(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
非ヒト哺乳動物組織に由来する物質を含む、ヒト患者に移植可能な化学的に固定された医療用心臓弁バイオプロテーゼを得る方法であって、以下の工程：
ａ）前記ヒト患者の体内に移植するためのバイオプロテーゼを、（ｉ）前記バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型の表現型が、（ｉｉ）前記ヒト患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型の表現型に適合性がある場合に、積極的に選択する工程
を含み、
ここで、ＡＢＯ／ＡＢＨ表現型が表現型Ａであるヒト患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ表現型がＡまたはＨから選択される表現型である場合に、該バイオプロテーゼを積極的に選択する、
前記方法。
【請求項２】
非ヒト哺乳動物組織に由来する物質を含む、ヒト患者に移植可能な化学的に固定された医療用心臓弁バイオプロテーゼを得る方法であって、以下の工程：
ａ）バイオプロテーゼが体内に移植されるヒト患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型の表現型を決定する工程、
ｂ）１つのバイオプロテーゼの候補、または複数のバイオプロテーゼの候補のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型の表現型を決定する工程、
および
ｃ）前記ヒト患者の体内に移植するためのバイオプロテーゼを、（ｉ）前記バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型の表現型が、（ｉｉ）前記ヒト患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型の表現型に適合性がある場合に、積極的に選択する工程
を含み、
ここで、工程ａ）および工程ｂ）の実行順序は問わず、
ここで、ＡＢＯ／ＡＢＨ表現型が表現型Ａであるヒト患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ表現型がＡまたはＨから選択される表現型である場合に、該バイオプロテーゼを積極的に選択する、
前記方法。
【請求項３】
非ヒト哺乳動物組織に由来する物質を含む、ヒト患者に移植可能な化学的に固定された医療用心臓弁バイオプロテーゼを得る方法であって、以下の工程：
ａ）ＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型の表現型が既知の、複数のバイオプロテーゼを提供する工程、
および
ｂ）前記複数のバイオプロテーゼの中で、前記ヒト患者の体内に移植するための少なくとも１つのバイオプロテーゼを、（ｉ）前記バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型の表現型が、（ｉｉ）前記ヒト患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型の表現型に適合性がある場合に、積極的に選択する工程、
を含み、
ここで、ＡＢＯ／ＡＢＨ表現型が表現型Ａであるヒト患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ表現型がＡまたはＨから選択される表現型である場合に、該バイオプロテーゼを積極的に選択する、
前記方法。
【請求項４】
バイオプロテーゼに含まれる非ヒト哺乳動物組織に由来する物質が、ブタ、ウシ、ヒツジ、カンガルー、アザラシ、ラクダおよびウマから選択される哺乳動物に由来する物質から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
バイオプロテーゼが、心臓弁型バイオプロテーゼである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
バイオプロテーゼが、僧帽弁、大動脈弁、肺動脈弁および三尖弁から選択される心臓弁からなる、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
請求項１の工程ａ）、請求項２の工程ｃ）または請求項３の工程ｂ）におけるバイオプロテーゼの選択が、以下の適合性ルール：
−ＡＢＯ／ＡＢＨ表現型が表現型Ａであるヒト患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ表現型がＡまたはＨから選択される表現型である場合に、該バイオプロテーゼを積極的に選択し、
−ＡＢＯ／ＡＢＨ表現型が表現型Ｏであるヒト患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ表現型が表現型Ｈである場合に、該バイオプロテーゼを積極的に選択し、
−ＡＢＯ／ＡＢＨ表現型が表現型Ｂであるヒト患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ表現型がＢ（ヒト）またはＨから選択される表現型である場合に、該バイオプロテーゼを積極的に選択し、
−ＡＢＯ／ＡＢＨ表現型が表現型ＡＢであるヒト患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ表現型がＡ、ＢまたはＨから選択される表現型である場合に、該バイオプロテーゼを積極的に選択し、
および、
−すべてのヒト患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ表現型が検出できない場合に、該バイオプロテーゼを積極的に選択する、
に従って実行される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
−  （ｉ）１つまたは複数のバイオプロテーゼ候補、および（ｉｉ）ヒト患者の、それぞれのルイス式血液型の表現型が、決定されているか、知られていること、
および
−  ルイス式血液型の表現型についての適合性がさらに確立された場合に、バイオプロテーゼを積極的に選択すること、
をさらに特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
−  （ｉ）１つまたは複数のバイオプロテーゼ候補、および（ｉｉ）ヒト患者の、それぞれのＲｈ式血液型の表現型が、決定されているか、知られていること、
および
−  Ｒｈ式血液型の表現型についての適合性がさらに確立された場合に、バイオプロテーゼを積極的に選択すること、
をさらに特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、体内に移植するためのバイオプロテーゼの分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
体内に移植するためのバイオプロテーゼは何年も前から知られている。それは主に、動物組織に由来するプロテーゼで構成されており、通常は血管や動脈管あるいは心臓弁の、組織の機能不全を克服するために、患者の体内に移植されるものである。
心臓弁バイオプロテーゼに於いては、僧帽弁、大動脈弁、肺動脈弁、三尖弁、あるいは側膜修復インプラントが特に知られている。
血管バイオプロテーゼに於いては、大動脈導管あるいは肺の導管が特に知られており、他のバイオプロテーゼに於いては、膝、足首や肩の「人工」靭帯なども、知られている。
【０００３】
体内に移植するためのバイオプロテーゼは、主にウシ、ブタ、ヒツジの組織から、またはカンガルー、アザラシ、ラクダやウマなどの組織からも作られる。心臓弁自体、血管、皮膚、硬膜、心膜、靭帯、腱、消化器粘膜などの動物組織を化学固定したものが、広く使用されている。
【０００４】
体内に移植するためのバイオプロテーゼは、少なくとも40年前から正常にヒトに使用されている。特にバイオプロテーゼは、機械的プロテーゼに比べて、多くの利点があり、とりわけ、バイオプロテーゼでは、機械的プロテーゼで観察されるような血栓症のリスクが発生しない。従って、バイオプロテーゼの使用は、快適な治療に大きく貢献しており、機械的プロテーゼと違って、出血の原因となる抗凝固剤を使用しなくてよい。また移植手術の間、バイオプロテーゼの作動能率は徐々に減るかもしれないが、機械的プロテーゼのような突然の破裂がなく、患者の機能障害をかなり制限することができる。そして、バイオプロテーゼ移植のための非侵襲的な外科技術が、特に心臓弁交換の際に今日可能となった。
【０００５】
上記の理由から、バイオプロテーゼは、特に心臓や血管の機能障害を治療するために、現在最も頻繁に使用されるプロテーゼである。
【０００６】
バイオプロテーゼは、若い患者、妊婦、高齢者の患者に対する、最も一般的な処方である。
【０００７】
しかし、バイオプロテーゼの主な欠点は寿命が短いことであり、患者の体内で耐久年数は15年以下である。大動脈弁バイオプロテーゼの平均寿命は12年から14年である。
【０００８】
バイオプロテーゼの障害の主な原因は、石灰化の進行に伴う退化で、バイオプロテーゼ組織の厚さを増加させて機械的特性を損ない、正常機能を狂わせて裂け目から破裂する。（Tyers, et al. (1995) Ann Thorac Surg 60, S464-468; discussion S468-469 ; Bortolotti, et al. (1991). J Card Surg 6, 638-643 ; Grunkemeier, et al. (1995) J Heart Valve Dis 4, 49-55 ; Schoen, et al. (1984) Cardiol Clin 2, 717-739。）。
【０００９】
その寿命の短さから、バイオプロテーゼは原則として50歳以上の患者に移植されており、小児の移植には適さない。バイオプロテーゼは70歳以上の患者に適する（上山ら（2002）。人工臓器26、105-1062）一方、70歳未満の患者には、余命がバイオプロテーゼの寿命よりも長い場合、バイオプロテーゼ移植の使用は、リスクがより高くなる（Schoen, et al. (1999) Founder's Award, 25th Annual Meeting of the Society for Biomaterials, perspectives. Providence, RI, April 28-May 2, 1999.. J Biomed Mater Res 47, 439-465）。特に、若い患者や小児の移植ではリスクが高まり、バイオプロテーゼの損傷の進行が特に早い。（Williams, et al. (1982. J Thorac Cardiovasc Surg 84, 446-450 ; Rocchini et al. (1981) Circulation 64, II162-171)。新生児の移植では2年未満で障害が出る。残念ながら、小児に適する移植は現在のところ存在しない。
【００１０】
バイオプロテーゼの石灰化に関するその他の要因は、まだ全て確立されていないが、関連する要因は次の通りである：（i）患者の移植時の年齢（Bortolotti, et al. (1991). J Card Surg 6, 638-643 ; Jamieson, et al. (1988). Ann Thorac Surg 46, 155-162）、（ii）代謝の問題（例えば、高カルシウム血症、甲状腺機能亢進状態、糖尿病、パジェット病など）、カルシウムの経口投与、慢性腎不全（Schoen, et al. (1988) J Biomed Mater Res 22, 11-36)、（iii）食事要因、(iv)感染の発現、（V）挿入時の組織の脱水、（vi） 移植または大動脈輪狭窄による歪みに起因する機械的ストレス、（vii）移植部位の位置（大動脈または僧帽弁）（Jamieson, et al. (1995) Ann Thorac Surg 60, S235-240）（心臓弛緩時の拡張期の動脈レベルでＳ状の閉鎖がおこる一方で、心室収縮時の機械的ストレスと収縮
【００１１】
期血圧状態が過剰にかかり、僧帽弁の移植位置が悪くなる）、（Viii）感染、（IX）慢性的な炎症（石灰化が、体内の炎症すべての原因となる（結核、珪肺などがその例 ）、（X）妊娠（Jamieson, et al. (1995) Ann Thorac Surg 60, S282-286; discussion S287）、（Xi）子供の成長過程（Silver, et al. (1980) Am J Cardiol 45, 685-689）、および（Xii）初期の非最適な抗凝固。
【００１２】
若年層や小児のリン酸石灰代謝は、高齢患者よりも進行が早く、バイオプロテーゼの石灰化が加速する原因となる。しかし、シミオネッスら（Simionescu, et al. (2004) Expert Opin Biol Ther 4, 1971-1985）は、成長と思春期に沿った小児のバイオプロテーゼの石灰化に関連した多数の科学実験の分析を行い、それによると、バイオプロテーゼの機能障害は成長過程前後の同一方法で起こり、これは単純なリン酸石灰代謝のような他の機序が関与する可能性があることを示唆している。
バイオプロテーゼの短い寿命に関する欠点を打開するために、他の技術が使用されている。
【００１３】
移植中のバイオプロテーゼの歪みが起こらないように、バイオプロテーゼの固定組織から受けた機械的ストレスを特に低減し、移植技術を改善する試みがなされている。
【００１４】
他の技術では、バイオプロテーゼの機械的および/または化学的性質を改善するために、特に開始からの動物組織固定の様々な治療を完成させた。また、グルタルアルデヒドによる固定の従来技術を改善するために提案された技術として、例えば、アルコール/トゥイーン/ホルムアルデヒドの混合物を含む溶液と固定後の技術が、殺菌手順として提案された（Carpentier, et al. (1984) Circulation）また、変性剤の入っていない界面活性剤によるグルタルアルデヒド固定組織の治療が提案された（米国特許出願2004/0093674）。最近では、グルタルアルデヒド固定による治療を組み合わせた技術や、界面活性剤あるいは変性剤および熱による理学療法によるアジュバント療法が、固定の工程で開発された（米国特許出願2006/0217805、2005/0071926、2004/0030405、2003/0226208）。
【００１５】
バイオプロテーゼの石灰化を防ぐために、グルタルアルデヒド以外の架橋剤を用いた治療も（Ogle, et al. (2003) Ann Thorac Surg 75, 1267-1273; Chen, (1994) Circulation 90, 323-329; Vyavahare et al. (1997) Circulation 95, 479-488 ; Clark, et al. (2005) Ann Thorac Surg 79, 897-904）開発された。
【００１６】
患者の身体的な機械的ストレスを減らすために、改良されたジオメトリでバイオプロテーゼを取得するための技術も施行された。また、機械的ストレスの勾配を制限することを目的に、心臓弁バイオプロテーゼのための「ステント」なしのバイオプロテーゼが開発された。（Hopkins, (2006) Circulation 114, 261-264 ; Schoen, et al. (1999) Founder's Award, 25th Annual Meeting of the Society for Biomaterials, perspectives. Providence, RI, April 28-May 2, 1999. J Biomed Mater Res 47, 439-46）
【００１７】
上記の議論は、バイオプロテーゼ組織の石灰化を減らすか、または遅らせる技術を含む多数の技術が、バイオプロテーゼの寿命を向上させるために開発されているという事実を示唆している。
【００１８】
しかしそれでもなお、身体内での寿命を増加させるために、特に若い患者に移植するためのバイオプロテーゼとして、石灰化を防いだバイオプロテーゼの、その可用性のための最先端技術を開発する、という課題が残されている。
【発明の概要】
【００１９】
本発明は、動物組織に由来する物質を含む、患者に移植可能な医療用バイオプロテーゼを得る方法であって、前記患者の体内に移植するためのバイオプロテーゼを、（ｉ）前記バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、（ｉｉ）前記患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型に適合性がある場合に、積極的に選択する工程を含む、前記方法に関する。
【００２０】
本発明はまた、動物に由来する物質を含み、次の工程を含む、患者への体内に移植するための医療用バイオプロテーゼを得る方法に関する。
【００２１】
ａ）バイオプロテーゼが体内に移植される患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型を決定する工程、
ｂ）１つのバイオプロテーゼの候補、または複数のバイオプロテーゼの候補のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型を決定する工程、
および
ｃ）前記患者の体内に移植するためのバイオプロテーゼを、（ｉ）前記バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、（ｉｉ）前記患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型に適合性がある場合に、積極的に選択する工程
を含み、ここで工程ａ）および工程ｂ）の実行順序は問わない、前記方法。
本発明はまた、動物に由来する物質を含み、次の工程を含む、患者への体内に移植するためのバイオプロテーゼを得る方法に関する。
a）ＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が既知の、バイオプロテーゼ数種が提示される工程、および
b）（ｉ）前記バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、（ｉｉ）前記患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型に適合性がある場合に、数種のうち、少なくとも１つのバイオプロテーゼが積極的に選択される工程
【００２２】
一般に、上記で定義されたような方法により得られたバイオプロテーゼは、前記患者の体内での石灰質を減少させる。
バイオプロテーゼの前記の実施形態では、バイオプロテーゼに含まれている動物組織からの物質は、哺乳動物の、特にブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、ラクダ、アザラシ、カンガルーから選択される物質であることが好ましい。
前記のバイオプロテーゼは、特に心臓弁、ステント弁、弁尖を含む心臓組織、心膜パッチ、心室拘束システム、冠状動脈グラフト、ステント付きまたはステントなしの脈管用人工装具、中心静脈シャント、ハイブリッド人工血管または弁膜リングなし、消化管、皮膚、膀胱、血管導管、導管、創傷組織のような軟部組織、 IVCフィルター、血液透析へのアクセス、緑内障のための排水装置、気管内-気管支チューブまたはステント、陰茎インプラント、整形外科用インプラント、歯科インプラント、顎顔面復元装置、人工腱、靭帯プロテーゼ、神経再生チューブ、パッチ、再構成組織、活性剤給送器具（特許出願PCT/FR2008000785に記載）、動脈バイオプロテーゼ、血管バイオプロテーゼ、肺バイオプロテーゼ、組織交換または再生の際に選択される。
【００２３】
前記のバイオプロテーゼは、特に僧帽弁、大動脈、肺動脈弁、三尖弁から選択される心臓弁からなる。
【００２４】
本発明に係る医療バイオプロテーゼを得るための方法における、好ましい実施形態として、前記の方法は、バイオプロテーゼの選択が次の適合性の規則に従って行われることで特徴づけられる。
【００２５】
−ＡＢＯ／ＡＢＨ血液型がＡ型である患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、ＡまたはＨから選択される血液型である場合に、バイオプロテーゼを積極的に選択し、
−ＡＢＯ／ＡＢＨ血液型がＯ型である患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、Ｈ型である場合に、バイオプロテーゼを積極的に選択し、
−ＡＢＯ／ＡＢＨ血液型がＢ型である患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、Ｂ（ヒト）またはＨから選択される血液型である場合に、バイオプロテーゼを積極的に選択し、
−ＡＢＯ／ＡＢＨ血液型がＡＢ型である患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、Ａ、ＢまたはＨから選択される血液型である場合に、バイオプロテーゼを積極的に選択し、
および、
−すべての患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が検出されない場合に、バイオプロテーゼを積極的に選択する、
【００２６】
ある実施形態の中で、前記の方法が次のように特徴づけられる。
−（ｉ）１つまたは複数のバイオプロテーゼ候補、および（ｉｉ）患者の、それぞれのＲｈ式血液型が、決定されているか、知られていること、
および
−Ｒｈ式血液型についての適合性がさらに確立された場合に、バイオプロテーゼを積極的に選択すること、
【００２７】
その他の実施形態で、前記の方法が次のように特徴づけられる、
−（ｉ）１つまたは複数のバイオプロテーゼ候補、および（ｉｉ）患者の、それぞれのルイス式血液型が、決定されているか、知られていること、
および
−ルイス式血液型についての適合性がさらに確立された場合に、バイオプロテーゼを積極的に選択すること、
【００２８】
ルイス式血液型で、Ａ型と同じ選択基準で、lex-とley-型のバイオプロテーゼを割り当てることができる。
- Ｈ型と同じ選択基準は、lex-とley+-型のバイオプロテーゼを割り当てることができる。
- Ｉ型(A-/H-/I+)と同じ選択基準は、lex+とley-型のバイオプロテーゼを割り当てることができる。
【００２９】
ある実施形態では、I型(A-/H-/I+) バイオプロテーゼなどのＡＢＨ型のバイオプロテーゼを体系的に削除することにより、負の選択に進むことができる。
【００３０】
発明の詳細説明
本発明では、患者の体内に移植されるときに石灰質を減少させ、長寿命の体内に移植するためのバイオプロテーゼを取得するための新しい方法を提供する。
【００３１】
本発明により、移植手術前に移植を受ける患者がバイオプロテーゼと適合すれば、体内に移植するためのバイオプロテーゼの石灰化現象を減少または遅らせることができることが明らかになった。
【００３２】
より具体的には、前記の患者の体内に移植されたバイオプロテーゼが、ＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型によって選択され、前記のバイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型と、前記の患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が適合していれば、石灰化現象を減少させることができる、ということが、本発明により明らかになった。
【００３３】
特に、生体内移植後に、移植された哺乳類のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型と適合した１番目のバイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、見た目が１番目とそっくりだが、移植された哺乳動物のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が適合しない２番目のバイオプロテーゼよりも、カルシウム含量が１／５程度であった、ということが、例から明らかになった。
【００３４】
バイオプロテーゼ移植を受けた920人の患者を対象に行われた多変量統計解析から、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型と患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型との適合性が、生体内埋め込み式バイオプロテーゼの寿命に関する主な予測因子であった、ということが例から明らかになった。特に、前記の多変量統計解析から、移植バイオプロテーゼの型は患者の体内での寿命の予測因子とは無関係であることが判明した。
【００３５】
また、バイオプロテーゼ移植を受けた920人の患者の中で、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型と適合している可能性が高い患者のバイオプロテーゼの寿命は、その他のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型のバイオプロテーゼよりも２．３３歳以上長い、ということが例から明らかになった。
【００３６】
また、バイオプロテーゼ移植を受けた920人の患者の中で、移植されたバイオプロテーゼが１６年以上耐久している患者のバイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型は、その患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型と適合している可能性が高い、ということが明らかになった。
【００３７】
また、移植されたバイオプロテーゼと患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が適合していることで、移植バイオプロテーゼの石灰化を減少または遅延できることが明らかになった。それゆえ、例に示される多変量統計研究で、患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型と適合しないバイオプロテーゼを移植された患者に、石灰化バイオプロテーゼがより多く見つかった。
【００３８】
具体的に、移植されたバイオプロテーゼが１６年以上耐久している患者の中で、全ての患者のバイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、その患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型と適合している。特に、Ａ型のバイオプロテーゼ移植をうけた患者は、その患者の血液型もＡ型であった。
【００３９】
患者の体内に移植されたバイオプロテーゼの寿命の延命は、移植を受ける患者と一致するＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型のバイオプロテーゼを移植前に選ぶことで得られる、ということが 前記に記載された事項から判明した。
【００４０】
出願人の知識の範囲では、カルシウム代謝と免疫機構の生理学的関係は全く文献に示されておらず、この結果はさらに驚くべきことである。時間の経過とともに発生するバイオプロテーゼの機能不全が、特に機能不全が起こる前の移植期間によって証明され、バイオプロテーゼ移植から７、８年経過して発生し、免疫抑制のための治療を受けていない患者のための早熟期の血管臓器の移植片拒絶反応のいずれの機序にも似ていないことが明らかになった。
【００４１】
本発明はまた、（i）バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、（ii）患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型に適合性があるとき、動物に由来する物質を含み、バイオテーゼが積極的に患者の移植に選択される工程を含む、患者への体内に移植するための医療用バイオプロテーゼを得る方法に関する。
【００４２】
上記の方法は、本詳細において「一番目の方法」と呼ばれる。
本発明はまた、動物に由来する物質を含み、次の工程を含む、患者への体内に移植するための医療用バイオプロテーゼを得る方法に関する。
a）バイオプロテーゼが移植される体の中で、患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型を決定する工程
b）１つのバイオプロテーゼ、またはいくつかのバイオプロテーゼの候補の中でのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型を決定する工程、および
c）（i）バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、（ii）患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型に適合性があるとき、バイオテーゼが積極的に患者の移植に選択される工程
【００４３】
ここで工程ａ）および工程ｂ）の実行順序は問わない。
このようにして、移植される必要のある患者の体内で、石灰化が減少したバイオプロテーゼが得られた。
【００４４】
上記の方法は、本詳細において「二番目の方法」と呼ばれる。
本発明はまた、動物に由来する物質を含み、次の工程を含む、患者への体内に移植するための医療用バイオプロテーゼを得る方法に関する。
ａ）ＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が既知の、複数のバイオプロテーゼを提供する工程、
および
ｂ）前記患者の体内に移植するための少なくとも１つのバイオプロテーゼを、（ｉ）前記バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、（ｉｉ）前記患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型に適合性がある場合に、積極的に選択する工程、
を含む、前記方法。
【００４５】
このようにして、移植された患者の体内にあるバイオプロテーゼの石灰化が減少された。
上記の方法は、本詳細において「三番目の方法」と呼ばれる。
【００４６】
一般的に、上記のいずれかの方法によって得られたバイオプロテーゼは、移植される患者の体内で、石灰化が減少した。
【００４７】
上記の方法を総称して、本詳細において「方法」または、「方法群」と呼ばれる。当分野の技術者は、上記の一番目、二番目および三番目の方法は、バイオプロテーゼを取得するための一般的な方法の選択肢から構成されることを理解している。
【００４８】
「体内に移植するための医療用バイオプロテーゼ」、「体内に移植するためのバイオプロテーゼ」とは、一部または全部が動物組織でできており、その動物組織は必要に応じて適切な物理的、化学的または機械的特性を持たせるため、化学的・生物学的または物理学的に処理された、発明による人体または動物移植用バイオプロテーゼを意味する。
【００４９】
バイオプロテーゼは、特に心臓バイオプロテーゼとして使用され、左房室弁、大動脈弁、肺動脈弁、三尖弁、僧帽弁あるいは側膜修復インプラントに使用することができる。
【００５０】
バイオプロテーゼはまた、血管バイオプロテーゼとしても使用され、特に大動脈管路または肺導管にも使用することができる。
【００５１】
バイオプロテーゼはまた、人工靭帯としても使用され、膝・足首・肩の人工靭帯、ステントつきまたはステントなしの弁膜、弁尖を含む心臓組織、心膜パッチ、心室密閉システム、冠状動脈グラフト、ステントつきまたはステントなしの人工血管、中心静脈シャント、シャント、ハイブリッドまたは非ハイブリッド人工血管、弁膜リング、消化管、皮膚、膀胱、血管導管、導管または創傷組織などの軟組織、IVCフィルター、血液透析へのアクセス、緑内障のための排水装置、気管内-気管支チューブまたはステント、陰茎インプラント、整形外科用インプラント、歯科インプラント、顎顔面復元装置、人工腱、靭帯プロテーゼ、神経再生チューブ、パッチ、再構成組織、活性剤給送器具（特許出願PCT/FR2008000785に記載）に使用することができる。
【００５２】
本発明での取得方法で使用できる様々な種類のバイオプロテーゼは、特に開示される中でも最先端の資料を参照し、本詳細の後半で説明する。
【００５３】
動物の組織から得られる「物質」は、バイオプロテーゼの種類によって異なる。前記の「物質」は、特に動物組織自体を含み、 心臓組織、血管組織、皮膚、靭帯、腱や消化器系の粘膜下組織を含む。心臓組織とは、心臓弁と頭頂心臓組織を意味する。血管組織とは、導管、静脈管、動脈管路を含む静脈組織と動脈組織を意味する。
【００５４】
体内に移植するためのバイオプロテーゼの中には、動物組織からの「物質」に、コラーゲンなどの一つまたは複数の細胞外マトリックスの1つまたは複数の成分が含まれる。
【００５５】
動物から採取される前記の物質は、バイオプロテーゼの種類によってかなり違ってくることがあるが、一般的には、哺乳動物組織からの物質が使用される。殆どの場合、ブタ、ウシ、ヒツジおよびウマの哺乳動物から選ばれた組織の物質が使用される。最も一般的なバイオプロテーゼ、特に心臓バイオプロテーゼは、ブタ種およびウシ亜科、好ましくはブタおよびウシの組織から作られる。
【００５６】
従って、本発明による体内に移植するための医療用バイオプロテーゼを得るための方法で、バイオプロテーゼに含まれている動物組織からの物質は哺乳動物から採取され、好ましくはブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、ブタの哺乳動物から選択して採取される。
【００５７】
「患者」とは、ヒトまたはヒト以外のイヌ、ネコ、ウマ等を含む哺乳動物を意味する。
【００５８】
「ＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型」とは、ヒトや特にブタなどの動物の「ＡＢＯ」と「ＡＢＨ」の血液型区分と、 特にブタなどの動物の「ＡＢＨ」血液型区分を意味する。本詳細で後述するが、ＡＢＯ／ＡＢＨ血液型の抗原は、赤血球だけでなく殆どの生体組織で発現する。またＡＢＯ／ＡＢＨ血液型の抗原は、分泌することができるので、体内を自由に循環し、身体の物質や細胞膜上によく吸着する。組織のＡＢＯ／ＡＢＨ血液型は、通常、Ａ、Ｂ、ＡＢとＯ型の４種類のうちのいずれかに属する。後述されるように、他の血液型を持つヒトや動物もあり、統計的には少数派で、ボンベイ型と呼ばれる。
【００５９】
患者の血液型を決定するための技術として、ＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型がよく知られている。例えば、血清学検査では、患者の抗Ａおよび抗Ｂ抗体の有無を決定するために使用される。決定方法は以下の通り。
【００６０】
- Ａ型を有する個人において、抗Ｂ抗体の存在と、抗Ａ抗体の非存在が決定される。
- Ｂ型を有する個人において、抗Ａ抗体の存在と、抗Ｂ抗体の非存在が決定される。
- ＡＢ型を有する個人において、抗Ａ抗体と抗Ｂ抗体の非存在が決定される。
- Ｏ型を有する個人において、抗Ａ抗体と抗Ｂ抗体の存在が決定される。
【００６１】
各個人のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型を決定するための検査が、公知の免疫学的手法に従って頻繁に実施されている。
【００６２】
-抗Ａ、抗Ｂ抗体、必要に応じて抗Ｈ抗体を用いて、検査される患者の赤血球の血液型を決定する。
あるいは、
- Ａ型またはＢ型の抗原が固定されたサポートを使用し、例えば既知の血液型の赤血球または前記の抗体が既知の技術によって固定された免疫学的検査に適合したサポートを使用して、抗Ａ、抗Ｂ抗体の有無を決定する。
【００６３】
ＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型で、体内に移植するための医療用バイオプロテーゼの血液型を決定するために、よく知られた免疫学的検査の技術は、我々が接触している間の工程を含む、抗Ａ、抗Ｂまたは抗Ｈ（抗Ｈ1、抗Ｈ2）または抗I、抗Lexおよび抗Ley抗体、レクチン（他の抗Ｈおよび/または抗ＵＥ1レクチンＵＥ1、ＰＮＡラッカセイのような抗-Iレクチン（参考：Oriol R. Transplant international 1994））にて、前記のバイオプロテーゼの表面、またはより一般的には前記のバイオプロテーゼに含まれる動物組織の物質を使って施行する。
【００６４】
体内に移植するための医療用バイオプロテーゼの血液型をＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型で決定するための、血液型に対応する遺伝子型を決定するための技術もまた、適切なプライマーの核酸と増幅ＤＮＡを用いて、それから適切なヌクレオチドプローブを用いた検出方法で特徴づけられるＤＮＡ増幅反応で施行する。これらの遺伝子型の検出技術は、当分野の技術者の間でよく知られており、現在一般的に医療分析研究所で施行され、民間の病院や分析ラボでも行われている。
【００６５】
患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型とバイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型の「適合性」の規則は、それぞれ、通常は血清学検査のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型の適合性を決定するための技術で使用されているものである。
【００６６】
例に示すように、上記の方法に従って得られるバイオプロテーゼは、多くの場合、今日移植に使用されている人工のプロテーゼよりも、患者の体内での平均寿命が大幅に長くなっている。いずれの理論に縛られることなく、出願人は、（I）患者に適合するバイオプロテーゼおよび（ii）患者との適合性がないバイオプロテーゼで、観察される寿命の違いは、臨床研究の中で実際に観察される寿命の違いよりもはるかに低い、と考える。患者の体内のバイオプロテーゼの寿命は、バイオプロテーゼ配置選択の現在の優位なファクターとして既に現れており、他のどのような既知のファクターよりも優勢である。
【００６７】
本発明の方法によって、治療を受けた患者の中で、移植期間が7年未満で発生する初期の変化の影響を制限することで、バイオプロテーゼの移植を行うことが可能になった。
【００６８】
本発明による、体内に移植するための医療用バイオプロテーゼを得るための最初の方法では、（i）前記のバイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、(ii)前記の患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型に適合するとき、本質的な特徴は、前記のバイオプロテーゼの積極的な選択の技術的工程にある。
【００６９】
前記の一番目の方法の施行は、前記の患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、先に決まっていることに関与する。
【００７０】
前記の一番目の方法を述べた実施形態の中では、患者と適合するバイオプロテーゼの選択が積極的にされる技術工程を踏めるよう、前記のバイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型も事前に決定される。
【００７１】
前記の一番目の方法を述べた他の実施形態では、ＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が検出されない、またはＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型がＯ型であり、積極的な選択の技術的工程が選択されるべき中で、全てのバイオプロテーゼが「検出できないＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型Ｏ型」となる場合を必然的に含むとき、「普遍的な」バイオプロテーゼが使用される。
【００７２】
対称的に、当分野の技術者は、技術的工程の積極的な選択が、医療用バイオプロテーゼを体内移植された患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型と一致しないＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型のバイオプロテーゼの技術的工程の消極的な選択の必然的な具現化である、と理解する。
【００７３】
医療バイオプロテーゼを得るための他の方法のために書かれた技術的特徴がバイオプロテーゼの積極的選択の工程に関連するため、上記の一番目の方法の実行に直接移行する、ということが特定された。
【００７４】
3つの重要なステップを含む、本発明の体内に移植するための医療用バイオプロテーゼを得るための二番目の方法の中で、ここで工程ａ）および工程ｂ）の実行順序は問わない。患者と適合するバイオプロテーゼを選択するために工程c)を実行する時点で、ＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型での前記の患者の血液型とバイオプロテーゼの血液型が適合することが判明している、ということだけで十分である。
【００７５】
2番目の方法の実施形態のいくつかでは、患者の血液型の決定工程a)が、前記のバイオプロテーゼの血液型決定工程b)に先駆けて、７、８年前に実行される場合があるが、これは、ヒトまたはヒトではない哺乳動物の間で生涯変わることはないので、不利にはならない。
【００７６】
2番目の方法の実施形態のいくつかでは、工程b）が工程a)に先駆けて実行されることがあるが、例えば、ＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が決定された数多くのバイオプロテーゼが、移植手術に先駆けて数ヶ月間の与えられた時間で製作される場合や、 例えば短期間でバイオプロテーゼ移植手術が決定された場合など、移植を受ける患者の血液型が後で決定された場合が、上記に該当する。
【００７７】
上記の体内に移植するための医療用バイオプロテーゼを得るための三番目の方法によると、ＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が先に決定され、そのため既知の７、８個のバイオプロテーゼが、準備された。三番目の方法によると、移植を受ける患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型も先に決定され、そのため既知である。それゆえ、発明された三番目の方法の重要な工程は、上記の一番目の方法についての、７、８個のバイオプロテーゼの中から少なくとも１個のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が患者と適合するバイオプロテーゼが選択されることである。
【００７８】
本発明による体内に移植するための医療用バイオプロテーゼを得るための方法の実施形態の例では、前記のバイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が決定されるという事実が、前記のバイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、あるいはバイオプロテーゼの製造ロットのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、製造者によって記録されるという事実により具現化される。その他の実地形態の例では、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、そのバイオプロテーゼの包装に記録されることが可能で、或いは、バイオプロテーゼが数個入ったロットの包装にも同じＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型を記録することができる。またその他の実施形態によれば、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型は、バイオプロテーゼ包装または多数のバイオプロテーゼが入ったロット包装に添付される書類に記録することも可能である。さらにその他の実施形態によれば、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型は、製造元やバイオプロテーゼを販売する中間業者の書類にも記録されている。それらの実施形態によると、医師はバイオプロテーゼの指示において、患者のＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型を販売業者または製造業者に指定し、彼らが前記の書類を使用して移植を受ける患者に適合するバイオプロテーゼを送ることができるようにしている。そしてまたその他の実施形態では、医師がバイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型の参照がオンライン等で、製造業者や販売業者からできるようにされている。
【００７９】
バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型に関する情報の可用性に関する上記の記述は、前記のバイオプロテーゼの血液型情報と共に、他の既知の適用システムや、前記のバイオプロテーゼの選択基準を構成している、一つないし複数のその他の既知の適用システムの中の血液型の発明の実施形態の中で一般化されている。
【００８０】
ブタのコロニーやグループ、品種の血液型が判っている場合は、各バイオプロテーゼの血液型を検索する必要はなく、患者の血液型に基づいてバイオプロテーゼを割り当てればそれで十分である。
【００８１】
本発明による、バイオプロテーゼを取得するための方法の実施形態のいくつかでは、前記のバイオプロテーゼは、心臓弁型バイオプロテーゼ、動脈バイオプロテーゼ、血管バイオプロテーゼ、パッチ、または組織、肺バイオプロテーゼ、交換または再生組織で使用されている。
【００８２】
交換または再生組織は、特に表皮と真皮のような皮膚の様々な組織が含まれている。
【００８３】
本発明による、バイオプロテーゼを取得するための方法による実施形態の例では、左房室弁、大動脈弁、肺動脈弁、三尖弁に使用される弁膜バイオプロテーゼが作製されている。
【００８４】
本発明の方法の実施形態の例では、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型は、バイオプロテーゼに含まれる動物組織の物質の血液型と一致する。
【００８５】
また、別の本発明の方法の実施形態の例では、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型は、バイオプロテーゼに含まれる動物組織の物質の血液型とは異なる。
【００８６】
例えば、バイオプロテーゼ製造方法では、開始からの動物組織の化学的、生物学的または物理的治療法は、ＡＢＯ／ＡＢＨ抗原を損なう可能性があり、それは、動物の組織によって発現したＡＢＨ / ＡＢＯ抗原が検出できなくなり、前記のバイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型がそれゆえＨ型になると決定されるような、糖によってなされる。
【００８７】
他の例では、開始からの動物組織の化学的、生物学的または物理的治療法は、バイオプロテーゼ製造方法の間に、ほんの部分的にＡＢＯ／ＡＢＨ抗原を損ない、前記のバイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型は、それゆえＨまたはＩ型であると結果的に決定される。
【００８８】
上記の理由から、本発明の方法で、前記のバイオプロテーゼが含む動物組織の物質の血液型だけではなく、最終的なバイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、決定された患者に移植されるという意味で重要である。
【００８９】
本詳細に記載された、体内に移植するための医療用バイオプロテーゼを得るための方法の実施形態の例では、請求項２の工程ｃ)または請求項３の工程ｂ)のバイオプロテーゼ選択が、次の適合性ルールに従って実行される。
【００９０】
−ＡＢＯ／ＡＢＨ血液型がＡ型である患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、ＡまたはＨから選択される血液型である場合に、バイオプロテーゼを積極的に選択し、
−ＡＢＯ／ＡＢＨ血液型がＯ型である患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、Ｈ型である場合に、バイオプロテーゼを積極的に選択し、
−ＡＢＯ／ＡＢＨ血液型がＢ型である患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、Ｂ（ヒト）またはＨから選択される血液型である場合に、バイオプロテーゼを積極的に選択し、
−ＡＢＯ／ＡＢＨ血液型がＡＢ型である患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が、Ａ、ＢまたはＨから選択される血液型である場合に、バイオプロテーゼを積極的に選択し、
および、
−すべての患者に対して、バイオプロテーゼのＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が検出されない場合に、バイオプロテーゼを積極的に選択する、
【００９１】
上記の実施形態の第1の態様によれば、本発明の方法は、ＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型が検出されないバイオプロテーゼが、(i)遺伝子組み換え動物を含む、ＡＢＯ／ＡＢＨ抗原を発現しない動物の物質を含むバイオプロテーゼおよび（ii）ＡＢＯ／ＡＢＨ抗原障害の原因となる1つまたは複数の化学的、生物学的、物理学的または酵素治療を受けたバイオプロテーゼから選択される。
【００９２】
ＡＢＯ／ＡＢＨ抗原を発現していない動物は、好ましくは、遺伝子組み換え動物で、特にそのゲノムＤＮＡが人工的遺伝子組み換え技術によって変更されている動物であり、遺伝子では、コードする酵素がＡＢＯ／ＡＢＨ抗原の構成糖の合成を触媒するのが好ましい。この型の遺伝子組み換え動物を製作する技術は、例えば、米国特許7126039に記載されるような技術だが、異種移植片の急性血管性拒絶反応を誘発せず、ヒトの移植のためにつくられた動物の血管臓器の供給のための申請のための技術である。
【００９３】
「ノックアウト」と呼ばれる動物を含む、遺伝子組み替え動物は、ヒトのＡＢＯ／ＡＢＨ抗原の合成に関与する遺伝子のためのものである。これは、ヒトのＡＢＯ／ＡＢＨ抗原のための、特に糖転移酵素A1と糖転移酵素Bのようなフコース転移酵素、あるいは糖転移酵素酵素をコードする遺伝子のための、トランスジェニックアニマルと成り得る。これらの遺伝子組み替え動物はまた、α-ガラクトシルトランスフェラーゼ酵素、異種超急性拒絶反応のための主要な酵素の拒絶に関与する、他の糖残基または他のアンチジーンのノックアウトとなる可能性がある。
【００９４】
本発明による、体内に移植するための医療用バイオプロテーゼを取得するための方法の、実施形態の例では、移植を受ける患者のバイオプロテーゼの適合性規則は、依然として、当分野の技術者の間で良く知られたＲｈ型血液型追加の必要性がある。
【００９５】
従って、本発明の方法の実施形態のいくつかでは、これらの方法は次のことがらでさらに特徴づけられる。
−(i)１つまたは複数のバイオプロテーゼ候補、および(ii)患者の、それぞれのＲｈ式血液型が、決定されているか、知られていること、
および
−Ｒｈ式血液型についての適合性がさらに確立された場合に、バイオプロテーゼを積極的に選択すること、
Ｒｈ式血液型で、移植を受ける患者がＲｈ陽性の場合、Ｒｈ陽性のバイオプロテーゼが、積極的に選択されること、
Ｒｈ式血液型で、移植を受ける患者がＲｈ陽性あるいはＲｈ陰性の場合、Ｒｈ陰性のバイオプロテーゼが、積極的に選択されること。
【００９６】
実例を通して、バイオプロテーゼと移植を受ける患者の間の適合性規則の具体例を、以下に記載する。
【００９７】
Ｏ型グループの患者には、バイオプロテーゼのＡ型および、好ましくはＩ型が回避される。バイオプロテーゼの血液型がＡ-およびＨ+およびＩ-が選択されるのが好ましいが、次候補としての選択肢は、Ａ-およびＨ+およびＩ+である。つまり、Ｏ型グループの患者には、上記に記述したように、Ｈ型のバイオプロテーゼを提供することが可能である。
【００９８】
Ｂ型グループの患者には、バイオプロテーゼのＡ型または、好ましくはI型が回避される。そして、バイオプロテーゼの血液型がＡ-およびＨ+およびＩ-が選択されるのが好ましいが、次候補としての選択肢は、Ａ-およびＨ+およびＩ+である。つまり、Ｂ型グループの患者には、上記に記述したように、Ｈ型またはヒトＢ型のバイオプロテーゼを提供することが可能である。
【００９９】
ＡＢ型グループの患者には、Ｈ型、動物またはヒトＡ型、ヒトＢ型のバイオプロテーゼを移植することができる。
【０１００】
ボンベイ型の患者には、血液型H、BおよびABのバイオプロテーゼは避ける。ボンベイ型の患者は、包括的に糖質残基の発現を減らしたバイオプロテーゼによって改善される。
【０１０１】
通常、血液型の結合されたバイオプロテーゼは避ける。
Ｉ型には２種類のバイオプロテーゼがあり、A-/H-/I+型バイオプロテーゼと、バイオプロテーゼまたは抗原Ｉは、抗原Ａまたは抗原Ｈのどちらかと結合している。この２種類を見分ける方法は、抗Ｉ抗体とレクチンPNA間の抗原の検出感度の違いを調べることである。抗Ｉ抗体は、A-/H-/I+型の抗Ｉ抗体を認識するが、殆どの場合、レクチンPNAは特異なＡ、Ｈ型の抗-I抗体を認識しない。それゆえ、血液型がレクチンおよび抗Ｉで認識される場合は、生物学的適合としてA-/H-/I+型は排除してよい。
【０１０２】
しかし、本発明における実地形態の例では、これらの方法は次のように特徴づけられる、
−（ｉ）１つまたは複数のバイオプロテーゼ候補、および（ｉｉ）患者の、それぞれのルイス式血液型が、決定されているか、知られていること、
および
−ルイス式血液型についての適合性がさらに確立された場合に、バイオプロテーゼを積極的に選択すること。
【０１０３】
分泌型およびルイス式血液型の患者は、機能するFUT2遺伝子と相互関係がある。この遺伝子は２H核をコード化する。それは、分泌型またはルイス式の特徴により、H１-１型またはH２型の代わりに、ブタの組織を患者に与えるほうが役立つ。A、H、I+型バイオプロテーゼとルイス式血液型などのＡＢＨ式血液型のもうひとつの抗原との間の直接相関がしばしば存在する。動物のA+型(A+/H+/I- または A+/H-/I+)は、一般的にlex-およびley-型である。動物のH型(H+/A-/I+またはH+/A-/I-)は、一般的にley+およびlex-型である。動物のI+型(A-/H-/I+)は、一般的にlex+およびley-型である。それゆえ、バイオプロテーゼの血液型は、以下のようになる。
【０１０４】
-患者へA型を使用する場合、バイオプロテーゼはlex-およびley-型である。
-患者へH型を使用する場合、バイオプロテーゼはley+およびlex-型である。
-患者へI型を使用する場合、バイオプロテーゼはlex+およびley-型である。
【０１０５】
つまり、配分としてABO/ABH式血液型群を、他のABO/ABH式血液型群またはこの血液型に関連する全ての生物学的変形に置き換えてよい。
【０１０６】
H+抗原の動物は、一般にI-抗原がないことに注意する(約80%の確率)。
【０１０７】
本発明による方法で得た移植型医療バイオプロテーゼの実地形態の例で、バイオプロテーゼは、肯定的または否定的にも、ABO/ABH式血液型の適合性に加えて、他の互換システムでの患者の血液型、MNS型、P型、ルター型、ケル型、ダッフィ型、キッド型、ディエゴ型、カートライト型、Xg型、シアナ型、ドンブロック型、コルトン型、レンステナー・ウィーナー型、チド・ロジャース型、HH型、KX型、ガービッチ型、クロマー型、ノップス型、インディアン型、OK型、RAPH型、ジョン・ミルトンハーゲン型、II型、グロボシド型とGIL型などの、他の互換システムにも適合性がある。（Hosoi, E. (2008) Biological and clinical aspects of ABO blood group system. J Med Invest 55, 174-182を参照）
【０１０８】
本発明による方法で得た移植型医療バイオプロテーゼの実地形態の例で、患者のABO/ABH式血液型の適合性に加えて、Ｒｈ式(CED) (RHD遺伝子, CE) (41)、Ａ、Ｂ、ＡＢ、Ｏ型グループの核H型（H1, H2, H3, H4型）(FUT遺伝子)、分泌型(SE, se)（分泌型・非分泌型）、ルイス式（Lea, Leb, Lex）(FUT遺伝子)、ケル（KEL遺伝子）、キッド（JK遺伝子）、ルセラン（LU遺伝子）、MNS、ダッフィ、Tn、T、 Cad/sd、ディエゴ(DI) （AE1遺伝子）、カートライト(YT) (ACHE 遺伝子)、Xg (XG) (XG 遺伝子)、シアナ (SC ) (SC 遺伝子), ドンブロック (DO) (DO 遺伝子), コルトン (CO) (AQP1 遺伝子), LW (LW) (LW 遺伝子), チド・ロジャース(CH/RG) (CH/RG 遺伝子), Kx (XK) (XK 遺伝子), ガービッチ (GE) (GYPC遺伝子), クロマー (CROM) (DAF遺伝子), ノップス(KN) (CR1遺伝子), インディアン (IN) (CD44遺伝子), MN (glycophorin) Pk, 等、（Hosoi (2008)）などの他の適合性においても積極的に選択される。
【０１０９】
その他の発明の特徴は下記に詳細を記す。これらは、実地形態の例で、単体または組み合わせで利用される。
【０１１０】
適合システムの詳細な説明
【０１１１】
血液型抗原は、赤血球の表面で発現される糖残基である。すべての赤血球抗原は必ずしも赤芽球によって合成されていない。例えば、ルイス抗原は血漿中に輸送される糖脂質から赤血球に吸着する。最もよく知られる抗原は、ABO式とRh式だが、ルイス、ケル、ダフィー、TN、T、CAD / SD、PK、P型（E. Hosoi  (29) 2008の総説）のような血液型抗原もある。最近まで、ヒトのABO式血液型のグループ認識は、特定の抗原を持つ赤血球を凝集するための血清にある、抗体能力によって行われていた。したがって、ヒトのABO式血液型によると、血液型Ｏ、Ｂ型の抗原Ａに対する血清の抗体があり、血液型Ａ、Ｏ型の抗原Ｂに対する血清の抗体があり、最終的には血液型ＡＢ型のこれらの抗原に対する血清の抗体がある。
【０１１２】
実際、A1、A2、B、O1、O2、ABというグループがあり、グループA1とA2の間で認識される糖は同じである。組織中の抗原の発現と局在が複数レベルであり、これは異なっている（30）。ABO式血液型が複雑なため、分子生物学的手法（31-34）は、数年後には現存の血清学技術に置き換えられるかも知れない。ヒトのABO式血液型は非常に複雑で、Rh式（８５％はRh式+ (DD or Dd)、ルイス式+ (Le (a+b-)またはLe (a-b+)）、ダッフィ、ケル、キッド、ルセラン、MNS、分泌型などの特徴を含む。抗原の存在により（または非存在により）、各個人が血液中に、対応する抗原が欠けた抗体を持つ（または持たない）。これらの抗体数は、輸血または妊娠によって増やすことができる。他グループの影響度は、民族によって異なる。白人では、Ａ，Ｏ型がそれぞれ、他の血液型より40-45%多く、Ｂ型は10％未満であり、ＡＢ型は約3％である。アジア地域では、Ｂ型は20％で、アフリカ地域では、15-20%である。アジア地域でのＡＢ型は、約10-15%である。
【０１１３】
ABO抗原は、赤血球上に発現する抗原だけではない。ABOは、唾液分泌あるいは乳に含まれるムチンの形で患者の体内に存在し、凝固タンパク質（ウィルブランド因子）のように、様々な循環要因の中にある。また、内皮および上皮細胞の多くの組織、特に腺組織に発現する。別の要因が、組織の血液型、特にABO特異性、ルイス、分泌の特異性と非特異性、細胞の種類と組織型（35）の種類、量および組織分布に影響を与える。「分泌型」と呼ばれる患者では、ABO型が、唾液やその他の分泌物でも発現する。また、毛髪等のケラチン付属物でも発現する。H抗原のガラクトースで、ガラクトースは、B抗原群（糖）を形成するα結合1,3の形式で関連付けられる。N-アセチルガラクトサミンがH抗原のガラクトースに輸送された場合、糖抗原Ａ群が形成される。ＡとＢ群の形成は、遺伝子ＡとＢによってコード化された糖転移酵素ＡまたはＢによる。Ｏ群に関しては、この酵素は活性化されず、01または02の特異性用にコード化されたＯ群の特殊な酵素が発現するが、この酵素は遺伝子欠損により活性化されない。また、ガラクトシルトランスフェラーゼＡ用にコード化されたA1 およびA2遺伝子という２種類が存在するが、抗原Ａの組織発現によって多少活性がある。少なくとも４種類のH核がヒトには存在し、最も一般的なものは1型および2型である。3と4型は、主に消化管や気道上皮に存在する。ブタと同じように、ヒトでは、胃の上皮系細胞のH群のH物質は、表面タンパク質のSer またはThrに架橋するGalNAcによる「O-グリコシル化がリンクされた」タンパク質によって運ばれた 炭化水素構造である(36)。
【０１１４】
他の抗原は、ルイス式、Rh式、ケル式、ダフィー式の抗原など、ABO式にリンクされている。ルイス特異性は、フコース転移酵素の作用で形成される。H、分泌型とルイス型の特異性は、複合糖質の糖鎖の末尾の特徴的形態が１型の二糖類(Galb1-3GlcNAc)または２型(Galb1-4GlcNAc)である、２つの主要な物質にあるL-フコースを添加することによって決定される。フコース転移酵素Hは、患者の分泌型SEがL-フコースを主に１型鎖のどこかに転移させるとき、フコース転移酵素L-フコースの転移を(GDPFucとして)、２型鎖のガラクトース(Gal)の位置１-２の中に触媒する。一方、ルイス式特異性の過程にあるフコース転移酵素は、Lea と Leb を形成するために、N‐アセチルグルコサミン(GIAc)の１型鎖とH１型のa1-3位置にL-フコースを転移させ、また一方、別の専門用語で知られる物質(CD15, X, Lex) または (SSEA-1 and Y or Ley)を形成するため、２型鎖のa1-3位置と２型のH位置にL-フコースを転移させる。
【０１１５】
フコース転移酵素は、FUT遺伝子（総説として、「JP Baron Vers une approche moleculaire de la structure, du polymorphisme et de la fonction des groupes sanguins TCB (1996)181-210」）によってエンコードされた事実である。ルイス特異性は、実際にはフコース転移酵素FUT4月6日特にFUT3によってエンコードされます。他の活動は分泌としてフコシルトランスフェラーゼによってエンコードまたはFUT2遺伝子によってコードされる他のフコース転移酵素、フコシル2によって決定されるタイプではない。グループHタイプ1の形成は、主にFUT2と少しFUT1が含まれます。グループHタイプ2の形成は、主にFUT1と少しFUT2が含まれる。Hタイプ1：Galのα1-2にL-Fucを有するGalβ1-3GlcNAc-R/ Hタイプ2：Galのα1-2にL-Fucを有するGalβ1-4GlcNAc-R。
【０１１６】
ルイス抗原は、特に慢性の炎症または腫瘍組織現象における「シアル酸」にすることができる。リー抗原はFUT3でエンコードされている。FUT2によって分泌プロフィールSE。lexは、FUT4-6によるCD15（X、SSEA-1）だけでなく、FUT3（LE）。FUT3とFUT2または多分FUT1によってLEB。LEBの分泌は必ずしもされている理由抗原の形成はそのFUT2遺伝子がアクティブである必要があるので、これは、説明している。FUT7またはFUT5。SLEX Sylil型2 FUT6が含まれます。そのようなブタなどの動物では、血液型A+の動物はlex-/ley-が一般的である。A-/H+。動物は一般にley+/lex-である。A-/H-/I+動物は一般的にlex+/ley-である。
【０１１７】
上記の議論は、ヒトまたは動物でのH鎖に存在するタイプが密接にルイス式では、その分泌または非分泌血液型に連結することができる方法を示している。動物では、いくつかの感染症またはいくつかの行動への感受性はまた、フコース転移酵素のいくつかの形態の発現と相関していたことが示されている。
【０１１８】
発明の方法で使用可能な移植型医療バイオプロテーゼ
移植用医療バイオプロテーゼは人間に移植できるように意図されている装置を含んでいる動物組織をまたは動物の統合プロダクト部分的または完全に含み、または動物組織から浄化され、架橋結合するおよび/または修理される部品。装置は他の自己由来のものに一致する、総合的なまたは総合された生物的部品を含むことができる。装置は組織(例えば米国特許
6936070, 5067962, 6790213, 4585458, 7404819, 20070254005)、マトリックス(例えば米国特許20010051824, 20040157206, 6652583, 6174333, 5855620, 5613982)、コラーゲン(例えば米国特許20030203008, 6548077, 6127143, 5814328, 5374539)、管、心臓バイオプロテーゼ(例えば20090118826, 7348175, 20020173843, 5824061, 6391538, 7316712, 20090030511, 6719789, 6074417, 7011681, 6530952, 5824067, 20040024452, 5769780, 4692164, 4626255, 20080154358, 2003010729 7331993 7503930, 7503929, 6997950, 20030196274, 20030181974, 20030181974, 7322932, 6027530, 7166124, 7163556, 6540781, 20010002445, 7354749, 20080095662, 5545214, 20040106991, 7320705, 2004143323, 7455689, 5662704, 20030125805, 20030125793, 7125418, 7125418, 7318998, 7041132, 7033390, 6719785, 6682558, 6087552, 5755782, 5571174, 5549665, 5545215, 5489297, 5352240, 5326370, 5728152, 5156621, 5080670, 4626255, 4561129, 4388735, 4378224, 2008702554, 7579381, 7214344, 6878168, 6561970, 6547827, 6214054, 6008292 ;, 5935168, 5931969, 5931969, 5782931 , 5215541, 4885005, 4838888, 4648881, 4647283, 20060217805, 20040052830, 20030228692, 5632778, 5613982, 6350732, 20040136965, 7129035, 7014655, 6861211, 7438850, 6203755, 20060207031, 20050071926, 20040253291, 20050010284, 6322593, 6302909, 6231614, 6193749, 6177514, 6156531, 6156531, 6132986, 6093530, 5919472, 5094661, 5002566 , 4976733, 5447536, 5368608, 7479164, 5733339, 6596471, 30030196274, 7156881, 20020091445, 6998418, 6545042, 7014655, 6106555, 5080670, 7078163, 6509145, 2003010746, 5935168, 6471723, 6350732, 5613982)、心臓弁、パッチ(例えば米国特許20010051824, 20040157206, 6652583, 6174333, 5855620)、弁プロテーゼ（例えば、米国特許20090118826、5545215、WO/2000/047136）、としてPCT/FR2008000785、例えば定義されている足場であってもよい。それは注射することができる。これは、その重合一部のコンポーネントの自発的または注入後、または写真の活性化、紫外線照射、ガンマ線照射、電流、磁気的相互作用、イオン相互作用、化学的、酵素的、生物学、温度、超音波、塩、疎水性/後に生成媒体であることができる親水性の巻線、ファンデルワールス力、芳香族結合-金属 - 配位子は、pH、濃度、酸化還元、酸化、スタッキング、機械的電磁または重力または団体。
【０１１９】
本発明の範囲内に、植込み型医療バイオプロテーゼは、すべての固定異種の組織が含まれている。組織/組織抽出/コラーゲン：用語の組織または組織抽出物、コラーゲンは同じ意味で使用して関連付けることができる。それは、天然または合成のかもしれません。この組織はない物理的及び/又は酵素（コラゲナーゼなど）、および/または化学的に修飾されたか（例えば、米国特許20040052830、20030228692、5632778、5613982、20010000804、20050266390のように）関連した脱細胞またはすることができる。この組織は、（例えば、米国特許7141064）圧縮することができる。組織は、合成成分（米国特許20020172706、6596024、6562069、4729139、4481009例のような）に関連付けることができる。組織は、トランスグルタミナーゼによる例スルホ/NHS（20060159641、7479164）またはgenipin（20020091445、6998418）により架橋されることがある。架橋の一般的な方法は、（米国特許20020177223）が記載されている。架橋（米国特許20050244460）自発的に可逆的であることがある。
【０１２０】
装置は)、コラーゲン(米国特許20030203008、6548077、6127143、5814328、5374539)例えば米国特許7189259のような組織、中心の心臓弁または一部分、例えば20040158320、20010020191、6358275、6206917、6110212、6087552)、例えば米国特許20040157206、6652583、6174333、5855620のようなマトリックスのような管の水路のどちらである場合もある。
【０１２１】
組織は石灰化に特性、例えば、身体検査、低下、免疫原性への抵抗を、傾向、血栓形成能を一般に改良するため、承諾、抵抗、生物的特性固定である場合もある。それは"を変えるために変更することができる; ABH「それを」と、より互換性があるようにする広の抗原性; ABO" 血液型。組織エキスのために細胞外のマトリックスの部品はコラーゲン、エラスチンを含む蛋白質のような特に含まれている。コラーゲンの浄化のための異った方法は例えばのように提案された(米国特許20030203008、6548077、6127143、5814328、5374539)。
【０１２２】
コラーゲンを合成することができる。コラーゲンを含む様々なコンポーネントは、変更することができる。コラーゲン項はそのようなコラーゲン（I、II、III、IV、V、VI、VII、XIおよび他のコラーゲン）のような様々なコラーゲンタイプが含まれていたり、異なる種の関連用語「コラーゲン」はまた、コラゲナーゼ以外のプロテアーゼを使用して、コラーゲン分子の両端のテロペプチドを削除することによって調製し不溶性コラーゲン、可溶性コラーゲン、アテロコラーゲンを意味する。コラーゲンや組織がこのような尿管、心膜などの組織から調製することができる、血管、腱、筋膜、脱細胞または真皮、腱膜、羊膜型の膜を脱細胞ません。ブタ「SIS」 {Lindberg, 2001 #184; Badylak, 1998 #185}の例については、腸粘膜下組織のように、心臓弁は、消化組織、硬膜、心臓弁など...）。このようなポリマー繊維や線維形成ペプチドのようなコラーゲンの合成のコピーである可能性がある。コラーゲンは化学的に修飾され、製品がスクシニルまたはエステル化またはカルボキサミドの形成、またはコラーゲンの脱アミノ化することによって得ることができる上記のように、ポリ乳酸などの合成ポリマーとコラーゲンの混合物）（PGA）および/またはポリ（DL-ラクチド-co-グリコリド）（PLGA）および/またはポリ（DL-ラクチド - コ - カプロラクトン）（PCLコラーゲンにリンクされている）、ゼラチン、加熱により変性コラーゲン、コラーゲンの加水分解によって得られたポリペプチドとして、コラーゲンの誘導体合成ポリマーは、ポリ乳酸（PLA）、ポリグリコール酸（PGA）、ポリ（L-乳酸の間で選択することができる）（PLLA）、PLGA、ポリ（無水物）（PA）、ポリカーボネート（PC）、ヒドロキシ酸、ポリオルトエステル（POE）、propylfumarates）（PPF）、多糖類、ラクトン（PL）、ポリカプロラクトン、ポリアミド、ポリ酸、ポリホスファゼンのポリアセタール（PPZ）、生分解性シアノ、生分解性ポリウレタン（中央ユニット）、多糖類、ポリピロール、ポリアニリン、ポリチオフェン、ポリスチレン、ポリエステル（PE）、非生分解性ポリウレタン、ポリ尿素、ポリ（エチレンテレフタレート）（PET）、ポリ（エチレンビニルアセテート）、ポリプロピレン、ポリメタクリレート、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリエチレンオキシド、ポリビニルアルコール（PVA）、ゴアテックス（ポリテトラフルオロエチレン）、ダクロン（ポリエチレンテレフタレート）、ポリテトラフルオロエチレン（PTFE）、ポリエチレングリコール（PEG）、コポリマーは、説明した上記は、上記の添加剤、ポリマー、コポリマー、およびそれらと生物学的製剤と合成誘導体の会合の間に添加剤のいずれかの混合物のいずれか。
【０１２３】
コラーゲン、組織抽出物は、唯一の合成、無機物質（例えば、ガラス、Si/Si02として、チタン/酸化チタン、金、クロム、コバルト、ダイヤモンド、プラチナ、ヒドロキシアパタイト、ニチノール、鉄鋼、シリカ、ストレプトアビジン - ビオチン、関連付けることができるこのようなラテックス、ナイロン、catguth、綿、麻、ポリエステル、シルク、セラミック、プラスチック合金、繊維、アビジン、ストレプトアビジン、共重合体スポンジ-カプロラクトン-CO-L-ラクチドなどの人工タンパク質は、ポリ-L-ラクチドで補強したヒアルロン酸（PCLA）、デンプン、任意の混合物）のニット組織の生物学的有機材料（例えば、そのプロテオグリカン、糖タンパク質、グリコサミノグリカン、アルギン酸、アガロース、ヒアルロン酸、アガロース、キトサン、フィブリノーゲン/フィブリンペア、カルボキシメチルキトサンとの混合物として、ゼラチン、スクロース、八硫酸蔗糖、デキストラン、セルロース、メチル化セルロース、セファロース、セファデックス（例えば、ラテックスなど）、またはそれらの結合によって模倣タンパク質。
【０１２４】
組織は、化学的、酵素的または物理的に変更することができる。これは、接着分子を含むさまざまな分子または生物活性剤に関連付けることができ、これらの異なる薬剤は、または組織の構成要素に接続されていない場合がある。生物活性剤および接着分子は、国際特許出願で定義されている(PCT/FR2008000785)。
【０１２５】
生物活性剤の物理的な刺激は、ストレス、熱、電磁波として含まれている。これは、滅菌方法（例えば、米国特許7438850、6203755、2008008906、6946098、6908591、6682695、6036918など）に、その保全の向上を目指して治療に供することができる（例えば、米国特許20040136965、7129035、7014655、6861211）。異なる組織と治療が関連付けることができる。
【０１２６】
移植型医療バイオプロテーゼの製造のための所望の血液型の動物の組織を得るための方法
1）決定されたブタABH/ヒトABO-ABO組織の取得
「ヒトの ABO-ABH 血液型」:「ABO-ABH 血液型」により、我々はABOまたはABH血液型システムやヒト組織広い意味で同様の遺伝子の異なる抗原を意味し、これらの遺伝子の転写産物の調節因子、糖または糖残基またはこれらの抗原とそのレギュレータと同様にリンクされている抗原のすべて変数は、これらの抗原の発現については、製品にリンクされ、ABOグループ（32、34、37）または移植される患者の組織ABH/ルイス/分泌（30、38）（35、39、40）。ABO抗原は、糖残基が行われているタンパク質や脂質で、これらは糖タンパク質や一般的な糖脂質の糖残基である。また分泌製品の組織、体液中のこれはABO式血液型システムの抗原のみではなく、これらの抗原の家族が血中に発現するが、これは、ABO式血液かもしれません必ずしも赤血球上に発現されていないが、組織や分泌製品、唾液、ヒトの体液に発現することができる別の報告抗原決定基と広い意味での患者のグループのシステムである。これらは、広い意味でのABO群である。国際を含む輸血（（A1、A2）を参照のことA、B、AB、O）の命名（ABO遺伝子）だけでなく、他のRh式の特異性（CED）（RHD遺伝子、CE）（41）、タイプに応じて23のメインシステムよりたとえば、グループA、B、ABまたはOのコアH（タイプH1、H2、H3、H4）（FUT遺伝子）、分泌型（SE、SE）（分泌/非分泌）、ルイス（リー、LEB、Lexの（）FUT遺伝子）、ケル（KEL遺伝子）、キッド（JK遺伝子）、ルター派（LU遺伝子）、MNS、ダフィー、TN、T、CAD / SD、サンディエゴ（DI）（AE1遺伝子）、カートライト（YT）（コルトンACHE遺伝子）、XG（XG）（XG遺伝子）、Scianna（SC）（SC遺伝子）、Dombrock（DO）（ジーンDO）、（CO）（AQP1遺伝子）、LW（LW）（LW遺伝子）、Chido/ロジャース（CH/ RG）（CH/ RG遺伝子）、KX（XK）（XK遺伝子）、Gerbich（GE）（GYPC遺伝子）、クローマー（CROM）（DAF遺伝子）、Knops（KN）（CR1遺伝子）、インド（IN）（CD44遺伝子）、MN（グリコフォリン）PKなど.... 総論として、E. Hosoi (2008)。
【０１２７】
これらの遺伝子のための多数の変異が存在する。これらの変異の一つは、ボンベイ/パラボンベイ型患者のH鎖の有無に対応している。これは、突然変異、組み合わせ、特定の組織またはこれらの発現のレベルで、例えば微粒子発現の可能性がある抗原。また、「htg4人間偽」は、例えばABO式血液型システムに関連付けられている偽にすることができる。ABOグループは、異なる抗原によっても異なる特異性のためにコード化するか、またはそれらの発現を調節する遺伝子で表される。
【０１２８】
たとえば、グループは主に酵素トランスフェラーゼ酵素Bによるトランスフェラーゼ、グループBでエンコードされているから、組織発現が異なる別の活動レベルを持っているトランスフェラーゼA1とA2をコードする少なくとも2つの遺伝子を、が存在Hの特異性とルイスと分泌型の特異抗原が。FUT型遺伝子（42）に依存している。
【０１２９】
それはまた、その合成がＡＢＯ式血液型（systeme ABO）の酵素に関与する遺伝子であってもよい。これらの同じ遺伝子は、特異性（ＣＤ１５、Ｘ、Ｌｅｘ）または（ＳＳＥＡ−１およびＹまたはＬｅｙ）の具現化にも関与している。それはＡＢＯ式血液型に直接属さないが、その合成がＡＢＯ式血液型の酵素、遺伝子または遺伝子調節因子を機能させる抗原、例えば、ＣＡ１９．９抗体で認識されるシアリルＬｅａ（ＣＤ１５、Ｘ、Ｌｅｘ）または（ＳＳＥＡ−１およびＹまたはＬｅｙ）、またはフォルスマン糖脂質合成酵素（３３）であってもよい。
【０１３０】
それはまた、これらの様々な特異性、または、これらの様々な抗原の発現の調節因子もしくは修飾因子、または、これらの抗原の一部の発現に関連する抗原をコードする遺伝子であってもよい。それは、同じ転写因子、同じ遺伝子上の同じ位置、または、ゲノム上で極めて近いものであってもよい。
【０１３１】
それはまた、糖化されたまたはされていない抗原であって、その発現がこれらの血液型の一部に関連するものであってもよい。より広範に、それは、このＡＢＯ−ＡＢＨファミリーのサブグループに属する患者の行動または特有の生物学的特性であってもよい。
【０１３２】
動物組織のＡＢＨ表現型：
組織の「ＡＢＨ表現型」は、ヒトにおけるＡＢＯ式血液型に対応する動物のＡＢＨ式血液型（４３）に関するものであり、抗原は血中に発現するが、特に組織または分泌産物もしくは液性産物に発現する。ＡＢＨ表現型は、移植時のバイオプロテーゼのものと一致する。ＡＢＨ表現型の改変は、必要に応じて、バイオプロテーゼの製造の任意の時点で行うことができる。これらの糖化誘導体は、一般的に、スフィンゴ糖脂質の形態で、細胞、特に上皮細胞（４４）の表面にＮ結合型で発現するか、分泌されるムチンに発現する（Julenius, {2005 #297}参照）。同様に、Ｈ型の、ブタにおける上皮細胞上（３６）またはムチンの形態の分泌物における（４６）（４７）固定様式が報告されている。Ｎ−アセチルガラクトサミンがＨ抗原のガラクトース上に転移されれば、Ａ型三糖抗原が形成される。Ａ抗原の形成は、ヒトＡ型遺伝子と同一のＡ型転移酵素遺伝子によりコードされるＡ型糖転移酵素に依存している。
【０１３３】
本発明は、所定の血液型Ａ、Ｏ、Ｂ、ＡＢ、またはドナー動物（４３）、特にブタ（４８〜５１）もしくはウシもしくはウマにおけるＡＢＨ型／ルイス型／分泌型、血液／組織の特定の表現型のルイス血液型または組織ＡＢＨ型のための選択方法を提案する。なお、ＡＢＨ抗原は大部分の動物種で発現している。しかしながら、一部の抗原、例えば、Ａ、Ｈの組織での発現は、種によって変動するが、１つの種の中の品種によっても変動する。この場合、所定の広義のＡＢＯ血液型の患者のために、どの品種からインプラントを調製するかを提案することができ、割り当ては、考慮した品種における所望の抗原の出現を考慮して行われる。いずれにせよ、インプラントの割り当ての選択が、患者の広義のＡＢＯ血液型を考慮して行われることに変わりはない。また、所望の抗原を提示するか、またはこれらの抗原を特に血液および組織ＡＢＨに関して発現しないか、またはＡＢＨ式血液型の一部の抗原を発現しない特定の動物の異なるコロニーまたはクローンを有することも考え得る。ここにおいても、インプラントの選択の割り当ては、患者のＡＢＯ式血液・組織型または関連する変数を考慮して行われる。
したがって、ＡＢＨ式血液型は大部分の哺乳動物、特にブタおよびウシまたはウマまたはカンガルーまたはアザラシに存在する。ブタにおいては、Ａ〜Ｌの血液型の多数の抗原が存在し、そのそれぞれをコードする異なる対立遺伝子を有する。このＡＢＨ式血液型は、限定されずに、免疫学的、組織学的もしくは遺伝学的技法またはこれらの組合せを用いて、血液、組織、特に分泌組織（消化管、泌尿器、唾液腺）、分泌産物、唾液、消化タンパク質、乳等において調査することができる。迅速であるために興味深い手法は、唾液腺上皮細胞におけるＡＢＨ式血液型の直接的な調査である（５１）。３種の遺伝子が特に発現している：Ａ抗原、Ｈ抗原およびＩ抗原である。Ｉ抗原はブタ特有のものである。Ａ抗原およびＨ抗原はヒトのＡ抗原に類似している。Ｂ抗原は異なっている。Oriol（４３、４９）ならびに（５１）および（５２）の研究によると、全体として、３つの主要な表現型Ａ＋、Ｈ＋およびＩ＋が存在し、出現率はそれぞれ５１％、３８％および１１％である。分類はＡ型の抗原性の発現の有無によって行う。Ａ型の抗原性がない場合は、Ｈ型の抗原性の有無によって行う。ＡおよびＨが陰性のブタは一般的にＩ型である。
【０１３４】
表現型Ａ＋のブタは、一般的にｌｅｘ−／ｌｅｙ−である。表現型H＋のブタは、一般的にｌｅｙ+／ｌｅｘ−である。表現型Ｉ＋のブタは、一般的にｌｅｘ＋／ｌｅｙ−である。一般的に、特にＨ抗原が発現しているＡ型の場合、Ｉ抗原発現が欠如している。
表現型Ｉ＋（Ａ−／Ｈ−／Ｉ＋）のブタは、ＰＮＡレクチンによっても抗Ｉ抗体によっても認識される。Ａ＋およびＨ＋のブタは、一般的にＰＮＡレクチンによっては認識されない。表現型Ａ＋およびＨ＋のブタにおけるＩ抗原の認識は一般的に抗Ｉ抗原を用いて行う。
【０１３５】
「ヒト表現型Ａ」の動物組織の取得
動物のＡ抗原は、発現した場合、ヒトＡ抗原との完全な類似性がある。Ａ型の特異性はＡ型転移酵素に依存している。最も容易な手法は、この特異性を発現する動物の選択である。場合によっては、この特異性を有する個体で飼育を行うことができる。表現型Ａのブタについては、実際、少なくとも２つのタイプのブタが存在する。Ａ＋のブタと、ヒトのようにＨ型のコア上に糖残基を発現するＡ＋かつＨ＋のブタである。２番目のタイプのブタの方がより適合性ではあるが、この２つのタイプのブタは有益である。
【０１３６】
表現型Ａの出現率はブタの品種に依存する。例えば、Ａ型の出現率はデンマークランドレースブタで２３％、ハンプシャー種で３４％、デュロック種で４９％である。Ｈ型は、デュロックで４６％、デンマークランドレースで２９％、ハンプシャーで１３％である。Ｉ型の発現は、４０〜４８％程度である（Andresen E. 1961 PNAS Pig Blood group antigenes参照）。
【０１３７】
Ａ型では、大部分の５２％がＨもＩも発現しておらず、したがってＡ＋／Ｈ−／Ｉ−である。しかしながら、このＡ型のブタの一定数はヒトＨ抗原も発現しており、したがって、Ａ型に対して極めて適合性が高い一方（Ａ＋／Ｈ＋／Ｉ−）（１６％）、他のものはＩ抗原を発現し、したがって、より適合性が低い（Ａ＋／Ｈ−／Ｉ＋）（３１％）。
【０１３８】
別の手法は、ヒトＡ型転移酵素の特異性を発現する、遺伝的に改変されたブタを得、これらのブタに由来する組織を用いてバイオプロテーゼを製造することである。この改変はさらに、特に、アルファ−Ｇａｌ抗原：異種血管性拒絶の主要抗原であるアルファＧａｌ（Ｇａｌα１，３Ｇａｌβ１，４ＧｌｃＮＡｃβ１−Ｒ）（「αＧａｌ」）（KZ.  Konakci et al.（５３））などの他の糖残基の発現を阻害する目的の他の遺伝的改変を伴ってもよい。
【０１３９】
「表現型Ｈ」の動物組織の取得
Ｈ抗原については、一部のケースにおいて、抗原を調査する組織または場所および試験するブタによってはむしろ１型または２型のヒトＨ抗原である。抗Ｈ抗体、抗Ｈ１抗体もしくは抗Ｈ２抗体、または他のアイソタイプ、または、例えばUlex Europaeus1などのレシチンを用いるか、遺伝子的手法による。特異性Ｈ１およびＨ２をコードする遺伝子は、フコース転移酵素であるＦＵＴ１およびＦＵＴ２遺伝子である。表現型Ｈ＋は、ブタの３８％を占める。Ｈ型に関して、７８％は真のＨ（Ａ−／Ｈ＋／Ｉ−）であるが、２２％はＩ型の抗原性をも示す。他方、特異性Ｈは、Ａ型のブタの１６％にも存在する（Ａ＋／Ｈ＋／Ｉ−）。Ｈ＋のブタ（Ａ−／Ｈ＋）は、一般的にｌｅｙ＋／ｌｅｘ−およびＩ＋またはＩ−（一般的にはＩ−）である。Ａ＋のブタ（Ａ＋／Ｈ＋）は、同様に一般的にＩ−である。
【０１４０】
同様に様々な手法が可能である。第１の手法は、表現型Ｈを有する動物を選択することである。それは、特に抗Ｈ抗体によって認識される動物か、Ｈ抗原を認識するレクチンによって認識される動物か、ｌｅｙ＋／ｌｅｘ−の血液型である。別の解決手段は、その集団の中で表現型Ｈを有しない動物を排除することによる、表現型Ｉ＋の組織（ｌｅｙ＋／ｌｅｘ−の組織または組織）および抗Ｉレクチンと反応する組織を排除することによる、負の選択を行うことである。こうして、表現型Ａ＋／Ｈ−／Ｉ−、表現型Ａ＋／Ｈ＋／Ｉ−および表現型Ａ−／Ｈ＋／Ｉ−が富化された集団に至る。表現型Ａ＋／Ｈ−またはＡ＋／Ｈ＋の集団を得るために、表現型Ａ−／Ｈ＋の動物の負の選択を行うことができるが、これは、これらの動物が一般的に表現型ｌｅｙ＋／ｌｅｘ−だからである。そうしたら、Ｈ抗原またはＥＵＡ１と反応しない個体を排除することができ、その場合、残った集団は、表現型Ａ＋／Ｈ＋／Ｉ−で富化されている（これは、目標とする表現型を得るための負の選択の一例である）。かかる集団は、ヒトに移植されることを目的とする弁の表現型として、より「適合性」がある。別の解決手段は、Ａ＋／Ｈ＋のブタから調製した組織を用い、Ａ−／Ｈ＋型の組織を得るために、これらの組織を例えば、アルファ−Ｄ−ガラクトシダーゼなどの酵素により消化することである。エキソグリコシダーゼによる消化技法も利用することができる（５４）（５４）。
同様に様々な手法が可能である。Ａ型のように、コアＨをコードする一部のヒト遺伝子、特にＦＵＴ遺伝子を発現するトランスジェニック動物の組織を用いることもできる。
【０１４１】
「ヒト表現型Ｂ」の動物組織の取得
特異性ＨおよびＢと異なり、ヒトの特異性Ｂを発現するブタは存在しない。しかしながら、Ｂ型の患者において、表現型Ｈの動物から得た組織は良好に耐容されている。場合によっては、ヒトＢ型転移酵素活性を発現するトランスジェニック動物を生成することが可能である。
【０１４２】
一部の動物のＡＢＨ表現型による非選択
ブタの表現型解析は二重の利点がある。希望の抗原を有するブタを選択する利点と同時に、ヒトとの適合性が低いＡＢＨの抗原的特異性を有するブタを選択しない利点がある。関係するのは、特に、表現型Ｉ（Ａ−／Ｈ−／Ｉ＋、Ａ−／Ｈ＋／−／Ｉ＋およびＡ−／Ｈ＋／Ｉ＋）のブタである。Ｉ＋のブタは一般的にＰＮＡ＋またはＰＮＡおよび抗Ｉ＋となるにもかかわらず、Ｉ抗原＋は、Ａ＋型、Ｈ＋型またはＩ＋型の如何に関わらず相当容易に特定することができる。
【０１４３】
一般的に、これらの表現型の発現に直接関連するＡ＋、Ｈ＋もしくはＩ＋抗原または特異性ｌｅｘ／ｌｅｙの発現についてブタを積極的に選択してもよい。集団内で対象とする抗原の頻度を高めるために、負の選択を行ってもよく、それは例えば、もとの品種の選択において、または、表現型Ｉ＋（ＰＮＡ＋、抗Ｉ＋）の動物を排除することにより、すなわち、Ｉ抗原などの一部の抗原を発現する動物（抗Ｉ＋およびＰＮＡ＋／−の動物）を排除することにより行うことができる。表現型Ａに関する負の選択の別の様式は、表現型Ｈ＋（Ｈ＋抗体およびＵＥＡ＋レシチンにより認識される）および／またはＩ＋を排除することである。これはまた、表現型ｌｅｘ＋／ｌｅｙ−またはｌｅｘ−／ｌｅｙ＋を排除することにもなる。
【０１４４】
表現型Ａ＋（抗Ａ）およびＩ＋（抗ＩおよびＰＮＡ＋）を排除することによる負の選択によって、Ｈの集団を得ることができる。Ｈ＋の集団はまた、表現型ｌｅｙ−を排除することによっても得ることができる。
Ｉ型に関し、大部分はＡ＋／Ｈ−／Ｉ＋、Ａ−／Ｈ＋／Ｉ＋またはＡ−／Ｈ−／Ｉ＋：１６％である。
【０１４５】
ＡＢＨ抗原の発現が低い組織の取得
一部のケースにおいて、組織に固定されたＡＢＨ抗原を取り除くために、酵素的、物理的もしくは化学的手段またはこれらの組合せを用いることも可能である。しかしながら、大部分のケースにおいて、この手法は組織の特性を変質させる。
ヒトの１型および２型のコアＨの化学構造は周知であり、スフィンゴ糖脂質の形態で、細胞、特に上皮細胞（４４）の表面にＮ結合型で発現するか、分泌されるムチンに発現する（Julenius, {2005 #297}）。同様に、Ｈ型の、ブタにおける上皮細胞上（３６）またはムチンの形態の分泌物における（４６）（４７）固定様式が報告されている。
【０１４６】
手法の１つは、Ｈ体をその支持体から解放するための処理を用いることである。別の手法は、モチーフが固定されているタンパク質または脂質モチーフを取り除くことである。ノイラミニダーゼ（４７）などの酵素またはアルファ−Ｌ−フコシダーゼ型の酵素を用いて、コアＨを消失させることが可能である。別の化学的方法は、Derevitskaya, 1983 #294に記載の、ブタのコアＨを断片化するための方法のように、組織からＡＢＨ式血液型の一部の糖残基を消失させることである。糖鎖のβ脱離とその後のエナミン基の臭素化により、アルカリ性水素化ホウ素ナトリウムによる臭素化アミノ酸残基の開裂をもたらす、ブタのコアＨの断片化に用いる技法（５５）によって、コアＨを分離させる化学的方法を用いる。メタノール−エチルエーテル（１：１、ｖ／ｖ）およびクロロホルム−メタノール（１：１、ｖ／ｖ）による処理を用いることも可能である（K.Kishi and S. Iseki  Immunochemical studies on blood group H and B substances from human hair参照）。これらの手順の全てをバイオプロテーゼに用いてもよい。
【０１４７】
ブタＡＢＨ式血液型に関して遺伝的に改変された、または、ヒトＡＢＯ式血液型の抗原を発現する動物の利用
適合性を改善する目的で、ヒトＡＢＯ式血液型に適合させるために、遺伝子改変ブタ、特にＡＢＨ遺伝子に関するものを利用してもよい。
【０１４８】
例えば、ブタにおいて古典的に発現されている血液型の一部の抗原（例えば、Ａ〜Ｌ型の抗原）を発現しないブタを選択すること、または、血液型のかかる抗原またはこの抗原の糖化誘導体もしくは変異体を発現しないように、または、別の抗原を過剰発現するようにブタを遺伝的に改変することができる。これはまた、過剰発現または過小発現を伴う、血液型の抗原の発現レベルでの調節であってもよい。血液型の発現のために、異なる酵素間で、基質レベルでの競合がしばしば生じることを考慮する必要がある。したがって、ある糖残基を大量に生成させると、別の糖化抗原が発現されないことがある。例えば、Ｉ抗原などの抗原を発現しないブタを生産する。
【０１４９】
動物、特にブタは、非遺伝子改変動物であってもよい。この場合、ブタの表現型を調査し、可能であれば、所望の抗原表現型の出現率が高い品種を選好することにより、または、所定の種について、希望する個体、または、例えば変異した表現型を有する個体、または、古典的なブタの表現型のＡＢＨ抗原の一部を発現しないような個体を選択することにより、希望するブタを選択する。
【０１５０】
ヒトＡＢＯ式血液型に関するトランスジェニックブタを用い、特にＡＢＯ式血液型の遺伝子の特異的な活性、例えば、ヒトＢ型転移酵素などの活性を発現させ、Ｂ抗原を、特にＨ型のブタに生成させることにより、ブタの適合性を改善することもできる。また、トランスジェニックブタを生成し、これらを、ヒトのＡ型転移酵素遺伝子、Ｂ型転移酵素遺伝子または「フコース転移酵素」遺伝子（ＦＵＴ遺伝子）を発現するように遺伝的に改変することにより、Ｈ、ＡまたはＢ抗原の発現を、特に所望の組織において増大させることもできる。また、ブタＡＢＨ式血液型の一部の遺伝子（とりわけ、Ａ〜Ｌの抗原）に関するＫＯブタを生成することもできる。
【０１５１】
このＡＢＨ抗原性の改変はまた、糖残基アルファＧａｌ（Ｇａｌα１，３Ｇａｌβ１，４ＧｌｃＮＡｃβ１−Ｒ）（「αＧａｌ」）などの別の抗原性モチーフに対する抗原性の改変と組み合わせてもよい。これは、アルファガラクトシルトランスフェラーゼの伝達のためのＫＯブタなどの遺伝子改変ブタにより、または、組織を、とりわけアルファガラクトシルトランスフェラーゼなどの酵素で処理することにより得ることができる。
【０１５２】
拒絶に関与する糖残基または抗原について改変された他のブタ、例えば、超急性異種血管性拒絶の主要抗原：アルファＧａｌ（Ｇａｌα１，３Ｇａｌβ１，４ＧｌｃＮＡｃβ１−Ｒ）（「αＧａｌ」）を発現しないブタを用いてもよい。
【０１５３】
これらの改変は、バイオプロテーゼの表面における、ＡＢＨ式血液型に属するまたは属しない他の糖残基の発現または抗原の発現の改変を目的とする他の方法と関連させてもまたは連結させてもよい。この方法は、移植された組織の免疫原性、石灰化、物理的特性、毒性、生物適合性、血栓形成性を改変することを目的とする他の手法と連結させてもよい。それは、経時的な安定性を含む、固定の品質を改善することを目的とする技法をも含む。
特定のブタＡＢＨ／ヒトＡＢＯ−ＡＢＨ表現型の組織を得るために、様々な処理手法を組み合わせることができる。
【０１５４】
２）特定の動物ＡＢＨ／ヒトＡＢＯ−ＡＢＨ表現型を有する組織の固定／網状化
適合するＡＢＨの動物組織を無菌的に取り出し、固定および処理のために調製する。以下の発明においてはグルタルアルデヒドによる古典的な固定の利用を提案するが、この固定の多数の変法またはバイオプロテーゼの製造のために古典的に用いられている他の固定剤を利用してもよい。
【０１５５】
組織を無菌水またはＰＢＳで洗浄する。脂質、脂肪酸、コレステロールなどを除去するため、固定の前に、組織を界面活性剤で処理してもよい（米国特許4553974参照）。組織は、リン酸バッファー中のｐＨ７．４の０．６２５％グルタルアルデヒド溶液中、２週間、固定圧力２ｍｍＨｇ未満、３７℃の温度管理下で固定する。次いで、組織を変性剤／界面活性剤／架橋剤の混合物により３日間処理する（参照として、それぞれ、ホルムアルデヒド４％、エタノール２．２％、Ｔｗｅｅｎ８０  １．２％）。
【０１５６】
ブタ組織の、グルタルアルデヒドでの処理、次いで、ホルムアルデヒド／エタノール／ｔｗｅｅｎでの処理による固定は１９８４年から提案されている（６）。それ以降、グルタルアルデヒドによる様々な固定、ならびに、様々な変性剤（例えば、米国特許20070255423）が提案されている。石灰化抑制剤がしばしば組み合わされる。塩化アルミニウムおよび/またはエタノールによる化学的前処理がときに用いられる。界面活性剤を用いてもよい（参照として、例えば、ドデシル硫酸、アルファオレイン酸、ホモシステイン酸／米国特許20060154230）。次いで、組織を滅菌することができ（例えば、米国特許743850、6203755）、保存溶液を用いることができる（例えば、米国特許5935168、20040136965, 7129035、7014655、6861211、7579381、7214344、6878168、6561970、6547827、6214054、6008292、5935168、5931969、5782931、5215541、4885005、4838888、4648881、4647283）。至極当然のことながら、他の固定法またはこの固定の変法、例えば、グルタルアルデヒドによる固定ｐＨの変更、還元剤の使用、熱による固定等を伴う変法を用いてもよい（例えば、米国特許7579381、7214344、6878168、6561970、6547827、6214054、6008292、5935168、5931969、5782931、5215521、4885005、4838888、4648881、4647283、20070255423、20060217805、20040253291、20070255423、20050071926、7214344、20090164005）。
【０１５７】
他の網状化剤：この重合または網状化は、既知の網状化剤および誘導体および／またはこれらのアナログ、誘導体、および、その組合せとの化学反応に由来し得、それは、例えば、ゲニピン、ノルジヒドログアイアレチン酸アグリコン、ゲニポシド酸、エポキシ化合物、ジアルデヒドデンプン、グルタルアルデヒド、ホルムアルデヒド、スベルイミノ酸ジメチル、カルボジイミド、アシルアジド、「染料媒介性光酸化」、スクシンイミジル、ジイソシアネート、アジ化アシル、グリセルアルデヒド、シアナミド、ジイミド、アジプイミド酸ジメチル、ルテイン、ノルジヒドログアイアレチン酸、酵素的変換、トロンビン、熱脱水処理、細胞による内因性網状化およびその正常な生化学産物（細胞により産生されるリジン酸化酵素など）、固定されていないグルタルアルデヒドの除去、または、残存するグルタルアルデヒドの遊離を、アミン成分によりブロックすることにより低減することを目的とする方法、例えば、事前にグルタルアルデヒドで固定した組織に固定される、または、処理した組織中に直接投与されるジホスホン酸塩の利用、グルタルアルデヒド中で固定された組織に共有結合により固定された、脂肪族基で置換された酸（amino-substituted aliphatic functional acid）の利用、グルタルアルデヒドによる固定の前または後の鉄またはスズの塩（ferric or stannic salts）の利用、硫化多糖（sulfated polysaccharides）、例えば、コンドロイチン硫酸等による組織の処理、グルタルアルデヒドによる固定の前または後のキトサン／ヘパリンによる網状化処理の利用、塩またはポリマー（特に弾性ポリマー）、グルタルアルデヒドによる固定の後の、リン酸エステルまたは４級アンモニウム塩が豊富な、または、硫化脂肪族アルコール（sulfated higher aliphatic alcohol）が豊富な溶液の利用、または、これらの手順の一部の組合せである。様々な網状化が提案されている（例えば、米国特許7579381、20050071926、6214054、7214344、20090164005）。他の固定剤または網状化剤の例は次のとおりである：スルホ−ＮＨＳ（例えば、米国特許7479164、5733339）、トリグリシジルアミ（ＴＧＡ）（米国特許0030196274、7156881参照）、ビス−マレイミド（米国特許6596471参照）、ゲニピン（例えば、米国特許20020091445、6998418、6545042）、エポキシド（例えば、米国特許7014655、6106555、5080670）、他の固定（例えば、米国特許5094661、5002566、4976733、5679112、5447536、5368608、6322593、6302909、66231614、6193749、6177514、6156531、6132986、6093530、5919472、20060207031、200500719326、2003010746、6471723）。
【０１５８】
他の関連する処理：脱細胞化組織を用いてもよい（例えば、米国特許20040052830、20030228692、5632778、5613982）。網状化剤または架橋剤に加え、他の化学剤または物理剤、酵素剤などの生物剤を組み合わせてもよく、それは例えば、還元剤、洗剤、初期の組織を脱細胞化するための剤、脂質を除去するための剤（例えば、米国特許6350732、20040253291）、グルタルアルデヒドによる固定を非可逆的とすることにより改善するための剤（例えば、米国特許6479079）などである。
様々な網状化法、処理または手順を組み合わせることができる。
【０１５９】
３）特定の動物ＡＢＨ／ヒトＡＢＯ−ＡＢＨ表現型を有する固定／網状化された組織からのバイオプロテーゼデバイスの製造
本発明において、先に取得した組織による弁バイオプロテーゼなどの移植可能なデバイスの実現を提案する。特定のＡＢＨを有する組織を無菌室に移送し、加工、精製または整形し、および、任意の生物学的または非生物学的成分（例えば、ステント、支持体、ポスト、リング、パイプ、ポリエステルメッシュの断片など）に付着させまたは組み合せ、バイオプロテーゼデバイスを形成する。バイオプロテーゼは、大動脈弁輪の交連部を再現する３つのポストを備えたコバルトとクロムの合金製の環状の金属製のフレームに固定されたブタ大動脈弁製の３つの弁で構成される。このステントは、弁、特に交連部に負荷された応力を部分的に減衰させるために弾力性がある。３つの弁は大動脈基部から切り取り、隣接する構造を最大限取り除き、筋の残りをステント壁に直接組み込む。縫着輪はシリコーン製で、ステント全体と同様、ＰＴＦＥ織布で被覆されている。別のケースでは、ブタの大動脈基部をモノブロックで用いるため（大動脈半月弁、大動脈弁輪および大動脈洞を含む）、バイオプロテーゼを再構成する必要がない。
【０１６０】
別のバイオプロテーゼを、事前に取得した組織から製造することができる。これらのデバイスの非限定例は次のとおりである：ステント付のバイオプロテーゼ：１９７５年から市販されている、初期はグルタルアルデヒドで固定され、次いで１９８４年からはグルタルアルデヒドによる固定と、ホルムアルデヒド、エタノール、Ｔｗｅｅｎによる処理を受けているCarpentier-Edwardsのブタ弁（Edwards lifescience）、Carpentier-Edwards RTMステント付ブタバイオプロテーゼ、ウシ心膜製バイオプロテーゼ（Carpentier-Edwards .RTM pericardial BioprosthesisTM参照）、０．６２５％グルタルアルデヒドで固定された（Hancock ITM）またはグルタルアルデヒドと界面活性剤であるドデシル硫酸で固定された（Hancock IITM）ブタバイオプロテーゼのHancock弁（MedtronicTM）、グルタルアルデヒドおよびアルファオレイン酸で低圧固定されたブタバイオプロテーゼのMosaicTM弁（MedtronicTM）、BiocorTMおよびEpicTM弁（Saint JudeTM）、mitroflowTM弁（carbomedixTM）、グルタルアルデヒドで固定し、ホモシステイン酸ベースの後処理を行った仔ウシ心膜によるpericarbonTM弁（Sorin）、弁輪上モデルのSopranoTM、ステントレスブタ大動脈プロテーゼ（Edwards RTM参照）、グルタルアルデヒドで固定され、アルファオレイン酸系の石灰化抑制剤を伴うブタ大動脈基部のfreestyleTM弁（MedtronicTM）、グルタルアルデヒド中で固定されたブタ大動脈弁のTorontoTM弁（Saint Jude MedicalTM）、グルタルアルデヒド中、低圧で固定されたブタ大動脈基部のPrimaTM弁（EdwardsTM）、仔ウシ心膜の２枚のシートの組合せで構成される、グルタルアルデヒドで固定し、ホモシステイン酸で後固定したPericarbon FreedomTM弁（Sorin）、ブタの３つの無冠動脈洞で形成されるCryoLife-O'BrienTM弁、ATS 3fTM、血管内経路で設置するバイオプロテーゼのCoreValveTM（CoreValve, Inc, Paris, France）（WO03079929）。
【０１６１】
現在の主要な心臓バイオプロテーゼ：「Surgical Technology International」、www. Surgicaltechnology.com、STI XV Cardiovascular surgery、「Advanced Technologies for cardiac valve replacement, transcatheter innovation and reconstructive surgery」、W.R. Jamieson E、Hancock standard and Carpentier-Edwards standard、Carpentier-Edwards Supra-Annular（SAV）Aortic Porcine Bioprosthesis、Carpentier-Edwards PERIMOUNT心膜バイオプロテーゼ（Edwards Lifesciences, Irvine, CA, USA）、Carpentier-Edwards Duraflex Low-Pressure Mitral Bioprosthesis、Carpentier-Edwards PERIMOUNT Magna Aortic & Mitral Bioprosthesis、Carpentier-Edwards PERIMOUNT Plus Mitral Pericardial Bioprosthesis、Carpentier-Edwards PERIMOUNT Theon Mitral Replacement System、Edwards PrimaTM Plus Stentless Porcine Bioprosthesis、Carpentier-Edwards Biophysio Pericardial Aortic Bioprosthesis、Hancock IIブタバイオプロテーゼ（Medtronic, Inc., Minneapolis, MN, USA）、Medtronic MosaicTMブタバイオプロテーゼ（Medtronic, Inc., Minneapolis, MN, USA）、Medtronic Mosaic UltraTM（Medtronic, Inc., Minneapolis, MN, USA）、Medtronic FreestyleTM Stentless Porcine Bioprosthesis、Medtronic-Venpro ContegraTM弁付肺導管（Medtronic, Inc., Minneapolis, MN, USA）、St. Jude Medical-Biocorブタバイオプロテーゼ（St. Jude Medical, Inc., Belo Horizonte, MG, Brazil）、St. Jude Medical-Biocor Supra Porcine Bioprosthesis、St. Jude Medical Epicブタバイオプロテーゼ（St. Jude Medical, Inc., St. Paul, MN, USA）、St. Jude Medical Epic Supra Porcine Bioprosthesis、St. Jude Medical-Toronto SPVステントレスブタバイオプロテーゼ（St. Jude Medical, Inc., St. Paul, MN, USA）、St. Jude Medical-Toronto Stentless RootTMブタバイオプロテーゼ（St. Jude Medical, Inc., Minneapolis, MN, USA）、St. Jude Medical-Biocor心膜バイオプロテーゼ（St. Jude Medical, Inc., Belo Horizonte, MG, Brazil）、St. Jude Medical-Biocorステントレスブタバイオプロテーゼ（St. Jude Medical, Belo Horizonte, MG, Brazil）、St. Jude Medical TrifectaTM心膜バイオプロテーゼ（St. Jude Medical, Inc., St. Paul, MN, USA）、Sorin PericarbonTM MORE心膜バイオプロテーゼ（Sorin Biomedica, Saluggia, Italy）、Sorin PericarbonTM Freedomステントレス心膜バイオプロテーゼ（Sorin Biomedica, Saluggia, Italy）、Sorin PericarbonTM Freedom Soloステントレス心膜バイオプロテーゼ（Sorin Biomedica, Saluggia, Italy）、Soprano大動脈弁輪上心膜バイオプロテーゼ（Sorin Biomedica, Saluggia, Italy）、Mitroflow心膜バイオプロテーゼ（Sorin-Mitroflow, Richmond, British Columbia, Canada）、導管有りまたは無しCryoValve大動脈弁（Cryolife International, Inc., Kennesaw, GA, USA）、CryoValve Mitral valve（Cryolife International, Inc., Kennesaw, GA, USA）、Cryolife-O'Brienステントレスブタバイオプロテーゼ（Cryolife, Inc., Kennesaw, GA, USA）、Shelhigh Skeletonized Super-StentlessTM（Shelhigh, Inc., Union, NJ, USA）、BioMitralTM弁（Model NR-900）、現世代Shelhighブタ肺動脈弁導管（Shelhigh, Inc., Union, NJ, USA）、Koehler Aspireブタバイオプロテーゼ（Koehler, Bellshill, Scotland）、Koehler Elanステントレス大動脈ブタバイオプロテーゼ（Koehler, Bellshill, Scotland）、Koehler Root Elanステントレス大動脈ブタバイオプロテーゼ（Koehler, Bellshill, Scotland）、3F TherapeuticsTMバイオプロテーゼ（3F Therapeutics Inc., Lake Forest, CA, USA）、Labcorステント付ブタバイオプロテーゼ（Labcor, Inc., Belo Horizonte, MG, Brazil）、Labcorステント付心膜バイオプロテーゼ（Labcor, Inc., Belo Horizonte, MG, Brazil）、Labcorステントレスブタバイオプロテーゼ（Labcor, Inc., Belo Horizonte, MG, Brazil）、Glycar QuattroTM僧帽弁バイオプロテーゼ（Glycar, Inc., Johannesburg, South Africa）。
【０１６７】
これらの発明に対応する主要な特許は限定されずに次のとおりである：大動脈バイオプロテーゼ（例えば米国特許7316712、6391538、20020173843、5824061、20090030511、6254636、6086612、6719789、6074417、7011681 、6530952、5824067、20040024452、5769780、 4692164、4626255、20080154358、5824060、7166124、7163556、6540781、5728152、5571174、5549665、5352240）、僧帽弁バイオプロテーゼ、肺動脈弁バイオプロテーゼ7320705、ステント有りまたは無しの三尖弁バイオプロテーゼ（例えば米国特許5156621、5080670、4626255、4561129、4388735、4378224）、吸収性ステントを有するバイオプロテーゼ（例えば米国特許5489297）、縫合を伴うまたは伴わないバイオプロテーゼ（例えば20030196274、20030181974、7322932、6027530）、ステントと組み合わされてるまたは組み合わされていないバイオプロテーゼ（例えば20090118826）、血管内移植用のバイオプロテーゼ（例えば20030125805、20030125793、7125418、7318998、7041132、7033390、6719785、 6682558、6087552、5755782、554521）または最小侵襲手術による移植用のバイオプロテーゼの製造のための様々な手法が報告されている。また、弁を形成するためにシートを組み立てるための手法も報告されている。弁製造の可能性。支持体システム（例えば米国特許20010002445）。バイオプロテーゼの製造時に物理的刺激を利用する可能性（例えば米国特許7348175）。弁修復システム（例えば米国特許20040143323、7455689）またはバイオプロテーゼをin situで製造するためのシステム（例えば米国特許5326370）（Edwards Lifesciences経皮的大動脈弁（Edwards Lifesciences, Irvine, CA, USA）、CoreValve経皮的心膜大動脈弁（CoreValve, Irvine, CA, USA）、Medtronic Melody経カテーテル肺動脈弁（Medtronic Inc., Minneapolis, MN, USA）、ENABLETM Aortic Bioprosthesis（3F Therapeutics, Lake Forest, CA, USA）、ENTRATATM経心室大動脈バイオプロテーゼ（3F Therapeutics, Lake Forest, CA, USA）、Edwards AscendraTM弁置換システム（Edwards Lifesciences, Irvine, CA, USA）、Sadra Percutaneous心膜大動脈弁（Sadra Medical, Campbell, CA, USA）、AorTx（AorTx, Palo Alto, CA, USA）コンセプト、Corazon PAVRシステム（Corazon Technologies, Menlo Park, CA, USA）、Corazon Surgical Aortic Valve Repair（SAVR）System（Corazon Technologies, Menlo Park, CA, USA）、三尖弁逆流のための経皮的バイオプロテーゼ（3F Therapeutics, Lake Forest, CA, USA）。
【０１６３】
他のバイオプロテーゼデバイスの例は次のとおりである（非網羅的リスト）：マトリクスパッチを製造する可能性（例えば米国特許20010051824、20040157206、6652583、6174333、5855620、6517576）、Cook Biotech Inc, West Lafayette, IN, USA、EnCapTM TechnologyによるSMJTM Pericardial Patch（St Jude MedicalTM）、脈管を製造する可能性（例えば米国特許5545215、20040158320、20010020191、6358275、6206917、6110212、6087552）、弁付導管を製造する可能性（例えば米国特許5376112）または生物組織を処理するための可能性（例えば米国特許20060207031）。
【０１６４】
バイオプロテーゼは足場、例えば、PCT/FR2008000785に記載の足場などであってもよい。この足場は細胞化されていてもよく、細胞治療、皮膚を包含する組織の再生、置換、再建のために用いることができる。三次元足場は完全に生分解性であるか、または部分的に生分解性であるか、または生分解性ではない。三次元足場は液相中で形成し、送達されると、活性化後または活性化せずに、固相に変換し得る（例えば、溶液、ペースト、ゲル、コロイド懸濁物、血漿）。三次元足場は、自発的に巨視的構造に集合することができる疎水性アミノ酸および親水性アミノ酸で構成されたヒドロゲル製のものであってもよい。三次元足場は、ゲルまたは界面活性剤であってもよい。足場が界面活性剤または「インテリジェント物質」である三次元足場において、「インテリジェント物質」は、分子レベルの局所的相互作用に基づき大規模に自発的に集合した構造で構成される生物材料である。三次元足場において、３Ｄの構築は、異なる２Ｄ足場上で得た培養物の重層によって得てもよい。この２Ｄ足場への細胞の接着は多様であってもよい。これらの２Ｄ支持体は、接着分子の固定により修飾されたコラーゲン／フィブリン／フィブリノーゲンを含有してもよい。異なる性質の複数の３Ｄ足場もまた、順次または他の様式で重層してもよい。三次元足場は細胞のマトリクスを形成してもよく、当該マトリクスにおいて、人工組織の構築は、構造的再集合を促進する、選択された形態の生体材料を含んでもよい：マイクロ構造またはナノ構造（例えば、マイクロチューブまたはナノチューブ、ナノ粒子、マイクロポアまたはナノポア）。マイクロ粒子またはナノ粒子は、シリコン、ポリ−（乳酸）酸混合物、グリコール酸−乳酸コポリマー、シクロデキストリン、量子ドットナノ粒子と結合したまたは結合していないリポソーム、マグネタイト、フィラメント、外部界面を形成するための構造的アナログ、フィラメントまたはチューブを形成するβまたはα構造のペプチドアナログ、スポンジ、パウダー、パイプ、球体、マイクロスフェア、フィルム、マイクロフィブリルまたはナノフィブリル、脂質膜、線維、メッシュ、マトリクス、パッチ、織布、キルトまたはこれらの組合せでできている。
【０１６５】
別のバイオプロテーゼデバイス（例えば米国特許5067962、6936070、6790213、4585458、7404819）は、Shelhigh BioRing（Shelhigh, Inc., Milburn, NJ, USA）、PrimaTM、RestoreTM、OasisTM、SurgisisTM、CuffPatchTM、GraftJacketTM、AllodermTM、TissueMendTM、OrthAdaptTMなどである。デバイスはまた、注射可能なまたはそうではないコラーゲン（例えば米国特許6548077、6127143、5814328、5374539）、例えば圧縮された組織（例えば米国特許7141064）であってもよい。これは、例えば、ブタの皮膚組織から製造したバイオプロテーゼによる再建手術のように、再生、置換、組織再建に用いることができる。
【０１６６】
上述の様々なデバイスは組み合わせてもよい。
【０１６７】
ＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型における表現型適合性の規則を支配する原理
これはつまり、所定の「ＡＢＯ表現型」の患者に対し、バイオプロテーゼデバイスのＡＢＨ表現型が患者のＡＢＯ式血液型と「適合」するようにして、この患者に可能な限り低い反応性をもたらす可能性のある組織または組織抽出物を移植することである。
【０１６８】
表現型は、バイオプロテーゼデバイスに、その移植時に発現しているものであり、それは、組織を調製した１つまたは複数の動物のＡＢＨ表現型と異なっていてもよい。Ａ、Ｂ抗原が存在するか否かに応じて、個体はその血液中に、欠如している抗原に対する免疫学的反応性を有するかまたは有しない。この反応性は、これらの個体の血液中の、欠如している抗原に対する抗体の存在により発現する。Ｈ抗原を有さず、したがってＡ型抗原およびＢ型抗原も有さず、したがって抗Ｈ抗体、抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体を有する「ボンベイ型」の個体を除き、すべての人類は特異性Ｈを発現する。したがって、彼らは抗Ｈ抗体を有しない。したがって、Ａ型の患者は抗Ｂ反応性を有するが、ＨまたはＡの組織を受容する。Ｂ型の患者は抗Ａ反応性を有するが、ＢおよびＨの組織を受容する。Ｏ型の患者は抗Ａおよび抗Ｂ反応性を有し、Ｈ型の組織を受容する。ＡＢ型の患者は抗Ａ、抗Ｂまたは抗Ｈ反応性を有さず、したがって、Ａ、ＢまたはＨの組織を受容する。「ボンベイ型」の患者は、抗Ａ、抗Ｂおよび抗Ｈ反応性を有する。反応性は、ヒトＡ、Ｂ、Ｈ抗原に対するものである。ヒトと、例えばブタなどの一部の動物との間に、Ａ抗原について、および、Ｈ抗原についてはある程度同一性が存在するものの、これはＢ抗原については正しくなく、異なっている。Ｂ型のヒト個体は、したがって、Ｂ型の動物組織に対して免疫学的反応を引き起こす。ブタで発現している他の血液型、特にＡ型の抗原性を発現しないブタに頻繁に存在するＩ型について、個体は、この抗原に対して反応性を引き起こす。様々な抗原性については先に定義した。
本発明は、限定されることなく、以下の例においてさらに例証される。
【実施例】
【０１６９】
例１：特定の動物ＡＢＨ／ヒトＡＢＯ−ＡＢＨ表現型を有する動物組織の取得
例１においては、「ヒト表現型Ａ」を有する組織を取得するために、組織レベルで抗原性Ａを発現する一部のブタの特性を利用したが、所定の特異性を有する組織を取得するための他の手法は本願において先に記載した。
【０１７０】
例１において、Ａ特異性をコードするヒトＡ型転移酵素の活性を検出するために、ブタの弁から抽出したＤＮＡに対するＰＣＲを用いた。InvitrogenTMのＤＮＡ抽出キットを用い、ヒトＡ１遺伝子を増幅することが知られている３組のプライマー（５６）を用いてＤＮＡを増幅した。しかしながら、ＦＹ−５２０（５’−ＣＣＧＧＡＡＴＴＣＡＡＣＡＣＴＴＣＡＴＧＧＴＧＧＧＡＣＡＣ−３’  配列番号１）およびＦＹ−５２１（５’−ＣＣＧＧＡＡＴＴＣＴＡ  ＧＣＴＣＴＣＡＴＣＡＴＧＣＣＡＣＡＣ−３’  配列番号２）などの他のプライマーを用いることもできる。ブタの表現型解析のために、他の手法、例えば組織学的手法などを用いてもよい。
【０１７１】
Ａ．動物組織のＡＢＨ表現型を取得する方法
動物におけるＡＢＨ型の同定方法は比較的共通しており、ヒトのＡＢＯ表現型に対して適用される技法の多くが動物にも適用可能である。ブタで用いた技法は、他の種、特にウシに拡張することができる。実際、ＡＢＯ／ＡＢＨ式血液型は、進化の過程で極めて保存されたシステムである。
【０１７２】
Ｂ．ブタの血液型の検出
ブタの血液型を決定するために、ヘパリン処理したチューブに０．５ｍｌのブタの血液と０．５ｍｌのＰＢＳとを取る。希釈した血液２５マイクロリットルを、エッペンドルフチューブに入れ、遠心分離する。２５マイクロリットルのマウス抗ヒトＡ抗体をインキュベートし、室温で５分インキュベートし、次いで９００ｇで３分間遠視分離する。遠心分離後、通常の顕微鏡下で血液凝集を観察する。抗ヒトＢ抗体とのインキュベーションが陰性対照となる（５１）。
【０１７３】
ブタにおいては、多くの動物と同様、ＡＢＨ式組織型が併存しており、ＡＢＨ式血液型と組織型との間にはある種の相関関係がある（４３）。
一部の組織は、他の組織よりＡＢＨ抗原を発現しやすい。外分泌組織、消化管上皮、泌尿器、および特に、腎臓、精巣を包含する生殖器、唾液腺である。
【０１７４】
Ｃ．固定された組織上でのブタＡＨ型の検出
腎生検試料を、凍結媒体Ｏ．Ｃ．Ｔ．（Miles, Inc., Elkhart, IN, USA）中、液体窒素で凍結した。試料を切断し、次いで−８０℃で保存した。切片を二次的に冷アセトンで１０分間固定し、周囲空気で乾燥させ、次いでＰＢＳで７分間再水和した。バックグラウンドを低減するために、切片を種々の剤、３％過酸化水素（Sigma）およびアビジン（Dakocytoformation）、タンパク質ブロッキング剤（Thermo, Electron, Pittsburgh PA, USA）で１５分間インキュベートした。各処理の間、１０分間リンスした。切片を、室温で３０分間抗Ａまたは抗Ｈ一次抗体（DakoCytoformation）とインキュベートした。洗浄後、切片を、二次抗体のビオチン化ヒツジ抗マウス抗体（DakoCytoformation）と３０分間二次的にインキュベートした。発色反応は、ペルオキシダーゼと反応して赤色の発色を示す３−アミノ−９−エチルカルバゾールを用いて行った。切片はまた、Ｈ−Ｅ（ヘマトキシリン−エオジン）染色した（５１）。
【０１７５】
パラホルムアルデヒドでの固定、次いで超音波処理、次いで非ビオチン検出キット（Vision detection kit HRP/DAB (Dako, H5007））の使用による別の解決手段がある（５８）。
【０１７６】
Ｈ抗原の検出は、特異的レクチンUlex EuropaeusI（UEAI）（Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA）または抗Ｈ抗体、抗Ｈ１抗体もしくは抗Ｈ２抗体（Oriol Transplant international 1994参照）を用いて行うことができる。ブタＩ抗原も、レクチン、例えば、ガラクトース特異的リシンレクチン（RCA120）（５２）、Arachis Hypogaea、Helix pomatia（HPA  San Mateo CA USA）など、および、Ａ型に対する抗体によって同定することができる。ラージホワイト種のブタでは全体として（３７頭のブタに対する分析）、５１％のブタがＡ型である（抗体による標識）。３８％は抗Ａ抗体によっては認識されないが、Ｈ鎖、特にＵＥＡＩレクチンにより認識される２型を発現する。最後に、１１％のブタはＡ−かつＨ−であるが、別なレクチンで認識され（参照として、Arachis Hypogaea（PNA）および抗Ｉ＋抗体）、一般的にｌｅｙ−／ｌｅｘ＋である。
【０１７７】
しかしながら、Ａ＋型のブタにおいてさえ、Ｉ＋でもあるものが一定数存在する。Ａ型のブタは、１５／１９がＵＥＡと反応しないため、一般的にＨ−である。しかしながら、これらのブタの３／１９はＨ抗原とヒトＡ抗原を発現する。これらはＡ＋／Ｈ＋／Ｉ−である。
【０１７８】
これら表現型Ａのブタの中に、純粋なＡ型ではなく、ブタに特異的なＩ型をも発現するブタも６／１９、約３０％存在する。これらのブタはＡ＋／Ｈ−／Ｉ＋である（４９）。
【０１７９】
一般的に、Ｈ＋のブタは、Ｌｅｗｉｓ特異性をも発現し、一般的にｌｅｘ−／ｌｅｙ＋である。Ａ−Ｈ＋型については、３／１４がＩ＋でもある（４９）。Busch J.の、交雑種（ラージホワイト／ランドレース／デュロック）のブタ腎生検試料に関する別の分析は、Ａ＋が８／１１であり、２／８（２５％）がＡ＋Ｈ＋であることを示す。残りの３／１１はＡ−Ｈ＋である（５１）。
【０１８０】
Ｈ鎖のコアの型がＨ１であるかＨ２であるかを決定するために、様々な毒素、例えば、「大腸菌由来易熱性毒素」（ＬＴ）またはコレラ毒素（ＣＴ）等に対する耐性を用いることができる（これらの動物の組織またはこれらの動物が分泌したタンパク質に対して、抗Ｈ１またはこうＨ２特異抗体を用いることもできる）。ブタの腸表面に存在する分泌物から精製したタンパク質の、これらの毒素を固定する能力は、対象となるブタのコアＨの表現型Ｈ１またはＨ２に直接関連していると考えられる。固定がなければ、それはＩ型のブタである。ＬＴのみ固定されるのはコアＨ２である。ＬＴとＣＴとが固定されれば、それはコアＨ１である。この種の手法は、感染への多少とも高い耐性から（５２、５９、６０）、または、特定の行動、例えば、寝藁の大きさなどにより（６１）、ブタの表現型を迅速に同定する方法となり得る。大腸菌はコアＡ、Ｈ１を特異的に認識する受容体を保有している。この特性も同様に、コアＨ１のブタを同定するために用いることができる（６２）。
【０１８１】
これらの動物の、特に３週令を超える動物の精巣の生検試料におけるＬｅｗｉｓ特異性に注目してもよい（特に抗ｌｅｘ抗体または抗ｌｅｙ抗体を用いることが可能）。Ｌｅｗｉｓ特異性は、ＦＵＴ２遺伝子でコードされ、これはまた、Ｈ鎖のＨ２型コアをもコードしている。味覚腺もまた、ＡＢＯ抗原のパネルの大部分を検出することを可能にする（６３）。
【０１８２】
組織を１０％ホルマリンで固定し、切片作成のためにパラフィンに包埋する。脱パラフィン後、切片を湿室中、フルオレセインまたはローダミンと結合したレクチン２０ｍｇ／ｍｌと３０分間インキュベートし、次いで蛍光用媒体（Vector Laboratories, Burlingame , CA, USA）にマウントし、蛍光顕微鏡下で観察した（４３、４９）。
【０１８３】
検出は、多数の組織、特に外分泌組織、生殖・泌尿器（５１）、消化管（４９）、消化器の生検試料に対して行うことができる。総説として、Nishi K. et al. 2005 ABO Blood Typing（６４）がある。
【０１８４】
Ｄ．動物の分泌産物におけるＡＢＨ表現型の検出
分泌物自体、例えば、乳（６５）、顎下腺分泌物、気管支粘液などにおいて、Ｈ型物質の分析を同様に行うことが可能である。ＡＢＯ型はムチンに関連していることが多い。ＨＰＬＣ（３６）、または、抗Ｈ１（クローン17-206 Signet Dedham MA, USA）、もしくは抗Ｈ２（クローン92 FR-A2 Dako Carpinteria, CA, USA）、もしくは抗Ｌｅｂ（クローンT218 Signet Dedham MA, USA）、抗Ｌｅａ（クローンKM231 Calbiochem-Novabiochem San Diego CA）もしくは抗Ｌｅｘ（クローンP12 Calbiochem-Novabiochem San Diego CA）（Clonex（６５））特異抗体を用いたウェスタンブロットにより、様々な形態を同定することが可能である。大部分のブタは乳中にＨ１型のコアＨを分泌するが、Ｈ２型のコアＨの分泌はより限定されている（６５）。
【０１８５】
Ｅ．粘膜上皮細胞におけるブタＡＨ型の検出
より簡便な別の技法は、口腔粘膜を綿でこすり、この綿をスライドガラスに押し当てることにより、口腔粘膜上皮細胞について表現型解析を行うことである。検体は周囲温度で風乾する。スライドを冷アセトン（Sigma, St Louis, MO, USA）で１０分間固定する。次いでＰＢＳで再水和する。１／５０希釈のマウス抗ヒトＡモノクローナルＩｇＭ抗体、１／５０希釈のマウス抗ヒトＨモノクローナルＩｇＭ抗体（DakoCytoformation, Carpinteria, CA, USA）を１００マイクロリットル、湿室中６０分間適用し、次いでＦＩＴＣ結合ヒツジ抗マウス抗体１／１００（Vector, Burlingame, CA, USA）と暗中で６０分間インキュベートし、蛍光顕微鏡で観察する（５１）。
【０１８６】
Ｆ．皮膚付属器におけるＡＢＨ式血液型の検出
Ａ抗原が皮膚付属器、例えば毛などの内部に発現していることが示されている（６４）。
【０１８７】
Ｇ．動物のＡＢＨ式血液型に関する遺伝子型解析
ＡＢＯ型の複雑性のため、分子生物学的技法（３１〜３４）は、何年かのうちに、血清学による現行の技法にとって代わる可能性がある。これらの技法は動物で利用することができる（６６）。
【０１８８】
ブタの表現型解析を遺伝子型解析により行うことも可能である（５６、５７、６３、６７〜６９）。これらの糖の生成の全体は、遺伝子がコードする様々な酵素の指揮下にある。極めて有益なことに、これらの様々な活性をコードする遺伝子は、進化の過程で極めてよく保存されており、それは多くの場合、ある遺伝子をシーケンシングするために用いるヒトのプライマー配列が動物でも利用できるほどである。ヒトＡ抗原をコードするエンドガラクトシダーゼＡ（Ａ１またはＡ２）遺伝子の場合は特にそうである（６７）。特異性Ｈについては、特にＦＵＴ１およびＦＵＴ２遺伝子に注目することが可能である（４２、６０、７０〜７２）。動物におけるＡＢＨ型に対する「遺伝子型解析」は、唾液などの分泌物（６７）、血液、組織、例えば、ブタにおける下顎腺組織などから抽出したＤＮＡ（５７）について行われた。遺伝子型解析はＡＢＯ型について調査してもよいが、分泌型／非分泌型について調査してもよい（７３）。
【０１８９】
上述の様々な技法により、希望する単数または複数のブタを、そのＡＢＨ特異性によって同定することが可能となる。それは、Ａ＋（Ａ＋Ｈ＋Ｉ−＞Ａ＋Ｈ−Ｉ−＞Ａ＋Ｈ−Ｉ＋）のブタ、Ｈ＋（Ａ−Ｈ＋Ｉ−＞Ａ−Ｈ＋Ｉ＋）のブタ、および他のブタ、特にＩ（Ａ−Ｈ−Ｉ＋）のブタである。場合によっては、結果を組織の組織学的切片で確認することができる。この手法は、コアＨの表現型解析、場合によっては、例えば、下顎腺における遺伝子型解析を伴ってもよい。
【０１９０】
したがって、バイオプロテーゼは、例えば、患者のコアＨのＨ１型またはＨ２型の表現型に応じて提案される。上記で見たとおり、コアＨのタイプ、Ｈ１またはＨ２と、患者が分泌型の表現型か否かと、Ｌｅｗｉｓ型ＬｅａまたはＬｅｂに関する特徴との間に直接的な関係が存在する。
【０１９１】
例２：特定の動物ＡＢＨ／ヒトＡＢＯ−ＡＢＨ表現型の組織の固定／網状化
例１において、Ａ＋型またはＡ−型のブタから先に取り出したブタの弁組織を、ｐＨ７．４のＰＢＳ中の０．６２５％グルタルアルデヒド溶液に、３７℃での温度管理下、２週間浸漬し、変性剤／界面活性剤および架橋剤（参照として、それぞれ、４％ホルムアルデヒド、２．２％エタノールおよび１．２％Ｔｗｅｅｎ８０）による処理に３日間供した。
【０１９２】
組織の固定のための様々な可能性は上述のとおりであり、我々が使用した固定法の代わりに用いることができる。それは例えば、非限定的に、組織を固定するための上述のような様々な種類の処理などである。それは例えば、グルタルアルデヒドに代わる固定法である（米国特許7579381、7214344、6878168、6561970、6547827、6214054、6008292、5935168、5931969、5782931、5215521、4885005、4838888、4648881、4647283、20070255423、20060217805、20040253291、20070255423、20050071926、7214344、20090164005）。
【０１９３】
例３：網状化組織のＡＢＨ表現型を知ることにより、レシピエントにおける石灰化の程度が低いバイオプロテーゼ組織を、レシピエントのＡＢＯ／ＡＢＨ型に応じて得ることが可能である：
【０１９４】
ラットは、ブタと同様、ＢまたはＡＢ型の抗原性を発現する。先に固定した表現型Ａ＋またはＡ−のブタ組織を、ＡＢＨ表現型がＡ＋（参照としてＡＢ）またはＡ−（参照としてＢ）のWistarラットに無菌的に皮下移植した。
【０１９５】
移植を受けたラットの表現型は、下顎腺の生検試料を組織学的に標識することにより決定した。下顎腺組織を１０％ホルムアルデヒドで固定し、パラフィンに入れ、５マイクロメートルの切片を作製した。抗Ａ抗体（ortho diagnostic, Ranitan NJ）を、先に記載されたとおりに使用した（J. Of Forenscic Medicine and toxicology 2001, 20, n°2 Nishimura A.参照）。
【０１９６】
移植片の石灰化は、ラットの皮下への３０日間の移植後に、吸光分光法により測定した。各群ｎ＝１０で、Ａ−のラットにおけるＡ＋のブタ移植片の石灰化は、１３５±２２μｇＣａ／ｍｇ乾燥組織であった。Ａ＋のラットにおけるＡ＋のブタ移植片の石灰化は、３０±７μｇＣａ／ｍｇ乾燥組織であった。
この例は、由来する組織のＡＢＨ表現型を知ることにより、レシピエントのＡＢＯ／ＡＢＨ型を知っており、かつ、我々が定義した基準に従って割り当てがなされた場合に、石灰化する傾向が小さいデバイスを得ることがいかに可能になるかをよく示している。
【０１９７】
例４：移植された患者のＡＢＯ表現型に応じたブタバイオプロテーゼデバイスの結果：
４．１  バイオプロテーゼの寿命に対する患者のＡＢＯ表現型の関与：
現在、所与の個体に関して、バイオプロテーゼの寿命を予測するためのパラメータはほとんど存在しない。バイオプロテーゼを割り当てるために、移植部位、年齢、移植部位の形状（傾き、外形寸法）を考慮するが、免疫学的反応性などの対象に特有のパラメーターは考慮していない。
【０１９８】
以下の研究において、我々はＡＢＯ血液型のを知ることにより、バイオプロテーゼデバイスが有するＡＢＨ糖残基に対する対象の反応性を決定することができ、この反応性を考慮し、デバイスを適合させることにより、寿命がより長く、早期不全がより少なく、石灰化の傾向がより低いデバイスを取得することが可能となる証拠を提供する。
Ａ＋型またはＡ−型のブタから製造した「Carpentier-Edwards standart」型ブタバイオプロテーゼ（グルタルアルデヒドによる処理またはグルタルアルデヒド処理＋「滅菌処理（参照として、ホルムアルデヒド／エタノール／Ｔｗｅｅｎ）」）を、Ａ型、Ｏ型、Ｂ型、ＡＢ型の患者に移植した。
【０１９９】
移植時およびバイオプロテーゼの製造時には、本発明において証明するように、バイオプロテーゼの寿命にブタのＡＢＨ型が影響し得ることも、患者のＡＢＯ型が影響し得ることも知らなかったため、ブタの表現型は調査していなかった。
【０２００】
ブタにおける表現型Ａの頻度が約３０％であることから、Ａ型の患者は、表現型が自身に一致する動物において製造されたバイオプロテーゼを受けるチャンスが３分の１であった。一部の市販のバイオプロテーゼがそうであったように、２頭のブタから製造されたバイオプロテーゼの場合、このチャンスは１／６となる。
【０２０１】
したがって、我々は１０年の期間にわたって、劣化が理由で外植された全てのバイオプロテーゼを調査した。これは約９２０の患者数となる。これらの患者において、バイオプロテーゼの寿命に影響することが報告されている様々な要因（移植時の年齢、性別、バイオプロテーゼの直径、バイオプロテーゼの種類、移植部位（大動脈弁／僧帽弁／三尖弁）、移植したバイオプロテーゼの数）ならびに患者のＡＢＯ型を調査した。男性は５２％、移植部位は大動脈弁位が６２％、僧帽弁位が３６％、三尖弁位が２％であった。移植したバイオプロテーゼの数は、ｎ＝１が８２％、ｎ＝２が１７％、ｎ＝３が１％であった。バイオプロテーゼの寿命は、＜６年（１０．４％）、［６−９］（２７．３％）、［９−１２］（３５．５％）、［１２−１４］（１３．９％）、＞１４（１２．８％）であった。劣化バイオプロテーゼを有する患者におけるＡＢＯ型の分布は、Ａ型が３６．３％、Ｏ型が４２．４％、Ｂ型が１５．２％、ＡＢ型が６．１％であった。これらの患者が由来するコーカサス集団において、ＡＢＯ型の分布はそれぞれ、Ａ＞４０％、Ｏ＞４０％、Ｂ型＜１０％、ＡＢ型≒３％である。我々が再手術した患者の集団においては、Ａ型の患者の比率が低く、Ｏ型の患者の％は標準的であるのに対し、Ｂ型およびＡＢ型は多くなっており、Ａ型の患者と比較して、Ｏ型、Ｂ型またはＡＢ型の患者において再手術の発生が多くなる傾向がある。
【０２０２】
我々は次に、現在までバイオプロテーゼの寿命に影響を与えるものとして従来報告されていたリスクファクターの全体に、患者のＡＢＯ型をさらに組み入れて、多変量解析を行った。ＳＥＭソフトウェアを利用した。
【０２０３】
我々は、バイオプロテーゼの寿命を説明するための２つの独立変数を見出した（表１参照）。患者の血液型、移植部位および移植したバイオプロテーゼの数である。極めて興味深いことに、本モデルにおける最も重要な要因は患者のＡＢＯ型である。
【０２０４】
表１：ブタバイオプロテーゼの寿命に関する要因の多変量解析：他の血液型と比較したＡ型の影響
【表１】
0005916615.tif 000002
他の全ての要因から独立して、Ａ型の患者は他の血液型の患者よりバイオプロテーゼの寿命が２．３３年長い。この差は、多変量解析において最も重みが高いものとして最初に出力されたものであるから、それだけでも重要である。それは、無視できないデータであり、バイオプロテーゼの移植のための選択においてすべての医師から認識されている、バイオプロテーゼの移植部位（僧帽弁／大動脈弁移植部位）と同様の重要性がある。
【０２０５】
我々が報告する差は、期待される利益を大幅に過小評価している。実際、由来するブタの品種によってＡ型の出現率は２０〜４０％の範囲である。さらに、Ａ型の中に、異なる表現型Ａ＋-Ｈ＋-Ｉ−、Ａ＋-Ｈ＋-Ｉ−だけでなく、Ａ＋-Ｈ−-Ｉ＋も約３０％存在する。したがって、観察された差は、１４％〜３０％に過ぎないブタの組織を受けたＡ型の患者によるものと考えることができる。実際の差は、年数の延長という観点から我々が報告した数字に比べ、おそらく３倍大きい。この確率は、異なる複数のブタから調製したバイオプロテーゼを受けようとするＡ型の患者についてはさらに２倍小さい。
【０２０６】
Ｏ型の患者（表２）は、他の血液型に比べ、そのバイオプロテーゼの寿命が特別長いということはない。Ｂ型（表３）およびＡＢ型（表４）についても同様である。興味深いことに、Ｂ型は、異種反応性の主要抗原である「アルファＧａｌ」とある種の構造的類似性を有しているにもかかわらず、Ｂ型の患者のバイオプロテーゼ寿命は特別に際立ったものではない。
【０２０７】
表２：ブタバイオプロテーゼの寿命に関する要因の多変量解析：他の血液型と比較したＯ型の影響
【表２】
0005916615.tif 000003
表３：ブタバイオプロテーゼの寿命に関する要因の多変量解析：他の血液型と比較したＢ型の影響
【表３】
0005916615.tif 000004
表４：ブタバイオプロテーゼの寿命に関する要因の多変量解析：他の血液型と比較したＡＢ型の影響
【表４】
0005916615.tif 000005
この発明において、我々はバイオプロテーゼの寿命に対するＡＢＯ型の影響を示す。我々は、患者のＡＢＯ型を異種組織に対する反応性のマーカーとして考慮することにより、いかに所与の患者について顕著に寿命が改善されたバイオプロテーゼなどの医学的／外科的デバイスの取得を可能にするかを示す。寿命の延長は、現在まで開発され、市販された様々な種類のバイオプロテーゼによって得られたあらゆる結果を大幅に上回るものである。
【０２０８】
４．２  この発明において、我々は、いかに患者のＡＢＯを知ることが、例外的とみなされた寿命または説明のつかない早期不全を有することになるバイオプロテーゼを決定するためのキーファクターであるかを示す。
この発明において、我々は、いかに患者のＡＢＯ型を考慮することが、所与の患者において、当該患者が適合するＡＢＨ表現型のデバイスを受けるならば、持続期間が長いデバイスの取得、および、バイオプロテーゼの７年未満での早期変質による早期不全の抑制を可能にするかを示す。これにより、長期にわたり良好であるとともに、早期不全が少ないという結果の観点でより安全なデバイスを実現することが可能となる。
【０２０９】
我々は別個に、１６年を超える例外的な寿命を有するバイオプロテーゼの群を、バイオプロテーゼの寿命を説明するために知られている全ての要因と、患者のＡＢＯ型とを含めて分析した。
【０２１０】
再度、表５が示すとおり、患者のＡＢＯ型は、多変量解析において、１６年を超える例外的なバイオプロテーゼの寿命の主要な予測因子である。同様に極めて重要な点は、ここでも、Ａ型は、移植部位よりも上位の、バイオプロテーゼの長期の寿命の最も重要な予測因子として出てきている。再度、移植したバイオプロテーゼの種類は、この解析において、バイオプロテーゼのより長い寿命の有意な予測変数としては出てきていない。
【０２１１】
表５
【表５】
0005916615.tif 000006
ＡＢＯ型を考慮することにより、バイオプロテーゼの７年未満での早期変化の発生を抑制することも可能となる。同様に、Ａ型の患者は、他の血液型の患者よりも、バイオプロテーゼの早期変性（７年未満）のリスクが低い。
【０２１２】
４．３  この発明において、我々は、いかにバイオプロテーゼが有する糖残基に対する患者の反応性により、バイオプロテーゼが石灰化する傾向を説明できるかを示す。
外植時に、バイオプロテーゼが石灰化した状態にあるか否かを総括した。バイオプロテーゼには他の種類の変性、特に破れまたはパンヌスの形成が存在することを知っておくべきである。
【０２１３】
石灰化の傾向を説明するために、様々な要因、特に移植時の患者の年齢（若年対象において石灰化がとりわけ早い）、バイオプロテーゼの移植期間が報告されている。我々はここでも、ＡＢＯ型が重要であり、Ａ型の患者について石灰化の傾向が小さいことを示す（係数＜１、表６参照）。
【０２１４】
表６
【表６】
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別の血液型Ｏを、別の血液型ＢおよびＡＢと比較した多変量解析の結果を表７に示す。Ｏ型の石灰化への効果は中立であるが、Ｂ型およびＡＢ型の患者は、そのバイオプロテーゼが石灰化する傾向がより強い（参照として、係数＞１、それぞれ１．３および１．１２（１より大きい））。
【０２１５】
表７
【表７】
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【０２１６】
例５：バイオプロテーゼの組織のＡＢＨ表現型は患者のＡＢＯ／ＡＢＨ表現型に適合させるべきである：
動物におけるバイオプロテーゼの組織の石灰化が動物のＡＢＨ表現型と移植したバイオプロテーゼのＡＢＨ表現型に依存することを示した、動物における移植例（例３）に加え、我々はこのことがヒトにおいても確認されるかを調査した。我々は、例外的な結果が、実際のところバイオプロテーゼのＡＢＨ表現型と患者のＡＢＯ表現型との間の偶然の適合に関連するものでないか否かを確認した。
【０２１７】
我々は、例外的な寿命（１６年超）のブタバイオプロテーゼについて、バイオプロテーゼが由来するブタのＡＢＨ表現型を調査した。したがって、我々は、InvitrogenのＤＮＡ抽出用キットを用いて、外植されたバイオプロテーゼのＤＮＡを抽出した。我々は次に、Ａ型転移酵素活性の発現を、ヒトＡ１遺伝子の増幅について記載した３組の「プライマー」を用いてＤＮＡを増幅して調査した。ブタとヒトのＡ型転移酵素をコードする遺伝子は同じであるが、制限酵素断片は異なっており、したがって、ＰＣＲ産物をＥｃｏＲＩとＢａｍＨＩまたはＥｃｏＲＩのみで消化し（５６）、アガロースゲルで泳動することにより、Ａ型転移酵素活性の由来を確認することが可能である。こうして、Ａ型の患者について、ブタ由来のＡ型転移酵素活性を検出することが可能である。Ｐ５３遺伝子のような、ブタとヒトで発現しているがサイズが異なる他のマーカーをコントロールとして利用した。
【０２１８】
例外的な寿命の外植された様々なバイオプロテーゼの分析は、例外的な寿命のバイオプロテーゼを有するＡ型の患者がすべてＡ型のブタに由来するバイオプロテーゼを受けていたことを示した。例外的な寿命のバイオプロテーゼを有した何人かのＢ型およびＯ型の患者は、誰もＡ型のバイオプロテーゼを受けていなかった。
【０２１９】
したがって、この分析は、動物組織のＡＢＨ表現型と患者のＡＢＯ表現型とを適合させることが重要であることを示している。
したがって、この発明は、患者のＡＢＯ表現型に適合したバイオプロテーゼを提案するものである。
【配列表】
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