(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンショウエキスを有効成分として含む、時計遺伝子Periodの発現リズムを誘導することにより概日リズムを調整する概日リズム調整剤（但し、食品を除く）。
【請求項２】
サンショウエキスを有効成分として含む、時計遺伝子Periodの発現リズムを誘導するPeriod遺伝子発現調節剤（但し、食品を除く）であって、概日リズムを調整するために使用される、Period遺伝子発現調節剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、時計遺伝子の発現調節剤に関するものであり、より詳しくは、時計遺伝子Periodの発現調節剤、ならびにそれを含む概日リズム調整剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
地球上の殆ど全ての生物は体内に約２４時間周期で自律振動する「生体時計」を持っている。生体時計は、概日リズム（サーカディアンリズム）という生物学的な日周変動を引き起こし、生物の睡眠・覚醒サイクルをはじめ、体温、血圧、ホルモン分泌、代謝、さらには、心身の活動、摂食などの、様々な生体現象（活動）の日周変動を支配すると考えられている。近年、概日リズムの乱れが、睡眠障害、皮膚疾患、生活習慣病、さらには欝病等の精神神経疾患など、様々な心身の症状または疾患の発症要因として指摘されている。【０００３】
図１に示すように、生体時計は、「時計遺伝子（クロックジーン）」と呼ばれる遺伝子群を含むリズム発生システムにより制御されており、哺乳類の場合、CLOCK, BMAL1, PERIOD, CRYPTOCHROMEの４つのコアとなるタンパク質をコードする遺伝子の転写の促進/抑制により形成されるフイードバックループが時計分子機構の中核（コア）をなし、このフイードバックループが約２４時間のリズムを刻むことにより、概日リズムが形成される。【０００４】
概日リズムの制御中枢（中枢時計）は視床下部の視交叉上核に存在しているが、肝臓、腎臓、皮膚など末梢組織においても時計遺伝子が発現し、同様のシステムで概日リズムを形成することが明らかになっている。末梢の時計遺伝子は、視交叉上核からのシグナルによりその発現が調節されているが、さらに、グルココルチコイド、カテコラミン、アンジオテンシンIIなどのシグナル刺激因子が、末梢組織や細胞の時計遺伝子の発現を直接制御して生理リズムを作り出していることもわかってきた。近年、線維芽細胞などの培養細胞において、グルココルチコイド、フォルスコリンまたは血清等の刺激因子を加えて発現リズムを同調させて時計遺伝子発現の概日リズムをin vitroで誘導し、その発現を指標として概日リズムを評価することが行われている(非特許文献１−３)。【０００５】
時計遺伝子は、転写因子として他の遺伝子の発現リズムを直接制御し、さらに、ホルモン分泌の調節等を介して間接的により多くの遺伝子の日周発現を制御しており、生体における時計遺伝子の発現リズムが乱れると、生体器官の働きや内分泌系に障害があらわれ、高血圧などの生活習慣病をはじめ様々な疾病を引き起こすことが明らかとなっている（非特許文献４）。例えば、肥満の人は時計遺伝子の発現に異常があることが報告されており、また鬱病や癌などとの関連性も報告されている。さらに、時計遺伝子が皮膚の様々な生理機能の概日リズムを調節していることもわかってきており、正常ヒト皮膚線維芽細胞を用いた実験において、タイプIコラーゲン遺伝子が、時計遺伝子Period2と同様の発現パターンで概日リズムをもって発現されていることが報告されている（非特許文献５）。【０００６】
従って、時計遺伝子の発現を調節することにより、それにより制御されている生体の様々な行動リズムや生理機能の概日リズムを調整することが可能であり、時計遺伝子の発現を調節できる薬剤の開発が強く望まれている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】OkamuraH., (2004) Clock genes in cell clocks: Roles, Actions, and Mysteries. Journalof Biological Rhythms, 19 (5); 388-399
【非特許文献２】BalsalobreA., Damiola F., and Schibler U., (1998) A serum shock induces circadian geneexpression in mammalian tissue culture cells. Cell, 93; 929-937
【非特許文献３】YagitaK., Tamanini F., van der Horst G., and Okamura H., (2001) Molecular mechanismsof the biological clock in cultures fibroblasts. Science, 292; 278-281
【非特許文献４】HastingsM., O’Neill JS., and Maywood ES., (2007) Circadian clocks: regulators ofendocrine and metabolic rhythms. Journal of Endocrinology, 195; 187-198
【非特許文献５】泉香津代ほか、概日リズムを持つ皮膚生理遺伝子の探索、日本分子生物学会  第３２回年会  要旨2P-0009
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、上記のような事情に鑑み、生体時計のコア遺伝子であるPeriodの発現を調節できる薬剤を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、培養細胞において、特定の植物のエキスまたは精油が、時計遺伝子Periodの発現リズムを誘導しさらにその発現を促進させ得ることを見出し、本発明を完成するに至った。【００１０】
本発明のPeriod遺伝子発現調節剤は、アルニカエキス、コウホネエキス、コウチャエキス、サンショウエキス、ジュニパーオイル、セダーオイル、ラベンダーオイル、クローブバッドオイル、サイプレスオイル、ローズオイル、イランイランオイル、ガルバナムオイル、ペチグレンオイル、ペッパーオイル、タイムオイル、バジルオイルおよびβ‐カリオフィレンより成る群から選択される１以上を有効成分として含むことを特徴とする。これら特定の植物のエキスまたは精油が時計遺伝子の発現を調節できることは今まで全く知られていなかった。【００１１】
本発明において、遺伝子発現調節とは、遺伝子の発現を促進させることに加え、遺伝子の発現リズム（位相または周期）を調節することを含む。【００１２】
本発明の概日リズム調整剤は、上記のPeriod遺伝子発現調節剤を含む。上述したように、時計遺伝子は、直接または間接的に、生体器官の働きや内分泌系に関与する様々な遺伝子の日周発現を制御しており、生体時計のコア遺伝子であるPeriod遺伝子の発現を調節することにより、それにより制御されている生体の様々な行動リズムや生理機能の概日リズムを調整することができる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明のPeriod遺伝子発現調節剤はいずれも生薬または香料であり、経皮、経口、吸入など様々な投与方法に応用することが可能で、かつ医薬、医薬部外品、化粧料、食品、雑貨、衣料等様々な態様で使用でき、効果的にPeriod遺伝子の発現を調節して、概日リズムの不調に起因する様々な心身及び皮膚の症状または疾患を改善することが可能である。【００１４】
さらに、本発明のPeriod遺伝子発現調節剤のうち、ヒアルロン酸合成酵素（Has）遺伝子の発現リズムを調節するものについては、その発現を促進できるため、皮膚のヒアルロン酸産生の概日リズムを調整すると共に、その産生量を高めて皮膚機能を改善できると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】時計遺伝子による概日リズム発生システムのコアループ部分を示す概略図
【図２】培養ヒト皮膚線維芽細胞における、コルチゾールおよびフォルスコリンによる時計遺伝子発現の概日リズムの誘導を示すグラフ
【図３】培養ヒト皮膚線維芽細胞における、試験物質によるPeriod1遺伝子発現調節を示すグラフ
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明のPeriod遺伝子発現調節剤は、特定の植物のエキスまたは精油を有効成分とする。
【００１７】
Period遺伝子発現を調節できる植物のエキスとして、アルニカ、コウホネ、コウチャおよびサンショウから選択される生薬エキスが挙げられる。それら生薬の詳細については、日本汎用化粧品原料集第４版（薬事日報）を参照されたい。
【００１８】
上記生薬エキスは常法により得ることができ、例えば各エキスの起源となる植物を抽出溶媒とともに浸漬または加熱還流した後、濾過し、濃縮して得ることができる。抽出溶媒としては、通常抽出に用いられる溶媒であれば任意に用いることができ、例えば、水、メタノール、エタノール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン等のアルコール類、含水アルコール類、クロロホルム、ジクロルエタン、四塩化炭素、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン等の有機溶媒等を、それぞれ単独あるいは組み合わせて用いることができる。上記溶媒で抽出して得られたエキスをそのまま、あるいは濃縮したエキスを吸着法、例えばイオン交換樹脂を用いて不純物を除去したものや、ポーラスポリマー（例えばアンバーライトＸＡＤ−２）のカラムにて吸着させた後、メタノールまたはエタノールで溶出し、濃縮したものも使用することができる。また分配法、例えば水／酢酸エチルで抽出したエキス等も用いられる。
【００１９】
これら生薬エキスはいずれも市販されているが、各生薬エキスについて以下に簡単に説明する。
【００２０】
アルニカエキスは、キク科（Compositae）のアルニカ（Arnica montana）の抽出エキスであり、アルニカの花を50％エタノール等で抽出して得られるものが好適である。
【００２１】
コウホネエキスは、スイレン科（Nymphaeaceae）のコウホネ（Nuphar japonicum）の抽出エキスであり、コウホネの根茎を50％エタノール等で抽出して得られるものが好適である。
【００２２】
コウチャエキスは、ツバキ科（Theaceae）のコウチャ(Thea sinensis L. var. assamica)の抽出エキスであり、コウチャの葉を30％エタノール等で抽出して得られるものが好適である。
【００２３】
サンショウエキスは、ミカン科(Rutaceae)サンショウ属のサンショウ（Zanthoxylum piperitum）の抽出エキスであり、サンショウの果皮を70％エタノール等で抽出して得られるものが好適である。
【００２４】
Period遺伝子発現を調節できる植物の精油（香料）として、ジュニパーオイル、セダーオイル、ラベンダーオイル、クローブバッドオイル、サイプレスオイル、ローズオイル、イランイランオイル、ガルバナムオイル、ペチグレンオイル、ペッパーオイル、タイムオイル、バジルオイルおよびβ‐カリオフィレンが挙げられる。これら香料はいずれも市販されているが、以下に簡単に説明する。
【００２５】
ジュニパーオイルは、ヒノキ科の常緑樹であるジュニパー（Juniperus communis L)の枝葉などを水蒸気蒸留して得られる精油である。
【００２６】
セダーオイルはヒマラヤスギ（セイヨウスギ）属の木材から水蒸気蒸留によって得られる精油である。
【００２７】
ラベンダーオイルは、シソ科に属する小潅木であるラベンダー(Lavandula officinalis)の刈り取った花を水蒸気蒸留して得られる精油である。
【００２８】
クローブバッドオイルは、フトモモ科クローブ（Eugenia caryophyllata）の開花前の花蕾を乾燥し、水蒸気蒸留することにより得られる精油である。
【００２９】
サイプレスオイルは、サイプレス（Cupressus sempervirene）の枝葉などを水蒸気蒸留法して得られる精油である。
【００３０】
ローズオイルは、キャベッジ・ローズ（Rosa centifolia L）やダマスク・ローズ（Rosa damascena Mill.） などのバラの花を水蒸気蒸留して得られる精油である。
【００３１】
イランイランオイルは、バンレイシ科（Anonaceae）に属する植物（Canning odorata）の花をそのままの状態で水蒸気蒸留、もしくは生花を石油エーテルなどで溶媒抽出することにより得られる精油である。
【００３２】
ガルバナムオイルは、セリ科のFerula galbaniflua および近縁種植物の葉や芽から浸出するゴム状の浸出物を水蒸気蒸留して得られる精油である。
【００３３】
ペチグレンオイルは、ミカン科のビターオレンジ（Citrus aurantium）の葉などを水蒸気蒸留して得られる精油である。
【００３４】
ペッパーオイルは、コショウ科に属する多年生植物であるペッパー（Piper nigrum L.）の漿果を水蒸気蒸留して得られる精油である。
【００３５】
タイムオイルは、シソ科の多年草であるタイム（Thymus vulgaris L.）の全草を水蒸気蒸留して得られる精油である。
【００３６】
バジルオイルは、シソ科の一年草であるバジル（Ocimum basilicum L.）の地上部全草を水蒸気蒸留して採取される精油である。
【００３７】
β−カリオフィレンは、主に、チョウジなどのフトモモ科植物、ラベンダーオイル等の植物および精油中に存在する天然のセスキテルペン類である。
【００３８】
本発明のPeriod遺伝子発現調節剤は、上記の植物のエキス（生薬）または精油（香料）の１種または２種以上を含んでいてよい。例えば、上記生薬の１種または２種以上と、香料の１種または２種以上とを組み合せて配合してもよい。
【００３９】
本発明の概日リズム調整剤は、Period遺伝子発現調節剤としての上記の植物のエキスまたは精油の１または２種以上を含む。
【００４０】
本発明のPeriod遺伝子発現調節剤は、単独で用いてもよいが、他の時計遺伝子の発現調節作用を有する薬剤と組み合せて使用してもよい。
【００４１】
他の時計遺伝子として、例えば、Bmal遺伝子（Bmal1, Bmal2）、Clock遺伝子、Cryptochrome遺伝子、albumin site D-binding protein (Dbp)遺伝子、E4BP4遺伝子、Npas2遺伝子、Rev-erb遺伝子などが挙げられるが、中でも、生体時計の他のコア遺伝子であるBmal、Clockおよび／またはCryptochrome遺伝子、特にBmal遺伝子の発現調節剤と組み合せて使用することが好ましい。
【００４２】
図１に示すように、概日リズム発生システムにおいて、Bmal遺伝子の発現産物であるBMAL1はCLOCKとヘテロニ量体を形成してPeriod遺伝子の転写を促進し、一方、発現されたPERIOD (PER)はCRYPTOCHROME（CRY）とヘテロニ量体を形成してBMALおよびCLOCKの活性を抑制し、２４時間周期で振動するフイードバックループを形成する。哺乳類では、Bmal遺伝子とPeriod遺伝子はほぼ１２時間ずれた位相でそれぞれ概日リズムを刻んで発現されており、Bmalの発現は夜中増加し、一方Periodの発現は昼間増加する。従って、Period遺伝子とBmal遺伝子の発現を共に調節して、生体時計のコアループを調節することにより、より効果的に概日リズムを調整できると考えられる。
【００４３】
Bmal遺伝子発現調節剤として、限定はされないが、例えば、生薬であるヒノキ、クロレラ、ホップおよびサンショウ等のエキス、ならびに香料であるジュニパー、ラベンダー、ユーカリ、オリバナム、サイプレス、パルマローザ、パインニードル、ローズ、イランイラン、エレミ、ペチグレン、ペッパー、タイムおよびカモミール等の精油が挙げられる。培養皮膚線維芽細胞において、これら生薬または香料がBmal遺伝子の発現リズムを誘導し、またその発現を促進できることが確認されている。
【００４４】
さらに、本発明のPeriod遺伝子発現調節剤および概日リズム調整剤は、それらを単独で用いてもよいが、様々な対象物に含めることができる。その対象物の種類に応じて、上記の必須成分の他に、任意の構成要素をさらに含めることができる。
【００４５】
例えば、対象物が皮膚外用剤である場合には、その剤形（例えば、液剤、粉末剤、顆粒剤、エアゾール剤、固形剤、ジェル剤、パッチ剤、坐剤等）や、製品形態（例えば化粧料、医薬品、医薬部外品等）に応じて、通常そのような皮膚外用剤に含まれる任意の成分を、上記のPeriod遺伝子発現調節剤と共に含んでいてよい。皮膚外用剤は、皮膚（頭皮、頭髪、爪も含む）に対して適用する組成物全般を包括する概念であり、例えば、基礎化粧料、メーキャップ化粧料、毛髪化粧料、皮膚もしくは毛髪洗浄料等の化粧料や、軟膏剤、パッチ剤、坐剤、歯磨等の種々の医薬品ないし医薬部外品等を含む。その剤形も特に限定されず、例えば、水溶液系、可溶化系、乳化系、油液系、ゲル系、ペースト系、軟膏系、エアゾール系、水−油２層系、水−油−粉末３層など、任意の剤型を含む。皮膚外用剤が化粧料である場合、例えば、香水、オードトワレ、オーデコロン、クリーム、乳液類、化粧水、ファンデーション類、粉白粉、口紅、石鹸、シャンプー・リンス類、ボディーシャンプー、ボディーリンス、ボディーパウダー類、浴剤類等が挙げられる。
【００４６】
また、例えば、芳香剤、消臭剤、アロマキャンドル、インセンス、文房具、財布、バッグ、靴等の任意の雑貨類や、例えば下着、洋服、帽子、ストッキング、靴下等の任意の衣類、あるいは例えば散剤、顆粒、錠剤、カプセル剤等様々な形態のサプリメント（栄養補助食品）、菓子、飲料等の任意の食品等に、本発明のPeriod遺伝子発現調節剤を含めることができる。さらに、Period遺伝子発現調節剤が上記の精油（香料）を含む場合、本発明の効果が得られる限り、吸入医薬品や空中散布剤のような吸入製品において用いてもよい。
【００４７】
尚、本発明のPeriod遺伝子発現調節剤の使用態様を例示したが、これらに限定されるものではなく、本発明の効果を達成できる限り、任意の態様で用いることができる。また、本発明のPeriod遺伝子発現調節剤の他に、具体的な態様に応じて、他の概日リズム調整作用を有する薬剤を、本発明の効果を損なわない限り配合することができる。
【００４８】
対象物中における本発明のPeriod遺伝子発現調節剤の配合量は、用いる生薬または香料の種類や形態、対象物等によって適宜選択することができ、特に限定されないが、例えば、対象物の全質量に対して、０．００００１〜１００質量％であり、より好適には、０．０００１〜５０質量％であり、さらに好適には、０．０００１〜２０質量％である。
【００４９】
尚、本発明のPeriod遺伝子発現調節剤または概日リズム調整剤やそれを配合した対象物の具体的な適用は、概日リズムの調整に関連するものであれば特に限定されない。例えば、時差ぼけ症候群、交代勤務症候群、睡眠相遅延症候群、非２４時間型睡眠・覚醒症候群、概日リズム睡眠障害を有する鬱状態など、さらにはそれら概日リズム障害に付随する不眠、体調不調、注意欠損、意欲低下、肌荒れなどの諸症状の予防、改善または治療等に適用できる。
【実施例】
【００５０】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。尚、培養細胞として、皮膚線維芽細胞、上皮細胞、内皮細胞、色素細胞、脂肪細胞、神経細胞など各種細胞を用いることができるが、本実施例ではヒト皮膚線維芽細胞を用いて評価を行なった。いずれの生物種および細胞種においても時計遺伝子のコアシステムは共通であるため、ヒト皮膚線維芽細胞での評価結果は、他の生物種および細胞種にも反映できると考えられる。また、ヒトでは、Period遺伝子としてPeriod1、Period2およびPeriod3の３種類の存在が知られているが、同じ遺伝子群で同様の挙動を示すと考えられており、本実施例では代表としてPeriod1の発現を測定した。【００５１】
培養ヒト皮膚線維芽細胞を用いた時計遺伝子発現リズム評価系の検討
培養ヒト皮膚線維芽細胞を用いた系で時計遺伝子発現の概日リズムを評価できることを確認した。【００５２】
培養ヒト皮膚線維芽細胞は、正常成人皮膚由来線維芽細胞を購入し（Cell Application, Inc）、実験に用いた。10%FBS、20mM HEPES、Glutamax、抗菌剤を添加したDMEM培地に播種し、37℃、5%CO2にて培養した。培養６日目に、コルチゾールまたはフォルスコリンをそれぞれ50ng/ml、10μMとなるように各ウェルに添加して、添加直後を0時間とし、経時的に細胞をサンプリングした。市販のRNA抽出キットを使用して細胞からRNAを抽出し、市販のPCRプライマー（Perfect Real Time Primer、タカラバイオ社）を用い、RT-PCR法により目的とする遺伝子の発現量を測定した。時計遺伝子としては、コアシステムに関わるPeriod1およびBmal1の発現量を定量した。同様に、ハウスキーピング遺伝子であるRPLP0の発現量を定量して内部標準として用い、RPLP0の発現量に対する目的遺伝子の相対的発現量を算出した。【００５３】
生体内で、コルチゾール等のグルココルチコイドは末梢組織等の生体時計の調節に関与し、朝起床時にコルチゾールの血中濃度が上昇して生体時計をリセットすると考えられている。培養細胞では通常、個々の細胞がばらばらのタイミングでリズムを刻んでいるが、コルチゾールやフォルスコリンのようなシグナル刺激因子で刺激することにより、時計遺伝子発現リズムを同調させて概日リズムを誘導することができる。【００５４】
結果を図２に示す。コルチゾールまたはフォルスコリンで刺激することにより、Period1の発現は刺激後約２時間でピークとなり、またBmal1の発現は刺激後約１６時間でピークとなり、いずれも約２４時間周期の概日リズムを刻んで発現されることを確認できた。【００５５】
Period遺伝子発現調節効果に関する試験物質の評価
上記の結果から、培養ヒト皮膚線維芽細胞評価系において、Period１は薬剤による刺激の約２時間後に発現量がピークとなる概日リズムを刻むことが認められ、刺激の２時間後のPeriod1遺伝子発現量を指標として、試験物質のPeriod遺伝子発現調節効果について評価した。尚、Period遺伝子発現リズムの誘導を確認するため、刺激の１６時間後のPeriod1遺伝子発現量もあわせて測定した。【００５６】
上記と同様の方法により、正常成人皮膚由来線維芽細胞（Cell Application, Inc）を播種し、培養６日目に、各薬剤を100ppmとなるように添加して、２時間後および１６時間後に細胞をサンプリングした。市販のRNA抽出キットを使用して細胞からRNAを抽出し、市販のPCRプライマー（Perfect Real Time Primer、タカラバイオ社）を用い、RT-PCR法にPeriod１遺伝子の発現量を測定した。【００５７】
さらに、一部の試験物質について、皮膚の水分保持に重要な役割を果たすヒアルロン酸の合成に関わるヒアルロン酸合成酵素（HAS）の遺伝子発現についても同様に測定した。HASとしてはHAS1、HAS2、HAS3が知られているが、ここではHAS2を代表として調べた。【００５８】
ハウスキーピング遺伝子であるRPLP0の発現量を定量して内部標準として用い、RPLP0の発現量に対する目的遺伝子の相対的発現量を算出した。得られた値について、Dunnettの多重比較検定を行い、コントロールと比較して片側５％の危険率で有意差があるものを効果有りと判定した。【００５９】
図３に、各種試験薬剤、あるいは陽性対照としてのコルチゾールまたはフォルスコリンを添加後２時間および１６時間後のPeriod1遺伝子の相対的発現量を示す。【００６０】
また、下記の表１に、２時間後のPeriod1遺伝子の相対的発現量を示す。一部の試験物質については、１６時間後のHas2遺伝子の相対的発現量を併せて表１に示す。
【表１】
0005868313.tif 000002
【００６１】
アルニカエキス、コウホネエキス、コウチャエキス、サンショウエキス、ジュニパーオイル、セダーオイル、ラベンダーオイル、クローブバッドオイル、サイプレスオイル、ローズオイル、イランイランオイル、ガルバナムオイル、ペチグレンオイル、ペッパーオイル、タイムオイル、バジルオイルおよびβ‐カリオフィレンは、陽性対照であるコルチゾールおよびフォルスコリンと同様に、刺激後約２時間でピークとなる発現リズムを誘導し、さらにコントロールと比較してPeriod1遺伝子の発現量を有意に高め、それら生薬または香料がPeriod遺伝子発現を調節し得ることが示された。【００６２】
さらに、ジュニパー、イランイラン、およびペッパーは、１６時間後のHas2遺伝子発現を促進することから、皮膚のヒアルロン酸産生を高めて皮膚機能を改善または向上させ得ることが示唆された。【００６３】
尚、本発明のPeriod遺伝子発現調節剤は、Bmal遺伝子発現調節剤と組み合せて使用することができるが、そのようなBmal遺伝子発現調節剤として、限定はされないが、生薬であるヒノキエキス、クロレラエキス、ホップエキス、サンショウエキス、ならびに香料であるジュニパーオイル、ラベンダーオイル、ユーカリオイル、オリバナム、サイプレスオイル、パルマローザオイル、パインニードルオイル、ローズオイル、イランイランオイル、エレミオイル、ペチグレンオイル、ペッパーオイル、タイムオイルおよびカモミールオイルが挙げられる。それら生薬または香料は、上記と同様の方法により、培養ヒト皮膚線維芽細胞において、Bmal遺伝子の発現リズムについてBmal1を代表として調べた結果、Bmal遺伝子発現リズムを誘導しまたその発現を促進させ得ることが確認されている。下記表２に、刺激16時間後のBmal1遺伝子の相対的発現量を示す。
【表２】
0005868313.tif 000003
【００６４】
(配合例)
以下、本発明のPeriod発現調整剤の配合例を示すが、本発明の実施は以下に限定されるものではない。尚、下記の配合例では本発明のPeriod 発現調整剤としてタイムオイルを用いているが、それに限定されるものではなく、上記のPeriod遺伝子発現を調節し得る生薬および／または香料の１種または２種以上の混合物を同様に配合することができる。配合量は全て製品全量に対する質量％で表す。【００６５】
フレグランス
（１）アルコール                                        ７５．０
（２）精製水                                              残余
（３）ジプロピレングリコール                              ５．０
（４）本発明のPeriod発現調整剤：タイムオイル           １０．０
（５）酸化防止剤                                          ８．０
（６）色素                                                適量
（７）紫外線吸収剤                                        適量
【００６６】
ルームフレグランス
（１）アルコール                                        ８０．０
（２）精製水                                              残余
（３）酸化防止剤                                          ５．０
（４）本発明のPeriod発現調整剤：タイムオイル             ３．０
（５）３−メチルー３メトキシブタノール                    ５．０
（６）ジベンジリデンソルビトール                          ５．０
【００６７】
インセンス
（１）タブ粉                                            ７５．５
（２）安息香酸ナトリウム                                １５．５
（３）本発明のPeriod発現調整剤：タイムオイル             ５．０
（４）ユーカリオイル                                      １．０
（５）精製水                                              残余
【００６８】
入浴剤
（１）硫酸ナトリウム                                    ４５．０
（２）炭酸水素ナトリウム                                ４５．０
（３）ラベンダーオイル                                    ９．０
（４）本発明のPeriod発現調整剤：タイムオイル             １．０
【００６９】
マッサージ用ジェル
（１）エリスリトール                                      ２．０
（２）カフェイン                                          ５．０
（３）オウバク抽出物                                      ３．０
（４）グリセリン                                        ５０．０
（５）カルボキシビニルポリマー                            ０．４
（６）ポリエチレングリコール４００                      ３０．０
（７）エデト３ナトリウム                                  ０．１
（８）ポリオキシレン（１０）メチルポリシロキサン共重合体  ２．０
（９）スクワラン                                          １．０
（１０）水酸化カリウム                                    ０．１５
（１１）本発明のPeriod発現調整剤：タイムオイル           １．０
【００７０】
マッサージクリーム
（１）固形パラフィン                                      ５．０
（２）ミツロウ                                          １０．０
（３）ワセリン                                          １５．０
（４）流動パラフィン                                    ４１．０
（５）１．３−ブチレングリコール                          ４．０
（６）モノステアリン酸グリセリン                          ２．０
（７）ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノラウリン酸エステル      ２．０
（８）ホウ砂                                              ０．２
（９）カフェイン                                          ２．０
（１０）防腐剤                                            適量
（１１）酸化防止剤                                        適量
（１２）本発明のPeriod発現調整剤：タイムオイル           １．０
（１３）精製水                                            残余 
【００７１】
芳香性繊維
キュプロアンモニウムセルロース溶液（セルロース濃度１０重量％、アンモニウム濃度７重量％、銅濃度３．６重量％）に、本発明のPeriod発現調整剤を内包したマイクロカプセル（粒子径５０μｍ以下、マイクロカプセルに占める精油の割合は５０重量％）をセルロース重量に対して０．１〜２０重量％の範囲内で添加、混和した後、通常の湿式紡糸方法に従って紡糸し、精錬工程、乾燥工程を経て、芳香性繊維を得た。
【００７２】
顆粒
（１）スクラロース                                            ０．１
（２）本発明のPeriod発現調整剤：タイムオイル              ０．１
（３）香味料                                                  ５．０
（４）賦形剤（セオラス）                                    １０．０
（５）マルチトール                                            残余
【００７３】
錠剤（チュアブルタイプ）
（１）イノシトール                                          １１．０
（２）マルチトール                                          ２１．０
（３）スクロース                                              ０．５
（４）鮭白子抽出物（ＤＮＡ  Ｎａ）                            ０．１
（５）酵母抽出物                                              ０．１
（６）本発明のPeriod発現調整剤：タイムオイル                 ０．１
（７）香味料                                                  ５．０
（８）賦形剤                                                  残余
【００７４】
タブレット
（１）潤沢剤（ショ糖脂肪酸エステル等）                        １．０
（２）アラビアガム水溶液（５％）                              ２．０
（３）酸味料                                                  １．０
（４）着色料                                                  適量
（５）本発明のPeriod発現調整剤：タイムオイル                 ０．１
（６）糖質（粉糖またはソルビトール等）                        残余
【００７５】
キャンディー
（１）砂糖                                                ５０．０
（２）水飴                                                ４７．９５
（３）有機酸                                                ２．０
（４）本発明のPeriod発現調整剤：タイムオイル                ０．０５
【００７６】
ガム
（１）砂糖                                                ４３．０
（２）ガムベース                                          ３０．９５
（３）グルコース                                          １０．０
（４）水飴                                                １６．０
（５）本発明のPeriod発現調整剤：タイムオイル              ０．０５
【００７７】
これら配合例の製品は、それぞれの製品形態の典型的な使用態様における使用テストにより、Period遺伝子の発現を調節して、生体の概日リズムを調整することができる。
【図１】
0005868313.tif 000004
【図２】
0005868313.tif 000005
【図３】
0005868313.tif 000006