(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬学的に許容可能な担体、配列番号１３６に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、または、Ｎ末端から１〜２０アミノ酸、Ｃ末端から１〜２０アミノ酸もしくはその両方が欠失している配列番号１３６のアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第１のポリペプチド、並びに配列番号４、１３、１３８及び１３９のいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、Ｎ末端から１〜２０アミノ酸、Ｃ末端から１〜２０アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号４、１３、１３８及び１３９のいずれか１つのアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第２のポリペプチドを含むワクチン製剤。
【請求項２】
薬学的に許容可能な担体、配列番号１３６のアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第１のポリペプチド、並びに配列番号２に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、Ｎ末端から１〜２０アミノ酸、Ｃ末端から１〜２０アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号２のアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第２のポリペプチドを含むワクチン製剤。
【請求項３】
前記第２のポリペプチドが、配列番号４に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、Ｎ末端から１〜２０アミノ酸、Ｃ末端から１〜２０アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号４のアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる、請求項１に記載のワクチン製剤。
【請求項４】
配列番号２に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第３のポリペプチドをさらに含む、請求項３に記載のワクチン製剤。
【請求項５】
配列番号１３に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第３のポリペプチドをさらに含む、請求項２または３に記載のワクチン製剤。
【請求項６】
配列番号１３８に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第３のポリペプチドをさらに含む、請求項２または３に記載のワクチン製剤。
【請求項７】
配列番号１３９に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第３のポリペプチドをさらに含む、請求項２または３に記載のワクチン製剤。
【請求項８】
薬学的に許容可能な担体、配列番号１３６に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、Ｎ末端から１〜２０アミノ酸、Ｃ末端から１〜２０アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号１３６のアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第１のポリペプチドを含み、配列番号２、１３、１３８及び１３９のいずれか２つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列、又はその免疫原性断片からなるか、或いは、Ｎ末端から１〜２０アミノ酸、Ｃ末端から１〜２０アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号２、１３、１３８及び１３９のいずれか２つのアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる少なくとも２つの追加のポリペプチドをさらに含む、ワクチン製剤。
【請求項９】
前記少なくとも２つの追加のポリペプチドが、配列番号２及び配列番号１３に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列、又はその免疫原性断片からなる、請求項８に記載のワクチン製剤。
【請求項１０】
前記第２のポリペプチドが、配列番号１３、１３８及び１３９のいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列、又はその免疫原性断片からなる請求項１に記載のワクチン製剤。
【請求項１１】
配列番号４及び５のいずれか１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列、又はその免疫原性断片からなるか、或いは、Ｎ末端から１〜２０アミノ酸、Ｃ末端から１〜２０アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号４及び５のいずれか１つのアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第３のポリペプチドをさらに含む、請求項１０に記載のワクチン製剤。
【請求項１２】
薬学的に許容可能な担体、配列番号１３８及び１３９のうちの１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、Ｎ末端から１〜２０アミノ酸、Ｃ末端から１〜２０アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号１３８及び１３９のうちの１つのアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第１のポリペプチド、並びに配列番号３、４、５及び１３６のうちの１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片の１つからなるか、或いは、Ｎ末端から１〜２０アミノ酸、Ｃ末端から１〜２０アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号３、４、５及び１３６のうちの１つのアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第２のポリペプチドを含むワクチン製剤。
【請求項１３】
前記第２のポリペプチドが、配列番号３及び１３６のうちの１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる、請求項１２に記載のワクチン製剤。
【請求項１４】
配列番号４及び５のうちの１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、Ｎ末端から１〜２０アミノ酸、Ｃ末端から１〜２０アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号４及び５のうちの１つのアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第３のポリペプチドをさらに含む、請求項１２又は１３に記載のワクチン製剤。
【請求項１５】
前記第２のポリペプチドが、配列番号４及び５のうちの１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、Ｎ末端から１〜２０アミノ酸、Ｃ末端から１〜２０アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号４及び５のうちの１つのアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる、請求項１２に記載のワクチン製剤。
【請求項１６】
配列番号３及び１３６のうちの１つに対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなる第３のポリペプチドをさらに含む、請求項１２又は１５に記載のワクチン製剤。
【請求項１７】
キラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンの１つ以上の精製画分を含むアジュバントをさらに含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
【請求項１８】
前記断片が、１８〜２０アミノ酸残基がＮ末端から除去された配列番号１３６のアミノ酸配列の切断された断片である、請求項１に記載のワクチン製剤。
【請求項１９】
前記１８〜２０のアミノ酸残基が、シグナル配列に対応する、請求項１８に記載のワクチン製剤。
【請求項２０】
薬学的に許容可能な担体及び配列番号１３８に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、Ｎ末端から１〜２０アミノ酸、Ｃ末端から１〜２０アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号１３８のアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるポリペプチドを含むワクチン製剤。
【請求項２１】
前記断片が、残基３９１〜５４４からの少なくとも５０残基が欠失しており、残基７８６〜８２１からの少なくとも２５残基が欠失している配列番号１のアミノ酸配列の切断された断片である、請求項１２に記載のワクチン製剤。
【請求項２２】
薬学的に許容可能な担体及び配列番号１３９に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるか、或いは、Ｎ末端から１〜２０アミノ酸、Ｃ末端から１〜２０アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号１３９のアミノ酸配列又はその免疫原性断片からなるポリペプチドを含むワクチン製剤。
【請求項２３】
前記断片が、残基３９１〜５０８からの少なくとも２５残基が欠失しており、残基７８６〜８６４からの少なくとも２５残基が欠失している配列番号１のアミノ酸配列の切断された断片である、請求項１４に記載のワクチン製剤。
【請求項２４】
少なくとも１つのポリペプチドが、免疫原性担体にコンジュゲートしている、請求項１〜２３のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
【請求項２５】
薬学的に許容可能な担体及び配列番号１３８に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸配列又はその免疫原性断片を有するか、或いは、Ｎ末端から１〜２０アミノ酸、Ｃ末端から１〜２０アミノ酸又はその両方が欠失している配列番号１３８のアミノ酸配列又はその免疫原性断片を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有する核酸を含むワクチン製剤。
【請求項２６】
前記ヌクレオチド配列が、配列番号１４０、又は免疫原性ポリペプチドをコードするその断片を含む、請求項２５に記載のワクチン製剤。
【請求項２７】
前記核酸が、ＤＮＡである、請求項２５に記載のワクチン製剤。
【請求項２８】
前記核酸が、プラスミドの一部である、請求項２５〜２７のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
【請求項２９】
アジュバントをさらに含む、請求項１〜１６及び２０〜２８のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
【請求項３０】
前記アジュバントが、キラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンの１つ以上の精製画分である、請求項２９に記載のワクチン製剤。
【請求項３１】
前記アジュバントが、サポニン画分Ａ及びサポニン画分Ｃを含む、請求項１７又は３０に記載のワクチン製剤。
【請求項３２】
前記アジュバントが、コレステロール、ホスファチジルコリン、サポニン画分Ａ及びサポニン画分Ｃを含む、請求項３１に記載のワクチン製剤。
【請求項３３】
前記アジュバントが、粒子の形態である、請求項３２に記載のワクチン製剤。
【請求項３４】
サポニン画分Ａを含む粒子が、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％又は１％未満のサポニン画分Ｃを含み、サポニン画分Ｃを含む粒子が、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％又は１％未満のサポニン画分Ａを含む、請求項３３に記載のワクチン製剤。
【請求項３５】
５〜２００μｇの各ポリペプチド及び５〜２００μｇの前記アジュバントを含む、請求項１７及び２９〜３４のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
【請求項３６】
前記ポリペプチドが、タグをさらに含む融合タンパク質である、請求項１〜２４のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
【請求項３７】
対象におけるＨＳＶ−２、ＨＳＶ−１、又は、ＨＳＶ−２及びＨＳＶ−１による感染を阻害する、請求項１〜３６のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
【請求項３８】
対象におけるＨＳＶ−２、ＨＳＶ−１、又は、ＨＳＶ−２及びＨＳＶ−１感染を治療する、請求項１〜３６のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
【請求項３９】
対象におけるＨＳＶ−２、ＨＳＶ−１、又は、ＨＳＶ−２及びＨＳＶ−１の症状の発症を阻害し、又はその重症度を低減する、請求項１〜３６のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
【請求項４０】
ヘルペス性病変の数を低減する、請求項３９に記載のワクチン製剤。
【請求項４１】
対象がヘルペス性病変を罹患する日数を低減する、請求項３９に記載のワクチン製剤。
【請求項４２】
１つ以上のＨＳＶ−２抗原に対するＩｇＧ力価を増加させる、請求項３９に記載のワクチン製剤。
【請求項４３】
１つ以上のＨＳＶ−２抗原に対するＴ細胞応答を増加させる、請求項３９に記載のワクチン製剤。
【請求項４４】
ＨＳＶ−２、ＨＳＶ−１、又は、ＨＳＶ−２及びＨＳＶ−１感染の発症時のヘルペス性病変の数を低減する、請求項３７に記載のワクチン製剤。
【請求項４５】
対象における３回以下の用量においてＨＳＶ−２、ＨＳＶ−１、又は、ＨＳＶ−２及びＨＳＶ−１の症状の発症を阻害し、又はＨＳＶ−２、ＨＳＶ−１、又は、ＨＳＶ−２及びＨＳＶ−１による感染を阻害する、請求項１〜３６のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
【請求項４６】
対象におけるＨＳＶ−２、ＨＳＶ−１、又は、ＨＳＶ−２及びＨＳＶ−１感染を阻害するための組成物であって、有効量の請求項１〜３６のいずれか一項に記載のワクチン製剤を含む、組成物。
【請求項４７】
３回用量レジメン後に対象におけるＨＳＶ−２、ＨＳＶ−１、又は、ＨＳＶ−２及びＨＳＶ−１感染を阻害する、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
前記対象が、ヒトである、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４９】
前記対象が、事前にＨＳＶ−２、ＨＳＶ−１、又は、ＨＳＶ−２及びＨＳＶ−１により感染していない、請求項４６に記載の組成物。
【請求項５０】
対象におけるＨＳＶ−２、ＨＳＶ−１、又は、ＨＳＶ−２及びＨＳＶ−１感染を治療するための組成物であって、有効量の請求項１〜２３のいずれか一項に記載のワクチン製剤を含む、組成物。
【請求項５１】
ＨＳＶ−２、ＨＳＶ−１、又は、ＨＳＶ−２及びＨＳＶ−１症状の発症を阻害し、又はその重症度を低減する、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
ヘルペス性病変の数を低減する、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
対象がヘルペス性病変を罹患する日数を低減する、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５４】
１つ以上のＨＳＶ−２抗原に対するＩｇＧ力価を増加させる、請求項５０又は５１に記載の組成物。
【請求項５５】
１つ以上のＨＳＶ−２抗原に対するＴ細胞応答を増加させる、請求項５０又は５１に記載の組成物。
【請求項５６】
ＨＳＶ−２、ＨＳＶ−１、又は、ＨＳＶ−２及びＨＳＶ−１感染の発症時のヘルペス性病変の数を低減する、請求項５０又は５１に記載の組成物。
【請求項５７】
３回用量レジメン後に対象におけるＨＳＶ−２、ＨＳＶ−１、又は、ＨＳＶ−２及びＨＳＶ−１症状の発症を阻害し、又はその重症度を低減する、請求項５０又は５１に記載の組成物。
【請求項５８】
前記対象が、ヒトである、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５９】
前記対象が、事前にＨＳＶ−２、ＨＳＶ−１、又は、ＨＳＶ−２及びＨＳＶ−１により感染していない、請求項５０に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１０年１１月２４日に出願された米国仮特許出願第６１／４１７，０８９号明細書に対する優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）は、性器ヘルペスの主な原因である。ＨＳＶ−２は、性的接触により伝染される場合が最も多く、ウイルスによる感染は、典型的には、生殖器及び肛門周辺部における病変の再発性発症をもたらすと同時に、ウイルスを生殖管中に排出する。ウイルス排出は、病変又は他の症状の不存在下でも起こり得る。ＨＳＶ−２はまた、知覚神経節中で潜伏を確立する。ＨＳＶ−２感染は、感染患者に身体的不快感および精神性的不健全を引き起こし、さらなる健康上のリスクをもたらす。特に、ＨＳＶ−２に感染した患者は、ＨＩＶに感染するリスクが増加し、ＨＳＶ−２に感染した妊婦は、ＨＳＶ−２を胎児に垂直伝染させ得る。免疫不全個体又は新生児において、ＨＳＶ−２感染は致命的であり得る。現在、ＨＳＶ−２感染の治癒法は存在しない。
【０００３】
ＨＳＶ−２感染は蔓延しており、ある研究によると、世界人口のほぼ２０％が感染していると推定される（非特許文献１）。男性よりも女性の方が多く感染し、年齢とともに罹患率が増加する。ＨＳＶ−２と診断された若者の数が多いことは、ＨＳＶ−２感染が生涯にわたるため、人口に対する罹患率が上昇し続けることを示している。
【０００４】
ＨＳＶ−２の症状についての治療の任意選択は限られている。化合物、例えばファムシクロビル、バラシクロビル、又はアシクロビルを使用する抗ウイルス治療は、症状の期間を限定し、一部の場合において、病変の治癒を速め、ウイルス排出の発生を低減する。しかしながら、抗ウイルス薬は、治癒法ではなく、発症の再発を防止するのものでも、ウイルスを完全に除去するものでもない。加えて、抗ウイルス薬の使用では、患者がＨＳＶ−２感染の症状を認識し、次いで確実な診断を受け、最終的に抗ウイルスレジメンに従う必要がある。これらの要件は、抗ウイルス薬が容易に入手可能でない世界の地域では支持され得ない。加えて、患者は、症状が出ないため、又は初期感染の症状が鎮静し、疾患からの回復を示唆するため、感染に気付かない場合が多い。
【０００５】
ＨＳＶ−２に関連した医療問題及び社会問題に対処するため、ＨＳＶ−２による感染を阻害又は妨げるための医薬組成物を開発することが強く望まれている。有効な組成物を使用して、ＨＳＶ−２に対する免疫応答の向上を誘発して、それにより初期感染を防止し、ウイルスが視覚神経節中で潜伏を確立する能力を遮断し、発症の再発を排除し、及び／又はウイルス排出を防止することができる。免疫系は、症状が少なくて弱く、経時的な頻度の減少とともに顕在化する再発性感染により証明されるとおり、ＨＳＶ−２に対する防御を開始することが公知である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｌｏｏｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００８，Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００８，８６（１０）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ＨＳＶワクチンの最終目標は、ウイルス感染から長期間保護することであるが、疾患の症状の抑制も、健康に顕著な恩恵を提供する。予防又は治療ワクチンのいずれかの現在の目標の１つは、一次感染及び潜伏感染からの臨床エピソード及びウイルス排出を低減することである。予防ワクチンの３つのカテゴリー、ｉ）全ウイルス、ｉｉ）タンパク質サブユニット、及びｉｉｉ）遺伝子をベースとしたサブユニットワクチン（Ｓｔａｎｂｅｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．，３０（３）：５４９−５６６，２０００）が臨床試験において試験されたが、不本意な結果となった。１９７０年代に、多数の死滅ウイルスワクチンが開発されたが、いずれも有効ではなかった。近年、弱毒化ＨＳＶが免疫原性の低いことが見出された。２つの組換え糖タンパク質に基づいたサブユニットワクチンが、様々なアジュバント製剤との組み合わせにおいて臨床評価された。Ｃｈｉｒｏｎにより開発されたあるワクチンは、トランスフェクトされたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞から精製されてアジュバントのミョウバン及びＭＦ５９を用いて製剤された、ＨＳＶ−２の糖タンパク質Ｄ（ｇＤ２）及び糖タンパク質Ｂ（ｇＢ２）の両方の切断形態を含有する。Ｇｌａｘｏ−Ｓｍｉｔｈｋｌｉｎｅ（ＧＳＫ）により開発された別のワクチンは、アジュバントのミョウバン及び３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）を用いて製剤された切断ｇＤ２を含有する。両方のワクチンは、第１相／第２相試験において免疫原性であり、耐容性が良好であった。しかしながら、第３相分析において、Ｃｈｉｒｏｎワクチンは、ＨＳＶ−２セロコンバージョンに対して全体的効力を示さなかったため、研究が中止された。ＧＳＫワクチンは、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２血清反応陰性女性ボランティアではかなりの効力（７３〜７４％）を示したが、男性では効力を示さなかった。
【０００８】
たとえ限定されたワクチン効力が、ＨＳＶ患者には有用な影響を与えようが、これらの試験は、少数のワクチンの実現性のみを試験している。これは、ワクチンの発見が系統的ではなかったためである。全ウイルスワクチンの追求は、免疫系への病原体自体の提示が最適な免疫を生成することを想定する。実際、全病原体ワクチンに対する免疫応答の広さおよび期間は、歴史的に見てサブユニットワクチンよりも良好であった。しかしながら、ワクチン株の病原性を考慮しなければならない。サブユニットワクチンは、これまで、疾患の発病機序及び感染中の免疫原性における想定される重要性に基づいてワクチン試験用に選択されてきた。これらのアプローチは、一部の製剤で限られた効力を有する、ＨＳＶに対する１つの候補を同定したが、他の製剤においては効力を有さなかった。したがって、ヘルペスウイルスワクチン発見の新たな改善された方法論がヘルペス疾患から保護するために必要である。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
ＨＳＶ−２の感染及び伝染は、大きな健康上の懸案事項である。本開示は、とりわけ、ＨＳＶ−２に対してある高度に有効なワクチンを提供する。このようなワクチンは、治療的又は予防的に使用することができる。本開示は、特定の抗原及びこれらの抗原を使用してＨＳＶ−２に対する免疫応答を誘発する方法も提供する。
【００１０】
一態様において、本開示は、薬学的に許容可能な担体並びに配列番号１３６又はその免疫原性断片からなる少なくとも１つのポリペプチドを含むワクチン製剤を記載する、ワクチン製剤は、上記の配列番号からなる第１のポリペプチド、配列番号１又は配列番号４からなる第２のポリペプチド並びに任意選択で配列番号１及び４の他方からなる第３のポリペプチドを含み得る。一部の実施形態において、第２又は第３のポリペプチドは、配列番号１のポリペプチド断片、例えば配列番号２、８〜１６、１３８及び１３９のポリペプチド、又はその免疫原性断片からなる。一部の実施形態において、ワクチン製剤は、配列番号１３６、又はその免疫原性断片からなる第１のポリペプチド、配列番号４若しくは５、又はその免疫原性断片からなる第２のポリペプチド、配列番号２、８〜１６、１３８及び１３９、又はその免疫原性断片からなる群から選択される第３のポリペプチド、並びに任意選択で配列番号２、８〜１６、１３８及び１３９、又はその免疫原性断片からなる群から選択される第４のポリペプチドを含み得る。
【００１１】
本発明の別の態様は、薬学的に許容可能な担体、並びにキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンの１つ以上の精製画分を含むアジュバント、並びに配列番号１、４、５、及び１３６又はその免疫原性断片のいずれかを含む少なくとも１つのポリペプチドを含むワクチン製剤を提供する。ある実施形態において、少なくとも１つのポリペプチドは、１つ以上の配列番号１のポリペプチド断片、例えば配列番号２、８〜１６、１３８及び１３９のポリペプチドを含む。
【００１２】
さらに別の態様において、本発明は、膜貫通ドメインの貫通残基３４０〜３６３のすべて又は少なくとも８つの連続したアミノ酸残基部分を欠く、配列番号５を含むポリペプチドが配列番号４の代わりに存在するワクチン製剤を提供する。このポリペプチドは、グリコシル化されてもよく、又はグリコシル化されていなくてもよい。
【００１３】
一部の実施形態において、ワクチン製剤中のポリペプチドは、免疫原性担体、例えば、キーホールリンペットヘモシアニンにコンジュゲートすることができる。他の実施形態において、ワクチン製剤は、アジュバントをさらに含む。アジュバントはキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンの１つ以上の精製画分であり得、又はアジュバントはサイトカインを含み得、又はアジュバントは、ＴＬＲアゴニストを有するカチオン性ペプチドを含み得る。
【００１４】
本発明は、本明細書に開示される有効量のワクチン製剤を投与することによりＨＳＶ−２感染に罹患している、又はＨＳＶ−２感染を受けやすい対象を治療する方法を提供する。一部の実施形態において、この方法は、例えば、ヘルペス性病変の数の低減、対象がヘルペス性病変を罹患する日数の低減、未感染対象におけるＨＳＶ−２による感染の低減、１つ以上のＨＳＶ−２抗原に対するＩｇＧ力価及び／若しくはＴ細胞応答の増加、並びに／又はＨＳＶ−２感染の発症時のヘルペス性病変の数の低減によりＨＳＶ−２の症状を阻害する。
【００１５】
本発明の一態様は、配列番号１〜３８、１３５、１３６、１３８及び１３９、又はその免疫原性断片の少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドから選択される２、３、４またはそれを超える単離されたポリペプチドを含む医薬組成物を提供する。
【００１６】
別の態様において、本発明は、薬学的に許容可能な担体並びに配列番号１〜３８、１３５、１３６、１３８及び１３９、又はその免疫原性断片の少なくとも１つを含むポリペプチドを含むワクチン製剤を提供する。ある実施形態において、ポリペプチドは、配列番号１〜３８、１３５、１３６、１３８及び１３９の少なくとも１つからなる。
【００１７】
本発明の別の態様は、配列番号１〜３８、１３５、１３６、１３８及び１３９、又はその免疫原性断片の少なくとも１つをコードするヌクレオチド配列を有する２、３、４またはそれを超える単離された核酸を含む医薬組成物を提供する。ある実施形態において、核酸は、配列番号１、３、５、３８又はその免疫原性断片の少なくとも１つをコードする。例えば、核酸は、配列番号３９〜４５、１１７〜１２９、１３７、１４０及び１４１、又は免疫原性ポリペプチドをコードするその断片の少なくとも１つを含み得る。
【００１８】
別の態様において、本発明は、薬学的に許容可能な担体及び配列番号１、３、５、３８、１３６若しくは１３８、又はその免疫原性断片の少なくとも１つをコードするヌクレオチド配列を有する核酸を含むワクチン製剤を提供する。例えば、核酸は、配列番号３９、４６、１１８、１３７若しくは１４０、又は免疫原性ポリペプチドをコードするその断片の少なくとも１つを含むヌクレオチド配列を有し得る。
【００１９】
本発明の別の態様は、対象における免疫応答を誘導する方法であって、有効量の本明細書に記載のワクチン製剤又は医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法を提供する。
【００２０】
本発明のさらに別の態様は、対象におけるＨＳＶ−２感染の１つ以上の症状を軽減する方法であって、有効量の本明細書に記載のワクチン製剤又は医薬組成物を前記対象に投与することを含む方法を提供する。一部の実施形態において、ＨＳＶ−２感染の症状は、病変形成、疼痛、刺激、掻痒、発熱、倦怠感、頭痛、ウイルス排出、及び前駆症状の１つ以上を含む。
【００２１】
本発明のさらなる態様は、ＨＳＶ−２感染の発症を阻害する方法であって、有効量の本明細書に記載のワクチン製剤又は組成物を投与することを含む方法を提供する。
【００２２】
本出願人らは、本発明の別の態様を開示し、この態様は、ＨＳＶ−２に曝露された対象における潜伏ＨＳＶ−２感染の発現を阻害する方法であって、有効量の本明細書に記載のワクチン製剤又は組成物を投与することを含む方法を提供する。
【００２３】
関連態様において、本発明は、ＨＳＶ−２に感染した対象におけるウイルス排出を低減する方法であって、有効量の本明細書に記載のワクチン製剤又は組成物を投与することを含む方法を提供する。
【００２４】
さらに、本発明の一態様は、ＨＳＶ−２に感染した対象における発症の再発を低減する方法であって、有効量の本明細書に記載のワクチン製剤又は組成物を投与することを含む方法を提供する。
【００２５】
本発明の追加の態様は、上記の医薬組成物のいずれかを生成する方法であって、前記２つ以上のポリペプチドを発現させること；及び前記２つ以上のポリペプチドを単離することを含む方法を提供する。
【００２６】
本出願人らは、本発明の一態様をさらに開示し、この態様は、ＨＳＶ−２に感染した対象における症状の重症度を診断する方法であって、（ｉ）本明細書に記載の１つ以上の単離されたＨＳＶ−２ポリペプチドによりパルスした自己抗原提示細胞（ＡＰＣ）に応答するＴ細胞の活性化を測定すること、及び（ｉｉ）前記レベルを、高頻度の発症を罹患する感染対象から得た基準レベルと比較することを含み；それにより、基準レベルに対する前記応答の有意な増加が、前記対象が、より重度でない症状（例えば、対象は無症状である）を有することを示す方法を提供する。応答の有意な増加が、例えば、１．５倍以上、２倍以上、３倍上、５倍以上、１０倍以上又はさらには２０倍以上の増加を含み得る。
【００２７】
本発明の別の態様は、ＨＳＶ−２に感染した対象における症状の重症度を診断する方法であって、（ｉ）本明細書に記載のポリペプチド、又はその免疫原性断片から選択される１つ以上の単離されたＨＳＶ−２ポリペプチドを提示するＡＰＣに応答した、自然感染した又はウイルスに曝露された対象からのＴ細胞の活性化を測定すること、及び（ｉｉ）前記レベルを、高頻度の発症を罹患する感染対象から得た基準レベルと比較することを含み；それにより、基準レベルに対する前記活性化の有意な減少が、前記対象が、より重度の症状（例えば、高頻度の発症）を有する方法を提供する。
【００２８】
本発明の別の態様は、本明細書に記載のリスト、又はその免疫原性断片から選択される１つ以上の単離されたＨＳＶポリペプチドに結合する抗体を含む医薬組成物を提供する。
【００２９】
さらに、本発明の異なる態様は、本明細書に記載のアミノ酸配列、又はその免疫原性断片を有するポリペプチドから選択される２、３、４またはそれを超える数のポリペプチドを、哺乳動物Ｔ細胞中でのサイトカイン産生を促進する能力について試験することにより、ＨＳＶ−２についての免疫原性組成物を同定する方法であって、免疫原性組成物が、サイトカインのレベルを、未感作哺乳動物Ｔ細胞により産生されるサイトカインのレベルよりも有意に高いレベルに上昇させる組成物である方法を提供する。サイトカインのレベルの有意な増加は、典型的には、未感作細胞により産生されるレベルの少なくとも１．５倍、２倍、３倍、５倍、１０倍、又はさらには２０倍の増加である。
【００３０】
本発明のなお別の態様は、対象からの試料においてＨＳＶ−２を検出する方法であって、（ｉ）本明細書に記載のアミノ酸配列を有する１つ以上のポリペプチド又はその免疫原性断片に対して産生される１つ以上の抗体に前記試料を接触させること、及び（ｉｉ）試料からの前記１つ以上のＨＳＶ−２ポリペプチドに結合した前記１つ以上の抗体を検出することを含む方法を提供する。
【００３１】
最後に、本発明の一態様は、本明細書に記載のポリペプチドをコードする２つ以上の単離されたポリヌクレオチド又はその免疫原性ペプチドをコードする断片を含む医薬組成物を提供する。
【００３２】
共に図面を構成する以下に記載される図は、例示を目的としているに過ぎず、限定を目的とするものではない。
例えば、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
薬学的に許容可能な担体、配列番号１３６又はその免疫原性断片からなる第１のポリペプチド、並びに配列番号１、２、４、５、１３、１３８及び１３９、又はその免疫原性断片の１つからなる第２のポリペプチドを含むワクチン製剤。
（項目２）
上記第２のポリペプチドが、配列番号４及び５、又はその免疫原性断片の１つからなる、項目１に記載のワクチン製剤。
（項目３）
配列番号２又はその免疫原性断片からなる第３のポリペプチドをさらに含む、項目２に記載のワクチン製剤。
（項目４）
配列番号１３又はその免疫原性断片からなる第３のポリペプチドをさらに含む、項目２に記載のワクチン製剤。
（項目５）
配列番号１３８又はその免疫原性断片からなる第３のポリペプチドをさらに含む、項目２に記載のワクチン製剤。
（項目６）
配列番号１３９又はその免疫原性断片からなる第３のポリペプチドをさらに含む、項目２に記載のワクチン製剤。
（項目７）
配列番号２、１３、１３８及び１３９、又はその免疫原性断片から選択される少なくとも２つのポリペプチドをさらに含む、項目２に記載のワクチン製剤。
（項目８）
配列番号２及び配列番号１３、又はその免疫原性断片をさらに含む、項目７に記載のワクチン製剤。
（項目９）
上記第２のポリペプチドが、配列番号１、２、１３、１３８及び１３９、又はその免疫原性断片の１つからなる項目１に記載のワクチン製剤。
（項目１０）
配列番号４及び５、又はその免疫原性断片の１つからなる第３のポリペプチドをさらに含む、項目９に記載のワクチン製剤。
（項目１１）
上記第２のポリペプチドが、配列番号１若しくは４、又はその免疫原性断片の１つからなる項目１に記載のワクチン製剤。
（項目１２）
上記第２のポリペプチドが、配列番号４又はその免疫原性断片からなる、項目１に記載のワクチン製剤。
（項目１３）
薬学的に許容可能な担体、配列番号１３８及び１３９、又はその免疫原性断片の１つからなる第１のポリペプチド、並びに配列番号３、４、５及び１３６、又はその免疫原性断片の１つからなる第２のポリペプチドを含むワクチン製剤。
（項目１４）
上記第２のポリペプチドが、配列番号３及び１３６、又はその免疫原性断片の１つからなる、項目１３に記載のワクチン製剤。
（項目１５）
配列番号４及び５、又はその免疫原性断片の１つからなる第３のポリペプチドをさらに含む、項目１３又は１４に記載のワクチン製剤。
（項目１６）
上記第２のポリペプチドが、配列番号４及び５、又はその免疫原性断片の１つからなる、項目１３に記載のワクチン製剤。
（項目１７）
配列番号３及び１３６、又はその免疫原性断片の１つからなる第３のポリペプチドをさらに含む、項目１３又は１６に記載のワクチン製剤。
（項目１８）
キラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンの１つ以上の精製画分を含むアジュバントをさらに含む、項目１〜１７のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
（項目１９）
薬学的に許容可能な担体及び配列番号１３６又はその免疫原性断片からなるポリペプチドを含むワクチン製剤。
（項目２０）
上記断片が、少なくとも１８アミノ酸残基がＮ末端から除去された配列番号１９の切断された断片である、項目１９に記載のワクチン製剤。
（項目２１）
上記アミノ酸残基が、シグナル配列に対応する、項目２０に記載のワクチン製剤。
（項目２２）
薬学的に許容可能な担体及び配列番号１３８又はその免疫原性断片からなるポリペプチドを含むワクチン製剤。
（項目２３）
上記断片が、残基３９１〜５４４からの少なくとも５０残基が欠失しており、残基７８６〜８２１からの少なくとも２５残基が欠失している配列番号１の切断された断片である、項目１３に記載のワクチン製剤。
（項目２４）
薬学的に許容可能な担体及び配列番号１３９又はその免疫原性断片からなるポリペプチドを含むワクチン製剤。
（項目２５）
上記断片が、残基３９１〜５０８からの少なくとも２５残基が欠失しており、残基７８６〜８６４からの少なくとも２５残基が欠失している配列番号１の切断された断片である、項目１５に記載のワクチン製剤。
（項目２６）
少なくとも１つのポリペプチドが、免疫原性担体にコンジュゲートしている、項目１〜２５のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
（項目２７）
薬学的に許容可能な担体及び配列番号１、３、５、３８、若しくは１３８、又はその免疫原性断片を有するポリペプチドの少なくとも１つをコードするヌクレオチド配列を有する核酸を含むワクチン製剤。
（項目２８）
上記ヌクレオチド配列が、配列番号３９、４６、１１８、若しくは１４０、又は免疫原性ポリペプチドをコードするその断片の少なくとも１つを含む、項目２７に記載のワクチン製剤。
（項目２９）
上記ヌクレオチド配列が、完全長ポリペプチドをコードする、項目２７に記載のワクチン製剤。
（項目３０）
上記核酸が、ＤＮＡである、項目２７又は２９に記載のワクチン製剤。
（項目３１）
上記核酸が、プラスミドの一部である、項目２７〜３０のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
（項目３２）
アジュバントをさらに含む、項目１〜１７及び１９〜３１のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
（項目３３）
上記アジュバントが、キラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンの１つ以上の精製画分である、項目３２に記載のワクチン製剤。
（項目３４）
上記アジュバントが、サポニン画分Ａ及びサポニン画分Ｃを含む、項目１８又は３３に記載のワクチン製剤。
（項目３５）
上記アジュバントが、コレステロール、ホスファチジルコリン、サポニン画分Ａ及びサポニン画分Ｃを含む、項目３４に記載のワクチン製剤。
（項目３６）
上記アジュバントが、粒子の形態である、項目３５に記載のワクチン製剤。
（項目３７）
サポニン画分Ａを含む粒子が、サポニン画分Ｃを実質的に含まず、サポニン画分Ｃを含む粒子が、サポニン画分Ａを実質的に含まない、項目３６に記載のワクチン製剤。
（項目３８）
５〜２００μｇの各ポリペプチド及び５〜２００μｇの上記アジュバントを含む、項目１８及び３２〜３７のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
（項目３９）
上記ポリペプチドが、タグをさらに含む融合タンパク質である、項目１〜２６のいずれか一項に記載の製剤のワクチン。
（項目４０）
対象におけるＨＳＶ−２による感染を阻害する、項目１〜３９のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
（項目４１）
対象におけるＨＳＶ−２感染を治療する、項目１〜３９のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
（項目４２）
対象におけるＨＳＶ−２の症状の発症を阻害し、又はその重症度を低減する、項目１〜３９のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
（項目４３）
ヘルペス性病変の数を低減する、項目４２に記載のワクチン製剤。
（項目４４）
対象がヘルペス性病変を罹患する日数を低減する、項目４２に記載のワクチン製剤。
（項目４５）
１つ以上のＨＳＶ−２抗原に対するＩｇＧ力価を増加させる、項目４２に記載のワクチン製剤。
（項目４６）
１つ以上のＨＳＶ−２抗原に対するＴ細胞応答を増加させる、項目４２に記載のワクチン製剤。
（項目４７）
ＨＳＶ−２感染の発症時のヘルペス性病変の数を低減する、項目４０に記載のワクチン製剤。
（項目４８）
対象における３回以下の用量においてＨＳＶ−２の症状の発症を阻害し、又はＨＳＶ−２による感染を阻害する、項目１〜３９のいずれか一項に記載のワクチン製剤。
（項目４９）
対象におけるＨＳＶ−２感染を阻害する方法であって、有効量の項目１〜３９のいずれか一項に記載のワクチン製剤を投与することを含む方法。
（項目５０）
３回用量レジメン後に対象におけるＨＳＶ−２感染を阻害する、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
上記対象が、ヒトである、項目４９に記載の方法。
（項目５２）
上記対象が、事前にＨＳＶ−２により感染していない、項目４９に記載の方法。
（項目５３）
対象におけるＨＳＶ−２感染を治療する方法であって、有効量の項目１〜２５のいずれか一項に記載のワクチン製剤を投与することを含む方法。
（項目５４）
ＨＳＶ−２症状の発症を阻害し、又はその重症度を低減する、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
ヘルペス性病変の数を低減する、項目５４に記載の方法。
（項目５６）
対象がヘルペス性病変を罹患する日数を低減する、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
１つ以上のＨＳＶ−２抗原に対するＩｇＧ力価を増加させる、項目５３又は５４に記載の方法。
（項目５８）
１つ以上のＨＳＶ−２抗原に対するＴ細胞応答を増加させる、項目５３又は５４に記載の方法。
（項目５９）
ＨＳＶ−２感染の発症時のヘルペス性病変の数を低減する、項目５３又は５４に記載の方法。
（項目６０）
３回用量レジメン後に対象におけるＨＳＶ−２症状の発症を阻害し、又はその重症度を低減する、項目５３又は５４に記載の方法。
（項目６１）
上記対象が、ヒトである、項目５３に記載の方法。
（項目６２）
上記対象が、事前にＨＳＶ−２により感染していない、項目５３に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１Ａ】図１Ａ及び図１Ｂはそれぞれ、ｇＤ２完全長タンパク質、ｇＤ２ΔＴＭＲ、又は膜貫通ドメインのすぐ上流で切断されたｇＤ２（３０６ｔとして示されている）による免疫化後のＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答を説明する例示的グラフを示す。
【図１Ｂ】図１Ａ及び図１Ｂはそれぞれ、ｇＤ２完全長タンパク質、ｇＤ２ΔＴＭＲ、又は膜貫通ドメインのすぐ上流で切断されたｇＤ２（３０６ｔとして示されている）による免疫化後のＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答を説明する例示的グラフを示す。
【図２Ａ】図２Ａ及び図２Ｂはそれぞれ、ｇＬ２又はＲＳ１．１、ＲＳ１．３．１、及びＲＳ１．３．２によりコードされるＩＣＰ４断片に及ぶ重複ペプチドのプールによる免疫化後のＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答を説明する例示的グラフを示す。
【図２Ｂ】図２Ａ及び図２Ｂはそれぞれ、ｇＬ２又はＲＳ１．１、ＲＳ１．３．１、及びＲＳ１．３．２によりコードされるＩＣＰ４断片に及ぶ重複ペプチドのプールによる免疫化後のＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答を説明する例示的グラフを示す。
【図３Ａ】図３Ａ及び図３Ｂはそれぞれ、ｇＤ２ΔＴＭＲ、又はｇＤ２ΔＴＭＲ及びＩＣＰ４．２による免疫化後のＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答を説明する例示的グラフを示す。
【図３Ｂ】図３Ａ及び図３Ｂはそれぞれ、ｇＤ２ΔＴＭＲ、又はｇＤ２ΔＴＭＲ及びＩＣＰ４．２による免疫化後のＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答を説明する例示的グラフを示す。
【図４Ａ】図４Ａ及び図４Ｂは、ｇＤ２ΔＴＭＲ、ＩＣＰ４．２、ｇＤ２ΔＴＭＲとＩＣＰ４、ｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＵＬ４０タンパク質、及びｇＬ２ｓ  ｖ．２とＵＬ４０タンパク質による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（パネルＡ）又はＣＤ８＋（パネルＢ）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の数を説明する例示的グラフを示す。
【図４Ｂ】図４Ａ及び図４Ｂは、ｇＤ２ΔＴＭＲ、ＩＣＰ４．２、ｇＤ２ΔＴＭＲとＩＣＰ４、ｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＵＬ４０タンパク質、及びｇＬ２ｓ  ｖ．２とＵＬ４０タンパク質による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（パネルＡ）又はＣＤ８＋（パネルＢ）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の数を説明する例示的グラフを示す。
【図５】ｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＵＬ４０タンパク質、及びｇＬ２ｓ  ｖ．２とＵＬ４０タンパク質に対するＩｇＧ１及びＩｇＧ２ｃ抗体力価を説明する。
【図６Ａ】図６Ａ及び図６Ｂは、ｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．２、ＩＣＰ４．２とｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．９、ＩＣＰ４．９とｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．５、及びＩＣＰ４．５とｇＬ２ｓ  ｖ．２による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（パネルＡ）又はＣＤ８＋（パネルＢ）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の平均数を説明する例示的グラフを示す。
【図６Ｂ】図６Ａ及び図６Ｂは、ｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．２、ＩＣＰ４．２とｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．９、ＩＣＰ４．９とｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．５、及びＩＣＰ４．５とｇＬ２ｓ  ｖ．２による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（パネルＡ）又はＣＤ８＋（パネルＢ）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の平均数を説明する例示的グラフを示す。
【図６Ｃ】図６Ｃ及び図６Ｄは、精製タンパク質によってではなく、示されたタンパク質に及ぶ重複ペプチドのプールによりＡＰＣをパルスしたことを除き図６Ａ及び図６Ｂと同様にｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．２、ＩＣＰ４．２とｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．９、ＩＣＰ４．９とｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．５、及びＩＣＰ４．５とｇＬ２ｓ  ｖ．２による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（パネルＣ）又はＣＤ８＋（パネルＤ）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の平均数を説明する例示的グラフを示す。
【図６Ｄ】図６Ｃ及び図６Ｄは、精製タンパク質によってではなく、示されたタンパク質に及ぶ重複ペプチドのプールによりＡＰＣをパルスしたことを除き図６Ａ及び図６Ｂと同様にｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．２、ＩＣＰ４．２とｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．９、ＩＣＰ４．９とｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．５、及びＩＣＰ４．５とｇＬ２ｓ  ｖ．２による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（パネルＣ）又はＣＤ８＋（パネルＤ）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の平均数を説明する例示的グラフを示す。
【図７】ｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．５、ｇＬ２ｓ  ｖ．２とＩＣＰ４．５、ＩＣＰ４．９、ｇＬ２ｓ  ｖ．２とＩＣＰ４．９、ＩＣＰ４．２、及びｇＬ２ｓ  ｖ２とＩＣＰ４．２に対する抗体力価を説明する例示的グラフを示す。
【図８Ａ】図８Ａ及び図８Ｂは、ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）とｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）、ｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質ブースト；及びｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（パネルＡ）又はＣＤ８＋（パネルＢ）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の平均数を説明する例示的グラフを示す。
【図８Ｂ】図８Ａ及び図８Ｂは、ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）とｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）、ｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質ブースト；及びｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（パネルＡ）又はＣＤ８＋（パネルＢ）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の平均数を説明する例示的グラフを示す。
【図９】ＩＣＰ４．２及びｇＬ２ｓ  ｖ．２（さらにｇＤ２ΔＴＭＲ）に対する全ＩｇＧ抗体力価を説明する例示的グラフを示す。
【図１０Ａ】図１０Ａ及び図１０Ｂは、ｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）、ｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質ブースト；ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）；ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）とｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；及びｐＵｓ６  ＤＮＡ（ｇＤ２をコード）による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（パネルＡ）又はＣＤ８＋（パネルＢ）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の数を説明する例示的グラフを示す。
【図１０Ｂ】図１０Ａ及び図１０Ｂは、ｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）、ｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質ブースト；ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）；ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）とｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；及びｐＵｓ６  ＤＮＡ（ｇＤ２をコード）による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（パネルＡ）又はＣＤ８＋（パネルＢ）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の数を説明する例示的グラフを示す。
【図１１】ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）、ｐＲＳ１．９  ＤＮＡ（ＩＣＰ４．９をコード）、及びｐＵｓ４  ＤＮＡ（ｇＧ２をコード）、２１日目の対応するＤＮＡブースト（第１のマウスの群）又はＩＣＰ４．２タンパク質ブースト（第２のマウスの群）による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（左パネル）又はＣＤ８＋（右パネル）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の数を説明する例示的グラフを示す。
【図１２】ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）及びｐＵｓ４  ＤＮＡ（ｇＧ２をコード）、２１及び３５日目の対応するＤＮＡブースト（第３のマウスの群）による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（左パネル）又はＣＤ８＋（右パネル）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の数を説明する例示的グラフを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本願は、ＨＳＶ−２に対するワクチン及び免疫原性組成物を記載する。ワクチン製剤は、表１からの配列若しくはその免疫原性断片を含むポリペプチド、又は表１からの配列若しくはその免疫原性断片を含む少なくとも２つのポリペプチドの組み合わせを含み得る。ある実施形態において、ワクチンのポリペプチドは、配列番号１〜２６、１３５、１３６、１３８及び１３９の少なくとも１つの全配列を含む、又は配列番号１〜２６、１３５、１３６、１３８及び１３９のいずれか１つの全配列からなる。免疫原性組成物は、表１若しくは表２からの配列若しくはその免疫原性断片を含むポリペプチド、又は表１若しくは表２からの配列若しくはその免疫原性断片を含む少なくとも２つのポリペプチドの組み合わせを含み得る。ある実施形態において、免疫原性組成物のポリペプチドは、配列番号１〜３８、１３５、１３６、１３８及び１３９のいずれか１つの全配列を含む、又は配列番号１〜３８、１３５、１３６、１３８及び１３９のいずれか１つの全配列からなる。表１又は表２におけるポリペプチドは、示される配列番号３９〜４６及び１１７〜１３４、１３７、１４０及び１４１並びに／又はｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｓｉｔｅｓ／ｅｎｔｒｅｚ上で公的に入手可能なｃＤＮＡ配列によりコードされ得る。ｃＤＮＡ及びタンパク質配列は、ＨＧ５２、３３３、及びＧ株を含むＨＳＶ−２の任意の公知の株からも得ることができる。したがって、ｃＤＮＡ配列は、ＮＣ＿００１７９８．１のゲノム配列からの遺伝子名又はタンパク質名によりアクセスすることができ、ＮＣ＿００１７９８．１に開示されている配列に対して約９７％保存され得る。本明細書に記載のとおり、ポリペプチドは、タンパク質名、配列番号、及び／又はタンパク質をコードする遺伝子の名称で呼ぶことができる。
【００３５】
ポリペプチドは、様々な発現系中で調製することができる。好適な発現系には、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、及びバキュロウイルスベースの発現系（例えば、昆虫細胞における）が含まれる。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を使用して調製されたポリペプチドは、典型的には、完全長であり、グリコシル化されていないが、切断型変異体を調製することができる。ある実施形態において、これらの切断型変異体は、シグナルドメインのすべて又は一部を保持する。バキュロウイルス系を使用して調製されたポリペプチドは、典型的には、Ｎ末端シグナル配列を欠くが、完全又は部分的にグリコシル化されている。
【００３６】
一部の実施形態において、ポリペプチドは、非哺乳動物細胞系中で調製される。外因性シグナル配列が使用される場合、ポリペプチドは、外因性シグナル配列に対応するＮ末端における１つ以上のアミノ酸を含有し得る。昆虫発現系中で一般に使用される外因性シグナル配列は、ミツバチメリチンシグナル配列である。他の実施形態において、ポリペプチドは、開裂されたシグナル配列に対応する１つ以上のアミノ酸を含有し得る。例示的なポリペプチドは、ポリペプチドを調製するために使用される系に応じてインタクトのままの又は切断された哺乳動物シグナル配列からの１つ以上のアミノ酸を含有し得る。
【００３７】
【表１】
0006055776.tif 000002
【００３８】
【表２】
0006055776.tif 000003
【００３９】
【表３】
0006055776.tif 000004
【００４０】
【表４】
0006055776.tif 000005
【００４１】
免疫原性ＨＳＶ−２ポリペプチド
表１及び／又は表２に示される免疫原性ポリペプチド又はポリヌクレオチドは、医薬組成物において使用することができる。本発明は、免疫原性ポリペプチド又はこれらの免疫原性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを薬学的担体と一緒に含有する医薬組成物を提供する。ＨＳＶ−２からの抗原は、ＨＳＶ−２に曝露された又は感染した患者からの免疫細胞をスクリーニングすることにより同定することができる。簡単に述べると、ＨＳＶ−２抗原のライブラリーを細菌により発現させ、ＡＰＣと混合した。次いで、ＡＰＣが、ＨＳＶ−２由来ポリペプチドをプロセシングして、ＨＳＶ−２に曝露された又は感染したヒト患者から単離されたリンパ球に提示した。患者は、いくつかの集団：（１）ＨＳＶ−２に曝露されたが感染について血清反応陰性、（２）ＨＳＶ−２に感染したが無症状、（３）ＨＳＶ−２に感染し、低頻度の発症を罹患する、（４）ＨＳＶ−２に感染し、高頻度の発症を罹患する、（５）未感作及び（６）ＨＳＶ−２について血清反応陰性（ＨＳＶ−２−）であるが、ＨＳＶ−１について血清反応陽性（ＨＳＶ−１＋）、に属した。各集団からのリンパ球応答を、ＨＳＶ−２由来ポリペプチドに対する反応性について比較し、スクリーニングにより、ある患者集団において他の患者集団と比較して高頻度で反応性リンパ球を誘導する抗原を検出した。感染したが無症状である患者及び曝露されたが血清反応陰性である患者は、高頻度の発症を罹患する患者が活性化しない防御免疫応答を活性化することができ；特に、曝露されたが血清反応陰性である患者は、ＨＳＶ−２感染に対する殺菌免疫を開始したと推測される。ポリペプチドの固有の組が、これらの患者集団からのリンパ球を活性化すると考えられる。したがって、本発明は、感染したが無症状である患者又は曝露されたが血清反応陰性である患者のリンパ球を活性化する特定のＨＳＶ−２ポリペプチドの組成物、又はＨＳＶ−２による感染を阻害若しくは妨げるこれらのポリペプチドの組み合わせも企図する。
【００４２】
感染したが無症状である患者、又は曝露されたが血清反応陰性である患者における免疫原性に基づいて同定された抗原は、同様に、あらゆる対象において免疫原性であると予想される。
【００４３】
一部の実施形態において、ポリペプチドは、先天性免疫応答、体液性免疫応答、又は細胞性免疫応答を誘導し得る。細胞性免疫応答は、ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞が関与し得、ある実施形態において、ＣＤ４＋Ｔ細胞が関与する免疫応答は、ＴＨ１細胞が活性化される免疫応答である。一部の実施形態において、免疫原性ポリペプチドは、ＴＨ２サイトカインの誘導を回避する。一部の実施形態において、ＣＤ４＋Ｔ細胞が関与する免疫応答は、ＴＨ１７細胞が活性化される免疫応答である。
【００４４】
本発明の組成物中のポリペプチド（又はその免疫原性断片）は、個体のＨＬＡハプロタイプに関係なく、複数の個体においてＴ細胞応答を誘導し得る。具体的には、ポリペプチドにおけるエピトープは、以下のＨＬＡスーパータイプ：ＨＬＡ−Ａ２、−Ａ３、−Ａ２４、−Ａ１、−Ｂ７、−Ｂ８、−Ｂ２７、−Ｂ４４、−Ｂ５８、及びＢ６２、並びにＨＬＡ−ＤＱＢ０１、−ＤＱＢ０２、−ＤＱＢ０３、−ＤＱＢ−０４、及びＤＱＢ０５の１つ以上を有する個体においてＴ細胞応答を誘導し得る。
【００４５】
一部の実施形態において、表１及び／又は表２からの１つ以上、例えば、２、３、４つまたはそれを超える数のポリペプチド（又はその免疫原性断片）が、本発明の組成物において提供される。一部の実施形態において、表１及び／又は表２からの２つのポリペプチドが、本発明の組成物において提供される。他の実施形態において、表１及び／又は表２からの３つのポリペプチドが、本発明の組成物において提供される。他の実施形態において、表１及び／又は表２からの４つのポリペプチドが、本発明の組成物において提供される。
【００４６】
一部の実施形態において、表１及び／又は表２からの２、３、４つまたはそれを超える数のポリペプチド（又はその免疫原性断片）が、コンジュゲートとして一緒に提供される。一部の実施形態において、表１及び／若しくは表２からの２つのポリペプチド、又は表１及び／若しくは表２からの３つのポリペプチドが、又は表１及び／若しくは表２からの４つのポリペプチドがコンジュゲートとして提供される。一部の実施形態において、表１及び／又は表２からの２、３、４つまたはそれを超える数のポリペプチドが、例えば、融合タンパク質として、互いに共有結合している。一部の実施形態において、表１及び／若しくは表２からの２つのポリペプチド、又は表１及び／若しくは表２の３つのポリペプチド、又は表１及び／若しくは表２からの４つのポリペプチドが、例えば、融合タンパク質として、互いに共有結合している。
【００４７】
一部の実施形態において、組成物は、配列番号１〜３８、１３５、１３６、１３８及び１３９からなる群から選択される２、３、４つまたはそれを超える数のポリペプチドを含み、任意の他のＨＳＶ−２ポリペプチドを含有しても、含有しなくてもよい。
【００４８】
ある実施形態において、本出願人らは、表１及び／又は表２の遺伝子によりコードされるポリペプチドに対して少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％同一であるポリペプチド、又は前記ポリペプチドの一部を提供する。ある実施形態において、相同ポリペプチドは、少なくとも８、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００のアミノ酸長である。一部の実施形態において、例えば直前に記載されたポリペプチドにおいて、ポリペプチドは、３００、３５０、４００、４５０、又は５００以下のアミノ酸長である。
【００４９】
免疫原性組成物は、前記ポリペプチド及び遺伝子の一部、例えば、欠失突然変異体、切断突然変異体、オリゴヌクレオチド、及びペプチド断片も含み得る。一部の実施形態において、前記タンパク質の一部は、免疫原性である。
【００５０】
タンパク質の一部又はその相同体の免疫原性は、完全長タンパク質の免疫原性を決定するために使用されるアッセイと同一のアッセイを使用して容易に決定することができる。一部の実施形態において、タンパク質の一部は、完全長タンパク質と実質的に同一の免疫原性を有する。一部の実施形態において、免疫原性は、完全長タンパク質の免疫原性の１０％、２０％、３０％、４０％、又は５０％以下である。タンパク質断片は、例えば、直鎖、環状、又は分枝鎖であり得る。一部の実施形態において、タンパク質又はタンパク質断片は、１つ以上の非天然アミノ酸（例えば、天然のタンパク質に典型的に見出される２０種のアミノ酸以外のアミノ酸）を含む。非天然アミノ酸は、非定型側鎖を有し得る。加えて、ペプチド模倣物を使用することもでき：これらは、ペプチド主鎖の代替物を取り込み得る。
【００５１】
本明細書に記載のポリペプチド組成物の一部の実施形態は、免疫原性ポリペプチドの哺乳動物細胞への導入及び続く細胞性免疫応答の刺激を促進するために膜移行配列（ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｎｇ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）（ＭＴＳ）を含有する免疫原性ポリペプチドを含む。例示的な膜輸送配列には、カポジ線維芽細胞成長因子のシグナル配列における疎水性領域、α−シヌクレイン、β−シヌクレイン、又はγ−シヌクレインのＭＴＳ、アンテナペディアホメオドメインの第３のへリックス、ＳＮ５０、インテグリンβ３ｈ領域、ＨＩＶ  Ｔａｔ、ｐＡｎｔｐ、ＰＲ−３９、アバエシン、アピダエシン、Ｂａｃ５、Ｂａｃ７、ネズミマラリア原虫（Ｐ．ｂｅｒｇｈｅｉ）ＣＳタンパク質、並びに米国特許第６，２４８，５５８号明細書、同第６，４３２，６８０号明細書、及び同第６，２４８，５５８号明細書に記載のＭＴＳが含まれる。
【００５２】
ある実施形態において、免疫原性ポリペプチドは、別の分子にコンジュゲートしている（すなわち、共有結合している）。これは、例えば、抗原の半減期、溶解度、バイオアベイラビリティ、又は免疫原性を増加させ得る。免疫原性ポリペプチドにコンジュゲートさせることができる分子には、炭水化物、ビオチン、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリシアル酸、Ｎ−プロピオニル化ポリシアル酸、核酸、多糖、及びＰＬＧＡが含まれる。３００ｇ／モル未満から１０００００００ｇ／モルを超える分子量に及ぶ多くの異なるタイプのＰＥＧが存在する。ＰＥＧ鎖は、直鎖、分枝鎖、又は櫛型若しくは星型の形状であり得る。
【００５３】
ワクチンにおいて使用される免疫原性ＨＳＶ−２ポリペプチド及び核酸
ある実施形態において、１つ以上、例えば、２、３、４つまたはそれを超える数の免疫原性断片又はその変異体が、混合物において提供される。例えば、ワクチン製剤は、配列番号１〜２６、１３６、１３８又は１３９のいずれか１つ以上を含み得る。
【００５４】
ある実施形態において、ワクチン製剤は、ＩＣＰ４、ＩＣＰ４．２、ＩＣＰ４．５、ＩＣＰ４．９、ＩＣＰ４．１０、ｇＬ２、ｇＬ２ｓ  ｖ．２、ｇＤ２ΔＴＭＲ及びｇＤ２（配列番号１〜５、１３、１３６、１３８及び１３９）又はこれらの免疫原性断片のいずれか１、２、３、若しくは４つを含み得る。ある実施形態において、組み合わせは、ＩＣＰ４（配列番号１）、ＩＣＰ４．２（配列番号２）、ＩＣＰ４．５（配列番号１３）、ＩＣＰ４．９（配列番号１３８）及びＩＣＰ４．１０（配列番号１３９）の１つのみからのポリペプチド又は免疫原性断片を含有する。他の実施形態において、組み合わせは、ｇＤ２ΔＴＭＲ（配列番号４）及びｇＤ２（配列番号５）の１つのみからのポリペプチド又は免疫原性断片を含有する。さらに他の実施形態において、組み合わせは、ｇＬ２（配列番号３）及びｇＬ２ｓ  ｖ．２ｓ（配列番号１３６）の１つのみからのポリペプチド又は免疫原性断片を含有する。一部の実施形態において、組み合わせは、ＩＣＰ４．２（配列番号２）、ＩＣＰ４．５（配列番号１３）、ＩＣＰ４．９（配列番号１３８）及びＩＣＰ４．１０（配列番号１３９）の任意の２つからのポリペプチド又は免疫原性断片を含有する。
【００５５】
一部の実施形態において、ワクチン製剤は、少なくとも１つの配列番号１のポリペプチド断片、例えば配列番号２、８〜１６、１３８及び１３９のポリペプチドを含み得る。一部の実施形態において、ワクチン製剤は、少なくとも２つの配列番号１のポリペプチド断片、例えば配列番号２、８〜１６、１３８及び１３９のポリペプチドを含み得る。１つ以上の配列番号１のポリペプチド断片を、本明細書に記載のワクチン製剤又は免疫原性組成物のいずれかにおける配列番号１と置き換えることができる。
【００５６】
ＩＣＰ４、ＩＣＰ４．２、ＩＣＰ４．５、ＩＣＰ４．９、ＩＣＰ４．１０、ｇＬ２、ｇＬ２ｓ  ｖ．２、ｇＤ２ΔＴＭＲ及びｇＤ２の例示的組み合わせは、以下を含む：
【００５７】
【表５】
0006055776.tif 000006
【００５８】
【表６】
0006055776.tif 000007
【００５９】
【表７】
0006055776.tif 000008
【００６０】
上記の個々の抗原及び組み合わせは、ＨＳＶ−２からの又はそれ由来の追加のペプチド、例えば配列番号６〜１２、１４〜２６、及び配列番号１３５又はその免疫原性断片から選択される配列を含むポリペプチドも含み得る。
【００６１】
一部の実施形態において、上記の個々の抗原及び組み合わせは、単離された核酸として提供される。ある態様において、核酸は、配列番号３９〜４５、１１７〜１２９、１３７、１４０、１４１、又はその免疫原性断片の少なくとも１つのヌクレオチド配列を有する。核酸は、本発明の組成物において単独で又は組み合わせで存在し得る。例示的な組み合わせは、ＩＣＰ４（配列番号１）、ＩＣＰ４．９（配列番号１３８）、ｇＬ２（配列番号３）、ｇＧ２（配列番号３８）及びｇＤ２（配列番号５）の２つ以上をコードする核酸を含む。
【００６２】
ＲＳ１によりコードされるＩＣＰ４（配列番号１）
ＲＳ１は、基本転写機構の特定の成分と相互作用し、その成分をウイルスプロモーターに動員し、転写開始のために形成を安定させ得る転写トランス活性化因子であるＩＣＰ４をコードする。ＩＣＰ４は、トランス活性化／リン酸化（配列番号１のアミノ酸残基１５０〜２００にほぼ及ぶ）、ＤＮＡ結合（配列番号１の残基３８０〜５４０にほぼ及ぶ）、核局在（配列番号１の残基６３０〜７３０にほぼ及ぶ）、及び後期調節性トランス活性化（配列番号１の残基１２２０〜１３１９にほぼ及ぶ）の区別されるドメインを含有する。ＲＳ１のＤＮＡ及びタンパク質配列は、ヒトヘルペスウイルス２型完全ゲノムにおいて、公的に利用可能なデータベース、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｓｉｔｅｓ／ｅｎｔｒｅｚ？ｄｂ＝ｇｅｎｅにおけるワールド・ワイド・ウェブ上のＮＣＢＩ  ＮＩＨのウェブサイト上）でのＲＳ１の検索により見出すことができる。
【００６３】
一部の実施形態において、ＨＳＶ−２に対するワクチンは、ＩＣＰ４（配列番号１）の残基３８３〜７６６から選択される少なくとも２０の連続したアミノ酸残基を含有するが、ＩＣＰ４（配列番号１）の１０００個以下のアミノ酸を含有するポリペプチドを含む。このポリペプチドは、少なくとも２０個の残基の断片の変異体でもあり得る。
【００６４】
ある実施形態において、このポリペプチドは、ＩＣＰ４からの９５０、９００、８５０、８００、７５０、７００、６５０、６００、５５０、５００、４５０、又はさらには４００個以下の連続したアミノ酸を含む。例示的なポリペプチドは、以下の完全長ＩＣＰ４のアミノ酸残基にほぼ対応する：３８３〜７６６（ＲＳ１．２）；１〜４００（ＲＳ１．１）；７５０〜１０２４（ＲＳ１．３．１）；１００８〜１３１９（ＲＳ１．３．２）；７５０〜１３１９（ＲＳ１．３）；２８０〜７８５（全ＤＮＡ結合領域を含むＲＳ１．４）；６８０〜１３１９（グリコシラーゼ／Ｃ末端領域を含むＲＳ１．５）；２０８〜１３１９（Ｎ末端のＭｅｔ残基も含み得るＲＳ１．６）；１〜３８０と５４５〜１３１９（残基３８１〜５４４にほぼ及ぶ領域が欠失して、ＤＮＡ結合領域が除去されたＲＳ１．７）；１〜７８５と８７０〜１３１９（残基７８６〜８６９にほぼ及ぶ領域が欠失して、核局在ドメインが除去されたＲＳ１．８）、又はＩＣＰ４（配列番号１）の１〜７６６、３８３〜１３１８、１００〜７５０、４００〜１３００、２５０〜７６６、３８３〜９００など。
【００６５】
ＲＳ１．２によりコードされるＩＣＰ４内部断片ＩＣＰ４．２（配列番号２）
ＲＳ１．２は、ＩＣＰ４．２と示されるＩＣＰ４の３９１のアミノ酸断片をコードする。ＲＳ１．２のＤＮＡ及びタンパク質配列は、ヒトヘルペスウイルス２型完全ゲノムにおいて、公的に利用可能なデータベース、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｓｉｔｅｓ／ｅｎｔｒｅｚ？ｄｂ＝ｇｅｎｅにおけるワールド・ワイド・ウェブ上のＮＣＢＩ  ＮＩＨのウェブサイト上）でのＲＳ１の検索により見出すことができる。
【００６６】
特定の実施形態において、ＨＳＶ−２に対するワクチンは、残ＩＣＰ４．２（配列番号２）の５０から全３９１のアミノ酸残基、例えば１００から３９１、２００から３９１、又は２５０から３５０残基を含有するポリペプチドを含む。特定の実施形態において、このポリペプチドは、ＩＣＰ４．２（配列番号２）のすべてを含む、又はＩＣＰ４．２（配列番号２）自体である。これらのポリペプチドは、例えば、本明細書に記載のＩＣＰ４．２（配列番号２）の完全長又は断片を含み得、ＩＣＰ４（配列番号１）のアミノ酸残基１〜３８２若しくは７６７〜１３１８又はその断片が、ある実施形態において、使用されるＩＣＰ４．２のアミノ酸残基と連続している。配列番号２の残基を配列番号１の１〜３８２又は７６７〜１３１８の選択残基に組み合わせる例示的な断片を上記に記載する。
【００６７】
ＩＣＰ４．２の免疫原性断片は、実験的に測定された、又はアルゴリズムにより同定された少なくとも１つの免疫原性部分を含む。このような方法により同定されたペプチドは、以下を含む：
ＧＬＡＨＶＡＡＡＶ  （配列番号４７）
ＦＩＳＧＳＶＡＲＡ  （配列番号４８）
ＱＹＡＬＩＴＲＬＬ  （配列番号４９）
ＲＹＤＲＡＱＫＧＦ  （配列番号５０）
ＧＹＡＭＡＡＧＲＦ  （配列番号５１）
ＰＰＨＡＤＡＰＲＬ  （配列番号５２）
ＫＰＡＡＡＡＡＰＬ  （配列番号５３）
ＳＥＡＡＶＡＡＶ  （配列番号５４）
ＦＧＷＧＬＡＨＶ  （配列番号５５）
ＹＡＬＩＴＲＬＬＹ  （配列番号５６）
ＡＬＰＲＳＰＲＬＬ  （配列番号５７）
ＤＬＬＦＱＮＱＳＬ  （配列番号５８）
ＡＤＬＬＦＱＮＱＳ  （配列番号５９）
ＡＲＮＳＳＳＦＩＳ  （配列番号６０）
ＱＡＣＦＲＩＳＧＡ  （配列番号６１）
ＦＶＲＤＡＬＶＬＭ  （配列番号６２）
ＦＤＧＤＬＡＡＶＰ  （配列番号６３）
ＧＬＧＤＳＲＰＧＬ  （配列番号６４）
ＷＡＰＥＬＧＤＡＡ  （配列番号６５）
ＥＣＬＡＡＣＲＧＩ  （配列番号６６）
ＲＡＷＬＲＥＬＲＦ  （配列番号６７）
【００６８】
したがって、一部の態様において、本出願は、ＩＣＰ４．２の免疫原性断片を提供する。これらの断片は、一部の場合において、サイズが完全長ポリペプチドに近い。例えば、これらの断片は、一方又は両方の末端から多くても１、２、３、４、５、１０、又は２０個のアミノ酸を欠き得る。他の実施形態において、断片は、１００〜３９１のアミノ酸長、又は１５０〜３９１、又は２００〜３９１、又は２５０〜３９１のアミノ酸長である。他の例示的な断片は、アミノ酸残基１〜３５０、１〜３００、１〜２５０、１〜２００、１〜１５０、１〜１００、１〜５０、５０〜３９１、５０〜３５０、５０〜３００、５０〜２５０、５０〜２００、５０〜１５０、５０〜１００、１００〜３９１、１００〜３５０、１００〜３００、１００〜２５０、１００〜２００、１００〜１５０、１５０〜３９１、１５０〜３５０、１５０〜３００、１５０〜２５０、１５０〜２００、２００〜３９１、２００〜３５０、２００〜３００、２００〜２５０、２５０〜３９１、２５０〜３５０、２５０〜３００、３００〜３９１、及び３５０〜３９１である。上記の断片又はその小断片（例えば、８〜５０、８〜３０、又は８〜２０個のアミノ酸残基の断片）は、好ましくは、Ｔ細胞応答を少なくとも１．５倍又は２倍に増加させるなどの、後述する生物学的活性の１つを有する。断片は、本明細書に記載されるワクチン中のポリペプチドとして使用することができ、又は別のタンパク質、タンパク質断片若しくはポリペプチドに融合させることができる。
【００６９】
ある態様において、本出願は、ＩＣＰ４．２に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は９９．５％の同一性を有する免疫原性ポリペプチド又はその免疫原性断片を提供する。
【００７０】
ＵＬ１によりコードされる糖タンパク質Ｌ−２（配列番号３又は配列番号１３６）
ＵＬ１は、ウイルス及び細胞膜の融合に要求され、ウイルスの宿主細胞への侵入を可能にするヘテロ二量体糖タンパク質である糖タンパク質Ｌ−２（ｇＬ２）をコードする。ＵＬ１のＤＮＡ及びタンパク質配列は、ヒトヘルペスウイルス２型完全ゲノムにおいて、公的に利用可能なデータベース、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ（ｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｓｉｔｅｓ／ｅｎｔｒｅｚ？ｄｂ＝ｇｅｎｅにおけるワールド・ワイド・ウェブ上のＮＣＢＩ  ＮＩＨのウェブサイト上）での検索により見出すことができる。
【００７１】
一部の実施形態において、このポリペプチドは、ＵＬ１（配列番号３）の細胞質形態であり得る。他の実施形態において、このポリペプチドは、シグナル配列の１つ以上のアミノ酸を欠くＵＬ１の分泌形態であり得る。ＵＬ１の分泌形態の例示的ポリペプチドは、配列番号１３６のポリペプチドである。ある実施形態において、このポリペプチドは、それが実質的に精製された後に凝集体を形成しない。一部の実施形態において、このポリペプチドは、開裂されたシグナル配列に対応する１つ以上のアミノ酸を含有する。シグナル配列は、ポリペプチドが精製された系に応じて哺乳動物シグナル配列であり得、又は非哺乳動物シグナル配列であり得る。
【００７２】
一部の実施形態において、ＨＳＶ−２に対するワクチンは、ｇＬ２（配列番号３又は配列番号１３６）の残基１〜２２４又は１〜２００から選択される少なくとも２０の連続したアミノ酸残基を含有するが、ｇＬ２（配列番号３又は配列番号１３６）の２２４又は２００以下のアミノ酸を含有するポリペプチドを含む。このポリペプチドは、少なくとも２０の残基の断片の変異体でもあり得る。
【００７３】
一部の実施形態において、このポリペプチドは、配列番号３又は配列番号１３６の１５０〜２００又は２００〜２５０のアミノ酸の断片に対して少なくとも８５％同一である。
【００７４】
ある実施形態において、このポリペプチドは、ｇＬ２からの２００又は１００以下の連続したアミノ酸を含む。例示的なポリペプチドは、ｇＬ２（配列番号３又はアミノ酸残基１〜２０、２１〜４０、４１〜６０、６１〜８０の、８１〜１００、１０１〜１２０、１２１〜１４０、１４１〜１６０、１６１〜１８０、又は１８１〜２００の配列番号１３６）のアミノ酸残基１〜２０、２１〜４０、４１〜６０、６１〜８０の、８１〜１００、１０１〜１２０、１２１〜１４０、１４１〜１６０、１６１〜１８０、１８１〜２００、２０１〜２２１などである。
【００７５】
他の態様において、本出願は、ｇＬ２の免疫原性断片を提供する。ｇＬ２の免疫原性断片は、実験的に測定された、又はアルゴリズムにより同定された少なくとも１つの免疫原性部分を含む。このような方法により同定されたペプチドは、以下を含む：
ＡＹＬＶＮＰＦＬＦ  （配列番号１００）
ＰＦＬＦＡＡＧＦＬ  （配列番号１０１）
ＴＥＹＶＬＲＳＶＩ  （配列番号１０２）
ＧＳＱＡＴＥＹＶＬ  （配列番号１０３）
ＲＩＤＧＩＦＬＲＹ  （配列番号１０４）
ＦＬＥＤＬＳＨＳＶ  （配列番号１０５）
ＹＶＬＲＳＶＩＡＫ  （配列番号１０６）
ＹＶＬＲＳＶＩＡＫ  （配列番号１０７）
ＡＹＬＶＮＰＦＬＦ  （配列番号１０８）
ＥＴＴＴＲＲＡＬＹ  （配列番号１０９）
ＲＩＤＧＩＦＬＲＹ  （配列番号１１０）
ＹＬＶＮＰＦＬＦＡ  （配列番号１１１）
ＦＶＣＬＦＧＬＶＶ  （配列番号１１２）
ＬＹＫＥＩＲＤＡＬ  （配列番号１１３）
ＧＬＤＴＦＬＷＤＲ  （配列番号１１４）
ＲＶＳＰＴＲＧＲＲ  （配列番号１１５）
ＹＶＬＲＳＶＩＡＫ  （配列番号１１５）
ＧＬＤＴＦＬＷＤＲ  （配列番号１１６）
ＤＩＬＲＶＰＣＭＲ  （配列番号１１７）
ＤＲＨＡＱＲＡＹＬ  （配列番号１１８）
【００７６】
ＵＳ６によりコードされる糖タンパク質Ｄ−２（配列番号５）及びＵＳ６ΔＴＭＲによりコードされる内部欠失糖タンパク質Ｄ−２（配列番号４）
ＵＳ６は、宿主細胞侵入受容体に結合して、ウイルスと宿主膜との融合を引き起こし得るエンベロープ糖タンパク質であるエンベロープ糖タンパク質Ｄ−２（ｇＤ２）をコードする。ｇＤ２タンパク質は、成熟タンパク質から開裂されたシグナルドメイン（アミノ酸残基１〜２５）、及び膜貫通ドメイン（アミノ酸残基３４０〜３６３にほぼ及ぶ）を含む、いくつかの区別されるドメインを有する。ＵＳ６のＤＮＡ及びタンパク質配列は、ヒトヘルペスウイルス２型完全ゲノムにおいて、公的に利用可能なデータベース、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｓｉｔｅｓ／ｅｎｔｒｅｚ？ｄｂ＝ｇｅｎｅにおけるワールド・ワイド・ウェブ上のＮＣＢＩ  ＮＩＨのウェブサイト上）での検索により見出すことができる。
【００７７】
一部の実施形態において、ＨＳＶ−２に対するワクチンは、膜貫通ドメイン（アミノ酸残基３４０〜３６３にほぼ及び、これらの残基を含む）のすべて又は一部及びシグナル配列が欠損しているｇＤ２を含むポリペプチドを含む。他の実施形態において、欠失領域は、膜貫通ドメインをフランキングする配列の５〜１０個のアミノ酸をさらに含み得る。欠失領域は、膜貫通ドメインの一部、例えば、残基３４０〜３６３の間の少なくとも３つのアミノ酸も含み得る。一部の実施形態において、膜貫通ドメインがもはや機能的でないように、膜貫通ドメインの少なくとも１つの残基が修飾、欠失、又は置換されている。例えば、変異体は、アミノ酸残基３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４１、３４２、３４３、３４４、３４５、又は３４６で始まり、アミノ酸残基３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、３６５、３６６、３６７、又は３６８で終わるその内部欠失を有し得る。
【００７８】
アミノ酸残基３４０〜３６３（膜貫通ドメイン）が欠損しているｇＤ２をコードする構築物は、ＵＳ６ΔＴＭＲ（配列番号４０）と呼ばれる。対応するタンパク質は、ｇＤ２ΔＴＭＲ（配列番号４）と示される。他の実施形態において、ｇＤ２又はｇＤ２ΔＴＭＲの免疫原性断片は、膜貫通ドメインの一部における欠失を含み得、及び／又は膜貫通ドメインの外部のフランキング配列における欠失を含み得る。
【００７９】
他の態様において、本出願は、ｇＤ２又はｇＤ２ΔＴＭＲの免疫原性断片を提供する。ｇＤ２又はｇＤ２ΔＴＭＲの免疫原性断片は、実験的に測定された、又はアルゴリズムによって同定された少なくとも１つの免疫原性部分を含む。このような方法により同定されたペプチドは、以下を含む。
ＡＬＡＧＳＴＬＡＶ  （配列番号６８）
ＬＬＥＤＰＡＧＴＶ  （配列番号６９）
ＶＩＧＧＩＡＦＷＶ  （配列番号７０）
ＴＶＹＹＡＶＬＥＲ  （配列番号７１）
ＫＹＡＬＡＤＰＳＬ  （配列番号７２）
ＡＦＥＴＡＧＴＹＬ  （配列番号７３）
ＡＰＳＮＰＧＬＩＩ  （配列番号７４）
ＩＰＩＴＶＹＹＡＶ  （配列番号７５）
ＡＰＰＳＨＱＰＬＦ  （配列番号７６）
ＦＬＭＨＡＰＡＦＥ  （配列番号７７）
ＦＳＡＶＳＥＤＮＬ  （配列番号７８）
ＶＹＹＡＶＬＥＲ  （配列番号７９）
ＩＧＭＬＰＲＦＩ  （配列番号８０）
ＹＴＥＣＰＹＮＫＳ  （配列番号８１）
ＦＬＭＨＡＰＡＦＥ  （配列番号８２）
ＮＬＧＦＬＭＨＡＰ  （配列番号８３）
ＶＩＧＧＩＡＦＷＶ  （配列番号８４）
ＧＩＡＦＷＶＲＲＲ  （配列番号８５）
ＳＥＤＮＬＧＦＬＭ  （配列番号８６）
ＲＴＱＰＲＷＳＹＹ  （配列番号８７）
ＩＡＦＷＶＲＲＲＡ  （配列番号８８）
ＬＶＩＧＧＩＡＦＷ  （配列番号８９）
ＦＷＶＲＲＲＡＱＭ  （配列番号９０）
ＰＹＴＳＴＬＬＰＰ  （配列番号９１）
ＶＧＴＡＡＬＬＶＶ  （配列番号９２）
ＴＡＡＬＬＶＶＡＶ  （配列番号９３）
ＴＳＴＬＬＰＰＥＬ  （配列番号９４）
ＧＴＶＳＳＱＩＰＰ  （配列番号９５）
ＴＡＧＴＹＬＲＬＶ  （配列番号９６）
ＧＶＴＶＤＳＩＧＭ  （配列番号９７）
ＡＦＷＶＲＲＲＡＱ  （配列番号９８）
ＲＶＹＨＩＱＰＳＬ  （配列番号９９）
【００８０】
したがって、一部の態様において、本出願は、ｇＤ２（配列番号５）又はｇＤ２ΔＴＭＲ（配列番号４）の免疫原性断片を提供する。断片は、一部の場合において、サイズが完全長ポリペプチドに近い。例えば、これらの断片は、一方又は両方の末端から多くても１、２、３、４、５、１０、又は２０個のアミノ酸を欠き得る。他の実施形態において、断片は、１００〜３９３のアミノ酸長、又は１５０〜３９３、又は２００〜３９３、又は２５０〜３９３のアミノ酸長である。他の例示的な断片は、アミノ酸残基１〜３５０、１〜３００、１〜２５０、１〜２００、１〜１５０、１〜１００、１〜５０、５０〜３９３、５０〜３５０、５０〜３００、５０〜２５０、５０〜２００、５０〜１５０、５０〜１００、１００〜３９３、１００〜３５０、１００〜３００、１００〜２５０、１００〜２００、１００〜１５０、１５０〜３９３、１５０〜３５０、１５０〜３００、１５０〜２５０、１５０〜２００、２００〜３９３、２００〜３５０、２００〜３００、２００〜２５０、２５０〜３９３、２５０〜３５０、２５０〜３００、３００〜３９３、及び３５０〜３９３である。上記の断片又はその小断片（例えば、８〜５０、８〜３０、又は８〜２０個のアミノ酸残基の断片）は、好ましくは、Ｔ細胞応答を少なくとも１．５倍又は２倍に増加させるなどの、後述する生物学的活性の１つを有する。断片は、本明細書に記載のワクチン中のポリペプチドとして使用することができ、又は別のタンパク質、タンパク質断片、若しくはポリペプチドに融合させることができる。
【００８１】
他の実施形態において、ポリペプチドは、配列番号４若しくは配列番号５の全配列を含む、又は配列番号４若しくは配列番号５の全配列からなる。ある実施形態において、ｇＤ２の免疫原性断片は、シグナルドメイン（アミノ酸残基１〜２５）及び／又は膜貫通ドメイン（アミノ酸残基３４０〜３６３）のすべて又は一部を保持する。
【００８２】
ある実施形態において、ポリペプチドは、ヒト自己抗原に対して２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、又は７０％未満の相同性を有する。このような自己抗原の例には、ＨＳＶ−１からのＵＬ６又はＨＳＶ−２からのｇＫ若しくはＵＬ５３が含まれる。
【００８３】
ある態様において、本出願は、ｇＤ２ΔＴＭＲに対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は９９．５％の同一性を有する免疫原性ポリペプチド、又はその免疫原性断片を提供する。
【００８４】
ＲＳ１．５によりコードされるＩＣＰ４内部断片ＩＣＰ４．５（配列番号１３）
ＲＳ１．５は、ＩＣＰ４．５と示されるＩＣＰ４の残基７７５〜１３１８に対応する５４４のアミノ酸断片をコードする。ＲＳ１．５のＤＮＡ及びタンパク質配列は、ヒトヘルペスウイルス２型完全ゲノムにおいて、公的に利用可能なデータベース、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｓｉｔｅｓ／ｅｎｔｒｅｚ？ｄｂ＝ｇｅｎｅにおけるワールド・ワイド・ウェブ上のＮＣＢＩ  ＮＩＨのウェブサイト上）でのＲＳ１の検索により見出すことができる。
【００８５】
特定の実施形態において、ＨＳＶ−２に対するワクチンは、ＩＣＰ４．５（配列番号１３）の５０〜全５４４のアミノ酸残基、例えば５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、又は５４４残基を含有するポリペプチドを含む。特定の実施形態において、このポリペプチドは、ＩＣＰ４．５（配列番号１３）のすべてを含む、又はＩＣＰ４．５（配列番号１３）自体である。これらのポリペプチドは、例えば、本明細書に記載のＩＣＰ４．５（配列番号１３）の完全長又は断片を含み、ＩＣＰ４（配列番号１）のアミノ酸残基１〜７７４又はその断片が、ある実施形態において、使用されるＩＣＰ４．５のアミノ酸残基と連続している。配列番号１３の残基を配列番号１の１〜７７４の選択残基に組み合わせる例示的な断片を上記に記載する。
【００８６】
ＩＣＰ４．５の免疫原性断片は、実験的に測定された、又はアルゴリズムにより同定された少なくとも１つの免疫原性部分を含む。したがって、一部の態様において、本出願は、ＩＣＰ４．５の免疫原性断片を提供する。これらの断片は、一部の場合において、サイズが完全長ポリペプチドに近い。例えば、これらの断片は、一方又は両方の末端から多くても１、２、３、４、５、１０、又は２０のアミノ酸を欠き得る。他の実施形態において、断片は、５０〜５４４のアミノ酸長、又は１００〜５４４、又は１５０〜５４４、又は２００〜５４４、又は２５０〜５４４、又は３００〜５４４、又は３５０〜５４４、又は４００〜５４４、又は４５０〜５４４、又は５００〜５４４のアミノ酸長である。他の例示的断片は、アミノ酸残基１〜５００、１〜４５０、１〜４００、１〜３５０、１〜３００、１〜２５０、１〜２００、１〜１５０、１〜１００、１〜５０、５０〜５４４、５０〜５００、５０〜４５０、５０〜４００、５０〜３５０、５０〜３００、５０〜２５０、５０〜２００、５０〜１５０、５０〜１００、１００〜５４４、１００〜５００、１００〜４５０、１００〜４００、１００〜３５０、１００〜３００、１００〜２５０、１００〜２００、１００〜１５０、１５０〜５４４、１５０〜５００、１５０〜４５０、１５０〜４００、１５０〜３５０、１５０〜３００、１５０〜２５０、１５０〜２００、２００〜５４４、２００〜５００、２００〜４５０、２００〜４００、２００〜３５０、２００〜３００、２００〜２５０などである。上記の断片又はその小断片（例えば、８〜５０、８〜３０、又は８〜２０個のアミノ酸残基の断片）は、好ましくは、Ｔ細胞応答を少なくとも１．５倍又は２倍に増加させるなどの、後述する生物学的活性の１つを有する。断片は、本明細書に記載のワクチン中のポリペプチドとして使用することができ、又は別のタンパク質、タンパク質断片、若しくはポリペプチドに融合させることができる。
【００８７】
ある態様において、本出願は、ＩＣＰ４．５に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は９９．５％の同一性を有する免疫原性ポリペプチド又はその免疫原性断片を提供する。
【００８８】
ＲＳ１．９によりコードされるＩＣＰ４断片ＩＣＰ４．９（配列番号１３８）、及びＲＳ１．１０によりコードされるＩＣＰ４断片ＩＣＰ４．１０（配列番号１３９）
ＲＳ１．９は、ＩＣＰ４．９と示されるＩＣＰ４の残基３９１〜５４４及び残基７８６〜８２１の二重内部欠失を担持するＩＣＰ４の１１３０のアミノ酸断片をコードする。ＲＳ１．１０は、ＩＣＰ４．１０と示されるＩＣＰ４の残基３９１〜５０８及び残基７８６〜８２１の二重内部欠失を担持するＩＣＰ４の１１６６のアミノ酸断片をコードする。ＲＳ１．９及びＲＳ１．１０のＤＮＡ及びタンパク質配列は、ヒトヘルペスウイルス２型完全ゲノムにおいて、公的に利用可能なデータベース、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｓｉｔｅｓ／ｅｎｔｒｅｚ？ｄｂ＝ｇｅｎｅにおけるワールド・ワイド・ウェブ上のＮＣＢＩ  ＮＩＨのウェブサイト上）でのＲＳ１の検索により見出すことができる。
【００８９】
特定の実施形態において、ＨＳＶ−２に対するワクチンは、ＩＣＰ４．９（配列番号１３８）又はＩＣＰ４．１０（配列番号１３９）の５０〜全１１３０又は１１６６のアミノ酸残基、例えば５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１０５０、１１００、１１３０又は１１６６残基を含有するポリペプチドを含む。特定の実施形態において、このポリペプチドは、ＩＣＰ４．９（配列番号１３８）若しくはＩＣＰ４．１０（配列番号１３９）のすべてを含む、又はＩＣＰ４．９（配列番号１３８）若しくはＩＣＰ４．１０（配列番号１３９）自体である。これらのポリペプチドは、例えば、本明細書に記載のＩＣＰ４．９（配列番号１３８）又はＩＣＰ４．１０（配列番号１３９）の完全長又は断片を含み得る。
【００９０】
ＩＣＰ４．９又はＩＣＰ４．１０の免疫原性断片は、実験的に測定された、又はアルゴリズムにより同定された少なくとも１つの免疫原性部分を含む。したがって、一部の態様において、本出願は、ＩＣＰ４．９又はＩＣＰ４．１０の免疫原性断片を提供する。これらの断片は、一部の場合において、サイズが完全長ポリペプチドに近い。例えば、これらの断片は、一方又は両方の末端から多くても１、２、３、４、５、１０、又は２０のアミノ酸を欠き得る。他の実施形態において、断片は、５０〜１１３０のアミノ酸長、又は１００〜１１３０、又は１５０〜１１３０、又は２００〜１１３０、又は２５０〜１１３０、又は３００〜１１３０、又は４００〜１１３０、又は５００〜１１３０、又は６００〜１１３０、又は７００〜１１３０、又は８００〜１１３０、又は９００〜１１３０、又は１０００〜１１３０のアミノ酸長である。他の例示的断片は、アミノ酸残基１〜１１３０、１〜１０００、１〜９００、１〜８００、１〜７００、１〜６００、１〜５００、１〜４００、１〜３００、１〜２００、１〜１５０、１〜１００、１〜５０、５０〜１１３０、５０〜１０００、５０〜９００、５０〜８００、５０〜７００、５０〜６００、５０〜５００、５０〜４００、５０〜３００、５０〜２５０、５０〜２００、５０〜１５０、５０〜１００、１００〜１１３０、１００〜１０００、１００〜９００、１００〜８００、１００〜７００、１００〜６００、１００〜５００、１００〜４００、１００〜３００、１００〜２５０、１００〜２００、１００〜１５０などである。上記の断片又はその小断片（例えば、８〜５０、８〜３０、又は８〜２０個のアミノ酸残基の断片）は、好ましくは、Ｔ細胞応答を少なくとも１．５倍又は２倍に増加させるなどの、後述する生物学的活性の１つを有する。断片は、本明細書に記載のワクチン中のポリペプチドとして使用することができ、又は別のタンパク質、タンパク質断片、若しくはポリペプチドに融合させることができる。
【００９１】
ある実施形態において、ＩＣＰ４．９の類似体は、配列番号１に基づき、残基３９１〜５４４からの少なくとも５０、７５、１００、１２５、１３０、１４０、１４５又は１５０残基が欠失している。別個に又は組み合わせにおいて、残基７８６〜８２１からの少なくとも２０、２５、又は３０残基が欠失している。
【００９２】
ある実施形態において、ＩＣＰ４．１０の類似体は、配列番号１に基づき、残基３９１〜５０８からの少なくとも２５、５０、７５、９０、９５、１００、１０５、１１０又は１１５残基が欠失している。別個に又は組み合わせにおいて、残基７８６〜８２１からの少なくとも２５、５０、６０、６５、７０又は７５残基が欠失している。
【００９３】
ある態様において、本出願は、ＩＣＰ４．９又はＩＣＰ１．１０に対して少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は９９．５％の同一性を有する免疫原性ポリペプチド、又はその免疫原性断片若しくは類似体を提供する。
【００９４】
ＨＳＶ−２ポリペプチドの追加の特性
典型的には、本明細書に記載のワクチン製剤又は医薬組成物中に存在するポリペプチドは、単独で、又は変異体として免疫原性であり、この変異体は、別のポリペプチドに融合したポリペプチド、又はアジュバントと混合された若しくは複合体形成したポリペプチドを含む。変異体は、本明細書に記載のとおり、配列同一性が１００％未満の配列も含む。加えて、適切な免疫原性を有する断片、前駆体、及び類似体を使用することができる。
【００９５】
これらのポリペプチドは、哺乳動物、例えば、マウス、モルモット、又はヒトにおいて免疫原性であり得る。免疫原性ポリペプチドは、典型的には、アッセイ又は対象において有意な免疫応答をもたらし得るポリペプチドである。あるいは、免疫原性ポリペプチドは、（ｉ）抗体、例えば、ポリペプチドに結合する中和抗体の産生を誘導し得る、（ｉｉ）ＴＨ１免疫を誘導し得る、（ｉｉｉ）例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞の数の増加、ＣＤ８＋Ｔ細胞の感染又は再感染部位への局在の増加によりＣＤ８＋Ｔ細胞応答を活性化させ得る、（ｉｖ）ＴＨ１７免疫を誘導し得る、及び／又は（ｖ）先天性免疫を活性化させ得る。一部の実施形態において、免疫原性ポリペプチドは、その抗原に特異的な抗体の検出可能な量の産生をもたらす。
【００９６】
ある実施形態において、ポリペプチドは、ヒト自己抗原に対して２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、又は７０％未満の相同性を有する。
【００９７】
ポリペプチドは、１つ以上の免疫原性部分及び１つ以上の非免疫原性部分を含み得る。免疫原性部分は、タンパク質マイクロアレイ、ＥＬＩＳＰＯＴ／ＥＬＩＳＡ技術、及び／又は当該ポリペプチドの様々な欠失突然変異体（例えば、断片）に対する特定のアッセイを含め、様々な方法により同定することができる。免疫原性部分は、コンピュータアルゴリズムにより同定することもできる。ＥｐｉＭａｔｒｉｘ（ＥｐｉＶａｘにより生産）のような一部のこのようなアルゴリズムは、計算マトリックスアプローチを使用する。抗原エピトープを同定するための他の計算ツールには、ＰＥＰＶＡＣ（Ｄａｎａ  Ｆａｒｂｅｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによりワールド・ワイド・ウェブ上でｉｍｍｕｎａｘ．ｄｆｃｉ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／ＰＥＰＶＡＣにおいてホストされるＰｒｏｍｉｓｃｕｏｕｓ  ＥＰｉｔｏｐｅ−ｂａｓｅｄ  ＶＡＣｃｉｎｅ）、ＭＨＣＰｒｅｄ（部分最小二乗アプローチを使用し、Ｔｈｅ  Ｊｅｎｎｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによりワールド・ワイド・ウェブ上でｗｗｗ．ｊｅｎｎｅｒ．ａｃ．ｕｋ／ＭＨＣＰｒｅｄにおいてホストされる）、及びワールド・ワイド・ウェブ上でｗｗｗ．ｓｙｆｐｅｉｔｈｉ．ｄｅ／においてホストされるＳｙｆｐｅｉｔｈｉが含まれる。
【００９８】
一部の実施形態において、ワクチン又は医薬組成物は、融合タンパク質及び／又は融合ＤＮＡ構築物を含み得る。上記の基本的なＤＮＡ配列は、タンパク質産物の配列に影響しないように改変することができる。例えば、ＤＮＡ配列は、コドンを最適化して、宿主、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、昆虫細胞系（例えば、バキュロウイルス発現系を使用）又は哺乳動物（例えば、チャイニーズハムスター卵巣）細胞系における発現を改善することができる。ある実施形態において、ＤＮＡ配列は、外因性配列、例えば非哺乳動物細胞中での発現のための外因性シグナル配列を含み得る。特定の実施形態において、例えば約５０００ダルトン未満、例えば、１５００から５０００ダルトンの分子量を有するポリペプチドなどを含む、より低分子量の関連ポリペプチドが使用される場合、改変が、所望の免疫応答の誘発において有用であり得る。例えば、より低分子量のポリペプチドは、適切な免疫原性担体、例えば他の病原体又はウイルス（例えば、破傷風トキソイド）からのタンパク質、巨大タンパク質（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン）などにコンジュゲートすることができる。コンジュゲーションは、直接的又は間接的（例えば、リンカーを介して）であり得る。他の特定の実施形態において、融合タンパク質は、上記のポリペプチド又はその免疫原性断片若しくは変異体及びタグを含み得る。タグは、Ｎ末端又はＣ末端であり得る。例えば、タグは、核酸又はポリペプチドに付加して、精製、検出、溶解度を促進することができ、又はタンパク質若しくは核酸に対する他の望ましい特徴を付与することができる。例えば、精製タグは、親和性精製に使用することができるペプチド、オリゴペプチド、又はポリペプチドであり得る。例には、Ｈｉｓ、ＧＳＴ、ＴＡＰ、ＦＬＡＧ、ｍｙｃ、ＨＡ、ＭＢＰ、ＶＳＶ−Ｇ、チオレドキシン、Ｖ５、アビジン、ストレプトアビジン、ＢＣＣＰ、カルモジュリン、Ｎｕｓ、Ｓタグ、リポタンパク質Ｄ、及びβガラクトシダーゼが含まれる。一部の実施形態において、融合タンパク質は短鎖である。したがって、一部の場合において、融合タンパク質は、上記のポリペプチドの一方又は両方の末端上の１、２、３、４、５、１０、２０、又は５０個以下の追加のアミノ酸、例えば表１のポリペプチドのいずれかの連続したアミノ酸を含む。
【００９９】
一部の実施形態において、タグ、分泌シグナル、又は他のシグナル配列を、ポリペプチドのＣ末端及び／又はＮ末端に付加することができる。タグは、発現されたポリペプチドの精製を支援するために使用することができる。例示的なタグには、ＨＨＨＨＨＨ（配列番号１３０）及びＭＳＹＹＨＨＨＨＨＨ（配列番号１３１）が含まれる。分泌シグナルは、非哺乳動物細胞、例えば昆虫細胞についての使用に最適化することができる。例示的な分泌シグナルは、ＭＫＦＬＶＮＶＡＬＶＦＭＶＶＹＩＳＹＩＹＡ（配列番号１３２）である。
【０１００】
検出タグを使用して、タグを検出して結果的にタグに融合した任意のアミノ酸配列を検出することができる。検出タグには、蛍光タンパク質、蛍光標識に結合するタンパク質、及び高電子密度部分に結合するタンパク質が含まれる。蛍光タンパク質の例には、ｄｓＲｅｄ、ｍＲＦＰ、ＹＦＰ、ＧＦＰ、ＣＦＰ、ＢＦＰ、及びＶｅｎｕｓが含まれる。蛍光標識又は高電子密度標識に結合するタンパク質の例は、ＦｌＡｓＨである。
【０１０１】
本明細書に開示される別の態様は、本発明の組成物（例えば、表１に列記されたポリペプチドの１つ以上又は２つ以上を含む組成物）に対して生成される抗体調製物である。種々の抗体のいずれかが含まれる。このような抗体には、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、組換え抗体、ヒト化又は部分ヒト化抗体、一本鎖抗体、Ｆａｂ抗体、及びこれらの断片などが含まれる。抗体は、任意のアイソタイプ、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、様々なＩｇＧアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４などであり；抗体は、ヤギ、ウサギ、マウス、ニワトリなどを含む、抗体を産生する任意の動物種からのものであり得る。一部の実施形態において、Ｆａｂ分子は、遺伝子形質転換された宿主、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中で発現され、アセンブルされる。したがって、ラムダベクター系は、前駆抗体を生成する対象と同等又はそれを超過する潜在的多様性を有するＦａｂの集団を発現させるために利用可能である。Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９），Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６，１２７５−８１を参照されたい。
【０１０２】
ワクチン及び医薬組成物の成分
ある実施形態において、ワクチン及び医薬組成物は、上記のポリペプチド及び核酸の１つ以上並びに以下の１つ以上：アジュバント、安定剤、緩衝剤、界面活性剤、制御放出成分、塩、保存剤、及び前記抗原に特異的な抗体を含む。
【０１０３】
アジュバント
本明細書に記載のワクチン製剤及び医薬組成物はそれぞれ、アジュバントを含み得る。アジュバントは、その主な作用機序に基づいて２つのクラス：ワクチン送達系及び免疫賦活性アジュバント（例えば、Ｓｉｎｇｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．ＨＩＶ  Ｒｅｓ．，１：３０９−２０，２００３を参照されたい）に大きく分けられる。ワクチン送達系は、粒子状製剤、例えば、エマルジョン、マイクロ粒子、例えば粒子及び／又はマトリックスであり得る免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）、及びリポソームの場合が多い。対照的に、免疫賦活性アジュバントは、病原体に由来することもあり、先天性免疫系の細胞を活性化させる病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）、例えば、リポ多糖（ＬＰＳ）、モノホスホリルリピッド（ＭＰＬ）、又はＣｐＧ含有ＤＮＡを表し得る。
【０１０４】
あるいは、アジュバントは、有機及び無機として分類することができる。無機アジュバントには、ヒトワクチンにおいて一般に使用されるアルミニウム塩、例えば、リン酸アルミニウム、非晶質アルミニウムヒドロキシホスフェートスルフェート（ａｍｏｒｐｈｏｕｓ  ａｌｕｍｉｎｕｍ  ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）、及び水酸化アルミニウムが含まれる。有機アジュバントは、巨大分子を含む有機分子を含む。有機アジュバントの例は、コレラ毒素である。
【０１０５】
アジュバントは、アジュバントが誘導する応答によっても分類することができ、アジュバントは、２つ以上のタイプの応答を活性化し得る。一部の実施形態において、アジュバントは、ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化を誘導する。アジュバントは、ＴＨ１細胞の活性化及び／又はＴＨ１７細胞の活性化及び／又はＴＨ２細胞の活性化を誘導し得る。あるいは、アジュバントは、ＴＨ１細胞及び／又はＴＨ１７細胞の活性化を誘導し得るが、ＴＨ２細胞の活性化を誘導し得ない、又はこの逆である。一部の実施形態において、アジュバントは、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を誘導する。さらなる実施形態において、アジュバントは、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞の活性化を誘導し得る。一部の実施形態において、アジュバントは、ＴＨ１細胞又はＴＨ１７細胞又はＴＨ２細胞の活性化を誘導する。他の実施形態において、アジュバントは、Ｂ細胞の活性化を誘導する。さらに他の実施形態において、アジュバントは、ＡＰＣの活性化を誘導する。これらのカテゴリーは、相互に排他的ではなく；一部の場合において、アジュバントは、２つ以上のタイプの細胞を活性化する。
【０１０６】
ある実施形態において、アジュバントは、ＡＰＣ、例えば樹状細胞の数又は活性を増加させる物質である。ある実施形態において、アジュバントは、ＡＰＣ、例えば樹状細胞の成熟を促進する。一部の実施形態において、アジュバントは、サポニンであるか、又はサポニンを含む。典型的には、サポニンは、トリテルペングリコシド、例えば、キラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ）樹木の樹皮から単離されたトリテルペングリコシドである。生物学的起源からのサポニン抽出物は、さらに分画して（例えば、クロマトグラフィーにより）、最良のアジュバント活性及び許容可能な毒性を有する抽出物の部分を単離することができる。アジュバントとして使用されるキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ）樹木からの抽出物の典型的な画分は、画分Ａ及び画分Ｃとして公知である。例示的なサポニンアジュバントは、Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓから入手可能なＱＳ−２１（画分Ｃ）である。ＱＳ−２１は、オリゴ糖コンジュゲート小分子である。任意選択で、ＱＳ−２１は、脂質、例えば３Ｄ−ＭＰＬ又はコレステロールと混合することができる。
【０１０７】
本明細書に記載のワクチン製剤において使用することができるサポニンの特定の形態は、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）である。ＩＳＣＯＭは、一般にキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）、サポニンマトリックス及び脂質（例えば、コレステロール及びリン脂質、例えば、ホホスファチジルコリン）を含む、当技術分野において認識されるアジュバントのクラスである。ある実施形態において、ＩＳＣＯＭは、目的のポリペプチド又は核酸と一緒にアセンブルされる。しかしながら、様々なサポニンマトリックスを、様々な比で使用することができる。加えて、様々なサポニンマトリックスは、同一粒子中で一緒に存在し得、又は１つの粒子当たり実質的に１つの画分のみを有し得る（示される画分Ａ及びＣの比が、様々な割合で粒子を一緒に混合することにより生成されるように）。この文脈では、「実質的に」は、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％又はさらには１％未満を指す。このようなアジュバントは、７０〜９５Ａ：３０〜５Ｃ、例えば、７０Ａ：３０Ｃから７５Ａ：２５Ｃ；７５Ａ：２５Ｃから８０Ａ：２０Ｃ；８０Ａ：２０Ｃから８５Ａ：１５Ｃ；８５Ａ：１５Ｃから９０Ａ：１０Ｃ；９０Ａ：１０Ｃから９５Ａ：５Ｃ；又は９５Ａ：５Ｃから９９Ａ：１Ｃの比に混合された画分Ａ及び画分Ｃを含み得る。ＣＳＬにより生産されるＩＳＣＯＭマトリックス、並びにＩｓｃｏｎｏｖａにより生産されるＡｂＩＳＣＯ１００及び３００は、典型的には直径４０〜５０ｎｍのケージ状構造を形成する、サポニン、コレステロール及びリン脂質（細胞膜からの脂質）を含むＩＳＣＯＭマトリックスである。Ｎｏｒｄｉｃ  Ｖａｃｃｉｎｅｓにより生産されるＰｏｓｉｎｔｒｏは、複数の様々な機序、例えば、電荷修飾による静電相互作用、キレート化基の取り込み、又は直接結合により免疫原が粒子に結合したＩＳＣＯＭマトリックスである。
【０１０８】
一部の実施形態において、アジュバントは、ＴＬＲリガンドである。ＴＬＲは、白血球膜上に見出すことができるタンパク質であり、外来抗原（微生物抗原を含む）を認識する。例示的なＴＬＲリガンドは、Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌから入手可能なＩＣ−３１である。ＩＣ３１は、抗微生物ペプチド、ＫＬＫ、及び免疫賦活性オリゴデオキシヌクレオチド、ＯＤＮ１ａを含む。ＩＣ３１は、ＴＬＲ９アゴニスト活性を有する。別の例は、ＣｐＧ含有ＤＮＡである。多種多様なＣｐＧ含有ＤＮＡは、Ｐｒｉｚｅｒ（Ｃｏｌｅｙ）から入手可能であり：ＶａｘＩｍｍｕｎｅは、ＣｐＧ７９０９（（ＣｐＧ）含有オリゴデオキシヌクレオチド）であり、Ａｃｔｉｌｏｎは、ＣｐＧ１０１０１（（ＣｐＧ）含有オリゴデオキシヌクレオチド）である。
【０１０９】
一部の実施形態において、アジュバントは、ナノエマルジョンである。１つの例示的なナノエマルジョンアジュバントは、Ｎａｎｏｂｉｏにより生産されるＮａｎｏｓｔａｔ  Ｖａｃｃｉｎｅである。このナノエマルジョンは、高エネルギー水中油型エマルジョンである。このナノエマルジョンは、典型的には、１５０〜４００ナノメートルのサイズであり、安定性を提供するための界面活性剤を含む。Ｎａｎｏｓｔａｔについてのさらなる情報は、米国特許第６，０１５，８３２号明細書、同第６，５０６，８０３号明細書、同第６，５５９，１８９号明細書、同第６，６３５，６７６号明細書、及び同第７，３１４，６２４号明細書に見出すことができる。
【０１１０】
一部の実施形態において、アジュバントは、サイトカインを含む。一部の実施形態において、サイトカインは、インターロイキン、例えばＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１７及びＩＬ−２３である。一部の実施形態において、サイトカインは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）である。アジュバントは、精製されたポリペプチドとしてのサイトカインを含み得る。あるいは、アジュバントはサイトカインをコードする核酸を含み得る。
【０１１１】
アジュバントは、抗原（例えば、上記のポリペプチド）に共有結合させることができる。一部の実施形態において、アジュバントは、ＡＰＣの活性化を介して炎症応答を誘導するタンパク質であり得る。一部の実施形態において、これらのタンパク質の１つ以上は、得られる融合分子は、樹状細胞成熟を促進し、樹状細胞を活性化してサイトカイン及びケモカインを産生させ、最終的に、Ｔ細胞への抗原の提示及びＴ細胞応答の開始を向上させるように、最適な抗原と組換え技術で融合させることができる（Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００５；６５（１１），ｐｐ４９４７−４９５４を参照されたい）。抗原に共有結合させることができる他の例示的なアジュバントは、多糖、合成ペプチド、リポペプチド、及び核酸を含む。
【０１１２】
アジュバントは、単独で又は２種以上の組み合わせで使用することができる。アジュバントは、抗原に直接コンジュゲートさせることができる。アジュバントを組み合わせて、抗原に対する免疫応答の大きさを増加させることもできる。典型的には、同一アジュバント又はアジュバントの混合物が、ワクチンの各用量中に存在する。しかしながら、任意選択で、アジュバントは、ワクチンの最初の投与量に含めて投与することができ、続く投与量（すなわち、ブースターショット）には含めない。あるいは、強いアジュバントを、ワクチンの最初の用量とともに投与することができ、弱いアジュバント又は低用量の強いアジュバントを、続く投与量とともに投与することができる。アジュバントは、抗原の投与の前、抗原の投与と同時、又は抗原の投与の後（１、２、６、又は１２時間以内であることもあり、１、２、又は５日以内であることもある）に対象に投与することができる。あるアジュバントは、ヒト患者、非ヒト患者、又はその両方に適切である。
【０１１３】
ワクチン及び医薬組成物の追加の成分
上記の抗原及びアジュバントに加えて、ワクチン製剤又は医薬組成物は、１つ以上の追加の成分を含み得る。
【０１１４】
ある実施形態において、ワクチン製剤又は医薬組成物は、１つ以上の安定剤、例えば、糖（例えば、スクロース、グルコース、又はフルクトース）、リン酸塩（例えば、リン酸二ナトリウム、リン酸一カリウム、リン酸二カリウム、又はリン酸一ナトリウム）、グルタミン酸塩（例えば、Ｌ−グルタミン酸一ナトリウム）、ゼラチン（例えば、処理ゼラチン、加水分解ゼラチン、又はブタゼラチン）、アミノ酸（例えば、アルギニン、アスパラギン、ヒスチジン、Ｌ−ヒスチジン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、リシン、フェニルアラニン、チロシン、及びこれらのアルキルエステル）、イノシン、又はホウ酸ナトリウムを含み得る。
【０１１５】
ある実施形態において、ワクチン製剤又は医薬組成物は、１つ以上の緩衝剤、例えば、重炭酸ナトリウム及びアスコルビン酸の混合物などを含む。一部の実施形態において、ワクチン製剤は、生理食塩水、例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、又は蒸留水中で投与することができる。
【０１１６】
ある実施形態において、ワクチン製剤又は医薬組成物は、１つ以上の界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、ポリエチレングリコール−ｔｅｒｔ−オクチルフェニルエーテル−ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェニル−ポリエチレングリコール（ＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００）；ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートポリエチレングリコールソルビタンモノラウレート（ＴＷＥＥＮ２０）；並びにホルムアルデヒド及びオキシランを有する４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノールポリマー（ＴＹＬＯＸＡＰＯＬ）を含む。界面活性剤は、イオン性又は非イオン性であり得る。
【０１１７】
ある実施形態において、ワクチン製剤又は医薬組成物は、１つ以上の塩、例えば、塩化ナトリウム、塩化アンモニウム、塩化カルシウム、又は塩化カリウムを含む。
【０１１８】
ある実施形態において、保存剤がワクチンに含められる。他の実施形態において、保存剤は使用されない。保存剤は、複数回用量ワクチンバイアルで使用されることが最も多く、単回用量ワクチンバイアルで必要とされることは少ない。ある実施形態において、保存剤は、２−フェノキシエタノール、メチル及びプロピルパラベン、ベンジルアルコール、及び／又はソルビン酸である。
【０１１９】
ある実施形態において、ワクチン製剤又は医薬組成物は制御放出製剤である。
【０１２０】
ＤＮＡワクチン
ある態様において、ワクチンは、本明細書に開示される核酸の１つ以上を含む。核酸ワクチンが患者に投与されると、対応する遺伝子産物（例えば、所望の抗原）が患者の体内で産生される。一部の実施形態において、最適化された組換えポリヌクレオチドを含む核酸ワクチンベクターを哺乳動物（ヒトを含む）に送達して、治療又は予防免疫応答を誘導することができる。核酸は、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又は合成核酸であり得る。核酸は、一本鎖又は二本鎖であり得る。
【０１２１】
核酸ワクチンベクター（例えば、アデノウイルス、リポソーム、パピローマウイルス、レトロウイルスなど）を、インビボでの細胞の形質導入のために哺乳動物に直接投与することができる。核酸ワクチンは、非経口投与を含む任意の好適な方式で投与するために医薬組成物として製剤化することができる。プラスミドベクターは、典型的には、筋組織への遺伝子移動により効率的である。経口投与によりＤＮＡベクターを粘膜表面に送達する潜在性も報告されており（ＰＬＧＡ封入ロタウイルス及びＢ型肝炎）、ＤＮＡプラスミドが遺伝子の他の組織中への直接導入に利用されている。ＤＮＡワクチンは、動物中に主として筋肉内注射により、遺伝子銃送達、又はエレクトロポレーションにより導入されている。プラスミドは、導入された後、一般に、複製なしでエピソームで維持される。コードされるタンパク質の発現は、意図される時間持続することが示されており、Ｂ及びＴ細胞の刺激を提供する。
【０１２２】
感染又は他の病態の治療又は予防で投与すべきベクターの有効量の決定において、医師は、ベクターの毒性、疾患の進行度、及び抗ベクター抗体の産生（存在する場合）を評価する。多くの場合、ベクターからの裸核酸に等しい用量は、典型的な７０キログラムの患者では、約１μｇから１ｍｇであり、核酸を送達するために使用されるベクターの用量は、等量の治療用核酸が産生されるように計算する。投与は、単回又は分割用量により達成することができる。核酸ワクチンベクターの毒性及び治療効力は、細胞培養又は実験動物での標準薬学手順を使用して決定することができる。
【０１２３】
核酸ワクチンは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、改変核酸、又はこれらの組み合わせを含有し得る。一部の実施形態において、ワクチンは、１つ以上のクローニング又は発現ベクターを含み；例えば、ワクチンは、それぞれが哺乳動物細胞中でヌクレオチドコード領域を自律発現して少なくとも１つの免疫原性ポリペプチドを産生し得る複数の発現ベクターを含み得る。発現ベクターは、真核生物プロモーター配列、例えば、１つ以上のコード領域に作動可能に連結した強い真核生物プロモーターのヌクレオチド配列などを含むことが多い。本明細書の組成物及び方法は、任意の特定の真核生物プロモーターの使用を伴うこともあり得、多種多様なもの、例えばＣＭＶ又はＲＳＶプロモーターが公知である。プロモーターは、宿主細胞に対して異種性であり得るが、異種性である必要はない。使用されるプロモーターは、構成的プロモーターであり得る。
【０１２４】
本組成物及び本方法に有用なベクターは、環状又は直鎖、一本鎖又は二本鎖であり得、プラスミド、コスミド、又はエピソームであり得る。好適な実施形態において、各ヌクレオチドコード領域は、別個のベクター上に存在し；しかしながら、１つ以上のコード領域が単一ベクター上に存在し得、これらのコード領域は単一又は複数のプロモーターの制御下であり得ることを理解すべきである。
【０１２５】
多数のプラスミドを、核酸ワクチンの産生に使用することができる。核酸ワクチンの好適な実施形態は、プラスミドＶＲ１０１２（Ｖｉｃａｌ  Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ  Ｃａｌｉｆ．）、ｐＣＭＶＩ．ＵＢＦ３／２（Ｓ．Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｔｅｘａｓ）又はｐｃＤＮＡ３．１（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆ．）をベクターとして使用する構築物を用いる。加えて、ベクター構築物は、動物の免疫系を刺激する免疫賦活性配列（ＩＳＳ）、例えば非メチル化ｄＣｐＧモチーフを含有し得る。核酸ワクチンは、免疫原性ポリペプチドを含有する融合産物もコードし得る。プラスミドＤＮＡは、送達系として弱毒化細菌を使用して送達することもでき、これは、経口投与されるＤＮＡワクチンに好適な方法である。細菌を非依存性複製プラスミドにより形質転換し、そのプラスミドが、宿主細胞中での弱毒化細菌の死滅後に宿主細胞の細胞質中に放出される。
【０１２６】
所望の抗原をコードするＤＮＡを含むＤＮＡワクチンは、断片単独、直鎖化されたプラスミド、環状プラスミド、複製し得るプラスミド、エピソーム、ＲＮＡなどを含む任意の好適な形態で宿主細胞中に導入することができる。好ましくは、遺伝子はプラスミド中で含有される。ある実施形態において、プラスミドは発現ベクターである。遺伝子材料を発現し得る個々の発現ベクターは、標準組換え技術を使用して生成することができる。例えば、一般的なクローニング法についてはＭａｎｉａｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｒ  ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．，１９８５）を参照されたい。
【０１２７】
投与経路には、限定されるものではないが、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、皮内、皮下、静脈内、動脈内、眼球内及び経口並びに局所的、経皮的投与、吸入若しくは坐剤による投与又は粘膜組織への投与、例えば膣、直腸、尿道、バッカル及び舌下組織への洗浄による投与が含まれる。典型的な投与経路には、筋肉内、腹腔内、皮内及び皮下注射が含まれる。遺伝子構築物は、限定されるものではないが、慣習的な注射器、無針注射デバイス、「マイクロプロジェクティルボンバードメント遺伝子銃（ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ  ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｄｔ  ｇｅｎｅ  ｇｕｎ）」、又は他の物理的方法、例えばエレクトロポレーション（「ＥＰ」）、「ハイドロダイナミック法」、若しくは超音波を含む手段により投与することができる。ＤＮＡワクチンは、ＤＮＡが発現され、所望の抗原が細胞中で作製される限り、ＤＮＡを送達するために使用することができる任意の方法により送達することができる。
【０１２８】
一部の実施形態において、ＤＮＡワクチンは、公知のトランスフェクション試薬、例えばカチオン性リポソーム、フルオロカーボンエマルジョン、コクレエート（ｃｏｃｈｌｅａｔｅ）、小管、金粒子、生分解性マイクロスフェア、又はカチオン性ポリマーを介して送達される。コクレエート送達ビヒクルは、ホスファチジルセリン、コレステロール、及びカルシウムからなる安定なリン脂質カルシウム沈殿物であり；この非毒性及び非炎症性トランスフェクション試薬は消化系中に存在し得る。生分解性マイクロスフェアは、ポリマー、例えば（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、トランスフェクションのためのＤＮＡのマイクロカプセルの生成において使用することができるポリエステルを含む。脂質ベース微小管は、互いに結合している端部により充填された螺旋状に巻き付いた２つの層の脂質からなることが多い。小管が使用される場合、核酸は、動物の体内への送達及び制御放出のためにその中央の中空部分中に配置することができる。
【０１２９】
一部の実施形態において、ＤＮＡワクチンは、マイクロスフェアを介して粘膜表面に送達される。生体接着マイクロスフェアは、様々な技術を使用して調製することができ、眼、鼻腔、尿管、結腸及び胃腸管に見出されるものを含む任意の粘膜組織に接着するように調整することができ、ワクチンの局在化及び全身性制御放出の可能性を提供する。生体接着マイクロスフェアの特定の粘膜組織への適用は、局在化ワクチン作用に使用することもできる。一部の実施形態において、粘膜ワクチン送達のための代替的アプローチは、特定のタンパク質抗原についての遺伝子をコードするプラスミドＤＮＡ発現ベクターの粘膜表面への直接投与である。
【０１３０】
本発明によるＤＮＡプラスミドワクチンは、使用すべき投与方式に従って製剤化することができる。ＤＮＡプラスミドワクチンが注射組成物である一部の実施形態において、それらは、無菌、及び／又はパイロジェンフリー及び／又はパティキュレートフリーである。一部の実施形態において、等張製剤が好ましく使用される。一般に、等張性のための添加剤には、塩化ナトリウム、デキストローズ、マンニトール、ソルビトール及びラクトースが含まれ得る。一部の実施形態において、等張性溶液、例えばリン酸緩衝生理食塩水が好ましい。一部の実施形態において、安定剤には、ゼラチン及びアルブミンが含まれる。一部の実施形態において、血管収縮剤を製剤に添加する。一部の実施形態において、製剤を室温又は周囲温度において意図された期間安定とする安定剤、例えばＬＧＳ又は他のポリカチオン又はポリアニオンを製剤に添加する。
【０１３１】
一部の実施形態において、ＤＮＡワクチンは、薬理学的に許容可能な担体又は希釈剤をさらに含み得る。ワクチンのための好適な担体は、当業者に周知であり、限定されるものではないが、タンパク質、糖などが含まれる。このような担体は、水性又は非水性溶液、懸濁液、及びエマルジョンであり得る。非水性担体の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブ油、及び注射有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体には、水、アルコール性／水性溶液、エマルジョン又は懸濁液、例として生理食塩水及び緩衝媒体が含まれる。非経口ビヒクルには、塩化ナトリウム溶液、リンガーデキストローズ及び塩化ナトリウム、乳酸化リンガー又は固定油が含まれる。静脈内ビヒクルには、体液及び栄養補充剤、電解質補充剤、例えばリンガーデキストローズベースのものなどが含まれる。保存剤及び抗菌剤には、酸化防止剤、キレート化剤、不活性ガスなどが含まれる。好ましい保存剤には、ホルマリン、チメロサール、ネオマイシン、ポリミキシンＢ及びアンフォテリシンＢが含まれる。
【０１３２】
核酸を動物に送達する代替アプローチは、ウイルス又は細菌ベクターの使用を伴う。好適なウイルスベクターの例には、アデノウイルス、ポリオウイルス、ポックスウイルス、例えば、αウイルス、ワクシニア、カナリア痘、及び鶏痘、ナマズ・ヘルペス・ウイルスを含むヘルペスウイルス、アデノウイルス関連ベクター、並びにレトロウイルスが含まれる。ウイルス様ベクターには、ビロソーム及びウイルス様粒子が含まれる。例示的な細菌ベクターには、弱毒化形態のサルモネラ菌、赤痢菌、エドワージエラ・イクタルリ（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ  ｉｃｔａｌｕｒｉ）、エルシニア・ルッケリ（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｒｕｃｋｅｒｉｉ）、及びリステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）が含まれる。一部の実施形態において、核酸は、免疫原性ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を自己発現し得るプラスミドなどのベクターである。
【０１３３】
ワクチンの使用
本明細書に記載のワクチンは、ＨＳＶ−１及び特にＨＳＶ−２を含むヘルペスの予防及び／又は治療処置に使用することができる。ワクチン接種を受ける対象は、男性又は女性であり得、子供又は成人であり得る。一部の実施形態において、治療される対象はヒトである。他の実施形態において、対象は、非ヒト動物である。
【０１３４】
予防的使用
予防的実施形態において、ＨＳＶ−２ワクチンを、ＨＳＶ−２の確立に対する保護に役立ち得る免疫応答を誘導するために対象に投与する。
【０１３５】
一部の実施形態において、本発明のワクチン組成物は、防御免疫を付与し、ワクチン接種をされた個体が、ワクチンへのその曝露の結果として、症状の発症の遅延を示す、又は症状の重症度を軽減することができる（例えば、感染の発症時の病変の数を低減する）（例えば、メモリー応答）。ある実施形態において、症状の重症度の軽減は、少なくとも２５％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又はさらには９０％である。ワクチン接種をされた一部の個体は、ＨＳＶ−２との接触時に症状を示さない、又はＨＳＶ−２による感染さえも示さないこともあり得る。防御免疫は、典型的には、以下の機序の１つ以上：粘膜、体液性、又は細胞性免疫により達成される。粘膜免疫は主に、気道、胃腸管、及び泌尿生殖器の粘膜表面におけるＩｇＡ（ｓＩＧＡ）抗体の分泌の結果である。ｓＩＧＡ抗体は、抗原処理細胞、Ｂ及びＴリンパ球により媒介される一連の事象の後に生成され、体の粘膜裏打ち組織上でのＢリンパ球によるｓＩＧＡの産生をもたらす。体液性免疫は、典型的には、血清中のＩｇＧ抗体及びＩｇＭ抗体の結果である。例えば、ＩｇＧ力価を、本明細書に記載のワクチン製剤の投与後に１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、又はさらには１００倍以上まで上昇させることができる。細胞性免疫は、細胞障害性Ｔリンパ球を介して、又はマクロファージ及びＴリンパ球が関与する遅延型過敏を介して達成することができ、抗体を要求しないＴ細胞が関与する他の機序によっても達成することができる。特に、細胞性免疫は、ＴＨ１細胞又はＴＨ１７細胞により媒介され得る。ＴＨ１細胞の活性化は、免疫応答を生成しないポリペプチドに応答して放出されるＩＦＮ−γのレベルに対するＩＦＮ−γの分泌により測定することができる。ある実施形態において、放出されるＩＦＮ−γの量は、１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、又はさらには１００倍以上である。防御免疫の主な結果は、ＨＳＶ−２ウイルス粒子の破壊又はＨＳＶ−２の複製能の阻害である。一部の実施形態において、ＨＳＶ−２への曝露前の抗原の提示により付与される防御免疫は、ＨＳＶ−２陽性状態へのセロコンバージョンの見込みを低減する。
【０１３６】
防御免疫の期間は、可能な限り長いことが好ましい。ある実施形態において、ワクチン製剤は、６ヶ月、１年、２年、５年、１０年、２０年又はさらには一生涯続く防御免疫を生成する。
【０１３７】
一部の実施形態において、特定のポリペプチドの組み合わせは、ＨＳＶ−２感染又は上記症状の発症の阻害に有効であることを証明し得る。予防的使用のための例示的ワクチン製剤は、薬学的に許容可能な担体、配列番号１３６、又はその免疫原性断片からなる第１のポリペプチド、配列番号１若しくは４、又はその免疫原性断片からなる第２のポリペプチド、並びに任意選択で配列番号１及び４の他方、又はその免疫原性断片からなる第３のポリペプチドを含み得る。一部の実施形態において、第２又は第３のポリペプチドは、配列番号１のポリペプチド断片、例えば配列番号２、８〜１６、１３８及び１３９のポリペプチド、又はその免疫原性断片からなる。一部の実施形態において、予防的使用のためのワクチン製剤は、配列番号１３６、又はその免疫原性断片からなる第１のポリペプチド、配列番号４若しくは配列番号５、又はその免疫原性断片からなる第２のポリペプチド、配列番号２、８〜１６、１３８及び１３９、又はその免疫原性断片からなる群から選択される第３のポリペプチド、並びに任意選択で配列番号２、８〜１６、１３８及び１３９、又はその免疫原性断片からなる群から選択される第４のポリペプチドを含み得る。
【０１３８】
他の実施形態において、予防的使用のためのワクチン製剤は、薬学的に許容可能な担体及び配列番号１、３、５、３８、１３６若しくは１３８、又はその免疫原性断片の少なくとも１つをコードするヌクレオチド配列を有する核酸を含む。例えば、核酸は、配列番号３９、４６、１１８、１３７若しくは１４０、又は免疫原性ポリペプチドをコードするその断片の少なくとも１つを含むヌクレオチド配列を有し得る。
【０１３９】
治療的使用
治療的適用において、本発明のポリペプチド又は核酸を含むワクチンを、ＨＳＶ−２に罹患している患者に患者の治療に十分な量投与することができる。患者の治療は、この場合、感染した個体におけるＨＳＶ−２の症状を遅延させる、又は軽減することを指し得る。一部の実施形態において、患者の治療は、病変の期間を低減すること、病変の数を低減すること、エピソード当たりの症状の期間を低減すること、及び／又はそうでなければエピソード当たりの発症における症状の強さを低減することを指す。ある実施形態において、ワクチンは、軽度の症状の期間又は重症度を低減し；一部の実施形態において、ワクチンは、重度の症状の期間又は重症度を低減する。一部の実施形態において、ワクチンは、ウイルス排出を低減し、これによりワクチン接種された患者からのＨＳＶ−２の伝染性を低減する。ある実施形態において、上記の低減は、少なくとも２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又はさらには９０％である。ある実施形態において、上記の低減は、症状、ウイルス排出、及び／又は将来的発症の完全な停止を含む（例えば、知覚神経節中の潜伏を確立するウイルスの能力を阻害することにより）。
【０１４０】
治療的実施形態において、ＨＳＶ−２ワクチンを、感染後に患者に投与する。ＨＳＶ−２ワクチンは、感染の直後、例えば、症状の顕在化の前に投与することができ、又は症状の顕在化の間若しくはその後に投与することができる。一部の実施形態において、ＨＳＶ−２ワクチンは、早期感染の内因性再活性化を防止し得る。一部の実施形態において、感染後ワクチンを、高リスク群の患者に投与することができる。
【０１４１】
本明細書に開示されるワクチン製剤の治療効果の期間は、可能な限り長いことが好ましい。ある実施形態において、ワクチン製剤は、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１年、２年、５年、１０年、２０年又はさらには一生涯続く治療効果を生成する。
【０１４２】
一部の実施形態において、特定のポリペプチドの組み合わせは、上記のＨＳＶ−２に罹患している患者の治療に有効であることを証明し得る。治療的使用のための例示的ワクチン製剤は、薬学的に許容可能な担体、配列番号１３６、又はその免疫原性断片からなる第１のポリペプチド、配列番号１若しくは４、又はその免疫原性断片からなる第２のポリペプチド、並びに任意選択で配列番号１及び４の他方、又はその免疫原性断片からなる第３のポリペプチドを含み得る。一部の実施形態において、第２又は第３のポリペプチドは、配列番号１のポリペプチド断片、例えば配列番号２、８〜１６、１３８及び１３９のポリペプチド、又はその免疫原性断片からなる。一部の実施形態において、治療的使用のためのワクチン製剤は、配列番号１３６、又はその免疫原性断片からなる第１のポリペプチド、配列番号４若しくは配列番号５、又はその免疫原性断片からなる第２のポリペプチド、配列番号２、８〜１６、１３８及び１３９、又はその免疫原性断片からなる群から選択される第３のポリペプチド、並びに任意選択で配列番号２、８〜１６、１３８及び１３９、又はその免疫原性断片からなる群から選択される第４のポリペプチドを含み得る。
【０１４３】
他の実施形態において、治療的使用のためのワクチン製剤は、薬学的に許容可能な担体及び配列番号１、３、５、３８、１３６若しくは１３８又はその免疫原性断片の少なくとも１つをコードするヌクレオチド配列を有する核酸を含む。例えば、核酸は、配列番号３９、４６、１１８、１３７若しくは１４０、又は免疫原性ポリペプチドをコードするその断片の少なくとも１つを含むヌクレオチド配列を有し得る。
【０１４４】
ワクチン接種効力のアッセイ
本明細書に開示されるワクチンによるワクチン接種の効力を多数の手法で決定することができる。
【０１４５】
ワクチン効力は、様々なモデル系でアッセイすることができる。ＨＳＶ−２の試験に使用される好適なモデル系には、以下の実施例に記載のとおりモルモットモデル及びマウスモデルが含まれる。簡単に述べると、動物にワクチン接種し、次いでＨＳＶ−２により誘発する、又は既に感染した動物にワクチンを投与する。次いで、ＨＳＶ−２誘発又はワクチンに対する動物の応答を、上記の測定の１つを使用して対照動物と比較する。同様のアッセイを、ヒトの臨床試験に使用することができる。上記の治療及び予防効果は、ワクチンの効力を決定するさらなる手法を表す。
【０１４６】
加えて、効力は、未感作ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）のインビトロ免疫化により評価することができ、ＡＰＣをワクチンに曝露し、次いでＡＰＣを同一ドナーからの未感作Ｔ細胞と共培養して、試験管での免疫化に対する一次応答を評価する。ワクチンに曝露されなかったＡＰＣを使用したＴ細胞の活性化に対する１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍、又は１００倍以上のＴ細胞の活性化は、ある実施形態において適正な応答とみなされる。
【０１４７】
ワクチン効力は、ウイルス中和アッセイによりさらに決定することができる。簡単に述べると、動物を免疫化し、血清を免疫化後の様々な日に回収した。血清の連続希釈液を、ウイルスとともにプレインキュベートし、この間、ウイルスに特異的な血清中の抗体がウイルスに結合する。次いで、ウイルス／血清混合物を許容細胞に添加してプラークアッセイにより感染力を決定する。血清中の抗体がウイルスを中和する場合、対照群と比較して存在するプラークが少ない。
【０１４８】
医薬組成物の使用
ＨＳＶ感染に対する防御
本開示の医薬組成物は、ＨＳＶ−２に対して免疫応答を誘発するように設計される。本明細書に記載の組成物は、これらの組成物が投与される対象において、先天性免疫応答、抗体応答若しくは細胞性免疫応答、又はこれらの応答の組み合わせを刺激し得る。一部の実施形態において、本組成物は、免疫細胞、例えば好中球、マクロファージ、及びＮＫ細胞を、感染の末梢部位又は知覚神経節において刺激する。本組成物は、マクロファージによる浸潤；好中球による抗ウイルス化合物、例えば一酸化窒素、ＴＮＦ−α、インターフェロン（ＩＦＮ）、及びインターロイキン１２（ＩＬ−１２）の産生；並びに／又はＩＦＮ−γを産生するためのＮＫ細胞の刺激を刺激し得る。ＩＬ−２、ＩＦＮ−α及びＩＦＮ−βの産生は、本組成物のポリペプチドにより引き起こすこともでき、感染の制御を支援すると考えられる。
【０１４９】
一部の実施形態において、本組成物は、中和抗体の産生を刺激する抗原を含む。中和抗体は、ウイルスエンベロープの糖タンパク質を標的化することができ、この糖タンパク質は、ウイルス粒子と宿主細胞との相互作用を媒介し、ＨＳＶ−２の細胞中への付着、結合、及び侵入を担う。したがって、例示的な組成物は、上記の１つ以上の糖タンパク質、又は上記の核酸によりコードされる１つ以上の糖タンパク質を含む。本明細書に記載の免疫原性抗原及び／又はエピトープは、別個に、順次、又は互いに組み合わせて投与することができる。
【０１５０】
一部の実施形態において、本組成物は、細胞性応答を誘発し、この細胞性応答は、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞及び／又は抗ウイルスサイトカインの産生が関与し得る。本組成物は、ＴＨ１７細胞によるＩＬ−１７分泌を引き起こし得る。本組成物は、例えば、先天性免疫応答の活性化を介してＩＦＮ−γ分泌を引き起こし、ＣＤ８＋Ｔ細胞のウイルスのクリアリングを媒介し得る。ＩＦＮ−γは、ＴＨ１細胞、ＴＣ細胞、樹状細胞、及びＮＫ細胞によっても分泌され、本組成物は、これらの細胞型のいずれかによるＩＦＮ−γ分泌を引き起こし得る。ＣＤ８＋Ｔ細胞のこのような活性は、細胞溶解性であり得る、あるいは、ニューロンの死滅を防止するニューロン表面上の阻害分子により調節することができる。ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞は、ウイルスの潜伏の維持を担い、したがって再活性化を防止し得る。一部の実施形態において、本組成物は、ウイルスのその潜伏状態からの再活性化を防止するＣＤ４＋Ｔ細胞応答及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞応答をブーストする。
【０１５１】
一部の実施形態において、本組成物は、ＨＳＶの宿主免疫応答を回避する能力を遮断する、あるいは通常はＨＳＶにより回避される免疫応答をブーストする。一部の実施形態において、本組成物は、ＨＳＶ−２が免疫バランスをＨＳＶ抗原のトレランスにシフトするのを阻害する。ＨＳＶ−２は、ＴＨ２細胞を介するトレランスを媒介し得る。まず、ＨＳＶ−２は、ＩＬ−１０、ＴＨ２サイトカインを分泌するサプレッサーＴ細胞、例えばＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞及びＴｒ１細胞を誘導し得る。ＴＨ２サイトカインは、同時刺激分子を下方調節し、抗原提示樹状細胞の成熟及び機能を阻害する。加えて、ＨＳＶ−２による感染は、効率的なＣＤ８＋キラーＴ細胞の誘導に不可欠である樹状細胞の成熟及び遊走を阻害する。注目すべきことに、ＴＨ２サイトカインは、無再発エピソードの間に産生されるＴＨ１サイトカインとは対照的に、ＨＳＶ−２感染の再発の間に産生される。したがって、ある実施形態において、本発明の組成物は、サプレッサーＴ細胞を抑制し、及び／又は樹状細胞の成熟若しくは遊走又はその両方を誘導する。
【０１５２】
一部の実施形態において、哺乳動物においてＨＳＶ−２に対する免疫応答を誘導する方法は、上記の組成物を投与することを含む。組成物は、異なる時点、例えば、ＨＳＶ−２への曝露前、ＨＳＶ−２による初期感染後、ＨＳＶ−２が潜伏を確立する前若しくは後、ＨＳＶ−２排出が起こる前若しくは後、及び／又は再発性発症が起こる前若しくは後などで免疫応答を誘導するために使用することができる。一部の実施形態において、ＨＳＶ−２に対する免疫応答は、上記の時点の１つ以上において誘導することができる。本組成物は、ＴＨ１応答及び／若しくはＴＨ１７応答を誘導し得るがＴＨ２応答を誘導し得ず、又は同時若しくは異なる時点において応答を活性化し得る。
【０１５３】
一部の実施形態において、組成物の投与により、ＨＳＶによる初期感染、潜伏、又は再発性感染に伴う症状を低減する。このような組成物は、ＨＳＶ感染若しくは発症に伴う病変、糜爛、疼痛、刺激、掻痒、発熱、倦怠感、頭痛、ウイルス排出、又は前駆症状の発生率及び／又は重症度を低減し得る。
【０１５４】
一部の実施形態において、ＨＳＶ−２の抗原に対する１つ以上の抗体を、受動免疫を生成するために個体に投与することができる。受動免疫は、既存の抗体の形態の活性な体液性免疫の、ある個体から別の個体への移動から生じる。受動免疫は、高い感染リスクが存在し、体が自己の免疫応答を発現するための時間が不十分である、又は進行中若しくは免疫抑制疾患の症状を軽減するための時間が不十分である場合に使用することができる。Ｔ細胞の養子移入は、患者におけるＨＳＶ−２抗原に対する免疫応答を誘発する別の方法を提供し得る。一実施形態において、自己Ｔ細胞は、上記のポリペプチドに由来する抗原を提示するＡＰＣ上で拡張させることができる。続いて、拡張したＨＳＶ−２特異的Ｔ細胞を、このＴ細胞が由来する患者に戻す。
【０１５５】
診断的使用
本出願は、患者におけるＨＳＶ−２の検出のための、とりわけ迅速、安価、高感度な特殊な方法を提供する。これに関連して、病院及び医師が、ＨＳＶ−２に感染している、又は感染のリスクのある患者を検査及び治療することが有用なはずである。本明細書において使用される「患者」は、ＨＳＶ−２に感染しているか、又はＨＳＶ−２感染に罹患する可能性を有する個体（例えば、ヒト）を指す。
【０１５６】
一部の実施形態において、個体におけるＨＳＶ−２を検出するために、本明細書に記載のポリペプチド、例えば表１及び／又は表２のポリペプチドの１つに対する抗体を使用することができる。本開示は、ＨＳＶ−２感染の疑いのある患者からの生物学的試料のフェノタイピングの方法であって、（ａ）必要に応じて、生物学的試料を免疫アッセイ感受性とすること、（ｂ）ＨＳＶ−２のエピトープへの抗体又は抗原結合部分の結合を可能にする条件下で、試料を、適切なＨＳＶ−２特異的抗体又はその抗原結合部分に接触させること；及び（ｃ）試料が、対照組織と比較してＨＳＶ−２の存在を示すか否かを決定することを含み；試験組織がＨＳＶ−２の存在を示す場合、患者をＨＳＶ−２に感染している可能性が高いと認定する方法も提供する。
【０１５７】
あるいは、個体における抗ＨＳＶ−２抗体を検出するために上記のポリペプチドを使用することができる。本開示は、ＨＳＶ−２感染の疑いのある患者からの生物学的試料のフェノタイピングの方法であって、（ａ）必要に応じて、生物学的試料を、親和性アッセイ、例えばＥＬＩＳＡ感受性とすること、（ｂ）試料中に存在する任意の宿主抗体への抗原の結合を可能にする条件下で、試料を、ＨＳＶ−２特異的抗原又はその一部に接触させること；及び（ｃ）試料が、対照組織と比較してＨＳＶ−２の存在を示すか否かを決定することを含み；試験組織がＨＳＶ−２の存在を示す場合、患者をＨＳＶ−２に感染している可能性が高いと認定する方法も提供する。上記の試験は、他のウイルス感染を検出するために、例えば、上記のタンパク質、例えば表１及び／又は表２のものの相同体（別のウイルス種由来）を使用することにより適切に調整することができる。
【０１５８】
ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、ウエスタンブロッティング、競合アッセイ、及びスポットブロットを含め、抗体抗原結合を測定する多数の方法が、当該技術分野において公知である。検出ステップは、例えば、化学発光法、蛍光法、又は比色分析であり得る。抗体タンパク質結合を測定する１つの好適な方法は、ペプチドが色素含有マイクロスフェアにコンジュゲートしたＬｕｍｉｎｅｘ  ｘＭＡＰシステムである。ｘＭＡＰシステムを含むあるシステムは、いくつかの異なるマーカーの多重測定に感受性であり、抗体のレベルを即座に測定するために使用することができる。一部の実施形態において、他のシステムを使用して、複数のマーカーを多重アッセイする。例えば、以下のシステム：抗原マイクロアレイ、ビーズマイクロアレイ、ナノバーコード粒子技術、ｃＤＮＡ発現ライブラリーからのアレイされたタンパク質、タンパク質のインサイチュアレイ、生存形質転換体のタンパク質アレイ、ユニバーサルタンパク質アレイ、ラブ・オン・チップ・マイクロフルイディクス、及びピン上ペプチドのいずれかを使用してプロファイリングを行うことができる。臨床アッセイの別のタイプは、抗体結合を検出する化学発光アッセイである。ＶＩＴＲＯＳ  Ｅｃｉ抗ＨＣＶアッセイを含め、一部のこのようなアッセイにおいて、抗体が、液体懸濁液中の微粒子から構成される固相支持体に結合し、表面蛍光光度計を使用して蛍光産物の酵素的生成を定量する。
【０１５９】
他の実施形態において、ＨＳＶ−２に特異的なＴ細胞を検出するために、上記のポリペプチド、例えば表１及び／又は表２のものを使用することができる。本開示は、ＨＳＶ−２感染の疑いのある患者からの生物学的試料のフェノタイピングの方法であって、（ａ）必要に応じて、生物学的試料を、Ｔ細胞の活性化についてのアッセイ感受性とすること、（ｂ）ＡＰＣがＨＳＶ−２特異的ポリペプチドをプロセシングできる条件下で、試料を、ＨＳＶ−２特異的ポリペプチド又はその一部に接触させること、及び（ｃ）ＨＳＶ−２特異的ポリペプチドに応答したＴ細胞の活性化を決定することを含み、感染患者に対するＴ細胞活性化の上昇がＨＳＶ−２感染を示す方法を提供する。この診断アッセイは、ＨＳＶ−２に曝露されたがセロコンバージョンされずに検出可能なレベルの抗ＨＳＶ−２抗体を産生しない患者を含め、あらゆる患者におけるＨＳＶ−２特異的Ｔ細胞の存在を検出することを目的とする。
【０１６０】
Ｔ細胞活性化は、サイトカイン特異的ＥＬＩＳＡ、トリチウム化チミジン取り込み又は膜インターカレート（ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｉｎｔｅｒｃｏｌａｔｉｎｇ）（ＰＫＨ−６７）若しくは細胞質（ＣＦＳＥ）色素により測定される細胞増殖、ＥＬＩＳＰＯＴ、フローサイトメトリー、及びビーズアレイを含む多くのアッセイを使用して測定することができる。加えて、抗原に特異的であるマウス又はヒトからのＴ細胞系又はＴ細胞ハイブリドーマにおけるＴ細胞応答を測定することができる。活性化Ｔ細胞についての読み取りには、Ｔ細胞又はＴ細胞ハイブリドーマが抗原に応答して活性化された場合に誘導される増殖、サイトカイン産生、又はハイブリドーマにより発現された代理酵素の読み取りが含まれる。例えば、Ｔ細胞応答の活性化は、β−ガラクトシダーゼを産生するように操作されたＴ細胞ハイブリドーマにより検出することができる。β−ガラクトシダーゼは、比色β−ガラクトシダーゼ基質、例えばクロロフェニルレッドβ−Ｄガラクトピラノシド（ＣＰＲＧ）の使用を介して検出することができる。
【０１６１】
ＨＳＶ−２による感染は、急性又は潜伏性であり得る。一部の実施形態において、生物学的試料がＨＳＶ−２の存在を示す場合、本明細書に記載の治療有効量の組成物及び治療を患者に施すことができる。生物学的試料には、例えば、血液、精液、尿、膣液、粘液、唾液、糞便、尿、脳脊髄液、又は組織試料が含まれ得る。一部の実施形態において、生物学的試料は、移植目的の器官である。ある実施形態において、検出ステップの前に、生物学的試料を、ＨＳＶ−２の増殖を促進する培養条件に供する。
【０１６２】
本明細書における診断試験を使用して、患者から採取した試料及び他の供給源から得た試料を含む様々な試料中のＨＳＶ−２を検出することができる。例えば、診断試験を使用して、医療器具などの物体上のＨＳＶ−２を検出することができる。一部の実施形態において、本明細書における試験は、動物、例えば家畜（ウシ、ブタ、ニワトリ、ヤギ、ウマなど）、愛玩動物（イヌ、ネコ、トリなど）、又は野生動物から採取した試料に対して行うことができる。ある実施形態において、本明細書における試験は、細胞培養物、例えば治療用タンパク質を産生するヒト細胞の培養物、有用な生物分子の産生目的の細菌の培養物、又は研究目的で増殖される細胞の培養物から採取した試料に対して行うことができる。
【０１６３】
本発明は、患者におけるＨＳＶ−２感染の位置を決定する方法であって、（ａ）標識ＨＳＶ−２抗体又はその抗原結合部分を含む医薬組成物を患者に投与すること、（ｂ）標識を検出すること、及び（ｃ）患者が対照と比較してＨＳＶ−２を有するか否かを決定することを含む方法も包む。ある実施形態において、この方法は、患者がＨＳＶ−２に感染している場合、本明細書に記載の治療有効量の組成物を患者に投与するステップをさらに含む。この方法は、患者における感染細胞型及び／又はＨＳＶ−２の容量を決定することをさらに含み得る。この方法を使用して患者におけるＨＳＶ−２の拡散を評価し、局所治療が適切であるか否かを決定することができる。
【０１６４】
一部の実施形態において、本明細書に記載のポリペプチドを使用して感染過程の予後診断を行うことができる。一部の実施形態において、本明細書におけるポリペプチドに特異的なＴ細胞又は抗体の応答を、患者から採取した試料で検出することができる。抗体又はＴ細胞が通常のレベルで存在する場合、患者が、病原体に対する有効な免疫応答を引き起こしたことを示す。抗体又はＴ細胞が不存在である、又は低減したレベルにおいて存在する場合は、患者が病原体に対する十分な応答を引き起こせなかったことを示し、より積極的な治療が推奨される。一部の実施形態において、低減したレベルにおいて存在する抗体又はＴ細胞は、防御免疫応答を有する患者の典型的なレベルの５０％、２０％、１０％、５％、２％、又は１％において存在する応答を指す。Ｔ細胞応答は、当該技術分野において公知の方法、例えばＴ細胞増殖、ＥＬＩＳＰＯＴ又はＥＬＩＳＡにより検出することができ、抗体は、当該技術分野において公知の方法、例えばＥＬＩＳＡを使用して、本明細書に記載の抗原のいずれかの親和性により検出することができる。
【０１６５】
一部の実施形態において、ＨＳＶ−２抗原に特異的なＴ細胞の検出を使用して、患者におけるＨＳＶ−２感染の進行及び症状を予測することができる。ＨＳＶ−２による感染後、一部の患者は、無症状のままであるが、ウイルスは潜伏を確立し得る。他の患者は、ＨＳＶ−２感染の症状を示し、再発性発症を罹患し得る。無症状患者に見出されるＨＳＶ−２抗原は、症状及び／又は再発性発症を示す患者に見出される抗原とは異なり得る。したがって、本発明の検出方法を使用して、ＨＳＶ−２に感染した患者の集団内の下位群を区別することができる。下位群は、高頻度の発症を罹患する患者及び発症を低頻度で罹患するか若しくは発症を罹患しない患者、又は高レベルのウイルスを排出する患者及び低レベルのウイルスを排出するか若しくはウイルスを排出しない患者にさらに分類することができる。他の抗原ではなくあるＨＳＶ−２抗原に対するＴ細胞応答の存在及びレベルに基づいた患者のカテゴリー化は、医療従事者が適切な治療レジメンを決定するのに役立ち得る。同様に、Ｔ細胞応答の程度の差及び／又はＴ細胞により産生されるサイトカインの組み合わせ及びレベルの差を使用して、患者におけるＨＳＶ−２感染の進行及び症状を予測することもできる。したがって、Ｔ細胞が応答するＨＳＶ−２抗原の補体が、重度の症状、高頻度の発症、及び／又は高レベルのウイルス排出を予測する感染患者は、ＨＳＶ−２抗原の補体が無症状感染を予測する患者よりも集中的な抗ウイルス治療及び／又は長期間の治療処置を要求し得る。
【０１６６】
本明細書における方法は、ＨＳＶ−２の検出に限定されるものではないことが当業者により理解される。他の実施形態は、上記のタンパク質、例えば表１及び／又は表２におけるものに相同なタンパク質を有するウイルスを含む近縁ウイルスの検出を含む。このような近縁ウイルスには、例えば、ヘルペスウイルス科の他のメンバーが含まれる。相同性に応じて、これらの近縁ウイルスには、ヘルペスウイルス科のメンバーではないウイルスも含まれ得る。
【０１６７】
ＨＳＶ−２による感染リスクが増加した群における使用
本質的にあらゆる個体は、ＨＳＶ−２による感染のあるリスクを有する。しかしながら、ある下位集団は感染リスクが増加している。一部の実施形態において、ＨＳＶ−２についての組成物を受ける患者は、免疫不全である。
【０１６８】
医療処置から生じる免疫不全病態は、当該個体をより高い感染リスクに曝露する可能性が高い。免疫不全病態を生成することが公知の治療の前又はその間に、免疫不全病態である個体の感染を予防的に治療することが可能である。このような病態を生成することが公知の治療の前又はその間に抗原により予防的に治療することにより、続く感染を予防すること又は免疫不全状態に起因して個体が感染するリスクを低減することが可能である。個体が、例えば、免疫不全病態をもたらす治療の後に感染した場合、個体に抗原組成物を投与することにより感染を治療することも可能である。
【０１６９】
ある実施形態において、本組成物を子供又は成人患者に投与する。他の実施形態において、組成物は、例えば胎児又は乳児の感染を阻害するため、妊娠前に感染した妊婦又は妊娠中に感染した妊婦に適切である。本組成物は、子宮中で、又は出産中に感染した新生児及び幼児に投与することもできる。
【０１７０】
投与の用量及び経路
投与量及びタイミング
各ワクチン用量における抗原の量は、単回投与で、又は複数回投与にわたり上記の予防又は治療応答を誘導する有効量として選択される。好ましくは、この用量は、典型的なワクチン接種において有意な有害副作用を有さない。このような量は、どの特異的抗原が用いられるかに応じて変動する。一般に、用量は、１〜１０００μｇ、一部の場合において、２〜１００μｇ、例えば、４〜４０μｇのタンパク質を含むことが予想される。あるいは、用量は、１０〜６０００μｇ、一部の場合において、２０〜４０００μｇ、例えば３０〜４０００μｇの核酸を含む。特定のワクチンの最適量は、抗体力価、Ｔ細胞の活性化レベル、及び対象における他の応答の観察を含む標準的試験により確定することができる。一部の実施形態において、送達すべき抗原の適切量は、対象の年齢、体重、及び健康状態（例えば、免疫不全状態）に依存する。アジュバントは、存在する場合、典型的には、用量当たり１μｇ〜２５０μｇ、例えば、５０〜１５０μｇ、７５〜１２５μｇ又は１００μｇの量で存在する。
【０１７１】
一部の実施形態において、上記の結果を得るために１回用量のワクチンのみが投与される。他の実施形態において、最初のワクチン接種の後、１回以上のブーストワクチン接種、例えば、合計で２、３、４又は５回、対象がワクチン接種を受ける。有利には、回数が３回以下である。１回のワクチン接種レジメンが、０、０．５〜２及び４〜８ヶ月における投与を含むように、ブーストワクチン接種を、例えば、最初のワクチン接種から約１ヵ月、２ヵ月、４ヵ月、６ヵ月、又は１２ヵ月後に施すことができる。同一又は異なる経路により投与することができるワクチンの分割用量を投与することが有利であり得る。
【０１７２】
一部の実施形態において、本発明は、第１の用量のワクチン及び第２、第３又は第４の用量のワクチン（ブーストワクチン）を含む治療レジメンを供給する。例示的実施形態において、第１の用量のワクチンは、１つ以上のポリペプチド抗原、又は１つ以上のポリペプチド抗原をコードする核酸、又は１つ以上のポリペプチド抗原及び同一若しくは他のタンパク質抗原をコードする核酸の組み合わせを含む。一部の実施形態において、ブーストワクチンは、第１の用量と同一のポリペプチド抗原、核酸、又はポリペプチド抗原及び核酸と製剤化される。一部の実施形態において、ブーストワクチンは、第１の用量と異なるポリペプチド抗原、核酸、又はポリペプチド抗原及び核酸と製剤化される。一部の実施形態において、第１の用量は、ポリペプチド抗原のみを含み得、ブーストワクチンは、核酸のみを含み得、又は第１の用量は、核酸のみを含み得、ブーストワクチンは、ポリペプチドのみを含み得る。一部の実施形態において、第１の用量は、ポリペプチド抗原及び核酸を含み得、ブーストワクチンは、タンパク質抗原のみ又は核酸のみを含み得る。一部の実施形態において、第１の用量は、タンパク質抗原のみ又は核酸のみを含み得、ブーストワクチンは、タンパク質抗原及び核酸を含み得る。ブーストワクチンがポリペプチドである、ある実施形態において、ポリペプチドは、任意選択で上記アジュバントの１つ以上、特にＩＳＣＯＭの１つ以上との組み合わせにおけるｇＬ２（配列番号３）又はＩＣＰ４（配列番号１）又はその免疫原性断片（例えば、ＩＣＰ４．２、及びｇＬ２ｓ  ｖ．２、配列番号２及び１３６）である。このようなポリペプチドブーストワクチンは、上記核酸ワクチン（例えば、配列番号１、３、５、３８、１３６若しくは１３８、又はその免疫原性断片の少なくとも１つをコードするヌクレオチド配列を有する核酸）のいずれか１つとの併用において特に有用である。
【０１７３】
本明細書に記載の医薬組成物は、様々な剤形をとり得る。ある実施形態において、組成物は、固体又は粉末化（例えば、凍結乾燥）形態で提供され：又は溶液形態でも提供され得る。ある実施形態において、剤形は、１回用量の凍結乾燥組成物及び少なくとも１つの別個の希釈剤の滅菌容器として提供される。
【０１７４】
一部の実施形態において、抗原は、用量当たり１μｍｏｌの量で患者に送達される。一部の実施形態において、抗原は、用量当たり１０ｎｍｏｌから１００ｎｍｏｌの範囲の用量において送達される。送達すべき抗原の適切量は、当業者が決定することができる。一部の実施形態において、送達すべき抗原の適切量は、対象の年齢、体重、及び健康状態（例えば、免疫不全状態）に依存する。
【０１７５】
本明細書に開示される医薬組成物は、（一部の実施形態において）免疫原性応答の一部として抗体の産生を誘発するために十分な量で投与される。一部の実施形態において、組成物は、５μｇ／０．５ｍｌ又は１０μｇ／１ｍｌから２００μｇ／１ｍｌの量の抗原を含有するように製剤化することができる。他の実施形態において、組成物は、抗原の組み合わせを含み得る。複数の抗原はそれぞれ、同一濃度であり得、又は異なる濃度であり得る。
【０１７６】
一部の実施形態において、組成物は、組成物の次の投与が前の投与よりも高濃度の組成物を含有するように、用量漸増様式で投与される。一部の実施形態において、組成物は、組成物の次の投与が前の投与よりも低濃度の組成物を含有するような様式で投与される。
【０１７７】
治療的適用において、組成物は、疾患を罹患する患者に、疾患及びその合併症を治癒する、又は少なくとも部分的に抑止するために十分な量で投与される。
【０１７８】
本明細書に記載の組成物の治療的適用は、例えば、組成物により治療されない個体において起こるレベルの９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％又は１０％に、ＨＳＶ−２に感染した患者において伝染性を低減する、疾患の進行を遅延させる、ウイルス排出を低減する、又は再発性感染を排除することを含む。組成物は、例えば、組成物により治療されない個体において起こるレベルの９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、又は１０％に、感染した個体により排出されるＨＳＶ−２の量を低減する、感染した患者の潜伏段階からのＨＳＶ−２の再活性化に要求されるタンパク質の発現を阻害する、及び／又は感染した患者のニューロンにおけるＨＳＶ−２の複製を阻害することもできる。
【０１７９】
予防的実施形態において、組成物は、感染性疾患又は他の病態の確立を阻害し得る免疫応答を誘導するためにヒト又は他の哺乳動物に投与される。一部の実施形態において、組成物は、ウイルスが潜伏を確立するのを部分的に遮断し得、又は潜伏が確立される効率を低減し得る。
【０１８０】
一部の実施形態において、１回用量（投与）のみの組成物が与えられる。他の実施形態において、組成物は、複数回用量で投与される。様々な実施形態において、組成物は、１回、２回、３回、又は４回以上投与される。対象に投与される用量の回数は、抗原、疾患の程度又は疾患への予想される曝露、及び対象の組成物に対する応答に依存する。
【０１８１】
一部の実施形態において、組成物は、抗菌分子との組み合わせで投与される。抗菌分子には、抗ウイルス分子が含まれ得る。多くの抗ウイルス分子が、現在、当該技術分野において公知であり、宿主細胞へのウイルス付着、ウイルス遺伝子及び／又は酵素の宿主細胞内への放出、宿主細胞機構を使用するウイルス成分の複製、ウイルス成分の完全ウイルス粒子へのアセンブリ、及び新たな宿主に感染するためのウイルス粒子の放出を含むウイルスのライフサイクルの１つ以上の段階を標的とする。
【０１８２】
投与の経路
本明細書におけるワクチン製剤及び医薬組成物は、個体への投与、典型的には、全身投与（例えば、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮内、皮下、経皮、真皮下、頭蓋内、鼻腔内、経粘膜、経肛門、経膣、経口、舌下、バッカル経路、若しくはそれらを吸引させることができる）により送達することができ、又はそれらを局所適用により投与することができる。
【０１８３】
一部の実施形態において、組成物は、感染の可能性が高い部位に直接投与することができる。女性患者において、組成物は、粘膜に局所適用する、又は当技術分野において公知のデバイス及び方法を使用して経膣的又は経直腸的に送達することができる。経膣及び経直腸の送達経路は、組成物投与量の長期、連続的、又はパルス送達及び投与を可能にし、予防用組成物又は治療用組成物の使用に応じて、ＨＳＶへの曝露の前又は後で投与することができる。男性患者において、組成物は、皮膚又は粘膜に局所適用する、又は経直腸的に送達することができる。両方の患者集団において、組成物は、知覚神経節に標的化することもできる。
【０１８４】
ＨＳＶ−２ワクチン又は医薬組成物は、筋肉内経路を介して投与されることが多い。典型的には、この経路において、ワクチンは、筋組織のアクセス可能な領域に注射される。筋肉内注射は、一部の実施形態において、三角筋、外側広筋、腹又は背殿筋に与えられる。注射は、典型的には、ワクチンが筋肉に浸透するように皮膚の表面に対して約９０°の角度において与えられる。
【０１８５】
ＨＳＶ−２ワクチンは、皮下投与することもできる。注射は、典型的には、ワクチンが筋肉ではなく皮下組織に投与されるように皮膚の表面に対して４５°の角度において行われる。
【０１８６】
一部の実施形態において、ＨＳＶ−２ワクチンは皮内投与される。皮内投与は、皮下投与に類似するが、注射は、それほど深くなく、標的皮膚層は真皮である。注射は、典型的には、ワクチンが表皮のすぐ下側に送達されるように皮膚の表面に対して１０〜１５°の角度において与えられる。
【０１８７】
一部の実施形態において、ＨＳＶ−２ワクチンはエレクトロポレーションにより投与される。エレクトロポレーションによる送達は、筋肉内又は皮内であり得る。エレクトロポレーションのための好適なデバイスには、Ｉｎｏｖｉｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｌｕｅ  Ｂｅｌｌ，ＰＡ）により作製されるデバイス及びＩｃｈｏｒ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）により作製されるＴｒｉＧｒｉｄＴＭ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍが含まれる。
【０１８８】
製剤
ワクチン製剤は、ヒト患者への投与に好適であり得、ワクチン調製物は、ＵＳＦＤＡのガイドラインに適合し得る。一部の実施形態において、ワクチン製剤は、非ヒト動物への投与に好適である。一部の実施形態において、ワクチンは、エンドトキシンもエキソトキシンも実質的に含まない。エンドトキシンには、パイロジェン、例えばリポ多糖（ＬＰＳ）分子が含まれる。ワクチンは、不活性なタンパク質断片も実質的に含み得ない。一部の実施形態において、ワクチンは、工業用水、水道水、又は蒸留水よりも低いレベルのパイロジェンを有する。他のワクチン成分を、当該技術分野において公知の方法、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、限外ろ過、又は蒸留を使用して精製することができる。他の実施形態において、パイロジェンは、患者に投与する前に不活化又は破壊することができる。ワクチンの原料、例えば、水、緩衝剤、塩及び他の化学物質を、スクリーニング及びパイロジェン除去することもできる。ワクチン中のすべての材料を滅菌し、ワクチンの各ロットを滅菌性について試験することができる。したがって、ある実施形態において、ワクチン中のエンドトキシンのレベルが、ＵＳＦＤＡにより設定されたレベル、例えば、くも膜下注射組成物については製品１ｋｇ当たり０．２エンドトキシン（ＥＵ）、非くも膜下注射組成物については製品１ｋｇ当たり５ＥＵ、滅菌水については１ｍＬ当たり０．２５〜０．５ＥＵ未満になる。
【０１８９】
一部の実施形態において、ポリペプチドを含むワクチンは、所望のポリペプチドの量に対して５％、２％、１％、０．５％、０．２％、０．１％未満の他の不所望な非ポリペプチドを含有する。一部の実施形態において、ワクチンは、５％未満、２％未満、１％未満、０．５％未満、０．２％未満、又は０．１％未満のＤＮＡ及び／又はＲＮＡを含有する。
【０１９０】
ワクチンは、妥当なリスクベネフィット比の範囲内で低い毒性を有するか、又は毒性を有さないことが好ましい。
【０１９１】
医薬組成物の導入に好適な製剤は、投与経路により変動する。例えば、非経口投与、例えば、関節内（関節の内部）、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、鼻腔内、及び皮下経路による投与に好適な製剤には、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、及び目的のレシピエントの血液により製剤を等張性にする溶質を含有し得る水性及び非水性の等張性滅菌注射液、並びに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、及び保存剤を含み得る水性及び非水性滅菌懸濁液が含まれる。製剤は、単位用量又は複数回用量の密封容器、例えばアンプル及びバイアル中で提供することができる。
【０１９２】
注射用の溶液及び懸濁液は、上記種類の滅菌された粉末、顆粒、及び錠剤から調製することができる。パッケージ核酸が形質導入された細胞を、静脈内投与又は非経口投与することもできる。
【０１９３】
経口投与に好適な製剤は、（ａ）液体溶液、例えば希釈溶液、例えば水、生理食塩水又はＰＥＧ４００中に懸濁された有効量のポリペプチド又はパッケージ核酸；（ｂ）液体、固体、顆粒又はゼラチンとして所定量の活性成分をそれぞれ含有するカプセル、サシェ又は錠剤；（ｃ）適切な液体中の懸濁液；及び（ｄ）好適なエマルジョンからなり得る。錠剤形態は、ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、リン酸カルシウム、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、トラガカント、微結晶性セルロース、アカシア、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、及び他の賦形剤、着色剤、充填剤、結合剤、希釈剤、緩衝剤、湿潤剤、保存剤、付香剤、色素、崩壊剤、及び薬学的に適合可能な担体の１つ以上を含み得る。トローチ形態は、通常はスクロース及びアカシア又はトラガカントである香料中の活性成分を含み得、同様に芳香錠は、不活性基剤、例えば、ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシアエマルジョン、ゲルなどの中に活性成分を含み、活性成分に加えて当該技術分野において公知の担体も含有する。医薬組成物は、例えば、リポソーム中に、又は活性成分の徐放を提供する製剤中に封入することができる。
【０１９４】
抗原は、単独で、又は他の好適な成分との組み合わせで、吸入を介して投与すべきエアロゾル製剤（例えば、「霧状」にすることができる）にすることができる。エアロゾル製剤は、許容可能な加圧噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などの中に入れることができる。
【０１９５】
経膣又は経直腸投与に好適な製剤には、例えば、ポリペプチド又はパッケージ核酸と坐剤基剤からなる坐剤が含まれる。好適な坐剤基剤には、天然又は合成のトリグリセリド又はパラフィン炭化水素が含まれる。加えて、ポリペプチド又はパッケージ核酸と、例えば、液体トリグリセリド、ポリエチレグリコール、及びパラフィン炭化水素を含む基剤との組み合わせからなるゼラチン直腸カプセルを使用することも可能である。製剤は、ヒト患者への投与に好適であり得、この調製物は、ＵＳＦＤＡガイドラインに適合し得る。一部の実施形態において、製剤は、非ヒト動物への投与に好適である。一部の実施形態において、組成物は、エンドトキシンもエキソトキシンも実質的に含まない。エンドトキシンには、パイロジェン、例えばリポ多糖（ＬＰＳ）分子が含まれ得る。組成物は、発熱又は他の副作用を引き起こし得る不活性なタンパク質断片も実質的に含み得ない。一部の実施形態において、組成物は、１％未満、０．１％未満、０．０１％未満、０．００１％未満、又は０．０００１％未満のエンドトキシン、エキソトキシン、及び／又は不活性なタンパク質断片を含有する。一部の実施形態において、組成物は、工業用水、水道水、又は蒸留水よりも低いレベルのパイロジェンを有する。他の成分を、当該技術分野において公知の方法、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、限外ろ過、又は蒸留を使用して精製することができる。他の実施形態において、パイロジェンは、患者に投与する前に不活化又は破壊することができる。組成物の原料、例えば、水、緩衝剤、塩、及び他の化学物質を、スクリーニング及びパイロジェン除去することもできる。組成物中のすべての材料を滅菌し、組成物の各ロットを滅菌性について試験することができる。したがって、ある実施形態において、組成物中のエンドトキシンのレベルが、ＵＳＦＤＡにより設定されたレベル：くも膜下注射組成物については製品１ｋｇ当たり０．２エンドトキシン（ＥＵ）；非くも膜下注入組成物の場合は、製品１ｋｇ当たり５ＥＵ；滅菌水については１ｍＬ当たり０．２５〜０．５ＥＵ未満になる。
【０１９６】
ある実施形態において、調製物は、５０％、２０％、１０％、又は５％未満（乾燥重量で）の汚染タンパク質を含む。ある実施形態において、所望の分子は、他の生物巨大分子、例えば、他のタンパク質（特に、精製された調製物として又は対象の再構成混合物中でのその機能における成分タンパク質の特徴を実質的に覆う、減弱する、撹乱する、又は変更することができる他のタンパク質）などの実質的不存在下で存在する。ある実施形態において、同一種類の生物巨大分子の少なくとも８０％、９０％、９５％、９９％、又は９９．８％（乾燥重量で）存在する（しかし、水、緩衝剤、及び他の小分子、特に５０００未満の分子量を有する分子も存在し得る）。
【０１９７】
組成物は、妥当なリスクベネフィット比の範囲内で低い毒性を有するか、又は毒性を有さないことが好ましい。ある実施形態において、組成物は、組成物により治療されている動物のＬＤ５０測定値未満の濃度において成分を含む。ＬＤ５０測定値は、マウス又は他の実験モデル系において得て、ヒト及び他の動物に対して推定することができる。ヒト及び他の動物における化合物のＬＤ５０を推定する方法は、当該技術分野において周知である。組成物及び組成物中の任意の成分は、１００ｇ／ｋｇを超える、５０ｇ／ｋｇを超える、２０ｇ／ｋｇを超える、１０ｇ／ｋｇを超える、５ｇ／ｋｇを超える、２ｇ／ｋｇを超える、１ｇ／ｋｇを超える、５００ｍｇ／ｋｇを超える、２００ｍｇ／ｋｇを超える、１００ｍｇ／ｋｇを超える、５０ｍｇ／ｋｇを超える、２０ｍｇ／ｋｇを超える、又は１０ｍｇ／ｋｇを超えるラットにおけるＬＤ５０値を有し得る。一部の実施形態において、組成物の治療指数（集団の５０％について毒性の用量（ＴＤ５０）を集団の５０％について最少有効用量（ＥＤ５０）により除したものとして測定）は、１よりも大きい、１０よりも大きい、又は１００よりも大きい。
【０１９８】
ワクチン製剤及び免疫原性組成物の調製及び貯蔵
本明細書に記載のＨＳＶ−２ワクチンは、様々な技術を使用して生産することができる。例えば、ポリペプチドを、組換えＤＮＡ技術を使用して好適な宿主細胞中で産生させることができる。好適な宿主細胞は、細菌、酵母、哺乳動物、又は他の種類の細胞であり得る。宿主細胞は、関連ポリペプチド遺伝子の１つの外因性コピーを発現するように改変することができる。典型的には、遺伝子は、適切な調節配列、例えば強いプロモーター及びポリアデニル化配列に作動可能に連結される。一部の実施形態において、プロモーターは、誘導性又は抑制性である。他の調節配列は、ポリペプチドをどのように精製したいかに応じて、目的のポリペプチドの分泌若しくは排出又は細胞質若しくは膜中での目的のポリペプチドの保持を提供し得る。遺伝子は、染色体外プラスミド上に存在し得、又は宿主ゲノム中に統合することができる。当業者は、天然配列と１００％同一の核酸を使用する必要はないことを認識する。むしろ、これらの配列に対していくぶんの改変は認容され、望ましいことがある。例えば、核酸を変更して、コードされたポリペプチドが同一のままであるように遺伝子コードの縮重を利用することができる。一部の実施形態において、遺伝子は、特定の宿主中での発現を改善するためにコドン最適化される。核酸は、例えば、ＰＣＲ又は化学合成により生成することができる。
【０１９９】
組換え細胞系が生成されたら、ポリペプチドを組換え細胞系から単離することができる。この単離は、例えば、親和性精製技術又は物理的分離技術（例えば、サイズカラム）により達成することができる。
【０２００】
本開示のさらなる態様において、１つ以上のポリペプチド又はその免疫原性断片若しくは変異体を担体及び／又はアジュバントと混合することを含む製造方法が提供される。一部の実施形態において、アジュバントは、ＴＨ１細胞応答を刺激するアジュバントである。
【０２０１】
一部の実施形態において、本発明の組成物中での包含のための抗原は、細胞培養で産生することができる。１つの方法は、１つ以上の哺乳動物発現ベクターを提供すること、及び配列番号１〜３８、１３５、１３６、１３８又は１３９のいずれか１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドから選択される２つ以上のポリペプチドをコードするヌクレオチドをクローニングし、次いでこのポリペプチドを発現及び単離することを含む。
【０２０２】
一部の実施形態において、本発明の組成物中での包含のための核酸は、細菌宿主、例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中での複製により生成し、標準的ＲＮＡ又はＤＮＡ精製法により精製することができる。
【０２０３】
本明細書に記載の免疫原性ポリペプチド、及びこのポリペプチドを発現する核酸組成物を、核酸組成物を哺乳動物に投与するためのパック、ディスペンサーデバイス、及びキットにパッケージングすることができる。例えば、１つ以上の単位剤形を含有するパック又はディスペンサーデバイスが提供される。典型的には、化合物の投与についての取扱説明書がパッケージングに提供されるとともに、示される病態、例えば本明細書に開示される病態の治療に化合物が好適であるという好適な表示がラベル上に提供される。
【実施例】
【０２０４】
実施例１
ＨＳＶ−２抗原の同定
ＨＳＶ−２ポリペプチドのライブラリー（ＨＳＶ−２Ｇ株、ロット番号７Ｃ００１３、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）を用意し、ヒトドナーからの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によりスクリーニングした。簡単に述べると、ＨＳＶポリペプチドのライブラリーを細菌により発現させ、ＡＰＣと混合した。次いで、ＡＰＣが、ＨＳＶ−２に感染したヒト患者から単離されたリンパ球にＨＳＶ由来ペプチドを提示した。患者は、下記のとおり、いくつかの集団に属した。各集団からのリンパ球応答を、発現された各タンパク質に対する反応性について比較し、スクリーニングにより、他の患者集団と比較してある患者集団において高頻度で反応性リンパ球を誘導する抗原を検出した。感染したが無症状の患者及び曝露されたが血清反応陰性の患者は、高頻度の発症を罹患する患者が活性化しない防御免疫応答を活性化することができ；特に、曝露されたが血清反応陰性の患者は、ＨＳＶ−２感染に対して殺菌免疫を開始したと推測される。ポリペプチドの固有の組が、これらの患者集団からのリンパ球を活性化すると考えられる。
【０２０５】
各集団からのＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞からのＩＦＮ−γの放出を、候補抗原への曝露後にＥＬＩＳＡにより測定した。抗原は、１年当たり５回以上の発症を罹患する高頻度再発者により放出されたＩＦＮ−γのレベルに対する、放出されたＩＦＮ−γの増加倍率、並びに高頻度及び低頻度再発者と比較した感染したが無症状のレスポンダー、又は曝露されたが血清反応陰性の集団の頻度に基づいて選択した。
【０２０６】
ＵＬ１０、ＵＬ１９、ＵＬ４０、ＵＳ４、ＵＳ６、ＲＳ１（ＲＳ１．１、ＲＳ１．２、ＲＳ１．３）、ＵＬ３６（ＵＬ３６．３、ＵＬ３６．４、ＵＬ３６．５）、ＵＬ３２、及びＲＬ２によりコードされる抗原の同定
リンパ球を、いくつかの集団：感染したが無症状（ｎ＝４０）、曝露されたが血清反応陰性（ｎ＝４０）、１年当たり４回以上の発症を罹患する高頻度再発者（ｎ＝４３）、１年当たり４回未満の発症を罹患する低頻度再発者（ｎ＝１９）、未感作（ｎ＝１０）、及びＨＳＶ−２−／ＨＳＶ−１＋（ｎ＝１０）に属する患者から単離した。表３は、再発者コホート（高頻度及び低頻度再発者の組み合わせ）と比較した、曝露された患者コホートにおけるＵＬ１０、ＵＬ１９、ＵＬ４０、ＵＳ４、ＵＳ６、ＲＳ１（ＲＳ１．１、ＲＳ１．２、ＲＳ１．３）、ＵＬ３６（ＵＬ３６．３、ＵＬ３６．４、ＵＬ３６．５）、ＵＬ３２、及びＲＬ２によりコードされる１３のＨＳＶ−２抗原についての頻度分析を示す。
【０２０７】
【表８】
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【０２０８】
ＵＬ１、ＵＬ４９．５、及びＵＬ５４によりコードされる抗原の同定
リンパ球を、いくつかの集団：感染したが無症状（ｎ＝４０）、曝露されたが血清反応陰性（ｎ＝４０）、１年に４回以上の発症を罹患する高頻度再発者（ｎ＝４３）、１年に４回未満の発症を罹患する低頻度再発者（ｎ＝１９）、未感作（ｎ＝１０）、及びＨＳＶ−２−／ＨＳＶ−１＋（ｎ＝１０）に属する患者から単離した。
【０２０９】
表４は、再発者コホート（高頻度及び低頻度再発者の組み合わせ）と比較した、曝露された患者コホートにおけるＵＬ１、ＵＬ４９．５及びＵＬ５４によりコードされる３つのＨＳＶ−２抗原についての頻度分析を示す。
【０２１０】
【表９】
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【０２１１】
ＲＬ１、ＵＬ２、及びＵＬ１１によりコードされる抗原の同定
リンパ球を、いくつかの集団：感染したが無症状（ｎ＝４０）、曝露されたが血清反応陰性（ｎ＝４０）、１年当たり４回以上の発症を罹患する高頻度再発者（ｎ＝４３）、１年当たり４回未満の発症を罹患する低頻度再発者（ｎ＝１９）、未感作（ｎ＝１０）、及びＨＳＶ−２−／ＨＳＶ−１＋（ｎ＝１０）に属する患者から単離した。
【０２１２】
表５は、再発者コホート（高頻度及び低頻度再発者の組み合わせ）と比較した、曝露された患者コホートにおけるＲＬ１、ＵＬ２、及びＵＬ１１によりコードされる３つのＨＳＶ−２抗原についての頻度分析を示す。
【０２１３】
【表１０】
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【０２１４】
実施例２
インビボデータ：タンパク質抗原免疫化
モルモット治療ワクチン接種プロトコル［プロトコルＡ］
雌Ｈａｒｔｌｅｙモルモットを、５×１０５ｐｆｕにおいてＨＳＶ−２株ＭＳにより膣内誘発して生殖管感染を確立した。動物を、感染後第１日目に膣スワブにより感染をモニタリングし、感染後３から１４日目に急性疾患についてモニタリングした。１４日目に、原発性疾患の消散後、動物を１２の群に無作為化し、抗原（１５μｇ用量における各ＨＳＶ−２ポリペプチド）とアジュバント（５０μｇ用量のＩＳＣＯＭマトリックスとキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンマトリックスＡ及びＣの９１：９の混合物）により皮下免疫化した。各群は、感染後１４、２１、及び３５日目に合計３回のワクチン接種を受けた。生殖器スワブをワクチン接種期間中に回収してウイルス排出をモニタリングし、毎日観察を記録した。症状を、重症度に基づいた０〜４のスコア：０＝無症状；１＝赤み又は腫れ；２＝少数の小水疱；３＝いくつかの大水疱；４＝浸軟を伴ういくつかの大水疱、でスコアを付けた。加えて、症状が上記のスコア間の重症度の中間の病変を有する動物には、０．５、１．５、２．５、又は３．５のスコアを付けた。
【０２１５】
ＩＣＰ４．２、ｇＤ２ΔＴＭＲ、及びｇＤ２を用いた例示的治療ワクチン接種試験
例示的試験の結果を以下の表６〜表１０に示す。中和抗体力価を、各群の１２〜２０匹の動物のうちの４匹の平均を使用して、感染後４１日目及び第３の免疫化の７日後に決定した。平均再発病変スコア及び平均病変日数をそれぞれ、感染後１５日目から６３日目又は７０日目に決定した。病変スコアは、１５日目から６０日目の各群についての合計病変を表し、次いで平均を計算した。平均病変日数は、免疫化又は非免疫化動物にヘルペス性病変が現れるまでの感染後の平均日数を表す。膣スワブ試料を、感染後２０〜６３日目の間の１２日間にすべての動物から回収し、量的リアルタイムＰＣＲによるウイルス排出力価についてのアッセイまで−８０℃において保存した。
【０２１６】
【表１１】
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【０２１７】
【表１２】
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【０２１８】
【表１３】
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【０２１９】
【表１４】
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【０２２０】
【表１５】
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【０２２１】
マウス予防ワクチン接種プロトコル［プロトコルＢ］
０日目及び９日目に、６〜８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、抗原（ＨＳＶ−２ポリペプチド）とアジュバント（１２μｇ用量のＩＳＣＯＭマトリックスとキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンマトリックスＡ及びＣの８２：１８の混合物）により皮下免疫化した。１１日目に、発情周期をデポ・プロベラ（Ｄｅｐｏ  Ｐｒｏｖｅｒａ）により同期させ、次いで１６日目に、マウスに、麻酔下でＬＤ５０の１０倍量のＨＳＶ−２株３３３を膣内付着を介して誘発した。すべての動物を、罹患率（臨床スコア）及び死亡率、並びに体重についてモニタリングし、膣スワブを感染後１７日目から２８日目の間に回収した。臨床スコアを、以下のスケール：０＝無症状、１＝膣紅斑、２＝膣紅斑及び浮腫、３＝膣ヘルペス性病変、４＝片側性麻痺又は重度の陰部潰瘍、及び５＝両側性麻痺又は死亡、を使用して記録した。
【０２２２】
ＶＰ５、ｇＤ２ΔＴＭＲ、及びｇＤ２ΔＴＭＲとＩＣＰ４．２を用いた例示的マウス予防ワクチン接種試験
実験群において、０日目及び９日目に、マウスを、５μｇ又は１０μｇの抗原とアジュバント（１２μｇ用量のＩＳＣＯＭマトリックスとキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンマトリックスＡ及びＣの８２：１８の混合物）により皮下免疫化した。対照動物は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）のみ又はアジュバントのみを受けた。
【０２２３】
ＰＢＳのみ又はアジュバントのみを受けたマウスはすべて、誘発後９日目までに死亡した（生存マウスなし）。対照的に、抗原を受けたマウスは、多くが９日目まで生存し、２０〜７５％が誘発後１２日目までに生存した。疾患症状（生殖器及び神経疾患）の重症度にも、誘発後９又は１０日目にスコアを付けた。ＩＳＣＯＭアジュバントとＶＰ５、ｇＤ２ΔＴＭＲ、又はｇＤ２ΔＴＭＲとＩＣＰ４．２により免疫化したマウスは、ＰＢＳのみ又はアジュバントのみの群と比較して疾患症状の有意な減少を示した。
【０２２４】
【表１６】
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【０２２５】
ｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４、及びｇＤ２ΔＴＭＲを用いたマウス予防ワクチン接種試験の結果
実験群において、０日目及び２１日目にＣ５７ＢＬ／６マウスを、５μｇ又は１０μｇの抗原とアジュバント（２４μｇ用量のＩＳＣＯＭマトリックスとキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンマトリックスＡ及びＣの９１：９の混合物）により皮下免疫化した。対照マウスはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）のみ、又はアジュバントのみを受けた。動物に、最後の免疫化から７日後に１０４ＰＦＵのＨＳＶ−２株３３３を膣内誘発した。一部の場合において、未誘発動物のサブセットを免疫原性実験についての誘発の日に安楽死させてワクチンに対するＴ細胞及び抗体応答をモニタリングする。すべての誘発した動物を、罹患率（臨床スコア）及び死亡率、並びに体重についてモニタリングし、ウイルス排出評価のための膣スワブを上記のとおり感染後１７から２８日目の間に回収した。臨床スコアを記録し、マウスの実験群及び対照群にわたり比較する。
【０２２６】
モルモット予防ワクチン接種プロトコル［プロトコルＣ］
２５０〜３５０グラム（体重）の雌Ｈａｒｔｌｅｙモルモットに、０日目及び１４〜２１日目に、１５μｇの抗原とアジュバント（５０μｇ用量のＩＳＣＯＭマトリックスとキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンマトリックスＡ及びＣの９１：９の混合物）により皮下免疫化した。ブースト２〜３週間後に足指爪クリップにより血清を回収し、次いでモルモットを、膣内付着を介して５×１０５ＰＦＵのＨＳＶ−２株ＭＳにより誘発した。膣スワブ試料を、３０及び３２日目にすべての動物から回収し、定量リアルタイムＰＣＲによるウイルス力価についてのアッセイまで−８０℃において保存した。モルモットは、毎日（１〜１４日目）評価し、原発性性器皮膚疾患を、１〜４の病変重症度スコアスケールを使用して定量した。数字スコアを、以下のとおり特定の疾患徴候に割り当てた：０、無疾患；１、赤み又は腫れ；２、少数の小水疱；３、いくつかの大水疱；４、浸軟を伴ういくつかの大水疱。試験の最後において、モルモットを安楽死させ、後根神経節（ＤＲＧ）を摘出し、それらを定量リアルタイムＰＣＲ分析のために処理するまで−８０℃において保存した。
【０２２７】
【表１７】
0006055776.tif 000018
【０２２８】
ワクチン接種試験を、Ｌ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４、及びｇＤ２ΔＴＭＲも用いて行う。２５０〜３５０グラム（体重）の雌Ｈａｒｔｌｅｙモルモットに、０日目及び２１日目に、１５μｇの抗原とアジュバント（５０μｇ用量のＩＳＣＯＭマトリックスとキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンマトリックスＡ及びマトリックスＣの９１：９の混合物）により皮下免疫化する。対照動物は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）のみ、又はアジュバントのみを受ける。インビトロでの合計ＩｇＧ応答及びウイルスの抗体中和をモニタリングするために免疫化後に足指爪クリップにより血清を回収し、免疫化したモルモットに５×１０５ＰＦＵのＨＳＶ−２株ＭＳの膣内付着を介して誘発する。動物を、誘発後１５日間、急性感染についてモニタリングする。膣スワブ試料を、誘発後２、４、及び６日目にすべての動物から回収し、定量リアルタイムＰＣＲによるウイルス力価についてのアッセイまで−８０℃において保存する。モルモットは、毎日（１〜１４日目）評価し、原発性性器皮膚疾患を、１〜４の病変重症度スコアスケールで定量する。数字スコアを、以下のとおり特定の疾患徴候に割り当てる：０、無疾患；１、赤み又は腫れ；２、少数の小水疱；３、いくつかの大水疱；４、浸軟を伴ういくつかの大水疱。急性期後、動物を再発について毎日（１５〜６３日目）モニタリングする。群を最初の再発までの時間の長さについて評価し、性器皮膚疾患についてモニタリングし、一部の場合において、膣スワブを規則的な間隔において採取してウイルス排出をモニタリングする。試験の最後（誘発後ほぼ６３日目）で、モルモットを安楽死させ、後根神経節（ＤＲＧ）を摘出し、それらを定量リアルタイムＰＣＲ分析によりウイルス力価のために処理するまで−８０℃において保存する。
【０２２９】
免疫原性アッセイＩ（標準型）［プロトコルＤ］
マウスを、生理食塩水中の５μｇの抗原とアジュバント（１２μｇ用量のＩＳＣＯＭマトリックスとキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンマトリックスＡ及びＣが８２：１８の混合物）を１００μｌにより、首筋に注射して皮下免疫化した。マウスは、１又は２回、７日間隔で注射を受けた。注射の免疫原性の分析を、最後の注射から７日後に行った。
【０２３０】
免疫原性アッセイは、エクスビボＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴであった。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を脾臓から濃縮し、別個に分析した。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイのために、膜プレートを捕捉抗体により一晩被覆することにより膜プレートを調製し、続いて３７℃において少なくとも２時間、補給培地によりブロッキングした。マウスを安楽死させ、マウスの脾臓を摘出した。次いで、Ｔ細胞を、磁気ビーズを使用してＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞について脾細胞をソートすることにより調製した。ブロッキング溶液を、ＥＬＩＳＰＯＴプレートから洗い流して、Ｔ細胞を、ブロッキングされたプレートに添加した。プレートをインキュベーターに戻して、Ｔ細胞を沈降させた。ＡＰＣを、未感作Ｔ細胞枯渇脾細胞を３７℃において２時間、抗原によりパルスすることにより調製した。ＣＤ４＋ＥＬＩＳＰＯＴについて、ＡＰＣを全タンパク質によりパルスした。ＣＤ８＋ＥＬＩＳＰＯＴについて、ＡＰＣを、タンパク質を発現する大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）とｃＬＬＯによりパルスした。培地対照は、追加の抗原なしで３７℃において２時間インキュベートしたＡＰＣであった。パルスされたＡＰＣを放射線照射し、Ｔ細胞を含有するプレートの適切なウェルに添加した。次いで、ホルボールミリスチン酸アセテート（ＰＭＡ）及びイオノマイシンを、陽性対照としての別個のＴ細胞含有対照ウェルに添加した。プレートを、５％ＣＯ２下、３７℃において１８時間インキュベートした。次いで、二次ビオチン化抗体、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）及び３−アミノ−９−エチルカルバゾール（ＡＥＣ）基質を使用してプレートを発色させた。
【０２３１】
１．ＩＣＰ４．２を用いた免疫原性アッセイＩの結果
免疫原性アッセイＩは、ＩＣＰ４．２を用いた１回及び２回の注射レジメンの両方についてロバストな免疫原性応答を示した。１回の注射レジメンについて、２０００００個のＴ細胞当たりのＩＦＮ−γスポットの数は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋細胞のそれぞれで８及び１０１であった。２回の注射レジメンについて、スポットの数はそれぞれ５０及び７０であった。対照的に、１５未満のスポットが、培地又はアジュバント単独についてＣＤ４＋又はＣＤ８＋細胞中で観察された。
【０２３２】
２．ｇＤ２ΔＴＭＲ及びｇＤ２を用いた免疫原性アッセイＩの結果
免疫原性アッセイＩの例示的結果を、図１Ａ及びＢに示す。ロバストなＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答が、完全長ｇＤ２及びｇＤ２ΔＴＭＲの両方について得られた。対照的に、膜貫通ドメインのすぐ上流で切断されたｇＤ２抗原（図１に３０６ｔとして示される）による免疫化は、有意に低減した応答をもたらした。
【０２３３】
免疫原性アッセイＩＩ（迅速型）［プロトコルＥ］
ＨＳＶ−２ｏｒｆｅｏｍｅライブラリーからの組換え大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を、ｇＬ２又はＩＣＰ４タンパク質の断片（ＩＣＰ４．２、並びにＲＳ１．１、ＲＳ１．３．１及びＲＳ１．３．２によりコードされるポリペプチド）を発現するように誘導した。タンパク質は、細菌細胞内で保持される。次いで、細菌をＰＦＡにより固定し、ＰＢＳにより広範囲に洗浄し、免疫化に使用するまで−８０℃において保存した。
【０２３４】
１群当たり３匹のマウスを、ＰＢＳ中の１×１０８の細菌により腹腔内免疫化した。マウスは、１週間の間隔において１〜２回のブースターを受けた。最後のブーストから７日後に、血清を回収し、ＨＳＶ−２中和アッセイにおいて分析した。９６ウェル丸底プレートの血漿又は血清試料について５倍の連続希釈液を調製し、次いで５０ＰＦＵのＨＳＶ−２（株３３３）を各ウェルに添加した。プレートを覆い、３７℃において１時間インキュベートした。２００μｌのウイルス血清混合物を、４８ウェル組織培養プレート中で増殖させたベロ細胞の２つのウェルに移し、３７℃において１時間インキュベートした。次いで、３００μｌの２％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭを各ウェルに添加し、プレートを３７℃において４８時間インキュベートした。ウイルスプラークを可視化するために、プレートをクリスタルバイオレットにより染色した。
【０２３５】
【表１８】
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【０２３６】
免疫原性アッセイＩＩＩ（重複ペプチドプール）［プロトコルＦ］
マウスを、ｇＬ２並びにＲＳ１．３．１及びＲＳ１．３．２によりコードされるＩＣＰ４断片の全配列に及ぶプールされた重複ペプチド（ＯＬＰ）２μｇ／マウスにより免疫化した。ＯＬＰは、１マウス当たり１００μｌの総容量にＴｉｔｅｒＭａｘアジュバント（Ａｌｅｘｉｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ）中で製剤化し、アジュバントは、皮下用量の１／３を占めた。マウスを、０日目に免疫化し、６日目にブーストし、脾臓及び血液を１１日目に回収した。単一の細胞懸濁液を脾臓から調製し、赤血球を溶解させた。次いで、脾細胞懸濁液を半分に分割した。初めの半分を、ＡＰＣ、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞に分け；ＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴプレートの１ウェル当たり２０００００個のＴ細胞を播種し、１０００００個のＡＰＣ並びに免疫化に対応するＯＬＰプール、無関連ペプチド、陽性及び陰性対照により刺激した。細胞を、プレート中で一晩インキュベートし、その後にプレートを発色させ、ウェルごとにスポットをカウントした。各脾細胞懸濁液の残りの半分を、分けられていない脾細胞（４０００００個／ウェル）として行い、ペプチドによりパルスし、上記のとおりアッセイした。
【０２３７】
例示的結果を、免疫化群当たりの応答の大きさとして図２Ａ及びＢに示す。
【０２３８】
１及び２つの抗原を用いたワクチン接種［プロトコルＧ］
例示的試験１．Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるｇＤ２ΔＴＭＲ及びｇＤ２ΔＴＭＲとＩＣＰ４の免疫原性
精製タンパク質をアジュバントと混合し、未感作マウス中に免疫化してタンパク質抗原に対するＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答を作製する能力を評価した。簡単に述べると、抗原単独（ｇＤ２ΔＴＭＲ（５μｇ））又は抗原の組み合わせ（ｇＤ２ΔＴＭＲ及びＩＣＰ４．２（１０μｇ））をアジュバント（１２μｇ用量のＩＳＣＯＭマトリックスとキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンマトリックスＡ及びＣの８２：１８の混合物）と混合し、９日間隔で２回、マウスに皮下投与した。第２の免疫化から７日後に、マウスを安楽死させ、エクスビボＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴアッセイのために脾臓を摘出した。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗体被覆磁気ビーズを使用して濃縮し、次いで、９６ウェルプレート中のＩＦＮ−γ特異的抗体被覆膜上で共培養した。ＡＰＣは、特異的又は非特異的精製タンパク質（上記）によりパルスし、ｘ線照射器により照射した未感作脾細胞であった。Ｔ細胞及びＡＰＣの共培養から１８時間後、捕捉されたＩＦＮγをビオチン化二次ＩＦＮ−γ特異的抗体により検出し、セイヨウワサビペルオキシダーゼ及び３−アミノ−９−エチルカルバゾール基質により可視化した。データは、各群当たり３匹のマウスの、２×１０５個のＴ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位数±標準偏差として記録する。図３は、各群当たり３匹のマウスの、２×１０５個のＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の数±標準偏差を示す。図３Ａ及びＢに示すとおり、ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の数は、ｇＤ２ΔＴＭＲ抗原単独と比較して、ＩＣＰ４．２と組み合わせたｇＤ２ΔＴＭＲ抗原により免疫化されたマウスにおいて増加する。
【０２３９】
例示的試験２．ｇＤ２及びＩＣＰ４．２の組み合わせとアジュバント免疫化は、マウスにおける疾患症状及び死亡率を低減した
ｇＤ２との組み合わせにおけるＩＣＰ４．２タンパク質とアジュバントによる免疫化後に防御免疫を引き起こす能力を、致死ＨＳＶ−２誘発マウスモデルにおいて評価した。簡単に述べると、１群当たり８匹のＣ５７ＢＬ／６マウスを、ｇＤ２（２μｇ）若しくはＩＣＰ４．２（１０μｇ）とアジュバントにより個々に、又は両方の抗原の組み合わせとアジュバントにより免疫化した。製剤を、９日間隔で２回、首筋に皮下投与した。ウイルス感染の５日前に発情周期をデポ・プロベラにより同期させ、二次免疫化の７日後に動物を、ＬＤ５０の２０倍量のＨＳＶ−２株３３３により膣内誘発した。疾患症状を、感染後にスコアを付け、生存動物をモニタリングした。疾患の重症度のスコアは、以下のとおりであった：０＝無症状、１＝赤み、２＝赤み及び腫れ、３＝ヘルペス性病変、４＝重度の潰瘍又は片側性麻痺、並びに５＝両側性麻痺又は死亡。
【０２４０】
【表１９】
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【０２４１】
例示的試験３．ｇＤ２ΔＴＭＲ及びＩＣＰ４．２の組み合わせとアジュバントの免疫化は、マウスにおける疾患症状及び死亡率を低減した
マウスをｇＤ２ΔＴＭＲとＩＣＰ４．２抗原の組み合わせにより免疫化し、上記のとおり誘発した。抗原の組み合わせとアジュバントにより免疫化されたマウスは、アジュバントとともにｇＤ２ΔＴＭＲを受けた動物と比較して、ウイルス誘発から１０日後の平均疾患スコアが低いことを示した。
【０２４２】
【表２０】
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【０２４３】
例示的試験４．ｇＤ２及びＩＣＰ４．２の組み合わせとアジュバントの免疫化は、ＨＳＶ−２感染モルモットに治療投与した場合の再発病変の重症度を低減した
抗原とアジュバントによる治療免疫化後の感染モルモットにおけるＨＳＶ−２再活性化に影響を及ぼす能力を評価した。簡単に述べると、雌Ｈａｒｔｌｅｙモルモットを、５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−２株ＭＳにより膣内感染させ、原発性疾患について１４日間モニタリングし、次いで免疫化群（Ｎ＝１５）に無作為化した。動物を、抗原（１５μｇ）とアジュバント（５０μｇ）又はアジュバント単独、又はビヒクル対照により感染後１４、２１、及び３５日目の３回皮下免疫化し、局所疾患の重症度について毎日スコアを付けた。スコア付けの体系は、以下のとおりであった：０＝無症状、１＝赤み、２＝単一の病変、３＝大きい病変又は融合病変、４＝重度の潰瘍又は片側性麻痺、及び５＝両側性麻痺又は死亡。
【０２４４】
表１６は、モルモットが急性疾患から回復した後の各週についての平均再発病変スコアとしてデータを示す。ｇＤ２及びＩＣＰ４．２抗原の組み合わせにより治療されたモルモットは、アジュバントとともに個々の抗原を受けた動物と比較して、最後の免疫化から７日目（４２日目）及び１４日目（４９日目）の平均病変スコアの低減を示した。
【０２４５】
【表２１】
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【０２４６】
例示的試験５．ｇＤ２ΔＴＭＲ及びＩＣＰ４．２の組み合わせとアジュバントの免疫化は、ＨＳＶ−２感染モルモットに治療投与した場合の再発病変の重症度を低減した
抗原とアジュバントによる治療免疫化後の感染モルモットにおけるＨＳＶ−２再活性化に影響を及ぼす能力を評価した。雌Ｈａｒｔｌｅｙモルモットに、５×１０５ｐｆｕのＨＳＶ−２株ＭＳにより膣内チャレンジして生殖管感染を確立した。動物を、感染後１日目に膣スワブにより感染についてモニタリングし、感染後３から１４日目に急性疾患についてモニタリングした。１４日目、原発性疾患の消散後、動物を１２の群に無作為化し、抗原（１５μｇ用量における各ＨＳＶ−２ポリペプチド）とアジュバント（５０μｇ用量のＩＳＣＯＭマトリックスとキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンマトリックスＡ及びＣの９１：９の混合物）により皮下免疫化した。各群は、感染後１４、２１、及び３５日目に合計３回のワクチン接種を受けた。生殖器スワブをワクチン接種期間中に回収してウイルス排出をモニタリングし、毎日観察を記録した。症状を、重症度に基づいた０から４のスケールに基づきスコア付けした：０＝無症状；１＝赤み又は腫れ；２＝少数の小水疱；３＝いくつかの大水疱；４＝浸軟を伴ういくつかの大水疱。加えて、症状が上記のスコア間の重症度の中間の病変を有する動物には、０．５、１．５、２．５、又は３．５のスコアを付けた。表１７は、モルモットが急性疾患から回復した後の各週についての平均再発病変スコアとしてデータを示す。ｇＤ２ΔＴＭＲ及びＩＣＰ４．２抗原の組み合わせにより治療されたモルモットは、アジュバントとともに個々の抗原を受けた動物と比較して、最後の免疫化後の平均病変スコアの低減を示した。
【０２４７】
【表２２】
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【０２４８】
例示的試験６．Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるｇＤ２ΔＴＭＲ、ＩＣＰ４．２、ｇＤ２ΔＴＭＲとＩＣＰ４．２、ｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＵＬ４０タンパク質、及びｇＬ２ｓ  ｖ．２とＵＬ４０タンパク質の免疫原性
精製タンパク質をアジュバントと混合し、未感作マウス中に免疫化して、タンパク質抗原に対する両方の抗体応答並びにＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答を作製する能力を評価した。簡単に述べると、抗原単独又は抗原の組み合わせをアジュバント（ＩＳＣＯＭマトリックスとキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンマトリックスＡ及びＣの９１：９の混合物）と混合し、２１日間隔で２回、マウスに皮下投与した。第２の免疫化から７日後、マウスを安楽死させた。血液を回収して上記のダイレクトタンパク質ＥＬＩＳＡアッセイにより抗原特異的抗体力価を測定し、エクスビボＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴアッセイのために脾臓を摘出した。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗体被覆磁気ビーズを使用して濃縮し、次いで、９６ウェルプレート中のＩＦＮ−γ特異的抗体被覆膜上で共培養した。ＡＰＣは、特異的又は非特異的精製抗原（上記）によりパルスし、ｘ線照射器により照射した未感作脾細胞であった。Ｔ細胞及びＡＰＣの共培養から１８時間後、捕捉されたＩＦＮ−γをビオチン化二次ＩＦＮ−γ特異的抗体により検出し、セイヨウワサビペルオキシダーゼ及び３−アミノ−９−エチルカルバゾール基質により可視化した。データは、各群当たり３匹のマウスの、２×１０５個のＴ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位数±標準偏差として記録する。
【０２４９】
免疫化マウスの抗原特異的血清抗体力価は、ダイレクトタンパク質ＥＬＩＳＡにより測定した。血清は、上記の回収された血液から処理し、−８０℃において貯蔵した。ＥＬＩＳＡプレートを４℃で一晩、０．１Ｍカーボネート緩衝液ｐＨ９．５中５μｇの全タンパク質によりコーティングした。ＴＢＳ＋０．０５％ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）−２０（ＴＢＳ−Ｔ）でプレートを洗浄し、ＴＢＳ−Ｔ＋１％ウシ血清アルブミンで１時間ブロッキングした。血清試料を段階希釈し、抗原被覆ウェルにおいて室温で２時間インキュベートした。プレートを洗浄し、１：１０，０００希釈のヤギ抗マウスアルカリホスファターゼ（ＡＰ）コンジュゲート抗ＩｇＧにより１時間プローブした。ＡＰ活性の検出は、ｐ−ニトロフェニルリン酸（ｐＮＰＰ；Ｓｉｇｍａｆａｓｔ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を添加することによって達成し、反応は３Ｎ  ＮａＯＨにより吸光度の読み取り４０５ｎｍで停止させた。段階希釈の直線部分を外挿し、曲線の直線部分がバックグラウンドのカットオフと交わる希釈度としてエンドポイントを定義することにより、エンドポイント力価を計算した。データの計算に使用したカットオフは、未感作マウスからの陰性対照血清の値の２倍であった。
【０２５０】
図４Ａ及びＢは、ｇＤ２ΔＴＭＲ、ＩＣＰ４．２、ｇＤ２ΔＴＭＲとＩＣＰ４、ｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＵＬ４０タンパク質、及びｇＬ２ｓ  ｖ．２とＵＬ４０タンパク質による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（パネルＡ）又はＣＤ８＋（パネルＢ）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の数を説明する例示的グラフを示す。マウスを個々の抗原により、又は以下の組み合わせ：ｇＤ２ΔＴＭＲとＩＣＰ４．２、ｇＬ２ｓ  ｖ．２とＵＬ４０タンパク質において免疫化した場合ＩＣＰ４．２、ｇＤ２ΔＴＭＲ、ＵＬ４０及びｇＬ２に特異的な強いＴ細胞応答が観察された。
【０２５１】
図５は、ｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＵＬ４０タンパク質、及びｇＬ２ｓ  ｖ．２とＵＬ４０タンパク質に対するＩｇＧ１及びＩｇＧ２ｃ抗体力価を説明する。マウスをコグネイト抗原により個々に又は組み合わせにおいて免疫化した場合、ｇＬ２ｓ  ｖ．２及びＵＬ４０タンパク質に対する抗体が観察された。抗原特異的抗体のＩｇＧ１及びＩｇＧ２ｃサブタイプがすべての抗原について検出された。
【０２５２】
例示的試験７．Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．２、ＩＣＰ４．２とｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．９、ＩＣＰ４．９とｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．５、及びＩＣＰ４．５とｇＬ２ｓ  ｖ．２の免疫原性
例示的試験６に記載のとおり、精製タンパク質をアジュバントと混合し、未感作マウス中に免疫化してタンパク質抗原に対する両方の抗体応答並びにＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞応答を作製する能力を評価したが、ＡＰＣを示された精製タンパク質、又は示されたタンパク質を及ぶ重複ペプチドのプールによりパルスした。マウスは、２つの異なる用量におけるｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．５、２つの異なる用量におけるＩＣＰ４．９、ＩＣＰ４．２、又はＩＣＰ４．５、ＩＣＰ４．９、及びＩＣＰ４．２の組み合わせとｇＬ２ｓ  ｖ．２を受けた。
【０２５３】
図６Ａ及びＢは、ｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．２、ＩＣＰ４．２とｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．９、ＩＣＰ４．９とｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．５、及びＩＣＰ４．５とｇＬ２ｓ  ｖ．２による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（パネルＡ）又はＣＤ８＋（パネルＢ）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の平均数を説明する例示的グラフを示す。強いｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．２、ＩＣＰ４．９、及びＩＣＰ４．５のＴ細胞応答が得られた。タンパク質間を重複する配列に起因する一部の予想された交差反応性が観察された。予想されない交差反応性がｇＬ２ｓ  ｖ．２とＩＣＰ４．５との間で観察された。
【０２５４】
図６Ｃ及びＤは、精製タンパク質によってではなく、示されたタンパク質に及ぶ重複ペプチドのプールによりＡＰＣをパルスしたことを除き図６Ａ及びＢと同様にｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．２、ＩＣＰ４．２とｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．９、ＩＣＰ４．９とｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．５、及びＩＣＰ４．５とｇＬ２ｓ  ｖ．２による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（パネルＣ）又はＣＤ８＋（パネルＤ）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の平均数を説明する例示的グラフを示す。
【０２５５】
図７は、ｇＬ２ｓ  ｖ．２、ＩＣＰ４．５、ｇＬ２ｓ  ｖ．２とＩＣＰ４．５、ＩＣＰ４．９、ｇＬ２ｓ  ｖ．２とＩＣＰ４．９、ＩＣＰ４．２、及びｇＬ２ｓ  ｖ２とＩＣＰ４．２に対する抗体力価を説明する例示的グラフを示す。マウスは、ＩＣＰ４．２、ＩＣＰ４．９、及びＩＣＰ４．５に対して強い抗体応答を開始した。この抗原をＩＣＰ４断片のそれぞれと対にした場合、弱いｇＬ２ｓ  ｖ．２特異的抗体応答が観察された。
【０２５６】
実施例３
インビボデータ：タンパク質抗原とＤＮＡ、及びＤＮＡのみを用いたマウス予防ワクチン接種試験
例示的試験１及び２。ｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質、ｐＵｓ６  ＤＮＡ（ｇＤ２をコード）、及びｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）による免疫化とｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質ブーストは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける疾患症状及び死亡率を低減した
これらの試験において、０及び２１日目Ｃ５７ＢＬ／６マウスの群を１０μｇのｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質とアジュバント（２４μｇ用量のＩＳＣＯＭマトリックスとキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）サポニンマトリックスＡ及びマトリックスＣの９１：９の混合物）、又はアジュバントとしての５０μｇのマウスＩＬ−１２をコードするＤＮＡプラスミド（ｐＩＬ−１２）と組み合わせた１００μｇのｇＤ２をコードするＤＮＡプラスミド（ｐＵｓ６）により筋肉内免疫化した。別の群は、０日目に、プライム免疫化として１００μｇのｇＬ２をコードするＤＮＡプラスミド（ｐＵＬ１）及び５０μｇのｐＩＬ−１２を受け、２１日目にブーストのために１０μｇのｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質とＩＳＣＯＭアジュバントを受けた。対照動物は、５０μｇのｐＩＬ−１２又はＩＳＣＯＭアジュバントのみを受けた。動物を、最後の免疫化から７日後に１０４ＰＦＵのＨＳＶ−２株３３３により膣内誘発した。一部の場合において、未誘発動物のサブセットを免疫原性実験のための誘発の日に安楽死させてワクチンに対するＴ細胞及び抗体応答をモニタリングした（以下の例示的試験３及び４に記載のとおり）。すべての誘発したマウスを、罹患率（臨床スコア）及び死亡率、並びに体重についてモニタリングし、上記のとおりウイルス排出評価のために膣スワブを上記感染後１から１０日目の間に回収した。臨床スコアを記録し、マウスの実験群及び対照群にわたり比較した。
【０２５７】
表１８及び表１９は、２つの別個の予防ワクチン接種試験の例示的結果を説明する。
【０２５８】
【表２３】
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【０２５９】
【表２４】
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【０２６０】
例示的試験３。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）とｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；ｇＬ２タンパク質；及びｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）とｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質ブーストの免疫原性
Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、上記の例示的試験１及び２に記載のとおり、ｇＤ２、ＩＣＰ４又はｇＬ２をコードするプラスミドＤＮＡにより、ＩＬ−１２又はｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質をコードするプラスミドＤＮＡとともに、ＩＳＣＯＭを用いて又は用いずに免疫化した。２つの群を、ｇＬ２をコードするプラスミドＤＮＡ及びＩＬ１２をコードするプラスミドＤＮＡによりプライミングし、ｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質によりブーストした。加えて、マウスを、ｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質及びＩＣＰ４プラスミドＤＮＡの組み合わせによりＩＬ１２プラスミドとともに免疫化した。最後の免疫化から７日後、血液を回収して下記のダイレクトタンパク質ＥＬＩＳＡアッセイにより抗原特異的抗体力価を測定し、エクスビボＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴアッセイのために脾臓を摘出した。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を、抗体被覆磁気ビーズを使用して濃縮し、次いで、９６ウェルプレート中のＩＦＮ−γ特異的抗体被覆膜上で共培養した。ＡＰＣは、示されたタンパク質に及ぶ重複ペプチドのプールによりパルスし、ｘ線照射器により照射した未感作脾細胞であった。Ｔ細胞及びＡＰＣの共培養から１８時間後、捕捉されたＩＦＮ−γをビオチン化二次ＩＦＮ−γ特異的抗体により検出し、セイヨウワサビペルオキシダーゼ及び３−アミノ−９−エチルカルバゾール基質により可視化した。データは、各群当たり３匹のマウスの、２×１０５個のＴ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位数±標準偏差として記録する。
【０２６１】
免疫化マウスの抗原特異的血清抗体力価は、ダイレクトタンパク質ＥＬＩＳＡにより測定した。血清は、上記の回収された血液から処理し、−８０℃において貯蔵した。ＥＬＩＳＡプレートを４℃において０．１Ｍカーボネート緩衝液、ｐＨ９．５中の５μｇの全タンパク質により一晩被覆した。プレートをＴＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０（ＴＢＳ−Ｔ）により洗浄し、ＴＢＳ−Ｔ＋１％ウシ血清アルブミンにより１時間ブロッキングした。血清試料を段階希釈し、抗原被覆ウェル中で室温において２時間インキュベートした。プレートを洗浄し、１：１００００の希釈のヤギ抗マウスアルカリホスファターゼ（ＡＰ）コンジュゲート抗ＩｇＧにより１時間プロービングした。ＡＰ活性の検出は、ｐ−ニトロフェニルホスフェート（ｐＮＰＰ；Ｓｉｇｍａｆａｓｔ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の添加により達成し、反応は、３ＮのＮａＯＨにより停止させ、吸光度を４０５ｎｍにおいて読み取った。エンドポイント力価は、段階希釈の直線部分の外挿及び曲線の直線部分がバックグラウンドのカットオフと交わる希釈度としてのエンドポイントの定義により計算した。データ計算に使用されるカットオフは、未感作マウスからの陰性対照血清の値の２倍であった。
【０２６２】
図８Ａ及びＢは、ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）とｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）と、ｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質ブースト；及びｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（パネルＡ）又はＣＤ８＋（パネルＢ）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の平均数を説明する例示的グラフを示す。強いｇＬ２−又はｇＬ２ｓ  ｖ．２特異的Ｔ細胞応答が、プライム及びブースト免疫化のためにｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質とＩＳＣＯＭアジュバントを受けたマウスにおいて観察された。さらに強い応答が、ｐＵＬ１及びｐＩＬ−１２  ＤＮＡによりプライミングし、ｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質によりブーストしたマウスにおいて観察された。ｐＵＬ１  ＤＮＡをプライミング及びブーストに使用した場合、弱いＴ細胞応答が観察された。極めて低いレベルのＩＣＰ４特異的Ｔ細胞が検出された。
【０２６３】
図９は、ＩＣＰ４．２及びｇＬ２ｓ  ｖ．２（さらにｇＤ２ΔＴＭＲ）に対する全ＩｇＧ抗体力価を説明する例示的グラフを示す。ｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質によるプライム及び／又はブーストが、ｇＬ２ｓ  ｖ．２特異的抗体の発生に要求された。
【０２６４】
例示的試験４．Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）とｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質ブースト；ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）；ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）とｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；及びｐＵｓ６  ＤＮＡ（ｇＤ２をコード）の免疫原性
Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、上記の例示的試験１及び２において上記のとおり、ｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質とアジュバント；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）とｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質とアジュバントブースト；ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）；ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）とｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；及びｐＵｓ６  ＤＮＡ（ｇＤ２をコード）により免疫化した。最後の免疫化から７日後、上記の例示的試験３に記載のとおりエクスビボＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴアッセイのために脾臓を摘出した。
【０２６５】
図１０Ａ及びＢは、ｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；ｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）と、ｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質ブースト；ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）；ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）とｐＵＬ１  ＤＮＡ（ｇＬ２をコード）；及びｐＵｓ６  ＤＮＡ（ｇＤ２をコード）による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（パネルＡ）又はＣＤ８＋（パネルＢ）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の数を説明する例示的グラフを示す。強いｇＬ２−又はｇＬ２ｓ  ｖ．２特異的Ｔ細胞応答が、ｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質とＩＳＣＯＭアジュバントを受けたマウス又はプライム及びブースト免疫化のためにｐＵＬ１及びｐＩＬ１２  ＤＮＡプラスミドを受けたマウスにおいて観察された。応答は、ｐＵＬ１及びｐＩＬ−１２  ＤＮＡプラスミドによりプライミングし、次いでｇＬ２ｓ  ｖ．２タンパク質とＩＳＣＯＭアジュバントによりブーストしたマウスにおいてさらに増強された。
【０２６６】
例示的試験５．ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）、ｐＲＳ１．９  ＤＮＡ（ＩＣＰ４．９をコード）、及びｐＵｓ４  ＤＮＡ（ｇＧ２をコード）と、対応するＤＮＡブースト；ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）、ｐＲＳ１．９  ＤＮＡ（ＩＣＰ４．９をコード）、及びｐＵｓ４  ＤＮＡ（ｇＧ２をコード）とＩＣＰ４．２ブーストの免疫原性
Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、上記の例示的試験１及び２に記載のとおり、ＩＣＰ４、ＩＣＰ４．９、ｇＧ２をコードするプラスミドＤＮＡ又は空のプラスミドにより、マウスＩＬ−１２をコードするプラスミドとの組み合わせにおいて免疫化した。次いで、マウスを３つの群に分割した。第１の群のマウスを、それらをプライミングした同一の手法で２１日目にブーストした。第２の群のマウスを、２１日目にＩＣＰ４．２タンパク質とＩＳＣＯＭアジュバントによりブーストした。第３の群のマウスを、それらをプライミングした同一の手法で２１及び３５日目にブーストした。最後の免疫化から７日後、上記例示的試験３に記載のとおりエクスビボＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴアッセイのために脾臓を摘出した。
【０２６７】
図１１は、ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）、ｐＲＳ１．９  ＤＮＡ（ＩＣＰ４．９をコード）、及びｐＵｓ４  ＤＮＡ（ｇＧ２をコード）と、２１日目の対応するＤＮＡブースト（第１のマウスの群）又はＩＣＰ４．２タンパク質ブースト（第２のマウスの群）による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（左パネル）又はＣＤ８＋（右パネル）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の数を説明する例示的グラフを示す。強いＩＣＰ４．２特異的Ｔ細胞応答が、ｐＲＳ１又はｐＲＳ１．９  ＤＮＡによりプライミングし、次いでＩＣＰ４．２タンパク質とＩＳＣＯＭアジュバントによりブーストしたマウスにおいて観察された。
【０２６８】
図１２は、ｐＲＳ１  ＤＮＡ（ＩＣＰ４をコード）及びｐＵｓ４  ＤＮＡ（ｇＧ２をコード）と、２１及び３５日目の対応するＤＮＡブースト（第３のマウスの群）による免疫化後の、２×１０５個のＣＤ４＋（左パネル）又はＣＤ８＋（右パネル）Ｔ細胞当たりのＩＦＮ−γスポット形成単位の数を説明する例示的グラフを示す。
【０２６９】
配列
配列番号１＝ＩＣＰ４
【化１】
0006055776.tif 000026
配列番号２＝構築物ＲＳ１．２によりコードされるＩＣＰ内部断片（ＩＣＰ４．２）
【化２】
0006055776.tif 000027
配列番号３＝細胞質性ｇＬ２
【化３】
0006055776.tif 000028
配列番号４＝構築物ＵＳ６ΔＴＭＲによりコードされるｇＤ２内部欠失ｄＤ２ΔＴＭＲ
【化４】
0006055776.tif 000029
配列番号５＝ＵＳ６によりコードされるｇＤ２についての予測配列
【化５】
0006055776.tif 000030
配列番号６＝ＲＬ１によりコードされるＩＣＰ３４．５
【化６】
0006055776.tif 000031
配列番号７＝ＲＬ２によりコードされるＩＣＰ０
【化７】
0006055776.tif 000032
配列番号８＝構築物ＲＳ１．１によりコードされるＩＣＰ４内部断片（＃１〜４００）
【化８】
0006055776.tif 000033
配列番号９＝構築物ＲＳ１．３．１によりコードされるＩＣＰ４内部断片（＃７５０〜１０２４）
【化９】
0006055776.tif 000034
配列番号１０＝構築物ＲＳ１．３．２によりコードされるＩＣＰ４内部断片（＃１００８〜１３１９）
【化１０】
0006055776.tif 000035
配列番号１１＝構築物ＲＳ１．３によりコードされるＩＣＰ４内部断片（＃７５０〜１３１９）
【化１１】
0006055776.tif 000036
配列番号１２＝構築物ＲＳ１．４によりコードされるＩＣＰ４内部断片（＃３４１〜８８３）
【化１２】
0006055776.tif 000037
配列番号１３＝構築物ＲＳ１．５によりコードされるＩＣＰ４内部断片（＃７７５〜１３１８）
【化１３】
0006055776.tif 000038
配列番号１４＝構築物ＲＳ１．６によりコードされるＩＣＰ４内部断片（＃２１０〜１３１８）
【化１４】
0006055776.tif 000039
配列番号１５＝構築物ＲＳ１．７によりコードされるＩＣＰ４内部断片（＃３９１〜５４４の欠失）
【化１５】
0006055776.tif 000040
配列番号１６＝構築物ＲＳ１．８によりコードされるＩＣＰ４内部断片（＃７８６〜８６８の欠失）
【化１６】
0006055776.tif 000041
配列番号１７＝ＵＬ２によるウラシルＤＮＡグリコシラーゼについての予測配列
【化１７】
0006055776.tif 000042
配列番号１８＝ＵＬ１１によりコードされるテグメントタンパク質についての予測配列
【化１８】
0006055776.tif 000043
配列番号１９＝構築物ＵＬ１ｓ  ｖ．１によりコードされるｇＬ２分泌ｖ．１
【化１９】
0006055776.tif 000044
配列番号２０＝構築物ＵＬ１９ａによりコードされるＶＰ５についての予測配列
【化２０】
0006055776.tif 000045
配列番号２１＝構築物ＵＬ１９ΔＴＥＶによりコードされるＶＰ５
【化２１】
0006055776.tif 000046
配列番号２２＝ＵＬ３６によりコードされるＩＣＰ１／２についての予測配列
【化２２】
0006055776.tif 000047
配列番号２３＝構築物ＵＬ３６．３．４．１によりコードされるＩＣＰ１／２内部断片
【化２３】
0006055776.tif 000048
配列番号２４＝構築物ＵＬ３６．４．２．５によりコードされるＩＣＰ１／２内部断片
【化２４】
0006055776.tif 000049
配列番号２５＝ＵＬ４０によりコードされるレダクターゼについての予測配列
【化２５】
0006055776.tif 000050
配列番号２６＝ＵＳ１２によりコードされるＩＣＰ４７
【化２６】
0006055776.tif 000051
配列番号２７＝ＵＬ１０によりコードされるｇＭ２
【化２７】
0006055776.tif 000052
配列番号２８＝ＵＬ１５によりコードされる開裂／パッケージングタンパク質についての予測配列
【化２８】
0006055776.tif 000053
配列番号２９＝ＵＬ２６．５によりコードされるＩＣＰ３５についての予測配列
【化２９】
0006055776.tif 000054
配列番号３０＝ＵＬ３０によりコードされるポリメラーゼについての予測配列
【化３０】
0006055776.tif 000055
配列番号３１＝ＵＬ５によりコードされるヘリカーゼ／プライマーゼ複合体についての予測配列
【化３１】
0006055776.tif 000056
配列番号３２＝ＵＬ８によりコードされるヘリカーゼ／プライマーゼ複合体についての予測配列
【化３２】
0006055776.tif 000057
配列番号３３＝ＵＬ１５．５によりコードされる未知タンパク質についての予測配列
【化３３】
0006055776.tif 000058
配列番号３４＝ＵＬ３２によりコードされるパッケージングタンパク質についての予測配列
【化３４】
0006055776.tif 000059
配列番号３５＝構築物ＵＬ３６．４．２によりコードされるＩＣＰ１／２断片についての予測配列
【化３５】
0006055776.tif 000060
配列番号３６＝ＵＬ５４によりコードされるＩＣＰ２７についての予測配列
【化３６】
0006055776.tif 000061
配列番号３７＝ＵＬ４９．５によりコードされるウイルス粒子タンパク質
【化３７】
0006055776.tif 000062
配列番号３８＝ＵＳ４によりコードされるｇＧ２
【化３８】
0006055776.tif 000063
配列番号３９＝ＲＳ１
【化３９】
0006055776.tif 000064
【化４０】
0006055776.tif 000065
【化４１】
0006055776.tif 000066
配列番号４０＝構築物ＵＳ６ΔＴＭＲ
【化４２】
0006055776.tif 000067
配列番号４１＝ＲＬ１
【化４３】
0006055776.tif 000068
配列番号４２＝ＲＬ２
【化４４】
0006055776.tif 000069
配列番号４３＝構築物ＵＬ３６．３．４．１
【化４５】
0006055776.tif 000070
配列番号４４＝構築物ＵＬ３６．４．２．５
【化４６】
0006055776.tif 000071
配列番号４５＝ＵＳ１２
【化４７】
0006055776.tif 000072
配列番号４６＝ＵＳ４
【化４８】
0006055776.tif 000073
配列番号１１７＝構築物ＲＳ１．２
【化４９】
0006055776.tif 000074
配列番号１１８＝ＵＬ１
【化５０】
0006055776.tif 000075
配列番号１１９＝構築物ＵＬ１ｓ
【化５１】
0006055776.tif 000076
配列番号１２０＝構築物ＵＬ１９ΔＴＥＶ
【化５２】
0006055776.tif 000077
【化５３】
0006055776.tif 000078
配列番号１２１＝構築物ＲＳ１．１
【化５４】
0006055776.tif 000079
配列番号１２２＝構築物ＲＳ１．３．１
【化５５】
0006055776.tif 000080
配列番号１２３＝構築物ＲＳ１．３．２
【化５６】
0006055776.tif 000081
配列番号１２４＝構築物ＲＳ１．３
【化５７】
0006055776.tif 000082
配列番号１２５＝構築物ＲＳ１．４
【化５８】
0006055776.tif 000083
配列番号１２６＝構築物ＲＳ１．５
【化５９】
0006055776.tif 000084
配列番号１２７＝構築物ＲＳ１．６
【化６０】
0006055776.tif 000085
【化６１】
0006055776.tif 000086
配列番号１２８＝構築物ＲＳ１．７
【化６２】
0006055776.tif 000087
【化６３】
0006055776.tif 000088
配列番号１２９＝構築物ＲＳ１．８
【化６４】
0006055776.tif 000089
【化６５】
0006055776.tif 000090
配列番号１３０＝Ｈｉｓタグ
ＨＨＨＨＨＨ
配列番号１３１＝タグ
ＭＳＹＹＨＨＨＨＨＨ
配列番号１３２＝分泌シグナル
【化６６】
0006055776.tif 000091
配列番号１３３＝ＵＬ４９．５
【化６７】
0006055776.tif 000092
配列番号１３４＝ＵＬ１０
【化６８】
0006055776.tif 000093
配列番号１３５＝ＵＬ２によりコードされるウラシルＤＮＡグリコシラーゼ
【化６９】
0006055776.tif 000094
配列番号１３６＝構築物ＵＬ１ｓ  ｖ．２によりコードされるｇＬ２分泌ｖ．２
【化７０】
0006055776.tif 000095
配列番号１３７＝ＵＬ１ｓ  ｖ．２
【化７１】
0006055776.tif 000096
配列番号１３８＝構築物ＲＳ１．９によりコードされるＩＣＰ４内部断片（＃３９１−５４４及び＃７８６−８２１の欠失）
【化７２】
0006055776.tif 000097
配列番号１３９＝構築物ＲＳ１．１０によりコードされるＩＣＰ４内部断片（＃３９１−５０８及び＃７８６−８２１の欠失）
【化７３】
0006055776.tif 000098
配列番号１４０＝構築物ＲＳ１．９
【化７４】
0006055776.tif 000099
【化７５】
0006055776.tif 000100
配列番号１４１＝構築物ＲＳ１．１０
【化７６】
0006055776.tif 000101
【化７７】
0006055776.tif 000102
【０２７０】
均等物及び範囲
当業者は、本明細書に記載される本発明の具体的な実施形態の多くの均等物を認識し、又はルーチン程度の実験を用いて確認することができるであろう。本発明の範囲は上記の説明に限定されることは意図されず、むしろ添付の特許請求の範囲に記載されるとおりである。
【０２７１】
特許請求の範囲において、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」などの冠詞は、そうでない旨が示されない限り、又は他の形で文脈上明らかでない限り、１つではなく１つ以上を意味し得る。従って、例えば「細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」と言うとき、それは当業者に公知の１つ以上の細胞に対する参照を含むなどする。群の１つ以上の構成要素間に「又は」を含むクレーム又は説明は、そうでない旨が示されない限り、又は他の形で文脈上明らかでない限り、群の構成要素の１つ、２つ以上、又は全てが所与の物又は方法に存在する、それにおいて用いられる、又は他の形でそれに関連する場合を満たしているものと見なされる。本発明は、群のなかの正確に一つの構成要素が所与の物又は方法に存在する、それにおいて用いられる、又は他の形でそれに関連する実施形態を含む。本発明は、群の構成要素の２つ以上、又は全てが所与の物又は方法に存在する、それにおいて用いられる、又は他の形でそれに関連する実施形態を含む。さらに、本発明は、列挙されるクレームの１つ又は複数からの１つ以上の限定、要素、クローズ、記述的用語等が別のクレームに導入される全ての変形例、組み合わせ、及び並べ替えを包含することが理解されるべきである。例えば、別のクレームに従属する任意のクレームを、同じ基本クレームに従属する任意の他のクレームに見られる１つ以上の限定を含むように変更することができる。さらに、クレームが組成物について記載している場合、特に指示されない限り、又は矛盾若しくは不整合が生じるであろうことが当業者に明らかでない限り、本明細書に開示される任意の目的のために組成物を使用する方法が含まれ、及び本明細書に開示される作製方法のいずれか又は当該技術分野において公知の他の方法によって組成物を作製する方法が含まれることが理解されるべきである。
【０２７２】
例えばマーカッシュ群形式において、要素がリストとして提示される場合、それらの要素の部分的な群の各々もまた開示され、及びその群から任意の１つ又は複数の要素が取り除かれてもよいことが理解されるべきである。一般に、本発明又は本発明の態様が特定の要素、特徴等を含むものとして言及される場合、本発明の特定の実施形態又は本発明の態様は、かかる要素、特徴等からなる、又はそれらから本質的になることが理解されなければならない。簡潔にするため、本明細書でそれらの実施形態がこの言葉で（ｉｎ  ｈａｅｃ  ｖｅｒｂａ）具体的に記載されることはない。用語「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」はオープンであるものと意図され、さらなる要素又はステップの包含を許容することが注記される。
【０２７３】
範囲が示される場合、端点は含まれる。さらに、特に指示されない限り、又は他の形で文脈及び当業者の理解から明らかでない限り、範囲として表現される値は、本発明の異なる実施形態では、文脈上特に明確に指示されない限りその範囲の下限値の１０分の１単位までの記載される範囲内の任意の具体的な値又は部分的範囲をとり得ることが理解されるべきである。
【０２７４】
加えて、先行技術の範囲内に含まれる本発明の任意の特定の実施形態がクレームの任意の１つ以上から明示的に除外され得ることが理解されるべきである。かかる実施形態は当業者に公知であると見なされるため、除外が本明細書に明示的に記載されない場合であっても、それらは除外され得る。本発明の組成物の任意の特定の実施形態（例えば、任意の抗原、任意の投与方法、任意の予防的及び／又は治療的適用等）は、先行技術の存在が関係するか否かに関わらず、何らかの理由で、任意の１つ以上のクレームから除外され得る。
【０２７５】
上記で及びテキスト全体を通じて考察される文献は、単にそれらの開示が本願の出願日より前であるために提供される。本明細書のいかなる事項も、先行する開示であるという理由で本発明者らがかかる開示に先行する権利を有しないことを認めるものとして解釈されてはならない。
【０２７６】
他の実施形態
当業者は、上記が単に本発明の特定の好ましい実施形態を表すに過ぎないことを容易に理解するであろう。以下の特許請求の範囲に記載されるとおりの本発明の趣旨又は範囲から逸脱することなく、上記に記載される手順及び組成物に様々な変更及び改良を加えることができる。
【図１Ａ】
0006055776.tif 000103
【図１Ｂ】
0006055776.tif 000104
【図２Ａ】
0006055776.tif 000105
【図２Ｂ】
0006055776.tif 000106
【図３Ａ】
0006055776.tif 000107
【図３Ｂ】
0006055776.tif 000108
【図４Ａ】
0006055776.tif 000109
【図４Ｂ】
0006055776.tif 000110
【図５】
0006055776.tif 000111
【図６Ａ】
0006055776.tif 000112
【図６Ｂ】
0006055776.tif 000113
【図６Ｃ】
0006055776.tif 000114
【図６Ｄ】
0006055776.tif 000115
【図７】
0006055776.tif 000116
【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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