(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式：
【化２】
0005898701.tif 000164
の化合物および医薬として許容可能な担体または希釈剤を含む、神経変性のタンパク質凝集性疾患または軽度認知障害の処置または予防における使用のための医薬組成物。
【請求項２】
前記化合物および乾式圧縮に好適な少なくとも１つの希釈剤を含む、固体剤形である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記固体剤形が、米国薬局方（ＵＳＰ）総則＜７１１＞に定義された標準的な薬局方の方法によって評価して、３０分以内に少なくとも８０％まで溶出する、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記少なくとも１つの希釈剤が、微結晶性セルロース、マンニトール、カルシウム塩、および糖から選ばれる、請求項２または請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記糖が、ラクトース、シュークロース、デキストロースおよびマルトデキストリンから選ばれる、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記組成物が、架橋ポリビニルピロリドン、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、またはアルファ化デンプンから選ばれる少なくとも１つの崩壊剤をさらに含む、請求項２〜５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記固体剤形が、フィルムコーティングされている、請求項２〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
１．５超のｐＫ１を有する酸をさらに含み、場合により、前記酸が、マレイン酸、リン酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、アスパラギン酸およびシアル酸から選ばれる、請求項２〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
マンニトール、セルロース系材料、デンプンまたはそれらの混合物から選ばれる担体をさらに含む、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記組成物が粒子を含み、該粒子の１０％超が１０ミクロンより大きなサイズを有することを特徴とする、請求項２〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
水を嫌う粒子形状を有する担体を含む、請求項２〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記タンパク質凝集性疾患がパーキンソン病である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記タンパク質凝集性疾患がポリグルタミン病である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記タンパク質凝集性疾患が、ハンチントン病、球脊髄性筋萎縮症（ケネディ病）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体委縮症または脊髄小脳失調症である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記タンパク質凝集性疾患が、ＴＤＰ−４３プロテイノパチーである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記タンパク質凝集性疾患がタウオパチーである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記タンパク質凝集性疾患が、アルツハイマー病、ピック病、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、１７番染色体に連鎖するパーキンソニズムを伴うＦＴＤ、前頭側頭葉変性（ＦＴＬＤ）症候群、脱抑制・認知症・パーキンソニズム・筋萎縮症複合、淡蒼球橋黒質変性症、グアムＡＬＳ症候群、淡蒼球黒質ルイ体変性症、大脳皮質基底核変性症、嗜銀顆粒性認知症、ボクサー認知症もしくは慢性外傷性脳障害、ダウン症候群、レビー小体認知症、亜急性硬化性全脳炎、Ｃ型ニーマン・ピック病、Ｂ型サンフィリポ症候群、または筋緊張性ジストロフィーＤＭ、ＤＭ１もしくはＤＭ２または筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
アルツハイマー病の処置または予防方法における使用のための、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
ＰＳＰ、ＡＬＳまたはＦＴＬＤの処置または予防方法における使用のための、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
軽度認知障害の処置または予防方法における使用のための、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
タンパク質凝集性疾患の処置または予防における使用のための医薬品の製造における、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用であって、前記タンパク質凝集性疾患がパーキンソン病である、前記使用。
【請求項２２】
タンパク質凝集性疾患の処置または予防における使用のための医薬品の製造における、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用であって、前記タンパク質凝集性疾患がポリグルタミン病である、前記使用。
【請求項２３】
タンパク質凝集性疾患の処置または予防における使用のための医薬品の製造における、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用であって、前記タンパク質凝集性疾患が、ハンチントン病、球脊髄性筋萎縮症（ケネディ病）、歯状核赤核淡蒼球ルイ体委縮症または脊髄小脳失調症である、前記使用。
【請求項２４】
タンパク質凝集性疾患の処置または予防における使用のための医薬品の製造における、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用であって、前記タンパク質凝集性疾患がＴＤＰ−４３プロテイノパチーである、前記使用。
【請求項２５】
タンパク質凝集性疾患の処置または予防における使用のための医薬品の製造における、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用であって、前記タンパク質凝集性疾患がタウオパチーである、前記使用。
【請求項２６】
アルツハイマー病、ピック病、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、１７番染色体に連鎖するパーキンソニズムを伴うＦＴＤ、前頭側頭葉変性（ＦＴＬＤ）症候群、脱抑制・認知症・パーキンソニズム・筋萎縮症複合、淡蒼球橋黒質変性症、グアムＡＬＳ症候群、淡蒼球黒質ルイ体変性症、大脳皮質基底核変性症、嗜銀顆粒性認知症、ボクサー認知症もしくは慢性外傷性脳障害、ダウン症候群、レビー小体認知症、亜急性硬化性全脳炎、Ｃ型ニーマン・ピック病、Ｂ型サンフィリポ症候群、または筋緊張性ジストロフィーＤＭ、ＤＭ１もしくはＤＭ２または筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）であるタンパク質凝集性疾患の処置または予防における使用のための医薬品の製造における、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用。
【請求項２７】
アルツハイマー病の処置または予防における使用のための医薬品の製造における、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
ＰＳＰ、ＡＬＳまたはＦＴＬＤの処置または予防における使用のための医薬品の製造における、請求項２６に記載の使用。
【請求項２９】
軽度認知障害の処置または予防における使用のための医薬品の製造における、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は、一般に、その用途および製剤を含む、フェノチアジン化合物、特に、ある種のフェノチアジンジアミニウム塩の分野に関する。いくつかの実施態様において、本発明は、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミンなどのジアミノフェノチアジン化合物のビス（スルホン酸）塩に関する。本発明の化合物は、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）などのタウオパチーの処置において有用である。
【背景技術】
【０００２】
背景技術
本発明、および本発明が関連する現在の技術水準をより十分に説明および開示するために、多くの特許および刊行物が本明細書中で引用される。これらの参考文献は、それぞれ本明細書において、個々の参考文献が参照することにより組み込まれるよう具体的かつ個別に指示される場合と同じ程度に、その全体が参照することにより本開示に組み込まれる。
【０００３】
後続の特許請求の範囲を含む本明細書全体を通じて、文脈上別途要求されない限り、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、述べられた整数もしくはステップまたは整数もしくはステップの群を包含することを意味するものであり、任意の他の整数もしくはステップまたは整数もしくはステップの群を排除することを意味するものではないと理解されるであろう。
【０００４】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上別途明確に要求されない限り、複数の指示対象を含むことに留意しなければならない。したがって、例えば、「医薬担体（ａ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｃａｒｒｉｅｒ）」への言及は、２種以上のかかる担体の混合物などを含む。
【０００５】
範囲は、本明細書でしばしば「約」一特定値から、および／または「約」別の一特定値までというように表される。かかる範囲が表される場合、別の実施態様は、上記一特定値から、および／または上記別の一特定値までを含む。同様に、先に示した「約」の使用により値が近似値として表される場合、該特定値は別の一実施態様を形成すると理解されるであろう。
【０００６】
本明細書中の任意のサブタイトルは、便宜のためにのみ含まれ、いかなる方法によっても開示を限定するものと解釈されてはならない。
【０００７】
認知症の状態は、罹患した患者の脳におけるβ−アミロイド斑および神経原線維変化（ＮＦＴｓ）などのタンパク様構造の細胞内および／または細胞外沈着物の進行性蓄積により特徴づけられることが多い。これらの病変の出現は、病的な神経原線維変性および脳萎縮、ならびに認知障害と大いに相関している（例えば、Mukaetova-Ladinska, E.B. etal., 2000, Am. J. Pathol., Vol 157, No. 2, pp.623-636を参照のこと）。
【０００８】
アルツハイマー病において、老人斑とＮＦＴsは対らせん状細線維（ＰＨＦｓ）を含み、その主要構成成分は微小管結合タンパク質、タウである（例えば、Wischik et al., 1988, PNAS USA,Vol. 85, pp. 4506-4510を参照のこと）。斑は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の異常なプロセシングに由来する細胞外β−アミロイド原線維も含む（例えば、Kang et al., 1987, Nature, Vol.325, p. 733を参照のこと）。（'Neurobiology of Alzheimer'sDisease', 2nd Edition, 2000, Eds. Dawbarn, D and Allen, S.J., TheMolecular and Cellular Neurobiology Series, Bios Scientific Publishers, Oxford中の）Ｗｉｓｃｈｉｋらによる論文は、神経変性認知症の病因におけるタウタンパク質の推定される役割について詳細に検討している。タウの正常な形態の喪失、病的ＰＨＦｓの蓄積、および前頭葉中央におけるシナプスの喪失はすべて、関連する認識障害と相関している。さらに、シナプスの喪失および錐体細胞の喪失はどちらも、タウ反応性神経原線維病変の形態学的尺度と相関し、これは、アルツハイマー病では、分子レベルにおけるタウタンパク質プールの可溶性形態から重合化形態（すなわち、ＰＨＦｓ）へのほとんど全体的な再分配に匹敵する。
【０００９】
タウは、オルタナティブスプライシングアイソフォームとして存在し、微小管結合ドメインに相当する反復配列を３または４コピー含む（例えば、Goedert, M., et al., 1989, EMBOJ., Vol. 8, pp. 393-399; Goedert M., et al., 1989, Neuron, Vol. 3, pp. 519-526を参照のこと）。ＰＨＦｓ中のタウは、コアドメインまでタンパク分解性プロセシングを受け（例えば、Wischik, C.M., et al., 1988,PNAS USA, Vol.85, pp. 4884-4888; Wischik et al., 1988, PNAS USA, Vol. 85, pp.4506-4510; Novak, M., et al., 1993, EMBO J., Vol. 12, pp. 365-370を参照のこと）、これは、反復ドメインの相シフトバージョンからなり；わずかに３つの反復が安定なタウ−タウ相互作用に関与する（例えば、Jakes, R., et al., 1991, EMBOJ., Vol. 10, pp. 2725-2729を参照のこと）。ＰＨＦ様タウ凝集体は、いったん形成されると、更なる捕捉のためのシード（seed）として作用し、完全長タウタンパク質のタンパク分解性プロセシングのためのテンプレートを提供する（例えば、Wischik et al., 1996, PNAS USA,Vol. 93, pp. 11213-11218を参照のこと）。
【００１０】
ＰＨＦｓ中に取り込まれた反復ドメインにおいて観察される相シフトは、細線維中への取り込みの間に反復ドメインが誘導されたコンフォメーション変化を受けることを示唆する。ＡＤの発症中、このコンフォメーション変化が、損傷されたまたは突然変異した膜タンパク質などの病理学的基質へのタウの結合によって開始されうる、と予想される（例えば、Wischik, C.M. et al. 1997, in"Microtubule-assosiated proteins: modifications in disease", Eds.Avila, J., Brandt, R. and Kosik, K.S. (Harwood Academic Publishers,Amsterdam)pp. 185-241を参照のこと）。
【００１１】
ＰＨＦｓはそれらの形成および蓄積の過程において、最初に集合して、おそらく、ＰＨＦの集合の前又はその過程で切断される初期のタウオリゴマーからアモルファスな凝集体を細胞質内に形成する（例えば、Mena, R., et al., 1995, ActaNeuropathol., Vol. 89, pp. 50-56; Mena, R., et al., 1996, Acta Neuropathol.,Vol. 91, pp. 633-641を参照のこと）。その後、これらの細線維は続いて古典的な細胞内ＮＦＴｓを形成する。この状態において、ＰＨＦｓは、切断型タウのコアおよび完全長タウを含む毛羽立った外部被覆から成る（例えば、Wischik et al., 1996, PNAS USA,Vol. 93, pp. 11213-11218を参照のこと）。この集合プロセスは、指数関数的であり、正常な機能的タウの細胞内プールを消費し、新しいタウの合成を誘導して、不足を補う（例えば、Lai, R.Y.K. et al., 1995,Neurobiology of Ageing, Vol. 16, No. 3, pp. 433-445を参照のこと）。最終的に、ニューロンの機能不全は細胞死に向かって進行し、細胞外ＮＦＴを後に残す。細胞死は、細胞外ＮＦＴｓの数との相関性が高い（例えば、Wischik et al., 'Neurobiology ofAlzheimer's Disease', 2nd Edition, 2000, Eds. Dawbarn, D. and Allen,S.J., The Molecular and Cellular Neurobiology Series, Bios ScientificPublishers, Oxfordを参照のこと）。もつれ（tangles）が細胞外空間に押し出されると、ニューロンの毛羽立った外部被覆が急激に喪失し、それに対応してＮ−末端タウ免疫反応性が喪失するが、ＰＨＦコアに関連するタウ免疫反応性は保存される（例えば、Bondareff, W. et al., 1994, J. Neuropath.Exper. Neurol., Vol. 53, No.2, pp. 158-164を参照のこと）。
【００１２】
ジアミノフェノチアジン化合物
（メチレンブルー（ＭＢ）；塩化メチルチオニン；塩化テトラメチルチオニン；３，７−ビス（ジメチルアミノ）フェノチアジン−５−イウムクロライド；Ｃ．ｌ．Ｂａｓｉｃ  Ｂｌｕｅ  ９；塩化テトラメチルチオニン；３，７−ビス（ジメチルアミノ）フェナザチオニウムクロライド；Ｓｗｉｓｓ  ｂｌｕｅ；Ｃ．ｌ．５２０１５；Ｃ．ｌ．Ｓｏｌｖｅｎｔ  Ｂｌｕｅ  ８；アニリンバイオレット；およびＵｒｏｌｅｎｅ  Ｂｌｕｅ（登録商標）としても知られる）塩化メチルチオニニウム（ＭＴＣ）は、低分子量（３１９．８６）、水溶性の、以下の式の三環式有機化合物である：
【００１３】
【化１】
0005898701.tif 000002
【００１４】
塩化メチルチオニニウム（ＭＴＣ）は、周知のフェノチアジン染料および酸化還元指示薬であり、生物物理系の光学プローブとして、ナノ細孔物質における挿入剤として、酸化還元メディエーターとして、およびフォトエレクトロクロミック・イメージングにおいても使用されてきた。
【００１５】
塩化メチルチオニニウム（ＭＴＣ）および他のジアミノフェノチアジンは、タンパク質が病的に凝集する疾患におけるタンパク質凝集の阻害剤として記載されてきた。
【００１６】
特に、ＭＴＣを含むジアミノフェノチアジンは、タウタンパク質の凝集を阻害し、ＰＨＦｓの構造を破壊し、ＰＨＦコアのタンパク質分解安定性を逆転させることが示されている（例えば、ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ９６／３０７６６号、Ｈｏｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅを参照のこと）。かかる化合物は、アルツハイマー病を含む様々な疾患の処置または予防における使用に関して開示された。
【００１７】
ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ２００７／１１０６３０号（Ｗｉｓ  Ｔａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｌｔｄ）も、ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩＬＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＬＨＩ、ＭＴＮ，およびＥＴＮを含むＭＴＣに関連する、ある特定のジアミノフェノチアジン化合物を開示し、これらは、例えば、アルツハイマー病の処置における薬剤として有用である。
【００１８】
さらに、ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ２００５／０３０６７６号（Ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｃｏｕｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ａｂｅｒｄｅｅｎ）は、放射性標識フェノチアジン、およびタウオパチーなどの診断および治療におけるそれらの使用を検討する。
【００１９】
塩化メチルチオニニウム（ＭＴＣ）は、他の医療用途に関しても開示されている。例えば、それは現在、メトヘモグロビン血症（血液が酸素を体内のそれを必要とする場所に運ぶことができない場合に生じる状態）を処置するために使用されている。ＭＴＣはまた、（例えば、手術前または手術中に身体のある部分を着色するための）医療用染料として；（例えば、尿中に存在するある種の化合物を検出するための指示薬染料としての）診断薬として；穏和な尿路消毒薬として；粘膜表面の刺激薬として；腎臓結石の治療薬および予防薬として；ならびに黒色腫の診断および処置においても使用されている。
【００２０】
ＭＴＣは、マラリアを処置するために単独で使用（例えば、Guttmann, P. and Ehrlich, P.,1891, "Uber die wirkung des methylenblau bei malaria," Berl. Klin.Woschenr., Vol. 28, pp. 953-956を参照のこと）またはクロロキンと併用（例えば、Schirmer, H., et al., 2003,"Methylene blue as an antimalarial agent," Redox Report, Vol. 8, pp.272-275; Rengelshausen, J., et al., 2004, "Pharmacokinetic interaction ofchloroquine and methylene blue combination against malaria," EuropeanJournal of Clinical Pharmacology, Vol. 60, pp. 709-715を参照のこと）されている。
【００２１】
ＭＴＣ（名称Ｖｉｒｏｓｔａｔ（登録商標）、ニューヨークのＢｉｏｅｎｖｉｓｉｏｎ  Ｉｎｃ．から）は、強力なインビトロの殺ウイルス活性も示している。具体的には、Ｖｉｒｏｓｔａｔ（登録商標）は、臨床検査においてＨＩＶおよび西ナイルウイルスなどのウイルスに対して有効である。また、Ｖｉｒｏｓｔａｔ（登録商標）は現在、肝臓のウイルス感染症である慢性Ｃ型肝炎の処置に関する臨床試験中である。このウイルス、ＨＣＶは、急性肝炎、ならびに肝硬変および肝癌を含む慢性肝疾患の主要原因である。
【００２２】
ＭＴＣは、光と併用した場合に、核酸（ＤＮＡまたはＲＮＡ）の複製を妨げることもできる。血漿、血小板および赤血球は、核ＤＮＡまたはＲＮＡを含まない。ＭＴＣを該血液成分に導入すると、それは、細菌細胞壁またはウイルス膜を横断した後、核酸構造の内部に移動する。光によって活性化されると、該化合物はウイルス性または細菌性の病原体の核酸に結合し、ＤＮＡまたはＲＮＡの複製を妨げる。ＭＴＣは病原体を不活化させることができるため、試験により未検出のままであろう病原体の伝染の危険性を低減させる可能性を有する。
【００２３】
米国においては、通常Ｕｒｏｌｅｎｅ  Ｂｌｕｅ（登録商標）の名称のもとにＭＴＣの経口および非経口製剤が市販されてきた。
【００２４】
還元（「ロイコ」）形
ＭＴＣ、フェノチアジン−５−イウム塩、は、「還元形」であると考えられる、対応する１０Ｈ−フェノチアジン化合物、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミンに対して「酸化形」であると考えられる。
【００２５】
【化２】
0005898701.tif 000003
【００２６】
上記「還元形（または「ロイコ」形）」は、不安定であり、容易かつ急速に酸化されて、対応する「酸化」形を生じうることが知られている。
【００２７】
May et al.（Am J Physiol Cell Physiol, 2004, Vol. 286, pp. C1390-C1398）は、ヒト赤血球がＭＴＣを順次還元し、取り込むこと；ＭＴＣ自体は細胞によって取り込まれないこと；細胞膜を横切るのは、ＭＴＣの還元形であること；取り込み速度は酵素依存性であること；ならびにＭＴＣおよび還元されたＭＴＣの両方が細胞中で濃縮されること（還元されたＭＴＣは、細胞内部でいったん再平衡化してＭＴＣを形成する）を示した。
【００２８】
ＭＴＣおよび類似の薬剤は、胃腸で吸収されて血流に入る。未吸収の薬剤は、消化管を下って遠位腸まで浸透する。一つの重要な望ましくない副作用は、遠位腸中の未吸収薬剤の作用、例えば、どちらも下痢をもたらす、遠位腸の鋭敏化および／または遠位腸中のフローラに対する未吸収薬剤の抗微生物作用、である。したがって、遠位腸まで下って浸透する薬剤の量を最小化することが望ましい。胃腸中での薬剤の取り込みを増加させることによって（すなわち、薬剤のバイオアベイラビリティーを増大させることによって）、投与量を低減することができ、下痢などの望ましくない副作用が改善されうる。
【００２９】
細胞によって取り込まれるのがＭＴＣの還元形であるため、還元形を患者に投与することが望ましいかも知れない。これは、酵素による還元の律速段階への依存も低下させるかも知れない。
【００３０】
ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ０２／０５５７２０号（Ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｃｏｕｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ａｂｅｒｄｅｅｎ）は、タンパク質凝集性疾患、主にタウオパチー、の処置のための、ある種のジアミノフェノチアジンの還元形の使用を開示する。
【００３１】
ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ２００７／１１０６２７号（Ｗｉｓ  Ｔａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｌｔｄ）は、アルツハイマー病を含む疾患処置のための薬剤またはプロドラッグとして有効な、ある種の３，７−ジアミノ−１０Ｈ−フェノチアジニウム塩を開示する。ＭＴＣに関しては、これらの化合物は「還元された」または「ロイコ」形でもある。これらは、以下の塩も含んでいた：
【００３２】
【表１】
0005898701.tif 000004
【００３３】
ＭＴＣを使用するのに比べてある種の利益を提供するにもかかわらず、ある条件下でのＬＭＴ．２ＨＣｌの合成は、結晶内に捕捉されたＣＨ３Ｃｌを生じるかも知れない。ＣＨ３Ｃｌは毒性であり、そのレベルは安全レベル未満に保たれる必要があるため、後で除去される必要がある。
【００３４】
さらに、ＬＭＴ．２ＨＢｒは、臭素イオンを含む。臭素は高レベル又は慢性的投薬のいずれかにおいて毒性であり、低レベルにおいては錯乱などの副作用を患者にもたらすため、原則としてあまり望ましくない。
【００３５】
したがって、既知のものに比べて１つまたは複数の望ましい特性を有する、メチルチオニニウム化合物のさらなる塩を提供することが技術に寄与するであろうと考えることができる。
【００３６】
さらに、治療薬としての安定性、吸収、および／またはそれらの有効性を改善する、メチルチオニニウム化合物の新規製剤を提供することは、技術に寄与するであろう。
【発明の概要】
【００３７】
発明の概要
ここに本発明者らは、先に開示されたジアミノフェノチアジン化合物および塩に比較して改善された特性を有する、安定なフェノチアジンジアミニウム化合物の新しいクラスを同定した。
【００３８】
該化合物の特性が以下に記載され、それによって、好ましい実施態様において、本発明が１つまたは複数の改善された物理学的な、薬物動態学的な、生化学的なまたは他の有益な特性を提供可能であることがわかる。
【００３９】
他の態様において、本発明者らは、３，７−ジアミノ−１０Ｈ−フェノチアジニウム塩の新規製剤も提供する。
【００４０】
一態様において、本発明は、ある種の化合物、具体的には、本明細書に記載のある種のフェノチアジンジアミニウム化合物を提供する。
【００４１】
該化合物は、以下の一般式（Ｉ）：
【００４２】
【化３】
0005898701.tif 000005
【００４３】
｛式中、
Ｒ１およびＲ９は、それぞれ独立して、−Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルおよびハロゲン化Ｃ１−４アルキルから選ばれ；
Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢは、それぞれ独立して、−Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルおよびハロゲン化Ｃ１−４アルキルから選ばれ；
Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、それぞれ独立して、−Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルおよびハロゲン化Ｃ１−４アルキルから選ばれ；
さらに、ここで、
ＲＡおよびＲＢは、それぞれ独立して、Ｃ１−４アルキル、ハロゲン化Ｃ１−４アルキル、およびＣ６−１０アリールから選ばれるか；または
ＲＡおよびＲＢは、連結してＲＡＢ基を形成し、ここで、ＲＡＢは、Ｃ１−６アルキレンおよびＣ６−１０アリーレンから選ばれる｝
の化合物、および医薬として許容可能なその塩から選ばれる。
【００４４】
本発明の別の態様は、上記化合物を合成するための方法に関する。
【００４５】
本発明の別の態様は、本明細書に記載の化合物および医薬として許容可能な担体または希釈剤を含む医薬組成物に関する。
【００４６】
本発明の別の態様は、本明細書に記載の化合物および医薬として許容可能な担体または希釈剤を混合するステップを含む、医薬組成物の調製方法に関する。
【００４７】
本発明の別の態様は、本明細書に記載の化合物を含み、さらに、乾式圧縮に好適な少なくとも１つの希釈剤、および場合により、１つまたは複数の他の賦形剤を含む、固体剤形の医薬組成物に関する。
【００４８】
本発明の別の態様は、乾式圧縮法による医薬組成物の製造方法であって、該組成物が、本明細書に記載の化合物、乾式圧縮に好適な少なくとも１つの希釈剤、および場合により、１つまたは複数の他の賦形剤を含む固体剤形である、上記方法に関する。
【００４９】
本発明の別の態様は、本明細書に記載の化合物、乾式圧縮に好適な少なくとも１つの希釈剤、および場合により、１つまたは複数の他の賦形剤を含む、自由流動性の凝集性粉末であって、該粉末が固体剤形に圧縮可能である、上記粉末に関する。
【００５０】
本発明の別の態様は、（例えば、タウタンパク質、シヌクレインなどの）タンパク質の凝集、例えば、神経変性疾患および／または臨床的認知症に関連するタンパク質の凝集を逆転させ、および／または阻害する方法であって、上記タンパク質と本明細書に記載の化合物または組成物の有効量を接触させるステップを含む、上記方法に関する。かかる方法は、インビトロ、またはインビボにおいて実施されることができる。
【００５１】
本発明の別の態様は、対象における疾患状態の処置または予防方法であって、上記対象に、本明細書に記載の化合物の予防的または治療的有効量を、好ましくは医薬組成物、好ましくは本明細書にさらに記載される固体剤形の医薬組成物の形態において、投与することを含む、上記方法に関する。
【００５２】
本発明の別の態様は、治療（therapy）による、ヒトまたは動物の体の（疾患状態などの）処置または予防方法における使用のための、本明細書に記載の化合物または組成物に関する。
【００５３】
本発明の別の態様は、疾患状態の処置または予防における使用のための医薬品の製造における、本明細書に記載の化合物または組成物の使用に関する。
【００５４】
いくつかの実施態様において、上記疾患状態は、タンパク質凝集性疾患である。
いくつかの実施態様において、上記疾患状態は、タウオパチー、例えば、神経変性タウオパチー、例えば、アルツハイマー病または以下に記載される他の疾患である。
いくつかの実施態様において、上記疾患状態は、皮膚癌、例えば、黒色腫である。
いくつかの実施態様において、上記疾患状態は、ウイルス性、細菌性または原虫性疾患状態、例えば、Ｃ型肝炎、ＨＩＶ、西ナイルウイルス（ＷＮＶ）、またはマラリアである。
【００５５】
本発明の別の態様は、（血液または血漿サンプルなどの）サンプル中の病原体を不活性化する方法であって、本明細書に記載の化合物または組成物を上記サンプル中に導入するステップおよび該サンプルを光に曝露するステップを含む、上記方法に関する。
【００５６】
本発明の別の態様は、以下の：（ａ）好ましくは、医薬組成物として、好適な容器中でおよび／または好適な包装とともに提供される、本明細書に記載の化合物；ならびに（ｂ）使用のための指示、例えば、該化合物または組成物をどのように投与するかについての書面による指示、を含む、キットに関する。
【００５７】
当業者に理解されるであろうとおり、本発明の一態様の特徴および好ましい実施態様は、本発明の他の態様にも関する。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】図１は、本発明の代表的化合物（ＬＭＴ．２ＭｓＯＨ）の、重水素化メタノール（ＣＤ３ＯＤ）中、６００ＭＨｚにおける１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図２】図２は、ＣＤ３ＯＤ中、１００．５６ＭＨｚの周波数における、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨの１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３】図３は、ＣＤ３ＯＤ中、１００．５６ＭＨｚの周波数における、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨのＤＥＰＴ−１３５スペクトルを示す。
【図４】図４は、ＣＤ３ＯＤ中、１００．５６ＭＨｚの周波数における、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨのＨＳＱＣスペクトルを示す。
【図５】図５は、ＣＤ３ＯＤ中、１００．５６ＭＨｚの周波数における、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨのＨＳＱＣスペクトルの拡大部分を示す。
【図６】図６は、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨの赤外（ＦＴ−ＩＲ）スペクトルを示す（ＫＢｒ）。
【図７】図７は、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨの電子衝撃（ＥＩ）質量スペクトルを示す。
【図８】図８は、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨのエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）質量スペクトルを示す。
【図９】図９は、脱イオン水中のＬＭＴ．２ＭｓＯＨのＵＶ／Ｖｉｓスペクトルを示す。
【図１０】図１０は、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨに関するＨＰＬＣトレースを示す。
【図１１】図１１は、Ｃｕ  Ｋα照射により測定した、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨに関する粉末Ｘ線ディフラクトグラムを示す。
【図１２】図１２は、結晶性ＬＭＴ．２ＭｓＯＨに関するＦＴ−ラマンスペクトルを示す。最も強いシグナルは、１６１５ｃｍ−１、１５８８ｃｍ−１、１２５８ｃｍ−１、および１０４２ｃｍ−１において見出された。
【図１３】図１３は、結晶性ＬＭＴ．２ＭｓＯＨに関する熱重量測定プロフィールを示す。２４０〜２７０℃における分解開始までの恒量を、ＴＧおよびＴＧ−ＦＴＩＲにより検出した。
【図１４】図１４は、結晶性ＬＭＴ．２ＭｓＯＨに関する示差走査熱量分析を示す。２７１℃におけるシャープな融点（ΔＨ＝８７Ｊ／ｇ）に続いて直ちに分解が起こった。
【図１５ａ】図１５ａは、２５℃において５％／時間のスキャン速度で測定した、結晶性ＬＭＴ．２ＭｓＯＨに関する動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）曲線を示す。水平の破線は、１当量の水の取り込みのステップを示す。サンプルの安定した重量（０．５％未満の重量変化）が、０％から７０％の間の相対湿度（ｒ．ｈ．）範囲において観察された。このｒ．ｈ．より高いと、水の取り込みが急速に増加し、最後にサンプルは潮解した。乾燥後、含水量は、５０％のｒ．ｈ．において約４当量まで再び減少した。比較のために、結晶性二塩酸塩（ＬＭＴ．２ＨＣｌ）のＤＶＳ曲線が破線として示され、二臭化水素酸塩（ＬＭＴ．２ＨＢｒ）のＤＶＳ曲線が点線として示される。
【図１５ｂ】図１５ｂは、２５℃において５％／時間のスキャン速度で測定した、結晶性ＬＭＴ．２ＭｓＯＨに関する動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）曲線を示す。水平の破線は、１当量の水の取り込みのステップを示す。サンプルの安定した重量（０．５％未満の重量変化）が、０％から７０％の間の相対湿度（ｒ．ｈ．）範囲において観察された。このｒ．ｈ．より高いと、水の取り込みが急速に増加し、最後にサンプルは潮解した。乾燥後、含水量は、５０％のｒ．ｈ．において約４当量まで再び減少した。比較のために、結晶性二塩酸塩（ＬＭＴ．２ＨＣｌ）のＤＶＳ曲線が破線として示され、二臭化水素酸塩（ＬＭＴ．２ＨＢｒ）のＤＶＳ曲線が点線として示される。
【図１５ｃ】図１５ｃは、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨに関する動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）曲線を時間の関数として示す。相対湿度も示す（右軸）。水平の破線は、１当量の水の取り込みのステップを示す。
【図１６】図１６は、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨ（左）および再結晶化ＬＭＴ．２ＭｓＯＨ（右）に関する偏光顕微鏡写真を示す。１００μｍ以下のサイズの結晶が、２−ＰｒＯＨ／水からの再結晶化によって得られた。結晶は、不規則な形状である。
【図１７ａ】図１７ａは、ＬＭＴＥｓＯＨのＸ線結晶構造を示す。
【図１７ｂ】図１７ｂは、ＬＭＴ．ＥＤＳＡのＸ線結晶構造を示す。
【図１７ｃ】図１７ｃは、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨのＸ線結晶構造を示す。
【図１８】図１８は、ＬＭＴ．２ＨＢｒ、ＬＭＴ．２ＨＣｌおよびＬＭＴ．２ＭｓＯＨの投与後のブタにおける経時的なＭＴ部分の血漿濃度の比較を示す。
【図１９】図１９は、溶出試験において使用された機器の略図である（製剤例１２を参照のこと）。
【００５９】
発明の詳細な説明
本発明者らは、望ましい物理学的特性もしくは他の特性および／または先に開示されたジアミノフェノチアジン化合物と塩に比べて驚くほど改善された活性を有する、フェノチアジンジアミニウム化合物の新しいクラスを同定した。
【００６０】
他の態様において、彼らはさらに、上記クラス（しかし、それに限定されない）を含むフェノチアジンジアミニウム化合物の新規製剤を提供した。
【００６１】
化合物
一般論として、文脈上別途要求されない限り、本発明の化合物は、３，７−ジアミノ−１０Ｈ−フェノチアジン化合物のビス（スルホネート）塩（またはビス（スルホン酸）塩）と記述されることができる。言い換えれば、該化合物は、対応する３，７−ジアミノ−１０Ｈ−フェノチアジン化合物と有機スルホン酸の塩である。
【００６２】
より具体的には、本発明の化合物は、以下の一般式：
【００６３】
【化４】
0005898701.tif 000006
【００６４】
｛式中、
Ｒ１，Ｒ９、Ｒ３ＮＡ、Ｒ３ＮＢ、Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、上記で定義されたとおりである｝
の化合物のビス（スルホネート）塩である。
【００６５】
いくつかの実施態様において、上記塩は、ビス（アルキルスルホネート）塩またはビス（アリールスルホネート）塩である。
【００６６】
いくつかの実施態様において、上記塩は、ビス（メタンスルホネート）塩、ビス（エタンスルホネート）塩、ビス（ｐ−トルエンスルホネート）塩、ビス（ベンゼンスルホネート）塩、エタンジスルホネート塩、プロパンジスルホネート塩、またはナフタレンジスルホネート塩から選ばれる。
【００６７】
いくつかの実施態様において、上記塩は、（ビス（メシレート）塩とも呼ばれることができる）ビス（メタンスルホネート）塩である。
いくつかの実施態様において、上記塩は、（ビス（エシレート）塩とも呼ばれることができる）ビス（エタンスルホネート）塩である。
いくつかの実施態様において、上記塩は、（ビス（トシレート）塩とも呼ばれることができる）ビス（ｐ−トルエンスルホネート）塩である。
いくつかの実施態様において、上記塩は、ビス（ベンゼンスルホネート）塩である。
いくつかの実施態様において、上記塩は、エタンジスルホネート塩である。
いくつかの実施態様において、上記塩は、プロパンジスルホネート塩である。
いくつかの実施態様において、上記塩は、ナフタレンジスルホネート塩、好ましくは、ナフタレン−１，５−ジスルホネート塩である。
【００６８】
言い換えれば、本発明の化合物は、３，７−ジアミノ−１０Ｈ−フェノチアジン化合物、例えば、上記に示したもの、と２つの有機スルホン酸部分（ＲＡＳＯ３ＨおよびＲＢＳＯ３Ｈ）との反応から得られる生成物であると考えることができる。上記２つの有機スルホン酸部分は、場合により、同じ（すなわち、ＲＡとＲＢが連結されている）分子上に存在してよい。
【００６９】
いくつかの実施態様において、本発明の化合物は、以下の一般式（Ｉ）：
【００７０】
【化５】
0005898701.tif 000007
【００７１】
｛式中、
Ｒ１およびＲ９は、それぞれ独立して、以下の：−Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、およびハロゲン化Ｃ１−４アルキルから選ばれ；
Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢは、それぞれ独立して、以下の：−Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、およびハロゲン化Ｃ１−４アルキルから選ばれ；
Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、それぞれ独立して、以下の：−Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、およびハロゲン化Ｃ１−４アルキルから選ばれ；
さらにここで、
ＲＡおよびＲＢは、それぞれ独立して、以下の：Ｃ１−４アルキル、ハロゲン化Ｃ１−４アルキル、およびＣ６−１０アリールから選ばれるか；または
ＲＡおよびＲＢは、連結してＲＡＢ基を形成し、ここで、ＲＡＢは、以下の：Ｃ１−６アルキレンおよびＣ６−１０アリーレンから選ばれる｝
の化合物ならびに医薬として許容可能なその塩、溶媒和物および水和物から選ばれる。
【００７２】
本発明の化合物は、本明細書中で、３，７−ジアミノ基がプロトン化した形態である、３，７−ジアミノ−１０Ｈ−フェノチアジン化合物の構造を示す一般式によって表される。
【００７３】
生じた二重に陽性荷電した種は、（場合により、同じ分子上に存在しうる、すなわち、ＲＡおよびＲＢが連結されている）２つのスルホネート対イオン部分と結合する：
【００７４】
【化６】
0005898701.tif 000008
【００７５】
しかしながら、当業者に理解されるであろうとおり、同じ塩は、例えば、同様に以下のような他の方法で表されることができる：
【００７６】
【化７】
0005898701.tif 000009
【００７７】
さらなる定義および優先傾向
本明細書中に使用される用語「Ｃ１−４アルキル」は、１〜４個の炭素原子を有する、脂肪族もしくは脂環式、またはその組み合わせであってよい、炭化水素化合物から、水素原子を除去することによって得られる一価の部分に関する。
【００７８】
同様に、用語「Ｃ２−４アルケニル」は、Ｃ２−４アルケン化合物（すなわち、少なくとも１つの二重結合および２から４個までの炭素原子を含む炭化水素化合物）から水素原子を除去することによって得られる一価の部分に関する。
【００７９】
本明細書中で使用される用語「Ｃ１−６アルキレン」は、１から６個までの炭素原子を有する脂肪族直鎖炭化水素化合物の２つの水素原子を、どちらも同じ炭素原子から、または２つの異なる炭素原子のそれぞれから除去することによって得られる、二座の部分に関する。
【００８０】
いくつかの実施態様において、Ｃ１−４アルキル基は、以下の：−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ、−ｉＰｒ、−ｎＰｒおよびｎ−Ｂｕなどの直鎖Ｃ１−４アルキル基；−ｉＰｒ、−ｉＢｕ、−ｓＢｕ、および−ｔＢｕなどの分岐Ｃ３−４アルキル基；ならびに−ｃＰｒおよび−ｃＢｕなどの環状Ｃ３−４アルキル基から選ばれることができる。
【００８１】
いくつかの実施態様において、Ｃ２−４アルケニル基は、−ＣＨ＝ＣＨ２（ビニル）および−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２（アリル）などの直鎖Ｃ１−４アルケニル基から選ばれることができる。
【００８２】
いくつかの実施態様において、ハロゲン化Ｃ１−４アルキル基は、以下の：−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３、および−ＣＦ２ＣＦ３から選ばれることができる。
【００８３】
本明細書中で使用される用語「Ｃ６−１０アリール」は、Ｃ６−１０芳香族化合物の芳香環から水素原子を除去することによって得られる一価の部分に関し、該化合物は、１つの環、または（例えば、融合した）２つもしくはそれを超える環を有し、６から１０個までの環原子を有し、ここで、少なくとも１つの上記環が芳香環である。
【００８４】
本明細書中で使用される用語「Ｃ６−１０アリーレン」は、６から１０個までの炭素原子を有する芳香族化合物から２つの水素原子を除去することによって得られる二座の部分に関する。
【００８５】
いくつかの実施態様において、Ｃ６−１０アリール基は、フェニル、およびナフチルなどのＣ６−１０カルボアリール基から選ばれることができる。
【００８６】
いくつかの実施態様において、Ｃ６−１０アリーレン基は、フェニレンおよびナフチレンから選ばれることができる。
【００８７】
上記Ｃ１−４アルキルおよびＣ１−６アルキレン基は、非置換であってよいか、または場合により、例えば、ハロ（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）、アミノ（例えば、−ＮＨ２、−ＮＨＲ、または−ＮＲ２、ここで、Ｒはそれぞれ独立してＣ１−４アルキルである）、ヒドロキシ（−ＯＨ）、アルコキシ（−ＯＲ、ここで、Ｒは独立してＣ１−４アルキルである）、ニトロ（−ＮＯ２）などから選ばれる１つまたは複数の基で置換されてよい。
【００８８】
上記Ｃ６−１０アリールおよびＣ６−１０アリーレン基は、非置換であってよいか、または場合により、例えば、−ＭｅなどのＣ１−４アルキル、−ＣＦ３などのハロゲン化Ｃ１−４アルキル、ハロ（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩ）、アミノ（例えば、−ＮＨ２、−ＮＨＲ、または−ＮＲ２、ここで、Ｒはそれぞれ独立してＣ１−４アルキルである）、ヒドロキシ（−ＯＨ）、アルコキシ（−ＯＲ、ここで、Ｒは独立してＣ１−４アルキルである）、ニトロ（−ＮＯ２）などから選ばれる１つまたは複数の基で置換されてよい。
【００８９】
ＲＡおよびＲＢ基
ＲＡおよびＲＢは、それぞれ独立して、以下の：Ｃ１−４アルキル、ハロゲン化Ｃ１−４アルキル、およびＣ６−１０アリールから選ばれるか、または
ＲＡおよびＲＢは、連結してＲＡＢ基を形成し、ここで、ＲＡＢは、以下の：Ｃ１−６アルキレンおよびＣ６−１０アリーレンから選ばれる。
【００９０】
いくつかの実施態様において、ＲＡおよびＲＢは、それぞれ独立して、以下の：Ｃ１−４アルキル、ハロゲン化Ｃ１−４アルキル、およびＣ６−１０アリールから選ばれる。
【００９１】
いくつかの実施態様において、ＲＡおよびＲＢは、それぞれ独立して、Ｃ１−４アルキルである。
いくつかの実施態様において、ＲＡおよびＲＢは、それぞれ独立して、Ｍｅ、Ｅｔ、ｎＰｒ、ｉＰｒ、ｎＢｕ、ｉＢｕ、ｔＢｕから選ばれる。
いくつかの実施態様において、ＲＡおよびＲＢは、それぞれ独立して、ＭｅおよびＥｔから選ばれる。
【００９２】
いくつかの実施態様において、ＲＡおよびＲＢは、それぞれ独立して、Ｃ６−１０アリールである。
いくつかの実施態様において、ＲＡおよびＲＢは、それぞれ独立して、ベンゼン、１−ナフタレン、２−ナフタレンおよびｐ−トルエンから選ばれる。
【００９３】
いくつかの実施態様において、ＲＡおよびＲＢは、それぞれ独立して、Ｍｅ、Ｅｔ、ベンゼンおよびｐ−トルエンから選ばれる。
【００９４】
いくつかの実施態様において、ＲＡおよびＲＢは、同一である。
いくつかの実施態様において、ＲＡおよびＲＢは、異なる。
【００９５】
いくつかの実施態様において、ＲＡおよびＲＢは、同一であり、独立してＭｅである。その場合、上記化合物は、ジアミノフェノチアジンビス（メタンスルホネート）塩と呼ばれ、一般式（Ｉａ）で表される：
【００９６】
【化８】
0005898701.tif 000010
【００９７】
いくつかの実施態様において、ＲＡおよびＲＢは、連結してＲＡＢ基を形成する。
【００９８】
これらの実施態様において、本発明の化合物は、代わりに以下の一般式Ｉｂ：
【００９９】
【化９】
0005898701.tif 000011
【０１００】
｛式中、
ＲＡＢは、Ｃ１−６アルキレンおよびＣ６−１０アリーレンから選ばれる｝
によって表されることができる。
【０１０１】
いくつかの実施態様において、ＲＡＢは、Ｃ１−６アルキレン基である。
いくつかの実施態様において、ＲＡＢは、以下の：−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、および−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−から選ばれる、Ｃ１−６アルキレン基である。
いくつかの実施態様において、ＲＡＢは、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）およびプロピレン（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）から選ばれる、Ｃ１−６アルキレン基である。
いくつかの実施態様において、ＲＡＢは、エチレンである。
【０１０２】
いくつかの実施態様において、ＲＡＢは、Ｃ６−１０アリーレン基である。
【０１０３】
いくつかの実施態様において、ＲＡＢは、フェニレンおよびナフチレンから選ばれる、Ｃ６−１０アリーレン基である。
【０１０４】
いくつかの実施態様において、ＲＡＢは、フェニレンである。
いくつかの実施態様において、ＲＡＢは、１，２−フェニレン、１，３−フェニレン、および１，４−フェニレンから選ばれる。
いくつかの実施態様において、ＲＡＢは、場合により、Ｃ１−４アルキル、ハロゲン化Ｃ１−４アルキル、およびハロなどから選ばれる１つまたは複数の置換基で置換されたフェニレンである。
【０１０５】
いくつかの実施態様において、ＲＡＢは、ナフチレンである。
いくつかの実施態様において、ＲＡＢは、１，２−ナフチレン、１，３−ナフチレン、１，４−ナフチレン、１，５−ナフチレン、１，６−ナフチレン、１，７−ナフチレンおよび１，８−ナフチレンから選ばれる。
いくつかの実施態様において、ＲＡＢは、以下の：１，５−ナフチレン、すなわち、
【０１０６】
【化１０】
0005898701.tif 000012
【０１０７】
および１，８−ナフチレン、すなわち、
【０１０８】
【化１１】
0005898701.tif 000013
【０１０９】
から選ばれる。
【０１１０】
いくつかの実施態様において、ＲＡＢは、場合により、Ｃ１−４アルキル、ハロゲン化Ｃ１−４アルキル、およびハロなどから選ばれる１つまたは複数の置換基で置換されたナフチレンである。
【０１１１】
Ｒ１およびＲ９基
いくつかの実施態様において、Ｒ１およびＲ９は、それぞれ独立して、−Ｈ、−Ｍｅ、−Ｅｔ、または−ＣＦ３である。
いくつかの実施態様において、Ｒ１およびＲ９は、それぞれ独立して、−Ｈ、−Ｍｅ、または−Ｅｔである。
【０１１２】
いくつかの実施態様において、Ｒ１およびＲ９は、同一である。
いくつかの実施態様において、Ｒ１およびＲ９は、異なる。
【０１１３】
いくつかの実施態様において、Ｒ１およびＲ９は、それぞれ独立して−Ｈである。
いくつかの実施態様において、Ｒ１およびＲ９は、それぞれ独立して−Ｍｅである。
いくつかの実施態様において、Ｒ１およびＲ９は、それぞれ独立して−Ｅｔである。
【０１１４】
Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢ基
Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢは、それぞれ独立して、以下の：−Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、およびハロゲン化Ｃ１−４アルキルから選ばれる。
【０１１５】
いくつかの実施態様において、Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢは、それぞれ独立して、以下の：Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルおよびハロゲン化Ｃ１−４アルキルから選ばれる。
【０１１６】
いくつかの実施態様において、Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢは、それぞれ独立して、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ、−ｎＢｕ、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、または−ＣＦ３である。
【０１１７】
いくつかの実施態様において、Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢは、それぞれ独立して、−Ｍｅ、−ｎＰｒ、−ｎＢｕ、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、または−ＣＦ３である。
【０１１８】
いくつかの実施態様において、Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢは、それぞれ独立して、−Ｍｅ、または−Ｅｔである。
【０１１９】
いくつかの実施態様において、Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢは、同一である。
いくつかの実施態様において、Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢは、異なる。
【０１２０】
いくつかの実施態様において、Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢは、それぞれ独立して−Ｍｅである。
【０１２１】
Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢ基
Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、それぞれ独立して、以下の：−Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、およびハロゲン化Ｃ１−４アルキルから選ばれる。
【０１２２】
いくつかの実施態様において、Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、それぞれ独立して、以下の：Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、およびハロゲン化Ｃ１−４アルキルから選ばれる。
【０１２３】
いくつかの実施態様において、Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、それぞれ独立して、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ、−ｎＢｕ、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、または−ＣＦ３である。
【０１２４】
いくつかの実施態様において、Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、それぞれ独立して、−Ｍｅ、−ｎＰｒ、−ｎＢｕ、−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、または−ＣＦ３である。
【０１２５】
いくつかの実施態様において、Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、それぞれ独立して、−Ｍｅまたは−Ｅｔである。
【０１２６】
いくつかの実施態様において、Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、同一である。
いくつかの実施態様において、Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、異なる。
【０１２７】
いくつかの実施態様において、Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、それぞれ独立して−Ｍｅである。
【０１２８】
Ｒ３ＮＡ、Ｒ３ＮＢ、Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢ基
いくつかの実施態様において：
Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢは、それぞれ独立して、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、またはハロゲン化Ｃ１−４アルキルであり；
Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、それぞれ独立して、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、またはハロゲン化Ｃ１−４アルキルである。
【０１２９】
いくつかの実施態様において：
Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢは、それぞれ独立して、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ、−ｎＢｕ、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、または−ＣＦ３であり；
Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、それぞれ独立して、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ、−ｎＢｕ、−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、または−ＣＦ３である。
【０１３０】
いくつかの実施態様において、
Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢは、それぞれ独立して、−Ｍｅまたは−Ｅｔであり；
Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、それぞれ独立して、−Ｍｅまたは−Ｅｔである。
【０１３１】
いくつかの実施態様において、Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢならびにＲ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、すべて同一である。
いくつかの実施態様において、Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢならびにＲ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、同一であり、かつ、すべてが−Ｍｅであるかまたはすべてが−Ｅｔである。
【０１３２】
いくつかの実施態様において、Ｒ３ＮＡおよびＲ３ＮＢならびにＲ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、同一であり、かつ、すべてが−Ｍｅである。
【０１３３】
塩および溶媒和物
本明細書に記載の化合物はそれ自体が塩であるが、それらは、混合塩（すなわち、別の塩と組み合わせた本発明の化合物）の形態で提供されることもできる。かかる混合塩は、用語「および医薬として許容可能なその塩」によって包含されることを意図される。特記されない限り、特別な化合物への言及は、その塩も含む。
【０１３４】
本発明の化合物は、溶媒和物または水和物の形態で提供されることもできる。本明細書中で使用される用語「溶媒和物」は、慣用の意味において、（化合物、化合物の塩などの）溶質と溶媒の複合体を意味する。溶媒が水である場合、溶媒和物は、好都合に一水和物、二水和物、三水和物などの水和物と呼ばれる。特記されない限り、化合物への言及は、その溶媒和物または水和物形態も含む。
【０１３５】
もちろん、化合物の塩の溶媒和物または水和物も、本発明に包含される。
【０１３６】
同位体の多様性
いくつかの実施態様において、化合物の１つまたは複数の炭素原子は、１１Ｃ、１３Ｃまたは１４Ｃである。
くつかの実施態様において、化合物の１つまたは複数の炭素原子は、１１Ｃである。
いくつかの実施態様において、化合物の１つまたは複数の炭素原子は、１３Ｃである。
いくつかの実施態様において、化合物の１つまたは複数の炭素原子は、１４Ｃである。
いくつかの実施態様において、化合物の１つまたは複数の窒素原子は、１５Ｎである。
【０１３７】
いくつかの実施態様において、Ｒ３ＮＡ、Ｒ３ＮＢ、Ｒ７ＮＡ、Ｒ７ＮＢ、Ｒ１、Ｒ９、ＲＡおよびＲＢ基のうちの１つまたは複数あるいはすべての１つまたは複数あるいはすべての炭素原子は、１１Ｃ、１３Ｃまたは１４Ｃである。
いくつかの実施態様において、Ｒ３ＮＡ、Ｒ３ＮＢ、Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢのうちの１つまたは複数あるいはすべての１つまたは複数あるいはすべての炭素原子は、１１Ｃ、１３Ｃまたは１４Ｃである。
【０１３８】
組み合わせ
上記の実施態様のすべての適合性のある組み合わせは、各組み合わせが具体的かつ個別に記載されるかのように、本明細書において明示的に開示される。
【０１３９】
特に、本発明の化合物においては、Ｒ３ＮＡ、Ｒ３ＮＢ、Ｒ７ＮＡ、Ｒ７ＮＢ、Ｒ１、Ｒ９、ＲＡおよびＲＢ（およびＲＡＢ）基は、独立した変数として定義され、当業者は、これらの基および置換基の任意の適合性のある組み合わせが本発明の化合物および方法において利用されうることを理解するであろう。
【０１４０】
したがって、これらのおよび他の定義された変数のすべての適合性のある組み合わせは、明確に本発明に包含され、それぞれのおよびすべての組み合わせが個別にかつ明示的に記載されるかのように、本明細書において開示される。
【０１４１】
いくつかの好ましい実施態様
いくつかの実施態様において、本発明の化合物は、以下の化合物、ならびに医薬として許容可能なその塩、溶媒和物および水和物から選ばれることができる：
【０１４２】
【表２】
0005898701.tif 000014
【０１４３】
本発明の１つの特別な化合物は、以下の化合物１：
【０１４４】
【化１２】
0005898701.tif 000015
【０１４５】
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミニウムビス（メタンスルホネート）である。
【０１４６】
この化合物は、以下の：
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミンビス（ハイドロメタンスルホネート）
ロイコメチルチオニニウムビス（ハイドロメタンスルホネート）
ロイコメチルチオニニウムビス（メシレート）
ＬＭＴＭ
ＬＭＴ．２ＭｓＯＨ
と呼ばれることもできる。
【０１４７】
純度
本発明の化合物は、「安定化された還元形」であると好都合に記載することができる。該化合物は酸化（例えば、自動酸化）して対応する酸化形を生じる。したがって、本発明の化合物を含む組成物が、対応する酸化化合物の少なくとも一部を不純物として含むことが、不可避でない場合、ありうる。
【０１４８】
したがって、本発明の別の態様は、実質的に精製された形態、および／または混入物（例えば、対応する酸化化合物、他の混入物）を実質的に含まない形態である、本明細書に記載の化合物に関する。
【０１４９】
いくつかの実施態様において、実質的に精製された形態は、少なくとも純度５０重量％、例えば少なくとも純度６０重量％、例えば少なくとも純度７０重量％、例えば少なくとも純度８０重量％、例えば少なくとも純度９０重量％、例えば少なくとも純度９５重量％、例えば少なくとも純度９７重量％、例えば少なくとも純度９８重量％、例えば少なくとも純度９９重量％である。
【０１５０】
いくつかの実施態様において、混入物は５０重量％以下、例えば４０重量％以下、例えば３０重量％以下、例えば２０重量％以下、例えば１０重量％以下、例えば５重量％以下、例えば３重量％以下、例えば２重量％以下、例えば１重量％以下に相当する。
【０１５１】
プロダクト・バイ・プロセス
いくつかの実施態様において、上記化合物は、本明細書に記載の方法により得られるか、または得ることができるものである。
【０１５２】
化学合成
本発明の化合物の化学合成の方法を本明細書に記載する。本発明の範囲内のさらなる化合物の合成を容易化するために、これらおよび／または他の周知の方法を、知られたやり方で改変し、かつ／または適応させることができる。
【０１５３】
式（Ｉ）：
【０１５４】
【化１３】
0005898701.tif 000016
【０１５５】
の化合物は、以下の式（ＩＩ）：
【０１５６】
【化１４】
0005898701.tif 000017
【０１５７】
｛式中、
Ｒ１、Ｒ９、Ｒ３ＮＡ、Ｒ３ＮＢ、Ｒ７ＮＡ、およびＲ７ＮＢは、先に定義したとおりである｝
の化合物から調製されることができる。
【０１５８】
式（ＩＩ）の化合物は、例えば、以下の式（ＩＩＩ）：
【０１５９】
【化１５】
0005898701.tif 000018
【０１６０】
｛式中、
ＲＰｒｏｔはアミン保護基であり、Ｒ１、Ｒ９、Ｒ３ＮＡ、Ｒ３ＮＢ、Ｒ７ＮＡ、Ｒ７ＮＢ、ＲＡおよびＲＢは、先に定義したとおりである｝
の化合物から調製されることができる。
【０１６１】
非限定的な例として、ＲＰｒｏｔは、アシル基、例えば、アセチル（−Ｃ（＝Ｏ）Ｍｅ）またはベンジル（−Ｃ（＝Ｏ）Ｐｈ）基であることができる。
【０１６２】
式（ＩＩ）の化合物は、例えば、式（ＩＩＩ）の化合物の脱保護により、または他の知られた方法により、調製されることができる。逆に、式（ＩＩ）の化合物は、式（ＩＩＩ）の化合物の保護によって生成されることができる。
【０１６３】
式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物は知られており、既知の方法を用いて、既知のおよび／または市販の出発材料から、例えば、対応するフェノチアジン化合物から調製されることができる。
【０１６４】
例えば、式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の中間体は、ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ２００７／１１０６２７号に開示された３，７−ジアミノ−１０Ｈ−フェノチアジン塩酸塩、臭化水素酸塩、よびヨウ化水素酸塩の合成のための方法において使用された。
【０１６５】
上記文書に開示されたとおり、好適なフェノチアジンは、例えば、亜硝酸ナトリウムと酢酸およびクロロホルムを用いて、対応する３，７−ジニトロ−フェノチアジンに変換可能である。
【０１６６】
次いで、環アミノ基が、例えば、無水酢酸およびピリジンなどを用いて、酢酸塩として保護されることができる。
【０１６７】
次いで、例えば、塩化スズＩＩとエタノールを用いて、ニトロ基がアミノ基に還元されることができる。
【０１６８】
次いで、アミノ基が置換されることができ、例えば、二置換されることができ、例えば、メチル二置換されることができ、例えば、ヨウ化メチル、水酸化ナトリウム、ＤＭＳＯ、およびテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムブロミドを用いて置換されて、Ｎ−アセチル保護された３，７−ジアルキルアミノ−１０Ｈ−フェノチアジンを提供することができる。
【０１６９】
かかる方法の例は、スキーム１ａおよび１ｂに図示される。該方法における任意の１つまたは複数の本明細書に記載の試薬の使用は、もちろん本発明に包含される：
【０１７０】
【化１６】
0005898701.tif 000019
【０１７１】
【化１７】
0005898701.tif 000020
【０１７２】
次いで、このＮ−アセチル中間体のアミノ基は脱保護されることができ、すなわち、Ｎ−アセチル基が、例えば、水性酸を用いて除去されることができる。
【０１７３】
式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物は、ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ２００８／００７０７４号に開示された方法を用いて製造されることもできる。この文書は、ＲＰｒｏｔがアシル基、例えば、アセチル基である、式（ＩＩＩ）の化合物及び式（ＩＩ）の化合物を開示する。
【０１７４】
１つのアプローチにおいて、最初に、例えば、ヒドラジン（ＮＨ２ＮＨ２）、メチルヒドラジン（ＭｅＮＨＮＨ２）、または水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）；および無水酢酸（（Ｈ３ＣＣＯ）２Ｏ）との反応により；例えば、ピリジン（Ｃ６Ｈ５Ｎ）またはヒューニッヒ塩基（ジイソプロピルエチルアミン、Ｃ８Ｈ１９Ｎ）などの好適な塩基の存在下、例えば、エタノールまたはアセトニトリルなどの好適な溶媒中、適切な塩化チオニニウム（例えば、塩化メチルチオニニウム、塩化エチルチオニニウムなど）が還元され、アセチル化されて、対応する１−（３，７−ビス−ジメチルアミノ−フェノチアジン−１０−イル）−エタノンを生じることができる。還元され、アセチル化された（式（ＩＩＩ）の）化合物は、その後、例えば、好適な酸との反応によって、（アセチル基を除去することにより）脱保護されて、式（ＩＩ）の化合物を生じるか、または直接使用されることができる。有利には、この反応は、純度の高い生成物を生成することができる。
【０１７５】
以下のスキームに一例が示される。
【０１７６】
【化１８】
0005898701.tif 000021
【０１７７】
別のアプローチにおいては、例えば、還元剤フェニルヒドラジン、エタノール、無水酢酸およびピリジンとの反応によって、塩化エチルチオニニウムセミ亜鉛（ethyl thioninium semi zinc chloride）などの適切なチオニニウム塩が、同時に還元され、環アミノ基保護されることができる。
【０１７８】
以下のスキームに一例が示される：
【化１９】
0005898701.tif 000022
【０１７９】
したがって、一態様において、本発明は、以下の式（Ｉ）：
【０１８０】
【化２０】
0005898701.tif 000023
【０１８１】
の３，７−ジアミノ−１０Ｈ−フェノチアジン化合物の、以下の式（ＩＩ）：
【０１８２】
【化２１】
0005898701.tif 000024
【０１８３】
｛式中、
ＲＡ、ＲＢ、Ｒ１、Ｒ９、Ｒ３ＮＡ、Ｒ３ＮＢ、Ｒ７ＮＡ、およびＲ７ＮＢは、先に定義したとおりである｝
の化合物からの調製方法を提供する。
【０１８４】
いくつかの実施態様において、上記方法は、以下の：塩形成（ＳＦ）のステップを含む。
【０１８５】
いくつかの実施態様において、塩形成（ＳＦ）は、適切なスルホン酸による式（ＩＩ）の化合物の処理を含む。
いくつかの実施態様において、塩形成は、有機溶媒中での適切なスルホン酸による式（ＩＩ）の化合物の溶液の処理を含む。
【０１８６】
さらなる態様において、本発明は、以下の式（Ｉ）：
【０１８７】
【化２２】
0005898701.tif 000025
【０１８８】
の３，７−ジアミノ−１０Ｈ−フェノチアジン化合物の、以下の式（ＩＩＩ）：
【０１８９】
【化２３】
0005898701.tif 000026
【０１９０】
｛式中、
ＲＡ、ＲＢ、Ｒ１、Ｒ９、Ｒ３ＮＡ、Ｒ３ＮＢ、Ｒ７ＮＡ、およびＲ７ＮＢは、先に定義したとおりであり、さらに、ＲＰｒｏｔは、アミン保護基である｝
の化合物からの調製方法を提供する。
【０１９１】
多種多様なアミン保護基が広く使用され、有機合成において周知である。例えば、Protective Groups in Organic Synthesis（T. Green and P. Wuts; 4thEdition; John Wiley and Sons, 2006）を参照のこと。
【０１９２】
いくつかの実施態様において、アミン保護基は、酸で開裂可能な保護基である。
【０１９３】
いくつかの実施態様において、アミン保護基は、アセチル基などのアシル基である。
【０１９４】
いくつかの実施態様において、上記方法は、以下の：
環アミノ脱保護（ＤＰ）ステップと；
塩形成（ＳＦ）ステップと、
を含む。
【０１９５】
環アミノ脱保護（ＤＰ）は、Ｎ−保護された環アミン基（−ＮＲＰｒｏｔ−）を遊離の環アミン基（−ＮＨ−）に変換するための保護基の除去を含む。式（ＩＩＩ）の化合物の脱保護は、対応する式（ＩＩ）の化合物を生成する。
【０１９６】
アミン保護基の除去のための方法は本分野で知られている。。例えば、Protective Groups in Organic Synthesis（T. Green and P. Wuts; 4thEdition; John Wiley and Sons, 2006）を参照のこと。
【０１９７】
いくつかの実施態様において、環アミノ脱保護（ＤＰ）のステップおよび塩形成（ＳＦ）のステップが同時に（すなわち、１つのステップとして）実施される。例えば、以下のとおりである：
【０１９８】
【化２４】
0005898701.tif 000027
【０１９９】
いくつかの実施態様において、同時の環アミノ脱保護（ＤＰ）および塩形成（ＳＦ）は、式（Ｉ）のビス（スルホネート）塩を生成するための、適切なスルホン酸による式（ＩＩＩ）の化合物の処理を含む。
【０２００】
いくつかの実施態様において、同時の環アミン脱保護および塩形成は、有機溶媒中の式（ＩＩＩ）の化合物の溶液のスルホン酸および水による処理を含むことができる。
【０２０１】
いくつかの実施態様において、上記有機溶媒はトルエンである。
【０２０２】
本発明の方法において、スルホン酸は、アルキルスルホン酸およびアリールスルホン酸から選ばれることができる。それは、式ＲＡＳＯ３ＨまたはＲＢＳＯ３Ｈのスルホン酸であることができ、ここで、ＲＡとＲＢは本明細書中で定義されたとおりである。
【０２０３】
いくつかの実施態様において、スルホン酸は、ジスルホン酸、すなわち、１分子あたり２つのスルホン酸部分を含む化合物であることができる。これらのスルホン酸部分は、アルキレンまたはアリーレン基によって連結されることができる。
【０２０４】
いくつかの実施態様において、スルホン酸は、以下の：メタンスルホン酸（ＭｓＯＨ）、エタンスルホン酸（ＥｓＯＨ）、ベンゼンスルホン酸（ＢＳＡ）、ナフタレンスルホン酸（ＮＳＡ）、ｐ−トルエンスルホン酸（ＴｓＯＨ）、エタンジスルホン酸（ＥＤＳＡ）、プロパンジスルホン酸（ＰＤＳＡ）およびナフタレン−１，５−ジスルホン酸（ＮＤＳＡ）から選ばれることができる。
【０２０５】
いくつかの実施態様において、フェノチアジン出発材料（すなわち、式（ＩＩＩ）の化合物）は、最初に、完全に溶解するまで上記有機溶媒中で加熱され、得られた溶液は試薬（すなわち、スルホン酸および水）の添加前に濾過される。
【０２０６】
いくつかの実施態様において、上記化合物は、約６０〜８０℃、例えば、約７０℃の温度において上記有機溶媒中で加熱される。
【０２０７】
いくつかの実施態様において、上記スルホン酸は、フェノチアジン出発材料に対して少なくとも２モル当量、例えば、約２．２モル当量の量で添加される。ジスルホン酸が使用される場合、フェノチアジン出発材料の１分子あたり同じ数のスルホン酸部分を達成するように、酸のモル量は少なくとも１モル当量、例えば、約１．１モル当量となることが理解されるであろう。
【０２０８】
温度上昇（発熱）を防ぐために、ゆっくりとスルホン酸を添加することが望ましいかも知れない。したがって、いくつかの実施態様においては、スルホン酸は徐々に添加される。いくつかの実施態様においては、スルホン酸は約１５〜２５℃の温度において添加される。
【０２０９】
いくつかの実施態様において、スルホン酸と水の添加後、反応が約８０〜９０℃の温度まで加熱される。いくつかの実施態様においては、例えば、クロマトグラフィーによる分析によって完了したと判定されるまで、反応はこの温度に維持される。
【０２１０】
いくつかの実施態様において、反応後、生成物を沈殿させるために、溶液は対抗溶媒（counter solvent）で処理される。いくつかの実施態様においては、対抗溶媒はエタノールなどのアルコールである。
【０２１１】
少量、例えば、出発材料（式（ＩＩ）の化合物）１グラムあたり約１ｍｇの所望のビス（スルホネート）生成物によって、反応混合物を「シード（seed）」することが望ましいかも知れない。理論に束縛されることを望むことなく、シードの添加は所望の生成物の早期のかつ効率的な沈殿を確実にし、可能性のある副反応および副生成物の形成の機会を低減させると考えられる。シードは、沈殿した生成物の粒径の制御において効果があるとも考えられる。
【０２１２】
したがって、いくつかの実施態様においては、反応後、得られた混合物が少量の所望のビス（スルホネート）塩によってシードされる。
いくつかの実施態様においては、シードは、すり潰された所望のビス（スルホネート）塩を含む。
いくつかの実施態様においては、シードは、約１００μｍ未満のサイズまですり潰された所望のビス（スルホネート）塩を含む。
【０２１３】
いくつかの実施態様においては、沈殿した生成物は、濾過によって単離される。
いくつかの実施態様においては、濾過後、生成物は、エタノールまたはアセトニトリルなどの有機溶媒で洗浄される。
【０２１４】
塩形成（ＳＦ）は、式（ＩＩ）の化合物から式（Ｉ）のビス（スルホネート）塩を生成する：
【０２１５】
【化２５】
0005898701.tif 000028
【０２１６】
上記で説明したとおり、ビス（スルホネート）塩は、対応するアミノ−保護された（例えば、Ｎ−アセチル）式（ＩＩＩ）の化合物から直接調製されることもできる。
【０２１７】
【化２６】
0005898701.tif 000029
【０２１８】
この場合、塩形成は、脱保護と同時に、例えば、メタンスルホン酸などの適切なスルホン酸を脱保護ステップのために使用することによって実施されることができる。以下のスキームに一例が図示される：
【０２１９】
【化２７】
0005898701.tif 000030
【０２２０】
さらなる態様において、本発明は、以下の式（Ｉ）：
【０２２１】
【化２８】
0005898701.tif 000031
【０２２２】
｛式中、
ＲＡ、ＲＢ、Ｒ１、Ｒ９、Ｒ３ＮＡ、Ｒ３ＮＢ、Ｒ７ＮＡ、およびＲ７ＮＢは、先に定義したとおりである｝
の化合物の調製方法を提供し、該方法は、以下の：
本明細書中で定義される、式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の化合物を調製するステップと、
それに続く、塩形成（ＳＦ）ステップおよび／または
環アミン脱保護（ＤＰ）ステップと
を含む。
【０２２３】
塩形成（ＳＦ）および環アミン脱保護（ＤＰ）のステップは、上記したとおりである。
【０２２４】
いくつかの実施態様において、上記式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の化合物を調製することは、ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ２００７／１１０６２７号に記載の方法を含む。
いくつかの実施態様において、上記式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の化合物を調製することは、ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ２００８／００７０７４号に記載の方法を含む。
【０２２５】
いくつかの実施態様において、式（ＩＩ）の化合物を調製することは、上記したように、式（ＩＩＩ）の化合物の環アミン脱保護（ＤＰ）を含む。
【０２２６】
いくつかの実施態様において、式（ＩＩＩ）の化合物を調製することは、以下の：
窒化（ＮＯ）、
環アミノ保護（ＡＰ）、
窒素還元（ＮＲ）、
アミン置換（ＡＳ）
から選ばれる１つまたは複数のステップを含む。
【０２２７】
いくつかの実施態様において、式（ＩＩＩ）の化合物を調製することは、以下の：
還元（ＲＥＤ）ステップと、
環アミノ保護（ＡＰ）ステップと
を含む。
【０２２８】
上記ステップは、任意の論理順序で実施されてよい。いくつかの実施態様において、該ステップは、列挙された順序で実施される（すなわち、リスト中の任意のステップは、リスト中の先行するステップと同時に、またはその後に実施される）。
【０２２９】
いくつかの実施態様において、窒化（ＮＯ）は、以下の：
窒化（ＮＯ）、ここで、１０Ｈ−フェノチアジンが３，７−ジニトロ−１０Ｈ−フェノチアジンに変換される、例えば：
【０２３０】
【化２９】
0005898701.tif 000032
【０２３１】
を含む。
【０２３２】
いくつかの実施態様において、窒化は、亜硝酸塩、例えば、亜硝酸ナトリウム、例えば、亜硝酸ナトリウムと酢酸、およびジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジメトキシエタン、アセトン、ジクロロメタンまたはクロロホルムなどの溶媒を用いて実施される。
【０２３３】
いくつかの実施態様において、環アミノ保護（ＡＰ）は、以下の：
環アミノ保護（ＡＰ）、ここで、３，７−ジニトロ−１０Ｈ−フェノチアジンの環アミノ基（−ＮＨ−）が保護された環アミノ基（−ＮＲＰｒｏｔ）に変換され、例えば：
【０２３４】
【化３０】
0005898701.tif 000033
【０２３５】
を含む。
【０２３６】
いくつかの実施態様において、環アミノ保護は、酢酸塩として、例えば、無水酢酸を用いて、例えば、無水酢酸およびアミン塩基などの塩基、例えば、トリエチルアミンまたはピリジンを用いて達成される。
【０２３７】
いくつかの実施態様において、窒素還元（ＮＲ）ステップは、以下の：
窒素還元（ＮＲ）、ここで、保護された３，７−ジニトロ−１０Ｈ−フェノチアジンの各ニトロ（−ＮＯ２）基が、アミノ（−ＮＨ２）基に変換され、例えば、以下のとおりである：
【０２３８】
【化３１】
0005898701.tif 000034
【０２３９】
いくつかの実施態様において、窒素還元は、例えば、塩化スズＩＩ、例えば、塩化スズＩＩとエタノールを用いて実施されることができる。。
いくつかの実施態様において、窒素還元は、パラジウムチャコール（Ｐｄ／Ｃ）および水素を用いて、例えば、２−メチル−テトラヒドロフラン中で実施されることができる。
いくつかの実施態様において、窒素還元は、例えば、メタノールおよびＴＨＦ中で亜鉛および水性塩化アンモニウムを用いて実施されることができる。
【０２４０】
いくつかの実施態様において、アミン置換（ＡＳ）ステップは以下の：
アミン置換（ＡＳ）、ここで、保護された３，７−ジアミノ−１０Ｈ−フェノチアジンの各アミノ（−ＮＨ２）基が、二置換アミノ基に変換され、例えば、以下のとおりである：
【０２４１】
【化３２】
0005898701.tif 000035
【０２４２】
いくつかの実施態様において、アミン置換は、アルキルハライド、例えば、ヨウ化アルキル、例えば、ヨウ化メチル、例えば、ヨウ化メチルと水酸化ナトリウム、ＤＭＳＯ、トルエンおよびテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムブロミドを用いて実施される。
いくつかの実施態様において、アミン置換は、還元条件下におけるホルムアルデヒド（例えば、パラホルムアルデヒド、ホルマリン）による処理を含む。例えば、Ｐｄ／Ｃ触媒の存在下でのホルマリンおよび水素ガスによる処理；またはシアノ水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤と酢酸の存在下におけるパラホルムアルデヒドによる処理。
【０２４３】
いくつかの実施態様において、還元（ＲＥＤ）ステップは、以下の：
還元（ＲＥＤ）、ここで、３，７−ジ（二置換アミノ）−チオニニウム塩が、例えば、ヒドラジン（ＮＨ２ＮＨ２）、メチルヒドラジン（ＭｅＮＨＮＨ２）、または水素化ホウ素ナトリウムなどの還元剤およびピリジン、トリエチルアミンまたはヒューニッヒ塩基（ジイソプロピルエチルアミン）などの塩基による処理によって還元されて、対応する３，７−ジ（二置換アミノ）−１０Ｈ−フェノチアジンを生じる、
である。
【０２４４】
いくつかの実施態様において、環アミノ保護（ＡＰ）ステップは、以下の：
環アミノ保護（ＡＰ）、ここで、３，７−ジ（二置換アミノ）−１０Ｈ−フェノチアジンが、例えば、無水酢酸による処理によって保護されて、対応する保護された３，７−ジ（二置換アミノ）−１０Ｈ−フェノチアジン、例えば、対応するＮ−アセチル３，７−ジ（二置換アミノ）−１０Ｈ−フェノチアジンを生じる、
である。
【０２４５】
いくつかの実施態様において、上記ステップは、列挙された順序（すなわち、リスト中の任意のステップは、リスト中の先行するステップと同時に、またはその後に実施される）で実施される。
【０２４６】
いくつかの実施態様において、還元（ＲＥＤ）ステップおよび環アミノ保護（ＡＰ）ステップは、同時に（すなわち、１つのステップとして）実施される。
【０２４７】
例えば、いくつかの実施態様において、併合された還元（ＲＥＤ）ステップおよび環アミノ保護（ＡＰ）ステップは、以下の：
還元（ＲＥＤ）および環アミノ保護（ＡＰ）、ここで、３，７−ジ（二置換アミノ）−チオニニウム塩が還元されて、対応する３，７−ジ（二置換アミノ）−１０Ｈ−フェノチアジンを生じさせ、該３，７−ジ（二置換アミノ）−１０Ｈ−フェノチアジンの環アミノ基（−ＮＨ−）が保護された環アミノ基（−ＲＰｒｏｔ）に変換されて、対応する保護された３，７−ジ（二置換アミノ）−１０Ｈ−フェノチアジンを生じさせ、例えば、以下のとおりである：
【０２４８】
【化３３】
0005898701.tif 000036
【０２４９】
｛式中、Ｙは、対イオンである｝
いくつかの実施態様において、ＹはＣｌを表す。
【０２５０】
いくつかの実施態様において、３，７−ジ（二置換アミノ）−チオニニウム塩は、塩化メチルチオニニウム（ＭＴＣ）である。
【０２５１】
いくつかの実施態様において、併合された還元（ＲＥＤ）ステップおよび環アミノ保護（ＡＰ）ステップは、フェニルヒドラジン、ＭｅＮＨＮＨ２、またはＮＨ２ＮＨ２．Ｈ２Ｏなどのヒドラジンおよび無水酢酸を用いて達成される。
【０２５２】
いくつかの実施態様において、上記ステップは、窒素雰囲気下で実施される。
【０２５３】
いくつかの実施態様において、併合された還元（ＲＥＤ）ステップおよび環アミノ保護（ＡＰ）ステップは、例えば、フェニルヒドラジン、エタノール、無水酢酸およびピリジンを用いて実施される。
【０２５４】
いくつかの実施態様において、併合された還元（ＲＥＤ）ステップおよび環アミノ保護（ＡＰ）ステップは、例えば、ヒドラジン水和物、アセトニトリル、無水酢酸、およびトリエチルアミンを用いて窒素雰囲気下で実施される。
【０２５５】
いくつかの実施態様において、保護された３，７−ジ（二置換アミノ）−１０Ｈ−フェノチアジン、例えば、Ｎ−アセチル３，７−ジ（二置換アミノ）−１０Ｈ−フェノチアジンは、精製ステップを経る。
いくつかの実施態様において、精製は、化合物を溶解するための、トルエンなどの有機溶媒および酢酸などの酸の添加、続く洗浄ステップを含む。
いくつかの実施態様において、洗浄は、水および／または水性酢酸の化合物溶液への添加；撹拌および／または加熱；ならびに、有機層の分離を含む。
いくつかの実施態様において、洗浄は、例えば、３回まで反復される。
いくつかの実施態様において、精製された生成物の単離が洗浄に続く。
いくつかの実施態様において、精製された生成物の単離は、生成物の冷却,
沈殿および濾過を含む。
【０２５６】
結晶形態
いくつかの実施態様において、本発明の化合物は、結晶形態で提供される。
いくつかの実施態様において、結晶形態は、本明細書に記載の「Ａ形態」である。
いくつかの実施態様において、結晶形態は、図１７に示される構造を有し、ならびに／または付録の表１に示された結晶学データおよび／もしくは付録の表２に示された原子座標および／もしくは付録の表３に示された結合長と結合角および／もしくは付録の表４に示された異方性変位パラメータおよび／もしくは付録の表５に示された水素座標および等方性変位パラメータを特徴とする。
【０２５７】
タンパク質凝集の逆転および／または阻害
本発明の一態様は、タンパク質の凝集、例えば、神経変性疾患および／または臨床的認知症に関連するタンパク質の凝集を調節するための（例えば、逆転させ、および／または阻害するための）、本明細書に記載の化合物または組成物の使用である。凝集は、インビトロまたはインビボであってよく、以下に議論する病態に関連してもよい。
【０２５８】
したがって、本発明の一態様は、タンパク質の凝集、例えば、神経変性疾患および／または臨床的認知症に関連するタンパク質の凝集を調節する（例えば、逆転させ、および／または阻害する）方法であって、該タンパク質を本明細書に記載の化合物または組成物の有効量と接触させることを含む上記方法に関する。該方法は、インビトロまたはインビボにおいて実施されることができる。
【０２５９】
同様に、本発明の一態様は、哺乳動物の脳におけるタンパク質の凝集を調節する（例えば、逆転させ、および／または阻害する）方法に関し、該凝集は、本明細書に記載の病態に関連しており、上記処置は、該処置を必要とする上記哺乳動物に、上記凝集の阻害剤である本明細書に記載の化合物または組成物の予防的または治療的有効量を投与するステップを含む。
【０２６０】
処置方法
本発明の別の態様は、処置を必要とする患者に、予防的または治療的有効量の本明細書に記載の化合物、好ましくは医薬組成物の形態である該化合物を投与することを含む、処置の方法に関する。
【０２６１】
治療方法における使用
本発明の別の態様は、治療によるヒトまたは動物の体の（例えば、疾患状態の）処置方法における使用のための、本明細書に記載の化合物または組成物に関する。
【０２６２】
医薬品の製造における使用
本発明の別の態様は、（例えば、疾患状態の）処置における使用のための医薬品の製造における、本明細書に記載の化合物または組成物の使用に関する。
【０２６３】
いくつかの実施態様において、上記医薬品は、本発明の化合物を含む。
【０２６４】
いくつかの実施態様において、上記医薬品は、以下に記載の組成物である。
【０２６５】
処置される疾患状態−タンパク質凝集性疾患
本発明の化合物および組成物は、タンパク質凝集性疾患の処置または予防において有用である。
【０２６６】
したがって、いくつかの実施態様において、上記疾患状態は、タンパク質凝集性疾患であり、例えば、上記処置は、上記疾患状態に関連するタンパク質の凝集を阻害するのに十分な量の本明細書に記載の化合物または組成物による。
【０２６７】
一般に、タンパク質凝集は、誘導された構造的な重合化相互作用、すなわち、タンパク質またはその断片の構造変化がさらなる（前駆体）タンパク質分子の自己増殖的な鋳型化した結合および凝集を引き起こすもの、に起因する。核生成が開始すると、凝集カスケードが続いて起こり、これは、さらなるタンパク質分子の誘導された構造的重合化を含み、さらなるタンパク分解に対して実質的に抵抗性である凝集体中の毒性生成物断片の形成に導く。こうして形成されたタンパク質凝集体は、神経変性疾患、臨床的認知症、および他の病理学的症状として顕在化する病態の主因と考えられる。
【０２６８】
以下の表は、様々な疾患に関連する凝集性タンパク質および対応するタンパク質凝集性疾患を列挙する。これらのタンパク質または疾患に関する本発明の化合物および組成物の使用は、本発明に包含される。
【０２６９】
【表３−１】
0005898701.tif 000037
【０２７０】
【表３−２】
0005898701.tif 000038
【０２７１】
【表３−３】
0005898701.tif 000039
【０２７２】
【表３−４】
0005898701.tif 000040
【０２７３】
ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ０２／０５５７２０号、同第ＷＯ２００７／１１０６３０号、および同第ＷＯ２００７／１１０６２７号に記載のとおり、ジアミノフェノチアジンは、かかるタンパク質凝集性疾患の阻止において有用である。
【０２７４】
したがって、文脈上別途要求されない限り、タウタンパク質またはタウ様タンパク質（例えば、ＭＡＰ２；以下を参照のこと）に関する実施態様の記載は、本明細書で議論する他のタンパク質（例えば、β−アミロイド、シヌクレイン、プリオンなど）、または類似した病的凝集をこの凝集の伝播において重要な領域における立体構造変化によって開始もしくは被るかもしくはこのようにして形成された凝集体にタンパク質分解安定性を付与する他のタンパク質にも等しく当てはまると解釈すべきであると理解されるであろう（例えば、"Neurobiology ofAlzheimer's Disease", 2nd Edition, 2000, Eds. Dawbarn, D. and Allen, S.J.,The Molecular and Cellular Neurobiology Series, Bios Scientific Publishers,Oxford中のWischikらによる論文を参照のこと）。かかるすべてのタンパク質は、本明細書において「凝集性疾患タンパク質」と呼ばれることができる。
【０２７５】
同様に、本明細書中で「タウ−タウ凝集」などに関して言及される場合、これはβ−アミロイド凝集、プリオン凝集、シヌクレイン凝集などの他の「凝集性タンパク質凝集」にも当てはまると解釈することができる。「タウタンパク質分解」などに関しても同様である。
【０２７６】
好ましい凝集性疾患タンパク質
本発明の好ましい実施態様はタウタンパク質に基づく。本明細書中で使用される用語「タウタンパク質」は、一般にタウタンパク質ファミリーの任意のタンパク質を意味する。タウタンパク質は、構築と分解の反復サイクル中に微小管と同時精製する、より多数のタンパク質ファミリーのうちの１つとして特徴づけられ（例えば、Shelanski et al., 1973, Proc.Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 70, pp. 765-768を参照のこと）、微小管関連タンパク質（ＭＡＰｓ）として知られる。タウファミリーのメンバーは、特徴的なＮ−末端セグメント、脳において発生過程で調節される、Ｎ−末端セグメントに挿入される約５０アミノ酸の配列、３１〜３２アミノ酸の３または４タンデムリピートからなる特徴的なタンデムリピート領域、およびＣ−末端を有するという共通の特徴を共有している。
【０２７７】
ＭＡＰ２は、細胞体樹状突起コンパートメント中の主要な微小管関連タンパク質である（例えば、Matus, A., in"Microtubules" [Hyams and Lloyd, Eds.] pp. 155-166, John Wiley andSons, New York, USAを参照のこと）。ＭＡＰ２アイソフォームは、タンデムリピート領域内のタウタンパク質とほとんど同一であるが、Ｎ−末端ドメインの配列と範囲の両方において実質的に異なる（例えば、Kindler and Garner, 1994, Mol.Brain Res., Vol. 26, pp. 218-224を参照のこと）。それにもかかわらず、タンデムリピート領域における凝集はタウリピートドメインに対して選択的ではない。したがって、本明細書中のタウタンパク質またはタウ−タウ凝集に関する任意の議論は、タウ−ＭＡＰ２凝集、ＭＡＰ２−ＭＡＰ２凝集などにも関連すると解釈すべきであると理解されるであろう。
【０２７８】
いくつかの実施態様において、タンパク質はタウタンパク質である。
【０２７９】
いくつかの実施態様において、タンパク質はシヌクレイン、例えば、α−またはβ−シヌクレインである。
【０２８０】
いくつかの実施態様において、タンパク質はＴＤＰ−４３である。
【０２８１】
ＴＡＲ  ＤＮＡ結合タンパク質４３（ＴＤＰ−４３）は、染色体１ｐ３６．２上のＴＡＲＤＢＰによってコードされる４１４アミノ酸タンパク質である。このタンパク質は、高度に保存され、広く発現され、主に核に局在化されているが、核と細胞質の間を行き来することができる（Mackenzie et al 2010）。それは、転写およびスプライシング調節に関与し、マイクロＲＮＡプロセシング、アポトーシス、細胞分割、メッセンジャーＲＮＡの安定化、神経可塑性の調節および樹状突起の一体性維持などの他のプロセスにおいても役割を有しうる。さらに、２００６年以来、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）における機能仮説のＴＤＰ−４３毒性増加を支持する相当な数の証拠が蓄積している。ＴＤＰ−４３は、本質的に凝集傾向のあるタンパク質であり、インビトロで形成した凝集体は、ＡＬＳ患者における変性ニューロンに見られるＴＤＰ−４３沈着に超微細構造が類似する（Johnson et al 2009）。Ｊｏｈｎｓｏｎら（２００８）は、ＴＤＰ−４３が酵母モデルにおいて過剰発現すると、凝集した形態のみが毒性であることを示した。数種のインビトロの研究も、ＴＤＰ−４３のＣ−末端断片が完全長ＴＤＰ−４３よりも、ユビキチン化して細胞に対して毒性となる不溶性の細胞質凝集体を形成する可能性が高いことを示している（Arai et al 2010; Igaz et al2009; Nonaka et al 2009; Zhang et al 2009）。Ｎｏｎａｋａら（２００９）が、これらの細胞質凝集体が内因性の完全長タンパク質に結合して核からそれを枯渇させると示唆したにもかかわらず、Ｚｈａｎｇら（２００９）は、正常な核発現が維持されることを見い出し、凝集体に関する純粋な毒性効果であることを示唆した。Ｙａｎｇら（２０１０）は、培養ＮＳＣ３４運動ニューロン中のＴＤＰ−４３のＣ−およびＮ−末端断片の凝集体内に完全長ＴＤＰ−４３が捕捉されることを記載した。かかる切断断片の存在の結果として障害された神経突起伸長は、完全長タンパク質の過剰発現によって救われうる。インビボにおける神経突起伸長の役割はいまだ確証されていないが、このモデルは、Ｎｏｎａｋａらによる、ＡＬＳ発病におけるＴＤＰ−４３の役割についての示唆を支持するであろう。
【０２８２】
細胞培養中でのＴＤＰ−４３突然変異体の発現は、Ｃ−末端断片の生成増加と野生型タンパク質よりもさらに大きな細胞質凝集および毒性効果をもたらすことが繰り返し報告されている（Kabashi et al 2008; Sreedharanet al 2008; Johnson et al 2009; Nonaka et al 2009; Arai et al 2010; Barmarda etal 2010; Kabashi et al 2010）。
【０２８３】
本発明のいくつかの実施態様において、タンパク質がタウタンパク質である場合、（例えば、場合により、哺乳動物の脳における神経原線維変化（ＮＦＴｓ）中の対らせん状細線維（ＰＨＦｓ）の形態の）タンパク質凝集体の生成を阻害する方法であって、処置が上記のとおりである方法が提供される。
【０２８４】
好ましい適応症−タンパク質凝集性疾患
特に、タウタンパク質（およびその異常な機能またはプロセシング）が役割を果たしうるのはアルツハイマー病（ＡＤ）だけではない。ピック病および進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）などの神経変性障害の病因は、それぞれ歯状回、および新皮質の星状錐体細胞中の病的な切断型タウ凝集体の蓄積と関連しているようである。他の認知症は、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）；１７番染色体に連鎖するパーキンソニズムを伴うＦＴＤ（ＦＴＤＰ−１７）；脱抑制・認知症・パーキンソニズム・筋萎縮症複合（ＤＤＰＡＣ）；淡蒼球橋黒質変性症（ＰＰＮＤ）；グアムＡＬＳ症候群；淡蒼球黒質ルイ体変性症（ＰＮＬＤ）；大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）などを含む（例えば、"Neurobiology ofAlzheimer's Disease", 2nd Edition, 2000, Eds. Dawbarn, D. and Allen, S.J.,The Molecular and Cellular Neurobiology Series, Bios Scientific Publishers,Oxford中のWischikらの論文；特に表５．１を参照のこと）。異常なタウ凝集により主にまたは部分的に特徴づけられるこれらの疾患のすべては、本明細書では「タウオパチー」と呼ばれる。
【０２８５】
したがって、いくつかの実施態様において、疾患状態はタウオパチーである。
いくつかの実施態様において、疾患状態は神経変性タウオパチーである。
【０２８６】
いくつかの実施態様において、疾患状態は、アルツハイマー病（ＡＤ）、ピック病、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、１７番染色体に連鎖するパーキンソニズムを伴うＦＴＤ（ＦＴＤＰ−１７）、前頭側頭葉変性（ＦＴＬＤ）症候群、脱抑制・認知症・パーキンソニズム・筋萎縮症複合（ＤＤＰＡＣ）、淡蒼球橋黒質変性症（ＰＰＮＤ）、グアムＡＬＳ症候群、淡蒼球黒質ルイ体変性症（ＰＮＬＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、嗜銀顆粒性認知症（ＡｇＤ）、ボクサー認知症（ＤＰ）もしくは慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）、ダウン症候群（ＤＳ）、レビー小体認知症（ＤＬＢ）、亜急性硬化性全脳炎（ＳＳＰＥ）、ＭＣＩ、Ｃ型ニーマン・ピック病（ＮＰＣ）、Ｂ型サンフィリポ症候群（ムコ多糖症ＩＩＩＢ）、または筋緊張性ジストロフィー（ＤＭ）、ＤＭ１もしくはＤＭ２、または慢性外傷性脳障害（ＣＴＥ）から選ばれる。
【０２８７】
いくつかの実施態様において、疾患状態は、タウ病変を伴うリソソーム蓄積症である。ＮＰＣは、コレステロール代謝に影響を及ぼすＮＰＣ１遺伝子における突然変異により引き起こされ（Love et al 1995）、Ｂ型サンフィリポ症候群は、ＮＡＧＬＵ遺伝子における突然変異により引き起こされ、リソソーム中にヘパリン硫酸塩が蓄積する（Ohmi et al. 2009）。これらのリソソーム蓄積症においては、タウ病変が観察され、その処置は、疾患の進行を低下させうる。他のリソソーム蓄積症も、タウの蓄積に特徴を有しうる。
【０２８８】
パーキンソン病およびＭＣＩの処置におけるフェノチアジンジアミニウムの使用は、ＰＣＴ国際特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ２００７／００１１０５号および同第ＰＣＴ／ＧＢ２００８／００２０６６号により詳細に記載されている。
【０２８９】
いくつかの実施態様において、疾患状態は、パーキンソン病、ＭＣＩ、またはアルツハイマー病である。
【０２９０】
いくつかの実施態様において、疾患状態は、ハンチントン病または球脊髄性筋萎縮症（またはケネディ病）、および歯状核赤核淡蒼球ルイ体委縮症、および様々な脊髄小脳失調症などの他のポリグルタミン病である。
いくつかの実施態様において、疾患状態は、（例えば、タウオパチーまたはＴＤＰ−４３プロテイノパチーであることがある、以下を参照のこと）ＦＴＬＤ症候群である。
いくつかの実施態様において、疾患状態はＰＳＰまたはＡＬＳである。
【０２９１】
いくつかの実施態様において、処置（例えば、神経変性タウオパチー、例えば、アルツハイマー病の処置）は、場合により、１つまたは複数の他の作用物質、例えば、１つまたは複数の（（Ａｒｉｃｅｐｔ（商標）としても知られる）ドネペジル、（Ｅｘｅｌｏｎ（商標）としても知られる）リバスチグミン、（Ｒｅｍｉｎｙｌ（商標）としても知られる）ガランタミンなどの）コリンエステラーゼ阻害剤、（（Ｅｂｉｘａ（商標）、Ｎａｍｅｎｄａ（商標）としても知られる）メマンチンなどの）ＮＭＤＡ受容体拮抗薬、ムスカリン受容体作動薬、および／またはβ−アミロイドの生成亢進をもたらすアミロイド前駆体タンパク質プロセシングの阻害剤と併用してもよい。
【０２９２】
ＴＤＰ−４３プロテイノパチーは、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ；ＡＬＳ−ＴＤＰ）および前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ−ＴＤＰ）を含む。
【０２９３】
ＡＬＳおよび他の神経変性障害における神経変性におけるＴＤＰ−４３の役割は、いくつかの最近の刊行物に概説されている（Chen-Plotkin et al 2010;Gendron et al 2010; Geser et al 2010;Mackenzie et al 2010）。
【０２９４】
ＡＬＳは、一次運動野、脳幹および脊髄中の上部および下部両方の運動ニューロンの変性の結果としての進行性麻痺および筋消耗を特徴とする。それは、運動ニューロン病（ＭＮＤ）と称されることもあるが、上部または下部運動ニューロンのいずれかを冒すＡＬＳ以外の疾患もある。確定診断は、延髄、腕および脚の筋系における上部および下部両方の運動ニューロンの徴候といかなる他の病気の経過によっても説明できない臨床的進行の明確な証拠を必要とする（Wijesekera and Leigh 2009）。
【０２９５】
症例の大多数がＡＬＳ−ＴＤＰであるにもかかわらず、病的タンパク質がＴＤＰ−４３と異なる他の症例がある。誤って折りたたまれた（ミスフォールド）ＳＯＤ１は、ＳＯＤ１の突然変異を伴うＡＬＳにおけるユビキチン陽性の封入体中の病的タンパク質であり（Seetharaman et al 2009）、家族性ＡＬＳの非常に小さなサブセット（約３〜４％）においては、（肉腫タンパク質中に融合された）ＦＵＳ中の突然変異によって、ユビキチン化した病的タンパク質はＦＵＳである（Vance et al 2009; Blair et al2010）ＦＵＳの障害された核移行手段は依然として明らかでないが、ＴＤＰ−４３同様、ＦＵＳは核細胞質シャトリングにおいて重要であるようである。Ｍａｃｋｅｎｚｉｅら（２０１０）を改変したＡＬＳの新しい分子レベルの分類は、様々なサブタイプにおける別個の根本的病態カニズムを反映している（以下の表を参照のこと）。
【０２９６】
（Ｍａｃｋｅｎｚｉｅら、２０１０を改変した）ＡＬＳの新しい分子レベルの分類。大多数の症例において、ＴＤＰ−４３は、ＡＬＳにおいて見られる病的なユビキチン化タンパク質である。
【０２９７】
【表４】
0005898701.tif 000041
【０２９８】
筋萎縮性側索硬化症は、ほぼ一世紀半の間、疾病の分類に関する存在として認識され、ＩＣＤ  １０（Ｇ１２．２）においてはＭＮＤのサブタイプとして分類されている。Ｃｈａｒｃｏｔの元の記述とはわずかに異なる信頼できる臨床診断がＡＬＳに関して利用可能であり、根本的な分子病理を反映する神経病理学的基準も合意に達している。
【０２９９】
ＡＬＳは病理学的に３つの亜群、ＡＬＳ−ＴＤＰ、ＡＬＳ−ＳＯＤ１およびＡＬＳ−ＦＵＳ、に分類されるが、あとの２つの状態は稀である。これまで最大の試験は、すべての散発性のＡＬＳ症例がＴＤＰ−４３病理を有することを示した（Mackenzie et al 2007）。ＡＬＳのわずか約５％が家族性であり（Byrne et al 2010）、ＳＯＤ１に突然変異があり、最も一般的な突然変異はＦＡＬＳにおいて見られ、症例の１２〜２３％を占める（Andersen et al 2006）。ＳＯＤ１もＳＡＬＳの２〜７％において関与しうる。ＦＵＳにおける突然変異は、ずっと稀であり、ＦＡＬＳのわずか約３〜４％である（Blair et al 2010）。したがって、ＳＡＬＳの臨床症例がＴＤＰ−４３に基づく病理を有するであろうと確実に予測することができる。同様に、症例の約４％を占めるＴＤＰ−４３における突然変異によって、これはＦＡＬＳにおいて確実に予想可能である（Mackenzie et al 2010）。ＦＡＬＳの１〜２％を占める、ＶＣＰ（Johnson et al 2010）、ＡＮＧ（Seilhean et al 2009）、およびＣＨＭＰ２Ｂ（Cox et al 2010）における突然変異を伴うＡＬＳも、ＴＤＰ−４３陽性の病理と関連すると報告されている。ＳＯＤ１、ＦＵＳおよびＡＴＸＮ２の突然変異がＴＤＰ−４３陽性の凝集体に関連することは見出されていないが、ＴＤＰ−４３はこれらの突然変異に起因すると推定される病理過程に関与すると報告されている（Higashi et al 2010; Ling et al2010; Elden et al 2010）。
【０３００】
したがって、ＴＤＰ−４３がＳＡＬＳ症例の圧倒的多数の病因において重要かつ潜在的な中心的役割を有し、かなりの割合のＦＡＬＳの病因に関与しうるということが確証された。現在、ＡＬＳは、ＴＤＰ−４３プロテイノパチーであると広く考えられており（Neumann et al 2009）、インビトロおよびインビボの多数の研究が、ＴＤＰ−４３の凝集による毒性機能獲得（toxic gain of function）が、この疾患の神経毒性の少なくともいくらかには関与するという仮説を支援している。
【０３０１】
ＦＴＬＤ症候群は、中年後期に発症のピークがある、潜行性発症の、容赦ない進行性の神経変性状態である。類似した障害の陽性の家族歴が一親等においてしばしばある。
【０３０２】
行動型ＦＴＤは、しばしば反復行動および食事のパターンの変化を伴う、社会的および対人関係の機能における初期の顕著な変化を特徴とする。意味性認知症では、そうでなければ弁舌流暢であるにもかかわらず換語困難が顕著であり、認識評価におけるオブジェクト知識の低下および一語理解の障害を伴う。進行性非流暢性失語症は、発語動作の問題と文法障害の組み合わせを呈する。これら３つのＦＴＬＤ症候群のための臨床診断特徴を、以下の表およびＮｅａｒｙら（１９９８）の全基準に示す。
【０３０３】
【表５】
0005898701.tif 000042
【０３０４】
ＴＤＰ−４３陽性の封入体がＡＬＳおよびＦＴＬＤ−ＴＤＰを特徴づけるという発見（Neumann et al 2006）の直後に、ＡＬＳの家族性および散発性の症例におけるＴＡＲＤＢＰ遺伝子中のミスセンス突然変異が確認された（Gitcho et al 2008; Sreedharanet al 2008）。これまで、世界中で遺伝的に無関係の７９家族において３８種の異なるＴＡＲＤＢＰ突然変異が報告されている（Mackenzie et al 2010）。ＴＡＲＤＢＰ突然変異は、すべての家族性ＡＬＳ症例の約４％、散発性ＡＬＳ症例の約１．５％を占める。
【０３０５】
２０１０年１２月現在、家族性および散発性ＡＬＳに関連する１３遺伝子の突然変異が確認されている。ＡＬＳの他の５つの染色体座への関連が実証されているが、特異的な突然変異はこれまで確認されていない。
【０３０６】
ＴＤＰ−４３プロテイノパチーにおけるメチルチオニニウム（ＭＴ）
ＭＴは、圧倒的多数の家族性および散発性ＡＬＳの病理学的特徴であり、ＦＴＬＤ−Ｐの特徴でもある細胞内のＴＤＰ−４３タンパク質凝集を標的とし、低下させることのできる作用様式を有する。
【０３０７】
さらに、実験室データは、メチルチオニニウムが、ＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞中のＴＤＰ−４３凝集体の形成を阻害することを示す。０．０５μＭのＭＴによる処置の後、ＴＤＰ−４３凝集体は５０％減少した。これらの発見は、イムノブロット分析によって確認された（Yamashita et al 2009）。
【０３０８】
したがって、本発明の化合物および組成物は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）および前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）の処置のために有用であることができる。
【０３０９】
ハンチントン病およびポリグルタミン病におけるメチルチオニニウム（ＭＴ）
ＭＴは、ハンチントン病の病理学的特徴である細胞内のポリグルタミンタンパク質凝集を低下させることができる。ハンチントン病は、ハンチンチンのＮ−末端に位置する翻訳されたＣＡＧリピートの拡張により引き起こされる。野生型染色体は、６〜３４リピートを含むが、ハンチントン病においては、染色体は３６〜１２１リピートを含む。病気の発症年齢は、タンパク質内のポリグルタミンリピートをコードするＣＡＧ区域の長さと逆相関する。
【０３１０】
実験室データは、１０２残基のひとつながりのポリグルタミンを含むハンチンチン派生物の凝集体形成を、ゼブラフィッシュにおいてメチルチオニニウムが阻害することが示す（van Bebber et al. 2010）。０、１０および１００μＭで試験した場合、ＭＴは、ゼブラフィッシュにおけるかかる凝集体の形成を容量依存的に予防した。
【０３１１】
したがって、本発明の化合物および組成物は、ハンチントン病ならびに球脊髄性筋萎縮症（またはケネディ病）、および歯状核赤核淡蒼球ルイ体委縮症、および様々な脊髄小脳失調症などの他のポリグルタミン病の処置のために有用であることができる（Orr & Zoghbi, 2007）。
【０３１２】
ミトコンドリア病およびラフォラ病
ミトコンドリア障害、特に呼吸鎖疾患（ＲＣＤｓ）において最も頻繁に冒される器官は、骨格筋に加えて中枢神経系（ＣＮＳ）である。ＲＣＤｓのＣＮＳ徴候は、脳卒中様のエピソード、てんかん、片頭痛、失調症、痙縮、運動障害、精神障害、認知機能低下、または認知症（ミトコンドリア認知症）さえ含む。これまで、ミトコンドリア認知症は、ＭＥＬＡＳ、ＭＥＲＲＦ、ＬＨＯＮ、ＣＰＥＯ、ＫＳＳ、ＭＮＧＩＥ、ＮＡＲＰ、レイ症候群、およびアルパース−フッテンロッハー病において報告された（Finsterer, 2009）。ミトコンドリア呼吸鎖中には、一連の電子移動に関与する４つの複合体がある。これらの複合体のいずれかの異常な機能は、異常な電子輸送鎖およびその後の異常なミトコンドリア呼吸に次いで、ミトコンドリア病に至る。ミトコンドリア呼吸鎖の複合体ＩＩＩは、電子をチトクロームｃに移動させる。
【０３１３】
本発明の化合物および組成物は、呼吸鎖の複合体ＩＩＩ機能の欠損および／または障害に関連するミトコンドリア病を処置するためにも使用されることができる。上記化合物は、チオニニウム部分が酸化および還元形の間を変換する酸化還元電位が低いため、有効な電子担体として作用する能力がある。ミトコンドリア病をもたらす複合体ＩＩＩ機能の障害および／または欠損の場合には、本発明の化合物は、酸化および還元形間を行き来するチオニニウム部分の能力のために、複合体ＩＩＩの電子輸送および移動の役割を果たすこともでき、したがって、準最適に機能する複合体ＩＩＩの代わりに電子担体として作用し、電子をチトクロームｃに移動させる。
【０３１４】
本発明の化合物および組成物は、ミスフォールドタンパク質／アミノ酸のモノマー／オリゴマーをＨｓｐ７０  ＡＤＰ関連タンパク質の蓄積および／またはリフォールディング経路から転向させ、これらの異常に折りたたまれたタンパク質モノマー／オリゴマーを、これらのミスフォールドタンパク質／アミノ酸のモノマー／オリゴマーを直接経路を介して除去する経路である、Ｈｓｐ７０  ＡＴＰ−依存性ユビキチン−プロテアソーム系（ＵＰＳ）に直接導く経路に向けなおす能力を有する、活性チオニニウム部分を生成する能力も有する（Jinwal et al 2009）。
【０３１５】
ラフォラ病（ＬＤ）は、ポリグリコサンと呼ばれる分岐の少ない不溶性のグリコーゲンが多くの組織中に徐々に蓄積することに関連した、常染色体劣性の十代で発症する致死的てんかんである。脳内では、ポリグルコサン体またはラフォラ体がニューロン中に形成する。ＭＴによるＨｓｐ７０  ＡＴＰａｓｅの阻害（Jinwal et al. 2009）は、ミスフォールドタンパク質の除去を上方制御しうる。ラフォラ病は主に、ミスフォールドタウタンパク質の凝集を加速しうる封入体が結果として生じる、どちらも第６染色体上にあるラフォリン（Ｌａｆｏｒｉｎ）またはマリン（Ｍａｌｉｎ）遺伝子のいずれかにおける突然変異によるリソソームのユビキチン−プロテアソーム系（ＵＰＳ）の欠損による。障害されたＵＰＳによる二次的なミトコンドリアの損傷は、さらに、ミトコンドリア活性の抑制および電子輸送鎖の障害を招き、さらなるリポフスチンをもたらし、ラフォラ病に特徴的な発作を引き起こす。
【０３１６】
ＭＴ部分は、Ｈｓｐ７０  ＡＴＰａｓｅを阻害することによって、存在するタウ凝集体を分解し、さらなるタウの蓄積を低下させ、リソソーム効率を高めることができる。ＭＴは、そのＨｓｐ７０  ＡＴＰａｓｅに対する阻害作用を通じてユビキチンプロテアソーム系によるタウモノマー／オリゴマーの除去を促進することによって、タウのもつれの減少に導きうる。
【０３１７】
したがって、本発明の化合物および組成物は、ラフォラ病の処置において有用であることができる。
【０３１８】
処置される疾患状態−他の疾患状態
いくつかの実施態様において、疾患状態は皮膚癌である。
いくつかの実施態様において、疾患状態は黒色腫である。
いくつかの実施態様において、疾患状態はウイルス性、細菌性または原虫性疾患状態である。
いくつかの実施態様において、（原虫性）疾患状態はマラリアである。処置は、１つまたは複数の抗微生物剤、例えば、クロロキンおよび／またはアトバコンと併用してもよい。
【０３１９】
いくつかの実施態様において、（ウイルス性の）疾患状態は、Ｃ型肝炎、ＨＩＶまたは西ナイルウイルス（ＷＮＶ）により引き起こされる。
【０３２０】
他の用途
本発明の別の一態様は、サンプル（例えば、血液または血漿サンプル）中の病原体を不活化する方法であって、本明細書に記載の化合物をサンプルに導入するステップ、およびサンプルを光に曝露するステップを含む方法における、上記化合物の使用に関する。
【０３２１】
例えば、いくつかの実施態様において、上記方法は、上記化合物をサンプル中に導入するステップと、次いで、サンプルを光に曝露するステップとを含む。
【０３２２】
リガンドとしての使用
タウタンパク質の凝集を阻害可能である本明細書に記載の化合物は、タウタンパク質（または凝集タウタンパク質）のリガンドまたは標識としても作用することが可能であろう。したがって、いくつかの実施態様において、本発明の化合物はタウタンパク質（または凝集タウタンパク質）のリガンドである。
【０３２３】
かかる化合物（リガンド）は、安定および不安定な検出可能な同位体、放射性同位体、陽電子放出原子、磁気共鳴標識、染料、蛍光マーカー、抗原基、治療部分、または予後判定、診断もしくは治療用途において援助となりうる任意の他の部分などの化学基を組み込むか、それにコンジュゲーションするか、それとキレート化するか、そうでなければそれと結合することができる。
【０３２４】
例えば、いくつかの実施態様において、上記化合物は本明細書で定義される通りであるが、化合物が１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つなど）の検出可能な標識、例えば、同位体、放射性同位体、陽電子放出原子、磁気共鳴標識、染料、蛍光マーカー、抗原基または治療部分を組み込むか、それにコンジュゲーションするか、それとキレート化するか、そうでなければそれと結合するというさらなる限定を伴う。
【０３２５】
いくつかの実施態様において、上記化合物は、リガンドならびに標識、例えば、タウタンパク質（または凝集タウタンパク質）の標識であり、１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つなど）の検出可能な標識を組み込むか、それにコンジュゲーションするか、それとキレート化するか、そうでなければそれと結合する。
【０３２６】
例えば、いくつかの実施態様において、上記化合物は上記定義の通りであるが、該化合物が１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つなど）の検出可能な標識を組み込むか、それにコンジュゲーションするか、それとキレート化するか、そうでなければそれと結合するというさらなる限定を伴う。
【０３２７】
（例えば、タウタンパク質または凝集タウタンパク質に連結した場合の）標識された化合物は、任意の好適な手段により可視化または検出されることができ、当業者は、本分野で知られた任意の好適な検出手段を使用することができることを理解するであろう。
【０３２８】
例えば、上記化合物（リガンド−標識）は、陽電子放出原子（例えば、１１Ｃ）を（例えば、１つまたは複数のアルキル基置換基、例えば、メチル基置換基の炭素原子として）組み込み、本分野で知られた陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）を用いて該化合物を検出することによって好適に検出されることができる。
【０３２９】
かかる１１Ｃ標識化合物は、本明細書に記載の方法を知られたやり方で適応させることで、例えば、ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ０２／０７５３１８号（その図１１ａ、１１ｂ、１２を参照のこと）および同第ＷＯ２００５／０３０６７６号に記載の方法と同様にして調製されうる。
【０３３０】
したがって、本発明の別の一態様は、タウタンパク質（または凝集タウタンパク質）の標識方法であって、以下の：（ｉ）タウタンパク質（または凝集タウタンパク質）を、１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つなど）の検出可能な標識を組み込むか、それにコンジュゲーションするか、それとキレート化するか、そうでなければそれと結合する化合物と接触させるステップを含む方法に関する。該化合物は、本明細書に記載の組成物として提供されてもよい。
【０３３１】
本発明の別の一態様は、タウタンパク質（または凝集タウタンパク質）の検出方法であって、以下の：（ｉ）タウタンパク質（または凝集タウタンパク質）を、１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つなど）の検出可能な標識を組み込むか、それにコンジュゲーションするか、それとキレート化するか、そうでなければそれと結合する化合物と接触させるステップと、（ｉｉ）タウタンパク質（もしくは凝集タウタンパク質）に結合した該化合物の存在および／または量を検出するステップとを含む方法に関する。該化合物は、本明細書に記載の組成物として提供されてもよい。
【０３３２】
本発明の別の一態様は、疾患に罹患していると考えられる対象におけるタウプロテイノパチーの診断または予後判定方法であって、以下の：（ｉ）タウタンパク質または凝集タウタンパク質、特にタウタンパク質を標識可能な化合物（例えば、１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つなど）の検出可能な標識を組み込むか、それにコンジュゲーションするか、それとキレート化するか、そうでなければそれと結合する化合物）を該対象に導入するステップと；（ｉｉ）対象の脳内のタウタンパク質もしくは凝集タンパク質に結合した該化合物の存在および／または量を決定するステップと；（ｉｉｉ）（ｉｉ）で得られた決定結果と対象の疾患状態とを関連づけるステップとを含む方法に関する。該化合物は、本明細書に記載の組成物として提供されてもよい。
【０３３３】
本発明の別の一態様は、タウプロテイノパチーの診断または予後判定方法における使用のための、タウタンパク質または凝集タウタンパク質を標識可能な化合物（例えば、１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つなど）の検出可能な標識を組み込むか、それにコンジュゲーションするか、それとキレート化するか、そうでなければそれと結合する化合物）に関する。該化合物は、本明細書に記載の組成物として提供されてもよい。
【０３３４】
本発明の別の一態様は、タウプロテイノパチーの診断もしくは予後判定における使用のための診断または予後判定試薬の製造方法における、タウタンパク質または凝集タウタンパク質、特にタウタンパク質を標識可能な化合物（例えば、１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つなど）の検出可能な標識を組み込むか、それにコンジュゲーションするか、それとキレート化するか、そうでなければそれと結合する化合物）の使用に関する。該化合物は、本明細書に記載の組成物として提供されてもよい。
【０３３５】
当業者は、リガンド／標識を直接投与する代わりに、同じ対象中に存在するかまたは投与される活性化剤により活性型（例えば、連結形態、標識化形態）に変換される前駆体形態としてそれらが投与されうることを理解するであろう。
【０３３６】
本明細書中に開示されるリガンドは、診断または予後判定方法の一部として使用されることができる。それは、処置のための患者を選定するか、または対象に投与される処置もしくは治療薬（例えば、タウタンパク質凝集の阻害剤）の有効性を評価するために使用されることができる。
【０３３７】
処置
状態の処置に関連して本明細書中で使用される用語「処置」は一般に、ヒトまたは動物にかかわらず（例えば、獣医学用途における）、何らかの望ましい治療効果が達成される処置および治療、例えば、状態の進行の阻害に関し、進行速度の低下、進行速度の停止、状態の退行、状態の寛解、および状態の治癒を含む。予防的手段（例えば、予防、阻止）としての処置も含まれる。
【０３３８】
本明細書中で使用される用語「治療的有効量」は、所望の処置計画に従って投与された際に、妥当なベネフィット／リスク比に見合った何らかの所望の治療効果を生み出すのに有効な、本発明の化合物、または該化合物を含む材料、組成物もしくは剤形（dosage from）のその量に関する。
【０３３９】
同様に、本明細書で使用される用語「予防的有効量」は、所望の処置計画に従って投与された場合に、妥当なベネフィット／リスク比に見合った何らかの所望の予防効果を生み出すのに有効な、本発明の化合物、または該化合物を含む材料、組成物もしくは剤形（dosage from）のその量に関する。
【０３４０】
本明細書に照らして、用語「予防」は、完全な成功、すなわち、完全な保護または完全な防止に限定されると理解されてはならない。本文脈においては、予防はむしろ、特定の状態を遅らせ、和らげ、または回避することを助けることによって健康を保持する目的で、症状を示す状態の検出に先立って投与される手段を意味する。
【０３４１】
用語「処置」は、２種以上の処置または治療が、例えば、連続してまたは同時に併用される、併用処置および治療を含む。処置および治療の例として、化学療法（例えば、薬剤、（例えば、免疫療法におけるような）抗体、（例えば、光線力学的療法、ＧＤＥＰＴ、ＡＤＥＰＴなどにおけるような）プロドラッグを含む活性作用物質の投与）；手術；放射線療法；および遺伝子療法が挙げられるが、それに限定されない。
【０３４２】
例えば、本明細書に記載の化合物による処置と、１つまたは複数の他の（例えば、１つ、２つ、３つ、４つの）作用物質または治療を併用することが有益である場合がある。
【０３４３】
具体的な組み合わせは、彼／彼女の一般常識、および熟練した開業医に知られた投与計画によって用量を選定するであろう医師の裁量によるであろう。
【０３４４】
作用物質（すなわち、本明細書に記載の化合物と１つまたは複数の他の作用物質）は、同時または連続投与されることができ、個々に異なる投与スケジュールで、異なる経路を介して投与されることができる。例えば、連続投与される場合、作用物質は（例えば、５〜１０分の時間にわたる）緊密な間隔で、またはより長い間隔で（例えば、１、２、３、４時間もしくはそれを超えて空けて、必要であればさらに長い時間を空けて）投与されることができ、正確な投与計画は治療薬の特性に見合ったものである。
【０３４５】
作用物質（すなわち、本明細書に記載の化合物と１つまたは複数の他の作用物質）は、単一剤形中で一緒に製剤化することができ、あるいは各作用物質を別々に製剤化し、場合によってそれらの使用のための指示書を備えたキットの形態で一緒に提供されることもできる。
【０３４６】
投与経路
本発明の化合物またはそれを含む医薬組成物は、全身／末梢または局所（すなわち所望の作用の部位）にかかわらず、任意の好都合な投与経路により対象／患者に投与されることができる。
【０３４７】
投与経路としては、（例えば、摂取による）経口；頬側；舌下；（例えば、パッチ、プラスターなどによるものを含む）経皮；（例えば、パッチ、プラスターなどによるものを含む）経粘膜；（例えば、点鼻薬による）鼻腔内；（例えば、点眼薬による）眼内；（例えばエアロゾルを介し、例えば口または鼻を経由した、例えば吸入またはガス注入療法による）肺内；（例えば坐薬または浣腸による）直腸内；（例えばペッサリーによる）膣内；例えば、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、動脈内、心臓内、くも膜下腔内、脊髄内、嚢内、嚢下、眼窩内、腹腔内、気管内、表皮下、関節内、くも膜下および胸骨内注射を含む（例えば、脳内への血管内カテーテル注射を含む）注射による非経口；例えば、皮下または筋肉内へのデポーまたはリザーバの埋め込みが挙げられるが、それに限定されない。
【０３４８】
好ましい組成物は、以下においてより詳細に記載されるとおりに製剤化された経口組成物である。
【０３４９】
対象／患者
対象／患者は、動物、哺乳動物、有胎盤哺乳動物、げっ歯類（例えば、モルモット、ハムスター、ラット、マウス）、ネズミ類（例えば、マウス）、ウサギ類（例えば、ウサギ）、鳥類（例えば、トリ）、イヌ類（例えば、イヌ）、ネコ類（例えば、ネコ）、ウマ類（例えば、ウマ）、ブタ類（例えば、ブタ）、ヒツジ類（例えば、ヒツジ）、ウシ類（例えば、雌ウシ）、霊長類、サル類（例えば、サルもしくは類人猿）、サル（例えば、マーモセット、ヒヒ）、単孔類（例えば、カモノハシ）、類人猿（例えば、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル）またはヒトであってよい。
【０３５０】
さらに、対象／患者は、任意のその発育形態、例えば、胎児であってよい。
【０３５１】
いくつかの実施態様において、対象／患者はヒトである。
【０３５２】
組成物／製剤
本発明の化合物は単独で使用（例えば、投与）可能であるが、それを組成物または製剤として提供することが好ましい場合が多い。
【０３５３】
したがって、本発明の別の態様は、本明細書に記載の化合物および医薬として許容可能な担体または希釈剤を含む組成物を提供する。
【０３５４】
いくつかの実施態様において、組成物は、本明細書に記載の化合物、および医薬として許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物（例えば、製剤（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）、製剤（ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）、医薬品）である。
【０３５５】
いくつかの実施態様において、組成物は、本明細書に記載の少なくとも１つの化合物を、医薬として許容可能な担体、希釈剤、賦形剤、補助剤、充填剤、緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤、滑沢剤、安定化剤、可溶化剤、界面活性剤（例えば、湿潤剤）、隠蔽剤、着色剤、風味剤および甘味剤を含むがそれに限定されない、当業者に周知の１つまたは複数の他の医薬として許容可能な成分と共に含む医薬組成物である。
【０３５６】
いくつかの実施態様において、組成物は、他の活性作用物質、例えば、他の治療薬または予防薬をさらに含む。
【０３５７】
好適な担体、希釈剤、賦形剤などは、標準的な薬学のテキストに見出すことができる。例えば、Handbook of PharmaceuticalAdditives,2nd Edition (eds. M. Ash and I. Ash), 2001 (Synapse Information Resources,Inc., Endicott, New York, USA), Remington's Pharmaceutical Sciences,20th edition, pub. Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; および Handbook of Pharmaceutical Excipients,2nd edition, 1994を参照のこと。
【０３５８】
本発明の別の一態様は、本明細書で定義された少なくとも１つの［１１Ｃ］−放射標識化合物を、当業者に周知の１つまたは複数の他の医薬として許容可能な成分、例えば、担体、希釈剤、賦形剤などと混合するステップを含む、医薬組成物の製造方法に関する。分離した単位（例えば、錠剤など）として製剤化した場合、各単位は所定量（用量）の上記化合物を含む。
【０３５９】
本明細書中で使用される用語「医薬として許容可能な」は、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応または他の問題もしくは合併症がなく、妥当なベネフィット／リスク比に見合った、問題の対象（例えば、ヒト）の組織との接触における使用に、堅実な医療判断の範囲内で好適である、化合物、成分、材料、組成物、剤形などに関する。各担体、希釈剤、賦形剤などは、製剤の他の成分と適合性があるという意味でも「許容可能な」ものでなければならない。
【０３６０】
製剤は、薬学の分野で周知の任意の方法で調製されることができる。かかる方法は、上記化合物を１つまたは複数の副成分を構成する担体と会合させるステップを含む。一般に、製剤は上記化合物を担体（例えば液体担体、微粉固体担体など）と均一かつ緊密に会合させた後、必要であれば生成物を成形することにより調製される。
【０３６１】
製剤は、速放性もしくは徐放性；即時、遅延、時限もしくは持続放出；またはその組み合わせを提供するために調製されることができる。
【０３６２】
（例えば、注射による）非経口投与に好適な製剤は、上記化合物が溶解しているか、懸濁しているか、そうでなければ（例えば、リポソームまたは他の微粒子として）提供される、水性または非水性の、等張性で、パイロジェンフリーの滅菌液（例えば、溶液、懸濁液）を含む。かかる液体は、抗酸化剤、緩衝剤、防腐剤、安定化剤、静菌剤、懸濁剤、増粘剤、および製剤を目的の受容者の血液（または他の関連する体液）と等張性にする溶質などの他の医薬として許容可能な成分をさらに含んでもよい。賦形剤の例として、例えば、水、アルコール、ポリオール、グリセロール、植物油などが挙げられる。かかる製剤中で使用される好適な等張性担体の例として、塩化ナトリウム注射液、リンゲル液または乳酸加リンゲル液が挙げられる。典型的に、液体中の上記化合物の濃度は、約１ｎｇ／ｍｌ〜約１０μｇ／ｍｌ、例えば、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１μｇ／ｍｌである。製剤は、単位用量または多用量密封容器、例えば、アンプルおよびバイアル中で提供されることができ、使用直前に滅菌液体担体、例えば、注射用水を加えることしか必要としない凍結乾燥状態で貯蔵されることができる。即時注射溶液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製されることができる。
【０３６３】
いくつかの好ましい製剤の例
本発明の一態様は、（例えば、本明細書に記載の方法により得られるか、または得ることができ；本明細書に記載の純度を有する；などの）本明細書に記載の化合物２０〜３００ｍｇ、および医薬として許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含む投与単位（例えば、医薬錠剤またはカプセル剤）に関する。
【０３６４】
いくつかの実施態様において、投与単位は錠剤である。
いくつかの実施態様において、投与単位はカプセル剤である。
【０３６５】
いくつかの実施態様において、上記カプセル剤はゼラチンカプセルである。
いくつかの実施態様において、上記カプセル剤はＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）カプセルである。
【０３６６】
いくつかの実施態様において、上記量は３０〜２００ｍｇである。
いくつかの実施態様において、上記量は約３０ｍｇである。
いくつかの実施態様において、上記量は約６０ｍｇである。
いくつかの実施態様において、上記量は約１００ｍｇである。
いくつかの実施態様において、上記量は約１５０ｍｇである。
いくつかの実施態様において、上記量は約２００ｍｇである。
【０３６７】
本明細書全体を通じて、投与量、例えば、上記で示されたもの、は、化合物自体の量または投与単位に含有された遊離塩基当量（すなわち、ＬＭＴ部分の量）を意味することができる。これらの選択肢はどちらも本発明によって明確に開示される。
【０３６８】
いくつかの実施態様において、医薬として許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤は、グリセリド（例えば、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ  ４４／１４（登録商標）；ラウロイルマクロゴール−３２グリセリド  ＰｈＥｕｒ、ＵＳＰ）およびコロイド状二酸化ケイ素（例えば、２％Ａｅｒｏｓｉｌ  ２００（登録商標）；Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ  Ｓｉｌｉｃｏｎ  Ｄｉｏｘｉｄｅ  ＰｈＥｕｒ、ＵＳＰ）のうちの１つもしくは両方であるか、またはそれを含む。
【０３６９】
新規製剤−固体剤形
錠剤の製剤化およびフィルムコーティングのために一般に使用される方法は、乾燥過程の間に低湿度を伴う熱の使用をしばしば必要とする。
【０３７０】
ＬＭＴＭおよび他のロイコ−メチルチオニウム塩は、潜在的に、メチルチオニニウム部分（ＭＴ）への酸化、例えば、Ｌ  Ａｚｕｒｅ  Ｂ（ＬＡＢ）への分解の傾向がある（以下のスキームを参照のこと）：
【０３７１】
【化３４】
0005898701.tif 000043
【０３７２】
したがって、（上記の説明のとおり）酸化の傾向がある、例えばＬＭＴＭなどの材料に関しては、慣用の製剤化方法は、分解、そしてしたがって、生成物の性能における不安定性をもたらす可能性がある。
【０３７３】
したがって、本発明の製剤の原理は、ロイコ−メチルチオニウム塩、例えば、ビス（メタンスルホネート）（ＬＭＴＭ）を活性物質として含み、該活性物質が実質的に安定な形態でその中に存在する、圧縮された医薬製剤およびカプセル剤を、直接錠剤圧縮技術または他の独特の打錠技術により、およびカプセル化によって製造する方法の提供である。
【０３７４】
固体剤形の調製にもっとも一般的に使用される方法は、（湿式造粒法（ｍｏｉｓｔ  ｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ）とも呼ばれる）湿式造粒法（ｗｅｔ  ｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ）である。これは、造粒液（ｇｒａｎｕｌａｔｉｎｇ  ｆｌｕｉｄ）の粉末への添加を含む。造粒液は、水、または後で乾燥によって除去可能な十分に揮発性の何らかの他の溶媒であってよい。造粒液は、結合剤も含んでよい。溶媒が除去されたら、得られた塊は粉砕される。
【０３７５】
湿式造粒法は、製剤中のさまざまな成分の物理学的性質に関連する任意の問題を克服する可能性がより高いため、直接打錠法よりもしばしば好ましい。湿式造粒法は、許容可能な固体剤形を得るために必要な流動性と凝集性を有する材料を提供する。すべての顆粒は通常、同量の薬剤を含むため、一般に、固体剤形の含有量均一性は湿式造粒法によって改善される。賦形剤からの薬剤の分離も回避される。
【０３７６】
直接打錠法において、圧縮される組成物の個々の構成成分は、先に造粒することなく混合され、その後直接打錠される。これが洗練されかつ単純な方法と思われる一方、十分な強度を有してなお投与後に十分迅速に崩壊する商業的に有用な錠剤をそれによって得ることは困難である。また、多くの活性物質は直接打錠法によって加工処理されることはできず、なぜなら、それらは造粒ステップなしに圧縮されることができないからである。
【０３７７】
驚くべきことに、本発明の化合物が、製造および貯蔵の間、錠剤などの乾式圧縮された固体剤形中で安定であること、Ｌ  Ａｚｕｒｅ  Ｂ（ＬＡＢ）およびメチルチオニニウム（ＭＴ）などの形成された分解産物の量が規格内（例えば、２％未満のＬＡＢおよび１２％未満のＭＴ）に制御可能であることが、ここに見出された。
【０３７８】
これは、例えば、慣用の湿式造粒法により加工処理された場合のＬＭＴＭの挙動とは対照的である。理論に束縛されることを望むことなく、慣用の湿式造粒法においては、例えば、ＬＭＴＭは非常に不安定であることができ、相当量のＬＡＢ及びＭＴが形成されうる。
【０３７９】
したがって、本発明の一態様は、本発明の化合物を含む固体剤形の医薬組成物を提供する。該組成物は、乾式圧縮に好適な少なくとも１つの希釈剤をさらに含むことが好ましい。該医薬組成物は、上記化合物が実質的に安定な形態で存在することを特徴とする。
【０３８０】
本発明の別の態様は、本発明の化合物および直接打錠に好適な少なくとも１つの希釈剤、および場合により１つまたは複数の他の賦形剤を含む、自由流動性で凝集性の粉末を提供し、該粉末は、固体剤形に圧縮されることができる。
【０３８１】
これらの組成物および製剤は、本発明のビス（スルホネート）塩、特に、ＬＭＴＭに関して、本明細書に最初に記載される。しかしながら、本製剤化方法の利益は、塩のロイコ−メチルチオニウムファミリーの他のメンバーにも等しくあてはまる。
【０３８２】
例えば、本明細書に記載の製剤は、上記で簡単に議論したＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ２００７／１１０６２７号（ＷｉｓＴａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｌｔｄ）に開示された３，７−ジアミノ−１０Ｈ−フェノチアジニウム塩にも適用可能である。これらは、ロイコ−メチルチオニウムビス（ハイドロブロミド）（ＬＭＴ．２ＨＢｒ、ＬＭＴＢ）およびロイコ−メチルチオニウムビス（ハイドロクロライド）（ＬＭＴ．２ＨＣｌ、ＬＭＴＣ）を含む。
【０３８３】
したがって、より広い態様においては、本発明は、以下の式Ｉ：
【０３８４】
【化３５】
0005898701.tif 000044
【０３８５】
｛式中、
Ｒ１，Ｒ９、Ｒ３ＮＡ、Ｒ３ＮＢ、Ｒ７ＮＡおよびＲ７ＮＢは、先に定義されたとおりであり；
さらに、ここで、ＨＸ１およびＨＸ２は、それぞれ独立してプロトン酸である｝
の化合物または医薬として許容可能なその塩、溶媒和物もしくは水和物を含む、本明細書に記載の固体剤形の医薬組成物を提供する。
【０３８６】
完全を期して、当業者には理解されるであろうとおり、上記の式は等しく以下の：
【０３８７】
【化３６】
0005898701.tif 000045
【０３８８】
｛式中、
Ｘ１およびＸ２は、対応する対イオンである｝
のとおりに書くこともできることを注記しておく。
【０３８９】
好ましくは、Ｘ１およびＸ２は、独立して（アルキルスルホネートまたはアリールスルホネート、例えば、上記で定義されたＲＡＳＯ３−またはＲＢＳＯ３−などの）スルホネートまたはハライド（Ｃｌ−，Ｂｒ−，Ｉ−）である。言い換えれば、ＨＸ１およびＨＸ２は、独立してスルホン酸（ＲＡＳＯ３Ｈ、ＲＢＳＯ３Ｈ）またはハイドロハライド（ＨＣｌ、ＨＢｒ、ＨＩ）であることが好ましい。
【０３９０】
以後使用されるとおり、用語「活性成分」は、関連するロイコ（メチルチオニニウム）塩を意味する。言い換えれば、これは、本発明の化合物、例えば、ＬＭＴＭなどの式（Ｉ）の化合物を意味する。
【０３９１】
本発明の別の態様は、乾式圧縮法による、上記医薬組物の製造方法を提供する。該方法は、活性化合物と乾式圧縮に好適な少なくとも１つの希釈剤、および場合により１つまたは複数の他の賦形剤の密な粉末混合物の乾式圧縮を含むことが好ましい。
【０３９２】
いくつかの実施態様において、上記方法は直接打錠を含む。
いくつかの実施態様において、上記方法は単純な直接打錠を含む。
いくつかの実施態様において、上記方法は乾式造粒を含む。
いくつかの実施態様において、上記方法は賦形剤の湿式造粒（moist granulation）、続いてさらに造粒しながらの（extra-granularly）活性成分の添加を含む。
【０３９３】
本発明の固体剤形は、活性成分（本発明の化合物、例えば、ＬＭＴＭ）の長期の化学的および物理学的安定性を有利に示す。本発明の医薬組成物も、長期の貯蔵後にさえ、速い溶出速度を有する。
【０３９４】
本文脈において、活性成分の「実質的に安定な」形態は、製剤過程の間または製剤化された製品の貯蔵において、反応していかなる有意な程度までも酸化不純物または他の分解産物などの不純物を形成しない形態を意味する。
【０３９５】
したがって、本文脈において、例えば、２０％ｗ／ｗ未満、１５％ｗ／ｗ未満、１０％ｗ／ｗ未満の酸化不純物または他の分解産物を含む材料に言及しうる。言い換えれば、材料は、少なくとも８０％ｗ／ｗ、少なくとも８５％ｗ／ｗ、少なくとも９０％ｗ／ｗの純粋な活性成分をその元の（未反応の）形態で含む。
【０３９６】
いくつかの実施態様において、活性成分を含む材料は、例えば、２０％ｗ／ｗ未満、１５％ｗ／ｗ未満、１２％ｗ／ｗ未満、または１０％ｗ／ｗ未満のＭＴを含みうる。いくつかの実施態様において、材料は、例えば、５％ｗ／ｗ未満、３％ｗ／ｗ未満、または２％ｗ／ｗ未満のＬＡＢを含みうる。
【０３９７】
「安定な」錠剤は、本発明の関係において、温度および湿度の制御された条件下での長期の貯蔵後に実質的に安定なままである錠剤である。安定性試験は、選ばれた環境条件に直接曝露された固体剤形、または包装中に含まれた固体剤形により実施されることができる。
【０３９８】
活性成分の含有量
コーティングされていない組成物中の活性成分の量は、一般に、約１０％ｗ／ｗ超であるが、２０％ｗ／ｗ超、または３０％ｗ／ｗ超であることもできる。活性成分の量は、一般に、錠剤製剤中で約７０％ｗ／ｗ未満であり、通常、６０％ｗ／ｗ未満、または５０％ｗ／ｗ未満である。したがって、コーティングされていない錠剤コア中の活性成分の量は典型的に、約１０％（または２０％もしくは３０％）ｗ／ｗから約７０％（または６０％もしくは５０％）ｗ／ｗまでである。コーティングが組成物に適用される場合、以下に記載のとおり、組成物の総重量が増加し、したがって、組成物全体中の活性成分のパーセンテージはいくらか減少する。
【０３９９】
希釈剤
活性成分は、本質的に圧縮可能でなく、したがって、圧縮を助けるために好適な希釈剤の添加を必要とすることがある。
【０４００】
したがって、本発明の医薬組成物は、一般的に、少なくとも１５％ｗ／ｗ、より一般的には少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％または少なくとも５０％ｗ／ｗの希釈剤（単数または複数）を含む。
【０４０１】
使用されうる希釈剤としては、微結晶性セルロース、ラクトース、マンニトール、第二リン酸カルシウム、硫酸カルシウムおよび炭酸カルシウムなどのカルシウム塩、ならびにラクトース、シュークロース、デキストロースおよびマルトデキストリンなどの糖のうちの１つ以上が挙げられる。
【０４０２】
好ましい希釈剤は、微結晶性セルロース、ラクトースおよびマンニトールである。ラクトースおよびマンニトールのスプレー乾燥形態が、これらの化合物の直接打錠または乾式造粒技術のために特に好ましい形態である。
【０４０３】
本明細書に記載の活性成分、例えば、ＬＭＴＭなどの本発明の化合物が、微結晶性セルロース、スプレー乾燥されたラクトース、無水ラクトースおよびマンニトールのうちの１つまたは複数などの直接打錠用希釈剤とともに製剤化された場合、得られた固体剤形は、長期貯蔵後でさえ、活性成分が化学的に安定のままであるという意味で安定である、ということが思いがけなく見出された。
【０４０４】
したがって、本発明は、安定であり、良好な溶出プロフィール、許容可能な硬度およびチッピングに対する耐性ならびに短い崩壊時間を有する、低用量、中用量または高用量の錠剤、例えば、低用量、中用量または高用量のＬＭＴＭ錠剤の調製方法を提供する。
【０４０５】
本発明の組成物の溶出
驚くべきことに、本発明者らは、本明細書に記載の独特の固体剤形が非常に速い溶出速度を提供することを見い出した。
【０４０６】
本明細書において上記で説明したとおり、理論に束縛されることを望むことなく、活性メチルチオニニウム（ＭＴ）部分は、胃および／または上部ＧＩ管から吸収されることが好ましいかも知れないと考えられる。したがって、ロイコ（メチルチオニニウム）塩の崩壊が速くかつ溶出の速い製剤は、目的の吸収ポイントに薬剤の最大可能量を送達すると考えられるため、有益であろう。
【０４０７】
本明細書に記載の固体剤形の速い溶出速度は、それらが胃および／または上部ＧＩ管中で急速に溶出可能であり、したがって、迅速な吸収のために活性成分をそこで効果的に提供することを意味する。
【０４０８】
いくつかの実施態様において、本発明の製剤は、標準的な薬局方の方法を用いて評価された場合、３０分以内で少なくとも８０％の溶出、好ましくは、１５分以内で少なくとも８０％の溶出、より好ましくは、１０分以内で少なくとも８０％の溶出を提供する。
【０４０９】
いくつかの実施態様において、本発明の製剤は、標準的な薬局方の方法を用いて評価された場合、３０分以内で少なくとも９０％の溶出、好ましくは、１５分以内で少なくとも９０％の溶出、より好ましくは、１０分以内で少なくとも９０％の溶出を提供する。
【０４１０】
いくつかの実施態様において、本発明の製剤は、標準的な薬局方の方法を用いて評価された場合、３０分以内で少なくとも９５％の溶出、好ましくは、１５分以内で少なくとも９５％の溶出、より好ましくは、１０分以内で少なくとも９５％の溶出を提供する。
【０４１１】
溶出速度は、米国薬局方（ＵＳＰ）総則＜７１１＞に記載の標準的な薬局方の方法によって測定されることができる。現在のＵＳＰは、ＵＳＰ３４（２０１１）である。例えば、本発明の製剤に関する溶出速度は、ＵＳＰ溶出装置２（Ｐａｄｄｌｅ）に準じた装置を用いて測定されることができる。
【０４１２】
いくつかの実施態様において、上記の溶出速度は、０．１Ｍ塩酸中、約５μｇ／ｍｌの実施濃度のＬＭＴにおいて、５０ｒｐｍのパドルスピードで撹拌しながら評価される。いくつかの実施態様において、溶出速度は分光光度分析によって評価される。いくつかの実施態様において、分析は、ＵＶ／可視分光光度法（λｍａｘ  ＬＭＴ＝２５５ｎｍ）を含む。
【０４１３】
それらの驚くほど高い溶出速度の結果として、本明細書に記載の製剤化方法は、高度のバイオアベイラビリティーを有する活性化合物を提供することができる。
【０４１４】
貯蔵が「ストレス」条件下（すなわち、高い温度および湿度）であっても、長期の貯蔵後に早い溶出速度が維持される。本発明の方法によって製剤化された組成物の早い溶出速度、したがって、良好なバイオアベイラビリティーは、製剤自体の多様性に対しても耐性が高い。
【０４１５】
他の成分
医薬組成物は、一般に、滑沢剤も含むであろう。滑沢剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリルフマル酸ナトリウム、ステアリン酸、グリセリルベハプテート（ｇｌｙｃｅｒｙｌｂｅｈａｐｔａｔｅ）、ポリエチレングリコール、エチレンオキシドポリマー（例えば、登録商標ＣａｒｂｏｗａｘのもとにＵｎｉｏｎ  Ｃａｒｂｉｄｅ，Ｉｎｃ．，Ｄａｎｂｕｒｙ，  ＣＴから入手可能なもの）、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウムとラウリル硫酸ナトリウムの混合物、および水素化植物油が挙げられる。好ましい滑沢剤としては、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウムおよびステアリルフマル酸ナトリウムが挙げられる。滑沢剤として最も好ましいのは、ステアリン酸マグネシウムである。滑沢剤は一般に、総（コーティングされていない）錠剤重量の約０．５〜約５．０％を構成する。使用される滑沢剤の量は、一般に、約１．０〜約２．０％、好ましくは０．５〜２．０％ｗ／ｗである。
【０４１６】
希釈剤（単数または複数）および滑沢剤（単数または複数）に加えて、他の慣用の賦形剤も本発明の医薬組成物中に存在してよい。かかる追加の賦形剤としては、崩壊剤、結合剤、風味剤、着色剤および流動促進剤が挙げられる。いくつかの賦形剤は、結合剤と錠剤崩壊剤の両方としてなどの、複数の機能を果たすことができる。
【０４１７】
錠剤崩壊剤は、迅速な溶出を達成するために必要な量で存在することができる。崩壊剤は、剤形が水性環境中におかれた場合、錠剤またはカプセル中の粒子結合の物理的力に対抗する。崩壊剤の例としては、架橋ポリビニルピロリドン（クロスポビドン）、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロースナトリウム）、およびアルファ化デンプンが挙げられる。一般に、崩壊剤の量は、組成物の０〜約２５％ｗ／ｗ、より一般的には、約１％〜約１５％ｗ／ｗ、かつ、通常は１０％未満または５％ｗ／ｗ未満である。
【０４１８】
結合剤は、固体製剤中の粒子の接着に寄与する賦形剤である。結合剤の例としては、セルロース誘導体（カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルセルロース、微結晶性セルロース）ならびにラクトース、シュークロース、デキストロース、グルコース、マルトデキストリンなどの糖、ならびにマンニトール、キシリトール、ポリメタクリレート、ポリビニルピロリドン、ソルビトール、アルファ化デンプン、アルギン酸およびアルギン酸ナトリウムなどのその塩、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ポリエチレングリコール、カラギーナンなどが挙げられる。一般に、結合剤の量は、組成物の０％〜９５％ｗ／ｗなど、大きく変化しうる。上記のとおり、賦形剤は、複数の機能を果たす。例えば、打錠用希釈剤も結合剤としての役割を果たす。
【０４１９】
流動促進剤は、その流動性を改善するために粉末に添加される物質である。流動促進剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム、（Ａｅｒｏｓｉｌとして販売されるグレードなどの）コロイド状二酸化ケイ素、デンプンおよびタルクが挙げられる。流動促進剤は、０〜約５％ｗ／ｗのレベルで医薬組成物中に存在することができる。しかしながら、ここでも、賦形剤は複数の機能を果たしうることに注意すべきである。例えばステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤は、流動促進剤としても機能することができる。
【０４２０】
本発明の医薬組成物中に組み込まれることのできる着色剤の例としては、二酸化チタンおよび／またはＦＤ＆Ｃ染料として知られるものなどの食品に適した染料及び天然の着色剤が挙げられる。着色剤は、本発明の第二の態様によって圧縮された粉末混合物中で用いられることはなさそうだが、以下に記載するように、組成物に適用されるコーティングの一部を形成することができ、その場合、着色剤は約２．０％ｗ／ｗ以下の量でフィルムコーティング中に存在することができる。
【０４２１】
錠剤は慣用のフィルムコーティングで被覆されることがのぞましく、該コーティングは、最終製品に堅牢性、飲み込み易さおよび優美な外観を与える。多くのポリマーフィルムコーティング材料が本分野で知られている。好ましいフィルムコーティング材料は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）または部分的に加水分解されたポリビニルアルコール（ＰＶＡ）（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌ  ａｌｃｏｈｏｌ−ｐａｒｔ  ｈｙｄｒｏｌｙｓｅｄ）である。ＨＰＭＣおよびＰＶＡは、コーティング助剤として働く賦形剤を含む登録商標Ｏｐａｄｒｙのコーティング製剤中で、Ｃｏｌｏｒｃｏｎなどから購入可能である。Ｏｐａｄｒｙ製剤は、タルク、ポリデキストロース、トリアセチン、ポリエチレングリコール、ポリソルベート８０、二酸化チタンおよび１つ以上の染料またはレーキを含みうる。ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドンおよび酢酸ポリビニルなどのビニルコポリマーならびにアクリル酸−メタクリル酸コポリマーを含む他の好適なフィルム形成性ポリマーも使用されてよい。フィルムコーティングの使用は、取扱いの容易さのために有益であり、それは、青色のコーティングされていないコアは、飲み込む間に口の内側を染めてしまうかも知れないからである。コーティングは、剤形の光安定性も改善する。
【０４２２】
錠剤のコーティングは、慣用のコーティングパンを用いて都合よく実施されることができる。該方法の好ましい実施態様において、コーティングパンは加熱された流入空気を用いて排気温度が３５〜５５℃、より好ましくは４０〜５０℃に達するまで予熱される。これは、典型的に、４５〜７５℃、好ましくは５０〜６５℃の入り口温度の加熱された流入空気の１０〜１５分間の適用を必要としうる。その後、活性成分（例えば、ＬＭＴＭ）を含む錠剤コアがコーティングパンに加えられ、水性のフィルムコートが適用される。噴霧速度は、所望の重量増加（コーティング重量）が達成されるまで、床温が３８〜４８℃、より好ましくは４２〜４４℃に維持されるように制御される。
【０４２３】
乾式圧縮法
本明細書中で使用される「乾式圧縮」は、熱または水分の使用を含まない、圧縮技術を意味する。乾式圧縮は、好適な希釈剤との活性成分の直接打錠を含むか、またはそれは、乾式造粒（例えば、スラッギング／二重圧縮法またはローラー圧縮）を含んでよい。
【０４２４】
直接打錠は、活性成分と直接打錠に好適な希釈剤との単純な直接打錠を含むことができる。或いは、その後に乾燥した活性成分（および場合によりさらなる乾燥賦形剤）とともに直接打錠されることのできる、乾燥した顆粒状賦形剤混合物を生成するための、賦形剤の造粒、例えば、湿式造粒を含むこともできる。
【０４２５】
したがって、いくつかの実施態様において、本発明の固体剤形は、単純な直接打錠を含む製造方法において生成されることができる。この実施態様において、錠剤成分、すなわち、活性成分（例えば、ＬＭＴＭ）、希釈剤（単数または複数）および他の任意の賦形剤が、タンブリングブレンダー中などで一緒に固体微粒子形態に混合されて、密な混合物を作り出し、次いで、打錠機を用いて圧縮される。
【０４２６】
他の実施態様において、組成物は乾式造粒法により調製される。乾式造粒は、造粒液を使用しない造粒方法を意味する。材料が乾式造粒されるためには、その成分の少なくとも１つ、活性成分または希釈剤のいずれかが、凝集特性を有さなければならない。乾式造粒は、「スラッギング」として知られる方法によって実施されることができる。「スラッギング」において、造粒される材料は、最初、典型的に大きな平面的工作機械設備（flat-faced tooling）を備えた打錠機（米国特許第４，８８０，３７３号にリニアプレスの一例が図示されている）を用いて大きな圧縮された塊または「スラッグ」とされる。圧縮される材料からの空気の脱出に十分な時間を可能とすることにより、かなり密度の高いスラッグが形成されることができる。圧縮されたスラッグはその後、粉砕ミル（comminuting mill）などにより、手動または自動的に所望のメッシュスクリーンを通して粉砕される。「スラッギング」による顆粒の形成も、先行圧縮として知られている。錠剤が造粒されたスラッグ化材料（granulated slugged material）から作られる場合、この方法は、「二重圧縮法（double compression method）」と呼ばれる。
【０４２７】
乾式造粒は、「ローラー圧縮機」を用いて実施されることもできる。ローラー圧縮機においては、材料粒子は、２つの高圧ローラーの間を通過することによって圧密化され、圧縮される。ローラー圧縮機からの圧縮された材料はその後、粉砕によって均一な粒径に縮小される。その後、均一な顆粒は、(例えばロータリー打錠機によって)材料を打錠するために滑沢剤などの他の物質と混合されることができる。医薬用途に加えて、食品産業、動物飼料産業および肥料産業などの他の産業においてローラー圧縮が使用される。
【０４２８】
今日、乾式造粒は、一般にローラー圧縮またはスラッギングを意味すると理解され、本分野の当業者に周知である（例えば、Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets (Leiberman, Lachman, andSchwartz (Eds); Marcel Dekker, Inc, 2nd Edition, 1989) andRemington's Pharmaceutical Sciences (A.R. Gennaro (Ed); Mack Publishing Co,Easton, PA 18th edition, 1990)を参照のこと）。
【０４２９】
本発明のさらなる実施態様において、錠剤は、賦形剤の湿式造粒およびさらに造粒しながらのＭＴＣの取り込みにより調製される。典型的に、かかる方法は、場合によりポリビニルピロリドンなどの結合剤を添加したラクトースおよび／または微結晶性セルロースと水などの湿式塊状化（wet massing）希釈剤を含む。湿った塊は、乾燥され、次いでメッシュを通されて顆粒を形成する。活性成分および滑沢剤などの任意の残りの賦形剤は、その後、乾燥した顆粒と混合され、圧縮されて錠剤を形成する。
【０４３０】
本発明の組成物における酸の使用
ＬＭＴＭなどの本発明の化合物を包含するロイコ（メチルチオニニウム）化合物を含む組成物は、いくつかの実施態様において、製剤化前に好適な量のある種の酸をバルク物質（bulk substance）に添加することによって安定化されることができる。製剤中および製品の有効期限中ずっと、さらなるＭＴの形成を防止し、それによって規制上の承認を得るとともにこん包における関連コストを削減する目的で安定な医薬組成物を提供するために、これらの酸は使用されることができる。
【０４３１】
したがって、本発明によれば、本明細書に記載の活性成分および医薬として許容可能な担体を含む医薬組成物であって、該製剤がＭＴの形成を防止するための十分量の酸をさらに含むことを特徴とする、医薬組成物も提供される。理論に束縛されることを望むことなく、１．５超のｐＫ１を有する酸が好ましいと考えられる。いくつかの実施態様において、酸は５％から２５％ｗ／ｗまでの量で存在する。
【０４３２】
好ましくは、組成物は上記の乾式圧縮法によって調製される。
【０４３３】
本発明の目的のために好ましい酸は、マレイン酸（ｐＫ１  １．９）、リン酸（ｐＫ１  ２．１２）、アスコルビン酸（ｐＫ１  ４．１７）、ソルビン酸（ｐＫ１  ４．７６）、アスパラギン酸およびシアル酸である。添加された酸の安定化作用は、適切な担体を選ぶことによって亢進されることができる。担体は、マンニトール、セルロース系材料、もしくはデンプン、またはそれらの混合物であることが好ましい。典型的に、担体は、製剤の少なくとも４０％ｗ／ｗの量で存在する。
【０４３４】
粒径
乾燥粉末混合物についての適切な粒径範囲、典型的に、粒子の１０％超が１０ミクロンより大きなサイズを有する、を選ぶことによっても、ＭＴ形成の顕著な減少が達成可能であることが見出された。したがって、本発明の別の態様によれば、本明細書に記載の活性成分および医薬として許容可能な担体を含む医薬組成物であって、該組成物が、その１０％超が１０ミクロンより大きなサイズを有する粒子を含むことをさらに特徴とする医薬組成物が提供される。
【０４３５】
担体
適切な担体の選択、特に、水の侵入を嫌う粒子形状を有するものによっても、ＭＴ形成の顕著な減少が達成可能であることが見出された。例えば、無孔性の表面を有する滑らかで平たい形状の長い層状構造の粒子である、Ｅｌｃｅｍａ  ＴＭは、水のアクセスを制限することによってＭＴ形成を減少させるようである。この目的のためには、エチルセルロース、マンニトールおよびＳｔａｒｃｈ  １５００  ＴＭおよび微結晶性セルロースも特に好適である。
【０４３６】
したがって、本発明の別の態様によれば、ロイコ（メチルチオニニウム）化合物、例えば、ＬＭＴＭなどの本発明の化合物、および医薬として許容可能な担体を含む医薬組成物であって、該担体がＥｌｃｅｍａ  ＴＭ、エチルセルロース、マンニトール、またはＳｔａｒｃｈ  １５００  ＴＭであることを特徴とする、医薬組成物が提供される。
【０４３７】
カプセル化
本発明による安定化された乾燥粉末混合物は、例えば、（製剤例１〜４に記載される手段などによって造粒された粉末に先に変換されるか、またはされずに）錠剤に圧縮されるかまたはカプセル中に充填されて、非常に優れた貯蔵寿命を有する医薬組成物を生じる。
【０４３８】
本発明によるカプセルは、典型的にゼラチン、好ましくはＨＰＭＣ製である。好ましい賦形剤として、ラクトース、デンプン、セルロース、乳糖および高分子量ポリエチレングリコールが挙げられる。
【０４３９】
結論
上記方法によって調製された医薬組成物および製剤は、製造完了直後、慣用の水性造粒法を用いて生成された製剤よりも安定である。さらに、それらは、貯蔵における亢進された安定性を示すことができる。
【０４４０】
例えば、こうして調製された、含有量が１０〜５０重量％のＬＭＴＭ、好ましくは１５％〜４０重量％のＬＭＴＭを含む医薬組成物は、標準的な安定性試験、例えば、長期の加速化安定性試験において、２５℃の温度および６０±５％の相対湿度で、２４ヶ月以内のＬ  Ａｚｕｒｅ  Ｂの増加は、ＬＭＴＭピーク面積に対して２％を超えない。
【０４４１】
加工処理中および貯蔵において、ＬＭＴＭなどのロイコ（メチルチオニニウム）化合物は、酸化して少量のＭＴを生成しうる（上記スキームを参照のこと）。
【０４４２】
本発明のロイコ製剤中の比較的低濃度（例えば、１２％未満）のＭＴは、望ましいものではないが、ＬＭＴＭおよび様々な他のロイコ塩からの荷電した形態または酸化形として体に提供されたとしても、これはその後、吸収される前に非荷電の（還元された）ＭＴ形に還元されることができるため、それ自体が有害な臨床的意義を有するとは考えられない。混合および打錠などの加工処理の間に形成された少量のＭＴに加えて、本発明のロイコ−メチルチオニニウム塩は、特に水分の存在下において、錠剤内に存在する賦形剤に吸収された酸素と反応して、より多くのＭＴを生じうる。
【０４４３】
本発明の製剤の１つの利益は、錠剤中に形成されるＭＴの量を、例えば、２５℃、６０％の相対湿度において貯蔵された場合、２年間にわたって、１２％未満まで、最小化することである。これは、錠剤の加工処理および貯蔵の両方の間に形成されたＭＴの蓄積量を意味し：一般に、本発明の製剤化方法が、加工処理の間の５％未満のＭＴ形成をもたらし；その後、最大約５〜７％のＭＴが完成したパックの貯蔵の間に形成されることを意味する。これは、少なくとも２４ヶ月の貯蔵寿命を提供する。
【０４４４】
これは、以下の製剤例において実証される。
【０４４５】
用量
上記化合物、および上記化合物を含む組成物の適切な用量は患者によって変化しうることは当業者には理解されるであろう。最適用量の決定は一般に、任意の危険性または有害な副作用に対する治療効果のレベルの釣り合わせを必然的に伴うであろう。選択される用量レベルは、特定化合物の活性、投与経路、投与時間、化合物の排泄率、処置期間、併用される他の薬物、化合物および／または材料、状態の重症度、ならびに患者の種、性別、年齢、体重、状態、一般的な健康、および前病歴を含むがそれに限定されない様々な因子に依存するであろう。一般に、用量は実質的に有害（harmful）または有害（deleterious）な副作用をもたらさずに所望の効果を達成する作用部位における局所濃度を達成するよう選択されるであろうが、化合物の量および投与経路は、最終的には医師、獣医師または臨床医の裁量によるであろう。
【０４４６】
投与は、処置の過程全体を通じて、単一用量で連続的に、または断続的に（例えば適切な間隔を空けて分割用量で）行うことができる。投与の最も有効な手段および用量を決定する方法は、当業者に周知であり、治療に使用される製剤、治療の目的、処置される標的細胞、および処置される対象により変化するであろう。処置を行う医師、獣医師または臨床医により選択される用量レベルおよびパターンを用いて、単回または複数回投与が実施されることができる。
【０４４７】
一般に、上記化合物の好適な用量は、１日あたり、対象の体重１キログラムあたり約１００ｎｇ〜２５ｍｇ（より典型的には、約１μｇ〜約１０ｍｇ）である。
【０４４８】
いくつかの実施態様において、上記化合物は、以下の投与計画に従ってヒト患者に投与される：約１００ｍｇ、１日３回。
【０４４９】
いくつかの実施態様において、上記化合物は、以下の投与計画に従ってヒト患者に投与される：約１５０ｍｇ、１日２回。
【０４５０】
いくつかの実施態様において、上記化合物は、以下の投与計画に従ってヒト患者に投与される：約２００ｍｇ、１日２回。
【実施例】
【０４５１】
以下の実施例は、本発明を例解するためにのみ提供され、その範囲を限定することを意図しない。
【０４５２】
実施例１−合成および特徴づけ
１０−アセチル−Ｎ,Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルフェノチアジン−３，７−ジアミンの実験室合成
【０４５３】
【化３７】
0005898701.tif 000046
【０４５４】
３，７−ジニトロ−１０Ｈ−フェノチアジンの合成（２）
温度計、滴下漏斗および凝縮器を備えた１リッターの三つ首丸底フラスコ（ＲＢＦ）に、フェノチアジン（分子量１９９，２８ｇ／モル、２５．００ｇ、１２５．５ミリモル）およびジメチルスルホキシド（２５０ｍｌ）を添加し、２分間またはフェノチアジンが溶解するまで混合物を撹拌した。次いで、水を半分満たしたドレッシェルボトル（Dreschel bottle）に凝縮器を連結した。亜硝酸ナトリウム（分子量６９．００ｇ／モル、５１．９４ｇ、７５２．７ミリモル）をＲＢＦに添加し、酢酸（１５０ｍｌ）を滴下漏斗に添加した。次いで、２０分間にわたって酢酸をＲＢＦに滴加した。明るい黄色のスラリーが赤い色になり、溶液から固体が沈殿した。酢酸の添加が完了後、周囲温度（３６〜２０℃）において混合物を２時間撹拌し、その後、温度を９５℃まで上昇させ、１７時間撹拌した。この後、混合物を５０℃まで冷却し、メタノール（１００ｍｌ）を添加し、混合物をさらに２２℃まで冷却した。次いで、冷却された混合物を濾過し、ケーク（cake）をメタノール（３×２５ｍｌ）で洗浄した。真空を適用しながら洗浄されたケークをフィルター上に３０分間放置し、その後、５０℃において１５時間乾燥させて、茶色固体として生成物を生じた。（分子量２８９．２７ｇ／モル、２９．４５ｇ、８１％）。
【０４５５】
備考
１．酢酸の添加は、ＮＯｘガスを生じさせ、これは水を半分満たしたドレッシェルボトル中でこのガスを泡立てることによって、硝酸に変換させた。
２．酢酸の添加は、発熱性であり、混合物は２２℃から３６℃まで上昇した。
３．任意の酢酸ナトリウムの溶解を助けるため、および生成物の収率を最大化するための反溶媒（anti solvent）として、メタノールを添加した。
４．ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、アセトンまたはジメトキシエタン（ＤＭＥ）を反応溶媒として用いても、合成は成功した。
【０４５６】
ＮＭＲ：生成物（５ｍｇ）をＤＭＳＯ−ｄ６（１．５ｍｌ）に溶解し、完全に固体を溶解させるために温める必要があるかもしれない。
【０４５７】
【数１】
0005898701.tif 000047
【０４５８】
３，７−ジニトロ−１０−アセチルフェノチアジンの合成（３）
温度計および凝縮器を備えた５００ｍｌの三つ首丸底フラスコに、３，７−ジニトロ−１０Ｈ−フェノチアジン（分子量２８９．２７ｇ／モル、２９．００ｇ、１００ミリモル）、ジメチルホルムアミド（５８ｍｌ）、無水酢酸（分子量１０２．０９ｇ／モル、１０２．０９ｇ、１０００ミリモル）およびトリエチルアミン（分子量１０１．１９ｇ／モル、４０．８８ｇ、４０１ミリモル）を添加した。混合物を１０５℃まで加熱し、この温度において３時間撹拌した。混合物を周囲温度（２１℃）まで冷却し、その後、５℃まで冷却するまで１時間撹拌した。生成物を濾過により単離し、メタノール（３×３０ｍｌ）で洗浄して、明るい黄色の結晶固体を生じさせ、これを５０℃において１５時間乾燥した（分子量３３１．３１ｇ／モル、２６．９４ｇ、８１％）。
【０４５９】
備考
１．生成物の結晶は、反応の間、１０５℃において約１時間後に形成する。
２．冷却後、生成物のバルクが約７０℃において沈殿する。
３．生成物は、メタノールで洗浄する前はオレンジ色であった。
【０４６０】
ＮＭＲ：生成物（１０ｍｇ）をＤＭＳＯ−ｄ６（１．５ｍｌ）に溶解した。
【０４６１】
【数２】
0005898701.tif 000048
【０４６２】
１０−アセチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルフェノチアジン−３，７−ジアミンの合成（５）
温度計および凝縮器を備えた１００ｍｌの三つ首丸底フラスコに、３，７−ジニトロ−１０−アセチルフェノチアジン（分子量３３１．３１ｇ／モル、５ｇ、１５．０９ミリモル）、パラジウム炭素（１０％、乾燥、０．５ｇ）および２−メチルテトラヒドロフラン（２５ｍｌ）を添加した。混合物を５６℃まで加熱する前に、フラスコを排気し、水素で５回パージした。１７時間後、還元が完了して化合物４を生じたことを判定し（ｔｌｃ条件を参照のこと）、ホルマリンを添加した（分子量３０．０３ｇ／モル、１４．７ｇ、１８１．１ミリモル）。フラスコをもう一度排気し、水素で５回パージした。ホルマリン添加から７１時間後（総時間８８時間）、５６℃においてｔｌｃによってテトラ−メチル化の完了を判定した。混合物を５０℃において濾過し、灰色の触媒を２−メチルテトラヒドロフランで洗浄し（３×５ｍｌ）、濾液および洗液を併合した。混合物を均一化するために、この溶液にメタノール（５ｍｌ）を添加した。５℃まで冷却すると、無色の固体が溶液から沈殿した。さらに２容のメタノール（１０ｍｌ）を添加し、スラリーを５℃において５０分間撹拌した。粗生成物を濾過によって単離して、無色の固体を生じさせ、これをメタノールで洗浄し（３×５ｍｌ）、５０℃において１６時間乾燥した（分子量３２７．４５ｇ／モル、２．２６ｇ、４６％）。単離過程からの濾液に水（５０ｍｌ）を添加すると、さらに固体が生じた。懸濁液を５℃において２時間撹拌し、その後、濾過によって集めメタノールで洗浄し（３×５ｍｌ）そして５０℃において１３時間乾燥した（分子量３２７．４５ｇ／モル、０．８３ｇ、１７％）。生成物の総収量は（３．０９ｇ、６３％）であった。
【０４６３】
備考
１．順相ｔｌｃ条件、溶出液７５％酢酸エチル、２５％石油精（４０〜６０℃）、および２５４ｎｍのＵＶランプ。
２．ジニトロ出発材料の保持因子は、黄色のスポットとしての０．６８であり、水素化生成物の保持因子は、青のスポットとしての０．２５であり、メチル化生成物の保持因子は、明るい青のスポットとしての０．６７である。
３．水素化ステップのｔｌｃ分析のための方法は、直接スポッティングであったが、メチル化生成物の分析は、反応アリコートに添加した水を含み、これを酢酸エチルで抽出してスポットした。
４．１７時間後、ｔｌｃは２つのスポットを示し、主要スポットは還元生成物であり、微量スポットは未知である。
５．８８時間後、ｔｌｃは主要スポットとしてテトラ−メチル化生成物を主に示した。
６．典型的に、還元およびメチル化は７２時間以内に完了するであろう。
７．２つのサンプルの１Ｈ  ＮＭＲ分光分析は、同一のスペクトルを生じ、微量の２−メチルテトラヒドロフランを５ｐｐｍにおける未知のシグナルとともに検出した。
【０４６４】
ＮＭＲ：生成物（１０ｍｇ）をＣＤＣｌ３（１．５ｍｌ）に溶解した。
【０４６５】
【数３】
0005898701.tif 000049
【０４６６】
１０−アセチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルフェノチアジン−３，７−ジアミンの代替合成（５）
５０ｍｌの丸底フラスコに、３，７−ジニトロ−１０Ｈ−アセチルフェノチアジン（分子量３３１．３１ｇ／モル、１ｇ、３．０２ミリモル）、亜鉛末（分子量６５．３９ｇ／モル、１．３８ｇ、２１．１３ミリモル）、メタノール（６ｍｌ）およびテトラヒドロフラン（２ｍｌ）を添加した。混合物を５０℃まで加熱し、その後、水性塩化アンモニウム（６ｍｌの水に溶解した、分子量５３．４９ｇ／モル、２．２６ｇ、４２．２６ミリモル）の温溶液（４５〜５０℃）をゆっくりと添加して穏やかな還流を維持した。次いで、混合物を７０℃まで加熱し、この温度で２時間撹拌し、その後、周囲温度（２３℃）まで冷却した。冷却した混合物を濾過して亜鉛塩を除去し、化合物４を含有する濾液をパラホルムアルデヒド（分子量３０．０３ｇ／モル、１．０９ｇ、３６．２２ミリモル）、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（分子量６２．８４ｇ／モル、１．１４ｇ、１８．１１ミリモル）および酢酸（２ｍｌ）で処理した。混合物を５０℃まで加熱し、この温度で３時間撹拌した。周囲温度（２３℃）まで冷却後、水（２×１０ｍｌ）を添加し、無色のスラリーを１６時間撹拌した。次いで、固体を濾過により集め、メタノール（３×２ｍｌ）で洗浄して、表題化合物（分子量３２７．４５ｇ／モル、０．９１ｇ、９２％）をオフホワイトの固体として生じさせた。
【０４６７】
備考
１．亜鉛および水性塩化アンモニウムを用いる還元反応は、速くかつクリーンで、完了に至るまでわずか２時間しかかからず、ｔｌｃ分析によって他のスポットは記録されなかった。
２．シアノ水素化ホウ素ナトリウム、パラホルムアルデヒドおよび酢酸を用いる還元的メチル化は、速くかつクリーンで、完了に至るまでわずか３時間しかかからなかった。
【０４６８】
ＮＭＲ：生成物（１０ｍｇ）をＣＤＣｌ３（１．５ｍｌ）に溶解した。
【０４６９】
【数４】
0005898701.tif 000050
【０４７０】
合成１：Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミニウムビス（メタンスルホネート）（ＬＭＴ．２ＭｓＯＨ）の合成
【０４７１】
【化３８】
0005898701.tif 000051
【０４７２】
１０−アセチル−Ｎ,Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミン（ＡｃＭＴ）（１５０ｇ）を三つ首の丸底フラスコに添加した。トルエン（１．８ｌ）を添加し、混合物を還流温度まで３０分間加熱した。５μのインラインフィルターを通過させて、蒸留装置１を備えたジャケット付き容器に入れる前に、溶液を７０℃まで放冷した。トルエン（１５０ｍｌ）を丸底フラスコに添加した。移送ラインおよびフィルターをすすぐためにこれを使用した。減圧下２でおよそ１．４ｌのトルエンを留去した。水（４２ｍｌ）を添加する３前に、温度を１８℃まで低下させた。この後、メタンスルホン酸（ＭＳＡ）（６５．５ｍｌ、９９％。２．２当量）を５分間にわたって４添加した。２回目の水（１８ｍｌ）を添加した。混合物を８５℃まで３時間加熱し、この時までにｔｌｃ分析によって反応が完了したことを判定した。無水ＥｔＯＨ（１５０ｍｌ）を２０分間にわたって添加する５前に、この二相性溶液を５０℃まで放冷した。１５０ｍｇのＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミニウムビス（メタンスルホネート）を用いて、混合物にシーディングした６−８。２回目のＥｔＯＨ（６００ｍｌ）を９０分間にわたって添加し９、反応を１時間にわたって２０℃まで放冷した１０。固体を濾過により集める前に、それをこの温度で１時間撹拌した。ケークを３×３００ｍｌのＭｅＣＮで洗浄し１１、乾燥するまで５分間吸引し、一夜、真空下に置いて、黄色の結晶性固体として生成物を生じさせた（収率８５〜９０％）。
【０４７３】
【数５】
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【０４７４】
備考
１．還流温度までの加熱は、５μフィルターを通る移送のためのＡｃＭＴの完全な溶解を確実にする。トルエンは、良好な溶媒であり、７０℃を標的とすることは、材料が溶液中に留まることを確実にすることとプラスチック製の移送ホースとフィルターへの損傷の可能性を最小化することとの間の折衷案である。
２．５００ｍｌの残りのトルエンは、反応体積が反応容器の最小撹拌深度を満たすことを確実にする。
３．生成物が自由流動性の沈殿として結晶化することを確実にするために、水の体積を制御した。反応のシーディングは、水の体積の小さな変動の影響を低下させる。
４．加水分解を実行し、十分量の過剰の酸（０．２当量）を残しつつ塩を形成して、溶液中での生成物の安定性を確実にするために、２．２当量のＭＳＡを使用する。ＭＳＡの添加は、わずかな発熱を引き起こし、したがって添加時間は５分間である。
５．ＥｔＯＨは、生成物を沈殿させるための対抗溶媒（counter solvent）として使用する。シードが溶解しないことを確実にするために、一部をシードの前に添加する。添加時間の延長は、生成物の制御された結晶化を確実にする（備考７および８を参照のこと）。
６．シードを使用せずに反応を実施することが可能であるが、その取り込みは、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨの早期の沈殿を確実にし、これは次に（潜在的な遺伝毒性副生成物であるアルコールエステルＥＭＳ−合成過程においては検出されない、などの）副生成物の形成およびＥｔＯＨの封入（inclusion）を防止する。
７．シードは、生成物の粒径を制御する手段としても有用である。乳鉢と乳棒で１００μｍ未満まですり潰されたシード材料を使用した場合、生成物の平均粒径の顕著な低下が観察される。すり潰されていない１００μ未満のシードを使用した場合、そのような効果は観察されなかった。したがって、理論に束縛されることを望むことなく、粒径を制御するシードの能力は、シードの粒径の関数ではなく、本来のまたはシードの破砕が露出させた「新しい」結晶面の比率に連係しているとみられる。
８．最後に、シード材料が比較的大きくかつ破砕されていなかった場合、かなりの量の生成物（薄い膜）が、ＥｔＯＨ添加の間に反応容器の側面に付着しうる。これは、ＥｔＯＨ添加後に加熱／冷却サイクルをプロセスに導入することによって低減することができる。しかしながら、破砕されたシードの利用の予想外のおまけは、ＥｔＯＨ添加後に存在する薄い膜の物質（skinned material）のレベルを約９０％減少させることであった。したがって、加熱／冷却サイクルを実施することはもはや必要なかった。これは、新たな表面よりも小さなシードサイズに連係していると見られ、それは、１００μ未満の未破砕のシードを用いて反応を実施した場合に、同様の被覆の減少が観察されたからである。
９．ＥｔＯＨ添加の速度は、粒径およびＥｔＯＨの封入に効果がある。急速な添加（１時間未満）は、粒径を減少させるが、ＥｔＯＨ封入は増加する。遅い添加（２時間）は、反対の効果を有し、したがって、釣り合いをとらなければならない。
１０．冷却速度は、同様であるがより低い効果を有する。迅速な冷却（１時間未満）は、粒径の減少と付随するＥｔＯＨレベルの増加をもたらす。遅い冷却は、反対の効果を有する。
１１．ＥｔＯＨは、関連物質の除去においてＭｅＣＮと等しく有効であるが、その使用は、保持されるＥｔＯＨのレベルのわずかな増加を伴う。
【０４７５】
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミニウムビス（メタンスルホネート）（ＬＭＴ．２ＭｓＯＨ）の特徴づけ
元素分析（微量分析）
分析は、炭素、窒素、水素および硫黄に関する理論値と分析値の間の良好な相関関係を有する。
【０４７６】
【表６】
0005898701.tif 000053
【０４７７】
１Ｈ−核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを、重水素化メタノールＣＤ３ＯＤ中、Ｖａｒｉａｎ  ６００  ＭＨｚ装置において得て、図１に示す。
【０４７８】
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルの帰属は以下のとおりである：
【０４７９】
【化３９】
0005898701.tif 000054
【０４８０】
【表７】
0005898701.tif 000055
【０４８１】
１３Ｃ−核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法
１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルを、重水素化メタノールＣＤ３ＯＤ中、Ｖａｒｉａｎ  ４００  ＭＨｚ  ＮＭＲ装置において１００．５６ＭＨｚの周波数で得て、図２に示す。
【０４８２】
１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルの最初の帰属は、既知の化学シフトのチャートとの相関に基づいた（参考文献:Structure Determination ofOrganic Compounds: Tables of Spectral Data, Pretsch E., et al. Springer,London, p122）。
【０４８３】
さらなる帰属は、帰属を明確に確認するために、ＤＥＰＴ−１３５、ＨＳＱＣおよびＨＭＢＣ実験を利用した。ＤＥＰＴ−１３５（Ｄｉｓｔｏｒｔｉｏｎｌｅｓｓ  Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｂｙ  Ｐｏｌａｒｉｓａｔｉｏｎ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ）、ＨＳＱＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ）およびＨＭＢＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｂｏｎｄ  Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ）スペクトルを、Ｖａｒｉａｎ  ４００  ＭＨｚ  ＮＭＲ装置において１００．５６MHｚの周波数で得た（図３〜５を参照のこと）。
【０４８４】
【表８】
0005898701.tif 000056
【０４８５】
赤外分光法（ＩＲ）
サンプルを徹底的に混合し、２００ｍｇの無水ＫＢｒとともに乳鉢と乳棒ですり潰した。次いで、１５００ｐｓｉの圧力でダイを用い、この混合物を円盤状に圧縮した。次いで、Ｎｉｃｏｌｅｔ  Ａｖａｔａｒ  ３２０  ＦＴ−ＩＲ分光計においてＩＲスペクトルを得た。スペクトルを図６に示す。
【０４８６】
【表９】
0005898701.tif 000057
【０４８７】
質量分析（ＭＳ）
Ｗａｔｅｒｓ，  ＬＣＴ  Ｐｒｅｍｉｅｒ  ＸＥ質量分光計を用いて質量分光分析を実施した。１ｍｌ／時間の流速を採用した。活性成分の分析に使用した供給源は、陽性モードの電子衝突電離であった。メタンスルホネート対イオンの分析に使用した供給源は、陽性モードのエレクトロスプレーイオン化であった。
【０４８８】
電子衝突電離を用いて、主要ピークは２８５において観察される（図７を参照のこと）。これは、分子イオンＣ１６Ｈ１９Ｎ３Ｓに相当する。測定された実際の質量と理論値の比較を以下に提供する：
【０４８９】
【表１０】
0005898701.tif 000058
【０４９０】
測定した正確な質量は、Ｃ１６Ｈ１９Ｎ３Ｓについての計算した質量とよく一致した。
【０４９１】
エレクトロスプレーイオン化を用いて、主要ピークは９５において観察される（図８を参照のこと）。これは、対イオンＣＨ３Ｏ３Ｓの分子イオンに相当する。
【０４９２】
【表１１】
0005898701.tif 000059
【０４９３】
紫外−可視分光法（ＵＶ−Ｖｉｓ）
５ｍｇのサンプルを脱イオン水に溶解し、メモリ付フラスコ中で合計１００ｍｌとした。Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌａｍｂｄａ  ２５  ＵＶ／Ｖｉｓ分光計において、水晶キュベットを用いて分析を実施した。ＵＶ−Ｖｉｓスペクトルを図９に示す。
【０４９４】
【表１２】
0005898701.tif 000060
【０４９５】
２５５におけるλｍａｘについての減衰係数εは、３４２５４．６４であった。これは、以下のランベルト・ベールの法則にしたがって計算した：
【０４９６】
【数６】
0005898701.tif 000061
【０４９７】
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
１００ｍｇのサンプルをＨＰＬＣ分析のために提出した。以下の表にまとめた方法に従って、同一性についてＶＷＤ  ＤｅｔｅｃｔｏｒまたはＰＤＡを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １２００シリーズにおいて分析を実施した。
【０４９８】
【表１３】
0005898701.tif 000062
【０４９９】
ＨＰＬＣトレースを図１０に示す。有機物純度は、９９．４５％ｗ／ｗであると確認した。
【０５００】
【表１４】
0005898701.tif 000063
【０５０１】
結晶形態
上記方法において、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨは、結晶形態で生成する。ＬＭＴ．２ＭｓＯＨの結晶形態を、図１１に示すＸ線粉末回折スペクトルによって図示する。ＸＲＰＤは、高度な結晶秩序の指標である鋭いシグナルを示す。相対ピーク強度の変化が観察され、これは、粒径の相違とともに配向効果に起因しうる。相対ピーク強度のわずかな変化（５０％未満）のみが、サンプルの厚さの関数として観察される（０．１ｍｍ対１．０ｍｍ）。
【０５０２】
結晶形態は、ＦＴ−ラマン、熱重量（ＴＧ）、示差走査熱量（ＤＳＣ）、動的水蒸気吸着（ＤＶＳ）分析、および顕微鏡検査によってさらに特徴づけされる（図１２〜１６）。この形態は、都合よく「Ａ形態」と呼ばれることができる。
【０５０３】
単結晶Ｘ線分析のための結晶を、エタノール、メタンスルホン酸および水から得た。図１７ｃを参照のこと。
【０５０４】
機器の詳細
Ｘ線粉末回折：Ｂｒｕｋｅｒ  ０８  Ａｄｖａｎｃｅ、Ｃｕ  Ｋａ  照射（λ＝１．５４１８０Å）、４０ｋＶ／４０ｍＡ、ＬｙｎｘＥｙｅ検出器、２θステップ幅０．０２°、ステップあたり３７秒、２θスキャン範囲２．５°〜５０°。平坦な表面とするためのわずかな圧力を加えた以外はいかなる特別な処理もせずに、深さ０．１または１．０ｍｍのシリコン単結晶サンプルホルダー上でサンプルを調製した。測定の間、すべてのサンプルを回転させた。
示差走査熱量測定：Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＤＳＣ  ７。Ｎ２下、密閉した金るつぼ、加熱速度２０℃／分、−５０℃から２８０℃までスキャン。
動的水蒸気吸着：Ｐｒｏｊｅｋｔ  Ｍｅｓｓｔｅｃｈｎｉｋ  ＳＰＳ  １１−１００ｎ水蒸気吸着分析器。微量てんびんの上のアルミニウムるつぼ中にサンプルを置き、２５℃でのあらかじめ定めた湿度プログラム（相対湿度５０〜０〜９５〜５０％、Δ相対湿度＝５％時間−１および極値における「等湿（isohumid）」平衡期間によるスキャニング）を開始する前に、２５℃および５０％相対湿度において平衡化した。
ＦＴ−ラマン分光法：Ｂｒｕｋｅｒ  ＲＦＳ１００．Ｎｄ：ＹＡＧ  １０６４ｎｍ励起、５０ｍＷレーザーパワー、Ｇｅ検出器、１２８スキャン、範囲５０〜３５００ｃｍ−１、２ｃｍ−１分解能、アルミニウムサンプルホルダー。
偏光顕微鏡検査：Ｌｅｉｃａ  ＯＦＣ２８０  ＣＣＯカメラを備えたＬｅｉｔｚ  Ｏｒｔｈｏｐｌａｎ顕微鏡。
ＴＧ：ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＴＧＡ  Ｑ５０００。開放アルミニウムるつぼ、Ｎ２雰囲気、加熱速度１０℃分−１、範囲２５〜３００℃。
ＴＧ−ＦＴＩＲ：Ｂｒｕｋｅｒ  ＦＴ−ＩＲ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒ  ２２を備えたＮｅｔｚｓｃｈ  Ｔｈｅｒｍｏ−Ｍｉｃｒｂａｌａｎｃｅ  ＴＧ  ２０９。マイクロホールを有するアルミニウムるつぼ、Ｎ２雰囲気、加熱速度１０℃分−１、範囲２５〜２５０℃。
【０５０５】
理論に束縛されることを望むことなく、この形態が、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨの唯一の安定な多形をあらわすことが示唆される。多形性試験は、Ａ形態がほとんどすべての晶析システムにおいて再現されることを示している（脱気した溶媒を用いて不活性雰囲気下で試験を実施した）。
【０５０６】
ＬＭＴ．２ＭｓＯＨの水溶液の蒸発によってアモルファスなＬＭＴ．２ＭｓＯＨを調製することができるが、さらなる乾燥後にアモルファス材料がＡ形態に再結晶化する。
【０５０７】
ＡｃＭＴおよびＬＭＴ．２ＭｓＯＨの工業的規模の合成
【０５０８】
【化４０】
0005898701.tif 000064
【０５０９】
１０−アセチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミン（ＡｃＭＴ）の大規模合成
アセトニトリル（ＭｅＣＮ）（３００ｌ）をリアクター１（Ｒ１）に添加し、−５〜０℃に冷却した。塩化メチルチオニニウム三水和物（ＭＴＣ．３Ｈ２Ｏ）（１５０ｋｇ）を添加し、温度を１５〜２５℃に上昇させた。トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）（１００ｌ）、続いてＭｅＣＮ（２０ｌ）を添加した。ヒドラジン水和物（Ｎ２Ｈ４．Ｈ２Ｏ）（１２ｌ）を３０分間にわたって添加した。反応温度を１時間にわたって６０〜７０℃に上昇させ、次いで、４０〜５０℃に低下させる前に１時間、この温度に維持した。無水酢酸（Ａｃ２Ｏ）（２４０ｌ）を１時間にわたって添加し、続いてＭｅＣＮ（２０ｌ）ですすいだ。バッチ温度を２時間、９０〜１００℃に高めた。温度を５５〜６５℃に低下させ、温度を維持しつつ、水（３４０ｌ）を２時間にわたって加えた。次いで、バッチ温度を２時間にわたって−５〜５℃に低下させ、その温度に６時間維持した。固体を濾過によって集めた。水（４００ｌ）をＲ１に添加する前に、ケークから完全に液体を除去（de-liquore）した。放置してＲ１中の温度を１５〜２５℃まで上昇させたあと、水を分けて添加してフィルターケークを洗浄した。取り出す前に、生成物を窒素流下で６時間乾燥させた（収量：９０〜１１０ｋｇ）。
【０５１０】
１０−アセチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミン（ＡｃＭＴ）の大規模精製
水（３００ｌ）、続いて１０−アセチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミン（ＡｃＭＴ）（１００ｋｇ）をＲ１に添加した。トルエン（４００ｌ）および８０％の酢酸水溶液（４０ｌ）を添加し、続いて水ですすいだ（５０ｌ）。バッチ温度を１時間、７５〜８５℃まで上昇させた。攪拌機を停止し、３０分間、層を落ち着かせた。下部の水性層を除去し、新しい水（３００ｌ）、８０％酢酸水溶液（４０ｌ）を添加し、続いて、すすぎ水（５０ｌ）を添加した。７５〜８５℃において１時間、混合物を撹拌した後、攪拌機を停止させ、３０分間、層を落ち着かせた。下部の水性層を除去し、新しい水（３００ｌ）、８０％酢酸水溶液（４０ｌ）を添加し、続いて、すすぎ水（５０ｌ）を添加した。混合物を７５〜８５℃において１時間撹拌した後、撹拌器を停止させた。３０分間、層を落ち着かせた後、下部層を除去し、水（３９０ｌ）を添加し、混合物を１時間撹拌した。攪拌機を停止させ、３０分間、層を落ち着かせた。下部の水性層を除去し、温度を−５〜５℃に低下させた。ジャケット温度を８０℃に上昇させ、次いで、それが６０℃に達したら、２時間にわたって温度を−１０〜０℃に低下させた。混合物を４時間撹拌した後、フィルターに移した。ケークから完全に液体除去したあと、トルエン（１５０ｌ）をＲ１に添加した。Ｒ１中でトルエンを３０分間にわたって撹拌した後、フィルターケークを洗浄するためにそれを分けて使用した。生成物を、窒素流下、フィルター上で４８時間、乾燥による損失が１％未満まで乾燥させた後、取り出した（収量：７５〜９０ｋｇ）。
【０５１１】
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミニウムビス（メタンスルホネート）（ＬＭＴ．２ＭｓＯＨ）の大規模合成
ＡｃＭＴ（１８〜２２ｋｇ）をＲ１に添加した。トルエン（体積（ｌ）＝１６×ＡｃＭＴ重量）を添加し、混合物を９０〜１００℃まで、３０分間加熱した。溶液を６０〜８０℃まで放冷した後、リアクター２（Ｒ２）まで５μのインラインフィルターを通過させた。トルエン（５０ｌ）を（なお、約７０℃の）リアクター１に添加し、３０分間撹拌した。これを移送ラインおよびフィルターをすすぐために使用した。上記過程をもう一回繰り返した。次いで、減圧下、蒸留によってＲ２から過剰のトルエンを除去する過程を開始した。さらに２回分のＡｃＭＴ（それぞれ１８〜２２ｋｇ）を許容するＲ２の限度容量を、上記方法にしたがって、Ｒ１からＲ２に移した。Ｒ２中のバッチ体積が約３４０ｌに減少したところで蒸留を完了した。１５〜３０分間、温度を９５〜１０５℃に上昇させた後、１５〜２５℃に冷却した。水（２０ｌ）をＲ２に添加した。この後、バッチ温度を１５〜３０℃に保持しつつ、メタンスルホン酸（ＭＳＡ）（３３ｌ、９９％、２．２当量）を添加した。２回目の水（１０ｌ）を添加し、この温度において混合物を２時間撹拌した。３〜４時間、混合物を８０〜９０℃まで加熱した。該二相性溶液を４８〜５８℃まで放冷した後、無水ＥｔＯＨ（７５ｌ）を１５〜３０分にわたって添加した。スターラーを停止させ、１５０ｇの破砕した（１００μ未満）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミニウムビス（メタンスルホネート）を用いて混合物にシーディングした。２回目のＥｔＯＨ（３００ｌ）を８０〜１１０分間にわたって添加した。ジャケット温度を１０℃に設定し、温度が２５℃に達したら、ジャケット温度を２０℃に再設定した。それを１５〜２５℃において２時間撹拌した後、濾過によって固体を集めた。ケークから完全に液体除去した。ＭｅＣＮ（３００ｌ）をＲ２に添加し、１５分間撹拌した後、フィルターケークを洗浄するために分けて使用した。２回目の３００ｌのＭｅＣＮをＲ２に添加し、洗浄過程を繰り返した。生成物を、フィルター上で、乾燥による損失が０．２％未満まで乾燥させた後、取り出した（収率８０〜９０％）。
【０５１２】
合成２：Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミニウムビス（エタンスルホネート）（ＬＭＴ．２ＥｓＯＨ）の合成および分析
【０５１３】
【化４１】
0005898701.tif 000065
【０５１４】
ＬＭＴ．２ＥｓＯＨのための合成法
ＬＭＴ．２ＥｓＯＨの合成を、１０−アセチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミンの酸加水分解によって実施した。使用した酸は、エタンスルホン酸であり、溶媒の組み合わせは、水性メタノールであった。
【０５１５】
実験の詳細
１００ｍｌの丸底フラスコに、１０−アセチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミン（５ｇ、１５．２７ミリモル、分子量３２７．４５ｇ／モル）（７０％、水性）、エタンスルホン酸（７．２１ｇ、４５．８１ミリモル、分子量１１０．１３ｇ／モル）およびメタノール（２５ｍｌ）を添加した。この混合物を７５℃まで加熱し、この温度で４時間撹拌した後、混合物を氷水の上で冷却した。固体は形成せず、真空下でメタノールを除去すると、粘ちょうな緑色の油が生じた。この油にイソプロパノール（２５ｍｌ）を添加し、混合物を還流温度まで加熱して、確実に均一な溶液とした。冷却した後、沈殿が形成するまでアセトンを添加した。懸濁液を１時間、氷水の上で冷却した後、濾過して黄色の固体として粗生成物を生じさせ、これは空気に曝露すると緑色に変わった。該粗製物をアセトン（３×５ｍｌ）で洗浄し、３日間空気乾燥して、粗生成物（３．３５ｇ、４３％、分子量５０５．６８ｇ／モル）が明るい緑色の固体として生じた。
【０５１６】
【数７】
0005898701.tif 000066
【０５１７】
結晶学
１ｇのＬＭＴ．２ＥｓＯＨサンプルを酢酸（約０．１ｇ）に溶解し、酢酸エチルを上に重ね、暗所で３日間、ゆっくりと拡散させた。結晶が発生し、これを集め、Ｘ線回折によって分析して、生成物をビス（エタンスルホネート）であると確認した。図１７ａを参照のこと。
【０５１８】
合成３：Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミニウムビス（ｐ−トルエンスルホネート）（ＬＭＴ．２ＴｓＯＨ）の合成および分析
【０５１９】
【化４２】
0005898701.tif 000067
【０５２０】
ＬＭＴ．２ＴｓＯＨのための合成法
ＬＭＴ．２ＴｓＯＨの合成を、炭酸ナトリウムによりＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミニウムジクロライドを中和し、中性種を有機溶媒中に抽出することによって実施した。抽出物をｐ−トルエンスルホン酸で処理し、混合物を乾燥するまで濃縮した。
【０５２１】
実験の詳細
５０ｍｌのビーカーに、炭酸ナトリウム（０．５９ｇ、５．５８ミリモル、分子量１０５．９９ｇ／モル）および水（１０ｍｌ）を添加し、固体が溶解するまで混合物を撹拌した。１００ｍｌの分離漏斗に、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミニウムジクロライド（１ｇ、２．７９ミリモル、分子量３５８．３３ｇ／モル）、テトラヒドロフラン（３５ｍｌ）およびジエチルエーテル（５ｍｌ）、次いで、炭酸ナトリウムの水溶液を添加した。中性種を有機溶媒層中へ抽出し、水性層から分離した。テトラヒドロフラン（５ｍｌ）に予め溶解したｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１．０６ｇ、５．５８ミリモル、分子量１９０．２０ｇ／モル）を有機抽出物に添加し、混合物を乾燥するまで濃縮して、シャリシャリとした緑色のアモルファスな泡として生成物を生じさせた（分子量６２９．８２１６ｇ／モル）。
【０５２２】
【数８】
0005898701.tif 000068
【０５２３】
合成４：Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミニウムエタンジスルホネート（ＬＭＴ．ＥＤＳＡ）の合成および分析
【０５２４】
【化４３】
0005898701.tif 000069
【０５２５】
１０−アセチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミンの酸加水分解によってＬＭＴ．ＥＤＳＡの合成を実施した。使用した酸は、１,２−エタンジスルホン酸であり、溶媒の組み合わせは水性エタノールであった。
【０５２６】
実験の詳細
２５ｍｌの丸底フラスコに、１０−アセチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミン（１ｇ、３．０５ミリモル、分子量３２７．４５ｇ／モル）、１，２−エタンジスルホン酸一水和物（０．９５ｇ、４．５８ミリモル、分子量２０８．２１ｇ／モル）、水（１ｍｌ）およびエタノール（５ｍｌ）を添加した。この混合物を８５℃まで加熱し、この温度において２．５時間撹拌し、ここで、溶液から黄緑色の固体が沈殿した。スラリーを氷水の上で３０分間冷却した後、濾過して、黄緑色の固体として粗生成物が生じた。該粗製物をエタノール（３×３ｍｌ）で洗浄し、１５分間空気乾燥した後、７０℃の温度において３．５時間オーブン乾燥して、黄色の固体として粗生成物（１．３３ｇ、９１％、分子量４７５．６１ｇ／モル）が生じた。
【０５２７】
ＬＭＴ．ＥＤＳＡの精製
５０ｍｌのコニカルフラスコに、粗ＬＭＴ．ＥＤＳＡ（１ｇ、２．１０ミリモル、分子量４７５．６１ｇ／モル）および水（１０ｍｌ）を添加した。スラリーを９５℃まで加熱し、固体が溶解するまでこの温度において撹拌した。次いで、溶液を２５℃まで放冷し、ここで、明るい緑色の結晶固体が形成した。次いで、スラリーを氷水の上で３０分間冷却した後、濾過した。集めた固体をメタノール（３×３ｍｌ）で洗浄し、１８時間空気乾燥して、結晶性の明るい緑色の固体として精製された生成物が生じた（０．８８ｇ、８８％、分子量４７５．６１ｇ／モル）。
【０５２８】
【数９】
0005898701.tif 000070
【０５２９】
結晶学
４０ｍｇのＬＭＴ．ＥＤＳＡサンプルを熱い重水素化水（約１ｍｌ）に溶解し、暗所にてゆっくりと放冷した。発生した結晶を集め、Ｘ線回折により分析して、生成物がＬＭＴ対ＥＤＳＡ付加物が１：１の一水和物であることを確認した。図１７ｂを参照のこと。
【０５３０】
合成５：Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミニウムナフタレンジスルホネート（ＬＭＴ．ＮＤＳＡ）の合成および分析
【０５３１】
【化４４】
0005898701.tif 000071
【０５３２】
ＬＭＴ．ＮＤＳＡのための合成法
ＬＭＴ．ＮＤＳＡの合成を、１０−アセチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミンの酸加水分解により実施した。使用した酸は、１，５−ナフタレンジスルホン酸であり、溶媒の組み合わせは水性エタノールであった。
【０５３３】
実験の詳細
２５ｍｌの丸底フラスコに、１０−アセチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミン（１ｇ，３．０５ミリモル、分子量３２７．４５ｇ／モル）、１，５−ナフタレンジスルホン酸四水和物（１．６５ｇ、４．５８ミリモル、分子量３６０．３６ｇ／モル）、水（１ｍｌ）およびエタノール（５ｍｌ）を添加した。この混合物を８５℃まで加熱し、この温度において３０分間撹拌し、ここで、混合物はまだ不溶性であった。この熱い混合物に、水（４ｍｌ）を添加し、反応を９５℃まで加熱し、この温度において８時間撹拌した。懸濁液を氷水の上で１０分間冷却した後、濾過して、明るい緑色の固体として粗生成物が生じた。該粗製物をエタノール（３×５ｍｌ）で洗浄し、３日間空気乾燥して、明るい青緑色の固体として粗生成物（１．７５ｇ、１００％、分子量５７３．７１ｇ／モル）が生じた。
【０５３４】
【数１０】
0005898701.tif 000072
【０５３５】
実施例２−溶解度試験
ｉ）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミニウムジブロミド、ジクロライドおよびビス（メタンスルホネート）（ＬＭＴ．２ＨＢｒ、ＬＭＴ．２ＨＣｌおよびＬＭＴ．２ＭｓＯＨ）塩の溶解度
２つの水性溶液（２１．４℃において、ｐＨ２．００および３．０１）を、ＨＣｌ（５Ｍ）を注意深く脱イオン水に添加することによって調製した。
【０５３６】
各実験において、上記溶液のうちの１つの５ｍｌアリコートを３７℃に加熱した。適切な塩（ＬＭＴ．２ＭｓＯＨ、ＬＭＴ．２ＨＣｌまたはＬＭＴ．２ＨＢｒ）の一部を添加し、この混合物をしばらく撹拌して、固体を完全に溶解させた。さらなる溶解が起こらなくなるまで、このステップを繰り返した。
【０５３７】
結果を以下の表に示す：
【０５３８】
【表１５】
0005898701.tif 000073
【０５３９】
見てわかるとおり、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨは良好な水溶解度を有する。
【０５４０】
ｉｉ）ＬＭＴ．２ＭｓＯＨ塩のｐＨ依存性
関連する実験において、以下の３種の緩衝原液を調製した（ｐＨ２、ｐＨ３、およびｐＨ７）：
【０５４１】
ｐＨ２緩衝水溶液
塩化カリウム（ＫＣｌ）の溶液（０．２Ｍ）（５０ｍＬの脱イオン水中、０．７４５ｇ）を最初に調製した。この溶液から５０ｍＬをとり、約８０ｍＬの脱イオン水で希釈した。次いで、ｐＨを２に調整するために（０．２Ｍの）塩酸（ＨＣｌ）溶液を使用し、その後、脱イオン水でさらに希釈して、合計２００ｍＬとした。２１．６℃における２．００の最終ｐＨを記録した。
【０５４２】
ｐＨ３緩衝水溶液
フタル酸水素カリウムの溶液（０．１Ｍ）（１００ｍＬの脱イオン水中、２．０４２ｇ）を最初に調製した。この溶液から１００ｍＬをとり、約５０ｍＬの脱イオン水で希釈した。次いで、ｐＨを３に調整するために０．２ＭのＨＣｌ溶液を使用し、その後、脱イオン水でさらに希釈して、合計２００ｍＬとした。２１．７℃における２．９９の最終ｐＨを記録した。
【０５４３】
ｐＨ７緩衝水溶液
第一リン酸カリウム（ＫＨ２ＰＯ４）の溶液（０．１Ｍ）（１００ｍＬの脱イオン水中、１．３７０ｇ）を最初に調製した。この溶液から１００ｍＬをとり、約８０ｍＬの脱イオン水で希釈した。次いで、ｐＨを７に調整するために０．５Ｍの水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）溶液を使用し、その後、脱イオン水でさらに希釈して、合計２００ｍＬとした。２２℃における７．０７の最終ｐＨを記録した。
【０５４４】
方法
水性緩衝溶液の５ｍＬアリコートを、マイクロ・フリー（micro-flea）を入れたバイアルに添加した。このバイアルを２５℃に設定した水浴中に置いた。該溶液に１回１〜１．５ｇずつＬＭＴ．２ＭｓＯＨを添加した。各添加後に、１０分の撹拌時間を許容して、溶解のための最大の機会を保証した。混合物の均一性を目視により判定した。上記撹拌時間の後、視覚による検査により判定して固体がまだ存在する場合、飽和点に到達したと判断した。
【０５４５】
結果
得られた混合物の粘度は、過剰の固体の適切な単離を不可能とするため、正確な溶解度を決定することは不可能であった。結論として、結果はそれぞれ、飽和点前に添加したＬＭＴ．２ＭｓＯＨが下限を構成し、飽和点後に添加したＬＭＴ．２ＭｓＯＨの総質量が上限を提供する範囲として報告する。
【０５４６】
３つの実験からの結果を以下に示す：
【０５４７】
【表１６】
0005898701.tif 000074
【０５４８】
見てわかるとおり、ｐＨが低下するにつれて溶解度はわずかに減少するが、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨは、３つの水性系それぞれにおいてよく機能した。
【０５４９】
結論として、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨは、ＭＴＣ（示さない）よりも優れた水溶解性を示し、対応する塩化物および臭化物塩に比べて亢進した溶解度を有する。これは、本明細書に開示された処置および用途に関するさらに高い有用性を示唆する。
【０５５０】
実施例３−凝集および毒性の阻害
方法：タウ凝集に関する固相アッセイ
タウ−タウ凝集アッセイは、精製された組換えタウ断片を固相イムノアッセイにおいて使用する。方法は、例えば、ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ９６／３０７６６号に詳細に記載される。すなわち、このアッセイは、溶液中の切断型タウ（アミノ酸２９７〜３９１）の固相に結合した切断型タウ（残基２９７〜３９０）への結合を測定する。前者の結合は、Ｃ−末端Ｇｌｕ−３９１残基を含むペプチドを特異的に認識する抗体ｍＡｂ４２３により検出する。インビトロで形成されたタウ複合体は、対らせん状細線維のタンパク質分解安定なコアにおいて見出される、９４／９５−アミノ酸反復ドメイン（残基２９７〜３９０）を介した病的なタウ−タウ結合相互作用の安定性の結果としてアルツハイマー病において形成する凝集複合体に類似している。
【０５５１】
（平均±ＳＥとして表される）Ｂ５０値は、タウ−タウ結合が５０％減少する化合物の濃度として決定される。
【０５５２】
方法：細胞に基づくタウ凝集アッセイ
このアッセイは、誘導性プロモーター（ｐＯＰＲＳＶＩ）の制御下で完全長ヒトタウタンパク質（ｈｔａｕ４０）を、および構成的プロモーター（ｐｃＤＮＡ３．１）の制御下で低レベルの切断型タウ（２９５〜３９０、ｄＧＡ）を発現するように遺伝子操作された３Ｔ６マウス細胞に基づく。大量のｈｔａｕ４０の発現は、ＩＰＴＧ（１０〜５０μＭ）の添加によって誘導され、これは次に、テンプレートとして作用するｄＧＡタウの存在下で完全長タウの凝集とプロセシングが起こる過程によってさらなる切断型タウの生成をもたらす。タウ−タウ凝集阻害剤のアッセイへの添加は、この過程をブロックする。方法は、ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ０２／０５５７２０号により詳細に記載される。
【０５５３】
結果を、１２ｋＤ断片の生成が５０％阻害される濃度として表す。これは、ＥＣ５０値と呼ばれる。
【０５５４】
１０ｃｍディッシュにおいて細胞（４Ａおよびそのクローン）を約８０％コンフルエントまで増殖させた後、２つの２４ウエルプレートに分割し、２４時間増殖させた。供試品を様々な濃度で添加し、２４時間後、ＩＰＴＧを添加する。一夜のインキュベーション後、培地を除去し、ＰＢＳでウエルを洗浄し、レムリ（Laemmli）バッファーの添加によって細胞を集めた。その後のゲル電気泳動、ウエスタンブロッティングおよび抗体標識のために、サンプルを−２０℃で貯蔵した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによってサンプルを分離し、ＰＶＤＦメンブレンに移し、７／５１抗体で標識したタウをＫｏｄａｋ  Ｉｍａｇｅ  ＳｔａｔｉｏｎにおいてＥＣＬにより検出する。化合物は典型的に、一連の濃度範囲にわたり、４つの濃度で３回反復して試験し、すべてのサンプルを１つのゲルに流す。薬剤の存在しない対照サンプルに正規化した、ｄＧＡのｈｔａｕ４０バンドに対する強度の比を薬剤濃度に対してプロットし、ＥＣ５０値を、上記比が０．５となる濃度からグラフにより決定した。
【０５５５】
上記方法をすぐ下の表１に要約する。すべての実験において、ＭＴＣ（ＴＲｘ００１４．０４７）を対照として流し、ＥＣ５０＝０．５９μＭを有するＭＴＣに対してＥＣ５０値を正規化した。
【０５５６】
【表１７】
0005898701.tif 000075
【０５５７】
方法：細胞毒性アッセイ
細胞（３Ｔ６マウス線維芽細胞）を、１０ｃｍディッシュ中で約８０％コンフルエントまで増殖させた後、９６ウエルプレートあたり１０ｃｍディッシュの１０％、１ウエルあたり５０μｌで、９６ウエルプレートに分割した。８ウエルの１列は、（アッセイにおける試薬ブランクとするために）空のままとした。細胞を一夜増殖させた後、開始濃度（典型的に、ＭＴＣまたはＬＭＴ．２ＨＢｒについては２００μＭ）で４つのウエルに添加し、続くウエルにおいては、順次１：２希釈し、細胞の最後の４つのウエルは薬剤を含まない対照として使用した。これは、９６ウエルプレートあたり、２種の薬剤を試験することを可能とする。薬剤の存在下で４８時間、細胞を放置し、その後、培地を除去し、ＰＢＳで細胞を洗浄した。ラクテートデヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）アッセイに基づくＣｙｔｏｔｏｘ９６ウエルキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて細胞数を決定した。アッセイは、細胞溶解により放出される安定な細胞質酵素であるＬＤＨを定量的に測定する。放出されたＬＤＨを、結果としてテトラゾリウム塩の赤いホルマザン生成物への変換が起こる、酵素的アッセイによって測定する。生じた色の量は、溶解した細胞数に比例する。すなわち、細胞を４５〜６０分間、５０μｌ／ウエルの１×溶解バッファーによって溶解し、続いて、３０分間の５０μｌ／ウエルのＬＤＨアッセイ試薬、そして、５０μｌ／ウエルの停止バッファーにより反応停止する。吸光度を４９０ｎｍにおいて読み取る。未処理ウエル（未処理細胞＝１．０）に対する相対的な吸光度を薬剤濃度に対してプロットした。グラフにより、吸光度が５０％減少した濃度からＬＤ５０を決定した。ＬＭＴ．２ＨＢｒの試験に際して、ＭＴＣ（ＴＲｘ００１４．０４７）をすべての実験において対照として流し、ＬＤ５０＝６５μＭを有するＭＴＣに対してＬＤ５０値を較正した。
【０５５８】
結果：
本発明による様々なビス（スルホネート）塩を試験し、ビス（ハライド）塩Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミニウムジクロライド（ＬＭＴＣ、ＬＭＴ．２ＨＣｌ）およびＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−１０Ｈ−フェノチアジン−３，７−ジアミニウムジ（ブロミド）ＬＭＴ．２ＨＢｒと塩化メチルチオニニウム（ＭＴＣ）を比較した。
【０５５９】
異なるメチルチオニニウム塩形態についてのインビトロのデータを、すぐ下の表２に要約する：
【０５６０】
【表１８】
0005898701.tif 000076
【０５６１】
コメント
ＬＭＴ．２ＭｓＯＨおよびＬＭＴ．２ＨＣｌについてのＥＣ５０値（平均±ＳＥ）は、それぞれ０．１９±０．０４μＭおよび０．６３±０．１０μＭであり、対応する治療指数は１７９および１０２である。
【０５６２】
タウ−タウ凝集の細胞に基づくモデルにおける化合物の相対的効力は、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨ＞ＭＴＣ、ＬＭＴ．２ＨＢｒ、ＬＭＴ．２ＨＣｌである。ＭＴＣに比べて、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨの治療指数は６３％高い。
【０５６３】
細胞に基づくアッセイにおける効力の順番は、ＭＴＣ、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨ＞ＬＭＴ．２ＨＣｌ＞ＬＭＴ．２ＨＢｒである。ＬＭＴ．２ＭｓＯＨおよびＬＭＴ．２ＨＣｌについてのＢ５０値は、それぞれ２３８．２±７４．２μＭおよび３６０．８±３８．２μＭである。細胞を含まないアッセイにおける相対的効力の順番は、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨ＞ＭＴＣ、ＬＭＴ．２ＨＣｌ、ＬＭＴ．２ＨＢｒである。
【０５６４】
実施例４−毒性学、不純物および造血系に対する効果
ＬＭＴ．２ＨＢｒ、ＬＭＴ．２ＨＣｌ、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨまたはＭＴＣを、毎日、１４日間、雌性Ｗｉｓｔａｒラットに投与し；用量は、１日目から１０日目までは９５ｍｇＭＴ／ｋｇ／日および１１日目から１４日目までは６０ｍｇＭＴ／ｋｇ／日であった。体位を高くすること（raised body posture）、行動抑制および全身的虚弱の臨床兆候がすべての処置群において見られた。処置関連死がＬＭＴ．２ＨＢｒ処置群およびＭＴＣ処置群において発生した。
【０５６５】
赤血球パラメータの変化が、すべての処置群の血液および骨髄において見られ、これは再生性貧血の指標であった。これらは以下の：血液中の赤血球数の減少、低濃度のヘモグロビンおよび網状赤血球数の増加ならびに骨髄中の赤血球前駆細胞数の増加を含んだ。これは、脾臓における赤血球生成レベルの増加によって病理学的に実証された。
【０５６６】
好中性顆粒球数の減少がすべての処置動物の骨髄において見られたが、この効果の強さは他の群よりもＬＭＴ．２ＨＢｒ処置群においてかなり大きかった。この相違は、作製した血液塗抹標本中で観察された好中球減少症の重症度においても認められ、ＬＭＴ．２ＨＢｒ処置動物においては成熟した好中球の顕著な枯渇が、ＭＴＣでは中程度の減少があり、そして、ＬＭＴ．２ＨＣｌまたはＬＭＴ．２ＭｓＯＨ群においては減少しなかった。この試験の結果は、少なくともラットにおいて、ＬＭＴ．２ＨＢｒが、ＬＭＴ．２ＨＣｌ、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨまたはＭＴＣよりも好中球枯渇を引き起こす傾向が高いことを示唆する。成熟した好中球および顆粒球数の減少も、ラットにおけるＬＭＴ．２ＨＢｒの６か月の試験で、高用量（４５ｍｇＭＴ／ｋｇ／日）において骨髄中で観察された。ＬＭＴ．２ＨＢｒ後に観察された好中球の減少または好中球減少症は、可逆的ではあるが、その主要な役割が細菌の破壊であるため、患者を細菌感染により罹りやすくするであろう。
【０５６７】
したがって、ラットにおける耐容性（用量依存性の死）および好中球反応に関して、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨは、ＬＭＴ．２ＨＢｒに比較して改善された性質を示す。
【０５６８】
【表１９】
0005898701.tif 000077
【０５６９】
ＬＭＴ．２ＨＣｌおよびＬＭＴ．２ＭｓＯＨは、上記分析において同等であったが、該２つの塩形態において見出された不純物に相違があった。ＬＭＴ，２ＨＣｌに関しては、塩化メチルの存在が合成中に検出され、完全に除去することが困難なやり方で生成物中に捕捉された。対照的に、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨの合成過程において、エチルおよびメチルメタンスルホネート（ＥＭＳ、ＭＭＳ）などの不純物は、はるかに低いレベルまで制御可能であった。
【０５７０】
ラット、サルおよびミニブタにおいて、造血系に対する試験を実施した。
【０５７１】
メトヘモグロビン血症が観察された最低用量は、ラットにおいて１５ｍｇＭＴ／ｋｇ／日（ＭＴＣおよびＬＭＴ．２ＨＢｒ）または３０ｍｇＭＴ／ｋｇ／日（ＬＭＴ．２ＭｓＯＨ）、霊長類において５．３ｍｇＭＴ／ｋｇ／日（ＭＴＣ）、およびミニブタにおいて１０ｍｇＭＴ／ｋｇ／日（ＬＭＴ．２ＭｓＯＨおよびＬＭＴ．２ＨＢｒ）であった。
【０５７２】
ミニブタにおける９ヶ月のＬＭＴ．２ＭｓＯＨ試験において、投薬の最初の２８日間の後、３ｍｇＭＴ／ｋｇ／日ではメトヘモグロビン血症の兆候はなかった。
【０５７３】
しかしながら、予想されるとおり、ＭＴＣ、ＬＭＴ．２ＨＢｒまたはＬＭＴ．２ＭｓＯＨの用量レベルが増加すると、メトヘモグロビンレベルの増加および究極的には耐容性を示さなかった用量におけるハインツ体（赤血球内の変性し、沈殿したヘモグロビンの凝集体）の形成により証明される、ＲＢＣｓへの酸化的ストレスの徴候が用量依存的に現れた。
【０５７４】
実施例５−薬物動態
図１８は、ブタにおける、２種の経口投与量（２および１５ｍｇ／ｋｇ）のＬＭＴ．２ＨＢｒ、ＬＭＴ．２ＨＣｌおよびＬＭＴ．２ＭｓＯＨ投与後の、ＭＴ部分の血漿濃度の時間経過の比較を示す。
【０５７５】
見てわかる通り、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨについての（１時間のＴｍａｘにおける）Ｃｍａｘは、ＬＭＴ．２ＨＣｌまたはＬＭＴ．２ＨＢｒについてのそれよりも２倍高かった。したがって、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨは、ＬＭＴ．２ＨＣｌまたはＬＭＴ．２ＨＢｒよりもＭＴへのより有効な曝露を提供することができる。
【０５７６】
実施例６−胃刺激試験
試験（ＭＴＣまたはＬＭＴ．２ＨＢｒによる、２８日齢ラット）：最終的な動物からの、選ばれた胃の顕微鏡所見の発生および重症度
【０５７７】
【表２０】
0005898701.tif 000078
【０５７８】
上記から、１群あたり１０匹で以下のことが予測できる。
【０５７９】
【表２１】
0005898701.tif 000079
【０５８０】
試験（ＬＭＴ．２ＭｓＯＨによる、２８日齢ラット）：最終的な動物からの、選ばれた胸骨、肝臓、脾臓および胃の顕微鏡所見の発生および重症度
【０５８１】
【表２２】
0005898701.tif 000080
【０５８２】
これらの結果は、ＬＭＴ．２ＭｓＯＨが、ＬＭＴ．２ＨＢｒよりも胃刺激を起こしにくいことを示す。
【０５８３】
実施例７−製剤
製剤例１：直接打錠法を用いるＬＭＴＭ錠剤の調製
直接打錠法によって、以下の組成を有する錠剤を調製した。
【０５８４】
【表２３】
0005898701.tif 000081
【０５８５】
ＬＭＴＭ、スプレー乾燥されたマンニトール、微結晶性セルロース、クロスポビドンおよびステアリン酸マグネシウムを、タンブリングブレンダー中で混合し、次いで、打錠機を用いて圧縮した。
【０５８６】
次いで、錠剤コアをＯｐａｄｒｙ＊ブルー（＊Ｃｏｌｏｒｃｏｎの一連のフィルムコーティング材料に関する登録商標）の水性懸濁液でフィルムコーティングした。
【０５８７】
製剤例２−乾式造粒法（ローラー圧縮）によるＬＭＴＭ錠剤の調製
乾式造粒法によって、以下の組成を有する錠剤を調製した：
【０５８８】
【表２４】
0005898701.tif 000082
【０５８９】
ＬＭＴＭ、スプレー乾燥されたマンニトール、微結晶性セルロース、クロスポビドンおよびステアリン酸マグネシウムを、タンブリングブレンダー中で混合した。次いで、この混合物をローラー圧縮機を用いて造粒し、好適なスクリーンを用いて振動造粒機により粉砕した。この場合、ローラー圧縮の前にステアリン酸マグネシウムの半量を使用し、その後、慣用の打錠機における圧縮の前に、ステアリン酸マグネシウムの半量を造粒処理に添加して混合した。
【０５９０】
次いで、錠剤コアをＯｐａｄｒｙ＊ブルー（＊Ｃｏｌｏｒｃｏｎの一連のフィルムコーティング材料に関する登録商標）の水性懸濁液でフィルムコーティングした。
【０５９１】
製剤例３−乾式造粒（スラッギング）によるＬＭＴＭ錠剤の調製
さらなる乾式造粒法によって、以下の組成を有する錠剤を調製した：
【０５９２】
【表２５】
0005898701.tif 000083
【０５９３】
ＬＭＴＭおよび賦形剤を、タンブリングブレンダー中で混合し、次いで、打錠機を用いて圧縮してスラッグ（プレーンな、平坦な表面の錠剤）を生成した。
【０５９４】
次いで、２０メッシュのスクリーンを備えた振動造粒機を用いてスラッグを粉砕した。
【０５９５】
この実施例において、ステアリン酸マグネシウムの半量をスラッギングの前に使用し、その後、慣用の打錠機における圧縮の前に、ステアリン酸マグネシウムの半量を造粒処理に添加して混合した。
【０５９６】
次いで、錠剤コアをＯｐａｄｒｙ＊ブルー（＊Ｃｏｌｏｒｃｏｎの一連のフィルムコーティング材料に関する登録商標）の水性懸濁液でフィルムコーティングした。
【０５９７】
製剤例４：賦形剤の湿式造粒およびさらに造粒しながらのＬＭＴＭの取り込みによるＬＭＴＭ錠剤の調製
湿式造粒法によって、以下の組成を有する錠剤を調製した：
【０５９８】
【表２６】
0005898701.tif 000084
【０５９９】
マンニトール、クロスポビドン（全体の３分の１）および微結晶性セルロースをタンブリングブレンダー中で混合した。次いで、混合した材料を水中のＰＶＰ溶液を用いて造粒した。湿った塊を流動層乾燥機中で乾燥し、好適なスクリーンを備えた振動造粒機を用いて粉砕した。
【０６００】
次いで、慣用の打錠機における圧縮の前に、粉砕された材料を残りのクロスポビドンおよびステアリン酸マグネシウム、ならびにＬＭＴＭと混合した。次いで、錠剤コアをＯｐａｄｒｙ＊ブルー（＊Ｃｏｌｏｒｃｏｎの一連のフィルムコーティング材料に関する登録商標）の水性懸濁液でフィルムコーティングした。
【０６０１】
製剤例５：ＬＭＴＭカプセル剤の調製
以下の組成を有するカプセル剤を調製した。
【０６０２】
【表２７】
0005898701.tif 000085
【０６０３】
ＬＭＴＭおよび賦形剤を、タンブリングブレンダー中で混合した。得られた薬剤混合物をカプセルに（５０、７５、１００、１２５および１５０ｍｇの製剤をサイズ１のカプセルに、２００ｍｇの製剤をサイズ０のカプセルに）、カプセル充填機を用いて充填した。ゼラチンカプセルおよびＨＰＭＣカプセルの両方を調製した。
【０６０４】
製剤例６：ＬＭＴＭ７５ｍｇフィルムコート錠剤の安定性試験の結果
【０６０５】
【表２８】
0005898701.tif 000086
【０６０６】
製剤例７：ＬＭＴＭ１００ｍｇフィルムコート錠剤の安定性試験の結果
【０６０７】
【表２９】
0005898701.tif 000087
【０６０８】
製剤例８：ＬＭＴＭ７５ｍｇフィルムコート錠剤の安定性試験の結果
【０６０９】
【表３０】
0005898701.tif 000088
【０６１０】
製剤例９：ＬＭＴＭ１００ｍｇフィルムコート錠剤の安定性試験の結果
【０６１１】
【表３１】
0005898701.tif 000089
【０６１２】
製剤例１０：ＬＭＴＢ１００ｍｇフィルムコート錠剤
【０６１３】
【表３２】
0005898701.tif 000090
【０６１４】
製剤例１１：ＬＭＴＭ７５ｍｇフィルムコート錠剤
【０６１５】
【表３３】
0005898701.tif 000091
【０６１６】
製剤例１２−溶出試験
製剤例１０および１１のとおりに調製した、ＬＭＴＢフィルムコート錠剤（３×１００ｍｇ）およびＬＭＴＭ錠剤（４×７５ｍｇ）を、５０ｒｐｍのパドルスピードで撹拌し（図１９を参照のこと）、標準的な薬局方の方法（ＵＳＰ３４）および以下に特定する条件を用いて評価した。
【０６１７】
【表３４】
0005898701.tif 000092
【０６１８】
結果を以下の表に示す。
【０６１９】
【表３５】
0005898701.tif 000093
【０６２０】
【表３６】
0005898701.tif 000094
【０６２１】
通常の条件（２５℃／６０％ＲＨ）または「ストレス」条件（４０℃／７５％ＲＨ）下、様々な期間貯蔵した錠剤も、同じ方法を用いて試験した。
結果を以下の表に示す。
【０６２２】
【表３７】
0005898701.tif 000095
【０６２３】
【表３８】
0005898701.tif 000096
【０６２４】
【表３９】
0005898701.tif 000097
【０６２５】
【表４０】
0005898701.tif 000098
【０６２６】
付録−結晶学データ
ＬＭＴ．ＥＤＳＡに関する結晶学データ（図１７ａ）
【０６２７】
【表４１】
0005898701.tif 000099
【０６２８】
【表４２】
0005898701.tif 000100
【０６２９】
【表４３−１】
0005898701.tif 000101
【０６３０】
【表４３−２】
0005898701.tif 000102
【０６３１】
【表４３−３】
0005898701.tif 000103
【０６３２】
【表４４】
0005898701.tif 000104
【０６３３】
【表４５】
0005898701.tif 000105
【０６３４】
ＬＭＴ．２ＥｓＯＨに関する結晶学データ（図１７ｂ）
【０６３５】
【表４６】
0005898701.tif 000106
【０６３６】
【表４７−１】
0005898701.tif 000107
【０６３７】
【表４７−２】
0005898701.tif 000108
【０６３８】
【表４７−３】
0005898701.tif 000109
【０６３９】
【表４７−４】
0005898701.tif 000110
【０６４０】
【表４８−１】
0005898701.tif 000111
【０６４１】
【表４８−２】
0005898701.tif 000112
【０６４２】
【表４８−３】
0005898701.tif 000113
【０６４３】
【表４８−４】
0005898701.tif 000114
【０６４４】
【表４８−５】
0005898701.tif 000115
【０６４５】
【表４８−６】
0005898701.tif 000116
【０６４６】
【表４８−７】
0005898701.tif 000117
【０６４７】
【表４８−８】
0005898701.tif 000118
【０６４８】
【表４８−９】
0005898701.tif 000119
【０６４９】
【表４８−１０】
0005898701.tif 000120
【０６５０】
【表４８−１１】
0005898701.tif 000121
【０６５１】
【表４８−１２】
0005898701.tif 000122
【０６５２】
【表４８−１３】
0005898701.tif 000123
【０６５３】
【表４８−１４】
0005898701.tif 000124
【０６５４】
【表４８−１５】
0005898701.tif 000125
【０６５５】
【表４８−１６】
0005898701.tif 000126
【０６５６】
【表４８−１７】
0005898701.tif 000127
【０６５７】
【表４８−１８】
0005898701.tif 000128
【０６５８】
【表４８−１９】
0005898701.tif 000129
【０６５９】
【表４８−２０】
0005898701.tif 000130
【０６６０】
【表４８−２１】
0005898701.tif 000131
【０６６１】
【表４９−１】
0005898701.tif 000132
【０６６２】
【表４９−２】
0005898701.tif 000133
【０６６３】
【表４９−３】
0005898701.tif 000134
【０６６４】
【表４９−４】
0005898701.tif 000135
【０６６５】
【表５０−１】
0005898701.tif 000136
【０６６６】
【表５０−２】
0005898701.tif 000137
【０６６７】
【表５０−３】
0005898701.tif 000138
【０６６８】
【表５０−４】
0005898701.tif 000139
【０６６９】
ＬＭＴ．２ＭｓＯＨに関する結晶学データ（図１７ｃ）
【０６７０】
【表５１】
0005898701.tif 000140
【０６７１】
【表５２−１】
0005898701.tif 000141
【０６７２】
【表５２−２】
0005898701.tif 000142
【０６７３】
【表５３−１】
0005898701.tif 000143
【０６７４】
【表５３−２】
0005898701.tif 000144
【０６７５】
【表５３−３】
0005898701.tif 000145
【０６７６】
【表５３−４】
0005898701.tif 000146
【０６７７】
【表５３−５】
0005898701.tif 000147
【０６７８】
【表５３−６】
0005898701.tif 000148
【０６７９】
【表５３−７】
0005898701.tif 000149
【０６８０】
【表５３−８】
0005898701.tif 000150
【０６８１】
【表５３−９】
0005898701.tif 000151
【０６８２】
【表５３−１０】
0005898701.tif 000152
【０６８３】
【表５４−１】
0005898701.tif 000153
【０６８４】
【表５４−２】
0005898701.tif 000154
【０６８５】
【表５５−１】
0005898701.tif 000155
【０６８６】
【表５５−２】
0005898701.tif 000156
【０６８７】
【表５６−１】
0005898701.tif 000157
【０６８８】
【表５６−２】
0005898701.tif 000158
【０６８９】
【表５６−３】
0005898701.tif 000159
【０６９０】
【表５６−４】
0005898701.tif 000160
【０６９１】
【表５６−５】
0005898701.tif 000161
【０６９２】
【表５６−６】
0005898701.tif 000162
【０６９３】
【表５６−７】
0005898701.tif 000163
0005898701.tif 000165
【図１】
0005898701.tif 000166
【図２】
0005898701.tif 000167
【図３】
0005898701.tif 000168
【図４】
0005898701.tif 000169
【図５】
0005898701.tif 000170
【図６】
0005898701.tif 000171
【図７】
0005898701.tif 000172
【図８】
0005898701.tif 000173
【図９】
0005898701.tif 000174
【図１０】
0005898701.tif 000175
【図１１】
0005898701.tif 000176
【図１２】
0005898701.tif 000177
【図１３】
0005898701.tif 000178
【図１４】
0005898701.tif 000179
【図１５ａ】
0005898701.tif 000180
【図１５ｂ】
0005898701.tif 000181
【図１５ｃ】
0005898701.tif 000182
【図１６】
0005898701.tif 000183
【図１７ａ】
0005898701.tif 000184
【図１７ｂ】
0005898701.tif 000185
【図１７ｃ】
0005898701.tif 000186
【図１８】
0005898701.tif 000187
【図１９】
0005898701.tif 000188