(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５インスリン化合物コンジュゲートと、１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の希釈剤と、１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤と、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤から成る群から選択される少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含み、
前記滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウムであり、
前記ＩＮ−１０５は、インスリンＢ鎖のＢ２９位のε−アミノ酸リジンで構造式ＣＨ３Ｏ−（Ｃ４Ｈ２Ｏ）３−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨの両親媒性オリゴマーとコンジュゲートしたインスリン分子である、
ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物。
【請求項２】
前記脂肪酸の構成成分が、カプリン酸及び／又はラウリン酸又はそれらの塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記脂肪酸がカプリン酸ナトリウムである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記結合剤が、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、デンプン、ゼラチン、糖、天然ガム、合成ガム、及びそれらの組合せから成る群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記結合剤がポリビニルピロリドンである、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記希釈剤が、カルシウム塩、セルロース、セルロース誘導体、パラチノース、有機酸、糖、糖アルコール、ペクチン酸塩、及びそれらの組合せから成る群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記希釈剤がマンニトールである、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記崩壊剤が、架橋ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、カチオン交換樹脂、アルギン酸、グァーガム、及びそれらの組合せから成る群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記透過促進剤が、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリン酸ナトリウム、パルミトイルカルニチン、ホスファチジルコリン、シクロデキストリン、シクロデキストリン誘導体、カルニチン、カルニチン誘導体、粘膜付着性ポリマー、閉鎖帯毒素（zonula occludings toxin）、胆汁酸塩、脂肪酸、及びそれらの組合せから成る群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記可塑剤が、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、クエン酸アセチル、トリアセチン、アセチル化モノグリセリド、菜種油、オリーブ油、ゴマ油、クエン酸アセチルトリエチル、グリセリン、ソルビトール、シュウ酸ジエチル、リンゴ酸ジエチル、フマル酸ジエチル、コハク酸ジブチル、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、セバシン酸ジブチル、クエン酸トリエチル、クエン酸トリブチル、三酪酸グリセロール、三酢酸グリセリル、及びそれらの混合物から成る群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記経口剤形が、錠剤、カプセル、粒子、粉末又はサッシェ（ｓａｃｈｅｔ）又は乾燥懸濁物の形態である、請求項１に記載の経口投与可能な医薬組成物。
【請求項１２】
０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５インスリン化合物コンジュゲートと、１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤及び０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤から成る群から選択される少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤と、を含み、
前記滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウムであり、
前記ＩＮ−１０５は、インスリンＢ鎖のＢ２９位のε−アミノ酸リジンで構造式ＣＨ３Ｏ−（Ｃ４Ｈ２Ｏ）３−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨの両親媒性オリゴマーとコンジュゲートしたインスリン分子である、ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物を製造するプロセスであって、
ａ．好適な飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩を粉砕する工程と、
ｂ．工程（ａ）から得られた脂肪酸を有機溶媒を用いて造粒する工程と、
ｃ．工程（ｂ）から得られた顆粒を風乾させる工程と、
ｄ．メッシュを通して乾燥顆粒を削り、所望の粒度の顆粒を得る、削る工程と、
ｅ．脂肪酸顆粒に対して、前記ＩＮ−１０５インスリン化合物コンジュゲートを前記希釈剤、前記崩壊剤、前記滑沢剤及び任意選択で前記少なくとも１つの賦形剤と共に配合する工程と、
ｆ．配合した混合物を圧縮して、錠剤を形成する、圧縮する工程と、
を含む、プロセス。
【請求項１３】
使用する前記有機溶媒が、イソプロパノール、アセトン、メチルアルコール、メチルイソブチルケトン、クロロホルム、１−プロパノール、２−プロパノール、アセトニトリル、１−ブタノール、２−ブタノール、エチルアルコール、シクロヘキサン、ジオキサン、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド、ジクロロエタン、ヘキサン、イソオクタン、塩化メチレン、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、トルエン、四塩化炭素、及びそれらの組合せから成る群から選択される、請求項１２に記載のプロセス。
【請求項１４】
請求項１に記載のＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物の５ｍｇ〜５００ｍｇ錠剤。
【請求項１５】
請求項１に記載のＩＮ−１０５の安定で経口投与可能な固形医薬組成物であって、
ａ．２℃〜４０℃の温度範囲；及び
ｂ．少なくとも６ヶ月の期間にわたる２５℃±２℃／６０％±５％相対湿度（ＲＨ）、３０℃±２℃／６５％±５％相対湿度、４０℃±２℃／７５％±５％相対湿度を含む群から選択される条件への曝露に対して安定を保つことを特徴とする、固形医薬組成物。
【請求項１６】
不純物が、製造時の不純物レベルと比較した場合に５％を超えて増加しないことを特徴とする、請求項１５に記載の安定で経口投与可能な固形医薬組成物。
【請求項１７】
不純物が、製造時の不純物レベルと比較した場合に１０％を超えて増加しないことを特徴とする、請求項１５に記載の安定で経口投与可能な固形医薬組成物。
【請求項１８】
前記組成物中の化合物のアッセイが、１０％を超えて減少しないことを特徴とする、請求項１５に記載の安定で経口投与可能な医薬組成物。
【請求項１９】
溶出プロファイルが、任意の時間間隔で少なくとも７５％であることを特徴とする、請求項１５に記載の安定で経口投与可能な固形医薬組成物。
【請求項２０】
前記時間間隔が２年を上回る期間に及ぶ、請求項１９に記載の安定で経口投与可能な固形医薬組成物。
【請求項２１】
硬度プロファイルの差が、製造時の硬度プロファイルと比較した場合に１ｋｇ／ｃｍ２以下であることを特徴とする、請求項１５に記載の安定で経口投与可能な固形医薬組成物。
【請求項２２】
前記組成物の少なくとも９５％±２％が、
（ａ）２℃〜８℃又は２５℃〜４０℃の温度範囲
（ｂ）少なくとも６ヶ月の期間にわたる２５℃±２℃／６０％±５％相対湿度（ＲＨ）、３０℃±２℃／６５％±５％相対湿度、４０℃±２℃／７５％±５％相対湿度を含む群から選択される条件への曝露に対して分解されずに残存することを特徴とする、請求項１５に記載の安定で経口投与可能な固形医薬組成物。
【請求項２３】
前記組成物の少なくとも９０％±２％が、
ａ．２℃〜８℃又は２５℃〜４０℃の温度範囲
ｂ．少なくとも６ヶ月の期間にわたる２５℃±２℃／６０％±５％相対湿度（ＲＨ）、３０℃±２℃／６５％±５％相対湿度、４０℃±２℃／７５％±５％相対湿度を含む群から選択される条件への曝露に対して分解されずに残存することを特徴とする、請求項１５に記載の安定で経口投与可能な固形医薬組成物。
【請求項２４】
０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５インスリン化合物コンジュゲートと、１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤、及び任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤から成る群から選択される少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含み、
前記滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウムであり、
前記ＩＮ−１０５は、インスリンＢ鎖のＢ２９位のε−アミノ酸リジンで構造式ＣＨ３Ｏ−（Ｃ４Ｈ２Ｏ）３−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨの両親媒性オリゴマーとコンジュゲートしたインスリン分子である、非晶質噴霧乾燥粒子を含む請求項１に記載の固形医薬組成物を製造する方法であって、
ａ．溶媒中に前記ＩＮ−１０５インスリン化合物コンジュゲート及び前記飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩を含む溶液又は懸濁液を調製する工程と、
ｂ．前記溶媒の相当量を除去することができる条件下で、前記溶液をチャンバ内に噴霧して、前記ＩＮ−１０５インスリン化合物コンジュゲートの前記非晶質噴霧乾燥粒子を得る工程と、
ｃ．前記ＩＮ−１０５インスリン化合物コンジュゲートの前記非晶質噴霧乾燥粒子を前記希釈剤、前記崩壊剤、前記滑沢剤及び任意選択で前記少なくとも１つの賦形剤と混合する工程と、
ｄ．前記固形医薬組成物を形成する工程と、
を含む、方法。
【請求項２５】
前記脂肪酸の構成成分が、Ｃ４〜Ｃ１２脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩を含む群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記脂肪酸の構成成分がカプリン酸ナトリウムである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記溶媒が水である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
溶媒中に前記ＩＮ１０５及び脂肪酸構成成分を含む前記溶液又は前記懸濁液が、希釈剤をさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
前記希釈剤がマンニトールである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記噴霧乾燥粒子の大きさが１μ〜１００μである、請求項２４に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＩＮ１０５を含む前記溶液又は前記懸濁液を、８０℃〜１５０℃の範囲の温度で噴霧乾燥させる、請求項２４に記載の方法。
【請求項３２】
噴霧乾燥に用いる霧化圧の範囲が０．５ｋｇ／ｃｍ２〜１．５ｋｇ／ｃｍ２である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
ＩＮ１０５の前記噴霧乾燥組成物の純度が少なくとも９５％である、請求項２４乃至３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
ＩＮ１０５の前記噴霧乾燥組成物の純度が少なくとも９８％である、請求項２４乃至３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
ＩＮ１０５の前記噴霧乾燥組成物の純度が少なくとも９９％である、請求項２４乃至３４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イヌ及びヒトにおける糖尿病の効力モデルで望ましい薬物動態プロファイル及び効能を示す、タンパク質／ペプチド若しくはそれらのコンジュゲート及び／又はカチオン−インスリンコンジュゲート複合体を経口送達により摂取することができる、即席の（improvised：即放性の）医薬組成物に関する。好ましい製剤は、０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のインスリン、インスリン化合物コンジュゲート及び／又はカチオンインスリンコンジュゲート、１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の、飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩から選択される１つ又は複数の脂肪酸構成成分を含むと共に、難水溶性組成物の溶解度、溶出速度及び有効なバイオアベイラビリティを改善することができ、且つ製造時の拡張に応じてｉｎ  ｖｉｖｏでの放出プロファイルを一定化することができる、最適量の他の薬学的に好適なポリマー賦形剤をさらに含有する。本発明のさらなる一態様は、上述の製剤を製造するプロセスを特徴づける。
【背景技術】
【０００２】
インスリン投与の従来の皮下経路を、その生理的臨床活性を変えることのない経口薬物送達機構によって置き換えることについての研究がますます盛んになっている。生物学的巨大分子に対して有効な経口薬物送達系を設計する際に当該技術分野において立ちはだかる課題は主として、インスリンの酵素的分解の受け易さ及び上皮透過性の低さに関連している。また、インスリンの構造及び立体配座は、生物学的活性が喪失する製剤化条件及びプロセス条件に曝露されると、容易に変化する。これらの制限に対抗するアプローチの中には、インスリン類似体の使用、アミリン、グルカゴン様ペプチド、Ｃ−ペプチド等のペプチドの投与、吸入形態、鼻腔内形態を包含するものがあったが、これらはそれぞれ、バイオアベイラビリティの制限に満足に対処するものではなかった。
【０００３】
当該技術分野では、既存のコンジュゲートと比べてバイオアベイラビリティが増大しているか、又は他の医薬的特質が改善されている誘導体化インスリンコンジュゲートを含む薬学的に許容可能な複合体が必要とされている。さらに、これらの改善されたコンジュゲートは、タンパク質の経口送達の利益を最大化し易い、安定且つ即席の製剤の形態で送達される必要がある。本発明は、インスリン送達の制限に対処するために、バイオアベイラビリティが増大した改善されたインスリンコンジュゲートと、改善された製剤との複合アプローチを適用する。
【０００４】
インスリン化合物の例としては、ヒトインスリン、リスプロ（lyspro）インスリン、ｄｅｓ３０インスリン、天然のプロインスリン、人工のプロインスリン等が挙げられる。カチオン構成成分は、例えば、Ｚｎ＋＋、Ｍｎ＋＋、Ｃａ＋＋、Ｆｅ＋＋、Ｎｉ＋＋、Ｃｕ＋＋、Ｃｏ＋＋及びＭｇ＋＋から成る群から選択される二価金属カチオンであり得る。カチオン−インスリン化合物コンジュゲート複合体はまた、インスリン化合物コンジュゲートを与える、インスリン化合物と（例えば、共有結合又はイオン結合で）カップリングした修飾部分を含む。また修飾部分は、インスリン化合物コンジュゲートの溶解性が、対応する非コンジュゲートインスリン化合物と同等か、又はそれよりも大きくなるように選択されるが、亜鉛を加えると、インスリン化合物コンジュゲートの水溶性は減少する。複合体の水溶性は、インスリン化合物の水溶性よりも大きい。
【０００５】
組成物の製造において有用な、好適な修飾部分及びインスリンコンジュゲートの例は、特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献７、特許文献８、特許文献９、特許文献１０、特許文献１１、特許文献１２（これらの開示内容全体が参照により本明細書中に援用される）の中に見出すことができる。かかるカチオン−インスリン化合物コンジュゲート複合体のさらなる例は、特許文献１３、特許文献１４及び特許文献１５で与えられる。
【０００６】
既存の従来技術とは異なり、本発明の化合物は、分裂促進ポテンシャルが低減しており、これはＩｎｓｕｇｅｎ（登録商標）のほぼ３分の１である。
【０００７】
インスリンは、その同族である、インスリン受容体（ＩＲ）にナノモル以下の親和性で結合し、活性化する。インスリンは、構造的に連関したインスリン増殖因子受容体（ＩＧＦＲ）とも結合するが、その親和性はインスリン受容体の約１０００分の１である。したがって、生理的インスリン濃度では、ＩＧＦＲは全くインスリンの効果を媒介する役割を果たさない。しかしながら、非常に高いインスリン濃度（インスリンを投与される糖尿病患者）では、インスリン受容体（非特許文献１）よりも効率良く増殖刺激を伝播するＩＧＦＲを介した分裂促進効果が奏される。
【０００８】
早くから同定されている、アスパラギン酸Ｂ１０残基が修飾されたインスリン類似体の１つは、速効性のインスリン効果を与えることを狙いとしたが、この修飾はまた、その類似体の分裂促進性を顕著に増大させた［非特許文献２］。インスリン増殖因子−１（ＩＧＦ−１）受容体及びインスリン受容体に対する幾つかのインスリン類似体の結合を試験するために、或る試験を実施した。結合定数を測定し、試験されたインスリン類似体の代謝能及び分裂促進能と関連付けた［非特許文献３］。行われた試験の通り、通常のインスリンとの比較で、インスリンリスプロ、インスリンアスパルト及びインスリングラルギンが、インスリン受容体との結合に僅かな変化があった一方で、インスリンデテミールは、その変化が顕著に小さかった。これらの類似体はそれぞれ、ＩＧＦ受容体からの解離速度が同様であるか、又は増大しており、この解離速度を、類似体の分裂促進挙動と関連付けた。
【０００９】
タンパク質／ペプチド及びそれらのコンジュゲート、カチオン−ペプチドコンジュゲート複合体、カチオン−インスリンコンジュゲート複合体の分裂促進能は、ヒト乳房上皮細胞の分裂促進性及び増殖を増大させるリスクがあるために最大の懸念事項である。試験からは、インスリンアスパルトのＩＧＦ−１の結合が天然のヒトインスリンと類似したものであったことが示されている。インスリンリスプロ及びインスリングラルギンは、ＩＧＦ−１受容体との結合親和性がそれぞれ１．５倍〜６．５倍増大しており、インスリングラルギンの分裂促進応答が顕著に大きいことが示唆された。
【００１０】
インスリン類似体、そのコンジュゲート、カチオン−ペプチドコンジュゲート複合体、カチオン−インスリンコンジュゲート複合体の分裂促進性の長期的効果は、継続的に留意すべき重要な因子である。非特許文献４では、「天然のヒトインスリンには、その代謝作用に加えて、弱い分裂促進効果がある。インスリン分子の構造修飾が、分裂促進能を増大させ、場合によっては以前より存在する新生物の増殖刺激を生じる可能性があるため、この効果は、インスリン類似体の安全性にとって重要なものとなっている。」「インスリン様増殖因子１（ＩＧＦ−１）受容体活性化の亢進及び／又はインスリン受容体を介した異常なシグナル伝達が関与しているが、インスリン類似体の分裂促進活性を担う機構（複数可）は未だに明らかにされていない。」と述べられている。
【００１１】
ＩＧＦ−１が結腸癌増殖、乳癌増殖、前立腺癌増殖及び肺癌増殖を促進するという証拠が蓄積されてきているため、細胞増殖アッセイで判定されると共に、長期の療法に安全であると言ってもよい、分裂促進リスクが最小化されたタンパク質／ペプチド及びそれらのコンジュゲート、カチオン−ペプチドコンジュゲート複合体、カチオン−インスリンコンジュゲート複合体を開発する必要性がある。
【００１２】
本発明は、Ｉｎｓｕｇｅｎ（登録商標）との比較で分裂促進性が３分の１であるタンパク質／ペプチド、それらのコンジュゲート及び／又はカチオン−ポリペプチドコンジュゲート複合体に関する。本発明のさらなる態様は、薬品中の賦形剤が、原薬の分裂促進能特性に統計的に影響を与えないという事実を対象とする。
【００１３】
本発明の別の態様は、イヌ及びヒトにおける糖尿病の効力モデルで望ましい薬物動態プロファイル及び効能を示す、タンパク質／ペプチド若しくはそれらのコンジュゲート及び／又はカチオン−インスリンコンジュゲート複合体を経口送達により摂取することができる、即席の医薬組成物に関する。
【００１４】
特許文献１６は、薬物及び促進剤を含む、固形経口剤形であって、該促進剤が、炭素鎖長が炭素数約６〜２０の中鎖脂肪酸の塩である、固形経口剤形を開示している。特許文献１７は、０．１％（ｗ／ｗ）〜７５％（ｗ／ｗ）の脂肪酸構成成分を有する、経口投与による摂取用に製剤化された固形医薬組成物であって、該脂肪酸構成成分が、飽和若しくは不飽和の脂肪酸及び／又は塩並びに治療剤を含む、固形医薬組成物を包含する。
【００１５】
上記にもかかわらず、依然として、製造時の生物学的活性の喪失に関連した課題を克服することができ、同時に、摂取後にｉｎ  ｖｉｖｏで酵素分解に対して高い耐性を示す、実現可能な経口インスリン製剤を製造する必要性がある。本発明は、両方の要求に対処する。それに関して、本発明は、当該技術分野において立ちはだかる課題に対処して、有効性の高い経口インスリン−コンジュゲート薬物送達機構を設計する。
【００１６】
本発明は、投薬及び好都合な投与方法に関して様々な利点を示す。特許請求している合理的に設計された、測定される他の賦形剤の構成成分を含む、ＩＮ−１０５の経口製剤、及び経口投与可能な錠剤を製造するプロセスが容易に拡張可能であることを本発明者らが提案しているように、本発明は、従来技術の組成物に勝るまた別の利点を構成する。また、この合理的に設計された経口製剤及びそれを作製するプロセスに起因して、拡張性因子は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの薬物性能又はそのｉｎ  ｖｉｖｏでの放出プロファイルに影響を与えない。
【００１７】
現在利用可能な経口インスリン製剤は、安定性のレベルが低く、かかる治療薬剤の経口投与の可能性の妨げとなっている。本発明の最も重要な態様の１つは、本発明の経口インスリン製剤が、錠剤安定性の様々なパラメータ、例えば、硬度、崩壊時間、高分子量不純物の蓄積及び溶出速度に悪影響を与えることなく、様々な温度にわたって安定であるという事実を特徴とする。こうして作製された錠剤は、４０℃／７５％相対湿度の加速安定性試験条件下であっても優れた安定性を示す。分子及び製造方法の固有の安定な特性は、製剤の安定な本質によるものである。
【００１８】
本発明の別の態様は、拡張可能な噴霧乾燥手順によって製造されるカチオン−インスリンコンジュゲート複合体の改善された医薬組成物を製造するプロセスであって、任意選択で１つ又は複数の薬学的に許容可能な賦形剤を含む、カチオン−インスリンコンジュゲート複合体及び少なくとも１つの脂肪酸構成成分の水性懸濁液を調製する工程を含む、プロセスに関する。
【００１９】
噴霧乾燥プロセスを用いた微粒子の典型的なプロセスでは、材料、例えば、粒子のバルクを形成することを目的とする成分を、適切な溶媒に溶解させて、溶液を形成する。或いは、噴霧乾燥することを目的とする材料を、非溶媒に懸濁又は乳化させて、懸濁液又は乳濁液を形成することができる。他の構成成分、例えば、薬物、薬学的に許容可能な賦形剤又は孔形成剤が、任意選択でこの段階で加えられる。次いで、この溶液を霧化して、液滴の微細な霧を形成する。液滴を直ちに、液滴が乾燥ガスと接触する乾燥チャンバに投入する。液滴から乾燥ガスへ溶媒を蒸発させて、液滴を固化することにより、粒子を形成する。次いで、これらの粒子を、乾燥ガスから分離及び回収する。
【００２０】
かかる噴霧乾燥プロセスを、例えば、実験室スケール又はパイロットプラントスケールから工業プラントスケールにスケールアップする際には、或る特定の問題に直面する可能性がある。仮に、乾燥速度及び乾燥容量が、適当な形で最適化されない場合には、例えば、溶媒粒子の不適当な乾燥、製品収率の低減、純度の低減等の望ましくない問題に直面する可能性がある。一方で、不適当な形で拡張される乾燥速度の増大は、幾つかの製品粒子、例えば、厳密に規定された（critically defined）性能規格を有するものに対して、好適でない粒子形態及び／又は粒度分布を生じる可能性がある。より重要なことには、溶媒が蒸発するにつれて固体形成材料が析出する様式を変えることにより、規格標準から外れるように粒子の構造（例えば、多孔度）を変化させ、粒子が診断剤又は治療剤を適当に含有及び送達することができないようにする可能性もある。
【００２１】
したがって、当該技術分野において、フロー特性が改善され、含量均一性が改善され、且つ回収効率が改善された、高純度の均質固形非晶質分散体を製造する、改善された噴霧乾燥プロセスが必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２２】
【特許文献１】米国特許第７，０６０６７５号明細書
【特許文献２】米国特許第６，３０３，５６９号明細書
【特許文献３】米国特許第６，２１４，３３０号明細書
【特許文献４】米国特許第６，１１３９０６号明細書
【特許文献５】米国特許第５，９８５，２６３号明細書
【特許文献６】米国特許第５，９００，４０２号明細書
【特許文献７】米国特許第５，６８１，８１１号明細書
【特許文献８】米国特許第５，６３７，７４９号明細書
【特許文献９】米国特許第５，６１２，６４０号明細書
【特許文献１０】米国特許第５，５６７，４２２号明細書
【特許文献１１】米国特許第５，４０５，８７７号明細書
【特許文献１２】米国特許第５，３５９，０３０号明細書
【特許文献１３】米国特許出願公開第２００３／０８３２３２号明細書
【特許文献１４】米国特許出願公開第２００６／００１９８７３号明細書
【特許文献１５】米国特許出願公開第２００６／００１９８７４号明細書
【特許文献１６】国際公開第００／５００１２号パンフレット
【特許文献１７】米国特許出願公開第２００６／００１８８７４号明細書
【非特許文献】
【００２３】
【非特許文献１】Lammers R, et al., EMBO 1989
【非特許文献２】Drejer, K.著「ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの受容体結合からｉｎ  ｖｉｖｏでのグルコース取込みまでのインスリン類似体の生理活性（The bioactivity of insulin analogues from in vitro receptor binding to in vivo glucose uptake）、Diabetes Metab Rev, 1992. 8(3): p. 259-85
【非特許文献３】Kurtzhals, P., et al.著「受容体結合と臨床使用用に設計したインスリン類似体の代謝能及び分裂促進能との相関関係（Correlations of receptor binding and metabolic and mitogenic potencies of insulin analogs designed for clinical use）、Diabetes, 2000.49(6): p. 999-1005
【非特許文献４】文献ＣＰＭＰ／ＳＷＰ／３７２／０１（インスリン類似体の発癌可能性の非臨床的判定に関する留意事項（Points to consider on the non-clinical assessment of the carcinogenic potential of insulin analogues））
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２４】
本発明の目的の１つは、製品純度、収率及び安定性に悪影響を与えることなく粒子の乾燥を改善する乾燥プロセスを包含するカチオン−インスリンコンジュゲート複合体の噴霧乾燥組成物を提供することである。本プロセスにより、他の必要な賦形剤をさらに配合することにより、カチオン−インスリンコンジュゲート複合体の経口医薬組成物を生成する、標的治療剤の均質噴霧乾燥固形粒子が生成される。
【００２５】
本発明の他の目的及び利点は、後続の開示及び添付の特許請求の範囲を鑑みることで、当業者にはより十分に明らかなものとなるであろう。
【００２６】
本発明の主たる目的は、飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、カチオン−インスリンコンジュゲート複合体の経口投与可能な固形医薬組成物を開発することである。
【００２７】
本発明の別の目的は、経口剤形が、錠剤、カプセル、粒子、粉末又はサッシェ（ｓａｃｈｅｔ）又は乾燥懸濁物の形態である、経口投与可能な固形医薬組成物を開発することである。
【００２８】
本発明のまた別の目的は、ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物を製造するプロセスを開発することである。
【００２９】
本発明のさらに別の目的は、ＩＮ−１０５の錠剤組成物を開発することである。
【００３０】
本発明のさらに別の目的は、投与後５分〜６０分以内に糖尿病患者における食後の血中グルコース濃度の最大制御を達成する、経口投与可能な固形医薬組成物の用量を開発することである。
【００３１】
本発明のさらに別の目的は、安定を保つことを特徴とする、ＩＮ−１０５の安定で経口投与可能な医薬組成物を開発することである。
【００３２】
本発明のさらに別の目的は、非晶質噴霧乾燥粒子を製造する方法を開発することである。
【００３３】
本発明のさらに別の目的は、その天然の対応物との比較で分裂促進性が３分の１に低減している、ＩＮ１０５の医薬組成物を開発することである。
【００３４】
本発明のさらに別の目的は、賦形剤がコンジュゲートの分裂促進能に影響を与えない、カチオン−ペプチドコンジュゲート複合体を含む、医薬組成物を開発することである。
【課題を解決するための手段】
【００３５】
よって、本発明は、約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物；経口剤形が、錠剤、カプセル、粒子、粉末又はサッシェ（ｓａｃｈｅｔ）又は乾燥懸濁物の形態である、経口投与可能な医薬組成物；約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ１０５の経口投与可能な固形医薬組成物を製造するプロセスであって、ａ）好適な飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩を粉砕する工程と、ｂ）工程（ａ）から得られた脂肪酸を有機溶媒を用いて造粒する工程と、ｃ）工程（ｂ）から得られた顆粒を風乾させる工程と、ｄ）メッシュを通して乾燥顆粒を削り、所望の粒度の顆粒を得る、削る工程と、ｅ）脂肪酸顆粒に対して、カチオン−インスリンコンジュゲート複合体を他の賦形剤と共に配合する工程と、ｆ）配合した混合物を圧縮して、錠剤を形成する、圧縮する工程とを含む、プロセス；約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ１０５の経口投与可能な固形医薬組成物を製造するプロセスであって、ａ）好適な飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩並びに結合剤を粉砕する工程と、ｂ）カチオン−インスリンコンジュゲート複合体を結合剤を用いて有機溶媒中に懸濁させて、湿塊を形成する、懸濁させる工程と、ｃ）工程（ｂ）から得られた構成成分を結合剤を用いて造粒する工程と、ｄ）工程（ｃ）の乾燥顆粒を削る工程と、ｅ）顆粒に他の賦形剤を配合する工程と、ｆ）配合した混合物を圧縮して、錠剤を形成する、圧縮する工程とを含む、プロセス；使用する有機溶媒が、イソプロパノール、アセトン、メチルアルコール、メチルイソブチルケトン、クロロホルム、１−プロパノール、２−プロパノール、アセトニトリル、１−ブタノール、２−ブタノール、エチルアルコール、シクロヘキサン、ジオキサン、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド、ジクロロエタン、ヘキサン、イソオクタン、塩化メチレン、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、トルエン、四塩化炭素又はそれらの組合せを含む群から選択される、プロセス；約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物の５ｍｇ〜５００ｍｇ錠剤；約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物の５０ｍｇ錠剤；約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物の１００ｍｇ錠剤；約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物の１５０ｍｇ錠剤；約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物の２００ｍｇ錠剤；約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物の２５０ｍｇ錠剤；投与後５分〜６０分以内に糖尿病患者における食後の血中グルコース濃度の最大制御を達成する、経口投与可能な固形医薬組成物の用量；約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５の安定で経口投与可能な固形医薬組成物であって、（ａ）約２℃〜４０℃の温度範囲、（ｂ）少なくとも６ヶ月の期間にわたる２５℃±２℃／６０％±５％相対湿度（ＲＨ）、３０℃±２℃／６５％±５％相対湿度、４０℃±２℃／７５％±５％相対湿度を含む群から選択される条件への曝露に対して安定を保つことを特徴とする、固形医薬組成物；約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、非晶質噴霧乾燥粒子を製造する方法であって、ａ）溶媒中にカチオン−インスリン化合物コンジュゲート及び脂肪酸構成成分を含む溶液又は懸濁液を調製する工程と、ｂ）溶媒の相当量を除去することができる条件下で、溶液をチャンバ内に噴霧する工程と、ｃ）カチオン−インスリン化合物コンジュゲートの噴霧乾燥粒子を得る工程とを含む、方法；約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５のインスリン分泌性医薬組成物であって、分裂促進性がその天然の対応物との比較で３分の１に低減していることを特徴とする、インスリン分泌性医薬組成物；並びに約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、医薬組成物であって、賦形剤がコンジュゲートの分裂促進能に影響を与えないことを特徴とする、医薬組成物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】平均血漿インスリンプロファイル−ＩＮ−１０５製剤錠剤（ＦＤＴ−３）を示す図である。
【図２】ＦＤＴ−３投与における正規化グルコースプロファイルを示す図である。
【図３】平均血漿インスリンプロファイル−ＩＮ−１０５製剤錠剤（ＦＤＴ−１９）を示す図である。
【図４】ＦＤＴ−１９投与における正規化グルコースプロファイルを示す図である。
【図５】平均血漿インスリンプロファイル−ＩＮ−１０５製剤錠剤（ＦＤＴ−２０）を示す図である。
【図６】ＦＤＴ−２０投与後のグルコースプロファイルを示す図である。
【図７】血漿インスリンプロファイルを示す図である。
【図８】グルコース注入速度プロファイルを示す図である。
【図９】血漿グルコースプロファイルを示す図である。
【図１０】ＰＬＡソフトウェアによって求めたＩｎｓｕｇｅｎ（登録商標）及びＩＮ１０５の様々な濃度にわたるバイオアッセイの平行性及び線形性を示す図である。データは、実験の３連値の平均±ＳＥＭを表す。
【図１１】線形範囲の４点を用いたＰＬＡ分析からのＩＮ−１０５及びＨＩＭ−２と比較したＩｎｓｕｇｅｎの分裂促進能を示す図である。
【図１２】ＰＬＡソフトウェアによって求めたＩｎｓｕｇｅｎ（登録商標）対ＩＮ１０５（Ａ）及びＩｎｓｕｇｅｎ対ＨＩＭ−２（Ｂ）の様々な濃度にわたるバイオアッセイの平行性及び線形性を示す図である。データは、実験の３連値の平均±ＳＥＭを表す。
【図１３】線形範囲の４点を用いたＰＬＡ分析に対する、ＩＮ−１０５粉末と比較した、透析したＩＮ−１０５の分裂促進活性を示す図である。
【図１４】Ｉｎｓｕｇｅｎ（登録商標）、ＩＮ１０５及びＨＩＭ−２の間での代謝能の比較を示す図である。
【図１５】ＰＬＡソフトウェアによって求めたＩｎｓｕｇｅｎ（登録商標）対ＩＮ１０５（Ａ）及びＩｎｓｕｇｅｎ対ＨＩＭ−２（Ｂ）の様々な濃度にわたるバイオアッセイの平行性及び線形性を示す図である。データは、実験の３連値の平均±ＳＥＭを表す。
【図１６】（Ａ）Ｉｎｓｕｇｅｎ（登録商標）、（Ｂ）ＩＮ１０５及び（Ｃ）ＨＩＭ−２の一部位競合曲線をそれぞれ示す図である。曲線は、Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄバージョン−４ソフトウェアによって求めた。データは、実験の３連値の平均を表す。
【発明を実施するための形態】
【００３７】
本発明は、約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物に関する。
【００３８】
本発明の別の実施形態において、脂肪酸の構成成分は、カプリン酸及び／又はラウリン酸又はそれらの塩である。
【００３９】
本発明のさらに別の実施形態において、脂肪酸はカプリン酸ナトリウムである。
【００４０】
本発明のさらに別の実施形態において、結合剤は、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、デンプン、ゼラチン、糖、天然及び合成のガム又はそれらの組合せを含む群から選択される。
【００４１】
本発明のさらに別の実施形態において、結合剤はポリビニルピロリドンである。
【００４２】
本発明のさらに別の実施形態において、希釈剤は、カルシウム塩、セルロース若しくはセルロース誘導体、パラチノース、有機酸、糖及び糖アルコール、ペクチン酸塩又はそれらの組合せを含む群から選択される。
【００４３】
本発明のさらに別の実施形態において、希釈剤はマンニトールである。
【００４４】
本発明のさらに別の実施形態において、崩壊剤は、架橋ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、カチオン交換樹脂、アルギン酸、グァーガム又はそれらの組合せを含む群から選択される。
【００４５】
本発明のさらに別の実施形態において、滑沢剤が、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、フマル酸、ポリエチレングリコール、アラニン及びグリシンを含む群から選択される。
【００４６】
本発明のさらに別の実施形態において、滑沢剤はステアリン酸マグネシウムである。
【００４７】
本発明のさらに別の実施形態において、透過促進剤は、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリン酸ナトリウム、パルミトイルカルニチン、ホスファチジルコリン、シクロデキストリン及びその誘導体、カルニチン及びその誘導体、粘膜付着性ポリマー、閉鎖帯毒素（zonula occludings toxin）、胆汁酸塩、脂肪酸又はそれらの組合せを含む群から選択される。
【００４８】
本発明のさらに別の実施形態において、透過促進剤はラウリル硫酸ナトリウムである。
【００４９】
本発明のさらに別の実施形態において、透過促進剤はβ−シクロデキストリンである。
【００５０】
本発明のさらに別の実施形態において、可塑剤は、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、クエン酸アセチル、トリアセチン、アセチル化モノグリセリド、菜種油、オリーブ油、ゴマ油、クエン酸アセチルトリエチル、グリセリン、ソルビトール、シュウ酸ジエチル、リンゴ酸ジエチル、フマル酸ジエチル、コハク酸ジブチル、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、セバシン酸ジブチル、クエン酸トリエチル、クエン酸トリブチル、三酪酸グリセロール、三酢酸グリセリル又はそれらの混合物を含む群から選択される。
【００５１】
本発明のさらに別の実施形態において、可塑剤はポリエチレングリコールである。
【００５２】
本発明はまた、経口剤形が、錠剤、カプセル、粒子、粉末又はサッシェ（ｓａｃｈｅｔ）又は乾燥懸濁物の形態である、経口投与可能な医薬組成物に関する。
【００５３】
本発明はまた、約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ  １０５の経口投与可能な固形医薬組成物を製造するプロセスであって、
ａ．好適な飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩を粉砕する工程と、
ｂ．工程（ａ）から得られた脂肪酸を有機溶媒を用いて造粒する工程と、
ｃ．工程（ｂ）から得られた顆粒を風乾させる工程と、
ｄ．メッシュを通して乾燥顆粒を削り、所望の粒度の顆粒を得る、削る工程と、
ｅ．脂肪酸顆粒に対して、カチオン−インスリンコンジュゲート複合体を他の賦形剤と共に配合する工程と、
ｆ．配合した混合物を圧縮して、錠剤を形成する、圧縮する工程と、
を含む、プロセスに関する。
【００５４】
本発明はまた、約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ１０５の経口投与可能な固形医薬組成物を製造するプロセスであって、
ａ）好適な飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩並びに結合剤を粉砕する工程と、
ｂ）カチオン−インスリンコンジュゲート複合体を結合剤を用いて有機溶媒中に懸濁させて、湿塊を形成する、懸濁させる工程と、
ｃ）工程（ｂ）から得られた構成成分を前記結合剤を用いて造粒する工程と、
ｄ）工程（ｃ）の乾燥顆粒を削る工程と、
ｅ）顆粒に他の賦形剤を配合する工程と、
ｆ）配合した混合物を圧縮して、錠剤を形成する、圧縮する工程と、
を含む、プロセスに関する。
【００５５】
本発明のさらに別の実施形態において、使用する有機溶媒は、イソプロパノール、アセトン、メチルアルコール、メチルイソブチルケトン、クロロホルム、１−プロパノール、２−プロパノール、アセトニトリル、１−ブタノール、２−ブタノール、エチルアルコール、シクロヘキサン、ジオキサン、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド、ジクロロエタン、ヘキサン、イソオクタン、塩化メチレン、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、トルエン、四塩化炭素又はそれらの組合せを含む群から選択される。
【００５６】
本発明はまた、約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物の５ｍｇ〜５００ｍｇ錠剤に関する。
【００５７】
本発明はまた、約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物の５０ｍｇ錠剤に関する。
【００５８】
本発明はまた、約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物の１００ｍｇ錠剤に関する。
【００５９】
本発明はまた、約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物の１５０ｍｇ錠剤に関する。
【００６０】
本発明はまた、約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物の２００ｍｇ錠剤に関する。
【００６１】
本発明はまた、約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５の経口投与可能な固形医薬組成物の２５０ｍｇ錠剤に関する。
【００６２】
本発明はまた、投与後５分〜６０分以内に糖尿病患者における食後の血中グルコース濃度の最大制御を達成する、経口投与可能な固形医薬組成物の用量に関する。
【００６３】
本発明の別の実施形態において、経口投与可能な固形医薬組成物は、経口投与後１２０分以内にヒト患者における血清グルコースを少なくとも５％低下させる。
【００６４】
本発明はまた、約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５の安定で経口投与可能な固形医薬組成物であって、
（ａ）約２℃〜４０℃の温度範囲
（ｂ）少なくとも６ヶ月の期間にわたる２５℃±２℃／６０％±５％相対湿度（ＲＨ）、３０℃±２℃／６５％±５％相対湿度、４０℃±２℃／７５％±５％相対湿度
を含む群から選択される条件への曝露に対して安定を保つことを特徴とする、固形医薬組成物に関する。
【００６５】
本発明の別の実施形態において、不純物は、製造時の不純物レベルと比較した場合に５％を超えて増加しない。
【００６６】
本発明のさらに別の実施形態において、不純物は、製造時の不純物レベルと比較した場合に１０％超増加しない。
【００６７】
本発明のさらに別の実施形態において、組成物中の化合物のアッセイは、１０％を超えて減少しない。
【００６８】
本発明のさらに別の実施形態において、溶出プロファイルは、任意の時間間隔で少なくとも７５％である。
【００６９】
本発明のさらに別の実施形態において、時間間隔は、２年を上回る期間に及ぶ。
【００７０】
本発明のさらに別の実施形態において、硬度プロファイルの差が、製造時の硬度プロファイルと比較した場合に１ｋｇ／ｃｍ２以下である。
【００７１】
本発明のさらに別の実施形態において、組成物の少なくとも９５％±２％が、
（ａ）約２℃〜８℃又は２５℃〜４０℃の温度範囲
（ｂ）少なくとも６ヶ月の期間にわたる２５℃±２℃／６０％±５％相対湿度（ＲＨ）、３０℃±２℃／６５％±５％相対湿度、４０℃±２℃／７５％±５％相対湿度
を含む群から選択される条件への曝露に対して分解されずに残存する。
【００７２】
本発明のさらに別の実施形態において、組成物の少なくとも９０％±２％が、
ａ．約２℃〜８℃又は２５℃〜４０℃の温度範囲
ｂ．少なくとも６ヶ月の期間にわたる２５℃±２℃／６０％±５％相対湿度（ＲＨ）、３０℃±２℃／６５％±５％相対湿度、４０℃±２℃／７５％±５％相対湿度
を含む群から選択される条件への曝露に対して分解されずに残存する。
【００７３】
本発明はまた、約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、非晶質噴霧乾燥粒子を製造する方法であって、
ａ．溶媒中にカチオン−インスリン化合物コンジュゲート及び脂肪酸構成成分を含む溶液又は懸濁液を調製する工程と、
ｂ．溶媒の相当量を除去することができる条件下で、溶液をチャンバ内に噴霧する工程と、
ｃ．カチオン−インスリン化合物コンジュゲートの噴霧乾燥粒子を得る工程と、
を含む、方法に関する。
【００７４】
本発明のさらに別の実施形態において、脂肪酸の構成成分は、Ｃ４〜Ｃ１２脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩を含む群から選択される。
【００７５】
本発明のさらに別の実施形態において、脂肪酸の構成成分がカプリン酸ナトリウムである。
【００７６】
本発明のさらに別の実施形態において、溶媒が水である。
【００７７】
本発明のさらに別の実施形態において、溶媒中にＩＮ１０５及び脂肪酸構成成分を含む溶液又は懸濁液が、希釈剤をさらに含む。
【００７８】
本発明のさらに別の実施形態において、希釈剤がマンニトールである。
【００７９】
本発明のさらに別の実施形態において、噴霧乾燥粒子の大きさが約１μ〜１００μである。
【００８０】
本発明のさらに別の実施形態において、ＩＮ１０５を含む溶液又は懸濁液は、８０℃〜１５０℃の範囲の温度で噴霧乾燥される。
【００８１】
本発明のさらに別の実施形態において、噴霧乾燥に用いる霧化圧の範囲は、０．５ｋｇ／ｃｍ２〜１．５ｋｇ／ｃｍ２である。
【００８２】
本発明のさらに別の実施形態において、ＩＮ１０５の噴霧乾燥組成物の純度は、少なくとも９５％である。
【００８３】
本発明のさらに別の実施形態において、ＩＮ１０５の噴霧乾燥組成物の純度は、少なくとも９８％である。
【００８４】
本発明のさらに別の実施形態において、ＩＮ１０５の噴霧乾燥組成物の純度は、少なくとも９９％である。
【００８５】
本発明はまた、約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、ＩＮ−１０５のインスリン分泌性医薬組成物であって、その天然の対応物と比較して３分の１に低減した分裂促進性を示すことを特徴とする、ＩＮ−１０５のインスリン分泌性医薬組成物に関する。
【００８６】
本発明のさらに別の実施形態において、ＩＮ−１０５のインスリン分泌性医薬組成物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ  ｖｉｖｏでの細胞増殖を、その天然の対応物の少なくとも２０％±５％に低減させる。
【００８７】
本発明のさらに別の実施形態において、ＩＮ−１０５のインスリン分泌性医薬組成物は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ  ｖｉｖｏでの細胞増殖を、その天然の対応物の少なくとも２％±０．５％に低減させる。
【００８８】
本発明のさらに別の実施形態において、組成物は、その天然の対応物と同様の代謝効率を示す。
【００８９】
本発明はまた、約０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のＩＮ−１０５と、約１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸、脂肪酸エステル又はそれらの塩と、任意選択で結合剤、可塑剤、透過促進剤及び可溶化剤を含む、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）の崩壊剤、１０％（ｗ／ｗ）の希釈剤、０．５％（ｗ／ｗ）の滑沢剤から成る群から選択される少なくとも３つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む、医薬組成物であって、賦形剤がコンジュゲートの分裂促進能に影響を与えないことを特徴とする、医薬組成物に関する。
【００９０】
本発明の主たる目的は、経口送達時にヒトにおける糖尿病の効力モデルで望ましい薬物動態プロファイル及び効能を示す、タンパク質／ペプチド、それらのコンジュゲート及び／又はカチオン−ポリペプチドコンジュゲート複合体を含む、即放性製剤を提供することである。当該技術の現状からは、消化管における非修飾インスリンの不安定性が認識されており、即放性の合理的に設計された製剤を開発することによってこれらの課題を回避しようと努力を行っている。
【００９１】
本発明のカチオン−ペプチドコンジュゲート複合体、カチオン−インスリンコンジュゲート複合体は、分裂促進能が低減していることを特徴とする。本発明中で記載するコンジュゲートは、長期の使用後であっても、分裂促進反応を誘導するリスクが比較的少ないか、又は全くないという事実から有利であるため、糖尿病の長期の治療及び管理に安全に使用することができる。本発明の治療化合物は、分裂促進能がＩｎｓｕｇｅｎ（登録商標）と比較した場合に３分の１に低減していることを特徴とする。
【００９２】
本発明の重要な一態様によれば、薬品中の賦形剤が原薬の分裂促進特性に影響を与えないため、製剤又は組成物の分裂促進能は、現在市販されているインスリン治療薬剤と比較した場合に相対的に小さいままである。
【００９３】
本発明の別の目的は、最大で１２ヶ月に及ぶ時間間隔の間、様々な温度に渡って安定性を示す、タンパク質／ペプチド、それらのコンジュゲート及び／又はカチオン−ポリペプチドコンジュゲート複合体を含む、即放性製剤を提供することである。現在開発している製剤は、室温で安定であると共に、高温でも安定性を示す。
【００９４】
本発明の一態様によれば、そのように製造された医薬組成物を、最大で１２ヶ月に及ぶ時間間隔の間、温度及び相対湿度の異なる試験条件で評価する。
【００９５】
本発明の好ましい実施形態は、０．０１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）のインスリン、インスリン化合物コンジュゲート及び／又はカチオンインスリンコンジュゲートと、１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩から選択される１つ又は複数の脂肪酸構成成分と、１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の希釈剤と、１％〜２０％の崩壊剤と、０．０１％〜５％の結合剤と、０．０１％〜５％の吸着剤（限定するものではないが、他の好適な薬学的に許容可能な担体を含む）とを含む、経口送達可能な製剤に関する。
【００９６】
よって、本発明の一態様は、誘導体化インスリンコンジュゲート、インスリン類似体、インスリン複合体（限定するものではないが、インスリン様活性を有する他の治療剤を含む）から選択される少なくとも１つの生物学的に活性な化合物を含む、製剤に関する。
【００９７】
また別の態様において、本発明は、治療活性剤の分解耐性を高める好適な賦形剤を用いる最適な作業条件下で、上述した経口送達可能な製剤を製造するプロセスを提供する。
【００９８】
また別の好ましい態様において、酵素分解耐性を有する、タンパク質／ペプチド、それらのコンジュゲート及び／又はカチオン−ポリペプチドコンジュゲート複合体から選択される少なくとも１つの生物学的に活性な化合物を含む、経口送達可能な錠剤を製造するプロセスであって、
１．好適な飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩を粉砕する工程と、
２．工程（１）から得られた脂肪酸を有機溶媒を用いて造粒する工程と、
３．工程（２）から得られた顆粒を風乾させる工程と、
４．メッシュを通して乾燥顆粒を削り、約２５０μｍの所望の大きさの顆粒を得る、削る工程と、
５．脂肪酸顆粒に対して、カチオン−インスリン化合物コンジュゲートを他の賦形剤と共に配合する工程と、
６．配合した混合物を圧縮して、錠剤を形成する、圧縮する工程と、
を含む、プロセス。
【００９９】
上記目的及びその他の目的によれば、本発明は、一部には、投与後２０分〜３０分以内に糖尿病患者における食後の血中グルコース濃度の最大制御を達成する、修飾インスリンの用量を含む、経口固形剤形を対象とする。
【０１００】
当業者は、特定の化合物、症状の重篤度、及び被験者の副作用に対する感受性に応じて用量レベルが変動し得ることを容易に理解するであろう。所定の化合物に対する好ましい投与量は、種々の手段によって当業者が容易に求めることができる。好ましい手段は、所定の化合物の生理的効能を測定することである。単位剤形（dosage unit form）は、液体又は粉末若しくはサッシェ（ｓａｃｈｅｔ）を含む、錠剤、カプセル若しくは粒子等の固体であり得る。
【０１０１】
本発明はまた、薬学的に許容可能な賦形剤の少なくとも１つと共に治療薬を含有する１μ〜１００μの噴霧乾燥粒子を製造する噴霧乾燥の即席のプロセスに関する。
【０１０２】
プロセスは、（ａ）治療薬と、任意選択で０．００１％（ｗ／ｗ）〜２０％（ｗ／ｗ）の濃度の希釈剤、任意選択で１０％（ｗ／ｗ）〜６０％（ｗ／ｗ）の、飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩から選択される１つ又は複数の脂肪酸構成成分を含有する溶液を調製すること、並びに（ｂ）得られたスラリを噴霧乾燥して、噴霧乾燥粉末を形成することを包含する。
【０１０３】
本発明の次なる態様は、錠剤形態に圧縮される噴霧乾燥粉末と他の医薬賦形剤を組み合わせることに関する。
【０１０４】
本発明の方法は、例えば、条件が、所定の入熱当たりの蒸発効率の増大をもたらす場合には、治療剤を含む均質固体粒子を生成する能力を提供することができる。本発明においてかかる粉末粒子を製造する方法は、例えば、溶液又は懸濁液の混合物を形成する生物活性材料の水懸濁液又は水溶液を調製すること、混合物を減圧することによって超微細な液滴を噴霧すること、及び噴霧ガスを乾燥ガスに交換すること、例えば、噴霧乾燥装置の乾燥チャンバ内に噴霧することによって液滴を乾燥させて粉末粒子にすることを含み得る。
【０１０５】
本発明の他の目的及び利点は、後続の開示及び添付の特許請求の範囲を鑑みて、当業者にはより十分に明らかとなるであろう。
【０１０６】
本発明はさらに、動物、好ましくはヒトにおける糖尿病、耐糖能障害、初期糖尿病及び末期糖尿病を治療する方法、並びにタンパク質／ペプチド、それらのコンジュゲート及び／又はカチオン−ポリペプチドコンジュゲート複合体を、治療活性剤の分解耐性を高める好適な賦形剤と共に含む、１つ又は複数の単位用量の即放性製剤の剤形を投与することを含む、グルコース恒常性を達成する方法を提供する。
【０１０７】
定義：
本発明を説明し、特許請求するに際しては、本明細書中に提示する定義に従って、以下の専門用語を使用する。
【０１０８】
「カチオン−インスリン化合物コンジュゲート」は、任意のインスリン化合物構成成分を含む。インスリン化合物は、例えば、哺乳類インスリン化合物、例えば、ヒトインスリン、又はインスリン化合物誘導体若しくは類似体であり得る。治療剤は具体的には、ＩＮ−１０５分子に関する。ＩＮ−１０５は、インスリンＢ鎖のＢ２９位のε−アミノ酸リジンで構造式ＣＨ３Ｏ−（Ｃ４Ｈ２Ｏ）３−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨの両親媒性オリゴマーとコンジュゲートしたインスリン分子である。分子は、Ａ１、Ｂ１及びＢ２９の一箇所でコンジュゲート（monoconjugated）してもよく、Ａ１、Ｂ１及びＢ２９の様々な組合せの２箇所でコンジュゲート（diconjugated）してもよく、又はＡ１、Ｂ１及びＢ２９の様々な組合せの３箇所でコンジュゲート（triconjugated）してもよい。
【０１０９】
「治療的有効量」は、投薬間隔の間、有効な絶食状態又は摂食状態のいずれかにあるヒト糖尿病患者における血中グルコース濃度の臨床的に意義のある制御を達成するのに十分な、本発明の剤形に含まれるインスリンの量を指す。
【０１１０】
本明細書中で使用する場合、「希釈剤」／「充填剤」／「増量剤」は、製剤のかさを増加させて、錠剤を圧縮に実用的な大きさにするために加える不活性物質である。本発明における使用に考慮される一般的に使用される希釈剤としては、糖アルコール、有機酸、ｇａｌｅｎ  ＩＱ、パラチノース、セルロース及びセルロース誘導体、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、ラクトース、カオリン、マンニトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、粉糖並びにシリカ等が挙げられる。
【０１１１】
本明細書中で使用する場合、「結合剤」は、粉末材料に粘着性を付与するために使用する作用剤である。結合剤（又は「造粒剤」として知られていることもある）は、錠剤製剤に対して粘着性を付与し、それにより、錠剤が圧縮後に原形を保つことが保証されると共に、所望の硬度及び大きさの顆粒の製剤によって易流動性が改善される。結合剤として一般的に使用される材料としては、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、デンプン；ゼラチン；糖、例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、糖蜜及びラクトース；天然及び合成のガム、例えば、アラビアガム、アルギン酸ナトリウム、アイリッシュモスの抽出物、パンワー（panwar）ガム、ガッチガム、イサポール皮（isapol husks）の粘液、Ｖｅｅｇｕｍ、微結晶セルロース、微結晶デキストロース、アミロース及びカラマツアラビノガラクタン）等が挙げられる。本発明の文脈においては、ポリビニルピロリドンを使用する。
【０１１２】
本明細書中で使用する場合、「崩壊薬」又は「崩壊剤」は、投与後の錠剤の破壊を容易にするか、又はその崩壊を容易にする物質である。崩壊剤として機能する材料は、デンプン、クレー、セルロース、アルギン又はガムとして化学的に分類されている。他の崩壊薬としては、Ｖｅｅｇｕｍ  ＨＶ、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、セルロース及び木材製品、天然のスポンジ、カチオン交換樹脂、アルギン酸、グァーガム、シトラスパルプ、架橋ポリビニルピロリドン及びカルボキシメチルセルロース等が挙げられる。
【０１１３】
「滑沢剤」は、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、フマル酸、分子量４０００超のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、アラニン及びグリシンを含む群から選択することができる。本発明の文脈における好ましい滑沢剤は、ステアリン酸マグネシウム又はステアリン酸ナトリウムである。
【０１１４】
「ステアリン酸マグネシウム」は、脂肪から得られる固形有機酸の混合物を含むマグネシウムの化合物を意味し、主に、比率が変動し得るステアリン酸マグネシウム及びパルミチン酸マグネシウムから成る。ステアリン酸マグネシウムは、圧縮錠剤の製造における薬学的必需品（滑沢剤）として使用される。
【０１１５】
「透過促進剤」は、膜透過性を増大させ、且つ生体膜を通じた薬物移送を容易にすることにより、送達される治療剤のバイオアベイラビリティを改善する任意の化合物を意味する。好適な膜透過促進剤としては、界面活性剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリン酸ナトリウム、パルミトイルカルニチン、ラウレス−９、ホスファチジルコリン、シクロデキストリン及びその誘導体、胆汁酸塩、例えば、グリココール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム及びフシジン酸ナトリウム、ＥＤＴＡを含むキレート剤、クエン酸及びサリチル酸塩、及び脂肪酸（例えば、オレイン酸、ラウリン酸、アシルカルニチン、モノジグリセリド及びジグリセリド）、Ｌ−カルニチン（carnithine）及びその誘導体、粘膜付着性ポリマー、閉鎖帯毒素（zonula occludings toxin：ＺＯＴ）又はそれらの組合せが挙げられる。
【０１１６】
「可塑剤」は、クエン酸アセチル、トリアセチン、アセチル化モノグリセリド、菜種油、オリーブ油、ゴマ油、クエン酸アセチルトリエチル、グリセリン、ソルビトール、シュウ酸ジエチル、リンゴ酸ジエチル、フマル酸ジエチル、コハク酸ジブチル、フタル酸ジブチル、フタル酸ジオクチル、セバシン酸ジブチル、クエン酸トリエチル、クエン酸トリブチル、三酪酸グリセロール、三酢酸グリセリル、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール及びそれらの混合物から成る群から選択される。可塑剤は、最も好ましくはポリエチレングリコールである。可塑剤は、皮膜形成ポリマーの最大４０％（ｗ／ｗ）まで存在し得る。本発明の文脈において使用する代表的な可塑剤は、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）である。
【０１１７】
「ポリアルキレングリコール」、すなわち、「ＰＡＧ」は、置換又は非置換の直鎖又は分枝鎖のポリアルキレングリコールポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）及びポリブチレングリコール（ＰＢＧ）並びにそれらの組合せ（例えば、２つ以上の異なるＰＡＧサブユニット、例えば、ＰＥＧ、ＰＰＧ、ＰＰＧ及びＰＢＧサブユニットから選択される２つ以上の異なるＰＡＧユニットの組合せを含む、直鎖又は分枝鎖のポリマー）を指し、ポリアルキレングリコールのモノアルキルエーテルを含む。「ＰＡＧサブユニット」という用語は、単一のＰＡＧユニットを意味し、例えば、「ＰＥＧサブユニット」は、単一のポリエチレングリコールユニット、例えば、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−を指し、「ＰＰＧサブユニット」は、単一のポリプロピレングリコールユニット、例えば、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−を指し、「ＰＢＧサブユニット」は単一のポリプロピレングリコールユニット、例えば、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）−を指す。ＰＡＧ及び／又はＰＡＧサブユニットはまた、置換されたＰＡＧ又はＰＡＧサブユニット、例えば、アルキル側鎖、例えば、メチル、エチル若しくはプロピル側鎖又はカルボニル側鎖を含むＰＡＧ、並びに１つ又は複数の分枝鎖のＰＡＧサブユニットを含むＰＡＧ、例えば、イソ−ＰＰＧ又はイソ−ＰＢＧを含む。
【０１１８】
「可溶化剤」は、薬物の水溶性を高める任意の物質であり得る。
【０１１９】
本明細書中で使用する場合、「薬学的に許容可能な担体」は、糖質及び修飾糖質及びそれらの誘導体、ポリエチレン及び／又はポリプロピレングリコール及びそれらの誘導体、無機充填剤又は滑剤、脂肪酸及びそのエステル及び塩、防腐剤並びにコーティング剤から成る群から選択される１つ又は複数の作用剤を含む。
【０１２０】
本明細書中で言及する場合、「有効量」は、毒性がなく、任意の医療に伴う合理的な利益／リスク比で所望の局所的又は全身的な効果及び性能を提供するのに十分な任意の作用剤の量を意味する。例えば、滑沢剤の有効量は、いかなる有害効果ももたらさずに錠剤化する目的で組成物を滑沢させる機能を発揮するのに十分な量である。
【０１２１】
本発明の文脈において、「有機溶媒」は、液体ポリマー及びその混合物を含む、非水起源の任意の溶媒を指す。本発明に好適な有機溶媒としては、アセトン、メチルアルコール、メチルイソブチルケトン、クロロホルム、１−プロパノール、イソプロパノール、２−プロパノール、アセトニトリル、１−ブタノール、２−ブタノール、エチルアルコール、シクロヘキサン、ジオキサン、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド、ジクロロエタン、ヘキサン、イソオクタン、塩化メチレン、ｔｅｒｔ−ブチルアルコール、トルエン、四塩化炭素又はそれらの組合せが挙げられる。
【０１２２】
「アッセイ」は、特定の物質の量を見出し、測定するための実験室試験であり得る。
【０１２３】
「不純物」は、以下の特性のうちの１つ又はいずれかの組合せによって本質的に特徴付けられる、組成物の品質又は状態を不純にする、天然の製剤の一部ではない構成成分と定義することができる：
ａ．コンタミネーション又はポリューション
ｂ．不変性又は均質性の欠如；粗悪化
ｃ．他のものを不純にするもの；粗悪な構成成分又は添加剤
【０１２４】
「溶出試験」は、錠剤剤形又はカプセル剤形に関して個々の学術論文で述べられているような溶出要件への適合性を求めるために行われる。錠剤溶出は、剤形からの薬物放出の速度を測定する規格化された方法である。溶出試験の主な役割は、ａ）製品開発時の治療有効性の最適化及び安定性判定、ｂ）製造ロット間での均一性を保証するための製造品質の日常的な判定、ｃ）「生物学的同等性」、すなわち、１つ又は異なる製造業者からの別個の製品バッチから同一の生物学的活性が得られるかどうかの判定等の特質で要約することができる。
【０１２５】
溶出は、約３７．０℃±０．５℃の最適体積の媒体に約５０ｒｐｍの回転速度で錠剤を溶解させることによって実行することができる。溶出は、１５分から始めて様々な時間間隔で測定する。溶出試験の実行に用いることができる様々な媒体としては、ｐＨが１〜９の範囲、より好ましくは２〜７の範囲である、水、緩衝液及び酸性媒体が挙げられる。
【０１２６】
「硬度」は概して、直径圧縮試験で錠剤を破壊するのに必要な力として測定する。この試験は、錠剤が破壊されるまで２つの台座の間に錠剤を配置することから成る。錠剤を破壊させる破砕強度を記録する。「硬度」は、錠剤破砕強度と称されることもある。錠剤硬度の測定に使用される幾つかの機器としては、Ｓｔｏｋｅｓ（Ｍｏｎｓａｎｔｏ）テスタ、ｓｔｒｏｎｇ−Ｃｏｂｂテスタ、Ｐｆｉｚｅｒテスタ、Ｅｒｗｅｋａテスタ、Ｈｅｂｅｒｌｅｉｎテスタ（又はＳｃｈｌｅｕｎｉｇｅｒ）テスタ、ｋｅｙテスタ及びｖａｎ  ｄｅｒ  Ｋａｍｐテスタが挙げられる。硬度測定の単位は、Ｋｇ／ｃｍ２である。
【０１２７】
「崩壊」は、試験装置のスクリーン上に残存する、不溶性のコーティング又はカプセル外殻の断片を除く、ユニットの任意の残留物が、明らかに堅固な核を有しない軟塊である状態として定義される。
【０１２８】
慣習的且つ広義に使用される「噴霧乾燥」という用語は、液体混合物を破壊して小さな液滴にすること（霧化）及び液滴から溶媒を蒸発させる強力な駆動力が存在する噴霧乾燥装置内で混合物から溶媒を迅速に除去することを包含するプロセスを指す。噴霧乾燥プロセス及び噴霧乾燥装置は、概して、「ペリーの化学エンジニアハンドブック（Perry's Chemical Engineers' Handbook）」、２０−５４頁〜２０−５７頁（第６版、1984）に記載されている。噴霧乾燥プロセス及び装置に関するさらなる詳細は、Marshall著「霧化及び噴霧乾燥（Atomization and Spray-Drying）」、50 Chem. Eng. Prog. Monogram. Series 2（1954）及びMasters著「噴霧乾燥ハンドブック（Spray Drying Handbook）」（第４版、1985）によって概説されている。
【０１２９】
本明細書中で使用する場合、「乾燥」という用語は、液滴又は粒子から溶媒を除去した結果として形成される液滴又は粒子を指す。
【０１３０】
本明細書中で使用する場合、「粒子」という用語は、ミクロ粒子、サブミクロン粒子及びマクロ粒子を含む。概して、粒子の直径、すなわち、最長寸法は、約１００ｎｍ〜５ｍｍの間である。粒子は、球、カプセル、不規則形状、結晶、粉末、凝集体又は凝集塊である可能性がある。
【０１３１】
本発明は、非機能的な（ｉｎｓｔａ−ｃｏａｔ、ｋｏｌｌｉｃｏａｔ  ＩＲ）又は腸溶性のコーティング剤、例えば、セルロース系ポリマー、フィルムコーティング剤又はポリメチルアクリレートと、当業者に既知の他のコーティング剤とを共に含み得るコーティング剤の使用を考慮する。
【０１３２】
本発明は、広範な一構成態様において、共有結合的にコンジュゲートした治療剤複合体を含む製剤であって、治療剤がポリマーの１つ又は複数の分子と共有結合し、該ポリマーが、その不可欠の部分としてポリアルキレングリコール部分等の親水性部分及び脂肪酸部分等の親油性部分を包含する、製剤に関する。好ましい一態様において、治療剤は、直鎖ポリアルキレングリコールポリマー（その不可欠の部分として、脂肪酸部分等の親油性部分が包含される）の１つ又は複数の分子との共有結合によって共有結合的にコンジュゲートすることができる。
【０１３３】
本発明において使用する修飾インスリンコンジュゲートは、アルキル鎖が親油性である一方で、親水性であるポリエチレングリコール部分を含む、本質的に両親媒性である低分子量ポリマー又はオリゴマーを結合することによって開発される。この結合により、薬物分子の溶解度が変化すると共に、消化管における酵素分解に対してタンパク質又はペプチドが安定化する。コンジュゲートした薬物は、天然状態の薬物よりも効率良くＧＩ壁を通過して吸収される。血流を横切る際に、親水性及び疎水性の鎖間の結合が加水分解されて、活性の高いインスリン−ＰＥＧ化合物が血中で循環するため、薬物の薬物動態が都合良く変化する。
【０１３４】
本発明は具体的には、ＩＮ−１０５分子に関する。ＩＮ−１０５は、インスリンＢ鎖のＢ２９位のε−アミノ酸リジンで、構造式ＣＨ３Ｏ−（Ｃ４Ｈ２Ｏ）３−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯＯＨの両親媒性オリゴマーとコンジュゲートしたインスリン分子である。
【０１３５】
本発明の最も重要な態様の１つの通り、本発明のカチオン−ペプチドコンジュゲート複合体、カチオン−インスリンコンジュゲート複合体は、分裂促進能が低減していることを特徴とする。本発明中で記載するコンジュゲートは、長期の使用後であっても、分裂促進反応を誘導するリスクが比較的少ないか、又は全くないという事実から有利であるため、糖尿病の長期の治療及び管理に安全に使用することができる。本発明の治療化合物は、分裂促進能がＩｎｓｕｇｅｎ（登録商標）と比較した場合に３分の１に低減していることを特徴とする。
【０１３６】
本発明の重要な一態様によれば、薬品中の賦形剤が原薬の分裂促進特性に影響を与えないため、製剤又は組成物の分裂促進能は、現在市販されているインスリン治療薬剤と比較した場合に相対的に小さいままである。
【０１３７】
「天然の対応物」は、修飾対応物と同様の基本的なｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏでの生理活性を示す非修飾ペプチド／タンパク質を指し、すなわち、該分子は、任意の種類の修飾を施す前のペプチド／ポリペプチドである。
【０１３８】
標準的な専門用語によれば、「分裂促進的」という用語は、細胞の分裂を刺激するような物質を定義し、それがなければ（すなわち、この物質の影響なしには）非常に分裂が制限される。
【０１３９】
本発明において提示される物質の発明的価値は、特定の経験及び実験を参酌して、専門家が、インスリン自体が分裂促進的な物質であると見なしたと考えている事実において明らかであり［DeMeyts P著「インスリンとインスリン様増殖因子−１受容体との結合及び負の協同性の構造基盤並びにその分裂促進シグナル伝達対代謝シグナル伝達との関連性（The structural basis of Insulin and Insulin-like growth factor-1 receptor binding and negative cooperativity and its relevance to Mitogenic versus metabolic signaling）」Diabetologia 37: S135-S148, 1994］、Ish-Shalom D, Christoffersen CT, Vorwerk P, Sacerdoti-Sierra N, Shymko RM, Naor D及びDe Meyts P著「インスリン受容体によって媒介されるインスリン及びインスリン類似体の分裂促進性（Mitogenic properties of Insulin and Insulin analogues mediated by the insulin receptor）」Diabetologia 40: S25-S31、本発明のタンパク質／ペプチド、それらのコンジュゲート及び／又はカチオン−ポリペプチドコンジュゲート複合体は、Ｂａｌｂ  ３Ｔ３−Ａ３１細胞の測定可能な増殖のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの誘導によって求められる分裂促進能が３分の１に減少していることを示している。
【０１４０】
本発明の一態様によれば、細胞によるＡｌａｍａｒ  ｂｌｕｅ色素取込みによって測定される、本発明の例示化合物が誘導する細胞増殖のレベルが低いものの検出することができる場合には、本発明の例示化合物は、Ｉｎｓｕｇｅｎ（登録商標）と比較して「分裂促進性が低減」していると言われる。当業者は、他の好適な方法を使用することができると共に、本発明が決して特定の増殖アッセイに限定されるものではないことを認識するであろう。
【０１４１】
本発明の一態様によれば、細胞によるＡｌａｍａｒ  ｂｌｕｅ色素取込みによって測定される、本発明の例示化合物が誘導する細胞増殖のレベルが低いため検出することができない場合には、本発明の例示化合物は、Ｉｎｓｕｇｅｎ（登録商標）と比較して実質的に「非分裂促進的」であると言われる。当業者は、他の好適な方法を使用することができると共に、本発明が決して特定の増殖アッセイに限定されるものではないことを認識するであろう。
【０１４２】
比色法によるｉｎ  ｖｉｔｒｏでのバイオアッセイを、分裂促進活性の定量化に用いた［Okajima T., Nakamura K., Zhang H., Ling N., Tanabe T., Yasuda T.及びRosenfeld R. G.著「細胞増殖及びグルコース消費のインスリン様増殖因子（ＩＧＦ）刺激に対する高感度比色バイオアッセイ：ＩＧＦアナログの試験における使用（Sensitive Colorimetric Bioassays for Insulin-like Growth Factor  (IGF) Stimulation of Cell Proliferation and Glucose Consumption: Use in Studies of IGF Analogs）」Endocrinology, 1992, Vol. 120: 2201-2210］。
【０１４３】
生物学的アッセイは、平行線法の助けを借りて分析することが多い。用量の対数を横軸にプロットする一方で、対応する応答を縦軸に表す。各処置に対する個体応答を、標準調製品については青色の三角、試料調製品については緑色の四角の記号で表す。
【０１４４】
平行線モデルの助けを借りて、以下の仮説の統計学的妥当性を試験する：
１．用量応答関係は、標準調製品及び試料調製品に関して線形である。
２．用量応答曲線には有意な勾配がある。
３．標準調製品及び試料調製品の用量応答曲線は平行である。
【０１４５】
平行線手順には、従来の一点アッセイと比較して幾つかの利点がある。上述の仮説を確認するために、
１．線形の用量応答相関の仮定だけではなく、証明も行い、
２．用量非依存的な相対能を得る。
【０１４６】
少なくとも４つの連続点から成る曲線の線形部分に関して、４−パラメータロジスティック（logistics）曲線への当てはめを利用することによって、分裂促進能の再現性を分析した。この結果から、ＩＮ１０５の分裂促進能は、Ｉｎｓｕｇｅｎ（登録商標）と比較して統計的に３分の１であることが示された。
【０１４７】
本発明の重要な一態様の通り、粉末形態及び透析溶液のＩＮ−１０５分子の分裂促進能は同一である。ＩＮ−１０５の分裂促進能は、Ｉｎｓｕｇｅｎ（登録商標）と比較した場合に３分の１である。
【０１４８】
本発明のまた別の重要な態様の通り、ＨＩＭ２分子の分裂促進能は、Ｉｎｓｕｇｅｎ（登録商標）と比較した場合に３０分の１である。
【０１４９】
限定するものではないが、本発明の例示誘導体、例えば、ＩＮ−１０５は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞増殖を、その天然の対応物の少なくとも２０％又は少なくとも２５％又は少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％に低減させる。より好ましくは少なくとも３０％のレベルに低減させる。
【０１５０】
限定するものではないが、本発明の例示誘導体、例えば、ＨＩＭ−２は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞増殖を、その天然の対応物の少なくとも２％又は少なくとも２．５％又は少なくとも３％、少なくとも３．５％に低減させる。より好ましくは少なくとも３．８％のレベル、最も好ましくは少なくとも４％に低減させる。
【０１５１】
本発明のまた別の態様によれば、インスリンのその同族受容体への結合の評価は、原薬形態であるＩｎｓｕｇｅｎ（登録商標）、ＩＮ−１０５及びＨＩＭ−２の相対的な結合親和性を比較して行う。本発明の最も重要な態様は、その天然の対応物との比較で分裂促進能が相当程度低減するにもかかわらず、本発明の例示化合物の代謝活性が、影響されることも損なわれることもなく残存するという事実に関する。
【０１５２】
代謝作用としてのインスリンの細胞に対する効果は、インスリンがインスリン受容体に結合する能力に依存し、本発明において例示する代謝アッセイは、分化した脂肪細胞によるグルコース取込みに対するインスリンの効果を求めることにより、本発明の例示原薬の代謝効率を評価及び比較するためのデータを提供するのに役立つ。
【０１５３】
薬品からの原薬の抽出：
Ｉｎｓｕｇｅｎ（登録商標）及び本発明の例示化合物、例えば、ＩＮ１０５及びＨＩＭ２を、Ｚｎ不含且つ賦形剤不含の原薬の調製に使用する。バイアルを氷酢酸（ｐＨ約３．４）を用いて清澄化する。清澄化溶液をＣ８シリカ逆相カラムにローディングし、２５０ｍＭ酢酸及び１００％エタノールによる勾配溶出を用いて分離する。溶出時に分画物を回収し、９９％以上の純度を基準としてプールする。この溶出プールを、１ＫＤカットオフ膜を用いて１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）に対して１５時間透析する。最後に、ｐＨ８．０で得られる、透析したＺｎ不含且つ賦形剤不含のインスリンを分析用ＲＰ−ＨＰＬＣによって分析する。
【０１５４】
ＨｅｐＧ２細胞は、ＡＴＣＣから入手した。ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）、熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１００×ペニシリン−ストレプトマイシン溶液及び１００×ＨＥＰＥＳ塩溶液は、Invitrogenから調達した。ウシ血清アルブミン、水酸化ナトリウム、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ  １００及び重炭酸ナトリウムは、Sigma Aldrichから入手した。
【０１５５】
放射標識組換えヒトインスリンは、比放射能が２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌｅのもの（カタログ番号Ａ３６４７４）をImmunotech（Beckman Coulter）から調達する。
【０１５６】
方法：
ＨｅｐＧ２細胞を、５％  ＣＯ２雰囲気中３７℃の加湿条件下で、１０％  ＦＢＳ及び１×ペニシリン−ストレプトマイシン溶液を添加した１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝ＤＭＥＭ中に維持する。アッセイのために、ＨｅｐＧ２細胞をトリプシン処理し、２４ウェルプレートの１ウェル当たり４０００００個の細胞密度で播種した。３日間インキュベートした後、細胞を用いて放射性リガンド結合アッセイを実施する（１、２）。
【０１５７】
アッセイを実施する前に、培地を除去し、細胞を、結合緩衝液（ＤＭＥＭ、２．２ｍｇ／ｍｌ重炭酸ナトリウム、１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン及び５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ）で２回洗浄して、培地中に存在する任意の微量の増殖因子を除去する。固定量の放射性リガンド（０．３２５ｎＭ）及び種々の濃度の非放射性インスリン原薬（１０−１３Ｍ〜１０−５Ｍ）を用いて２連で競合結合実験を準備する。最終反応体積は１ｍｌとする。次いで、プレートを、６０ｒｐｍに設定した振盪機を用いて１５℃で一晩インキュベートする（２）。翌日、ウェルからすべての培地を廃棄し、各ウェルを、氷冷した結合緩衝液で２回洗浄する。
【０１５８】
各ウェルには、可溶化試薬（０．５Ｍ水酸化ナトリウム、０．５％  Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ  １００）１ｍｌを入れた。可溶化させた細胞ペレットをラジオイムノアッセイチューブに移し、結合放射能を、γ線計数器（Stratec BioMedical Systems、ドイツ）で読み取った。この機器は、較正されており、８０％の効率であることが分かっている。
【０１５９】
結合親和性の算出：
使用したインスリンの様々な濃度でのカウント／分（ＣＰＭ値）を正規化するために、結合％は、以下の等式を用いて算出した；
結合％＝（ＣＰＭ試料−ＣＰＭブランク）／（ＣＰＭコントロール−ＣＰＭブランク）×１００
（式中、ＣＰＭコントロールは、非放射性インスリンを全く加えず、放射標識インスリンを加えた細胞を含有したウェルの平均ＣＰＭであり、ＣＰＭブランクは、非放射性インスリンだけでなく放射標識インスリンも含有しなかったウェルの平均ＣＰＭであり、ＣＰＭ試料は、種々の濃度の非放射性インスリンだけでなく、放射標識インスリンも含有したウェルの平均ＣＰＭであった）。
【０１６０】
競合結合曲線の分析：
競合結合実験では、様々な濃度の非標識リガンドの存在下で単一濃度の標識リガンドの結合が測定される。競合結合実験は、標識及び非標識リガンドと同一の化合物を用いることによって受容体数及び親和性を求めるために使用する。
【０１６１】
実験は、単一濃度の放射性リガンドを用いて行われる。インキュベーションは、平衡に達するまで行うべきであり、典型的には、非標識化合物の種々の濃度が約６桁の範囲にわたる。
【０１６２】
曲線の上部は、競合する非標識薬物非存在下の放射性リガンド結合に等しい値のプラトーである。これは、合計結合である。曲線の下部は、非特異的結合（ＮＳ）に等しいプラトーである。上部及び下部のプラトーの差が、特異的結合である。
【０１６３】
Ｙ軸は、ｃｐｍとして表すか、又はｆｍｏｌ結合／ｍｇタンパク質若しくは結合部位数／細胞のようなさらに有用な単位に変換することができる。１００％（競合物なし）〜０％（最大濃度の競合物での非特異的結合）のデータを正規化することが可能である。
【０１６４】
上部及び下部のプラトーの半分の放射性リガンド結合を生じる非標識薬物の濃度は、ＩＣ  ５０（５０％阻害濃度）と呼ばれ、ＥＣ５０（５０％有効濃度）とも呼ばれる。ＩＣ５０は、特異的結合を半分阻害する非標識薬物の濃度である。
【０１６５】
標識及び非標識リガンドが単一の結合部位で競合する場合には、競合結合曲線の斜度は、質量作用の法則によって求められる。
【０１６６】
非線形回帰は、競合結合曲線に当てはめてｌｏｇ（ＩＣ５０）を求めるために使用される。典型的には、Ｇｒａｐｈ  ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用い、一部位競合モデル式を用いて、Ｌｏｇ（ＩＣ５０）を求める。
【０１６７】
ＩＣ  ５０（放射性リガンドの特異的結合の５０％を阻害する非標識薬物の濃度）の最良適合値を求めるためには、非線形回帰問題が１００％（合計）プラトー及び０％（非特異的）プラトーを決定可能である必要がある。非標識薬物の広範な濃度に渡って集めたデータによれば、曲線は明確に決まった下部及び上部のプラトーを有しており、プログラムは、難なく３つすべての値（両方のプラトー及びＩＣ  ５０）を適合させているはずである。
【０１６８】
合理的に製剤化された組成物は、即時放出時に生体利用可能である。上記したタイプの結合によりコンジュゲートされた治療剤において、ポリマー構成成分は、好適に構築、修飾又は適宜官能基化されて、選択的に、結合によりコンジュゲートする能力を付与することができる。
【０１６９】
一態様において、本発明は、１つ又は複数の飽和若しくは不飽和のＣ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９若しくはＣ１０脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩を含む、脂肪酸組成物を提供する。好ましい脂肪酸は、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸及びラウリン酸である。好ましい脂肪酸塩は、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸及びラウリン酸のナトリウム塩である。
【０１７０】
修飾部分は、他の親水性ポリマーを含んでもよい。例としては、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、例えば、ポリ（オキシエチル化グリセロール）、ポリ（オキシエチル化ソルビトール）及びポリ（オキシエチル化グルコース）；ポリ（ビニルアルコール）（「ＰＶＡ」）；デキストラン；並びに糖質系ポリマー等が挙げられる。ポリマーは、直鎖又は分枝鎖である、上記ポリマーのモノマーから成る、ホモポリマー又はランダムコポリマー若しくはブロックコポリマー及びランダムターポリマー若しくはブロックターポリマーである可能性がある。
【０１７１】
当業者は、使用するカチオン−インスリン化合物コンジュゲートの合計量を求めることができる。治療剤の量は、特定の活性剤の目的を実現するのに有効な量である。組成物中の量は、治療的有効用量、すなわち、薬理学的に又は生物学的に有効な量である。しかしながら、その量は、組成物をカプセル、錠剤又は液体等の単位剤形で使用する場合には、薬理学的に又は生物学的に有効な量を下回る可能性がある。というのも、単位剤形が、複数の送達剤／生物学的又は化学的活性剤組成物を含有してもよく、又は、分割して薬理学的に又は生物学的に有効な量を含有してもよいからである。そして、合計有効量は、薬理学的又は生物学的又は化学的に活性な量の生物学的活性剤又は薬理学的活性剤を合計で含有する累積単位で投与することができる。
【０１７２】
或る特定の好ましい実施形態において、１つ又は複数の剤形に含有される医薬組成物は、送達剤を約５ｍｇ〜約８００ｍｇ、好ましくは約１０ｍｇ〜約６００ｍｇ、より好ましくは約１０ｍｇ〜約４００ｍｇ、さらにより好ましくは約２５ｍｇ〜約２００ｍｇ、最も好ましくは約７５ｍｇ、１００ｍｇ又は１５０ｍｇ含む。より好ましくは、組成物は、摂食した糖尿病患者への経口投与後約１５分〜約６０分以内に、より好ましくは経口投与後約１０分〜２０分以内に、血漿インスリン濃度のピークを与える。
【０１７３】
本発明の目的のために、治療的有効量のインスリンを含む本発明の剤形が、治療効果を達成する１つ又は複数の単位用量（例えば、錠剤、カプセル、粉末、半固体、経口噴霧剤、舌下錠（例えば、ジェルキャップ又はフィルム））を含み得ることが考慮される。さらに、本発明の目的のために、剤形の好ましい実施形態が経口剤形であることが考慮される。
【０１７４】
場合によっては、複合体形成したインスリン化合物コンジュゲートは、科学的に許容可能なコントロール、例えば、対応する複合体形成していないインスリン化合物コンジュゲートと比べてｐＫプロファイルが長期化するか、又はそうでなければ変化する。ｐＫプロファイルは、例えば、マウス、ラット、イヌ又はヒトにおける標準的なｉｎ  ｖｉｖｏでの実験を用いて判定することができる。カチオン−インスリン化合物コンジュゲート複合体の特質を判定する本明細書中に記載するアッセイは、本発明の一態様である。
【０１７５】
好ましい態様において、酵素分解耐性を有する、タンパク質／ペプチド、それらのコンジュゲート及び／又はカチオン−ポリペプチドコンジュゲート複合体から選択される少なくとも１つの生物学的に活性な化合物を含む、経口送達可能な錠剤を製造するプロセスであって、
１．好適な飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩を粉砕する工程と、
２．工程（１）から得られた脂肪酸を有機溶媒を用いて造粒する工程と、
３．工程（２）から得られた顆粒を風乾させる工程と、
４．メッシュを通して乾燥顆粒を削り、所望の粒度の顆粒を得る、削る工程と、
５．脂肪酸顆粒に対して、カチオン−インスリン化合物コンジュゲート、崩壊剤、結合剤及び他の賦形剤を配合する工程と、
６．錠剤を圧縮、研磨及び包装する工程と、
を含む、プロセス。
【０１７６】
また別の好ましい態様において、酵素分解耐性を有する、タンパク質／ペプチド、それらのコンジュゲート及び／又はカチオン−ポリペプチドコンジュゲート複合体から選択される少なくとも１つの生物学的に活性な化合物を含む、経口送達可能な錠剤を製造するプロセスであって、
１．好適な飽和若しくは不飽和のＣ４〜Ｃ１２脂肪酸及び／又はかかる脂肪酸の塩、例えば、カプリン酸ナトリウム、ＰＶＰ−Ｋ−３０を粉砕する工程と、
２．結合剤としてのＰＶＰＫ−３０を用いて、ＩＮ−１０５を有機溶媒中に懸濁させて、湿塊を形成する、懸濁させる工程と、
３．結合剤としてＰＶＰ−Ｋ３０を用いて、得られた構成成分を造粒する工程と、
４．４５＃（３５５μｍ）を通して乾燥カプリン酸ナトリウム顆粒を削る工程と、
５．カプリン酸ナトリウム顆粒に他の賦形剤を配合する工程と、
６．錠剤を圧縮、研磨及び包装する工程と、
を含む、プロセス。
【０１７７】
本発明の最も重要な態様によれば、本発明の組成物に適用される「安定な」という用語は、本発明の目的のために、（ｉ）約２℃〜８℃、２５℃、３０℃及び４０℃の温度、（ｉｉ）少なくとも１年間の２５℃／６０％相対湿度（ＲＨ）、３０℃／６５％相対湿度、４０℃／７５％相対湿度又は例示した条件の任意の組合せを含む群から選択される様々な保存条件に製剤を曝露した後であっても、製剤が分解されずに残存するか、又は許容できない程度にまで分解しないことを意味する。本発明の本質に関する文脈において、分解されない、又は許容できない程度にまで分解しないことは、投与製剤構成成分が、試験期間中の安定性の適用限界内で十分に残存することを意味するものとする。
【０１７８】
本発明の一態様によれば、安定性の試験は、１ヶ月〜１２ヶ月、好ましくは１ヶ月、好ましくは２ヶ月、好ましくは３ヶ月、好ましくは４ヶ月、好ましくは５ヶ月、好ましくは６ヶ月、好ましくは７ヶ月、好ましくは９ヶ月、好ましくは１１ヶ月、最も好ましくは１２ヶ月の期間行われる。本発明は、剤形が約２年にわたる期間の間、適合性を保つという安定性特質を考慮する。
【０１７９】
本発明の医薬組成物の安定性特質は、温度の異なる試験条件、例えば、２℃〜８℃の範囲の低温条件、２５℃〜３０℃の周囲室温条件及び４０℃のやや高温の条件で評価する。当業者には明らかなように、温度条件及び該温度条件で実証される安定性は、本明細書中で試験する温度条件に厳密に限定しなくてもよい。本発明は、試験条件の間に示される安定性特質が低温及び高温の広範な範囲内で実証されるように拡張されることを考慮する。組成物及びその安定性特質は、２℃〜４０℃の温度範囲では大きく変動しない。
【０１８０】
本発明の医薬組成物の安定性特質は、相対湿度の異なる試験条件、例えば、２５℃／６０％相対湿度（ＲＨ）、３０℃／６５％相対湿度、４０℃／７５％相対湿度のＲＨ条件又は本明細書中に例示した条件の組合せで評価する。当業者には明らかなように、相対湿度条件及び該温度条件で実証される安定性は、本明細書中で試験する相対湿度条件に厳密に限定しなくてもよい。本発明は、試験条件の間に示される安定性特質が本明細書中に明示的には開示されていない広範な相対湿度温度の範囲内で実証されるように拡張されることを考慮する。組成物及びその安定性特質は、２５℃／６０％〜４０℃／７５％の範囲の相対湿度では大きく変動しない。
【０１８１】
本発明の一態様によれば、本発明の組成物は、組成物の少なくとも９５％±２％が、
（ａ）約２℃〜８℃又は２５℃〜４０℃の温度範囲、
（ｂ）少なくとも６ヶ月の期間にわたる２５℃／６０％相対湿度（ＲＨ）、３０℃／６５％相対湿度、４０℃／７５％相対湿度、
を含む群から選択される条件への曝露に対して分解されずに残存することを特徴とする。
【０１８２】
本発明の一態様によれば、本発明の組成物は、組成物の少なくとも９５％±２％が、
（ａ）約２℃〜８℃又は２５℃〜４０℃の温度範囲、
（ｂ）少なくとも６ヶ月の期間にわたる２５℃／６０％相対湿度（ＲＨ）、３０℃／６５％相対湿度、４０℃／７５％相対湿度、
を含む群から選択される条件への曝露に対して分解されずに残存することを特徴とする。
【０１８３】
本発明のまた別の態様によれば、錠剤組成物に対して試験する様々な安定性特質としては、限定するものではないが、硬度、崩壊時間、溶出プロファイル及びクロマトグラフィ純度が挙げられる。
【０１８４】
よって、本発明の様々な実施形態の通り、投薬及び好都合な投与方法に関して様々な利点が示される。特許請求している合理的に設計された、測定される他の賦形剤の構成成分を含む、ＩＮ−１０５の経口製剤、及び経口投与可能な錠剤を製造するプロセスがｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏで放出プロファイルに影響を及ぼすことなく容易に拡張可能であることを本発明者らが提案しているように、本発明は、従来技術の組成物に対してまた別の利点を構成する。また、この合理的に設計された経口製剤及びそれを作製するプロセスに起因して、拡張性因子は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの薬物性能又はそのｉｎ  ｖｉｖｏでの放出プロファイルに影響を与えない。
【０１８５】
本発明の重要な態様の１つは、組成物を噴霧乾燥して、カチオン−インスリンコンジュゲート複合体の均質非晶質混合物を得ることに関する。
【０１８６】
種々のパラメータを最適化することにより、液滴の平均の大きさを変えることができる。液滴の大きさは、例えば、超臨界に近い流体の圧力又は高圧ガスの圧力を調整すること、懸濁液又は溶液の圧力を調整すること、懸濁液又は溶液の流速を調整すること、ノズル管内径を選択すること、乾燥ガスの温度を調整すること、粒子形成槽内部の圧力を調整すること、及び／又は懸濁液若しくは溶液の構成要素の濃度を変化させること等によって影響される可能性がある。例えば、懸濁液又は溶液は、約０．５ｍｌ／分〜約４０ｍｌ／分で混合チャンバに供給して、内径１００μｍのノズル孔から噴霧することができ、速度が低いほど、小さな液滴が形成され、速度が高いほど、大きな液滴が形成される。この方法では、質量中央径が約１μｍ〜約２００μｍの範囲の液滴を形成することが好ましい。
【０１８７】
本発明において、噴霧乾燥が効率良く行われる温度は通常、約８０℃〜約３００℃、好ましくは約１００℃〜約１８０℃の範囲である。温度制御は、温度感受性の高い物質から成るか、又はこれを含有する製品粒子の安定性の維持に特に重要である可能性がある。
【０１８８】
本発明の或る特定の実施形態を用いて得られた医薬組成物は、本発明の化合物の有益な効果を享受することができる任意の動物に投与することができる。かかる動物の中でもヒトが一番に挙げられるが、本発明はそのように限定されるものではない。
【０１８９】
本発明において粉末製剤粒子を製造する方法は、例えば、生体活性材料及びポリオールの水懸濁液又は水溶液（任意選択で他の適合性医薬賦形剤の１つ又は複数を含む）を調製すること、溶液又は懸濁液と加圧ガスとの混合物を形成すること、混合物を減圧することによって超微細な液滴を噴霧すること、並びに噴霧ガスを乾燥ガスに交換すること、例えば、噴霧乾燥装置の乾燥チャンバ内に噴霧することによって液滴を乾燥させて粉末粒子にすることを含み得る。
【０１９０】
「溶媒」という用語は、噴霧乾燥粒子の原体を形成する材料を、噴霧乾燥機の霧化機に送達するために溶解、懸濁又は乳化させ、且つ乾燥ガスへ蒸発する、液体を指し、液体は、その材料にとって溶媒又は非溶媒であるかを問わない。溶媒の選択は、原体材料及び霧化機に供給される材料の形態、例えば、材料を溶媒に溶解、懸濁又は乳化させるかどうかによって決まる。本発明の文脈における最も好ましい溶媒は水である。
【０１９１】
噴霧乾燥法を用いる場合、希釈剤と組み合わせた、カチオン−インスリン化合物コンジュゲートから成る群から選択される活性成分のうち少なくとも１つを含む溶液の形態の原料は、噴霧乾燥されて粒子を生じる。
【０１９２】
薬物溶液の粒子の大きさは、ポリマー溶液の噴霧に使用する霧化機、霧化機の圧力、流速、使用する成分、その濃度、溶媒のタイプ、粘度、噴霧する温度（入口温度及び出口温度の両方）及び治療剤の分子量に応じて決まる。概して、濃度が同一であると仮定した場合、分子量が大きいほど、粒度は大きくなる。
【０１９３】
本発明の態様の１つは、直接圧縮法及び噴霧乾燥法によって製造したカチオン−インスリン化合物コンジュゲート経口組成物の２つのプロトタイプ製剤の比較によるイヌクランプ試験に関する。
【０１９４】
以下の測定を実施した：グルコース注入速度、血漿インスリン濃度及び血漿グルコースレベル（内因性インスリン化合物放出の推定を可能にする）。正常血糖の維持に必要なグルコース注入速度は、インスリン化合物作用の指標となる。グルコース注入速度及び血漿インスリンレベルを評価し、比較した。
【０１９５】
噴霧乾燥方法によって製造したプロトタイプ製剤は、薬物吸収及び得られるグルコース注入速度のレベルが一定しており、安定性又は生物学的活性が失われない。
【０１９６】
プロトタイプ製剤Ｉ（製剤８６２）は以下の組成を有する。
【０１９７】
【表１】
0005868594.tif 000002
【０１９８】
以下の実施例において、本発明をさらに定義する。当然のことながら、これらの実施例は、本発明の好ましい実施形態を示してはいるが、例示のみを目的とするものである。上記の説明及びこれらの実施例から、当業者は、本発明の本質的な特徴を見分けることができ、その精神及び範囲を逸脱することなく、様々な用途及び条件に適応するように本発明の様々な変化形態及び変更形態を作製することができる。
【０１９９】
本発明は、以下の実施例からより深く理解されるであろう。しかしながら、当業者は、これらの実施例がその後に続く特許請求の範囲において特定する本発明の単なる例示に過ぎないことを容易に理解するであろう。
【０２００】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を表す。
【０２０１】
実施例Ｉ：
本発明に係る薬物製剤を製造及び試験した。よって、必要量の粉砕したカプリン酸ナトリウムをプラネタリーミキサ（遊星ミキサ）内に精秤し、イソプロピルアルコール７００ｍｌを用いて造粒した。粉末混合物を顆粒形態に変換するために加えるイソプロピルアルコールの量を算出した。混合物が遊星ミキサの壁に付着しないように、湿塊は５分毎に解砕した。湿塊を、湿式造粒機内で１８＃ふるいに通し、フード下で一晩風乾させた。
【０２０２】
顆粒の含水量：試料重量＝０．６６２ｇｍ；含水量の％＝２．２７％
【０２０３】
適量のＩＮ−１０５、カプリン酸ナトリウム顆粒、Ｋｏｌｌｉｄｏｎ  ＣＬ及びｐｅａｒｌｉｔｏｌを秤量し、６０＃ふるいに通し、ダブルコーンブレンダ内で１２ｒ．ｐ．ｍ．の速度で２０分間混合した。２０分間均質混合した後、この配合物を、８８ｒ．ｐ．ｍ．〜９０ｒ．ｐ．ｍ．の速度で３分間、ａｅｒｏｓｏｌ及びステアリン酸マグネシウムで滑沢させた。
【０２０４】
【表２】
0005868594.tif 000003
【０２０５】
実施例Ｉの通りに製造した錠剤を、２６時間絶食させた６匹の健常雄ビーグル犬で試験した。各錠剤は、水２０ｍｌと共に投与した。血液試料を採取して、血中グルコース及び血漿インスリンレベルを測定した。図１及び図２に表すように、錠剤により血漿インスリンレベルは急激に増加し、投与時から２０分のＴｍａｘで約１００ｍＵ／ｍｌのＣｍａｘを示し、それに対応する形で血漿グルコース濃度が約３５％降下した。
【０２０６】
こうして製造した錠剤を、ＩＣＨガイドラインの通りに安定性試験に供した。３０℃／６５％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨで加速安定性試験を実行しながら、２℃〜８℃及び２５℃で長期試験を実行した。
【０２０７】
【表３】
0005868594.tif 000004
【０２０８】
【表４】
0005868594.tif 000005
【０２０９】
【表５】
0005868594.tif 000006
【０２１０】
【表６】
0005868594.tif 000007
【０２１１】
実施例２：
ミルにかけられたカプリン酸ナトリウムを精秤し、遊星ミキサに入れ、２分間混合した。秤量した必要量のＩＮ−１０５を、０．３５％（ｗ／ｗ）のポリビニルピロリドンを含むイソプロパノールに加えて懸濁液を形成し、マグネティックスターラを用いて３０分間十分に撹拌した。適量のイソプロパノールを造粒時に加えた。
【０２１２】
顆粒を遊星ミキサ内で１５分間混合し、１４＃ふるいに通し、熱風炉内で３０℃で２時間乾燥させた。
【０２１３】
【表７】
0005868594.tif 000008
【０２１４】
遊星ミキサの速度＝４（１５分間）。加えたＩＰＡの体積＝２００ｍｌ。
【０２１５】
０．７ｇｍ（０．３５％）ＰＶＰ＋７．３３ＧＭ。ＩＮ−１０５を、８０ｍｌのＩＰＡに懸濁させた。残りの６．３ｇｍのＰＶＰを、４０ｍｌのＩＰＡに懸濁させた。残存量のＩＰＡを加えて、硬質な湿塊を形成した。
【０２１６】
配合プロセス：
精秤量のＩＮ−１０５＋カプリン酸ナトリウム＋ＰＶＰ  Ｋ−３０顆粒、Ｐｅａｒｌｉｔｏｌ及びＫｏｌｌｉｄｏｎ  ＣＬを４５＃ふるいに通し、オクタゴナルブレンダ内で混合した。均質混合後、この配合物を、Ａｅｒｏｓｉｌ及びステアリン酸マグネシウムで滑沢させ、十分に混合し、錠剤に圧縮した。
【０２１７】
【表８】
0005868594.tif 000009
【０２１８】
実施例２の通りに製造した錠剤を、２６時間絶食させた６匹の健常雄ビーグル犬で試験した。各錠剤は、水２０ｍｌと共に投与した。血液試料を採取して、血中グルコース及び血漿インスリンレベルを測定した。図３及び図４に表すように、錠剤により血漿インスリンレベルは急激に増加し、投与時から２０分のＴｍａｘで約７５ｍＵ／ｍｌのＣｍａｘを示し、それに対応する形で血漿グルコース濃度がベースラインから約３５％降下した。
【０２１９】
こうして製造した錠剤を、ＩＣＨガイドラインの通りに安定性試験に供した。３０℃／６５％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨで加速安定性試験を実行しながら、２℃〜８℃及び２５℃で長期試験を実行した。
【０２２０】
【表９】
0005868594.tif 000010
【０２２１】
【表１０】
0005868594.tif 000011
【０２２２】
【表１１】
0005868594.tif 000012
【０２２３】
【表１２】
0005868594.tif 000013
【０２２４】
実施例３：
精秤量のＩＮ−１０５、カプリン酸ナトリウム＋β−シクロデキストリン複合体、重炭酸ナトリウム及びＫｏｌｌｉｄｏｎ  ＣＬを４５＃ふるいに通し、ポリエチレン袋内で混合した。均質混合後、この配合物を、Ａｅｒｏｓｉｌ及びステアリン酸マグネシウムで滑沢させ、十分に混合し、錠剤に圧縮した。
【０２２５】
【表１３】
0005868594.tif 000014
【０２２６】
【表１４】
0005868594.tif 000015
【０２２７】
【表１５】
0005868594.tif 000016
【０２２８】
【表１６】
0005868594.tif 000017
【０２２９】
【表１７】
0005868594.tif 000018
【０２３０】
実施例４：
精秤量のＩＮ−１０５、ラウリル硫酸ナトリウム、Ｋｏｌｌｉｄｏｎ  ＣＬ及びＰｅａｒｌｉｔｏｌを４５＃ふるいに通し、オクタゴナルブレンダ内で混合した。均質混合後、この配合物を、Ａｅｒｏｓｉｌ及びステアリン酸マグネシウムで滑沢させ、十分に混合し、錠剤に圧縮した。
【０２３１】
【表１８】
0005868594.tif 000019
【０２３２】
実施例４の記載のように製造した錠剤を、２６時間絶食させた６匹の健常雄ビーグル犬で試験した。各錠剤は、水２０ｍｌと共に投与した。血液試料を採取して、血中グルコース及び血漿インスリンレベルを測定した。得られた結果を図５及び図６に示す。こうして製造した錠剤を、ＩＣＨガイドラインの通りに安定性試験に供した。３０℃／６５％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨで加速安定性試験を実行しながら、２℃〜８℃及び２５℃で長期試験を実行した。
【０２３３】
【表１９】
0005868594.tif 000020
【０２３４】
【表２０】
0005868594.tif 000021
【０２３５】
【表２１】
0005868594.tif 000022
【０２３６】
【表２２】
0005868594.tif 000023
【０２３７】
実施例５：
造粒時に結合剤としてＰＶＰ  Ｋ−３０（２％（Ｗ／Ｗ））及び可塑剤としてＰＥＧ  ６０００（１％（Ｗ／Ｗ））及びＩＮ−１０５を加えた、カプリン酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム及びＰＥＡＲＬＩＴＯＬ顆粒の製造
精秤量の粉砕したカプリン酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム及びＰｅａｒｌｉｔｏｌを遊星ミキサに入れ、５分間乾式混合した。一方、ＰＶＰ  Ｋ  ３０をＩＰＡに溶解させ、ＩＮ−１０５を懸濁させた。ＰＥＧ  ６０００を水に溶解させた（５％（ｖ／ｖ））。この溶液を、マグネティックスターラを用いて十分に撹拌した。造粒剤としてＰＶＰＫ及びＰＥＧ溶液を用いて、カプリン酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム及びＰｅａｒｌｉｔｏｌを造粒した。このプロセスを２０分間実行した。形成した湿塊は、湿式造粒機内で１８＃ふるいに通し、ＬＡＦ内で乾燥させた。
【０２３８】
加えたＩＰＡの体積−１３０ｍｌ
１００ｍｌ＝ＩＮ−１０５＋ＰＶＰ  ｋ、６ｍｌ＝ＰＥＧ水溶液、遊星ミキサの速度＝２〜４（２０分間）
湿式造粒機の速度−２００ｒｐｍ
顆粒の含水量
試料の重量−０．５２５ｇｍ
含水量％−１．９９％
【０２３９】
【表２３】
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【０２４０】
【表２４】
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【０２４１】
精秤量のＩＮ−１０５＋カプリン酸ナトリウム＋重炭酸ナトリウム＋Ｐｅａｒｌｉｔｏｌ＋ＰＶＰ  Ｋ  ３０及びＰＥＧ顆粒を３５＃ふるいに通し、ダブルコーンブレンダ内でＫｏｌｌｉｄｏｎ  ＣＬと混合した。均質混合後、この配合物を、Ａｅｒｏｓｉｌ及びステアリン酸マグネシウムで滑沢させ、十分に混合し、錠剤に圧縮した。
【０２４２】
こうして製造した錠剤を、ＩＣＨガイドラインの通りに安定性試験に供した。３０℃／６５％ＲＨ及び４０℃／７５％ＲＨで加速安定性試験を実行しながら、２℃〜８℃及び２５℃で長期試験を実行した。
【０２４３】
【表２５】
0005868594.tif 000026
【０２４４】
【表２６】
0005868594.tif 000027
【０２４５】
【表２７】
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【０２４６】
【表２８】
0005868594.tif 000029
【０２４７】
これらは、望ましい薬物放出プロファイルを与える、好ましい用量比例的な製剤である。これらの製剤は、ほぼ一定のＩＮ−１０５を放出すると想定されている。
【０２４８】
実施例６：
１．６６３ｇｍのＩＮ−１０５及び５０ｇのカプリン酸ナトリウムを、１０％水酸化ナトリウムを用いてｐＨを８．２８に調整することによって水に溶解させた。溶液を噴霧乾燥用に取った。この溶液を並流式で８０℃で噴霧乾燥した。使用した霧化圧は１．５ｋｇ／ｃｍ２であり、噴霧乾燥機への供給流速は２ｍｌ／分であった。噴霧乾燥試料の純度は約９８％であり、予想される合計の５２ｇｍから、合計で１６ｇｍの顆粒及び１．５ｇｍの微粉末を回収した。
【０２４９】
この噴霧乾燥粉末を、マンニトール、ｅｘｐｌｏｔａｂ、コロイドシリカ及びステアリン酸マグネシウムのような他の製剤賦形剤と混合し、錠剤形態に圧縮した。次いで、これらの錠剤を、イヌクランプモデルで試験することにより、薬物動態的及び薬力学的な応答を観察した。
【０２５０】
実施例７：
濃度が３５ｇ／ｌであるＩＮ１０５の供給スラリを用いて噴霧乾燥試料を得た。賦形剤には、マンニトール及びカプリン酸ナトリウムを使用した。カプリン酸ナトリウム１０５０ｍｇ及びマンニトール１０１５ｍｇの混合物に、供給スラリ１ｍｌを含有する溶液２０ｍｌを加え、完全に混合した。この溶液を並流式で８０℃で噴霧乾燥した。使用した霧化圧は１．５ｋｇ／ｃｍ２であり、噴霧乾燥機への供給流速は２ｍｌ／分であった。試料に対する回収率は６０％前後であり、その噴霧乾燥試料の純度は約９８％であった。
【０２５１】
実施例８：
濃度が３５ｇ／ｌであるＩＮ１０５の供給スラリを用いて噴霧乾燥試料を得た。賦形剤には、マンニトール及びカプリン酸ナトリウムを使用した。カプリン酸ナトリウム１０５０ｍｇ及びマンニトール９４５ｍｇの混合物に、供給スラリ３ｍｌを含有する溶液２０ｍｌを加え、完全に混合した。溶液を並流式で８０℃で噴霧乾燥した。使用した霧化圧は１．２ｋｇ／ｃｍ２であり、噴霧乾燥機への供給流速は２ｍｌ／分であった。試料に対する回収率は６０％前後であり、その純度は後に９８．６％であることが判明した。
【０２５２】
実施例９：
濃度が３５ｇ／ｌであるＩＮ１０５の供給スラリを用いて噴霧乾燥試料を得た。賦形剤には、マンニトール及びカプリン酸ナトリウムを使用した。カプリン酸ナトリウム１０５０ｍｇ及びマンニトール１０１５ｍｇの混合物に、供給スラリ１ｍｌを含有する溶液２０ｍｌを加え、完全に混合した。この溶液を並流式で１２０℃で噴霧乾燥した。使用した霧化圧は１．５ｋｇ／ｃｍ２であり、噴霧乾燥機への供給流速は２ｍｌ／分であった。試料に対する回収率は６０％前後であり、その純度は後に９９．５％であることが判明した。
【０２５３】
実施例１０：
濃度が３５ｇ／ｌであるＩＮ１０５の供給スラリを用いて噴霧乾燥試料を得た。賦形剤には、マンニトール及びカプリン酸ナトリウムを使用した。カプリン酸ナトリウム１０５０ｍｇ及びマンニトール９４５ｍｇの混合物に、供給スラリ３ｍｌを含有する溶液２０ｍｌを加え、完全に混合した。この溶液を並流式で１２０℃で噴霧乾燥した。使用した霧化圧は１．２ｋｇ／ｃｍ２であり、噴霧乾燥機への供給流速は２ｍｌ／分であった。試料に対する回収率は６０％前後であり、その純度は後に９８．３％であることが判明した。
【０２５４】
実施例１１：
濃度が１１．５ｇ／ｌであるＩＮ１０５供給スラリを用いて、噴霧乾燥試料を得た。賦形剤には、マンニトール及びカプリン酸ナトリウムを使用した。カプリン酸ナトリウム３０００ｍｇ及びマンニトール２８８５ｍｇの混合物に、供給スラリ１０ｍｌを含有する溶液５０ｍｌを加え、完全に混合した。溶液を向流式で１５０℃で噴霧乾燥した。使用した霧化圧は０．８６ｋｇ／ｃｍ２であり、噴霧乾燥機への供給流速は４ｍｌ／分であった。試料純度は９４．７１％であることが判明した。
【０２５５】
イヌクランプ試験を通じてスクリーニングした２つのプロトタイプ製剤［製剤−８６２−直接圧縮法によって製造した錠剤］及び［製剤−８７２−噴霧乾燥法によって製造した錠剤］から、噴霧乾燥プロセスによって製造した製剤−８７２が、薬物吸収及び得られるグルコース注入速度のレベルが比較的一定しており、安定性又は生物学的活性が失われないことから、噴霧乾燥プロセスがカチオン−インスリン化合物コンジュゲート組成物を製造する非常に経済的で、商業的に実現可能であり、且つ拡張可能な方法を整えるプロセスとなることが示唆された。
【０２５６】
【表２９】
0005868594.tif 000030
【０２５７】
【表３０】
0005868594.tif 000031
【０２５８】
【表３１】
0005868594.tif 000032
【０２５９】
実施例１２：
Ｉｎｓｕｇｅｎ（登録商標）及びＩＮ１０５の１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８）溶液として製剤化した一晩透析したＤＳのＨＰＬＣ定量によって求めた濃度を示した。
【０２６０】
【表３２】
0005868594.tif 000033
【０２６１】
３Ｔ３−Ａ３１細胞は、ＡＴＣＣから入手した（マウス線維芽細胞、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１６３）。ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）、熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及びＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ色素は、Invitrogenから調達した。ＩＧＦ１及び１Ｍ  ＨＥＰＥＳ溶液は、Sigma Aldrichから入手した。３Ｔ３−Ａ３１細胞を、５％  ＣＯ２雰囲気中３７℃の加湿条件下で、１０％  ＦＢＳを添加した１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝ＤＭＥＭ中に維持した。アッセイのために、３Ｔ３−Ａ３１細胞を０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡでトリプシン処理した。細胞数をトリパンブルー染色を用いて血球計によって計数した。１ウェル当たり１００００個の細胞を、９６ウェルプレート内の０．５％  ＦＢＳを添加した１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝ＤＭＥＭに播種した。様々な濃度のそれぞれのインスリンを３連でウェルに加えた。様々な濃度の増殖因子と共に２０時間培養した後、Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ色素（１０％（ｖ／ｖ））を加え、３７℃のインキュベータでさらに４時間、プレートをさらにインキュベートした。蛍光（励起波長＝５３０ｎｍ；発光波長＝５９０ｎｍ）を、９６ウェルプレートリーダを用いて測定した。
【０２６２】
【表３３】
0005868594.tif 000034
【０２６３】
実施例１３：
Ｉｎｓｕｇｅｎ（登録商標）及びＩＮ１０５の１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８）溶液として製剤化した一晩透析したＤＳのＨＰＬＣ定量によって求めた濃度を表ＸＩＩＩに示す。
【０２６４】
【表３４】
0005868594.tif 000035
【０２６５】
３Ｔ３−Ｌ１細胞は、ＡＴＣＣから入手した。ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）、熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、ペニシリン−ストレプトマイシン溶液（１０×）及び１Ｍ  ＨＥＰＥＳ溶液は、Invitrogenから調達した。デキサメタゾン、イソブチルメチルキサンチン、４−アミノアンチピリン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−ｍ−トルイジン及びグルコースオキシダーゼ／ペルオキシダーゼ試薬は、Sigma Aldrichから入手した。
【０２６６】
３Ｔ３−Ｌ１細胞は、５％  ＣＯ２雰囲気中３７℃の加湿条件下で、１０％  ＦＢＳ、１００Ｕ／１００μｇペニシリン／ストレプトマイシンを添加した１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝ＤＭＥＭ（維持培地）中に維持した。代謝アッセイを実施するために、３Ｔ３−Ｌ１細胞を脂肪細胞に分化させる必要があった。３Ｔ３−Ｌ１細胞を０．２５％トリプシン−ＥＤＴＡでトリプシン処理した。細胞数は、トリパンブルー染色を用いて血球計によって計数した。１ウェル当たり２５０００個の細胞を９６ウェルプレート内の維持培地中に播種した。細胞は、次の２日間コンフルエントを達成させた。３日目に、細胞を分化培地（維持培地中、０．５ｍＭデキサメタゾン及び０．２５μＭイソブチルメチルキサンチン）で置き換えて、さらに４日間維持した。７日目に、分化培地を、再び維持培地に置き換えて、３日間維持した。９日目に、１×ＰＢＳ、及び１５ｍｌ遠心管に調製した様々な濃度の各インスリンの０．５％  ＦＢＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン及び１×Ｐｅｎ−Ｓｔｒｅｐを添加した低グルコース培地アッセイ緩衝液溶液で細胞を洗浄した。希釈液（dilutions）をウェル内に３連で加えた。様々な濃度のインスリンを用いて２２時間培養した後、グルコース推定のために、９６ウェルプレートをインキュベータから取り出した。グルコースは、培地中のグルコースをグルコン酸及び過酸化水素に変換するＧＯＰＯＤ試薬の助けを借りて推定した。形成された過酸化水素は、基質（４−アミノアンチピリン及びＮ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−ｍ−トルイジン）と反応して５５０ｎｍ波長で読み取ることができる紫色の生成物を与えた。代謝活性の算出：データ表示に関しては、培地中に残存するグルコース％を、「インスリンなし」の値を１００％と見なして測定した。
【０２６７】
このアッセイの結果から、Ｉｎｓｕｇｅｎ（登録商標）、ＩＮ１０５及びＨＩＭ−２のいずれの代謝能も同様であり、その代謝能がＰＬＡ分析の許容限度内（０．８〜１．２）であることが示され、図１４に表されるように、Ｉｎｓｕｇｅｎ及びＩＮ−１０５が代謝的に等価であることが実証された。図１４は、Ｉｎｓｕｇｅｎ（登録商標）対ＩＮ１０５及びＩｎｓｕｇｅｎ（登録商標）対ＨＩＭ−２の代謝能が同一であることを示す。Ｉｎｓｕｇｅｎ（登録商標）とＩＮ１０５の代謝能比は、１．１６６であることが分かり、Ｉｎｓｕｇｅｎ（登録商標）とＨＩＭ−２の代謝能比は１．１４９であることが分かった。データは、実験の３連定量値の平均値±ＳＥＭを表したものである。図１５は、ＰＬＡソフトウェアによって求めたＩｎｓｕｇｅｎ（登録商標）及びＩＮ１０５の様々な濃度にわたるバイオアッセイの平行性及び線形性を示す。このデータは、実験の３連値の平均±ＳＥＭを表す。
【０２６８】
【表３５】
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【０２６９】
実施例１４：
様々なインスリンバイアルを、氷酢酸（ｐＨ約３．４）を用いて清澄化した。次いで、清澄化溶液を、Ｃ８シリカ逆相カラムにローディングし、２５０ｍＭ酢酸及び１００％エタノールによる勾配溶出を用いて分離した。溶出時に分画物を回収し、９９％以上の純度を基準としてプールした。この溶出プールを、１ＫＤカットオフ膜を用いて１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）に対して１５時間透析した。最後に、ｐＨ８．０で得た、透析したＺｎ不含且つ賦形剤不含のインスリンを分析用ＲＰ−ＨＰＬＣによって分析した。Ｉｎｓｕｇｅｎ（登録商標）、ＩＮ１０５及びＨＩＭ−２の１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８）溶液として製剤化した一晩透析した亜鉛不含ＤＳのＨＰＬＣ定量によって求めた濃度を表ＸＶに示す。
【０２７０】
【表３６】
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【０２７１】
ＨｅｐＧ２細胞は、ＡＴＣＣ（ＡＴＣＣカタログ番号ＨＢ−８０６５）から入手した。ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）、熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１００×ペニシリン−ストレプトマイシン溶液及び１００×ＨＥＰＥＳ塩溶液は、Invitrogenから調達した。ウシ血清アルブミン、水酸化ナトリウム、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ  １００及び重炭酸ナトリウムは、Sigma Aldrichから入手した。
【０２７２】
放射標識組換えヒトインスリンは、比放射能が２２００Ｃｉ／ｍｍｏｌｅのもの（カタログ番号ＮＥＸ４２０）をPerkin Elmerから調達する。
【０２７３】
ＨｅｐＧ２細胞を、５％  ＣＯ２雰囲気中３７℃の加湿条件下で、１０％  ＦＢＳ及び１×ペニシリン−ストレプトマイシン溶液を添加した１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝ＤＭＥＭ中に維持する。アッセイのために、ＨｅｐＧ２細胞をトリプシン処理し、２４ウェルプレートの１ウェル当たり４０００００個の細胞密度で播種する。３日間インキュベートした後、細胞を用いて放射性リガンド結合アッセイを実施する（１、２）。
【０２７４】
アッセイを実施する前に、培地を除去し、細胞を結合緩衝液（ＤＭＥＭ、２．２ｍｇ／ｍｌ重炭酸ナトリウム、１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン及び５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ）で２回洗浄して、培地中に存在する任意の微量の増殖因子を除去する。固定量の放射性リガンド（０．３２５ｎＭ）及び種々の濃度の非放射性インスリン原薬（１０−１２Ｍ〜１０−７Ｍ）を用いて、競合結合実験を２連で用意する。最終の反応体積は１ｍｌとする。次いで、１００ｒｐｍに設定した振盪機を用いて１５℃で一晩プレートをインキュベートする（２）。翌日、ウェルからすべての培地を廃棄し、各ウェルを氷冷した結合緩衝液で２回洗浄する。
【０２７５】
各ウェルに、可溶化試薬（０．５Ｍ水酸化ナトリウム、０．５％  Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ  １００）１ｍｌを入れた。可溶化させた細胞をラジオイムノアッセイチューブに移し、結合放射能を、γ線計数器（Stratec BioMedical Systems、ドイツ）で読み取った。この機器は較正されており、８０％の効率であることが分かっている。
【０２７６】
結合親和性算出：
使用したインスリンの様々な濃度でのカウント／分（ＣＰＭ値）を正規化するために、結合％を以下の等式を用いて算出した；
結合％＝（ＣＰＭ試料−ＣＰＭブランク）／（ＣＰＭコントロール−ＣＰＭブランク）×１００
（式中、ＣＰＭコントロールは、非放射性インスリンを全く加えず、放射標識インスリンを加えた細胞を含有したウェルの平均ＣＰＭであり、ＣＰＭブランクは、非放射性インスリンだけでなく放射標識インスリンも含有しなかったウェルの平均ＣＰＭであり、ＣＰＭ試料は、種々の濃度の非放射性インスリンだけでなく、放射標識インスリンも含有したウェルの平均ＣＰＭであった）。
【０２７７】
【表３７】
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【０２７８】
上記明細書及び実施例は、理解のしやすさのみを目的として与えられている。本発明が添付の特許請求の範囲の精神内の変更形態及び変形形態を用いて実践され得ることを認識する当業者にとっては変更形態が自明であるように、これらを不必要な限定と理解するべきではない。
【０２７９】
本願の出願時に出願人にとって既知である上記の好ましい実施形態の説明及び本発明の最良の形態を提示しており、例示及び説明を目的としている。排他的であること、又は本発明を開示する正確な形態に限定するものではなく、上記教示を鑑みて多くの変更形態及び変形形態が可能である。この実施形態は、本発明の原理及びその実際の適用について最も良く説明され、且つ当業者が様々な実施形態において、また、考慮される特定の使用に好適であるような様々な変更形態により、本発明を最も良く利用することができるように選択及び記載したものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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