(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン１５（Ｓｉｇｌｅｃ−１５；配列番号２）に特異的に結合する能力を有する、単離された抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号６６で示された軽鎖可変ドメインの３つの相補性決定領域、および配列番号６８で示された重鎖可変ドメインの３つの相補性決定領域を含むことを特徴とする、単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
配列番号６６で示されたアミノ酸配列と１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン、および配列番号６８で示されたアミノ酸配列と１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメインを含むことを特徴とする、請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
配列番号１１１で示されたアミノ酸配列、配列番号１１２で示されたアミノ酸配列及び配列番号１１３で示されたアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン、並びに配列番号１１４で示されたアミノ酸配列、配列番号１１５で示されたアミノ酸配列及び配列番号１１６で示されたアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む、単離された抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４】
前記抗体は、定常領域またはその断片を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項５】
前記定常領域は、ヒトＩｇＧ２免疫グロブリンまたはヒトＩｇＧ１免疫グロブリンに由来する、請求項４に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項６】
前記抗原結合断片は、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、または（Ｆａｂ'）2を含むことを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項７】
前記抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはその抗原結合断片である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
【請求項８】
前記抗体が、検出可能部分または細胞毒性部分とコンジュゲートしている、請求項１〜７のいずれか一項に記載の単離された抗体。
【請求項９】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片の軽鎖可変ドメインおよび／または重鎖可変ドメインをコードする核酸。
【請求項１０】
請求項９に記載の核酸を含むベクター。
【請求項１１】
請求項９に記載の核酸を含むか、または請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合断片を含むもしくは発現する、単離された細胞。
【請求項１２】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片の少なくとも１つと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項１３】
骨量減少または骨疾患の治療のための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片の少なくとも１つを含む医薬組成物。
【請求項１４】
前記骨量減少または骨疾患が癌と関連する、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
骨量減少または骨疾患の診断のための、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片の少なくとも１つを含む医薬組成物。
【請求項１６】
配列番号２、または配列番号２のアミノ酸２０〜２５９と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列番号２の変異体を検出する方法であって、
配列番号２または配列番号２の変異体を発現する細胞、あるいは配列番号２または配列番号２の変異体を含む、または含む疑いがあるサンプルを、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片の少なくとも１つと接触させる工程と、
結合を測定する工程とを含む、方法。
【請求項１７】
請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体を含む、キット。
【請求項１８】
骨量減少の治療のための、少なくとも１つの抗体または抗原結合断片を含む医薬組成物であって、前記抗体または抗原結合断片が、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に特異的に結合し、配列番号６６で定義された軽鎖可変ドメインの３つの相補性決定領域、および配列番号６８で定義された重鎖可変ドメインの３つの相補性決定領域を含む、医薬組成物。
【請求項１９】
前記抗体またはその抗原結合断片が、ヒト化されており、ヒトＩｇＧ１定常領域を含み、前記軽鎖可変ドメインの３つの相補性決定領域が、配列番号１１１で示されたアミノ酸配列、配列番号１１２で示されたアミノ酸配列及び配列番号１１３で示されたアミノ酸配列を含み、前記重鎖可変ドメインの３つの相補性決定領域が、配列番号１１４で示されたアミノ酸配列、配列番号１１５で示されたアミノ酸配列及び配列番号１１６で示されたアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記抗体またはその抗原結合断片が、細胞毒性部分とコンジュゲートしている、請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記骨量減少が癌と関連する、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に特異的に結合するモノクローナル抗体およびその抗原結合断片、ならびに癌または骨量減少（例えば骨関連疾患に関連する、もしくは破骨細胞の分化や活性の増加に関連する、重度または過度な骨量減少など）の診断、予防、および治療を含む、特定疾患の処置のための、それらの使用に関するものである。本発明はまた、破骨細胞の活性が増加する他の各種疾患の診断、予防、および治療のための、これらの抗体の使用にも関連する。
【背景技術】
【０００２】
骨は動的な結合組織であって、骨の構造的、機械的および生化学的な完全性、ならびに人体のミネラルのホメオスタシスを支えるのに必要とされる、機能的に異なる複数の細胞集団で構成される。関与する主な細胞の種類には、骨形成と骨量の維持を担う骨芽細胞、骨吸収を担う破骨細胞が含まれる。動的なプロセスでの骨芽細胞および破骨細胞の機能は、骨再形成と呼ばれる。これらの細胞のその前駆細胞からの発達と増殖は、全身性のホルモンによってだけでなく、骨の微小環境において生産される成長因子やサイトカインのネットワークによって支配されている。骨再形成は、個体の生涯を通じて進行中であり、健康な骨組織とミネラルのホメオスタシスの維持のため必要である。そのプロセスは概ね平衡状態のままで、全身性のホルモン、ペプチド、および下流のシグナル伝達経路タンパク質、局所的転写因子、サイトカイン、成長因子および骨基質再形成遺伝子の複雑な相互作用によって支配されている。
【０００３】
骨の再形成の過程で生じるあらゆる阻害または不均衡が骨疾患を生じ得、最も一般的な骨疾患は正味の骨量の減少によって特徴付けられる。骨量の減少の主な原因は、破骨細胞の数および／または活性の上昇である。そのような疾患のうち最も一般的で、おそらく最もよく知られたものは、特に閉経後の女性に発生する骨粗鬆症である。実際、骨粗鬆症は、中後年および高齢の女性における骨折の最も重要かつ根本的な原因である。エストロゲン欠乏は閉経後骨粗鬆症の要因として密接に関係づけられてきたが、Ｆｒｏｓｔが４０年前に記載しているように（Ｆｒｏｓｔ  Ｈ．Ｍ．１９６４）、骨再形成は骨格全体での個々のパケットで生じる局所的に制御されたプロセスであることの証拠がかなり以前から存在している。
【０００４】
骨再形成は個々のパケットで行われるため、骨吸収の開始および通常の骨再形成プロセスにおいては、局所的に産生されるホルモンおよび酵素が全身性のホルモンよりも重要であり得る。このような局所的な調節は、それらが作用する微小環境における骨芽細胞と破骨細胞によって媒介される。複数の小胞が、骨基質に向かって酵素を輸送し、部分的に消化された骨基質を内部に取り込む。密閉ゾーン内の微小環境は、リソソーム酵素が豊富に存在し、体の正常な生理的ｐＨに比べて非常に酸性度が高い。波状縁膜は、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬの受容体、およびマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）受容体を発現し、ＲＡＮＫＬおよびＭ−ＣＳＦの両受容体は、急速に破骨細胞を不活性化することのできるカルシトニン受容体とともに破骨細胞の分化を担っている（Ｂａｒｏｎ，Ｒ．２００３）。
【０００５】
阻害と刺激の複雑なパターンにおいて、成長ホルモン、インスリン様成長因子１、性ステロイド、甲状腺ホルモン、カルシウム代謝活性型ホルモン（例えば、ＰＴＨやプロスタグランジンＥ２など）、各種サイトカイン（例えばインターロイキン１β、インターロイキン６、および腫瘍壊死因子αなど）、および１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ（カルシトリオール）は、骨再形成の過程で協働して作用する（Ｊｉｌｋａら１９９２；Ｐｏｌｉら１９９４；Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら１９９８；ｄｅ  Ｖｅｍｅｊｏｕｌ  １９９６）。
【０００６】
したがって、これらの特殊な細胞によって生成された独特な局所的環境は、他の組織で発現していない独特の遺伝子配列、および／または他の組織で発現されるポリペプチドおよびポリヌクレオチドのスプライス変異体のいずれかの発現によるもの、とするのが理にかなっている。破骨細胞活性に特異的なポリヌクレオチド、ポリペプチドおよびそれらの変異体および誘導体を単離および同定することにより、再形成プロセスの明確な理解が可能となり、骨再形成に関連する疾病状態の治療のための組織特異的な治療の標的が提供されることになろう。
【０００７】
骨再形成に結びついている多くの疾患が十分に理解されておらず、一般的に治療不可能であるかまたは限られた範囲内でしか治療できない。例えば、変形性関節症は、疼痛の軽減や患部の関節の変形を防止することに焦点を当てた治療や処置の方法が存在しないことから、治療が困難である。非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が、一般に疼痛を軽減するために使用されている。
【０００８】
別の例として挙げられるのは、現状ＦＤＡに米国での使用が承認された薬物としては骨破壊を防止する骨再吸収阻害薬しか存在しない、骨粗鬆症である。エストロゲン補充療法は、再吸収阻害薬の一例である。その他の再吸収阻害薬としては、アレンドロネート（フォサマックス（Ｆｏｓａｍａｘ）−ビスホスホネート系再吸収阻害薬）、リセドロネート（アクトネル（Ａｃｔｏｎｅｌ）−ビスホスホネート系再吸収阻害薬）、ラロキシフェン（エビスタ（Ｅｖｉｓｔａ）−選択的エストロゲン受容体調整薬（ＳＥＲＭ））、カルシトニン（カルシマー（Ｃａｌｃｉｍａｒ）−ホルモン）、および副甲状腺ホルモン／テリパラチド（フェルテオ（Ｆｏｒｔｅｏ）−カルシウム代謝を調節するのに役立つヒトのホルモン、副甲状腺ホルモンの合成型）などが挙げられる。
【０００９】
アレンドロネートおよびリセドロネートなどのビスホスホネートは骨の表面に永久的に結合し、破骨細胞活性を阻害する。これによって骨芽細胞の再吸収率を増大させることができる。最も一般的な副作用は悪心、腹痛および下痢である。しかしアレンドロネートは、食道の過敏症および炎症を引き起こし、場合によっては、食道の潰瘍を引き起こすことも報告されている。リセドロネートはアレンドロネートと化学的に異なり、食道の過敏症を引き起こす可能性が低い。しかし、ある種の食品、カルシウム、鉄サプリメント、ビタミンおよびミネラル、または酸中和剤（カルシウム、マグネシウム、またはアルミニウムを含む）はリセドロネートの吸収を低下させて、有効性の消失をもたらすことがある。
【００１０】
ラロキシフェンおよび他のＳＥＲＭ（タモキシフェンなど）の、最も一般的な副作用は顔面紅潮である。しかし、ラロキシフェンおよび他のホルモン補充療法剤は、深部静脈血栓症および肺塞栓症を含む血栓、心血管疾患および癌の危険を増大させることが判明してきている。
【００１１】
カルシトニンは、骨密度の増大および骨の強化について、エストロゲンおよび他の再吸収阻害薬ほど有効ではない。注射用または鼻腔スプレー用カルシトニンの一般的な副作用は悪心および紅潮である。患者は鼻過敏症、鼻水、または鼻血を発症することがある。注射用カルシトニンは、注射部位における局部的な皮膚の発赤、皮膚の発疹、および紅潮を引き起こすことがある。
【００１２】
骨再形成が関与するいくつかの疾患または状態同士の関連を示す状況証拠としては、ＦＤＡにより最初はページェット病の治療用に承認されたエチドロネート（ダイドロネル）を使用したものが挙げられる。ページェット病は、骨の脆弱化や疼痛をもたらす、無秩序かつ加速的な骨再形成によって特徴付けられる骨疾患である。いくつかの研究において、ダイドロネルをオフラベル使用することにより、確定した骨粗鬆症を罹患する閉経後の女性において骨密度が増加することが判明した。さらに、長期のステロイド（例えば、プレドニゾンまたはコルチゾンなど）の投薬を必要とする患者では骨量減少の防止に効果があることも判明した。しかしダイドロネルを高用量でまたは連続的に使用すると、骨軟化症と呼ばれる別の骨疾患を引き起こす可能性がある。骨粗鬆症と同様に、骨軟化症は骨の脆弱化と骨折のリスク増加をもたらし得る。骨軟化症の懸念があることと骨折率の減少に関する十分な研究が依然不足しているために、米国ＦＤＡは、骨粗鬆症の治療目的ではダイドロネルを承認していない。
【００１３】
骨粗鬆症の治療法は、主に骨量の減少率を低下させる再吸収阻害薬に焦点を合わせてきていたが、新しい療法は単に骨を維持するかあるいはその劣化を遅らせる代わりに、骨ミネラル濃度を増大させることに効果を発揮する。骨粗鬆症治療薬の初期段階の開発パイプラインは、概ね新しい治療クラスの薬剤候補、特にカテプシンＫ阻害剤、オステオプロテゲリン、およびカルシウム受容体アンタゴニストならびに新規のビスホスホネートからなる。これらのうちいくつかは、骨の生物学の深い理解に基づきゲノムプログラムを利用して新規の薬剤を開発している例であり、長期的には骨疾患の治療の様相を変える可能性を有する。
【００１４】
本発明は、癌や骨量減少（例えば、骨関連疾患に関連する、または破骨細胞の分化や活性の増加に関連する重度または過度な骨量減少）の診断、予後、治療（予防を含む）のためのＳｉｇｌｅｃ−１５に特異的な抗体の使用方法を開示する。具体的には、本発明は、破骨細胞の分化を阻害するための抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体の使用に関するものである。
【００１５】
シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン（Ｓｉｇｌｅｃ）は、シアル酸と相互作用する能力）を有する免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバーである（ＭｃＭｉｌｌａｎおよびＣｒｏｃｋｅｒ，２００８；Ｃｒｏｃｋｅｒら，２００７）。特定の構造上の特徴として、特にシアル酸および不特定数のＣ２セットＩｇドメインに結合するアミノ末端ＶセットＩｇドメインを示す特徴を共有するいくつかのＳｉｇｌｅｃのファミリーが存在する。これらの膜受容体は、一般的に高度に特異的な方式で発現され、そのファミリーの多くは造血細胞で発現される（ＭｃＭｉｌｌａｎおよびＣｒｏｃｋｅｒ，２００８）。
これらのタンパク質は、細胞間相互作用を促進し、シグナル伝達を媒介し、また糖鎖の認識を介して免疫機能を調節すると考えられている（Ｃｒｏｃｋｅｒら，２００７）。シアル酸は、通常細胞表面上の複合糖質の両端に位置する９炭糖である。シアル酸は種々のタンパク質および脂質に付着できる（ＭｃＭｉｌｌａｎおよびＣｒｏｃｋｅｒ，２００８）。
【００１６】
Ｓｉｇｌｅｃ−１５は、Ｓｉｇｌｅｃ−１４と高い相同性を有する、最近報告されたＳｉｇｌｅｃファミリーメンバーの１種である（Ａｎｇａｔａら，２００７）。この著者らは、Ｓｉｇｌｅｃ−１５がシアリルＴｎ構造に優先的に結合し、かつＤＡＰ１２およびＤＡＰ１０と相互作用することを報告している。これらの相互作用の機能的意義はわかっていないが、Ｓｉｇｌｅｃ−１５は、おそらく活性化機能を有しているのでないかと述べられている（Ａｎｇａｔａら、２００７）。Ｓｉｇｌｅｃ−１５の哺乳類における潜在的な役割についてのこのような洞察が従前よりなされてはいたが、新規な破骨細胞の分化調節因子を発見するためのスクリーニングの一部としてその配列が同定されたとき、当該タンパク質の生物学的機能を理解する上で重要な進歩が生じた（Ｓｏｏｋｎａｎａｎら、２００７）。本特許出願には、破骨細胞発生のマウスモデルにおけるＲＮＡ阻害によるＳｉｇｌｅｃ−１５転写物の減弱により、ＲＡＮＫＬ処理に応じた前駆物質の分化の有意な減少がもたらされたことが開示されている。同様の結果がヒト破骨細胞についても開示されている。さらに本明細書に開示した研究により、Ｓｉｇｌｅｃ−１５の細胞膜における局在は、破骨細胞の分化におけるその機能発揮のために必要であることも判明した。さらに、最近の出版物によれば、表面の複合糖質の末端におけるシアル酸の存在は、適正な破骨細胞の分化に必要であり、破骨細胞前駆細胞の融合にとってもおそらく重要であることが判明している（Ｔａｋａｈａｔａら，２００７）。この最後の観察結果は、シアル酸の結合と分化している破骨細胞におけるＳｉｇｌｅｃ−１５の発現との間の直接の機能的な結びつきを新たに示しており、かつＳｉｇｌｅｃ−１５は破骨細胞前駆体の初期の分化プログラムにおいて重要な役割を果たしていることを強く示唆している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】Frost H.M., 1964 Dymanics of Bone Remodelling. In: Bone Biodynamics, Little and Brown, Boston, MA, USA pp.315
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
したがって、Ｓｉｇｌｅｃ−１５の発現プロファイル、破骨細胞分化の間のその強力な誘導能、膜表面でのその局在、およびその構造的特徴はいずれも、モノクローナル抗体による細胞表面の当該タンパク質のターゲティングの可能性を支持する理由となる。破骨細胞を標的とするモノクローナル抗体をベースにした治療法の他の唯一の例は、デノスマブ、即ちＲＡＮＫＬに特異的なヒトモノクローナル抗体の利用である（Ｅｌｌｉｓら，２００８）。本発明は、特に骨関連疾患や破骨細胞の分化が増大する場合での、骨量減少の検出または治療における破骨細胞分化の遮断薬としての抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体または抗原結合断片の使用に関する。本発明はまた、癌の検出や治療における当該抗体または抗原結合断片の使用にも関連する。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明は、骨量減少または癌の治療（予防を含む）、検出および診断に有用な、抗体および抗原結合断片ならびにキットに関連する。前記抗体および抗原結合断片は、分化した破骨細胞、卵巣癌細胞、腎癌細胞、中枢神経系の癌細胞、前立腺癌細胞、メラノーマ細胞、乳癌細胞、肺癌細胞または結腸癌細胞の検出、ならびに骨量減少、卵巣癌、腎癌、中枢神経系の癌、前立腺癌、メラノーマ、乳癌、肺癌または結腸癌の診断にも有用であり得る。本発明の抗体または抗原結合断片はまた、骨量減少、卵巣癌、腎癌、中枢神経系の癌、前立腺癌、メラノーマ、乳癌、肺癌、または結腸癌の治療にも有用であり得る。
【００２０】
本発明の抗体または抗原結合断片は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５（配列番号２）の２０番目から２５９番目までのアミノ酸の領域、またはＳｉｇｌｅｃ−１５変異体（例えば、配列番号４）の対応する領域に結合し得る。より詳細には、本発明の抗体または抗原結合断片は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５（配列番号２）の４９番目から１６５番目までのアミノ酸の領域、またはＳｉｇｌｅｃ−１５変異体（例えば、配列番号４）の対応する領域に結合し得る。
【００２１】
本発明は特に、破骨細胞の分化を促進できるポリペプチドに結合する能力、および前記ポリペプチドの破骨細胞分化活性を阻害する能力を有する、単離された抗体または抗原結合断片に関する。
【００２２】
本発明の抗体または抗原結合断片は、配列番号２の２０番目から２５９番目までのアミノ酸の領域に結合するもの、または配列番号２の２０番目から２５９番目までのアミノ酸の領域と少なくとも８０％の配列同一性を有する変異体に結合するものも包含する。
【００２３】
より具体的には、本発明の抗体または抗原結合断片は、特に配列番号２の４９番目から１６５番目までのアミノ酸の領域、または配列番号２の４９番目から１６５番目までのアミノ酸の領域と少なくとも８０％の配列同一性を有する変異体に結合し得る。
【００２４】
さらに具体的には、本発明の抗体または抗原結合断片は、特に配列番号２と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドに結合し得る。
【００２５】
したがって本発明によれば、抗体または抗原結合断片が、前記ポリペプチドの破骨細胞の分化を促進する能力または腫瘍の増殖を促進する能力を阻害し得る。
【００２６】
配列番号２または配列番号２の変異体の細胞外領域に結合する能力を有する抗体または抗原結合断片は、特に本発明の意図するところである。
【００２７】
したがって本発明は、破骨細胞の分化を促進できるポリペプチドに結合する能力を有し、シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン１５（Ｓｉｇｌｅｃ−１５；配列番号２）の２０番目から２５９番目までのアミノ酸の領域と少なくとも８０％の配列同一性を有する、単離された抗体または抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片は、破骨細胞の分化を阻害する能力、骨再吸収を阻害する能力、またはＳｉｇｌｅｃ−１５がシアル酸に結合するのをブロックする能力を有する、単離された抗体または抗原結合断片を提供する。
【００２８】
本発明の抗体または抗原結合断片は、破骨細胞前駆細胞の分化した破骨細胞への分化に干渉する（阻害する）能力を有し得る。
【００２９】
本発明によれば、前記単離された抗体または抗原結合断片は、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、またはそれらの断片であり得る。
【００３０】
ある典型的な実施形態では、前記単離された抗体または抗原結合断片は、ヒト抗体またはその断片の定常領域のアミノ酸を含み得るヒト抗体またはキメラ抗体であり得る。
【００３１】
前記定常領域またはその断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４に由来するものであり得る。より具体的な態様では、前記定常領域が、ＩｇＧ２に由来するものであり得る。
【００３２】
特に有用であり得る抗原結合断片としては、例えば、ＦＶ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、または（Ｆａｂ’）２が挙げられる。
【００３３】
前記抗体または抗原結合断片は、単離された哺乳類細胞（ハイブリドーマ細胞を除く）またはハイブリドーマ細胞において、または該細胞から産生され得る。単離された哺乳類細胞の一例はヒトの細胞である。
【００３４】
単離された哺乳類細胞（例えばヒトの細胞）におけるモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、またはそれらの断片の産生は、本発明の特に意図するところである。このようにして産生されるキメラ抗体またはヒト抗体は、ヒト抗体の定常領域のアミノ酸またはその断片、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４に由来する定量領域またはそのだ断片を含み得る。より具体的な態様では、前記定常領域はＩｇＧ２由来のものであり得る。
【００３５】
本発明の一側面において、本発明の抗体または抗原結合断片は、ヒト破骨細胞前駆細胞が分化したヒト破骨細胞に分化するのを干渉する（阻害する）能力を有し得る。
【００３６】
典型的な実施形態では、本発明の抗体または抗原結合断片は、初代ヒト破骨細胞前駆細胞が分化したヒト破骨細胞に分化するのを干渉する（阻害する）能力を有し得る。
【００３７】
そのような活性を有する抗体または抗原結合断片には、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、またはそれらの断片が含まれる。
【００３８】
より具体的な実施形態では、そのような活性を有し得る抗体または抗原結合断片には、例えば、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、またはそれらの断片が含まれる。
【００３９】
さらに具体的な実施形態では、そのような活性を有し得る抗体または抗原結合断片には、例えば、ヒト抗体またはその断片の定常領域のアミノ酸を含み得るキメラ抗体、ヒト抗体、またはその断片が含まれる。
【００４０】
ヒト抗体またはキメラ抗体の定常領域またはその断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４に由来するものであり得る。より具体的には、前記定常領域は、ＩｇＧ２に由来するものであり得る。
【００４１】
本発明の抗体および抗原結合断片はまた、一般的にＳｉｇｌｅｃ−１５を発現または過剰発現する細胞をターゲティングするために用いることができ、そのような細胞としては、骨細胞、および乳癌細胞、結腸癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、腎癌細胞、ならびに、メラノーマ細胞、および中枢神経系の癌の細胞などが挙げられる。
【００４２】
より具体的には、前記抗体および抗原結合断片は、分化しつつある破骨細胞をターゲティングするために用いることができる。
【００４３】
本発明はその一側面において、配列番号２に特異的に結合する能力を有し得る、単離された、または実質的に精製された抗体または抗原結合断片を提供する。
【００４４】
より具体的に、本発明のある実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、配列番号２の２０番目のアミノ酸から２５９番目のアミノ酸までの間に位置するドメインに結合し得る。
【００４５】
本発明の別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、配列番号２の２０番目のアミノ酸から２５９番目のアミノ酸までの領域内で構成されるエピトープに結合する能力を有し得る。
【００４６】
したがって本発明は、配列番号２に特異性を有する、診断用および／または治療用の抗体または抗原結合断片を包含する。また本発明には、本発明の抗体と同一のエピトープ特異性を有する抗体または抗原結合断片も包含される。候補の抗体は、本明細書に記載の抗体に対するエピトープに結合するものであるか否かを判定することにより、および／または前記エピトープに結合することが知られている抗体または抗原結合断片を用いて競合アッセイを行うことにより同定することができる。
【００４７】
したがって、本発明はその別の側面において、本明細書に記載する抗体または抗原結合断片と競合する能力を有する、単離された抗体または抗原結合断片を提供する。
【００４８】
本発明はさらに別の側面において、本発明の抗体または抗原結合断片を用いる治療方法および検出方法を提供する。
【００４９】
「抗体」という用語は、インタクトな抗体、モノクローナルまたはポリクローナル抗体をさす。「抗体」という用語には、二特異性抗体などの多特異的な抗体も包含される。ヒト抗体は通常、それぞれ可変領域および定常領域を含む２つの軽鎖および２つの重鎖から形成されている。軽鎖可変領域は、本明細書中ではフレームワーク領域に挟まれたＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３として特定されている、３つのＣＤＲを含む。重鎖可変領域は、本明細書中ではフレームワーク領域に挟まれたＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２とＣＤＲＨ３として特定されている、３つのＣＤＲを含む。
【００５０】
本明細書において使用される「抗原結合断片」なる用語は、抗原（例えば配列番号２またはその変異体）に結合する能力を有する抗体の１つまたは複数の断片をさす。抗体の抗原結合機能は、インタクトな抗体の断片によって発揮され得ることが判明している。「抗原結合断片」という用語の範囲内に包含される結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価の断片）、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片）、（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（Ｖ）ｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４−５４６）、ＶＨドメインからなる断片、および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば、ＶＨ  ＣＤＲ３）などが挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、それぞれ別の遺伝子によってコードされているが、両ドメインは、それらを一本鎖のポリペプチドにできる合成リンカーにより、組換えの方法を用いて結合することができ、この場合一本鎖のポリペプチドにおいては、ＶＬおよびＶＨ領域の対が一価分子を形成する（一本鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）としても知られる；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９−５８８３を参照）。そのような一本鎖抗体が、抗体の「抗原結合断片」という用語の範囲内に包含されることも本発明の意図するところである。さらに抗原結合断片は、（ｉ）免疫グロブリンのヒンジ領域ポリペプチドに融合された結合ドメインポリペプチド（例えば、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、またはリンカーペプチドを介して軽鎖可変領域に融合された重鎖可変領域など）、（ｉｉ）ヒンジ領域に融合された免疫グロブリン重鎖ＣＨ２定常領域、および（ｉｉｉ）ＣＨ２定常領域に融合された免疫グロブリン重鎖ＣＨ３定常領域を含む、結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質を含む。ヒンジ領域は二量体化を防ぐべく、１つまたは複数のシステイン残基をセリン残基で置換することによって改変することができる。このような結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質は、米国特許出願第２００３／０１１８５９２号および同第２００３／０１３３９３９号にさらに開示されている。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来技術を用いて取得されるものであり、当該断片は、インタクトな抗体の場合と同様に有用性の有無についてスクリーニングされる。
【００５１】
典型的な抗原結合部位は、軽鎖免疫グロブリンと重鎖免疫グロブリンの組み合わせによって形成される可変領域から構成される。抗体の可変領域の構造は非常に不変性が高く、非常に類似な構造を示す。これらの可変領域は、典型的には、３つの超可変領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる）が間に配置された、比較的相同性の高いフレームワーク領域（ＦＲ）から構成される。抗原結合断片の全体的な結合活性は、多くの場合、ＣＤＲの配列によって決定される。ＦＲは、多くの場合、最適な抗原結合のためのＣＤＲの三次元における適切な配置とアライメントにおいて一定の役割を果たす。
【００５２】
本発明の抗体および／または抗原結合断片は、例えば、マウス、ラットまたは他の哺乳類に由来するものであるか、あるいは組換えＤＮＡ技術による場合などのように他のソースに由来するものであり得る。
【００５３】
本発明のさらなる範囲、利用性および利点は、後述する限定を意図しない詳細な説明から明らかとなろう。本明細書の詳細な説明は、本発明の実施の形態を記載しているが、これは添付図面とともに本発明の実施形態の例示のみを目的とするものであることを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】６名の異なるドナー由来の、ヒトの分化している破骨細胞のサンプルにおける、Ｓｉｇｌｅｃ−１５  ｍＲＮＡのＰＣＲベースの発現プロファイリングを示す。３０個のヒト正常組織由来のＲＮＡサンプルにおける発現プロファイリングも示す。対照として、Ｓｉｇｌｅｃ−１５の発現パターンを既知の破骨細胞マーカーであるカテプシンＫ（ＣＡＴＫ）と比較し、また各サンプル中のＲＮＡの質を確保するためにハウスキーピング遺伝子であるグリセルアルデヒド３リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）を対照に含めた。
【図２】癌細胞株のＮＣＩ−６０パネルから単離されたサンプル中のＳｉｇｌｅｃ−１５  ｍＲＮＡの発現を示す。
【図３】２９３−６Ｅ細胞においてＦｃ融合タンパク質として発現された、精製したヒト組換えＳｉｇｌｅｃ−１５のサンプルが含まれているクマシー染色したポリアクリルアミドゲルを示す。この調製物は、本明細書中に開示するモノクローナル抗体を生成するために用いられた。
【図４】抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５  Ｆａｂを含むオムニクローナル（Ｏｍｎｉｃｌｏｎａｌ）ライブラリー＃２５からの９６穴プレートから選択された各モノクローナル抗体のＦｃ−Ｓｉｇｌｅｃ−１５  ＥＬＩＳＡの結果を示す。太字の数字で示されたウェルには、典型的なモノクローナル抗体２５Ａ１、２５Ｂ４、２５Ｂ８、２５Ｃ１、２５Ｄ８、２５Ｅ５、２５Ｅ６、および２５Ｅ９が含まれていた。また、Ｆｃ−Ｓｉｇｌｅｃ−１５融合タンパク質のＦｃ部分に特異的なモノクローナル抗体を特定するためにＦｃ部分を単独で使用した同一プレート上のＥＬＩＳＡも示されている。
【図５】マウスＦａｂをＩｇＧ２のマウス−ヒトキメラモノクローナル抗体に変換するために必要な手順を示すスキームを提示する。
【図６】典型的な抗体２５Ｂ４、２５Ｂ８、２５Ｃ１、２５Ｄ８、２５Ｅ６、および２５Ｅ９に対する、マウス抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５  Ｆａｂの結合と、対応するＩｇＧ２キメラモノクローナル抗体の結合とを比較する図を示す。この結果から、Ｆａｂ可変領域の相対的な結合が、完全ヒトＩｇＧ２のスカフォールドに移されたときに維持されることが分かる。
【図７】漸次濃度を増加させた抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５  ＩｇＧ２のキメラモノクローナル抗体の２５Ｂ８、２５Ｅ６、および２５Ｅ９で処置したときのヒトの破骨細胞の分化の阻害を示す。処置の後に破骨細胞をＴＲＡＰ発現の有無を調べるために染色した。
【図８】漸次濃度を増加させた抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５  ＩｇＧ２のキメラモノクローナル抗体の２５Ｂ８、２５Ｅ６、および２５Ｅ９で処置したときのマウスの破骨細胞の分化の阻害を示す。処置の後に破骨細胞をＴＲＡＰ発現の有無を調べるべく染色した。
【図９】典型的な抗体２５Ｃ８の存在下でのヒトおよびマウスＳｉｇｌｅｃ−１５の比較結合度を示す。この結果は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−１５に対して産生された抗体の結合が、マウスＳｉｇｌｅｃ−１５とも相互作用することを示す。
【図１０Ａ】Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ２プログラムを用いて、選択されたＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３配列について（それぞれ）得られたアライメント結果の要約を示す。ここで「＊」は当該位置の残基がアライメントをとった全て配列において同一であることを意味し、「：」は、保存された置換が観察されたことを意味し、「．」は半保存的な置換が観察されたことを意味する。コンセンサスＣＤＲは、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗプログラムを用いて生成した（Ｌａｒｋｉｎ  Ｍ．Ａ．，ら，（２００７）ＣｌｕｓｔａｌＷ  ａｎｄ  ＣｌｕｓｔａｌＸ  ｖｅｒｓｉｏｎ２．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２００７  ２３（２１）：２９４７−２９４８）。
【図１０Ｂ】Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ２プログラムを用いて、選択されたＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３配列について（それぞれ）得られたアライメント結果の要約を示す。ここで「＊」は当該位置の残基がアライメントをとった全て配列において同一であることを意味し、「：」は、保存された置換が観察されたことを意味し、「．」は半保存的な置換が観察されたことを意味する。コンセンサスＣＤＲは、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗプログラムを用いて生成した（Ｌａｒｋｉｎ  Ｍ．Ａ．，ら，（２００７）ＣｌｕｓｔａｌＷ  ａｎｄ  ＣｌｕｓｔａｌＸ  ｖｅｒｓｉｏｎ２．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２００７  ２３（２１）：２９４７−２９４８）。
【図１０Ｃ】Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ２プログラムを用いて、選択されたＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３配列について（それぞれ）得られたアライメント結果の要約を示す。ここで「＊」は当該位置の残基がアライメントをとった全て配列において同一であることを意味し、「：」は、保存された置換が観察されたことを意味し、「．」は半保存的な置換が観察されたことを意味する。コンセンサスＣＤＲは、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗプログラムを用いて生成した（Ｌａｒｋｉｎ  Ｍ．Ａ．，ら，（２００７）ＣｌｕｓｔａｌＷ  ａｎｄ  ＣｌｕｓｔａｌＸ  ｖｅｒｓｉｏｎ２．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２００７  ２３（２１）：２９４７−２９４８）。
【図１１Ａ】Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ２プログラムを用いて、選択されたＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３配列について（それぞれ）得られたアライメント結果の要約を示す。ここで「＊」は当該位置の残基がアライメントをとった全て配列において同一であることを意味し、「：」は、保存された置換が観察されたことを意味し、「．」は半保存的な置換が観察されたことを意味する。コンセンサスＣＤＲは、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗプログラムを用いて生成した（Ｌａｒｋｉｎ  Ｍ．Ａ．，ら，（２００７）ＣｌｕｓｔａｌＷ  ａｎｄ  ＣｌｕｓｔａｌＸ  ｖｅｒｓｉｏｎ２．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２００７  ２３（２１）：２９４７−２９４８）。
【図１１Ｂ】Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ２プログラムを用いて、選択されたＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３配列について（それぞれ）得られたアライメント結果の要約を示す。ここで「＊」は当該位置の残基がアライメントをとった全て配列において同一であることを意味し、「：」は、保存された置換が観察されたことを意味し、「．」は半保存的な置換が観察されたことを意味する。コンセンサスＣＤＲは、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗプログラムを用いて生成した（Ｌａｒｋｉｎ  Ｍ．Ａ．，ら，（２００７）ＣｌｕｓｔａｌＷ  ａｎｄ  ＣｌｕｓｔａｌＸ  ｖｅｒｓｉｏｎ２．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２００７  ２３（２１）：２９４７−２９４８）。
【図１１Ｃ】Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗ２プログラムを用いて、選択されたＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３配列について（それぞれ）得られたアライメント結果の要約を示す。ここで「＊」は当該位置の残基がアライメントをとった全て配列において同一であることを意味し、「：」は、保存された置換が観察されたことを意味し、「．」は半保存的な置換が観察されたことを意味する。コンセンサスＣＤＲは、Ｃｌｕｓｔａｌ  Ｗプログラムを用いて生成した（Ｌａｒｋｉｎ  Ｍ．Ａ．，ら，（２００７）ＣｌｕｓｔａｌＷ  ａｎｄ  ＣｌｕｓｔａｌＸ  ｖｅｒｓｉｏｎ２．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ２００７  ２３（２１）：２９４７−２９４８）。
【図１２】Ｓｉｇｌｅｃ−１５に特異的な２５Ｅ９候補抗体の、破骨細胞の骨再吸収活性を阻害する能力を示す。
【図１３Ａ−Ｃ】Ｓｉｇｌｅｃ−１５のｃＤＮＡを過剰発現する細胞から調製されたライセート（図１３Ａ）、ヒト破骨細胞から調製されたライセート（図１３Ｂ）、マウス破骨細胞から調製されたライセート（図１３Ｃ）、およびＵ８７神経膠芽腫細胞から調製されたライセートの免疫ブロッティングによって、およびインタクトなＵ８７細胞のフローサイトメトリーによって、Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体がタンパク質を検出できることを示す。
【図１３Ｄ−Ｅ】Ｓｉｇｌｅｃ−１５のｃＤＮＡを過剰発現する細胞から調製されたライセート（図１３Ａ）、ヒト破骨細胞から調製されたライセート（図１３Ｂ）、マウス破骨細胞から調製されたライセート（図１３Ｃ）、およびＵ８７神経膠芽腫細胞から調製されたライセートの免疫ブロッティングによって、およびインタクトなＵ８７細胞のフローサイトメトリーによって、Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体がタンパク質を検出できることを示す。
【図１４】Ｓｉｇｌｅｃ−１５に対して産生された抗体が、他の近縁なＳｉｇｌｅｃ（Ｓｉｇｌｅｃ−２およびＣＤ３３を含む）に結合しないことを示す。
【図１５】抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体が、Ｓｉｇｌｅｃ−１５とシアル酸との間の相互作用を阻害できることを示す。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
［破骨細胞および正常な組織におけるＳｉｇｌｅｃ−１５の発現プロファイル］
本発明は、破骨細胞の活性の上昇に起因する重度の骨量減少が観察される各種骨関連疾患に見られる破骨細胞を標的とするモノクローナル抗体の使用に関する。破骨細胞に対して抗体を誘発するためには、前記細胞の表面で発現される破骨細胞特異的抗原の特定を行わなければならない。破骨細胞特異的抗原を特定するのに利用可能ないくつかの技術が存在し、ＲＡＮＫＬで処置された分化している破骨細胞においてＳｉｇｌｅｃ−１５を特定するのに使用された方法である、ｍＲＮＡのサブトラクティブ転写ベースの増幅（ＳＴＡＲ）と呼ばれる革新的なプラットフォームについては国際特許出願ＰＣＴ／ＣＡ２００７／０００２１０の明細書に記載されている。
【００５６】
ヒト破骨細胞のＳＴＡＲライブラリーの解析では、分泌された細胞表面タンパク質をコードする多くの遺伝子が得られた。ＡＢ−０３２６と呼ばれるこれらの遺伝子の１つは、配列番号１に示す塩基配列の９８７塩基対のｃＤＮＡによってコードされる配列番号２に対応する３２８アミノ酸のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを含んでいた。公開データベースの検索により、ＡＢ−０３２６ヌクレオチド配列は、ＣＤ３３抗原様３（ＣＤ３３Ｌ３）と呼ばれるヒトの遺伝子の配列と同一であることが判明した。ＣＤ３３Ｌ３は、後にシアル酸結合タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃファミリーのメンバーであることが判明し、他のＳｉｇｌｅｃとの相同性に基づいて、Ｓｉｇｌｅｃ−１５と改名された（Ｃｒｏｃｋｅｒら，２００７）。この情報に基づいて、マウスのオルソログを単離して配列決定し、アミノ酸レベルの塩基配列でヒト配列と約８５％の配列同一性を有することを見出した。配列番号３および配列番号４はそれぞれ、マウスＳｉｇｌｅｃ−１５のｃＤＮＡとポリペプチドの配列とを示す。バイオインフォマティクス解析により、細胞外区画にその機能ドメインを提示する１型膜タンパク質の種類を予測した。他のＳｉｇｌｅｃ配列では、アミノ末端のシグナルペプチド（配列番号２の１番目のアミノ酸から１９番目のアミノ酸の間に位置する）が、当該タンパク質に細胞の膜を標的とさせ、最終的なプロセシングされたタンパク質が、カルボキシ末端に位置する（配列番号２の２６番目のアミノ酸と２８３番目のアミノ酸の間に位置する）単一の膜貫通らせんを介して膜に固定される。Ｖセット免疫グロブリンドメインは、配列番号２の４９番目のアミノ酸と１６５番目のアミノ酸の間に位置し、Ｃ２セット免疫グロブリンドメインは、配列番号２の１７８番目のアミノ酸と２４番目のアミノ酸の間に位置している。
【００５７】
本発明は、破骨細胞が分化している間のＳｉｇｌｅｃ−１５の機能に関連している。以前の調査結果（Ｓｏｏｋｎａｎａｎら、２００７）により、ヒトＳｉｇｌｅｃ−１５をコードする転写物がＲＡＮＫＬに応答して大幅にアップレギュレートされることが確認された。この決定は、異なるヒトＰＢＭＮＣドナーに由来するいくつかの異なるヒト破骨細胞の分化実験のスポットされた全ＲＮＡのサンプルが含まれているＲＮＡのマクロアレイで行われた。さらにこれらの研究（Ｓｏｏｋｎａｎａｎら、２００７）により、Ｓｉｇｌｅｃ−１５転写物が３０のヒト正常組織の巨大なパネルの中ただ１つの正常組織で発現されたが、これからＳｉｇｌｅｃ−１５遺伝子発現が非常に高い破骨細胞特異性を示すことが判明した。半定量的ＲＴ−ＰＣＲなどのより高感度の方法を使用し、多数の破骨細胞サンプル中におけるＳｉｇｌｅｃ−１５のｍＲＮＡの発現をＲＡＮＫＬ処置後１日以内に刺激し、この遺伝子が細胞融合の開始前に破骨細胞前駆細胞において早期に発現されることを示した。最後にＳｉｇｌｅｃ−１５の組織発現プロファイルを半定量的ＲＴ−ＰＣＲにより評価し、ただ１つのヒト正常組織で発現されることを見出し、これによりＳｏｏｋｎａｎａｎらのマクロアレイの結果を検証した。まとめると、これらの発現の結果が、本出願人の発見した方法が、（Ｓｉｇｌｅｃ−１５によって例示されているような）分化している破骨細胞に非常に限定されている標的を特定する能力が高いことを強調している。
【００５８】
破骨細胞の分化の初期段階でのＳｉｇｌｅｃ−１５の発現、その正常組織に限定された発現、および破骨細胞の活性におけるＳｉｇｌｅｃ−１５の重要な生物学的役割に基づいて、Ｓｉｇｌｅｃ−１５を、癌誘発性骨量減少や骨粗鬆症など骨関連疾患の発見、予防、および治療のためのモノクローナル抗体開発のための治療用標的として選択した。
【００５９】
したがって、Ｓｉｇｌｅｃ−１５をターゲティングするための、種々の抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体およびその免疫学的機能性断片（キメラおよびヒト化モノクローナル抗体、抗体断片、一本鎖抗体、ドメイン抗体、抗原結合領域を有するポリペプチドなど）が提供される。
【００６０】
［抗原としての配列番号２および配列番号２由来のエピトープ］
国際特許出願第ＰＣＴ／ＣＡ２００７／０００２１０において、出願人は、配列番号２が破骨細胞の分化に関与しているという予想外の発見に到達した。したがって、この抗原は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで抗原を発現する細胞をターゲティングするために、もしくはｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで抗原を測定するための検出アッセイの開発のために有用であり得る。
【００６１】
したがって、本発明は、特異的な抗体の生成のために有用で、および／または配列番号２を発現する細胞に特異的な抗原を提供する。抗原またはエピトープは、配列番号２または配列番号２の変異体の、少なくとも１０個のアミノ酸（かつ最長でその全長まで）の断片を含み得る。
【００６２】
典型的な抗原は、配列番号２タンパク質の全体、または配列番号２と少なくとも８０％の配列同一性を有する配列番号２の変異体、または配列番号２または配列番号２の変異体の少なくとも１０個のアミノ酸を含む断片である。
【００６３】
本明細書に記載する抗原またはエピトープは、抗体および抗原結合断片を生成するために、キーホールリンペット（ＫＨＬ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、卵白アルブミン（ＯＶＡ）その他の担体と融合させることができる。
【００６４】
本発明はまた、本明細書中に記載する抗体および抗原結合断片を生成するために、配列番号２の２０番目のアミノ酸から２５９番目のアミノ酸までの領域内で構成されるエピトープを提供する。エピトープは、配列番号２の２０番目のアミノ酸から２５９番目のアミノ酸までの領域または配列番号２の変異体の対応する部分の領域内に含まれる少なくとも１０個のアミノ酸の断片を含み得る。
【００６５】
本発明はさらに、配列番号２または配列番号２の変異体に対する抗体を生成するための組成物を提供する。当該組成物は、配列番号２の２０番目のアミノ酸から２５９番目のアミノ酸までの領域または配列番号２の変異体の対応する部分の領域内に含まれる配列番号２のエピトープと、担体とを含み得る。
【００６６】
前記組成物の典型的な態様としては、配列番号２または配列番号２の変異体に対する抗体を生成するための医薬組成物が挙げられる。その医薬組成物は、配列番号２の２０番目のアミノ酸から２５９番目のアミノ酸までの領域または配列番号２の変異体の対応する部分の領域内に含まれる配列番号２のエピトープと、薬学的に許容される担体とを含み得る。
【００６７】
本発明はさらに別の側面において、配列番号２または配列番号２の変異体に対する抗体を生成する方法を提供する。その方法は、配列番号２の２０番目のアミノ酸から２５９番目のアミノ酸までの領域または配列番号２の変異体の対応する部分の領域内に含まれる配列番号２のエピトープを含むポリペプチドを投与する工程を含み得る。
【００６８】
本発明は別側面において、配列番号２または配列番号２の変異体に対する抗体を生成するための、配列番号２の２０番目のアミノ酸から２５９番目のアミノ酸までの領域または配列番号２の変異体の対応する部分の領域内に含まれる配列番号２のエピトープの使用を提供する。
【００６９】
配列番号２と８０％の配列同一性を有する配列番号２の変異体の典型的な実施形態としては、例えば、以下に限定しないが、配列番号４、ならびにＧｅｎｅＢａｎｋアクセション番号またはＮＣＢＩ参照配列：ＡＡＹ４０７４３．１、ＸＰ＿５１２１０９．２、ＸＰ＿００１０８９０００．１、ＸＰ＿６０１０６４．４、ＮＰ＿００１０９４５０８．１、ＸＰ＿８５５２３８．１、ＸＰ＿５７４１７６．２、およびＥＡＸ０１４６２．１としてデータベースに登録されているその他の類似体が挙げられる。
【００７０】
［配列番号２または配列番号２の変異体に結合する抗体および抗原結合断片］
抗体は、最初に目的の抗原に対するその特異性に基づいてＦａｂライブラリーから単離した。最大の特徴を示す抗体の軽鎖可変ドメインまたは重鎖可変ドメインのアミノ酸配列どうしの比較により、本発明者は、ＣＤＲ内および可変領域内でのコンセンサス配列を導出することができた。ＣＤＲのコンセンサス配列は、配列番号１４８−１５８および１９７−２１０に提示されている。可変領域のコンセンサス配列は、配列番号１９１−１９６に記載されている。
【００７１】
本明細書に記載の可変領域を所望の種の定常領域と融合することにより、所望の種のエフェクター細胞が抗体を認識できるようにさせることができる。定常領域は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブタイプに由来するものであり得る。可変領域のフレームワーク領域に定常領域をクローニングすなわち合成することは、当業者の知識の範囲内であって、例えば組換えＤＮＡ技術によって実行することができる。
【００７２】
本発明の特定の実施形態では、配列番号２に結合する抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブタイプのものであり得る。本発明のより具体的な態様は、ＩｇＧ１サブタイプの抗体に関連する。当該抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体媒介性細胞傷害（ＣＭＣ）、または免疫複合体と関連するものの媒介について生物学的に活性であるＩｇＧ１サブタイプのヒト化抗体であり得る。典型的なＡＤＣＣは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が活性化し、ＮＫ細胞の表面上のＦｃ受容体が抗体被覆された細胞を認識することにより生じる。Ｆｃ受容体は、標的細胞（特に配列番号２などの抗原を発現する骨細胞）の表面に結合するＩｇＧ１上に存在するもののような、抗体のＦｃドメインを認識する。一旦ＩｇＧのＦｃ受容体に結合すると、ＮＫ細胞はサイトカインおよび細胞毒性のある顆粒を放出し、これらは標的細胞に入りアポトーシスを誘発することによって細胞死を促進する。
【００７３】
本発明は、配列番号２に結合する抗体の集団について記載した。特定の態様において、抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（例えば、キメラ抗体またはヒト化抗体など）、抗体断片（例えば、抗原結合断片など）、一本鎖抗体、ドメイン抗体、および抗原結合領域を有するポリペプチドからなる群から選択され得る。
【００７４】
したがって本発明はその別の側面において、単離された抗体または抗原結合断片であって、軽鎖可変ドメインとして
ａ）配列番号69, 配列番号75, 配列番号81, 配列番号87, 配列番号93, 配列番号99, 配列番号105, 配列番号111, 配列番号１７３、配列番号１７９および配列番号１８５からなる群から選択されるＣＤＲＬ１配列、
ｂ）配列番号70, 配列番号76. 配列番号82, 配列番号88, 配列番号94, 配列番号100, 配列番号106, 配列番号112,配列番号１７４、配列番号１８０および配列番号１８６からなる群から選択されるＣＤＲＬ２配列、および／または
ｃ）配列番号71, 配列番号77, 配列番号83, 配列番号89, 配列番号95, 配列番号101, 配列番号107, 配列番号113,配列番号１７５、配列番号１８１および配列番号１８７からなる群から選択されるＣＤＲＬ３配列、
を有するものを含む、単離された抗体または抗原結合断片を提供する。
【００７５】
前記単離された抗体または抗原結合断片は、重鎖可変ドメインとしては、
ａ）配列番号72, 配列番号78, 配列番号84, 配列番号90, 配列番号96, 配列番号102, 配列番号108, 配列番号114,配列番号１７６、配列番号１８２および配列番号１８８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１配列、
ｂ）配列番号73, 配列番号79, 配列番号85, 配列番号91, 配列番号97, 配列番号103, 配列番号109, 配列番号115,配列番号１７７、配列番号１８３および配列番号１８９からなる群から選択されるＣＤＲＨ２配列、および／または
ｃ）配列番号74, 配列番号80, 配列番号86, 配列番号92, 配列番号98, 配列番号104, 配列番号110, 配列番号116,配列番号１７８、配列番号１８４および配列番号１９０からなる群から選択されるＣＤＲＨ３配列、
を有し得る。
【００７６】
本発明はさらに別の側面において、単離された抗体または抗原結合断片であって、軽鎖可変ドメインとして
ａ）配列番号１４８、配列番号６９、配列番号７５および配列番号１０５からなる群から選択されるＣＤＲＬ１配列と少なくとも８０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１、
ｂ）配列番号１４９、配列番号：１５０、配列番号：７６、配列番号８２および配列番号１０６からなる群から選択されるＣＤＲＬ２配列と少なくとも８０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２、または
ｃ）配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号７７、配列番号８３、配列番号９５、配列番号１０７および配列番号１５２からなる群から選択されるＣＤＲＬ３配列と少なくとも８０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３、
を有するものを含む、単離された抗体または抗原結合断片を提供する。
【００７７】
本発明はさらに別の側面において、単離された抗体または抗原結合断片であって、重鎖可変ドメインとして
ａ）配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号８４、配列番号９６および配列番号１０２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１配列と少なくとも８０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１、
ｂ）配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号７３、配列番号７９、配列番号８５、配列番号９７、配列番号１０３、配列番号１０９からなる群から選択されるＣＤＲＨ２配列と少なくとも８０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２、または
ｃ）配列番号１５８、配列番号７４、配列番号９８、配列番号１０４、配列番号１１０および配列番号１１６からなる群から選択されるＣＤＲＨ３配列と少なくとも８０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３、
を有するものを含む、単離された抗体または抗原結合断片を提供する。
【００７８】
典型的な実施形態では、前記抗体またはその抗原結合断片は、いずれかの軽鎖可変領域のＣＤＲ、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３の組み合わせを含み得る。ＣＤＲ３は、より具体的に選択され得る。前記組み合わせには、例えばＣＤＲＬ１とＣＤＲＬ３；ＣＤＲＬ１とＣＤＲＬ２；ＣＤＲＬ２とＣＤＲＬ３；ならびにＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３の各組み合わせが含まれ得る。
【００７９】
別の典型的な実施形態では、前記抗体またはその抗原結合断片は、いずれかの重鎖可変領域のＣＤＲ、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３の組み合わせを含み得る。ＣＤＲ３は、より具体的に選択され得る。前記組み合わせには、例えばＣＤＲＨ１とＣＤＲＨ３；ＣＤＲＨ１とＣＤＲＨ２；ＣＤＲＨ２とＣＤＲＨ３；ならびにＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３の各組み合わせが含まれ得る。
【００８０】
本発明によれば、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、またはＣＤＲＬ３のなかの少なくとも２種類のＣＤＲを含み得る。
【００８１】
また本発明によれば、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を１つずつ含み得る。
【００８２】
さらに本発明によれば、前記抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、またはＣＤＲＬ３のなかの少なくとも２種類のＣＤＲおよび；
ｂ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、またはＣＤＲＨ３のなかの少なくとも２種類のＣＤＲを含み得る。
【００８３】
前記抗体またはその抗原結合断片は、より好ましくはＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３をそれぞれ１つずつ含み得る。
【００８４】
前記抗体またはその抗原結合断片はまた、より好ましくはＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３をそれぞれ１つずつ含み得る。
【００８５】
本発明はさらに別の側面において、単離された抗体または抗原結合断片であって、重鎖可変ドメインとして
ａ）配列番号72, 配列番号78, 配列番号84, 配列番号90, 配列番号96, 配列番号102, 配列番号108, 配列番号114,配列番号１７６、配列番号１８２および配列番号１８８からなる群から選択されるＣＤＲＨ１配列、
ｂ）配列番号73, 配列番号79, 配列番号85, 配列番号91, 配列番号97, 配列番号103, 配列番号109, 配列番号115,配列番号１７７、配列番号１８３および配列番号１８９からなる群から選択されるＣＤＲＨ２配列、および／または
ｃ）配列番号74, 配列番号80, 配列番号86, 配列番号92, 配列番号98, 配列番号104, 配列番号110, 配列番号116,配列番号１７８、配列番号１８４および配列番号１９０からなる群から選択されるＣＤＲＨ３配列、
を有するものを含む、単離された抗体または抗原結合断片を提供する。
【００８６】
本発明によれば、前記抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、またはＣＤＲＨ３を１つ含み得る。
【００８７】
本発明によれば、前記抗体またはその抗原結合断片はまた、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を１つずつ含み得る。
【００８８】
軽鎖可変ドメインまたは重鎖可変ドメインの一方のみが利用可能な場合は、抗体またはその抗原結合断片は、当技術分野で公知の方法を用いて相補的な可変ドメインのライブラリーをスクリーニングすることによって再構築することができる（Ｐｏｒｔｏｌａｎｏら  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９３）１５０：８８０−８８７，Ｃｌａｒｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ（１９９１）３５２：６２４−６２８）。
【００８９】
本明細書中に記載するＣＤＲの少なくとも１つにおいて、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する可変鎖を含むポリペプチドすなわち抗体も、本発明に包含される。
【００９０】
ＣＤＲの少なくとも２つにおいて少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する可変鎖を含むポリペプチドすなわち抗体も本発明に包含される。
【００９１】
ＣＤＲの３つにおいて少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する可変鎖を含むポリペプチドすなわち抗体も本発明に包含される。
【００９２】
ＣＤＲの少なくとも１つにおいて少なくとも２つの保存的アミノ酸置換を有する可変鎖を含むポリペプチドすなわち抗体も本発明に包含される。
【００９３】
ＣＤＲの少なくとも２つにおいて少なくとも２つの保存的アミノ酸置換を有する可変鎖を含むポリペプチドすなわち抗体も本発明に包含される。
【００９４】
ＣＤＲの３つにおいて少なくとも２つの保存的アミノ酸置換を有する可変鎖を含むポリペプチドすなわち抗体も本発明に包含される。
【００９５】
本発明は別の側面において、抗体またはその抗原結合断片であって、本明細書中に記載する抗体またはその抗原結合断片のいずれかの、軽鎖可変ドメインの相補性決定領域を少なくとも１つおよび重鎖可変ドメインの相補性決定領域の少なくとも１つを、（一本鎖ポリペプチド上にまたは分離した複数のポリペプチド鎖上に）含む、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００９６】
本発明はさらに別の側面において、本明細書中に記載する抗体またはその抗原結合断片のいずれかの、６つの全ての相補性決定領域（ＣＤＲ）を、（一本鎖ポリペプチド上にまたは分離した複数のポリペプチド鎖上に）含む、抗体またはその抗原結合断片に関連する。
【００９７】
本発明の抗体または抗原結合断片はさらに、１つまたは複数のＣＤＲのアミノ末端領域および／またはカルボキシ末端領域に隣接する追加のアミノ酸を含んでもいてもよい。これらの追加のアミノ酸は、本明細書中に記載する対応する抗体のフレームワーク領域と同一であるか、または、例えば保存的アミノ酸置換を含み得る。
【００９８】
本発明のある実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式RＳＸ１ａＸ２ａＳＬＬＨＳＮＧＸ３ａＴＹＬＹ（配列番号１４８）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＬ１配列を含み得、ここで
Ｘ１ａは、例えば、中性親水性アミノ酸であり得；
Ｘ２ａは、例えば、リジン、グルタミン酸であり得；
Ｘ３ａは、例えば、疎水性アミノ酸またはアスパラギンであり得る。
【００９９】
より具体的な実施形態では、Ｘ１ａは、例えばセリンであり得る。
【０１００】
より具体的な実施形態では、Ｘ２ａは、例えばリジンであり得る。
【０１０１】
より具体的には、Ｘ３ａは、例えばイソロイシンまたはバリンであり得る。
【０１０２】
より具体的な実施形態では、Ｘ３ａは、イソロイシンであり得る。
【０１０３】
本発明の別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＲＡＳＸａ１０ＮＩＸｂ１０Ｘｃ１０ＹＬＡ（配列番号１９７）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＬ１配列を含み得、ここで
Ｘａ１０は、例えば、ＧまたはＥであり得；
Ｘｂ１０は、例えば、ＹまたはＨであり得；
Ｘｃ１０は、例えば、ＳまたはＮであり得る。
【０１０４】
本発明の別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＲＳＳＸ１ｘＳＬＬＨＳＮＧＸ２ｘＴＹＬＹ（配列番号２０１）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＬ１配列を含み得、ここでＸ１ｘおよびＸ２ｘは、本明細書に定義するものである。
【０１０５】
本発明の別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＲＳＸａ６ＫＳＬＬＨＳＮＧＮＴＹＬＹ（配列番号２０２）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＬ１配列を含み得、ここでＸａ６は、本明細書に定義するものである。
【０１０６】
前記抗体または抗原結合断片はまた、表３または表５Ｂに記載の配列番号７５、配列番号６９、配列番号１０５および他のＣＤＲＬ１を含むもの、またはその配列からなるものから選択されたＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０１０７】
本発明の別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式Ｘ１ｂＭＳＮＬＡＳ（配列番号１４９）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＬ２配列を含み得、ここでＸ１ｂは、例えば、塩基性アミノ酸であり得る。
【０１０８】
より具体的には、Ｘ１ｂは、例えばグルタミンまたはアスパラギンであり得る。
【０１０９】
より具体的な実施形態では、Ｘ１ｂは、例えばグルタミンであり得る。
【０１１０】
本発明の別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＲＸ１ｃＳＮＬＸ２ｃＳ（配列番号１５０）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＬ２配列を含み得、ここでＸ１ｃは、例えば、メチオニンまたはスレオニンであり得、Ｘ２ｃは、例えば、疎水性アミノ酸であり得る。
【０１１１】
より具体的には、Ｘ２ｃは、例えばアラニンまたはバリンであり得る。
【０１１２】
より具体的な実施形態では、Ｘ１ｃは、例えばメチオニンであり得る。
【０１１３】
より具体的な実施形態では、Ｘ１ｃは、例えばアラニンであり得る。
【０１１４】
本発明の別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＮＡＫＴＬＸａ１１Ｘｂ１１（配列番号１９８）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＬ２配列を含み得、ここで
Ｘa１１は任意のアミノ酸、または例えば、ＰまたはＡであり得；
Ｘｂ１１は任意のアミノ酸、または例えば、ＥまたはＤなどの酸性アミノ酸であり得る。
【０１１５】
前記抗体または抗原結合断片はまた、例えば、表３または表５Ｂに記載の配列番号７６、配列番号８２、配列番号１０６および他のＣＤＲＬ２を含むもの、またはその配列からなるものから選択されたＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０１１６】
本発明の別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式Ｘ１ｄＱＸ２ｄＬＥＸ３ｄＰＸ４ｄＴ（配列番号１５１）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＬ３配列を含み得、ここで
Ｘ１ｄは、例えば、疎水性アミノ酸であり得；
Ｘ２ｄは、例えば、塩基性アミノ酸であり得；
Ｘ３ｄは、例えば、チロシンまたはロイシンであり得；
Ｘ４ｄは、例えば、芳香族アミノ酸であり得る。
【０１１７】
より具体的には、Ｘ１ｄは、例えばメチオニンまたはアラニンであり得る。より具体的な実施形態では、Ｘ１ｄは、例えばメチオニンであり得る。
【０１１８】
より具体的には、Ｘ２ｄは、例えばヒスチジンまたはアスパラギンであり得る。より具体的な実施形態では、Ｘ２ｄは、例えばヒスチジンであり得る。
【０１１９】
より具体的な実施形態では、Ｘ３ｄは、例えばチロシンであり得る。
【０１２０】
より具体的には、Ｘ４ｄは、例えばチロシンまたはフェニルアラニンであり得る。より具体的な実施形態では、Ｘ４ｄは、例えばチロシンであり得る。
【０１２１】
付加的な実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＱＱＷＳＳＮＰＸ１ｅＴ（配列番号１５２）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＬ３配列を含み得、ここでＸ１ｅは、例えば、プロリンまたはロイシンであり得る。
【０１２２】
本発明の別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＱＨＹＧＸａ１２ＰＬＴ（配列番号１９９）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＬ３配列を含み得、ここでＸａ１２は任意のアミノ酸、または例えば、ＡまたはＶなどの疎水性アミノ酸であり得る。
【０１２３】
本発明の別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式Ｘａ８ＱＸｂ８ＬＥＸｃ８ＰＹＴ（配列番号２０３）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＬ３配列を含み得、ここでＸａ８、Ｘｂ８、Ｘｃ８は、本明細書に定義するものである。
【０１２４】
本発明の別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＱＨＨＹＧＸａ４ＰＬＴ（配列番号２０４）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＬ３配列を含み得、ここでＸａ４は、本明細書に定義するものである。
【０１２５】
前記抗体または抗原結合断片はまた、表３または表５Ｂに記載の配列番号７７、配列番号８３、配列番号９５、配列番号１０７、配列番号１５２および他のＣＤＲＬ３を含むもの、またはその配列からなるものから選択されたＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０１２６】
付加的な実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＧＹＴＦＸ１ｆＸ２ｆＹＸ３ｆＭＸ４ｆ（配列番号１５３）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＨ１配列を含み得、ここで
Ｘ１ｆは、例えば、スレオニンまたはアスパラギンであり得；
Ｘ２ｆは、例えば、スレオニン、アルギニン、セリンまたはアスパラギン酸であり得；
Ｘ３ｆは、例えば、トリプトファンまたはアスパラギン、アスパラギン酸またはグルタミン酸であり得；
Ｘ４ｆは、例えば、チロシン、ヒスチジン、またはアスパラギン酸であり得る。
【０１２７】
より具体的な実施形態では、Ｘ１ｆは、例えば、スレオニンであり得る。
【０１２８】
より具体的な実施形態では、Ｘ２ｆは、例えば、セリンであり得る。
【０１２９】
より具体的な実施形態では、Ｘ３ｆは、例えば、トリプトファンであり得る。
【０１３０】
より具体的な実施形態では、Ｘ４ｆは、例えば、ヒスチジンであり得る。
【０１３１】
付加的な実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＧＹＴＦＴＤＹＸ５ｆＭＨ（配列番号１５４）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＨ１配列を含み得、ここでＸ５ｆは、例えば、酸性アミノ酸であり得る。
【０１３２】
より具体的には、Ｘ５ｆは、例えば、グルタミン酸またはアスパラギン酸であり得る。より具体的な実施形態では、Ｘ５ｆは、例えば、アスパラギン酸であり得る。
【０１３３】
本発明の別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＧＹＴＦＴＸ１ｌＹＷＭＨ（配列番号２０５）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＨ１配列を含み得、ここでＸ１ｌは、本明細書に定義するものである。
【０１３４】
本発明の別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＧＹＴＦＴＤＹＸ１ｓＭＨ（配列番号２０８）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＨ１配列を含み得、ここでＸ１ｓは、本明細書に定義するものである。
【０１３５】
前記抗体または抗原結合断片は例えば、表３または表５Ａに記載の配列番号８４、配列番号９６、配列番号１０２および他のＣＤＲＨ１を含むもの、またはその配列からなるものから選択されたＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０１３６】
別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＬＩＮＰＸ１ｇＮＸ２ｇＲＸ３ｇＮ（配列番号１５５）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＨ２配列を含み得、ここで
Ｘ１ｇは、例えば、中性親水性アミノ酸であり得；
Ｘ２ｇは、例えば、アラニンまたはグリシンであり得；
Ｘ３ｇは、例えば、プロリンまたはスレオニンであり得る。
【０１３７】
より具体的な実施形態では、Ｘ１ｇは、例えば、セリンまたはスレオニンであり得る。より具体的な実施形態では、Ｘ１ｇは、例えば、スレオニンであり得る。
【０１３８】
より具体的な実施形態では、Ｘ２ｇは、例えば、グリシンであり得る。
【０１３９】
より具体的な実施形態では、Ｘ３ｇは、例えば、スレオニンであり得る。
【０１４０】
さらに別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式Ｘ１ｈＩＤＰＥＴＧＧＴＡ（配列番号１５６）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＨ２配列を含み得、ここでＸ１ｈは、例えば、アラニンまたはスレオニンであり得る。
【０１４１】
より具体的な実施形態によれば、Ｘ１ｈは、例えば、スレオニンであり得る。
【０１４２】
さらに別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＥＩＸ１ｉＰＸ２ｉＸ３ｉＳＸ４ｉＸ５ｉＮ（配列番号１５７）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＨ２配列を含み得、ここで
Ｘ１ｉは、例えば、アスパラギン酸またはアスパラギンであり得；
Ｘ２ｉは、例えば、アスパラギン酸またはセリンであり得；
Ｘ３ｉは、例えば、アスパラギン酸またはセリンであり得；
Ｘ４ｉは、例えば、チロシンまたはスレオニンであり得；
Ｘ５ｉは、例えば、スレオニンまたはイソロイシンであり得る。
【０１４３】
さらに別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＡＸａ１３ＹＰＧＮＧＤＳＲ（配列番号２００）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＨ２配列を含み得、ここでＸａ１３は、ＩまたはＶなどの疎水性アミノ酸であり得る。
【０１４４】
本発明の付加的な実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式Ｘ１ｔＩＤＰＥＴＧＧＴＡ（配列番号２０６）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＨ２配列を含み得、ここでＸ１ｔは、本明細書に定義するものである。
【０１４５】
本発明の他の付加的な実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＬＩＮＰＸ１ｍＮＸ２ｍＲＸ３ｍＮ（配列番号２０７）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＨ２配列を含み得、ここでＸ１ｍ、Ｘ２ｍ、およびＸ３ｍは、本明細書に定義するものである。
【０１４６】
本発明の別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式Ｘ１ｔＩＤＰＥＴＧＧＴＡ（配列番号２０９）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＨ２配列を含み得、ここでＸ１ｔは、本明細書に定義するものである。
【０１４７】
前記抗体または抗原結合断片はまた、表３または表５Ａに記載の配列番号７３、配列番号７９、配列番号８５、配列番号９７、配列番号１０３、配列番号１０９および他のＣＤＲＨ２を含むもの、またはその配列からなるものから選択されたＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０１４８】
付加的な実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＴＸ１ｊＦＹＹＸ２ｊＸ３ｊＸ４ｊＮＹＤＶＧＦＡＹ（配列番号１５８）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＨ３配列を含み得、ここで
Ｘ１ｊは、例えば、中性親水性アミノ酸であり得；
Ｘ２ｊは、例えば、中性親水性アミノ酸であり得；
Ｘ３ｊは、例えば、チロシンまたはヒスチジンであり得；
Ｘ４ｊは、例えば、チロシンまたはセリンであり得る。
【０１４９】
より具体的には、Ｘ１ｊは、例えば、セリンまたはスレオニンであり得る。より具体的な実施形態では、Ｘ１ｊは、例えば、セリンであり得る。
【０１５０】
より具体的には、Ｘ２ｊは、例えば、セリンまたはスレオニンであり得る。り具体的な実施形態では、Ｘ２ｊは、例えば、スレオニンであり得る。
【０１５１】
より具体的な実施形態では、Ｘ３ｊは、例えば、チロシンであり得る。より具体的な実施形態では、Ｘ４ｊは、例えば、セリンであり得る。
【０１５２】
本発明の別の実施形態によれば、前記抗体または抗原結合断片は、式ＴＸ１ｖＦＹＹＸ２ｖＸ３ｖＸ４ｖＮＹＤＶＧＦＡＹ（配列番号２１０）で表される配列を含むもの、またはその配列からなるものであり得るＣＤＲＨ３配列を含み得、ここでＸ１ｖ、Ｘ２ｖ、Ｘ３ｖ、およびＸ４ｖは、本明細書に定義するものである。
【０１５３】
前記抗体または抗原結合断片は例えば、表３または表５Ａに記載の配列番号７４、配列番号９８、配列番号１０４、配列番号１１０、配列番号１１６および他のＣＤＲＨ３を含むもの、またはその配列からなるものから選択されたＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０１５４】
本明細書に記載の重鎖および／または軽鎖のフレームワーク領域は、本明細書に示されるフレームワーク領域の１または複数に由来するものであり得る。したがって、前記抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載するＣＤＲ（例えば、特定のＣＤＲまたは配列番号１４８−１５８および１９７−２１０のコンセンサスＣＤＲから選択されたもの）、および本明細書に示される軽鎖または重鎖可変領域に由来するフレームワーク領域の１または複数を含み得る。
【０１５５】
本発明によれば、抗体または抗原結合断片は、重鎖可変領域（またはその断片）として、式
X1kX2kQX3kQQX4kX5kX6kEX7kVX8kPGASVKLSCKASGYTFTX1lYWMHWVKQRPGQGLEWIGLINPX1mNX2mRX3mNYNEX1nFX2nX3nKATLTVDKSSSTAYMX4nLSSLTSEDSAVYYCARGGDGDYFDYWGQGTTLTVSS (SEQ ID NO.:191)
を有するものを含み得、ここで
Ｘ１ｋは、例えばＱまたはＥであり得；
Ｘ２ｋは、任意のアミノ酸、またはＶまたはＩなどの疎水性アミノ酸であり得；
Ｘ３ｋは、任意のアミノ酸、またはＶまたはＬなどの疎水性アミノ酸であり得；
Ｘ４ｋは、任意のアミノ酸、または例えばＰまたはＳであり得；
Ｘ５ｋは、任意のアミノ酸、または例えばＲまたはＧであり得；
Ｘ６ｋは、任意のアミノ酸、または例えばＡまたはＴであり得；
Ｘ７ｋは、任意のアミノ酸、またはＬまたはＩなどの疎水性アミノ酸であり得；
Ｘ８ｋは、任意のアミノ酸、またはＲまたはＫなどの塩基性アミノ酸であり得；
Ｘ１ｌは、任意のアミノ酸、または例えばＳまたはＴなどの中性親水性アミノ酸であり得；
Ｘ１ｍは、任意のアミノ酸、または例えばＴまたはＳなどの中性親水性アミノ酸であり得；
Ｘ２ｍは、任意のアミノ酸、または例えばＧまたはＡであり得；
Ｘ３ｍは、任意のアミノ酸、または例えばＰまたはＴであり得；
Ｘ１ｎは、任意のアミノ酸、または例えばＫまたはＲなどの塩基性アミノ酸であり得；
Ｘ２ｎは、任意のアミノ酸、または例えばＮまたはＫなどの塩基性アミノ酸であり得；
Ｘ３ｎは、任意のアミノ酸、例えばＮ、またはＳまたはＴなどの中性親水性アミノ酸であり得；
Ｘ４ｎは、任意のアミノ酸、またはＱまたはＨなどの塩基性アミノ酸であり得る。
【０１５６】
本発明の別の実施形態によれば、本発明の抗体または抗原結合断片は、重鎖可変領域（またはその断片）として、式
X10VX2oLQQSGAELARPGASVKFSCKASGYTFTRNWIQWVKQRPGQGLEWIGAXa13YPGNGDSRYTQKFKGKATLTADKSSX1qTAYMQLX2qX3qLX4qSEDSAVYYCARLAGNYAYYFDYWGQGTALTVSS  (SEQ ID NO.:192)
を有するものを含み得、ここで
Ｘ１ｏは、例えば、ＱまたはＤであり得；
Ｘ２ｏは、任意のアミノ酸、またはＫまたはＱなどの塩基性アミノ酸であり得；
Ｘａ１３は、任意のアミノ酸、または例えばＩまたはＶなどの疎水性アミノ酸であり得；
Ｘ１ｑは、任意のアミノ酸、または例えばＳまたはＮであり得；
Ｘ２ｑは、任意のアミノ酸、または例えばＳまたはＮであり得；
Ｘ３ｑは、任意のアミノ酸、または例えばＧまたはＳであり得；
Ｘ４ｑは、任意のアミノ酸、または例えばＡまたはＳであり得る。
【０１５７】
本発明のさらに別の実施形態によれば、本発明の抗体または抗原結合断片は、重鎖可変領域（またはその断片）として、式
X1rX2rX3rLQQSGX4rELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYX1sMHWVKQTPVHGLEWIGX1tIDPETGGTAYNQKFKGKATLTADX1uSSX2uTAYMELSSLTSEDSAVYYCTX1vFYYX2vX3vX4vNYDVGFAYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO.:193)
を有するものを含み得、ここで
Ｘ１ｒは、例えば、ＥまたはＱであり得；
Ｘ２ｒは、任意のアミノ酸、またはＡまたはＩなどの疎水性アミノ酸であり得；
Ｘ３ｒは、任意のアミノ酸、または例えばＹまたはＱであり得；
Ｘ４ｒは、任意のアミノ酸、またはＡまたはＶなどの疎水性アミノ酸であり得；
Ｘ１ｓは、任意のアミノ酸、またはＤまたはＥなどの酸性アミノ酸であり得；
Ｘ１ｔは、任意のアミノ酸、または例えばＡまたはＴであり得；
Ｘ１ｕは、任意のアミノ酸、またはＫまたはＲなどの塩基性アミノ酸であり得；
Ｘ２ｕは、任意のアミノ酸、またはＳまたはＴなどの中性親水性アミノ酸であり得；
Ｘ１ｖは、任意のアミノ酸、またはＳまたはＴなどの中性親水性アミノ酸であり得；
Ｘ２ｖは、任意のアミノ酸、またはＴまたはＳなどの中性親水性アミノ酸であり得；
Ｘ３ｖは、任意のアミノ酸、または例えばＹまたはＨであり得；
Ｘ４ｖは、任意のアミノ酸、または例えばＳまたはＹであり得る。
【０１５８】
付加的な実施形態によれば、本発明の抗体または抗原結合断片は、軽鎖可変領域（またはその断片）として、式
DIVMTX1wAX2wFSNPVX3wLGTX4wASISCRSSX1xSLLHSNGX2xTYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSX1ySGSGTX2yFTLRISRVEAEDVGVYYCXa8QXb8LEXc8PYTFGXa9GTKLEIK (SEQ ID NO.:194)
を有するものを含み得、ここで
Ｘ１ｗは、任意のアミノ酸、またはＱまたはＨなどの塩基性アミノ酸であり得；
Ｘ２ｗは、任意のアミノ酸、またはＶまたはＡなどの疎水性アミノ酸であり得；
Ｘ３ｗは、任意のアミノ酸、または例えばＴまたはＩであり得；
Ｘ４ｗは、任意のアミノ酸、または例えばＳまたはＰであり得；
Ｘ１ｘは、任意のアミノ酸、または例えばＥまたはＫであり得；
Ｘ２ｘは、任意のアミノ酸、またはＶまたはＩなどの疎水性アミノ酸であり得；
Ｘ１ｙは、任意のアミノ酸、または例えばＳまたはＧであり得；
Ｘ２ｙは、任意のアミノ酸、または例えばＤまたはＡであり得；
Ｘａ８は、任意のアミノ酸、またはＭまたはＡなどの疎水性アミノ酸であり得；
Ｘｂ８は、任意のアミノ酸、またはＮまたはＨなどの塩基性アミノ酸であり得；
Ｘｃ８は、任意のアミノ酸、または例えばＹまたはＬであり得；
Ｘａ９は、任意のアミノ酸、または例えばＧまたはＳであり得る。
【０１５９】
別の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合断片は、軽鎖可変領域（またはその断片）として、式
X1zIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASXa10NIXb10Xc10YLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLXa11Xb11GVXa3Xb3RFSGSGSGTQXc3SLKINXd3LQPEDFGSYXe3CQHHYGXa4PLTFGXa5GTKXb5ELK (SEQ ID NO.:195)
を有するものを含み得、ここで
Ｘ１ｚは、任意のアミノ酸、または例えばＤまたはＮであり得；
Ｘａ１０は、任意のアミノ酸、または例えばＥまたはＧであり得；
Ｘｂ１０は、任意のアミノ酸、または例えばＹまたはＨであり得；
Ｘｃ１０は、任意のアミノ酸、または例えばＳまたはＮであり得；
Ｘａ１１は、任意のアミノ酸、または例えばＰまたはＡであり得；
Ｘｂ１１は、任意のアミノ酸、またはＥまたはＤなどの酸性アミノ酸であり得；
Ｘａ３は、任意のアミノ酸、または例えばＰまたはＳであり得；
Ｘｂ３は、任意のアミノ酸、または例えばＶまたはＳであり得；
Ｘｃ３は、任意のアミノ酸、またはＦまたはＹなどの芳香族アミノ酸であり得；
Ｘｄ３は、任意のアミノ酸、または例えばＮまたはＳであり得；
Ｘｅ３は、任意のアミノ酸、または例えばＨまたはＹであり得；
Ｘａ４は、任意のアミノ酸、またはＡまたはＶなどの疎水性アミノ酸であり得；
Ｘａ５は、任意のアミノ酸、または例えばＳまたはＡであり得；
Ｘｂ５は、任意のアミノ酸、またはＶまたはＬなどの疎水性アミノ酸であり得る。
【０１６０】
さらに別の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合断片は、軽鎖可変領域（またはその断片）として、式
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSXa6KSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRXa7SRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGGGTKLEIK (SEQ ID NO.:196)
を有するものを含み得、ここで
Ｘ６ａは、任意のアミノ酸、またはＳまたはＴなどの中性親水性アミノ酸であり得；
Ｘａ７は、任意のアミノ酸、またはＩまたはＬなどの疎水性アミノ酸であり得る。
【０１６１】
［Ｓｉｇｌｅｃ−１５に結合する抗体］
本発明の特定の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に結合する抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブタイプである。好ましい実施形態において、抗体は、ＩｇＧ２のサブタイプの抗体である。本実施形態において、抗体は、破骨細胞の表面上の通常のＳｉｇｌｅｃ−１５の機能の生物学的活性をブロックすることについて生物学的に活性であるＩｇＧ２のサブタイプのヒト化抗体である。このようなブロックは、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−１５と、その基質、そのリガンド、Ｓｉｇｌｅｃ−１５自体、または隣接する細胞上の他のタンパク質との会合を防止するものであり得る。
【０１６２】
本発明は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に結合する抗体の集団を開示している。特定の態様において、抗体は、モノクローナル抗体およびその免疫機能性断片（例えば、キメラおよびヒト化モノクローナル抗体）、抗体断片、一本鎖抗体、ドメイン抗体、抗原結合領域を有するポリペプチドからなる。
【０１６３】
典型的な抗原結合部位は、軽鎖免疫グロブリンと重鎖免疫グロブリンの組み合わせによって形成される可変領域から構成される。抗体可変領域の構造は非常に一貫しており、極めてよく似た構造を示す。これらの可変領域は、典型的には、３つの超可変領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる）が間に配置された、比較的相同性の高いフレームワーク領域（ＦＲ）から構成される。抗原結合断片の全体的な結合活性は、多くの場合、ＣＤＲの配列によって決定されているが、ＦＲは最適な抗原結合のためのＣＤＲの三次元における適切な配置とアライメントにおいて重要な役割を果たす。
【０１６４】
表１は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体の具体例の完全な軽鎖および重鎖免疫グロブリンに対応するアミノ酸およびヌクレオチドの配列を開示する。
【０１６５】
【表１】
0005855569.tif 000002
【０１６６】
Ｓｉｇｌｅｃ−１５に結合することができた抗体は、表１に記載されているいずれかのＬ鎖といずれかのＨ鎖の免疫グロブリンを含み得る。特定の実施形態では、抗体２５Ａ１の軽鎖は、２５Ａ１の重鎖または２５Ｂ４の重鎖と組み合わされて、Ｓｉｇｌｅｃ−１５結合活性を有する完全な抗体を形成し得る。本発明の例示的な実施形態では、２５Ａ１のＬ鎖は２５Ａ１のＨ鎖と組み合わされ得、２５Ｂ４のＬ鎖は２５Ｂ４のＨ鎖と組み合わされ得、２５Ｂ８のＬ鎖はＨ鎖２５Ｂ８と組み合わされ得、２５Ｃ１のＬ鎖は２５Ｃ１のＨ鎖と組み合わされ得、２Ｄ８のＬ鎖は２５Ｄ８のＨ鎖と組み合わされ得、２５Ｅ５のＬ鎖は２５Ｅ５のＨ鎖と組み合わされ得、２５Ｅ６のＬ鎖は、２５Ｅ６のＨ鎖と組み合わされ得、または２５Ｅ９のＬ鎖は、２５Ｅ９のＨ鎖と組み合わされ得る。さらに、抗体またはその抗原結合断片のいくつかの例は、表１に記載されている抗体のリストにおける２つのＬ鎖といずれかの２つのＨ鎖の任意の組み合わせからなるものであり得る。
【０１６７】
抗体２５Ａ１の免疫グロブリン軽鎖および重鎖の完全なヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号５および７に示され、抗体２５Ａ１の免疫グロブリン軽鎖および重鎖の対応するアミノ酸配列は、配列番号６および８にそれぞれ示されている。したがって例示的な実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に特異的に結合する抗体は、配列番号６に示される軽鎖アミノ酸と、配列番号８に示される重鎖アミノ酸配列との組み合わせを含み得る。別の実施形態では、抗体は、配列番号６またはその変異体を含む２個の同一または実質的に同一な２５Ａ１軽鎖と、配列番号８またはその変異体を含む２個の同一または実質的に同一な２５Ａ１重鎖を含むものであり得る。
【０１６８】
抗体２５Ｂ４の免疫グロブリン軽鎖および重鎖の完全なヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号９および１１に示され、抗体２５Ｂ４の免疫グロブリン軽鎖および重鎖の対応するアミノ酸配列は、配列番号１０および１２にそれぞれ示されている。したがって例示的な実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に特異的に結合する抗体は、配列番号１０に示される軽鎖アミノ酸と、配列番号１２に示される重鎖アミノ酸配列との組み合わせを含み得る。別の実施形態では、抗体は、配列番号１０またはその変異体を含む２個の同一または実質的に同一な２５Ｂ４軽鎖と、配列番号１２またはその変異体を含む２個の同一または実質的に同一な２５Ｂ４重鎖を含むものであり得る。
【０１６９】
抗体２５Ｂ８の免疫グロブリン軽鎖および重鎖の完全なヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号１３および１５に示され、抗体２５Ｂ８の免疫グロブリン軽鎖および重鎖の対応するアミノ酸配列は、配列番号１４および１６にそれぞれ示されている。したがって例示的な実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に特異的に結合する抗体は、配列番号１４に示される軽鎖アミノ酸と、配列番号１６に示される重鎖アミノ酸配列との組み合わせを含み得る。別の実施形態では、抗体は、配列番号１４またはその変異体を含む２個の同一または実質的に同一な２５Ｂ８軽鎖と、配列番号１６またはその変異体を含む２個の同一または実質的に同一な２５Ｂ８重鎖を含むものであり得る。
【０１７０】
抗体２５Ｃ１の免疫グロブリン軽鎖および重鎖の完全なヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号１７および１９に示され、抗体２５Ｃ１の免疫グロブリン軽鎖および重鎖の対応するアミノ酸配列は、配列番号１８および２０にそれぞれ示されている。したがって例示的な実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に特異的に結合する抗体は、配列番号１８に示される軽鎖アミノ酸と、配列番号２０に示される重鎖アミノ酸配列との組み合わせを含み得る。別の実施形態では、抗体は、配列番号１８またはその変異体を含む２個の同一または実質的に同一な２５Ｃ１軽鎖と、配列番号２０またはその変異体を含む２個の同一または実質的に同一な２５Ｃ１重鎖を含むものであり得る。
【０１７１】
抗体２５Ｄ８の免疫グロブリン軽鎖および重鎖の完全なヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号２１および２３に示され、抗体２５Ｄ８の免疫グロブリン軽鎖および重鎖の対応するアミノ酸配列は、配列番号２２および２４にそれぞれ示されている。したがって例示的な実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に特異的に結合する抗体は、配列番号２２に示される軽鎖アミノ酸と、配列番号２４に示される重鎖アミノ酸配列との組み合わせを含み得る。別の実施形態では、抗体は、配列番号２２またはその変異体を含む２個の同一または実質的に同一な２５Ｄ８軽鎖と、配列番号２４またはその変異体を含む２個の同一または実質的に同一な２５Ｄ８重鎖を含むものであり得る。
【０１７２】
抗体２５Ｅ５の免疫グロブリン軽鎖および重鎖の完全なヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号２５および２７に示され、抗体２５Ｅ５の免疫グロブリン軽鎖および重鎖の対応するアミノ酸配列は、配列番号２６および２８にそれぞれ示されている。したがって例示的な実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に特異的に結合する抗体は、配列番号２６に示される軽鎖アミノ酸と、配列番号２８に示される重鎖アミノ酸配列との組み合わせを含み得る。別の実施形態では、抗体は、配列番号２６またはその変異体を含む２個の同一または実質的に同一な２５Ｅ５軽鎖と、配列番号２８またはその変異体を含む２個の同一または実質的に同一な２５Ｅ５重鎖を含むものであり得る。
【０１７３】
抗体２５Ｅ６の免疫グロブリン軽鎖および重鎖の完全なヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号２９および３１に示され、抗体２５Ｅ６の免疫グロブリン軽鎖および重鎖の対応するアミノ酸配列は、配列番号３０および３２にそれぞれ示されている。したがって例示的な実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に特異的に結合する抗体は、配列番号３０に示される軽鎖アミノ酸と、配列番号３２に示される重鎖アミノ酸配列との組み合わせを含み得る。別の実施形態では、抗体は、配列番号３０またはその変異体を含む２個の同一または実質的に同一な２５Ｅ６軽鎖と、配列番号３２またはその変異体を含む２個の同一または実質的に同一な２５Ｅ６重鎖を含むものであり得る。
【０１７４】
抗体２５Ｅ９の免疫グロブリン軽鎖および重鎖の完全なヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号３３および３５に示され、抗体２５Ｅ９の免疫グロブリン軽鎖および重鎖の対応するアミノ酸配列は、配列番号３４および３６にそれぞれ示されている。したがって例示的な実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に特異的に結合する抗体は、配列番号３４に示される軽鎖アミノ酸と、配列番号３６に示される重鎖アミノ酸配列との組み合わせを含み得る。別の実施形態では、抗体は、配列番号３４またはその変異体を含む２つの同一または実質的に同一な２５Ｅ９軽鎖と、配列番号３６またはその変異体を含む２つの同一または実質的に同一な２５Ｅ９重鎖を含むものであり得る。
【０１７５】
表１に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性をそれぞれ独立して有し得る、免疫グロブリン軽鎖および／または重鎖の組み合わせによって形成された他の抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその抗原結合断片の変異体も提供される。特定の実施形態において、抗体変異体は、少なくとも１本の軽鎖と１本の重鎖を含み得る。他の例では、抗体変異体は、２本の同一または実質的に同一な軽鎖および２本の同一または実質的に同一な重鎖を含むことができる。本発明によれば、変異した領域は、定常領域または可変領域に位置し得る。また本発明では、変異した領域がフレームワーク領域に配置し得る。
【０１７６】
また、表１に記載する軽鎖配列の可変領域の１つまたはその変異体、および表１に記載する重鎖配列の可変領域の１つまたはその変異体を含む抗体も本発明に包含される。軽鎖と重鎖は定常領域を含み得る。表１の軽鎖と重鎖の組み合わせもまた、本発明に包含される。
【０１７７】
軽鎖および重鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合断片もまた、本発明において提供される。さらに特定の実施形態は、これらの軽鎖および重鎖可変領域の抗原結合断片、変異体、および誘導体を含む。
【０１７８】
さらに別の実施形態は、配列番号２またはその変異体に特異的に結合する能力を有する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体が、
ａ）配列番号３８に定義される軽鎖可変ドメインおよび配列番号４０に定義される重鎖可変ドメイン；
ｂ）配列番号４２に定義される軽鎖可変ドメインおよび配列番号４４に定義される重鎖可変ドメイン；
ｃ）配列番号４６に定義される軽鎖可変ドメインおよび配列番号４８に定義される重鎖可変ドメイン；
ｄ）配列番号５０に定義される軽鎖可変ドメインおよび配列番号５２に定義される重鎖可変ドメイン；
ｅ）配列番号５４に定義される軽鎖可変ドメインおよび配列番号５６に定義される重鎖可変ドメイン；
ｆ）配列番号５８に定義される軽鎖可変ドメインおよび配列番号６０に定義される重鎖可変ドメイン；
ｇ）配列番号６２に定義される軽鎖可変ドメインおよび配列番号６４に定義される重鎖可変ドメイン；
ｈ）配列番号６６に定義される軽鎖可変ドメインおよび配列番号６８に定義される重鎖可変ドメイン；
を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片を含む。
【０１７９】
上記の特定の組み合わせの軽鎖可変領域は、他の軽鎖可変領域（特に、表２に記載のもの）に変更され得ることを、ここに理解されたい。同様に、上記の特定の組み合わせの重鎖可変領域は、他の重鎖可変領域（特に、表２に記載のもの）に変更される場合がある。
【０１８０】
軽鎖および重鎖可変領域を含む抗体も、本発明において提供される。さらに特定の実施形態は、これらの軽鎖および重鎖可変領域の抗原結合断片、変異体、および誘導体を含む。これらの軽鎖および重鎖可変領域に存在する配列の例は表２に開示されている。
【０１８１】
【表２】
0005855569.tif 000003
【０１８２】
したがって、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に結合する抗体および抗原結合断片は、同一の記号表示された抗体の、または抗体の任意の組み合わせにおける１つの軽鎖可変領域と１つの重鎖可変領域を含み得る。例えば、典型的な実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその断片は、２５Ａ１の軽鎖可変領域（配列番号３８）と２５Ａ１の重鎖可変領域（配列番号ＮＯ４０）を含み得る。別の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその断片は、２５Ａ１軽鎖可変領域（配列番号３８）と２５Ｂ４重鎖可変領域（配列番号ＮＯ４４）を含み得る。別の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体は、２つの同一または実質的に同一の軽鎖可変領域および２つの同一または実質的に同一の重鎖領域を含み得る。さらに別の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体は、２つの異なる軽鎖可変領域および２つの異なる重鎖領域を含むものであり得る。
【０１８３】
表２、表５Ａおよび表５Ｂに記載のアミノ酸配列と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、または９９％の配列同一性をそれぞれ独立して有し得る、軽鎖および／または重鎖の可変領域の組み合わせによって形成された他の抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその抗原結合断片の変異体も提供される。抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体の変異体は、表２に記載する軽鎖および／または重鎖の可変領域のアミノ酸配列における保存的なアミノ酸の変化、アミノ酸の置換、欠失、または付加も含み得ることも当業者は理解されよう。
【０１８４】
【表３Ａ】
0005855569.tif 000004
【０１８５】
【表３Ｂ】
0005855569.tif 000005
【０１８６】
本発明の特定の実施形態では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその抗原結合断片は、表３に示すＣＤＲ配列を含むか、または表３のＣＤＲ配列と実質的な配列同一性を有し得る。例示的な実施形態では、２５Ａ１抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体は、配列番号６８、６９、および７０でコードされたＣＤＲ１、２、および３をそれぞれ含む軽鎖可変領域、および／または配列番号７１、７２、および７３でコードされたＣＤＲ１、２および３をそれぞれ含む重鎖可変領域を含み得る。他の実施形態ではＣＤＲ３領域は、抗原結合を提供するのに十分なものであり得る。ＣＤＲＬ３またはＣＤＲＨ３のいずれか、もしくはＣＤＲＬ３とＣＤＲＨ３の両方を含むようなポリペプチドは、本発明に包含される。
【０１８７】
さらに、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその抗原結合断片は表３に記載するＣＤＲの任意の組み合わせを含み得る。例えば、抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖ＣＤＲ３および重鎖のＣＤＲ３を含み得る。抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその抗原結合断片に含まれているＣＤＲが、表３に記載するＣＤＲ配列と８０％、８５％、９０％、または９５％の配列同一性を有する変異体ＣＤＲであり得ることは理解されよう。変異体が表３に記載するＣＤＲ配列の保存的なアミノ酸の変化、アミノ酸の置換、欠失、または付加も含み得ることも、当業者は認識するはずである。
【０１８８】
本発明の他の典型的な態様は、配列番号２またはその変異体（配列番号２の２０番目から２５９番目までのアミノ酸の領域、または４０番目から１６５番目までのアミノ酸の領域と少なくとも８０％の配列同一性を有する変異体）に特異的に結合する能力を有する、単離された抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体が、
ａ）表５Ｂに記載する軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲおよび表５Ａに記載する重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲ；
ｂ）配列番号１９４に定義する軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲおよび配列番号１９１に定義する重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲ；
ｃ）配列番号１９５に定義する軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲおよび配列番号１９２に定義する重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲ；
ｄ）配列番号１９６に定義する軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲおよび配列番号１９３に定義する重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲ；
ｅ）配列番号３８に定義する軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲおよび配列番号４０に定義する重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲ；
ｆ）配列番号４２に定義する軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲおよび配列番号４４に定義する重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲ；
ｇ）配列番号４６に定義する軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲおよび配列番号４８に定義する重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲ；
ｈ）配列番号５０に定義する軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲおよび配列番号５２に定義する重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲ；
ｉ）配列番号５４に定義する軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲおよび配列番号５６に定義する重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲ；
ｊ）配列番号５８に定義する軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲおよび配列番号６０に定義する重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲ；
ｋ）配列番号６２に定義する軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲおよび配列番号６４に定義する重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲ；
ｌ）配列番号６６に定義する軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲおよび配列番号６８に定義する重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲ；
ｍ）配列番号１６２に定義する軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲおよび配列番号１６４に定義する重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲ；
ｎ）配列番号１６６に定義する軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲおよび配列番号１６８に定義する重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲ；
ｏ）配列番号１７０に定義する軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲおよび配列番号１７２に定義する重鎖可変ドメインの３つのＣＤＲ；
を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片を含む。
【０１８９】
本発明は別の側面において、Ｓｉｇｌｅｃ−１５またはその変異体（配列番号２の２０番目から２５９番目までのアミノ酸の領域、または４０番目から１６５番目までのアミノ酸の領域と少なくとも８０％の配列同一性を有する変異体）に特異的に結合する能力を有する、単離された抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体が、
ａ）表５Ｂに記載する配列と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインおよび表５Ａに記載する配列と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン；
ｂ）配列番号１９４と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインおよび配列番号１９１と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン；
ｃ）配列番号１９５と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインおよび配列番号１９２と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン；
ｄ）配列番号１９６と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインおよび配列番号１９３と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン；
ｅ）配列番号３８と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインおよび配列番号４０と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン；
ｆ）配列番号４２と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインおよび配列番号４４と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン；
ｇ）配列番号４６と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインおよび配列番号４８と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン；
ｈ）配列番号５０と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインおよび配列番号５２と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン；
ｉ）配列番号５４と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインおよび配列番号５６と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン；
ｊ）配列番号５８と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインおよび配列番号６０と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン；
ｋ）配列番号６２と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインおよび配列番号６４と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン；
ｌ）配列番号６６と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインおよび配列番号６８と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン；
ｍ）配列番号１６２と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインおよび配列番号１６４と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン；
ｎ）配列番号１６６と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインおよび配列番号１６８と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン；
ｏ）配列番号１７０と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインおよび配列番号１７２と少なくとも７０％（７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％）の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン；
を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片に関する。
【０１９０】
さらに上記の特定の組み合わせの軽鎖可変領域は、本明細書に記載する他の軽鎖可変領域に変更され得る。同様に、上記の特定の組み合わせの重鎖可変領域は、本明細書に記載する他の重鎖可変領域を変更され得る。
【０１９１】
［変異体抗体およびその抗原結合断片］
また、本発明は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の変異体を包含する。本発明に包含される変異体抗体またはその抗原結合断片は、アミノ酸配列に変異を有するものである。例えば、本発明に包含される変異体抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも１つの変異体ＣＤＲ（２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、最大１２個の変異体ＣＤＲ）、変異体軽鎖可変ドメイン、変異体重鎖可変ドメイン、変異体軽鎖および／または変異体重鎖を有するものである。本発明に包含される変異体抗体またはその抗原結合断片は、元の抗体またはその抗原結合断片と比較して、例えば同程度または増強された結合親和性を有するものである。
【０１９２】
本明細書で使用される「変異体」という用語は、本明細書に記載するあらゆる配列に適用され、例えば変異体ＣＤＲ（ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、および／またはＣＤＲＨ３のいずれか）、変異体軽鎖可変ドメイン、変異体重鎖可変ドメイン、変異体軽鎖、変異体重鎖、変異体抗体、変異体抗原結合断片、および配列番号２の変異体が含まれる。
【０１９３】
本発明に包含される変異体抗体または抗原結合断片は、挿入、欠失またはアミノ酸置換（保存的または非保存的置換）を含み得るものである。これらの変異体は、そのアミノ酸配列中の少なくとも１つアミノ酸残基が除去され、その場所に挿入された異なる残基を有し得る。
【０１９４】
置換変異誘発について最も関心のある部位には、超可変領域（ＣＤＲ）が含まれるが、フレームワーク領域における変化、あるいは定常領域における変化も意図するところに含まれる。保存的置換は、以下に記載のグループ（グループ１〜６）のひとつに含まれる（ＣＤＲ，可変鎖、抗体などの）アミノ酸を同じグループに属する他のアミノ酸に交換されることによって生じ得る。
【０１９５】
通常、ＣＤＲにおける変異は、フレームワーク領域における変異より抗体または抗原結合断片の抗原結合活性に大きな影響を与え得る。本発明に包含される変異体抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載するものと実質的に同一の抗原結合能力を持つもの（同様の、同一の、またはわずかに小さいだけの抗原結合能力を持つものを含む）か、もしくは本明細書に記載するものより高い抗原結合能力を持つものである。
【０１９６】
保存的置換の他の典型的な態様は、表１Ａの「好ましい置換」の見出しの下に記載されている。そのような置換が望ましくない特性をもたらす場合、より大きい変化、表１Ａにおいて「典型的な置換」と命名されたもの、またはアミノ酸のクラスに関連して後に説明するものを導入し、生成物をスクリーニングしてもよい。
【０１９７】
変異体は、置換変異誘発によって生成され、かつ本発明のポリペプチドの生物活性を保持し得ることが知られている。これらの変異体は、そのアミノ酸配列中の少なくとも１つアミノ酸残基が除去され、その場所に挿入された異なる残基を有し得る。例えば、置換変異誘発について最も関心のある部位には、さまざまな種に由来する特定の残基が同一であるような部位が含まれる。「保存的置換」として特定される置換の例を、図１Ａに示す。そのような置換が望ましくない変化をもたらす場合、他の種類の置換、表１において「典型的な置換」と命名されたもの、またはアミノ酸のクラスに関連して後に説明するものを導入し、生成物をスクリーニングする。
【０１９８】
機能的または免疫学的同一性の大幅な変更は、例えばシート構造またはらせん構造のような、（ａ）置換領域におけるポリペプチド骨格の構造の維持、（ｂ）標的部員における分子の電荷または疎水性の維持、または（ｃ）側鎖の大きさの維持に対する影響について有意差を有する置換のなかから選択することによって、達成される。天然の残基は、共通の側鎖の特性に基づいて複数のグループ、即ち
（グループ１）  疎水性：ノルロイシン、メチオニン（Ｍｅｔ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）
（グループ２）  中性親水性：システイン（Ｃｙｓ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）
（グループ３）  酸性：アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）
（グループ４）  塩基性：アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、リジン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）
（グループ５）  鎖配向に影響を与える残基：グリシン（Ｇｌｙ）、（Ｐｒｏ）はプロリン、および
（グループ６）  芳香族：トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）
に分割される。非保存的置換は、これらのクラスのいずれかのメンバーから別のクラスのメンバーへの交換を伴う。
【０１９９】
【表４】
0005855569.tif 000006
【０２００】
変異体抗体またはその抗原結合断片のアミノ酸配列の変異は、アミノ酸の付加、欠失、挿入、置換等、１つまたは複数のアミノ酸の主鎖または側鎖における１箇所または複数箇所の変更、もしくは１つまたは複数のアミノ酸への他の分子群または別分子の付加（主鎖または側鎖）を含み得る。
【０２０１】
変異体抗体またはその抗原結合断片は、元の抗体または抗原結合断片と比較すると、そのアミノ酸配列にかなりの配列類似性および／または配列同一性を有し得る。２つの配列間の類似度は、同一なもの（同一のアミノ酸）のパーセンテージおよび保存的な置換のパーセンテージに基づく。
【０２０２】
一般に、可変鎖間の配列類似性および同一性の程度は、使用してＢｌａｓｔ２シーケンスプログラム（Ｔａｔｉａｎａ  Ａ．Ｔａｔｕｓｏｖａ，Ｔｈｏｍａｓ  Ｌ．Ｍａｄｄｅｎ（１９９９），”Ｂｌａｓｔ  ２  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ−ａ  ｎｅｗ  ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ｃｏｍｐａｒｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ”，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ．１７４：２４７−２５０）をデフォルト設定で使用して、すなわちＢＬＡＳＴＰプログラム、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックス（ｏｐｅｎ  ｇａｐ  １１およびｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  ｇａｐ  ｐｅｎａｌｔｙ  １；ｇａｐｘ  ｄｒｏｐｏｆｆ  ５０，ｅｘｐｅｃｔ  １０．０，ｗｏｒｄ  ｓｉｚｅ  ３）、および活性化フィルタを用いてここに決定した。
【０２０３】
パーセント同一性は、したがって、元のペプチドと同一で、同一または類似した位置を占め得るアミノ酸の存在の指標となる。
【０２０４】
パーセント類似性は、同一または類似した位置における元のペプチドと同一なもの、および保存的アミノ酸置換で置換されているものであるアミノ酸の存在の指標となる。
【０２０５】
本発明の（ＶＬ変異体、ＶＨ変異体、ＣＤＲ変異体、抗体変異体、ポリペプチド変異体などを含む）変異体（すなわち類似体）は、したがって、元の配列または元の配列の一部と少なくとも７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有し得るものを含む。
【０２０６】
本発明によれば、配列番号２の変異体は、配列番号２の４９番目から１６５番目までのアミノ酸の領域、または、または２０番目から２５９番目までのアミノ酸の領域と少なくとも８０％の配列同一性を有する領域を有するポリペプチドを含む。配列番号２の変異体はまた、配列番号２と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。
【０２０７】
変異体の典型的な態様は、本明細書に記載するいずれかの配列と少なくとも８１％の配列同一性を有し、元の配列または元の配列の一部と８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列類似性を有するものである。
【０２０８】
変異体の他の典型的な態様は、本明細書に記載するいずれかの配列と少なくとも８２％の配列同一性を有し、元の配列または元の配列の一部と８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列類似性を有するものである。
【０２０９】
変異体のさらに別の典型的な態様は、本明細書に記載するいずれかの配列と少なくとも８５％の配列同一性を有し、元の配列または元の配列の一部と８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列類似性を有するものである。
【０２１０】
変異体のさらに別の典型的な態様は、本明細書に記載するいずれかの配列と少なくとも９０％の配列同一性を有し、元の配列または元の配列の一部と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列類似性を有するものである。
【０２１１】
変異体のさらに別の典型的な態様は、本明細書に記載するいずれかの配列と少なくとも９５％の配列同一性を有し、元の配列または元の配列の一部と９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列類似性を有するものである。
【０２１２】
変異体のさらに別の典型的な態様は、本明細書に記載するいずれかの配列と少なくとも９７％の配列同一性を有し、元の配列または元の配列の一部と９７％、９８％、９９％または１００％の配列類似性を有するものである。
【０２１３】
簡潔化の目的で、本出願人は本明細書において、本発明に包含される個々の変異体の典型的な形態であって、特定の％配列同一性および％配列類似性を有するものを示す表１Ｂを提示している。表中の各「Ｘ」は、所定の変異体を定めるものと解されたい。
【０２１４】
【表５】
0005855569.tif 000007
【０２１５】
本明細書において使用される「同一」なる用語は、ある配列が他の配列との１００％の配列同一性を有することを意味する。
【０２１６】
本明細書において使用される「実質的に同一」なる用語は、ある配列が他の配列との７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有することを意味する。
【０２１７】
本発明は、本明細書に記載の配列と少なくとも８０％の配列同一性を有する、ＣＤＲ、軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン、軽鎖、重鎖、抗体および／または抗原結合断片を包含する。
【０２１８】
本発明の抗体または抗原結合断片の典型的な態様は、配列番号３８と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号４２と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号４６と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号５０と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号５４と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号５８と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号６２と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号６６と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号１６２と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号１６６と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、および配列番号１７０と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列からなる群から選択された配列を含む軽鎖可変ドメインを含むものである。
【０２１９】
これらの軽鎖可変ドメインは、配列番号６９と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ１配列、配列番号７０と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ２配列、および配列番号７１と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２２０】
本発明の典型的な実施形態においては、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号６９と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２２１】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号６９と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２２２】
本発明の別の典型的な実施形態においては、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７０と少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２２３】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７０と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２２４】
本発明の別の典型的な実施形態においては、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７１と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２２５】
本発明のさらなる典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７１と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２２６】
上述の軽鎖可変ドメインは、配列番号７５と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ１配列、配列番号７６と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ２配列、配列番号７７と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２２７】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７５と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２２８】
本発明の別の典型的な実施形態においては、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７５と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２２９】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７６と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２３０】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７６と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２３１】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７７と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２３２】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７７と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２３３】
上述の軽鎖可変ドメインは、配列番号８１と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ１配列、配列番号８２と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ２配列、配列番号８３と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２３４】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８１と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２３５】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８１と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２３６】
本発明のさらなる典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８２と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２３７】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８２と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２３８】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８３と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２３９】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８３と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２４０】
上述の軽鎖可変ドメインは、配列番号８７と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ１配列、配列番号８８と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ２配列、配列番号８９と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２４１】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８７と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２４２】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８７と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２４３】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８８と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２４４】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８８と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２４５】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８９と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２４６】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８９と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２４７】
上述の軽鎖可変ドメインは、配列番号９３と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ１配列、配列番号９４と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ２配列、配列番号９５と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２４８】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９３と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２４９】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９３と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２５０】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９４と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２５１】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９４と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２５２】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９５と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２５３】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９５と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２５４】
上述の軽鎖可変ドメインは、配列番号９９と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ１配列、配列番号１００と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ２配列、配列番号１０１と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２５５】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９９と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２５６】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９９と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２５７】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１００と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２５８】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１００と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２５９】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０１と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２６０】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０１と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２６１】
上述の軽鎖可変ドメインは、配列番号１０５と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ１配列、配列番号１０６と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ２配列、配列番号１０７と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２６２】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０５と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２６３】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０５と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２６４】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０６と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２６５】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０６と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２６６】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０7と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２６７】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０７と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２６８】
上述の軽鎖可変ドメインは、配列番号１１１と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ１配列、配列番号１１２と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ２配列、配列番号１１３と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２６９】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１１１と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２７０】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１１１と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２７１】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１１２と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２７２】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１１２と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２７３】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１１３と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２７４】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１１３と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２７５】
上述の軽鎖可変ドメインは、配列番号１７３と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ１配列、配列番号１７４と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ２配列、配列番号１７５と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２７６】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１７３と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２７７】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１７３と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２７８】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１７４と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２７９】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１７４と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２８０】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１７５と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２８１】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１７５と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２８２】
上述の軽鎖可変ドメインは、配列番号１７９と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ１配列、配列番号１８０と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ２配列、配列番号１８１と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２８３】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１７９と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２８４】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１７９と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２８５】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８０と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２８６】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８０と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２８７】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８１と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２８８】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８１と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２８９】
上述の軽鎖可変ドメインは、配列番号１８５と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ１配列、配列番号１８６と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ２配列、配列番号１８７と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２９０】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８５と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２９１】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８５と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１配列を含み得る。
【０２９２】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８６と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２９３】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８６と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２配列を含み得る。
【０２９４】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８７と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２９５】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８７と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３配列を含み得る。
【０２９６】
本発明の典型的な実施形態では、本発明の抗体または抗原結合断片は、配列番号４０と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号４４と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号４８と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号５２と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号５６と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号６０と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号６４と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号６８と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号１６４と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、配列番号１６８と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列、および配列番号１７２と少なくとも７０％の配列同一性を有する（８０％、８５％、９０％、９５％と１００％の配列同一性を有するものを含む）配列からなる群から選択された配列を含む重鎖可変ドメインを含むものである。
【０２９７】
上述の重鎖可変ドメインは、配列番号７２と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ１配列、配列番号７３と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ２配列、配列番号７４と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０２９８】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７２と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０２９９】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７２と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３００】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７３と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３０１】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７３と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３０２】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７４と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３０３】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７４と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３０４】
上述の重鎖可変ドメインは、配列番号７８と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ１配列、配列番号７９と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ２配列、配列番号８０と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３０５】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７８と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３０６】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７８と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３０７】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７９と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３０８】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号７９と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３０９】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８０と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３１０】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８０と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３１１】
上述の軽鎖可変ドメインは、配列番号８４と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ１配列、配列番号８５と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ２配列、配列番号８６と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３１２】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８４と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３１３】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８４と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３１４】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８５と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３１５】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８５と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３１６】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８６と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３１７】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号８６と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３１８】
上述の軽鎖可変ドメインは、配列番号９０と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ１配列、配列番号９１と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ２配列、配列番号９２と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３１９】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９０と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３２０】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９０と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３２１】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９１と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３２２】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９１と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３２３】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９２と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３２４】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９２と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３２５】
上述の軽鎖可変ドメインは、配列番号９６と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ１配列、配列番号９７と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ２配列、配列番号９８と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３２６】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９６と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３２７】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９６と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３２８】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９７と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３２９】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９７と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３３０】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９８と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３３１】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号９８と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３３２】
上述の軽鎖可変ドメインは、配列番号１０２と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ１配列、配列番号１０３と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ２配列、配列番号１０４と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３３３】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０２と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３３４】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０２と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３３５】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０３と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３３６】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０３と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３３７】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０４と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３３８】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０４と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３３９】
上述の重鎖可変ドメインは、配列番号１０８と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ１配列、配列番号１０９と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ２配列、配列番号１１０と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３４０】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０８と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３４１】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０８と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３４２】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０９と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３４３】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１０９と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３４４】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１１０と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３４５】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１１０と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３４６】
上述の重鎖可変ドメインは、配列番号１１４と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ１配列、配列番号１１５と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ２配列、配列番号１１６と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３４７】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１１４と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３４８】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１１４と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３４９】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１１５と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３５０】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１１５と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３５１】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１１６と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３５２】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１１６と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３５３】
上述の重鎖可変ドメインは、配列番号１７６と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ１配列、配列番号１７７と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ２配列、配列番号１７８と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３５４】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１７６と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３５５】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１７６と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３５６】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１７７と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３５７】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１７７と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３５８】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１７８と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３５９】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１７８と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３６０】
上述の重鎖可変ドメインは、配列番号１８２と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ１配列、配列番号１８３と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ２配列、配列番号１８４と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３６１】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８２と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３６２】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８２と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３６３】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８３と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３６４】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８３と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３６５】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８４と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３６６】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８４と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３６７】
上述の重鎖可変ドメインは、配列番号１８８と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ１配列、配列番号１８９と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ２配列、配列番号１９０と少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３６８】
本発明の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８８と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３６９】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８８と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１配列を含み得る。
【０３７０】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８９と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３７１】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１８９と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２配列を含み得る。
【０３７２】
本発明のさらに別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１９０と少なくとも９０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３７３】
本発明の別の典型的な実施形態では、本明細書に記載する抗体のいずれかが、配列番号１９０と１００％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３配列を含み得る。
【０３７４】
［細胞における抗体の産生］
本明細書中に開示される抗体は、当業者によく知られた様々な方法（例えば、ハイブリドーマによる方法、あるいは組換えＤＮＡ法）によって作ることができる。
【０３７５】
本発明の典型的な実施形態では、抗体は、マウスを抗原で免疫し、脾臓細胞を単離してＨＧＰＲＴを発現しない骨髄腫細胞と融合し、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミン（ＨＡＴ）を含む培地によってハイブリッド細胞を選択する従来のハイブリドーマ技術によって製造することができる。
【０３７６】
本発明の別の典型的な実施形態では、抗体を組換えＤＮＡ法によって製造し得る。
【０３７７】
抗体を発現するために、本明細書に記載する免疫グロブリン軽鎖および重鎖のいずれかをコードすることができるヌクレオチド配列は、発現ベクター（即ち、特定のホストにおいて挿入されたコード配列の転写および翻訳制御のための要素を含むベクター）に挿入し得る。これらの要素としては、例えば、エンハンサー、構成的および誘導性プロモーター、５’および３’非翻訳領域などの調節配列が挙げられる。当業者によく知られている方法を用いてそのような発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ組換えＤＮＡ技術、合成技術、およびｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝子組換えが含まれる。
【０３７８】
当業者に公知の各種発現ベクター／宿主細胞の系を利用して、本明細書に記載する免疫グロブリン軽鎖および重鎖のいずれかをコードすることができるヌクレオチド配列に由来するポリペプチドまたはＲＮＡを発現させることができる。これらの系としては、組換えバクテリオファージ、プラスミド、またはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌；酵母は、酵母発現ベクターで形質転換された酵母；バキュロウイルスベクターを感染させた昆虫細胞系；ウイルスまたは細菌発現ベクターで形質転換した植物細胞系；または動物細胞系などの微生物が挙げられるが、これらに限定されない。哺乳動物系においては組換えタンパク質が長期的に生産されるため、細胞株での安定な発現が達成され得る。例えば、本明細書に記載の免疫グロブリン軽鎖および重鎖のいずれかをコードできるヌクレオチド配列を、ウイルスの複製起点および／または内因性発現エレメントを含み得る発現ベクターと、同じベクター上または別のベクター上にある選択可能すなわち可視マーカー遺伝子とを用いて、細胞株に形質転換することができる。ただし、本発明は、使用されるベクターまたはホスト細胞によって限定されるものではない。本発明の特定の実施形態では、本明細書に記載する免疫グロブリン軽鎖および重鎖のいずれかをコードできるヌクレオチド配列を、それぞれ別々の発現ベクターに連結し、各鎖が別々に発現させることができる。別の実施形態では、本明細書に記載の免疫グロブリン軽鎖および重鎖のいずれかをコードできる軽鎖および重鎖の両方を単一の発現ベクターに連結し、同時に発現させることができる。
【０３７９】
また、ＲＮＡおよび／またはポリペプチドは、本明細書に記載する免疫グロブリン軽鎖および重鎖のいずれかをコードできるヌクレオチド配列を含むベクターから、それぞれｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写系または結合されたｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写／翻訳系をそれぞれ使用して、発現することができる。
【０３８０】
一般的に、本明細書中に記載する免疫グロブリン軽鎖および重鎖のいずれかをコードできるヌクレオチド配列を含む、および／または本明細書中に記載する免疫グロブリン軽鎖および重鎖のいずれかをコードできるヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドまたはその一部を発現するホスト細胞は、当業者に公知の種々の手順によって特定できる。これらの手順としては、ＤＮＡ／ＤＮＡもしくはＤＮＡ／ＲＮＡハイブリダイゼーション、ＰＣＲ増幅、およびタンパク質バイオアッセイまたはイムノアッセイ技術（核酸またはアミノ酸配列の検出および／または定量のための膜、溶液、または核酸またはチップをベースにした技術を含む）などが挙げられるが、これらに限定されない。特異的なポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のいずれかを用いる、ポリペプチドの発現を検出し測定するための免疫学的方法は当技術分野で周知である。このような技術の例としては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ法）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、蛍光活性化−細胞選別法（ＦＡＣＳ）などが挙げられる。当業者は容易にこれらの方法を本発明に適用し得る。
【０３８１】
したがって、本明細書に記載する免疫グロブリン軽鎖および重鎖のいずれかをコードできるヌクレオチド配列を含む宿主細胞は、対応するＲＮＡ（ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡは、ｓｈＲＮＡなど）の転写および／または細胞培養からのポリペプチドの発現のための条件下で培養することができる。細胞によって産生されるポリペプチドは、使用されるベクターおよび／または配列に応じて分泌されるか、または細胞内に保持され得る。典型的な実施形態では、本明細書に記載する免疫グロブリン軽鎖および重鎖のいずれかをコードできるヌクレオチド配列を含む発現ベクターは、原核生物または真核生物の細胞膜を介したポリペプチドの分泌を誘導するシグナル配列を含むように設計され得る。
【０３８２】
遺伝コード固有の縮重のため、例えば本明細書に記載する免疫グロブリン軽鎖および重鎖のいずれかをコードできるヌクレオチド配列によりコードされたポリペプチドを発現する目的で、同一の、実質的に同一の、または機能的に同等のアミノ酸配列をコードする他のＤＮＡ配列を作製して使用することができる。以下に限定されないが、クローニング、プロセシング、および／または遺伝子産物の発現の改変などの各種の目的で塩基配列を変更するため、本発明のヌクレオチド配列を一般的に当技術分野で公知の方法を用いて改変することができる。ランダムに断片化することによるＤＮＡシャフリングおよび遺伝子断片や合成オリゴヌクレオチドのＰＣＲによる再構築を用いて、塩基配列を改変し得る。例えば、オリゴヌクレオチドによる部位特異的突然変異誘発法を用いて、新しい制限部位を作成する変異、グリコシル化パターンを変更する変異、コドン選択を変更する変異、スプライスバリアントをつくりだす変異、などの各種変異を導入することができる。
【０３８３】
さらに、宿主細胞株は、挿入された配列の発現を調節する能力または所望の方式で発現されたポリペプチドをプロセシングする能力の有無により選択され得る。ポリペプチドの修飾としては、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、およびアシル化などが挙げられるが、これらに限定されない。典型的な実施形態では、特定の糖鎖結合の構造またはパターンを含む抗体が必要とされ得る。翻訳後プロセシングは、ポリペプチドの「プリプロ」型を切断し、タンパク質のターゲティング、折り畳み、および／または活性を特定するために使用することもできる。翻訳後の活性のための特定の細胞機構および特徴的な機序を有する異なる宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＭＤＣＫ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、およびＷ１３８細胞）は市販されており、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）からも入手可能であり、発現されたポリペプチドの正しい修飾およびプロセシングを確実にするべく選択することができる。
【０３８４】
ハイブリドーマ細胞はハイブリッドマウスの細胞であることから、マウス抗体を産生するために厳密に使用される。そのようなマウス抗体のグリコシル側鎖がヒトの細胞で観察されたグリコシル化パターンとは大幅に異なる可能性があることは明らかである。ヒトの細胞とハイブリドーマとの間でリン酸化パターンの違いはまた、抗体の活性にも影響を与える可能性がある。さらに、ヒトへのマウス抗体の投与は、通常、マウス抗体が持ち得る生物学的活性のいずれかを中和する可能性がある抗抗体の免疫応答を誘導する。
【０３８５】
ヒトの免疫系によるマウス抗体の認識を最小にするため、またはヒトでの抗体の生物活性を向上させるため、マウス抗体を部分的に（例えばキメラ）または完全なヒト化抗体に変換するのが有利である。このように、（部分的または完全な）ヒト化抗体の軽鎖および重鎖の組換え体を、ハイブリドーマ細胞（例えば、２９３細胞、ＣＨＯ細胞など）以外の哺乳動物発現系に導入し得る。哺乳動物発現系は、得られるグリコシル化パターンが、天然に存在する抗体のヒト型それに近いものとなるという利点が得られる。
【０３８６】
例えば、溶解性ＩｇＧ１抗体の場合には、免疫グロブリン鎖の適切なグリコシル化はエフェクター機能に必要である。ＩｇＧ１モノクローナル抗体のこれらの生物学的機能は、抗体依存性細胞毒性作用（ＡＤＣＣ）や補体依存性細胞毒性作用（ＣＤＣ）が含まれ、この両方が、哺乳動物細胞における発現時にアミノ酸にグラフトされている糖の側鎖の種類に大きく影響される。
【０３８７】
さらに、最適化された哺乳動物細胞発現系は、ハイブリドーマに比べて大量の抗体を分泌することが多い。したがって、生産のためにヒト細胞を導入することについては、実用的な、およびおそらく経済的な理由が存在する。
【０３８８】
天然の、改変した、または組換えられた核酸配列は異種配列に連結し、上記のホスト系のいずれかの異種ポリペプチド部分を含む融合ポリペプチドの翻訳物が生じることは、当業者は容易に理解するであろう。このような異種ポリペプチド部分により、市販のアフィニティーマトリックスを用いた融合ポリペプチドの精製が容易になり得る。このような部分には、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトース結合タンパク質、チオレドキシン、カルモジュリン結合ペプチド、６−Ｈｉｓ（Ｈｉｓ）、ＦＬＡＧ、ｃ−ｍｙｃ、血球凝集素（ＨＡ）、およびモノクローナル抗体エピトープなどの抗体エピトープなどが含まれるが、これらに限定されない。
【０３８９】
本発明は別の側面において、融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含み得るポリヌクレオチドに関連する。当該融合タンパク質は、本明細書に記載するポリペプチド（例えば、完全な軽鎖、完全な重鎖、可変領域、ＣＤＲなど）に融合する融合の相手（例えば、ＨＡ、ＦＣなど）を含み得る。
【０３９０】
核酸およびポリペプチド配列の全部または一部を、当技術分野で周知の化学的または酵素的方法を使用して合成できることを、当業者は認識するはずである。例えば、ペプチド合成は様々な固相技術を用いて行うことができ、ＡＢＩ４３１Ａペプチドシンセサイザー（ＰＥ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）などの装置を用いて、合成を自動化することができる。必要に応じて、アミノ酸配列を、合成および／または他のタンパク質からの配列との結合の間に改変して、変異体タンパク質を作製し得る。
【０３９１】
［抗体コンジュゲート］
検出または治療目的のためには必ずしも必要ではないが、本発明の抗体または抗原結合断片は検出可能な部分（すなわち、検出または診断目的で利用される）または治療用部分（治療目的で利用される）と結合させることができる。
【０３９２】
検出目的で、非結合抗体（一次抗体）を抗原に結合するために使用し、かつ検出可能な部分を備えかつ一次抗体に結合可能な二次抗体を加えることができる。しかし、上記のように、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体は、検出可能な標識とのコンジュゲートであってもよく、したがって二次抗体は不要であろう。
【０３９３】
「検出可能な部分」とは、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、化学的および／または他の物理的手段によって検出可能な部分をさす。検出可能な部分は、当技術分野で周知の方法を用いて、本発明の抗体およびその抗原結合断片に直接および／または間接的に結合（例えば、限定するものではないが、ＤＯＴＡまたはＮＨＳ結合などの結合を介してなど）することができる。必要な感度、結合しやすさ、安定性の要件および使用できる器具類などに応じて選択される、多種多様な検出可能な部分を用い得る。適切な検出可能な部分としては、蛍光標識、放射性標識（例えば、限定するものではないが、１２５Ｉ、Ｉｎ１１１、Ｔｃ９９、Ｉ１３１、ならびにＰＥＴスキャナ用の陽電子放出放射性同位体など）、核磁気共鳴標識、発光標識、化学発光標識、発色団標識、酵素標識（例えば、限定するものではないが、限界西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼなど）、量子ドット、および／またはナノ粒子などが挙げられるが、これらに限定されない。検出可能な部分は、検出可能なシグナルを発生させる、および／または発生することによって、当該検出可能な部分からのシグナルが検出され得るようにする。
【０３９４】
本発明の別の典型的な実施形態において、抗体またはその抗原結合断片は、治療的部分（例えば、薬物、細胞毒性部分）に結合（修飾）することができる。
【０３９５】
いくつかの事例では、治療の目的で、非結合抗体が、その抗体自体が抗原を封鎖する能力を有するもの、抗原と他の結合の相手と間の重要な相互作用をブロックし得るもの、またはエフェクター細胞などを動員できるもの等であり得る。しかし、上記のように、抗体は、治療用部分とコンジュゲートさせることができる。
【０３９６】
典型的な実施形態では、抗体および抗原結合断片は、化学療法剤または細胞毒性剤を含み得る。例えば、抗体および抗原結合断片は、化学療法剤または細胞毒性剤に結合させることができる。このような化学療法剤または細胞毒性剤としては、イットリウム９０、スカンジウム４７、レニウム１８６、ヨウ素１３１、ヨウ素１２５、当業者に周知のその他の物質（例えば、ルテチウム（例えばＬｕ１７７）、ビスマス（例えばＢｉ２１３）、銅（例えばＣｕ６７）など）などが挙げられるが、これらに限定されない。他の例では、化学療法剤または細胞毒性剤は、当業者に知られているもののなかでは、５−フルオロウラシル、アドリアマイシン、イリノテカン、タキサン、シュードモナスエンドトキシン、リシンおよび他の毒素からなるものであり得る。
【０３９７】
また、本発明の方法を実施するために、かつ当技術分野で周知のように、本発明の抗体またはその抗原結合断片（結合または非結合）を、本発明の抗体またはその抗原結合断片に特異的に結合でき、かつ望ましい検出可能な部分や診断用または治療用の部分を備え得る二次分子（例えば二次抗体など）とともに用いることができる。
【０３９８】
［本発明の抗体の医薬組成物とその使用］
抗体（結合または非結合）の医薬組成物も本発明に包含される。当該医薬組成物は、抗体またはその抗原結合断片を含み得、また薬学的に許容される担体を含み得る。
【０３９９】
本発明の他の側面は、本明細書に記載する抗体またはその抗原結合断片と、担体とを含み得る組成物に関連する。
【０４００】
本発明のさらに別の側面は、骨疾患や癌の治療または診断における本明細書に記載する単離された抗体または抗原結合断片の使用に関連する。
【０４０１】
有効成分に加えて、医薬組成物には、薬学的に許容される担体（水、ＰＢＳ、塩溶液、ゼラチン、油、アルコール、および他の賦形剤を含む）と、薬学的に使用され得る製剤にするための活性化合物の処理を促進する助剤とを含めることができる。他の事例においては、このような製剤を滅菌し得る。
【０４０２】
本明細書中で使用される「医薬組成物」は、通常、治療上有効な量の薬剤とともに、薬学的に許容される希釈剤、防腐剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／または担体を含む。本明細書中で使用される「治療上有効な量」とは、与えられた条件と投与レジメンで治療効果を挙げられる量をさす。このような組成物は、液体のまたは凍結乾燥あるいは乾燥した製剤であり、様々なバッファー成分の希釈剤（例えば、トリスＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩など）、ｐＨおよびイオン強度、表面への吸着を防止するためのアルブミンまたはゼラチンなどの添加剤、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０、プルロニックＦ６８、胆汁酸塩など）、可溶化剤（例えば、グリセロール、ポリエチレングリセロール）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、防腐剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン）、増量物質または等張剤（例えば、ラクトース、マンニトール）、共有結合しているポリマー（例えば、タンパク質に結合したポリエチレングリコール）、金属イオンとの錯体、あるいはポリマー化合物の特定の製剤（ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲルなど）内へ、またはその上に材料を組み込んだもの、もしくはリポソーム、マイクロエマルジョン、ミセル、単層または多層小胞、赤血球ゴースト、またはスフェロプラストに材料を組み込んだものを含む。このような組成物は、その物理的状態、溶解度、安定性、ｉｎ  ｖｉｖｏ放出速度、およびｉｎ  ｖｉｖｏクリアランス速度に影響を及ぼすことになる。徐放性組成物または持続放出性組成物は、親油性デポ剤（例えば、脂肪酸、ワックス、オイル）を含む。また、ポリマーで被覆した粒子状組成物（例えば、ポロキサマーまたはポロキサミン）も本発明で想定されている。本発明の組成物の別実施形態は、各種投与経路（非経口投与、経肺投与、経鼻投与、経口投与、経膣投与、経直腸投与など）のための浸透促進剤、プロテアーゼ阻害剤、または粒状の保護コーティングを組み込んでいる。一実施形態において、医薬組成物は、非経口投与、癌近傍（ｐａｒａｃａｎｃｅｒａｌｌｙ）投与、経粘膜投与、経皮投与、筋肉内投与、静脈内投与、皮内投与、皮下投与、腹腔内投与、脳室内投与、頭蓋内投与、および腫瘍内投与される。
【０４０３】
さらに、本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」または「医薬用担体」は、当分野で周知であり、０．０１〜０．１Ｍまたは０．０５Ｍのリン酸緩衝液または０．８％生理食塩水などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。さらに、このような薬学的に許容される担体は、水性または非水性の溶液、懸濁液、およびエマルジョンであり得る。非水性溶媒の例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルなどが挙げられる。水性担体としては、水、アルコール／水性溶液、エマルジョンまたは懸濁液などが挙げられ、生理食塩水および緩衝培地も含まれる。経口ビークルには、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース用域、デキストロースおよび塩化ナトリウム溶液は、乳酸加リンゲル溶液、または固定油などが含まれる。静脈内ビークルには、液体および栄養補給液、リンゲルデキストロースをベースにしたものなどの電解質補充液などが含まれる。防腐剤や他の添加剤、例えば、抗菌剤、酸化防止剤、照合剤、不活性ガスなども含められる。
【０４０４】
任意の化合物についての治療上有効な用量は、細胞培養アッセイか、またはマウス、ラット、ウサギ、イヌ、ブタなどの動物モデルのいずれかで最初に推定し得る。動物モデルはまた、投与の濃度範囲および経路を決定するためにも使用できる。このような情報は、ヒトでの投与のための有用な用量および経路を決定するために使用され得る。これらの技術は当業者に高知であり、治療上有効な用量とは、症状や状態を改善する有効成分の量をさす。治療効果と毒性は、細胞培地において標準的な薬学的手順によって、または実験動物を用いて、例えば、ＥＤ５０（集団の５０％に治療上有効な用量）およびＬＤ５０（集団の５０％の致死量）の統計情報を算出し、対比することによって決定し得る。上記の治療組成物のいずれかを、治療を必要とする任意の被験体、例えば限定されないがイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ウサギ、サル、ヒトなどの哺乳動物に適用し得る。
【０４０５】
本発明において利用される医薬組成物は、任意の数の投与経路（経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、脳室内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、経腸、局所、舌下、または直腸手段を含むが、これらに限定されない）によって投与し得る。
【０４０６】
本明細書の開示内容の趣旨での「治療」という用語は、標的の病態または疾患を予防もしくは抑制（軽減）することを目的とした、治療および予防処置の両方をさす。治療を必要するものには、既に疾患に罹患したもの、ならびに、疾患を有する傾向のあるものまたは疾患が予防されるべきものが含まれる。
【０４０７】
抗体またはその抗原結合断片は種々の骨量減少または癌の治療における治療的用途を有し得る。典型的な実施形態においては、抗体またはその断片は、骨疾患（例えば、破骨細胞の骨分解活性が上昇する状態など）に関連する骨量減少の治療の用途を有し得る。特定の事例では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２を発現し、ＡＤＣＣを媒介することによって免疫反応を誘導する細胞と相互作用し得る。他の例では、抗体および断片は、配列番号２とそのタンパク質の結合対象との相互作用をブロックし得る。
【０４０８】
抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体またはその抗原結合断片は、各種骨関連疾患（以下に限定されないが、骨粗鬆症、骨減少症、骨軟化症、副甲状腺機能亢進症、甲状腺機能低下症、甲状腺機能亢進症、性腺機能低下症、甲状腺中毒症、全身性肥満細胞症、成人、低フォスファターゼ症、副腎皮質機能亢進症、骨形成不全症、パジェット病、クッシング病／症候群、ターナー症候群、ゴーシェ病、エーラー・ダンロス症候群、マルファン症候群、メンケス症候群、ファンコニ症候群、多発性骨髄腫、高カルシウム血症、低カルシウム血症、関節炎、歯周病、くる病（ビタミンＤ依存性くる病Ｉ型、ＩＩ型およびＸ染色体性低リン酸塩血症性くる病）、骨性線維形成不全症（ｆｉｂｒｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｍｐｅｒｆｅｃｔａ  ｏｓｓｉｕｍ）、骨硬化性疾患（例えば、濃化異骨症など）、およびマクロファージ媒介炎症プロセスによって引き起こされる障害を含む）に関係する骨量減少の治療における治療用途があり得る。好ましい実施形態において、抗体および断片は、重度の骨量減少がみられる状態、特に骨に対する転移性癌において治療用途を有する。特定の事例では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体および断片は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５を発現する細胞（例えば、破骨細胞など）と相互作用し得る。他の事例では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体および断片は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５とそのタンパク質の結合相手との相互作用をブロックし得る。
【０４０９】
抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体および抗原結合断片は、各種骨再形成疾患によって引き起こされるもしくはそれに関連する骨量減少、または癌の治療において治療的用途を有し得る。特に、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体および免疫学的機能性断片は、破骨細胞が非常に活発であり、それが骨表面の劣化をもたらしている状態において治療用途を有する。特定の事例では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体および抗原結合断片を、同じ状態に対する他の治療と同時に組み合わせて投与することができる。したがって、抗体は当業者に知られている抗骨吸収阻害剤（例えばビスホスホネート）と併用して投与することができる。さらに、抗体は、細胞分裂阻害剤（例えばタキサン）、白金ベースの薬剤（例えばシスプラチン）、ＤＮＡ損傷剤（例えばドキソルビシン）、および当業者に知られている他の細胞毒性治療とともに投与することができる。他の事例では、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体およびその免疫学的機能性断片は、他の治療用抗体とともに投与することができる。そのような治療用抗体には、ＲＡＮＫＬ、ＥＧＦＲ、ＣＤ−２０、およびＨＥＲ２を標的とする抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【０４１０】
特定の事例では、前記抗体および抗原結合断片を、同じ状態に対する他の治療と同時に組み合わせて投与することができる。したがって、その抗体は、細胞分裂阻害剤（例えばタキサン）、白金ベースの薬剤（例えばシスプラチン）、ＤＮＡ損傷剤（例えばドキソルビシン）、および当業者に知られている他の抗癌治療とともに投与することができる。他の事例では、その抗体および抗原結合断片は、他の治療用抗体とともに投与することができる。そのような治療用抗体には、ＥＧＦＲ、ＣＤ−２０、およびＨＥＲ２を標的とする抗体が含まれるが、これらに限定されない
【０４１１】
本発明はさらに別の側面において、配列番号２を発現する細胞または配列番号２の変異体を発現する細胞の増殖を阻害する方法であって、本明細書に記載する抗体または抗原結合断片の有効量と細胞とを接触させる工程を含み得る、方法に関する。
【０４１２】
本発明はまた、哺乳動物において癌または骨量減少を治療する、すなわち配列番号２を発現する細胞または配列番号２の変異体を発現する細胞の増殖を阻害する方法であって、本明細書に記載する抗体またはその抗原結合断片を、それが必要な哺乳動物に対して投与する工程を含み得る、方法も包含する。
【０４１３】
また、本発明は、卵巣癌細胞、腎癌細胞、中枢神経系の癌細胞、前立腺癌細胞、メラノーマ細胞、乳癌細胞、肺癌細胞または結腸癌細胞からなる群から選択される癌細胞の増殖を阻害する方法を提供する。前記方法は、配列番号２の２０番目のアミノ酸から２５９番目のアミノ酸までの領域、または配列番号２の４９番目のアミノ酸から１６５番目のアミノ酸までの領域と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドの発現を阻害する能力を有する核酸を癌細胞に対して提供する工程を含み得る。当該癌細胞は、配列番号２の２０番目のアミノ酸から２５９番目のアミノ酸までの領域、または配列番号２の４９番目のアミノ酸から１６５番目のアミノ酸までの領域と少なくとも８０％の配列同一性を有するポリペプチドを発現し得る。
【０４１４】
本発明によれば、前記核酸は、例えば、ｓｉＲＮＡまたはアンチセンスであり得る。
【０４１５】
本発明はまた、哺乳動物において癌または骨量減少を検出する、すなわち配列番号２を発現する細胞または配列番号２の変異体を発現する細胞の増殖を検出する方法であって、本明細書に記載する抗体またはその抗原結合断片を、それが必要な哺乳動物に対して投与する工程を含み得る、方法も包含する。
【０４１６】
本発明はさらに別の側面において、配列番号２を発現する細胞または配列番号２の変異体を発現する細胞の増殖を阻害する方法であって、本明細書に記載する抗体または抗原結合断片の有効量と細胞とを接触させる工程を含み得る、方法に関する。
【０４１７】
本発明の別の側面は、配列番号２、および配列番号２の２０番目のアミノ酸から２５９番目のアミノ酸までの領域、または配列番号２の４９番目のアミノ酸から１６５番目のアミノ酸までの領域と少なくとも８０％の配列同一性を有する変異体を検出する方法に関連し、当該方法は、配列番号２またはその変異体を発現する細胞もしくは配列番号２またはその変異体を含むまたは含む疑いのあるサンプル（生検、血清、血漿、尿など）を、本明細書に記載する抗体または抗原結合断片と接触させる工程、および結合を測定する工程を含み得る。
【０４１８】
抗体と抗原との結合により、抗原の予想分子量の上昇が生ずることになる。したがって、抗体または抗原結合断片と抗原とが特異的に結合した後に物理的変化が生ずる。
【０４１９】
そのような変化は、例えば、電気泳動を行った後に、ウエスタンブロット法およびゲルまたはブロットの着色、質量分析、ＨＰＬＣを、コンピュータなどと組み合わせて利用することによって検出し得る。分子量の変化を計算することができる装置は当技術分野で公知であり、例えばＰｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｅｒ（登録商標）が挙げられる。
【０４２０】
抗体が例えば検出可能な標識を含む場合、標識が放出する蛍光、標識の放射線の放出、基質その他により提供される標識の酵素活性によって、抗原−抗体複合体を検出し得る。
【０４２１】
抗体またはその抗原結合断片と抗原との結合の検出および／または測定は、当技術分野で公知の各種方法によって行うことができる。抗体またはその抗原結合断片と抗原との間の結合は、検出可能な標識（放射線放出、蛍光、色の変化など）によって放出されるシグナルを検出できる装置を用いてモニタリングし得る。このような装置は、結合が生じたこと示すデータを提供するとともに、抗原に結合した抗体の量に関する表示も提供し得る。この装置（通常はコンピュータと接続される）は、バックグラウンド信号（例えば、抗原−抗体結合の非存在下で得られたシグナル）即ちバックグラウンドノイズと、特定の抗体−抗原結合によって得られたシグナルとの差を計算し得る。したがって、当該装置は抗原が検出されたか否かに関する表示および結論をユーザーに対し提供し得る。
【０４２２】
サンプルは、癌または骨疾患を罹患しているか、癌または骨疾患が疑われるか、または骨量減少が起きているか、骨量減少の起こる対象となり得る哺乳動物（例えば、ヒト）に由来するものであり得る。そのサンプルは、哺乳動物または細胞培養上清から得られた組織サンプルであり得る。
【０４２３】
本発明によれば、当該サンプルは、哺乳動物から得られた血清サンプル、血漿サンプル、血液サンプル、または腹水であり得る。本明細書に記載する抗体または抗原結合断片は、配列番号２を検出し得るという有利を有する。
【０４２４】
前記方法は、配列番号２または配列番号２の変異体に結合した抗体または抗原結合断片によって形成される複合体を定量する工程を含み得る。
【０４２５】
本発明の抗体または抗原結合断片は、特に、骨疾患または癌の検出、診断、または治療に使用され得る。
【０４２６】
本発明の別の側面は、本明細書に記載する１種以上の抗体またはその抗原結合断片を含む１つ以上の容器を含み得るキットにも関連する。
【０４２７】
［核酸、ベクターおよび細胞］
抗体は通常、軽鎖および重鎖をコードする核酸配列を含むベクターから発現される軽鎖および重鎖が発現できる細胞においてつくられる。
【０４２８】
したがって、本願は、本明細書中に記載するＣＤＲ（ＣＤＲの変異体を含む）、軽鎖可変ドメイン（軽鎖可変ドメインの変異体を含む）、重鎖可変ドメイン（重鎖可変ドメインの変異体を含む）、軽鎖（軽鎖の変異体を含む）、重鎖（重鎖の変異体を含む）のいずれかをコードできる核酸を包含する。
【０４２９】
本発明の核酸の典型的な態様は、軽鎖可変ドメインであって、
ａ）配列番号６９、配列番号７５、配列番号８１、配列番号８７、配列番号９３、配列番号９９、配列番号１０５、および配列番号１１１からなる群から選択されるＣＤＲＬ１配列、
ｂ）配列番号７０、配列番号７６、配列番号８２、配列番号８８、配列番号９４、配列番号１００、配列番号１０６、および配列番号１１２からなる群から選択されるＣＤＲＬ２配列、および／または
ｃ）配列番号７１、配列番号７７、配列番号８３、配列番号８９、配列番号９５、配列番号１０１、配列番号１０７、および配列番号１１３からなる群から選択されるＣＤＲＬ３配列、
を有する、該軽鎖可変ドメインをコードする核酸を含む。
【０４３０】
本発明によれば、前記核酸は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、またはＣＤＲＬ３のなかの少なくとも２種類のＣＤＲを含み得る軽鎖可変ドメインをコードし得る。
【０４３１】
また本発明によれば、前記核酸は、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３を１つずつ含み得る軽鎖可変ドメインをコードし得る。
【０４３２】
本発明はまた、重鎖可変ドメインであって、
ａ）配列番号７２、配列番号７８、配列番号８４、配列番号９０、配列番号９６、配列番号１０２、配列番号１０８、および配列番号１１４からなる群から選択されるＣＤＲＨ１配列、
ｂ）配列番号７３、配列番号７９、配列番号８５、配列番号９１、配列番号９７、配列番号１０３、配列番号１０９、および配列番号１１５からなる群から選択されるＣＤＲＨ２配列、および／または
ｃ）配列番号７４、配列番号８０、配列番号８６、配列番号９２、配列番号９８、配列番号１０４、配列番号１１０、および配列番号１１６からなる群から選択されるＣＤＲＨ３配列、
を有する、該重鎖可変ドメインをコードする核酸にも関連する。
【０４３３】
本発明はその別の側面において、軽鎖可変ドメインであって、
ａ）配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号８４、配列番号９６および配列番号１０２からなる群から選択されるＣＤＲＬ１配列と少なくとも８０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ１、
ｂ）配列番号１４９、配列番号：１５０、配列番号：７６、配列番号８２および配列番号１０６からなる群から選択されるＣＤＲＬ２配列と少なくとも８０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ２、または
ｃ）配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号７７、配列番号８３、配列番号９５、配列番号１０７および配列番号１５２からなる群から選択されるＣＤＲＬ３配列と少なくとも８０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＬ３、
を有する、該軽鎖可変ドメインをコードする核酸を提供する。
【０４３４】
本発明はさらに別の側面において、重鎖可変ドメインであって、
ａ）配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号８４、配列番号９６および配列番号１０２からなる群から選択されるＣＤＲＨ１配列と少なくとも８０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ１、
ｂ）配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号７３、配列番号７９、配列番号８５、配列番号９７、配列番号１０３、配列番号１０９からなる群から選択されるＣＤＲＨ２配列と少なくとも８０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ２、または
ｃ）配列番号１５８、配列番号７４、配列番号９８、配列番号１０４、配列番号１１０および配列番号１１６からなる群から選択されるＣＤＲＨ３配列と少なくとも８０％の配列同一性を有し得るＣＤＲＨ３、
を有する、該重鎖可変ドメインをコードする核酸を提供する。
【０４３５】
本発明によれば、前記核酸は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、またはＣＤＲＨ３のなかの少なくとも２種類のＣＤＲを含み得る重鎖可変ドメインをコードし得る。
【０４３６】
本発明によれば、前記核酸は、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３を１つずつ含み得る重鎖可変ドメインをコードし得る。
【０４３７】
本発明はまた、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する抗体変異体をコードする核酸を包含する。
【０４３８】
本発明によれば、前記核酸が、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有するＣＤＲをコードし得る。
【０４３９】
本発明によれば、前記核酸が、少なくとも２つのＣＤＲにおいて少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有するＣＤＲをコードし得る。
【０４４０】
本発明によれば、前記核酸が、３つのＣＤＲにおいて少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有するＣＤＲをコードし得る。
【０４４１】
本発明によれば、前記核酸が、少なくとも１つのＣＤＲにおいて少なくとも２つの保存的アミノ酸置換を有するＣＤＲをコードし得る。
【０４４２】
本発明によれば、前記核酸が、少なくとも２つのＣＤＲにおいて少なくとも２つの保存的アミノ酸置換を有するＣＤＲをコードし得る。
【０４４３】
本発明によれば、前記核酸が、３つのＣＤＲにおいて少なくとも２つの保存的アミノ酸置換を有するＣＤＲをコードし得る。
【０４４４】
本発明の別の側面は、配列番号３７、配列番号４１、配列番号４５、配列番号４９、配列番号５３、配列番号５７、配列番号６１および配列番号６５からなる群から選択される配列と少なくとも７０％（少なくとも８０％も含む）の配列同一性を有する軽鎖可変ドメインをコードする核酸に関連する。
【０４４５】
本発明のさらに別の側面は、配列番号３９、配列番号４３、配列番号４７、配列番号５１、配列番号５５、配列番号５９、配列番号６３および配列番号６７からなる群から選択される配列と少なくとも７０％（少なくとも８０％も含む）の配列同一性を有する重鎖可変ドメインをコードする核酸に関連する。
【０４４６】
本発明はさらに別の側面において、本明細書に記載する核酸を含むベクターに関連する。
【０４４７】
本発明によれば、そのベクターは発現ベクターであり得る。
【０４４８】
特定のホストにおいて挿入されたコード配列の転写および翻訳の制御のための要素を含むベクターは当技術分野で公知である。これらの要素は、例えば、エンハンサー、構成的および誘導性プロモーター、５’および３’非翻訳領域のような調節配列を含み得る。当業者によく知られている方法を用いて、そのような発現ベクターを構築することができる。これらの方法としては、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ組換えＤＮＡ技術、合成技術、およびｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝的組換え技術が挙げられる。
【０４４９】
本発明の別の側面は、本明細書に記載する核酸を含み得る、単離された細胞に関連する。
【０４５０】
単離された細胞は、それぞれ別々のベクター上または同じベクトルのいずれかに位置する軽鎖可変ドメインをコードする核酸および重鎖可変ドメインをコードする核酸を含み得る。単離された細胞は、それぞれ別々のベクター上または同じベクトルのいずれかに位置する軽鎖をコードする核酸および重鎖をコードする核酸を含み得る。
【０４５１】
本発明によれば、その細胞は、抗体またはその抗原結合断片を、発現、構築、および／または分泌する能力を有し得る。本発明は別の側面において、本明細書に記載する抗体を含み得る、および／または発現し得る細胞を提供する。
【０４５２】
本発明によれば、その細胞は、軽鎖可変ドメインをコードする核酸および重鎖可変ドメインをコードする核酸を含み得る。その細胞は、抗体またはその抗原結合断片を、発現、構築、および／または分泌する能力を有し得る。
【０４５３】
本発明の詳細をさらに概説する実施例を以下に提示する。
【０４５４】
［スクリーニングアッセイの典型的な実施形態］
本発明は別の側面において、卵巣癌細胞、腎癌細胞、中枢神経系の癌細胞、前立腺癌細胞、メラノーマ細胞、乳癌細胞、肺癌細胞または結腸癌細胞の増殖を阻害できる化合物を特定する方法を提供する。当該方法は、配列番号２の２０番目のアミノ酸から２５９番目のアミノ酸までの領域と少なくとも８０％の配列同一性を有する領域を含むポリペプチド、または前記ポリペプチドを発現する細胞を、候補の化合物とともに準備する工程と、前記ポリペプチドの活性または発現を測定する工程とを含み得る。ポリペプチドの活性または発現の低下により、適切な阻害剤化合物を積極的に特定し得る。
【０４５５】
本発明によれば、前記候補化合物は、前記ポリペプチドに特異的に結合し得る。
【０４５６】
本発明によれば、前記候補化合物は、例えば抗体またはその抗原結合断片であり得る。
【０４５７】
本発明によれば、前記候補化合物は、例えばｓｉＲＮＡまたはアンチセンスであり得る。
【０４５８】
本発明の範囲から逸脱することなく他の種類のアッセイも実施することができる。
【実施例】
【０４５９】
［実施例１］
本実施例は、破骨細胞およびヒト組織のＲＮＡサンプルにおけるＳｉｇｌｅｃ−１５の発現のパターンについて記載するものである。
【０４６０】
同定された最も有望な遺伝子の１つは、細胞表面のＩ型膜タンパク質、Ｓｉｇｌｅｃ−１５をコードするもので、ＡＢ−０３２６と命名した。この候補遺伝子は、最初にヒト破骨細胞ライブラリーから単離され、初代マウスの破骨細胞ならびにマウスＲＡＷ２６４．７細胞において、ＲＴ−ＰＣＲによって前駆細胞と比較したとき、同様のＲＡＮＫＬ依存アッププレギュレーションも確認された（Ｓｏｏｋｎａｎａｎら、２００７）。Ｓｉｇｌｅｃ−１５の組織発現プロファイルは、有効性の有無にもとづいて選択されたすべての標的に影響を及ぼした基準である、発現の特異性を決定するべく評価した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＮＣｓ）を６名のヒトのドナーから得て、少なくとも１４日間、破骨細胞分化培地（ＭＣＳ−ＦおよびＲＡＮＫＬ）で培養した。全ＲＮＡを、前駆体細胞（ＲＡＮＫＬ処置なし（図１、上の囲みの▲部分）から、または中間の時間間隔で（図１、上の囲みの−部分）単離した。各ＲＮＡサンプルの１μｇを、Ｔｈｅｒｍｏｓｃｒｉｐｔ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，ＯＮ）を製造元の指示に従って使用して、一本鎖ｃＤＮＡに変換し、２００倍に希釈し、Ｓｉｇｌｅｃ−１５転写物の断片を特異的に増幅するために前もって最適化されたＰＣＲ反応で使用した。ＰＣＲ反応に用いたオリゴヌクレオチドの配列は、配列番号１１７および１１８に示す。図１の上の囲み（分化している破骨細胞）に示すように、Ｓｉｇｌｅｃ−１５転写物は、前駆細胞において、分化している破骨細胞と比較してはるかに低いレベルで発現していた。さらに、分化が進むにつれて、Ｓｉｇｌｅｃ−１５転写物のレベルが増加した。比較すると、周知の破骨細胞マーカー遺伝子、カテプシンＫも（図１のＣＡＴＫ、分化している破骨細胞）破骨細胞の分化の間にアップレギュレートされていた。ＣＡＴＫメッセージを増幅するために使用したオリゴヌクレオチドは、配列番号１１９および１２０に表示する。対照として、ハウスキーピング遺伝子を特異的に増幅するプライマー、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ、図１の下の囲み、分化している破骨細胞を参照）を増幅するプライマーを用いて、同じサンプルでＰＣＲ反応を実施した。当該ＰＣＲ反応に使用されるＧＡＰＤＨ特異的プライマーの配列は配列番号１２１および１２２に示す。この後者の反応は、開始時に等しい量のＲＮＡが、各サンプル中に存在したことを示している。ヒト正常組織からの全ＲＮＡは、民間ベンダー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）から購入した。図１（上の囲み、正常組織）に示すように、Ｓｉｇｌｅｃ−１５は、ただ１つの組織（肺、レーン９）において弱く検出され、他のすべての組織サンプルからは全く検出されなかった。この事実は、分化破骨細胞にきわめて制限されている標的を識別する能力についての本出願人の発見した方法の強みを強調している。図１のレーン番号は以下の組織に対応している。即ち、レーン番号と組織との対応は次の通りです：１、副腎；２、乳房；３、空腸；４、気管；５、肝臓；６、胎盤；７、大動脈；８、脳；９、肺；１０、副腎皮質；１１、食道；１２、結腸；１３、卵巣；１４、腎臓；１５、前立腺；１６��胸腺；１７、骨格筋；１８、上大静脈；１９、胃；２０、小腸；２１、心臓；２２、卵管；２３、脾臓；２４、膀胱；２５、子宮頸部；２６、膵臓；２７、回腸；２８、十二指腸；２９、甲状腺；３０、睾丸；レーン１０と１１の間およびレーン２０と２１の間の空白レーンは、ネガティブコントロール（ｃＤＮＡなし）を表す。本出願人による試験の結果は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５は、分化している破骨細胞でアップレギュレートされ、実質的にすべての正常ヒト組織には存在しないことを明示しており、かつＳｉｇｌｅｃ−１５に対する抗体は、非標的組織で相互作用が有意に低下することを示唆している。
【０４６１】
追加の発現プロファイリングの研究を行って、癌の適応症におけるＳｉｇｌｅｃ−１５の発現を決定した。当業者であれば、Ｓｉｇｌｅｃ−１５遺伝子がこの種の適応で発現されたことが判明した場合、本発明の抗体が癌における有用性を有し得ることを認識するであろう。この研究に取り組むべく、ＰＣＲベースの方法を、９種の癌から単離された癌細胞株におけるＳｉｇｌｅｃ−１５転写物の発現パターンを決定するべく適合させた。細胞株が示す癌の種類は、白血病、中枢神経系の癌、乳癌、結腸癌、肺癌、悪性黒色腫、卵巣癌、前立腺癌、腎癌（表４を参照）である。これらのＲＮＡサンプルは、ＮＣＩ／ＮＩＨのＤＴＰ（Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｐｒｏｇｒａｍ）から入手した。ＮＣＩから得られた全ＲＮＡサンプルから増幅した同じＲＡＭＰ  ＲＮＡサンプルを使用して、５００ｎｇのＲＮＡを、上記のように一本鎖ｃＤＮＡに変換した。ｃＤＮＡ反応物を希釈して、反応物の１／２００が各ＰＣＲ実験に使用されたようにした。ＰＣＲは、ＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ製のＤＮＡ  Ｅｎｇｉｎｅ  Ｔｅｔｒａｄにおいて、Ｑｉａｇｅｎ（Ｍｉｓｓｉｓｓａｕｇａ，ＯＮ）製のＨｏｔ−Ｓｔａｒｔ  Ｔａｑポリメラーゼを用いて９６穴プレートで行った。反応混合物の半分を、１．２％アガロース／エチジウムブロミド染色ゲル上にロードし、増幅産物をＵＶ光で可視化した。等量のＲＮＡが各反応に用いられたことを確認するため、ＲＮＡのレベルをＧＡＰＤＨの発現でモニタリングした。
【０４６２】
【表６Ａ】
0005855569.tif 000008
【０４６３】
【表６Ｂ】
0005855569.tif 000009
【０４６４】
図２に示すように、Ｓｉｇｌｅｃ−１５は、いくつかの癌のタイプ、具体的には卵巣癌、腎癌、中枢神経系の癌、および前立腺癌において発現されることが判明した。実際、Ｓｉｇｌｅｃ−１５は、白血病を除き、これらのサンプルが示すほぼすべての癌の適応で検出された。この結果は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に対する抗体が癌疾患における用途を有し得ることを示唆している。
【０４６５】
実施例２（下記参照）に記載の抗体は、免疫ブロッティングによる細胞ライセート中のＳｉｇｌｅｃ−１５の検出のためにも使用できる。ヒトのＳｉｇｌｅｃ−１５のｃＤＮＡの全オープンリーディングフレームを、哺乳動物発現ベクターのＣＭＶプロモーターの下流にクローニングした（ｃＤＮＡ−Ｓｉｇｌｅｃ−１５）。この構築物、またはＳｉｇｌｅｃ−１５をコードしていない対照の空ベクターを、Ａ３７５メラノーマ細胞にトランスフェクトした。Ａ３７５メラノーマ細胞はＳｉｇｌｅｃ−１５タンパク質を低い内生レベルで発現する。安定したトランスフェクション体のプールを、Ｇ４１８を用いた選択により単離した。Ｓｉｇｌｅｃ−１５をトランスフェクトしたＡ３７５細胞（＋）および対照のＡ３７５細胞（−）からの細胞ライセートを、モノクローナル抗体Ｅ６を用いた免疫ブロッティングで解析した。図１３Ａに示すように、抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５をトランスフェクトした細胞では３５ｋＤａの単一バンドを検出したが、対照の細胞では検出しなかった。これは、一次アミノ酸配列（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ｏｒｇ／ｓｍｓ／ｐｒｏｔ＿ｍｗ．ｈｔｍｌ）に基づくＳｉｇｌｅｃ−１５の予測分子量（３５．６２ｋＤａ）と、極めて近い値となっている。ライセートを抗β−アクチン抗体を用いて免疫ブロッティングにより解析し、各レーンには全量が同程度のライセートがロードされたことも確認した。この結果は、免疫ブロッティングにより、抗体Ｅ６が、クローニングされたＳｉｇｌｅｃ−１５のｃＤＮＡをトランスフェクトした細胞からのライセートにおいて過剰発現されたＳｉｇｌｅｃ−１５を非常に特異的な形で認識することを示している。
【０４６６】
分化したヒトＰＢＭＮＣ（図１）におけるＳｉｇｌｅｃ−１５のｍＲＮＡレベルの増加が、Ｓｉｇｌｅｃ−１５タンパク質レベルの増加に対応することを確認するため、ＭＣＳＦ単独で処理したヒトＰＢＭＮＣ（非分化、Ｃ）、またはＭＣＳＦとＲＡＮＫＬで処理したヒトＰＢＭＮＣ（分化、Ｄ）からライセートを調製した（図１３Ｂ）。また、未処理のままのＲＡＷ  ２６４．７細胞（非分化、Ｃ）、またはＲＡＮＫＬで処理したＲＡＷ２６４．７細胞（分化、Ｄ）からもライセートを調製した（図１３Ｃ）。ＲＡＮＫＬによって破骨細胞の分化を誘導すると、ＲＡＷ２６４．７細胞がＳｉｇｌｅｃ−１５のｍＲＮＡレベルをアップレギュレートすることは以前に明らかにされている（Ｓｏｏｋｎａｎａｎ、２００７）。抗体Ｅ９を用いた免疫ブロッティングによるこれらのライセートを解析によって、ＲＴ−ＰＣＲの研究により予測されたように、破骨細胞への分化の際にＰＢＭＮＣおよびＲＡＷ  ２６４．７細胞の両方においてＳｉｇｌｅｃ−１５タンパク質レベルが劇的に上昇することを証明される（図１３Ｂおよび図１３Ｃ）。
【０４６７】
ＮＣＩ６０細胞パネルからのｍＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ解析（図２）により、中枢神経系由来の癌細胞株が特に高い割合でＳｉｇｌｅｃ−１５を発現することが示されたが、最近のマイクロアレイを用いた研究で、ＮＣＩ６０細胞パネルの一部ではないが、Ｓｉｇｌｅｃ−１５のｍＲＮＡを非常に高いレベルで発現する、Ｕ８７神経膠芽腫を含む癌細胞株の組がいくつか発見された（Ｓｈａｎｋａｖａｒａｍ、２００７）。したがって本発明者は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５タンパク質の内因性発現はＵ８７細胞で検出できるか否か試験した。確かに、Ｕ８７細胞ライセートの免疫ブロッティングによって、Ｓｉｇｌｅｃ−１５のサイズのタンパク質が検出される。このタンパク質を同定するために、Ｕ８７細胞に、Ｓｉｇｌｅｃ−１５を標的とする低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）のプール（ＳＩＧＬＥＣ１５  ｓｉＧＥＮＯＭＥ  ＳＭＡＲＴｐｏｏｌ、Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）をトランスフェクトし（＋）、若しくは同細胞に、対照の、標的なしのｓｉＲＮＡプールをとフランスフェクトし（−）、７２時間成長させて、その後細胞を溶解した。Ｓｉｇｌｅｃ−１５の特徴と一致して、標的のあるｓｉＲＮＡでの処理は、標的のない対照と比較して、このタンパク質の発現量の減少をもたらした（図１３Ｄ）。Ｓｉｇｌｅｃ−１５が癌細胞の細胞表面で見出されるか否かを調べるため、本発明者はｓｉＲＮＡで処理したＵ８７細胞をフローサイトメトリーによって解析した。生細胞を氷上に置き、Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体Ｅ９で染色（実施例２を参照）するか、もしくは抗体が細胞外の抗原とは結合できるが、細胞内の抗原とは結合できない条件の下で、アイソタイプの対照の抗体で染色した。標的のあるｓｉＲＮＡで処理すると、抗体Ｅ９の結合が減少したが、対照の抗体は結合に影響がでなかった（図１３Ｅ）。以上の結果は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５は癌細胞で発現し、Ｓｉｇｌｅｃ−１５は抗体の結合のために細胞表面にアクセス可能であることを証明している。
【０４６８】
［実施例２］
この実施例は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に結合するモノクローナル抗体のファミリーに関する詳細を提供する。
【０４６９】
モノクローナル抗体を生成するため、組換え体ヒトＳｉｇｌｅｃ−１５を、大規模過渡的トランスフェクション技術を用いて２９３Ｅ細胞で産生させた（Ｄｕｒｏｃｈｅｒら，２００２；Ｄｕｒｏｃｈｅｒ、２００４）。配列番号２の２０番目のアミノ酸から２５９番目のアミノ酸までの領域をコードするｃＤＮＡを、ＢａｍＨＩ制限部位（配列番号１２４）を組み込んだフォワードプライマーとＮｏｔＩ制限部位（配列番号１２５）を組み込んだリバースプライマーとを用いたＰＣＲによって、増幅した。得られたＰＣＲ産物をＢａｍＨＩおよびＮｏｔＩで消化して、断片を発現ベクターｐＹＤ５（配列番号１２６）に連結し、これを同様に同じ制限酵素で消化してｐＹＤ５−０３２６と呼ばれるベクターを作製した。ｐＹＤ５発現プラスミドは、融合タンパク質の生成を可能とするヒトＦｃドメインのコード配列とともに、培養培地中への融合タンパク質の分泌を可能とするＩｇＧ１シグナルペプチドをコードする配列を含む。各１ｍｌの細胞について、１μｇの発現ベクター（ｐＹＤ５−０３２６２０−２５９と呼ばれる）を、１ｍｌ当たり１．５−２．０百万細胞の密度まで懸濁液中で増殖させた２９３６Ｅ細胞にトランスフェクトした。使用されたトランスフェクション試薬は、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）であって、１：３のＤＮＡ：ＰＥＩ比でＤＮＡを含むもの（直鎖状、ＭＷ２５０００、型番２３９６６、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＰＡ）であった。細胞の増殖を５日間継続させ、その後、培養液を、組換え体Ｆｃ−０３２６２０−２５９融合タンパク質の精製のために回収した。そのタンパク質を、製造元（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃａｎａｄａ  Ｌｔｄ．，Ｏａｋｖｉｌｌｅ，ＯＮ）の指示通りにプロテインＡ−アガロースを用いて精製した。精製したＦｃ−０３２６２０−２５９（Ｆｃ−Ｓｉｇｌｅｃ−１５２０−２５９として示す）のサンプルを示す代表的なポリアクリルアミドゲルを図３に示す。
【０４７０】
Ｓｉｇｌｅｃ−１５に結合する抗体を、Ｂｉｏｓｉｔｅのファージディスプレイ技術を用いて生成した。これらの抗体を生成するための当該技術と方法の詳細な説明は、米国特許第６，０５７，０９８号明細書に記載されている。簡単に述べると、当該技術は、抗原結合フラグメント（Ｆａｂ）を表示するファージライブラリーのストリンジェントなパンニングを利用している。何回かパンニングを反復した後、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に高い親和性と特異性をもって結合した軽鎖および重鎖可変領域を含む組換え体Ｆａｂが豊富に存在するライブラリー（Ｏｍｎｉｃｌｏｎａｌと称する）を得た。このライブラリー（より正確にはＯｍｎｉｃｌｏｎａｌ  ＡＬ００２５Ｚ１と記号表示されたもの）から、９６の独立した組換え体モノクローナルＦａｂを大腸菌から調製し、Ｓｉｇｌｅｃ−１５との結合の有無について試験した。
【０４７１】
個々のモノクローナル抗体の相対的な結合度を測定するためには、組換え体ヒトＦｃ−Ｓｉｇｌｅｃ−１５２０−２５９を、大規模過渡的トランスフェクション技術を用いて２９３Ｅ細胞で産生させた（Ｄｕｒｏｃｈｅｒら，２００２；Ｄｕｒｏｃｈｅｒ、２００４）。モノクローナル調製物の９６穴マスタープレートは、各ウェルに異なる濃度の精製された抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５Ｆａｂが含まれていた。２つ目のストックマスタープレートは、Ｆａｂを最終濃度１０ｍｇ／ｍｌに希釈することによって調製し、これ以降のすべての希釈はＥＬＩＳＡ測定のために行った。モノクローナル調節物へのＦＣ−Ｓｉｇｌｅｃ−１５の結合を行うために、Ｆｃ−Ｓｉｇｌｅｃ−１５２０−２５９をＮＨＳ−ビオチン（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）でビオチン化し、ウェル当たり１０ｎｇをストレプトアビジン９６穴プレートに塗布した。それぞれ１ｎｇのＦａｂモノクローナル調製物を各ウェルに添加し、室温で３０分間インキュベートした。結合した抗体は、ＴＭＢ液基質（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃａｎａｄａ  Ｌｔｄ．，Ｏａｋｖｉｌｌｅ，ＯＮ）の存在下でＨＲＰコンジュゲートマウス抗κ軽鎖抗体で検出し、測定値読み出しは、マイクロタイタープレートリーダーにおいて４５０ｎｍで行った。図４Ａに示すように、合計５３個の（濃灰色で強調表示した）モノクローナル抗体は、このアッセイにおいて有意な結合を示した（＞０．２任意のＯＤ４５０単位）。抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に対して最も高い親和性での結合を増強するべく、意図的に１ウェル当たり１ｎｇに希釈した。抗体はＦｃ融合タンパク質を用いて生成されたので、当該モノクローナル抗体は、ビオチン化Ｆｃドメインのみを用いてＥＬＩＳＡにおいても試験した。図４Ｂに示すように、１７個の抗体が、Ｆｃ−Ｓｉｇｌｅｃ−１５２０−２５９のＦｃ部分と相互作用した（薄灰色で強調表示した）。太字で示された値（図４を参照）は、典型的な抗体２５Ａ１、２５Ｂ４、２５Ｂ８、２５Ｃ１、２５Ｄ８、２５Ｅ５、２５Ｅ６、２５Ｅ９を表す。これらのデータから、抗体の結合はウェルごとに異なっていることも明らかとなったが、これは抗体がＳｉｇｌｅｃ−１５に対して異なる親和性を有することを示している。
【０４７２】
本発明の抗体またはその抗原結合断片は、該抗原に特異的に効率的に結合できることを本出願人は指摘した。実際、１ｎｇの抗体が、５００ｎｇ未満の配列番号２に結合できることが判明した。
【０４７３】
Ｓｉｇｌｅｃファミリーに属する他の２種のメンバー、ＣＤ３３およびＳｉｇｌｅｃ−２への結合を試験することによって、これらのＳｉｇｌｅｃ−１５の抗体の特異性を評価した。ＣＤ３３（ＧｅｎｅＢａｎｋ（登録商標）登録番号ＮＭ＿００１７７２．３）は、ＳｉｇｌｅｃのＣＤ３３関連ファミリーの原型であって、ヒトタンパク質の中で、これらのＳｉｇｌｅｃはＳｉｇｌｅｃ−１５との最も高いアミノ酸配列の類似性を共有する（それらの２つのそれぞれのＮ末端Ｉｇ様ドメインの間には２９％程度の配列同一性がある）。Ｓｉｇｌｅｃ−２（ＧｅｎｅＢａｎｋ（登録商標）登録番号ＮＭ＿００１７７１．３）は、類似性は比較的小さい（２３％の配列同一性）が、Ｓｉｇｌｅｃ−１５と同様に、そして他のほとんどのＳｉｇｌｅｃとは異なり、α２−６結合したシアル酸コンジュゲートへの結合に対して顕著なために顕著な選好性を有している（Ａｎｇａｔａ  ２００７，Ｂｌｉｘｔ  ２００３）。Ｓｉｇｌｅｃ−２およびＣＤ３３のＶセットおよびＮ末端Ｃ２セットＩｇ様ドメインを有する配列（抗体産生のための抗原として用いられるＳｉｇｌｅｃ−１５の領域に対応する）を、ヒトＰＢＭＮＣのｃＤＮＡライブラリーからｐＹＤ５ベクターにクローニングした。これらの構築物をトランスフェクトした２９３−６Ｅ細胞の上清、および非トランスフェクト２９３−６Ｅ細胞の上清、もしくはｐＹＤ５−Ｓｉｇｌｅｃ−１５またはｐＹＤ５空ベクターでトランスフェクトをしたものの上清を、抗Ｆｃ抗体で免疫ブロッティングにより解析して、発現レベルを評価した（図１４Ａ）。これらの構築物をトランスフェクトしたことにより、予想されたサイズのＦｃ標識タンパク質の発現がもたらされた（図１４Ａ）。これらの上清のアリコートを真空ドットブロッティングによりＰＶＤＦ（登録商標）に吸着させ（Ｂｉｏ−ｄｏｔ装置、Ｂｉｏ−Ｒａｄ）、かつ代表的なＳｉｇｌｅｃ−１５モノクローナル抗体の結合を評価した（多くの抗体がＳｉｇｌｅｃ−１５の原型、非変性形態にのみ反応するためにウェスタンブロットを使用しなかった）。対照としての、抗Ｆｃおよび抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５オムニクローナル（ｏｍｎｉｃｌｏｎａｌ）抗体は、すべての４つのＦｃ標識タンパク質と反応した（図１４Ｂ）。それに対して、モノクローナル抗体Ｄ８およびＥ９は、Ｆｃ単独、Ｓｉｇｌｅｃ−２またはＣＤ３３に検出可能な結合を示さないが、このことはＤ８およびＥ９がＳｉｇｌｅｃ−１５に対して高度に特異的であることを示している。
【０４７４】
［実施例３］
この実施例では、Ｆａｂを完全ＩｇＧ２キメラモノクローナル抗体に変換するために使用される方法が開示されている。方法論のスキームは、図５に示されている。
【０４７５】
抗原の生物学的機能を検証するべくｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ試験を実施するために、Ｆａｂに含まれる軽鎖および重鎖可変領域を完全な抗体スカフォールドに移し、マウス−ヒトキメラＩｇＧ２ｓを生成した。ｉ）Ｆａｂ発現ベクターの上流の元の細菌のシグナルペプチド配列が哺乳動物のシグナルペプチドに置換され、かつｉｉ）のマウス抗体の軽鎖および重鎖の定常領域がヒト定常領域に置換されるように、免疫グロブリン軽鎖および重鎖の両方のための発現ベクターを構築した。この移動を実現するための方法は、当業者に周知の標準的な分子生物学的手法を使用している。この方法論の概要は本明細書に記載されている（図５参照）。
【０４７６】
軽鎖発現ベクター：ｐＴＴＶＨ８Ｇと呼ばれ（Ｄｕｒｏｃｈｅｒら，２００２）、２３９Ｅ過渡的トランスフェクションシステムで使用されるように設計された、既存の哺乳動物発現プラスミドを、マウス軽鎖可変領域に対応するように変更した。得られたマウス−ヒトキメラ軽鎖は、マウス可変領域、それに続くヒトκ定常ドメインを含んでいた。ヒトκ定常領域をコードするｃＤＮＡ配列は、プライマーＯＧＳ１７７３とＯＧＳ１７７４（それぞれ配列番号１２７および１２８）を用いてＰＣＲにより増幅した。ヒトκ定常領域のヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号１２９および１３０に示されている。得られた３２１塩基対のＰＣＲ産物は、ｐＴＴＶＨ８Ｇの、ヒトＶＥＧＦ  Ａのシグナルペプチド配列（ＮＭ＿００３３７６）のすぐ下流に連結した。このクローニングステップにより、マウス軽鎖可変領域をコードするｃＤＮＡの正確な配置を可能にする独特の制限エンドヌクレアーゼ部位も配置させた。ｐＴＴＶＫ１と呼ばれる最後の発現プラスミドの配列を配列番号１３１に示す。表２に開示された配列に基づいて、抗体２５Ａ１、２５Ｂ４、２５Ｂ８、２５Ｃ１、２５Ｄ８、２５Ｅ５、２５Ｅ６および２５Ｅ９（それぞれ配列番号３７、４１、４５、４９、５３、５７、６１、および６５）の軽鎖可変領域に特異的なＰＣＲプライマーを、その５’末端に、ＶＥＧＦシグナルペプチドの最後の２０塩基対と同一の配列が組み込まれるように設計した。これらのプライマーの配列は、２５Ａ１について配列番号１３２に、２５Ｂ４、２５Ｂ８、２５Ｃ１、２５Ｄ８、および２５Ｅ９について配列番号１３３に、２５Ｅ５について配列番号１３４に、２５Ｅ６について配列番号１３５に、それぞれ示されている。３’末端が同一であったので、すべての４つの軽鎖可変領域を増幅するために同じリバースプライマーを用いた。このプライマー（配列番号１３６）には、その３’末端に、ヒトκ定常ドメインの最初の２０塩基対と同一の配列が組み込まれている。ＰＣＲ断片および消化されたｐＴＴＶＫ１の両方を、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼの３’−５’エキソヌクレアーゼ活性で処理し、アニールすることによって結合された相補的な両端を得た。アニーリングの反応物はコンピテントな大腸菌に形質転換し、発現プラスミドを配列決定によって確認して、マウスの軽鎖可変領域が正しくｐＴＴＶＫ１発現ベクターに挿入されたことを確認した。この軽鎖発現プラスミドの構築に使用される方法は、元のＦａｂライブラリーに含まれているすべての抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体に適用できることを、当業者であれば容易に認識するはずである。
【０４７７】
重鎖発現ベクター：重鎖免疫グロブリンを生成するための発現ベクターは、軽鎖免疫グロブリンの産生のための上記のｐＴＴＶＫ１と同様の方法で設計されている。キメラ抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体の場合には、安定したブロッキング抗体の好ましい型であるＩｇＧ２のアイソタイプが必要であった。この目的のために、ヒトＩｇＧ２免疫グロブリンの定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を増幅し、既存のＩｇＧ１発現ベクターに連結した。詳細な方法は、本明細書に記載されている。ヒトＩｇＧＫシグナルペプチド配列とともに、ＩｇＧ１のヒトＦｃドメインのＣＨ３領域を含むプラスミドｐＹＤ１１（Ｄｕｒｏｃｈｅｒら，２００２）を、ヒト定常ＣＨ１領域をコードするｃＤＮＡ配列を連結することによって改変した。独特の制限エンドヌクレアーゼ部位を含むように設計されたＰＣＲプライマーＯＧＳ１７６９とＯＧＳ１７７０（配列番号１３７および１３８）を用いて、配列番号１３９および１４０に示す核酸配列および対応するアミノ酸配列を含む、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１領域を増幅した。ヒトＣＨ１の３０９塩基対の断片をＩｇＧＫシグナルペプチド配列のすぐ下流に連結した後、得られたプラスミドを制限酵素ＡｐａＩおよびＮｓｉＩで消化した。これらの酵素は、ＩｇＧ１の定常領域配列が、発現ベクターのヒトＩｇＧ２の配列に置換されることを可能にする、全く同じ位置において定常領域のＩｇＧ１およびＩｇＧ２のｃＤＮＡの両方を消化する。ヒトＩｇＧ２定常ドメインをコードするｃＤＮＡは、市販のものを発売元（Ｏｐｅｎ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）から入手した。ＩｇＧ２の免疫グロブリン重鎖を発現するために使用される最終的なプラスミドはｐＹＤ１９と記号表示するものとし、その配列は配列番号１４１に示す。選択された重鎖可変領域がこのベクターに連結されている場合、得られたプラスミドは、ヒト定常領域とともに完全なＩｇＧ２重鎖免疫グロブリンをコードしている。表２に開示された配列に基づいて、抗体２５Ａ１、２５Ｂ４、２５Ｂ８、２５Ｃ１、２５Ｄ８、２５Ｅ５、２５Ｅ６および２５Ｅ９（それぞれ配列番号３９、４３、４７、５１、５５、５９、６３、および６７）の重鎖可変領域に特異的なＰＣＲプライマーを、その５’末端に、ＩｇＧＫシグナルペプチドの最後の２０塩基対と同一の配列が組み込まれるように設計した。これらのプライマーの配列は、２５Ａ１について配列番号１４２に、２５Ｂ４および２５Ｄ８について配列番号１４３に、２５Ｂ８、２５Ｃ１、および２５Ｅ９について配列番号１４４に、２５Ｅ５について配列番号１４５に、２５Ｅ６について配列番号１４６に、それぞれ示されている。３’末端が同一であったので、すべての４つの重鎖可変領域を増幅するために同じリバースプライマーを用いた。このプライマー（配列番号１４７）には、その３’末端に、ヒトＣＨ１定常ドメインの最初の２０塩基対と同一の配列が組み込まれている。ＰＣＲ断片および消化されたｐＹＤ１９の両方を、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼの３’−５’エキソヌクレアーゼ活性で処理し、アニールすることによって結合された相補的な両端を得た。アニーリングの反応物はコンピテントな大腸菌に形質転換し、発現プラスミド���配列決定によって確認して、マウスの重鎖可変領域が正しくｐＹＤ１９発現ベクターに挿入されたことを確認した。この重鎖発現プラスミドの構築に使用される方法は、元のＦａｂライブラリーに含まれているすべての抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体に適用できることを、当業者であれば容易に認識するはずである。
【０４７８】
２９３Ｅ細胞におけるヒトＩｇＧ２ｓの発現：上述のように調製した、免疫グロブリンの軽鎖および重鎖をコードする発現ベクターは、過渡的トランスフェクションシステム（Ｄｕｒｏｃｈｅｒら，２００２）を用いて２９３Ｅ細胞で発現された。両方の免疫グロブリン鎖のアミノ末端に組み込まれたシグナルペプチドによって、成熟したＩｇＧ２の細胞を無血清培養液から回収した。軽鎖および重鎖発現ベクターを同時トランスフェクトするために使用される方法は、本明細書中に記載されている。各１ｍｌの細胞について、軽鎖および重鎖発現プラスミドの両方の組み合わせ１μｇを、１ｍｌ当たり１．５−２．０百万細胞の密度まで懸濁液中で増殖させた２９３６Ｅ細胞にトランスフェクトした。軽鎖プラスミドと重鎖プラスミドの比率は、組織培地において抗体の最大収率が達成できるように最適化したが、その比率は９：１（Ｌ：Ｈ）であることが判明した。使用されたトランスフェクション試薬は、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）であって、１：３のＤＮＡ：ＰＥＩ比でＤＮＡを含むもの（直鎖状、ＭＷ２５０００、型番２３９６６、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ，ＰＡ）であった。細胞の増殖を５日間継続させ、その後、培養液を、ＩｇＧ２キメラモノクローナル抗体の精製のために回収した。そのタンパク質を、製造元（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃａｎａｄａ  Ｌｔｄ．，Ｏａｋｖｉｌｌｅ，ＯＮ）の指示通りにプロテインＡ−アガロースを用いて精製した。
【０４７９】
選択されたモノクローナル抗体の相対的結合親和性をより正確に決定するために、Ｆａｂｎｏ濃度を漸次増加させて、ビオチン標識したＦｃ−Ｓｉｇｌｅｃ−１５２０−２５９とともにインキュベートした。１０ｎｇのビオチン標識したＦｃ−Ｓｉｇｌｅｃ−１５２０−２５９を、ストレプトアビジンマイクロタイタープレートに塗布し、図６に示すように、濃度を漸次増加させたＦａｂまたはキメラＩｇＧ２モノクローナル抗体２５Ｂ４、２５Ｂ８、２５Ｃ１、２５Ｄ８、２５Ｅ６、および２５Ｅ９を添加した。図６に示すように、２５Ｂ４、２５Ｂ８、２５Ｃ１、２５Ｄ８、２５Ｅ６、および２５Ｅ９キメラＩｇＧ２モノクローナル抗体の結合は、Ｆａｂｓと非常に類似していた。この結果から、マウスＦａｂからヒトＩｇＧ２の骨格へ可変ドメインを転置させることが、軽鎖および重鎖可変領域のＳｉｇｌｅｃ−１５結合を与える能力に、あまり大きな影響を及ぼさないことが判明した。
【０４８０】
［実施例４］
この実施例では、破骨細胞の分化を阻害するための抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体の使用が開示されている。
【０４８１】
ヒトＰＢＭＮＣを（ＡｌｌＣｅｌｌｓ、Ｅｍｏｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡ）５％ＣＯ２雰囲気中で３７℃で２４時間、適切な培地に入れた。細胞を１ｍｌ当たり１０００００細胞の細胞密度で９６穴プレートに播種し、３５ｎｇのＭ−ＣＳＦおよび３０ｎｇ／ｍｌのＲＡＮＫＬの存在下で、濃度を漸次増加させた（０．０１ｍｇ／ｍｌ−１００ｍｇ／ｍｌ）抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５  ＩｇＧ２キメラモノクローナル抗体で処理した。未分化前駆細胞をＭ−ＣＳＦのみで処理した対照ウェルは、非Ｓｉｇｌｅｃ−１５結合ＩｇＧ２で処理した。細胞を固定してＴＲＡＰ染色し、多核細胞をカウントし、撮影（倍率４０倍）した。図７に示すように、ｍＡｂｓ標的Ｓｉｇｌｅｃ−１５は、用量依存的にヒトの破骨細胞の分化を効果的に阻害する可能性がある。破骨細胞分化の阻害は、試験された典型的なＳｉｇｌｅｃ−１５抗体のすべてで程度の違いはあれ観察されたが、最も活性なモノクローナル抗体は、２５Ｂ８、２５Ｅ６、２５Ｅ９であった。対照のキメラＩｇＧ２で処理した細胞は阻害されなかった（図８の右下囲い、対照ＩｇＧ２参照）。この結果は、ＲＮＡ干渉によるＳｉｇｌｅｃ−１５発現のノックダウンがヒト破骨細胞分化の阻害を引き起こしたことを示した、Ｓｏｏｋｎａｎａｎ（Ｓｏｏｋｎａｎａｎら、２００７）に開示する実験結果と完全に一致している。
【０４８２】
分化した破骨細胞の生物学的機能は、骨を再吸収することであり、したがって、破骨細胞の活性は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５を標的とする抗体によっても阻害されるはずである。これを試験するため、ヒトＰＢＭＮＣを合成リン酸カルシウム基板ディスク（ＢＤ  ＢｉｏＣｏａｔ（登録商標）Ｏｓｔｅｏｌｏｇｉｃ（登録商標）ＭｕｌｔｉＴｅｓｔスライド）上に播種し、上記と同様の条件で培養した。前駆細胞を、対照アイソタイプＩｇＧ、または２５Ｄ８または２５Ｅ９抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体のいずれかの存在下で、Ｍ−ＣＳＦとＲＡＮＫＬで処理した。抗体の濃度は１ｍｇ／ｍｌまたは１０ｍｇ／ｍｌであった。一旦は完全成熟した破骨細胞は、対照の未処置ウェル中に存在した。細胞をディスクから掻き取り、残りの骨基質には、カルシウムミネラルを茶色に発色させる標準フォンコッサ染色を施した。図１２に示すように、未分化破骨細胞を含むウェル（左上の囲み、Ｍ−ＣＳＦ）は、表面に白い斑点（分解ピット）として表れる基質の分解の証拠を全く示さなかった。予想通り、ＲＡＮＫＬで処理した細胞は、顕著に分解の証拠を示しており、表面には多くのピットが含まれていた（左下の囲み、Ｍ−ＣＳＦ＋ＲＡＮＫＬ）。同様に、対照ＩｇＧで処理した破骨細胞も骨基質を分解することができ、これらの対照の抗体が非特異的に破骨細胞活性を阻害しなかったことが明らかになった。分化破骨細胞を抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体で処理した場合は、２５Ｅ９の候補は、このアッセイにおいて効果的に骨の分解を抑制した（図１２、右の囲み）。これに対して、２５Ｄ８抗体は、このアッセイにおいて分解を阻害しなかった（図１２、中央右の囲みを参照）。まとめると、これらの結果（図７および図１２）は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５に対する抗体が、破骨細胞の分化および骨の分解活性を阻害することを実証している。
【０４８３】
並列実験で、マウスＰＢＭＮＣを同様の方法で処理した。図８に示すように、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５キメラ抗体は、２５Ｂ８、２５Ｅ６、および２５Ｄ８で記号表示されるキメラｍＡｂｓに代表されるマウスの破骨細胞の分化を阻害する可能性がある。この結果により、ヒトのＳｉｇｌｅｃ−１５オルソログに対して生成されたモノクローナル抗体は、マウスのＳｉｇｌｅｃ−１５タンパク質に対しても同様に交差反応性であることが確認された。このことはＥＬＩＳＡを用いて実験的に検証された。マウスＳｉｇｌｅｃ−１５ｃＤＮＡの断片であって、２１番目のアミノ酸から２５６番目のアミノ酸までの領域に対応するものを、配列番号１５９および１６０に示す配列を含むオリゴヌクレオチドを用いて増幅した。２９３−６Ｅ細胞での発現のためのヒトのＳｉｇｌｅｃ−１５断片について説明したのと同様に、このＰＣＲ断片をｐＹＤ５発現ベクターに連結した。組換え体Ｆｃ−マウスＳｉｇｌｅｃ−１５を、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを用いて精製した。
【０４８４】
典型的な抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５モノクローナルＦａｂ（２５Ｃ８と記号表示されるもの）を、Ｆｃ−ヒト（ｈ）Ｓｉｇｌｅｃ−１５２０−２５９またはＦｃ−マウス（Ｍ）Ｓｉｇｌｅｃ−１５２１−２５６のいずれかとともにインキュベートした。この結果（図９を参照）から、
ヒトのＳｉｇｌｅｃ−１５に対して生成された抗体の結合活性はまた、マウスのＳｉｇｌｅｃ−１５オルソログとも交差反応することを示している。
【０４８５】
上記の結果は、破骨細胞におけるＳｉｇｌｅｃ−１５の重要性を明確に示している。破骨細胞前駆細胞においてＳｉｇｌｅｃ−１５が減衰すると、多核成熟破骨細胞を形成する能力が著しく損なわれた細胞が生ずる。したがって、阻害剤（特に治療用モノクローナル抗体）でＳｉｇｌｅｃ−１５を標的とすることは、急性転移性骨癌または慢性骨粗鬆症による骨の分解の直接の原因となる細胞をターゲティングする非常に選択的な方法であることは明らかであろう。
【０４８６】
［実施例５］
この実施例は、シアル酸（ＳＡ）コンジュゲートへのＳｉｇｌｅｃ−１５の結合をブロックする抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体の能力に関するものである。
【０４８７】
シアル酸糖タンパク質の形成には、適切な破骨細胞が必要である（Ｔａｋａｈａｔａら、２００７）。Ｓｉｇｌｅｃ−１５はシアル酸に結合するが、この結合はアミノ酸残基Ｒ１４３に依存している（Ａｎｇａｔａ，２００７）。Ｓｉｇｌｅｃ−１５抗体が破骨細胞形成を阻害するメカニズムの１つには、Ｒ１４３を包含するエピトープとの相互作用に因るその標的のシアル酸結合機能の阻害が含まれている可能性がある。この可能性を確かめるために、本発明者は、組換え体Ｎｅｕ５Ａｃａ２−６−ＧａｌＮＡｃ−ＰＡＡ−ビオチン（Ｇｌｙｃｏｔｅｃｈ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）の結合をブロックするＳｉｇｌｅｃ−１５の能力を調べるべくＥＬＩＳＡベースのアッセイを行った。Ｎｅｕ５Ａｃａ２−６−ＧａｌＮＡｃ−ＰＡＡ−ビオチンは、好ましいＳｉｇｌｅｃ−１５のシアル酸を含む結合の相手である（Ａｎｇａｔａ，２００７）。Ｆｃ−Ｓｉｇｌｅｃ−１５をプロテインＡ被覆したマイクロタイタープレート上に固定化し、次に別のシグレック−１５抗体を塗布した。インキュベーションと非結合抗体の除去の後、Ｎｅｕ５Ａｃａ２−６−ＧａｌＮＡｃ−ＰＡＡ−ビオチンを追加した。抗体がシアル酸結合部位をブロックしていない場合にのみ、このビオチン化プローブはシＳｉｇｌｅｃ−１５と複合体を形成しているはずである。ビオチン化プローブの存在は、標準的な方法によりストレプトアビジン−ＨＲＰを用いて検出した。図１５に示すように、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１５オムニクローナルおよび２５Ｄ８抗体は、非標的の対照の抗体と比較して、シアル酸の結合を阻害する。抗体Ｅ６も明確であるが、比較的目立たない程度の効果を有する。抗体Ｅ９はほとんど効果がなく、これはＥ９のエピトープがシアル酸結合部位と重複していないことを示している。対照の抗体を添加しても（図１５、ｃｔｌ  ＩｇＧ２を参照）、Ｓｉｇｌｅｃ−１５シアル酸部分の結合を防止できなかった。Ｆｃのみをプレートに塗布したとき、ＳＡを取り除いたときに結合が検出されなかったことから（図１５、ＳＡ無、Ｆｃ＋ＳＡ、およびＦｃのみ、の各場合参照）、この方法は、Ｓｉｇｌｅｃ−１５の存在に大きく依存していた。以上の結果から、Ｓｉｇｌｅｃ−１５モノクローナル抗体が、Ｒ１４３に近い相互作用に起因するとみられるが、Ｓｉｇｌｅｃ−１５のシアル酸結合機能を、程度の多少はあれ阻害し得ることが証明された。この特性は、破骨細胞形成に対するその影響において重要である可能性がある。
【０４８８】
［参考資料］
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【０４８９】
配列表
SEQ ID NO:（配列番号）1
ATGGAAAAGTCCATCTGGCTGCTGGCCTGCTTGGCGTGGGTTCTCCCGACAGGCTCATTTGTGAGAACTAAAATAGATACTACGGAGAACTTGCTCAACACAGAGGTGCACAGCTCGCCAGCGCAGCGCTGGTCCATGCAGGTGCCACCCGAGGTGAGCGCGGAGGCAGGCGACGCGGCAGTGCTGCCCTGCACCTTCACGCACCCGCACCGCCACTACGACGGGCCGCTGACGGCCATCTGGCGCGCGGGCGAGCCCTATGCGGGCCCGCAGGTGTTCCGCTGCGCTGCGGCGCGGGGCAGCGAGCTCTGCCAGACGGCGCTGAGCCTGCACGGCCGCTTCCGGCTGCTGGGCAACCCGCGCCGCAACGACCTCTCGCTGCGCGTCGAGCGCCTCGCCCTGGCTGACGACCGCCGCTACTTCTGCCGCGTCGAGTTCGCCGGCGACGTCCATGACCGCTACGAGAGCCGCCACGGCGTCCGGCTGCACGTGACAGCCGCGCCGCGGATCGTCAACATCTCGGTGCTGCCCAGTCCGGCTCACGCCTTCCGCGCGCTCTGCACTGCCGAAGGGGAGCCGCCGCCCGCCCTCGCCTGGTCCGGCCCGGCCCTGGGCAACAGCTTGGCAGCCGTGCGGAGCCCGCGTGAGGGTCACGGCCACCTAGTGACCGCCGAACTGCCCGCACTGACCCATGACGGCCGCTACACGTGTACGGCCGCCAACAGCCTGGGCCGCTCCGAGGCCAGCGTCTACCTGTTCCGCTTCCATGGCGCCAGCGGGGCCTCGACGGTCGCCCTCCTGCTCGGCGCTCTCGGCTTCAAGGCGCTGCTGCTGCTCGGGGTCCTGGCCGCCCGCGCTGCCCGCCGCCGCCCAGAGCATCTGGACACCCCGGACACCCCACCACGGTCCCAGGCCCAGGAGTCCAATTATGAAAATTTGAGCCAGATGAACCCCCGGAGCCCACCAGCCACCATGTGCTCACCGTGA
SEQ ID NO:2
MEKSIWLLACLAWVLPTGSFVRTKIDTTENLLNTEVHSSPAQRWSMQVPPEVSAEAGDAAVLPCTFTHPHRHYDGPLTAIWRAGEPYAGPQVFRCAAARGSELCQTALSLHGRFRLLGNPRRNDLSLRVERLALADDRRYFCRVEFAGDVHDRYESRHGVRLHVTAAPRIVNISVLPSPAHAFRALCTAEGEPPPALAWSGPALGNSLAAVRSPREGHGHLVTAELPALTHDGRYTCTAANSLGRSEASVYLFRFHGASGASTVALLLGALGFKALLLLGVLAARAARRRPEHLDTPDTPPRSQAQESNYENLSQMNPRSPPATMCSP
SEQ ID NO:3
ATGGAGGGGTCCCTCCAACTCCTGGCCTGCTTGGCCTGTGTGCTCCAGATGGGATCCCTTGTGAAAACTAGAAGAGACGCTTCGGGGGATCTGCTCAACACAGAGGCGCACAGTGCCCCGGCGCAGCGCTGGTCCATGCAGGTGCCCGCGGAGGTGAACGCGGAGGCTGGCGACGCGGCGGTGCTGCCCTGCACCTTCACGCACCCGCACCGCCACTACGACGGGCCGCTGACGGCCATCTGGCGCTCGGGCGAGCCGTACGCGGGCCCGCAGGTGTTCCGCTGCACCGCGGCGCCGGGCAGCGAGCTGTGCCAGACGGCGCTGAGCCTGCACGGCCGCTTCCGCCTGCTGGGCAACCCGCGCCGCAACGACCTGTCCCTGCGCGTCGAGCGCCTCGCCCTGGCGGACAGCGGCCGCTACTTCTGCCGCGTGGAGTTCACCGGCGACGCCCACGATCGCTATGAGAGTCGCCATGGGGTCCGTCTGCGCGTGACTGCAGCTGCGCCGCGGATCGTCAACATCTCGGTGCTGCCGGGCCCCGCGCACGCCTTCCGCGCGCTCTGCACCGCCGAGGGGGAGCCCCCGCCCGCCCTCGCCTGGTCGGGTCCCGCCCCAGGCAACAGCTCCGCTGCCCTGCAGGGCCAGGGTCACGGCTACCAGGTGACCGCCGAGTTGCCCGCGCTGACCCGCGACGGCCGCTACACGTGCACGGCGGCCAATAGCCTGGGCCGCGCCGAGGCCAGCGTCTACCTGTTCCGCTTCCACGGCGCCCCCGGAACCTCGACCCTAGCGCTCCTGCTGGGCGCGCTGGGCCTCAAGGCCTTGCTGCTGCTTGGCATTCTGGGAGCGCGTGCCACCCGACGCCGACTAGATCACCTGGTCCCCCAGGACACCCCTCCACGGTCTCAGGCTCAGGAGTCCAATTATGAAAATTTGAGCCAGATGAGTCCTCCAGGCCACCAGCTGCCACGTGTTTGCTGTGAGGAACTCCTCAGCCATCACCATCTAGTCATTCACCATGAGAAATAA
SEQ ID NO:4
MEGSLQLLACLACVLQMGSLVKTRRDASGDLLNTEAHSAPAQRWSMQVPAEVNAEAGDAAVLPCTFTHPHRHYDGPLTAIWRSGEPYAGPQVFRCTAAPGSELCQTALSLHGRFRLLGNPRRNDLSLRVERLALADSGRYFCRVEFTGDAHDRYESRHGVRLRVTAAAPRIVNISVLPGPAHAFRALCTAEGEPPPALAWSGPAPGNSSAALQGQGHGYQVTAELPALTRDGRYTCTAANSLGRAEASVYLFRFHGAPGTSTLALLLGALGLKALLLLGILGARATRRRLDHLVPQDTPPRSQAQESNYENLSQMSPPGHQLPRVCCEELLSHHHLVIHHEK
SEQ ID NO:5
GAAAATGTGCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATATCCTGCAGTGCCAGCTCAAGTGTAAGTTACATGTACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGATCCTCCCCCAAACCCTGGATTTATCGCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTAACCCACTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGGGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO:6
ENVLTQSPAIMSASPGEKVTISCSASSSVSYMYWYQQKPGSSPKPWIYRTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPLTFGAGTKLELKVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:7
GAGGTCCAGCTGCAACAATCTGGGACTGAGCTGGTGAGGCCTGGGTCCTCAGTGAAGATTTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGGTACTGGATGGACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATCGGAGAGATTGATCCTTCTGATAGTTATACTAACTACAATCAAAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGATAAATTCTCCAGAACAGCCTATATGGAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGATCGGGGGCCTACTCTAGTGACTATAGTTACGACGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
GCCTCAACGAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCGCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCGCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
SEQ ID NO:8
EVQLQQSGTELVRPGSSVKISCKASGYTFTRYWMDWVKQRPGQGLEWIGEIDPSDSYTNYNQKFKGKATLTVDKFSRTAYMELSSLTSEDSAVYYCARSGAYSSDYSYDGFAYWGQGTLVTVSA
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:9
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCATTCTCCAATCCAGTCACTCTTGGAACATCAGCTTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTACATAGTAATGGCATCACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO:10
DIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPYTFGGGTKLEIKVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:11
CAGGTCCAAGTGCAGCAGCCTGGGGCTGAAATTGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGACTGATTAATCCTACCAACGGTCGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACACTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGAGGGGGGGACGGGGACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCAGCCTCAACGAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCGCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCGCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
SEQ ID NO:12
QVQVQQPGAEIVRPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGLINPTNGRTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGDGDYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:13
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTACTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCTTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO:14
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSTKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGGGTKLEIKVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:15
GAGATCCAGCTGCAGCAGTCTGGAGTTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGACGCTGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACACATTTACTGACTATGACATGCACTGGGTGAAGCAGACACCTGTTCATGGCCTGGAATGGATTGGAACTATTGATCCTGAAACTGGTGGTACTGCCTACAATCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCGGACAGATCCTCCACCACAGCCTACATGGAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTACAACTTTCTACTATAGTCACTATAATTACGACGTGGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCTCAACGAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCGCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCGCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
SEQ ID NO:16
EIQLQQSGVELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYDMHWVKQTPVHGLEWIGTIDPETGGTAYNQKFKGKATLTADRSSTTAYMELSSLTSEDSAVYYCTTFYYSHYNYDVGFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:17
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCCCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCTTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO:18
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGGGTKLEIKVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:19
GAGATCCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGACGCTGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACACATTTACTGACTATGAAATGCACTGGGTGAAGCAGACACCTGTTCATGGCCTGGAATGGATTGGAGCTATTGATCCTGAAACTGGTGGTACTGCCTACAATCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGGAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTACAAGTTTCTACTATACTTACTATAATTACGACGTGGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCTCAACTGGGGCGTCTTATTACTATGCTATGGACCACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAGCCTCAACGAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCGCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCGCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
SEQ ID NO:20
EIQLQQSGAELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYEMHWVKQTPVHGLEWIGAIDPETGGTAYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCTSFYYTYYNYDVGFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:21
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCATTCTCCAATCCAGTCACTCTTGGAACATCAGCTTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTACATAGTAATGGCATCACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTAGCAGTGGGTCAGGAACTGATTTCACACTGAGAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTGCTCAAAATCTAGAACTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO:22
DIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSSSGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYCAQNLELPYTFGGGTKLEIKVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:23
CAGGTCCAAGTGCAGCAGCCTGGGGCTGAGCTTGTGAAGCCTGGGGCTTCGGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGACTGATTAATCCTAGCAACGCTCGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAATACCAAGGCCACACTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGAGGGGGGGACGGGGACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCAGCCTCAACGAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCGCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCGCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
SEQ ID NO:24
QVQVQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGLINPSNARTNYNEKFNTKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGDGDYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:25
CAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAACACTCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATGACCTGCAGTGCCAGCTCAAGTGTAAGTTACATGTACTGGTACCAGCAGAAGCCAAGATCCTCCCCCAAACCCTGGATTTATCGCACATCCAACCTGGTTTCTGGAGTCCCTGTACGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTAACCCACCCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAACGGGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO:26
QIVLTQSPTLMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMYWYQQKPRSSPKPWIYRTSNLVSGVPVRFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPPTFGAGTKLELKVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:27
GAAGTGAAGCTTGAGGAGTCTGGAGGTGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGATCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCAGGATTCGATTTTAGTAAAGACTGGATGAGTTGGGTCCGGCAGGCTCCAGGGAAAGGGCTAGAATGGATTGGAGAAATTAATCCAGATAGCAGTACGATAAACTATGCACCATCTCTTAAGGATAAATTCATCATCTCCAGAGAGAACGCCAAAAATACGCTGTACCTGCAAATGAGCAAAGTGAGATCTGAGGACACAGCCCTTTATTACTGTTCAAGACTAGAGGACTACGAAGACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCAACGAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCGCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCGCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
SEQ ID NO:28
EVKLEESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFDFSKDWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYAPSLKDKFIISRENAKNTLYLQMSKVRSEDTALYYCSRLEDYEDWYFDVWGAGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:29
AGTATTGTGATGACCCAGACTCCCAAATTCCTGCTTGTATCAGCAGGAGACAGGGTTACCATAACCTGCAAGGCCAGTCAGAGTGTGAGTAATGCTGTAGCTTGGTACCAACAGAAGCCAGGGCAGTCTCCTAAACTGCTGATATACTATACATCCAATCGCTACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATATGGGACGGATTTCACTTTCACCATCACCACTGTGCAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGGATTATACCTCTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAACGGGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO:30
SIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSNAVAWYQQKPGQSPKLLIYYTSNRYTGVPDRFTGSGYGTDFTFTITTVQAEDLAVYFCQQDYTSPWTFGGGTKLEIKVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:31
CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTGGCGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGTTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCAACACCTATAATATGTACTGGTTGAAACAGAGGCCTGGGCAAGGCCTTGAGTGGATTGGGGGGATTGATCCTAGCAATGGTGATACTAAAATCAATGAGAAGTTCAAGAACAAGGCCACACTGACTGTTGACAAATCCTCCAGTACAGCCTATATGCAACTCAGCGGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTACAAGCCATACGTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCTCAACGAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCGCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCGCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
SEQ ID NO:32
QVQLQQPGAELAKPGASVKLSCKASGYTFNTYNMYWLKQRPGQGLEWIGGIDPSNGDTKINEKFKNKATLTVDKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYYCTSHTYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:33
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTACTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCTTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAACGGGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO:34
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSTKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGGGTKLEIKVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:35
GAGATCCAGCTGCAGCAGTCTGGAGTTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGACGCTGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACACATTTACTGACTATGACATGCACTGGGTGAAGCAGACACCTGTTCATGGCCTGGAATGGATTGGAACTATTGATCCTGAAACTGGTGGTACTGCCTACAATCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCGGACAGATCCTCCACCACAGCCTACATGGAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTACAAGTTTCTACTATACTTACTCTAATTACGACGTGGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCAGCCTCAACTGGGGCGTCTTATTACTATGCTATGGACCACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAGCCTCAACGAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCGCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCGCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGATGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
SEQ ID NO:36
EIQLQQSGVELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYDMHWVKQTPVHGLEWIGTIDPETGGTAYNQKFKGKATLTADRSSTTAYMELSSLTSEDSAVYYCTSFYYTYSNYDVGFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:37
GAAAATGTGCTCACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATATCCTGCAGTGCCAGCTCAAGTGTAAGTTACATGTACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGATCCTCCCCCAAACCCTGGATTTATCGCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTAACCCACTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
SEQ ID NO:38
ENVLTQSPAIMSASPGEKVTISCSASSSVSYMYWYQQKPGSSPKPWIYRTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPLTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:39
GAGGTCCAGCTGCAACAATCTGGGACTGAGCTGGTGAGGCCTGGGTCCTCAGTGAAGATTTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGGTACTGGATGGACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATCGGAGAGATTGATCCTTCTGATAGTTATACTAACTACAATCAAAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGTAGATAAATTCTCCAGAACAGCCTATATGGAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGATCGGGGGCCTACTCTAGTGACTATAGTTACGACGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
SEQ ID NO:40
EVQLQQSGTELVRPGSSVKISCKASGYTFTRYWMDWVKQRPGQGLEWIGEIDPSDSYTNYNQKFKGKATLTVDKFSRTAYMELSSLTSEDSAVYYCARSGAYSSDYSYDGFAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:41
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCATTCTCCAATCCAGTCACTCTTGGAACATCAGCTTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTACATAGTAATGGCATCACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
SEQ ID NO:42
DIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPYTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:43
CAGGTCCAAGTGCAGCAGCCTGGGGCTGAAATTGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGACTGATTAATCCTACCAACGGTCGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGAGCAAGGCCACACTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGAGGGGGGGACGGGGACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
SEQ ID NO:44
QVQVQQPGAEIVRPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGLINPTNGRTNYNEKFKSKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGDGDYFDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO:45
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTACTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCTTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
SEQ ID NO:46
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSTKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:47
GAGATCCAGCTGCAGCAGTCTGGAGTTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGACGCTGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACACATTTACTGACTATGACATGCACTGGGTGAAGCAGACACCTGTTCATGGCCTGGAATGGATTGGAACTATTGATCCTGAAACTGGTGGTACTGCCTACAATCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCGGACAGATCCTCCACCACAGCCTACATGGAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTACAACTTTCTACTATAGTCACTATAATTACGACGTGGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
SEQ ID NO:48
EIQLQQSGVELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYDMHWVKQTPVHGLEWIGTIDPETGGTAYNQKFKGKATLTADRSSTTAYMELSSLTSEDSAVYYCTTFYYSHYNYDVGFAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:49
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCCCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCTTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
SEQ ID NO:50
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:51
GAGATCCAGCTGCAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGACGCTGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACACATTTACTGACTATGAAATGCACTGGGTGAAGCAGACACCTGTTCATGGCCTGGAATGGATTGGAGCTATTGATCCTGAAACTGGTGGTACTGCCTACAATCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGGAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTACAAGTTTCTACTATACTTACTATAATTACGACGTGGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
SEQ ID NO:52
EIQLQQSGAELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYEMHWVKQTPVHGLEWIGAIDPETGGTAYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCTSFYYTYYNYDVGFAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:53
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCATTCTCCAATCCAGTCACTCTTGGAACATCAGCTTCCATCTCCTGCAGGTCTAGTAAGAGTCTCCTACATAGTAATGGCATCACTTATTTGTATTGGTATCTGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATTTATCAGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTAGCAGTGGGTCAGGAACTGATTTCACACTGAGAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTGCTCAAAATCTAGAACTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
SEQ ID NO:54
DIVMTQAAFSNPVTLGTSASISCRSSKSLLHSNGITYLYWYLQKPGQSPQLLIYQMSNLASGVPDRFSSSGSGTDFTLRISRVEAEDVGVYYCAQNLELPYTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:55
CAGGTCCAAGTGCAGCAGCCTGGGGCTGAGCTTGTGAAGCCTGGGGCTTCGGTGAAGCTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGATTGGACTGATTAATCCTAGCAACGCTCGTACTAACTACAATGAGAAGTTCAATACCAAGGCCACACTGACTGTAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGAGGGGGGGACGGGGACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCA
SEQ ID NO:56
QVQVQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGLINPSNARTNYNEKFNTKATLTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGGDGDYFDYWGQGTTLTVSS
SEQ ID NO:57
CAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAACACTCATGTCTGCATCTCCAGGGGAGAAGGTCACCATGACCTGCAGTGCCAGCTCAAGTGTAAGTTACATGTACTGGTACCAGCAGAAGCCAAGATCCTCCCCCAAACCCTGGATTTATCGCACATCCAACCTGGTTTCTGGAGTCCCTGTACGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATCAGCAGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCACTTATTACTGCCAGCAGTGGAGTAGTAACCCACCCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
SEQ ID NO:58
QIVLTQSPTLMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMYWYQQKPRSSPKPWIYRTSNLVSGVPVRFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAATYYCQQWSSNPPTFGAGTKLELK
SEQ ID NO:59
GAAGTGAAGCTTGAGGAGTCTGGAGGTGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGATCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCAGGATTCGATTTTAGTAAAGACTGGATGAGTTGGGTCCGGCAGGCTCCAGGGAAAGGGCTAGAATGGATTGGAGAAATTAATCCAGATAGCAGTACGATAAACTATGCACCATCTCTTAAGGATAAATTCATCATCTCCAGAGAGAACGCCAAAAATACGCTGTACCTGCAAATGAGCAAAGTGAGATCTGAGGACACAGCCCTTTATTACTGTTCAAGACTAGAGGACTACGAAGACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO:60
EVKLEESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFDFSKDWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYAPSLKDKFIISRENAKNTLYLQMSKVRSEDTALYYCSRLEDYEDWYFDVWGAGTTVTVSS
SEQ ID NO:61
AGTATTGTGATGACCCAGACTCCCAAATTCCTGCTTGTATCAGCAGGAGACAGGGTTACCATAACCTGCAAGGCCAGTCAGAGTGTGAGTAATGCTGTAGCTTGGTACCAACAGAAGCCAGGGCAGTCTCCTAAACTGCTGATATACTATACATCCAATCGCTACACTGGAGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATATGGGACGGATTTCACTTTCACCATCACCACTGTGCAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTTCTGTCAGCAGGATTATACCTCTCCGTGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATCAAA
SEQ ID NO:62
SIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSNAVAWYQQKPGQSPKLLIYYTSNRYTGVPDRFTGSGYGTDFTFTITTVQAEDLAVYFCQQDYTSPWTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:63
CAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGGGGCTGAACTGGCGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAGTTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCAACACCTATAATATGTACTGGTTGAAACAGAGGCCTGGGCAAGGCCTTGAGTGGATTGGGGGGATTGATCCTAGCAATGGTGATACTAAAATCAATGAGAAGTTCAAGAACAAGGCCACACTGACTGTTGACAAATCCTCCAGTACAGCCTATATGCAACTCAGCGGCCTGACATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTACAAGCCATACGTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
SEQ ID NO:64
QVQLQQPGAELAKPGASVKLSCKASGYTFNTYNMYWLKQRPGQGLEWIGGIDPSNGDTKINEKFKNKATLTVDKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYYCTSHTYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:65
GATATTGTGATGACCCAGGCTGCACCCTCTGTACCTGTCACTCCTGGAGAGTCAGTATCCATCTCCTGCAGGTCTACTAAGAGTCTCCTGCATAGTAATGGCAACACTTACTTGTATTGGTTCCTGCAGAGGCCAGGCCAGTCTCCTCAGCTCCTGATATATCGGATGTCCAACCTTGCCTCAGGAGTCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCAGGAACTGCTTTCACACTGAGAATCAGTAGAGTGGAGGCTGAGGATGTGGGTGTTTATTACTGTATGCAACATCTAGAATATCCTTTCACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
SEQ ID NO:66
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSTKSLLHSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:67
GAGATCCAGCTGCAGCAGTCTGGAGTTGAGCTGGTGAGGCCTGGGGCTTCAGTGACGCTGTCCTGCAAGGCTTCGGGCTACACATTTACTGACTATGACATGCACTGGGTGAAGCAGACACCTGTTCATGGCCTGGAATGGATTGGAACTATTGATCCTGAAACTGGTGGTACTGCCTACAATCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACACTGACTGCGGACAGATCCTCCACCACAGCCTACATGGAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCCGTCTATTACTGTACAAGTTTCTACTATACTTACTCTAATTACGACGTGGGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCTGCA
SEQ ID NO:68
EIQLQQSGVELVRPGASVTLSCKASGYTFTDYDMHWVKQTPVHGLEWIGTIDPETGGTAYNQKFKGKATLTADRSSTTAYMELSSLTSEDSAVYYCTSFYYTYSNYDVGFAYWGQGTLVTVSA
SEQ ID NO:69
SASSSVSYMY
SEQ ID NO:70
RTSNLAS
SEQ ID NO:71
QQWSSNPLT 
SEQ ID NO:72
GYTFTRYWMD 
SEQ ID NO:73
EIDPSDSYTN 
SEQ ID NO:74
ARSGAYSSDYSYDGFAY 
SEQ ID NO:75
RSSKSLLHSNGITYLY 
SEQ ID NO:76
QMSNLAS
SEQ ID NO:77
MQHLEYPYT 
SEQ ID NO:78
GYTFTSYWMH 
SEQ ID NO:79
LINPTNGRTN 
SEQ ID NO:80
ARGGDGDYFDY 
SEQ ID NO:81
RSTKSLLHSNGNTYLY
SEQ ID NO:82
RMSNLAS
SEQ ID NO:83
MQHLEYPFT
SEQ ID NO:84
GYTFTDYDMH
SEQ ID NO:85
TIDPETGGTA
SEQ ID NO:86
TTFYYSHYNYDVGFAY
SEQ ID NO:87
RSSKSLLHSNGNTYLY 
SEQ ID NO:88
RMSNLAS 
SEQ ID NO:89
MQHLEYPFT 
SEQ ID NO:90
GYTFTDYEMH 
SEQ ID NO:91
AIDPETGGTA 
SEQ ID NO:92
TSFYYTYYNYDVGFAY 
SEQ ID NO:93
RSSKSLLHSNGITYLY 
SEQ ID NO:94
QMSNLAS 
SEQ ID NO:95
AQNLELPYT 
SEQ ID NO:96
GYTFTSYWMH 
SEQ ID NO:97
LINPSNARTN 
SEQ ID NO:98
ARGGDGDYFDY 
SEQ ID NO:99
SASSSVSYMY 
SEQ ID NO:100
RTSNLVS 
SEQ ID NO:101
QQWSSNPPT 
SEQ ID NO:102
GFDFSKDWMS 
SEQ ID NO:103
EINPDSSTIN 
SEQ ID NO:104
SRLEDYEDWYFDV 
SEQ ID NO:105
KASQSVSNAVA 
SEQ ID NO:106
YTSNRYT 
SEQ ID NO:107
QQDYTSPWT 
SEQ ID NO:108
GYTFNTYNMY 
SEQ ID NO:109
GIDPSNGDTK 
SEQ ID NO:110
TSHTY 
SEQ ID NO:111
RSTKSLLHSNGNTYLY 
SEQ ID NO:112
RMSNLAS 
SEQ ID NO:113
MQHLEYPFT 
SEQ ID NO:114
GYTFTDYDMH 
SEQ ID NO:115
TIDPETGGTA 
SEQ ID NO:116
TSFYYTYSNYDVGFAY 
SEQ ID NO:117
GTAAGCAAGCTTGCTCACGCCTTCCGCGCGCTC
SEQ ID NO:118
GTAAGCAGATCTCTGGCGCCATGGAAGCGGAACAG
SEQ ID NO:119
CACTGGGAGCTATGGAAGAAGAC
SEQ ID NO:120
CAAAAGTGCAAAGAAGGGAAGACA
SEQ ID NO:121
TGAAGGTCGGAGTCAACGGATTTGGT
SEQ ID NO:122
CATGTGGGCCATGAGGTCCACCAC
SEQ ID NO:123
VRTKIDTTENLLNTEVHSSPAQRWSMQVPPEVSAEAGDAAVLPCTFTHPHRHYDGPLTAIWRAGEPYAGPQVFRCAAARGSELCQTALSLHGRFRLLGNPRRNDLSLRVERLALADDRRYFCRVEFAGDVHDRYESRHGVRLHVTAAPRIVNISVLPSPAHAFRALCTAEGEPPPALAWSGPALGNSLAAVRSPREGHGHLVTAELPALTHDGRYTCTAANSLGRSEASVYLFRFHGASGAS
SEQ ID NO:124
GTAAGCGGATCCGTGAGAACTAAAATAGATACTA
SEQ ID NO:125:
GTAAGCGCGGCCGCGCTGGCGCCATGGAAGCGGAACAGGTA
SEQ ID NO:126
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TTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGC
SEQ ID NO:127
GTAAGCGCTAGCGCCTCAACGAAGGGCCCATCTGTCTTTCCCCTGGCCCC
SEQ ID NO:128
GTAAGCGAATTCACAAGATTTGGGCTCAACTTTCTTG
SEQ ID NO:129
GCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG
SEQ ID NO:130
AVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:131
CTTGAGCCGGCGGATGGTCGAGGTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATTACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAAGTTTAAACGGATCTCTAGCGAATTCATGAACTTTCTGCTGTCTTGGGTGCATTGGAGCCTTGCCTTGCTGCTCTACCTCCACCATGCCAAGTGGTCCCAGGCTTGAGACGGAGCTTACAGCGCTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAGGGTACCGCGGCCGCTTCGAATGAGATCCCCCGACCTCGACCTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTGGTCGAGATCCCTCGGAGATCTCTAGCTAGAGCCCCGCCGCCGGACGAACTAAACCTGACTACGGCATCTCTGCCCCTTCTTCGCGGGGCAGTGCATGTAATCCCTTCAGTTGGTTGGTACAACTTGCCAACTGGGCCCTGTTCCACATGTGACACGGGGGGGGACCAAACACAAAGGGGTTCTCTGACTGTAGTTGACATCCTTATAAATGGATGTGCACATTTGCCAACACTGAGTGGCTTTCATCCTGGAGCAGACTTTGCAGTCTGTGGACTGCAACACAACATTGCCTTTATGTGTAACTCTTGGCTGAAGCTCTTACACCAATGCTGGGGGACATGTACCTCCCAGGGGCCCAGGAAGACTACGGGAGGCTACACCAACGTCAATCAGAGGGGCCTGTGTAGCTACCGATAAGCGGACCCTCAAGAGGGCATTAGCAATAGTGTTTATAAGGCCCCCTTGTTAACCCTAAACGGGTAGCATATGCTTCCCGGGTAGTAGTATATACTATCCAGACTAACCCTAATTCAATAGCATATGTTACCCAACGGGAAGCATATGCTATCGAATTAGGGTTAGTAAAAGGGTCCTAAGGAACAGCGATATCTCCCACCCCATGAGCTGTCACGGTTTTATTTACATGGGGTCAGGATTCCACGAGGGTAGTGAACCATTTTAGTCACAAGGGCAGTGGCTGAAGATCAAGGAGCGGGCAGTGAACTCTCCTGAATCTTCGCCTGCTTCTTCATTCTCCTTCGTTTAGCTAATAGAATAACTGCTGAGTTGTGAACAGTAAGGTGTATGTGAGGTGCTCGAAAACAAGGTTTCAGGTGACGCCCCCAGAATAAAATTTGGACGGGGGGTTCAGTGGTGGCATTGTGCTATGACACCAATATAACCCTCACAAACCCCTTGGGCAATAAATACTAGTGTAGGAATGAAACATTCTGAATATCTTTAACAATAGAAATCCATGGGGTGGGGACAAGCCGTAAAGACTGGATGTCCATCTCACACGAATTTATGGCTATGGGCAACACATAATCCTAGTGCAATATGATACTGGGGTTATTAAGATGTGTCCCAGGCAGGGACCAAGACAGGTGAACCATGTTGTTACACTCTATTTGTAACAAGGGGAAAGAGAGTGGACGCCGACAGCAGCGGACTCCACTGGTTGTCTCTAACACCCCCGAAAATTAAACGGGGCTCCACGCCAATGGGGCCCATAAACAAAGACAAGTGGCCACTCTTTTTTTTGAAATTGTGGAGTGGGGGCACGCGTCAGCCCCCACACGCCGCCCTGCGGTTTTGGACTGTAAAATAAGGGTGTAATAACTTGGCTGATTGTAACCCCGCTAACCACTGCGGTCAAACCACTTGCCCACAAAACCACTAATGGCACCCCGGGGAATACCTGCATAAGTAGGTGGGCGGGCCAAGATAGGGGCGCGATTGCTGCGATCTGGAGGACAAATTACACACACTTGCGCCTGAGCGCCAAGCACAGGGTTGTTGGTCCTCATATTCACGAGGTCGCTGAGAGCACGGTGGGCTAATGTTGCCATGGGTAGCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATGCTATCCTAATAGAGATTAGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATGCTATCCTCACGATGATAAGCTGTCAAACATGAGAATTAATTCTTGAAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTCTAGCTAGAGGTCGACCAATTCTCATGTTTGACAGCTTATCATCGCAGATCCGGGCAACGTTGTTGCATTGCTGCAGGCGCAGAACTGGTAGGTATGGCAGATCTATACATTGAATCAATATTGGCAATTAGCCATATTAGTCATTGGTTATATAGCATAAATCAATATTGGCTATTGGCCATTGCATACGTTGTATCTATATCATAATATGTACATTTATATTGGCTCATGTCCAATATGACCGCCATGTTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTCCGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTACGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACACCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAATAACCCCGCCCCGTTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCCTCACTCTCTTCCGCATCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGCTCGCGGTTGAGGACAAACTCTTCGCGGTCTTTCCAGTACTCTTGGATCGGAAACCCGTCGGCCTCCGAACGGTACTCCGCCACCGAGGGACCTGAGCGAGTCCGCATCGACCGGATCGGAAAACCTCTCGAGAAAGGCGTCTAACCAGTCACAGTCGCAAGGTAGGCTGAGCACCGTGGCGGGCGGCAGCGGGTGGCGGTCGGGGTTGTTTCTGGCGGAGGTGCTGCTGATGATGTAATTAAAGTAGGCGGT
SEQ ID NO:132
ATGCCAAGTGGTCCCAGGCTGAAAATGTGCTCACCCAGTCTCC
SEQ ID NO:133
ATGCCAAGTGGTCCCAGGCTGATATTGTGATGACCCAGGCTGC
SEQ ID NO:134
ATGCCAAGTGGTCCCAGGCTCAAATTGTTCTCACCCAGTCTCC
SEQ ID NO:135
ATGCCAAGTGGTCCCAGGCTAGTATTGTGATGACCCAGACTCC
SEQ ID NO:136
GGGAAGATGAAGACAGATGGTGCAGCCACAGC
SEQ ID NO:137
GTAAGCGCTAGCGCCTCAACGAAGGGCCCATCTGTCTTTCCCCTGGCCCC
SEQ ID NO:138
GTAAGCGAATTCACAAGATTTGGGCTCAACTTTCTTG
SEQ ID NO:139
GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCAGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGT
SEQ ID NO:140
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
SEQ ID NO:141
CTTGAGCCGGCGGATGGTCGAGGTGAGGTGTGGCAGGCTTGAGATCCAGCTGTTGGGGTGAGTACTCCCTCTCAAAAGCGGGCATTACTTCTGCGCTAAGATTGTCAGTTTCCAAAAACGAGGAGGATTTGATATTCACCTGGCCCGATCTGGCCATACACTTGAGTGACAATGACATCCACTTTGCCTTTCTCTCCACAGGTGTCCACTCCCAGGTCCAAGTTTGCCGCCACCATGGAGACAGACACACTCCTGCTATGGGTACTGCTGCTCTGGGTTCCAGGTTCCACTGGCGGAGACGGAGCTTACGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCTCCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCCGGGAAATGATCCCCCGACCTCGACCTCTGGCTAATAAAGGAAATTTATTTTCATTGCAATAGTGTGTTGGAATTTTTTGTGTCTCTCACTCGGAAGGACATATGGGAGGGCAAATCATTTGGTCGAGATCCCTCGGAGATCTCTAGCTAGAGCCCCGCCGCCGGACGAACTAAACCTGACTACGGCATCTCTGCCCCTTCTTCGCGGGGCAGTGCATGTAATCCCTTCAGTTGGTTGGTACAACTTGCCAACTGAACCCTAAACGGGTAGCATATGCTTCCCGGGTAGTAGTATATACTATCCAGACTAACCCTAATTCAATAGCATATGTTACCCAACGGGAAGCATATGCTATCGAATTAGGGTTAGTAAAAGGGTCCTAAGGAACAGCGATGTAGGTGGGCGGGCCAAGATAGGGGCGCGATTGCTGCGATCTGGAGGACAAATTACACACACTTGCGCCTGAGCGCCAAGCACAGGGTTGTTGGTCCTCATATTCACGAGGTCGCTGAGAGCACGGTGGGCTAATGTTGCCATGGGTAGCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATGCTATCCTAATAGAGATTAGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATATACTACCCAAATATCTGGATAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATTTATATCTGGGTAGCATAGGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGCATATGCTATCCTAATCTATATCTGGGTAGTATATGCTATCCTAATCTGTATCCGGGTAGCATATGCTATCCTCACGATGATAAGCTGTCAAACATGAGAATTAATTCTTGAAGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTGTTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGCAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGTACATTTATATTGGCTCATGTCCAATATGACCGCCATGTTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTCCGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTACGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACACCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAATAACCCCGCCCCGTTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAGATCCTCACTCTCTTCCGCATCGCTGTCTGCGAGGGCCAGCTGTTGGGCTCGCGGTTGAGGACAAACTCTTCGCGGTCTTTCCAGTACTCTTGGATCGGAAACCCGTCGGCCTCCGAACGGTACTCCGCCACCGAGGGACCTGAGCGAGTCCGCATCGACCGGATCGGAAAACCTCTCGAGAAAGGCGTCTAACCAGTCACAGTCGCAAGGTAGGCTGAGCACCGTGGCGGGCGGCAGCGGGTGGCGGTCGGGGTTGTTTCTGGCGGAGGTGCTGCTGATGATGTAATTAAAGTAGGCGGT
SEQ ID NO:142
GGGTTCCAGGTTCCACTGGCGAGGTCCAGCTGCAACAATCTGG
SEQ ID NO:143
GGGTTCCAGGTTCCACTGGCCAGGTCCAAGTGCAGCAGCCTGG
SEQ ID NO:144
GGGTTCCAGGTTCCACTGGCGAGATCCAGCTGCAGCAGTCTGG
SEQ ID NO:145
GGGTTCCAGGTTCCACTGGCGAAGTGAAGCTTGAGGAGTCTGG
SEQ ID NO:146
GGGTTCCAGGTTCCACTGGCCAGGTCCAACTGCAGCAGCCTGG
SEQ ID NO:147
GGGGCCAGGGGAAAGACAGATGGGCCCTTCGTTGAGGC
SEQ ID NO.:148
RSX1aX2aSLLHSNGX3aTYLY 
X1aは中性親水性アミノ酸；
X3aは疎水性アミノ酸またはアスパラギン；
X2aはリジンまたはグルタミン酸。
SEQ ID NO.:149        
X1bMSNLAS 
X1bは塩基性アミノ酸。
SEQ ID NO.:150
RX1cSNLXｘS
X1cはメチオニンまたはスレオニン；
X2cは疎水性アミノ酸。
SEQ ID NO.:151
X1dQX2dLEX3dPX4dT
X1dは疎水性アミノ酸；
X2dは塩基性アミノ酸；
X3dはチロシンまたはロイシン；および
X4dは芳香族アミノ酸。
SEQ ID NO.:152
QQWSSNPX1eT 
X1eはプロリンまたはロイシン。
SEQ ID NO.:153
GYTFX1fX2fYX3fMX 
X1fはスレオニンまたはアスパラギン；
X2fはスレオニン、アルギニン、セリンまたはアスパラギン酸；
X3fはトリプトファン、アスパラギン、アスパラギン酸またはグルタミン酸；および
X4fはチロシン、ヒスチジン、アスパラギン酸。
SEQ ID NO.:154
GYTFTDYX5fMH 
X5fは酸性アミノ酸。
SEQ ID NO.:155
LINPX1gNX2gRX3gN
X1g中性疎水性アミノ酸；
X2gアラニンまたはグリシン；および
X3gプロリンまたはスレオニン。
SEQ ID NO.:156
X1hIDPETGGTA 
X1hはアラニンまたはスレオニン。
SEQ ID NO.:157
EIX1iPX2iX3iSX4iX5iN 
X1iはアスパラギン酸またはアスパラギン；
X2iはアスパラギン酸またはセリン；
X3iはアスパラギン酸またはセリン；
X4iはチロシンまたはスレオニン；および
X5iはスレオニンまたはイソロイシン。
SEQ ID NO.:158
TX1jFYYX2jX3jX4jNYDVGFAY
X1jは中性親水性アミノ酸；
X2jは中性親水性アミノ酸；
X3jはチロシンまたはヒスチジン；
X4jはチロシンまたはセリン。
SEQ ID NO.:159
GTAAGCGAATTCATGGTGAAAACTAGAAGAGACGC
SEQ ID NO.:160
GTAAGCAAGCTTTTAGCCGTGGAAGCGGAACAGG
SEQ ID NO.:161 （２５Ｂ０２  可変軽鎖ＤＮＡ）
AACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGTCGAGCAAGTGAGAATATTTACAGTTATTTAGCATGGTATCAACAGAAGCAGGGAAAATCTCCTCAGCTCCTGGTCTATAATGCAAAAACCTTACCAGAAGGTGTGTCAGTAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACACAGTTTTCTCTGAAGATCAACAACCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAGTTATCACTGTCAACATCATTATGGTGTTCCTCTTACGTTCGGTTCTGGGACCAAGCTGGAGTTGAAA
SEQ ID NO.:162 （２５Ｂ０２  可変軽鎖アミノ酸）
NIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLPEGVSVRFSGSGSGTQFSLKINNLQPEDFGSYHCQHHYGVPLTFGSGTKLELK
SEQ ID NO.:163 （２５Ｂ０２  可変重鎖ＤＮＡ）
CAGGTGAAGCTTCAGCAGTCCGGGGCTGAGCTGGCAAGACCTGGGGCTTCAGTGAAGTTTTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACTAGGAACTGGATACAGTGGGTAAAACAGAGGCCTGGACAGGGTCTGGAATGGATTGGGGCTATTTATCCTGGAAATGGTGATAGTAGGTATACTCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGCAGATAAATCCTCGAACACAGCCTACATGCAACTCAGCGGTTTGGCATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGATTGGCTGGTAACTACGCTTACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCGCTCTCACAGTCTCCTCA
SEQ ID NO.:164 （２５Ｂ０２  可変重鎖アミノ酸）
QVKLQQSGAELARPGASVKFSCKASGYTFTRNWIQWVKQRPGQGLEWIGAIYPGNGDSRYTQKFKGKATLTADKSSNTAYMQLSGLASEDSAVYYCARLAGNYAYYFDYWGQGTALTVSS
SEQ ID NO.:165 （２５Ｄ１１  可変軽鎖ＤＮＡ）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGTCGAGCAAGTGGGAATATTCACAATTATTTAGCATGGTATCAACAGAAGCAGGGAAAATCTCCTCAGCTCCTGGTCTATAATGCAAAAACCTTACCAGAAGGTGTGTCAGTAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACACAGTTTTCTCTGAAGATCAACAACCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAGTTATCACTGTCAACATCATTATGGTGTTCCTCTTACGTTCGGTTCTGGGACCAAGCTGGAGTTGAAA
SEQ ID NO.:166 （２５Ｄ１１  可変軽鎖アミノ酸）
DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLPEGVSVRFSGSGSGTQFSLKINNLQPEDFGSYHCQHHYGVPLTFGSGTKLELK
SEQ ID NO.:167 （２５Ｄ１１  可変重鎖ＤＮＡ）
CAGGTGAAGCTTCAGCAGTCCGGGGCTGAGCTGGCAAGACCTGGGGCTTCAGTGAAGTTTTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTCACTAGGAACTGGATACAGTGGGTAAAACAGAGGCCTGGACAGGGTCTGGAATGGATTGGGGCTATTTATCCTGGAAATGGTGATAGTAGGTATACTCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGCAGATAAATCCTCGAACACAGCCTACATGCAACTCAGCGGTTTGGCATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGATTGGCTGGTAACTACGCTTACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCGCTCTCACAGTCTCCTCA
SEQ ID NO.:168 （２５Ｄ１１  可変重鎖アミノ酸）
QVKLQQSGAELARPGASVKFSCKASGYTFTRNWIQWVKQRPGQGLEWIGAIYPGNGDSRYTQKFKGKATLTADKSSNTAYMQLSGLASEDSAVYYCARLAGNYAYYFDYWGQGTALTVSS
SEQ ID NO.:169 （２５Ｅ１０  可変軽鎖ＤＮＡ）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGCCTCCCTATCTGCATCTGTGGGAGAAACTGTCACCATCACATGTCGAGCAAGTGGGAATATTCACAATTATTTAGCATGGTATCAGCAGAAACAGGGAAAATCTCCTCAGCTCCTGGTCTATAATGCAAAAACCCTAGCAGATGGTGTGCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGAACACAATATTCTCTCAAGATCAACAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGGGAGTTATTACTGTCAACATCATTACGGTGCTCCTCTTACGTTCGGTGCTGGGACCAAGGTGGAGCTGAAA
SEQ ID NO.:170 （２５Ｅ１０  可変軽鎖アミノ酸）
DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASGNIHNYLAWYQQKQGKSPQLLVYNAKTLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQPEDFGSYYCQHHYGAPLTFGAGTKVELK
SEQ ID NO.:171 （２５Ｅ１０  可変重鎖ＤＮＡ）
GATGTGCAGCTGCAACAATCTGGGGCTGAGCTGGCAAGACCTGGGGCTTCAGTGAAGTTTTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACTAGGAACTGGATACAGTGGGTTAAACAGAGGCCTGGACAGGGTCTGGAATGGATTGGGGCTGTTTATCCTGGAAATGGTGATAGTAGGTATACTCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGCAGATAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTCAACAGTTTGTCATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGCGCAAGATTGGCTGGTAACTACGCTTACTACTTTGACTACTGGGGCCAAGGCACCGCTCTCACAGTCTCCTCA
SEQ ID NO.:172 （２５Ｅ１０  可変重鎖アミノ酸）
DVQLQQSGAELARPGASVKFSCKASGYTFTRNWIQWVKQRPGQGLEWIGAVYPGNGDSRYTQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLNSLSSEDSAVYYCARLAGNYAYYFDYWGQGTALTVSS
SEQ ID NO.:173 
RASENIYSYLA
SEQ ID NO.:174
NAKTLPE
SEQ ID NO.:175
QHHYGVPLT
SEQ ID NO.:176
GYTFTRNWIQ
SEQ ID NO.:177
AIYPGNGDSR
SEQ ID NO.:178
ARLAGNYAYYFDY
SEQ ID NO.:179
RASGNIHNYLA
SEQ ID NO.:180
NAKTLPE
SEQ ID NO.:181
QHHYGVPLT
SEQ ID NO.:182
GYTFTRNWIQ
SEQ ID NO.:183
AIYPGNGDSR
SEQ ID NO.:184
ARLAGNYAYYFDY
SEQ ID NO.:185
RASGNIHNYLA
SEQ ID NO.:186
NAKTLAD
SEQ ID NO.:187
QHHYGAPLT
SEQ ID NO.:188
GYTFTRNWIQ
SEQ ID NO.:189
AVYPGNGDSR
SEQ ID NO.:190
ARLAGNYAYYFDY
【０４９０】
【表７】
0005855569.tif 000010
【０４９１】
【表８】
0005855569.tif 000011
【０４９２】
【表９】
0005855569.tif 000012
【０４９３】
【表１０】
0005855569.tif 000013
【図１２】
0005855569.tif 000014
【図１】
0005855569.tif 000015
【図２】
0005855569.tif 000016
【図３】
0005855569.tif 000017
【図４】
0005855569.tif 000018
【図５】
0005855569.tif 000019
【図６】
0005855569.tif 000020
【図７】
0005855569.tif 000021
【図８】
0005855569.tif 000022
【図９】
0005855569.tif 000023
【図１０Ａ】
0005855569.tif 000024
【図１０Ｂ】
0005855569.tif 000025
【図１０Ｃ】
0005855569.tif 000026
【図１１Ａ】
0005855569.tif 000027
【図１１Ｂ】
0005855569.tif 000028
【図１１Ｃ】
0005855569.tif 000029
【図１３Ａ−Ｃ】
0005855569.tif 000030
【図１３Ｄ−Ｅ】
0005855569.tif 000031
【図１４】
0005855569.tif 000032
【図１５】
0005855569.tif 000033
【配列表】
0005855569000001.app