(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物
【化１】
0006055771.tif 000022
［式中、
ｎは６であり、
Ｒは−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、または−ＣＨ（ＯＨ）―であり、
ＢがＨのとき、Ａは、
【化２】
0006055771.tif 000023
であるか、または
ＡがＨのとき、Ｂは、
【化３】
0006055771.tif 000024
であり、
ここで、
ＹはＯ、Ｓ、ＮＨ、又はＣＨ２であり、かつ
ｐは３〜７である。］またはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項２】
Ｒが−Ｃ（Ｏ）−である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項３】
前記塩が、金属対イオンを含む塩基付加塩であり、該金属対イオンがナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムおよびリチウムからなる群から選択される、請求項１または２に記載の薬学的に許容し得る塩。
【請求項４】
前記化合物が下記化合物のいずれか１つまたはその酸の形態である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容し得る塩。
【表１】
0006055771.tif 000025
【請求項５】
前記化合物が化合物Ｉである、請求項４に記載の化合物またはその薬学的に許容し得る塩。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容し得る塩および薬学的に許容し得る担体を含む、医薬組成物。
【請求項７】
（ｉ）血液障害、（ｉｉ）炎症関連疾患、（ｉｉｉ）腎障害もしくは腎障害合併症、または（ｉｖ）線維症関連臓器機能不全の予防または治療のための、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記組成物が腎保護性組成物である、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記血液障害が貧血または好中球減少症である、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
対象の赤血球生成および／または血液生成を刺激するためのものである、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記腎障害が腎症である、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
対象の化学療法薬を用いた治療から生じる毒作用に対する腎保護のためのものである、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
対象の腎機能を改善するためのものである、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
クレアチニンのクリアランスまたは尿酸のクリアランスを改善するためのものである、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記炎症関連疾患が、免疫介在性炎症性疾患または自己免疫疾患であるか、あるいは関節炎、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、糸球体腎炎、脈管炎、乾癬性関節炎、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、強直性脊椎炎、シェーグレン症候群、スティル病、ブドウ膜炎、強皮症、筋炎、ライター症候群またはヴェゲナー症候群である、
請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記線維症関連臓器機能不全が、線維症関連腎臓機能不全、線維症関連心臓機能不全、線維症関連肺機能不全、線維症関連肝臓機能不全、線維症関連脳機能不全、腎症、糖尿病性腎症、心内膜心筋線維症、肺線維症、特発性肺線維症または肝硬変である、請求項７に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カルボン酸フェニルケトン化合物およびその薬学的な使用に関する。より具体的には、本発明は、同化合物を含む医薬組成物、ならびに対象の貧血症、好中球減少症、白血球減少症、炎症、および／または線維症の予防または治療のためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
血液障害
血液生成（hematopoiesis（hema=血液））とは、あらゆる種類の血液細胞の形成、発達、および分化のプロセスのことである。白血球および赤血球を含めて、あらゆる血液細胞成分が血液生成幹細胞から生じる。白血球（leukocytes）または白血球（white blood cells（ＷＢＣ））は、感染症および異物に対して体を防衛する免疫系の細胞を含有する。赤血球はヘモグロビンを含有する非有核で両凹面の円盤状の細胞であるが、この細胞は酸素の輸送に必要不可欠である。白血球数の減少が白血球減少症と呼ばれるのに対し、貧血症は、血液中の赤血球数、ヘモグロビン量、または濃厚赤血球体積が正常を下回る場合に存在する状態である。血液の障害およびいくつか種類がある白血球減少症および貧血症は、化学療法（例えば、化学療法によって発症する貧血症）および癌（例えば、癌関連貧血症）をはじめとするさまざまな根本原因によって生じ得る。そのため、血液生成を活性化し、化学療法および放射線療法によって誘導される骨髄抑制の望ましからざる副作用に対処するための新規の組成物および方法が求められている。
【０００３】
炎症
免疫介在性炎症性疾患（ＩＭＩＤ）とは、決定的な病因はないが炎症を引き起こす共通の炎症経路によって特徴づけられ、正常な免疫応答の異常調節に起因し得る、または誘発され得る一群の状態または疾患のことである。自己免疫疾患とは、体成分に対する体液性および／または細胞媒介性の免疫応答、またはそれより広い意味で自己に対する免疫応答が組織損傷に伴って生じるような一群の疾患または障害のうちのいずれかを指す。自己免疫疾患に対する現在の治療薬は、おおまかに言って２つのグループに分類することができ、自己に対する免疫反応を弱めるかまたは抑える薬物と、慢性炎症から発生する症状に対処する薬物とがある。さらに詳細に述べれば、自己免疫疾患（例えば、主として関節炎）に対する従来の治療法は、（１）アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、エトドラク、およびケトプロフェンなどの非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、（２）プレドニゾンおよびデキサメタゾンなどのコルチコステロイド、（３）メトトレキサート、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリンＡ、Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（商標）、Ｎｅｏｒａｌ（商標）、およびＦＫ５０６（タクロリムス）などの疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、（４）組み換えタンパクであるＲｅｍｉｃａｄｅ（商標）、Ｅｎｂｒｅｌ（商標）、およびＨｕｍｉｒａ（商標）などの生物製剤である。非常に多くの治療法が利用可能であるが、従来の治療薬は必ず有効というわけではない。さらに問題をはらむのは付随する毒性であり、これが慢性疾患に必要な長期使用を不可能にすることが多い。そのため、慢性的および非慢性的な自己免疫疾患をはじめとする炎症性疾患の治療に有用な化合物が求められている。
【０００４】
線維症および腎疾患
線維症とは、臓器または組織中の過剰な線維性結合組織の形成または発達のことであり、損傷組織の創傷治癒過程の一環として起こり得る。それは自然に解消されない過剰な形態の創傷治癒と考えることのできるものである。
【０００５】
線維症は皮膚にも発症し得るが、腎臓、心臓、肝臓、および脳などの臓器にも発症することがある。臓器であれば、線維症は多くの場合、硬化症とそれに続く罹患臓器の停止に先立って発症する。もちろん、完全な臓器不全の最もよくみられる帰結は死である。したがって、例えば肺線維症が、疾病率および死亡率のおもな原因である。これは高用量化学療法（例えば、ブレオマイシン）および骨髄移植の使用に伴って発症するものである。特発性肺線維症（ＩＰＦ）は、平均生存期間が症状発現後４〜５年の肺線維症である。現在のところ、人間のニーズのために承認された有効な抗線維症薬はない。そのため、線維症の治療に有用な化合物が求められている。
【０００６】
腎線維症は、慢性腎損傷が末期腎疾患へと進行する原因となっている一般的な経路である。腎臓は、いくつもの重要な機能―すなわち、代謝老廃物の排泄、体内の水分および塩分の調節、酸バランスの維持、ならびに種々のホルモンおよびオータコイドの排泄―を実行する構造的に複雑な臓器である。腎臓の疾患は複雑であるが、４つの基本的な形態学的要素―すなわち、糸球体、細管、間質、および血管―に対するその影響によって区分することにより、その研究が促進される。残念ながら、複数の構造に影響を及ぼす障害もあり、腎臓内の構造の解剖学的な相互依存は、１つの構造に対する損傷がほとんど必ずその他の構造に影響を及ぼすことを示唆している。そのため、原因が何であれ、あらゆる形態の腎疾患には腎臓の４つの要素を最終的にすべて破壊する傾向があり、慢性腎不全という結果をもたらす。例えば、真性糖尿病などの自己免疫疾患では、腎臓が、組織の損傷または病変を被る第一の標的となる。腎臓癌（例えば、腎細胞癌）患者に実施されることのある腎摘出、または腎切除は、残存する腎臓内の腎機能に悪影響を及ぼす可能性がある。また化学療法および免疫抑制療法も、腎臓に有害な影響を及ぼす原因となる。そのため、腎疾患をかかえる患者に投与することのできる安全性プロフィールを持つ薬物が求められている。このほか、腎臓の健康を長引かせるか、またはもはや機能しなくなる程までの悪化から保護することのできる医薬化合物も求められている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、新たな治療法、化合物、および医薬組成物に対するこのようなニーズに対応する。本発明は、（ｉ）血液障害、（ｉｉ）炎症関連疾患、ならびに／または（ｉｉｉ）腎障害および／もしくは腎障害合併症のほか、線維症から生じ得る他の機能障害または病変（複数可）をも予防および／または治療するための新たな化学物質および新たな治療方法を提供する。
【０００８】
本明細書中の本発明の開示、図、および説明の概観から、本発明のさらなる特徴が明らかとなろう。
【０００９】
本発明は、対象のさまざまな疾患および状態の予防および／または治療のための化合物、組成物、および方法に関する。
【００１０】
（発明の概要）
本発明の特定の態様は、本明細書に定義する式Ｉおよび式ＩＩによる化合物、およびその薬学的に許容し得る塩に関する。本発明の別のいくつかの態様は、本明細書に定義する式Ｉおよび式ＩＩによる化合物およびその薬学的に許容し得る塩に関する。
【００１１】
本発明の特定の一態様は、本明細書に定義する式Ｉまたは式ＩＩによって表わされる化合物の、（ｉ）血液障害（例えば、貧血、好中球減少）、（ｉｉ）炎症関連疾患（例えば、自己免疫疾患）、（ｉｉｉ）腎障害および／もしくは腎障害合併症、ならびに／または（ｉｖ）線維症関連臓器不全の予防および／もしくは治療のための使用に関する。本発明の別の特定の態様は、本明細書に定義する式Ｉまたは式ＩＩによって表わされる化合物の、（ｉ）血液障害（例えば、貧血、好中球減少）、（ｉｉ）炎症関連疾患（例えば、自己免疫疾患）、（ｉｉｉ）腎障害および／もしくは腎障害合併症、ならびに／または（ｉｖ）線維症関連臓器機能不全に伴う疾患の予防および／または治療のための使用に関する。
【００１２】
本発明の別の関連する態様は、（ｉ）血液障害（例えば、貧血、好中球減少）、（ｉｉ）炎症関連疾患（例えば、自己免疫疾患）、（ｉｉｉ）腎障害および／もしくは腎障害合併症、ならびに／または（ｉｖ）線維症関連臓器不全の予防または治療のための、本明細書に定義する式Ｉまたは式ＩＩによって表わされる化合物を含む医薬組成物に関する。本発明のさらに別の関連する態様は、本明細書に定義する式Ｉまたは式ＩＩの化合物を含む医薬組成物の、（ｉ）血液障害（例えば、貧血、好中球減少）、（ｉｉ）炎症関連疾患（例えば、自己免疫疾患）、（ｉｉｉ）腎障害および／もしくは腎障害合併症、ならびに／または（ｉｖ）線維症関連臓器機能不全の予防または治療のための医薬品の製造に使用するための、本明細書に定義する式Ｉまたは式ＩＩの化合物を含む医薬組成物に関する。一つの特定例は、本明細書に定義する式Ｉまたは式ＩＩによって表わされる化合物を含む、腎臓保護組成物である。
【００１３】
本発明の関連する態様は、（ｉ）血液障害（例えば、貧血、好中球減少）、（ｉｉ）炎症関連疾患（例えば、自己免疫疾患）、（ｉｉｉ）腎障害および／もしくは腎障害合併症、ならびに／または（ｉｖ）線維症関連臓器機能不全の予防または治療のための方法であって、本明細書に定義する式Ｉもしくは式ＩＩの化合物、または本明細書に定義する式Ｉまたは式ＩＩの化合物を含む医薬組成物の治療的有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む方法に関する。
【００１４】
本発明はさらに、対象のさまざまな疾患および／または状態に対して予防的に有効および／または治療的に有効な薬剤としての、本明細書に定義する式Ｉまたは式ＩＩの化合物、およびその薬学的に許容し得る塩に関する。
【００１５】
本発明のさらなる態様は、以下に述べる本明細書の説明、請求項、および総括から、当業者に明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】非炎症性および炎症性の状態下で、化合物Ｉがインビトロで（ＲＡＷ．２６４細胞）ＩＬ−１２の産生に及ぼす効果を示す棒グラフである。
【図２】化合物Ｉおよび化合物ＩＩがドキソルビシン誘導性腎毒性マウスモデルの腎保護に及ぼすインビボの効果を示す棒グラフである。
【図３】化合物Ｉを用いた予防的治療がドキソルビシンに誘導されたマウスの腎病変を減少させることを示す棒グラフである。
【図４】対照で治療したマウスおよび化合物Ｉで治療したマウスのドキソルビシン誘導性病変の組織学的マイクログラムである。
【図５】化合物Ｉを用いた経口的治療がドキソルビシン誘導性腎毒性マウスモデルの血清ＣＴＧＦに及ぼす効果を示す棒グラフである。
【図６】シクロホスファミドによる免疫抑制マウスに対する化合物Ｉおよび化合物ＩＩを用いた経口的治療の直後に認められた赤色骨髄細胞数の有意な増加を示すグラフである。
【図７】シクロホスファミドによる免疫抑制マウスに対する化合物Ｉおよび化合物ＩＩを用いた経口的治療の直後に認められた白色骨髄細胞数の有意な増加を示すグラフである。
【図８】５／６−腎摘出（ＮＸ）ラットに対する化合物Ｉの経口投与の直後に得られたＧＦＲの改善を示す棒グラフである。
【図９】５／６−ＮＸラットおよび化合物Ｉ（１０ｍｇ／ｋｇおよび５０ｍｇ／ｋｇ）で治療した５／６−ＮＸラットの１日目および１２５日目におけるＧＦＲ改善率の変化をパーセントで示した棒グラフである。
【図１０】化合物Ｉが、５／６−ＮＸラットの６３日目および８４日目のタンパク尿を、１０ｍｇ／ｋｇの用量で減少させることを示す棒グラフである。
【図１１】化合物Ｉを１０ｍｇ／ｋｇおよび５０ｍｇ／ｋｇの用量で投与すると、５／６−ＮＸラットの血清尿素が減少することを示す棒グラフである。
【図１２】化合物Ｉを１０ｍｇ／ｋｇおよび５０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した場合の血清クレアチンに対する作用を示す棒グラフである。
【図１３】５／６−ＮＸラット、および２１日目、４２日目、６３日目、８４日目、および１０５日目に１０ｍｇ／ｋｇの化合物Ｉで治療した５／６−ＮＸラットにおけるＭＣＰ−１の尿中排泄を示す棒グラフである。化合物Ｉで治療したラットでは、尿中排泄が有意に低下している（８４日目から）。
【図１４】５／６ＮＸ−ラットおよび１０ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ｉで治療した５／６−ＮＸラットの腎臓ＩＬ−１２ｐ４０タンパク質を示す棒グラフである。化合物Ｉで治療したラットでは、腎臓ＩＬ−１２ｐ４０が有意に上昇している。
【図１５】１０ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ｉで治療した治療済みの５／６−ＮＸラットにおける間質および糸球体の線維症／硬化症の減少を示す棒グラフである。
【図１６】化合物Ｉを用いた５／６−ＮＸラットの治療（経口、１０ｍｇ／ｋｇ）が、５／６−ＮＸラットにおける腎臓ＣＴＧＦの発現を減少させることを示すノーザンブロットである。
【図１７】５／６−ＮＸラットおよび化合物Ｉの経口投与による治療を受けた（経口、１０ｍｇ／ｋｇおよび５０ｍｇ／ｋｇ）５／６−ＮＸラットの生存率を示すグラフである。化合物Ｉによる治療が生存率を上昇させる。
【図１８】化合物Ｉ（１０および５０ｍｇ／ｋｇ）で治療したＵＵＯ（片側尿管閉塞）−ラットの血清アルブミン濃度を示す棒グラフである。
【図１９】化合物Ｉ（１０および５０ｍｇ／ｋｇ）で治療したＵＵＯ−ラットの腎臓のＭＣＰ−１レベルを示す棒グラフである。
【図２０】正常ＨＫ−２細胞およびＴＧＦ−β誘導ＥＭＴ細胞の上皮型カドヘリンに対する化合物Ｉの作用を示す棒グラフである。ヒトＧＡＰＤＨ内因性対照に標準化したヒト上皮型カドヘリンＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイを用いたリアルタイムＰＣＲ；基準はＴＧＦ−β処理細胞２４時間（ＲＱ＝１）。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１（ｔ−検定）
【図２１】正常ＨＫ−２細胞およびＴＧＦ−β誘導ＥＭＴ細胞のＣＴＧＦに対する化合物Ｉの作用を示す棒グラフである。ヒトＧＡＰＤＨ内因性対照に標準化したヒトＣＴＧＦＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイを用いたリアルタイムＰＣＲ；基準はＴＧＦ−β処理細胞２４時間（ＲＱ＝１）。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１（ｔ−検定）
【図２２】正常ＨＫ−２細胞およびＴＧＦ−β誘導性ＥＭＴ細胞のコラーゲン１に対する化合物Ｉの作用を示す棒グラフである。ヒトＧＡＰＤＨ内因性対照に標準化したヒトＣＴＧＦＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイを用いたリアルタイムＰＣＲ；基準はＴＧＦ−β処理細胞２４時間（ＲＱ＝１）。＊＊ｐ＜０．０１（ｔ−検定）
【発明を実施するための形態】
【００１７】
Ａ）本発明の総括
本発明は、有益な薬剤特性を持つ式Ｉおよび式ＩＩの化合物を開示する。例えば、本発明の化合物は、貧血症および／もしくは好中球減少症の個体、炎症性疾患の個体、ならびに／または高血圧治療を含むこともある腎保護および／もしくは線維症にかかりやすい他臓器（心臓、肝臓、肺、脳）の保護を必要とする個体の赤血球および／または白血球の産生促進に有効であり得る。
【００１８】
Ｂ）本発明の化合物
一態様によれば、本発明は、式Ｉによって表わされる新規化合物
【００１９】
【化１】
0006055771.tif 000002
またはその薬学的に許容し得る塩に関し、
式中、
ｎは２〜６であり、
Ｒは−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、ＮＨ、ＮＲ’、Ｏ、Ｓ、もしくはＣＨ２であり、
ＢがＨの場合、Ａは（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、Ｗ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、もしくは
【化２】
0006055771.tif 000003
であり、
ＡがＨの場合、Ｂは（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、Ｗ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、もしくは
【化３】
0006055771.tif 000004
であり、または
ＡおよびＢは共有結合して、ＣＯＯＨで置換された５、６、もしくは７員のシクロアルキルを形成し、
ここで、
Ｒ’はＣ１−３アルキルであり、
ＷはＯ、Ｓ、またはＮＨであり、
ＹはＯ、Ｓ、ＮＨ、またはＣＨ２であり、
ｍは０〜２であり、かつ
ｐは１〜７である。
【００２０】
好ましい実施形態では、Ｒは−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、または−ＣＨ（ＯＨ）−である。さらなる好ましい実施形態では、Ｒは−Ｃ（Ｏ）−である。好ましい実施形態では、ｐは３〜７である。
【００２１】
別の態様によれば、本発明は、式ＩＩによって表わされる新規化合物
【化４】
0006055771.tif 000005
またはその薬学的に許容し得る塩に関し、
式中、
ｎは２〜６であり、
ＢがＨの場合、Ａは（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、Ｗ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、もしくは
【化５】
0006055771.tif 000006
であり、
ＡがＨの場合、Ｂは（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、Ｗ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、もしくは
【化６】
0006055771.tif 000007
であり、または
ＡおよびＢは共有結合して、ＣＯＯＨで置換された５、６、もしくは７員のシクロアルキルであり、
ここで、
ＹはＯ、Ｓ、ＮＨ、またはＣＨ２であり、
ＷはＯ、Ｓ、またはＮＨであり、
ｍは０〜２であり、かつ
ｐは３〜７である。
【００２２】
別の態様によれば、本発明は、式Ｉによって表わされる化合物
【化７】
0006055771.tif 000008
またはその薬学的に許容し得る塩を用いた対象の予防または治療のための特定の医学的および薬学的な使用に関し、
式中、
ｎは２〜６であり、
Ｒは−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−、ＮＨ、ＮＲ１、Ｏ、Ｓ、もしくはＣＨ２であり、
ＢがＨの場合、Ａは（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、Ｗ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、もしくは
【化８】
0006055771.tif 000009
であり、
ＡがＨの場合、Ｂは（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、Ｗ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、もしくは
【化９】
0006055771.tif 000010
であり、または
ＡおよびＢは共有結合して、ＣＯＯＨで置換された５、６、もしくは７員のシクロアルキルを形成し、
ここで、
Ｒ１はＣ１−３アルキルであり、
ＷはＯ、Ｓ、またはＮＨであり、
ＹはＯ、Ｓ、ＮＨ、またはＣＨ２であり、
ｍは０〜２であり、
ｐは１〜７である。
【００２３】
さらなる態様では、本発明は、式Ｉによって表わされる化合物またはその薬学的に許容し得る塩を用いた対象の予防または治療のための特定の医学的および薬学的な使用および方法に関し、式中、Ｒは−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、または−ＣＨ（ＯＨ）−である。そのような使用および方法の好ましい実施形態では、ｐは３〜７である。
【００２４】
別のさらなる態様によれば、本発明は、式ＩＩによって表わされる化合物
【化１０】
0006055771.tif 000011
またはその薬学的に許容し得る塩を用いた対象の予防または治療のための使用または方法に関し、
式中、
ｎは２〜６であり、
ＢがＨである場合、Ａは（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、Ｗ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、もしくは
【化１１】
0006055771.tif 000012
であり、
ＡがＨである場合、Ｂは（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、Ｗ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ、もしくは
【００２５】
【化１２】
0006055771.tif 000013
であり、または
ＡおよびＢは共有結合して、ＣＯＯＨで置換された５、６、または７員のシクロアルキルを形成し、
式中、
ＹはＯ、Ｓ、ＮＨ、またはＣＨ２であり、
ＷはＯ、Ｓ、またはＮＨであり、
ｍは０〜２であり、かつ
ｐは３〜７である。
【００２６】
本明細書に用いる場合、用語「シクロアルキル」は、例えばＣ５−Ｃ７シクロアルキルが単環式に配置された５、６、または７個の炭素を持つ基を含むと定義されているように、指定された数の炭素原子をその中に持つ単環式飽和脂肪族炭化水素基を意味するよう意図されている。Ｃ５−Ｃ７シクロアルキルの例としては、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロへプチルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
本明細書に用いる場合、用語「アルキル」は、指定された数の炭素原子を持つ直鎖飽和脂肪族炭化水素基を含むよう意図されており、例えばＣ１−Ｃ３アルキルのようなＣ１−Ｃ３は、直線的に配置された１、２、または３個の炭素を持つ基を含むものとして定義されている。上に定義したアルキルの例としては、メチル、エチル、およびｎ−プロピルが挙げられるが、これらに限定はされない。
【００２８】
式Ｉおよび式ＩＩの化合物の例としては、以下の表１に掲載する化合物を挙げることができるが、これらに限定はされない。
【００２９】
本発明の実施形態では、式Ｉまたは式ＩＩの化合物の薬学的に許容し得る塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、またはリチウムの塩基付加塩である。好ましい実施形態では、この化合物はナトリウム塩である。一部の実施形態では、この化合物は以下の表１に掲載するナトリウム塩である。さらに好ましくは、この化合物は、本明細書に定義する化合物Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、Ｘ、またはＸＸＩＩである。
【００３０】
表１：式Ｉおよび式ＩＩの化合物の例
【表１】
0006055771.tif 000014
【表２】
0006055771.tif 000015
【００３１】
本発明の化合物、またはその薬学的に許容し得る塩は、１つまたは複数の不斉中心、キラル軸、およびキラル平面を含有する可能性があり、そのためエナンチオマー、ジアステレオマー、および他の立体異性形態を生じさせる可能性があり、（Ｒ）−もしくは（Ｓ）−、または（Ｄ）−もしくは（Ｌ）−などの絶対立体配置を単位として定義することができる。本発明は、考え得るそのような異性体、さらにそのラセミ体および光学的に純粋な形態をすべて含むよう意図されている。光学活性の（＋）および（−）、（Ｒ）−および（Ｓ）−、または（Ｄ）−および（Ｌ）−異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を用いて調製するか、または逆相ＨＰＬＣなどの従来技術を用いて分割することができる。ラセミ混合物を調整した後に個々の光学異性体に分割するか、またはこのような光学異性体をキラル合成によって調製することができる。エナンチオマーは、例えばジアステレオマー塩の形成に続く結晶化による分離、気液または液体クロマトグラフィー、エナンチオマー特異的な試薬を用いた一つのエナンチオマーの選択反応など、当業者に公知の方法によって分割することができる。このほか、所望のエナンチオマーを分離技術によって別の化学物質へと変換させる場合は、その所望のエナンチオマー形態を形成する別のステップが必要になるということも、当業者には理解されるであろう。あるいは、光学活性の試薬、基剤、触媒、もしくは溶媒を用いた不斉合成によって、または１つのエナンチオマーを不整変換によって別のエナンチオマーへと転化させることによって、特異的エナンチオマーを合成することができる。
【００３２】
本発明のある化合物は、両性イオン性の形態で存在することができ、本発明は、これらの化合物およびその混合物の両性イオン性の形態を含む。
【００３３】
塩
本明細書に用いる場合、用語「薬学的に許容し得る塩」は塩基付加塩を意味するよう意図されている。薬学的に許容し得る塩の例は、例えばＢｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ”Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ６６，  １−１９（１９７７）にも記載されている。薬学的に許容し得る塩は、従来の化学的方法によって、酸部分を含有する親薬剤から合成し得る。一般に、そのような塩は、このような薬剤の遊離酸形態を化学量論量の適切な塩基と水中もしくは有機溶媒中、またはこの両者の混合物中で反応させることによって調製される。塩は、薬剤の最終的な単離もしくは精製の間にその場で調製するか、または本発明の精製された化合物をその遊離酸形態で、所望の対応する塩基と別々に反応させ、このようにして形成された塩を単離することによって調製することができる。
【００３４】
記載する化合物のすべての酸、塩、ならびに他のイオン性および非イオン性の形態が、本発明の化合物として含まれる。例えば、本明細書においてある化合物が酸として示される場合は、その化合物の塩の形態も含まれる。同じように、ある化合物が塩として示される場合は、酸の形態も含まれる。
【００３５】
プロドラッグ
あるいくつかの実施形態では、一般化された式Ｉまたは式ＩＩによって表わされ、遊離カルボン酸の形で存在する本発明の化合物は、薬学的に許容し得るあらゆる塩、テトラゾールのような等比体積の同等物、およびそのプロドラッグ形態なども含み得る。後者の例としては、アルコールまたはアミノ酸をはじめとするアミンと式Ｉまたは式ＩＩによって定義される遊離酸とが反応する際に得られる薬学的に許容し得るエステルまたはアミドが挙げられる。
【００３６】
水和物
さらに、本発明の化合物は、水和した形態および無水形態でも存在し得る。本明細書に記載する式のうちいずれかの水和物が、一水和物としてまたは多水和物の形態で存在し得る本発明の化合物として含まれる。
【００３７】
Ｃ）調製方法
一般的に言って、本発明の化合物はいずれも、容易に利用することのできる、および／または従来の方法で調整し得る出発材料、試薬、および従来の合成手順を用いて、任意の従来の方法で調製することができる。特に興味深いのは、Ｈｕｎｄｅｒｔｍａｒｋ，  Ｔ．、  Ｌｉｔｔｋｅ，  Ａ．  Ｆ．、Ｂｕｃｈｗａｌｄ，  Ｓ．  Ｌ．、Ｆｕ，  Ｇ．  Ｃ．の研究である（Ｌｅｔｔ．  ２０００、１２、ｐｐ．１７２９−１７３１）。
【００３８】
下記の例示部分は、化合物Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、Ｘ、またはＸＸＩＩの具体的ではあるが非制限的な合成例を提供する。
【００３９】
Ｄ）薬学的用途
本明細書に示唆し、かつ例示しているように、本発明の化合物は有益な薬剤特性を持っているため、これらの化合物は、対象のさまざまな疾患および／または状態の予防および／または治療に有用な薬学的用途を持つ可能性がある。本発明者らが企図する医学的および薬学的な用途としては、制限はされないが。血液障害、炎症関連疾患、および腎障害とそれに続く腎不全、または線維症から生じる他臓器の機能不全もしくは病変（複数可）に対処するものが挙げられる。
【００４０】
用語「対象」は、線維症から生じる血液障害、炎症関連疾患、および腎不全または他臓器の機能不全または病変（複数可）が起こり得る生命体を含む。用語「対象」は、哺乳類または鳥類などの動物を含む。好ましくは、対象は哺乳類である。さらに好ましくは、対象はヒトである。最も好ましくは、対象は治療を必要とするヒト患者である。
【００４１】
本明細書に用いる場合、「予防すること」または「予防」とは、疾患または障害をもたらすリスク（または感受性）の可能性を少なくとも低減すること（すなわち、疾患に暴露されたかまたは疾患の素因があるが、その疾患の症状をまだ経験または示していない患者に対し、疾患の臨床症状の少なくとも１つを発現させないようにすること）である。そのような患者を特定するための生物学的および生理学的パラメーターは、本明細書に提供されているほか、医師にも周知である。
【００４２】
対象の「治療」または対象を「治療すること」という用語は、疾患もしくは状態、疾患もしくは状態の症状、または疾患もしくは状態に対するリスク（もしくは感受性）を遅らせ、安定させ、治し、癒し、緩和し、治療し、変質させ、改善し、悪化を緩和し、軽減し、回復させ、もしくはこれに作用を及ぼすことを目的とした本発明の化合物の対象への適用もしくは投与（または、本発明の化合物の細胞もしくは組織への適用もしくは投与）を含む。用語「治療すること」とは、減退；寛解；悪化速度の緩和；疾患の重症度の軽減；症状の安定化、減退、または損傷、病理、もしくは状態を対象にとってより耐えやすいものにすること；変性もしくは衰退の速度を緩めること；変性の最終時点の衰弱を少なくすること；または対象の身体的もしくは精神的な健康などのあらゆる客観的もしくは主観的なパラメーターをはじめとする損傷、病理、もしくは状態の治療もしくは改善に関する成功の兆候のことである。一部の実施形態では、用語「治療すること」が、対象の平均余命の増加および／または追加治療（例えば、透析または腎移植）が必要となるまでの遅延を含み得る。
【００４３】
血液障害および血液生成
本発明が企図する医学的および薬学的用途には、血液障害への対処が含まれる。用語「血液障害」とは、赤血球、白血球、および／または血小板の正常な生理、形成、増殖、および／または機能におけるあらゆる変化のことである。したがって、本発明は、その態様のひとつにおいて、それを必要とする対象、好ましくはヒト患者の血液生成を促進するため、ならびに／または、赤血球、白血球、および／もしくは血小板の血球数を増加させるための方法、化合物、および組成物に関する。
【００４４】
したがって、本発明の一態様は、それを必要とする対象の白血球の産生を促進するため、および／または対象の白血球の減少（すなわち、白血球減少症（leukopeniaまたはleukocytopenia））を阻害するための化合物の使用に関する。関連する態様は、対象の免疫系の活性化および対象の感染リスクの低減のためのこれらの化合物の使用を含む。一実施形態では、白血球は好中球顆粒球であり、障害は好中球減少症である。公知のように、化学療法、放射線療法、白血病、骨髄線維症、および再生不良性貧血には白血球数の低下が伴うことが多い。さらに、よく用いられる多くの薬剤が、白血球減少症（例えば、よく処方される抗生物質であるミノサイクリン）をもたらすことが多い。そのため、本発明は、このような特定の疾患および状態の予防および／または治療のための、本明細書に記載の化合物の使用にも関する。
【００４５】
本発明の方法、化合物、および／または組成物の有効性を評価、査定、および／または確認するために、経時的測定を判断してもよい。赤血球数、血液生成、および赤血球生成の定量的評価は、当技術分野で公知である。
【００４６】
一般的に、ヒトの標準的な総白血球数は１ｍｍ３（またはｍＬ）当たり４，３００〜１０，０００の範囲であり、平均値は１ｍｍ３当たり７，０００と考えられている。ヒトの血の標準的な好中球数は、１ｍｍ３当たり１，８００〜７，２００の範囲である。したがって、白血球減少症とは、白血球数が１ｍｍ３当たり５，０００以下まで減少した状態のことである。一部の実施形態では、対象は、総白血球数が１ｍｍ３当たり約８，０００未満、または１ｍｍ３当たり約５，０００未満、または１ｍｍ３当たり約４，０００未満、または１ｍｍ３当たり３，０００未満のヒト患者である。一部の実施形態では、対象は、好中球顆粒球の総数が１ｍｍ３当たり約５，０００未満、または１ｍｍ３当たり約４，０００未満、または１ｍｍ３当たり約３，０００未満、または１ｍｍ３当たり約２，０００未満、または１ｍｍ３当たり約１，０００未満のヒト患者である。一部の実施形態では、本発明の方法、化合物、または組成物は、患者の総白血球数（および／または好中球顆粒球数）を１ｍｍ３当たり少なくとも５００、１ｍｍ３当たり少なくとも１，０００、または１ｍｍ３当たり少なくとも２，０００またはそれ以上増加させるのに有効である。
【００４７】
本発明の別の態様は、対象の赤血球産生（即ち、赤血球生成）を活性化するため、および／または対象の赤血球の減少（即ち、貧血症）を阻害するための、本明細書に記載の化合物の使用に関する。関連する態様としては、過剰な失血（例えば、大出血、または慢性的な少量失血）、過剰な血液細胞破壊（例えば、溶血）、または赤血球の産生不足（例えば、無効血液生成）を補うためのこれらの化合物の使用が挙げられる。関連する態様としては、赤血球前駆細胞から血液細胞の産生を促すことをはじめとする血液細胞分化のためのこれらの化合物の使用が挙げられる。
【００４８】
本発明者らにとって特に興味深いのは、癌治療での化学療法または放射線療法の使用に伴う貧血症である。このほか特に興味深いのは、生存のために定期的な透析または腎移植を必要とするような末期腎疾患に伴う貧血症である。このため、本発明の一部の態様は、ヒトの血液生成系を活性化するための方法、化合物、および組成物であって、例えば、化学療法および／または放射線療法の骨髄抑制作用、ならびにヒト血液生成系の活性化が治療的価値を有し得るような、限定はされないが貧血症などの他の任意の状況を治療するための方法、化合物、および組成物に関する。本発明のさらなる態様は、ヒト患者に対する化学療法および／または放射線療法の有効性を増大させるのに有効な方法に関する。また本発明の方法、化合物、および組成物は、より多くの治療的有用性を実現するのに必要な化学療法組成物の用量を、副作用の増大を防ぎながら増やすためにも有用であり得る。さらなる態様は、ヒトにおける化学療法誘導性貧血を低減または除去するための本発明の方法、化合物、または組成物に関する。
【００４９】
一般に、正常成人では、男性および女性の赤血球数（１ｍｍ３当たり１００万単位）、ヘモグロビン値（ｇ／１００ｍＬ）、およびヘマトクリット値または充填赤血球量（ｍＬ／１００ｍＬ）（海面位で）が、それぞれ４．８＋／−０．６および５．４＋／−０．９、１４．０＋／−２．０および１６．０＋／−２．０、ならびに５２．０＋／−５．０および４７．０＋／−５．０である。貧血症とは、ヘマトクリット値の測定によって特徴づけられる血液中の赤血球数、ヘモグロビン量、または充填赤血球量が減少した場合に存在する状態のことである。一部の実施形態では、対象は、ヘマトクリット値が４０から３０の間、または約４０未満のヒト患者である。一部の実施形態では、本発明の方法、化合物、または組成物は、患者の総赤血球数および／またはヘマトクリット値の減少速度の低下または維持に有効である。一部の実施形態では、本発明の方法、化合物、または組成物は、患者のヘマトクリット値を安定化、および／または約５、または約１０、または正常値の達成に必要な数だけ増加させるのに有効である。一部の実施形態では、本発明の方法、化合物、または組成物は、輸血（複数可）の必要性を低下させるのに有効である。
【００５０】
炎症
本発明の別の態様は、炎症関連疾患の予防および／または治療のための本発明の化合物の使用に関する。用語「炎症関連疾患」とは、免疫仲介性炎症性疾患（ＩＭＩＤ）ならびに自己免疫疾患の関節炎、糸球体腎炎、脈管炎、乾癬性関節炎、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、乾癬、スティル病（マクロファージ活性化症候群）、ブドウ膜炎、強皮症、筋炎、ライター症候群、およびヴェゲナー症候群を含むがこれらに限定はされない慢性および急性の炎症性疾患をはじめ、炎症に伴うありとあらゆる異常のことである。炎症に伴う障害の他の例としては、尋常性座瘡、喘息、セリアック病、慢性前立腺炎、過敏症、骨盤内炎症性疾患、炎症性腸疾患、再灌流傷害、サルコイドーシス、移植片拒絶反応、脈管炎、間質性膀胱炎、クローン病、結腸炎、皮膚炎、憩室炎、肝炎、パーキンソン病、アテローム性動脈硬化、アルツハイマー病、および癌が挙げられるが、これらに限定はされない。さらに、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、乾癬、および肝疾患などの慢性炎症性疾患は、疲労、倦怠感、および社会的関心の喪失をはじめとする「疾病行動」を引き起こす。一般的に言って、予防的および治療的な使用は、本明細書に記載の化合物を、対象、好ましくはそれを必要とするヒト患者に投与することを含む。本発明の化合物は、任意の従来の治療、より好ましくは本明細書の上記に記載した背景技術の部分に定義された現行の治療とともに投与することができる。本発明の方法、化合物および／または組成物の有効性を評価、査定、および／または確認するために、継時的測定を実施することができる。炎症の測定のための定量的方法および技術は当技術分野で周知であり、例えば、例示の部分に提供するものと類似の方法を含む。
【００５１】
腎保護
本発明のさらに別の態様は、それを必要とする対象の腎障害を予防および／または治療するための本発明の化合物の使用に関する。用語「腎障害」、「腎疾患」、または「腎臓病」は、腎臓の正常な生理および機能のあらゆる変化を意味する。これは、物理的、化学的、または生物学的損傷、発作、外傷、または、例えば腎摘出、化学療法、高血圧、糖尿病、鬱血性心不全、狼瘡、鎌状赤血球貧血、ならびにさまざまな炎症性、感染性、および自己免疫疾患、ＨＩＶ関連腎症などの疾患を含む幅広い急性および慢性の状態および事象から生じ得る。この用語は、腎移植、腎症；慢性腎臓病（ＣＫＤ）；糸球体腎炎；多発性嚢胞腎；腎肥大（一方または両方の腎臓の過度の肥大）；ネフローゼ症候群；末期腎疾患（ＥＳＲＤ）；急性および慢性腎不全；間質性疾患；腎炎；硬化症（例えば、疾患または損傷に起因する炎症；腎の線維症および瘢痕化；腎関連の増殖性疾患；および他の原発性または続発性の病態をはじめとするさまざまな原因から生じる組織および／または血管の硬結または硬化）などの疾患および状態を含むが、これらに限定はされない。腎不全に続く透析およびカテーテル配置に伴う線維症、例えば腹膜および血管アクセス線維症も含まれる。一部の実施形態では、本発明はさらに具体的に、腎保護のための方法、化合物、および組成物に関する。本明細書に用いる場合、「腎保護」とは、腎臓内の疾患の進行速度を遅延させるか停止させるプロセスのことであり、そのため腎臓はそれ以降保護される。好ましい実施形態（例えば、薬剤性腎毒性）では、式Ｉの化合物が細胞毒性薬または抗炎症薬もしくは免疫抑制薬の投与前、投与中、または投与後に投与される。本明細書に使用する場合、「細胞毒性薬」とは、例えば腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、または血液生成細胞など、増殖性の極めて高い細胞を殺す薬剤のことである。細胞毒性薬の例としては、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ブレオマイシン、エトポシド、トポテカン、イリノテカン、タキソテール、タキソール、フルオロウラシル、メトトレキサート、ゲムシタビン、シスプラチン、カルボプラチン、またはクロランブシル、および上記化合物のうちいずれかのアゴニストが挙げられるが、これらに限定はされない。また細胞毒性薬は、抗ウイルス薬、例えばＡＺＴ（すなわち、３’−アジド−３’−デオキシチミジン）または３ＴＣ／ラミブジン（すなわち、３−チアシチジン）であってもよい。そのような薬剤は、ヒト患者を含む哺乳類に貧血を引き起こし得る。一部の実施形態では、腎保護とは、化学療法薬を用いた哺乳類の治療から生じる毒性作用に対して哺乳類に与えられる保護のことである。例えば、式Ｉおよび式ＩＩの化合物は、化学療法薬を用いた治療の結果として生じる毒性作用から哺乳類を保護するため、またはその回復を促進するために用いることができる。
【００５２】
一部の実施形態では、腎障害又は腎臓病は、おおまかに「腎症」または「腎症（複数）」と定義することができる。用語「腎症」または「腎症（複数）」は、腎線維症および／または糸球体疾患（例えば、糸球体線維症、糸球体腎炎）および／または慢性腎不全をもたらし得るような腎臓内のあらゆる臨床病理学的変化を包含する。本発明の一部の態様は、高血圧性腎症、糖尿病性腎症、ならびに、例えば鎮痛薬性腎症、免疫仲介糸球体症（例えば、ＩｇＡ腎症またはベルジェ病、ループス腎炎）、虚血性腎症、ＨＩＶ関連腎症、膜性腎症、糸球体腎炎、糸球体線維症、放射線造影剤誘発性腎症、中毒性腎症、鎮痛剤誘発性腎毒性、シスプラチン腎症、移植腎症、および他の形態の糸球体異常もしくは損傷、糸球体毛細管損傷（管状線維症tubular fibrosis）など、他の種類の腎症の予防および／または治療のための組成物およびその使用に関する。一部の実施形態では、用語「腎症」または「腎症（複数）」は、具体的に、対象の尿中タンパク質（タンパク尿）の存在および／または腎不全の存在がある障害または疾患を指す。
【００５３】
本発明はさらに、腎障害合併症を予防および／または治療するための方法、化合物、および組成物に関する。用語「腎障害合併症」とは、腎障害、健康状態、事故、または重症度が悪化し得る腎障害の進行過程で生じる陰性反応と相関する二次的状態のことである。「腎障害合併症」は通常、体中に広がったり他臓器系に影響を及ぼしたりする可能性のある症状または病的変化に苦しむ対象の腎疾患が重症化するにつれて発症する。本明細書に用いる場合、用語「腎障害合併症」は、血管系の疾患（例えば、大血管合併症、細小血管合併症など）、循環器疾患（例えば、動脈硬化、アテローム性動脈硬化、環動脈疾患、鬱血性心不全、脳卒中、アンギナ、虚血性心疾患、心筋梗塞など）、糖尿病性脂質異常症、脂質異常症（例えば、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高リポタンパク血症）、メタボリック症候群、肥満、貧血、浮腫、膵炎、弱い骨（weak bones）、栄養不良性の健康状態、および神経損傷を含有するが、これらに制限されない。
【００５４】
一部の実施形態によれば、本発明は、糸球体硬化、腎血管構造の一時的変異、および尿細管間質疾患をはじめとする腎症の特徴的な様相または兆候を予防または治療するための方法、化合物、および組成物に関する。本発明が企図する腎症の特徴的様相としては、腎細胞のアポトーシス、線維症、硬化症、および／またはタンパク質の管状領域内蓄積が挙げられる。したがって、一部の態様では、本発明は腎細胞アポトーシス、線維症、硬化症、および／またはタンパク質の管状領域内蓄積の予防法に関する。関連する態様は、腎臓細胞のＣＴＧＦｍＲＮＡの発現および／またはＴＧＦ−βｍＲＮＡの発現を低減するための本明細書に定義する化合物および医薬組成物の使用に関する。
【００５５】
一部の実施形態では、対象は、例えば糖尿病、後生的な進行性腎疾患、および線維性腎疾患および／または本明細書に記載された任意の腎疾患、腎障害、もしくは腎障害合併症などの障害を患っている可能性がある。一部の実施形態では、対象は、糸球体ろ過の不調および／または腎不全を罹患しているか、または罹患していることが疑われるヒト患者である。一部の実施形態では、対象は、化学療法または放射線療法の治療を受けているか、または受けたことのあるヒト患者である。したがって、関連する態様は、本明細書に定義する化合物または医薬組成物を、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ブレオマイシン、タキソール、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、ジェムシタビン、シスプラチン、カルボプラチン、およびクロランブシルを含むがこれらに限定はされない化学療法薬から腎臓を保護するために用いることに関する。本発明の方法は、本明細書に定義する化合物または医薬組成物の予防的または治療的有効量を、例えばそれを必要とするヒト患者などの対象に投与することを含み得る。
【００５６】
本発明の方法、化合物および／または組成物の有効性を評価、査定、および／または確認するために、継時的な測定結果を判定することができる。腎機能の定量的評価および腎機能障害のパラメーターは当技術分野で周知であり、例えばＬｅｖｅｙ（Ａｍ．Ｊ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓ．１９９３，２２（Ｉ）：２０７−２１４）に見ることができる。腎機能／機能障害の判定のためのアッセイの例としては、血清クレアチニン濃度、クレアチニンクリアランス速度、シスタチンＣクリアランス速度、２４時間尿クレアチニンクリアランス、２４時間尿タンパク質分泌、糸球体ろ過率（ＧＦＲ）、尿アルブミン・クレアチニン比（ＡＣＲ）、アルブミン代謝排出速度（ＡＥＲ）、および腎バイオプシーが挙げられる。したがって、一部の態様では、本発明は、式Ｉおよび式ＩＩの化合物を、それを必要とする対象に投与することによってクレアチニンクリアランスを増加させる方法、インスリン分泌および／またはインスリン感受性を増大させる方法、インスリン耐性を低下させる方法に関する。
【００５７】
一部の実施形態では、対象は、腎症を発症する危険性があるか、または腎症の診断を受けたことがある。一般的に、ヒトの正常な糸球体ろ過率（ＧＦＲ）は、約１００から約１４０ｍＬ／分である。一部の実施形態では、対象は進行腎症（すなわち、ＧＦＲが７５ｍＬ／分未満）のヒト患者である。一部の実施形態では、対象は末期腎不全（すなわち、ＧＦＲが１０ｍＬ／分未満）のヒト患者である。一部の実施形態では、本発明の方法、化合物、または組成物は、患者のＧＦR値を少なくとも１、５、１０、１５、２０、または２５ｍＬ／分またはそれ以上上昇させるのに有効である。
【００５８】
一部の実施形態では、対象は、腎臓病を発症する危険性があるか、または腎臓病の診断を受けたことがある。各種の実施形態において、対象は、第１期腎臓病、第ＩＩ期腎臓病、第ＩＩＩ期腎臓病、第ＩＶ期腎臓病、もしくは第Ｖ期腎臓病を罹患しているか、またはそれに向かって進行中のヒト患者である。一部の実施形態では、本発明の方法、化合物、または組成物は、患者の腎臓病を安定化または改善するのに有効である（例えば、第Ｖ期から第ＩＶ期へ、または第ＩＶ期から第ＩＩＩ期へ、または第ＩＩＩ期から第ＩＩ期へ、または第ＩＩ期から第Ｉ期ヘ）。
【００５９】
腎症の最初の臨床兆候のひとつは、アルブミン尿またはタンパク尿の存在である。尿中のアルブミン量が１日当たり３０〜３００ｍｇの間である場合を微量アルブミン尿（microalbuminuria）と呼び、尿中のアルブミン量が１日当たり３００ｍｇを超える場合を大量アルブミン尿（macroalbuminuria）と呼ぶ。尿中タンパク質量が１日当たり０．５ｇを超える場合をタンパク尿と呼ぶ。一部の実施形態では、対象は、微量アルブミン尿のヒト患者である。一部の実施形態では、対象は、尿中アルブミン量が１日当たり３００ｍｇを超える人患者である。一部の実施形態では、本発明の方法、化合物、または組成物は、患者のアルブミン尿を１日に少なくとも１０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００ｍｇ低下させるのに有効である。一部の実施形態によれば、本発明は、式Ｉまたは式ＩＩの化合物をそれを必要とする対象に投与することによって、タンパク尿を予防または低下させる方法に関する。一部の実施形態では、対象は、タンパク尿を発症する危険性があるか、またはタンパク尿と診断されたことがある。一部の実施形態では、対象は、その尿中に１日当たり０．５〜４ｇのタンパク質を排出するヒト患者である。一部の実施形態では、対象は、その尿中に１日当たり約４ｇを超えるタンパク質を排出するヒト患者である。
【００６０】
本発明の方法、化合物、および組成物の有効性は、望ましくない症状の低下によって評価することができる。そのような低下は、例えば、治療前の機能と比べた腎機能の改善によって決定することができる。そのような改善は、腎不全（透析または移植を含む）の発症の遅延、または、例えばタンパク尿の上昇速度の低下、または血清クレアチニンの上昇速度の低下、またはクレアチニンクリアランスもしくはＧＦＲのパラメーターの低下、または入院率または死亡率の低下などによって決定される腎機能の悪化速度の低下に、明白に表われ得る。好ましい実施形態では、この化合物は化合物Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、Ｘ、もしくはＸＸＩＩ、またはその薬学的に許容し得る塩である。
【００６１】
一実施形態では、本発明の化合物を、腎症または関連する障害または合併症の予防または治療のために現在用いられているかまたは開発中の、少なくとも１つのさらなる公知化合物と組み合わせて用いる。そのような公知化合物の例としては、ＡＣＥ阻害薬（例えば、カプトプリル（Ｃａｐｏｔｅｎ（登録商標））、エナラプリル（Ｉｎｎｏｖａｃｅ（登録商標））、ホシノプリル（Ｓｔａｒｉｌ（登録商標））、リジノプリル（Ｚｅｓｔｒｉｌ（登録商標））、ペリンドプリル（Ｃｏｖｅｒｓｙｌ（登録商標））、キナプリル（Ａｃｃｕｐｒｏ（登録商標））、トランダナロプリル（Ｇｏｐｔｅｎ（登録商標））、ロテンシン、モエキシプリル、ラミプリル）、ＲＡＳ遮断薬、アンジオテンシン受容体遮断薬（ＡＲＢ）（例えば、オルメサルタン、イルべサルタン、ロサルタン、バルサルタン、カンデサルタン、エプロサルタン、テルミサルタンなど）、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）阻害薬（例えば、ルボキシスタウリン）、ＡＧＥ依存性経路の阻害薬（例えば、アミノグアニジン、ＡＬＴ−９４６、ピロドキサミン（ピロドドリン）、ＯＰＢ−９２５２、アラゲブリウム）、抗炎症薬（例えば、シクロオキシゲナーゼ−２阻害薬、マイコフェノレートモフェチル、ミゾリビン、ペントキシフィリン）、ＧＡＧ（例えば、スロデキシド（ＵＳ５，４９６，８０７））、ピリドキサミン（ＵＳ７，０３０，１４６）、エンドセリン拮抗薬（例えば、ＳＰＰ３０１）、ＣＯＸ−２阻害薬、ＰＲＡＲ−γ拮抗薬、およびアミホスチン（シスプラチン腎症に用いる）、カプトプリル（糖尿病性腎症に用いる）、シクロホスファミド（特発性膜性腎症に用いる）、チオ硫酸ナトリウム（シスプラチン腎症に用いる）、トラニラストのような他の化合物が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００６２】
線維症
線維症とは、損傷した組織の創傷治癒過程の一環として起こり得る臓器内の過剰な線維性結合組織の形成または発達のことである。線維症は、線維組織が過剰にではなく臓器の必要に応じて生じるような創傷治癒の正常な過程から分化する。線維症は、治療しなければ、臓器不全をもたらす組織の硬結又は硬化である硬化症を発症させる。細胞レベルでは、正常組織の損傷に反応して線維芽細胞（fibroblasts）が創傷中に移動し、そこで新たな細胞外マトリックスを合成し、再構築する。このプロセスの原因となる線維芽細胞（fibroblast）は筋線維芽細胞と呼ばれ、収縮性の高いタンパク質α平滑筋アクチンを発現する。正常組織の修復では、筋線維が消失する。しかし、線維症では、筋線維芽細胞が損傷した組織に残留する。筋線維芽細胞は、局所に存在する線維芽細胞（fibroblast）がＴＦＧβおよびＣＴＧＦなどの成長因子タンパク質に反応して分化することによって生じ得る。存在する線維芽細胞（fibroblast）は、中間細胞型である線維（芽）細胞（fibrocyte）を経由して分化する組織マクロファージによって発生し得る。そのため、線維（芽）細胞（fibrocyte）は、幹細胞、マクロファージ、および線維芽細胞（fibroblast）の混合した特性を持つ。
【００６３】
本発明のさらに別の態様は、それを必要とする対象の線維症関連疾患または線維症関連臓器機能不全を予防および／または治療するための式Ｉおよび式ＩＩの化合物の使用に関する。用語「線維症関連臓器機能不全」とは、腎臓、心臓、肺、肝臓、脳、骨髄、隔膜および後腹膜の軟組織、皮膚、腸、ならびに関節（膝、肩他）の機能不全または病変（複数可）に限定はされないがこれらをはじめとする線維症によってもたらされるあらゆる臓器機能不全または病変（複数可）のことである。また本発明は、心内膜心筋線維症（心臓）、特発性肺線維症（肺）、肝硬変（肝臓）、骨髄線維症（骨髄）、ならびにケロイドおよび腎性全身線維症（皮膚）に限定はされないがこれらをはじめとする炎症性および線維性の反応を伴う線維症関連疾患をも包含する。ある特定の実施形態によれば、本発明による化合物は、上記に記載した通り、炎症を予防および／または治療する能力を持ち、それに続くあらゆる線維症を予防および／または治療する能力を持つ。
【００６４】
好ましい実施形態では、臓器は腎臓であり、式Ｉおよび式ＩＩによって記載される化合物は腎臓病の予防および／または治療のためのものである。上記に記載した通り、腎組織生検およびそれに続く病変スコアは、線維性疾患および腎臓病に対する潜在的な抗線維性薬剤としての化合物の有効性の最終評価を提供するのに有用であり得る。さらに、化合物の有効性のより間接的ではあるが便利な評価を獲得し、それによって、本発明の化合物のインターロイキン−１２（ＩＬ−１２）産生誘導能力を測定することにより、数多くの化合物の潜在的な抗線維力を検査することが可能となることも考えられる。ＩＬ−１２は、マクロファージ（および樹枝状細胞）によって産生される炎症反応を促進するサイトカインであり、ＩＬ−１２が線維症を減衰させることが知られている。例えば、Ｍ．  Ｈｅｓｓｅ，  ｅｔ  ａｌ．がＡｍｅｒ．  Ｊ．  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  １５７，  ９４５−９５５（２０００）の中で、ＩＬ−１２がマウスの肉芽腫性疾患モデルに対して抗線維作用を及ぼすことを教示している。同じく、Ｍ．  Ｐ．  Ｋｅａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．がＡｍｅｒ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２８１，  Ｌ９２−Ｌ９７（２００１）の中で、ＩＬ−１２がマウスのブレオマイシン誘発性肺線維症を減衰させることを教示している。Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ８７，  ８５８−８７０（２００７）の中のＡ．  Ｂｅｌｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．による小論評では、ＩＬ−１２が線維（芽）細胞（fibrocytes）の分化を阻害することが報告されている。
【００６５】
Ｅ）医薬組成物および医薬製剤
本発明の関連する態様は、本明細書に記載された本発明の化合物（例えば、式Ｉまたは式ＩＩの化合物）の１つまたは複数を含む医薬組成物に関する。上記に示した通り、本発明の化合物は、（ｉ）血液障害の予防および／または治療（例えば、血液生成の促進によって）、（ｉｉ）炎症関連疾患の予防および／または治療（例えば、自己免疫疾患）、（ｉｉｉ）腎障害および／または腎障害合併症の予防および／または治療、（ｉｖ）線維症関連臓器機能不全の予防および／または治療に対して有用であり得る。
【００６６】
本明細書に用いる場合、用語「治療的有効量」は、化合物の量であって、特定の障害、疾患、または状態の治療または予防のために対象に投与したときに、その障害、疾患、または状態の治療または予防をもたらすのに十分な量を意味する。投与量および治療的有効量は、例えば、使用する特定の薬剤の活性、対象の年齢、体重、全体的な健康、性別、および食べ物、投与時間、投与経路、排出速度、および該当する場合は任意の薬剤の組み合わせ、医師が薬剤に所望する対象に及ぼす効果および化合物の性質（例えば、生体利用率、安定性、有効性、毒性など）、ならびに対象が罹患している特定の障害（複数可）をはじめとする多様な因子によって変えてよい。さらに、治療的有効量は、対象の血液パラメーター（例えば、脂質状態、インスリン濃度、血糖）、疾患状態の重症度、臓器の機能、または潜在する疾患もしくは合併症によって異なり得る。そのような適切な用量は、本明細書に記載のアッセイをはじめとする任意の利用可能なアッセイを用いて決定することができる。本発明の化合物の１つまたは複数をヒトに投与する場合、医師は、例えば、最初は比較的低用量を処方し、その後適切な応答が得られるまで用量を増やすこともできる。
【００６７】
しかしながら、一般的に言って、用量は、経口投与の場合は１日当たり約１〜約１００ｍｇ／ｋｇの範囲であり、静脈内または皮下投与の場合は１日当たり０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。好ましくは、用量は経口投与され、約１０ｍｇ／ｋｇである。好ましくは、用量は経口投与され、約５０ｍｇ／ｋｇである。
【００６８】
本明細書に用いる場合、用語「医薬組成物」は、本明細書に定義する式Ｉまたは式ＩＩの本発明の化合物の少なくとも１つ、および少なくとも１つの薬学的に許容し得る担体、希釈剤、ビヒクル、または賦形剤の存在を指す。
【００６９】
本明細書に用いる場合、用語「薬学的に許容し得る担体」、「薬学的に許容し得る希釈剤」、または「薬学的に許容し得る賦形剤」は、限定はされないが、好ましくはヒトである対象への使用に許容し得る任意のアジュバント、担体、賦形剤、流動促進剤、甘味剤、希釈剤、防腐剤、染料／着色剤、調味料、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、安定剤、等張剤、溶媒、乳化剤、または、リポソーム、シクロデキストリン、封入用ポリマー性送達系、またはポリエチレングリコール基質などの封入剤を意味することが意図されている。それは、好ましくは、動物、さらに好ましくはヒトへの使用が連邦政府もしくは州政府の規制当局によって承認された、または承認され得る、または米国薬局方もしくは他の一般に認められた薬局方に掲載された化合物もしくは組成物のことである。薬学的に許容し得るビヒクルは、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、その適切な混合物、および植物油を含有する溶媒または分散媒体であり得る。薬学的に許容し得るビヒクルのさらなる例としては、限定はされないが、注射ＵＳＰのための水、限定はされないが、塩化ナトリウム注射、リンゲル液、デキストロース液、デキストロースおよび塩化ナトリウム液、および乳酸加リンゲル液などの水性ビヒクル、限定はされないが、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、およびポリプロピレングリコールなどの水混和性ビヒクル、限定はされないが、コーン油、綿実油、ピーナツ油、ゴマ油、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、および安息香酸ベンジルなどの非水性ビヒクルが挙げられる。微生物の作用の防止は、抗微生物剤または抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどの添加によって実現される。多くの場合に、例えば糖類、塩化ナトリウム、または、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコールなどの等張剤が組成物に含まれる。組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムもしくはゼラチンを含めると、注射用組成物の持続的吸収をもたらすことができる。
【００７０】
一部の実施形態では、本発明の組成物は、式Ｉおよび式ＩＩの化合物の有効量を含む。好適な化合物は、化合物Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、Ｘ、またはＸＸＩＩである。
【００７１】
一部の実施形態では、本発明は、血液疾患を予防および／または治療するための医薬組成物に関し、これは式Ｉまたは式ＩＩの化合物を１つまたは複数含む。
【００７２】
一部の実施形態では、本発明は、炎症関連疾患を予防および／または治療するための医薬組成物に関し、これは式Ｉまたは式ＩＩの化合物を１つまたは複数含む。
【００７３】
一部の実施形態では、本発明は、腎障害を予防および／または治療するための医薬組成物に関し、これは式Ｉまたは式ＩＩの化合物を１つまたは複数含む。
【００７４】
一部の実施形態では、本発明は、線維症関連臓器機能不全を予防および／または治療するための医薬組成物に関し、これは式Ｉまたは式ＩＩの化合物を１つまたは複数含む。
【００７５】
本発明の化合物は、投与の前に、利用可能な技術および手順を用いて医薬組成物へと製剤化してよい。例えば、本医薬組成物は、経口、静脈内（ｉｖ）、筋肉内（ｉｍ）、デポ筋肉内、皮下（ｓｃ）、デポ皮下、舌下、鼻腔内、髄腔内、局所、または直腸経路による投与に好適な方法で製剤化してよい。
【００７６】
好ましくは、本発明の化合物（複数可）は、経口的に投与することができる。製剤は、単位投与量の形態で便利な形で提示してよく、調剤学の分野で周知の任意の方法で調製してよい。このような製剤または組成物の調製方法は、本発明の化合物を、薬学的に許容し得るビヒクル（例えば、不活性の希釈剤または吸収可能な食べられる担体）および任意で１つまたは複数の補助成分と会合させるステップを含む。一般的に言って、製剤は、本発明の化合物を液体担体、または微粉化した固体担体、または両方と、均一かつ密に会合させ、その後に必要に応じて製品を成形することによって調製する。そのような治療的に有用な組成物中の治療薬の量は、好適な投与量が得られる量である。
【００７７】
経口投与に好適な本発明の製剤は、カプセル（例えば、硬ゼラチンカプセルまたは軟ゼラチンカプセル）、カシェ剤、ピル、錠剤、ロゼンジ、粉末、顆粒、ペレット、糖衣錠、例えばコーティング錠（例えば、腸溶媒）もしくは素錠、の形で、または水性もしくは非水性液の溶液または懸濁液として、または水中油もしくは油中水乳濁液として、またはエリキシル剤もしくはシロップとして、またはトローチとして、または口内洗浄液としてなどでよく、それぞれが本発明の化合物を活性成分として所定量含有する。また本発明の化合物は、ボーラス、舐剤、もしくはペースト、または対象の食べ物に直接組み込んでもよい。さらに、いくつかの実施形態では、これらのペレットは、（ａ）即時または急速な薬剤放出を提供する（つまり、コーティングされていない）、（ｂ）例えば時間をかけた持続放出を提供するようコーティングする、（ｃ）胃腸管内の耐容性が良くなるように腸溶コーティングをして製剤化することができる。コーティングは従来の方法で、通常はｐＨコーティングまたは時間依存性コーティングを行って、本発明の化合物が所望の位置の近くに放出されるか、または所望の作用を長引かせるためにさまざまな時点で放出されるようにする。このような投薬形態は、一般に、酢酸フタル酸セルロース、ポリ酢酸フタル酸ビニル、フタル酸ヒドロキシプロピル・メチルセルロース、エチルセルロース、ワックス類、およびセラックのうちの１つまたは複数を含むが、これらに限定はされない。
【００７８】
経口投与のための固体剤形では、本発明の化合物は、クエン酸ナトリウムまたは第二リン酸カルシウムなど、１つもしくは複数の薬学的に許容し得る担体、または以下のいずれか、即ちスターチ、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、またはケイ酸などの充填剤または増量剤、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、またはアカシアなどの結合剤、グリセロールなどの保湿剤、寒天、カルボン酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカスターチ、アルギン酸、一定のケイ酸塩、およびカルボン酸ナトリウムなどの崩壊剤、パラフィンなどの緩和剤、第四アンモニウム化合物などの吸収促進剤、例えばセチルアルコールおよびグリセロールモノステアレートなどの湿潤剤、カオリンおよびベントナイト粘土などの吸収剤、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびその混合物などの滑材、ならびに着色剤のいずれかと混合してもよい。カプセル、錠剤、およびピルの場合は、医薬組成物はこのほかに緩衝剤を含んでもよい。類似の種類の固形組成物も、ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を用いて、硬ゼラチンカプセルおよび軟ゼラチンカプセルの充填剤として用いてもよい。
【００７９】
経口用組成物は、一般に、溶液、乳濁液、懸濁液などを含む。このような組成物の調製に好適な薬学的に許容し得るビヒクルは、当技術分野で周知である。シロップ、エリキシル剤、乳濁剤、および懸濁剤のための担体の一般的な成分としては、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、液体ショ糖、ソルビトール、および水が挙げられる。懸濁液の場合、一般的な懸濁剤としては、メチルセルロース、カルボキシメチル・セルロース・ナトリウム、トラガカント、およびアルギン酸ナトリウムが挙げられ、一般的な湿潤剤としては、レシチンおよびポリソルベート８０が挙げられ、かつ一般的な防腐剤としては、メチルパラベンおよび安息香酸ナトリウムが挙げられる。経口液体組成物は、上に記載の甘味料、香味料、および着色料も含有してよい。
【００８０】
注射に用いるのに好適な医薬組成物は、滅菌注射液の即時調製のための滅菌水溶液（水溶性の場合）または分散液、および滅菌粉末を含むことができる。
あらゆる場合に、組成物は無菌でなければならず、かつ注射針が通る程度に流動性でなければならない。製造および貯蔵の状況下で安定でなければならず、細菌およびカビの汚染作用に汚染されずに保存されなければならない。滅菌注射液は、必要な量の治療薬を、必要に応じて上に挙げた成分の１つまたは組み合わせとともに適切な溶媒に組み込み、続いてろ過滅菌することによって調製することができる。通常、分散液は、治療薬を塩基性分散媒と上に挙げたもののうちから必要な他の成分とを含有する滅菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。滅菌注射液の調製のための滅菌粉末剤の場合、調製方法は、活性成分（つまり、治療薬）の粉末プラス先に滅菌ろ過したその溶液から任意のさらなる所望の成分を生じる真空乾燥および冷凍乾燥である。
【００８１】
一部の医薬製剤は、吸入によるエアゾールとしての投与に好適であり得る。このような製剤は、本明細書の式Ｉまたは式ＩＩの所望の化合物、またはそのような化合物（複数可）の複数の固体粒子の溶液または懸濁液を含む。例えば、本発明の化合物の金属塩は、吸入による投与用の医薬品活性成分（ＡＰＩ）の微粒子の調製になじみやすい物理化学的性質を持つことが予想されるが、これらの化合物の遊離酸形態はなじみにくい。所望の製剤は小さいチェンバー内に置き、噴霧することができる。噴霧は、圧縮空気または超音波エネルギーによって達成され、薬剤または塩を含む複数の液滴または固体粒子を形成する。液滴または固体粒子は、粒子径が約０．５〜約５ミクロンの範囲でなければならない。固体粒子は、本明細書に記載の式Ｉまたは式ＩＩのいずれかの化合物もしくはその塩の固形剤を、当技術分野で公知の任意の適切な方法、例えば微粒化などで処理することによって得ることができる。固体粒子または液滴のサイズは、例えば約１〜約２ミクロンとなろう。この点において、市販の噴霧器がこの目的に利用可能である。エアゾールとして投与するのに好適な医薬製剤は、液体の形であってよく、製剤は、本明細書に記載のいずれかの式またはその塩の水溶性薬剤を、水を含む担体中に含むことになる。製剤の表面張力を十分に低くして、噴霧した時に所望のサイズ範囲の液滴の形成をもたらす界面活性剤が存在してよい。
【００８２】
また本発明の組成物は、例えば対象の表皮組織上または上皮組織上に組成物を直接置いたり、もしくは広げたりすることによって、または「貼剤」を通して経皮的に、対象に局所投与してもよい。そのような組成物としては、例えばローション、クリーム、溶液、ジェル、および固形物がある。これらの局所用組成物は、本発明の化合物の有効量、通常は少なくとも約０．１％、または約１％〜約５％さえ含むことができる。局所投与のための好適な担体は、通常は皮膚上に連続した膜としてそのまま残り、発汗または水に漬けることによる除去に耐える。一般に、担体は本来有機体であり、その中に治療薬を分散または溶解させることができる。担体は、薬学的に許容し得る軟化剤、乳化剤、増粘剤、溶媒などを含んでもよい。
【００８３】
掲題の薬剤の全身送達を達成するのに有用な他の組成物には、舌下、口腔内、および鼻腔内の投薬形態を含めてもよい。そのような組成物は、通常、スクロース、ソルビトール、およびマンニトールのような可溶性の充填物質、ならびにアカシア、微結晶性セルロース、カルボキシメチルセルロース、およびヒドロキシプロピル・メチルセルロースのような結合剤を含む。上に開示した流動促進剤、滑剤、甘味剤、着色剤、抗酸化剤、および香味剤も含めてよい。
【００８４】
また本発明の化合物は、非経口、腹腔内、髄腔内、または脳内投与してもよい。そのような組成物の場合は、本発明の化合物を、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびその混合物中、ならびに油中に調製することができる。通常の保存および使用状況の下であれば、このような調製物は、微生物の増殖を防ぐために防腐剤を含有してよい。
【００８５】
本発明の治療方法はこのほか、（ｉ）血液障害、（ｉｉ）炎症関連疾患、（ｉｉｉ）腎障害および／もしくは腎障害合併症、ならびに（ｉｖ）線維症関連臓器機能不全の予防および／もしくは治療のために、少なくとも１つの本発明の化合物、または薬学的に許容し得るその塩と、別の治療的に有効な薬剤との同時投与も含んでもよい。したがって、本発明のさらなる態様は、併用療法による対象の治療方法であって、第１の薬剤および第２の薬剤の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含み、第１の薬剤は式Ｉまたは式ＩＩに定義された通りであり、かつ第２の薬剤は上文の（ｉ）〜（ｉｖ）の障害または疾患のいずれか１つの予防または治療のためである治療方法に関する。本明細書に用いる場合、「併用療法による治療」または「〜との併用で」という句にみられる用語「併用の」または「併用で」は、第１の薬剤を第２の薬剤の存在下で投与することを含む。併用療法による治療方法は、第１、第２、第３、またはさらなる薬剤を同時投与する方法を含む。また併用療法による治療方法は、第１の薬剤またはさらなる薬剤を第２の薬剤またはさらなる薬剤の存在下で投与する方法も含み、前記第２の薬剤またはさらなる薬剤は、例えば事前に投与されていてもよい。併用療法による治療方法は、さまざまな行為者によって段階的に実施してもよい。例えば、一人の関係者が第１の薬剤を投与し、そして第２の行為者が対象に第２の薬剤を投与する際に、第２の薬剤（および／またはさらなる薬剤）の存在下で第１の薬剤（および／またはさらなる薬剤）が投与後である限りは、その投与段階を同時に、またはほぼ同時に、または時間をおいて実施してもよい。行為者と対象とは同じ存在者であってもよい（例えば、ヒト）。
【００８６】
したがって、本発明は、上記の疾患または状態のうちいずれか１つの症状または合併症を予防、低減、または除去する方法にも関する。この方法は、少なくとも１つの本発明の化合物を含む第１の医薬組成物と、１つまたは複数のさらなる活性成分を含む第２の医薬組成物とを、それを必要とする対象に投与することを含み、その際にいずれの活性成分も、治療する疾患または状態の１つまたは複数の症状または合併症を阻害、低減、または除去するのに十分な量で投与される。一態様では、第１および第２の医薬組成物の投与は、時間的に少なくとも２分間の間隔をあける。好ましくは、第１の薬剤は、本明細書に定義する式Ｉまたは式ＩＩの化合物またはその薬学的に許容し得る塩、例えばナトリウム塩である。第２の薬剤は、以上に示した化合物の一覧から選択することができる。
【００８７】
Ｆ）キット
本発明の化合物（複数可）は、容器（例えば、パッケージング、箱、小瓶など）を任意で含むキットの一部として包装することができる。キットは、本明細書に記載の方法に従って商業的に用いてもよく、かつ本発明の方法での使用に関する説明書を含めてもよい。キットのさらなる要素としては、酸、塩基、緩衝剤、無機塩、溶媒、抗酸化剤、防腐剤、または金属キレート剤を含むこともできる。キットのさらなる要素は、純水な組成物として、またはキットのさらなる要素を１つもしくは複数包含する水性溶液もしくは有機溶液として存在する。キットのありとあらゆる要素が、任意で緩衝剤をさらに含む。
【００８８】
本発明の化合物（複数可）は、同時に、または同じ投与経路で対象に投与される可能性もあり、または投与されない可能性もある。したがって、本発明の方法は、医者が用いる時に適切な量の２つまたは複数の活性成分の患者への投与を簡素化するキットを包含する。
【００８９】
本発明の代表的なキットは、本明細書に定義する式Ｉまたは式ＩＩによって定義される本発明の少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容し得る塩の単位投薬形態、および、少なくとも１つのさらなる活性成分の単位投与形態を含む。本発明の化合物と併せて用いることのできるさらなる活性成分の例としては、上記に示した本発明の化合物と組み合わせて用いることのできるいずれかの化合物が挙げられるが、これに限定はされない。
【００９０】
本発明のキットは、１つまたは複数の活性成分を投与するのに用いることのできる薬学的に許容し得るビヒクルを、さらに含むことができる。例えば、活性成分を非経口投与用に再構成しなければならない固形で提供する場合は、好適なビヒクルを入れた密閉された容器をキットに含め、その中に活性成分を溶解させて、非経口投与に好適な、粒状物質を含まない滅菌溶液を作るようにすることができる。薬学的に許容し得るビヒクルの例は上記に挙げた。
【実施例】
【００９１】
機器類：
ＨＰＬＣクロマトグラムおよび質量スペクトルはいずれも、５分勾配で０．０１％のトリフルオロ酢酸と共に１５〜９９％のアセトニトリル−水を溶離剤として、流量２ｍＬ／分にて分析用Ｃ１８カラム（２５０ｘ４．６ｍｍ、５ミクロン）を用いて、ＨＰ１１００  ＬＣ−ＭＳ  Ａｇｉｌｅｎｔ計器上に記録した。
【００９２】
実施例１：化合物Ｉの合成：（ナトリウム（ＲＳ）−２−｛４−オクタノイルフェノキシ｝デカノエート）
【００９３】
【化１３】
0006055771.tif 000016
【００９４】
１−｛４−ヒドロキシフェニル｝オクタン−１−オン（１０．０ｇ、４５．４ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（９．４ｇ、６８．１ｍｍｏｌ）、およびヨード（１．５ｇ、９．１ｍｍｏｌ）のアセトン中（１００ｍＬ）混合物を、エチル２−ブロモデカノエート（１３．９ｇ、４９．９ｍｍｏｌ）で処理し、反応物を窒素下室温で一晩撹拌した。溶媒を真空蒸発し、残渣を酢酸エチルと水に分離した。有機相を飽和塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空ろ過および蒸発させた。粗材料をシリカゲルのパッド上で精製し、５％酢酸エチル／ヘキサンで溶出して、エチル（ＲＳ）−２−｛４−オクタンフェノキシ｝デカノエート（１１．９ｇ、６２％）を無色油として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 7.92 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 4.66 (dd, J = 7.5, 5.2 Hz, 1H), 4.21 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.89 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.90-2.03 (m, 2H), 1.66-1.74 (m, 2H), 1.43-1.56 (m, 2H), 1.24-1.37 (m, 18H), 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 0.85-0.89 (m, 6H)。テトラヒドロフラン（３６０ｍＬ）、メタノール（９０ｍＬ）、および水（９０ｍＬ）の混合物中のエチルエステル（１１．９ｇ、２８．３ｍｍｏｌ）溶液を水酸化リチウム一水和物（５．９ｇ、１４１．５ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を室温で２０時間撹拌した。水酸化リチウム一水和物の第２の部分（２．３ｇ、５４．８ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温でさらに３時間撹拌した。反応混合物を真空濃縮し、残渣を酢酸エチルと水に分離した。有機相を飽和塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空ろ過および蒸発して、粗生成物を得た。４０％酢酸エチル／ヘキサンにより溶出するシリカゲルパッド上の精製、およびヘキサンからの再結晶化により、［ＲＳ］−２−｛４−オクタノイルフェノキシ｝デカン酸（９．４ｇ、８６％）を白色固体として得た。m.p. 45-47℃；1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 7.93 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.91 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 4.72 (dd, J = 6.8, 5.7 Hz, 1H), 2.90 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.98-2.04 (m, 2H), 1.67-1.74 (m, 2H), 1.46-1.59 (m, 2H), 1.24-1.37 (m, 18H), 0.87 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 0.88 (t, J = 6.9 Hz, 3H)。このエタノール（２００ｍＬ）中の酸（９．４ｇ、２４．１ｍｍｏｌ）溶液を重炭酸ナトリウム（２．０ｇ、２４．１ｍｍｏｌ）の水（５０ｍＬ）溶液で処理し、反応物を室温で５時間撹拌した。溶媒を真空濃縮し、溶液を水（９５０ｍＬ）で希釈し、ろ過し（０．２μｍ）、凍結乾燥して、ナトリウム（ＲＳ）−２−｛４−オクタノイルフェノキシ｝デカノエートを白色固体（８．８ｇ、８８％）として得た。mp 275-280℃；1H NMR (400 MHz, CD3OD：δ 7.96 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.97 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 4.72 (dd, J = 6.2, 5.9 Hz, 1H), 2.95 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.94-1.99 (m, 2H), 1.64-1.72 (m, 2H), 1.49-1.57 (m, 2H), 1.28-1.40 (m, 18H), 0.90 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 0.89 (t, J = 6.9 Hz, 3H); 13C NMR (101 MHz, CD3OD：δ 200.72, 177.83, 163.37, 130.20, 129.61, 114.70, 79.55, 37.94, 33.19, 31.87, 31.76, 29.45, 29.38, 29.24, 29.22, 29.16, 25.74, 24.85, 22.57, 22.52, 13.29, 13.28; LRMS (ESI): m/z 391 (M - Na+ + 2H+); HPLC 6 min。
【００９５】
化合物Ｉのエナンチオマーの分割
【００９６】
【化１４】
0006055771.tif 000017
【００９７】
（Ｒ）−および（Ｓ）−２−｛４−オクタノイルフェノキシ｝デカノエートのナトリウム塩
１）（Ｓ）−ラクタミドエステルの形成および分離：（ＲＳ）−２−｛４−オクタノイルフェノキシ｝デカン酸（０．９ｇ、２．４ｍＬ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液を、塩化オキサリル（０．２６ｍＬ、３．１ｍｍｏｌ）の滴下で処理し、反応物を室温で１時間撹拌した。トリエチルアミン（０．５１ｍＬ、３．７ｍｍｏｌ）を添加した後、（Ｓ）−ラクタミド（０．５ｇ、６．１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で２０時間撹拌した。次に、溶液を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、１Ｍの水性塩化水素（１００ｍＬ）、水（１００ｍＬ）、および飽和塩化ナトリウム（５０ｍＬ）で洗浄し、次に硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空蒸発した。この２つのジアステレオマーを、Ｂｉｏｔａｇｅ（商標）４０Ｌカラム（シリカ）上で、１：４〜１：１のジエチルエーテル／ヘキサンで溶離した後、１：４〜１：１の酢酸エチル／ヘキサンで溶離して、分離した。これにより、別々の純粋なジアステレオマーが得られた。
【００９８】
第１のジアステレオマー（０．５１ｇ、４５％）を白色のろう様固体として得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 7.93 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.91 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.68 (br s, 1H), 5.54 (br s, 1H), 5.22 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 4.77 (dd, J = 7.3, 5.2 Hz, 1H), 2.88 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.92-2.08 (m, 2H), 1.69, (tt, J = 7.3, 7.3 Hz, 2H), 1.46-1.56 (m, 2H), 1.47, (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.23-1.38 (m, 18H), 0.86 (t, J = 6.6 Hz, 6H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3：δ 199.15, 172.34, 170.09, 161.35, 131.47, 130.82, 114.56, 76.70, 71.16, 38.59, 32.90, 32.00, 31.93, 29.57, 29.52, 29.35 (3C), 25.26, 24.68, 22.84 (2C), 17.85, 14.29 (2C)。
【００９９】
第２のジアステレオマー（０．５ｇ、４２％）を粘性の無色油として得た
1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 7.90 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.91 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.25 (br s, 1H), 6.15 (br s, 1H), 5.20 (q, J = 6.9 Hz, 1H), 4.79 (dd, J = 6.6, 5.9 Hz, 1H), 2.88 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.95-2.01 (m, 2H), 1.68, (tt, J = 7.3, 7.3 Hz, 2H), 1.47-1.55 (m, 2H), 1.39, (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.22-1.37 (m, 18H), 0.86 (t, J = 6.8 Hz, 6H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3：δ 199.43, 172.71, 170.29, 161.52, 131.31, 130.60, 114.84, 76.48, 71.13, 38.59, 32.80, 32.00, 31.93, 29.58, 29.53, 29.36 (3C), 25.36, 24.76, 22.84, 17.69, 14.29 (2C)。
【０１００】
２）ジアステレオマーの対応するナトリウム塩への転化
一般的手順
【０１０１】
ジアステレオマーエステル（１．７ｇ、３．７ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（７２ｍＬ）溶液を、水酸化リチウム（０．５ｇ、１８．７）の水（１８ｍＬ）溶液で処理し、反応物を室温で１７時間撹拌した。この反応物を、１Ｍの水性塩化水素（１５０ｍＬ）の添加により急冷し、酢酸エチル（２ｘ１００ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を水（１５０ｍＬ）および飽和塩化ナトリウムで洗浄した後、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空ろ過および蒸発で粗製の酸を得た。
【０１０２】
第１のエナンチオマー（より高いＲｆ、シリカゲル）
【０１０３】
１：９〜７：３の酢酸エチル／ヘキサンで溶出したＢｉｏｔａｇｅ（商標）４０Ｌカラム（シリカ）上での精製により、精製された酸のエナンチオマーが白色固体（１．３ｇ、８７％）として得られた。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 11.50 (s, 1H), 7.92 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 4.71 (dd, J = 6.4, 5.9 Hz, 1H), 2.89 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.97-2.03 (m, 2H), 1.69, (tt, J = 7.1, 7.1 Hz, 2H), 1.45-1.59 (m, 2H), 1.21-1.38 (m, 18H), 0.862 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 0.859 (t, J = 6.8 Hz, 3H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3：δ 200.20, 176.59, 161.76, 131.00, 130.77, 114.83, 76.15, 38.59, 32.80, 32.03, 31.93, 29.59, 29.53, 29.39, 29.37 (2C), 25.38, 24.91, 22.89 (2C), 14.30 (2C)。この酸（１．３ｇ、３．２ｍｍｏｌ）のエタノール（２０ｍＬ）溶液を、重炭酸ナトリウム（０．３ｇ、３．２ｍｍｏｌ）の水（５ｍＬ）溶液で処理し、反応物を室温で３日間撹拌した。溶媒を真空蒸発して、粗製塩を白色ろう様固体として得た。この材料を水（１３０ｍＬ）に溶解させ、ろ過し（０．２ミクロン、ナイロン）、凍結乾燥して、純粋なエナンチオマーを白色固体（１．１ｇ、９７％）として得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD：δ 7.91 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.46 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 2.92 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.90-1.95 (m, 2H), 1.66, (tt, J = 7.2, 7.2 Hz, 2H), 1.44-1.61 (m, 2H), 1.24-1.39 (m, 18H), 0.890 (t, J = 6.7 Hz, 3H), 0.882 (t, J = 6.7 Hz, 3H); 13C NMR (101 MHz, CD3OD：δ 200.66, 177.83, 163.37, 130.24, 129.64, 114.73, 79.59, 37.96, 33.20, 31.87, 31.76, 29.46, 29.40, 29.26, 29.22, 29.16, 25.75, 24.86, 22.57, 22.53, 13.32, 13.29。他のデータは今後収集する。
【０１０４】
第２のエナンチオマー（より低いＲｆ、シリカゲル）
【０１０５】
１：９〜７：３の酢酸エチル／ヘキサンで溶出したＢｉｏｔａｇｅ（商標）４０Ｌカラム（シリカ）上の精製により、精製された酸のエナンチオマーを白色固体（１．１ｇ、８７％）として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 11.51 (s, 1H), 7.91 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 4.71 (dd, J = 6.6, 5.9 Hz, 1H), 2.89 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.97-2.03 (m, 2H), 1.69, (tt, J = 7.1, 7.1 Hz, 2H), 1.45-1.58 (m, 2H), 1.21-1.37 (m, 18H), 0.862 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 0.858 (t, J = 7.0 Hz, 3H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3：δ 200.16, 176.47, 161.77, 131.03, 130.76, 114.84, 76.18, 38.58, 32.79, 32.02, 31.93, 29.58, 29.52, 29.37, 29.36 (2C), 25.36, 24.91, 22.84 (2C), 14.35, 14.28。この酸（１．１ｇ、２．７ｍｍｏｌ）のエタノール（１６ｍＬ）溶液を、重炭酸ナトリウム（０．２ｇ、２．７ｍｍｏｌ）の水（４ｍＬ）溶液で処理し、反応物を室温で１８時間撹拌した。溶媒を真空蒸発させ、粗製塩を透明な無色のシロップとして得た。この材料を水（１００ｍＬ）に溶解させ、ろ過し（０．２ミクロン、ナイロン）、凍結乾燥して、純粋なエナンチオマーを白色固体として得た（１．１ｇ、９９％）。1H NMR (400 MHz, CD3OD：δ 7.91 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 4.46 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 2.92 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.90-1.95 (m, 2H), 1.66, (tt, J = 7.1, 7.1 Hz, 2H), 1.45-1.61 (m, 2H), 1.24-1.39 (m, 18H), 0.890 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.881 (t, J = 6.9 Hz, 3H); 13C NMR (101 MHz, CD3OD：δ 200.65, 177.82, 163.37, 130.20, 129.65, 114.74, 79.58, 37.96, 33.19, 31.87, 31.76, 29.46, 29.40, 29.26, 29.22, 29.16, 25.75, 24.86, 22.57, 22.53, 13.32, 13.29。
【０１０６】
実施例２：３−オクタノイル安息香酸ナトリウム
【０１０７】
【化１５】
0006055771.tif 000018
【０１０８】
３−ホルミル安息香酸メチル（２．０ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）溶液を、窒素下で−７８℃まで冷却した。ｎ−へプチルマグネシウム臭化物のテトラヒドロフラン（１Ｍ、１２．２ｍＬ）溶液を、３０分間にわたり滴加し、反応物を−７８℃で３時間撹拌した。塩化水素水溶液（１Ｍ）の添加により反応物を急冷し、混合物を酢酸エチルで抽出した（３ｘ）。抽出物をまとめて硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中でろ過および蒸発を行った。粗材料を、１０％酢酸エチル／ヘキサンで溶出しながらＢｉｏｔａｇｅ（商標）４０Ｍカラム（シリカ）上で精製し、（ＲＳ）−３−｛１−ヒドロキシオクチル｝安息香酸メチル（２．２ｇ、６９％）を無色油として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 7.98 (s, 1H), 7.91 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.39 (dd, J = 7.8, 7.8 Hz, 1H), 4.65-4.71 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 2.33 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 1.62-1.80 (m, 2H), 1.18-1.41 (m, 10H), 0.85 (t, J = 6.9 Hz, 3H)。第２級アルコール（２．０ｇ、７．５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５０ｍＬ）溶液をシリカゲル（１６ｇ）およびクロロクロム酸ピリジニウム（３．２ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）で処理し、反応物を室温で一晩撹拌した。反応混合物をシリカゲルでろ過し、残渣をジクロロメタンで洗浄した。混合ろ過液と洗液を真空蒸発させて、３−オクタノイル安息香酸メチル（９．５ｇ、８６％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 8.58-8.59 (m, 1H), 8.20-8.23 (m, 1H), 8.14-8.17 (m, 1H), 7.53-7.57 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.00 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.74 (tt, J = 7.3, 7.3 Hz, 2H), 1.24-1.40 (m, 8H), 0.88 (t, J = 6.9 Hz, 3H)。メチルエステル（１．０ｇ、３．８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）溶液を、水酸化リチウム一水和物（８００ｍｇ、１９．１ｍｍｏｌ）の水（７ｍＬ）溶液で処理した。次にメタノール（７ｍＬ）を添加し、混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物を、ｐＨが５未満になるまで水性塩化水素（１Ｍ）で処理した後、酢酸エチル（３ｘ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中でろ過と蒸発を行い、３−オクタノイル安息香酸（９１９ｍｇ、９７％）を得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD：δ 8.59 (dd, J = 1.7, 1.2 Hz, 1H), 8.18-8.24 (m, 2H), 7.61 (ddd, J = 7.8, 7.8, 0.4 Hz, 1H), 3.05 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.71 (tt, J = 7.3, 7.3 Hz, 2H), 1.27-1.41 (m, 8H), 0.90 (t, J = 7.0 Hz, 3H)。この酸（９１９ｍｇ、３．７ｍｍｏｌ）と重炭酸ナトリウム（３１１ｍｇ、３．７ｍｍｏｌ）との混合物を水（２０ｍＬ）で処理し、反応物を超音波処理で加熱し、固体がほとんど溶解するまで撹拌した。アセトニトリルを添加し、混合物をろ過し（０．４５μｍ）、凍結乾燥して、３−オクタノイル安息香酸ナトリウムを白色固体（１．０ｇ、１００％）として得た。1H NMR (400 MHz, D2O：δ 8.14 (s, 1H), 7.81 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.18 (dd, J = 8.0, 7.8 Hz, 1H), 2.69 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.33 (tt, J = 7.0, 7.0 Hz, 2H), 0.88-1.03 (m, 8H), 0.54 (t, J = 7.0 Hz, 3H). 13C NMR (101 MHz, D2O：δ 203.93, 173.62, 137.25, 136.27, 133.92, 130.27, 128.59, 128.48, 38.58, 31.41, 28.82, 28.79, 24.25, 22.32, 13.60; LRMS (ESI): m/z 249 (M - Na+ + 2H+); HPLC: 4 min。
【０１０９】
実施例３：（ＲＳ）−５−オクタノイルインダンカルボン酸ナトリウム
【０１１０】
【化１６】
0006055771.tif 000019
【０１１１】
インダン−２−カルボン酸（５０４ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）および硫酸（２ｍＬ）の乾燥エタノール中溶液を、７５℃で３日間加熱した。この溶液を真空濃縮した後、ジクロロメタンと水に分離した。水性水酸化ナトリウム（５Ｍ）で水層のｐＨを１３〜１４に調節し、層を分離させた。水層を飽和塩化ナトリウムで希釈し、ジクロロメタンで抽出した（２ｘ）。飽和塩化ナトリウムで混合有機抽出物を洗浄し、真空中でろ過し、蒸発させて、粗生成物を得た。Ｂｉｏｔａｇｅ（商標）２５Ｓカラム（シリカ）上で、３％酢酸エチル／ヘキサンで溶出しながら精製し、インダン−２−カルボン酸エチル（５２６ｍｇ、９６％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 7.22-7.26 (m, 2H), 7.17-7.20 (m, 2H), 4.21 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.19-3.39 (m, 5H), 1.31 (t, J = 7.0 Hz, 3H)。インダン−２−カルボン酸エチル（１００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）と塩化アルミニウム（１６４ｍｇ、１２ｍｍｏｌ）とのジクロロメタン（４ｍＬ）中の混合物を、塩化オクタノイル（０．１ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）を用いて室温で処理し、反応物を周囲温度で一晩撹拌した。この反応混合物を氷と塩酸水溶液（１Ｍ）との混合物の上に注ぎ、ジクロロメタンで抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物を硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中でろ過し、蒸発させた。この粗材料をＢｉｏｔａｇｅ（商標）カラム（シリカ）上で５％酢酸エチル／ヘキサンで溶出しながら精製し、（ＲＳ）−５−オクタノイル−インダン−２−カルボン酸エチル（１１０ｍｇ、６５％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 7.69-7.77 (m, 2H), 7.29-7.32 (m, 1H), 4.07-4.17 (m, 2H), 3.15-3.36 (m, 5H), 2.84-2.90 (m, 2H), 1.62-1.70 (m, 2H), 1.19-1.34 (m, 8H), 0.80-0.87 (m, 3H)。テトラヒドロフラン（３ｍＬ）、メタノール（１ｍＬ）、および水（１ｍＬ）の混合物中のエチルエステル（８２ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の懸濁液を水酸化リチウム（４３ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を真空濃縮し、残渣を水で希釈した。ｐＨは、水性塩化水素（１Ｍ）でｐＨ４に調節し、混合物を酢酸エチルで抽出した（３ｘ）。混合有機抽出物を硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空でろ過し、蒸発させ、粗生成物を得た。Ｂｉｏｔａｇｅ（商標）１２Ｍカラム（シリカ）上で、２％酢酸エチル／ヘキサンで溶出しながら精製し、（ＲＳ）−５−オクタノイル−インダン−２−カルボン酸（６０ｍｇ、８０％）を得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD：δ 7.80 (s, 1H), 7.78 (dd, J = 7.8, 1.4 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.36 (tt, J = 8.2, 8.2 Hz, 1H), 3.24 (d, J = 8.2 Hz, 4H), 2.96 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.67 (tt, J = 7.2, 7.2 Hz, 2H), 1.26-1.39 (m, 8H), 0.89 (t, J = 6.9 Hz, 3H)。この酸（６０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）のエタノール（４ｍＬ）および水（１ｍＬ）中の溶液を重炭酸ナトリウム（１８ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）で処理し、反応物を室温で一晩撹拌した。溶媒を真空濃縮し、溶液を水で希釈し、ろ過し（２０μｍ）、凍結乾燥して、（ＲＳ）−５−オクタノイル−インダン−２−カルボン酸ナトリウムを白色固体（５４ｍｇ、８７％）として得た。1H NMR (400 MHz, CD3OD：δ 7.91 (s, 1H), 7.76 (dd, J = 7.8, 1.6 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.16-3.25 (m, 5H), 2.97 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.68 (tt, J = 7.3, 7.3 Hz, 2H), 1.28-1.40 (m, 8H), 0.90 (t, J = 7.0 Hz, 3H); LRMS (ESI): m/z 289 (M - Na+ + 2H+); HPLC: 5 min。
【０１１２】
実施例４：化合物ＶＩＩＩ：（ＲＳ）−２−｛−４−オクタノイルフェノキシ｝オクタン酸ナトリウムの合成
１−｛４−ヒドロキシフェニル｝−１−オクタノン（４４０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）および（ＲＳ）−２−ブロモオクタン酸エチル（５５２ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）を化合物Ｉの調製に用いた手順に従って反応させ、（ＲＳ）−２−｛４−オクタノイルフェノキシ｝オクタン酸エチル（６０５ｍｇ、７８％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 7.91 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.88 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 4.66 (dd, J = 5.1, 7.4 Hz, 1H), 4.20 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.88 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.88-2.02 (m, 2H), 1.70 (tt, J = 7.2, 7.2 Hz, 2H), 1.41-1.56 (m, 2H), 1.25-1.37 (m, 14H), 1.23 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.87 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.86 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3：δ 199.41, 171.48, 161.81, 131.01, 130.54 (2C), 114.77 (2C), 76.75, 61.62, 38.56, 32.90, 31.94, 31.78, 29.60, 29.38, 29.07, 25.33, 24.80, 22.85, 22.75, 14.39, 14.31, 14.26。結果として生じたエステル（６０５ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を、化合物Ｉの調製に用いた手順に従って水酸化リチウム（１８６ｍｇ、７．８ｍｍｏｌ）で鹸化し、（ＲＳ）−２−｛４−オクタノイルフェノキシ｝オクタン酸（４８７ｍｇ、８７％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 9.70 (br s, 1H), 7.89 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 4.69 (dd, J = 5.9, 6.6 Hz, 1H), 2.87 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.95-2.01 (m, 2H), 1.67 (tt, J = 7.2, 7.2 Hz, 2H), 1.43-1.58 (m, 2H), 1.24-1.37 (m, 14H), 0.851 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.849 (t, J = 7.4 Hz, 3H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3：δ 200.38, 176.08, 161.84, 130.85, 130.78 (2C), 114.83 (2C), 76.20, 38.56, 32.79, 31.93, 31.76, 29.57, 29.35, 29.05, 25.34, 24.92, 22.84, 22.74, 14.29, 14.23。次に、この酸（５００ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）を、化合物Ｉの調製に用いた手順に従ってナトリウム塩に転化させ、（ＲＳ）−２−｛４−オクタノイルフェノキシ｝オクタン酸ナトリウム（４０４ｍｇ、７６％）を白色固体として得た。mp 165-170℃；1H NMR (400 MHz, CD3OD：δ 7.91 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.95 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.58 (dd, J = 6.1, 6.3 Hz, 1H), 2.91 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.91-1.96 (m, 2H), 1.62-1.69 (m, 2H), 1.44-1.58 (m, 2H), 1.25-1.39 (m, 14H), 0.87-0.90 (m, 6H); 13C NMR (101 MHz, CD3OD：δ 200.50, 176.40, 162.96, 130.28 (2C), 129.94, 114.71 (2C), 78.38, 38.00, 32.98, 31.79, 31.74, 29.27, 29.20, 29.05, 25.50, 24.79, 22.56, 22.51, 13.36, 13.34; LRMS (ESI): m/z 769 (M2H+), 748 (2M - Na+ + 2H+), 363 (M - Na+ + 2H+); HPLC: 3 min。
【０１１３】
実施例５：化合物ＩＸ：（ＲＳ）−２−｛４−ブチリルフェノキシ｝デカン酸ナトリウムの合成
１−｛４−ヒドロキシフェニル｝−１−ブタノン（３２８ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）と（ＲＳ）−２−ブロモデカン酸エチル（６１４ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）とを、化合物Ｉの調製に用いた手順に従って反応させ、（ＲＳ）−２−｛４−ブチリルフェノキシ｝デカン酸エチル（６１６ｍｇ、８５％）を澄んだ無色油として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 7.88 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.86 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 4.64 (dd, J = 5.7, 6.8 Hz, 1H), 4.17 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.83 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.85-1.99 (m, 2H), 1.65-1.75 (m, 2H), 1.39-1.44 (m, 2H), 1.22-1.34 (m, 10H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.94 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.83 (t, J = 7.0 Hz, 3H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3：δ 199.04, 171.39, 161.80, 130.98, 130.48 (2C), 114.74 (2C), 76.68, 61.55, 40.37, 32.85, 32.01, 29.53, 29.37 (2C), 25.33, 22.84, 18.11, 14.34, 14.29, 14.10。結果として生じたエステル（６１６ｍｇ、１．７０ｍｍｏｌ）を、化合物Ｉの調製に用いた手順に従って水酸化リチウム（２０３ｍｇ、８．５ｍｍｏｌ）で鹸化させ、（ＲＳ）−２−｛４−ブチリルフェノキシ｝デカン酸（１６６ｍｇ、２９％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 10.06 (br s, 1H), 7.91 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 4.70 (dd, J = 5.9, 6.4 Hz, 1H), 2.87 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.96-2.02 (m, 2H), 1.68-1.77 (m, 2H), 1.44-1.59 (m, 2H), 1.24-1.37 (m, 10H), 0.97 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.86 (t, J = 7.0 Hz, 3H);  13C NMR (101 MHz, CDCl3：δ 199.95, 176.56, 161.74, 131.03, 130.73 (2C), 114.82 (2C), 76.16, 40.47, 32.79, 32.03, 29.53, 29.39, 29.37, 25.38, 22.86, 18.26, 14.31, 14.12。次に、この酸（１６６ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を、化合物Ｉの調製に用いた手順に従ってナトリウム塩に転化させ、［ＲＳ］−２−｛４−ブチリルフェノキシ｝デカン酸ナトリウム（１４９ｍｇ、８５％）を白色固体として得た。mp 262-278℃；1H NMR (400 MHz, CD3OD：δ 7.91 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 4.70 (dd, J = 6.1, 6.5 Hz, 1H), 2.90 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.88-1.93 (m, 2H), 1.67 (tq, J = 7.4, 7.4 Hz, 2H), 1.41-1.57 (m, 2H), 1.20-1.35 (m, 10H), 0.95 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.83 (t, J = 6.9 Hz, 3H); 13C NMR (101 MHz, CD3OD：δ 201.82, 178.07, 163.36, 130.53 (2C), 129.54, 114.83 (2C), 79.46, 39.99, 33.11, 31.80, 29.40, 29.27, 29.15, 25.72, 22.54, 18.30, 14.46, 14.15; LRMS (ESI): m/z 713 (M2H+), 669 (2M - 2Na+ + 3H+), 335 (M - Na+ + 2H+); HPLC: 3 min。
【０１１４】
実施例6：化合物Ｘ：［ＲＳ］−２−｛４−ヘキサノイルフェノキシ｝デカン酸ナトリウムの合成
１−｛４−ヒドロキシフェニル｝−１−ヘキサノン（３８４ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）と［ＲＳ］−２−ブロモデカン酸エチル（６１４ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）とを、化合物Ｉの調製に用いた手順に従って反応させ、（ＲＳ）−２−｛４−ヘキサノイルフェノキシ｝デカン酸エチル（６２８ｍｇ、８０％）を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 7.86 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.84 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 4.60-4.65 (m, 1H), 4.15 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.83 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.86-1.97 (m, 2H), 1.61-1.70 (m, 2H), 1.38-1.52 (m, 2H), 1.20-1.34 (m, 14H), 1.18 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.78-0.87 (m, 6H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3：δ 199.17, 171.36, 161.78, 130.95, 130.46 (2C), 114.72 (2C), 76.66, 61.51, 38.41, 32.84, 32.00, 31.76, 29.52, 29.35 (2C), 25.31, 24.41, 22.83, 22.74, 14.33, 14.26, 14.14。結果として生じたエステル（６２８ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を、化合物Ｉの調製に用いた手順に従って水酸化リチウム（１９３ｍｇ、８．０ｍｍｏｌ）で鹸化させ、（ＲＳ）−２−｛４−ヘキサノイルフェノキシ｝デカン酸を得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 7.93 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 6.91 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 5.77 (br s, 1H), 4.70 (dd, J = 5.8, 6.6 Hz, 1H), 2.89 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.97-2.03 (m, 2H), 1.67-1.74 (m, 2H), 1.44-1.60 (m, 2H), 1.23-1.37 (m, 14H), 0.90 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.87 (t, J = 7.0 Hz, 3H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3：δ 199.76, 176.29, 161.56, 131.20, 130.70 (2C), 114.81 (2C), 76.12, 38.56, 32.78, 32.03, 31.80, 29.53, 29.40, 29.36, 25.36, 24.51, 22.87, 22.76, 14.33, 14.20。次に、この酸（４６８ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を化合物Ｉの調製に用いた手順に従ってナトリウム塩に転化させ、［ＲＳ］−２−｛４−ヘキサノイルフェノキシ｝デカン酸ナトリウム（４５９ｍｇ、９３％）を白色固体として得た。mp 275-280℃；1H NMR (400MHz, CD3OD：δ 7.91 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.44-4.48 (m, 1H), 2.89-2.96 (m, 2H), 1.88-1.96 (m, 2H), 1.63-1.71 (m, 2H), 1.44-1.61 (m, 2H), 1.24-1.38 (m, 14H), 0.84-0.93 (m, 6H); 13C NMR (101MHz, CD3OD：δ 200.89, 177.86, 163.36, 130.27 (2C), 129.60, 114.75 (2C), 79.54, 37.94, 33.18, 31.86, 31.49, 29.44, 29.38, 29.21, 25.73, 24.55, 22.58, 22.45, 13.36, 13.23; LRMS (ESI): m/z 769.8 (M2H+), 747.8 (2M - Na+ + 2H+), 363.2 (M - Na+ + 2H+); HPLC: 3.min。
【０１１５】
実施例７：（ＲＳ）−４−オクタノイルインダン−２−カルボン酸ナトリウムＸＸＶＩ
（ＲＳ）−４−オクタノイル−２−カルボン酸メチル（７１ｍｇ、４％）を、その異性体である（ＲＳ）−５−オクタノイル−２−カルボン酸メチルの調製中に、副生成物として単離した。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 7.66 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 7.6, 7.6 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.64 (A of ABX, J = 18.0, 9.4 Hz, 1H), 3.48 (B of ABX, J = 18.1, 7.3 Hz, 1H), 3.13-3.34 (m, 3H), 2.90 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.68 (tt, J = 7.2, 7.2 Hz, 2H), 1.24-1.38 (m, 8H), 0.86 (t, J = 6.9 Hz, 3H); 13C NMR (101 MHz, CDCl3：δ 203.01, 176.79, 144.82, 143.67, 134.73, 129.30, 128.35, 127.83, 52.91, 44.06, 40.82, 38.71, 36.44, 32.73, 30.34, 30.19, 25.36, 23.64, 15.10。このメチルエステル（７１．０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を標準のプロトコルに従って鹸化させ、（ＲＳ）−４−オクタノイル−２−カルボン酸（６６．０ｍｇ、９６％）をオフホワイトの固体として得た。1H NMR (400 MHz, CDCl3：δ 7.69 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.26 (dd, J = 7.6, 7.6 Hz, 1H), 3.67 (A of ABX, J = 18.0, 9.0 Hz, 1H), 3.56 (B of ABX, J = 18.0, 6.9 Hz, 1H), 3.19-3.39 (m, 3H), 2.93 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.70 (tt, J = 7.3, 7.3 Hz, 2H), 1.24-1.38 (m, 8H), 0.88 (t, J = 6.9 Hz, 3H)。次に、結果として生じた酸（６６．０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）を標準のプロトコルに従ってナトリウム塩に転化させ、（ＲＳ）−４−オクタノイル−２−カルボン酸ナトリウム（７０．０ｍｇ、９９％）をオフホワイトの固体として得た。mp 106-110℃；1H NMR (400 MHz, CD3OD：δ 7.69 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.24 (dd, J = 7.6, 7.6 Hz, 1H), 3.37-3.56 (m, 2H), 3.10-3.21 (m, 3H), 2.95 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.66 (tt, J = 7.3, 7.3 Hz, 2H), 1.26-1.39 (m, 8H), 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 3H); 13C NMR (101 MHz, CD3OD：δ 203.56, 182.93, 145.34, 143.96, 133.93, 128.26, 126.97, 126.42, 47.62, 39.89, 38.69, 36.70, 31.76, 29.21, 29.17, 24.55, 22.52, 13.28; LRMS (ESI): m/z 577 (2M - 2Na+ + 3H+), 289 (M - Na+ + 2H+); HPLC: 3.0 min。
【０１１６】
一般的に言って、本発明のケトン化合物はいずれも、３種類の異なる方法で調製し得る。第１の手段は、カルボン酸カリウムなどの塩基の存在下におけるアルキルケトフェニルとブロモアルキルエステルとのカップリング反応である。次のステップは、このエステルの鹸化と、それに続く金属塩の形成である。また、エステルの代わりにブロモアルキル酸を用いることによって、この手順の修正に取り組むことが可能である。この場合は、カップリング反応の間に形成されたカリウム塩を対応する酸へとその場で中性化し、この酸を所望の金属塩へと転化させる。第２のアプローチは、臭化アルキルマグネシウムとアルデヒド安息香酸誘導体またはアルデヒドフェニル酢酸誘導体との間のグリニャール反応を伴う。結果として生じたアルコールを対応するケトンへと酸化し、続いてこのエステルを酸へと鹸化すると金属塩が形成される。第３の手段は、この酸塩化物とアラルキルエステルとのＦｉｅｄｅｌ−Ｃｒａｆｔ反応を用いることである。これによって、酸へと転化させることができ、次に最終生成物の金属塩をもたらすことのできるケトエステルが得られる。
【０１１７】
実施例８：リポ多糖刺激ＲＡＷ２６４．７細胞上のＩＬ−１２の産生に化合物が及ぼす作用
ＩＬ−１２はＴヘルパー（Ｔｈ１／Ｔｈ２）バランスの重要な調節因子であるが、これが、どちらにしても、自己免疫、アトピー、および腫瘍など、いくつかの感染症では決定的に歪んでいる。ＩＬ−１２の産生を増加させる化合物が、アトピーやアレルギーの症状に限定はされないがこれらをはじめとするいくつかの疾患の治療には有用であり得る―Ｉ．  Ｊ．  Ｅｌｅｎｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．  ＮＹ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．９１７，９４−１０５  （２０００）、ＨＩＶ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ；  Ｆ．  Ｖｉｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗｏｒｋ  ２１（３），  ２１５−２１８  （２０１０）、  ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ；  Ｌ．Ａ．  Ｂａｓｉｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ＤＯＩ  １０．１１８６／１４７９−５８７６−６−２６  （２００７），およびｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｄｉｓｅａｓｅ，  Ｍ．Ｐ．  Ｋｅａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２８１，  Ｌ９２−Ｌ９７  （２００１）。上に述べた通り、ＩＬ−１２が線維芽細胞の分化を阻害することが示されている―Ｄ．Ｄ．  Ｓｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｌｅｕｋｏｃ．  Ｂｉｏｌ．  ８３，  １３２３−１３３３  （２００８）。線維芽細胞は、損傷および侵入に対する組織の応答に関与する間葉細胞の前駆細胞を循環させている。このような細胞の分化、輸送、および機能に関して動物モデルから蓄積されている知見は、慢性の炎症とコラーゲンの過剰蓄積を特徴とする疾患の発現への関与を思わせる。例えば、Ｅ．Ｌ．  ＨｅｒｚｏｇおよびＲ．  Ｂｕｃａｌａ、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ＤＯＩ  １０．１０１６／ｊ．ｅｘｐｈｅｍ．２０１０．０３．００４（２０１０）が示すような、これらの病的障害および線維性疾患としては、喘息、肺線維症（この疾患の最も普通の形態である特発性肺線維症）、皮膚疾患（線維芽細胞は、強皮症および腎性全身性線維症などの皮膚の線維形成性疾患を患う患者の皮膚に認められている）、心疾患（虚血、心筋症―線維芽細胞は、家族性の閉塞性肥大型心筋症に寄与すると主張されている）、肝障害（感染性か、自己免疫性か、または毒素によるかに拘らず）から発生する肝線維症、腎線維症（慢性腎疾患および糖尿病性腎疾患を含むが、これらに限定されない）、および他のさまざまな線維性障害、例えば限定はされないが加齢などが挙げられる（Ｊ．  Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．  Ｇｅｒｏｎｔｏｌ．  Ａ  Ｂｉｏｌ．  Ｓｃｉ．  Ｍｅｄ．  Ｓｃｉ．  ６４，  ７３１−７３９（２００９））。
【０１１８】
選択された化合物がＩＬ−１２の産生に及ぼす影響は、ＴＡＷ２６４．７（マクロファージ様）細胞を対象として取り組まれた。ＲＡＷ２６４．７細胞を、１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳを用いて、化合物の存在下または不在下、空気９５％−二酸化炭素５％の湿気のある環境で、３７℃で２１時間培養した。ＩＬ−１２ＥＬＩＳＡを用いて、培地内のＩＬ−１２濃度をメーカー（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の推奨に従って測定した。
【０１１９】
表２は、代表的な化合物がＩＬ−１２の産生に及ぼす影響を表している。いずれの化合物も、炎症状態下（つまり、ＬＰＳの存在下）で、ＩＬ−１２の産生の有意な増加を誘導している。ＬＰＳが不在の場合は、ＩＬ−１２の産生に対する化合物の影響はない。
【０１２０】
表２：ＩＬ−１２の産生に対する代表的化合物の影響
【表３】
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【０１２１】
非炎症性および炎症性の状態の下で化合物ＩがＩＬ−１２の産生に及ぼす影響を、図１に示す。化合物Ｉは、炎症が存在する場合に限り、インビトロでＩＬ−１２を増加させる（ＲＡＷ．２６５細胞）。
【０１２２】
これらの結果は、式Ｉおよび式ＩＩの化合物がＬＰＳの存在下でＩＬ−１２の産生を誘導することを示している。ＩＬ−２の産生を刺激するこの能力は、本発明の化合物がＩＬ−１２の誘導の結果として、血液障害（例えば、貧血、好中球減少）、炎症関連疾患、および線維症関連臓器機能不全の予防および／または治療に有用であり得ることを意味している。このことは、上記の資料、Ｌ．  Ａ．  Ｂａｓｉｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ＤＯＩ  １０，１１８６／１４７９−５８７６−６−２６（２００７）によっても立証され、ＩＬ−１２が血液生成（白血球、赤血球、および血小板）を刺激することが教示されている。このことは、さらにＴ．Ｋ．  Ｔａｒｒａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．も、Ｊ．  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １８９，  ２１９−２３０  （１９９９）の中で立証しており、実験的自己免疫ブドウ膜炎のためのマウスモデルに対して実施された作業では、治療が指定された時間に実施されるならば、自己免疫疾患における偏ったヘルパーＴ（Ｔｈ１／Ｔｈ２）バランスが、疾患の進行からの保護へと有利に変化し得ることを教示している。自己免疫疾患におけるヘルパーＴ細胞バランスの修復のためのＩＬ−１２の使用は、米国特許第７，５３４，４３０号（２００９年）にさらに解説されている。この特許は、ＩＬ−１２およびＩＬ−１２拮抗薬を免疫細胞バランスの修復および多発性自己免疫疾患の治療のために使用することを教示している。最後に、このことは、上述した資料によってなおもさらに立証されており、ＩＬ−１２が、ＣＴＧＦの産生を阻害する（細胞レベルで、実施例５も参照されたい）こと、および線維芽細胞の分化を阻害することによって、線維症を減少させることを教示している。線維症は、臓器機能不全およびそれに続く臓器不全に関連する罹患率および死亡率と関係がある。
【０１２３】
実施例９：正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）上のＴＧＦ−β誘導性ＣＴＧＦ産生に化合物が及ぼす影響
線維症とは、瘢痕組織の過剰かつ持続的な形成のことであり、これは肺、腎臓、目、心臓、肝臓、および皮膚に影響を及ぼすさまざまな慢性疾患における臓器不全に関連した罹患率および死亡率の原因となる（Ｘ．  Ｓｈｉ−Ｗｅｎ，  Ａ．  Ｌｅａｓｋ，  Ｄ．  Ａｂｒａｈａｍ  ｉｎ  ＳｃｉｅｎｃｅＤｉｒｅｃｔ  １９，  １３３−１４４（２００８）。例えば、腎疾患では、尿細管間質性線維症が、病因にかかわらず疾患の進行および最終的には末期腎疾患（ＥＳＲＤ）をもたらし、慢性腎疾患（ＣＫＤ）によくみられる最終経路となっている。ＣＴＧＦは、上皮間葉移行（ＥＭＴ）の促進に対するその影響を通じて、このプロセスにかかわっている。ＥＭＴは、正常に機能している細胞を、瘢痕組織の成分を産生する筋線維芽細胞へと変容させる細胞プロセスである。正常な組織修復プロセスでは、ＥＭＴが組織の治癒を促進し、治癒がいったん実現すれば活動を停止する。しかしながら、慢性疾患に生じるような再発性の発作および障害が、増殖因子の不均衡（ＣＴＧＦレベルの上昇）および機能不全のシグナルを生じさせ、持続性のＥＭＴをもたらす。ＣＴＧＦは、腎臓、肺、および肝臓をはじめとする多様な組織でのＥＭＴの発生を促進する。最近の研究では、超ろ過、タンパク尿、肥大、および微小血管の漏出をはじめ、ＣＫＤに伴う他の病理にもＣＴＧＦが関係していることを示唆している。抗ＣＴＧＦ療法はこの疾患プロセスをいくぶん逆転させる可能性があることが証明されている。
【０１２４】
ＮＨＤＧを対象として、選択された化合物がＣＴＧＦの産生に及ぼす影響を取り上げた。１０ｎｇ／ｍＬのＴＧＦ−βを入れたかまたは入れないＤＭＥＭ（０．５％ＦＢＳ）の中で、空気９５％−二酸化炭素５％の湿気のある環境で、細胞を３７℃で４８時間培養した。ＣＴＧＦ−ＥＬＩＳＡをメーカー（Ｐｒｅｐｏｔｅｃｈ）推奨に従って用いて、培地中のＣＴＧＦの産生を測定した。表３は、選択された代表的な化合物が、正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）におけるＴＧＦ−β誘導性ＣＧＴＦ産生の阻害に及ぼす影響を表している。
【０１２５】
表３：代表的な化合物がＮＨＤＦにおけるＴＧＦ誘導性ＣＴＧＦ産生の阻害に及ぼす影響
【表４】
0006055771.tif 000021
【０１２６】
この結果は、式Ｉおよび式ＩＩの化合物がＣＴＧＦの産生を阻害することを示すものである。このＣＴＧＦ産生阻害能力は、本発明の化合物が線維症および線維症関連臓器機能不全を予防および／または治療するのに有用であり得るということを意味している。このことは、本実施例の上記および他の部分の上記（Ｄ節―線維症を参照されたい）に記載した線維形成過程におけるＣＴＧＦの重要な役割によって立証される。このことはさらに、ＣＴＧＦに対するヒトモノクローナル抗体が放射線誘導性肺線維症モデルの線維症を逆転させたことが最近明らかにされ（Ｆｉｂｒｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．，  Ｍａｙ  １７，  ２０１０からのプレスリリース、かつ米国ニューオーリンズでのアメリカ胸部学会国際会議で発表された（要約書Ａ１０５４号）という事実によっても、さらに立証される。
【０１２７】
実施例１０：化合物Ｉおよび化合物ＩＩがドキソルビシン誘導性腎毒性モデルの腎保護に及ぼす影響
ドキソルビシン誘導性腎毒性モデルを対象に、以下の手順で、化合物Ｉおよび化合物ＩＩの経口投与によるインビボ保護の実証を試みた。３日目から１０日目にかけて、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（６〜１０週間）を化合物を用いて予防的に処置した。０日目に１０ｍｇ／ｋｇのドキソルビシンを静脈内注入することにより、腎毒性が誘導された。１１日目に血清アルブミンを測定した。
【０１２８】
図２に示す通り、化合物Ｉまたは化合物ＩＩを用いた予防的処置は、ドキソルビシンが誘導する血清アルブミンの低下を阻害する。
【０１２９】
ドキソルビシンが腎毒性および心臓毒性を誘導することは周知である。図３は、ドキソルビシン誘導腎毒性モデルに対して組織化学により決定された組織学的腎病変スコアを表している。図３に示す通り、ドキソルビシンは１１日目に有意な腎病変を誘導する。化合物Ｉを用いた予防的治療は、ドキソルビシンによって誘導された腎病変を糸球体および尿細管のレベルで減少させる。同じような結果が、化合物ＩＩにも観察された。
【０１３０】
ドキソルビシンは、おもに尿細管の領域に初期の病変を誘導する。毒性はさらに糸球体まで広がる（ドキソルビシン後１１日目頃）。図４は、対照および化合物Ｉで治療されたマウスにおけるドキソルビシン誘導性病変の組織学的なマイクログラムを示したものである。ドキソルビシンは、腎細胞アポトーシス、線維症、硬化症、および病気に冒された尿細管領域でのタンパク質蓄積を誘導する。化合物Ｉを用いた治療が、ドキソルビシンの毒性から腎臓を保護する。
【０１３１】
化合物Ｉで治療した動物では血清中のＣＴＧＦ産生に対して著しい阻害が認められることが実証しているように、化合物Ｉによるドキソルビシン誘導性腎毒性からの保護をもたらすと思われる機序は、線維症の阻害を伴う。図５は、化合物Ｉを用いた経口治療がドキソルビシン誘導性腎毒性モデルの血清ＣＴＧＦにおよぼす影響を図示したものである。ドキソルビシンは血清ＣＴＧＦの著しい上昇を誘導するが、化合物Ｉ（ｐ＜０．０１）を用いて治療することにより、これを予防することができる。
【０１３２】
このような結果は、ドキソルビシンで治療したマウスと比べて式Ｉおよび式ＩＩの化合物が、ＣＴＧＦのインビボ産生を阻害した後に、病変スコア、組織マイクログラム、および血清アルブミン濃度の正常化からも明らかなように線維症に起因する組織損傷を減少させることを、これらの結果が立証している。上記のことは、特に腎臓の場合には、本発明の化合物が薬物誘導性（ドキソルビシン）の炎症と、それに続く線維症関連臓器機能不全とを予防および／または治療するために有用であり得ることのインビボの証拠を提供している。
【０１３３】
実施例１１：化学的予防試験
生後６〜８週間の雌のＣ５７ＢＬ／６マウスの免疫反応を、２５０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドの０日目静脈内投与による治療で抑制した。化合物Ｉおよび化合物ＩＩの免疫防御作用を調べるため、−３、−２、および−１日目にそれぞれの化合物を５０ｍｇ／ｋｇずつマウスに経口投与する前治療を実施した。＋５日目に、心穿刺および頸椎脱臼によりマウスを屠殺した。次に、大腿骨（骨髄細胞の供給源として）の徹底的な病理学的観察を記録した。屠殺後、ＰＢＳ緩衝液中で組織を押しつぶし、血球計上で細胞を計数した。
【０１３４】
シクロホスファミドで治療したマウスに対する化合物Ｉおよび化合物ＩＩを用いた経口前治療では、赤色骨髄の細胞数に著しい増加が観察された。（図６）。さらに、シクロホスファミドで治療したマウスに対する両化合物を用いた経口前治療では、白色骨髄の細胞数の増加が観察された（図７）。
【０１３５】
実施例１２：腎線維症のモデルとしての５／６腎摘出術
生後６週間の雄のウィスター系ラットに対し、５／６腎摘出術（５／６−ＮＸ）または疑似手術を実施した。０日目にケタミン麻酔下（６０〜１００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）で左腎の３分の２を除去し、続いて７日目に右腎の全摘を実施した。疑似手術したラットには腎臓の露出および腎周囲脂肪の除去を実施した。疑似手術を受けた動物にはビヒクル（生理食塩水）を与え、対照として用いた。５／６−ＮＸ動物には、ビヒクルまたは化合物Ｉをそれぞれ１０および５０ｍｇ／ｋｇずつ連日投与する経胃的強制飼養による治療を実施した。動物を１日目から１３２日目まで治療し、１３３日目に屠殺した。腎機能を評価するため、クレアチニンクリアランスを２１日目およびその後３週間おきに測定した。次に糸球体ろ過量（ＧＦＲ）を算出した。組織学的病変スコアのほかに血清尿素、血清クレアチニン、および腎ＣＴＧＦも評価した。
【０１３６】
化合物Ｉの経口投与による治療は、１２６日目にＧＦＲの改善をもたらした（ｐ＝０．０８、図８）
【０１３７】
図９は、ＧＦＲに観察された変化を改善率として表わして示したものである。５／６−ＮＸラットが８４日目から１２６日目にかけてＧＦＲの漸減を示したのに対し、化合物Ｉで治療した動物は８４日目および１０５日目にＧＦＲの改善を示した。１２６日目には腎機能が低下している様子であったが、治療していない動物に観察されたものよりは程度が少なかった。
【０１３８】
さらに、図１０から明らかなように、化合物Ｉによる治療はタンパク尿の減少をもたらした。
【０１３９】
図１１は、化合物Ｉ（１０および５０ｍｇ／ｋｇ、経口投与）を用いた１日目から１３２日目にわたる動物の治療が、血清尿素を減少させたことを例示している。
【０１４０】
図１２は、５／６−ＮＸラットに対する化合物Ｉを用いた治療も、１２６日目に血清クレアチニンを減少させたことを示している。
【０１４１】
ＭＣＰ−１が残存腎臓の炎症状態のマーカーである。図１３は、化合物Ｉで治療した５／６−ＮＸラットの尿ＭＣＰ−１の排出量が著明に低下したことを示している。この低下は、化合物Ｉで治療したラットに観察されたＧＦＲの改善、ならびに炎症および線維症の阻害と相関している。
【０１４２】
５／６−ＮＸラットは、疑似のものと比べて、その腎臓ＩＬ−１２ｐ４０レベルが著しく低下した。化合物Ｉを用いた経口治療はＩＬ−１２ｐ４０の著しい（１０ｍｇ／ｋｇでｐ＝０．０４）増加を誘導するが、これはインビトロのデータと相関している。図１４に示す通り、この増加は未治療の５／６−ＮＸ群と比較したものであり、ＩＬ−１２ｐ４０レベルは疑似ラットに観察されたものと似ていた。
【０１４３】
図１５で説明するように、これらの動物からの残存腎組織の組織学的検査は、腎摘出ラットと化合物Ｉで治療された腎摘出ラットとの間に著しい差があることを明らかにした。化合物Ｉで治療した動物からの腎臓は、間質および糸球体の線維症／硬化症が減少したことを示している。
【０１４４】
図１６に示す通り、腎組織のさらなる分析により、化合物Ｉで治療したラットでは、線維症の減少が結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）の発現と同時に起こることが明らかとなった。この結果は、インビトロのデータを裏付けるものである。
【０１４５】
ＣＴＧＦ、ＴＧＦ−β、α−ＳＭＡ（筋線維芽細胞のマーカー）、およびコラーゲン１（線維症のマーカー）をリアルタイムＰＣＲによって定量した。結果では、化合物Ｉ（１０ｍｇ／ｋｇ）の経口投与が、残存腎臓におけるこれらのマーカーの発現を有意に低下させることが示された。
【０１４６】
また、腎摘出ラットは５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ｉの経口量で、治療期間全体を通じて乳酸リンゲル液を必要としなかった。
【０１４７】
図１７に示す通り、化合物Ｉは５／６−ＮＸラットの生存率を上昇させる。
【０１４８】
実施例１３：ラット片側尿管閉塞（ＵＵＯ）モデル
間質性腎線維症のモデルである片側尿管閉塞（ＵＵＯ）モデルに対し、化合物Ｉを用いた治療の効果を検討した。生後６〜８週間目、体重２００〜２５０ｇのＳｐｒａｑｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを使用した。全身麻酔（イソフルレン）によりラットを鎮静させてから背中左側を切開し、左側の近位尿管を露出した。
疑似手術を実施されたラットは、その尿管が露出されたが、結紮はされなかった。経口強制飼養により、１日目から１３日目までラットを治療した。１４日目にラットを屠殺した。
【０１４９】
腎損傷の目安として血清アルブミン減少を用いた。図１８は、ＵＵＯが血清アルブミンの有意な現象を誘導し、これが化合物Ｉの経口投与によって防止されたことを図示している。
【０１５０】
図１９は、結紮された腎臓では、腎臓ＭＣＰ−１が著明に増加して炎症を暗示し、かつ５／６−ＮＸラットに対する５０ｍｇ／ｋｇの化合物Ｉを用いた治療では、腎臓ＭＣＰ−１が有意に減少したことを示している。
【０１５１】
腎組織のさらなる分析では、化合物Ｉの経口治療が腎臓内のＴＧＦ−βの発現を減少させたことが明らかにされた。またＣＴＧＦおよびコラーゲン１の発現の著しい用量反応阻害も、化合物Ｉで治療された動物に観察された。
【０１５２】
全体的に見てこれらの結果は、腎臓内のＴＢＧ−β、ＣＴＧＦ、およびコラーゲン１のｍＲＮＡの発現の阻害によって観察される線維症の減少を示している。
【０１５３】
実施例１４：上皮間葉移行（ＥＭＴ）
証拠から、腎尿細管上皮細胞が上皮間葉移行（ＥＭＴ）を経験して、病的状態下で基質を産生する線維芽細胞になる。この表現型の転換は、成熟し、分化した腎上皮細胞の著名な可塑性を示すだけではなく、幅広い慢性腎疾患の発症にもかかわっている。最近の試験では、線維化した腎臓の間質性線維芽細胞の大部分が、尿細管上皮細胞からＥＭＴを介して生じることを示す有力な証拠が提供されている。同様に、ｔＰＡ−／−マウスの尿細管基底膜の完全性の保存のため、尿管ＥＭＴの選択的遮断が閉塞性損傷後の線維性病変の発現から腎臓を保護する。このような所見が、最終的に末期腎不全をもたらす慢性腎線維症の発症および進行に対する尿細管ＥＭＴの決定的重要性を強調している。いくつかの因子が、さまざまなインビトロおよびインビボのモデルにおけるＥＭＴの潜在的なイニシエーターとして示唆されている。ＣＴＧＦを例外として、これらのメディエイターのひとつひとつが、ＥＭＴのプロセスを完結させるために、ＴＧＦ−βの誘導を必要とする。
【０１５４】
化合物ＩがＥＭＴに及ぼす作用を決定するために、さらなる分析を試みた。化合物ＩがＴＧＦ−β誘導性ＥＭＴに及ぼす作用を、ヒト近位尿細管上皮細胞（ＨＫ−２）に関して分析した。ＥＭＴの進行を評価するために、プロ上皮系マーカーの上皮型カドヘリンおよび間葉細胞系／プロ繊維系マーカーのＣＴＧＦおよびコラーゲン１を定量リアルタイムＰＣＲで分析した。ＴＢＧ−β誘導性ＥＭＴの阻害に対する化合物Ｉの予想有効性を分析するために、われわれはまず、ＨＫ−２細胞のＥＭＴを誘導するＴＧＦ−βの能力を検証した。図２０、２１、および２２に示す通り、ＥＭＴは、上皮型カドヘリンの下方制御およびＣＴＧＦの上方制御およびコラーゲン１転写物の発現によって決定されるＴＧＢ−βによって誘導されている。さらに、上皮型カドヘリンの上方制御ならびにＣＴＧＦおよびコラーゲン１の下方制御によって明らかにされているように、ＴＧＦ−β誘導性ＥＭＴは両方の細胞において、化合物Ｉによって著しく誘導されている。さらにまた、化合物Ｉが単独で、ＣＴＧＦおよびコラーゲン１の基本的発現を下方制御することができた。
【０１５５】
参照のため、および特定の節を見つける際の支援となるように、本明細書には見出しを含めた。これらの見出しは、そこに記載された構想の範囲を限定するよう意図されてはおらず、かつこれらの構想は本明細書全体を通じて他の節にも該当する可能性がある。したがって、本発明は、本明細書に示された実施形態に限定されるよう意図されてはおらず、本明細書に開示された原則および新規の特徴と一致する最も広い範囲を認められなければならない。
【０１５６】
単数形「あるひとつの（ａ）」、「あるひとつの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確に別の指示を与えていない限り、対応する複数形への言及を含む。
【０１５７】
別の示唆がない限り、数字はいずれも本明細書および特許請求の範囲に用いられる成分、反応条件、濃度、特性、などの量を表し、用語「約」によってあらゆる場合に修正されるものと理解されなければならない。最低限でも、それぞれの数値パラメーターは、少なくとも報告された有意な桁数に照らし、かつ通常の丸め技法を適用することによって解釈されなければならない。したがって、逆のことが指示されない限り、本明細書および付属の特許請求の範囲に明記された数値パラメーターは、得ようとしている特性に応じて変化し得る近似値である。数値範囲およびパラメーターが実施形態の幅広い範囲を明記していても、具体的な実施例に明記される数値は可能な限り正確に報告されている。しかしながら、いずれの数値も、実験、テスト測定、統計的分析などにおけるばらつきから生じる一定の誤差を本質的に含んでいる。
【０１５８】
本明細書に記載された実施例および実施形態は、専ら例示のためのものにすぎず、これらを踏まえたさまざまな修正または変更が当業者には示唆されるであろうし、また本発明および付属の特許請求の範囲のうちに含められるべきであることが理解されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
0006055771.tif 000037
【図１３】
0006055771.tif 000038
【図１４】
0006055771.tif 000039
【図１５】
0006055771.tif 000040
【図１６】
0006055771.tif 000041
【図１７】
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【図１８】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図１９】
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