(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ末端とカルボキシル末端を有するアミノ酸分子を、両性アミノアルデヒドおよびイソシアニドと反応させる工程を含む、環状アミノ酸分子の製造方法であって、
前記両性アミノアルデヒドがアジリジンアルデヒドであり、
前記環状アミノ酸分子が下記の構造を有し、
【化２０】
0005866277.tif 000033
式中、アミノ酸分子がアミノ酸または直鎖ペプチドであり、
前記
【化２１】
0005866277.tif 000034
基が任意置換アミドであり、
Ｒが前記アミノ酸分子のアミノ末端の任意置換基であり、
Ｒｎが前記アミノ酸分子のカルボキシル末端の側鎖である、環状アミノ酸分子の製造方法。
【請求項２】
前記両性アミノアルデヒドが下記の構造を有する、請求項１に記載の方法。
【化２２】
0005866277.tif 000035
【請求項３】
前記イソシアニドがｔｅｒｔ-ブチルイソシアニドである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
単官能アルデヒドの代わりに前記両性アミノアルデヒドを用いることを含む修飾Ｕｇｉ反応である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記アミノ酸分子のアミノ酸が、脂肪族残基、酸性残基、または塩基性残基である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
１段階反応である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記反応が室温で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記反応がトリフルオロエタノール（ＴＦＥ）中で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−イソプロパノール（ＨＦＩＰ）と水とを２０：１で混合したものを溶媒として用いる、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ＨＦＩＰを溶媒として用いる、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
アジリジン環の求核的開環を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
下記の構造を有し、
【化２３】
0005866277.tif 000036
式中、アミノ酸分子がアミノ酸または直鎖ペプチドであり、
前記
【化２４】
0005866277.tif 000037
基が任意置換アミドであり、
Ｒが前記アミノ酸分子のアミノ末端の任意置換基であり、
Ｒｎが前記アミノ酸分子のカルボキシル末端の側鎖である、環状アミノ酸分子。
【請求項１３】
前記アミノ酸分子がペプチドである、請求項１２に記載の環状アミノ酸分子。
【請求項１４】
前記アミノ酸分子がアミノ酸である、請求項１２に記載の環状アミノ酸分子。
【請求項１５】
前記ペプチドが酸性残基または塩基性残基を少なくとも一つ含んでいる、請求項１３に記載の環状アミノ酸分子。
【請求項１６】
アジリジン環が開環された、請求項１２に記載の環状アミノ酸分子。
【請求項１７】
蛍光標識が組み込まれた、請求項１２に記載の環状アミノ酸分子。
【請求項１８】
チオ安息香酸を用いてチオエステル残基が組み込まれた、請求項１２に記載の環状アミノ酸分子。
【請求項１９】
下記の構造を有する化合物。
【化２５】
0005866277.tif 000038
【請求項２０】
下記の構造を有する化合物。
【化２６】
0005866277.tif 000039
【請求項２１】
下記の構造を有する化合物。
【化２７】
0005866277.tif 000040
【請求項２２】
下記の構造を有する化合物。
【化２８】
0005866277.tif 000041
【請求項２３】
下記の構造を有する化合物。
【化２９】
0005866277.tif 000042
【請求項２４】
下記の構造を有する化合物。
【化３０】
0005866277.tif 000043
【請求項２５】
下記の構造を有する化合物。
【化３１】
0005866277.tif 000044
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、環状アミノ酸分子およびその製造方法、特に両性アミノアルデヒドおよびイソシアニドとの反応によるアミノ酸または直鎖ペプチドの大環状化に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペプチドは、多種多様な生物学的プロセスに影響を及ぼして、ホルモン、抗生物質およびシグナル伝達分子として働くという点で、極めて重要な役割を果している。生物学的標的と特異性の高い相互作用を生じることから、ペプチドは、医学分野で広く用いられている。とはいえ、生物学的利用能は低いので、治療に関するペプチドの莫大な可能性の実現は必ずしも容易ではない。この短所は、エンド−およびエクソペプチダーゼによるペプチドの分解が引き起こす結果であり、ペプチドのin vivo安定性の低下にもつながる。直鎖ペプチドに比べて、環状ペプチドは分解されにくい。環状ペプチドの安定性には主な理由が２つある。第一に、エクソペプチダーゼは、環状ペプチドの（実在しない）端部を開裂できないことである。第二に、環状ペプチド、特に小〜中程度の大きさの環を持つ環状ペプチドは、環状ペプチドの拘束された骨格が、タンパク質分解中に所望の大きさの立体配座への適応を阻むために、エンドペプチダーゼの作用を受けにくいことである。その上、環状ペプチド内部での低い電荷と分子内水素結合が受動的膜透過性を高めることにより、生物学的利用能の向上にも寄与する。最も重要なのは、環状構造がアミノ酸配列に与える立体配座の拘束によって、環状ペプチドとその生化学的標的との間のエンタルピー相互作用が最大化すると同時に、望ましい結合エントロピーも確保されることである。
【０００３】
天然起源の環状ペプチドと合成環状ペプチドはいずれも、アミノ酸配列を予め剛直な構造にするための足場として非常に重要視されてきた１。おびただしい数の既知の環状ペプチドの中でも特に重要なのは、剛直な、小〜中程度の大きさの環である。様々なシクロラクタム化法や非ペプチド性環化法２が開発されてきた。
【０００４】
直鎖前駆体の大環状化は、直鎖ペプチドの配座優先に起因する、幾つかの熱力学的および動力学的な課題を抱えている。鎖−環の立体配座平衡は、非環式前駆体から環状分子を合成する際に直面する主要な障害である。短鎖の直鎖ペプチドは環状構造を取り易いが、これは、Ｎ末端とＣ末端の間のイオン対化によって推進される（スキーム１、Ａ）３。不利なエントロピーにもかかわらず、この環状構造は、静電相互作用と他の極性相互作用によって蓄えられたエンタルピーのおかげで、熱力学的に恵まれている。スキーム１から分かるように、従来の活性化剤は、ペプチドの両性イオン特性を取り去って、イオン対を形成できなくさせる傾向がある。その結果、静電相互作用と他の極性相互作用からエンタルピーが生じなければ、活性化ペプチドは不規則な直鎖構造を呈する（スキーム１、Ｂ）。大環状化を生じさせるには、活性化ペプチドがプレ環化構造（Ｃ）になってから所望の環状分子（Ｄ）を形成する必要がある。シクロ二量化４、シクロ三量化および重合５から生じる副生物の形成を制限するには、１０−４以上に高希釈することが不可欠である。残念なことに、希釈は反応時間を延ばし、その結果、エピ化などのバックグランド処理を誘発する。中でも最も困難な環化は、７つ未満の残基を含む直鎖ペプチドを環化させるものである６、７。
【０００５】
【数１】
0005866277.tif 000002
【０００６】
大環状構造の化学的空間を研究する上でのもう一つの共通の課題は、終盤での修飾に関するものである。これは、バイオ企業や製薬会社が構築した大環状化合物ライブラリーにおける長年の課題である。典型的な環化法（閉環メタセシス、ヒュスゲン環化付加）もやはり、それより先の合成には適さない。前記目的を達成するには、官能基の手を環化前に組み込む必要がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
一態様では、環状アミノ酸分子の製造方法であって、前記方法が、アミノ末端とカルボキシル末端を有するアミノ酸分子を、イソシアニドおよび下記式（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）：
【０００８】
【化１】
0005866277.tif 000003
【０００９】
［式中、ｎ＝０または１であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は独立して、Ｈ、低級アルキル、アルケニル、複素環、シクロアルキル、式−Ｃ（Ｏ）ＯＲ＊（式中、Ｒ＊はアルキルおよびアリールから選択される）で表されるエステル、式−Ｃ（Ｏ）ＮＲ＊＊Ｒ＊＊＊（式中、Ｒ＊＊およびＲ＊＊＊は独立して、アルキルおよびアリールから選択される）で表されるアミド、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、−ＯＨ、低級アルキル、アリール、−低級アルキルアリールまたは−ＮＲａＲｂから選択され、前記式中、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、低級アルキル、アリールもしくは低級アルキルアリールから選択される）、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ（式中、Ｒｃは、低級アルキル、アリールまたは低級アルキルアリールから選択される）あるいは低級アルキル−ＯＲｄ（式中、Ｒｄは、好適な保護基またはＯＨ基である）から選択され、これらは全て、場合により、１つ以上の置換可能な位置で１つ以上の好適な置換基によって置換され、
前記化合物のアルデヒド成分は、場合により亜硫酸水素塩を付加した形態であってよく、
前記アミノ酸分子は、アミノ酸、直鎖ペプチドまたはこれらの塩であり、ただし前記アミノ酸分子が直鎖ペプチドである場合、前記化合物は、前記ペプチドのアミノ末端の近位の炭素原子と立体化学的に整合しつつ、前記アルデヒドの近位にアジリジン不斉中心を含むものとする。］
の化合物と反応させる工程を含む、
前記方法を提供する。
【００１０】
他の態様では、本明細書に記載する方法を用いて製造される、環状アミノ酸分子を提供する。
【００１１】
別の態様では、式（ＩＩ）：
【００１２】
【化２】
0005866277.tif 000004
【００１３】
［前記式中、ｎ＝０または１であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は独立して、Ｈ、低級アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケニル、複素環、式−Ｃ（Ｏ）ＯＲ＊（式中、Ｒ＊はアルキルおよびアリールから選択される）で表されるエステル、式−Ｃ（Ｏ）ＮＲ＊＊Ｒ＊＊＊（式中、Ｒ＊＊およびＲ＊＊＊は独立して、アルキルおよびアリールから選択される）で表されるアミド、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、−ＯＨ、低級アルキル、アリール、−低級アルキルアリールまたはＮＲａＲｂから選択され、前記式中、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、低級アルキル、アリールもしくは−低級アルキルアリールから選択される）、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ（式中、Ｒｃは、低級アルキル、アリールまたは−低級アルキルアリールから選択される）あるいは−低級アルキル−ＯＲｄ（式中、Ｒｄは、好適な保護基またはＯＨ基である）から選択され、これらは全て、場合により、１つ以上の置換可能な位置で１つ以上の好適な置換基によって置換され、
結合［ａ］および［ｂ］は互いにシン位にあり、
Ｒ’は、前記アミノ末端アミノ酸のアミノ酸側鎖であり、
Ｒ”は、任意置換アミドであり、および
前記アミノ酸分子は、アミノ酸または直鎖ペプチドであって、Ｎ’は前記アミノ酸分子のアミノ末端での窒素であり、およびＣ’は前記アミノ酸分子のカルボキシ末端での炭素であり、ただし前記アミノ酸分子が直鎖ペプチドである場合、結合［ａ］および［ｃ］は互いにアンチ位にあるものとする。］
で表される環状アミノ酸分子を提供する。
【００１４】
もう一つの態様では、アミノ酸分子の環化における化合物の用途であって、前記化合物が、式（Ｉａ）／（Ｉｂ）：
【００１５】
【化３】
0005866277.tif 000005
【００１６】
で表されるものであって、式中前記アミノ酸分子のアミノ末端の近位の炭素原子と立体化学的に整合しつつ、前記アルデヒド基の近位の炭素原子にα−立体中心を含んでおり、
ｎ＝０または１であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は独立して、Ｈ、低級アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケニル、複素環、式−Ｃ（Ｏ）ＯＲ＊（式中、Ｒ＊はアルキルおよびアリールから選択される）で表されるエステル、式−Ｃ（Ｏ）ＮＲ＊＊Ｒ＊＊＊（式中、Ｒ＊＊およびＲ＊＊＊は独立して、アルキルおよびアリールから選択される）で表されるアミド、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、−ＯＨ、低級アルキル、アリール、−低級アルキルアリールまたは−ＮＲａＲｂから選択され、前記式中、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、低級アルキル、アリールもしくは−低級アルキルアリールから選択される）、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ（式中、Ｒｃは、低級アルキル、アリールまたは−低級アルキルアリールから選択される）あるいは−低級アルキル−ＯＲｄ（式中、Ｒｄは、好適な保護基である）から選択され、これらがいずれも、場合により、１つ以上の置換可能な位置で１つ以上の好適な置換基によって置換されており、
前記アミノ酸分子は、アミノ酸、直鎖ペプチドまたはこれらの塩であり、ただし前記アミノ酸分子が直鎖ペプチドである場合、前記化合物は、前記ペプチドのアミノ末端の近位の炭素原子と立体化学的に整合しつつ、前記アルデヒドの近位にアジリジン不斉中心を含むものとする、前記化合物の用途を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】ロイシン異性体を用いた粗反応混合物の１Ｈ−ＮＭＲ比較を表す。
【図２】アミナール生成物を引き起こす不整合反応を表すスキームである。
【図３】環状生成物をもたらす整合反応を表す。
【図４】方法１〜３で合成される環状生成物の化学構造を表す。
【図５】環状生成物１の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図６】環状生成物２の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図７】環状生成物３の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図８】環状生成物４の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図９】環状生成物５の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図１０】環状生成物６の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図１１】環状生成物７の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図１２】環状生成物８の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図１３】環状生成物９の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図１４】環状生成物１０の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図１５】環状生成物１１の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図１６】環状生成物１２の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図１７】環状生成物１３の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図１８】環状生成物１４の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図１９】環状生成物１５の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図２０Ａ】環状生成物１６の１Ｈ−およびＣＯＳＹ  ＮＭＲスペクトルである。
【図２０Ｂ】環状生成物１６の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図２１】環状生成物１７の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図２２】環状生成物１８の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図２３】環状生成物１９の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図２４】環状生成物２０の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図２５】環状生成物２１の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルである。
【図２６】環状生成物２２の１Ｈ−およびＣＯＳＹ  ＮＭＲスペクトルである。
【図２７】環状生成物２３の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルである。
【図２８】Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙの０．２ＭでのＨＡＴＵ媒介環化に関する未処理のＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）分析結果を表す。
【図２９】Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙの０．２Ｍでのイソシアニド／アミノアルデヒド媒介環化に関する未処理のＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）分析結果を表す。
【図３０】アジリジン含有環状ペプチドの求核的開環反応を表す。
【図３１】チオール及びアンモニウムイオンのｐＫａ並びにイオン対のΔｐＫａを表す。
【図３２】チオール開環生成物の反応混合物についての未処理のＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）分析結果を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の実施態様は、以下の記述および添付の図面を参照することで十分に理解できよう。記述および図面において、同様の数字は同様の構造またはプロセスを表すものとする。
【００１９】
本明細書では、環状ペプチドを高収率および高い選択率で生成すると同時に、従来の環化反応中に通常生じる問題を回避した、１段階反応について説明する。今や大環状分子の終盤での多様化は、一続きに達成することが可能である。大環状化生成物は特異的修飾部位を有するので、環状ペプチドを終盤に構造変化することが可能である。環化後の多様化は、バイオ産業及び製薬業界両者の大員環ライブラリでの長年の課題であった。本発明の大環状化方法は、特にこの課題を解決するものである。
【００２０】
本明細書では、合成に役立つ無保護のアジリジン基とアルデヒド基を含む、安定な両性アミノアルデヒド類の用途について述べている８。両性アミノアルデヒドを、ペプチドのアミン末端およびカルボキシル末端と可逆反応するように促す。結果として生じる求電子性中間体は、有効モル濃度が高いので、求核性アジリジン部と速やかに反応する。その結果、好ましくない鎖／環平衡をル・シャトリエの原理によってシフトさせて、環状生成物へ効率良く転化させるようにする。別の態様では、環化は、脂肪族アミノ酸側鎖残基や酸性および塩基性アミノ酸側鎖残基を用いることもできる。特にペプチドは、酸性および塩基性残基を有するものを含めて、本発明の方法の範疇にあると考えられ、どの場合でも単一のジアステレオマー生成物をもたらす。トリフルオロエタノール（「ＴＦＥ」）は、ペプチドの二次構造を安定化して極性相互作用を促進する能力９が知られており、好ましい反応媒体である。ユージー（Ugi）４成分縮合反応は、カルボン酸とアミンとアルデヒドとイソシアニドを用いる周知の反応１０であって、両性イオン大環状化前駆体を生成する好ましい手段である。反応機構上、ユージー反応は、アミド結合形成の熱力学的原動力に繋がる一連の可逆転移を経て進行することが知られている。出発原料としてα−アミノ酸とアルデヒドとイソシアニドを用いると、反応は、両性イオン性イミニウムイオン中間体を介して進み、イソシアニドからの攻撃により、求電子性混合無水物を生成する。その後のメタノールとの反応により、直鎖ペプチドエステルがジアステレオ異性体混合物として得られる１１。この反応を、直鎖ペプチドと従来の（単官能）アルデヒドを用いた環状ペプチド合成で試みた。しかし、ジアステレオ選択性や支配的なシクロ二量化生成物がないことから、収率は低かった１２、１３。
【００２１】
一態様では、環状アミノ酸分子の製造方法であって、前記方法が、アミノ末端とカルボキシル末端とを有するアミノ酸分子を、イソシアニドおよび式（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）：
【００２２】
【化４】
0005866277.tif 000006
【００２３】
［式中、ｎ＝０または１であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は独立して、Ｈ、低級アルキル、アルケニル、複素環、シクロアルキル、式−Ｃ（Ｏ）ＯＲ＊（式中、Ｒ＊はアルキルおよびアリールから選択される）で表されるエステル、式−Ｃ（Ｏ）ＮＲ＊＊Ｒ＊＊＊（式中、Ｒ＊＊およびＲ＊＊＊は独立して、アルキルおよびアリールから選択される）で表されるアミド、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、−ＯＨ、低級アルキル、アリール、−低級アルキルアリールまたはＮＲａＲｂから選択され、前記式中、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、低級アルキル、アリールもしくは−低級アルキルアリールから選択される）、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ（式中、Ｒｃは、低級アルキル、アリールまたは−低級アルキルアリールから選択される）あるいは−低級アルキル−ＯＲｄ（式中、Ｒｄは、好適な保護基またはＯＨ基である）から選択され、これらは全て、場合により、１つ以上の置換可能な位置で１つ以上の好適な置換基によって置換され、
前記化合物のアルデヒド成分は、場合により亜硫酸水素塩を付加した形態であってよく、
そして前記アミノ酸分子は、アミノ酸、直鎖ペプチドまたはこれらの塩であり、ただし前記アミノ酸分子が直鎖ペプチドである場合、前記化合物は、前記ペプチドのアミノ末端の近位の炭素原子と立体化学的に整合しつつ、前記アルデヒドの近位にアジリジン不斉中心を含むものとする。］
の化合物と反応させる工程を含む、前記方法を提供する。
【００２４】
好ましくは、アミノ酸分子がアミノ酸である場合、アミノ末端は一級アミノ基または二級アミノ基であるが、アミノ酸分子がペプチドである場合、アミノ末端は二級アミノ基である。
【００２５】
一実施態様では、Ｒ１〜Ｒ５のうちいずれか１つはＨである。好ましくは、ｎ＝０であり、そしてＲ２およびＲ３はＨである、またはＲ１〜Ｒ３はＨである。
【００２６】
特別な実施態様では、Ｒ１は、ＣＨ２ＯＴＢＤＭＳまたはＣＨ２ｉＰｒである。
【００２７】
一実施態様では、アミノ酸分子は直鎖ペプチドである。好ましくは、直鎖ペプチドのアミノ末端アミノ酸は、プロリン、およびＮＨＢｎ、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＰｈまたはＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＮで置換されたアミノ基を有するアミノ酸からなる群より選択される。
【００２８】
他の実施態様では、アミノ酸分子は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セレノシステイン、セリン、チロシン、トレオニン、トリプトファンおよびバリンからなる群より選択されるＤ−またはＬ−アミノ酸である。
【００２９】
アミノ酸分子は、α−アミノ酸、β−アミノ酸またはγ−アミノ酸であってよい。
【００３０】
一実施態様では、イソシアニドは、（Ｓ）−（−）−α−メチルベンジルイソシアニド、１，１，３，３−テトラメチルブチルイソシアニド、１−ペンチルイソシアニド、２，６−ジメチルフェニルイソシアニド、２−モルホリノエチルイソシアニド、２−ナフチルイソシアニド、２−ペンチルイソシアニド、４−メトキシフェニルイソシアニド、ベンジルイソシアニド、ブチルイソシアニド、シクロヘキシルイソシアニド、イソプロピルイソシアニド、ｐ−トルエンスルホニルメチルイソシアニド、フェニルイソシアニドジクロリド、ｔｅｒｔ−ブチルイソシアニド、（トリメチルシリル）メチルイソシアニド、１Ｈ−ベンゾトリアゾル−１−イルメチルイソシアニド、２−クロロ−６−メチルフェニルイソシアニド、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル２−イソシアノサクシネート、ｔｅｒｔ−ブチル２−イソシアノ−３−メチルブチレート、ｔｅｒｔ−ブチル２−イソシアノ−３−フェニルプロピオネート、ｔｅｒｔ−ブチル２−イソシアノプロピオネートおよびｔｅｒｔ−ブチル３−イソシアノプロピオネートからなる群より選択され、好ましくはｔｅｒｔ-ブチルイソシアニドである。
【００３１】
一部の実施態様では、前記方法は非求核性反応媒体中、好ましくはトリフルオロエタノール中、またはＨＦＩＰと水との混合液中で行う。
【００３２】
一実施態様において、アミノ酸分子がアミノ酸である場合は、前記方法を水中で行う。
【００３３】
一部の実施態様では、前記方法は、前記アジリジン部分の求核的開環反応によって前記環状アミノ酸分子に蛍光標識を結合させる工程を更に含む。
【００３４】
一部の実施態様では、ペプチドの長さは、アミノ酸２〜３０個分である。
【００３５】
別の態様では、本明細書に記載の方法を用いて製造された、環状アミノ酸分子を提供する。
【００３６】
環化は、場合により、特定のペプチドまたはアミノ酸側鎖を当業者に既知の方法で保護する必要がある可能性があるので、その保護も包含するものと考えられる。
【００３７】
別の態様では、式（ＩＩ)：
【００３８】
【化５】
0005866277.tif 000007
【００３９】
［前記式中、ｎ＝０または１であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は独立して、Ｈ、低級アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケニル、複素環、式−Ｃ（Ｏ）ＯＲ＊（式中、Ｒ＊はアルキルおよびアリールから選択される）で表されるエステル、式−Ｃ（Ｏ）ＮＲ＊＊Ｒ＊＊＊（式中、Ｒ＊＊およびＲ＊＊＊は独立して、アルキルおよびアリールから選択される）で表されるアミド、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、−ＯＨ、低級アルキル、アリール、−低級アルキルアリールまたは−ＮＲａＲｂから選択され、前記式中、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、低級アルキル、アリールもしくは−低級アルキルアリールから選択される）、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ（式中、Ｒｃは、低級アルキル、アリールまたは低級アルキルアリールから選択される）あるいは−低級アルキル−ＯＲｄ（式中、Ｒｄは、好適な保護基またはＯＨ基である）から選択され、これらは全て、場合により、１つ以上の置換可能な位置で１つ以上の好適な置換基によって置換され、
結合［ａ］および［ｂ］が互いにシン位にあり、
Ｒ’は、前記アミノ末端アミノ酸のアミノ酸側鎖であり、
Ｒ”は、任意置換アミドであり、
そして前記アミノ酸分子は、アミノ酸または直鎖ペプチドであって、Ｎ’は前記アミノ酸分子のアミノ末端での窒素であり、およびＣ’は前記アミノ酸分子のカルボキシ末端での炭素であり、ただし前記アミノ酸分子が直鎖ペプチドである場合、結合［ａ］および［ｃ］は互いにアンチ位にあるものとする。］
で表される環状アミノ酸分子を提供する。
【００４０】
好ましくは、アミノ酸分子がアミノ酸である場合、アミノ末端は一級アミノ基または二級アミノ基であるが、アミノ酸分子が直鎖ペプチドである場合、アミノ末端は二級アミノ基である。
【００４１】
一実施態様では、Ｒ１〜Ｒ５のうちいずれか１つはＨである。好ましくは、ｎ＝０であり、そしてＲ２およびＲ３はＨである、またはＲ１〜Ｒ３はＨである。
【００４２】
特別な実施態様では、Ｒ１は、ＣＨ２ＯＴＢＤＭＳまたはＣＨ２ｉＰｒである。
【００４３】
一実施態様では、アミノ酸分子は直鎖ペプチドである。好ましくは、直鎖ペプチドのアミノ末端アミノ酸は、プロリン、およびＮＨＢｎ、ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＳＯ２ＰｈまたはＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＮで置換されたアミノ基を有するアミノ酸からなる群より選択される。
【００４４】
他の実施態様では、アミノ酸分子は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セレノシステイン、セリン、チロシン、トレオニン、トリプトファンおよびバリンからなる群より選択されるＤ−またはＬ−アミノ酸である。
【００４５】
アミノ酸分子は、α−アミノ酸、β−アミノ酸またはγ−アミノ酸であってよい。
【００４６】
一実施態様では、Ｒ”は、ｔｅｒｔ−ブチルアミドである。
【００４７】
別の態様では、アミノ酸分子の環化における化合物の用途であって、前記化合物は、式（Ｉａ）／（Ｉｂ）：
【００４８】
【化６】
0005866277.tif 000008
【００４９】
で表されるものであって、式中前記アミノ分子のアミノ末端の近位の炭素原子と立体化学的に整合しつつ、前記アルデヒド基の近位の炭素原子にα−立体中心を含んでおり、および
ｎ＝０または１であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は独立して、Ｈ、低級アルキル、アリール、ヘテロアリール、アルケニル、複素環、式−Ｃ（Ｏ）ＯＲ＊（式中、Ｒ＊はアルキルおよびアリールから選択される）で表されるエステル、式−Ｃ（Ｏ）ＮＲ＊＊Ｒ＊＊＊（式中、Ｒ＊＊およびＲ＊＊＊は、アルキルおよびアリールから独立して選択される）で表されるアミド、−ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは、−ＯＨ、−低級アルキル、アリール、−低級アルキルアリールまたは−ＮＲａＲｂから選択され、前記式中、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、低級アルキル、アリールもしくは−低級アルキルアリールから選択される）、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ（式中、Ｒｃは、−低級アルキル、アリールまたは−低級アルキルアリールから選択される）あるいは−低級アルキル−ＯＲｄ（式中、Ｒｄは、好適な保護基である）から選択され、これらは全て、場合により、１つ以上の置換可能な位置で１つ以上の好適な置換基によって置換されており、
そして前記アミノ酸分子は、アミノ酸、直鎖ペプチドまたはこれらの塩であり、ただし前記アミノ酸分子が直鎖ペプチドである場合、前記化合物は、前記ペプチドのアミノ末端の近位の炭素原子と立体化学的に整合しつつ、前記アルデヒドの近位にアジリジン不斉中心を含むものとする、
前記化合物の用途を提供する。
【００５０】
本明細書で使用するとき、用語「アミノ酸分子」は、それぞれのアミノ酸に加えて、ペプチド類も包含するものとする。
【００５１】
本明細書で使用するとき、用語「アミノ酸」は、アミノ基、カルボン酸基および多種多様な側鎖を含む分子を指す。アミノ酸には、タンパク質中に一般に存在する２０個のアミノ酸だけでなく、当業者に既知の非標準的なアミノ酸および非天然アミノ酸誘導体も含むものとするため、α−、β−およびγ−アミノ酸を含むが、これらに限定されない。ペプチドは、少なくとも２個のアミノ酸の重合体であり、例えば、標準的なアミノ酸、非標準的なアミノ酸および非天然アミノ酸を包含することができる。
【００５２】
本発明に関して使用するとき、用語「好適な置換基」は、Ｈ、ヒドロキシル、シアノ、アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ヘキシル等の低級アルキル）、アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ等の低級アルコキシ）、アリールオキシ（例えば、フェノキシ等）、ビニル、アルケニル（例えば、ヘキセニル等）、アルキニル；ホルミル、ハロアルキル（例えば、ＣＦ３、ＣＣｌ３等を包含する低級ハロアルキル）、ハロゲン化物、アリール（例えば、フェニルおよびナフチル）、ヘテロアリール（例えば、チエニルおよびフラニル等）、アミド（例えば、Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂであって、前記式中、ＲａおよびＲｂは独立して、低級アルキル、アリールまたはベンジル等から選択される）、アシル（例えば、Ｃ（Ｏ）Ｃ６Ｈ５等）、エステル（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３等）、エーテルおよびチオエーテル（例えば、Ｏ−Ｂｎ等）、チオアルコキシ、ホスフィノ並びに−ＮＲａＲｂ（式中、ＲａおよびＲｂは独立して、低級アルキル、アリールまたはベンジル等から選択される）を独立して包含するものとする。本発明に関して使用するとき、好適な置換基とは、本発明の方法によって所望の生成物の形成を妨げない置換基を表すものと理解すべきである。
【００５３】
本発明に関して使用するとき、本明細書中で単独でまたは他の置換基と組み合わせて用いられる用語「低級アルキル」とは、炭素数１〜６の非環式、直鎖または分枝鎖アルキル置換基を表し、例えばメチル、エチル、１−メチルエチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル等が挙げられる。「低級アルコキシ」、「低級チオアルキル」および「低級アルケニル」等は、炭素原子数に関しては前記用語と同じような使い方であると理解すべきである。本明細書中で用いられる「低級アルコキシ」としては、例えばメトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシが挙げられる。
【００５４】
用語「アルキル」には低級アルキルが含まれ、例えば炭素原子数７〜１０の非環式、直鎖または分枝鎖アルキル置換基のように、炭素原子数が６を超えるアルキル基も包含される。
【００５５】
本明細書中で単独でまたは他の置換基と組み合わせて使用するとき、用語「アリール」とは、単環式芳香族系または多環式芳香族系を表す。例えば、用語「アリール」には、フェニル環またはナフチル環が含まれ、さらには、蛍光標識（例えば、アントラセン）または放射性標識およびそれらの誘導体のように、より大きな多環式芳香族系を包含する場合もある。
【００５６】
本明細書中で単独でまたは他の置換基と組み合わせて使用するとき、用語「ヘテロアリール」とは、窒素、酸素および硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子を含有し、そして芳香族系を形成する、５員、６員または７員の不飽和複素環を表す。用語「ヘテロアリール」にはまた、窒素、酸素および硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子を含有する、５員、６員または７員の不飽和複素環を構成する多環式芳香族系も包含される。
【００５７】
本明細書中で単独でまたは他の置換基と組み合わせて使用するとき、用語「シクロアルキル」とは、シクロアルキル置換基を表すものであり、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５８】
本明細書中で使用するとき、用語「シクロアルキル−アルキル−」とは、シクロアルキルラジカルが直接結合しているアルキルラジカルを表すものであり、シクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチルメチル、１−シクロペンチルエチル、２−シクロペンチルエチル、シクロヘキシルメチル、１−シクロヘキシルエチルおよび２−シクロヘキシルエチルが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で使用する場合、アリールアルキル−、アリール低級アルキル−（例えば、ベンジル）、−低級アルキルアルケニル（例えば、アリル）、ヘテロアリールアルキル−等は、前記用語「アルキル」または「低級アルキル」と同じような使い方であると理解すべきである。例えば、用語「アリールアルキル−」とは、アリールが結合したアルキルラジカルを表す。アリールアルキル−の例としては、ベンジル（フェニルメチル）、１−フェニルエチル、２−フェニルエチルおよびフェニルプロピルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５９】
本明細書中で単独でまたは他のラジカルと組み合わせて使用するとき、用語「複素環」とは、窒素、酸素および硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子を含有する３員〜７員の飽和または不飽和（芳香族を含む）複素環から水素を除去して得られる、１価のラジカルを表す。このような複素環の例としては、アジリジン、エポキシド、アゼチジン、ピロリジン、テトラヒドロフラン、チアゾリジン、ピロール、チオフェン、ヒダントイン、ジアゼピン、イミダゾール、イソキサゾール、チアゾール、テトラゾール、ピぺリジン、ピペラジン、ホモピぺリジン、ホモピペラジン、１，４−ジオキサン、４−モルホリン、４−チオモルホリン、ピリジン、ピリジン−Ｎ−オキシドまたはピリミジン等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６０】
本明細書中で単独でまたは他のラジカルと組み合わせて使用するとき、用語「アルケニル」とは、炭素原子を２個以上含有し、そのうちの少なくとも２個が二重結合で互いに結合された、不飽和非環式直鎖ラジカルを表すものとする。このようなラジカルの例としては、エテニル（ビニル）、１−プロペニル、２−プロペニルおよび１−ブテニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６１】
本明細書中で使用するとき、用語「アルキニル」とは、炭素原子を２個以上含有し、そのうちの少なくとも２個が三重結合で互いに結合された、不飽和非環式直鎖ラジカルを表すものとする。このようなラジカルの例としては、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニルおよび１−ブチニルが挙げられるが、これらに限定されない。  
【００６２】
本明細書中で単独でまたは他のラジカルと組み合わせて使用するとき、用語「アルコキシ」とは、−Ｏ−（Ｃ１〜ｎ）アルキルラジカルを表し、前記式中、アルキルは、先に定義したように炭素原子を１個以上含有しており、例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、１−メチルエトキシ、ブトキシおよび１，１−ジメチルエトキシが挙げられる。ｎが１〜６の場合は、「低級アルコキシ」という用語が前述と同様に適用されるが、用語「アルコキシ」には、「低級アルコキシ」だけでなく、ｎが６を超える（例えば、ｎ＝７〜１０）アルコキシ基も包含される。本明細書中で単独でまたは他のラジカルと組み合わせて使用するとき、用語「アリールオキシ」は−Ｏ−アリールを表すものであって、前記アリールは、上述と同様に定義される。
【００６３】
ペプチドは、アミノ酸２個以上の重合体である。
【００６４】
以下の実施例は、本発明の様々な態様を例証するものであって、本明細書に述べる本発明の広範な態様を限定するものではない。
【実施例】
【００６５】
実施例１
材料および方法
無水トルエンとジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を入手して、そのまま使用した。テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）は、ナトリウム・ベンゾフェノンケチルを用いてアルゴン中で蒸留した。ＴＦＥ（２，２，２−トリフルオロエタノール）およびＨＦＩＰ（１，１，１，３，３，３−ヘキサフルオロ−２−イソプロパノール）を含む他の溶媒は全て試薬級の品質であった。融点は、メルテンプ（MelTemp）融点測定装置で測定したものであり、補正はしていない。
【００６６】
方法１：
次の方法を用いてアミノ酸／ペプチド環化反応を行った。マグネティック撹拌子を入れたスクリューキャップ付きバイアル瓶に、ペプチド（０．２ミリモル）とＴＦＥ  １ｍｌを加えて、均一な溶液となるまで撹拌した。次に、アジリジンアルデヒド二量体（０．１ミリモル）およびイソシアニド（０．２ミリモル）を続けて加えて、得られた混合物を、表２に記載した時間で撹拌した。反応は、６０ｅＶのエレクトロスプレイイオン化質量分析（「ＥＳＩ−ＭＳ」）および／または薄層クロマトグラフィー（「ＴＬＣ」）分析でモニターした。反応終了後、水１ｍｌとＥｔ２Ｏ  １ｍｌを加えて、混合物を激しく震盪してから氷で冷した。生じた沈殿物を濾過し、ヘキサンと冷Ｅｔ２Ｏ（１ｍｌ）で洗浄すると、環状ペプチドが得られた。生成物が水溶性であるかまたは沈殿しない場合は、反応混合物を減圧濃縮した後、Ｅｔ２Ｏおよびヘキサン（０．２ｍｌ）を加えて紛体化して、環状ペプチド生成物を得た。
【００６７】
方法２：
ＴＦＥの代わりにＨＦＩＰを用いてアミノ酸／ペプチド環化反応を行った（方法２）。マグネティック撹拌子を入れたスクリューキャップ付きバイアル瓶に、ペプチド（０．２ミリモル）とＨＦＩＰ  １ｍｌを加えて、均一な溶液となるまで撹拌した。次に、アジリジンアルデヒド二量体（０．１ミリモル）およびイソシアニド（０．２ミリモル）を続けて加えて、得られた混合物を、表２に記載した時間で撹拌した。反応は、６０ｅＶのＥＳＩ−ＭＳおよび／またはＴＬＣ分析でモニターした。反応終了後、混合物を減圧濃縮してから、Ｅｔ２Ｏおよびヘキサン（０．２ｍｌ）を加えて紛体化して、環状ペプチド生成物を得た。
【００６８】
方法３：
ＨＦＩＰと水を用いてアミノ酸／ペプチド環化反応を行った。マグネティック撹拌子を入れたスクリューキャップ付きバイアル瓶に、ペプチド（０．２ミリモル）、ＨＦＩＰ  １ｍｌおよびＨ２Ｏ  ４７マイクロリットルを加えて、均一になるまで撹拌した。次に、アジリジンアルデヒド二量体（０．１ミリモル）およびイソシアニド（０．２ミリモル）を続けて加えて、得られた混合物を、表２に記載した時間で撹拌した。反応は、６０ｅＶのＥＳＩ−ＭＳおよび／またはＴＬＣ分析でモニターした。反応終了後、混合物を減圧濃縮してから、Ｅｔ２Ｏおよびヘキサンを加えて紛体化して、環状ペプチド生成物を得た。
【００６９】
注釈：
システインまたはチオール残渣含有ペプチドを用いた反応では、反応前に溶媒をアルゴンを用いて２時間脱気した。その後、反応はアルゴン雰囲気下で行った。
【００７０】
方法１〜３それぞれで合成され得る環状生成物の一部を表１にまとめ、図４に示す。
【００７１】
表１．アミノ酸／ペプチド環化反応に用いた方法
【表１】
0005866277.tif 000009
【００７２】
表１に挙げた各環状生成物の相対立体化学は、各１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのメチン領域をピペラジノン（１）のスペクトルで関連づけて確定した。
【００７３】
クロマトグラフィー：
フラッシュカラムクロマトグラフィー分析は、２３０〜４００メッシュのシリサイクル（Silicycle）シリカゲルを用いて行った。マッハライ・ナーゲル（Macherey-Nagel）製のプレコート済みガラス基材付きＴＬＣプレート（ＳＩＬ  Ｇ／ＵＶ２５４、０．２５ｍｍ）で薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を行い、そしてＵＶランプ（２５４ｎｍ）とヨード染色を用いて可視化した。
【００７４】
核磁気共鳴スペクトル：
１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルは、バリアン（Varian）製マーキュリー（Mercury）４００または５００ＭＨｚ分光器で記録した。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルはＴＭＳ（０  ｐｐｍ）を基準とし、また１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルはＣＤＣｌ３（７７．２３ｐｐｍ）を基準とした。ピーク多重度は次の略語で表している：ｓ  シングレット、ｂｓ  ブロードなシングレット、ｄ  ダブレット、ｔ  トリプレット、ｑ  カルテット、ｍ  マルチプレット、ｄｓ  シングレットのダブレット、ｄｄ  ダブレットのシングレット、ｄｄｄ  ダブレットのダブレットのダブレット、ｂｔ  ブロードなトリプレット、ｔｄ  ダブレットのトリプレット、ｔｄｄ  ダブレットのダブレットのトリプレット。
【００７５】
質量分析：
高分解能質量スペクトルは、７０ｅＶのＶＧ  ７０−２５０Ｓ（二重集束形）質量分析計、またはＥＳＩイオン源とＭＳ／ＭＳと正確な質量測定機能を装備するＡＢＩ／サイエックスＱスター（ABI/Sciex  Qstar）質量分析計で測定した。低分解能の質量スペクトル（ＥＳＩ）は、６０ｅＶ、７０ｅＶおよび１００ｅＶで測定した。
【００７６】
アジリジンアルデヒド二量体を得るための合成経路：
本実験で使用したアミノアルデヒド二量体は全て、補足の式１および２に示した合成経路により調製した。
【００７７】
結果
様々なピペラジノンを１段階反応で生成した（表２）。
【００７８】
表２．ピペラジノン合成適用範囲（Ｌ−アミノ酸由来生成物を示す）
【化７】
0005866277.tif 000010
【表２】
0005866277.tif 000011
【００７９】
環／鎖平衡をシフトする工程は、両性アミノアルデヒドをＵｇｉの反応条件下に供したときに生じた求電子性混合無水物に対する、求核性ＮＨアジリジンの渡環効果を衰弱させることである（スキーム２）。反応を化学量論的条件で行って、環状ペプチド生成物を得る。高希釈、すなわち環状ペプチド合成で高収率を得るために通常必須の臨界条件は必要としない。
【数２】
0005866277.tif 000012
【００８０】
通常困難とされる中程度の大きさの環が、非常に容易にしかも高収率で数時間以内に生成され得る（表３）。
【００８１】
表３．直鎖ペプチドの大環状化についての代表的な適用範囲
【化８】
0005866277.tif 000013
【表３】
0005866277.tif 000014
【００８２】
表１中の環状生成物の１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを図５〜２７に示す。
【００８３】
直鎖ペプチド、イソシアニドおよび両性アミノアルデヒドを用いた、立体選択性と化学選択性に優れた様々な環状ペプチドを作製するための１段階反応を示している。ユージー（Ugi）反応は、単官能アルデヒドの代わりに両性アミノアルデヒドを用いて行う。Ｌ−フェニルアラニンをｔｅｒｔ−ブチルイソシアニドおよびアジリジンアルデヒドと反応させると、環状ピペラジノンが約１時間で収率９２％で得られた（表２、番号１）。化合物１の相対立体化学は、Ｘ線分析を用いて確認した。ある種のアミノ酸をこの反応で処理すると、どの場合も直鎖ペプチドを形成することなく、対応するピペラジノン生成物が単一のジアステレオ異性体として得られた（図１）。
【００８４】
エピマーの存在は、粗反応混合物の１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６またはＣＤＣｌ３）分析で調べた。調査したどの反応にも、エピマーに相当するシグナルは検出されなかった。そのため、得られた粗環状ペプチドの選択性は＞２０：１となった。
【００８５】
反応結果に対する中程度のペプチド鎖長の効果について調べた（表２）。難易度の高い中程度の大きさの環は容易に調製され、その反応時間は１０時間未満であり、高収率かつジアステレオ選択的に反応が進行する。好ましい調製手順には、ジエチルエーテルおよびヘキサンから生成物の沈殿も含まれている。環状ペプチドは、ＨＰＬＣでそれ以上精製しなくてもよい。その上、反応の全過程においても、また生成物の単離中でも、ラセミ化が検出されなかった。エピ化が生じないことは、高い立体選択性からも明らかであり、したがって、カルボニル基の近位にＳ立体中心を有するアジリジンアルデヒドは、Ｌ−アミノ酸残基を含むペプチドと、Ｎ末端で大環状化を生じさせる。Ｄ−アミノ酸末端ペプチドとの「不整合」反応は非生産的であって、安定なアミナールの形成をもたらす。
【００８６】
ペプチドとの環化を生じさせるためにＮ末端アミノ酸のα−立体中心（この場合はプロリン）がアジリジンアルデヒドのα−立体中心と整合したのであろうと判断した。不整合反応では、生じた唯一の生成物が、対応するアミナールである（図２）。長い反応時間後やイソシアニド当量の追加後にも、環状ペプチドの生成は認められなかった。この制約は、一つ一つのアミノ酸を環化するときには現れない。
【００８７】
アミノアルデヒドの逆の光学異性体を同じ反応に使用すると、プロリンとアミノアルデヒドはどちらもα−立体中心にＳ−配置を有していた。この整合例では、ペプチドの環化が容易に進行して、対応する環状生成物が高収率で得られた（図３）。
【００８８】
この立体選択プロセスは、Ｎ末端で起こり得るエピ化に大きな影響を及ぼす。環化が起こるには整合した立体化学が必要となるため、その結果生じる環状ペプチドには当然、整合立体中心が含まれるであろう。さらに、不整合反応で環状ペプチドが形成されなかったことは、マクロ条件下でエピ化が生じないこと（すなわち、整合した基質がもたらされること）を示唆している。
【００８９】
この化学反応での一貫した収率は、環化を支配する反応機構に起因して得られる可能性が高い。この点においては、単官能アルデヒドとのユージー（Ugi）反応からの脱却は明白である。イソシアニドおよびペプチドとの反応に単官能アルデヒドを用いると、低いジアステレオ選択性が認められる。さらに重要なことには、残基を６個未満含む直鎖ペプチドの環化中には望ましくないシクロ二量化が生じ、トリペプチドの環化ではシクロ二量体のみが生成する１３。この低い選択性は、混合無水物に対するアミンの緩慢な渡環攻撃の結果であり（スキーム２、Ａ）、したがって、分子間反応を速度論的に競合させる。二級アミン末端ペプチドを含む環化反応混合物に両性アミノアルデヒドを加えると、緩慢な渡環攻撃に代わって、混合無水物の環外に位置する求核性アジリジンによる迅速な攻撃が生じる（スキーム２、Ｂ）。これにより、妨げのない攻撃軌跡が展開される。ＴＦＥは非求核性溶媒であるため、混合無水物の早期加溶媒分解は見られない。この反応機構は、中間体である環状混合無水物の形成時にのみＣ末端が活性化されて、その後、環外のアジリジンの攻撃を受けるようにする。これは、分子内の大環状化に対する選択性を確保するだけでなく、Ｃ末端の活性化を長引かせたりエピ化を生じさせたりもしない。したがって、高希釈、つまり従来の環状ペプチド合成で高収率を達成するために通常必須の臨界条件を必要としない６。さらに、本発明に係る実験ではオリゴマー副生物もポリマー副生物も検出されなかった。本発明に係る反応と、従来の直鎖テトラペプチドのラクタム化（環状ペプチドの合成で一般に用いられる反応）との対照比較も行った。アミノアルデヒドが媒介する大環状化は、迅速に、選択性良く、しかも効率良く、環状ペプチドを形成した。これに対し、ラクタム化中に形成された無数の構造物からは、ほんの少量の環状ペプチドが検出された。望ましくないシクロ二量化５が大環状化よりも優勢であったことは、従来の分子内反応の緩慢な反応速度論を証明するものである。ペプチドの大環状化反応は一般に、極度な希釈条件下で行われる。典型的な手順では、１０−４Ｍのモル濃度を要する。この大量希釈が、分子間環化における選択性を高めて、その結果、望ましくないシクロ二量化や三量化を制限する。
【００９０】
表３に挙げた各環状生成物の相対立体化学についての特性分析結果は次の通りである。
【００９１】
（３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３−ベンジル−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−７−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）−２−オキソ−１，４−ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン−５−カルボキサミド（１）
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ：７．３６−７．１８（ｍ，５Ｈ），６．７５（ｂｓ，１Ｈ），３．８６（ｄｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｄｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｂｓ，１Ｈ），３．４７（ｄｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１．２Ｈｚ，１Ｈ），３．２５（ｄｄ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．１０（ｍ，１Ｈ），２．５２（ｄｄ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，１０．４Ｈｚ，１Ｈ），２．４０（ｍ，１Ｈ），１．８０（ｂｓ，１Ｈ），１．０２（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．１０（ｓ，３Ｈ），０．０８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ．  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）δ：１８４．８，１６９．０，１３８．５，１２９．７，１２８．９，１２７．０，６３．９，５７．５，５３．６，５０．７，４４．６，３９．０，３５．５，２８．５，２６．１，１８．６，−５．０ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．４４６．２８３３，ｆｏｕｎｄ  ４４６．２８３１
【００９２】
（３Ｒ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３−ベンジル−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−７−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）−２−オキソ−１，４−ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン−５−カルボキサミド（２）
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ：７．３５−７．２０（ｍ，５Ｈ），６．３２（ｂｓ，１Ｈ），３．８６（ｍ，１Ｈ），３．７３（ｄｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，４．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｂｓ，１Ｈ），３．７３（ｄｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，４．２Ｈｚ，１Ｈ），３．２５（ｄｄ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．１０（ｍ，１Ｈ），２．５２（ｄｄ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，１０．４Ｈｚ，１Ｈ），２．４０（ｍ，１Ｈ），１．８０（ｂｓ，１Ｈ），１．３１（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．１０（ｓ，３Ｈ），０．０８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ．  １３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ：１８４．０，１６９．１，１３６．２，１２９．２，１２９．１，１２７．３，６３．０，５９．５，５１．４，４９．６，４２．２，３８．７，３６．０，２８．８，２６．１，１８．７，−５．１ｐｐｍ．  ＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．４４６．３，ｆｏｕｎｄ  ４４６．３
【００９３】
（３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−７−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）−３−メチル−２−オキソ−１，４−ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン−５−カルボキサミド（３）
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ：７．４２（ｓ，ＮＨ），３．８８（ｄｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｄｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，５．２Ｈｚ，１Ｈ），３．５５（ｄ，Ｊ＝０．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４６（ｄｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１．６Ｈｚ，１Ｈ），３．０７（ｍ，１Ｈ），２．３６（ｔｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．８（ｂｓ，ＮＨ），１．３９（ｓ，９Η），１．２３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．０９（ｓ，３Ｈ），０．０８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ．  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）δ：１８５．５，１６９．３，６３．９，５３．８，５１．２，５１．０，４４．５，３９．３，２８．９，２６．１，１６．６，１５．０，−５．０ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．３７０．２５２０，ｆｏｕｎｄ  ３７０．２５２０
【００９４】
（１Ｓ，３ａＳ，８Ｒ，８ａＳ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）−３−オキソオクタヒドラジリノ［１，２−ａ］ピロロ［１，２−ｄ］ピラジン−８−カルボキサミド（４）
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ：６．１７（ｓ，１Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，４．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｄｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７０（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），３．１２（ｄｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，９．２Ｈｚ，１Ｈ），２．９７（ｄｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．９３−２．８９（ｍ，１Ｈ），２．６０（ｑ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），２．２５−２．０５（ｍ，２Ｈ），１．９０−１．７５（ｍ，３Ｈ），１．７０−１．５１（ｍ，１Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），０．８５（ｓ，９Ｈ），０．０９（ｓ，３Ｈ），０．０８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ．  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）δ：１８３．０，１６８．６，６５．０，６３．４，６３．２，５４．６，５１．３，４３．４，４１．０，２９．０，２６．１，２２．２，２２．０，１８．９，−５．１ｐｐｍ．  ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．３９６．２６７６，ｆｏｕｎｄ  ３９６．２６５６
【００９５】
（３Ｒ，５Ｓ，６Ｓ，７Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−（３−グアニジノプロピル）−７−イソブチル−２−オキソ−１，４−ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン−５−カルボキサミド（５）
１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ＭＨｚ）δ：３．５９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．４６（ｍ，１Ｈ），３．１３（ｍ，１Ｈ），２．９４（ｍ，１Ｈ），３．３７（ｍ，１Ｈ），１．７８−１．４４（ｍ，８Ｈ），１．２２（ｓ，９Ｈ），０．８３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，３Ｈ），０．８１（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ．  １３Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，４００ＭＨｚ）δ：１８６．７，１７２．０，１５６．９，５４．９，５４．５，５４．０，４４．５，４２．８，２８．７，２７．９，２６．５，２５．７，２５．０，２４．１，２２．２，２１．５ｐｐｍ．  ＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．３６７．３，ｆｏｕｎｄ  ３６７．２  ａｎｄ  １８４．１  ｆｏｒ  ［Ｍ＋２Ｈ］２＋／２
【００９６】
（３Ｓ，５Ｓ，６Ｓ，７Ｓ）−３−（４−アミノブチル）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−７−イソブチル−２−オキソ−１，４−ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン−５−カルボキサミド（６）
ＮＭＲ  （Ｄ２Ｏ  ｗｉｔｈ  １０％  ｖ／ｖ  ＣＤ３ＣＯＯＤ，４００ＭＨｚ）δ：５．１４（ｄｄｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，４．４Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．０７（ｄｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，４．４Ｈｚ，１Ｈ），２．８５（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．８２−１．４６（ｍ，１０Ｈ），１．３２（ｓ，９Ｈ），０．８３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．８１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ．  １３Ｃ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ  ｗｉｔｈ  １０％  ｖ／ｖ  ＣＤ３ＣＯＯＤ，１００ＭＨｚ）δ：１７８．０，１７３．８，９７．２，５８．６，５４．５，５３．０，４０．６，３９．３，２９．３，２７．８，２７．６，２７．２，２６．８，２４．６，２２．２，２１．９，２０．８ｐｐｍ．  ＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．３３９．３，ｆｏｕｎｄ  ３３９．２  ａｎｄ  １７０．１  ｆｏｒ  ［Ｍ＋２Ｈ］２＋／２
【００９７】
（５Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−７−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）−２−オキソ−１，４−ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン−５−カルボキサミド（７）
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：６．９８（ｓ，１Ｈ），３．８７（ｄｄ，Ｊ＝１１．５，４．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｄｄ，Ｊ＝１１．５，４．５Ｈｚ，１Ｈ），３．３４−３．２４（ｍ，２Ｈ），３．１３（ｄ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，１Ｈ），２．４０（ｔｄ，Ｊ＝４．５，３．４Ｈｚ，１Ｈ），２．１７−１．９６（ｍ，１Ｈ），１．４３−１．３６（ｍ，９Ｈ），０．９４−０．８６（ｍ，９Ｈ），０．１３−０．０５（ｍ，６Ｈ）．１３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１８３．９３，１６８．３７，７７．４８，７７．１６，７６．８４，６３．０２，５５．８１，５１．２５，４８．７２，４５．２７，３９．６４，２８．８７，２６．０６，１８．５５，０．１５，−５．０９，−５．１２．
【００９８】
２−（（３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｒ））−５−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−７−イソブチル−２−オキソ−１，４−ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン−３−イル）酢酸（８）
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：４．６９−４．５８（ｍ，１Ｈ），３．９２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ＝９．８，３．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６６（ｄｄ，Ｊ＝７．８，４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．９０（ｄｄ，Ｊ＝１７．５，３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．８１（ｄｄ，Ｊ＝１６．７，４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．６９−２．５３（ｍ，２Ｈ），１．３６−１．３２（ｍ，９Ｈ），０．９８（ｄｔ，Ｊ＝８．５，４．２Ｈｚ，６Ｈ）．  １３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：１８８．２１，１７２．４０，１５８．６６，１５８．６２，５６．０５，５５．２５，５５．２３，５１．９５，４４．１７，４３．５５，４３．３５，４２．５５，４２．３９，４２．１６，４１．９８，２９．８５，２８．９０，２８．８５，２８．１０，２７．３７，２７．１６，２６．８５，２６．５１，２３．１９，２２．６３，２１．０５
【００９９】
（３Ｒ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−７−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−３−（メルカプトメチル）−２−オキソ−１，４−ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン−５−カルボキサミド（９）
注釈：この化合物のスペクトルは非常にブロードなピークを特徴とするので、正確な分光学的同定は困難である。この原因は、求核性チオールの存在や、酸化およびアジリジン開環を受け易いといった、化合物（９）本来の不安定さにある。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ：３．４７（ｓ，１Ｈ），３．４１（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），４．３５−２．４２（ｍ，７Ｈ），１．７０−１．４２（ｂｓ，１０Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．１０（ｓ，３Ｈ），０．０８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ．ＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．４０２．６，ｆｏｕｎｄ  ４０２．２
【０１００】
（３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−３−（（１Ｈ−イミダゾル−４−イル）メチル）−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−７−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−２−オキソ−１，４−ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン−５−カルボキサミド（１０）
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ：７．５６（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ），６．２２（ｓ，１Ｈ），４．４６（ｍ，１Ｈ），３．７２（ｄｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｍ，１Ｈ），３．４４（ｄｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１．５Ｈｚ，１Ｈ），３．２７（ｄｄ，Ｊ＝１４．１Ｈｚ，３．１Ｈｚ，１Ｈ），２．９９（ｄｄ，Ｊ＝１４．７Ｈｚ，４．２Ｈｚ，１Ｈ），２．８０（ｄｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ，８．１Ｈｚ，１Ｈ），２．４０（ｍ，１Ｈ），２．０５（ｂｓ，１Ｈ），１．３６（ｓ，９Ｈ），０．８７（ｓ，９Ｈ），０．０７（ｓ，３Ｈ），０．０５（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ．  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００  ＭＨｚ）δ：１８５．４，１７１．４，１６９．５，１６８．６，１３５．１，６４．３，６２．７，６０．６，５４．７，５１．２，４４．５，３９．３，２８．９，２６．０，１８．４，−５．３ｐｐｍ．  ＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．４３６．６，ｆｏｕｎｄ  ４３６．２
【０１０１】
（３Ｓ，５Ｒ，６Ｒ，７Ｓ）−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−７−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−３−（ヒドロキシメチル）−２−オキソ−１，４−ジアザビシクロ［４．１．０］ヘプタン−５−カルボキサミド（１１）
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ：６．８０（ｂｓ，１Ｈ），６．１５（ｂｓ，１Ｈ），４．０２（ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｄｄ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ，６．７Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ＝１４．２Ｈｚ，３．０Ｈｚ，１Ｈ），３．６８（ｂｓ，１Ｈ），３．５３（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｄｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．１３（ｍ，１Ｈ），２．５５（ｍ，１Ｈ），２．４２（ｍ，１Ｈ），１．３９（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．１０（ｓ，３Ｈ），０．０８（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ．  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）δ：１８５．３，１６８．９，６３．５，６１．４，５５．８，５３．９，５１．２，４４．９，３９．６，２８．９，２６．１，１８．６，−５．１ｐｐｍ．  ＭＳ  （ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．３８６．６，  ｆｏｕｎｄ  ３８６．２
【０１０２】
（１Ｓ，４Ｓ，６ａＳ，１１Ｒ，１１ａＳ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）−４−イソブチル−３，６−ジオキソデカヒドロ−１Ｈ−アジリノ［１，２−ａ］ピロロ［１，２−ｄ］［１，４，７］トリアゾニン−１１−カルボキサミド（１２）
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ：４．４７（ｍ，１Ｈ），４．１４（ｄｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，６Ｈｚ，１Ｈ），４．０７−３．９９（ｍ，２Ｈ），３．８４（ｄｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．３２（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．２６−３．１５（ｍ，２Ｈ），２．４２−２．３０（ｍ，２Ｈ），１．９２−１．７８（ｍ，３Ｈ），１．７４（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），１．５９（ｓｅｐｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），１．２２（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），０．８７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），０．８４（ｓ，９Ｈ），０．０６（ｓ，３Ｈ），０．０３（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ．  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ）δ：１７４．１，１６４．１，１５７．４，８６．５，６２．４，６０．７，６０．６，５７．７，５４．２，５２．１，５０．２，３９．６，２９．０，２５．８，２５．２，２５．１，２２．１，２１．０，２０．５，１７．９，−６．５ｐｐｍ．  ＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．５０９．３，  ｆｏｕｎｄ  ５０９．３
【０１０３】
（１Ｓ，４Ｓ，６ａＲ，１１Ｓ，１１ａＲ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−（３−グアニジノプロピル）−１−イソブチル−３，６−ジオキソデカヒドロ−１Ｈ−アジリノ［１，２−ａ］ピロロ［１，２−ｄ］［１，４，７］トリアゾニン−１１−カルボキサミド（１３）
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ：４．２６（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），４．１８（ｄｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５８（ｄｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，５．２Ｈｚ，１Ｈ），３．２８−３．２４（ｍ，２Ｈ），３．００（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），２．７０（ｄｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，６．４Ｈｚ，１Ｈ），２．３２−２．１８（ｍ，２Ｈ），１．９８−１．５２（ｍ，１１Ｈ），１．２８（ｓ，９Ｈ），１．０１（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ．  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ）δ：１７８．０，１６０．８，１５９．１，１５７．４，８６．９，６４．３，６３．５，６０．２，５４．５，５３．７，５１．０，４２．６，４１．４，２９．４，２８．８，２６．１，２４．９，２４．５，２２．７，２１．３，２０．４ｐｐｍ．  ＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．４６４．３，ｆｏｕｎｄ  ４６４．３  ａｎｄ  ２３２．６  ｆｏｒ［Ｍ＋２Ｈ］２＋／２
【０１０４】
２−（（１Ｓ，４Ｓ，６ａＲ，１１Ｓ，１１ａＲ）−１１−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−１−イソブチル−３，６−ジオキソデカヒドロ−１Ｈ−アジリノ［１，２−ａ］ピロロ［１，２−ｄ］［１，４，７］トリアゾニン−４−イル）酢酸（１４）
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ：４．４６（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３４（ｄｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｄｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．３８−３．３０（ｍ，１Ｈ），３．０２（ｄｄ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ），２．８５−２．７３（ｍ，１Ｈ），２．５７（ｄｄ，Ｊ＝１７．２Ｈｚ，８．４Ｈｚ，１Ｈ），２．４５−２．３２（ｍ，２Ｈ），２．０５−１．６２（ｍ，７Ｈ），１．５８−１．４８（ｍ，２Ｈ），１．２７（ｓ，９Ｈ），１．０１（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），０．９８（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）ｐｐｍ．  ＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．４２３．３，ｆｏｕｎｄ  ４２３．２
【０１０５】
（１Ｓ，４Ｓ，９ａＳ，１４Ｒ，１４ａＳ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）−４−イソブチル−３，６，９−トリオキソテトラデカヒドロアジリノ［１，２−ａ］ピロロ［１，２−ｄ］［１，４，７，１０］テトラアザシクロドデシン−１４−カルボキサミド（１５）１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）δ：４．５５（ｄｄｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，３．２Ｈｚ，１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３２（ｄｄ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，４Ｈｚ，１Ｈ），４．２１（ｄｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，６Ｈｚ，１Ｈ），４．１５−４．０５（ｍ，３Ｈ），３．９１（ｄｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．４１Ｈｚ（ｄｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），３．３６−３．２８（ｍ，１Ｈ），２．５０−２．３０（ｍ，２Ｈ），２．００−１．５０（ｍ，７Ｈ），１．３１（ｓ，９Ｈ），０．９８−０．９２（ｍ，６Ｈ），０．９２（ｓ，９Ｈ），０．１３（ｓ，３Ｈ），０．１１（ｓ，３Ｈ）ｐｐｍ．  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，１００  ＭＨｚ）δ：１７８．３，１６６．４，１６５．１，１５７．６，８６．７，６２．７，６１．０，６０．１，５４．２，５３．７，５２．６，５０．５，４４．０，４１．６，２８．９，２５．６，２５．２，２５．１，２５．１，２２．６，２０．７，２０．５，１７．９，−６．５，−６．５ｐｐｍ．  ＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．５６６．４，ｆｏｕｎｄ  ５６６．４
【０１０６】
（１Ｒ，１ａＳ，２Ｒ，６ａＳ，１２Ｓ，１８Ｓ）−１８−ベンジル−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−１，１２−ジイソブチル−７，１０，１３，１６，１９−ペンタオキソイコサヒドロアジリノ［１，２−ａ］ピロロ［１，２−ｄ］［１，４，７，１０，１３，１６］ヘキサアザシクロオクタデシン−２−カルボキサミド（１６）
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）δ：７．８２（ｂｓ，ＮＨ），７．４０−７．２０（ｍ，５Η），７．１８（ｂｓ，ＮＨ），７．０５（ｂｓ，ＮＨ），６．８１（ｂｓ，２  ＮＨ），４．６４（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），４．１３（ｄｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．１０−３．９０（ｍ，２Ｈ），３．５７（ｄｄ，Ｊ＝１６Ｈｚ，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５０−３．３９（ｍ，２Ｈ），３．２６（ｄｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，５．６Ｈｚ，１Ｈ），３．１２（ｄｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．１２−３．０８（ｍ，１Ｈ），３．００−２．９２（ｍ，２Ｈ），２．６３（ｔ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．２８−２．１８（ｍ，１Ｈ），１．９０−１．７０（ｍ，２Ｈ），１．３７−１．２５（ｍ，９Ｈ），１．１０−０．８８（ｍ，１２Ｈ）ｐｐｍ．  １３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５  ＭＨｚ）δ：１８１．４，１７６．１，１７５．７，１７２．１，１７０．１，１６９．２，１３６．４，１３０．１，１２８．７，１２６．８，５６．２，６３．０，４３．２，４２．５，４０．２，３８．６，３７．９，３１．２，３０．０，２９．８，２９．５，２８．８，２８．７，２７．２，２５．１，２４．９，２４．３，２３．３，２３．１，２２．８，２２．７，２２．６，２２．４，２２．３，２１．９，  ＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．６８２．４，  ｆｏｕｎｄ  ６８２．４
【０１０７】
（１Ｓ，１２ａＳ，１７Ｒ，１７ａＲ）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−１−イソブチル−３，６，９，１２−テトラオキソヘキサデカヒドロ−１Ｈ−アジリノ［１，２−ａ］ピロロ［１，２−ｄ］［１，４，７，１０，１３］ペンタアザシクロペンタデシン−１７−カルボキサミド（１７）
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：４．５７−４．４４（ｍ，１Ｈ），４．３２−３．７０（ｍ，１０Ｈ），３．３８（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），３．２８（ｓ，１Ｈ），３．１４（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，５．６Ｈｚ，１Ｈ），２．５２−２．４１（ｍ，１Ｈ），２．３７（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），２．１５−１．６５（ｍ，８Ｈ），１．６４−１．４８（ｍ，２Ｈ），１．４２−１．２３（ｍ，８Ｈ），１．００（ｄｔ，Ｊ＝２１．４，７．４Ｈｚ，６Ｈ）．  １３Ｃ  ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：１７６．１８，１７１．２３，１６８．９７，１６５．９０，１５９．２４，８６．３７，６５．７７，６３．４９，６１．４８，５９．７６，５５．４１，５１．４３，４７．３８，４５．６５，４５．２３，４４．５９，４４．４３，４４．１９，４３．４１，４２．４６，２９．８５，２９．４３，２８．９７，２８．５８，２８．４６，２７．７２，２７．１３，２６．７４，２５．６８，２３．８４，２３．６８，２３．１４，２３．０６，２２．１６，２１．６２．
【０１０８】
ｔｅｒｔ−ブチル２−（（１Ｓ，４Ｓ，７Ｓ，１３Ｓ，１５ａＳ，２０Ｒ，２０ａＳ）−２０−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−１−（（（ｔｅｒｔブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−３，６，９，１２，１５−ペンタオキソ−１３−（３−（３−（（２，２，４，６，７−ペンタメチル−２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル）スルホニル）グアニジノ）プロピル）イコサヒドロアジリノ［１，２−ａ］ピロロ［１，２−ｄ］［１，４，７，１０，１３，１６］ヘキサアザシクロオクタデシン−７−イル）アセテート（１８）
１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．８４（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，２Ｈ），７．５８（ｄｄ，Ｊ＝１８．１，９．１Ｈｚ，２Ｈ），７．０７（ｓ，１Ｈ），６．４１（ｓ，２Ｈ），５．６８（ｓ，１Ｈ），４．８５（ｄｑ，Ｊ＝１３．７，６．８Ｈｚ，１Ｈ），４．７０−４．５８（ｍ，１Ｈ），４．３５（ｑ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），４．１７−４．０７（ｍ，１Ｈ），３．９７（ｄｄ，Ｊ＝１４．２，７．５Ｈｚ，２Ｈ），３．７４（ｓ，１Ｈ），３．６９−３．５７（ｍ，１Ｈ），３．５６−３．４２（ｍ，２Ｈ），３．４２−３．１３（ｍ，４Ｈ），２．９６（ｓ，２Ｈ），２．９３（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ），２．８９−２．７６（ｍ，４Ｈ），２．６６−２．５３（ｍ，７Ｈ），２．４２−２．１５（ｍ，２Ｈ），２．１０（ｓ，３Ｈ），２．０７−１．９８（ｍ，１Ｈ），１．８７−１．５５（ｍ，８Ｈ），１．４６（ｓ，６Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），１．３４（ｓ，９Ｈ），０．８７（ｓ，９Ｈ），０．０９（ｓ，３Ｈ），０．０５（ｓ，３Ｈ）．  １３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１８７．０７，１７６．１４，１７４．４６，１７１．４６，１７１．０４，１６９．１１，１６６．９３，１５８．７７，１５６．３９，１３８．６３，１３３．６６，１３２．５５，１２４．６５，１１７．５５，１０５．２４，８６．４９，８２．６４，６３．９２，６３．８４，６０．８１，５７．０７，５１．６９，５１．３１，５０．３７，４９．５６，４５．４７，４３．５１，４０．４３，３７．５５，３５．９９，３０．２８，２９．１７，２８．８３，２８．２２，２６．１１，２４．６１，１９．４９，１８．７１，１８．１９，１７．３１，１２．６９，−５．１１，−５．４４．  ＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．１１０４．６，  ｆｏｕｎｄ  １１０４．６
【０１０９】
ｔｅｒｔ−ブチル（４−（（１Ｓ，４Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ，１５ａＳ，２０Ｒ，２０ａＳ）−１３−（（Ｒ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）エチル）−２０−（ｔｅｒｔ−ブチルカルバモイル）−１−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−１０−（２−メチルチオ）エチル−３，６，９，１２，１５−ペンタオキソイコサヒドロアジリノ［１，２−ａ］ピロロ［１，２ｄ］［１，４，７，１０，１３，１６］ヘキサアザシクロオクタデシン−７−イル）ブチル）カルバメート（１９）
１Ｈ  ＮＭＲ  （４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．８３（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｓ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝２１．３Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｍ，２Ｈ），７．０８（ｄｄ，Ｊ＝１５．７，７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｓ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），４．９８（ｄ，Ｊ＝２７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．８４−４．６７（ｍ，１Ｈ），４．６０（ｓ，１Ｈ），４．４０−４．３０（ｍ，１Ｈ），４．１６−３．９３（ｍ，４Ｈ），３．８２（ｓ，２Ｈ），３．７７−３．６９（ｍ，３Ｈ），３．６７（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），３．４５−３．２８（ｍ，２Ｈ），３．２７−２．９９（ｍ，６Ｈ），３．００−２．８６（ｍ，２Ｈ），２．８４（ｓ，１Ｈ），２．７８−２．５５（ｍ，３Ｈ），２．４５−２．１９（ｍ，５Ｈ），２．１２（ｓ，４Ｈ），２．０６−１．９７（ｍ，３Ｈ），１．８９（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，７Ｈ），１．７１−１．５５（ｍ，３Ｈ），１．５４−１．３９（ｍ，２１Ｈ），１．３６（ｓ，１３Ｈ），１．３１−１．２６（ｍ，１２Ｈ），１．０６（ｔ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，４Ｈ），０．９３−０．８２（ｍ，１４Ｈ），０．０６（ｓ，３Ｈ），０．０５（ｓ，３Ｈ）．  １３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１８２．９９，１７５．２０，１７１．９４，１７０．７５，１７０．３７，１６８．９３，１５６．４４，７７．４３，７５．６９，６６．３２，６４．３５，６３．９３，６１．７７，５７．５２，５６．５８，５４．２８，４２．６８，４０．３７，３１．２１，３０．９５，３０．０８，２９．８８，２９．３６，２８．８５，２８．６６，２６．０１，２４．９２，２４．１６，１８．９１，１８．４８，１７．８９，１５．４８，−５．２５，−５．２９．  ＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．９８３．６，  ｆｏｕｎｄ  ９８３．６
【０１１０】
（１Ｓ，７Ｓ，１０Ｓ，１５ａＳ，２０Ｒ，２０ａＳ）−１０−（（１Ｈ−イミダゾル−５−イル）メチル）−７−（４−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）ベンジル）−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−３，６，９，１２，１５−ペンタオキソイコサヒドロアジリノ［１，２−ａ］ピロロ［１，２−ｄ］［１，４，７，１０，１３，１６］ヘキサアザシクロオクタデシン−２０−カルボキサミド（２０）
１Ｈ  ＮＭＲ  （４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：９．９２（ｓ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），７．３９−７．２７（ｍ，１１Ｈ），７．１７−７．０２（ｍ，１１Ｈ），６．７８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．６９（ｓ，１Ｈ），４．４８（ｐ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），４．４２−４．１８（ｍ，２Ｈ），４．０６−３．９９（ｍ，１Ｈ），３．９１（ｄｄ，Ｊ＝１１．４，３．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｄｄ，Ｊ＝１１．３，４．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｄｄ，Ｊ＝９．８，４．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４８−３．３７（ｍ，１Ｈ），３．３２−２．９９（ｍ，８Ｈ），２．８３（ｄｄ，Ｊ＝６．８，３．４Ｈｚ，１Ｈ），２．４１−１．９５（ｍ，２Ｈ），１．９１−１．７２（ｍ，２Ｈ），１．６１（ｓ，１２Ｈ），１．４１（ｓ，１０Ｈ），１．３５−１．２４（ｍ，２０Ｈ），０．７２（ｓ，１Ｈ），０．０７（ｓ，３Ｈ），０．０５（ｓ，３Ｈ）．  １３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１８４．３１，１７５．２０，１７２．６１，１７０．６７，１６９．４７，１６８．１２，１５４．５３，１４２．３１，１３８．１９，１３６．８１，１３１．９１，１２９．９７，１２９．８５，１２８．４３，１２８．３７，１２０．０９，７７．４３，６３．４９，６２．１７，６１．５５，５７．８４，５４．９７，５２．１９，５１．１５，４８．６７，４３．３６，４２．５３，４１．７５，３６．３６，３１．８４，３０．９９，２９．９２，２９．８８，２９．４４，２９．０５，２８．６７，２６．０７，２４．４９，１９．８０，１８．５６，−５．１９．  ＭＳ  （ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．８６６．５，ｆｏｕｎｄ  ８６６．５
【０１１１】
（１Ｓ，４Ｓ，７Ｓ，１３Ｓ，１５ａＳ，２０Ｒ，２０ａＳ）−１３−ベンジル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）−４−メチル−３，６，９，１２，１５−ペンタオキソ−７−（２−オキソ−２−（トリチルアミノ）エチル）イコサヒドロアジリノ［１，２−ａ］ピロロ［１，２ｄ］［１，４，７，１０，１３，１６］ヘキサアザシクロオクタデシン−２０−カルボキサミド（２１）
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：７．９４（ｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，２Ｈ），７．７３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），７．３４−７．１１（ｍ，２３Ｈ），６．７９（ｓ，１Ｈ），４．９２−４．７２（ｍ，２Ｈ），４．５９（ｄｄ，Ｊ＝１６．３，８．６Ｈｚ，１Ｈ），４．２５（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），４．０１（ｄ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ，１Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝１４．２，７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｓ，１Ｈ），３．５９−３．５１（ｍ，２Ｈ），３．４８−３．２４（ｍ，３Ｈ），３．０９（ｄｄ，Ｊ＝１３．８，８．９Ｈｚ，１Ｈ），２．９６−２．６８（ｍ，６Ｈ），２．５９（ｄｄ，Ｊ＝１５．８，３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．４５−２．０８（ｍ，２Ｈ），２．０７−１．９６（ｍ，１Ｈ），１．６２（ｓ，５Ｈ），１．５２−１．１７（ｍ，１８Ｈ），０．９４（ｓ，９Ｈ），０．１５（ｓ，３Ｈ），０．１３（ｓ，３Ｈ）．  １３Ｃ  ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：１８４．０６，１７５．６４，１７３．９３，１７１．０１，１７０．４９，１６９．１５，１６７．２０，１４４．２８，１３６．９８，１２９．６１，１２８．８１，１２８．４９，１２８．３０，１２７．４８，１２６．７５，７７．５５，７７．２３，７６．９１，７１．１７，６３．６３，６０．７２，５７．１２，５２．９６，５１．５４，５０．５８，４９．７１，４９．２７，４５．３５，４４．５３，３７．２７，３６．８０，３３．９３，３０．２２，２９．２４，２６．２４，２４．３２，１８．７８，１７．８９，０．２２，−５．１１，−５．３４．  ＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．１０２７．５，  ｆｏｕｎｄ  １０２７．６
【０１１２】
（４Ｓ，１０Ｓ，１５ａＳ，２０Ｒ，２０ａＳ）−４−ベンジル−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチル）−１０−イソブチル−３，６，９，１２，１５−ペンタオキソイコサヒドロアジリノ［１，２−ａ］ピロロ［１，２ｄ］［１，４，７，１０，１３，１６］ヘキサアザシクロオクタデシン−２０−カルボキサミド（２２）
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ：８．３３（ｂｓ，１Ｈ），８．１７（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｓ，１Ｈ），７．２１（ｍ，５Ｈ），６．０４（ｂｓ，１Ｈ），５．０８（ｂｓ，１Ｈ），４．５８（ｍ，１Ｈ），３．８７（ｄｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，５．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８０（ｂｓ，１Ｈ），２．４８（ｄｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１．８Ｈｚ，２Ｈ），２．１６（ｍ，２Ｈ），１．６２−１．５７（ｍ，７Ｈ），１．４８（ｍ，２Ｈ），１．４２（ｍ，２Ｈ），１．３５（ｍ，２Ｈ），１．２０（ｍ，９Ｈ），１．０７（ｍ，２Ｈ），０．８１（ｍ，６Ｈ）ｐｐｍ．  ＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．６２６．８，ｆｏｕｎｄ  ６２６．３  ａｎｄ  ３１３．７  ｆｏｒ  ［Ｍ＋２Ｈ］２＋／２
【０１１３】
化合物２２に７−ｍｍｃが結合したもの（２３）
環状ペプチド２２を原材料として反応させて、結合したペプチド２３を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ８．９５（ｓ，１Ｈ），８．６８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），８．３２（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），７．４２−７．０８（ｍ，５Ｈ），６．４６（ｓ，１Ｈ），６．３１（ｓ，１Ｈ），４．４７−４．１５（ｍ，３Ｈ），３．７３（ｄｄ，Ｊ＝２０．５，１４．１Ｈｚ，３Ｈ），３．４５−３．３３（ｍ，２Ｈ），３．１７（ｄｄ，Ｊ＝２０．９，１３．０Ｈｚ，２Ｈ），２．９８−２．６４（ｍ，４Ｈ），２．４０（ｓ，２Ｈ），２．２２−２．１０（ｍ，１Ｈ），１．９１（ｄｄｄ，Ｊ＝２２．９，１３．４，６．６Ｈｚ，２Ｈ），１．７９−１．４０（ｍ，５Ｈ），１．３０−１．１５（ｍ，９Ｈ），０．９３−０．７４（ｍ，６Ｈ）．  ＭＳ（ＥＳＩ）［ＭＨ］＋ｃａｌｃｄ．８１８．４，  ｆｏｕｎｄ  ８１８．３
【０１１４】
ＨＡＴＵ媒介環化
都合のよいことに、環化反応は、少なくとも０．００２Ｍ濃度の出発原料アミノ酸／ペプチドで行うことができる。好ましくは０．００２Ｍ〜０．２Ｍの濃度で行う。
【０１１５】
他の実施態様では、本発明の方法は、少なくとも０．１Ｍ濃度の出発原料アミノ酸／ペプチドで行う。別の実施態様では、本発明の方法は、約０．２Ｍ濃度の出発原料アミノ酸／ペプチドで行う。
【０１１６】
慣例上、従来の大環状化はこのような高濃度で行うことはできない。これは、ＨＡＴＵプロセスとの直接比較から明らかとなったものであり、観測された主生成物はオリゴマー化や重合に由来するものではない。
【０１１７】
Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾル−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（「ＨＡＴＵ」）によって媒介されるＰｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙの環化を、０．２Ｍにおけるアミノアルデヒド／イソシアニド環化法と比較した。反応完了時に、粗反応混合物を液体クロマトグラフィー／エレクトロスプレイイオン化質量分析（「ＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）」）で分析して、所望の環状ペプチドに対する選択性の度合いを調べた。
【０１１８】
ＨＡＴＵ反応の質量分析（「ＭＳ」）による分析結果からは、０．２Ｍでシクロ二量化が優勢であることが分かった（図２８）。ｍ／ｚ＝５３７．２と５５９．２の主要ピークはそれぞれ、シクロ二量化生成物とそのナトリウムキレートに相当するが、所望の環状ペプチドは、ｍ／ｚ＝２６９にほんの少量検出された。また、シクロ三量体（ｍ／ｚ＝８０５）も検出された。粗反応混合物にはさらに、いくつかの他の未知の副生物も含まれていた。
【０１１９】
ＭＳピーク分析結果から、次の６成分が見つかった。
成分１：ピークスキャン番号２７．４。上位イオンピーク６５５．５６６．９２３
成分２：ピークスキャン番号２８．４。上位イオンピーク９８２．７４４．７１４
成分３：ピークスキャン番号２９．９。上位イオンピーク２３５．８４８．５３８
成分４：ピークスキャン番号３０．９。上位イオンピーク５５９．８２７．５６０
成分５：ピークスキャン番号３１．９。上位イオンピーク７５２．９３１
成分６：ピークスキャン番号３２．７。上位イオンピーク５３７．２９５．４４６
【０１２０】
イソシアニド/アミノアルデヒド媒介環化に関する未処理のＬＣ−ＭＳ（ＥＳＩ）分析結果からは、所望の環状ペプチド（ｍ／ｚ＝４７９）の選択性が０．２Ｍで高水準であることが分かった（図２９）。二量体副生物や三量体副生物のピークは全く検出されなかった。反応混合物中には、特徴的なフラグメントイオンピークと残留Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙのみが残っていた。
【０１２１】
ＭＳピーク分析結果からは、次の２成分が見つかった。
成分１：ピークスキャン番号２９．７。上位イオンピーク２８７．２１２．３８３（Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）
成分２：ピークスキャン番号３０．９。上位イオンピーク４７９．３９６．２４０（環状ペプチド）
【０１２２】
実施例２
方法および材料
方法Ａ：
求核試薬として芳香族チオールを用いて、アジリジン含有環状ペプチドの開環を行う（方法Ａ）。マグネティック撹拌子を入れたスクリューキャップ付きバイアル瓶に、アジリジン含有環状ペプチドと芳香族チオール（０．０６６ミリモル）を、脱気したＣＨＣｌ３  ０．２ｍｌに加えた。次に、この溶液にＮＥｔ３（０．０６ミリモル）を加えて、反応溶液を室温で３〜４時間撹拌した。その後、反応溶液をＣＨ２Ｃｌ２で希釈して、ＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液（３ｍｌ）で２回洗浄した後、食塩水（３ｍｌ）で１回洗浄した。続いて、有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させて、濾過し、減圧濃縮した。未処理の開環生成物も高純度ではあったが、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中５％ＭｅＯＨ）で精製することで、分析上純粋な試料が得られた。
【０１２３】
方法Ｂ：
求核試薬として脂肪族チオール又はイミドを用いて、アジリジン含有環状ペプチドの開環を行う（方法Ｂ）。マグネティック撹拌子を入れたスクリューキャップ付きバイアル瓶に、アジリジン含有環状ペプチド（０．０６ミリモル）と脂肪族チオールまたはイミド（０．０６６ミリモル）を、脱気したＣＨＣｌ３  ０．２ｍｌに加えた。次に、この溶液にＤＢＵ（０．０６ミリモル）を加えて、反応溶液を室温で３〜４時間撹拌した。その後、反応溶液をＣＨ２Ｃｌ２で希釈して、ＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液（３ｍｌ）で２回洗浄した後、食塩水（３ｍｌ）で１回洗浄した。続いて、有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させて、濾過し、減圧濃縮した。未処理の開環生成物も高純度ではあったが、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中５％ＭｅＯＨ）で精製することで、分析上純粋な試料が得られた。
【０１２４】
結果
蛍光置換基（これに限定されるものではない）を包含する側鎖を、大環状化生成物に付加した（スキーム３）。
【０１２５】
【数３】
0005866277.tif 000015
【０１２６】
活性化アジリジン環を環状ペプチド骨格へ組み込むことで、求核的開環による様々な側鎖との結合に有用な位置がもたらされる。この十分に練られた方法は、炭化水素からビオチンおよびファルネシル誘導体１４に至る、求核性生体分子を用いて証明されている。例えば、環状ペプチドの結合手順は、一般に用いられる蛍光標識である７−メルカプト−４−メチルクマリン（７−ｍｍｃ）を用いて、アジリジン部分を求核的開環することで証明することができる（スキーム３）。別の態様では、市販のチオ安息香酸を用いて環状ペプチドを開環することで、終盤でのチオエステル残基の合成を利用することも可能である。この反応は円滑に進んで、開環生成物が収率９８％で得られる。チオエステル官能性を終盤に組み込むことで、酸化と求電子試薬の両方から保護するのに通常必須の工程が不要となる。その他多くの天然および非天然のアミノ酸側鎖も同様の開環手順で組み込まれる可能性があり、合成の終盤に環状ペプチドの立体配座を最適化する道が開かれる。他の求核試薬、例えば脂肪族チオール、酸、モルホリン等の二級アミンそしてイミドも同様に開環時に有効に作用した。
【０１２７】
他の態様では、アジリジン環を含む環状ペプチドを開環処理に付す（図３０）。このプロセスでは、合成の終盤に、対象の側鎖を環状ペプチド骨格へ付加することが可能である。開環反応は、ｐＫａに基づいて選択された好適な塩基／求核試薬系を用いて行った。好ましい反応では、ΔｐＫａ＝ｐＫａ［ＮＲ３Ｈ＋］−ｐＫａ［求核試薬］≒−１を満たす塩基／求核試薬ペアが用いられていた（図３１）。
【０１２８】
これらデータは、塩基と求核試薬との間の強いイオンペアリング（ΔｐＫａ＞１）によって反応性の低下が生じ得る可能性があることを示唆している。開環に最適な条件は、手際よく進行して、抽出処理後、修飾された可能性がある環状ペプチドを高純度で提供することが分かった（図３２）。
【０１２９】
実施例３
環状生成物（１）のＸ線分析を行った。
【０１３０】
結果
【化９】
0005866277.tif 000016
【０１３１】
表４．ｋ０７２２７の結晶データおよび精密構造解析
【表４】
0005866277.tif 000017
【０１３２】
表５．ｋ０７２２７の原子座標（×１０４）と等価等方性置換パラメータ（Å２×１０３）。Ｕ（等価）は、直交Ｕｉｊテンソル量のトレースの３分の１と定義する。
【表５Ａ】
0005866277.tif 000018
【表５Ｂ】
0005866277.tif 000019
【表５Ｃ】
0005866277.tif 000020
【０１３３】
表６．ｋ０７２２７の結合距離［Å］と結合角［°］
【表６Ａ】
0005866277.tif 000021
【表６Ｂ】
0005866277.tif 000022
【表６Ｃ】
0005866277.tif 000023
【表６Ｄ】
0005866277.tif 000024
【表６Ｅ】
0005866277.tif 000025
【表６Ｆ】
0005866277.tif 000026
【０１３４】
表７．ｋ０７２２７の異方性置換パラメータ（Å２×１０３）。異方性置換係数の指数は、−２π２［ｈ２ａ＊２Ｕ１１＋…＋２ｈｋａ＊ｂ＊Ｕ１２］で表される。
【表７Ａ】
0005866277.tif 000027
【表７Ｂ】
0005866277.tif 000028
【表７Ｃ】
0005866277.tif 000029
【０１３５】
【表８Ａ】
0005866277.tif 000030
【表８Ｂ】
0005866277.tif 000031
【表８Ｃ】
0005866277.tif 000032
【０１３６】
本発明の好ましい実施態様を本明細書に記載してきたが、本発明の精神または添付の特許請求の範囲を逸脱することなく、変更が可能なことは当業者には分かるであろう。本明細書に記載した参照文献はいずれも、その全部を参照として本明細書に組み込まれる。
【０１３７】
参照文献
(1) Drahl, S. Chem. Eng. News 2009, 87, 31.
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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