(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Iの化合物：
【化１】
0005855566.tif 000058
［式中、
Tは、C（O）NH2、COOH又はCOOR1であり、
式中、R1は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であり、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2からなる群の1つ以上の基から選択され、かつ
該置換されていてもよいC1−20アルキル基において、1から10個の骨格炭素（但し、
末端の骨格炭素を除く）は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよく；
Zは、F、Cl、Br又はOSO2R2であり、
式中、R2は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であり、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2からなる群の1つ以上の基から選択され、かつ
該置換されていてもよいC1−20アルキル基において、1から10個の骨格炭素（但し、末端の骨格炭素を除く）は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよく；
Aは、H、F、Cl、Br、OH、CN、OR3、NO2、SO2R3、SR3及びCOR3からなる群から選択され、
式中、R3は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であり、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2からなる群の1つ以上の基から選択され、かつ
該置換されていてもよいC1−20アルキル基において、1から10個の骨格炭素（但し、末端の骨格炭素を除く）は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよく；
Dは、H、F、Cl、Br、OH、CN、OR4、NO2、SO2R4、SR4及びCOR4からなる群から選択されるが、但しA及びDはともにHではなく、
式中、R4は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であり、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2からなる群の1つ以上の基から選択され、かつ
該置換されていてもよいC1−20アルキル基において、1から10個の骨格炭素（但し、末端の骨格炭素を除く）は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよく；
A及びDは一緒になって、オキソ基を形成してもよく；
Xは、NH2、NHR5、NHC（NH）NH2、NHC（NH）NHR5、NR5R6、NHC（NR6）NR5及びNHC（NH）N（R5）R6からなる群から選択され、
式中、R5及びR6は、独立して、C6H5、CH2C6H5又はC1−8アルキル基であり；
Eは、NH2、NHC（O）CH3、OR7、NHR7及びN（R7）（R8）からなる群から選択され、
式中、R7及びR8は、独立して、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であり、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2からなる群の1つ以上の基から選択され、かつ
該置換されていてもよいC1−20アルキル基において、1から10個の骨格炭素（但し、末端の骨格炭素を除く）は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよく；
Qは、CH2OH、CH2R9、CH（R9）（R10）、C（R9）（R10）（R11）、
【化２】
0005855566.tif 000059
からなる群から選択され、
式中、R9、R10及びR11は、独立して、CH3又はCH2CH3であり、かつ
J及びGのそれぞれは、独立して、H、OH、OAc、OC（O）CH3、F、Cl、Br、NO2、CN、OR12、SO2R12、COR12及びSR12からなる群から選択され、
式中、R12は、CH3、CH2CH3又はCH2CH2CH3であり、かつ
Mは、H、OH、OAc、OC（O）CH3、NH2、F又はClであり、かつ
Lは、H、OH、OAc、OC（O）R13又はNH2であり、
式中、R13は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であり、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2からなる群の1つ以上の基から選択され、かつ
該置換されていてもよいC1−20アルキル基において、1から10個の骨格炭素（但し、末端の骨格炭素を除く）は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよい］。
【請求項２】
下記式Iの化合物：
【化３】
0005855566.tif 000060
［式中、
Tは、C（O）NH2、COOH又はCOOR1であり、
式中、R1は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であり、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2からなる群の1つ以上の基から選択され、かつ
該置換されていてもよいC1−20アルキル基において、1から10個の骨格炭素（但し、末端の骨格炭素を除く）は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよく；
Zは、F又はClであり;
Aは、F又はClであり;
Dは、Hであり;
Xは、NH2、NHCH3、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH2CH2CH2CH3及びNHC（NH）NH2からなる群から選択され；
Eは、NH2又はNHC（O）CH3であり；
Qは、以下：
【化４】
0005855566.tif 000061
からなる群から選択され、
式中、J及びGのそれぞれは、独立して、H、OH、OAc、OC（O）CH3、F、Cl、Br、NO2及びCNからなる群から選択され、
Mは、H、OH又はOAcであり;かつ
Lは、H、OH又はOAcである］。
【請求項３】
Tが、COOH又はCOOR1であり、
式中、R1が、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であり、
該置換基が、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2からなる群の1つ以上の基から選択される、
請求項1に記載の化合物。
【請求項４】
Tが、C（O）OCH3、C（O）OCH2CH3、C（O）OCH2CH2CH3、C（O）OCH2CH2CH2CH3、C（O）OCH2CH2CH2CH2CH3、C（O）OCH2CH2CH2CH2CH2CH3、C（O）OCH2CH2CH2CH2CH2CH2CH3、C（O）OCH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH3又はCOOHである、請求項1又は3に記載の化合物。
【請求項５】
Aが、F、Cl、Br、OH、CN及びNO2からなる群から選択される、請求項1、3乃至4のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Aが、F、Cl及びOR3からなる群から選択され、
式中、R3が、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であり、
該置換基が、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2からなる群の1つ以上の基から選択される、
請求項1、3乃至5のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
AがF又はClである、請求項1、3乃至6のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
AがFである、請求項1乃至7のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Dが、H、F、Cl、Br、OH、CN及びNO2からなる群から選択されるが、但しA及びDはともにHではない、請求項1、3乃至8のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Dが、H、F及びClからなる群から選択されるが、但しA及びDはともにHではない、請求項1、3乃至9のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
DがF又はClである、請求項1、3乃至10のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
DがHであるが、但しA及びDはともにHではない、請求項1、3乃至11のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
Xが、NH2、NHR5、NHCH3、NHCH2CH3、NHC（NH）NH2、NHC（NH）NHR5、NHC（NR6）NR5及びNR5R6からなる群から選択され、式中、R5及びR6は、独立して、C6H5、CH2C6H5又はC1−8アルキル基である、請求項1、3乃至12のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
Xが、NH2、NHCH3、NHCH2CH3及びNHC（NH）NH2からなる群から選択される、請求項1、3乃至13のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
Xが、NH2又はNHC（NH）NH2である、請求項1、3乃至14のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
Eが、NH2、NHC（O）CH3、OR7及びNHR7からなる群から選択され、
式中、R7が、独立して、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−10アルキル基であり、
該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2からなる群の1つ以上の基から選択され、かつ
該置換されていてもよいC1−10アルキル基において、1から9個の骨格炭素（但し、末端の骨格炭素を除く）は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよい、
請求項1、3乃至15のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
Eが、NH2又はNHC（O）CH3である、請求項1、3乃至16のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
Eが、NHC（O）CH3である、請求項1、3乃至17のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
Qが、CH2R9、CH（R9）（R10）、C（R9）（R10）（R11）、
【化５】
0005855566.tif 000062
からなる群から選択され、
式中、R9、R10及びR11は、独立して、CH3又はCH2CH3であり、かつ
J及びGのそれぞれは、独立して、H、OH、OAc、OC（O）CH3、F、Cl、Br、NO2、CN、OR12、SO2R12、COR12及びSR12からなる群から選択され、
式中、R12は、CH3、CH2CH3又はCH2CH2CH3であり、かつ
Mは、H、OH、OAc、OC（O）CH3、NH2、F又はClであり、かつ
Lは、H、OH、OAc、OC（O）R13又はNH2であり、
式中、R13は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であり、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2からなる群の1つ以上の基から選択される、
請求項1、3乃至18のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２０】
Qが、
【化６】
0005855566.tif 000063
からなる群から選択され、
式中、J及びGのそれぞれが、独立して、H、OH、OAc、OC（O）CH3、F、Cl、Br、NO2及びCNからなる群から選択され、
Mが、H、OH、OAc、OC（O）CH3、NH2、F又はClであり、かつ
Lが、H、OH、OAc、OC（O）R13又はNH2である、
請求項1、3乃至19のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
Qが、
【化７】
0005855566.tif 000064
からなる群から選択され、
式中、J及びGのそれぞれが、独立して、H、OH及びOAcからなる群から選択され、
Mが、H、OH又はOAcであり、かつ
Lが、H、OH又はOAcである、
請求項1、3乃至20のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
Qが、
【化８】
0005855566.tif 000065
であって、
式中、J及びGのそれぞれが、独立して、H、OH及びOAcからなる群から選択され、
Mが、H、OH又はOAcであり、かつ
Lが、H、OH又はOAcである、
請求項1、3乃至21のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
Qが、
【化９】
0005855566.tif 000066
であって、
式中、J及びGのそれぞれが、独立して、OH及びOAcからなる群から選択され、
Mが、OH又はOAcであり、かつ
Lが、OH又はOAcである、
請求項1、3乃至22のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２４】
ウイルスノイラミニダーゼ活性を調節する医薬を製造するための、請求項1乃至23に記
載の1つ以上の化合物の使用。
【請求項２５】
該ウイルスノイラミニダーゼが、GH34ノイラミニダーゼである、請求項24に記載の使用。
【請求項２６】
ウイルスノイラミニダーゼ活性の調節が、ヒト対象におけるインフルエンザ治療のためである、請求項24又は25に記載の使用。
【請求項２７】
ウイルスノイラミニダーゼ活性を調節するための、請求項1乃至23に記載の1つ以上の化合物。
【請求項２８】
該ウイルスノイラミニダーゼが、GH34ノイラミニダーゼである、請求項27に記載の化合物。
【請求項２９】
ウイルスノイラミニダーゼ活性の調節が、ヒト対象におけるインフルエンザ治療のためである、請求項27又は28に記載の化合物。
【請求項３０】
請求項1乃至23に記載のいずれか1つの化合物と、医薬上許容される賦形剤とを含む、医薬組成物。
【請求項３１】
ウイルスノイラミニダーゼ活性を調節するための、請求項30に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
該ウイルスノイラミニダーゼが、GH34ノイラミニダーゼである、請求項31に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
ウイルスノイラミニダーゼ活性の調節が、ヒト対象におけるインフルエンザ治療のためである、請求項31又は32に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
請求項1乃至23に記載の1つ以上の化合物、又はその医薬上許容される塩を含む、商業パッケージ。
【請求項３５】
下記化合物2：
【化１０】
0005855566.tif 000067
の調製方法であって、
下記化合物SAN3：
【化１１】
0005855566.tif 000068
を、MeNO2／H2O存在下、少なくとも4日間、１−クロロメチル−４−フルオロ−１，４−ジアゾニアビシクロ［２．２．２］オクタンビス（テトラフルオロボラート）と反応させて、下記化合物1：
【化１２】
0005855566.tif 000069
を生成する工程、及び
該化合物1を、−30℃から0℃の間で三フッ化ジエチルアミノ硫黄（DAST）、CH2CL2と反応させる工程、
を含む、方法。
【請求項３６】
化合物2をNaOMe及びMeOHと混合し、
ついで、Pd／C、H2及びMeOHと混合し、
ついで、LiOH、H2O及びMeOHと混合して、下記化合物4：
【化１３】
0005855566.tif 000070
を生成する工程、
をさらに含む、請求項35に記載の方法。
【請求項３７】
下記化合物12：
【化１４】
0005855566.tif 000071
の調製方法であって、
下記化合物2：
【化１５】
0005855566.tif 000072
をNaOMe及びMeOHと混合し、
ついで、中性になるまでAcOHと混合し、
ついで、PMe3、H2O及びMeOHと混合し、
ついで、Et3N、MeOH及びDMF中、下記化合物VII：
【化１６】
0005855566.tif 000073
と反応させて、下記化合物VIII：
【化１７】
0005855566.tif 000074
を生成する工程、及び
化合物VIIIをLiOH、H2O及びTHFと反応させ、
ついで、Pd／C、H2、H2O及びTHFと反応させる工程、
を含む、方法。
【請求項３８】
以下の1つから選択される化合物：
【化１８】
0005855566.tif 000075
【化１９】
0005855566.tif 000076
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本願は、2009年7月15日に出願された「ノイラミジナーゼ（NEURAMIDINASE）阻害剤：組成物及びインフルエンザ治療のためのその使用方法」と題する米国仮特許出願番号61／213,786号の利益を主張し、その出願はその全体が参照によって本明細書に援用される。
【０００２】
［技術分野］
本発明は、ウイルス感染を治療又は予防するための、治療薬、その使用及び方法に関する。特に、本発明は、インフルエンザなどのウイルス感染に対する、化合物、組成物、治療及び治療方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
インフルエンザウイルスによる感染及び侵入は、宿主細胞表面上のシアル酸残基の仲介を必要とする。シアル酸とノイラミン酸とは交互に用いられる。同様に、シアリダーゼとノイラミニダーゼも交互に用いられる。宿主細胞へのウイルスの最初の接着は、ウイルスのヘマグルチニンタンパク質を介した、ウイルスと宿主細胞シアル酸（帯電している、9炭糖）との結合によって生じる。いったん細胞内へ侵入すると、ウイルスは、宿主細胞の機構をうまく利用して複製する。しかし、最適に感染し続けるために、宿主細胞表面からシアル酸を切り離し、他の細胞へ感染するためにウイルスが宿主細胞から脱出するのを助ける、ノイラミニダーゼをウイルスは発達させた。宿主細胞表面からシアル酸を切り離すことに失敗すると、宿主細胞への接着によってウイルスは保持されたままとなる。
【０００４】
ノイラミニダーゼのGH33ファミリーには、ウイルス酵素（GH34ファミリー）以外の全てのシアリダーゼが含まれる。GH33ファミリーとGH34ファミリーとは構造的に異なっており、配列によっても異なる（ファミリー分類のバックグラウンドに関して、Cantarel BL. et al. （2009）；及びHenrissat B. and Davies GJ （1997）を参照されたい）。従来の研究により、2,3−ジフルオロシアル酸が、GH33ノイラミニザーゼの有効な阻害剤であること、GH33ノイラミニダーゼが、共有結合中間体（covalent intermediate）の過程をたどることが実証されている（例えば、Watts、A. et al. （2003）； Amaya、M. F. et al. （2004）； Watts、A. G. and Withers、S. G. （2004）； Watts、A.G. et al. （2006）； Newstead、S. et al. （2008）； Damager、I. et al. （2008）；及びBuchini、S. et al. （2008）を参照されたい）。
【０００５】
文献で報告されているGH34シアリダーゼ（すなわち、ウイルスシアリダーゼ）の最も可能性の高いメカニズムは、イオン対中間体を伴うものである（von Itzstein M. （2007））。
【０００６】
ノイラミニダーゼを阻害する多数の化合物が公知である。ある周知のノイラミニダーゼ阻害剤は、アルケン含有シアル酸アナログである（例えば：ラニナミビル（Laninamivir）CAS # 203120−17−6；オセルタミビル（Oseltamivir）（タミフル）CAS # 204255−11−8； 及びザナミビル（Zanamivir）（リレンザ）CAS # 139110−80−8；US 5,360,817；及びIkeda et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry （2006） 14：7893−7897も参照されたい）。（反応性）フッ化物脱離基を有するフッ化糖誘導体が、様々な「保持型」グリコシダーゼの阻害剤であり、特に安定したグリコシル−酵素中間体の形成を介して機能することが示されている（例えば、Hagiwara et al. （1994）；及びBuchini et al. （2008））。これらの試薬は、その標的酵素に対して非常に特異的であり、生物学的に極めて利用可能であること、血液脳関門を横断できることが示されている。このような阻害剤は、作用機序に基づいて作用しており、当該阻害を低下させるウイルス酵素のなんらかの変異は、必然的に、天然の基質であるシアル酸に対する酵素効率を低下させるはずであることから、ウイルスによる耐性発現を困難なものにしており、従って、耐性を示す可能性は高くないようである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
［発明の概要］
本発明は、一部、本明細書に記載の共有結合中間体を有する化合物が、ノイラミニダーゼを調節するという思いがけない発見に基づく。具体的には、本明細書で同定する化合物は、ノイラミニダーゼ阻害を示し、ウイルス感染の治療又は予防に有用であり得る。特に、インフルエンザの治療又は予防に有用であり得る。
【０００８】
本明細書に記載の化合物は、ノイラミニダーゼ阻害メカニズムを研究するために、in vivo又はin vitroにおける調査利用（すなわち、非臨床）目的で使用されてよい。さらに、これらの化合物は、組換えタンパク質、ウイルス株、培養液中で保持された細胞（cell maintained in culture）及び／又は動物モデルを用いてノイラミニダーゼ阻害を調査するin vivo又はin vitro研究のために、個々に又はキットの一部として使用されてよい。あるいは、本明細書に記載の化合物は、商業パッケージ及び／又は使用説明書と組み合わされてよい。
【０００９】
本発明はまた、一部、本明細書に記載の化合物が、研究用及び治療用の両方の目的で、in vivo又はin vitroのいずれかでノイラミニダーゼ活性を調節するために使用され得るという発見にも基づく。化合物は、ノイラミニザーゼ活性を調節し得るような有効量で使用され得る。ノイラミニダーゼはウイルスであってよい。ノイラミニダーゼは、インフルエンザノイラミニダーゼであってよい。特に、化合物は、ノイラミニダーゼ活性を阻害するために使用されてよい。化合物調節活性は、ウイルス感染研究のために、in vivo又はin vitroモデルのいずれかで用いられてよい。例えば、インフルエンザ感染などである。さらに、化合物調節活性は、ウイルス感染の治療又は予防のために使用されてよい。ウイルス感染はインフルエンザであってよい。
【００１０】
さらに、本発明は、3−フルオロ−シアル酸化合物が、炭素2（式IのZ位）で十分な脱離基を有し、本明細書に記載のとおり、適切な立体化学を有する場合に、GH34シアリダーゼ阻害剤であり得るとの認識に一部基づく。本明細書で同定する化合物は、ノイラミニダーゼ阻害を示し、ウイルス感染の治療又は予防に有用であり得る。特に、インフルエンザの治療又は予防に有用であり得る。
【００１１】
1つの実施態様では、下記式Ｉの構造を有する化合物を提供する：
【００１２】
【化１】
0005855566.tif 000002
【００１３】
［式中、
Tは、C（O）NH2、COOH又はCOOR1であり、
式中、R1は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であり、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択され、かつ
該置換されていてもよいアルキル基の0から10個の骨格炭素は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよく；
Zは、F、Cl、Br又はOSO2R2であり、
式中、R2は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であり、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択され、かつ
該置換されていてもよいアルキル基の0から10個の骨格炭素は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよく；
Aは、H、F、Cl、Br、OH、CN、OR3、NO2、SO2R3、SR3及びCOR3を含む群から選択され、
式中、R3は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であり、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択され、かつ
該置換されていてもよいアルキル基の0から10個の骨格炭素は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよく；
Dは、H、F、Cl、Br、OH、CN、OR4、NO2、SO2R4、SR4及びCOR4を含む群から選択されてよいが、但しA及びDはともにHでなくてよく、
式中、R4は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であってよく、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよく、かつ
該置換されていてもよいアルキル基の0から10個の骨格炭素は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよく；
A及びDは一緒になって、オキソ基を形成してもよく；
Xは、N3、NH2、NHR5、NHCH3、NHCH2CH3、NHC（NH）NH2、NHC（NH）NHR5、NR5R6及びNHC（NH）N（R5）R6を含む群から選択されてよく、
式中、R5及びR6は、独立して、C6H5、CH2C6H5又はC1−8アルキル基であってよく；
Eは、NH2、NHC（O）CH3、OR7、NHR7及びN（R7）（R8）を含む群から選択されてよく、
式中、R7及びR8は、独立して、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であってよく、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよく、かつ
該置換されていてもよいアルキル基の0から10個の骨格炭素は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよく；
Qは、CH2OH、CH2R9、CH（R9）（R10）、C（R9）（R10）（R11）、
【００１４】
【化２】
0005855566.tif 000003
【００１５】
を含む群から選択されてよく、
式中、R9、R10及びR11は、独立して、CH3又はCH2CH3であってよく、かつ
J及びGのそれぞれは、独立して、H、OH、OAc、OC（O）CH3、F、Cl、Br、NO2、CN、OR12、SO2R12、COR12及びSR12の群から選択されてよく、
式中、R12は、CH3、CH2CH3又はCH2CH2CH3であってよく、かつ
Mは、H、OH、OAc、OC（O）CH3、NH2、F又はClであってよく、かつ
Lは、H、OH、OAc、OC（O）R13又はNH2であってよく、
式中、R13は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であってよく、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよく、かつ
該置換されていてもよいアルキル基の0から10個の骨格炭素は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよい］。
【００１６】
さらなる実施態様において、下記式Iの構造を有する化合物を提供する：
【００１７】
【化３】
0005855566.tif 000004
【００１８】
［式中、
Tは、C（O）NH2、COOH又はCOOR1であってよく、
式中、R1は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であってよく、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよく、かつ
該置換されていてもよいアルキル基の0から10個の骨格炭素は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよく；
Zは、F、Cl、Br又はOSO2R2であってよく、
式中、R2は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であってよく、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよく、かつ
該置換されていてもよいアルキル基の0から10個の骨格炭素は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよく；
Aは、F又はClであってよく;
Dは、Hであってよく;
Xは、NH2、NHCH3、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH2CH2CH2CH3及びNHC（NH）NH2を含む群から選択されてよく；
Eは、NH2又はNHC（O）CH3であってよく；
Qは、以下：
【００１９】
【化４】
0005855566.tif 000005
【００２０】
を含む群から選択されてよく、
式中、J及びGのそれぞれは、独立して、H、OH、OAc、OC（O）CH3、F、Cl、Br、NO2、CN、OR12、SO2R12、COR12及びSR12の群から選択されてよく、
R12は、CH3、CH2CH3又はCH2CH2CH3であってよく、かつ
Mは、H、OH、OAc、OC（O）CH3、NH2、F又はClであってよく、かつ
Lは、H、OH、OAc、OC（O）R13又はNH2であってよく、
式中、R13は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−10アルキル基であってよく、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよく、かつ
該置換されていてもよいアルキル基の0から10個の骨格炭素は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよい］。
【００２１】
さらなる実施態様において、下記式Iの構造を有する化合物を提供する：
【００２２】
【化５】
0005855566.tif 000006
【００２３】
［式中、
Tは、C（O）NH2、COOH又はCOOR1であってよく、
式中、R1は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であってよく、
ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよく、かつ
該置換されていてもよいアルキル基の0から10個の骨格炭素は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよく；
Zは、F又はClであってよく;
Aは、F又はClであってよく;
Dは、Hであってよく;
Xは、NH2、NHCH3、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH2CH2CH2CH3及びNHC（NH）NH2を含む群から選択されてよく；
Eは、NH2又はNHC（O）CH3であってよく；
Qは、以下：
【００２４】
【化６】
0005855566.tif 000007
【００２５】
を含む群から選択されてよく、
式中、J及びGのそれぞれは、独立して、H、OH、OAc、OC（O）CH3、F、Cl、Br、NO2、CNの群から選択されてよく、
Mは、H、OH、OAcであってよく;かつ
Lは、H、OH、OAcであってよい］。
【００２６】
さらなる実施態様において、ウイルスノイラミニダーゼ活性を調節するための、本明細書に記載の化合物を提供する。ウイルスノイラミニダーゼは、GH34ノイラミニダーゼであってよい。ウイルスノイラミニダーゼ活性の調節は、動物におけるインフルエンザ治療のためであってよい。動物は哺乳動物であってよい。動物はヒトであってよい。
【００２７】
さらなる実施態様において、ウイルスノイラミニダーゼ活性を調節するための薬剤の調製に使用するための、本明細書に記載の化合物を提供する。ウイルスノイラミニダーゼは、GH34ノイラミニダーゼであってよい。ウイルスノイラミニダーゼ活性の調節は、動物におけるインフルエンザ治療のためであってよい。動物は哺乳動物であってよい。動物はヒトであってよい。
【００２８】
さらなる実施態様において、ウイルスノイラミニダーゼ活性を調節するための、本明細書に記載の化合物を提供する。ウイルスノイラミニダーゼは、GH34ノイラミニダーゼであってよい。ウイルスノイラミニダーゼ活性の調節は、動物におけるインフルエンザ治療のためであってよい。動物は哺乳動物であってよい。動物はヒトであってよい。
【００２９】
さらなる実施態様において、1つ以上の本明細書に記載の化合物と、医薬上許容される賦形剤とを含んでよい、医薬組成物を提供する。ウイルスノイラミニダーゼは、GH34ノイラミニダーゼであってよい。ウイルスノイラミニダーゼ活性の調節は、動物におけるインフルエンザ治療のためであってよい。動物は哺乳動物であってよい。動物はヒトであってよい。
【００３０】
さらなる実施態様において、ウイルスノイラミニダーゼ活性を調節するための、本明細書に記載の化合物又はその医薬上許容される塩を提供する。ウイルスノイラミニダーゼは、GH34ノイラミニダーゼであってよい。ウイルスノイラミニダーゼ活性の調節は、動物におけるインフルエンザ治療のためであってよい。動物は哺乳動物であってよい。動物はヒトであってよい。
【００３１】
さらなる実施態様において、1つ以上の本明細書に記載の化合物又はその医薬上許容される塩でウイルスノイラミニダーゼ活性を調節する方法を提供する。ウイルスノイラミニダーゼは、GH34ノイラミニダーゼであってよい。ウイルスノイラミニダーゼ活性の調節は、動物におけるインフルエンザ治療のためであってよい。動物は、哺乳動物であってよい。動物はヒトであってよい。
【００３２】
さらなる実施態様において、1つ以上の本明細書に記載の化合物若しくはその医薬上許容される塩、又はその医薬組成物を含んでよい、商業パッケージを提供する。商業パッケージは、インフルエンザ治療における、化合物若しくはその医薬上許容される塩、又はその医薬組成物の使用説明書を任意に含んでよい。
【００３３】
Tは、C（O）NH2、COOH又はCOOR1であってよく、式中、R1は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であってよく、ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよい。あるいは、Tは、C（O）OCH3、C（O）OCH2CH3、C（O）OCH2CH2CH3、C（O）OCH2CH2CH2CH3、C（O）OCH2CH2CH2CH2CH3、C（O）OCH2CH2CH2CH2CH2CH3、C（O）OCH2CH2CH2CH2CH2CH2CH3、C（O）OCH2CH2CH2CH2CH2CH2CH2CH3又はCOOHであってよい。あるいは、Tは、C（O）OCH3、C（O）OCH2CH3、C（O）OCH2CH2CH3、C（O）OCH2CH2CH2CH3、C（O）OCH2CH2CH2CH2CH3 又はCOOHであってよい。
【００３４】
Aは、F、Cl、Br、OH、CN、OR3、NO2及びCOR3を含む群から選択されてよく、式中、R3は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であってよく、ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよく、かつ該置換されていてもよいアルキル基の0から10個の骨格炭素は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよい。あるいは、Aは、F、Cl、Br、OH、CN、OR3及びNO2を含む群から選択されてよく、式中、R3は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であってよく、ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよく、かつ該置換されていてもよいアルキル基の0から10個の骨格炭素は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよい。あるいは、Aは、F、Cl、Br、OH、CN及びNO2を含む群から選択されてよい。あるいは、Aは、F、Cl、Br、OR3及びNO2を含む群から選択されてよく、式中、R3は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であってよく、ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよい。あるいは、Aは、F、Cl及びOR3を含む群から選択されてよく、式中、R3は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であってよく、ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよい。あるいは、Aは、F又はClであってよい。あるいは、Aは、Fであってよい。
【００３５】
Dは、H、F、Cl、Br、OH、CN、OR4、NO2及びCOR4を含む群から選択されてよいが、但しA及びDはともにHでなくてよく、式中、R4は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−10アルキル基であってよく、ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよく、かつ置換されていてもよいアルキル基の0から10個の骨格炭素は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよい。あるいは、Dは、H、F、Cl、Br、OH、CN、OR4、NO2及びCOR4を含む群から選択されてよいが、但しA及びDはともにHでなくてよく、式中、R4は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−10アルキル基であってよく、ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよい。あるいは、Dは、H、F、Cl、Br、OH、CN及びNO2を含む群から選択されてよいが、但しA及びDはともにHでなくてよい。あるいは、Dは、H、F、Cl、Br、OH及びNO2を含む群から選択されてよいが、但しA及びDはともにHでなくてよい。あるいは、Dは、H、F、Cl、Br及びOHを含む群から選択されてよいが、但しA及びDはともにHでなくてよい。あるいは、Dは、H、F、Cl及びBrを含む群から選択されてよいが、但しA及びDはともにHでなくてよい。あるいは、Dは、H、F及びCl含む群から選択されてよいが、但しA及びDはともにHでなくてよい。あるいは、Dは、H、F及びCl含む群から選択されてよいが、但しA及びDはともにHでなくてよい。あるいは、Dは、F又はClであってよい。あるいは、Dは、H又はFであってよいが、但しA及びDはともにHでなくてよい。あるいは、DはFであってよい。あるいは、DはHであってよいが、但しA及びDはともにHでなくてよい。
【００３６】
Xは、NH2、NHR5、NHCH3、NHCH2CH3、NHC（NH）NH2、NHC（NH）NHR5及びNR5R6を含む群から選択されてよく、式中、R5及びR6は、独立して、C6H5、CH2C6H5又はC1−8アルキル基であってよい。あるいは、Xは、NH2、NHR5、NHCH3、NHCH2CH3、NHC（NH）NH2及びNHC（NH）NHR5を含む群から選択されてよく、式中、R5は、C6H5、CH2C6H5又はC1−8アルキル基であってよい。あるいは、Xは、NH2、NHR5、NHCH3、NHCH2CH3及びNHC（NH）NH2を含む群から選択されてよく、式中、R5は、C6H5、CH2C6H5又はC1−8アルキル基であってよい。あるいは、Xは、NH2、NHR5、NHCH3、NHCH2CH3及びNHC（NH）NH2を含む群から選択されてよく、式中、R5は、C6H5、CH2C6H5又はC1−8アルキル基であってよい。あるいは、Xは、NH2、NHR5、NHCH3、NHCH2CH3及びNHC（NH）NH2を含む群から選択されてよく、式中、R5はC1−8アルキル基であってよい。あるいは、Xは、NH2、NHCH3及びNHC（NH）NH2を含む群から選択されてよい。あるいは、Xは、NH2、NHCH2CH3及びNHC（NH）NH2を含む群から選択されてよい。あるいは、Xは、NH2又はNHC（NH）NH2であってよい。
【００３７】
Eは、NH2、NHC（O）CH3、OR7、NHR7を含む群から選択されてよく、式中、R7は、独立して、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−10アルキル基であってよく、ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよく、かつ該置換されていてもよいアルキル基の0から10個の骨格炭素は、独立して、O、N又はSと置き換わっていてもよい。あるいは、Eは、NH2、NHC（O）CH3、OR7及びNHR7を含む群から選択されてよく、式中、R7は、独立して、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−10アルキル基であってよく、ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよい。あるいは、Eは、NH2、NHC（O）CH3及びOR7を含む群から選択されてよく、式中、R7は、独立して、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−10アルキル基であってよく、ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよい。あるいは、Eは、NH2又はNHC（O）CH3であってよい。あるいは、EはNHC（O）CH3であってよい。
【００３８】
Qは、CH2R9、CH（R9）（R10）、C（R9）（R10）（R11）、
【００３９】
【化７】
0005855566.tif 000008
【００４０】
を含む群から選択されてよい
（式中、R9、R10及びR11は、独立して、CH3又はCH2CH3であってよく、J及びGのそれぞれは、独立して、H、OH、OAc、OC（O）CH3、F、Cl、Br、NO2、CN、OR12、SO2R12、COR12及びSR12の群から選択されてよく、式中、R12は、CH3、CH2CH3又はCH2CH2CH3であってよく、かつMは、H、OH、OAc、OC（O）CH3、NH2、F又はClであってよく、かつLは、H、OH、OAc、OC（O）R13又はNH2であってよく、式中、R13は、直鎖状、分枝状又は環状で、飽和又は不飽和の、置換されていてもよいC1−20アルキル基であってよく、ここで、該置換基は、オキソ、OH、F、Cl、Br、I、NH2、CN、SH、SO3H及びNO2を含む群の1つ以上の基から選択されてよい）。あるいは、Qは、以下：
【００４１】
【化８】
0005855566.tif 000009
【００４２】
を含む群から選択されてよい
（式中、J及びGのそれぞれは、独立して、H、OH、OAc、OC（O）CH3、F、Cl、Br、NO2、CNの群から選択されてよく、Mは、H、OH、OAc、OC（O）CH3、NH2、F又はClであってよく、かつLは、H、OH、OAc、OC（O）R13又はNH2であってよい）。あるいは、Qは、以下：
【００４３】
【化９】
0005855566.tif 000010
【００４４】
を含む群から選択されてよい
（式中、J及びGのそれぞれは、独立して、H、OH、OAcの群から選択されてよく、Mは、H、OH又はOAcであってよく、かつLは、H、OH又はOAcであってよい）。あるいは、Qは、以下：
【００４５】
【化１０】
0005855566.tif 000011
【００４６】
であってよい
（式中、J及びGのそれぞれは、独立して、H、OH、OAcの群から選択されてよく、Mは、H、OH又はOAcであってよく、かつLは、H、OH又はOAcであってよい）。あるいは、Qは、以下：
【００４７】
【化１１】
0005855566.tif 000012
【００４８】
であってよい
（式中、J及びGのそれぞれは、独立して、OH、OAcの群から選択されてよく、Mは、OH又はOAcであってよく、かつLは、OH又はOAcであってよい）。
【００４９】
さらなる実施態様において、下記工程を含む化合物2の調製方法を提供する：
下記化合物SAN3：
【００５０】
【化１２】
0005855566.tif 000013
【００５１】
を、MeNO2／H2Oの存在下、少なくとも4日間、１−クロロメチル−４−フルオロ−１，４−ジアゾニアビシクロ［２．２．２］オクタンビス（テトラフルオロボラート）(セレクトフルオル(登録商標))と反応させて、下記化合物1：
【００５２】
【化１３】
0005855566.tif 000014
【００５３】
を生成する工程、及び−30℃から0℃の間で化合物1を三フッ化ジエチルアミノ硫黄（DAST）、CH2CL2と反応させる工程。
【００５４】
本方法は、化合物2をNaOMe及びMeOHと混合し；ついで、Pd／C、H2及びMeOHと混合し；ついで、LiOH、H2O及びMeOHと混合して、下記化合物4：
【００５５】
【化１４】
0005855566.tif 000015
【００５６】
を生成する工程をさらに含んでよい。
【００５７】
さらなる実施態様において、下記工程を含んでよい、化合物12の調製方法を提供する：
下記化合物2：
【００５８】
【化１５】
0005855566.tif 000016
【００５９】
と、NaOMe及びMeOHとを混合し；ついで、中性になるまでAcOHと混合し；ついで、PMe3、H2O及びMeOHと混合し；ついで、Et3N、MeOH及びDMF中、下記化合物VII：
【００６０】
【化１６】
0005855566.tif 000017
【００６１】
と反応させて、下記化合部物VIII：
【００６２】
【化１７】
0005855566.tif 000018
【００６３】
を生成する工程；ついで化合物VIIIをLiOH、H2O及びTHFと反応させ；ついで、Pd／C、H2、H2O及びTHFと反応させる工程。
【００６４】
さらなる実施態様において、表2A及び2Bに記載の1つ以上の化合物から選択されてよい化合物を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】図1には、ノイラミニダーゼメカニズムを示す。
【図２】図2には、2,3−ジフルオロシアル酸（1）によるノイラミニダーゼの不活性化を示す。
【図３】図3A及び3Bには、濃度（3A）により示すとおり、及び化合物4の濃度に対して擬一次不活性化速度定数（ki obs）をリプロットしたもの（3B）により示すとおり、化合物4によるインフルエンザシアリダーゼ（サブタイプN9）の時間依存性の不活性化を示す。
【図４】図4A及び4Bには、IV及びIN投与後のDFSA−4Gu血漿レベルを示す。
【図５】図5A、5B及び5Cには、IV及びIN投与後のDFSA−4Gu気管レベルを示す。
【図６】図6A、6B及び6Cには、IV及びIN投与後のDFSA−4Gu肺レベルを示す。
【図７】図7には、IV及びIN投与後のザナミビル（Zanamivir）肺レベルを示す。
【図８】図8には、HK1 H2N3インフルエンザAウイルスに感染させ、ノイラミニダーゼ阻害剤で治療したマウスの生存率をプロットしたものを示す。
【００６６】
［詳細な説明］
本明細書で使用する場合、語句「Cx−yアルキル」又は「Cx−Cyアルキル」は、当業者に通常理解されるとおりに用いられ、多くの場合、xからyの数（整数x及びyを含めて、その範囲内の全ての個々の整数が含まれる）の炭素原子を含む、炭素骨格又は主炭素鎖を有する化学物質（chemical entity）を言う。例えば、「C1−10アルキル」は、その炭素骨格又は主鎖に、1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10個の炭素原子を有する化学物質である。
【００６７】
本明細書で使用する場合、用語「分枝状」は、当業者に通常理解されるとおりに用いられ、多くの場合、1つよりも多くの連続鎖（contiguous chain）に分かれる骨格又は主鎖を含む化学物質を言う。1つよりも多くの方向に分かれる骨格又は主鎖の部分は、直鎖状、環状又はそれらの任意の組合せであってよい。分枝状アルキルの例には、tert−ブチル及びイソプロピルを挙げることができるが、これらに限定されない。
【００６８】
本明細書で使用する場合、用語「非分枝状」は、当業者に通常理解されるとおりに用いられ、多くの場合、1つよりも多くの連続鎖に分かれない骨格又は主鎖を含む化学物質を言う。非分枝状アルキルの例には、メチル、エチル、n−プロピル及びn−ブチルを挙げることができるが、これらに限定されない。
【００６９】
本明細書で使用する場合、用語「置換」は、当業者に通常理解されるとおりに用いられ、多くの場合、1つ以上のヘテロ原子を含む異なる化学基で置換された1つの化学基を有する化学物質を言う。特記のない限り、置換アルキルは、1つ以上の水素原子が、水素ではない1つ以上の原子で置換されたアルキルである。例えば、これに限定されないが、クロロメチルは置換アルキルの例であり、特に置換メチルの例である。アミノエチルは、これに限定されないが、置換アルキルの別の例であり、特に置換エチルの例である。本明細書に記載の官能基は、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9又は10個の置換基で置換されてよいが、これらに限定されない。
【００７０】
本明細書で使用する場合、用語「非置換」は、当業者に通常理解されるとおりに用いられ、多くの場合、炭化水素であり、かつ／又はヘテロ原子を含まない化学物質である。非置換アルキルの例には、メチル、エチル、tert−ブチル及びペンチルを挙げることができるが、これらに限定されない。
【００７１】
本明細書で使用する場合、化学物質に言及する場合の用語「飽和」は、当業者に通常理解されるとおりに用いられ、多くの場合、単結合のみを含む化学物質を言う。飽和化学物質の例には、エタン、tert−ブチル及びN＋H3を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００７２】
本明細書で使用する場合、用語「ハロゲン化」は、当業者に通常理解されるとおりに用いられ、水素原子が、塩素、フッ素、ヨウ素又は臭素などのハロゲン原子で置換されている部分又は化学物質を言う。例えば、フッ化側鎖とは、1つ以上の水素原子が、1つ以上のフッ素原子で置き換えられた側鎖を言う。
【００７３】
飽和C1−C10アルキルの例としては、メチル、エチル、n−プロピル、i−プロピル、sec−プロピル、n−ブチル、i−ブチル、sec−ブチル、t−ブチル、n−ペンチル、i−ペンチル、sec−ペンチル、t−ペンチル、n−ヘキシル、i−ヘキシル、1,2−ジメチルプロピル、2−エチルプロピル、1−メチル−2−エチルプロピル、1−エチル−2−メチルプロピル、1,1,2−トリメチルプロピル、1,1,2−トリエチルプロピル、1,1−ジメチルブチル、2,2−ジメチルブチル、2−エチルブチル、1,3−ジメチルブチル、2−メチルペンチル、3−メチルペンチル、sec−ヘキシル、t−ヘキシル、n−ヘプチル、i−ヘプチル、sec−ヘプチル、t−ヘプチル、n−オクチル、i−オクチル、sec−オクチル、t−オクチル、n−ノニル、i−ノニル、sec−ノニル、t−ノニル、n−デシル、i−デシル、sec−デシル及びt−デシルを挙げてよいが、これらに限定されない。C2−C10アルケニルの例としては、ビニル、アリル、イソプロペニル、1−プロペン−2−イル、1−ブテン−1−イル、1−ブテン−2−イル、1−ブテン−3−イル、2−ブテン−1−イル、2−ブテン−2−イル、オクテニル及びデセニルを挙げてよいが、これらに限定されない。C2−C10アルキニルの例には、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、ヘプチニル、オクチニル、ノニニル及びデシニルを挙げてよいが、これらに限定されない。飽和C1−C10アルキル、C2−C10アルケニル又はC2−C10アルキニルは、例えば、独立して、窒素、硫黄又は酸素である1つ以上のヘテロ原子によって分断されていてもよいが、これに限定されない。
【００７４】
C6−C10アリール基の例としては、フェニル（Ph）、ペンタレニル、インデニル、ナフチル及びアズレニルを挙げてよいが、これに限定されない。C6−9アリール−C1−4アルキル基は、例えば、上記いずれかで定義したC6−9アリール基を置換基として有する、上記いずれかで定義したC1−4アルキル基であってよいが、これに限定されない。C6−8アリール−C2−4アルケニル基は、例えば、上記いずれかで定義したC6−8アリール基を置換基として有する、上記いずれかで定義したC2−4アルケニルであってよいが、これに限定されない。C6−8アリール−C2−4アルキニル基は、例えば、上記いずれかで定義したC6−8アリール基を置換基として有する、上記いずれかで定義したC2−4アルキニル基であってよいが、これに限定されない。独立して、窒素、硫黄又は酸素である1つ以上のヘテロ原子を含む、4員から10員の非芳香族複素環基の例には、ピロリジニル、ピロリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリジニル（imidazolydinyl）、モルホリニル、テトラヒドロピラニル、アゼチジニル、オキセタニル、オキサチオラニル、フタルイミド及びスクシンイミドを挙げてよいが、これらに限定されない。独立して、窒素、硫黄又は酸素である1つ以上のヘテロ原子を含む、5員から10員の芳香族複素環基の例には、ピロリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル（pyrazinyl）、イミダゾリル、チアゾリル及びオキサゾリルを挙げてよいが、これらに限定されない。
【００７５】
本明細書に記載の式に関わる実施態様は、本明細書中に示したもの又は記載したものを含めて、全ての考えられる立体化学的な代替物を含む。
【００７６】
ある実施態様において、本明細書に記載の化合物又は上記その許容される塩はウイルス感染の全身的治療又は予防のために用いられてよい。ある実施態様において、本明細書に記載の化合物又は上記その許容される塩は、ウイルス感染の全身的治療又は予防のための薬剤又は組成物の調製に使用されてよい。ある実施態様において、本明細書に記載の任意の感染を全身的に治療する方法も提供する。ある実施態様は、本明細書に記載の化合物及び医薬上許容される賦形剤又はキャリアを含む組成物を使用する。ある実施態様において、ウイルス感染は、少なくとも一部は、インフルエンザウイルスによりもたらされる。本明細書に記載の任意の適応症を治療する方法も提供する。このような方法は、本明細書に記載の化合物若しくは本明細書に記載の化合物を含む組成物、又は本明細書に記載の化合物の有効量若しくは本明細書に記載の化合物を含む組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与する工程を含んでよい。
【００７７】
本明細書に記載の化合物は、遊離形態又はその塩の形態であってよい。ある実施態様において、本明細書に記載の化合物は、当分野で公知の医薬上許容される塩の形態であってよい（Berge et al.、J. Pharm. Sci. 1977、66、1）。本明細書で用いられる医薬上許容される塩には、例えば、親化合物の所望の薬理活性を有する塩が挙げられる（親化合物の生物学的有効性及び／又は性質を保持し、生物学的に及び／又はその他の点で望ましくないことがない、塩）。塩を形成できる1つ以上の官能基を有する本明細書に記載の化合物は、例えば、医薬上許容される塩として形成されてよい。1つ以上の塩基性官能基を含有する化合物は、例えば、医薬上許容される有機酸又は無機酸と、医薬上許容される塩を形成し得る。医薬上許容される塩は、例えば、これらに限定されないが、酢酸、アジピン酸、アルギン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、酪酸、桂皮酸、クエン酸、ショウノウ酸、カンファースルホン酸、シクロペンタンプロピオン酸、ジエチル酢酸、ジグルコン酸（digluconic acid）、ドデシルスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、グルコヘプタン酸（glucoheptanoic acid）、グルコン酸、グリセロリン酸、グリコール酸、ヘミスルホン酸（hemisulfonic acid）、ヘプタン酸、ヘキサン酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、2−ヒドロキシエタンスルホン酸、イソニコチン酸、乳酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、2−ナフタレンスルホン酸（2−napthalenesulfonic acid）、ナフタレンジスルホン酸、p−トルエンスルホン酸、ニコチン酸、硝酸、シュウ酸、パモ酸、ペクチン酸（pectinic acid）、3−フェニルプロピオン酸、リン酸、ピクリン酸、ピメリン酸、ピバル酸、プロピオン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸、硫酸、スルファミン酸、酒石酸、チオシアン酸又はウンデカン酸に由来するものであってよい。1つ以上の酸性官能基を含む化合物は、例えば、これに限定されないが、アルカリ金属若しくはアルカリ土類金属に基づく無機塩基、又は1級アミン化合物、2級アミン化合物、3級アミン化合物、4級アミン化合物、置換アミン、天然に存在する置換アミン、環式アミン、若しくは塩基性イオン交換樹脂などの有機塩基などの医薬上許容される塩基と医薬上許容される塩を形成し得る。医薬上許容される塩は、例えば、これに限定されないが、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン又はアルミニウムなどの医薬上許容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩若しくは重炭酸塩、アンモニア、ベンザチン、メグルミン、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、イソプロピルアミン、トリプロピルアミン、トリブチルアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、2−ジメチルアミノエタノール、2−ジエチルアミノエタノール、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、ヒドラバミン（hydrabamine）、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、グルカミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、プロカイン、N−エチルピペリジン、テオブロミン、テトラメチルアンモニウム化合物、テトラエチルアンモニウム化合物、ピリジン、N,N−ジメチルアニリン、N−メチルピペリジン、モルホリン、N−メチルモルホリン、N−エチルモルホリン、ジシクロヘキシルアミン、ジベンジルアミン、N,N−ジベンジルフェネチルアミン、1−エフェナミン、N,N'−ジベンジルエチレンジアミン又はポリアミン樹脂に由来するものであってよい。ある実施態様において、本明細書に記載の化合物は、酸性及び塩基性基の両方を含んでよく、内部塩又は双性イオンの形態、例えば、これに限定されないがベタインの形態であってよい。本明細書に記載の塩は、当業者に公知の通常のプロセスによって調製されてよく、例えば、これに限定されないが、その遊離形態を有機酸、無機酸、有機塩基若しくは無機塩基と反応させることにより、又は他の塩からの陰イオン交換若しくは陽イオン交換により調製されてよい。当業者ならば、塩の調製が、化合物の単離及び／又は精製の間にin situで行い得ること、あるいは塩の調製が、単離及び／又は精製した化合物を別途反応させることにより行い得ることを十分に理解するだろう。
【００７８】
ある実施態様において、本明細書に記載の化合物及びその全ての異なる形態（例えば、遊離形態、塩、多形体、異性体など）は、例えば、溶媒和物などの溶媒付加形態であってよい。溶媒和物は、化合物又はその塩と物理的に会合した、化学量論的量の溶媒又は非化学量論的量の溶媒のいずれかを含む。溶媒は、例えば、医薬上許容される溶媒であってよいが、これに限定されない。例えば、溶媒が水である場合、水和物が形成され、溶媒がアルコールである場合、アルコラートが形成される。
【００７９】
ある実施態様において、本明細書に記載の化合物及びその全ての異なる形態（例えば、遊離形態、塩、溶媒和物、異性体など）は、例えば、多形体、擬似多形体、立体配座多形体、非晶質形態又はそれらの組合せを含む、結晶形態及び／又は非晶質形態を含んでよい。多形体は、同じ元素組成の化合物の異なる結晶充填配列を含む。多形体は、通常、異なるX線回折パターン、赤外線スペクトル、融点、密度、硬度、結晶形、光学特性及び電気的特性、安定性、及び／又は溶解度を有する。当業者ならば、再結晶溶媒、結晶化速度及び保存温度を含む様々な因子が、単一の結晶形態を優位にさせ得ることを理解するであろう。
【００８０】
ある実施態様において、本明細書に記載の化合物及びその全ての異なる形態（例えば、遊離形態、塩、溶媒和物、多形体）には、例えば、幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性体、個々のエナンチオマー、個々のジアステレオマー、ラセミ化合物（racemate）、ジアステレオマー混合物及びそれらの組合せなどの異性体が含まれ、便宜上示された式の記載によって限定されない。
【００８１】
ある実施態様において、本発明の医薬組成物は、このような化合物の塩、好ましくは医薬上又は生理的に許容される塩を含んでよい。医薬調製物は、投与が、注射、吸入、局所投与、洗浄又は選択される治療に適する他の様式によるかにかかわらず、典型的には、調製物の投与様式について許容される1つ以上のキャリア、賦形剤又は希釈剤を含むだろう。適したキャリア、賦形剤又は希釈剤には、このような投与様式での使用について当分野で公知のものが挙げられる。
【００８２】
適した医薬組成物は、当分野で公知の手段によって製剤化され得、その投与様式及び用量は、当業者によって決定され得る。非経口投与については、化合物を、滅菌水若しくは生理食塩水、又はビタミンKで使用されるものなど非水溶性化合物の投与に使用される医薬上許容されるビヒクルに溶解できる。腸内投与については、化合物を、タブレット、カプセルで投与してよく、液体形態に溶解してもよい。タブレット又はカプセルは、腸溶コーティングされてよく、あるいは徐放性製剤であってもよい。放出されるべき化合物を封入したポリマー若しくはタンパク質微粒子、軟膏、ペースト、ゲル、ヒドロゲル又は溶液を含む、化合物を投与するために局所的に（topically）又は局部的に（locally）使用可能な、多くの適した製剤が公知である。長期にわたる放出を提供するために、徐放性パッチ又はインプラントを使用することができる。当業者に公知の多くの技術は、Alfonso GennaroによるRemington: the Science & Practice of Pharmacy、20th ed.、Lippencott Williams & Wilkins、（2000）に記載されている。非経口投与のための製剤は、例えば、賦形剤、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、植物由来の油又は水素化ナフタレンなどを含んでよい。化合物の放出を制御するために、生体適合性、生分解性のラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー又はポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーを使用してよい。他の潜在的に有用な、調節性化合物の非経口デリバリーシステムには、エチレン−ビニルアセテートコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、うめ込み型の注入システム及びリポソームが挙げられる。吸入用製剤には、ラクトースなどの賦形剤が含まれてよく、あるいは、ポリオキシエチレン−9−ラウリルエーテル、グリココレート（glycocholate）及びデオキシコレート（deoxycholate）などを含む水溶液であってよく、あるいは点鼻薬の形態で投与するための油性溶液であってよく、又はゲルであってよい。製剤は、鼻腔内デリバリーのために特に調製されてよい。例えば、鼻孔吸入などである。
【００８３】
本発明の化合物若しくは医薬組成物、又は本発明で使用するための化合物若しくは医薬組成物は、インプラント、グラフト、プロテーゼ、ステントなどの医療機器又は医療器具により投与されてよい。また、インプラントは、このような化合物又は組成物を含みかつ放出することが意図された、考案されたものであってよい。例としては、一定期間にわたって化合物を放出するように適合した高分子材料でできたインプラントを挙げることができる。
【００８４】
本明細書に記載の医薬組成物の「有効量」には、治療的有効量又は予防的有効量が含まれる。「治療的有効量」とは、投薬時（at dosages）及び必要期間において、例えば、ウイルス負荷量の減少、寿命の増加又は平均余命の増加など所望の治療結果を達成するのに有効な量を言う。化合物の治療的有効量は、対象の病態、年齢、性別及び体重、並びに対象において所望の反応を誘発する化合物の能力などの因子によって変化し得る。投薬レジメンは、最適な治療反応を提供するよう調整され得る。治療的有効量はまた、治療的に有益な効果が、化合物のなんらかの毒性効果又は有害作用を上回る量でもある。「予防的有効量」とは、投薬時（at dosages）及び必要期間において、例えば、重症感染症の低下若しくは遅延若しくは非発症、寿命の増加、平均余命の増加又は感染の進行の予防など所望の予防的結果を達成するのに有効な量を言う。典型的には、予防的有効量が、治療的有効量よりも少なくなり得るように、疾患前又は疾患の初期段階に予防的用量が対象に使用される。
【００８５】
用量値は、緩和させる病状の重症度によって変化し得ることに留意されたい。任意の特定の対象について、具体的な投薬レジメンは、個体の必要性及び組成物投与を管理又は監督する人の専門的な判断に応じて、経時的に調整し得る。本明細書に記載の用量範囲は、あくまで例示であり、医薬の実務家により選択され得る用量範囲を限定するものではない。組成物中の活性化合物の量は、対象の病態、年齢、性別及び体重などの因子によって変化し得る。投薬レジメンは、最適な治療反応を提供するように調整され得る。例えば、単回ボーラス投与量を投与してもよく、いくつかの分割した用量を経時的に投与してもよく、あるいは、治療状況の要求により示されるとおりに用量を比例的に減少又は増加させてよい。投与の簡便性及び用量の均一性のために、用量単位形態で非経口組成物を製剤化することが有利であり得る。
【００８６】
ある実施態様において、本明細書に記載の化合物及びその全ての異なる形態は、例えば、これに限定されるものではないが、他の治療方法と組み合わせて使用されてよい。
【００８７】
通常、本明細書に記載の化合物は、実質的な毒性をもたらすことなく使用されるべきである。本発明の化合物の毒性は、標準的な技術を用いて、例えば、細胞培養物又は実験動物で試験し、治療指数、すわなち、LD50（集団の50％致死量）とLD100（集団の100％致死量）との比率を決定することによって決定され得る。しかしながら、重篤な病態など、状況によっては、相当な過剰量の組成物を投与する必要があり得る。本明細書に記載のある種の化合物は、ある種の濃度で有毒であり得る。毒性のある濃度及び非毒性の濃度を決定するために、力価測定（titration）研究を使用し得る。毒性は、特定の化合物又は組成物の細胞株にわたる特異性を調べることにより評価し得る。化合物が他の組織に対してなんらかの効果を有する場合、指標（indication）を提供するために動物研究を用いてよい。
【００８８】
本明細書に記載の化合物は、対象に投与され得る。本明細書で使用する場合、「対象」は、ヒト、ヒト以外の霊長類、ラット、マウス、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコなどであってよい。対象は、ウイルス感染などの感染を有することが疑われるものであってよく、これらの感染を有する危険性があるものであってよく、あるいはウイルス感染を有することが疑われるものであってよく、ウイルス感染のリスクがあると疑われるものであってよい。特に、感染は、ノイラミニダーゼにより媒介され得る。インフルエンザなどのウイルス感染の診断方法及びインフルエンザなどのウイルス感染の臨床描写（clinical delineation）は、当業者に公知である。
【００８９】
表1には、作製し、ノイラミニダーゼ調節活性について試験した化合物を示す。
【００９０】
【表１】
0005855566.tif 000019
【００９１】
表2Aには、ノイラミニダーゼ調節活性を有する化合物を示す。
【００９２】
【表２】
0005855566.tif 000020
【００９３】
表2Bには、作製し、ノイラミニダーゼ調節活性を有すると見込まれる化合物を示す。
【００９４】
【表３】
0005855566.tif 000021
【００９５】
【表４】
0005855566.tif 000022
【００９６】
本明細書に記載の化合物はまた、分析及び研究目的で用いられてもよい。
【００９７】
本発明の方法で使用する化合物は、本明細書に記載の方法を用いて合成されてよい。
【００９８】
様々に変形した実施態様及び実施例を本明細書に記載する。これらの実施態様及び実施例は、本発明を説明するものであって、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【００９９】
Hagiwaraらによる、以前出版された研究（1994）では、あまり効果的ではないシアリダーゼ阻害剤として3−フルオロ−シアル酸が報告された。具体的には、彼らは、2つの化合物を報告しており、そのうちの1つは、炭素2（式IのZ位）にOH基を有している。しかし、OH基は、共有結合中間体の捕捉を可能にするのに十分な脱離基ではない。従って、HagiwaraらのOH化合物（式IのZ位に相当するC2におけるもの）は、最小の阻害しか示さない。さらに、C2（式IのZ位に相当）にフッ素（十分な脱離基）を有する、Hagiwaraらにより試験された他の化合物も、正確な立体化学を有さなかった。従って、Hagiwaraらは、これらの要求を認識していなかった。
【０１００】
［一般的な方法］
（合成）
式Iの化合物の化学的調製の一般的な方法を、これに限定されないが、以下の例示的なスキームに記載する。
【０１０１】
【化１８】
0005855566.tif 000023
【０１０２】
１−クロロメチル−４−フルオロ−１，４−ジアゾニアビシクロ［２．２．２］オクタンビス（テトラフルオロボラート）(セレクトフルオル)（3.5当量）を、SAN3（1当量）のMeNO2／水（3／1〜4／1）溶液に添加し、反応を完成させるために、溶液を室温で3日間以上撹拌した（SAN3の合成−Chandler、M. et al. Journal of the Chemical Society−Perkin Transactions1、1995; 1173−1180）。反応混合物を飽和NaHCO3でクエンチし、EtOAcで抽出した。化合物（I）の存在は、TLCを介して容易に確認できる。アキシアル−F（1）は、出発物質よりも低いRf値を有し、エカトリアル−F化合物及び任意の他の立体異性体（アノマーヒドロキシ異性体）は、出発物質よりも高いRf値を有し得る。C3のフッ化物は、19F NMR実験で−204 ppmで検出され、1H−及び19F−NMR結合定数に基づいて、立体化学を決めた。結合定数JH3／F3（47.9 Hz）及びJF3／H4（31.0 Hz）は、それぞれ、C3のフッ素原子のアキシアル配置の指標となる。
【０１０３】
【表５】
0005855566.tif 000024
【０１０４】
出発物質のみが短波UVにより検出されるので、TLCでのUVにより反応が完成したかをモニタリングできる。反応は、UV活性化合物が存在しなくなった場合に完全であると考えられる。
【０１０５】
【化１９】
0005855566.tif 000025
【０１０６】
DAST（1.1当量）を、化合物1（1当量）のDCM懸濁液（−40℃）に滴下し、溶液を30分間激しく撹拌した。混合物が透明（clear）になった後、反応混合物を飽和NaHCO3でクエンチし、DCM及びEtOAcで抽出して、化合物2を得た。反応混合物が20分後も透明にならない場合には、最後に10分間、反応混合物を−10℃のバスに置く。
【０１０７】
化合物2は、室温で一晩、MeOH中のPd／Cで水素化し、ついで触媒をろ去し、6M NaOMeを反応混合物に添加した。ついで、混合物をIR120（H＋、強）で酸性化して、Na＋を除去した。樹脂をろ去し、ろ液を溶媒留去し、クロマトグラフィーにかけた（EtOAc／MeOH／水＝15／2／1）。水素化は、ニンヒドリン溶液で染色することによりモニタリングした。化合物3及び4の両方が単離された。
【０１０８】
【化２０】
0005855566.tif 000026
【０１０９】
化合物3のMeCN／水（5／1）溶液に、アセトアルデヒド（2当量）を室温で添加した。30分後、4当量のNaCNBH3を添加し、反応混合物を同一温度で10分間撹拌した。反応混合物を5％クエン酸でクエンチし、EtOAc／アセトン（9／1）でクロマトグラフィーにかけた。
【０１１０】
モノアセチル化アミン（6）を湿潤（wet）MeOH中の6M NaOMeで脱保護して、化合物7を得た。
【０１１１】
【化２１】
0005855566.tif 000027
【０１１２】
化合物4は、乾燥EtOH中の触媒HCL（Et2O中、2M HCl）で、室温で再エステル化した。反応混合物を一晩放置し、ついで溶媒留去した。通常、2当量のHClを添加した。シリカゲルクロマトグラフィーによりエチルエステルを分離できる。
【０１１３】
【化２２】
0005855566.tif 000028
【０１１４】
二フッ化化合物2を、湿潤MeOH中の6M NaOMeで、室温で脱保護し、IR120（強H＋）で酸性化後、シリカゲルクロマトグラフィーにより90％の収率で容易に化合物8を精製した。
【０１１５】
【化２３】
0005855566.tif 000029
【０１１６】
アジド2をPd／Cで水素化して、化合物3を得、ついでNH3（g）をバブリングしてアセテートを除去し、良好な収率でアミド4を得た。
【０１１７】
【化２４】
0005855566.tif 000030
【０１１８】
化合物11の調製のため、アミン3を、ピリジン中のAc2Oでアセチル化し、O−アセチレート及びメチルエステルをNaOMeで選択的に除去した。N−アセチル化化合物11を精製し、70％の収率で得た（全部で3ステップ）。
【０１１９】
【化２５】
0005855566.tif 000031
【０１２０】
グアニル化（guanylated）化合物12は、MeOH中の3,5−ジメチルピラゾール−1−カルボキサミジン及びEt3Nで60℃、3週間、調製した。3週間後、反応混合物をクエンチし、50％の出発物質4を首尾よく回収した。4−グアニル化（guanylated）12を80％の収率で単離し、室温で5時間、EtOH中の触媒HClで再エステル化した後、80％の収率でエチルエステル13を得た。
【０１２１】
式Iの化合物は、これに限定されないが、以下の例示的なスキームに記載の化学的方法により調製し得る。
【０１２２】
【化２６】
0005855566.tif 000032
【０１２３】
2,3−ジフルオロシアル酸の4−アミノ誘導体の合成。試薬及び条件は以下のとおりである：Ref 1は、Chandler et al. （1995） J Chem Soc. Perk. Trans 1、1173−1180;（a）4当量の１−クロロメチル−４−フルオロ−１，４−ジアゾニアビシクロ［２．２．２］オクタンビス（テトラフルオロボラート）(セレクトフルオル)、MeNO2／水（3／1）、rt.;（b）DAST、DCM、−40℃；；（c）NaOMe、湿潤MeOH、rt.;（d）Pd／C、H2、MeOH、rt.;（e）EtOH、cat.HCl、rt.;（f）4についてアセトアルデヒド、5についてベンズアルデヒド、NaCNBH3、アセトン、rt.；かつ（g）3,5−ジメチルピラゾール−1−カルボキサミジンニトレート、MeOH、60℃。
【０１２４】
あるいは、C4にアミンを有する式Iの化合物は、これに限定されないが、以下の例示的なスキームに記載の化学的方法により調製し得る。
【０１２５】
【化２７】
0005855566.tif 000033
【０１２６】
あるいは、C4にグアニジンを有する式Iの化合物は、これに限定されないが、以下の例示的なスキームに記載の化学的方法により調製し得る。
【０１２７】
【化２８】
0005855566.tif 000034
【０１２８】
あるいは、式Iの化合物は、これに限定されないが、以下の例示的なスキームに記載の化学的方法により調製し得る。
【０１２９】
【化２９】
0005855566.tif 000035
【０１３０】
あるいは、C1に修飾を有する式Iの化合物は、これに限定されないが、以下の例示的なスキームに記載の化学的方法により調製し得る。
【０１３１】
【化３０】
0005855566.tif 000036
【０１３２】
アルキル鎖長の変形は、1−オクタノール（8個の炭素を有するC8）を代わりのアルコールに置換することにより達成し得ることを当業者であれば理解するだろう。例えば、上記スキーム中の1−オクタノールは、代わりの1級アルコールに置換されてよく、該1級アルコールは、例えば、以下の1つ以上から選択されてよい：プロパン−1−オール（C3）;ブタノール（C4）;1−ペンタノール（C5）;1−ヘキサノール（C6）;1−ヘプタノール（C7）;1−ノナノール（C9）;1デカノール（C10）;ウンデカノール（C11）;ドデカノール（C12）;1−テトラデカノール（C14）;セチルアルコール（C16）;ステアリルアルコール（C18）;及びアラキジルアルコール（C20）。同様に、この反応の代わりの基質が選択され得ることも理解されるだろう。例えば、DFSA−4NH2（化合物4）の代わりに、化合物12（DFSA−4Gu）又は化合物7などが置換されてよい。
【０１３３】
あるいは、C1に修飾を有する式Iの化合物は、これに限定されないが、以下の例示的なスキームに記載の化学的方法により調製し得る。例えば、エチル5−アセトアミド−4−グアニル−2,3,4,5,−テトラデオキシ−3−フルオロ−D−エリトロ−β−L−マンノ−ノン−2−ウロピラノシロネートフルオリドの塩酸塩を以下に記載するが、これには、C1（R1）にエチル基を付加している。当業者ならば、生成する塩の変形が、代わりの酸を置換することにより達成され得ること、C1のアルキル基の長さが、上記代わりのアルコールを置換することにより調整され得ることを理解するであろう。
【０１３４】
【化３１】
0005855566.tif 000037
【０１３５】
あるいは、環C6に修飾を有する式Iの化合物は、これに限定されないが、以下の例示的なスキームに記載の化学的方法により調製し得る。
【０１３６】
【化３２】
0005855566.tif 000038
【０１３７】
当業者であれば、アルキル鎖長の変形が、トリメチルオルトオクチレート（8個の炭素を有するC8）又はトリメチルオルトブチレート（4個の炭素を有するC4）のいずれかを、代わりのオルトエステル誘導体に置換することにより達成され得ることを理解するだろう。例えば、上記スキームのトリチメルオルトオクチレート又はトリメチルオルトブチレートは、代わりのオルトエステル誘導体に置換されてよく、該誘導体は、例えば、以下の1つ以上から選択されてよい：トリメチルオルトアセテート（C2）;トリメチルオルトプロピオネート（C3）;トリメチルオルトペンチオネート（C5）;トリメチルオルトヘキサネート（C6）;トリメチルオルトヘプタネート（C7）;トリメチルオルトノネート（orthononate）（C9）;トリメチルオルトデカネート（C10）。同様に、この反応の代わりの基質も選択され得る。
【０１３８】
［特性］
（2R，3R）−4−アジド−4−デオキシ−3−フルオロ−7,8,9−トリ−O−アセチル−シアル酸メチルエステル（1）
ESI−MS m／z 515.1 （＋Na）; 19F−NMR （CFCl3，282 MHz） δ −204.7 （dd，J 47.9及び31.0 Hz）; 1H NMR （300 MHz） δ  5.32 （1H，m）; 5.14 （1H，m）; 5.00 （1H，dd，J 31.4及び1.5 Hz），4.86 （1H，dd，J 4.5及び1.9 Hz），4.25 （1H，m），4.15 （1H，m），4.04 （1H，dd，J 12.5及び8.5 Hz），3.83 （1H，m），3.77 （3H，OMe），2.02 （12H，4s，4 Ac）.
【０１３９】
（2R，3R）−4−アジド−2,4−ジデオキシ−2,3−ジフルオロ−7,8,9−トリ−O−アセチル−シアル酸メチルエステル（2）
ESI−MS m／z = 517.0 （＋Na）; 19F−NMR （CFCl3，282 MHz） δ −123.2 （1F，t，8.46 Hz），−217.2 （1F，m）; 1H−NMR （300MHz） δ7.23 （1H，d，NH），5.97 （1H，m），5.37 （1H，m），5.24 （1H，m），5.10 （1H，dd，J 49.4及び7.3 Hz），4.65 （1H，dt，28.1及び9.4 Hz），4.51 （1H，m），4.27 （2H，m），3.88 （3H，d，J 7.0 Hz，OMe），3.39 （1H，m），2.10 （12H，m，4Ac）. 13C NMR （100MHz） δ 21.6，21.7，21.8，24.5，49.1，54.7，57.8 （dd），62.7，68.5，69.6，71.6 （d），78.2，87.5 （dd），105.5 （dd），165.0 （dd），170.6，171.4，172.2，172.5.
【０１４０】
（2R，3R）−4−アジド−2,4−ジデオキシ−2,3−ジフルオロシアル酸（8）
ESI−MS m／z = 353.2 （−H）; F−NMR （CFCl3，282 MHz） δ −122.3 （1F，d，J 11.3 Hz），−216.4 （1F，ddd，J 50.1，29.2及び11.3 Hz）; 1H−NMR （300MHz） δ 5.30 （1H，dm，J 50.2 Hz），4.34 （1H，t，J 10.8 Hz），4.07 （1H，dd，J 29.1及び11.2 Hz），3.90 （1H，d，J 10.5 Hz），3.74 （2H，m），3.50 （3H，m），1.95 （3H，s，Ac）. 13C NMR （100MHz） δ23.0，45.9 （d），61.5 （dd），63.9，68.7，71.1，74.1 （d），88.0 （dd），106.5 （dd），169.2 （dd），175.8.
【０１４１】
（2R，3R）−4−アミノ−2,4−ジデオキシ−2,3−ジフルオロシアリルアミド（9）
ESI−MS m／z = 350.1 （＋Na）; 19F−NMR （CFCl3，282 MHz） δ−121.1 （1F，d，J 8.46 Hz），−219.4 （1F，m）; 1H−NMR （300MHz） δ5.10 （1H，dm，J 49.3 Hz），4.20 （1H，t，J 10.8 Hz），3.96 （1H，d J 10.6 Hz），3.73 （2H，m），3.50 （3H，m），1.95 （3H，d，J 1.2 Hz，Ac）. 13C NMR （100MHz） δ22.2，46.1，51.5 （dd），63.2，67.5，70.1，74.1，87.0 （dd） 105.0 （dd），168.2 （dd），175.2.
【０１４２】
（2R，3R）−4−（N−アセチル）アミノ−2,4−ジデオキシ−2,3−ジフルオロシアル酸（11）
ESI−MS m／z = 415.1 （＋ 2 Na）; 19F−NMR （CFCl3，282 MHz） δ −121.8 （1F，d，J 11.9 Hz），−214.4 （1F，m）; 1H−NMR （300MHz） δ5.05 （1H，d，J 50.5 Hz），4.50 （1H，m），4.18 （1H，m），4.05 （1H，d J 10.4Hz），3.82 （1H，d，J 10.3 Hz），3.75 （2H m），3.48 （2H，m），1.89 （3H，s，Ac），1.84 （3H，s，Ac）. 13C NMR （100MHz） δ21.6，21.8 （d），45.2，50.8 （m），63.1，68.0，70.5，70.6，73.3 （d），73.5，169.5 （dd），174.2，174.8.
【０１４３】
（2R，3R）−4−（N−エチル）アミノ−2,4−ジデオキシ−2,3−ジフルオロシアル酸（7）
ESI−MS m／z = 355.3 （−H）; 19F−NMR （CFCl3，282 MHz） δ −121.8 （1F，d，J 11.5 Hz），−216.4 （1F，m）; 1H−NMR （300MHz） δ5.30 （1H，dm，J 50.2 Hz），4.29 （1H，t，J 10.7 Hz），3.82 （1H，d J 10.6 Hz），3.73 （2H，m），3.52 （3H，m），3.00 （2H，m），1.95 （3H，s，Ac），1.10 （3H，t，J 7.3 Hz）. 13C NMR （100MHz） δ 12.4，23.2，41.3，45.2，58.0 （dd），63.9，64.2 （d），68.7，71.2，74.2 （d），85.5 （dd），107.2 （dd），170.0 （dd），176.1.
【０１４４】
（2R，3R）−4−アミノ−2,4−ジデオキシ−2,3−ジフルオロシアル酸（4）
ESI−MS m／z = 351.2 （＋ Na）; 19F−NMR （CFCl3，282 MHz） δ −122.0 （1F，d，J 11.3 Hz），−217.4 （1F，m）; 1H−NMR （400MHz） δ5.10 （1H，ddt，J 50.4，10.0及び5.2 Hz），4.16 （1H，m），3.73 （3H m），3.45 （3H，m），1.91 （3H，dd，J 5.1及び1.4 Hz，Ac）. 13C NMR （100MHz） δ23.1，46.8，53.1 （dd），63.9，64.1，68.5，71.4，74.4，89.8 （dd），108.5 （dd），170.4 （dd），176.0.
【０１４５】
エチル（2R,3R）−4−アミノ−2,4−ジデオキシ−2,3−ジフルオロシアリレート（5）
ESI−MS m／z = 379.1 （＋ Na）; 19F−NMR （CFCl3，282 MHz） δ −122.3 （1F，d，J 5.6 Hz），−219.0 （1F，m）; 1H−NMR （400MHz） δ5.10 （1H，ddt，J 49.2，10.0及び2.8 Hz），4.45 （2H，m），4.14 （1H，m），4.05 （1H，d J 10.4Hz），3.88 （3H m），3.66 （3H，m），2.10 （3H，d，J 1.6 Hz，NAc），1.30 （3H，dt，J 70.4及び7.2 Hz）. 13C NMR （100MHz） δ 13.4，17.1，22.4，44.6 （dd），52.4 （dd），57.7，63.2，65.0，67.7 （d），70.1 （d），73.3 （d），86.7 （dm），105.1 （tm），167.0 （dm），175.4 （d）.
【０１４６】
（2R,3R）−4−グアニル−2,4−ジデオキシ−2,3−ジフルオロシアル酸（12）
ESI−MS m／z = 370.3 （−H）; 19F−NMR （CFCl3，282 MHz） δ −121.3 （1F，d，J 14.4 Hz），−214.7 （1F，m）; 1H−NMR （300MHz） δ5.00 （1H，dm，J 50.2 Hz），4.19 （1H，t，J 8.9 Hz），3.81 （2H，m），3.52 （3H，m），3.10 （1H，q，J 7.3 Hz），1.90 （3H，s，Ac），1.12 （4H，m）. 13C NMR （100MHz） δ22.3，43.5，46.5，55.1，63.9，68.9，71.5，74.2，89.5 （dd），107.0 （dd），161.5，170.1 （dd），175.8.
【０１４７】
エチル（2R,3R）−4−グアニル−2,4−ジデオキシ−2,3−ジフルオロシアリレート（13）
ESI−MS m／z = 421.4 （＋ Na）; 19F−NMR （CFCl3，282 MHz） δ −122.5 （1F，d，J 12.0 Hz），−216.0 （1F，m）; 1H−NMR （300MHz） δ5.16 （1H，dm，J 49.5 Hz），4.32 （2H，m），4.18 （2H，m），4.03 （1H，d，J 9 Hz），3.70 （2H，m），3.50 （3H，m），3.09 （2H，q，J 7.1 Hz），1.90 （3H，s，Ac），1.23 （3H，t，J 6.2 Hz）.
【０１４８】
【化３３】
0005855566.tif 000039
【０１４９】
オクチル5−アセトアミド−4−アミノ−2,3,4,5,−テトラデオキシ−3−フルオロ−D−エリトロ−β−L−マンノ−ノン−2−ウロピラノシロネートフルオリドの塩酸塩
ESI−MS m／z = 463.3 （M＋Na）; 1H−NMR （400 MHz，CH3OD） δ 5.37 （1H，app dt ，J 49.92，5.04），4.50 - 4.44 （1H，m），4.38 - 4.27 （2H，m），4.21 - 4.11 （2H，m），3.80 - 3.77 （1H，m），3.75 （1H，dd，J 6.91，2.30），3.69 - 3.66 （1H，m），3.60 - 3.55 （1H，m），2.04 （3H，s），1.80 - 1.73  （2H，m），1.42 - 1.28 （10，m），0.91 （3H，t，J 7.00）.
【０１５０】
【化３４】
0005855566.tif 000040
【０１５１】
エチル5−アセトアミド−7,8,9−トリ−O−アセチル−4−アミノ−2,3,4,5−テトラデオキシ−3−フルオロ−D−エリトロ−β−L−マンノ−ノン−2−ウロピラノシロネートフルオリドの塩酸塩
ESI−MS m／z = 483.3 （M＋H）; 1H−NMR （400 MHz，CDCl3） δ 6.99 （1H，s），5.70 - 5.23 （3H，m），5.02 （1H，s），4.61 - 4.08 （6H，m），2.28 - 1.23 （15H，m）.
【０１５２】
【化３５】
0005855566.tif 000041
【０１５３】
エチル5−アセトアミド−4−アミノ−2,3,4,5,−テトラデオキシ−3−フルオロ−D−エリトロ−β−L−マンノ−ノン−2−ウロピラノシロネートフルオリド
ESI−MS m／z = 379.1 （M＋Na）; 1H−NMR （400 MHz，D2O） δ 5.18 （1H，app d，J 49.34），4.38 （2H，q，J 7.16），4.20 - 4.14 （1H，m），4.01 （1H，d，J 10.51），3.87 - 3.76 （2H，m），3.61 （1H，dd，J 11.95，5.86），3.55 （1H，d，J 9.29），3.39 （1H，dd，J 30.00，10.96），2.03 （3H，s），1.32 （3H，t，J 7.16）.
【０１５４】
【化３６】
0005855566.tif 000042
【０１５５】
5−アセトアミド−4−アミノ−9−ブチロイル−2,3,4,5,−テトラデオキシ−3−フルオロ−D−エリトロ−β−L−マンノ−ノン−2−ウロピラノシロネートフルオリドの塩酸塩
ESI−MS m／z = 421.3 （M＋Na）; 1H−NMR （400 MHz，MeOD） δ 5.34 （1H，app d，J 51.62），4.47 （1H，app t，J 10.66），4.36 （1H，d，J 10.20），4.16 （1H，dd，J 11.42，6.24），4.09 - 3.97 （3H，m），3.55 （1H，d，J 9.14），2.34 （2H，t，J 7.31），2.03 （3H，s），1.70 - 1.61 （2H，m），0.96 （3H，t，J 7.31）.
【０１５６】
【化３７】
0005855566.tif 000043
【０１５７】
5−アセトアミド−4−アミノ−9−オクタノイル−2,3,4,5,−テトラデオキシ−3−フルオロ−D−エリトロ−β−L−マンノ−ノン−2−ウロピラノシロネートフルオリドの塩酸塩
ESI−MS m／z = 453.3 （M−H）; 1H−NMR （400 MHz，MeOD） δ 5.35 （1H，app d，J 45.84），4.58 -4.28 （2H，m），4.23 - 3.88 （4H，m），3.63 - 3.50 （1H，m），2.48 - 2.26 （2H，m），2.15 - 1.94 （3H，m），1.72 - 1.54 （2H，m），1.51 - 1.14 （8H，m），1.03 - 0.88 （3H，m）.
【０１５８】
【化３８】
0005855566.tif 000044
エチル5−アセトアミド−4−グアニル−2,3,4,5,−テトラデオキシ−3−フルオロ−D−エリトロ−β−L−マンノ−ノン−2−ウロピラノシロネートフルオリドの塩酸塩
ESI−MS m／z = 421.4 （M＋Na）; 1H−NMR （300MHz，D2O） 5.16 （1H，app d，J 49.5 Hz），4.32 （2H，m），4.18 （2H，m），4.03 （1H，d，J 9 Hz），3.70 （2H，m），3.50 （3H，m），3.09 （2H，q，J 7.1 Hz），1.90 （3H，s），1.23 （3H，t，J 6.2 Hz）.
【０１５９】
［酵素動態］
全ての実験は、0.1％ BSA含有20 mM Tris／50 mM CaCl2バッファー、pH 7.6で実施した。キュベットは、1 cmの経路長を有し、循環水槽（circulating water bath）を結合したCary 4000又はCary 300 UV／可視光スペクトロフォトメーターのいずれかで用いた。データは、GraFit 4.0（Erithacus software）プログラムを用いて分析した。時間依存性の不活性化は、様々な濃度の不活性化剤（inactivator）の存在下、酵素を30℃でプレインキュベートすることにより実施した。残存酵素活性は、一定量の不活性化混合物を、0.5 mM 4−トリフルオロメチルウンベリフェリルシアル酸（CF3MUSA）含有アッセイ溶液に添加することにより、適切な時間間隔で測定した。動態パラメータは、385 nmの吸光度で、初期線形増加（initial linear increase）を測定することにより決定した。各時点での初期速度を時間の関数としてプロットして、時間依存性の指数関数的減衰曲線を得、下記方程式：
（速度）t＝（速度）t=0 e（ki obs t）＋オフセット
を用いて、各不活性化剤濃度についてki obsが得られた。
【０１６０】
速度はゼロまで減衰しないので、オフセットを用いた。下記方程式：
ki obs＝ki[I]／（Kd＋[I]）
に、不活性化剤濃度に対してki obsをプロットすることにより、不活性化速度定数（ki）及び不活性化剤の可逆的解離定数（Kd）を決定した。
【０１６１】
[I]<<Kdの場合には、下記方程式：
ki obs＝ki[I]／Kd
にデータを適合させることにより二次速度定数（ki／Kd）を決定した。
【０１６２】
時間依存性の再活性化は、不活性化酵素溶液（50μL）をAmicon（商標）10 Kフィルター（Millipore（商標））に適用して、過剰量の不活性化剤を除去することにより実施した。フィルターは、150 μLのバッファーで、4℃、5回洗浄した。酵素活性は、一定量の溶出酵素を0.5 mM CF3MUSA含有アッセイ溶液に添加することにより、時間間隔で分析した。各アクセプター濃度での再活性化についての一次速度定数（kr obs）は、一次方程式に、時間に対する活性データを直接適合することにより決定した。再活性化実験を試みたが、時間がたっても有意な酵素活性を検出することができず、シアリル−酵素中間体の加水分解は非常に遅いことが示唆される。下記方程式：
Ki＝Kd（khyd／ki）
にデータを適合することによりKiを決定した。
【０１６３】
［インフルエンザ抗ウイルス活性の細胞に基づくアッセイ］
細胞系アッセイを用いて、抗ウイルス活性について化合物を試験した。該細胞系アッセイは、抗ウイルス化合物の連続2倍希釈を作製し（試験ウイルス数に対して十分な量（ウイルス当たり60μL）のMegaVir培地中、1：2〜1：4096）、ここに、100感染単位の具体的なインフルエンザウイルスを添加し、マイクロタイタープレート中、調製物をMDCK細胞の単層に移すことからなる。96ウェルマイクロタイタープレートでアッセイを実施した。感染3日から5日後に、インフルエンザ細胞変性効果の進行についてプレートをモニタリングする。抗ウイルス活性は、細胞変性効果の進行の阻害により測定される。単層が損傷を受けていない、化合物の最も高い希釈を希釈限界（end-point）として得る。ザナミビル（Zanamivir）は、ポジティブコントロールとして使用した。
【０１６４】
希釈調製物：
1．クリーンな96ウェルマイクロタイタープレートのA列に、試験ウイルス数に対して十分な量（ウイルス当たり60μL）のMegaVir培地中1：2〜1：4096の抗ウイルス化合物の2倍連続希釈を調製する。
2．96ウェルマイクロタイタープレートのクリーンな列に、55μLの2倍希釈系列を移す。
3．55μLの希釈系列に、55μLの希釈インフルエンザウイルスを添加する（25μL当たり100 TCID50）。さらに、ポジティブコントロールウェルにもウイルスを添加する。
4．現在の100μL混合物に、55μLの4X TPCK処理トリプシンを添加する。トリプシンは、ポジティブコントロール及びネガティブコントロールウェルにも添加する。ウェルを混合する。
5．さらに、逆滴定（back titration）のために、MegaVir培地中、接種ウイルスについて1:2〜1:256の2倍連続希釈も調製する。
【０１６５】
プレート接種：
6．〜200μLのMegaVir培地中MDCK細胞の融合性単層を含む96ウェルマイクロタイタープレートにおいて、75μLの混合物を二重に（as duplicates）2つの各列に移す。
7．50μLのポジディブコントロール及び25μLのネガティブコントロールを各ウェルに移す。
8．さらに、25μLのウイルス逆滴定も二重（in duplicates）に移す。
9．従って、各ウェル中：
a.サンプル：25μLの化合物＋25μLのウイルス＋25μLのトリプシン
b.ポジティブコントロール：25μLのウイルス＋25μLのトリプシン（化合物は含まず）
c.ネガティブコントロール：25μLのトリプシン（化合物又はウイルスを含まず）
d.逆滴定：25μLのウイルス。
10．プレートは、CO2インキュベーター中、37℃で3日間インキュベートし、ついで3日目及び5日目における細胞変性効果の出現を観察する。
【０１６６】
［In Vivo 薬物動態（PK）プロファイル研究］
（用量投与）
静脈（IV）注射−28G針を用いて、個々のマウスの体重に基づく動物に対する規定用量（mg／kg）を投与するため、必要な量をマウスに注射した。注射量は、200μL／20 gマウスであった。およそ1分間のIV注射の間、マウスを簡単に拘束した。静脈拡張は、1〜2分間の間、加熱灯（heating lamp）下で動物を保持することにより達成した。
【０１６７】
経鼻（IN）投与−爪先をつまむ際の反射が起こらなくなるまで、イソフルラン2％及び2 L／O2／minでマウスを麻酔した。立位で動物を拘束し、マイクロピペットを用いて、体重15 g当たり10μLの化合物を動物の各鼻孔に注入した。およそ20秒間の注入手順の間、マウスを簡単に拘束し、気泡を形成することなく化合物をマウスに吸入させるため、放出速度を調整した。さらに2分間又は呼吸が正常に戻るまで、逆さにしてマウスを麻酔チャンバーに戻した。
【０１６８】
（薬物動態サンプリング）
マウスは個別に体重を計り、体重に従ってグループに均等に分配した。マウス（n=20／グループ及びn＝4／時点）は、用量投与セクションで記載したとおり、被験物質で注射した。
【０１６９】
血液回収：研究のグループ分けの表で示す時点で血液を回収した。血液回収のために、CO2吸入によりマウスをと殺し（terminated）、心穿刺により血液を回収した。最後の呼吸時に、マウスを吸入チャンバーから取り出し、およそ500〜700μLの血液を、25G針を用いて、心穿刺により回収し、適切なEDTAマイクロテナー（microtainer）チューブに入れた。各チューブを数回逆にして、血液とEDTAとをむらなく混合して、凝集を防いだ。血液サンプルは、全てのサンプルを特定の時点で回収するまで氷上で保存し、ついで、血漿を得るためにさらに処理する。
【０１７０】
血漿調製:血漿は、2500 rpm、15分間、4℃でサンプルを遠心分離（Beckman GH 3.8A rotor、RCFavg 250xgに基づくrpm）することにより調製し、ついで、ピペッティングにより取り出し、氷上、ラベルしたバイアルに入れ、ついで−80℃で凍結した。サンプルは、ドライアイス上で運んだ。
【０１７１】
組織回収：血液回収後、気管及び肺組織を摘出した。簡単に述べると、首腹側を切って、甲状腺及び胸骨甲状筋を露出した。筋肉をそっと裂いて分け、喉頭と気管を露出した。止血かん止（hemostat）を用いて、気管を塞ぎ（喉頭近傍）、ついで、喉頭と気管全体のちょうど後部を切り、肺が結合した気管支を取り除いた。気管を肺から分離した。組織は、生理食塩水で洗浄しなかった。各組織サンプルは、氷上、個々のラベルしたバイアルに移し、−80℃で凍結した。サンプルはドライアイス上で運んだ。
【０１７２】
（動物の観察）
試験化合物投与後、最初の2時間、毒性の急性兆候についてマウスを連続してモニタリングした。最後の時点（7日目）で、マウスのグループについて、1日2回マウスをモニタリングした後、マウスをと殺し組織を回収した。個々のマウスの体重は、研究を行っている間、毎週月曜、水曜及び金曜日に測定した。
【０１７３】
（データ収集）
血液回収の実際の時間（時刻）、体重、及び行動パラメータ（実験計画の薬物動態サンプリングで記載したとおり）。以下の記録を集めた：
・体重によるマニュアルランダム化
・個々の体重
・観察
・コメント
・血液及び組織回収の実際の時間
・組織サンプルの同一性（identity）
・動物のなんらかの早期終結に関する理由／所見。
【０１７４】
（動物の観察）
薬剤誘発性ストレスの評価−全ての動物は、投与後及び少なくとも1日1回、必要とされる場合にはさらに数回、前処置及び処置期間、死亡率と病的状態（morbidity）について観察した。特に、健康障害の兆候は、体重の減少、食欲の変化及び行動の変化（例えば、歩き方の変化、不活発、ストレスの全体的な兆候など）に基づいた。重篤な毒性の兆候が見られた場合には、動物をと殺（terminated）し（CO2窒息）、解剖して、他の毒性の兆候を評価した。以下の臓器を調べた：肝臓、胆嚢、脾臓、肺、腎臓、心臓、腸、リンパ節及び膀胱（bladder）。なんらかの他とは異なる所見も記録した。
【０１７５】
瀕死の動物は人道的な理由からと殺（terminated）し、と殺の決定は、動物ケアの専門家及び研究指示者の判断によった。これらの所見は、生データとして記録したが、死亡時刻は、翌日、記録を取るだろう。
【０１７６】
［インフルエンザのIn Vivoマウスモデル］
（動物）
インフルエンザのマウスモデルを本研究で使用した。6〜7週齢の雌のマウス（Balb／C−Mus musculus）に、適合したHK1インフルエンザウイルスをマウス当たり1250 pfu与えた。負荷用量（challenge dose）は、in vivo力価測定（titration）研究で決定した、3x LD50であった。動物は、レベル2の封じ込め室で飼育した。
【０１７７】
【表６】
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【０１７８】
（用量の経鼻投与）
爪先をつまむ際の反射が起こらなくなるまで、イソフルラン2％及び2 L／O2／minでマウスを麻酔した。立位で動物を拘束し、マイクロピペットを用いて、10μLの化合物を動物の各鼻孔に注入した。およそ20秒間の注入手順の間、マウスを簡単に拘束し、気泡を形成することなく化合物をマウスに吸入させるため、放出速度を調整した。さらに2分間又は呼吸が正常に戻るまで、逆さにしてマウスを麻酔チャンバーに戻した。
【０１７９】
（ウイルスの経鼻接種）
爪先をつまむ際の反射が起こらなくなるまで、イソフルラン2％及び2 L／O2／minでマウスを麻酔した。立位で動物を拘束し、マイクロピペットを用いて、3,000 pfuのインフルエンザAウイルスであるA／HK／1／68（H3N2）を含むウイルス調製物10μLを、各鼻孔に注入した（動物1匹当たり1,250 pfuの総接種量）。ウイルスは、血清不含DMEM懸濁液として調製した。およそ20秒間の注入手順の間、マウスを簡単に拘束し、気泡を形成することなく化合物をマウスに吸入させるため、放出速度を調整した。さらに2分間又は呼吸が正常に戻るまで、逆さにしてマウスを麻酔チャンバーに戻した。
【０１８０】
（データ収集）
以下の記録を集めた：
・体重によるマニュアルランダム化
・個々の体重
・観察
・コメント
・動物のなんらかの早期終結に関する理由／所見。
【０１８１】
（薬剤又は病気誘発性ストレスの評価）
全ての動物は、投与後、処置の間は1日2回及びその後は1日1回、死亡率と病的状態について観察した。健康障害の兆候には、体重の減少、食欲の変化、呼吸困難及び行動の変化（例えば、歩き方／姿勢の変化、不活発、ストレスの全体的な兆候など）を含めた。重篤な病気の兆候（＞15％の体重減少により決定）が見られた場合には、動物をエンドポイントと称し、と殺した（CO2窒息）。
【０１８２】
瀕死の動物は人道的な理由からと殺（terminated）し、と殺の決定は、動物ケアの専門家及び研究指示者の判断によった。これらの所見は、生データとして記録し、死亡時刻は、翌日、記録を取った。
【０１８３】
［実施例］
さらなる実施態様を以下の非限定的な実施例に関連して記載する。
【０１８４】
（実施例1：ウイルスシアリダーゼ酵素アッセイ）
インフルエンザシアリダーゼを、異なる濃度の様々な化合物とともにインキュベートすると、作用機序に基づく阻害剤について予測されたとおり、酵素活性が時間依存的に減少する結果となった。これは、図3A及びBで、化合物4について示すとおりである。図3A及び3Bは、化合物4による、インフルエンザシアリダーゼ（サブタイプN9）の時間依存性の不活性化を示す。指示濃度の化合物4とともに酵素をインキュベートし、一定量を0.5 mM CF3MUSAで分析した。指示濃度での化合物4による不活性化（3A）、及び化合物4の濃度に対して擬一次不活性化速度定数（ki obs）をリプロットしたもの（3B）を示す。
【０１８５】
化合物8を除いて、全ての3−フルオロシアリルフルオリドが、30℃で、インフルエンザシアリダーゼに対して優れた不活性化プロファイルを示し、シアリダーゼが完全に不活性化する時間の半分の時間が、全てのアミン誘導体でおよそ10分間と見積もられた（化合物4、7、9、11、及び12）（表4の概要参照）。興味深いことに、4−アミノ化化合物4と、4−グアニル化（guanylated）化合物12は、良好な不活性化値を示した（化合物4については、ki／Kd＝25 min−1mM−1、化合物12については、ki／Kd＝24 min−1mM−1）。さらに、同一温度でのバッファー溶液中、不活性化シアリダーゼが完全に再活性化する時間の半分の時間が、化合物4では4.8時間、化合物12では6.7時間と測定され、化合物4及び12は、遅い再活性化を示した。従って、3−フルオロシアリル酵素中間体は、インフルエンザシアリダーゼの活性部位を非常に安定して阻害し、その効果的なKiはナノモル範囲であった（化合物4については93 nM、化合物12については70 nM）。
【０１８６】
2,3−ジフルオロシアル酸（23DFSA）及び4−アジド化合物8の不活性化パラメータは、30℃では、シアリル酵素中間体の急速な加水分解により、測定できなかった。従って、これら2つの阻害剤の動態値（kinetic value）を4℃で測定し、推定される不活性化数値を得た。化合物23DFSAのki／Kd値は、196 min−1mM−1と測定され、4−アジド化合物8及び4−アミン化合物4は、4℃で、26倍低い動態値を示した（化合物8についてはki／Kd＝7.5 min−1mM−1 、化合物4については7.3 min−1mM−1）。4−アミン誘導体は、低い不活性化動態値を示したが、これらの化合物は、その非常に遅い再活性化により、4−ヒドロキシル化誘導体（23DFSA）よりも、優れた阻害剤であることが明らかとなった。
【０１８７】
【表７】
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【０１８８】
a 全ての実験は、0.1％ BSA含有20 mM TRIS／50 mM CaCl2バッファー、pH 7.6、30℃で実施した。b 動態値は、4℃で収集した。ND＝測定せず。
【０１８９】
（実施例2：ヒトシアリダーゼ酵素活性）
異なる濃度の各化合物をヒトシアリダーゼとともにインキュベートすると、非常に高濃度（10 mM）の化合物でさえも、ヒトシアリダーゼの不活性化をもたらさなかったことから、インフルエンザシアリダーゼに対する化合物の特異性が実証された。
【０１９０】
（実施例3：インフルエンザA株を用いた細胞保護アッセイ）
候補阻害剤（化合物4、5、7〜9及び11〜13）は、2つのインフルエンザA株に対する細胞変性効果（CPE）について、ザナミビル（Zanamivir）及び／又は2,3−DFSAに対して試験した。現在の細胞保護アッセイは、抗ウイルス活性の良好な定性的指標であるとはいえ、その結果は多くの場合可変であり（第三者であるTisdale M. （2000）に指摘されている）、定量的分析を行う場合には注意が必要であることに留意することが重要である。
【０１９１】
【表８】
0005855566.tif 000047
【０１９２】
【表９】
0005855566.tif 000048
【０１９３】
【表１０】
0005855566.tif 000049
【０１９４】
表7は、MDCK細胞の融合性単層が、細胞変性ウイルス感染から5日間にわたって保護された、抗ウイルス濃度（μM）を示す。
【０１９５】
（実施例4：インフルエンザB株を用いた細胞保護アッセイ）
候補阻害剤は、2つのインフルエンザB株に対する細胞変性効果（CPE）について、ザナミビル（Zanamivir）に対して試験した。現在の細胞保護アッセイは、抗ウイルス活性の良好な定性的指標であるとはいえ、その結果は多くの場合可変であり（第三者であるTisdale M. （2000）に指摘されている）、定量的分析を行う場合には注意が必要であることに留意することが重要である。
【０１９６】
【表１１】
0005855566.tif 000050
【０１９７】
【表１２】
0005855566.tif 000051
【０１９８】
（実施例5：In Vivo薬物動態（PK）プロファイル研究）
本研究の目的は、鼻腔内経路による、ザナミビル（Zanamivir）と比較した、新規フルオロシアル化合物（DFSA−4Gu）の薬物動態プロファイルを評価することであり、Balb／Cマウス（Mus musculus）において、鼻腔内経路及び静脈内経路により投与された場合のDFSA−4Guの薬物動態プロファイルを比較することであった。
【０１９９】
【表１３】
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【０２００】
PK研究は、全て1 mg／kgの単回用量で、IN及びIV経路で投与されたマウスにおけるDFSA−4Guを評価し、IN経路で投与されたザナミビルを評価することにより実施した。DFSA−4Guについて組織レベル及び血漿レベルを得、ザナミビルについて肺組織レベルを得た。両方の経路による全ての組織において見かけ上の一次反応速度（apparent first order kinetics）でレベルが減少した。IN経路によるDFSA−4Guとザナミビルとの比較は、肺において同程度の化合物の曝露が両方の薬剤で観察されたことを示した。
【０２０１】
（PKパラメータの算出）
1 mg／kgの単回用量を経鼻投与した後、DFSA−4GuとザナミビルについてPKパラメータを算出した。
【０２０２】
【表１４】
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【０２０３】
1 mg／kgの単回用量を静脈内投与した後、DFSA−4GuについてPKパラメータを算出した。
【０２０４】
【表１５】
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【０２０５】
化合物の見かけの半減期は、静脈内投与後よりも経鼻投与後のほうが長かった。同様に、DFSA−4GuについてAUCとして表される曝露は、AUC比率（IN／IV）が肺＝9.3であり気管＝17.0であることから、静脈内投与と比較して、経鼻投与の方が気管及び肺において増加した。
【０２０６】
ザナミビル及びDFSA−4Guの経鼻投与した後の肺におけるAUCも同様であり、AUC（肺）（ザナミビル／DFSA−4Gu）＝1.07であった。経鼻投与後の肺における、2つの薬剤の見かけの半減期もまた同様であった。
【０２０７】
（実施例6：インフルエンザ感染のIn Vivoマウスモデル）
ザナミビル、DFSA−4Gu及びDFSA−4NH2のin vivoにおける有効性をインフルエンザ（HK1）マウスモデルで試験した。感染前に単回用量の薬剤を経鼻投与により動物に受けさせ、全部で6日間、1日2回、継続した用量（follow−up doses）を与えることにより、化合物をザナミビルと比較した。感染による死亡は、15％の体重の減少と設定し、その後動物を安楽死させた。動物の生存率は、未処置のコントロールグループと比較して、1 mg／Kg用量のDFSA−4GU及びザナミビル（Zanamavir）を受けたグループにおいて、有意に伸びた。同様に、DFSA−4NH2で処置すると、未処置のコントロールグループと比較して、いくらか生存率が伸びた。しかしながら、薬剤で処置しても、薬剤処置された全ての動物が、最終的には、インフルエンザ感染によるエンドポイントに達したことから、死亡を妨げなかった。これらの結果は有望であるが、異なるウイルス株を使用したり、薬剤用量を増加させることにより、生存率が変わり得る。
【０２０８】
【表１６】
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【０２０９】
† オリジナルプロトコルでは、健康なコントロールグループのそれぞれに対してN＝3であった（表6のグループ6及び7）。本研究の実施においては、トータルの動物数を60匹まで増加させ、これらのグループにおいてN＝5を使用した。
【０２１０】
【表１７】
0005855566.tif 000056
【０２１１】
【表１８】
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【０２１２】
1 P−値は、各グループを、未処置グループ＃7の平均値と個々に比較する、スチューデントT検定により決定した。0.05未満のp−値が、統計的に有意であると考えられた。
【０２１３】
上記結果及びプロトコルの可能性ある変形に関して、異なるウイルス株の使用、異なるエンドポイントの使用又は薬剤用量の増加が認められ得る。例えば、A／PR／8／34などのマウス適合ウイルス株は、異なる結果をもたらし得る。また、20％以上体重が減少しても動物は未だ回復し得ることから、15％の体重減少というエンドポイントは低すぎることもあり得る。例えば、Bantiaら（2001）は、20％超の体重減少後にザナミビル（Zanamavir）処置動物が回復したと報告した。同様に、完全な保護を達成するには、より高い薬剤用量が必要とされ得る。例えば、Levenaら（2001）は、保護効果を観察する前に、10及び50 mg／kg／日のザナミビル（Zanamavir）用量を必要とした。
【０２１４】
本発明に記載のクラスのフッ化化合物は、様々なグリコシダーゼの阻害剤であり、その標的酵素に対して特異的である。これらの化合物は、その阻害作用の作用機序に基づいている。それらは、正常な基質と同様に酵素と結合し、正常な基質と同様に、最初の触媒作用ステップ（中間体の形成）を受けるが、その次の第二ステップを受けるのは非常に遅い（加水分解を介したターンオーバー）。重要なことに、このメカニズムに基づく阻害は、ウイルスによる耐性形成を非常に困難なものにするだろう。阻害剤は作用機序に基づくので、阻害を減少させるウイルス酵素のなんらかの変異は、必然的に、天然の基質に対する酵素の有効性も減少させなければならない。図2には、3−フルオロシアリルフルオリド（1、23DFSA）によるノイラミニダーゼ阻害の例を示す（記:シアル酸の番号付けは、アノマーカルボキシレートによる正常な糖のものとは異なる）。
【０２１５】
フルオロシアルは、2つの点でザナミビル及びオセルタミビル（Oseltamivir）と根本的に異なる。ザナミビル及びオセルタミビルは、その平らで環状のコンホメーションにより、酵素活性部位と非常に緊密に相互作用する、可逆的結合阻害剤である。それらの結合様式は、加水分解の間の糖の遷移状態構造を模倣しているようである。従って、これらは、遷移状態模倣剤である。対照的に、フルオロシアルは、二重結合を含まず、従って、対称なイス型配座（regular chair conformation）を採用する。これらは、基質であるかのように酵素と反応し、活性部位求核剤と二重結合を形成し、非常に遅いスピードで生成物に加水分解する。これらは、形成された中間体の長寿命特性によって、非常に高い有効性を得ている。
【０２１６】
この完全に異なる作用様式に起因して、アミン又はグアニジン置換基の導入が、その有効性を高めうることは明らかではなかった。なぜなら、糖環が、2つの場合で非常に異なるコンホメーションを有するからである：アミン／グアニジンは、2つの場合で非常に異なる様式で存在し得、従って、全く異なった相互作用をするようである。より重要なことに、フルオロシアルの主要な有効性は、相対的に長寿命の二重結合中間体の形成に由来する。4−ヒドロキシルの代わりに4−アミン／グアニジンを導入すると、中間体の形成（グリコシル化）を遅くするよりもはるかに、中間体の加水分解（脱グリコシル化）がスローダウンし、その結果、非常に長寿命の中間体が得られ、従って、より高い有効性の阻害剤が得られ得るということは、全く証明されていなかった。
【０２１７】
本発明の種々の実施態様を本明細書中に開示しているが、当業者の一般的な通常の知識によって、本発明の範囲内で、多数の改作および改変がなされ得る。かかる改変は、実質的に同じ方法で、同じ結果を達成するために、本発明の任意の態様を公知の均等物で置換することを含む。数値範囲は、その範囲を規定する数値を含む。単語「含む（comprising）」は、本明細書中で、語句「これに限定されないが、・・・含む（including, but not limited to）」と実質的に同等のオープンエンドの用語として使用されており、単語「含む（comprises）」は、対応する意味を有する。本明細書で使用する場合、単数形「1つの（a）」、「1つの（an）」及び「その（the）」は、文脈によって明確に別段指示されない限り、複数の指示対象を含む。従って、例えば、「1つのもの（a thing）」への言及は、1個よりも多くのこのようなものを含む。本明細書での参考文献の引用は、かかる参考文献が本発明に対する先行技術であることを承認するものではない。
【０２１８】
［参考文献］
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【図１】
0005855566.tif 000077
【図２】
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【図３】
0005855566.tif 000079
【図４】
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【図５】
0005855566.tif 000081
【図６】
0005855566.tif 000082
【図７】
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【図８】
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