(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号：２４５の核酸塩基配列の少なくとも１２個の連続する核酸塩基の部分を含んでなる核酸塩基配列を有する、１２ないし３０個の結合されたヌクレオシドからなる一本鎖修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる一本鎖化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項２】
前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号：２４５の配列を含んでなる、請求項１に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項３】
前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が、配列番号：２４５の配列からなる、請求項１に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項４】
前記オリゴヌクレオチドが、１６個の結合されたヌクレオシドからなる、請求項１−３のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項５】
少なくとも一つのヌクレオシド間結合が、修飾ヌクレオシド間結合である、請求項１−４のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項６】
それぞれのヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１−５のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項７】
少なくとも一つのヌクレオシドが、修飾糖を含んでなる、請求項１−６のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項８】
少なくとも一つの修飾糖が、二環式糖である、請求項７に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項９】
前記二環式糖が、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’架橋又は４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋を含んでなる、請求項８に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項１０】
前記修飾糖が、２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３基又は２’−Ｏ−ＣＨ３基を含んでなる、請求項７に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項１１】
少なくとも一つのヌクレオシドが、修飾核酸塩基を含んでなる、請求項１−１０のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項１２】
前記修飾核酸塩基が、５’−メチルシトシンである、請求項１１に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項１３】
前記修飾オリゴヌクレオチドが：
１ないし５個の結合したヌクレオシドからなる５’−ウイング；
１ないし５個の結合したヌクレオシドからなる３’−ウイング；
８ないし１２個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなる５’−ウイング及び３’−ウイング間のギャップ；
を含んでなり；そして
ここで、５’−ウイング及び３’−ウイングの少なくとも一方が、少なくとも一つの二環式ヌクレオシド又は一つの２’−置換ヌクレオシドを含んでなる；
請求項１−１２のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項１４】
前記修飾オリゴヌクレオチドが：
１ないし５個の結合したヌクレオシドからなる５’−ウイング；
１ないし５個の結合したヌクレオシドからなる３’−ウイング；
８ないし１２個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなる５’−ウイング及び３’−ウイング間のギャップ；
を含んでなり；そして
ここで、５’−ウイング及び３’−ウイングの少なくとも一方が、少なくとも一つの二環式ヌクレオシド及び少なくとも一つの２’−置換ヌクレオシドを含んでなる；
請求項１−１２のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項１５】
前記修飾オリゴヌクレオチドが：
３個の結合したヌクレオシドからなる５’−ウイング；
３個の結合したヌクレオシドからなる３’−ウイング；
１０個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなる５’−ウイング及び３’−ウイング間のギャップ；
を含んでなり； 
ここで、５’−ウイング及び３’−ウイングのそれぞれの各ヌクレオシドが、拘束エチルヌクレオシドを含んでなり；
ここで、それぞれのヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり；そして
ここで、それぞれのシトシンが、５’−メチルシトシンである；
請求項１−１２のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項１６】
配列番号：２４５の核酸塩基配列を有する１６個の結合したヌクレオシドからなる一本鎖修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドは：
３個の結合したヌクレオシドからなる５’−ウイング；
３個の結合したヌクレオシドからなる３’−ウイング；
１０個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなる５’−ウイング及び３’−ウイング間のギャップ；
を含んでなり；
ここで、５’−ウイング及び３’−ウイングのそれぞれの各ヌクレオシドが、拘束エチルヌクレオシドを含んでなり；
ここで、それぞれのヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合であり；そして
ここで、それぞれのシトシンが、５’−メチルシトシンである；
前記化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項１７】
前記一本鎖修飾オリゴヌクレオチドからなる、請求項１−１６のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項１８】
動物における過剰増殖性疾病の治療用である、請求項１−１７のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項１９】
動物における過剰増殖性疾病の治療用である、請求項１−１８のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項２０】
前記過剰増殖性疾病が癌である、請求項１８又は１９に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩。
【請求項２１】
請求項１−２０のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に受容可能な塩及び医薬的に受容可能な希釈剤又は担体を含んでなる医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、電子形式の配列表を伴って出願される。配列表は、２０１２年３月２９日に作成された６７２ＫｂのサイズのＢＩＯＬ０１４２ＷＯＳＥＱ．ｔｘｔの表題のファイルとして提供される。電子形式の配列表中の情報は、その全てが参照により本明細書中に組込まれる。
【０００２】
分野
ある態様において、提供されるものは、動物におけるＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を阻害するための方法、化合物、及び組成物である。このような方法、化合物、及び組成物は、過剰増殖性疾病を、治療、予防、又は改善するために有用である。
【背景技術】
【０００３】
ＳＴＡＴ（転写のシグナル伝達及び活性化因子）ファミリーのタンパク質は、転写のシグナル伝達及び活性化において二重の役割を演じるＤＮＡ結合性タンパク質である。現時点で、六つのＳＴＡＴファミリーの別個のメンバー（ＳＴＡＴ１、ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ３、ＳＴＡＴ４、ＳＴＡＴ５、及びＳＴＡＴ６）及び幾つかのアイソフォーム（ＳＴＡＴ１α、ＳＴＡＴ１β、ＳＴＡＴ３α及びＳＴＡＴ３β）が存在する。ＳＴＡＴの活性は、各種のサイトカイン及び分裂促進的刺激によって調節される。サイトカインのその受容体への結合は、これらの受容体に伴うヤヌスタンパク質チロシンキナーゼ（ＪＡＫ）の活性化をもたらす。これは、ＳＴＡＴをリン酸化し、核への移行及びＳＴＡＴ反応性遺伝子の転写活性化をもたらす。ＳＴＡＴ上の特異的チロシンキナーゼのリン酸化は、その活性化をもたらし、特異的遺伝子のプロモーター配列に結合するＳＴＡＴのホモダイマー及び／又はヘテロダイマーの形成をもたらす。ＳＴＡＴ活性化によるサイトカインによって仲介される現象は、細胞増殖及び分化並びにアポトーシスの予防を含む。
【０００４】
ＳＴＡＴ活性化の特異性は、特異的サイトカインのためであり、即ち、それぞれのＳＴＡＴは、少数の特異的サイトカインに応答する。増殖因子のような他の非サイトカインシグナル伝達分子も、更にＳＴＡＴを活性化することが見いだされている。これらの因子のタンパク質チロシンキナーゼに伴う細胞表面の受容体への結合も、更にＳＴＡＴのリン酸化をもたらす。
【０００５】
ＳＴＡＴ３（更に急性相応答因子（ＡＰＲＦ））は、特に、インターロイキン−６（ＩＬ−６）並びに上皮増殖因子（ＥＧＦ）に対して応答性であることが見いだされている（Ｄａｒｎｅｌｌ，Ｊｒ．，Ｊ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４，２６４，１４１５−１４２１）。更に、ＳＴＡＴ３は、インターフェロンによるシグナル伝達において重要な役割を有することが見いだされている（Ｙａｎｇ，Ｃ．−Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９８，９５，５５６８−５５７２）。ＳＴＡＴ３をＭＡＰＫ経路によって制御することができることを示唆する証拠が存在する。ＥＲＫ２は、セリンのリン酸化を誘発し、そして更にＳＴＡＴ３と会合する（Ｊａｉｎ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９８，１７，３１５７−３１６７）。
【０００６】
ＳＴＡＴ３は、殆どの細胞型中に発現する（Ｚｈｏｎｇ，Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９４，９１，４８０６−４８１０）。これは、組織損傷及び炎症に対する反応に関係する遺伝子の発現を誘発する。ＳＴＡＴ３は、更にｂｃｌ−２の発現によりアポトーシスを予防することが示されている（Ｆｕｋａｄａ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１９９６，５，４４９−４６０）。
【０００７】
最近、ＳＴＡＴ３が、形質転換された細胞のミトコンドリア中で検出され、そして癌細胞のそれと類似の糖分解及び酸化的リン酸化活性を容易にすることが示された（Ｇｏｕｇｈ，Ｄ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００９，３２４，１７１３−１７１６）。ミトコンドリア中のＳＴＡＴ３の阻害は、活性化されたＲａｓによる悪性形質転換を障害する。データは、その核での役割に加えて、ミトコンドリア中のＳＴＡＴ３に対するＲａｓ仲介の形質転換機能を確認する。
【０００８】
ＳＴＡＴ３の異常な発現又は恒常的発現は、多くの疾病過程に伴われる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｄａｒｎｅｌｌ，Ｊｒ．，Ｊ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４，２６４，１４１５−１４２１；
【非特許文献２】Ｙａｎｇ，Ｃ．−Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９８，９５，５５６８−５５７２；
【非特許文献３】Ｊａｉｎ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９８，１７，３１５７−３１６７；
【非特許文献４】Ｚｈｏｎｇ，Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９４，９１，４８０６−４８１０；
【非特許文献５】Ｆｕｋａｄａ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，１９９６，５，４４９−４６０；
【非特許文献６】Ｇｏｕｇｈ，Ｄ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００９，３２４，１７１３−１７１６。
【発明の概要】
【００１０】
本明細書中に提供されるものは、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を調節するための方法、化合物、及び組成物である。ある態様において、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ及びタンパク質の発現を調節するために有用な化合物は、アンチセンス化合物である。ある態様において、アンチセンス化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【００１１】
ある態様において、調節は、細胞又は組織において起こることができる。ある態様において、細胞又は組織は動物中にある。ある態様において、動物はヒトである。ある態様において、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルは減少される。ある態様において、ＳＴＡＴ３のタンパク質レベルは減少される。このような減少は、時間依存的様式又は容量依存的様式で起こることができる。
【００１２】
更に提供されるものは、疾病、疾患、及び症状を予防、治療、及び改善するために有用な方法、化合物、並びに組成物である。ある態様において、このような疾病、疾患、及び症状は、過剰増殖性疾病、疾患、及び症状である。ある態様において、このような過剰増殖性疾病、疾患、及び症状は、癌、並びに関連する悪性腫瘍並びに転移を含む。ある態様において、このような癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含む肺癌、膵臓癌、結腸直腸癌、多発性骨髄腫、肝細胞癌（ＨＣＣ）、神経膠芽腫、卵巣癌、骨肉腫、頭頸部癌、乳癌、類表皮癌、腸管腺腫、前立腺癌、及び胃癌を含む。
【００１３】
このような疾病、疾患、及び症状は、一つ又はそれより多い危険因子、原因、又は結果を共通に有することができる。過剰増殖性疾病の発症のためのある種の危険因子及び原因は、老化；タバコの使用；日光及びイオン化照射への暴露；ある種の化学薬品との接触；ある種のウイルス及び細菌による感染；ある種のホルモン療法；癌の家族的履歴；アルコールの使用；並びに不良な食事制限、身体活動性の欠如、及び／又は過体重を含むある種の生活習慣の選択を含む。過剰増殖性疾病の発症に伴うある種の徴候及び結果は、乳房又は身体のいずれもの他の部分における肥厚又はしこり；新しい痣又は既存の痣の変化；治癒しない痛み；治らない嗄れ声又は咳；排便又は排尿習慣の変化；食後の違和感；嚥下の困難さ；不解明な体重増加又は減少；異常な出血又は分泌；疲れ；身体中の一つ又はそれより多い腫瘍の転移；心拍停止及び発作を含む心血管合併症；並びに死亡を含む。
【００１４】
ある態様において、治療の方法は、ＳＴＡＴ３アンチセンス化合物をそれを必要とする個体に投与することを含む。ある態様において、治療の方法は、ＳＴＡＴ３アンチセンスオリゴヌクレオチドをそれを必要とする個体に投与することを含む。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
前記の一般的説明及び以下の詳細な説明の両方が、例示及び説明的のみであり、そして特許請求されるような本発明を制限するものではないことは理解されることである。本明細書中で、単数の使用は、多に具体的に記述されない限り複数を含む。本明細書中で使用される場合、“又は”の使用は、他に記述されない限り“及び／又は”を意味する。更に、用語“含み”並びに“含む”及び“含んで”のような他の形態の使用は、制約的ではない。更に、“要素”又は“成分”のような用語は、一つの単位を含んでなる要素及び成分並びに一つより多い下位単位を含んでなる要素及び成分の両方を、具体的に他に記述しない限り包含する。
【００１６】
本明細書中に使用される項目の表題は、構成上の目的のみであり、そして記載される対象事項を制約すると解釈されるべきではない。制約されるものではないが、特許、特許出願、文献、書籍、及び条約を含む本出願中に引用された全ての文書又は文書の一部は、本明細書中で考察される文書の一部並びにその全てが、参考文献として本明細書中に明確に援用される。
【００１７】
定義
具体的な定義が提供されない限り、本明細書中に記載される分析化学、合成有機化学、並びに医薬及び製薬化学に関連して使用される命名法、並びにその方法及び技術は、当技術において公知であり、そして普通に使用されるものである。標準的技術を、化学合成及び化学分析のために使用することができる。可能な場合、全ての特許、出願、公開された出願及び他の刊行物、国立バイオデータ情報センター（ＮＣＢＩ）のようなデータベースにより得られるＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号及び付属する配列情報、並びに本明細書中に開示されるものの中で言及される他のデータは、本明細書中で考察される文書の一部、並びにその全てが参考文献として援用される。
【００１８】
他に示されない限り、以下の用語は、以下の意味を有する：
“２’−デオキシヌクレオシド”は、デオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）中に天然に存在するような２’−Ｈフラノシル糖部分を含んでなるヌクレオシドを意味する。ある態様において、２’−デオキシヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含んでなることができるか、又はＲＮＡ核酸塩基（例えばウラシル）を含んでなることができる。
【００１９】
“２’−Ｏ−メトキシエチル”（更に２’−ＭＯＥ及び２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３も）は、フラノシル（ｆｕｒｏｓｙｌ）環の２’位のＯ−メトキシ−エチル修飾を指す。２’−Ｏ−メトキシエチルで修飾された糖は、修飾糖である。
【００２０】
“２’−ＭＯＥヌクレオシド”（更に２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドも）は、２’−ＭＯＥで修飾された糖部分を含んでなるヌクレオシドを意味する。
【００２１】
“２’−置換ヌクレオシド”は、２’−位にＨ又はＯＨ以外の置換基を含んでなるヌクレオシドを意味する。他に示さない限り、２’−置換ヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドではない。
【００２２】
“５’−メチルシトシン”は、５’位に接続されたメチル基で修飾されたシトシンを意味する。５−メチルシトシンは、修飾核酸塩基である。
【００２３】
“約”は、数値の±１０％内を意味する。例えば、“化合物は、ＳＴＡＴ３の少なくとも約７０％の阻害に影響した”と記述された場合、これは、ＳＴＡＴ３レベルが６３％ないし７７％の範囲内で阻害されることを意味する。
【００２４】
“活性な医薬剤”は、個体に投与された場合、治療的利益を提供する医薬組成物中の物質又は複数の物質を意味する。例えば、ある態様において、ＳＴＡＴ３を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、活性な医薬剤である。
【００２５】
“活性な標的領域”又は“標的領域”は、一つ又はそれより多い活性なアンチセンス化合物が標的とする領域を意味する。“活性なアンチセンス化合物”は、標的核酸レベル又はタンパク質レベルを減少させるアンチセンス化合物を意味する。
【００２６】
“同時に投与される”は、二つの薬剤の、両方の薬理学的効果が患者中で同時に顕在化されるいずれもの様式の同時投与を指す。同時投与は、両方の薬剤が、一つの医薬組成物中で、同一剤形中で、又は同一の投与の経路で投与される必要はない。両方の薬剤の効果は、それら自体が同時に顕在化される必要はない。効果は、一定の期間重複することのみを必要とし、そして同一の継続期間を持つ必要はない。
【００２７】
“投与”は、個体に医薬剤を提供することを意味し、そして制約されるものではないが、医師による投与及び自己投与を含む。
【００２８】
“改善”は、関連する疾病、疾患、又は症状の少なくとも一つの指標、徴候又は症候の減少を指す。指標の重篤度は、当業者にとって既知の主観的又は客観的方法によって決定することができる。
【００２９】
“動物”は、ヒト、又は制約されるものではないが、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、並びに制約されるものではないが、サル及びチンパンジーを含む非ヒト霊長類を含む非ヒト動物を指す。
【００３０】
“抗体”は、抗原と何らかの方法で特異的に反応することによって特徴づけられる分子を指し、ここで、抗体及び抗原は、それぞれ他の用語で定義される。抗体は、完全な抗体分子或いはそのいずれもの断片又は重鎖、軽鎖、Ｆａｂ領域、及びＦｃ領域のような領域を指すことができる。
【００３１】
“アンチセンス活性”は、アンチセンス化合物のその標的核酸へのハイブリダイゼーションに寄与するいずれもの検出又は測定可能な活性を意味する。ある態様において、アンチセンス活性は、このような標的核酸によってコードされる標的核酸或いはタンパク質の量又は発現の減少である。
【００３２】
“アンチセンス化合物”は、水素結合による標的核酸へのハイブリダイゼーションを受けることが可能なオリゴマー化合物を意味する。アンチセンス化合物の例は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｓｎｏＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、及びサテライト反復のような一本鎖及び二本鎖化合物を含む。
【００３３】
“アンチセンス阻害”は、アンチセンス化合物の非存在中の標的核酸レベル又は標的タンパク質レベルと比較した、標的核酸に対して相補的なアンチセンス化合物の存在中の標的核酸レベル又は標的タンパク質レベルの減少を意味する。
【００３４】
“アンチセンスオリゴヌクレオチド”は、標的核酸の対応する領域又はセグメントへのハイブリダイゼーションを可能にする核酸塩基配列を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。
【００３５】
“二環式糖”は、二つの原子の架橋によって修飾されたフラノシル（ｆｕｒｏｓｙｌ）環を意味する。二環式糖は、修飾糖である。
【００３６】
“二環式ヌクレオシド”（更にＢＮＡも）は、糖環の二つの炭素原子を接続する架橋を含んでなり、これによって二環式環系を形成する糖部分を有するヌクレオシドを意味する。ある態様において、架橋は、糖環の４’−炭素及び２’−炭素を接続する。
【００３７】
“キャップ構造”又は“末端キャップ部分”は、アンチセンス化合物のいずれかの末端に組込まれた化学的修飾を意味する。
【００３８】
“ｃＥｔ”又は“拘束エチル”は、架橋が、式：４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’を有する、４’−炭素及び２’−炭素を接続する架橋を含んでなる糖部分を有する二環式ヌクレオシドを意味する。
【００３９】
“拘束エチルヌクレオシド”（更にｃＥｔヌクレオシドも）は、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋を含んでなる二環式糖部分を含んでなるヌクレオシドを意味する。
【００４０】
“化学的に別個の領域”は、同一アンチセンス化合物の他の領域と何らかの意味で化学的に異なる、アンチセンス化合物の領域を指す。例えば、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオチドを有する領域は、２’−Ｏ−メトキシエチル修飾を持たないヌクレオチドを有する領域と化学的に別個である。
【００４１】
“キメラアンチセンス化合物”は、少なくとも二つの化学的に別個の領域を有するアンチセンス化合物を意味する。
【００４２】
“同時投与”は、二つ又はそれより多い医薬剤の個体への投与を意味する。二つ又はそれより多い医薬剤は、単一の医薬組成物中にあることができ、又は別々の医薬組成物中にあることができる。二つ又はそれより多い医薬剤のそれぞれは、同一又は異なった投与の経路によることができる。同時投与は、並行又は連続投与を包含する。
【００４３】
“相補的”は、第一の核酸及び第二の核酸の核酸塩基間の対形成の能力を意味する。
【００４４】
“連続する核酸塩基”は、互いに直接隣接する核酸塩基を意味する。
【００４５】
“希釈剤”は、薬理学的活性を欠くが、しかし医薬的に必要又は好ましい組成物中の成分を意味する。例えば、注射される組成物中の希釈剤は、液体、例えば生理食塩水溶液であることができる。
【００４６】
“投与量”は、一回の投与で、又は規定された時間内に提供される医薬剤の規定された量を意味する。ある態様において、一定の投与量は、一回、二回、又はそれより多いボーラス、錠剤、又は注射で投与することができる。例えば、ある態様において、皮下投与が所望され、所望の投与量が一回の投与によって容易に適応されない体積を必要とする場合、従って二回又はそれより多い注射を、所望の投与量を達成するために使用することができる。ある態様において、医薬剤は、長い時間をかけた、又は連続的な注入によって投与される。投与量は、時間、日、週、又は月当たりの医薬剤の量として記述することができる。
【００４７】
“有効な量”は、薬剤を必要とする個体において所望の生理学的結果を実現するために十分な、活性な医薬剤の量を意味する。有効な量は、治療される個体の健康及び身体条件、治療される個体の分類学的群、組成物の処方、個体の医学的状態の評価、及び他の関連する因子によって個体間で変化することができる。
【００４８】
“完全に相補的”又は“１００％相補的”は、第一の核酸のそれぞれの核酸塩基が、第二の核酸中に相補的核酸塩基を有することを意味する。ある態様において、第一の核酸は、アンチセンス化合物であり、そして標的核酸が第二の核酸である。
【００４９】
“ギャップマー”は、ＲＮアーゼのＨ開裂を支持する複数のヌクレオシドを有する内部領域が、一つ又はそれより多いヌクレオシドを有する外部領域間に位置するキメラアンチセンス化合物を意味し、ここで、内部領域を含んでなるヌクレオシドは、外部領域を含んでなるヌクレオシド又は複数のヌクレオシドと化学的に別個である。内部領域は“ギャップ”と呼ぶことができ、そして外部領域は“ウイング”と呼ぶことができる。
【００５０】
“拡大ギャップ（Ｇａｐ−ｗｉｄｅｎｅｄ）”は、１ないし６個のヌクレオシドを有する５’及び３’ウイングセグメントの間に、そして直接的に隣接して位置する、１２個又はそれより多い連続する２’−デオキシリボヌクレオシドのギャップセグメントを有するキメラアンチセンス化合物を意味する。
【００５１】
“ハイブリダイゼーション”は、相補的核酸分子のアニーリングを意味する。ある態様において、相補的核酸分子は、アンチセンス化合物及び標的核酸を含む。
【００５２】
“過剰増殖性疾病”は、細胞の急速な又は過剰な増殖及び複製によって特徴づけられる疾病を意味する。過剰増殖性疾病の例は、癌、例えば、細胞腫、肉腫、リンパ腫、及び白血病、並びに関連する悪性腫瘍及び転移を含む。
【００５３】
“過剰増殖性疾病に対する危険性がある動物を確認すること”は、過剰増殖性疾病を持つと診断された動物を確認する、又は過剰増殖性疾病を発症しやすい動物を確認することを意味する。過剰増殖性疾病を発症しやすい個体は、老化；他の過剰増殖性疾病の履歴；タバコ使用の履歴；日光及び／又はイオン化照射に対する暴露の履歴；ある種の化学薬品との事前の接触、特に連続的接触；ある種のウイルス及び細菌による過去の又は現時点の感染；ある種のホルモン療法の事前の又は現時点の使用；遺伝子的素因；アルコールの使用；及び不良な食事制限、身体活動性の欠如、及び／又は過体重を含むある種の生活習慣の選択を含む過剰増殖性疾病に対する一つ又はそれより多い危険因子を有するものを含む。このような確認は、個体の医学的履歴の評価及び標準的な臨床試験又は評価を含むいずれもの方法によって達成することができる。
【００５４】
“直接隣接する”は、直接的に隣接する要素間に介在する要素がないことを意味する。
【００５５】
“ＳＴＡＴ３を阻害すること”は、ＳＴＡＴ３アンチセンスオリゴヌクレオチドを含むＳＴＡＴ３アンチセンス化合物の存在中のＳＴＡＴ３のｍＲＮＡの発現及び／又はタンパク質レベルを、アンチセンスオリゴヌクレオチドのようなＳＴＡＴ３アンチセンス化合物の非存在中のＳＴＡＴ３のｍＲＮＡの発現及び／又はタンパク質レベルの発現と比較して減少することを意味する。
【００５６】
“個体”は、治療又は療法のために選択されたヒト又は非ヒト動物を意味する。
【００５７】
“ヌクレオシド間結合”は、ヌクレオシド間の化学的結合を指す。
【００５８】
“結合されたヌクレオシド”は、一緒に結合された隣接するヌクレオシドを意味する。
【００５９】
“ミスマッチ”又は“非相補性核酸塩基”は、第一の核酸の核酸塩基が、第二の又は標的核酸の対応する核酸塩基と対形成が可能ではない事例を指す。
【００６０】
“修飾ヌクレオシド間結合”は、天然に存在するヌクレオシド間結合（即ち、ホスホジエステルヌクレオシド間結合）の置換又はいずれもの変化を指す。
【００６１】
“修飾核酸塩基”は、アデニン、シトシン、グアニン、チミジン、又はウラシル以外のいずれもの核酸塩基を指す。“非修飾核酸塩基”は、プリン塩基のアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、並びにピリミジン塩基のチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）を意味する。
【００６２】
“修飾ヌクレオチド”は、独立に、修飾糖部分、修飾ヌクレオシド間結合、又は修飾核酸塩基を有するヌクレオチドを意味する。“修飾ヌクレオシド”は、独立に、修飾糖部分又は修飾核酸塩基を有するヌクレオシドを意味する。
【００６３】
“修飾オリゴヌクレオチド”は、修飾ヌクレオシド間結合、修飾糖、及び／又は修飾核酸塩基を含んでなるオリゴヌクレオチドを意味する。
【００６４】
“修飾糖”は、天然の糖の置換又は変化を意味する。
【００６５】
“モチーフ”は、アンチセンス化合物中の化学的に別個の領域のパターンを意味する。
【００６６】
“天然に存在するヌクレオシド間結合”は、３’から５’へのホスホジエステル結合を意味する。
【００６７】
“天然の糖部分”は、ＤＮＡ（２’−Ｈ）又はＲＮＡ（２’−ＯＨ）中に見出される糖を意味する。
【００６８】
“核酸”は、モノマーのヌクレオチドから構成される分子を指す。核酸は、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、一本鎖核酸、二本鎖核酸、低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）、及びマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）を含む。
【００６９】
“核酸塩基”は、他の核酸の塩基と対形成することが可能な複素環式部分を意味する。
【００７０】
“核酸塩基配列”は、いずれもの糖、結合、又は核酸塩基修飾に関わらず、連続する核酸塩基の順序を意味する。
【００７１】
“ヌクレオシド”は、糖に結合した核酸塩基を意味する。
【００７２】
“ヌクレオシド模倣物”は、糖又は糖及び塩基を置換するために使用される構造の、そして必ずしも例えばモルホリノ、シクロヘキセニル、シクロヘキシル、テトラヒドロピラニル、ビシクロ又はトリシクロ糖模倣物、例えば非フラノース糖単位を有するヌクレオシド模倣物のようなオリゴマー化合物の一つ又はそれより多い位置における結合ではないものを含む。ヌクレオチド模倣物は、ヌクレオシドを置換するために使用される構造のもの、及び例えばペプチド核酸又はモルホリノ（−Ｎ（Ｈ）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−又は他の非ホスホジエステル結合によって結合されたモルホリノ）のようなオリゴマー化合物の一つ又はそれより多い位置における結合を含む。糖代替物は、僅かに広範な用語のヌクレオシド模倣物と重複するが、しかし糖単位（フラノース環）の置換のみを示すことを意図している。本明細書中に提供されるテトラヒドロピラニル環は、フラノース糖基がテトラヒドロピラニル環系で置換されたフラノース糖基である糖代替物の例の例示である。
【００７３】
“ヌクレオチド”は、ヌクレオシドの糖部分に共有的に結合したリン酸基を有するヌクレオシドを意味する。
【００７４】
“オフターゲット効果”は、意図する標的核酸以外の遺伝子のＲＮＡ又はタンパク質発現の調節に伴う所望しない或いは有害な生物学的効果を指す。
【００７５】
“オリゴマー化合物”又は“オリゴマー”は、核酸分子の少なくとも一つの領域にハイブリダイズすることが可能な結合されたモノマーのサブユニットのポリマーを意味する。
【００７６】
“オリゴヌクレオチド”は、そのそれぞれが互いに独立に修飾され又は非修飾であることができる結合されたヌクレオシドのポリマーを意味する。
【００７７】
“非経口投与”は、注射（例えばボーラス注射）又は注入による投与を意味する。非経口投与は、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与、或いは頭蓋内投与、例えば、くも膜下腔内又は脳室内投与を含む。
【００７８】
“ペプチド”は、アミノ結合による少なくとも二つのアミノ酸を結合することによって形成される分子を意味する。
【００７９】
“医薬組成物”は、個体への投与のために適した物質の混合物を意味する。例えば、医薬組成物は、一つ又はそれより多い活性な医薬剤及び滅菌水溶液を含んでなることができる。ある態様において、医薬組成物は、ある種の細胞株の自由取込みアッセイにおいて活性を示す。
【００８０】
“医薬的に受容可能な誘導体”は、本明細書中に記載される化合物の医薬的に受容可能な塩、複合体、プロドラッグ又は異性体を包含する。
【００８１】
“医薬的に受容可能な塩”は、アンチセンス化合物の生理学的に、そして医薬的に受容可能な塩、即ち、親オリゴヌクレオチドの所望の生物学的活性を保持し、そしてそれに対して所望しない毒物学的効果を与えない塩を意味する。
【００８２】
“ホスホロチオエート結合”は、ホスホジエステル結合が、非架橋酸素原子の一つを硫黄原子によって置換することによって修飾ヌクレオシド間の結合を意味する。ホスホロチオエート結合（Ｐ＝Ｓ）は、修飾ヌクレオシド間結合である。
【００８３】
“部分”は、核酸の規定された数の連続する（即ち、結合した）核酸塩基を意味する。ある態様において、部分は、標的核酸の規定された数の連続する核酸塩基である。ある態様において、部分は、アンチセンス化合物の規定された数の連続する核酸塩基である。
【００８４】
“予防する”は、疾病、疾患、又は症状の開始又は発症を、数分ないし無制限に遅延するか或いは未然に防ぐことを指す。予防は、更に疾病、疾患、又は症状を発生する危険性を減少させることを意味する。
【００８５】
“プロドラッグ”は、内在性酵素又は他の化学薬品或いは条件の作用によって身体又はその細胞内で活性な形態に転換される不活性な形態で調製される治療剤を意味する。
【００８６】
“副作用”は、所望の効果以外の治療に起因する生理学的反応を意味する。ある態様において、副作用は、注射部位反応、肝機能試験異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常、筋障害、及び倦怠感を含む。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの増加は、肝毒性又は肝機能異常を示すことができる。例えば、ビリルビンの増加は、肝毒性又は肝機能異常を示すことができる。
【００８７】
“転写のシグナル伝達及び活性化因子３核酸”又は“ＳＴＡＴ３核酸”は、ＳＴＡＴ３をコードするいずれもの核酸を意味する。例えば、ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸は、ＳＴＡＴ３をコードするＤＮＡ配列、ＳＴＡＴ３をコードするＤＮＡ（イントロン及びエクソンを含んでなるゲノムＤＮＡを含む）から転写されたＲＮＡ配列、及びＳＴＡＴ３をコードするｍＲＮＡ配列を含む。“ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ”は、ＳＴＡＴ３タンパク質をコードするｍＲＮＡを意味する。
【００８８】
“一本鎖オリゴヌクレオチド”は、相補鎖にハイブリダイズされていないオリゴヌクレオチドを意味する。
【００８９】
“特異的にハイブリダイズ可能な”は、特異的結合が所望される条件下で、即ち、ｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ及び療法的治療の場合の生理学的条件下で、非標的核酸に対して最小の効果を示すか、効果を示さないが、所望の効果を誘発するためにアンチセンスオリゴヌクレオチド及び標的核酸間に十分な程度の相補性を有するアンチセンス化合物を指す。
【００９０】
“標的とする”又は“標的化”は、標的核酸に特異的にハイブリダイズし、そして所望の効果を誘発するものであるアンチセンス化合物の設計及び選択の過程を意味する。
【００９１】
“標的核酸”、“標的ＲＮＡ”、“標的ｍＲＮＡ”、及び“標的ＲＮＡ転写物”は、全てアンチセンス化合物によって標的とされることが可能な核酸を指す。
【００９２】
“標的セグメント”は、アンチセンス化合物が標的とする標的核酸のヌクレオチドの配列を意味する。“５’標的部位”は、標的セグメントの最も５’側のヌクレオチドを指す。“３’標的部位”は、標的セグメントの最も３’側のヌクレオチドを指す。
【００９３】
“治療的に有効な量”は、治療的利益を個体に提供する医薬剤の量を意味する。
【００９４】
“治療する”は、疾病、疾患、又は症状の変化或いは改善を達成するために医薬組成物を投与することを指す。
【００９５】
“非修飾ヌクレオチド”は、天然に存在する核酸塩基、糖部分、及びヌクレオシド間結合から構成されるヌクレオチドを意味する。ある態様において、非修飾ヌクレオチドは、ＲＮＡヌクレオチド（即ち、β−Ｄ−リボヌクレオシド）又はＤＮＡヌクレオチド（即ち、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド）である。
【００９６】
ある種の態様
ある態様において、提供されるものは、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ又はタンパク質発現を阻害するための方法、化合物、及び組成物である。
【００９７】
ある態様において、提供されるものは、腫瘍及び腫瘍の体積の成長を予防するための方法である。ある態様において、提供されるものは、腫瘍の成長及び腫瘍の体積を減少させるための方法である。
【００９８】
ある態様において、提供されるものは、それを必要とする個体におけるＳＴＡＴ３に伴う疾病、疾患、及び症状の治療、予防、或いは改善のための方法、化合物、及び組成物である。更に意図されるものは、ＳＴＡＴ３に伴う疾病、疾患、又は症状の治療、予防、或いは改善のための医薬の調製のための方法及び化合物である。ＳＴＡＴ３に関連する疾病、疾患、及び症状は、過剰増殖性疾病、例えば、癌、細胞腫、肉腫、リンパ腫、及び白血病、並びに関連する悪性腫瘍及び転移を含む。
【００９９】
ある態様において、提供されるものは、ＳＴＡＴ３に関連する疾病の治療、予防、又は改善において使用するためのＳＴＡＴ３アンチセンス化合物である。ある態様において、ＳＴＡＴ３化合物は、細胞、組織、又は動物中においてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ及び／又はＳＴＡＴ３タンパク質の発現を阻害することが可能な、ＳＴＡＴ３アンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【０１００】
ある態様において、提供されるものは、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含む肺癌、膵臓癌、結腸直腸癌、多発性骨髄腫、肝細胞癌（ＨＣＣ）、神経膠芽腫、卵巣癌、骨肉腫、頭頸部癌、乳癌、類表皮癌、腸管腺腫、前立腺癌、及び胃癌の治療又は予防において使用するための本明細書中に記載されるようなＳＴＡＴ３アンチセンス化合物である。
【０１０１】
ある態様において、提供されるものは、転移からの癌の治療又は予防において使用するための本明細書中に記載されるようなＳＴＡＴ３アンチセンス化合物である。
【０１０２】
ある態様において、提供されるものは、過剰増殖性疾病、例えば、癌、細胞腫、肉腫、リンパ腫、及び白血病、並びに関連する悪性腫瘍及び転移の治療、予防、又は改善において使用するための本明細書中に記載されるようなＳＴＡＴ３アンチセンス化合物である。
【０１０３】
ある態様において、提供されるものは、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物である。ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸は、ＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号ＮＭ＿１３９２７６．２に記載される配列のいずれか（配列番号：１として本明細書中に援用される）又はヌクレオチド４１８５０００ないし４２６４０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号ＮＴ＿０１０７５５．１４の相補物（配列番号：２として本明細書中に援用される）である。
【０１０４】
ある態様において、本明細書中で提供されるアンチセンス化合物は、配列番号１の次の領域：２５０−２８６；２５０−２８５；２６４−２８５；２６４−２８２；７２８−７４５；７２９−７４５；７２９−７４４；７８７−８０３；８６７−８８３；９５５−９７８；１１４６−１１７０；１８９６−１９２０；１８９９−１９２０；１８９９−１９１９；１８９９−１９１８；１８９９−１９１６；１９０１−１９１６；１９４６−１９６３；１９４７−１９６３；２１５５−２２０５；２１５５−２１８７；２１５６−２１７９；２２０４−２２２１；２６８１−２６９６；２６９９−２７１６；３００１−３０３３；３００８−３０３３、３０１０−３０３３、３０１０−３０３２、３０１５−３０３３，３０１５−３０３２、３０１５−３０３１、３０１６−３０３３、３０１６−３０３２，３０１６−３０３３；３４５２−３４９９；３４６０−３４７６；３５８３−３６０８；３５９１−３６１６；３５９５−３６１５；３５９５−３６１４；３５９５−３６１２；３６７５−３７０６；３７１３−３７９０；３７１５−３７３５；３８３３−３８７８；３８８９−３９３２；３９７７−４０１２；４０６７−４１００；４２２５−４２５６；４２３４−４２５２；４２３５−４２５２；４２３５−４２５１；４２３６−４２５２；４３０６−４３４１；４４３１−４４５６；４４３９−４４５４；４４７１−４５１０；４４８８−４５０５；４５３０−４５５８；４５３９−４５７２；４５４１−４５５８；４６３６−４８０１；４７８２−４７９６；４８００−４８２３；４８１１−４８４７；４８１３−４８５９；４８１３−４８１５；４８１３−４８３１；４８２７−４８５９；４８２７−４８４４；４８４２−４８５９のいずれか一つを標的とする。
【０１０５】
ある態様において、本明細書中に提供されるアンチセンス化合物は、配列番号１の次の領域：２５０−２８６；２５０−２８５；２６４−２８５；２６４−２８２；７２８−７４５；７２９−７４５；７２９−７４４；７８７−８０３；８６７−８８３；９５５−９７８；１１４６−１１７０；１８９６−１９２０；１８９９−１９２０；１８９９−１９１９；１８９９−１９１８；１８９９−１９１６；１９０１−１９１６；１９４６−１９６３；１９４７−１９６３；２１５５−２２０５；２１５５−２１８７；２１５６−２１７９；２２０４−２２２１；２６８１−２６９６；２６９９−２７１６；３００１−３０３３；３００８−３０３３、３０１０−３０３３、３０１０−３０３２、３０１５−３０３３、３０１５−３０３２、３０１５−３０３１、３０１６−３０３３、３０１６−３０３２，３０１６−３０３３；３４５２−３４９９；３４６０−３４７６；３５８３−３６０８；３５９１−３６１６；３５９５−３６１５；３５９５−３６１４；３５９５−３６１２；３６７５−３７０６；３７１３−３７９０；３７１５−３７３５；３８３３−３８７８；３８８９−３９３２；３９７７−４０１２；４０６７−４１００；４２２５−４２５６；４２３４−４２５２；４２３５−４２５２；４２３５−４２５１；４２３６−４２５２；４３０６−４３４１；４４３１−４４５６；４４３９−４４５４；４４７１−４５１０；４４８８−４５０５；４５３０−４５５８；４５３９−４５７２；４５４１−４５５８；４６３６−４８０１；４７８２−４７９６；４８００−４８２３；４８１１−４８４７；４８１３−４８５９；４８１３−４８１５；４８１３−４８３１；４８２７−４８５９；４８２７−４８４４；４８４２−４８５９のいずれか一つと相補的である。ある態様において、提供されるものは：
修飾されたアンチセンスオリゴヌクレオチドが：
１ないし５個の結合したヌクレオシドからなる５’−ウイング；
１ないし５個の結合したヌクレオシドからなる３’−ウイング；
８ないし１２個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなる５’−ウイング及び３’−ウイング間のギャップ；
を含んでなり；そしてここで、５’−ウイング及び３’−ウイングの少なくとも一方が、少なくとも一つの二環式ヌクレオシド又は２’−置換ヌクレオシドを含んでなる；
１２ないし２２個の結合したヌクレオシドからなる修飾されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを含んでなる化合物であり；
ここで、修飾されたアンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号：１の核酸塩基配列の核酸塩基２５０−２８６；２５０−２８５；２６４−２８５；２６４−２８２；７２８−７４５；７２９−７４５；７２９−７４４；７８７−８０３；８６７−８８３；９５５−９７８；１１４６−１１７０；１８９６−１９２０；１８９９−１９２０；１８９９−１９１９；１８９９−１９１８；１８９９−１９１６；１９０１−１９１６；１９４６−１９６３；１９４７−１９６３；２１５５−２２０５；２１５５−２１８７；２１５６−２１７９；２２０４−２２２１；２６８１−２６９６；２６９９−２７１６；３００１−３０３３；３００８−３０３３、３０１０−３０３３、３０１０−３０３２、３０１５−３０３３、３０１５−３０３２、３０１５−３０３１、３０１６−３０３３、３０１６−３０３２、３０１６−３０３３；３４５２−３４９９；３４６０−３４７６；３５８３−３６０８；３５９１−３６１６；３５９５−３６１５；３５９５−３６１４；３５９５−３６１２；３６７５−３７０６；３７１３−３７９０；３７１５−３７３５；３８３３−３８７８；３８８９−３９３２；３９７７−４０１２；４０６７−４１００；４２２５−４２５６；４２３４−４２５２；４２３５−４２５２；４２３５−４２５１；４２３６−４２５２；４３０６−４３４１；４４３１−４４５６；４４３９−４４５４；４４７１−４５１０；４４８８−４５０５；４５３０−４５５８；４５３９−４５７２；４５４１−４５５８；４６３６−４８０１；４７８２−４７９６；４８００−４８２３；４８１１−４８４７；４８１３−４８５９；４８１３−４８１５；４８１３−４８３１；４８２７−４８５９；４８２７−４８４４；４８４２−４８５９のいずれかの等しい長さの部分と相補的である。
【０１０６】
ある態様において、本明細書中に提供されるアンチセンス化合物は、配列番号２の次の領域：２６６８−２６８８；２７０３−２７２０；５０００−５０２１；５００１−５０１７；５６９７−５７２２；５６９９−５７１６；６４７５−６４９０；６４７５−６４９１；６４７６−６４９１；７６８２−７７０５；８０７８−８０９７；８０７９−８０９５；９８６２−９８１１；９８７０−９８９７；９８７５−９８９３；９８７５−９８９１；９８７７−９８９３；１１６９９−１１７１９；１２３４２−１２３６６；１２３４５−１２３６４；１２３４６−１２３６４；１２３４７−１２３６４；１２３５３−１２３８０；１２３５７−１２３７６；１２３５８−１２３７６；１２３５８−１２３７３；１２３６０−１２３７６；１４１２８−１４１４８；１６８６３−１６８８３；４６０９１−４６１１１；５０６９２−５０７０９；５０６９３−５０７０９；５０６９３−５０７０８；６１３２５−６１３４９；６６１３３−６６１５７；６６１３６−６６１５７；６６１３６−６６１５５；６６１３６−６６１５３；６６１３８−６６１５３；６６１８４−６６２００；６７０６７−６７０８３；４１７１−７４２２０；７４１９９−７４２２０；７４２０２−７４２２０；７４１７１−７４２１９；７４１９９−７４２１９；  ７４２０２−７４２１９；７４１７１−７４２１８；７４１９９−７４２１８；７４２０２−７４２１８；７４７２３−７４７６８；７４７６４−７４８０３；７４７８２−７４８０２；７４７８２−７４８０１；７４７８２−７４８００；７４７８２−７４７９９；７４７８３−７４８０２；７４７８３−７４８０１；７４７８３−７４８００；７４７８３−７４７９９；７４８６２−７４８９３；７４９００−７４９７７；７４９０２−７４９２２；７４９０２−７４９２０；７５０７０−７５１１９；７５１６４−７５１９９；７５２５４−７５２８７；７５４１２−７５４４３；７５４２１−７５４３９；７５４２２−７５４３９；７５４２２−７５４３８；７５４２３−７５４３９；７５４２３−７５４３８；７５４９３−７５５２８；７５６１６−７５６４３；７５６２６−７５６４１；７５６５８−７５６９９；７５６７６−７５６９２；７５７１７−７５７４５；７５７２６−７５７５９；７５７２６−７５７４５；７５７２７−７５７４５；７５７２８−７５７４５；７５８３１−７５９８８；７５８５２−７５９６９；７５９６９−７５９８４；７５９８７−７６０５６；７６０００−７６０４６；７６０００−７６０３２；７６０００−７６０１８；７６０１４−７６０４６；７６０１４−７６０３２；７６０２９−７６０４６；及び７６０３１−７６０４６のいずれか一つを標的とする。
【０１０７】
ある態様において、本明細書中に提供されるアンチセンス化合物は、配列番号２の次の領域：２６６８−２６８８；２７０３−２７２０；５０００−５０２１；５００１−５０１７；５６９７−５７２２；５６９９−５７１６；６４７５−６４９０；６４７５−６４９１；６４７６−６４９１；７６８２−７７０５；８０７８−８０９７；８０７９−８０９５；９８６２−９８１１；９８７０−９８９７；９８７５−９８９３；９８７５−９８９１；９８７７−９８９３；１１６９９−１１７１９；１２３４２−１２３６６；１２３４５−１２３６４；１２３４６−１２３６４；１２３４７−１２３６４；１２３５３−１２３８０；１２３５７−１２３７６；１２３５８−１２３７６；１２３５８−１２３７３；１２３６０−１２３７６；１４１２８−１４１４８；１６８６３−１６８８３；４６０９１−４６１１１；５０６９２−５０７０９；５０６９３−５０７０９；５０６９３−５０７０８；６１３２５−６１３４９；６６１３３−６６１５７；６６１３６−６６１５７；６６１３６−６６１５５；６６１３６−６６１５３；６６１３８−６６１５３；６６１８４−６６２００；６７０６７−６７０８３；４１７１−７４２２０；７４１９９−７４２２０；７４２０２−７４２２０；７４１７１−７４２１９；７４１９９−７４２１９；７４２０２−７４２１９；７４１７１−７４２１８；７４１９９−７４２１８；７４２０２−７４２１８；７４７２３−７４７６８；７４７６４−７４８０３；７４７８２−７４８０２；７４７８２−７４８０１；７４７８２−７４８００；７４７８２−７４７９９；７４７８３−７４８０２；７４７８３−７４８０１；７４７８３−７４８００；７４７８３−７４７９９；７４８６２−７４８９３；７４９００−７４９７７；７４９０２−７４９２２；７４９０２−７４９２０；７５０７０−７５１１９；７５１６４−７５１９９；７５２５４−７５２８７；７５４１２−７５４４３；７５４２１−７５４３９；７５４２２−７５４３９；７５４２２−７５４３８；７５４２３−７５４３９；７５４２３−７５４３８；７５４９３−７５５２８；７５６１６−７５６４３；７５６２６−７５６４１；７５６５８−７５６９９；７５６７６−７５６９２；７５７１７−７５７４５；７５７２６−７５７５９；７５７２６−７５７４５；７５７２７−７５７４５；７５７２８−７５７４５；７５８３１−７５９８８；７５８５２−７５９６９；７５９６９−７５９８４；７５９８７−７６０５６；７６０００−７６０４６；７６０００−７６０３２；７６０００−７６０１８；７６０１４−７６０４６；７６０１４−７６０３２；７６０２９−７６０４６；及び７６０３１−７６０４６のいずれか一つと相補的である。
【０１０８】
ある態様において、提供されるものは：
修飾されたアンチセンスオリゴヌクレオチドが：
１ないし５個の結合したヌクレオシドからなる５’−ウイング；
１ないし５個の結合したヌクレオシドからなる３’−ウイング；
８ないし１２個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなる５’−ウイング及び３’−ウイング間のギャップ；
を含んでなり；そしてここで、５’−ウイング及び３’−ウイングの少なくとも一方が、少なくとも一つの二環式ヌクレオシド又は２’−置換ヌクレオシドを含んでなる；
１２ないし２２個の結合したヌクレオシドからなる修飾されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを含んでなる化合物であり；
ここで、修飾されたアンチセンスオリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号：２の核酸塩基配列の核酸塩基２６６８−２６８８；２７０３−２７２０；５０００−５０２１；５００１−５０１７；５６９７−５７２２；５６９９−５７１６；６４７５−６４９０；６４７５−６４９１；６４７６−６４９１；７６８２−７７０５；８０７８−８０９７；８０７９−８０９５；９８６２−９８１１；９８７０−９８９７；９８７５−９８９３；９８７５−９８９１；９８７７−９８９３；１１６９９−１１７１９；１２３４２−１２３６６；１２３４５−１２３６４；１２３４６−１２３６４；１２３４７−１２３６４；１２３５３−１２３８０；１２３５７−１２３７６；１２３５８−１２３７６；１２３５８−１２３７３；１２３６０−１２３７６；１４１２８−１４１４８；１６８６３−１６８８３；４６０９１−４６１１１；５０６９２−５０７０９；５０６９３−５０７０９；５０６９３−５０７０８；６１３２５−６１３４９；６６１３３−６６１５７；６６１３６−６６１５７；６６１３６−６６１５５；６６１３６−６６１５３；６６１３８−６６１５３；６６１８４−６６２００；６７０６７−６７０８３；４１７１−７４２２０；７４１９９−７４２２０；７４２０２−７４２２０；７４１７１−７４２１９；７４１９９−７４２１９；７４２０２−７４２１９；７４１７１−７４２１８；７４１９９−７４２１８；７４２０２−７４２１８；７４７２３−７４７６８；７４７６４−７４８０３；７４７８２−７４８０２；７４７８２−７４８０１；７４７８２−７４８００；７４７８２−７４７９９；７４７８３−７４８０２；７４７８３−７４８０１；７４７８３−７４８００；７４７８３−７４７９９；７４８６２−７４８９３；７４９００−７４９７７；７４９０２−７４９２２；７４９０２−７４９２０；７５０７０−７５１１９；７５１６４−７５１９９；７５２５４−７５２８７；７５４１２−７５４４３；７５４２１−７５４３９；７５４２２−７５４３９；７５４２２−７５４３８；７５４２３−７５４３９；７５４２３−７５４３８；７５４９３−７５５２８；７５６１６−７５６４３；  ７５６２６−７５６４１；７５６５８−７５６９９；７５６７６−７５６９２；７５７１７−７５７４５；７５７２６−７５７５９；７５７２６−７５７４５；７５７２７−７５７４５；７５７２８−７５７４５；７５８３１−７５９８８；７５８５２−７５９６９；７５９６９−７５９８４；７５９８７−７６０５６；７６０００−７６０４６；７６０００−７６０３２；７６０００−７６０１８；７６０１４−７６０４６；７６０１４−７６０３２；７６０２９−７６０４６；及び７６０３１−７６０４６のいずれかの等しい長さの部分と相補的である。
【０１０９】
ある態様は、配列番号：１の核酸塩基３００８から３０３３の等しい長さの部分と相補的な、少なくとも１２個の連続する核酸塩基の部分を含んでなる核酸塩基配列を有する１２ないし３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物を提供し、ここで、核酸塩基配列は、配列番号：１と相補的である。
【０１１０】
ある態様は、配列番号：１の核酸塩基３０１６から３０３１の等しい長さの部分と相補的な、少なくとも１２個の連続する核酸塩基の部分を含んでなる核酸塩基配列を有する１２ないし３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物を提供し、ここで、核酸塩基配列は、配列番号：１と相補的である。
【０１１１】
ある態様は、配列番号：２の核酸塩基６４７６から６４９１の等しい長さの部分と相補的な、少なくとも１２個の連続する核酸塩基の部分を含んでなる核酸塩基配列を有する１２ないし３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物を提供し、ここで、核酸塩基配列は、配列番号：２と相補的である。
【０１１２】
ある態様は、配列番号：１の核酸塩基２５０−２８６；２５０−２８５；２６４−２８５；２６４−２８２；７２８−７４５；７２９−７４５；７２９−７４４；７８７−８０３；８６７−８８３；９５５−９７８；１１４６−１１７０；１８９６−１９２０；１８９９−１９２０；１８９９−１９１９；１８９９−１９１８；１８９９−１９１６；１９０１−１９１６；１９４６−１９６３；１９４７−１９６３；２１５５−２２０５；２１５５−２１８７；２１５６−２１７９；２２０４−２２２１；２６８１−２６９６；２６９９−２７１６；３００１−３０３３；３００８−３０３３、３０１０−３０３３、３０１０−３０３２、３０１５−３０３３、３０１５−３０３２、３０１５−３０３１、３０１６−３０３３、３０１６−３０３２、３０１６−３０３３；３４５２−３４９９；３４６０−３４７６；３５８３−３６０８；３５９１−３６１６；３５９５−３６１５；３５９５−３６１４；３５９５−３６１２；３６７５−３７０６；３７１３−３７９０；３７１５−３７３５；３８３３−３８７８；３８８９−３９３２；３９７７−４０１２；４０６７−４１００；４２２５−４２５６；４２３４−４２５２；４２３５−４２５２；４２３５−４２５１；４２３６−４２５２；４３０６−４３４１；４４３１−４４５６；４４３９−４４５４；４４７１−４５１０；４４８８−４５０５；４５３０−４５５８；４５３９−４５７２；４５４１−４５５８；４６３６−４８０１；４７８２−４７９６；４８００−４８２３；４８１１−４８４７；４８１３−４８５９；４８１３−４８１５；４８１３−４８３１；４８２７−４８５９；４８２７−４８４４；又は４８４２−４８５９の等しい長さの部分と相補的な、少なくとも１２個の連続する核酸塩基の部分を含んでなる核酸塩基配列を有する１２ないし３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物を提供し、ここで、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号：１と相補的である。
【０１１３】
ある態様は、配列番号：２の核酸塩基２６６８−２６８８；２７０３−２７２０；５０００−５０２１；５００１−５０１７；５６９７−５７２２；５６９９−５７１６；６４７５−６４９０；６４７５−６４９１；６４７６−６４９１；７６８２−７７０５；８０７８−８０９７；８０７９−８０９５；９８６２−９８１１；９８７０−９８９７；９８７５−９８９３；９８７５−９８９１；９８７７−９８９３；１１６９９−１１７１９；１２３４２−１２３６６；１２３４５−１２３６４；１２３４６−１２３６４；１２３４７−１２３６４；１２３５３−１２３８０；１２３５７−１２３７６；１２３５８−１２３７６；１２３５８−１２３７３；１２３６０−１２３７６；１４１２８−１４１４８；１６８６３−１６８８３；４６０９１−４６１１１；５０６９２−５０７０９；５０６９３−５０７０９；５０６９３−５０７０８；６１３２５−６１３４９；６６１３３−６６１５７；６６１３６−６６１５７；６６１３６−６６１５５；６６１３６−６６１５３；６６１３８−６６１５３；６６１８４−６６２００；６７０６７−６７０８３；４１７１−７４２２０；７４１９９−７４２２０；７４２０２−７４２２０；７４１７１−７４２１９；７４１９９−７４２１９；７４２０２−７４２１９；７４１７１−７４２１８；７４１９９−７４２１８；７４２０２−７４２１８；７４７２３−７４７６８；７４７６４−７４８０３；７４７８２−７４８０２；７４７８２−７４８０１；７４７８２−７４８００；７４７８２−７４７９９；７４７８３−７４８０２；７４７８３−７４８０１；７４７８３−７４８００；７４７８３−７４７９９；７４８６２−７４８９３；７４９００−７４９７７；７４９０２−７４９２２；７４９０２−７４９２０；７５０７０−７５１１９；７５１６４−７５１９９；７５２５４−７５２８７；７５４１２−７５４４３；７５４２１−７５４３９；７５４２２−７５４３９；７５４２２−７５４３８；７５４２３−７５４３９；７５４２３−７５４３８；７５４９３−７５５２８；７５６１６−７５６４３；７５６２６−７５６４１；７５６５８−７５６９９；７５６７６−７５６９２；７５７１７−７５７４５；７５７２６−７５７５９；７５７２６−７５７４５；７５７２７−７５７４５；７５７２８−７５７４５；７５８３１−７５９８８；７５８５２−７５９６９；７５９６９−７５９８４；７５９８７−７６０５６；７６０００−７６０４６；７６０００−７６０３２；７６０００−７６０１８；７６０１４−７６０４６；７６０１４−７６０３２；７６０２９−７６０４６；又は７６０３１−７６０４６の等しい長さの部分と相補的な、少なくとも１２個の連続する核酸塩基の部分を含んでなる核酸塩基配列を有する１２ないし３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物を提供し、ここで、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号：２と相補的である。
【０１１４】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号：２４５の配列を含んでなる。
【０１１５】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号：２４５の配列からなる。
【０１１６】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号：４１３の配列を含んでなる。
【０１１７】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号：４１３の配列からなる。
【０１１８】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号：１又は２と１００％相補的である。
【０１１９】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、一本鎖修飾オリゴヌクレオチドからなる。
【０１２０】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つの修飾ヌクレオシド間結合を有する。
【０１２１】
ある態様において、それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０１２２】
ある態様において、少なくとも一つのヌクレオシドは、修飾糖である。
【０１２３】
ある態様において、少なくとも一つの修飾糖は、二環式糖である。
【０１２４】
ある態様において、二環式糖は、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’架橋を含んでなる。
【０１２５】
ある態様において、二環式糖は、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋を含んでなる。
【０１２６】
ある態様において、修飾糖は、２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３基を含んでなる。
【０１２７】
ある態様において、修飾糖は、２’−ＯＣＨ３基を含んでなる。
【０１２８】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも一つのヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含んでなる。
【０１２９】
ある態様において、修飾核酸塩基は、５’−メチルシトシンである。
【０１３０】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは：
１ないし５個の結合されたヌクレオシドからなる５’−ウイング；
１ないし５個の結合されたヌクレオシドからなる３’−ウイング；
８ないし１２個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなる５’−ウイング及び３’−ウイング間のギャップを含んでなり；そして
ここで、５’−ウイング及び３’−ウイングの少なくとも一方は、少なくとも一つの二環式ヌクレオシド又は一つの２’−置換ヌクレオシドを含んでなる。
【０１３１】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは：
１ないし５個の結合されたヌクレオシドからなる５’−ウイング；
１ないし５個の結合されたヌクレオシドからなる３’−ウイング；
８ないし１２個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなる５’−ウイング及び３’−ウイング間のギャップを含んでなり；そして
ここで、５’−ウイング及び３’−ウイングの少なくとも一方は、少なくとも一つの二環式ヌクレオシド及び少なくとも一つの２’−置換ヌクレオシドを含んでなる。
【０１３２】
ある態様において、２’−置換ヌクレオシドは、２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３  基又は２’−Ｏ−ＣＨ３基からなる基のいずれかを含んでなる。
【０１３３】
ある態様において、二環式ヌクレオシドは、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’架橋及び４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋からなる基のいずれかを含んでなる。
【０１３４】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは：
３個の結合されたヌクレオシドからなる５’−ウイング；
３個の結合されたヌクレオシドからなる３’−ウイング；
１０個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなる５’−ウイング及び３’−ウイング間のギャップを含んでなり； 
ここで、それぞれの５’−ウイング及び３’−ウイングのそれぞれのヌクレオシドは、拘束エチルヌクレオシドを含んでなり；
ここで、それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり；そして
ここで、それぞれのシトシンは、５’−メチルシトシンである。
【０１３５】
ある態様は、１２ないし３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなり、そして配列番号：２４５の核酸塩基配列の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含んでなる核酸塩基配列を有する化合物を提供する。
【０１３６】
ある態様は、１２ないし３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなり、そして配列番号：４１３の核酸塩基配列の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含んでなる核酸塩基配列を有する化合物を提供する。
【０１３７】
ある態様は、１２ないし３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなり、そして配列番号：９−４２６、４３０−４４２、４４５−４６４、４７１−４９８、５００−１０３４、１０３６−１５１２、及び１５４１−２７５７の核酸塩基配列のいずれかの少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含んでなる核酸塩基配列を有する化合物を提供する。
【０１３８】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、一本鎖修飾オリゴヌクレオチドからなる。
【０１３９】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも一つのヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。
【０１４０】
ある態様において、それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合である。
【０１４１】
ある態様において、少なくとも一つのヌクレオシドは、修飾糖を含んでなる。
【０１４２】
ある態様において、少なくとも一つの修飾糖は、二環式糖である。
【０１４３】
ある態様において、二環式糖は、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’架橋を含んでなる。
【０１４４】
ある態様において、二環式糖は、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋を含んでなる。
【０１４５】
ある態様において、修飾糖は、２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３基を含んでなる。
【０１４６】
ある態様において、修飾糖は、２’−ＯＣＨ３基を含んでなる。
【０１４７】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも一つのヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含んでなる。
【０１４８】
ある態様において、修飾核酸塩基は、５’−メチルシトシンである。
【０１４９】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは：
１ないし５個の結合されたヌクレオシドからなる５’−ウイング；
１ないし５個の結合されたヌクレオシドからなる３’−ウイング；
８ないし１２個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなる５’−ウイング及び３’−ウイング間のギャップを含んでなり；そして
ここで、５’−ウイング及び３’−ウイングの少なくとも一方は、少なくとも一つの二環式ヌクレオシド又は２’−置換ヌクレオシドを含んでなる。
【０１５０】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは：
１ないし５個の結合されたヌクレオシドからなる５’−ウイング；
１ないし５個の結合されたヌクレオシドからなる３’−ウイング；
８ないし１２個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなる５’−ウイング及び３’−ウイング間のギャップを含んでなり；そして
ここで、５’−ウイング及び３’−ウイングの少なくとも一方は、少なくとも一つの二環式ヌクレオシド及び少なくとも一つの２’−置換ヌクレオシドを含んでなる。
【０１５１】
ある態様において、２’−置換ヌクレオシドは、２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３  基又は２’−Ｏ−ＣＨ３基からなる基のいずれかを含んでなる。
【０１５２】
ある態様において、二環式ヌクレオシドは、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’架橋及び４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋からなる基のいずれかを含んでなる。
【０１５３】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは：
３個の結合されたヌクレオシドからなる５’−ウイング；
３個の結合されたヌクレオシドからなる３’−ウイング；
１０個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなる５’−ウイング及び３’−ウイング間のギャップを含んでなり； 
ここで、それぞれの５’−ウイング及び３’−ウイングのそれぞれのヌクレオシドは、拘束エチルヌクレオシドを含んでなり；
ここで、それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり；そして
ここで、それぞれのシトシンは、５’−メチルシトシンである。
【０１５４】
ある態様は：
修飾オリゴヌクレオチドが：
１ないし５個の結合されたヌクレオシドからなる５’−ウイング；
１ないし５個の結合されたヌクレオシドからなる３’−ウイング；
８ないし１２個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなる５’−ウイング及び３’−ウイング間のギャップ；
を含んでなる１２ないし２２個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチド；
を含んでなる化合物を提供し；
ここで、５’−ウイング及び３’−ウイングの少なくとも一方は、少なくとも一つの二環式ヌクレオシド又は２’−置換ヌクレオシドを含んでなり；
ここで、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号：１の核酸塩基配列の核酸塩基３０１６から３０３１の等しい長さの部分と相補的であり；そして
ここで、この化合物は、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ発現の発現を阻害する。
【０１５５】
ある態様は：
修飾オリゴヌクレオチドが：
１ないし５個の結合されたヌクレオシドからなる５’−ウイング；
１ないし５個の結合されたヌクレオシドからなる３’−ウイング；
８ないし１２個の結合された２’−デオキシヌクレオシドからなる５’−ウイング及び３’−ウイング間のギャップ；
を含んでなる１２ないし２２個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなる化合物を提供し；
ここで、５’−ウイング及び３’−ウイングの少なくとも一方は、少なくとも一つの二環式ヌクレオシド又は２’−置換ヌクレオシドを含んでなり；
ここで、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号：２の核酸塩基配列の核酸塩基６４７６から６４９１の等しい長さの部分と相補的であり；そして
ここで、この化合物は、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ発現の発現を阻害する。
【０１５６】
ある態様において、５’−ウイング及び３’−ウイングの少なくとも一方は、少なくとも一つの２’−置換デオキシヌクレオシドを含んでなる。
【０１５７】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、一本鎖修飾オリゴヌクレオチドからなる。
【０１５８】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つの二環式ヌクレオシドを含んでなる。
【０１５９】
ある態様において、少なくとも一つの二環式ヌクレオシドは、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋を含んでなる。
【０１６０】
ある態様において、それぞれの二環式ヌクレオシドは、４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’架橋を含んでなる。
【０１６１】
ある態様において、少なくとも一つの二環式ヌクレオシドは、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’架橋を含んでなる。
【０１６２】
ある態様において、それぞれの二環式ヌクレオシドは、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’架橋を含んでなる。
【０１６３】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも一つの２’−置換ヌクレオシドを含んでなる。
【０１６４】
ある態様において、少なくとも一つの２’−置換ヌクレオシドは、２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３基を含んでなる。
【０１６５】
ある態様において、それぞれの２’−置換ヌクレオシドは、２’−Ｏ（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３基を含んでなる。
【０１６６】
ある態様において、少なくとも一つの２’−置換ヌクレオシドは、２’−Ｏ−ＣＨ３基を含んでなる。
【０１６７】
ある態様において、それぞれの２’−置換ヌクレオシドは、２’−Ｏ−ＣＨ３基を含んでなる。
【０１６８】
ある態様において、少なくとも一つのヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。
【０１６９】
ある態様において、それぞれの修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
【０１７０】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも一つのヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含んでなる。
【０１７１】
ある態様において、修飾核酸塩基は、５’−メチルシトシンである。
【０１７２】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは、以下のとおりの式Ａ：
（Ｊ）ｍ−（Ｂ）ｎ−（Ｊ）ｐ−（Ｂ）ｒ−（Ａ）ｔ−（Ｄ）ｇ−（Ａ）ｖ−（Ｂ）ｗ−（Ｊ）ｘ−（Ｂ）ｙ−（Ｊ）ｚ
によって記載される糖モチーフを有し、
式中：
それぞれのＡは、独立に２’−置換ヌクレオシドであり；
それぞれのＢは、独立に二環式ヌクレオシドであり；
それぞれのＪは、独立に２’−置換ヌクレオシド又は２’−デオキシヌクレオシドのいずれかであり；
それぞれのＤは、２’−デオキシヌクレオシドであり；
ｍは、０−４であり；ｎは、０−２であり；ｐは、０−２であり；ｒは、０−２であり；ｔは、０−２であり；ｖは、０−２であり；ｗは、０−４であり；ｘは、０−２であり；ｙは、０−２であり；ｚは、０−４であり；ｇは、６−１４であり；
但し：
ｍ、ｎ、及びｒの少なくとも一つは、０以外であり；
ｗ及びｙの少なくとも一つは、０以外であり；
ｍ、ｎ、ｐ、ｒ、及びｔの合計は、２から５までであり；そして
ｖ、ｗ、ｘ、ｙ、及びｚの合計は、２から５までである；
ことを条件とする。
【０１７３】
ある態様において、修飾オリゴヌクレオチドは：
ｋ−ｄ（１０）−ｋ
ｅ−ｄ（１０）−ｋ
ｋ−ｄ（１０）−ｅ
ｋ−ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｋ
ｋ−ｋ−ｄ（１０）−ｅ−ｅ
ｅ−ｅ−ｄ（１０）−ｋ−ｋ
ｋ−ｋ−ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｋ−ｋ
ｅ−ｅ−ｅ−ｄ（１０）−ｋ−ｋ−ｋ
ｋ−ｋ−ｋ−ｄ（１０）−ｅ−ｅ−ｅ
ｋ−ｋ−ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｋ−ｋ
ｅ−ｋ−ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｋ−ｅ
ｅ−ｅ−ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｋ−ｅ
ｅ−ｄ−ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｋ−ｅ
ｅ−ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｅ−ｋ−ｅ
ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｅ−ｋ−ｅ−ｅ
ｅ−ｅ−ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｅ−ｋ−ｅ
ｅ−ｄ−ｄ−ｋ−ｄ（９）−ｋ−ｋ−ｅ
ｅ−ｅ−ｅ−ｅ−ｄ（９）−ｋ−ｋ−ｅ
からなる群のいずれかの糖モチーフを有し、
ここで、ｋは、拘束エチルヌクレオシドであり、ｅは、２’−ＭＯＥで置換されたヌクレオシドであり、そしてｄは、２’−デオキシヌクレオシドである。
【０１７４】
ある態様は、１２ないし３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなり、そして配列番号：９−４２６、４３０−４４２、４４５−４６４、４７１−４９８、５００−１０３４、１０３６−１５１２、及び１５４１−２７５７の核酸塩基配列のいずれかの少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含んでなる核酸塩基配列を有する化合物を、それを必要とする動物に投与することを含んでなる、動物の過剰増殖性疾病を治療する方法を提供する。
【０１７５】
ある態様は、１２ないし３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなり、そして配列番号：２４５の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含んでなる核酸塩基配列を有する化合物を、それを必要とする動物に投与することを含んでなる、動物の過剰増殖性疾病を治療する方法を提供する。
【０１７６】
ある態様は、１２ないし３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなり、そして配列番号：４１３の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含んでなる核酸塩基配列を有する化合物を、それを必要とする動物に投与することを含んでなる、動物の過剰増殖性疾病を治療する方法を提供する。
【０１７７】
ある態様において、投与は、動物の腫瘍の大きさを減少させる。
【０１７８】
ある態様において、投与は、動物の腫瘍の体積を減少させる。
【０１７９】
ある態様において、投与は、動物における転移を予防する。
【０１８０】
ある態様において、投与は、動物の生存を延長する。
【０１８１】
ある態様において、投与は、動物のカヘキシアを減少させる。
【０１８２】
ある態様は、１２ないし３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなり、そして配列番号：９−４２６、４３０−４４２、４４５−４６４、４７１−４９８、５００−１０３４、１０３６−１５１２、及び１５４１−２７５７の核酸塩基配列のいずれかの少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含んでなる核酸塩基配列を有する化合物を、それを必要とする動物に投与することを含んでなる、動物のＳＴＡＴ３の発現を減少させる方法を提供する。
【０１８３】
ある態様は、１２ないし３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなり、そして配列番号：２４５の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含んでなる核酸塩基配列を有する化合物を、それを必要とする動物に投与することを含んでなる、動物のＳＴＡＴ３の発現を減少させる方法を提供する。
【０１８４】
ある態様は、１２ないし３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含んでなり、そして配列番号：４１３の少なくとも１２個の連続する核酸塩基を含んでなる核酸塩基配列を有する化合物を、それを必要とする動物に投与することを含んでなる、動物のＳＴＡＴ３の発現を減少させる方法を提供する。
【０１８５】
ある態様において、化合物は、２−１０−２のウイング−ギャップ−ウイングモチーフを持たない。
【０１８６】
アンチセンス化合物
オリゴマー化合物は、制約されるものではないが、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、オリゴヌクレオチド類似体、オリゴヌクレオチド模倣物、アンチセンス化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及びｓｉＲＮＡを含む。オリゴマー化合物は、これが水素結合により標的核酸とのハイブリダイゼーションを受けることが可能なことを意味する標的核酸に対して“アンチセンス”であることができる。
【０１８７】
ある態様において、アンチセンス化合物は、５’から３’の方向で書かれた場合、それに対してこれが標的化される標的核酸の標的セグメントの逆相補物を含んでなる核酸塩基配列を有する。あるこのような態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’から３’の方向で書かれた場合、それに対してこれが標的化される標的核酸の標的セグメントの逆相補物を含んでなる核酸塩基配列を有する。
【０１８８】
ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１２ないし３０個のサブユニットある。ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１４ないし３０個のサブユニットある。ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物は、長さ１２ないし２２個のサブユニットある。言い換えれば、このようなアンチセンス化合物は、それぞれ１２個ないし３０個の結合したサブユニット、１４個から３０個の結合したサブユニット、１２個ないし２２個の結合したサブユニットである。他の態様において、アンチセンス化合物は、８ないし８０、  １２ないし５０、１３ないし３０、１３ないし５０、１４ないし３０、１４ないし５０、１５ないし３０、１５ないし５０、１６ないし３０、１６ないし５０、１７ないし３０、１７ないし５０、１８ないし２２、１８ないし２４、１８ないし３０、１８ないし５０、１９ないし２２、１９ないし３０、１９ないし５０、又は２０ないし３０個の結合したサブユニットである。あるこのような態様において、アンチセンス化合物は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、又は８０個の結合した長さ、或いは上記数値のいずれか二つによって定義される範囲のサブユニットである。幾つかの態様において、アンチセンス化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり、そして結合したサブユニットは、ヌクレオチドである。
【０１８９】
ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、短縮又は切断することができる。例えば、単一のサブユニットを、５’末端から（５’切断）、又は別の方法として３’末端から（３’切断）欠失することができる。ＳＴＡＴ３核酸を標的とする短縮又は切断されたアンチセンス化合物は、アンチセンス化合物の５’末端から二つのサブユニットを欠失させることができ、又は別の方法として３’末端から二つのサブユニットを欠失させることができる。別の方法として、欠失されたヌクレオシドは、アンチセンス化合物、例えば、５’末端から欠失された一つのヌクレオシド及び３’末端から欠失された一つのヌクレオシドを有するアンチセンス化合物中に分散することができる。
【０１９０】
単一の付加的サブユニットが、延長されたアンチセンス化合物中に存在する場合、付加的サブユニットは、アンチセンス化合物の５’又は３’末端に位置することができる。二つ又はそれより多い付加的サブユニットが存在する場合、例えば、アンチセンス化合物の５’末端（５’付加）に、又は別の方法として３’末端（３’付加）に加えられた二つのサブユニットを有するアンチセンス化合物において、加えられたサブユニットは、互いに隣接することができる。別の方法として、加えられたサブユニットは、アンチセンス化合物中に、例えば５’末端に加えられた一つのサブユニット及び３’末端に加えられた一つのサブユニットを有するアンチセンス化合物中に分散されることができる。
【０１９１】
活性を除外することなく、アンチセンスオリゴヌクレオチドのようなアンチセンス化合物の長さを増加又は減少する、及び／又はミスマッチ塩基を導入することが可能である。例えば、Ｗｏｏｌｆ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：７３０５−７３０９，１９９２）中で、１３−２５個の核酸塩基の長さの一連のアンチセンスオリゴヌクレオチドが、卵母細胞注射モデルにおける標的ＲＮＡの開裂を誘発するその能力に対して試験された。アンチセンスオリゴヌクレオチドの末端付近に８又は１１個のミスマッチ塩基を伴う２５個の核酸塩基長さのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ミスマッチを含有しないアンチセンスオリゴヌクレオチドより少ない程度であるが、標的ｍＲＮＡの特異的開裂を方向付けることが可能であった。同様に、標的特異的開裂は、１又は３個のミスマッチを伴うものを含む１３個の核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用して達成された。
【０１９２】
Ｇａｕｔｓｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９３：４６３−４７１，Ｍａｒｃｈ  ２００１）は、ｂｃｌ−２のｍＲＮＡと１００％の相補性を有し、そしてｂｃｌ−ｘＬのｍＲＮＡに対して３個のミスマッチを有するオリゴヌクレオチドの、ｂｃｌ−２及びｂｃｌ−ｘＬの両方のｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏの発現を減少させる能力を示した。更に、このオリゴヌクレオチドは、強力な抗腫瘍活性をｉｎ  ｖｉｖｏで示した。
【０１９３】
Ｍａｈｅｒ  ａｎｄ  Ｄｏｌｎｉｃｋ（Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１６：３３４１−３３５８，１９８８）は、一連のタンデムの１４個の核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチド、並びにそれぞれタンデムのアンチセンスオリゴヌクレオチドの二つ又は三つの配列で構成される、２８及び４２個の核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、ウサギ網状赤血球アッセイにおける、ヒトＤＨＦＲの翻訳を停止するその能力に対して試験した。単独の三つの１４個の核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドのそれぞれは、２８又は４２個の核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドより更に僅かなレベルではあるが、翻訳を阻害することが可能であった。
【０１９４】
ある態様において、本明細書中に記載される化合物は、本明細書中に記載されるようにＨｕＶＥＣ細胞に供給された場合、２０ｕＭより少ない、１９ｕＭより少ない、１８ｕＭより少ない、１７ｕＭより少ない、１６ｕＭより少ない、１５ｕＭより少ない、１４ｕＭより少ない、１３ｕＭより少ない、１２ｕＭより少ない、１１ｕＭより少ない、１０ｕＭより少ない、９ｕＭより少ない、８ｕＭより少ない、７ｕＭより少ない、６ｕＭより少ない、５ｕＭより少ない、４ｕＭより少ない、３ｕＭより少ない、２ｕＭより少ない、１ｕＭより少ないｉｎ  ｖｉｔｒｏのＩＣ５０の少なくとも一つを有するために有効である。
【０１９５】
ある態様において、本明細書中に記載される化合物は、本明細書中に記載されるようにＨｕＶＥＣ細胞に供給された場合、１．０ｕＭより少ない、０．９ｕＭより少ない、０．８ｕＭより少ない、０．７ｕＭより少ない、０．６ｕＭより少ない、０．５ｕＭより少ない、０．４ｕＭより少ない、０．３ｕＭより少ない、０．２ｕＭより少ない、０．１ｕＭより少ないｉｎ  ｖｉｔｒｏのＩＣ５０の少なくとも一つを有するために有効である。
【０１９６】
ある態様において、本明細書中に記載される化合物は、本明細書中に記載されるようにＨｕＶＥＣ細胞に供給された場合、０．９５ｕＭより少ない、０．９０ｕＭより少ない、０．８５ｕＭより少ない、０．８０ｕＭより少ない、０．７５ｕＭより少ない、０．７０ｕＭより少ない、０．６５ｕＭより少ない、０．６０ｕＭより少ない、０．５５ｕＭより少ない、０．５０ｕＭより少ない、０．４５ｕＭより少ない、０．４０ｕＭより少ない、０．３５ｕＭより少ない、０．３０ｕＭより少ない、０．２５ｕＭより少ない、０．２０ｕＭより少ない、０．１５ｕＭより少ない、０．１０ｕＭより少ない、０．０５ｕＭより少ない、０．０４ｕＭより少ない、０．０３ｕＭより少ない、０．０２ｕＭより少ない、０．０１ｕＭより少ないｉｎ  ｖｉｔｒｏのＩＣ５０の少なくとも一つを有するために有効である。
【０１９７】
ある態様において、本明細書中に記載されるような化合物は、本明細書中に記載されるような癌細胞株に対する自由取込み法によって供給される場合、２０ｕＭより少ない、１５ｕＭより少ない、１０ｕＭより少ない、５ｕＭより少ない、２ｕＭより少ないｉｎ  ｖｉｔｒｏのＩＣ５０の少なくとも一つを有するために有効である。
【０１９８】
ある態様において、本明細書中に記載されるような化合物は、生理食塩水治療の動物と比較して４倍、３倍、又は２倍より多くないＡＬＴ或いはＡＳＴ値の増加、又は３０％、２０％、１５％、１２％、１０％、５％、又は２％より多くない肝臓、脾臓、或いは腎臓の重量の増加の少なくとも一つを有することによって示されるように非常に許容可能である。ある態様において、本明細書中に記載されるような化合物は、生理食塩水治療の動物と比較してＡＬＴ又はＡＳＴの増加を持たないことによって示されるように非常に許容可能である。ある態様において、本明細書中に記載されるような化合物は、生理食塩水治療の動物と比較して肝臓、脾臓、或いは腎臓の重量の増加を持たないことによって示されるように非常に許容可能である。ある態様において、これらの化合物は、ＩＳＩＳ４５５２６５、ＩＳＩＳ４５５２６９、ＩＳＩＳ４５５２７１、ＩＳＩＳ４５５２７２、ＩＳＩＳ４５５２９１、ＩＳＩＳ４５５３７１、ＩＳＩＳ４５５３９４、ＩＳＩＳ４５５７０３、ＩＳＩＳ４５５４２９、ＩＳＩＳ４５５４７１、ＩＳＩＳ４５５５２７、ＩＳＩＳ４５５５３０、ＩＳＩＳ４５５５３６、ＩＳＩＳ４５５５４８、ＩＳＩＳ４５５６１１、ＩＳＩＳ４６５２３６、ＩＳＩＳ４６５２３７、ＩＳＩＳ４６５５８８、ＩＳＩＳ４６５７４０、ＩＳＩＳ４６５７５４、ＩＳＩＳ４６５８３０、ＩＳＩＳ４６６６７０、ＩＳＩＳ４６６７２０；ＩＳＩＳ４８１３７４、ＩＳＩＳ４８１３９０、ＩＳＩＳ４８１４２０、ＩＳＩＳ４８１４３１、ＩＳＩＳ４８１４５３、ＩＳＩＳ４８１４６４、ＩＳＩＳ４８１４７５、ＩＳＩＳ４８１４９５、ＩＳＩＳ４８１５００、ＩＳＩＳ４８１５０１、ＩＳＩＳ４８１５２５、ＩＳＩＳ４８１５４８、ＩＳＩＳ４８１５４９、ＩＳＩＳ４８１５９７、ＩＳＩＳ４８１６９５、ＩＳＩＳ４８１７００、ＩＳＩＳ４８１７０２、ＩＳＩＳ４８１７１０、ＩＳＩＳ４８１７２５、ＩＳＩＳ４８１７５０、及びＩＳＩＳ４８１７６３を含む。ある態様において、このような化合物は、配列番号５７、９０、９０、１７５、２２３、２４５、２６７、３０７、３１７、３１８、３６６、４１１、４１３、５４、２５８、２６８、２７２、２８８、４６４、３６７、３９３、１５６４、１５６８、１５７１、１５７２、１５９０、１６７０、１６９３、１７２８、１７７０、１８２６、１８２９、１８３５、１８４７、１９１０、１９９７、２１６８、２１９８、２３２５、２３３９、２７２０、２７３１、２７３２、及び２７５６のいずれか一つの配列を含んでなる化合物を含む。
【０１９９】
アンチセンス化合物のモチーフ
ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物は、阻害活性の向上、標的核酸に対する結合親和性の増加、又はｉｎ  ｖｉｖｏのヌクレアーゼによる分解に対する耐性のようなアンチセンス化合物特性を与えるパターン又はモチーフに配列された化学的に修飾されたサブユニットを有する。
【０２００】
キメラアンチセンス化合物は、典型的にはヌクレアーゼ分解に対する耐性の増加、細胞取込みの増加、標的核酸に対する結合親和性の増加、及び／又は阻害活性の増加を与えるように修飾された少なくとも一つの領域を含有する。キメラアンチセンス化合物の第２の領域は、ＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖を開裂する細胞のエンドヌクレアーゼＲＮアーゼＨのための基質として所望により役立つことができる。
【０２０１】
ギャップマーモチーフを有するアンチセンス化合物は、キメラアンチセンス化合物と考えられる。ギャップマー中で、ＲＮアーゼＨ開裂を支持する複数のヌクレオチドを有する内部領域は、内部領域のヌクレオシドと化学的に別個である複数のヌクレオチドを有する外部領域の間に位置する。ギャップマーモチーフを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの場合、ギャップセグメントは、一般的にエンドヌクレアーゼ開裂のための基質として役立つが、一方ウイングセグメントは修飾ヌクレオシドを含んでなる。ある態様において、ギャップマーの領域は、それぞれの別個の領域を含んでなる糖部分の種類によって区別される。ギャップマーの領域を区別するために使用される糖部分の種類は、幾つかの態様において、β−Ｄ−リボヌクレオシド、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、２’−修飾ヌクレオシド（このような２’−修飾ヌクレオシドは、特に２’−ＭＥＯ及び２’−Ｏ−ＣＨ３を含むことができる）、及び二環式糖修飾ヌクレオシド（このような二環式糖修飾ヌクレオシドは、拘束エチルを有するものを含むことができる）を含むことができる。ある態様において、ウイングは、例えば、２’−ＭＯＥ及び拘束エチルを含む幾つかの修飾糖部分を含むことができる。ある態様において、ウイングは、幾つかの修飾又は非修飾糖部分を含むことができる。ある態様において、ウイングは、２’−ＭＯＥヌクレオシド、拘束エチルヌクレオシド、及び２’−デオキシヌクレオシドの各種の組合せを含むことができる。
【０２０２】
それぞれの別個の領域は、均一な糖部分、変種、又は交互糖部分を含んでなることができる。ウイング−ギャップ−ウイングモチーフは、しばしば“Ｘ−Ｙ−Ｚ”と記載され、ここで、“Ｘ”は、５’−ウイングの長さであり、“Ｙ”は、ギャップの長さであり、そして“Ｚ”は、３’−ウイングの長さである。“Ｘ”及び“Ｚ”は、均一、変種、又は交互糖部分を含んでなることができる。ある態様において、“Ｘ”及び“Ｙ”は、一つ又はそれより多い２’−デオキシヌクレオシドを含むことができる。
【０２０３】
“Ｙ”は、２’−デオキシヌクレオシドを含んでなることができる。本明細書中で使用する場合、“Ｘ−Ｙ−Ｚ”と記載されるギャップマーは、ギャップが５’−ウイング及び３’ウイングのそれぞれに直接隣接して位置するような配置を有する。従って、５’−ウイング及びギャップ、又はギャップ及び３’−ウイングの間に介入ヌクレオシドは存在しない。本明細書中に記載されるアンチセンス化合物の何れもは、ギャップマーモチーフを有することができる。ある態様において、“Ｘ”及び“Ｚ”は、同一であり、他の態様において、これらは、異なっている。ある態様において、“Ｙ”は、８ないし１５個間のヌクレオシドである。Ｘ、Ｙ、又はＺは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０個又はそれより多いヌクレオシドのいずれかであることができる。
【０２０４】
ある態様において、本明細書中に提供されるギャップマーは、例えば、１−９−１のモチーフを有する１１塩基長を含む。
【０２０５】
ある態様において、本明細書中に提供されるギャップマーは、例えば、１−９−２、２−９−１、又は１−１０−１のモチーフを有する１２塩基長を含む。
【０２０６】
ある態様において、本明細書中に提供されるギャップマーは、例えば、１−９−３、２−９−２、３−９−１、１−１０−２、又は２−１０−１のモチーフを有する１３塩基長を含む。
【０２０７】
ある態様において、本明細書中に提供されるギャップマーは、例えば、１−９−４、２−９−３、３−９−２、４−９−１、１−１０−３、２−１０−２、又は３−１０−１のモチーフを有する１４塩基長を含む。
【０２０８】
ある態様において、本明細書中に提供されるギャップマーは、例えば、１−９−５、２−９−４、３−９−３、４−９−２、５−９−１、１−１０−４、２−１０−３、３−１０−２、又は４−１０−１のモチーフを有する１５塩基長を含む。
【０２０９】
ある態様において、本明細書中に提供されるギャップマーは、例えば、２−９−５、３−９−４、４−９−３、５−９−２、１−１０−５、２−１０−４、３−１０−３、４−１０−２、又は５−１０−１のモチーフを有する１６塩基長を含む。
【０２１０】
ある態様において、本明細書中に提供されるギャップマーは、例えば、３−９−５、４−９−４、５−９−３、２−１０−５、３−１０−４、４−１０−３、又は５−１０−２のモチーフを有する１７塩基長を含む。
【０２１１】
ある態様において、本明細書中に提供されるギャップマーは、例えば、４−９−５、５−９−４、３−１０−５、４−１０−４、又は５−１０−３のモチーフを有する１８塩基長を含む。
【０２１２】
ある態様において、本明細書中に提供されるギャップマーは、例えば、５−９−５、４−１０−５、又は５−１０−４のモチーフを有する１９塩基長を含む。
【０２１３】
ある態様において、本明細書中に提供されるギャップマーは、例えば、５−１０−５のモチーフを有する２０塩基長を含む。
【０２１４】
ある態様において、アンチセンス化合物は、ウイング−ギャップ又はギャップ−ウイング配置、即ち、ギャップマー配置のために先に記載したような、Ｘ−Ｙ又はＹ−Ｚ配置を有する“ウイングマー”モチーフを有する。従って、本明細書中に提供されるウイングマー配置は、制約されるものではないが、例えば、５−１０、８−４、４−１２、１２−４、３−１４、１６−２、１８−１、１０−３、２−１０、１−１０、８−２、２−１３、５−１３、５−８、又は６−８を含む。
【０２１５】
ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物は、２−１０−２ギャップマーモチーフを有する。
【０２１６】
ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物は、３−１０−３ギャップマーモチーフを有する。
【０２１７】
ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物は、５−１０−５ギャップマーモチーフを有する。
【０２１８】
ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物は、１−１０−５ギャップマーモチーフを有する。
【０２１９】
ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物は、３−１０−４ギャップマーモチーフを有する。
【０２２０】
ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物は、２−１０−４ギャップマーモチーフを有する。
【０２２１】
ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物は、４−９−３ギャップマーモチーフを有する。
【０２２２】
ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物は、拡大ギャップモチーフを有する。
【０２２３】
ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物は、以下の糖モチーフ：
ｋ−ｄ（１０）−ｋ
ｅ−ｄ（１０）−ｋ
ｋ−ｄ（１０）−ｅ
ｋ−ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｋ
ｋ−ｋ−ｄ（１０）−ｅ−ｅ
ｅ−ｅ−ｄ（１０）−ｋ−ｋ
ｋ−ｋ−ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｋ−ｋ
ｅ−ｅ−ｅ−ｄ（１０）−ｋ−ｋ−ｋ
ｋ−ｋ−ｋ−ｄ（１０）−ｅ−ｅ−ｅ
ｋ−ｋ−ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｋ−ｋ
ｅ−ｋ−ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｋ−ｅ
ｅ−ｅ−ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｋ−ｅ
ｅ−ｄ−ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｋ−ｅ
ｅ−ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｅ−ｋ−ｅ
ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｅ−ｋ−ｅ−ｅ      
ｅ−ｅ−ｋ−ｄ（１０）−ｋ−ｅ−ｋ−ｅ
ｅ−ｄ−ｄ−ｋ−ｄ（９）−ｋ−ｋ−ｅ
ｅ−ｅ−ｅ−ｅ−ｄ（９）−ｋ−ｋ−ｅ
のいずれかを有し、
ここで、ｋは、拘束エチルヌクレオシドであり、ｅは、２’−ＭＯＥ置換ヌクレオシドであり、そしてｄは、２’−デオキシヌクレオシドである。
【０２２４】
ある態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下のとおりの式Ａ：
（Ｊ）ｍ−（Ｂ）ｎ−（Ｊ）ｐ−（Ｂ）ｒ−（Ａ）ｔ−（Ｄ）ｇ−（Ａ）ｖ−（Ｂ）ｗ−（Ｊ）ｘ−（Ｂ）ｙ−（Ｊ）ｚ
によって記載される糖モチーフを有し、
式中：
それぞれのＡは、独立に２’−置換ヌクレオシドであり；
それぞれのＢは、独立に二環式ヌクレオシドであり；
それぞれのＪは、独立に２’−置換ヌクレオシド又は２’−デオキシヌクレオシドのいずれかであり；
それぞれのＤは、２’−デオキシヌクレオシドであり；
ｍは、０−４であり；ｎは、０−２であり；ｐは、０−２であり；ｒは、０−２であり；ｔは、０−２であり；ｖは、０−２であり；ｗは、０−４であり；ｘは、０−２であり；ｙは、０−２であり；ｚは、０−４であり；ｇは、６−１４であり；
但し：
ｍ、ｎ、及びｒの少なくとも一つは、０以外であり；
ｗ及びｙの少なくとも一つは、０以外であり；
ｍ、ｎ、ｐ、ｒ、及びｔの合計は、２から５までであり；そして
ｖ、ｗ、ｘ、ｙ、及びｚの合計は、２から５までである；
ことを条件とする。
【０２２５】
標的核酸、標的領域及びヌクレオチド配列
ＳＴＡＴ３をコードするヌクレオチド配列は、制約されるものではないが、次：ＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号ＮＭ＿１３９２７６．２（配列番号：１として本明細書中に援用される）及びヌクレオチド４１８５０００ないし４２６４０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号ＮＴ＿０１０７５５．１４の相補物（配列番号：２として本明細書中に援用される）を含む。
【０２２６】
本明細書中に含有される実施例中のそれぞれの配列番号に記載される配列が、糖部分、ヌクレオシド間結合、又は核酸塩基に対するいずれもの修飾に関係しないことは理解されることである。このように、配列番号によって定義されるアンチセンス化合物は、独立に糖部分、ヌクレオシド間結合、又は核酸塩基に対する一つ又はそれより多い修飾を含んでなることができる。Ｉｓｉｓ番号（Ｉｓｉｓ  Ｎｏ）によって記載されるアンチセンス化合物は、核酸塩基配列及びモチーフの組合せを示す。
【０２２７】
ある態様において、標的領域は、標的核酸の構造的に定義された領域である。例えば、標的領域は、３’ＵＴＲ、５’ＵＴＲ、エキソン、イントロン、エキソン／イントロン接合部、コード領域、翻訳開始領域、翻訳終止領域、又は他の定義された核酸領域を包含することができる。ＳＴＡＴ３に対して構造的に定義された領域は、ＮＣＢＩのような配列データベースから寄託番号によって得ることができ、そしてこのような情報は、本明細書中に参考文献として援用される。ある態様において、標的領域は、標的領域内の一つの標的セグメントの５’標的部位から、同一標的領域内のもう一つの標的セグメントの３’標的部位までの配列を包含することができる。
【０２２８】
標的化は、所望の効果が起こるように、それに対してアンチセンス化合物がハイブリダイズする、少なくとも一つの標的セグメントの決定を含む。ある態様において、所望の効果は、ｍＲＮＡ標的核酸レベルの減少である。ある態様において、所望の効果は、標的核酸によってコードされるタンパク質のレベル、又は標的核酸に伴う表現型の変化の減少である。
【０２２９】
標的領域は、一つ又はそれより多い標的セグメントを含有することができる。標的領域内の多数の標的セグメントは、重複することができる。別の方法として、これらは、非重複であることができる。ある態様において、標的領域内の標的セグメントは、約３００個より多くないヌクレオチドによって分離されている。ある態様において、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸上の２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、又は１０個のヌクレオチドである、概略それである、それより多くない、概略それより多くないヌクレオチドの数によって、或いは前記の値のいずれか二つによって定義される範囲で分離されている。ある態様において、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸上の５個より多くない、又は概略それより多くないヌクレオチドによって分離されている。ある態様において、標的セグメントは連続している。意図されるものは、本明細書中に記載される５’標的部位又は３’標的部位のいずれかである開始核酸を有する範囲によって定義される標的領域である。
【０２３０】
適した標的セグメントは、５’ＵＴＲ、コード領域、３’ＵＴＲ、イントロン、エキソン、エキソン／イントロン接合部内で見出すことができる。開始コドン又は終止コドンを含有する標的セグメントも、更に適した標的セグメントである。適した標的セグメントは、開始コドン又は終止コドンのようなある種の構造的に定義された領域を特異的に除外することができる。
【０２３１】
適した標的セグメントの決定は、標的核酸の配列のゲノム中の他の配列との比較を含むことができる。例えば、異なった核酸間の類似性の領域を確認するために、ＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用することができる。この比較は、選択される標的核酸以外の配列に非特異的様式でハイブリダイズすることができるアンチセンス化合物配列（即ち、非標的又はオフターゲット配列）の選択を防止することができる。
【０２３２】
活性な標的領域内のアンチセンス化合物の活性に変化（例えば、標的核酸レベルの減少のパーセントによって定義されるような）が存在することができる。ある態様において、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルの減少は、ＳＴＡＴ３発現の阻害を示している。ＳＴＡＴ３タンパク質のレベルの減少も、更に標的ｍＲＮＡ発現の阻害を示している。更に、表現型の変化は、ＳＴＡＴ３発現の阻害を示している。ある態様において、細胞増殖の減少、腫瘍成長の減少、及び腫瘍体積の減少は、ＳＴＡＴ３発現の阻害を示すことができる。ある態様において、癌に伴う徴候の改善は、ＳＴＡＴ３発現の阻害を示すことができる。ある態様において、カヘキシアの減少は、ＳＴＡＴ３発現の阻害を示す。ある態様において、癌マーカーの減少は、ＳＴＡＴ３発現の阻害を示す。
【０２３３】
ハイブリダイゼーション
幾つかの態様において、ハイブリダイゼーションは、本明細書中に開示されるアンチセンス化合物及びＳＴＡＴ３核酸間に起こる。ハイブリダイゼーションの最も普通の機構は、核酸分子の相補的核酸塩基間の水素結合に関係する（例えば、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ，Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ  ｏｒ  ｒｅｖｅｒｓｅｄ  Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ  ｈｙｄｒｏｇｅｎ  ｂｏｎｄｉｎｇ）。
【０２３４】
ハイブリダイゼーションは、各種の条件下で起こることができる。厳密な条件は、配列依存性であり、そしてハイブリダイズされる核酸分子の特質及び組成によって決定される。
【０２３５】
配列が標的核酸に特異的にハイブリダイズ可能であるか否かを決定する方法は、当技術において公知である。ある態様において、本明細書中に提供されるアンチセンス化合物は、ＳＴＡＴ３核酸と特異的にハイブリダイズ可能である。
【０２３６】
相補性
アンチセンス化合物及び標的核酸は、アンチセンス化合物の十分な数の核酸塩基が、所望の効果（例えば、ＳＴＡＴ３核酸のような標的核酸のアンチセンス阻害）を起こすものであるように、標的核酸の対応する核酸塩基と水素結合することができる場合、互いに相補的である。
【０２３７】
アンチセンス化合物及びＳＴＡＴ３核酸間の非相補的核酸塩基は、そのアンチセンス化合物が標的核酸に特異的にハイブリダイズすることが可能なままであることを条件に、許容することができる。更に、アンチセンス化合物は、介入又は隣接するセグメントが、ハイブリダイゼーション現象に関係しないように、一つ又はそれより多いＳＴＡＴ３核酸のセグメントを超えてハイブリダイズすることができる（例えば、ループ構造、ミスマッチ又はヘアピン構造）。
【０２３８】
ある態様において、本明細書中に提供されるアンチセンス化合物、又はその特定化された部分は、ＳＴＡＴ３核酸、標的領域、標的セグメント、或いはこれらの特定化された部分に対して、又は少なくとも、７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％相補的である。アンチセンス化合物の標的核酸との相補性のパーセントは、ルーチン的方法を使用して決定することができる。
【０２３９】
例えば、アンチセンス化合物の２０個の核酸塩基の１８個が標的領域に対して相補的であり、そして従って特異的にハイブリダイズするものであるアンチセンス化合物は、９０％相補性であるものである。この例において、残りの非相補性核酸塩基は、相補的核酸塩基と共に密集するか又は分散することができ、そして互いに、又は相補的核酸塩基に対して連続する必要はない。このように、標的核酸と完全に相補性の二つの領域によって隣接された四つの非相補的核酸塩基を有する１８個の核酸塩基の長さのアンチセンス化合物は、標的核酸と７７．８％の全体的相補性を有するものであり、そして従って本発明の範囲内に入るものである。アンチセンス化合物の標的核酸の領域との相補性のパーセントは、当技術において既知のＢＬＡＳＴプログラム（基本的なローカルアラインメント探査ツール）及びＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９０，２１５，４０３  ４１０；Ｚｈａｎｇ  ａｎｄ  Ｍａｄｄｅｎ，Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．，１９９７，７，６４９  ６５６）を使用してルーチン的に決定することができる。類似性、配列同一性又は相補性のパーセントは、例えばＳｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．，１９８１，２，４８２  ４８９）のアルゴリズムを使用するデフォルトの設定を使用するＧａｐプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ  ８  ｆｏｒ  Ｕｎｉｘ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ，Ｍａｄｉｓｏｎ  Ｗｉｓ．）によって決定することができる。
【０２４０】
ある態様において、本明細書中に提供されるアンチセンス化合物、又はその特定化された部分は、標的核酸、又はその特定化された部分に、完全に相補的（１００％相補的）である。例えば、アンチセンス化合物は、ＳＴＡＴ３核酸、又は標的領域、又は標的セグメント或いはその標的配列に対して完全に相補的であることができる。本明細書中で使用される場合、“完全に相補的”は、アンチセンス化合物のそれぞれの核酸塩基が、標的核酸の対応する核酸塩基と正確な対形成をすることが可能であることを意味する。例えば、２０個の核酸塩基のアンチセンス化合物は、アンチセンス化合物に対して完全に相補的である標的核酸の対応する２０個の核酸塩基部分が存在する限り、４００個の核酸塩基の長さの標的配列と完全に相補的である。完全に相補的は、更に第１又は第２の核酸の特定化された部分に対する言及において使用することができる。例えば、３０個の核酸塩基のアンチセンス化合物の２０個の核酸塩基部分は、４００個の核酸塩基の長さの標的配列に対して“完全に相補的”であることができる。標的配列が、それぞれの核酸塩基がアンチセンス化合物の２０個の核酸塩基部分に対して相補的である、対応する２０個の核酸塩基部分を有する場合、３０個の核酸塩基のオリゴヌクレオチドの２０個の核酸塩基部分は、標的配列に対して完全に相補的である。同時に、全ての３０個の核酸塩基のアンチセンス化合物は、アンチセンス化合物の残りの１０個の核酸塩基も、更に標的配列に対して相補性であるか否かによって、標的配列に対して相補的であることができるか、又はそうであることができない。
【０２４１】
非相補的核酸塩基の位置は、アンチセンス化合物の５’末端又は３’末端であることができる。別の方法として、非相補的核酸塩基又は複数の核酸塩基は、アンチセンス化合物の内部位置にあることができる。二つ又はそれより多い非相補的核酸塩基が存在する場合、これらは、連続している（即ち結合している）か、又は非連続であることができる。一つの態様において、非相補的核酸塩基は、ギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドのウイングセグメント中に位置する。
【０２４２】
ある態様において、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個の、或いはそれまでの個数の核酸塩基の長さであるアンチセンス化合物は、ＳＴＡＴ３核酸又はその特定化された部分のような標的核酸に対して４個より多くない、３個より多くない、２個より多くない、又は１個より多くない非相補的核酸塩基（類）を含んでなる。
【０２４３】
ある態様において、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０個の、或いはそれまでの個数の核酸塩基の長さであるアンチセンス化合物は、ＳＴＡＴ３核酸又はその特定化された部分のような標的核酸に対して６個より多くない、５個より多くない、４個より多くない、３個より多くない、２個より多くない、又は１個より多くない非相補的核酸塩基（類）を含んでなる。
【０２４４】
本明細書中に提供されるアンチセンス化合物は、更に標的核酸の部分に対して相補的であるものを含む。本明細書中で使用する場合、“部分”は、標的核酸の領域又はセグメント内の規定した数の近接した（即ち結合した）核酸塩基を指す。“部分”は、更にアンチセンス化合物の規定された数の近接した核酸塩基を指すことができる。ある態様において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも８個の核酸塩基部分と相補的である。ある態様において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも９個の核酸塩基部分と相補的である。ある態様において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１０個の核酸塩基部分と相補的である。ある態様において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１１個の核酸塩基部分と相補的である。ある態様において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１２個の核酸塩基部分と相補的である。ある態様において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１３個の核酸塩基部分と相補的である。ある態様において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１４個の核酸塩基部分と相補的である。ある態様において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１５個の核酸塩基部分と相補的である。更に意図するものは、標的セグメントの少なくとも９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個、又はそれより多い、或いはこれらの値のいずれか二つによって定義される範囲の核酸塩基部分と相補的であるアンチセンス化合物である。
【０２４５】
同一性
本明細書中に提供されるアンチセンス化合物は、更に特定のヌクレオチド配列、配列番号、又は具体的なＩｓｉｓ番号によって表される化合物、又はこれらの部分に対する規定された同一性のパーセントを有することができる。本明細書中で使用する場合、アンチセンス化合物は、これが同一の核酸塩基の対形成の能力を有する場合、本明細書中に開示される配列と同一である。例えば、開示されたＤＮＡ配列中のチミジンの代わりにウラシルを含有するＲＮＡは、ウラシル及びチミジンの両方が、アデニンと対形成するため、ＤＮＡ配列と同一であると考えられるものである。本明細書中に記載されるアンチセンス化合物の短縮及び延長された変種、並びに本明細書中に提供されるアンチセンス化合物に対して非同一性塩基を有する化合物も、更に意図されている。非同一性塩基は、互いに隣接するか、又はアンチセンス化合物中に分散されることができる。アンチセンス化合物の同一性のパーセントは、これが比較される配列に対して同一の塩基対形成を有する塩基の数によって計算される。
【０２４６】
ある態様において、アンチセンス化合物、又はその部分は、本明細書中に開示されるアンチセンス化合物又は配列番号、或いはその部分の一つ又はそれより多くに対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である。
【０２４７】
ある態様において、アンチセンス化合物の部分は、標的核酸の等しい長さの部分と比較される。ある態様において、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５個の核酸塩基部分が、標的核酸の等しい長さの部分と比較される。
【０２４８】
ある態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドの部分は、標的核酸の等しい長さの部分と比較される。ある態様において、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５個の核酸塩基部分が、標的核酸の等しい長さの部分と比較される。
【０２４９】
修飾
ヌクレオシドは、塩基−糖の組合せである。ヌクレオシドの核酸塩基（更に塩基としても知られる）部分は、通常複素環塩基部分である。ヌクレオチドは、更にヌクレオシドの糖部分に共有的に結合したリン酸基を含むヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を含むこれらのヌクレオシドにおいて、リン酸基は、糖の２’、３’又は５’ヒドロキシル部分に結合することができる。オリゴヌクレオチドは、隣接するヌクレオシドのお互いの共有結合によって形成されて、直線のポリマーのオリゴヌクレオチドを形成する。オリゴヌクレオチド構造内で、リン酸基は、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合を形成するとして一般的に言及される。
【０２５０】
アンチセンス化合物に対する修飾は、置換或いはヌクレオシド間結合、糖部分、又は核酸塩基に対する変化を包含する。修飾されたアンチセンス化合物は、例えば、細胞取込みの向上、核酸標的に対する親和性の向上、ヌクレアーゼの存在中の安定性の増加、又は阻害活性の増加のような好ましい特性のために天然の形態と比較してしばしば好まれる。
【０２５１】
化学的に修飾ヌクレオシドは、更に短縮又は切断されたアンチセンスオリゴヌクレオチドのその標的核酸に対する結合親和性を増加するために使用することもできる。従って、このような化学的に修飾ヌクレオシドを有する短いアンチセンス化合物により、しばしば匹敵する結果を得ることができる。
【０２５２】
修飾ヌクレオシド間結合
ＲＮＡ及びＤＮＡの天然に存在するヌクレオシド間結合は、３’から５’へのホスホジエステル結合である。一つ又はそれより多い修飾された、即ち天然に存在しないヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物は、例えば細胞取込みの向上、標的核酸に対する親和性の向上、及びヌクレアーゼの存在中の安定性の増加のような好ましい特性のために、しばしば天然に存在するヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物を超えて選択される。
【０２５３】
修飾ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドは、リン原子を保持するヌクレオシド間結合、並びにリン原子を持たないヌクレオシド間結合を含む。代表的なリンを含有するヌクレオシド間結合は、制約されるものではないが、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホルアミデート、及びホスホロチオエートを含む。リン含有及び非リン含有結合の調製の方法は、公知である。
【０２５４】
ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物は、一つ又はそれより多いヌクレオシド間結合を含んでなる。ある態様において、修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。ある態様において、アンチセンス化合物のそれぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０２５５】
修飾糖部分
本明細書中に提供されるアンチセンス化合物は、糖基が修飾された一つ又はそれより多いヌクレオシドを所望により含有することができる。このような糖を修飾ヌクレオシドは、ヌクレアーゼ安定性の向上、結合親和性の増加、又は幾つかの他の有利な生物学的特性をアンチセンス化合物に与えることができる。ある態様において、ヌクレオシドは、化学的に修飾されたリボフラノース環部分を含んでなる。化学的に修飾されたリボフラノース環の例は、制約されるものではないが、置換基の付加（５’及び２’置換基を含む）；二環式核酸（ＢＮＡ）を形成するための非ジェミナルな環原子の架橋；Ｓ、Ｎ（Ｒ）、又はＣ（Ｒ１）（Ｒ）２（Ｒ＝Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル又は保護基）によるリボシル環の酸素原子の置換；及びこれらの組合せを含む。化学的に修飾された糖の例は、２’−Ｆ−５’−メチル置換されたヌクレオシド（他の開示された５’，２’−ビス置換されたヌクレオシドに対して、８／２１／０８に公開されたＰＣＴ国際特許出願ＷＯ２００８／１０１１５７を参照されたい）、２’−位における更なる置換を伴うＳによるリボシル環の酸素原子の置換（２００５年６月１６日に公開された、公開された米国特許出願ＵＳ２００５／０１３０９２３を参照されたい）、又は、別の方法として、ＢＮＡの５’−置換（ＬＮＡが、例えば５’−メチル又は５’−ビニル基で置換された、１１／２２／０７に公開されたＰＣＴ国際特許出願ＷＯ２００７／１３４１８１を参照されたい）を含む。
【０２５６】
修飾糖部分を有するヌクレオシドの例は、制約されるものではないが、５’−ビニル、５’−メチル（Ｒ又はＳ）、４’−Ｓ、２’−Ｆ、２’−ＯＣＨ３、及び２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３置換基を含んでなるヌクレオシドを含む。２’位の置換基は、更にアリル、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル、ＯＣＦ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、及びＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択することもでき、ここで、それぞれのＲｍ及びＲｎは、独立にＨ或いは置換された又は非置換のＣ１−Ｃ１０アルキルである。
【０２５７】
本明細書中で使用する場合、“二環式ヌクレオシド”は、二環式糖部分を含んでなる修飾ヌクレオシドを指す。二環式ヌクレオシドの例は、制約されるものではないが、４’及び２’リボシル環原子間の架橋を含んでなるヌクレオシドを含む。ある態様において、本明細書中に提供されるアンチセンス化合物は、架橋が４’から２’の二環式ヌクレオシドを含んでなる一つ又はそれより多い二環式ヌクレオシドを含む。このような４’から２’の二環式ヌクレオシドの例は、制約されるものではないが、式：４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）；４’−（ＣＨ２）−Ｓ−２’；４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）；４’−ＣＨ（ＣＨ３）-−Ｏ−２’及び４’−Ｃ-Ｈ（ＣＨ２ＯＣＨ３）-−Ｏ−２’、並びにこれらの類似体（２００８年７月１５日に公布された米国特許第７，３９９，８４５号を参照されたい）；４’−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）-−Ｏ−２’、及びその類似体（２００９年１月８日に公開された、公開されたＰＣＴ国際特許出願ＷＯ２００９／００６４７８を参照されたい）；４’−ＣＨ２−Ｎ（ＯＣＨ３）−２’、及びその類似体（２００８年１２月１１日に公開された、公開されたＰＣＴ国際特許出願ＷＯ２００８／１５０７２９を参照されたい）；４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−２’（２００４年９月２日に公開された、公開された米国特許出願ＵＳ２００４／０１７１５７０を参照されたい）；ＲがＨ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、又は保護基である４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’（２００８年９月２３日に公布された米国特許第７，４２７，６７２号を参照されたい）；４’−ＣＨ２−Ｃ-（Ｈ）（ＣＨ３）−２’（Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７４，１１８−１３４を参照されたい）；及び４’−ＣＨ２−Ｃ-（＝ＣＨ２）−２、及びその類似体（２００８年１２月８日に公開された、公開されたＰＣＴ国際特許出願ＷＯ２００８／１５４４０１を参照されたい）の一つを含む。更に、例えば：Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９８，４，４５５−４５６；Ｋｏｓｈｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０；Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２０００，９７，５６３３−５６３８；Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２；Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１２９（２６）８３６２−８３７９（Ｊｕｌ．４，２００７）；Ｅｌａｙａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｎｓ．Ｄｒｕｇｓ，２００１，２，５５８−５６１；Ｂｒａａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００１，８，１−７；Ｏｒｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２００１，３，２３９−２４３；米国特許第６，６７０，４６１号、７，０５３，２０７号、６，２６８，４９０号、６，７７０，７４８号、６，７９４，４９９号、７，０３４，１３３号、６，５２５，１９１号、７，３９９，８４５号；公開されたＰＣＴ国際特許出願ＷＯ２００４／１０６３５６、ＷＯ９４／１４２２６、ＷＯ２００５／０２１５７０及びＷＯ２００７／１３４１８１；米国特許公開ＵＳ２００４／０１７１５７０、ＵＳ２００７／０２８７８３１、及びＵＳ２００８／００３９６１８；及び米国特許番号１２／１２９，１５４、６０／９８９，５７４、６１／０２６，９９５、６１／０２６，９９８、６１／０５６，５６４、６１／０８６，２３１、６１／０９７，７８７、及び６１／０９９，８４４；並びにＰＣＴ国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４５９１、ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６１５４、及びＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６８９２２を参照されたい。それぞれの前述の二環式ヌクレオシドは、例えば、α−Ｌ−リボフラノース及びβ−Ｄ−リボフラノースを含む一つ又はそれより多い立体化学的糖配置を有することによって調製することができる（１９９９年３月２５日にＷＯ９９／１４２２６として公開されたＰＣＴ国際特許出願ＰＣＴ／ＤＫ９８／００３９３を参照されたい）。
【０２５８】
ある態様において、ＢＮＡヌクレオシドの二環式糖部分は、制約されるものではないが、ペントフラノシル糖部分の４’及び２’位間に少なくとも一つの架橋を有する化合物を含み、ここで、このような架橋は、独立に：−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ−、−Ｃ（＝ＮＲａ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒａ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−、及び−Ｎ（Ｒａ）−から独立に選択される１個又は２から４個までの結合基を含んでなり；
ここで：
ｘは、０、１、又は２であり；
ｎは、１、２、３、又は４であり；
それぞれのＲａ及びＲｂは、独立に、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換されたＣ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換されたＣ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換されたＣ５−Ｃ２０アリール、複素環ラジカル、置換された複素環ラジカル、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、Ｃ５−Ｃ７脂環式ラジカル、置換されたＣ５−Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換されたアシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）、又はスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり；そして
それぞれのＪ１及びＪ２は、独立に、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換されたＣ１−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換されたＣ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール、置換されたＣ５−Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換されたアシル、複素環ラジカル、置換された複素環ラジカル、Ｃ１−Ｃ１２アミノアルキル、置換されたＣ１−Ｃ１２アミノアルキル、又は保護基である。
【０２５９】
ある態様において、二環式糖部分の架橋は、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−又は、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−である。ある態様において、架橋は、４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−２’、４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’、４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’、及び４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’−であり、ここで、それぞれのＲは、独立に、Ｈ、保護基、又はＣ１−Ｃ１２アルキルである。
【０２６０】
ある態様において、二環式ヌクレオシドは、更に異性体配置によって定義される。例えば、４’−２’メチレン−オキシ架橋を含んでなるヌクレオシドは、α−Ｌ−配置又はβ−Ｄ−配置であることができる。以前に、α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡが、アンチセンス活性を示すアンチセンスオリゴヌクレオチド中に組込まれている（Ｆｒｉｅｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５−６３７２）。
【０２６１】
ある態様において、二環式ヌクレオシドは、制約されるものではないが、以下に示すような（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｃ）Ｅチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ、（Ｇ）メチレン−チオ（４’−ＣＨ２−Ｓ−２’）ＢＮＡ、（Ｈ）メチレン−アミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ、（Ｉ）メチル炭素環式（４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’）ＢＮＡ、及び（Ｊ）  プロピレン炭素環式（４’−（ＣＨ２）３−２’）ＢＮＡ：
【０２６２】
【化１】
0005943993.tif 000002
【０２６３】
を含み、ここで、Ｂｘは、塩基部分であり、そしてＲは、独立に、Ｈ、保護基又はＣ１−Ｃ１２アルキルである。
【０２６４】
ある態様において、二環式ヌクレオシドは、以下の式Ｉ：
【０２６５】
【化２】
0005943993.tif 000003
【０２６６】
を有し、式中：
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり；
−Ｑａ−Ｑｂ−Ｑｃ−は、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｃ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒｃ）−、−ＣＨ２−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−、又は−Ｎ（Ｒｃ）−Ｏ−ＣＨ２であり；  
Ｒｃは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル又はアミノ保護基であり；そして
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合体基、反応性リン基、リン部分、又は支持媒体への共有結合である。
【０２６７】
ある態様において、二環式ヌクレオシドは、以下の式ＩＩ：
【０２６８】
【化３】
0005943993.tif 000004
【０２６９】
を有し、式中：
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり；
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合体基、反応性リン基、リン部分、又は支持媒体への共有結合であり；
Ｚａは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、アシル、置換されたアシル、置換されたアミト゛、チオール、又は置換されたチオである。
【０２７０】
一つの態様において、それぞれの置換基は、独立に、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪｃ、ＮＪｃＪｄ、ＳＪｃ、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊｃ、及びＮＪｅＣ（＝Ｘ）ＮＪｃＪｄから独立に選択される置換基でモノ又は多置換され、ここで、それぞれのＪｃ、Ｊｄ、及びＪｅは、独立に、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、又は置換されたＣ１−Ｃ６アルキルであり、そしてＸは、Ｏ又はＮＪｃである。
【０２７１】
ある態様において、二環式ヌクレオシドは、以下の式ＩＩＩ：
【０２７２】
【化４】
0005943993.tif 000005
【０２７３】
を有し、式中：
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり；
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合体基、反応性リン基、リン部分、又は支持媒体への共有結合であり；
Ｚｂは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、、又は置換されたアシル（Ｃ（＝Ｏ）−）である。
【０２７４】
ある態様において、二環式ヌクレオシドは、以下の式ＩＶ：
【０２７５】
【化５】
0005943993.tif 000006
【０２７６】
を有し、式中：
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり；
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合体基、反応性リン基、リン部分、又は支持媒体への共有結合であり；
Ｒｄは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、又は置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり；
それぞれのｑａ、ｑｂ、ｑｃ及びｑｄは、独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、又は置換されたＣ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、置換されたＣ１−Ｃ６アルコキシ、アシル、置換されたアシル、Ｃ１−Ｃ６アミノアルキル、或いは置換されたＣ１−Ｃ６アミノアルキルである；
ある態様において、二環式ヌクレオシドは、以下の式Ｖ：
【０２７７】
【化６】
0005943993.tif 000007
【０２７８】
を有し、式中：
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり；
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合体基、反応性リン基、リン部分、又は支持媒体への共有結合であり；
ｑａ、ｑｂ、ｑｅ及びｑｆは、それぞれ独立に、水素、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換されたＣ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換されたＣ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、置換されたＣ１−Ｃ１２アルコキシ、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）-ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）-ＮＪｊＪｋ又はＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであるか；
或いはｑｅ及びｑｆは、一緒に＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり；
ｑｇ及びｑｈは、それぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、又は置換されたＣ１−Ｃ１２アルキルである。
【０２７９】
メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡモノマーのアデニン、シトシン、グアニン、５−メチル−シトシン、チミン及びウラシルの合成及び調製は、そのオリゴマー化、及び核酸認識特性と共に記載されている（例えば、Ｋｏｓｈｋｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７−３６３０を参照されたい）。ＢＮＡ及びその調製は、更にＷＯ９８／３９３５２及びＷＯ９９／１４２２６中に記載されている。
【０２８０】
メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ、及び２’−チオ−ＢＮＡの類似体も、更に調製されている（例えばＫｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９−２２２２を参照されたい）。核酸ポリメラーゼのための基質としてのオリゴデオキシリボヌクレオチド二重鎖を含んでなるロックドヌクレオシド類似体の調製も、更に記載されている（例えば、Ｗｅｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ９９／１４２２６を参照されたい）。更に、新規な立体構造的に制限された高親和性のオリゴヌクレオチド類似体の２’−アミノ−ＢＮＡの合成が、当技術において記載されている（例えば、Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５−１００３９を参照されたい）。更に、２’−アミノ−及び２’−メチルアミノ−ＢＮＡが、調製され、そして相補的ＲＮＡ及びＤＮＡ鎖とのその二重鎖の熱安定性は、以前に報告されている。
【０２８１】
ある態様において、二環式ヌクレオシドは、以下の式ＶＩ：
【０２８２】
【化７】
0005943993.tif 000008
【０２８３】
を有し、式中：
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり；
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立に、Ｈ、ヒドロキシル保護基、複合体基、反応性リン基、リン部分、又は支持媒体への共有結合であり；
それぞれのｑｉ、ｑｊ、ｑｋ及びｑｌは、独立に、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、置換されたＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、置換されたＣ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、置換されたＣ２−Ｃ１２アルキニル、Ｃ１−Ｃ１２アルコキシ、置換されたＣ１−Ｃ１２アルコキシ、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）-ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）-ＮＪｊＪｋ、又はＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり；そして
ｑｉ及びｑｊ  又はｑｌ及びｑｋは、一緒に、＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、ここで、ｑｇ及びｑｈは、それぞれ独立にＨ、ハロゲン、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、又は置換されたＣ１−Ｃ１２アルキルである。
【０２８４】
４’−（ＣＨ２）３−２’架橋及びアルケニル類似体の架橋４’−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−２’を有する一つの炭素環の二環式ヌクレオシドが記載されている（例えば、Ｆｒｅｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４２９−４４４３及びＡｌｂａｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，７７３１−７７４０を参照されたい）。炭素環の二環式ヌクレオチドの合成及び調製も、更にそのオリゴマー化及び生化学的研究と共に記載されている（例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００７，１２９（２６），８３６２−８３７９を参照されたい）。
【０２８５】
本明細書中で使用する場合、“４’−２’二環式ヌクレオシド”又は“４’から２’の二環式ヌクレオシド”は、２’炭素原子及び４’炭素原子を接続する架橋を含んでなるフラノース環を含んでなる二環式ヌクレオシドを指す。
【０２８６】
本明細書中で使用する場合、“単環式ヌクレオシド”は、二環式糖部分ではない修飾糖部分を含んでなるヌクレオシドを指す。ある態様において、ヌクレオシドの糖部分、又は糖部分類似体は、いずれもの位置で修飾又は置換されていることができる。
【０２８７】
本明細書中で使用する場合、“２’−修飾糖”は、２’位で修飾されたフラノシル糖を意味する。ある態様において、このような修飾は：制約されるものではないが、置換された又は非置換のアルコキシ、置換された又は非置換のチオアルキル、置換された又は非置換のアミノアルキル、置換された又は非置換のアルキル、置換された又は非置換のアリル、及び置換された又は非置換のアルキニルを含むハロゲン化物から選択される置換基を含む。ある態様において、２’修飾は、制約されるものではないが、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、及びＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］２を含む置換基から選択され、ここで、ｎおよびｍは、１から約１０までである。他の２’−置換基は、更に：Ｃ１−Ｃ１２アルキル；置換されたアルキル；アルケニル；アルキニル；アルカリール；アラルキル；Ｏ−アルカリール又はＯ−アラルキル；ＳＨ；ＳＣＨ３；ＯＣＮ；Ｃｌ；Ｂｒ；ＣＮ；ＣＦ３；ＯＣＦ３；ＳＯＣＨ３；ＳＯ２ＣＨ３；ＯＮＯ２；ＮＯ２；Ｎ３；ＮＨ２；ヘテロシクロアルキル；ヘテロシクロアルカリール；アミノアルキルアミノ；ポリアルキルアミノ；置換されたシリル；ＲＮＡ開裂基；レポーター基；インターカレーター；薬物動態学的特性を改良するための基；及びアンチセンス化合物の薬力学的特性を改良するために基、並びに類似の特性を有する他の置換基から選択することができる。ある態様において、修飾ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ側鎖を含んでなる（例えば、Ｂａｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，２７２，１１９４４−１２０００を参照されたい）。このような２’−ＭＯＥ置換は、非修飾ヌクレオシド及び２’−Ｏ−メチル、Ｏ−プロピル、及びＯ−アミノプロピルのような他の修飾ヌクレオシドと比較して、改良された結合親和性を有すると記載されている。２’−ＭＯＥ置換基を有するオリゴヌクレオチドも、更に遺伝子発現のアンチセンス阻害剤であり、ｉｎ  ｖｉｖｏ使用に対する約束された将来を持つことが示されている（例えば、Ｍａｒｔｉｎ，Ｐ．，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６−５０４；Ａｌｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｉｍｉａ，１９９６，５０，１６８−１７６；Ａｌｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，１９９６，２４，６３０−６３７；及びＡｌｔｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９７，１６，９１７−９２６を参照されたい）。
【０２８８】
本明細書中で使用する場合、“修飾されたテトラヒドロピランヌクレオシド”又は“修飾ＴＨＰヌクレオシド”は、正常なヌクレオシド中のペントフラノシル残基において置換された６員のテトラヒドロピラン“糖”を有するヌクレオシド（糖代替物）を意味する。修飾ＴＨＰヌクレオシドは、制約されるものではないが、当技術においてヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、アニトール核酸（ＡＮＡ）、マンニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）核酸（ＭＮＡ）（Ｌｅｕｍａｎｎ，ＣＪ．Ｂｉｏｏｒｇ．＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００２）１０：８４１−８５４を参照されたい）、フルオロＨＮＡ（Ｆ−ＨＮＡ）と呼ばれるもの、又は以下の式Ｘ：
【０２８９】
【化８】
0005943993.tif 000009
【０２９０】
を有する化合物を含み、ここで、それぞれの前記式Ｘの少なくとも一つのテトラヒドロピランヌクレオシド類似体に対して独立に：
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり；
Ｔ３及びＴ４は、それぞれ独立に、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に結合するヌクレオシド間結合基であるか、又はＴ３及びＴ４の一方は、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に結合するヌクレオシド間結合基であり、そしてＴ３及びＴ４の他方は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、結合された複合体基、或いは５’ 又は３’−末端基であり；
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７は、それぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換されたＣ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、置換されたＣ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、又は置換されたＣ２−Ｃ６アルキニルであり；そして
Ｒ１及びＲ２の一方は、水素であり、そして他方は、ハロゲン、置換された又は非置換のアルコキシ、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、及びＣＮから選択され、ここで、ＸはＯ、Ｓ、又はＮＪ１であり、そしてそれぞれのＪ１、Ｊ２、及びＪ３は、独立に、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである。
【０２９１】
ある態様において、ｑｍ、ｑｎ、ｑｐ、ｑｒ、ｑｓ、ｑｔ、及びｑｕがそれぞれＨである、式Ｘの修飾ＴＨＰヌクレオシドが提供される。ある態様において、ｑｍ、ｑｎ、ｑｐ、ｑｒ、ｑｓ、ｑｔ、及びｑｕの少なくとも一つは、Ｈ以外である。ある態様において、ｑｍ、ｑｎ、ｑｐ、ｑｒ、ｑｓ、ｑｔ、及びｑｕの少なくとも一つは、メチルである。ある態様において、Ｒ１及びＲ２の一方がＦである、式ＸのＴＨＰヌクレオシドが提供される。ある態様において、Ｒ１はフルオロであり、そしてＲ２はＨであり、Ｒ１はメトキシであり、そしてＲ２はＨであり、そしてＲ１はメトキシエトキシであり、そしてＲ２はＨである。
【０２９２】
本明細書中で使用する場合、“２’−修飾”又は“２’−置換”は、２’位でＨ又はＯＨ以外の置換基を含んでなる糖を含んでなるヌクレオシドを指す。２’−修飾ヌクレオシドは、制約されるものではないが、糖環の二つの炭素原子を接続する架橋が、２’炭素及び糖環のもう一つの炭素を接続する二環式ヌクレオシド、並びにアリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ−アリル、Ｏ−Ｃ１−Ｃ１０アルキル、−ＯＣＦ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ３、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、又はＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）のような非架橋２’置換基を持つヌクレオシドを含み、ここで、それぞれのＲｍ及びＲｎは、独立に、Ｈ或いは置換された又は非置換のＣ１−Ｃ１０アルキルである。２’−修飾ヌクレオシドは、更に、例えば、糖の他の位置及び／又は核酸塩基における他の修飾を含んでなることができる。
【０２９３】
本明細書中で使用する場合、“２’−Ｆ”は、２’位においてフルオロ基を含んでなる糖を指す。
【０２９４】
本明細書中で使用する場合、“２’−ＯＭｅ”又は“２’−ＯＣＨ３”或いは“２’−Ｏ−メチル”は、それぞれ糖環の２’位において−ＯＣＨ３基を含んでなる糖を含んでなるヌクレオシドを指す。
【０２９５】
本明細書中で使用する場合、“オリゴヌクレオチド”は、複数の結合したヌクレオシドを含んでなる化合物を指す。ある態様において、一つ又はそれより多い複数のヌクレオシドは、修飾されている。ある態様において、オリゴヌクレオチドは、一つ又はそれより多いリボヌクレオシド（ＲＮＡ）及び／又はデオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）を含んでなる。
【０２９６】
アンチセンス化合物への組込みのためにヌクレオシドを修飾するために使用することができる、多くの他のビシクロ及びトリシクロ糖代替環系も当技術において既知である（例えば、総括文献：Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｊ．Ｃ，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，１０，８４１−８５４を参照されたい）。このような環系は、活性を向上するために各種の更なる置換を受けることができる。
【０２９７】
修飾糖の調製のための方法は、当業者にとって公知である。
【０２９８】
修飾糖部分を有するヌクレオチドにおいて、核酸塩基部分（天然、修飾、又はこれらの組合せ）は、適当な核酸標的とのハイブリダイゼーションのために維持される。
【０２９９】
ある態様において、アンチセンス化合物は、修飾糖部分を有する一つ又はそれより多いヌクレオチドを含んでなる。ある態様において、修飾糖部分は、２’−ＭＯＥである。ある態様において、２’−ＭＯＥ修飾ヌクレオチドは、ギャップマーモチーフ中に配置される。ある態様において、修飾糖部分は、ｃＥｔである。ある態様において、ｃＥｔ修飾ヌクレオチドは、ギャップマーモチーフのウイング中に配置される。
【０３００】
医薬組成物を処方するための組成及び方法
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、医薬組成物又は製剤の調製のために医薬的に受容可能な活性又は不活性な物質と混合することができる。医薬組成物の処方のための組成及び方法は、制約されるものではないが、投与の経路、疾病の程度、又は投与される投与量を含む多くの基準に依存する。
【０３０１】
ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物は、アンチセンス化合物を適した医薬的に受容可能な希釈剤又は担体と混合することによって、医薬組成物に使用することができる。医薬的に受容可能な希釈剤は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。ＰＢＳは、非経口的に供給される組成物における使用のために適した希釈剤である。従って、一つの態様において、本明細書中に記載される方法において使用されるものは、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物及び医薬的に受容可能な希釈剤を含んでなる医薬組成物である。ある態様において、医薬的に受容可能な希釈剤は、ＰＢＳである。ある態様において、アンチセンス化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【０３０２】
アンチセンス化合物を含んでなる医薬組成物は、ヒトを含む動物への投与において、生物学的に活性な代謝産物又はその残基を与える（直接又は間接的に）ことが可能な、いずれもの医薬的に受容可能な塩、エステル、又はこのようなエステルの塩、或いはいずれもの他のオリゴヌクレオチドを包含する。従って例えば、本開示は、更にアンチセンス化合物の医薬的に受容可能な塩、プロドラッグ、このようなプロドラッグの医薬的に受容可能な塩、及び他の生物学的同等物に達する。適した医薬的に受容可能な塩は、制約されるものではないが、ナトリウム及びカリウム塩を含む。
【０３０３】
プロドラッグは、アンチセンス化合物の一方又は両方の末端において、身体内で内在性ヌクレアーゼによって開裂されて、活性なアンチセンス化合物を形成する更なるヌクレオシドの組込みを含むことができる。
【０３０４】
複合化アンチセンス化合物
アンチセンス化合物は、得られたアンチセンスオリゴヌクレオチドの活性、細胞分布、又は細胞取込みを向上する一つ又はそれより多い分子或いは複合体と、共有的に結合することができる。典型的な複合体基は、コレステロール分子及び脂質分子を含む。更なる複合体基は、炭化水素、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、及び染料を含む。
【０３０５】
アンチセンス化合物は、更に、例えば、ヌクレアーゼ安定性のような特性を向上するために、アンチセンス化合物の一方又は両方の末端に一般的に接続される、一つ又はそれより多い安定化基を有するように修飾することもできる。安定化基に含まれるものは、キャップ構造である。これらの末端修飾は、末端核酸を有するアンチセンス化合物を、エキソヌクレアーゼ分解から保護し、そして細胞内の供給及び／又は局在化において援助することができる。キャップは、５’−末端（５’−キャップ）、又は３’−末端（３’−キャップ）に存在することができるか、或いは両方の末端に存在することができる。キャップ構造は、当技術において公知であり、そして例えば、逆位デオキシ脱塩基キャップを含む。ヌクレアーゼ安定性を与えるためのアンチセンス化合物の一方又は両方の末端をキャップするために使用することができる更なる３’及び５’−安定化基は、２００３年１月１６日に公開されたＷＯ０３／００４６０２中に開示されているものを含む。
【０３０６】
細胞培養及びアンチセンス化合物治療
ＳＴＡＴ３核酸のレベル、活性又は発現に対するアンチセンス化合物の効果は、各種の細胞型でｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験することができる。このような分析に使用しされる細胞型は、商業的業者（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓｕｓ，ＶＡ；Ｚｅｎ−Ｂｉｏ，Ｉｎｃ．，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，ＮＣ；Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から入手可能であり、そして業者の説明書により、商業的に入手可能な試薬（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して培養される。例示的な細胞型は、制約されるものではないが、ＨｕＶＥＣ細胞、ｂ．ＥＮＤ細胞、ＨｅｐＧ２細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、及び初代培養肝細胞を含む。
【０３０７】
アンチセンスオリゴヌクレオチドのｉｎ  ｖｉｔｒｏの試験
本明細書中に記載されるものは、アンチセンスヌクレオチドによる細胞の治療のための方法であり、これは、他のアンチセンス化合物による治療のために適当に改変することができる。
【０３０８】
細胞は、細胞が培養中に概略６０−８０％密集に達した時点でアンチセンスオリゴヌクレオチドにより治療することができる。
【０３０９】
培養された細胞中にアンチセンスオリゴヌクレオチドを導入するために普通に使用される一つの試薬は、カチオン性脂質形質移入試薬ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を含む。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮとＯＰＴＩ−ＭＥＭ１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中で、アンチセンスオリゴヌクレオチドの所望の最終濃度、及び１００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチド当たり２から１２ｕｇ／ｍＬまでの範囲であることができるＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮの濃度を達成するために混合することができる。
【０３１０】
培養された細胞中にアンチセンス化合物を導入するために使用されるもう一つの試薬は、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を含む。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥと、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ１還元血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中で、アンチセンス化合物の所望の濃度、及び１００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチド当たり２から１２ｕｇ／ｍＬまでの範囲であることができるＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ濃度を達成するために混合される。
【０３１１】
培養された細胞中にアンチセンス化合物を導入するためのもう一つの技術は、電気穿孔法を含む。
【０３１２】
細胞は、アンチセンスオリゴヌクレオチドでルーチン的方法によって治療される。細胞は、アンチオリゴヌクレオチド治療の１６−２４時間後に回収することができ、この時点で標的核酸のＲＮＡ又はタンパク質レベルが、当技術において既知の、そして本明細書中に記載される方法によって測定される。一般的に、治療が多数の繰返しで行われた場合、データは、繰返し治療の平均として提示される。
【０３１３】
使用されるアンチセンスヌクレオチドの濃度は、細胞株によって変化する。特定の細胞株のための最適なアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度を決定するための方法は、当技術において公知である。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、典型的には、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥと形質移入される場合、１ｎＭから３００ｎＭの範囲の濃度で使用される。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、電気穿孔法を使用して形質移入される場合、６２５から２０，０００ｎＭまでの範囲のより高い濃度で使用される。
【０３１４】
自由取込みアッセイ
ある態様において、癌細胞株中のアンチセンスオリゴヌクレオチドの形質移入非依存性活性（即ち、自由取込み）は、効力の基準である。自由取込みは、例えば、ＳＫ−ＢＲ−３細胞、Ｕ２５１−ＭＧ細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞、Ｈ４６０細胞、Ａ４３１細胞、ｃｏｌｏ２０５細胞、ＳＮＢ−１９細胞、ＳＫ−ＯＶ３細胞、Ｈ１９９３肺癌細胞、Ｈ３５８肺癌細胞、ＰＣ−９肺癌細胞、ＫＨＭ−３５肺癌細胞、Ｃａｐａｎ−１膵臓癌細胞、ＨＰＡＦ−１１膵臓癌細胞、及びＣｏｌｏ２０１結腸直腸癌細胞のような癌細胞株において測定することができる。
【０３１５】
自由取込みアッセイにおいて、アンチオリゴヌクレオチドは、形質移入剤又は電気穿孔の援助なしに細胞株に投与される。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、一回又はそれより多い投与で細胞株に投与され、そして標的ｍＲＮＡ又はタンパク質発現の阻害パーセントが測定される。多数回の投与が投与された場合、ＩＣ５０を測定することができる。ある態様において、一回投与又は多数回投与後の阻害パーセントによって測定されるような高い程度の効力を示すアンチセンスオリゴヌクレオチドが、低い程度の効力を示すアンチセンスオリゴヌクレオチドと比較して好まれる。これらの高い程度のｉｎ  ｖｉｔｒｏの効力を示すアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ｉｎ  ｖｉｖｏの効力を示すより大きい可能性がある。
【０３１６】
ＲＮＡの単離
ＲＮＡの分析は、全細胞ＲＮＡ又はポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡに対して行うことができる。ＲＮＡ単離の方法は、当技術において公知である。ＲＮＡは、当技術において公知の方法を使用して、例えばＴＲＩＺＯＬ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して製造業者の推奨するプロトコルによって調製される。
【０３１７】
標的レベル又は発現の阻害の分析
ＳＴＡＴ３核酸のレベル又は発現の阻害は、当技術において既知の各種の方法で分析することができる。例えば、標的核酸レベルは、例えば、ノーザンブロット分析、競合的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、又は定量的リアルタイムＰＣＲによって定量化することができる。ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡ又はポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡに対して行うことができる。ＲＮＡ単離の方法は、当技術において公知である。ノーザンブロット分析も、更に当技術においてルーチン的である。定量的リアルタイムＰＣＲは、ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡから入手可能な、商業的に入手可能なＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７６００、７７００、又は７９００配列検出装置を使用し、そして製造業者の説明書によって使用して都合よく達成することができる。
【０３１８】
標的ＲＮＡレベルの定量的リアルタイムＰＣＲ分析
標的ＲＮＡレベルの定量化は、ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７６００、７７００、又は７９００配列検出装置（ＰＥ−Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を、製造業者の説明書によって使用する定量的リアルタイムＰＣＲによって達成することができる。定量的リアルタイムＰＣＲの方法は、当技術において公知である。
【０３１９】
リアルタイムＰＣＲに先立って、単離されたＲＮＡは、逆トランスクリプターゼ（ＲＴ）反応にかけられ、これは、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を産生し、これは、次いでリアルタイムＰＣＲ適用のための基質として使用される。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲ反応は、同じ試料ウェル中で連続して行われる。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲ試薬は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）から得ることができる。ＲＴリアルタイムＰＣＲ反応は、当業者にとって公知の方法によって行われる。
【０３２０】
リアルタイムＰＣＲによって得られる遺伝子（又はＲＮＡ）標的の量は、シクロフィリンＡのようなその発現が一定である遺伝子の発現レベル、又はＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用する全ＲＮＡを定量化することよるかのいずれかを使用して正規化される。シクロフィリンＡの発現は、標的と同時に、多重で、又は別個に行うことによってリアルタイムＰＣＲによって定量化される。全ＲＮＡは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ  ＲＮＡ定量化試薬（Ｉｎｖｅｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を使用して定量化される。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮによるＲＮＡ定量化の方法は、Ｊｏｎｅｓ，Ｌ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ，（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，２６５，３６８−３７４）によって教示されている。ＣＹＴＯＦＬＵＯＲ４０００装置（ＰＥ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）が、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮの蛍光を測定するために使用される。
【０３２１】
プローブ及びプライマーは、ＳＴＡＴ３核酸とハイブリダイズするように設計される。リアルタイムＰＣＲプローブ及びプライマーを設計する方法は、当技術において公知であり、そしてＰＲＩＭＥＲ  ＥＸＰＲＥＳＳソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）のようなソフトウェアの使用を含むことができる。
【０３２２】
タンパク質レベルの分析
ＳＴＡＴ３核酸のアンチセンス阻害は、ＳＴＡＴ３タンパク質レベルを測定することによって評価することができる。ＳＴＡＴ３のタンパク質レベルは、免疫沈降法、ウェスタンブロット分析（免疫ブロッティング）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、定量的タンパク質アッセイ、タンパク質活性アッセイ（例えば、カスパーゼ活性アッセイ）、免疫組織化学、免疫細胞化学又は蛍光標示式細胞分取（ＦＡＣＳ）のような当技術において公知の各種の方法で評価又は定量化することができる。標的を指向する抗体は、確認され、そして抗体のＭＳＲＳカタログ（Ａｅｒｉｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＭＩ）のような各種の供給源から得ることができるか、又は当技術において公知の慣用的なモノクローナル又はポリクローナル抗体発生法により調製することができる。マウス、ラット、サル、及びヒトＳＴＡＴ３の検出のために有用な抗体は、商業的に入手可能である。
【０３２３】
アンチセンス化合物のｉｎ  ｖｉｖｏの試験
アンチセンス化合物、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＳＴＡＴ３の発現を阻害し、そして細胞増殖の減少、癌に伴う徴候の改善、カヘキシアの減少、及び癌マーカーの減少のような表現型の変化を産生するその能力を評価するために動物において試験される。試験は、正常な動物で、又は実験的な疾病モデルで行うことができる。動物への投与のために、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、リン酸緩衝生理食塩水のような医薬的に受容可能な希釈剤中に処方される。投与は、腹腔内、静脈内、皮下、くも膜下腔内、及び脳室内のような、非経口の投与の経路を含む。アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与量の計算及び投与頻度は、当業者の能力の範囲内であり、そして投与の経路及び動物の体重のような因子に依存する。アンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療の期間後、ＲＮＡを肝臓組織から単離し、そしてＳＴＡＴ３核酸発現の変化を測定する。ＳＴＡＴ３タンパク質レベルの変化も更に測定する。
【０３２４】
ある態様において、異種移植腫瘍モデルが、腫瘍の増殖及び転移に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果を測定するために使用される。本明細書中に記載される異種移植腫瘍モデルにおいて、癌性細胞株からの細胞を動物に接種する。このような細胞株は、例えば、ヒト乳癌細胞、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、Ａ４３１ヒト類表皮癌、Ｕ２５１ヒト神経膠腫腫瘍細胞、及びヒトＮＣＩ−Ｈ４６０非小細胞肺癌細胞を含むことができる。本明細書中に記載され、そして本明細書中に記載される異種移植モデルにおいて使用されるある種の化合物は、ヒトＳＴＡＴ３、マウスＳＴＡＴ３、ラットＳＴＡＴ３、及び／又はサルＳＴＡＴ３を標的とすることができる。本明細書中に記載され、そして本明細書中に記載される異種移植モデルにおいて使用されるある種の化合物は、一つ又はそれより多い種のＳＴＡＴ３と交差反応することができる。ある態様において、本明細書中に記載され、そして本明細書中に記載される異種移植モデルにおいて使用される化合物は、内在性ＳＴＡＴ３が減少されない（交差反応性の欠如により）データが示唆するより強力な腫瘍増殖及び腫瘍体積の阻害剤であることができる。
【０３２５】
ある種の表示
ある態様において、提供されるものは、本明細書中に提供される一つ又はそれより多い医薬組成物を投与することを含んでなる、個体を治療する方法、化合物、及び組成物である。ある態様において、個体は、過剰増殖性疾病を有する。ある態様において、過剰増殖性疾病は、癌、例えば、細胞腫、肉腫、リンパ腫、及び白血病、並びに付随する悪性腫瘍及び転移である。ある態様において、癌の種類は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含む肺癌、膵臓癌、結腸直腸癌、多発性骨髄腫、肝細胞細胞腫（ＨＣＣ）、神経膠芽腫、卵巣癌、骨肉腫、頭頸部癌、乳癌、類表皮癌、腸管腺腫、前立腺癌、及び胃癌である。ある態様において、個体は、癌、例えば、細胞腫、肉腫、リンパ腫、及び白血病、並びに付随する悪性腫瘍及び転移を含む過剰増殖性疾病の危険性がある。これは、老化；タバコの使用；日光及びイオン化照射に対する暴露；ある種の化学薬品との接触；ある種のウイルス及び細菌による感染；ある種のホルモン療法；遺伝子的素因；アルコールの使用；並びに不良な食事制限、身体活動性の欠如、及び／又は過体重を含むある種の生活習慣の選択を含む過剰増殖性疾病を発症する一つ又はそれより多い危険因子を有する個体を含む。ある態様において、個体は、過剰増殖性疾病に対する治療が必要であると確認されている。ある態様において、個体におけるＳＴＡＴ３発現を予防的に減少することに対する方法が提供される。ある態様は、治療的に有効な量のＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物を個体に投与することにより、それを必要とする個体を治療することを含む。
【０３２６】
ある態様において、本明細書中に記載される方法、化合物、及び組成物による治療は、腫瘍の骨と骨の境界におけるＳＴＡＴ３のようなある種の遺伝子の上方制御に伴う癌の転移を予防するために有用である。ある態様において、本明細書中に記載される方法、化合物、及び組成物による治療は、癌を骨への転移から予防するために有用である。ある態様において、本明細書中に記載される方法、化合物、及び組成物による治療は、腎細胞腫、乳癌、非小細胞肺癌、及び前立腺癌の骨への転移から予防するために有用である。
【０３２７】
一つの態様において、治療的に有効な量のＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物の投与は、アンチセンス化合物の投与に対する個体の反応を決定するために、個体の血清中のＳＴＡＴ３レベルをモニターすることを伴う。アンチセンス化合物の投与に対する個体の反応は、治療的介入の量及び期間を決定するために医師によって使用される。
【０３２８】
ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物の投与は、少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５又は９９％、或いはこれらの値のいずれか二つによって定義される範囲のＳＴＡＴ３発現の減少をもたらす。ある態様において、ＳＴＡＴ３核酸を標的とするアンチセンス化合物の投与は、細胞増殖の減少、腫瘍成長の減少、腫瘍体積の減少、癌に伴う徴候の改善、及び癌マーカーの減少をもたらす。ある態様において、ＳＴＡＴ３アンチセンス化合物の投与は、細胞増殖、腫瘍成長、及び腫瘍体積を、少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５又は９９％、或いはこれらの値のいずれか二つによって定義される範囲減少する。
【０３２９】
ある態様において、ＳＴＡＴ３を標的とするアンチセンス化合物を含んでなる医薬組成物は、過剰増殖性疾患に罹った、又は感受性である患者を治療するための医薬の調製のために使用される。
【０３３０】
ある種の組合せ療法
ある態様において、本明細書中に提供される一つ又はそれより多い医薬組成物は、一つ又はそれより多い他の医薬剤と同時投与される。ある態様において、このような一つ又はそれより多い他の医薬剤は、本明細書中に提供される一つ又はそれより多い医薬組成物と同一の疾病、疾患、又は症状を治療するために設計される。ある態様において、このような一つ又はそれより多い他の医薬剤は、本明細書中に提供される一つ又はそれより多い医薬組成物とは異なった疾病、疾患、又は症状を治療するために設計される。ある態様において、このような一つ又はそれより多い他の医薬剤は、本明細書中に提供される一つ又はそれより多い医薬組成物の好ましくない副作用を治療するために設計される。ある態様において、本明細書中に提供される一つ又はそれより多い医薬組成物は、他の医薬剤の好ましくない効果を治療するためにもう一つの医薬剤と共に同時投与される。ある態様において、本明細書中に提供される一つ又はそれより多い医薬組成物は、組合せ効果を産生するためにもう一つの医薬剤と共に同時投与される。ある態様において、本明細書中に提供される一つ又はそれより多い医薬組成物は、相乗効果を産生するためにもう一つの医薬剤と共に同時投与される。
【０３３１】
ある態様において、本明細書中に提供される一つ又はそれより多い医薬組成物及び一つ又はそれより多い他の医薬剤は、同時に投与される。ある態様において、本明細書中に提供される一つ又はそれより多い医薬組成物及び一つ又はそれより多い他の医薬剤は、異なった時間に投与される。ある態様において、本明細書中に提供される一つ又はそれより多い医薬組成物及び一つ又はそれより多い他の医薬剤は、一つの製剤中に一緒に調製される。ある態様において、本明細書中に提供される一つ又はそれより多い医薬組成物及び一つ又はそれより多い他の医薬剤は、別個に調製される。ある態様において、一つ又はそれより多い他の医薬剤は、オールトランスレチノイン酸、アザシチジン、アザチオプリン、ブレオマイシン、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エトポシド、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イマチニブ、メクロレタミン、メルカプトプリン、メトトレキセート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセード、テニポシド、チオグアニン、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、又はビノレルビンを含む。ある態様において、一つ又はそれより多い他の医薬剤は、もう一つのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。ある態様において、もう一つのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、第２のアンチセンスオリゴヌクレオチドである。
【０３３２】
ある態様において、一つ又はそれより多い他の医薬剤は、分子標的療法を含む。ある態様において、分子標的療法は、ＥＧＦＲ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＨＥＲ２阻害剤、又はＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ阻害剤である。ある態様において、ＥＧＦＲ阻害剤は、ゲフィチニブ、エルロチニブ、ラパチニブ、セツキシマブ、パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｕｍｂｏ）を含む。ある態様において、ｍＴＯＲ阻害剤は、エベロリムス及びテムシロリムスを含む。ある態様において、ＨＥＲ２阻害剤は、トラスツズマブ及びラパチニブを含む。ある態様において、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ阻害剤は、パゾパニブ、ベバシズマブ、スニチニブ、及びソラフェニブを含む。
【０３３３】
ある態様において、本明細書中に提供されるもう一つの医薬組成物は、放射線療法と共に投与される。ある態様において、一つ又はそれより多い医薬組成物は、放射線療法と同時に投与される。ある態様において、一つ又はそれより多い医薬組成物は、放射線療法の前に投与される。ある態様において、一つ又はそれより多い医薬組成物は、放射線療法の後に投与される。ある態様において、一つ又はそれより多い医薬組成物は、放射線療法の投与計画を通して各種の時点で投与される。
【０３３４】
ある態様において、放射線療法は、腫瘍の成長を阻害するために有用である。ある態様において、放射線療法は、全体的生存期間を増加するために有用である。ある態様において、本明細書中に提供される一つ又はそれより多い医薬に投与と組合せて使用される放射線療法は、放射線療法及び一つ又はそれより多い医薬の投与の両方が、有効な抗増殖性反応を、制約された毒性を伴って達成することを制約され得るために、いずれかの療法を単独で使用するより有益である。
【０３３５】
ある態様において、医師は、放射線療法及び本明細書中に提供されるもう一つの医薬組成物の投与の両方を含む治療の投与計画を設計する。ある態様において、医師は、放射線療法、本明細書中に提供される一つ又はそれより多い医薬組成物の投与、及び一つ又はそれより多い他の化学療法剤の投与を含む治療の投与計画を設計する。
【０３３６】
許容性
ある態様において、本明細書中に提供される化合物は、最小の副作用を示す。副作用は、動物の炎症性反応のような、典型的にはＳＴＡＴ３を標的とすることに無関係なアンチセンス化合物の投与に対する反応を含む。ある態様において、化合物は、動物によって十分に許容される。増加した許容性は、制約されるものではないが、アンチセンス化合物のヌクレオチド配列、ヌクレオチドに対する化学的修飾、アンチセンス化合物中の非修飾の又は修飾されたヌクレオチドの特定のモチーフ、又はこれらの組合せを含む多くの因子に依存する。許容性は、多くの因子によって決定することができる。このような因子は、体重、器官重量、肝機能、腎機能、血小板数、白血球数を含む。
【０３３７】
ある態様において、本明細書中に提供される化合物は、器官重量に対して最小の影響を示す。ある態様において、化合物は、７倍、６倍、５倍、４倍、３倍、２倍より小さい脾臓及び／又は肝臓の重量の増加を示すか、又は有意な増加を示さない。
【０３３８】
ある態様において、本明細書中に提供される化合物は、肝機能に対して最小の影響を示す。肝機能の評価のための因子は、ＡＬＴレベル、ＡＳＴレベル、血漿ビリルビンレベル及び血漿アルブミンレベルを含む。ある態様において、本明細書中に提供される化合物は、７倍より小さい、６倍より小さい、５倍より小さい、４倍より小さい、３倍より小さい、若しくは２倍より小さいＡＬＴ又はＡＳＴの増加を示すか、或いは有意な増加を示さない。ある態様において、本明細書中に提供される化合物は、３倍より小さい、２倍より小さい血漿ビリルビンレベルの増加を示すか、又は有意な増加を示さない。
【０３３９】
ある態様において、本明細書中に提供される化合物は、腎機能に対して最小の影響を示す。ある態様において、本明細書中に提供される化合物は、３倍より小さい、２倍より小さい血液の尿素窒素（ＢＵＮ）の血漿濃度の増加を示すか、又は有意な増加を示さない。ある態様において、本明細書中に提供される化合物は、６倍、５倍、４倍、３倍、２倍より小さい尿タンパク質のクレアチニンに対する比の増加を示すか、又は有意な増加を示さない。
【０３４０】
ある態様において、本明細書中に提供される化合物は、血液学的因子対して最小の影響を示す。ある態様において、本明細書中に提供される化合物は、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％又は５％より少ない血小板数の減少を示す。ある態様において、本明細書中に提供される化合物は、腎機能に対して最小の影響を示す。ある態様において、本明細書中に提供される化合物は、４倍より小さい、３倍より小さい、２倍より小さい単球数の増加を示すか、又は有意な増加を示さない。
【０３４１】
ある態様において、化合物は、更に、好ましい薬物動態を示す。ある態様において、アンチセンス化合物は、関連する生物学的流体又は組織中の比較的高い半減期を示す。
【０３４２】
ある態様において、化合物又は組成物は、更に、好ましい粘度を示す。ある態様において、化合物又は組成物の粘度は、１６５−１８５ｍｇ／ｍＬの濃度において４０ｃＰより大きくない。
【０３４３】
他の態様において、化合物は、上記の特徴の組合せを示し、そして動物モデル中のＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ発現を高い効率で減少する。
【実施例】
【０３４４】
非制約的開示及び参考文献の組込み
本明細書中に記載されるある種の化合物、組成物及び方法は、ある種の態様によって具体的に記載されてきたが、以下の実施例は、本明細書中に記載される化合物を例示するためのみに役立ち、そしてそれを制約する意図はない。本出願中に引用される参考文献のそれぞれは、その全てが参考文献として援用される。
【０３４５】
実施例１：ＨｕＶＥＣ細胞中のヒトＳＴＡＴ３のアンチセンス阻害
アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ヒトＳＴＡＴ３核酸を標的として設計し、そしてｉｎ  ｖｉｔｒｏのヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡの発現に対するその効果に対して試験した。表１及び２に提示したキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドを、２−１０−２ｃＥｔギャップマー又は３−１０−３ｃＥｔギャップマーのいずれかとして設計した。２−１０−２ｃＥｔギャップマーは、１４個のヌクレオチドの長さであり、ここで、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含んでなり、そしてそれぞれ二つのヌクレオシドを含んでなるウイングによって両側において（５’及び３’方向で）隣接されていた。３−１０−３ｃＥｔギャップマーは、１６個のヌクレオチドの長さであり、ここで、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含んでなり、そしてそれぞれ三つのヌクレオシドを含んでなるウイングによって両側において（５’及び３’方向で）隣接されていた。５’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシド及び３’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、ｃＥｔ糖修飾を有する。それぞれのギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。それぞれのギャップマー中の全てのシトシン残基は、５’−メチルシトシンである。
【０３４６】
ｃＥｔギャップマーの効力は、ＩＳＩＳ  ３３７３３２、ＩＳＩＳ  ３３７３３３、及びＩＳＩＳ  ３４５７８５と比較され、これらは、ヒトＳＴＡＴ３を標的とする５−１０−５ＭＯＥギャップマーであり、そして更に本明細書中に参考文献として援用される米国特許第７，３０７，０６９号中に記載されている。
【０３４７】
ウェル当たり２０，０００個の細胞密度の培養されたＨｕＶＥＣ細胞を、電気穿孔を使用して１，０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドと共に形質移入した。概略２４時間の治療期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトのプライマープローブセットＲＴＳ１９９（順方向配列ＡＣＡＴＧＣＣＡＣＴＴＴＧＧＴＧＴＴＴＣＡＴＡＡ、本明細書中で配列番号：６と命名；逆方向配列ＴＣＴＴＣＧＴＡＧＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＴＡＧＡＧＡＡＣ、本明細書中で配列番号：７と命名；プローブ配列ＣＡＧＴＡＴＡＧＣＣＧＣＴＴＣＣＴＧＣＡＡＧＡＧＴＣＧＡＡ、本明細書中で配列番号：８と命名）を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして提示される。全てのｃＥｔギャップマー及びＭＯＥギャップマーは、同じ条件下で試験された。
【０３４８】
“ヒト標的開始部位”は、ヒト遺伝子配列中でギャップマーが標的とする５’に最も近いヌクレオシドを示す。“ヒト標的停止部位”は、ヒト遺伝子配列においてギャップマーが標的とする３’に最も近いヌクレオシドを示す。表１に記載したそれぞれのギャップマーは、本明細書中で配列番号：１（ＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号ＮＭ＿１３９２７６．２）と命名したヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡを標的とする。表２中に記載したそれぞれのギャップマーは、本明細書中で配列番号：２（ヌクレオチド４１８５０００ないし４２６４０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号ＮＴ＿０１０７５５．１４の相補物）と命名したヒトＳＴＡＴ３ゲノム配列を標的とする。
【０３４９】
【表１−１】
0005943993.tif 000010
【０３５０】
【表１−２】
0005943993.tif 000011
【０３５１】
【表１−３】
0005943993.tif 000012
【０３５２】
【表１−４】
0005943993.tif 000013
【０３５３】
【表１−５】
0005943993.tif 000014
【０３５４】
【表１−６】
0005943993.tif 000015
【０３５５】
【表１−７】
0005943993.tif 000016
【０３５６】
【表１−８】
0005943993.tif 000017
【０３５７】
【表１−９】
0005943993.tif 000018
【０３５８】
【表１−１０】
0005943993.tif 000019
【０３５９】
【表２−１】
0005943993.tif 000020
【０３６０】
【表２−２】
0005943993.tif 000021
【０３６１】
【表２−３】
0005943993.tif 000022
【０３６２】
【表２−４】
0005943993.tif 000023
【０３６３】
【表２−５】
0005943993.tif 000024
【０３６４】
【表２−６】
0005943993.tif 000025
【０３６５】
【表２−７】
0005943993.tif 000026
【０３６６】
【表２−８】
0005943993.tif 000027
【０３６７】
【表２−９】
0005943993.tif 000028
【０３６８】
【表２−１０】
0005943993.tif 000029
【０３６９】
【表２−１１】
0005943993.tif 000030
【０３７０】
実施例２：ｂ．ＥＮＤ細胞中のマウスＳＴＡＴ３のアンチセンス阻害
実施例１に記載した研究において試験されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更にｂ．ＥＮＤ細胞中のＳＴＡＴ３のｍＲＮＡに対するその効果に対して試験した。ウェル当たり２０，０００個の細胞密度の培養されたｂ．ＥＮＤ細胞を、電気穿孔を使用して、７，０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドと共に形質移入した。概略２４時間の治療期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。マウスのプライマープローブセットＲＴＳ２３８１（順方向配列ＧＣＣＡＣＧＴＴＧＧＴＧＴＴＴＣＡＴＡＡＴＣＴ、本明細書中で配列番号：４６５と命名；逆方向配列ＧＡＴＡＧＡＧＧＡＣＡＴＴＧＧＡＣＴＣＴＴＧＣＡ、本明細書中で配列番号：４６６と命名；プローブ配列ＴＴＧＧＧＴＧＡＡＡＴＴＧＡＣＣＡＧＣＡＡＴＡＴＡＧＣＣＧ、本明細書中で配列番号：４６７と命名）を、ＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるような全ＲＮＡ含有量によって調節した。
【０３７１】
ＳＴＡＴ３マウス遺伝子配列と相補的なある種の配列は、ｂ．ＥＮＤ細胞において良好な阻害を示した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして表３に提示される。表３中のヒトオリゴヌクレオチドを、本明細書中で配列番号：３（ヌクレオチド１２２８６００１ないし１２３４４０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号ＮＴ＿１６５７７３．２の相補物）と命名したマウスＳＴＡＴ３ゲノム配列と比較した。“マウス標的開始部位”は、マウス遺伝子配列中でギャップマーが標的とする５’に最も近いヌクレオシドを示す。“マウス標的停止部位”は、マウス遺伝子配列においてギャップマーが標的とする３’に最も近いヌクレオシドを示す。
【０３７２】
【表３−１】
0005943993.tif 000031
【０３７３】
【表３−２】
0005943993.tif 000032
【０３７４】
実施例３：ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＳＴＡＴ３を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの許容性
実施例１において評価された４５２種の化合物中から選択された高いレベルの効力を示す４０種のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、ｉｎ  ｖｉｖｏの許容性に対して更に試験した。
【０３７５】
２−４匹のオスのＢＡＬＢ／ｃマウスの群に、２５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドを週２回、３週間皮下注射した。４匹のオスのＢＡＬＢ／ｃマウスの一つの群に、ＰＢＳを週２回、３週間皮下注射した。この群のマウスを、比較される治療群に対する対照群として使用した。最後の投与の１日後、体重を取り、マウスを安楽死させ、そして器官及び血漿を、更なる分析のために回収した。
【０３７６】
マウスの体重を、投与前及び治療期間の終りに測定した。初期の体重と比較した増加のパーセントを計算した。肝臓、脾臓、及び腎臓の重量を研究の終りに測定し、そしてＰＢＳ治療のマウスと比較した。
【０３７７】
代謝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、トランスアミラーゼ及びＢＵＮの血漿濃度を、自動化臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）、ＡＳＴ（アスパルテートトランスアミナーゼ）、及びＢＵＮの濃度を測定した。
【０３７８】
試験された４０種のアンチセンスオリゴヌクレオの中で、ＩＳＩＳ４８１３７４、ＩＳＩＳ４８１３９０、ＩＳＩＳ４８１４２０、ＩＳＩＳ４８１４３１、ＩＳＩＳ４８１４５３、ＩＳＩＳ４８１４６４、ＩＳＩＳ４８１４７５、ＩＳＩＳ４８１４９５、ＩＳＩＳ４８１５００、ＩＳＩＳ４８１５０１、ＩＳＩＳ４８１５２５、ＩＳＩＳ４８１５４８、ＩＳＩＳ４８１５４９、ＩＳＩＳ４８１５９７、ＩＳＩＳ４８１６９５、ＩＳＩＳ４８１７００、ＩＳＩＳ４８１７０２、ＩＳＩＳ４８１７１０、ＩＳＩＳ４８１７２５、ＩＳＩＳ４８１７５０、及びＩＳＩＳ４８１７６３を含むある種のアンチセンスヌクレオチドが、体重、器官重量、ＡＬＴ、ＡＳＴ、及びＢＵＮのパラメーターの許容閾値に適合した。
【０３７９】
実施例４：ＨｕＶＥＣ細胞中のヒトＳＴＡＴ３の容量依存性アンチセンス阻害
ＳＴＡＴ３の有意なｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害を示す実施例１及び２からのギャップマーを、ＨｕＶＥＣ細胞中で各種の投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり２０，０００個の細胞の密度でプレートに入れ、そして電気穿孔を使用して、表４に規定したように、３１．２５ｎＭ、６２．５ｎＭ、１２５ｎＭ、２５０ｎＭ、５００ｎＭ、及び１，００００ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドで形質移入した。概略１６時の治療時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲで測定した。ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９（順方向配列ＡＣＡＴＧＣＣＡＣＴＴＴＧＧＴＧＴＴＴＣＡＴＡＡ、本明細書中で配列番号：６と命名；逆方向配列ＴＣＴＴＣＧＴＡＧＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＴＡＧＡＧＡＡＣ、本明細書中で配列番号：７と命名；プローブ配列ＣＡＧＴＡＴＡＧＣＣＧＣＴＴＣＣＴＧＣＡＡＧＡＧＴＣＧＡＡ、本明細書中で配列番号：８と命名）を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０３８０】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）を、更に表４に提示し、そして使用されたオリゴヌクレオチドの濃度に対する、それぞれの濃度で達成されたＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ発現の阻害のパーセントをプロットし、そして対照と比較して、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ発現の５０％の阻害が達成されるオリゴヌクレオチドの濃度を記録することによって計算した。表４に例示するように、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡのレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで治療した細胞において、用量依存的様式で有意に減少した。
【０３８１】
【表４】
0005943993.tif 000033
【０３８２】
実施例５：ＳＫ−ＢＲ−３細胞中のアンチセンスヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
実施例４からのギャップマーを、ＳＫ−ＢＲ−３細胞中で各種の投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり４，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、表５に規定したように、０．０２μＭ、０．１μＭ、０．５μＭ、１μＭ、２．５μＭ、及び１０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲで測定した。本明細書中で先に記載したヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０３８３】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）を、更に表５に示す。表５に例示するように、殆どのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドは、細胞膜を透過することが可能であり、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡのレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで治療した細胞において、用量依存的様式で有意に減少した。
【０３８４】
【表５】
0005943993.tif 000034
【０３８５】
実施例６：Ｕ２５１−ＭＧ細胞中のアンチセンスヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
実施例５からのギャップマーを、Ｕ２５１−ＭＧ細胞中で各種の投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり４，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、表６に規定したように、０．０２μＭ、０．１μＭ、０．５μＭ、１μＭ、２．５μＭ、及び１０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲで測定した。本明細書中で先に記載したヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０３８６】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）を、更に表６に示す。表６に例示するように、殆どのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドは、細胞膜を透過することが可能であり、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡのレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで治療した細胞において、用量依存的様式で有意に減少した。
【０３８７】
【表６】
0005943993.tif 000035
【０３８８】
実施例７：Ｕ２５１−ＭＧ細胞中のアンチセンスヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
先に記載した研究からのＩＳＩＳ４８１４６４及びＩＳＩＳ４８１５４９を、異なった投与量でＵ２５１−ＭＧ細胞中で更に試験した。細胞を、ウェル当たり４，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、表７に規定したように、０．１μＭ、１μＭ、５μＭ、１０μＭ、及び２０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲで測定した。本明細書中で先に記載したヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０３８９】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）を、更に表７に示す。表７に例示するように、両方のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドは、細胞膜を透過することが可能であった。
【０３９０】
【表７】
0005943993.tif 000036
【０３９１】
実施例８：ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞中のアンチセンスヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
ＩＳＩＳ４８１４６４及びＩＳＩＳ４８１５４９を、異なった投与量でＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞中で更に試験した。細胞を、ウェル当たり４，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、表８に規定したように、０．０２μＭ、０．２μＭ、１．０μＭ、５．０μＭ、及び１０．０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲで測定した。本明細書中で先に記載したヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０３９２】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）を、更に表８に示す。表８に例示するように、両方のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドは、細胞膜を透過することが可能であり、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡのレベルを、用量依存的様式で有意に減少した。
【０３９３】
【表８】
0005943993.tif 000037
【０３９４】
実施例９：Ａ４３１細胞中のアンチセンスヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
ＩＳＩＳ４８１４６４及びＩＳＩＳ４８１５４９を、異なった投与量でＡ４３１細胞中で更に試験した。細胞を、ウェル当たり４，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、表９に規定したように、０．０２μＭ、０．２μＭ、１．０μＭ、５．０μＭ、及び１０．０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲで測定した。本明細書中で先に記載したヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０３９５】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）を、更に表９に示す。表９に例示するように、両方のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドは、細胞膜を透過することが可能であり、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡのレベルを、用量依存的様式で有意に減少した。
【０３９６】
【表９】
0005943993.tif 000038
【０３９７】
実施例１０：Ｈ４６０細胞中のアンチセンスヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
ＩＳＩＳ４８１４６４及びＩＳＩＳ４８１５４９を、異なった投与量でＨ４６０細胞中で更に試験した。細胞を、ウェル当たり４，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、表１０に規定したように、０．０２μＭ、０．２μＭ、１．０μＭ、５．０μＭ、及び１０．０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲで測定した。本明細書中で先に記載したヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０３９８】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）を、更に表１０に示す。表１０に例示するように、両方のＩＳＩＳオリゴヌクレオチドは、細胞膜を透過することが可能であり、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡのレベルを、用量依存的様式で有意に減少した。
【０３９９】
【表１０】
0005943993.tif 000039
【０４００】
実施例１１：ＨｕＶＥＣ細胞中のヒトＳＴＡＴ３のアンチセンス阻害
アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ヒトＳＴＡＴ３核酸を標的として設計し、そしてｉｎ  ｖｉｔｒｏのヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡの発現に対するその効果に対して試験した。ウェル当たり２０，０００個の細胞の密度の培養されたＨｕＶＥＣ細胞を、電気穿孔を使用して１，０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドと共に形質移入した。概略２４時間の治療期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトのプライマープローブセットＲＴＳ１９９（順方向配列ＡＣＡＴＧＣＣＡＣＴＴＴＧＧＴＧＴＴＴＣＡＴＡＡ、本明細書中で配列番号：６と命名；逆方向配列ＴＣＴＴＣＧＴＡＧＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＴＡＧＡＧＡＡＣ、本明細書中で配列番号：７と命名；プローブ配列ＣＡＧＴＡＴＡＧＣＣＧＣＴＴＣＣＴＧＣＡＡＧＡＧＴＣＧＡＡ、本明細書中で配列番号：８と命名）を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして提示される。
【０４０１】
表１１中のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドを、３−１０−３ＭＯＥ、デオキシ、及びｃＥｔギャップマーとして設計した。ギャップマーは、１６個のヌクレオチドの長さであり、ここで、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含んでなり、そしてそれぞれ三つのヌクレオシドを含んでなるウイングによって両側において（５’及び３’方向で）隣接されている。５’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ糖修飾を有する。３’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、ｃＥｔ糖修飾を有する。それぞれのギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。それぞれのギャップマー中の全てのシトシン残基は、５’−メチルシトシンである。表１１の化学式の欄は、それぞれのギャップマーの糖モチーフを提示し、ここで、‘ｅ’は、２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し、‘ｋ’は、拘束エチル（ｃＥｔ）ヌクレオシドを示し、そして‘ｄ’は、２’−デオキシヌクレオシドを示す。
【０４０２】
“ヒト標的開始部位”は、ヒト遺伝子配列中でギャップマーが標的とする５’に最も近いヌクレオシドを示す。“ヒト標的停止部位”は、ヒト遺伝子配列においてギャップマーが標的とする３’に最も近いヌクレオシドを示す。表１１に記載したそれぞれのギャップマーは、本明細書中で配列番号：１（ＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号ＮＭ＿１３９２７６．２）と命名したヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡを標的とする。
【０４０３】
【表１１−１】
0005943993.tif 000040
【０４０４】
【表１１−２】
0005943993.tif 000041
【０４０５】
【表１１−３】
0005943993.tif 000042
【０４０６】
【表１１−４】
0005943993.tif 000043
【０４０７】
【表１１−５】
0005943993.tif 000044
【０４０８】
【表１１−６】
0005943993.tif 000045
【０４０９】
【表１１−７】
0005943993.tif 000046
【０４１０】
【表１１−８】
0005943993.tif 000047
【０４１１】
【表１１−９】
0005943993.tif 000048
【０４１２】
【表１１−１０】
0005943993.tif 000049
【０４１３】
【表１１−１１】
0005943993.tif 000050
【０４１４】
【表１１−１２】
0005943993.tif 000051
【０４１５】
【表１１−１３】
0005943993.tif 000052
【０４１６】
【表１１−１４】
0005943993.tif 000053
【０４１７】
【表１１−１５】
0005943993.tif 000054
【０４１８】
【表１１−１６】
0005943993.tif 000055
【０４１９】
実施例１２：ＨｕＶＥＣ細胞中のヒトＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
ＳＴＡＴ３の有意なｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害を示す、上記実施例１１に記載された研究からのギャップマーを、ＨｕＶＥＣ細胞中で、各種の投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり２０，０００個の細胞の密度でプレートに入れ、そして電気穿孔を使用して、表１２に示すような２３．４３７５ｎＭ、９３．７５ｎＭ、３７５．０ｎＭ、及び１，５００．０ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共に形質移入した。概略１６時間の治療期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲで測定した。本明細書中で先に記載したヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０４２０】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）を、更に表１２に提示し、そして使用されたオリゴヌクレオチドの濃度に対するそれぞれの濃度で達成されたＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ発現の阻害のパーセントをプロットし、そして対照と比較して、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ発現の５０％の阻害が達成されるオリゴヌクレオチドの濃度を記録することによって計算した。表１２に例示するように、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡのレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで治療した細胞において、用量依存的様式で有意に減少した。
【０４２１】
【表１２−１】
0005943993.tif 000056
【０４２２】
【表１２−２】
0005943993.tif 000057
【０４２３】
実施例１３：ＨｕＶＥＣ細胞中のヒトＳＴＡＴ３のアンチセンス阻害
アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ヒトＳＴＡＴ３核酸を標的として設計し、そしてｉｎ  ｖｉｔｒｏのヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ発現に対するその効果を試験した。表１３及び１４のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、各種の化学的修飾を有する１６又は１７個のヌクレオチドの長さのギャップマーである。それぞれのギャップマーは、９又は１０個の２’−デオキシヌクレオシドからなる中央のギャップセグメントを含んでなり、そしてそれぞれ１、２、３、４、又は５個のヌクレオチドを含んでなるウイングによって両側において（５’及び３’方向で）隣接されている。ウイング中のそれぞれのヌクレオチドは、２’−ＭＯＥ糖修飾又はｃＥｔ糖修飾を含んでなる。ギャップマーのモチーフは、３−１０−３、４−９−３、２−１０−４、１−１０−５、及び３−１０−４を含む。表１３及び１４の化学式の欄は、それぞれのギャップマーの糖モチーフを提供し、ここで、‘ｅ’は、２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し、‘ｋ’は、拘束エチル（ｃＥｔ）ヌクレオシドを示し、そして‘ｄ’は、２’−デオキシヌクレオシドを示す。それぞれのギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。それぞれのギャップマー中の全てのシトシン残基は、５’−メチルシトシンである。
【０４２４】
キメラアンチセンスオリゴヌクレオチドの効力は、ＩＳＩＳ４８１４６４、ＩＳＩＳ  ５１８３４４、及びＩＳＩＳ  ５１８３４９と比較された（本明細書中で先に記載された）。
【０４２５】
ウェル当たり２０，０００個の細胞の密度の培養されたＨｕＶＥＣ細胞を、電気穿孔を使用して、１，０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドと共に形質移入した。概略２４時間の治療期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。本明細書中で先に記載したヒトプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０４２６】
“ヒト標的開始部位”は、ヒト遺伝子配列中でギャップマーが標的とする５’に最も近いヌクレオシドを示す。“ヒト標的停止部位”は、ヒト遺伝子配列においてギャップマーが標的とする３’に最も近いヌクレオシドを示す。表１３に記載したそれぞれのギャップマーは、本明細書中で配列番号：１（ＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号ＮＭ＿１３９２７６．２）と命名したヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡを標的とする。表１４中に記載したそれぞれのギャップマーは、本明細書中で配列番号：２（ヌクレオチド４１８５０００ないし４２６４０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号ＮＴ＿０１０７５５．１４の相補物）と命名したヒトＳＴＡＴ３ゲノム配列を標的とする。
【０４２７】
【表１３−１】
0005943993.tif 000058
【０４２８】
【表１３−２】
0005943993.tif 000059
【０４２９】
【表１３−３】
0005943993.tif 000060
【０４３０】
【表１３−４】
0005943993.tif 000061
【０４３１】
【表１３−５】
0005943993.tif 000062
【０４３２】
【表１３−６】
0005943993.tif 000063
【０４３３】
【表１３−７】
0005943993.tif 000064
【０４３４】
【表１３−８】
0005943993.tif 000065
【０４３５】
【表１３−９】
0005943993.tif 000066
【０４３６】
【表１３−１０】
0005943993.tif 000067
【０４３７】
【表１３−１１】
0005943993.tif 000068
【０４３８】
【表１３−１２】
0005943993.tif 000069
【０４３９】
【表１３−１３】
0005943993.tif 000070
【０４４０】
【表１３−１４】
0005943993.tif 000071
【０４４１】
【表１４−１】
0005943993.tif 000072
【０４４２】
【表１４−２】
0005943993.tif 000073
【０４４３】
【表１４−３】
0005943993.tif 000074
【０４４４】
【表１４−４】
0005943993.tif 000075
【０４４５】
【表１４−５】
0005943993.tif 000076
【０４４６】
【表１４−６】
0005943993.tif 000077
【０４４７】
【表１４−７】
0005943993.tif 000078
【０４４８】
【表１４−８】
0005943993.tif 000079
【０４４９】
【表１４−９】
0005943993.tif 000080
【０４５０】
【表１４−１０】
0005943993.tif 000081
【０４５１】
【表１４−１１】
0005943993.tif 000082
【０４５２】
【表１４−１２】
0005943993.tif 000083
【０４５３】
【表１４−１３】
0005943993.tif 000084
【０４５４】
【表１４−１４】
0005943993.tif 000085
【０４５５】
【表１４−１５】
0005943993.tif 000086
【０４５６】
【表１４−１６】
0005943993.tif 000087
【０４５７】
【表１４−１７】
0005943993.tif 000088
【０４５８】
【表１４−１８】
0005943993.tif 000089
【０４５９】
【表１４−１９】
0005943993.tif 000090
【０４６０】
【表１４−２０】
0005943993.tif 000091
【０４６１】
【表１４−２１】
0005943993.tif 000092
【０４６２】
実施例１４：ＨｕＶＥＣ細胞中のヒトＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
ＳＴＡＴ３の有意なｉｎ  ｖｉｔｒｏの阻害を示す実施例１３に記載された研究からのギャップマーを、ＨｕＶＥＣ細胞中で、各種の投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり２０，０００個の細胞の密度でプレートに入れ、そして電気穿孔を使用して、表１５に示すような３９．１ｎＭ、１５６．３ｎＭ、６２５．０ｎＭ、及び２，５００．０ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共に形質移入した。概略１６時間の治療期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲで測定した。本明細書中で先に記載したヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０４６３】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）を、更に表１５に示す。表１５に例示するように、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡのレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで治療した細胞において、用量依存的様式で有意に減少した。
【０４６４】
【表１５−１】
0005943993.tif 000093
【０４６５】
【表１５−２】
0005943993.tif 000094
【０４６６】
【表１５−３】
0005943993.tif 000095
【０４６７】
実施例１５：ＨｕＶＥＣ細胞中のヒトＳＴＡＴ３のアンチセンス阻害
更なるアンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＳＴＡＴ３核酸を標的として設計し、そしてｉｎ  ｖｉｔｒｏのＳＴＡＴ３のｍＲＮＡに対するその効果を試験した。ウェル当たり２０，０００個の細胞密度の培養されたＨｕＶＥＣ細胞を、電気穿孔を使用して、１，０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドと共に形質移入した。概略２４時間の治療期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。本明細書中で先に記載したヒトプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０４６８】
表１６中のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、３−１０−３デオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマー又は３−１０−４デオキシ、ＭＯＥ及びｃＥｔギャップマーである。３−１０−３ギャップマーは、１６個のヌクレオシドの長さであり、ここで、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含んでなり、そしてそれぞれ三つのヌクレオシドを含んでなるウイングによって両側において（５’及び３’方向で）隣接されている。３−１０−４ギャップマーは、１７個のヌクレオシドの長さであり、ここで、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオチドを含んでなり、そして５’方向において３個のヌクレオシドを含んでなるウイングによって、そして３’方向において４個のヌクレオシドを含んでなるウイングによって隣接されている。それぞれのギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。それぞれのギャップマー中の全てのシトシン残基は、５’−メチルシトシンである。表１６の化学式の欄は、それぞれのギャップマーの糖モチーフを提示し、ここで、‘ｅ’は、２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し、‘ｋ’は、拘束エチル（ｃＥｔ）ヌクレオシドを示し、そして‘ｄ’は、２’−デオキシヌクレオシドを示す。
【０４６９】
“ヒト標的開始部位”は、ヒト遺伝子配列中でギャップマーが標的とする５’に最も近いヌクレオシドを示す。“ヒト標的停止部位”は、ヒト遺伝子配列においてギャップマーが標的とする３’に最も近いヌクレオシドを示す。表１６に記載したそれぞれのギャップマーは、本明細書中で配列番号：１（ＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号ＮＭ＿１３９２７６．２）と命名したヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡを標的とする。表１７中に記載したそれぞれのギャップマーは、本明細書中で配列番号：２（ヌクレオチド４１８５０００ないし４２６４０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号ＮＴ＿０１０７５５．１４の相補物）と命名したヒトＳＴＡＴ３ゲノム配列を標的とする。
【０４７０】
【表１６−１】
0005943993.tif 000096
【０４７１】
【表１６−２】
0005943993.tif 000097
【０４７２】
【表１７−１】
0005943993.tif 000098
【０４７３】
【表１７−２】
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【０４７４】
【表１７−３】
0005943993.tif 000100
【０４７５】
実施例１６：ＨｕＶＥＣ細胞中のヒトＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
ＳＴＡＴ３の有意なｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害を示す実施例１５に記載された研究からのギャップマーを、ＨｕＶＥＣ細胞中で、各種の投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり２０，０００個の細胞の密度でプレートに入れ、そして電気穿孔を使用して、表１８に規定すように３９．１ｎＭ、１５６．３ｎＭ、６２５．０ｎＭ、及び２，５００．０ｎＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共に形質移入した。概略１６時間の治療期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲで測定した。本明細書中で先に記載したヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されるような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０４７６】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）を、更に表１８に示す。表１８に例示するように、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡのレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで治療した細胞において、用量依存的様式で有意に減少した。
【０４７７】
【表１８】
0005943993.tif 000101
【０４７８】
実施例１７：ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト乳癌異種移植モデルの治療におけるＳＴＡＴ３を標的とするＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果
ヒト乳癌細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１で接種したＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、ＩＳＩＳ４８１４６４及びＩＳＩＳ４８１５４９で治療した。ＩＳＩＳ４８１５４９は、マウスの配列と交差反応可能である（即ち、マウス配列にハイブリダイズする）。マウスの腫瘍成長及びオリゴヌクレオチドの許容性を評価した。
【０４７９】
治療
研究を、Ｐｈａｒｍａｒｏｎ  Ｉｎｃ（Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）で行った。ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、Ｂｅｉｊｉｎｇ  ＨＦＫ  Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から得た。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト乳癌細胞を、１０％の熱不活化胎児ウシ血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、及び２ｍＭのＬ−グルタミンで補充されたＬｅｉｂｏｖｉｔｚ’ｓ  Ｌ−１５培地中で単層培養物としてｉｎ  ｖｉｔｒｏで維持した。細胞を、空気中の５％ＣＯ２の雰囲気中で３７℃で維持した。腫瘍細胞を、トリプシン−ＥＤＴＡ処理を伴って週２回ルーチン的に継代培養した。指数増殖期で増殖中の細胞を回収し、そして腫瘍接種のために計数した。
【０４８０】
それぞれ８匹の無作為に割当てられた生後６−８週間のメスのＢＡＬＢ／ｃマウスの三つの群に、腫瘍発生のためにＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍の断片（腫瘍接種継代から産生された３ｍｍ×２ｍｍ×２ｍｍ）を右側腹に接種した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの治療を、平均の腫瘍の大きさが概略１００ｍｍ３に達した、腫瘍接種後１１日目に開始した。二つの群に、２５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８１４６４又はＩＳＩＳ４８１５４９を３週間、週２回で腹腔内に注射した。対照群のマウスに、ＰＢＳを３週間、週２回腹腔内に注射した。
【０４８１】
動物の取扱い、管理、及び治療の関する全ての方法は、施設内動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって認可された指針に従って行った。動物を、可動性、食物消費、体重変化、及びいずれもの他の異常な影響のような正常な行動に対する腫瘍の成長のいずれもの影響をルーチン的に検査した。
【０４８２】
ＲＮＡ分析
ＲＮＡを、本明細書中に記載したプライマープローブセットＲＴＳ１９９を使用する、ヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルのリアルタイムＰＣＲ分析のために、腫瘍組織から抽出した。マウスのＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルも、更にプライマープローブセットｍＳＴＡＴ３＿ＬＴＳ００６６４（順方向配列ＣＧＡＣＡＧＣＴＴＣＣＣＣＡＴＧＧＡ、本明細書中で配列番号：１５１３と命名；逆方向配列ＡＴＧＣＣＣＡＧＴＣＴＴＧＡＣＴＣＴＣＡＡＴＣ、本明細書中で配列番号：１５１４と命名；プローブ配列ＣＴＧＣＧＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＧＣＡＣＣＴＴ、本明細書中で配列番号：１５１５と命名）を使用して測定した。結果を、ＰＢＳ対照に対する、シクロフィリンに対して正規化されたＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。表１９に示すように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療は、ＰＢＳと比較して、ヒト及びマウスのＳＴＡＴ３のｍＲＮＡの両方の減少をもたらした。
【０４８３】
【表１９】
0005943993.tif 000102
【０４８４】
腫瘍成長に対する影響
腫瘍の大きさを、週２回、ノギスを使用して二つの寸法で測定した。腫瘍の体積を、式：Ｖ＝０．５３６×ａ×ｂ２を使用して計算し、式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長径及び短径である。腫瘍の大きさは、Ｔ−Ｃ及びＴＶ／ＣＶ値の計算のために使用した。Ｔ−Ｃは、Ｔを治療群の腫瘍が所定の大きさ（９００ｍｍ３）に達するために必要な中位時間（日数）とし、そしてＣを対照群の腫瘍が同じ大きさに達するための中位時間（日数）として計算した。ＴＶ／ＣＶ値（パーセントとして表示）は、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの抗腫瘍有効性の表示であり、ここで、ＴＶ及びＣＶは、所定の日（３２日目）における治療及び対照群のそれぞれの平均体積であった。
【０４８５】
結果を表２０及び２１に示す。データは、ＩＳＩＳ４８１４６４及びＩＳＩＳ４８１５４９による治療が、腫瘍の成長を有意に妨害したことを示す。
【０４８６】
【表２０】
0005943993.tif 000103
【０４８７】
【表２１】
0005943993.tif 000104
【０４８８】
体重の測定
動物の全体的健康状態に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、体重を、治療期間中定期的に測定した。データを表２２に提示し、そしてＩＳＩＳ４８１４６４又はＩＳＩＳ４８１５４９のいずれかによる治療が有意な体重の増減を起こさないことを示す。
【０４８９】
【表２２】
0005943993.tif 000105
【０４９０】
実施例１８：Ａ４３１ヒト類表皮癌異種移植モデルの治療におけるＳＴＡＴ３を標的とするＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果
ヒト類表皮癌細胞Ａ４３１で接種したＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、ＩＳＩＳ４８１４６４及びＩＳＩＳ４８１５４９で治療した。ＩＳＩＳ４８１５４９は、マウスの配列と交差反応可能である（即ち、マウス配列にハイブリダイズする）。マウスの腫瘍成長及び許容性に対する治療の効果を評価した。
【０４９１】
治療
研究を、Ｐｈａｒｍａｒｏｎ  Ｉｎｃ（Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）で行った。ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、Ｂｅｉｊｉｎｇ  ＨＦＫ  Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から得た。Ａ４３１ヒト類表皮癌細胞を、１０％の熱不活化胎児ウシ血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、及び２ｍＭのＬ−グルタミンで補充されたＤＭＥＭ培地中で単層培養物としてｉｎ  ｖｉｔｒｏで維持した。細胞を、空気中の５％ＣＯ２の雰囲気中で３７℃で維持した。腫瘍細胞をトリプシン−ＥＤＴＡ処理を伴って週２回ルーチン的に継代培養した。指数増殖期で増殖中の細胞を回収し、そして腫瘍接種のために計数した。
【０４９２】
それぞれ８匹の無作為に割当てられた生後６−８週間のメスのＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの三つの群に、腫瘍発生のために５×１０６のＡ４３１腫瘍細胞を皮下に接種した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの治療を、平均の腫瘍の大きさが概略９５ｍｍ３に達した、腫瘍接種後８日目に開始した。二つの群に、２５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８１４６４又はＩＳＩＳ４８１５４９を４週間、週２回で腹腔内に注射した。対照群のマウスに、ＰＢＳを４週間、週２回腹腔内に注射した。
【０４９３】
動物の取扱い、管理、及び治療の関する全ての方法は、施設内動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって認可された指針に従って行った。ルーチンのモニターの時点で、動物を、可動性、食物消費、体重変化、及びいずれもの他の異常な影響のような正常な行動に対する腫瘍の成長のいずれもの影響を検査した。
【０４９４】
ＲＮＡ分析
ＲＮＡを、本明細書中に記載したプライマープローブセットＲＴＳ１９９を使用するヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルのリアルタイムＰＣＲ分析のために、腫瘍組織から抽出した。マウスのＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルも、更に本明細書中に記載したプライマープローブセットｍＳＴＡＴ３＿ＬＴＳ００６６４を使用して測定した。結果を、ＰＢＳ対照に対する、シクロフィリンに対して正規化されたＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。表２３に示すように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療は、ＰＢＳと比較して、ヒト及びマウスのＳＴＡＴ３のｍＲＮＡの両方の減少をもたらした。
【０４９５】
【表２３】
0005943993.tif 000106
【０４９６】
タンパク質の分析
タンパク質を、ヒトＳＴＡＴ３タンパク質レベルのＳＴＡＴ３モノクローナル抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃａｔ  ＃９１３５）によるウェスタン分析のために腫瘍溶菌液から抽出した。結果を、ハウスキーピングタンパク質、ＰＢＳ対照に対する、ＣＯＸ−ＩＩに対して正規化されたＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。表２４に示すように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療は、ＰＢＳと比較して、ＳＴＡＴ３タンパク質レベルの減少をもたらした。
【０４９７】
【表２４】
0005943993.tif 000107
【０４９８】
腫瘍成長に対する影響
腫瘍の大きさを、週２回、ノギスを使用して二つの寸法で測定し、そして腫瘍の体積を、式：Ｖ＝０．５×ａ×ｂ２を使用して計算し、式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長径及び短径である。腫瘍の大きさは、Ｔ−Ｃ及びＴＶ／ＣＶ値の計算のために使用した。Ｔ−Ｃは、Ｔを治療群の腫瘍が所定の大きさ（８００ｍｍ３）に達するために必要な中位時間（日数）とし、そしてＣを対照群の腫瘍が同じ大きさに達するための中位時間（日数）として計算された。ＴＶ／ＣＶ値（パーセントとして表示）は、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの抗腫瘍有効性の表示であり、ここで、ＴＶ及びＣＶは、所定の日（３３日目）における治療及び対照群のそれぞれの平均体積であった。
【０４９９】
結果を表２５及び２６に示す。データは、ＩＳＩＳ４８１４６４又はＩＳＩＳ４８１５４９のいずれかによる治療が、腫瘍の成長を有意に妨害したことを示す。
【０５００】
【表２５】
0005943993.tif 000108
【０５０１】
【表２６】
0005943993.tif 000109
【０５０２】
体重の測定
動物の全体的健康状態に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、体重を、治療期間中定期的に測定した。データを表２７に提示し、そしてＩＳＩＳ４８１４６４又はＩＳＩＳ４８１５４９のいずれかによる治療が、マウスの全体的な健康状態に影響しないことを示す。
【０５０３】
【表２７】
0005943993.tif 000110
【０５０４】
実施例１９：ＮＣＩ−Ｈ４６０ヒト非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）異種移植モデルの治療におけるＳＴＡＴ３を標的とするＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果
ヒトＮＣＩ−Ｈ４６０ヒトＮＳＣＬＣで接種したＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、ヒトＳＴＡＴ３を標的とするＩＳＩＳ４９１４６４、及びヒト及びマウスＳＴＡＴ３の両方を標的とするＩＳＩＳ４８１５４９で治療した。マウスの腫瘍成長の治療の効果及び許容性を評価した。
【０５０５】
治療
研究を、Ｐｈａｒｍａｒｏｎ  Ｉｎｃ（Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）で行った。ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、Ｂｅｉｊｉｎｇ  ＨＦＫ  Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から得た。ＮＣＩ−Ｈ４６０ヒトＮＳＣＬＣ細胞を、１０％の熱不活化胎児ウシ血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、及び２ｍＭのＬ−グルタミンで補充されたＲＰＭＩ−１６４０培地中で単層培養物としてｉｎ  ｖｉｔｒｏで維持した。細胞を、空気中の５％ＣＯ２の雰囲気中で３７℃で維持した。腫瘍細胞を、トリプシン−ＥＤＴＡ処理を伴って週２回ルーチン的に継代培養した。指数増殖期で増殖中の細胞を回収し、そして腫瘍接種のために計数した。
【０５０６】
それぞれ８匹の無作為に割当てられた生後６−８週間のメスのＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの三つの群に、腫瘍発生のために２×１０６のＮＣＩ−Ｈ４６０腫瘍細胞を皮下に接種した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの治療を、平均の腫瘍の大きさが概略１００ｍｍ３に達した、腫瘍接種後６日目に開始した。二つの群に、２５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８１４６４又はＩＳＩＳ４８１５４９を３週間、週２回で腹腔内に注射した。第３の群のマウスに、ＰＢＳを３週間、週２回腹腔内に注射し、そして対照群として役立てた。
【０５０７】
動物の取扱い、管理、及び治療の関する全ての方法は、施設内動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって認可された指針に従って行った。ルーチンのモニターの時点で、動物を、可動性、食物消費、体重変化、及びいずれもの他の異常な影響のような正常な行動に対する腫瘍の成長のいずれもの影響を検査した。
【０５０８】
ＲＮＡ分析
ＲＮＡを、本明細書中に記載したプライマープローブセットＲＴＳ１９９を使用するヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルのリアルタイムＰＣＲ分析のために、腫瘍組織から抽出した。マウスのＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルも、更に本明細書中に記載したプライマープローブセットｍＳＴＡＴ３＿ＬＴＳ００６６４を使用して測定した。結果を、ＰＢＳ対照に対する、シクロフィリンに対して正規化されたＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。表２８に示すように、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療は、ＰＢＳと比較して、ヒト及びマウスのＳＴＡＴ３のｍＲＮＡの両方の減少をもたらした。
【０５０９】
【表２８】
0005943993.tif 000111
【０５１０】
腫瘍成長に対する影響
腫瘍の大きさを、週２回、ノギスを使用して二つの寸法で測定し、そして腫瘍の体積を、式：Ｖ＝０．５×ａ×ｂ２を使用して計算し、式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長径及び短径である。腫瘍の大きさは、Ｔ−Ｃ及びＴＶ／ＣＶ値の計算のために使用した。Ｔ−Ｃは、Ｔを治療群の腫瘍が所定の大きさ（１，５００ｍｍ３）に達するために必要な中位時間（日数）とし、そしてＣを対照群の腫瘍が同じ大きさに達するための中位時間（日数）として計算された。ＴＶ／ＣＶ値（パーセントとして表示）は、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの抗腫瘍有効性の表示であり、ここで、ＴＶ及びＣＶは、所定の日（２０日目）における治療及び対照群のそれぞれの平均体積であった。
【０５１１】
結果を表２９及び３０に示す。データは、ＩＳＩＳ４８１４６４又はＩＳＩＳ４８１５４９のいずれかによる治療が、腫瘍の成長を有意に妨害したことを示す。
【０５１２】
【表２９】
0005943993.tif 000112
【０５１３】
【表３０】
0005943993.tif 000113
【０５１４】
体重の測定
動物の全体的健康状態に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、体重を、治療期間中定期的に測定した。データを表３１に提示し、そしてＩＳＩＳ４８１４６４又はＩＳＩＳ４８１５４９のいずれかによる治療が、マウスの全体的な健康状態に影響しないことを示す。
【０５１５】
【表３１】
0005943993.tif 000114
【０５１６】
実施例２０：ヒト神経膠芽腫同所性マウスモデルにおけるヒトＳＴＡＴ３のアンチセンス阻害の効果
ヒト神経膠芽腫細胞で同所性移植されたＮＵ／Ｊマウスを、ＣＡＧＣＡＧＡＴＣＡＡＧＴＣＣＡＧＧＧＡ（配列番号：１５９０）の配列を有する５−１０−５ＭＯＥギャップマーであるＩＳＩＳ４５５２９１で治療した。マウスの腫瘍成長の治療及び許容性の影響を評価した。
【０５１７】
治療
３０匹のＮＵ／Ｊマウスに、右前頭葉に５×１０５個のＵ−８７  ＭＧ−ｌｕｃ２細胞を定位的に移植した。腫瘍細胞の移植後１５日目に、１５匹のこれらのマウスに、２μＬのＰＢＳ中に溶解した１００μｇのＩＳＩＳ４５５２９１を、腫瘍移植の部位にボーラス注射で頭蓋内に投与した。残りの１５匹のマウスに、２μＬのＰＢＳを、腫瘍移植の部位にボーラス注射で頭蓋内に投与した。第２の群のマウスは、対照群として役立てた。
【０５１８】
分析
腫瘍移植の１８日後に、それぞれの群からの５匹のマウスを、ＣＯ２吸入によって安楽死させ、そして脳の試料をＲＮＡ分析のために収集した。ＲＮＡを、本明細書中に先に記載したプライマープローブセットＲＴＳ１９９を使用するヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルのリアルタイムＰＣＲ分析のために腫瘍組織から抽出した。ＩＳＩＳ４５５２９１による治療は、ＰＢＳ対照と比較して、腫瘍組織中のヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡの２７％の減少をもたらした。
【０５１９】
それぞれの群の残りのマウスを、生存期間分析のために２週間まで定期的にモニターした。ＰＢＳ対照群の生存期間中央値は、３０．５日であった。ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドで治療したマウスの生存期間中央値は、３５日であった。Ｐ値は、０．２０８８であった。
【０５２０】
実施例２１：ＡＰＣ／Ｍｉｎ＋マウスにおけるＩＳＩＳ４８１５４９による治療の効果
ＡＰＣ／Ｍｉｎ＋マウスモデルの、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベル及び腸管腺腫の数に対するＩＳＩＳ４８１５４９による治療の効果を評価した。ＡＰＣ／Ｍｉｎ＋マウス系統を、若年齢で全腸管中の自然な腺腫形成に罹らせた（Ｍｏｓｅｒ  Ａ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９０．２４７：３２２−３２４）。
【０５２１】
治療
４匹のオスの生後９週間のＡＰＣ／Ｍｉｎ＋マウスの二つの群に、４週間、毎週５回投与される５ｍｇ／ｋｇ又は２５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８１５４９（それぞれ２５ｍｇ／ｋｇ及び１２５ｍｇ／ｋｇの合計週当たり投与量）を皮下注射した。４匹のオスの生後９週間のＡＰＣ／Ｍｉｎ＋マウスの一つの群に、４週間、毎週５回投与される５０ｍｇ／ｋｇの対照オリゴヌクレオチド、ＩＳＩＳ１４１９２３（２５０ｍｇ／ｋｇの合計週当たり投与量）を皮下注射した。４匹のオスの生後９週間のＡＰＣ／Ｍｉｎ＋マウスの対照群に、４週間、週５回投与されるＰＢＳを皮下注射した。最後の注射後の４８時間目にマウスをイソフルラン（ｉｓｏｆｌｕｒａｎｃｅ）で安楽死させ、続いて頸椎脱臼させた。
【０５２２】
結腸及び腸を取出し、互いに分離し、そして清浄にした。概略５ｃｍの上部腸管を切除し、そして１％の２−メルカプトエタノールを伴う２．５ｍＬのＲＬＴ緩衝液（Ｑｉａｇｅｎ）（ＲＬＴ−ＢＭｅ）中でホモジナイズし、そしてドライアイス中に入れた。結腸を半分に切り、そして組織の近位の半分を、２．５ｍＬのＲＬＴ−ＢＭｅ中でホモジナイズし、そしてドライアイス中に入れた。肝臓の小片（０．２ｇ）を、切除し、そしてＲＬＴ−ＢＭｅ中でホモジナイズし、そしてドライアイス中に入れた。
【０５２３】
ＲＮＡ分析
ＲＮＡを、ＰｕｒｅＬｉｎｋＴＭ全ＲＮＡ精製キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；＃１２１７３−０１１Ａ）を使用して、製造業者のプロトコルによって組織から単離した。ＲＴ−ＰＣＲを、ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ装置（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、製造業者のプロトコルによって行った。マウスのプライマープローブセットｍＳＴＡＴ３＿ＬＴＳ００６６４（順方向配列ＣＧＡＣＡＧＣＴＴＣＣＣＣＡＴＧＧＡ、本明細書中で配列番号：１５１３と命名；逆方向配列ＡＴＧＣＣＣＡＧＴＣＴＴＧＡＣＴＣＴＣＡＡＴＣ、本明細書中で配列番号：１５１４と命名；プローブ配列ＣＴＧＣＧＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＧＣＡＣＣＴＴ、本明細書中で配列番号：１５１５と命名）を、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ハウスキーピング遺伝子、シクロフィリンのｍＲＮＡレベルを、プライマープローブセットｍｃｙｃｌｏ＿２４（順方向配列ＴＣＧＣＣＧＣＴＴＧＣＴＧＣＡ、本明細書中で配列番号：１５１６と命名；逆方向配列ＡＴＣＧＧＣＣＧＴＧＡＴＧＴＣＧＡ、本明細書中で配列番号：１５１７と命名；プローブ配列ＣＣＡＴＧＧＴＣＡＡＣＣＣＣＡＣＣＧＴＧＴＴＣ、本明細書中で配列番号：１５１８と命名）で測定し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを正規化するために使用した。
【０５２４】
ＩＳＩＳ４８１５４９による治療は、肝臓、小腸及び大腸中の２５ｍｇ／ｋｇ／週及び１２５ｍｇ／ｋｇ／週の投与において、肝臓中のＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ発現の統計的に有意な減少（表３２）をもたらした。治療及び対照群間の有意な差は、スチューデント両側ｔ検定を使用して決定した（ｐ＜０．０５）。
【０５２５】
【表３２】
0005943993.tif 000115
【０５２６】
腺腫の数の解析
小腸の組織学的解析を、腺腫の数を顕微鏡的に評価するために行った。１２５ｍｇ／ｋｇ／週のＩＳＩＳ４８１５４９による治療は、ＰＢＳ対照と比較して、統計的に有意な腫瘍の数の減少をもたらした（表３３）。治療及び対照群間の有意な差は、スチューデント両側ｔ検定を使用して決定した（ｐ＜０．０５）。
【０５２７】
【表３３】
0005943993.tif 000116
【０５２８】
実施例２２：ＰＣ−９  ＮＳＣＬＣ異種移植モデルの治療におけるＳＴＡＴ３を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果
ヒト非小細胞肺癌細胞株、ＰＣ−９を接種されたＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）を、ＩＳＩＳ４８１５４９及びＩＳＩＳ４８１４６４で治療した。マウスの腫瘍の成長及びＳＴＡＴ３標的の減少を評価した。
【０５２９】
治療
生後６から８週のメスのＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに、７×１０６のＰＣ−９ヒトＮＳＣＬＣ細胞を皮下接種した。１５０−２００ｍｍ３の平均腫瘍体積を示すマウスを選択し、そして異なった治療群に無作為化した。７匹のマウスの二つの群に、６週間、毎週５回投与される２５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８１５４９又はＩＳＩＳ４８１４６４（１２５ｍｇ／ｋｇの合計週当たり投与）を皮下注射した。７匹のマウスの一つの群に、６週間、毎週５回投与される２５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ３４７５２６（本明細書中で配列番号：１５１９と命名されるマウス又はヒト標的が未知のＴＣＴＴＡＴＧＴＴＴＣＣＧＡＡＣＣＧＴＴ）（１２５ｍｇ／ｋｇの合計週当たり投与）を皮下注射した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの最後の投与は、マウスが安楽死させられる２４時間前に与えられた。
【０５３０】
ＲＮＡ分析
腫瘍を回収し、そしてＲＮＡを、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮＡｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（＃７４１０６）を使用して、製造業者のプロトコルによって単離した。ＳＴＳＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＡＢＩ  ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ  ＲＴ−ＰＣＲ装置を、ヒトのプライマープローブセットＲＴＳ２０３３（順方向配列ＧＡＧＧＣＣＣＧＣＣＣＡＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２０と命名；逆方向配列ＴＴＣＴＧＣＴＡＡＴＧＡＣＧＴＴＡＴＣＣＡＧＴＴＴＴ、本明細書中で配列番号：１５２１と命名；プローブ配列ＣＴＧＣＣＴＡＧＡＴＣＧＧＣ、本明細書中で配列番号：１５２２と命名）と共に使用して測定した。ハウスキーピング遺伝子、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡレベルを、ヒトのプライマープローブセット（順方向配列ＧＡＡＧＧＴＧＡＡＧＧＴＣＧＧＡＧＴＣ、本明細書中で配列番号：１５２３と命名；逆方向配列ＧＡＡＧＡＴＧＧＴＧＡＴＧＧＧＡＴＴＴＣ、本明細書中で配列番号：１５２４と命名；プローブ配列ＣＡＡＧＣＴＴＣＣＣＧＴＴＣＴＣＡＧＣＣ、本明細書中で配列番号：１５２５と命名）で測定し、そしてＲＮＡレベルを正規化するために使用した。結果を表３４に提示し、そしてアンチセンスオリゴヌクレオチドが、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを減少させたことを示す。
【０５３１】
【表３４】
0005943993.tif 000117
【０５３２】
腫瘍成長の解析
腫瘍を、研究期間をとおして定期的に測定した。腫瘍成長の阻害（ＴＧＩ）を、式：
ＴＧＩ＝［１−（ＳＴＡＴ３のＡＳＯ群（最終）のＸ））−ＳＴＡＴ３のＡＳＯ群（１日目）のＸ）／（対照のＡＳＯ群（最終）のＸ−対照のＡＳＯ群（１日目）のＸ））］×１００、式中、Ｘ＝平均腫瘍体積、を使用して計算した。
【０５３３】
治療群の対照群との差を、ＡＮＯＶＡ統計的検定を使用して評価した。結果を表３５に示す。データは、腫瘍の成長がＩＳＩＳ４８１４６４によって、５２日までに９７％のＴＧＩで有意に阻害されたことを示す。ＩＳＩＳ４８１５４９による治療は、ＰＣ−９の腫瘍成長を７８％阻害した。
【０５３４】
【表３５】
0005943993.tif 000118
【０５３５】
体重の解析
体重を、研究期間をとおして定期的に測定した。結果を表３６に提示し、そして対照群と比較した治療群の体重の有意な変化がなかったことを示す。
【０５３６】
【表３６】
0005943993.tif 000119
【０５３７】
実施例２３：ＬＧ−４７６  ＮＳＣＬＣ異種移植モデルの治療におけるＩＳＩＳ４８１４６４の効果
免疫不全であるＮＯＤ．Ｃｇ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪマウス（ＮＳＧ；ＪＡＸ  ＃５５５７）に、ヒト非小細胞肺癌細胞株、ＬＧ−４７６（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）を接種し、そしてＩＳＩＳ４８１４６４で治療した。マウスの腫瘍成長及びＳＴＡＴ３標的の減少を評価した。
【０５３８】
治療
生後４から６週のメスのＮＳＧマウスに、ＬＧ−４７６ヒトＮＳＣＬＣ細胞を皮下接種し、そして臨床観察、体重及び腫瘍体積のために毎週３回モニターした。腫瘍が１，０００ｍｍ３に達した時点で、腫瘍を回収し、そして断片化した。３−５ｍｍ３の寸法の腫瘍断片を、３０匹のＮＳＧマウスの右後側腹部に皮下に移植した。マウスを、毎週３回モニターした。個々の腫瘍が２００−２５０ｍｍ３に達した時点で、マウスを二つの群に無作為に割当て、そして３週間、毎週５回投与される２５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８１４６４又はＰＢＳ（１２５ｍｇ／ｋｇの合計週当たり投与）を注射した。腫瘍を最後の投与後２４時間に回収した。
【０５３９】
ＲＮＡ分析
腫瘍からの溶菌液を、ＡＢＩのＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ  ＲＴ−ＰＣＲ装置を、ヒト特異的プライマープローブセットＲＴＳ２０３３と共に使用して調製した。ハウスキーピング遺伝子、シクロフィリンのｍＲＮＡレベルを、ヒト特異的プライマープローブセット（順方向配列ＧＡＣＧＧＣＧＡＧＣＣＣＴＴＧＧ、本明細書中で配列番号：１５２６と命名；逆方向配列ＴＧＣＴＧＴＣＴＴＴＧＧＧＡＣＣＴＴＧＴＣ、本明細書中で配列番号：１５２７と命名；プローブ配列ＣＣＧＣＧＴＣＴＣＣＴＴＴＧＡＧＣＴＧＴＴＴＧＣ、本明細書中で配列番号：１５２８と命名）で測定した。治療及び対照群の間の有意な差は、スチューデント両側ｔ検定を使用して決定した（ｐ＜０．０５）。
【０５４０】
ＩＳＩＳ４８１４６４による治療は、ＰＢＳ対照と比較して、腫瘍の腫瘤中のＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルの４３％の減少をもたらし（図８）、これは、統計的に有意である。
【０５４１】
タンパク質の解析
全細胞の溶菌液を、プロテアーゼ阻害剤カクテルを含有する氷冷の放射性免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝液中で腫瘍をホモジナイズすることによって調製した。溶菌液を、ＳＴＡＴ３抗体（Ａｂｃａｍ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，＃ａｂ３２５００）を使用するウェスタンブロッティングによって分析した。ハウスキーピングタンパク質、シトクロムオキシダーゼＩＩ（ＣＯＸＩＩ；＃ａｂ７９３９３）及びサバイビン（＃ａｂ７６４２４）も更に探査した。ＳＴＡＴ３レベルを、ＣＯＸＩＩタンパク質又はサバイビンタンパク質のいずれかに対して正規化し、そしてＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して定量化した。
【０５４２】
ＩＳＩＳ４８１４６４による治療は、ＰＢＳ対照と比較して、腫瘍の腫瘤中のＳＴＡＴ３のタンパク質レベルの５０％の減少をもたらし、これは、統計的に有意である。
【０５４３】
腫瘍成長の解析
腫瘍を、研究期間をとおして定期的に測定した。ＩＳＩＳ４８１４６４による治療は、ＰＢＳ対照と比較して、概略３９％の腫瘍体積の減少をもたらした。
【０５４４】
実施例２４：ＰＣ９細胞中のアンチセンスオリゴヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
先に記載した研究からのＩＳＩＳ４８１４６４を、更に非小細胞肺癌細胞株のＰＣ９細胞中で異なった投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり３，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、表３７に規定したように０．０２μＭ、０．１μＭ、０．５μＭ、２．５μＭ、及び１０．０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＳＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ２０３３（順方向配列ＧＡＧＧＣＣＣＧＣＣＣＡＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２０と命名；逆方向配列ＴＴＣＴＧＣＴＡＡＴＧＡＣＧＴＴＡＴＣＣＡＧＴＴＴＴ、本明細書中で配列番号：１５２１と命名；プローブ配列ＣＴＧＣＣＴＡＧＡＴＣＧＧＣ、本明細書中で配列番号：１５２２と命名）をｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ヒトのプライマープローブセットＨＴＳ５００２（順方向配列ＣＧＧＡＣＴＡＴＧＡＣＴＴＡＧＴＴＧＣＧＴＴＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２９と命名；逆方向配列ＧＣＣＡＴＧＣＣＡＡＴＣＴＣＡＴＣＴＴＧＴ、本明細書中で配列番号：１５３０と命名；プローブ配列ＣＣＴＴＴＣＴＴＧＡＣＡＡＡＡＣＣＴＡＡＣＴＴＧＣＧＣＡＧＡ、本明細書中で配列番号：１５３１と命名）によって測定されるようなハウスキーピング遺伝子のベータアクチンの含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０５４５】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）も、更に表３７に示す。表３７に例示するように、ＩＳＩＳ４８１４６４は、細胞膜に浸透することが可能である。
【０５４６】
【表３７】
0005943993.tif 000120
【０５４７】
実施例２５：Ｃ４２Ｂ細胞中のアンチセンスオリゴヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
先に記載した研究からのＩＳＩＳ４８１４６４を、更に前立腺癌細胞株のＣ４２Ｂ細胞中で異なった投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり３，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、表３８に規定したように０．０２μＭ、０．１μＭ、０．５μＭ、２．５μＭ、及び１０．０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＳＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ２０３３（順方向配列ＧＡＧＧＣＣＣＧＣＣＣＡＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２０と命名；逆方向配列ＴＴＣＴＧＣＴＡＡＴＧＡＣＧＴＴＡＴＣＣＡＧＴＴＴＴ、本明細書中で配列番号：１５２１と命名；プローブ配列ＣＴＧＣＣＴＡＧＡＴＣＧＧＣ、本明細書中で配列番号：１５２２と命名）を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ヒトのプライマープローブセットＨＴＳ５００２（順方向配列ＣＧＧＡＣＴＡＴＧＡＣＴＴＡＧＴＴＧＣＧＴＴＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２９と命名；逆方向配列ＧＣＣＡＴＧＣＣＡＡＴＣＴＣＡＴＣＴＴＧＴ、本明細書中で配列番号：１５３０と命名；プローブ配列ＣＣＴＴＴＣＴＴＧＡＣＡＡＡＡＣＣＴＡＡＣＴＴＧＣＧＣＡＧＡ、本明細書中で配列番号：１５３１と命名）によって測定されるようなハウスキーピング遺伝子のベータアクチンの含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０５４８】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）も、更に表３８に示す。表３８に例示するように、ＩＳＩＳ４８１４６４は、細胞膜に浸透することが可能である。
【０５４９】
【表３８】
0005943993.tif 000121
【０５５０】
実施例２６：Ｃｏｌｏ２０１細胞中のアンチセンスオリゴヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
先に記載した研究からのＩＳＩＳ４８１４６４を、更に大腸直腸癌細胞株のＣｏｌｏ２０１細胞中で異なった投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり３，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、表３９に規定したように０．０２μＭ、０．１μＭ、０．５μＭ、２．５μＭ、及び１０．０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＳＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ２０３３（順方向配列ＧＡＧＧＣＣＣＧＣＣＣＡＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２０と命名；逆方向配列ＴＴＣＴＧＣＴＡＡＴＧＡＣＧＴＴＡＴＣＣＡＧＴＴＴＴ、本明細書中で配列番号：１５２１と命名；プローブ配列ＣＴＧＣＣＴＡＧＡＴＣＧＧＣ、本明細書中で配列番号：１５２２と命名）を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ヒトのプライマープローブセットＨＴＳ５００２（順方向配列ＣＧＧＡＣＴＡＴＧＡＣＴＴＡＧＴＴＧＣＧＴＴＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２９と命名；逆方向配列ＧＣＣＡＴＧＣＣＡＡＴＣＴＣＡＴＣＴＴＧＴ、本明細書中で配列番号：１５３０と命名；プローブ配列ＣＣＴＴＴＣＴＴＧＡＣＡＡＡＡＣＣＴＡＡＣＴＴＧＣＧＣＡＧＡ、本明細書中で配列番号：１５３１と命名）によって測定されるようなハウスキーピング遺伝子のベータアクチンの含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０５５１】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）も、更に表３９に示す。表３９に例示するように、ＩＳＩＳ４８１４６４は、細胞膜に浸透することが可能である。
【０５５２】
【表３９】
0005943993.tif 000122
【０５５３】
実施例２７：ＢＴ４７４Ｍ１細胞中のアンチセンスオリゴヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
先に記載した研究からのＩＳＩＳ４８１４６４を、更に乳癌細胞株のＢＴ４７４Ｍ１細胞中で異なった投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり３，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、表４０に規定したように０．０２μＭ、０．１μＭ、０．５μＭ、２．５μＭ、及び１０．０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＳＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ２０３３（順方向配列ＧＡＧＧＣＣＣＧＣＣＣＡＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２０と命名；逆方向配列ＴＴＣＴＧＣＴＡＡＴＧＡＣＧＴＴＡＴＣＣＡＧＴＴＴＴ、本明細書中で配列番号：１５２１と命名；プローブ配列ＣＴＧＣＣＴＡＧＡＴＣＧＧＣ、本明細書中で配列番号：１５２２と命名）を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ヒトのプライマープローブセットＨＴＳ５００２（順方向配列ＣＧＧＡＣＴＡＴＧＡＣＴＴＡＧＴＴＧＣＧＴＴＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２９と命名；逆方向配列ＧＣＣＡＴＧＣＣＡＡＴＣＴＣＡＴＣＴＴＧＴ、本明細書中で配列番号：１５３０と命名；プローブ配列ＣＣＴＴＴＣＴＴＧＡＣＡＡＡＡＣＣＴＡＡＣＴＴＧＣＧＣＡＧＡ、本明細書中で配列番号：１５３１と命名）によって測定されるようなハウスキーピング遺伝子のベータアクチンの含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０５５４】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）も、更に表４０に示す。表４０に例示するように、ＩＳＩＳ４８１４６４は、細胞膜に浸透することが可能である。
【０５５５】
【表４０】
0005943993.tif 000123
【０５５６】
実施例２８：Ｈ９２９細胞中のアンチセンスオリゴヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
先に記載した研究からのＩＳＩＳ４８１４６４を、更に多発性骨髄腫細胞株のＨ９２９細胞中で異なった投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり１０，０００−１２，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、表４１に規定したように０．０１μＭ、０．５μＭ、２．５μＭ、及び１０．０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共にインキュベートした。概略７２時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＳＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ２０３３（順方向配列ＧＡＧＧＣＣＣＧＣＣＣＡＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２０と命名；逆方向配列ＴＴＣＴＧＣＴＡＡＴＧＡＣＧＴＴＡＴＣＣＡＧＴＴＴＴ、本明細書中で配列番号：１５２１と命名；プローブ配列ＣＴＧＣＣＴＡＧＡＴＣＧＧＣ、本明細書中で配列番号：１５２２と命名）を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ヒトのプライマープローブセットＨＴＳ５００２（順方向配列ＣＧＧＡＣＴＡＴＧＡＣＴＴＡＧＴＴＧＣＧＴＴＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２９と命名；逆方向配列ＧＣＣＡＴＧＣＣＡＡＴＣＴＣＡＴＣＴＴＧＴ、本明細書中で配列番号：１５３０と命名；プローブ配列ＣＣＴＴＴＣＴＴＧＡＣＡＡＡＡＣＣＴＡＡＣＴＴＧＣＧＣＡＧＡ、本明細書中で配列番号：１５３１と命名）によって測定されるようなハウスキーピング遺伝子のベータアクチンの含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０５５７】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）も、更に表４１に示す。表４１に例示するように、ＩＳＩＳ４８１４６４は、細胞膜に浸透することが可能である。
【０５５８】
【表４１】
0005943993.tif 000124
【０５５９】
実施例２９：ＭＭ１Ｒ細胞中のアンチセンスオリゴヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
先に記載した研究からのＩＳＩＳ４８１４６４を、更に多発性骨髄腫細胞株のＭＭ１Ｒ細胞中で異なった投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり１０，０００−１２，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、表４２に規定したように０．０１μＭ、０．５μＭ、２．５μＭ、及び１０．０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共にインキュベートした。概略７２時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＳＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ２０３３（順方向配列ＧＡＧＧＣＣＣＧＣＣＣＡＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２０と命名；逆方向配列ＴＴＣＴＧＣＴＡＡＴＧＡＣＧＴＴＡＴＣＣＡＧＴＴＴＴ、本明細書中で配列番号：１５２１と命名；プローブ配列ＣＴＧＣＣＴＡＧＡＴＣＧＧＣ、本明細書中で配列番号：１５２２と命名）を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ヒトのプライマープローブセットＨＴＳ５００２（順方向配列ＣＧＧＡＣＴＡＴＧＡＣＴＴＡＧＴＴＧＣＧＴＴＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２９と命名；逆方向配列ＧＣＣＡＴＧＣＣＡＡＴＣＴＣＡＴＣＴＴＧＴ、本明細書中で配列番号：１５３０と命名；プローブ配列ＣＣＴＴＴＣＴＴＧＡＣＡＡＡＡＣＣＴＡＡＣＴＴＧＣＧＣＡＧＡ、本明細書中で配列番号：１５３１と命名）によって測定されるようなハウスキーピング遺伝子のベータアクチンの含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０５６０】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）も、更に表４２に示す。表４２に例示するように、ＩＳＩＳ４８１４６４は、細胞膜に浸透することが可能である。
【０５６１】
【表４２】
0005943993.tif 000125
【０５６２】
実施例３０：ＳＫ−ＯＶ３卵巣癌異種移植モデルの治療におけるＳＴＡＴ３を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに、ヒト卵巣癌細胞株、ＳＫ−ＯＶ３を接種し、そしてＩＳＩＳ４８１４６４又はＩＳＩＳ４８１５４９で治療した。ＩＳＩＳ４８１５４９は、マウスの配列と交差反応可能である（即ち、マウス配列にハイブリダイズする）。
【０５６３】
研究１
ヒト卵巣癌ＳＫ−ＯＶ３細胞（概略１００ｍｍ３）を、ヌードマウスに腹腔内注射した。１０日後、マウスに、１１週間、毎週２回投与される２５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８１４６４又はＩＳＩＳ４８１５４９を、皮下接種した。マウスを、最後の投与の２４時間後安楽死させた。
【０５６４】
ＲＮＡ分析
溶菌液を、ヒトのプライマープローブセット（ＲＴＳ２０３３）及びマウスのプライマリープローブセット（ｍＳＴＡＴ３−ＬＴＳ０６６４）を使用するＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルのＲＴ−ＰＣＲ分析においてＲＮＡ抽出キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用することによって調製した。結果を表４３に示す。結果をＰＢＳ対照に対する、ＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。データは、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドによる治療が、ＰＢＳ対照と比較して、ヒト及びマウスのＳＴＡＴ３のｍＲＮＡの両方の減少をもたらすことを示す。
【０５６５】
【表４３】
0005943993.tif 000126
【０５６６】
タンパク質の解析
リン酸化されたＳＴＳＴ３に対する抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を使用するＳＴＡＴ３タンパク質レベルのウェスタンブロット分析のために、溶菌液を、ＲＩＰＡ緩衝液で調製した。結果を、図１に示す。データは、ＩＳＩＳ４８１５４９による治療が、ＰＢＳ対照と比較して、リン酸化されたＳＴＳＴ３タンパク質の減少をもたらすことを示す。
【０５６７】
ＩＬ−６レベルの解析
マウスのプライマープローブセットｍＩＬ６−ＬＴＳ００６２９を使用するＩＬ−６のＲＴ−ＰＣＲ分析のために、溶菌液をＲＮＡ抽出キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して調製した。データは、ＩＳＩＳ４８１５４９による治療が、ＰＢＳ対照と比較して、ＩＬ−６のｍＲＮＡの両方の有意な減少をもたらすことを示す。
【０５６８】
【表４４】
0005943993.tif 000127
【０５６９】
腫瘍重量の解析
腫瘍を回収した。腫瘍の重量を測定し、そして結果を表４５に示す。結果は、ＰＢＳ対照の腫瘍重量のパーセントとして提示される。データは、ＩＳＩＳ４８１５４９による治療が、ＰＢＳ対照と比較して、腫瘍重量の有意な減少をもたらすことを示す。
【０５７０】
【表４５】
0005943993.tif 000128
【０５７１】
研究２
ヒト卵巣癌ＳＫ−ＯＶ３細胞（概略１００ｍｍ３）を、ヌードマウスに皮下接種した。１０日後、マウスに、６週間、毎週５回投与される５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８１４６４、又は５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４８１４６４及びＩＳＩＳ４８１５４９の組合せのいずれかを、腹腔内接種した。マウスを、最後の投与の２４時間後安楽死させた。
【０５７２】
腫瘍体積の解析
腫瘍を、ノギスを使用して定期的に測定し、そして腫瘍体積を、式、腫瘍体積＝１／２（長さ×幅２）を使用して計算した。結果を図２に示す。データは、マウスのＩＳＩＳ４８１４６４及びＩＳＩＳ４８１５４９の組合せによる治療が、腫瘍の成長の有意な阻害をもたらすことを示す。
【０５７３】
実施例３１：カニクイザルにおけるＩＳＩＳ４８１４６４の許容性の研究
カニクイザルにおけるＩＳＩＳ４８１４６４の効力及び許容性を評価した。
【０５７４】
治療
オス及びメスのナイーブなカニクイザルを、五つの治療群に割当てた。それぞれ５匹のサルの三つの群は、研究の最初の週中の二日毎（１、３、５及び７日目）に３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ又は３０ｍｇ／ｋｇの負荷投与を、続いてその後毎週一回（１４日目に開始）の投与を受けた。対照群の５匹のサルは、研究の最初の週中の二日毎（１、３、５及び７日目）にＰＢＳを負荷投与として、続いてその後毎週一回（１４日目に開始）の投与を受けた。これらの投与は、１時間の静脈内（ｉ．ｖ．）注入により投与された。５匹のサルの５番目の群は、研究の最初の週中の二日毎（１、３、５及び７日目）に皮下投与される３０ｍｇ／ｋｇの負荷投与を、続いてその後毎週一回（１４日目に開始）の皮下（ｓ．ｃ．）投与を受けた。
【０５７５】
ｉ．ｖ．注入のために、サルは、鎮痛剤無しに拘束椅子に拘束された。カテーテルを、頭部静脈の一つに入れ、そして適当な投与量のＩＳＩＳ４８１４６４溶液を、較正されたシリンジポンプ（Ｓｔｏｅｌｔｉｎｇ  Ｃｏ，ＵＳＡ）を使用して概略１時間かけて一定速度で注入した。投与部位は、右及び左腕間で交代し、そして投与時間を記録した。注入速度は、計算された投与体積を供給するために選択され、そしてポンプの精度をモニターし、そしてそれぞれの投与に対して記録した。注入期間の終りに、投与溶液をＰＢＳに切り換えた。ｓ．ｃ．投与の場合、注射を、背中の四つの部位の時計回りの交代で行った。注射部位を、定期的剃毛によって維持し、そして刺青で恒久的に番号を付けた。
【０５７６】
それぞれの群からの３匹のサルを、４４日目に犠牲にし、これは４２日目の最後の投与の４８時間後であった。それぞれの群からの他の２匹のサルを、毒薬学的影響に対して観察した。サルの計画された安楽死を、ケタミン／キシラジン誘導の麻酔及びペントバルビタールナトリウムの投与後の瀉血によって行った。実施例中に記載されたプロトコルは、施設内動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって認可された。
【０５７７】
ＲＮＡ分析
肝臓の組織を、１％の２−メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ）で補充された３ｍＬのＲＬＴ溶菌緩衝液（Ｑｉａｇｅｎ）中でホモジナイズした。ＲＮＡを、得られたホモジネートから、ＲＮＡ精製のための、Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙの９６ウェルプレートを使用して、製造業者のプロトコルによって精製した。精製後、ＲＮＡ試料を、Ｐｅｒｋｉｎ−ＥｌｍｅｒのＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７７００配列決定装置及びＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ３２３５（順方向配列ＡＡＧＴＴＴＡＴＣＴＧＴＧＴＧＡＣＡＣＣＡＡＣＧＡ、本明細書中で配列番号：１５３２と命名；逆方向配列ＣＴＴＣＡＣＣＡＴＴＡＴＴＴＣＣＡＡＡＣＴＧＣＡＴ、本明細書中で配列番号：１５３３と命名；プローブ配列ＴＧＣＣＧＡＴＧＴＣＣＣＣＣＣＧＣＡ、本明細書中で配列番号：１５３４と命名）を使用するＲＴ−ＰＣＲ分析にかけた。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、プライマープローブセットｍｋ＿ｃｙｃｌｏＡ＿２ｎｄ（順方向配列ＴＧＣＴＧＧＡＣＣＣＡＡＣＡＣＡＡＡＴＧ、本明細書中で配列番号：１５３５と命名；逆方向配列ＴＧＣＣＡＴＣＣＡＡＣＣＡＣＴＣＡＧＴＣ、本明細書中で配列番号：１５３６と命名；プローブ配列ＴＴＣＣＣＡＧＴＴＴＴＴＣＡＴＣＴＧＣＡＣＴＧＣＣＡＸ、本明細書中で配列番号：１５３７と命名）を使用して定量化されたサルのシクロフィリンＡに対して正規化した。
【０５７８】
ｉ．ｖ．注入又はｓ．ｃ．注射のいずれかによる３０ｍｇ／ｋｇの投与濃度のＩＳＩＳＩ４８１４６４による治療は、ＰＢＳ対照に対して、肝臓のＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ発現の統計的に有意な減少（表４６）をもたらした。治療及び対照群間の有意な差は、スチューデントｔ検定を使用して決定した（ｐ＜０．０５）。
【０５７９】
【表４６】
0005943993.tif 000129
【０５８０】
タンパク質の解析
肝臓の組織を、プロテアーゼ及びホスファターゼの両方の阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ）を含有する１ｍＬの氷冷のＲＩＰＡ緩衝液（Ｓｉｇｍａ）中でホモジナイズした。全溶菌液を、Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  ＰＡＧＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）によって分離し、ＰＶＤＦメンブランに移し、そしてＳＴＡＴ３（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，＃９１３２）及びＧＡＰＤＨ（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，＃０６−１−Ｇ４−Ｃ５）に対する一次抗体を使用して免疫ブロットした。免疫特異的バンドを、Ｘ線フィルムに暴露した後、Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｐｌｕｓ検出キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で検出した。次いでバンドの強度をスキャンし、そしてＩｍａｇｅＪソフトウェアを使用して定量化した。治療及び対照群間の有意な差は、スチューデントｔ検定を使用して決定した（ｐ＜０．０５）。
【０５８１】
表４７に示すように、ＳＴＡＴ３タンパク質レベルに用量依存的の減少があり、３ｍｇ／ｋｇ／週及び１０ｍｇ／ｋｇ／週においてそれぞれ３３％及び８２％減少であった。ＳＴＡＴ３タンパク質は、３０ｍｇ／ｋｇ／週において投与経路に関係なく検出不能であった。
【０５８２】
【表４７】
0005943993.tif 000130
【０５８３】
肝機能
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、血液試料を全ての研究群から収集した。血液試料を、投与の４８時間後の４４日目に大腿静脈穿刺により収集した。血液試料（１ｍＬ）を、血清分離のために抗凝集剤を伴わずに試験管に収集した。試験管を室温で概略６０分間保ち、そして次いで血清を得るために１０分間３，０００ｒｐｍで遠心した。各種の肝機能マーカーのレベルを、Ｔｏｓｈｉｂａ  ２００ＦＲ  ＮＥＯ化学分析器（Ｔｏｓｈｉｂａ  Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）を使用して測定した。ＡＬＴ及びＡＳＴの血漿レベルを測定し、そして結果を、ＩＵ／Ｌで表示して、表４８に示す。オス及びメスのサルのデータを別個に示す。結果は、ＩＳＩＳ４８１４６４による治療が、肝機能に対してアンチセンスオリゴヌクレオチドに対して予測した範囲外の影響を持たないことを示す。
【０５８４】
【表４８】
0005943993.tif 000131
【０５８５】
腎機能
腎機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、血液試料を全ての研究群から収集した。血液試料を、投与の４８時間後の４４日目に大腿静脈穿刺により収集した。血液試料（１ｍＬ）を、血清分離のために抗凝集剤を伴わずに試験管に収集した。試験管を室温で概略６０分間保ち、そして次いで血清を得るために１０分間３，０００ｒｐｍで遠心した。各種の腎機能マーカーのレベルを、Ｔｏｓｈｉｂａ  ２００ＦＲ  ＮＥＯ化学分析器（Ｔｏｓｈｉｂａ  Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）を使用して測定した。結果を、ｍｇ／ｄＬで表示して表４９に示す。血漿の化学的データは、ＩＳＩＳ４８１４６４による治療が、腎機能に対してアンチセンスオリゴヌクレオチドに対して予測した範囲外のいずれもの影響を持たないことを示す。
【０５８６】
【表４９】
0005943993.tif 000132
【０５８７】
体重の測定
ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドのサルの全体的健康状態に対する影響を評価するために、体重を測定し、そして表５０及び５１に示す。結果は、ＩＳＩＳ４８１４６４による治療の体重に対する影響が、アンチセンスオリゴヌクレオチドに対して予測した範囲内であったことを示す。
【０５８８】
【表５０】
0005943993.tif 000133
【０５８９】
【表５１】
0005943993.tif 000134
【０５９０】
実施例３２：ＨｕＶＥＣ細胞中のヒトＳＴＡＴ３のアンチセンス阻害
アンチセンスオリゴヌクレオチドを、ＳＴＡＴ３核酸を標的として設計し、そしてｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＳＴＡＴ３のｍＲＮＡに対するその効果を試験した。ウェル当たり５，０００個の細胞の密度の培養されたＨｕＶＥＣ細胞を、ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ  ２０００（登録商標）試薬を使用して３０ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドで形質移入した。概略２４時間の治療期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトのプライマープローブセットＲＴＳ２０３３（順方向配列ＧＡＧＧＣＣＣＧＣＣＣＡＡＣＡ、本明細書中で配列番号：５と命名；逆方向配列ＴＴＣＴＧＣＴＡＡＴＧＡＣＧＴＴＡＴＣＣＡＧＴＴＴＴ、本明細書中で配列番号：６と命名；プローブ配列ＣＴＧＣＣＴＡＧＡＴＣＧＧＣ、本明細書中で配列番号：７と命名）を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されたような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０５９１】
表５２及び５３のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計された。ギャップマーは、２０個のヌクレオシドの長さであり、ここで、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含んでなり、そしてそれぞれ五つのヌクレオシドを含んでなるウイングによって両側において（５’及び３’方向で）隣接されている。５’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシド及び３’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ糖修飾を有する。それぞれのギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。それぞれのギャップマー中の全てのシトシン残基は、５’−メチルシトシンである。“ヒト標的開始部位”は、ヒト遺伝子配列中でギャップマーが標的とする５’に最も近いヌクレオシドを示す。“ヒト標的停止部位”は、ヒト遺伝子配列においてギャップマーが標的とする３’に最も近いヌクレオシドを示す。表５２に記載したそれぞれのギャップマーは、本明細書中で配列番号：１（ＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号ＮＭ＿１３９２７６．２）と命名したヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡを標的とする。表５３中に記載したそれぞれのギャップマーは、本明細書中で配列番号：２（ヌクレオチド４１８５０００ないし４２６４０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号ＮＴ＿０１０７５５．１４の相補物）と命名したヒトＳＴＡＴ３ゲノム配列を標的とする。
【０５９２】
ギャップマーの効力は、更にヒトＳＴＡＴ３を標的とする５−１０−５ＭＯＥギャップマーであるＩＳＩＳ３３７３３２、ＩＳＩＳ３３７３３３、及びＩＳＩＳ３４５７８５と比較され、そしてこれらは、更に参考文献として本明細書中に援用される米国特許第７，３０７，０６９号中に記載されている。
【０５９３】
【表５２−１】
0005943993.tif 000135
【０５９４】
【表５２−２】
0005943993.tif 000136
【０５９５】
【表５２−３】
0005943993.tif 000137
【０５９６】
【表５２−４】
0005943993.tif 000138
【０５９７】
【表５２−５】
0005943993.tif 000139
【０５９８】
【表５２−６】
0005943993.tif 000140
【０５９９】
【表５２−７】
0005943993.tif 000141
【０６００】
【表５３−１】
0005943993.tif 000142
【０６０１】
【表５３−２】
0005943993.tif 000143
【０６０２】
【表５３−３】
0005943993.tif 000144
【０６０３】
【表５３−４】
0005943993.tif 000145
【０６０４】
【表５３−５】
0005943993.tif 000146
【０６０５】
【表５３−６】
0005943993.tif 000147
【０６０６】
【表５３−７】
0005943993.tif 000148
【０６０７】
【表５３−８】
0005943993.tif 000149
【０６０８】
【表５３−９】
0005943993.tif 000150
【０６０９】
【表５３−１０】
0005943993.tif 000151
【０６１０】
【表５３−１１】
0005943993.tif 000152
【０６１１】
【表５３−１２】
0005943993.tif 000153
【０６１２】
【表５３−１３】
0005943993.tif 000154
【０６１３】
【表５３−１４】
0005943993.tif 000155
【０６１４】
【表５３−１５】
0005943993.tif 000156
【０６１５】
【表５３−１６】
0005943993.tif 000157
【０６１６】
【表５３−１７】
0005943993.tif 000158
【０６１７】
実施例３３：ＨｕＶＥＣ細胞中のヒトＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
ＳＴＡＴ３の有意なｉｎ  ｖｉｔｒｏの阻害を示す実施例３２に記載した研究からのギャップマーを、ＨｕＶＥＣ細胞中で各種の投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり５，０００個の細胞の密度でプレートに入れ、そしてＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００（登録商標）試薬を使用して、表５４に規定するように１．１ｎＭ、３．３ｎＭ、１０．０ｎＭ、及び３０．０ｎＭの濃度のアンチセンスヌクレオチドで形質移入した。概略１６時間の治療期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９（順方向配列ＡＣＡＴＧＣＣＡＣＴＴＴＧＧＴＧＴＴＴＣＡＴＡＡ、本明細書中で配列番号：６と命名；逆方向配列ＴＣＴＴＣＧＴＡＧＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＴＡＧＡＧＡＡＣ、本明細書中で配列番号：７と命名；プローブ配列ＣＡＧＴＡＴＡＧＣＣＧＣＴＴＣＣＴＧＣＡＡＧＡＧＴＣＧＡＡ、本明細書中で配列番号：８と命名）を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されたような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０６１８】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）も、更に表５４に提示し、そして使用されたオリゴヌクレオチドの濃度に対する、それぞれの濃度で達成されたＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ発現の阻害のパーセントをプロットし、そして対照と比較して、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡ発現の５０％の阻害が達成されるオリゴヌクレオチドの濃度を記録することによって計算した。表５４に例示するように、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡのレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで治療した細胞において、用量依存的様式で有意に減少した。
【０６１９】
【表５４−１】
0005943993.tif 000159
【０６２０】
【表５４−２】
0005943993.tif 000160
【０６２１】
実施例３４：マイクロウォークによって設計されたオリゴヌクレオチドによるＨｕＶＥＣ細胞中のヒトＳＴＡＴ３のアンチセンス阻害
更なるギャップマーを、少なくとも５０％の阻害を示す実施例１に提示したギャップマーに基づき設計した。これらのギャップマーを、本来のギャップマーの上流及び下流に僅かに移動した（即ち、“マイクロウォーク（ｍｉｃｒｏｗａｌｋ）”）ギャップマーを作ることによって設計した。これらのギャップマーを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験した。ＩＳＩＳ３３７３３２も更に比較物質としてアッセイに含めた。ウェル当たり５，０００個の細胞の密度の培養されたＨｕＶＥＣ細胞を、ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ  ２０００（登録商標）試薬を使用して３０ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドで形質移入した。概略２４時間の治療期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。本明細書中に先に記載したヒトのプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されたような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。結果を表５５に示す。
【０６２２】
表５５のキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、５−１０−５ＭＯＥギャップマーとして設計された。表５５中の星印（＊）を伴って命名されたギャップマーは、それから、ギャップマー、ＩＳＩＳ４６５２２６−４６６７４４が、マイクロウォークによって設計された本来のギャップマーである。５−１０−５ギャップマーは、２０個のヌクレオシドの長さであり、ここで、中央のギャップセグメントは、１０個の２’−デオキシヌクレオシドを含んでなり、そしてそれぞれ五つのヌクレオシドを含んでなるウイングによって両側において（５’及び３’方向で）隣接されている。５’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシド及び３’ウイングセグメントのそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥ糖修飾を有する。それぞれのギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。それぞれのギャップマー中の全てのシトシン残基は、５’−メチルシトシンである。“ヒト標的開始部位”は、ヒト遺伝子配列中でギャップマーが標的とする５’に最も近いヌクレオシドを示す。“ヒト標的停止部位”は、ヒト遺伝子配列においてギャップマーが標的とする３’に最も近いヌクレオシドを示す。表５５中に記載したそれぞれのギャップマーは、本明細書中で配列番号：２（ヌクレオチド４１８５０００ないし４２６４０００から切断されたＧＥＮＢＡＮＫ寄託番号ＮＴ＿０１０７５５．１４の相補物）と命名したヒトＳＴＡＴ３ゲノム配列の標的領域に及ぶ２３１３−７６０１７核酸塩基を標的とする。
【０６２３】
【表５５−１】
0005943993.tif 000161
【０６２４】
【表５５−２】
0005943993.tif 000162
【０６２５】
【表５５−３】
0005943993.tif 000163
【０６２６】
【表５５−４】
0005943993.tif 000164
【０６２７】
【表５５−５】
0005943993.tif 000165
【０６２８】
【表５５−６】
0005943993.tif 000166
【０６２９】
【表５５−７】
0005943993.tif 000167
【０６３０】
【表５５−８】
0005943993.tif 000168
【０６３１】
【表５５−９】
0005943993.tif 000169
【０６３２】
【表５５−１０】
0005943993.tif 000170
【０６３３】
【表５５−１１】
0005943993.tif 000171
【０６３４】
【表５５−１２】
0005943993.tif 000172
【０６３５】
【表５５−１３】
0005943993.tif 000173
【０６３６】
【表５５−１４】
0005943993.tif 000174
【０６３７】
【表５５−１５】
0005943993.tif 000175
【０６３８】
【表５５−１６】
0005943993.tif 000176
【０６３９】
【表５５−１７】
0005943993.tif 000177
【０６４０】
【表５５−１８】
0005943993.tif 000178
【０６４１】
【表５５−１９】
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【０６４２】
【表５５−２０】
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【０６４３】
【表５５−２１】
0005943993.tif 000181
【０６４４】
【表５５−２２】
0005943993.tif 000182
【０６４５】
実施例３５：ＨｕＶＥＣ細胞中のヒトＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
ＳＴＡＴ３の有意なｉｎ  ｖｉｔｒｏの阻害を示す実施例３に記載した研究からのギャップマーを、ＨｕＶＥＣ細胞中で各種の投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり５，０００個の細胞の密度でプレートに入れ、そしてＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ２０００（登録商標）試薬を使用して、表５６に規定するように８．８ｎＭ、１７．５ｎＭ、３５．０ｎＭ、及び７０．０ｎＭの濃度のアンチセンスヌクレオチドで形質移入した。概略１６時間の治療期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。本明細書中で先に記載したヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されたような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０６４６】
表５６に例示するように、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡのレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで治療した細胞において、用量依存的様式で減少した。
【０６４７】
【表５６−１】
0005943993.tif 000183
【０６４８】
【表５６−２】
0005943993.tif 000184
【０６４９】
実施例３６：ＨｕＶＥＣ細胞中のヒトＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
実施例３に記載した研究からのギャップマーを、ＨｕＶＥＣ細胞中で各種の投与量で更に試験した。細胞を、ウェル当たり２０，０００個の細胞の密度でプレートに入れ、そして電気穿孔を使用して、表５７に規定するように、１８７．５ｎＭ、３７５．０ｎＭ、７５０．０ｎＭ、１，５００．０ｎＭ、３，０００．０ｎＭ、及び６，０００．０ｎＭの濃度のアンチセンスヌクレオチドで形質移入した。概略１６時間の治療期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。本明細書中で先に記載した、ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されたような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０６５０】
表５７に例示するように、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡのレベルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドで治療した細胞において、用量依存的様式で有意に減少した。
【０６５１】
【表５７−１】
0005943993.tif 000185
【０６５２】
【表５７−２】
0005943993.tif 000186
【０６５３】
実施例３７：ＣＤ１マウスにおけるヒトＳＴＡＴ３を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの許容性
高いレベルの効力を示す３９種のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、ｉｎ  ｖｉｖｏの許容性に対して更に試験した。
【０６５４】
８匹のオスのＣＤ１マウスの複数の群に、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドを６週間、毎週２回皮下注射した。８匹のオスのＣＤ１マウスの一つの群に、ＰＢＳを６週間、毎週２回皮下注射した。この群は、対照として役立てた。最後の投与の３日後、マウスを安楽死させ、そして器官及び血漿を、更なる分析のために回収した。肝臓、脾臓、及び腎臓の重量を研究の終りに測定し、そしてＰＢＳ治療のマウスと比較した。
【０６５５】
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、トランスアミナーゼの血漿濃度を、自動化臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）及びＡＳＴ（アスパルテートトランスアミナーゼ）の血漿濃度を測定した。
【０６５６】
腎機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、血液尿素窒素（ＢＵＮ）の血漿濃度を、自動化臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。
【０６５７】
全てのマウスの群から得た血液を、血球容量（ＨＣＴ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）、平均赤血球ヘモグロビン（ＭＣＨ）、及び平均赤血球ヘモグロビン濃度（ＭＣＨＣ）測定及び分析のために、並びにＷＢＣ、ＲＢＣのそれのような異なった血液細胞の数、及び全ヘモグロビン含有量の測定のために、Ａｎｔｅｃｈ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓに送った。
【０６５８】
試験された３９種のアンチセンスオリゴヌクレオチドの中で、ＩＳＩＳ４５５２６５、ＩＳＩＳ４５５２６９、ＩＳＩＳ４５５２７１、ＩＳＩＳ４５５２７２、ＩＳＩＳ４５５２９１、ＩＳＩＳ４５５３７１、ＩＳＩＳ４５５３９４、ＩＳＩＳ４５５７０３、ＩＳＩＳ４５５４２９、ＩＳＩＳ４５５４７１、ＩＳＩＳ４５５５２７、ＩＳＩＳ４５５５３０、ＩＳＩＳ４５５５３６、ＩＳＩＳ４５５５４８、ＩＳＩＳ４５５６１１、ＩＳＩＳ４６５２３６、ＩＳＩＳ４６５２３７、ＩＳＩＳ４６５５８８、ＩＳＩＳ４６５７４０、ＩＳＩＳ４６５７５４、ＩＳＩＳ４６５８３０、ＩＳＩＳ４６６６７０、及びＩＳＩＳ４６６７２０を含むある種のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、器官重量、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＢＵＮ、及び血液学的パラメーターに対する許容閾値に合致した。
【０６５９】
実施例３８：ＣＤ１マウスの肝臓におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの半減期の測定
ＣＤ１マウスを、記載されたＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで治療し、そして肝臓中のオリゴヌクレオチドの半減期を評価した。
【０６６０】
治療
それぞれ１２匹のＣＤ１マウスの複数の群に、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４５５２６５、ＩＳＩＳ４５５２６９、ＩＳＩＳ４５５２７１、ＩＳＩＳ４５５２７２、ＩＳＩＳ４５５２９１、ＩＳＩＳ４５５３７１、ＩＳＩＳ４５５３９３、ＩＳＩＳ４５５５５３、ＩＳＩＳ４５５５８２、ＩＳＩＳ４５５７０３、ＩＳＩＳ４５５３９４、ＩＳＩＳ４５５４２９、ＩＳＩＳ４５５４３８、ＩＳＩＳ４５５４７１、ＩＳＩＳ４５５５２７、ＩＳＩＳ４５５５３０、ＩＳＩＳ４５５５３６、ＩＳＩＳ４５５５４０、ＩＳＩＳ４５５５４８、ＩＳＩＳ４５５６１１、ＩＳＩＳ４５５４２９、ＩＳＩＳ４５５４６３、ＩＳＩＳ４５５４６４、ＩＳＩＳ４５５４７１、ＩＳＩＳ４５５５２７、ＩＳＩＳ４５５６１１、ＩＳＩＳ４６５２３６、ＩＳＩＳ４６５２３７、ＩＳＩＳ４６５２３９、ＩＳＩＳ４６５５８８、ＩＳＩＳ４６５７４０、ＩＳＩＳ４６５７４２、ＩＳＩＳ４６５７５１、ＩＳＩＳ４６５７５２、ＩＳＩＳ４６５７５４、ＩＳＩＳ４６５８３０、ＩＳＩＳ４６６６７０、ＩＳＩＳ４６６７１８、及びＩＳＩＳ４６６７２０を、２週間、毎週２回皮下注射した。それぞれの群からの４匹のマウスを、３日目、２８日目、及び５６日目に、最後の投与後、犠牲にした。肝臓を分析のために回収した。
【０６６１】
オリゴヌクレオチド濃度の測定
全長のオリゴヌクレオチドの濃度、並びに全てのオリゴヌクレオチド濃度（分解された形態を含む）を測定した。使用された方法は、以前に刊行された方法（Ｌｅｅｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ｇｅａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）の改良であり、これは、フェノール−クロロホルム（液−液）抽出、それに続く固相抽出を含む。内部標準（ＩＳＩＳ３５５８６８、本明細書中で配列番号：２７５８と命名された２７塩基長の２’−Ｏ−メトキシエチルで修飾されたホスホロチオエートオリゴヌクレオリド、ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＴＴＴ）を、抽出に先立ち加えた。組織試料の濃度を、概略１．１４μｇ／ｇの定量化下限（ＬＬＯＱ）の較正曲線を使用して計算した。次いで半減期を、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（ＰＨＡＲＳＩＧＨＴ）を使用して計算した。
【０６６２】
それぞれのオリゴヌクレオチドの半減期を、表５８に示す。１１−３４日の半減期を持つアンチセンスオリゴヌクレオチドを、更なる研究のために選択した。
【０６６３】
【表５８】
0005943993.tif 000187
【０６６４】
実施例３９：Ｓｐｒａｇｕｅ−ＤａｗｌｅｙラットにおけるヒトＳＴＡＴ３を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの許容性
高いレベルの効力を示す２３種のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、ｉｎ  ｖｉｖｏの許容性に対して更に試験した。
【０６６５】
４匹のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの複数の群に、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドを、６週間、毎週２回皮下注射した。ラットの一つの群に、ＰＢＳを６週間、毎週２回皮下注射した。この群を、対照群として役立てた。最後の投与の３日後、ラットを安楽死させ、そして器官及び血漿を、更なる分析のために回収した。肝臓、脾臓、及び腎臓の重量を、研究の終りに測定し、そしてＰＢＳで治療したラットと比較した。
【０６６６】
肝機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、トランスアミラーゼの血漿濃度を、自動化臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。ＡＳＴ（アスパルテートトランスアミナーゼ）、及び全ビリルビンの血漿濃度を測定した。
【０６６７】
腎機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、ＢＵＮ、全尿タンパク質、及びクレアチニンを、自動化臨床化学分析器（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＵ４００ｅ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を使用して測定した。
【０６６８】
試験された２３種のアンチセンスオリゴヌクレオチド中で、ＩＳＩＳ４５５２６９、ＩＳＩＳ４５５２９１、ＩＳＩＳ４５５３７１、ＩＳＩＳ４５５７０３、ＩＳＩＳ４５５４２９、ＩＳＩＳ４６５２３６、ＩＳＩＳ４６５２３７、ＩＳＩＳ４６５７５４、ＩＳＩＳ４６５８３０、及びＩＳＩＳ４６６６７０を含むある種のアンチセンスオリゴヌクレオチドが、器官重量、ＡＳＴ、ビリルビン、ＢＵＮ、全尿タンパク質、及びクレアチニンに対する許容閾値に合致した。
【０６６９】
実施例４０：Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの肝臓及び腎臓中のアンチセンスオリゴヌクレオチドの半減期の測定
Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、ＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドで治療し、そしてオリゴヌクレオチドの半減期、並びにオリゴヌクレオチド分解並びに肝臓及び腎臓からの排除のための経過時間を評価した。
【０６７０】
治療
それぞれ４匹のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの複数の群に、２０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４５５２６５、ＩＳＩＳ４５５２６９、ＩＳＩＳ４５５２７１、ＩＳＩＳ４５５２７２、ＩＳＩＳ４５５２９１、ＩＳＩＳ４５５３７１、ＩＳＩＳ４５５３９４、ＩＳＩＳ４５５７０３、ＩＳＩＳ４５５４２９、ＩＳＩＳ４５５４７１、ＩＳＩＳ４５５５２７、ＩＳＩＳ４５５５３０、ＩＳＩＳ４５５５３６、ＩＳＩＳ４５５５４８、ＩＳＩＳ４５５６１１、ＩＳＩＳ４６５２３６、ＩＳＩＳ４６５２３７、ＩＳＩＳ４６５５８８、ＩＳＩＳ４６５７４０、ＩＳＩＳ４６５７５４、ＩＳＩＳ４６５８３０、ＩＳＩＳ４６６６７０、及びＩＳＩＳ４６６７２０を２週間、毎週２回皮下注射した。最後の投与の３日後、ラットを犠牲にし、そして肝臓及び腎臓を分析のために収集した。
【０６７１】
オリゴヌクレオチド濃度の測定
全長のオリゴヌクレオチドの濃度、並びに全てのオリゴヌクレオチド濃度（分解された形態を含む）を測定した。使用された方法は、以前に刊行された方法（Ｌｅｅｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ｇｅａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）の改良であり、これは、フェノール−クロロホルム（液−液）抽出、それに続く固相抽出を含む。内部標準（ＩＳＩＳ３５５８６８、本明細書中で配列番号：２７５８と命名された２７塩基長の２’−Ｏ−メトキシエチルで修飾されたホスホロチオエートオリゴヌクレオリド、ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＴＴＴ）を、抽出に先立ち加えた。組織試料の濃度を、概略１．１４μｇ／ｇの定量化下限（ＬＬＯＱ）の較正曲線を使用して計算した。全長のオリゴヌクレオチド濃度の腎臓と肝臓の比、並びに全てのオリゴヌクレオチド濃度のそれを計算した。結果を表５９に示す。
【０６７２】
【表５９】
0005943993.tif 000188
【０６７３】
実施例４１：ＳＫ−ＢＲ−３細胞中のアンチセンスオリゴヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
実施例６−９に記載した齧歯類の許容性研究からのギャップマーを、ＳＫ−ＢＲ−３細胞中で異なった投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり４，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、いずれもの形質移入試薬を使用せずに、表６０に規定するように、０．０２μＭ、０．１０μＭ、０．５０μＭ、１．００μＭ、２．５０μＭ、及び１０．００μＭの濃度のアンチセンスヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。本明細書中で先に記載した、ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されたような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０６７４】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）も、更に表６０に示す。
【０６７５】
【表６０】
0005943993.tif 000189
【０６７６】
実施例４２：ヒトＳＴＡＴ３を標的とするＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの粘度の測定
実施例６−１０に記載した研究から選択されたアンチセンスオリゴヌクレオチドの粘度を、４０ｃＰより大きい粘度を有する選別されたアンチセンスヌクレオチドの援助により測定した。４０ｃＰより大きい粘度を有するオリゴヌクレオチドは、いずれもの対象に投与するために高すぎる粘度であるものである。
【０６７７】
ＩＳＩＳオリゴヌクレオチド（３２−３５ｍｇ）を、ガラスバイアル中に秤量し、１２０μＬの水を加え、そしてアンチセンスオリゴヌクレオチドを、バイアルを５０℃に加熱することによって溶液中に溶解した。予熱された試料の一部（７５μＬ）を、マイクロ粘度計（Ｃａｎｂｒｉｄｇｅ）にピペットで入れた。マイクロ粘度計の温度を、２５℃に設定し、そして試料の粘度を測定した。予熱試料のもう一つの一部（２０μＬ）を、８５℃で２６０ｎＭにおけるＵＶ読取り（Ｃａｒｙ  ＵＶ装置）のために１０ｍＬの水中にピペットで入れた。結果を表６１に示し、そして全てのアンチセンスオリゴヌクレオチド溶液が、先に記述した基準下でその粘度において最適であることを示す。
【０６７８】
【表６１】
0005943993.tif 000190
【０６７９】
実施例４３：カニクイザルにおけるヒトＳＴＡＴ３を標的とするＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドの影響
高いレベルの効力を示す９種のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、カニクイザルにおいて更に試験した。肝臓及び腎臓におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの許容性及び薬物動態学的特性を評価した。
【０６８０】
研究を、Ｋｏｒｅａ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，Ｒｅｐｕｂｌｉｃ  ｏｆ  Ｋｏｒｅａにおいて行った。研究に先立ち、サルを３０日の時間検疫所に維持し、この間、血清化学及び血液学の標準的項目（ｐａｎｅｌ）、卵及び寄生虫に対する糞便試料の検査、並びに結核試験を、異常な又は病気のサルを選別するために行った。それぞれ４匹の無作為に割当てられたオスのカニクイザルの九つの群に、２５ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳアンチセンスオリゴヌクレオチドを、最初の週は週当たり３回、そしてその後、次の７週間、毎週２回皮下注射した。対照群の４匹のカニクイザルに、ＰＢＳを、最初の週は週当たり３回、そしてその後、次の７週間は毎週２回皮下注射した。全ての群の終末犠牲を、最後の投与の４８時間後である５５日目に行った。
【０６８１】
研究の期間中、サルを、病気又は窮迫の徴候に対して毎日観察した。治療に対して不都合な影響を示すいずれものサルは、排除され、そして獣医師及び研究医に照会された。
【０６８２】
サルの全体的健康状態に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、脾臓  心臓、腎臓、肝臓、及び胆嚢の重量を、５５日目に測定した。器官の重量を測定し、そして治療群の重量を、対応するＰＢＳ対照の重量と比較した。
【０６８３】
肝臓及び腎臓機能に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、血液試料を、全ての研究群から収集した。サルを、血液収集に先立って、一晩絶食させた。概略１ｍＬのそれぞれの血液試料を、血清の分離のために、抗凝集剤を伴わずに試験管中に収集した。試験管を室温で９０分間維持し、そして次いで血清を得るために遠心（３０００ｒｐｍで室温で１０分間）した。トランスアミナーゼの濃度を、Ｔｏｓｈｉｂａ  ２００ＦＲ  ＮＥＯ化学分析器（Ｔｏｓｈｉｂａ  Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）を使用して測定した。ＡＬＴ（アラニントランスアミナーゼ）、ＡＳＴ（アスパルテートトランスアミナーゼ）、及びＢＵＮの血漿濃度を、５５日目に測定した。肝臓で合成され、そして炎症のマーカーとして役立つＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）も、更に５５日目に同様に測定した。
【０６８４】
炎症に関係する因子に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、血液を、補体Ｃ３レベル、ＭＩＰ−１βサイトカインレベル、及び血小板数の分析のために、５５日目に全ての動物から収集した。
【０６８５】
補体Ｃ３の分析のために、それぞれ概略０．５ｍＬの血液試料を、血清分離のために抗凝固剤を伴わずに試験管に収集した。サイトカインレベルの分析のために、それぞれ概略２ｍＬの血液試料を、血清分離のために抗凝固剤を伴わずに試験管に収集した。試験管を、室温で９０分間維持し、そして次いで血清を得るために遠心（３０００ｒｐｍで室温で１０分間）した。補体Ｃ３を、自動化分析器（Ｔｏｓｈｉｂａ  ２００ＦＲ  ＮＥＯ化学分析器、Ｔｏｓｈｉｂａ  Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）を使用して測定した。血清を、９列（ｎｉｎｅ−ｐａｎｅｌ）のＳｅａｒｃｈｌｉｇｈｔ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  Ａｒｒａｙを使用するサイトカイン分析のために使用した。
【０６８６】
血小板計数のために、それぞれ概略０．５ｍＬの血液試料を、ＥＤＴＡのカリウム塩を含有する試験管に収集した。試料を、ＡＤＶＩＡ１２０血液学的分析器（Ｂａｙｅｒ，  ＵＳＡ）を使用する血小板計数のために分析した。
【０６８７】
オリゴヌクレオチドの濃度を、５５日目に肝臓及び腎臓で測定した。使用した方法は、以前に刊行された方法（Ｌｅｅｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ｇｅａｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）の改良であり、これは、フェノール−クロロホルム（液−液）抽出、それに続く固相抽出を含む。内部標準（ＩＳＩＳ３５５８６８、本明細書中で配列番号：２７５８と命名された、２７塩基長の２’−Ｏ−メトキシエチルで修飾されたホスホロチオエートオリゴヌクレオリド、ＧＣＧＴＴＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＴＴＴ）を、抽出に先立ち加えた。組織試料の濃度を、概略１．１４μｇ／ｇの定量化下限（ＬＬＯＱ）の較正曲線を使用して計算した。
【０６８８】
試験された９種のアンチセンスオリゴヌクレオチド中で、ＩＳＩＳ４５５２６９、ＩＳＩＳ４５５３７１、ＩＳＩＳ４５５４２９、及びＩＳＩＳ４５５６７０を含むある種のアンチセンスオリゴヌクレオチドが、器官重量、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＢＵＮ、及び血液学的パラメーターのための許容閾値に合致した。
【０６８９】
実施例４４：ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞中のアンチセンスオリゴヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
実施例１２に記載した研究からのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞中で異なった投与量で更に試験した。細胞を、ウェル当たり４，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、いずれもの形質移入試薬を使用せずに、表６２に規定するように、０．０２μＭ、０．２０μＭ、１．００μＭ、５．００μＭ、及び１０．００μＭの濃度のアンチセンスヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。本明細書中で先に記載した、ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されたような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）も、更に表６２に示す。
【０６９０】
【表６２】
0005943993.tif 000191
【０６９１】
実施例４５：Ｕ２５１−ＭＧ細胞中のアンチセンスオリゴヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
実施例１２に記載した研究からのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、Ｕ２５１−ＭＧ細胞中で異なった投与量で更に試験した。細胞を、ウェル当たり４，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、いずれもの形質移入試薬を使用せずに、表６３に規定するように、０．１μＭ、１．０μＭ、５．０μＭ、１０．０μＭ、及び２０．０μＭの濃度のアンチセンスヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。本明細書中で先に記載した、ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されたような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）も、更に表６３に示す。
【０６９２】
【表６３】
0005943993.tif 000192
【０６９３】
実施例４６：Ａ４３１細胞中のアンチセンスオリゴヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
実施例１２に記載した研究からのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、Ａ４３１細胞中で異なった投与量で更に試験した。細胞を、ウェル当たり４，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、いずれもの形質移入試薬を使用せずに、表６４に規定するように、０．０２μＭ、０．２μＭ、１．０μＭ、５．０μＭ、及び１０．０μＭの濃度のアンチセンスヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。本明細書中で先に記載した、ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されたような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０６９４】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）も、更に表６４に示す。表６４に例示するように、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドは、細胞膜を透過することが可能であり、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡのレベルを、用量依存的様式で有意に減少した。
【０６９５】
【表６４】
0005943993.tif 000193
【０６９６】
実施例４７：Ｈ４６０細胞中のアンチセンスオリゴヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
実施例１２に記載した研究からのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドを、Ｈ４６０細胞中で異なった投与量で更に試験した。細胞を、ウェル当たり４，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、いずれもの形質移入試薬を使用せずに、表６５に規定するように、０．０２μＭ、０．２０μＭ、１．００μＭ、５．００μＭ、及び１０．００μＭの濃度のアンチセンスヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間の後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。本明細書中で先に記載した、ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ１９９を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定されたような全ＲＮＡ含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０６９７】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）も、更に表６５に示す。表６５に例示するように、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドは、細胞膜を透過することが可能であり、そしてＳＴＡＴ３のｍＲＮＡのレベルを、用量依存的様式で有意に減少した。
【０６９８】
【表６５】
0005943993.tif 000194
【０６９９】
実施例４８：Ｕ２５１ヒト神経膠腫癌の異種移植モデルの治療におけるＳＴＡＴ３を標的とするＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの効果
ヒトＵ２５１神経膠腫腫瘍細胞を接種されたＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、実施例１２に記載した研究からのＩＳＩＳオリゴヌクレオチドで治療した。マウスにおける腫瘍成長に対する治療の効果を評価する。
【０７００】
治療
ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスに、１×１０６個の腫瘍細胞を、皮下に移植した。移植の４日目、それぞれ４匹のマウスの複数の群に、３週間半、毎週５回腹腔内に注射される５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４５５２６９、ＩＳＩＳ４５５２９１、ＩＳＩＳ４５５３７１、ＩＳＩＳ４５５７０３、ＩＳＩＳ４５５４２９、ＩＳＩＳ４６５２３７、ＩＳＩＳ４６５７５４、ＩＳＩＳ４６５８３０、又はＩＳＩＳ４６６６７０を投与した。マウスの一つの群に、３週間半、毎週５回腹腔内に注射される５０ｍｇ／ｋｇの対照オリゴヌクレオチド、ＩＳＩＳ１４１９２３を投与した。マウスの一つの群に、３週間半、毎週５回腹腔内に注射されるＰＢＳを投与した。
【０７０１】
腫瘍成長に対する影響
腫瘍の大きさを、ノギスを使用して二つの寸法で毎週２回測定し、そして腫瘍体積を、式：Ｖ＝０．５×ａ×ｂ２を使用して計算し、式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長径及び短径である。結果を表６６に示す。データは、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドによる治療が、腫瘍の成長を有意に妨害することを示す。‘ｎ／ａ’は、その時点でデータ点が入手不可能であったことを示す。
【０７０２】
【表６６】
0005943993.tif 000195
【０７０３】
実施例４９：ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト乳癌の異種移植モデルの治療におけるＳＴＡＴ３を標的とするＩＳＩＳ４５５２９１の効果
ヒト乳癌細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１を接種されたＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、ＩＳＩＳ４５５２９１で治療した。マウスにおける腫瘍成長に対する治療の効果及び許容性を評価した。
【０７０４】
治療
研究を、Ｐｈａｒｍａｒｏｎ  Ｉｎｃ（Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）で行った。ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、Ｂｅｉｊｉｎｇ  ＨＦＫ  Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から得た。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト乳癌細胞を、１０％の熱不活化胎児ウシ血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、及び２ｍＭのＬ−グルタミンで補充されたＬｅｉｂｏｖｉｔｚ’ｓ  Ｌ−１５培地中で単層培養物としてｉｎ  ｖｉｔｒｏで維持した。細胞を、空気中の５％ＣＯ２の雰囲気中で３７℃で維持した。腫瘍細胞を、トリプシン−ＥＤＴＡ処理を伴って週２回ルーチン的に継代培養した。指数増殖期で増殖中の細胞を回収し、そして腫瘍接種のために計数した。
【０７０５】
それぞれ８匹の無作為に割当てられた生後６−８週間のメスのＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの二つの群に、腫瘍発生のためにＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍の断片（腫瘍接種継代から産生された３ｍｍ×２ｍｍ×２ｍｍ）を右側腹に接種した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの治療を、平均の腫瘍の大きさが概略１００ｍｍ３に達した、腫瘍接種後１１日目に開始した。一つの群に、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４５５２９１を３週間、毎週２回で腹腔内に注射した。他の群のマウスに、ＰＢＳを３週間、毎週２回腹腔内に注射し、そして対照群として役立てた。
【０７０６】
動物の取扱い、管理、及び治療の関する全ての方法は、施設内動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって認可された指針に従って行った。ルーチンのモニターの時点で、マウスを、可動性、食物消費、体重変化、及びいずれもの他の異常な影響のような正常な行動に対する腫瘍の成長のいずれもの影響を検査した。
【０７０７】
ＲＮＡ分析
ＲＮＡを、本明細書中に記載したプライマープローブセットＲＴＳ１９９を使用する、ヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルのリアルタイムＰＣＲ分析のために、腫瘍組織から抽出した。マウスのＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルも、更にプライマープローブセットｍＳＴＡＴ３＿ＬＴＳ００６６４（順方向配列ＣＧＡＣＡＧＣＴＴＣＣＣＣＡＴＧＧＡ、本明細書中で配列番号：１５１３と命名；逆方向配列ＡＴＧＣＣＣＡＧＴＣＴＴＧＡＣＴＣＴＣＡＡＴＣ、本明細書中で配列番号：１５１４と命名；プローブ配列ＣＴＧＣＧＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＧＣＡＣＣＴＴ、本明細書中で配列番号：１５１５と命名）を使用して測定した。結果を、ＰＢＳ対照に対する、シクロフィリンに対して正規化されたＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。表６７に示すように、ＩＳＩＳ４５５２９１による治療は、ＰＢＳ対照と比較して、ヒト及びマウスのＳＴＡＴ３のｍＲＮＡの両方の減少をもたらした。
【０７０８】
【表６７】
0005943993.tif 000196
【０７０９】
腫瘍成長に対する影響
腫瘍の大きさを、週２回、ノギスを使用して二つの寸法で測定し、そして腫瘍の体積を、式：Ｖ＝０．５３６×ａ×ｂ２を使用して計算し、式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長径及び短径である。腫瘍の大きさは、Ｔ−Ｃ及びＴＶ／ＣＶ値の計算のために使用した。Ｔ−Ｃは、Ｔを治療群の腫瘍が所定の大きさ（９００ｍｍ３）に達するために必要な中位時間（日数）とし、そしてＣを対照群の腫瘍が同じ大きさに達するための中位時間（日数）として計算した。ＴＶ／ＣＶ値（パーセントとして表示）は、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの抗腫瘍有効性の表示であり、ここで、ＴＶ及びＣＶは、所定の日（３２日目）における治療及び対照群のそれぞれの平均体積であった。
【０７１０】
結果を表６８及び６９に示す。データは、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡの阻害が、腫瘍の成長を有意に妨害したことを示す。
【０７１１】
【表６８】
0005943993.tif 000197
【０７１２】
【表６９】
0005943993.tif 000198
【０７１３】
体重の測定
動物の全体的健康状態に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、体重を、治療期間中定期的に測定した。データを表７０に提示し、そしてＩＳＩＳ４５５２９１による治療が、マウスの全体的体重に影響しないことを示す。
【０７１４】
【表７０】
0005943993.tif 000199
【０７１５】
実施例５０：Ａ４３１ヒト類表皮癌の異種移植モデルの治療におけるＳＴＳＴ３を標的とするＩＳＩＳ４５５２９１の効果
ヒト類表皮癌細胞Ａ４３１を接種されたＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、ＩＳＩＳ４５５２９１で治療した。マウスにおける腫瘍成長に対する治療の効果及び許容性を評価した。
【０７１６】
治療
研究を、Ｐｈａｒｍａｒｏｎ  Ｉｎｃ（Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）で行った。ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、Ｂｅｉｊｉｎｇ  ＨＦＫ  Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から得た。Ａ４３１ヒト類表皮癌細胞を、１０％の熱不活化胎児ウシ血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、及び２ｍＭのＬ−グルタミンで補充されたＤＭＥＭ培地中で単層培養物としてｉｎ  ｖｉｔｒｏで維持した。細胞を、空気中の５％ＣＯ２の雰囲気中で３７℃で維持した。腫瘍細胞を、トリプシン−ＥＤＴＡ処理を伴って週２回ルーチン的に継代培養した。指数増殖期で増殖中の細胞を回収し、そして腫瘍接種のために計数した。
【０７１７】
それぞれ８匹の無作為に割当てられた生後６−８週間のメスのＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの二つの群に、腫瘍発生のために５×１０６個のＡ４３１腫瘍細胞を皮下に接種した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの治療を、平均の腫瘍の大きさが概略９５ｍｍ３に達した、腫瘍接種後８日目に開始した。一つの群に、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４５５２９１を４週間、毎週２回で腹腔内に注射した。他の群のマウスに、ＰＢＳを３週間、毎週２回腹腔内に注射し、そして対照群として役立てた。
【０７１８】
動物の取扱い、管理、及び治療の関する全ての方法は、施設内動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって認可された指針に従って行った。ルーチンのモニターの時点で、マウスを、可動性、食物消費、体重変化、及びいずれもの他の異常な影響のような正常な行動に対する腫瘍の成長のいずれもの影響を検査した。
【０７１９】
ＲＮＡ分析
ＲＮＡを、本明細書中に記載したプライマープローブセットＲＴＳ１９９を使用する、ヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルのリアルタイムＰＣＲ分析のために、腫瘍組織から抽出した。マウスのＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルも、更にプライマープローブセットｍＳＴＡＴ３＿ＬＴＳ００６６４を使用して測定した。結果を、ＰＢＳ対照に対する、シクロフィリンに対して正規化されたＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。表７１に示すように、ＩＳＩＳ４５５２９１による治療は、ＰＢＳ対照と比較して、ヒト及びマウスのＳＴＡＴ３のｍＲＮＡの両方の減少をもたらした。
【０７２０】
【表７１】
0005943993.tif 000200
【０７２１】
腫瘍成長に対する影響
腫瘍の大きさを、週２回、ノギスを使用して二つの寸法で測定し、そして腫瘍の体積を、式：Ｖ＝０．５×ａ×ｂ２を使用して計算し、式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長径及び短径である。腫瘍の大きさは、Ｔ−Ｃ及びＴＶ／ＣＶ値の計算のために使用した。Ｔ−Ｃは、Ｔを治療群の腫瘍が所定の大きさ（８００ｍｍ３）に達するために必要な中位時間（日数）とし、そしてＣを対照群の腫瘍が同じ大きさに達するための中位時間（日数）として計算した。ＴＶ／ＣＶ値（パーセントとして表示）は、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの抗腫瘍有効性の表示であり、ここで、ＴＶ及びＣＶは、所定の日（３３日目）における治療及び対照群のそれぞれの平均体積であった。
【０７２２】
結果を表７２及び７３に示す。データは、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡの阻害が、腫瘍の成長を妨害したことを示す。
【０７２３】
【表７２】
0005943993.tif 000201
【０７２４】
【表７３】
0005943993.tif 000202
【０７２５】
体重の測定
動物の全体的健康状態に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、体重を、治療期間中定期的に測定した。データを表７４に提示し、そしてＩＳＩＳ４５５２９１による治療が、マウスの全体的体重に影響しないことを示す。
【０７２６】
【表７４】
0005943993.tif 000203
【０７２７】
実施例５１：ＮＣＩ−Ｈ４６０ヒト非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の異種移植モデルの治療におけるＳＴＳＴ３を標的とするＩＳＩＳ４５５２９１の効果
ヒトＮＣＩ−４６０ヒトＮＳＣＬＣを接種されたＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、ＩＳＩＳ４５５２９１で治療した。マウスにおける腫瘍成長に対する治療の効果及び許容性を評価した。
【０７２８】
治療
研究を、Ｐｈａｒｍａｒｏｎ  Ｉｎｃ（Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）で行った。ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスを、Ｂｅｉｊｉｎｇ  ＨＦＫ  Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から得た。ＮＣＩ−Ｈ４６４ヒトＮＳＣＬＣ細胞を、１０％の熱不活化胎児ウシ血清、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、及び２ｍＭのＬ−グルタミンで補充されたＲＰＭＩ−１６４０培地中で単層培養物としてｉｎ  ｖｉｔｒｏで維持した。細胞を、空気中の５％ＣＯ２の雰囲気中で３７℃で維持した。腫瘍細胞を、トリプシン−ＥＤＴＡ処理を伴って週２回ルーチン的に継代培養した。指数増殖期で増殖中の細胞を回収し、そして腫瘍接種のために計数した。
【０７２９】
それぞれ８匹の無作為に割当てられた生後６−８週間のメスのＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの二つの群に、腫瘍発生のために２×１０６個のＮＣＩ−Ｈ４６０腫瘍細胞を皮下に接種した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの治療を、平均の腫瘍の大きさが概略１００ｍｍ３に達した、腫瘍接種後６日目に開始した。一つの群に、５０ｍｇ／ｋｇのＩＳＩＳ４５５２９１を３週間、毎週２回で腹腔内に注射した。他の群のマウスに、ＰＢＳを３週間、毎週２回腹腔内に注射し、そして対照群として役立てた。
【０７３０】
動物の取扱い、管理、及び治療の関する全ての方法は、施設内動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって認可された指針に従って行った。ルーチンのモニターの時点で、マウスを、可動性、食物消費、体重変化、及びいずれもの他の異常な影響のような正常な行動に対する腫瘍の成長のいずれもの影響を検査した。
【０７３１】
腫瘍成長に対する影響
腫瘍の大きさを、週２回、ノギスを使用して二つの寸法で測定し、そして腫瘍の体積を、式：Ｖ＝０．５×ａ×ｂ２を使用して計算し、式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長径及び短径である。腫瘍の大きさは、Ｔ−Ｃ及びＴＶ／ＣＶ値の計算のために使用した。Ｔ−Ｃは、Ｔを治療群の腫瘍が所定の大きさ（１，５００ｍｍ３）に達するために必要な中位時間（日数）とし、そしてＣを対照群の腫瘍が同じ大きさに達するための中位時間（日数）として計算した。ＴＶ／ＣＶ値（パーセントとして表示）は、ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの抗腫瘍有効性の表示であり、ここで、ＴＶ及びＣＶは、所定の日（２０日目）における治療及び対照群のそれぞれの平均体積であった。
【０７３２】
結果を表７５及び７６に示す。データは、ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡの阻害が、腫瘍の成長を有意に妨害したことを示す。
【０７３３】
【表７５】
0005943993.tif 000204
【０７３４】
【表７６】
0005943993.tif 000205
【０７３５】
体重の測定
動物の全体的健康状態に対するＩＳＩＳオリゴヌクレオチドの影響を評価するために、体重を、治療期間中定期的に測定した。データを表７７に提示し、そしてＩＳＩＳ４５５２９１による治療が、マウスの全体的体重に影響しないことを示す。
【０７３６】
【表７７】
0005943993.tif 000206
【０７３７】
実施例５２：ヒト神経膠芽腫の同所性マウスモデルにおけるヒトＳＴＡＴ３のアンチセンス阻害の効果
ヒト神経膠芽腫細胞で同所性に移植されたＮＵ／Ｊマウスを、ＣＡＧＣＡＧＡＴＣＡＡＧＴＣＣＡＧＧＧＡ（配列番号：１５９０  の配列を有する５−１０−５ギャップマーのＩＳＩＳ４５５２９１で治療した。マウスにおける腫瘍の成長に対する器量の効果及び許容性を評価した。
【０７３８】
治療
３０匹のＮＵ／Ｊマウスに、５×１０５個のＵ−８７ＭＧ−ｌｕｃ２細胞を右前頭葉に定位的に移植した。腫瘍細胞移植後の１５日目に、これらの１５匹のマウスに、２μＬのＰＢＳ中に溶解された１００μｇのＩＳＩＳ４５５２９１を腫瘍移植の部位にボーラス注射で頭蓋内投与した。残りの１５匹のマウスに、２μＬのＰＢＳを腫瘍移植の部位にボーラス注射で頭蓋内投与した。
【０７３９】
解析
腫瘍移植後の１８日目に、それぞれの群からの５匹のマウスを、ＣＯ２吸入によって安楽死させ、そして脳の試料をＲＮＡ分析のために収集した。ＲＮＡを、本明細書中で先に記載したプライマープローブセットＲＴＳ１９９を使用するヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルのリアルタイムＰＣＲ分析のために、腫瘍組織から抽出した。ＩＳＩＳ４５５２９１による治療は、ＰＢＳ対照と比較して、腫瘍細胞中のヒトＳＴＡＴ３のｍＲＮＡの２７％の減少をもたらした。
【０７４０】
それぞれの群の残りのマウスを、生存期間解析のために２週目まで定期的にモニターした。ＰＢＳ対照群の生存期間中央値は、３０．５日であった。ＩＳＩＳオリゴヌクレオチドで治療したマウスの生存期間中央値は、３５日であった。Ｐ値は、０．２０８８であった。
【０７４１】
実施例５３：ＰＣ９細胞中のアンチセンスオリゴヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
先に記載した研究からのＩＳＩＳ４５５７０３及びＩＳＩＳ４５５２９１を、非小細胞肺癌細胞株のＰＣ９細胞中で異なった投与量で更に試験した。細胞を、ウェル当たり３，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、表７８に規定したように０．０２μＭ、０．１μＭ、０．５μＭ、２．５μＭ、及び１０．０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＳＴ３のｍＲＮＡレベルを、定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ２０３３（順方向配列ＧＡＧＧＣＣＣＧＣＣＣＡＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２０と命名；逆方向配列ＴＴＣＴＧＣＴＡＡＴＧＡＣＧＴＴＡＴＣＣＡＧＴＴＴＴ、本明細書中で配列番号：１５２１と命名；プローブ配列ＣＴＧＣＣＴＡＧＡＴＣＧＧＣ、本明細書中で配列番号：１５２２と命名）をｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ヒトのプライマープローブセットＨＴＳ５００２（順方向配列ＣＧＧＡＣＴＡＴＧＡＣＴＴＡＧＴＴＧＣＧＴＴＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２９と命名；逆方向配列ＧＣＣＡＴＧＣＣＡＡＴＣＴＣＡＴＣＴＴＧＴ、本明細書中で配列番号：１５３０と命名；プローブ配列ＣＣＴＴＴＣＴＴＧＡＣＡＡＡＡＣＣＴＡＡＣＴＴＧＣＧＣＡＧＡ、本明細書中で配列番号：１５３１と命名）によって測定されるようなハウスキーピング遺伝子のベータアクチンの含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０７４２】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）も、更に表７８に示す。表７８に例示するように、ＩＳＩＳ４５５７０３及びＩＳＩＳ４５５２９１は、細胞膜に浸透することが可能である。
【０７４３】
【表７８】
0005943993.tif 000207
【０７４４】
実施例５４：Ｃ４２Ｂ細胞中のアンチセンスオリゴヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
先に記載した研究からのＩＳＩＳ４５５２９１を、更に前立腺癌細胞株のＣ４２Ｂ細胞中で異なった投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり３，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、表７９に規定したように０．０２μＭ、０．１μＭ、０．５μＭ、２．５μＭ、及び１０．０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＳＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ２０３３（順方向配列ＧＡＧＧＣＣＣＧＣＣＣＡＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２０と命名；逆方向配列ＴＴＣＴＧＣＴＡＡＴＧＡＣＧＴＴＡＴＣＣＡＧＴＴＴＴ、本明細書中で配列番号：１５２１と命名；プローブ配列ＣＴＧＣＣＴＡＧＡＴＣＧＧＣ、本明細書中で配列番号：１５２２と命名）を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ヒトのプライマープローブセットＨＴＳ５００２（順方向配列ＣＧＧＡＣＴＡＴＧＡＣＴＴＡＧＴＴＧＣＧＴＴＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２９と命名；逆方向配列ＧＣＣＡＴＧＣＣＡＡＴＣＴＣＡＴＣＴＴＧＴ、本明細書中で配列番号：１５３０と命名；プローブ配列ＣＣＴＴＴＣＴＴＧＡＣＡＡＡＡＣＣＴＡＡＣＴＴＧＣＧＣＡＧＡ、本明細書中で配列番号：１５３１と命名）によって測定されるようなハウスキーピング遺伝子のベータアクチンの含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０７４５】
表７９に例示するように、ＩＳＩＳ４５５２９１は、細胞膜に浸透することが可能である。
【０７４６】
【表７９】
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【０７４７】
実施例５５：Ｃｏｌｏ２０１細胞中のアンチセンスオリゴヌクレオチドの自由取込み後のＳＴＡＴ３の用量依存的アンチセンス阻害
先に記載した研究からのＩＳＩＳ４５５２９１を、更に大腸直腸癌細胞株のＣｏｌｏ２０１細胞中で異なった投与量で試験した。細胞を、ウェル当たり３，０００個の細胞の密度でプレートに入れた。細胞を、表８０に規定したように０．０２μＭ、０．１μＭ、０．５μＭ、２．５μＭ、及び１０．０μＭの濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドと共にインキュベートした。概略２４時間後、ＲＮＡを細胞から単離し、そしてＳＴＳＴ３のｍＲＮＡレベルを定量的リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトＳＴＡＴ３のプライマープローブセットＲＴＳ２０３３（順方向配列ＧＡＧＧＣＣＣＧＣＣＣＡＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２０と命名；逆方向配列ＴＴＣＴＧＣＴＡＡＴＧＡＣＧＴＴＡＴＣＣＡＧＴＴＴＴ、本明細書中で配列番号：１５２１と命名；プローブ配列ＣＴＧＣＣＴＡＧＡＴＣＧＧＣ、本明細書中で配列番号：１５２２と命名）を、ｍＲＮＡレベルを測定するために使用した。ＳＴＡＴ３のｍＲＮＡレベルを、ヒトのプライマープローブセットＨＴＳ５００２（順方向配列ＣＧＧＡＣＴＡＴＧＡＣＴＴＡＧＴＴＧＣＧＴＴＡＣＡ、本明細書中で配列番号：１５２９と命名；逆方向配列ＧＣＣＡＴＧＣＣＡＡＴＣＴＣＡＴＣＴＴＧＴ、本明細書中で配列番号：１５３０と命名；プローブ配列ＣＣＴＴＴＣＴＴＧＡＣＡＡＡＡＣＣＴＡＡＣＴＴＧＣＧＣＡＧＡ、本明細書中で配列番号：１５３１と命名）によって測定されるようなハウスキーピング遺伝子のベータアクチンの含有量によって調節した。結果を、非治療の対照細胞に対するＳＴＡＴ３の阻害のパーセントとして示す。
【０７４８】
それぞれのオリゴヌクレオチドの最大半量阻害濃度（ＩＣ５０）も、更に表８０に示す。表２９に例示するように、ＩＳＩＳ４５５２９１は、細胞膜に浸透することが可能である。
【０７４９】
【表８０】
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