ここで、抗体またはＦｃ領域は、２つ以上の反応基が形成されるように、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。別の実施形態において、該方法は、少なくとも２、少なくとも４、少なくとも６、少なくとも８、少なくとも１０、少なくとも１２、少なくとも１４、少なくとも１６、少なくとも１８、少なくとも２０、少なくとも２２、少なくとも２４、少なくとも２６、少なくとも２８、少なくとも３０、少なくとも３２、少なくとも３４、少なくとも３６、少なくとも３８、少なくとも４０またはそれ以上の新しく導入した反応基が形成されるように、少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＦｃ領域または抗体を含む。さらなる実施形態において、少なくとも１つの置換は、システインを用い、反応基は、チオール基である。
【０１７０】
共役が可能な本開示のＦｃ領域および抗体は、ブロッキングまたはキャップ化されたスルフヒドリル基を含むシステイン残基を含有し得る。かかるキャップは、スルフヒドリル基と相互作用し、共役体形成を妨げるまたは抑制するタンパク質、ペプチド、イオン、および他の物質が含まれる。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、共役反応前に脱キャップ化を要し得る。特定の実施形態において、本開示の抗体は、脱キャップ化され、共役可能なスルフヒドリル基を提示する。他の特定の実施形態において、本開示の抗体は、天然に生じるジスルフィド結合を妨げない、または再構成しない脱キャップ化反応に付される。他の実施形態において、本開示の抗体は、２００９年１月１６日に出願されたＰＣＴ公開第ＰＣＴ／ＵＳ０９／３１２９４号の実施例９または１０で示されている脱キャップ化反応に付される。
【０１７１】
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、共役されるべき抗体は、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２ｍｇ／ｍＬ、少なくとも３ｍｇ／ｍＬ、少なくとも４ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５ｍｇ／ｍＬまたはそれ以上の濃度で存在する共役反応に付され得る。
【０１７２】
抗体共役体の使用方法
本開示の共役体は、種々の疾患または障害、例えば、腫瘍抗原の過剰発現により特徴づけられるものを治療するために使用され得ると企図される。例示的な状態または過剰増殖性障害には、良性または悪性の腫瘍、白血病、およびリンパ系悪性疾患が含まれる。その他には、ニューロン、グリア、星状膠、視床下部、腺性、マクロファージ、上皮、内皮、および間質悪性疾患が含まれる。他の癌または過剰増殖性障害には、頭部、頸部、眼、口、喉、食道、胸部、皮膚、骨、肺、結腸、直腸、結腸直腸、胃、脾臓、腎臓、骨格筋、皮下組織、転移性メラノーマ、子宮内膜、前立腺、乳房、卵巣、精巣、甲状腺、血液、リンパ節、腎臓、肝臓、膵臓、脳、または中枢神経系の癌が含まれる。本開示の方法により予防、処置、治療、または改善され得る癌の例としては、頭部、頸部、眼、口、喉、食道、胸部、骨、肺、結腸、直腸、胃、前立腺、乳房、卵巣、腎臓、肝臓、膵臓、および脳の癌が含まれるが、これらに限定されない。追加的な癌には、白血病、限定的なものではないが、例えば急性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、例えば骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、赤白血病性白血病および骨髄形成異常症候群、慢性白血病、限定的なものではないが、例えば慢性骨髄性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ性白血病、へアリー細胞白血病；真性多血症；リンパ腫、限定的なものではないが、例えばホジキン病、非ホジキン病；多発性骨髄腫、限定的なものではないが、例えば、くすぶり型多発性骨髄腫、非分泌性（ｎｏｎｓｅｃｒｅｔｏｒｙ）骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、形質細胞性白血病、単発性形質細胞腫、および髄外性形質細胞腫；ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症；意義不明の単クローン性高ガンマグロブリン異常症；良性単クローン性ガンマグロブリン血症；重鎖病；骨癌および結合組織肉腫、限定的なものではないが、例えば骨肉腫、骨髄腫骨疾患、多発性骨髄腫、真珠腫誘発性骨肉腫、骨パジェット病、骨肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性巨細胞腫、骨線維肉腫、脊索腫、骨膜肉腫、軟部肉腫、血管肉腫（ｈｅｍａｎｇｉｏｓａｒｃｏｍａ）、線維肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、神経線維鞘腫、横紋筋肉腫、および骨膜肉腫；脳腫瘍、限定的なものではないが、例えば神経膠腫、星状細胞腫、脳幹神経膠腫、上衣腫、乏突起神経膠腫、非グリア腫瘍、聴神経鞘腫、頭蓋咽頭腫、髄芽腫、髄膜腫、松果体細胞腫、松果体芽細胞腫、および原発性脳リンパ腫；乳癌、限定的なものではないが、例えば腺癌、小葉（小細胞）癌、管内癌、髄様乳癌、ムチン産生乳癌、細管乳癌、乳頭状乳癌、パジェット病（若年性パジェット病を含む）、および炎症性乳癌；副腎癌、限定的なものではないが、例えば褐色細胞腫および副腎皮質癌；甲状腺癌、限定的なものではないが、例えば乳頭状または小胞性甲状腺癌、髄様甲状腺癌および退形成甲状腺癌；膵臓癌、限定的なものではないが、例えばインスリノーマ、ガストリン産生腫瘍、グルカゴン産生腫瘍、ＶＩＰ産生腫瘍、ソマトスタチン分泌腫瘍、およびカルチノイドもしくは島細胞腫；下垂体癌、限定的なものではないが、例えばクッシング病、プロラクチン分泌腫瘍、先端肥大症、および尿崩症；眼癌、限定的なものではないが、例えば眼メラノーマ、例えば虹彩メラノーマ、脈絡膜メラノーマ、毛様体メラノーマ、および網膜芽細胞腫；膣癌、例えば扁平上皮癌、腺癌、およびメラノーマ；外陰癌、例えば扁平上皮癌、メラノーマ、腺癌、基底細胞癌、肉腫、およびパジェット病；子宮頸癌、限定的なものではないが、例えば扁平上皮癌および腺癌；子宮癌、限定的なものではないが、例えば子宮内膜癌および子宮肉腫；卵巣癌、限定的なものではないが、例えば卵巣上皮癌、境界（ｂｏｒｄｅｒｌｉｎｅ）腫瘍、胚細胞腫瘍、および間質腫瘍；食道癌、限定的なものではないが、例えば扁平上皮癌、腺癌、腺様嚢包癌、粘表皮癌、腺様扁平上皮癌、肉腫、メラノーマ、プラスマ細胞腫、疣状癌、および燕麦細胞（小細胞）癌；胃癌、限定的なものではないが、例えば腺癌、菌状発育（ｆｕｎｇａｔｉｎｇ）（ポリプ状）、潰瘍性、表在性、びまん性、悪性リンパ腫、脂肪肉腫、線維肉腫、および癌肉腫；結腸癌；直腸癌；肝癌、限定的なものではないが、例えば肝細胞癌および肝芽腫、胆嚢癌、例えば腺癌；胆管癌、限定的なものではないが、例えば乳頭状、結節性、およびびまん性；肺癌、例えば非小細胞肺癌、扁平上皮癌（類表皮癌）、腺癌、大細胞癌、および小細胞肺癌；精巣癌、限定的なものではないが例えば胚芽性腫瘍、セミノーマ、無形成性、古典的（典型的）、精母細胞、非セミノーマ、胎児性癌、テラトーマ癌、絨毛癌（卵黄嚢腫瘍）、前立腺癌、限定的なものではないが、例えば腺癌、平滑筋肉腫、および横紋筋肉腫；ペナル（ｐｅｎａｌ）癌；口内癌、限定的なものではないが、例えば扁平上皮癌；基底癌；唾液腺癌、限定的なものではないが、例えば腺癌、粘表皮癌、および腺様嚢胞癌；咽頭癌、限定的なものではないが、例えば鱗状細胞癌および疣状；皮膚癌、限定的なものではないが例えば基底細胞癌、扁平上皮癌およびメラノーマ、表在性メラノーマ、結節性メラノーマ、悪性ほくろ、末端性ほくろ性メラノーマ；腎臓癌、限定的なものではないが、例えば腎細胞癌、腺癌、副腎腫、線維肉腫、移行上皮癌（腎盤および／または尿管）；ウィルムス腫瘍；膀胱癌、限定的なものではないが、例えば移行上皮癌、鱗状細胞癌、腺癌、癌肉腫、等が含まれるが、これらに限定されない。加えて、癌には、粘液肉腫、骨原性肉腫、内皮肉腫、リンパ管内皮腫、中皮腫、滑膜腫、血管芽細胞腫、上皮癌、嚢胞腺癌、気管支癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、および乳頭状腺癌が含まれる（このような障害の概説としては、Ｆｉｓｈｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２ｄ  Ｅｄ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、およびＭｕｒｐｈｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｉｎｆｏｒｍｅｄ  Ｄｅｃｉｓｉｏｎｓ：Ｔｈｅ  Ｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ａｎｄ  Ｒｅｃｏｖｅｒｙ，Ｖｉｋｉｎｇ  Ｐｅｎｇｕｉｎ，Ｐｅｎｇｕｉｎ  Ｂｏｏｋｓ  Ｕ．Ｓ．Ａ．，ｉｎｃ．，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａを参照）。また、アポトーシスにおける異常により引き起こされる癌も、本開示の方法および組成物により治療され得ると企図される。このような癌としては、濾胞性リンパ腫、���５３変異を有する癌、乳房、前立腺、および卵巣のホルモン依存性腫瘍、ならびに前癌性病変、例えば家族性腺腫様ポリプ症、および骨髄形成異常症候群が含まれるが、これらに限定されない。
【０１７３】
本開示のタンパク質および同一物を含む組成物は、例えば、自己免疫および／もしくは炎症障害、例えばシェーグレン症候群、慢性関節リウマチ、狼瘡、乾癬、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性および他の網膜症、水晶体後線維増殖症、加齢性黄斑変性、血管新生性緑内障、血管腫、甲状腺過形成（グレーヴス病を含む）、角膜および他の組織移植、および慢性炎症、敗血症、関節リウマチ、腹膜炎、クローン病、再灌流障害、敗血症、内毒素ショック、嚢胞性線維症、心内膜炎、乾癬、関節炎（例えば、乾癬性関節炎）、アナフィラキシーショック、臓器虚血、再灌流障害、脊髄損傷、ならびに同種移植片拒絶が含まれるが、これらに限定されない、多数の目的に、広範囲の慢性および急性の疾患および障害に対する治療用物質として有用である。自己免疫および／または炎症障害の他の例としては、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、副腎の自己免疫疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎および精巣炎、シェーグレン症候群、乾癬、アテローム性動脈硬化症、糖尿病性および他の網膜症、水晶体後線維増殖症、加齢性黄斑変性、血管新生性緑内障、血管腫、甲状腺過形成（グレーヴス病を含む）、角膜および他の組織移植、および慢性炎症、敗血症、関節リウマチ、腹膜炎、再灌流障害、敗血症、内毒素ショック、嚢胞性線維症、心内膜炎、乾癬、関節炎（例えば、乾癬性関節炎）、アナフィラキシーショック、臓器虚血、再灌流障害、脊髄損傷および同種移植片拒絶、自己免疫性血小板減少症、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心筋症、セリアックスプルー皮膚炎、慢性疲労免疫機能不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄多発性神経障害、チャーグーストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素症、円板状狼瘡、必須混合クリオグロブリン血症、線維筋肉痛−線維筋炎、糸球体腎炎、グレーヴズ病、ギランバレー、橋本病甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡニューロパチー、若年性関節炎、扁平苔癬、エリテマトーデス、メニエール病、混合性結合組織病、多発性硬化症、１型または免疫媒介型糖尿病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性ガンマグロブリン欠乏血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、ライター症候群、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティッフマン症候群、全身性エリテマトーデス、エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、脈管炎、例えば疱疹状皮膚炎脈管炎、尋常性白斑およびウェゲナー肉芽腫症が含まれるが、これらに限定されない。炎症障害の例には、喘息、脳炎、炎症性腸疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アレルギー障害、敗血性ショック、肺線維症、未分化脊椎関節症、未分化関節障害、関節炎、炎症性骨溶解、および慢性ウイルスまたは細菌感染から生じる慢性炎症が含まれるが、これらに限定されない。本開示の組成物および方法は、上述の疾患を予防、処置、または治療するために使用される１つ以上の従来の療法と共に使用され得る。
【０１７４】
本開示はまた、ウイルス、真菌、真核微生物、および細菌等の種々の感染性因子を不活性化するための本開示の組成物の使用方法を提供する。いくつかの実施形態において、本開示の組成物は、ＲＳＶ、ｈＭＰＶ、ＰＩＶ、またはインフルエンザウイルスを不活性化するために使用され得る。他の実施形態において、本開示の組成物は、例えば、ネグレリア属（Ｎａｅｇｌｅｒｉａ）、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、ブラストマイセス属（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ）、ヒストプラズマ属（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、または白癬（Ｔｉｎｅａ属）等であるが、これらに限定されない、真菌病原体のメンバーを不活性化するために使用され得る。他の実施形態において、本開示の組成物は、例えば、ジアルジア属（Ｇｉａｒｄｉａ）、トキソプラズマ属（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）、プラスモジウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）、トリパノソーマ属（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ）、およびエントアメーバ属（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ）等であるが、これらに限定されない、真核微生物のメンバーを不活性化するために使用され得る。他の実施形態において、本開示の組成物は、例えば、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、ボレリア（Ｂｏｒｒｅｌｉａ）、ビブリオ（Ｖｉｂｒｏ）、およびネイセリア（Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ）属等であるが、これらに限定されない、細菌病原体のメンバーを不活性化するために使用され得る。
【０１７５】
本開示の組成物は、多数の目的に、例えば、ウイルス性、細菌性、および真菌性疾患を含む感染症が含まれるが、これらに限定されない、多種多様な慢性および急性の疾患および障害に対する治療剤として有用である。ウイルス病原体の例としては、アデノウイルス科（例えば、マストアデノウイルス属およびアビアデノウイルス属）、ヘルペスウイルス科（例えば、単純ヘルペスウイルス１、単純ヘルペスウイルス２、単純ヘルペスウイルス５、および単純ヘルペスウイルス６）、レヴィウイルス科（例えば、レヴィウイルス属、腸内細菌ファージＭＳ２、アロレヴィウイルス属）、ポックスウイルス科（例えば、チョルドポックスウイルス亜科、パラポックスウイルス属、アビポックスウイルス属、カプリポックスウイルス属、レポリポックスウイルス属、スイポックスウイルス属、モルスサイポックスウイルス属、およびエントモポックスウイルス亜科）、パポーバウイルス科（例えば、ポリオーマウイルス属およびパピローマウイルス属）、パラミクソウイルス科（例えば、パラミクソウイルス属、パラインフルエンザウイルス１、モルビリウイルス属（例えば、麻疹ウイルス）、ルブラウイルス属（例えば、ムンプスウイルス）、ニューモノウイルス亜科（例えば、ニューモウイルス属、ヒト呼吸器合包体ウイルス）、メタニューモウイルス（例えば、トリニューモウイルスおよびヒトメタニューモウイルス））、ピコルナウイルス科（例えば、エンテロウイルス属、ライノウイルス属、ヘパトウイルス属（例えば、ヒトＡ型肝炎ウイルス）、カルヂオウイルス属、およびアフトウイルス属）、レオウイルス科（例えば、オルソレオウイルス属、オルビウイルス属、ロタウイルス属、シポウイルス属、フィジーウイルス属、フィトレオウイルス属、およびオリザウイルス属）、レトロウイルス科（例えば、哺乳類Ｂ型レトロウイルス属、哺乳動物Ｃ型レトロウイルス属、トリＣ型レトロウイルス属、Ｄ型レトロウイルス群、ＢＬＶ−ＨＴＬＶレトロウイルス、レンチウイルス属（例えば、ヒト免疫不全ウイルス１およびヒト免疫不全ウイルス２）、スプマウイルス属）、フラビウイルス科（例えば、Ｃ型肝炎ウイルス）、ヘパドナウイルス科（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス）、トガウイルス科（例えば、アルファウイルス属（例えば、シンドビスウイルス）、およびルビウイルス属（例えば、風疹ウイルス））、ラブドウイルス科（例えば、ベシクロウイルス属、リッサウイルス属、エフェメロウイルス属、シトラブドウイルス属、およびヌクレオラブドウイルス属）、アレナウイルス科（例えば、アレナウイルス属、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、イッピーウイルス、およびラッサウイルス）、ならびにコロナウイルス科（例えば、コロナウイルス属およびトロウイルス属）が含まれるが、これらに限定されない。細菌病原体の例としては、アクワスピリルム（Ａｑｕａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）科、アゾスピリルム（Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）科、アゾトバクター（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ）科、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ）科、バルトネラ（Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ）種、ブデロビブリオ（Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ）科、カンピロバクター（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）種（例えば、クラミジア肺炎菌（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ））、クロストリジウム、腸内細菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）科（例えば、シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）種、エドワードシエラ（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ）、エンテロバクター・エアロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、エルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）種、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、ハフニア（Ｈａｆｎｉａ）種、クレブジエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）種、モルガネラ（Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ）種、変形菌（Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、プロビデンシア（Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種、セラティア・マルセセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）、およびシゲラ・フレクスネリ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｆｌｅｘｎｅｒｉ））、ガルジネラ（Ｇａｒｄｉｎｅｌｌａ）科、インフルエンザエ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ハロバクテリウム（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）科、ヘリコバクター（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）科、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎａｌｌａｃｅａｅ）科、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）種、メチロコッカス（Ｍｅｔｈｙｌｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）科、マイコバクテリア（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）（例えば結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｃｅａｅ）科、オセアノスピリルム（Ｏｃｅａｎｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）科、パスツレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｃｅａｅ）科、肺炎球菌（Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ）種、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、リゾビウム（Ｒｈｉｚｏｂｉａｃｅａｅ）科、スピリルム（Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ）科、スピロソマセア（Ｓｐｉｒｏｓｏｍａｃｅａｅ）科、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓｓ）（例えば、メシチリン耐性黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、およびスタフィロコッカス・パイロゲネス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｒｏｇｅｎｅｓ））、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）（例えば、腸炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ）、ストレプトコッカス・フェーシエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｓｃｉａｅ）、および肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ））、バンピロビブルヘリコバクター（Ｖａｍｐｉｒｏｖｉｂｒ  Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）科、ならびにバンピロビブリオＶａｍｐｉｒｏｖｉｂｒｉｏ）科が含まれるが、これらに限定されない。真菌病原体の例としては、アブシディア（Ａｂｓｉｄｉａ）種（例えば、アブシディア・コリムビフェラ（Ａｂｓｉｄｉａ  ｃｏｒｙｍｂｉｆｅｒａ）およびアブシディア・ラモサ（Ａｂｓｉｄｉａ  ｒａｍｏｓａ））、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種（例えば、アスペルギルス・フラブス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ）、アスペルギルス・フミガタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ）、ク���コウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、およびアスペルギルス・テレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｕｓ））、バシジオボルス・ラナルム（Ｂａｓｉｄｉｏｂｏｌｕｓ  ｒａｎａｒｕｍ）、ブラストマイセス・デルマティディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、カンジダ種（例えば、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・ガラブラータ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・ケル（Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｅｒｒ）、カンジダ・クルーゼイ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ）、カンジダ・パラプシロシス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、カンジダ・シュードトロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・クイレルモンディイ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｑｕｉｌｌｅｒｍｏｎｄｉｉ）、カンジダ・ルゴーザ（Ｃａｎｄｉｄａ  ｒｕｇｏｓａ）、カンジダ・ステラトイデア（Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ）、およびカンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ））、コクシジオイデス・イミティス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）、コニジオボルス（Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）種、クリプトコッカス・ネオフォルムス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍｓ）、カニンガメラ（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ）種、皮膚糸状菌、ヒストプラズマ・カプスラタム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、マイクロスポルム・ジプセウム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ  ｇｙｐｓｅｕｍ）、ムコル・プシルス（Ｍｕｃｏｒ  ｐｕｓｉｌｌｕｓ）、パラコッキディオイデス・ブラシリエンシス（Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、シューダルエシェリア・ボイディイイ（Ｐｓｅｕｄａｌｌｅｓｃｈｅｒｉａ  ｂｏｙｄｉｉ）、リノスポリジウム・シーベリ（Ｒｈｉｎｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｓｅｅｂｅｒｉ）、ニューモシスティス・カリニイ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）、クモノスカビ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）種（例えば、リゾップス・アルヒザス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ）、リゾップス・オライザエ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、およびリゾップス・マイクロスポルス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｓ））、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）種、スポロトリクス・シェネキイイ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ）、ならびに例えば接合菌（Ｚｙｇｏｍｙｃｅｔｅｓ）、子嚢菌（Ａｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓ）、担子菌（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ）、不完全菌（Ｄｅｕｔｅｒｏｍｙｃｅｔｅｓ）、および卵菌（Ｏｏｍｙｃｅｔｅｓ）等の綱が含まれるが、これらに限定されない。
【０１７６】
本開示はまた、細胞集団を枯渇させるための抗体の使用方法を提供する。１つの実施形態において、本開示の方法は、好酸球、好塩基球、好中球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マスト細胞、単球、内皮細胞、および腫瘍細胞の細胞型を枯渇させるのに有用である。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、操作されない対照抗体またはその共役体と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上のそれぞれの細胞集団を枯渇させる。
【０１７７】
本開示の抗体およびその共役体はまた、疾患またはその症状の診断および検出においても有用であり得る。別の実施形態において、本開示の組成物は、疾患の進行のモニタリングにおいて有用であり得る。別の実施形態において、本開示の組成物は、治療計画のモニタリングにおいて有用であり得る。別の実施形態において、本開示の組成物は、エクスビボ用途、例えば、診断キットにおける診断に有用であり得る。
【０１７８】
本開示の組成物は、標的抗原の可視化において有用であり得る。いくつかの実施形態において、該標的抗原は、内在化する細胞表面受容体である。他の実施形態において、該標的抗原は、細胞内抗原である。他の実施形態において、該標的は、核内抗原である。
【０１７９】
１つの実施形態において、本開示の抗体または抗体−薬物共役体は、一旦結合すると、細胞内に内在化され、ここで、内在化は、本明細書に記載される対照抗体よりも少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１１０％、少なくとも約１３０％、少なくとも約１４０％、少なくとも約１５０％、少なくとも約１６０％、または少なくとも約１７０％多い。
【０１８０】
別の実施形態において、本開示の抗体は、一旦結合すると、細胞内に内在化され、ここで、内在化は、本明細書に記載される対照抗体よりも１〜１０％、１０〜２０％、２０〜３０％、３０〜４０％、４０〜５０％、５０〜６０％、６０〜７０％、７０〜８０％、８０〜９０％、９０〜１００％、１００〜１１０％、１１０〜１２０％、１２０〜１３０％、１３０〜１４０％、１４０〜１５０％、１５０〜１６０％、または１６０〜１７０％多い。
【０１８１】
別の実施形態において、本開示の抗体は、一旦結合すると、細胞内に内在化され、ここで、内在化は、二次抗体を用いた内在化アッセイにより判定されるように、対照抗体よりも１〜１０％、１０〜２０％、２０〜３０％、３０〜４０％，４０〜５０％、５０〜６０％、６０〜７０％、７０〜８０％、８０〜９０％、９０〜１００％、１００〜１１０％、１１０〜１２０％、１２０〜１３０％、１３０〜１４０％、１４０〜１５０％、１５０〜１６０％、または１６０〜１７０％多い。
【０１８２】
医薬組成物
別の態様において、本開示は、例えば、薬学的に許容される担体と共に製剤化された本開示の抗体または抗体共役体の１つまたは組み合わせを含有する医薬組成物が含まれるが、これに限定されない組成物を提供する。このような組成物は、限定的なものではないが、例えば、本開示の２つ以上の異なる抗体の１つまたは組み合わせを含み得る。例えば、本開示の医薬組成物は、標的抗原上の異なるエピトープに結合するまたは相補的活性を有する抗体の組み合わせを含み得る。
【０１８３】
本開示の医薬組成物はまた、他の薬剤と併用した併用療法においても投与され得る。例えば、該併用療法は、少なくとも１つの他の両方と併用した本開示の抗体を含むことができ、ここで、該療法は、手術、免疫療法、化学療法、放射線治療、または薬物療法であり得る。
【０１８４】
本開示の医薬化合物は、１つ以上の薬学的に許容される塩を含み得る。かかる塩の例には、酸付加塩および塩基付加塩が含まれる。酸付加塩には、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リン等の無毒性無機酸に由来するもの、ならびに脂肪族モノ−およびジ−カルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族酸、および芳香族スルホン酸等の無毒性有機酸に由来するものが含まれる。塩基付加塩には、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属に由来するもの、ならびにＮ，Ｎ′−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカイン等の無毒性有機アミンに由来するものが含まれる。
【０１８５】
本開示の医薬組成物はまた、薬学的に許容される抗酸化剤も含み得る。薬学的に許容される抗酸化剤の例としては、（１）アスコルビン酸、塩酸システイン、硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等の水溶性抗酸化剤、（２）アスコルビルパルミタート、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、プロピルガラート、アルファ−トコフェロール等の油溶性抗酸化剤、および（３）クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等の金属キレート剤が含まれる。
【０１８６】
本開示の医薬組成物において使用され得る適当な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、およびそれらの適当な混合物、オリーブ油等の植物油、ならびにオレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルが含まれる。適当な流動性は、例えば、レシチン等のコーティング剤の使用により、分散液の場合には要求される粒径の維持により、および界面活性剤の使用により維持することができる。
【０１８７】
これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤等の補助剤も含有し得る。微生物の存在の予防は、滅菌法、ならびにパラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸等の種々の抗菌および抗真菌剤の組み込みの両方により確保され得る。糖、塩化ナトリウム等の等張化剤を該組成物に含めることも望ましい場合がある。加えて、注射可能な医薬品形態の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによりもたらされ得る。
【０１８８】
医薬組成物は、典型的には、製造および貯蔵の条件下で無菌かつ安定でなければならない。該組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または高薬物濃度に適した他の秩序構造として製剤化することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコール等）、およびその適当な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。適当な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用により、分散液の場合には要求される粒径の維持により、および界面活性剤の使用により維持することができる。多くの場合、例えば、糖、多価アルコール（マンニトール、ソルビトール等）、または塩化ナトリウム等の等張化剤を該組成物中に含めることが好ましいであろう。注射可能な組成物の持続的吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを組成物中に含めることによりもたらされ得る。
【０１８９】
滅菌注射液は、上記列挙の成分の１つまたは組み合わせを含む適切な溶媒中に必要量の活性化合物を組み込み、必要に応じて、その後に滅菌精密濾過を行うことによって、調製することができる。一般に、分散液は、上記列挙の塩基性分散媒および必要な他の成分を含む滅菌ビヒクルへの活性化合物の組み込みによって調製される。滅菌注射液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、その予め濾過滅菌した溶液から活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末が得られる真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）である。
【０１９０】
１つの実施形態において、本開示の組成物は、内毒素および／または関連発熱物質を実質的に含有しない発熱物質非含有製剤である。内毒素には、微生物の内部に封じ込められた毒素、および微生物が破壊または死亡した場合に放出される毒素が含まれる。また、発熱物質には、細菌および他の微生物の外膜由来の発熱誘発性熱安定性物質（糖タンパク質）が含まれる。これらの物質は共に、ヒトに投与された場合に、発熱、低血圧、およびショックを引き起こし得る。潜在的な有害な作用のため、低量の内毒素であっても、それを静脈内に投与される医薬品溶液から除去するのが有利である。Ｆｏｏｄ＆Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（「ＦＤＡ」）は、静脈内薬物投与の１回の１時間の期間中、５内毒素単位（ＥＵ）／用量／キログラム体重の上限を定めている（Ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ  Ｆｏｒｕｍ  ２６（１）：２２３（２０００））。治療タンパク質が数百または数千ミリグラム／キログラム体重の量で投与される場合、微量の内毒素であってもそれを除去するのが有利である。１つの実施形態において、該組成物中の内毒素および発熱物質レベルは、１０ＥＵ／ｍｇ未満、または５ＥＵ／ｍｇ未満、または１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である。別の実施形態において、該組成物中の内毒素および発熱物質レベルは、約１０ＥＵ／ｍｇ未満、または約５ＥＵ／ｍｇ未満、または約１ＥＵ／ｍｇ未満、または約０．１ＥＵ／ｍｇ未満、または約０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、または約０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である。
【０１９１】
１つの実施形態において、本開示は、組成物を投与することを含み、該投与は、経口、非経口、筋肉内、鼻腔内、膣、直腸、舌、舌下、頬側、頬内、静脈内、皮膚、皮下、または経皮投与である。
【０１９２】
別の実施形態において、本開示は、さらに、手術、化学療法、ホルモン療法、生物学的療法、免疫療法、または放射線療法等の他の療法と組み合わせて組成物を投与することを含む。
【０１９３】
用量／投与
本開示の抗体または抗体共役体を含む医薬または無菌組成物を調製するために、該抗体／抗体共役体は、薬学的に許容される担体または賦形剤と混合する。治療および診断薬剤の製剤は、例えば、凍結乾燥粉末、スラリー、水溶液、ローション、または懸濁液剤の形態で、生理的に許容される担体、賦形剤、または安定剤と混合することにより調製され得る（例えば、Ｈａｒｄｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、Ａｖｉｓ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ、Ｗｅｉｎｅｒ  ａｎｄ  Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．を参照）。
【０１９４】
治療薬のための投与計画の選択は、実体（entity）の血清または組織ターンオーバー速度、症状のレベル、実体の免疫原性、および生物学的マトリックスにおける標的細胞の接近性を含むいくつかの要因に依存する。ある実施形態において、投与計画は、副作用の許容されるレベルと調和させて、患者に送達される治療薬の量を最大にする。したがって、送達される生物学的製剤の量は、部分的には、特定の実体および治療される状態の重症度に依存する。抗体、サイトカイン、および低分子の適切な用量を選択するにあたっての指針は、入手可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（ｅｄ．）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ａｎｄ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、Ｂａｃｈ（ｅｄ．）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、Ｂａｅｒｔ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１−６０８、Ｍｉｌｇｒｏｍ，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６−１９７３、Ｓｌａｍｏｎ，ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２、Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３−６１９、Ｇｈｏｓｈ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２、Ｌｉｐｓｋｙ，ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４−１６０２を参照）。
【０１９５】
適当な用量の決定は、例えば、治療に影響を及ぼすこと、または治療に影響を及ぼすと予想されることが当技術分野で公知であるまたは疑われるパラメータおよび要因を用いて、臨床医によってなされる。一般に、該用量は、最適用量より若干少ない量から開始し、いずれかの負の副作用に対して所望のまたは最適な効果が達成されるまで、その後少量ずつ増加させる。重要な診断尺度には、例えば、炎症の症状の尺度、または産生される炎症サイトカインのレベルが含まれる。
【０１９６】
本開示の医薬組成物における活性成分の実際の投与量レベルは、患者にとって毒性となることなく、特定の患者、組成物、および投与様式に関する所望の治療応答を達成するのに有効な活性成分量が得られるよう変化させ得る。選択される投与量レベルは、使用される本開示の特定の組成物、またはそのエステル、塩、もしくはアミドの活性、投与経路、投与時点、使用される特定の化合物の排泄速度、治療の持続期間、使用される特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物、および／または物質、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、一般的健康状態、および病歴、ならびに医学分野で公知の同様の要因を含む種々の薬物動態学的要因に依存する。
【０１９７】
本開示の抗体または抗体共役体を含む組成物は、連続的注入により、または例えば、１日、１週間、もしくは週１〜７回の間隔での投与により提供され得る。用量は、静脈内、皮下、局所、経口的、鼻腔内、直腸、筋肉内、脳内に、または吸入により提供され得る。特定の用量プロトコルは、顕著な望ましくない副作用を回避する最大用量または投与頻度を含むものである。週当たりの合計用量は、少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ体重、少なくとも０．２μｇ／ｋｇ、少なくとも０．５μｇ／ｋｇ、少なくとも１μｇ／ｋｇ、少なくとも１０μｇ／ｋｇ、少なくとも１００μｇ／ｋｇ、少なくとも０．２ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１．０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２．０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも１０ｍｇ／ｋｇ、少なくとも２５ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも５０ｍｇ／ｋｇであり得る（例えば、Ｙａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７−４３４、Ｈｅｒｏｌｄ，ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２−１６９８、Ｌｉｕ，ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１−４５６、Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉ，ｅｔ  ａｌ．（２０００３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３−１４４を参照）。該用量は、少なくとも１５μｇ、少なくとも２０μｇ、少なくとも２５μｇ、少なくとも３０μｇ、少なくとも３５μｇ、少なくとも４０μｇ、少なくとも４５μｇ、少なくとも５０μｇ、少なくとも５５μｇ、少なくとも６０μｇ、少なくとも６５μｇ、少なくとも７０μｇ、少なくとも７５μｇ、少なくとも８０μｇ、少なくとも８５μｇ、少なくとも９０μｇ、少なくとも９５μｇ、、または少なくとも１００μｇであり得る。対象に投与される用量回数は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、もしくは１２またはそれ以上であり得る。
【０１９８】
本開示の抗体または抗体共役体に関しては、患者に投与される投与量は、患者の体重の０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇであり得る。該投与量は、患者の体重の０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜２ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜１ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．７５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．０００１〜０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜０．５ｍｇ／ｋｇ、０．０１〜０．２５ｍｇ／ｋｇ、または０．０１〜０．１０ｍｇ／ｋｇであり得る。
【０１９９】
本開示の抗体または抗体共役体の投与量は、キログラム（ｋｇ）単位の患者の体重とｍｇ／ｋｇ単位の投与用されるべき用量とを乗じることにより算出され得る。本開示の抗体の投与量は、患者の体重の１５０μｇ／ｋｇ以下、１２５μｇ／ｋｇ以下、１００μｇ／ｋｇ以下、９５μｇ／ｋｇ以下、９０μｇ／ｋｇ以下、８５μｇ／ｋｇ以下、８０μｇ／ｋｇ以下、７５μｇ／ｋｇ以下、７０μｇ／ｋｇ以下、６５μｇ／ｋｇ以下、６０μｇ／ｋｇ以下、５５μｇ／ｋｇ以下、５０μｇ／ｋｇ以下、４５μｇ／ｋｇ以下、４０μｇ／ｋｇ以下、３５μｇ／ｋｇ以下、３０μｇ／ｋｇ以下、２５μｇ／ｋｇ以下、２０μｇ／ｋｇ以下、１５μｇ／ｋｇ以下、１０μｇ／ｋｇ以下、５μｇ／ｋｇ以下、２．５μｇ／ｋｇ以下、２μｇ／ｋｇ以下、１．５μｇ／ｋｇ以下、１μｇ／ｋｇ以下、０．５μｇ／ｋｇ以下、または０．５μｇ／ｋｇ以下であり得る。
【０２００】
本開示の抗体または抗体共役体の単位用量は、０．１ｍｇ〜２０ｍｇ、０．１ｍｇ〜１５ｍｇ、０．１ｍｇ〜１２ｍｇ、０．１ｍｇ〜１０ｍｇ、０．１ｍｇ〜８ｍｇ、０．１ｍｇ〜７ｍｇ、０．１ｍｇ〜５ｍｇ、０．１〜２．５ｍｇ、０．２５ｍｇ〜２０ｍｇ、０．２５〜１５ｍｇ、０．２５〜１２ｍｇ、０．２５〜１０ｍｇ、０．２５〜８ｍｇ、０．２５ｍｇ〜７ｍｇ、０．２５ｍｇ〜５ｍｇ、０．５ｍｇ〜２．５ｍｇ、１ｍｇ〜２０ｍｇ、１ｍｇ〜１５ｍｇ、１ｍｇ〜１２ｍｇ、１ｍｇ〜１０ｍｇ、１ｍｇ〜８ｍｇ、１ｍｇ〜７ｍｇ、１ｍｇ〜５ｍｇ、または１ｍｇ〜２．５ｍｇであり得る。
【０２０１】
本開示の抗体または抗体共役体の投与量は、対象において、少なくとも０．１μｇ／ｍＬ、少なくとも０．５μｇ／ｍＬ、少なくとも１μｇ／ｍＬ、少なくとも２μｇ／ｍＬ、少なくとも５μｇ／ｍＬ、少なくとも６μｇ／ｍＬ、少なくとも１０μｇ／ｍＬ、少なくとも１５μｇ／ｍＬ、少なくとも２０μｇ／ｍＬ、少なくとも２５μｇ／ｍＬ、少なくとも５０μｇ／ｍＬ、少なくとも１００μｇ／ｍＬ、少なくとも１２５μｇ／ｍＬ、少なくとも１５０μｇ／ｍＬ、少なくとも１７５μｇ／ｍＬ、少なくとも２００μｇ／ｍＬ、少なくとも２２５μｇ／ｍＬ、少なくとも２５０μｇ／ｍＬ、少なくとも２７５μｇ／ｍＬ、少なくとも３００μｇ／ｍＬ、少なくとも３２５μｇ／ｍＬ、少なくとも３５０μｇ／ｍＬ、少なくとも３７５μｇ／ｍＬ、または少なくとも４００μｇ／ｍＬの血清力価を達成し得る。代替的に、本開示の抗体の投与量は、対象において、少なくとも０．１μｇ／ｍＬ、少なくとも０．５μｇ／ｍＬ、少なくとも１μｇ／ｍＬ、少なくとも２μｇ／ｍＬ、少なくとも５μｇ／ｍＬ、少なくとも６μｇ／ｍＬ、少なくとも１０μｇ／ｍＬ、少なくとも１５μｇ／ｍＬ、少なくとも２０μｇ／ｍＬ、少なくとも２５μｇ／ｍＬ、少なくとも５０μｇ／ｍＬ、少なくとも１００μｇ／ｍＬ、少なくとも１２５μｇ／ｍＬ、少なくとも１５０μｇ／ｍＬ、少なくとも１７５μｇ／ｍＬ、少なくとも２００μｇ／ｍＬ、少なくとも２２５μｇ／ｍＬ、少なくとも２５０μｇ／ｍＬ、少なくとも２７５μｇ／ｍＬ、少なくとも３００μｇ／ｍＬ、少なくとも３２５μｇ／ｍＬ、少なくとも３５０μｇ／ｍＬ、少なくとも３７５μｇ／ｍＬ、または少なくとも４００μｇ／ｍＬの血清力価を達成し得る。
【０２０２】
本開示の抗体または抗体共役体の用量は、少なくとも１日間、２日間、３日間、５日間、１０日間、１５日間、３０日間、４５日間、２ヶ月間、７５日間、３ヶ月間、または少なくとも６ヶ月間で分けられ得る。
【０２０３】
特定の患者に対する有効量は、治療される状態、患者の一般的健康状態、投与の方法、経路、および用量、ならびに副作用の重症度等の要因によって異なり得る（例えば、Ｍａｙｎａｒｄ，  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ａ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  ＳＯＰｓ  ｆｏｒ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．；Ｄｅｎｔ（２００１）Ｇｏｏｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｇｏｏｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｕｒｃｈ  Ｐｕｂｌ．，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫを参照）。
【０２０４】
投与の経路は、例えば、局所または皮膚適用、静脈内、腹腔内、脳内、筋肉内、眼内、動脈内、脳脊髄内、病巣内への注射または注入、あるいは徐放系またはインプラントによるものであり得る（例えば、Ｓｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８３）Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２２：５４７−５５６、Ｌａｎｇｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．（１９８１）Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７、Ｌａｎｇｅｒ（１９８２）Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５、Ｅｐｓｔｅｉｎ，ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：３６８８−３６９２、Ｈｗａｎｇ，ｅｔ  ａｌ．（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４０３０−４０３４、米国特許第６，３５０４６６号および同第６，３１６，０２４号を参照）。必要に応じて、該組成物はまた、可溶化剤、および注射部位の疼痛を軽減するためにリドカイン等の局所麻酔薬も含み得る。加えて、肺内投与はまた、例えば、吸入器またはネブライザーの使用およびエアゾール化剤による製剤も使用することができる。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号、同第５，９８５，３２０号、同第５，９８５，３０９号、同第５，９３４，２７２号、同第５，８７４，０６４号、同第５，８５５，９１３号、同第５，２９０，５４０号、および同第４，８８０，０７８号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ９２／１９２４４号、同第ＷＯ９７／３２５７２号、同第ＷＯ９７／４４０１３号、同第ＷＯ９８／３１３４６号、同第ＷＯ９９／６６９０３号を参照されたく、これらの各々は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。１つの実施形態において、本開示の抗体、併用療法、または組成物は、Ａｌｋｅｒｍｅｓ  ＡＩＲ（商標）肺薬物送達技術（Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ．）を用いて投与される。
【０２０５】
本開示の組成物はまた、当技術分野で公知の種々の方法の１つ以上を用いて、１つ以上の投与経路で投与され得る。当業者に理解されるように、投与の経路および／または様式は、所望の結果によって異なるであろう。本開示の抗体の選択される投与経路には、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄、または他の非経口投与経路、例えば、注射または注入が含まれる。非経口投与は、腸内および局所投与以外の投与様式に相当し得るものであり、通常は、注射によるものであり、静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外、および胸骨内の注射および注入が含まれるが、これらに限定されない。代替的に、本開示の組成物は、非経口経路、例えば、局所、表皮、または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、膣、直腸、舌下、または局所経路により投与することができる。
【０２０６】
本開示の抗体またはその共役体は、制御放出または徐放系で投与される場合には、制御放出または徐放を達成するためにポンプが使用され得る（例えば、Ｌａｎｇｅｒ、上記を参照、Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０、Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７、Ｓａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４を参照）。高分子物質を使用して、本開示の療法を制御放出または徐放を達成することができる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９７４）、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）、Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照、また、Ｌｅｖｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０、Ｄｕｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１、Ｈｏｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７  １：１０５も参照）、米国特許第５，６７９，３７７号、米国特許第５，９１６，５９７号、米国特許第５，９１２，０１５号、米国特許第５，９８９，４６３号、米国特許第５，１２８，３２６号、ＰＣＴ公開第９９／１５１５４号、およびＰＣＴ公開第９９／２０２５３号を参照。徐放製剤に使用されるポリマーの例としては、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリラート）、ポリ（メチルメタクリラート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−コ−ビニルアセタート）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、およびポリオルトエステルが含まれるが、これらに限定されない。１つの実施形態において、徐放製剤に使用されるポリマーは、不活性であり、浸出性不純物を含有せず、貯蔵時に安定であり、無菌であり、生分解性である。制御放出または徐放系は、予防または治療標的に接近して配置され、したがって、全身用量のごく一部を要するに過ぎない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、上記を参照、ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４））。
【０２０７】
制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３）による総説において考察されている。当業者に公知の任意の技術を用いて、本開示の１つ以上の抗体またはその共役体を含む徐放製剤を産生することができる。例えば、米国特許第４，５２６，９３８号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９１／０５５４８号、ＰＣＴ公開第ＷＯ９６／２０６９８号、Ｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，“Ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｈｙ  ｏｆ  ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｇｅｌ，”Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３９：１７９−１８９、Ｓｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｌｕｎｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｌｏｎｇ−Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ，”ＰＤＡ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＆  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ５０：３７２−３９７、Ｃｌｅｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，“Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｆｏｒ  ａ  ｂＦＧＦ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，”Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３−８５４、およびＬａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，“Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｆｏｒ  Ｌｏｃａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９−７６０を参照されたく、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２０８】
本開示の抗体または抗体共役体を局所投与する場合、それは、軟膏剤、クリーム剤、経皮パッチ、ローション剤、ゲル剤、シャンプー、噴霧剤、エアゾール剤、溶液剤、乳剤、または当業者に公知の他の形態で製剤化され得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，１９ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９９５）を参照。非噴霧可能局所剤形の場合、局所適用に適しており、場合によっては、水より大きな動的粘性率を有する担体または１つ以上の賦形剤を含む粘性ないし半固体または固体形態が典型的に使用される。適当な製剤には、溶液剤、懸濁液剤、乳剤、クリーム剤、軟膏剤、散剤、リニメント剤、ロウ剤（外用軟膏）等が含まれるが、これらに限定されるものではなく、これらは、所望により、滅菌され、または例えば浸透圧等の種々の特性に影響を及ぼすための補助物質（例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、バッファー、または塩）と混合される。他の適当な局所剤形には、噴霧可能なエアゾール剤が含まれ、ここで、活性成分は、場合によっては、固体または液体不活性担体と組み合わされ、加圧揮発性物質（例えば、気体推進剤、例えばフレオン）との混合物として、またはスクィーズボトル内に充填される。所望により、保湿剤または湿潤剤を、医薬組成物および剤形にも加えられ得る。このような追加的成分の例は、当技術分野で公知である。
【０２０９】
抗体または抗体共役体を含む組成物を鼻腔内に投与する場合には、それは、エアゾール形態、噴霧剤、ミスト、または滴剤の形態で製剤化され得る。特に、本開示において使用する予防または治療剤は、適当な推進剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適当な気体）の使用により、加圧パックまたはネブライザーから、エアゾール噴霧剤の形態で簡便に送達され得る。加圧エアゾールの場合、定量を送達するための弁を設けることにより投与単位が定められ得る。吸入器または通気器において使用されるカプセル剤およびカートリッジ剤（例えばゼラチンから構成されるもの）は、該化合物と、ラクトースまたはデンプン等の適当な粉末基剤との粉末混合物を含有するよう製剤化され得る。
【０２１０】
第２の治療剤、例えば、サイトカイン、ステロイド、化学療法剤、抗生物質、または放射線による共投与または治療のための方法は、当技術分野で公知である（例えば、Ｈａｒｄｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．）（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０．ｓｕｐ．ｔｈ  ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、Ｐｏｏｌｅ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（ｅｄｓ．）（２００１）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｆｏｒ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，Ｐａ．、Ｃｈａｂｎｅｒ  ａｎｄ  Ｌｏｎｇｏ（ｅｄｓ．）（２００１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，Ｐａ．を参照）。有効量の治療薬は、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも約３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％、症状を軽減し得る。
【０２１１】
本開示の抗体またはその共役体と組み合わせて投与することができる追加的な療法（例えば、予防または治療剤）は、本開示の抗体から５分未満を隔てて、３０分未満を隔てて、約１時間を隔てて、約１時間を隔てて、約１〜約２時間を隔てて、約２時間〜約３時間を隔てて、約３時間〜約４時間を隔てて、約４時間〜約５時間を隔てて、約５時間〜約６時間を隔てて、約６時間〜約７時間を隔てて、約７時間〜約８時間を隔てて、約８時間〜約９時間を隔てて、約９時間〜約１０時間を隔てて、約１０時間〜約１１時間を隔てて、約１１時間〜約１２時間を隔てて、約１２時間〜１８時間を隔てて、１８時間〜２４時間を隔てて、２４時間〜３６時間を隔てて、３６時間〜４８時間を隔てて、４８時間〜５２時間を隔てて、５２時間〜６０時間を隔てて、６０時間〜７２時間を隔てて、７２時間〜８４時間を隔てて、８４時間〜９６時間を隔てて、または９６時間〜１２０時間を隔てて投与され得る。２つ以上の療法は、患者の１回の同じ来院時に投与され得る。
【０２１２】
本開示の抗体または抗体共役体および他の療法は、周期的に投与され得る。周期的療法は、ある期間にわたる第１の療法（例えば、第１の予防または治療剤）の投与、およびそれに続く、ある期間にわたる第２の療法（例えば、第２の予防または治療剤）の投与、および任意に、それに続く、ある期間にわたる第３の療法（例えば、予防または治療剤）等の投与、ならびにこの連続的投与の反復を含み、すなわち、該周期は、これらの療法のうちの１つに対する耐性の発生を軽減するため、および／またはこれらの療法のうちの１つの副作用を回避または軽減するため、および／またはこれらの療法の効力を改善するためのものである。
【０２１３】
ある実施形態において、本開示の抗体および抗体共役体は、インビボにおける適切な分布が確保されるように製剤化され得る。例えば、血液−脳関門（ＢＢＢ）は、多数の高親水性化合物を排除する。本開示の治療化合物がＢＢＢ（所望により）を通過することを確保するために、それらは、例えば、リポソーム中に製剤化することができる。リポソームの製造方法に関しては、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号、同第５，３７４，５４８号、および同第５，３９９，３３１号を参照。該リポソームは、特定の細胞または器官へ選択的に輸送される１つ以上の部分を含むことができ、したがって、標的とされる薬物送達を増強させる（例えば、Ｖ．Ｖ．Ｒａｎａｄｅ（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５を参照）。例示的な標的化部分には、ホラートまたはビオチン（例えば、Ｌｏｗらの米国特許第５，４１６，０１６号を参照）、マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８）、抗体（Ｐ．Ｇ．Ｂｌｏｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３５７：１４０、Ｍ．Ｏｗａｉｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０）、界面活性剤プロテインＡ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４）、ｐ１２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９０９０）を参照、また、Ｋ．Ｋｅｉｎａｎｅｎ、Ｍ．Ｌ．Ｌａｕｋｋａｎｅｎ（１９９４）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３４６：１２３、Ｊ．Ｊ．Ｋｉｌｌｉｏｎ、Ｉ．Ｊ．Ｆｉｄｌｅｒ（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２７３も参照）が含まれる。
【０２１４】
本開示は、投与を必要とする対象に、本開示の抗体または抗体共役体を含む医薬組成物を、単独で、または他の療法と組み合わせて投与するためのプロトコルを提供する。本開示の併用療法の療法（例えば、予防または治療剤）は、同時または連続的に対象に投与され得る。本開示の併用療法の療法はまた、周期的にも投与され得る。周期的療法は、ある期間にわたる第１の療法（例えば、第１の予防または治療剤）の投与、およびそれに続く、ある期間にわたる第２の療法（例えば、第２の予防または治療剤）の投与を含み、すなわち、該周期は、これらの療法のうちの１つに対する耐性の発生を軽減するため、および／またはこれらの療法のうちの１つの副作用を回避または軽減するため、および／またはこれらの療法の効力を改善するためのものである。
【０２１５】
本開示の併用療法の療法（例えば、予防または治療剤）は、同時に対象に投与され得る。「同時に」という用語は、厳密に同一時点での療法（例えば、予防または治療剤）の投与に限定されるものではなく、本開示の抗体またはその共役体が他の療法と共に作用して、それらがそれ以外の様態で投与された場合に比べて増加した利益をもたらし得るように、ある配列および時間間隔で、本開示の抗体または抗体共役体を含む医薬組成物が対象に投与されることを意味する。例えば、各療法は、同時に、または異なる時点においていずれかの順序で連続的に対象に投与され得るが、それらは、同時に投与されない場合には、所望の治療または予防効果が得られるよう時間的に十分に接近して投与されるべきである。各療法は、任意の適当な形態および任意の適当な経路で、別々に対象に投与され得る。種々の実施形態において、該療法（例えば、予防または治療剤）は、１５分未満を隔てて、３０分未満を隔てて、１時間未満を隔てて、約１時間を隔てて、約１時間〜約２時間を隔てて、約２時間〜約３時間を隔てて、約３時間〜約４時間を隔てて、約４時間〜約５時間を隔てて、約５時間〜約６時間を隔てて、約６時間〜約７時間を隔てて、約７時間〜約８時間を隔てて、約８時間〜約９時間を隔てて、約９時間〜約１０時間を隔てて、約１０時間〜約１１時間を隔てて、約１１時間〜約１２時間を隔てて、２４時間を隔てて、４時間を隔てて、８時間を隔てて、７２時間を隔てて、または１週間を隔てて、対象に投与される。他の実施形態において、２つ以上の療法（例えば、予防または治療剤）は、患者の同一来院時に投与される。
【０２１６】
該併用療法の予防または治療剤は、同じ医薬組成物中で対象に投与され得る。代替的に、該併用療法の予防または治療剤は、別々の医薬組成物中で対象に同時に投与され得る。該予防または治療剤は、同じまたは異なる投与経路により対象に投与され得る。
【０２１７】
均等物
前述の明細書は、当業者が、本開示を実施し得るのに十分なものであると見なされる。前述の説明および実施例は、本開示のある例示的な実施形態を詳細に示している。しかしながら、前記の説明がどんなに詳細に本文中に記載されているとしても、本開示は多数の様態で実施可能であり、本開示は添付の特許請求の範囲およびその任意の均等物に従い解釈されるべきであると理解されよう。
【０２１８】
特許、特許出願、論文、教科書等を含む本明細書中で引用されているすべての参考文献、およびそれらの中で引用されている参考文献は、それらが既に組み込まれていない限りにおいて、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２１９】
例示的な実施形態
１．システイン操作された抗体であって、該システイン操作された抗体は、抗体重鎖の定常ドメインにおける少なくとも１つの表面アミノ酸残基における１つ以上のアミノ酸のシステイン残基への置換を含み、該システイン操作された抗体は、少なくとも１つのチオール基を含む、システイン操作された抗体。  
２．前記抗体が２つ以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
３．前記抗体が４つ以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
４．前記抗体が６つ以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
５．前記抗体が８つ以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
６．前記抗体が１０以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
７．前記抗体が１２以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
８．前記抗体が１４以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
９．前記抗体が１６以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
１０．前記抗体が１８以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
１１．前記抗体が２０以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
１２．前記抗体が２２以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
１３．前記抗体が２４以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
１４．前記抗体が２６以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
１５．前記抗体が２８以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
１６．前記抗体が３０以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
１７．前記抗体が３２以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
１８．前記抗体が３４以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
１９．前記抗体が３６以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
２０．前記抗体が３８以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。  
２１．前記抗体が４０以上のチオール基を含む、実施形態１に記載のシステイン操作された抗体。
【０２２０】
２２．前記表面アミノ酸残基は、２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される、実施形態１〜２１のいずれかに記載のシステイン操作された抗体。  
２３．前記抗体は、前記抗体のＣＨ１ドメインの１３１位、１３２位、１３３位、１３４位、１３５位、１３６位、１３７位、１３８位、および１３９位から選択される位置でのシステイン残基への置換をさらに含む、実施形態１〜２２のいずれかに記載のシステイン操作された抗体。
【０２２１】
２４．前記システイン操作された抗体は、特定の標的に対して、システイン操作前の抗体と同じまたはそれより高い結合親和性を示す、実施形態１〜２３のいずれかに記載のシステイン操作された抗体。  
２５．前記システイン操作された抗体は、特定の標的に対して、システイン操作前の抗体と同じまたはそれより低い結合親和性を示す、実施形態１〜４のいずれかに記載のシステイン操作された抗体。  
２６．前記システイン操作された抗体は、システイン操作前の抗体と同じ、それより低い、またはそれより高い結合親和性を示す、実施形態１〜２５のいずれかに記載のシステイン操作された抗体。  
２７．前記システイン操作された抗体は、システイン操作前の抗体と同じまたはそれより高いレベルの抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導する、実施形態１〜２６のいずれかに記載のシステイン操作された抗体。  
２８．前記システイン操作された抗体は、システイン操作前の抗体より低いレベルの抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導する、実施形態１〜２６のいずれかに記載のシステイン操作された抗体。  
２９．前記システイン操作された抗体は、システイン操作前の抗体と同じまたはそれより高いレベルの抗体依存性補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を誘導する、実施形態１〜２７のいずれかに記載のシステイン操作された抗体。  
３０．前記システイン操作された抗体は、システイン操作前の抗体と同じまたはそれより低いレベルの抗体依存性補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を誘導する、実施形態１〜２７のいずれかに記載のシステイン操作された抗体。
【０２２２】
３１．前記システイン操作された抗体は、断片化、Ｔｍ、および／または凝集プロファイルにより測定すると、システイン操作前の抗体と同じまたはそれより高いレベルの安定性を示す、実施形態１〜３０のいずれかに記載のシステイン操作された抗体。  
３２．前記システイン操作された抗体は、断片化、Ｔｍ、および／または凝集プロファイルにより測定すると、システイン操作前の抗体より低いレベルの安定性を示す、実施形態１〜３０のいずれかに記載のシステイン操作された抗体。  
３３．前記システイン操作された抗体は、システイン操作前の抗体と比較して、改善されたまたは低減した半減期を示す、実施形態１〜３２のいずれかに記載のシステイン操作された抗体。
【０２２３】
３４．前記チオール基は、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、毒素、放射性核種、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ペプチド核酸、非天然アミノ酸、ペプチド、酵素、蛍光タグ、またはビオチンへの化学的共役が可能である、実施形態１〜３３のいずれかに記載のシステイン操作された抗体。  
３５．前記細胞傷害性薬剤は、抗チューブリン剤、ＤＮＡマイナーグルーブ結合剤、抗ミトメイタンサノイド、およびアウリスタチンから選択される、実施形態３４に記載のシステイン操作された抗体。  
３６．前記化学療法剤は、タキソール、パクリタキセル、ドキソルビシン、メトトレキサート、ドラスタチン、ビンカアルカロイド、メトトレキサート、およびデュオカルマイシンから選択される、実施形態３４に記載のシステイン操作された抗体。  
３７．前記毒素は、アブリン、ブルシン、シクトキシン、ジフテリア毒素、ボツリヌス毒素、志賀毒素、内毒素、破傷風毒素、百日咳毒素、炭疽毒素、コレラ毒素、ファルカリノール、アルファ毒素、ゲルダナマイシン、ゲロニン、ロタウストラリン、リシン、ストリキニーネ、およびテトロドトキシンから選択される、実施形態３４に記載のシステイン操作された抗体。  
３８．前記放射性核種は、クロミウム（５１Ｃｒ）、コバルト（５７Ｃｏ）、フッ素（１８Ｆ）、ガドリニウム（１５３Ｇｄ、１５９Ｇｄ）、ゲルマニウム（６８Ｇｅ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、ランタニウム（１４０Ｌａ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、マンガン（５４Ｍｎ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、リン（３２Ｐ）、プラセオジミウム（１４２Ｐｒ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、ルテニウム（９７Ｒｕ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、セレニウム（７５Ｓｅ）、ストロンチウム（８５Ｓｒ）、硫黄（３５Ｓ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、スズ（１１３Ｓｎ、１１７Ｓｎ）、トリチウム（３Ｈ）、キセノン（１１３Ｘｅ）、イッテルビウム（１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ）、イットリウム（９０Ｙ）、および亜鉛（６５Ｚｎ）から選択される、実施形態３４に記載のシステイン操作された抗体。
【０２２４】
３９．前記抗体は、内在化抗体である、実施形態３４に記載のシステイン操作された抗体。  
４０．前記抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、または抗体様分子である、実施形態１〜３９のいずれかに記載のシステイン操作された抗体。
【０２２５】
４１．実施形態１〜４０のいずれかに記載のシステイン操作された抗体の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸。  
４２．実施形態４１に記載の核酸を含むベクター。  
４３．実施形態４２に記載のベクターを含む宿主細胞。  
４４．実施形態１〜４０のいずれかに記載のシステイン操作された抗体の抗体共役体。  
４５．実施形態４４に記載の抗体共役体を含む医薬組成物。
【０２２６】
４６．検出を必要とする対象において、癌、自己免疫、炎症性または感染性疾患または障害を検出する方法であって、実施形態４５に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。  
４７．前記疾患または障害は、前記抗体共役体により結合される細胞表面抗原を過剰発現する細胞を含む、実施形態４６に記載の方法。  
４８．標的細胞の増殖を阻害する方法であって、有効量の実施形態４４に記載の抗体共役体と前記細胞を接触させることを含む、方法。  
４９．対象において、標的細胞の増殖を阻害する方法であって、有効量の実施形態４５に記載の組成物を投与することを含む、方法。  
５０．前記標的細胞は、前記抗体共役体により結合される細胞表面抗原を過剰発現する細胞を含む、実施形態４８または４９に記載の方法。  
５１．治療を必要とする対象において、癌、自己免疫、炎症性または感染性疾患または障害を治療する方法であって、治療有効量の実施形態４５に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。  
５２．前記疾患または障害は、前記抗体共役体により結合される細胞表面抗原を過剰発現する細胞を含む、実施形態５１に記載の方法。  
５３．前記方法は、前記疾患と関連する細胞を殺すまたは該細胞の増殖速度を低減することを含む、実施形態５１に記載の方法。  
５４．前記方法は、Ｂ細胞またはＴ細胞を枯渇することを含む、実施形態５１に記載の方法。  
５５．追加の療法を施すことを含み、前記追加の療法が、化学療法、生物学的療法、免疫療法、放射線療法、ホルモン療法、および外科手術から選択される、実施形態５１に記載の方法。
【０２２７】
５６．実施形態１〜４０のいずれかに記載のシステイン操作された抗体に異種分子を効率的に共役させるための方法。  
５７．前記方法は、抗体のＦｃ領域の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも１つの位置に、前記異種分子を共役させることを含む、実施形態５６に記載の方法。  
５８．前記異種分子は、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、毒素、放射性核種、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ペプチド核酸、ペプチド、酵素、蛍光タグ、またはビオチンから選択される、実施形態５６または５７に記載の方法。  
５９．前記細胞傷害性薬剤は、抗チューブリン剤、ＤＮＡマイナーグルーブ結合剤、抗ミトメイタンサノイド、およびアウリスタチンから選択される、実施形態５８に記載の方法。  
６０．前記化学療法剤は、タキソール、パクリタキセル、ドキソルビシン、メトトレキサート、ドラスタチン、ビンカアルカロイド、およびメトトレキサートから選択される、実施形態５８に記載の方法。  
６１．前記毒素は、アブリン、ブルシン、シクトキシン、ジフテリア毒素、ボツリヌス毒素、志賀毒素、内毒素、破傷風毒素、百日咳毒素、炭疽毒素、コレラ毒素、ファルカリノール、アルファ毒素、ゲルダナマイシン、ゲロニン、ロタウストラリン、リシン、ストリキニーネ、およびテトロドトキシンから選択される、実施形態５８に記載の方法。  
６２．前記放射性核種は、クロミウム（５１Ｃｒ）、コバルト（５７Ｃｏ）、フッ素（１８Ｆ）、ガドリニウム（１５３Ｇｄ、１５９Ｇｄ）、ゲルマニウム（６８Ｇｅ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、ランタニウム（１４０Ｌａ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、マンガン（５４Ｍｎ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、リン（３２Ｐ）、プラセオジミウム（１４２Ｐｒ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、ルテニウム（９７Ｒｕ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、セレニウム（７５Ｓｅ）、ストロンチウム（８５Ｓｒ）、硫黄（３５Ｓ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、スズ（１１３Ｓｎ、１１７Ｓｎ）、トリチウム（３Ｈ）、キセノン（１１３Ｘｅ）、イッテルビウム（１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ）、イットリウム（９０Ｙ）、および亜鉛（６５Ｚｎ）から選択される、実施形態５８に記載の方法。
【０２２８】
６３．共役の効率は、共役反応後に残留する残りのチオール基によって測定した場合、少なくとも５％またはそれ以上である、実施形態５６〜６２のいずれかに記載の方法。  
６４．前記効率は、共役反応後に残留する残りのチオール基によって測定した場合、少なくとも２５％またはそれ以上である、実施形態５６〜６３のいずれかに記載の方法。  
６５．前記効率は、共役反応後に残留する残りのチオール基によって測定した場合、少なくとも７５％またはそれ以上である、実施形態５６〜６４のいずれかに記載の方法。
【０２２９】
６６．操作された抗体であって、抗体のＦｃ領域のＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインの少なくとも１つの表面アミノ酸残基において１つ以上のアミノ酸の非天然に生じる残基への置換を含み、
前記操作された抗体は、少なくとも１つの反応基を含み、
前記非天然に生じる残基は、システイン、リシン、チロシン、ヒスチジン、セレノシステイン、セレノメチオニン、および非天然アミノ酸から選択される、操作された抗体。  
６７．前記抗体は、２つ以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
６８．前記抗体は、４つ以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
６９．前記抗体は、６つ以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
７０．前記抗体は、８つ以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
７１．前記抗体は、１０以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
７２．前記抗体は、１２以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
７３．前記抗体は、１４以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
７４．前記抗体は、１６以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
７５．前記抗体は、１８以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
７６．前記抗体は、２０以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
７７．前記抗体は、２２以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
７８．前記抗体は、２４以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
７９．前記抗体は、２６以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
８０．前記抗体は、２８以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
８１．前記抗体は、３０以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
８２．前記抗体は、３２以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
８３．前記抗体は、３４以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
８４．前記抗体は、３６以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
８５．前記抗体は、３８以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。  
８６．前記抗体は、４０以上の置換を含む、実施形態６６に記載の操作された抗体。
【０２３０】
８７．前記表面アミノ酸残基は、２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される、実施形態６６〜８６のいずれかに記載のシステイン操作された抗体。  
８８．前記抗体は、前記抗体のＣＨ１ドメインの１３１位、１３２位、１３３位、１３４位、１３５位、１３６位、１３７位、１３８位、および１３９位から選択される位置で、システインへの置換をさらに含む、実施形態６６〜８７のいずれかに記載の操作された抗体。
【０２３１】
８９．前記操作された抗体は、特定の標的に対して、操作前の抗体と同じまたはそれより高い結合親和性を示す、実施形態６６〜８８のいずれかに記載の操作された抗体。  
９０．前記操作された抗体は、特定の標的に対して、操作前の抗体より低い親和性を示す、実施形態６６〜８９のいずれかに記載の操作された抗体。  
９１．前記操作された抗体は、１つ以上のＩｇＧ  Ｆｃ受容体に対して、操作前の抗体と同じ、低減した、またはそれより高い結合親和性を示す、実施形態６６〜９０のいずれかに記載の操作された抗体。  
９２．前記操作された抗体は、操作前の抗体と同じまたはそれより高いレベルの抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導する、実施形態６６〜９１のいずれかに記載の操作された抗体。  
９３．前記操作された抗体は、操作前の抗体より低いレベルの抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導する、実施形態６６〜９１のいずれかに記載の操作された抗体。  
９４．前記操作された抗体は、操作前の抗体と同じまたはそれより高いレベルの抗体依存性補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を誘導する、実施形態６６〜９１のいずれかに記載の操作された抗体。  
９５．前記操作された抗体は、操作前の抗体より低いレベルの抗体依存性補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を誘導する、実施形態６６〜９１のいずれかに記載の操作された抗体。
【０２３２】
９６．前記操作された抗体は、断片化、Ｔｍ、および／または凝集プロファイルにより測定すると、操作前の抗体と同じまたはそれより高いレベルの安定性を示す、実施形態６６〜９５のいずれかに記載の操作された抗体。  
９７．前記操作された抗体は、断片化、Ｔｍ、および／または凝集プロファイルにより測定すると、操作前の抗体より低いレベルの安定性を示す、実施形態６６〜９５のいずれかに記載の操作された抗体。  
９８．前記操作された抗体は、操作前の抗体と比較して、増加したまたは低減した半減期を示す、実施形態６６〜９７のいずれかに記載の操作された抗体。
【０２３３】
９９．前記チオール基は、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、毒素、放射性核種、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ペプチド核酸、非天然アミノ酸、ペプチド、酵素、蛍光タグ、またはビオチンへの化学的共役が可能である、実施形態６６〜９８のいずれかに記載の操作された抗体。  
１００．前記細胞傷害性薬剤は、抗チューブリン剤、ＤＮＡマイナーグルーブ結合剤、抗ミトメイタンサノイド、およびアウリスタチンから選択される、実施形態９９に記載の操作された抗体。  
１０１．前記化学療法剤は、タキソール、パクリタキセル、ドキソルビシン、メトトレキサート、ドラスタチン、ビンカアルカロイド、メトトレキサート、およびデュオカルマイシンから選択される、実施形態９９に記載の操作された抗体。  
１０２．前記毒素は、アブリン、ブルシン、シクトキシン、ジフテリア毒素、ボツリヌス毒素、志賀毒素、内毒素、破傷風毒素、百日咳毒素、炭疽毒素、コレラ毒素、ファルカリノール、アルファ毒素、ゲルダナマイシン、ゲロニン、ロタウストラリン、リシン、ストリキニーネ、およびテトロドトキシンから選択される、実施形態９９に記載の操作された抗体。  
１０３．前記放射性核種は、クロミウム（５１Ｃｒ）、コバルト（５７Ｃｏ）、フッ素（１８Ｆ）、ガドリニウム（１５３Ｇｄ、１５９Ｇｄ）、ゲルマニウム（６８Ｇｅ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、ランタニウム（１４０Ｌａ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、マンガン（５４Ｍｎ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、リン（３２Ｐ）、プラセオジミウム（１４２Ｐｒ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、ルテニウム（９７Ｒｕ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、セレニウム（７５Ｓｅ）、ストロンチウム（８５Ｓｒ）、硫黄（３５Ｓ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、スズ（１１３Ｓｎ、１１７Ｓｎ）、トリチウム（３Ｈ）、キセノン（１１３Ｘｅ）、イッテルビウム（１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ）、イットリウム（９０Ｙ）、および亜鉛（６５Ｚｎ）から選択される、実施形態９９に記載の操作された抗体。
【０２３４】
１０４．前記抗体は、内在化抗体である、実施形態９９に記載の操作された抗体。  
１０５．前記抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、または抗体様分子である、実施形態６６〜１０４のいずれかに記載の操作された抗体。
【０２３５】
１０６．実施形態６６〜１０５のいずれかに記載の操作された抗体の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸。  
１０７．実施形態１０６に記載の核酸を含むベクター。  
１０８．実施形態１０７に記載のベクターを含む宿主細胞。  
１０９．実施形態６６〜１０５のいずれかに記載の操作された抗体の抗体共役体。  
１１０．実施形態１０９に記載の抗体共役体を含む医薬組成物。
【０２３６】
１１１．検出を必要とする対象において、癌、自己免疫、炎症性または感染性疾患または障害を検出する方法であって、実施形態１１０に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。  
１１２．前記疾患または障害は、前記抗体共役体により結合される細胞表面抗原を過剰発現する細胞を含む、実施形態１１１に記載の方法。  
１１３．標的細胞の増殖を阻害する方法であって、有効量の実施形態１０９に記載の抗体共役体と前記細胞を接触させることを含む、方法。  
１１４．対象において、標的細胞の増殖を阻害する方法であって、有効量の実施形態１１０に記載の組成物を投与することを含む、方法。  
１１５．前記標的細胞は、前記抗体共役体により結合される細胞表面抗原を過剰発現する細胞を含む、実施形態１１３または１１４に記載の方法。  
１１６．治療を必要とする対象において、癌、自己免疫、炎症性または感染性疾患または障害を治療する方法であって、治療有効量の実施形態１１０に記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。  
１１７．前記疾患または障害は、前記抗体共役体により結合される細胞表面抗原を過剰発現する細胞を含む、実施形態１１６に記載の方法。  
１１８．前記方法は、前記疾患と関連する細胞を殺すまたは該細胞の増殖速度を低減することを含む、実施形態１１６に記載の方法。  
１１９．前記方法は、Ｂ細胞またはＴ細胞を枯渇することを含む、実施形態１１６に記載の方法。  
１２０．追加の療法を施すことを含み、前記追加の療法が、化学療法、生物学的療法、免疫療法、放射線療法、ホルモン療法、および外科手術から選択される、実施形態１１６に記載の方法。
【０２３７】
１２１．実施形態６６〜１０５のいずれかに記載の操作された抗体に異種分子を効率的に共役させるための方法。  
１２２．前記方法は、前記抗体のＦｃ領域の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される少なくとも１つの位置に、前記異種分子を共役させることを含む、実施形態１２１に記載の方法。  
１２３．前記異種分子は、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、毒素、放射性核種、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ペプチド核酸、ペプチド、酵素、蛍光タグ、またはビオチンから選択される、実施形態１２１または１２２に記載の方法。  
１２４．前記細胞傷害性薬剤は、抗チューブリン剤、ＤＮＡマイナーグルーブ結合剤、抗ミトメイタンサノイド、およびアウリスタチンから選択される、実施形態１２３に記載の方法。  
１２５．前記化学療法剤は、タキソール、パクリタキセル、ドキソルビシン、メトトレキサート、ドラスタチン、ビンカアルカロイド、およびメトトレキサートから選択される、実施形態１２３に記載の方法。  
１２６．前記毒素は、アブリン、ブルシン、シクトキシン、ジフテリア毒素、ボツリヌス毒素、志賀毒素、内毒素、破傷風毒素、百日咳毒素、炭疽毒素、コレラ毒素、ファルカリノール、アルファ毒素、ゲルダナマイシン、ゲロニン、ロタウストラリン、リシン、ストリキニーネ、およびテトロドトキシンから選択される、実施形態１２３に記載の方法。  
１２７．前記放射性核種は、クロミウム（５１Ｃｒ）、コバルト（５７Ｃｏ）、フッ素（１８Ｆ）、ガドリニウム（１５３Ｇｄ、１５９Ｇｄ）、ゲルマニウム（６８Ｇｅ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、ランタニウム（１４０Ｌａ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、マンガン（５４Ｍｎ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、リン（３２Ｐ）、プラセオジミウム（１４２Ｐｒ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、ルテニウム（９７Ｒｕ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、セレニウム（７５Ｓｅ）、ストロンチウム（８５Ｓｒ）、硫黄（３５Ｓ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、スズ（１１３Ｓｎ、１１７Ｓｎ）、トリチウム（３Ｈ）、キセノン（１１３Ｘｅ）、イッテルビウム（１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ）、イットリウム（９０Ｙ）、および亜鉛（６５Ｚｎ）から選択される、実施形態１２３に記載の方法。
【０２３８】
１２８．前記効率は、共役反応後に残留する残りのチオール基によって測定した場合、少なくとも５％またはそれ以上である、実施形態１２１〜１２７のいずれかに記載の方法。  
１２９．前記効率は、共役反応後に残留する残りのチオール基によって測定した場合、少なくとも２５％またはそれ以上である、実施形態１２１〜１２８のいずれかに記載の方法。  
１３０．前記効率は、共役反応後に残留する残りのチオール基によって測定した場合、少なくとも７５％またはそれ以上である、実施形態１２１〜１２９のいずれかに記載の方法。
【０２３９】
１３１．抗体のＦｃ領域であって、２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される１つ以上のアミノ酸の置換を含む、前記Ｆｃ領域。  
１３２．前記Ｆｃ領域は、
ａ）２８９および４４０、
ｂ）３３０および４４０、
ｃ）３３９および４４０、
ｄ）３５９および４４０、
ｅ）２８９および３５９、
ｆ）３３０および３５９、
ｇ）３３９および３５９、
ｈ）２８９および３３９、
ｉ）３３０および３３９、
ｊ）２８９および３３０、ならびに
ｋ）３３９および４４２
の置換対のうちの１つ以上を含む、実施形態１３１に記載のＦｃ領域。  
１３３．前記Ｆｃ領域は、
ａ）２８９、３３９、および４４２、
ｂ）２８９、３３０、および３３９、
ｃ）３３０、３３９、および４４２、ならびに
ｄ）２８９、３３０、および４４２
の置換群のうちの１つ以上を含む、実施形態１３１および１３２に記載のＦｃ領域。
【０２４０】
１３４．前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプから選択される、実施形態１３１〜１３３のいずれかに記載のＦｃ領域。  
１３５．前記置換は、システイン、リシン、チロシン、ヒスチジン、セレノシステイン、およびセレノメチオニンから選択されるアミノ酸への置換を含む、実施形態１３１〜１３３のいずれかに記載のＦｃ領域。  
１３６．前記置換は、システインを含む、実施形態１〜１３４のいずれかに記載のＦｃ領域。  
１３７．前記システインは、チオール基を含む、実施形態１３６に記載のＦｃ領域。  
１３８．前記チオール基は、化学的共役が可能である、実施形態１３７に記載のＦｃ領域。  
１３９．前記Ｆｃ領域は、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、毒素、放射性核種、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ペプチド核酸、非天然アミノ酸、ペプチド、酵素、蛍光タグ、およびビオチンのうちの１つ以上と共役させられる、請求項１３８に記載のＦｃ領域。
【０２４１】
１４０．実施形態１〜１３９のいずれかに記載のＦｃ領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。  
１４１．前記抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、または抗体様分子である、実施形態１４０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。  
１４２．前記抗体は、前記抗体のＣＨ１ドメインの１３１位、１３２位、１３３位、１３４位、１３５位、１３６位、１３７位、１３８位、および１３９位から選択される１つ以上のアミノ酸の置換をさらに含む、実施形態１４０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。  
１４３．実施形態１３１〜１４２のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物。  
１４４．検出を必要とする対象において、癌、自己免疫、炎症性または感染性疾患または障害を検出する方法であって、抗体またはその抗原結合フラグメントを前記対象に投与することを含み、操作された抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される１つ以上のアミノ酸の置換を含む、方法。  
１４５．治療を必要とする対象において、癌、自己免疫、炎症性または感染性疾患または障害を治療する方法であって、治療有効量の抗体またはその抗原結合フラグメントを前記対象に投与することを含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される１つ以上のアミノ酸の置換を含む、方法。
【０２４２】
１４６．実施形態１〜１４５のいずれかに記載のＦｃ領域をコードする配列を含む核酸。  
１４７．配列番号１〜２４の配列から選択されるアミノ酸配列をコードする配列を含む、実施形態１４６に記載の核酸。  
１４８．実施形態１４６および１４７のいずれかに記載の核酸を含む宿主細胞。  
１４９．哺乳動物細胞である、実施形態１４８に記載の宿主細胞。
【０２４３】
１５０．抗体またはその抗原結合フラグメントを産生する方法であって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントを発現させるために適切な条件下で、実施形態１４８に記載の宿主細胞をインキュベートするステップと、前記抗体またはその抗原結合フラグメントを単離するステップを含む、方法。
【０２４４】
１５１．抗体のＦｃ領域を含む組成物であって、前記Ｆｃ領域は、２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される１つ以上のアミノ酸の置換を含む組成物。  
１５２．前記Ｆｃ領域は、
ａ）２８９および４４０、
ｂ）３３０および４４０、
ｃ）３３９および４４０、
ｄ）３５９および４４０、
ｅ）２８９および３５９、
ｆ）３３０および３５９、
ｇ）３３９および３５９、
ｈ）２８９および３３９、
ｉ）３３０および３３９、
ｊ）２８９および３３０、ならびに
ｋ）３３９および４４２
の置換対のうちの１つ以上を含む、実施形態１５１に記載のＦｃ領域。  
１５３．前記Ｆｃ領域は、
ａ）２８９、３３９、および４４２、
ｂ）２８９、３３０、および３３９、
ｃ）３３０、３３９、および４４２、ならびに
ｄ）２８９、３３０、および４４２
の置換群のうちの１つ以上を含む、実施形態１５１および１５２に記載のＦｃ領域。
【０２４５】
１５４．前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４アイソタイプから選択される、実施形態１５１〜１５３のいずれかに記載のＦｃ領域。  
１５５．前記置換は、システイン、リシン、チロシン、ヒスチジン、セレノシステイン、およびセレノメチオニンから選択されるアミノ酸への置換を含む、実施形態１５１〜１５４のいずれかに記載のＦｃ領域。  
１５６．前記置換は、システインを含む、実施形態１〜１５４のいずれかに記載のＦｃ領域。
【０２４６】
１５７．前記システインは、チオール基を含む、実施形態１５６に記載のＦｃ領域。  
１５８．前記チオール基は、化学的共役が可能である、実施形態１５７に記載のＦｃ領域。  
１５９．前記Ｆｃ領域は、細胞傷害性薬剤、化学療法剤、毒素、放射性核種、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ペプチド核酸、非天然アミノ酸、ペプチド、酵素、蛍光タグ、およびビオチンのうちの１つ以上と共役させられる、請求項１５８に記載のＦｃ領域。
【０２４７】
１６０．実施形態１〜１５９のいずれかに記載のＦｃ領域を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。  
１６１．前記抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、または抗体様分子である、実施形態１６０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。  
１６２．前記抗体は、前記抗体のＣＨ１ドメインの１３１位、１３２位、１３３位、１３４位、１３５位、１３６位、１３７位、１３８位、および１３９位から選択される１つ以上のアミノ酸の置換をさらに含む、実施形態１６０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。  
１６３．実施形態１５１〜１６２のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物。
【０２４８】
１６４．検出を必要とする対象において、癌、自己免疫、炎症性または感染性疾患または障害を検出する方法であって、抗体またはその抗原結合フラグメントを前記対象に投与することを含み、操作された抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される１つ以上のアミノ酸の置換を含む、方法。  
１６５．治療を必要とする対象において、癌、自己免疫、炎症性または感染性疾患または障害を治療する方法であって、治療有効量の抗体またはその抗原結合フラグメントを前記対象に投与することを含み、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖の２３９位、２８２位、２８９位、２９７位、３１２位、３２４位、３３０位、３３５位、３３７位、３３９位、３５６位、３５９位、３６１位、３８３位、３８４位、３９８位、４００位、４４０位、４２２位、および４４２位から選択される１つ以上のアミノ酸の置換を含む、方法。
【０２４９】
１６６．実施形態１３１〜１６５のいずれかに記載のＦｃ領域をコードする配列を含む核酸。  
１６７．配列番号１〜２４の配列から選択されるアミノ酸配列をコードする配列を含む、実施形態１６６に記載の核酸。  
１６８．実施形態１６６および１６７のいずれかに記載の核酸を含む宿主細胞。  
１６９．哺乳動物細胞である、実施形態１６８に記載の宿主細胞。
【０２５０】
１７０．抗体またはその抗原結合フラグメントを産生する方法であって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントを発現させるために適切な条件下で、実施形態１６８に記載の宿主細胞をインキュベートするステップと、前記抗体またはその抗原結合フラグメントを単離するステップを含む、方法。  
１７１．配列番号１〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む組成物。
【実施例】
【０２５１】
８．実施例
次に、本開示を、次の実施例を参照して説明する。これらの実施例は、例証目的のために提供されるにすぎず、本開示は、これらの実施例に限定されるものとして決して解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書に提供される教示の結果としてより明白となる任意かつすべての変形を包含するものとして解釈されるべきである。
【０２５２】
８．１  実施例１．単一変異体のシステイン操作された抗体の発現および特徴づけ
一連のシステイン置換を、ＩｇＧ１分子のＣＨ２およびＣＨ３ドメインの表面領域（図１を参照）およびＦｃ空洞（cavity）（例えば、Ｌｅｕ３９８）の表面露出領域に施した。システイン操作されたＩｇＧ１分子を、標準的なＤＮＡ組換え技術を用いて生成した（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２０００，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂ  Ｐｒｅｓｓを参照）。ＩｇＧ１分子中に存在するＣＨ２およびＣＨ３ドメインの表面領域は、溶媒露出される領域に相当する。これらの領域が示す溶媒への露出は、領域内の特異的残基への試薬の共役を可能にする。ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインの表面上にあることが予測される種々のアミノ酸は、システイン残基で置換されるべき特定の候補アミノ酸である。
【０２５３】
図２においては、ＮＤ１野生型およびそのシステイン操作された誘導体を発現させ、精製し、ＰＡＧＥ分析に付した。ＮＤ１天然抗体（レーン１）およびその種々のシステイン操作された誘導体（レーン２〜２１、クローンＮＤ２〜２１に相当する）は、還元条件下で非常に類似した分子量プロファイルを示した。これらの結果は、組換えシステイン操作された抗体が、十分に発現し、対照レーンと比較してそれらの予測された分子量を保持することを示唆している。
【０２５４】
図３においては、すべての組換えシステイン操作されたタンパク質は、プロテインＡによって精製され、ＰＢＳ  １Ｘ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．２で透析し、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにおいて分析した。サンプルの同一性を図に図式的に表示する。右から左の標準タンパク質（点線で示したクロマトグラム）のピーク位置は、チログロブリン６７０ＫＤａ；２、ウシガンマグロブリン１５８ＫＤａ；３、ニワトリオボアルブミン４４ＫＤａ；４、ウマミオグロビン１７ＫＤａ；５、ビタミンＢ１２  １３．５ＫＤａである。変異抗体保持時間は、約８．６分であり、これは、約１５０ＫＤａの分子量に相当する。各変異に対する単量体含有率を示す。各変異体（ＮＤ２〜２１）は、天然抗体（ＮＤ−１）と比較して、類似のＳＥＣ溶出プロファイルを示した。この分析は、それらの期待される分子量を保持することに加えて組換えタンパク質が、導入されたシステインにより、ジスルフィド結合ホモ二量体を形成しないことを確認する。
【０２５５】
図４は、ＮＤ１（天然）の重鎖定常ドメイン配列の配列を示す。図４ａは、変異体ＮＤ２からＮＤ６の配列を示す。図４ｂは、変異体ＮＤ７からＮＤ１１の配列を示す。図４ｃは、変異体ＮＤ１２からＮＤ１６の配列を示す。図４ｄは、変異体ＮＤ１７からＮＤ２１の配列を示す。ＮＤ２からＮＤ２１の導入した点変異を、下線および太字により表す。
【０２５６】
ＮＤ１からＮＤ２１はそれぞれ、配列番号１〜２１を有する。各々は、ヒトＩｇＧ１に対してＨＣ  Ｆｃに由来する。
【０２５７】
図５は、Ｆｃシステイン変異体の組換え発現を示す。変異体の各々は、天然ＮＤ１に匹敵する発現レベルがあった。さらに、ＮＤ５を除く各々の変異体は、９３％で、または９３％を超えるモノマーで発現した（ＳＥＣ−ＨＰＬＣによって判定される）。それらはまた、天然ＮＤ１（ＭＡＬＬＳによって判定される）と類似の分子量および流体力学半径を有した（データ示されず）。
【０２５８】
図６は、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によって判定されたシステインＦｃ操作された変異体のＦｃＲｎ結合を示す。７０％単量体である変異体ＮＤ５（Ｄ３１２Ｃ）、および非グリコシル化変異体ＮＤ２０（Ｎ２９７Ｃ）は別として、変異体は、天然抗体ＮＤ１と類似のＦｃＲｎへの結合シグナルを保持する。
【０２５９】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を使用して、図７に示される天然およびシステイン操作された抗体の融解温度（Ｔｍ）を決定した。ＤＳＣ実験は、１０℃〜１１０℃の範囲の温度の関数として、本開示の抗体の熱容量を測定した。ＤＳＣ測定は、Ｍｉｃｒｏｃａｌ  ＶＰ−ＤＳＣ超高感度走査マイクロ熱量計を用いて行った。ＤＳＣ実験は、２５ｍＭ  ヒスチジン−ＨＣｌ  ｐＨ６、５ｍＭ  ＥＤＴＡ中で行った。ＤＳＣのために使用された溶液およびサンプルは、０．２２ミクロンフィルターを使用して濾過し、熱量計内への充填直前に脱気した。各組の測定に関して、まず、バッファー対ベースライン実施を行った。この直後に、該バッファー溶液をサンプル細胞から除去した。該サンプル細胞に、０．５〜１ｍｇ／ｍＬの濃度の０．５ｍＬの抗体（天然およびシステイン操作された）溶液を充填した。測定中、参照細胞をサンプルバッファーで満たした。各々のサンプル対バッファー実験から、対応するバッファー対バッファーベースライン実施を差し引いた。生データを濃度および走査速度に関して正規化した。Ｍｉｃｒｏｃａｌにより提供されたＯｒｉｇｉｎ  ＤＳＣソフトウェアを用いて、該データを適合させた。
【０２６０】
図７に示されるＮＤ１〜２１のＤＳＣ分析を、ｐＨ６．０の２５ｍＭ  Ｈｉｓ緩衝液を用いて、１５℃から１１０℃の範囲で、１℃／分で行った。変異体ＮＤ５（Ｄ３１２Ｃ）、ＮＤ１１（Ｅ３５６Ｃ）、およびＮＤ２０（Ｎ２９７Ｃ）を除いて、変異体は、天然ＮＤ１に対して類似のＤＳＣプロファイルを有する。
【０２６１】
図８は、１ｍｇスケールでの操作された抗体へのビオチン−ＰＥＧ２−マレイミドの共役および対照ＮＤ１における種々のプロトコルを示す。これらの実験におけるビオチン部分は、薬物と置き換えることができ、ビオチンは、共役のモデルとしての役割を果たす。ＰＥＧ２は、リンカーであり、マレイミド部分は、システインと反応する。「ＴＣＥＰ」は、トリス−（２−カルボキシエチル）ホスフィンを示す。別途特定されない限り、モル抗体に関してモル過剰を示す。
【０２６２】
図９は、共役プロトコルＤからのサンプルにおける還元タンパク質ゲルのウエスタンブロットを示す。変異および天然タンパク質を、プロテインＡによって精製し、ＰＢＳ  １Ｘ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．２で透析した。１〜２１の数字は、それぞれ、ＮＤ１〜２１に相当する。Ｍは、分子量マーカーである。Ｃは、軽鎖および重鎖の両方のリシン残基でのビオチンと共役した対照抗体である。サンプルは、まず、ＮｕＰａｇｅ  １０％ゲル上でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分解された。移動させたタンパク質を有するブロットを、ＴＢＳＴ  ２％ＢＳＡでブロッキングし、アビジン−ＨＲＰでインキュベートし、ＨＲＰに対する発色性基質で可視化した。ＨＣは、抗体重鎖に対応するタンパク質バンドであり、ＬＣは、抗体軽鎖に対応するタンパク質バンドである。いくつかの変異体（特に、ＮＤ２、３、４、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、１９）の重鎖において顕著な共役があるが、ＮＤ１（天然）のＨＣにおいて検出可能な共役はない。ＮＤ１を含む、すべての変異体のＬＣにおいていくつかの共役がある。
【０２６３】
図１０は、共役プロトコルＤからのサンプルにおいてクーマシー染色した非還元タンパク質ゲルを示す。すべての変異体および天然タンパク質を、プロテインＡによって精製し、ＰＢＳ  １Ｘ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．２で透析し、還元および非還元条件下で、１０％均一なＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて分析した。ＳｅｅＢｌｕｅ  Ｐｌｕｓ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）分子量標準（図式的に示されるようにｋＤａで）を使用した。３μｇの各サンプルを充填し、ゲルをＳｉｍｐｌｙＢｌｕｅ（商標）ＳａｆｅＳｔａｉｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて染色した。１〜２１の数字は、それぞれ、ＮＤ１〜２１に相当する。Ｍは、分子量マーカーである。ほとんどの共役変異体は、天然ＮＤ１と類似する電気泳動移動度パターンを示す。いくつかの共役変異体は、いくつかの明らかな二量体（ＮＤ３、５、１３、１５、１７、１８、１９）を含有し、ある変異体は、いくつかの明らかな断片化（ＮＤ２０）を示す。
【０２６４】
図１１は、プロトコルＤにより共役された、ＮＤ変異体の無傷集団およびペプチドマッピングの結果を含む。変異体ＮＤ４、７、１０、１２、１８は、操作されたシステインで、ほぼ９０％または９０％を超え、オリゴマー化がない、またはほとんどないことを示す。ＤＡＲは、共役サンプルの薬物対抗体のモル比である。
【０２６５】
８．２  実施例２．二重変異体のシステイン操作された抗体の発現および特徴づけ
選択変異体に基づいて、ＤＭ１〜ＤＭ１１に付番された、図１２に示される１１個の二重変異体を構築した。二重変異体のうちの１０個は、選択変異体ＮＤ４、ＮＤ７、ＮＤ１０、ＮＤ１２、ＮＤ１８に基づき、別の二重変異体は、ＮＤ１０およびＮＤ１９に基づいた。
【０２６６】
図１３は、二重変異体の発現におけるデータを提供する。すべての二重変異体は、一過性トランスフェクションによって十分に発現した。これらの二重変異体のうちの４個ＤＭ８、ＤＭ９、ＤＭ１０、ＤＭ１１のみが、発現し、（ＵＶ検出によるサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ−ＵＶ）によって判定される）９３％を超えるモノマーレベルで精製される。これらの４個の二重変異体は、天然ＮＤ１と類似するＭＷおよびＲｈを有する（データ示されず）。
【０２６７】
二重ＮＤ変異体は、図１４に見られるように、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて分析された。「Ｃ」は、対照として、天然ＮＤ１である。「Ｍ」は、分子量標準である。１〜１０の数字は、ＤＭ１〜１０に相当する。ＳＤＳ−ＰＡＧＥの結果は、ＳＥＣ−ＵＶの結果と一致する。変異体ＤＭ１〜７は、高い凝集パーセントを含む。変異体ＤＭ４は、最小量のモノマーを有し、ＤＭ８は、最大パーセントのモノマーを含有する。
【０２６８】
図１５は、二重変異体のＤＳＣ分析からの結果を示す。Ｈｉｓ緩衝液が１０ｍＭであることを除いて、上記のようにＤＳＣを分析した。４個の大部分が単量体（９３％超）である二重変異体は、天然および単一変異体ＮＤ１０と非常に類似するＤＳＣプロファイルを示す。
【０２６９】
図１６は、二重変異体の共役を分析するウエスタンブロット法およびクーマシー染色の結果を提供する。二重変異体ＤＭ８（ＮＤ４およびＮＤ１０）とＤＭ１１（ＮＤ１０およびＮＤ１９）の共役は、プロトコルＤ（図６を参照）で、１０：１のビオチン−マレイミド：抗体の比および２０：１のビオチン−マレイミド：抗体の比を使用する。
【０２７０】
図１６に記載されるように共役された二重変異体を無傷集団およびペプチドマッピングに付し、そのデータを図１７に提供する。２個の二重変異体、ＤＭ８（ＮＤ４およびＮＤ１０）およびＤＭ１１（ＮＤ１０およびＮＤ１９）は、操作されたシステインで、ほぼ９０％または９０％を超える共役を有する。ＤＡＲは、共役サンプルの薬物対抗体のモル比である。
【０２７１】
８．３  実施例３．修飾された共役プロトコル
共役反応をスケールアップする際の実験を行った。図１８は、単一および二重ＮＤ変異体に行われた共役の結果を示す。ＴＣＥＰ処理後のより過剰な一晩透析の使用を除いて、共役プロトコルＤ（図８）を使用し、室温で１時間、それ自体の共役を行った。薬物：ｍＡｂのモル比は、単一変異体に対して１０：１、二重変異体に対して２０：１であった。
【０２７２】
図１９は、前の図１８に示されるように、単一および二重変異体の共役されたサンプルのペプチドマッピング分析の結果を示す。本表は、操作されたシステインでの共役の効率、ならびに全体の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を要約している。ＤＭ９”は、同じ変異を用いたＤＭ９の第２の調製物である。
【０２７３】
８．４  実施例４．スケールアップ共役
図２０は、スケールアップ共役実験の結果を示す。（ａ）２．５、（ｂ）５、（ｃ）１０、（ｄ）２０、および（ｅ）４０ｍｇ／ｍＬの抗体で、共役を行った。図１８に記載される共役プロトコルを使用した。薬物：抗体のモル比は、１０：１であった。タンパク質ゲルにおいて、「Ｃ」は、天然ＮＤ１である。
【０２７４】
図２１は、スケールアップ共役のペプチドマッピングの結果を示す。前の図２０からの共役されたサンプルをペプチドマッピング分析に付した。共役効率の結果を示す。該濃度は、ＴＣＥＰ処理中の抗体濃度、ｄｈＡＡで刺激されたリフォールディングおよび共役に相当する。
【０２７５】
８．５  実施例５．三重変異体のシステイン操作された抗体の発現および特徴づけ
４個の三重変異体は、選択変異体に基づいて開発された。図２２は、Ｔ１〜Ｔ４と称される、三重変異体における変異に対して選択された残基を示す。
【０２７６】
図２３は、４個の三重変異体の発現およびモノマーレベルを提供する。タンパク質は、０．５Ｌの培養液から精製されたタンパク質であった。モノマーレベルを、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにおいて判定した。比較のために、天然抗体ＮＤ１は、９９％単量体である。
【０２７７】
図２４は、ビオチン−マレイミドによる三重変異体の共役の結果を含む。ＴＣＥＰ／ｄｈＡＡプロトコルは、室温で、１時間、１：２０の抗体：薬物のモル比での共役を伴い使用した。Ｔ１の２つの異なるタンパク質製剤を共役させた。共役特異性および効率のための対照として、天然ＮＤ１および二重変異体ＤＭ１１を含んだ。
【０２７８】
図２５は、三重変異体のペプチドマッピングの結果を示す。前の図２４からの共役された三重変異体サンプルを、ペプチドマッピング分析に付した。操作システインでの共役の効率を提示する。
【０２７９】
図２６は、１０ｍＭ  Ｈｉｓ緩衝液を用いて、上記のように行われた三重変異体のＤＳＣ分析を示す。Ｔ１は、第１の遷移、ＣＨ２に対して数度低い溶解温度を示す。Ｔ２は、８５℃で、沈殿物の一部を示す。Ｔ３は、高温で沈殿する。Ｔ４は、天然型とほぼ同一である。
【図１】
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【図２】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図３ｃ】
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【図３ｄ】
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【図４−１】
0005918129.tif 000009
【図４−２ａ】
0005918129.tif 000010
【図４−２ｂ】
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【図４−２ｃ】
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【図４−２ｄ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【配列表】
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