(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料中のＡ群ストレプトコッカスの存在を検出するための装置であって、
（ｉ）Ａ群ストレプトコッカス特異的抗原を含有する、または含有する疑いのある試料を受け入れるための試料受入ゾーン、
（ｉｉ）標識ゾーンであって、前記抗原がそこを通過したとき、当該抗原を特異的に標識及び結合するための抗体を含有する標識ゾーン、および
（ｉｉｉ）捕捉ゾーンであって、前記抗体に結合された前記抗原をそこに特異的に結合するための手段を有する捕捉ゾーン、
を有するマトリックスであって、前記試料受入ゾーン、標識ゾーン、および捕捉ゾーンが、液体フロー経路においてマトリックス上に配置され、かつ
試料受入ゾーンおよび標識ゾーンの少なくとも１つがＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）を備えたマトリックス、を具備する、装置。
【請求項２】
抗体がポリクローナル抗体である、請求項１に記載の装置。
【請求項３】
抗体が蛍光標識されている、請求項１または請求項２に記載の装置。
【請求項４】
前記抗体に結合された前記抗原を特異的に結合するための手段が捕捉抗体である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の装置。
【請求項５】
捕捉抗体がポリクローナル抗体である、請求項４に記載の装置。
【請求項６】
（ｉ）Ａ群ストレプトコッカス特異的抗原を含有する、または含有する疑いのある試料を受け入れるための試料受入ゾーン、
（ｉｉ）標識ゾーンであって、前記抗原がそこを通過したとき、当該抗原を特異的に結合するための抗体を含有する標識ゾーン、および
（ｉｉｉ）捕捉ゾーンであって、前記抗体に結合された前記抗原をそこに特異的に結合するための手段を有する捕捉ゾーン、
を有するマトリックスであって、試料受入ゾーン、標識ゾーン、および捕捉ゾーンが、液体フロー経路においてマトリックス上に配置されている、マトリックス、を備えた装置；ならびに
抽出試薬を含む容器
を具備するキットであって、抽出試薬、試料受入ゾーン、および標識ゾーンの少なくとも１つがＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）を含む、キット。
【請求項７】
ＮＡＧが試料受入ゾーン上に付着されている、請求項６に記載のキット。
【請求項８】
生体試料中のＡ群ストレプトコッカスの存在または非存在を検出するための方法であって、
請求項１〜５のいずれか一項に記載の装置を供給する工程；
生体試料を前記装置に置く工程；および
Ａ群ストレプトコッカスの存在または非存在を判定する工程
を含む、方法。
【請求項９】
生体試料を収集するための器具を供給する工程；および
生体試料を前記器具において収集する工程
をさらに含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
使用説明書を供給する工程であって、前記説明書が、試料を収集するとき、舌、口腔の側面または上面を器具に触れさせないようには警告していない、工程をさらに含む、請求項８または請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の装置；
抽出試薬を含む容器；
生体試料を収集するための器具；および
使用説明書
を具備するキット。
【請求項１２】
器具がスワブである、請求項１１に記載のキット。
【請求項１３】
説明書が、試料を収集するとき、舌、口腔の側面または上面を器具に触れさせないようには警告していない、請求項１１または請求項１２に記載のキット。
【請求項１４】
試料におけるＡ群ストレプトコッカスの検出においてラテラルフローアッセイの偽陽性率を低下させるための方法であって、
前記ラテラルフローアッセイにおいて、当該アッセイに用いられるポリクローナル抗体標識のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）結合性成分が優先的に結合し、
当該方法は、Ａ群ストレプトコッカス抗原へのポリクローナル抗体の特異的結合を増強し、かつアッセイの偽陽性率を低下させるのにブロッキング剤として有効な量のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）で吸湿性マトリックスを処理する工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
[0001]  本出願は、２０１１年８月３日に出願された米国特許出願第６１／５１４，７９０号の優先権を主張し、その米国特許出願は参照により本明細書で援用される。
【０００２】
[0002]  本開示は、一般的に、診断の分野、特に、生体試料において分析物を検出するための装置、方法、およびキットに関する。より具体的には、本開示は、Ａ群ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）の検出の特異度がＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの添加によって増強されている、イムノアッセイを提供する。
【背景技術】
【０００３】
[0003]  ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（A群ストレプトコッカス）は、細胞の鎖となって、または細胞のペアとなって生じる、グラム陽性、非運動性、非胞子形成性の細菌であり、個々の細胞は、円形〜卵形の球菌で、直径が０．６〜１．０マイクロメートルである。Ａ群ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉの細胞表面構造は、標準のペプチドグリカンである、Ｎ−アセチルグルコサミンおよびＮ−アセチルムラミン酸の繰り返し単位で構成される。歴史的には、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉの最終的な同定は、最初にＲｅｂｅｃｃａ  Ｌａｎｃｅｆｉｅｌｄによって記載されているような、「細胞壁」多糖抗原の血清反応性に基づいている。１８個の群特異的抗原（ランスフィールド群）が確立された。Ａ群莢膜多糖（「Ｃ物質」または「群糖鎖抗原」とも呼ばれる）は、Ｎ−アセチルグルコサミンおよびラムノースのポリマーである。群抗原によっては、複数の種によって共有されている（K. Todar、Online Textbook of Bacteriology; textbookofbacteriology.net参照）。
【０００４】
[0004]  Ｓ．ピオゲネスは、ヒトの最もよく見られる病原体の一つである。正常な個体の約５〜１５％は、その細菌を、通常、気道内にもっているが、無症状のままである。常在菌叢として、Ｓ．ピオゲネスは、防御が損なわれている場合、またはその生物体が恒常的防御を突破することができる場合、感染することができる。その細菌が脆弱な組織に取り込まれ、または伝染する場合、様々な型の化膿性感染が生じ得る。
【０００５】
[0005]  Ｓ．ピオゲネスに関連した急性疾患は、主に、気道、血流、または皮膚に生じる。連鎖球菌疾患は、ほとんどの場合、呼吸器感染症（咽頭炎または扁桃炎）または皮膚感染症（膿皮症）である。急性Ｓ．ピオゲネス感染症は、咽頭炎（連鎖球菌性咽頭炎）、猩紅熱（発疹）、膿痂疹（皮膚の上層の感染）、または蜂巣炎（皮膚の深層の感染）として現れ得る。侵襲性、毒素産生性感染は、壊死性筋膜炎、関節または骨の感染、筋炎、髄膜炎、心内膜炎、および連鎖球菌毒素ショック症候群を生じ得る。患者はまた、Ｓ．ピオゲネスによって引き起こされる急性感染症の後、急性リウマチ熱および急性糸球体腎炎などの免疫媒介性連鎖球菌感染後続発症を発症する場合があり、それは、未処置の感染症の１〜３％で起こる。これらの状態およびそれらの病態は、細菌の内転移に起因し得るのではなく、Ａ群連鎖球菌抗原に対する異常な免疫学的反応に起因し得る。
【０００６】
[0006]  ペニシリンは、Ａ群連鎖球菌疾患の処置に効果的であるため、感染症の大部分は、せいぜい、発疹を伴う咽頭炎になるにすぎない。しかしながら、急速進行性疾患の偶発症例により、および未処置の感染症における重篤な続発症の小さいリスクのため、Ｓ．ピオゲネスは、依然として主要な健康上の懸念であり、これらの続発症のリスクおよび機構を明らかにすること、ならびにストレプトコッカス（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）のリウマチ惹起性株および腎炎惹起性株を同定することへ努力が向けられているところである。
【０００７】
[0007]  Ｓ．ピオゲネスの細胞表面は、細菌の病原性決定因子の大部分、特に、コロニー形成、ならびにファゴサイトーシスおよび宿主免疫応答の回避と関係した決定因子の原因となる。細菌の表面は、信じられないほど複雑で、かつ化学的に多様である。抗原性成分には、莢膜多糖（Ｃ物質）、細胞壁ペプチドグリカンおよびリポテイコ酸（LTA）、ならびにＭタンパク質、綿毛タンパク質、フィブロネクチン結合性タンパク質（例えば、タンパク質F）、および細胞結合型ストレプトキナーゼを含む様々な表面タンパク質が挙げられる。
【０００８】
[0008]  Ｓ．ピオゲネスの原形質膜は、ヒト心筋、骨格筋、および平滑筋、心臓弁線維芽細胞、ならびに神経細胞組織の抗原に類似したいくつかの抗原を含有する。病原体と宿主の間の分子擬態は、自己免疫疾患の発症についての機構として提案されている。微生物は、宿主タンパク質と類似したタンパク質を含有するため、宿主の免疫応答は、感染に対して抑制され、または寛容である場合がある。逆に、分子擬態による宿主Ｂ細胞およびＴ細胞の刺激は、宿主の免疫系が、自己タンパク質に対して、あたかもそれらが外来であるかのように、応答し始める原因となり得る。
【０００９】
[0009]  他の自己免疫疾患においてのように、環境因子と遺伝的因子の両方が、リウマチ性心炎および炎症性心疾患の発症に関与し、Ａ群ストレプトコッカスと心臓組織の間の分子擬態が役割を果たしているように思われる。Ａ群連鎖球菌抗原に対するＢ細胞およびＴ細胞応答の研究は、Ａ群連鎖球菌感染後のリウマチ性心炎の発病機序におけるいくつかの段階についていくらかの情報をもたらしている。初期段階は、Ａ群連鎖球菌糖鎖抗原Ｎ−アセチル−グルコサミンと心筋ミオシンに対する交差反応性自己抗体の発現を含む。その後、これらの抗体は、弁内皮と反応し、そのことは、血管細胞接着分子−１（VCAM-1）の発現と共に炎症を起こす。その後、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋のＴ細胞は、内皮／心内膜を通って弁（無血管構造）へ浸潤する。心内膜のすぐ下に、マクロファージおよびＴ細胞を含有する、アショフ体または肉芽腫病変が生じる可能性がある。そのＴ細胞は、連鎖球菌Ｍタンパク質抗原配列に対して応答性である。弁は、瘢痕化し、最終的には、弁における血管新生および進行性慢性疾患となる。宿主において、擬態抗原の心筋ミオシンおよびラミニンは、それぞれ、心筋および弁に関与している。（Cunningham、Front. Biosci. 、2003、8:s533-43）。
【００１０】
[0010]  リウマチ熱（RF）および抗リン脂質症候群（APS）は、類似した心臓病態および神経病態を共有する自己免疫疾患である。ＲＦおよびＡＰＳにおいて液性免疫のかなりの重複があるように思われ、両方の疾患における心臓弁病変および中枢神経系異常の発現の根底に共通の発症機序があるという仮説を支持している。これらの自己免疫状態に関与する病原性分子である、Ｍタンパク質、Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン（「NAG」または「GlcNAc」とも呼ばれる）、およびβ２糖タンパク質−Ｉ（β2GPI）は、いくつかのエピトープを共有することが見出された。ＡＰＳ患者由来の免疫グロブリンＧ血清は、かなりの抗連鎖球菌Ｍタンパク質活性ならびに抗ＧｌｃＮＡｃ活性を含んでいた。さらに、β２ＧＰＩは、舞踏病を有するＡＰＳ患者由来の抗ＧｌｎＮＡｃ活性を阻害した。（Blankら、 2006、Rheumatology (Oxford). 45(7):833-41）。
【００１１】
[0011]  生体試料における微生物病原体の検出は、処置が、原因である生物体によってかなり異なり得るため、臨床医学において特に有益である。したがって、感染疾患を有する疑いのある患者の生体試料における病原体の正確かつ迅速な同定は、患者に敏速かつ適切な処置を提供するのに重大な意味をもつ可能性がある。生体試料における病原生物体の迅速な同定は、命に関わらない感染症についてさえも重要である。
【００１２】
[0012]  微生物感染症を診断する迅速な方法は、臨床治療を導くための結果をタイムリーに提供するために開発されてきた。これらの迅速な方法の最も効果的なもののいくつかは、免疫学に基づいている。微生物特異的抗原に対するモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体が開発され、生体試料において特定の微生物を同定するイムノアッセイに用いられている。例えば、ヒト試料におけるＡ群連鎖球菌抗原の同定のためのイムノアッセイは、Ｓ．ピオゲネス感染の早期検出に有用であり、そのことによって、適切な抗生物質処置が開始され得る。
【００１３】
[0013]  咽頭滲出液におけるＡ群ストレプトコッカスは、Ａ群ストレプトコッカスに特異的な抗原に対するポリクローナル抗体によって同定することができる。１つのそのような試験は、米国特許第５，７７０，４６０号に記載されており、それは、Ａ群ストレプトコッカス特異的抗原についての１段階ラテラルフローアッセイを提供している。しかしながら、咽頭スワブに頼る試験は、高い偽陽性率によって混乱する場合が多い。咽頭スワブ試験の使用に関する説明書は具体的に、舌、頬、および／または歯をスワブに接触させることを避けるようにユーザーに指示しているが、それにもかかわらず、不注意な接触がしばしば起こる。舌、頬、および／または歯に由来する上皮細胞は、Ｓ．ピオゲネス細胞壁の１つまたは複数の成分の分子擬態を含む可能性があり、Ａ群ストレプトコッカスに特異的なポリクローナル抗体は、Ａ群ｓｔｒｅｐに感染していない試験対象またはＡ群ｓｔｒｅｐを保有する試験対象における上皮細胞上のエピトープを結合し、かつ「認識し」、偽陽性の結果を生じる可能性がある。偽陽性率が低下した、高特異的かつ容易なイムノアッセイが、Ａ群ストレプトコッカス感染の正確な検出を提供するために必要とされる。全く驚くべきことに、本開示は、これらを始めとする関連ニーズを満たす。
【発明の概要】
【００１４】
[0014]  本開示は、生体試料においてＡ群ストレプトコッカス（本明細書では、「Ｓｔｒｅｐ  Ａ」とも呼ばれる）を検出するための装置、方法、および改善された診断キットを提供する。より具体的には、本開示は、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンのアッセイへの添加により偽陽性結果の率が低下した、Ａ群連鎖球菌感染が検出される、改善されたイムノアッセイを提供する。
【００１５】
[0015]  一態様において、試料においてＡ群ストレプトコッカスの存在を検出するための装置が提供される。装置は、（ｉ）Ａ群ストレプトコッカス特異的抗原を含有する、または含有する疑いのある試料を受け入れるための試料受入ゾーン、（ｉｉ）標識ゾーンであって、その抗原がそこを通過したとき、それを特異的に標識するための抗体を含有する標識ゾーン、および（ｉｉｉ）捕捉ゾーンであって、標識された抗原をそこに特異的に結合するための手段を有する捕捉ゾーンを有するマトリックスであって、試料受入ゾーン、標識ゾーン、および捕捉ゾーンが、液体フロー経路においてマトリックス上に配置され、かつ試料受入ゾーンおよび標識ゾーンの少なくとも１つがＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）を含む、マトリックスを具備する。
【００１６】
[0016]  一実施形態において、抗体はポリクローナル抗体である。
【００１７】
[0017]  別の実施形態において、抗体は蛍光標識されている。
【００１８】
[0018]  さらに別の実施形態において、標識された抗原を特異的に結合するための手段は、捕捉抗体である。一実施形態において、捕捉抗体はポリクローナル抗体である。
【００１９】
[0019]  別の態様において、キットが提供される。キットは、（ｉ）Ａ群ストレプトコッカス特異的抗原を含有する、または含有する疑いのある試料を受け入れるための試料受入ゾーン、（ｉｉ）標識ゾーンであって、その抗原がそこを通過したとき、それを特異的に標識するための抗体を含有する標識ゾーン、および（ｉｉｉ）捕捉ゾーンであって、標識された抗原をそこに特異的に結合するための手段を有する捕捉ゾーンを有するマトリックスであって、試料受入ゾーン、標識ゾーン、および捕捉ゾーンが、液体フロー経路においてマトリックス上に配置されている、マトリックスを備えた装置、ならびに抽出試薬を含む容器を具備する。抽出試薬、試料受入ゾーン、および標識ゾーンの少なくとも１つは、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）を含む。
【００２０】
[0020]  一実施形態において、ＮＡＧは、試料受入ゾーン上に付着されている。
【００２１】
[0021]  別の態様において、生体試料におけるＡ群ストレプトコッカスの存在または非存在を検出するための方法が提供される。方法は、本明細書に記載されているような装置またはキットを供給する工程、生体試料を装置に置く工程、例えば、装置の試験ライン上での結果を視覚的に（肉眼で、器具で、または器具によって補助された眼で）読み取ることにより、Ａ群ストレプトコッカスの存在または非存在を判定する工程を含む。
【００２２】
[0022]  一実施形態において、方法はさらに、生体試料を収集するための器具を供給する工程、および器具において生体試料を収集する工程を含む。
【００２３】
[0023]  さらに別の実施形態において、方法は、使用に関する説明書を提供する工程であって、その説明書が、試料を収集するとき、舌、口腔の側面または上面を器具に触れさせないように警告はしていない、工程をさらに含む。
【００２４】
[0024]  別の態様において、キットが提供される。キットは、本明細書に記載された実施形態のいずれかによる装置、抽出試薬を含む容器、および生体試料を収集するための器具、および使用に関する説明書を具備する。
【００２５】
[0025]  一実施形態において、器具はスワブである。
【００２６】
[0026]  別の実施形態において、説明書は、試料を収集するとき、舌、口腔の側面または上面を器具に触れさせないように警告はしていない。
【００２７】
[0027]  さらに別の態様において、試料におけるＡ群ストレプトコッカスの検出においてラテラルフローアッセイの偽陽性率を低下させるための方法であって、ラテラルフローアッセイにおいて、アッセイに用いられるポリクローナル抗体標識のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）結合性成分が優先的に結合する、方法が提供される。方法は、Ａ群ストレプトコッカス抗原へのポリクローナル抗体の特異的結合を増強し、かつアッセイの偽陽性率を低下させるのにブロッキング剤として有効な量のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）で吸湿性マトリックスを処理する工程を含む。
【００２８】
[0028]  一実施形態において、試料においてＡ群ストレプトコッカスの存在を検出するための装置が提供される。装置は、Ａ群ストレプトコッカス特異的抗原を含む疑いのある試料を受け入れるための受入チャンバーであって、試料と化合して処理試料を形成する液体抽出試薬およびＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）を受け入れるのに必要な大きさであるチャンバー；ならびに処理試料を受け入れるための試料受入ゾーン、標識ゾーンであって、その抗原がそこを通過したとき、それを特異的に標識するためのポリクローナル抗体を有する標識ゾーン、および捕捉ゾーンであって、標識された抗原をそこに特異的に結合するための手段を有する捕捉ゾーンを有するマトリックスであって、試料受入ゾーン、標識ゾーン、および捕捉ゾーンが、液体フロー経路においてマトリックス上に配置されている、マトリックスを具備する。
【００２９】
[0029]  別の実施形態において、試料においてＡ群ストレプトコッカスの存在を検出するための方法が提供される。方法は、（ｉ）Ａ群ストレプトコッカス特異的抗原を含有する、または含有する疑いのある試料を受け入れるための試料受入ゾーン、（ｉｉ）標識ゾーンであって、その抗原がそこを通過したとき、それを特異的に標識するための抗体を含有する標識ゾーン、および（ｉｉｉ）捕捉ゾーンであって、標識された抗原をそこに特異的に結合するための手段を有する捕捉ゾーンを有するマトリックスであって、試料受入ゾーン、標識ゾーン、および捕捉ゾーンが、液体フロー経路においてマトリックス上に配置されている、マトリックスを供給する工程、ならびに試料受入ゾーンを試料と接触させる工程であって、前記試料が、接触前にＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）を含む液体試薬で処理される、工程、ならびに捕捉ゾーンにおいて抗原の存在または非存在を検出する工程を含む。
【００３０】
[0030]  別の実施形態において、試料においてＡ群ストレプトコッカスの存在を検出するための装置が提供される。装置は、Ａ群ストレプトコッカス特異的抗原を含む疑いのある試料を受け入れるための受入チャンバーであって、試料と接触して処理試料を供給する液体抽出試薬を受け入れるのに必要な大きさであるチャンバーと；処理試料を受け入れるための試料受入ゾーン、標識ゾーンであって、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）、およびその抗原がそこを通過したとき、それを特異的に標識するためのポリクローナル抗体を含有する標識ゾーン、ならびに捕捉ゾーンであって、標識された抗原をそこに特異的に結合するための手段を有する捕捉ゾーンを有するマトリックスであって、試料受入ゾーン、標識ゾーン、および捕捉ゾーンが、液体フロー経路においてマトリックス上に配置されている、マトリックスとを備える。
【００３１】
さらに別の実施形態において、試料においてＡ群ストレプトコッカスの存在を検出するための装置が提供される。装置は、Ａ群ストレプトコッカス特異的抗原を含む疑いのある試料を受け入れるための受入チャンバーであって、試料と接触して処理試料を供給する液体抽出試薬を受け入れるのに必要な大きさであるチャンバーと；処理試料を受け入れるための試料受入ゾーン、標識ゾーンであって、その抗原がそこを通過したとき、それを特異的に標識するためのポリクローナル抗体を含有する標識ゾーン、ならびに捕捉ゾーンであって、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）、および標識された抗原をそこに特異的に結合するための手段を含む捕捉ゾーンを有するマトリックスであって、試料受入ゾーン、標識ゾーン、および捕捉ゾーンが、液体フロー経路においてマトリックス上に配置されている、マトリックスとを備える。
【００３２】
[0032]  さらに別の実施形態において、試料中のＡ群ストレプトコッカスの検出におけるラテラルフローアッセイの偽陽性率を低下させるための方法であって、ラテラルフローアッセイにおいて、アッセイに用いられるポリクローナル抗体標識のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）結合性成分が優先的に結合する、方法が提供される。方法は、Ａ群ストレプトコッカス抗原へのポリクローナル抗体の特異的結合を増強し、かつアッセイの偽陽性率を低下させるのにブロッキング剤として有効な量のＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）を抽出試薬に、またはイムノアッセイ試験片の局所領域に加える工程を含む。
【００３３】
[0033]  別の実施形態において、液体試料を収納箱へ導入するための少なくとも１つの開口部を有する収納箱、抽出試薬、前記液体試料に接触するための前記収納箱における多孔性材料の試料受入ゾーン、および標識ゾーンにおけるポリクローナル抗体標識物質を有する、Ａ群ストレプトコッカスを検出するためのイムノアッセイ装置における改善が提供される。改善は、Ａ群ストレプトコッカス抗原へのポリクローナル抗体の特異的結合を増強し、かつアッセイの偽陽性率を低下させるのにブロッキング剤として有効な量で試料受入ゾーンに加えられるＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）を含む。
【００３４】
[0034]  さらに別の実施形態において、液体試料を収納箱へ導入するための少なくとも１つの開口部を有する収納箱、抽出試薬、前記液体試料に接触するための前記収納箱における多孔性材料の試料受入ゾーン、および標識ゾーンにおけるポリクローナル抗体標識物質を有する、Ａ群ストレプトコッカスを検出するためのイムノアッセイ装置における改善が提供される。改善は、Ａ群ストレプトコッカス抗原へのポリクローナル抗体の特異的結合を増強し、かつアッセイの偽陽性率を低下させるのにブロッキング剤として有効な量で標識ゾーンに加えられるＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）を含む。
【００３５】
[0035]  なお別の実施形態において、液体試料を収納箱へ導入するための少なくとも１つの開口部を有する収納箱、抽出試薬、前記液体試料に接触するための前記収納箱における多孔性材料の試料受入ゾーン、および標識ゾーンにおけるポリクローナル抗体標識物質を有する、Ａ群ストレプトコッカスを検出するためのイムノアッセイ装置における改善が提供される。改善は、Ａ群ストレプトコッカス抗原へのポリクローナル抗体の特異的結合を増強し、かつアッセイの偽陽性率を低下させるのにブロッキング剤として有効な量で抽出試薬に加えられるＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）を含む。
【００３６】
[0036]  下に記載および例証された、次の態様およびその実施形態は、例示的、および例証的であることを意図するものであって、範囲を限定することを意図するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】[0037]図１は、健康な個体（C-001〜C-030）から採取された咽喉スワブ、陰性対照試料、および陽性対照試料におけるＳｔｒｅｐ  Ａ抗原の絶対カウントを示す棒グラフであり、それぞれが、Ｓｔｒｅｐ  Ａについてのラテラルフロー診断イムノアッセイを用いて試験された。
【図２】[0038]図２は、ヒトの唾液（全体および遠心分離後の画分）、頬、舌、鼻、耳、および皮膚から、ならびに実験台上面から収集された試料についての、Ｓｔｒｅｐ  Ａイムノアッセイ装置における試験ラインでのシグナルの絶対値を示す棒グラフである。
【図３】[0039]図３は、健康な個体（C-001〜C-0030）由来の唾液試料についての、Ｓｔｒｅｐ  Ａイムノアッセイ装置の試験ラインでのシグナルの絶対値を示す棒グラフであり、イムノアッセイにおける付着のために、試料を調製するとき、既知量の抗Ａ群Ｓｔｒｅｐ抗体を抽出試薬に加えた。
【図４】[0040]図４は、示された化学化合物を抽出試薬中に含めることにより、装置での試験のために調製された舌スワブ試料についての、Ｓｔｒｅｐ  Ａの検出のためのイムノアッセイ装置の試験ラインで観察された相対シグナルを示す棒グラフである。
【図５】[0041]図５は、例示的なイムノアッセイ装置を示す図である。
【図６】[0042]図６は、舌スワブ試料（菱形）および２×１０３生物体／試験のＳｔｒｅｐ  Ａ品質管理標準（四角形）についての、抽出試薬中に存在するＮＡＧの濃度の関数としてのＳｔｒｅｐ  Ａについてのイムノアッセイ装置の試験ラインでの相対シグナルのグラフである。
【図７】[0043]図７は、図１に提示されたデータ、およびＮＡＧ０．５ｍｇ／ｍＬが抽出試薬に加えられて、イムノアッセイＳｔｒｅｐ  Ａ検出片上で再び試験された試料（示された患者のそれぞれについてのデータセットのそれぞれにおける右側の棒）を示す棒グラフである。
【図８】[0044]図８は、０．４ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ、０．８ｍｇ／ｍＬ、および１ｍｇ／ｍＬの濃度でのＮＡＧの溶液を試料パッド上に付着させて、乾燥させ、そして、食塩水（陰性対照、各データセットにおける左の棒）、２×１０３生物体／試験の品質管理標準（各データセットにおける中央の棒）、および舌スワブ（各データセットにおける右の棒）の適用でのシグナルについて試験することによる、装置の試料パッド内にＮＡＧを含むＳｔｒｅｐ  Ａイムノアッセイ装置の試験ラインでの絶対シグナルを示す棒グラフである。
【図９】[0045]図９は、本明細書における本発明に従って、ＮＡＧの添加で向上した、Ａ群ストレプトコッカスについてのイムノアッセイの感度、特異度、陽性適中率、および陰性適中率の計算を示す表である。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
[0046]  これらを始めとする実施形態は、後に続く詳細な説明においてさらに記載されている。
【００３９】
[0047]  Ｉ．定義
本方法および組成物が記載される前に、本開示が、記載された特定の実施形態に限定されず、それとして、当然のことながら、変わり得ることは理解されるべきである。本開示のいくつかの実施形態は、下で詳細に記載されている。これらの実施形態は、多くの種々の形をとり得、本明細書に明確に示されたそれらの実施形態に限定されると解釈されるべきではない。むしろ、これらの実施形態は、本開示が、徹底的かつ完全であるように、および本開示の範囲を当業者に十分に伝えるように、提供される。本明細書に用いられる専門用語は、特定の実施形態のみを記載するためのものであり、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるものであるから、限定することを意図されない。
【００４０】
[0048]  本明細書に言及した全ての特許、出願、公開された出願、および他の刊行物は、全体として参照により本明細書で援用される。
【００４１】
[0049]  本明細書に用いる場合、以下の用語は以下の意味を有することを意図される：
【００４２】
[0050]  本明細書に用いる場合、単数形「１つの（a）」、「１つの（an）」、および「その（the）」は、文脈が明らかに他に指図しない限り、複数形の指示対象を含む。したがって、例えば、「１つの（a）タンパク質」への言及は、複数のそのようなタンパク質を含み、「その（the）製剤」への言及は、１つまたは複数の製剤および当業者に知られたその等価物への言及などを含む。
【００４３】
[0051]  値の範囲を示す場合、その範囲の上限と下限の間の、文脈が明らかに他に指図しない限り下限の単位の１０分の１で、それぞれの間にある値もまた、具体的に開示されることは理解されている。提示された範囲における任意の提示された値または間にある値と、その提示された範囲における任意の他の提示された、または間にある値との間のそれぞれのより小さい範囲は、本開示によって包含される。これらのより小さい範囲の上限と下限は、非依存的に、その範囲に含まれてもよいし、排除されてもよく、より小さい範囲に、一方の限界値が含まれ、どちらの限界値も含まれず、または両方の限界値が含まれる各範囲もまた、本開示によって包含され、提示された範囲における任意の具体的に排除された限界値に制約される。提示された範囲がその限界値の１つまたは両方を含む場合、それらの一方または両方を排除する範囲もまた、本開示の範囲内である。
【００４４】
[0052]  「タンパク質」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、および「ペプチド」は、長さまたは翻訳後修飾（例えば、グリコシル化、リン酸化、脂質化、ミリスチル化、ユビキチン化など）に関わらず、アミド結合によって共有結合性に連結された少なくとも２個のアミノ酸のポリマーを表すように交換可能に用いられる。この定義内には、Ｄ−アミノ酸およびＬ−アミノ酸、ならびにＤ−アミノ酸とＬ−アミノ酸の混合物が含まれる。
【００４５】
[0053]  Ｎ−アセチルグルコサミン（「Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン」、「ＮＡＧ」、または「ＧｌｃＮＡｃ」とも呼ばれる）は、Ｃ８Ｈ１５ＮＯ６の分子式、２２１．２１ｇ／ｍｏｌの分子量を有するグルコースの単糖誘導体である。それは、細菌細胞壁におけるバイオポリマーの一部であり、特に、ストレプトコッカス  ピオゲネス（A群ストレプトコッカス）の細胞表面構造は、Ｎ−アセチルムラミン酸（MurNAc）の乳酸残基においてオリゴペプチドで架橋した、ＮＡＧとＮ−アセチルムラミン酸（MurNAc）の交互単位を含む。この層状構造はペプチドグリカンと呼ばれる。ＮＡＧは、ポリマーのキチンのモノマー単位であり、そのキチンは、昆虫および甲殻類の外骨格を形成する。グルクロン酸と重合したＮＡＧは、高等生物の結合組織、上皮組織、および神経組織の成分である、ヒアルロナンを形成する。
【００４６】
[0054]  用語「配列同一性」は、配列アラインメントプログラムを用いて整列した、２つまたはそれ以上の整列した配列における核酸またはアミノ酸配列の同一性を意味する。
【００４７】
[0055]  ２つの配列間の同一性を決定するために用いることができる、例示的なコンピュータプログラムには、ＢＬＡＳＴプログラムのパッケージソフト、例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸおよびＴＢＬＡＳＴＸ、ＢＬＡＳＴＰ、ならびにＴＢＬＡＳＴＮが挙げられるが、それらに限定されず、それらは（ncbi.nlm.gov/BLAST/）においてインターネット上で公的に利用可能である。Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９０、およびＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９７も参照されたい。
【００４８】
[0056]  「配列同一性のパーセンテージ」および「パーセンテージ相同性」は、ポリヌクレオチド間およびポリペプチド間での比較を指すように本明細書で交換可能に用いられ、２つの最適に整列した配列を比較ウィンドウに関して比較することにより決定され、比較ウィンドウにおけるポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の部分は、その２つの配列の最適なアラインメントのために、（付加も欠失も含まない）参照配列と比較して付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含んでもよい。パーセンテージは、両方の配列において同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が存在する位置の数を決定して、マッチした位置の数が得られ、そのマッチした位置の数を、比較ウィンドウにおける位置の総数で割り、その結果に１００を掛けて、配列同一性のパーセンテージが得られることにより、計算され得る。あるいは、パーセンテージは、両方の配列において同一の核酸塩基またはアミノ酸残基が存在するか、または核酸塩基もしくはアミノ酸残基がギャップと整列しているかのいずれかの位置の数を決定して、マッチした位置の数が得られ、そのマッチした位置の数を、比較ウィンドウにおける位置の総数で割り、その結果に１００を掛けて、配列同一性のパーセンテージが得られることにより、計算されてもよい。当業者は、２つの配列を整列させるのに利用可能な多数の確立されたアルゴリズムがあることを認識している。比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ  ＆  Ｗａｔｅｒｍａｎ、Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ＆  Ｗｕｎｓｃｈ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アラインメントアルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ  ＆  Ｌｉｐｍａｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法により、これらのアルゴリズム（GCG Wisconsin Software PackageにおけるGAP、BESTFIT、FASTA、およびTFASTA）のコンピュータによる実行により、または目視検査（一般的に、Current Protocols in Molecular Biology、F. M. Ausubelら編、Current Protocols、Greene Publishing Associates, Inc.とJohn Wiley & Sons, Inc.との合弁事業、(1995 Supplement) (Ausubel)参照）により、行うことができる。パーセント配列同一性および配列類似性を決定するのに適しているアルゴリズムの例は、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ  ２．０アルゴリズムであり、それらは、それぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０、およびＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９７７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３３８９〜３４０２に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎウェブサイトを通して公的に利用可能である。ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメータのＷ、Ｔ、およびＸは、アラインメントの感度および速度を決定する。（ヌクレオチド配列についての）ＢＬＡＳＴＮプログラムは、デフォルトとして、１１のワード長（W）、１０の期待値（E）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、および両方の鎖の比較を用いる。アミノ酸配列について、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デ��ォルトとして、３のワード長（W）、１０の期待値（E）、およびＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスを用いる（Henikoff & Henikoff、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 (1989)参照）。
【００４９】
[0057]  上記で言及したアルゴリズムおよびプログラムの全てが、本明細書における本開示の目的として、配列アラインメントおよび％配列同一性の決定に適しているが、％配列同一性の決定は、典型的には、ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅパッケージ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ、Ｍａｄｉｓｏｎ  ＷＩ）におけるＢＥＳＴＦＩＴまたはＧＡＰプログラムを用いて、提供されたデフォルトパラメータを使って実施される。
【００５０】
[0058]  句「％配列同一性」は、配列アラインメントプログラムを用いて整列した場合、２つまたはそれ以上の整列した配列間の核酸またはアミノ酸の配列同一性のレベルを指す。例えば、７０％相同性は、定義済みのアルゴリズムによって決定された７０％配列同一性と同じことを意味し、したがって、所定の配列の相同体は、その所定の配列の長さに関して７０％より高い配列同一性を有する。配列同一性の例示的なレベルには、所定の配列、例えば、本明細書に記載されているようなタンパク質の核酸配列またはアミノ酸配列に対する７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％配列同一性が挙げられるが、それらに限定されない。
【００５１】
[0059]  「付随した」とは、疾患、状態、または表現型の発現または顕在化と同時に起こることを指す。付随は、変化が様々な疾患および状態の基盤を与え得る、ハウスキーピング機能を担う遺伝子、特定の疾患、状態、または表現型に関与する経路の一部である遺伝子、および疾患、状態、または表現型の顕在化に間接的に寄与する遺伝子が原因になり得るが、それらに限定されない。
【００５２】
[0060]  本開示に関して、生体液は、糞便、生検標本、皮膚、爪、および毛髪を含む固体もしくは半流動性試料、または尿、唾液、痰、粘液、血液、血漿もしくは血清などの血液成分、羊水、精液、腟分泌物、涙、髄液、洗浄液、および他の体液などの液体試料でもよい。試料の中には、例えば、子宮頸部、尿道、鼻孔、および咽喉からのスワブ検体が含まれる。そのような試料のいずれも、生きている、死んだ、または瀕死の動物または植物由来であってもよい。動物には、ヒトなどの哺乳類が挙げられる。
【００５３】
[0061]  「抗体」とは、免疫グロブリン遺伝子（複数可）またはその断片によって実質的にコードされるポリペプチドを指す。認められている免疫グロブリン遺伝子には、κ、λ、α、γ、δ、ε、およびμ定常領域、加えて、無数の免疫グロブリン可変領域の遺伝子が挙げられる。軽鎖はκかまたはλのいずれかとして分類される。重鎖は、γ、μ、α、δ、またはεとして分類され、それらは、次には、それぞれ、免疫グロブリンクラスＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを定義する。典型的には、抗体は、別の分子に特異的に結合し、それによって、別の分子の特定の空間的および極性構成と相補的であると定義される、その表面上または空洞中の領域を有する免疫グロブリンである。抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルでもよい。抗体には、完全な免疫グロブリンまたはその断片が挙げられ得る。その断片には、Ｆａｂ、Ｆｖ、およびＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’などが挙げられ得る。抗体にはまた、組換え方法によって作製されるキメラ抗体またはその断片も挙げられ得る。
【００５４】
[0062]  「抗体」には、ＩｇＧ、ＩｇＭ、およびＩｇＡアイソタイプの全抗体を含む全抗体、ならびにその任意の抗原結合断片（すなわち、「抗原結合部分」）または一本鎖が挙げられる。「抗体」とは、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（H）鎖および２つの軽（L）鎖またはそれらの抗原結合部分を含む糖タンパク質を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではVHと省略される）および重鎖定常領域で構成される。ＩｇＧ重鎖定常領域は、４つのドメイン、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではVLと省略される）および軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬで構成される。ＶＨおよびＶＬ領域はさらに、フレームワーク領域（FR）と名付けられた、より高く保存されている領域と共に散在した、相補性決定領域（CDR）と名付けられた超可変の領域へ細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へ、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置された、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１成分（C1q）が挙げられる宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【００５５】
[0063]  本明細書で用いる場合、「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことを意図される（例えば、対象タンパク質に特異的に結合する単離された抗体は、対象タンパク質以外の抗原を特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、対象タンパク質のエピトープ、アイソフォーム、または変異体に特異的に結合する単離された抗体は、例えば、他の種由来の、他の関連した抗原（例えば、種相同体）に対する交差反応性を有する場合がある。さらに、単離された抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まない場合がある。実施形態によっては、異なる特異性を有する「単離された」モノクローナル抗体の組合せは、明確に定義された組成で組み合わされる。
【００５６】
[0064]  「特異的結合」とは、抗体の既定の抗原への結合を指す。典型的には、抗体は、１０−７Ｍ以下の解離定数（KD）で結合し、かつ既定の抗原または密接に関係した抗原以外の非特異的抗原（例えば、BSA、カゼイン）への結合についてのそのＫＤのせいぜい２分の１であるＫＤで、既定の抗原に結合する。句「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」は、用語「抗原に特異的に結合する抗体」に関して本明細書で交換可能に用いられる。
【００５７】
[0065]  本明細書に用いられる場合、「免疫学的結合」とは、一般的に、抗体またはその断片と、１型インターフェロンまたはその抗体が特異的である受容体との間で起こる、そのタイプの非共有結合性相互作用を指す。免疫学的結合相互作用の強度または親和性は、相互作用の解離定数（Kd）によって表すことができ、より小さいＫｄが、より大きい親和性を示す。選択された抗体の免疫学的結合性質は、当技術分野においてよく知られた方法を用いて数量化することができる。１つのそのような方法は、抗原結合部位／抗原複合体形成速度および解離速度を測定することを必要とし、それらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性に依存し、かつ両方の方向における速度に等しく影響する幾何学的パラメータに依存する。したがって、「オン速度定数」（Kon）および「オフ速度定数」（Koff）の両方は、濃度、ならびに会合および解離の実際の速度の計算によって決定することができる。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの率は、親和性に関係していない全てのパラメータの削除を可能にし、したがって、解離定数Ｋｄに等しい。一般的には、Ｄａｖｉｅｓら、Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９：４３９〜４７３（１９９０）参照。
【００５８】
[0066]  ＩｇＧ抗体についての「高親和性」とは、１０−８Ｍ以下、より好ましくは１０−９以下、さらにより好ましくは１０−１０Ｍ以下のＫＤを有する抗体を指す。しかしながら、「高親和性」結合は、他の抗体アイソタイプについて異なり得る。例えば、ＩｇＭアイソタイプについての「高親和性」結合は、１０−７Ｍ以下、より好ましくは１０−８Ｍ以下のＫＤを有する抗体を指す。
【００５９】
[0067]  ある化合物に対するモノクローナル抗体は、培養中の連続細胞系によって抗体分子の産生をもたらす任意の技術を用いて調製してもよい。これらには、Ｋｏｈｌｅｒ  ＆  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５、Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５〜４９７および／またはＫａｐｒｏｗｓｋｉ、米国特許第４，３７６，１１０号によって最初に記載されたハイブリドーマ技術、；Ｋｏｓｂｏｒら、１９８３、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２および／またはＣｏｔｅら、１９８３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：２０２６〜２０３０によって記載されたヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術；ならびにＣｏｌｅら、１９８５、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、７７〜９６ページにより記載されたＥＢＶ−ハイブリドーマ技術が挙げられるが、それらに限定されない。加えて、適切な抗原特異性のマウス抗体分子由来の遺伝子を、適切な生物活性のヒト抗体分子由来の遺伝子と共に、スプライスすることによる「キメラ抗体」（Morrisonら、1984、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 :6851 -6855; Neubergerら、1984、Nature 312:604-608; Takedaら、1985、Nature 314:452-454; Boss、米国特許第4,816,397号; Cabilly、米国特許第4,816,567号）の作製のために開発された技術を用いることができる。または、「ヒト化」抗体を調製することができる（例えば、Queen、米国特許第5,585,089号参照）。あるいは、一本鎖抗体の作製について記載された技術（例えば、米国特許第4,946,778号参照）は、化合物特異的一本鎖抗体を作製するために適応し得る。
【００６０】
[0068]  特定の結合部位の欠失を含む抗体断片は、知られた技術によって作製され得る。例えば、そのような断片には、Ｆ（ａｂ’）２断片（抗体分子のペプシン消化によって作製することができる）およびＦａｂ断片（F(ab’)2断片のジスルフィド架橋を還元することにより作製することができる）が挙げられるが、それらに限定されない。あるいは、Ｆａｂ発現ライブラリーが、対象ペプチドに対する所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂ断片の迅速かつ簡単な同定を可能にするように構築され得る（Huseら、1989、Science 246: 1275-1281）。
【００６１】
[0069]  所望のペプチドに特異的な抗体または抗体断片は、例えば、アガロースに付けることができ、抗体−アガロース複合体は、ペプチドを精製するためのイムノクロマトグラフィに用いられる。Ｓｃｏｐｅｓ、１９８４、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｉｎｃ．、Ｎ．Ｙ．、Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ、１９７４、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：Ｉｍｍｕｎｏａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ３４：７２３〜７３１参照。
【００６２】
[0070]  「検出する」および「検出」は、それらの標準的な意味をもち、選択されたタンパク質またはタンパク質活性の検出、測定、および／または特徴づけを包含することを意図される。例えば、酵素活性は、そのタンパク質のインヒビター、アクチベータ、およびモジュレータを検出し、スクリーニングし、または特徴づける過程において「検出されて」もよい。
【００６３】
[0071]  用語「参照レベル」は、陽性または陰性対照の検出されたレベルを指す。例えば、陽性対照の参照レベルは、既知のＡ群ストレプトコッカス細菌の試料もしくは培養物、Ａ群ストレプトコッカスに感染していることが知られている対象から得られる、既知量のＡ群ストレプトコッカス特異的抗原であり得、またはＡ群ストレプトコッカス特異的抗原の既知の源に由来した数値を指し得る。
【００６４】
[0072]  「標識」は、本明細書に記載された部分、例えば、ペプチド、タンパク質、または抗体に付けた場合、そのような部分を、知られた検出方法、例えば、分光法、光化学的方法、電気化学発光方法、および電気泳動方法を用いて検出可能にする任意の部分を指す。本開示に用いるのに適した様々な標識には、化学的手段かまたは物理的手段のいずれかを通してシグナルを生じる標識であって、シグナルが視覚的手段または器具による手段によって検出可能である、標識が挙げられる。例示的な標識には、フルオロフォアおよび放射性同位元素が挙げられるが、それらに限定されない。そのような標識は、適切な検出器、例えば、蛍光光度計によって、標識された化合物の直接的検出を可能にする。そのような標識には、酵素および基質、色素原、触媒、蛍光化合物、リン光性化合物、化学発光性化合物、および放射性標識を挙げることができる。典型的には、視覚的に検出可能な標識が用いられ、それにより、試料における分析物の量の器具（例えば、分光光度計）による読み出しを提供する。標識には、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ガラクトシダーゼ（αおよび/またはβ）、およびアルカリフォスファターゼなどの酵素が挙げられる。適切な基質には、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（TMB）および１，２ジオキセタンが挙げられる。検出方法は、用いられた標識に依存し、当業者には明らかであろう。適切な直接的標識の例として、放射標識、フルオロフォア、発色団、キレート化剤、粒子、化学発光剤などが挙げられる。
【００６５】
[0073]  そのような実施形態について、標識は、直接的標識、すなわち、それ自体が検出可能であり、もしくは検出可能なシグナルを生じる標識であってもよく、またはそれは、間接的標識、すなわち、別の化合物の存在下で、検出可能であり、もしくは検出可能なシグナルを生じる標識であってもよい。「標識された第２抗体」とは、検出可能な標識に付いた抗体を指す。標識は、抗体が、液状試料における分析物の存在に関係している検出可能なシグナルを生じることを可能にする。
【００６６】
[0074]  放射性標識：適切な放射標識には、例として、かつ非限定的に、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、５７Ｃｏ、１３１Ｉ、および１８６Ｒｅが挙げられる。
【００６７】
[0075]  「発色団」は、吸収特性を有する、すなわち、様々な光量子源のいずれかによる照射で励起する能力がある部分を指す。発色団は、蛍光性または非蛍光性であり得、それには、とりわけ、色素、フルオロフォア、発光分子、化学発光分子、および電気化学発光分子が挙げられる。
【００６８】
[0076]  適切な間接的標識の例として、基質と反応または相互作用して、検出可能なシグナルを生じる能力がある酵素（ＥＬＩＳＡおよびＥＭＩＴイムノアッセイに用いられるものなど）、標識された部分を結合する能力があるリガンドなどが挙げられる。間接的標識として有用な適切な酵素には、例として、かつ非限定的に、アルカリフォスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、リゾチーム、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼ、およびウレアーゼが挙げられる。ＥＬＩＳＡおよびＥＭＩＴイムノアッセイにおけるこれらの酵素の使用は、Ｅｎｇｖａｌｌ、１９８０、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍ．７０：４１９〜４３９および米国特許第４，８５７，４５３号に詳細に記載されている。
【００６９】
[0077]  「基材」、「支持体」、「固体支持体」、「固体障壁」、または「樹脂」は、交換可能な用語であり、任意の固相材料を指す。基材はまた、「固相」、「表面」、および／または「膜」などの用語を包含する。固体支持体は、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリフルオロエチレン、ポリエチレンオキシ、およびポリアクリルアミドなどの有機ポリマー、加えて、それらのコポリマーおよびグラフトで構成することができる。固体支持体は、ガラス、シリカ、細孔制御ガラス（CPG）、逆相シリカ、または金もしくは白金などの金属など、無機物でもよい。「固体支持体」には、膜（例えば、ニトロセルロース）、マイクロタイタープレート（例えば、PVC、ポリプロピレン、ポリスチレン）、ディップスティック、試験管、およびガラスまたはプラスチックビーズが挙げられる。基材の形状は、ビーズ、球、粒子、顆粒、ゲル、膜、または表面の形をとり得る。表面は、平面、実質的に平面、または非平面でもよい。固体支持体は、多孔性または非多孔性であり得、膨潤または非膨潤特性を有し得る。固体支持体は、ウェル、陥凹、または他の容器、器、フィーチャ、もしくはロケーションの形に形成することができる。複数の支持体が、アレイ上で、試薬のロボット配達のために、または検出方法および／もしくは器具により、アドレス可能に、様々な位置に配置することができる。生体分子を固定化するための方法は、当技術分野において周知であり、その抗体は、共有結合または非共有結合で結合することができる。一実施形態において、固体支持体は、ビオチン化抗体が非共有結合で結合した、ストレプトアビジンコーティングプレートである。
【００７０】
[0078]  統計学および診断試験において、感度および特異度は、二項分類試験の性能の統計学的尺度である。感度（「再現率」とも呼ばれる）は、それとして正しく同定されている実際の陽性の割合を測る（例えば、その状態を有するとして正しく同定されている、病人のパーセンテージ）。特異度は、正しく同定されている、陰性の割合を測る（例えば、その状態を有しないとして正しく同定されている健康な人のパーセンテージ）。これらの２つの尺度は、第Ｉ種および第ＩＩ種の過誤の概念に密接に関係している。理論上の最適予測は、１００％感度（すなわち、病気群由来の全ての人を病気であると予測する）および１００％特異度（すなわち、健康な群由来の誰をも病気であるとは予測しない）を達成することを目指しているが、理論的には、いかなる予測量も、ベイズの誤差率として知られた、最低誤差限界を有する。
【００７１】
[0079]  「特異度」は、診断試験が陰性結果を同定する能力に関する。
【００７２】
【数１】
0006055828.tif 000002
試験が、高特異度を有する場合には、試験からの陽性結果は、試験が試験している疾患の存在の高確率を意味する。
【００７３】
[0080]  「感度」は、診断試験が陽性結果を同定する能力に関する。
【００７４】
【数２】
0006055828.tif 000003
試験が高感度を有する場合には、陰性結果は、疾患の非存在を示唆するであろう。例えば、１００％の感度は、試験が全ての実際の陽性を認識している  −  すなわち、全ての病人が、病気であると認識されている。したがって、高特異度と対照的に、高感度試験における陰性結果は、疾患を除外するために用いられる。
【００７５】
[0081]  任意の試験について、通常、その尺度の間にトレードオフがある。例えば、安全に対する潜在的脅威について試験している空港の安全性設定において、スキャナは、航空機および搭乗者らを脅かす物体を見逃すというリスクを低減するために（高感度）、ベルトバックルおよび鍵のような低リスクの品目（低特異度）にトリガーするように設定される場合がある。このトレードオフは、受信者動作特性（ROC）曲線を用いてグラフで表すことができる。
【００７６】
[0082]  実施形態によっては、ＲＯＣは、要約統計量を作成するために用いられる。いくつかの一般的なバージョンは以下である：無識別線に対して９０度の線とのＲＯＣ曲線の切片（Youden’s J統計量とも呼ばれる）；ＲＯＣ曲線と無識別線の間の面積；ＲＯＣ曲線下の面積、または「ＡＵＣ」（「曲線下面積」）、またはＡ’（「a-プライム」と発音される）；ｄ’（「d-プライム」と発音される）、ノイズのみの条件下でのシステムにおける活性の分布の平均と、シグナルのみの条件下でのそれの分布の間の距離を、それらの標準偏差で割る、ただし、両方のこれらの分布が同じ標準偏差を有する正規分布であるという仮定の下にある。これらの仮定の下、ＲＯＣの形はｄ’へのみ依存することが証明され得る。
【００７７】
[0083]  試験の「陽性適中率（PPV）」または「精度」は、正しく診断されている、陽性試験結果を有する対象の割合を記載するために用いられる要約統計量である。試験されることになっている根底にある状態を陽性試験結果が反映しているという確率を、それが反映するため、それは診断方法の性能の尺度である。しかしながら、その値は、対象とする転帰の有病率に依存し、その転帰は、特定の標的集団について知られていない場合がある。ＰＰＶは、ベイズの定理を用いて導くことができる。
【００７８】
[0084]  ＰＰＶは以下として定義される：
【００７９】
【数３】
0006055828.tif 000004
式中、「真陽性」は、試験が陽性予測を示し、かつ対象がゴールドスタンダード下で陽性結果を有するという事象であり、「偽陽性」は、試験が陽性予測を示し、かつ対象がゴールドスタンダード下で陽性結果を有するという事象である。
【００８０】
[0085]  「陰性適中率（NPV）」は、正しく診断されている、陰性試験結果を有する対象の割合として定義される。高ＮＰＶは、試験が陰性結果を生じる場合、その結果が陽性であるはずだったということはめったに見られないということを意味する。医療試験の身近な状況においては、高ＮＰＶは、試験が、病人を健康であると誤分類することはめったにない。これは、健康な人を病気であると誤って分類する試験の傾向については言及していないことに留意されたい。
【００８１】
[0086]  ＮＰＶは以下のように決定される：
【００８２】
【数４】
0006055828.tif 000005
式中、「真陰性」は、試験が陰性予測を示し、かつ対象がゴールドスタンダード下で陰性結果を有するという事象であり、「偽陰性」は、試験が陰性予測を示し、かつ対象がゴールドスタンダード下で陽性結果を有するという事象である。
【００８３】
[0087]  有病率、感度、および特異度が知られている場合には、陽性適中率および陰性適中率（PPVおよびNPV）は、以下のように任意の有病率について計算することができる：
【００８４】
【数５】
0006055828.tif 000006
【００８５】
[0088]  疾患の有病率が非常に低い場合には、陽性適中率は、たとえ感度と特異度の両方が高いとしても、１に近いことはない。したがって、一般的な集団をスクリーニングすることにおいて、陽性試験結果を有する多くの人が偽陽性であろうことは避けられない。
【００８６】
[0089]  異常が稀であればあるほど、陰性試験結果が異常なしを示すことをより強く確信することができ、かつ陽性結果が実際に異常を示すことをあまり確信することができない。有病率は、疾患の事前確率として知られた、対象が疾患を有することの、試験実施前の確率として解釈することができる。陽性適中率および陰性適中率は、試験において陽性である対象および陰性である対象についてのその同じ確率の修正推定値であり、事後確率として知られている。事前確率と事後確率の差は、その試験の有用性を評価する１つの手段である。
【００８７】
[0090]  任意の試験結果について、患者が対象の状態を真に有した場合にその結果を得る確率を、彼または彼女が健康であった場合の対応する確率と比較することができる。これらの確率の比は、尤度比と呼ばれ、感度／（１−特異度）として計算される。（Altman DG、Bland JM (1994)「Diagnostic tests 2: Predictive values」、BMJ 309 (6947): 102）。
【００８８】
[0091]  「除外基準」、「除外」、または「ＲＯ」は、疾患または状態の医学的鑑別診断に用いられる用語であり、その診断において、特定の基準が、排除または包含の臨床的判断過程において評価される。その基準を検討して、疾患を有することについての全ての、または有意な数の基準を満たしていることはないと対象が決定されている場合、対象は「除外される」。
【００８９】
ＩＩ．ＮＡＧを含む装置およびキットならびに使用方法
[0092]  本発明の裏付けとして行われた研究において、咽喉スワブを、３０人の健康なボランティアから収集した。各試料を、Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗原の存在または非存在について、Ｓｔｒｅｐ  Ａの検出のためのイムノアッセイ試験片を用いてスクリーニングした。予想外にも、番号表示Ｃ−００１〜Ｃ０３０によって表された各人についての図１に提示されたデータからわかるように、これらのスワブの大部分が陽性結果を示した。陰性対照試料は、左側の３本の棒として示され、「Ｎｏｓｗａｂ−Ｎｅｇ」、「ｅｓｗａｂ−Ｎｅｇ」、および「ｅｓｗａｂ−Ｎｅｂ１．５」と表示されている。陽性対照試料は、一番右にあり、「陽性（２×１０−３）」と表されている。少なくとも患者Ｃ−００１、Ｃ−００２、Ｃ−００７、Ｃ０１０、Ｃ−０１３、Ｃ−０１７、Ｃ−０１８、Ｃ−０２０、Ｃ−０２３、Ｃ−０２４、およびＣ−０３０は、Ｓｔｒｅｐ  Ａについて陽性であった。これらの大部分は、その試料が健康な個体由来であったため、偽陽性ではないかと疑われた。観察された多数の偽陽性を理解するために、さらなる調査を行った。
【００９０】
[0093]  ＱＵＩＣＫ−ＶＵＥ（登録商標）Ｓｔｒｅｐ  Ａ（Quidel Corporation）などのいくつかの市販のＳｔｒｅｐ  Ａラテラルフロー試験の添付文書は、スワブ上で試料を収集する臨床医または人に、スワブを舌、扁桃、頬、または歯に触れさせないように警告している。そのような警告は、上記の研究において得られ、かつ試験された試料に適用され、それゆえ、なぜ高い偽陽性率が観察されたかは明らかではなかった。対象の口腔内の舌、頬、および歯由来のヒト生体材料が、Ｓｔｒｅｐ  Ａイムノアッセイを用いての偽陽性の、可能性が高い原因として疑われた。
【００９１】
[0094]  唾液、頬の内側、舌、鼻道粘液、耳、および皮膚の健康なヒトからの試料を収集するためにスワブを用いた別の研究を行った。陰性対照として、実験台表面のスワブを採取した。スワブを、ラテラルフローイムノアッセイを用いてＳｔｒｅｐ  Ａの存在について試験した。この研究において、唾液の試料を収集し、遠心分離して、上清およびペレットが得られ、それらも試験した。結果は図２に示され、耳、皮膚、および台表面由来の試料は、これらの試料が陰性対照試料（抽出試薬のみ、ニートスワブ、PBS/BSAの試料）とほぼ同じ絶対シグナルを生じるため、Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗原を含まない。しかしながら、口腔組織、唾液、頬、および舌から得られた試料は、陰性対照と比較して、Ｓｔｒｅｐ  Ａの存在について陽性であった。
【００９２】
[0095]  唾液試料を、既知量のポリクローナル抗Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗体の試料への添加あり、および添加なしで、Ｓｔｒｅｐ  Ａの存在または非存在について試験した、別の研究が実施例１に記載されている。結果は図３に示されており、図３において、ｘ軸に沿っての各ラベルの左側の棒が唾液試料に対応し、ｘ軸上の各試料ラベルの右側の棒が、唾液試料＋抗Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗体添加に対応する。一番右の３つの試料は、抗Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗体の添加ありおよび添加なしでの既知数の生物体を含むＳｔｒｅｐ  Ａについての品質管理標準に対応する。その図におけるデータは、Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗原よりむしろ、唾液試料中の成分が、イムノアッセイ装置における試験ラインでの偽陽性読み取りをもたらしていたことを示している。
【００９３】
[0096]  偽陽性読み取りの可能性のある源または原因を同定するために、さらなる研究を行った。実施例２に詳述された、その研究において、一連の化学物質を、Ｓｔｒｅｐ  Ａイムノアッセイにおいて抗Ｓｔｒｅｐ  Ａポリクローナル抗体の結合を阻害または阻止するそれらの能力について試験した。試験された化合物には、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＮＡＧ）、グルコサミン、アセチル−ガラクトサミン、ガラクトサミン、マンノサミン、アセチル−ムラミン酸、キチン、キトサン、およびヒアルロン酸（HA-50K）が挙げられる。健康なヒト患者由来の舌スワブ試料およびＳｔｒｅｐ  Ａ品質管理標準（１×１０３生物体／試験）を試験のために入手した。Ｓｔｒｅｐ  Ａの検出のためのイムノアッセイ装置を用いて、舌スワブ試料（図４における各データセットについての右側の棒）およびＱＣ標準（図４における各データセットについての左側の棒）をそれぞれ、図４においてｘ軸に沿って示された試験化合物の存在下で、（市販のQUICK-VUE（登録商標）Strep Aキット中の抽出試薬などの）抽出試薬で処理した。対照およびコンパレータとして、Ｓｔｒｅｐ  Ａ  ＱＣ標準および舌スワブ試料もそれぞれ、抽出試薬で処理した（図４において「Extr A+B」とラベルされた、図４における左のデータセット；左の棒は陽性対照QC標準であり、セットの右の棒は舌スワブである）。結果は図４に示されており、図４において、試験ラインにおけるシグナルの相対活性が、それの適切な対照に対して示されている。試験された化合物のうち、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）が、イムノアッセイ装置の試験ラインでＳｔｒｅｐ  Ａ  ＱＣ標準から生じたシグナルを５０％より多く、抑制し、舌スワブからのシグナルを、対照舌スワブシグナルの１６％まで抑制することができた。舌スワブ検体からの偽陽性シグナルが、ＮＡＧの添加によって効率的に抑制されたという事実は、Ｓｔｒｅｐ  Ａポリクローナル抗体が、舌／口腔由来のヒト組織または細胞へのいくらかの非特異的結合活性を含むことを示唆している。
【００９４】
[0097]  したがって、一実施形態において、ＮＡＧのイムノアッセイへの添加が企図されており、ＮＡＧの存在は、Ｓｔｒｅｐ  Ａポリクローナル抗体集団の抗体と、試験試料中の成分との間の非特異的結合を、ＮＡＧの非存在下で得られるシグナルの少なくとも約５０％、より好ましくは少なくとも約６０％、７０％、または７５％、低下させるのに効果的である。
【００９５】
[0098]  理論に縛られるつもりはないが、データは、咽頭スワブ検体上で誤って収集された上皮細胞に存在する糖タンパク質からの偽陽性シグナルが、ＮＡＧのイムノアッセイへの添加によって効率的に阻止または抑制することができることを示唆している。イムノアッセイに用いられるポリクローナル抗Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗体は、実施形態によっては、Ａ群連鎖球菌細胞壁タンパク質を模倣するヒト上皮細胞壁糖タンパク質を認識する抗体集団を含む場合がある。この抗体集団を阻止することができる試薬をイムノアッセイに供給することにより、偽陽性率を低下させることにより全体的な精度に関するイムノアッセイの性能を向上させることができる。本発明は、イムノアッセイ装置にＮＡＧを含めること、および／またはイムノアッセイと共に提供される抽出試薬（複数可）にＮＡＧを含めることによりこのニーズを満たす。
【００９６】
[0099]  ＮＡＧを含む、Ａ群ストレプトコッカスを検出するためのイムノアッセイが企図されており、そのアッセイは、特異度が増強した、Ａ群ストレプトコッカス生物体の１段階前処理および検出を可能にするラテラルフロー装置を含む。イムノアッセイ装置は、当技術分野において知られており、典型的には、少なくとも試料受入ゾーン、標識ゾーン、および捕捉ゾーンを有し、米国特許第５，４１５，９９４号；第５，７６３，２６２号、および第５，７７０，４６０号（それらは全体として参照により援用される）のいずれかにおける記載に従って、調製することができる。
【００９７】
[0100]  したがって、本開示の一態様において、試料においてＡ群ストレプトコッカスの存在を検出するための装置が提供される。装置の様々な実施形態が想定されており、例示的な実施形態が例証のために本明細書に記載されている。しかしながら、当業者は、例証となる実施形態が、本明細書に示された発明概念に対して非限定的であることは認識されよう。
【００９８】
[0101]  一般的な実施形態において、装置は、流体連結した一連のゾーンを含む。好ましい実施形態において、試料受入ゾーンは、標識ゾーン、捕捉ゾーン、および／または吸収ゾーンなどの第２のゾーンおよび次のゾーンと流体連結している。装置の第１の実施形態は、図５に描かれ、それは、Ａ群ストレプトコッカスの検出のためのイムノアッセイ試験片を示す。例示的な試験片１０は、好ましくは試験片の長さを延長する、支持層１２で構成される。支持層１２は、試料パッド１４、標識パッド１６、ニトロセルロース部材１７、および任意の吸収パッド１８を順番に支えている。ニトロセルロース部材上には、試験ライン２０および対照ライン２２がある。Ｓｔｒｅｐ  Ａの検出について、標識パッドは、抗Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗体を含み、試験ラインも同様である。一実施形態において、標識パッド上に付着した抗体は、抗体の検出を助け、または可能にする標識を含む。標識された抗体は、Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗原を、それが標識ゾーンを通過するとき、特異的に結合する。捕捉ゾーンは、標識された抗原をその上に特異的に結合するための手段を含む。本発明により、試料を、装置への適用の前、および／または装置内の流動中に、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）と接触させる。本明細書に記載された研究は、ＮＡＧがアッセイに組み入れられる場合、Ｓｔｒｅｐ  Ａを検出するために意図された装置の性能の向上を例証する。ＮＡＧは、装置へ、例えば、試料受入ゾーン、標識ゾーン、もしくは両方の中に組み入れることができ、および／または試料は、装置の試料受入ゾーンへのそれの適用の前にＮＡＧで処理することができる。
【００９９】
[0102]  一実施形態において、ラテラルフローイムノアッセイは、着色ビーズまたは着色粒子などの、肉眼で視覚的に読み取ることができる標識を有するイムノアッセイを含み、イムノアッセイの試験ラインでのそのようなビーズまたは粒子の収集は、ユーザーにより肉眼で見ることができる。別の実施形態において、ラテラルフローイムノアッセイは、器具により、または器具の助けを借りた眼により、読み取られる標識を有するイムノアッセイを含む。例えば、イムノアッセイにおける蛍光標識は、その標識を励起することができる器具を用いて検出され、励起された標識は、器具で、器具により助けられた眼で、または眼で読み取ることができる。例示的な器具およびラテラルフローイムノアッセイは、参照により本明細書において援用される米国特許出願第６１／６６６，６８９号に記載されている。
【０１００】
[0103]  別の態様において、試料においてＡ群ストレプトコッカスの存在を検出するための装置が提供され、その装置は、（ｉ）Ａ群ストレプトコッカス特異的抗原を含有する、または含有する疑いのある試料を受け入れるための試料受入ゾーン、（ｉｉ）標識ゾーンであって、その抗原がそこを通過したとき、それを特異的に標識するための抗体を含有する標識ゾーン、および（ｉｉｉ）捕捉ゾーンであって、標識された抗原をそこに特異的に結合するための手段を有する捕捉ゾーンを有するマトリックスであって、試料受入ゾーン、標識ゾーン、および捕捉ゾーンが、液体フロー経路においてマトリックス上に配置され、かつ試料受入ゾーン、標識ゾーン、または両方がＮＡＧを含有する、マトリックスを具備する。
【０１０１】
[0104]  使用を企図した装置の別の実施形態は、参照により本明細書において援用される米国特許第５，４１５，９９４号に記載されている。この実施形態において、装置は、ラテラルフローイムノアッセイ装置との流体接触のために位置づけられ、または位置づけ可能な、好ましくは、イムノアッセイ試験片の試料受入ゾーンまたは標識ゾーンとの流体連結のために位置づけられた受入チャンバーを含む。Ｓｔｒｅｐ  Ａを含有する疑いのある生体試料は、例えば、試料を含有するスワブの挿入により、または試料の一定分量を受入チャンバーへ分注することにより、受入チャンバーへ受け入れられる。１つまたは複数の抽出剤または処理剤が、受入チャンバーまたはスワブへ追加として加えることができる。一実施形態において、処理剤はＮＡＧを含む。一実施形態において、受入チャンバーは、試料受入ゾーンより上に位置づけられ、ＮＡＧを含む液体抽出試薬を受け入れるために必要な大きさであり、任意選択により、患者試料を含有するスワブを受け入れるための円筒部分を含む。イムノアッセイ試験片は、Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗原を含む疑いのある処理された試料を含有する抽出液を受け入れるための試料受入ゾーン、標識ゾーンであって、その抗原がそこを通過したとき、それを特異的に標識するためのポリクローナル抗体を有する標識ゾーン、および捕捉ゾーンであって、標識された抗原をそこに特異的に結合するための手段を有する捕捉ゾーンを有するマトリックスであって、試料受入ゾーン、標識ゾーン、および捕捉ゾーンが、液体フロー経路においてマトリックス上に配置されている、マトリックスを具備する。
【０１０２】
[0105]  本明細書に記載された装置の実施形態によっては、生体試料を処理するために供給される抽出試薬は、ＮＡＧを含有する。実施形態によっては実施形態によっては、イムノアッセイ装置の標識ゾーンは、ＮＡＧを含有する。実施形態によっては、イムノアッセイ装置の捕捉ゾーンは、ＮＡＧを含有する。実施形態によっては、イムノアッセイ装置の試料受入ゾーンは、ＮＡＧを含有する。実施形態によっては、これらの特定されたゾーンの全部または一部は、ＮＡＧを、任意選択により、抽出試薬中のＮＡＧと組み合わせて、含む。
【０１０３】
[0106]  上記のような装置を、ＮＡＧの、装置の感度および精度への効果をさらに評価するために用いた。実施例３に記載された別の研究においては、イムノアッセイにおける種々の濃度のＮＡＧを、Ｓｔｒｅｐ  Ａ偽陽性シグナルの阻害について評価した。舌スワブを健康な個体から採取し、Ｓｔｒｅｐ  Ａ品質管理（QC）標準（２．０×１０３生物体／試験）を、ＮＡＧが０．１２５ｍｇ／ｍＬ、０．２５ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、および２ｍｇ／ｍＬで抽出試薬に加えられることを除いて、提供された抽出試薬を用いて試料を抽出することにより、試験のために調製した。試料をイムノアッセイ装置上へ付着させた。結果は、図６において、舌スワブ試料（菱形）および２×１０３生物体／試験のＳｔｒｅｐ  Ａ品質管理標準（四角形）について、抽出試薬中に存在するＮＡＧの濃度の関数として示されている。
【０１０４】
[0107]  図６における結果は、ＮＡＧが、Ｓｔｒｅｐ  Ａ陽性シグナルの抑制より、偽陽性をより効率的に阻害することを示唆している。０．５ｍｇ／ｍＬ（抽出試薬の体積）の濃度でイムノアッセイ中に存在するＮＡＧは、ＮＡＧの非存在下で観察されるシグナルの約２０％まで偽陽性を阻害することができ、一方、同じＮＡＧ濃度において、２．０×１０３生物体／試験でのＳｔｒｅｐ  Ａ  ＱＣ標準の陽性シグナルは、ＮＡＧの非存在下で観察されたシグナルの５０％に留まった。
【０１０５】
[0108]  実施例４に記載された別の研究においては、最初に収集された３０個の試料（図１）を再び、試験し、今回は、イムノアッセイ試験キットと共に提供された抽出試薬にＮＡＧ０．５ｍｇ／ｍＬを添加した。図７は、再び図１のデータ（各データセットの左の棒）、およびＮＡＧ０．５ｍｇ／ｍＬを含む抽出試薬で調製された同じ患者（例えば、C-002）由来の唾液試料の一定分量（示された患者のそれぞれについてのデータセットのそれぞれにおける右側の棒）を提示する棒グラフである。
【０１０６】
[0109]  図８は、患者試料を、装置の試料パッド上にＮＡＧを含むイムノアッセイ装置において試験した別の研究の結果を示す。０．４ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ、０．８ｍｇ／ｍＬ、および１ｍｇ／ｍＬの濃度でのＮＡＧの溶液を試料パッド上に付着させ、乾燥させることにより、装置を調製した。図８の棒グラフにおいて、食塩水陰性対照と共に、舌スワブ試料およびＳｔｒｅｐ  Ａ  ＱＣ標準をそれぞれ、装置において試験した。食塩水（陰性対照）の適用時の試料パッド中にＮＡＧを含むＳｔｒｅｐ  Ａイムノアッセイ装置の試験ラインでの絶対シグナルが、各データセットの左の棒で示され、２×１０３生物体／試験の品質管理標準が、各データセットの中央の棒で示され、舌スワブは、各データセットの右の棒で示されている。Ｓｔｒｅｐ  Ａ  ＱＣ標準が試験された場合、加えて、舌スワブ検体について、ＮＡＧの存在下で、陽性シグナルの阻害が観察された。この結果は、抽出溶液中にＮＡＧを用いる研究からの結果（上記の図７および実施例４）と一致している。したがって、ＮＡＧを、イムノアッセイ装置自体の適切な場所に、またはオフラインの抽出媒質中に含め得ることが実証されている。
【０１０７】
[0110]  本明細書に提示されたデータは、Ｓｔｒｅｐ  ＡについてのイムノアッセイへのＮＡＧの添加が、Ａ群ストレプトコッカスについての試験の特異度を向上させ、かつ偽陽性率を低下させることを示している。したがって、ＮＡＧは、そのような試験において偽陽性を効果的に低下させるために用いることができる。ＮＡＧにより偽陽性を阻止しながら、Ｓ．ピオゲネスからの陽性シグナルを観察することを最適化するために、抗体、ＮＡＧ、および試料の量を調整し得ることを、当業者は認識されよう。本明細書で行われた研究に基づいた試験の感度および特異度は、図９に示されており、図９は、改善されたＡ群ストレプトコッカスイムノアッセイの感度、特異度、陽性適中率、および陰性適中率の計算を示している。
【０１０８】
[0111]  前述に基づいて、かつ別の態様において、（ｉ）Ａ群ストレプトコッカス特異的抗原を含有する、または含有する疑いのある試料を受け入れるための試料受入ゾーン、（ｉｉ）標識ゾーンであって、その抗原がそこを通過したとき、それを特異的に標識するための抗体を含有する標識ゾーン、および（ｉｉｉ）捕捉ゾーンであって、標識された抗原をそこに特異的に結合するための手段を有する捕捉ゾーンを有するマトリックスであって、試料受入ゾーン、標識ゾーン、および捕捉ゾーンが、液体フロー経路においてマトリックス上に配置されている、マトリックスを供給する工程、ならびに（ｂ）試料受入ゾーンを試料と接触させる工程であって、前記試料が、接触工程前に、ＮＡＧを含む液体試薬で処理されている、工程；ならびに（ｃ）捕捉ゾーンにおいて抗原の存在または非存在を検出する工程を含む、試料においてＳｔｒｅｐ  Ａの存在または非存在を検出するための方法が提供される。一実施形態において、マトリックスは追加として、捕捉ゾーンの下流に吸収ゾーンを含む。
【０１０９】
[0112]  別の態様において、液体試料中のＡ群ストレプトコッカスの検出において、ラテラルフローアッセイの偽陽性率を低下させるための方法であって、ラテラルフローアッセイにおいて、アッセイに用いられるポリクローナル抗体標識のＮＡＧ結合性成分が優先的に結合し、その方法が、Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗原へのポリクローナル抗体の特異的結合を増強し、かつアッセイの偽陽性率を低下させるためにブロッキング剤として有効な量のＮＡＧで吸湿性マトリックスを処理することを含む、方法が提供される。
【０１１０】
[0113]  別の態様において、液体試料中のＡ群ストレプトコッカスの検出において、ラテラルフローアッセイの偽陽性率を低下させるための方法であって、ラテラルフローアッセイにおいて、アッセイに用いられるポリクローナル抗体標識のＮＡＧ結合性成分が優先的に結合し、その方法が、Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗原へのポリクローナル抗体の特異的結合を増強し、かつアッセイの偽陽性率を低下させるのにブロッキング剤として有効な量のＮＡＧを抽出試薬に加えることを含む、方法が提供される。
【０１１１】
[0114]  Ａ群ストレプトコッカスを検出するための公知のイムノアッセイ装置の改良は、Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗原に対するポリクローナル抗体の少なくとも一部の特異的結合を増強し、それにより、アッセイの偽陽性率を低下させるのにブロッキング剤として有効な量でＮＡＧを試料受入ゾーンに加えることにより、行うことができる。改良は、Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗原へのポリクローナル抗体の特異的結合を増強し、かつアッセイの偽陽性率を低下させるのにブロッキング剤として有効な量でＮＡＧを標識ゾーンに加えることを含み得る。改良はまた、Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗原へのポリクローナル抗体の特異的結合を増強し、かつアッセイの偽陽性率を低下させるのにブロッキング剤として有効な量でＮＡＧを抽出試薬に加えることを含み得る。
【０１１２】
[0115]  実施形態によっては、試料は、咽頭スワブの使用を通して収集される。実施形態によっては、試料は、咽頭、舌、頬、歯、歯茎、または鼻道のスワブを通して収集される。実施形態によっては、尿、唾液、痰、粘液、血液、血漿または血清などの血液成分、羊水、精液、創傷分泌物、腟分泌物、涙、髄液、洗浄液、および他の体液などの体液が試料採取される。試料の中には、例えば、子宮頸部、尿道、鼻孔、および咽喉からのスワブ検体が含まれる。
【０１１３】
[0116]  実施形態によっては、第１抗体は、Ａ群ストレプトコッカスの１つまたは複数のエピトープに結合し、かつまたＮＡＧにも結合するポリクローナル抗体である。実施形態によっては、抗体は、ポリクローナル抗体の集団であり、その集団は、ＮＡＧへの特異的結合を有する抗体の一部を含む。実施形態によっては、抗体は、グルコサミン、ガラクトサミン、マンノサミン、アセチル−ムラミン酸、キチン、キトサン、および／またはヒアルロン酸（例えば、HA-50K）には結合しない。
【０１１４】
[0117]  実施形態によっては、抗体は、Ａ群ストレプトコッカス抗原を検出することについて高特異性および低感受性を有する。実施形態によっては、抗体は、Ａ群ストレプトコッカス抗原を検出することについて高感受性および低特異性を有する。実施形態によっては、抗体は、Ａ群ストレプトコッカス抗原を検出することについて高特異性および高感受性を有する。
【０１１５】
[0118]  本開示のイムノアッセイに用いられる抗体の例には、アフィニティ精製されたウサギ抗Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗体などのポリクローナル抗体が挙げられ得るが、それに限定されない。
【０１１６】
[0119]  Ａ群ストレプトコッカスを検出するための、先行の組成物、方法、およびキットの成分、加えて様々な抗体を記載する例証的な刊行物には以下が挙げられる：米国特許第５，４１５，９９４号；第５，７６３，２６２号、および第５，７７０，４６０号。これらの特許、出願、および刊行物の全ては、全体として、参照により本明細書において援用される。
【０１１７】
[0120]  キット
本明細書に記載されているようなイムノアッセイ装置を備えるキットもまた企図される。イムノアッセイ装置に加えて、キットは、追加として、装置を用いることおよび生体試料を収集することについての書面による説明書、生体試料を収集するための器具または道具、装置に印を付けるためのラベル、処理された試料を調製するための試薬を含有する容器またはバイアルのいずれか１つまたは複数を含んでもよい。キットは、追加として、アッセイの結果を読み取って解釈するための説明書を含んでもよい。キットはさらに、検体試料に関する試験結果を比較するために用いられ得る参照試料を含んでもよい。一実施形態において、キットは、生体試料を収集するためのスワブ、ならびにアッセイの使用および試料を収集することについての説明書を含み、その説明書は、例えば、咽喉の奥、扁桃、頬、または舌の１つまたは複数に接触させることに対しての警告を含まない。
【０１１８】
[0121]  したがって、別の態様において、（ｉ）Ａ群ストレプトコッカス特異的抗原を含有する、または含有する疑いのある試料を受け入れるための試料受入ゾーン、（ｉｉ）標識ゾーンであって、その抗原がそこを通過したとき、それを特異的に標識するための抗体を含有する標識ゾーン、および（ｉｉｉ）捕捉ゾーンであって、標識された抗原をそこに特異的に結合するための手段を有する捕捉ゾーン、および任意選択により、（ｉｖ）吸収ゾーンを有するマトリックスであって、試料受入ゾーン、標識ゾーン、および捕捉ゾーン（および存在するならば、任意選択の吸収材）が、液体フロー経路においてマトリックス上に配置されている、マトリックスを具備する装置；ならびに（ｂ）抽出試薬を含む容器を備えるキットであって、抽出試薬、試料受入ゾーン、および標識ゾーンの少なくとも１つがＮＡＧを含有する、キットが提供される。
【０１１９】
[0122]  実施例６は、試料受入チャンバーを有するカセット内に収納されたラテラルフローイムノアッセイ試験片、試薬溶液を有するバイアルおよびバイアルの開口端にしっかりとはまるドロッパチップ、滅菌レーヨンスワブ、熱失活した非感染性Ａ群ストレプトコッカスでコーティングされた陽性対照スワブ、熱失活した非感染性Ｃ群ストレプトコッカスでコーティングされた陰性対照スワブ、ならびに使用説明書で構成されるキットを用いて行われた研究を要約する。試験キットは、２つの咽喉スワブが、細菌性咽頭炎を示唆する症状を有する５３３人の患者から得られた臨床研究において用いられた。
【０１２０】
[0123]  実施例の研究に用いられたラテラルフローイムノアッセイ試験片は、試験片の試料パッド上にＮＡＧを乾燥した形で含有した（図５参照）。試験片を、試験片上の試験ラインおよび対照ラインから放射された蛍光または発光シグナルを読み取ることができる器具と連動して働くように設計した。研究の結果は、実施例６に詳述されており、そこでは、感度および特異度が、それぞれ、９９％および９６％であったことがわかる。
【実施例】
【０１２１】
[0124]  以下の実施例は、本開示の方法および組成物を用いて実施することができる例示的なアッセイを記載する。しかしながら、本開示は、下に記載された特定の実施形態に限定されるとは決してみなされるべきではない。
【０１２２】
（実施例１）：健康なボランティア由来の唾液試料を用いた研究
[0125]  唾液検体を、３０人の健康なドナーから収集した。陽性対照として、既知数の抗原からなるＳｔｒｅｐ  Ａについての品質管理（QC）標準を得た。３．７５×１０２生物体／試験、３．７５×１０４生物体／試験、および３．７５×１０５生物体／試験を有するＱＣ標準を得た。各唾液検体の一定分量を、図５に示されたものと類似し、かつ蛍光標識を有するＳｔｒｅｐＡ抗原に特異的なポリクローナル抗体を含むラテラルフローイムノアッセイ試験片上に付着させた。各唾液検体の第２の一定分量を、既知量（２ｍｇ／ｍＬ）のアフィニティ精製されたポリクローナルＳｔｒｅｐ  Ａ抗体と組み合わせた。唾液＋抗体試料を、イムノアッセイ装置上に付着させ、イムノアッセイ装置の試験ラインを、抗原を示す蛍光シグナルの存在について視覚的に観察した。結果は図３に示されている。
【０１２３】
[0126]  図３で示されているように、唾液検体の一部は、蛍光分析計を用いて読み取るとき、イムノアッセイ装置の試験ラインで陽性シグナルを示した。図３における各試料についての右側の棒によって見られるように、試料を処理するときに抽出混合物に加えられた抗Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗体は、陽性シグナルを阻害した。唾液試料およびＱＣ標準における抗Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗体の存在は、陽性シグナルを異なって減弱した。唾液検体におけるＳｔｒｅｐ  Ａ抗体の存在下での減弱は、Ｓｔｒｅｐ  Ａ  ＱＣ標準においてより少なかった。これは、下記の表１に示されているように、抗体の存在下および非存在下でのシグナルの比をとることにより見ることができる。これらの結果は、Ｓｔｒｅｐ  Ａ抗原以外の唾液検体中の成分が、偽陽性シグナルを生じたことを示している。
【０１２４】
【表１】
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【０１２５】
（実施例２）：観察された偽陽性結果における糖類化合物の分析
[0127]  細菌細胞壁およびヒト組織におけるもので構成され、またはそれらと類似した構造を有する化合物を同定し、Ｓｔｒｅｐ  Ａイムノアッセイ試験で陽性シグナルの発現を阻害する能力の調査のために選択した。研究のために選択された化学物質は、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）、グルコサミン、アセチル−ガラクトサミン、ガラクトサミン、マンノサミン、アセチル−ムラミン酸、キチン、キトサン、およびヒアルロン酸（HA-50K）であった。
【０１２６】
[0128]  その研究において、健康なヒト患者由来の舌スワブ検体を得た。Ｓｔｒｅｐ  Ａ品質管理標準（１×１０３生物体／試験）もまた試験のために得た。舌スワブ試料およびＱＣ標準試料をそれぞれ、試験化合物の１つで処理し、その後、試料を、Ｓｔｒｅｐ  Ａの検出のためのイムノアッセイ装置上に付着させた。対照およびコンパレータとして、Ｓｔｒｅｐ  Ａ  ＱＣ標準および舌スワブをそれぞれ、Ｓｔｒｅｐ  Ａイムノアッセイ試験キットと共に提供された抽出試薬で処理した（図４において「ExtrA+B」とラベルを付けられた図４における左のデータセット；左の棒は陽性対照QC標準であり、セットの右の棒は舌スワブである）。結果は図４に示されており、図４において、試験ラインでのシグナルの相対活性が、舌スワブ試料（図４における各データセットについての右側の棒）およびＱＣ標準試料（図４における各データセットについての左側の棒）について、それの適切な対照に対して示されている。試験された化合物のうち、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（NAG）が、イムノアッセイ装置の試験ラインにおけるＳｔｒｅｐ  Ａ  ＱＣ標準から生じたシグナルを、５０％より多く、抑制し、舌スワブからのシグナルを対照舌スワブシグナルの１６％まで抑制することができた。舌スワブ検体からの偽陽性シグナルが、ＮＡＧの添加によって効率的に抑制することができるという事実は、アフィニティ精製されたＳｔｒｅｐ  Ａ抗体が、舌／口腔由来のヒト組織または細胞に対するいくらかの非特異的結合活性を含有することを示唆している。
【０１２７】
（実施例３）：陽性シグナルおよび偽陽性シグナルへのＮＡＧの用量反応
[0129]  ６個の舌スワブを、健康な個体から採取した。２．０×１０３生物体／試験を有するＳｔｒｅｐ  Ａ品質管理（QC）標準を得た。蛍光標識を有するポリクローナルＳｔｒｅｐ  Ａ抗体を用いるＳｔｒｅｐ  Ａの検出のためのイムノアッセイ装置を用いる試験のために、スワブおよびＱＣ標準を調製した。各試料を、０．１２５ｍｇ／ｍＬ、０．２５ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、および２ｍｇ／ｍＬでＮＡＧを含む試薬と混合した。試料を、イムノアッセイ装置上に付着させ、陽性シグナルの存在についての蛍光分析計を用いて、試験ラインを視覚的に観察した。結果は、図６において、舌スワブ試料（菱形）について、および２×１０３生物体／試験のＳｔｒｅｐ  Ａ品質管理標準（四角形）について、抽出試薬中に存在するＮＡＧの濃度の関数として示されている。
【０１２８】
（実施例４）：抽出試薬中にＮＡＧを含むイムノアッセイ
[0130]  健康なドナーから収集された３０個の咽喉スワブを、ＮＡＧが０．５ｍｇ／ｍＬの濃度で抽出混合物に加えられた、Ｓｔｒｅｐ  Ａについてのイムノアッセイにおいて試験した。抽出された試料を、イムノアッセイ上に付着させ、試験ラインを、蛍光分析計を用いて調べ、放射されたシグナルの絶対カウントを得た。各患者由来の試料の一定分量をまた、抽出試薬中にＮＡＧを用いることなしに、試験した（図１におけるデータ、比較のために図７に表されている）。結果は図７に示され、図７において、各患者についての各データセットの右側の棒は、ＮＡＧの存在下で調製された試料に対応する。結果は、健康なドナー由来のいくつかの咽喉スワブ検体が、強い偽陽性シグナルを生じ得るが、これらの偽陽性が、ＮＡＧ０．５ｍｇ／ｍＬによって劇的に抑制され得ることを示している。特に、検体＃１８（「C-018」）を参照されたい。検体＃２４（「C-024」）は、細胞培養によってＳｔｒｅｐ  Ａ陽性であることを確認された。
【０１２９】
（実施例５）：イムノアッセイ装置の試料パッド内にＮＡＧを含むイムノアッセイ
[0131]  試料パッド内に既知量のＮＡＧを有するイムノアッセイ装置を調製した。０．４ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ、０．８ｍｇ／ｍＬ、および１ｍｇ／ｍＬの濃度でのＮＡＧの溶液を試料パッド上に付着させ、乾燥させることにより、装置を調製した。
【０１３０】
[0132]  食塩水陰性対照と共に、舌スワブ試料およびＳｔｒｅｐ  Ａ  ＱＣ標準をそれぞれ、各濃度のＮＡＧを有するイムノアッセイ装置において試験した。結果は図８に示され、図８において、食塩水（陰性対照）の適用時の試料パッド内にＮＡＧを含むＳｔｒｅｐ  Ａイムノアッセイ装置の試験ラインでの絶対シグナルが、各データセットの左の棒で示され、２×１０３生物体／試験の品質管理標準が、各データセットの中央の棒で示され、舌スワブは、各データセットの右の棒で示されている。
【０１３１】
（実施例６）：試料パッド内にＮＡＧを含むＳｔｒｅｐ  Ａイムノアッセイ試験片の感度および特異度
[0133]  Ｓｔｒｅｐ  Ａの検出のためのイムノアッセイ試験片を備えるキットを調製した。キットは、試料受入チャンバーを有するカセット内に収納されたイムノアッセイ試験片、試薬溶液を有するバイアルおよびバイアルの開口端にしっかりとはまるドロッパチップ、滅菌レーヨンスワブ、熱失活した非感染性Ａ群ストレプトコッカスでコーティングされた陽性対照スワブ、熱失活した非感染性Ｃ群ストレプトコッカスでコーティングされた陰性対照スワブ、ならびに使用説明書を含んでいた。イムノアッセイ試験片は、試験片の試料パッド上にＮＡＧを含み、器具によって読み取り可能な蛍光標識を有するように設計された。
【０１３２】
[0134]  細菌性咽頭炎を示唆する症状を有する５３３人の患者から２個の咽喉スワブが得られた臨床研究において、試験キットを用いた。１個の咽喉スワブを、中央参照試験所へ冷たいアイスパック上で輸送し、ヒツジ血液寒天プレート（SBA）上に画線し、最高４８時間、培養した。画線後すぐに、この同じスワブを、蛍光イムノアッセイ試験片において試験した。蛍光イムノアッセイ試験片の性能を、それの結果の、対応する培養結果との比較によって決定した。画線プレートの第一象限における１０個以上、および残りの３つの象限におけるゼロ個以上のＡ群ストレプトコッカス（GAS）陽性コロニーを有する細菌培養物を、培養陽性とみなした。この分析からの結果は、表６−１に提示されている。稀にしかコロニーを示さない、すなわち、第一象限における１０個未満のコロニー、および残りの象限において増殖なしのＳＢＡプレートを、含めなかった。
【０１３３】
【表２】
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【０１３４】
[0135]  このデータから、感度は７０／７０（１００％）（９５％信頼区間（C.I.）９４〜１００％）である；特異度は４３２／４４８（９６％）（９５％C.I.  ９４〜９８％）である；陽性適中率は８１％であり、陰性適中率１００％である。
【０１３５】
[0136]  ＳＢＡプレート上の細菌増殖のレベルに基づいたＧＡＳ陽性培養物の分布、および蛍光イムノアッセイ試験片で得られた対応する結果は、表６−２に提示されている。培養結果の分類もまた決定した。分類は、画線されたプレートの各象限内のＧＡＳ陽性コロニーの数に基づき、稀有（第一象限における１０個未満のコロニー、およびその残りの象限における増殖なし）から４＋（全ての４つの象限における１０個超のコロニー）までに定められた。この培養分類に基づいた蛍光イムノアッセイ試験片の結果は、表６−２に提示されている。
【０１３６】
【表３】
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【０１３７】
[0137]  同じ患者から収集された他の咽喉スワブを、ＳＢＡ上での画線なしに、医師のオフィスまたは診療所で直接、試験した。結果を、他方のスワブで得られた培養（上記の表６−１参照）と比較した。このスワブの直接的試験で得られた感度および特異度はそれぞれ、９９％（６９／７０）および９６％（４２６／４４２）であった。１５個の稀有（上記表６−２参照）、および６個の無効があった；これらは、臨床精度の計算から除外された。蛍光イムノアッセイ試験片をまた、ヒツジ血液寒天プレート上の推定的Ａ群ストレプトコッカスコロニーの同定を確認するために用いた。培養物確認について、その試験は、１００％感度および９５％特異度であった（表６−３）。
【０１３８】
【表４】
0006055828.tif 000010
【０１３９】
[0138]  このデータから、感度は１７／１７（１００％）（９５％C.I.  ７８〜１００％）である；特異度は２０／２１（９６％）（９５％C.I.  ７６〜１００％）である；陽性適中率は９４％であり、陰性適中率は１００％である。
【０１４０】
[0139]  様々な特定の実施形態が、例証され、記載されているが、当業者は、それらの様々な改変、並べ替え、追加、および部分的組合せを認識し、かつこれらが、本開示の精神および範囲から逸脱することなく、なされ得ることを理解されよう。したがって、本開示が、本明細書に開示された特定の実施形態に限定されるべきではなく、その特定の実施形態はそれ自体、例として提示されていることは、理解されるべきである。特定の用語が本明細書に用いられているが、それらは、一般的かつ説明的意味のみで用いられ、限定を目的とするものではない。
【０１４１】
[0140]  非限定的に、特許、特許出願、論文、書籍、学術論文、インターネットウェブページ、および本開示に引用された他の刊行物を含む、本出願に引用された全ての文献および類似した資料は、そのような文献および類似した資料の形式に関わらず、あたかもそれぞれが、個々に示されて、参照により援用されているかのように同じ程度で、いかなる目的に対しても、全体として参照により明確に援用される。援用された文献および類似した資料のうちの１つまたは複数が、本開示（非限定的に、定義された用語、用語の用い方、記載された技術などが挙げられる）と異なり、またはそれに矛盾する場合には、本開示が支配する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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