(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳酸菌株から作られる純乳酸菌粉末であり、腸内細菌の菌相の改善、胃粘膜の損傷指数の低減、および胃粘膜中のヒスチジン濃度の降下のためのラクトバチルス・パラカゼイ・亜種・パラカゼイ  ＮＴＵ  １０１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１）を含有するプロバイオティック組成物であって、
前記乳酸菌株は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１を有するヌクレオチドを含む、受託番号ＤＳＭ  ２８０４７のラクトバチルス・パラカゼイ・亜種・パラカゼイ  ＮＴＵ  １０１（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１）であり、
前記純乳酸菌粉末における前記ラクトバチルス・パラカゼイ・亜種・パラカゼイ  ＮＴＵ  １０１の含有菌数は１×１０１１ＣＦＵ／gであることを特徴とする、
ラクトバチルス・パラカゼイ・亜種・パラカゼイ  ＮＴＵ  １０１を含有するプロバイオティック組成物。
【請求項２】
前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１と少なくとも一つの特定の炭素源とを培養培地中に置き、そして少なくとも２４時間の培養を経ることにより、前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１から乳酸が生成されることを特徴とする、請求項１に記載のラクトバチルス・パラカゼイ・亜種・パラカゼイ  ＮＴＵ  １０１を含有するプロバイオティック組成物。
【請求項３】
前記特定の炭素源は、グルコース、ガラクトース、Ｄ−リボース、キシロース、フルクトース、α−ラクトース、マルトース、スクロース、トレハロース、ラフィノース、イノシトール、ソルビトール、Ｄ−マンニトール、クエン酸、デキストリン、デンプン及び糖蜜からなる群から選択されることを特徴とする、請求項２に記載のラクトバチルス・パラカゼイ・亜種・パラカゼイ  ＮＴＵ  １０１を含有するプロバイオティック組成物。
【請求項４】
前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１と少なくとも一つの特定の窒素源とを培養培地中に置き、そして少なくとも２４時間の培養を経ることにより、前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１から乳酸が生成されることを特徴とする、請求項１に記載のラクトバチルス・パラカゼイ・亜種・パラカゼイ  ＮＴＵ  １０１を含有するプロバイオティック組成物。
【請求項５】
前記特定の窒素源は、酵母エキス、牛肉エキス  、ペプトン、大豆ペプトン、トリプシン、コーンスティプリカー、カゼイン、尿素、クエン酸アンモニウム及び硫酸アンモニウムからなる群から選択されることを特徴とする、請求項４に記載のラクトバチルス・パラカゼイ・亜種・パラカゼイ  ＮＴＵ  １０１を含有するプロバイオティック組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ラクトバチルス・パラカゼイ・亜種・パラカゼイ  ＮＴＵ  １０１を含有するプロバイオティック組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
「乳酸菌」とは、糖類を代謝して５０％以上の乳酸を生成することができる細菌を意味する。その例として、乳酸桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、やロイコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）等が挙げられる。人類が発酵乳品を飲用する悠久の歴史を持つので  乳酸菌は、古くから安全性が非常に高い菌種（ＧＲＡＳ，  ｇｅｎｅｒａｌｌｙ  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ  ａｓ  ｓａｆｅ）として認識されており、最も代表的な腸内有益菌でもある。
【０００３】
乳酸菌は、「プロバイオティクス」中に最も重要な一群の細菌であり、プロバイオティクスの定義を「人類に投与する期間の間に、人類の腸内菌叢品質を向上させる１種または複数種の微生物」とする。その中、乳酸菌によって腸内菌叢品質を向上させることに作用するメカニズムとしては、下記（１）〜（４）点を含む。
（１）有機酸を生成して、腸内ｐＨを低下させる。
（２）有害菌と養分の競争を行う。
（３）腸の粘膜上皮に付着させ、有害菌の増殖場所を減少させる。
（４）抗菌物質を生成する。
【０００４】
現在、台湾国内では、多数の発酵乳産品について、飲用に関する人体実験を大規模に実施することにより、その産品は、腸内有益菌を増加させる効果が証明され、かつ衛生署の保健食品認証を取得することができる。
【０００５】
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１（ラクトバチルス・パラカゼイ・亜種・パラカゼイ  ＮＴＵ  １０１）は、台湾国立大学の微生物と生化学研究院の院長潘子明教授及びその研究開発チームによって研究開発された１つの優良な本土の乳酸菌株である。現在、多数の文献には、既にＬ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１は、胃腸菌相の改善、血圧低下、血液脂質低下、コレステロール低下、や抗アレルギー等多種の保健効果を有することが実証され、市場の潜在能力を有し、多種の産品が既に市販されているか、あるいは市販しようとする準備ができている。
【０００６】
しかしながら、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１を商品化することに既に成功したが、菌株識別するための技術に不足点がある。また、必要なＤＮＡ分子識別マーカーを保護するための特許を出願する必要がある。ＤＮＡ分子識別マーカーは、特定菌株のＤＮＡまたはＤＮＡ多型性パターンを鑑別するためのものである。伝統的な生物化学的測定に比べ、ＤＮＡ分子識別マーカーを用いて菌株を鑑別することで、下記の利点を有する。分離菌株を培養する必要がなく、または生菌を培養する必要もないので、加工製品に適用することができる。
【０００７】
そのため、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１を識別することが可能となる特定菌株のＤＮＡ及びそのＤＮＡ多型性パターンを提供するために、本出願の発明者は、鋭意に研究・発明した結果、遂に本発明の１種のＮＴＵ  １０１乳酸菌株及びプライマー組合せを研究・開発して完成するに至った。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明に関するいくつかの態様の基本的な理解を提供するために、下記に本発明の簡潔な概要を示す。この概要は、本発明に関する網羅的な概説を示すものではない点を理解されたい。なお、この概要は、本発明の鍵となる部分または重要な部分を確定することを意図したものでもなければ、本発明の範囲を限定することを意図したものでもない。その目的は、単に後ほど示されるさらに詳細な説明の前置きとして、いくつかのコンセプトを簡単な形で提示することにある。
【０００９】
本発明の主な目的は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１（ラクトバチルス・パラカゼイ・亜種・パラカゼイ  ＮＴＵ  １０１）に関する１種の乳酸菌株及びプライマー組合せを提供することであり、これにより、関連技術者は、Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１についての菌株鑑別するための依拠を得ることが可能となる。またさらに、関連技術者は、分離菌株または生菌を培養する必要なく、ＤＮＡ分子識別マーカーを用いてＮＴＵ  １０１菌株を迅速に鑑別できる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
従って、上記した本発明の主な目的を達成するため、本出願の発明者より、１種の乳酸菌株を提供する。それは、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１（ラクトバチルス・パラカゼイ・亜種・パラカゼイ  ＮＴＵ  １０１）であり、それは２０１３年１１月１８日にドイツ微生物培養細胞コレクションセンターに寄託され、受託番号ＤＳＭ  ２８０４７を与えられた。その内、前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１を有するヌクレオチドを含む。前記ヌクレオチドは、ランダム増幅多型ＤＮＡ及びポリメラーゼ連鎖反応の技術による複数本のプライマーの増幅で増殖させて得られる。その内、前記乳酸菌株を、さらに純乳酸菌粉末または複合乳酸菌粉末に製粉し、かつ成人は、毎日少なくとも４ｇの前記純乳酸菌粉末または前記複合乳酸菌粉末を摂取すれば、腸内の少なくとも１種の細菌の菌相の改善、胃粘膜の損傷面積の低減、胃粘膜の損傷指数の低減、及び胃粘膜中のヒスチジン濃度の降下を補助可能であろう。
【００１１】
また、前記複数本のプライマーは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２を有するヌクレオチド断片と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３を有するヌクレオチド断片と、を含む。
【００１２】
さらに、前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１と炭素源とを培養培地中に置き、そして少なくとも２４時間の培養を経ることにより、前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１から乳酸が生成される。
【００１３】
前記炭素源は、グルコース、ガラクトース、Ｄ−リボース、キシロース、フルクトース、α−ラクトース、マルトース、スクロース、トレハロース、ラフィノース、イノシトール、ソルビトール、Ｄ−マンニトール、クエン酸、デキストリン、デンプン及び糖蜜からなる群から選択される。
【００１４】
さらに、前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１と窒素源とを培養培地中に置き、そして少なくとも２４時間の培養を経ることにより、前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１から乳酸が生成される。
【００１５】
前記窒素源は、酵母エキス、牛肉エキス  、ペプトン、大豆ペプトン、トリプシン、コーンスティプリカー、カゼイン、尿素、クエン酸アンモニウム及び硫酸アンモニウムからなる群から選択される。
【００１６】
また、上記した本発明の主な目的を達成するため、本出願の発明者より、前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１である乳酸菌株を鑑別するためのプライマー組合せを提出する。
前記プライマー組合せは、（１）Ａ３−５Ｆ３  ＣＧＣＣＧＡＡＣＧＣＧＡＣＴＴＡＣＡＴＣ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４）、または（２）Ａ３−５Ｒ３  ＧＧＣＡＡＡＴＴＴＡＡＡＣＴＴＧＣＣＴＴＣＡＡＣＧ（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５）である。その内、ランダム増幅多型ＤＮＡ及びポリメラーゼ連鎖反応（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）の技術により、前記Ａ３−５Ｆ３のプライマーを増幅してＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１を有する前記ヌクレオチドを作製する。
【発明の効果】
【００１７】
従来技術に比べ、本発明の有益な効果は、次のとおりである。本発明が提供するＬ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１である乳酸菌株のヌクレオチド及びそのプライマー組合せによれば、関連技術者は、Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１についての菌株鑑別するための依拠を得ることが可能となる。またさらに、関連技術者は、分離菌株または生菌を培養する必要なく、ＤＮＡ分子識別マーカーを用いてＮＴＵ  １０１菌株を迅速に鑑別できる。
【００１８】
本発明の実施例または従来技術の技術的解決策をより明瞭に説明するため、以下、実施例または従来技術に対する説明に使用される必要な添付図面について、簡単に紹介する。明らかなように、以下に説明する添付図面は、単に本発明のいくつかの実施例を説明するために使用されるものにすぎず、創作的な労働を行わないことを前提として、当該分野における普通の技術者であれば、これらの添付図面に基づいて別の添付図面をさらに取得することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】プライマー組合せＡ、ＪとＬのＲＡＰＤ多型性パターンを示す画像である。
【図２Ａ】プライマー組合せＡとｃａｓｅｉ  ｇｒｏｕｐの乳酸桿菌のＲＡＰＤ多型性パターンを比較解析する画像である。
【図２Ｂ】プライマー組合せＡとｃａｓｅｉ  ｇｒｏｕｐの乳酸桿菌のＲＡＰＤ多型性パターンを比較解析する画像である。
【図２Ｃ】プライマー組合せＡとｃａｓｅｉ  ｇｒｏｕｐの乳酸桿菌のＲＡＰＤ多型性パターンを比較解析する画像である。
【図３Ａ】プライマー組合せＬとｃａｓｅｉ  ｇｒｏｕｐの乳酸桿菌のＲＡＰＤ多型性パターンを示す比較解析する画像である。
【図３Ｂ】プライマー組合せＬとｃａｓｅｉ  ｇｒｏｕｐの乳酸桿菌のＲＡＰＤ多型性パターンを示す比較解析する画像である。
【図３Ｃ】プライマー組合せＬとｃａｓｅｉ  ｇｒｏｕｐの乳酸桿菌のＲＡＰＤ多型性パターンを示す比較解析する画像である。
【図４】ＲＡＰＤ多型性断片Ａ３−５の比較図である。
【図５】ＲＡＰＤ多型性断片Ｌ３−１８の比較図である。
【図６Ａ】ＲＡＰＤ多型性断片Ａ３−５の分子マーカーの特異性の測定パターンを示す図である。
【図６Ｂ】ＲＡＰＤ多型性断片Ａ３−５の分子マーカーの特異性の測定パターンを示す図である。
【図７】胃壁の画像である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明に係る実施例の目的、技術的解決策及び利点をより明瞭にするため、下記では、本発明の実施例中の技術的解決策に対して明瞭かつ十分に説明する。なお、ここで記載された実施例は、あくまでも本発明の一部の実施例にすぎず、全ての実施例ではないことが明白であろう。
本発明の一実施形態中に記載の要素と特徴は、１つまたはさらに複数の別の実施形態に示される要素と特徴と組み合わせて実施することができる。注意すべきは、目的を明瞭にするため、説明において本発明に関係ないもの（当該分野における普通の技術者が既知している部品と処理の表記と記載）は省略してある点である。本発明中の実施例に基づき、当該分野における普通の技術者が創造的な労働をしない前提で得られるその他の実施例は、全て本発明の保護範囲に含まれる。
【００２１】
ＮＴＵ  １０１乳酸菌株（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｕｔａｎｔ）は、台湾国立大学の微生物と生化学研究院の院長潘子明教授及びその研究開発チームによって研究開発された１つの優良な本土の乳酸菌株Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１（ラクトバチルス・パラカゼイ・亜種・パラカゼイ  ＮＴＵ  １０１）であり、それを２０１３年１１月１８日にドイツ微生物培養細胞コレクションセンター（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ，Ｉｎｈｏｆｆｅｎｓｔｒ．７Ｂ，Ｄ−３８１２４  Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ））に寄託され、かつ受託番号ＤＳＭ  ２８０４７を与えられた。
具体的には、受託日：２０１３年１１月１８日、当該生物材料のサンプルを寄託する機関名：ＤＳＭＺ−ドイツ微生物培養細胞コレクションセンター、住所：ドイツ国、Ｄ−３８１２４ブラウンシュバイヒ、インホッフェンシュトラーセ７Ｂ。なお、当該生物材料をラクトバチルス・パラカゼイ・亜種・パラカゼイ  ＮＴＵ  １０１菌株（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１）と命名する。また、当該生物材料の特徴として、乳酸細菌培養培地（即ち、寒天ゲル平板）上にＮＴＵ  １０１菌株を置き、嫌気性（ａｎａｅｒｏｂｉｃ）または好気性（ａｅｒｏｂｉｃ）状態で、３７℃、２４〜４８時間を培養することで、平板上には、乳白色、円形、表面平滑かつ辺縁平坦、直径２〜３ｍｍのコロニーが観察されることである。また、ＮＴＵ  １０１菌株の細胞は、運動性を有しない桿状細胞（０．８〜１．０×２．０〜４．０μｍ）であり、細胞の末端が円滑平坦で、常に単一細胞または連鎖状細胞群を呈する。乳酸（１（＋）−Ｌａｃｔｉｃ  ａｃｉｄ）を生成することができる一方、アルギニン（ａｒｇｉｎｉｎｅ）の代謝によるアンモニアを生成することなく、ウレアーゼ（Ｕｒｅａｓｅ）活性を有しない。
【００２２】
下記表１を参照する。前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１と炭素源とを培養培地中に置き、そして少なくとも２４時間の培養を経ることにより、前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１から一定量の乳酸が生成される。また、表１に示すように、前記炭素源は、グルコース、ガラクトース、Ｄ−リボース、キシロース、フルクトース、α−ラクトース、マルトース、スクロース、トレハロース、ラフィノース、イノシトール、ソルビトール、Ｄ−マンニトール、クエン酸、デキストリン、デンプンまたは糖蜜のうちの任意の１種である。
【００２３】
【表１】
0005973537.tif 000002
【００２４】
また、下記表２を参照する。前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１と窒素源とを培養培地中に置き、そして少なくとも２４時間の培養を経ることにより、前記Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１から一定量の乳酸が生成される。また、表２に示すように、前記窒素源は、酵母エキス、牛肉エキス  、ペプトン、大豆ペプトン、トリプシン、コーンスティプリカー、カゼイン、尿素、クエン酸アンモニウムまたは硫酸アンモニウムのうちの任意の１種である。
【００２５】
【表２】
0005973537.tif 000003
【００２６】
上記した表１と表２に詳しく示される実験データから、乳酸菌株Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１は、確実に一定量の乳酸を生成することが実証された。そのため、乳酸菌株Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１を加工製品の発酵菌として用いることができる。
【００２７】
次に、乳酸菌株Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１のＤＮＡを効果的に鑑別するために、本発明において、まず生工株式会社（ＭＤＢｉｏ，  Ｉｎｃ．，Ｔａｉｐｅｉ，Ｔａｉｗａｎ）から２０本のランダムプライマー（Ｒａｎｄｏｍ  Ｐｒｉｍｅｒ）を購入し、かつ前記複数本のランダムプライマーを下記表３にまとめて示す。
【００２８】
【表３】
0005973537.tif 000004
【００２９】
そして、表３に記載の２０本のプライマーを無菌水で１００μＭの濃度まで再溶解させてから、−２０℃の環境下に保存する。続いて、下記表４を参照する。表４には、ＲＡＰＤに応用するプライマー組合せが示される。
表４に示すように、ランダム増幅多型ＤＮＡ（Ｒａｎｄｏｍ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ  ＤＮＡ，ＲＡＰＤ）の技術により、上記したプライマーを乳酸菌株Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１に類似するＤＮＡになるように増幅するために、表３に記載の２０本のプライマーを表４に基づいて１６種のプライマー組合せになるように調製し、かつ各種のプライマー組合せのそれぞれの最終濃度が１μＭとなる。
【００３０】
【表４】
0005973537.tif 000005
【００３１】
続いて、ポリメラーゼ連鎖反応（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）により、上記表４の１６種のプライマー組合せに対してＲＡＰＤを行う。その中、ＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ）の反応総容量を２５μｌとし、その内、３ｎｇ菌株ＤＮＡ、８０ｎＭプライマー、１ＸＥｘｓｅｌ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ、５ＵＥｘｓｅｌ  ＤＮＡ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｂｅｒｔｅｃ  Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅ，Ｔａｉｐｅｉ，Ｔａｉｗａｎ）、及び２００ＭｄＮＴＰを含む。ＰＣＲの反応条件として、９５℃で５分間加熱した後、再び９５℃で３０秒間加熱し、２５℃で３分間を結合させてから、７０℃で４５秒間伸長させることである。この条件でサイクルを３５回繰り返して行う。最後に、７０℃で７分間を伸長させる。
【００３２】
上記ＰＣＲ反応を完成した後には、ＰＣＲ生成物を取り出して１％アガロース（ａｇａｒｏｓｅ）ゲルを用いて電気泳動解析を行う。そして、電気泳動ゲルシートをＳＹＢＲ  Ｓａｆｅ染色試薬（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）で３０分間染色してから、２０分間脱染する。その後、染色した前記電気泳動ゲルシートを青色光（４８８ｎｍ）のライトボックス内に置いて観察すると共に、画像処理システムで写真を撮影して保存しておく。さらに、上記製造工程を経て得られるＲＡＰＤ断片は、ＦａｖｏｒＰｒｅｐＴＭ  Ｇｅｌ／ＰＣＲ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  （Ｆａｖｏｒｇｅｎ  ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃｏｒｐ）を用いて切断・回収を行い、そしてＴ＆ＡＴＭ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｋｉｔ  （Ｙｅａｓｔｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｔａｉｐｅｉ，Ｔａｉｗａｎ）を用いて回収したＲＡＰＤ断片に対して選択的増殖を行う。最後に、明欣生物科技術株式会社（Ｔａｉｐｅｉ，Ｔａｉｗａｎ）に委託し、ＮＴＵ  １０１菌株についての独特の確認を行う。
【００３３】
図１は、プライマー組合せＡ、ＪとＬのＲＡＰＤ多型性パターンを示す画像である。図１に示すように、１６種のプライマー組合せにおいて、プライマー組合せＡ、ＪとＬは、適宜数量のＲＡＰＤ多型性断片を生成することができる。そのため、プライマー組合せＡ、ＪとＬは、Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１菌株の特異性を有する独特なＲＡＰＤ多型性パターンを生成することができ、とりわけプライマー組合せＡとＬが好ましい。
【００３４】
続いて、下記表５を参照する。表５には、ＮＴＵ  １０１菌株を確認するための独特な菌株が示される。
表５に示すように、Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１を除き、表５に記載の菌株は、中華民国食品工業発展研究所（Ｆｏｏｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＦＩＲＤＩ，Ｈｓｉｎｃｈｕ，Ｔａｉｗａｎ）から購入したもので、また前記複数の菌株は、いずれもＬ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．  ｐａｒａｃａｓｅｉと非常に高い近縁関係のあるｃａｓｅｉ  ｇｒｏｕｐの乳酸桿菌に属し、その内、１２株のＬ．ｐａｒａｃａｓｅｉ（ラクトバチルス・パラカゼイ）、１０株のＬ．ｃａｓｅｉ（ラクトバチルス・カゼイ）、７株のＬ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ（ラクトバチルス・ラムノサス）及び３株のＬ．ｚｅａｅ（ラクトバチルス・ゼアエ）を含む。
【００３５】
【表５】
0005973537.tif 000006
0005973537.tif 000007
0005973537.tif 000008
【００３６】
図２Ａ、図２Ｂと図２Ｃは、それぞれプライマー組合せＡとｃａｓｅｉ  ｇｒｏｕｐの乳酸桿菌のＲＡＰＤ多型性パターンを比較解析する画像である。
図２Ａに示すように、プライマー組合せＡのＲＡＰＤ多型性断片を、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ（ラクトバチルス・パラカゼイ）と比較し、その比較結果から、プライマー組合せＡのＲＡＰＤ多型性断片の（核酸）は、顕著かつ独特な差異を有することが分かる。また、図２Ｂに示すように、プライマー組合せＡのＲＡＰＤ多型性断片を、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ（ラクトバチルス・カゼイ）と比較し、その比較結果から、プライマー組合せＡのＲＡＰＤ多型性断片は、顕著かつ独特な差異を有することが分かる。さらに、図２Ｃに示すように、プライマー組合せＡのＲＡＰＤ多型性断片を、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ（ラクトバチルス・ゼアエ）及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ（ラクトバチルス・ラムノサス）と比較し、その比較結果から、プライマー組合せＡのＲＡＰＤ多型性断片は、顕著かつ独特な差異を有することが分かる。
その内、このような独特性を有するプライマー組合せＡは、プライマーＢ０２とＤ１１を増幅して得られるもので、さらにＡ３−５として標示される。また、添付の配列表に示すように、このＡ３−５ヌクレオチド断片は、８３８ｂｐを有し、かつそのヌクレオチドをＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１として定義する。その他、添付の配列表の第２頁に示すように、プライマーＢ０２のヌクレオチド断片は、１０ｂｐを有し、かつそのヌクレオチドをＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２として定義する。相対的に、プライマーＤ１１のヌクレオチド断片も、１０ｂｐを有し、かつそのヌクレオチドをＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３として定義する。
【００３７】
続いて、図３Ａ、図３Ｂと図３Ｃは、それぞれプライマー組合せＬとｃａｓｅｉ  ｇｒｏｕｐの乳酸桿菌のＲＡＰＤ多型性パターンを示す比較解析する画像である。
図３Ａに示すように、プライマー組合せＬのＲＡＰＤ多型性断片を、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ（ラクトバチルス・パラカゼイ）と比較し、その比較結果から、プライマー組合せＬのＲＡＰＤ多型性断片の（核酸）は、顕著かつ独特な差異を有することが分かる。また、図３Ｂに示すように、プライマー組合せＬのＲＡＰＤ多型性断片を、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ（ラクトバチルス・カゼイ）と比較し、その比較結果から、プライマー組合せＬのＲＡＰＤ多型性断片は、顕著かつ独特な差異を有することが分かる。さらに、図３Ｃに示すように、プライマー組合せＬのＲＡＰＤ多型性断片を、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｚｅａｅ（ラクトバチルス・ゼアエ）及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ（ラクトバチルス・ラムノサス）と比較し、その比較結果から、プライマー組合せＬのＲＡＰＤ多型性断片は、顕著かつ独特な差異を有することが分かる。
その内、このような独特性を有するプライマー組合せＬは、プライマーＢ０９とＤ１９を増幅して得られるもので、さらにＬ３−１８として標示される。また、下記表６に示すように、このＬ３−１８ヌクレオチド断片は、２４７７ｂｐを有する。
【００３８】
【表６】
0005973537.tif 000009
【００３９】
上記各種の実験結果とデータから、初歩的にプライマー組合せＡとＬを増幅して得られるＲＡＰＤ多型性断片Ａ３−５とＬ３−１８は、Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１（ラクトバチルス・パラカゼイ・亜種・パラカゼイ  ＮＴＵ  １０１）の独特な断片を持つ可能性がある。この部分をより一層確認するため、ＤＮＡデータベース−−Ｇｅｎｂａｎｋ内からＬ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１と同源するものを取り出して比較する必要がある。
図４と図５は、それぞれＲＡＰＤ多型性断片Ａ３−５の比較図とＲＡＰＤ多型性断片Ｌ３−１８の比較図である。
図４の破線で囲まれた範囲に示すように、Ｇｅｎｂａｎｋデータベース内の同源ものと相互に比較した後、ＲＡＰＤ多型性断片Ａ３−５の方は、確実にＬ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１を分子識別標示するための独特な断片を持っていることが見出される。また、図５の破線で囲まれた範囲に示すように、ＲＡＰＤ多型性断片Ｌ３−１８の方は、同様にＬ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１を分子識別標示するための独特な断片を持っている。
【００４０】
従って、上記の比較結果によれば、ＲＡＰＤ多型性断片Ａ３−５とＬ３−１８のいずれも、Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１を分子識別標示するための独特な断片を持っていることが分かる。よって、分子マーカーの特異性を確認するため、さらに分子マーカーの特異性の測定を行う必要がある。下記表７に示すように、特異性を確認するためのプライマーを予め設計しておく。
【００４１】
【表７】
0005973537.tif 000010
【００４２】
図６Ａと図６Ｂは、それぞれＲＡＰＤ多型性断片Ａ３−５の分子マーカーの特異性の測定パターンを示す図である。
図６Ａと図６Ｂに示すように、上記表７のプライマーを用いてＮＴＵ  １０１の近縁菌種（ｃａｓｅｉ  ｇｒｏｕｐの乳酸桿菌（ラクトバチルス・カゼイ））に対して特異性の測定を行った後、プライマー組合せＡ３−５（Ｆ３／Ｒ３）は、ＮＴＵ  １０１菌株の特異性を有することが見出される。そのため、それ（核酸）は、ＮＴＵ  １０１菌株の特異性を鑑別するためのものである。
添付の配列表の第３頁に示すように、プライマー組合せＡ３−５Ｆ３のヌクレオチド断片は、２０ｂｐを有し、かつそのヌクレオチドをＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４として定義する。また、プライマー組合せＡ３−５Ｒ３のヌクレオチド断片は、２５ｂｐを有し、かつそのヌクレオチドをＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５として定義する。
【００４３】
上記説明したとおり、既にＮＴＵ  １０１乳酸菌株、そのヌクレオチド及びそのプライマー組合せが完全に開示された。また、上記を総合すると、本発明は、下記の利点を有することが分かる。本発明が提供するＬ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１乳酸菌株のヌクレオチド及びそのプライマー組合せによれば、関連技術者は、Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１についての菌株鑑別するための依拠を得ることが可能となる。またさらに、関連技術者は、分離菌株または生菌を培養する必要なく、ＤＮＡ分子識別マーカーを用いてＮＴＵ  １０１菌株を迅速に鑑別できる。
【００４４】
続いて、以下、本発明の乳酸菌株（即ち、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ  ＮＴＵ  １０１）の保健応用について説明する。本発明の乳酸菌株を、ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末または複合乳酸菌粉末に製粉することが可能であり、これにより、成人は、毎日少なくとも４ｇの前記ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末を摂取すれば、腸内の少なくとも１種の細菌の菌相の改善、胃粘膜の損傷面積の低減、胃粘膜の損傷指数の低減、及び胃粘膜中のヒスチジン濃度の降下を補助可能である。前記ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末は、確実に胃粘膜の損傷面積の低減、胃粘膜の損傷指数の低減、及び胃粘膜中のヒスチジン濃度の降下などの効果を補助できることを実証するため、以下に複数組の実験データを提供し、これらの実験データによって証明される。
【００４５】
確証実験において、ＳＤラット（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ  ｒａｔｓ，ＳＤＲｓ）（８週齢、体重が約２５０〜２７５ｇ）を試験動物として選択した。確証実験のグループ別にＣグループ（Ｃ  ｇｒｏｕｐ）、０．５倍グループ（０．５×  ｇｒｏｕｐ）、１倍グループ（１×  ｇｒｏｕｐ）、５倍グループ（５×  ｇｒｏｕｐ）、生菌グループ（Ｌｉｖｅ  ｇｒｏｕｐ）、死菌Ａグループ（Ｄ−Ａ  ｇｒｏｕｐ）及び死菌Ｂグループ（Ｄ−Ｂ  ｇｒｏｕｐ）が分けられ、各グループにつきＳＤラット８匹を含む。本実験において、成人用量４ｇを基礎にし、アメリカ食品医薬品局（Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ＦＤＡ）によって提供される人体の表面積換算式  （Ｂｏｄｙ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ａｒｅａ，ＢＳＡ）で換算すると、ラットの１倍用量は０．３（ｇ／ラット体重）となる。各グループの試験に使用される被測定物及び用量を下記表８に記録する。
【００４６】
【表８】
0005973537.tif 000011
【００４７】
期間を８週間とした実験過程において、飼料（ｃｈｏｗ  ｄｉｅｔ）をラットに投与した。なお、各グループの被測定物を１．０ｍＬの無菌蒸留水溶液に配合した後、ステンレス鋼製投与針を備えた無菌プラスチック製注射筒でラットに投与した。
【００４８】
下記表９に示すように、期間を８週間とした実験期間において、各グループの動物の体重はいずれも、時間の増加につれて正常に増加し、かつ各グループの動物の体重変化はいずれも、各試験グループの間に顕著な差異はなかった（ｐ＞０．０５）。
【００４９】
【表９】
0005973537.tif 000012
【００５０】
なお、下記表１０に示すように、被測定物を６週間〜８週間持続的に投与した後、各グループのラットの糞便の乾燥重量はいずれも、コントロールグループ（Ｃ  ｇｒｏｕｐ）よりも顕著に高いことを示す。実験結果から、複合乳酸菌粉末、ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末とＮＴＵ  １０１死菌粉末の長期投与により、動物が排出した糞便の乾燥重量を効果的に増加させることが可能と分かった。
【００５１】
【表１０】
0005973537.tif 000013
【００５２】
続いて、下記表１１を参照し、表中に各グループのラットの糞便と盲腸内容物中に含有されるウェルシュ菌（Ｃ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）菌数が統計された。表１１の実験結果から、複合乳酸菌粉末、ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末とＮＴＵ  １０１死菌粉末を４週間と６週間連続的に投与することにより、ＳＤラットの糞便中のＣ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ菌数を顕著に降下させることが可能と分かった（ｐ＜０．０５）。
なお、実験結果から、同時に複合乳酸菌粉末、ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末とＮＴＵ  １０１死菌粉末を８週間連続的に投与した後でも、ラットの糞便中のＣ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ菌数を顕著に降下させることが可能と分かった（ｐ＜０．０５）。
【００５３】
【表１１】
0005973537.tif 000014
【００５４】
また、期間を８週間とした被測定物の投与が完了した後、ＳＤラットを犠牲にすると共に、盲腸内容物を取得する。上記表１１に記録するように、ＮＴＵ  １０１死菌粉末Ｂを除き、複合乳酸菌粉末、ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末とＮＴＵ  １０１死菌粉末Ａを８週間連続的に投与することにより、ＳＤラットの盲腸中のＣ．ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ菌数を顕著に降下させることが可能である（ｐ＜０．０５）。
【００５５】
続いて、下記表１２を参照し、表中に各グループのラットの糞便と盲腸内容物中に含有されるビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．）菌数が統計された。表１２の実験結果から、複合乳酸菌粉末、ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末とＮＴＵ  １０１死菌粉末を４週間と６週間連続的に投与することにより、ＳＤラットの糞便中のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．菌数を顕著に増加させることが可能と分かった（ｐ＜０．０５）。その中、生菌グループのＳＤラットの糞便中に含有されるＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．菌数は、さらに他のグループのＳＤラットよりも高いことを示す。なお、実験結果から、同時に複合乳酸菌粉末、ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末とＮＴＵ  １０１死菌粉末を８週間連続的に投与した後でも、ラットの糞便中のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．菌数を顕著に増加させることが可能と分かった（ｐ＜０．０５）。
【００５６】
【表１２】
0005973537.tif 000015
【００５７】
また、期間を８週間とした被測定物の投与が完了した後、ＳＤラットを犠牲にすると共に、盲腸内容物を取得する。上記表１２に記録するように、複合乳酸菌粉末、ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末とＮＴＵ  １０１死菌粉末を８週間連続的に投与することにより、ＳＤラットの盲腸中のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｐ．菌数を顕著に増加させることが可能である（ｐ＜０．０５）。この結果、表１１と表１２の実験統計データから、毎日少なくとも０．３ｇ／ラット体重（成人用量４ｇに相当）を摂取すれば、腸内の少なくとも１種の細菌の菌相の改善を補助可能であることが実証された。
【００５８】
続いて、下記表１３を参照し、表中に各グループのラットの糞便と盲腸内容物中に含有される乳酸桿菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．）菌数が統計された。表１３の実験結果から、複合乳酸菌粉末、ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末とＮＴＵ  １０１死菌粉末を４週間と６週間連続的に投与することにより、ＳＤラットの糞便中のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．菌数を顕著に増加させることが可能と分かった（ｐ＜０．０５）。
その内、生菌グループのＳＤラットの糞便中に含有されるＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．菌数は、さらに他のグループのＳＤラットよりも高いことを示す。なお、実験結果から、同時に複合乳酸菌粉末、ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末とＮＴＵ  １０１死菌粉末を８週間連続的に投与した後でも、ラットの糞便中のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．菌数を顕著に増加させることが可能と分かった（ｐ＜０．０５）。
【００５９】
【表１３】
0005973537.tif 000016
【００６０】
また、期間を８週間とした被測定物の投与が完了した後、ＳＤラットを犠牲にすると共に、盲腸内容物を取得する。上記表１３に記録するように、複合乳酸菌粉末、ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末とＮＴＵ  １０１死菌粉末を８週間連続的に投与することにより、ＳＤラットの盲腸中のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｐ．菌数を顕著に増加させることが可能である（ｐ＜０．０５）。
【００６１】
続いて、下記表１４を参照し、表中に各グループのラットの盲腸中に含有される短鎖脂肪酸（Ｓｈｏｒｔ−ｃｈａｉｎ  ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄｓ）の含量が統計された。表１４の実験結果から、０．５倍の複合乳酸菌粉末及びＮＴＵ  １０１死菌粉末Ｂの投与を除き、複合乳酸菌粉末、ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末とＮＴＵ  １０１死菌粉末Ａを８週間連続的に投与することにより、各グループのＳＤラットの盲腸中に含有される酢酸（Ａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）、プロピオン酸（ｐｒｏｐｉｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）とブタン酸（ｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ）の含量を顕著に増加させることが可能である。周知の通り、これらの短鎖脂肪酸の中でも特に酢酸は、腸管のｐＨ値を降下させると共に、腸管の腐生菌の生長を抑制させることが可能である。
【００６２】
【表１４】
0005973537.tif 000017
【００６３】
続いて、下記表１５を参照し、表中に各グループのラットの急性胃部損傷の実験データが統計された。なお、図７に示された各グループのラットの胃壁の画像を同時に参照する。図７と表１５から、コントロールグループ（Ｃ  ｇｒｏｕｐ）の胃損傷面積（ｌｅｓｉｏｎ  ａｒｅａ）が４．１１±２．１４  ｍｍ２に達し、かつ損傷指数（ｌｅｓｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ）が０．０６３５±０．０４１９に達することが観察された。
複合乳酸菌粉末、ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末とＮＴＵ  １０１死菌粉末を８週間連続的に投与した後、ＮＴＵ  １０１純菌粉末、ＮＴＵ  １０１死菌粉末ＡとＮＴＵ  １０１死菌粉末Ｂを摂取したＳＤラットの損傷指数は、コントロールグループに対して、それぞれ９８．７４％、６７．７１％と７６．６９％減少することが発見された。同時に、各グループ別のラットの胃液ｐＨ値（ｐＨ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ｇａｓｔｒｉｃ  ａｃｉｄ）、総酸度（ｔｏｔａｌ  ｇａｓｔｒｉｃ  ａｃｉｄｉｔｙ）及び胃液体積（ｖｏｌｕｍｅ  ｏｆ  ｇａｓｔｒｉｃ  ａｃｉｄ）は、コントロールグループに比べて、顕著な差異はなかった。この結果、図７と表１５の実験結果から、毎日少なくとも０．３ｇ／ラット体重（成人用量４ｇに相当）を摂取すれば、胃粘膜の損傷面積の低減及び胃粘膜の損傷指数の低減を補助可能であることが実証された。
【００６４】
【表１５】
0005973537.tif 000018
【００６５】
下記表１６に示すように、表中に各グループのラットの胃粘膜中の脂質過酸化物のデータが統計された。表１６から、コントロールグループ（Ｃ  ｇｒｏｕｐ）の対照グループの胃粘膜中の脂質過酸化物の副次産物であるマロンアルデヒド（ｍａｌｏｎａｌｄｅｈｙｄｅ，ＭＤＡ）の濃度が２３．２８±３．７５μＭであることが観察された。複合乳酸菌粉末、ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末とＮＴＵ  １０１死菌粉末を８週間連続的に投与した後、ラットの胃粘膜中の脂質過酸化物の副次産物であるマロンアルデヒド（ｍａｌｏｎａｌｄｅｈｙｄｅ，ＭＤＡ）の濃度を顕著に降下させることが発見された。また、コントロールグループの胃粘膜中のスーパーオキシドジスムターゼ（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ  ｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）活性が１．６９±０．１７Ｕ／ｍＬであることに比べて、被測定物を８週間連続的に投与した後、各グループのラットの胃粘膜中のＳＯＤ活性を顕著に向上させることが発見された（ｐ＜０．０５）。この結果、表１６の実験結果から、毎日少なくとも０．３ｇ／ラット体重（成人用量４ｇに相当）を摂取すれば、胃粘膜の損傷の低減を補助可能であることが実証された。
【００６６】
【表１６】
0005973537.tif 000019
【００６７】
なお、上記表１６に示すように、複合乳酸菌粉末、ＮＴＵ  １０１乳酸菌粉末とＮＴＵ  １０１死菌粉末を８週間連続的に投与した後、各グループのラットの胃粘膜中のヒスチジン（Ｈｉｓｔｉｄｉｎｅ）濃度を顕著に降下させることが発見された。なお、各グループのラットの胃粘膜中のプロスタグランジン（Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｅ２，ＰＧＥ２）濃度も顕著に向上している（ｐ＜０．０５）。この結果、表１６の実験結果から、毎日少なくとも０．３ｇ／ラット体重（成人用量４ｇに相当）を摂取すれば、胃粘膜中のヒスチジン濃度の降下及びロスタグランジン濃度の向上を補助可能であることが実証された。
【産業上の利用可能性】
【００６８】
最後に、説明すべきは、以上、本発明及びその利点を詳細に説明したが、添付の特許請求の範囲により限定された本発明の精神と範囲を逸脱しない限り、種々の改良変更、取替え、変換を行うことが可能である点である。
なお、本発明の技術的範囲は、明細書に記述された過程、設備、手段、方法及びステップの具体的な実施例に限定されるものではない。当該分野における普通の技術者は、本発明の公開内容から、本発明に基づいて、ここで記述された対応する実施例と基本的に同様な機能を実行したり、またはそれと基本的に同様な結果を得たりするために、従来及び将来に開発される過程、設備、手段、方法またはステップが使用されることは容易に理解されよう。従って、添付の特許請求の範囲の要旨は、このような過程、設備、手段、方法またはステップがそれらの技術的範囲内に含まれることである。
【図１】
0005973537.tif 000020
【図２Ａ】
0005973537.tif 000021
【図２Ｂ】
0005973537.tif 000022
【図２Ｃ】
0005973537.tif 000023
【図３Ａ】
0005973537.tif 000024
【図３Ｂ】
0005973537.tif 000025
【図３Ｃ】
0005973537.tif 000026
【図４】
0005973537.tif 000027
【図５】
0005973537.tif 000028
【図６Ａ】
0005973537.tif 000029
【図６Ｂ】
0005973537.tif 000030
【図７】
0005973537.tif 000031
【配列表】
0005973537000001.app