(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
極性溶剤及び水・極性溶剤混合液から選ばれる溶剤を用いて抽出される抽出物であるクスリウコン抽出物を有効成分とするＴＲＰＶ３活性化剤。
【請求項２】
前記水・極性溶剤混合液中の極性溶剤の濃度が、３０．０〜９９．５％（ｖ／ｖ）である、請求項１記載のＴＲＰＶ３活性化剤。
【請求項３】
前記極性溶剤がエタノールである、請求項１又は２記載のＴＲＰＶ３活性化剤。
【請求項４】
温感付与剤である、請求項１から３のいずれか１項記載のＴＲＰＶ３活性化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、温感を付与するためのＴＲＰＶ３活性化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
感覚は、外部から受けた刺激が電気信号に変換され、神経細胞を通じて脳に伝達されることで生じる。外部刺激を電子信号に変換するには、その外部刺激を感知する受容体の存在が必要である。かかる受容体のうち、温度感覚を感知する受容体としてカプサイシン受容体（ＴＲＰＶ１）が、１９９７年に同定された（非特許文献１）。ＴＲＰＶ１は、カプサイシンのほかに４３℃以上の熱刺激で活性化されることから、温度感覚の受容体であると予想されていた。更に、ＴＲＰＶ１欠損マウスが熱刺激に対して鈍い反応しか示さないことから、ＴＲＰＶ１が熱受容体として機能することが確認されている（非特許文献２）。
【０００３】
しかしながら、ＴＲＰＶ１の活性化温度である４３℃は生体に痛みを生じさせる温度であること、更に化学リガンドであるカプサイシンは温感物質であると同時に発痛物質であることから、ＴＲＰＶ１は痛みの受容体として機能すると考えられている（非特許文献３）。
【０００４】
ＴＲＰＶ３は、ＴＲＰＶ１と同じＴＲＰ（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）ファミリーに属するイオンチャネルであり、２００２年に同定された温度受容体である（非特許文献４）。この受容体は活性化閾値が３０℃台であることから、痛みではなく温かい温度の受容体であると予想されている。更に、ＴＲＰＶ３欠損マウスを用いた解析から、ＴＲＰＶ３が皮膚での温度受容に関与することが確認されている（非特許文献５）。
【０００５】
ＴＲＰＶ３は、ヒノキの樹精の含有成分であるカンファーや、タイムやオレガノの含有成分であるチモールやカルバクロールなどの植物由来成分により活性化されることが知られている（非特許文献６）が、より強い温感付与効果を得るため、より強力なＴＲＰＶ３活性化作用を有する他の植物成分の提供に対するニーズが存在する。
【０００６】
ウコン属はショウガ目ショウガ科の１属であり、クルクマ属、クルクマ（Ｃｕｒｃｕｍａ）とも称される。ウコン属植物はアジアの熱帯地方、アフリカ、オーストラリアなどに分布する多年草で、４０〜５０種存在するといわれている。ウコン属植物の根茎や塊根は香辛料、健康食品、生薬、食品用着色料、染料に用いられ、またその花は鑑賞に用いられる。その代表的な種としては、ウコン（Ｃ．ｌｏｎｇａ）、ガジュツ（Ｃ．ｚｅｄｏａｒｉａ）、春ウコン（Ｃ．ａｒｏｍａｔｉｃａ）、クスリウコン（Ｃ．ｘａｎｔｈｏｒｒｈｉｚａ）などが挙げられる。特にクスリウコンは、トゥムゥ・ラワ（Ｔｅｍｕ  ｌａｗａｋ）又はジャワターメリック（Ｊａｖａ  ｔｕｒｍｅｒｉｃ）として一般的に知られる、インドネシアの伝統的な薬用植物であり、主成分としてＡｒ−ターメロン（ｔｕｍｅｒｏｎｅ）、α−クルクメン（ｃｕｒｃｕｍｅｎｅ）、β−クルクメン、クルゼレノン（ｃｕｒｚｅｒｅｎｏｎｅ）等のテルペノイド化合物、７〜３０％の精油、３０〜４０％の炭水化物、更に０．０２〜２．０％の芳香性色素であるクルクミノイド等を含有する（非特許文献７）。
【０００７】
ウコン属植物を用いた肝機能の増強、育毛（特許文献１）、免疫機能の増強（特許文献２）、美容用品への応用（特許文献３）などが知られているが、ウコン属植物を用いた温感付与効果に関しては知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特許第４２１３８３６号公報
【特許文献２】特開２００８−５４４０１７号公報
【特許文献３】特開平９−２０６３５号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｎａｔｕｒｅ  ３８９，８１６−８２４，１９９７
【非特許文献２】Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８８，３０６−３１３，２０００
【非特許文献３】総研大ジャーナル  １０，４０−４５，２００６
【非特許文献４】Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９６，２０４６−２０４９，２００２
【非特許文献５】Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０７，１４６８−１４７２，２００５
【非特許文献６】Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １５１，５３０−５４０，２００７
【非特許文献７】Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２３，２４３−２５４，１９９５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、化粧料、医薬品又は口腔用組成物に対して温感を付与するためのＴＲＰＶ３活性化剤の提供に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、鋭意研究の結果、ウコン属植物又はその抽出物がＴＲＰＶ３を活性化しうることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１２】
すなわち本発明は、以下の（１）から（８）に係るものである。
（１）  ウコン属植物又はその抽出物を有効成分とするＴＲＰＶ３活性化剤。
（２）  前記ウコン属植物が、クスリウコン、ガジュツ、春ウコン及び秋ウコンのうちのいずれか１つ又は２つ以上である、前記（１）記載のＴＲＰＶ３活性化剤。
（３）  前記ウコン属植物が、クスリウコンである、前記（１）記載のＴＲＰＶ３活性化剤。
（４）  ウコン属植物抽出物が、非極性溶剤、極性溶剤及び水・極性溶剤混合液から選ばれる溶剤を用いて抽出される抽出物である、前記（１）から（３）のいずれか１つに記載のＴＲＰＶ３活性化剤。
（５）  前記水・極性溶剤混合液中の極性溶剤の濃度が、３０．０〜９９．５％（ｖ／ｖ）である、前記（４）に記載のＴＲＰＶ３活性化剤。
（６）  前記極性溶剤がエタノールである、前記（５）記載のＴＲＰＶ３活性化剤。
（７）  温感付与組成物である、前記（１）から（６）のいずれか１つに記載のＴＲＰＶ３活性化剤。
（８）  前記（１）から（６）のいずれか１つに記載のＴＲＰＶ３活性化剤を用いることを特徴とする温感付与方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明のＴＲＰＶ３活性化剤を、例えば化粧料、浴剤、食品、医薬品又は口腔用組成物に配合し、それを用いることにより、痛みを伴うことなく、安全かつ簡便に温感を付与することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】クスリウコン、ウコン及びガジュツの抽出物によるＴＲＰＶ３活性化強度を示すグラフ。
【図２】抽出の際のエタノール濃度の相違による、ＴＲＰＶ３活性化強度の相違を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明において、ウコン属（Ｃｕｒｃｕｍａ属）植物とは、ショウガ目ショウガ科に属する植物のことを指し、例えば春ウコン（Ｃ．ａｒｏｍａｔｉｃａ）、秋ウコン（あるいは単にウコン）（Ｃ．ｌｏｎｇａ）、ガジュツ（Ｃ．ｚｅｄｏａｒｉａ）、マンゴージンジャー（Ｃ．ａｍａｄａ）、クスリウコン（Ｃ．ｘａｎｔｈｏｒｒｈｉｚａ）などが挙げられる。本発明においては、これらのウコン属植物の根茎や塊根を用いる。
【００１６】
本発明の第１の態様は、上記のウコン属植物又はその抽出物を有効成分とするＴＲＰＶ３活性化剤に関する。
【００１７】
ＴＲＰＶ３活性化剤とは、ＴＲＰＶ３活性化作用を有する物質、すなわちＴＲＰＶ３受容体アゴニストのことを指す。ＴＲＰＶ３活性化剤の作用により、ＴＲＰＶ３受容体が活性化され、それにより温感が増強する。
【００１８】
本発明で用いるウコン属植物としては、上記の植物のうちの１つ又は２つ以上であってもよく、用途や目的とする風味などに応じて適宜選択しうるが、好ましくはクスリウコンである。
【００１９】
本発明のＴＲＰＶ３活性化剤には、ウコン属植物をそのまま又は乾燥させた後に適当な大きさに切断・粉砕したものを使用してもよく、またその抽出物を使用してもよい。当該抽出物には、抽出エキスの他、更にそれを分離精製して得られるより活性の高い画分（成分）が包含される。その抽出は、室温又は加熱した状態で溶剤に含浸させる方法、又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて行われる溶剤抽出法、水蒸気蒸留等の蒸留法を用いて行ってもよく、また炭酸ガスを超臨界状態にして行う超臨界抽出法、圧搾して抽出物を得る圧搾法、マイクロ波水蒸気蒸留等を用いて行ってもよい。
【００２０】
溶剤抽出に用いられる抽出溶剤としては、水、極性溶剤、非極性溶剤、油脂、ワックス、その他オイル等のいずれをも使用することができ、これらを混合して用いることもできる。あるいは、上記の溶媒を代替する溶媒として知られる超臨界二酸化炭素を溶剤としてもよい。
【００２１】
極性溶剤としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類等が挙げられ、水と当該極性溶剤との混合液（例えば水・エタノール混合液）を用いることもできる。水・極性溶剤の混合液を用いる場合は、水の配合比率は低いほうが好ましく、例えば水・エタノール混合液を用いる場合、当該溶剤中のエタノール濃度は５０．０〜９９．５％（ｖ／ｖ）、より具体的には５０．０〜９５．０％（ｖ／ｖ）の濃度である。
【００２２】
一方、非極性溶剤としては、例えばジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類が挙げられ、これらは単独で又は２種以上を組み合わせて使用することができる。これらの溶剤のうち、ヘキサンがより好ましい。
【００２３】
抽出は、例えば植物１質量部に対して１〜５０質量部、好ましくは３〜２０質量部、より好ましくは５〜１０質量部の溶剤を用い、３〜１００℃、好ましくは１０〜８０℃、より好ましくは２０〜４０℃、更に好ましくは室温で、数時間〜数週間、通常は１〜１４日間、好ましくは３〜１０日間、より好ましくは７日間、浸漬又は加熱還流することにより行うことができる。
【００２４】
ウコン属植物抽出物をそのままＴＲＰＶ３活性化剤として使用することも可能であるが、ウコン属植物の抽出液を必要に応じて濃縮・精製することにより、更に増強効果に優れたＴＲＰＶ３活性化剤が得られる。ウコン属植物抽出物の分離精製手段としては、例えば当該抽出物の濾過、活性炭処理、液−液分配、カラムクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、ゲル濾過、精密蒸留等が挙げられる。
【００２５】
本発明では、上記で得られる抽出物は、そのまま用いてもよく、適宜な溶剤で希釈した希釈液として用いてもよく、あるいは濃縮エキスや乾燥粉末又はペースト状に調製したものを用いてもよい。また、凍結乾燥し、用時に、通常抽出に用いられる溶剤、例えば水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、水・エタノール混液、水・プロピレングリコール混液、水・ブチレングリコール混液等の溶剤で希釈して用いてもよい。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いてもよい。
【００２６】
本発明のウコン属植物又はその抽出物は、後記実施例に示すように、ＴＲＰＶ３活性化作用を有することから、ＴＲＰＶ３活性化剤となりえ、医薬、化粧料、食品あるいは口腔用組成物等に配合することにより、それらを使用した際に温感を付与することができる。ＴＲＰＶ３活性化剤は、ウコン属植物又はその抽出物を単独で用いたものであってもよく、また澱粉質、タンパク質、繊維質、糖質、脂質、脂肪酸、ビタミン、ミネラル、香料、着色料、甘味料、調味料、防腐剤、保存料、酸化防止剤などの、医薬品や食品に用いられる添加剤や賦形剤等と組み合わせた組成物、例えば温感付与組成物であってもよい。またその形態も特に限定されず、例えば溶液、懸濁液、シロップ、粉末、顆粒、粒子など、任意の形態に調製しうる。
【００２７】
温感を付与する対象は特に限定されないが、例えば医薬、化粧料、食品あるいは口腔用組成物などが挙げられる。
【００２８】
温感付与の対象となる医薬の形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等の経口投与形態、並びに、静脈内注射、筋肉注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤、湿布剤、パップ剤、軟膏、ローション、クリーム等の非経口投与形態が挙げられる。
【００２９】
温感付与の対象となる食品の形態としては、キャンディ、ガム、タブレット、カプセル、各種飲料等が挙げられる。
【００３０】
温感付与の対象となる化粧料の形態としては、皮膚外用剤、洗浄剤、メイクアップ化粧料、頭皮頭髪用化粧料、入浴剤等が挙げられ、それらは使用方法に応じて、ローション、乳液、ゲル、クリーム、軟膏剤、粉末、顆粒等の種々の剤型で提供できる。
【００３１】
温感付与の対象となる口腔用組成物の形態としては、歯磨剤、液状歯磨剤、洗口液、歯肉マッサージクリーム、口腔用軟膏、うがい用錠剤、トローチ等が挙げられる。
【００３２】
上記医薬、食品、化粧料、口腔用組成物中に本発明のＴＲＰＶ３活性化剤を配合して用いる場合のＴＲＰＶ３活性化剤の配合量は、十分な温感付与効果を有する限り特に限定されないが、通常ウコン属植物又はその抽出物（乾燥物換算）を、経口投与用の医薬、食品及び口腔用組成物では０．０１ｐｐｍ以上、非経口投与用の医薬及び化粧料などの外用組成物では１〜１０質量％以上とするのが好ましい。
【００３３】
本発明の他の態様は、上記のＴＲＰＶ３活性化剤を用いて温感を付与する方法に関する。具体的には、当該方法は、上記のＴＲＰＶ３活性化剤によりＴＲＰＶ３受容体を活性化し、それにより温感を付与するものである。温感付与方法は、ＴＲＰＶ３活性化剤を用いて温感が付与される態様であれば特に限定されず、例えばＴＲＰＶ３活性化剤を単独で適用してもよく、また他の医薬、化粧料、食品あるいは口腔用組成物等に含有させた形で適用してもよい。
【実施例】
【００３４】
（実施例１：エキス調製例）
【００３５】
クスリウコン：
ショウガ科クスリウコン（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｘａｎｔｈｏｒｒｈｉｚａ）の根茎４０ｇに、５０ｖｏｌ％エタノール４００ｍＬを加え、室温で７日間浸漬抽出した後、ろ過して抽出液を得た。当該抽出液を減圧乾燥し、抽出物（６．１ｇ）を得た後、再度５０ｖｏｌ％エタノールに、濃度１ｗ／ｖ％となるように溶解させ、試験サンプルとした。
【００３６】
ガジュツ：
ショウガ科ガジュツ（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｚｅｄｏａｒｉａ）の根茎４０ｇに、５０ｖｏｌ％エタノール４００ｍＬを加え、室温で７日間浸漬抽出した後、ろ過して抽出液を得た。当該抽出液を減圧乾燥し、抽出物（４．８ｇ）を得た後、再度５０ｖｏｌ％エタノールに、濃度１ｗ／ｖ％となるように溶解させ、試験サンプルとした。
【００３７】
秋ウコン：
ショウガ科秋ウコン（Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ）の根４０ｇに、５０ｖｏｌ％エタノール４００ｍＬを加え、室温で７日間浸漬抽出した後、ろ過して抽出液を得た。抽出液を減圧乾燥し、抽出物（３．０ｇ）を得た後、再度５０ｖｏｌ％エタノールに濃度１ｗ／ｖ％となるように溶解させ、試験サンプルとした。
【００３８】
（実施例２：ＴＲＰＶ３活性の評価）
（１）ヒトＴＲＰＶ３安定発現株の作製：
ヒトＴＲＰＶ３安定発現ＨＥＫ２９３細胞株を作製するため、ヒトＴＲＰＶ３遺伝子のクローニングを行った。全長ヒトＴＲＰＶ３遺伝子は、ヒト表皮角化細胞（クラボウ社製）より抽出した全ＲＮＡを鋳型とし、ＲＴ−ＰＣＲ法を用いて増幅した。
【００３９】
得られたＰＣＲ産物をエントリーベクターｐＥＮＴＲ−Ｄ／ＴＯＰＯ（インビトロジェン社製）へクローニングした後、ｐｃＤＮＡ３．２−Ｖ５／ＤＥＳＴ（インビトロジェン社製）へサブクローニングし、リポフェクトアミン２０００（インビトロジェン社製）によりＨＥＫ２９３細胞へ形質導入した。形質導入された細胞を、４５０μｇ／ｍｌのＧ−４１８（プロメガ社製）を含有するＤＭＥＭ培地中で増殖させることにより選抜した。ＨＥＫ２９３細胞は、内在性ＴＲＰＶ３を発現しないため、ＴＲＰＶ３形質導入株に対する対照（コントロール）として使用できる。
【００４０】
（２）カルシウムイメージング：
蛍光カルシウムイメージング法を用いて、ＨＥＫ２９３細胞へ形質導入したＴＲＰＶ３活性の測定を行った。まず、培養したＴＲＰＶ３発現細胞をポリ−Ｄ−リジンコートされた９６ウェルプレート（ＢＤファルコン社製）へ播種（３０，０００細胞／ウェル）し、３７℃で一晩インキュベートした後、培養液を除去し、リンガー液に溶解させたＦｌｕｏ４−ＡＭ（２μｇ／ｍｌ；同仁化学社製）を添加し、３７℃で３０〜６０分間インキュベートした。その後、９６ウェルプレートを蛍光プレートリーダー（ＦＤＳＳ３０００；浜松ホトニクス社製）にセットし、装置庫内温度を２５℃にした状態で、励起波長４８０ｎｍで励起させたときのＦｌｕｏ４による蛍光イメージを、検出波長５２０ｎｍにてＣＣＤカメラで検出した。測定は１秒毎に４分間行い、測定開始１５秒後に、ＦＤＳＳ３０００内蔵の分注器により、上記で調製した植物エキス（終濃度４０μｇ／ｍｌ及び２００μｇ／ｍｌ）を添加し、蛍光強度の変化によりＴＲＰＶ３の活性を評価した。
【００４１】
（３）ＴＲＰＶ３活性化の評価：
ＴＲＰＶ３活性は、植物エキスによる自家蛍光の影響を排除するため、下記の式で自家蛍光分を差し引いた。
自家蛍光を差し引いた蛍光強度（Ｆsub）
＝ＴＲＰＶ３発現細胞の蛍光強度（ＦV3）−ＨＥＫ２９３細胞の蛍光強度（ＦHEK）
また、植物エキスによるＴＲＰＶ３活性化作用は、植物エキス添加後の蛍光強度比のピークを用いて評価した。下記の式を用いて蛍光強度比を算出した。
蛍光強度比＝各時点のＦsub／測定開始時のＦsub
各処理群あたり２ウェルで評価を行い、その平均値を用いた。
【００４２】
（４）植物エキスによるＴＲＰＶ３活性化作用の結果：
植物エキスによるＴＲＰＶ３活性化強度を表１及び図１に示す。クスリウコン、秋ウコン、ガジュツ抽出物がＴＲＰＶ３活性化作用を有することが示された。
【００４３】
【表１】
0005916999.tif 000002
【００４４】
（５）抽出の際のエタノール濃度の検討
抽出の際のエタノール濃度を、５０．０％及び９５．０％（ｖ／ｖ）としたことを除き、段落［００３１］の手順に従い、クスリウコンエキスを得た。段落［００３７］及び［００３８］の手順に従い、上記クスリウコンエキス（終濃度４μｇ／ｍｌ）を添加し、ＴＲＰＶ３活性を評価した。その結果、エタノール濃度５０．０％の場合は蛍光強度１．５１であったのに対し、９５．０％の場合は３．１１であり、エタノール濃度９５．０％の方がクスリウコンエキスを効率的に抽出できることが明らかとなった（図２）。
【図１】
0005916999.tif 000003
【図２】
0005916999.tif 000004