(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療有効量のニュートロカイン−アルファのアンタゴニストおよび抗ＣＤ２０抗体を含む、患者の血漿または血清において、ＡＮＡ力価≧１：８０または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する、全身エリテマトーデス（ＳＬＥ）の患者を治療することに使用するための組成物であって、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが、ベリムマブのＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を含む抗ニュートロカイン−アルファ抗体である、組成物。
【請求項２】
前記患者が、該患者の血漿または血清において、ＡＮＡ力価≧１：８０および３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する、請求項１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（発明の背景）
ニュートロカインアルファタンパク質（配列番号２）は、ＡＰＲＩＬ（２８．７％、配列番号４）、ＴＮＦα（１６．２％）、およびリンホトキシン−α（ＬＴα）（１４．１％）に対するアミノ酸配列同一性を有するリガンドのＴＮＦファミリーのメンバーである（非特許文献１）。ニュートロカイン−アルファは、Ｂリンパ球刺激因子（ＢＬｙＳ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）、ＴＮＦ−およびＡｐｏＬ−関連白血球発現リガンド−１（ＴＡＬＬ−１）を含めた、多くの名称の下で科学および特許文献で知られている（非特許文献１；非特許文献２；および非特許文献３）。ニュートロカイン−アルファについての公式な命名法は、腫瘍壊死因子（リガンド）スーパーファミリーメンバー１３Ｂ（ＴＮＦＳＦ１３ｂ）である。全長ニュートロカイン−アルファ遺伝子は、タイプＩＩ膜結合タンパク質の非疎水性配列特徴によって先行されたアミノ酸４７〜７３の間に膜貫通スパンドメインを有する２８５アミノ酸のポリペプチドをコードする。ＴＮＦファミリーの他のメンバーのように、ニュートロカイン−アルファはトリマータンパク質として機能する。細胞の表面におけるニュートロカイン−アルファの発現に際して、細胞外ドメインはアミノ酸１３４において切断されて生物学的に活性なトリマーを放出する。
【０００２】
ニュートロカイン−アルファは、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーからの３つの異なる受容体に結合することが知られている。これらは膜貫通アクチベーターおよびＣＡＭＬインターアクター（ＴＡＣＩ，ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＣ５１７９０，配列番号６）、Ｂ細胞活性化因子受容体、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ，ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１８３  配列番号８）および（ＢＡＦＦ−Ｒ  ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿４４３１７７  配列番号１０）である（非特許文献４；非特許文献５；および非特許文献６）。受容体の発現はＢリンパ球にかなり制限される（非特許文献１）。ニュートロカイン−アルファの効果の大部分は、ＴＡＣＩまたはＢＣＭＡ欠乏マウスにおいては明らかでないニュートロカイン−アルファ発現またはＢＡＦＦ−Ｒ発現が欠乏したマウスのＢ細胞区画における顕著な欠陥のためＢＡＦＦ−Ｒによって媒介されると考えられている（非特許文献７；非特許文献８；および非特許文献６）。
【０００３】
ニュートロカイン−アルファタンパク質をインビトロおよびインビボでアッセイすると、ニュートロカイン−アルファはＢ細胞の増殖、分化および生存を促進することが示された。加えて、ニュートロカイン−アルファは同様にＴ細胞に対していくらか効果を有することが示された（非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１、非特許文献１２）。ニュートロカイン−アルファをトランスジェニック的に過剰発現するように作成されたマウスは、増大した数の末梢Ｂ細胞および増大した血清免疫グロブリン濃度を有した。加えて、ニュートロカイン−アルファトランスジェニックマウスは、自己抗体の発生、および糸球体腎炎を伴う兆候を含めた、ヒト全身エリテマトーデスで観察されたものに似た自己免疫表現型が与えられていた（非特許文献１；非特許文献１３）。後の研究は、血清／または滑液中のニュートロカイン−アルファのレベルは、全身エリテマトーデス、慢性関節リウマチおよびシェーグレン症候群のような自己免疫疾患を有する患者においてやはりアップレギュレートされたことを示した（非特許文献１４；非特許文献１５；非特許文献１６）。従って、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが自己免疫疾患の治療において治療的潜在能力を有するという科学分野における広く行き渡った確信がある。
【０００４】
全身エリテマトーデス（ＳＬＥまたは「狼瘡」）は、その兆候が極端に不均一である自己免疫疾患である。ＳＬＥを有する患者を診断するための現在の標準は１１の基準：（１）頬骨ちょう型紅斑、（２）円盤状紅斑、（３）光感受性、（４）口腔潰瘍、（５）関節炎、（６）漿膜炎、（７）腎臓障害、（８）神経学的障害、（９）血液学的障害、（１０）免疫学的障害および（１１）抗−核抗体の存在を含む。これらの基準は、ここに引用してその全体を援用する非特許文献１７；および非特許文献１８においてより詳細に説明されている。これらの１１の基準のうち、いずれか４つを持つ個人はＳＬＥを持つと診断できる。従って、ＳＬＥの臨床的診断を有する個体は重複しない兆候を有し得る。さらに、狼瘡の兆候の多くは他の疾患における兆候と重複する。例えば、慢性関節リウマチ、多発性筋炎−皮膚筋炎、全身硬化症（または強皮症）、シェーグレン症候群および種々の形態の血管炎は、以下の特徴：抗核抗体および抗ｄｓＤＮＡ抗体を含めた自己抗体の存在、関節の疼痛および腫脹、および皮膚紅斑、器官関与、のうちの１以上を含めた狼瘡での兆候を有する。かくして、現実には、狼瘡患者、および他の同様な疾患を有する患者を正しく診断するのはしばしば困難である。狼瘡病を診断するにおける困難性に導くさらなる因子は、該疾患が迅速に発生せず；むしろ、患者は経時的に徐々に兆候を蓄積するという事実を含む。加えて、ＳＬＥは患者内での可変活性を伴う疾患である。時々、該疾患は休止しており、他方、他の時点において、患者は「発赤」エピソードにおいて、その兆候の数および／または重症度の増加を経験する。最後に、明確に狼瘡を診断する１つの実験的テストは存在しない。加えて、当該分野においては、特定の兆候を持つ狼瘡患者のサブセットを定義し、および患者のサブセット、およびそれらのサブセットにおける患者に利益をより与えるような治療の間の修正を行うことができる必要性が存在する。
本出願は、免疫調節剤での治療からより利益を受けるだろう自己免疫疾患を有する患者の特定のサブグループを同定する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｍｏｏｒｅら，Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９９）２８５：２６０−２６３
【非特許文献２】Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９９９）１８９：１７４７−１７５６
【非特許文献３】Ｋｈａｒｅら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（２０００）９７：３３７０−３３７５
【非特許文献４】Ｇｒｏｓｓら，Ｎａｔｕｒｅ（２０００）４０４：９９５−９９９
【非特許文献５】Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００１）２９３：２１０８−２１１１
【非特許文献６】Ｙａｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０００）１：２５２−２５６
【非特許文献７】Ｓｃｈｉｅｍａｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００１）２９２：２１１１−２１１４
【非特許文献８】Ｇｒｏｓｓら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００１）１５：２８９−３０２
【非特許文献９】ＭａｃＫａｙら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９９９）１９０：１６９７−１７１０
【非特許文献１０】Ｈｕａｒｄら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００１）１６７：６２２５−６２３１
【非特許文献１１】Ｈｕａｒｄら，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００４）１６：４６７−４７５
【非特許文献１２】Ｎｇら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００４）１７３：８０７−８１７
【非特許文献１３】ＭａｃＫａｙら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９９９）１９２：１２９−１３５
【非特許文献１４】Ｃｈｅｅｍａら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．（２００１）４４：１３１３−１３１９
【非特許文献１５】Ｇｒｏｏｍら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２００２）１０９：５９−６８
【非特許文献１６】Ｍａｒｉｅｔｔｅら，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ（２００３）６２：１６８−１７１
【非特許文献１７】Ｔａｎら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．（１９８２）２５：１２７１−１２７７
【非特許文献１８】Ｈｏｃｈｂｅｒｇら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．（１９９７）４０：１７２５
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
第２相臨床試験において、０、１４、２８日における、次いで、週５２まで４週間毎にＩＶ注入として与えた、ニュートロカイン−アルファタンパク質を中和する抗体での狼瘡患者の処置は、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者のサブセットにおいて狼瘡に関連する兆候を有意に軽減することが見出された（実施例１参照）。驚くべきことに、（後により詳細に説明される、ＳＥＬＥＮＥ  ＳＬＥＤＡＩスコアの低下のような）疾患活性を測定する臨床的終点の統計学的に有意な改良は、臨床試験に登録された全患者集団と反対に、患者のサブセットで得られたに過ぎなかった。かくして、本発明は、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストのような免疫調節剤での治療により応答するようである患者のサブグループの同定に関する。
【０００７】
従って、一つの実施形態において、本発明は、治療有効量の免疫調節剤を投与することを含む、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者を治療する方法を提供する。免疫調節剤は後により詳細に記載する。特別な実施形態において、免疫調節剤は、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体またはその抗原結合断片ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質、またはその断片または変異体、ニュートロカイン−アルファ受容体に結合する抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ペプチドまたはポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体（例えば、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＥＰＲＩＬのドミナントネガティブ形態）を含めたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストである。ニュートロカイン−アルファのさらなるアンタゴニストは、ニュートロカイン−アルファの小分子アンタゴニスト、ニュートロカイン−アルファペプチド模倣物、ニュートロカイン−アルファを標的とするアンチセンスＲＮＡおよび短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ＡＰＩＲＬを標的とするアンチセンスＲＮＡおよび短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ニュートロカイン−アルファに対する受容体、および／またはＡＰＲＩＬに対する受容体を標的とするアンチセンスＲＮＡおよび短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を含む。ニュートロカイン−アルファ受容体は、例えば、膜貫通アクチベーターおよびＣＡＭＬインターカレーター（ＴＡＣＩ，ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＣ５１７９０，配列番号６）、Ｂ細胞活性化因子受容体、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ，ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１１８３配列番号８）および（ＢＡＦＦ−Ｒ，ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿４４３１７７  配列番号１０）を含む。
【０００８】
もう１つの実施形態において、本発明は、治療有効量の免疫調節剤を投与することを含む、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬの抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する自己免疫疾患を有する患者を治療する方法を提供する。患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者を同定することができる自己免疫疾患の例は、限定されるものではないが、全身エリテマトーデス（ＳＬＥ）、慢性関節リウマチ、シェーグレン症候群、強皮症、多発性筋炎−皮膚筋炎、フェルティ症候群、混合結合組織疾患、レイノー症候群、若年性慢性関節炎、糸球体腎炎、特発性血小板減少性紫斑病、およびＩｇＡ腎臓障害を含む。
【０００９】
特別な実施形態において、本発明は、治療有効量の免疫調節剤を投与することを含む、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有するシェーグレン症候群を有する患者を治療する方法を提供する。別の特別な実施形態において、本発明は、治療有効量のニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを投与すること含む、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗−ｄｓＤＮＡ抗体を有するシェーグレン症候群を有する患者を治療する方法を提供する。
【００１０】
特別な実施形態において、本発明は、治療有効量の免疫調節剤を投与することを含む、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗−ｄｓＤＮＡ抗体を有する慢性関節リウマチを有する患者を治療する方法を提供する。別の特別な実施形態において、本発明は、治療有効量のニュートロカイン−アルファを投与することを含む、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する慢性関節リウマチを有する患者を治療する方法を提供する。
【００１１】
特別な実施形態において、本発明は、治療有効量の免疫調節剤を投与することを含む、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する全身エリテマトーデス（ＳＬＥ）を有する患者を治療する方法を提供する。別の特別な実施形態において、本発明は、治療有効量のニュートロカイン−アルファアンタゴニストを投与することを含む、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する全身エディテマトーデス（ＳＬＥ）を有する患者を治療する方法を提供する。特別な実施形態において、狼瘡患者は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（ＡＣＲ）基準に従ってＳＬＥの臨床的診断を有するであろう（ここに、引用してその全体を援用する、例えば、Ｔａｎら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．２５：１２７１−７，（１９８２）；およびＨｏｃｈｂｅｒｇら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４０：１７２５，（１９９７）参照）。
【００１２】
また、本発明は、免疫調節剤の投与に先立って、患者が、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有すると決定することを含む患者を治療する方法を提供する。また、本発明は、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストの投与に先立って、患者が、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有するという決定を行うことを含む患者を治療する方法も提供する。
【００１３】
他の実施形態において、本発明は、免疫調節剤の投与に先立って、狼瘡患者が、以下の特徴の１以上を有するという決定を行うことを含む狼瘡患者を治療する方法を提供する：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  （ＡＣＲ）基準（例えば、Ｔａｎら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．２５：１２７１−７，（１９８２）；およびＨｏｃｈｂｅｒｇら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４０：１７２５，（１９９７）参照）；ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア≧６；患者の血漿または血清における低下したＣ４補体レベル；患者の血漿または血清における低下したＣ３補体レベル；１：８０以上のＡＮＡ力価；患者の血漿または血清における３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体；狼瘡関連症候群の治療用のプレドニゾンまたは他のコルチコステロイドの≧７．５ミリグラム／日を受容していること；および／または狼瘡／関連症状の治療のために従前に受けた免疫抑制療法を受容しているまたは既に受容したこと。特別な実施形態において、該決定は、患者の医療的記録の評価に基づいて医療実践者によってなされる。別の実施形態において、該決定は、実験室テスト結果に基づいて医療実践者によってなされる。特別な実施形態において、該決定は、もしあれば、狼瘡についての（免疫調節剤での医療的処置を含めた）患者の最後の医療的処置以来に、および本明細書中に記載された（ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを含めた）免疫調節剤の治療有効量を投与することを含む医療的治療の開始に先立って得られた、実験的テスト結果に基づいて医療実践者によってなされる。
【００１４】
別の実施形態において、本発明は、治療有効量の免疫調節剤を投与することを含む、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者に投与されるコルチコステロイドの頻度および／または量を低下させる方法を提供する。
【００１５】
特別な実施形態において、本発明は、治療有効量の免疫調節剤を投与することを含む、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有するシェーグレン症候群を有する患者に投与されるコルチコストロイドの頻度および／または量を低下させる方法を提供する。別の特別な実施形態において、本発明は、治療有効量のニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを投与することを含む、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有するシェーグレン症候群を有する患者に投与されるコルチコステロイドの頻度および／または量を低下させる方法を提供する。
【００１６】
特別な実施形態において、本発明は、治療有効量の免疫調節剤を投与することを含む、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する慢性関節リウマチを有する患者に投与されるコルチコステロイドの頻度および／または量を低下させる方法を提供する。別の特別な実施形態において、本発明は、治療有効量のニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを投与することを含む、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する慢性関節リウマチを有する患者に投与されるコルチコストロイドの頻度および／または量を低下させる方法を提供する。
【００１７】
特別な実施形態において、本発明は、治療有効量の免疫調節剤を投与することを含む、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する全身エリテマトーデス（ＳＬＥ）を有する患者に投与されるコルチコステロイドの頻度および／または量を低下させる方法を提供する。別の特別な実施形態において、本発明は、治療有効量のニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを投与することを含む、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する全身エリテマトーデス（ＳＬＥ）を有する患者に投与されるコルチコステロイドの頻度および／または量を低下させる方法を提供する。特別な実施形態において、狼瘡患者は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（ＡＣＲ）基準に従ってＳＬＥの臨床的診断を有するであろう（ここに、引用してその全体を援用する、例えば、Ｔａｎら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．２５：１２７１−７，（１９８２）；およびＨｏｃｈｂｅｒｇら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４０：１７２５，（１９９７）参照）。
【００１８】
さらなる実施形態において、本発明は、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者に投与されるコルチコステロイドの頻度および／または量を低下させる方法を提供し、それは少なくとも２５％ないし≦７．５ミリグラム／日まで減少する。特別な実施形態において、コルチコステロイドはプレドニゾン、プロドニゾロン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロンおよびデキサメタゾンからなる群より選択される。さらなる特別な実施形態において、コルチコステロドはプレドニゾンである。別の実施形態において、治療有効量の抗ニュートロカイン−アルファ抗体を投与することを含む、自己免疫疾患を有する患者に投与されるコルチコステロイドの頻度および／または量を低下させる方法を提供する。
【００１９】
慣性関節リウマチ患者が、０、１４、２８日に、次いで、週２４まで４週間毎にＩＶ注入として投与された、ニュートロカイン−アルファタンパク質を中和する抗体での処置を受けた別の第２相臨床試験（実施例３）において、治療は、５．１よりも大きなＤＡＳ２８スコアを有する患者、抗ＴＮＦ療法を従前に受容したことがない患者、および／またはニュートロカイン−アルファタンパク質を中和する抗体での治療の開始に先立って、患者の血漿および／または血清において、リウマチ因子を有した患者において、慢性関節リウマチに関連する兆候をより緩和するようである。ニュートロカイン−アルファタンパク質を中和する抗体での治療により応答するように見えたさらなるサブグループまたは慢性関節リウマチ患者は、男性患者、患者の血漿および／または血清において、抗−ＣＣＰ（環状シトルリン化ペプチド）抗体を有する患者、ニュートロカイン−アルファタンパク質を中和する抗体と同時にメトトレキセートを受けた患者、メトトレキサートでの治療を従前に受けなかった患者、および／またはメトトレキサート療法および少なくと別の他のＤＭＡＲＤ療法を従前に受けなかった患者を含む。
【００２０】
別の実施形態において、本発明は、医療的治療の投与に先立って患者のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩ、ＢＩＬＡＧおよびＰＧＡスコアを決定し；該医療的治療を投与し；次いで、医療的治療の投与に続いて患者のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩ、ＢＩＬＡＧおよびＰＧＡスコアを決定することを含む、医療的治療に狼瘡患者が応答しているかを決定する方法を提供する。この方法において、患者は、もし医療的治療の投与に続いて決定された患者のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアが医療的治療の投与に先立ってのＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアよりも４以上低いポイントであれば、医療的治療に応答したと考えられ；医療的治療の投与に続いて決定された患者のＢＩＬＡＧ指標スコアは、医療的治療の投与に先立って決定されたＢＩＬＡＧスコアと比較して、新しいＢＩＬＡＧ  Ａ器官ドメインスコアまたは２つの新しいＢＩＬＡＧ  Ｂ器官ドメインスコアを含まず、医療的治療に続いて決定されたＰＧＡスコアは、医療的治療の投与に先立って決定されたＰＧＡスコアよりも０．３ポイント未満高い。
【００２１】
従って、一つの実施形態において、本発明は、免疫調節剤の投与に先立って、慢性関節リウマチ患者が以下の特徴の１以上を有するという決定をなすことを含む、慢性関節リウマチ患者を治療する方法を提供する：患者は、抗ＴＮＦ療法、例えば、（ＲｅｍｉｃａｄｅＴＭ  Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，Ｉｎｃ．としても知られた）インフリキシマブ、アダリムマブ（Ａｂｂｏｔｔ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのＨｕｍｉｒａ（登録商標））、またはエタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））を従前に受容したことがない；患者は、患者の血漿および／または血清においてリウマチ因子を有する；患者は、患者の血漿および／または血清において測定可能な抗ＣＣＰ（環状シトルリン化ペプチド）抗体を有する；患者は、患者の血漿および／または血清において上昇したＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）レベルを有する；患者は、１以上の疾患変調抗リウマチ薬物での治療を従前に受けていない；患者は、高い修飾された疾患活性スコア（ＤＡＳ２８）を有する；患者は、腫脹した圧痛関節を有する；患者は、朝のこわばりを患う；患者は、増大した赤血球沈積速度（ＥＳＲ）を有し、および／または患者は男性である。
【００２２】
別の実施形態において、本発明は、約５．５〜約６．５のｐＨを持ち、治療有効量の抗体、５ｍＭ〜約５０ｍＭの量の緩衝液、約１５０ｍＭ〜約５００ｍＭの量のＮａＣｌ、約０．００３％〜約０．０５％の量の界面活性剤を含む水性医薬製剤を提供する。特別な実施形態において、前記製剤における抗体は、ＩｇＧ１／ラムダイソタイプを有する抗体である。さらなる実施形態において、前記製剤における抗体はＩｇＧ１／ラムダイソタイプを有するヒト抗体であり、前記製剤における緩衝液は１０ｍＭヒスチジンまたはクエン酸ナトリウムであり、前記製剤における界面活性剤は０．０１％ｗ／ｖの量のポリソルベート８０であり、前記製剤におけるＮａＣｌは約１５０ｍＭの濃度で存在し、製剤は６．０のｐＨを有する。他の特別な実施形態において、前記製剤は約２〜８℃の温度で少なくとも一年安定である。もう１つの実施形態において、前記製剤における抗体は１００ｍｇ／ｍｌの量で存在させる。
【００２３】
特別な実施形態において、本発明は、１００ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ１／λ抗体、０．７４ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジン、１．１ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジン１塩酸塩、８．８ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌ、および０．１ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０を含む水性医薬製剤を提供し、ここに、該製剤は６．０のｐＨを有する。
本発明は例えば、以下の項目を提供する：
（項目１）
治療有効量のニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを投与することを含む、患者の血漿または血清において、ＡＮＡ力価≧１：８０または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者を治療する方法。
（項目２）
前記患者が、該患者の血漿または血清において、ＡＮＡ力価≧１：８０および３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する、項目１記載の方法。
（項目３）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが、抗ＣＤ２０抗体と組み合わされて投与される、項目１記載の方法。
（項目４）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストの投与に先立って、前記患者が該患者の血漿または血清において、ＡＮＡ力価≧１：８０または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有するという決定を行う、項目１記載の方法。
（項目５）
前記決定が前記患者の医療記録に基づいてなされる、項目４記載の方法。
（項目６）
前記決定が実験室テストに基づいてなされる、項目４記載の方法。
（項目７）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが抗ニュートロカイン−アルファ抗体である、項目１記載の方法。
（項目８）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが、ＴＡＣＩのニュートロカイン−アルファ結合ドメイン（配列番号６）を含むタンパク質である、項目１記載の方法。
（項目９）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが、ＢＣＭＡのニュートロカイン−アルファ結合ドメイン（配列番号８）を含むタンパク質である、項目１記載の方法。
（項目１０）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが、ＢＡＦＦ−Ｒのニュートロカイン−アルファ結合ドメイン（配列番号１０）、または配列番号２６のアミノ酸残基２〜７０のアミノ酸配列を有するＢＡＦＦ−Ｒニュートロカイン−アルファ結合ドメインの変異体を含むタンパク質である、項目１記載の方法。
（項目１１）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストがニュートロカイン−アルファ結合ペプチド、ペプチボディ、ニュートロカイン−アルファタンパク質変異体、または抗ニュートロカイン−アルファ受容体抗体である、項目１記載の方法。
（項目１２）
前記ニュートロカイン−アルファタンパク質変異体がドミナントネガティブとして作用する、項目１１記載の方法。
（項目１３）
前記患者が自己免疫疾患を有する、項目１記載の方法。
（項目１４）
前記自己免疫疾患が全身エリテマトーデス（ＳＬＥ）である、項目１３記載の方法。
（項目１５）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが、抗ＣＤ２０抗体と組み合わされて投与される、項目１４記載の方法。
（項目１６）
前記自己免疫疾患が慢性関節リウマチ、シェーグレン症候群、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、フェルティ症候群、混合性結合組織病、レイノー症候群、または若年性慢性関節
炎である項目１３記載の方法。
（項目１７）
前記抗体が：
（ａ）配列番号１３のＶＨドメインおよびＶＬドメイン；
（ｂ）配列番号１４のＶＨドメインおよびＶＬドメイン；
（ｃ）配列番号１５のＶＨドメインおよびＶＬドメイン；
（ｄ）配列番号１６のＶＨドメインおよびＶＬドメイン；
（ｅ）配列番号１７のＶＨドメインおよびＶＬドメイン；
（ｆ）配列番号１８のＶＨドメインおよびＶＬドメイン；
（ｇ）配列番号１９のＶＨドメインおよび配列番号２０のＶＬドメイン；ならびに
（ｈ）配列番号２１のＶＨドメイン、および配列番号２２のＶＬドメイン；
からなる群より選択されるＶＨおよびＶＬドメインの組のアミノ酸配列を含む、項目７記載の方法。
（項目１８）
（ａ）患者が、該患者の血漿または血清において、ＡＮＡ力価≧１：８０または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有するという決定を行うこと；および、
（ｂ）該決定を行った後に、治療有効量のニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを該患者に投与すること；
を含む、全身エリテマトーデスを有する患者を治療する方法。
（項目１９）
前記患者が、該患者の血漿または血清において、ＡＮＡ力価≧１：８０および３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する、項目１８記載の方法。
（項目２０）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて投与される、項目１８記載の方法。
（項目２１）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを投与するに先立って、前記患者が：
（ａ）ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア≧６；
（ｂ）該患者の血漿または血清における低下したレベルのＣ３補体因子；
（ｃ）該患者の血漿または血清における低下したレベルのＣ４補体因子；
（ｄ）該患者が７．５ミリグラム／日以上のプレドニゾンを受容している；および
（ｅ）該患者が、狼瘡関連症状の治療のために、免疫抑制療法を受容している、または以前に受容したことがある；
からなる群より選択される少なくとも１つの特徴を有するという決定を行うことをさらに含む、項目１８記載の方法。
（項目２２）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストの投与に先立って、前記患者が６以上のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアを有するという決定を行うことを含む、項目２１記載の方法。
（項目２３）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを投与するに先立って、前記患者が、該患者の血漿または血清において９０ミリグラム／デシリットル未満のＣ３補体因子を有するという決定を行うことを含む、項目２１記載の方法。
（項目２４）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを投与するに先立って、前記患者が、該患者の血漿または血清において１６ミリグラム／デシリットル未満のＣ４補体因子を有するという決定を行うことを含む、項目２１記載の方法。
（項目２５）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを投与するに先立って、前記患者が７．５ミリグラム／日以上のプレドニゾンを受容しているという決定を行うことを含む、項目２１記載の方法。
（項目２６）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを投与するに先立って、前記患者が、狼瘡関連症状の治療のために免疫抑制療法を受容している、または以前に受容したことがあるという決定を行うことを含む、項目２１記載の方法。
（項目２７）
前記決定が前記患者の医療記録に基づいてなされる、項目１８記載の方法。
（項目２８）
前記決定が実験室テストに基づいてなされる、項目１８記載の方法。
（項目２９）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが抗ニュートロカイン−アルファ抗体である、項目１８記載の方法。
（項目３０）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが、ＴＡＣＩのニュートロカイン−アルファ結合ドメイン（配列番号６）を含むタンパク質である、項目１８記載の方法。
（項目３１）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが、ＢＣＭＡのニュートロカイン−アルファ結合ドメイン（配列番号８）を含むタンパク質である、項目１８記載の方法。
（項目３２）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが、ＢＡＦＦ−Ｒのニュートロカイン−アルファ結合ドメイン（配列番号１０）、または配列番号２６のアミノ酸残基２〜７０のアミノ酸配列を有するＢＡＦＦ−Ｒニュートロカイン−アルファ結合ドメインの変異体を含むタンパク質である、項目１８記載の方法。
（項目３３）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストがニュートロカイン−アルファ結合ペプチド、ペプチボディ、ニュートロカイン−アルファタンパク質変異体または抗ニュートロカイン−アルファ受容体抗体である、項目１８記載の方法。
（項目３４）
前記ニュートロカイン−アルファタンパク質変異体がドミナントネガティブとして作用する、項目３３記載の方法。
（項目３５）
治療有効量のニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを患者に投与することを含む、全身エリテマトーデスを有する患者に投与されるコルチコステロイドの頻度または量を低下させる方法。
（項目３６）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストの投与に先立って、前記患者が：
（ａ）ＡＮＡ力価≧１：８０；
（ｂ）該患者の血漿または血清における３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体；
（ｃ）ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア≧６；
（ｄ）該患者の血漿または血清における低下したレベルのＣ３補体因子；
（ｅ）該患者の血漿または血清における低下したレベルのＣ４補体因子；
（ｆ）該患者が７．５ミリグラム／日以上のプレドニゾンを受容している；および
（ｇ）該患者が、狼瘡関連症状の治療のために免疫抑制療法を受容しているか、または以前に受容したことがある；
からなる群より選択される少なくとも１つの特徴を有するという決定を行うことを含む、項目３５記載の方法。
（項目３７）
前記患者がＡＮＡ力価≧１：８０を有するという決定を行うことを含む、項目３６記載の方法。
（項目３８）
前記患者が該患者の血漿または血清において、３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有するという決定を行うことを含む、項目３６記載の方法。
（項目３９）
前記患者が該患者の血漿または血清において、ＡＮＡ力価≧１：８０および３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有するという決定を行うことを含む、項目３６記載の方法。
（項目４０）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを投与するに先立って、前記患者が６以上のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアを有するという決定を行うことを含む、項目３６記載の方法。
（項目４１）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを投与するに先立って、前記患者が該患者の血漿または血清において９０ミリグラム／デシリットル未満のＣ３補体因子を有するという決定を行うことを含む、項目３６記載の方法。
（項目４２）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを投与するに先立って、前記患者が該患者の血漿または血清において１６ミリグラム／デシリットル未満のＣ４補体因子を有するという決定を行うことを含む、項目３６記載の方法。
（項目４３）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを投与するに先立って、前記患者が７．５ミリグラム／日以上のプレドニゾンを受容しているという決定を行うことを含む、項目３６記載の方法。
（項目４４）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを投与するに先立って、前記患者が狼瘡関連症状の治療のために免疫抑制療法を受容している、または以前に受容したことがあるという決定を行うことを含む、項目３６記載の方法。
（項目４５）
前記決定が前記患者の医療記録に基づいてなされる、項目３６記載の方法。
（項目４６）
前記決定が実験室テストに基づいてなされる、項目３６記載の方法。
（項目４７）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが抗ニュートロカイン−アルファ抗体である、項目３５記載の方法。
（項目４８）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが、ＴＡＣＩのニュートロカイン−アルファ結合ドメイン（配列番号６）を含むタンパク質である、項目３５記載の方法。
（項目４９）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが、ＢＣＭＡのニュートロカイン−アルファ結合ドメイン（配列番号８）を含むタンパク質である、項目３５記載の方法。
（項目５０）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが、ＢＡＦＦ−Ｒのニュートロカイン−アルファ結合ドメイン（配列番号１０）、または配列番号２６のアミノ酸残基２〜７０のアミノ酸配列を有するＢＡＦＦ−Ｒニュートロカイン−アルファ結合ドメインの変異体を含むタンパク質である、項目３５記載の方法。
（項目５１）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストがニュートロカイン−アルファ結合ペプチド、ペプチボディ、ニュートロカイン−アルファタンパク質変異体または抗−ニュートロカイン−アルファ受容体抗体である項目３５記載の方法。
（項目５２）
前記ニュートロカイン−アルファタンパク質変異体がドミナントネガティブとして作用する、項目５１記載の方法。
（項目５３）
前記コルチコステロイドがプレドニゾン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロンおよびデキサメタゾンからなる群より選択される、項目３５記載の方法。
（項目５４）
前記コルチコステロイドがプレドニゾンである、項目３５記載の方法。
（項目５５）
患者に投与されるプレドニゾンの量が、少なくとも２５％ないし７．５ミリグラム／日以下低下する項目５４記載の方法。
（項目５６）
狼瘡の患者が、医療処置に応答するか否かを決定する方法であって、該方法は、
（ａ）医療処置の実施に先立って、該患者のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩ、ＢＩＬＡＧおよびＰＧＡスコアを決定すること；
（ｂ）該医療処置を実施すること；ならびに、
（ｃ）該医療処置の実施に続いて、該患者のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩ、ＢＩＬＡＧおよびＰＧＡスコアを決定すること；
を含み、ここで、工程（ｃ）で決定されたＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアが工程（ａ）において決定されたＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアより４ポイント以上低く、工程（ｃ）において決定されたＢＩＬＡＧ指標スコアが、工程（ａ）で決定されたＢＩＬＡＧスコアと比較して、新しいＢＩＬＡＧ  Ａ器官ドメインスコア、または２つの新しいＢＩＬＡＧ  Ｂ器官ドメインスコアを含まず、および工程（ｃ）で決定されたＰＧＡスコアが工程（ａ）で決定されたＰＧＡスコアから０．３ポイント以上高くはない場合、該患者は医療処置に応答したと考えられる、方法。
（項目５７）
前記医療処置がニュートロカイン−アルファのアンタゴニストを含む医薬組成物である、項目５６記載の方法。
（項目５８）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが抗ニュートロカイン−アルファ抗体である、項目５６記載の方法。
（項目５９）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが、ＴＡＣＩのニュートロカイン−アルファ結合ドメイン（配列番号６）を含むタンパク質である、項目５６を含む方法。
（項目６０）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが、ＢＣＭＡのニュートロカイン−アルファ結合ドメイン（配列番号８）を含むタンパク質である、項目５６記載の方法。
（項目６１）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストが、ＢＡＦＦ−Ｒのニュートロカイン−アルファ結合ドメイン（配列番号１０）、または配列番号２６のアミノ酸残基２〜７０のアミノ酸配列を有するＢＡＦＦ−Ｒニュートロカイン−アルファ結合ドメインの変異体を含むタンパク質である、項目５６記載の方法。
（項目６２）
前記ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストがニュートロカイン−アルファ結合ペプチド、ペプチボディ、ニュートロカイン−アルファタンパク質変異体または抗−ニュートロカイン−アルファ受容体抗体である、項目５６記載の方法。
（項目６３）
前記ニュートロカイン−アルファタンパク質変異体がドミナントネガティブとして作用する、項目６２記載の方法。
（項目６４）
約５．５〜約６．５のｐＨを持ち、治療有効量の抗体、約５ｍＭ〜約５０ｍＭの量の緩衝液、約１５０ｍＭ〜約５００ｍＭの量のＮａＣｌ、約０．００３％〜約０．０５％の量の界面活性剤を含む水性医薬製剤。
（項目６５）
前記抗体がヒトＩｇＧ１／λ抗体であり、前記緩衝液が１０ｍＭヒスチジンであり、前記界面活性剤が０．０１％ｗ／ｖの量のポリソルベート８０であり、前記ＮａＣｌが１５０ｍＭであって、６．０のｐＨを有する、項目６４記載の製剤。
（項目６６）
約２〜８℃の温度において少なくとも１年間安定である、項目６５記載の製剤。
（項目６７）
約２〜８℃の温度において少なくとも２年間安定である、項目６５記載の製剤。
（項目６８）
前記抗体が１００ｍｇ／ｍｌの量で存在する、項目６５記載の製剤。
（項目６９）
１００ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ１／λ抗体、０．７４ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジン、１．１ｍｇ／ｍｌのＬ−ヒスチジン一塩酸塩、８．８ｍｇ／ｍｌのＮａＣｌおよび０．１ｍｇ／ｍｌのポリソルベート８０を含み、６．０のｐＨを有する、項目６４記載の水性医薬製剤。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
以下の図面は本発明の実施形態を説明するものであり、特許請求の範囲に含まれる発明の範囲を限定するつもりはない。
【図１】図１は、ベースラインにおいて、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者における週５２でのＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩの平均パーセント減少を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
定義
一つの態様において、本発明は、治療有効量の免疫調節剤を投与することによって自己抗体陽性疾患を有する患者を治療する方法に広く関する。自己抗体陽性疾患を有する患者は血漿または血清または滑液のような一以上の生物学的流体試料中に検出可能な自己抗体力価を有する患者である。
【００２６】
本明細書中において、「免疫調節剤」への言及は、免疫系を刺激または阻害することができる医薬化合物の一般的クラスへの言及である。本明細書中における実施例は、狼瘡患者のサブグループの治療における拮抗性抗ニュートロカイン−アルファ抗体の成功した使用を記載する。かくして、用語「免疫調節剤」は、具体的には、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストとして作用することができる医薬化合物または分子にわたることを意図する。ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストは、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質、またはその断片または変異体、ニュートロカイン−アルファ受容体またはその抗原結合断片に結合する抗体、およびニュートロカイン−アルファ結合ペプチドまたはポリペプチドを含む組成物を含む。ニュートロカイン−アルファ受容体は、例えば、膜貫通アクチベーターおよびＣＡＭＬインターアクター（ＴＡＣＩ，ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＣ５１７９０）、ＢＡＦＦ−Ｒ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿４４３１７７）およびＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ，ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１１８３）を含む。ニュートロカイン−アルファ受容体の特に有用な形態は、細胞外ドメインの可溶性形態を含む。ニュートロカイン−アルファ受容体、またはその断片または変異体、およびニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチドは融合タンパク質、例えば、Ｆｃまたはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）融合タンパク質として用いることができる。ニュートロカイン−アルファのさらなるアンタゴニストは、ニュートロカイン−アルファの小分子アンタゴニスト、ニュートロカイン−アルファペプチド模倣物、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体（例えば、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬのドミナントネガティブ形態）を含む。そのようなニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体は、例えば、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬホモ−またはヘテロ多量体化を抑制することによってニュートロカイン−アルファ機能を拮抗することができる。あるいは、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体は、それらを含むポリペプチドが、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡおよびＢＡＦＦ−Ｒのようなニュートロカイン−アルファ受容体へ結合するのを、および／または該受容体を通ってのシグナリングを行うのを妨げるであろう。ニュートロカイン−アルファのさらなるアンタゴニストはニュートロカイン−アルファの小分子アンタゴニスト、ニュートロカイン−アルファペプチド模倣物、ニュートロカイン−アルファを標的とするアンチセンスＲＮＡおよび短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ニュートロカイン−アルファに対する受容体、および／またはＡＰＲＩＬに対する受容体を標的とするアンチセンスＲＮＡおよび短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を標的とするアンチセンスＲＮＡおよび短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を含む。ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストは後により詳細に記載する。
【００２７】
抗−ニュートロカイン−アルファ抗体は、Ｂ細胞の数および／または免疫グロブリン分泌のようなＢ細胞活性を低下させることによって働くと考えられる。かくして、用語「免疫調節剤」は、具体的には、Ｂ細胞変調剤および、特別な医薬分子においては、Ｂ細胞活性（例えば、Ｂ細胞増殖、分化、生存または免疫グロブリン分泌）および／またはＢ細胞の数を直接的にまたは間接的に阻害し、または低下させる化合物にわたることも意図する。特別な実施形態において、本発明の方法と組み合せて用いることができるＢ細胞変調剤は、全Ｂ細胞、活性化されたＢ細胞、ナイーブＢ細胞、記憶Ｂ細胞、血漿Ｂ細胞、およびプラスマサイトイドＢ細胞、ＣＤ１９＋Ｂ細胞および／またはＣＤ２０＋Ｂ細胞の活性または数を低下させる剤である。
【００２８】
免疫系は相互作用する細胞およびサイトカインの複雑なネットワークである。例えば、抗原提示細胞（マクロファージおよび樹状細胞のようなＡＰＣ）、およびＴ細胞、具体的には、ＣＤ４＋Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞は、Ｂ細胞を活性化させて、（ある疾患の状況における自己抗体を含めた）抗体を増殖させ、分泌させる役割をする。かくして、ＡＰＣまたはＴｈ細胞数または活性を低下または阻害することによって、Ｂ細胞活性を阻害することが可能である。同様に、Ｔｈ１およびＴｈ２応答のような種々のタイプの免疫応答があることが知られている。本発明の方法で用いることができる免疫調節剤は、別のタイプよりも一つのタイプの免疫応答を促進することができ、それにより、自己抗体陽性疾患を有する患者の治療において有益な効果を有する。従って、その最も広い意味において、用語「免疫調節剤」は、具体的には、一以上の細胞、細胞表面分子（例えば、細胞表面シグナリング分子）、および／または細胞、細胞表面分子（例えば、細胞表面シグナリング分子）、および先天的および／または適応免疫系の一部であるサイトカインの活性または量を刺激または阻害する医薬分子または化合物にわたることを意図する。免疫系の細胞は、限定されるものではないが、Ｂ細胞、Ｔ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。免疫調節剤によって刺激または阻害され得る免疫系の細胞の表面の細胞表面分子は、限定されるものではないが、ＣＤ２０のようなＣＤ抗原を含む。免疫系において重要なサイトカインは、限定されるものではないが、ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬおよびＣＤ４０Ｌを含めた、ＴＮＦリガンドスーパーファミリーのメンバーを含む。
【００２９】
詳細な記載
全身エリテマトーデス患者での第ＩＩ相臨床試験において、出願人は、０、１４、２８日に、ついで、週５２まで４週間毎にＩＶ注入として与えられた、ニュートロカイン−アルファタンパク質を中和する抗体での狼瘡患者の治療は、患者の血漿または血清において、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者において狼瘡に関連する兆候を有意に緩和したことを見出した（実施例１参照）。
【００３０】
したがって、本発明の特別な実施形態は、患者の血漿または血清において、≧１．８０のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬの抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する全身エリテマトーデスを有する患者を、ニュートロカイン−アルファの抗体アンタゴニストで治療する方法を提供する。しかしながら、当業者であれば、抗体分子は、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストとして作用できる種々の分子の一つに過ぎないことを容易に理解するであろう。かくして、本発明の別の特別な実施形態は、患者の血漿または血清において、≧１：８０のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する全身エリテマトーデスを有する患者を、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療する方法を提供する。
【００３１】
ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストは、限定されるものではないが、抗−ニュートロカイン−アルファ抗体またはその抗原−結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質またはその断片またはその変異体、ニュートロカイン−アルファ受容体またはその抗原結合断片に結合する抗体、またはニュートロカイン−アルファ結合ペプチドまたはポリペプチドを含む。ニュートロカイン−アルファ受容体は、例えば、膜貫通アクチベーターおよびＣＡＭＬインターアクター（ＴＡＣＩ，ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＣ５１７９０）、ＢＡＦＦ−Ｒ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿４４３１７７）、およびＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ，ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１１８３）を含む。ニュートロカイン−アルファ受容体の特に有用な形態は、ニュートロカイン−アルファに結合することができる細胞外ドメインの可溶性形態を含む。ニュートロカイン−アルファ受容体またはその断片または変異体、およびニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチドは、融合タンパク質、例えば、Ｆｃまたはヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）融合タンパク質として用いることができる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。ＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質の一つの例は、ＩｇＧ１免疫グロブリン分子のＦｃ領域に融合した配列番号６のアミノ酸１〜１５４である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。ＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質の一つの例は、ＩｇＧ１免疫グロブリン分子のＦｃ領域に融合した配列番号１０のアミノ酸１〜７０である。所望により、ＢＡＦＦ−Ｒにおけるアミノ酸２０（バリン）はアスパラギンで置換され、ＢＡＦＦ−Ｒにおけるアミノ酸２７（ロイシン）はプロリンで置換される。配列番号２６は、これらの２つのアミノ酸変化を持つＢＡＦＦ−Ｒのアミノ酸１〜７０を示す。
【００３２】
ニュートロカイン−アルファのさらなるアンタゴニストはニュートロカイン−アルファの小分子アンタゴニスト、ニュートロカイン−アルファペプチド模倣物、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体（例えば、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬのドミナントネガティブ形態）を含む。そのようなニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体は例えば、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬホモ−またはヘテロ多量体化を抑制することによってニュートロカイン−アルファ機能に拮抗することができる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。あるいは、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体は、それらを含むポリペプチドが、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡおよびＢＡＦＦ−Ｒのようなニュートロカイン−アルファ受容体へ結合するのを、および／またはそれを通ってシグナリングを行うのを妨げるであろう。ニュートロカイン−アルファのさらなるアンタゴニストは、ニュートロカイン−アルファの小分子アンタゴニスト、ニュートロカイン−アルファペプチド模倣物、ニュートロカイン−アルファを標的とするアンチセンスＲＮＡおよび短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ＡＰＲＩＬを標的とするアンチセンスＲＮＡおよび短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ニュートロカイン−アルファに対する受容体、および／またはＡＰＲＩＬに対する受容体を標的とするアンチセンスＲＮＡおよび短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を含む。ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストは後により詳細に記載する。
【００３３】
同様に、当業者であれば、特に、Ｂ細胞の活性または数を変調することができる分子を含めた、他の免疫調節剤が、本発明で有用であり得ることを認識するであろう。特別な実施形態において、本発明の方法と組み合せて用いることができるＢ細胞変調剤は、Ｂ細胞活性（例えば、Ｂ細胞の増殖、分化、生存または免疫グロブリン分泌）、および／またはＢ細胞数を直接的にまたは間接的に阻害または低下させる薬剤である。別の実施形態において、本発明の方法と組み合せて用いることができるＢ細胞変調剤は、全Ｂ細胞、活性化されたＢ細胞、ナイーブＢ細胞、記憶Ｂ細胞、血漿Ｂ細胞、およびプラスマサイトイドＢ細胞、ＣＤ１９＋Ｂ細胞および／またはＣＤ２０＋Ｂ細胞の活性または数を低下させる剤である。本発明で用いることができる免疫変調およびＢ細胞変調分子は、当業者に知られており、および後により詳細に記載する。
【００３４】
別の実施形態において、本発明は、治療有効量のニュートロカイン−アルファの抗体アゴニストを投与することを含む、「活性な」全身エリテマトーデス（ＳＬＥまたは「狼瘡」）を有する全身エリテマトーデス患者のサブセット内に入る患者を治療する方法を提供する。特別な実施形態において、本発明は、治療有効量のニュートロカイン−アルファの抗体アゴニストを投与することを含む、狼瘡と以前診断された、および活性な狼瘡を有する患者を治療する方法を提供する。本発明は、治療有効量のニュートロカイン−アルファの抗体アゴニストを投与するに先立って、患者が「活性な狼瘡」を有すると決定することを含む、活性な全身エリテマトーデス（ＳＬＥまたは「狼瘡」）疾患を有する全身エリテマトーデス患者のサブセット内に入る患者を治療する方法を提供する。特別な実施形態において、本発明は、治療有効量のニュートロカイン−アルファの抗体アンタゴニストを投与するに先立って、患者が狼瘡と以前に診断され、および活性な狼瘡を有するという決定を行うことを含む、狼瘡と以前診断され、および活性な狼瘡を有する患者を治療する方法を提供する。
【００３５】
別の実施形態において、本発明は、治療有効量のニュートロカイン−アルファ、または当該分野で知られおよび／または本明細書中に記載された他の調節剤を投与することを含む、「活性な」全身エリテマトーデス（ＳＬＥまたは「狼瘡」）病を有する全身エリテマトーデス患者のサブセット内に入る患者を治療する方法を提供する。特別な実施形態において、本発明は、治療有効量のニュートロカイン−アルファ、または当該分野で知られ、および／または本明細書中に記載された他の免疫調節剤を投与することを含む、狼瘡と以前診断され、および活性な狼瘡を有する患者を治療する方法を提供する。本発明は、治療有効量のニュートロカイン−アルファ、または当該分野で知られ、および／または本明細書中に記載された他の免疫調節剤を投与するに先立って、患者が「活性な狼瘡」を有するとの決定を行うことを含む、活性な全身エリテマトーデス病を有する全身エリテマトーデス患者のサブセット内に入る患者を治療する方法を提供する。特別な実施形態において、本発明は、治療有効量のニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または当該分野で知られ、および／または本明細書中に記載された他の免疫調節剤の投与に先立って、患者が狼瘡と以前診断され、および活性な狼瘡を有するという決定を行うことを含む、狼瘡と以前診断され、および活性な狼瘡を有する患者を治療する方法を提供する。
【００３６】
特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者が、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（ＡＣＲ）基準に従ってＳＬＥの臨床的診断を有する患者と定義される（例えば、ここに引用してその全体を援用する、Ｔａｎら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．２５：１２７１−７，（１９８２）；およびＨｏｃｈｂｅｒｇら．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４０：１７２５，（１９９７）。
【００３７】
特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア≧４を有する患者と定義される。ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩは、狼瘡エリテマトーデス国内評価試験におけるエストロゲンの安全性（Ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｉｎ  Ｌｕｐｕｓ  Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｔｒｉａｌ）によって変更された全身エリテマトーデス疾患活性指標（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｌｕｐｕｓ  Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ）を表す。ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアは、当該分野で公知の技術および方法を用いて臨床家／医師によってルーチン的に決定される。例えば、ここに引用してその全体を援用する、Ｂｏｍｂａｒｄｉｅｒら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．Ｊｕｎ；３５（６）：６３０−４０，１９９２；およびＳｔｒａｎｄら，Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．Ｆｅｂ；２６（２）：４９０−７，１９９９参照。簡単に述べれば、ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアは、９つの器官系に渡る２４カテゴリーにおいてＳＬＥ病活性を考慮することによって決定される。いくつかの器官系スコアにおける疾患は、他の器官系における疾患よりもより重み付けされる。特に、中枢神経系および血管（ＳＬＥ疾患活性尺度は、もし存在すれば、８ポイントが割り当てられ、腎臓および筋肉骨格ＳＬＥ疾患活性尺度は、もし存在すれば、４ポイントが割り当てられ、漿膜、皮膚および免疫学的ＳＬＥ疾患活性尺度は、もし存在すれば、２ポイントが割り当てられ、および体質上のおよび血液学的ＳＬＥ疾患活性尺度は、もし存在すれば、１ポイントが割り当てられる。最大理論ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアは１０５であるが、現実的には、少数の患者しか４５を超えるスコアは有しない。
【００３８】
標準ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアリング系において、もし被験体が０．５グラム／２４時間よりも大きなタンパク尿の新しい開始または最近の増加を有するならば４ポイントが割り当てられる。言い換えれば、もし一つの２４時間尿試料で得られたタンパク尿値が、患者の２４時間直前尿試料について決定された値よりも０．５ｇを超えてより大きければ、４ポイントがＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスケールでタンパク尿について割り当てられる。これは、「≧０．５ｇ／２４時間」のタンパク尿の増加または新しい開始として通常記載される。かくして、標準的なＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアリング系下では、タンパク尿についてベースラインで４ポイントが割り当てられた被験体は、現在の２４時間尿試料におけるタンパク尿値が、患者の２４時間直前尿試料で決定されたタンパク尿値よりも０．５ｇ以下だけより大きい限り、引き続いての往診において改善されるＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩを有するであろう。言い換えれば、患者は、安定なタンパク尿または０．５ｇ／２４時間以下のタンパク尿の増加に直面してもその合計スコアから導かれる４ポイントを有する。ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩタンパク尿スコアリングルールに対する変更は実施例２に記載されている。実施例２においては、本２４時間尿試料で決定されたタンパク尿がその患者の２４時間直前の尿試料で決定されたタンパク尿値よりも０．５グラムを超えてより低いのでなければ、４ポイントが継続的に割り当てられるように、タンパク尿スコアリングが変更される。さらに、もしタンパク尿の新しい開始、または＞０．５ｇ／２４時間であるタンパク尿の増加があれば、４ポイントが割り当てられる。本明細書中において、ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスケールに言及される場合、タンパク尿についてのスコアリングは、標準的なＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスケールに従ってなすことができる。好ましくは、患者のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアの決定におけるタンパク尿についてのスコアリングは、実施例２に記載されたタンパク尿スコアリング系に従ってなされる。
【００３９】
他の特別な実施形態において、活性狼瘡を有する患者は、ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア≧５を有する患者と定義される。さらなる特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア≧６を有する患者と定義される。さらなる特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア≧７を有する患者と定義される。さらなる特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者はＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア≧８を有する患者と定義される。他の特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア≧９を有する患者と定義される。他の特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者はＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア≧１０を有する患者と定義される。さらなる特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者はＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア≧１１を有する患者と定義される。さらなる特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者はＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア≧１２を有する患者と定義される。
【００４０】
他の実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、患者の血漿または血清において抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者と定義される。抗ｄｓＤＮＡ抗体力価、濃度またはレベルは、当該分野で公知の技術および方法を用いて臨床家／医師によってルーチン的に決定され得る。抗ｄｓＤＮＡ抗体力価、濃度またはレベルを決定するための一つの例のアッセイは、抗ｄｓＤＮＡ抗体の固定化されたｄｓＤＮＡへの特異的結合に基づく酵素結合免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）である。例えば、Ｈａｌｂｅｒｔら，Ｊ  Ｌａｂ  Ｃｌｉｎ  Ｍｅｄ．９７：９７−１１１，（１９８１）参照。抗ｄｓＤＮＡ抗体力価、濃度またはレベルを決定するための別の例のアッセイは、抗ｄｓＤＮＡ抗体の、Ｃｒｉｔｈｉｄｉａ  ｌｕｃｉｌｉａｅ細胞のｄｓＤＮＡへの特異的結合に基づく間接免疫蛍光アッセイである。例えば、Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅら，Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ．７２：８２９−３５（１９７９）参照。抗ｄｓＤＮＡ抗体力価、濃度またはレベルを決定するための、なお別の例のアッセイは、抗ｄｓＤＮＡ抗体の放射性方式ｄｓＤＮＡへの特異的結合、続いて、抗ｄｓＤＮＡ抗体放射性標識ｄｓＤＮＡ複合体の沈殿に基づくＦａｒｒアッセイである。例えば、Ｄａｖｉｓら，Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ．，６７：３７４−８，（１９９７）参照。特別な実施形態において、活性狼瘡を有する患者は、患者の血漿または血清において、３０国際単位／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者と定義され、ここに、国際単位（ＩＵ）は世界保健機構抗ｄｓＤＮＡ抗体参照調製に基づく。例えば、Ｆｅｌｔｋａｍｐら，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．，４７：７４０−７４６，（１９８８）参照。本パラグラフにおいて言及される文献の各々は、ここに引用してその全体を援用する。
【００４１】
さらなる特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、患者の血漿または血清において、４０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者と定義される。さらなる特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、患者の血漿または血清において、５０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者と定義される。さらなる特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、患者の血漿または血清において、６０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者と定義される。さらなる特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、患者の血漿または血清において、７５ＩＵ／ｍＬ以上の抗−ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者と定義される。さらなる特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、患者の血漿または血清において、１００ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者と定義される。さらなる特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、患者の血漿または血清において、１２５ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者と定義される。さらなる特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、患者の血漿または血清において、１５０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者と定義される。さらなる特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、患者の血漿または血清において、２００ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者と定義される。さらなる特別な実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、患者の血漿または血清において、３００ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者と定義される。
【００４２】
他の実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、患者の血漿または血清において、抗核抗体（ＡＮＡ＋）を有する患者と定義される。抗核抗体力価は、当該分野で公知の技術および方法を用いて臨床家／医師によってルーチン的に決定され得る。抗核抗体力価を決定するための一つの例のアッセイは、抗核抗体のＨＥｐ−２ヒト上皮細胞への特異的結合に基づく間接免疫蛍光アッセイである。例えば、Ｏｓｂｏｒｎら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，２７：１２８６−９，（１９８４）参照。別例のアッセイにおいて、ＡＮＡの固定化されたＡＮＡ抗原、例えば、ｄｓＤＮＡ、Ｒｏ／ＳＳ−Ａ、Ｌａ／ＳＳ−Ｂ、Ｓｍ、ＲＮＰへの特異的結合に基づき、抗核抗体の濃度またはレベルを、ＥＬＩＳＡを用いることによって決定することができる。例えば、Ｆｅｎｇｅｒら，Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ．，５０：２１４１−７，（２００４）参照。ＡＮＡテストは、Ｋａｖａｎａｕｇｈら，Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ＆  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２０００）１２４：７１−８１およびＧｒｅｉｄｉｎｇｅｒ，ＥＬ  ａｎｄ  Ｈｏｆｆｍａｎ，ＲＷ，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００３）３４：１１３−１１７にさらに記載されている。このパラグラフで言及された文献の各々は、ここに引用して一体化させる。
【００４３】
好ましい特別な実施形態において、活性狼瘡を有する患者は、１：８０以上のＡＮＡ力価を有する患者と定義される（例えば、患者の血漿または血清の希釈因子が８０以上である場合、陽性ＡＮＡテストが得られる）。例えば、１：１６０、１：３２０、および１：６４０の力価は、１：８０の力価よりも大きい。他の好ましい実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、１：１６０以上のＡＮＡ力価を有する患者と定義される。さらなる好ましい実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、１：３２０以上のＡＮＡ力価を有する患者と定義される。さらなる好ましい実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、１：６４０以上のＡＮＡ力価を有する患者と定義される。特別な実施形態において、ＡＮＡ力価は、ＨＥｐ−２細胞での間接的な免疫蛍光を用いて測定される。別の特別な実施形態において、ＡＮＡ力価は抗ｄｓＤＮＡ  ＥＬＩＳＡアッセイを用いて測定される。
【００４４】
他の実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、限定されるものではないが、抗Ｒｏ／ＳＳ−Ａ抗体、抗Ｌａ／ＳＳ−Ｂ抗体、抗ＲＮＰ抗体、抗カルジオリピン（抗リン脂質）、抗ｄｓＤＮＡ抗体、抗Ｓｍ抗体を含めた検出可能な自己抗体を有する患者と定義される。自己抗体の力価、濃度またはレベルは、当該分野で知られた技術および方法を用いて臨床家／医師によってルーチン的に決定することができる。
【００４５】
他の実施形態において、活性狼瘡を有する患者は、患者の血漿または血清において、低下したＣ３および／またはＣ４補体レベルを有する患者と定義される。当業者であれば、Ｃ３および／またはＣ４の正常なレベルは、Ｃ３および／またはＣ４を測定するのに用いられるアッセイに依存して変化し得ることを理解する。従って、血漿または血清Ｃ３補体の正常なレベルは、約９０ミリグラム／デシリットル〜約１８０ミリグラム／デシリットルであり得る。他の特別な実施形態において、血漿または血清Ｃ３補体の正常なレベルは、約８８ミリグラム／デシリットル〜約２０６ミリグラム／デシリットル、または約８８ミリグラム／デシリットル〜約２５２ミリグラム／デシリットルであり得る。血漿または血清Ｃ４補体の正常なレベルは、約１６ミリグラム／デシリットル〜約４７ミリグラム／デシリットルであり得る。他の特別な実施形態において、血漿または血清Ｃ３補体の正常なレベルは、約１２ミリグラム／デシリットル〜約７２ミリグラム／デシリットル、または約１３ミリグラム／デシリットル〜約７５ミリグラム／デシリットルからの範囲となり得る。特別な実施形態において、血漿または血清Ｃ３補体の低下したレベルは、９０ミリグラム／デシリットル未満と定義される。特別な実施形態において、血漿または血清Ｃ３補体の低下したレベルは、８８ミリグラム／デシリットル未満と定義される。特別な実施形態において、血漿または血清Ｃ３補体の低下したレベルは、８５ミリグラム／デシリットル未満と定義される。特別な実施形態において、血漿または血清Ｃ３補体の低下したレベルは、８０ミリグラム／デシリットル未満と定義される。特別な実施形態において、血漿または血清Ｃ３補体の低下したレベルは、７５ミリグラム／デシリットル未満と定義される。特別な実施形態において、血漿または血清Ｃ４補体の低下したレベルは、１６ミリグラム／デシリットル未満と定義される。特別な実施形態において、血漿または血清Ｃ４補体の低下したレベルは、１５ミリグラム／デシリットル未満と定義される。特別な実施形態において、血漿または血清Ｃ４補体の低下したレベルは、１４ミリグラム／デシリットル未満と定義される。特別な実施形態において、血漿または血清Ｃ４補体の低下したレベルは、１３ミリグラム／デシリットル未満と定義される。特別な実施形態において、血漿または血清Ｃ４補体の低下したレベルは、１２ミリグラム／デシリットル未満と定義される。特別な実施形態において、血漿または血清Ｃ４補体の低下したレベルは、１１ミリグラム／デシリットル未満と定義される。特別な実施形態において、血漿または血清Ｃ４補体の低下したレベルは、１０ミリグラム／デシリットル未満と定義される。特別な実施形態において、血漿または血清Ｃ４補体の低下したレベルは、９ミリグラム／デシリットル未満と定義される。補体レベルは、例えば、径方向免疫拡散アッセイを用い、当該分野で知られた技術および方法を用いて臨床家／医師によってルーチン的に決定され得る。
【００４６】
他の実施形態において、活性狼瘡を有する患者は、以下の特徴のいずれか１以上を有する患者と定義される：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃａｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  （ＡＣＲ）基準に従ったＳＬＥの臨床的診断（例えば、Ｔａｎら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．２５：１２７１−７，（１９８２）；およびＨｏｃｈｂｅｒｇら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４０：１７２５，（１９９７）参照）；ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア≧６；患者の血漿または血清における低下したＣ４補体レベル；患者の血漿または血清における低下したＣ３補体レベル；１：８０以上のＡＮＡ力価；患者の血漿または血清において、３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体；狼瘡関連症状の治療のために、≧７．５ミリグラム／日のプレドニゾンまた他のコレコチステロイドを受けつつある；および／または狼瘡関連症状の治療のために免疫抑制療法を受けつつある、または従前に受容したことがある。
【００４７】
他の実施形態において、活性な狼瘡を有する患者は、以下の特徴のいずれかの１以上を有する患者と定義される：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  （ＡＣＲ）基準に従ったＳＬＥの臨床的診断；ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア≧８；患者の血漿または血清における低下したＣ４補体レベル；患者の血漿または血清における低下したＣ３補体レベル；１：８０以上のＡＮＡ力価；患者の血漿または血清において、３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体；狼瘡関連症候群の治療のために４０ミリグラム／日のプレドニゾンまたは他のコルチコステロイドを受けつつある；および／または狼瘡関連症候群の治療のために、免疫抑制療法を受けつつある、または従前に受容したことがある。
【００４８】
多疾患活性指標は当該分野において臨床家または医師によく知られており、それを用いて、ＳＬＥ病活性のようなリウマチ病活性の程度を測定することができる（例えば、Ｓｔｒａｎｄ，ら，Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，２６：４９０−７，（１９９９）参照）。一つの実施形態において、ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩを疾患活性指標（ＤＡＩ）として用いる（例えば、Ｂｏｍｂａｒｄｉｅｒら．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．３５：６３０−４０，（１９９２）参照）。別の実施形態において、ＳＬＥ発赤指標はＤＡＩとして用いられる（例えば、Ｐｅｔｒｉら，Ｌｕｐｕｓ，８：６８５−９１，（１９９９）参照）。さらなる実施形態において、全身狼瘡国際共同臨床（Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｌｕｐｕｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｎｇ  Ｃｌｉｎｉｃｓ／Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｄａｍａｇｅ  Ｉｎｄｅｘ（ＳＬＩＣＣ／ＡＣＲ）をＤＡＩとして用いる（例えば、Ｇｌａｄｍａｎら，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，３９：３６３−９，（１９９６）参照）。別の実施形態において、医師包括的評価（ＰＧＡ）はＤＡＩとして用いられ、該ＰＧＡはビジュアルアナログスケールであり、０〜３の範囲であり、ここに、０は疾患活性無しであり、１は軽度な疾患活性であり、２は中程度の疾患活性であって、３は重篤な疾患活性であり、ＤＡＩとして用いられる。さらにもう１つの実施形態において、医療結果外観短フォーム３６（ＳＦ−３６）はＤＡＩとして用いられる。ＳＦ−３６は観察コホールト研究、ならびにランダム化された試験において健康関連生活の質（ＨＲＱＯＬ）の全てのドメインに対するＳＬＥのインパクトを反映することが示されている一般的なＨＲＱＯＬ機器である（その各々を、ここに引用してその全体を援用する、（Ｃｏｏｋら，Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，２７：１８９２−１８９５，（２０００）；Ｔｈｕｍｂｏｏら，Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，２６：９７−１０２，（１９９９）；Ｔｈｕｍｂｏｏら，Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，２７：１４１４−１４２０，（２０００）；Ｗａｒｅ  ＪＥら，Ｍｅｄ  Ｃａｒｅ，３０：４７３−４８３，（１９９２）；Ｓｍｏｌｅｎ  ＪＳら，Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，２６：５０４−５０７，（１９９９）；Ｇｌａｄｍａｎら，Ｌｕｐｕｓ，５：１９０−１９５，（１９９６）；Ａｌｏｎｓｏ  Ｊら，Ｑｕａｌ  Ｌｉｆｅ  Ｒｅｓ．，１３：２８３−２９８，２００４；およびＧｌａｄｍａｎら，Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，２７：３７７−９，（１９９５））。
【００４９】
さらなる実施形態において、（ＥｕｒｏＱｏｌ機器としても知られた）ＥＱ−５ＤをＤＡＩとして用いる。該ＥＱ−５Ｄは一般的な健康関連生活の質の尺度である。記載的健康状態分類システムを含有するのみならず、与えられた健康状態に関連する優先性値を反映する複合スコアまたは指標を生じさせることができる単純な自己−投与尋問であることが意図される。ＥＱ−５Ｄ記載的システムは５つの次元：運動性、自己−ケア、通常の活動、痛み／不快、および不安／鬱病よりなる。各次元は３つのレベルを有し、「健康に問題なし」、「中低度の健康の問題」、および「極端な健康の問題」を反映する（例えば、ここに引用して援用する、Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｏｌｉｃｙ．１９９０  Ｄｅｃ；１６（３）：１９９−２０８参照）。
【００５０】
さらなる実施形態において、慢性病療法（ＦＡＣＩＴ）測定システムの慢性病療法−疲労（ＦＡＣＩＴ−Ｆ）サブスケールについての機能的評価をＤＡＩとして用いる。ＦＡＣＩＴ−Ｆサブスケールは４つの主なＱＯＬドメイン：身体的幸福、社会的／家族的幸福、情緒的幸福、および機能的幸福に分けられた一般的問題の２７項の編集である。この測定ツールはエネルギーレベル、倦怠期、および活動を開始しまたは終了する能力についての患者フィードバックを集める（例えば、その各々をここに引用してその全体を援用する、Ｙｅｌｌｅｎ，Ｓ．Ｂ．ら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｉｎ  ａｎｄ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，１３：６３−７４，（１９９７）；Ｃｅｌｌａ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，９４（２）：５２８−５３８，（２００２）；およびＣｅｌｌａ，Ｄ．ら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｉｎ  ＆  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，２４（６）：５４７−５６１，（２００２）参照）。
【００５１】
さらなる実施形態において、疾患活性スコア（ＤＡＳ２８）をＤＡＩとして用いる。ＤＡＳ２８は、リウマチ病活性の評価のためのリウマチ学者によって用いられる標準的なツールである。この測定ツールは、接触に対して圧痛圧痛関節数（ＴＥＮ）、腫脹腫脹関節数（ＳＷ）、赤血球沈積速度（ＥＳＲ）、および疾患活性の患者評価（ＶＡＳ；ｍｍ）の評価に基づいて指標スコアを計算する（例えば、その各々をここに引用してその全体を援用する、Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｈｅｉｊｄｅ  Ｄ．Ｍ．Ｆ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ，２０：５７９−８，（１９９３）；Ｐｒｅｖｏｏ  Ｍ．Ｌ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ，３８：４４−８，（１９９５）参照）。
【００５２】
さらなる実施形態において、ブリティッシュ島狼瘡評価グループ（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｉｓｌｅｓ  Ｌｕｐｕｓ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｇｒｏｕｐ）（ＢＩＬＡＧ）をＤＡＩとして用いる（例えば、その各々をここに引用してその全体を援用する、Ｉｓｅｎｂｅｒｇら，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，４４：９０２−６，（２００５）；Ｇｏｒｄｏｎら，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，４２（１１）：１３７２−９，（２００３）；Ｉｓｅｎｂｅｒｇら，Ｌｕｐｕｓ，９（９）：６５１−４，（２０００）；Ｈａｙら，Ｑ  Ｊ  Ｍｅｄ．，８６：４４７−５８，（１９９３）；および２００４年４月４日にＡＤＳ−Ｌｉｍａｔｈｏｎ  Ｌｔｄより開放された、ＢＬＩＰＳＴＭバージョン３．０ソフトウエアプログラムユーザーガイド参照）。ＢＩＬＡＧ指標は、以前の測定と比較して臨床的特徴が新しい、より悪い、同一、または改良されているか否かに依存して、狼瘡およびスコアに影響されることが知られている８体の器官／システムを含む。８体の器官／システムの各々では、ＳＬＥ疾患発現の重症度はＡ、Ｂ、Ｃ、ＤまたはＥスコアであり、Ａが最も重症である（例えば、Ｈａｙ，ｉｂｉｄ参照）。ＢＩＬＡＧ指標は、疾患の重症度および治療の有効性を評価するための複合スコアを与える。この複合スコアは、狼瘡において冒される８体の器官／システムの各々にわたって寄与を加える。当該分野で知られたＢＩＬＡＧまたは他の尺度を用い、治療は、器官／システムの特異的サブセットにおける疾患発現を伴う狼瘡患者を標的とすることができる。
【００５３】
従って、特別な実施形態において、当該分野で知られた、および／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者がそのＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアの低下を達成したならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、当該分野で知られた、および／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、同一患者のベースラインＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア、患者の免疫調節剤での治療開始に先立って決定されたＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアと比較して、そのＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアの低下を達成したならば、治療に応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、当該分野で知られた、および／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者がそのＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアの少なくとも４ポイント低下を達成したならば、治療に応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、当該分野で知られた、および／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療された狼瘡患者は、もし該患者が、同一患者のベースラインＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア、患者の免疫調節剤での治療開始に先立って決定されたＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアと比較してそのＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアの少なくとも４ポイント低下を達成したならば、治療に応答している／応答したと考えられる。
【００５４】
別の特別な実施形態において、当該分野で知られた、および／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が医師包括的評価（ＰＧＡ）によって決定された疾患活性の悪化を経験していないならば、治療に応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、該患者は、もしＰＧＡスコアが減少し、安定なままであり、または０．３ポイント未満だけ増加したならば、疾患活性の悪化を経験していない。特別な実施形態において、該患者は、もしＰＧＡスコアが減少し、安定なままであり、または同一患者のベースラインＰＧＡスコア、患者の免疫調節剤での治療開始に先立って決定されたＰＧＡスコアから０．３ポイント未満だけ増加したならば、疾患活性の悪化を経験していない。
【００５５】
別の特別な実施形態において、当該分野で知られた、および／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者がブリティッシュ島狼瘡評価グループ（ＢＩＬＡＧ）の疾患活性指標によって決定して疾患活性の悪化を経験していないならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、患者は、もし該患者が患者のベースラインＢＩＬＡＧ評価以来、新しいＢＩＬＡＧ  Ａ器官ドメインスコアを獲得していない、または２つの新しいＢＩＬＡＧ  Ｂ器官ドメインスコアを獲得していないならば、疾患活性の悪化を経験していない。特別な実施形態において、患者は、もし該患者が新しいＢＩＬＡＧ  Ａ器官ドメインスコアを獲得しておらず、または２つのＢＩＬＡＧ  Ｂ器官ドメインスコアを獲得していないならば、疾患活性の悪化を経験しておらず、該ＢＩＬＡＧ評価は患者の免疫調節剤での治療開始に先立って測定されたものである。
【００５６】
別の特別な実施形態において、当該分野で知られた、および／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、各々、そのベースラインＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア、ＰＧＡスコアおよびＢＩＬＡＧ評価と比較して、そのＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアの低下を達成し、そのＰＧＡスコアの実質的悪化を有さず、およびブリティッシュ島狼瘡評価グループ（ＢＩＬＡＣ）の疾患活性指標によって決定して疾患活性の悪化を経験していないならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、各々、そのベースラインＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア、ＰＧＡスコアおよびＢＩＬＡＧ評価と比較して、そのＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアの少なくとも４ポイント低下を達成し、そのＰＧＡスコアの０．３０ポイントを超える増加を有さず、および新しいＢＩＬＡＧ  Ａ器官ドメインスコアを獲得しないか、または２つの新しいＢＩＬＡＧ  Ｂ器官ドメインスコアを獲得しなかったならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。
【００５７】
別の特別な実施形態において、当該分野で知られた、および／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者のプレドニゾンが低下しているならば、治療に応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、当該分野で知られた、および／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者が、もし該患者のプレドニゾンが患者の免疫調節剤での治療開始に先立って摂取していたプレドニゾン用量と比較して低下したならば、治療に応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されているまたは治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者のプレドニゾン用量が少なくとも２５％だけ低下したならば、治療に応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、当該分野において知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者が、もし該患者のプレドニゾン用量が少なくとも２５％ないし７．５ｍｇ／日以下だけ低下したならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者のプレドニゾン用量が患者のベースラインプレドニゾン用量から少なくとも２５％、または７．５ｍｇ／日以下だけ低下したならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者のプレドニゾン用量が少なくとも５０％だけ低下したならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者のプレドニゾンが少なくとも５０％、ないし７．５ｍｇ／日以下だけ低下したならば、治療に対して応答している／応答したと考えら得る。別の実施形態において、当該分野において知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある。狼瘡患者は、もし患者のプレドニゾン用量が患者のベースラインプレドニゾン用量から少なくとも５０％ないし７．５ｍｇ／日以下だけ低下したならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。
【００５８】
他の尺度を用いて、治療に対する狼瘡患者の応答の質を測定することができる。特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が改善されたＳＦ−３６健康概観スコアを有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。もう１つ特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が患者のベースラインＳＦ−３６健康概観スコアと比較して改善されたＳＦ−３６健康概観スコアを有するならば、治療に応答している／応答したと考えられる。
【００５９】
特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が改善されたＥＱ−５Ｄスコアを有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が患者のベースラインＥＱ−５Ｄスコアと比較して改善されたＥＱ−５Ｄスコアを有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。
【００６０】
特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が患者のＦＡＣＩＴ−Ｆスコアによって示される低下した疲労を示すならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし患者が、患者のベースラインＦＡＣＩＴ−Ｆスコアと比較して患者のＦＡＣＩＴ−Ｆスコアによって示される低下した疲労を示すならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。
【００６１】
特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されているまたは治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が改善されたＤＡＳ２８スコアを有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、患者のベースラインＤＡＳ２８スコアと比較して改善されたＤＡＳ２８スコアを有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。
【００６２】
別の特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が発赤の減少した頻度および／または持続を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、免疫調節剤での治療に先立っての発赤の頻度および／または持続と比較して、減少した発赤の頻度および／または持続を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が発赤の減少した重症度を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、免疫調節剤での治療に先立っての発赤の重症度と比較して、減少した発赤の重症度を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。ＳＬＥ発赤指標は、狼瘡兆候（発赤）の亢進の頻度および重症度を評価する。発赤は「軽度または中程度／または「重症」としてカテゴリー化される。温和または中程度発赤は以下の１以上を含む：３ポイント以上のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアの変化；新しい／より悪い円盤状、光感受性、深在性、皮膚血管炎または水疱性狼瘡；鼻咽頭潰瘍；胸膜炎；心膜炎；関節炎；発熱（ＳＬＥ）；０．５ｍｇ／ｋｇ／日を超えるに至らないプレドニゾンの増加；疾患活性のための添加されたＮＳＡＩＤまたはプラキニル；および２．５を超えるに至らないＰＧＡスコアの１．０を超える増加。重症発赤は以下の１以上を含む：１２を超えるまでのＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩの変化；新しい／より悪いＣＮＳ−ＳＬＥ；血管炎；腎炎；筋炎；Ｐｌｔ＜６０，０００；ヘム貧血（Ｈｂ＞３％における＜７％または減少）；プレドニゾン用量の倍化；０．５ｍｇ／ｋｇ／日を超えるまでのプレドニゾンの増加；サイトキサンの投薬；アザチオプリンの投薬；メトトリキサートの投薬；入院（ＳＬＥ）および２．５を超えるまでのＰＧＡスコアの増加。別の特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者がＳＬＥ発赤指標によって測定して減少した発赤の頻度および／または重症度を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、患者の以前の発赤頻度および／または重症度と比較して、ＳＬＥ発赤指標で測定して減少した発赤の頻度および／または重症度を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態にお��て、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、ＳＬＥ発赤指標の改変バージョンによって測定して減少した発赤の頻度および／または重症度を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が患者の以前の発赤頻度および／または重症度と比較して、ＳＬＥ発赤指標の改変バージョンによって測定して減少した発赤の頻度および／または重症度を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアの変化のみによって引き起こされる重症発赤は、ＳＬＥ発赤指標の改変バージョンから除外される。
【００６３】
従って、特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒを標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を含めたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が患者のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアを達成したならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、同一患者のベースラインＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア、患者のニュートロカイン−アルファのアンタゴニストでの治療開始に先立って決定されたＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアと比較して、患者のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアの低下を達成したならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が患者のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアの少なくとも４ポイント低下を達成したならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、同一患者のベースラインＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア、患者のニュートロカイン−アルファのアンタゴニストでの治療開始に先立って決定されたＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアと比較して、患者のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアの少なくとも４ポイント低下を達成したならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質断片または変異体である。
【００６４】
別の特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカインアルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、医師の包括的評価（ＰＧＡ）によって決定された疾患活性の悪化を経験していないならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、患者は、もしＰＧＡスコアが減少し、安定なままであり、または０．３ポイント未満だけ増加したならば、疾患活性の悪化を経験していない。特別な実施形態において、患者は、もしＰＧＡスコアが減少し、安定なままであり、または同一患者のベースラインＰＧＡスコア、患者のニュートロカイン−アルファのアンタゴニストでの処置開始に先立って決定されたＰＧＡスコアから０．３ポイント未満だけ増加したならば、疾患活性の悪化を経験していない。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質または変異体である。
【００６５】
別の特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、ブリティッシュ島狼瘡評価グループ（ＢＩＬＡＧ）の疾患活性指標によって決定して疾患活性の悪化を経験していないならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、患者は、もし該患者が新しいＢＩＬＡＧ  Ａ器官ドメインスコアを獲得せず、または２つの新しいＢＩＬＡＧ  Ｂ器官ドメインスコアを獲得しないならば、疾患活性の悪化を経験していない。特別な実施形態において、患者のベースラインＢＩＬＡＧ評価、すなわちＢＩＬＡＧが患者のニュートロカイン−アルファのアンタゴニストでの処置の開始に先立って決定されたものであるから、患者が、新しいＢＩＬＡＧ  Ａ器官ドメインスコアを獲得しておらず、または２つの新しいＢＩＬＡＧ  Ｂ器官ドメインスコアを獲得していないならば、疾患活性の悪化を経験していない。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファは、ＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＤＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗−ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。
【００６６】
別の実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＡに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことのある狼瘡患者は、もし該患者が、各々、患者のベースラインＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア、ＰＧＡスコア、およびＢＩＬＡＧスコアと比較して、患者のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアの低下を達成し、患者のＰＧＡスコアの実質的悪化を有さず、およびブリティッシュ島狼瘡評価グループ（ＢＩＬＡＧ）の疾患活性指標によって決定して疾患活性の悪化を経験していないならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、各々、患者のベースラインＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア、ＰＧＡスコアおよびＢＩＬＡＧスコアと比較して、患者のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアの少なくとも４ポイント低下を達成し、患者のＰＧＡスコアの０．３０を超えるポイント増加を有さず、および新しいＢＩＬＡＧ  Ａ器官ドメインスコアを獲得しておらず、または２つの新しいＢＩＬＡＧ  Ｂ器官ドメインスコアを獲得していないならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質断片または変異体である。
【００６７】
別の特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者のプレドニゾン用量が低下したならば治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者のプレドニゾン用量が、患者の免疫調節剤での治療開始に先立って摂取していたプレドニゾン用量と比較して低下したならば、治療に応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし患者のプレドニゾン用量が少なくとも２５％だけ低下したならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし患者のプレドニゾン用量が少なくとも２５％ないし７．５ｍｇ／日以下だけ低下したならば、治療に応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者が、もし患者のプレドニゾン用量が患者のベースラインプレドニゾン用量から少なくとも２５％ないし７．５ｍｇ／日以下だけ低下したならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者がもし患者のプレドニゾン用量が患者のベースラインプレドニゾン用量から少なくとも５０％だけ低下したならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されているまたは、治療されたことがある狼瘡患者は、もし患者のプレドニゾン用量が少なくとも５０％ないし７．５ｍｇ／日以下だけ低下したならば治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし患者のプレドニゾン用量が患者のベースラインプレドニゾン用量から少なくとも５０％、ないし７．５ｍｇ／日以下だけ低下したならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗−ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。
【００６８】
他の尺度を用いて、治療に対する狼瘡患者応答の質を測定することができる。特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原または結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が改善されたＳＦ−３６健康概観スコアを有するならば治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の状態を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、患者のベースラインＳＦ−３６健康概観スコアと比較して改善されたＳＦ−３６健康概観スコアを有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。
特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原または結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、治療されたことのある狼瘡患者は、もし該患者が改善されたＥＱ−５Ｄスコアを有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことのある狼瘡患者は患者のベースラインＥＱ−５Ｄスコアと比較して改善されたＥＱ−５Ｄスコアを有するならば治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ＢＡＦＦ−Ｒ−ＦＣタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、抗−ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。
【００６９】
特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原−結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗−ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原−結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が患者のＦＡＣＩＴ−Ｆスコアによって示して、低下した疲労を示すならば治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原−結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を含めたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が患者のベースラインＦＡＣＩＴ−Ｆスコアと比較して患者のＦＡＣＩＴ−Ｆスコアによって示して低下した疲労を示すならば、治療に応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗−ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗−ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質断片または変異体である。
【００７０】
特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が患者のベースラインＤＡＳ−２８スコアと比較して改善されたＤＡＳ−２８を有するならば治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原−結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が患者のベースラインＤＡＳ−２８スコアと比較して改善されたＤＡＳ−２８を有するならば治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。
【００７１】
別の特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が減少した発赤の頻度および／または持続を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストでの治療に先立った発赤の頻度および／または持続と比較して、減少した発赤の頻度および／または持続を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が減少した発赤の重症度を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者がニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療するに先立っての発赤の重症度と比較して減少した発赤の重症度を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。ＳＬＥ発赤指標は、狼瘡兆候（発赤）の亢進の頻度および重症度を評価する。発赤は「温和軽度または中程度」または「重症」としてカテゴリー化される。温和または中程度発赤は以下の１以上を含む：３ポイント以上のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアの変化；新しい／より悪い円盤状、光感受性、深在性、皮膚血管炎または水泡性狼瘡；鼻咽頭潰瘍；胸膜炎；心膜炎；関節炎；発熱（ＳＬＥ）；０．５ｍｇ／ｋｇ／日を超えないまでのプレドニゾンの増加；疾患活性に対する添加されたＮＳＡＩＤまたはプラクエニル；２．５を超えないまでのＰＧＡスコアの１．０を超える増加。重症発赤は以下の一以上を含む：１２を超えるまでのＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアの変化；新しい／より悪いＣＮＳ−ＳＬＥ；血管炎；腎炎；筋炎；Ｐｌｔ＜６０，０００；ヘム貧血（Ｈｂ＞３％における＜７％または減少）；プレドニゾン用量の倍化；０．５ｍｇ／ｋｇ／日を超えるまでのプレゾニドンの増加サイトキサンの投薬；アザチオプリンの投薬；メトトレキサートの投薬；入院（ＳＬＥ）および２．５を超えるまでのＰＧＡスコアの増加。別の特別な実施形態において、ニュートロカイン−��ルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者がＳＬＥ発赤指標によって測定して測定して減少した発赤の頻度および／または重症度を有するならば、治療に応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストでの治療に先立っての発赤の頻度および／または重症度と比較して、ＳＬＥ発赤指標で測定して減少した発赤の頻度および／または重症度を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、ＳＬＥ発赤指標の改変バージョンによって測定して減少した発赤の頻度および／または重症度を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。別の特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストでの治療に先立っての発赤の頻度および／または重症度と比較して、ＳＬＥ発赤指標の改変バージョンによって測定して減少した発赤の頻度および／または重症度を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。ＳＬＥ発赤指標の改変バージョンは、ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア変化単独によって誘発された重症発赤を排除する。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特異的な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。
【００７２】
前記した疾患活性指標（例えば、ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩ、ＰＧＡ、ＢＩＬＡＧ、ＳＬＥ発赤指標、ＳＦ−３６健康概観スコア、ＥＱ−５Ｄ、ＦＡＣＩＴ−Ｆ、ＤＡＳ２８）を用いて、個々にまたは組み合わせて狼瘡患者の状態を評価してもよい。これらの疾患活性指標によって測定された患者の健康改善は、患者の以前の疾患活性指標スコア測定の一以上に関連して、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒまたはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めた、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤での治療の開始後の時点において評価してもよい。加えて、特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、以前の測定に対して改善された疾患活性スコアを維持するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、一以上の疾患活性指標スコアは、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤での治療の開始後１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週、月および／または年において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤での治療の開始に先立って評価される。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。
【００７３】
特別な実施形態において、一以上の器官／系における疾患発現を持つ狼瘡患者は、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原−結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めた、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストおよび／または免疫調節剤で治療する。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗−ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。特別な実施形態において、粘膜皮膚および／または筋肉骨格系の関与の有りまたは無しにて、一以上の内部器官系における疾患発現を持つ狼瘡患者は、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストおよび／または他の免疫調節剤で治療される。特別な実施形態において、粘膜皮膚および／または筋肉骨格系の関与なくして、一以上の内部器官系における疾患発現を持つ狼瘡患者は、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストおよび／または免疫調節剤で処置される。狼瘡において、粘膜皮膚および／または筋肉骨格系に関係する疾患発現は、限定されるものではないが：円盤状発疹、頬発疹、または他の皮疹、粘膜潰瘍、皮下脂肪組織炎、皮膚血管炎、皮膚血栓症、指梗塞、指血栓症、脱毛症、爪周囲紅斑、凍瘡、線状出血、筋炎、多発性関節炎、関節炎、腱炎、関節痛および筋痛を含む。狼瘡においては、狼瘡によって影響されえる内部器官系は、限定されるものではないが、神経系、循環系、呼吸器系、尿／排泄系、消化系、および目を含む。神経系における狼瘡病発現は、限定されるものではないが、無菌髄膜炎、大脳血管炎、脱ミエリン症候群、筋障害、急性錯乱状態、精神病、急性炎症性脱ミエリン多発神経根筋障害、短神経障害、頭側神経障害、叢障害、多発性神経障害、発作障害、癲癇状態、血管炎によらない脳血管病、認識障害、運動障害、自律神経障害、小脳性運動失調、頭痛、狭心症、気分障害および不安障害を含む。循環系における狼瘡病発現は、限定されるものではないが、心筋炎、心臓不全、不整脈、新弁機能障害、漿膜炎、心タンポナーゼ、呼吸困難を伴う胸膜滲出、肺出血、肺血管炎、間隙性歯槽炎、間隙性肺炎、収縮性肺症候群、大動脈炎および冠血管炎を含む。消化系における狼瘡病発現は、限定されるものではないが、腹膜炎、腹側漿膜炎、腹水、狼瘡腸炎、狼瘡結腸炎、吸収不良、タンパク質喪失腸障害、肝炎、腸偽閉塞、急性胆嚢炎および急性膵炎を含む。目に関連する狼瘡病発現は、限定されるものではないが、眼窩炎症、角膜炎、前部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、網膜血管炎、上強膜炎、強膜炎、網膜／脈絡膜血管閉塞病、クトイド体、視神経炎および前部虚血性視神経障害を含む。
【００７４】
限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原−結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めた、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤での治療に対する患者の応答は、治療開始後に一以上の間隔でバイオマーカーを評価し、患者のバイオマーカー評価を同一バイオマーカーについての患者のベースラインおよび／または以前の測定と比較することによってモニターしてもよい。評価され得るバイオマーカーは、限定されるものではないが、免疫グロブリンレベル（例えば、全血清免疫グロブリン、ならびに血清ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、および／またはＩｇＥレベル）、自己抗体レベル（例えば、抗ｄｓＤＮＡ抗体、抗ＣＣＰ抗体、抗Ｒｏ／ＳＳ−Ａ抗体、抗Ｌａ／ＳＳ−Ｂ抗体、抗ＲＮＰ抗体、抗カルジオリピン（抗リン脂質）抗体、および抗Ｓｍ抗体レベルならびにＡＮＡ力価）、Ｂ細胞数（例えば、全Ｂ細胞数、活性化されたＢ細胞数、ナイーブＢ細胞数、記憶Ｂ細胞数、血漿Ｂ細胞数、および形質細胞様Ｂ細胞数、全ＣＤ１９＋Ｂ細胞および／またはＣＤ２０＋Ｂ細胞）、Ｃ４補体レベル、Ｃ３補体レベルを含む。特別な実施形態において、バイオマーカー測定はニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤での処置の開始に先立って、および／またはニュートロカイン−アルファまたは他の免疫調節剤での処置の開始後１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２週、月および／または年において評価される。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗−ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。
【００７５】
特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒを標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を含めた、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、該患者の免疫グロブリンのベースライン測定と比較して、減少したレベルの免疫グロブリン（例えば、合計血清免疫グロブリン、ならびに血清ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、および／またはＩｇＥレベル）を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、該患者の以前の免疫グロブリンの測定の一以上と比較して、減少したレベルの免疫グロブリン（例えば、全血清免疫グロブリン、ならびに血清ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、および／またはＩｇＥレベル）を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、該患者の以前の免疫グロブリンの測定の一以上と比較して、減少したレベルの免疫グロブリン（例えば、全血清免疫グロブリン、ならびに血清ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、および／またはＩｇＥレベル）を維持するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が正常レベルの免疫グロブリン（例えば、全血清免疫グロブリン、ならびに血清ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、および／またはＩｇＥレベル）を達成するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。
【００７６】
特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めた、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストで治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、該患者の自己抗体のベースライン測定と比較して、減少したレベルの自己抗体（例えば、抗ｄｓＤＮＡ抗体、抗ＣＣＰ抗体、抗Ｒｏ／ＳＳ−Ａ抗体、抗Ｌａ／ＳＳ−Ｂ抗体、抗ＲＮＰ抗体、抗カルジオリピン（抗リン脂質）抗体、および抗Ｓｍ抗体レベルならびにＡＮＡ力価）を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗−ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗−ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、患者の自己抗体の先の測定の一以上と比較して、減少したレベルの自己抗体（例えば、抗ｄｓＤＮＡ抗体、抗ＣＣＰ抗体、抗Ｒｏ／ＳＳ−Ａ抗体、抗Ｌａ／ＳＳ−Ｂ抗体、抗ＲＮＰ抗体、抗カルジオリピン（抗リン脂質）抗体、および抗Ｓｍ抗体レベルならびにＡＮＡ力価）を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者が、もし該患者が、該患者の自己抗体の以前の測定の一以上と比較して、減少したレベルの自己抗体（例えば、抗ｄｓＤＮＡ抗体、抗ＣＣＰ抗体、抗Ｒｏ／ＳＳ−Ａ抗体、抗Ｌａ／ＳＳ−Ｂ抗体、抗ＲＮＰ抗体、抗カルジオリピン（抗リン脂質）抗体、および抗Ｓｍ抗体レベルならびにＡＮＡ力価）を維持するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で処置されている、または処置されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、正常なレベルの自己抗体（例えば、抗ｄｓＤＮＡ抗体、抗ＣＣＰ抗体、抗Ｒｏ／ＳＳ−Ａ抗体、抗Ｌａ／ＳＳ−Ｂ抗体、抗ＲＮＰ抗体、抗カルジオリピン（抗リン脂質）抗体、および抗Ｓｍ抗体レベルならびにＡＮＡ力価）を達成するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ＩｇＧイソタイプの自己抗体が測定される。
【００７７】
特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を含めた、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、該患者のＢ細胞数のベースライン測定と比較して、減少した数のＢ細胞（例えば、全Ｂ細胞数、活性化Ｂ細胞数、ナイーブＢ細胞数、血漿Ｂ細胞数、および形質細胞様Ｂ細胞数、全ＣＤ１９＋Ｂ細胞数および／またはＣＤ２０＋Ｂ細胞数）を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファの断片または変異体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、該患者のＢ細胞数の以前の測定の一以上と比較して、減少したＢ細胞の数（例えば、全Ｂ細胞数、活性化Ｂ細胞数、ナイーブＢ細胞数、血漿Ｂ細胞数、および形質細胞様Ｂ細胞数、全ＣＤ１９＋Ｂ細胞数および／またはＣＤ２０＋Ｂ細胞数）を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、該患者のＢ細胞数の以前の測定の一以上と比較して、減少した数のＢ細胞（例えば、全Ｂ細胞数、活性化Ｂ細胞数、ナイーブＢ細胞数、血漿Ｂ細胞数、および形質細胞様Ｂ細胞数、全ＣＤ１９＋Ｂ細胞数および／またはＣＤ２０＋Ｂ細胞数）を維持するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が正常な数のＢ細胞（例えば、全Ｂ細胞数、活性化Ｂ細胞数、ナイーブＢ細胞数、血漿Ｂ細胞数、および形質細胞様Ｂ細胞数、全ＣＤ１９＋Ｂ細胞数および／またはＣＤ２０＋Ｂ細胞数）を達成するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。
【００７８】
特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めた当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、患者のＣ４のベースライン測定と比較して、増加した血清補体因子Ｃ４レベルを有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、該患者のＣ４の先の測定の一以上と比較して、増加したレベルのＣ４を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、該患者のＣ４の以前の測定の一以上と比較して、増加したレベルのＣ４を維持するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が正常なレベルのＣ４を達成したならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。
【００７９】
特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めた、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファ、または他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、該患者のＣ３のベースライン測定と比較して、増加した血清補体因子Ｃ３レベルを有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、該患者のＣ３の以前の測定の一以上と比較して、増加したレベルのＣ３を有するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が、該患者のＣ３の以前の測定の一以上と比較して、増加したレベルのＣ３を維持するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある狼瘡患者は、もし該患者が正常なレベルのＣ３を達成したならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。
【００８０】
特別な実施形態において、本発明は、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めた、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤の治療有効量を投与することを含む、一以上の免疫抑制剤で以前治療されたことがある患者を治療する方法を提供する。特別な実施形態において、本発明は、治療有効量のニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤を投与することを含む、全身エリテマトーデス（狼瘡）と以前に診断されたことがある、および一以上の免疫抑制剤で以前治療されたことがある患者を治療する方法を提供する。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗−ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。特別な実施形態において、患者が以前それで治療された免疫抑制剤はアザチオプリン（例えば、ＩＭＵＲＡＮＴＭ）、シクロホスファミド（例えば、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、ＣＴＸ）、カルシニューリン阻害剤、例えば、ＦＫ５０６、タクロリムスまたはシクロスポリン（例えば、ＰＲＯＧＲＡＦ（登録商標））および／またはＣＥＬＬＣＥＰＴ（登録商標）（その活性な代謝産物がミコフェノール酸であるミコフェノレートモテフィル）である。
【００８１】
狼瘡および他の自己免疫疾患のためのほとんどの現行の療法は、種々の炎症経路を非特異的にブロックする投薬を利用する。恐らくは、本療法で用いる最も危険な投薬はコルチコステロイドである。プレドニゾンのようなコルチコステロイドは疾患発現を制御するのに必須であるが、それらは感染に導く全体的免疫抑制、骨折に導く骨粗鬆症、および早期心臓麻痺および発作に導くアテローム性動脈硬化症に対して多数の有害効果も有する。臨床試験において、出願人らは、０、１４、２８日に、次いで、週５２まで４週間ごとにＩＶ注入によって与えた、ニュートロカイン−アルファタンパク質を中和する抗体での治療は、狼瘡患者において疾患発現を緩和するのに必要なコルチコステロイドプレドニゾン用量を低下するのに効果的であることを見出した。具体的には、抗ニュートロカイン−アルファ抗体での治療は、治療期間の最後の３ヶ月の間における低下したプレドニゾン使用に関連するように見えた。ベースラインにおいて１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡを有する患者において、抗ニュートロカイン−アルファ抗体を受ける対象のより大きなパーセンテージはそれらの低下したプレドニゾン用量を有し、他方、逆に、プラセボ治療を受ける対象のより大きな数は、７．５ｍｇ／日を越えるプレドニゾン用量まで増加する。
【００８２】
従って、一つの実施形態において、本発明は、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めた、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤の治療有効量を投与することを含む、コルチコステロイ治療の頻度、および／または患者に投与されたコルチコステロイドの量を低下させる方法を提供する。特別な実施形態において、該コルチコステロイドはプレドニゾン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロンまたはデキサメタゾンである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。特別な実施形態において、コルチコステロイド療法が低下された患者は炎症に罹った患者である。別の特別な実施形態において、コルチコステロイド療法が低下した患者は、限定されるものではないが、慢性関節リウマチ、狼瘡、シェーグレン症候群、または本明細書中にリストしたもののような他の自己免疫病を含めた自己免疫疾患を罹った患者である。
【００８３】
従って、特別な実施形態において、本発明は、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めた、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは、他の免疫調節剤の治療有効量を投与することを含む、コルチコステロイド治療の頻度、および／または全身エリテマトーデス（狼瘡）患者に投与されたコルチコステロイドの量を低下させる方法を提供する。別の特別な実施形態において、本発明は、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒを標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を含めた、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤の治療有効量を投与することを含む、プレドニゾン治療の頻度、および／または全身エリテマトーデス（狼瘡）患者に投与されたプレドニゾンの量を低下させる方法を提供する。この関係で、「治療有効量」とは、それに対してコルチコステロイドが典型的には製剤される疾患発現を緩和させるのに必要なコルチコステロイドを低下させる量をいう。これらの発現は、これらの発現の重症度を低下させるのに効果的な抗体／組成物量を決定するための方法のように、臨床家／医師によってよく知られている。好ましい実施形態において、患者に投与される本発明の抗体の用量は０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ患者体重である。より好ましくは、患者に投与される用量は０．１ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇ患者体重の間である。最も好ましい実施形態において、患者に投与される用量は１、４、１０、または２０ｍｇ／ｋｇである。
【００８４】
特別な実施形態において、患者に投与されるコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）の量は、以前のより高い用量から≦８０ミリグラム／日まで降下し、他方、同一患者は、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めた、当該分野で知られた、または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生法に同時に付される。特別な実施形態において、患者に投与されるコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）の量は以前のより高い用量から≦４０ミリグラム／日まで降下し、他方、同一患者は、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生法に同時に付される。特別な実施形態において、患者に投与されるコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）の量は従前のより高い用量から２０ミリグラム／日未満に降下され、他方、同一患者は、同時に、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生法に付される。特別な実施形態において、患者に投与されるコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）の量は以前のより高い用量から≦１０ミリグラム／日まで降下し、他方、同一患者は、同時に、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生法に付される。特別な実施形態において、患者に投与されるコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）の量は従前のより高い用量から≦８ミリグラム／日まで降下し、他方、同一患者は、同時に、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生法に付される。特別な実施形態において、患者に投与されるコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）の量は従前のより高い用量から≦６ミリグラム／日まで降下させ、他方、同一患者は、同時に、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生法に付される。特別な実施形態において、患者に投与されるコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）の量は従前のより高い用量から≦４ミリグラム／日まで降下させ、他方、同一患者は、同時に、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生法に付される。特別な実施形態において、患者に投与されるコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）の量は従前のより高い用量から≦２ミリグラム／日まで降下させ、他方、同一患者は、同時に、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生法に付される。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。
【００８５】
特別な実施形態において、患者に投与されるコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）の量は従前のより高い用量から≦７．５ミリグラム／日まで降下させ、他方、同一患者は、同時に、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載された特別な実施形態において、または他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生法に付される。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生法を開始させるに先立って患者が摂取していたプレドニゾンの用量と比較して、患者に投与されるコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）の量は、最後には、少なくとも２５％だけ降下させ、他方、患者は、同時に、ニュートロカイン−アルファまたは他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生に付される。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファまたは他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生法を開始するに先立って患者が摂取していたプレドニゾンの用量と比較して、患者に投与されるコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）の量は少なくとも５０％だけ最終的に降下させ、他方、該患者は、最終的には、ニュートロカイン−アルファまたは他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生法に付される。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファまたは他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生法を開始するに先立って患者が摂取していたプレドニゾンの量と比較して患者に投与されるコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）の量は、最終的には、少なくとも２５％ないし≦７．５ミリグラム／日によって降下され、他方、患者は、同時に、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは免疫調節剤を投与することを含む治療養生法に付される。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生法を開始するに先立って患者が摂取していたプレドニゾンの用量と比較して、患者に投与されるコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）の量は、少なくとも５０％ないし≦７．５ミリグラム／日だけ降下させ、他方、患者は同時に、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生法に付される。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗−ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗−ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。
【００８６】
特別な実施形態において、患者は一時的にまたは永久的にコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）療法から開放され、他方、同一患者は、同時に、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤を投与することを含む治療養生法に付される。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。
【００８７】
特別な実施形態において、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤を用いて、慢性関節リウマチ（ＲＡ）を有する患者を治療する。特別な実施形態において、治療すべき慢性関節リウマチ患者はＢ細胞悪性疾患を有しない。さらに、慢性関節リウマチ患者は、所望により、さらに、当該薬物で知られた用量、または低下した用量の、サリシレート；インドメタシン、フェニルブタゾン、フェニル酢酸誘導体（例えば、イブプロフェンおよびフェノプロフェン）、ナフタレン酢酸（ナプロキセン）、ピロールアルカン酸（トメチン）、インロール酢酸（スレンダック）、ハロゲン化アントラニル酸（メクロフェナメートナトリウム）、ピロキシカム、ゾメピラックおよびジフルニザルのような非−ステロイド系抗−炎症薬物；クロロキンのような抗−マラリア剤；金塩；ペニシラミン；またはメトトリキサートまたはコルチコステロイドのような免疫抑制剤のようなＲＡを治療するのに使用されるいずれか１以上の薬剤で治療される。しかしながら、好ましくは、慢性関節リウマチ患者は、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で治療されるのみである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニスト、ドミナントネガティブとして機能する、ニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。そのような免疫調節剤は、当業者によって容易に決定できる、後記投与スケジュールに従ってＲＡ患者に投与される。主な応答はＰａｕｌｕｓ指標（Ｐａｕｌｕｓら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．３３：４７７−４８４（１９９０））、すなわち、朝硬直の改善、痛いかつ炎症した関節の数、赤血球沈積（ＥＳＲ）、および患者および医師によって評価される疾患重症度の５ポイントスケールでの少なくとも２ポイント改善によって決定される。当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファアンタゴニスト、または他の免疫調節剤の投与は、前記したように治療された患者においてＲＡの兆候の１以上を緩和するであろう。
【００８８】
０，１４，２８日に、次いで、週２４まで４週間毎にＩＶ注入として与えられた、ニュートロカイン−アルファタンパク質を中和する抗体での治療を受けた慢性関節リウマチ患者は、５．１よりも大きなＤＡＳ２８スコアを有する患者、以前に抗ＴＮＦ療法を受容したことが無い患者、および／またはニュートロカイン−アルファタンパク質を中和する抗体での治療の開始に先立って患者の血漿および／または血清においてリウマチ因子を有するにおいて慢性関節リウマチに関連する兆候をより緩和するようであった。ニュートロカイン−アルファタンパク質を中和する抗体での治療により容易に応答するように見えた更なるサブグループは男性患者、患者の血漿および／または血清において、抗ＣＣＰ（環状シトルリン化ペプチド）を有する患者、ニュートロカイン−アルファタンパク質を中和する抗体と同時にメトトレキサートを受けた患者、以前メトトレキサートでの治療に失敗した患者および／またはメトトレキサート療法に従前に失敗した患者、および／またはメトトレキサート療法および少なくと別の他のＤＭＡＲＤ療法に従前失敗した患者を含むものであった。
【００８９】
従って、本発明は、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤を持つ慢性関節リウマチ患者を治療する方法を提供し、該慢性関節リウマチ患者は以下の特徴の１以上を有する：患者は以前に抗ＴＮＦ療法、例えば、（ＲｅｍｉｃａｄｅＴＭ  Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，Ｉｎｃ．としても知られた）インフリキシマブ、アダリムマブ（Ａｂｂｏｔｔ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのＨｕｍｉｒａ（登録商標））、またはエタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））を受容したことが無く；患者は患者の血漿および／または血清中にリウマチ因子を有し；患者は患者の血漿および／または血清中に測定可能な抗−ＣＣＰ（環状シトルリン化ペプチド）抗体を有し；患者は患者の血漿および／または血清中において上昇したＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）を有し；患者は以前１以上の疾患修飾性抗リウマチ薬物での治療を失敗しており；患者は高度に改変された疾患活性スコア（ＤＡＳ２８）を有し；患者は腫脹および圧痛関節を有し；患者は朝のこわばりを患っており；患者は増大した赤血球沈積速度（ＥＳＲ）を有し、および／または患者は男性である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−ペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。特別な実施形態において、慢性関節リウマチ患者は患者の血漿および／または血清中に１２ＩＵ／ｍｌ以上のリウマチ因子を有する。特別な実施形態において、上昇したＣＲＰレベルは１リットル当たり少なくとも１．５ミリグラムとして定義される。特別な実施形態において、上昇したＣＲＰレベルは１リットル当たり少なくとも５ミリグラムと定義される。特別な実施形態において、上昇したＣＲＰレベルは１リットル当たり少なくとも６ミリグラムと定義される。特別な実施形態において、上昇したＣＲＰレベルは１リットル当たり少なくとも９ミリグラムと定義される。特別な実施形態において、上昇したＣＲＰレベルは１リットル当たり少なくとも１０ミリグラムと定義される。特別な実施形態において、上昇したＣＲＰレベルは１リットル当たり少なくとも２０ミリグラムと定義される。特別な実施形態において、慢性関節リウマチ患者は、患者の血漿および：／または血清中に１０単位以上の抗ＣＣＰ抗体を有する。特別な実施形態において、慢性関節リウマチ患者は患者の血漿および／または血清中に２０単位以上の抗ＣＣＰ抗体を有する。特別な実施形態において、患者は、限定されるものではないが、メトトレキサート、アミノキノロン、スルファサラジン、およびレフルノミドを含めた１以上のＤＭＡＲＤでの治療を以前受けなかった��特別な実施形態において、患者はメトトレキサートでの治療を以前受けなかった。特別な実施形態において、患者は５．１よりも大きなＤＡＳ２８スコアを有する。特別な実施形態において、患者は少なくとも６つの腫脹関節および少なくとも８つの圧痛関節を有する。特別な実施形態において、患者は２８ｍｍ／時間よりも大きなＥＳＲを有する。特別な実施形態において、患者は少なくとも４５分間、朝のこわばりを患っている。特別な実施形態において、患者は少なくとも１時間朝のこわばりを患っている。特別な実施形態において、患者は少なくとも１時間半の間朝のこわばりを患っている。特別な実施形態において、患者は少なくとも２時間の間朝のこわばりを患っている。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。
【００９０】
従って、本発明は、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩｌに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めた、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤で慢性関節リウマチ患者を治療する方法を提供し、ここに、該慢性関節リウマチ患者は以下の特徴の１以上を有する：患者は以前抗ＴＮＦ療法、例えば、（ＲｅｍｉｃａｄｅＴＭ  Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，Ｉｎｃ．としても知られた）インフリキシマブ、アダリムマブ（Ａｂｂｏｔｔ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのＨｕｍｉｒａ（登録商標））、またはエタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））を受容したことが無く；患者は患者の血漿および／または血清中にリウマチ因子を有し；患者は患者の血漿および／または血清中に測定可能な抗ＣＣＰ（環状シトルリン化ペプチド）抗体を有し；患者は患者の血漿および／または血清中に上昇したＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）を有し；患者は以前に１以上の疾患修飾性抗リウマチ薬物での治療を受けておらず；患者は高度に改変された疾患活性スコア（ＤＡＳ２８）を有し；患者は腫脹および圧痛関節を有し；患者は朝のこわばりを患っており；患者は増大した赤血球沈積速度（ＥＳＲ）を有し、および／または患者は男性である。特別な実施形態において、慢性関節リウマチ患者は患者の血漿および／または血清中に１２ＩＵ／ｍｌ以上のリウマチ因子を有する。特別な実施形態において、上昇したＣＲＰレベルは１リットル当たり少なくとも１．５ミリグラムと定義される。特別な実施形態において、上昇したＣＲＰレベルは１リットル当たり少なくとも５ミリグラムと定義される。特別な実施形態において、上昇したＣＲＰレベルは１リットル当たり少なくとも６ミリグラムと定義される。特別な実施形態において、上昇したＣＲＰレベルは１リットル当たり少なくとも９ミリグラムと定義される。特別な実施形態において、上昇したＣＲＰレベルは１リットル当たり少なくとも１０ミリグラムと定義される。特別な実施形態において、上昇したＣＲＰレベルは１リットル当たり少なくとも２０ミリグラムと定義される、特別な実施形態において、慢性関節リウマチ患者は患者の血漿および／または血清中に１０単位以上の抗ＣＣＰ抗体を有する。特別な実施形態において、慢性関節リウマチ患者は患者の血漿および／または血清中に２０単位以上の抗ＣＣＰ抗体を有する。特別な実施形態において、患者は、限定されるものではないが、メトトレキサート、アミノキノロン、スルファサラジン、およびレフルノミドを含めた、��以上のＤＭＡＲＤでの治療を以前受けていない。特別な実施形態において、患者はメトトレキサートでの治療を以前受けていない。特別な実施形態において、患者は５．１よりも大きなＤＡＳ２８スコアを有する。特別な実施形態において、患者は少なくとも６つの腫脹関節および少なくとも８つの圧痛関節を有する。特別な実施形態において、患者は２８ｍｍ／時間を超えるＥＳＲを有する。特別な実施形態において、患者は少なくとも４５分間の朝のこわばりを患っている。特別な実施形態において、患者は少なくとも１時間朝のこわばりを患っている。特別な実施形態において、患者は少なくとも１時間半の間朝のこわばりを患っている。特別な実施形態において、患者は少なくとも２時間の間朝のこわばりを患っている。
【００９１】
別の特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬパリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めた、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある慢性関節リウマチ患者は、もし該患者がＡＣＲ２０応答を達成したならば治療に応答している／応答したことがあると考えられる。ＡＣＲ２０は、慢性関節リウマチのための治療に対する患者応答を評価するための、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  （ＡＣＲ）によって開発された指標である。ＡＣＲ２０応答は、兆候または疾患は発現の５つの他の評価（すなわち、患者痛みの評価、患者包括的評価、医師包括的評価、患者自己評価無能、急性相反応体［ＥＳＲまたはＣＲＰ］）のうちの３つに対する少なくとも２０％の改善に加えて、圧痛関節数および腫脹関節数の少なくとも２０％低下と定義される。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗−ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗−ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。
【００９２】
別の特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質、またはその断片または変異体、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めた、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニストまたは他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある慢性関節リウマチ患者は、もし該患者がＡＣＲ５０応答を達成するならば、治療に対して応答している／応答したと考えられる。ＡＣＲ５０は、慢性関節リウマチのための治療に対する患者応答を評価するためにＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  （ＡＣＲ）によって開発された指標である。ＡＣＲ５０応答は、兆候または疾患発現の５つの他の評価（すなわち、患者痛み評価、患者包括的評価、医師包括的評価、患者自己−評価無能、急性−相反応体［ＥＳＲまたはＣＲＰ］）のうちの３つについて少なくとも５０％の改善に加えて、圧痛関節数および腫脹関節数の少なくとも５０％低下と定義される。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗−ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。
【００９３】
別の特別な実施形態において、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）、またはその断片または変異体、抗ニュートロカイン−アルファ受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ）抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体、およびニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＢＡＦＦ−Ｒ、またはニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬに対する他の受容体を標的とするアンチセンスまたはｓｉＲＮＡを含めた、当該分野で知られたおよび／または本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト、または他の免疫調節剤で治療されている、または治療されたことがある慢性関節リウマチの患者は、もし該患者がＡＣＲ７０応答を達成すれば、治療に対して応答している／応答したことがあると考えられる。ＡＣＲ７０は、慢性関節リウマチのための治療に対する患者応答を評価するためのＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  （ＡＣＲ）によって開発された指標である。ＡＣＲ７０応答は、兆候または疾患発現の５つの他の評価（すなわち、患者痛み評価、患者包括的評価、医師包括的評価、患者自己評価無能、急性相反応体［ＥＳＲまたはＣＰＲ］）のうちの３つに対する少なくとも７０％の改善に加えて、圧痛関節数および腫脹関節数の少なくとも７０％低下と定義される。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。
【００９４】
免疫調節剤
本発明は、免疫調節剤で、患者の血漿または血清において１：８０以上のＡＮＡ力価および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗−ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者を治療する方法を提供する。「免疫調節剤」の意味は、本明細書中で用いる場合、先に議論した。特別な実施形態において、免疫調節剤はニュートロカイン−アルファのアンタゴニストである。「アンタゴニスト」とは、ニュートロカイン−アルファのインビトロおよび／またはインビボ機能的および／または生物学的作用（例えば、Ｂ細胞の分化、増殖および／または生存の刺激；Ｂ細胞によるＩｇ産生の刺激；およびニュートロカイン−アルファ受容体への結合）を阻害し、または逆作用することができる薬剤を意味する。この阻害は、アンタゴニストおよびニュートロカイン−アルファポリペプチドの間の直接的物理的接触の有りまたは無しで起こり得る。Ｂ細胞活性を阻害するニュートロカイン−アルファアンタゴニストの能力をテストするためのアッセイは、本明細書中に記載される。ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、限定されるものではないが、抗ニュートロカイン−アルファ抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質、またはその断片または変異体、ニュートロカイン−アルファ受容体に結合する抗体、またはその抗原結合断片、ニュートロカイン−アルファ結合ペプチドまたはポリポペプチド、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体（例えば、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬのドミナントネガティブ形態）を含む。ニュートロカイン−アルファのさらなるアンタゴニストはニュートロカイン−アルファの小分子アンタゴニスト、ニュートロカイン−アルファペプチド模倣物、ニュートロカイン−アルファを標的とするアンチセンスＲＮＡ、および短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ＡＰＲＩＬを標的とするアンチセンスＲＮＡおよび短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ニュートロカイン−アルファに対する受容体および／またはＡＰＲＩＬに対する受容体を標的とするアンチセンスＲＮＡおよび短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を含む。これらの各々は以下により詳細に記載する。
【００９５】
ニュートロカイン−アルファアンタゴニスト
Ａ．ニュートロカイン−アルファおよびＡＰＲＩＬポリペプチド
特別な実施形態において、本発明の方法で用いるニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ニュートロカイン−アルファまたはＡＰＲＩＬポリペプチド断片または変異体である。ニュートロカイン−アルファポリペプチドは、ＡＰＲＩＬポリペプチド、およびその断片および変異体は以下により詳細に記載する。ニュートロカイン−アルファタンパク質（配列番号２）は、ＡＰＲＩＬ（配列番号４；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＦ０４６８８８；ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９７／３３９０２；Ｈａｈｎｅ，Ｍ．ら，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．（１９９８）１８８（６）：１１８５−９０）、ＴＮＦα、およびリンホトキシン−α（ＬＴα）（Ｍｏｏｒｅら，１９９９）を同定するためのアミノ酸配列を共有するリガンドのＴＮＦファミリーのメンバーである。全長ニュートロカイン−アルファ遺伝子は、残基１〜４６の間の細胞内ドメイン、タイプＩＩ膜結合タンパク質に特徴的な非疎水性配列が先行する残基４７〜７３の間の膜貫通スパンドメイン、および残基７４〜２８５の間の細胞外ドメインを有する２８５アミノ酸ポリペプチドをコードする。ＴＮＦファミリーの他のメンバーのように、ニュートロカイン−アルファはトリマータンパク質として機能する。細胞の表面におけるニュートロカイン−アルファの発現に際して、細胞外ドメインはアミノ酸１３４において切断されて、生物学的に活性なトリマーを放出する。構造的特徴は、ＴＮＦ−ファミリーリガンドは配列多様性を示すが、それらは高い構造相同性を示す。リガンドのＴＮＦ−ファミリーの他のメンバーのようなニュートロカイン−アルファタンパク質は，ＴＮＦ様ゼリーロール形態を形成する２層β−サンドイッチである。ニュートロカイン−アルファタンパク質は、いくつかの構造および寸法において他のＴＮＦ−ファミリーリガンドと同様である。しかしながら、ニュートロカイン−アルファの受容体結合領域は、他のサイトカインで観察されるものよりもより顕著な溝である（Ｏｒｅｎら，（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ９：２８８−２９２）ニュートロカイン−アルファポリペプチド、例えば、その各々をここに引用してその全体を援用する、国際公開番号ＷＯ９８／１８９２１、ＷＯ００／５０５９７、ＷＯ０２／１８２０、およびＷＯ０３／０３３６５８により詳細に記載されている。
【００９６】
前記したように、ニュートロカイン−アルファポリペプチドは、Ｂ細胞の増殖、分化、生存、およびＩｇ分泌を刺激するように機能する。かくして、本発明の方法におけるニュートロカイン−アルファの天然形態を用いることが予測されるであろう。しかしながら、ニュートロカイン−アルファ天然形態は、標的化剤として用いて、Ｂ細胞活性を阻害できる他の薬剤（例えば、細胞毒性部位またはタンパク質）をＢ細胞と隣接させることができる（例えば、放射性標識ニュートロカイン−アルファを用いて、圧倒的に起源がＢ細胞であるニュートロカイン−アルファ受容体を発現する細胞を標的化し、殺傷するＷＯ００／０３３６５８の実施例１２および１３参照）。あるいは、１以上のニュートロカイン−アルファ受容体に結合するが、シグナリングを誘導しないニュートロカイン−アルファの断片または変異体は、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストとして用いることができる。安定なホモトリマーまたはヘテロトリマーを形成し、または維持するためのニュートロカイン−アルファの能力に影響するニュートロカイン−アルファ断片または変異体は、本発明の方法においてニュートロカイン−アルファアンタゴニストとして用いることもできる。かくして、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファポリペプチドは、配列番号２のニュートロカイン−アルファタンパク質のポリペプチドの断片または変異体を含む。ポリペプチドの断片または変異体は「独立して存在すること」ができるか、または最も好ましくは単一の連続的領域として、そのより大きなポリペプチド内で断片が一部または領域を形成するものからなることができる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファポリペプチドは、ニュートロカイン−アルファの予測される細胞外ドメイン（配列番号２のアミノ酸残基７３〜２８５）、およびニュートロカイン−アルファの可溶性断片（配列番号２のアミノ酸残基１３４〜２８５）を含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド断片を含む。別の実施形態において、本発明の方法で用いることができるポリペプチド断片または変異体は、前記した天然ニュートロカイン−アルファのポリペプチド断片に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるポリペプチドの断片または変異体を含むか、あるいはそれよりなる。
【００９７】
別の実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファポリペプチド変異体はペプチド模倣物を含む。模倣物は、タンパク質の二次構造のエレメントを模倣するペプチド含有分子である。例えば、ここに引用して援用する、Ｊｏｈｏｎｓｏｎら，“Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｕｒｎ  Ｍｉｍｅｔｉｃｓ”  ｉｎ  ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ  ＡＮＤ  ＰＨＡＲＭＡＣＹ，Ｐｅｚｚｕｔｏら，Ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｍａｎ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９３）参照。ペプチド模倣物の使用の背後にある根本的原理は、タンパク質のペプチド骨格は抗体および抗原のそれのような分子相互作用を容易とするようにアミノ酸側鎖を向けるように主として存在する点にある。ペプチド模倣物は、天然分子と同様な分子相互作用を行うことが予測される。これらの原理を用いて、本明細書中に開示された標的ペプチドの天然特性の多くを有するが、改変されたおよび改善さえされた特徴を持つ第二世代の分子を作成することができる。
【００９８】
ＡＰＲＩＬ（配列番号４）は、ニュートロカイン−アルファ（配列番号２；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００６５７３；Ｍｏｏｒｅら，（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：２６０−２６３；Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら，（１９９９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９：１７４７−１７５６；およびＫｈａｒｅら，（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．９７：３３７０−３３７５）、ＴＮＦα、およびリンホトキシン−α（ＮＴα）（Ｍｏｏｒｅら，１９９９）に対してアミノ酸配列同一性を共有するリガンドのＴＮＦファミリーのメンバーである。全長ＡＰＲＩＬ遺伝子は、残基１〜２８の間の細胞内ドメイン、残基２９および４９の間の膜貫通スパンドメイン、および残基５０〜２５０の間の細胞外ドメインを有する２５０アミノ酸ポリペプチドをコードする。ＴＮＦファミリーの他のメンバーのように、ＡＰＲＩＬはトリマータンパク質として機能する。細胞の表面におけるＡＰＲＩＬの発現に際して、細胞外ドメインはアミノ酸部位１０５において切断されて、生物学的に活性なトリマーを放出する。
【００９９】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬポリペプチドは、配列番号４のＡＰＲＩＬタンパク質のポリペプチド断片または変異体を含む。ポリペプチド断片は「独立して存在」することができ、あるいは最も好ましくは単一連続領域として、該断片が一部または領域を形成するそのより大きなポリペプチド内に含まれ得る。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬポリペプチドは、ＡＰＲＩＬの予測された細胞外ドメイン（配列番号４のアミノ酸残基５０〜２５０）、およびＡＰＲＩＬの可溶性断片（配列番号４のアミノ酸残基１０５〜２５０）を含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド断片を含む。別の実施形態において、本発明の方法で用いることができるポリペプチド断片または変異体は、前記した天然ＡＰＲＩＬのポリペプチド断片に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるポリペプチド断片または変異体を含むか、あるいはそれよりなる。
【０１００】
別の実施形態において、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬポリペプチド変異体は、ペプチド模倣物を含む。模倣物は、タンパク質二次構造のエレメントを模倣するペプチド含有分子である。例えば、ここに引用して援用する、Ｊｏｈｎｓｏｎら，“Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｕｒｎ  Ｍｉｍｅｔｉｃｓ”ｉｎ  ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ  ＡＮＤ  ＰＨＡＲＭＡＣＹ，  Ｐｅｚｚｕｔｏら，Ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｍａｎ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９３）参照。ぺプチド模倣物の使用の背後となる基礎となる原理は、タンパク質のペプチド骨格は、抗体および抗原のそれのような、分子相互作用を容易とするようにアミノ酸側鎖を向けるように主として存在する点にある。ペプチド模倣物は、天然分子と同様な分子相互作用を行うことを期待する。これらの原理を用いて、本明細書中に開示される標的化ペプチドの天然特性の多くを有するが、改変されたおよび改善さえされた特徴を持つ第二世代の分子を作成することができる。
【０１０１】
本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファおよびＡＰＲＩＬポリペプチドは、（（異なるタンパク質の）異種タンパク質配列に結合したペプチドを介して連結されたポリペプチドを含む）融合タンパク質のような修飾された形態で発現または合成することができ、分泌シグナルのみならず、さらなる異種機能的領域を含むことができる。そのような融合タンパク質は、当該分野で公知の方法によって、ニュートロカイン−アルファまたはＡＰＲＩＬポリペプチド、および所望のアミノ酸配列をコードする所望の核酸配列を相互に適当なリーディングフレームにてライゲーションしし、次いで、融合タンパク質産物を当該分野で知られた方法によって発現させることによって作成することができる。あるいは、そのような融合タンパク質は、タンパク質合成技術によって、例えば、ペプチドシンセサイザの使用によって作成することができる。かくして、例えば、さらなるアミノ酸、特に荷電したアミノ酸の領域をポリペプチドのＮ−末端に付加させて、精製の間、または引き続いての取り扱いおよび貯蔵の間に宿主細胞において安定性および必要性を改善することができる。また、ペプチド部位をポリペプチドに加えて、精製を容易とすることができる。そのような領域は、ポリペプチドの最終調製に先立って除去することができる。分泌または排出を起こし、安定性を改善し、および精製を容易とするためのポリペプチドへのペプチド部位の付加は、とりわけ、当該分野において精通したおよびルーチン的技術である。
【０１０２】
本発明の方法で用いることができる好ましいニュートロカイン−アルファまたはＡＰＲＩＬ融合タンパク質は、タンパク質を安定化し、精製するのに有用な免疫グロブリンからの異種領域を含む。例えば、ＥＰ−Ａ−Ｏ  ４６４−５３３（カナダ対応出願２０４５８６９）およびＷＯ００／０２４７８２は、別のヒトタンパク質またはその部分と一緒に免疫グロブリン分子の定常領域の種々の部分を含む融合タンパク質を開示する。ニュートロカイン−アルファ免疫グロブリン融合タンパク質は、例えば、ここに引用してその全体を援用するＹｕら，（２０００）Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １：２５２−２５６に記載されている。ＡＰＲＩＬ免疫グロブリン融合タンパク質は、例えば、ここにその全体を引用して援用するＰＣＴ公開ＷＯ０１／０８７９７７に記載されている。多くの場合、融合タンパク質におけるＦｃ部分は、療法および診断で用いるのに徹底的に有利であり、かくして、例えば、改良された薬物動態学的特性をもたらす（ＥＰ−Ａ  ０２３２  ２６２）。他方、いくつかの使用のために、融合タンパク質が記載した有利な方法で発現され、検出され、精製された後に、Ｆｃ部分を欠失できるのが望ましいであろう。これは、療法または診断で用いるのにＦｃタンパク質が障害となることが判明した場合に、例えば、融合タンパク質を免疫化のための抗原として用いるべき場合に当てはまる。薬物発見において、例えば、ｈＩＬ−５のようなヒトタンパク質は、高−スループットスクリーニングアッセイの目的でＦｃ部分と融合させて、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同定してきた。Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔら，Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ８：５２−５８（１９９５）およびＫ．Ｊｏｈａｎｓｏｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：９４５９−９４７１（１９９５）参照。
【０１０３】
当業者が認識し、かつ先に議論したように、ニュートロカイン−アルファおよびＡＰＲＩＬポリペプチドを他のポリペプチド配列に融合させることができる。例えば、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファポリペプチドは、免疫グロブリンの定常ドメイン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）、またはその部分（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはそのいずれかの組合せおよびその部分）、またはアルブミン（限定されるものではないが、組換えヒトアルブミンまたはその断片または変異体（例えば、引用してここにその全体を援用する、１９９９年３月２日に発行された米国特許第５，８７６，９６９号、ＥＰ特許０  ４１３  ６２２、および１９９８年６月１６日に発行された米国特許第５，７６６，８８３号参照）を含む）と融合させることができ、その結果、キメラポリペプチドがもたらされる。
【０１０４】
そのような融合タンパク質が精製を容易とすることができ、貯蔵寿命を延長することができ、インビボで半減期を増加させることができる。これは、ヒトＣＤ４−ポリペプチドの最初の２つのドメイン、および哺乳動物免疫部グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のドメインよりなるキメラタンパク質で示されてきた。例えば、ＥＰ  ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４−８６（１９９８）参照。免疫系に対する上皮バリアーを横切っての抗原の増強された送達は、ＩｇＧまたはＦｃ断片のようなＦｃＲｎ結合パートナーにコンジュゲートした抗原（例えば、インスリン）で証明されている（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２２０２４およびＷＯ９９／０４８１３参照）。ＩｇＧ部分ジスルフィド結合によるジスルフィド結合ダイマー構造を有するＩｇＧ融合タンパク質もまた、モノマーポリペプチドまたはその断片単独よりも他の分子に結合し、それを中和するにおいてより効果的であることも判明した。例えば、Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ，２７０：３９５８−３９６４（１９９５）参照。
【０１０５】
成熟形態の５８５個のアミノ酸のタンパク質であるヒト血清アルブミン（ＨＡＳ、またはＨＡ）（配列１１）は、血清の浸透圧の有意な割合を担い、また、内因性および外因性リガンドのキャリアとして機能する。現在、臨床的使用のためのＨＡは、ヒト血液からの抽出によって産生される。微生物における組換えＨＡ（ｒＨＡ）の産生は、ＥＰ３３０  ４５１およびＥＰ３６１  ９９１に開示されている。
【０１０６】
担体分子としてのアルブミンの役割、およびその不活性な性質は、インビボでのポリペプチドのキャリアおよびトランスポーターとして用いるための望ましい特性である。種々のタンパク質のためのキャリアとしてのアルブミン融合タンパク質の成分としてのアルブミンの使用は、ＷＯ９３／１５１９９、ＷＯ９３／１５２００およびＥＰ４１３  ６２２に提案されている。ポリペプチドへの融合のためのＨＡのＮ−末端断片の使用もまた提案されている（ＥＰ３９９  ６６６）。治療タンパク質へのアルブミンの融合は、ＨＡをコードするＤＮＡまたはその断片は治療タンパク質をコードするＤＮＡに連結されるように遺伝子的操作によって達成することができる。次いで、適当な宿主を融合ヌクレオチド配列で形質転換またはトランスフェクトし、融合ポリペプチドを発現するように適当なプラスミド上に配置する。発現は、例えば、原核生物または真核生物細胞からインビトロで行うことができ、または例えば、トランスジェニック生物からインビボで行うことができる。
【０１０７】
本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、好ましくは遺伝子融合（すなわち、アルブミン融合タンパク質は、ニュートロカイン−アルファの全てまたは部分をコードするポリヌクレオチドが、アルブミンの全てまたは部分をコードするポリヌクレオチドまたはイン・フレームにて連結された核酸の翻訳によって生じる）または相互の化学的結合によって相互に結合した、少なくともニュートロカイン−アルファポリペプチドの断片または変異体、および少なくともヒト血清アルブミン断片または変異体を含む。アルブミン融合タンパク質の一部分であった、ニュートロカイン−アルファポリペプチドまたはアルブミンタンパク質は、アルブミン融合タンパク質の「部分」、「領域」または「部位」ということができる（例えば、「ニュートロカイン−アルファ部分」または「アルブミンタンパク質部分」）。
【０１０８】
一つの実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ニュートロカイン−アルファポリペプチドおよび血清アルブミンタンパク質を含むか、あるいはそれからなる。他の実施形態において、本発明方法として用いることができる、アルブミン融合タンパク質は、ニュートロカイン−アルファの断片および血清アルブミンタンパク質を含むか、あるいはそれよりなる。他の実施形態において、本発明の方法によって用いることができる、アルブミン融合タンパク質は、ニュートロカイン−アルファの変異体および血清アルブミンタンパク質を含むか、あるいはそれよりなる。好ましい実施形態において、アルブミン融合タンパク質の血清アルブミンタンパク質成分は、血清アルブミンの成熟部分である。
【０１０９】
さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができる、アルブミン融合タンパク質は、ニュートロカイン−アルファポリペプチド、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な断片を含むか、それよりなる。さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができる、アルブミン融合タンパク質は、ニュートロカイン−アルファポリペプチド、または血清アルブミンの生物学的に活性な、および／または治療的に活性な変異体を含むか、あるいはそれよりなる。好ましい実施形態において、アルブミン融合タンパク質のニュートロカイン−アルファ部分は全長ニュートロカイン−アルファポリペプチドである。さらに好ましい実施形態において、アルブミン融合タンパク質のニュートロカイン−アルファタンパク質部分はニュートロカイン−アルファポリペプチドの成熟した可溶性ドメインである。
【０１１０】
さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができる、アルブミン融合タンパク質は、ニュートロカイン−アルファの断片または変異体、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な断片または変異体を含むか、あるいはそれよりなる。さらなる実施形態において、本発明はニュートロカイン−アルファポリペプチドの成熟部分、および（限定されるものではないが、組換えヒト血清アルブミンまたはその断片または変異体（例えば、ここに引用してその全体を援用する１９９９年３月２日に発行された米国特許第５，８７６，９６９号、ＥＰ特許０  ４１３  ６２２および１９９８年６月１６日に発行された米国特許第５，７６６，８８３号参照）を含めた）血清アルブミンの成熟部分を含むか、あるいはそれよりなるアルブミン融合タンパク質を提供する。好ましい実施形態において、（その断片または変異体を含めた）ニュートロカイン−アルファポリペプチドは、ヒト血清アルブミンの成熟形態（すなわち、ここに引用してその全体を援用するＥＰ０  ３２２  ０９４の実施例１および２に示されたヒト血清アルブミンのアミノ酸１〜５８５）と融合される。別の好ましい実施形態において、（その断片または変異体を含めた）本発明の抗体は、ヒト血清アルブミンのアミノ酸残基１−ｘを含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド断片と融合され、ここに、ｘが１〜５８５の整数であり、該アルブミン断片は、血清アルブミン活性を有する。別の好ましい実施形態において、その断片または変異体を含めた。ニュートロカイン−アルファポリペプチドは、ここに引用してその全体を援用する米国特許第５，７６６，８８３号に記載されたように、ヒト血清アルブミンのアミノ酸残基１−ｚを含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド断片と融合され、ここに、ｚは３６９〜４１９の整数である。（その断片または変異体を含めた）ニュートロカイン−アルファポリペプチドは、異種タンパク質（例えば、免疫グロブリン、Ｆｃポリペプチド、またはヒト血清アルブミンポリペプチド）のＮ−またはＣ−末端いずれかに融合させることができる。
【０１１１】
好ましい実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質で用いるヒト血清アルブミンタンパク質は、配列番号１１を参照して点突然変異の以下の組の一方または双方を含有する：Ｌｅｕ−４０７をＡｌａに、Ｌｅｕ−４０８をＶａｌに、Ｖａｌ−４０９をＡｌａおよびＡｒｇ−４１０をＡｌａに：またはＡｒｇ−４１０をＡに、Ｌｙｓ−４１３をＧｌｎにおよびＬｙｓ−４１４をＧｌｎに（例えば、ここに引用してその全体を援用する国際公開番号ＷＯ９５／２３８５７参照）。なおより好ましい実施形態において、前記した点突然変異の組の一方または双方を含有する本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は酵母Ｙａｐ３ｐタンパク質分解切断に対する改善された安定性／抵抗性を有して、酵母宿主細胞で発現される組換えアルブミン融合タンパク質の増大した産生を可能とする。
【０１１２】
好ましくは、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質はＮ−末端部分としてＨａ、Ｃ−末端部分としてニュートロカイン―アルファトリペプチドを含む。あるいは、Ｃ―末端部分としてのＨａ、およびＮ−末端部分としてのニュートロカイン―アルファポリペプチドを含むアルブミン融合タンパク質も用いることができる。
【０１１３】
他の実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、アルブミンのＮ―末端およびＣ―末端の双方に融合したニュートロカイン―アルファポリペプチドを有する。特別な実施形態において、Ｎ―およびＣ−末端において融合したニュートロカイン―アルファは同一である。別の実施形態において、Ｎ―およびＣ―末端において融合したニュートロカイン―アルファポリペプチドは異なるニュートロカイン―アルファポリペプチドである。別の実施形態において、ニュートロカイン―アルファポリペプチドはアルブミンのＮ―またはＣ―末端いずれかに融合し、および異種ポリペプチドは残りの末端に融合している。
【０１１４】
加えて、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、融合した部分の間にリンカーペプチドを含んで、該部位の間のより大きな物理的分離を供することができる。リンカーペプチドは、それがフレキシブルであるか、またはより剛性であるようにアミノ酸よりなることができる。
【０１１５】
一般に、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は一つのＨＡ−由来領域および一つのニュートロカイン―アルファ領域を有することができる。しかしながら、各タンパク質の複数領域を用いて、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質を作成することができる。同様に、１を超えるタンパク質を用いて、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質を作成することができる。例えば、タンパク質をＨＡのＮ―およびＣ―末端の双方に融合することができる。そのような立体配置において、タンパク質部分が同一または異なるタンパク質分子であってよい。二機能性アルブミン融合タンパク質の構造は：Ｘ−ＨＡ−ＹまたはＹ−ＨＡ−Ｘとして表すことができる。
【０１１６】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン―アルファタンパク質またはその断片または変異体をサイトトキシン（例えば、細胞増殖抑制剤または殺細胞剤）にコンジュゲートすることができる。サイトトキシンまたはサイトトキシン剤は細胞に対して有害ないずれの剤も含む。その例はパクリタキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、マイトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、およびそのアナログまたはホモログを含む。
【０１１７】
別の実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン―アルファタンパク質、またはその断片または変異体はトキシンにコンジュゲートすることができる。
【０１１８】
「トキシン」とは、規定された条件下で細胞の死滅を引き起こす細胞の表面中または表面上に通常は存在しない、内因性細胞傷害性エフェクター系、放射性同位体、ホロトキシン、修飾されたトキシン、トキシンの触媒サブユニット、またはいずれかの分子または酵素に結合し、それを活性化する１以上の化合物を意味する。使用することができるトキシンは、限定されるものではないが、当該分野で知られた放射性同位体、例えば、固有のまたは誘導された内因性細胞傷害性エフェクター系に結合する抗体（またはその部分を含有する補体固定）、チミジンキナーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮＡｓｅ、アルファトキシン、リシン、アブリン、ジュードモナスエキソトキシンＡ、ジフテリアトキシン、サポリン、モモルジン、ゲロニン、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、アルファ―サルシンおよびコレラトキシンのような化合物を含む。「トキシン」は、細胞増殖抑制剤または殺細胞剤、治療剤または放射性金属イオン、例えば、２１３Ｂｉのようなアルファ―エミッター、または例えば１０３Ｐｄ、１３３Ｘｅ、１３１Ｉ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、３５Ｓ、９０Ｙ、１５３Ｓｍ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、９０イッテリウム、１１７スズ、１８６レニウム、１６６ホロミウム、および１８８レニウムのような他の放射性同位体も含む。
【０１１９】
さらなる例において、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬポリペプチドは、免疫グロブリンの定常ドメイン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）またはその部分（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはそのいずれかの組合せおよびその部分）、またはアルブミン（限定されるものではないが、組換えヒトアルブミン、またはその断片または変異体を含む（例えば、ここに引用してその全体を援用する１９９９年３月２日に発行された米国特許第５，８７６，９６９号、ＥＰ特許０  ４１３  ６２２、および１９９８年６月１６日に発行された米国特許第５，７６６，８８３号参照））と融合させることができ、その結果、キメラポリペプチドがもたらされる。
【０１２０】
そのような融合タンパク質は精製を容易とすることができ、貯蔵寿命を延長することができ、インビボにて半減期を増大させることができる。これは、ヒトＣＤ４−ポリペプチドの最初の２つのドメイン、および哺乳動物免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のドメインよりなるキメラタンパク質について示されている。例えば、ＥＰ  ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４−８６（１９８８）参照。免疫系に対する上皮バリアーを横切っての抗原の増強された送達は、ＩｇＧまたはＦｃ断片のようなＦｃＲｎ結合パートナーにコンジュゲートされた抗原（例えば、インスリン）について示されている（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２２０２４およびＷＯ９９／０４８１３参照）。ＩｇＧ部分のジスルフィド結合のため、ジスルフィド結合ダイマー構造を有するＩｇＧ融合タンパク質もまた、モノマーポリペプチドまたはその断片単独よりも他の分子に結合し、それを中和するにおいてより効果的であることが判明している。例えば、Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：３９５８−３９６４（１９９５）参照。
【０１２１】
本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、好ましくは遺伝子融合（すなわち、アルブミン融合タンパク質は、ＡＰＲＩＬの前部または部分をコードするポリヌクレオチドがアルブミンの前部または部分をコードするポリヌクレオチドとイン・フレームにて連結された核酸の翻訳によって生じる）、または化学的結合によって相互に結合した、ＡＰＲＩＬポリペプチドの少なくとも断片または変異体およびヒト血清アルブミンの少なくとも断片または変異体を含む。アルブミン融合タンパク質の一部分であったＡＰＲＩＬポリペプチドおよびアルブミンタンパク質は、アルブミン融合タンパク質の「部分」、「領域」または「部位」ということができる（例えば、「ＡＰＲＩＬ部分」または「アルブミンタンパク質部分」）。
【０１２２】
一つの実施形態において、本発明の方法で用いることができる、アルブミン融合タンパク質はＡＰＲＩＬポリペプチドおよび血清アルブミンタンパク質を含むか、あるいはそれよりなる。他の実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質はＡＰＲＩＬの断片、および血清アルブミンタンパク質を含み、あるいはそれよりなる。他の実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＡＰＲＩＬの変異体、および血清アルブミンタンパク質を含み、あるいはそれからなる群より選択される。好ましい実施形態において、アルブミン融合タンパク質の血清アルブミンタンパク質成分は血清アルブミンの成熟部分である。
【０１２３】
さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＡＰＲＩＬポリペプチド、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な断片を含み、あるいはそれよりなる。さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＡＰＲＩＬポリペプチドおよび、血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な変異体を含むか、あるいはそれよりなる。好ましい実施形態において、アルブミン融合タンパク質のＡＰＲＩＬ部分は全長ＡＰＲＩＬポリペプチドである。さらなる好ましい実施形態において、アルブミン融合タンパク質のＡＰＲＩＬ部分はＡＰＲＩＬポリペプチドの成熟した可溶性ドメインである。
【０１２４】
さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＡＰＲＩＬの断片または変異体、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび治療的に活性な変異体を含むか、あるいはそれからなる群より選択される。ＡＰＲＩＬポリペプチドの成熟部分および血清アルブミンの成熟部分を含むか、あるいはそれよりなるアルブミン融合タンパク質を提供する。
【０１２５】
さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＡＰＲＩＬの断片または変異体、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な断片または変異体を含むか、あるいはそれよりなる。好ましい実施形態において、本発明はＡＰＲＩＬポリペプチドの成熟部分、および血清アルブミンの成熟部分（限定されるものではないが、ヒト血清アルブミン、またはその断片または変異体を含む（例えば、ここに引用してその全体を援用する１９９９年３月２日に発行された米国特許第５，８７６，９６９号、ＥＰ特許０  ４１３  ６２２、および１９９８年６月１６日に発行された米国特許第５，７６６，８８３号参照））を含むか、あるいはそれよりなるアルブミン融合タンパク質を提供する。好ましい実施形態において、（その断片または変異体を含めた）ＡＰＲＩＬポリペプチドは、ヒト血清アルブミンの成熟形態（すなわち、ここに引用してその全体を援用するＥＰ  ０  ３２２  ０９４の実施例１および２に示されたヒト血清アルブミンのアミノ酸１〜５８５）と融合させる。別の好ましい実施形態において、（その断片または変異体を含めた）本発明の抗体は、ｘが１〜５８５の整数であるヒト血清アルブミンのアミノ酸残基１−ｘを含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド断片と融合され、該アルブミン断片はヒト血清アルブミン活性を有する。別の好ましい実施形態において、（その断片または変異体を含めた）ＡＰＲＩＬポリペプチドは、ここに引用してその全体を援用する米国特許第５，７６６，８８３号に記載されたように、ｚが３６９〜４１９の整数であるヒト血清アルブミンのアミノ酸残基１−ｚを含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド断片と融合される。（その断片または変異体を含めた）ＡＰＲＩＬポリペプチドは、異種タンパク質のＮ−またはＣ−末端（例えば、免疫グロブリンＦｃポリペプチド、またはヒト血清アルブミンポリペプチド）に融合することができる。
【０１２６】
好ましい実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質で用いるヒト血清アルブミンタンパク質は、配列番号１１を参照して点突然変異の以下の組の一方または双方を含む：Ｌｅｕ−４０７をＡｌａに、Ｌｅｕ−４０８をＶａｌに、Ｖａｌ−４０９をＡｌａ、およびＡｒｇ−４１０をＡｌａに；またはＡｒｇ−４１０をＡに、Ｌｙｓ−４１３をＧｌｎに、およびＬｙｓ−４１４をＧｌｎに（例えば、ここに引用してその全体を援用する国際公開番号ＷＯ９５／２３８５７参照）。なおより好ましい実施形態において、点突然変異の前記した組一方または双方を含有する本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、酵母Ｙａｐ３ｐタンパク質分解切断に対して改善された安定性／抵抗性を有し、酵母宿主細胞で発現された組換えアルブミン融合タンパク質の増大した産生を可能とする。
【０１２７】
好ましくは、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、Ｎ−末端部分としてのＨＡ、およびＣ−末端部分としてのＡＰＲＩＬポリペプチドを含む。あるいは、Ｃ−末端部分としてのＨＡ、およびＮ−末端部分としてのＡＰＲＩＬポリペプチドを含むアルブミン融合タンパク質を用いることができる。
【０１２８】
他の実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、アルブミンのＮ−末端およびＣ−末端双方に融合されるＡＰＲＩＬポリペプチドを有する。特別な実施形態においてＮ−およびＣ−末端において融合したＡＰＲＩＬポリペプチドは同一である。別の実施形態において、Ｎ−およびＣ−末端において融合したＡＰＲＩＬポリペプチドは異なるＡＰＲＩＬポリペプチドである。別の実施形態において、ＡＰＲＩＬポリペプチドはアルブミンのＮ−またはＣ−末端においていずれかにおいて融合しており、および異種ポリペプチドは残りの末端において融合している。
【０１２９】
加えて、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、融合した部分の間のリンカーペプチドを含んで、該部位の間のより大きな物理的分離を供することができる。リンカーペプチドはそれがフレキシブルであるかまたはより剛性であるようにアミノ酸よりなることができる。
【０１３０】
一般に、本発明の方法で用いることができる、アルブミン融合タンパク質は、一つのＨＡ−由来領域および一つのＡＰＲＩＬ領域を有する。しかしながら、各タンパク質の複数領域を用いて、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質を作成することができる。同様に、１を超えるタンパク質を用いて、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質を作成することができる。例えば、タンパク質をＨＡのＮ−およびＣ−末端双方に融合させることができる。そのような立体配置において、タンパク質部分は同一または異なるタンパク質分子であってよい。二機能的アルブミン融合タンパク質の構造は：Ｘ−ＨＡ−ＹまたはＹ−ＨＡ−Ｘとして表すことができる。
【０１３１】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬタンパク質またはその断片または変異体をサイトトキシン（例えば、細胞増殖抑制剤または殺細胞剤）にコンジュゲートすることができる。サイトトキシンまたはサイトトキシン剤は細胞に対して有害ないずれの剤も含む。その例はパクリタキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、マイトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、およびそのアナログまたはホモログを含む。
【０１３２】
別の実施形態において、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬタンパク質、またはその断片または変異体はトキシンにコンジュゲートすることができる。
【０１３３】
「トキシン」とは、規定された条件下で細胞の死滅を引き起こす細胞の表面中または表面上に通常は存在しない、内因性細胞傷害性エフェクター系、放射性同位体、ホロトキシン、修飾されたトキシン、トキシンの触媒サブユニット、またはいずれかの分子または酵素に結合し、それを活性化する１以上の化合物を意味する。使用することができるトキシンは、限定されるものではないが、当該分野で知られた放射性同位体、例えば、固有のまたは誘導された内因性細胞傷害性エフェクター系に結合する抗体（またはその部分を含有する補体固定）、チミジンキナーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮＡｓｅ、アルファトキシン、リシン、アブリン、ジュードモナスエキソトキシンＡ、ジフテリアトキシン、サポリン、モモルジン、ゲロニン、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、アルファ―サルシンおよびコレラトキシンのような化合物を含む。「トキシン」は、細胞増殖抑制剤または殺細胞剤、治療剤または放射性金属イオン、例えば、２１３Ｂｉのようなアルファ―エミッター、または例えば１０３Ｐｄ、１３３Ｘｅ、１３１Ｉ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、３５Ｓ、９０Ｙ、１５３Ｓｍ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、９０イッテリウム、１１７スズ、１８６レニウム、１６６ホロミウム、および１８８レニウムのような他の放射性同位体も含む。
【０１３４】
タンパク質エンジニアリングを使用して、ニュートロカイン−アルファおよびＡＰＲＩＬポリペプチドの特徴を改変して、本発明の方法で用いることができるポリペプチドを表示させることができる。当業者に知られた組換えＤＮＡ技術を用いて、単一または多数のアミノ酸置換、欠失、付加または融合タンパク質を含めた、新規な突然変異タンパク質または「ムテイン」を作り出すことができる。そのような修飾されたポリペプチドは、例えば、増強された活性、減少した活性または増加した安定性を示すことができる。加えて、それらはより高い収率で精製することができ、および少なくともある精製および貯蔵条件下で、対応する天然ポリペプチドよりも良好な溶解性を示すことができる。例えば、分泌タンパク質の細胞外ドメインまたは成熟形態を含めた多くのタンパク質では、当該分野において、生物学的機能の実質的喪失なくして、１以上のアミノ酸をＮ−末端またはＣ−末端から欠失することができることが知られている。例えば、Ｒｏｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６８：２９８４−２９８８（１９９３）は、３、８または２７のアミノ−末端アミノ酸残基がたとえ失われさえしても、ヘアピン結合活性を有する修飾されたＫＧＦタンパク質を報告している。
【０１３５】
本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファおよびＡＰＲＩＬポリペプチドはモノマーまたはマルチマー（すなわち、ダイマー、トリマー、テトラマーおよびより高次のマルチマー）であってよい。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファおよびＡＰＲＩＬポリペプチドはホモマーまたはヘテロマーであってよい。ニュートロカインアルファホモマーとは（本明細書中に記載されたニュートロカイン−アルファ断片、変異体および融合タンパク質を含めた）ニュートロカイン−アルファポリペプチドのみを含有するマルチマーをいう。これらのホモマーは、同一または異なるアミノ酸配列を有するニュートロカイン−アルファポリペプチドを含有することができる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファポリペプチドは（例えば、同一または異なるアミノ酸配列を有する２つのニュートロカイン−アルファポリペプチドを含有する）ニュートロカイン−アルファホモダイマー、または（例えば、同一または異なるアミノ酸配列を有する３つのニュートロカイン−アルファポリペプチドを含有する）ニュートロカイン−アルファホモトリマーである。好ましい実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファポリペプチドはニュートロカイン−アルファのホモトリマーである。さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファポリペプチドは、少なくともホモダイマー、少なくともホモトリマーまたは少なくともホモテトラマーである。ＡＰＲＩＬホモマーとは、（本明細書中に記載されたＡＰＲＩＬ断片、変異体、または融合タンパク質を含めた）ＡＰＲＩＬポリペプチドのみを含有するマルチマーをいう。これらもホモマーは、同一または異なるアミノ酸配列を有するＡＰＲＩＬポリペプチドを含有することができる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬポリペプチドは（例えば、同一または異なるアミノ酸配列を有する２つのＡＰＲＩＬポリペプチドを含有する）ＡＰＲＩＬホモダイマーである、または（例えば、同一または異なるアミノ酸配列を有する３つのＡＰＲＩＬポリペプチドを含有する）ＡＰＲＩＬホモトリマーである。好ましい実施形態において、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬポリペプチドはＡＰＲＩＬのホモトリマーである。さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬポリペプチドは少なくともホモダイマー、少なくともホモトリマー、または少なくともホモテトラマーである。
【０１３６】
ヘテロマーニュートロカイン−アルファとは、ニュートロカイン−アルファポリペプチドに加えて、異種ポリペプチド（すなわち異なるタンパク質のポリペプチド）を含有するマルチマーをいう）。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファポリペプチドはヘテロダイマー、ヘテロトリマー、またはヘテロテトラマーである。さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファポリペプチドは、少なくともヘテロダイマー、少なくともヘテロトリマー、または少なくともヘテロテトラマーであるマルチマーである。ヘテロマーＡＰＲＩＬとは、ＡＰＲＩＬポリペプチドに加えて、異種ポリペプチド（すなわち、異なるタンパク質のポリペプチド）を含有するマルチマーをいう。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬポリペプチドはヘテロダイマー、ヘテロトリマー、またはヘテロテトラマーである。さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬポリペプチドは、少なくともヘテロダイマー、少なくともヘテロトリマー、または少なくともヘテロテトラマーであるマルチマーである。さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファポリペプチドは、ニュートロカイン−アルファポリペプチドおよびＡＰＲＩＬポリペプチド双方またはその断片または変異体を含むヘテロトリマーである。さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファポリペプチドは、（断片または変異体を含めた）一つのニュートロカイン−アルファポリペプチド、および（断片または変異体を含めた）２つのＡＰＲＩＬポリペプチドを含むヘテロトリマーである。さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファポリペプチドは、（断片または変異体を含めた）ニュートロカイン−アルファポリペプチド、および（断片または変異体を含めた）一つのＡＰＲＩＬポリペプチドを含むヘテロトリマーである。
【０１３７】
さらなる実施形態において、本発明で用いることができるニュートロカイン−アルファポリペプチドはホモマー、特にホモトリマーのニュートロカイン−アルファポリペプチドであり、ここに、マルチマーの個々のタンパク質成分はニュートロカイン−アルファの成熟形態（すなわち、例えば、配列番号２のアミノ酸残基１３４〜２８５）、またはその断片または変異体を含み、あるいはそれよりなる。他の実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファポリペプチドはヘテロマー、特に、２つのニュートロカイン−アルファポリペプチドおよび一つのＡＰＲＩＬポリペプチドを含有するヘテロトリマー、または一つのニュートロカイン−アルファポリペプチドおよび２つのＡＰＲＩＬポリペプチドを含有するヘテロトリマーのようなヘテロトリマーのニュートロカイン−アルファポリペプチドであり、ここに、ニュートロカイン−アルファヘテロマーの個々のタンパク質成分はニュートロカイン−アルファの成熟細胞外可溶性部分（配列番号２のアミノ酸残基１３４〜２８５）、またはその断片または変異体、または成熟細胞外可溶性部分ＡＰＲＩＬ（例えば、配列番号４のアミノ酸残基１０５〜２５０）またはその断片または変異体いずれかを含むか、あるいはそれよりなる。
【０１３８】
さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬポリペプチドはホモマー、特にホモトリマーのＡＰＲＩＬポリペプチドであり、ここに、マルチマーの個々のタンパク質成分はＡＰＲＩＬの成熟形態（例えば、配列番号４のアミノ酸残基１０５〜２５０）またはその断片または変異体を含むか、あるいはそれよりなる。他の実施形態において、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬポリペプチドはヘテロマー、特に２つのＡＰＲＩＬポリペプチドおよび一つのニュートロカイン−アルファポリペプチドを含有するヘテロトリマー、または一つのＡＰＲＩＬポリペプチドおよび２つのニュートロカイン−アルファポリペプチドを含有するヘテロトリマーのようなヘテロトリマーのＡＰＲＩＬポリペプチドであり、ここに、ＡＰＲＩＬヘテロマーの個々のタンパク質成分はＡＰＲＩＬの成熟細胞外可溶性部分（例えば、配列番号４のアミノ酸残基１０５〜２５０）、またはその断片または変異体、またはニュートロカイン−アルファの成熟細胞外可溶性部分（例えば、配列番号２のアミノ酸残基１３４〜２８５）、またはその断片または変異体いずれかを含むか、あるいはそれよりなる。
【０１３９】
本発明の方法で用いることができるマルチマーは、疎水性、親水性、イオン性および／または共有結合の結果であり得、および／または例えばリポソーム形成によって間接的に連結させることができる。かくして一つの実施形態において、例えば、ホモダイマーまたはヘテロダイマーのようなマルチマーは、ポリペプチドが溶液中で相互に接触する場合に形成される。別の実施形態において、例えば、ヘテロトリマーまたはヘテロテトラマーのようなヘテロマルチマーは、ポリペプチドが溶液中で相互に接触する場合に形成される。他の実施形態において、マルチマーは、ニュートロカイン−アルファポリペプチドとの、および／またはそれの間の共有結合によって形成される。他の実施形態において、マルチマーは、ＡＰＲＩＬポリペプチドとの、および／またはその間の共有結合によって形成される。そのような共有結合は、（例えば、ニュートロカイン−アルファについては配列番号２で引用された、またはＡＰＲＩＬについては配列番号４で引用された）ポリペプチド配列に含有された１以上のアミノ酸残基を含むことができる。１つの例において、共有結合は、天然（すなわち天然に生じる）ポリペプチドにおいて相互作用するポリペプチド配列内に位置するシステイン残基の間の架橋である。別の例において共有結合は、化学的または組換え操作の結果である。あるいは、そのような共有結合は、ニュートロカイン−アルファまたはＡＰＲＩＬ融合タンパク質における異種ポリペプチド配列に含有された１以上のアミノ酸残基を含むことができる。例えば、米国特許第５，４７８，９３５号参照。特別な例において、共有結合は（本発明に記載された）ニュートロカイン−アルファ−Ｆｃ融合タンパク質に含有された異種配列の間である。特別な例において共有結合は（本発明に記載された）ＡＰＲＩＬ−Ｆｃ融合タンパク質に含有された異種配列の間である。別の例において本発明の方法で用いることができる融合タンパク質における共有結合は、例えば、オステオプロテゲリンのような共有結合したマルチマーを形成することができる別のＴＮＦファミリーリガンド／受容体メンバーからの異種ポリペプチド配列の間である（例えば、ここに引用してその内容の全体を援用する、国際公開番号ＷＯ９８／４９３０５参照）。別の実施形態において、２以上のニュートロカイン−アルファポリペプチドおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチドは合成リンカー（例えば、ペプチド、炭水化物または可溶性ポリマーリンカー）を介して結合される。その例は、ここに引用して援用する米国特許第５，０７３，６２７号に記載されたペプチドリンカーを含む。ペプチドリンカーによって分離された多数のニュートロカイン−アルファポリペプチドおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチドを含むタンパク質は、慣用的な組換えＤＮＡ技術を用いて産生することができる。
【０１４０】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬのドミナントネガティブである。特に、ドミナントネガティブ形態を含めたニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬの変異体は、例えば、国際特許公開番号ＷＯ０６／０３４１０６、ＷＯ０５／１１３５９８、ＷＯ０４／０８９９８２、ＷＯ０４／０８１０４３およびＷＯ０３／０５７８５６、および米国特許公開番号ＵＳ２００６００１４２４８、ＵＳ２００５０２２１４４３、ＵＳ２００５０１３０８９２、ＵＳ２００５００４８６２６、ＵＳ２００５００３４８０およびＵＳ２００３０１６６５５９に記載されている。前記文献はここに引用してその全体を援用する。そのようなニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体は、例えば、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬホモ−またはヘテロ−多量体化を抑制することによってニュートロカイン−アルファ機能に拮抗することができる。あるいは、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬポリペプチド変異体は、それらを含むポリペプチドが、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡおよびＢＡＦＦ−Ｒのようなニュートロカインアルファ受容体へ結合し、および／または該受容体を介するシグナリングを行うのを妨げることができる。
【０１４１】
別の実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ここに引用してその全体を援用する、Ｇａｏ  ら．，（２００６）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．２８：１６４９−５４に記載されたニュートロカイン−アルファタンパク質突然変異である。
【０１４２】
別の実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファアンタゴニストはΔＢＡＦＦ（配列番号１２）である。
【０１４３】
Ｂ．抗−ニュートロカイン−アルファ抗体
特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗−ニュートロカイン−アルファ抗体またはその抗原−結合断片である。抗−ニュートロフィン−アルファ抗体およびその断片は、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ０１／０８７９７７、ＷＯ０３／０１６４６８、ＷＯ０１／６０３９７、ＷＯ０２／０２６４１およびＷＯ０３／５３９７９；ＵＳ公開番号２００５／００７０６９４および２００５／０２５５３２；およびＣａｏら，（２００５）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  １０１：８７−９４；Ｃｈ’ｅｎら，（２００５）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３６：７８−８５；Ｌｉｕら，（２００５）Ａｃｔａ  Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｓｉｎ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）３７：４１５−４２０；Ｓｃｈｅｎｅｉｄｅｒら，（１９９９）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８９；１７４７−１７５６；Ｓｕｎら，（２００６）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ２５：８０−８５；Ｓｕｎら，（２００６）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ２５：２３８−２４２に記載されており、以下により詳細に記載されている。前記文献の各々をここに引用してその全体を援用する。
【０１４４】
本明細書中で用いる用語「抗体」とは、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子をいう。それ自体、用語抗体は、全抗体分子のみならず、抗体断片ならびに抗体の（誘導体を含めた）変異体、および抗体断片を含む。本出願における用語「抗体」によって記載される分子の例は、限定されるものではないが：単一鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖｓ）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖｓ）、Ｆｖｓ、およびＶＬまたはＶＨドメインいずれかを含むか、あるいはそれよりなる断片を含む。本明細書中で用いる用語「単一鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」とは、抗体のＶＨドメインに連結された抗体のＶＬドメインを含むポリペプチドをいう。特別な抗原（例えば、ニュートロカイン−アルファ）に免疫特異的に結合する抗体は、他の抗原に対して交差反応性を有することができる。好ましくは、特定の抗原に免疫特異的に結合する抗体は他の抗原と交差反応しない。特定の抗原に免疫特異的に結合する抗体は、例えば、イムノアッセイ、または当業者に知られた他の技術、例えば、ここに引用してその全体を援用する、２００６年７月３１日に出願された米国特許出願第６０／８３４，１５２に記載されたイムノアッセイによって同定することができる。
【０１４５】
本発明の方法で用いることができる抗体は、限定されるものではないが、モノクローナル、多特異的、ヒトまたはキメラ抗体、単一鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、抗イディオタイプ（抗−Ｉｄ）抗体、および前記のいずれかのエピトープ−結合断片を含む。本発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子のいずれのタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、またはサブクラスであり得る。
【０１４６】
本発明の方法で用いることができる抗体は、抗体のマルチマー形態を含むこともできる。例えば、本発明の方法で用いることができる抗体は、モノマー免疫グロブリン分子の抗体ダイマー、トリマー、高次マルチマーの形態をとることができる。全免疫グロブリン分子の、またはＦ（ａｂ’）２断片のダイマーは四価であり、他方、Ｆａｂ断片またはｓｃＦＶ分子のダイマーは二価である。抗体マルチマー内の個々のモノマーは同一または異なっていてもよく、すなわち、それらはヘテロマーまたはホモマー抗体マルチマーであって良い。例えば、マルチマー内の個々の抗体は同一または異なる結合特異性を有することができる。抗体の多量体化は、抗体の天然凝集を介して、または当該分野で知られた化学的または組換え連結技術を介して達成することができる。例えば、精製された抗体調製物（例えば、精製されたＩｇＧ１分子）のいくらかのパーセンテージは、抗体ホモダイマー、および他の高次の抗体マルチマーを含有するタンパク質凝集物を自然に形成する。あるいは、抗体ホモダイマーは、当該分野で公知の化学結合技術を介して形成することができる。例えば、限定されるものではないが、ＳＭＣＣ［４−（マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸スクシンイミジル］およびＳＡＴＡ［Ｓ−アセチルチオ−酢酸Ｎ−スクシンイミジル］（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）から入手可能）を含めた、ヘテロ二機能的架橋剤を用いて、抗体マルチマーを形成することができる。抗体ホモダイマーの形成のための例示的なプロトコルは、ここに引用してその全体を援用する、Ｇｈｅｔｉｅら，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＵＳＡ（１９９７）９４：７５０９−７５１４に掲げられている。抗体ホモダイマーは、ペプシンでの消化を介してＦａｂ’２ホモダイマーに変換することができる。抗体ホモダイマーを形成するための別の方法は、ここに引用してその全体を援用する、Ｚｈａｏ  ａｎｄ  Ｋｏｈｌｅｒ，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  （２００２）２５：３９６−４０４に記載された自己親和性（ａｕｔｏｐｈｉｌｉｃ）Ｔ１５ペプチドの使用を介するものである。
【０１４７】
あるいは、抗体は、組換えＤＮＡ技術を介して多量体化することができる。ＩｇＭおよびＩｇＡは、Ｊ鎖ポリペプチドとの相互作用を介して抗体マルチマーを天然で形成する。ＩｇＧ分子のような非−ＩｇＡまたは非ＩｇＭ分子は、ＩｇＡまたはＩｇＭのＪ鎖相互作用ドメインを含有するように作成することができ、それにより、非ＩｇＡまたは非−ＩｇＭ分子に対して、より高次のマルチマーを形成する能力を付与する（例えば、その双方をここに引用してその全体を援用する、Ｃｈｉｎｔａｌａｃｈａｒｕｖｕら，（２００１）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０１：２１−３１．およびＦｒｉｇｅｒｉｏら，（２０００）Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  １２３：１４８３−９４参照）。ＳｃＦｖダイマーは、当該分野で知られた組換え技術を介して形成することもでき；ｓｃＦｖダイマーの構築の例は、ここに引用してその全体を援用する、Ｇｏｅｌ  ら．，（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６０：６９６４−６９７１に与えられる。抗体マルチマーは、限定されるものではないが、サイズ排除クロマトグラフィーを含めた、当該分野で知られたいずれの適当な方法を用いても精製することができる。
【０１４８】
明細書中に別の記載がない限り、抗体による特異的結合または免疫特異的結合は、該抗体が標的抗原に結合するが、タンパク質の同一ファミリーにおける他のタンパク質（例えば、他のＴＮＦファミリーリガンド）のような標的抗原以外のタンパク質に特異的に結合（すなわち、交差反応）しないことを意味する。標的抗原に結合し、他のタンパク質と交差反応しない抗体は、必ずしも、全ての条件において該他のタンパク質に結合しない抗体ではなく；むしろ、標的抗原特異的抗体は、それがアッセイまたは処置の少なくと別のタイプで用いるのに適する、すなわち、低いバックグラウンドレベルを与えるか、あるいは処置において合理的でない有害効果をもたらさないように、該他のタンパク質に結合するその能力と比較して、標的抗原に優先的に結合する。抗体によって結合されたタンパク質の部分はエピトープとして知られているのはよく知られている。エピトープは線状（すなわち、タンパク質配列における順次のアミノ酸残基を含む）、または立体配座的でよい（すなわち、タンパク質の一次構造において連続しないが、タンパク質の二次、三次、または四次構造によって一緒にされる１以上のアミノ酸残基を含む）。標的抗原特異的抗体が標的抗原のエピトープに結合することを仮定すれば、標的抗原に特異的に結合する抗体は、標的抗原の断片または変異体における与えられた標的抗原特異的抗体によって結合されたエピトープの存在または不存在に依存して、標的抗原の断片および／または標的抗原の変異体（例えば、標的抗原に対して少なくとも９０％同一であるタンパク質）に結合してもしなくても良い。同様に、標的抗原−特異的抗体は、オルソログにおける抗体によって認識されるエピトープの存在または不存在に応じて、（その断片を含めた）標的抗原の種オルソログ（ｓｐｅｃｉｅｓ  ｏｒｔｈｌｏｇｕｅ）に結合することができる。加えて、標的抗原特異的抗体は、標的抗原融合タンパク質、例えば、修飾された形態の標的抗原融合タンパク質に結合することができる。抗体が標的抗原融合タンパク質に結合するそのような場合において、抗体は、結合が特異的となるように、融合タンパク質の標的抗原部位との結合接触をなさねばならない。
【０１４９】
いずれかの特定の標的抗原に特異的に結合する抗体は、例えば、イムノアッセイ、または当業者に知られた他の技術、例えば、ここに引用してその全体を援用する、２００６年７月３１日に出願された米国特許出願第６０／８３４，１５２号に記載されたイムノアッセイによって同定することができる。本発明の方法で用いることができる抗体は、ニュートロカイン−アルファに対して「特異的」であって良いが、要件ではない。本発明の方法で用いることができる抗−ニュートロカインアルファ抗体は、それらの交差反応性の点で記載し、または特定することができる。ニュートロカイン−アルファポリペプチドのいずれかの他のアナログ、オルソログ、またはホモログに結合しない抗体は、本発明の方法で用いることができる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体はＡＰＲＩＬと交差反応する。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体はヒトタンパク質のネズミ、ラットおよび／またはウサギホモログ、およびその対応するエピトープと交差反応する。
【０１５０】
特別な実施形態において、（特異的抗体−抗原結合をアッセイするための当該分野で良く知られた免疫アッセイによって決定されるような）ニュートロカイン−アルファポリペプチド、ポリペプチド断片、または配列番号２の変異体、および／またはニュートロカイン−アルファエピトープに結合する抗体は、本発明の方法で用いることができる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、他のポリペプチド配列に融合したニュートロカイン−アルファポリペプチドに結合することができる。例えば、ニュートロカイン−アルファポリペプチドは、免疫グロブリンの定常ドメイン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）、またはその部分（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはそのいずれかの組合せ、およびその部分）、または（限定されるものではないが、組換えヒトアルブミンまたはその断片または変異体を含めた（例えば、ここに引用してその全体を援用する１９９９年３月２日に発行された米国特許第５，８７６，９６９号、ＥＰ特許０  ４１３  ６２２、および１９９８年６月１６日に発行された米国特許第５，７６６，８８３号参照））アルブミンと融合させることができ、その結果、キメラポリペプチドがもたらされる。そのような融合タンパク質は、精製を容易とすることができ、インビボにて半減期を増大させることができる。これは、ヒトＣＤ４−ポリペプチドの最初の２つのドメイン、および哺乳動物免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のドメインよりなるキメラタンパク質について示されている。例えば、ＥＰ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４−８６（１９８８）を参照。免疫系に対する上皮バリアーを横切る抗原の増強された送達は、ＩｇＧまたはＦｃ断片のようなＦｃＲｎ結合パートナーにコンジュゲートした抗原（例えば、インスリン）について示されている（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２２０２４およびＷＯ９９／０４８１３参照）。ＩｇＧ部分ジスルフィド結合によるジスルフィド結合ダイマー構造を有するＩｇＧ融合タンパク質は、モノマーポリペプチドまたはその断片単独よりも他の分子に結合し、それは中和するのにより効果的であることが判明している。例えば、Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：３９５８−３９６４（１９９５）参照。
【０１５１】
別の実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、エラープロンＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入、または組換えに先立つ他の方法によってニュートロカイン−アルファポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのランダム変異導入法によって作成された突然変異体ニュートロカイン−アルファポリペプチドに結合する。別の実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、１以上の異種分子の１以上の成分、モチーフ、セクション、部分、ドメイン、断片等と組換えられたニュートロカイン−アルファの１以上の成分、モチーフ、セクション、部分、ドメイン、断片等に結合する。好ましい実施形態において、異種分子が、例えば、ＴＮＦ−アルファ、リンフォトキシン−アルファ（ＴＮＦ−ベータとしても知られたＬＴ−アルファ）、（複合体ヘテロダイマーＬＴ−アルファ２ベータで見出された）ＬＴ−ベータ、ＯＰＧＬ、ＦａｓＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＤｃＲ３、ＯＨ４０Ｌ、ＴＮＦ−ガンマ（国際公開番号ＷＯ９６／１４３２８）、ＡＩＭ−Ｉ（国際公開番号ＷＯ９７／３３８９９）、ＡＩＭ−ＩＩ（国際公開番号ＷＯ９７／３４９１１）、ＡＰＲＩＬ（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８（６）：１１８５−１１９０）、エンドカイン−アルファ（国際公開番号ＷＯ９８／０７８８０）、ＯＰＧ、ＯＸ４０、および神経成長因子（ＮＧＦ）、およびＦａｓ、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０および４  ＩＢＢの可溶性形態、ＴＲ２（国際公開番号ＷＯ９６／３４０９５）、ＤＲ３（国際公開番号ＷＯ９７／３３９０４）、ＤＲ４（国際公開番号ＷＯ９８／３２８５６）、ＴＲ５（国際公開番号ＷＯ９８／３０６９３）、ＴＲ６（国際公開番号ＷＯ９８／３０６９４）、ＴＲ７（国際公開番号ＷＯ９８／４１６２９）、ＴＲＡＮＫ、ＴＲ９（国際公開番号ＷＯ９８／５６８９２）、ＴＲ１０（国際公開番号ＷＯ９８／５４２０２）、３１２Ｃ２（国際公開番号ＷＯ９８／０６８４２）、ＴＲ１２、ＣＡＤ、およびｖ−ＦＬＩＰである。さらなる実施形態において、異種分子はいずれかの数のＴＮＦファミリーである。
【０１５２】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体はホモマー、特にホモトリマーのニュートロカイン−アルファポリペプチドに結合する。他の特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、２つのニュートロカイン−アルファポリペプチドおよび１つのＡＰＲＩＬポリペプチドを含有するヘテロポリマー、または１つのニュートロカイン−アルファポリペプチドおよび２つのＡＰＲＩＬポリペプチドを含有するヘテロトリマーのような、ヘテロマー、特にヘテロトリマーのニュートロカイン−アルファポリペプチドに結合する。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体はホモマー、特にホモトリマーのニュートロカイン−アルファポリペプチドに結合し、ここに、マルチマーの個々のタンパク質成分がニュートロカイン−アルファの成熟形態（例えば、配列番号２のアミノ酸残基１３４〜２８５）よりなる。他の特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、２つのニュートロカイン−アルファポリペプチドおよび１つのＡＰＲＩＬポリペプチドを含有するヘテロトリマー、または１つのニュートロカイン−アルファポリペプチドおよび２つのＡＰＲＩＬポリペプチドを含有するヘテロトリマーのような、ヘテロマー、特にヘテロトリマーのニュートロカイン−アルファポリペプチドに結合し、ここに、ニュートロカイン−アルファヘテロマーの個々のタンパク質成分は、ニュートロカイン−アルファの成熟細胞外可溶性部分（例えば、配列番号２のアミノ酸残基１３４〜２８５）、または成熟細胞外可溶性部分ＡＰＲＩＬ（例えば、配列番号４のアミノ酸残基１０５〜２５０）よりなる。
【０１５３】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、ニュートロカイン−アルファモノマータンパク質の立体配座エピトープに結合する。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、ニュートロカイン−アルファのマルチマー、特にトリマータンパク質の立体配座エピトープに結合する。他の実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、（例えば、ＡＰＲＩＬポリペプチドとで）ニュートロカイン−アルファがヘテロトリマーを形成する場合に、またはニュートロカイン−アルファおよび異種ポリペプチドの間の融合タンパク質において存在するような、異種ポリペプチドとでニュートロカイン−アルファの隣接位置から生じる立体配座エピトープに結合する。
【０１５４】
本発明の方法で用いることができる抗体は、限定されるものではないが、ポリクローナル、モノクローナル、多特異的、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体、単一鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生された断片、（例えば、抗ニュートロカイン−アルファ抗体に対する抗−ｉｄ抗体を含めた）抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、および前記のいずれかのエピトープ結合断片を含む。好ましい実施形態において、免疫グロブリンはＩｇＧ１またはＩｇＧ４イソタイプである。免疫グロブリンは重鎖および軽鎖を共に有することができる。ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ重鎖のアレイは、カッパまたはラムダ形態の軽鎖と対合することができる。
【０１５５】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体はニュートロカイン−アルファ−結合抗体断片であり、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単一鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、単一−鎖抗体、ジスルフィド−結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、およびＶＬまたはＶＨドメインいずれかを含む断片を含む。単一鎖抗体を含めた、ニュートロカイン−アルファ結合抗体断片は、単独で、あるいは以下の：ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインの全体または部分と組み合わされた可変領域を含むことができる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合断片は、ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインとの可変領域のいずれかの組合せを含む。本発明の方法で用いることができる抗体は、鳥類および哺乳動物を含めたいずれの動物起源からのものであっても良い。好ましくは、抗体はヒト、ネズミ（例えば、マウスおよびラット）、ロバ、シップウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリである。本明細書中に用いるように、「ヒト」抗体は、ここに引用してその内容の全体を援用する、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉら、による米国特許第５，９３９，５９８号に記載されているように、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、または１以上のヒト免疫グロブリンについてトランスジェニックな動物から単離され、内因性免疫グロブリンを発現しない抗体を含む。
【０１５６】
本発明の方法で用いることができる抗体は単一特異性、二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）、三重特異性（ｔｒｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）またはより大きな多重特異性（ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）のものであって良い。多重特異性抗体はニュートロカイン−アルファポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であって良く、またはニュートロカイン−アルファポリペプチド、ならびに異種ポリペプチドまたは固体支持体材料のような異種エピトープ双方に対して特異的であって良い。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９３／１７７１５；ＷＯ９２／０８８０２；ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９（１９９１）；米国特許第４，４７４，８９３号；第４，７１４，６８１号；第４，９２５，６４８号；第５，５７３，９２０号；第５，６０１，８１９；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３（１９９２）参照。
【０１５７】
本発明の方法で用いることができる抗体は、ニュートロカイン−アルファポリペプチドに対するその結合親和性の点で記載し、または特定することができる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、５×１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、または１０−１２Ｍ以下の解離定数またはＫＤでもって、ニュートロカイン−アルファポリペプチドまたはその断片または変異体に結合する。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、各個々の引用値の任意の１つの範囲内である、解離定数またはＫＤでもってニュートロカイン−アルファポリペプチドに結合する。
【０１５８】
ニュートロカイン−アルファポリペプチドとの受容体／リガンド相互作用を部分的にまたは十分に破壊するニュートロカイン−アルファ抗体を、本発明の方法で用いることができる。また、リガンド結合を妨げないが、受容体活性化を妨げるニュートロカイン−アルファ−特異的抗体も含まれる。受容体活性化（すなわち、シグナリング）は、本明細書中に記載された技術、またはそうでなければ当該分野で知られた技術によって決定することができる。例えば、受容体活性化は、当該分野で知られた技術、および／または免疫沈澱、続いてのウェスタンブロット解析による受容体またはその基質のリン酸化（例えば、チロシンまたはセリン／スレオニン）を用いて、転写因子ＮＦ−ＡＴ、ＡＰ−１、ＭＡＰＫ８／ＪＮＫおよび／またはＮＦ−カッパＢ（非カノニカルＮＦ−カッパＢシグナリング経路を含む）の活性化を検出することによって決定することができる。
【０１５９】
前記ニュートロカイン−アルファ抗体は、当該分野で知られた方法を用いて作成することができる。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／４０２８１；米国特許第５，８１１，０９７号；Ｄｅｎｇら，Ｂｌｏｏｄ  ９２（６）：１９８１−１９８８（１９９８）；Ｃｈｅｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８（１６）：３６６８−３６７８（１９９８）；Ｈａｒｒｏｐら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（４）：１７８６−１７９４（１９９８）；Ｚｈｕら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８（１５）：３２０９−３２１４（１９９８）；Ｙｏｏｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０（７）：３１７０−３１７９（１９９８）；Ｐｒａｔら，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉ．１１１（Ｐｔ２）：２３７−２４７（１９９８）；Ｐｉｔａｒｄら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０５（２）：１７７−１９０（１９９７）；Ｌｉａｕｔａｒｄら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ９（４）：２３３−２４１（１９９７）；Ｃａｒｌｓｏｎ  ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１７）：１１２９５−１１３０１（１９９７）；Ｔａｒｙｍａｎら，Ｎｅｕｒｏｎ  １４（４）：７５５−７６２（１９９５）；Ｍｕｌｌｅｒら，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ６（９）：１１５３−１１６７（１９９８）；Ｂａｒｔｕｎｅｋら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ８（１）：１４−２０（１９９６）（これらは全てここに引用してその全体を援用する）参照。
【０１６０】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる（抗体断片、またはその変異体を含むか、あるいはそれからなる群より選択される分子を含めた）ニュートロカイン−アルファ抗体は、ニュートロカイン−アルファ、またはニュートロカイン−アルファの断片または変異体に特異的に結合する。特に、例えば、表１で参照される配列番号１３〜１８のいずれか１つのアミノ酸配列を有する単一鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖｓ）のような抗体を本発明の方法で用いることができる。
【０１６１】
表１：ニュートロカイン−アルファに免疫特異的に結合するｓｃＦｖｓ
【０１６２】
【表１】
0005936994.tif 000002
本発明の一つの実施形態において、本発明で用いることができる抗体はニュートロカイン−アルファに結合し、表１に参照れさるＶＨドメインのいずれか一つおよび／または表１に参照されるＶＬドメインのいずれか一つのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、本発明で用いることができる抗体は表１で参照される同一ｓｃＦｖからのＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を含む。代替的な実施形態において、本発明で用いることができる抗体は、表１に参照された異なるｓｃＦｖｓからのＶＨドメインおよびＶＬドメインのアミノ酸配列を含む。別の実施形態において、本発明で用いることができる抗体は、ニュートロカイン−アルファに特異的に結合し、表１で参照されるＶＨ  ＣＤＲのいずれか１つ、２つ、３つ、３つ、またはそれ以上および／または表１で参照されるＶＬ  ＣＤＲのいずれか１つ、２つ、３つ、３つ、またはそれ以上のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。好ましい実施形態において、本発明で用いることができる抗体は、表１で参照される同一ｓｃＦｖからのＶＨ  ＣＤＲおよびＶＬ  ＣＤＲのアミノ酸配列を含む。代替的な実施形態において、本発明で用いることができる抗体は、表１に参照された異なるｓｃＦｖからのＶＨ  ＣＤＲおよびＶＬ  ＣＤＲのアミノ酸配列を含む。ニュートロカイン−アルファに免疫特異的に結合する表１に参照されるｓｃＦｖの抗体断片または変異体を含むか、あるいはそれよりなる分子を本発明で用いることができる。
【０１６３】
特別な実施形態において、本発明で用いることができる抗ニュートロカイン−アルファ抗体は、表１に記載された、配列番号１３のＶＨおよびＶＬドメインを含む。別の特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、表１に記載された、配列番号１３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３およびＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３領域を含む。
【０１６４】
特別な実施形態において、本発明で用いることができる抗ニュートロカイン−アルファ抗体は、表１に記載された、配列番号１４のＶＨおよびＶＬドメインを含む。別の特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、表１に記載された、配列番号１３のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３およびＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３領域を含む。
【０１６５】
特別な実施形態において、本発明で用いることができる抗ニュートロカイン−アルファ抗体は、表１に記載された、配列番号１３のＶＨおよびＶＬドメインを含む。別の特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、表１に記載された、配列番号１４のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３およびＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３領域を含む。
【０１６６】
特別な実施形態において、本発明で用いることができる抗ニュートロカイン−アルファ抗体は、表１に記載された、配列番号１５のＶＨおよびＶＬドメインを含む。別の特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、表１に記載された、配列番号１５のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３およびＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３領域を含む。
【０１６７】
特別な実施形態において、本発明で用いることができる抗ニュートロカイン−アルファ抗体は、表１に記載された、配列番号１６のＶＨおよびＶＬドメインを含む。別の特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、表１に記載された、配列番号１６のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３およびＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３領域を含む。
【０１６８】
特別な実施形態において、本発明で用いることができる抗ニュートロカイン−アルファ抗体は、表１に記載された、配列番号１７のＶＨおよびＶＬドメインを含む。別の特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、表１に記載された、配列番号１７のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３およびＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３領域を含む。
【０１６９】
特別な実施形態において、本発明で用いることができる抗ニュートロカイン−アルファ抗体は、表１に記載された、配列番号１８のＶＨおよびＶＬドメインを含む。別の特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、表１に記載された、配列番号１８のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３およびＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３領域を含む。
【０１７０】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗ニュートロカイン−アルファ抗体は、例えば、ＵＳ特許公開番号２００５０１８６６３７に記載された中和抗−ニュートロカイン−アルファ抗体である１５Ｃ１０のＶＨおよびＶＬドメインを含む。１５Ｃ１０のＶＨドメインのアミノ酸配列は配列番号１９において与えられる。１５Ｃ１０のＶＬドメインのアミノ酸配列は配列番号２０において与えられる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗ニュートロカイン−アルファ抗体は、１５Ｃ１０の抗原結合断片または変異体である。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗ニュートロカイン−アルファ抗体は、１５Ｃ１０のヒト化バージョンである。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗−ニュートロカイン−アルファ抗体は、１５Ｃ１０のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３およびＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３領域を含む。
【０１７１】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗ニュートロカイン−アルファ抗体は、ここに引用してその全体を援用する国際特許公開番号ＷＯ０３／０１６４４６８に記載された４Ａ５−３．１．１−Ｂ４抗−ニュートロカイン−アルファ抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含む。ニュートロカイン−アルファは、ＷＯ０３／０１６４４６８では、ｈＴＮＦＳＦ１３ｂをいう。４Ａ５−３．１．１−Ｂ４のＶＨドメインのアミノ酸配列は配列番号２１において与えられる。４Ａ５−３．１．１−Ｂ４のＶＬドメインのアミノ酸配列は配列番号２２において与えられる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗−ニュートロカイン−アルファ抗体は、４Ａ５−３．１．１−Ｂ４の抗原結合断片または変異体である。別の特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、４Ａ５−３．１．１−Ｂ４のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ３およびＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３領域を含む。
【０１７２】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ抗体は、細胞から発現される天然ニュートロカイン−アルファポリペプチドに特異的に結合する。
【０１７３】
Ｃ．ニュートロカイン−アルファ結合ポリペプチド
特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはニュートロカイン−アルファ結合ペプチドまたはポリペプチドである。ニュートロカイン−アルファ結合ペプチドまたはポリペプチドは、例えば、その各々をここに引用してその全体を援用する、国際特許公開番号ＷＯ０５／００５２６２、ＷＯ０５／０００３５１、ＷＯ０２／０９２６２０、ＷＯ０２／１６４１２、ＷＯ０２／０２６４１およびＷＯ０２／１６４１１およびＵＳ特許公開番号ＵＳ２００６１３５４３０、ＵＳ２００６０８４６０８、ＵＳ２００３１９４７４３、ＵＳ２００３０１９５１５６およびＵＳ２００３０９１５６５に記載されている。ニュートロカイン−アルファ結合ペプチドまたはポリペプチドは、例えば、ここに引用してその全体を援用する、Ｓｕｎら，（２００６）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３４６：１１５８−１１６２に記載されている。本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合ペプチドは、フィラメント状ファージのコートタンパク質との融合によって提示されたランダムペプチド配列から同定された短いポリペプチドを含む。ファージディスプレイペプチドライブラリー技術の議論のためには、例えば、Ｓｃｏｔｔら、（１９９０），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：  ３８６；Ｄｅｖｌｉｎら、（１９９０），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９；１９９３年６月２９日に発行された米国特許第５，２２３，４０９号；１９９８年３月３１日に発行された米国特許第５，７３３，７３１号；１９９６年３月１２日に発行された米国特許第５，４９８，５３０号；１９９５年７月１１日に発行された米国特許第５，４３２，０１８号；１９９４年８月１６日に発行された米国特許第５，３３８，６６５号；１９９９年７月１３日に発行された米国特許第５，９２２，５４５号；１９９６年１２月１９日に公開されたＷＯ９６／４０９８７；および１９９８年４月１６日に発行されたＷＯ９８／１５８３３（その各々をここに引用してその全体を援用する）。該ペプチドを発現するファージは固定化されたニュートロカイン−アルファ標的ペプチドに対する継続ラウンドのアフィニティー精製、続いての再増殖によって単離される。ニュートロカイン−アルファに対する最高結合を持つ候補を配列決定して、各結合ペプチドの同一性を決定することができる。次いで、各同定されたニュートロカイン−アルファ結合ペプチドを「ビヒクル」に結合させて、本発明の方法で用いるさらなるニュートロカイン−アルファ結合ペプチドを生じさせることができる。用語「ビヒクル」とは、分解を妨げ、および／または半減期を増大させ、毒性を低下させ、免疫原性を低下させ、またはニュートロカイン−アルファ結合ペプチドの生物学的活性を増加させる分子をいう。例示的なビヒクルはＦｃドメインおよびその変異体（好ましい「ペプチボディ」）；線状ポリマー（例えば、５ｋＤ、２０ｋＤ、および３０ｋＤ  ＰＥＧ、ポリリシン、デキストラン等を含めたポリエチレングリコール（ＰＥＧ））；分岐鎖ポリマー（例えば、１９８１年月１５日に発行されたＤｅｎｋｅｎｗａｌｔｅｒらに対する米国特許第４，２８９，８７２号；１９９３年７月２０日に発行されたＴａｍに対する���５，２２９，４９０号；１９９３年１０月２８日に公開されたＦｒｅｃｈｅｔらによるＷＯ９３／２１２５９）；脂質；（ステロイドのような）コレステロール基；炭水化物またはオリゴ糖（例えば、デキストラン）；サルベージ受容体に結合する天然または合成タンパク質、ポリペプチドまたはペプチド；限定されるものではないが、組換えヒトアルブミンまたはその断片または変異体を含めたアルブミン（例えば、ここに引用してその全体を援用する、１９９９年３月２日に発行された米国特許第５，８７６，９６９号、ＥＰ０  ４１３  ６２２、および１９９８年６月１６日に発行された米国特許第５，７６６，８８３号参照）；およびロイシンジッパードメイン、および他のそのようなタンパク質およびタンパク質断片を含む。本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合ペプチドは、アミノ酸残基の一つのＮ−末端、Ｃ−末端、または側鎖を介してペプチドに結合した少なくと別のビヒクルの存在を必要とする。多数のビヒクルを用いることもできる；例えば、各末端におけるＦｃ、または末端におけるＦｃ、および他の末端または側鎖におけるＰＥＧ基。ニュートロカイン−アルファ結合ペプチドのためには、Ｆｃドメインは好ましいビヒクルである。ＦｃドメインはペプチドのＮまたはＣ末端に、あるいはＮおよびＣ末端双方において融合することができる。Ｎ末端への融合が好ましい。
【０１７４】
前記したように、Ｆｃ変異体は、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合ペプチドのための適当なビヒクルである。天然Ｆｃを広く修飾してＦｃ変異体を形成することができ、但し、サルベージ受容体への結合は維持されるものとする；例えば、ＷＯ９７／３４６３１およびＷＯ  ６／３２４７８参照。そのようなＦｃ変異体においては、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合ペプチドによって必要とされない構造的特徴または機能的活性を供する天然Ｆｃの１以上の部位を除去することができる。これらの部位は、例えば、残基を置換し、または欠失させ、該部位に残基を挿入し、または該部位を含有する部分を切断することによって除去することができる。挿入されたまたは置換された残基はペプチド模倣物スまたはＤ−アミノ酸のような改変されたアミノ酸であってもよい。Ｆｃ変異体は多数の理由で望ましく、そのいくつかは、後に記載する。例示的なＦｃ変異体は分子および配列を含み、ここに：
１．ジスルフィド結合形成に関与する部位を除去する。そのような除去は、本発明の分子を産生するのに用いる宿主細胞に存在する他のシステイン−含有タンパク質との反応を回避することができる。この目的では、Ｎ−末端におけるシステイン−含有セグメントを切断することができ、あるいはシステイン残基を欠失させ、あるいは他のアミノ酸（例えば、アラニル、セリル）、で置換することができる。システイン残基を除去する場合においてさえ、単一鎖Ｆｃドメインは、一緒に非共有結合的に保有されるダイマーＦｃドメインを依然として形成することができる。
【０１７５】
２．天然Ｆｃは、それを選択された宿主細胞とより適合させるように修飾される。例えば、プロリンイミノペプチダーゼのようなＥ．ｃｏｌｉ中の消化酵素によって認識され得る典型的な天然ＦｃのＮ−末端近くのＰＡ配列を除去することができる。また、特に、分子がＥ．ｃｏｌｉのような細菌細胞において組換えにより発現される場合に、Ｎ−末端メチオニン残基を付加することもできる。
【０１７６】
３．天然ＦｃのＮ−末端の部分を除去して、選択された宿主細胞で発現させる場合に、Ｎ−末端不均一性を妨げる。この目的では、Ｎ−末端における最初の２０のアミノ酸残基のいずれかを欠失させることができる。
【０１７７】
４．１以上のグリコシル化部位を除去する。典型的にはグリコシル化される残基（例えば、アスパラギン）は細胞溶解性応答を付与することができる。そのような残基は欠失し、または未グリコシル化残基（例えば、アラニン）で置換することができる。
【０１７８】
５．Ｃ１ｑ結合部位のような補体との相互作用に関与する部位を除去する。例えば、ヒトＩｇＧ１のＥＫＫ配列を欠失し、または置換することができる。補体動員は、本発明の方法で用いることができる分子にとって有利ではなく、従って、そのようなＦｃ変異体で回避することができる。
【０１７９】
６．サルベージ受容体以外のＦｃ受容体への結合に影響する部位を除去する。天然Ｆｃは、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合ペプチド融合分子に必要なある種の白血球細胞との相互作用のための部位を有することができ、従って、除去することができる。
【０１８０】
７．ＡＤＣＣ部位は除去される。ＡＤＣＣ部位は当該分野で公知である；例えば、ＩｇＧ１におけるＡＤＣＣ部位に関しては、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（５）：６３３−９（１９９２）参照。これらの部位は、同様に、本発明の方法で用いることができる融合分子に必要ではなく、従って、除去することができる。
【０１８１】
８．天然Ｆｃが非−ヒト抗体に由来する場合、天然Ｆｃをヒト化することができる。典型的には、天然Ｆｃをヒト化するには、非−ヒト天然Ｆｃにおける選択された残基を、ヒト天然Ｆｃで通常見出される残基で置換する。抗体のヒト化のための技術は当該分野でよく知られている。
【０１８２】
本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合ペプチドのための代替ビヒクルは、サルベージ受容体に結合することができるタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、抗体断片または小分子（例えば、ペプチド模倣化合物）であろう。例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されたポリペプチドをビヒクルとして用いることができよう。ペプチドは、ファージディスプレイ、またはサルベージ受容体への結合についてのＲＮＡ−ペプチドスクリーニングによって選択することもできる。そのようなサルベージ受容体−結合化合物は「ビヒクル」の意味内にやはり含まれ、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合ペプチドで用いることができる。そのようなビヒクルは、（例えば、プロテアーゼによって認識される配列を回避することによって）増大した半減期、および（例えば、抗体ヒト化において発見された非−免疫原性配列を好都合とすることによって）減少した免疫原性について選択すべきである。
【０１８３】
前記したように、ポリマービヒクルを、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合ペプチドで用いることもできる。ビヒクルとして有用な化学部位を結合させるための種々の手段が現在利用可能である。例えば、ここに引用してその全体を援用する、特許協力条約（「ＰＣＴ」）国際公開番号ＷＯ９６／１１９５３参照。このＰＣＴ公開は、とりわけ、タンパク質のＮ−末端への水溶性ポリマーの選択的結合を開示する。
【０１８４】
特別な実施形態において、好ましいポリマービヒクルはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ＰＥＧ基はいずれの便宜な分子量のものであってもよく、線状または分岐状であってよい。ＰＥＧの平均分子量は、好ましくは、約２キロダルトン（「ｋＤ」）〜１００ｋＤ、より好ましくは約５ｋＤ〜約５０ｋＤ、最も好ましくは約５ｋＤ〜約１０ｋＤの範囲である。ＰＥＧ基は、一般には、ＰＥＧ部位上の反応性基（例えば、アルデヒド、アミノ、チオール、またはエステル基）を通じてのアシル化または還元性アルキル化を介する本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合部位のために、本発明の化合物上の反応性基（例えば、アルデヒド、アミノ、またはエステル基）へ結合されるであろう。
【０１８５】
合成ペプチドのＰＥＧ化のための有用な戦略は、溶液中でコンジュゲート結合を形成することを介して、ペプチドおよびＰＥＧを組み合わせることを含み、各々が相互に反応性である特殊な機能を担う。ペプチドは慣用的な固相合成で容易に調製することができる。ペプチドは特定の部位における適当な官能基で「予め活性化」される。前駆体は、ＰＥＧ部位との反応に先立って精製し、十分に特徴付ける。ペプチドとＰＥＧとの連結は、通常、水性相で起こる、逆相分析ＨＰＬＣによって容易にモニターすることができる。ＰＥＧ化ペプチドは分取用ＨＰＬＣによって容易に精製し、分析ＨＰＬＣ、アミノ酸分析およびレーザー脱着質量分析によって特徴付けることができる。
【０１８６】
多糖ポリマーは、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合ペプチドで用いることができる別のタイプの水溶性ポリマーである。デキストランは、α１−６結合によって圧倒的に結合されたグルコースの個々のサブユニットよりなる多糖ポリマーである。デキストランそれ自体は多くの分子量範囲で入手でき、約１ｋＤ〜約７０ｋＤの分子量にて容易に入手可能である。デキストランは、それ自体で、あるいは他のビヒクル（例えば、Ｆｃ）と組み合せて、ビヒクルとして本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合ペプチドで用いる適当な水溶性ポリマーである。例えば、ＷＯ９６／１１９５３およびＷＯ９６／０５３０９参照。治療または診断免疫グロブリンへコンジュゲートしたデキストランの使用は報告されている；例えば、ここに引用してその全体を援用する、欧州特許公開番号０  ３１５  ４５６参照。約１ｋＤ〜約２０ｋＤのデキストランは、デキストランを本発明に従ってビヒクルとして用いる場合に好ましい。
【０１８７】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合ペプチドは所望により「リンカー」を含む。存在する場合、その化学的構造は重大ではない。というのは、それは主としてスペーサーとして働くからである。リンカーは、好ましくは、ペプチド結合によって一緒に連結されたアミノ酸よりなる。かくして、好ましい実施形態において、リンカーはペプチド結合によって結合された１〜３０のアミノ酸から構成され、ここに、該アミノ酸は２０の天然に生じるアミノ酸から選択される。これらのアミノ酸のいくつかは、当業者によってよく理解されているようにグリコシル化することができる。より好ましい実施形態において、該１〜２０のアミノ酸はグリシン、アラニン、プロリン、アスパラギン、グルタミン、およびリシンから選択される。なおより好ましくは、リンカーは、グリシンおよびアラニンのような立体的障害がないアミノ酸の大部分から構成される。かくして、好ましいリンカーはポリグリシン（特に、（Ｇｌｙ）４、（Ｇｌｙ５）、ポリ（Ｇｌｙ−Ａｌａ）、およびポリアラニンである。好ましいリンカーは５を超えるアミノ酸を含むリンカーであり、適当なリンカーはグリシン、アラニン、プロリン、アスパラギン、グルタミン、リシン、スレオニン、セリンまたはアスパルテートから選択される役５００までのアミノ酸を有する。約２０〜５０のアミノ酸のリンカーが最も好ましい。
【０１８８】
非−ペプチドリンカーも、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合ペプチドで有用である。例えば、ｎが２〜２０である−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−のようなアルキルリンカーを用いることができる。これらのアルキルリンカーは、さらに、低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６）低級アシル、ハロゲン（例えば、Ｃｌ、Ｂｒ）、ＣＮ、ＮＨ２、フェニル等のようないずれかの非立体障害基によって置換され得る。
【０１８９】
好ましい実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合ペプチドは配列番号２３のアミノ酸配列、配列番号２４のアミノ酸配列、または配列番号２５のアミノ酸配列を含む。特に好ましい実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合ペプチドは、配列番号２３のアミノ酸配列である（ＡＭＧ  ６２３；ＡＧＰ３ペプチボディ）。
【０１９０】
ニュートロカイン−アルファ受容体
特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質、またはその断片または変異体である。ニュートロカイン−アルファ受容体は、例えば、膜貫通アクチベーターおよびＣＡＭＬインターアクター（ＴＡＣＩ、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＣ５１７９０、配列番号６）、Ｂ細胞活性化因子受容体（ＢＡＦＦ−Ｒ、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ ４４３１７７  配列番号１０）、およびＢ−細胞成熟化抗原（ＢＣＭＡ、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ ００１１８３  配列番号８）を含む。ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質、その断片および変異体ならびにそれに対する抗体は、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ０３／０１４２９４、ＷＯ０２／０６６５１６、ＷＯ０２／０２４９０９、ＷＯ０３／０１４２９４、ＷＯ０３／０２４９９１、ＷＯ０２／０９４８５２およびＷＯ０４／０１１６１１、および米国特許公開番号ＵＳ２００３０１４８４４５、ＵＳ２００３００９９９９０、ＵＳ２００５０７０６８９、ＵＳ２００５０４３５１６およびＵＳ２００３０１２７８３に記載されており、後により詳細に記載する。前記した文献の各々をここに引用してその全体を援用する。
【０１９１】
Ｄ．ニュートロカイン−アルファ受容体、ＴＡＣＩ
以下に記載したもののようなＴＡＣＩポリペプチドは、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬアンタゴニストとして作用し、本発明の方法で用いることもできるＴＲ１７としても知られたＴＡＣＩは、約３１．８ｋＤａの推定分子量を持つ２９３アミノ酸残基（配列番号６）のタンパク質である。ＴＡＣＩをコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列は配列番号５に与えられる。約１〜約１６５の推定アミノ酸は細胞外ドメインを構成する（配列番号６）；約１６６〜約１８６のアミノ酸は膜貫通ドメイン（配列番号６）を構成し；および約１８７〜約２９３のアミノ酸は細胞内ドメインを構成する（配列番号６）。
【０１９２】
従って、１つの実施形態において、本発明の方法で用いることができるＴＡＣＩタンパク質は、配列番号６のアミノ酸配列を含むか、あるいはそれよりなる単離されたポリペプチド、または例えば、（配列番号６のアミノ酸１〜１６５を含む）ＴＡＣＩ細胞外ドメインおよび／または（配列番号６のアミノ酸３３〜１０４を含む）ＴＡＣＩシステインリッチなドメインのような、配列番号６の一部を含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド；ならびに前記したポリペプチドに対して少なくとも８０％同一、より好ましくは少なくとも９０％または９５同一、なおより好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるポリペプチドである。
【０１９３】
別の実施形態において、本発明の方法で用いることができるＴＡＣＩタンパク質は、配列番号６のアミノ酸１〜１５４を含む単離されたポリペプチド、ならびに前記したポリペプチドに対して少なくとも８０％同一、より好ましくは少なくとも９０％または９５％同一、なおより好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるポリペプチドである。
【０１９４】
ＴＡＣＩポリペプチドの参照アミノ酸配列に対して少なくとも、例えば、９５％「同一」であるアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、ポリペプチド配列がＴＡＣＩ受容体の参照アミノ酸の各１００アミノ酸当たり５までのアミノ酸改変改変を含んでもよいことを除いて、ポリペプチドのアミノ酸配列が参照配列に同一であることを意図する。換言すれば、参照アミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るには、参照配列における５％までのアミノ酸残基を欠失し、または別のアミノ酸で置換することができ、あるいは参照配列における合計アミノ酸残基の５％までのアミノ酸の数を参照配列に挿入することができる。参照配列のこれらの改変は、参照アミノ酸配列のアミノまたはカルボキシ末端位置において、あるいは末端位置の間のどこかで起こることができ、参照配列における残基の間に個々に、または参照配列内の１以上の隣接基において散在し得る。
【０１９５】
ＴＡＣＩのポリペプチド断片は配列番号６に含まれるアミノ酸配列を含むか、あるいはそれよりなるポリペプチドを含む。ポリペプチド断片は「独立して存在」することができるか、あるいは最も好ましくは単一連続領域として、断片が部分または領域を形成するより大きなポリペプチド内に含まれる。さらなる実施形態において、ポリペプチド断片は１以上のＴＡＣＩドメインを含み、あるいはあるいはそれよりなる。好ましいポリペプチド断片は：（ａ）（配列番号６の約１〜約１６５のアミノ酸残基を構成すると予測される）ＴＡＣＩ細胞外ドメインを含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド；（ｂ）（配列番号６の約３３〜約１０４のアミノ酸残基を構成すると予測される）ＴＡＣＩシステインリッチなドメインを含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド；（ｃ）（配列番号６の約１６６〜約１８６のアミノ酸残基を構成すると予測される）ＴＡＣＩ膜貫通ドメインを含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド；（ｄ）（配列番号６の約１８７〜約２９３のアミノ酸残基を構成すると予測される）ＴＡＣＩ細胞内ドメインを含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド；（ｅ）ポリペプチド（ａ）〜（ｄ）のいずれかの組合せから選択されるメンバーを含む。
【０１９６】
ＴＡＣＩの細胞外システインリッチなモチーフはＴＡＣＩおよびそのリガンド、ニュートロカイン−アルファおよびＡＰＲＩＬの間の相互作用で重要である。従って、好ましい実施形態において、本発明の方法で用いることができるＴＡＣＩポリペプチド断片は、配列番号６のアミノ酸残基３３〜６６および／または７０〜１０４を含むか、あるいはそれよりなる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるＴＡＣＩポリペプチドは細胞外システインリッチなモチーフ（配列番号６の残基３３〜６６および残基７０〜１０４）の一方または双方を含み、あるいはあるいはそれよりなる。これらのシステインリッチなモチーフの一方または双方のポリペプチド配列に対して少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるポリペプチド配列を含む、あるいはあるいはそれよりなるタンパク質の好ましい。
【０１９７】
本発明の方法で用いることができるＴＡＣＩタンパク質の他の断片は、ＴＡＣＩの構造的または機能的属性によって特徴付けられる断片である。そのような断片は、アルファラセンおよびアルファラセン形成領域（「アルファ領域」）、ベータシートおよびベータシート形成領域（「ベータ領域」）、ターンおよびターン形成領域（「ターン領域」）、コイルおよびコイル形成領域（「コイル領域」）、親水性領域、疎水性領域、アルファ両親媒性領域、ベータ両親媒性領域、表面形成領域、および米国特許第６，９６９，５１９号に議論されたような、完全な（すなわち、全長）ＴＡＣＩ（配列番号６）の（Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆプログラムのデフォルトパラメータを用いて同定された、１．５以上の抗原性指標を有する４以上の連続アミノ酸を含有する）高抗原性指標領域を含む。ある好ましい領域は、限定されるものではないが、これらのコンピュータプログラムのデフォルトパラメータを用いて予測される、Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ予測アルファ領域、ベータ領域、ターン領域、およびコイル領域；Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ予測アルファ領域、ベータ領域、およびターン−領域；Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ予測親水性；Ｈｏｐｐ−Ｗｏｏｄｓ予測疎水性領域；Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇアルファおよびベータ両親媒性領域；Ｅｍｉｎｉ表面−形成領域；およびＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ高抗原性指標領域を含む。
【０１９８】
本発明の方法で用いられるＴＡＣＩポリペプチドは、（（異なるタンパク質の）異種タンパク質配列に結合したペプチドを介して連結されたポリペプチドを含む）融合タンパク質のような修飾された形態で発現、分泌シグナルのみならず、さらなる異種機能領域を含むことができる。あるいは、そのような融合タンパク質は、タンパク質合成技術によって、例えば、ペプチドシンセサイザの使用によって作成することができる。かくして、さらなるアミノ酸、特に荷電したアミノ酸の領域をペプチドのＮ−末端に付加して、精製の間にあるいは引き続いての取り扱いおよび貯蔵の間に宿主細胞における安定性および必要性を改善することができる。また、ペプチド部位をポリペプチドに付加して、精製を容易とすることができる。そのような領域は、ポリペプチドの最終調製に先立って除去することができる。分泌または排出を起こし、安定性を改善し、および精製を容易とするためのペプチド部位のポリペプチドへの付加は、とりわけ当該分野において精通したかつルーチン的な技術である。
【０１９９】
本発明の方法で用いることができる好ましいＴＡＣＩ融合タンパク質は、タンパク質を可溶化するのに有用な免疫グロブリンからの異種領域を含む。例えば、ＥＰ−Ａ−Ｏ  ４６４５３３（カナダ対応出願２０４５８６９）およびＷＯ００／０２４７８２は、別のヒトタンパク質またはその部分と共に、免疫グロブリン分子の定常領域の種々の部分を含む融合タンパク質を開示する。ＴＡＣＩ免疫グロブリン融合タンパク質が、例えば、ここに引用してその全体を援用する、ＰＣＴ公開ＷＯ０１／６０３９７、ＷＯ０１／８１４１７、ＷＯ０１／０８７９７７、およびＷＯ０２／９４８５２；米国公開番号ＵＳ２００３１０３９８６およびＵＳ２００６０３４８５２およびＧｒｏｓｓら，（２０００）Ｎａｔｕｒｅ  ４０４：９９５−９９９およびＹｕら，（２０００）Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １：２５２−２５６に記載されている。多くの場合において、融合タンパク質におけるＦｃ部分は、治療および診断で用いるのにかなり有利であり、かくして、例えば、改善された薬物動態学特性をもたらす（ＥＰ−Ａ  ０２３２  ２６２）。他方、いくつかの場合には、融合タンパク質が記載された有利な方法で発現され、検出され、および精製された後に、Ｆｃ部分を欠失することができるのが望ましいであろう。これは、Ｆｃ部分が治療および診断で用いるのに障害となることが判明した場合、例えば、融合タンパク質が免疫化用の抗原として用いるべき場合に当てはまる。薬物発見において、例えば、ｈＩＬ５−受容体のようなヒトタンパク質は、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同定するための高スループットスクリーニングアッセイの目的で、Ｆｃ部分と融合されている。Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ８：５２−５８（１９９５）およびＫ．Ｊｏｈａｎｓｏｎら，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７０：１６：９４５９−９４７１（１９９５）参照。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるＡＴＣＩ−Ｆｃ融合タンパク質は、Ａｔａｃｉｃｅｐｔ（ＴＡＣＩ−Ｉｇ）である。
【０２００】
当業者が認識するように、かつ先に議論したように、ＴＡＣＩポリペプチドは他のポリペプチド配列に融合させることができる。例えば、ＴＡＣＩポリペプチドは免疫グロブリンの定常ドメイン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）、その部分（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはそのいずれかの組合せ、およびその部分）、または（限定されるものではないが、組換えヒトアルブミンまたはその断片または変異体（例えば、ここに引用してその全体を援用する、１９９９年３月２日に発行された米国特許第５，８７６，９６９号、ＥＰ特許０  ４１３  ６２２、および１９９８年６月１６日に発行された米国特許第５，７６６，８８３号参照）を含めた）アルブミンと融合させることができ、その結果、キメラポリペプチドがもたらされる。
【０２０１】
そのような融合タンパク質は精製を容易とすることができ、貯蔵寿命を延長することができ、インビボにて半減期を増加させることができる。これは、ヒトＣＤ４−ポリペプチドの最初の２つのドメイン、および哺乳動物免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のドメインよりなるキメラタンパク質で示されている。例えば、ＥＰ  ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ら．，Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４−８６（１９８８）参照。免疫系に対する上皮バリアーを横切っての抗原の増強された送達は、ＩｇＧまたはＦｃ断片のようなＦｃＲｎ結合パートナーにコンジュゲートされた抗原（例えば、インスリン）について示されている（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２２０２４およびＷＯ９９／０４８１３参照）。ＩｇＧ部分ジスルフィド結合のためジスルフィド−結合ダイマー構造を有するＩｇＧ融合タンパク質は、モノマーポリペプチド、またはその断片単独以外の分子の結合および中和においてより効果的であることも判明した。例えば、Ｆｏｕｎｔｏｕｎａｋｉｓ  ら．，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：３９５８−３９６４（１９９５）参照。
【０２０２】
本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、好ましくは遺伝子融合（すなわち、アルブミン融合タンパク質は、ＴＡＣＩの全てまたは部分をコードするポリヌクレオチドがアルブミンの全てまたは部分をコードするポリヌクレオチドとイン−フレームと連結された核酸の翻訳によって生じる）、または相互への化学的結合によって相互に結合した、ＴＡＣＩポリペプチドの少なくとも断片または変異体、およびヒト血清アルブミンの少なくとも断片または変異体を含む。アルブミン融合タンパク質の一部分であったＴＡＣＩポリペプチドおよびアルブミンタンパク質は、アルブミン融合タンパク質の「部分」、「領域」または「部位」ということができる（例えば、「ＴＡＣＩ部分」または「アルブミンタンパク質部分」）。
【０２０３】
別の実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＴＡＣＩポリペプチドおよび血清アルブミンタンパク質を含むか、あるいはそれよりなる。他の実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＴＡＣＩの断片、および血清アルブミンタンパク質を含むか、あるいはそれよりなる。他の実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＴＡＣＩの変異体および血清アルブミンタンパク質を含むか、あるいはそれよりなる。好ましい実施形態において、アルブミン融合タンパク質の血清アルブミンタンパク質成分は血清アルブミンの成熟部分である。
【０２０４】
さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＴＡＣＩポリペプチド、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な断片を含み、あるいはあるいはそれよりなる。さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＴＡＣＩポリペプチド、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な変異体を含み、あるいはあるいはそれよりなる。好ましい実施形態において、アルブミン融合タンパク質のＴＡＣＩ部分は全長ＴＡＣＩポリペプチドである。さらに好ましい実施形態において、アルブミン融合タンパク質のＴＡＣＩ部分はＴＡＣＩポリペプチドの成熟可溶性ドメインである。
【０２０５】
さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＴＡＣＩの断片または変異体、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な断片または変異体を含み、あるいはあるいはそれよりなる。好ましい実施形態において、本発明は、ＴＡＣＩポリペプチドの成熟部分、および血清アルブミンの成熟部分を含む、あるいはあるいはそれよりなるアルブミン融合タンパク質を提供する。
【０２０６】
さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＴＡＣＩの断片または変異体、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な断片または変異体を含み、あるいはあるいはそれよりなる。好ましい実施形態において、本発明は、ＴＡＣＩポリペプチドの成熟部分、および（限定されるものではないが、組換えヒト血清アルブミン、またはその断片または変異体（例えば、ここに引用してその全体を援用する、１９９９年３月２日に発行された米国特許第５，８７６，９６９号、ＥＰ特許０  ４１３  ６２２、および１９９８年６月１６日に発行された米国特許第５，７６６，８８３号参照）を含めた）血清アルブミンの成熟部分を含む、あるいはあるいはそれよりなるアルブミン融合タンパク質を提供する。好ましい実施形態において、（その断片または変異体を含めた）ＴＡＣＩポリペプチドは、ヒト血清アルブミンの成熟形態（すなわち、ここに引用してその全体を援用するＥＰ特許０  ３２２  ０９４の図１および２に示されたヒト血清アルブミンのアミノ酸１〜５８５）と融合させる。別の好ましい実施形態において、（その断片または変異体を含めた）本発明の抗体は、ｘが１〜５８５の整数であるヒト血清アルブミンのアミノ酸残基１−ｘを含む、あるいはあるいはそれよりなるポリペプチド断片に融合され、およびアルブミン断片はヒト血清アルブミン活性を有する。別の好ましい実施形態において、（その断片または変異体を含めた）ＴＡＣＩポリペプチドは、ここに引用してその全体を援用する、米国特許第５，７６６，８８３号に記載されたような、ｚが３６９〜４１９の整数であるヒト血清アルブミンのアミノ酸残基１−ｚを含む、あるいはあるいはそれよりなるポリペプチド断片と融合される。（その断片または変異体を含めた）ＴＡＣＩポリペプチドは、異種タンパク質（例えば、免疫グロブリンＦｃポリペプチドまたはヒト血清アルブミンポリペプチド）のＮ−またはＣ−末端に融合させることができる。
【０２０７】
好ましい実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質で用いられるヒト血清アルブミンタンパク質は、配列番号１１：Ｌｅｕ−４０７をＡｌａに、Ｌｅｕ−４０８をＶａｌに、Ｖａｌ−４０９をＡｌａに、およびＡｒｇ−４１０をＡｌａに；またはＡｒｇ−４１０をＡに、Ｌｙｓ−４１３をＧｌｎに、およびＬｙｓ−４１４をＧｌｎに、を参照する点突然変異の以下の組の一方または双方を含有する（例えば、ここに引用してその全体を援用する国際公開番号ＷＯ９５／２３８５７参照）。なおより好ましい実施形態において、点突然変異の前記した組一方または双方を含有する本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、酵母Ｙａｐ３ｐタンパク質分解切断に対して改善された安定性／抵抗性を有し、酵母宿主細胞で発現された組換えアルブミン融合タンパク質の増大した産生を可能とする。
【０２０８】
好ましくは、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、Ｎ−末端部分としてのＨＡ、およびＣ−末端部分としてのＴＡＣＩポリペプチドを含む。あるいは、Ｃ−末端部分としてのＨＡ、およびＮ−末端部分としてのＴＡＣＩポリペプチドを含むアルブミン融合タンパク質を用いることができる。
【０２０９】
他の実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、アルブミンのＮ−末端およびＣ−末端双方に融合されるＴＡＣＩポリペプチドを有する。特別な実施形態においてＮ−およびＣ−末端において融合したＴＡＣＩポリペプチドは同一である。別の実施形態において、Ｎ−およびＣ−末端において融合したＴＡＣＩポリペプチドは異なるＴＡＣＩポリペプチドである。別の実施形態において、ＴＡＣＩポリペプチドはアルブミンのＮ−またはＣ−末端においていずれかにおいて融合しており、および異種ポリペプチドは残りの末端において融合している。
【０２１０】
加えて、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、融合した部分の間のリンカーペプチドを含んで、該部位の間のより大きな物理的分離を供することができる。リンカーペプチドはそれがフレキシブルであるかまたはより剛性であるようにアミノ酸よりなることができる。
【０２１１】
一般に、本発明の方法で用いることができる、アルブミン融合タンパク質は、一つのＨＡ−由来領域および一つのＴＡＣＩ領域を有する。しかしながら、各タンパク質の複数領域を用いて、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質を作成することができる。同様に、１を超えるタンパク質を用いて、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質を作成することができる。例えば、タンパク質をＨＡのＮ−およびＣ−末端双方に融合させることができる。そのような立体配置において、タンパク質部分は同一または異なるタンパク質分子であってよい。二機能的アルブミン融合タンパク質の構造は：Ｘ−ＨＡ−ＹまたはＹ−ＨＡ−Ｘとして表すことができる。
【０２１２】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるＴＡＣＩタンパク質またはその断片または変異体をサイトトキシン（例えば、細胞増殖抑制剤または殺細胞剤）にコンジュゲートすることができる。サイトトキシンまたはサイトトキシン剤は細胞に対して有害ないずれの剤も含む。その例はパクリタキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、マイトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、およびそのアナログまたはホモログを含む。
【０２１３】
別の実施形態において、本発明の方法で用いることができるＴＡＣＩタンパク質、またはその断片または変異体はトキシンにコンジュゲートすることができる。
【０２１４】
「トキシン」とは、規定された条件下で細胞の死滅を引き起こす細胞の表面中または表面上に通常は存在しない、内因性細胞傷害性エフェクター系、放射性同位体、ホロトキシン、修飾されたトキシン、トキシンの触媒サブユニット、またはいずれかの分子または酵素に結合し、それを活性化する１以上の化合物を意味する。使用することができるトキシンは、限定されるものではないが、当該分野で知られた放射性同位体、例えば、固有のまたは誘導された内因性細胞傷害性エフェクター系に結合する抗体（またはその部分を含有する補体固定）、チミジンキナーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮＡｓｅ、アルファトキシン、リシン、アブリン、ジュードモナスエキソトキシンＡ、ジフテリアトキシン、サポリン、モモルジン、ゲロニン、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、アルファ―サルシンおよびコレラトキシンのような化合物を含む。「トキシン」は、細胞増殖抑制剤または殺細胞剤、治療剤または放射性金属イオン、例えば、２１３Ｂｉのようなアルファ―エミッター、または例えば１０３Ｐｄ、１３３Ｘｅ、１３１Ｉ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、３５Ｓ、９０Ｙ、１５３Ｓｍ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、９０イッテリウム、１１７スズ、１８６レニウム、１６６ホロミウム、および１８８レニウムのような他の放射性同位体も含む。
【０２１５】
本発明の方法で用いることができるＴＡＣＩポリペプチドの特徴を改良または改変するためには、タンパク質エンジニアリングを使用することができる。当業者に知られた組換えＤＮＡ技術を用いて、新規な突然変異タンパク質または「単一または多数のアミノ酸置換、欠失、負荷または融合タンパク質を含めたムテイン」を作り出すことができる。そのような修飾されたポリペプチドは、例えば、増強された活性または増強された安定性を示すことができる。加えて、それらはより高い収率で精製することができ、少なくともある精製および貯蔵条件下で対応する天然ポリペプチドよりも良好な溶解性を示す。
【０２１６】
本発明の方法で用いることができるＴＡＣＩタンパク質はモノマーまたはマルチマー（すなわち、ダイマー、トリマー、テトラマーおよびより高次のマルチマー）であってよい。特別な実施形態において、本発明のポリペプチドはモノマー、ダイマー、トリマーまたはテトラマーである。さらなる実施形態において、本発明のマルチマーは少なくともダイマー、少なくともトリマー、または少なくともテトラマーである。タンパク質のＴＮＦファミリーのあるメンバーは、トリマー形態で存在すると信じられている（Ｂｅｕｔｌｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｆｆｅｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４：６６７，１９９４；Ｂａｎｎｅｒ  ら．，Ｃｅｌｌ  ７３：４３１，１９９３）。かくして、トリマーＴＡＣＩは増強された生物学的活性の利点を供することができる。
【０２１７】
特別な実施形態において、マルチマーはホモマーまたはヘテロマーであってよい。本明細書中で用いるように、用語ホモマーとは、（本明細書中に記載されたＴＡＣＩ断片、変異体、および融合タンパク質を含めた）ＴＡＣＩタンパク質のみを含有するマルチマーをいう。これらのホモマーは、同一または異なるポリペプチド配列を有するＴＡＣＩタンパク質を含有することができる。特別な実施形態において、ホモマーは同一のポリペプチド配列を有するＴＡＣＩタンパク質のみを含有するマルチマーである。別の特別な実施形態において、ホモマーは、異なるポリペプチド配列を有するＴＡＣＩタンパク質を含有するマルチマーである。
【０２１８】
本明細書中で用いるように、用語ヘテロマーとは、ＴＡＣＩタンパク質に加えて、異種タンパク質（すなわち、ＴＡＣＩ遺伝子によってコードされたポリペプチド配列に対応しないポリペプチド配列のみを含有するタンパク質）を含有するマルチマーをいう。マルチマーは、疎水性、親水性、イオン性および／または共有結合の結果であってよく、および／または例えば、リポソーム形成によって間接的に連結され得る。かくして、１つの実施形態において、例えば、ホモダイマー、ホモトリマー、ヘテロトリマーまたはヘテロテトラマーのようなマルチマーは、タンパク質が溶液中で相互に接触する場合に形成される。他の実施形態において、マルチマーはＴＡＣＩタンパク質との、および／またはその間の共有結合によって形成される。そのような共有結合は、タンパク質のポリペプチド配列に含まれる１以上のアミノ酸残基を含むことができる。１つの例において、共有結合は、天然（すなわち、天然に生じる）ポリペプチドにおいて相互作用するタンパク質のポリペプチド配列内に位置するシステイン残基の間の架橋である。別の例において、共有結合は化学的または組換え操作の結果である。
【０２１９】
あるいは、そのような共有結合は、ＴＡＣＩ融合タンパク質における異種ポリペプチド配列に含有された１以上のアミノ酸残基を含むことができる。１つの例において、共有結合は融合タンパク質に含有された異種配列の間である（例えば、ここに引用してその内容の全体を援用する、米国特許第５，４７８，９２５号参照）。特別な例において、共有結合は（本明細書中に記載された）ＴＡＣＩ−Ｆｃ融合タンパク質に含有された異種配列の間である。別の特別な例において、融合タンパク質の共有結合は、例えば、オセテオプロテゲリンのような、共有結合によるマルチマーを形成することができる別のＴＮＦファミリーリガンド／受容体メンバーからの異種ポリペプチド配列の間である（例えば、ここに引用してその内容の全体を援用する、国際公開番号ＷＯ９８／４９３０５参照）。別の実施形態において、２以上のＴＡＣＩポリペプチドは合成リンカー（例えば、ペプチド、炭水化物または可溶性ポリマーリンカー）を介して連結される。その例は（ここに引用して援用する）米国特許第５，０７３，６２７号に記載されたペプチドリンカーを含む。ペプチドリンカーによって分離された多数のＴＡＣＩポリペプチドを含むタンパク質は、慣用的な組換えＤＮＡ技術を用いて産生することができる。
【０２２０】
特別な実施形態において、（特異的抗体−抗原結合をアッセイするための当該分野で良く知られたイムノアッセイによって測定して）ＴＡＣＩポリペプチド、ポリペプチド断片、配列番号６の変異体、および／またはＴＡＣＩポリペプチドエピトープに結合する抗体は、本発明の方法で用いることができる。抗ＴＡＣＩ抗体およびその断片は、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ０４／０１１６１１、ＷＯ０１／０８７９７７、ＷＯ０１／６０３９７、およびＷＯ０２／６６５１６；米国特許公開ＵＳ２００５０４３５１６およびＵＳ２００３０１２７８３；およびＣｈ’ｅｎら，（２００５）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３６：７８−８５およびＬｉｕら，（２００３）Ｘｉ  Ｂａｏ  Ｙｕ  Ｆｅｎ  Ｚｉ  Ｍｉａｎ  Ｙｉ  Ｘｕｅ  Ｚａ  Ｚｈｉ  １９：１６８−１６９に記載されている。前記文献の各々を、ここに引用してその全体を援用する。抗体は、限定されるものではないが、ポリクローナル、モノクローナル、多特異的、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体、単一鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生される断片、抗−イディオタイプ（抗−Ｉｄ）抗体（例えば、抗−ＴＡＣＩ抗体に対する抗−Ｉｄ抗体を含む）、および前記のいずれかのエピトープ−結合断片を含む。本明細書中で用いる用語「抗体」とは、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、免疫特異的に抗原に結合する抗原結合部位を含有する分子をいう。免疫グロブリン分子は免疫グロブリン分子のいずれかのタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、またはサブクラスとすることができる。特別な実施形態において、免疫グロブリン分子はＩｇＧ１である。他の特別な実施形態において、免疫グロブリン分子はＩｇＧ４である。
【０２２１】
本発明の方法で用いることができるＴＡＣＩ結合抗体は、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単一−鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、単一−鎖抗体、ジスルフィド−結合Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、およびＶＬまたはＶＨドメインいずれかを含む断片を含む。単一−鎖抗体を含めた抗原−結合抗体断片は、単独の、または以下の：ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインの全てまたは部分と組み合わせた可変領域を含むことができる。また、ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインと共に可変領域のいずれかの組合せも含む抗原−結合断片が含まれる。抗体は、鳥類および哺乳動物を含めたいずれかの動物起源からのものであっても良い。好ましくは、抗体はヒト、ネズミ（例えば、マウスおよびラット）、ロバ、シップウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリである。本明細書中に用いるように、「ヒト」抗体は、ここに引用してその内容の全体を援用する、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉら、による米国特許第５，９３９，５９８号に記載されているように、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、または１以上のヒト免疫グロブリンについてトランスジェニックな動物から単離され、内因性免疫グロブリンを発現しない抗体を含む。
【０２２２】
本発明の方法で用いることができる抗−ＴＡＣＩ抗体は単一特異性、二重特異性、三重特異性またはより大きな多重特異性のものであって良い。多重特異性抗体はＴＡＣＩポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であって良く、またはＴＡＣＩポリペプチド、ならびに異種ポリペプチドまたは固体支持体材料のような異種エピトープ双方に対して特異的であって良い。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９３／１７７１５；ＷＯ９２／０８８０２；ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ  ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９（１９９１）；米国特許第４，４７４，８９３号；第４，７１４，６８１号；第４，９２５，６４８号；第５，５７３，９２０号；第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３（１９９２）参照。
【０２２３】
ＴＡＣＩ抗体はそれらの交差反応性の点で記載し、または特定することができる。ＴＡＣＩポリペプチドの他のアナログ、オルソログ、またはホモログは本発明の方法で用いることができる。特別な実施形態において、ＴＡＣＩ抗体はヒトＴＡＣＩタンパク質のネズミ、ラットおよび／またはウサキセホモログ、およびその対応するエピトープと交差反応するこてができる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗−ＴＡＣＩ抗体はＴＡＣＩのみならず、ＢＣＭＡおよびＢＡＦＦ−Ｒにも結合する。
【０２２４】
本発明の方法で用いることができるＴＡＣＩ抗体は、ＴＡＣＩポリペプチドに対するその結合親和性の点で記載し、または特定することができる。好ましい結合親和性は、５×１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、または１０−１２Ｍ以下の解離定数またはＫＤを持つものを含む。
【０２２５】
本発明の方法で用いることができるＴＡＣＩ抗体はＴＡＣＩポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストとして作用する。例えば、ＴＡＣＩポリペプチドとの受容体／リガンド相互作用を破壊するＴＡＣＩ抗体は部分的にまたは全部が含まれる。また、リガンド結合を妨げないが、受容体活性化を妨げる受容体特異的抗体も含まれる。受容体活性化（すなわち、シグナリング）は、本明細書に記載された、または当該分野で知られた技術によって決定することができる。例えば、受容体活性化は、当該分野で知られた技術、および／または免疫沈澱による受容体またはその基質のリン酸化（例えば、チロシンまたはセリン／スレオニン）を用いて、転写因子ＮＦ−ＡＴ、ＡＰ−１および／またはＮＦ−カッパＢを検出することによって決定することができる。
【０２２６】
特別な実施形態において、共にリガンド結合および受容体活性化を妨げる受容体−特異的ＴＡＣＩ抗体、ならびに受容体リガンド複合体を認識し、好ましくは、未結合受容体または未結合リガンドを特異的に認識しないＴＡＣＩ抗体を本発明の方法で用いることができる。前記ＴＡＣＩ抗体は、当該分野で知られた方法を用いて作成することができる。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／４０２８１；米国特許第５，８１１，０９７号；Ｄｅｎｇら，Ｂｌｏｏｄ  ９２（６）；１９８１−１９８８（１９９８）；Ｃｈｅｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５８（１６）：３６６８−３６７８（１９９８）；Ｈａｒｒｏｐら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（４）；１７８６−１７９４（１９９８）；Ｚｈｕら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５８（１５）３２０９−３２１４（１９９８）；Ｙｏｏｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０（７）：３１７０−３１７９（１９９８）；Ｐｒａｔら，Ｊ．  Ｃｅｌｌ．  Ｓｃｉ．１１１（Ｐｔ２）：２３７−２４７（１９９８）；Ｐｉｔａｒｄら，Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０５（２）：１７７−１９０（１９９７）；Ｌｉａｕｔａｒｄら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ９（４）：２３３−２４１（１９９７）；Ｃａｒｌｓｏｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１７）：１１２９５−１１３０１（１９９７）；Ｔａｒｙｍａｎら，Ｎｅｕｒｏｎ  １４（４）：７５５−７６２（１９９５）；Ｍｕｌｌｅｒ  ら，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ６（９）：１１５３−１１６７（１９９８）；Ｂａｒｔｕｎｅｋら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ８（１）：１４−２０（１９９６）（全て、ここに引用してその全体を援用する）参照。
【０２２７】
Ｅ．ニュートロカイン−アルファ受容体、ＢＣＭＡ
以下に記載したもののようなＢＣＭＡポリペプチドは、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬアンタゴニストとして作用し、本発明の方法で用いることもできる。ＴＲ１８としても知られたＢＣＭＡは、約２０．１ｋＤａの推定分子量を持つ１８４アミノ酸残基（配列番号８）のタンパク質である。ＢＣＭＡをコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列は配列番号７に与えられる。約１〜約５４の推定アミノ酸は細胞外ドメインを構成する（配列番号８）；約５５〜約８０のアミノ酸は膜貫通ドメイン（配列番号８）を構成し；および約８１〜約１８４のアミノ酸は細胞内ドメインを構成する（配列番号８）。
【０２２８】
従って、１つの実施形態において、本発明の方法で用いることができるＢＣＭＡタンパク質は、配列番号８のアミノ酸配列を含むか、あるいはそれよりなる単離されたポリペプチド、または例えば、（配列番号８のアミノ酸１〜５４を含む）ＢＣＭＡ細胞外ドメインおよび／または（配列番号８のアミノ酸８〜４１を含む）ＢＣＭＡシステインリッチなドメインのような、配列番号８の一部を含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド；ならびに前記したポリペプチドに対して少なくとも８０％同一、より好ましくは少なくとも９０％または９５同一、なおより好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるポリペプチドである。
【０２２９】
ＢＣＭＡポリペプチドの参照アミノ酸配列に対して少なくとも、例えば、９５％「同一」であるアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、ポリペプチド配列がＢＣＭＡ受容体の参照アミノ酸の各１００アミノ酸当たり５までのアミノ酸改変を含んでもよいことを除いて、ポリペプチドのアミノ酸配列が参照配列に同一であることを意図する。換言すれば、参照アミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るには、参照配列における５％までのアミノ酸残基を欠失し、または別のアミノ酸で置換することができ、あるいは参照配列における合計アミノ酸残基の５％までのアミノ酸の数を参照配列に挿入することができる。参照配列のこれらの改変は、参照アミノ酸配列のアミノまたはカルボキシ末端位置において、あるいは末端位置の間のどこかで起こることができ、参照配列における残基の間に個々に、または参照配列内の１以上の隣接基において散在し得る。
【０２３０】
ＢＣＭＡのポリペプチド断片は配列番号８に含まれるアミノ酸配列を含むか、あるいはそれよりなるポリペプチドを含む。ポリペプチド断片は「独立して存在」することができるか、あるいは最も好ましくは単一連続領域として、断片が部分または領域を形成するより大きなポリペプチド内に含まれる。さらなる実施形態において、ポリペプチド断片は１以上のＢＣＭＡドメインを含み、あるいはあるいはそれよりなる。好ましいポリペプチド断片は：（ａ）（配列番号８の約１〜約５４のアミノ酸残基を構成すると予測される）ＢＣＭＡ細胞外ドメインを含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド；（ｂ）（配列番号８の約８〜約４１のアミノ酸残基を構成すると予測される）ＢＣＭＡシステインリッチなドメインを含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド；（ｃ）（配列番号８の約５５〜約８０のアミノ酸残基を構成すると予測される）ＢＣＭＡ膜貫通ドメインを含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド；（ｄ）（配列番号８の約８１〜約１８４のアミノ酸残基を構成すると予測される）ＢＣＭＡ細胞内ドメインを含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド；（ｅ）ポリペプチド（ａ）〜（ｄ）のいずれかの組合せから選択されるメンバーを含む。
【０２３１】
ＢＣＭＡの細胞外システインリッチなモチーフはＢＣＭＡおよびそのリガンドの間の相互作用で重要である。従って、好ましい実施形態において、本発明の方法で用いることができるＢＣＭＡポリペプチド断片は、配列番号８のアミノ酸残基８〜４１のアミノ酸配列を含むか、あるいはそれよりなる。システインリッチモチーフのポリペプチド配列に対して少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるポリペプチド配列を含む、あるいはあるいはそれよりなるタンパク質も好ましい。
【０２３２】
本発明の方法で用いることができるＢＣＭＡタンパク質の他の断片は、ＢＣＭＡの構造的または機能的属性によって特徴付けられる断片である。そのような断片は、アルファラセンおよびアルファラセン形成領域（「アルファ領域」）、ベータシートおよびベータシート形成領域（「ベータ領域」）、ターンおよびターン形成領域（「ターン領域」）、コイルおよびコイル形成領域（「コイル領域」）、親水性領域、疎水性領域、アルファ両親媒性領域、ベータ両親媒性領域、表面形成領域、および米国特許出願第１０／７８６，１７６号に議論されたような、完全な（すなわち、全長）ＢＣＭＡ（配列番号８）の（Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆプログラムのデフォルトパラメータを用いて同定された、１．５以上の抗原性指標を有する４以上の連続アミノ酸を含有する）高抗原性指標領域を含む。ある好ましい領域は、限定されるものではないが、これらのコンピュータプログラムのデフォルトパラメータを用いて予測される、Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ予測アルファ−領域、ベータ領域、ターン領域、およびコイル領域；Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ予測アルファ領域、ベータ領域、およびターン領域；Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ予測親水性；Ｈｏｐｐ−Ｗｏｏｄｓ予測疎水性領域；Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇアルファおよびベータ両親媒性領域；Ｅｍｉｎｉ表面−形成領域；およびＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ高抗原性指標領域を含む。
【０２３３】
本発明の方法で用いられるＢＣＭＡポリペプチドは、（（異なるタンパク質の）異種タンパク質配列に結合したペプチドを介して連結されたポリペプチドを含む）融合タンパク質のような修飾された形態で発現され分泌シグナルのみならず、さらなる異種機能領域を含むことができる。あるいは、そのような融合タンパク質は、タンパク質合成技術によって、例えば、ペプチドシンセサイザの使用によって作成することができる。かくして、さらなるアミノ酸、特に荷電したアミノ酸の領域をペプチドのＮ−末端に付加して、精製の間にあるいは引き続いての取り扱いおよび貯蔵の間に宿主細胞における安定性および必要性を改善することができる。また、ペプチド部位をポリペプチドに付加して、精製を容易とすることができる。そのような領域は、ポリペプチドの最終調製に先立って除去することができる。分泌または排出を起こし、安定性を改善し、および精製を容易とするためのペプチド部位のポリペプチドへの付加は、とりわけ当該分野において精通したかつルーチン的な技術である。
【０２３４】
本発明の方法で用いることができる好ましいＢＣＭＡ融合タンパク質は、タンパク質を可溶化するのに有用な免疫グロブリンからの異種領域を含む。例えば、ＥＰ−Ａ−Ｏ  ４６４５３３（カナダ対応出願２０４５８６９）およびＷＯ００／０２４７８２は、別のヒトタンパク質またはその部分と共に、免疫グロブリン分子の定常領域の種々の部分を含む融合タンパク質を開示する。ＢＣＭＡ免疫グロブリン融合タンパク質が、例えば、ここに引用してその全体を援用する、ＰＣＴ公開ＷＯ０１／０８７９７７、ＷＯ０１／０６３９７，およびＷＯ０１／２４８１１、およびＧｏｒｓｓら，（２０００）Ｎａｔｕｒｅ  ４０４：９９５−９９９、Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，（２０００）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９２：１２９−１３５、およびＹｕら、（２０００）Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １：２５２−２５６に記載されている。多くの場合において、融合タンパク質におけるＦｃ部分は、治療および診断で用いるのにかなり有利であり、かくして、例えば、改善された薬物動態学特性をもたらす（ＥＰ−Ａ  ０２３２  ２６２）。他方、いくつかの場合には、融合タンパク質が記載された有利な方法で発現され、検出され、および精製された後に、Ｆｃ部分を欠失することができるのが望ましいであろう。これは、Ｆｃ部分が治療および診断で用いるのに障害となることが判明した場合、例えば、融合タンパク質が免疫化用の抗原として用いるべき場合に当てはまる。薬物発見において、例えば、ｈＩＬ５−受容体のようなヒトタンパク質は、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同定するための高−スループットスクリーニングアッセイの目的で、Ｆｃ部分と融合されている。Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ８：５２−５８（１９９５）およびＫ．Ｊｏｈａｎｓｏｎ  ら．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７０：１６：９４５９−９４７１（１９９５）参照。
【０２３５】
当業者が認識するように、かつ先に議論したように、ＢＣＭＡポリペプチドは他のポリペプチド配列に融合させることができる。例えば、ＢＣＭＡポリペプチドは免疫グロブリンの定常ドメイン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）、その部分（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはそのいずれかの組合せ、およびその部分）、または（限定されるものではないが、組換えヒトアルブミンまたはその断片または変異体（例えば、ここに引用してその全体を援用する、１９９９年３月２日に発行された米国特許第５，８７６，９６９号、ＥＰ特許０  ４１３  ６２２、および１９９８年６月１６日に発行された米国特許第５，７６６，８８３号参照）を含めた）アルブミンと融合させることができ、その結果、キメラポリペプチドがもたらされる。
【０２３６】
そのような融合タンパク質は精製を容易とすることができ、貯蔵寿命を延長することができ、インビボにて半減期を増加させることができる。これは、ヒトＣＤ４−ポリペプチドの最初の２つのドメイン、および哺乳動物免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のドメインよりなるキメラタンパク質で示されている。例えば、ＥＰ  ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４−８６（１９８８）参照。免疫系に対する上皮バリアーを横切っての抗原の増強された送達は、ＩｇＧまたはＦｃ断片のようなＦｃＲｎ結合パートナーにコンジュゲートされた抗原（例えば、インスリン）について示されている（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２２０２４およびＷＯ９９／０４８１３参照）。ＩｇＧ部分ジスルフィド結合のためジスルフィド−結合ダイマー構造を有するＩｇＧ融合タンパク質は、モノマーポリペプチド、またはその断片単独以外の分子の結合および中和においてより効果的であることも判明した。例えば、Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：３９５８−３９６４（１９９５）参照。
【０２３７】
本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、好ましくは遺伝子融合（すなわち、アルブミン融合タンパク質は、ＢＣＭＡの全てまたは部分をコードするポリヌクレオチドがアルブミンの全てまたは部分をコードするポリヌクレオチドとイン−フレームと連結された核酸の翻訳によって生じる）、または相互への化学的結合によって相互に会合した、ＢＣＭＡポリペプチドの少なくとも断片または変異体、およびヒト血清アルブミンの少なくとも断片または変異体を含む。アルブミン融合タンパク質の一部分であったＢＣＭＡポリペプチドおよびアルブミンタンパク質は、アルブミン融合タンパク質の「部分」、「領域」または「部位」ということができる（例えば、「ＢＣＭＡ部分」または「アルブミンタンパク質部分」）。
【０２３８】
別の実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＢＣＭＡポリペプチドおよび血清アルブミンタンパク質を含み、あるいはあるいはそれよりなる。他の実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＢＣＭＡの断片、および血清アルブミンタンパク質を含むか、あるいはそれよりなる。他の実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＢＣＭＡの変異体および血清アルブミンタンパク質を含むか、あるいはそれよりなる。好ましい実施形態において、アルブミン融合タンパク質の血清アルブミンタンパク質成分は血清アルブミンの成熟部分である。
【０２３９】
さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＢＣＭＡポリペプチド、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な断片を含み、あるいはあるいはそれよりなる。さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＢＣＭＡポリペプチド、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な変異体を含み、あるいはあるいはそれよりなる。好ましい実施形態において、アルブミン融合タンパク質のＢＣＭＡ部分は全長ＢＣＭＡポリペプチドである。さらに好ましい実施形態において、アルブミン融合タンパク質のＢＣＭＡ部分はＢＣＭＡポリペプチドの成熟可溶性ドメインである。
【０２４０】
さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＢＣＭＡの断片または変異体、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な断片または変異体を含み、あるいはあるいはそれよりなる。好ましい実施形態において、本発明は、ＢＣＭＡポリペプチドの成熟部分、および血清アルブミンの成熟部分を含む、あるいはあるいはそれよりなるアルブミン融合タンパク質を提供する。
【０２４１】
さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＢＣＭＡの断片または変異体、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な断片または変異体を含み、あるいはあるいはそれよりなる。好ましい実施形態において、本発明は、ＢＣＭＡポリペプチドの成熟部分、および（限定されるものではないが、組換えヒト血清アルブミン、またはその断片または変異体（例えば、ここに引用してその全体を援用する、１９９９年３月２日に発行された米国特許第５，８７６，９６９号、ＥＰ特許０  ４１３  ６２２、および１９９８年６月１６日に発行された米国特許第５，７６６，８８３号参照）を含めた）血清アルブミンの成熟部分を含む、あるいはあるいはそれよりなるアルブミン融合タンパク質を提供する。好ましい実施形態において、（その断片または変異体を含めた）ＢＣＭＡポリペプチドは、ヒト血清アルブミンの成熟形態（すなわち、ここに引用してその全体を援用するＥＰ特許０  ３２２  ０９４の図１および２に示されたヒト血清アルブミンのアミノ酸１〜５８５）と融合させる。別の好ましい実施形態において、（その断片または変異体を含めた）本発明の抗体は、ｘが１〜５８５の整数であるヒト血清アルブミンのアミノ酸残基１−ｘを含む、あるいはあるいはそれよりなるポリペプチド断片に融合され、およびアルブミン断片はヒト血清アルブミン活性を有する。別の好ましい実施形態において、（その断片または変異体を含めた）ＢＣＭＡポリペプチドは、ここに引用してその全体を援用する、米国特許第５，７６６，８８３号に記載されたような、ｚが３６９〜４１９の整数であるヒト血清アルブミンのアミノ酸残基１−ｚを含む、あるいはあるいはそれよりなるポリペプチド断片と融合される。（その断片または変異体を含めた）ＢＣＭＡポリペプチドは、異種タンパク質（例えば、免疫グロブリンＦｃポリペプチドまたはヒト血清アルブミンポリペプチド）のＮ−またはＣ−末端に融合させることができる。
【０２４２】
好ましい実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質で用いられるヒト血清アルブミンタンパク質は、配列番号１１：Ｌｅｕ−４０７をＡｌａに、Ｌｅｕ−４０８をＶａｌに、Ｖａｌ−４０９をＡｌａに、およびＡｒｇ−４１０をＡｌａに；またはＡｒｇ−４１０をＡに、Ｌｙｓ−４１３をＧｌｎに、およびＬｙｓ−４１４をＧｌｎに、を参照する点突然変異の以下の組の一方または双方を含有する（例えば、ここに引用してその全体を援用する国際公開番号ＷＯ  ９５／２３８５７参照）。なおより好ましい実施形態において、点突然変異の前記した組一方または双方を含有する本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、酵母Ｙａｐ３ｐタンパク質分解切断に対して改善された安定性／抵抗性を有し、酵母宿主細胞で発現された組換えアルブミン融合タンパク質の増大した産生を可能とする。
【０２４３】
好ましくは、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、Ｎ−末端部分としてのＨＡ、およびＣ−末端部分としてのＢＣＭＡポリペプチドを含む。あるいは、Ｃ−末端部分としてのＨＡ、およびＮ−末端部分としてのＢＣＭＡポリペプチドを含むアルブミン融合タンパク質を用いることができる。
【０２４４】
他の実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、アルブミンのＮ−末端およびＣ−末端双方に融合されるＢＣＭＡポリペプチドを有する。特別な実施形態においてＮ−およびＣ−末端において融合したＢＣＭＡポリペプチドは同一である。別の実施形態において、Ｎ−およびＣ−末端において融合したＢＣＭＡポリペプチドは異なるＢＣＭＡポリペプチドである。別の実施形態において、ＢＣＭＡポリペプチドはアルブミンのＮ−またはＣ−末端においていずれかにおいて融合しており、および異種ポリペプチドは残りの末端において融合している。
【０２４５】
加えて、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、融合した部分の間のリンカーペプチドを含んで、該部位の間のより大きな物理的分離を供することができる。リンカーペプチドはそれがフレキシブルであるかまたはより剛性であるようにアミノ酸よりなることができる。
【０２４６】
一般に、本発明の方法で用いることができる、アルブミン融合タンパク質は、一つのＨＡ−由来領域および一つのＢＣＭＡ領域を有する。しかしながら、各タンパク質の複数領域を用いて、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質を作成することができる。同様に、１を超えるタンパク質を用いて、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質を作成することができる。例えば、タンパク質をＨＡのＮ−およびＣ−末端双方に融合させることができる。そのような立体配置において、タンパク質部分は同一または異なるタンパク質分子であってよい。二機能的アルブミン融合タンパク質の構造は：Ｘ−ＨＡ−ＹまたはＹ−ＨＡ−Ｘとして表すことができる。
【０２４７】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるＢＣＭＡタンパク質またはその断片または変異体をサイトトキシン（例えば、細胞増殖抑制剤または殺細胞剤）にコンジュゲートすることができる。サイトトキシンまたはサイトトキシン剤は細胞に対して有害ないずれの剤も含む。その例はパクリタキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、マイトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、およびそのアナログまたはホモログを含む。
【０２４８】
別の実施形態において、本発明の方法で用いることができるＢＣＭＡタンパク質、またはその断片または変異体はトキシンにコンジュゲートすることができる。
【０２４９】
「トキシン」とは、規定された条件下で細胞の死滅を引き起こす細胞の表面中または表面上に通常は存在しない、内因性細胞傷害性エフェクター系、放射性同位体、ホロトキシン、修飾されたトキシン、トキシンの触媒サブユニット、またはいずれかの分子または酵素に結合し、それを活性化する１以上の化合物を意味する。使用することができるトキシンは、限定されるものではないが、当該分野で知られた放射性同位体、例えば、固有のまたは誘導された内因性細胞傷害性エフェクター系に結合する抗体（またはその部分を含有する補体固定）、チミジンキナーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮＡｓｅ、アルファトキシン、リシン、アブリン、ジュードモナスエキソトキシンＡ、ジフテリアトキシン、サポリン、モモルジン、ゲロニン、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、アルファ―サルシンおよびコレラトキシンのような化合物を含む。「トキシン」は、細胞増殖抑制剤または殺細胞剤、治療剤または放射性金属イオン、例えば、２１３Ｂｉのようなアルファ―エミッター、または例えば１０３Ｐｄ、１３３Ｘｅ、１３１Ｉ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、３５Ｓ、９０Ｙ、１５３Ｓｍ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、９０イッテリウム、１１７スズ、１８６レニウム、１６６ホロミウム、および１８８レニウムのような他の放射性同位体も含む。
【０２５０】
本発明の方法で用いることができるＢＣＭＡポリペプチドの特徴を改良または改変するためには、タンパク質エンジニアリングを使用することができる。当業者に知られた組換えＤＮＡ技術を用いて、新規な突然変異タンパク質または「単一または多数のアミノ酸置換、欠失、負荷または融合タンパク質を含めたムテイン」を作り出すことができる。そのような修飾されたポリペプチドは、例えば、増強された活性または増強された安定性を示すことができる。加えて、それらはより高い収率で精製することができ、少なくともある精製および貯蔵条件下で対応する天然ポリペプチドよりも良好な溶解性を示す。本発明のなお別の実施形態において、ＢＣＭＡポリペプチド突然変異体は「ドミナントネガティブ」であり得る。この目的では、例えば、ＴＮＦ−保存ドメインのすべてまたは一部を欠如する突然変異体のような欠陥があるＢＣＭＡを用いて、ＢＣＭＡの活性を減少させることができる。非−機能的ＢＭＣＡポリペプチドを組み立てて、結合することができるが、シグナル変換を誘導することができない受容体（例えば、マルチマー）を形成するであろう。
【０２５１】
本発明の方法で用いることができるＢＣＭＡタンパク質はモノマーまたはマルチマー（すなわち、ダイマー、トリマー、テトラマーおよびより高次のマルチマー）であってよい。特別な実施形態において、本発明のポリペプチドはモノマー、ダイマー、トリマーまたはテトラマーである。さらなる実施形態において、本発明のマルチマーは少なくともダイマー、少なくともトリマー、または少なくともテトラマーである。タンパク質のＴＮＦファミリーのあるメンバーは、トリマー形態で存在すると信じられている（Ｂｅｕｔｌｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｆｆｅｌ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４：６６７，１９９４；Ｂａｎｎｅｒら，Ｃｅｌｌ  ７３：４３１，１９９３）。かくして、トリマーＢＣＭＡは増強された生物学的活性の利点を供することができる。
【０２５２】
特別な実施形態において、マルチマーはホモマーまたはヘテロマーであってよい。本明細書中で用いるように、用語ホモマーとは、（本明細書中に記載されたＢＣＭＡ断片、変異体、および融合タンパク質を含めた）ＢＣＭＡタンパク質のみを含有するマルチマーをいう。これらのホモマーは、同一または異なるポリペプチド配列を有するＢＣＭＡタンパク質を含有することができる。特別な実施形態において、ホモマーは同一のポリペプチド配列を有するＢＣＭＡタンパク質のみを含有するマルチマーである。別の特別な実施形態において、ホモマーは、異なるポリペプチド配列を有するＢＣＭＡタンパク質を含有するマルチマーである。
【０２５３】
本明細書中で用いるように、用語ヘテロマーとは、ＢＣＭＡタンパク質に加えて、異種タンパク質（すなわち、ＢＣＭＡ遺伝子によってコードされたポリペプチド配列に対応しないポリペプチド配列のみを含有するタンパク質）を含有するマルチマーをいう。マルチマーは、疎水性、親水性、イオン性および／または共有結合の結果であってよく、および／または例えば、リポソーム形成によって間接的に連結され得る。かくして、一つの実施形態において、例えば、ホモダイマー、ホモトリマー、ヘテロトリマーまたはヘテロテトラマーのようなマルチマーは、タンパク質が溶液中で相互に接触する場合に形成される。他の実施形態において、マルチマーはＢＣＭＡタンパク質との、および／またはその間の共有結合によって形成される。そのような共有結合は、タンパク質のポリペプチド配列に含まれる１以上のアミノ酸残基を含むことができる。一つの例において、共有結合は、天然（すなわち、天然に生じる）ポリペプチドにおいて相互作用するタンパク質のポリペプチド配列内に位置するシステイン残基の間の架橋である。別の例において、共有結合は化学的または組換え操作の結果である。
【０２５４】
あるいは、そのような共有結合は、ＢＣＭＡ融合タンパク質における異種ポリペプチド配列に含有された１以上のアミノ酸残基を含むことができる。一つの例において、共有結合は融合タンパク質に含有された異種配列の間である（例えば、ここに引用してその内容の全体を援用する、米国特許第５，４７８，９２５号参照）。特別な例において、共有結合は（本明細書中に記載された）ＢＣＭＡ−Ｆｃ融合タンパク質に含有された異種配列の間である。別の特別な例において、融合タンパク質の共有結合は、例えば、オセテオプロテゲリンのような、共有結合により会合したマルチマーを形成することができる別のＴＮＦファミリーリガンド／受容体メンバーからの異種ポリペプチド配列の間である（例えば、ここに引用してその内容の全体を援用する、国際公開番号ＷＯ９８／４９３０５参照）。別の実施形態において、２以上のＢＣＭＡポリペプチドは合成リンカー（例えば、ペプチド、炭水化物または可溶性ポリマーリンカー）を介して連結される。その例は（ここに引用して援用する）米国特許第５，０７３，６２７号に記載されたペプチドリンカーを含む。ペプチドリンカーによって分離された多数のＢＣＭＡポリペプチドを含むタンパク質は、慣用的な組換えＤＮＡ技術を用いて産生することができる。
【０２５５】
特別な実施形態において、（特異的抗体−抗原結合をアッセイするための当該分野で良く知られたイムノアッセイによって測定して）ＢＣＭＡポリペプチド、ポリペプチド断片、配列番号８の変異体、および／またはＢＣＭＡポリペプチドエピトープに結合する抗体は、本発明の方法で用いることができる。抗−ＢＣＭＡ抗体およびその断片は、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ０１／０８７９７７、ＷＯ０１／６０３９７、およびＷＯ０２／６６５１６およびＣｈ’ｅｎら，（２００５）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３６：７８−８５記載されている。前記文献の各々を、ここに引用してその全体を援用する。抗体は、限定されるものではないが、ポリクローナル、モノクローナル、多重特異性、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体、単一鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生される断片、抗−イディオタイプ（抗−Ｉｄ）抗体（例えば、抗−ＢＣＭＡ抗体に対する抗−Ｉｄ抗体を含む）、および前記のいずれかのエピトープ−結合断片を含む。本明細書中で用いる用語「抗体」とは、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、免疫特異的に抗原に結合する抗原結合部位を含有する分子をいう。免疫グロブリン分子は免疫グロブリン分子のいずれかのタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、またはサブクラスとすることができる。特別な実施形態において、免疫グロブリン分子はＩｇＧ１である。他の特別な実施形態において、免疫グロブリン分子はＩｇＧ４である。
【０２５６】
本発明の方法で用いることができるＢＣＭＡ結合抗体は、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単一鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、単一鎖抗体、ジスルフィド−結合Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、およびＶＬまたはＶＨドメインいずれかを含む断片を含む。単一鎖抗体を含めた抗原−結合抗体断片は、単独の、または以下の：ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインの全てまたは部分と組み合わせた可変領域を含むことができる。また、ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインと共に可変領域のいずれかの組合せも含む抗原−結合断片が含まれる。抗体は、鳥類および哺乳動物を含めたいずれかの動物起源からのものであっても良い。好ましくは、抗体はヒト、ネズミ（例えば、マウスおよびラット）、ロバ、シップウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリである。本明細書中に用いるように、「ヒト」抗体は、ここに引用してその内容の全体を援用する、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによる米国特許第５，９３９，５９８号に記載されているように、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、または１以上のヒト免疫グロブリンについてトランスジェニックな動物から単離され、内因性免疫グロブリンを発現しない抗体を含む。
【０２５７】
本発明の方法で用いることができる抗−ＢＣＭＡ抗体は単一特異性、二重特異性、三重特異性またはより大きな多重特異性のものであって良い。多重特異性抗体はＢＣＭＡポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であって良く、またはＢＣＭＡポリペプチド、ならびに異種ポリペプチドまたは固体支持体材料のような異種エピトープ双方に対して特異的であって良い。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９３／１７７１５；ＷＯ９２／０８８０２；ＷＯ９１／００３６０；Ｗ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９（１９９１）；米国特許第４，４７４，８９３号；第４，７１４，６８１号；第４，９２５，６４８号；第５，５７３，９２０号；第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３（１９９２）参照。
【０２５８】
ＢＣＭＡ抗体はそれらの交差反応性の点で記載し、または特定することができる。ＢＣＭＡポリペプチドの他のアナログ、オルソログ、またはホモログは本発明の方法で用いることができる。特別な実施形態において、ＢＣＭＡ抗体はヒトＢＣＭＡタンパク質のネズミ、ラットおよび／またはウサギホモログ、およびその対応するエピトープと交差反応することができる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗−ＢＣＭＡ抗体はＢＣＭＡのみならず、ＴＡＣＩおよびＢＡＦＦ−Ｒにも結合する。
【０２５９】
本発明の方法で用いることができるＢＣＭＡ抗体は、ＢＣＭＡポリペプチドに対するその結合親和性の点で記載し、または特定することができる。好ましい結合親和性は、５×１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、または１０−１２Ｍ以下の解離定数またはＫＤを持つものを含む。
【０２６０】
本発明の方法で用いることができるＢＣＭＡ抗体はＢＣＭＡポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストとして作用する。例えば、ＢＣＭＡポリペプチドとの受容体／リガンド相互作用を破壊するＢＣＭＡ抗体は部分的にまたは全部が含まれる。また、リガンド結合を妨げないが、受容体活性化を妨げる受容体特異的抗体も含まれる。受容体活性化（すなわち、シグナリング）は、本明細書に記載された、または当該分野で知られた技術によって決定することができる。例えば、受容体活性化は、当該分野で知られた技術、および／または免疫沈澱による受容体またはその基質のリン酸化（例えば、チロシンまたはセリン／スレオニン）を用いて、転写因子ＮＦ−ＡＴ、ＡＰ−１および／またはＮＦ−カッパＢを検出することによって決定することができる。
【０２６１】
特別な実施形態において、共にリガンド結合および受容体活性化を妨げる受容体−特異的ＢＣＭＡ抗体、ならびに受容体リガンド複合体を認識し、好ましくは、未結合受容体または未結合リガンドを特異的に認識しないＢＣＭＡ抗体を本発明の方法で用いることができる。前記ＢＣＭＡ抗体は、当該分野で知られた方法を用いて作成することができる。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／４０２８１；米国特許第５，８１１，０９７号；Ｄｅｎｇら，Ｂｌｏｏｄ  ９２（６）；１９８１−１９８８（１９９８）；Ｃｈｅｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８（１６）：３６６８−３６７８（１９９８）；Ｈａｒｒｏｐら，Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（４）；１７８６−１７９４（１９９８）；Ｚｈｕら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８（１５）３２０９−３２１４（１９９８）；Ｙｏｏｎら，  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０（７）：３１７０−３１７９（１９９８）；Ｐｒａｔら，Ｊ．  Ｃｅｌｌ．  Ｓｃｉ．１１１（Ｐｔ２）：２３７−２４７（１９９８）；Ｐｉｔａｒｄら，Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０５（２）：１７７−１９０（１９９７）；Ｌｉａｕｔａｒｄら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ９（４）：２３３−２４１（１９９７）；Ｃａｒｌｓｏｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１７）：１１２９５−１１３０１（１９９７）；Ｔａｒｙｍａｎら，Ｎｅｕｒｏｎ  １４（４）：７５５−７６２（１９９５）；Ｍｕｌｌｅｒら，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ６（９）：１１５３−１１６７（１９９８）；Ｂａｒｔｕｎｅｋら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ８（１）：１４−２０（１９９６）（全て、ここに引用してその全体を援用する）参照。
【０２６２】
Ｆ．ニュートロカイン−アルファ受容体、ＢＡＦＦ−Ｒ
以下に記載したもののようなＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドは、ニュートロカイン−アルファおよび／またはＡＰＲＩＬアンタゴニストとして作用し、本発明の方法で用いることもできる。ＴＲ２１としても知られたＢＡＦＦ−Ｒは、約１８．９ｋＤａの推定分子量を持つ１８４アミノ酸残基（配列番号１０）のタンパク質である。ＢＡＦＦ−ＲをコードするｃＤＮＡのヌクレオチド配列は配列番号９に与えられる。約１〜約８１の推定アミノ酸は細胞外ドメインを構成する（配列番号１０）；約８２〜約１０１のアミノ酸は膜貫通ドメイン（配列番号１０）を構成し；および約１０２〜約１８４のアミノ酸は細胞内ドメインを構成する（配列番号１０）。
【０２６３】
従って、１つの実施形態において、本発明の方法で用いることができるＢＡＦＦ−Ｒタンパク質は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むか、あるいはそれよりなる単離されたポリペプチド、または例えば、（配列番号１０のアミノ酸１〜８１を含む）ＢＡＦＦ−Ｒ細胞外ドメインおよび／または（配列番号１０のアミノ酸１９〜３５を含む）ＢＡＦＦ−Ｒシステインリッチなドメインのような、配列番号１０の一部を含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド；ならびに前記したポリペプチドに対して少なくとも８０％同一、より好ましくは少なくとも９０％または９５％同一、なおより好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるポリペプチドである。
【０２６４】
別の実施形態において、本発明の方法で用いることができるＢＡＦＦ−Ｒタンパク質は、配列番号１０のアミノ酸１〜７０および／または配列番号２６のアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドである。配列番号２６はＢＡＦＦ−Ｒのアミノ酸１〜７０を示し、ここに、ＢＡＦＦ−Ｒにおけるアミノ酸２０（バリン）はアスパラギンで置換されており、ＢＡＦＦ−Ｒにおけるアミノ酸２７（ロイシン）はプロリンで置換されている。別の実施形態において、本発明の方法で用いることができるＢＡＦＦ−Ｒタンパク質は、配列番号２６のアミノ酸２〜７０を含む単離されたポリペプチドである。前記したポリペプチドに対して少なくとも８０％同一、より好ましくは少なくとも９０％または９５％同一、なおより好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％、９９％または１００％同一であるポリペプチドを本発明の方法で用いることができる。
【０２６５】
ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドの参照アミノ酸配列に対して少なくとも、例えば、９５％「同一」であるアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、ポリペプチド配列がＢＡＦＦ−Ｒ受容体の参照アミノ酸の各１００アミノ酸当たり５までのアミノ酸改変を含んでもよいことを除いて、ポリペプチドのアミノ酸配列が参照配列に同一であることを意図する。換言すれば、参照アミノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るには、参照配列における５％までのアミノ酸残基を欠失し、または別のアミノ酸で置換することができ、あるいは参照配列における合計アミノ酸残基の５％までのアミノ酸の数を参照配列に挿入することができる。参照配列のこれらの改変は、参照アミノ酸配列のアミノまたはカルボキシ末端位置において、あるいは末端位置の間のどこかで起こることができ、参照配列における残基の間に個々に、または参照配列内の１以上の隣接基において散在し得る。
【０２６６】
ＢＡＦＦ−Ｒのポリペプチド断片は配列番号１０に含まれるアミノ酸配列を含むか、あるいはそれよりなるポリペプチドを含む。ポリペプチド断片は「独立して存在」することができるか、あるいは最も好ましくは単一連続領域として、断片が部分または領域を形成するより大きなポリペプチド内に含まれる。さらなる実施形態において、ポリペプチド断片は１以上のＢＡＦＦ−Ｒドメインを含み、あるいはあるいはそれよりなる。好ましいポリペプチド断片は：（ａ）（配列番号１０の約１〜約８１のアミノ酸残基を構成すると予測される）ＢＡＦＦ−Ｒ細胞外ドメインを含むか、あるいはそれよりなるポリペプチド；（ｂ）（配列番号１０の約１９〜約３５のアミノ酸残基を構成すると予測される）ＢＡＦＦ−Ｒシステインリッチなドメインを含む、あるいはあるいはそれよりなるポリペプチド；（ｃ）（配列番号１０の約８２〜約１０１のアミノ酸残基を構成すると予測される）ＢＡＦＦ−Ｒ膜貫通ドメインを含む、あるいはあるいはそれよりなるポリペプチド；（ｄ）（配列番号１０の約１０２〜約１８４のアミノ酸残基を構成すると予測される）ＢＡＦＦ−Ｒ細胞内ドメインを含む、あるいはあるいはそれよりなるポリペプチド；（ｅ）ポリペプチド（ａ）〜（ｄ）のいずれかの組合せから選択されるメンバーを含む。
【０２６７】
ＢＡＦＦ−Ｒの細胞外システインリッチなモチーフはＢＡＦＦ−Ｒおよびそのリガンド、ニュートロカイン−アルファおよびＡＰＲＩＬの間の相互作用で重要である。従って、好ましい実施形態において、本発明の方法で用いることができるＢＡＦＦ−Ｒポリペプチド断片は、配列番号１０のアミノ酸残基１９〜３５のアミノ酸配列を含むか、あるいはそれよりなる。システインリッチモチーフのポリペプチド配列に対して少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるポリペプチド配列を含む、あるいはあるいはそれよりなるタンパク質も好ましい。
【０２６８】
本発明の方法で用いることができるＢＡＦＦ−Ｒタンパク質の他の断片は、ＢＡＦＦ−Ｒの構造的または機能的属性によって特徴付けられる断片である。そのような断片は、アルファラセンおよびアルファ−ラセン形成領域（「アルファ領域」）、ベータシートおよびベータシート形成領域（「ベータ領域」）、ターンおよびターン形成領域（「ターン領域」）、コイルおよびコイル形成領域（「コイル領域」）、親水性領域、疎水性領域、アルファ両親媒性領域、ベータ両親媒性領域、表面形成領域、および米国特許第７，１１２，４１０号に議論されたような、完全な（すなわち、全長）ＢＡＦＦ−Ｒ（配列番号１０）の（Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆプログラムのデフォルトパラメータを用いて同定された、１．５以上の抗原性指標を有する４以上の連続アミノ酸を含有する）高抗原性指標領域を含む。ある好ましい領域は、限定されるものではないが、これらのコンピュータプログラムのデフォルトパラメータを用いて予測される、Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ予測アルファ領域、ベータ領域、ターン領域、およびコイル領域；Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ予測アルファ領域、ベータ領域、およびターン領域；Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ予測親水性；Ｈｏｐｐ−Ｗｏｏｄｓ予測疎水性領域；Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇアルファおよびベータ両親媒性領域；Ｅｍｉｎｉ表面形成領域；およびＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ高抗原性指標領域を含む。
【０２６９】
本発明の方法で用いられるＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドは、（（異なるタンパク質の）異種タンパク質配列に結合したペプチドを介して連結されたポリペプチドを含む）融合タンパク質のような修飾された形態で発現され、分泌シグナルのみならず、さらなる異種機能領域を含むことができる。あるいは、そのような融合タンパク質は、タンパク質合成技術によって、例えば、ペプチドシンセサイザの使用によって作成することができる。かくして、さらなるアミノ酸、特に荷電したアミノ酸の領域をペプチドのＮ−末端に付加して、精製の間にあるいは引き続いての取り扱いおよび貯蔵の間に宿主細胞における安定性および必要性を改善することができる。また、ペプチド部位をポリペプチドに付加して、精製を容易とすることができる。そのような領域は、ポリペプチドの最終調製に先立って除去することができる。分泌または排出を起こし、安定性を改善し、および精製を容易とするためのペプチド部位のポリペプチドへの付加は、とりわけ当該分野において精通したかつルーチン的な技術である。
【０２７０】
本発明の方法で用いることができる好ましいＢＡＦＦ−Ｒ融合タンパク質は、タンパク質を可溶化するのに有用な免疫グロブリンからの異種領域を含む。例えば、ＥＰ−Ａ−Ｏ  ４６４５３３（カナダ対応出願２０４５８６９）およびＷＯ００／００２４７８２は、別のヒトタンパク質またはその部分と共に、免疫グロブリン分子の定常領域の種々の部分を含む融合タンパク質を開示する。ＢＡＦＦ−Ｒ免疫グロブリン融合タンパク質が、例えば、ここに引用してその全体を援用する、Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒら，（２００３）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８：３３１２７−３３１３３およびＣａｒｔｅｒら，（２００５）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ５２：３９４３−３９５４に記載されている。多くの場合において、融合タンパク質におけるＦｃ部分は、治療および診断で用いるのにかなり有利であり、かくして、例えば、改善された薬物動態学特性をもたらす（ＥＰ−Ａ  ０２３２  ２６２）。他方、いくつかの場合には、融合タンパク質が記載された有利な方法で発現され、検出され、および精製された後に、Ｆｃ部分を欠失することができるのが望ましいであろう。これは、Ｆｃ部分が治療および診断で用いるのに障害となることが判明した場合、例えば、融合タンパク質が免疫化用の抗原として用いるべき場合に当てはまる。
薬物発見において、例えば、ｈＩＬ５−受容体のようなヒトタンパク質は、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同定するための高スループットスクリーニングアッセイの目的で、Ｆｃ部分と融合されている。Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔ  ら．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ８：５２−５８（１９９５）およびＫ．Ｊｏｈａｎｓｏｎ  ら．，Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７０：１６：９４５９−９４７１（１９９５）参照。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃ融合タンパク質はＢＲ３−Ｆｃである。
【０２７１】
当業者が認識するように、かつ先に議論したように、ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドは他のポリペプチド配列に融合させることができる。例えば、ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドは免疫グロブリンの定常ドメイン（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）、その部分（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはそのいずれかの組合せ、およびその部分）、または（限定されるものではないが、組換えヒトアルブミンまたはその断片または変異体（例えば、ここに引用してその全体を援用する、１９９９年３月２日に発行された米国特許第５，８７６，９６９号、ＥＰ特許０  ４１３  ６２２、および１９９８年６月１６日に発行された米国特許第５，７６６，８８３号参照）を含めた）アルブミンと融合させることができ、その結果、キメラポリペプチドがもたらされる。
【０２７２】
そのような融合タンパク質は精製を容易とすることができ、貯蔵寿命を延長することができ、インビボにて半減期を増加させることができる。これは、ヒトＣＤ４−ポリペプチドの最初の２つのドメイン、および哺乳動物免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のドメインよりなるキメラタンパク質で示されている。例えば、ＥＰ  ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４−８６（１９８８）参照。免疫系に対する上皮バリアーを横切っての抗原の増強された送達は、ＩｇＧまたはＦｃ断片のようなＦｃＲｎ結合パートナーにコンジュゲートされた抗原（例えば、インスリン）について示されている（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２２０２４およびＷＯ９９／０４８１３参照）。ＩｇＧ部分ジスルフィド結合のためジスルフィド結合ダイマー構造を有するＩｇＧ融合タンパク質は、モノマーポリペプチド、またはその断片単独以外の分子の結合および中和においてより効果的であることも判明した。例えば、Ｆｏｕｎｔｏｕｎａｋｉｓら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：３９５８−３９６４（１９９５）参照。
【０２７３】
ＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質の１つの例は、ＩｇＧ１免疫グロブリン分子のＦｃ領域に融合した配列番号１０のアミノ酸１〜７０である。所望により、ＢＡＦＦ−Ｒにおけるアミノ酸２０（バリン）はアスパラギンで置換されており、ＢＡＦＦ−Ｒにおけるアミノ酸２７（ロイシン）はプロリンで置換されている。配列番号２６は、これらの２つのアミノ酸が変化したＢＡＦＦ−Ｒのアミノ酸１〜７０を示す。
【０２７４】
本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、好ましくは遺伝子融合（すなわち、アルブミン融合タンパク質は、ＢＡＦＦ−Ｒの全てまたは部分をコードするポリヌクレオチドがアルブミンの全てまたは部分をコードするポリヌクレオチドとインフレームとライゲーションされた核酸の翻訳によって生じる）、または相互への化学的結合によって相互に結合した、ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドの少なくとも断片または変異体、およびヒト血清アルブミンの少なくとも断片または変異体を含む。アルブミン融合タンパク質の一部分であったＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドおよびアルブミンタンパク質は、アルブミン融合タンパク質の「部分」、「領域」または「部位」ということができる（例えば、「ＢＡＦＦ−Ｒ部分」または「アルブミンタンパク質部分」）。
【０２７５】
別の実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドおよび血清アルブミンタンパク質を含み、あるいはあるいはそれよりなる。他の実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＢＡＦＦ−Ｒの断片、および血清アルブミンタンパク質を含むか、あるいはそれよりなる。他の実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＢＡＦＦ−Ｒの変異体および血清アルブミンタンパク質を含むか、あるいはそれよりなる。好ましい実施形態において、アルブミン融合タンパク質の血清アルブミンタンパク質成分は血清アルブミンの成熟部分である。
【０２７６】
さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチド、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な断片を含み、あるいはあるいはそれよりなる。さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチド、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な変異体を含み、あるいはあるいはそれよりなる。好ましい実施形態において、アルブミン融合タンパク質のＢＡＦＦ−Ｒ部分は全長ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドである。さらに好ましい実施形態において、アルブミン融合タンパク質のＢＡＦＦ−Ｒ部分はＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドの成熟可溶性ドメインである。
【０２７７】
さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＢＡＦＦ−Ｒの断片または変異体、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な断片または変異体を含み、あるいはあるいはそれよりなる。好ましい実施形態において、本発明は、ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドの成熟部分、および血清アルブミンの成熟部分を含む、あるいはあるいはそれよりなるアルブミン融合タンパク質を提供する。
【０２７８】
さらなる実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、ＢＡＦＦ−Ｒの断片または変異体、および血清アルブミンの生物学的に活性なおよび／または治療的に活性な断片または変異体を含み、あるいはあるいはそれよりなる。好ましい実施形態において、本発明は、ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドの成熟部分、および（限定されるものではないが、組換えヒト血清アルブミン、またはその断片または変異体（例えば、ここに引用してその全体を援用する、１９９９年３月２日に発行された米国特許第５，８７６，９６９号、ＥＰ特許０  ４１３  ６２２、および１９９８年６月１６日に発行された米国特許第５，７６６，８８３号参照）を含めた）血清アルブミンの成熟部分を含む、あるいはあるいはそれよりなるアルブミン融合タンパク質を提供する。好ましい実施形態において、（その断片または変異体を含めた）ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドは、ヒト血清アルブミンの成熟形態（すなわち、ここに引用してその全体を援用するＥＰ特許０  ３２２  ０９４の図１および２に示されたヒト血清アルブミンのアミノ酸１〜５８５）と融合させる。別の好ましい実施形態において、（その断片または変異体を含めた）本発明の抗体は、ｘが１〜５８５の整数であるヒト血清アルブミンのアミノ酸残基１−ｘを含む、あるいはあるいはそれよりなるポリペプチド断片に融合され、およびアルブミン断片はヒト血清アルブミン活性を有する。別の好ましい実施形態において、（その断片または変異体を含めた）ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドは、ここに引用してその全体を援用する、米国特許第５，７６６，８８３号に記載されたような、ｚが３６９〜４１９の整数であるヒト血清アルブミンのアミノ酸残基１−ｚを含む、あるいはあるいはそれよりなるポリペプチド断片と融合される。（その断片または変異体を含めた）ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドは、異種タンパク質（例えば、免疫グロブリンＦｃポリペプチドまたはヒト血清アルブミンポリペプチド）のＮ−またはＣ−末端に融合させることができる。
【０２７９】
好ましい実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質で用いられるヒト血清アルブミンタンパク質は、配列番号１１：Ｌｅｕ−４０７をＡｌａに、Ｌｅｕ−４０８をＶａｌに、Ｖａｌ−４０９をＡｌａに、およびＡｒｇ−４１０をＡｌａに；またはＡｒｇ−４１０をＡに、Ｌｙｓ−４１３をＧｌｎに、およびＬｙｓ−４１４をＧｌｎに、を参照する点突然変異の以下の組の一方または双方を含有する（例えば、ここに引用してその全体を援用する国際公開番号ＷＯ９５／２３８５７参照）。なおより好ましい実施形態において、点突然変異の前記した組一方または双方を含有する本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、酵母Ｙａｐ３ｐタンパク質分解切断に対して改善された安定性／抵抗性を有し、酵母宿主細胞で発現された組換えアルブミン融合タンパク質の増大した産生を可能とする。
【０２８０】
好ましくは、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、Ｎ−末端部分としてのＨＡ、およびＣ−末端部分としてのＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドを含む。あるいは、Ｃ−末端部分としてのＨＡ、およびＮ−末端部分としてのＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドを含むアルブミン融合タンパク質を用いることができる。
【０２８１】
他の実施形態において、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、アルブミンのＮ−末端およびＣ−末端双方に融合されるＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドを有する。特別な実施形態においてＮ−およびＣ−末端において融合したＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドは同一である。別の実施形態において、Ｎ−およびＣ−末端において融合したＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドは異なるＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドである。別の実施形態において、ＢＡＦＦ−ＲポリペプチドはアルブミンのＮ−またはＣ−末端においていずれかにおいて融合しており、および異種ポリペプチドは残りの末端において融合している。
【０２８２】
加えて、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質は、融合した部分の間のリンカーペプチドを含んで、該部位の間のより大きな物理的分離を供することができる。リンカーペプチドはそれがフレキシブルであるかまたはより剛性であるようにアミノ酸よりなることができる。
【０２８３】
一般に、本発明の方法で用いることができる、アルブミン融合タンパク質は、一つのＨＡ−由来領域および一つのＢＡＦＦ−Ｒ領域を有する。しかしながら、各タンパク質の複数領域を用いて、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質を作成することができる。同様に、１を超えるタンパク質を用いて、本発明の方法で用いることができるアルブミン融合タンパク質を作成することができる。例えば、タンパク質をＨＡのＮ−およびＣ−末端双方に融合させることができる。そのような立体配置において、タンパク質部分は同一または異なるタンパク質分子であってよい。二機能的アルブミン融合タンパク質の構造は：Ｘ−ＨＡ−ＹまたはＹ−ＨＡ−Ｘとして表すことができる。
【０２８４】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるＢＡＦＦ−Ｒタンパク質またはその断片または変異体をサイトトキシン（例えば、細胞増殖抑制剤または殺細胞剤）にコンジュゲートすることができる。サイトトキシンまたはサイトトキシン剤は細胞に対して有害ないずれの剤も含む。その例はパクリタキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、マイトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、およびそのアナログまたはホモログを含む。
【０２８５】
別の実施形態において、本発明の方法で用いることができるＢＡＦＦ−Ｒタンパク質、またはその断片または変異体はトキシンにコンジュゲートすることができる。
【０２８６】
「トキシン」とは、規定された条件下で細胞の死滅を引き起こす細胞の表面中または表面上に通常は存在しない、内因性細胞傷害性エフェクター系、放射性同位体、ホロトキシン、修飾されたトキシン、トキシンの触媒サブユニット、またはいずれかの分子または酵素に結合し、それを活性化する１以上の化合物を意味する。使用することができるトキシンは、限定されるものではないが、当該分野で知られた放射性同位体、例えば、固有のまたは誘導された内因性細胞傷害性エフェクター系に結合する抗体（またはその部分を含有する補体固定）、チミジンキナーゼ、エンドヌクレアーゼ、ＲＮＡｓｅ、アルファトキシン、リシン、アブリン、ジュードモナスエキソトキシンＡ、ジフテリアトキシン、サポリン、モモルジン、ゲロニン、アメリカヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、アルファ―サルシンおよびコレラトキシンのような化合物を含む。「トキシン」は、細胞増殖抑制剤または殺細胞剤、治療剤または放射性金属イオン、例えば、２１３Ｂｉのようなアルファ―エミッター、または例えば１０３Ｐｄ、１３３Ｘｅ、１３１Ｉ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、３５Ｓ、９０Ｙ、１５３Ｓｍ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、９０イットリウム、１１７スズ、１８６レニウム、１６６ホロミウム、および１８８レニウムのような他の放射性同位体も含む。
【０２８７】
本発明の方法で用いることができるＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドの特徴を改良または改変するためには、タンパク質エンジニアリングを使用することができる。当業者に知られた組換えＤＮＡ技術を用いて、新規な突然変異タンパク質または「単一または多数のアミノ酸置換、欠失、負荷または融合タンパク質を含めたムテイン」を作り出すことができる。そのような修飾されたポリペプチドは、例えば、増強された活性または増強された安定性を示すことができる。加えて、それらはより高い収率で精製することができ、少なくともある精製および貯蔵条件下で対応する天然ポリペプチドよりも良好な溶解性を示す。本発明のなお別の実施形態において、ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチド突然変異体は「ドミナントネガティブ」であり得る。この目的では、例えば、ＴＮＦ−保存ドメインの全てまたは一部を欠如する突然変異体のような欠陥があるＢＡＦＦ−Ｒを用いて、ＢＡＦＦ−Ｒの活性を減少させることができる。非機能的ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドを組み立てて、結合することができるが、シグナル変換を誘導することができない受容体（例えば、マルチマー）を形成するであろう。
【０２８８】
本発明の方法で用いることができるＢＡＦＦ−Ｒタンパク質はモノマーまたはマルチマー（すなわち、ダイマー、トリマー、テトラマーおよびより高次のマルチマー）であってよい。特別な実施形態において、本発明のポリペプチドはモノマー、ダイマー、トリマーまたはテトラマーである。さらなる実施形態において、本発明のマルチマーは少なくともダイマー、少なくともトリマー、または少なくともテトラマーである。タンパク質のＴＮＦファミリーのあるメンバーは、トリマー形態で存在すると考えられている（Ｂｅｕｔｌｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｆｆｅｌ，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４：６６７，１９９４；Ｂａｎｎｅｒ  ら．，Ｃｅｌｌ  ７３：４３１，１９９３）。かくして、トリマーＢＡＦＦ−Ｒは増強された生物学的活性の利点を供することができる。
【０２８９】
特別な実施形態において、マルチマーはホモマーまたはヘテロマーであってよい。本明細書中で用いるように、用語ホモマーとは、（本明細書中に記載されたＢＡＦＦ−Ｒ断片、変異体、および融合タンパク質を含めた）ＢＡＦＦ−Ｒタンパク質のみを含有するマルチマーをいう。これらのホモマーは、同一または異なるポリペプチド配列を有するＢＡＦＦ−Ｒタンパク質を含有することができる。特別な実施形態において、ホモマーは同一のポリペプチド配列を有するＢＡＦＦ−Ｒタンパク質のみを含有するマルチマーである。別の特別な実施形態において、ホモマーは、異なるポリペプチド配列を有するＢＡＦＦ−Ｒタンパク質を含有するマルチマーである。
【０２９０】
本明細書中で用いるように、用語ホモマーとは、ＢＡＦＦ−Ｒタンパク質に加えて、異種タンパク質（すなわち、ＢＡＦＦ−Ｒ遺伝子によってコードされたポリペプチド配列に対応しないポリペプチド配列のみを含有するタンパク質）を含有するマルチマーをいう。マルチマーは、疎水性、親水性、イオン性および／または共有結合の結果であってよく、および／または例えば、リポソーム形成によって間接的に連結され得る。かくして、一つの実施形態において、例えば、ホモダイマー、ホモトリマー、ヘテロトリマーまたはヘテロテトラマーのようなマルチマーは、タンパク質が溶液中で相互に接触する場合に形成される。他の実施形態において、マルチマーはＢＡＦＦ−Ｒタンパク質との、および／またはその間の共有結合によって形成される。そのような共有結合は、タンパク質のポリペプチド配列に含まれる１以上のアミノ酸残基を含むことができる。一つの例において、共有結合は、天然（すなわち、天然に生じる）ポリペプチドにおいて相互作用するタンパク質のポリペプチド配列内に位置するシステイン残基の間の架橋である。別の例において、共有結合は化学的または組換え操作の結果である。
【０２９１】
あるいは、そのような共有結合は、ＢＡＦＦ−Ｒ融合タンパク質における異種ポリペプチド配列に含有された１以上のアミノ酸残基を含むことができる。一つの例において、共有結合は融合タンパク質に含有された異種配列の間である（例えば、ここに引用してその内容の全体を援用する、米国特許第５，４７８，９２５号参照）。特別な例において、共有結合は（本明細書中に記載された）ＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃ融合タンパク質に含有された異種配列の間である。別の特別な例において、融合タンパク質の共有結合は、例えば、オセテオプロテゲリンのような、共有結合により会合したマルチマーを形成することができる別のＴＮＦファミリーリガンド／受容体メンバーからの異種ポリペプチド配列の間である（例えば、ここに引用してその内容の全体を援用する、国際公開番号ＷＯ９８／４９３０５参照）。別の実施形態において、２以上のＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドは合成リンカー（例えば、ペプチド、炭水化物または可溶性ポリマーリンカー）を介して連結される。その例は（ここに引用して援用する）米国特許第５，０７３，６２７号に記載されたペプチドリンカーを含む。ペプチドリンカーによって分離された多数のＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドを含むタンパク質は、慣用的な組換えＤＮＡ技術を用いて産生することができる。
【０２９２】
特別な実施形態において、（特異的抗体−抗原結合をアッセイするための当該分野で良く知られたイムノアッセイによって測定して）ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチド、ポリペプチド断片、配列番号１０の変異体、および／またはＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドエピトープに結合する抗体は、本発明の方法で用いることができる。抗ＢＡＦＦ−Ｒ抗体およびその断片は、例えば、Ｌｅｅら，（２００６）Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｈａｔ  ｍｉｍｉｃ  ＢＡＦＦ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｔａｒｇｅｔ  ｂｏｔｈ  ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  ｍｕｒｉｎｅ  Ｂ  Ｃｅｌｌｓ  Ｂｌｏｏｄ（２００６年７月１３日にオンラインで予め公開されたＢｌｏｏｄ  Ｆｉｒｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ  Ｐａｐｅｒ）  Ｖｏｌ．０，Ｎｏ．２００６，ｐｐ．２００６０３０１１，Ｃｈ’ｅｎら，（２００５）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３６：７８−８５，Ｎａｋａｍｕｒａら，（２００５）Ｖｉｒｃｈｏｗｓ  Ａｒｃｈ  ４４７：５３−６０、およびＣａｒｔｅｒら，（２００５）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ５２：３９４３−３９５４に記載されている。前記文献の各々を、ここに引用してその全体を援用する。抗体は、限定されるものではないが、ポリクローナル、モノクローナル、多特異的、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体、単一鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生される断片、抗イディオタイプ（抗−Ｉｄ）抗体（例えば、抗−ＢＡＦＦ−Ｒ抗体に対する抗−Ｉｄ抗体を含む）、および前記のいずれかのエピトープ結合断片を含む。本明細書中で用いる用語「抗体」とは、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、免疫特異的に抗原に結合する抗原結合部位を含有する分子をいう。免疫グロブリン分子は免疫グロブリン分子のいずれかのタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、またはサブクラスとすることができる。特別な実施形態において、免疫グロブリン分子はＩｇＧ１である。他の特別な実施形態において、免疫グロブリン分子はＩｇＧ４である。
【０２９３】
本発明の方法で用いることができるＢＡＦＦ−Ｒ結合抗体は、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単一鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、単一鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、およびＶＬまたはＶＨドメインいずれかを含む断片を含む。単一鎖抗体を含めた抗原結合抗体断片は、単独の、または以下の：ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインの全てまたは部分と組み合わせた可変領域を含むことができる。また、ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインと共に可変領域のいずれかの組合せも含む抗原−結合断片が含まれる。抗体は、鳥類および哺乳動物を含めたいずれかの動物起源からのものであっても良い。好ましくは、抗体はヒト、ネズミ（例えば、マウスおよびラット）、ロバ、シップウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリである。本明細書中に用いるように、「ヒト」抗体は、ここに引用してその内容の全体を援用する、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによる米国特許第５，９３９，５９８号に記載されているように、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含み、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、または１以上のヒト免疫グロブリンについてトランスジェニックな動物から単離され、内因性免疫グロブリンを発現しない抗体を含む。
【０２９４】
本発明の方法で用いることができる抗ＢＡＦＦ−Ｒ抗体は単一特異性、二重特異性、三重特異性またはより大きな多重特異性のものであって良い。多重特異性抗体はＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であって良く、またはＢＡＦＦ−Ｒポリペプチド、ならびに異種ポリペプチドまたは固体支持体材料のような異種エピトープ双方に対して特異的であって良い。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９３／１７７１５；ＷＯ９２／０８８０２；ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９（１９９１）；米国特許第４，４７４，８９３号；第４，７１４，６８１号；第４，９２５，６４８号；第５，５７３，９２０号；第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３（１９９２）参照。
【０２９５】
ＢＡＦＦ−Ｒ抗体はそれらの交差反応性の点で記載し、または特定することができる。ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドの他のアナログ、オルソログ、またはホモログは本発明の方法で用いることができる。特別な実施形態において、ＢＡＦＦ−Ｒ抗体はヒトＢＡＦＦ−Ｒタンパク質のネズミ、ラットおよび／またはウサギホモログ、およびその対応するエピトープと交差反応することができる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗−ＢＡＦＦ−Ｒ抗体はＢＡＦＦ−Ｒのみならず、ＴＡＣＩおよびＢＣＭＡにも結合する。
【０２９６】
本発明の方法で用いることができるＢＡＦＦ−Ｒ抗体は、ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドに対するその結合親和性の点で記載し、または特定することができる。好ましい結合親和性は、５×１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、または１０−１２Ｍ以下の解離定数またはＫＤを持つものを含む。
【０２９７】
本発明の方法で用いることができるＢＡＦＦ−Ｒ抗体はＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドのアゴニストまたはアンタゴニストとして作用する。例えば、ＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドとの受容体／リガンド相互作用を破壊するＢＡＦＦ−Ｒ抗体は部分的にまたは全部が含まれる。また、リガンド結合を妨げないが、受容体活性化を妨げる受容体−特異的抗体も含まれる。受容体活性化（すなわち、シグナリング）は、本明細書に記載された、または当該分野で知られた技術によって決定することができる。例えば、受容体活性化は、当該分野で知られた技術、および／または免疫沈澱による受容体またはその基質のリン酸化（例えば、チロシンまたはセリン／スレオニン）を用いて、転写因子ＮＦ−ＡＴ、ＡＰ−１および／またはＮＦ−カッパＢを検出することによって決定することができる。
【０２９８】
特別な実施形態において、共にリガンド結合および受容体活性化を妨げる受容体−特異的ＢＡＦＦ−Ｒ抗体、ならびに受容体リガンド複合体を認識し、好ましくは、未結合受容体または未結合リガンドを特異的に認識しないＢＡＦＦ−Ｒ抗体を本発明の方法で用いることができる。前記ＢＡＦＦ−Ｒ抗体は、当該分野で知られた方法を用いて作成することができる。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／４０２８１；米国特許第５，８１１，０９７号；Ｄｅｎｇら，Ｂｌｏｏｄ  ９２（６）；１９８１−１９８８（１９９８）；Ｃｈｅｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５８（１６）：３６６８−３６７８（１９９８）；Ｈａｒｒｏｐら，Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（４）；１７８６−１７９４（１９９８）；Ｚｈｕら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８（１５）３２０９−３２１４（１９９８）；Ｙｏｏｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０（７）：３１７０−３１７９（１９９８）；Ｐｒａｔら，Ｊ．  Ｃｅｌｌ．  Ｓｃｉ．１１１（Ｐｔ２）：２３７−２４７（１９９８）；Ｐｉｔａｒｄら，Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０５（２）：１７７−１９０（１９９７）；Ｌｉａｕｔａｒｄら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ９（４）：２３３−２４１（１９９７）；Ｃａｒｌｓｏｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１７）：１１２９５−１１３０１（１９９７）；Ｔａｒｙｍａｎら，Ｎｅｕｒｏｎ  １４（４）：７５５−７６２（１９９５）；Ｍｕｌｌｅｒら，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ６（９）：１１５３−１１６７（１９９８）；Ｂａｒｔｕｎｅｋら，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ８（１）：１４−２０（１９９６）（全て、ここに引用してその全体を援用する）参照。
【０２９９】
Ｇ．抗−ＡＰＲＩＬ抗体
好ましい実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは抗ＡＰＲＩＬ抗体またはその抗原結合断片である。抗ＡＰＲＩＬ抗体およびその断片は、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ０１／０８７９７７、ＷＯ９９／１２９６５、ＷＯ０１／６０３９７、およびＷＯ０２／０９４１９２；米国特許第６，５０６，８８２号；２００２年１０月１１日に出願された米国特許公開番号２００２／０１６６８６４；およびＣｈ’ｅｎら，（２００５）Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３６：７８−８５；に記載されており、後により詳細に記載する。前記文献の各々をここに引用してその全体を援用する。
【０３００】
特別な実施形態において、（特異的抗体抗原結合をアッセイするための当該分野で良く知られたイムノアッセイによって測定して）ＡＰＲＩＬポリペプチド、ポリペプチド断片、または配列番号４の変異体、および／またはＡＰＲＩＬエピトープを本発明の方法で用いることができる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、他のポリペプチド配列に融合したＡＰＲＩＬポリペプチドに結合することができる。例えば、ＡＰＲＩＬポリペプチドは、免疫グロブリンの定常領域（ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）またはその部分（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはそのいずれかの組合せおよびその部分）、またはアルブミン（限定されるものではないが、組換えヒトアルブミン、またはその断片または変異体を含む（例えば、ここに引用してその全体を援用する、１９９９年３月２０日に発行された米国特許第５，８７６，９６９号、ＥＰ特許０  ４１３  ６２２、および１９９８年６月１６日に発行された米国特許第５，７６６，８８３号参照））と融合することができ、その結果、キメラポリペプチドがもたらされる。そのような融合タンパク質は精製を容易とすることができ、インビボで半減期を増大させることができる。これは、ヒトＣＤ４−ポリペプチドの最初の２つのドメイン、および哺乳動物免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のドメインよりなるキメラタンパク質について示されている。例えば、ＥＰ  ３９４，８２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，３３１：８４−８６（１９８８）参照。免疫系に対する上皮バリアーを横切る抗原の増強された送達は、ＩｇＧまたはＦｃ断片のようなＦｃＲｎ結合パートナーにコンジュゲートした抗原（例えば、インスリン）について示されている（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／２２０２４およびＷＯ９９／０４８１３参照）。ＩｇＧ部分のジスルフィド結合によるジスルフィド−結合ダイマー構造を有するＩｇＧ融合タンパク質は、モノマーポリペプチドまたはその断片単独よりも他の分子に結合し、それを中和するにおいてより効果的であることも判明した。例えば、Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２７０：３９５８−３９６４（１９９５）参照。
【０３０１】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体はホモマー、特にホモトリマーのＡＰＲＩＬポリペプチドに結合する。他の特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、２つのＡＰＲＩＬポリペプチドおよび１つのニュートロカイン−アルファポリペプチドを含有するヘテロトリマー、または１つのＡＰＲＩＬポリペプチドおよび２つのニュートロカイン−アルファポリペプチドを含有するヘテロトリマーのようなヘテロマー、特にヘテロトリマーのＡＰＲＩＬポリペプチドに結合する。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体はホモマー、特にヘテロトリマーＡＰＲＩＬポリペプチドに結合し、ここに、マルチマーの個々のタンパク質成分はＡＰＲＩＬの成熟形態（例えば、配列番号４のアミノ酸残基１０５〜２５０参照）よりなる。他の特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、２つのＡＰＲＩＬポリペプチドおよび１つのニュートロカイン−アルファポリペプチドを含有するヘテロトリマー、または１つのＡＰＲＩＬポリペプチドおよび２つのニュートロカイン−アルファポリペプチドを含有するヘテロトリマーのようなヘテロモノマー、特にヘテロトリマーのＡＰＲＩＬポリペプチドに結合し、ここに、ＡＰＲＩＬヘテロマーの個々のタンパク質成分はＡＰＲＩＬの成熟細胞外可溶性タンパク質（例えば、配列番号４のアミノ酸残基１０５〜２５０）、または成熟細胞外可溶性部分ニュートロカイン−アルファ（例えば、配列番号２のアミノ酸残基１３４−２８５）いずれかよりなる。
【０３０２】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、ＡＰＲＩＬモノマータンパク質の立体配座エピトープに結合する。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、ＡＰＲＩＬマルチマー、特にトリマータンパク質の立体配座エピトープに結合する。他の実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、ＡＰＲＩＬが（例えば、ニュートロカイン−アルファポリペプチドとで）ヘテロトリマーを形成する場合に、あるいはＡＰＲＩＬおよび異種ポリペプチドの間の融合タンパク質において存在するような、異種ポリペプチドと共にＡＰＲＩＬの隣接位置から生じる立体配座エピトープに結合する。
【０３０３】
本発明の方法で用いることができる抗体は、限定されるものではないが、ポリクローナル、モノクローナル、多特異的、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体、単一鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生される断片、（例えば、抗−ＡＰＲＩＬ抗体に対する抗−ｉｄ抗体を含めた）抗−イディオタイプ（抗−Ｉｄ）抗体、および前記のいずれかのエピトープ−結合断片を含む。本明細書中で用いられる用語「抗体」とは、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子をいう。本発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子のいずれのタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、またはサブクラスのものとすることもできる。好ましい実施形態において、免疫グロブリンはＩｇＧ１またはＩｇＧ４イソタイプである。免疫グロブリンは重鎖および軽鎖双方を有することができる。ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ重鎖のアレイはカッパまたはラムダ形態の軽鎖と対合することができる。
【０３０４】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体はＡＰＲＩＬ−結合抗体断片であり、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単一鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、単一鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、およびＶＬまたはＶＨドメインいずれかを含む断片を含む。単一鎖抗体を含めたＡＰＲＩＬ−結合抗体断片は、単独で、あるいは以下の：ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインの全部または部分と組み合わせた可変領域を含むことができる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬ−結合断片は、可変領域とヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインとのいずれかの組合せを含む。本発明の方法で用いることができる抗体は、鳥類および哺乳動物を含めたいずれの動物起源からのものであってもよい。好ましくは、抗体はヒト、ネズミ（例えば、マウスおよびラット）、ロバ、シップウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリである。本明細書中で用いるように、「ヒト」抗体は、例えば、その内容をここに引用してその全体を援用する、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらによって米国特許第５，９３９，５９８号に記載された、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含む、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、または１以上のヒト免疫グロブリンに対してトランスジェニックであって、内因性免疫グロブリンを発現しない動物から単離された抗体を含む。
【０３０５】
本発明の方法で用いることができる抗体は単一特異性、二重特異性、三重特異性、またはより大きな多重特異性なものであってよい。多重特異性抗体はＡＰＲＩＬポリペプチドの異なるエピトープに特異的であってよく、あるいはＡＰＲＩＬポリペプチド双方に対して、ならびに異種ポリペプチドまたは固体支持体材料のような異種エピトープに対して特異的であって良い。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９３／１７７１５；ＷＯ９２／０８８０２；ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔ，ら．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９（１９９１）；米国特許第４，４７４，８９３号；第４，７１４，６８１号；第４，９２５，６４８号；第５，５７３，９２０号；第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ら．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３（１９９２）参照。
【０３０６】
本発明で用いることができる抗ＡＰＲＩＬ抗体は、その交差反応の点で記載し、または特定することができる。ＡＰＲＩＬポリペプチドのいずれかの他のアナログ、オルソログ、またはホモログに結合しない抗体を本発明の方法で用いることができる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体はニュートロカイン−アルファと交差反応する。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体はヒトタンパク質のネズミ、ラットおよび／またはウサギホモログ、およびその対応するエピトープと交差反応する。
【０３０７】
本発明の方法で用いることができる抗体は、ＡＰＲＩＬポリペプチドに対するそれらの結合親和性の点で記載し、または特定することもできる。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、５×１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、または１０−１２Ｍ以下の解離定数またはＫＤを持つＡＰＲＩＬポリペプチド、またはその断片、または変異体に結合する。特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができる抗体は、個々の引用された値の各々の間にある範囲のいずれかの１つ内にある解離定数またはＫＤでもってＡＰＲＩＬポリペプチドに結合する。
【０３０８】
例えば、ＡＰＲＩＬポリペプチドとの受容体／リガンド相互作用を部分的にまたは十分に破壊するＡＰＲＩＬが含まれる。また、リガンド結合を妨げないが、受容体アクチベーターを妨げないＡＰＲＩＬ−特異的抗体が含まれる。受容体活性化（すなわち、シグナリング）は、本明細書中に記載された、あるいはそうでなければ当該分野で知られた技術によって測定することができる。例えば、受容体活性化は、当該分野で知られた技術、および／または受容体またはその基質のリン酸化（例えば、チロシンまたはセリン／スレオニン）、続いてのウェスタンブロット解析を用いて転写因子ＮＦ−ＡＴ、ＡＰ−１、および／またはＮＦ−カッパＢの活性化を検出することによって決定することができる。
【０３０９】
特別な実施形態において、リガンド結合および受容体活性化を妨げるＡＰＲＩＬ−特異的抗体、ならびに受容体−リガンド複合体を認識するが、好ましくは、未結合受容体を特異的に認識しない抗体を本発明の方法で用いることができる。特別な実施形態において、リガンドに結合し、かつリガンドの受容体への結合を妨げる中和抗体、ならびにリガンドに結合し、それにより受容体活性化を妨げるが、リガンドが受容体に結合するのを妨げない抗体を本発明の方法で用いることができる。前記ＡＰＲＩＬ抗体は当該分野で知られた方法を用いて作成することができる。例えば、（全てをここに引用してその全体を援用する）ＰＣＴ公開ＷＯ９６／４０２８１；米国特許第５，８１１，０９７号；Ｄｅｎｇら，Ｂｌｏｏｄ  ９２（６）：１９８１−１９８８（１９９８）；Ｃｈｅｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８（１６）：３６６８−３６７８（１９９８）；Ｈａｒｒｏｐら，（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（４）：１７８６−１７９４（１９９８）；Ｚｈｕら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８（１５）：３２０９−３２１４（１９９８）；Ｙｏｏｎら，Ｊ．Ｉｍｍｎｕｏｌ．１６０（７）：３１７０−３１７９（１９９８）；Ｐｒａｔら，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉ．１１１（Ｐｔ２）：２３７−２４７（１９９８）；Ｐｉｔａｒｄ  ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０５（２）：１７７−１９０（１９９７）；Ｌｉａｕｔａｒｄら，Ｃｙｔｏｋｅｉｎｅ  ９（４）：２３３−２４１（１９９７）；Ｃａｒｌｓｏｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１７）：１１２９５−１１３０１（１９９７）；Ｔａｒｙｍａｎら，Ｎｅｕｒｏｎ  １４（４）：７５５−７６２（１９９５）；Ｍｕｌｌｅｒら，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ６（９）：１１５３−１１６７（１９９８）；Ｂａｒｔｕｎｅｋら，Ｃｙｔｏｃｉｎｅ  ８（１）：１４−２０（１９９６）参照。
【０３１０】
Ｈ．ＡＰＲＩＬ結合ポリペプチド
特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストはＡＰＲＩＬ結合ペプチドまたはポリペプチドである。ＡＰＲＩＬ結合エピトープまたはポリペプチドは、例えば、その各々をここに引用してその全体を援用する、国際特許公開番号ＷＯ０１／８７９７７、ＷＯ０１／８７９７９および米国特許公開番号ＵＳ２００２０８１２９６およびＵＳ２００２０８６０１８に記載されている。本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬ結合ペプチドは、フィラメント状ファージのコートタンパク質との融合によって表示されるランダムペプチド合成から同定された短ポリペプチドを含む。ファージディスプレイペプチドライブラリー技術の議論については、例えば、（その各々をここに引用してその全体を援用する）Ｓｃｏｔｔら，（１９９０），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３８６；Ｄｅｖｌｉｎら，（１９９０），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：４０４；１９９３年６月２９日に発行された米国特許第５，２２３，４０９号；１９９８年３月３１日に発行された米国特許第５，７３３，７３１号；１９９６年３月１２日に発行された米国特許第５，４９８，５３０号；１９９５年７月１１日に発行された米国特許第５，４３２，０１８号；１９９４年８月１６日に発行された米国特許第５，３３８，６６５号；１９９９年７月１３日に発行された米国特許第５，９２２，５４５号；１９９６年１２月１９日に公開されたＷＯ９６／４０９８７；および１９９８年４月１６日に発行されたＷＯ９８／１５８３３参照。該ペプチドを発現するファージは、固定化ＡＰＲＩＬ標的ペプチドに対する順次のラウンドのアフィニティー精製に続いての再増殖によって単離する。ＡＰＲＩＬへの最高結合を持つ候補を配列決定して、各結合ペプチドの同一性を決定する。次いで、各同一ＡＰＲＩＬ結合ペプチドを「ビヒクル」へ結合させて、本実験の方法で用いるさらなるＡＰＲＩＬ結合ペプチドを得ることができる。用語「ビヒクル」とは、分解を妨げ、および／または半減期を増大させ、毒性を低下させ、免疫原性を低下させ、あるいはＡＰＲＩＬ結合ペプチドの生物学的活性を増大させる分子をいう。例示的なビヒクルはＦｃドメインおよびその変異体（好ましい「ペプチボディ」）；線状ポリマー（例えば、５ｋＤ、２０ｋｄ、および３０ｋＤ  ＰＥＧ、ポリリシン、デキストランなどを含めたポリエチレングリクコール（ＰＥＧ））；分岐鎖ポリマー（例えば、１９８１年９月１５日に発行されたＤｅｎｋｅｎｗａｌｔｅｒらに対する米国特許第４，２８９，８７２号；１９９３年７月２０日に発行されたＴａｍに対する第５，２２９，４９０号；１９９３年１０月２８日に発行されたＦｒｅｃｈｅｔらによるＷＯ９３／２１２５９参照；脂質；（ステロイドのような）コレステロール基；炭水化物またはオリゴ糖（例えば、デキストラン）；サルベージ受容体に結合する天然または合成タンパク質ポリペプチドまたはペプチド；限定されるものではないが、組換えヒトアルブミン、またはその断片または変異体を含めたアルブミン（例えば、ここに引用してその全体を援用する１９９９年３月２日に発行された米国特許第５，８７６，９６９号、ＥＰ特許０  ４１２３  ６２２、および１９９８年６月１６日に発行された��国特許第５，７６６，８８３号参照）；およびロイシンジッパードメイン、および他のそのようなタンパク質およびタンパク質断片を含む。本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬ結合ポリペプチドは、アミノ酸残基の一つのＮ−末端、Ｃ−末端または側鎖を通じてペプチドに結合した少なくと別のビヒクルの存在を必要する。多重ビヒクルも用いることができる；例えば、各末端における複数Ｆｃ、または末端におけるＦｃ、他の末端または側鎖におけるＰＥＧ基。ＡＰＲＩＬ結合ペプチドについては、Ｆｃドメインは好ましいビヒクルである。ＦｃドメインはペプチドのＮまたはＣ末端に、またはＮおよびＣ末端双方において融合することができる。Ｎ末端への融合が好ましい。
【０３１１】
前記したように、Ｆｃ変異体は、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬ結合ペプチドのための適当なビヒクルである。天然Ｆｃを広く修飾して、Ｆｃ変異体を形成することができ、ただし、サルベージ受容体への結合が維持されるものとする；例えば、ＷＯ  ９７／３４６３１およびＷＯ  ９６／３２４７８参照。そのようなＦｃ変異体において、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬ結合ペプチドによって必要とされない構造的特徴または機能的活性を供する天然Ｆｃの１以上の部位を除去することができる。例えば、残基を置換しまたは欠失し、部位へ残基を挿入しまたは部位を含有する部分を切断することによってこれらの部位を除去することができる。挿入されたまたは置換された残基はペプチド模倣物またはＤ−アミノ酸のような改変されたアミノ酸であってもよい。Ｆｃ変異体は多数の理由で望ましいが、そのいくつかを以下に記載する。例示的なＦｃ変異体は分子および配列を含み、ここに；
１．ジスルフィド結合形成に関与する部位を除去する。そのような除去は、本発明の分子を産生するのに用いる宿主細胞に存在する他のシステイン含有タンパク質との反応を回避することができる。この目的では、Ｎ−末端におけるシステイン−含有セグメントを切断することができ、あるいはシステイン残基を欠失させ、または他のアミノ酸（例えば、アラニル、セリル）で置換することができる。システイン残基を除去する場合でさえ、単一鎖Ｆｃドメインは、一緒に非−共有結合的に保持されるダイマーＦｃドメインを依然として形成することができる。
【０３１２】
２．天然Ｆｃを修飾して、それを選択された宿主により適合するようにする。例えば、プロリンイミノペプチダーゼのようなＥ．ｃｏｌｉにおける消化酵素によって認識できる典型的な天然ＦｃのＮ−末端近くのＰＡ配列を除去することができる。特に、分子がＥ．ｃｏｌｉのような細菌細胞において組換えにより発現される場合に、Ｎ−末端メチオニン残基を加えることができる。
【０３１３】
３．天然ＦｃのＮ−末端の部分を除去して、選択された宿主細胞において発現される場合に、Ｎ−末端不均一性を妨げる。この目的では、Ｎ−末端における最初の２０アミノ酸残基のいずれかを欠失させることができる。
【０３１４】
４．１以上のグリコシル化部位を除去する。典型的にはグリコシル化される残基（例えば、アスパラギン）は細胞溶解性応答を付与することができる。そのような残基は欠失することができるか、未グリコシル化残基（例えば、アラニン）で置換することができる。
【０３１５】
５．Ｃ１ｑ結合部位のような補体との相互作用に関与する部位を除去する。例えば、ヒトＩｇＧ１のＥＫＫ配列を欠失させ、置換することができる。補体動員は、本発明の方法で用いることができる分子で有利ではなく、従って、そのようなＦｃ変異体で回避することができる。
【０３１６】
６．サルベージ受容体以外のＦｃ受容体への結合に影響する部位を除去する。天然Ｆｃは、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ結合ペプチド融合分子に必要とされないある白血球細胞との相互作用のための部位を有することができ、従って除去することができる。
【０３１７】
７．ＡＤＣＣ部位は除去する。ＡＤＣＣ部位は当該分野で知られている；例えば、ＩｇＧ１におけるＡＤＣＣ部位に関してはＭｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（５）：６３３−９（１９９２）参照。これらの部位は、同様に、本発明の方法で用いることができる融合分子に必要ではなく、従って、除去することができる。
【０３１８】
８．天然Ｆｃが非−ヒト抗体に由来する場合、天然Ｆｃをヒト化することができる。典型的には、天然Ｆｃをヒト化するには、非−ヒト天然Ｆｃにおける選択された残基をヒト天然Ｆｃにおいて通常見出される残基で置換する。抗体ヒト化のための技術は当該分野でよく知られている。
【０３１９】
本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬ結合ペプチドのための代替ビヒクルは、サルベージ受容体に結合することができる、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、抗体断片、または小分子（例えば、ペプチド模倣化合物）であろう。例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されたポリペプチドをビヒクルとして用いることができよう。ペプチドはファージディスプレイ、またはサルベージ受容体への結合についてのＲＮＡペプチドスクリーニングによって選択することもできよう。そのようなサルベージ受容体−結合化合物もまた、「ビヒクル」の意味内に含まれ、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬ結合ペプチドで用いることができる。そのようなビヒクルは（例えば、プロテアーゼによって認識される配列を回避することによって）増大した半減期、および（例えば、抗体ヒト化において発見された非−免疫原性配列を好都合とすることによって）減少した免疫原性について選択すべきである。
【０３２０】
前記したように、ポリマービヒクルは、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬ結合ペプチドで用いることもできる。ビヒクルとして有用な化学部位を結合するための種々の手段が現在入手可能である。例えば、ここに引用してその全体を援用する、特許協力条約（「ＰＣＴ」）国際公開番号ＷＯ  ９６／１１９５３参照。このＰＣＴ公開は、とりわけ、水溶性ポリマーのタンパク質のＮ−末端への選択的結合を開示する。
【０３２１】
特別な実施形態において、好ましいポリマービヒクルはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ＰＥＧ基はいずれの便宜な分子量のものであって良く、線状または分岐状であってよい。ＰＥＧの平均分子量は好ましくは、約２キロダルトン（「ｋＤ」）〜１００ｋＤ、より好ましくは約５ｋＤ〜約５０ｋＤ、最も好ましくは約５ｋＤ〜約１０ｋＤの範囲である。ＰＥＧ基は、本発明の化合物上の反応性基（例えば、アルデヒド、アミノ、またはエステル基）に対して、一般には、ＰＥＧ部位上の反応性基（例えば、アルデヒド、アミノ、チオール、またはエステル基）を通じる、アシル化または還元的アルキル化を介して本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬ結合ペプチドに結合させる。
【０３２２】
合成ペプチドのＰＥＧ化のための有用な戦略は、溶液中のコンジュゲート結合の形成を通じて、ペプチドおよびＰＥＧ部位を合わせることを含み、各々は相互に対して反応性である特殊な機能性を担う。ペプチドは慣用的な固相合成で容易に調製することができる。
ペプチドは特定の部位における適当な官能基で「予め活性化」させる。ＰＥＧ部位との反応に先立って、前駆体を精製し、十分に特徴付ける。ペプチドのＰＥＧとの連結は通常水性相中で起こり、逆相分析ＨＰＬＣによって容易にモニターすることができる。ＰＥＧ化ペプチドは分取用ＨＰＬＣによって容易に精製することができ、分析ＨＰＬＣアミノ酸分析、レーザー脱着質量分析によって特徴付けることができる。
【０３２３】
多糖ポリマーは、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬ結合ペプチドで用いることができる水溶性ポリマーの別のタイプである。デキストランは、α１ー６結合によって圧倒的に結合されたグルコースの個々のサブユニットから構成される多糖ポリマーである。デキストランそれ自体は多くの分子量範囲で入手可能であり、約１ｋＤ〜約７０ｋＤの分子量にて容易に入手可能である。デキストランは、ビヒクルそれ自体としてあるいは別のビヒクル（例えば、Ｆｃ）と組み合せて本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬ結合ペプチドで用いる適当な水溶性ポリマーである。例えば、ＷＯ  ９６／１１９５３およびＷＯ  ９６／０５３０９参照。治療または診断免疫グロブリンにコンジュゲートしたデキストランの使用は報告されている；例えば、ここに引用してその全体を援用する欧州特許公開番号０  ３１５  ４５６参照。約１ｋＤ〜約２０ｋＤのデキストランが、デキストランを本発明に従ってビヒクルとして用いる場合に好ましい。
【０３２４】
特別な実施形態において、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬ結合ペプチドは所望により「リンカー」を含む。存在する場合、その化学構造は重大ではない。というのは、それは主としてスペーサーとして働くからである。リンカーは、好ましくは、ペプチド結合によって一緒に連結されたアミノ酸で構成される。かくして、好ましい実施形態において、リンカーはペプチド結合によって連結された１〜３０アミノ酸から構成され、ここに、アミノ酸は２０の天然に生じるアミノ酸から選択される。これらのアミノ酸のいくつかは、当業者に良く理解されるようにグリコシル化されていても良い。なおより好ましい実施形態において、１〜２０のアミノ酸はグリシン、アラニン、プロリン、アスパラギン、グルタミンおよびリシンから選択される。より好ましくは、リンカーは、グリシンおよびアラニンのような立体的に障害を受けないアミノ酸の大部分から構成される。かくして、好ましいリンカーはポリグリシン（特に、（Ｇｌｙ）４，（Ｇｌｙ）５）、ポリ（Ｇｌｙ−Ａｌａ）である。好ましいリンカーは５を超えるアミノ酸を含むアミノ酸リンカーであり、適当なリンカーはグリシン、アラニン、プロリン、アスパラギン、グルタミン、リシン、スレオニン、セリンまたはアスパルテートから選択される約５００までのアミノ酸を有する。約２０〜５０のアミノ酸リンカーが最も好ましい。
【０３２５】
非−ペプチドリンカーもまた、本発明の方法で用いることができるＡＰＲＩＬ結合ペプチドで有用である。例えば、ｎが２〜２０である−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−のようなアルキルリンカーを用いることができよう。これらのアルキルリンカーは、低級アルキル（例えば、Ｃ１−Ｃ６）低級アシルハロゲン（例えば、Ｃｌ、Ｂｒ）、ＣＮ、ＮＨ２、フェニル等のようないずれかの非−立体障害基によってさらに置換されていてもよい。
【０３２６】
Ｉ．アンチセンスおよびｓｉＲＮＡ
特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、アンチセンスＲＮＡ、触媒ＲＮＡ（リボザイム）、またはニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、またはニュートロカイン−アルファに対する受容体（例えば、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡおよびＢＡＦＦ−Ｒ）を標的とする短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）である。特別な実施形態において、ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒに対して向けられたアンチセンス分子を本発明の方法で用いることができる。アンチセンス技術を用いて、アンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡを通じてまたは三重−ラセン形成を通じて遺伝子発現を制御することができる。アンチセンス技術は、例えば、Ｏｋａｎｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５６：５６０（１９９１）；”Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｓ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｉｎ，  Ｆｌ（１９８８）において議論されている。三重ラセン形成は、例えば、Ｌｅｅら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６：３０７３（１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４１：４５６（１９８８）；およびＤｅｒｖａｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：１３６０（１９９１）で議論されている。該方法は相補的ＤＮＡまたはＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に基づく。例えば、本発明のポリペプチドの細胞外ドメインをコードするポリヌクレオチドの５’コーディング部分を用いて、長さが約１０〜４０塩基対のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドを設計することができる。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、転写に関与する遺伝子の領域に対して相補的となるように設計し、それにより、ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒの転写および産生を妨げる。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドはインビボにてｍＲＮＡにハイブリダイズし、ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−ＲポリペプチドへのｍＲＮＡの転写をブロックする。前記したオリゴヌクレオチドを、アンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡがインビボで発現されて、ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒの産生を阻害することができるように細胞に送達することもできる。
【０３２７】
一つの実施形態において、本発明の方法で用いることができるニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒアンチセンス核酸は外因性配列からの転写によって細胞内で産生される。例えば、ベクターまたはその部分は転写され、本発明の方法で用いることができるアンチセンス核酸（ＲＮＡ）を生じる。そのようなベクターは、ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒアンチセンス核酸をコードする配列を含有するであろう。そのようなベクターは、それが転写されて、所望のアンチセンスＲＮＡを生じる限り、エピソームに留まるか、または染色体に組み込まれ得る。そのようなベクターは、当該分野において標準的な組換えＤＮＡ技術方法によって構築することができる。ベクターは、脊椎動物細胞において複製および発現で用いられる当該分野で公知のプラスミド、ウイルスまたは他のものであり得る。ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ、またはその断片をコードする配列の発現は、脊椎動物、好ましくはヒト細胞において作用する当該分野で公知のいずれのプロモーターによるものでもあり得る。そのようなプロモーターは誘導性または構成的であり得る。そのようなプロモーターは、限定されるものではないが、ＳＶ４０初期プロモーター領域（Ｂｅｒｎｏｉｓｔ  ａｎｄ  Ｃｈａｍｂｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ２９：３０４−３１０（１９８１）、ラウス肉腫ウイルスの３’ロングターミナルリピートに含まれるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏら，Ｃｅｌｌ  ２２：７８７−７９７（１９８０））、ヘルペスチミジンプロモーター（Ｗａｇｎｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：１４４１−１４４５（１９８１））、メタロチオネイン遺伝子の調節配列（Ｂｒｉｎｓｔｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ  ２９６：３９−４２（１９８２））などを含む。
【０３２８】
本発明の方法で用いることができるアンチセンス核酸は、ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ遺伝子のＲＮＡ転写体の少なくとも部分に相補的な配列を含む。しかしながら、好ましくはないが、絶対的相補性は要求されない。本明細書中で言及される「ＲＮＡの少なくとも部分に対して相補的な」配列は、ＲＮＡとハイブリダイズでき、安定なディプレックスを形成する十分な相補性を意味し；二重標準ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒアンチセンス核酸の場合には、かくして、ディプレックスＤＮＡの単一ストランドをテストすることができ、またはトリプレックス形成をアッセイすることができる。ハイブリダイズする能力は、相補性の程度およびアンチセンス核酸の長さの双方に依存する。一般に、ハイブリダイズする核酸がより長ければ、それが含有することができ、依然として安定したディプレックス（当てはまる場合にはトリプレックス）を形成することができるニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ  ＲＮＡとの塩基ミスマッチがより多くなる。当業者であれば、ハイブリダイズした複合体の融解点を決定するための標準的な手法の使用によってミスマッチの許容できる程度を確認することができる。
【０３２９】
メッセージの５’末端に相補的なオリゴヌクレオチド、例えば、ＡＵＧ開始コドンまでの、およびそれを含めた５’非翻訳配列は、翻訳を阻害するにおいて最も効果的に働くはずである。しかしながら、ｍＲＮＡの３’非翻訳に相補的な配列は、同様に、ｍＲＮＡの翻訳を阻害するにおいて効果的なことが示されている。一般に、Ｗａｇｎｅｒ，Ｒ．，１９９４，Ｎａｔｕｒｅ  ３７２：３３３−３３５参照。かくして、ニュートロカイン−アルファ（配列番号１）、ＡＰＲＩＬ（配列番号３）、ＴＡＣＩ（配列番号５）、ＢＣＭＡ（配列番号７）またはＢＡＦＦ−Ｒ（配列番号９）の５’−または３’−非−翻訳非−翻訳コーディング領域いずれかに相補的なオリゴヌクレオチドは、内因性ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ  ｍＲＮＡの翻訳を阻害するためのアンチセンスアプローチで用いることができよう。ｍＲＮＡの５’非翻訳領域に相補的なオリゴヌクレオチドは、ＡＵＧ開始コドンの相補体を含むべきである。ｍＲＮＡコーディング領域に対して相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドは翻訳のより効率の低い阻害剤であるが、本発明の方法に従って用いることができよう。ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ  ｍＲＮＡ５’−、３’−またはコーディング領域にハイブリダイズするように設計されたか否かにかかわらず、アンチセンス核酸は長さが少なくとも６ヌクレオチドとすべきであり、好ましくは、長さが６〜約５０ヌクレオチドの範囲のオリゴヌクレオチドである。特別な態様において、オリゴヌクレオチドは少なくとも１０ヌクレオチド、少なくとも１７ヌクレオチド、少なくとも２５ヌクレオチドまたは少なくとも５０ヌクレオチドである。
【０３３０】
本発明の方法で用いることができるポリヌクレオチドはＤＮＡまたはＲＮＡ、またはキメラ混合物、またはその誘導体または改変バージョン、一本鎖または二本鎖であり得る。オリゴヌクレオチドは塩基部位、糖、またはリン酸骨格において修飾して、例えば、分子の安定性、ハイブリダイゼーション等を改良することができる。オリゴヌクレオチドは（例えば、インビボで宿主細胞受容体を標的化するための）ペプチド、または細胞膜（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６５５３−６５５６；Ｌｅｍａｉｔｒｅら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：６４８−６５２（１９８７）；１９８８年１２月１５日に公開されたＰＣＴ公開番号ＷＯ８８／０９８１０参照）、または血液−脳関門（例えば、１９８８年４月２５日に公開されたＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／１０１３４参照）を横切る輸送を容易とする剤、ハイブリダイゼーション−トリガード切断剤（例えば、Ｋｒｏｌら，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：９５８−９７６（１９８８）参照）またはインターカレーティング剤（例えば、Ｚｏｎ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９−５４９（１９８８）参照）のような他の付属基を含むことができる。この目的では、オリゴヌクレオチドは別の分子、例えば、ペプチド、ハイブリダイゼーショントリガード架橋剤、輸送剤、ハイブリダイゼーション−トリガード切断剤にコンジュゲートすることができる。
【０３３１】
本発明の方法で用いることができるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、限定されるものではないが、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、ベータ−Ｄ−ガラクトシルケオシン、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニル、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、ベータ−Ｄ−マンノシルケオシン、５−メトキシカルボニルメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（Ｖ）、ウイブトキソシン、プロリドウラシル、ケオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミノプリンを含めた群から選択される少なくと別の修飾された塩基部位を含むことができる。
【０３３２】
本発明の方法で使用しうるアンチセンスオリゴヌクレオチドにはまた、限定はしないが、アラビノース、２−フルオロアラビノース、キシルロースおよびヘキソースを含む群より選択された少なくとも１つの修飾された糖部位が含まれうる。
【０３３３】
また他の実施様態において、本発明の方法にて使用しうるアンチセンスオリゴヌクレオチドには、限定はしないが、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホルアミドチオエート、ホスホルアミデート、ホスホルジアミデート、メチルホスホネート、アルキルホスホトリエステル、およびホルムアセタール、またはこれらのアナログを含む群より選択される、少なくとも１つの修飾ホスフェート骨格が含まれる。
【０３３４】
また他の実施様態において、本発明の方法にて使用しうるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、アルファ芳香族オリゴヌクレオチドである。アルファ芳香族オリゴヌクレオチドは、通常のベータ−ユニットと逆で、鎖が平行して互いに走る、相補ＲＮＡと特異的な二本鎖ハイブリッドを形成する（Ｇａｕｔｉｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ．１５：６６２５−６６４１（１９８７））。オリゴヌクレオチドは、２−０−メチルリボヌクレオチド（Ｉｎｏｕｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５：６１３１−６１４８（１９８７））、またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡアナログ（Ｉｎｏｕｅら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．２１５：３２７−３３０（１９９７））である。
【０３３５】
本発明の方法において使用しうるポリヌクレオチドは、本技術分野で公知の標準の方法によって、たとえば（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓなどより市販されているような）自動化ＤＮＡ合成機の利用によって、合成してよい。たとえば、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、Ｓｔｅｉｎら（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８））の方法によって合成してよく、メチルホスホネートオリゴヌクレオチドは、制御孔ガラスポリマー支持体（Ｓａｒｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：７４４８−７４５１（１９８８））などの利用によって調製可能である。
【０３３６】
ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒコード領域配列に相補的なアンチセンスヌクレオチドが使用可能である一方で、転写され、翻訳されていない領域に相補的なものが、本発明の方法における利用のためにもっとも好ましい。
【０３３７】
特定の実施形態において、本発明の方法にて使用しうるニュートロカイン−アルファアンタゴニストにはまた、触媒ＲＮＡ、またはニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒに対して指向するリボザイム（たとえばＰＣＴ国際公報第ＷＯ９０／１１３６４号、１９９０年１０月４日に発行、Ｓａｒｖｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：１２２２−１２２５（１９９０）を参照のこと）も挙げられる。部位特異的認識配列にてｍＲＮＡを切断するリボザイムを、ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ  ｍＲＮＡｓを破壊するために利用可能である一方で、ハンマーヘッド型リボザイムの使用が本発明の方法において好ましく用いられる。ハンマーヘッド型リボザイムは、標的ｍＲＮＡと相補的な塩基対を形成するフランキング領域によって決定された場所にて、ｍＲＮＡを切断する。唯一の要求は、標的ｍＲＮＡが、以下の２塩基の配列、５’−ＵＧ−３’を持つことである。ハンマーヘッド型リボザイムの構築および産生が本技術分野で周知であり、Ｈａｓｅｌｏｆｆ  ａｎｄ  Ｇｅｒｌａｃｈ，Ｎａｔｕｒｅ  ３３４；５８５−５９１（１９８８）にてより完全に記述されている。ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒのヌクレオチド配列内に、多数の可能性のあるハンマーヘッド型リボザイム切断部位が存在する。好ましくは、リボザイムは、切断認識部位が、ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ  ｍＲＮＡの５’末端近くに位置するように、つまり、効果を高め、非機能性ｍＲＮＡ転写物の細胞内蓄積を最小化するために、設計される。
【０３３８】
アンチセンスアプローチにおいてのように、本発明の方法にて使用しうるリボザイムは、（たとえば、安定性の改善、標的化などのために）修飾されたオリゴヌクレオチドからなり得、ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒをインビボで発現する細胞に伝達されるべきである。リボザイムをコードしているＤＮＡ構築物を、アンチセンスコードＤＮＡの導入のために上記と同様の様式で、細胞内に導入しうる。送達の好ましい方法には、たとえばｐｏｌＩＩＩまたはｐｏｌＩＩプロモーターのような、強力な構成的プロモーターの制御下で、リボザイムを「コードしている」ＤＮＡまたはＲＮＡ構築物を使用することが含まれ、それによって、トランスフェクトされた細胞が、内因性ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒメッセージを破壊し、翻訳を阻害するのに十分な量のリボザイムを産生する。アンチセンス分子と違いリボザイムは触媒であるので、効果に対して必要な細胞内濃度はより低い。
【０３３９】
特定の実施形態において、ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒに対して指向される短い干渉ＲＮＡを、本発明の方法にて使用してよい。ｓｉＲＮＡ技術を使用して、細胞ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）の誘導を介して遺伝子発現を制御するために使用可能である。ｓｉＲＮＡ技術が、たとえばＨａｍｉｌｔｏｎ  ＡＪ  ａｎｄ  Ｂａｕｌｃｏｍｂｅ  ＤＣ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９９  Ｏｃｔ  ２９；２８６（５４４１）：９５０−２、Ｅｌｂａｓｈｉｒ  ＳＭら、Ｎａｔｕｒｅ，２００１  Ｍａｙ  ２４：４１１（６８３６）：４９４−８およびＨａｎｏｎ，Ｇｅｒｇｏｒｙ  Ｊ．ａｎｄ  Ｒｏｓｓｉ，Ｊｏｈｎ  Ｊ．Ｎａｔｕｒｅ  ４３１，３７１−３７８（２００４）にて議論されている。本方法は、細胞内への短い二本鎖ＲＮＡ（一般的に２０〜２５ヌクレオチド）の導入に基づいている。二本鎖ＲＮＡは巻かれておらず、各鎖は分離される。ＲＮＡの一本鎖がついでＲＩＳＣ内に組み込まれる。ＲＩＳＣがついで、配列特異的ｍＲＮＡ切断を指向し、結果として翻訳抑制となる。たとえば、ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドのコード部分を、長さにして約２０〜２５ヌクレオチドのｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドを設計するために使用してよい。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、およそ２０〜２５ヌクレオチド断片、およそ９ヌクレオチドのスペーサー、および選択したヌクレオチド断片の逆相補物で設計される。本構築物から産生されたＲＮＡ転写物が、それ自体折りたたまれ、ヘアピンループを形成することが予想される。ヘパリンループＲＮＡの細胞への送達により、結果としてＲｎａｓｅ、すなわちＤｉｃｅｒによる処理で、短い二本鎖ｓｉＲＮＡが産生される。本ｓｉＲＮＡの鎖のＲＩＳＣエフェクター複合体内への組み込みが、結果として、ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒの産生を阻害するために、ｓｉＲＮＡによって標的化されたｍＲＮＡの切断となる。
【０３４０】
１つの実施形態において、本発明の方法において使用しうるニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ  ｓｉＲＮＡ核酸は、外因性配列からの転写によって細胞内で産生される。たとえば、ベクターまたはその一部分が転写され、本発明の方法にて使用しうるｓｉＲＮＡが産生される。そのようなベクターは、ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ  ｓｉＲＮＡ核酸をコードしている配列を含む。そのようなベクターは、本技術分野で標準の組換え体ＤＮＡ技術方法によって構築可能である。ベクターは、脊椎動物細胞中の複製および発現のために使用される、プラスミド、ウイルス、または本技術分野で公知の他のものでありうる。ニュートロカイン−アルファ、ＡＰＲＩＬ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡまたはＢＡＦＦ−Ｒ  ｓｉＲＮＡをコードしている配列の転写は、典型的に、通常小核ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡｓ）の転写を指向する、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーター（たとえばＵ６またはＨ１）を用いて実施される。
【０３４１】
Ｂ−細胞調節物
ニュートロカイン−アルファおよびＡＰＲＩＬに対するレセプターに加えて、Ｂリンパ球は、細胞外微小環境に関してＢ細胞に情報を与え、Ｂ細胞機能および生存を正に、および負に制御するために、膜貫通シグナルとして働くために機能する、種々の細胞表面分子を発現する。これらのレセプターのうち、ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ２２が、治療的発明のための見込みある標的として同定されてきた。
【０３４２】
ＣＤ２０は、カルシウムチャネルとして複合体内で作用する、内在性膜タンパク質である。ＣＤ２０カルシウムチャネルの阻害剤は、Ｃａ２＋ホメオスタシスを崩壊させ、細胞周期進行を崩壊させる。特定の実施形態において、抗ＣＤ２０抗体を、本発明の方法において使用してよい。好ましい実施形態において、本発明の方法にて使用しうる抗ＣＤ２０抗体は、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）である。他の好ましい実施形態において、本発明の方法にて使用しうる抗−ＣＤ２０抗体は、ＴＲＵ−０１５である。別の好ましい実施形態において、本発明の方法にて使用しうる抗ＣＤ２０抗体は、ＴＲＵ−０１５である。別の好ましい実施形態において、本発明の方法にて使用しうる抗ＣＤ２０抗体は、オクレリズマブ（ＰＲＯ７０７６９）である。別の好ましい実施形態において、本発明の方法にて使用しうる抗ＣＤ２０抗体は、ＩＭＭＵ−１０６である。別の好ましい実施形態において、本発明の方法にて使用しうる抗ＣＤ２０抗体は、ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０である。
【０３４３】
ＣＤ２２は、Ｂリンパ球を含む種々の細胞にて見られる、シアル酸結合タンパク質のシグレックファミリーのメンバーである。ＣＤ２２の、種々のシスおよびトランス炭化水素リガンドとの相互作用が、結果として、Ｂ細胞発達、増殖および活性化の種々の態様の制御となる。特定の実施形態において、抗ＣＤ２２抗体を、本発明の方法にて使用してよい。好ましい実施形態において、本発明の方法にて使用しうる抗ＣＤ２２抗体はエプラツズマブである。
【０３４４】
他の免疫調節薬剤
特定の実施形態において、本発明の方法は、１つ以上の以下の薬物、ＣｅｌｌＣｅｐｔ（マイコフェノレート  モフェティル、ＭＭＦ）、Ｏｒｅｎｃｉａ（登録商標）（アバタセプト、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ）、ＲｉｑｕｅｎｔＴＭ（アベチムス  ナトリウム、ＬＪＰ３９４）、ＰｒｅｓｔａｒａＴＭ（プラセロン）、Ｅｄｒａｔｉｄｅ（ＴＶ−４７１０）、Ａｃｔｅｍｒａ（登録商標）（トシリズマブ、アトリズマブ）、ＶＸ−７０２、ＴＲＸ  １、ＩＰＰ−２０１１０１、ＡＢＲ−２１５７５７、スフィンゴシン−１−リン酸−１（Ｓ１Ｐ１）アゴニスト、ＨｕＭａｘ−ＩｎｆｌａｍＴＭ（ＭＤＸ０１８）、ＭＥＤＩ−５４５（ＭＤＸ−１１０３／１３３３）、ＲｈｕＤｅｘ（登録商標）、Ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ、ＥＮＢＲＥＬＴＭ（Ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）、抗ＴＮＦ抗体、抗インターフェロン−アルファ抗体、で実施してよい。
【０３４５】
患者集団
本明細書で記述したように、狼瘡患者がニュートロカイン−アルファタンパク質を中和する抗体で処置された臨床試験からのデータが、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡを有する患者において、狼瘡に関連した症状を有意に改善した（実施例１）。驚くべき事に、（以下でより詳細に示したような、ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアにおける減少のような）疾患活性を測定する臨床評価点における統計学的に有意な改善が、臨床試験にて登録された全患者集団に対して、患者のサブセットにてのみ得られた。したがって、本発明は、ニュートロカイン−アルファのアゴニストような免疫調節薬剤での処置に対してより応答する傾向のある患者のサブグループの同定に関する。
【０３４６】
さらに、本明細書で記述したように、全身エリテマトーデス（ＳＬＥ）は、患者が持ちうる広い症状の性質、および狼瘡に関連した多くの症状が、多くの他の自己免疫疾患にても見られるという事実によって、正確に診断することが難しい、非常に不均一な疾患である。したがって、本発明の１つの実施形態は、疾患診断に関わりなく、治療的に効果的な量の、ニュートロカイン−アルファまたは、本技術分野で公知であり、および／もしくは本明細書で記述された他の免疫調節薬剤を投与することを含む、患者の血漿または血清中、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者を処置する方法を提供する。本発明の別の実施形態は、疾患診断に関わりなく、治療的に効果的な量の、ニュートロカイン−アルファまたは、本技術分野で公知であり、および／または本明細書で記述された他の免疫調節薬剤を投与することを含み、さらに免疫調節薬剤を投与する前に、患者が、患者の血漿または血清中、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を持つことを決定することを含む、患者の血漿または血清中、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＵ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者を処置する方法を提供する。
【０３４７】
さらなる実施形態において、患者の血漿または血清中、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＬ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者は、ＳＬＥではない自己免疫疾患を患う。さらなる実施形態において、患者の血漿または血清中、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＬ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者は、慢性関節リウマチを患う。さらなる実施形態において、患者の血漿または血清中、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＬ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者は、シェーグレン症候群を患う。さらなる実施形態において、患者の血漿または血清中、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＬ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者は、強皮症を患う。さらなる実施形態において、患者の血漿または血清中、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＬ／ｍＬ以上の抗−ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者は、多発性筋炎−皮膚筋炎を患う。さらなる実施形態において、患者の血漿または血清中、１：８０のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＬ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者は、フェルティ症候群を患う。さらなる実施形態において、患者の血漿または血清中、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＬ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者は、混合性結合組織疾患を患う。さらなる実施形態において、患者の血漿または血清中、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＬ／ｍＬ以上の抗−ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者は、レイノー症候群を患う。さらなる実施形態において、患者の血漿または血清中、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＬ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者は、若年性慢性関節炎を患う。
【０３４８】
さらに、全身性エリテマトーデスおよび慢性関節リウマチの患者を処置するために、ニュートロカイン−アルファタンパク質を中和する抗体を用いる両第２相臨床試験において（実施例１および３を参照のこと）、ベースラインで自己抗体陽性疾患の患者が、処置に対してより応答する傾向にあることが観察されたことが明らかである。本明細書で記述したように、ベースラインにおいて、１：８０以上のＡＮＡ力価、および／または３０ＩＬ／ｍＬ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を持つＳＬＥ患者は、ＡＮＡ力価が１：８０未満であり、抗ｄｓＤＮＡ抗体のレベルが３０ＩＵ／ｍＬ未満であるＳＬＥ患者よりも、一群としてより強い応答を示した。同様に、慢性関節リウマチにおいて、ベースラインでリウマチ因子［ＲＦ］または抗環状シトルリン化ペプチド［ＣＣＰ］抗体に関して陽性であった患者が、ベースラインでリウマチ因子［ＲＦ］または抗環状シトルリン化ペプチド［ＣＣＰ］抗体に対して陽性でなかった慢性関節リウマチ患者よりも、一群としてより強い応答を示したことが観察された。
【０３４９】
したがって、本発明の他の態様において、疾患診断に関わりなく、治療的に効果的な量の、ニュートロカイン−アルファまたは、本技術分野で公知であり、および／もしくは本明細書で記述された他の免疫調節薬剤を投与することを含む、ベースラインでリウマチ因子［ＲＦ］または抗環状シトルリン化ペプチド［ＣＣＰ］抗体に対して陽性の患者を処置する方法が提供される。本発明の別の実施形態は、疾患診断に関わりなく、治療的に効果的な量の、ニュートロカイン−アルファまたは、本技術分野で公知であり、および／もしくは本明細書で記述された他の免疫調節薬剤を投与することを含み、さらに、免疫調節薬剤を投与する前に、患者が、ベースラインでリウマチ因子［ＲＦ］または抗環状シトルリン化ペプチド［ＣＣＰ］抗体に対して陽性であることを決定することを含む、ベースラインでリウマチ因子［ＲＦ］または抗環状シトルリン化ペプチド［ＣＣＰ］抗体に対して陽性の患者を処置する方法を提供する。特定の実施形態において、血漿および／または血清中、１２ＩＵ／ｍｌ以上のリウマチ因子を持つ場合に、患者がリウマチに対して陽性であると考えられる。特定の実施形態において、患者が、その血漿および／血清中、１０ユニット以上の抗ＣＣＰ抗体を持つ場合に、患者が抗ＣＣＰ抗体に対して陽性であると考えられる。
【０３５０】
本発明のさらなる態様において、疾患診断に関わりなく、治療的に効果的な量の、ニュートロカイン−アルファまたは、本技術分野で公知であり、および／もしくは本明細書で記述された他の免疫調節薬剤を投与することを含む、ベースラインにて自己抗体陽性である患者を処置する方法が提供される。本発明の別の実施形態は、疾患診断に関わりなく、治療的に効果的な量の、ニュートロカイン−アルファまたは、本技術分野で公知であり、および／もしくは本明細書で記述された他の免疫調節薬剤を投与することを含み、免疫調節薬剤を投与する前に、患者が、ベースラインにて自己抗体陽性であることを決定することをさらに含む、ベースラインにて自己抗体陽性である患者を処置する方法を提供する。
【０３５１】
免疫調節薬剤の作製
本発明で使用可能な免疫調節薬剤を作製および／または単離する方法が、本技術分野の当業者に公知である。天然のタンパク質性である免疫調節薬剤（たとえば抗ニュートロカイン−アルファ抗体、ニュートロカイン−アルファ結合ペプチドおよびポリペプチド、ニュートロカイン−アルファ受容体タンパク質ならびに上記ポリペプチドの断片および変異体）を調製するために利用可能な方法を、以下に簡単に概説している。
【０３５２】
１つの実施形態において、免疫調節タンパク質をコードしているポリヌクレオチドが、ベクター（たとえばクローニングベクターまたは発現ベクター）内に挿入される。ベクターはたとえば、ファージベクター、プラスミドベクター、ウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターでありうる。レトロウイルスベクターは、複製コンピテントまたは複製欠如でありうる。後者において、ウイルス増殖は一般的に、補完宿主細胞にてのみ発生する。免疫調節タンパク質をコードしているポリヌクレオチドは、宿主内での増殖のための選択可能マーカーを含むベクターに結合してよい。宿主細胞内へのベクター構築物の導入は、本技術分野で公知の技術によって達成可能であり、それには限定はしないが、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、トランスダクション、感染または他の方法が含まれる。そのような方法は、Ｄａｖｉｓら、Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９８６）のような、多くの標準の研究室マニュアルにて記述されている。
【０３５３】
一般的に、組換え発現ベクターには、複製起源、たとえば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のアンピシリン耐性遺伝子および酵母菌（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＴＲＰ１遺伝子のような、宿主細胞の形質転換を許容する選別可能マーカー、ならびに下流構造配列の転写を指向するための、高度に発現した遺伝子に由来するプロモーターが含まれる。特に、そのようなプロモーターは、３−ホスホグリセレート  キナーゼ（ＰＧＫ）のような糖分解酵素、ａ−因子、酸ホスファターゼ、またはヒートショックタンパク質などをコードしているオペロン由来でありうる。異種構造配列が、翻訳開始配列および終結配列、ならびに好ましくは、ペリプラズマ空間または細胞外培地中への翻訳されたタンパク質の分泌を指向しうるリーダー配列と、適切な相にて構築される。任意に、異種配列は、所望の特徴、たとえば発現した組換え体産物の安定化または単純精製を与えるＮ−末端同定ペプチドを含む融合タンパク質をコードしうる。
【０３５４】
１つの実施形態において、免疫調節タンパク質をコードしているポリヌクレオチドは、数例あげるとすると、ファージラムダＰＬプロモーター、大腸菌ｌａｃ、ｔｒｐ、ｐｈｏＡおよびｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期および後期プロモーター、およびレトロウイルスＬＴＲのプロモーターのような、適切な異種調節要素（たとえばプロモーターまたはエンハンサー）と操作可能に結合する。他の適切なプロモーターは、当業者に公知である。
【０３５５】
指摘したように、発現ベクターは好ましくは、少なくとも１つの選別可能マーカーを含む。そのようなマーカーとして、ジヒドロ葉酸リダクターゼ、真核細胞培養のためのＧ４１８またはネオマイシン耐性、ならびに大腸菌および他の細菌内での培養のためのテトラサイクリン、カナマイシンまたはアンピシリン耐性遺伝子が挙げられる。代表的な適切な宿主の例には、限定はしないが、大腸菌、ストレプトマイセスおよびサルモネラ  チフィムリウム細胞などの細菌細胞、酵母細胞（たとえばサッカロマイセス  セルビシエまたはピッチア  パストリス（ＡＴＣＣ受託番号２０１１７８）などの）真菌細胞、ドロソフィラＳ２およびスポドプテラＳｆ９細胞などの昆虫細胞、ＣＨＯ、ＣＯＳ、２９３およびＢｏｗｅｓメラノーマ細胞などの動物細胞、および植物細胞が挙げられる。上記宿主細胞のための適切な培養培地および条件が、本技術分野で公知である。
【０３５６】
宿主細胞は、哺乳動物細胞（たとえばヒト由来細胞）などのより高次の真核細胞、または酵母細胞などのより低次の真核細胞であってよく、または宿主細胞は、細菌細胞のような原核細胞であってよい。挿入された遺伝子配列の発現を調節するか、または特定の所望の様式で遺伝子産物を修飾および処理する宿主株を選択してよい。特定のプロモーターからの発現が、特定の誘導因子の存在下で上昇可能であり、したがって、遺伝的に操作したポリペプチドの発現が制御されうる。さらに、異なる宿主細胞が、タンパク質の翻訳および翻訳後の処理および修飾（たとえばリン酸化、切断）のための特徴および特定の機構を持つ。適切な細胞株を、発現した外来タンパク質の所望の修飾および処理を確かにするために選択可能である。宿主細胞内での発現のための適切なベクターおよびプロモーターの選択は、周知の手順であり、発現ベクター構築、ベクターの宿主内への導入および宿主内での発現のための必要な技術が、本技術分野で日常の技術である。
【０３５７】
細菌利用のために有用な発現ベクターは、機能的プロモーターと操作可能なリーディング相にて、好適な翻訳開始シグナルおよび終結シグナルとともに、所望のタンパク質をコードしている構造ＤＮＡまたはＲＮＡ配列を挿入することによって構築される。ベクターには、１つ以上の表現系選別可能マーカーと、ベクターの維持を確実にし、必要に応じて宿主内で増幅を提供するための複製起源を含む。形質転換のために好適な原核細胞宿主として、他も選択肢として使用可能であり得るが、大腸菌、バチルス  サブチルス、サルモネラ  チフィムリウム、ならびにシュードモナス属、ストレプトマイセス属、およびスタフィロコッカス属内の種々の種が挙げられる。代表的な、しかし非限定的な例として、細菌利用のための有用な発現ベクターは、周知のクローニングベクターｐＢＲ３２２（ＡＴＣＣ３７０１７）の遺伝的要素を含む、市販されているプラスミドに由来する選別可能マーカーおよび細菌複製起源を含みうる。そのような市販ベクターとして、たとえば、ｐＫＫ２２３−３（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）およびＧＥＭ１（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｂｉｏｔｅｃ、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ）が挙げられる。これらのｐＢＲ３２２「骨格」区画を、適切なプロモーターおよび発現すべき構造配列と組み合わせる。細菌での利用のために好ましいベクターには、ｐＨＥ４−５（ＡＴＣＣ受託番号２０９３１１、およびそれらの変異体）、ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．上記から入手可能なｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０およびｐＱＥ−９、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能なｐＢＳベクター、Ｐｈａｇｅｓｃｒｉｐｔベクター、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ、ならびにＰｈａｒｍａｃｉａから入手可能なｐｔｒｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５が含まれる。酵母系にて使用するための好ましい発現ベクターとして、限定はしないが、ｐＹＥＳ２、ｐＹＤ１、ｐＴＥＦ１／Ｚｅｏ、ｐＹＥＳ２／ＧＳ、ｐＰＩＣＺ、ｐＧＡＰＺ、ｐＧＡＰＺａｌｐｈａ、ｐＰＩＣ９、ｐＰＩＣ３．５、ｐＨＩＬ−Ｄ２、ｐＨＩＬ−ｓ１、ｐＰＩＣ３．５Ｋ、ｐＰＩＣ９Ｋ、およびＰＡＯ８１５（すべてＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡから入手可能）が挙げられる。好ましい真核生物ベクターは、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅから入手可能なｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳＧ、ならびにｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧおよびｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）である。他の好適なベクターが、当業者に簡単に理解される。
【０３５８】
好適な宿主株の形質転換および適切な細胞濃度までの宿主株の増殖につづいて、選別したプロモーターが、適切な方法（たとえば温度シフトまたは化学導入）によって導入され、細胞をさらなる期間培養する。細胞を典型的に遠心分離によって回収し、物理的または化学的方法によって崩壊させ、得られた粗抽出物をさらなる精製のために保存する。
【０３５９】
タンパク質の発現にて使用する微生物細胞は、当業者によく公知の方法のような、凍結融解サイクル、超音波処理、化学的分解、または細胞溶解剤の利用のような、任意の従来の方法によって崩壊可能である。
【０３６０】
１つの実施形態において、酵母ピッチア（Ｐｉｃｈｉａ）パストリスを、真核生物系において、ニュートロカイン−アルファタンパク質を発現するために使用する。ピッチア  パストリスは、その単独炭素供給源として、メタノールを代謝可能なメチロトローフ酵母である。メタノール代謝経路における主要な段階は、Ｏ２を用いた、メタノールのホルムアルデヒドへの酸化である。この反応は、酵素アルコールオキシダーゼによって触媒される。その単独炭素供給源としてメタノールを代謝するために、ピッチア  パストリスは、部分的に、Ｏ２に対するアルコールオキシダーゼの比較的低い親和力のために、高レベルのアルコールオキシダーゼを産生しなければならない。結果として、増殖培地中、主要炭素供給源としてのメタノールに依存して、２つのアルコールオキシダーゼ遺伝子（ＡＯＸ１）の１つのプロモーター領域が高度に活性である。メタノールの存在下、ＡＯＸ１遺伝子から産生されたアルコールオキシダーゼには、ピッチア  パストリス中、およそ３０％までの総可溶性タンパク質が含まれる。Ｅｌｌｉｓ，Ｓ．Ｂ．，ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：１１１１−２１（１９８５）、Ｋｏｕｔｚ，Ｐ．Ｊ．，ら、Ｙｅａｓｔ  ５：１６７−７７（１９８９）、Ｔｓｃｈｏｐｐ，Ｊ．Ｆ．，ら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５：３８５９−７６（１９８７）を参照のこと。したがって、ＡＯＸ１制御配列のすべてまたは一部の転写制御の下、異種コード配列が、メタノールの存在下、ピッチア酵母増殖において、非常に高いレベルで発現する。
【０３６１】
１つの例において、プラスミドベクターｐＰＩＣ９Ｋを、「Ｐｉｃｈｉａ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」Ｄ．Ｒ．Ｈｉｇｇｉｎｓ  ａｎｄ  Ｊ．Ｃｒｅｇｇ，ｅｄｓ．Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，１９９８にて基本的に記述されるような、ピッチア酵母系にて、本明細書で列記したような免疫調節タンパク質またはその部分をコードしているＤＮＡを発現するために使用する。本発現ベクターは、多重クローニング部位の上流に局在する、ピッチア  パストリス  アルカリホスファターゼ（ＰＨＯ）分泌シグナルペプチド（すなわちリーダー）に連結した強力なＡＯＸ１プロモーターにより、免疫調節タンパク質の発現および分泌が可能になる。
【０３６２】
当業者に簡単に理解されるように、提案された発現構築物が、必要に応じてインフレームＡＵＧを含む、転写、翻訳、分泌（所望の場合）などのための適切に位置したシグナルを提供する限り、ｐＹＥＳ２、ｐＹＤ１、ｐＴＥＦ１／Ｚｅｏ、ｐＹＥＳ２／ＧＳ、ｐＰＩＣＺ、ｐＧＡＰＺ、ｐＧＡＰＺａｌｐｈａ、ｐＰＩＣ９、ｐＰＩＣ３．５、ｐＨＩＬ−Ｄ２、ｐＨＩＬ−Ｓ１、ｐＰＩＣ３．５Ｋ、およびＰＡＯ８１５のような、多くの他の酵母ベクターを、ｐＰＩＣ９Ｋの代わりに使用可能である。
【０３６３】
１つの実施形態において、高レベルの異種コード配列の発現を、本発明の異種ポリヌクレオチドをたとえばｐＧＡＰＺまたはｐＧＡＰＺａｌｐｈａのような発現ベクター内にクローニングすること、およびメタノールの非存在下で酵母培養液を増殖させることによって達成してよい。
【０３６４】
より高次の真核生物による、免疫調節タンパク質をコードしているＤＮＡの転写を、ベクター内にエンハンサー配列を挿入することによって増加させる。エンハンサーは、その転写を増加させるために、プロモーターに作用する、通常約１０〜３００ｂｐの、ＤＮＡのｃｉｓ活性要素である。例として、１００〜２７０ｂｐの複製起源の後ろ側のＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起源の後ろ側のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。
【０３６５】
種々の哺乳動物細胞培養系がまた、組換えタンパク質を発現するために使用可能である。哺乳動物発現系の例として、Ｇｌｕｚｍａｎ（Ｃｅｌｌ  ２３：１７５（１９８１））によって記述された、サル肝臓繊維芽細胞のＣＯＳ−７株、および適合可能ベクターを発現しうる他の細胞株、たとえばＣ１２７、３Ｔ３、ＣＨＯ、ＨｅＬａおよびＢＨＫ細胞株が挙げられる。哺乳動物発現ベクターは、複製起源、好適なプロモーターおよびエンハンサー、ならびにまた任意の必要なリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナーおよびアクセプター部位、転写終結配列、および５’フランキング非転写配列が含まれる。ＳＶ４０スプライス由来のＤＮＡ配列、およびアデニル化部位を使用して、必要な非転写遺伝的要素を提供してよい。
【０３６６】
特定の実施形態において、ニュートロカイン−アルファ受容体の細胞外ドメイン（たとえばＴＡＣＩ、ＢＣＭＡおよびＢＡＦＦ−Ｒ）のような、免疫調節タンパク質の一部分を発現するように設計された構築物を使用する。当業者は、そのような発現構築物を産生するためのポリヌクレオチドプライマーを設計するために、それぞれ配列番号５および配列番号６、それぞれ配列番号７および配列番号８、またはそれぞれ配列番号９および配列番号１０として提供されたポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列を使用しうる。
【０３６７】
宿主細胞を使用しえた、免疫調節タンパク質をコードしているポリヌクレオチドを発現する。そのような宿主細胞として、脊椎動物起源、とりわけ哺乳動物起源の、初代、二次および不死化宿主細胞が挙げられる。いくつかの場合において、宿主細胞を操作して、内因性遺伝物質（たとえばニュートロカイン−アルファコード配列）を削除または置換する、および／または遺伝物質（たとえば異種ポリヌクレオチド配列）を含める。いくつかの例において、宿主細胞を、免疫調節タンパク質をコードしている内因性ポリヌクレオチドの発現を促進および／または変更するように修飾する。たとえば、本技術分野で公知の技術を使用して、異種制御領域（たとえばプロモーターおよび／またはエンハンサー）および内因性ポリヌクレオチド配列を、相同組換えを介して操作可能に結合させる（たとえば、それぞれの開示物が、全体において参考文献によって援用されている、１９９７年６月２４日付与、米国特許第５，６４１，６７０号、１９９６年９月２６日発行、国際特許公報第ＷＯ９６／２９４１１号、１９９４年８月４日発行、国際特許公報第ＷＯ９４／１２６５０号、Ｋｏｌｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：８９３２−８９３５（１９８９）、およびＺｉｊｌｓｔｒａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：４３５−４３８（１９８９）を参照のこと）。
【０３６８】
本明細書で記述された宿主細胞を、従来の方法において、免疫調節タンパク質を産生するために使用可能である。あるいは、細胞を含まない翻訳系をまた、本発明のＤＮＡ構築物由来のＲＮＡを用いて、免疫調節ポリペプチドを産生するために使用可能でもある。
【０３６９】
要求に応じて、フレームＡＵＧを、（（異なるタンパク質の）異種タンパク質配列に結合するペプチドを介して結合したポリペプチドを含む）融合タンパク質のような、修飾形態で発現または合成してよく、分泌シグナルのみでなく、さらなる異種機能的領域も含んでよい。そのような融合タンパク質は、免疫調節タンパク質をコードしているポリヌクレオチドと、所望のアミノ酸配列をコードしている所望の核酸配列を、適切なリーディングフレームにて、本技術分野で公知の方法によって、互いにライゲーションすること、および本技術分野で公知の方法によって、融合タンパク質産物を発現することによって作製可能である。あるいは、そのような融合タンパク質を、タンパク質合成技術によって、たとえばペプチド合成機の利用によって、作製可能である。したがって、たとえば、さらなるアミノ酸の領域、とりわけ荷電アミノ酸を、精製の間、または続く処理および保存の間、宿主細胞中の安定性および持続性を改善するために、ポリペプチドのＮ−末端に加えてよい。また、ペプチド部位を、精製を促進するために、ポリペプチドに加えてよい。そのような領域を、ポリペプチドの最終調製の前に除いてよい。分泌または排出を引き起こすため、安定性を改善するため、および精製を促進するために、特にペプチド部位のポリペプチドへの添加が、本技術分野で一般的で、日常の技術である。
【０３７０】
１つの実施形態において、免疫調節タンパク質をコードしているポリヌクレオチドを、免疫調節タンパク質の、原核または真核細胞の特定のコンパートメントへの局在化を指向する、および／または原核または真核細胞からの免疫調節タンパク質の分泌を指向するシグナル配列に融合してよい。たとえば、大腸菌において、タンパク質の発現をペリプラズマ空間に指向することが望まれる。ポリペプチドの細菌のペリプラズマ配列への発現を指向するために、本発明のポリペプチドが融合するシグナル配列またはタンパク質（またはその断片）の例として、限定はしないが、ｐｅｌＢシグナル配列、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）シグナル配列、ＭＢＰ、ｏｍｐＡシグナル配列、ペリプラズマ大腸菌易熱性エンテロトキシンＢ−サブユニットのシグナル配列、アルカリホスファターゼのシグナル配列が挙げられる。いくつかのベクターが、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓから入手可能なベクターのｐＭＡＬシリーズ（とりわけｐＭＡＬ−ｐシリーズ）のような、タンパク質の局在化を指向する融合タンパク質の構築のために市販されている。特定の実施形態において、免疫調節タンパク質をコードしているポリヌクレオチドを、グラム陰性細菌中のそのようなポリペプチドの発現および精製の効率を増加させるために、ｐｅｌＢペクテートリアーゼシグナル配列に融合してよい。その内容が、全体において参考文献によって本明細書に組み込まれている、米国特許第５，５７６，１９５号および第５，８４６，８１８号を参照のこと。
【０３７１】
哺乳動物細胞中での分泌を指向するために、免疫調節タンパク質に融合しうるシグナルペプチドの例として、限定はしないが、ＭＰＩＦ−１シグナル配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＢ５１１３４のアミノ酸１〜２１）、スタニオカルシンシグナル配列（ＭＬＱＮＳＡＶＬＬＬＬＶＩＳＡＳＡ、配列番号２７）およびコンセンサスシグナル配列（ＭＰＴＷＡＷＷＬＦＬＶＬＬＬＡＬＷＡＰＡＲＧ、配列番号２８）が挙げられる。バキュロウイルス発現系と結合して使用しうる好適なシグナル配列は、ｇｐ６７シグナル配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＡ７２７５９のアミノ酸１〜１９）である。
【０３７２】
好適な融合タンパク質には、タンパク質を安定化し、精製するために有用である免疫グロブリンからの異種領域が含まれる。たとえば、欧州特許第Ｏ４６４５３３Ａ号（対応カナダ出願第２０４５８６９号）は、別のヒトタンパク質またはその部分とともに、免疫グロブリン分子の定常領域の種々の部分を含む融合タンパク質を開示している。多くの場合、融合タンパク質中のＦｃ部分が、治療および診断における利用で完全に利点があり、したがって、たとえば結果として、薬物動態特性の改善となる（欧州特許第０２３２２６２Ａ号）。一方で、いくつかの利用に関して、記述した有利な様式で、融合タンパク質を発現させ、削除し、精製した後、Ｆｃ部分を削除可能であることが望ましい。これは、Ｆｃ部分が、治療および診断で使用するために邪魔になることが証明された場合、たとえば融合タンパク質が、免疫化のための抗原として使用されるべき場合である。薬物ディスカバリーにおいて、たとえば、ｈＩＬ−５のようなヒトタンパク質を、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同定するための高スループットスクリーニングアッセイの目的のために、Ｆｃ部分と融合された。Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ８：５２−５８（１９９５）およびＫ．Ｊｏｈａｎｓｏｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：９４５９−９４７１（１９９５）を参照のこと。
【０３７３】
本発明の方法にて使用しうる免疫調節タンパク質には、天然に精製された産物、化学合成手順の産物、たとえば細菌、酵母、高次植物、昆虫および哺乳動物細胞を含む、原核または真核宿主からの、組換え技術によって産生された産物が含まれる。組換え産生手順で使用する宿主に依存して、免疫調節タンパク質に糖付加してよく、または糖付加しなくてよい。さらに、免疫調節タンパク質にはまた、いくつかの場合、宿主媒介工程の結果として、初期修飾メチオニン残基も含まれうる。
【０３７４】
本発明の方法にて使用しうる免疫調節タンパク質は、本技術分野で公知の技術を用いて化学的に合成可能である（たとえばＣｒｅｉｇｈｔｏｎ，１９８３，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ＆  Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．、およびＨｕｎｋａｐｉｌｌｅｒ，Ｍ．ら，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ  ３１０：１０５−１１１を参照のこと）。たとえば、免疫調節タンパク質の断片に相当するペプチドを、ペプチド合成機の利用によって合成可能である。さらに、所望の場合、非古典的アミノ酸または化学的アミノ酸アナログを、免疫調節タンパク質をコードしているポリヌクレオチド配列内への置換または添加として導入可能である。非古典的アミノ酸として、限定はしないが、共通アミノ酸のＤ−アイソマー、２，４−ジアミノブチル酸、ａ−アミノイソブチル酸、４−アミノブチル酸、Ａｂｕ、２−アミノブチル酸、ｇ−Ａｂｕ、ｅ−Ａｈｘ、６−アミノヘキサノン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソブチル酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、ホモシトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、ｂ−アラニン、フルオロ−アミノ酸、ｂ−メチルアミノ酸、Ｃａ−メチルアミノ酸、Ｎａ−メチルアミノ酸のようなデザイナーアミノ酸、および一般的にアミノ酸アナログが挙げられる。さらに、アミノ酸は、Ｄ（右旋性）またはＬ（左旋性）でありうる。
【０３７５】
本発明の方法にて使用しうる免疫調節タンパク質を、翻訳の間、または後に、たとえば糖付加、アセチル化、リン酸化、アミド化、公知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解、抗体分子または他の細胞リガンドへの結合などによって、特異的に修飾してよい。任意の多数の化学修飾を、限定はしないが、臭化シアン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテアーゼ、ＮａＢＨ４による特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、酸化、還元、チュニカマイシンの存在下での代謝合成などを含む、公知の技術によって実施してよい。
【０３７６】
さらなる翻訳後の修飾には、たとえば、Ｎ−結合またはＯ−結合糖鎖、Ｎ−末端またはＣ−末端の処理、アミノ酸骨格への化学的部位の接着、Ｎ−結合またはＯ−結合糖鎖の化学修飾、および原核宿主細胞発現の結果としての、Ｎ−末端メチオニン残基の添加または欠損が含まれる。ポリペプチドは、酵素的、蛍光、放射性同位体、またはアフィニティラベルのような、検出可能なラベルで修飾可能でもあり、タンパク質の検出および単離が可能にある。
【０３７７】
好適な酵素の例として、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ、好適な補欠分子族複合体の例として、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられ、好適な蛍光物質の例として、ビオチン、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル、またはフィコエリスリンが挙げられ、発光物質の例として、ルミノールが挙げられ、生物発光物質の例として、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびアエクオリンが挙げられ、好適な放射活性物質の例として、たとえば、２１３Ｂｉのようなアルファ−放出物質、またはたとえばヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５ｍＩｎ、１１３ｍＩｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）およびテクネチウム（９９Ｔｃ、９９ｍＴｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、２３Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｔｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎおよび１１７Ｔｉｎのような他の放射性同位体が挙げられる。
【０３７８】
特定の実施形態において、本発明の方法にて使用しうる免疫調節タンパク質を、ユーロピウムで標識してよい。たとえば、免疫調節タンパク質（たとえばニュートロカイン−アルファのアンタゴニスト）を、使用説明書にしたがって、ＤＥＬＦＩＡ  Ｅｕ−標識化キット（カタログ番号１２４４−３０２、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を用いてユーロピウムで標識してよい。
【０３７９】
特定の実施形態において、たとえば、免疫調節タンパク質が、限定はしないが、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、１６６Ｈｏおよび１５３Ｓｍを含む放射性金属イオンをポリペプチドに共役するために有用なマクロ環状キレーターに結合される。好ましい実施形態において、免疫調節タンパク質に結合したマクロ環状キレーターに結合した放射金属イオンは、１１１Ｉｎである。別の好ましい実施形態において、免疫調節タンパク質に結合したマクロ環状キレーターに結合した放射金属イオンは９０Ｙである。特定の実施形態において、マクロ環状キレーターは、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）である。他の特定の実施形態において、ＤＯＴＡは、リンカー分子を介して、免疫調節タンパク質に結合する。ＤＯＴＡをポリペプチドに共役するために有用なリンカー分子の例は、本技術分野で一般的に知られており、たとえば、全体が参考文献によって本明細書に援用されている、ＤｅＮａｒｄｏら，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４（１０）：２４８３−９０，１９９８、Ｐｅｔｅｒｓｏｎら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１０（４）：５５３−７，１９９９、およびＺｉｍｍｅｒｍａｎら，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２６（８）：９４３−５０，１９９９を参照のこと。さらに、抗体に共役しうるキレート剤、およびそれらを作製し、使用するための方法を開示している、米国特許第５，６５２，３６１号および第５，７５６，０６５号が、全体が参考文献によって、本明細書に援用されている。米国特許第５，６５２，３６１号および第５，７５６，０６５号が、抗体に対してキレート剤を共役させることに焦点を当てているが、当業者は、キレート剤を他のポリペプチドに共役させるために、そこで開示された方法を簡単に適合可能である。
【０３８０】
１つの実施形態において、本発明の方法にて使用しうる免疫調節タンパク質を、ビオチンにて標識化してよい。
【０３８１】
ポリペプチドの可溶性、安定性およびインビボまたはインビトロ循環時間の増加、または免疫原性の減少のような、さらなる利点を提供しうる免疫調節タンパク質の化学修飾した誘導体（米国特許第４，１７９，３３７号を参照のこと）をまた、本発明の方法にて使用してもよい。誘導体化のための化学部位は、ポリエチレングリコール、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコールなどのような、水溶性ポリマーから選択してよい。ポリペプチドを、分子内の無作為な部位にて、または分子内の所定位置にて修飾してよく、１、２、３以上の結合化学部位を含んでよい。
【０３８２】
ポリマーは、任意の分子量であってよく、分岐または非分岐であってよい。ポリエチレングリコールに関して、好ましい分子量は、取り扱いおよび製造において簡便であるために、約１ｋＤａ〜約１００ｋＤａ（語句「約」は、ポリエチレングリコールの調製において、いくつかの分子が、言及した分子量より大きい、未満であることを示唆している）の間である。他のサイズを、所望の治療プロファイル（たとえば、所望の持続放出期間、任意に、生物学的活性における効果、取り扱いの簡便さ、抗原性の程度または欠損、ポリエチレングリコールの、治療的タンパク質またはアナログへの他の公知の効果）に依存して使用してよい。たとえば、ポリエチレングリコールは、約２００、５００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、８５００、９０００、９５００、１０，０００、１０，５００、１１，０００、１１，５００、１２，０００、１２，５００、１３，０００、１３，５００、１４，０００、１４，５００、１５，０００、１５，５００、１６，０００、１６，５００、１７，０００、１７，５００、１８，０００、１８，５００、１９，０００、１９，５００、２０，０００、２５，０００、３０，０００、３５，０００、４０，０００、５０，０００、５５，０００、６０，０００、６５，０００、７０，０００、７５，０００、８０，０００、８５，０００、９０，０００、９５，０００または１００，０００ｋＤａの平均分子量を持ってよい。
【０３８３】
以上で言及したように、ポリエチレングリコールは分岐構造を持ってよい。分岐ポリエチレングリコールは、たとえば、それぞれの開示物が参考文献によって本明細書に援用されている、米国特許第５，６４３，５７５号、Ｍｏｒｐｕｒｇｏら，Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．５６：５９−７２（１９９６）、Ｖｏｒｏｂｊｅｖら，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  １８：２７４５−２７５０（１９９９）およびＣａｌｉｃｅｔｉら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１０：６３８−６４６（１９９９）で記述されている。
【０３８４】
ポリエチレングリコール分子（または他の化学部位）は、タンパク質の機能的または抗原性ドメインにおける効果を考慮して、タンパク質に結合すべきである。多数の結合方法が当業者にとって利用可能であり、たとえば、参考文献によって本明細書に援用される欧州特許第０４０１３８４号（ＰＥＧのＧ−ＣＳＦへの結合）、またＭａｌｉｋら，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２０：１０２８−１０３５（１９９２）（塩化トレシルを用いたＧＭ−ＣＳＦのペグ化を報告している）を参照のこと。たとえば、ポリエチレングリコールは、遊離アミノまたはカルボキシル基のような反応性基を介して、アミノ酸残基を通して共有結合してよい。反応性基は、活性化ポリエチレングリコール分子が結合しうるものである。遊離アミノ基を持つアミノ酸残基には、たとえば、リシン残基およびＮ−末端アミノ酸残基が含まれ、遊離カルボキシル基を持つものには、アスパラギン酸残基、グルタミン酸残基、およびＣ−末端アミノ酸残基が含まれる。スルフヒドリル基をまた、ポリエチレングリコール分子を結合させるための反応性基として使用してもよい。治療目的のために好ましいものは、Ｎ−末端またはリシン基での結合のような、アミノ基での結合である。
【０３８５】
以上で示唆したように、ポリエチレングリコールは、任意の多数のアミノ酸残基への結合を介して、タンパク質に結合してよい。たとえば、ポリエチレングリコールは、リシン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸またはシステイン残基への共有結合を介してタンパク質に連結可能である。１つ以上の反応化学を利用して、タンパク質の特定のアミノ酸残基（たとえば、リシン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸またはシステイン）へ、またはタンパク質の１つより多い型のアミノ酸残基（たとえばリシン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システインおよびそれらの組合せ）にポリエチレングリコールを結合させてよい。
【０３８６】
当業者はとりわけ、Ｎ−末端にて化学的に修飾されるタンパク質を所望しうる。例示として、ポリエチレングリコールを使用して、（分子量、分岐などによる）種々のポリエチレングリコール分子、反応混合液中のポリエチレングリコール分子のタンパク質（またはペプチド）分子に対する割合、実施されるペグ化反応の型、および選択されたＮ−末端ペグ化タンパク質を得る方法、から選択してよい。Ｎ−末端ペグ化調製物を得る（すなわち、必要ならば、この部位を他のモノペグ化部位から分離する）方法は、ペグ化タンパク質分子の集団から、Ｎ−末端ペグ化物質を精製することによってでありうる。Ｎ−末端修飾にて化学的に修飾された選択的タンパク質は、特定のタンパク質中の誘導体化のために利用可能な、異なる型の一級アミノ基の異なる反応性（リシン対Ｎ−末端）を利用する還元アルキル化によって達成されうる。適切な反応条件下、ポリマーを含むカルボニル基による、Ｎ−末端でのタンパク質の本質的に選択的な誘導が達成される。
【０３８７】
以上で示唆したように、本発明のタンパク質のペグ化は、任意の数の手段によって達成されうる。たとえば、ポリエチレングリコールを、直接、または介在リンカーによってのいずれかで、タンパク質に結合してよい。ポリエチレングリコールをタンパク質へ結合するためのリンカーを持たない系が、それぞれの開示物が、参考文献によって本明細書に援用されている、Ｄｅｌｇａｄｏら，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓ．９：２４９−３０４（１９９２）、Ｆａｎｃｉｓら，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｊ．ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌ．６８：１−１８（１９９８）、米国特許第４，００２，５３１号、米国特許第５，３４９，０５２号、国際特許第ＷＯ９５／０６０５８号、および第ＷＯ９８／３２４６６号にて記述されている。
【０３８８】
ポリエチレングリコールを、介在リンカーなしに直接タンパク質のアミノ酸残基に結合するための１つの系が、トレシルクロリド（ＣｌＳＯ２ＣＨ２ＣＦ３）を用いて、モノメトキシポリエチレングリコール（ＭＰＥＧ）の修飾によって産生される、トレシル化ＭＰＥＧを利用する。トレシル化ＭＰＥＧとのタンパク質の反応に際して、ポリエチレングリコールが、タンパク質のアミノ基に直接結合する。したがって、本発明には、本発明のタンパク質を２，２，２−トリフルオレオタンスルホニル基を持つポリエチレングリコール分子と反応させることによって生成された、タンパク質−ポリエチレングリコール共役物が含まれる。
【０３８９】
ポリエチレングリコールはまた、多数の異なる介在リンカーを用いてタンパク質に結合可能である。たとえば、そのすべての開示物が、参考文献によって本明細書に援用されている、米国特許第５，６１２，４６０号が、ポリエチレングリコールをタンパク質に連結するためのウレタンリンカーを開示している。ポリエチレングリコールがリンカーによってタンパク質に結合したタンパク質−ポリエチレングリコール共役物をまた、ＭＰＥＧ−スクシンイミジルスクシネート、１，１’−カルボニルジイミダゾールで活性化したＭＰＥＧ、ＭＰＥＧ−２，４，５−トリクロロペニルカルボン酸、ＭＰＥＧ−ｐ−ニトロフェノールカルボン酸、および種々のＭＰＥＧ−スクシネート誘導体のような化合物とのタンパク質の反応によって生成可能である。多数のさらなるポリエチレングリコール誘導体、およびポリエチレングリコールをタンパク質に結合するための反応化学が、そのすべての開示物が参考文献によって本明細書に援用されている、国際特許第ＷＯ９８／３２４６６号にて記述されている。本明細書で列記した反応化学を用いて産生されたペグ化タンパク質産物が、本発明の範囲内に含まれる。
【０３９０】
本発明の各タンパク質に結合するポリエチレングリコール部位の数（すなわち置換の程度）もまた変化しうる。たとえば、本発明のペグ化タンパク質が、平均して、１，２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、１７、２０またはそれ以上のポリエチレングリコール分子と連結してよい。同様に、置換の平均程度は、タンパク質分子あたり、１〜３、２〜４、３〜５、４〜６、５〜７，６〜８、７〜９、８〜１０、９〜１１、１０〜１２、１１〜１３、１２〜１４、１３〜１５、１４〜１６、１５〜１７、１６〜１８、１７〜１９または１８〜２０ポリエチレングリコール部位のような範囲内である。置換の程度を決定するための方法が、たとえばＤｅｌｇａｄｏら，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓ．９：２４９−３０４（１９９２）にて議論されている。
【０３９１】
本発明の方法にて使用しうる免疫調節タンパク質を、限定はしないが、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンおよび陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含む公知の方法によって回収および精製可能である。より好ましくは、高性能液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）を精製のために利用する。
【０３９２】
製剤および投与
本発明は、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストのような免疫調節薬剤を含む、有効量の医薬組成物を被験体に投与することによる、処置、阻害および予防の方法を提供する。特定の実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、抗ニュートロカイン−アルファ抗体である。特定の実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ＴＡＣＩ−Ｆｃタンパク質である。特定の実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ＢＡＦＦ−Ｒ−Ｆｃタンパク質である。特定の実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、抗ニュートロカイン−アルファペプチボディである。特定の実施形態において、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストは、ドミナントネガティブとして機能するニュートロカイン−アルファタンパク質の断片または変異体である。好ましい実施形態において、免疫調節薬剤は、本質的に精製される（たとえば、その効果を制限するか、または望まない副作用を起こす基質を本質的に含まない）。被験体は好ましくは、限定はしないが、ウシ、ブタ、ウマ、ニワトリ、ネコ、イヌなどのような動物を含む動物であり、好ましくは哺乳動物であり、もっとも好ましくはヒトである。
【０３９３】
免疫調節薬剤を、個々の患者の臨床的状況（とりわけ免疫調節薬剤のみでの処置の副作用）、免疫調節薬剤を含む組成物の送達部位、投与方法、投与スケジュール、および臨床医に公知の他の因子を考慮にいれて、良好な医薬実施と一致した様式で、製剤化および投与する。本明細書の目的のための「治療有効量」の免疫調節薬剤はしたがって、そのような考慮によって決定される。
【０３９４】
種々の送達系が公知であり、たとえばリポソーム、マイクロ粒子、マイクロカプセルにおけるカプセル化、この化合物を発現可能な組換え細胞、レセプター媒介性エンドサイトーシス（たとえばＷｕ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２（１９８７）を参照のこと）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸構築などの、免疫調節薬物を含む医薬組成物を投与するために使用可能である。導入の方法には、限定はしないが、経皮、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮内、経鼻、硬膜外および経口経路が含まれる。免疫調節薬剤を含む医薬組成物は、任意の従来の経路、たとえば、注入またはボーラス注射によって、上皮または粘膜裏層（たとえば口粘膜、直腸および小腸粘膜など）を介した吸収によって投与してよく、他の生物活性剤と一緒に投与してよい。投与は全身または局所でありうる。さらに、免疫調節薬剤を含む医薬組成物を、脳室内および髄膜注射を含む、任意の好適な経路によって中枢神経系に導入することが望ましく、脳室内注射は、たとえば、オマヤレザバー（Ｏｍａｙａ  ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）のような、レザバーに結合した脳室内カテーテルによって促進してよい。肺投与もまた、吸入器またはネブライザーの利用、およびエアゾル化剤での調製物によって、使用可能である。
【０３９５】
特定の実施形態において、本発明は、治療剤の医薬製剤（たとえば本技術分野で公知であり、および／または本明細書で記述している免疫調節薬剤）に関する。とりわけ、本発明は、天然のタンパク質性である治療剤の医薬製剤（たとえばタンパク質および抗体）に関する。本発明の医薬製剤には、薬理学的に許容可能な賦形剤が含まれる。一般に、本発明の医薬製剤は、治療剤が、その物理的、化学的および生物学的活性を維持するように調製される。本発明の医薬製剤は、好適な温度で保存しうる。たとえば、本発明の医薬製剤は、２〜８℃、−４０℃または−８０℃にて保存してよい。特定の実施形態において、安定な製剤とは、２年間にわたり約１％未満の治療剤の凝集が観察される、２年間にわたり約１％未満の治療剤の酸化が観察される、および／または２年間にわたり約４％未満の治療剤の脱アミド化が観察されるものである。本発明の医薬製剤中に存在する治療剤の量は、たとえば、所望の用量および投与の様式を考慮に入れることによって決定する。本発明の１つの実施形態において、本発明の医薬製剤中の治療薬剤の濃度は、約１〜１６０ｍｇ／ｍｌ、約１０〜１５５ｍｇ／ｍｌ、約２０〜１５０ｍｇ／ｍｌ、約３０〜１４５ｍｇ／ｍｌ、約４０〜１４０ｍｇ／ｍｌ、約５０〜１３５ｍｇ／ｍｌ、約６０〜１３０ｍｇ／ｍｌ、約７０〜１２５ｍｇ／ｍｌ、約８０〜１２０ｍｇ／ｍｌ、約９０〜１１５ｍｇ／ｍｌ、約９５〜１１０ｍｇ／ｍｌ、約１００〜１０５ｍｇ／ｍｌ、または約１００ｍｇ／ｍｌである。上記の濃度の中間、たとえば約１１〜１５４ｍｇ／ｍｌの範囲もまた本発明の一部として意図される。たとえば、上限および／または下限として、任意の上記した値の組合せを用いた値の範囲が含まれることが意図される。本文脈中、「約」には、特に引用された範囲、および範囲の上限および／または下限において、数（５、４、３、２または１）ｍｇ／ｍｌによる大きな、または小さな範囲が含まれる。
【０３９６】
本発明の水性医薬製剤には、ｐＨ緩衝溶液が含まれる。本発明の１つの実施形態において、本発明の医薬製剤に使用する緩衝液は、約５〜約７の範囲のｐＨを持つ。好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤に使用する緩衝液は、約５．５〜約６．５の範囲のｐＨを持つ。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤に使用する緩衝液は、約５．８〜約６．２の範囲のｐＨを持つ。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤に使用する緩衝液は、約６．０のｐＨを持つ。上記のｐＨの中間の範囲もまた、本発明の一部に含まれると意図される。たとえば、上限および／または下限として、任意の上記した値の組合せを用いた値の範囲が含まれることが意図される。本文脈において、「約」には、特に引用された範囲、および範囲の上限および／または下限において、０．５、０．４、０．３、０．２または０．１ｐＨユニットによる大きな、または小さな範囲が含まれる。好ましい範囲内にｐＨを制御する緩衝液の例として、酢酸（たとえば、酢酸ナトリウム）、（コハク酸ナトリウムのような）コハク酸、グルコン酸、ヒスチジン、クエン酸、Ｔｒｉｓ、リン酸、グリシルグリシンおよび他の有機酸緩衝液が挙げられる。さらなる例示的緩衝液は、薬理学的に許容可能であり、以下で定義されるもののような、好適な酸、塩基およびそれらの塩から作製されうるものである。
【０３９７】
薬理学的に許容可能な酸には、調製される濃度および様式にて非毒性である無機および有機酸が含まれる。たとえば、好適な無機酸には、塩酸、過塩素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、硫酸、スルホン酸、スルフィン酸、スルファニル酸、リン酸、カルボン酸などが含まれる。好適な有機酸には、たとえば、ギ酸、２−ヒドロ酢酸、トリフルオロ酢酸、フェニル酢酸、トリメチル酢酸、ｔ−ブチル酢酸、アントラニル酸、プロパン酸、２−ヒドロキシプロパン酸、２−オキソプロパン酸、プロパンジオイン酸、シクロペンタンプロピオン酸、シクロペンタンプロピオン酸、３−フェニルプロピオン酸、ブタノン酸、ブタンジオイン酸、安息香酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、２−アセトキシ−安息香酸、アスコルビン酸、シンナミン酸、ラウリル硫酸、ステアリン酸、ムコン酸、マンデル酸、コハク酸、エンボン酸、フマル酸、リンゴ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、マロン酸、乳酸、クエン酸、タルタル酸、グリコール酸、グリコン酸、グルコン酸、ピルビン酸、グリオキサル酸、オキサル酸、メシル酸、コハク酸、サリチル酸、フタル酸、パルモイル酸、パルメイン酸、チオシアン酸、メタンンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、カンホルスルホン酸、４−メチルビシクロ［２．２．２］−オクト−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプトン酸、４，４’−メチレンビス−３−（ヒドロキシ−２−エン−１−カルボン酸）、ヒドロキシナフトイン酸などを含む、直鎖および分岐鎖アルキル、芳香族、環状、環状脂肪族、アリール脂肪族、複素環、飽和、不飽和、モノ−、ジ−、およびトリカルボン酸が含まれる。
【０３９８】
薬理学的に許容可能な塩基には、調製される濃度および様式にて非毒性である無機および有機塩基が含まれる。たとえば、好適な塩基には、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム、Ｎ−メチルグルカミン、モルホリン、ピペリジンのような無機塩基形成金属から形成されるもの、たとえばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジエチルアミノエタノール、トリメトアミン、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルコサミン、チオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ポリアミン樹脂などのような、一級、二級および三級アミン、置換アミン、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂［たとえば、Ｎ（Ｒ’）４＋（式中Ｒ’は独立してＨまたはＣ１−４アルキル、たとえばアンモニウム、Ｔｒｉｓ）］を含む有機非毒性塩基が含まれる。とりわけ好ましい有機非毒性塩基は、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、エタノールアミン、トリメタミン、ジシクロヘキシルアミン、コリンおよびカフェインである。
【０３９９】
本発明で利用可能なさらなる薬理学的に許容可能な酸および塩基には、たとえばヒスチジン、グリシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシンおよびアスパラギンのようなアミノ酸に由来するものが含まれる。
【０４００】
薬理学的に許容可能な緩衝液には、上記で示した酸および塩基の酸添加塩および塩基添加塩両方に由来するものが含まれる。本発明の１つの実施形態において、本発明の医薬製剤の緩衝液は、コハク酸、ヒスチジン、クエン酸および／またはリン酸である。好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤の緩衝液は、ヒスチジンである。別の好ましい実施形態において、本発明の薬理学的に許容可能な緩衝液はクエン酸である。
【０４０１】
本発明の別の実施形態において、本発明の医薬製剤の緩衝液濃度は、約５〜５０ｍＭ、約５〜２０ｍＭ、約５〜１５ｍＭ、または約１０ｍＭである。上記した濃度の中間の範囲、たとえば約６〜４８ｍＭもまた、本発明の一部として意図される。たとえば、上限および／または下限において、任意の上記した値の組合せを用いた値の範囲が含まれることが意図される。本文脈において、「約」は、特に引用した範囲、および範囲の上限および／または下限にて、数（５、４、３、２または１）ｍＭによる大きな、または小さな範囲を含む。
【０４０２】
界面活性剤をまた、本発明の医薬製剤に加えてもよい。例示的界面活性剤として、ポリソルベート（たとえばポリソルベート２０または８０）、またはポロキサマー（たとえばポロキサマー１８８）のような非イオン性界面活性剤が含まれる。他の薬理学的に許容可能な界面活性剤が、本技術分野でよく知られており、また企図される。特定の実施形態において、界面活性剤の量は、（振とうまたは輸送に際して発生するような）治療剤の凝集を減らすため、本発明の医薬製剤での粒子形成を最小化するため、および／または治療剤の非特異的吸収を減少させるために十分な量で加えられる。好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤には、ポリソルベートである界面活性剤が含まれる。
【０４０３】
１つの実施形態において、本発明の医薬製剤には、界面活性剤ポリソルベート２０が含まれる。１つの好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤には、少なくとも０．００７％〜約０．０７％の間のポリソルベート２０が含まれる。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤には、約０．０１％〜約０．０５％の間のポリソルベート２０が含まれる。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤には、約０．０１％〜約０．０３％の間のポリソルベート２０が含まれる。別の好ましい実施形態において、約０．０１％ポリソルベート２０が、本発明の医薬製剤に見られる。本文脈において、「約」とは、ポリソルベート２０の割合が、０．００７％未満ではないという条件で、とりわけ引用された範囲、および範囲の上限および／または下限にて、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％または０．００５％による大きいな、または小さな範囲を含む。
【０４０４】
別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤には、界面活性剤ポリソルベート８０が含まれる。１つの好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤には、約０．００１５％〜約０．０７％の間のポリソルベート８０が含まれる。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤には、少なくとも０．００３％〜約０．０５％の間のポリソルベート８０が含まれる。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤には、少なくとも０．００５％〜約０．０３％の間のポリソルベート８０が含まれる。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤には、少なくとも０．０１％〜約０．０３％の間のポリソルベート８０が含まれる。別の好ましい実施形態において、約０．０１％  ポリソルベート８０が、本発明の医薬製剤に見られる。本文脈において、「約」は、ポリソルベート８０の割合が、０．００１５％未満ではないという条件で、とりわけ引用された範囲、および範囲の上限および／または下限にて、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％または０．００５％による大きな、または小さな範囲を含む。
【０４０５】
等張調節剤をまた、本発明の医薬製剤に加えてもよい。有用な等張調節剤には塩およびアミノ酸が含まれる。薬理学的に許容可能で、本発明の医薬製剤のために好適である塩には、塩化ナトリウム、コハク酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウムおよび塩化カルシウムが含まれる。本発明の医薬製剤での使用のために好ましい塩は、ＮａＣｌおよびＭｇＣｌ２である。ＮａＣｌは、脱アミノ化および凝集から薬剤を保護することによって、治療剤の安定性を改善しうる。１つの好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、ＮａＣｌを含む。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、約１５０〜約５００ｍＭ  ＮａＣｌを含む。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、約１５０ｍＭ  ＮａＣｌを含む。本文脈において、「約」は、とりわけ引用された範囲、および範囲の上限および／または下限にて、１、２、３、４、５、１０、２５または５０ｍＭによる大きな、または小さな範囲を含む。好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は等張性である。等張性によって、本発明の医薬製剤が、本質的にヒト血液と同様の浸透圧を持つことが意味される。等張性調製物は一般的に、約２５０〜約３５０ｍＯｓｍ、好ましくは約２９０〜約３１０ｍＯｓｍの浸透圧を持つ。本文脈において、「約」は、とりわけ引用した範囲、および範囲の上限および／または下限にて、数（５、４、３、２または１）ｍＯｓｍによる大きな、または小さな範囲を含む。等張性は、たとえば、蒸気圧または氷凍結型浸透圧計を用いて測定可能である。
【０４０６】
１つの実施形態において、本発明の医薬製剤には、上記で同定した薬剤（すなわち治療剤、緩衝液、界面活性剤および等張調節剤）が含まれ、ベンジルアルコール、フェノール、ｍ−クレソール、クロロブタノールおよび塩化ベンズエトニウムのような１つ以上の保存剤は本質的に含まれない。別の実施形態において、保存剤が本発明の医薬製剤に含まれ得、とりわけ、製剤は多重投与製剤である。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）にて記述されたもののような、１つ以上の他の薬理学的に許容可能な担体、賦形剤または安定剤が、それらが、製剤の所望の特徴に明らかに不利に影響を与えないという条件で、本発明の医薬製剤に含まれてよい。許容可能な担体、賦形剤または安定剤は、使用する用量および濃度において、レシピエントに対して非毒性であり、さらなる緩衝剤、共溶媒、アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤、ＥＤＴＡのようなキレート剤、金属複合体（たとえばＺｎタンパク質複合体）、ポリエステルのような生分解性ポリマー、保存剤、抗凍結剤（ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）、溶解保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔｓ）、増量剤などが含まれる。好適な抗凍結剤には、ポリオール類、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、グルタミン酸、他のアミノ酸などが含まれる。さらなる好適な抗凍結剤には、スクロース、マンノース、トレハロース、グルコース、ソルビトールおよびマンニトールなどのような、糖および糖アルコールが含まれる。好適な溶解保護剤には、スクロース、トレハロース、ラクトースおよびマルトースなどを含む糖が包含しうる。好適な増量剤には、マンニトール、グリシンおよびソルビタール（ｓｏｒｂｉｔａｌ）などが含まれる。
【０４０７】
特定の実施形態において、本発明の医薬製剤には、抗凍結剤が含まれない。さらなる実施形態において、本発明の医薬製剤にはスクロースが含まれない。
【０４０８】
一般的にタンパク質製剤を安定化させるために使用するＥＤＴＡがまた、本発明の医薬製剤に含まれうる。キレート剤としてのＥＤＴＡは、スルフヒドリル基の金属触媒酸化を阻害し得、したがって、ジスルフィド結合凝集物の形成を減少させる。好ましいＥＤＴＡの濃度は、約０．０１％〜約０．２％である。
【０４０９】
本発明の医薬製剤は、処置されている特定の兆候のために、必要に応じて１つ以上の他の治療剤、好ましくは、本発明の医薬製剤中の治療剤に不利に影響を与えない補助活性を持つものと組み合わせてもよい。組合せは、さらなる治療剤が、免疫調節薬剤との組合せとして調製される場合に企図される。さらに、組合せは、さらなる治療剤が、独立して調製されるが、しかし免疫調節薬剤との同時投与または重複投与のために意図される。そのようなさらなる治療剤は、意図する目的のために効果的な量で、併用して好適に存在する。本発明の製剤と組合せ可能なさらなる治療剤がさらに以下に記述されている。
【０４１０】
本発明は、好ましい実施形態において、１０ｍＭヒスチジン緩衝液、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０１％ポリソルベート８０、ｐＨ６．０（±０．５）を含むか、またはそれらからなる医薬製剤を提供する。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１６０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約８０ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌの量での抗体、１０ｍＭヒスチジン緩衝液、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０１％ポリソルベート８０、ｐＨ６．０（±０．５）を含むか、またはそれらからなる。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、静脈内投与のために、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１６０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約８０ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌの量での抗体、１０ｍＭヒスチジン緩衝液、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０１％ポリソルベート８０  ｐＨ６．０（±０．５）を含むか、またはそれらからなる。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、皮下投与のために、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１６０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約８０ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌの量での抗体、１０ｍＭヒスチジン緩衝液、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０１％ポリソルベート８０、ｐＨ６．０（±０．５）を含むか、またはそれらからなる。本文脈において、「約」には、特に引用した範囲、および範囲の上限および／または下限として、数（５、４、３、２または１）ｍｇ／ｍｌによる大きな、または小さな範囲が含まれる。
【０４１１】
好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、１００ｍｇ／ｍｌの抗体、１０ｍＭ
ヒスチジン緩衝液、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０１％ポリソルベート８０、ｐＨ６．０（±０．５）を含むか、またはそれらからなる。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、静脈内投与のために１００ｍｇ／ｍｌの抗体、１０ｍＭ  ヒスチジン緩衝液、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０１％ポリソルベート８０、ｐＨ６．０（±０．５）を含むか、またはそれらからなる。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、皮下投与のために１００ｍｇ／ｍｌの抗体、１０ｍＭ  ヒスチジン緩衝液、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０１％ポリソルベート８０、ｐＨ６．０（±０．５）を含むか、またはそれらからなる。
【０４１２】
本発明は、好ましい実施形態において、０．７４ｍｇ／ｍｌ  Ｌ−ヒスチジン、１．１ｍｇ／ｍｌ  Ｌ−ヒスチジン一塩酸塩、８．８ｍｇ／ｍｌ  ＮａＣｌ、および０．１ｍｇ／ｍｌ  ポリソルベート８０、ｐＨ６．０（±０．５）を含むか、またはそれらからなる医薬製剤を提供する。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１６０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約８０ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌの量での抗体、０．７４ｍｇ／ｍｌ  Ｌ−ヒスチジン、１．１ｍｇ／ｍｌ  Ｌ−ヒスチジン一塩酸塩、８．８ｍｇ／ｍｌ  ＮａＣｌ、および０．１ｍｇ／ｍｌ  ポリソルベート８０、ｐＨ６．０（±０．５）を含むか、またはそれらからなる。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、静脈内投与のために、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１６０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約８０ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌの量での抗体、０．７４ｍｇ／ｍｌ  Ｌ−ヒスチジン、１．１ｍｇ／ｍｌ  Ｌ−ヒスチジン一塩酸塩、８．８ｍｇ／ｍｌ  ＮａＣｌ、および０．１ｍｇ／ｍｌ  ポリソルベート８０、ｐＨ６．０（±０．５）を含むか、またはそれらからなる。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、皮下投与のために、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１６０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約８０ｍｇ／ｍｌ〜約１２０ｍｇ／ｍｌの量での抗体、０．７４ｍｇ／ｍｌ  Ｌ−ヒスチジン、１．１ｍｇ／ｍｌ  Ｌ−ヒスチジン一塩酸塩、８．８ｍｇ／ｍｌ  ＮａＣｌ、および０．１ｍｇ／ｍｌ  ポリソルベート８０、ｐＨ６．０（±０．５）を含むか、またはそれらからなる。本文脈において、「約」には、特に引用した範囲、および範囲の上限および／または下限として、数（５、４、３、２または１）ｍｇ／ｍｌによる大きいな、または小さな範囲が含まれる。
【０４１３】
好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、１００ｍｇ／ｍｌの抗体、０．７４ｍｇ／ｍｌ  Ｌ−ヒスチジン、１．１ｍｇ／ｍｌ  Ｌ−ヒスチジン一塩酸塩、８．８ｍｇ／ｍｌ  ＮａＣｌ、および０．１ｍｇ／ｍｌ  ポリソルベート８０、ｐＨ６．０（±０．５）を含むか、またはそれらからなる。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、静脈投与のために、１００ｍｇ／ｍｌの抗体、０．７４ｍｇ／ｍｌ  Ｌ−ヒスチジン、１．１ｍｇ／ｍｌ  Ｌ−ヒスチジン一塩酸塩、８．８ｍｇ／ｍｌ  ＮａＣｌ、および０．１ｍｇ／ｍｌ  ポリソルベート８０、ｐＨ６．０（±０．５）を含むか、またはそれらからなる。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、皮下投与のために、１００ｍｇ／ｍｌの抗体、０．７４ｍｇ／ｍｌ  Ｌ−ヒスチジン、１．１ｍｇ／ｍｌ  Ｌ−ヒスチジン一塩酸塩、８．８ｍｇ／ｍｌ  ＮａＣｌ、および０．１ｍｇ／ｍｌ  ポリソルベート８０、ｐＨ６．０（±０．５）を含むか、またはそれらからなる。
【０４１４】
好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤中の抗体は、モノクローナル抗体である。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤中の抗体はＩｇＧ抗体である。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤中の抗体は、ＩｇＧ１抗体である。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤中の抗体は、ＩｇＧ１／λ抗体である。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤中の抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。
【０４１５】
好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、２〜８℃にて少なくとも６ヶ月間安定である。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、２〜８℃にて少なくとも９ヶ月間安定である。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、２〜８℃にて少なくとも１年間安定である。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、２〜８℃にて少なくとも１．５年間安定である。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、２〜８℃にて少なくとも２年間安定である。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、２〜８℃にて少なくとも３年間安定である。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、２〜８℃にて少なくとも４年間安定である。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、２〜８℃にて少なくとも５年間安定である。
【０４１６】
好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤は、凍結融解の繰り返しにわたって、有意な安定性を提示することが可能であり、続くそのような処置が、融解後安定のままでありうる。一般的に、凍結すべき製剤が迅速に凍結され、たとば液体窒素中で凍結される。融解は、たとえば緩速融解である約０℃〜約２５℃の温度範囲、または急速融解である約２６℃〜４０℃の温度範囲であり得る。本文脈において、「約」には、特に引用した範囲、および範囲の上限および／または下限として、数（５、４、３、２または１）度による大きいな、または小さな範囲が含まれる。急速融解の例は、本発明の医薬製剤の、３７℃水浴中での融解である。好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤の抗体は、少なくとも１回の凍結融解の間安定である。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤の抗体は、少なくとも２回の凍結融解の間安定である。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤の抗体は、少なくとも３回の凍結融解の間安定である。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤の抗体は、少なくとも４回の凍結融解の間安定である。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤の抗体は、少なくとも５回の凍結融解の間安定である。別の好ましい実施形態において、本発明の医薬製剤の抗体は、少なくとも１０回の凍結融解の間安定である。
【０４１７】
安定性を保存するために、本発明の医薬製剤を凍結融解するための最適なレジメを決定することが望ましく、または特定の凍結融解周に供する抗体に対して最大の安定性を与える本発明の医薬製剤を同定することが望ましい。したがって、本発明の実施形態において、本パラメータを評価する。たとえば、本発明の医薬製剤を、分解産物がほとんど生成されない（たとえば最大の安定性を持つ）手順を決定するために、急速凍結、緩速凍結、急速融解、緩速融解のような種々の凍結融解条件下での安定性に関してアッセイ可能である。
【０４１８】
濃度試験によって、ＩｇＧ１／λ抗体が、（ＳＥＣ−ＨＰＬＣによって決定されるように）純度、および凝集（粒子が観察されない）において有害な影響なしに、１０ｍＭ  ヒスチジン緩衝液、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および０．０１％  ポリソルベート８０、ｐＨ６．０を含む本発明の医薬製剤中、少なくとも１６０ｍｇ／ｍｌまで濃縮してよいことが示された（データは示していない）。さらに、粘度の増加が濃縮によって観察された。粘度が増加するので、投与の困難さの可能性が増加する。研究によって、粘度が７．７５ｃＰ未満の試料を、１０秒未満で、３０Ｇ１／２インチ針により簡単に注射可能であることが示された。表Ｘ中で示したように、１６０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ１／λ抗体濃度においてさえ、医薬製剤の粘度が７．７５ｃＰ未満であり、したがって、シリンジによって簡単に注射される。
【０４１９】
表Ｘ  ＩｇＧ１／λ抗体濃度の関数としての粘度
【０４２０】
【表２】
0005936994.tif 000003
インビボ投与のために使用される製剤がもっとも好ましく無菌である。これは、製剤の調製前または後、無菌ろ過膜によるろ過によって簡単に達成される。
【０４２１】
好ましい実施形態において、本発明の抗体は、１０ｍＭクエン酸ナトリウム、１．９％グリシン、０．５％スクロース、０．０１％ポリソルベート８０、ｐＨ６．５（±０．３）中に処方される。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、静脈投与のために、１０ｍＭクエン酸ナトリウム、１．９％グリシン、０．５％スクロース、０．０１％ポリソルベート８０、ｐＨ６．５（±０．３）中に処方される。
【０４２２】
好ましい実施形態において、本発明の抗体は、１０ｍＭクエン酸ナトリウム、８％スクロース、０．０４％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０（ｐＨ６．５）（±０．３）中に処方される。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、静脈内注射のために、１０ｍＭクエン酸ナトリウム、８％スクロース、０．０４％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０（ｐＨ６．５）中に処方される。別の好ましい実施形態において、本発明の抗体は、皮下注射のために、１０ｍＭクエン酸ナトリウム、８％スクロース、０．０４％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０（ｐＨ６．５）中に処方される。
【０４２３】
一般的に、製剤は、ニュートロカイン−アルファ抗体または本技術分野で公知および／あるいは本明細書で記述された他の免疫調節薬剤を、液体担体または微粉固体担体、または両方と均一および密接に接触させることによって調製する。ついで、必要であれば、産物を所望の製剤に成型する。好ましくは、担体は非経口担体であり、より好ましくは、レシピエントの血液と等張である溶液である。そのような担体賦形剤の例として、水、生理食塩水、リンガー溶液およびデキストロース溶液が挙げられる。固定油およびオレイン酸エチルのような非水性ビヒクルもまた、リポソームと同様に本明細書で有用である。
【０４２４】
担体は好適に、等張性および化学安定性を増強する基質のような少量の添加物を含む。そのような物質は、使用する用量および濃度にて、レシピエントに対して非毒性であり、リン酸、クエン酸、コハク酸、酢酸および他の有機酸のような緩衝液またはそれらの塩、アスコルビン酸のような抗酸化剤、たとえばポリアルギニンまたはトリペプチドなどの低分子量（約１０残基以下）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンのようなタンパク質、ポリビニルピロリドンのような親水性ポリマー、グリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸またはアルギニンのようなアミノ酸、単糖類、二糖類およびセルロースまたはその誘導体、グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストリンを含む他の炭化水素、ＥＤＴＡのようなキレート剤、マンニトールまたはソルビトールのような糖アルコール、ナトリウムのようなカウンターイオン、クレソール、フェノール、クロロブタノール、ベンジルアルコールおよびパラベンのような保存剤、ならびに／またはポリソルベート、ポロキサマーまたはＰＥＧのような非イオン性界面活性剤が含まれる。
【０４２５】
免疫調節ポリペプチドを含む組成物は、約０．００１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、または０．１ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１〜１０ｍｇ／ｍｌまたは１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度で、約３〜１０、または３〜８、より好ましくは５〜８、もっとも好ましくは６〜７のｐＨにて、そのような賦形剤中に典型的に処方される。ある特定の上記の賦形剤、担体または安定剤の利用が、結果としてポリペプチドの塩の形成となることが理解される。
【０４２６】
治療的投与のために使用される組成物がもっとも好ましく無菌である。滅菌は、無菌ろ過膜（たとえば０．２ミクロン膜）を介したろ過によって簡単に達成される。治療的組成物を一般的に、無菌のアクセスポートを持つ容器、たとえば皮下注射針によってストッパー穴あけが可能である静脈溶液バッグまたはバイアル内に配置する。
【０４２７】
本発明の方法にて使用しうる免疫調節薬剤を含む医薬組成物は、通常、ユニットまたは多重投与容器、たとえば密封アンプルまたはバイアル中に、水溶液として、または再構成のための凍結乾燥製剤として保存される。凍結乾燥製剤の例として、１０−ｍｌバイアルを、５ｍｌの無菌ろ過１％（ｗ／ｖ）水性ニュートロカイン−アルファポリペプチド溶液で満たし、得られた混合液を凍結乾燥する。注入溶液を、静菌注射用水を用いて、凍結乾燥ニュートロカイン−アルファポリペプチドを再構成することによって調製する。
【０４２８】
あるいは、本発明の方法にて使用しうる免疫調節薬剤を含む医薬組成物を、単一用量容器中、凍結乾燥形態で保存する。注入選択を、注射のための無菌担体を用いて再構成する。
【０４２９】
特定の実施形態において、本発明にて使用しうる免疫調節薬剤は、ニュートロカイン−アルファまたは抗ＣＤ２０抗体の放射標識された形態のような、放射標識されたポリペプチドである。放射標識された分子を含むそのような医薬組成物にはまた、アスコルビン酸ナトリウム、ゼントラン−４０、およびグリセロールのような放射保護剤および血漿増量剤が含まれてよい。特定の実施形態において、本発明の方法にて使用しうる組成物には、１０．０ｍＭクエン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、８．７ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、４％（ｗ／ｖ）アスコルビン酸ナトリウム、３．３％（ｗ／ｖ）Ｇｅｎｅｔｒａｎ−４０中で処方した、ニュートロカイン−アルファポリペプチドまたはそれらの断片または変異体のヨウ化形態が含まれる。
【０４３０】
特定の実施形態において、本発明の方法にて使用しうる組成物には、少なくとも１ｍｇ／ｍＬの配列番号２のアミノ酸残基１３４〜２８５のヨウ化形態、１０．０ｍＭクエン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、８．７ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、４％（ｗ／ｖ）アスコルビン酸ナトリウム、３．３％（ｗ／ｖ）Ｇｅｎｅｔｒａｎ−４０が含まれる。特定の実施形態において、本発明の方法にて使用しうる組成物には、少なくとも２ｍｇ／ｍＬの配列番号２のアミノ酸残基１３４〜２８５のヨウ化形態、１０．０ｍＭクエン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、８．７ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、４％（ｗ／ｖ）アスコルビン酸ナトリウム、３．３％（ｗ／ｖ）Ｇｅｎｅｔｒａｎ−４０が含まれる。特定の実施形態において、本発明の方法にて使用しうる組成物には、少なくとも３ｍｇ／ｍＬの配列番号２のアミノ酸残基１３４〜２８５のヨウ化形態、１０．０ｍＭクエン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、８．７ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、４％（ｗ／ｖ）アスコルビン酸ナトリウム、３．３％（ｗ／ｖ）Ｇｅｎｅｔｒａｎ−４０が含まれる。特定の実施形態において、本発明の方法にて使用しうる組成物には、少なくとも４ｍｇ／ｍＬの配列番号２のアミノ酸残基１３４〜２８５のヨウ化形態、１０．０ｍＭクエン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、８．７ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、４％（ｗ／ｖ）アスコルビン酸ナトリウム、３．３％（ｗ／ｖ）Ｇｅｎｅｔｒａｎ−４０が含まれる。特定の実施形態において、本発明の方法にて使用しうる組成物には、少なくとも４．６ｍｇ／ｍＬの配列番号２のアミノ酸残基１３４〜２８５のヨウ化形態、１０．０ｍＭクエン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、８．７ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、４％（ｗ／ｖ）アスコルビン酸ナトリウム、３．３％（ｗ／ｖ）Ｇｅｎｅｔｒａｎ−４０が含まれる。
【０４３１】
特定の実施形態において、本発明の方法にて使用しうる組成物には、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜２０ｍｇ／ｍＬの間の、配列番号２のアミノ酸残基１３４〜２８５のヨウ化形態、１０．０ｍＭクエン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、８．７ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、４％（ｗ／ｖ）アスコルビン酸ナトリウム、３．３％（ｗ／ｖ）Ｇｅｎｅｔｒａｎ−４０が含まれる。特定の実施形態において、本発明の方法にて使用しうる組成物には、約１ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬの間の、配列番号２のアミノ酸残基１３４〜２８５のヨウ化形態、１０．０ｍＭクエン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、８．７ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、４％（ｗ／ｖ）アスコルビン酸ナトリウム、３．３％（ｗ／ｖ）Ｇｅｎｅｔｒａｎ−４０が含まれる。特定の実施形態において、本発明の方法にて使用しうる組成物には、約２ｍｇ／ｍＬ〜８ｍｇ／ｍＬの間の、配列番号２のアミノ酸残基１３４〜２８５のヨウ化形態、１０．０ｍＭクエン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、８．７ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、４％（ｗ／ｖ）アスコルビン酸ナトリウム、３．３％（ｗ／ｖ）Ｇｅｎｅｔｒａｎ−４０が含まれる。特定の実施形態において、本発明の方法にて使用しうる組成物には、約３ｍｇ／ｍＬ〜６ｍｇ／ｍＬの間の、配列番号２のアミノ酸残基１３４〜２８５のヨウ化形態、１０．０ｍＭクエン酸ナトリウム、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、８．７ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、４％（ｗ／ｖ）アスコルビン酸ナトリウム、３．３％（ｗ／ｖ）Ｇｅｎｅｔｒａｎ−４０が含まれる。
【０４３２】
好ましい実施形態において、本発明の方法にて使用しうる組成物には、抗ニュートロカイン−アルファ抗体が含まれる。他の実施形態において、本発明の方法にて使用しうる組成物には、ニュートロカイン−アルファに特異的に結合する抗体が含まれる。他の実施形態において、本発明の方法にて使用しうる組成物には、アンタゴニスト抗ニュートロカイン−アルファ抗体が含まれる。他の実施形態において、本発明の方法にて使用しうる組成物には、ニュートロカイン−アルファに特異的に結合し、ニュートロカイン−アルファの生物学的活性を中和する抗体を含む。他の実施形態において、本発明の方法にて使用しうる組成物には、細胞培養から精製した組換え体ニュートロカイン−アルファタンパク質に結合する抗ニュートロカイン−アルファ抗体が含まれ、前記組換え体ニュートロカイン−アルファタンパク質は、配列番号２の少なくともアミノ酸１３４〜２８５をコードしているポリヌクレオチドによってコードされる。他の実施形態において、本発明の方法にて使用しうる組成物には、ニュートロカイン−アルファに特異的に結合する抗体が含まれ、前記抗体は細胞培養液から精製した組換え体ニュートロカイン−アルファタンパク質に結合し、前記組換え体ニュートロカイン−アルファタンパク質が配列番号２の少なくともアミノ酸１３４〜２８５をコードしているポリヌクレオチドによってコードされる。
【０４３３】
免疫調節薬剤を含む医薬組成物は、経口、経直腸、非経口、皮下、嚢内、膣内、腹腔内、（粉末、軟膏、滴下または経皮パッチによってのような）局所、口内、または経口または経鼻スプレーとして（たとえば蒸気または粉末の吸入を介して）投与してよい。
【０４３４】
本明細書で使用するところの語句「非経口」は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内、皮下および関節内注射および注入を含む投与の様式を意味する。
【０４３５】
好ましい実施形態において、免疫調節薬剤を含む組成物を皮下で投与する。
【０４３６】
別の好ましい実施形態において、免疫調節薬剤を含む組成物を静脈内に投与する。
【０４３７】
免疫調節薬剤を含む組成物をまた、除放システムによって投与してよい。除放組成物の好適な例として、（たとえばフィルムまたはマイクロカプセルのような、成型物の形態におけるたとえば半透性ポリマーマトリックスのような）好適なポリマー物質、（たとえば許容可能な油中のエマルジョンのような）好適な疎水性物質、またはイオン交換樹脂、および（たとえば難溶性塩のような）難溶性誘導体が挙げられる。
【０４３８】
除放マトリックスには、ポリアクチド（米国特許第３，７７３，９１９号、欧州特許第５８，４８１号）、Ｌ−グルタミン酸およびガンマ−エチル−Ｌ−グルタミン酸のコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ，Ｕ．ら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２２：５４７−５５６（１９８３））、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）（Ｒ．Ｌａｎｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７（１９８１）、およびＲ．Ｌａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ  Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５（１９８２））、酢酸エチレンビニル（Ｒ．Ｌａｎｇｅｒら、上記）、またはポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシブチル酸（欧州特許第１３３，９８８号）が含まれる。
【０４３９】
特定の実施形態において、免疫調節薬剤を含む組成物は、たとえば、そのすべてが参考文献によって本明細書に援用されている、米国特許第４，９３８，７６３号、第５，２７８，２０１号、第５，２７８，２０２号、第５，３２４，５１９号、第５，３４０，８４９号および第５，４８７，８９７号にて、および国際特許出願第ＷＯ０１／３５９２９号、第ＷＯ００／２４３７４号および第ＷＯ００／０６１１７号にて記述されたような、生分解性高分子薬剤送達系に処方される。特定の実施形態において、免疫調節薬剤を含む組成物を、Ａｔｒｉｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ．（Ｆｏｒｔ  Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ）のＡＴＲＩＧＥＬ（登録商標）生分解性システムを用いて処方する。他の特定の実施形態において、免疫調節薬剤を含む組成物を、Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）から入手可能なＰｒｏＬｅａｓｅ（登録商標）除放システムを用いて処方する。
【０４４０】
医薬製剤中で使用可能な生分解性ポリマーの例として、限定はしないが、ポリアクチド類、ポリグリコリド類、ポリカプロラクトン類、ポリアンヒドリド類、ポリアミド類、ポリウレタン類、ポリエステルアミド類、ポリオルソエステル類、ポリジオキサノン類、ポリアセタール類、ポリケタール類、ポリカルボネート類、ポリオルソカルボネート類、ポリホスファゼン類、ポリヒドロキシブチレート類、ポリヒドロキシバレレート類、ポリアルキレンオキサレート類、ポリアルキレンスクシネート類、ポリ（マレイン酸）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（メチルビニルエーテル）、ポリ（無水マレイン酸）、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリヒドロキシセルロース、キチン、キトサン、および上記物質のコポリマー、テルポリマーまたは組合せまたは混合物が挙げられる。好ましいポリマーは、より低い程度の結晶化を持ち、より疎水性であるものである。これらのポリマーおよびコポリマーは、また高程度の水素結合を持つポリグリコリドおよびキチンのような高結晶性ポリマーよりも、生物適合な溶媒中で可溶性である。所望の可溶性パラメータを持つ好ましい物質は、ポリアクチド類、ポリカプロラクトン類、および可溶性を増強するためにより非結晶質な領域が存在するグルコリドとのこれらのコポリマーである。特に好ましい実施形態において、免疫調節剤を含む組成物の製剤中で使用可能な生分解性ポリマーは、ポリ（ラクチド−コ−グルコリド類）である。分子量、疎水性、およびラクチド／グリコチド比のようなポリマー特性を改変して、所望の薬物放出プロファイルを得てもよい（たとえば、そのすべてが参考文献によって本明細書に援用される、Ｒａｖｉｖａｒａｐｕら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ８９：７３２−７４１（２０００）を参照のこと）。
【０４４１】
生分解性ポリマーのための溶媒が、非毒性、水混和性もしくは生物適合性であることがまた好ましい。そのような溶媒の例として、限定はしないが、メタノール、グリセリンプロピレングリコール、ブタノールのような、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、２−ピロリドン、Ｃ２〜Ｃ６アルカノール類、Ｃ１〜Ｃ１５アルコール類、ジル類、トリオール類、およびエタノール、グリセリンポリエチレングリコール、ブタノールのようなテトラオール類、アセトン、ジエチルケトンおよびメチルエチルケトンのようなＣ３〜Ｃ１５アルキルケトン類、酢酸メチル、酢酸エチル、乳酸エチルのようなＣ３〜Ｃ１５エステル類、メチルエチルケトンのようなアルキルケトン類、ジメチルホルムアミド、ジメチルラクトアミドおよびカプロラクタムのようなＣ１〜Ｃ１５アミド類、テトラヒドロフランまたはソルケタールのようなＣ３〜Ｃ２０エーテル類、トゥイーン類、トリアセチン、炭酸プロピレン、デシルメチルスルホキシド、ジメチルスルホキシド、オレイン酸、１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オンが挙げられる。他の好ましい溶媒は、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、ジプロピレングリコール、トリブチリン、オレイン酸エチル、グリセリン、グリコフラール、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸、ポリエチレングリコール、炭酸プロピレン、およびクエン酸トリエチルである。もっとも好ましい溶媒は、溶媒能およびその適合性のために、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、２−ピロリドン、ジメチルスルホキシド、トリアセチン、および炭酸プロピレンである。
【０４４２】
さらに、免疫調節剤および生分解性ポリマーを含む製剤組成物にはまた、放出速度調整剤および／または孔形成剤が含まれてよい。放出速度調整剤の例として、限定はしないが、脂肪酸、トリグリセリド、他の疎水性化合物、有機溶媒、可塑剤および親水性化合物が挙げられる。好適な放出速度調整剤には、たとえば、酢酸２−エトキシエチル、酢酸メチル、酢酸エチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ジメチル、フタル酸ジブチル、アジピン酸ジメチル、コハク酸ジメチル、オキサロ酢酸ジメチル、クエン酸ジメチル、クエン酸トリエチル、クエン酸アセチルトリブチル、クエン酸アセチルトリエチル、トリ酢酸グルセロール、ジ（ｎ−ブチル）セベケートなどのようなモノ−、ジ−、およびトリカルボン酸のエステル、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセリン、ソルビトールなどのようなポリヒドロキシアルコール類、脂肪酸類、トリグリセリド類、エポキシ化大豆油、および他のエポキシ化植物油のようなグリセロールのトリエステル類、コレステロールのようなステロール類、置換Ｃ６〜置換Ｃ１２アルカノール類、２−エトキシエタノールなどのようなアルコール類、などが含まれる。放出速度調整剤は、単独で、または他のそのような剤との組合せで使用してよい。放出速度調整剤の好適な組合せには、限定はしないが、グリセリン／ポリエチレングリコール、ソルビトール／グリセリン、酸化エチレン／酸化プロピレン、ブチレングリコール／アジピン酸などが含まれる。好ましい放出速度調整剤には、限定はしないが、クエン酸ジメチル、クエン酸トリエチル、ヘプタノン酸エチル、グリセリンおよびヘキサンジオールが含まれる。ポリマー組成物中で使用しうる好適な孔形成剤には、限定はしないが、スクロースおよびデキストロースのような糖、塩化ナトリウムおよび炭酸ナトリウムのような塩、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコールおよびポリビニルピロリドンのようなポリマー類が含まれる。塩または糖のような定義された孔サイズを提供する固体結晶が好ましい。
【０４４３】
特定の実施形態において、免疫調節剤を含む組成物を、Ａｔｒｉｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｆｏｒｔ  Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ）のＢＥＭＡＴＭ  生体分解性粘膜接着系（ＢｉｏＥｒｏｄｉｂｌｅ  Ｍｕｃｏａｄｈｅｓｉｖｅ  Ｓｙｓｔｅｍ）、ＭＣＡＴＭ  粘膜皮膚吸収系（ＭｕｃｏＣｕｔａｎｅｏｕｓ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ）、ＳＭＰＴＭ  溶媒ミクロ粒子系（Ｓｏｌｖｅｎｔ  ＭｉｃｒｏＰａｒｔｉｃｌｅ  Ｓｙｓｔｅｍ）、またはＢＣＰＴＭ  生物分解ポリマー系（ＢｉｏＣｏｍｐａｔｉｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍ）を用いて処方する。
【０４４４】
除放組成物にはまた、リポソームに封入された組成物（一般的に、Ｌａｑｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）、Ｔｒｅａｔら、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｆｉｄｌｅｒ（ｅｄｓ．），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３１７−３２７および３５３−３６５（１９８９）を参照のこと）が含まれる。リポソームは、それ自体公知の方法によって調製してよい。独逸特許第３，２１８，１２１号、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８２：３６８８−３６９２（１９８５）、Ｈｗａｎｇｒａ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７７：４０３０−４０３４（１９８０）、欧州特許第５２，３２２号、欧州特許第３６，６７６号、欧州特許第８８，０４６号、欧州特許第１４３，９４９号、欧州特許第１４２，６４１号、日本特許明細書第８３−１１８００８号、米国特許第４，４８５，０４５号および第４，５４４，５４５号および欧州特許第１０２，３２４号。通常、リポソームは、脂質含量が約３０ｍｏｌ．パーセントより大きなコレステロールである、小さな（約２００〜８００オングストローム）単層型であり、選択された割合は、最適な免疫調節治療に対して調整される。
【０４４５】
他の実施形態において、除放組成物には、本技術分野で公知の結晶製剤が含まれる。
【０４４６】
またさらなる実施形態において、免疫調節剤を含む組成物を、ポンプの方法によって送達する（Ｌａｎｇｅｒ上記、Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１（１９８７）、Ｂｕｃｈｗａｌｄら、Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７（１９８０）、Ｓａｕｄｅｋら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４（１９８９）を参照のこと）。
【０４４７】
他の制御放出系が、Ｌａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０））による概説にて議論されている。
【０４４８】
非経口投与のために、１つの実施形態において、免疫調節剤を、一般的に、所望の程度の純度にて、単回投与注射形態（溶液、懸濁液またはエマルジョン）で、薬理学的に許容可能な担体、すなわち使用した用量および濃度にてレシピエントに対して非毒性であり、製剤の他の成分と適合可能であるものと、混合することによって処方する。たとえば、活性成分が免疫調節タンパク質である場合、製剤は好ましくは、酸化剤およびポリペプチドに対して有害であると公知である他の化合物を含まない。
【０４４９】
特定の実施形態において、医薬化合物または組成物を、処置が必要な領域に局所的に投与することが望ましく、たとえば限定はしないが、手術間の局所注入、たとえば手術後の包帯と併用する局所適用によって、注射によって、カテーテルの方法によって、座薬の方法によって、またはインプラントの方法によって達成してよく、前記インプラントは、シラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜または繊維のような膜を含む、多孔性、非多孔性、またはゼラチン性物質である。好ましくは、抗体を含む本発明のタンパク質を投与する時に、タンパク質が吸収されない物質を使用することに注意しなければならない。
【０４５０】
別の実施形態において、免疫調節剤は、ビヒクル中、とりわけリポソーム中で送達可能である（Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）、Ｔｒｅａｔら、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｆｉｄｌｅｒ（ｅｄｓ．），Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３５３−３６５（１９８９）、Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ，同書、ｐｐ．３１７−３２７を参照のこと、一般的に同書を参照のこと）。
【０４５１】
また別の実施形態において、免疫調節剤は、制御放出系中で送達可能である。１つの実施形態において、ポンプを使用してよい（Ｌａｎｇｅｒ、上記、Ｓｅｆｔｏｎ，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１（１９８７）、Ｂｕｃｈｗａｌｄら、Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７（１９８）、Ｓａｕｄｅｋら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４（１９８９）を参照のこと）。他の実施形態において、ポリマー材料が使用可能である（Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、Ｌａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９７４）、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ、Ｓｍｏｌｅｎ  ａｎｄ  Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．）、Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）、Ｒａｎｇｅｒ  ａｎｄ  Ｐｅｐｐａｓ，Ｊ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１（１９８３）を参照のこと、またＬｅｖｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１９０（１９８５）、Ｄｕｒｉｎｇら、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１（１９８９）、Ｈｏｗａｒｄら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５（１９８９）を参照のこと。また別の実施形態において、制御放出系を、治療標的、すなわち脳の近くに配置することが可能であり、したがって、全身投与の位置画分のみが必要とされる（たとえば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、上記、ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）を参照のこと）。
【０４５２】
他の制御放出系が、Ｌａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５４７−１５３３（１９９０））による概説にて議論されている。
【０４５３】
本発明の化合物が、タンパク質をコードしている核酸である特定の実施形態において、核酸を、適切な核酸発現ベクターの一部として構築すること、およびたとえばレトロウイルスベクターの利用によって（米国特許第４，９８０，２８６号を参照のこと）、または直接注射によって、またはマイクロ粒子の照射（たとえば遺伝子ガン、Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ，Ｄｕｐｏｎｔ）の利用によって、または脂肪もしくは細胞表面レセプターもしくはトランスフェクト剤でコーティングすることによって、または核に入ることが知られているホメオボックス様ペプチドへ結合状態で投与すること（たとえば、Ｊｏｌｉｏｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１８６４−１８６８（１９９１））などによって細胞内となるように投与することで、そのコードしているタンパク質の発現を促進するためにインビボにて投与可能である。あるいは、核酸を細胞内に導入し、相同組換えによって、発現のために宿主細胞ＤＮＡ内に組み込むことができる。
【０４５４】
本発明はまた、医薬組成物も提供する。そのような組成物には、治療有効量の化合物、および薬学的に許容可能な担体が含まれる。特定の実施形態において、語句「薬学的にに許容可能な」は、連邦政府または州政府の規制当局によって許可された、または米国薬局方または他の一般的に認識された、動物、よりとりわけヒトでの利用のための薬局方に列記された、を意味する。語句「担体」は、治療物質を一緒に投与する、希釈液、アジュバント、賦形剤またはビヒクルを意味する。そのような医薬担体は、ピーナッツ油、大豆油、ミネラル油、セサミ油などのような、石油、動物、植物または合成由来のものを含む、水および油のような無菌液体でありうる。医薬組成物を静脈内に投与する場合に、水が好ましい担体である。食塩水溶液および水性デキストロースおよびグリセロール溶液もまた、とりわけ注射溶液のために、液体担体として利用可能である。好適な医薬賦形剤には、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが含まれる。所望の場合、組成物にはまた、少量の湿潤または乳化剤、またはｐＨ緩衝剤が含まれうる。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、ピル、カプセル、粉末、除放製剤などの形態を取り得る。組成物は、トリグリセリドのような伝統的な結合剤および担体とともに、座薬として処方可能である。経口製剤には、医薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような、標準の担体が含まれてよい。好適な医薬担体の例が、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」にて記述されている。そのような組成物は、患者への適切な投与のための形態を提供するために、好適な量の担体と一緒に、好ましくは精製形態で、治療有効量の化合物を含む。製剤は、投与の様式に適合する。
【０４５５】
好ましい実施形態において、組成物を、ヒトへの静脈投与のために適合した医薬組成物として、日常の手順にしたがって処方する。典型的に、静脈投与のための組成物は、無菌等張水性緩衝液の溶液である。必要ならば、組成物には、注射部位の痛みを和らげるために、可溶化剤およびリグノカインのような局所麻酔が含まれうる。一般的に、成分は、別々に提供されるか、またはたとえば活性剤の量を示したアンプルまたはサシェのような密封容器中、乾燥凍結粉末または水を含まない濃縮物として、単一投与形態で一緒に混合されるかのいずれかである。組成物が注入によって投与される場合、無菌医薬等級水または食塩水を含む注入ボトルで調剤可能である。組成物を注射によって投与する場合、注射のための無菌水または食塩水のアンプルを提供し、成分を投与の前に混合することができる。
【０４５６】
免疫調節剤を、中性形態または塩形態として処方してよい。薬学的に許容可能な塩には、塩酸、リン酸、酢酸、硝酸、酒石酸などに由来するもののようなアニオンと形成されたもの、およびナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するもののようなカチオンと形成されたものが含まれる。
【０４５７】
本明細書で記述されたように、本発明の方法にて効果的である免疫調節剤の量は、標準の臨床技術によって決定可能である。さらに、インビトロアッセイを任意に使用して、最適な投与範囲を同定するための手助けとしてよい。製剤中で使用する実際の用量はまた、投与経路、疾患または障害の重症度に依存し、専門家の決定および各患者の状況にしたがって決定されるべきである。有効量は、インビトロまたは動物モデル試験系に由来する用量応答曲線から外挿してよい。
【０４５８】
抗体に関して、患者に投与する用量は、典型的には患者体重の０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。好ましくは、患者へ投与する用量は、患者体重の０．１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは患者体重の１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである。好ましい実施形態において、１、４、１０または２０ｍｇ／ｋｇの用量を患者に静脈内に投与する。一般的に、ヒト抗体は、外来ポリペプチドに対する免疫応答のために、他の種からの抗体よりも、ヒト体内でより長い半減期を持つ。したがって、より低い用量のヒト抗体、および低い頻度の投与がしばしば可能である。さらに、本発明の抗体の投与の用量および頻度は、たとえば脂質化のような改変によって、抗体の取り込みおよび組織浸潤（たとえば脳へ）を増強することによって減少させてよい。
【０４５９】
一般的な定理として、１用量あたり非経口で投与するポリペプチドの全薬学的に効果的な量は、上記したように、治療的決定に従うが、患者体重の約１マイクログラム／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。より好ましくは、本用量は少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、ヒトに対してもっとも好ましくは約０．０１〜１ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。
【０４６０】
別の実施形態において、ポリペプチドは、０．０００１〜０．０４５ｍｇ／ｋｇ／日の間の用量、好ましくは０．００４５〜０．０４５ｍｇ／ｋｇ／日の間の用量、より好ましくは、ヒトにおいて約４５マイクログラム／ｋｇ／日の用量でヒトに対して投与され、マウスにおいて、約３ｍｇ／ｋｇ／日の用量である。
【０４６１】
連続して与えられる場合、ポリペプチドは典型的に、約１マイクログラム／ｋｇ／時間〜約５０マイクログラム／ｋｇ／時間の用量速度で、一日あたり１〜４回の注射によって、または連続皮下注入によってのいずれかで、たとえばミニポンプを用いて投与される。静脈バッグ溶液もまた使用してよい。
【０４６２】
変化を観察するために必要な処置の長さ、および応答の起こる処置後の間隔が、所望の効果に依存して変化するように思われる。
【０４６３】
免疫調節剤を含む組成物は、連続注入、一日あたり複数回の慎重な注射（たとえば一日３回以上、一日二回）、一日あたり単回注射、または断続的にあたえる慎重な注射（たとえば一日二回、一日一回、一日おき、週に二回、毎週、二週間に一回、毎月、二ヶ月間に一回、および三ヶ月ごと）として投与してよい。連続して与える場合、ポリペプチドは典型的には、約０．００１〜１０マイクログラム／ｋｇ／時間〜約５０マイクログラム／ｋｇ／時間、一日あたり１〜４回の注射によって、または連続皮下注入によってのいずれかで、たとえばミニポンプを用いて投与される。
【０４６４】
投与すべき免疫調節剤を含む組成物の有効量を、生物学的半減期、生物学的利用能、および毒性のようなパラメータを扱う当業者によく知られている手順を通して決定してよい。そのような決定が、とりわけ本明細書で提供される詳細な開示を考慮して、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０４６５】
生物体の免疫調節剤に対する生体暴露がまた、治療的および／または薬学的に有効な投与養成法にて重要な役割を果たしうる。相対的に長時間の、相対的に低容量の免疫調節剤の繰り返し投与のような種々の用量が、相対的に短時間の免疫調節剤の比較的高い用量の繰り返し投与で達成されるものと、治療的および／または医薬に区別可能な効果を持ちうる。
【０４６６】
Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈ，Ｅ．Ｊ．，ら（Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ５０（４）：２１９−４４（１９６６））によって供給された等価表面積投与変換係数（ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ  ｓｕｒｆａｃｅ  ａｒｅａ  ｄｏｓａｇｅ  ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）を用いて、当業者は、所与の実験系における免疫調節剤の利用から得られたデータを，別の実験系において１用量あたり投与される免疫調節剤の薬学的有効量の正確な推定値へ都合よく変換しうる。マウスにおける免疫調節剤の投与を介して得られた実験データを、たとえば、Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈらによって供給された変換係数を介して、ラット、サル、イヌおよびヒト中のニュートロカイン−アルファの薬学的有効量の正確な推定のために変換してよい。以下の変換表（表ＩＩＩ）が、Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈらによって提供されたデータの要約である。表ＩＩＩは、一つの種からのｍｇ／ｋｇに関して表された用量を、表に示した他の種におけるｍｇ／ｋｇとして表された等価の表面積用量へ変換するために、およその係数を示している。
【０４６７】
表ＩＩＩ．等価表面積投与変換係数
【０４６８】
【表３】
0005936994.tif 000004
したがって、たとえば、表ＩＩＩで提供された変換係数を用いて、マウスにおける５０ｍｇ／ｋｇの用量を、（５０ｍｇ／ｋｇ）×（１／４）＝１２．５ｍｇ／ｋｇにより、サルにおける適切な用量の１２．５ｍｇ／ｋｇに変換する。さらなる例として、マウスにおける０．０２、０．０８、０．８、２および８ｍｇ／ｋｇの用量が、それぞれヒトにおいて、１．６６７マイクログラム／ｋｇ、６．６７マイクログラム／ｋｇ、６６．７マイクログラム／ｋｇ、１６６．７マイクログラム／ｋｇおよび０．６６７ｍｇ／ｋｇの有効量と等しい。
【０４６９】
ある特定の実施形態において、ニュートロカイン−アルファまたは抗ニュートロカイン−アルファ抗体の放射標識形態の投与が企図される。適用される放射用量は、実質的に変化してよい。放射標識ニュートロカイン−アルファまたは抗ニュートロカイン−アルファ抗体組成物を、７０ｋｇ体重あたり、約０．１〜約１００ｍＣｉの用量で投与可能である。別の実施形態において、放射標識ニュートロカイン−アルファまたは抗ニュートロカイン−アルファ抗体組成物を、７０ｋｇ体重あたり、約０．１〜約５０ｍＣｉの用量で投与可能である。別の実施形態において、放射標識ニュートロカイン−アルファまたは抗ニュートロカイン−アルファ抗体組成物を、７０ｋｇ体重あたり、約０．１、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍＣｉの用量で投与可能である。
【０４７０】
放射標識ニュートロカイン−アルファまたは抗ニュートロカイン−アルファ抗体組成物を、約０．１〜約１０ｍＣｉ／体重ｋｇの用量で投与可能である。別の実施形態において、放射標識ニュートロカイン−アルファまたは抗ニュートロカイン−アルファ抗体組成物を、約０．２５〜約５ｍＣｉ／体重ｋｇの用量で投与可能である。特定の実施形態において、放射標識ニュートロカイン−アルファまたは抗ニュートロカイン−アルファ抗体組成物を、約０．３５、０．７０、１．３５、１．７０、２．０、２．５または３．０ｍＣｉ／ｋｇの用量で投与可能である。
【０４７１】
放射標識ニュートロカイン−アルファまたは抗ニュートロカイン−アルファ抗体組成物を、約１〜約５０ｍＣｉ／ｍ２の用量で投与可能である。別の実施形態において、放射標識ニュートロカイン−アルファまたは抗ニュートロカイン−アルファ抗体組成物を、約１０〜約３０ｍＣｉ／ｍ２の用量で投与可能である。特定の実施形態において、放射標識ニュートロカイン−アルファまたは抗ニュートロカイン−アルファ抗体組成物を、約１０、１５、２０、２５または３０ｍＣｉ／ｍ２の用量で投与可能である。
【０４７２】
放射標識ニュートロカイン−アルファまたは抗ニュートロカイン−アルファ抗体組成物中の総ニュートロカイン−アルファタンパク質、ニュートロカイン−アルファＳＶタンパク質、抗ニュートロカイン−アルファ抗体および／または抗ニュートロカイン−アルファＳＶ抗体の濃度はまた、約１マイクログラム／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇまで変化しうる。特定の実施形態において、放射標識ニュートロカイン−アルファまたは抗ニュートロカイン−アルファ抗体組成物中のニュートロカイン−アルファタンパク質、ニュートロカイン−アルファＳＶタンパク質、抗ニュートロカイン−アルファ抗体および／または抗ニュートロカイン−アルファＳＶ抗体の総濃度は、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００マイクログラム／ｋｇでありうる。
【０４７３】
たとえば、リンパ腫は放射線感受性腫瘍であると知られている。免疫診断イメージングのために、複合体によるトレース標識化を使用してよく、典型的に１〜２０ｍｇのニュートロカイン−アルファタンパク質を、約１〜６０ｍＣｉの放射性同位体で標識する。用量は、イメージングのために使用する同位体にいくらか依存してよく、より高い末端の範囲、好ましくは４０〜６０ｍＣｉを９９ｍＴｃとともに使用してよく、より低い末端の範囲、好ましくは１〜２０ｍＣｉを１１１Ｉｎととともに使用してよい。イメージング目的のために、約１〜約３０ｍｇのニュートロカイン−アルファ複合体を被験体に与えることが可能である。放射免疫治療目的のために、ニュートロカイン−アルファ複合体を、被ばくした全体線量が約１１００ｃＧｙまで、しかし好ましくは、５００ｃＧｙ以下であるような十分な量で、被験体に投与する。ニュートロカイン−アルファタンパク質、ニュートロカイン−アルファ共役物（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）およびニュートロカイン−アルファ複合体を含む、被験体に投与するニュートロカイン−アルファタンパク質の総量は、患者体重の１．０μｇ／ｋｇ〜１．０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。別の実施形態において、被験体に投与するニュートロカイン−アルファタンパク質の総量は、患者体重の２０μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇの範囲であり得る。
【０４７４】
ヒトの全身に対しておよそ５００ｃＧｙを与えうる放射活性の量は、約８２５ｍＣｉの１３１Ｉであると推定される。投与される放射活性の量は、部分的に、選択した同位体に依存する。９０Ｙによる治療のために、約１〜約２００ｍＣｉ量の放射活性が適切であると考えられ、好ましい量は１〜１５０ｍＣｉであり、および１〜１００ｍＣｉ（たとえば６０ｍＣｉ）がもっとも好ましい。投与された放射活性の量から組織線量を推定する好ましい方法は、トレーサー用量で、イメージングまたは他の薬物動態養成法を実施することであり、それによって予測線量測定の推定を得る。個々に投与するための放射薬理学の適切な用量を決定することにおいて、そのような器官に対する最大耐性と比較して、個々の器官が受ける照射の量を考慮することが必要である。そのような情報が、当業者に公知であり、たとえば、両方がそのすべてが参考文献によって本明細書に援用されている、Ｅｍａｍｉら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｐｈｙｓｉｃｓ  ２１：１０９−２２（１９９１）、およびＭｅｒｅｄｉｔｈ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ＆  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  １７：８３−９９（２００２）を参照のこと。
【０４７５】
骨髄は毒性のために放射用量を制限する組織であるので、たとえば全身に対して、２００〜６００ｃＧｙ（またはそれ以上）の範囲で、「高用量」プロトコールが骨髄置換プロトコールの支持を必要としうる。
【０４７６】
特定の実施形態において、患者は組成物（たとえば、ニュートロカイン−アルファ、または本技術分野で公知および／または本明細書で記述された免疫調節剤に特異的に結合する抗体）の複数投与を受ける。複数投与の１つの組が、周期としてよばれる。単一周期には、たとえば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２以上の投与が含まれうる。任意の１投与のために、用量は初期薬物負荷を可能にする、および／または質量、体表面積、疾患活性、疾患応答性、薬物耐性、回復時間、ＰＫパラメータおよび／または医薬反応（類）における患者特異的差違を説明するために、固定されるか、または変化してよい。
【０４７７】
所定の周期内の任意の２回の投与間の時間は、疾患活性、疾患応答性、薬物耐性、回復時間、ＰＫパラメータ、および／または薬理反応（類）における患者特異的差違に対応するために、固定されるか、または変化してよい。特定の実施形態において、患者に、続く投与にて所定量の２倍である初期負荷用量を与える。他の実施形態において、任意の２回の投与の間の時間は、１、２、３、４、５、６、または７日（１週間）以上であり得る。特定の実施形態において、任意の２回の投与間の時間は、１、２、３、４、５、６、７または８週以上であり得る。患者にはまた、多周期の処置を与えうる。２周期以上が必要である場合、任意の２処置周期間の時間は、疾患活性、疾患応答性、薬物耐性、回復時間、ＰＫパラメータ、および／または薬理反応（類）における患者特異的差違に対応するために、固定されるか、または変化してよい。特定の実施形態において、任意の２周期間の時間は、１、２、３、４、５、６週間以上でありうる。特定の実施形態において、任意の２周期間の時間は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月以上でありうる。特定の実施形態において、任意の２周期間の時間は、１、２、３、４、５年以上でありうる。特定の実施形態において、患者に、初期ボーラス投与、続いて１または複数周期処置を与える。
【０４７８】
１つの実施形態において、初期ボーラス投与には、患者に静脈内に投与される２ｍｇ／ｋｇ以上のニュートロカイン−アルファの抗体アンタゴニストの用量が含まれる。１つの実施形態において、初期ボーラス投与には、患者に静脈内に投与される５ｍｇ／ｋｇ以上のニュートロカイン−アルファの抗体アンタゴニストの用量が含まれる。好ましい実施形態において、初期ボーラス投与には、患者に静脈内に投与される１０ｍｇ／ｋｇ以上のニュートロカイン−アルファの抗体アンタゴニストの用量が含まれる。他の実施形態において、初期ボーラス投与には、患者に静脈内に投与される１５ｍｇ／ｋｇ以上のニュートロカイン−アルファの抗体アンタゴニストの用量が含まれる。１つの実施形態において、初期ボーラス投与には、患者に静脈内に投与される２０ｍｇ／ｋｇ以上または等しいニュートロカイン−アルファの抗体アンタゴニストの用量が含まれる。
【０４７９】
他の特定の実施形態において、初期ボーラスには、抗ＣＤ２０抗体が含まれる。
【０４８０】
他の特定の実施形態において、初期ボーラスには、Ｂ細胞破壊剤が含まれる。
【０４８１】
本発明はまた、医薬組成物の１つ以上の成分にて充填された１つ以上の容器を含む、医薬パックまたはキットも提供する。医薬品または生物学的産物の製造、利用または販売に関連する行政機関によって規定された形態での掲示が任意にそのような容器（類）に関連し、掲示は、ヒト投与のための製造、利用または販売の機関による許可を反映している。
【０４８２】
免疫調節剤は、単独で、または限定はしないが１つ以上のさらなる免疫調節剤、化学療法剤、抗生物質、抗ウイルス剤、ステロイド性および非ステロイド抗炎症剤、従来の免疫療法剤およびサイトカインを含む、他の治療剤と併用して投与してよい。併用は、たとえば混合物として一緒に、別々にしかし同時にまたは一斉に、または連続してのいずれかで投与してよい。これには、混合剤を治療混合物として一緒に投与する提示、およびまた混合剤を、たとえば同一の個体への別の静脈内ラインを介してのように、別々にしかし同時に投与する手順が含まれる。「併用での」投与にはさらに、最初に与えられた１つの化合物または薬剤の別々の投与と、それに続く第二の化合物または薬剤が含まれる。
【０４８３】
次段落において、免疫調節剤を他の化合物との併用で投与してよいことが開示される。ある特定の例において、追加の化合物はそれ自体がまた免疫調節剤である。そのような段落での開示は、２つ以上の異なる免疫調節剤を、本発明の方法と合わせて、互いに併用して投与してよいことが特に企図されることを伝える意図がある。たとえば、抗ニュートロカイン−アルファ抗体を、本発明の方法と合わせて、抗ＣＤ２０抗体と同時に使用してよいことが特に企図される。
【０４８４】
免疫調節剤との併用で投与しうる、従来の非特異的免疫抑制剤には、限定はしないが、ステロイド類、シクロスポリン、シクロスポリンアナログ、シクロホスファミド、シクロホスファミドＩＶ、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、アザチオプリン、ＦＫ−５０６、１５−デオキシスペルグアリン、および応答Ｔ細胞の機能を抑制することによって作用する他の免疫抑制剤が含まれる。免疫調節剤との併用で投与しうる他の免疫抑制剤には、限定はしないが、プレドニゾロン、メトトレキサート、サリドマイド、メトキサレン、ラパマイシン、レフルノミド、ミゾリビン（ＢＲＥＤＩＮＩＮＴＭ）、ブレクイナル、デオキシスペルグアリンおよびおアザスピラン（ＳＫＦ１０５６８５）が含まれる。
【０４８５】
特定の実施形態において、免疫調節剤を、免疫抑制剤との組合せで投与する。免疫調節剤とともに投与しうる免疫抑制調製物には、限定はしないが、ＯＲＴＨＯＣＬＯＮＥ  ＯＫＴ（登録商標）３（ムロモナブ−ＣＤ３）、ＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥＴＭ、ＮＥＯＲＡＬＴＭ、ＳＡＮＧＤＹＡＴＭ（シクロスポリン）、ＰＲＯＧＲＡＦ（登録商標）（ＦＫ５０６、タクロリムス）、ＣＥＬＬＣＥＰＴ（登録商標）（ミコフェノレート  モテフィル、活性代謝物がミコフェノール酸）、ＩＭＵＲＡＮＴＭ（アザチオプリン）、グルコルチコステロイド、ＤＥＬＴＡＳＯＮＥＴＭ（プレドニゾン）およびＨＹＤＥＬＴＲＡＳＯＬＴＭ（プレドニゾロン）のようなアドレノコルチコールステロイド、ＦＯＬＥＸＴＭおよびＭＥＸＡＴＥＴＭ（メトトレキサート）、ＯＸＳＯＲＡＬＥＮ−ＵＬＴＲＡＴＭ（メトキサレン）およびＲＡＰＡＭＵＮＥＴＭ（シロリムス）が含まれる。特定の実施形態において、免疫抑制剤を、器官または骨髄移植の拒絶を予防するために使用してよい。
【０４８６】
別の実施形態において、免疫調節剤を、ステロイド治療との組合せで投与する。免疫調節剤との併用で投与しうるステロイド類には、限定はしないが、経口コルチコステロイド類、プレドニゾンおよびメチルプレドニゾロン（たとえばＩＶメチルプレドニゾロン）が含まれる。特定の実施形態において、免疫調節剤を、プレドニゾンとの併用で投与する。さらなる特定の実施形態において、免疫調節剤を、プレドニゾンおよび免疫抑制剤との併用で投与する。免疫調節剤およびプレドニゾンと投与しうる免疫抑制剤は、本明細書で記述したようなものであり、限定はしないが、アザチオプリン、シクロホスファミドおよびシクロホスファミドＩＶが含まれる。他の特定の実施形態において、免疫調節剤を、メチルプレドニゾロンとの組合せで投与する。さらに特定の実施形態において、免疫調節剤を、メチルプレドニゾロンおよび免疫抑制剤との併用で投与する。免疫調節剤およびメチルプレドニゾロンとの併用で投与しうる免疫抑制剤は、本明細書で記述したものであり、限定はしないが、アザチオプリン、シクロホスファミドおよびシクロホスファミドＩＶが含まれる。
【０４８７】
好ましい実施形態において、免疫調節剤を、抗マラリア剤との併用で投与する。免疫調節剤と投与しうる抗マラリア剤には、限定はしないが、ヒドロキシクロクイン（たとえばＰＬＡＱＵＥＮＩＬＴＭ）、クロロクインおよび／またはクイナクリンが含まれる。
【０４８８】
好ましい実施形態において、免疫調節剤を、ＮＳＡＩＤとの併用で投与する。
【０４８９】
包括的実施形態において、免疫調節剤を、１、２、３、４、５、または１０以上の下記の薬物との併用で投与する。ＮＲＤ−１０１（Ｈｏｅｃｈｓｔ  Ｍａｒｉｏｎ  Ｒｏｕｓｓｅｌ）、ジクロフェナク（Ｄｉｍｅｔｈａｉｄ）、オキサプロジンカリウム（Ｍｏｎｓａｎｔｏ）、メカセルミン（Ｃｈｉｒｏｎ）、Ｔ−６１４（Ｔｏｙａｍａ）、ペメトレキセド二ナトリウム（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、アトレレウトン（Ａｂｂｏｔｔ）、バルデコキシブ（Ｍｏｎｓａｎｔｏ）、エルテナク（Ｂｙｋ  Ｇｕｌｄｅｎ）、カンパス、ＡＧＭ−１４７０（Ｔａｋｅｄａ）、ＣＤＰ−５７１（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ  Ｃｈｉｒｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＭ−１０１（ＣａｒｂｏＭｅｄ）、ＭＬ−３０００（Ｍｅｒｃｋｌｅ）、ＣＸＢ−２４３１（ＫＳ  Ｂｉｏｍｅｄｉｘ）、ＣＢＦ−ＢＳ２（ＫＳ  Ｂｉｏｍｅｄｉｘ）、ＩＬ−１Ｒａ遺伝子治療（Ｖａｌｅｎｔｉｓ）、ＪＴＥ−５２２（Ｊａｐａｎ  Ｔｏｂａｃｃｏ）、パクリタキセル（Ａｎｇｉｏｔｅｃｈ）、ＤＷ−１６６ＨＣ（Ｄｏｎｇ  Ｗｈａ）、ダルブフェロン  メシレート（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ）、可溶性ＴＮＦレセプター１（ｓｙｎｅｒｇｅｎ、Ａｍｇｅｎ）、ＩＰＲ−６００１（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、トロカード（Ｈｏｆｆｍａｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ）、ＥＦ−５（Ｓｃｏｔｉａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＩＩＬ−２８４（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＢＩＩＦ−１１４９（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、ＬｅｕｋｏＶａｘ（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｃｓ）、ＭＫ−６６３（Ｍｅｒｃｋ）、ＳＴ−１４８２（Ｓｉｇｍａ−Ｔａｕ）、およびブチキソコートプロピオネート（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ）。
【０４９０】
１つの実施形態において、免疫調節剤を、１つ以上の下記の薬物との併用で投与する。Ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ（またＲｅｍｉｃａｄｅＴＭ、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，Ｉｎｃ．としても知られている）、Ｔｒｏｃａｄｅ（Ｒｏｃｈｅ、ＲＯ−３２−３５５５）、Ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ（またＨｏｅｃｈｓｔ  Ｍａｒｉｏｎ  ＲｏｕｓｓｅｌからのＡｒａｖａＴＭとしても知られている）、ＫｉｎｅｒｅｔＴＭ（Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．からのＡｎａｋｉｎｒａとしても知られているＩＬ−１レセプターアンタゴニスト）、ＳＣＩＯ−４６９（Ｓｃｉｏｓ，Ｉｎｃ．からのｐ３８キナーゼ阻害剤）、Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのアダリムマブ、および／またはＧｅｎｅｌａｂｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．からのＡＳＬＥＲＡＴＭ（プラステロン、デヒドロエピアンドロステロン、ＧＬ７０１）。
【０４９１】
別の実施形態において、免疫調節剤を、１、２、３、４、または５以上の下記の薬物との併用で投与する。メトトレキサート、スルファサラジン、アウロチオマレイン酸ナトリウム、アウラノフィン、シクロスポリン、ペニシラミン、アザチオプリン、（たとえば本明細書で記述したような）抗マラリア薬、シクロホスファミド、クロラムブシル、金、ＥＮＢＲＥＬＴＭ（エタネルセプト）、抗−ＴＮＦ抗体、ＬＪＰ３９４（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）およびプレドニゾロン。
【０４９２】
別の実施形態において、免疫調節剤を、抗マラリア薬、メトトレキサート、抗−ＴＮＦ抗体、ＥＮＢＲＥＬＴＭおよび／またはスルフラサラジンとの併用で投与する。１つの実施形態において、免疫調節剤を、メトトレキサートとの併用で投与する。別の実施形態において、免疫調節剤を、抗−ＴＮＦ抗体との組合せで併用する。別の実施形態において、免疫調節剤を、メトトレキサートおよび抗−ＴＮＦ抗体との併用で投与する。別の実施形態において、免疫調節剤を、スルフラサラジンとの併用で投与する。別の特定の実施形態において、免疫調節剤を、メトトレキサート、抗ＴＮＦ抗体およびスルフラサラジンとの併用で投与する。別の実施形態において、免疫調節剤を、ＥＮＢＲＥＬＴＭとの組合せで投与する。別の実施形態において、免疫調節剤を、ＥＮＢＲＥＬＴＭおよびメトトレキサートとの併用で投与する。別の実施形態において、免疫調節剤を、ＥＮＢＲＥＬＴＭ、メトトレキサートおよびスルフラサラジンとの併用で投与する。別の実施形態において、免疫調節剤を、ＥＮＢＲＥＬＴＭおよびスルフラサラジンとの併用で投与する。他の実施形態において、１つ以上の抗マラリア薬を、上記の組合せの１つと併用する。特定の実施形態において、免疫調節剤を、抗マラリア薬（たとえばヒドロキシクロロキン）、ＥＮＢＲＥＬＴＭ、メトトレキサートおよびスルフラサラジンとの併用で投与する。別の特定の実施形態において、免疫調節剤を、抗マラリア薬（たとえば、ヒドロキシクロロキン）、スルフラサラジン、抗−ＴＮＦ抗体およびメトトレキサートとの併用で投与する。
【０４９３】
さらなる実施形態において、免疫調節剤を、単独で、または１つ以上の静脈免疫グロブリン調製物との併用で投与する。免疫調節剤とともに投与しうる静脈免疫グロブリン調節物には、限定はしないが、ＧＡＭＭＡＲＴＭ、ＩＶＥＥＧＡＭＴＭ、ＳＡＮＤＯＧＬＯＢＵＬＩＮＴＭ、ＧＡＭＭＡＧＡＲＤ  Ｓ／ＤＴＭ、およびＧＡＭＩＭＵＮＥＴＭが含まれる。特定の実施形態において、免疫調節剤は、移植治療（たとえば骨髄移植）における静脈免疫グロブリン調製物との併用で投与する。
【０４９４】
さらなる実施形態において、免疫調節剤は、単独、または抗炎症剤との併用で投与する。免疫調節剤とともに投与しうる抗炎症剤には、限定はしないが、グルココルチコイド類および非ステロイド性抗炎症剤類、アミノアリールカルボン酸誘導体、アリール酢酸誘導体、アリールブチル酸誘導体、アリールカルボン酸類、アリールプロピオン酸誘導体、ピラゾール類、ピラゾロン類、サリチル酸誘導体類、チアジンカルボキシアミド類、ｅ−アセタミドカプロン酸、Ｓ−アデノシルメチオニン、３−アミノ−４−ヒドロキシブチル酸、アミキシトリン、ベンダザック、ベンジダミン、ブコローム、ジフェンピラミド、ジタゾール、エモルファゾン、グアイアズレン、ナブメトン、ニメスリド、オルゴテイン、オキサセプロール、パラニリン、ペリソキサール、ピフォキシム、プロクアゾン、プロキサゾールおよびテニダップが含まれる。
【０４９５】
特定の実施形態において、免疫調節剤は、単独、または抗ＣＤ４０抗体との併用で投与する。１つの実施形態において、免疫調節剤と抗ＣＤ４０抗体の共投与は、慢性関節リウマチの処置のために想定される。１つの実施形態において、抗ＣＤ４０抗体との免疫調節剤の共投与が、全身性エリテマトーデスの処置のために想定される。
【０４９６】
特定の実施形態において、免疫調節剤は、単独、または抗ＩＬ−１５抗体との併用で投与する。１つの実施形態において、免疫調節剤と抗ＩＬ−１５抗体の共投与は、慢性関節リウマチの処置のために想定される。１つの実施形態において、抗ＩＬ−１５抗体との免疫調節剤の共投与が、全身性エリテマトーデスの処置のために想定される。
【０４９７】
特定の実施形態において、免疫調節剤は、単独、またはＣＴＬＡ４−ＩｇおよびＬＥＡ２９Ｙとの併用で投与する。１つの実施形態において、免疫調節剤のＣＴＬＡ４−ＩｇおよびＬＥＡ２９Ｙとの共投与は、慢性関節リウマチの処置のために想定される。１つの実施形態において、免疫調節剤のＣＴＬＡ４−ＩｇおよびＬＥＡ２９Ｙとの共投与は、全身性エリテマトーデスの処置のために想定される。
【０４９８】
特定の実施形態において、免疫調節剤は、単独、または抗ＩＬ−６レセプター抗体との併用で投与する。１つの実施形態において、免疫調節剤の抗ＩＬ−６レセプター抗体との共投与は、慢性関節リウマチの処置のために想定される。１つの実施形態において、免疫調節剤の抗ＩＬ−６レセプター抗体との共投与は、全身性エリテマトーデスの処置のために想定される。
【０４９９】
特定の実施形態において、免疫調節剤は、単独、または抗Ｃ５（補体成分）抗体との併用で投与する。１つの実施形態において、免疫調節剤の抗Ｃ５抗体との共投与は、慢性関節リウマチの処置のために想定される。１つの実施形態において、免疫調節剤の抗Ｃ５抗体との共投与は、全身性エリテマトーデスの処置のために想定される。
【０５００】
特定の実施形態において、免疫調節剤は、単独、または補体カスケード阻害剤との併用で投与する。補体カスケード阻害剤には、限定はしないが、抗プロペルジン抗体（Ｇｌｉａｔｅｃｈ、ＴＰ−１０、組換え体可溶性Ｉ型補体レセプター（ＡＶＡＮＴ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．、Ｐｅｘｅｌｉｚｍａｂ、補体Ｃ５阻害剤（Ａｌｅｘｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．）、および５Ｇ１．１、すなわちその炎症性成分中への補体成分Ｃ５の切断を予防するモノクローナル抗体が含まれる。１つの実施形態において、免疫調節剤の補体カスケード阻害剤との共投与は、炎症、慢性関節リウマチおよび／または全身性エリテマトーデスの処置のために想定される。
【０５０１】
別の実施形態において、免疫調節剤は、化学療法剤との併用で投与する。免疫調節剤とともに投与しうる化学療法剤には、限定はしないが、抗生物質誘導体（たとえばドキソルビシン、ブレオマイシン、ダウノルビシンおよびダクチノマイシン）、抗エストロゲン類（たとえばタモキシフェン）、抗代謝拮抗剤類（たとえばフルオロウラシル、５−ＦＵ、メトトレキサート、フロキシウリジン、インターフェロンアルファ−２ｂ、グルタミン酸、プリカマイシン、メルカプトプリンおよび６−チオグアニン）、細胞傷害剤類（たとえばカルムスチン、ＢＣＮＵ、ロムスチン、ＣＣＮＵ、シトシンアラビノシド、シクロホスファミド、エストラムスチン、ヒドロキシウレア、プロカルバジン、マイトマイシン、ブスルファン、シスプラチンおよび硫酸ビンクリスチン）、ホルモン類（たとえばメドロキシプロゲステロン、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エチニルエストラジオール、エストラジオール、酢酸メゲストロール、メチルテストステロン、ジエチルスチルベストロール二リン酸、クロロトリアニセン、およびテストラクトン）、ステロイド類および組合せ（たとえば、ベサメサゾンリン酸ナトリウム）および他のもの（たとえばジカルバジン、アスパラギナーゼ、ミトタン、ビンクリスチンスルフェート、ビンブラスチンスルフェートおよびエトポシド）が含まれる。
【０５０２】
特定の実施形態において、免疫調節剤は、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）との併用で、または１つ以上のＣＨＯＰの成分との併用で投与する。１つの実施形態において、免疫調節剤は、ヒトモノクローナル抗ＣＤ２０抗体のような、抗ＣＤ２０抗体との併用で投与する。別の実施形態において、免疫調節剤は、抗ＣＤ２０とＣＨＯＰ、または抗ＣＤ２０抗体と任意の組合せの１つ以上のＣＨＯＰの成分、とりわけシクロホスファミドおよび／またはプレドニゾンとの併用で投与する。特定の実施形態において、免疫調節剤は、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂとの併用で投与する。さらなる実施形態において、免疫調節剤は、ＲｉｔｕｘｉｍａｂとＣＨＯＰ、またはＲｉｔｕｘｉｍａｂと１つ以上のＣＨＯＰの成分の任意の組合せ、とりわけシクロホスファミドおよび／またはプレドニゾンとの併用で投与する。特定の実施形態において、免疫調節剤は、トシツモマブ（Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡからの抗ＣＤ２０抗体）との併用で投与する。さらなる実施形態において、免疫調節剤を、トシツモマブとＣＨＯＰ、またはトシツモマブと１つまたはそれ以上のＣＨＯＰの成分の任意の組合せ、とりわけシクロホスファミドおよび／またはプレドニゾンとの併用で投与する。トシツモマブは任意に１３１Ｉに結合してよい。抗ＣＤ２０抗体は任意に、放射性同位体、毒素または細胞傷害性プロドラッグと結合してよい。
【０５０３】
他の特定の実施形態において、免疫調節剤は、ＺｅｖａｌｉｎＴＭとの併用で投与する。さらなる実施形態において、免疫調節剤は、ＺｅｖａｌｉｎＴＭとＣＨＯＰ、またはＺｅｖａｌｉｎＴＭと１つ以上のＣＨＯＰの成分の任意の組合せ、とりわけシクロホスファミドおよび／またはプレドニゾンとの併用で投与する。ＺｅｖａｌｉｎＴＭは、１つ以上の放射性同位体に結合してよい。とりわけ好ましい同位体は、９０Ｙおよび１１１Ｉｎである。
【０５０４】
さらなる実施形態において、免疫調節剤を、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ（ＲｉｔｕｘａｎＴＭ）および／またはＩｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ  Ｔｉｕｘｅｔａｎ（ＺｅｖａｌｉｎＴＭ、たとえば（Ｉｎ−１１１）Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ  Ｔｉｕｘｅｔａｎまたは（Ｙ−９０）Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ  Ｔｉｕｘｅｔａｎ）との併用で投与する。特定の実施形態において、免疫調節剤は、非ホジキンスリンパ腫の処置のために、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂおよび／またはＩｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ  Ｔｉｕｘｅｔａｎとの併用で投与する。
【０５０５】
特定の実施形態において、免疫調節剤は、疾患フレアに続く、たとえば狼瘡フレアの後の、抗ＣＤ２０投与で補う慢性処置として投与する。
【０５０６】
さらなる実施形態において、免疫調節剤を、イマチニブメシレート（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）：４−［（４−メチル−１−ピペラジン）メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］−フェニル］ベンズアミド  メタンスルホネート）との併用で投与する。
【０５０７】
さらなる実施形態において、免疫調節剤を、ボルテゾミブ（ＶｅｌｃａｄｅＴＭ  ［（１Ｒ）−３−メチル−１−［［（２Ｓ）−１−オキソ−３−フェニル−２−［（ピラジニルカルボニル）アミノ］プロピル］アミノ］ブチル］ボロン酸）との併用で投与する。
【０５０８】
さらなる実施形態において、免疫調節剤を、Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）との併用で投与する。
【０５０９】
さらなる実施形態において、免疫調節剤を、リン酸フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標）：９Ｈ−プリン−６−アミン、２−フルオロ−９−（５−Ｏ−ホスホノ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）（２−フロロ−アラ−ＡＭＰ））との併用で投与する。
【０５１０】
免疫調節剤を、限定はしないが、アルキル化剤、アントラサイクリン、カルムスチン（ＤＴＩ−０１５、ＢＣＮＵ、ＢｉＣＮＵ、Ｇｌｉａｄｅｌ  Ｗａｆｅｒ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、ＣＴＸ）、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｄｏｘｉｌ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、メルファラン（Ｌ−ＰＡＭ、Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標）、フェニルアラニンマスタード）、プレドニゾン、サリドマイドおよびビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標）、Ｏｎｃｏ  ＴＣＳ（登録商標）、Ｌｅｕｒｏｃｒｉｓｔｉｎｅ（登録商標））を含む、多発性骨髄腫の処置にて有用な１つまたはそれ以上の治療剤との併用で投与する。
【０５１１】
免疫調節剤との併用で投与しうる、多発性骨髄腫の処置において有用な治療的剤の好ましい組合せには、限定はしないが、シクロホスファミド＋プレドニゾン、メルファラン＋プレドニゾン（ＭＰ）、ビンクリスチン＋Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）＋デキサメタゾン（ＶＣＤ）、ビンクリスチン＋メルファラン＋シクロホスファミド＋プレドニゾン、あるいはビンクリスチン＋カルムスチン＋ドキソルビシン＋プレドニゾン（ＶＭＣＰ／ＶＢＡＰ）が含まれる。
【０５１２】
免疫調節剤を、限定はしないが、２−クロロデオキシアデノシン、アミホスチン（Ｅｔｈｙｏｌ（登録商標）、Ｅｔｈｉｏｆｏｓ（登録商標）、ＷＥ−２７２）、ベキサロテン（Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（登録商標）、Ｔａｒｇｒｅｔｉｎゲル（登録商標）、Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ経口（登録商標）、ＬＧＤ１０６９）、ブレオマイシン（Ｂｌｅｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）、Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標）、ＣＢＤＣＡ）、カルムスチン（ＤＴＩ−０１５、ＢＣＮＵ、ＢｉＣＮＵ、Ｇｌｉａｄｅｌ  Ｗａｆｅｒ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）、ＣＤＤＰ）、クラドリビン（２−ＣｄＡ、Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、ＣＴＸ）、シタラビン（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標）、ａｒａ−Ｃ、シトシン  アラビノシド（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標）、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ダウノルビシン（ダウノマイシン、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標）、Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ（登録商標）、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｍｅ（登録商標））、デニロイキン  ジフィトックス（Ｏｎｔａｋ（登録商標））、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））、ドラセトロンメシレート（Ａｎｚｅｍｅｔ（登録商標））、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｄｏｘｉｌ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エリスロポエチン（ＥＰＯ（登録商標）、Ｅｐｏｇｅｎ（登録商標）、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標））、リン酸エトポシド（Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（登録商標））、エトポシド（ＶＰ−１６、Ｃｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標）、ＦＡＭＰ）、グラニセトロン（Ｋｙｔｒｉｌ（登録商標））、ヒドロコルチゾン、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標）、ＤＭＤＲ、ＩＤＡ）、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、インターフェロンアルファ（Ａｌｆａｆｅｒｏｎｅ（登録商標）、Ａｌｐｈａ−ＩＦ（登録商標））、インターフェロンアルファ２ａ（Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ（登録商標））、メクロロエタミン（窒素マスタード、ＨＮ２、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、メルファラン（Ｌ−ＰＡＭ、Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標）、フェニルアラニン  マスタード）、メトトレキサート（登録商標）（ＭＴＸ、Ｍｅｘａｔｅ（登録商標）、Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、メチルプレドニゾロン（Ｓｏｌｕｍｅｄｒｏｌ（登録商標））、ミトキサトロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標）、ＤＨＡＤ）、オンダンセトロン（Ｚｅｆｒａｎ（登録商標））、ペントスタチン（Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標）、２−デオキシコホルマイシン）、ペルホスファミド（４−ヒドロペルオキシシクロホスファミド、４−ＨＣ）、プレドニゾン、プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、抗−ＣＤ２０  ＭＡｂ）、チオテパ（トリエチレンチオホスファオラミド、Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、トポテカン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標）、ＳＫ＆Ｆ−１０４８６４、ＮＳＣ−６０９６９９、Ｅｃｏｔｏｐｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標）、ＶＬＢ）、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標）、Ｏｎｃｏ  ＴＣＳ（登録商標）、ＶＣＲ、Ｌｅｕｒｏｃｒｉｓｔｉｎｅ（登録商標））、およびビンデシン（Ｅｌｄｉｓｉｎｅ（登録商標）、Ｆｉｌｏｄｅｓｉｎ（登録商標））を含む、非ホジキンスリンパ腫の処置にて有用な１つまたはそれ以上の治療剤との併用で投与してよい。
【０５１３】
免疫調節剤との併用で投与しうる、非ホジキンスリンパ腫の処置にて有用である治療剤の好ましい組合せには、限定はしないが、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）＋ブレノキサン＋ビンブラスチン＋ダカルバジン（ＡＢＤＶ）、抗イデオタイプ治療（ＢｓＡｂ）＋インターフェロンアルファ、抗イデオタイプ治療（ＢｓＡｂ）＋クロラムブシル、抗イデオタイプ治療（ＢｓＡｂ）＋インターロイキン−２、ＢＣＮＵ（カルムスチン）＋エトポシド＋Ａｒａ−Ｃ（シタラビン）＋メルファレン（ＢＥＡＭ）、ブレオマイシン＋エトポシド＋アドリアマイシン＋シクロホスファミド＋ビンクリスチン＋プロカルバジン＋プレドニゾン（ＢＥＡＣＯＰＰ）、ブリオスタチン＋ビンクリスチン、シクロホスファミド＋ＢＣＮＵ（カルムスチン）＋ＶＰ−１６（エトポシド）（ＣＢＶ）、シクロホスファミド＋ビンクリスチン＋プレドニゾン（ＣＶＰ）、シクロホスファミド＋Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）（ヒドロキシダウノマイシン）＋ビンクリスチン（オンコボリン）＋プレドニゾン（ＣＨＯＰ）、シクロホスファミド＋Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標）（ミトキサントロン）＋ビンクリスチン（オンコボリン）＋プレドニゾン（ＣＮＯＰ）、シクロホスファミド＋ドキソルビシン＋テニポシド＋プレドニゾン、シクロホスファミド＋Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標（ヒドロキシルダウノマイシン）、ビンクリスチン（オンコボリン）＋プレドニゾン＋リツキシマブ（ＣＨＯＰ＋リツキシマブ）、シクロホスファミド＋ドキソルビシン＋テニポシド＋プレドニゾン＋インターフェロンアルファ、シタラビン＋ブレオマイシン＋ビンクリスチン＋メトトレキサート（ＣｙｔｒａＢＯＭ）、デキサメタゾン＋シタラビン＋シスプラチン（ＤＨＡＰ）、デキサメタゾン＋イソスファミド＋シスプラチン＋エトポシド（ＤＩＣＥ）、ドキソルビシン＋ビンブラスチン＋メクロルエタミン＋ビンクリスチン＋ブレオマイシン＋エトポシド＋プレドニゾン（Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｖ）、エトポシド＋Ｌビンブラスチン＋アドリアマイシン（ＥＶＡ）、エトポシド＋メチルプレドニゾロン＋シタラビン＋シスプラチン（ＥＳＨＡＰ）、エトポシド＋プレドニゾン＋イソスファミド＋シスプラチン（ＥＰＩＣ）、フルダラビン、ミトキサトロン＋デキサメタゾン（ＦＭＤ）、フルダラビン、デキサメタゾン、シタラビン（ａｒａ−Ｃ）、＋シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））（ＦｌｕＤＡＰ）、イソスファミド＋シスプラチン＋エトポシド（ＩＣＥ）、メクロルエタミン＋Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標）（ビンクリスチン）＋プロカルバジン＋プレドニゾン（ＭＯＰＰ）、メスナ＋イソスファミド＋イダルビシン＋エトポシド（ＭＩＺＥ）、ロウコボリンレスキューと一緒のメトトレキサート＋ブレオマイシン＋アドリアマイシン＋シクロホスファミド＋オンコボリン＋デキサメタゾン（ｍ−ＢＡＣＯＤ）、プレドニゾン＋メトトレキサート＋アドリアマイシン＋シクロホスファミド＋エトポシド（ＰｒｏＭＡＣＥ）、チオテパ＋ブスルファン＋シクロホスファミド、チオテパ＋ブスルファン＋メルファラン、トポテカン＋パクリタキセル、およびビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））＋Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）＋���キサメタゾン（ＶＡＤ）が含まれる。
【０５１４】
免疫調節剤との併用で投与しうる、非ホジキンスリンパ腫の処置にて有用な治療剤のさらなる例には、限定はしないが、Ａ００７（４−４’−ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニルヒドラゾン）、ＡＧ−２０３４（ＡＧ−２０２４、ＡＧ−２０３２，ＧＡＲＦＴ［グリシンアミド  リボヌクレオシド  トランスホルミラーゼ］阻害剤）、アルデスロイキン（ＩＬ−２、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））、アリトレチノイン（Ｐａｎｒｅｔｉｎ（登録商標）、ＬＧＮ−１０５７）、アルトレタミン（Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、ヘキサメチルメラミン、Ｈｅｘａｓｔａｔ（登録商標））、アミノカンプトテシン（９−ＡＣ、９−アミノカンプトテシン、ＮＳＣ６０３０７１）、抗ＣＤ１９／ＣＤ３  ＭＡｂ（抗ＣＤ１９／ＣＤ３  ｓｃＦｖ、抗ＮＨＬ  ＭＡｂ）、抗−イデオタイプ治療（ＢｓＡｂ）、アラビノシルグアニン（Ａｒａ−Ｇ、ＧＷ５０６Ｕ７８）、三酸化ヒ素（Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）、ＡＴＯ）、Ｂ４３−ゲニステイン（抗ＣＤ１９  Ａｂ／ゲニステイン共役物）、Ｂ７抗体共役物、ベタシン（Ｂｅｔａ−ＬＴ）、ＢＬｙｓアンタゴニスト、ブリオスタチン−１（Ｂｒｙｏｓｔａｔｉｎ（登録商標）、ＢＭＹ−４５６１８、ＮＳＣ−３３９５５５）、ＣＨＭＬ（細胞親和性非均質分子脂質）、クロファラビン（クロロフルオロ−ａｒａＡ）、ダクリズマブ（Ｚｅｎａｐａｘ（登録商標））、デプシペプチド（ＦＲ９０１２２８、ＦＫ２２８）、ドラスタチン１０（ＤＯＬＡ−１０、ＮＳＣ−３７６１２８）、エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標）、ＥＰＩ、４’エピドキソルビシン）、エプラツズマブ（Ｌｙｍｐｈｏｃｉｄｅ（登録商標）、ヒト化抗ＣＤ２２、ＨＡＴ）、Ｆｌｙ３／ｆｌｋ２リガンド（Ｍｏｂｉｓｔａ（登録商標））、Ｇ３１３９（Ｇｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標）、ＧｅｎｔａＡｎｔｉｃｏｄｅ（登録商標）、Ｂｃｌ−２アンチセンス）、Ｈｕ１Ｄ１０（抗ＨＬＡ−ＤＲ  ＭＡｂ、ＳＭＡＲＴ  １Ｄ１０）、ＨｕｍａＬＹＭ（抗ＣＤ２０  ＭＡｂ）、イブリツモマブ  チウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））、インターフェロンガンマ（ガンマ−インターフェロン、Ｇａｍｍａ  １００（登録商標）、Ｇａｍｍａ−ＩＦ）、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標）、ＣＰＴ−１１、Ｔｏｐｏｔｅｃｉｎ（登録商標）、ＣａｐｔｏＣＰＴ−１）、ＩＳＩＳ−２０５３、ＩＳＩＳ−３５２１（ＰＫＣ−アルファアンチセンス）、Ｌｍｂ−２イムノトキシン（抗ＣＤ２５組換え免疫毒素、抗Ｔａｃ（Ｆｖ）−ＰＥ３８）、Ｌｅｕｖｅｃｔｉｎ（登録商標）（シトフェクチン＋ＩＬ−２遺伝子、ＩＬ−２遺伝子治療）、Ｌｙｍ−１（１３１−ＬＬＹＭ−１）、リンパ腫ワクチン（Ｇｅｎｉｔｏｐｅ）、ネララビン（化合物５０６、Ｕ７８）、ニュージーン化合物（Ｏｎｃｏｍｙｃ−ＮＧ（登録商標）、Ｒｅｓｔｅｎ−ＮＧ（登録商標）、ｍｙｃアンチセンス）、ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２  ｓｃＦｖ（ＮｏｖｏＭＡｎ−Ｇ２  ＩｇＭ）、Ｏ６−ベンジルグアニン（ＢＧ、Ｐｒｏｃｅｐｔ（登録商標））、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎｅ（登録商標）、Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））、パクリタキセル（Ｐａｘ���ｎｅ（登録商標）、Ｔａｘｏｌ（登録商標）、パクリタキセルＤＨＡ（Ｔａｘｏｐｒｅｘｉｎ（登録商標））、ペルデジン（ＢＣＸ−３４、ＰＮＰ阻害剤）、レベッカマイシンおよびレベッカマイシンアナログ、ＳＣＨ−６６３３６、ソブゾキサン（ＭＳＴ−１６、Ｐｅｒａｚｏｌｉｎ（登録商標））、ＳＵ５４１６（Ｓｅｍａｘａｎｉｂ（登録商標）、ＶＥＧＦ阻害剤）、ＴＥＲ−２８６、サリドマイド、ＴＮＰ−４７０（ＡＧＭ−１４７０）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、バルスポダル（ＰＳＣ８３３）、バキシド（Ｂ細胞リンパ腫ＤＮＡワクチン）、ビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、ＷＦ１０（マクロファージ調節物）およびＸＲ−９５７６（ＸＲ−９３５１、Ｐ糖タンパク質／ＭＤＲ阻害剤）が含まれる。
【０５１５】
免疫調節剤は、限定はしないが、アムサクリン、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標）、ＣＢＤＣＡ）、カルムスチン（ＤＴＩ−０１５、ＢＣＮＵ、ＢｉＣＮＵ、Ｇｌｉａｄｅｌ  Ｗａｆｅｒ（登録商標））、コレカリフェロール、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、ＣＴＸ）、シタラビン（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標）、ａｒａ−Ｃ、シトシン  アラビノシド、ＤｒｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダウノルビシン（ダウノマイシン、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標）、Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ（登録商標）、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｄｏｘｉｌ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（ＶＰ−１６、Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、Ｆｉｌｇｒａｓｔａｍ（登録商標）（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）、Ｇ−ＣＳＦ、Ｌｅｕｋｉｎｅ（登録商標））、フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標）、ＦＡＭＰ）、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標）、ＤＭＤＲ、ＩＤＡ）、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イマチニブメシレート（ＳＴＩ−５７１、Ｉｍａｔｉｎｉｂ（登録商標）、Ｇｌｉｖｅｃ（登録商標）、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）、Ａｂ１チロシンキナーゼ阻害剤）、インターフェロンガンマ（ガンマ−インターフェロン、Ｇａｍｍａ１００（登録商標）、Ｇａｍｍａ−ＩＦ）、Ｌ−アスパラギナーゼ（Ｅｌｓｐａｒ（登録商標）、Ｃｒａｓｔｉｎｉｎ（登録商標）、Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ  ｍｅｄａｃ（登録商標）、Ｋｉｄｒｏｌａｓｅ（登録商標））、メルカプトプリン（６−メルカプトプリン、６−ＭＰ）、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ（登録商標）（ＭＴＸ、Ｍｅｘａｔｅ（登録商標）、Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標）、ＤＨＡＤ）、Ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ（登録商標）（Ｏｎｃｏｓｐａｒ（登録商標））、プレドニゾン、レチノイン酸、テニポシド（ＶＭ−２６、Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、チオグアニン（６−チオグアニン、６−ＴＧ）、トポテカン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標）、ＳＫ＆Ｆ−１０４８６４、ＮＳＣ−６０９６９９、Ｅｖｏｔｏｐｉｎ（登録商標））、トレチノイン（Ｒｅｔｉｎ−Ａ（登録商標）、Ａｔｒａｇｅｎ（登録商標）、ＡＴＲＡ、Ｖｅｓａｎｏｉｄ（登録商標））およびビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標）、Ｏｎｃｏ  ＴＣＳ（登録商標）、ＶＣＲ、Ｌｅｕｒｏｃｒｉｓｔｉｎｅ（登録商標））を含む、急性リンパ性白血病の処置のために有用である１つまたはそれ以上の治療剤との併用で投与してよい。
【０５１６】
免疫調節剤との併用で投与してよい、急性リンパ性白血病の処置にて有用な治療的剤のさらなる例には、限定はしないが、アミノカンプトテシン（９−ＡＣ、９−アミノカンプトテシン、ＮＳＣ  ６０３０７１）、アミノプテリン、アンナマイシン（ＡＲ−５２２、アンナマイシンＬＦ、Ａｒｏｎｅｘ（登録商標））、アラビノシルグアニン（Ａｒａ−Ｇ、ＧＷ５０６Ｕ７８、Ｎｅｌｚａｒａｂｉｎｅ（登録商標））、三酸化ヒ素（Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）、ＡＴＯ、Ａｔｒｉｖｅｘ（登録商標））、Ｂ４３ゲニステイン（抗ＣＤ１９  Ａｂ／ゲニステイン共役物）、Ｂ４３−ＰＡＰ（抗ＣＤ１９  Ａｂ／ポークイド抗ウイルスタンパク質共役物）、コルジセピン、ＣＳ−６８２、デシタビン（５−アザ−２’−デオキシチジン）、ドラスタチン１０（ＤＯＬＡ−１０、ＮＳＣ−３７６１２８）、Ｇ３１３９（Ｇｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標）、ＧｅｎｔａＡｎｔｉｃｏｄｅ（登録商標）、Ｂｃｌ−２アンチセンス）、イロフルベン（ＭＧＩ−１１４、イボフルバン、アシルフルベンアナログ）、ＭＳ−２０９、フェニルブチレート、キニン、ＴＮＰ−４７０（ＡＧＭ−１４７０、フマジリン）、トリメトレキサート（Ｎｅｕｔｒｅｘｉｎ（登録商標））、トロキサシタビン（ＢＣＨ−２０４、ＢＣＨ−４５５６、Ｔｒｏｘａｔｙｌ（登録商標））、ＵＣＮ−０１（７−ヒドロキシスタウロスポリン）、ＷＨＩ−Ｐ１３１およびＷＴ１ワクチンが含まれる。
【０５１７】
免疫調節剤との併用で投与しうる急性リンパ性白血病の処置にて有用な治療的剤の好ましい組合せには、限定はしないが、カルボプラチン＋ミトキサトロン、カルムスチン＋シクロホスファミド＋エトポシド、シタラビン＋ダウノルビシン、シタラビン＋ドキソルビシン、シタラビン＋イダルビシン、シタラビン＋インターフェロンガンマ、シタラビン＋Ｌ−アスパラゲナーゼ、シタラビン＋ミトキサントロン、シタラビン＋フルダラビンおよびミトキサントロン、エトポシド＋シタラビン、エトポシド＋イホスファミド、エトポシド＋ミトキサントロン、イホスファミド＋エトポシド＋ミトキサントロン、イホスファミド＋テニポシド、メトトレキサート＋メルカプトプリン、メトトレキサート＋メルカプトプリン＋ビンクリスチン＋プレドニゾン、フェニルブチレート＋シタラビン、フェニルブチレート＋エトポシド、フェニルブチレート＋トポテカン、フェニルブチレート＋トレチノイン、キニン＋ドキソルビシン、キニン＋ミトキサトロン＋シタラビン、チオグアニン＋シタラビン＋アムサクリン、チオグアニン＋エトポシド＋イダルビシン、チオグアニン＋レチノイン酸＋クロレカリフェロール、ビンクリスチン＋プレドニゾン、ビンクリスチン＋プレドニゾンおよびＬ−アスパラギナーゼ、ビンクリスチン＋デキサメタゾン／プレドニゾン＋アスパラギナーゼ＋ダウノルビシン／ドキソルビシン、ビンクリスチン＋デキサメタゾン／プレドニゾン＋アスパラギナーゼ＋ダウノルビシン／ドキソルビシン＋フィルグラスチム、ビンクリスチン＋デキサメタゾン／プレドニゾン＋アスパラギナーゼ＋ダウノルビシン／ドキソルビシン＋シクロホスファミド＋メトトレキサート、およびビンクリスチン＋デキサメタゾン／プレドニゾン＋アスパラギナーゼ＋ダウノルビシン／ドキソルビシン＋シクロホスファミド＋メトトレキサート＋フィルグラスチムが含まれる。
【０５１８】
免疫調節剤は、限定はしないが、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、クラドリビン（２−ＣｄＡ、Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、ＣＴＸ）、シタラビン（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標）、ａｒａ−Ｃ、シトシン  アラビノシド、ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標）、シタラビン  オクホスフェート、ａｒａ−ＣＭＰ）、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｄｏｘｉｌ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、フルダラビン（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標）、ＦＡＭＰ）、ペントスタチン（Ｎｉｐｅｎｔ（登録商標）、２−デオキシコホルマイシン）、プレドニゾンおよびビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｏｒｉｎ（登録商標）、Ｏｎｃｏ  ＴＣＳ（登録商標）、ＶＣＲ、Ｌｅｕｒｏｃｒｉｓｔｉｎｅ（登録商標））を含む、慢性リンパ性白血病の処置にて有用な１つまたはそれ以上の治療的剤との併用で投与してよい。
【０５１９】
免疫調節剤との併用で投与しうる、慢性リンパ性白血病の処置にて有用な治療的剤のさらなる例には、限定はしないが、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））、アミノカンプトテシン（９−ＡＣ、９−アミノカンプトテシン、ＮＳＣ６０３０７１）、アミノプテリン、アンナマイシン（ＡＲ−５２２、アンナマイシンＬＦ、Ａｒｏｎｅｘ（登録商標））、アラビノシルグアニン（Ａｒａ−Ｃ、ＧＷ５０６Ｕ７８、Ｎｅｌｚａｒａｂｉｎｅ（登録商標）、化合物５０６Ｕ７８）、アルセニントリオキシド（Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）、ＡＴＯ、Ａｔｒｉｖｅｘ（登録商標））、ブリオスタチン−１（Ｂｒｙｏｓｔａｔｉｎ（登録商標）、ＢＭＹ−４５６１８、ＮＳＣ−３３９５５５）、ＣＳ−６８２、ドラスタチン−１０（ＤＯＬＡ−１０、ＮＳＣ−３７６１２８）、フィルグラスチム（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）、Ｇ−ＣＳＦ、Ｌｅｕｋｉｎｅ）、フラボピリドール（ＮＳＣ−６４９８９０、ＨＭＲ−１２７５）、Ｇ３１３９（Ｇｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標）、ＧｅｎｔａＡｎｔｉｃｏｄｅ（登録商標）、Ｂｃｌ−２アンチセンス）、イロフルベン（ＭＧＩ−１１４、イボフルバン、アシルフルベンアナログ）、ＭＳ−２０９、フェニルブチレート、Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ（登録商標）（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）、抗ＣＤ２０  ＭＡｂ）、サリドマイド、セオフィリン、ＴＮＰ−４７０（ＡＧＭ−１４７０、フマギリン）、ＵＣＮ−０１（７−ヒドロキシスタウロスポリン）およびＷＨＩ−Ｐ１３１が含まれる。
【０５２０】
免疫調節剤との併用で投与しうる慢性リンパ性白血病の処置にて有用な治療的剤の好ましい組合せには、限定はしないが、フルダラビン＋プレドニゾン、およびシクロホスファミド＋ドキソルビシン＋ビンクリスチン＋プレドニゾン（ＣＨＯＰ）が含まれる。
【０５２１】
さらなる実施形態において、免疫調節剤を、サイトカインとの併用にて投与する。免疫調節剤と投与しうるサイトカインには、限定はしないが、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１５、抗−ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＩＦＮ−アルファ、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−ガンマ、ＴＮＦ−アルファおよびＴＮＦ−ベータが含まれる。別の実施形態において、免疫調節剤を、限定はしないが、ＩＬ−１アルファ、ＩＬ−１ベータ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１およびＩＬ−２２を含む、任意のインターロイキンとともに投与してよい。好ましい実施形態において、免疫調節剤を、ＩＬ４およびＩＬ１０との併用で投与する。ＩＬ４およびＩＬ１０両方が、ニュートロカイン−アルファ仲介Ｂ細胞増殖を増強することが、本発明者らによって観察された。
【０５２２】
インビトロで、ＩＦＮガンマおよびＩＬ−１０がそれぞれ、単球およびマクロファージ（マクロファージは、初代単球を、２０ｍｇ／ｍＬのＭ−ＣＳＦとともに１２〜１５日間培養することによって得た）において、ニュートロカイン−アルファの細胞表面発現を増強することが本発明者によって観察された一方で、ＩＬ−４処置は、単球およびマクロファージにおいてニュートロカイン−アルファの細胞表面発現を減少させた。ＩＬ−１０とともに投与したＩＬ−４によって、ニュートロカイン−アルファのＩＬ−１０誘導細胞表面発現の完全な阻害となった。ＩＦＮ−ガンマと投与したＩＬ−４によって、ニュートロカイン−アルファの細胞表面発現の増加となった。ＩＦＮ−ガンマおよびＩＬ−１０でのマクロファージの処置によって、未処理マクロファージと比べて、培養培地中に放出された可溶性（活性）ニュートロカイン−アルファが３倍増加した。
【０５２３】
さらなる実施形態において、免疫調節剤を、ケモカインとともに投与する。別の実施形態において、免疫調節剤を、ケモカインベータ−８、ケモカインベータ−１、および／またはマクロファージ炎症タンパク質−４とともに投与する。好ましい実施形態において、免疫調節剤を、ケモカインベータ−８とともに投与する。
【０５２４】
さらなる実施形態において、免疫調節剤を、ＩＬ−４アンタゴニストとの併用で投与する。免疫調節剤と一緒に投与しうるＩＬ−４アンタゴニストには、限定はしないが、可溶性ＩＬ−４レセプターポリペプチド、可溶性ＩＬ−４レセプターポリペプチドの多様な形態、ＩＬ−４によって誘導された生物学的シグナルを変換することなしに、ＩＬ−４レセプターに結合する抗−ＩＬ−４レセプター抗体、ＩＬ−４の１つ以上のＩＬ−４レセプターへの結合をブロックする抗−ＩＬ４抗体、およびＩＬ−４レセプターに結合するが、ＩＬ−４によって誘導された生物学的シグナルを変換しないＩＬ−４の変異タンパク質が含まれる。好ましくは、本方法にしたがって使用する抗体は、（たとえば本明細書にて記述したもののような、抗体断片を含む）モノクローナル抗体である。
【０５２５】
さらなる実施形態において、免疫調節剤を、造血増殖係数との併用で投与する。免疫調節剤とともに投与しうる造血増殖因子には、限定はしないが、ＬＥＵＫＩＮＥＴＭ（ＳＡＲＧＲＡＭＯＳＴＩＭＴＭ）およびＮＥＵＰＯＧＥＮＴＭ（ＦＩＬＧＲＡＳＴＩＭＴＭ）が含まれる。
【０５２６】
さらなる実施形態において、免疫調節剤を、繊維芽細胞増殖因子との併用で投与する。免疫調節剤とともに投与しうる繊維芽細胞増殖因子には、限定はしないが、ＦＧＦ−１、ＦＧＦ−２、ＦＧＦ−３、ＦＧＦ−４、ＦＧＦ−５、ＦＧＦ−６、ＦＧＦ−７、ＦＧＦ−８、ＦＧＦ−９、ＦＧＦ−１０、ＦＧＦ−１１、ＦＧＦ−１２、ＦＧＦ−１３、ＦＧＦ−１４およびＦＧＦ−１５が含まれる。
【０５２７】
さらなる実施形態において、免疫調節剤は、降圧剤との併用で投与する。免疫調節剤とともに投与しうる降圧剤には、限定はしないが、ニフェジピン（ＡＤＡＬＡＴＴＭ、ＰＲＯＣＡＲＤＩＡＴＭ）のようなカルシウムチャネルブロッキング剤、ヒドララジン（ＡＰＲＥＳＯＬＩＮＥＴＭ）のような末梢血管拡張剤、プロパノロール（ＩＮＤＥＲＡＬＴＭ）のようなベータアドレナリン作用ブロッキング剤、ラベトロール（ＮＯＲＭＯＤＹＮＥＴＭ、ＴＲＡＮＤＡＴＥＴＭ）のようなアルファ／ベータアドレナリン作用ブロッカー、カプトプリル（ＣＡＰＯＴＥＮＴＭ）のようなアンジオテンシンＩＩの産生を抑制する剤、ロサルタン（ＣＯＺＡＡＲＴＭ）のようなアンジオテンシンＩＩの活性を直接阻害する剤、およびヒドロクロロチアジド（ＨＹＤＲＯＤＩＵＲＩＬＴＭ、ＥＳＩＤＲＥＸＴＭ）のようなチアジド利尿薬が含まれる。
【０５２８】
免疫調節剤は、単独、または他のアジュバントとの併用で投与してよい。免疫調節剤とともに投与しうるアジュバントには、限定はしないが、アルム、アルム＋デオキシコレート（ＩｍｍｕｎｏＡｇ）、ＭＴＰ−ＰＥ（Ｂｉｏｃｉｎｅ  Ｃｏｒｐ．）、ＱＳ２１（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ）、ＢＣＧ、およびＭＰＬが含まれる。特定の実施形態において、免疫調節剤は、アルムとの併用で投与する。他の特定の実施形態において、免疫調節剤は、ＱＳ−２１との併用で投与する。免疫調節剤とともに投与しうるさらなるアジュバントには、限定はしないが、モノホスホリル脂質免疫調整剤、ＡｄｊｕＶａｘ  １００ａ、ＱＳ−２１、ＱＳ−１８、ＣＲＬ１００５、アルミニウム塩、ＭＦ−５９およびＶｉｒｏｓｏｍａｌアジュバント技術が含まれる。免疫調節剤とともに投与しうるワクチンには、限定はしないが、ＭＭＲ（はしか、流行性耳下腺炎、風疹）、ポリオ、水痘、破傷風／ジフテリア、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｂ型インフルエンザ、百日咳、肺炎、インフルエンザ、ライム病、ロタウイルス、コレラ、黄色熱、日本脳炎、急性灰白髄炎、狂犬病、腸チフスおよび百日咳に対する保護に指向するワクチン、および／またはＰＮＥＵＭＯＶＡＸ−２３ＴＭが含まれる。他の特定の実施形態において、免疫調節剤は、ＰＮＥＵＭＯＶＡＸ−２３ＴＭとともに使用する。
【０５２９】
１つの実施形態において、免疫調節剤を、ＴＮＦファミリーの他のメンバーとの併用で投与する。免疫調節剤とともに投与しうる、ＴＮＦ、ＴＮＦ関連、またはＴＮＦ様分子には、限定はしないが、ＴＮＦ−アルファの可溶形態、リンホトキシン−アルファ（ＬＴ−アルファ、またＴＮＦ−ベータとしても知られる）、（複合体ヘテロトリマーＬＴ−アルファ２−ベータにて見られる）ＬＴ−ベータ、ＯＰＧＬ、ＦａｓＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＤｃＲ３、ＯＸ４０Ｌ、ＴＮＦ−ガンマ（国際特許公開第ＷＯ９６／１４３２８号）、ＴＲＡＩＬ／ＡＩＭ−１（国際特許公開第ＷＯ９７／３３８９９号）、ＬＩＧＨＴ／ＡＩＭ−ＩＩ（国際特許公開第ＷＯ９７／３４９１１号）、ＡＰＲＩＬ（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８（６）：１１８５−１１９０）、エンドカイン−アルファ（国際特許公開第ＷＯ９８／０７８８０号）、ＦＡＳＴＲ／ＴＲ６（国際特許公開第ＷＯ９８／３０６９４号）、オステオプロテグリン（ＯＰＧ）、およびニュートロカイン−アルファ（国際特許公開第ＷＯ９８／１８９２１号）、ＯＸ４０および神経増殖因子（ＮＧＦ）、およびＦａｓ、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ４０および４０ＩＢＢの可溶形態、ＴＲ２（国際特許公開第ＷＯ９６／３４０９５号）、ＤＲ３（国際特許公開第ＷＯ９７／３３９０４号）、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１／ＤＲ４（国際特許公開第ＷＯ９８／３２８５６号）、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＲ５（国際特許公開第ＷＯ９８／３０６９３号）、ＴＲ６（国際特許公開第ＷＯ９８／３０６９４号）、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２／ＴＲ７（国際特許公開第ＷＯ９８／４１６２９号）、ＴＲＡＮＫ、ＴＲ９（国際特許公開第ＷＯ９８／５６８９２号）、ＴＲＡＩＬ−Ｒ４／ＴＲ１０（国際特許公開第ＷＯ９８／５４２０２号）、３１２Ｃ２（国際特許公開第ＷＯ９８／０６８４２号）およびＴＲ１２が含まれる。
【０５３０】
別の実施形態において、免疫調節剤を、１つ以上のニュートロカイン−アルファレセプター（たとえばＴＡＣＩ、ＢＣＭＡおよびＢＡＦＦ−Ｒ）との併用で投与する。好ましい実施形態において、ニュートロカイン−アルファレセプターは可溶性である。他の好ましい実施形態において、ニュートロカイン−アルファレセプターは、Ｉａｎ  ＩｇＧ分子のＦｃ領域のような、免疫グロブリン分子のＦｃ領域に融合する。たとえば、ＴＡＣＩ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＣ５１７９０）のアミノ酸残基１〜１５４、ＢＣＭＡ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１１８３）のアミノ酸１〜４８、またはＢＡＦＦ−Ｒ（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿４４３１７７）のアミノ酸１〜８１が、ＩｇＧ分子のＦｃ領域に融合してよく、本技術分野において公知で、および／または本明細書に記述された他の免疫調節剤との併用で使用してよい。別の実施形態において、免疫調節剤との併用で投与しうるＢＡＥＥ−Ｒ−Ｆｃタンパク質は、ＩｇＧ１免疫グロブリン分子のＦｃ領域に融合した、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０のアミノ酸１〜７０である。任意に、ＢＡＦＦ−Ｒ中のアミノ酸２０（バリン）がアスパラギンに置換され、ＢＡＦＦ−Ｒ中のアミノ酸２７（ロイシン）がプロリンに置換される。
【０５３１】
好ましい実施形態において、免疫調節剤を、抗ＣＤ４０Ｌ抗体および／または抗ＣＤ４０抗体との併用で投与する。
【０５３２】
さらなる実施形態において、免疫調節剤を、単独、または抗血管新生剤（類）との併用で投与する。免疫調節剤とともに投与しうる抗血管新生剤には、限定はしないが、アンジオスタチン（Ｅｎｔｒｅｍｅｄ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、トロポニン−１（Ｂｏｓｔｏｎ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）、抗浸潤因子、レチノイン酸およびその誘導体、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ）、スラミン、メタロプロテイナーゼ−１の組織阻害剤、メタロプロテイナーゼ−２の組織阻害剤、ＶＥＧＩ、プラスミノーゲン活性物阻害剤−１、プラスミノーゲン活性物阻害剤−２、および種々の形態のより軽い「ｄ群」遷移金属が含まれる。
【０５３３】
より軽い「ｄ群」遷移金属には、たとえば、バナジウム、モリブデン、タングステン、チタン、ニオビウムおよびタンタルム種が含まれる。そのような遷移金属種は、遷移金属錯体を形成しうる。上記遷移金属種の好適な錯体には、オキソ遷移金属錯体が含まれる。
【０５３４】
バナジウム錯体の代表的な例には、バナジウム酸塩およびバナジル錯体のような、オキソバナジウム錯体が含まれる。好適なバナジウム酸塩錯体には、たとえば、メタバナジウム酸アンモニウム、メタバナジウム酸ナトリウムおよびオルトバナジウム酸ナトリウムのような、メタバナジウム酸塩およびオルトバナジウム酸塩錯体が含まれる。好適なバナジル錯体には、たとえばバナジルアセチルアセトネート、およびバナジル硫酸一水和物および三水和物のようなバナジル硫酸水和物を含むバナジル硫酸塩が含まれる。
【０５３５】
タングステンおよびモリブデン錯体の代表的な例にはまた、オキソ錯体が含まれる。好適なオキソタングステン錯体には、タングステン酸塩および酸化タングステン錯体が含まれる。好適なタングステン酸錯体には、タングステン酸アンモニウム、タングステン酸カルシウム、タングステン酸ナトリウム二水和物、およびタングステン酸が含まれる。好適な酸化タングステンには、酸化タングステン（ＩＶ）および酸化タングステン（ＶＩ）が含まれる。好適なオキソモリブデン錯体には、モリブデン酸塩、酸化モリブデンおよびモリブデニル錯体が含まれる。好適なモリブデン酸錯体には、モリブデン酸アンモニウムおよびその水和物、モリブデン酸ナトリウムおよびその水和物、およびモリブデン酸カリウムおよびその水和物が含まれる。好適な酸化モリブデンには、酸化モリブデン（ＩＶ）、酸化モリブデン（ＶＩ）およびモリブデン酸が含まれる。好適なモリブデニル錯体には、たとえばモリブデニルアセチルアセトネートが含まれる。他の好適なタングステンおよびモリブデン錯体には、たとえばグリセロール、酒石酸および糖に由来するヒドロキソ誘導体が含まれる。
【０５３６】
広く種々の他の血管新生因子もまた、本発明の文脈内で使用してよい。代表的な例には、限定はしないが、血小板因子４、硫酸プロタミン、（クイーンクラブシェルから調製した）硫酸化キチン誘導体（Ｍｕｒａｔａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１：２２−２６，１９９１）、硫酸化ポリサッカライドペプチドグリカン錯体（ＳＰ−ＰＧ）（本化合物の機能は、エストロゲンおよびクエン酸タモキシフェンのようなステロイドの存在によって増強されうる）、スタウロスポリン、たとえば、プロリンアナログ、シスヒドロキシプロリン、ｄ，Ｌ−３，４−デヒドロプロリン、チアプロリン、アルファ、アルファ  ジピロリジル、フマル酸アミノプロピオニトリルを含む、マトリックス代謝の調節物、４−プロピル−５−（４−ピリジニル）−２（３Ｈ）−オキサゾロン、メトトレキサート、マイトキサントロン、ヘパリン、インターロイキン類、２マクログロブリン血清、ｃｈＩＭＰ−３（Ｐａｖｌｏｆｆら、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６７：１７３２１−１７３２６，１９９２）、キモスタチン（Ｔｏｍｋｉｎｓｏｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．２８６：４７５−４８０，１９９２）、シクロデキストリン  テトラデカスルフェート、エポメマイシン、カンプトテシン、フマギリン（Ｉｎｇｂｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５５−５５７，１９９０）、チオマレイン酸金ナトリウム（「ＧＳＴ」、Ｍａｔｓｕｂａｒａ  ａｎｄ  Ｚｉｆｆ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７９：１４４０−１４４６，１９８７）、抗コラゲナーゼ血清、アルファ２−抗プラスミン（Ｈｏｌｍｅｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２（４）：１６５９−１６６４，１９８７）、ビスアントレン（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）、ロベンザリット二ナトリウム（Ｎ−（２）−カルボキシフェニル−４−クロロアンスロニリン酸二ナトリウム、または「ＣＣＡ」）（Ｔａｋｅｕｃｈｉら、Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  ３６：３１２−３１６，１９９２）、およびＢＢ９４のようなメタロプロテイナーゼ阻害剤が含まれる。
【０５３７】
本発明の文脈内でまた使用してよいさらなる抗血管新生因子には、サリドマイド（Ｃｅｌｇｅｎｅ、Ｗａｒｒｅｎ，ＮＪ）、血管増殖抑制性ステロイド、ＡＧＭ−１４７０（Ｈ．Ｂｒｅｍ  ａｎｄ  Ｊ．Ｆｏｌｋｍａｎ  Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．２８：４４５−５１（１９９３））、インテグリンアルファｖベータ３アンタゴニスト（Ｃ．Ｓｔｏｇａｒｄら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０３：４７−５４（１９９９））、カルボキシアミノイミダゾール（ｃａｒｂｏｘｙｎａｍｉｎｏｌｍｉｄａｚｏｌｅ）、カルボキシアミドトリアゾール（ＣＡＩ）（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）、コンブレタスタチンＡ−４（ＣＡ４Ｐ）（ＯｘｉＧＥＮＥ、Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）、スクラミン（Ｍａｇａｉｎｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｐｌｙｍｏｕｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、ＰＡ）、ＴＮＰ−４７０（Ｔａｐ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｃｔｉａｌｓ、Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）、ＺＤ−０１０１  アストラゼネカ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）（Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）、ＡＰＲＡ（ＣＴ２５８４）、ベネフィン、ビロスタチン−１（ＳＣ３３９５５５）、ＣＧＰ−４１２５１（ＰＫＣ４１２）、ＣＭ１０１、デキソラゾキサン（ＩＣＲＦ１８７）、ＤＭＸＡＡ、エンドスタチン、フラボプリジオール、ゲネステイン（Ｇｅｎｅｓｔｅｉｎ）、ＧＴＥ、ＩｍｍＴｈｅｒ、イレッサ（ＺＤ１８３９）、オクテオチド（ソマトスタチン）、パンレチン、ペナシラミン、フォトポイント、ＰＩ−８８、プリノマスタット（ＡＧ−３３４０）、プルリチン、スラジスタ（ＦＣＥ２６６４４）、タモキシフェン（ノルバデックス）、タザロテン、テトラチオモリブデート、キセローダ（カペシタビン）、および５−フルオロウラシルが含まれる。
【０５３８】
免疫調節剤との併用で投与しうる抗血管新生剤は、限定はしないが、細胞外マトリックスのタンパク質分解を阻害すること、内皮細胞細胞外マトリックス接着分子の機能をブロックすること、増殖因子のような血管新生誘導物の機能をアンタゴナイズすることによって、および増殖内皮細胞上に発現したインテグリンレセプターを阻害することを含む種々の機構を介して働きうる。細胞外マトリックスタンパク質分解を干渉し、免疫調節剤との併用で投与しうる、抗血管新生阻害剤の例には、限定はしないが、ＡＧ−３３４０（Ａｇｏｕｒｏｎ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）、ＢＡＹ−１２−９５６６（Ｂａｙｅｒ、Ｗｅｓｔ  Ｈｅａｖｅｎ，ＣＴ）、ＢＭＳ−２７５２９１（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍａｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）、ＣＧＳ−２７０３２Ａ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、Ｅａｓｔ  Ｈａｎｏｖｅｒ，ＮＪ）、マリマスタット（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ）およびメタスタット（Ａｅｔｅｒｎａ、Ｓｔ−Ｆｏｙ、Ｑｕｅｂｅｃ）が含まれる。内皮細胞細胞外マトリックス接着分子の形成をブロッキングすることによって働き、免疫調節剤との併用で投与しうる抗血管新生阻害剤の例として、限定はしないが、ＥＭＤ−１２１９７４（Ｍｅｒｃｋ  ＫｃｇａＡ  Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）およびビタキシン（Ｉｘｓｙｓ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ／メディイミューン（Ｍｅｄｉｉｍｕｎｅ）、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）が挙げられる。血管新生誘導物を直接アンタゴナイズする、または阻害することによって働き、免疫調節剤との併用で投与しうる抗血管申請阻害剤の例として、アンジオザイム（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ、Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）、抗ＶＥＧＦ抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｓ．Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）、ＰＴＫ−７８７／ＺＫ−２２５８４６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＳＵ−１０１（Ｓｕｇｅｎ、Ｓ．Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）、ＳＵ−５４１６（Ｓｕｇｅｎ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｕｐｊｏｈｎ、Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，ＮＪ）、およびＳＵ−６６６８（スーゲン）が挙げられる。他の抗血管新生剤は、血管新生を間接的に阻害することによって働く。免疫調節剤との併用で投与しうる血管新生の間接的阻害剤の例には、限定はしないが、ＩＭ−８６２（Ｃｙｔｒａｎ、Ｋｉｒｋｌａｎｄ，ＷＡ）、インターフェロンアルファ、ＩＬ−１２（Ｒｏｃｈｅ、Ｎｕｔｌｅｙ，ＮＪ）、およびペントサン  ポリスフレート（Ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）が挙げられる。
【０５３９】
好ましい実施形態において、抗血管新生剤との併用での免疫調節剤の利用は、たとえば本明細書で記述した自己免疫疾患のような、自己免疫疾患の処置、予防および／または軽減のために企図される。
【０５４０】
特定の実施形態において、抗血管新生剤との併用での免疫調節剤の利用は、関節炎の処置、予防および／または軽減のために企図される。より特定の実施形態において、抗血管新生剤との併用での免疫調節剤の利用は、慢性関節リウマチの処置、予防および／または軽減のために企図される。
【０５４１】
別の実施形態において、免疫調節剤は、抗凝固薬との併用で投与する。免疫調節剤との併用で投与しうる抗凝固剤には、限定はしないが、ヘパリン、ワーファリンおよびアスピリンが含まれる。特定の実施形態において、免疫調節剤は、ヘパリンおよび／またはワーファリンとの併用で投与する。別の特定の実施形態において、免疫調節剤は、ワーファリンとの併用で投与する。別の特定の実施形態において、免疫調節剤は、ワーファリンおよびアスピリンとの併用で投与する。別の特定の実施形態において、免疫調節剤は、ヘパリンとの併用で投与する。別の特定の実施形態において、免疫調節剤は、ヘパリンおよびアスピリンとの併用せで投与する。
【０５４２】
別の実施形態において、免疫調節剤を、抗カルジオリピン抗体の産生を抑制する剤との併用で投与する。特定の実施形態において、免疫調節剤を、リン脂質結合血漿タンパク質ベータ２−糖タンパク質Ｉ（ｂ２ＧＰＩ）に結合する抗カルジオリピン抗体の能力を阻害および／または減少させる薬剤との併用で投与する。
【０５４３】
特定の実施形態において、免疫調節剤は、抗レトロウイルス薬剤、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、および／またはプロテアーゼ阻害剤との併用で投与する。免疫調節剤との併用で投与しうるヌクレオシド逆転写酵素阻害剤には、限定はしないが、ＲＥＴＲＯＶＩＲＴＭ（ジドブジン／ＡＺＴ）、ＶＩＤＥＸＴＭ（ジダノシン／ｄｄＩ）、ＨＩＶＩＤＴＭ（ザルシタビン／ｄｄＣ）、ＺＥＲＩＴＴＭ（スタブジン／ｄ４Ｔ）、ＥＰＩＶＩＲＴＭ（ラミブジン／３ＴＣ）、およびＣＯＭＢＩＶＩＲＴＭ（ジドブジン／ラミブジン）が含まれる。免疫調節剤との併用で投与しうる非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤には、限定はしないが、ＶＩＲＡＭＵＮＥＴＭ（ネビラピン）、ＲＥＳＣＲＩＰＴＯＲＴＭ（デラビルジン）およびＳＵＳＴＩＶＡＴＭ（エファビレンズ）が含まれる。免疫調節剤との組合せで投与しうるプロテアーゼ阻害剤には、限定はしないが、ＣＲＩＸＩＶＡＮＴＭ（インジナビル）、ＮＯＲＶＩＲＴＭ（リトナビル）、ＩＮＶＩＲＡＳＥＴＭ（サクイナビル）、およびＶＩＲＡＣＥＰＴＴＭ（ネルフィナビル）が含まれる。
【０５４４】
ある特定の実施形態において、免疫調節剤を、抗レトロウイルス剤、ヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩｓ）、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＮＲＴＩｓ）、および／またはプロテアーゼ阻害剤（ＰＩｓ）との併用で投与する。免疫調節剤との組合せで投与するＮＲＴＩｓには、限定はしないが、ＲＥＴＲＯＶＩＲＴＭ（ジドブジン／ＡＺＴ）、ＶＩＤＥＸＴＭ（ジダノシン／ｄｄＩ）、ＨＩＶＩＤＴＭ（ザルシタビン／ｄｄＣ）、ＺＥＲＩＴＴＭ（スタブジン／ｄ４Ｔ）、ＥＰＩＶＩＲＴＭ（ラミブジン／３ＴＣ）、およびＣＯＭＢＩＶＩＲＴＭ（ジドブジン／ラミブジン）が含まれる。免疫調節剤との組合せで投与しうるＮＮＲＴＩｓには、限定はしないが、ＶＩＲＡＭＵＮＥＴＭ（ネビラピン）、ＲＥＳＣＲＩＰＴＯＲＴＭ（デラビルジン）およびＳＵＳＴＩＶＡＴＭ（エファビレンズ）が含まれる。免疫調節剤との併用で投与しうるプロテアーゼ阻害剤には、限定はしないが、ＣＲＩＸＩＶＡＮＴＭ（インジナビル）、ＮＯＲＶＩＲＴＭ（リトナビル）、ＩＮＶＩＲＡＳＥＴＭ（サクイナビル）、およびＶＩＲＡＣＥＰＴＴＭ（ネルフィナビル）が含まれる。
【０５４５】
さらなるＮＲＴＩｓには、ＬＯＤＥＮＯＳＩＮＥＴＭ（Ｆ−ｄｄＡ、酸安定アデノシンＮＲＴＩ、Ｔｒｉａｎｇｌｅ／Ａｂｂｏｔｔ）、ＣＯＶＩＲＡＣＩＬＴＭ（ラミブジン（３ＴＣ）に構造的に関連するが、インビトロで３〜１０倍強い活性を持つエムトリシタビン／ＦＩＴＣ、Ｔｒｉａｎｇｌｅ／Ａｂｂｏｔｔ）、ｄＯＴＣ（またラミブジンに構造的に関連するが、本質的割合のラミブジン耐性単離体に対して活性を維持するＢＣＨ−１０６５２、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａ）、アデホビル（ＦＤＡにより抗ＨＩＶに対する許可が拒否された、Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＰＲＥＶＥＯＮ（登録商標）（アデホビルの活性プロドラッグであるアデホビルジピボキシル、その活性形態はＰＭＥＡ−ｐｐである）、ＴＥＮＯＦＯＶＩＲＴＭ（ｂｉｓ−ＰＯＣ  ＰＭＰＡ、ＰＭＰＡプロドラッグ、Ｇｉｌｅａｄ）、ＤＡＰＤ／ＤＸＧ（ＤＡＰＤの活性代謝物、Ｔｒｉａｎｇｌｅ／Ａｂｂｏｔｔ）、Ｄ−Ｄ４ＦＣ（３ＴＣに関連し、ＡＺＴ／３ＴＣ−耐性ウイルスに対する活性を持つ）、ＧＷ４２０８６７Ｘ（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）、ＺＩＡＧＥＮＴＭ（アバカビル／１５９Ｕ８９、Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）、ＣＳ−８７（３’アジド−２’、３’−ジデオキシウリジン、国際特許第ＷＯ９９／６６９３６号）、ならびにβ−Ｌ−ＦＤ４Ｃおよびβ−Ｌ−ＦｄｄＣのＳ−アシル−２−チオエチル（ＳＡＴＥ）を有するプロドラッグ（国際特許第ＷＯ９８／６６９３６号）が含まれる。
【０５４６】
さらなるＮＮＲＴＩｓには、ＣＯＡＣＴＩＮＯＮＴＭ（ＨＥＰＴクラスの強力なＮＮＲＴＩであるエミビリン／ＭＫＣ−４４２、Ｔｒｉａｎｇｌｅ／Ａｂｂｏｔｔ）、ＣＡＰＲＡＶＩＲＩＮＥＴＭ（Ｋ１０３Ｎ変異を含むウイルスに対する活性を持つ次世代ＮＮＲＴＩである、ＡＧ−１５４９／Ｓ−１１５３）、ＰＮＵ−１４２７２１（その前駆体デラビルジンより２０倍〜５０倍強い活性を持ち、Ｋ１０３Ｎ変異体に対して活性である、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＆  Ｕｐｊｏｈｎ）、ＤＰＣ−９６１およびＤＰＣ−９６３（Ｋ１０３Ｎ変異を持つウイルスに対して活性であるように設計されたエファビレンズの第二世代誘導体、ＤｕＰｏｎｔ）、ＧＷ−４２０８６７Ｘ（ＨＢＹ０９７より２５倍高い活性を持ち、Ｋ１０３Ｎ変異体に対して活性である、Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）、ＣＡＬＡＮＯＬＩＤＥ  Ａ（Ｙ１８１ＣおよびＫ１０３Ｎ変異いずれかまたは両方を含むウイルスに対して活性であるラテックスツリーからの天然に存在する薬剤、）およびプロポリス（国際特許第ＷＯ９９／４９８３０号）が含まれる。
【０５４７】
さらなるプロテアーゼ阻害剤には、ＬＯＰＩＮＡＶＩＲＴＭ（ＡＢＴ３７８／ｒ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＢＭＳ−２３２６３２（アザペプチド、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、ＴＩＰＲＡＮＡＶＩＲＴＭ（非ペプチド性ジヒドロピロンのＰＮＵ−１４０６９０、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ａｎｄ  Ｕｐｊｏｈｎ）、ＰＤ−１７８３９０（非ペプチド性ジヒドロピロン、Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓ）、ＢＭＳ−２３２６３２（アザペプチド、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）、Ｌ−７５６，４２３（インジナビルアナログ、Ｍｅｒｃｋ）、ＤＭＰ−４５０（環状尿素化合物、Ａｖｉｄ  ＆  ＤｕＰｏｎｔ）、ＡＧ−１７７６（プロテアーゼ阻害剤耐性ウイルスに対するインビトロ活性を持つペプチド模倣物、Ａｇｏｕｒｏｎ）、ＶＣ−１７５／ＧＷ−４３３９０８（アムプレナビルのリン酸プロドラッグ、Ｖｅｒｔｅｘ  ＆  Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｃｏｍｅ）、ＣＧＰ６１７５５（Ｃｉｂａ）、およびＡＧＥＮＥＲＡＳＥＴＭ（アムプレナビル、Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  Ｉｎｃ．）が含まれる。
【０５４８】
さらなる抗レトロウイルス剤には、融合阻害剤／ｇｐ４１結合物が含まれる。融合阻害剤／ｇｐ４１結合物には、Ｔ−２０（その結果としての状態において、ｇｐ４１結合し、融合状態への転移を防止する、ＨＩＶ  ｇｐ４１膜貫通タンパク質エクトドメインの残基６４３〜６７８からのペプチド）およびＴ−１２４９（第二世代融合阻害剤、Ｔｒｉｍｅｒｉｓ）が含まれる。
【０５４９】
さらなる抗レトロウイルス剤には、融合阻害剤／ケモカインレセプターアンタゴニストが含まれる。融合阻害剤／ケモカインレセプターアンタゴニストには、ＡＭＤ３１００（ビシクラム）、ＳＤＦ−１およびそのアナログ、およびＡＬＸ４０−４Ｃ（カチオン性ペプチド）、Ｔ２２（１８アミノ酸ペプチド、Ｔｒｉｍｅｒｉｓ）およびＴ２２アナログＴ１３４およびＴ１４０、ＲＡＮＴＥＳ（９〜６８）、ＡＯＰ−ＲＡＮＴＥＳ、ＮＮＹ−ＲＡＮＴＥＳおよびＴＡＫ−７７９のようなＣＣＲ５アンタゴニスト、およびＮＳＣ６５１０１６（ジスタマイシンアナログ）のようなＣＣＲ５／ＣＸＣＲ４アンタゴニストが含まれる。また、ＣＣＲ２Ｂ、ＣＣＲ３およびＣＣＲ６アンタゴニストも含まれる。ＲＡＮＴＥＳ、ＳＤＦ−１、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１βなどのようなケモカインレセプターアゴニストもまた融合を阻害しうる。
【０５５０】
さらなる抗レトロウイルス剤には、インテグラーゼ阻害剤が含まれる。インテグラーゼ阻害剤には、ジカフェオイルキナ（ＤＦＱＡ）酸、Ｌ−チコリ酸（ジカフェオイル酒石（ＤＣＴＡ）酸）、クイナリザリン（ＱＬＣ）および関連アントラキノン、ＺＩＮＴＥＶＩＲＴＭ（真のインテグラーゼ阻害剤ではなく、細胞表面にておそらく作用するオリゴヌクレオチドのＡＲ１７７、Ａｒｏｎｄｅｘ）、および国際特許第９８／５０３４７号にて開示されたもののような、ナフトール類が含まれる。
【０５５１】
さらなる抗レトロウイルス剤には、ＢＣＸ−３４（プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、Ｂｉｏｃｒｙｓｔ）のようなヒドロキシウレア様化合物、ＤＩＤＯＸＴＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｆｏｒ  Ｈｅａｌｔｈ）のようなリボヌクレオチドリダクターゼ阻害剤、ＶＣ−４９７（Ｖｅｒｔｅｘ）のようなイノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）阻害剤、およびＣｅｌｌＣｅｐｔ（マイコフェノレート  モフェティル、Ｒｏｃｈｅ）のようなミコリン酸が含まれる。
【０５５２】
さらなる抗レトロウイルス剤には、ウイルスインテグラーゼの阻害剤、アリーレンビス（メチルケトン）化合物のようなウイルスゲノム核転位の阻害剤、ＡＯＰ−ＲＡＮＴＥＲＳ、ＮＮＹ−ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＮＴＥＳ−ＩｇＧ融合タンパク質、ＲＡＮＴＥＳおよびグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の可溶性複合体、およびＡＭＤ−３１００のようなＨＩＶエントリーの阻害剤、ジチエン化合物のようなヌクレオカプシド亜鉛フィンガー阻害剤、ＨＩＶ  ＴａｔおよびＲｅｖの標的、およびＡＢＴ−３７８のようなファーマコエンハンサーが含まれる。
【０５５３】
他の抗レトロウイルス剤治療および添加治療には、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＳＤＦ−１α、ＩＬ−２、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮＴＭ（アルデスロイキン／Ｌ２−７００１、Ｃｈｉｒｏｎ）、ＩＬ−４、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２およびＩＬ−１３のようなサイトカイン類およびリンホカイン類、ＩＦＮ−α２ａのようなインターフェロン類、ＴＮＦｓ、ＮＦκＢ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦおよびＩＬ−１０のアンタゴニスト、シクロスポリンおよびプレドニゾンのような免疫活性化を調節する剤、ＲｅｍｕｎｅＴＭ（ＨＩＶ  Ｉｍｍｕｎｏｅｇｅｎ）、ＡＰＬ  ４００−００３（Ａｐｐｏｌｌｏｎ）、組換え体ｇｐ１２０および断片、二価（Ｂ／Ｅ）組換え体エンベロープ糖タンパク質、ｒｇｐ１２０ＣＭ２３５、ＭＮ  ｒｇｐ１２０、ＳＦ−２  ｒｇｐ１２０、ｇｐ１２０／可溶性ＣＤ４複合体、デルタＪＲ−ＦＬタンパク質、非連続性ｇｐ１２０  Ｃ３／Ｃ４ドメインに由来する分岐鎖合成ペプチド、融合補体免疫原、およびＧａｇ、Ｐｏｌ、ＮｅｆおよびＴａｔワクチンのようなワクチン、遺伝的抑制要素表面発現（ＧＳＥｓ、国際特許第ＷＯ９８／５４３６６号）のような遺伝子に基づく治療、およびインターロイキン類（新規に合成されたＣＣＲ５の表面発現を阻害するために、ＥＲに標的化された一般的に改変されたＣＣケモカイン類（Ｙａｎｇら、ＰＮＡＳ  ９４：１１５６７−７２（１９９７）、Ｃｈｅｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．３：１１１０−１６（１９９７））、抗ＣＸＣＲ４抗体１２Ｇ５、抗ＣＣＲ５抗体２Ｄ７、５Ｃ７、ＰＡ８、ＰＡ９、ＰＡ１０、ＰＡ１１、ＰＡ１２およびＰＡ１４、抗ＣＤ４抗体Ｑ４１２０およいＲＰＡ−Ｔ４、抗ＣＣＲ３抗体７ｂ１１、抗ｇｐ１２０抗体１７ｂ、４８ｄ、４４７−５２Ｄ、２５７−Ｄ、２６８−Ｄおよび５０．１、抗Ｔａｔ抗体、抗ＴＮＦ−α抗体、およびモノクローナル抗体３３Ａ、ＴＣＤＤ、３，３’，４，４’，５−ペンタクロロビフェニル、３，３’，４，４’−テトラクロロビフェニル、およびα−ナフトフラボン（国際特許第ＷＯ９８／３０２１３号）のようなアリール炭化水素（ＡＨ）レセプターアゴニストおよびアンタゴニスト、およびγ−Ｌ−グルタミル−Ｌ−システインエチルエステル（γ−ＧＣＥ、国際特許第ＷＯ９９／５６７６４号）が含まれる。
【０５５４】
他の実施形態において、免疫調節剤を、抗日和見感染剤との併用で投与してよい。免疫調節剤との併用で投与してよい抗日和見感染剤には、限定はしないが、ＴＲＩＭＥＴＨＯＰＲＩＭ−ＳＵＬＦＡＭＥＴＨＯＸＡＺＯＬＥＴＭ、ＤＡＰＳＯＮＥＴＭ、ＰＥＮＴＡＭＩＤＩＮＥＴＭ、ＡＴＯＶＡＱＵＯＮＥＴＭ、ＩＳＯＮＩＡＺＩＤＴＭ、ＲＩＦＡＭＰＩＮＴＭ、ＰＹＲＡＺＩＮＡＭＩＤＥＴＭ、ＥＴＨＡＭＢＵＴＯＬＴＭ、ＣＩＤＯＦＯＶＩＲＴＭ、ＦＬＵＣＯＮＡＺＯＬＥＴＭ、ＩＴＲＡＣＯＮＡＺＯＬＥＴＭ、ＫＥＴＯＣＯＮＡＺＯＬＥＴＭ、ＡＣＹＣＬＯＶＩＲＴＭ、ＦＡＭＣＩＣＯＬＶＩＲＴＭ、ＰＹＲＩＭＥＴＨＡＭＩＮＥＴＭ、ＬＥＵＣＯＶＯＲＩＮＴＭ、ＮＥＵＰＯＧＥＮＴＭ（フィルグラスチム／Ｇ−ＣＳＦ）、およびＬＥＵＫＩＮＥＴＭ（サルグラモスチム／ＧＭ−ＣＳＦ）が含まれる。特定の実施形態において、免疫調節剤を、日和見性ニューモシスティス・カリニ肺炎感染を予防的に処置、予防、および／または診断するために、ＲＩＭＥＴＨＯＰＲＩＭ−ＳＵＬＦＡＭＥＴＨＯＸＡＺＯＬＥＴＭ、ＤＡＰＳＯＮＥＴＭ、ＰＥＮＴＡＭＩＤＩＮＥＴＭおよび／またはＡＴＯＶＡＱＵＯＮＥＴＭとの任意の併用で使用する。別の特定の実施形態において、免疫調節剤を、日和見性トリ型結核菌複合体感染を予防的に処置、予防および／または診断するために、ＩＳＯＮＩＡＺＩＤＴＭ、ＲＩＦＡＭＰＩＮＴＭ、ＰＹＲＡＺＩＮＡＭＩＤＥＴＭおよび／またはＥＴＨＡＭＢＵＴＯＬＴＭとの任意の併用で使用する。別の特定の実施形態において、免疫調節剤を、日和見性ヒト型結核菌感染を予防的に処置、予防および／または診断するために、ＲＩＦＡＢＵＴＩＮＴＭ、ＣＬＡＲＩＴＨＲＯＭＹＣＩＮＴＭおよび／またはＡＺＩＴＨＲＯＭＹＣＩＮＴＭとの任意の併用で使用する。別の特定の実施形態において、免疫調節剤を、日和見性サイトメガロウイルス感染を予防的に処置、予防および／または診断するために、ＧＡＮＣＩＣＬＯＶＩＲＴＭ、ＦＯＳＣＡＲＮＥＴＴＭおよび／またはＣＩＤＯＦＯＶＩＲＴＭとの任意の組合せで使用する。別の特定の実施形態において、免疫調節剤を、日和見性真菌感染を予防的に処置、予防および／または診断するために、ＦＬＵＣＯＮＡＺＯＬＥＴＭ、ＩＴＲＡＣＯＮＡＺＯＬＥＴＭ、および／またはＫＥＴＯＣＯＮＡＺＯＬＥＴＭとの任意の併用で使用する。別の特定の実施形態において、免疫調節剤を、日和見性単純ヘルペスウイルスＩ型および／またはＩＩ型感染を予防的に処置、予防および／または診断するために、ＡＣＹＣＬＯＶＩＲＴＭおよび／またはＦＡＭＣＩＣＯＬＶＩＲＴＭとの任意の併用で使用する。別の特定の実施形態において、免疫調節剤を、日和見性トキソプラズマ原虫感染を予防的に処置、予防および／または診断するために、ＰＹＲＩＭＥＴＨＡＭＩＮＥＴＭおよび／またはＬＥＵＣＯＶＯＲＩＮＴＭとの任意の併用で使用する。別の特定の実施形態において、免疫調節剤は、日和見性細菌感染を、予防的に処置、予防および／または診断するために、ＬＥＵＣＯＶＯＲＩＮＴＭおよび／またはＮＥＵＰＯＧＥＮＴＭとの任意の併用で使用する。
【０５５５】
さらなる実施形態において、免疫調節剤を、抗ウイルス剤との併用で投与する。免疫調節剤とともに投与しうる抗ウイルス剤には、限定はしないが、アシクロビル、リバビリン、アマンタジンおよびレマンチジンが含まれる。
【０５５６】
さらなる実施形態において、免疫調節剤を、抗生物質剤との併用で投与する。免疫調節剤とともに投与しうる抗生物質剤には、限定はしないが、アモキシリン、アミノグルコシド類、ベータ−ラクタム（糖ペプチド）、ベータ−ラクタマーゼ類、クリンダマイシン、クロラムフェニコール、セファロスポリン類、シプロフロキサシン、シプロフロキサシン、エリスロマイシン、フルオロキノロン類、マクロライド類、メトロニダゾール、ペニシリン類、キノロン類、リファンピン、ストレプトマイシン、スルホンアミド、テトラシクリン類、トリメトプリム、トリメトプリム−スルファンゾキサゾール、およびバンコマイシンが含まれる。
【０５５７】
さらに、免疫調節剤は、単独、または限定はしないが、放射線治療を含む他の治療養成法との組合せで投与してよい。そのような組合せ治療は、連続しておよび／または同時に投与してよい。
【０５５８】
キット
本発明はまた、１つまたはそれ以上の医薬組成物の成分で満たされた１つ以上の容器を含む医薬パックまたはキットも提供する。任意に、医薬品または生物学的産物の製造、利用または販売に関連する行政機関によって規定された形態での掲示が任意にそのような容器（類）に関連し、掲示は、ヒト投与のための製造、利用または販売の機関による許可を反映している。さらに、本発明のポリペプチドを、他の治療化合物と合わせて使用してよい。特定の実施形態において、キットには、医薬品または生物学的産物の製造、利用または販売に関連する行政機関によって規定された形態での掲示が含まれ、掲示は、その血清または血漿中で、１：８０以上のＡＮＡタイター、および／または３０ＩＵ以上の抗ｄｓＤＮＡ抗体を有する患者における、ヒト投与のための製造、利用または販売の機関による許可を反映している。
【実施例】
【０５５９】
本発明の一般的に記述しているが、例示の目的で提供され，制限の意図はない、以下の実施例を参照することによって、より簡単に理解されるであろう。
【０５６０】
実施例１  全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）を処置するための、ニュートロカイン−アルファタンパク質を中和する抗体（ベリムマブ）の利用を試験している臨床試験からの結果の要約
プロスペクティブな無作為化二重盲検プラセボ対照試験により、ＳＬＥに対する介護治療の標準に加えて、ニュートロカイン−アルファタンパク質を中和する抗体であるベリムマブを試験した。スクリーニングの時点で、測定可能な自己抗体およびＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアが４以上の歴を持つ、ＣＲ基準（Ｔａｎら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．２５：１２７１−７（１９８２）、およびＨｏｃｈｂｅｒｇら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４０：１７２５（１９９７））による、４４９人のＳＬＥの被験体に投与した。
【０５６１】
試験剤（１、４、１０ｍｇ／ｋｇベリムマブ）またはプラセボを、５２週にわたり、０日、１４日、２８日、ついで２８日ごとに静脈内に投与した。５２週処置期間を完了した被験体には、２４週間延長期間の研究の継続のオプションを与えた。ベリムマブは、１０ｍＭ  クエン酸ナトリウム、１．９％グリシン、０．５％スクロース、０．０１％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、ｐＨ６．５（±０．３）に処方した。プラセボ投与を与えた被験体には、ベリムマブを含まない製剤（１０ｍＭクエン酸ナトリウム、１．９％グリシン、０．５％スクロース、０．０１％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、ｐＨ６．５（±０．３））を与えた。効果を、ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩ（ＳＳ）、ＳＬＥフレア指数、‘医師の包括的評価（ＰＧＡ）によって、１〜２ヶ月ごとに評価した。ＢＩＬＡＧおよびＳＦ−３６疾患活性スコアをまた、定期的に評価した。先に決定した主要効果評価項目は、ＳＬＥフレア指数によって定義したように、２４時間の時点でのＳＳスコア、および５２週間にわたるフレアまでの時間における割合減少であった。生物学的マーカーには、ＡＮＡ、抗ｄｓＤＮＡ抗体（Ａｂ）、Ｃ３／Ｃ４、Ｉｇイソタイプおよび末梢Ｂ細胞ＦＡＣＳが含まれる。Ｂ細胞を、４色ＦＡＣＳ（ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２７、ＣＤ６９、ＣＤ３８、ＣＤ１３８およびＣＤ４５）によって、１〜２ヶ月ごと分析した。抗ｄｓＤＮＡ  Ａｂ、Ｉｇイソタイプ、総タンパク質、およびアルブミンレベルを含む血清自己抗体を、同一の訪問にて得た。尤度比カイ二乗、ウィルコクソン検定またはｔ−検定を使用して、生物学的マーカーにおける変化を分析した。
【０５６２】
本試験の被験体の平均年齢は、４２歳であり、これらの対象でのＳＬＥの平均期間は８．８年間であった。これらの被験体における疾患活性のベースラインレベルは比較的高く、およそ６７％の被験体が、ＳＳスコア８ポイント以上（平均ＳＳスコア：９．６）であった。本試験に登録された被験体の９３パーセントの対象が女性であった。７０％の被験体が白色人種であり、２４％の被験体がアフリカ系アメリカ人であり、３％の被験体がアジア人であり、１８％の被験体がヒスパニック系であった（カテゴリーは重なっている）。９８パーセントの被験体が、ＡＮＡに対して歴史的に陽性にスコア化されており、７１．５％の被験体がエントリー時点でＡＮＡ＋であった（スクリーン／日０の時点で、ＡＮＡタイターが１：８０以上および／または抗ｄｓＤＮＡ  Ａｂが３０ＩＵ／ｍｌ以上）。５０％の被験体が、エントリーの時点で、３０ＩＵ／ｍｌ以上の抗ｄｓＤＮＡタイターを持った。ベースラインで使用したＳＬＥに対するもっとも一般的な併用医薬物は、以下の、ステロイド類（およそ７０％の被験体）、アミノキノリン類（たとえば抗マラリア剤）（７０％）、ＣＯＸ−２阻害剤（２８％）、ＣＯＸ−１阻害剤（２６％）、アザチオプリン（２０％）、メトトレキサート（１６％）、およびミコフェノレート  モフェティル（１６％）が含まれた。それぞれ３４パーセントおよび４２％の活性およびプラセボ対象に、ベースラインにて、（プレドニゾンまたはプレドニゾン等価物用量＞７．５ｍｇ／日として定義した）全身性コルチコステロイドの臨床的に意味のある用量を与えていた。処置アームにおけるベースライン特徴または完了率において有意な差はなかった。
【０５６３】
主要効果評価項目は統計学的有意に達しなかったが、ＳＳスコアは、ＡＮＡ＋被験体にて、週５２にて２９％まで有意に減少した（ｐ＝０．０４３５、図１を参照のこと）。ＳＬＥフレアが、２４〜５２週の間、２４週ベースラインを用いて、ベリムマブの被験体において減少した（ｌｏｇランクｐ＝０．０３６）。合成数的ＢＩＬＡＧスコアにおける有意な差（ＢＩＬＡＧ合成は、器官システムグレードを以下のように数的スコアに変換することによって計算した：Ａ＝９、Ｂ＝３、Ｃ＝１、Ｄ＝０、Ｅ＝０）は観察されなかったが、ＡＮＡ＋被験体において、８つの個々の器官ドメインに対するスコアの解析によって、２つの器官ドメインにおいてスコアのわずかな減少（筋骨格、ｐ＜０．００８、神経的に、ｐ＜０．０３８）、および３つの器官ドメインでのスコアにおけるわずかな増加の傾向（心臓血管＆呼吸器、ｐ＝０．０６０、一般、ｐ＜０．１５、腎臓、ｐ＜０．１５）が明らかになった。改善が、プラセボ対ベリムマブ処置におけるプレドニゾンの増加にもかかわらず発生した（＞７．５ｍｇ／日までの増加、〜１５％対〜７％）。ＡＮＡ＋被験体において、７．５ｍｇ／日以下の低用量〜＞７．５ｍｇ／日の高用量の、プレドニゾンにおける増加の頻度の有意な減少が、早くも８週にて観察された（８〜１２週にわたり、および３２〜４０週にわたり、ｐ＜０．０５）。効果において用量応答はなく、すべての用量が等しく活性であることが示唆される。すべてのベリムマブアーム対プラセボにおける副作用（ＡＥ）、ＡＥ重症度、感染または研究室毒性を含む臨床的に有意な差が、安全にて見られた。ベリムマブのわずかな被験体が、胸膜炎（３．３％対８％、ｐ＜０．０５）であり、一方でより多くがじんましんを持った（４％対０％、ｐ＜０．０５）。注入反応はまれであり、ただ１つの副作用が報告された。ベリムマブに対する免疫原性が１被験体にて観察された（１ｍｇ／ｋｇ）。
【０５６４】
表ＩＸにて示したように、５２週でのＡＮＡ＋被験体の解析によって、ＢＩＬＡＧ指数（行３）によって、およびＰＧＡ（行４）によって測定したように、プラセボに対して、疾患の有意な安定化となった。さらに、試験中の処置群における応答率をまた、ＳＳスコアによって測定されたようなグローバル疾患活性の測定を、ＰＧＡ疾患活性指数によって評価した患者の総合状態の測定、およびＢＩＬＡＧスケールによって測定されたような特定の期間システムでの疾患の測定と混合した、混合応答評価項目（行１）を用いて分析した。患者がＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコア４以上の減少を持つ場合、混合評価項目において、処置に対して応答性であるとスコア化し、ＰＧＡスコアにおいて、０．３ポイント未満として定義されたそれらのＰＧＡスコアの悪化はなく、新規のＢＩＬＡＧ  Ａ器官ドメインスコアなし、または２つの新規ＢＩＬＡＧ  Ｂ器官ドメインスコアなしとして定義した、任意の特定の器官システムにおいて悪化はなかった。上記複合評価項目を用いたＡＮＡ＋被験体の解析によって、ベリムマブに対する有意な応答が明らかになった（ｐ＝０．００５８）。
【０５６５】
さらに、ＡＮＡ＋対象において、ＰＧＡおよびＳＦ−３６の物理的なコンポーネントスコア（ＳＦ−３６  ＰＣＳ）の有意な改善が、処置の早期で観察された。ベースラインＰＧＡからの平均パーセント変化が、ＡＮＡ＋プラセボ処置被験体と比較して、ベリムマブで処置したＡＮＡ＋被験体にて、早くも２週間で、有意な改善が示された（ｐ＜０．０５）。８週、１６週、４８週および５２週の時点でのＰＧＡスコアにおける平均パーセント変化の値がまた、ＡＮＡ＋被験体プラセボ処置被験体と比較して、ベリムマブ処置ＡＮＡ＋被験体において有意な改善を示した（８、１６および４８週時点でｐ＜０．０５、５２週時点でｐ＜０．０１）。平均ＳＦ−３６  ＰＣＳがまた、１２、２４、４８および５２週の時点で、ＡＮＡ＋プラセボ処置被験体と比較して、ベリムマブ処置ＡＮＡ＋被験体の生活の質における有意な改善を示した（各時間点でｐ＜０．０５）。
【０５６６】
（ベースラインからの中間値パーセント変化として表される）Ｂ細胞数の有意な減少が、ＣＤ１９＋  Ｂ細胞（週８〜５２の間実施した各測定に対してｐ＜０．０１）、活性化Ｂ細胞（ＣＤ２０＋／ＣＤ６９＋、週８〜５２の間実施した各測定に対してｐ＜０．０１）、ナイーブＢ細胞（ＣＤ２０＋／ＣＤ２７−、週８〜５２の間実施した各測定に対してｐ＜０．０１）、および形質細胞Ｂ細胞（ＣＤ２０＋／ＣＤ１３８＋、週８〜５２の間実施した各測定に対してｐ＜０．０１）を含んで、研究の経過にわたって、ベリムマブ−処置被験体に関して観察された。２４週の時点でのＢ細胞数の測定が、ベリムマブ（すべて処置混合）が、プラセボ処置被験体と比較して、２４週までに、有意にＢ細胞を減少させたことを示した。２４週の時点で、細胞数の有意な減少（ベースラインからの平均値パーセント変化として表される、ｐ＜０．０００１）が、ＣＤ１９＋  Ｂ細胞、ナイーブＢ細胞（ＣＤ２０＋／ＣＤ２７−）、活性化Ｂ細胞（ＣＤ２０＋／ＣＤ６９＋）、および形質細胞Ｂ細胞（ＣＤ２０＋／ＣＤ１３８＋）に関して観察された。ベリムマブ（すべての処置混合）は、５２週の時点で、Ｂ細胞数を有意に減少させた（中央値）。５２週の時点で、ＣＤ２０＋  Ｂ細胞における中央値パーセント変化は、早くも８週の時点で観察された有意な減少と混合して、すべての処置群に関して、５４％＊であった（ｐ＜０．０００１）。５２週の時点で、形質細胞Ｂ細胞（ＣＤ２０＋／ＣＤ１３８＋）における平均値パーセント変化が、混合したすべての処置群に対して６２％＊であった。また、活性Ｂ細胞（ＣＤ２０＋／ＣＤ６９＋  Ｂ細胞）における中央値パーセント変化は、５２週の時点で７０％＊であった（＊すべてｐ＜０．００２）。５２週の時点で、ＣＤ１９＋  Ｂ細胞およびナイーブＢ細胞（ＣＤ２０＋／ＣＤ２７−）が有意に減少し、一方で、メモリー細胞集団は保存された。反対にプラズマ細胞（ＣＤ２０−／ＣＤ１３８＋）は、５２週の時点で、ベリムマブ処置被験体にて、ベースライン（２．７％）上７２．５％増加し、対してプラセボ／標準処置において３０．６％増加した（ｐ＝０．０２）。さらに、ベリムマブは、７６週を通して、計数したＢ細胞数における減少を誘導した。７６週の時点で、ＣＤ２０＋  Ｂ細胞における中央値パーセント変化は、混合したすべての処置群に対して、６１％であった。７６週の時点で、形質細胞Ｂ細胞（ＣＤ２０＋／ＣＤ１３８＋）における中央値パーセント変化は、混合したすべての処置群に対して６０％であった。また、７６週の時点での活性化Ｂ細胞（ＣＤ２０＋／ＣＤ６９＋  Ｂ細胞）における中央値パーセント変化は、混合したすべての処置群で、８４％であった。エントリー時点で、３０ＩＵ／ｍｌ未満の抗ｄｓＤＮＡタイターを持った対象において、（ベースラインからの中央値パーセント変化として表した）抗ｄｓＤＮＡタイターにおける有意な減少が、ベリムマブ処置被験体対プラセボ処置被験体において、早くも４週にて観察された（４〜１２週の間に実施した各測定に対して、ｐ＜０．０１、１６〜２４週の間に実施した各測定に対してｐ＜０．０３、３２〜５２週の間に実施した各測定に対してｐ＜０．０１）。ベリムマブは、５２週時点で、抗���ｓＤＮＡ  Ａｂを３０％まで減少させ（ｐ＜０．０２、ベースライン陽性）、対してプラセボは９％であった。本効果は、７６週の時点での測定として維持され、抗ｄｓＤＮＡにて２８％の減少を示した。（ベースラインからの平均値パーセント変化として表される）血清ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＭレベルにおける有意なベリムマブ誘導減少が、プラセボ処置対照と比較して、ベリムマブ処置対照にて、早くも８週で明らかであった（ｐ＜０．０００１）。５２週の時点で、血清ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＭが減少した（それぞれ１０％、１４％、３４％および２９％）。減少は７６週を通して継続した（それぞれ１２％、１５％、３５％および３４％）。さらに、ベースラインにてＩｇイソタイプレベルが上昇した被験体に関して、ベリムマブを投与された４１％（５２／１２８、ｐ＝０．００１４）の被験体が、正常Ｉｇイソタイプレベルに戻り、１６％（７／４５）の対照被験体のみが正常化した。４〜５２週の間、ベリムマブ処置アームにて、ベースラインで低Ｃ４補体レベルの患者で実施した各測定に関して、有意な増加が、（ベースラインからの中央値パーセント変化として表された）Ｃ４補体レベルにて観察された（ｐ＜０．０１）。５２週の時点で、Ｃ４が、ベリムマブ処置アームにて３３％（ｐ＝０．０１２６、低ベースラインＣ４）まで増加した。再び、ベリムマブ効果が維持され、Ｃ４が、ベリムマブ処置アームにて、７６週の時点で４６％まで改善した。５２週の時点で、１４．５％（２４／１６５）のベリムマブを投与された抗ｄｓＤＮＡ＋対象が、プラセボにおいて３．５％（２／５８）と比較して、ネガティブに変換した（ｐ＝０．０１２）。７６週の時点で、３人のさらなるベリムマブを投与された抗ｄｓＤＮＡ対象がネガティブに変換した。
【０５６７】
ベリムマブはよく耐容性であり、有意な生物活性を示した。ベリムマブはＰＧＡスコアを改善し、Ｂ細胞数を減少させ、Ｃ４を増加させ、抗ｄｓＤＮＡを減少させ、Ｉｇイソタイプレベルを減少／正常化させた。ベリムマブは、６ヶ月後、フレア開始を遅延させた。エントリーにてＡＮＡ陽性である患者において、ＳＳスコアが、５２週の時点で有意に改善した。最後に、混合応答評価項目が、ＡＮＡ＋対象によるベリムマブ処置に対する有意な応答を明らかにした（表ＩＸを参照のこと）。
【０５６８】
表ＩＸ  ５２週時点でのＡＮＡ＋被験体における応答率
【０５６９】
【表４】
0005936994.tif 000005
ａ混合全活性対プラセボの対比較のための尤度比検定からのＰ値。
【０５７０】
実施例２  ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩに関するタンパク尿スコアリング
腎臓機能不全は、しばしば全身性エリテマトーデスに関連する。当業者は、腎臓機能、たとえば最終段階の腎臓疾患への進行、血清クレアチニン、クレアチニンクリアランス、イオサラメートクリアランス、単一尿試料中のタンパク質濃度と２４時間尿試料中のタンパク質濃度の維持倍増を評価するために使用可能な種々の標準測定を知っている。
【０５７１】
「２４時間尿試料」から計算したタンパク尿における変化が、ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩにおいてスコア化されるカテゴリーの１つである。タンパク尿測定は、本技術分野で公知の任意の方法によって実施してよい。特定の実施形態において、単一尿標本を回収し、タンパク質の量および／またはクレアチニンクリアランスを測定する。たとえばＬｅｍａｎｎら、Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ．，３３：２９７−９，１９８７およびＳｃｈｗａｂら、Ａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ．，Ｍａｙ；１４７（５）：９４３−４，１９８７を参照のこと。特定の実施形態において、尿を２４時間にわたって回収し、タンパク質の量および／またはクリアランスクリアランスを測定する。特定の実施形態において、単一尿標本を回収し、タンパク質量の、クレアチニンクリアランスの量に対する比を測定し、この比を使用して、２４時間尿試料におけるタンパク質の量を推定する、たとえばＲｕｇｇｅｎｅｎｔｉら、ＢＭＪ．３１６（７１３０）：５０４−９、１９９８を参照のこと。したがって、本実施例にて、「２４時間尿試料」は、２４時間尿試料に基づく尿中のタンパク質のグラム、または２４時間尿試料中のタンパク質のグラムの推定のいずれかを意味しうる。２４時間尿試料中のタンパク質の量の推定は、たとえば単一尿標本中のタンパク質の量の、単一尿試料中のクレアチニンクリアランスの量に対する比に基づいてよい。
【０５７２】
標準のＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアリングシステムにおいて、タンパク尿の新規開始、または２４時間尿試料直前に測定したタンパク尿値が少なくとも０．５グラムより高い、最近の２４時間尿試料中のタンパク尿となる最近のタンパク尿の増加を示す患者を、発行されたＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスケールにおいて、タンパク尿に関してスコア４を割り当てる。たとえば、Ｂｏｍｂａｒｄｉｅｒら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．Ｊｕｎ；３５（６）：６３０−４０，１９９２を参照のこと。したがって、標準ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアリングシステムの下、タンパク尿に対してベースラインにて４ポイントに割り当てられた被験体は、タンパク尿が、２４時間尿試料中＞０．５ｇまで増加し続けないかぎり、続く訪問時に、ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩの改善がみられる（すなわち、患者は、安定タンパク尿に直面してさえ、その総スコアから減少した４ポイントをもつか、０．５ｇ／２４以下増加する）。
【０５７３】
ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩタンパク尿スコアリングルールに対する改変を以下に記述している。標準ＳＥＬＥＮＡ  ＳＬＥＤＡＩスコアリングシステム中でのように、タンパク尿の新規開始、または２４時間尿試料直前に測定したタンパク尿値が少なくとも０．５グラムより高い、最近の２４時間尿試料中のタンパク尿となる最近のタンパク尿の増加を示す患者を、タンパク尿に関して、４のスコアに割り当てる。さらに、患者のタンパク尿値が改善されなかった（すなわち、２４時間尿試料直線に測定したタンパク尿値と比較して、最近２４時間尿試料中のタンパク尿における少なくとも０．５グラムまでの減少が存在しなかった）場合、患者は、タンパク尿に関して、４のスコアを割り当てられ続ける。しかしながら、患者のタンパク尿値が改善した（すなわち２４時間尿試料直線に測定したタンパク尿値と比較して、最近２４時間尿試料中のタンパク尿における少なくとも０．５グラムまでの減少が存在した場合）、患者はタンパク尿に関して０のスコアが割り当てられる。
【０５７４】
特定の実施形態において、先のタンパク尿測定は、現在の測定の２６週間以下前に得た２４時間尿試料で実施した。
【０５７５】
実施例３  慢性関節リウマチ（ＲＡ）を処置するための、ニュートロカイン−アルファタンパク質を中和する抗体（ベリムマブ）の利用を試験している臨床試験からの結果の要約
第２相多施設無作為化二重盲検プラセボ対照試験を、ＲＡの被験体にて実施した。対象を４処置群（プラセボ、１ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ）に無作為化した。ベリムマブまたはプラセボを、０、１４および２８日、その後２４週間２８日ごとに、つづいて任意の２４週間延長期間、１、４および１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。ベリムマブは、１０ｍＭクエン酸ナトリウム、１．９％グリシン、０．５％スクロース、０．０１％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、ｐＨ６．５（±０．３）に処方した。プラセボを投与した被験体には、ベリムマブを含まない製剤（１０ｍＭクエン酸ナトリウム、１．９％グリシン、０．５％スクロース、０．０１％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、ｐＨ６．５（±０．３））を与えた。合計２８３人の対象が本試験に参加した。ベリムマブを、試験の２４週間処置相の間に、１、４または１０ｍｇ／ｋｇの用量で、２１４対象に投与した。６９人の被験体にプラセボを与えた。
【０５７６】
統計学的に優れたＡＣＲ２０応答が、１ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．００９７）処置群、ならびに混合したすべての活性処置群（ｐ＝０．０２１３）にて達成された。ＡＣＲ２０は、慢性関節リウマチに対する処置への患者の応答を評価するために、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（ＡＣＲ）によって開発された指標である。ＡＣＲ２０応答は、症状または疾患発現の５つの他の評価（すなわち患者痛み評価、患者総合評価、医師総合評価、患者自己評価障害、急性期反応物［ＲＳＲまたはＣＲＰ］）の３つにおける、少なくとも２０％の改善に加えて、圧痛関節数および関節腫脹数における少なくとも２０％の減少として定義される。さらに、１ｍｇ／ｋｇ処置群に対する結果は、ボンフェロニ（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）閉鎖手順を用いた多重比較に対する適合下、統計学的に有意なままであった（ｐ＜０．０１６６）。ＳＬＥの被験体においてのように、ベリムマブは、自己抗体陽性疾患（リウマトイド因子［ＲＦ］または抗環状シトルリン化ペプチド［ＣＣＰ］）の被験体における、ならびにベースラインにて、Ｃ応答性タンパク質（ＣＲＰ）に対して陽性な被験体における、ＡＣＲ２０の改善と関連した。生物学的活性が、ＣＤ２０＋  Ｂ細胞、ナイーブＢ細胞、活性化Ｂ細胞およびＲＤにおける統計学的に有意な減少、処置の最初の月に増加し、連続投与にてゆっくり減少したメモリー細胞を含んで観察された。ベリムマブは、すべての用量にてよく耐容性であった。用量応答相関は、効果、安全性、またはバイオマーカー効果にて明らかにならなかった。試験の延長期間中の連続処置がよく耐容性であった。ＡＣＲ２０応答は、４８週の時点でおよそ４０％まで増加した。バイオマーカーにおける効果が増加するか、または連続処置にて維持され、一方でメモリー細胞はベースラインレベルまで減少し続けた。本試験における血清濃度は、第１相データに基づいて予測された範囲内であり、併用医薬物（すなわちメトトレキサート、レフルノミドまたはヒドロキシクロロキン）は、ベリムマブ暴露において、有意な効果を持たなかった。
【０５７７】
実施例４  ニュートロカイン−アルファは、２つの独立したシグナル送達経路を通して、Ｂ細胞寿命を延ばす。
ＢＬｙＳ、（Ｂリンパ細胞刺激物）、ＢＡＦＦ、ＴＡＬＬ−１、ＴＨＡＮＫ、ＴＮＦＳＦ１３ＦおよびｚＴＮＦ４とも呼ばれるニュートロカイン−アルファが、静止Ｂリンパ球の生存のために必須である（Ｒｏｋｉｎｇ，Ａ．Ｇ．，ａｎｄＭｅｌｃｈｅｒｓ，Ｆ．（２００２）．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４，２６６−２７５）。ナイーブＢ細胞ホメオスタシスにおけるニュートロカイン−アルファの重要性が、標的化遺伝子欠損、または可溶性デコイレセプターの導入によって産生されたニュートロカイン−アルファ欠損マウスが、辺縁帯および小胞Ｂ細胞、腫瘍成熟末梢Ｂ細胞集団における目を見張る欠損を持つという発見（Ｇｒｏｓｓ，Ｊ．Ａ．，ら（２００１）．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １５，２８９−３０２、Ｓｃｈｉｅｍａｎｎ，Ｂ．，ら（２００１）．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９３，２１１１−２１１４）によって、もっともよく示されている。反対に、トランスジーンからのニュートロカイン−アルファの異所性発現が、Ｔ細胞、Ｂ１細胞、早期（Ｔ１）移行Ｂ細胞、または骨髄中の発達Ｂ細胞に影響を与えることなく、小胞および辺縁帯末梢ゾーンＢ細胞を明らかに増殖させる（Ｍａｃｋａｙ，Ｆ．，ら（２００３）．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２１，２３１−２６４）。ニュートロカイン−アルファはまた、多数のＢ細胞腫瘍の維持のために必要であり、制御不全ニュートロカイン−アルファ刺激が、消去から自己応答性Ｂ細胞を救出し、それによって自己抗体の産生を促進する（Ｋａｌｌｅｄ，Ｓ．Ｌ．（２００５）．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ  ２０４，４３−５４）。したがって、ニュートロカイン−アルファは、正常および病原性Ｂ細胞両方のホメオスタシスにおける重要な役割を持つ。本実施例は、それによってニュートロカイン−アルファがＢ細胞生存を促進する機構を理解するために実施した実験の結果を詳述している。
【０５７８】
実験手順
マウス：Ｐｉｍ−１＋／＋２＋／＋、Ｐｉｍ−１−／−２＋／＋、Ｐｉｍ−１＋／＋２−／−およびＰｉｍ−１−／−２−／−マウスを、Ｐａｕｌ  Ｒｏｔｈｍａｎ  Ｃｏｌｕｉｍｂｉａ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ．のＰｉｍ−１＋／−２＋／−ストックより作成した。Ｃ５７ＢＬ／６（Ｂ６）マウスは、Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ  ＭＥから、またはＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｐｒｏｇｒａｍ，ＮＣＩ−Ｆｒｅｄｒｉｃｋ，Ｆｒｅｄｒｉｃｋ  ＭＤからであった。動物を交配し、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅガイドラインにしたがって、Ｕｎｉｖ．ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，Ｈａｒｖａｒｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ＳｃｈｏｏｌまたはＵｎｉｖ．ｏｆ  Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｈｏｏｌにて維持した。
【０５７９】
Ｂ細胞精製：脾臓Ｂ細胞を、脾臓細胞の抗ｔｈｙ１．２および補体処理と、続く得られたＢ細胞の、ステップワイズペーコール勾配を用いた精製、および６０〜７０％表面での細胞の回収によって得た。いくつかの実験において、ＣＤ２３＋Ｂ細胞を、ビオチン化抗ＣＤ２３抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ−Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡ）およびストレプトアビジンコート化マイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ  ＣＡ）を用いて、脾臓細胞懸濁液の陽性選別および磁気分離によって得た。ＣＤ２３＋Ｂ細胞は、インビボでの環境活性化が、ＣＤ２３の欠損を導くので、Ｐｅｒｃｏｌｌ上でサイズ選択はしなかった。抗体およびＰｅｒｃｏｌｌによって調製したＢ細胞は、＞９０％Ｂ２２０＋であり、一方ＣＤ２３＋Ｂ細胞は＞９５％純粋であった。
【０５８０】
細胞培養：精製Ｂ細胞またはＣＤ２３＋Ｂ細胞を、２−メルカプトエタノール、ＭＥＭ非必須アミノ酸、グルタミン、ペニシリンおよびストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ−１６４０（完全培地、ＣＭ）中で培養した。Ｂ細胞生存および他のアッセイのために、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ  ＭＤにて作製された組換え体ヒトニュートロカイン−アルファを、５０〜１００ｎｇ／ｍｌで使用した。ＦＬＡＧ−タグ化ヒトニュートロカイン−アルファは、Ｄｒ．Ｒａｎｄｏｌｐｈ  Ｎｏｅｌｌｅ，Ｄａｒｔｍｏｕｔｈ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｈｏｏｌからであった。齧歯類ニュートロカイン−アルファは、Ａｌｅｘｉｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  ＣＡから購入し、ヒトインターフェロンアルファ（ＩＦＮα）は、ＰＢＬ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪからであった。ラパマイシンを、最終濃度５０ｎＭにて使用し、メタノール中に溶解したストックから培養液に加えた。ラパマイシンを用いた実験における対照Ｂ細胞を、賦形剤対照としてメタノールで処理した。速度論アッセイのために、Ｂ細胞を調製し、４℃にて一晩冷蔵した。５〜６×１０６精製Ｂ細胞／試料を、５ｕｇ／ｍｌモノクローナル抗ＦＬＡＧ  Ｍ２抗体（Ｓｉｇｍａ）でコーティングした２４ウェルプレート上へスピンし、洗浄し、ＰＢＳ中１％ＢＳＡでブロックし、続いて、洗浄および細胞添加の一時間前に、ＦＬＡＧ−タグ化ヒトニュートロカイン−アルファ  ２ｕｇ／ウェルを加えた。未刺激対照Ｂ細胞は、ＦＬＡＧ抗体のみで処理したウェル上にスピンした。Ｂ細胞をまた、速度論アッセイ緩衝液（ハンクバランス塩溶液＋２％  ＢＳＡ）に加えた抗齧歯類ＩｇＭ（５ｕｇ／ｍｌ）、抗ＣＤ４０（０．５ｕｇ／ｍｌ）または１００ｎｇ／ｍｌの組換え体ヒトニュートロカイン−アルファとのインキュベーションンによって活性化した。
【０５８１】
抗体およびウェスタンブロッティング：ＨＲＰに共役した、マウス抗Ｐｉｍ２（１Ｄ１２）、Ｐｉｍ１（１９Ｆ７）、ヤギ抗アクチン（１−１９）、抗マウスＩｇ、抗ウサギＩｇおよび抗ヤギＩｇを、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  ＣＡ）より得た。ウサギ抗ホスホセリン４７３Ａｋｔ、ホスホスレオニン３８９  ｐ７０  Ｓ６キナーゼ、ホスホスレオニン２４／３２  ＦＫＨＲ／ＦＫＲＨＬ１、ホスホＧＳＫ３α／ベータ、ＧＳＫ、ｐ７０Ｓ６Ｋ、ＦＫＨＲおよびＡｋｔを、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、Ｂｅｖｅｒｌｙ  ＭＡより購入した。ウサギ抗マウスＭｃｌ−１を、Ｒｏｃｋｌａｎｄ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ  ＭＡから購入した。全細胞溶解物を、氷冷ＰＢＳ中でＢ細胞を洗浄し、プロテアーゼ阻害剤（ミニタブ、Ｒｏｃｈｅ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ  ＩＮ）およびホスファターゼ阻害剤カクテルＩおよびＩＩ（Ｓｉｇｍａ）を含むＲＩＰＡ（１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％  ＮＰ−４０、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、０．１％  ＳＤＳ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．０）中で溶解した。１０〜５０ｕｇのタンパク質を、４〜１２％  ＮｕＰａｇｅビス−トリス  ポリアクリルアミドゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏ（ｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ  ＣＡ）上で分解し、ニトロセルロースに移した。ブロットをＰＢＳ中３％  ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ、ＩｇＧフリー）、０．２％  Ｔｗｅｅｎ−２０でブロックし、４℃にて一晩、同一の緩衝液中で、一次抗体とともにインキュベートした。ブロットをＰＢＳ−０．２％、Ｔｗｅｅｎ−２０で洗浄し、ＨＲＰに共役した二次抗体とともにインキュベートし、ＥＣＬｐｌｕｓ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ  ＮＪ）を用いて発展させた。ブロットを、１％  ＳＤＳおよび１００ｕＭ  β−メルカプトエタノールを含むＰＢＳ中、６５℃にて２０分間のインキュベーションンによって再プローブ化するために揮散させた。ブロットをついで洗浄し、以上のようにブロックした。  
【０５８２】
生存アッセイ：５×１０６／ｍｌでのＢ細胞を、３７℃にてＣＭ中、２４ウェル組織培養ディッシュ中で培養した。Ｂ細胞に、５０〜１００ｎｇ／ｍｌのｒｈｕニュートロカイン−アルファ、５０ｎＭラパマイシン、２００ＵのヒトＩＦＮα、またはこれらの試薬の組合せを加えた。Ｂ細胞を５０ｍＭラパマイシンまたは賦形剤で、試験添加物を含む培養の１時間前に前処理し、新鮮なラパマイシンを培養の４８時間後に加えた。生存を、トリパンブルー排除を用いて、生細胞を計数することによって、毎日モニタし、各測定は三回に行った。
【０５８３】
結果
ニュートロカイン−アルファがＢ細胞生存を促進する機構の調査によって、ニュートロカイン−アルファが、Ｂ細胞中のＡｋｔ／ｍＴＯＲ経路を活性化することが明らかになった。精製Ｂ細胞を０、５、２０、６０または１２０分間、１００ｎｇ／ｍｌの組換え体ヒトまたは齧歯類ニュートロカイン−アルファまたは抗Ｉｇ（陽性対照）にて、プレガス培地中で刺激した。溶解物を、氷冷試料から調製し、ウェスタンブロットで解析した。そのような初代Ｂ細胞の組換え体ニュートロカイン−アルファでの刺激によって、Ａｋｔのセリン４７３およびスレオニン３０８のリン酸化の増加によって決定されるようなＡｋｔ経路の活性化となる。精製Ｂ細胞をプレート結合ＦＬＡＧ−タグ化ニュートロカイン−アルファ、可溶性ニュートロカイン−アルファ（１００ｎｇ／ｍｌ）、または０．５ｕｇ／ｍｌ  抗ＣＤ４０（陽性対照）で刺激した追加実験によって、Ａｋｔそれ自身が、Ａｋｔ基質、ＧＳＫβおよびフォークヘッド転写因子ＦＯＸＯ１およびＦＯＸＯ３ａのリン酸化によって見られるように活性化されたことが示された。ｍＴＯＲは、Ａｋｔの主要な下流効果器である。ニュートロカイン−アルファ刺激に続いて、初代Ｂ細胞中のｍＴＯＲの活性化がまた、ｍＴＯＲ基質、ｐ７０  Ｓ６キナーゼと、翻訳阻害剤４Ｅ−ＢＰ１のリン酸化によって示された。リン酸化パターンをウェスタンブロットによって研究した。
【０５８４】
ラパマイシンは、ｍＴＯＲの強力な阻害剤であり、Ｂ細胞増殖および分化の強力な抑制剤である。正常のドナーからの小静止Ｂ細胞を４日間、開始に際して直接培養液に加え、２日ごとに再度加えた、１００ｎｇ／ｍｌのｒｈｕニュートロカイン−アルファ、賦形剤または培養の前にＢ細胞を前処理するために使用した５０ｎＭラパマイシンと一緒に、またはなしで培養した。総ＢまたはＣＤ２３＋Ｂ細胞の、ニュートロカイン−アルファおよびラパマイシンとの共培養は、培養液中、４日後に存在する生細胞の数によって測定したように、生存のニュートロカイン−アルファ仲介増強を予防しなかった。この結果は、他の生存経路が、ニュートロカイン−アルファ処置Ｂ細胞で活性であり得ることを示唆した。
【０５８５】
Ｐｉｍｓは、種々の活性化物によって造血細胞中で誘導される、ラパマイシン耐性アポトーシス保護を提供可能である、３つのセリン／スレオニンキナーゼのファミリーである（Ｆｏｘ，Ｃ．Ｊ．，ら、（２００３）．Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ  １７，１８４１−１８５４およびＦｏｘ，Ｃ．Ｊ．ら、（２００５）．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２０１，２５９−２６６）。２日間の、１００ｎｇ／ｍｌ  ｒｈｕニュートロカイン−アルファでの処置に続いて、初代Ｂ細胞が、Ｐｉｍ１およびＰｉｍ２発現をアップレギュレートすることが、ウェスタンブロットで示された。
【０５８６】
ニュートロカイン−アルファ媒介Ｂ細胞生存におけるＰｉｍ１および２の関与を試験するために、野生型またはＰｉｍ１−／＋２−／＋ヘテロ接合体、Ｐｉｍ１−／−２−／−二重欠損またはＰｉｍ２欠損（Ｐｉｍ１＋／＋２−／−）ドナーからのＣＤ２３＋Ｂ細胞を、ＣＭ中で、賦形剤、１００ｎｇ／ｍｌ  ｒｈｕニュートロカイン−アルファとともに、そして５０ｎＭラパマイシンあり、またはなしで、培養した。生存を、トリパンブルー排除によって毎日測定した。興味深いことに、Ｐｉｍ１およびＰｉｍ２二重欠損マウスからのＢ細胞（Ｐｉｍ−１−／−２−／−Ｂ細胞）は、ニュートロカイン−アルファに暴露したときに生存の増強を示した。この結果は、ｍＴＯＲおよびＰｉｍｓ１および２が、互いに細胞生存のニュートロカイン−アルファ促進を媒介する、異なるシグナル送達経路にて動作することを表している。２つの異なる経路が関与しているという説を試験するために、Ｐｉｍ−１−／−２−／−Ｂ細胞でのニュートロカイン−アルファ媒介生存におけるラパマイシンの効果を試験した。ラパマイシンの添加は、Ｐｉｍ−１−／−２−／−Ｂ細胞におけるＢ細胞生存を増強するためのニュートロカイン−アルファの能力を無効にした。さらなる調査によって、Ｐｉｍ２機能のみ欠損しているＰｉｍ−１＋／−２−／−Ｂ細胞が、Ｐｉｍ−１＋／−２−／−Ｂ細胞と同様にラパマイシンに対して感受性であり、このことは、Ｐｉｍ１が、Ｂ細胞生存におけるニュートロカイン−アルファの効果に対して必須ではないことを示唆している。すべてまとめると、これらのデータは、ニュートロカイン−アルファ媒介生存を調節するために働く２つの独立した経路が存在すること、およびいずれの経路のみが、ニュートロカイン−アルファの本活性に対して必要であること、を示している。
【０５８７】
さらなる実験によって、末梢ＢおよびＴ細胞ホメオスタシスを促進することにおいて役割を果たすＢｃｌ−２ファミリーメンバーである、Ｍｃｌ−１の発現が、Ｂ細胞生存の効果的な増強（アポトーシス誘導に対する保護）のために必要であることが示唆された（データは示していない）。
【０５８８】
したがって、ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路の阻害剤（たとえばラパマイシン）と、Ｐｉｍ２経路の阻害剤を含む組成物を、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストによって誘導される効果を摸倣するために使用しうる。したがって、Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路の阻害剤（たとえばラパマイシン）と、Ｐｉｍ２経路の阻害剤を、Ｂ細胞生存を阻害するため、本明細書で開示した疾患または障害の１つ以上を処置するために、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストとして使用してよい。たとえば、Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路の阻害剤（たとえばラパマイシン）と、Ｐｉｍ２経路の阻害剤を含む組成物、Ｂ細胞ライフスパンを減少させるために使用してよい。さらに、Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路の阻害剤（たとえばラパマイシン）と、Ｐｉｍ２経路の阻害剤を含む組成物を、自己免疫疾患を処置するために使用してよい。特定の実施形態において、Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路の阻害剤（たとえばラパマイシン）と、Ｐｉｍ２経路の阻害剤を含む組成物を、Ｂ細胞仲介自己免疫疾患を処置するために使用してよい。他の特定の実施形態において、Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路の阻害剤（たとえばラパマイシン）と、Ｐｉｍ２経路の阻害剤を含む組成物を、自己抗体が優勢な自己免疫疾患を処置するために使用してよい。特定の実施形態において、Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路の阻害剤（たとえばラパマイシン）と、Ｐｉｍ２経路の阻害剤を含む組成物を、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、シェーグレン症候群、１型糖尿病、特発性血小板減少性紫斑病、ギラン・バレー（Ｇｕｌｌｉａｎ−ｂａｒｒｅ）症候群、橋本甲状腺炎、またはグレーブス病を処置するために使用してよい。
【０５８９】
さらに、阻害剤Ｍｃｌ−１を含む組成物を、ニュートロカイン−アルファアンタゴニストによって誘導される効果を摸倣するために使用してよい。したがって、Ｍｃｌ−１の阻害剤を含む組成物を、Ｂ細胞生存を阻害するために、または本明細書で開示した疾患または障害の１つ以上を処置するために、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストとして使用してもよい。たとえば、阻害剤Ｍｃｌ−１を含む組成物を、Ｂ細胞寿命を減少させるために使用してよい。特定の実施形態において、阻害剤Ｍｃｌ−１を含む組成物を、自己免疫疾患を処置するために使用してよい。他の特定の実施形態において、阻害剤Ｍｃｌ−１を含む組成物を、Ｂ細胞媒介自己免疫疾患を処置するために使用してよい。特定の実施形態において、阻害剤Ｍｃｌ−１を含む組成物を、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、シェーグレン症候群、１型糖尿病、特発性血小板減少性紫斑病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、またはグレーブス病を処置するために使用してよい。
【０５９０】
実施例５  抗体製剤の特性化
示差走査熱量測定による、１０ｍＭヒスチジンおよび１０ｍＭクエン酸緩衝液中の１ｍｇ／ｍｌ  ＩｇＧ１／λ抗体を用いて、各製剤中の抗体の温度安定性を評価した。本研究で使用した特定の抗体は、ニュートロカイン−アルファに対して特異的であり、ニュートロカイン−アルファ活性を中和可能である、ＩｇＧ１／λ抗体であった。解析によって、融解温度が、６．０〜７．５のｐＨ範囲の両方の緩衝液に対してもっとも高く、より高い融解温度が一般的により高い温度安定性を示唆することが明らかになった。クエン酸緩衝液の融解温度は、このｐＨ範囲で、ヒスチジン緩衝液よりも〜２℃高く、これは、クエン酸緩衝液が、より安定な抗体製剤を生成しうることを示唆している。しかしながら、タンパク質の温度可逆性は、クエン酸緩衝液中よりも、ヒスチジン緩衝液中でより高かった。これは、抗体が、そのより低い融解温度にかかわらず、クエン酸中よりもヒスチジン中にてより大きな生理学的安定性を持つことを示唆している。これは、２〜８℃にて１８時間にわたり保存した場合に、１０ｍＭクエン酸よりも１０ｍＭヒスチジンがより少ない凝集となったことがわかった、抗体製剤の安定性試験によって確認された。安定性試験の間、２つの緩衝液の緩衝能力を、繰り返しｐＨ測定によって評価した。抗体に対してより大きな生理学的安定性を提供することに加えて、ヒスチジンは、６．５〜７．０のｐＨ範囲でのクエン酸に比べて、ｐＨ６．０〜６．５にてより大きな緩衝能力を提供すると見られる。１８ヶ月安定性試験において、ヒスチジン製剤は、すべての試験した温度（２〜８℃、２５℃および４０℃）にて、長時間安定ｐＨにて維持された。反対に，クエン酸製剤は、より高い温度にて、より広い変化を持った（データは示していない）。
【０５９１】
実施例６  抗体製剤の長期安定性試験
抗体製剤の保存寿命を測定するために、１０ｍＭヒスチジン、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０１％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０、ｐＨ６．０中での、１００ｍｇ／ｍｌ抗体の長期安定性試験を実施した。本試験で使用した特定の抗体は、ニュートロカイン−アルファに対して特異的で、ニュートロカイン−アルファ活性を中和可能な、ＩｇＧ１／λ抗体であった。５ｍｌガラスバイアル中の２ｍｌの分液を２４ヶ月間、−８０℃、２〜８℃、２５℃および４０℃にて直立で保存した。試料を対照として−８０℃にて、保存寿命を決定するために２〜８℃、起こりうる任意の可能性ある分解経路をモニタするために加速条件（２５℃および４０℃）にて保存した。２４時間にわたり定期的に、試料を目視検査、ｐＨ、濃度、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ、イオン交換−ＨＰＬＣ（ＩＥ−ＨＰＬＣ）、バイオアッセイ、キャピラリー等電点電気泳動法（ｃＩＥＦ）、ペプチドマッピング、ＲＰ−ＨＰＬＣおよびＩＳＯＱＵＡＮＴ（登録商標）を含む多数のアッセイによって解析した。
【０５９２】
ＳＥＣ−ＨＰＬＣ、ＩＥ−ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣによる２〜８℃および−８０℃にて２４時間保存した試料の解析は、すべての３つの方法によって視覚的に同等であり、わずかな差しか観察されなかった。２〜８℃試料は、１ヶ月あたりおよそ０．０３％の割合で、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ純度が減少し、１ヶ月あたり０．１４％のおよその割合で早期溶出ＩＥ−ＨＰＬＣピーク（ほとんど脱アミノ化による）にて増加した（データは示していない）。２〜８℃試料は、２４時間の保存後、抗体の凝集（０．１％未満）、アミド分解（〜４％）、および酸化（１％）においては小さな差しか示さなかった。しかしながら、有意な分解が、加速条件下で保存した使用に関するすべてのアッセイによって観察された。加速条件下でのＳＥＣ−ＨＰＬＣによって観察された分解には、凝集および断片化の両方が含まれた。加速条件下でのＩＥ−ＨＰＬＣは結果として早期溶出ピークにおける増加となる。アミド分解および断片化が、２５℃にてペプチドマッピングによって観察され、アミド分解、酸化、断片化およびアスパラギン酸からイソアスパラギン酸への転位が４０℃にて観察された。したがって、本発明の医薬製剤中の１００ｍｇ／ｍｌのＩｇＧ１／λ抗体は、少なくとも２４時間の保存の間、２〜８℃で安定である。
【０５９３】
実施例７  ニュートロカイン−アルファ−ニュートロカイン−アルファレセプター相互作用の阻害に関して試験するためのインビトロアッセイ
以下は、化合物がニュートロカイン−アルファのアンタゴニストとして働くかどうか試験するために使用可能なアッセイを記述している。特に、本アッセイは、可溶性ニュートロカイン−アルファの、ＩＭ９細胞上のその同種レセプターへの結合を阻害する化合物の能力を測定する。
【０５９４】
ビオチン化ニュートロカイン−アルファの調製
１００μｇのヒトまたはマウスいずれかのニュートロカイン−アルファを、ｓｌｉｄｅ−ａ−ｌｙｚｅｒカセット（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて、５０ｍＭ重炭酸ナトリウム（炭酸水素ナトリウム）ｐＨ８．５に対して、４℃にて一晩透析する。翌日、ＮＨＳ−ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ）を１３．３ｍｇ／ｍｌまでＤＭＳＯ中に溶解する。ついでこれを、２０：１  ビオチン：ニュートロカイン−アルファの分子比で、ニュートロカイン−アルファに加え、混合し、２時間氷上でインキュベートする。ビオチン化ニュートロカイン−アルファをついで、４℃にて一晩、ｓｌｉｄｅ−ａ−ｌｙｚｅｒカセットも用いて、無菌ＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ）内で再び透析する。ビオチン化ニュートロカイン−アルファの生物活性を、レセプター結合阻害アッセイを用いて確認する（以下を参照のこと）。
【０５９５】
ＩＭ９細胞の維持
ＩＭ９細胞は、ニュートロカイン−アルファレセプターを発現しているＢリンパ球細胞株である。ＩＭ９細胞は、４ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１０％  ＦＣＳ、１０Ｕ  ペニシリン、１００ｇ／ｍｌ  ストレプトマイシン（すべての試薬はＳｉｇｍａから）を含むＲＰＭＩ−１６４０中で維持可能である。細胞を凍結ストックから融解し、濃度が４〜８×１０５／ｍｌに達した時に、培養液中５日後にアッセイで使用可能である。
【０５９６】
レセプター結合阻害アッセイ
平底９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）を、室温にて１時間、ウェルあたり１００μｌのＰＢＳ中のポリ−Ｌ−リシンの１：１０希釈（Ｓｉｇｍａ）でコーティングする。ついでプレートを水で２回洗浄し、風乾させて、４℃にて一晩おいた。１００μｌのＩＭ９細胞（ＲＰＭＩ−１６４０培養培地中１０６／ｍｌ）をついで各ウェルに加える。プレートをついで、３２００ｒｐｍにて５分間遠心して、細胞をペレットにする。培地を注意深く吸引し、２００μｌのＭＰＢＳ（３％Ｍａｒｖｅｌブロッキング溶液を含むＰＢＳ）を各ウェルに加える。プレートをついで１時間、室温にてブロックする。
【０５９７】
別の９６−ウェルプレートにて、ＭＰＢＳ中１０μｌのビオチン化ニュートロカイン−アルファ（１６２．５ｎｇ／ｍｌ）を各ウェルに加えて、最終濃度２５ｎｇ／ｍｌとする。５５μｌの各試験化合物を各ウェルに加える。各ウェル中の最終容量は６５μｌである。好ましくは、試験化合物もＭＰＢＳ中で希釈する。ついでプレートを室温にて３０分間インキュベートする。
【０５９８】
ＩＭ９コートプレートを、ＰＢＳにて２回洗浄し、タップ乾燥させ、すぐに５０μｌのファージ／ビオチン化ニュートロカイン−アルファ混合物を加え、室温にて１時間インキュベートする。プレートをＰＢＳＴにて３回、ＰＢＳにて３回洗浄し、タップ乾燥させ、５０μｌのストレプトアビジン−Ｄｅｆｉａ（Ｗａｌｌａｃ）を各ウェルに、製造者のアッセイ緩衝液中１：１０００希釈にて加える。ついでプレートを室温にて１時間インキュベートし、Ｄｅｌｆｉａ洗浄溶液にて６回洗浄する。プレート乾燥をタッピングした後、１００μｌ／ウェルのＤｅｌｆｉａ増強溶液（Ｗａｌｌａｃ）を加える。プレートを、ミセル形成を促進するために穏やかにタップし、室温にて１０分間インキュベートし、蛍光を６５２０ｎＭにて、ワラック１４２０ワークステーション上でよむ。
【０５９９】
本アッセイに含める適切な対照には、ビオチン化ニュートロカイン−アルファのそのレセプターへの最大の結合が本アッセイにおいてなんであるか、を示すためにバイオニュートロカイン−アルファのみの試料、および本アッセイで、バックグラウンドシグナルを示すために、バイオニュートロカイン−アルファを含まない試料、が含まれる。さらに有用な対照は、非ニュートロカイン−アルファ特異的、または「無関係（ｉｒｒｅｌｅｖａｎｔ）」化合物、つまり試験化合物と構造的に同様であるが、ニュートロカイン−アルファまたは１つのニュートロカイン−アルファレセプターいずれかと相互作用するとは考えられていない化合物である。もし試験化合物が、ＩｇＧ１イソタイプの抗ニュートロカイン−アルファ抗体である場合、好適な「無関係」対照は、ニュートロカイン−アルファまたはそのレセプターの１つに対して非特異的な他のＩｇＧ１抗体であり得る。
【０６００】
実施例８  ニュートロカイン−アルファアンタゴニスト分子のインビトロスクリーニングに対するヒトＢ細胞増殖アッセイ
推定ニュートロカイン−アルファアンタゴニストの効果を査定するための１つのバイオアッセイを、それぞれ３×ストック試薬として調製する、等用量のニュートロカイン−アルファ、応答細胞、および推定アンタゴニストを混合することによって、９６ウェルフォーマット中、三回で実施した。
【０６０１】
Ｂ−リンパ球を、ＭＡＣＳ（抗−ＣＤ３欠損）によってヒト扁桃腺から精製し、洗浄し、完全培地（ＣＭ）（１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌ  ストレプトマイシン、４ｍＭ  グルタミン、５×１０Ｅ−５  ベータ−メルカプトエタノールを含む１０％  ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０）中で、３×１０６細胞／ｍＬの濃度で再懸濁する。Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ、Ｃｏｗａｎ  Ｉ（ＳＡＣ、ＣａｌＢｉｏｃｈｅｍ）を、３×濃度で細胞に加える（３×＝ストックの１：３３，３３３希釈）。
【０６０２】
一方、可能性のあるアンタゴニストの８連続希釈（３倍）をＣＭ中で調製し、希釈したアンタゴニストはアッセイで試験すべき最終濃度３×である。たとえば、抗体を日常的に、１０ｕｇ／ｍＬの最終濃度で開始し、約１．５ｎｇ／ｍＬまでさげて試験する。
【０６０３】
ヒトｒニュートロカイン−アルファを、ＣＭ中３×濃度（３×＝３００ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬおよび３ｎｇ／ｍＬ）まで、ＣＭ中で調製する。可能性あるアンタゴニストを、予測されない低親和性またはアンタゴニスト濃度のための偽陰性を避けるために、７つの濃度のニュートロカイン−アルファにて日常的に試験する。
【０６０４】
５マイクロリットルの希釈アンタゴニストおよび５０ｕＬの希釈ニュートロカイン−アルファをついで、５０ｕＬの細胞混合液を含むウェルに加える。
【０６０５】
ついで細胞を、完全に加湿したチャンバー内で、７２時間（３７℃、５％  ＣＯ２）インキュベートする。７２時間後、細胞に、０．５μＣｉ／ウェル  ３Ｈ−チミジン（６．７Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を加え、さらに２４時間インキュベートする。プレートを、Ｔｏｍｔｅｃ  Ｃｅｌｌ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒを用いて回収し、フィルターを、ＴｏｐＣｏｕｎｔ  Ｓｃｉｔｉｌｌａｔｉｏｎ計数機（Ｐａｃｋａｒｄ）中で計数する。
【０６０６】
本アッセイに含める適切な対照には、本アッセイで、最大３Ｈ−チミジン取り込みがなんなのかを示すために、アンタゴニストを含まない試料、および本アッセイでバックグラウンドシグナルを示すために、ニュートロカイン−アルファを含まない試料が含まれる。さらに有用な対照は、非ニュートロカイン−アルファ特異的、または「無関係」化合物、つまり試験化合物と構造的に同様であるが、ニュートロカイン−アルファまたは１つのニュートロカイン−アルファレセプターいずれかと相互作用するとは考えられない化合物である。たとえば、もし試験化合物が、ＩｇＧ１イソタイプの抗ニュートロカイン−アルファ抗体である場合、好適な「無関係」対照は、ニュートロカイン−アルファまたはそのレセプターの１つに対して非特異的な他のＩｇＧ１抗体であり得る。
【０６０７】
当業者は、たとえば、段階の順番または使用する試薬など、本アッセイに改変を加えてよいことを理解するだろう。特定の例として、Ｂ細胞をＳＡＣの代わりに抗ＩｇＭでプライムしてよい。当業者は、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストとして働く化合物の能力を試験するために使用しうる他のアッセイも知っている。
【０６０８】
実施例９  ニュートロカイン−アルファアンタゴニスト分子のインビトロスクリーニングのための齧歯類Ｂ細胞増殖アッセイ
可能性あるニュートロカイン−アルファアンタゴニストが、ニュートロカイン−アルファ媒介Ｂ細胞増殖を阻害するかどうかを決定するために、齧歯類脾臓細胞増殖アッセイを実施してよい。簡単に記すと、齧歯類脾臓細胞を、２５ｇニードルおよび１０ｍｌの完全培地（１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌ  ストレプトマイシン、４ｍＭ  グルタミン、５×１０Ｅ−５  β−メルカプトエタノールを含む１０％  ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０）を用いて、脾臓をフラッシングすることによって単離する。細胞を１００ミクロンナイロンフィルターに通して、細胞クランプを除去する。ついで細胞懸濁液を、４００×ｇで、室温にて２５分間フィコールする（１つの１５ｍｌ円錐チューブ／脾臓、３ｍｌフィコール、１０ｍｌ細胞懸濁液／脾臓、ＳｉｇｍａからのＦｉｃｏｌ１０８３）。回収した細胞を、完全培地中で三回洗浄し、計数する。回収した細胞をついで、３×濃度のＳＡＣ（３×＝ストックの１：３３，３３３希釈、ストックは、ＣａｌＢｉｏｃｈｅｍから入手可能な、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（Ｃｏｗａｎ  Ｉ株）の１０％懸濁液）を含む完全培地中、３×１０６／ｍｌの濃度まで希釈する。
【０６０９】
各抗体に対して、３０μｇ／ｍｌ、３．０μｇ／ｍｌおよび０．３μｇ／ｍｌ濃度での５０マイクロリットルの抗体希釈液を、９６ウェルプレートの個々のウェルに三回で分液する。抗体を含まない（必要なら（市販されている）ヒトアイソタイプ対照を含む）培地を陰性対照として使用する。
【０６１０】
ニュートロカイン−アルファタンパク質を、３００ｎｇ／ｍｌ、９０ｎｇ／ｍｌおよび３０ｎｇ／ｍｌの濃度まで完全培地中で希釈する。５０マイクロリットルの各ニュートロカイン−アルファ希釈液を、ついでプレート中の抗体希釈系列に加える。抗体およびニュートロカイン−アルファ希釈液を含むプレートを、ついで３７℃、５％ＣＯ２にて３０分間インキュベートし、後にＳＡＣを含む５０マイクロリットルの脾臓細胞懸濁液をすべてのウェルに加える。ついでプレートを７２時間（３７℃、５％ＣＯ２）インキュベートする。
【０６１１】
７２時間後、各ウェルに、５０μｌの、０．５μＣｉの３Ｈ−チミジン（６．７Ｃｉ／ｍＭ、アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ））を含む完全培地を加え、細胞をさらに２０〜２４時間、（３７℃、５％ＣＯ２）にてインキュベートする。インキュベーションンの後、細胞を、Ｔｏｍｔｅｃ  Ｃｅｌｌ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒを用いて回収し、フィルターを、ＴｏｐＣｏｕｎｔ  Ｓｃｉｔｉｌｌａｔｉｏｎ計数機（パッカード）にて計数する。
【０６１２】
当業者は、たとえば、段階の順番または使用する試薬など、本アッセイに改変を加えてよいことを理解するだろう。特定の例として、Ｂ細胞をＳＡＣの代わりに抗−ＩｇＭでプライムしてよい。当業者は、ニュートロカイン−アルファのアンタゴニストとして働く化合物の能力を試験するために使用しうる他のアッセイも知っている。
【０６１３】
本発明が、以上の記述および実施例にてとくに記述された以外で実施しうることが明らかである。本発明の多数の改変および変法が、以上の技術に関して可能であり、したがって、付随する請求項の目的の範囲内である。
【０６１４】
（特許、特許明細書、雑誌記事、研究室マニュアル、本または他の文書を含む）明細書で引用されたすべての発行物が参考文献によって本明細書に援用されている。
【０６１５】
さらに、コンピュータおよび紙面両方でここに提出された配列表が、そのすべてが参考文献によって本明細書に援用されている。したがって、以下の米国特許仮出願および非仮出願特許明細書および国際特許出願のそれぞれの（明細書、配列表および図表を含む）すべての開示物が、そのすべてが参考文献によって本明細書に援用されている。２００５年１０月１３日に出願された、米国特許仮出願明細書番号第６０／７２５，６２５号、２００５年１１月１４日に出願された第６０／７３５，９６７号、２００６年２月２７日に出願された第６０／７７６，６６４号、２００６年３月１３日に出願された第６０／７８１，３８７号、２００６年３月３１日に出願された第６０／７８７，５５７号、２００６年５月４日に出願された第６０／７９７，３６０号、２００６年６月２０日に出願された第６０／８１４，８７０号、２００６年６月２２日に出願された第６０／８１５，５５８号、２００６年６月２３日に出願された第６０／８１５，８２７号、２００６年７月３１日に出願された第６０／８３４，１５０号、２００５年１０月１３日に出願された第６０／７２５，６２６号、２００５年１１月１４日に出願された第６０／７３５，９８８号、２００６年２月２７日に出願された第６０／７７６，６６５号、２００６年５月４日に出願された第６０／７９７，３５１号、２００６年６月２０日に出願された第６０／８１４，８６９号、２００６年６月２２日に出願された第６０／８１５，５５９号、２００６年７月３１日に出願された第６０／８３４，１５２号、２００５年１０月１３日に出願された第６０／７２５，６２７号、２００５年１１月１４日に出願された第６０／７３５，９６４号、２００６年２月２７日に出願された第６０／７７６，６５８号、２００５年１０月１３日に出願された第６０／７２５，６２９号、２００５年１１月１４日に出願された第６０／７３５，９６３号、２００６年２月２７日に出願された第６０／７７６，６６０号、２００５年１０月１３日に出願された第６０／７２５，６２８号、２００５年１１月１４日に出願された第６０／７３５，９８７号、２００６年２月２７日に出願された第６０／７７６，６５９号、２００４年２月１１日に出願された第６０／５４３，２６１号、２００４年６月１８日に出願された第６０／５８０，３８７号、２００４年１０月１２日に出願された第６０／６１７，１９１号、２００２年４月１日に出願された第６０／３６８，５４８号、２００１年１２月７日に出願された第６０／３３６，７２６号、２００１年１１月１６日に出願された第６０／３３１，４７８号、２００１年１０月３１日に出願された第６０／３３０，８３５号、２００１年１０月１８日に出願された第６０／３２９，７４７号、および２００１年１０月１７日に出願された第６０／３２９，５０８号、２０００年８月１５日に出願された第６０／２２５，６２８号、２０００年８月２３日に出願された第６０／２２７，００８号、２０００年９月２２日に出願された第６０／２３４，３３８号、２０００年１０月１７日に出願された第６０／２４０，８０６号、２０００年１１月３０日に出願された第６０／２５０，０２０号、２００１年３月６日に出願された第６０／２７６，２４８号、２００１年５月２５日に出願された第６０／２９３，４９９号、２００１年６月７日に出願された第６０／２９６，１２２号、２００１年７月１３日に出願された第６０／３０４，８０９号、１９９９年３月２日に出願された第６０／１２２，３８８号、１９９９年３月１２日に出願された第６０／１２４，０９７号、２０００年３月２６日に出願された第６０／１２６，５９９号、１９９９年４月２日に出願された第６０／１２７，５９８号、１９９９年４月１６日に出願された第６０／１３０，４１２号、１９９９年４月２３日に出願された第６０／１３０，６９６号、１９９９年４月２７日に出願された第６０／１３１，２７８号、１９９９年４月２９日に出願された第６０／１３１，６７８号、１９９９年５月２８日に出願された第６０／１３６，７８４号、１９９９年７月６日に出願された第６０／１４２，６５９号、１９９９年７月２７日に出願された第６０／１４５，８２４号、１９９９年１１月２４日に出願された第６０／１６７，２３９号、１９９９年１２月３日に出願された第６０／１６８，６２４号、１９９９年１２月１６日に出願された第６０／１７１，１０８号、１９９９年１２月２３日に出願された第６０／１７１，６２６号、２０００年１月１４日に出願された第６０／１７６，０１５号、および１９９７年１月１４日に出願された第６０／０３６，１００号、２００５年２月１０日に出願された米国非仮出願明細書番号第１１／０５４，５３９号、２００３年１２月１９日に出願された第１０／７３９，０４２号、２００３年１２月１６日に出願された第１０／７３５，８６５号、２００２年１０月１６日に出願された第１０／２７０，４８７号、２００１年８月１４日に出願された第０９／９２９，４９３号、２０００年６月８日に出願された第０９／５８８，９４７号、２０００年６月８日に出願された第０９／５８９，２８５号、２０００年６月８日に出願された第０９／５８９，２８６号、２０００年６月８日に出願された第０９／５８９，２８７号、２０００年６月８日に出願された第０９／５８９，２８８号、２０００年２月２２日に出願された第０９／５０７，９６８号、１９９９年２月２３日に出願された第０９／２５５，７９４号、および１９９８年１月１２日に出願された第０９／００５，８７４号、および２００１年８月１５日に出願された、国際特許出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ０１／２５５４９号、２０００年２月２２日に出願された第ＰＣＴ／ＵＳ００／０４３３６号、および１９９６年１０月２５日に出願された第ＰＣＴ／ＵＳ９６／１７９５７号。
【図１】
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【配列表】
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