(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、もしくはＩＩＩＢの化合物
【化１】
0005868994.tif 000019
または薬学的に許容できるその塩。
【請求項２】
化合物が、
【化２】
0005868994.tif 000020
である、請求項１に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項３】
化合物が式ＩＡの化合物である、請求項２に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項４】
化合物のアミノ置換炭素での鏡像体過剰率が少なくとも９５％である、請求項３に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項５】
化合物のアミノ置換炭素での鏡像体過剰率が少なくとも９９％である、請求項３に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項６】
化合物が、
【化３】
0005868994.tif 000021
である、請求項１に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項７】
化合物が、
【化４】
0005868994.tif 000022
である、請求項１に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項８】
化合物が式ＩＩＩＡの化合物である、請求項７に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項９】
化合物のアミノ置換炭素での鏡像体過剰率が少なくとも９５％である、請求項８に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項１０】
化合物のアミノ置換炭素での鏡像体過剰率が少なくとも９９％である、請求項８に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩。
【請求項１１】
請求項１から１０のいずれか一項に記載の化合物または薬学的に許容できるその塩と、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
【請求項１２】
急性神経障害および精神障害からなる群から選択される状態を治療するための、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
アルツハイマー病、統合失調症、自閉症、双極性障害、うつ病、または注意欠陥／多動性障害を治療するための、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
認知障害を治療するための、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
認知機能障害を治療するための、請求項１１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、そのラセミ混合物および分割された鏡像異性体を含めた、３−アミノ−１−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−７−カルボニトリル、３−アミノ−１−ヒドロキシ−７−（２−メトキシエトキシ）−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン、および３−アミノ−１−ヒドロキシ−７−［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチルエトキシ］−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オンの化合物、これらの薬学的に許容できる塩、ならびにヒトを含めた哺乳動物における、統合失調症ならびに他の精神障害、神経変性障害、および／または神経障害と関連する認知欠損の治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＫＡＴ（キヌレニンアミノトランスフェラーゼ）ＩＩは、キヌレニンがアミノ基転移を受けてＫＹＮＡ（キヌレン酸）となるのを触媒する、脳における主要な酵素である（Ｅ．Ｏｋｕｎｏら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．、第５７巻、５３３〜５４０、１９９１）。ＫＹＮＡは、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体複合体のグリシン調節部位に対して親和性を有する有効な興奮性アミノ酸（ＥＡＡ）受容体アンタゴニストである（Ｍ．Ｋｅｓｓｌｅｒら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．、第５２巻、１３１９〜１３２８頁、１９８９）。自然発生する脳代謝産物として、ＫＹＮＡは、おそらく、大脳のグルタミン酸作動性機能の負の内因性モジュレーターとして（Ｒ．Ｓｃｈｗａｒｃｚら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、第６４８巻、１４０〜１５３頁、１９９２）、またアリール炭化水素受容体の活性化因子として働く（Ｂ．ＤｉＮａｔａｌｅら、Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｓｃｉ．第１１５巻、８９〜９７頁、２０１０）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
ＥＡＡ受容体、特にＮＭＤＡ受容体は、哺乳動物の脳の機能において中心的な役割を果たすことが知られている（Ｊ．Ｃ．ＷａｔｋｉｎｓおよびＧ．Ｌ．Ｃｏｌｌｉｎｇｒｉｄｇｅ共編、Ｔｈｅ  ＮＭＤＡ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、オックスフォード、１９８９、２４２頁）。たとえば、ＮＭＤＡ受容体の活性化は、たとえば学習や記憶などの認知過程に不可欠である（ＷａｔｋｉｎｓおよびＣｏｌｌｉｎｇｒｉｄｇｅ、上記、１３７〜１５１頁）。したがって、その合成酵素を阻害することにより、ＫＹＮＡ合成を低減することは、特に、ＮＭＤＡ機能低下が予想される疾患状態において、ＥＡＡシグナル伝達を強化し、認知過程を改善し得る。したがって、ヒトの疾患状態において認知機能不全を改善するために、ＫＡＴ  ＩＩ阻害剤として作用して、脳内のＫＹＮＡ合成を低減する化合物が求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、そのラセミ混合物および分割された鏡像異性体を含めた、３−アミノ−１−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−７−カルボニトリル、３−アミノ−１−ヒドロキシ−７−（２−メトキシエトキシ）−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン、および３−アミノ−１−ヒドロキシ−７−［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチルエトキシ］−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン、薬学的に許容できるその塩に関する。簡潔に述べるために、３（Ｓ）鏡像異性体について論述するが、本発明は、薬学的に許容できるその塩を含めて、３（Ｓ）鏡像異性体だけでなく、両方の鏡像異性体およびラセミ混合物に関するものでもある。
【０００５】
本発明は、式ＩＡによって表される、（３Ｓ）−３−アミノ−１−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−７−カルボニトリル化合物を包含する。
【０００６】
【化１】
0005868994.tif 000002
【０００７】
本発明は、式ＩＩＡによって表される、（３Ｓ）−３−アミノ−１−ヒドロキシ−７−（２−メトキシエトキシ）−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オンの化合物を包含する。
【０００８】
【化２】
0005868994.tif 000003
【０００９】
本発明は、式ＩＩＩＡによって表される、（３Ｓ）−３−アミノ−１−ヒドロキシ−７−［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチルエトキシ］−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オンの化合物を包含する。
【００１０】
【化３】
0005868994.tif 000004
【００１１】
本発明は、式Ｉ、式ＩＩ、および式ＩＩＩの化合物の薬学的に許容できる塩、水和物、溶媒和物、異性体、結晶質および非結晶質形態、同形体、多形体、ならびに代謝産物も包含する。本発明はまた、こうした化合物のすべての互変異性体および立体化学異性体も包含する。
【００１２】
本発明はまた、一部では、哺乳動物においてＫＡＴ  ＩＩ媒介障害を治療する方法を対象とする。そのような障害には、統合失調症ならびに他の神経変性障害および／または神経障害と関連する認知欠損が含まれる。この方法は、式Ｉ、式ＩＩ、もしくは式ＩＩＩの化合物または薬学的に許容できるその塩を、その状態を治療するのに治療上有効である量で哺乳動物に投与することを含む。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の一実施形態は、式Ｉ、式ＩＡまたは式ＩＢの化合物である。
【００１４】
【化４】
0005868994.tif 000005
【００１５】
本明細書で使用するとき、「本発明の化合物」は、式Ｉ、式ＩＩ、および式ＩＩＩの化合物を包含する。こうした用語は、そのラセミ混合物、鏡像異性体、水和物、溶媒和物、異性体、結晶質および非結晶質形態、同形体、多形体、ならびに代謝産物を含めて、式Ｉ、式ＩＩ、および式ＩＩＩの化合物のすべての形態も包含すると定める。
【００１６】
本発明の別の実施形態は、アミノ置換炭素での鏡像体過剰率が少なくとも９５％である、鏡像異性体に関して純粋な式ＩＡ、式ＩＩＡ、および式ＩＩＩＡの化合物である。本発明の別の態様は、アミノ置換炭素での鏡像体過剰率（ｅｅ）が少なくとも９９％である、鏡像異性体に関して純粋な式ＩＡ、式ＩＩＡ、および式ＩＩＩＡの化合物を包含する。
【００１７】
本発明の別の実施形態は、式ＩＩ、式ＩＩＡまたは式ＩＩＢの化合物である。
【００１８】
【化５】
0005868994.tif 000006
【００１９】
本発明の別の実施形態は、式ＩＩＩ、式ＩＩＩＡまたは式ＩＩＩＢの化合物である。
【００２０】
【化６】
0005868994.tif 000007
【００２１】
本発明の別の実施形態は、アミノ置換炭素でのｅｅが少なくとも９５％であり、またはアミノ置換炭素でのｅｅが少なくとも９９％でもある、鏡像異性体に関して純粋な式ＩＡ、ＩＩＡ、およびＩＩＩＡの化合物を含めた、本発明の化合物の製造方法である。
【００２２】
本発明の別の実施形態は、哺乳動物において、急性神経障害および精神障害、卒中、脳虚血、脊髄外傷、軽度認知機能障害を含めた認知機能障害、頭部外傷、周産期低酸素症、心停止、低血糖性神経損傷、認知症、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、眼損傷、網膜症、認知障害、特発性および薬物誘発性パーキンソン病、筋痙縮および振戦を含めた筋肉の痙縮と関連する障害、てんかん、けいれん、片頭痛、尿失禁、物質耐性、物質離脱、精神病、統合失調症、統合失調症と関連する陰性症状、自閉症圏障害を含めた自閉症、双極性障害、限定はしないが大うつ病性障害および治療抵抗性うつ病を含めたうつ病、うつ病と関連する認知機能障害、がん治療と関連する認知機能障害、不安、気分障害、炎症性障害、敗血症、硬変、免疫応答回避と関連するがんおよび／または腫瘍、三叉神経痛、失聴、耳鳴、眼の黄斑変性、嘔吐、脳浮腫、疼痛、遅発性ジスキネジア、睡眠障害、注意欠陥／多動性障害、注意欠陥障害、注意および／または認知の欠陥を症状として含む障害、ならびに行為障害からなる群から選択される状態を治療または予防するための、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、またはＩＩＩＢの化合物から選択される化合物を投与することを含む方法、または医薬の調製である。
【００２３】
本発明の別の実施形態は、哺乳動物において、認知症、アルツハイマー病の認知欠損症状、アルツハイマー病の注意欠陥症状、多発梗塞性認知症、アルコール性認知症もしくは他の薬物関連認知症、頭蓋内腫瘍もしくは脳外傷と関連する認知症、ハンチントン病もしくはパーキンソン病と関連する認知症、またはＡＩＤＳ関連認知症、譫妄、健忘障害、外傷後ストレス障害、精神遅滞、学習障害（たとえば、読字障害、数学障害、または書字表出障害）、注意欠陥／多動性障害、加齢関連認知機能低下、精神病と関連する認知欠損、または統合失調症と関連する認知欠損からなる群から選択される状態を治療または予防するための、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、またはＩＩＩＢの化合物から選択される化合物を投与することを含む方法、または医薬の調製である。
【００２４】
異性体
以下では本発明の化合物と呼ぶ式Ｉ、式ＩＩ、または式ＩＩＩの化合物に不斉中心が存在する場合、化合物は、光学異性体（鏡像異性体）の形で存在する場合がある。一実施形態では、本発明は、本発明の化合物のラセミ混合物を含めて、鏡像異性体および混合物を含む。別の実施形態では、２箇所以上の不斉中心を含んでいる本発明の化合物について、本発明は、ジアステレオ異性体形態（個々のジアステレオ異性体およびその混合物）の化合物を含む。
【００２５】
互変異性体形態
本発明は、互変異性体形態の本発明の化合物を含む。構造異性体が、低いエネルギー障壁で相互変換可能である場合、互変異性体の異性（「互変異性体」）が生じ得る。互変異性は、たとえばイミノ、ケト、もしくはオキシム基を含んでいる本発明の化合物ではプロトン互変異性、または芳香族部分を含んでいる化合物ではいわゆる原子価互変異性体の形をとり得る。これは、単一の化合物が１種類に留まらない異性を示す場合もあるということである。固体形態および液体形態での互変異性体の様々な比率は、分子上の様々な置換基、ならびに化合物の単離に使用される特定の結晶化技術に応じて決まる。
【００２６】
塩
本発明の化合物は、無機酸または有機酸から得られる塩の形で使用することもできる。特定の化合物によりけりであるが、化合物の塩は、塩の１つまたは複数の物理的性質、たとえば、異なる温度および湿度における薬学的安定性が向上していることや、水または油への望ましい溶解性のために有利な場合がある。ある例では、化合物の塩を、化合物の単離、精製、および／または分割の補助手段として使用する場合もある。
【００２７】
塩を（たとえば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの状況で使用するのとは対照的に）患者に投与しようとする場合、その塩は、薬学的に許容できることが好ましい。用語「薬学的に許容できる塩」とは、本発明の化合物を、ヒトが摂取するのに適すると一般にみなされるアニオンまたはカチオンを有する酸または塩基と化合させることにより調製された塩を指す。薬学的に許容できる塩は、水への溶解度が親化合物より高いので、本発明の方法の生成物として特に有用である。医薬への使用では、本発明の化合物の塩は、非毒性の「薬学的に許容できる塩」である。用語「薬学的に許容できる塩」の範囲内にある塩は、遊離塩基を適切な有機酸または無機酸と反応させることにより一般に調製される、本発明の化合物の非毒性の塩を指す。
【００２８】
本発明の化合物の薬学的に許容できる適切な酸付加塩としては、可能である場合、無機酸、たとえば、塩酸、臭化水素酸、フッ化水素酸、ホウ酸、フルオロホウ酸、リン酸、メタリン酸、硝酸、炭酸、スルホン酸、および硫酸、ならびに有機酸、たとえば、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グリコール酸、イソチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、コハク酸、トルエンスルホン酸、酒石酸、およびトリフルオロ酢酸から得られる塩が挙げられる。適切な有機酸としては、たとえば、脂肪族、脂環式、芳香族、芳香脂肪族（ａｒａｌｉｐｈａｔｉｃ）、複素環、炭素環、およびスルホン酸クラスの有機酸が一般に挙げられる。
【００２９】
適切な有機酸の詳細な例として、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、グリコール酸塩、グルコン酸塩、ジグルコン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、グルクロン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、ピルビン酸塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、安息香酸塩、アントラニル酸、メシル酸塩、ステアリン酸塩、サリチル酸塩、ｐ−ヒドロキシ安息香酸塩、フェニル酢酸塩、マンデル酸塩、エンボン酸塩（パモ酸塩）、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、パントテン酸塩、トルエンスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、スルファニル酸塩、シクロヘキシルアミノスルホン酸塩、アルギン酸、β−ヒドロキシ酪酸、ガラクタル酸塩、ガラクツロン酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、グリコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩（ｐａｌｍｏａｔｅ）、ペクチン酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、およびウンデカン酸塩が挙げられる。
【００３０】
さらに、本発明の化合物が酸性部分を有する場合では、適切な薬学的に許容できるその塩として、アルカリ金属塩、すなわち、ナトリウム塩またはカリウム塩；アルカリ土類金属塩、たとえば、カルシウム塩またはマグネシウム塩；および適切な有機配位子と共に形成される塩、たとえば、第四級アンモニウム塩を挙げることができる。別の実施形態では、塩基の塩は、アルミニウム、アルギニン、ベンザチン、コリン、ジエチルアミン、ジエタノールアミン、グリシン、リシン、メグルミン、エタノールアミン、トロメタミン、および亜鉛の塩を含めて、非毒性の塩を形成する塩基から生成されるものである。
【００３１】
有機塩は、トロメタミン、ジエチルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）、プロカインなどの、第二級、第三級、または第四級アミンから生成されるものでもよい。塩基性窒素を含んでいる基は、低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）ハロゲン化物（たとえば、メチル、エチル、プロピル、およびブチル塩化物、臭化物、およびヨウ化物）、ジアルキルスルフェート（すなわち、ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミルスルフェート）、長鎖ハロゲン化物（すなわち、デシル、ラウリル、ミリスチル、およびステアリル塩化物、臭化物、およびヨウ化物）、アリールアルキルハロゲン化物（すなわち、ベンジルおよびフェネチル臭化物）他などの物質で四級化することができる。
【００３２】
一実施形態では、酸および塩基の半塩、たとえば、半硫酸塩および半カルシウム塩を生成することもできる。
【００３３】
同位体
本発明は、１個または複数の原子が、原子質量または質量数が自然界で通常見られる原子質量または質量数と異なっている原子で置き換えられていること以外は、本発明の化合物として列挙した化合物と同一である、同位体標識された化合物も包含する。本発明の化合物に組み込むことのできる同位体の例としては、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１１Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌなどの、それぞれ水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、および塩素の同位体が挙げられる。前述の同位体および／または他の原子の他の同位体を含んでいる本発明の化合物、そのプロドラッグ、ならびに前記化合物または前記プロドラッグの薬学的に許容できる塩は、本発明の範囲内にある。本発明の特定の同位体標識された化合物、たとえば、３Ｈや１４Ｃなどの放射性同位体が組み込まれている化合物は、薬物および／または基質組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム（ｔｒｉｔｉａｔｅｄ）、すなわち３Ｈ、およびカーボン１４、すなわち１４Ｃ同位体は、調製しやすく、検出可能であるので、特に好ましい。さらに、ジュウテリウム、すなわち２Ｈなどのより重い同位体での置換は、代謝安定性がより高いために生じる特定の治療上の優位性、たとえば、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期の延長または投与必要量の減少をもたらす場合があり、したがって、状況によっては好ましい場合もある。本発明の同位体標識された化合物およびそのプロドラッグは、スキームおよび／または以下の実施例および調製例で開示する手順を、同位体標識されていない試薬の代わりに容易に入手可能な同位体標識された試薬を用いて実施することによって一般に調製できる。
【００３４】
本発明はまた、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、またはＩＩＩＢの化合物のプロドラッグに関する。すなわち、それ自体は薬理活性をほとんどまたは全くもたなくてもよい、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、またはＩＩＩＢの化合物のある特定の誘導体は、身体内または身体上に投与されたとき、たとえば加水分解による切断によって、所望の活性を有する式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、またはＩＩＩＢの化合物に変換し得る。そのような誘導体を「プロドラッグ」と呼ぶ。プロドラッグの使用についてのこれ以上の情報は、Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、第１４巻、ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ（Ｔ．ＨｉｇｕｃｈｉおよびＷ．Ｓｔｅｌｌａ）、およびＢｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７（Ｅ．Ｂ．Ｒｏｃｈｅ、米国薬剤師会編）で見ることができる。
【００３５】
本発明によるプロドラッグは、たとえば、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、またはＩＩＩＢの化合物中に存在する適切な官能基を、たとえば、Ｈ．ＢｕｎｄｇａａｒｄによるＤｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、１９８５）に記載されているように、当業者に「プロ部分」として知られている特定の部分で置き換えることにより生成することができる。
【００３６】
本発明によるプロドラッグの非限定的な一部の例として、以下のものが挙げられる。
（ｉ）式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、またはＩＩＩＢの化合物がカルボン酸官能基を含んでいる場合、カルボン酸官能基が、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、またはＩＩＩＢの化合物上で適切に代謝不安定性の基（エステル、カルバメートなど）に機能化され、
（ｉｉ）式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、またはＩＩＩＢの化合物がアルコール官能基を含んでいる場合、アルコール官能基が、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、またはＩＩＩＢの化合物上で適切に代謝不安定性の基（エステル、カーボネート、カルバメート、アセタール、ケタールなど）に機能化され、
（ｉｉｉ）式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、またはＩＩＩＢの化合物が第一級もしくは第二級アミノ官能基またはアミドを含んでいる場合、そうした基が、式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、またはＩＩＩＢの化合物上で適切に代謝不安定性の基、たとえば、加水分解基（アミド、カルバメート、尿素、ホスホネート、スルホネートなど）に機能化される。
【００３７】
前述の例に従う置き換え基（ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ  ｇｒｏｕｐ）の別の例、および他のプロドラッグタイプの例は、前述の参照文献で見ることができる。
【００３８】
さらに、ある特定の式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、またはＩＩＩＢの化合物それ自体が、他の式Ｉ、ＩＡ、ＩＢ、ＩＩ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩ、ＩＩＩＡ、またはＩＩＩＢの化合物のプロドラッグとして働く場合もある。
【００３９】
投与および投薬（ｄｏｓｉｎｇ）
通常、本発明の化合物は、本明細書に記載の状態の治療に有効な量で投与する。本発明の化合物は、適切な経路によって、その経路に適合させた医薬組成物の形で、目的の治療に有効な用量を投与する。医学的状態の進行に対する処置に必要となる、化合物の治療上有効な用量は、医学分野でよく知られている前臨床および臨床の手法を使用して、当業者の手で容易に突き止められる。
【００４０】
本発明の化合物は、経口投与することができる。経口投与は、化合物が消化管に入るように飲み込むものでもよいし、または化合物が口から血流に直接入る頬側もしくは舌下投与を用いてもよい。
【００４１】
別の実施形態では、本発明の化合物は、血流中、筋肉、または内臓に直接投与することもできる。非経口投与に適する手段には、静脈内、動脈内、腹腔内、くも膜下腔内、脳室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、および皮下が含まれる。非経口投与に適するデバイスとして、（微細針を含めた）針注射器、無針注射器、および注入技術が挙げられる。
【００４２】
別の実施形態では、本発明の化合物は、皮膚または粘膜に局所的に、すなわち、皮膚上にまたは経皮的に投与することもできる。別の実施形態では、本発明の化合物は、鼻腔内にまたは吸入によって投与することもできる。別の実施形態では、本発明の化合物は、直腸投与または経膣投与することができる。別の実施形態では、本発明の化合物は、眼または耳に直接投与することもできる。
【００４３】
化合物および／または化合物を含有する組成物の投与計画は、患者のタイプ、年齢、体重、性別、および医学的状態；医学的状態の重症度；投与経路；ならびに用いる特定の化合物の活性を含めた様々な要素に基づくものである。したがって、投与計画は多種多様となり得る。体重１キログラムあたり１日約０．０１ｍｇ〜約１００ｍｇ程度の投与量レベルが、上で示した状態の治療では有用である。一実施形態では、（１回量または分割した用量で投与される）本発明の化合物の合計１日量は通常、約０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇである。別の実施形態では、本発明の化合物の合計１日量は、約０．１〜約５０ｍｇ／ｋｇであり、別の実施形態では、約０．５〜約３０ｍｇ／ｋｇ（すなわち、体重１ｋｇあたりの本発明の化合物ｍｇ）である。一実施形態では、投薬量は、０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日である。別の実施形態では、投薬量は、０．１〜１．０ｍｇ／ｋｇ／日である。投与量単位組成物は、そのような量または１日量を構成するその約数を含有するものでよい。多くの事例では、化合物の投与は、１日に複数回（通常は４回以下）繰り返される。所望なら、通常は、１日あたり複数回の用量を使用して、合計１日量を増やすこともできる。
【００４４】
経口投与では、組成物は、患者への投与量を症状によって調整するために、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、７５．０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２５０、および５００ミリグラムの活性成分を含有する錠剤の形で提供することができる。医薬は通常、約０．０１ｍｇ〜約５００ｍｇの活性成分、または別の実施形態では、約１ｍｇ〜約１００ｍｇの活性成分を含有する。静脈内について、定速注入の際の用量は、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ／分の範囲をとり得る。
【００４５】
本発明による適切な対象として、哺乳動物対象が挙げられる。本発明による哺乳動物には、限定はしないが、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、ブタ、げっ歯動物、ウサギ、霊長類などが含まれ、子宮内の哺乳動物も包含される。一実施形態では、ヒトが適切な対象である。ヒト対象は、どちらの性の者でも、どの発育段階にある者でもよい。
【００４６】
医薬の調製における使用
別の実施形態では、本発明は、本明細書で列挙した状態を治療する医薬を調製するための、１種または複数の本発明の化合物の使用を含む。
【００４７】
医薬組成物
本明細書中で言及した状態を治療するために、本発明の化合物は、化合物それ自体として投与することができる。一方、薬学的に許容できる塩は、親化合物よりも水への溶解性が高いので、医学的な適用に適する。
【００４８】
別の実施形態では、本発明は、医薬組成物を含む。そのような医薬組成物は、薬学的に許容できる担体と共に提供される本発明の化合物を含む。担体は、固体でも、液体でも、または両方でもよく、０．０５重量％〜９５重量％の活性化合物を含有し得る単位用量組成物、たとえば錠剤としての化合物に配合することができる。本発明の化合物は、ターゲット指向性薬物担体としての適切なポリマーと結合させることもできる。他の薬理活性物質が存在してもよい。
【００４９】
本発明の化合物は、適切な任意の経路によって、好ましくはそのような経路に適合させた医薬組成物の形で、目的の治療に有効な用量を投与することができる。活性化合物および組成物は、たとえば、経口、直腸、非経口、または局所投与することができる。
【００５０】
固体投与形態の経口投与は、たとえば、少なくとも１種の予め決められた量の本発明の化合物をそれぞれが含有する別個の単位、たとえば、硬カプセル剤もしくは軟カプセル剤、丸剤、カシェ剤、ロゼンジ、または錠剤の体裁にすることができる。別の実施形態では、経口投与は、粉末または顆粒形態にしてもよい。別の実施形態では、経口投与形態は、たとえばロゼンジなどの舌下である。このような固体剤形では、本発明の化合物に、１種または複数の佐剤が配合されているのが普通である。そうしたカプセル剤または錠剤は、徐放製剤を含有してもよい。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合では、剤形は、緩衝剤も含んでよく、または腸溶コーティングを施して調製することもできる。
【００５１】
別の実施形態では、経口投与は、液体投与形態にすることができる。経口投与用の液体剤形としては、たとえば、当業界で一般に使用される不活性希釈剤（すなわち水）を含有する薬学的に許容できる乳濁液、溶液、懸濁液、シロップ、およびエリキシルが挙げられる。このような組成物は、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、香味剤（たとえば甘味剤）、および／または着香剤などの佐剤も含んでよい。
【００５２】
別の実施形態では、本発明は、非経口投与形態を含む。「非経口投与」は、たとえば、皮下注射、静脈内注射、腹腔内、筋肉内注射、胸骨内注射、および注入を包含する。注射用製剤（すなわち、無菌の注射可能な水性または油性懸濁液）は、適切な分散剤、湿潤剤、および／または懸濁化剤を使用し、知られている技術に従って製剤することができる。
【００５３】
別の実施形態では、本発明は、局所投与形態を含む。「局所投与」は、たとえば、経皮パッチやイオン導入デバイスを介してなどの経皮投与、眼内投与、または鼻腔内もしくは吸入投与を包含する。局所投与用の組成物として、たとえば、局所用のゲル、スプレー、軟膏、およびクリームも挙げられる。局所用製剤は、皮膚または他の患部を通しての活性成分の吸収または通過を強化する化合物を含有してもよい。本発明の化合物が経皮デバイスによって投与されるとき、投与は、貯蔵部および多孔膜型または固体基材型のいずれかのパッチを使用して実現される。この目的のための典型的な製剤としては、ゲル、ヒドロゲル、ローション、溶液、クリーム、軟膏、散粉剤、包帯剤、フォーム、フィルム、皮パッチ、ウェーハ、植込錠、スポンジ、繊維、絆創膏、およびマイクロエマルジョンが挙げられる。リポソームも使用することができる。典型的な担体として、アルコール、水、鉱油、流動パラフィン、白色ワセリン、グリセリン、ポリエチレングリコール、およびプロピレングリコールが挙げられる。浸透性改善剤を混ぜてもよい。たとえば、ＦｉｎｎｉｎおよびＭｏｒｇａｎによるＪ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ、８８（１０）、９５５〜９５８（１９９９年、１０月）を参照されたい。
【００５４】
眼への局所投与に適する製剤としては、たとえば、本発明の化合物を適切な担体に溶解または懸濁させてある点眼剤が挙げられる。眼または耳への投与に適する典型的な製剤は、ｐＨ調整された等張性無菌食塩水中の超微粒子化懸濁液または溶液からなる滴剤の形でよい。眼および耳への投与に適する他の製剤として、軟膏、生分解性（すなわち、吸収性ゲルスポンジ、コラーゲン）および非生分解性（すなわち、シリコーン）植込錠、ウェーハ、レンズ、ならびにニオソームやリポソームなどの微粒子系または小胞系が挙げられる。架橋ポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、ヒアルロン酸、セルロース系ポリマー、たとえばヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、もしくはメチルセルロース、またはヘテロ多糖ポリマー、たとえばジェランガムなどのポリマーを、塩化ベンザルコニウムなどの保存剤と共に混ぜてもよい。このような製剤は、イオン導入法によって送達することもできる。
【００５５】
鼻腔内投与または吸入による投与では、本発明の活性化合物は、患者によって圧搾もしくはポンプによる汲み出しがなされるポンプスプレー容器から溶液もしくは懸濁液の形で、または加圧容器もしくはネブライザーから適切な噴射剤を使用しながらエアロゾルスプレー体裁として送達することが好都合である。鼻腔内投与に適する製剤は通常、（単独、またはたとえばラクトースとの乾燥ブレンドにした混合物として、またはたとえばホスファチジルコリンなどのリン脂質と混合した混合型成分粒子としての）乾燥粉末の形で乾燥粉末吸入器から、または加圧容器、ポンプ、スプレー、アトマイザー（好ましくは、電気水力学を使用して微細な霧を生成するアトマイザー）、もしくはネブライザーから、１，１，１，２−テトラフルオロエタンや１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパンなどの適切な噴射剤を使用しもしくは使用せずにエアロゾルスプレーとして投与する。鼻腔内の使用では、粉末は、生体接着剤、たとえば、キトサンまたはシクロデキストリンを含んでよい。
【００５６】
別の実施形態では、本発明は、直腸投与形態を含む。そのような直腸投与形態は、たとえば、坐剤の形でよい。カカオ脂が伝統的な坐剤基剤であるが、様々な代替品を適宜使用してよい。
【００５７】
製薬の分野で知られている他の担体材料および投与方式も使用することができる。本発明の医薬組成物は、有効な製剤手順や投与手順などの、よく知られた薬学の技術のいずれかによって準備することができる。有効な製剤手順および投与手順に関する上記の考慮事項は、当業界でよく知られており、標準の教本に記載されている。薬物の製剤は、たとえば、Ｈｏｏｖｅｒ，Ｊｏｈｎ  Ｅ．、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、ペンシルヴェニア州イーストン、１９７５；Ｌｉｂｅｒｍａｎら編、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ」、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ、ニューヨーク州ニューヨーク、１９８０；およびＫｉｂｂｅら編、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」（第３版）、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、ワシントン、１９９９で論述されている。
【００５８】
共投与
本発明の化合物は、様々な状態または疾患状態の治療において、単独で、または他の治療薬と組み合わせて使用することができる。本発明の（１種または複数の）化合物および他の（１種または複数の）治療薬は、（同じ剤形または別々の剤形のいずれかで）同時に、または順次投与することができる。例となる治療薬は、たとえば、代謝型グルタミン酸受容体作動薬でよい。
【００５９】
２種以上の化合物を「組み合わせて」の投与とは、２種の化合物を、一方の存在が他方の生物学的効果を変更するのに十分な近い時期に投与することを意味する。２種以上の化合物は、同時に、並行して、または順次投与することができる。さらに、同時投与は、投与前に化合物を混合して実施することもでき、または同時点であるが、異なる解剖学的部位で、もしくは異なる投与経路を使用して化合物を投与することにより実施することもできる。
【００６０】
語句「並行投与」、「共投与」、「同時投与」、および「同時に投与」とは、化合物を組み合わせて投与することを意味する。
【００６１】
一実施形態では、本発明の化合物は、知られている抗精神病薬、たとえば、ジプラシドン（Ｇｅｏｄｏｎ）、クロザピン、モリンドン、ロキサピン、ピモジド、リスペリドン、オランザピン、レモキシプリド、セルチンドール、アミスルプリド、クエチアピン、プロクロルペラジン、フルフェナジン、トリフルオロペラジン、チオリダジン、ハロペリドール、クロルプロマジン、フルペンチキソール、およびピポチアジンと共に、補助的療法として投与する。
【００６２】
別の実施形態では、本発明の化合物は、ＣＮＳ薬、たとえば、抗うつ薬（セルトラリンなど）、抗パーキンソン病薬（たとえば、デプレニル、Ｌ−ドーパ、Ｒｅｑｕｉｐ、Ｍｉｒａｐｅｘ、セレギリンやラサギリンなどのＭＡＯＢ阻害剤、ＴａｓｍａｒなどのｃｏｍＴ阻害剤、Ａ−２阻害剤、ドーパミン再取込み阻害剤、ＮＭＤＡ拮抗薬、ニコチン作動薬、ドーパミン作動薬、および神経型一酸化窒素合成酵素の阻害剤）、抗アルツハイマー病薬、たとえば、ドネペジル、タクリン、α２δ阻害剤、ＣＯＸ−２阻害剤、ギャバペンテノイド（ｇａｂａ  ｐｅｎｔｅｎｏｉｄ）、プロペントフィリン、またはメトリホネート、ならびに抗精神病薬、たとえば、ＰＤＥ１０阻害剤、５ＨＴ２Ｃ作動薬、α７ニコチン性受容体作動薬、ＣＢ１拮抗薬、およびドーパミンＤ２受容体を拮抗する活性を有する化合物と組み合わせて使用してもよい。
【００６３】
キット
本発明は、上述の治療方法を実施する際に使用するのに適するキットもさらに含む。一実施形態では、キットは、本発明の化合物の１種または複数を含む第一の剤形と、その剤形の容器とを、本発明の方法を実施するのに十分な量で含んでいる。
【００６４】
別の実施形態では、本発明のキットは、１種または複数の本発明の化合物を含む。
【００６５】
中間体
別の実施形態では、本発明は、本発明の化合物を調製するのに有用な新規な中間体に関する。
【００６６】
実験手順および作業例
以下の実施例により、本発明を例示する。しかし、本発明は、本明細書において十分に説明され、特許請求の範囲において列挙されるため、以下の実施例の細目によって限定されないものと理解されたい。
【００６７】
本明細書では、以下の略語を使用する。
ブライン：      飽和塩化ナトリウム水溶液
ＥｔＯＡｃ：    酢酸エチル
ｍｉｎ：        分
ｐｓｉ：        重量ポンド毎平方インチ
ＲＴ：          室温
【００６８】
実験手順
実験は、特に、酸素または水分に敏感な試薬または中間体を用いた場合では、一般に、不活性雰囲気（窒素またはアルゴン）中で実施した。市販の溶媒および試薬は、一般に、適切な場合では無水溶媒を含めて（一般に、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（ウィスコンシン州ミルウォーキー）のＳｕｒｅ−Ｓｅａｌ（商標）製品）、それ以上精製せずに使用した。生成物は、その先の反応に持ち込み、または生物学的試験にかける前に、一般に真空乾燥した。質量分析データは、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣＭＳ）、大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）、またはガスクロマトグラフィー−質量分析（ＧＣＭＳ）のいずれかの計測から報告する。核磁気共鳴（ＮＭＲ）データの化学シフトは、用いた重水素化溶媒を差し引いたピークを参考にした百万分率（ｐｐｍ、δ）で表示する。
【００６９】
他の実施例または方法における手順を参考にした合成では、反応条件（反応の長さおよび温度）は様々となり得る。一般に、反応は、薄層クロマトグラフィーまたは質量分析によって追跡し、必要に応じて後処理にかけた。精製は、実験により異なる場合もある。すなわち、一般に、溶離液／勾配に使用した溶媒および溶媒比率は、適切なＲｆまたは保持時間が得られるように選択した。
【実施例】
【００７０】
（実施例１）
（３Ｓ）−３−アミノ−１−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−７−カルボニトリル、ＨＣｌ塩（１）
【００７１】
【化７】
0005868994.tif 000008
ステップ１．  メチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−４−シアノ−２−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニネート（Ｃ１）の合成。機械式撹拌機および温度探針を備え付けた２リットル容三口丸底フラスコに、亜鉛粉末（８６．４１ｇ、１．３２ｍｏｌ）を装入した。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５００ｍＬ）を加え、フラスコを１０〜１２℃の水浴で冷却した。内部温度を２０〜２５℃に保ちながら、塩化トリメチルシリル（６２．７３ｍＬ、４９３．４ｍｍｏｌ）を滴下し、得られる懸濁液を１８〜２２℃で３０分間撹拌した。撹拌を止め、固体を沈降させ、暗黄色の上清を、吸引力を使用してカニューレで除去し、次いで廃棄した。固体にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２５０ｍＬ）を加え、懸濁液を５分間撹拌した。撹拌を止め、上清を再びカニューレで除去した。この洗浄工程を同一条件下でもう２回実施した。フラスコにＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）を加えて、活性亜鉛の懸濁液を得た。
【００７２】
フラスコを８〜１０℃の水浴で冷却しながら、活性亜鉛懸濁液に、メチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−ヨード−Ｌ−アラニネート（Ｓ．ｖａｎ  Ｚｕｔｐｈｅｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２００７、４８、２８５７〜２８５９に従って調製することができる）（１７３．９８ｇ、５２８．５９ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５００ｍＬ）溶液を添加漏斗で滴下した。滴下する間、内部温度は２５℃未満に保った。冷却浴を取り外し、混合物を２０〜２５℃で３０分間撹拌した。薄層クロマトグラフィー（４：１のヘプタン／ＥｔＯＡｃ）による分析によって、出発材料が完全にジンケートに変換されたことが示された。撹拌を止め、固体が沈降してしまった後、有機亜鉛溶液を、固体亜鉛を後に残しながら、窒素ガス圧を使用してカニューレで添加漏斗に移した。亜鉛残渣にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）を加え、混合物を５分間撹拌した。撹拌を止め、上清を同じようにしてカニューレで添加漏斗に移した。
【００７３】
機械式撹拌機、添加漏斗、および温度探針を備え付けた５リットル容四口丸底フラスコに、４−ブロモ−３−ニトロベンゾニトリル（１００ｇ、４４０．５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１Ｌ）溶液を装入した。２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（ＸＰｈｏｓ）（２１．０ｇ、４４．０ｍｍｏｌ）および酢酸パラジウム（ＩＩ）（４．９４ｇ、２２．０ｍｍｏｌ）を加え、フラスコを１４〜１６℃の水浴で冷却した。添加漏斗に移しておいたジンケート溶液を、内部温度を１８〜２０℃に保ちながら、少しずつ滴らせて加えた。得られる混合物を２０℃で１６時間撹拌し、この時点でＥｔＯＡｃ（１Ｌ）を加え、混合物をＣｅｌｉｔｅで濾過した。ＣｅｌｉｔｅパッドをＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で洗浄し、濾液にＥｔＯＡｃ（１Ｌ）およびｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（５００ｍＬ）を加えた。有機相を２０％ブライン（３×１Ｌ）で洗浄し、次いで濃縮して、暗橙色の油状物を得た。油状物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（５００ｍＬ）に溶解させ、Ｃｅｌｉｔｅで濾過し、Ｃｅｌｉｔｅパッドをｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（２×１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を濃縮乾燥して、暗褐色の油状物を得、これをシリカでのクロマトグラフィー（ヘプタン／ＥｔＯＡｃ勾配溶離）にかけて、ベージュ色の固体（１７８ｇ）を得、これを１６時間ヘプタン（９００ｍＬ）にスラリー化した。固体を濾過し、ヘプタン（２×１００ｍＬ）で洗浄し、３０℃で４時間真空乾燥させて、Ｃ１をオフホワイト色の固体として得た。収率: 94.67 g, 271.0 mmol, 62% 収率. 1H
NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.34 (s, 9H), 3.25
(dd, J=13.4, 8.8 Hz, 1H), 3.65 (dd, J=13.4, 5.5 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H),
4.63-4.72 (m, 1H), 5.24 (br d, J=7.9 Hz, 1H), 7.57 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.81 (br
d, J=8.0 Hz, 1H), 8.26 (br s, 1H).
【００７４】
ステップ２．  ｔｅｒｔ−ブチル［（３Ｓ）−７−シアノ−１−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−３−イル］カルバメート（Ｃ２）の合成。１リットル容Ａｔｌａｎｔｉｓ加圧反応器（Ｂｉｏｔａｇｅ）に、５％硫化白金炭素［Ｐｔ（Ｓ）／Ｃ］（７．００ｇ）およびＣ１（７０ｇ、２００ｍｍｏｌ）を装入した。ピリジン（７００ｍＬ）を加え、混合物を５ｐｓｉの水素ガス中にて２３℃で水素化した。２時間後、反応液を濾過して触媒を除去し、濾液を真空中で濃縮して最小体積とした。残渣をヘプタン（４×５００ｍＬ）との同時蒸発にかけて、残りのピリジンを除去した。得られる固体を２０℃で１６時間ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（３５０ｍＬ）にスラリー化し、スラリーを濾過し、固体をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（２×５０ｍＬ）で洗浄し、３０℃で１時間真空乾燥して、Ｃ２をオフホワイト色の固体（４５．７５ｇ）として得た。濾液を濃縮して、２回目の収穫のＣ２（６．０８ｇ）を得た。全収率: 51.83 g, 170.9 mmol, 85%. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)
δ1.41 (s, 9H), 3.06-3.15 (m, 2H), 4.28-4.37 (m, 1H),
7.30 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.43-7.49 (m, 3H), 10.76 (s, 1H).
【００７５】
ステップ３．実施例１の合成。機械式撹拌機を備え付けた２リットル容三口丸底フラスコに、ＨＣｌの２−プロパノール（５〜６Ｍ、１．０５Ｌ）溶液を装入した。フラスコにＣ２（５３．１３ｇ、１７５．２ｍｍｏｌ）を１回で加え、混合物を２０℃で撹拌した。１．５時間後、濃厚な懸濁液を濾過し、固体を２−プロパノール（１００ｍＬ）およびジエチルエーテル（２×１００ｍＬ）で洗浄し、次いで３０℃で１６時間真空乾燥して、実施例１を白色の固体として得た。収率: 41 g, 170 mmol, 97%. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)
δ3.21 (dd, J=15.2, 14.6 Hz, 1H), 3.33 (dd, J=15.6, 6.5
Hz, 1H, 推定; 溶媒ピークにより一部不明確),
4.47 (dd, J=14.5, 6.5 Hz, 1H), 7.56-7.58 (m, 2H), 7.59-7.60 (m, 1H), 8.75 (br
s, 3H), 11.16 (br s, 1H). ＨＰＬＣ保持時間：１．３４７分（カラム：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｔｌａｎｔｉｓ  Ｔ３、３．０×７５ｍｍ、３μｍ、移動相Ａ：０．０５％のトリフルオロ酢酸水溶液、移動相Ｂ：０．０５％のトリフルオロ酢酸アセトニトリル溶液、勾配：１０分かけて５％〜９５％のＢ、流量：１．２ｍＬ／分）。
【００７６】
（実施例２）
（３Ｓ）−３−アミノ−１−ヒドロキシ−７−［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチルエトキシ］−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン、ＨＣｌ塩（２）
【００７７】
【化８】
0005868994.tif 000009
ステップ１．  ４−ブロモ−３−ニトロフェノール（Ｃ３）の合成。温度計、均圧滴下漏斗、および排気スクラバー（１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液）を備え付けた５リットル容三口平底フラスコにおいて、１−ブロモ−４−メトキシ−２−ニトロベンゼン（１７０ｇ、０．７３ｍｏｌ）をジクロロメタン（１．５Ｌ）に溶解させた。溶液をアルゴン中で−７８℃に冷却した。三臭化ホウ素（１７６ｍＬ、１．８６ｍｏｌ）を冷ジクロロメタン（１．６Ｌ、０℃）に溶解させ、これを、冷却した反応液に、滴下漏斗で２時間かけて加えた。発熱（ｅｘｏｔｈｅｒｍ）によって温度が−５５℃となった。加え終えた時点で、冷却浴を取り外し、反応液を室温に温め、４８時間撹拌した。
【００７８】
内部温度を２０℃未満に保ちながら、反応混合物を、滴下漏斗で４時間かけて冷水（２．０Ｌ、氷／水浴）に加えた。スクラバー（１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液）を使用して、生成したＨＢｒガスを放出させないようにした。失活させた混合物を室温でさらに１時間撹拌し、この時点で相を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２．０Ｌ）で抽出し、有機層（ジクロロメタンおよびＥｔＯＡｃ）を合わせて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２×１．２Ｌ、下相が有機層となった）、次いでブライン（１Ｌ、下相が水層となった）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をジクロロメタン（３２０ｍＬ）に懸濁させ、終夜スラリー化し、固体を濾過によって収集した。固体を水酸化ナトリウム水溶液（２．０Ｍ、５００ｍＬ）に溶解させ、ジクロロメタン（５００ｍＬ）で抽出した。次いでジクロロメタン層を水酸化ナトリウム水溶液（２５０ｍＬ）で抽出し、水層を合わせてＨＣｌ水溶液（１．０Ｍ、７９０ｍＬ）でｐＨ２に酸性化した。沈殿したフェノールを濾過し、４０℃で１８時間真空乾燥して、Ｃ３を固体として得た。収率: 125.5 g, 0.5757 mol, 79%. 1H NMR (400 MHz, CD3OD)
δ6.95 (dd, J=8.8, 2.9 Hz, 1H), 7.24 (d, J=2.9 Hz, 1H),
7.57 (d, J=8.8 Hz, 1H).
【００７９】
ステップ２．  （４−ブロモ−３−ニトロフェノキシ）（トリイソプロピル）シラン（Ｃ４）の合成。Ｃ３（１６９ｇ、０．７７５ｍｏｌ）およびイミダゾール（１０５ｇ、１．５４ｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（８４５ｍＬ）に溶かした溶液に、塩化トリイソプロピルシリル（１８２ｍＬ、０．８５０ｍｏｌ）を１回で加えた。反応液を室温で１８時間撹拌し、次いで水（２Ｌ）中に注いだ。ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１Ｌ）で抽出した後、有機相を水（３×２Ｌ）、次いでブライン（１Ｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮して油状物とした。これをシリカゲルでのクロマトグラフィー（勾配：０％〜５％のＥｔＯＡｃヘプタン溶液）によって精製して、Ｃ４を得た。収率: 279 g, 0.745 mol, 96%. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δ1.11 (d, J=7.1 Hz, 18H), 1.22-1.33 (m, 3H), 6.95 (dd,
J=8.8, 2.9 Hz, 1H), 7.35 (d, J=2.9 Hz, 1H), 7.55 (d, J=8.7 Hz, 1H).
【００８０】
ステップ３．メチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−ニトロ−Ｏ−（トリイソプロピルシリル）−Ｌ−チロシネート（Ｃ５）の合成。以下のジンケート生成は、この反応の間に発熱が認められたため、２回分にして実施した。アルゴン中にて、側面がまっすぐな容器に入った亜鉛（１０．５ｇ、０．１６１ｍｏｌ）に、脱気した乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３２ｍＬ）を加えた。塩化トリメチルシリル（４．０５ｍＬ、３１．９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を３０分間激しく撹拌し、この時点で撹拌を止め、亜鉛を沈降させた。上清をアルゴン流中でデカントし、亜鉛にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）を加えた。混合物を３０秒間撹拌し、亜鉛を沈降させ、上清を前のように除去した。この手順をもう２回繰り返した。この活性亜鉛に、メチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−ヨード−Ｌ−アラニネート（Ｓ．ｖａｎ  Ｚｕｔｐｈｅｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２００７、４８、２８５７〜２８５９に従って調製することができる）（２２．８６ｇ、６９．４６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５５ｍＬ）溶液を加え、混合物を激しく撹拌した。発熱が収まった後（発熱は氷浴で制御した）、反応液をさらに３０分間撹拌し、この時点で撹拌を止め、亜鉛を沈降させた。両方のジンケート生成からの上清を、アルゴン流中にて、汚れていない反応フラスコにデカントした。ジンケートに、Ｃ４（４０．０ｇ、１０６．９ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）溶液、酢酸パラジウム（ＩＩ）（１．２０ｇ、５．３４ｍｍｏｌ）、および２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（ＸＰｈｏｓ）（５．１０ｇ、１０．７０ｍｍｏｌ）を順次加えた。反応液を４０℃で１８時間加熱し、次いで水（４００ｍＬ）中に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）を加え、得られる混合物をＣｅｌｉｔｅパッドで濾過し、濾過ケークをＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で洗浄した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせてブライン（５×４００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（勾配：２％〜１０％のＥｔＯＡｃヘプタン溶液）を使用して精製すると、Ｃ５が淡橙色の油状物として得られ、油状物は、静置すると凝固した。収率: 44.3 g, 89.2 mmol, 83%. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δ1.10 (d, J=7.2 Hz, 18H), 1.23-1.31 (m, 3H), 1.37 (s,
9H), 3.19 (dd, J=13.5, 8.2 Hz, 1H), 3.41 (dd, J=13.7, 5.8 Hz, 1H), 3.71 (s,
3H), 4.56-4.66 (m, 1H), 5.18 (br d, J=8 Hz, 1H), 7.05 (dd, J=8.4, 2.6 Hz, 1H),
7.21 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.43-7.47 (m, 1H).
【００８１】
ステップ４．  メチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−ニトロ−Ｌ−チロシネート（Ｃ６）の合成。アルゴン中にて、Ｃ５（１０３ｇ、２０７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１．０Ｌ）溶液に、フッ化テトラブチルアンモニウム（１Ｍテトラヒドロフラン溶液、２２８．１ｍＬ、２２８．１ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を１５分間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、次いでＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）と１０％クエン酸水溶液（４００ｍＬ）とに分配した。層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて１０％クエン酸水溶液（３００ｍＬ）、次いで水（３００ｍＬ）、ブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して褐色の油状物を得、これをヘプタンで摩砕した。得られる固体を濾過によって収集し、ヘプタンで洗浄し、７０℃で真空乾燥して、Ｃ６をベージュ色の固体として得た。収率: 50.6 g, 149 mmol, 72% 収率. LCMS m/z 339.1
(M-1). 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ1.35
(s, 9H), 2.99 (dd, J=13.7, 9.6 Hz, 1H), 3.43 (dd, J=13.7, 5.6 Hz, 1H), 3.69 (s,
3H), 4.46-4.53 (m, 1H), 6.98-7.0 (m, 1H), 7.01 (dd, J=8.4, 2.6 Hz, 1H), 7.21
(d, J=8.5 Hz, 1H), 7.37 (d, J=2.5 Hz, 1H).
【００８２】
ステップ５．  メチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｏ−［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチルエチル］−２−ニトロ−Ｌ−チロシネート（Ｃ７）の合成。Ｃ６（１０８ｇ、０．３１７ｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（１２３ｇ、０．４６９ｍｏｌ）、および（２Ｒ）−１−メトキシプロパン−２−オール（４２．１ｇ、０．４６７ｍｏｌ）からなる冷却（氷／水浴）した溶液に、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（９２ｍＬ、０．４６７ｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５００ｍＬ）溶液を３０分かけて加えた。発熱が認められ、これにより、反応温度が０℃から２５℃に上昇した。反応液を室温で１８時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）と水（５００ｍＬ）とに分配した。水層をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせてブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をジエチルエーテルとヘプタンの混合物（１：１、７５０ｍＬ）に懸濁させ、１８時間静置した。固体（トリフェニルホスフィンオキシドと還元されたアゾジカルボン酸ジイソプロピルの混合物）を濾過によって除去し、濾液を真空中で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（勾配：０％〜４０％のＥｔＯＡｃヘプタン溶液）によって精製すると、還元されたアゾジカルボン酸ジイソプロピルが混入したＣ７（１４４ｇ）が得られた。この混合物は、反応に悪影響を及ぼすことなく次のステップで使用することができた。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ1.32 (d, J=6.3 Hz, 3H), 1.37 (br s, 9H), 3.17 (dd, J=13.7, 8.2 Hz,
1H), 3.41 (s, 3H), 3.44 (dd, J=13.7, 5.5 Hz, 1H), 3.51 (dd, ABXパターンの半分, J=10.3, 4.0 Hz, 1H), 3.58 (dd, ABXパターンの半分,
J=10.3, 6.2 Hz, 1H), 3.73 (s, 3H), 4.54-4.66 (m, 2H), 5.19 (br d, J=8.4 Hz,
1H), 7.12 (dd, J=8.6, 2.6 Hz, 1H), 7.25 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.50-7.53 (m, 1H).
【００８３】
ステップ６．  ｔｅｒｔ−ブチル｛（３Ｓ）−１−ヒドロキシ−７−［（１Ｓ）−２−メトキシ−１−メチルエトキシ］−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−３−イル｝カルバメート（Ｃ８）の合成。Ｃ７（１５４ｇ、３７３ｍｍｏｌ）をピリジン（７７０ｍＬ）に溶解させ、２つの１リットル容オートクレーブに分けた。各反応液に、白金炭素（３％、７．２８ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）を、水（２０ｍＬ）でペーストにしたものとして加えた。各オートクレーブに、１６バールの水素を装入し、反応液を室温で６時間撹拌しておき、発熱によって温度が２７℃に上昇した。薄層クロマトグラフィー（溶離液：１：１のＥｔＯＡｃ／ヘプタン）により、出発材料の存在が示されたので、両方のオートクレーブに、１６バールの水素を装入し直し、室温で１８時間撹拌した。Ｃｅｌｉｔｅを介した濾過によって触媒を除去し、フィルターパッドをＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で洗浄し、濾液を減圧下で濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（１Ｌ）に溶解させ、１０％クエン酸水溶液（２×１Ｌ）、次いで水（５００ｍＬ）、ブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。残渣をジエチルエーテルおよびヘプタンで摩砕して、Ｃ８（８８．１１ｇ）を得た。濾液から２回目の収穫のＣ８を単離した。合計収率: 99.83 g, 272.5 mmol, 73%. 1H NMR (300 MHz, CDCl3)
δ1.32 (d, J=6.3 Hz, 3H), 1.47 (s, 9H), 2.79 (br dd,
J=14, 14 Hz, 1H), 3.26-3.38 (br m, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.50 (dd, ABXパターンの半分, J=10.2, 4.2 Hz, 1H), 3.60 (dd, ABXパターンの半分,
J=10.2, 6.0 Hz, 1H), 4.41-4.62 (m, 2H), 5.45 (br d, J=5 Hz, 1H), 6.64 (dd,
J=8.3, 2.5 Hz, 1H), 6.97 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.07 (d, J=8.2 Hz, 1H), 8.79 (br s,
1H).
【００８４】
追加のＣ８は、最終濾液から、シリカゲルクロマトグラフィー（勾配：０％〜５０％のＥｔＯＡｃヘプタン溶液）にかけた後、２−プロパノール／ヘプタンで摩砕して単離することができた。
【００８５】
ステップ７．実施例２の合成。Ｃ８（１５２ｇ、４１５ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌのジエチルエーテル溶液（２Ｍ、２．５Ｌ、５ｍｏｌ）に溶解させ、気体発生が止んでしまうまで１８時間撹拌した。混合物を濾過して固体を得、これをジエチルエーテル（４Ｌ）にスラリー化し、濾過し、次いで終夜５０℃で真空乾燥した。乳鉢と乳棒を使用して固体をすりつぶし、次いでさらに５０℃で１８時間真空乾燥して、実施例２を得た。収率: 121.65 g, 401.8 mmol, 97%. LCMS m/z 267.2 (M+1). 1H NMR
(400 MHz, D2O) δ1.21 (d, J=6.3 Hz, 3H), 3.12
(dd, ABXパターンの半分, J=14.5, 14.5 Hz, 1H), 3.24 (dd, ABXパターンの半分, J=14.8, 6.6 Hz, 1H), 3.35 (s, 3H), 3.57 (dd, ABXパターンの半分, J=11.1, 6.5 Hz, 1H), 3.61 (dd, ABXパターンの半分,
J=11.1, 3.3 Hz, 1H), 4.37 (dd, J=14.5, 6.6 Hz, 1H), 4.63-4.71 (m, 1H), 6.76
(dd, J=8.4, 2.4 Hz, 1H), 6.98 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.21 (d, J=8.4 Hz, 1H).
【００８６】
（実施例３）
（３Ｓ）−３−アミノ−１−ヒドロキシ−７−（２−メトキシエトキシ）−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン、ＨＣｌ塩（３）
【００８７】
【化９】
0005868994.tif 000010
ステップ１．  メチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｏ−（２−メトキシエチル）−２−ニトロ−Ｌ−チロシネート（Ｃ９）の合成。Ｃ６（４８ｇ、１４１ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（１１５ｇ、３５３ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２４０ｍＬ）に混ぜた混合物に、１−ブロモ−２−メトキシエタン（２９ｇ、２０９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を５時間４０℃に加熱し、室温で１８時間撹拌し、水（３００ｍＬ）で希釈した。ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１５０ｍＬ）で抽出した後、有機層を水（３×３００ｍＬ）、ブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮して、橙色の油状物を得、油状物は静置すると凝固した。ヘプタン（１００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）で摩砕すると、Ｃ９が固体として得られた。濾液から２回目の収穫のＣ９を単離した。母液を減圧下で濃縮し、２−プロパノール／ヘプタンで摩砕して、３回目の収穫のＣ９を得た。総収率: 41.5 g, 104 mmol, 74%. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δ1.38 (s, 9H), 3.20 (dd, J=13.7, 8.2 Hz, 1H), 3.41-3.47
(m, 1H), 3.46 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.76-3.79 (m, 2H), 4.15-4.19 (m, 2H),
4.58-4.67 (m, 1H), 5.17 (br d, J=8 Hz, 1H), 7.14 (dd, J=8.6, 2.8 Hz, 1H), 7.27
(d, J=8.5 Hz, 1H), 7.50-7.54 (m, 1H).
【００８８】
ステップ２．  ｔｅｒｔ−ブチル［（３Ｓ）−１−ヒドロキシ−７−（２−メトキシエトキシ）−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−３−イル］カルバメート（Ｃ１０）の合成。Ｃ９（４５ｇ、１１３ｍｍｏｌ）のピリジン（２２５ｍＬ）溶液に、白金炭素（５％、４．５０ｇ、１．１５ｍｍｏｌ）の水ペーストを加え、反応液を室温にて１８時間１５０ｐｓｉで水素化した。Ｃｅｌｉｔｅを介した濾過によって触媒を除去し、フィルターパッドをＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で洗浄し、濾液を真空中で濃縮して、油状物を得た。ヘプタン（３×２００ｍＬ）を加えた後、減圧下で溶媒を除去して、残存するピリジンを飛ばした。得られる固体を５％の２−プロパノールヘプタン溶液で摩砕し、濾過すると、Ｃ１０がオフホワイト色の固体として得られた。濾液をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、１０％クエン酸水溶液（５０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮して、淡褐色の固体を得た。ＥｔＯＡｃ／ヘプタンから摩砕すると、別の収穫のＣ１０が得られた。総収率: 27.52 g, 78.10 mmol, 69%. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δ1.45 (s, 9H), 2.79 (br dd, J=14, 14 Hz, 1H), 3.25-3.36
(br m, 1H), 3.47 (s, 3H), 3.74-3.78 (m, 2H), 4.11-4.16 (m, 2H), 4.41-4.51 (br
m, 1H), 5.48 (d, J=6.0 Hz, 1H), 6.63 (dd, J=8.3, 2.5 Hz, 1H), 6.98 (d, J=2.4
Hz, 1H), 7.06 (d, J=8.4 Hz, 1H), 9.10 (br s, 1H).
【００８９】
ステップ３．実施例３の合成。Ｃ１０（２９ｇ、８２ｍｍｏｌ）をＨＣｌの１，４−ジオキサン溶液（４Ｍ、３１０ｍＬ、１．２４ｍｏｌ）と合わせ、微細な沈殿が生成し、気体発生が止んでしまうまで（約３時間）撹拌した。固体を濾過によって収集し、ジエチルエーテル（１５０ｍＬ）にスラリー化し、濾過し、５０℃で１８時間真空乾燥した。得られる固体を、１時間還流メタノール（３００ｍＬ）にスラリー化し、濾過し、濾過ケークをジエチルエーテルで洗浄した。固体を５０℃で１８時間真空乾燥して、実施例３を得た。収率: 23.3 g, 80.7 mmol, 98%. LCMS m/z 253.1 (M+1). 1H NMR
(400 MHz, D2O) δ3.10 (br dd, ABXパターンの半分, J=14.7, 14.7 Hz, 1H), 3.22 (br dd, ABXパターンの半分, J=15, 6.5 Hz, 1H), 3.37 (s, 3H), 3.74-3.79 (m, 2H), 4.13-4.18 (m,
2H), 4.31-4.38 (m, 1H), 6.73 (dd, J=8.4, 2.5 Hz, 1H), 6.97 (d, J=2.6 Hz, 1H),
7.21 (d, J=8.4 Hz, 1H).
【００９０】
（実施例４）
（３Ｓ）−３−アミノ−１−ヒドロキシ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン（４）
【００９１】
【化１０】
0005868994.tif 000011
Ｌ−２−ニトロフェニルアラニン（Ｃ１１）（４１９．６ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）をメタノール（２３．８ｍＬ）および水（２４０μＬ）に溶解させた。溶解性を促進するために、濃ＨＣｌ水溶液（２〜４滴）を加えた。白金炭素（４２ｍｇ）を加え、反応液をＰａｒｒシェーカーにおいて１時間１０ｐｓｉで水素化し、その後、反応液をＣｅｌｉｔｅで濾過した。触媒を１Ｎの水酸化アンモニウムメタノール溶液、次いでメタノールで洗浄した。濾液を濃縮して粗生成物を得、引き続いて、これに、メタノール／ジクロロメタン溶液を使用して材料を溶解させながら、最小量のシリカを乾燥充填した（ｄｒｙ  ｐａｃｋｅｄ）。シリカゲルクロマトグラフィー（勾配：０％〜２０％のメタノール（１％水酸化アンモニウム含有）ジクロロメタン溶液）を使用して精製すると、実施例４が固体（２０７ｍｇ、５８％）として得られた。APCI m/z 179.1 (M+1). 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 2.88 (dd, J=14, 15 Hz, 1H), 3.09 (dd, J=15.3, 6.2 Hz, 1H), 3.67
(dd, J=13.6, 6.1 Hz, 1H,) 7.06 (ddd, J=7.2, 7.2, 1.7 Hz, 1H), 7.23 (br d, J=7.5
Hz, 1H), 7.27-7.34 (m, 2H).
【００９２】
（実施例５）
（３Ｓ）−３−アミノ−１−ヒドロキシ−７−イソプロポキシ−３，４−ジヒドロキノリン−２（１Ｈ）−オン、ＨＣｌ塩（５）
【００９３】
【化１１】
0005868994.tif 000012
ステップ１．  エチル４−イソプロポキシ−２−ニトロベンゾエート（Ｃ１２）の合成。エチル４−ヒドロキシ−２−ニトロベンゾエート（１．０２ｇ、４．８３ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１．３ｇ、９．４ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に混ぜた混合物を、２−ヨードプロパン（０．５４ｍＬ、５．４ｍｍｏｌ）で処理し、反応混合物を１８時間撹拌した。反応液を水中に注ぎ、１Ｎ  ＨＣｌ水溶液で酸性化した。ＥｔＯＡｃで抽出した後、有機層を合わせて水、次いでブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、Ｃ１２を油状物として得た。収率: 1.17 g, 4.62 mmol, 96%. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δ1.34 (t, J=7.1 Hz, 3H), 1.38 (d, J=6.0 Hz, 6H), 4.34 (q,
J=7.1 Hz, 2H), 4.64 (七重線, J=6.0 Hz, 1H), 7.06 (dd,
J=8.7, 2.5 Hz, 1H), 7.20 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.77 (d, J=8.7 Hz, 1H).
【００９４】
ステップ２．  ４−イソプロポキシ−２−ニトロ安息香酸（Ｃ１３）の合成。Ｃ１２（１．１７ｇ、４．６２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）およびメタノール（１０ｍＬ）に溶かした溶液に、水酸化リチウム水溶液（１Ｍ、６．９３ｍＬ、６．９３ｍｍｏｌ）を加え、反応液を室温で３時間撹拌した。次いで反応液を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液中に注ぎ、ジエチルエーテルで抽出した。有機層を合わせて水、次いでブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、Ｃ１３を橙色の固体として得た。収率: 847 mg, 3.76 mmol, 81%. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δ1.40 (d, J=6.0 Hz, 6H), 4.67 (七重線, J=6.0 Hz, 1H), 7.07 (dd, J=8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.12 (d, J=2.4 Hz,
1H), 7.94 (d, J=8.8 Hz, 1H).
【００９５】
ステップ３．  （４−イソプロポキシ−２−ニトロフェニル）メタノール（Ｃ１４）の合成。Ｃ１３（８４５ｍｇ、３．７５ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１５ｍＬ）溶液に、ボラン−テトラヒドロフラン錯体（１Ｍテトラヒドロフラン溶液、１５．０ｍＬ、１５．０ｍｍｏｌ）を加え、反応液を５０℃で１８時間加熱した。水（７５ｍＬ）に反応液をゆっくりと加え、次いでＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を合わせて０．５Ｎ  ＨＣｌ水溶液、水、ブラインで洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。Ｃ１４が黄色の油状物として得られた。収率: 550 mg, 2.60 mmol, 69%. LCMS m/z 210.1 (M-1). 1H NMR
(400 MHz, CDCl3) δ1.38 (d, J=6.0 Hz, 6H),
2.59 (br t, J=6 Hz, 1H), 4.63 (七重線, J=6.0 Hz, 1H), 4.85
(br d, J=5.9 Hz, 2H), 7.16 (dd, J=8.5, 2.7 Hz, 1H), 7.56 (br d, J=8.5 Hz, 1H),
7.59 (d, J=2.6 Hz, 1H).
【００９６】
ステップ４．  １−（ブロモメチル）−４−イソプロポキシ−２−ニトロベンゼン（Ｃ１５）の合成。Ｃ１４（５５０ｍｇ、２．６０ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（５０ｍＬ）溶液を０℃に冷却し、三臭化リン（０．２４５ｍＬ、２．６１ｍｍｏｌ）を滴下して処理した。反応液を０℃で２．５時間、次いで室温で３時間撹拌した。上清をデカントして、フラスコの底にある不溶性の油状物と分け、上清を追加のジエチルエーテルで希釈し、水、次いでブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（勾配：１０％〜２０％のＥｔＯＡｃヘプタン溶液）によって精製して、Ｃ１５を無色の油状物として得た。収率: 245 mg, 0.894 mmol, 34%. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δ1.38 (d, J=6.0 Hz, 6H), 4.62 (七重線, J=6.0 Hz, 1H), 4.80 (s, 2H), 7.09 (dd, J=8.5, 2.6 Hz, 1H), 7.44
(d, J=8.6 Hz, 1H), 7.54 (d, J=2.6 Hz, 1H).
【００９７】
ステップ５．  ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（ジフェニルメチレン）−Ｏ−イソプロピル−２−ニトロ−Ｌ−チロシネート（Ｃ１６）の合成。ジクロロメタン（５ｍＬ）中で、Ｃ１５（２４５ｍｇ、０．８９４ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（ジフェニルメチレン）グリシネート（２９０ｍｇ、０．９８２ｍｍｏｌ）、および臭化Ｏ−アリル−Ｎ−（９−アントラセニルメチル）シンコニジニウム（５３．９ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）を合わせ、−３０℃に冷却した（Ｅ．Ｊ．Ｃｏｒｅｙら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９７、１１９、１２４１４〜１２４１５を参照されたい）。水酸化セシウム（２２５ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）を加え、反応液を−３０℃で１８時間撹拌し、この時点でそれを飽和塩化アンモニウム水溶液で失活させ、ジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせて水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過した後、有機溶液を真空中で濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー（勾配：１０％〜２０％のＥｔＯＡｃヘプタン溶液）によって精製して、Ｃ１６を淡黄色の油状物として得た。収率: 252 mg, 0.516 mmol, 58%. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δ1.33 (d, J=6.0 Hz, 3H), 1.34 (d, J=6.0 Hz, 3H), 1.44
(s, 9H), 3.32 (dd, J=13.5, 9.2 Hz, 1H), 3.61 (dd, J=13.6, 4.1 Hz, 1H), 4.30
(dd, J=9.2, 4.1 Hz, 1H), 4.55 (七重線, J=6.0 Hz, 1H), 6.67
(br d, J=6.9 Hz, 2H), 6.96 (dd, J=8.5, 2.7 Hz, 1H), 7.24-7.40 (m, 8H),
7.57-7.60 (m, 2H).
【００９８】
ステップ６．  Ｏ−イソプロピル−２−ニトロ−Ｌ−チロシン、ＨＣｌ塩（Ｃ１７）の合成。Ｃ１６（２５２ｍｇ、０．５１６ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５ｍＬ）溶液を、ＨＣｌ水溶液（６Ｍ、１．８３ｍＬ、１１．０ｍｍｏｌ）で処理した。１８時間撹拌した後、反応液を真空中で濃縮した。残渣をジエチルエーテルでスラリー化し、濾過して、Ｃ１７を無色の固体として得た。収率: 150 mg, 0.492 mmol, 95%. LCMS m/z 269.2 (M+1). 1H NMR
(400 MHz, CD3OD),  特徴的ピーク: δ1.35 (d, J=6.0 Hz, 6H), 3.57 (dd, J=14.1, 7.0 Hz, 1H), 4.29 (dd,
J=7.8, 7.1 Hz, 1H), 4.71 (七重線, J=6.0 Hz, 1H), 7.25 (dd,
J=8.5, 2.7 Hz, 1H), 7.40 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.60 (d, J=2.6 Hz, 1H).
【００９９】
ステップ７．  ｔｅｒｔ−ブチル｛（３Ｓ）−１−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）オキシ］−７−イソプロポキシ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−３−イル｝カルバメート（Ｃ１８）の合成。Ｃ１７（１５０ｍｇ、０．４９２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１０ｍＬ）と混合し、得られる溶液を０℃に冷却した。これに、塩化スズ（ＩＩ）（９７％、４９４ｍｇ、２．５３ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム三水和物（９９％、６９４ｍｇ、５．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応液を０℃で５時間撹拌した。この時点で、トリエチルアミン（０．７０４ｍＬ、５．０５ｍｍｏｌ）および二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２２０ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１８時間撹拌した。真空中で溶媒を除去し、残渣をＥｔＯＡｃでスラリー化した。混合物を濾過し、不溶性の固体をＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を合わせて水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（勾配：１０％〜３０％のＥｔＯＡｃヘプタン溶液、１％のトリエチルアミンを加えたもの）を使用して精製して、Ｃ１８を無色の油状物として得た。収率: 92 mg, 0.21 mmol, 43%. LCMS m/z 437.2 (M+1). 1H NMR
(400 MHz, CDCl3) δ1.33 (d, J=6 Hz, 6H), 1.47
(s, 9H), 1.56 (s, 9H), 2.81-2.95 (m, 1H), 3.32-3.44 (m, 1H), 4.46-4.57 (m, 2H),
5.55 (br s, 1H), 6.60 (d, J=8 Hz, 1H), 7.11 (d, J=8 Hz, 1H), 7.27 (s, 1H).
【０１００】
ステップ８．実施例５の合成。Ｃ１８（９２ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）のメタノール（５ｍＬ）溶液を、濃ＨＣｌ水溶液（１２Ｍ、０．１５８ｍＬ、１．９０ｍｍｏｌ）で処理し、１時間５０℃に加熱した。反応混合物を真空中で濃縮し、得られる固体をジエチルエーテルにスラリー化し、次いで濾過によって収集した。固体をジエチルエーテルで洗浄して、実施例５を得た。収率: 49 mg, 0.18 mmol, 86%. LCMS m/z 237.2 (M+1). 1H NMR
(400 MHz, CD3OD) δ1.32 (d, J=6.0 Hz, 6H),
3.06 (ddd, J=14.6, 14.6, 1.1 Hz, 1H), 3.19 (dd, J=14.6, 6.5 Hz, 1H), 4.29 (dd,
J=14.6, 6.5 Hz, 1H), 4.61 (七重線, J=6.0 Hz, 1H), 6.67
(dd, J=8.3, 2.5 Hz, 1H), 6.93 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.18 (br d, J=8.3 Hz, 1H).
【０１０１】
（実施例６）
３−アミノ−１−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−８−カルボニトリル、ＨＣｌ塩（６）
【０１０２】
【化１２】
0005868994.tif 000013
ステップ１．  ３−メチル−２−ニトロベンズアミド（Ｃ１９）の合成。３−メチル−２−ニトロ安息香酸（５０．００ｇ、２７６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５００ｍＬ）およびトリエチルアミン（４１．８３ｇ、４１４ｍｍｏｌ）に溶かした溶液を、０℃に冷却した。クロロギ酸イソプロピル（５０．７４ｇ、４１４ｍｍｏｌ）を滴下し、反応液を０℃で１時間撹拌した。次いで、反応液に濃水酸化アンモニウム水溶液（３００ｍＬ）を加え、これを０℃でさらに３０分間撹拌した。濾過すると、Ｃ１９が白色の固体として得られた。収率: 41.6 g, 231 mmol, 84%. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)
δ2.28 (s, 3H), 7.53-7.61 (m, 3H), 7.71 (br s, 1H), 8.21
(br s, 1H).
【０１０３】
ステップ２．  ３−メチル−２−ニトロベンゾニトリル（Ｃ２０）の合成。Ｃ１９（４１．６０ｇ、２３１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４００ｍＬ）溶液を、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸無水物（９６．６ｇ、４６０ｍｍｏｌ）を滴下し、得られる混合物を０℃で１時間撹拌し、次いで水（４００ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：８：１、次いで４：１の石油エーテル／酢酸エチル）によって精製して、Ｃ２０を黄色の固体として得た。収率: 25 g, 150 mmol, 65%. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δ2.42 (s, 3H), 7.49-7.56 (m, 2H), 7.61-7.63 (m, 1H).
【０１０４】
ステップ３．  ３−（ブロモメチル）−２−ニトロベンゾニトリル（Ｃ２１）の合成。Ｃ２０（１５．００ｇ、９２．５１ｍｍｏｌ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（３２．９３ｇ、１８５．０ｍｍｏｌ）、および過酸化ベンゾイル（３．３６ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）を四塩化炭素（２００ｍＬ）に混ぜた混合物を、還流温度で４８時間加熱した。混合物を水（１００ｍＬ）で洗浄し、有機層を乾燥させ、濾過し、シリカゲルカラムで精製して（溶離液：２：１〜１：１の石油エーテル／ジクロロメタン）、Ｃ２１をオフホワイト色の固体として得た。収率: 6.26 g, 26.0 mmol, 28%. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δ4.60 (s, 2H), 7.67-7.71 (m, 1H), 7.80-7.85 (m, 2H).
【０１０５】
ステップ４．  エチル３−シアノ−Ｎ−（ジフェニルメチレン）−２−ニトロフェニルアラニネート（Ｃ２２）の合成。エチルＮ−（ジフェニルメチレン）グリシネート（５．００ｇ、１８．７ｍｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）に溶かした０℃の溶液に、水素化ナトリウム（油中６０％、９００ｍｇ、２２．４ｍｍｏｌ）を慎重に加え、混合物を０℃で１時間撹拌した。冷混合物にＣ２１（４．５１ｇ、１８．７ｍｍｏｌ）を１回で加え、反応液を０℃で３０分間撹拌した。反応液を水（１００ｍＬ）で失活させ、混合物を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせてブライン（２×５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：６：１〜４：１の石油エーテル／酢酸エチル）によって精製すると、Ｃ２２が褐色の油状物として得られた。収率: 4.5 g, 10.5 mmol, 56%. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δ1.16-1.20 (t, 3H), 3.24 -3.44 (m, 2H), 4.02-4.19 (m,
2H), 4.31-4.37 (m, 1H), 6.59-6.69 (m, 2H), 7.24-7.38 (m, 6H), 7.39-7.42 (m,
1H), 7.49-7.51 (d, 2H), 7.56-7.71 (m, 2H).
【０１０６】
ステップ５．  ３−シアノ−２−ニトロフェニルアラニン、ＨＣｌ塩（Ｃ２３）の合成。Ｃ２２（２．００ｇ、４．６８ｍｍｏｌ）に、濃ＨＣｌ水溶液（２０ｍＬ）を室温で加え、反応液を５０℃で４２時間加熱した。得られる混合物を真空中で濃縮し、残渣を酢酸エチル（２５ｍＬ）で洗浄し、濾過して、Ｃ２３を黄色の固体として得た。収率：１．０８ｇ、３．９８ｍｍｏｌ、８５％。
【０１０７】
ステップ６．  ｔｅｒｔ−ブチル｛１−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）オキシ］−８−シアノ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−３−イル｝カルバメート（Ｃ２４）の合成。実施例５におけるＣ１７をＣ１８に変形する一般手順に従って、化合物Ｃ２３をＣ２４に変換した。Ｃ２４は、黄色の固体として得られた。収率: 300 mg, 0.744 mmol, 19%. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δ1.39-1.40 (m, 9H), 1.49-1.55 (m, 9H), 2.87-2.98 (br m,
1H), 3.30-3.51 (br m, 1H), 4.40-4.60 (br m, 1H), 5.55 (br m, 1H), 7.09-7.14 (m,
1H), 7.37-7.39 (m, 1H), 7.52-7.54 (d, 1H).
【０１０８】
ステップ７．  ｔｅｒｔ−ブチル（８−シアノ−１−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−３−イル）カルバメート（Ｃ２５）の合成。Ｃ２４（２１０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（５ｍＬ）および水（５ｍＬ）に溶かした溶液に、酢酸（０．２ｍＬ）を加え、反応液を５０℃で５時間撹拌した。真空中で濃縮した後、水性残渣を酢酸エチル（１０ｍＬ）で抽出した。有機層を乾燥させ、濾過し、分取薄層クロマトグラフィーによって精製して、Ｃ２５を黄色の固体として得た。収率: 140 mg, 0.46 mmol, 88%. 1H NMR (400 MHz, CDCl3)
δ1.39 (s, 9H), 2.82-2.89 (m, 1H), 3.30-3.38 (br m, 1H),
4.44-4.47 (br m, 1H), 5.43 (m, 1H), 7.05-7.12 (m, 1H), 7.34-7.36 (d, 1H),
7.54-7.56 (d, 1H).
【０１０９】
ステップ８．実施例６の合成。Ｃ２５（１４０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）をＨＣｌの１，４−ジオキサン溶液（６Ｎ、１５ｍＬ）で処理し、反応混合物を室温で６時間撹拌した。ジエチルエーテル（３０ｍＬ）をゆっくりと加え、混合物を３０分間撹拌し、次いで１時間静置した。沈殿を濾過によって収集して、実施例６をオフホワイト色の固体として得た。収率: 48 mg, 0.20 mmol, 43%. LCMS m/z 204.4 (M+1). 1H NMR
(400 MHz, DMSO-d6) δ3.16 (dd, J=15, 15 Hz,
1H), 3.27 (dd, J=15, 6 Hz, 1H), 4.47 (dd, J=14.6, 6.3 Hz, 1H), 7.23 (dd, J=7.6,
7.6 Hz, 1H), 7.65 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.74 (d, J=7.7 Hz, 1H), 8.76 (br s, 3H),
11.5 (v br s, 1H).
【０１１０】
ヒトＫＡＴ  ＩＩ阻害スペクトルアッセイ
Ｌ−キヌレニン（ＫＹＮ）基質がヒトＫＡＴ  ＩＩ（ｈＫＡＴ  ＩＩ）酵素によってＫＹＮＡに変換されるにつれて、３７０ｎｍでの吸光度（ＯＤ３７０）が低下することに基づき、キヌレン酸（ＫＹＮＡ）の生成を間接的に評価する。したがって、阻害剤は、ＯＤ３７０の低下を阻害することになる。
【０１１１】
以下の試薬をＣｏｓｔａｒ  ３８４ウェル黒色プレートに入れることにより、プロトコールを実施した（合計アッセイ体積３０μＬ／ウェル）。
・１０μＬの３倍濃縮化合物、
・１０μＬの３倍濃縮基質ミックス（ＢＧＧ（Ｓｉｇｍａ  Ｇ−５００９）、３ｍＭのＬ−キヌレニンを含有する１５０ｍＭのＴｒｉｓ  Ａｃｅｔａｔｅ（Ｓｉｇｍａ  Ｋ３７５０）、３ｍＭのα−ケトグルタル酸を含有する１５０ｍＭのＴｒｉｓ  Ａｃｅｔａｔｅ（Ｓｉｇｍａ  Ｋ２０１０）、および２１０μＭのピリドキサール５−リン酸（ＰＬＰ）を含有する１５０ｍＭのＴｒｉｓ  Ａｃｅｔａｔｅ（Ｓｉｇｍａ  ９２５５）、ならびに
・１０μＬの３倍濃縮酵素（ウシ血清０．３％を加えた１５ｎＭの酵素を含有する１５０ｍＭのＴｒｉｓ  Ａｃｅｔａｔｅ））。
【０１１２】
プレートを密封し、３７℃で１５〜２０時間インキュベートした後、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ＰｌｕｓプレートリーダーでＯＤ３７０を読み取った。濃縮化合物の代わりにＤＭＳＯを加えたアッセイウェルを基準として、ＯＤ３７０値の低下を阻害する化合物の効力を、一定濃度範囲にわたって比較することにより、ＩＣ５０を算出した。実施例の生物学的データは、表１および２において見ることができる。
【０１１３】
本発明の化合物は、ＫＡＴＩＩの非可逆的阻害剤である。非可逆的阻害剤の効力は、ｋｉｎａｃｔ／ＫＩによって最もよく特徴付けられる（Ｃｏｐｅｌａｎｄ，Ｒ．Ａ．、「Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ」、Ｗｉｌｅｙ、２００５を参照されたい）。
【０１１４】
ＫＡＴＩＩ動態アッセイ
試験化合物を１００％ＤＭＳＯに溶解させ、１００％ＤＭＳＯで所要の濃度に希釈した。化合物の３倍最終濃度において、アッセイ専用緩衝液中のＤＭＳＯが１．０％となるように、さらに水で希釈した。化合物は、１１の濃度で試験した。アッセイプレートにおける最終ＤＭＳＯ濃度は、０．３３％に等しかった。
【０１１５】
アッセイ方法
吸光波長３７０ｎｍにおけるＬ−ＫＹＮ基質の吸光度の減少を測定することにより、ＫＡＴＩＩ酵素活性を追跡した。ＫＡＴＩＩアッセイは、３８４ウェルフォーマットにおいて、最終体積を３０μＬとし、１５０ｍＭのＴｒｉｓ  Ａｃｅｔａｔｅ緩衝液（ｐＨ７．０）、１ｍＭのＬ−ＫＹＮ、１ｍＭのα−ケトグルタル酸、７０μＭのＰＬＰ、０．１％のＢＧＧ、および３０ｎＭのヒトＫＡＴＩＩ酵素または５ｎＭのラットＫＡＴＩＩ酵素のどちらかを使用して進めた。化合物を１００％ＤＭＳＯに希釈し、スポットしてから、他の試薬を加えた。酵素は常に最後に加えた。アッセイプレートを、テープで縁に沿って密封し、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘプレートリーダーにおいて吸光波長３７０ｎｍで直ちに読み取った。ＳｐｅｃｔｒａＭａｘプレートリーダーは、１６時間にわたり５分毎に読み取るように設定した。
【０１１６】
動態読み取りデータが確実に一定に生成されるように、以下のステップを踏んだ。
１．化合物希釈物（化合物の調製において上述している）の１０μＬアリコートを、手作業でアッセイプレートに加えた後、すばやくスピンさせて、化合物がウェルの底に確実に集まるようした。
２．次いで、Ｌ−ＫＹＮ、α−ケトグルタル酸、およびＰＬＰを含有する基質ミックスの１０μＬアリコートを、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ機器でアッセイプレートに加えた。
３．最終的に、３倍濃度の酵素原液の１０μＬアリコートをＭｕｌｔｉｄｒｏｐ機器で最後に加えて、反応を開始した。
４．マイクロプレートのふたをアッセイプレートに被せ、テープを貼って湿気を閉じ込め、アッセイプレートをＳｐｅｃｔｒａＭａｘリーダーに挿入した。プレートの台の上ですばやく振動させて、確実に混合し、吸光度を室温において１６時間にわたり５分毎に読み取った（波長３７０ｎｍ）。
【０１１７】
効力の決定（ｋｉｎａｃｔ／ＫＩ値）
上述の直接基質吸光度減少アッセイを実施して、効力（ｋｉｎａｃｔ／ＫＩ値）を求めた。Ｍ．Ｍｉｌｅｎｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ２００８、１０５  １２８２０〜１２８２４およびＫ．Ａｈｎら、Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２００９、１６、４１１〜４２０に記載の一般手法を使用して、全効力、すなわちｋｉｎａｃｔ／ＫＩ値を求めた。最高用量を１ｍＭとし、２倍ずつ希釈して１ｎＭとする１１段階の濃度の阻害剤の存在下で、反応進行曲線（経時的なＡ３７０ｎｍの減少）を取得した。無阻害剤対照を常に含める。吸光度読み取りデータは、１６時間にわたり５分間隔で集めた。データ分析は、Ｗｉｎｄｏｗｓ用ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍバージョン５．０１、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、米国カリフォルニア州サンディエゴを使用して行った。各進行曲線を一相指数減衰モデル（等式１）に適合させて、各阻害剤濃度でのｋ実測（ｋｏｂｓ）値を求めたが、ここで、Ａｔは、時間ｔでの吸光度であり、Ａ０は、ｔ＝無限での吸光度であり、Ａ１は、合計吸光度変化（ｔ＝０とｔ＝無限大の吸光度差）であり、ｋｏｂｓは、酵素不活化の一次速度定数である。ヒトＫＡＴＩＩ酵素については、６時間の時間枠（５分〜３６０分）を使用して、すべての阻害剤濃度でｋｏｂｓ値を導いた。次いで、ｋｏｂｓ対［Ｉ］曲線を等式２に適合させることにより、阻害剤解離定数（ＫＩ）および無限阻害剤濃度での酵素不活化の一次速度定数（ｋｉｎａｃｔ）を得た。［Ｉ］が＜＜ＫＩであるとき、等式２は、等式３に簡略化され、ｋｉｎａｃｔ／ＫＩは、傾きｋｉｎａｃｔ／［ＫＩ（１＋［Ｓ］／Ｋｍ）］から算出され、この傾きは、ｋｏｂｓ対［Ｉ］線形回帰適合から取得される。
【０１１８】
【数１】
0005868994.tif 000014
【０１１９】
反応性代謝産物アッセイプロトコール
表２における代謝産物活性は、Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ  ａｓｓａｙ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ（Ｊ．Ｒ．Ｓｏｇｌｉａら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．２００４、３６、１０５〜１１６を参照されたい）に記載されているような、反応性代謝産物アッセイプロトコールを使用して測定する。
【０１２０】
ヒト肝細胞アッセイ（ＨＨＥＰ）
ヒト肝細胞アッセイ（ＨＨＥＰ）は、こうした無処置細胞が、第Ｉ相酵素（ＣＹＰ、アルデヒドオキシダーゼ、ＭＡＯなど）および第ＩＩ相酵素（ＵＤＰ−グルクロニルトランスフェラーゼやスルホトランスフェラーゼなど）を含めた、ｉｎ  ｖｉｖｏで見出されるすべての肝臓酵素を含んでいることから、肝臓の代謝をモニターするのに使用されるｖｉｔｒｏ系である。このアッセイの目的は、見かけのｉｎ  ｖｉｔｒｏ固有クリアランス（ＣＬｉｎｔ、ａｐｐ）に基づき、化合物をランク付けすることである。
【０１２１】
プロトコールは、以下の培地のいずれかを使用して実施した。
ａ．Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ特注粉末、フェノールレッドなしで２９２ｍｇ／ｍＬのＬ−グルタミンを補充したもの。使用前に２．２ｇ／ＬのＮａＨＣＯ３を加えなければならない。培地に、９５／５のＯ２／ＣＯ２（または空気／ＣＯ２）の気体を２０〜３０分間供給する。ｐＨを７．４に調整し、３７℃に温める。別法として、インキュベートをＣＯ２インキュベーターで行わない場合、培地への気体供給を省き、ＨＥＰＥＳを加えて、最終濃度を３７℃の培地中５０ｍＭとし、ｐＨを７．４に調整する。次いで培地を濾過滅菌する。
ｂ．Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ特注１倍液、フェノールレッドなしで２４ｍＭのＮａＨＣＯ３および５０ｍＭのＨＥＰＥＳを補充したもの。使用前に２９２ｍｇ／ｍＬのＬ−グルタミンを加えなければならない。培地は、３７℃に温める。
ｃ．Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ特注１倍液、２４ｍＭのＮａＨＣ０３を補充した、フェノールレッドなしのもの。使用前に２９２ｍｇ／ｍＬのＬ−グルタミンを加えなければならない。培地に、９５／５のＯ２／ＣＯ２（または空気／ＣＯ２）の気体を２０〜３０分間供給し、ｐＨを７．４に調整する。培地を３７℃に温める。
【０１２２】
ＣＯ２インキュベーターの設定は、９５／５の空気／ＣＯ２、３７℃、および湿度９５％に設定する。インキュベートは、９６ウェルまたは３８４ウェル平底プレートで行う。
【０１２３】
ａ．試験化合物（基質）の調製
肝細胞インキュベートの際の最終ＤＭＳＯ濃度が０．１％以下となるように、試験化合物ストックをＤＭＳＯに希釈する。最終試験化合物濃度は、１μＭとする。所要の３つの陽性対照（最初にＤＭＳＯに溶解させる）についてのインキュベート濃度：０．１μＭのプロプラノロール、１．０μＭのミダゾラム、１．０μＭのナロキソン。
【０１２４】
ｂ．ＩＶＴ凍結保存肝細胞の解凍手順
凍結保存肝細胞を、５ドナーについて複数通りに調製する。バイアルを３７〜４０℃の水浴において、氷がほとんどすべて融けるまで７５〜９０秒間解凍する。バイアルの中身をコニカルチューブまたはフラスコに空ける。穏やかに反転させて細胞を再懸濁する。細胞を室温にて５０〜９０ｇで５分間遠心分離する。上清を廃棄する。ＷＥＭを加え、チューブを穏やかに反転させて、肝細胞を再懸濁する。トリパンブルー色素排除法を使用して、合計細胞カウントおよび生細胞数を求める。細胞ペレットをＷＥＭに再懸濁して、所望の細胞密度を実現してから、細胞をプレートに分注する。
【０１２５】
ｃ．インキュベート条件
９６または３８４ウェルプレートを使用する。温度は３７℃に設定し、ＣＯ２インキュベーターは、９５／５の空気：ＣＯ２、湿度９５％に設定する。肝細胞密度は、５０万生細胞／ｍＬとする。最小初期肝細胞生存度（ＴＢＥに基づく）は、７０％とする。初期生存度は、所望であれば、Ｐｅｒｃｏｌｌ遠心分離によって増大させることができる。最終インキュベート体積は、９６ウェルプレートでは５０μＬ以下とし、３８４ウェルプレートでは２０μＬ以下とする。インキュベートの際の最終ＤＭＳＯ濃度は、０．１％を超えることはない。
【０１２６】
ｄ．アッセイ判断基準および算出
３０、６０、９０、および１２０分を含む、少なくとも５つのサンプル採取時点を設けなければならないが、２４０分を超えるべきでない。報告できるデータの判断基準は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＣＬｉｎｔを報告するには、回帰線のｒ２が０．８５以上でなければならないことである。
【０１２７】
ｅ．等式
ａ．ＣＬｉｎｔ，ａｐｐ＝［−傾き／０．５Ｍ細胞／ｍＬ］・１０００μＬ／ｍＬ＝μＬ／分／Ｍ細胞
【０１２８】
結果を表１および表２に示す。
【０１２９】
【表１】
0005868994.tif 000015
【０１３０】
【表２】
0005868994.tif 000016
【０１３１】
イヌにおける薬物動態研究
試験物質（実施例２〜３）を、２匹のイヌの群に、経口強制栄養または静脈内投与によって投与した。２匹の雄イヌは、Ｍａｒｓｈａｌ  Ｆａｒｍｓから入手したビーグル犬とし、処置開始時の体重は約９〜約１２ｋｇであり、年齢は約４才〜約６才の間の範囲であった。
【０１３２】
投与後０．２５、０．５、１、２、４、７、および２４時間の時期に血液サンプルを採取し、ＬＣ−ＭＳ−ＭＳアッセイを使用して、薬物原体についての分析にかけた。血漿分析データから導かれる薬物動態パラメータを、Ｗａｔｓｏｎ  ７．２．００３を使用して求めた。結果を表３および表４に示す。
【０１３３】
【表３】
0005868994.tif 000017
【０１３４】
【表４】
0005868994.tif 000018
【０１３５】
本発明または具体例としてのその（１つまたは複数の）実施形態の要素を紹介するとき、冠詞「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、および「ｓａｉｄ」は、その要素が１つまたは複数存在することを意味するものとする。用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」、および「ｈａｖｉｎｇ」は、包括的であり、列挙した要素以外の追加要素が存在し得ることを意味するものとする。本発明について、詳細な実施形態に関して記載してはいるが、それら実施形態の細目が、本発明の限定として解釈されることはなく、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定められる。