(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の試料中の分析物の有無を検出する方法であって、
複数の液体試料、及び複数の試料を処理するための装置を準備することと、
少なくとも２つの濾過済み液を生成するために、少なくとも２つの液体試料を、複数のフィルタエレメントのうちの少なくとも２つに通過させることと、
前記少なくとも２つの濾過済み液を少なくとも２つの分析物捕捉要素と接触させることと、
前記少なくとも２つの分析物捕捉要素を前記装置から分離することと、
前記分析物の有無を検出することと、
を含み、
前記複数の試料を処理するための装置は、
試料受容構成要素と、
濾液受容構成要素と、
複数の分析物捕捉要素と、を含み、
前記試料受容構成要素が、
第１の端部と、第２の端部と、それぞれが該第１の端部から該第２の端部まで延びる複数の離間した第１のチャンバとを有する、第１の本体であって、
前記第１の端部が、複数の第１の開口部であって、少なくとも１つの該第１の開口部が試料を受容するように構成された、複数の第１の開口部を含み、
前記第２の端部が、それぞれが第２の開口部を有する複数の出口を含み、
前記第１の本体が、複数の流体通路であって、それぞれが第１の開口部から第２の開口部まで、その間の第１のチャンバを通って延びる、複数の流体通路を形成する、第１の本体と、
複数のフィルタエレメントであって、各フィルタエレメントは前記複数の第１のチャンバのうちの１つの中の前記第１の開口部と前記第２の開口部との間に配置される、複数のフィルタエレメントと、を含み、
前記濾液受容構成要素が、
第３の端部と、第４の端部と、複数の離間した第２のチャンバとを有する第２の本体を含み、
該各第２のチャンバは、前記第３の端部から前記第４の端部まで延び、該各第２のチャンバは、
前記第３の端部にある、前記複数の出口のうちの１つを受容するように構成された第３の開口部と、
前記第４の端部にある第４の開口部と、を含み、
前記複数の分析物捕捉要素のそれぞれが、前記濾液受容構成要素に連結され、
前記試料受容構成要素が前記濾液受容構成要素に連結されると、前記装置が、複数の流路を形成し、各流路が、前記複数の第１のチャンバのうちの１つ、前記複数のフィルタエレメントのうちの１つ、及び前記複数の第２のチャンバのうちの１つを通る流体の通過を容易にし、かつ前記複数の分析物捕捉要素のうちの少なくとも１つとの流体の接触を容易にし、
前記複数の出口のそれぞれが、前記第２のチャンバの少なくとも一部に嵌入するように、かつ、前記少なくとも一部を通って長手方向に移動して前記複数の分析物捕捉要素の前記それぞれが前記試料受容構成要素の前記第２の端部によって前記装置から分離されるように、成形及びサイズ調整される、方法。
【請求項２】
前記少なくとも２つの分析物捕捉要素を前記装置から分離することが、前記少なくとも２つの分析物捕捉要素を前記装置から分離するために少なくとも２つの出口を使用することを更に含み、
前記少なくとも２つの出口を使用することが、前記少なくとも２つの分析物捕捉要素を前記装置から分離するために、前記少なくとも２つの出口を付勢して前記少なくとも２つの第２のチャンバに通すことを更に含む、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、米国特許仮出願第６１／４５１，０９６号（２０１１年３月９日出願）の利益を請求するものであり、該出願は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
多くの種類の試料（例えば、臨床試料、環境試料、食品試料、及び飲料試料）は、微生物の有無について定期的に検査される。具体的には、多くの試料は病原微生物の有無について検査される。多くの場合、試料は、標的微生物の数を増加させ、非標的微生物の数を減少させ、微生物を濃縮し、及び／又は試料中の潜在的に干渉する物質の量を減少させるために、様々な前処理（即ち、検出工程の前の処理）を必要とする。前処理工程は煩雑であり得、完了するまでに数時間から数日かかる可能性がある。試料の前処理を完了するまでにかかる工程数及び時間を低減するために、様々な物質及びデバイスが開発されてきた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
複数の試料を同時に処理することは、該手順のための簡単で効率的なデバイスがないことから困難であり得る。１つ以上の試料を微生物の検出用に調製するための簡単な方法の必要性が依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
概して、本発明は、試料中の微生物の検出を目的とする。具体的には、本開示は、微生物に関連する分析物の有無を検出するために試料を処理するための第１の装置及び対応する使用方法を提供する。有利にも、第１の装置は、簡単な１つの工程で、試料中の干渉物質の量を低減し、分析物を濃縮することができるように構成される。濃縮された分析物は、次に、別の簡単な工程で後続処理のために容器に移されることができる。本開示は、１つ以上の試料中の微生物に関連する分析物の有無を検出するために、複数の試料を処理するための第２の装置及び対応する使用方法を提供する。第１の装置によってもたらされる利点に加えて、第２の装置は、後続処理のために複数の濃縮された分析物を同時に容器に移すのを可能にする。
【０００５】
一態様では、本開示は、試料を処理するための装置を提供する。本装置は、試料受容構成要素と、濾液受容構成要素と、分析物捕捉要素とを含むことができる。試料受容構成要素は、第１の端部と、第２の端部と、該第１の端部から該第２の端部まで延びる第１のチャンバとを有する第１の中空体と、第１のチャンバ内の第１の端部と第２の端部との間に配置されるフィルタエレメントと、を含むことができる。第１の端部は、試料を受容するように構成された第１の開口部を含むことができ、第２の端部は第２の開口部を含むことができる。濾液受容構成要素は、第３の端部と、第４の端部と、第３の端部から第４の端部まで延びる第２のチャンバと、を有する第２の中空体を含むことができる。第３の端部は、試料収容部材の第２の端部を受容するように構成された第３の開口部を含むことができ、第４の端部は第４の開口部を含むことができる。分析物捕捉要素は、濾液受容構成要素に取り外し可能に連結されることができる。試料受容構成要素が濾液受容構成要素に連結されると、装置は、第１のチャンバ、フィルタエレメント、及び第２のチャンバを通り、かつ液状試料と分析物捕捉要素との間の接触を容易にする流路を形成することができる。第２の端部は、第２のチャンバの少なくとも一部に嵌入し、かつそこを通って長手方向に移動するように成形及びサイズ調整されることができる。
【０００６】
上記実施形態のいずれにおいても、分析物捕捉要素は更に第２のチャンバ内に配置されることができる。
【０００７】
上記実施形態のいずれにおいても、装置は、第５の開口部を有する第５の端部と、第６の開口部を有する第６の端部とを有する取り外し可能な内スリーブを更に含むことができ、該スリーブは第２のチャンバ内に配置される。上記実施形態のいずれにおいても、装置は、多孔質支持体又は多孔質シールドを更に含むことができる。上記実施形態のいずれにおいても、多孔質支持体又は多孔質シールドの少なくとも一部は、第２の中空体内の分析物捕捉要素と第４の開口部との間に配置されることができる。
【０００８】
上記実施形態のいずれにおいても、フィルタエレメントは複数の層を更に含むことができる。
【０００９】
上記実施形態のいずれにおいても、第２の端部は、第２のチャンバに挿入され、かつ第２の中空体を通って分析物捕捉要素、多孔質支持体、又は多孔質シールドと接触する点まで移動されるように適合されることができる。
【００１０】
別の実施形態では、本開示は、複数の試料を処理するための装置を提供する。本装置は、試料受容構成要素と、濾液受容構成要素と、複数の分析物捕捉要素と、を含むことができる。試料受容構成要素は、第１の端部と、第２の端部と、それぞれが該第１の端部から該第２の端部まで延びる複数の離間した第１のチャンバとを有する、第１の本体と、複数のフィルタエレメントであって、各フィルタエレメントは複数の第１のチャンバのうちの１つの中の第１の開口部と第２の開口部との間に配置される、複数のフィルタエレメントと、を含むことができる。第１の端部は、複数の第１の開口部を含むことができ、少なくとも１つの第１の開口部は、試料を受容するように構成される。第２の端部は、複数の出口を含むことができ、各出口は、第２の開口部を有する。第１の本体は、複数の流体通路を形成することができ、各通路は、第１の開口部から第２の開口部まで、その間の第１のチャンバを通って延びる。濾液受容構成要素は、第３の端部と、第４の端部と、複数の離間した第２のチャンバと、を有する第２の本体を含むことができ、各第２のチャンバは、第３の端部から第４の端部まで延びる。各第２のチャンバは、第３の端部にある、複数の出口のうちの１つを受容するように構成された第３の開口部と、第４の端部にある第４の開口部と、を含むことができる。複数の分析物捕捉要素のそれぞれは、濾液受容構成要素に連結されることができる。試料受容構成要素が濾液受容構成要素に連結されると、装置は複数の流路を形成することができ、各流路は、複数の第１のチャンバのうちの１つ、複数のフィルタエレメントのうちの１つ、及び複数の第２のチャンバのうちの１つを通る流体の通過を容易にし、かつ複数の分析物捕捉要素のうちの少なくとも１つとの流体の接触を容易にする。複数の出口のそれぞれは、第２のチャンバの少なくとも一部に嵌入し、かつそこを通って長手方向に移動するように成形及びサイズ調整されることができる。任意の実施形態では、複数の分析物捕捉要素のうちの少なくとも１つは更に、複数の第２のチャンバのうちの少なくとも１つの中に配置されることができる。任意の実施形態では、装置は、第５の開口部を有する第５の端部と、第６の開口部を有する第６の端部とを有する少なくとも１つの取り外し可能な内スリーブを更に含み、該スリーブは、複数の第２のチャンバのうちの少なくとも１つの中に配置される。任意の実施形態では、装置は、多孔質支持体又は多孔質シールドを更に含むことができる。任意の実施形態では、少なくとも１つの多孔質支持体の少なくとも一部は、少なくとも１つの第２のチャンバ内の分析物捕捉要素と第４の端部との間に配置されることができる。任意の実施形態では、分析物捕捉要素は多孔質支持体に連結されることができる。任意の実施形態では、少なくとも１つのフィルタエレメントは複数の層を更に含むことができる。任意の実施形態では、複数の出口のそれぞれは、複数の第２のチャンバの１つに挿入され、かつ第２のチャンバを通って分析物捕捉要素、多孔質支持体、又は多孔質シールドと接触する点まで移動されるように適合されることができる。
【００１１】
上記実施形態のいずれにおいても、第４の端部は、負圧源と結合するように構成されることができる。上記実施形態のいずれにおいても、試料受容構成要素又は濾液受容構成要素は、試料受容構成要素が濾液受容構成要素に連結されると、濾液受容構成要素に対する試料受容構成要素の位置を制御可能に維持する位置決め要素を更に含むことができる。
【００１２】
更に別の態様では、本開示は、試料中の分析物の有無を検出する方法を提供する。本方法は、液体試料及び試料を処理するための装置を提供することを含み得る。装置は、試料受容構成要素と、濾液受容構成要素と、分析物捕捉要素と、を含むことができる。試料受容構成要素は、第１の端部と、第２の端部と、該第１の端部から該第２の端部まで延びる第１のチャンバとを有する第１の中空体と、第１のチャンバ内の第１の端部と第２の端部との間に配置されるフィルタエレメントと、を含むことができる。第１の端部は、試料を受容するように構成された第１の開口部を含むことができ、第２の端部は第２の開口部を含むことができる。濾液受容構成要素は、第３の端部と、第４の端部と、第３の端部から第４の端部まで延びる第２のチャンバと、を有する第２の中空体を含むことができる。第３の端部は、試料収容部材の第２の端部を受容するように構成された第３の開口部を含むことができ、第４の端部は第４の開口部を含むことができる。分析物捕捉要素は、濾液受容構成要素に取り外し可能に連結されることができる。試料受容構成要素が濾液受容構成要素に連結されると、装置は、装置は、第１のチャンバ、フィルタエレメント、及び第２のチャンバを通り、かつ液状試料と分析物捕捉要素との間の接触を容易にする流路を形成することができる。第２の端部は、第２のチャンバに挿入され、かつ第２の中空体の一部を通って移動するように適合されることができる。本方法は、液体試料をフィルタエレメントに通過させることと、濾過済み液を分析物捕捉要素と接触させることと、分析物捕捉要素を装置から分離することと、分析物の有無を検出することと、を更に含むことができる。
【００１３】
上記実施形態のいずれにおいても、本方法は、装置を負圧源に取り付けることを更に含むことができ、液体試料をフィルタエレメントに通過させることは、試料をフィルタエレメントを通して引き込んで濾過済み試料を生成するために負圧を用いることを更に含む。本方法の上記実施形態のいずれにおいても、試料をフィルタエレメントを通して引き込むために負圧を用いることは、濾過済み試料を分析物捕捉要素と接触させるために負圧を用いることを更に含むことができる。本方法の上記実施形態のいずれにおいても、分析物捕捉要素を装置から分離することは、分析物捕捉要素を装置から分離するために第２の端部を用いることを更に含むことができる。本方法の上記実施形態のいずれにおいても、第２の端部を用いることは、分析物捕捉要素を分離するために、第２の端部を付勢して第２のチャンバに通すことを更に含むことができる。上記実施形態のいずれにおいても、本方法は、分析物捕捉要素を分離した後、分析物捕捉要素を細胞溶解剤で処理することを更に含むことができる。
【００１４】
更に別の態様では、本開示は、複数の試料中の分析物の有無を検出する方法を提供する。本方法は、複数の液体試料及び装置を提供することを含むことができる。本方法は、試料受容構成要素と、濾液受容構成要素と、複数の分析物捕捉要素とを含むことができる。試料受容構成要素は、第１の端部と、第２の端部と、それぞれが該第１の端部から該第２の端部まで延びる複数の離間した第１のチャンバとを有する、第１の本体と、複数のフィルタエレメントであって、各フィルタエレメントは複数の第１のチャンバのうちの１つの中の第１の開口部と第２の開口部との間に配置される、複数のフィルタエレメントと、を含むことができる。第１の端部は、複数の第１の開口部を含むことができ、少なくとも１つの第１の開口部は、試料を受容するように構成される。第２の端部は複数の出口を含むことができ、各出口は第２の開口部を有する。複数の第１のチャンバのそれぞれは、複数の第１の開口部の１つから複数の第２の開口部の１つまで、流体通路を形成することができる。濾液受容構成要素は、第３の端部と、第４の端部と、複数の離間した第２のチャンバと、を有する第２の本体を含むことができ、各第２のチャンバは、第３の端部から第４の端部まで延びる。各第２のチャンバは、第３の端部にある、複数の出口のうちの１つを受容するように構成された第３の開口部と、第４の端部にある第４の開口部と、を含むことができる。複数の分析物捕捉要素のそれぞれは、濾液受容構成要素に連結されることができる。試料受容構成要素が濾液受容構成要素に連結されると、装置は複数の流路を形成することができ、各流路は、複数の第１のチャンバのうちの１つ、複数のフィルタエレメントのうちの１つ、及び複数の第２のチャンバのうちの１つを通る流体の通過を容易にし、かつ複数の分析物捕捉要素のうちの少なくとも１つとの流体の接触を容易にする。複数の出口のそれぞれは、複数の第２のチャンバの１つに挿入され、かつ第２のチャンバの一部を通って移動されるように適合され得る。本方法は、少なくとも２つの濾過済み液を生成するために、少なくとも２つの液体試料を、複数のフィルタエレメントのうちの少なくとも２つに通過させることと、少なくとも２つの濾過済み液を少なくとも２つの分析物捕捉要素と接触させることと、少なくとも２つの分析物捕捉要素を装置から分離することと、分析物の有無を検出することと、を更に含むことができる。上記実施形態のいずれにおいても、本方法は、装置を負圧源に取り付けることを更に含むことができ、複数の液体試料を少なくとも２つのフィルタエレメントに通過させることは、液体試料を少なくとも２つのフィルタエレメントを通して引き込んで少なくとも２つの濾過済み試料を生成するために負圧を用いることを更に含む。本方法の実施形態のいずれにおいても、複数の試料を少なくとも２つのフィルタエレメントを通して引き込むために負圧を用いることは、濾過済み試料を少なくとも２つの分析物捕捉要素と接触させるために負圧を用いることを更に含むことができる。上記実施形態のいずれにおいても、少なくとも２つの分析物捕捉要素を装置から分離することは、少なくとも２つの分析物捕捉要素を装置から分離するために少なくとも２つの出口を使用することを更に含むことができる。上記実施形態のいずれにおいても、少なくとも２つの出口を使用することは、少なくとも２つの分析物捕捉要素を装置から分離するために、少なくとも２つの出口を付勢して少なくとも２つの第２のチャンバに通すことを更に含むことができる。上記実施形態のいずれにおいても、本方法は、少なくとも２つの分析物捕捉要素を分離した後、少なくとも２つの分析物捕捉要素を細胞溶解剤で処理することを更に含むことができる。
【００１５】
用語「好ましい」及び「好ましくは」とは、特定の状況下で、特定の利益をもたらすことができる、本発明の実施形態を指す。しかしながら、他の実施形態もまた、同じ状況又は他の状況下で、好ましい場合がある。更には、１つ以上の好ましい実施形態の詳細説明は、他の実施形態が有用ではないことを意味するものではなく、本発明の範囲から他の実施形態を排除することを意図するものではない。
【００１６】
用語「含む」及びその変化形は、これらの用語が本説明及び特許請求の範囲に現れる場合、限定する意味を有するものではない。
【００１７】
本明細書で使用するとき、「１つの」、「その」、「少なくとも１つの」、及び「１つ以上の」は、互換的に使用される。したがって、例えば、微生物は、「１つ以上の」微生物を意味すると解釈され得る。
【００１８】
用語「及び／又は」とは、列記される要素の１つ若しくは全て、又は列記される要素のうちの任意の２つ以上の組み合わせを意味する。
【００１９】
また本明細書では、終端点による数値範囲の詳細説明は、その範囲内に含まれる全ての数を包含する（例えば、１〜５は、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５などを包含する）。
【００２０】
上記の本発明の課題を解決するための手段は、開示される各実施形態、又は本発明のあらゆる実施を説明することを意図するものではない。以下の説明により、例示的実施形態をより具体的に例示する。本出願の全体における幾つかの箇所で、実施例のリストを通じて指針が提供され、それらの実施例は、様々な組み合わせで使用することができる。いずれの場合でも、記載されるリストは、代表的な群としての役割のみを果たすものであり、排他的なリストとして解釈するべきではない。
【００２１】
これら及び他の実施形態の追加の詳細を添付図及び以下の説明にて提示する。他の特徴、目的及び利点は、説明及び図面から、並びに請求項から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】本開示による、試料を処理するための装置の一実施形態の部分分解斜視図。
【図２Ａ】負圧源に接続された収容部に動作可能に連結された図１の組み立てられた装置の部分的に断面図の斜視図。
【図２Ｂ】第１の動作構成にある図２Ａの装置及びこれと一緒に用いられる容器の部分分解斜視図。
【図２Ｃ】第２の動作構成にある図２Ｂの組み立てられた装置及び容器の部分的に断面図の斜視図。
【図３】図１の装置の試料受容構成要素の断面側面図。
【図４】本開示によるフィルタエレメントの一実施形態の側面図。
【図５Ａ】図１の装置の濾液受容構成要素の断面側面図。
【図５Ｂ】分析物捕捉要素が連結された濾液受容構成要素の一実施形態の部分側面図。
【図６Ａ】多孔質支持体と多孔質シールドとの間に配置された分析物捕捉要素の一実施形態の分解側面図。
【図６Ｂ】多孔質支持体と多孔質シールドとの間に配置された分析物捕捉要素の別の実施形態の分解側面図。
【図７Ａ】図２Ｂの装置の断面側面図。
【図７Ｂ】第１の動作構成にある図７Ａの組み立てられた装置及び容器の断面側面図。
【図７Ｃ】容器が装置に動作可能に取り付けられている、第２の動作構成にある図７Ｂの組み立てられた装置の断面側面図。
【図８】本開示による、複数の試料を処理するための装置の一実施形態の分解斜視図。
【図９】第１の動作構成にある図８の装置の断面側面図。
【図１０】図９の装置の濾液受容構成要素の底面斜視図。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本開示は、概して、分析物の有無を検出するために試料を準備することに関する。特に、本開示は、比較的大きな粒子材料を液体試料から除去するのを容易にし、かつ後続の分析のために分析物を捕捉するための装置及び方法を提供する。有利にも、分析物の捕捉は、１つ又は２つの工程のみを用いる装置によって達成され得る。得られた捕捉分析物は、比較的濃縮されており、比較的不純物がなく、様々な検出方法（例えば、免疫検出法及び核酸検出法）で用いるのに適している。
【００２４】
本開示は、単一試料を処理するための方法及び装置を含む。本開示は、複数の試料を同時に処理するための方法及び装置を更に含む。本発明の方法は、試料中の分析物の検出に関する。どの実施形態でも、分析物は、生物学的分析物、例えば、試料中の微生物の存在を示す生物学的分析物などであり得る。
【００２５】
試料は、生物学的分析物を含み得る任意の試料であり得る。好適な試料の非限定的な例としては、細胞（例えば、哺乳類細胞、昆虫細胞、酵母細胞、糸状菌、細菌細胞）の懸濁液又は培養液、環境試料（例えば、表面のスワブ）、食品（例えば、原材料、プロセス中の試料、及び最終製品試料）、飲料、臨床試料（例えば、血液、尿、痰、組織、粘膜、糞便、創傷滲出液、膿）、及び水（例えば、地表水、飲料水、プロセス水）が挙げられる。
【００２６】
好適な生物学的分析物の非限定的な例としては、核酸（例えば、特定の種類の細胞又は微生物に関連するポリヌクレオチド）又は検出可能な抗原（例えば、タンパク質、オリゴペプチド、酵素、内毒素、細胞膜構成成分、及び細胞壁構成成分）が挙げられる。生物学的分析物を検出するための分析手順は、当該技術分野において周知である。検出されるべき好ましい生物学的分析物としては、例えば、反応（例えば、ＰＣＲ）で増幅されることができる核酸が挙げられる。
【００２７】
液状試料以外の他の試験試料としては、液体媒質中に溶解又は懸濁した液体並びに固体を挙げることができる。対象の試料としては、プロセス流、水、土壌、草木又は他の植物、空気、表面（例えば、汚染表面）などを挙げることができる。試料としては、培養細胞も挙げることもできる。試料としては、細胞、芽胞、又は酵素を含むデバイス（例えば、生物学的インジケーターデバイス）上、若しくはデバイス内の試料を挙げることもできる。
【００２８】
固体試料は、分解させることができ（例えば、ブレンド、音波破砕、均質化によって）、液体（例えば、水、緩衝剤、ブロス）中に懸濁させることができる。一部の実施形態では、試料材料を含む試料採取デバイス（例えば、スワブ、スポンジ）を、本方法で使用することができる。あるいは、試料材料を本方法で使用する前に、試料採取デバイスから、その試料材料を溶離させる（例えば、すすぐ、擦り落とす、搾り出す）ことができる。一部の実施形態では、液体試料又は固体試料は、液体（例えば、水、緩衝剤、ブロス）中に希釈してもよい。
【００２９】
好適な試料としては、細胞を含有するか、又は従前に細胞を含有していた細胞懸濁培地（例えば、培養ブロス、半固体細胞培養培地、及び組織培養培地、濾液）も挙げられる。好適な試料としては、細胞溶解物も挙げられる。細胞溶解物は、化学的手段（例えば、洗浄剤、酵素）、機械的手段（音波振盪、均質化、フレンチプレス）によって、又は当該技術分野において既知の他の細胞溶解手段によって、作り出すことができる。
【００３０】
微生物（例えば、細菌、菌類、ウイルス）は、検出可能な分析物の源である。微生物は、本明細書に記載されるように、様々な供給源に由来し得る試験試料内で分析することができる。特に対象となる微生物としては、原核生物及び真核生物、特にグラム陽性細菌、グラム陰性細菌、真菌、原生動物、マイコプラズマ、酵母、ウイルス、並びに更には脂質エンベロープウイルスが挙げられる。特に関連性のある生物としては、腸内細菌科、又は球菌科若しくはブドウ球菌属の種、連鎖球菌種、シュードモナス種、腸球菌種、サルモネラ菌種、レジオネラ菌種、赤痢菌種、エルシニア種、エンテロバクター種、エシェリキア種、バチルス種、リステリア種、ビブリオ種、コリネバクテリア種、並びにヘルペスウイルス、アスペルギルス種、フサリウム種、及びカンジダ種のメンバーが挙げられる。特に悪性の生物には、黄色ブドウ球菌（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）などの耐性菌株を包含する）、表皮ブドウ球菌、肺炎球菌、ストレプトコッカス・アガラクチア、化膿レンサ球菌、エンテロコッカス・フィカリス、バンコマイシン耐性腸球菌（ＶＲＥ）、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌（ＶＲＳＡ）、バンコマイシン低度耐性黄色ブドウ球菌（ＶＩＳＡ）、炭疽菌、緑膿菌、大腸菌、クロコウジカビ、アスペルギルス・フミガータス、アスペルギルス・クラバタス、フザリウム・ソラニ、フザリウム・オキシスポラム、フザリウム・クラミドスポラム（F. chlamydosporum）、リステリア・モノサイトゲネス、リステリア・イバノビ、コレラ菌、腸炎ビブリオ、サルモネラ・コレラスイス、チフス菌、ネズミチフス菌、カンジダ・アルビカンス、カンジダ・グラブラタ、カンジダ・クルセイ、エンテロバクター・サカザキ、大腸菌Ｏ１５７及び多剤耐性グラム陰性桿菌（ＭＤＲ）が挙げられる。
【００３１】
グラム陽性及びグラム陰性細菌が、特に関心が持たれている。その中で更により関心が持たれているのは、黄色ブドウ球菌などのグラム陽性細菌である。また、特に対象となるものは、ＭＲＳＡ、ＶＲＳＡ、ＶＩＳＡ、ＶＲＥ、及びＭＤＲ等の抗生物質耐性菌である。
【００３２】
図１は、本開示による第１の装置１００の一実施形態の分解上部斜視図を示す。第１の装置１００は、試料受容構成要素１２０と濾液受容構成要素１５０とを含む。試料受容構成要素１２０は、第１の端部１２４と、第１の端部１２４と反対側の第２の端部１２６とを有する第１の中空体１２１を含む。第１の端部は第１の開口部１３２を含む。第１の開口部は、試料を受容するように構成される。例えば、第１の開口部１３２は、ピペットチップを受容するように寸法設定されることができ、ここれを通して液体試料を第１の中空体１２１の中に移すことができる。
【００３３】
試料受容構成要素１２０は、任意の位置決め要素１８０を更に含む。位置決め要素１８０は、一時的に（例えば、試料が充填及び／又は処理されている間）試料受容構成要素１２０を濾液受容構成要素１５０に対して実質的に固定位置に保つように機能し得る。位置決め要素１８０は、図２に示すように、濾液受容構成要素１５０上に見られる構造体と協働的に機能し得る。いくつかの実施形態では、第１の中空体１２１の第２の端部１２６は、第３の開口部１６２に挿入され、図２Ａに示されるように、位置決め要素１８０が濾液受容構成要素１５０に対して（例えば、位置決め要素１８０がカラー１５５と接触する）第１の位置に達するまで第２の中空体１５１内に移動されることができる。同じ機能（即ち、試料受容構成要素１２０を濾液受容構成要素１５０に対して固定位置に一時的に保持すること）を達成するために、位置決め要素の他の構成及び／又は構造を用いることができることが理解されるであろう。
【００３４】
図１には、任意のライナー１５８も示されている。ライナー１５８は、存在する場合、第３の開口部１６２に挿入され、かつ第２の中空体１５１内に移動されるように寸法設定される。ライナー１５８は、当該技術分野において周知の成形法又は押し出し法により高分子材料（例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン）を用いて製造することができる。ライナー１５８は環状であり（即ち、その長手方向軸線の各端部に開口部を有する）、好ましくは、第２の中空体１５１の内径よりもわずかに小さい外径を有する。ライナー１５８は、使用のために第２の中空体１５１に摺動可能に挿入されることができる。任意に、ライナー１５８の一方の端部の開口部は、フランジを含んで、ライナー１５８の第２の中空体１５１の中への更なる移動を防止する、また、第２の中空体１５１にライナーを挿入する又は第２の中空体１５１からライナーを除去する間ライナー１５８を都合よく取り扱うことができる。
【００３５】
濾液受容構成要素１５０は、第３の端部１５４と、第３の端部１５４と反対側の第４の端部１５６とを有する第２の中空体１５１を含む。第３の端部１５４は第３の開口部１６２を含む。第３の開口部１６２は、試料受容構成要素１２０の第２の端部１２６を受容するように寸法設定される。第１の装置１００が任意のライナーを含む場合、試料受容構成要素の第２の端部１２６は、ライナー１５８に挿入されるように寸法設定される。本明細書に示されかつ説明されるように、液受容構成要素１５０は任意のカラー１５５を更に含み、このカラー１５５は、第１の装置１００を負圧源に連結するのを容易にすることができる。任意に、カラー１５５は、図２Ａに示されるように、濾液受容構成要素１５０に対して試料受容構成要素１２０の位置を保つために位置決め要素１８０と共同して作用するタブ１５７を更に含む。
【００３６】
図２Ａは、廃棄物収容部３００に動作可能に連結された図１の組み立てられた第１の装置１００の部分的に断面図の側面図を示す。第１の装置１００は、以下により詳細に示されかつ説明されるように、第１の動作構成にて示されている。この構成では、試料受容構成要素１２０の第２の端部（図示せず）は濾液受容構成要素１５０に挿入され、第１の装置１００は、第１の開口部１３２内に試料を受容する準備ができている。この構成では、位置決め要素１８０はタブ１５７と接触し、それによって、試料受容構成要素１２０が矢印「Ａ」で示される方向に濾液受容構成要素１５０に向かって移動することに対する中程度の抵抗（例えば、中程度の手動力で克服することができる抵抗）を提供することが分かる。位置決め要素１８０をカラー１５５から外側に外すのに十分な力（即ち、矢印「Ａ」に対してほぼ垂直な）で試料受容構成要素１２０及び濾液受容構成要素１５０が一緒に付勢され、それによって、第１の中空体１２１の第２の端部１２６が濾液受容構成要素１５０の中へと更に移動するまで、位置決め要素１８０は、第１の中空体１２１が第２の中空体１５１の中へと更に移動するのを防止する。
【００３７】
廃棄物収容部３００は、第１の装置１００の濾液受容構成要素１５０を受容するように構成された開口部を有するドッキング部分３１０を含む。ドッキング部分３１０は任意のガスケット３１５を含む。廃棄物収容部３００は、負圧源３２５に連結された導管３２０（例えば、パイプ又はホース）に動作可能に接続される。廃棄物収容部３００は、例えば、プラスチック、金属、又はガラスから製造され得、収容部３００の内部が負圧（例えば、最大約５２０ｔｏｒｒ（６９．３ｋＰａ））を受けたときにその一体性を維持するのに十分頑丈である。本明細書に示され説明されるように、第１の装置１００のカラー１５５は、使用中、ドッキング部分３１０の上へと摺動自在に移動して実質的に気密のシールを形成し、負圧源３２５が作動されて、第１の装置１００を通して液体試料を引き込む。
【００３８】
図２Ｂは、容器４００（例えば、試験管、ミクロ試験管など）が濾液受容構成要素１５０の第４の端部１５６に取り付けられている、図２Ａの組み立てられた第１の装置１００の部分分解斜視図を示す。完全に組み立てられると、容器４００は、濾液受容構成要素１５０の第４の開口部（図示せず、図１０参照）に取り外し可能に取り付けられ（例えば、摩擦嵌めにより）、容器開口部が濾液受容構成要素１５０の第４の開口部に対向した状態で位置付けられる。
【００３９】
図２Ｃは、第２の動作構成にある図２Ｂの組み立てられた第１の装置１００の斜視図を示す。容器４００は濾液受容構成要素１５０の第４の開口部１６４に挿入されている。この動作構成では、試料受容構成要素１２０の第２の端部１２６は、濾液受容構成要素の中に完全に挿入されていることが分かる。
【００４０】
図３は、図１の試料受容構成要素１２０の断面側面図を示す。試料受容構成要素１２０は、第１の端部１２４から第２の端部１２６まで延在する第１のチャンバ１３０を有する第１の中空体１２１を含む。第１の端部１２４は第１の開口部１３２を含む。第２の端部１２６は第２の開口部１３４を含む。第１のチャンバ１３０は、図示した実施形態では円筒形であるが、他の形状が適切な場合がある。第１のチャンバ１３０の第１の端部１２４に隣接する部分は、第１のチャンバの第２の端部１２６に隣接する部分よりも大きな直径を有することが分かる。この特徴は必要ではないが、一部の実施形態では望ましい場合がある。第１のチャンバ１３０は、第１の開口部１３２から第２の開口部１３４までの液体流路を形成する。第２の開口部１３４は第１の開口部１３２より小さい。第２の開口部１３４は第１の中空体１２１の内径よりも小さいので、プラットフォーム１３５が第１の中空体１２１の第２の端部１２６に形成される。プラットフォーム１３５は、フィルタエレメント１４０のための支持体を形成する。図示した実施形態は、第２の端部１２６に隣接して位置するプラットフォーム１３５を示しているが、いくつかの実施形態では、プラットフォーム１３５は、中空体１２１の第１の端部１２４により近い位置に位置決めされてもよいことが考えられる。図３には、本明細書に記載される位置決め要素１８０も示されている。
【００４１】
第１の中空体１２１は、例えば、高分子材料（例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリカーボネート）から射出成形によって製造され得る。あるいは、第１の中空体１２１は、ガラス又は金属を使用して製造され得る。
【００４２】
フィルタエレメント１４０は、そこを通過する液体試料から比較的大きい（例えば、直径≧５μｍ）粒子材料をトラップしかつ保持するための前置フィルタとしての機能を果たす。試料受容構成要素１２０は、第１のチャンバ１３０を通って第１の開口部１３２から第２の開口部１３４まで移動する液体試料がフィルタエレメント１４０を通過するように構成される。フィルタエレメント１４０はプラットフォーム１３５によって支持され、また任意に、プラットフォーム１３５に結合（例えば、接着剤又は他の固定手段によって。図示せず）されてもよい。
【００４３】
フィルタエレメント１４０は、当該技術分野において周知の様々な材料（例えば、ナイロン、ポリプロピレン、ガラス、若しくは酢酸セルロース繊維を含む不織布材、又は例えばポリカーボネートフィルムなどの有孔フィルム）で構成され得る。任意の実施形態では、フィルタエレメント１４０は材料の単一層を含んでもよい。いくつかの実施形態では、フィルタエレメント１４０は複数の層を含んでもよい。複数の層を含むフィルタエレメントの層は、試料から特定の物質を除去するのを促進するために、粒子材料を含んでもよい。
【００４４】
図４は、複数の層を含むフィルタエレメント１４０の一実施形態を示す。線Ａは、フィルタエレメント１４０を通過する流体の流れの方向を示す。層１４２は、試料が通過する多層フィルタエレメント１４０の第１の層である。層１４２は、ポリエチレン繊維から作製される薄膜フィルタ又は比較的粗い不織布デプスフィルタ（厚さ約１ｍｍ）を含むことができる。層１４２は、公称約２０〜５０μｍの気孔率を有し得、大径粒子がフィルタエレメント１４０の他の層に通過するのを防止する機能を果たすことができる。層１４３は、１つ以上の特定の非分析物質（例えば、脂質、ミネラル）を液体試料から除去する粒子材料を任意に含有するウェットレイド繊維性スキャフォルド（厚さ約０．２〜１ｍｍ）を含んでもよい。層１４３は、試料から粒子状物質を更に除去する公称の気孔率（例えば、１０〜２０μｍ）を有することができるが、繊維性及び／又は粒子材料もまた、液体から細菌を実質的に除去することなく液体試料から脂肪質成分を選択的に除去することができる。層１４４は、バクテリアよりも大きい（例えば、直径≧５μｍ）粒子材料を実質的に除去する働きをする濾材を含む。単独で又は他の材料との任意の組み合わせでフィルタエレメント１４０中で使用することができる材料の非限定的例は、ポリプロピレン製のフェルトフィルタ（品番ＮＢ００５ＰＰＳ２Ｒ、公称５μｍの気孔率、ＣＵＮＯ  ３Ｍ，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴより入手可能）である。他の既知の層（図示せず）及び／又は材料をフィルタエレメント１４０中で使用してもよく、各層は、液体試料がフィルタエレメント１４０を通過する際にその中の非分析物質の量を低減するように機能する。
【００４５】
図５Ａは、図１の濾液受容構成要素１５０の断面側面図を示す。濾液受容構成要素１５０は、ライナー１５８がその中に配設された第２の中空体１５１を含む。第２の中空体１５１は、任意のライナー１５８がその中に位置付けられると、第３の端部１５４から第４の端部１５６まで延びる第２のチャンバ１６０を形成する。第３の端部は第３の開口部１６２を含む。第４の端部１５６は第４の開口部１６４を含む。このように、第２のチャンバ１６０は、第２の中空体１５１の第３の開口部１６２から第４の開口部１６４まで延びる液体流路を形成する。第２の中空体１５１は、第３の端部１５４にカラー１５５を更に含む。使用中、カラー１５５は、第１の装置１００を通る液体の移動を容易にするために、負圧源（図２に示す）に動作可能に接続された容器に連結されることができる。
【００４６】
第２の中空体１５１は、例えば、高分子材料（例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリカーボネート）から射出成形によって製造され得る。あるいは、第２の中空体１５１はガラス又は金属を使用して製造され得る。
【００４７】
濾液受容構成要素１５０には、分析物捕捉要素１７０が取り外し可能に連結される。図５Ａの例示的実施形態では、分析物捕捉要素１７０は、第２のチャンバ１６０内で第４の端部１５６に隣接して配置される。分析物捕捉要素１７０は、第４の開口部１６４に隣接した任意の多孔質支持体１７２と任意の多孔質シールド１７６との間に配置される。多孔質支持体１７２は、存在する場合、その上の、液体試料が分析物捕捉要素１７０に近接して及び／又は分析物捕捉要素１７０を通って流れる際に、粒子状及び／又は比較的非剛性の分析物捕捉要素１７０を適所に保持する構造を提供する役割を果たす。
【００４８】
多孔質支持体１７２及び多孔質シールド１７６は共に、流体（例えば、水性液体）を通すことができる、例えば、セルロース繊維、合成繊維（例えば、高分子、ガラス）、発泡体（例えば、連続気泡発泡体、例えば、ポリウレタンなど）、及び多孔質フリット（例えば、ガラス、セラミック、高分子）などの様々な多孔質材料から製造することができる。好ましくは、多孔質シールド１７６は、存在する場合、微生物が上記材料を通って分析物捕捉要素１７０まで自由に通過することができるように、公称の気孔率が約５μｍ超、好ましくは約１０μｍ超である材料を含む。多孔質シールド１７６において使用することができる材料の非限定的な例は、ポリプロピレン製のフェルトフィルタ（品番ＮＢ００５ＰＰＳ２Ｒ、公称５μｍの気孔率、ＣＵＮＯ  ３Ｍ，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴより入手可能）である。
【００４９】
多孔質支持体１７２、分析物捕捉要素１７０、及び多孔質シールド１７６は、ライナー１５８又は第２の中空体１５１に摺動可能に挿入されることができ（例えば、圧入により）、またライナー１５８又は第２の中空体１５１の中に解放可能に保持されることができるように寸法設定される。いくつかの実施形態では（図示せず）、分析物捕捉要素１７０は、多孔質支持体１７２及び／又は多孔質シールド１７６に結合されてもよい（例えば、接着剤で結合される、縫い合わされる、熱溶着される）が、結合手段が、液体試料と分析物捕捉要素１７０との間の接触を実質的に妨げない及び／又は分析物捕捉要素１７０を通る液体試料の流れを実質的に妨げないことが条件である。
【００５０】
分析物捕捉要素１７０は、標的分析物を捕捉及び保持するように構成された材料を含む。いくつかの実施形態では、分析物捕捉要素１７０は、液体を通過させるが、およそ細菌のサイズ（約０．５〜約５μｍ）の粒子を保持する多孔質フィルタを含む。分析物捕捉要素１７０は、例えば、様々な膜型フィルタ（例えば、セルロースアセテートフィルタ、ナイロンフィルタ、ニトロセルロースフィルタ、ポリカーボネートフィルタ、セラミックフィルタ）の１つ以上であり得る。好適な膜型フィルタの非限定的な例は、共にＰａｌｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｐｏｒｔ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＮＹ）より入手可能な、ＶＥＲＳＡＰＯＲ  ３０００ＴＮ膜（公称３μｍの気孔率）及びＶＥＲＳＡＰＯＲ  ８００膜（公称０．８μｍの気孔率）である。任意に、濾材は、そこに結合する結合パートナー（例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、受容体、レクチン）を含んでもよい。いくつかの実施形態では、結合パートナーは、特定の標的分析物を結合することに対する特異性を提供し得る。図６Ａは、多孔質フィルタを含む分析物捕捉要素１７０の１つの構成の分解図を示す。分析物捕捉要素１７０（例えば、０．４５μｍの薄膜フィルタ）は、多孔質支持体１７２と多孔質シールド１７６との間に挟まれる。多孔質支持体１７２及び多孔質シールド１７６は共に、例えば、第２のチャンバ１６０の壁部と摩擦嵌めを形成する直径に発泡材料（例えば、ポリウレタン発泡体）を切断する打抜き型を使用することによって形成され得る。
【００５１】
あるいは又はこれに加えて、分析物捕捉要素１７０’は、標的分析物に結合するように構成された粒子材料（例えば、繊維、粒子、ビーズ）又は非多孔質シート材料（例えば、高分子フィルム）を含んでもよい。いくつかの実施形態では、粒子材料は多孔質であってもよい。いくつかの実施形態では、粒子材料は非多孔質であってもよい。いくつかの実施形態では、分析物捕捉要素１７０は、多孔質粒子材料と非多孔質粒子材料との組み合わせを含んでもよい。
【００５２】
いくつかの実施形態では、粒子材料は、比較的非特異的に標的分析物に結合し得る。特定の粒子状細胞濃縮剤が当該技術分野において知られており、本開示の方法における使用に適している。好適な細胞濃縮剤の非限定的な例としては、活性チャコール、ヒドロキシアパタイト（Ｂｅｒｒｙら；Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．；６３：４０６９〜４０７４；１９９７）、磁気ビーズ（Ｏｓｔｅｒら，Ｊ．Ｍａｇｎｅｔｉｓｍ  ａｎｄ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｍａｔ．；２２５：１４５〜１５０；２００１）、フェリ磁性鉱物、マグネタイト、キトサン、及びアフィニティー担体が挙げられる。試料から微生物を捕捉又は濃縮するための固定化金属支持物質を含む組成物の使用は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＰＣＴ国際公開特許ＷＯ２００８／１３４４７２に記載されている。
【００５３】
代表的な粒子材料は、珪藻土及び表面処理珪藻土を更に含む。こうした濃縮剤の具体例は、その開示内容が参照により本明細書に組み込まれる、同一出願人による米国特許出願公開第２０１０／０２０９９６１号に見出すことができる。無機材料は、水系中に分散又は懸濁された状態で、その材料及び水系のｐＨに特有の表面電荷を呈する。物質−水の界面の両側の電位は「ゼータ電位」と呼ばれ、電気泳動における移動度から（すなわち、水系中に置かれた帯電電極間を物質の粒子が移動する速度から）計算することができる。一実施形態では、濃縮剤は、非処理の珪藻土のゼータ電位よりも少なくともある程度正のゼータ電位を有してよく、こうした濃縮剤は、その表面が一般的に負に帯電する傾向を有する細菌などの微生物を濃縮するうえで非処理の珪藻土と比較して驚くほど顕著に効果的となり得る。
【００５４】
いくつかの実施形態では、粒子材料は、該粒子材料に結合する結合パートナーを含んでもよく、結合パートナーは、特定の標的分析物を結合することに対する特異性を提供し得る。いくつかの実施形態では、粒子材料は、マトリックス中に組み込まれてもよい（例えば、繊維性マトリックス中にトラップされたビーズ）。図６Ｂは、粒子材料（例えば、ヒドロキシアパタイト粒子）を含む分析物捕捉要素１７０’の１つの構成の分解図を示す。分析物捕捉要素１７０’は、多孔質支持体１７２と多孔質シールド１７６との間に挟まれる。多孔質支持体１７２及び多孔質シールド１７６は共に、本明細書に記載のように形成され得る。
【００５５】
図５Ｂは、本開示による濾液受容構成要素１５０’の第４の端部１５６の一部の概略的側面図を示す。図５Ａとは対照的に、分析物捕捉要素１７０が、第２のチャンバ１６０内に配置されたライナー１５８の中に、多孔質支持体１７２と多孔質シールド１７６との間に挟まれた状態で配置されると、この実施形態の分析物捕捉要素１７０（例えば、薄膜フィルタ）は、第２の端部１５６で第２の中空体１５２に（例えば、接着層を介して。図示せず）解放可能に連結される。他の結合手段（例えば、超音波溶接、熱圧着）を用いてもよく、ただし、それら手段は、液体試料と分析物捕捉要素１７０との間の接触を実質的に妨げない及び／又は分析物捕捉要素１７０を通る液体試料の流れを実質的に妨げないことが条件である。
【００５６】
図７Ａは、第１の動作構成にある図２Ｂの第１の装置１００の断面側面図を示す。第１の中空体１２１の第２の端部１２６は、第２のチャンバ１６０の少なくとも一部に嵌入し、かつそこを通って長手方向に移動するように成形及びサイズ調整される。第１の動作構成では、第１の中空体１２１の第２の端部１２６は、ライナー１５８に押し当てられ、更に次に第２の中空体１５０の内側表面に押し当てられる第１の中空体１２１の第２の端部１２６の外側表面によって実質的に耐漏液性の封止部が形成される程度まで、第２の中空体１５１の第２のチャンバ１６０内に配置されるライナー１５８に挿入される。図示した実施形態では、第１の中空体１２１の第２の端部１２６は、第２の開口部１３４を多孔質シールド１７６に隣接して位置付けるだけ十分遠くまで第２の中空体１５１内に挿入されることに留意すべきである。第１の装置１００が第１の動作構成に置かれる場合、第２の端部１２６は、封止部を形成するだけ十分遠くまで第２の中空体１５１に挿入されなければならないが、第２の開口部１３４が多孔質シールド１７６にすぐ近くに近接して位置づけられる必要はない。
【００５７】
この第１の作動位置では、第１の装置１００は、試料を受容及び処理する準備ができている。このように、第１の作動位置では、第１の開口部１３２から、第１のチャンバ１３０、フィルタエレメント１４０、第２の開口部１３４、図示されない第２のチャンバ、第４の開口部１６４を通り、分析物捕捉要素１７０まで又は分析物捕捉要素１７０を通る液体流路が形成される。試料受容構成要素１２０及び濾液受容構成要素を第１の作動位置に置く前又は後のいずれかの時点で、図２に示すように、濾液受容構成要素１５０を廃棄物収容部３００に連結することができる（例えば、カラー１５５を介して）。次に、液体試料を第１の開口部１３２を通して第１のチャンバ１３０の中に移動させることができ、廃棄物収容部３００（存在する場合）に負圧を加えることによって、又は重力流によって、液体流路を通して試料を引き込むことができる。
【００５８】
液体試料を第１のチャンバ１３０に移動させるとき、装置は、図２Ａに示されるように、廃棄物収容部３００によって支持され得る。液体試料（図示せず）を（例えば、注入又はピぺッティングによって）第１のチャンバ１３０の中に移し、フィルタエレメント１４０を通して第２のチャンバ１６０の中に通過させ、分析物捕捉要素１７０と接触させる及び／又は分析物捕捉要素１７０を通過させる。いくつかの実施形態では、液体試料は重力流によってデバイスを通過することができる。いくつかの実施形態では、第４の開口部１６４に負圧を加えることによって（図２に示されるように）、液体を第１の装置１００を通過するように付勢することができる。大量の液体試料は、この大量の液体試料の２つ以上のアリコートを連続的に第１の装置１００に通過させることによって、第１の装置１００を通過させることができる。いくつかの実施形態では、第１のチャンバ１３０の体積は、少なくとも約１ミリリットルである。いくつかの実施形態では、第１のチャンバ１３０の体積は、少なくとも約５ミリリットルである。いくつかの実施形態では、第１のチャンバ１３０の体積は、少なくとも約１０ミリリットルである。いくつかの実施形態では、第１のチャンバ１３０の体積は、少なくとも約２５ミリリットルである。いくつかの実施形態では、第１のチャンバ１３０の体積は、少なくとも約１００ミリリットルである。
【００５９】
液体試料が第１の装置１００を通過した後、分析物捕捉要素１７０を第１の装置１００から分離する。第１の装置１００を通して液体試料を引き込むために廃棄物収容部３００を使用する場合には、最初に、第１の装置１００を廃棄物収容部３００から取り外す。図２Ｂに示されるように、第１の装置１００の第４の端部１５６を容器（例えば、試験管。図示せず）の開口部の上に位置付けるか、又は任意に、容器の開口部が装置の第４の開口部１６４に面するように、容器を第１の装置１００に取り外し可能に取り付ける。互いに付勢されるように、試料受容構成要素１２０、濾液受容構成要素１５０、又は両方に力を加える。力は、上述のように、位置決め要素１８０を外側に外し、試料受容構成要素１２０の第２の端部１２６が濾液受容構成要素１５０の第２のチャンバ１６０に更に侵入するのを可能とし、それによって第１の装置１００を第２の動作構成にするのに十分でなければならない。
【００６０】
図７Ｂは、図２Ｂの組み立てられた第１の装置１００及び容器４００の部分分解断面図を示す。第１の装置１００がこの第１の動作構成状態にあるとき、ライナー１５８は濾液受容構成要素１５０の第２のチャンバ（図示せず）内に配置され、試料受容構成要素１２０の第２の端部１２６は、ライナー１５８に摺動可能に挿入されていることに留意する。この構成では、試料受容構成要素１２０の第２の端部は、好ましくは、多孔質シールド１７６、分析物捕捉要素１７０、又は多孔質支持体１７２をずらすほど第２のチャンバ１６０に侵入すべきでないことにも留意する。
【００６１】
図７Ｃは、第２の動作構成にある図２Ｃの第１の装置１００の断面側面図を示す。この構成では、試料受容構成要素１２０は、位置決め要素１８０が濾液受容構成要素１５０に対して第２の位置に達するまで、濾液受容構成要素１５０に向かって付勢されている。この位置では、試料受容構成要素１２０の第２の端部１２６は、多孔質シールド１７６、分析物捕捉要素１７０、及び多孔質支持体１７２をずらし、それによって、多孔質シールド１７６、分析物捕捉要素１７０、及び多孔質支持体１７２を第１の装置１００から分離させる（例えば、押出す）のに十分なだけ、第２の中空体１５１内に移動されている。分析物捕捉要素１７０が多孔質シールド１７６又は多孔質支持体１７２のいずれにも連結されていない場合、これらは自然に互いに分離することができる。有利にも、これにより、後続の処理（例えば、細胞溶解試薬との接触）のために分析物捕捉要素を露出させることができる。この動作構成では、分析物捕捉要素１７０は、本発明に記載される更なる処理のために、容器４００の中に都合よく放出される。
【００６２】
別の実施形態では、本開示は、複数の試料を処理するための装置を提供する。図８は、本開示による第２の装置２００の一実施形態の分解上部斜視図を示す。第２の装置２００は複数の試料を処理するように構造的に構成されていることを除けば、第２の装置２００の構造及び機能は、図１〜７の第１の装置１００に類似していることが分かる。いくつかの実施形態では、試料は第２の装置２００で同時に処理されることができる。
【００６３】
第２の装置２００は、試料受容構成要素２２０と濾液受容構成要素２５０とを含む。試料受容構成要素２２０は、第１の端部２２４と、第１の端部２２４の反対側の第２の端部２２６とを有する第１の本体２２１を含む。第１の端部は複数の第１の開口部２３２を有する。第１の開口部２３２は試料を受容するように構成される。例えば、第１の開口部２３２は、液体試料を第１の中空体２２１の中に移動させることができるピペットチップを受容するように寸法設定され得る。第２の端部は複数の出口２３３を含み、各出口は第２の開口部２３４を有する。
【００６４】
試料受容構成要素２２０は、任意の位置決め要素２８０を更に含む。位置決め要素２８０は、図２Ａ〜図２Ｃの第１の装置１００に関して示されかつ説明されるように、試料受容構成要素２２０を濾液受容構成要素２５０に対して実質的に固定位置に保つように一時的に機能することができる。位置決め要素２８０は、図２Ａ〜図２Ｃの第１の装置１００に関して示されかつ説明されるように、濾液受容構成要素２５０上に見られる構造と協働的に機能することができる。
【００６５】
図８には、任意のライナー２５８も示されている。存在する場合、ライナー２５８は、複数の第３の開口部２６２の少なくとも１つを通して第２の中空体２５１に挿入されるように寸法設定される。ライナー２５８は、第１の装置１００で使用される任意のライナー１５８に関して本明細書に記載されるように製造かつ使用され得る。
【００６６】
濾液受容構成要素２５０は、第３の端部２５４と、第３の端部２５４の反対側の第４の端部２５６とを有する第２の本体２５１を含む。第３の端部２５４は複数の第３の開口部２６２を有する。第３の開口部２６２は、試料受容構成要素２２０の出口２３３を受容するように寸法設定される。複数の出口２３３のそれぞれは、第２のチャンバ２６０の少なくとも一部に嵌入し、かつそこを通って長手方向に移動するように成形及びサイズ調整される。第２の装置２００が任意のライナー２５８を有する場合、試料受容構成要素２２０の複数の出口２３３のそれぞれは、ライナー２５８に挿入されるように成形及びサイズ調整される。濾液受容構成要素２５０は任意のカラー２５５を更に含み、このカラー２５５は、図２Ａに示されかつ説明される第１の装置１００と廃棄物収容部３００との結合と同様に、第２の装置２００を負圧源に結合するのを容易にすることができる。任意に、カラー２５５は、図２の第１の装置１００に関して示すように、位置決め要素２８０と共同して作用するタブ２５７を更に含んで、濾液受容構成要素２５０に対する試料受容構成要素２２０の位置を保つことができる。
【００６７】
第１の本体２２１及び／又は第２の本体２５１は、例えば、高分子材料（例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリカーボネート）から射出成形によって製造され得る。あるいは、第１の本体２２１及び／又は第２の本体２５１は、ガラス又は金属を使用して製造され得る。
【００６８】
図９は、図８の第２の装置２００の断面側面図を示す。第２の装置２００は第１の動作構成にあり（例えば、位置決め要素２８０はタブ２５７と接触している）、したがって、液体試料を複数の第１のチャンバ２３０の１つ以上の中に受容する準備ができている。図示した実施形態は、組み立てられた第２の装置２００が複数の液体流路を形成しているのを示しており、各流路は、第１の開口部２３２から、第１のチャンバ１３０、フィルタエレメント、第２のチャンバ（図示せず）、及び多孔質シールド１７６と多孔質支持体１７２との間に配置された分析物捕捉要素１７０を通って延びる。
【００６９】
図１０は、図９の第２の装置２００の濾液受容構成要素２５０の第２の端部２５６の部分的に断面図の底面斜視図を示す。図２Ｂ〜図２Ｃの第１の装置１００に関して示されかつ説明されるように、第４の端部２５６は、容器（例えば、管）の開放端部を受容するように成形及びサイズ調整された複数の第４の開口部２６４を含む。図１０は複数のライナー２５８を更に示し、各ライナーは第６の開口部２５９を含む。各ライナー２５８の第６の開口部２５９の近くには、多孔質支持体２７２が配置される。
【００７０】
第１の本体の一実施形態（図示せず）では、第１のチャンバは、少なくとも１つの液体流路（即ち、第１のチャンバ及びこれに接続された出口を含む）を、複数の液体流路の少なくとももう１つから分離させることができる構成で離間される。液体流路を分離させることにより、図３に示されかつ説明されるような第１の中空体が本質的に形成される。任意に、この実施形態の分離可能な液体流路のそれぞれは、本明細書に記載されるように位置決め要素を更に含み得る。
【００７１】
第１の装置１００又は第２の装置２００のいずれの実施形態も、試料を処理する方法で使用され得る。第２の装置２００は、１つの試料を１つずつ処理するために用いられてもよく、又は２つ以上の試料を同時に処理するために用いられてもよい。試料は、各試料中の分析物（例えば、微生物）の有無を検出するために処理され得る。有利にも、本開示の装置は、試料からの汚染物質の除去及び試料からの分析物の濃縮を、簡単な１つの工程でできるようにする。該方法は、液体試料をフィルタエレメント１４０に通過させることを含む。いくつかの実施形態では、濾過済み液を生成するために、負圧（例えば、本明細書に記載されるように、第１の装置１００を負圧源３２５に結合する）を用いて、試料をフィルタエレメント１４０に通して引き込むことができる。
【００７２】
該方法は、分析物を捕捉するために、濾過済み液を分析物捕捉要素１７０と接触させることを更に含む。いくつかの実施形態では、濾過及び捕捉は単一工程で達成されることができる。いくつかの実施形態では、濾過済み液を分析物捕捉要素と接触させることは、例えば、吸着又は濾過によって分析物を捕捉するために、濾過済み液を多孔質の分析物捕捉要素（例えば、薄膜フィルタ）に通すことを含み得る。いくつかの実施形態では、濾過済み液を分析物捕捉要素と接触させることは、例えば、非特異的吸着によって又は親和結合によって分析物を捕捉するために、濾過済み液を粒子状分析物捕捉要素（例えば、ヒドロキシアパタイト、イオン交換樹脂、抗体をコーティングした粒子）と流体連通状態に置くことを含み得る。
【００７３】
該方法は、分析物捕捉要素１７０を第１の装置１００から分離することを更に含む。有利にも、第１の装置１００及び第２の装置２００の設計は、簡単な一つの動作で分析物捕捉要素１７０を装置から分離させることができる簡単な手段を提供する（例えば、試料受容構成要素及び濾液受容構成要素を一緒に付勢して、試料受容構成要素の一部を分析物捕捉要素と接触させ、かつ分析物捕捉要素を濾液受容構成要素からイジェクトさせる）。有利にも、第１の装置１００及び第２の装置２００の設計により、任意に、分析物捕捉要素を分離する前に、容器４００を装置に連結するのが可能となる。これにより、技師は、第１の装置１００から分析物捕捉要素を取り外し可能に取り付けられた容器の中に直接イジェクトし、それによって、分析物捕捉要素の取り扱い及び／又は汚染の可能性を最小限に抑えることが可能となる。更に、取り付けられた容器４００は、分析物捕捉要素によって捕捉された分析物を処理するための試薬を更に含んでもよい。試薬は、特定の分析物及び検出方法により技師が選択することができる。
【００７４】
いくつかの実施形態では、分析物は、例えばバクテリアなどの微生物全体であり得る。いくつかの実施形態では、分析物は生きている微生物であり得る。これら実施形態では、培養技術によって微生物を検出するのが望ましい場合がある。そのため、分析物捕捉要素を懸濁媒体（水、緩衝液、緩衝食塩水、液体培地）の中ですすぐ及び／又は均質化することによって、微生物を分析物捕捉要素から分離又は溶離することができる。元の試料中に存在した標的微生物の有無又は量を判定するために、液体懸濁媒体を用いて培地（例えば、適切な寒天培養基）を植菌することができる。いくつかの実施形態では、分析物捕捉媒質を培地の上に直接移し、増殖及び分析することができる。そのため、分析物捕捉要素を容器の中にイジェクトすることによって装置から分析物捕捉要素を分離する場合には、容器はその中に懸濁媒体を含んでいてもよい。
【００７５】
いくつかの実施形態では、分析物は、微生物全体又は微生物の一部であってよい（例えば、細胞壁又はその破片、細胞膜又はその破片、タンパク質、あるいは多糖類）。これら実施形態では、免疫診断法（例えば、ＥＬＩＳＡ、免疫クロマトグラフィー）を用いて分析物を検出するのが望ましい場合がある。そのため、分析物捕捉要素を容器の中にイジェクトすることによって装置から分析物捕捉要素を分離する場合には、容器は、懸濁媒体、細胞溶解試薬（例えば、酸、塩基、洗剤、酵素、プロテアーゼ、リゾチーム、リソスタフィン）、及び／又は分析物特異的結合パートナー（例えば、抗体、受容体）をその中に有していてもよい。
【００７６】
いくつかの実施形態では、分析物は、特定の微生物又は微生物群に関連した酵素又は酵素基質（例えば、ＡＴＰ）であり得る。こうした実施形態では、酵素アッセイを用いて分析物を検出するのが望ましい場合がある。そのため、分析物捕捉要素を容器の中にイジェクトすることによって装置から分析物捕捉要素を分離する場合には、容器は、懸濁媒体、細胞溶解試薬（例えば、酸、塩基、洗剤、酵素、プロテアーゼ、リゾチーム、リソスタフィン）、酵素（例えば、ルシフェラーゼ、アデニル酸キナーゼ）、及び／又は酵素基質（例えば、ルシフェリン、発色酵素基質、又は蛍光発生酵素基質）をその中に有していてもよい。
【００７７】
いくつかの実施形態では、分析物は、微生物に関連するポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ）であり得る。こうした実施形態では、当該技術分野において周知の核酸検出法（例えば、ＰＣＲ、ｒｔＰＣＲ、ＬＣＲ、ＮＡＳＢＡ、ブロット分析）を用いて分析物を検出するのが望ましい場合がある。そのため、分析物捕捉要素を容器の中にイジェクトすることによって装置から分析物捕捉要素を分離する場合には、容器は、懸濁媒体、細胞溶解試薬（例えば、酸、塩基、洗剤、酵素、プロテアーゼ、リゾチーム、リソスタフィン）、分析物特異的プローブ、分析物特異的プライマー、及び／又はポリヌクレオチドを増幅若しくは標識するための試薬をその中に有していてもよい。
【００７８】
いくつかの実施形態では、該方法は濃縮工程を含むことができる。濃縮工程は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願第６１／４２８，８５６号（２０１０年１２月３１日出願）に記載されているように、標的微生物の増殖を促進するための培地、及び選択剤を含む潜在的な発泡体（latent effervescent body）を提供する工程を含み得る。
【００７９】
実施形態
実施形態１は、試料を処理するための装置であって、
試料受容構成要素と、
濾液受容構成要素と、
分析物捕捉要素と、を含み、
試料受容構成要素が、
第１の端部と、第２の端部と、該第１の端部から該第２の端部まで延びる第１のチャンバとを有する第１の中空体と、
第１のチャンバ内の第１の端部と第２の端部との間に配置されるフィルタエレメントと、を含み、
第１の端部が、試料を受容するように構成された第１の開口部を含み、
第２の端部が第２の開口部を含み、
濾液受容構成要素が、第３の端部と、第４の端部と、該第３の端部から該第４の端部まで延びる第２のチャンバと、を有する第２の中空体を含み、
第３の端部が、試料収容部材の第２の端部を受容するように構成された第３の開口部を含み、
第４の端部が第４の開口部を含み、
分析物捕捉要素が、濾液受容構成要素に取り外し可能に連結され、
試料受容構成要素が濾液受容構成要素に連結されると、装置が、第１のチャンバ、フィルタエレメント、及び第２のチャンバを通り、かつ液状試料と分析物捕捉要素との間の接触を容易にする流路を形成し、
第２の端部が、第２のチャンバの少なくとも一部に嵌入し、かつそこを通って長手方向に移動するように成形及びサイズ調整される、試料を処理するための装置である。
【００８０】
実施形態２は、分析物捕捉要素が更に第２のチャンバ内に配置される、実施形態１５の装置である。
【００８１】
実施形態３は、第５の開口部を有する第５の端部と、第６の開口部を有する第６の端部とを有する取り外し可能な内スリーブを更に含み、該スリーブが第２のチャンバ内に配置される、実施形態１又は２の装置である。
【００８２】
実施形態４は、多孔質支持体又は多孔質シールドを更に含む、実施形態１〜３のいずれか一つの装置である。
【００８３】
実施形態５は、多孔質支持体の少なくとも一部、又は多孔質シールドの少なくとも一部が、第２の中空体内の分析物捕捉要素と第４の開口部との間に配置される、実施形態４の装置である。
【００８４】
実施形態６は、分析物捕捉要素が多孔質支持体又は多孔質シールドに連結される、実施形態４又は実施形態５の装置である。
【００８５】
実施形態７は、フィルタエレメントが複数の層を更に含む、実施形態１〜６のいずれか一つの装置である。
【００８６】
実施形態８は、第２の端部が、第２のチャンバに挿入され、かつ第２の中空体を通って分析物捕捉要素、多孔質支持体、又は多孔質シールドと接触する点まで移動されるように適合される、実施形態１〜７のいずれか一つの装置である。
【００８７】
実施形態９は、複数の試料を処理するための装置であって、
試料受容構成要素と、
濾液受容構成要素と、
複数の分析物捕捉要素と、を含み、
試料受容構成要素が、
第１の端部と、第２の端部と、それぞれが該第１の端部から該第２の端部まで延びる複数の離間した第１のチャンバとを有する、第１の本体であって
第１の端部が、複数の第１の開口部であって、少なくとも１つの該第１の開口部が試料を受容するように構成された、複数の第１の開口部を含み、
第２の端部が、それぞれが第２の開口部を有する複数の出口を含み、
第１の本体が、複数の流体通路であって、それぞれが第１の開口部から第２の開口部まで、その間の第１のチャンバを通って延びる、複数の流体通路を形成する、第１の本体と、
複数のフィルタエレメントであって、各フィルタエレメントは複数の第１のチャンバのうちの１つの中の第１の開口部と第２の開口部との間に配置される、複数のフィルタエレメントと、を含み、
濾液受容構成要素が、
第３の端部と、第４の端部と、複数の離間した第２のチャンバとを有する第２の本体を含み、該各第２のチャンバは、第３の端部から前記第４の端部まで延び、該各第２のチャンバは、
第３の端部にある、複数の出口のうちの１つを受容するように構成された第３の開口部と、
第４の端部にある第４の開口部と、を含み、
複数の分析物捕捉要素のそれぞれが、濾液受容構成要素に連結され、
試料受容構成要素が濾液受容構成要素に連結されると、装置が、複数の流路を形成し、各流路が、複数の第１のチャンバのうちの１つ、複数のフィルタエレメントのうちの１つ、及び複数の第２のチャンバのうちの１つを通る流体の通過を容易にし、かつ複数の分析物捕捉要素のうちの少なくとも１つとの流体の接触を容易にし、
複数の出口のそれぞれが、第２のチャンバの少なくとも一部に嵌入し、かつそこを通って長手方向に移動するように成形及びサイズ調整される、複数の試料を処理するための装置である。
【００８８】
実施形態１０は、複数の分析物捕捉要素のうちの少なくとも１つが、更に、複数の第２のチャンバのうちの少なくとも１つの中に配置される、実施形態９の装置である。
【００８９】
実施形態１１は、第５の開口部を有する第５の端部と、第６の開口部を有する第６の端部とを有する少なくとも１つの取り外し可能な内スリーブを更に含み、該スリーブが、複数の第２のチャンバのうちの少なくとも１つの中に配置される、実施形態９又は実施形態１０の装置である。
【００９０】
実施形態１２は、少なくとも１つの多孔質支持体又は少なくとも１つの多孔質シールドを更に含む、実施形態９〜１１のいずれか一つの装置である。
【００９１】
実施形態１３は、少なくとも１つの多孔質支持体又は少なくとも１つの多孔質シールドの少なくとも一部が、少なくとも１つの第２のチャンバ内の分析物捕捉要素と第４の端部との間に配置される、実施形態１２の装置である。
【００９２】
実施形態１４は、分析物捕捉要素が多孔質支持体に連結される、実施形態１２〜１３のいずれか一つの装置である。
【００９３】
実施形態１５は、少なくとも１つのフィルタエレメントが複数の層を更に含む、実施形態９〜１４のいずれか一つの装置である。
【００９４】
実施形態１６は、複数の出口のそれぞれが、複数の第２のチャンバのうちの１つに挿入され、かつ第２のチャンバを通って分析物捕捉要素、多孔質支持体、又は多孔質シールドと接触する点まで移動されるように適合される、実施形態９〜１５のいずれか一つの装置である。
【００９５】
実施形態１７は、濾液受容構成要素が負圧源と結合されるように構成される、実施形態１〜１６のいずれか一つの装置である。
【００９６】
実施形態１８は、試料受容構成要素又は濾液受容構成要素の少なくとも一方が、試料受容構成要素が濾液受容構成要素に連結されると、濾液受容構成要素に対する試料受容構成要素の位置を制御可能に維持する位置決め要素を更に含む、実施形態１〜１７のいずれか一つの装置である。
【００９７】
実施形態１９は、試料中の分析物の有無を検出する方法であって、
液体試料、及び実施形態１〜８のいずれか一つの装置を提供することと、
液体試料をフィルタエレメントに通過させることと、
濾過済み液を分析物捕捉要素と接触させることと、
分析物捕捉要素を装置から分離することと、
分析物の有無を検出することと、を含む、方法である。
【００９８】
実施形態２０は、装置を負圧源に取り付けることを更に含み、液体試料を前記フィルタエレメントに通過させることが、試料を前記フィルタエレメントを通して引き込んで濾過済み試料を生成するために負圧を用いることを更に含む、実施形態１９の方法である。
【００９９】
実施形態２１は、試料を前記フィルタエレメントを通して引き込むために負圧を用いることが、濾過済み試料を分析物捕捉要素と接触させるために負圧を用いることを更に含む、実施形態２０の方法である。
【０１００】
実施形態２２は、分析物捕捉要素を装置から分離することが、分析物捕捉要素を分離するために第２の端部を用いることを更に含む、実施形態１９〜２１のいずれか一つの方法である。
【０１０１】
実施形態２３は、第２の端部を用いることが、分析物捕捉要素を装置から分離するために、第２の端部を付勢して第２のチャンバに通すことを更に含む、実施形態２２の方法である。
【０１０２】
実施形態２４は、分析物捕捉要素を分離した後、分析物捕捉要素を細胞溶解剤で処理することを更に含む、実施形態１９〜２３のいずれか一つの方法である。
【０１０３】
実施形態２５は、複数の試料中の分析物の有無を検出する方法であって、
複数の液体試料、及び実施形態９〜１８のいずれか一つの装置を提供することと、
少なくとも２つの濾過済み液を生成するために、少なくとも２つの液体試料を、複数のフィルタエレメントのうちの少なくとも２つに通過させることと、
少なくとも２つの濾過済み液を少なくとも２つの分析物捕捉要素と接触させることと、
少なくとも２つの分析物捕捉要素を装置から分離することと、
分析物の有無を検出することと、を含む、方法である。
【０１０４】
実施形態２６は、装置を負圧源に取り付けることを更に含み、複数の液体試料を少なくとも２つのフィルタエレメントに通過させることが、液体試料を少なくとも２つのフィルタエレメントを通して引き込んで少なくとも２つの濾過済み試料を生成するために負圧を用いることを更に含む、実施形態２５の方法である。
【０１０５】
実施形態２７は、複数の試料を少なくとも２つのフィルタエレメントを通して引き込むために負圧を用いることが、濾過済み試料を少なくとも２つの分析物捕捉要素と接触させるために負圧を用いることを更に含む、実施形態２６の方法である。
【０１０６】
実施形態２８は、少なくとも２つの分析物捕捉要素を前記装置から分離することが、少なくとも２つの分析物捕捉要素を装置から分離するために少なくとも２つの出口を使用することを更に含む、実施形態２５〜２７の方法である。
【０１０７】
実施形態２９は、少なくとも２つの出口を使用することが、少なくとも２つの分析物捕捉要素を装置から分離するために、少なくとも２つの出口を付勢して少なくとも２つの第２のチャンバに通すことを更に含む、実施形態２８の方法である。
【０１０８】
実施形態３０は、少なくとも２つの分析物捕捉要素を分離した後、少なくとも２つの分析物捕捉要素を細胞溶解剤で処理することを更に含む、実施形態２５〜２９のいずれか一つの方法である。
【０１０９】
本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な修正を行ってもよい。これらの及び他の実施形態は、以下の特許請求の範囲に含まれる。
【図１】
0005959542.tif 000002
【図２Ａ】
0005959542.tif 000003
【図２Ｂ】
0005959542.tif 000004
【図２Ｃ】
0005959542.tif 000005
【図３】
0005959542.tif 000006
【図４】
0005959542.tif 000007
【図５Ａ】
0005959542.tif 000008
【図５Ｂ】
0005959542.tif 000009
【図６Ａ】
0005959542.tif 000010
【図６Ｂ】
0005959542.tif 000011
【図７Ａ】
0005959542.tif 000012
【図７Ｂ】
0005959542.tif 000013
【図７Ｃ】
0005959542.tif 000014
【図８】
0005959542.tif 000015
【図９】
0005959542.tif 000016
【図１０】
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