(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚の保湿状態を回復、維持若しくは強化するための、及び／又は皮膚の乾燥の徴候が現れるのを防ぐ若しくは遅らせるための化粧剤であって、
植物タビビトノキ（Ｒａｖｅｎａｌａ  ｍａｄａｇａｓｃａｒｉｅｎｓｉｓ）の樹液、
植物タビビトノキの樹液から得られる植物抽出物、又は
植物タビビトノキの４５日未満の葉齢の若葉から得られる植物抽出物
を含む、化粧剤。
【請求項２】
前記植物抽出物が、前記樹液又は前記若葉の極性溶媒抽出物である、請求項１に記載の化粧剤。
【請求項３】
前記極性溶媒が、水、エタノール、ブタノール、グリセロール、ブチレングリコール及びプロピレングリコール、並びにこれらの極性溶媒の２つ以上の混合物から選択される、請求項２に記載の化粧剤。
【請求項４】
前記極性溶媒が、７０／３０の比（Ｖ／Ｖ）のエタノール及び水の混合物である、請求項３に記載の化粧剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の化粧剤を含む、皮膚の保湿状態を回復、維持若しくは強化するための、及び／又は皮膚の乾燥の徴候が現れるのを防ぐ若しくは遅らせるための化粧用組成物。
【請求項６】
乾燥重量で、０．００１％〜２％の前記化粧剤を含む、請求項５に記載の化粧用組成物。
【請求項７】
グリセロール、天然ポリオール、天然若しくは合成セラミド、尿素、ヒアルロン酸、アイユガトゥルケスタニカ（Ａｊｕｇａ  ｔｕｒｋｅｓｔａｎｉｃａ）の抽出物、ワンダコエルレア（Ｖａｎｄａ  ｃｏｅｒｕｌｅａ）の抽出物、レチノイン酸、Ｄ−キシロース、ウスベニアオイ（Ｍａｌｖａ  ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ）の抽出物及びツボクサ（Ｃｅｎｔｅｌｌａ  ａｓｉａｔｉｃａ）の抽出物からなる群から選択される１つ又は複数の活性成分をさらに含む、請求項５又は６に記載の化粧用組成物。
【請求項８】
顔料、染料、ポリマー、界面活性剤、レオロジー剤、香料、電解質、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、保存料及びこれらの混合物から選択され得る化粧品として許容される少なくとも１つの賦形剤をさらに含む、請求項５〜７のいずれか一項に記載の化粧用組成物。
【請求項９】
美容液、ローション、クリーム、ヒドロゲル、マスク、スティック又はパッチの形態である、請求項５〜８のいずれか一項に記載の化粧用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題は、植物タビビトノキの新規な抽出物及び皮膚の保湿状態を回復、維持又は強化するための化粧用活性剤としてのその使用、該抽出物を含む化粧用組成物、並びに前記組成物を使用する美容ケア方法である。
【０００２】
植物タビビトノキは、ゴクラクチョウカ（Ｓｔｒｅｌｉｔｚｉａｃｅａｅ）科に属するマダガスカル固有の樹木である。この植物は、現在、一属一種（ｍｏｎｏｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｇｅｎｕｓ）の、唯一の種Ｒａｖｅｎａｌａ  ｍａｄａｇａｓｃａｒｉｅｎｓｉｓ  Ｓｏｎｎ．とみなされている。この樹木は、扇状の葉の配置で目立つ。この樹木は「旅人の木」という名称で広く知られている。英語話者はこの樹木を「旅人の木」又は「旅人のヤシ」と呼ぶが、この樹木はヤシの木ではない。この樹木は、他の国々、特にスリナムにも存在し、特に観賞樹として、熱帯の国々で容易に栽培されている。
【０００３】
［先行技術］
皮膚の保湿状態の維持は、化粧品産業の主要な問題であり、化粧品産業は、任意の種類の化粧用組成物に使用可能な保湿化粧剤、及び特に水の蒸発を制限する、又は表皮中への水の輸送を改善するようにこれらの活性剤が作用することができる新しい標的を探している。
【０００４】
アクアポリン（ＡＱＰ）は、水並びにグリセロール及び尿素などの小分子の溶液中での拡散を促進するチャネルを形成する膜貫通タンパク質のファミリーである。
【０００５】
これらのアクアポリンの大きさは、６つのアルファへリックス膜貫通交差を有し約３０ｋＤａである（Ｊｕｎｇ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９４、２６９（２０）、１４６４８〜５４）。
【０００６】
アクアポリンは、身体中、特に、腎臓（水の再吸収）又は皮膚（経皮の水分損失）などの異なるコンパートメント間の水の実質的な移動の部位である器官の中に広く分布している。
【０００７】
ヒト表皮のケラチノサイトの形質膜中で示されたＡＱＰ−３は、生きた表皮の至る所に分布している（Ｒ  Ｓｏｕｇｒａｔ他、ＪＩＤ２００３、１１８：６７８〜６８５及びＭｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ．；１９９８；第９巻、４９９ａ）。
【０００８】
ＦＲ２８０１５０４には、ＡＱＰ３の発現を刺激する薬剤としてのアイユガトゥルケスタニカ（Ａｊｕｇａ  ｔｕｒｋｅｓｔａｎｉｃａ）の抽出物及び化粧品における保湿剤としてのその使用が開示されている。
【０００９】
国際公開第２００７／００７２５５号パンフレットには、皮膚においてアクアポリンＡＱＰ３及びＡＱＰ９の発現を刺激する種々の薬剤、並びに化粧品におけるその使用が開示されている。
【００１０】
それらの薬剤の中でも特定の物質、デキサメサゾンが、アクアポリンの発現、特にＡＱＰ−３の発現を刺激することはさらに周知である。
【００１１】
しかしながら、表皮の細胞中でＡＱＰ３の発現を刺激することによる、本発明による抽出物の保湿特性を開示している文献はない。
【００１２】
この特性は、皮膚の保湿を維持する又は助けることを目的とするケアを提供するための化粧用組成物におけるこのような抽出物の使用を特に興味深くする。
【００１３】
［発明の目的］
本発明の主要な目的は、特に、皮膚の保湿状態を回復、維持又は強化するための、新規な皮膚の保湿剤を提供することである。
【００１４】
本発明のさらなる主な目的は、このような保湿剤を含む化粧用組成物を提供することである。
【００１５】
さらに、本発明の主な目的は、特に、皮膚の保湿状態を回復、維持又は強化するための、前記化粧用組成物を使用する美容ケア方法を提供することである。
【００１６】
最後に、本発明の主な目的は、工業的規模及び化粧品規模で使用可能な単純な溶液を提供することである。
【００１７】
［発明の説明］
第１の態様によれば、本発明は、植物タビビトノキの樹液、又は若葉などの前記植物の樹液が豊富な植物組織を含む若しくは植物組織によって形成される植物材料から得られる植物抽出物に関する。
【００１８】
樹液の採取は、細菌汚染を最小化することができる条件下で行う。
【００１９】
樹液は、いったん採取したら、例えばロータベーパー（Ｒｏｔａｖａｐｏｒ）（登録商標）型のロータリーエバポレーターを用いて加熱するなど、任意の当業者に既知の方法によって乾燥するのが好都合である。
【００２０】
樹液が豊富な植物組織は、本発明による植物抽出物を調製するための抽出過程と、場合により、続いてこれらの化合物を精製及び単離するための段階を実施するために好ましい植物材料を構成する。
【００２１】
樹液が豊富なこれらの組織は、特にタビビトノキの若葉である。
【００２２】
発育の初期段階において、葉は、まずその中心の中央葉脈の周囲に巻いて成長する。次いで、葉は、横の葉脈で裂けることなく、開く。これらの段階では、葉は薄緑色である。これらの発育の初期段階において、葉にはまだ樹液が強くしみ込んでいる。
【００２３】
したがって、本発明の意味において、「若葉」又は「未成熟葉」という表現は、上記の葉の発育の初期段階に相当する。好ましくは、本発明による抽出物を調製するために植物材料として使用される若葉は、約４５日未満、好ましくは３０日未満の葉齢である。
【００２４】
若葉とは異なり、成熟段階のタビビトノキの葉は、葉の横の乾燥した葉脈に沿った多くの裂け目によって容易に認識できる。
【００２５】
本発明による抽出物は、より詳細には、極性溶媒又は極性溶媒の混合物を用いて、樹液、又は、樹液が豊富な植物材料を構成する若葉、を処理することによって得られる。
【００２６】
本発明によると、「極性溶媒」という表現は、その溶媒が、値４以上である極性指数値Ｐ’を有することを意味する。極性指数は、多かれ少なかれ分子の極性性質を示す熱力学量（溶解度及び状態変化）に基づいて計算される量である。溶媒の極性指数に関しては、参照により本出願に含まれる、Ｌ．Ｒ．ＳＮＹＤＥＲによる論文（Ｊ．ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、９２（１９７４）、２２３〜２３０）を参照されたい。
【００２７】
極性溶媒又は混合物を形成する極性溶媒は、水、Ｃ１〜Ｃ４アルコール、特にエタノール若しくはブタノール、又はグリコール、特にグリセロール、ブチレングリコール若しくはプロピレングリコールから好都合に選択される。
【００２８】
好ましい抽出物は、より詳細には、水、又は水及びエタノールの混合物などの水性アルコール混合物による処理によって得られる。
【００２９】
好ましい抽出物は、より詳細には、７０／３０の比（ｖ／ｖ）のエタノール及び水の混合物による処理によって得られる。
【００３０】
したがって、本発明の第２の主題は、皮膚の保湿状態を回復、維持又は強化するための保湿剤としての、植物タビビトノキの樹液又は先に定義した抽出物の化粧用組成物における使用に関する。
【００３１】
本発明によると、樹液又は先に定義した抽出物は、局所的適用に対する所望の効果を得るための有効量で、化粧用組成物中に活性剤として存在する。
【００３２】
「有効量」という表現は、所望の効果、この場合には皮膚の保湿に対する作用を得ることを可能にする樹液又は抽出物の量を意味すると理解される。
【００３３】
第３の態様によると、本発明は、活性剤として、植物タビビトノキの樹液又は先に定義した抽出物を含むことを特徴とする化粧用組成物に関する。
【００３４】
好ましい実施によると、化粧用組成物は、活性剤として、先に記載した、より詳細には極性溶媒又は極性溶媒の混合物を用いて得られる植物タビビトノキの若葉の抽出物を含む。
【００３５】
本発明の特定の実施形態によると、化粧用組成物は、乾燥重量で０．００１％〜２％、好ましくは０．０１％〜０．２％の植物タビビトノキの樹液又は先に定義した抽出物を含む。
【００３６】
本発明による化粧用組成物は、グリセロール又は天然ポリオール、天然若しくは合成セラミド、尿素、ヒアルロン酸、或いはアイユガトゥルケスタニカの抽出物、ワンダコエルレア（Ｖａｎｄａ  ｃｏｅｒｕｌｅａ）の抽出物、レチノイン酸、Ｄ−キシロース、ウスベニアオイ（Ｍａｌｖａ  ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ）の抽出物又はツボクサ（Ｃｅｎｔｅｌｌａ  ａｓｉａｔｉｃａ）の抽出物などの保湿特性を示す１つ又は複数の他の分子又は植物抽出物も含むことができる。
【００３７】
したがって、皮膚の保湿効果も示すこれらの分子又は抽出物は、本発明の活性剤の役割を補足する役割を果たし得る。
【００３８】
さらに、化粧用組成物は、抗老化活性を有する物質、脱色素活性若しくは皮膚美白活性を有する物質、痩身活性を有する物質、保湿活性を有する物質、鎮静、緩和、若しくはリラックス活性を有する物質、特に顔のつやの輝きを改善するための皮膚の微小循環を刺激する活性を有する物質、脂ぎった皮膚のケアのための皮脂調節活性を有する物質、皮膚のよごれを取る若しくは皮膚を清潔にすることを目的とする物質、及び抗フリーラジカル活性を有する物質からなる群から選択される１つ又は複数の他の化粧用活性剤も含むことができる。
【００３９】
特に、化粧用組成物は、
皮膚の表面での落屑を調節する表皮カリクレインを刺激する作用剤、特にノパルサボテンの抽出物、
表皮の脂質の合成を刺激し、角質層の水分損失防止効果（ｗａｔｅｒ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｅｆｆｅｃｔ）及び皮膚の柔軟性において必須の役割を果たす作用剤、特にヒマワリ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ  ａｎｎｕｓ  Ｌ．）の種子又はヘチマ（Ｌｕｆｆａ  ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａ）の抽出物、
ケラチノサイトの最終分化又はトランスグルタミナーゼを刺激し、角質細胞及び皮膚バリアの形成を強化する作用剤、特にベータ−エクジソン又はグルコン酸カルシウム若しくはピロリドンカルボン酸カルシウムなどのカルシウム誘導体、或いは表皮の再生を刺激する活性剤、特にコムギ油、
密着結合の形成を促進し、したがって細胞間の水分損失を制限する作用剤、特にスウィートチェストナット（Ｃａｓｔａｎｅａ  ｓａｔｉｖａ）又は三七人参（Ｓａｎｃｈｉ）のサポニンの抽出物、
Ｄ−キシロース又はキシロースの誘導体などの表皮レベルでグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の合成を刺激する作用剤、特にＣ−グリコシド及びその誘導体、
ビタミンＡ（レチノール）及び／又はそのエステルなどの細胞再生を促進する作用剤、特にビタミンＡのプロピオン酸塩、フルーツ酸、リンゴ酸、グリコール酸若しくはクエン酸などのアルファ−又はベータ−ヒドロキシ酸、サリチル酸又はそのエステル、ゲンチジン酸又はそのエステル、特にゲンチジン酸トコフェロール、
コラーゲン、特にＩ型、ＩＩ型、ＩＶ型又はＶＩＩ型コラーゲンの合成を刺激するペプチドなどの皮膚の張りを刺激する作用剤、ツボクサの抽出物、マデカス酸（ｍａｄｅｃａｓｓｉｃ  ａｃｉｄ）、アシアチン酸（ａｓｉａｔｉｃ  ａｃｉｄ）、マデカッソシド（ｍａｄｅｃａｓｓｏｓｉｄｅ）、オーツの抽出物、ブラジルナットノキ（Ｂｅｒｔｈｏｌｌｅｔｉａ  ｅｘｓｃｅｌｓａ）の抽出物、タンパク質の加水分解産物、ダイズペプチド、タチキジムシロ（Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ  ｅｒｅｃｔａ）の抽出物、ツクシメナモミ（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ  ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）の抽出物、ジンセノサイド又はノトジンセノサイド、特にＲｂ１又はＲ０、
表皮の分化を調節する作用剤、それらの中でもエクジステロイド型、エクジステロン、ツルケステロン又はビタミンＤのカルシウム誘導体若しくは前駆体のもの、
アデノシン、カルニチン又はそれらの誘導体、
メタロプロテイナーゼの阻害剤、特に、ナギイカダ（Ｒｕｃｕｓ  ａｓｃｕｌｅａｔｕｓ）若しくはアノゲイサス・レイカルパス（Ａｎｎｏｇｅｉｓｕｓ  ｌｅｉｃａｒｐｕｓ）の抽出物、又はケルセチン、ケンフェロール、アピゲニン、オウゴニンなどのフラボノイド、又はこれらを含む植物抽出物などの、ＭＭＰ１、ＭＭＰ２又はＭＭＰ９の阻害剤、
アスペルギルス・フミガータス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、ツルレイシ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ）又はセイヨウカボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ  ｍａｘｉｍａ）の抽出物などのエラスターゼ阻害剤、
琥珀の抽出物などのダーマトポンチンの合成を刺激する作用剤、
収斂性植物の抽出物、例えばアメリカマンサクの抽出物などの、毛穴を引き締める作用剤、
単独又はチタンの酸化物と組み合わせた、ベンゾフェノン、４−ブチルメトキシジベンゾイルメタン、オクトクリレン、メトキシケイヒ酸エチルヘキシル、サリチル酸エチルヘキシル、フェニルベンズイミダゾールスルホン酸又はホモサレートなどのＵＶＡ及びＵＶＢ放射から保護するフィルター、
コウジ酸、甘草若しくはクワの根の抽出物、アルブチン、パントテノスルホン酸カルシウム（ｃａｌｃｉｕｍ  ｐａｎｔｏｔｈｅｎｏｓｕｌｐｈｏｎａｔｅ）、ボルジン、ジアセチルボルジン、ビタミンＣ及びその誘導体、特にグリコシド、ユリ、特に球茎の抽出物などの、色素沈着障害、特に皮膚の老化と関係する色素沈着障害に対抗することを目的とした薬剤、
カワラヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｃａｐｉｌｌａｒｉｓ）の抽出物、ワレモコウ（Ｓａｎｇｕｉｓｏｒｂａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の抽出物、レスベラトロール及びその誘導体、クルクマ若しくはクルクミン若しくはテトラヒドロクルクミン、ブドウの種から抽出されるポリフェノール、ビタミンＥ及びその誘導体、特にそのリン酸塩誘導体、エルゴチオネイン若しくはその誘導体又はイデベノンなどの抗フリーラジカル又は抗炎症剤、
表皮及び真皮レベルでのヒアルロン酸の合成又はグリコサミノグリカンの合成を促進して保湿されたふっくらした皮膚をもたらす薬剤、特にビワ（Ｅｒｉｏｂｏｔｒｙａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）の抽出物若しくは低分子量のヒアルロン酸のフラグメント又はアデニウムオベスム（Ａｄｅｎｕｍ  ｏｂｓｅｓｕｍ）の抽出物、
抗しわ作用を改善するアスパラギン酸マグネシウム及びこれらの混合物のいずれか１つ、
から選択される１つ又は複数の他の化粧用活性剤を含むことができる。
【００４０】
化粧用組成物は、少なくとも１つの活性剤とは別に、前記組成物を調製するのに有用な少なくとも１つの化粧品として許容される（ｃｏｓｍｅｔｉｃａｌｌｙ  ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）賦形剤も含む。
【００４１】
好都合には、組成物は、顔料、染料、ポリマー、界面活性剤、レオロジー剤、香料、電解質、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、保存料及びこれらの混合物から選択され得る少なくとも１つの化粧品として許容される賦形剤をさらに含む。
【００４２】
化粧用組成物は、美容液、ローション、クリーム若しくはヒドロゲル、及び好ましくはマスク、又はスティック若しくはパッチの形態であり得る。
【００４３】
最後に、第４の態様によると、本発明の主題は、皮膚の保湿状態を回復、維持若しくは強化する、及び／又は皮膚の乾燥の徴候が現れるのを防ぐ若しくは遅らせる効果を得るために、植物タビビトノキの樹液若しくは若葉の抽出物、又は活性剤として植物タビビトノキの樹液若しくは先に定義した植物抽出物を含む化粧用組成物を、顔又は身体の皮膚の少なくとも１つの関連領域に適用するステップを含むことを特徴とする、美容ケア方法である。
【００４４】
実施例においては、特に指示がない限り、全てのパーセンテージは重量で与えられ、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧である。
【００４５】
本発明の他の目的、特徴及び利点は、本発明のいくつかの実施例に関してなされる以下の説明的記載から明確に明らかになるが、それらは単なる例示のために与えられるものであり、何ら本発明の範囲を限定することを意図していない。実施例においては、特に指示がない限り、温度は摂氏度であり、圧力は大気圧であり、量又はパーセンテージは重量で与えられる。
【００４６】
［発明の実施例］
＜実施例１：本発明による抽出物の調製＞
当業者に容易に理解可能なように、サンプルの細菌汚染をできる限り避けながら、樹液を、タビビトノキから抽出する。樹液をロータリーエバポレーターで乾燥させ、次いで７０／３０の体積／体積比のエタノール及び水の混合物中に溶解する。次いで溶媒を蒸発させて乾燥させる。
【００４７】
実施例４の実験のために、５重量％の乾燥抽出物を含む樹液抽出物の水溶液を調製する。
【００４８】
＜本発明による実施例２：タビビトノキの若葉の抽出物の調製＞
最大で３週の葉齢のタビビトノキの若葉を採取し、乾燥し、粉砕する。７０／３０の体積／体積比のエタノール及び水の混合物で植物材料を抽出する。溶媒を蒸発させて乾燥させる。
【００４９】
実施例４の実験のために、ＤＭＳＯ中４重量％の乾燥抽出物を含む若葉の水性アルコール抽出物の溶液を調製する。
【００５０】
＜実施例３：タビビトノキの成熟葉の抽出物の調製＞
タビビトノキの成熟葉を採取し、乾燥し、粉砕する。７０／３０の体積／体積比のエタノール及び水の混合物で植物材料を抽出する。最後に、溶媒を蒸発させて乾燥させる。
【００５１】
実施例４の実験のために、このようにして調製した、ＤＭＳＯ中４重量％の乾燥抽出物を含む成熟葉の水性アルコール抽出物の溶液を調製する。
【００５２】
＜実施例４：試験する活性剤の保湿活性を測定するためのヒトの皮膚の組織学的分析＞
＜材料及び方法＞
＜生検の準備＞
直径約１０ｍｍの３３の皮膚外植片を２７歳の女性の腹壁形成から調製する。これらの外植片は適当な培地中で生かしておく。
【００５３】
３０の外植片を６つの外植片の５つのロットに分け、残りの３つの外植片は未処理のコントロールとして使用する（ロット：Ｔ０）。
【００５４】
＜ロットの処理＞：
第１ロット：試験する活性剤を含まない水中油型エマルジョンである賦形剤が適用される６つの外植片。
【００５５】
第２ロット：４重量％の実施例１の溶液をさらに含み、エマルジョン中０．２重量％のタビビトノキの樹液の乾燥抽出物最終濃度である前と同一のエマルジョンが適用される６つの外植片。
【００５６】
第３ロット：５重量％の実施例２の溶液をさらに含み、エマルジョン中０．２重量％のタビビトノキの若葉の乾燥抽出物最終濃度であるエマルジョンが適用される６つの外植片。
【００５７】
第４ロット：５重量％の実施例３の溶液をさらに含み、エマルジョン中０．２重量％のタビビトノキの成熟葉の乾燥抽出物最終濃度であるエマルジョンが適用される６つの外植片。
【００５８】
第５ロット：ポジティブコントロール用の６つの外植片：デキサメサゾン
【００５９】
産物を１外植片当たり２ｍｇの投与量で局所的に適用し、小さなスパーテルで広げる。
【００６０】
処理を続けて４日間繰り返す。
【００６１】
＜サンプル及び組織学的検査＞
＜サンプル＞
外植片を、Ｄ０、Ｄ１及びＤ４日で、４日間にわたって組織学的検査のためにサンプリングする。
【００６２】
Ｔ０ロットの３つのコントロール外植片をＤ０日にサンプリングする。他の５つのロットに関しては、各々のロットの３つの外植片をＤ１日にサンプリングし、他方の３つの外植片をＤ４日にサンプリングする。
【００６３】
各々の外植片は、直ちに２つに切り分ける。２分の１は緩衝ホルマリンに固定し、他方の２分の１は−８０℃で凍結させる。
【００６４】
＜組織学的検査＞
緩衝ホルマリン中で２４時間固定後、Ｌｅｉｃａ１０２０自動脱水機を使用して、サンプルを脱水し、パラフィン含浸させる。ＬｅｉｃａＥＧ１１６０包埋ステーションを使用して、これらをブロックの中に組み入れる。
【００６５】
ＬｅｉｃａＲＭ２１２５Ｍｉｎｏｔ型ミクロトームを使用して、５ナノメートルの切片を作り、スーパーフロストシラン処理ガラス組織学的検査スライド上に固定する。
【００６６】
凍結したサンプルは、ＬｅｉｃａＣＭ３０５０クライオスタット中で７ｍｍに切断する。切片は、免疫学的標識化のためにスーパーフロストシラン処理ガラス組織学的検査スライド上に固定する。
【００６７】
顕微鏡観察は、×４０対物レンズを備えたＬｅｉｃａＤＭＬＢ型顕微鏡を使用して、光学顕微鏡により行う。顕微鏡写真は、ｔｒｉＣＣＤソニーＤＸＣ３９０Ｐカメラで撮影し、ＬｅｉｃａＩＭ１０００データアーカイビングソフトウェアを使用して記憶する。
【００６８】
＜一般形態＞
マッソントリクロームで染色したパラフィン切片に対して一般形態の観察を行う。これらの切片は、光学顕微鏡で観察する。
【００６９】
＜アクアポリン３（ＡＱＰ３）の標識化＞
パラフィン中に包埋された外植片切片をブアン液（ホルマリン＋ピクリン酸）で固定する。次いで、ＡＱＰ３を、Ｃｈｅｍｉｃｏｎから入手可能なウサギポリクローナル抗ＡＱＰ３抗体（ｒｅｆ  ＡＢ  ３２７６）で標識化し、次いでＤＡＢ（ジアミノベンジジン）で免疫組織化学的に展開させ、栗色を生じさせる。
【００７０】
＜結果＞
Ｄ１、次いでＤ４時点における、ロット番号１〜番号５の外植片の種々の切片に対する観察の結果を以下に論じ、以下の表１中に共に示す。
【００７１】
＜１  −Ｄ１におけるアクアポリン−３の標識化＞
＜未処理の外植片（ロット番号１）＞：
標識化は、確実に膜において、かなり明確である。それはまた、角質層の下の最後の細胞層を除いては、表皮の上部層により明確に示される。それは、基底層ではごく控えめに示され、基底ケラチノサイトの基底極ではほとんど示されない。
【００７２】
＜デキサメサゾンで処理した外植片（ポジティブコントロール）（ロット番号５）＞：
標識化は、確実に膜において、かなり明確である。それはまた、表皮の上部層により明確に示される。それは、角質層の下の最後の細胞層で控えめに存在する。それは、基底層、中でも側底空間に控えめに示される。それは、基底ケラチノサイトの基底極ではほとんど示されない。
【００７３】
＜タビビトノキの樹液を含む製剤で処理した外植片（ロット番号２）＞：
標識化は、確実に膜において、かなり明確である。それはまた、表皮の上部層により明確に示される。それは、角質層の下の最後の細胞層にわずかに存在する。それは、基底層で控えめに、側底空間でより明確に示される。それは、基底ケラチノサイトの基底極ではほとんど示されない。
【００７４】
＜タビビトノキの若葉の抽出物を含む製剤で処理した外植片（ロット番号３）＞：
標識化は、確実に膜において、かなり明確である。それはまた、表皮の上部層に明確に示される。それは、角質層の下の最後の細胞層に控えめに存在する。それは、基底層、中でも側底空間にかなり明確に示される。それは、基底ケラチノサイトの基底極で控えめに示される。
【００７５】
＜タビビトノキの成熟葉の抽出物を含む製剤で処理した外植片（ロット番号４）＞：
標識化はあまり明確ではなく、上部表皮層でほとんど示されない。それは、角質層の下の最後の細胞層に控えめに存在する。それは、基底層でほとんど示されず、側底空間でより明確に示される。それは、基底ケラチノサイトの基底極ではほとんど示されない。
【００７６】
＜２  −Ｄ４におけるＡＱＰ−３の標識化＞
＜未処理の外植片（ロット番号１）＞：
標識化は、確実に膜において、かなり明確であり、上部表皮層にわずかに多く示される。標識化は、角質層の下の最後の細胞層には存在しない。それは、基底層、中でも側底空間にごく控えめに示される。それは、基底ケラチノサイトの基底極ではほとんど示されない。
【００７７】
＜デキサメサゾンで処理した外植片（ポジティブコントロール）（ロット番号５）＞：
標識化は、確実に膜において、非常に明確であり、上部表皮層に明確に示される。それは、角質層の下の最後の細胞層にわずかに存在する。それは、基底層、中でも側底空間に非常に明確に示される。それは、基底ケラチノサイトの基底極ではほとんど示されない。
【００７８】
＜タビビトノキの樹液を含む製剤で処理した外植片（ロット番号２）＞：
標識化は、確実に膜において、明確であり、上部表皮層に非常に明確に多く示される。それは、角質層の下の最後の細胞層にかなり明確に存在する。それは、基底層、中でも側底空間で明確に示される。それは、基底ケラチノサイトの基底極で控えめに示される。
【００７９】
＜タビビトノキの若葉の抽出物を含む製剤で処理した外植片（ロット番号３）＞：
標識化は、確実に膜において、非常に明確であり、上部表皮層に明確に示される。それは、角質層の下の最後の細胞層に控えめに存在する。それは、基底層、中でも側底空間にかなり明確に示される。それは、基底ケラチノサイトの基底極で控えめに示される。
【００８０】
＜タビビトノキの成熟葉の抽出物を含む製剤で処理した外植片（ロット番号４）＞：
標識化はあまり明確ではなく、上部表皮層でほとんど示されない。それは、角質層の下の最後の細胞層に控えめに存在する。それは、基底層でほとんど示されず、側底空間でより明確に示される。それは、基底ケラチノサイトの基底極ではほとんど示されない。
【００８１】
【表１】
0005916046.tif 000002
【００８２】
結論
タビビトノキの樹液の抽出物及び若葉の水性アルコール抽出物は共に特に興味深い化粧品特性を示す。これらの抽出物は、表皮中の水の流れを調節する特別な効果を有する。ＡＱＰ−３の標識化により、ＡＱＰ３アクアポリンの調節及び／又は機能性に対する、試験する活性剤の注目すべき活性を示すことが可能になる。この活性は、表皮の基底層のより優れた保湿をもたらす。